(57)【要約】本開示は、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する抗体、及びかかる抗体を含む組成物を提供する。抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を使用した、腫瘍を含む疾患または病態の予防または治療のための方法もまた、本明細書に提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む参照抗体と同じＬ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）エピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２３を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号２４を含む、
（ｂ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２５を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号２６を含む、
（ｃ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２７を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号２８を含む、
（ｄ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２９を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号３０を含む、または
（ｅ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号３１を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号３２を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３中の少なくとも１つのアミノ酸が、ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３とは異なり、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、ＲＦＧＭＨ（配列番号２）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、ＦＩＳＮＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、ＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号１０）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、ＲＡＳＲＴＩＳＩＹＶＮ（配列番号６）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、ＱＱＳＩＧＲＧＶＶＴ（配列番号１１）を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）エピトープへの結合について、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む参照抗体と交差競合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２３を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号２４を含む、
（ｂ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２５を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号２６を含む、
（ｃ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２７を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号２８を含む、
（ｄ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号２９を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号３０を含む、または
（ｅ）前記参照抗体の前記ＶＨが、配列番号３１を含み、前記参照抗体の前記ＶＬが、配列番号３２を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３中の少なくとも１つのアミノ酸が、ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３とは異なり、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、ＲＦＧＭＨ（配列番号２）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、ＦＩＳＮＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、ＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号１０）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、ＲＡＳＲＴＩＳＩＹＶＮ（配列番号６）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）を含み、
前記ｍＡｂ４１７抗体の前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、ＱＱＳＩＧＲＧＶＶＴ（配列番号１１）を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ２にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、残基５にグルタミンを含む、請求項２または３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ１にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、残基８にセリンを含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、残基８にプロリンを含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ残基３〜９にアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、トレオニン、プロリン、及びトリプトファンを含む、請求項２〜６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ残基３〜９にアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、セリン、プロリン、及びトリプトファンを含む、請求項２〜７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ残基４〜９にロイシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、プロリン、及びトリプトファンを含む、請求項２〜８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのアミノ酸差が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３にあり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ残基４〜９にロイシン、バリン、トリプトファン、チロシン、プロリン、及びトリプトファンを含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、または配列番号２１を含む、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、ＲＦＧＭＨ（配列番号２）を含む、請求項２〜１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）を含む、請求項２〜１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、ＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含む、請求項２〜１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、ＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）を含む、請求項２〜１４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）を含む、請求項２〜１５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、ＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴ配列番号１３を含む、請求項２〜１６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３が、ＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴ（配列番号１３）を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３が、ＱＱＡＧＦＹＴＰＷＴ（配列番号１５）を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３が、ＱＱＡＧＦＹＳＰＷＴ（配列番号１７）を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３が、ＱＱＳＬＨＦＹＰＷＴ（配列番号１９）を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３が、ＱＱＳＬＶＷＹＰＷＴ（配列番号２１）を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ａ）前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、向上した生産性を示す、
（ｂ）前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、平衡解離定数（ＫＤ）によって測定される向上した親和性を示す、
（ｃ）前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、向上したＰＩ値を示す、
（ｄ）前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、会合定数（Ｋ）によって測定される向上した親和性を示す、または
（ｅ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の特徴を有する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上した生産性を示す、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
前記向上した生産性が、実施例３に従って発現された場合、少なくとも５５ｍｇ／Ｌ、少なくとも５６ｍｇ／Ｌ、少なくとも５７ｍｇ／Ｌ、少なくとも５８ｍｇ／Ｌ、少なくとも５９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６４ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６６ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６７ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６８ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７４ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７６ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７７ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７８ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８４ｍｇ／Ｌ、または少なくとも約８５ｍｇ／Ｌである、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上したＫＤを示す、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
前記向上したＫＤが、２．６×１０−１０Ｍ未満、２．５×１０−１０Ｍ未満、２．０×１０−１０Ｍ未満、１．５×１０−１０Ｍ未満、１．０×１０−１０Ｍ未満、９×１０−１１Ｍ未満、８×１０−１１Ｍ未満、７×１０−１１Ｍ未満、６×１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、４×１０−１１Ｍ未満、３×１０−１１Ｍ未満、２×１０−１１Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、９×１０−１２Ｍ未満、８×１０−１２Ｍ未満、７×１０−１２Ｍ未満、６×１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、４×１０−１２Ｍ未満、３×１０−１２Ｍ未満、２×１０−１２Ｍ未満、１×１０−１２Ｍ未満、９×１０−１３Ｍ未満、または８×１０−１３Ｍ未満である、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上した親和性（Ｋ）を示す、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２９】
前記向上した親和性（Ｋ）が、５×１０−１０Ｍ未満、４×１０−１０Ｍ未満、３×１０−１０Ｍ未満、２×１０−１０Ｍ未満、１．０×１０−１０Ｍ未満、９×１０−１１Ｍ未満、８×１０−１１Ｍ未満、７×１０−１１Ｍ未満、６×１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、４×１０−１１Ｍ未満、３×１０−１１Ｍ未満、２×１０−１１Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、９×１０−１２Ｍ未満、８×１０−１２Ｍ未満、７×１０−１２Ｍ未満、６×１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、４×１０−１２Ｍ未満、３×１０−１２Ｍ未満、２×１０−１２Ｍ未満、１×１０−１２Ｍ未満、９×１０−１３Ｍ未満、または８×１０−１３Ｍ未満である、請求項２８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上したＰＩ値を示す、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３１】
前記向上したＰＩ値が、９．６未満、９．５未満、９．４未満、９．３未満、９．２未満、９．１未満、９．０未満、８．９未満、８．８未満、８．７未満、８．６未満、８．５未満、８．４未満、８．３未満、８．２未満、８．１未満、８．０未満、７．９未満、７．８未満、７．７未満、または７．６未満である、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３２】
Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴ（配列番号１３）を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３３】
Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＡＧＦＹＳＰＷＴ（配列番号１７）を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３４】
Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＡＧＦＹＴＰＷＴ（配列番号１７）を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３５】
Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＳＬＨＦＹＰＷＴ（配列番号１９）を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３６】
Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＳＬＶＷＹＰＷＴ（配列番号１９）を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３７】
前記ＶＨが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＷＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＡＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３８】
前記ＶＬが、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２４）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３９】
前記ＶＨが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＷＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＡＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４０】
前記ＶＬが、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＧＦＹＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２８）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４１】
前記ＶＨが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＷＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＡＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
前記ＶＬが、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＧＦＹＴＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２６）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４３】
前記ＶＨが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＷＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＡＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４４】
前記ＶＬが、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＬＨＦＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３０）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４５】
前記ＶＨが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＷＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＡＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４６】
前記ＶＬが、ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＬＶＷＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨが、配列番号２３を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬが、配列番号２４を含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨが、配列番号２５を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬが、配列番号２６を含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨが、配列番号２７を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬが、配列番号２８を含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨが、配列番号２９を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬが、配列番号３０を含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＨが、配列番号３１を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＶＬが、配列番号３２を含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５２】
重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＨＣが、配列番号３８を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＬＣが、配列番号３９を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５３】
重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＨＣが、配列番号４０を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＬＣが、配列番号４１を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５４】
重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＨＣが、配列番号４２を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＬＣが、配列番号４３を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５５】
重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＨＣが、配列番号４４を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＬＣが、配列番号４５を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５６】
重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＨＣが、配列番号４６を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＬＣが、配列番号２０を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５７】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、それらの変異体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５８】
キメラ抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体である、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５９】
Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６０】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸。
【請求項６１】
請求項６０に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項６２】
請求項６１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項６３】
組織培養におけるＥ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞からなる群から選択される、請求項６３に記載の宿主細胞。
【請求項６４】
薬剤に結合される、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、免疫複合体。
【請求項６５】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、及び抗原に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、二重特異性または多重特異性抗体。
【請求項６６】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体、請求項６０に記載の核酸、請求項６１に記載のベクター、請求項６２もしくは６３に記載の細胞、請求項６４に記載の免疫複合体、または請求項６５に記載の二重特異性もしくは多重特異性抗体、及び担体を含む、組成物。
【請求項６７】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体、請求項６０に記載の核酸、請求項６１に記載のベクター、請求項６２もしくは６３に記載の細胞、請求項６４に記載の免疫複合体、または請求項６５に記載の二重特異性もしくは多重特異性抗体、及び使用説明書を含む、キット。
【請求項６８】
請求項６０に記載の核酸または請求項６１に記載のベクターを含む、免疫細胞。
【請求項６９】
Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項６８に記載の免疫細胞。
【請求項７０】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含むキメラ抗原受容体を含む、請求項６８または６９に記載の免疫細胞。
【請求項７１】
ヒトＬ１ＣＡＭタンパク質に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの産生方法であって、請求項６２または６３に記載の細胞を好適な条件下で培養することと、前記抗体を単離することと、を含む、前記方法。
【請求項７２】
疾患または病態の治療を必要とする対象における疾患または病態の治療方法であって、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の抗体、請求項６０に記載の核酸、請求項６１に記載のベクター、請求項６２もしくは６３に記載の細胞、請求項６４に記載の免疫複合体、請求項６５に記載の二重特異性もしくは多重特異性抗体、請求項６６に記載の組成物、または請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の免疫細胞を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項７３】
前記疾患または病態が、腫瘍を含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記腫瘍が、胆管癌、黒色腫、膵臓癌、神経膠腫、乳癌、リンパ腫、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、線維肉腫、結腸腺癌、肝臓癌、または卵巣癌を含む、請求項７２または７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記腫瘍が、胆管癌である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞、前記免疫複合体、前記二重特異性もしくは多重特異性抗体、前記組成物、または前記免疫細胞が、前記腫瘍の成長を抑制する、請求項７２〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞、前記免疫複合体、前記組成物、または前記免疫細胞が、免疫細胞の前記腫瘍への浸潤を増強する、請求項７２〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
追加の治療剤を投与することを含む、請求項７２〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
前記追加の治療剤が、化学療法、免疫療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記追加の治療剤が、免疫チェックポイント阻害剤である、請求項７９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／８６５，８７１号及び２０１８年６月２９日に出願された韓国特許出願第１０−２０１８−００７５９５５号に対する優先権を主張するものであり、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出された配列表の参照
本出願と共に提出されるＡＳＣＩＩテキストファイルに電子的に提出された配列表の内容（名称：４３７２＿００１ＰＣ０２＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：８２，７０４バイト、及び作成日：２０１９年６月２７日）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本開示は、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）に特異的に結合する抗体、かかる抗体を含む組成物、及び対象における腫瘍（例えば、胆管癌、黒色腫、膵臓癌、神経膠腫、乳癌、リンパ腫、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、線維肉腫、結腸腺癌、肝臓癌、及び／または卵巣癌）を含む疾患または病態を予防または治療するための、かかる抗体の使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）は、細胞表面上の細胞間接着を媒介する免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子（ＣＡＭ）のうちの１つである。２００〜２２０ｋＤａの分子量を有する。Ｌ１ＣＡＭは、ニューロン−ニューロン接着を媒介するタンパク質として最初に知られ、神経突起伸長及びニューロン移動に関与する。Ｌｅｅ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７４：５０２１−５０２５（１９９７）、ＭｃＧｕｉｒｅ  ＪＣ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１５（２）：３５７−３６５（１９７８）。
【０００５】
Ｌ１ＣＡＭは、主に正常なヒト脳において発現される。さらに、Ｌ１ＣＡＭ発現は、いくつかの造血及び腎細胞、末梢神経、腸クリプト細胞、及び神経節に見出されるが、他の正常な細胞には見出されない。Ｈｕｓｚａｒ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ３７：１０００−１００８（２００６）。
Ｌ１ＣＡＭタンパク質に特異的に結合する抗体は、Ｌ１ＣＡＭが過剰発現される疾患（例えば、がん）の診断及び予防または治療のために使用され得る。したがって、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合し、Ｌ１ＣＡＭ活性を調節することが可能である抗体を開発する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｌｅｅ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７４：５０２１−５０２５（１９９７）
【非特許文献２】ＭｃＧｕｉｒｅ  ＪＣ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１５（２）：３５７−３６５（１９７８）
【非特許文献３】Ｈｕｓｚａｒ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ３７：１０００−１００８（２００６）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示の一態様は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む参照抗体と同じＬ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）エピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを対象とし、（ａ）参照抗体のＶＨは、配列番号２３を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２４を含む、（ｂ）参照抗体のＶＨは、配列番号２５を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２６を含む、（ｃ）参照抗体のＶＨは、配列番号２７を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２８を含む、（ｄ）参照抗体のＶＨは、配列番号２９を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３０を含む、または（ｅ）参照抗体のＶＨは、配列番号３１を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３２を含む。
【０００８】
また、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に提供され、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３中の少なくとも１つのアミノ酸は、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３とは異なり、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１は、ＲＦＧＭＨ（配列番号２）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ２は、ＦＩＳＮＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ３は、ＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号１０）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＬ  ＣＤＲ１は、ＲＡＳＲＴＩＳＩＹＶＮ（配列番号６）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＬ  ＣＤＲ２は、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＬ  ＣＤＲ３は、ＱＱＳＩＧＲＧＶＶＴ（配列番号１１）を含む。
【０００９】
本開示は、Ｌ１ＣＡＭエピトープへの結合について、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む参照抗体と交差競合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに提供し、（ａ）参照抗体のＶＨは、配列番号２３を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２４を含む、（ｂ）参照抗体のＶＨは、配列番号２５を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２６を含む、（ｃ）参照抗体のＶＨは、配列番号２７を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２８を含む、（ｄ）参照抗体のＶＨは、配列番号２９を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３０を含む、または（ｅ）参照抗体のＶＨは、配列番号３１を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３２を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３中の少なくとも１つのアミノ酸は、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３とは異なり、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１は、ＲＦＧＭＨ（配列番号２）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ２は、ＦＩＳＮＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ  （配列番号９）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ３は、ＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号１０）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＬ  ＣＤＲ１は、ＲＡＳＲＴＩＳＩＹＶＮ（配列番号６）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＬ  ＣＤＲ２は、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）を含み、ｍＡｂ４１７抗体のＶＨ  ＣＤＲ３は、ＱＱＳＩＧＲＧＶＶＴ（配列番号１１）を含む。
【００１０】
