(57)【要約】  式の１−フェニルアセチル−８−アミノヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジン【化１】2021505671.tif 000076  を開示している。該化合物はカッパリガンドであり、薬物依存症、掻痒症、疼痛および炎症を治療する上で有益である。
2021505671.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物。
【化１】
2021505671.tif 000074
（式中、
Ｒ１は、水素、（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビル、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルおよび−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８は、水素、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ニトロ、−ＳＯ３Ｈおよび−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６から独立して選択され、但し（１）Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８のうち少なくとも１つは水素以外である必要があり、及び（２）Ｒ２またはＲ４がフッ素である場合、フェニル上の残りの置換基のうち少なくとも１つが、水素以外である必要があり、
Ｒ５およびＲ６は、（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルから選択され、場合によりフルオロで置換されており、またはそれらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ５およびＲ６が、５員、６員または７員の非芳香族複素環を形成し、場合によりフルオロまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換される。）
【請求項２】
Ｒ８が水素であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の１つが水素であり、前記残りの２つが水素、ハロゲン、フルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち２つが水素であり、前記残りの１つが、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチルおよびメチルから選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ７）ヒドロカルビルおよび−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロカルビルから選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、ベンジルおよび−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ７）ヒドロカルビルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項９】
オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジンの環接合がトランスであり、−ＮＲ５Ｒ６が、前記環接合において隣接した水素に対してシスである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
−ＮＲ５Ｒ６が、
【化２】
2021505671.tif 000075
であり、式中、Ｒ７が、水素、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１は、水素、（Ｃ１−Ｃ７）ヒドロカルビル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）ヒドロカルビルおよび−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロカルビルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルおよびフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルから選択されるか、またはそれらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ５およびＲ６が、５、６または７員の非芳香族複素環を形成し、そして
Ｒ８は水素である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１は、水素、（Ｃ３−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）ヒドロカルビルおよび−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロカルビルから選択され、
Ｒ２は水素であり、
Ｒ３およびＲ４は、水素、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルおよびフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、それらが結合している窒素と一緒になって、５員、６員または７員の非芳香族複素環を形成する、
請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１はメチルまたは（Ｃ５−Ｃ７）ヒドロカルビルである、
請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１は−ＣＨ２Ｒ１０であり、Ｒ１０は水素または（Ｃ４−Ｃ６）炭素環である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１はＨであり、Ｒ５はメチルであり、Ｒ６はメチルまたはシクロプロピルメチルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２およびＲ４が水素である場合、Ｒ３はフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、
請求項１１に記載の化合物。
【請求項１７】
窒素と一緒のＲ５およびＲ６は、ピロリジン環を形成する、
請求項１１に記載の化合物。
【請求項１８】
カッパオピオイド受容体を活性化するための方法であって、カッパオピオイド受容体と請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物とを、接触させることを含む、方法。
【請求項１９】
中毒症を治療する方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
前記中毒症が、コカインに対する中毒症である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物が、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
気分障害を治療するための方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
掻痒症を治療する方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
疼痛を治療するための方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
炎症を治療するための方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与することを含む、方法。
【請求項２６】
薬学的に許容される担体および請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１７年１２月８日に提出された米国仮特許出願第６２／５９６，３５７号による優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【発明の分野】
【０００２】
本発明は、薬物依存症、掻痒症、疼痛、炎症といった障害および気分障害を治療する上で有益である、１−フェニルアセチル−８−アミノヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジンファミリーのカッパオピオイド受容体リガンドに関する。
【発明の背景】
【０００３】
２０１４年には、最新（前月１か月）の１５０万人のコカイン使用者（１２歳以上）（米国人口の約０．６％）が報告された。薬物乱用警告ネットワーク（Ｄｒｕｇ  Ａｂｕｓｅ  Ｗａｒｎｉｎｇ  Ｎｅｔｗｏｒｋ、ＤＡＷＮ）による２０１１年の報告によれば、１３０万人近くが非合法薬物の誤用または乱用のために救急部門を訪れており、このうち５００，０００件以上がコカインに関係していた。ヒトにおいて効果的である、コカイン依存症を治療するための薬物は今までに提示されていない。
【０００４】
生体アミンといった神経伝達物質トランスポータを阻害するコカインへの暴露は、細胞外ドーパミン、セロトニンおよびノルアドレナリンの増加を急激に引き起こし、更に内因性オピオイド系の成分に変化を生じさせる。急性的には、コカインは、動物モデルでは背側線条体および腹側線条体においてダイノルフィンによる遺伝子発現を増加させる。慢性的なコカイン暴露はまた、ミューとカッパオピオイド受容体の結合にも変化を生じさせる。コカインの乱用または依存後、死後のヒトの脳に同様の変化が検出された。カッパオピオイド受容体／ダイノルフィン機能障害は、抑制といったような行動的作用を伴う動物における実験ストレス後に観察される。更に、ＰＥＴイメージングは、無快症または気分変調および不安感を含む精神的外傷症状を呈する人々において、変質した脳のＫＯＰ−ｒ集団を示している。
【０００５】
フルカッパアゴニストはコカインの報酬効果を遮断する能力を有するが、単独では嫌悪感があることを示している［Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １７９（３）：５５１−５５８（２００５）を参照されたい］。同様に、気分変調および幻覚作用／幻覚誘発作用は、ヒトでのＫＯＰ−ｒアゴニスト投与から生じる［Ｐｆｅｉｆｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３（４７６５）：７７４−７７６（１９８６）を参照されたい］。カッパアンタゴニストは、動物の自己投与モデルで必要となる、コカインへの復帰を誘発するストレスを遮断するが、薬物が誘発する回復には何ら作用しないと示されている。
【０００６】
複数の選択的ＫＯＰ−ｒアンタゴニスト（アゴニストの効能および完全遮断を伴わない）は現在まで同定されているものの、バイアスＫＯＰ−ｒアゴニストにシグナル伝達する、選択的パーシャルまたは特異的に有効なＧタンパク質／ベータ−アレスチンは、薬物中毒の動物モデルにおいて試験されたと過去に報告されていない。
【０００７】
慢性掻痒症は６週間を超えて持続する掻痒として定義されている。これには多くの要因があり、クオリティ・オブ・ライフを著しく低下させることと関連している。慢性掻痒症は、いくつかの皮膚疾患（例えば、アトピー性湿疹、乾癬、扁平苔癬および疥癬）を特徴とするが、種々の非皮膚障害をも引き起こす。慢性掻痒症の原因は、４つの主要グループへと大まかに分類される。これは皮膚的原因、全身性原因（例えば胆汁鬱滞、慢性腎臓疾患、骨髄増殖性疾患、甲状腺機能亢進症）、神経障害性原因（例えば、背部錯感覚症［上部背中の特徴的な掻痒］および腕橈骨掻痒症［おそらくは脊髄神経インピンジメントにより生じる腕部の特徴的な掻痒］）および心因性原因である。ナルフラフィン（ＴＲＫ−８２０）といったカッパアゴニストは、マウスモデルにてクロロキンにより誘発された引っ掻きを除去することが示されている［Ｉｎａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｗａｎ  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５０２，２３３−２３７（２００４）を参照されたい］。したがって、ＫＯＰ−ｒアゴニストは慢性掻痒症の治療に有用であると期待されている。
【０００８】
カッパアゴニストは、広範な内臓性疼痛モデルにおいて強力な鎮痛作用を発揮する。この作用は、末梢に配置されたＫ受容体にて介在され、場合によると一次感覚求心性神経の末梢神経終末に配置されたナトリウムチャネルにて追加の非オピオイド作用によって介在される。炎症が存在することで内臓性疼痛におけるＫアゴニストの鎮痛効果は増大される。したがって、疼痛および炎症の治療には、ＫＯＰ−ｒアゴニストは有用であると期待されている。
【０００９】
近年の研究では、カッパフルアゴニストは場合によっては躁病に有用であり、カッパパーシャルアゴニストは、気分の安定化に有用であると見いだすことができることを提言している。ただし、現在利用可能な薬剤は一部好ましくない特性を有している。改善された薬物様特性を有するカッパ選択アゴニストの開発により、気分を調整する薬物を提供することができる。
【発明の概要】
【００１０】
１−フェニルアセチル−８−アミノヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジン誘導体は、特異なアゴニスト作用を有するＫＯＰ−ｒリガンドであり、リガンドをコカインならびに他の覚醒剤およびアルコールによる依存症の治療に有用とすることが現在判明している。これらはまた、掻痒症、疼痛、炎症および気分障害を治療するのに有用である。
【００１１】
一態様では、本発明は式Ｉの化合物
【化１】
2021505671.tif 000003
に関し、式中、
Ｒ１は、水素、（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビル、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルおよび−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８は、（１）Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ８のうち少なくとも１つは水素以外でなければならず、かつ（２）Ｒ２またはＲ４がフッ素である場合、フェニル上の残りの置換基のうち少なくとも１つが、水素以外でなければならないという条件で、水素、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ニトロ、−ＳＯ３Ｈおよび−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６から独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルから選択され、任意選択的にはフルオロで置換されているか、またはそれらを付加している窒素と一緒にされ、Ｒ５およびＲ６が、５、６または７員の非芳香族複素環を形成し、任意選択的にはこれがフルオロまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換され得る。
【００１２】
別の態様では、本発明はカッパオピオイド受容体を活性化するための方法に関する。該方法は、カッパオピオイド受容体と、本明細書で記載したような化合物とを、接触させることを含む。
【００１３】
別の態様では、本発明は中毒症、特にコカイン中毒症を治療するための方法に関する。該方法は、本明細書で記載したような化合物を患者に投与することを含む。
【００１４】
別の態様では、本発明は気分障害を治療するための方法に関する。該方法は、本明細書で記載したような化合物を患者に投与することを含む。
【００１５】
別の態様では、本発明は掻痒症を治療するための方法に関する。該方法は、本明細書で記載したような化合物を患者に投与することを含む。
【００１６】
別の態様では、本発明は疼痛を治療するための方法に関する。該方法は、本明細書で記載したような化合物を患者に投与することを含む。
【００１７】
別の態様では、本発明は炎症を治療するための方法に関する。該方法は、本明細書で記載したような化合物を患者に投与することを含む。
【００１８】
別の態様では、本発明は薬学的に許容される担体および本明細書で記載したような化合物を含む薬学的組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【００１９】
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物：
【化２】
2021505671.tif 000004
に関する。
【００２０】
一部の実施形態では、Ｒ１は水素である。一部の実施形態では、Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ７）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は（Ｃ５−Ｃ７）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ７）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１はベンジルである。一部の実施形態では、Ｒ１は（Ｃ３−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ２Ｒ１０であり、式中、Ｒ１０は（Ｃ４−Ｃ６）炭素環である。
【００２１】
一部の実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。
【００２２】
一部の実施形態では、Ｒ２は水素である。一部の実施形態では、Ｒ２はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｒ２は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２はニトロである。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＳＯ３Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ２は−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である。一部の実施形態では、Ｒ２は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２はクロロである。一部の実施形態では、Ｒ２はフルオロである。一部の実施形態では、Ｒ２はトリフルオロメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２はフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。
【００２３】
一部の実施形態では、Ｒ３は水素である。一部の実施形態では、Ｒ３はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｒ３は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はニトロである。一部の実施形態では、Ｒ３は−ＳＯ３Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ３は−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である。一部の実施形態では、Ｒ３は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はクロロである。一部の実施形態では、Ｒ３はフルオロである。一部の実施形態では、Ｒ３はトリフルオロメチルである。一部の実施形態では、Ｒ３はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ３はフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。
【００２４】