ある特定の態様では、少なくとも１つのアミノ酸差は、（ｉ）ＶＨ  ＣＤＲ２の残基５におけるグルタミン、（ｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ１の残基８におけるセリン、及び／または（ｉｉｉ）抗Ｌ１ＣＡＭ抗体もしくはその抗原結合フラグメントのＶＬ  ＣＤＲ３の残基８におけるプロリンを含む。ある特定の態様では、少なくとも１つのアミノ酸差は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントの（ｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基３〜９におけるアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、トレオニン、プロリン、及びトリプトファン；（ｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基３〜９におけるアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、セリン、プロリン、及びトリプトファン；または（ｉｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基４〜９におけるロイシン、バリンもしくはヒスチジン、トリプトファンもしくはフェニルアラニン、チロシン、プロリン、及びトリプトファンを含む。いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、または配列番号２１を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１は、ＲＦＧＭＨ（配列番号２）を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＶＨ  ＣＤＲ２は、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＶＨ  ＣＤＲ３は、ＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１は、ＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＶＬ  ＣＤＲ２は、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＶＬ  ＣＤＲ３は、ＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴ（配列番号１３）を含む。
【００１１】
いくつかの態様では、本開示の抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、軽鎖ＣＤＲ３は、ＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴ（配列番号１３）、ＱＱＡＧＦＹＴＰＷＴ（配列番号１５）、ＱＱＡＧＦＹＳＰＷＴ（配列番号１７）、ＱＱＳＬＨＦＹＰＷＴ（配列番号１９）、またはＱＱＳＬＶＷＹＰＷＴ（配列番号２１）を含む。
【００１２】
本開示は、（ａ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上した生産性を示す、（ｂ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して平衡解離定数（ＫＤ）によって測定される向上した親和性を示す、（ｃ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上したＰＩ値を示す、（ｄ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して会合定数（Ｋ）によって測定される向上した親和性を示す、または（ｅ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の特徴を有する、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに提供する。
【００１３】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上した生産性を示し、向上した生産性は、実施例３に従って発現される場合、少なくとも５５ｍｇ／Ｌ、少なくとも５６ｍｇ／Ｌ、少なくとも５７ｍｇ／Ｌ、少なくとも５８ｍｇ／Ｌ、少なくとも５９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６４ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６６ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６７ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６８ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７４ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７６ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７７ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７８ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８４ｍｇ／Ｌ、または少なくとも約８５ｍｇ／Ｌである。
【００１４】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ４１７抗体と比較して平衡解離定数（ＫＤ）によって測定される向上した親和性を示し、向上したＫＤは、２．６×１０−１０Ｍ未満、２．５×１０−１０Ｍ未満、２．０×１０−１０Ｍ未満、１．５×１０−１０Ｍ未満、１．０×１０−１０Ｍ未満、９×１０−１１Ｍ未満、８×１０−１１Ｍ未満、７×１０−１１Ｍ未満、６×１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、４×１０−１１Ｍ未満、３×１０−１１Ｍ未満、２×１０−１１Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、９×１０−１２Ｍ未満、８×１０−１２Ｍ未満、７×１０−１２Ｍ未満、６×１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、４×１０−１２Ｍ未満、３×１０−１２Ｍ未満、２×１０−１２Ｍ未満、１×１０−１２Ｍ未満、９×１０−１３Ｍ未満、または８×１０−１３Ｍ未満である。
【００１５】
他の態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ４１７抗体と比較して会合定数（Ｋ）によって測定される向上した親和性を示し、向上したＫは、５×１０−１０Ｍ未満、４×１０−１０Ｍ未満、３×１０−１０Ｍ未満、２×１０−１０Ｍ未満、１．０×１０−１０Ｍ未満、９×１０−１１Ｍ未満、８×１０−１１Ｍ未満、７×１０−１１Ｍ未満、６×１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、４×１０−１１Ｍ未満、３×１０−１１Ｍ未満、２×１０−１１Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、９×１０−１２Ｍ未満、８×１０−１２Ｍ未満、７×１０−１２Ｍ未満、６×１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、４×１０−１２Ｍ未満、３×１０−１２Ｍ未満、２×１０−１２Ｍ未満、１×１０−１２Ｍ未満、９×１０−１３Ｍ未満、または８×１０−１３Ｍ未満である。いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上したＰＩ値を示し、向上したＰＩ値は、９．６未満、９．５未満、９．４未満、９．３未満、９．２未満、９．１未満、９．０未満、８．９未満、８．８未満、８．７未満、８．６未満、８．５未満、８．４未満、８．３未満、８．２未満、８．１未満、８．０未満、７．９未満、７．８未満、７．７未満、または７．６未満である。
【００１６】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＳＩＧＲＧＰＶＴ（配列番号１３）を含む。
【００１７】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＡＧＦＹＳＰＷＴ（配列番号１７）を含む。
【００１８】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＡＧＦＹＴＰＷＴ（配列番号１７）を含む。
【００１９】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＳＬＨＦＹＰＷＴ（配列番号１９）を含む。
【００２０】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含み、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＦＧＭＨ（配列番号２）、ＦＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）、及びＧＲＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ（配列番号４）を含み、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれＲＡＳＲＴＩＳＳＹＶＮ（配列番号１２）、ＡＡＳＮＬＨＳ（配列番号７）、及びＱＱＳＬＶＷＹＰＷＴ（配列番号１９）を含む。
【００２１】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＷＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦ  ＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＡＮＴＬ  Ｙ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲ  ＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号２３）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２２】
他の態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ＤＩＱＬ  ＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳ  ＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰ  ＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡ  ＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ  ＳＩＧＲＧＰＶＴＦＧ  ＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２４）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２３】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体または抗原結合フラグメントのＶＨは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＷＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦ  ＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＡＮＴＬ  Ｙ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲ  ＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号２７）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２４】
他の態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ＤＩＱＬ  ＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳ  ＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰ  ＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡ  ＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ  ＡＧＦＹＳＰＷＴＦＧ  ＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２８）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２５】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＷＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦ  ＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＡＮＴＬ  Ｙ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲ  ＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号２５）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２６】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ＤＩＱＬ  ＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳ  ＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰ  ＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡ  ＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ  ＡＧＦＹＴＰＷＴＦＧ  ＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２６）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２７】
他の態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＷＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦ  ＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＡＮＴＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲ  ＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号２９）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２８】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ＤＩＱＬ  ＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳ  ＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰ  ＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡ  ＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣ  ＱＱＳＬＨＦＹＰＷＴ  ＦＧ  ＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３０）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２９】
他の態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体または抗原結合フラグメントのＶＨは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＷＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＲＦＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦ  ＩＳＮＥＧＳＮＫＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＡＮＴＬ  Ｙ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲ  ＡＹＧＳＧＳＬＦＤＰ  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号３１）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３０】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ＤＩＱＬ  ＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＲＴＩＳ  ＳＹＶＮＷＹＲＱＲＰ  ＧＫＡＰＥＳＬＩＹＡ  ＡＳＮＬＨＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣ  ＱＱＳＬＶＷＹＰＷＴ  ＦＧ  ＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）として記載されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３１】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号２３を含み、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号２４を含む。他の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号２５を含み、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号２６を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号２７を含み、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号２８を含む。他の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号２９を含み、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号３０を含む。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号２９を含み、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号３０を含む。他の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号３１を含み、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号３２を含む。
【００３２】
また、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に提供され、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号３８を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号３９を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４０を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４１を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４２を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４３を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４４を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４５を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４６を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号２０を含む。
【００３３】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、その変異体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、キメラ抗体、またはヒト抗体である。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
【００３４】
本開示のいくつかの態様は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体をコードする核酸、核酸を含むベクター、ベクターを含む宿主細胞を対象とする。いくつかの態様では、宿主細胞は、組織培養におけるＥ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞からなる群から選択される。
【００３５】
本開示のいくつかの態様は、薬剤に結合した本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、免疫複合体を対象とする。
【００３６】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体または抗原結合フラグメントと、抗原に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、を含む、二重特異性または多重特異性抗体もまた本明細書に提供される。
【００３７】
本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、免疫複合体、または二重特異性もしくは多重特異性抗体、及び担体を含む組成物を対象とする。
【００３８】
本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び使用説明書を含むキットもまた本明細書に提供される。
【００３９】
本開示のいくつかの態様は、好適な条件下で宿主細胞を培養することと、抗体を単離することと、を含む、ヒトＬ１ＣＡＭタンパク質に特異的に結合する抗体の産生方法を対象とする。
【００４０】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、免疫複合体、または本明細書に開示される二重特異性もしくは多重特異性抗体を対象に投与することを含む、疾患または病態の治療を必要とする対象における疾患または病態の治療方法もまた本明細書に提供される。いくつかの態様では、疾患または病態は、腫瘍を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、胆管癌、黒色腫、膵臓癌、神経膠腫、乳癌、リンパ腫、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、線維肉腫、結腸腺癌、肝臓癌、または卵巣癌を含む。他の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、核酸、ベクター、細胞、免疫複合体、二重特異性または多重特異性抗体は、腫瘍の成長を抑制する、及び／または腫瘍への免疫細胞の浸潤を増強する。
【００４１】
本開示のいくつかの態様は、追加の治療剤を投与することを含む方法を対象とする。いくつかの態様では、追加の治療剤は、化学療法、免疫療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、追加の治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。
【００４２】
限定的と解釈されるべきではない以下の詳細な説明及び実施例から、本開示の他の特徴及び利点が明らかになる。本出願を通じて引用される科学論文、新聞報道、ＧｅｎＢａｎｋエントリー、特許及び特許出願を含む、引用される全ての参考文献の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１Ａ】フローサイトメトリーを使用した、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞（図１Ａ）、ＮＣＩ−Ｈ５２２（図１Ｂ）、ＳＫＯＶ３（図１Ｃ）、及びＢ１６Ｆ１（図１Ｄ）中のヒトＬＣＡＭ１に対するＡｂ４１７変異体の抗原結合特異性の分析を示す。
【図１Ｂ】同上。
【図１Ｃ】同上。
【図１Ｄ】同上。
【図２Ａ】サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）によって測定した、精製Ａｂ４１７（図２Ａ）及びＡｂ４１７変異体：Ａｂ６１２（図２Ｂ）、Ａｂ４Ｈ５（図２Ｃ）、Ａｂ２Ｃ２（図２Ｄ）、Ａｂ４Ｈ６（図２Ｅ）、及びＡｂ５Ｄ１２（図２Ｆ）の質を示す。
【図２Ｂ】同上。
【図２Ｃ】同上。
【図２Ｄ】同上。
【図２Ｅ】同上。
【図２Ｆ】同上。
【図３Ａ】Ａｂ４１７変異体の腫瘍成長阻害効果の分析を示す。図３Ａは、Ａｂ４１７（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ａｂ６１２（１０ｍｇ／ｋｇ）、対照ｈＦｃ（ヒトＦｃ）抗体（３．３）ｍｇ／ｋｇ、及び陰性対照（ＰＢＳ）の投与後のＣｈｏｉ−ＣＫ異種移植片モデルの腫瘍体積の変化を示す（＊ｐ＜０．０５、ダネットのｔ検定によるアイソタイプ対照群との有意差）。図３Ｂは、Ａｂ４１７、Ａｂ６１２、対照ｈＦｃ、及び陰性対照（ＰＢＳ）の投与後のＣｈｏｉ−ＣＫ異種移植片モデルの体重の変化を示す。図３Ｃは、Ａｂ４１７（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ａｂ６１２（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ａｂ６１２（１０ｍｇ／ｋｇ）、対照ｈＦｃ抗体（３．３）ｍｇ／ｋｇ、及び陰性対照（ビヒクル）の投与後のＣｈｏｉ−ＣＫ異種移植片モデルの腫瘍重量を示す。（＊ｐ＜０．０１、ダネットのｔ検定によるアイソタイプ対照群との有意差）。図３Ｄは、図３Ｃに記載したように、実験の終了後に犠牲にした８匹のマウスの各群の腫瘍画像を示す。
【図３Ｂ】同上。
【図３Ｃ】同上。
【図３Ｄ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
参照抗体と同じＬ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）エピトープに特異的に結合する、Ｌ１ＣＡＭエピトープへの結合について参照抗体と交差競合し、本明細書に開示される特性のうちの１つ以上を示す、及び／または腫瘍を含む疾患もしくは病態を予防及び／または治療する、単離抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に開示される。
【００４５】
本明細書に開示される本開示の理解を容易にするために、いくつかの用語及び語句が定義される。追加の定義は、詳細な説明を通して記載される。
【００４６】
Ｉ．定義
本開示を通して、「ａ」または「ａｎ」エンティティという用語は、１つ以上のそのエンティティを指し、例えば、「抗体」は、１つ以上の抗体を表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。
【００４７】
さらに、本明細書で使用される場合、「及び／または」は、他の特徴または構成要素の有無にかかわらず、２つの特定の特徴または構成要素の各々の具体的な開示とみなされるべきである。したがって、本明細書における「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の態様の各々を包含することが意図される。Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及び；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
【００４８】
本明細書において、態様が「含む」という言語で説明される場合、「からなる」及び／または「から本質的になる」という点で説明される類似の態様もまた提供されることを理解されたい。
【００４９】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示に関連する当業者に一般的に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。
【００５０】
単位、接頭辞、及び記号は、それらのＳｙｓｔｅｍｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）承認された形式で表される。数値範囲には、範囲を定義する数値が含まれる。別段の指示がない限り、アミノ酸配列は、左から右へ、アミノからカルボキシの配向で書かれる。本明細書に提供される見出しは、本明細書全体を参照することによって有することができる、本開示の様々な態様の制限ではない。したがって、以下に定義される用語は、本明細書の全体を参照することによってより完全に定義される。
【００５１】
「約」という用語は、およそ、概ね、大体、または、の領域内を意味するために本明細書で使用される。「約」という用語が数値範囲と併用される場合、それは、示される数値の上下の境界を延長することによってその範囲を修正する。一般に、「約」という用語は、例えば１０パーセント、上昇または下落（より高いまたはより低い）の分散によって、記載された値を上回る及び下回る数値を修正することができる。
【００５２】
「Ｌ１細胞接着分子」または「Ｌ１ＣＡＭ」という用語は、免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子（ＣＡＭ）に属する一体型膜糖タンパク質のうちの１つを指す。
【００５３】
「Ｌ１ＣＡＭ」という用語は、細胞によって天然に発現されるＬ１ＣＡＭの任意の変異体またはアイソフォームを含む。したがって、本明細書に記載される抗体は、同じ種における異なるアイソフォーム（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭの異なるアイソフォーム）と交差反応することができるか、またはヒト以外の種（例えば、マウスＬ１ＣＡＭ）からのＬ１ＣＡＭと交差反応することができる。代替的に、抗体は、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的であり得、他の種とのいかなる交差反応性も示さない。Ｌ１ＣＡＭ、またはその任意の変異体及びアイソフォームは、それらを天然に発現する細胞または組織から単離され得るか、または当該技術分野において周知の技法及び／または本明細書に記載される技法を使用して組み換え的に産生され得る。
【００５４】
ヒトＬ１ＣＡＭ（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ番号Ｐ３２００４−１、配列番号１）は、１，２５７個のアミノ酸からなる１型一体型膜糖タンパク質であり、１回細胞膜にまたがり、そのアミノ末端フラグメントは、細胞膜の外側に存在し、そのカルボキシル末端フラグメントは、細胞質中に存在する。Ｌ１ＣＡＭの細胞外ドメインは、６つの免疫グロブリン２型ドメイン（Ｉｇ１、Ｉｇ２、Ｉｇ３、Ｉｇ４、Ｉｇ５、及びＩｇ６）、５つのフィブロネクチンＩＩＩ様ドメイン（Ｆｎ１、Ｆｎ２、Ｆｎ３、Ｆｎ４、及びＦｎ５）、ならびに２０個のＮ−グリコシル化部位を含む。米国特許第９，７７７，０６０号。
【００５５】
ヒトＬ１ＣＡＭの少なくとも２つの追加のアイソフォームが同定された。アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ番号Ｐ３２００４−２、配列番号３）は、１，２５３個のアミノ酸からなる。アイソフロム２は、ヒトＬ１ＣＡＭのアミノ酸配列と比較して、アミノ酸残基１１７７〜１１８０を欠く。アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ番号Ｐ３２００４−３、配列番号５）は、１，２４８個のアミノ酸からなる。アイソフロム３は、アミノ酸残基１１７７〜１１８０を欠き、ヒトＬ１ＣＡＭのアミノ酸配列と比較してアミノ酸残基２６〜３１（ＹＥＧＨＨＶ→Ｌ）において以下の差を有する。
【００５６】
以下は、３つの既知のヒトＬ１ＣＡＭアイソフォームのアミノ酸配列である。
（Ａ）ヒトＬ１ＣＡＭ（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ番号Ｐ３２００４−１、配列番号１）
【化１】
2021529776.tif 000002
（Ｂ）ヒトＬ１ＣＡＭアイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ番号Ｐ３２００４−２、配列番号３）
【化２】
2021529776.tif 000003
（Ｃ）ヒトＬ１ＣＡＭアイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ番号Ｐ３２００４−３、配列番号５）
【化３】
2021529776.tif 000004
【００５７】
ヒトＬ１ＣＡＭのシグナル配列は、アミノ酸１〜１９（下線付き）に対応する。したがって、ヒトＬ１ＣＡＭアイソフォーム１、ヒトＬ１ＣＡＭアイソフォーム２、及びヒトＬ１ＣＡＭアイソフォーム３の成熟アイソフォームは、それぞれアミノ酸２０〜１，２５７、１，２５３、または１，２４８からなる。
【００５８】
「抗体」及び「抗体（複数）」という用語は、当該技術分野の用語であり、本明細書で互換的に使用することができ、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を有する分子を指す。本明細書で使用される用語としては、全抗体、及び任意の抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合フラグメント」）またはその一本鎖が挙げられる。「抗体」は、一態様において、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合フラグメントを指す。別の態様では、「抗体」は、単一可変ドメイン、例えば、ＶＨＨドメインを含む一本鎖抗体を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。ある特定の天然に存在する抗体において、重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の３つのドメインからなる。ある特定の天然に存在する抗体において、各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。
【００５９】
ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができ、より保存された、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される領域と散在する。各ＶＨ及びＶＬは、次の順でアミノ末端からカルボキシ末端へと配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００６０】
「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語及び同様の用語は、当該技術分野において認識され、抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域内のアミノ酸残基に番号付けするシステムを指す。ある特定の態様では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ＆Ｗｕ  ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用して、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、任意選択的に、３５に続く１つまたは２つの追加のアミノ酸（Ｋａｂａｔ番号付けスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと称される）を含み得るアミノ酸３１〜３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用して、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。特定の態様では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
【００６１】
「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」、「Ｋａｂａｔ位置」という語句、及びそれらの文法的変異形は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮またはその中への挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、ＣＤＲ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＷ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含むことができる。表１を参照されたい。
【表１】
2021529776.tif 000005
【００６２】
残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、抗体の配列の相同性領域における「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とのアラインメントによって決定することができる。代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号付けされるときのＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの終了は、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。
【００６３】
ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）はまた、ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域の番号付けシステムを提供する。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５−７７（２００３）を参照されたい。ＩＭＧＴ番号付けシステムは、５，０００を超える配列のアラインメント、構造データ、及び超可変ループの特徴付けに基づいており、全ての種について可変領域及びＣＤＲ領域を容易に比較することができる。ＩＭＧＴ番号付けスキームに従って、ＶＨ−ＣＤＲ１は、２６〜３５位にあり、ＶＨ−ＣＤＲ２は、５１〜５７位にあり、ＶＨ−ＣＤＲ３は、９３〜１０２位にあり、ＶＬ−ＣＤＲ１は、２７〜３２位にあり、ＶＬ−ＣＤＲ２は、５０〜５２位にあり、ＶＬ−ＣＤＲ３は、８９〜９７位にある。
【００６４】
本開示で考察する全ての重鎖定常領域アミノ酸位置について、番号付けは、Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６３（１）：７８−８５に最初に記載されているＥＵインデックスに従い、これは、配列決定された第１のヒトｌｇＧ１である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を記載する。ＥｄｅｌｍａｎらのＥＵインデックスはまた、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａに記載されている。したがって、「Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックス」または「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」及び「Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従う…位」という語句、ならびにその文法的変異形は、Ｋａｂａｔ１９９１に記載されるＥｄｅｌｍａｎらのヒトｌｇＧ１  ＥＵ抗体に基づく残基番号付けシステムを指す。