一部の実施形態では、Ｒ４は水素である。一部の実施形態では、Ｒ４はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｒ４は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４はニトロである。一部の実施形態では、Ｒ４は−ＳＯ３Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ４は−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である。一部の実施形態では、Ｒ４は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４はクロロである。一部の実施形態では、Ｒ４はフルオロである。一部の実施形態では、Ｒ４はトリフルオロメチルである。一部の実施形態では、Ｒ４はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ４はフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。
【００２５】
一部の実施形態では、Ｒ５は（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ５はフルオロ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ５は（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ５はメチルである。
【００２６】
一部の実施形態では、Ｒ６は（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ６はフルオロ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ６は（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ６はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ６はシクロプロピルメチルである。
【００２７】
一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、５員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、６員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、７員の非芳香族複素環を形成する。
【００２８】
一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換されている５員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換されている６員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換されている７員の非芳香族複素環を形成する。
【００２９】
一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されている５員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されている６員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されている７員の非芳香族複素環を形成する。
【００３０】
一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換され得る５員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換され得る６員の非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換され得る７員の非芳香族複素環を形成する。
【００３１】
一部の実施形態では、Ｒ５およびＲ６は、それらを付加している窒素と一緒にされ、ピロリジン環を形成する。
【００３２】
一部の実施形態では、−ＮＲ５Ｒ６は
【化３】
2021505671.tif 000005
であり、かつＲ７は水素であり、その他にはＲ７はフルオロである。またその他には、Ｒ７は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。
【００３３】
一部の実施形態では、Ｒ８は水素である。一部の実施形態では、Ｒ８はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ８はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ８はニトロである。一部の実施形態では、Ｒ８は−ＳＯ３Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ８は−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である。
【００３４】
要約すると、本発明は以下に関する。
［１］．式Ｉの化合物。
［２］．Ｒ１が水素である、上記［１］に記載の化合物。
［３］．Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［４］．Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ７）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［５］．Ｒ１が（Ｃ５−Ｃ７）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［６］．Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ７）アルキルである、上記［１］に記載の化合物。
［７］．Ｒ１がベンジルである、上記［１］に記載の化合物。
［８］．Ｒ１が（Ｃ３−Ｃ４）アルキルである、上記［１］に記載の化合物。
［９］．Ｒ１がメチルである、上記［１］に記載の化合物。
［１０］．Ｒ１が−ＣＨ２Ｒ１０であり、Ｒ１０が（Ｃ４−Ｃ６）炭素環である、上記［１］に記載の化合物。
［１１］．Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１２］．Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１３］．Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１４］．Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１５］．Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１６］．Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］に記載の化合物。
［１７］．Ｒ２が水素である、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［１８］．Ｒ２がハロゲンである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［１９］．Ｒ２が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２０］．Ｒ２がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２１］．Ｒ２がニトロである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２２］．Ｒ２が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２３］．Ｒ２が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２４］．Ｒ２が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２５］．Ｒ２がクロロである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２６］．Ｒ２がフルオロである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２７］．Ｒ２がトリフルオロメチルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２８］．Ｒ２がメチルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２９］．Ｒ２がフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［３０］．Ｒ３が水素である、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３１］．Ｒ３がハロゲンである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３２］．Ｒ３が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３３］．Ｒ３がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３４］．Ｒ３がニトロである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３５］．Ｒ３が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３６］．Ｒ３が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３７］．Ｒ３が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３８］．Ｒ３がクロロである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３９］．Ｒ３がフルオロである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４０］．Ｒ３がトリフルオロメチルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４１］．Ｒ３がメチルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４２］．Ｒ３がフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４３］．Ｒ４が水素である、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４４］．Ｒ４がハロゲンである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４５］．Ｒ４が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４６］．Ｒ４がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４７］．Ｒ４がニトロである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４８］．Ｒ４が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４９］．Ｒ４が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５０］．Ｒ４が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５１］．Ｒ４がクロロである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５２］．Ｒ４がフルオロである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５３］．Ｒ４がトリフルオロメチルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５４］．Ｒ４がメチルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５５］．Ｒ４がフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５６］．Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［５７］．Ｒ５がフルオロ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［５８］．Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［５９］．Ｒ５がメチルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６０］．Ｒ６が（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６１］．Ｒ５がフルオロ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６２］．Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６３］．Ｒ５がメチルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６４］．Ｒ５がシクロプロピルメチルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６５］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６６］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６７］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６８］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換された、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６９］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換された、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７０］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換された、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７１］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７２］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７３］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７４］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７５］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７６］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７７］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、ピロリジン環を形成する、上記［１］〜［５５］、［６５］、［６８］、［７１］および［７４］のいずれかに記載の化合物。
［７８］．−ＮＲ５Ｒ６が
【化４】
2021505671.tif 000006
であり、Ｒ７が水素である、上記［１］〜［５５］、［６５］および［７７］のいずれかに記載の化合物。
［７９］．−ＮＲ５Ｒ６が
【化５】
2021505671.tif 000007
であり、Ｒ７がフッ素である、上記［１］〜［５５］、［６５］、［６８］および［７７］のいずれかによる化合物。
［８０］．−ＮＲ５Ｒ６が
【化６】
2021505671.tif 000008
であり、Ｒ７が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［５５］、［６５］、［７１］および［７７］のいずれかに記載の化合物。
［８１］．Ｒ８が水素である、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８２］．Ｒ８がハロゲンである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８３］．Ｒ８が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８４］．Ｒ８がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８５］．Ｒ８がニトロである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８６］．Ｒ８が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８７］．Ｒ８が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
【００３５】
本明細書を通じて、用語および置換基はその定義を保持している。
【００３６】
Ｃ１−Ｃ１０炭化水素には、アルキル、シクロアルキル、ポリシクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびこれらの組合せが挙げられる。例としては、ベンジル、フェネチル、シクロヘキシルメチル、アダマンチル、カンホリルおよびナフチレチルが挙げられる。ヒドロカルビルは、単に要素的な構成成分として水素および炭素から構成される任意の置換基を指す。脂肪族炭化水素は、芳香族ではない炭化水素である。それらは飽和または不飽和、環式、直鎖または分枝鎖であってよい。脂肪族炭化水素の例としては、イソプロピル、２−ブテニル、２−ブチニル、シクロペンチル、ノルボルニルなどが挙げられる。芳香族炭化水素には、ベンゼン（フェニル）、ナフタレン（ナフチル）、アントラセンが挙げられる。
【００３７】
特段指定しない限り、アルキル（またはアルキレン）は、直鎖または分枝鎖飽和炭化水素構造およびこれらの組合せを含むよう意図されている。アルキルは、１〜２０個の炭素原子からなるアルキル基を指し、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１〜６個の炭素原子からなるアルキル基を指す。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルなどが挙げられる。
【００３８】
シクロアルキルは炭化水素の一部分であり、３〜８個の炭素原子からなる環式炭化水素基を含む。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、ノルボルニルなどが挙げられる。
【００３９】
特段指定しない限り、用語「炭素環」は、環の原子が酸化状態である任意のものを除いては全て炭素であるような環系を含むよう意図されている。したがって、（Ｃ３−Ｃ１０）炭素環とは、シクロプロパン、ベンゼン、シクロヘキセンといった系を含む、非芳香族系と芳香族系の両方を指し、（Ｃ８−Ｃ１２）炭素多環とは、ノルボルナン、デカリン、インダン、ナフタレンなどの系を指す。炭素環は、特に限定されない限り、単環、二環および多環を指す。
【００４０】