【００６５】
可変ドメイン（重鎖及び軽鎖の両方）ならびに軽鎖定常領域アミノ酸配列に使用される番号付けシステムは、Ｋａｂａｔ１９９１に記載されるものである。
【００６６】
抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＤ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ヒトにおけるＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ならびにマウスにおけるＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、及びＩｇＧ３）の免疫グロブリン分子であり得る。免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１は、いくつかのアロタイプにおいて存在し、これらは、最大でも数個のアミノ酸において互いに異なる。本明細書に開示される抗体は、一般に知られているアイソタイプ、クラス、サブクラス、またはアロタイプのいずれかに由来し得る。ある特定の態様では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４サブクラス、またはそれらの任意のハイブリッドのものである。ある特定の態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラス、またはヒトＩｇＧ２もしくはヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
【００６７】
「抗体」には、例として、天然に存在する抗体及び非天然に存在する抗体の両方、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体、キメラ抗体及びヒト化抗体、ヒト抗体及び非ヒト抗体、完全合成抗体、一本鎖抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、２つの重鎖及び２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖モノマー、抗体重鎖モノマー、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、イントラボディ、ヘテロコンジュゲート抗体、一価抗体、ラクダ化抗体、親和性抗体、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が含まれ、これらは、抗原結合（例えば、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン）が完全に可能な単一モノマー可変抗体ドメインからなる結合分子を含む。Ｈａｒｍｅｎ  Ｍ．Ｍ．ａｎｄ  Ｈａａｒｄ  Ｈ．Ｊ．Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３−２２（２００７））。
【００６８】
抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。かかる「フラグメント」は、例えば、約８〜約１５００アミノ酸長、好適には約８〜約７４５アミノ酸長、好適には約８〜約３００アミノ酸、例えば約８〜約２００アミノ酸長、または約１０〜約５０または１００アミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって行われ得ることが示されている。抗体、例えば、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ´）２フラグメント、ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、ならびにジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、または（ｖｉｉ）合成リンカーによって任意選択的に接合され得る２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組み換え方法を使用して、それらが単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって接合され得、その中で、ＶＬ及びＶＨ領域が対合して一価分子を形成する（別名、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照）。かかる一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語内に包含されることも意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に既知の従来の技法を使用して得られ、これらのフラグメントは、インタクトな抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングされる。抗原結合フラグメントは、組み換えＤＮＡ技法によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生され得る。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用され、当該技術分野で一般的である。可変領域は、典型的には、抗体のフラグメント、一般に軽鎖または重鎖のフラグメント、典型的には成熟重鎖中のアミノ末端１１０〜１２０アミノ酸及び成熟軽鎖中の約９０〜１１５アミノ酸を指し、これらは抗体間で配列において大きく異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に濃縮され、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
【００７０】
任意の特定の機序または理論に拘束されることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲが、抗体と抗原との相互作用及び特異性に主に関与すると考えられる。ある特定の態様では、可変領域は、ヒト可変領域である。ある特定の態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の態様では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。ある特定の態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラス（ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）の抗体を引き起こす、任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指し得る。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく任意の別個のタイプ、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。特定の態様では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。
【００７３】
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために互換的に使用される。
【００７４】
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために互換的に使用される。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、互換性があり、当該技術分野で共通の意味を有する。定常領域は、抗体フラグメント、例えば、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示すことができる軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端フラグメントである。免疫グロブリン分子の定常領域は、概して、免疫グロブリン可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する。
【００７６】
「Ｆｃ領域」（フラグメント結晶化領域）または「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ」は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）に位置するＦｃ受容体または古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）への結合を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域を指す。したがって、Ｆｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１またはＣＬ）を除く抗体の定常領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ抗体アイソタイプにおいて、Ｆｃ領域は、抗体の２つの重鎖の第２（ＣＨ２）及び第３（ＣＨ３）定常ドメインに由来する２つの同一のタンパク質フラグメントを含み、ＩｇＭ及びＩｇＥ  Ｆｃ領域は、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２〜４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３、ならびにＣγ１とＣγ２との間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃ２２６またはＰ２３０位のアミノ酸残基（またはこれら２つのアミノ酸間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端に伸長するものと定義され、ここでの番号付けは、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、約アミノ酸２３１〜約アミノ酸３４０に伸長する一方で、ＣＨ３ドメインは、Ｆｃ領域内のＣＨ２ドメインのＣ末端側に位置し、すなわち、ＩｇＧの約アミノ酸３４１〜約アミノ酸４４７に伸長する。本明細書で使用される場合、Ｆｃ領域は、任意のアロタイプ変異体を含む天然配列Ｆｃ、または変異体Ｆｃ（例えば、非天然に存在するＦｃ）であり得る。Ｆｃはまた、単独で、または「Ｆｃ領域を含む結合タンパク質」などのＦｃ包含タンパク質ポリペプチドの文脈においてこの領域を指し得、「Ｆｃ融合タンパク質」（例えば、抗体または免疫接着）とも称される。
【００７７】
「天然配列Ｆｃ領域」または「天然配列Ｆｃ」は、自然界に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにその天然に存在する変異体が含まれる。天然配列Ｆｃには、Ｆｃの様々なアロタイプが含まれる（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ  １：１、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照）。
【００７８】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、対立遺伝子変異体及び代替的にこれらの受容体のスプライシング形態を含む、ＦｃγＲファミリーの受容体を含む。ＦｃγＲファミリーは、３つの活性化（マウスにおけるＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、及びＦｃγＲＩＶ；ヒトにおけるＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡ）ならびに１つの阻害性（ＦｃγＲＩＩＢ）受容体からなる。ヒトＩｇＧ１は、ほとんどのヒトＦｃ受容体に結合し、最も強いＦｃエフェクター機能を誘発する。それが結合する活性化Ｆｃ受容体の種類に関して、マウスＩｇＧ２ａと同等であると見なされる。逆に、ヒトＩｇＧ４は、最小Ｆｃエフェクター機能を誘発する。Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）。
【００７９】
定常領域は、例えば、組み換え技術によって操作されて、１つ以上のエフェクター機能を排除することができる。「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体もしくはリガンドとの相互作用、またはそれから生じる生化学的事象を指す。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＦｃγＲ媒介性エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ及び抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、ならびに細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節が挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域を結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせる必要がある。したがって、「Ｆｃ機能を含まない定常領域」という用語は、Ｆｃ領域によって媒介される１つ以上のエフェクター機能が低減されるか、またはエフェクター機能を有しない定常領域を含む。
【００８０】
抗体のエフェクター機能は、異なるアプローチによって低減または回避され得る。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域を欠く抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または単量体ＶＨもしくはＶＬドメインからなるｓｄＡｂなど）を使用することによって低減または回避され得る。代替的に、いわゆるアグリコシル化抗体は、Ｆｃ領域の他の貴重な属性（例えば、長い半減期及びヘテロ二量体化）を保持しながら、抗体のエフェクター機能を低減するために、Ｆｃ領域内の特定の残基に結合される糖を除去することによって生成することができる。アグリコシル化抗体は、例えば、糖が結合する残基を欠失もしくは改変すること、糖を酵素的に除去すること、グリコシル化阻害剤の存在下で培養された細胞内で抗体を産生すること、またはタンパク質をグリコシル化することができない細胞（例えば細菌宿主細胞）内で抗体を発現させることによって生成され得る。例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号を参照されたい。別のアプローチは、エフェクター機能を低減したＩｇＧサブクラス由来のＦｃ領域を採用することである。例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３よりも低レベルのＦｃエフェクター機能を有することを特徴とする。Ｆｃ部分のＣＨ２ドメイン内のヒンジ領域に最も近接する残基は、抗体のエフェクター機能を担っており、これは、先天性免疫系のエフェクター細胞上のＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ−Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）の、大部分が重複する結合部位を含有するためである。Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）。したがって、Ｆｃエフェクター機能が低減した抗体またはＦｃエフェクター機能のない抗体は、例えば、ＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１アイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、またはＩｇＧ４由来のＩｇＧ２及びＣＨ２領域由来のヒンジ領域を含むキメラＦｃ領域（例えば、Ｌａｕ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９−４７７７（２０１３）を参照）、またはＦｃエフェクター機能の改変をもたらす突然変異を有する（例えば、Ｆｃ機能が低減したまたはＦｃ機能がない）Ｆｃ領域を生成することによって調製することができる。突然変異を有するかかるＦｃ領域は、当該技術分野において既知である。例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号、ならびにその中で引用される米国及びＰＣＴ出願、ならびにＡｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ  １：６，５７２−５７９（２００９）を参照されたい。これらの開示は、参照によりそれら全体が組み込まれる。
【００８１】
「ヒンジ」、「ヒンジドメイン」、「ヒンジ領域」、または「抗体ヒンジ領域」は、互換的に使用され、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに接合し、ヒンジの上部、中間、及び下部フラグメントを含む重鎖定常領域のドメインを指す（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８  １６１：４０８３）。ヒンジは、抗体の結合領域とエフェクター領域との間で様々なレベルの柔軟性を提供し、２つの重鎖定常領域間の分子間ジスルフィド結合のための部位も提供する。本明細書で使用される場合、ヒンジは、全てのＩｇＧアイソタイプについてＧｌｕ２１６で開始し、Ｇｌｙ２３７で終了する（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：４０８３）。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４ヒンジの配列は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照されたい。
【００８２】
「ＣＨ１ドメイン」という用語は、重鎖定常ドメインにおいて可変ドメインをヒンジに結合する重鎖定常領域を指す。本明細書で使用される場合、ＣＨ１ドメインは、Ａ１１８で開始し、Ｖ２１５で終了する。「ＣＨ１ドメイン」という用語は、野生型ＣＨ１ドメイン、ならびにその天然に存在する変異体（例えば、アロタイプ）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４（野生型及びアロタイプを含む）のＣＨ１ドメイン配列は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）上記、及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照されたい。例示的なＣＨ１ドメインは、抗体の生物学的活性（例えば、半減期）を修飾する突然変異を有するＣＨ１ドメインを含み、例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号、ならびにその中で引用される米国特許及び刊行物とＰＣＴ刊行物に記載される。
【００８３】
「ＣＨ２ドメイン」という用語は、重鎖定常ドメインにおいてヒンジをＣＨ３ドメインに結合する重鎖定常領域を指す。本明細書で使用される場合、ＣＨ２ドメインは、Ｐ２３８で開始し、Ｋ３４０で終了する。「ＣＨ２ドメイン」という用語は、野生型ＣＨ２ドメイン、ならびにその天然に存在する変異体（例えば、アロタイプ）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４（野生型及びアロタイプを含む）のＣＨ２ドメイン配列は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）上記、及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照されたい。例示的なＣＨ２ドメインは、抗体の生物学的活性（例えば、半減期）を修飾する突然変異、及び／または低減したＦｃエフェクター機能を有するＣＨ２ドメインを含み、例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号、ならびにその中で引用される米国特許及び刊行物とＰＣＴ刊行物に記載される。
【００８４】
「ＣＨ３ドメイン」という用語は、重鎖定常ドメイン内のＣＨ２ドメインに対してＣ末端である重鎖定常領域を指す。本明細書で使用される場合、ＣＨ３ドメインは、Ｇ３４１で開始し、Ｋ４４７で終了する。「ＣＨ３ドメイン」という用語は、野生型ＣＨ３ドメイン、ならびにその天然に存在する変異体（例えば、アロタイプ）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４（野生型及びアロタイプを含む）のＣＨ３ドメイン配列は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）上記、及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照されたい。例示的なＣＨ３ドメインは、抗体の生物学的活性（例えば、半減期）を修飾する突然変異を有するＣＨ３ドメインを含み、例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号、ならびにその中で引用される米国特許及び刊行物とＰＣＴ刊行物に記載される。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体）を指す。
【００８６】
「アロタイプ」は、特定のアイソタイプ群内の天然に存在する変異体を指し、これらの変異体は、数個のアミノ酸において異なる（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ  １：１を参照）。本明細書に記載される抗体は、任意のアロタイプのものであり得る。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアロタイプは、当該技術分野において既知である。例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）上記、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）、及びＬｅｆｒａｎｃ  ＭＰ，ｍＡｂｓ  １：４，１−７（２００９）を参照されたい。
【００８７】
「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という語句は、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に本明細書で使用される。
【００８８】
「単離抗体」は、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合する単離抗体は、Ｌ１ＣＡＭ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、Ｌ１ＣＡＭのエピトープに特異的に結合する単離抗体は、異なる種由来の他のＬ１ＣＡＭタンパク質と交差反応性を有することができる。
【００８９】
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において既知のいくつかの方法で測定及び／または表現することができる。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算され、モル濃度（Ｍ）として表されるが、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗原に対する抗体の解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法）、または動態排除アッセイ（ＫＩＮＥＸＡ（登録商標））などの、当業者に既知の技法によって決定することができる。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、「特異的結合」、「選択的結合」、及び「選択的に結合する」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、かかる結合が当業者によって理解されるため、抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する分子（例えば、抗体）を指す。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、イムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｏｉｓｅ、ＩＤ）、または当該技術分野において既知の他のアッセイによって決定されるように、一般に、より低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。特定の態様では、抗原に特異的に結合する分子は、分子が別の抗原に結合するときに、ＫＡよりも少なくとも２ログ、２．５ログ、３ログ、４ログ、またはそれを上回るＫＡで抗原に結合する。
【００９１】
抗体は、典型的には、１０−５〜１０−１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）によって反映される、高親和性で同族抗原に特異的に結合する。約１０−４Ｍを超える任意のＫＤは、一般に、非特異的結合を示すと考えられる。本明細書で使用される場合、抗原に「特異的に結合する」抗体は、抗原及び実質的に同一の抗原に高い親和性で結合する抗体を指し、これは、例えば、所定の抗原またはＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法）を使用してＢＩＡＣＯＲＥ（商標）２０００機器におけるイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定された場合、１０−７Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍ以下、さらにより好ましくは１０−９Ｍ以下、最も好ましくは１０−８Ｍ〜１０−１０Ｍ以下のＫＤを有するが、関連のない抗原に高親和性で結合しないことを意味する。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、タンパク質、ペプチド、またはハプテンなどの任意の天然または合成免疫原性物質を指す。抗原は、Ｌ１ＣＡＭまたはそのフラグメントであり得る。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局所領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（直鎖状もしくは連続的エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチドまたはポリペプチド（複数）の２つ以上の非連続領域（立体配座、非直鎖状、不連続、または非連続的エピトープ）から一緒になり得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、必ずしもそうではないが、変性溶媒への曝露時に保持され、一方で三次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒での処理時に失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間立体配座中に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または２０個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体によって結合するかの決定方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野で周知であり、例えば、免疫ブロット及び免疫沈降アッセイを含み、ここで、所与の抗体（例えば、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体）との反応性について、（例えば、Ｌ１ＣＡＭ由来の）重複または連続するペプチドが試験される。エピトープの空間的立体構造の決定方法としては、当該技術分野における技法、及び本明細書に記載される技法、例えば、Ｘ線結晶学、二次元核磁気共鳴、及びＨＤＸ−ＭＳが挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照）。
【００９４】
ある特定の態様では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と連結した水素／重水素交換、アレイベースのオリゴペプチド走査アッセイ、及び／または突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学については、当該技術分野において既知の方法のうちのいずれかを使用して結晶化を達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲなどのコンピュータソフトウェアを使用して精製することができる（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって頒布されたＹａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２；例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３を参照）。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成され得る。アラニン走査突然変異誘発技法を含む、突然変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：１３８８−１３９４  ａｎｄ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５を参照されたい。
【００９５】
「エピトープマッピング」という用語は、抗体−抗原認識のための分子決定基の同定プロセスを指す。
【００９６】
参照抗体と「同じエピトープに結合する」という用語は、抗体が、所与の方法によって決定されるアミノ酸残基の同じセグメントに結合することを意味する。本明細書に記載される抗体と共に、抗体が「Ｌ１ＣＡＭ上の同じエピトープ」に結合するかどうかを決定するための技法としては、例えば、エピトープの原子分解能及び水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析などのエピトープマッピング方法が挙げられる。他の方法は、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失がしばしばエピトープ成分の指標と見なされる、抗原フラグメントまたは抗原の突然変異した変異形への抗体の結合を監視する。加えて、エピトープマッピングのための計算的組み合わせ方法を使用することもできる。これらの方法は、目的の抗体がコンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリから特定の短いペプチドを親和性で単離する能力に依存する。同じＶＨ及びＶＬ、または同じＣＤＲ１、２、及び３配列を有する抗体は、同じエピトープに結合することが予想される。
【００９７】
「標的への結合について別の抗体と競合する」抗体は、他の抗体の標的への結合を（部分的または完全に）阻害する抗体を指す。２つの抗体が、標的への結合について互いに競合するかどうか、すなわち、１つの抗体が、他方の抗体の標的への結合を阻害するかどうか、及びどの程度阻害するかは、既知の競合実験、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を使用して決定され得る。いくつかの態様では、抗体は、別の抗体と競合し、別の抗体の標的への結合を少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、最初に標的と共にインキュベートされる冷たい抗体）であるかに応じて異なり得る。競合アッセイは、例えば、Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ  Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７またはＣｈａｐｔｅｒ  １１  ｏｆ″Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ″ｂｙ  Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ  １９９９に記載されるように実施することができる。抗体が互いに両方向で少なくとも５０％遮断する場合、すなわち、一方または他方の抗体が競合実験において抗原と最初に接触するかどうかにかかわらず、２つの抗体が「交差競合する」。
【００９８】
２つの抗体が結合について競合するかまたは交差競合するかを決定するための競合結合アッセイとしては、例えば、実施例に記載されるようなフローサイトメトリーによって、Ｌ１ＣＡＭを発現する細胞への結合についての競合が挙げられる。他の方法としては、ＳＰＲ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法）、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２（１９８３）を参照）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照）、１−１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６（１９９０））、及び直接標識ＲＩＡが挙げられる。（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」、及び「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原上のエピトープへの抗体結合を指す。典型的には、抗体は、（ｉ）例えば、所定の抗原、例えば組み換えヒトＭＩＣＡまたはＭＩＣＢを検体として、及び抗体をリガンドとして使用するＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００機器における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術、または抗体の抗原陽性細胞への結合のスキャチャード解析によって決定した場合、およそ１０−７Ｍ未満、例えばおよそ１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、もしくは１０−１０Ｍ未満、またはさらに低い平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、（ｉｉ）所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異性抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合するための親和性よりも少なくとも２倍高い親和性で所定の抗原に結合する。したがって、「ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する」抗体は、可溶性または細胞結合ヒトＬ１ＣＡＭに、１０−７Ｍ以下、例えば、およそ１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、もしくは１０−１０Ｍ未満、またはそれ以下のＫＤで結合する抗体を指す。「カニクイザルＬ１ＣＡＭと交差反応する」抗体は、カニクイザルＬ１ＣＡＭに、１０−７Ｍ以下、例えば、およそ１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、もしくは１０−１０Ｍ未満、またはそれ以下のＫＤで結合する抗体を指す。いくつかの態様では、非ヒト種由来のＬ１ＣＡＭと交差反応しないかかる抗体は、標準結合アッセイにおいて、これらのタンパク質に対する本質的に検出不可能な結合を示す。
【０１００】
「ｋａｓｓｏｃ」または「ｋａ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指すことが意図され、一方「ｋｄｉｓ」または「ｋｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、ｋｄ対ｋａの比（すなわち、ｋｄ／ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことが意図される。抗体のＫＤ値は、当該技術分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤを決定するための利用可能な方法としては、表面プラズモン共鳴、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）などのバイオセンサーシステム、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法）システム、またはフローサイトメトリー、及びスキャチャード解析が挙げられる。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、ＩｇＧ抗体に対する「高親和性」という用語は、標的抗原に対して１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、または１０−１０Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプについて変化し得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高親和性」結合は、１０−１０Ｍ以下、または１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。
【０１０２】
抗体またはその抗原結合フラグメントを使用するインビトロアッセイまたはインビボアッセイの文脈における「ＥＣ５０」という用語は、最大応答の５０％、すなわち、最大応答とベースラインとの中間である応答を誘導する抗体またはその抗原結合フラグメントの濃度を指す。
【０１０３】
「二重特異性」または「二官能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ´フラグメントの結合を含む様々な方法によって産生され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
【０１０４】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す抗体、または全ての抗体が特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す抗体の組成物を指す。したがって、「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、単一の結合特異性を示し、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び任意の定常領域を有する抗体または抗体組成物を指す。一態様では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって、及び／または組み換え組み合わせヒト抗体ライブラリによって産生される。
【０１０５】
「組み換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、組み換え手段によって調製、発現、作成、または単離された全てのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックもしくは導入染色体性である動物（例えば、マウス）、またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作成、または単離された抗体を含む。かかる組み換えヒト抗体は、生殖系列遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列を利用する可変領域及び定常領域を含むが、例えば、抗体成熟中に生じる後続の再配列及び突然変異を含む。当該技術分野で知られているように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７−１１２５を参照）、可変領域は、抗原結合ドメインを含有し、これは、外来抗原に特異的な抗体を形成するように再配列する様々な遺伝子によってコードされる。再配列に加えて、可変領域は、複数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異または超突然変異と称される）によってさらに修飾されて、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させることができる。定常領域は、抗原（すなわち、アイソタイプスイッチ）にさらに応答して変化するであろう。したがって、抗原に応答して軽鎖及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする再配列及び体細胞突然変異核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有することはできないが、代わりに、実質的に同一であるか、または同様である（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。
【０１０６】
「ヒト抗体」（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域はまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にも由来する。本明細書に記載される抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）によってコードされないアミノ酸残基を含み得る。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図していない。「ヒト」抗体及び「完全ヒト」抗体という用語は、同義に使用される。
【０１０７】
「キメラ抗体」とは、可変領域がある種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来する抗体を指す。
【０１０８】
「交差反応」という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される抗体が異なる種由来のＬ１ＣＡＭに結合する能力を指す。例えば、ヒトＬ１ＣＡＭに結合する本明細書に記載される抗体は、Ｌ１ＣＡＭの別の種（例えば、マウスＬ１ＣＡＭ）に結合することもできる。本明細書で使用される場合、交差反応性は、結合アッセイ（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）中の精製された抗原との特異的反応性を検出することによって、またはＬ１ＣＡＭを生理学的に発現する細胞への結合、またはそれ以外の場合、それと機能的に相互作用することによって測定することができる。交差反応性の決定方法としては、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００  ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）またはフローサイトメトリー技法を使用したＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析による、本明細書に記載される標準結合アッセイが挙げられる。
【０１０９】
本明細書で物体に適用される「天然に存在する」という用語は、物体が自然界で見出され得るという事実を指す。例えば、自然界の供給源から単離され得る生物（ウイルスを含む）に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列であって、実験室の人間によって意図的に修飾されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０１１０】
「ポリペプチド」は、鎖の長さに上限がない、少なくとも２つの連続的に結合されたアミノ酸残基を含む鎖を指す。タンパク質中の１つ以上のアミノ酸残基は、グリコシル化、リン酸化、またはジスルフィド結合形成などの修飾を含有することができるが、これらに限定されない。「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチドを含むことができる。
【０１１１】
「核酸分子」という用語は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得、ｃＤＮＡであり得る。
【０１１２】
「保存的アミノ酸置換」は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を指す。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体中の予測される非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基で置き換えられる。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸保存的置換の同定方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０−１１８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９−８８４（１９９９）、及びＢｕｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：４１２−４１７（１９９７）を参照）。
【０１１３】
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列を最適にアラインメントするために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れた、それらの配列が共有する同一位置の数の関数である（すなわち、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な実施例において記載されるように、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。
【０１１４】
２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、ならびに４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重み、及び１、２、３、４、５、または６の長さ重みを用いて決定することができる。２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７（１９８９））を使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長さペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を用いて決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重量及び１、２、３、４、５、または６の長さ重量を使用して決定することができる。
【０１１５】
本明細書に記載される核酸配列及びタンパク質配列は、例えば、関連配列を同定するために、公的データベースに対して検索を行うための「問い合わせ配列」としてさらに使用することができる。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いてＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を行い、本明細書に記載される核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いてＢＬＡＳＴタンパク質検索を行い、本明細書に記載されるタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップのあるアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されるように利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムの利用時には、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータを使用することができる。ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【０１１６】
核酸は、全細胞において、細胞溶解物において、または部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態において存在し得る。核酸は、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸（例えば、染色体の他の部分）またはタンパク質から精製されるときに、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当該技術分野において周知の他のものを含む標準的な技法によって、「単離される」または「実質的に純粋にされる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照されたい。
【０１１７】
核酸、例えば、ｃＤＮＡは、遺伝子配列を提供するための標準技法に従って突然変異させることができる。コード配列に関して、これらの突然変異は、所望のアミノ酸配列に影響を及ぼし得る。特に、本明細書に記載される天然Ｖ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチ、及び他のかかる配列と実質的に相同であるか、またはそれに由来するＤＮＡ配列が企図される（「由来」は、配列が同一であるか、または別の配列から修飾されていることを示す）。
【０１１８】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それが結合された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。１つのタイプのベクターは、追加のＤＮＡセグメントをライゲーション可能な環状二本鎖ＤＮＡループを指す「プラスミド」である。別のタイプのベクターは、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノムにライゲーションすることができる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞における自律複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に結合された遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書において「組み換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組み換えＤＮＡ技法における有用性の発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるため、互換的に使用することができる。しかしながら、同等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの他の形態の発現ベクターもまた含まれる。
【０１１９】
「組み換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、本明細書で使用される場合、細胞内に天然に存在しない核酸を含み、組み換え発現ベクターが導入された細胞であり得る細胞を指すことが意図される。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫を指すことが意図されることが理解されるべきである。ある特定の修飾は、突然変異または環境影響のいずれかに起因して後の世代において生じ得るため、かかる子孫は、実際には、親細胞と同一であることはできないが、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に依然として含まれる。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「結合された（ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、２つ以上の分子の会合を指す。結合は、共有結合または非共有結合であり得る。結合はまた、遺伝的（すなわち、組み換え融合）であり得る。かかる結合は、化学的コンジュゲーション及び組み換えタンパク質産生などの広範な技術分野で認識される技法を使用して達成され得る。
【０１２１】
「免疫応答」は、当該技術分野において理解されるとおりであり、一般に、脊椎動物内の、異物または異常、例えば、がん細胞に対する生物学的応答を指し、この応答は、これらの異物及びそれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１つ以上の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、もしくは好中球）、ならびにこれらの細胞もしくは肝臓（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）のうちのいずれかによって産生される可溶性巨大分子の作用によって媒介され、これらは、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん細胞もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病理学的炎症の場合、正常なヒト細胞もしくは組織の脊椎動物の体への選択的標的化、結合、損傷、破壊、及び／もしくは排除をもたらす。免疫反応としては、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくはＴｒｅｇ細胞の活性化もしくは阻害、または免疫系の任意の他の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化もしくは阻害が挙げられる。
【０１２２】
「免疫療法」は、免疫系または免疫応答を誘導する、増強する、抑制する、または他の方法で修飾することを含む方法による、疾患に罹患している、または疾患に罹患するもしくは疾患が再発するリスクがある対象の治療を指す。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、「投与すること」は、治療剤または治療剤を含む組成物を、当業者に既知の様々な方法及び送達系のうちのいずれかを使用して、対象に物理的に導入することを指す。本明細書に記載される抗体の好ましい投与経路としては、例えば、注射または注入による静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路が挙げられる。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常、注射による腸内及び局所投与以外の投与様式を意味し、限定されないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病変内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脳室内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入、ならびにインビボ電気穿孔を含む。代替的に、本明細書に記載される抗体は、非親側経路、例えば、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸、舌下、または局所経路を介して投与され得る。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／または１つ以上の延長期間にわたって行うことができる。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、「腫瘍の成長を抑制する」という語句は、腫瘍の成長の任意の測定可能な減少、例えば、腫瘍の成長の少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９９％、または１００％の阻害を含む。いくつかの態様では、腫瘍成長の阻害は、腫瘍成長阻害パーセント（ＴＧＩ％）として測定される。ＴＧＩ％は、ｄａｔ「ｔ」におけるＴＧＩを計算することによって決定することができ、このＴＧＩは、式：［１−（（Ｔｔ／Ｔ０）／（Ｃｔ／Ｃ０））］／［（Ｃｔ−Ｃ０）／Ｃｔ］＊１００［式１］に従って全ての処置動物から計算され、式中、Ｔｔ＝時間「ｔ」における処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｔ０＝最初の測定時の処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｃｔ＝時間「ｔ」における対照動物の腫瘍サイズ中央値、Ｃ０＝最初の測定時の対照動物の腫瘍サイズ中央値である。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「がん」は、体内の異常細胞の制御されていない成長を特徴とする広範な疾患群を指す。未制御の細胞分裂は、隣接する組織に侵入する悪性腫瘍または細胞の形成をもたらし得、リンパ系または血流を介して身体の遠隔部分に転移することができる。
【０１２６】
「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患に関連する症状、合併症、病態、または生化学的徴候の進行、発症、重症度、または再発を逆転、緩和、改善、阻害、または減速もしくは予防するか、または全生存期間を増強することを目的として、対象に対して行われるか、または活性剤を投与する任意のタイプの介入もしくはプロセスを指す。治療は、疾患を有する対象または疾患を有しない対象（例えば、予防のため）のものであり得る。
【０１２７】
「有効用量」または「有効投与量」という用語は、所望の効果を達成する、または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。「治療有効量」または「治療有効投与量」の薬物または治療剤は、単独でまたは別の治療剤と組み合わせて使用される場合、疾患症状の重症度の減少、無疾患症状期間の頻度及び期間の増加、全生存期間の増加（疾患と診断された患者がまだ生存している、がんなどの疾患の診断日もしくは治療開始日のいずれかからの期間）、または疾患苦痛に起因する機能障害もしくは身体障害の防止によって証明される疾患回帰を促進する任意の量の薬物である。薬物の治療有効量または投与量には、「予防有効量」または「予防有効投与量」が含まれ、これは、単独で、または疾患を発症する、もしくは疾患が再発するリスクがある対象に別の治療剤と組み合わせて投与されるときに、疾患の発症または再発を阻害する任意の量の薬物である。治療剤が疾患の退縮を促進するか、または疾患の発症もしくは再発を阻害する能力は、当業者に既知の様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において、またはインビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによって評価することができる。
【０１２８】
例として、抗がん剤は、対象においてがん退縮を促進する薬物である。いくつかの態様では、治療有効量の薬物は、がんを排除する点までがん退縮を促進する。「がん退縮を促進する」とは、有効量の薬物を単独で、または抗腫瘍剤と組み合わせて投与することにより、腫瘍成長もしくはサイズの低減、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の減少、無疾患症状期間の頻度及び期間の増加、全生存期間の増加、疾患の苦痛に起因する機能障害もしくは身体障害の防止、またはそれ以外の場合、患者における疾患症状の改善をもたらすことを意味する。加えて、治療に関する「有効」及び「有効性」という用語は、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方を含む。薬理学的有効性は、薬物が患者のがん退縮を促進する能力を指す。生理学的安全性とは、薬物の投与から生じる細胞、臓器、及び／または生物レベルにおける毒性または他の有害な生理学的影響（有害作用）のレベルを指す。
【０１２９】
腫瘍の治療のための例として、治療有効量または投与量の薬物は、未治療対象と比較して、細胞成長または腫瘍成長を少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約８０％阻害する。いくつかの態様では、治療有効量または投与量の薬物は、細胞成長または腫瘍成長を完全に阻害する、すなわち、細胞成長または腫瘍成長を１００％阻害する。化合物が腫瘍成長を阻害する能力は、以下に記載されるアッセイを使用して評価することができる。代替的に、組成物のこの特性は、化合物が細胞成長を阻害する能力を検査することによって評価することができ、かかる阻害は、当業者に既知のアッセイによってインビトロで測定することができる。本明細書に記載されるいくつかの態様では、腫瘍退縮を観察することができ、少なくとも約２０日、少なくとも約４０日、または少なくとも約６０日間の期間継続することができる。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。
【０１３１】
本明細書で使用される場合、「ｕｇ」及び「ｕＭ」という用語は、それぞれ「μｇ」及び「μＭ」と交換可能に使用される。
【０１３２】
本明細書に記載される様々な態様については、以下のサブセクションにさらに詳細に記載される。
【０１３３】
ＩＩ．抗Ｌ１ＣＡＭ抗体
特定の機能的特徴または特性を特徴とする、抗体、例えば、モノクローナル抗体が本明細書に開示される。例えば、抗体は、哺乳動物（例えば、ヒト及びマウス）Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合し、以下の機能的特性のうちの１つ以上を示す：
（ａ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上した生産性を示す、
（ｂ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して、平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されるように、向上した親和性を示す、
（ｃ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上したＰＩ値を示す、
（ｄ）ｍＡｂ４１７抗体と比較して、会合定数（Ｋ）によって測定されるように、向上した親和性を示す、
（ｅ）腫瘍を含む疾患もしくは病態を予防及び／もしくは治療する、または
（ｆ）これらの任意の組み合わせ。
【０１３４】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ４１７抗体と比較して向上した生産性を示し、例えば、向上した生産性は、実施例３に従って発現される場合、少なくとも５５ｍｇ／Ｌ、少なくとも５６ｍｇ／Ｌ、少なくとも５７ｍｇ／Ｌ、少なくとも５８ｍｇ／Ｌ、少なくとも５９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６４ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６６ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６７ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６８ｍｇ／Ｌ、少なくとも約６９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７４ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７６ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７７ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７８ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７９ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８１ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８２ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８３ｍｇ／Ｌ、少なくとも約８４ｍｇ／Ｌ、または少なくとも約８５ｍｇ／Ｌである。
【０１３５】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、高親和性で、例えば、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定して（例えば、実施例に記載されるように）、例えば、２．６×１０−１０Ｍ未満、２．５×１０−１０Ｍ未満、２．０×１０−１０Ｍ未満、１．５×１０−１０Ｍ未満、１．０×１０−１０Ｍ未満、９×１０−１１Ｍ未満、８×１０−１１Ｍ未満、７×１０−１１Ｍ未満、６×１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、４×１０−１１Ｍ未満、３×１０−１１Ｍ未満、２×１０−１１Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、９×１０−１２Ｍ未満、８×１０−１２Ｍ未満、７×１０−１２Ｍ未満、６×１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、４×１０−１２Ｍ未満、３×１０−１２Ｍ未満、２×１０−１２Ｍ未満、１×１０−１２Ｍ未満、９×１０−１３Ｍ未満、または８×１０−１３Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、２×１０−１０Ｍ未満、１．９×１０−１０Ｍ未満、１．８×１０−１０Ｍ未満、１．７×１０−１０Ｍ未満、１．６×１０−１０Ｍ未満、１．５×１０−１０Ｍ未満、１．４×１０−１０Ｍ未満、１．３×１０−１０Ｍ未満、１．２×１０−１０Ｍ未満、または１．１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、１．１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。他の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、９×１０−１２Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、１×１０−１２Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、８×１０−１１Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、１×１０−１２Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、１．０５×１０−１０Ｍ未満のＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約８．２２×１０−１２ＭのＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約７．４×１０−１１ＭのＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約９．６×１０−１１ＭのＫＤでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。
【０１３６】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、高親和性で、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定して（例えば、実施例に記載されるように）、例えば、５×１０−１０Ｍ未満、４×１０−１０Ｍ未満、３×１０−１０Ｍ未満、２×１０−１０Ｍ未満、１．０×１０−１０Ｍ未満、９×１０−１１Ｍ未満、８×１０−１１Ｍ未満、７×１０−１１Ｍ未満、６×１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、４×１０−１１Ｍ未満、３×１０−１１Ｍ未満、２×１０−１１Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、９×１０−１２Ｍ未満、８×１０−１２Ｍ未満、７×１０−１２Ｍ未満、６×１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、４×１０−１２Ｍ未満、３×１０−１２Ｍ未満、２×１０−１２Ｍ未満、１×１０−１２Ｍ未満、９×１０−１３Ｍ未満、または８×１０−１３Ｍ未満のＫでヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する。
【０１３７】
様々な種のＬ１ＣＡＭに対する抗体の結合能力を評価するための標準アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、及びＲＩＡを含む当該技術分野において既知である。好適なアッセイは、実施例に詳細に記載されている。抗体の結合動態（例えば、結合親和性）は、当該技術分野において既知の標準アッセイによって、例えばＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析、またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）によって評価することもできる。Ｌ１ＣＡＭの機能的特性（例えば、リガンド結合）に対する抗体の効果を評価するためのアッセイが、以下及び実施例でさらに詳細に記載される。
【０１３８】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、毛管等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）法によって測定して（例えば、実施例に記載されるように）、９．６未満、９．５未満、９．４未満、９．３未満、９．２未満、９．１未満、９．０未満、８．９未満、８．８未満、８．７未満、８．６未満、８．５未満、８．４未満、８．３未満、８．２未満、８．１未満、８．０未満、７．９未満、７．８未満、７．７未満、または７．６未満の改善された等電点（ＰＩ）値を示す。
【０１３９】
ある特定の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む参照抗体と同じＬ１ＣＡＭエピトープに特異的に結合し、（ａ）参照抗体のＶＨは、配列番号２３を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２４を含む、（ｂ）参照抗体のＶＨは、配列番号２５を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２６を含む、（ｃ）参照抗体のＶＨは、配列番号２７を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２８を含む、（ｄ）参照抗体のＶＨは、配列番号２９を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３０を含む、または（ｅ）参照抗体のＶＨは、配列番号３１を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３２を含む。
【０１４０】
ある特定の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む参照抗体と同じＬ１ＣＡＭエピトープに特異的に結合し、抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３中の少なくとも１つのアミノ酸は、参照抗体（例えば、ｍＡｂ４１７抗体）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３とは異なり、参照抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含み、参照抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む。ある特定の態様では、少なくとも１つのアミノ酸差は、（ｉ）ＶＨ  ＣＤＲ２の残基５におけるグルタミン、（ｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ１の残基８におけるセリン、及び／または（ｉｉｉ）抗Ｌ１ＣＡＭ抗体もしくはその抗原結合フラグメントのＶＬ  ＣＤＲ３の残基８におけるプロリンを含む。ある特定の態様では、少なくとも１つのアミノ酸差は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントの（ｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基３〜９におけるアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、トレオニン、プロリン、及びトリプトファン；（ｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基３〜９におけるアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、セリン、プロリン、及びトリプトファン；または（ｉｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基４〜９におけるロイシン、バリンもしくはヒスチジン、トリプトファンもしくはフェニルアラニン、チロシン、プロリン、及びトリプトファンを含む。
【０１４１】
ある特定の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｌ１ＣＡＭエピトープへの結合について、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む参照抗体と交差競合し、抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３中の少なくとも１つのアミノ酸は、参照抗体（例えば、ｍＡｂ４１７抗体）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３とは異なり、（ｉ）参照抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含み、参照抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む。ある特定の態様では、少なくとも１つのアミノ酸差は、（ｉ）ＶＨ  ＣＤＲ２の残基５におけるグルタミン、（ｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ１の残基８におけるセリン、及び／または（ｉｉｉ）抗Ｌ１ＣＡＭ抗体もしくはその抗原結合フラグメントのＶＬ  ＣＤＲ３の残基８におけるプロリンを含む。ある特定の態様では、少なくとも１つのアミノ酸差は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントの（ｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基３〜９におけるアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、トレオニン、プロリン、及びトリプトファン；（ｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基３〜９におけるアラニン、グリシン、フェニルアラニン、チロシン、セリン、プロリン、及びトリプトファン；または（ｉｉｉ）ＶＬ  ＣＤＲ３においてそれぞれ残基４〜９におけるロイシン、バリンもしくはヒスチジン、トリプトファンもしくはフェニルアラニン、チロシン、プロリン、及びトリプトファンを含む。
【０１４２】
ある特定の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｌ１ＣＡＭエピトープへの結合について、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む参照抗体と交差競合し、（ａ）参照抗体のＶＨは、配列番号２３を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２４を含む、（ｂ）参照抗体のＶＨは、配列番号２５を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２６を含む、（ｃ）参照抗体のＶＨは、配列番号２７を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号２８を含む、（ｄ）参照抗体のＶＨは、配列番号２９を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３０を含む、または（ｅ）参照抗体のＶＨは、配列番号３１を含み、参照抗体のＶＬは、配列番号３２を含む。
【０１４３】
競合する抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、または隣接するエピトープに結合する（例えば、立体障害によって明らかにされるように）。２つの抗体が標的への結合について互いに競合するかどうかは、ＲＩＡ及びＥＩＡなどの当該技術分野において既知の競合実験を使用して決定することができる。
【０１４４】
２つの抗体が同じエピトープに結合するかどうかを決定するための技法としては、例えば、エピトープの原子分解能及び水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析、抗原フラグメントまたは抗原の突然変異した変異形への抗体の結合の監視方法（抗原配列内のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失は、エピトープ成分の指標と見なされることが多い）、エピトープマッピングのための計算的組み合わせ方法が挙げられる。
【０１４５】
ある特定の態様では、例えば、免疫アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法）、または動態排除アッセイによって測定して、Ｌ１ＣＡＭファミリー内の別のタンパク質よりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上高い親和性でＬ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に提供される。特定の態様では、例えば、イムノアッセイによって測定して、Ｌ１ＣＡＭファミリー内の別のタンパク質と交差反応性を有しないＬ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に提供される。
【０１４６】
ある特定の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、天然抗体ではないか、または天然に存在する抗体ではない。例えば、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、例えば、より多い、より少ない、または異なるタイプの翻訳後修飾を有することによって、天然に存在する抗体のものとは異なる翻訳後修飾を有する。