複素環は、１〜４個の炭素が、Ｎ、ＯおよびＳから成る群から選択されるヘテロ原子によって置換されている脂肪族または芳香族炭素環残基を意味する。窒素および硫黄ヘテロ原子は、任意選択的には酸化されてよく、窒素ヘテロ原子は任意選択的に４級化されてよい。特段指定しない限り、複素環は非芳香族（ヘテロ脂肪族）または芳香族（ヘテロアリール）であってよい。複素環の例としては、ピロリジン、ピラゾール、ピロール、インドール、キノリン、イソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、ベンゾフラン、ベンゾジオキサン、ベンゾジオゾール（一般的には、置換基として生じる場合にはメチレンジオキシフェニルと称される）、テトラゾール、モルホリン、チアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、チオフェン、フラン、オキサゾール、オキサゾリン、イソオキサゾール、ジオキサン、テトラヒドロフランなどが挙げられる。ヘテロシクリル残基の例としては、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、イミダゾリジニル、ピラジニル、オキサゾキジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、ベンゾイミダゾリル、チアジアゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、チエニル（歴史的に見るとチオフェニルとも呼ばれる）、ベンゾチエニル、チアモルホリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリルおよびテトラヒドロキノリニルが挙げられる。
【００４１】
ヒドロカルビルオキシは、酸素を介し、親構造に付加している１個〜２０個の炭素原子から成る基を指し、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１〜６個の炭素原子を指す。アルコキシは、ヒドロカルビルオキシの一部分であり、直鎖または分枝鎖構成の基を含む。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシなどが含まれる。低級アルコキシは、１〜４個の炭素を含有する基を指す。用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。
【００４２】
特段指定しない限り、アシルはホルミルを指し、直鎖、分枝鎖、環式構成、飽和、不飽和および芳香族およびこれらの組合せであり、カルボニルの官能化を介して親構造に付加している、１、２、３、４、５、６、７および８個の炭素原子の基を指す。例としては、アセチル、ベンゾイル、プロピオニル、イソブチリルなどが挙げられる。低級アシルは、１〜４個の炭素を含有する基を指す。
【００４３】
本明細書で使用される場合、用語「任意選択的に置換された」は、「非置換または置換された」と同義で使用されてよい。用語「置換された」は、特定のラジカルを伴う特定基中の１個以上の水素原子を置換することを指す。例えば、置換アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリルなどは、アルキル、アリール、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを指す。この場合、各残基中の１個以上のＨ原子が、ハロゲン、ハロアルキル、アルキル、アシル、アルコキシアルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルボニル、フェニル、ヘテロアリール、ベンゼンスルホニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ハロアルコキシ、オキサアルキル、カルボキシ、アルコキシカルボニル［−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル］、アルコキシカルボニルアミノ［ＨＮＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル］、アミノカルボニル（カルボキサミドとしても知られている）［−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］、アルキルアミノカルボニル［−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−アルキル］、シアノ、アセトキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、（アルキル）（アリール）アミノアルキル、アルキルアミノアルキル（シクロアルキルアミノアルキルを含む）、ジアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルコキシ、ヘテロシクリルアルコキシ、メルカプト、アルキルチオ、スルホキシド、スルホン、スルホニルアミノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノ、アミジノ、アリール、ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、フェノキシ、ベンジルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシイミノ、アルコキシイミノ、オキサアルキル、アミノスルホニル、トリチル、アミジノ、グアニジノ、ウレイド、ベンジルオキシフェニルおよびベンジルオキシで置換される。一実施形態では、１、２または３個の水素原子は、特定のラジカルで置換される。アルキルおよびシクロアルキルの場合、３個超の水素原子は、フッ素で置換可能である。実際は、利用可能な水素原子は全てフッ素で置換可能である。
【００４４】
置換基Ｒｎは、一般的には導入される場合に定義され、本明細書および全ての独立請求項を通してその定義を保持する。
【００４５】
化合物の調製には、種々の化学基の保護および脱保護が含まれ得る。保護および脱保護の必要性および適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。前述の目的に適する基は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）中およびＭａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，２００１中のＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ［Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９］といった化学分野における標準的なテキストで議論されている。
【００４６】
本明細書に記載の化合物は３個の不斉中心を含有し、そのためエナンチオマー、ジアステレオマーおよび（Ｒ）−または（Ｓ）−として絶対立体化学という用語で定義できる他の立体異性体形態が生じる。本発明は、ラセミ化合物、光学的に純粋な形態および中間混合物といった考えられるこうした異性体全てを含むように意図されている。光学的に活性のある異性体は、ホモキラルシントンまたはホモキラル試薬を用いて調製されるか、キラルクロマトグラフィーといった従来技術を使用して光学的に分割してよい。互変体形態が含まれることが意図されている。本明細書で使用されるラセミ体、アンビスケールミックおよびスケールミックまたは鏡像異性的に純粋な化合物を図示したものは、Ｍａｅｈｒ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄ．６２，１１４−１２０（１９８５）から抜粋されており、これは単純で、単結合線は結合性のみを知らせ、立体化学的関係を知らせるものではない。実線および破線による楔形は、キラル要素の絶対配置を示すために使用される。波線は、それが表す結合が引き起こし得る任意の立体化学的関係を否定することを明確に示している。太い実線および破線は、相対配置を示すが絶対配置を意味するわけではない位置記述子であり、楔形の輪郭および点線または破線は、中間絶対配置である鏡像異性的に純粋な化合物を意味する。鏡像異性的に純粋とは、８０より大きい鏡像体過剰率を意味し、好ましくは９０より大きい鏡像体過剰率を意味する。
【００４７】
例えば、本発明の化合物を表す一般的構造：
【化７】
2021505671.tif 000009
は、３個の不斉中心（アスタリスクが記載されている）を含有する。一実施形態では、ジアステレオマーの相対立体化学は、
【化８】
2021505671.tif 000010
のように表され得る。
この表示は、中のオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジンがトランスであり、−ＮＲ５Ｒ６が環接合において隣接した水素に対してシスである該物質が、異性体の混合物［（４ａＳ，８Ｒ，８ａＲ）−８−シクロペンチル−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジンおよび（４ａＲ，８Ｓ，８ａＳ）−８−シクロペンチル−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｂ］ピラジン］であることを示す。エナンチオマーの混合比は、約１：１（ラセミ体）〜約９０：１０（８０％の鏡像体過剰率）で変化し得る。
【００４８】
該表示：
【化９】
2021505671.tif 000011
は相対立体化学が示されているが、絶対立体化学は未知である単一のエナンチオマーを示す。すなわち、実質的に純粋な単一のエナンチオマー（例えば、約８０％の鏡像体過剰率〜９９．９９％の鏡像体過剰率）のように各ジアステレオマー的鏡像であり得る。
【００４９】
エナンチオマーの絶対立体化学は、
【化１０】
2021505671.tif 000012
として表わされている。
この図による表示は、示されているエナンチオマーがその鏡像よりも優位であることを示す。この場合、示されたエナンチオマーの鏡像体過剰率（ｅ．ｅ）は、約８０％以上（例えば８０％〜９９．９９％）である。
【００５０】
本明細書で使用される場合、用語「治療」または「治療する」または「和らげる」または「緩和する」は、治療的な利益および／または予防的な利益を含むがこれに限定されない、有益または所望の結果を得るためのアプローチを指す。治療的な利益とは、治療されている基礎的な障害を根絶または回復させることを意味する。更に治療的利益は、患者が依然として基礎的な障害に悩まされ得るにも関わらず、患者において改善が観察されるよう、基礎的な障害に関連する１種以上の生理学的システムの根絶または回復により達成される。
【００５１】
本明細書で使用される場合、当業者により理解されるように、「化合物」といった記載は、特段更に制限されない限りその化合物の塩を含むよう意図されている。詳細な実施形態では、用語「式の化合物」は、該化合物または薬学的に許容されるその塩を指す。
【００５２】
用語「薬学的に許容される塩」は、無機酸および塩基ならびに有機酸および塩基を含む、薬学的に許容される無毒な酸または塩基から調製された塩を指す。本発明の化合物が、大半の場合にはそうであるように塩基性である場合、塩は無機酸および有機酸を含む薬学的に許容される無毒な酸から調製されてよい。本発明の化合物のため、適切な薬学的に許容される酸付加塩には、酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸（ベシル酸）、安息香酸、ホウ酸、酪酸、ショウノウ酸、カンファースルホン酸、炭酸、クエン酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、エチレンジアミン四酢酸、ギ酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、硝酸、オレイン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、ピバル酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、テオクラチック酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。化合物が酸性官能基（例えば、−ＳＯ３Ｈ）を含有する場合、本発明の化合物のため、適切な薬学的に許容される塩基付加塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から作製される金属塩またはリジン、アルギニン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、クロリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから作製される有機塩が挙げられるが、これに限定されない。更なる薬学的に許容される塩には、適切な場合、１〜２０個の炭素原子を有するアルキルに付加された、無毒性のアンモニウムカチオンおよびカルボン酸アニオン、スルホン酸アニオン、ホスホン酸アニオンが挙げられる。
【００５３】
更なる態様によれば、本発明は、１種以上の薬学的なその担体および任意選択的には１種以上の他の治療成分と一緒に、上記で開示された化合物または薬学的に許容されるその塩を含む薬学的組成物もまた、本明細書で提供されている。担体は、製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに有毒ではないという意味で「許容できる」ものでなければならない。
【００５４】
製剤には、経口、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内および関節内を含む）、直腸および局所（皮膚、頬側、舌下および眼を含む）投与に適切なものが挙げられる。最も適切な経路は、レシピエントの状態および障害によって変化してよい。製剤は、簡便なことには単位投与形態で提供されてよく、薬学技術分野で周知の任意の方法により調製されてよい。方法には全て、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩（「活性成分」）と、１種以上の補助成分を構成している担体とを、会合状態にする工程が含まれる。一般には、製剤は、活性成分と、液体担体または微細に分割された固体担体またはそれら両方とを会合させるように均一または均質状態にし、次いで必要であれば、生成物を望ましい製剤へと形成することで調製される。
【００５５】
経口投与に適切な本発明の製剤は、規定量の活性成分をそれぞれ含有するカプセル、カシェ剤または錠剤といった別個の単位、粉末または顆粒、水性の液体もしくは非水性の液体の溶液もしくは懸濁液または水中油型液体の懸濁液もしくは油中水型液体の懸濁液として存在してよい。活性成分は丸剤、舐剤またはペーストとして存在してよい。
【００５６】
錠剤は、圧縮または成形で製造されてよく、任意選択的には１種以上の補助成分を伴う。圧縮錠剤は、任意選択的には、結合剤、潤滑油、不活性希釈剤、潤滑剤、表面活性剤または分散剤と混合される粉末または顆粒といった流動性の高い形態の活性成分を、適切な機械で圧縮することにより調製されてよい。成形された錠剤は、不活性の液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を、適切な機械で成形することにより製造されてよい。錠剤は、任意選択的にはコーティングされるか溝がついていてよく、中の活性成分の徐放を維持、遅延または制限するように処方されてよい。
【００５７】
非経口投与用の製剤には、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬を含有できる水性および非水性の滅菌済注射用溶液ならびに製剤を対象レシピエントの血液と等張とする溶質が挙げられる。非経口投与用の製剤にはまた、水性および非水性の滅菌済懸濁液が挙げられ、これには懸濁剤および増粘剤を含むことができる。製剤は単位量である複数容器で提供されてよい。例えば密封されたアンプルおよびバイアルであり、例えば生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）など、使用直前に滅菌済液体担体の添加のみが必要となる、フリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてよい。即時注射用溶液および懸濁液を、滅菌済の粉末、顆粒および上記記載の種類の錠剤から調製してよい。
【００５８】
一般には、式Ｉの化合物は、以下に記載されるように調製され得る。
【化１１】
2021505671.tif 000013
【００５９】
中間体２の調製
【化１２】
2021505671.tif 000014
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中、２，５−ジヒドロフラン（５０．０ｇ、７１３ｍｍｏｌ、５４ｍＬ、１当量）溶液およびジクロロメタン（ＤＣＭ）（２００ｍＬ）を、オゾン（１５Ｐｓｉ）下にて−７８℃で２時間撹拌させた。該溶液に、ジメチルスルフィド（ＤＭＳ）（１３３ｇ、２．１４ｍｏｌ、１５６ｍＬ、３当量）を添加した。該溶液を２５℃で１４時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、２−（２−オキソエトキシ）アセトアルデヒドを得た。追加の精製を行うことなくこの物質を使用した。
【００６０】
中間体３の調製
【化１３】
2021505671.tif 000015
ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中、２−（２−オキソエトキシ）アセトアルデヒド（７０．０ｇ、６８６ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、ニトロメタン（６５．７ｇ、１．０８ｍｏｌ、５８．２ｍＬ、１．５７当量）およびＫ２ＣＯ３（１０４ｇ、７５４ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。次いで、得られた溶液を０℃で３時間撹拌させた。該溶液を２５ｏＣに温め、次いで２５℃で１３時間撹拌させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒｆ＝０．６）は、中間体２が完全に消費されたことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、４−ニトロテトラヒドロピラン−３，５−ジオールを黄色の固体として得た。
【００６１】
中間体４の調製
【化１４】
2021505671.tif 000016
Ｈ２Ｏ（１１０ｍＬ）中、４−ニトロテトラヒドロピラン−３，５−ジオール（１５．０ｇ、９２ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、ベンジルアミン（ＢｎＮＨ２）（１９．７ｇ、１８３．９ｍｍｏｌ、２０．１ｍＬ、２当量）を添加した。得られた溶液を４０℃で１６時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｎ３，Ｎ５−ジベンジル−４−ニトロ−テトラヒドロピラン−３，５−ジアミンを黄色の油として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【００６２】
中間体５の調製
【化１５】
2021505671.tif 000017
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中、Ｎ３，Ｎ５−ジベンジル−４−ニトロ−テトラヒドロピラン−３，５−ジアミン（５．００ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、ラネーＮｉ（１．２５ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。溶液をＨ２（４５Ｐｓｉ）下にて２５℃で１６時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、Ｎ３，Ｎ５−ジベンジルテトラヒドロピラン−３，４，５−トリアミンを黄色の油として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．３６−７．１９（１０Ｈ，ｍ），３．９１−３．７８（２Ｈ，ｍ），３．７８−３．７０（２Ｈ，ｍ），３．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ），２．８８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ），２．２９−１．９０（６Ｈ，ｍ）．ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１２．３（Ｍ＋Ｈ）．
【００６３】
中間体６の調製
【化１６】
2021505671.tif 000018