【０１４７】
ＩＩＩ．例示的な抗Ｌ１ＣＡＭ抗体
本明細書に開示される方法で使用され得る特定の抗体は、実施例１及び実施例２で構築された抗体Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２のＣＤＲ及び／または可変領域配列を有する抗体（例えば、モノクローナル抗体）、ならびにそれらの可変領域またはＣＤＲ配列に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性）を有する抗体である。Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２のＶＨアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２３、２５、２７、２９、及び３１に記載される。Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２のＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２４、２６、２８、３０、及び３２に記載される。
【表２】
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【表３】
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【表４Ａ−１】
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【表４Ａ−２】
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【表４Ｂ−１】
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【表４Ｂ−２】
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【０１４８】
したがって、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に提供され、重鎖可変領域は、配列番号２３、２５、２７、２９、または３１のアミノ酸配列を含む。他の態様では、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２、１０、または４からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲを含む。
【０１４９】
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントも提供され、軽鎖可変領域は、配列番号２４、２６、２８、３０、または３２のアミノ酸配列を含む。他の態様では、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２、７、１３、１５、１７、１９、または２１からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
【０１５０】
ある特定の態様では、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２、１０、または４からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ、及び配列番号１２、７、１３、１５、１７、１９、または２１からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
【０１５１】
また、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントも提供され、（ｉ）重鎖可変領域は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）重鎖可変領域は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、（ｉｉｉ）重鎖可変領域は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、（ｉｖ）重鎖可変領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、または（ｖ）重鎖可変領域は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
【０１５２】
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントが本明細書に提供され、重鎖可変領域は、配列番号２３、２５、２７、２９、または３１として記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
また、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントも本明細書に提供され、軽鎖可変領域は、配列番号２４、２６、２８、３０、または３２として記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１５４】
また、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントも提供され、重鎖可変領域は、配列番号２３、２５、２７、２９、及び３１として示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２４、２６、２８、３０、または３２として示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１５５】
いくつかの態様では、本開示は、単離された抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、
（ａ）配列番号２３及び２４をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列、
（ｂ）配列番号２５及び２６をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列、
（ｃ）配列番号２７及び２８をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列、
（ｄ）配列番号２９及び３０をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列、または
（ｅ）配列番号３１及び３２をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む。
【０１５６】
抗体Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２についてのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２、１０、及び４に記載される。Ａｂ６１２についてのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、７、及び１３に記載される。Ａｂ４Ｈ５についてのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、７、及び１５に記載される。Ａｂ２Ｃ２についてのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、７、及び１７に記載される。Ａｂ４Ｈ６についてのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、７、及び１９に記載される。Ａｂ５Ｄ１２についてのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、７、及び２１に記載される。
【０１５７】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する本開示の抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１５８】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１５９】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６０】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６１】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６２】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６３】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６４】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６５】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６６】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号３８を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号３９を含む。
【０１６７】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４０を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４１を含む。
【０１６８】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４２を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４３を含む。
【０１６９】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４４を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４５を含む。
【０１７０】
いくつかの態様では、ヒトＬ１ＣＡＭに特異的に結合する抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＨＣは、配列番号４６を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣは、配列番号４７を含む。
【表５Ａ−１】
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【表５Ａ−２】
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【表５Ａ−３】
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【表５Ｂ−１】
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【表５Ｂ−２】
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【０１７１】
本明細書に記載されるＶＨドメイン、またはその１つ以上のＣＤＲは、重鎖、例えば、完全長重鎖を形成するための定常ドメインに結合され得る。同様に、本明細書に記載されるＶＬドメイン、またはその１つ以上のＣＤＲは、軽鎖、例えば、完全長軽鎖を形成するための定常ドメインに結合され得る。完全長重鎖及び完全長軽鎖が結合して、完全長抗体を形成する。
【０１７２】
したがって、特定の態様では、抗体軽鎖及び重鎖、例えば、別個の軽鎖及び重鎖を含む抗体が本明細書に提供される。軽鎖に関して、特定の態様では、本明細書に記載される抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。別の具体的な態様では、本明細書に記載される抗体の軽鎖は、ラムダ軽鎖である。さらに別の具体的な態様において、本明細書に記載される抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。特定の態様では、Ｌ１ＣＡＭポリペプチド（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意のＶＬまたはＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の態様では、Ｌ１ＣＡＭポリペプチド（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載されるＶＬまたはＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野において記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ，（１９９１）上記を参照されたい。
【０１７３】
重鎖に関して、いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体の重鎖は、アルファ（ａ）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖であり得る。別の具体的な態様では、記載される抗体の重鎖は、ヒトα（ａ）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖を含むことができる。一態様では、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載されるＶＨまたはＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の態様では、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に開示されるＶＨまたはＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、重鎖の定常領域は、本明細書に記載されるか、または当該技術分野において既知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野において記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ，（１９９１）上記を参照されたい。
【０１７４】
いくつかの態様では、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載されるＶＨまたはＶＨ  ＣＤＲならびにＶＬ及びＶＬ  ＣＤＲを含む、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含む、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、定常領域は、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）、ならびにアロタイプ（例えば、Ｇ１ｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ、及びｎＧ４ｍ）及びそれらの変異体を含む、天然に存在するヒトＩｇＧの定常領域のアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）及びＪｅｆｆｅｒｉｓ  Ｒ．ａｎｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ，ｍＡｂｓ  １：４，１−７（２００９）を参照されたい。いくつかの態様では、定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはそれらの変異体の定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０１７５】
ある特定の態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆｃエフェクター機能、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を有しない。エフェクター機能は、Ｆｃ領域によって媒介され、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメイン内のヒンジ領域に最も近接する残基は、抗体のエフェクター機能を担っており、これは、先天性免疫系のエフェクター細胞上のＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ−Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）の大部分が重複する結合部位を含有するためである。また、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体よりも低レベルのＦｃエフェクター機能を有する。抗体のエフェクター機能は、当該技術分野において既知の異なるアプローチによって低減または回避され得、（１）Ｆｃ領域を欠く抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または単量体ＶＨもしくはＶＬドメインからなるｓｄＡｂなど）を使用することと、（２）アグリコシル化抗体を生成することと（例えば、糖が結合する残基を欠失または改変し、糖を酵素的に除去し、グリコシル化阻害剤の存在下で培養した細胞内で抗体を産生することによって、またはタンパク質をグリコシル化することができない細胞（例えば、細菌宿主細胞、例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号を参照）内で抗体を発現させることによって生成される）、（３）エフェクター機能が低減したＩｇＧサブクラス由来のＦｃ領域を採用することと（例えば、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４抗体由来のＦｃ領域、またはＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４抗体由来のＣＨ２ドメインを含むキメラＦｃ領域、例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号及びＬａｕ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９−４７７７（２０１３）を参照）、（４）Ｆｃ機能を低減する、またはＦｃ機能をもたらさない突然変異を有するＦｃ領域を生成することと、を含む。例えば、米国公開第２０１２０１００１４０号及びその中で引用される米国及びＰＣＴ出願、ならびにＡｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ  １：６，５７２−５７９（２００９）を参照されたい。
【０１７６】
したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、単量体ＶＨまたはＶＬドメインからなるＦａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、またはｓｄＡｂである。かかる抗体フラグメントは、当該技術分野において周知であり、上記に記載される。
【０１７７】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆｃエフェクター機能が低減しているか、またはＦｃエフェクター機能を有しないＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、定常領域は、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列を含み、いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１アイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、またはＩｇＧ２由来のヒンジ領域及びＩｇＧ４由来のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域、またはＦｃ機能の低減をもたらすか、もしくはＦｃ機能をもたらさない突然変異を有するＦｃ領域を含む。Ｆｃエフェクター機能が低減しているか、またはＦｃエフェクター機能を有しないＦｃ領域には、当該技術分野において既知のものが含まれる。例えば、Ｌａｕ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９−４７７７（２０１３）、Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ  １：６，５７２−５７９（２００９）、及び米国公開第２０１２０１００１４０号、ならびにその中で引用される米国特許及び刊行物ならびにＰＣＴ刊行物を参照されたい。また、Ｆｃエフェクター機能が低減しているか、またはＦｃエフェクター機能を有しないＦｃ領域は、当業者によって容易に作製することができる。
【０１７８】
ＩＶ．核酸分子
本明細書に記載される別の態様は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちのいずれか１つをコードする１つ以上の核酸分子に関する。核酸は、全細胞において、細胞溶解物において、または部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態において存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動、及び当該技術分野において周知の他のものを含む標準的な技法によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸（例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば、自然界で単離されたＤＮＡに結合する染色体ＤＮＡ）またはタンパク質から精製されるときに、「単離される」または「実質的に純粋にされる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。本明細書に記載される核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含有することができるか、または含有することができない。ある特定の態様では、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０１７９】
本明細書に記載される核酸は、標準の分子生物学技法を使用して得ることができる。ハイブリドーマによって発現される抗体（例えば、以下にさらに記載されるヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ）について、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖及び重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技法によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリから（例えば、ファージディスプレイ技法を使用して）得られる抗体について、抗体をコードする核酸をライブラリから回収することができる。
【０１８０】
本明細書に記載されるある特定の核酸分子は、Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、Ａｂ５Ｄ１２モノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬ配列をコードするものである。Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、Ａｂ５Ｄ１２のＶＨ配列をコードする例示的なＤＮＡ配列は、配列番号８、１４、１６、１８、または２２に記載される。Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、Ａｂ５Ｄ１２のＶＬ配列をコードする例示的なＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、及び３７に記載される。
【表６−１】
2021529776.tif 000017
【表６−２】
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【表６−３】
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【表７−１】
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【表７−２】
2021529776.tif 000021
【０１８１】
本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の作製方法は、重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列をシグナルペプチドと共に含む細胞株において重鎖及び軽鎖を発現することを含むことができる。これらのヌクレオチド配列を含む宿主細胞が、本明細書に包含される。
【０１８２】
ＶＨ及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られると、これらのＤＮＡフラグメントを、標準の組み換えＤＮＡ技法によってさらに操作して、例えば、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＬまたはＶＨをコードするＤＮＡフラグメントは、抗体定常領域または可塑性リンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に結合される。「作動可能に結合された」という用語は、この文脈で使用される場合、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がフレーム内に残るように、２つのＤＮＡフラグメントが接合されることを意味することが意図される。
【０１８３】
ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及び／またはＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に結合することによって、完全長の重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域、例えば、ＩｇＧ２及び／またはＩｇＧ４定常領域であり得る。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子について、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に結合され得る。
【０１８４】
ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＬコードＤＮＡを軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に結合することによって、完全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。
【０１８５】
ｓｃＦｖ遺伝子を作成するために、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡフラグメントを、可撓性リンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする別のフラグメントに作動可能に結合させ、その結果、ＶＨ及びＶＬ列が連続した一本鎖タンパク質として、ＶＬ及びＶＨ領域が可撓性リンカーによって接合された状態で発現され得るようにする（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４を参照）。
【０１８６】
いくつかの態様では、本開示は、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を含むベクターを提供する。他の態様では、ベクターを遺伝子療法に使用することができる。
【０１８７】
本開示に好適なベクターとしては、発現ベクター、ウイルスベクター、及びプラスミドベクターが挙げられる。一態様では、ベクターは、ウイルスベクターである。
【０１８８】
本明細書で使用される場合、発現ベクターは、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要なエレメントを含有する任意の核酸構築物を指すか、またはＲＮＡウイルスベクターの場合、適切な宿主細胞に導入されたときに、複製及び翻訳に必要なエレメントを含有する任意の核酸構築物を指す。発現ベクターとしては、プラスミド、ファージミド、ウイルス、及びそれらの誘導体が挙げられる。
【０１８９】
本開示の発現ベクターは、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むことができる。一態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのコード配列は、発現制御配列に作動可能に結合される。本明細書で使用される場合、２つの核酸配列は、それらが各構成要素核酸配列がその官能性を保持することを可能にするような方法で共有結合される場合、作動可能に結合される。コード配列及び遺伝子発現対照配列は、コード配列の発現または転写及び／もしくは翻訳を遺伝子発現対照配列の影響下または制御下に置くような方法で共有結合される場合、作動可能に結合されると言われる。５´遺伝子発現配列中のプロモーターの誘導が、コード配列の転写をもたらす場合、及び２つのＤＮＡ配列間の結合の性質が、（１）フレームシフト突然変異の導入をもたらさない場合、（２）コード配列の転写を誘導するプロモーター領域の能力を妨げない場合、または（３）タンパク質に翻訳される対応するＲＮＡ転写産物の能力を妨げない場合、２つのＤＮＡ配列が作動可能に結合されると言われる。したがって、遺伝子発現配列が、得られた転写産物が所望の抗体またはその抗原結合フラグメントに翻訳されるように、そのコード核酸配列の転写を行うことができる場合、遺伝子発現配列は、コード核酸配列に作動可能に結合されるであろう。
【０１９０】
ウイルスベクターとしては、以下のウイルス：レトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳癌ウイルス、及びラウス肉腫ウイルスなどのレトロウイルス；レンチウイルス；アデノウイルス；アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン・バーウイルス；乳頭腫ウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；及びレトロウイルスなどのＲＮＡウイルス由来の核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。当該技術分野において周知の他のベクターを容易に採用することができる。ある特定のウイルスベクターは、非必須遺伝子が目的の遺伝子に置き換えられた非細胞病性真核生物ウイルスに基づく。非細胞病性ウイルスには、レトロウイルスが含まれ、そのライフサイクルは、ゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写と、その後の宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルス組み込みとを伴う。レトロウイルスは、ヒト遺伝子療法試験のために承認されている。最も有用なのは、複製欠損（すなわち、所望のタンパク質の合成を誘導することができるが、感染性粒子を製造することができない）レトロウイルスである。かかる遺伝子改変レトロウイルス発現ベクターは、インビボでの遺伝子の高効率形質導入に一般的な有用性を有する。複製欠損レトロウイルスを産生するための標準プロトコル（プラスミドへの外因性遺伝子材料の組み込み、プラスミドによるパッケージング細胞株のトランスフェクション、パッケージング細胞株による組み換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の収集、及びウイルス粒子による標的細胞の感染のステップを含む）は、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９０）及びＭｕｒｒｙ，Ｅ．Ｊ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．（１９９１）に提供される。
【０１９１】
一態様では、ウイルスは、アデノ随伴ウイルス、二本鎖ＤＮＡウイルスである。アデノ随伴ウイルスは、複製欠損であるように操作することができ、広範囲の細胞型及び種に感染することができる。さらに、熱及び脂質溶媒の安定性、造血細胞を含む多様な系統の細胞における高い形質導入頻度、ならびに超感染阻害の欠如などの利点を有し、したがって、複数の一連の形質導入を可能にする。報告によれば、アデノ随伴ウイルスは、部位特異的な方法でヒト細胞ＤＮＡに組み込むことができ、それによって、挿入突然変異誘発の可能性及びレトロウイルス感染の特徴である挿入遺伝子発現の可変性を最小限に抑えることができる。加えて、野生型アデノ随伴ウイルス感染症は、選択的圧力の不在下で１００を超える継代にわたって組織培養において追跡され、アデノ随伴ウイルスゲノム組み込みが、比較的安定した事象であることを暗示している。アデノ随伴ウイルスはまた、染色体外様式で機能することができる。
【０１９２】
他の態様では、ベクターは、レンチウイルスに由来する。ある特定の態様では、ベクターは、非分裂細胞に感染することができる組み換えレンチウイルスのベクターである。
【０１９３】
レンチウイルスゲノム及びプロウイルスＤＮＡは、典型的には、２つの長末端反復（ＬＴＲ）配列に隣接する、レトロウイルスに見られる３つの遺伝子：ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖを有する。ｇａｇ遺伝子は、内部構造（マトリックス、カプシド、及びヌクレオカプシド）タンパク質をコードし、ｐｏｌ遺伝子は、ＲＮＡ指向性ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）、プロテアーゼ、及びインテグラーゼをコードし、ｅｎｖ遺伝子は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質をコードする。５´及び３´ＬＴＲは、ビリオンＲＮＡの転写及びポリアデニル化を促進する役割を果たす。ＬＴＲは、ウイルス複製に必要な全ての他のシス作用配列を含有する。レンチウイルスは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ｎｅｆ、及びｖｐｘ（ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、及び／またはＳＩＶ中）を含む追加の遺伝子を有する。
【０１９４】
５´ＬＴＲに隣接するのは、ゲノムの逆転写（ｔＲＮＡプライマー結合部位）及びウイルスＲＮＡを粒子（Ｐｓｉ部位）に効率的に封入するために必要な配列である。ウイルスゲノムからの封入（またはレトロウイルスＲＮＡの感染性ビリオンへのパッケージング）に必要な配列が欠損している場合、シス欠損は、ゲノムＲＮＡの封入を防止する。
【０１９５】
しかしながら、結果として生じる突然変異体は、依然として全てのビリオンタンパク質の合成を指向することができる。本開示は、非分裂細胞に感染することができる組み換えレンチウイルスの産生方法であって、パッケージング機能、すなわち、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ、ならびにｒｅｖ及びｔａｔを担持する２つ以上のベクターで好適な宿主細胞をトランスフェクトすることを含む、方法を提供する。以下で本明細書に開示されるであろうように、機能的ｔａｔ遺伝子を欠くベクターは、ある特定の用途に望ましい。したがって、例えば、第１のベクターは、ウイルスｇａｇ及びウイルスｐｏｌをコードする核酸を提供することができ、別のベクターは、パッケージング細胞を産生するためにウイルスｅｎｖをコードする核酸を提供することができる。本明細書では、転写ベクターとして同定される異種遺伝子を提供するベクターをそのパッケージング細胞に導入することにより、目的の外来遺伝子を担持する感染性ウイルス粒子を放出するプロデューサー細胞が得られる。
【０１９６】
ベクター及び外来遺伝子の上述の構成によれば、第２のベクターは、ウイルスエンベロープ（ｅｎｖ）遺伝子をコードする核酸を提供することができる。ｅｎｖ遺伝子は、レトロウイルスを含むほぼ任意の好適なウイルスに由来し得る。いくつかの態様では、ｅｎｖタンパク質は、ヒト及び他の種の細胞の形質導入を可能にする両性エンベロープタンパク質である。
【０１９７】
レトロウイルス由来のｅｎｖ遺伝子の例には、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶまたはＭＭＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶまたはＨＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶまたはＭＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶまたはＧＡＬＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が含まれるが、これらに限定されない。肝炎ウイルス及びインフルエンザの水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）タンパク質Ｇ（ＶＳＶ  Ｇ）などの他のｅｎｖ遺伝子を使用することもできる。
【０１９８】
ウイルスｅｎｖ核酸配列を提供するベクターは、本明細書の他の箇所に記載される調節配列と作動可能に会合する。
【０１９９】
レンチウイルスベクターの例は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ９９３１２５１、ＷＯ９７１２６２２、ＷＯ９８１７８１５、ＷＯ９８１７８１６、及びＷＯ９８１８９３４に開示される。
【０２００】
他のベクターとしては、プラスミドベクターが挙げられる。プラスミドベクターは、当該技術分野で広く説明されており、当業者に周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照されたい。ここ数年で、プラスミドベクターは、宿主ゲノム内で複製し、宿主ゲノムに組み込むことができないため、インビボで遺伝子を細胞に送達するのに特に有利であることが見出されている。しかしながら、宿主細胞と適合性のプロモーターを有するこれらのプラスミドは、プラスミド内で作動可能にコードされた遺伝子からペプチドを発現することができる。市販の供給業者から入手可能な一般的に使用されるプラスミドとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、様々なｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、様々なｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０、及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが挙げられる。特定のプラスミドの追加の例としては、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログ番号Ｖ７９０２０、ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログ番号Ｖ８７０２０、ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−Ｈｉｓ、カタログ番号Ｖ８６３２０、及びｐＢｕｄＣＥ４．１、カタログ番号Ｖ５３２２０が挙げられ、これらは全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）製である。他のプラスミドは、当業者には周知である。追加的に、プラスミドは、ＤＮＡの特定のフラグメントを除去及び／または付加するために、標準の分子生物学技法を使用してカスタム設計することができる。