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中、Ｎ３，Ｎ５−ジベンジルテトラヒドロピラン−３，４，５−トリアミン（３．１０ｇ、９．９５ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、シュウ酸ジメチル（１．１７ｇ、９．９５ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。得られた溶液を６６℃で１６時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、真空にて乾燥させ、４−ベンジル−８−（ベンジルアミノ）−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオンを白色の固体として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ＝３６６．３（Ｍ＋Ｈ）．
【００６４】
中間体７の調製
【化１７】
2021505671.tif 000019
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中、４−ベンジル−８−（ベンジルアミノ）−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオン（２．７０ｇ、７．３９ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１．３５ｇ）およびギ酸アンモニウム（４．６６ｇ、７３．９ｍｍｏｌ、１０当量）を添加した。該溶液を６５℃で３時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、８−アミノ−４−ベンジル−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオンを白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）：δ  ７．３９−７．３３（２Ｈ，ｍ），７．３２−７．２４（３Ｈ，ｍ），４．９５−４．８９（２Ｈ，ｍ），４．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ），４．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，１０．９Ｈｚ），３．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．２Ｈｚ），３．６９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．３，１０．７Ｈｚ），３．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），３．２９−３．２１（１Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），２．８４−２．７５（１Ｈ，ｍ）．ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７６．３（Ｍ＋Ｈ）．
【００６５】
中間体８の調製
【化１８】
2021505671.tif 000020
ＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）中、８−アミノ−４−ベンジル−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオン（２．００ｇ、７．２６ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、ＮａＨＣＯ３（４．１５ｇ、４９．４ｍｍｏｌ、１．９２ｍＬ、６．８当量）および１，４−ジヨードブタン（９．００ｇ、２９．０ｍｍｏｌ、３．８１ｍＬ、４当量）を添加した。該溶液を８２℃で１８時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオンを白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）：δ  ７．３９−７．３３（２Ｈ，ｍ），７．３２−７．２４（３Ｈ，ｍ），４．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），４．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），４．１４−４．００（２Ｈ，ｍ），３．７９−３．６７（２Ｈ，ｍ），３．４５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），３．２８−３．２３（１Ｈ，ｍ），２．９７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．４，１０．５Ｈｚ），２．８４−２．７６（２Ｈ，ｍ），２．７５−２．６７（２Ｈ，ｍ），１．８３−１．７１（４Ｈ，ｍ）．ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３０．０（Ｍ＋Ｈ）．
【００６６】
中間体９の調製
【化１９】
2021505671.tif 000021
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１．１９ｇ、８．８９ｍｍｏｌ、４８６μＬ、１．８３当量）溶液に、ＬｉＡｌＨ４（１．０３ｇ、２７．０ｍｍｏｌ、５．５６当量）を０℃で添加した。溶液を２５℃で３０分間撹拌させた。この溶液に、４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオン（１．６０ｇ、４．８６ｍｍｏｌ、１当量）を０℃で添加した。溶液を０℃で１時間、次いで２５℃で３０分間撹拌させた。この溶液に、ｐＨ＝８になるまでＮａＯＨ（２Ｍ）を添加した。該溶液をエチルアシデテート（ｅｔｈｙｌ  ａｃｄｅｔａｔｅ）（３×３０ｍＬ）で抽出した。次いで、有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し真空にて濃縮させ、４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−１，２，３，４ａ，５，７，８，８ａ−オクタヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジンを黄色の油として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０２．３（Ｍ＋Ｈ）．
【００６７】
ＲＯＣＫ−５−Ａ５３の調製
【化２０】
2021505671.tif 000022
ピリジン（２０ｍＬ）中、２−（３，４−ジクロロフェニル）酢酸（５９１ｍｇ、２．８８ｍｍｏｌ、１．１当量）溶液に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（７５４ｍｇ、３．９３ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。得られた溶液を２５℃で３０分間撹拌させた。この溶液に、４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−１，２，３，４ａ，５，７，８，８ａ−オクタヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン（７９０ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、得られた溶液を２５℃で１５．５時間撹拌させた。２５℃で５ｍＬのＨ２Ｏを添加することにより、反応混合物を急冷した。混合物を４０ｍＬのＨ２Ｏで希釈し、６０ｍＬの酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し減圧下で濃縮させ、１−［４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−３，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ（３，４−ｂ）ピラジン−１−イル］−２−（３，４−ジクロロフェニル）エタノンを黄色の油として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４８８．０（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４，ＴＦＡ  ｓａｌｔ）δ＝７．５０−７．２８（ｍ，７Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９５−４．８７（ｍ，１Ｈ），４．８４−４．７６（ｍ，１Ｈ），４．５０（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１２−４．０２（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．７６（ｍ，３Ｈ），３．６７−３．４４（ｍ，６Ｈ），３．４０−３．３３（ｍ，２Ｈ），３．１６−３．０１（ｍ，１Ｈ），２．８５（ｔｄ，Ｊ＝３．４，１２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４２−２．３２（ｍ，１Ｈ），２．０５（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）
【００６８】
ＲＯＣＫ−５−Ａ２２の調製
【化２１】
2021505671.tif 000023
ＴＨＦ（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中、パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）（１．４２ｇ、１０重量％Ｐｄ）溶液に、１−［４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−３，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ（３，４−ｂ）ピラジン−１−イル］−２−（３，４−ジクロロフェニル）エタノン（７１０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、１当量）およびＨＣｌ（３７％、１４．００ｍＬ）を添加した。該溶液を（１バールの）Ｈ２下にて２５℃で４０分間撹拌させた。反応混合物を、４０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を２５℃で添加することで急冷した。混合物を濾過した。該溶液を１５０ｍＬのＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し減圧下で濃縮させ、１−［８−ピロリジン−１−イル−２，３，４，４ａ，５，７，８，８ａ−オクタヒドロピラノ（３，４−ｂ）ピラジン−１−イル］−２−（３，４−ジクロロフェニル）エタノンを黄色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）：δ  ７．４８−７．４４（２Ｈ，ｍ），７．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．１，８．２Ｈｚ），４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５，１１．２Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｍ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ），３．９１−３．８０（２Ｈ，ｍ），３．６９（１Ｈ，ｍ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ），３．３５（１Ｈ，ｓ），３．２８−３．１８（２Ｈ，ｍ），３．１８−３．０９（１Ｈ，ｍ），３．０８−２．９０（４Ｈ，ｍ），２．７０（５Ｈ，ｍ），２．１６（１Ｈ，ｓ），１．７２−１．６７（４Ｈ，ｍ）．ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３９８．２（Ｍ＋Ｈ）．
【００６９】
ＲＯＣＫ−５−Ａ２３の調製
【化２２】
2021505671.tif 000024
ＨＣＯＯＨ（２ｍＬ）中、１−［８−ピロリジン−１−イル−２，３，４，４ａ，５，７，８，８ａ−オクタヒドロピラノ（３，４−ｂ）ピラジン−１−イル］−２−（３，４−ジクロロフェニル）エタノン（１００ｍｇ、２５１μｍｏｌ、１当量）溶液に、ＨＣＨＯ（３２６ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ、２９９μＬ、１６当量）を添加した。得られた溶液を８０℃で２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ）（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し減圧下で濃縮させ、１−［４−メチル−８−ピロリジン−１−イル−３，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ（３，４−ｂ）ピラジン−１−イル］−２−（３，４−ジクロロフェニル）エタノンを黄色の油として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ  ８．４９（１Ｈ，ｓ），７．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．３Ｈｚ），４．２３（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．９，１０．９Ｈｚ），４．１０−４．０２（１Ｈ，ｍ），３．８９−３．７５（２Ｈ，ｍ），３．４３−３．３７（３Ｈ，ｍ），３．３７−３．３４（３Ｈ，ｍ），３．２１−３．１５（４Ｈ，ｍ），２．８５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．７，１１．８Ｈｚ），２．４５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．１，１０．０Ｈｚ），２．２２（３Ｈ，ｓ），１．９５−１．８７（４Ｈ，ｍ）．ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１２．１（Ｍ＋Ｈ）．
【００７０】
中間体３Ａ２５の調製
【化２３】
2021505671.tif 000025
ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中、中間体９（２３ｍｇ、７６μｍｏｌ、１当量）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（２３ｍｇ、２２９μｍｏｌ、３２μＬ、３当量）の混合物に、Ｎ２下にて０℃でＤＣＭ（０．５ｍＬ）中、Ａ２５（４７ｍｇ、２２９μｍｏｌ、３当量）溶液を滴下した。混合物を０℃で３０分間撹拌させ、次いで２０℃に温めた。混合物を２０℃で１６時間撹拌させた。混合物を減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００〜２００メッシュシリカゲル、ジクロロメタン：メタノール＝１０／１）で精製し、中間体３Ａ２５を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４７２．２（Ｍ＋Ｈ＋）
【００７１】
ＲＯＣＫ−５−Ａ２５の調製
【化２４】
2021505671.tif 000026
ＴＨＦ（１．５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１．５ｍＬ）中、中間体３Ａ２５（２２ｍｇ、４７μｍｏｌ、１当量）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ、１０重量％Ｐｄ）および濃ＨＣｌ（１．４１ｍＬ）をＮ２下にて添加した。懸濁液を真空下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。混合物をＨ２（１５ｐｓｉ）下にて、２０℃で２０分間撹拌させた。反応混合物を濾過した。濾液をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１ｍＬ）で中和させた。混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮させた。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ×５μｍ、移動相［水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％〜４０％、１２分）で精製した。ＲＯＣＫ−５−Ａ２５を淡黄色の固体として得た。Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ）δ＝７．３２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．３６Ｈｚ，１Ｈ）７．１８−７．２０（ｍ，１Ｈ）７．１４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）７．０４−７．１１（ｍ，１Ｈ）７．０４−７．０４（ｍ，１Ｈ）７．０１−７．０１（ｍ，１Ｈ）４．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）４．１２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．９７Ｈｚ，１Ｈ）３．５７−３．９４（ｍ，５Ｈ）３．１８−３．３９（ｍ，２Ｈ）２．８８−３．１７（ｍ，５Ｈ）２．７５（ｂｒ  ｓ，５Ｈ）１．７２（ｂｒ  ｓ，５Ｈ）．ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３８２．０（Ｍ＋Ｈ＋）
【００７２】
中間体３Ａ２６の調製
【化２５】
2021505671.tif 000027
ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中、Ａ２６（２８ｍｇ、１３９μｍｏｌ、１．２当量）および中間体９（３５ｍｇ、１１６μｍｏｌ、１当量）混合物に、Ｎ２下にて２０℃でベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）（７３ｍｇ、１３９μｍｏｌ、１．２当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１８ｍｇ、１３９μｍｏｌ、２４μＬ、１．２当量）を添加した。混合物を２０℃で１６時間撹拌させた。混合物を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００〜２００メッシュシリカゲル、石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で精製し、中間体３＿Ａ２６を淡黄色の固体として得た。Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ）δ＝７．３２−７．４３（ｍ，２Ｈ）７．０３−７．１２（ｍ，１Ｈ）３．５９−３．７５（ｍ，６Ｈ）３．３６−３．６２（ｍ，４Ｈ）３．２３−３．３５（ｍ，２Ｈ）１．８４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１３．１５Ｈｚ，３Ｈ）１．４５−１．７２（ｍ，１Ｈ）１．４５−１．７２（ｍ，４Ｈ）１．３０−１．４３（ｍ，１Ｈ）１．３０−１．４４（ｍ，１Ｈ）１．２９−１．４４（ｍ，１Ｈ）１．２５−１．２６（ｍ，１Ｈ）０．７８−０．９５（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４８８．２（Ｍ＋Ｈ＋）．
【００７３】
ＲＯＣＫ−５−Ａ２６の調製
【化２６】
2021505671.tif 000028
ＲＯＣＫ−５−Ａ４０スキーム
【化２７】
2021505671.tif 000029
３−Ａ４０の調製
【化２８】
2021505671.tif 000030
中間体９（５０ｍｇ、１６６μｍｏｌ）およびＴＥＡ（１６８ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、２３１μＬ）をＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶解し、これに続いて酸塩化物（９０．８９ｍｇ、４９７．６４μｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をＮ２下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ（２Ｎ、０．５ｍＬ）溶液でｐＨ５に調整した。水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で洗浄し、次いで、ＮａＨＣＯ３水溶液を使用してｐＨを８に調整した。水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。該物質をそのまま次の工程にて使用した。
【００７４】
ＲＯＣＫ−５−５Ａ４０の調製
【化２９】
2021505671.tif 000031
３−Ａ４０（５０ｍｇ、１１２μｍｏｌ）溶液、Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ、１０重量％Ｐｄ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、濃ＨＣｌ（０．３ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０ｍＬ）を、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨを８に調整した。混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８、１００×３０  ５μ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１％〜３５％、１０分）で精製した。化合物ＲＯＣＫ−５−Ａ４０を白色の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ＝７．１５−７．０４（ｍ，３Ｈ），４．７４（ｄｔ，Ｊ＝４．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２９−４．０８（ｍ，３Ｈ），３．９２−３．９１（ｍ，１Ｈ），３．９２−３．８３（ｍ，１Ｈ），３．８４−３．７４（ｍ，１Ｈ），３．８４−３．７３（ｍ，１Ｈ），３．９１−３．７１（ｍ，３Ｈ），３．７０−３．６０（ｍ，３Ｈ），３．５８−３．４７（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．１，９．４，１３．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，６Ｈ），２．０２（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）：３５８．２．
【００７５】
ＲＯＣＫ−５−Ａ４４の調製
【化３０】
2021505671.tif 000032
Ｒｏｃｋ−５−Ａ２２（３０ｍｇ、７５μｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロリド（１７ｍｇ、１５１ｕｍｏｌ、１２μＬ）をＤＣＭ（３ｍＬ）中に吸収させた。トリエチルアミン（３８ｍｇ、３７７μｍｏｌ、５２ｕＬ）を反応混合物に添加した。反応容器を脱気し、Ｎ２でパージした（３回）。混合物をＮ２雰囲気下にて２０℃で２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ  ５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、％ＡＣＮ：１８％〜３８％、１０分）で精製した。ＲＯＣＫ−５−Ａ４４を白色の固体として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ７．５１−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝１．９，８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３７−４．２９（ｍ，２Ｈ），４．２８−４．１６（ｍ，２Ｈ），３．９４−３．８７（ｍ，４Ｈ），３．８３−３．７２（ｍ，３Ｈ），３．７０−３．５５（ｍ，３Ｈ），３．４７（ｔｄ，Ｊ＝４．２，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．９４（ｓ，３Ｈ），２．１１−１．８９（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）４７６．１．
【００７６】
表Ａに示されるいくつかの化合物は、スキームＡに示される順序を介し、同様の方法で製造される：
スキームＡ
【化３１】
2021505671.tif 000033
【００７７】
表Ａに示されるいくつかの化合物は、スキームＢに示される順序を介して製造される：
スキームＢ
【化３２】
2021505671.tif 000034
【００７８】
スキームＢ用の実験例
【化３３】
2021505671.tif 000035
アミン９（１ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１当量）およびＴＦＡＡ（１．７４ｇ、８．３ｍｍｏｌ、１．２ｍＬ、２．５当量）をＤＣＭ（２５ｍＬ）中に吸収させた。トリエチルアミン（１．０ｇ、１０ｍｍｏｌ、１．４ｍＬ、３当量）およびＤＭＡＰ（４１ｍｇ、３３０μｍｏｌ、０．１当量）を反応混合物に添加した。混合物を脱気し、Ｎ２でパージした（３回）。得られた混合物をＮ２雰囲気下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨを８に調整した。水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１〜０：１）で精製し、Ｂ１を得た。
【化３４】
2021505671.tif 000036
アミドＢ１（９５０ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、１当量）およびＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ、１０重量％Ｐｄ）を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）およびＨＣｌ（０．８ｍＬ）中に吸収させた。得られた溶液をＨ２（１５ｐｓｉ）下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をＮａＨＣＯ３水溶液（ｐＨ＝８）で塩基性とした。水溶液を３０ｍＬのＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（基本条件：カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．０４％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ勾配：５％〜３５％、１０分）により精製し、Ｂ２を得た。
【化３５】
2021505671.tif 000037
アミンＢ２（７００ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（４６１ｍｇ、４．５６ｍｍｏｌ、６３４μＬ、２当量）をＤＣＭ（２０ｍＬ）中に吸収させた。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ジカルボネート（４９７ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ、５２３μＬ、１当量）を添加し、得られた溶液をＮ２下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、Ｂｏｃ保護アミンＢ３を得た。該物質を次の工程で直接的に使用した。
【化３６】
2021505671.tif 000038
Ｂｏｃ保護アミンＢ３（８００ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ、１当量）およびＫ２ＣＯ３（１．３６ｇ，９．８２ｍｍｏｌ、５当量）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中に吸収させた。得られた混合物をＮ２下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒｆ＝０．５０）で精製し、アミンＢ４を得た。
【化３７】
2021505671.tif 000039
アミンＢ４（１９ｍｇ、１１６μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（２０ｍｇ、１４４μｍｏｌ、１．５当量）、ＥＤＣＩ（２８ｍｇ、１４４μｍｏｌ、１．５当量）およびＤＩＰＥＡ（５０ｍｇ、３８５μｍｏｌ、６７μＬ、４当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解させた。２−（３−シアノフェニル）酢酸（３０ｍｇ、９６μｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物をＮ２下にて２５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：ＵｎｉＳｉｌ  １２０×３０ｍｍ、１０μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：２０％〜５０％、１１分）で精製し、アミドＢ５を得た。
【化３８】
2021505671.tif 000040
アミドＢ５（１７ｍｇ、３７μｍｏｌ、１当量）をジオキサン（１０ｍＬ）中に溶解した。ジオキサン／ＨＣｌ（１０ｍＬ、４．０Ｍ）を添加した。得られた混合物をＮ２下にて２０℃で６時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：５％〜２５％、１０分）で精製し、５Ａ２８をＴＦＡ塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ  ７．７２−７．６１（ｍ，３Ｈ），７．５６−７．５１（ｍ，１Ｈ），４．７０（ｄｔ，Ｊ＝４．４，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｄｄ，Ｊ＝４．５，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３２−４．２１（ｍ，２Ｈ），４．１５（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．６４（ｍ，４Ｈ），３．６０−３．５０（ｍ，３Ｈ），３．３８−３．３４（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）３５５．１．
【００７９】
表Ａは、スキームＡおよびＢによって種々の化合物を作製するために使用された分光学的データおよびシントンを示す。
2021505671.tif 000041
2021505671.tif 000042
2021505671.tif 000043
2021505671.tif 000044
【００８０】
ＲＯＣＫ−５Ａ５２は、スキームＣに示される順序を介して製造される。
スキームＣ
【化３９】
2021505671.tif 000045
ＤＣＭ（３ｍＬ）中、５Ａ２２（１００ｍｇ、２５０μｍｏｌ、１当量）溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１２７ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、１７５μＬ、５当量）、ＤＭＡＰ（３．１ｍｇ、２５μｍｏｌ、０．１当量）およびシクロプロパンスルホニルクロリド（７１ｍｇ、５００μｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物をＮ２下にて３５℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ分取ＯＢＤ  Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、１０ミクロン、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１０％〜７０％、１０分）により精製し、５Ａ２２をオフホワイト色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，４００ＭＨｚ）δ  ７．４８−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝８．２５，２．０２Ｈｚ，１Ｈ），４．３０−４．４５（ｍ，２Ｈ），４．１６−４．２９（ｍ，２Ｈ），３．８８−４．００（ｍ，４Ｈ），３．７４−３．８７（ｍ，３Ｈ），３．４７−３．７１（ｍ，４Ｈ），３．３６−３．４２（ｍ，２Ｈ），２．４３−２．５５（ｍ，１Ｈ），１．８８−２．１６（ｍ，４Ｈ），０．９５−１．１６（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）５０２．１．
【００８１】
ＲＯＣＫ−５Ａ５５および表Ｂに示された化合物を、スキームＤに示されるように製造する：
スキームＤ
【化４０】
2021505671.tif 000046
ＤＣＥ（２ｍＬ）中、５Ａ２２（１０ｍｇ、２５μｍｏｌ、１当量）およびシクロブタンカルバルデヒド（４．２２ｍｇ、５０μｍｏｌ、２当量）溶液に、（ＣＨ３ＣＯＯ）３ＢＨＮａ（１１ｍｇ、５０μｍｏｌ、２．００当量）を添加した。得られた混合物をＮ２下にて２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ分取ＯＢＤ  Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、１０μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１０％〜７０％、１０分）で精製し、５Ａ５５をＴＦＡ塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ＝７．５６−７．４６（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．７，８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄｄ，Ｊ＝４．５，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．１４（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），３．８６−３．７５（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．５８（ｍ，３Ｈ），３．５８−３．４４（ｍ，４Ｈ），３．１５（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝６．５，１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．００−２．８８（ｍ，２Ｈ），２．６９（ｔｄ，Ｊ＝７．５，１５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２１−１．９４（ｍ，７Ｈ），１．９１−１．７５（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）４６６．１．
2021505671.tif 000047
2021505671.tif 000048
【００８２】
ＲＯＣＫ−５Ａ６７をスキームＥに示されるように製造する：
スキームＥ
【化４１】
2021505671.tif 000049
５Ａ２２（５ｍｇ、１２μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（１３ｍｇ、１２５μｍｏｌ、１８μＬ、１０当量）をＤＣＭ（１ｍＬ）中に溶解させた。クロロギ酸メチル（２．４ｍｇ、２５μｍｏｌ、１．９４μＬ、２当量）を添加した。得られた混合物をＮ２下にて２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ、５ミクロン、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１５％〜４５％、１０分）で精製し、５Ａ６７をＴＦＡ塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ）δ＝７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．５９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．２０−４．０４（ｍ，３Ｈ），３．９２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ），３．５７（ｓ，５Ｈ），３．３９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．２２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．０２−２．７９（ｍ，２Ｈ），１．９３（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）４５６．１．
【００８３】
キラル分離による、エナンチオマーＲＯＣＫ−５Ａ４４Ａおよび５Ａ４４Ｂの調製をスキームＦに示す。絶対立体化学は不明である。エナンチオマーは、示された条件下で溶出順序により特徴づけられる。
スキームＦ
【化４２】
2021505671.tif 000050
ラセミ体−５Ａ４４をキラルＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤＨ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ）、移動相［中性−ＩＰＡ］、ＩＰＡ％：４５％〜４５％、１５分）により分離し、５Ａ４４Ａ（ピーク１：保持時間−２．４分）および５Ａ４４Ｂ（ピーク２：保持時間−３．０２分）を得た。
【００８４】
キラル分離による、エナンチオマーＲＯＣＫ−５Ａ５２Ａおよび５Ａ５２Ｂの調製をスキームＧに示す。絶対立体化学は不明である。エナンチオマーは、示された条件下で溶出順序により特徴づけられる。
スキームＧ
【化４３】
2021505671.tif 000051
ラセミ体５Ａ５２をＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ）、移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥｔＯＨ］、ＥｔＯＨ％：３０％〜３０％、７分）により分離し、５Ａ５２Ａ（ピーク１−２．０２分）および５Ａ５２Ｂ（ピーク２−２．３３分）を得た。
【００８５】
キラル分離による、エナンチオマーＲＯＣＫ−５Ａ２４Ａおよび５Ａ２４Ｂの調製をスキームＨに示す。絶対立体化学は不明である。エナンチオマーは、示された条件下で溶出順序により特徴づけられる。
スキームＨ
【化４４】
2021505671.tif 000052
ラセミ体５Ａ２４をＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ）、移動相［中性−ＩＰＡ］、ＩＰＡ％：２４％〜２４％、６分）により分離し、５Ａ２４Ａ（ピーク１：保持時間−１．９３分）および５Ａ２４Ｂ（ピーク２：保持時間−２．２１分）を得た。
【００８６】
キラル分離による、エナンチオマーＲＯＣＫ−５Ａ５３Ａおよび５Ａ５３Ｂの調製をスキームＩに示す。絶対立体化学は不明である。エナンチオマーは、示された条件下で溶出順序により特徴づけられる。
スキームＩ
【化４５】
2021505671.tif 000053