【０２０１】
Ｖ．抗体産生
Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントは、抗体の合成のために当該技術分野において既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によって、または組み換え発現技法によって産生され得る。本明細書に記載される方法には、別段の指示がない限り、当該技術分野の技能内の分子生物学、微生物学、遺伝子解析、組み換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに関連分野における従来の技法が採用される。これらの技法は、例えば、本明細書で引用される参考文献に記載され、文献で完全に説明される。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
【０２０２】
特定の態様では、本明細書に記載される抗体は、例えば、ＤＮＡ配列の合成、遺伝子操作を介した作成を伴う任意の手段によって調製、発現、作成、または単離された抗体（例えば、モノロクローナル抗体）である。ある特定の態様では、かかる抗体は、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列またはアミノ酸配列）を含む。
【０２０３】
ある特定の態様では、本明細書に記載される細胞または宿主細胞を培養することを含む、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの作製方法が本明細書に提供される。ある特定の態様では、本明細書に記載される細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する（例えば、組み換え発現する）ことを含む、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの作製方法が本明細書に提供される。特定の態様では、細胞は、単離された細胞である。特定の態様では、外来性ポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。特定の態様では、方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体またはその抗原結合フラグメントを精製するステップをさらに含む。
【０２０４】
ポリクローナル抗体の産生方法は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章を参照）。
【０２０５】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組み換え及びファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該技術分野において既知の多種多様な技法を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３  ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）において教示されるものを含む、ハイブリドーマ技法を使用して産生され得る。「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術を通じて産生される抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載される抗体またはそのフラグメント、例えば、かかる抗体の軽鎖及び／または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組み換え的に産生され得る。
【０２０６】
特定の態様では、「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、単一細胞（例えば、組み換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体であり、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡまたは当該技術分野または本明細書に提供される実施例において既知の他の抗原結合または競合結合アッセイによって決定されるように、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に免疫特異的に結合する。特定の態様では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。ある特定の態様では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の態様では、モノクローナル抗体は、単一特異性または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。本明細書に記載されるモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されるハイブリドーマ法によって作製され得るか、または例えば、本明細書に記載される技法を使用してファージライブラリから単離され得る。クローン細胞株及びそれによって発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，上記の第１１章を参照）。
【０２０７】
ハイブリドーマ技術を使用した、特定の抗体の産生及びスクリーニング方法は、日常的であり、当該技術分野において周知である。例えば、ハイブリドーマ法において、マウスまたはヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター、もしくはマカクザルなどの他の適切な宿主動物を免疫化して、免疫化に使用されるタンパク質（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を誘発する。代替的に、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。次いで、リンパ球をポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。追加的に、ＲＩＭＭＳ（反復免疫化多発部位）技法を使用して、動物を免疫化することができる（参照によりその全体が組み込まれる、Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ＫＥ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １６：３８１−９）。
【０２０８】
いくつかの態様では、マウス（またはニワトリ、ラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌなどの他の動物）は、抗原（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭなどのＬ１ＣＡＭ）で免疫化され得、免疫応答が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清中で検出されると、マウス脾臓が採取され、脾細胞が単離される。脾細胞は次いで、周知の技法によって任意の好適な骨髄腫細胞、例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０からの細胞に融合してハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によってクローニングする。ある特定の態様では、免疫化マウスのリンパ節を採取し、ＮＳＯ骨髄腫細胞と融合させる。
【０２０９】
このように調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地で播種され、成長する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する物質ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含む。
【０２１０】
特定の態様は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベル産生をサポートし、ＨＡＴ培地などの培地に感受性を有する骨髄腫細胞を採用する。これらの骨髄腫細胞株の中には、マウス骨髄腫株、例えば、ＮＳＯ細胞株、またはＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの、及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞がある。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生についても記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ  Ｄ（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３：３００１−５、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０２１１】
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地を、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に対して指向されるモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野において既知の方法、例えば、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【０２１２】
所望の特異性、親和性、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準的な方法によって増殖され得る（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、上記）。この目的に好適な培養培地として、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍としてインビボで成長することができる。
【０２１３】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水、または血清から好適に分離される。
【０２１４】
本明細書に記載される抗体には、特異的Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）を認識し、当業者に既知の任意の技法によって生成することができる抗体フラグメントが含まれる。例えば、本明細書に記載されるＦａｂ及びＦ（ａｂ´）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生する）またはペプシン（Ｆ（ａｂ´）２フラグメントを産生する）などの酵素を使用して免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆａｂフラグメントは、抗体分子の２つの同一のアームのうちの１つに対応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対合された完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ´）２フラグメントは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって結合された抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
【０２１５】
一態様では、全抗体を産生するために、制限部位を保護するためのＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、テンプレート、例えばｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローニング技法を利用して、ＰＣＲ増幅したＶＨドメインを、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅したＶＬドメインは、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨ及びＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。次いで、当業者に既知の技法を使用して、重鎖変換ベクター及び軽鎖変換ベクターを細胞株に共トランスフェクトして、完全長抗体、例えばＩｇＧを発現する安定したまたは一過性の細胞株を生成する。
【０２１６】
キメラ抗体は、抗体の異なるフラグメントが異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合された非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、またはチキン）モノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−７、Ｏｉ  ＶＴ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、及び同第６，３３１，４１５号を参照されたい。
【０２１７】
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域、及び非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウスまたはニワトリ免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の態様では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくともフラグメント、典型的にはヒト免疫グロブリンのフラグメントを含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリングまたは再表面化（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号及び同第ＥＰ５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ  ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４、ならびにＲｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３）、鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、Ｔａｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０（３）：２６７−７９、Ｂａｃａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（１６）：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  ９（１０）：８９５  ９０４、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５（８）：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ  １５０（２）：４０９−１０、及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２３５（３）：９５９−７３に開示されている技法を含むが、これらに限定されない当該技術分野において既知の様々な技法を使用して産生され得る。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４Ａｌ号（２００５年２月２４日）も参照されたい。
【０２１８】
多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製するための方法が記載されている。例えば、米国特許第７，９５１，９１７号、同第７，１８３，０７６号、同第８，２２７，５７７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，９８９，８３０号、同第５，８６９，６２０号、同第６，１３２，９９２号、及び同第８，５８６，７１３号を参照されたい。
【０２１９】
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当該技術分野において周知の方法によって産生することができる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ＆Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３１：２５−３８、Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １（３）：２５３−２６３、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ７４（４）：２７７−３０２、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、及び同第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたい。
【０２２０】
さらに、Ｌ１ＣＡＭ抗原に免疫特異的に結合する抗体を、当業者に周知の技法を使用して、抗原を「模倣」する抗イディオタイプ抗体を生成するために利用することができる。（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ  ＮＳ＆Ｂｏｎａ  ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７−４４４、及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆ  Ａ（１９９１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。
【０２２１】
特定の態様では、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体と同じＬ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）のエピトープに結合する本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。特定の態様では、本明細書に記載される抗体（例えば、Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２）を（例えば、用量依存的様式で）Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）への結合から競合的に遮断する本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２２】
ヒト抗体は、当該技術分野において既知の任意の方法を使用して産生され得る。例えば、機能的内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用することができる。特に、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、またはマウス胚幹細胞への相同組み換えによって導入され得る。代替的に、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域は、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚幹細胞に導入され得る。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組み換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入と別個にまたは同時に機能しないようにすることができる。特に、ＪＨ領域のホモ接合欠失は、内因性抗体の産生を防止する。修飾された胚幹細胞を拡張し、胚盤胞にマイクロインジェクションしてキメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を産生する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、抗原の全てまたはフラグメント（例えば、Ｌ１ＣＡＭ）で正常に免疫化される。抗原に対して指向されたモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫化されたトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスによって保有されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配列し、その後、クラス切り替え及び体細胞突然変異を受ける。したがって、かかる技法を使用して、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  Ｎ＆Ｈｕｓｚａｒ  Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５−９３を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにかかる抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、及び同第ＷＯ９６／３３７３５、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することができるマウスの例としては、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，１８４号）、ＨＵＡＢ−ＭＯＵＳＥ（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍ、米国特許第５，５４５，８０６号及び同第５，５６９，８２５号）、ＴＲＡＮＳ  ＣＨＲＯＭＯ  ＭＯＵＳＥ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）及びＫＭ  ＭＯＵＳＥ商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）が挙げられる。
【０２２３】
Ｌ１ＣＡＭに特異的に結合するヒト抗体（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用して、上述のファージディスプレイ方法を含む当該技術分野において既知の様々な方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、及び同第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、及び同第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたい。
【０２２４】
いくつかの態様では、ヒト抗体は、マウス−ヒトハイブリドーマを使用して産生され得る。例えば、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球をマウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス−ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス−ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭなどのＬ１ＣＡＭ）に免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。かかる方法は既知であり、当該技術分野において記載されている。例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４６：１９−２３、Ｎａｇａｎａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １４：２７−３１を参照されたい。
【０２２５】
ＶＩ．細胞及びベクター
ある特定の態様では、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）ならびに関連するポリヌクレオチド及び発現ベクターに特異的に結合する、本明細書に記載される抗体（またはその抗原結合フラグメント）を（例えば、組み換え的に）発現する細胞（例えば、宿主細胞）が本明細書に提供される。例えば、哺乳動物細胞における宿主細胞における組み換え発現のための抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書に提供される。本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体（例えば、ヒトまたはヒト化抗体）を組み換え発現するためのかかるベクターを含む宿主細胞もまた、本明細書に提供される。特定の態様では、宿主細胞からかかる抗体を発現することを含む、本明細書に記載される抗体の産生方法が本明細書に提供される。
【０２２６】
Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体（例えば、完全長抗体、抗体の重鎖及び／または軽鎖、または本明細書に記載される一本鎖抗体）の組み換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。本明細書に記載される抗体分子、抗体の重鎖及び／または軽鎖、またはそのフラグメント（例えば、重鎖及び／または軽鎖可変ドメイン）をコードするポリヌクレオチドが得られると、当該技術分野において周知の技法を使用して、抗体分子の産生のためのベクターを組み換えＤＮＡ技術によって産生することができる。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体フラグメント（例えば、軽鎖もしくは重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現させることによるタンパク質の調製方法が本明細書に記載される。当業者に周知の方法を使用して、抗体または抗体フラグメント（例えば、軽鎖もしくは重鎖）コード配列、ならびに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技法、合成技法、及びインビボ遺伝子組み換えが含まれる。本明細書に記載される抗体分子をコードするヌクレオチド配列、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体もしくはそのフラグメントの重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、またはプロモーターに作動可能に結合された重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲを含む複製可能なベクターもまた提供される。そのようなベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照）、抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖及び軽鎖全体の両方の発現のためにかかるベクターにクローニングすることができる。
【０２２７】
発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に移すことができ、次いで、得られた細胞は、本明細書に記載される抗体（例えば、Ａｂ６１２、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２のＶＨ及び／またはＶＬ、またはＶＨ及び／またはＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ以上を含む抗体）もしくはそのフラグメントを産生するために従来の技法によって培養することができる。したがって、宿主細胞におけるかかる配列の発現のためにプロモーターに作動可能に結合された、本明細書に記載される抗体もしくはそのフラグメント、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはそのフラグメント、もしくは本明細書に記載される一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が本明細書に提供される。ある特定の態様では、二本鎖抗体の発現のために、重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターは、以下に詳述するように、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞内で共発現することができる。ある特定の態様では、宿主細胞は、本明細書に記載される抗体またはそのフラグメントの重鎖及び軽鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む。特定の態様では、宿主細胞は、２つの異なるベクターと、本明細書に記載される抗体またはそのフラグメントの重鎖もしくは重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載される抗体またはそのフラグメントの軽鎖もしくは軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター、とを含む。他の態様では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載される抗体またはそのフラグメントの重鎖もしくは重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載される抗体の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。特定の態様では、第１の細胞によって発現される重鎖／重鎖可変領域は、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合して、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗原結合フラグメントを形成する。ある特定の態様では、かかる第１の宿主細胞及びかかる第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が本明細書に提供される。
【０２２８】
特定の態様では、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターと、を含むベクターの集団が本明細書に提供される。
【０２２９】
様々な宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載される抗体分子を発現させることができる。かかる宿主発現系は、目的のコード配列を産生し、その後精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトしたときに、本明細書に記載される抗体分子を原位置で発現することができる細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物；抗体コード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した、もしくは抗体コード配列を含有する組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）；あるいは哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）、または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組み換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳＯ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７０３０、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、ＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒｌ．ｌ、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣｌ、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＳＰ２／０、Ｓｆ９、ヒトリンパ芽球、ＮＳ０、ボウ黒色腫、ＨＴ−１０８０、ＰＥＲＣ．６、及びＢＭＴ１０細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  ＳＹＳＴＥＭ（商標）（Ｌｏｎｚａ）由来のＣＨＯ細胞である。特定の態様では、本明細書に記載される抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。特定の態様では、哺乳動物発現ベクターは、ＰＯＰＴＩＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の態様では、特に全組み換え抗体分子の発現のために、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）が、組み換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間早期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併せて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞は、抗体の有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−５、及びＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８（７）：６６２−７）。ある特定の態様では、本明細書���記載される抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳＯ細胞によって産生される。特定の態様では、Ｌ１ＣＡＭ（例えば、ヒトＬ１ＣＡＭ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターによって調節される。
【０２３０】
細菌系では、いくつかの発現ベクターは、発現される抗体分子に意図される使用に応じて有利に選択され得る。例えば、大量のかかる抗体が産生される場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を誘導するベクターが望ましい場合がある。かかるベクターには、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ  Ｕ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ  Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ  ２：１７９１−１７９４）（抗体コード配列は、融合タンパク質が産生されるように、ｌａｃ  Ｚコード領域とフレーム内のベクターに個別にライゲーションされ得る）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ  Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １３：３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ＳＭ（１９８９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４：５５０３−５５０９）、ならびに同様のものが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターを使用して、グルタチオン５トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を有する融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させることもできる。一般に、かかる融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着及び結合、続いて遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたは第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【０２３１】
昆虫系では、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）を、外来遺伝子を発現させるベクターとして使用することができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で成長する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【０２３２】
哺乳動物宿主細胞において、いくつかのウイルスに基づく発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三連リーダー配列にライゲーションされ得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組み換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１または領域Ｅ３）への挿入は、生存可能であり、感染した宿主において抗体分子を発現することができる組み換えウイルスをもたらすであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ  Ｊ＆Ｓｈｅｎｋ  Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ  ８１（１２）：３６５５−９を参照）。特定の開始シグナルは、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳にも必要とされ得る。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列が含まれる。さらに、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列の読み取りフレームと同位相でなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の種々の起源であり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写終結因子などを含めることによって向上させることができる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照）。
【０２３３】
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾及び処理する宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のかかる修飾（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後処理及び修飾のための特徴的かつ特異的な機序を有する。適切な細胞株または宿主系を選択して、発現した外来タンパク質の正しい修飾及び処理を確保することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写物の適切な処理、グリコシル化、及びリン酸化のための細胞機構を有する真核宿主細胞を使用することができる。かかる哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＳＫＯＶ−３、Ｂ１６−Ｆ１、ＮＣＩ−Ｈ５２２、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ  ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７０３０、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒｌ．ｌ、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の態様では、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞中で産生される。