ラセミ体５Ａ５３をＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＪ（２５０ｍｍ×５０ｍｍ、１０μｍ）、移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＩＰＡ］、ＩＰＡ％：４０％〜４０％、６．２分）により分離し、５Ａ５３Ａ（ピーク１−１．５５分）および５Ａ５３Ｂ（ピーク２−１．７３分）を得た。ピーク１（５Ａ５３）を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ、２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、移動相：［水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：５０％〜８０％、１０分）により更に精製された。
【００８７】
キラル分離による、エナンチオマーＲＯＣＫ−５Ａ５５Ａおよび５Ａ５５Ｂの調製をスキームＪに示す。絶対立体化学は不明である。エナンチオマーは、示された条件下で溶出順序により特徴づけられる。
スキームＪ
【化４６】
2021505671.tif 000054
ラセミ体５Ａ５５をＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ）、移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥｔＯＨ］、ＥｔＯＨ％：３８％〜３８％、７分）により分離し、５Ａ５５Ａ（ピーク１−１．９９分）および５Ａ５５Ｂ（ピーク２−２．０８分）を得た。
【００８８】
ＲＯＣＫ−５Ａ５０をスキームＫに示されるように製造する：
スキームＫ
【化４７】
2021505671.tif 000055
【００８９】
スキームＫ用の実験例
【化４８】
2021505671.tif 000056
ＤＣＥ（２０ｍＬ）中、溶液７（５００ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１当量）に、シクロプロパンカルバルデヒド（１２７ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１３５ｕＬ、１当量）を添加した。混合物を脱気し、Ｎ２でパージした（３回）。混合物を、Ｎ２雰囲気下にて２０℃で１２時間撹拌させた。１２時間後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（７７０ｍｇ、３．６３ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物を、Ｎ２雰囲気下にて２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｋ１を得た。
【化４９】
2021505671.tif 000057
ＤＣＥ（１０ｍＬ）中、溶液Ｋ１（３０ｍｇ、９１μｍｏｌ、１当量）に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（５８ｍｇ、２７０μｍｏｌ、３当量）およびパラホルムアルデヒド（１００ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ、３２当量）を添加した。混合物を、Ｎ２雰囲気下にて２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｋ２を得た。
【化５０】
2021505671.tif 000058
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１０５ｍｇ、７８６μｍｏｌ、４３μＬ、２．７当量）溶液に、ＬｉＡｌＨ４（９０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、８．１当量）を０℃で添加した。得られた混合物を２０℃で０．５時間撹拌させた。ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、Ｋ２（１００ｍｇ、２９１μｍｏｌ、１当量）溶液を、０℃で反応混合物に添加した。得られた混合物を０℃（１時間）で撹拌させ、次いで２０℃（６時間）まで温めた。反応混合物を０℃で２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（３０ｍＬ）で急冷した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して残留物を得た。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：８％〜２８％、１０分）で精製し、Ｋ３を得た。
【化５１】
2021505671.tif 000059
アミンＫ３（３９ｍｇ、１９０μｍｏｌ、１．２当量）、ＤＩＰＥＡ（８２ｍｇ、６３４μｍｏｌ、１１０μＬ、４当量）およびＨＡＴＵ（７２ｍｇ、１９０μｍｏｌ、１．２当量）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解させた。２−（３，４−ジクロロフェニル）酢酸（５０ｍｇ、１５９μｍｏｌ、１当量）を添加した。得られた混合物を２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−Ｍｉｃｒｏ  ＵｎｉＳｉｌ  ５−１００  Ｃ１８  ＵＬＴＲＡ、１００×２５０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：２５％〜５５％、１１分）で精製し、アミドＫ４を得た。
【化５２】
2021505671.tif 000060
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ／ＨＣｌ（２ｍＬ、２ｍＬ、０．４ｍＬ）中、Ｋ４（４０ｍｇ、８０μｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ／Ｃ（５．５ｍｇ、８０μｍｏｌ、１０重量％Ｐｄ、１当量）溶液を、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下にて２０℃で６時間撹拌させた。混合物をセライトのパッドを通して濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ、１５０×２５ｍｍ、５ミクロン、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１０％〜４０％、１２分）にて精製し、５Ａ５０を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ＝７．５４−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．３６（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝３．９，１１．６Ｈｚ，２Ｈ），４．３１−４．１６（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝４．８，１１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．６８（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），３．５９−３．４２（ｍ，２Ｈ），３．３６−３．３３（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．１７−３．０６（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），０．７４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），０．４１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）４１２．１．
【００９０】
ＲＯＣＫ−５Ａ５１をスキームＬに示されるように製造する：
スキームＬ
【化５３】
2021505671.tif 000061
【００９１】
スキームＬ用の実験例
【化５４】
2021505671.tif 000062
ＨＣＯＯＨ（２０ｍＬ）中、溶液７（２００ｍｇ、７２６μｍｏｌ、１当量）に、ＨＣＨＯ（１．８９ｇ、２３ｍｍｏｌ、１．７３ｍＬ、３７％純度、３２当量）を添加した。混合物をＮ２雰囲気下にて６０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｌ１を得た。
【化５５】
2021505671.tif 000063
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１５４ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、６３μＬ、２．７当量）溶液に、ＬｉＡｌＨ４（１３２ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ、８．１当量）を０℃で添加した。得られた混合物を２０℃で０．５時間撹拌させた。ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、Ｌ１溶液を０℃で混合物に添加した。混合物を０℃で１時間、次いで２０℃で６時間撹拌させた。反応混合物を０℃で２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（３０ｍＬ）で急冷した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：５％〜２５％、１０分）で精製し、Ｌ２を得た。
【化５６】
2021505671.tif 000064
アミンＬ２（１０７ｍｇ、５２３μｍｏｌ、１．２当量）、ＤＩＰＥＡ（２２５ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ、３０４μＬ、４当量）およびＨＡＴＵ（１９９ｍｇ、５２３μｍｏｌ、１．２当量）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解させた。２−（３，４−ジクロロフェニル）酢酸（１２０ｍｇ、４３６μｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物を２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（基本条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ、１５０×２５ｍｍ、５μＭ、移動相：［水（０．０４％ＮＨ３Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：４５％〜７５％、１０分）にて精製し、Ｌ３を得た。
【化５７】
2021505671.tif 000065
ＴＨＦ／ＨＣｌ／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ０．４ｍＬ／２ｍＬ）中、Ｌ３（１５ｍｇ、３２μｍｏｌ、１当量）およびＰｄ／Ｃ（２ｍｇ、１０重量％Ｐｄ）の溶液を、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下にて２０℃で６時間撹拌させた。反応混合物をセライトのプラグで濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１％〜３０％、１０分）で精製し、５Ａ５０を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ＝７．５３−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｔ，Ｊ＝４．２，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．１８（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９４−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．７９−３．６０（ｍ，３Ｈ），３．５８−３．４４（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．２１（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｂｒ  ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）３７２．１．
【００９２】
本発明の化合物は、以下のスクリーニングで試験することができる。
ＫＯＰ−Ｒ膜に対し結合しているトリチウム標識Ｕ６９，５９３、ＭＯＰ−Ｒ膜に対し結合しているトリチウム標識ＤＡＭＧＯおよびＤＯＰ−Ｒ膜に対し結合しているＤＰＤＰＥ：
カッパ、ミューまたはデルタオピオイド受容体構成体を安定して発現している細胞由来の膜（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｕ２ＯＳ  ｈＯＰＲＫ１、ＣＨＯ−Ｋ１  ｒＯＰＲＭ１およびＣＨＯ−Ｋ１  ＯＰＲＤ１  β−アレスチン細胞株、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用した。細胞を組織培養プレートからかき取り、膜緩衝液（１０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌおよび１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）内でｔｉｓｓｕｅ  ｔｅａｒｏｒホモジナイザを用いて均質化し、４℃で３０分間、２０，０００ｇで遠心分離にかけ、使用まで−８０℃で凍結させた。使用前に、ペレットを結合緩衝液（５０ｍｍのトリス、１００ｍｍのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ダウンス型ホモジナイザを用いて均質化し、１．０ｎＭの適切なトリチウム標識リガンド（それぞれカッパ、ミューまたはデルタ結合に対し［３Ｈ］Ｕ６９，５９３、［３Ｈ］ＤＡＭＧＯまたは［３Ｈ］ＤＰＤＰＥ）および適切な濃度の化合物で５０μｇを、３０℃で６０分間インキュベートした。結合トリチウム標識リガンドを有する膜を、Ｂｒａｎｄｅｌハーベスタを用いてＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂフィルタ紙（Ｂｒａｎｄｅｌ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）上に収集した。結合トリチウム標識リガンドを、４ｍｌのＲｅａｄｙＳａｆｅシンチレーション流体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を添加した後、ＴｒｉＣａｒｂ−２９００ＴＲシンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ、ＵＳＡ）を用いて定量化した。各化合物に対する集計データを、非特異的結合を引いた状態で、化合物の不在下での最大結合へと正規化した。曲線のフィッティングは、ロジスティックシグモイド回帰分析を用いたＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  １７．０ソフトウェアにて行い、ＩＣ５０を測定した。
ＧＴＰガンマＳ
ヒトカッパオピオイド受容体を安定して発現しているＵ２ＯＳ細胞由来の膜を使用した。細胞を組織培養プレートからかき取り、膜緩衝液（１０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌおよび１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）内でｔｉｓｓｕｅ  ｔｅａｒｏｒホモジナイザを用いて均質化し、４℃で３０分間、２０，０００ｇで遠心分離にかけ、使用まで−８０℃で凍結させた。使用前に、ペレットをアッセイ緩衝液（５０ｍｍのトリス、１００ｍｍのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２および１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ダウンス型ホモジナイザを用いて均質化し、５０μｇを、０．１ｎＭの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ、１０ｎＭのＧＤＰおよび適切な濃度のアゴニストで、３０℃で２０分間インキュベートした。阻害を試験するため、全てのサンプルを１００ｎＭのＵ６９，５９３および適切な濃度の化合物でインキュベートした。結合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを有する膜を、Ｂｒａｎｄｅｌハーベスタを用いてＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂフィルタ紙（Ｂｒａｎｄｅｌ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）上に収集した。結合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを、４ｍＬのＲｅａｄｙＳａｆｅシンチレーション流体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を添加した後、ＴｒｉＣａｒｂ−２９００ＴＲシンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ、ＵＳＡ）を用いて定量化した。「無刺激」は、試験した最大投与量である１０，０００ｎＭでは、このアッセイにて刺激がなかったことを示している。ＮＡは該当しないことを示す。各化合物に対して、曲線のフィッティングは、ロジスティックシグモイド回帰分析を用いたＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  １７．０ソフトウェアにて行い、ＥＣ５０および最大パーセントの刺激を測定した。更に、最大パーセントの該試験フルアゴニスト化合物Ｕ６９，５９３による刺激を正規化し、％効能を測定した。
β２−アレスチン
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸから得られたＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを用いて実験を実施した。カッパ、ミューまたはデルタオピオイド受容体構成体を安定して発現している細胞（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｕ２ＯＳ  ｈＯＰＲＫ１、ＣＨＯ−Ｋ１  ｒＯＰＲＭ１およびＣＨＯ−Ｋ１  ＯＰＲＤ１  β−アレスチン細胞株、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）を９６ウェルプレートまたは３８４ウェルプレート内に蒔いた。３７℃で９０分間、化合物で細胞を刺激した。阻害を試験するため、全てのサンプルを１００ｎＭのＵ６９，５９３および適切な濃度の化合物でインキュベートした。次に、細胞をガロクトシダーゼ（ｇａｌｏｃｔｏｓｉｄａｓｅ）基質の存在下にて６０分間インキュベートし、化学発光生成物を得た。Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｎｅｏマイクロプレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ、ＵＳＡ）を用いて化学発光性を測定した。それぞれＫＯＰ−Ｒ、ＭＯＰ−ＲまたはＤＯＰ−Ｒアッセイ向けである３００ｎＭのＵ６９，５９３、１μＭのＤＡＭＧＯまたは１μＭのＤＰＤＰＥの存在下にて、拮抗作用アッセイを同様の方法で行った。「無刺激」は、試験した最大投与量である１０，０００ｎＭでは、このアッセイにて刺激がなかったことを示している。ＮＡは該当しないことを示す。各化合物に対して、曲線のフィッティングは、ロジスティックシグモイド回帰分析を用いたＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  １７．０ソフトウェアにて行い、ＥＣ５０および最大パーセントの刺激を測定した。更に、最大パーセントの該試験フルアゴニスト化合物Ｕ６９，５９３による刺激を正規化し、％効能を測定した。
【００９３】
本発明の代表的な化合物を前述のスクリーニングで試験し、以下の結果を得た：
2021505671.tif 000066
2021505671.tif 000067
2021505671.tif 000068
2021505671.tif 000069