【０２３４】
特定の態様では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、フコース含有量が低減しているか、またはフコース含有量がない。かかる抗体は、当業者に既知の技法を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化能力が不十分であるか、またはそれを欠く細胞において発現することができる。特定の例では、ｌ，６−フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株を使用して、低減したフコース含有量を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを産生することができる。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）系（Ｌｏｎｚａ）は、低減されたフコース含有量を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するために使用することができる、かかる系の一例である。
【０２３５】
組み換えタンパク質の長期的な高収率産生のために、安定した発現細胞を生成することができる。例えば、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を安定的に発現する細胞株、その抗原結合フラグメントは、操作され得る。特定の態様では、本明細書に提供される細胞は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを形成するように会合する軽鎖／軽鎖可変ドメイン及び重鎖／重鎖可変ドメインを安定的に発現する。
【０２３６】
ある特定の態様では、ウイルス複製起点を含む発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写終結因子、ポリアデニル化部位など）によって制御されるＤＮＡ、及び選択可能なマーカーで形質転換され得る。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞を濃縮培地中で１〜２日間成長させ、次いで選択培地中に切り替えることができる。組み換えプラスミド中の選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がそれらの染色体に安定してプラスミドを組み込み、成長して焦点を形成することを可能にし、次いで、これをクローニングして細胞株に拡張することができる。この方法を有利に使用して、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体またはその抗体結合フラグメントを発現する細胞株を操作することができる。かかる操作された細胞株は、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価において特に有用であり得る。
【０２３７】
単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ  １１（１）：２２３−３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ  Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ  ４８（１２）：２０２６−２０３４）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２（３）：８１７−２３）遺伝子を含むが、これらに限定されないいくつかの選択システムが、それぞれｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞において採用され得る。また、代謝拮抗剤耐性は、以下の遺伝子の選択の基礎として使用され得る：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７（６）：３５６７−７０、Ｏ’Ｈａｒｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８：１５２７−３１）、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ＆Ｂｅｒｇ  Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８（４）：２０７２−６）、アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ＧＹ＆Ｗｕ  ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  Ｐ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３２：５７３−５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２、及びＭｏｒｇａｎ  ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６２：１９１−２１７、Ｎａｂｅｌ  ＧＪ＆Ｆｅｉｇｎｅｒ  ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１（５）：２１１−５）、及びヒグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ＲＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３０（１−３）：１４７−５６）。組み換えＤＮＡ技術の分野で一般に知られている方法は、所望の組み換えクローンを選択するために日常的に適用することができ、かかる方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  Ｍ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、及びＤｒａｃｏｐｏｌｉ  ＮＣ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の第１２章及び第１３章、Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５０：１−１４に記載されており、これらは参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
【０２３８】
いくつかの態様では、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞上で発現され得る。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）として発現され得る。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞である。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」という語句は、本明細書で使用される場合、抗原の細胞外ドメインへの結合時に細胞に特殊な機能を行わせる細胞内ドメインに連結された抗原特異的細胞外（またはエクトドメイン）ドメインを有する組み換え融合タンパク質を指す。キメラ抗原受容体は、ＭＨＣ非依存性抗原に結合し、細胞内ドメインを介して活性化シグナルを形質導入する能力によって、他の抗原結合剤と区別される。
【０２３９】
いくつかの態様では、キメラ抗原受容体の抗原特異的細胞外ドメインは、抗原、すなわち、Ｌ１ＣＡＭを認識し、特異的に結合する。本開示のＣＡＲでの使用に好適なＬ１ＣＡＭ特異的細胞外ドメインは、任意の抗原結合ポリペプチドであってもよく、その多種多様性が当該技術分野において既知である。いくつかの場合では、抗原結合ドメインは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）またはＦａｂである。他の態様では、本開示のＣＡＲに有用な抗原結合フラグメントは、本明細書の任意の場所に開示される抗原結合フラグメントを含む。
【０２４０】
いくつかの態様では、ＣＡＲに有用な膜貫通ドメインは、細胞外ドメインに接続され、天然に存在する膜貫通ドメインを含むことができる。他の態様では、ＣＡＲに有用な膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、またはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１５４、ＣＤ８、または当該技術分野において既知の任意の他のものに由来し得る。
【０２４１】
「細胞内ドメイン」という用語は、抗原の細胞外ドメインへの結合時にエフェクター機能シグナルを形質導入し、Ｔ細胞に特殊な機能を行うように指示するＣＡＲの部分を指す。一態様では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様では、ＩＴＡＭは、ＣＤ３ゼータ（ζ、ｚｅｔａ）、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤＳ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、４−１  ＢＢ、ＤＡＰ−１０、ＯＸ４０、またはＦｃ［ε］ＲＩ［γ］に由来する。
【０２４２】
いくつかの態様では、本開示のＣＡＲは、細胞内ドメインに結合することができる共刺激ドメインをさらに含む。ＣＡＲ構築物内の共刺激ドメインは、シグナルを伝達し、ＣＡＲの細胞内部分の一部として細胞を活性化することができる。いくつかの態様では、共刺激ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＢ７−Ｈ３に由来する。
【０２４３】
他の態様では、本開示のＣＡＲは、リンカーをさらに含む。短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインと細胞内ドメインとの間に存在することができる。いくつかの態様では、リンカーは、細胞外ドメインが抗原、すなわち、Ｌ１ＣＡＭに結合しているときに、ＣＡＲの細胞内ドメインがＴ細胞活性化を誘導することができる限り、特定の長さに限定されない。いくつかの態様では、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカーを含む。
【０２４４】
他の態様では、本開示は、本開示のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含むベクターを含む。
【０２４５】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」という用語は、胸腺に由来するリンパ球であり、細胞の免疫応答に対するコントライトである。Ｔ細胞には、ＣＤ４＋Ｔ細胞（ヘルパーＴ細胞、ＴＨ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＴＬ）、記憶Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、またはナチュラルキラーＴ細胞が含まれる。いくつかの態様では、ＣＡＲが導入されるＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０２４６】
ＶＩＩ．免疫複合体、抗体誘導体、及び診断
本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、試料試験及びインビボイメージングを含む診断目的に使用することができ、この目的のために、抗体（またはその結合フラグメント）を適切な検出可能な薬剤にコンジュゲートして免疫複合体を形成することができる。診断目的のために、適切な薬剤は、全身イメージングのための放射性同位体、ならびに試料試験のための放射性同位体、酵素、蛍光標識、及び他の好適な抗体タグを含む検出可能な標識である。
【０２４７】
本明細書に記載される任意の抗Ｌ１ＣＡＭ抗体に結合され得る検出可能な標識は、コロイド金などの金属ゾルを含む粒子標識、例えばＮ２Ｓ２、Ｎ３Ｓ、またはＮ４型のペプチドキレート剤と共に提示されるＩ１２５またはＴｃ９９などの同位体、蛍光マーカー、発光マーカー、リン蛍光マーカーなどを含む発色団、ならびに所与の基質を検出可能なマーカーに変換する酵素標識、及びポリメラーゼ連鎖反応によるなどの増幅後に明らかにされるポリヌクレオチドタグを含む、インビトロ診断の分野で現在使用されている様々なタイプのうちのいずれかであり得る。好適な酵素標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなどを含む。例えば、標識は、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、ジナトリウム３−（４−（メトキシスピロ｛ｌ，２−ジオキセタン−３，２´−（５´−クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１３，７｝デカン｝−４−イル）フェニルホスフェート（ＣＳＰＤ）、ならびにＣＤＰ及びＣＤＰ−ＳＴＡＲ（登録商標）、または当業者に周知の他の発光基質、例えば、テルビウム（ＩＩＩ）及びユーロピウム（ＩＩＩ）などの好適なランタニドのキレートなどの１，２ジオキセタン基質の変換後の化学発光の存在または形成を測定することによって検出される酵素アルカリホスファターゼであり得る。検出手段は、選択された標識によって決定される。標識またはその反応産物の外観は、標識が微粒子であり、適切なレベルで蓄積する場合に肉眼を使用して、または分光光度計、発光度計、蛍光度計などの機器を使用して、全て標準的な慣行に従って達成することができる。
【０２４８】
いくつかの態様では、コンジュゲーション方法は、実質的に（またはほぼ）非免疫原性の結合、例えば、ペプチド−（すなわち、アミド−）、スルフィド−、（立体障害）、ジスルフィド−、ヒドラゾン−、及びエーテル結合をもたらす。これらの結合は、ほぼ非免疫原性であり、血清内で合理的な安定性を示す（例えば、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３（２００９）２３５−２４４、ＷＯ２００９／０５９２７８、ＷＯ９５／１７８８６を参照）。
【０２４９】
部分及び抗体の生化学的性質に応じて、異なるコンジュゲーション戦略を採用することができる。部分が天然に存在するか、または５０〜５００個のアミノ酸の組み換えである場合、タンパク質コンジュゲートの合成のための化学を説明する標準的な手順がテキストブックに存在し、これは当業者が容易に従うことができる（例えば、Ｈａｃｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．Ｐ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ，Ｄ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４７（２００８）１００３０−１００７４を参照）。いくつかの態様では、マレインイミド部分と抗体またはその部分内のシステイン残基との反応が使用される。これは、例えば、抗体のＦａｂまたはＦａｂ´フラグメントが使用される場合に特に好適なカップリング化学である。代替的に、いくつかの態様では、抗体または部分のＣ末端部へのカップリングが行われる。タンパク質のＣ末端修飾、例えば、ＦａｂフラグメントのＣ末端修飾は、記載の通りに行うことができる（Ｓｕｎｂｕｌ，Ｍ．ａｎｄ  Ｙｉｎ，Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７（２００９）３３６１−３３７１）。
【０２５０】
一般に、部位特異的反応及び共有結合は、天然アミノ酸を、存在する他の官能基の反応性と直交する反応性を有するアミノ酸に変換することに基づく。例えば、稀な配列構成内の特異的システインは、アルデヒド中で酵素的に変換され得る（Ｆｒｅｓｅ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ  Ｄｉｅｒｋｓ，Ｔ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．１０（２００９）４２５−４２７を参照）。また、ある特定の酵素の特異的な酵素反応性を所与の配列構成において天然アミノ酸と共に利用することによって、所望のアミノ酸修飾を得ることも可能である（例えば、Ｔａｋｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７（２００４）１１９−１２６、Ｇａｕｔｉｅｒ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５（２００８）１２８−１３６、及びＰｒｏｔｅａｓｅ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃ−Ｎ  ｂｏｎｄｓ  ｉｓ  ｕｓｅｄ  ｂｙ  Ｂｏｒｄｕｓａ，Ｆ．，Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４）３８９−４０３を参照）。部位特異的反応及び共有結合は、末端アミノ酸を適切な修飾試薬と選択的に反応させることによって達成することもできる。
【０２５１】
Ｎ末端システインとベンゾニトリルとの反応性（Ｒｅｎ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４８（２００９）９６５８−９６６２を参照）を使用して、部位特異的共有結合を達成することができる。
【０２５２】
天然化学ライゲーションはまた、Ｃ末端システイン残基に依存し得る（Ｔａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｖｏｇｅｌ；Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ，Ｂ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００９），２２（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），６５−９６）。
【０２５３】
ＵＳ６４３７０９５Ｂ１は、負に荷電したアミノ酸の伸長内のシステインと、正に荷電したアミノ酸の伸長内に位置するシステインとのより速い反応に基づくコンジュゲーション方法を記載する。
【０２５４】
部分は、合成ペプチドまたはペプチド模倣物でもあり得る。ポリペプチドが化学的に合成される場合、直交する化学反応性を有するアミノ酸をかかる合成中に組み込むことができる（例えば、ｄｅ  Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２０（２００９）１２８１−１２９５を参照）。様々な直交官能基が問題となっており、合成ペプチドに導入することができるため、かかるペプチドのリンカーへのコンジュゲーションは、標準化学である。
【０２５５】
単標識ポリペプチドを得るために、１：１の化学量論を有するコンジュゲートは、他のコンジュゲーション副産物からクロマトグラフィーによって分離することができる。この手順は、染料標識結合対メンバー及び荷電リンカーを使用することによって容易にすることができる。この種の標識及び高負荷電結合対メンバーを使用することにより、モノコンジュゲートポリペプチドは、電荷及び分子量の差を分離に使用することができるため、２つ以上のリンカーを担持する非標識ポリペプチド及びポリペプチドから容易に分離される。蛍光色素は、標識された一価結合剤のような非結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。
【０２５６】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体に結合する部分は、結合部分、標識部分、及び生物学的活性部分からなる群から選択される。
【０２５７】
本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、治療剤にコンジュゲートして、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）などの免疫複合体を形成することもできる。好適な治療剤としては、代謝拮抗剤、アルキル化剤、ＤＮＡ小溝結合剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ架橋剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、核輸出阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質、及び抗有糸分裂剤が挙げられる。ＡＤＣにおいて、抗体及び治療剤は、好ましくは、ペプチジル、ジスルフィド、またはヒドラゾンリンカーなどの切断可能なリンカーを介してコンジュゲートされる。ＡＤＣは、米国特許第７，０８７，６００号、同第６，９８９，４５２号、及び同第７，１２９，２６１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０９６９１０号、同第ＷＯ０７／０３８６５８号、同第ＷＯ０７／０５１０８１号、同第ＷＯ０７／０５９４０４号、同第ＷＯ０８／０８３３１２号、及び同第ＷＯ０８／１０３６９３号、米国特許公開第２００６００２４３１７号、同第２００６０００４０８１号、及び同第２００６０２４７２９５号に記載されるように調製することができる。
【０２５８】
いくつかの態様では、治療剤は、細胞毒素、非細胞毒性薬物、放射性薬剤、第２の抗体、酵素、抗腫瘍剤、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０２５９】
いくつかの態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び細胞毒素を含む。細胞毒素は、当該技術分野において既知の任意の細胞毒素から選択され得る。いくつかの態様では、細胞毒素は、ドラスタチン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、マイタンシン、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、デュオカルマイシン、センタナマイシン、ＳＮ３８、ドキソルビシン、それらの誘導体、それらの合成類似体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある特定の態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び細胞毒素Ａを含む。他の態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び非細胞毒性薬物を含む。
【０２６０】
いくつかの態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び放射性薬剤を含む。いくつかの態様では、放射性薬剤は、放射性ヌクレオチドである。ある特定の態様では、放射性薬剤は、放射性ヨウ素を含む。特定の態様では、放射性薬剤は、１３１−ヨウ素を含む。他の態様では、放射性薬剤は、放射性同位体イットリウム−９０を含む。
【０２６１】
いくつかの態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び第２の抗体を含む。ある特定の態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び酵素を含む。いくつかの態様では、酵素は、グルコースオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、ペルオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、ミエロペルオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、グルコースオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼを含む。
【０２６２】
ある特定の態様では、免疫複合体は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び抗腫瘍剤を含む。抗腫瘍剤は、当該技術分野において既知の任意のかかる薬剤であり得る。いくつかの態様では、抗腫瘍剤は、エピルビシンである。いくつかの態様では、抗腫瘍剤は、スーパー抗原である。ある特定の態様では、スーパー抗原は、ブドウ球菌性エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ／Ｅ−１２０、エスタフェナトクス）である。
【０２６３】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、例えば、本明細書に記載されるものはまた、ヒトＬ１ＣＡＭ、例えば、細胞表面上のヒトＬ１ＣＡＭ、または血清中の可溶性Ｌ１ＣＡＭなどのＬ１ＣＡＭを検出するために使用することもできる。抗体を、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーで使用することができる。いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を、特異的結合が生じるのに適切な時間、細胞または血清と接触させ、次いで試薬、例えば、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を検出する抗体を添加する。例示的なアッセイが、実施例に提供される。Ｌ１ＣＡＭ、例えば、試料（血清）中の表面発現Ｌ１ＣＡＭまたは可溶性Ｌ１ＣＡＭ（ｓＬ１ＣＡＭ）を検出するための例示的な方法は、（ｉ）試料中のＬ１ＣＡＭへの抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の特異的結合を可能にするのに十分な時間にわたって試料を抗Ｌ１ＣＡＭ抗体と接触させること、及び（２）試料を、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体に、例えば抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のＦｃ領域などに特異的に結合する検出試薬、例えば抗体と接触させることにより、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体によって結合されたＬ１ＣＡＭを検出することとを含む。洗浄ステップは、抗体及び／または検出試薬とのインキュベーション後に含むことができる。これらの方法で使用するための抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、別個の検出剤を使用することができるため、標識または検出剤に結合される必要はない。
【０２６４】
例えば、単剤療法または併用療法としての抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の他の使用は、本明細書の他の箇所、例えば、併用治療に関するセクションにおいて提供される。
【０２６５】
ＶＩＩＩ．二重特異性分子
本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、二重特異性分子を形成するために使用することができる。抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、またはその抗原結合部分は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、受容体のための別の抗体またはリガンド）に誘導体化または結合されて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成することができる。例えば、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、併用治療の潜在的な標的として使用することができる任意のタンパク質に特異的に結合する抗体またはｓｃＦｖに結合することができる。本明細書に記載される抗体は、実際には、３つ以上の異なる結合部位及び／または標的分子に結合する多重特異性分子を生成するために、２つ以上の他の機能的分子に誘導または結合することができ、かかる多重特異性分子は、本明細書で使用される「二重特異性分子」という用語によって包含されることも意図される。本明細書に記載される二重特異性分子を作成するために、本明細書に記載される抗体は、二重特異性分子が得られるように、１つ以上の他の結合分子、例えば、別の抗体、抗体フラグメント、ペプチド、または結合模倣物に（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合、または他の方法によって）機能的に結合することができる。
【０２６６】
したがって、Ｌ１ＣＡＭに対する少なくとも１つの第１の結合特異性、及び第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子が本明細書に提供される。二重特異性分子が多重特異性である本明細書に記載されるいくつかの態様では、分子は、第３の結合特異性をさらに含むことができる。
【０２６７】
いくつかの態様では、本明細書に記載される二重特異性分子は、結合特異性として、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、少なくとも１つの抗体またはその抗体フラグメントを含む。抗体はまた、軽鎖もしくは重鎖二量体、またはその任意の最小フラグメント、例えばＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号に記載されるＦｖまたは一本鎖構築物であり得る。
【０２６８】
本明細書に記載される二重特異性分子は、当該技術分野において既知の方法を使用して構成要素結合特異性をコンジュゲートすることによって調製することができる。例えば、二重特異性分子の各結合特異性は、別個に生成され、次いで、互いにコンジュゲートされ得る。結合特異性がタンパク質またはペプチドである場合、共有結合のために様々なカップリング剤または架橋剤を使用することができる。例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６、Ｌｉｕ，ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：８６４８を参照されたい。他の方法としては、Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８−１３２、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３）、及びＧｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７−２３７５）に記載されるものが挙げられる。いくつかのコンジュゲート剤は、いずれもＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手可能なＳＡＴＡ及びスルホ−ＳＭＣＣである。
【０２６９】
ＩＸ．組成物
さらに、薬学的に許容される担体と共に製剤化される、本明細書に記載される、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体のうちの１つもしくはその組み合わせ、または他の標的に対する抗体との組み合わせ、またはその抗原結合部分（複数可）を含む組成物、例えば、薬学的組成物が本明細書に提供される。かかる組成物は、本明細書に記載される（例えば、２つ以上の異なる）抗体のうちの１つもしくはその組み合わせ、または免疫複合体もしくは二重特異性分子を含むことができる。例えば、本明細書に記載される薬学的組成物は、標的抗原上で異なるエピトープと結合するか、または相補的活性を有する抗体（または免疫複合体もしくは二重特異性抗体）の組み合わせを含むことができる。
【０２７０】
本明細書に記載される薬学的組成物は、併用療法、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法は、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を、少なくとも１つの他の抗がん及び／または免疫調節剤、例えば、Ｔ細胞刺激（例えば、活性化）剤と組み合わせて含み得る。併用療法で使用され得る治療剤の例は、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の使用に関するセクションにおいて以下により詳細に記載される。
【０２７１】
いくつかの態様では、本発明の組成物は、増量剤をさらに含む。増量剤は、ＮａＣｌ、マンニトール、グリシン、アラニン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。他の態様では、本発明の組成物は、安定化剤を含む。安定化剤は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。他の態様では、本発明の組成物は、界面活性剤を含む。界面活性剤は、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。ある特定の態様では、組成物は、キレート剤をさらに含む。キレート剤は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミンテトラ酢酸、ニトリロトリアセト酸、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。
【０２７２】
他の態様では、組成物は、第３の抗体を含む。いくつかの態様では、第３の抗体は、本明細書に開示される任意の抗体である。
【０２７３】
一態様では、組成物は、ＮａＣｌ、マンニトール、ペンテト酸（ＤＴＰＡ）、スクロース、ＰＳ８０、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
【０２７４】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性のある任意の及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。いくつかの態様では、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。皮下注射のための選択肢は、細胞外マトリックスに起因して皮下に送達され得る生物学的製剤及び薬物の体積に対する従来の制限を除去する組み換えヒトヒアルロニダーゼ酵素（ｒＨｕＰＨ２０）とのＡｂの共製剤を伴う、Ｈａｌｏｚｙｍｅ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＥＮＨＡＮＺＥ（登録商標）薬物送達技術に基づく（米国特許第７，７６７，４２９号）。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、抗体、免疫複合体、または二重特異性分子は、化合物を不活性化することができる酸及び他の天然条件の作用から化合物を保護するために材料中にコーティングすることができる。
【０２７５】
本明細書に記載される薬学的化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含むことができる。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物活性を保持し、任意の望ましくない毒性学的な影響を付与しない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９Ａを参照。本明細書に記載される薬学的組成物は、薬学的に許容される抗酸化剤を含むこともできる。
【０２７６】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントを含有することができる。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順、ならびに様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含の両方によって確実となり得る。糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な薬学的形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらすことができる。
【０２７７】
薬学的に許容される担体としては、滅菌水溶液または分散液、及び滅菌注射液または分散液を即時調製するための滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのかかる培地及び薬剤の使用は、当該技術分野において既知である。任意の従来の培地または薬剤が活性化合物と互換性がない限り、本明細書に記載される薬学的組成物におけるそれらの使用が企図される。薬学的組成物は、防腐剤を含み得るか、または防腐剤を欠き得る。補助的な活性化合物は、組成物に組み入れることができる。
【０２７８】
治療組成物は、典型的には、製造及び保存の条件下で滅菌及び安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬物濃度に好適な他の順序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合には必要な粒径を維持することによって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、組成物は、等張剤、例えば、糖、多価アルコール（マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムなど）を組成物中に含むことができる。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【０２７９】
滅菌注射液は、必要に応じて、上に列挙される成分のうちの１つまたはその組み合わせを含む適切な溶媒に、必要とされる量の活性化合物を組み込み、その後で滅菌微小濾過することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本の分散媒、及び本明細書に列挙されるものから必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射液を調製するための滅菌粉末の場合、いくつかの調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）であり、予め滅菌濾過したその溶液から活性成分及び任意の追加の所望の成分の粉末を得る。
【０２８０】
例えば、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の投与に関して、投薬量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０２８１】
いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、その場合、投与される各抗体の投与量は、示される範囲内にある。抗体は通常、複数回投与される。
【０２８２】