2021505671.tif 000070
2021505671.tif 000071
2021505671.tif 000072
2021505671.tif 000073
脳下垂体からのプロラクチン放出は、生物種を越えて信頼できるＫＯＰ−ｒアゴニズムのバイオマーカであることが示されている。したがって、選択的カッパアンタゴニストにより遮断するという様式で、ＫＯＰ−ｒを発現している細胞株に関して生体外ＧＴＰガンマＳアッセイから予想される化合物によるプロラクチンの放出を証明することにより、生体内ＫＯＰ−ｒアゴニストの作用が示される。非バイアスフルアゴニストであるＵ５０４８８誘発放出と比べ、ＧＴＰガンマＳを介在した最大下カッパオピオイド受容体と結合したプロラクチン放出における特異な最大効能を証明することにより、該化合物が生体内パーシャルアゴニストＫＯＰ−ｒ作用を有することが示される。
【００９４】
ロータロッド協調運動障害の場合、このアッセイにおけるカッパアゴニスト作用は、カッパオピオイド受容体アレスチン介在シグナル伝達を反映している。このアッセイは、カッパオピオイド受容体アゴニストの鎮静特性を感度高く測定すると考えられている。一般的には、アレスチンとカッパオピオイド受容体とを結合する際効能が低減する化合物は、カッパオピオイド受容体リガンドの鎮静副反応に対して可能性が低下すると考えられている。生体内のロータロッドアッセイは、この可能性を確認するために使用される。
プロラクチン
【００９５】
マウスは、サンプリング３０分前に、試験された化合物を用いて腹腔内へと注射された。素早く断頭して胴部の血液を収集し、続いて２時間以内に血清を調製した。アッセイ緩衝液において血清を５倍希釈後、市販の酵素結合免疫吸着測定法（ＡｂＣａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を用いて血清プロラクチンレベルを測定した。本スクリーニングでは、化合物５Ａ２２は５ｍｇ／ｋｇにて著しいプロラクチン放出を示し、化合物５Ａ２３は３０ｍｇ／ｋｇにて著しいプロラクチン放出を示した。
ロータロッド
ロータロッド実験はマウスを用い、げっ歯類専用のロータロッド機器を用いて最大５匹の動物を同時に試験することで実施された（ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｏｄｌａｎｄ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）。ロータロッド回転速度は、毎分３回転で開始し、３００秒間にわたり毎分３０回転まで増加させた。この時間にて、該アッセイを終了させ動物をホームケージに移した。試験日前に少なくとも２回、動物をロータロッドへと順応させた。試験当日、各動物のロータロッドから落ちたベースライン時間を記録した。次いでマウスは、ビヒクルまたは化合物を用いて腹腔内へと注射され、注射後開始０〜２分でロータロッド測定を実施した。次に、続いてこれらの時点をその後選択した。ベースライン試験中、少なくとも１５０秒間ロータロッドに残れなかった動物を分析から除いた。本スクリーニングでは、化合物５Ａ２２は、１０ｍｇ／ｋｇでは著しい協調運動障害を示さなかったが、３０および９０ｍｇ／ｋｇでは著しい協調運動障害を示した。化合物５Ａ２３はまた、１０ｍｇ／ｋｇでは著しい協調運動障害を示さなかったが、統計に基づき３０および９０ｍｇ／ｋｇで著しい協調運動障害を示した。
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月28日(2020.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
要約すると、本発明は以下に関する。
［１］．式Ｉの化合物。
［２］．Ｒ１が水素である、上記［１］に記載の化合物。
［３］．Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［４］．Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ７）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［５］．Ｒ１が（Ｃ５−Ｃ７）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［６］．Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ７）アルキルである、上記［１］に記載の化合物。
［７］．Ｒ１がベンジルである、上記［１］に記載の化合物。
［８］．Ｒ１が（Ｃ３−Ｃ４）アルキルである、上記［１］に記載の化合物。
［９］．Ｒ１がメチルである、上記［１］に記載の化合物。
［１０］．Ｒ１が−ＣＨ２Ｒ１０であり、Ｒ１０が（Ｃ４−Ｃ６）炭素環である、上記［１］に記載の化合物。
［１１］．Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１２］．Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１３］．Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１４］．Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１５］．Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロカルビルである、上記［１］に記載の化合物。
［１６］．Ｒ１が−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］に記載の化合物。
［１７］．Ｒ２が水素である、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［１８］．Ｒ２がハロゲンである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［１９］．Ｒ２が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２０］．Ｒ２がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２１］．Ｒ２がニトロである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２２］．Ｒ２が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２３］．Ｒ２が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２４］．Ｒ２が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２５］．Ｒ２がクロロである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２６］．Ｒ２がフルオロである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２７］．Ｒ２がトリフルオロメチルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２８］．Ｒ２がメチルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［２９］．Ｒ２がフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物。
［３０］．Ｒ３が水素である、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３１］．Ｒ３がハロゲンである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３２］．Ｒ３が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３３］．Ｒ３がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３４］．Ｒ３がニトロである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３５］．Ｒ３が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３６］．Ｒ３が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３７］．Ｒ３が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３８］．Ｒ３がクロロである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［３９］．Ｒ３がフルオロである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４０］．Ｒ３がトリフルオロメチルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４１］．Ｒ３がメチルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４２］．Ｒ３がフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［２９］のいずれかに記載の化合物。
［４３］．Ｒ４が水素である、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４４］．Ｒ４がハロゲンである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４５］．Ｒ４が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４６］．Ｒ４がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４７］．Ｒ４がニトロである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４８］．Ｒ４が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［４９］．Ｒ４が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５０］．Ｒ４が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５１］．Ｒ４がクロロである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５２］．Ｒ４がフルオロである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５３］．Ｒ４がトリフルオロメチルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５４］．Ｒ４がメチルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５５］．Ｒ４がフルオロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［４２］のいずれかに記載の化合物。
［５６］．Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［５７］．Ｒ５がフルオロ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［５８］．Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［５９］．Ｒ５がメチルである、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６０］．Ｒ６が（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６１］．Ｒ５がフルオロ（Ｃ１−Ｃ１０）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６２］．Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロカルビルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６３］．Ｒ５がメチルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６４］．Ｒ５がシクロプロピルメチルである、上記［１］〜［５９］のいずれかに記載の化合物。
［６５］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６６］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６７］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６８］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換された、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［６９］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換された、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７０］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロで置換された、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７１］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７２］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７３］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７４］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、５員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７５］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、６員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７６］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、フルオロおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換された、７員の非芳香族複素環を形成する、上記［１］〜［５５］のいずれかに記載の化合物。
［７７］．Ｒ５およびＲ６が、それらを付加している窒素と一緒にされ、ピロリジン環を形成する、上記［１］〜［５５］、［６５］、［６８］、［７１］および［７４］のいずれかに記載の化合物。
［７８］．−ＮＲ５Ｒ６が
【化４】
2021505671.tif 000077
であり、Ｒ７が水素である、上記［１］〜［５５］、［６５］および［７７］のいずれかに記載の化合物。
［７９］．−ＮＲ５Ｒ６が
【化５】
2021505671.tif 000078
であり、Ｒ７がフッ素である、上記［１］〜［５５］、［６５］、［６８］および［７７］のいずれかによる化合物。
［８０］．−ＮＲ５Ｒ６が
【化６】
2021505671.tif 000079
であり、Ｒ７が（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、上記［１］〜［５５］、［６５］、［７１］および［７７］のいずれかに記載の化合物。
［８１］．Ｒ８が水素である、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８２］．Ｒ８がハロゲンである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８３］．Ｒ８が（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８４］．Ｒ８がフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８５］．Ｒ８がニトロである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８６］．Ｒ８が−ＳＯ３Ｈである、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
［８７］．Ｒ８が−Ｎ＋ＨＲ５Ｒ６である、上記［１］〜［８０］のいずれかに記載の化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
中間体３の調製
【化１３】
2021505671.tif 000080
ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中、２−（２−オキソエトキシ）アセトアルデヒド（７０．０ｇ、６８６ｍｍｏｌ、１当量）溶液に、ニトロメタン（６５．７ｇ、１．０８ｍｏｌ、５８．２ｍＬ、１．５７当量）およびＫ２ＣＯ３（１０４ｇ、７５４ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。次いで、得られた溶液を０℃で３時間撹拌させた。該溶液を２５℃に温め、次いで２５℃で１３時間撹拌させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒｆ＝０．６）は、中間体２が完全に消費されたことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、４−ニトロテトラヒドロピラン−３，５−ジオールを黄色の固体として得た。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
中間体９の調製
【化１９】
2021505671.tif 000081
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１．１９ｇ、８．８９ｍｍｏｌ、４８６μＬ、１．８３当量）溶液に、ＬｉＡｌＨ４（１．０３ｇ、２７．０ｍｍｏｌ、５．５６当量）を０℃で添加した。溶液を２５℃で３０分間撹拌させた。この溶液に、４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−１，４ａ，５，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジン−２，３−ジオン（１．６０ｇ、４．８６ｍｍｏｌ、１当量）を０℃で添加した。溶液を０℃で１時間、次いで２５℃で３０分間撹拌させた。この溶液に、ｐＨ＝８になるまでＮａＯＨ（２Ｍ）を添加した。該溶液をエチルアセテート（３×３０ｍＬ）で抽出した。次いで、有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し真空にて濃縮させ、４−ベンジル−８−ピロリジン−１−イル−１，２，３，４ａ，５，７，８，８ａ−オクタヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピラジンを黄色の油として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０２．３（Ｍ＋Ｈ）．
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
ＲＯＣＫ−５−Ａ４４の調製
【化３０】
2021505671.tif 000082
Ｒｏｃｋ−５−Ａ２２（３０ｍｇ、７５μｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロリド（１７ｍｇ、１５１μｍｏｌ、１２μＬ）をＤＣＭ（３ｍＬ）中に吸収させた。トリエチルアミン（３８ｍｇ、３７７μｍｏｌ、５２μＬ）を反応混合物に添加した。反応容器を脱気し、Ｎ２でパージした（３回）。混合物をＮ２雰囲気下にて２０℃で２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ  ５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、％ＡＣＮ：１８％〜３８％、１０分）で精製した。ＲＯＣＫ−５−Ａ４４を白色の固体として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ７．５１−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝１．９，８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３７−４．２９（ｍ，２Ｈ），４．２８−４．１６（ｍ，２Ｈ），３．９４−３．８７（ｍ，４Ｈ），３．８３−３．７２（ｍ，３Ｈ），３．７０−３．５５（ｍ，３Ｈ），３．４７（ｔｄ，Ｊ＝４．２，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．９４（ｓ，３Ｈ），２．１１−１．８９（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）４７６．１．
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
スキームＫ用の実験例
【化４８】
2021505671.tif 000083
ＤＣＥ（２０ｍＬ）中、溶液７（５００ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１当量）に、シクロプロパンカルバルデヒド（１２７ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１３５μＬ、１当量）を添加した。混合物を脱気し、Ｎ２でパージした（３回）。混合物を、Ｎ２雰囲気下にて２０℃で１２時間撹拌させた。１２時間後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（７７０ｍｇ、３．６３ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物を、Ｎ２雰囲気下にて２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｋ１を得た。
【化４９】
2021505671.tif 000084
ＤＣＥ（１０ｍＬ）中、溶液Ｋ１（３０ｍｇ、９１μｍｏｌ、１当量）に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（５８ｍｇ、２７０μｍｏｌ、３当量）およびパラホルムアルデヒド（１００ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ、３２当量）を添加した。混合物を、Ｎ２雰囲気下にて２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｋ２を得た。
【化５０】
2021505671.tif 000085
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１０５ｍｇ、７８６μｍｏｌ、４３μＬ、２．７当量）溶液に、ＬｉＡｌＨ４（９０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、８．１当量）を０℃で添加した。得られた混合物を２０℃で０．５時間撹拌させた。ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、Ｋ２（１００ｍｇ、２９１μｍｏｌ、１当量）溶液を、０℃で反応混合物に添加した。得られた混合物を０℃（１時間）で撹拌させ、次いで２０℃（６時間）まで温めた。反応混合物を０℃で２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（３０ｍＬ）で急冷した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して残留物を得た。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：８％〜２８％、１０分）で精製し、Ｋ３を得た。
【化５１】
2021505671.tif 000086
アミンＫ３（３９ｍｇ、１９０μｍｏｌ、１．２当量）、ＤＩＰＥＡ（８２ｍｇ、６３４μｍｏｌ、１１０μＬ、４当量）およびＨＡＴＵ（７２ｍｇ、１９０μｍｏｌ、１．２当量）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解させた。２−（３，４−ジクロロフェニル）酢酸（５０ｍｇ、１５９μｍｏｌ、１当量）を添加した。得られた混合物を２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−Ｍｉｃｒｏ  ＵｎｉＳｉｌ  ５−１００  Ｃ１８  ＵＬＴＲＡ、１００×２５０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：２５％〜５５％、１１分）で精製し、アミドＫ４を得た。
【化５２】
2021505671.tif 000087
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ／ＨＣｌ（２ｍＬ、２ｍＬ、０．４ｍＬ）中、Ｋ４（４０ｍｇ、８０μｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ／Ｃ（５．５ｍｇ、８０μｍｏｌ、１０重量％Ｐｄ、１当量）溶液を、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下にて２０℃で６時間撹拌させた。混合物をセライトのパッドを通して濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ、１５０×２５ｍｍ、５ミクロン、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１０％〜４０％、１２分）にて精製し、５Ａ５０を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ＝７．５４−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．３６（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝３．９，１１．６Ｈｚ，２Ｈ），４．３１−４．１６（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝４．８，１１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．６８（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），３．５９−３．４２（ｍ，２Ｈ），３．３６−３．３３（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．１７−３．０６（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），０．７４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），０．４１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）４１２．１．
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
スキームＬ用の実験例
【化５４】
2021505671.tif 000088
ＨＣＯＯＨ（２０ｍＬ）中、溶液７（２００ｍｇ、７２６μｍｏｌ、１当量）に、ＨＣＨＯ（１．８９ｇ、２３ｍｍｏｌ、１．７３ｍＬ、３７％純度、３２当量）を添加した。混合物をＮ２雰囲気下にて６０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｌ１を得た。
【化５５】
2021505671.tif 000089
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１５４ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、６３μＬ、２．７当量）溶液に、ＬｉＡｌＨ４（１３２ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ、８．１当量）を０℃で添加した。得られた混合物を２０℃で０．５時間撹拌させた。ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、Ｌ１溶液を０℃で混合物に添加した。混合物を０℃で１時間、次いで２０℃で６時間撹拌させた。反応混合物を０℃で２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（３０ｍＬ）で急冷した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：５％〜２５％、１０分）で精製し、Ｌ２を得た。
【化５６】
2021505671.tif 000090
アミンＬ２（１０７ｍｇ、５２３μｍｏｌ、１．２当量）、ＤＩＰＥＡ（２２５ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ、３０４μＬ、４当量）およびＨＡＴＵ（１９９ｍｇ、５２３μｍｏｌ、１．２当量）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解させた。２−（３，４−ジクロロフェニル）酢酸（１２０ｍｇ、４３６μｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物を２０℃で１２時間撹拌させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（基本条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ、１５０×２５ｍｍ、５μＭ、移動相：［水（０．０４％ＮＨ３Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：４５％〜７５％、１０分）にて精製し、Ｌ３を得た。
【化５７】
2021505671.tif 000091
ＴＨＦ／ＨＣｌ／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ／０．４ｍＬ／２ｍＬ）中、Ｌ３（１５ｍｇ、３２μｍｏｌ、１当量）およびＰｄ／Ｃ（２ｍｇ、１０重量％Ｐｄ）の溶液を、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下にて２０℃で６時間撹拌させた。反応混合物をセライトのプラグで濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｌｕｎａ
Ｃ１８  １００×３０ｍｍ、５μｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］、ＡＣＮ％：１％〜３０％、１０分）で精製し、５Ａ５０を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＴＦＡ  ｓａｌｔ，ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ＝７．５３−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｔ，Ｊ＝４．２，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．１８（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９４−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．７９−３．６０（ｍ，３Ｈ），３．５８−３．４４（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．２１（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｂｒ  ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＭＨ＋）３７２．１．
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
本発明の化合物は、以下のスクリーニングで試験することができる。
ＫＯＰ−Ｒ膜に対し結合しているトリチウム標識Ｕ６９，５９３、ＭＯＰ−Ｒ膜に対し結合しているトリチウム標識ＤＡＭＧＯおよびＤＯＰ−Ｒ膜に対し結合しているＤＰＤＰＥ：
カッパ、ミューまたはデルタオピオイド受容体構成体を安定して発現している細胞由来の膜（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｕ２ＯＳ  ｈＯＰＲＫ１、ＣＨＯ−Ｋ１  ｒＯＰＲＭ１およびＣＨＯ−Ｋ１  ＯＰＲＤ１  β−アレスチン細胞株、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用した。細胞を組織培養プレートからかき取り、膜緩衝液（１０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌおよび１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）内でｔｉｓｓｕｅ  ｔｅａｒｏｒホモジナイザを用いて均質化し、４℃で３０分間、２０，０００ｇで遠心分離にかけ、使用まで−８０℃で凍結させた。使用前に、ペレットを結合緩衝液（５０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ダウンス型ホモジナイザを用いて均質化し、１．０ｎＭの適切なトリチウム標識リガンド（それぞれカッパ、ミューまたはデルタ結合に対し［３Ｈ］Ｕ６９，５９３、［３Ｈ］ＤＡＭＧＯまたは［３Ｈ］ＤＰＤＰＥ）および適切な濃度の化合物で５０μｇを、３０℃で６０分間インキュベートした。結合トリチウム標識リガンドを有する膜を、Ｂｒａｎｄｅｌハーベスタを用いてＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂフィルタ紙（Ｂｒａｎｄｅｌ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）上に収集した。結合トリチウム標識リガンドを、４ｍｌのＲｅａｄｙＳａｆｅシンチレーション流体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を添加した後、ＴｒｉＣａｒｂ−２９００ＴＲシンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ、ＵＳＡ）を用いて定量化した。各化合物に対する集計データを、非特異的結合を引いた状態で、化合物の不在下での最大結合へと正規化した。曲線のフィッティングは、ロジスティックシグモイド回帰分析を用いたＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  １７．０ソフトウェアにて行い、ＩＣ５０を測定した。
ＧＴＰガンマＳ
ヒトカッパオピオイド受容体を安定して発現しているＵ２ＯＳ細胞由来の膜を使用した。細胞を組織培養プレートからかき取り、膜緩衝液（１０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌおよび１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）内でｔｉｓｓｕｅ  ｔｅａｒｏｒホモジナイザを用いて均質化し、４℃で３０分間、２０，０００ｇで遠心分離にかけ、使用まで−８０℃で凍結させた。使用前に、ペレットをアッセイ緩衝液（５０ｍｍのトリス、１００ｍｍのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２および１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ダウンス型ホモジナイザを用いて均質化し、５０μｇを、０．１ｎＭの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ、１０ｎＭのＧＤＰおよび適切な濃度のアゴニストで、３０℃で２０分間インキュベートした。阻害を試験するため、全てのサンプルを１００ｎＭのＵ６９，５９３および適切な濃度の化合物でインキュベートした。結合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを有する膜を、Ｂｒａｎｄｅｌハーベスタを用いてＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂフィルタ紙（Ｂｒａｎｄｅｌ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）上に収集した。結合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを、４ｍＬのＲｅａｄｙＳａｆｅシンチレーション流体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を添加した後、ＴｒｉＣａｒｂ−２９００ＴＲシンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ、ＵＳＡ）を用いて定量化した。「無刺激」は、試験した最大投与量である１０，０００ｎＭでは、このアッセイにて刺激がなかったことを示している。ＮＡは該当しないことを示す。各化合物に対して、曲線のフィッティングは、ロジスティックシグモイド回帰分析を用いたＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  １７．０ソフトウェアにて行い、ＥＣ５０および最大パーセントの刺激を測定した。更に、最大パーセントの該試験フルアゴニスト化合物Ｕ６９，５９３による刺激を正規化し、％効能を測定した。
β２−アレスチン
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸから得られたＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを用いて実験を実施した。カッパ、ミューまたはデルタオピオイド受容体構成体を安定して発現している細胞（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｕ２ＯＳ  ｈＯＰＲＫ１、ＣＨＯ−Ｋ１  ｒＯＰＲＭ１およびＣＨＯ−Ｋ１  ＯＰＲＤ１  β−アレスチン細胞株、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）を９６ウェルプレートまたは３８４ウェルプレート内に蒔いた。３７℃で９０分間、化合物で細胞を刺激した。阻害を試験するため、全てのサンプルを１００ｎＭのＵ６９，５９３および適切な濃度の化合物でインキュベートした。次に、細胞をガラクトシダーゼ基質の存在下にて６０分間インキュベートし、化学発光生成物を得た。Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｎｅｏマイクロプレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ、ＵＳＡ）を用いて化学発光性を測定した。それぞれＫＯＰ−Ｒ、ＭＯＰ−ＲまたはＤＯＰ−Ｒアッセイ向けである３００ｎＭのＵ６９，５９３、１μＭのＤＡＭＧＯまたは１μＭのＤＰＤＰＥの存在下にて、拮抗作用アッセイを同様の方法で行った。「無刺激」は、試験した最大投与量である１０，０００ｎＭでは、このアッセイにて刺激がなかったことを示している。ＮＡは該当しないことを示す。各化合物に対して、曲線のフィッティングは、ロジスティックシグモイド回帰分析を用いたＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎ  １７．０ソフトウェアにて行い、ＥＣ５０および最大パーセントの刺激を測定した。更に、最大パーセントの該試験フルアゴニスト化合物Ｕ６９，５９３による刺激を正規化し、％効能を測定した。
【国際調査報告】
2021505671.tif 000092
2021505671.tif 000093