抗体は、持続放出製剤として投与することができ、その場合、より低い頻度の投与が必要である。投与量及び頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変動する。一般に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、続いてヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体を示す。投与量及び投与の頻度は、治療が予防的であるか、または治療的であるかに応じて変化し得る。予防的用途において、比較的低い投薬量は、長期間にわたって比較的頻繁でない間隔で投与される。一部の患者は、生涯にわたって治療を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が低減または終了するまで、及び患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高い投与量が時々必要とされる。その後、患者は、予防的レジームを施すことができる。
【０２８３】
本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の「治療有効投与量」は、疾患症状の重症度の減少、無疾患症状期間の頻度及び期間の増加、または疾患の苦痛に起因する機能障害もしくは身体障害の防止をもたらし得る。がんの文脈において、治療有効用量は、生存期間の増加、例えば、全生存期間、及び／またはがんに関連する身体症状のさらなる悪化の予防をもたらし得る。がんの症状は当該技術分野において周知であり、例えば、異常なほくろの特徴、非対称性、境界、色及び／または直径を含むほくろの外観の変化、新たに色素沈着した皮膚領域、異常なほくろ、爪の下の暗い領域、乳房のしこり、乳首の変化、乳房の嚢胞、乳房の痛み、死亡、体重減少、脱力感、過度の疲労、摂食困難、食欲不振、慢性咳、呼吸困難の悪化、喀血、血尿、血便、吐き気、嘔吐、肝臓転移、肺転移、骨転移、腹部の満腹感、膨満感、腹腔内の液体、膣出血、便秘、腹部膨満、結腸穿孔、急性腹膜炎（感染、発熱、疼痛）、疼痛、嘔吐血、激しい発汗、発熱、高血圧、貧血、下痢、黄疸、めまい、悪寒、筋肉痙攣、結腸転移、肺転移、膀胱転移、肝臓転移、骨転移、腎臓転移、及び膵臓転移、嚥下困難などが挙げられる。
【０２８４】
治療有効用量は、疾患の早期兆候または予備兆候が存在するときに所望され得るような、がんの発症を予防または遅延させることができる。がんの診断に利用される実験室試験には、化学（Ｌ１ＣＡＭレベルの測定を含む）、血液学、血清学、及び放射線学が含まれる。したがって、前述のうちのいずれかを監視する任意の臨床的または生化学的アッセイを使用して、特定の治療ががんを治療するための治療有効用量であるかどうかを決定することができる。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
【０２８５】
本明細書に記載される組成物は、当該技術分野において既知の様々な方法のうちの１つ以上を使用して、１つ以上の投与経路を介して投与され得る。熟練者には理解されようが、投与経路及び／または投与様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の投与経路は、例えば、注射または注入によって、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路を含むことができる。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による腸内及び局所投与以外の投与形態を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、ならびに胸骨内注射及び注入を含む。
【０２８６】
代替的に、本明細書に記載される抗体は、非親側経路、例えば、局所、表皮、または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸、舌下、または局所経路を介して潜在的に投与され得る。
【０２８７】
Ｘ．キット
本明細書に記載される１つ以上の抗体、もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性分子、またはその免疫複合体を含むキットが本明細書に提供される。特定の態様では、本明細書に記載される薬学的組成物の成分のうちの１つ以上、例えば、本明細書に提供される１つ以上の抗体またはその抗原結合フラグメントが充填された１つ以上の容器、任意選択的に使用のための指示を含む薬学的パックまたはキットが本明細書に提供される。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載される薬学的組成物、及び本明細書に記載されるものなどの任意の予防剤または治療剤を含有する。
【０２８８】
ＸＩ．使用及び方法
本開示のある特定の態様は、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、ポリヌクレオチドを含む宿主細胞、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を含む免疫複合体、またはそれらの任意の組み合わせを対象に投与することを含む、対象の治療方法を対象とする。
【０２８９】
本開示のある特定の態様は、有効用量の本明細書に開示される組成物（例えば、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、免疫複合体、または薬学的組成物）を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。他の態様では、本開示は、有効用量の本明細書に開示される組成物を対象に投与することを含む、腫瘍細胞によるＬ１ＣＡＭの脱離を阻害することを必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。他の態様では、本開示は、有効用量の本明細書に開示される組成物を対象に投与することを含む、血清中の脱離したＬ１ＣＡＭを低減すること、及び／またはＬ１ＣＡＭを細胞表面上に保持することを必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。他の態様では、本開示は、有効用量の本明細書に開示される組成物を対象に投与することを含む、腫瘍細胞を殺滅することを必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。他の態様では、有効用量の本明細書に開示される組成物を対象に投与することを含む、腫瘍のサイズを低減することを必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。他の態様では、本開示は、有効用量の本明細書に開示される組成物を対象に投与することを含む、腫瘍の転移を阻害することを必要とする対象においてそれを行うことを対象とする。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。
【０２９０】
本開示の組成物は、任意の薬学的に許容される経路を使用して投与することができる。いくつかの態様では、組成物（例えば、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、免疫複合体、または薬学的組成物）は、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病変内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、胸骨内、局所、表皮、粘膜、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。いくつかの態様では、組成物は、静脈内投与される。いくつかの態様では、組成物は、皮下投与される。
【０２９１】
ある特定の態様では、本方法は、対象におけるがんのサイズ、例えば、腫瘍のサイズを低減する。いくつかの態様では、がんのサイズは、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低減する。
【０２９２】
いくつかの態様では、本方法は、対象の全生存期間を増加させる。いくつかの態様では、全生存期間は、同じがんを有するが、異なる療法で治療される対象の平均全生存期間と比較して増加する。ある特定の態様では、全生存期間は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍増加する。いくつかの態様では、全生存期間は、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約７ヶ月、少なくとも約８ヶ月、少なくとも約９ヶ月、少なくとも約１０ヶ月、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約１２ヶ月、少なくとも約１５ヶ月、少なくとも約１８ヶ月、少なくとも約２１ヶ月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、または少なくとも約１０年増加する。
【０２９３】
いくつかの態様では、本方法は、対象の無増悪生存期間を増加させる。いくつかの態様では、全生存期間は、同じがんを有するが、異なる療法で治療される対象の無増悪生存期間と比較して増加する。ある特定の態様では、無増悪生存期間は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍増加する。いくつかの態様では、全生存期間は、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約７ヶ月、少なくとも約８ヶ月、少なくとも約９ヶ月、少なくとも約１０ヶ月、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約１２ヶ月、少なくとも約１５ヶ月、少なくとも約１８ヶ月、少なくとも約２１ヶ月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、または少なくとも約１０年増加する。
【０２９４】
いくつかの態様では、方法は、対象の客観的奏効率を増加させる。ある特定の態様では、方法は、対象において完全奏功を誘導する。いくつかの態様では、方法は、対象において部分奏効を誘導する。
【０２９５】
いくつかの態様では、方法は、本明細書に開示される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体（またはポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、もしくは免疫複合体）及び第２の療法を投与することを含む。いくつかの態様では、第２の療法は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の前に投与される。いくつかの態様では、第２の療法は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の後に投与される。いくつかの態様では、第２の療法は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体と同時に投与される。ある特定の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び第２の療法は、別個に投与される。他の態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体及び第２の療法は、単一製剤中で投与される。
【０２９６】
第２の療法は、当該技術分野において既知の任意の他の療法であり得る。いくつかの態様では、第２の療法は、免疫療法を含む。いくつかの態様では、第２の療法は、化学療法を含む。いくつかの態様では、第２の療法は、放射線療法を含む。いくつかの態様では、第２の療法は、手術を含む。いくつかの態様では、第２の療法は、第２の治療剤を投与することを含む。
【０２９７】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、がんを有する患者におけるがん性細胞に対する免疫応答を増強することができる。がんを有する対象の治療方法であって、例えば、がん性腫瘍の成長が阻害もしくは低減されるように、及び／または腫瘍が退縮するように、及び／または長期生存が達成されるように、対象が治療されるように、本明細書に記載の抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を対象に投与することを含む、方法が本明細書に提供される。抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を単独で使用して、がん性腫瘍の成長を阻害することができる。代替的に、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、以下に記載されるように、別の薬剤、例えば、別の免疫原性薬剤、標準的ながん治療、または別の抗体と併用され得る。
【０２９８】
したがって、例えば、対象において腫瘍細胞の成長を阻害することによるがんの治療方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を対象に投与することを含む、方法が本明細書に提供される。本開示の抗体を使用してその成長が阻害され得るがんとしては、典型的には免疫療法に応答するがん、及び典型的には免疫療法に応答しないがんが挙げられる。治療することができるがんには、Ｌ１ＣＡＭ陽性癌も含まれる。がんは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍（液体腫瘍）を有するがんであり得る。治療のためのがんの非限定的な例としては、胆管癌、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸癌、腎臓癌（例えば、透明細胞癌）、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌（例えば、腎臓細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺癌（例えば、ホルモン難治性前立腺癌）、甲状腺癌、神経芽腫、咽頭癌、喉頭癌、口腔癌、結合組織の癌、ホジキンリンパ腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、膠芽腫（多形膠芽腫）、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝腫、乳癌、結腸腺癌、ならびに頭頸部癌（またはがん腫）、胃癌、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例えば、皮膚または眼内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛門領域の癌、精巣癌、卵管の癌、子宮内膜の癌、子宮頸部の癌、膣の癌、外陰部の癌、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、直腸癌、小児の固形腫瘍、尿管の癌、腎盂の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮細胞癌、アスベストによって誘発されるものを含む環境誘発癌、ウイルス関連癌、またはウイルス由来の癌（例えば、ヒト乳頭腫瘍（ＨＰＶに関連するもしくは由来する腫瘍））、ならびに前述のがんの任意の組み合わせが挙げられる。
【０２９９】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、以前の治療、例えば、免疫腫瘍学もしくは免疫療法薬物による以前の治療に対して不十分な応答を示したか、または進行したがんを有する患者、または本質的に難治性もしくは耐性のいずれかであるか、または耐性もしくは難治性状態が獲得されるがんを有する患者に投与される。例えば、第１の療法に応答しないかもしくは十分に応答しない、または治療後に疾患進行を見た対象は、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を単独で、または別の療法と組み合わせて投与することによって治療することができる。
【０３００】
いくつかの態様では、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、免疫腫瘍剤を以前に受けていない（すなわち、治療されていない）患者に投与される。
【０３０１】
いくつかの態様では、対象におけるがんの治療方法は、まず、対象がＬ１ＣＡＭ陽性であるか、例えば、Ｌ１ＣＡＭを発現する腫瘍細胞を有するかどうかを決定することと、対象がＬ１ＣＡＭ陽性癌を有する場合、次いで、例えば、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を対象に投与することと、を含む。がんを有する対象の、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体による治療方法は、Ｌ１ＣＡＭ、治療有効量のＬ１ＣＡＭ抗体を発現するがん細胞を有する対象に投与することを含み得る。また、対象が抗Ｌ１ＣＡＭ抗体による治療に応答するかどうかを予測するための方法であって、患者のがん細胞におけるＬ１ＣＡＭのレベルを決定することを含み、対象のがん細胞がＬ１ＣＡＭ陽性である場合、対象がＬ１ＣＡＭ抗体による治療に応答する可能性が高い、方法も本明細書に提供される。
【０３０２】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、標準的なケア治療と共に投与することができる。抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を防止することを意図した療法として投与することができる。
【０３０３】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、別の治療、例えば、放射線、手術、または化学療法と共に投与することができる。例えば、抗Ｌ１ＣＡＭ抗体補助療法は、微小転移が存在し得るリスクがある場合、及び／または再発のリスクを低減するために投与することができる。
【０３０４】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体、例えば、本明細書に記載される抗Ｌ１ＣＡＭ抗体は、ワクチン接種プロトコルと組み合わせることができる。腫瘍に対するワクチン接種のための多くの実験的戦略が考案されている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，２０００，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：６０−６２、Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ，Ｃ，２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：３００−３０２、Ｋｈａｙａｔ，Ｄ．２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：４１４−４２８、Ｆｏｏｎ，Ｋ．２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：７３０−７３８を参照。またＲｅｓｔｉｆｏ，Ｎ．ａｎｄ  Ｓｚｎｏｌ，Ｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｃｈ．６１，ｐｐ．３０２３−３０４３  ｉｎ  ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９７，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎも参照）。
【０３０５】
抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の投与はまた、標準的ながん治療（例えば、手術、放射線、及び化学療法）と組み合わせることもできる。抗Ｌ１ＣＡＭ抗体の投与は、化学療法レジームと効果的に組み合わせることができる。これらの事例では、投与される化学療法試薬の用量を低減することが可能である（Ｍｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：５３０１−５３０４）。
【０３０６】
本開示の実施には、別段の指示がない限り、当該技術分野の技能の範囲内である、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技法が採用される。かかる技法は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）、Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ、Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第４，６８３，１９５号、Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  （ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）、Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ  ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４  ａｎｄ  １５５、Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＶ、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）、）、Ｃｒｏｏｋｓ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００７）ａｎｄ  ｉｎ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。
【０３０７】
以下の実施例は、例示として提供されるが、限定するものではない。
【実施例】
【０３０８】
以下の実験方法及び詳細は、以下の実施例において参照される。
【０３０９】
実施例１．部位特異的突然変異誘発によるＡｂ６１２の構築
哺乳動物（例えば、ヒト及びマウス）Ｌ１ＣＡＭ結合ヒト抗体Ａｂ４１７及びその調製手順は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，７７７，０６０号及び国際公開第ＷＯ２０１４／０７７６４８号に開示されている。Ａｂ４１７抗体の生体物理特性を向上させるために、Ａｂ４１７抗体の可変領域を構成するそれぞれのアミノ酸が、Ａｂ４１７抗体の結合能力に及ぼす影響を検討した。
【０３１０】
ＤＮＡを合成して、Ａｂ４１７抗体の重鎖可変領域に突然変異Ｒ１６Ｇ、Ｄ５４Ｅ、Ｋ７６Ａ、及びＰ８８Ａを担持し、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってヒトＣγ１のＣＨ１ドメインをコードする遺伝子と組み換えた。結果として生じたＰＣＲ産物を１．５％のアガロースゲル上で電気泳動した。ＤＮＡを含有するバンドを切り出し、ＰＣＲ精製キット（ＧｅｎｅＡｌｌ（登録商標））を使用して精製した。精製したＤＮＡの両端を、制限酵素ＮｃｏＩ及びＡｐａＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化し、遺伝子ＩＩＩの全長を担持するヒトＦａｂファージディスプレイベクターｐＫＲＩＢＢ−ＦａｂＤ（参照）の修飾バージョン（ｐＫＲＩＢＢ−全ＧＩＩＩ）のＮｃｏＩ及びＡｐａＩ部位にサブクローニングした。結果として生じた組み換えファージミドをｐＫＲＩＢＢ−全ＧＩＩＩ−Ｆｄ６１２と命名した。
【０３１１】
ＤＮＡを合成して、Ａｂ４１７抗体の軽鎖可変領域に突然変異Ｉ３１Ｓ及びＶ９５Ｐを担持し、ＰＣＲによってヒトＣκをコードする遺伝子と組み換えた。結果として生じたＰＣＲ産物を１．５％のアガロースゲル上で電気泳動した。ＤＮＡを含有するバンドを切り出し、ＰＣＲ精製キット（ＧｅｎｅＡｌｌ（登録商標））を使用して精製した。精製したＤＮＡの両端を制限酵素ＢｓｔＸＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化し、ｐＫＲＩＢＢ−全ＧＩＩＩ−Ｆｄ６１２のＢｓｔＸＩ部位にサブクローニングした。結果として生じた組み換えファージミドをｐＫＲＩＢＢ−全ＧＩＩＩ−Ｆａｂ６１２と命名した。このために、重鎖可変領域における突然変異Ｒ１６Ｇ、Ｄ５４Ｅ、Ｋ７６Ａ、及びＰ８８Ａ、ならびにＡｂ４１７抗体の軽鎖可変領域における突然変異Ｉ３１Ｓ及びＶ９５Ｐを含む抗体をＡｂ６１２抗体と命名した。
【０３１２】
実施例２．ファージディスプレイＡｂ６１２変異体Ｆａｂライブラリの構築
実施例１で調製したＡｂ６１２抗体の親和性及び生体物理特性を向上させるために、Ａｂ６１２  ＬＣＤＲ３の５つの位置をＴＲＩＭ（トリヌクレオチド突然変異誘発、ＥＬＬＡ  ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によってランダム化した。Ａｂ６１２のＦＲ１〜ＦＲ３の配列を含有するフラグメントＡを合成した。無作為化ＬＣＤＲ３を用いてＡｂ６１２  ＦＲ３〜ＦＲ４の配列を含有するフラグメントＢ（５´−ＴＴＴ  ＡＡＴ  ＴＴＣ  ＣＡＣ  ＴＴＴ  ＡＧＴ  ＴＣＣ  ＣＴＧ  ＣＣＣ  ＧＡＡ  ＣＧＴ  ＣＣＡ  ＣＧＧ  Ｘ１７  Ｘ１５  Ｘ１５  Ｘ１３  Ｘ１５  ＴＴＧ  ＣＴＧ  ＡＣＡ  ＡＴＡ  ＡＴＡ  ＧＧＴ  ＧＧＣ  ＡＡＡ  ＡＴＣ  ＴＴＣ−３´）を合成した。Ｘは、アミノ酸の数を表し、Ｘ１７は、１７個のアミノ酸であり、Ｘ１５及びＸ１３は、それぞれ１５個のアミノ酸及び１３個のアミノ酸である。フラグメントＡ及びフラグメントＢを、Ｐｈｕｓｉｏｎ  Ｈｉｇｈ−Ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を有する組み換えＰＣＲによって組み立てた。結果として生じるＰＣＲ産物を、ＰＣＲ精製キット（ＧｅｎｅＡｌｌ（登録商標））を使用して精製し、ＢｓｔＸＩ制限酵素（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化し、ＢｓｔＸＩで消化したｐＫＲＩＢＢ−全ＧＩＩＩ−Ｆａｂ６１２発現ベクターと１：３のベクター：挿入物のモル比でライゲーションした。ＤＮＡを有能なＥ．ｃｏｌｉ  ＴＧ１に電気穿孔した。Ａｂ６１２変異体Ｆａｂライブラリは、５．９２×１０８コロニーを産生した。
【０３１３】
ヒトＬ１ＣＡＭを認識するモノクローナル抗体を単離するために、ヒトＬ１ＣＡＭを第１、第２、及び第３ラウンドのパンニングにおいて抗原として使用した。
【０３１４】
３回のパンニング後、４７０個のコロニーをランダムに選択し、９６ウェルプレートに別々に接種した後、３００μＬの２×ＹＴ／カルベニシリン／グルコース中、３７℃で８時間培養した。その後、１ｍＬの２×ＹＴ／カルベニシリン／グルコース培地を含有する各ウェルに３０μＬの細胞を播種し、ＯＤ６００が０．５になるまで２時間培養した。細胞を、３７℃で３０分間シャッキングすることなく、２０多重度の感染（ＭＯＩ）でＫＭ１３ヘルパーファージに感染させ、次いでシャッキングしながら３０分間インキュベートした。感染した細胞を、２９００×ｇで１０分間遠心分離した後、２×ＹＴ／カルベニシリン／カナマイシンに再懸濁し、３０℃で１２時間培養した。４７０コロニー由来のＦａｂファージを含有する上清を間接的かつ定量的ＥＬＩＳＡに供した。
【０３１５】
その中から、高活性を有するヒトＬ１ＣＡＭに結合する４１個のクローンを選択し、それらのプラスミドＤＮＡを単離し、配列決定した。その結果、３２個のクローンが互いに異なることが見出された。
【０３１６】
ヒトＬ１ＣＡＭへの３２個の独自のクローンの結合能力を分析するために、間接ＥＬＩＳＡを行った。その結果、４個のクローンは、最も高い抗原結合能力（すなわち、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２）を示すことが見出された。
【０３１７】
実施例３．ＦａｂのＩｇＧ１への変換及び産生
哺乳動物細胞についてコドン最適化配列を有する全ＩｇＧ１にＦａｂを変換するために、リーダー配列を有する重鎖及び軽鎖可変領域をＰＣＲによって増幅し、哺乳動物ＩｇＧ１発現プラスミドｐｄＣＭＶ−ｄｈｆｒ−Ａｂ６１２ベクター中のＥｃｏＲＩ及びＡｐａＩ部位（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）ならびにＢｓｉＷＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ部位（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）にそれぞれサブクローニングした。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞を培養し、ＥｘｐｉＣＨＯプロトコルに従ってＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用し、ＩｇＧ１発現プラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクションから７〜１４日後、細胞培養上清を遠心分離し、ボトルトップフィルター（０．２２μｍのＰＥＳ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して濾過し、それぞれの突然変異体の生産性を、以下の実施例５に記載されるように、ＥＬＩＳＡによって既存のＡｂ４１７抗体の生産性と比較した。
【０３１８】
表８に示すように、変異体抗体は、Ａｂ４１７よりも１．２５〜１．４４倍高い生産性を示した。Ａｂ６１２は、１．４４倍増強されたが、Ａｂ４Ｈ５、Ａｂ２Ｃ２、Ａｂ４Ｈ６、及びＡｂ５Ｄ１２は、それぞれ１．２５倍、１．２６倍、及び１．３６倍、ならびに１．２６倍増強された。
【表８】
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【０３１９】
実施例４．Ａｂ４１７変異体抗体の精製
これらの抗体の発現ベクターのプラスミドＤＮＡは、大量に得られ、それぞれ実施例１〜実施例３と同様の方法でＥｘｐｉＣＨＯ細胞内で発現された。細胞培養物を遠心分離して上清を収集した。上清を、ボトルトップフィルター（０．２２μｍのＰＥＳ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して濾過し、親和性クロマトグラフィーによって精製した。それぞれの上清を、タンパク質Ａ結合ビーズ（Ａｍｉｃｏｇｅｎ）を充填したカラムに適用し、抗体を、０．１Ｍのクエン酸ナトリウム溶液（ｐＨ３．２）を使用してタンパク質Ａから溶出した。次いで、１．０ＭのＴｒｉｓ溶液（ｐＨ８．０）を、中和のために溶出した抗体に直ちに添加した。精製したＩｇＧ１を、ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を有するＰＤ−１０カラムを使用した透析後、緩衝液（１０ｍＭのＮａｐｉ、５％のソルビトール、０．０１％のｔｗｅｅｎ２０）中に保管した。精製した抗体の濃度は、モル消滅係数に基づいて、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ２０００）を用いて決定した。精製した抗体を１０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びクーマシー染色に供して、重鎖及び軽鎖の各々がＩｇＧ全体として発現され、組み立てられたことを確認した。
【０３２０】
実施例５．Ａｂ４１７変異体抗体の特徴付け
ヒトＬ１ＣＡＭに対する精製抗体の親和性を、競合ＥＬＩＳＡによって測定した。ヒトＬ１ＣＡＭを１×１０−７Ｍの密度で調製し、０．１％のＰＢＡ緩衝液（０．１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）溶液を使用して１×１０−１２Ｍに段階希釈した。それぞれの抗体を、それらの結合能力に従って、特定の濃度で０．１％のＰＢＡ緩衝液中で希釈することによって調製した。希釈した抗原及び抗体を、３７℃で３時間、同じ体積比で互いに反応させた。９６ウェルプレート（ＭａｘｉＳｏｒｐ、Ｎｕｎｃ）を、４℃で一晩、１００ｎｇ／ウェルの濃度の緩衝液（１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、３４．８４ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）中で希釈した精製ヒトＬ１  ＣＡＭを使用してコーティングした。翌日、Ｄｉｆｃｏ脱脂乳（ＢＤ）を０．０５％のＰＢＳ−Ｔ緩衝液中に２％の濃度で溶解し、２００ｕｌを各ウェルに添加し、続いて３７℃で１時間インキュベートした。ウェルを０．０５％のＰＢＳ−Ｔ緩衝液で２回洗浄した。次に、３時間反応させた１００ｕｌの抗原／抗体反応物を添加し、室温で１時間反応させた。ウェルを０．０５％のＰＢＳ−Ｔ緩衝液で３回洗浄して、非抗原結合抗体を除去した。ヒト抗体のＦｃ領域を特異的に認識するヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）−ＨＲＰ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１／１００００）を二次抗体として添加し、３７℃で１時間反応させた。ウェルを０．０５％のＰＢＳ−Ｔ緩衝液で４回洗浄して、残りの二次抗体を除去した。発色による親和性を調べるために、酵素ＨＲＰ（二次抗体に共有結合した）の基質としてＴＭＢを含有する１００ｕｌの溶液（ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡ、ＢＤ）を各ウェルに添加し、室温で５分間インキュベートした。最後に、５０ｕｌの２．５Ｍ  ＨＳＯ溶液を各ウェルに添加して、酵素反応を終了させた。反応を終了した後、吸光度を４５０ｎｍにて測定した（ＶＥＲＳＡｍａｘマイクロプレートリーダー、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）。その結果を表９に示す。ヒトＬ１ＣＡＭに対するＡｂ４１７の親和性は、５×１０−１０Ｍであり、Ａｂ６１２の親和性は、２．６×１０−１０Ｍであり、Ａｂ４Ｈ５突然変異体の親和性は、６×１０−１１Ｍであり、Ａｂ２Ｃ２突然変異体の親和性は、５×１０−１１Ｍであり、Ａｂ４Ｈ６突然変異体の親和性は、６×１０−１１Ｍであり、Ａｂ５Ｄ１２突然変異体の親和性は、１．２×１０−１０Ｍであった。Ａｂ４１７変異体抗体は、Ａｂ４１７抗体よりもヒトＬ１ＣＡＭに対して約２〜１０倍高い結合親和性を示した。
【表９】
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【０３２１】
実施例６．Ａｂ４１７変異体の抗原結合特異性の分析
変異体抗体がヒト及びマウスＬ１ＣＡＭに選択的に結合するかどうかを調べるために、様々な種類の細胞を使用してフローサイトメトリーを行った。この点で、比較抗体として、ヒトＬ１ＣＡＭ及びマウスＬ１ＣＡＭに結合するＡｂ４１７抗体を使用した。
【０３２２】
ヒトＬ１ＣＡＭを発現しないことが知られているＣＨＯ−ＤＧ４４（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−３３５６）細胞を培養し、陰性対照として使用した。また、ヒトＬ１ＣＡＭ、ヒト卵巣癌、ＳＫＯＶ３（ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ−７７）、及びヒト非小細胞肺癌、ＮＣＩ−Ｈ５２２（ＡＹＣＣ番号ＣＲＬ−５８１０）を発現する細胞を培養した。マウスＬ１ＣＡＭを発現する細胞として、黒色腫細胞株Ｂ１６Ｆ１（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−６３２３）を培養した。培養した細胞を、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞について、解離緩衝液または０．０５％のトリプシン（ＧＩＢＣＯ）を使用して採取し、１％のＰＢＡ溶液中に再懸濁し、氷上に２０分間置いた。次いで、細胞を、管あたり４×１０５細胞の密度で丸底ポリスチレン試験管（Ｆａｌｃｏｎ）に添加した。精製した抗体を１０ｕｇ／ｍＬの濃度でＰＢＡ溶液中に希釈し、１００ｕｌを各管に添加し、よく混合した。管を４℃で１時間置いた。ヒトＩｇＧのＦｃ領域に特異的に結合し、ＦＩＴＣ（Ｓｉｇｍａ）と共有結合している二次抗体を、１：２０００の比で各管に添加した。プレートを箔で包んで光を遮断し、４℃で１時間反応させた。染色試薬ＰＩ（ヨウ化プロピジウム、Ｓｉｇｍａ）を１：２００の比で添加して、細胞生存率を評価した。全ての反応が完了した後、細胞内でＦＩＴＣ及びＰＩ蛍光シグナルを検出した。図１Ａは、変異体抗体が、Ｌ１ＣＡＭ陰性細胞（すなわち、ＣＨＯ−ＤＧ４４）には結合しないことを示す。図１Ｂ〜図１Ｄは、変異体抗体が、ヒトＬ１ＣＡＭ陽性細胞、ＮＣＩ−Ｈ５２２（図１Ｂ）、ＳＫＯＶ３（図１Ｃ）、及びマウスＬ１ＣＡＭ陽性細胞、Ｂ１６Ｆ１（図１Ｄ）に結合することを示す。変異体抗体は、マウス黒色腫細胞株Ｂ１６６Ｆ１と特異的に結合し、本発明のＡｂ４１７変異体がヒト及びマウスＬ１ＣＡＭの両方と特異的に結合することを示唆する。
【０３２３】
実施例７．ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる精製Ａｂ４１７変異体の質の測定
ＨＰＬＣグレードのＵＰＬＣ溶媒及びＰＢＳは、それぞれＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｆａｉｒ  Ｌａｗｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）及びＧＩＢＣＯ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から購入した。サイズ排除クロマトグラフィーを、Ｂｉｏｓｕｉｔ高分解能ＳＥＣカラム（７．５×３００ｍｍ、２５０Å粒径）で抗体試料を分離するために使用した。試料を、イソクラティックフローでＰＢＳ  ｐＨ７．４を使用して分離した。Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）ｅ２６９５分離モジュールを実験に使用し、２４８９ＵＶ／Ｖｉｓ検出器は、２８０ｎｍで吸光度を監視した。サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）分析は、Ａｂ４１７が広いピークを有する高分子量凝集体及び低分子フラグメントを有していたにもかかわらず（図２Ａ）、変異体抗体がモノマーピークを呈することを示した（図２Ｂ〜図２Ｆ）。
【０３２４】
実施例８．ヒトＬ１ＣＡＭに対するＡｂ４１７変異体の親和性の分析
ヒトＬ１ＣＡＭに対するＡｂ４１７及びＡｂ４１７変異体の親和性を、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ３８４（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してＢＬＩによって検査した。親和性分析のために、抗体を、ＰＢＳに０．１％のＢＳＡを添加することによって調製したＰＢＡ溶液で希釈した。ヒトＬ１ＣＡＭを５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６２５、０．７８１２５、または０ｎＭの濃度のＰＢＡで段階希釈した後、２００ｕｌの希釈Ｌ１ＣＡＭを不透明な９６ウェルプレートに添加して光透過を防止した。ＡＨＣ（抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ捕捉）センサチップを使用して、センサチップをＰＢＡ溶液、抗体、ＰＢＡ溶液、抗原、及びＰＢＡ溶液にこの順序で移しながら、抗体及び抗原の会合及び解離時に生じる屈折率の変化を調べることによって、抗体の抗原への結合動態を分析した。
【０３２５】
表１０は、ヒトＬ１ＣＡＭに対するＡｂ４１７の親和性（ＫＤ）が約０．２ｎＭであり、Ａｂ６１２の親和性が０．１ｎＭであり、Ａｂ４Ｈ５の親和性が８ｐＭであり、Ａｂ２Ｃ２Ｈの親和性が範囲外であり、Ａｂ４Ｈ６の親和性が０．０７ｎＭであり、Ａｂ５Ｄ１２の親和性が０．０９ｎＭであったことを示す。Ａｂ４１７と比較して変異体の親和性の増加（例えば、最大２５倍）は、解離速度の遅さに起因した。
【表１０】
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【０３２６】
実施例９．Ａｂ４１７変異体の等電点（ＰＩ）分析
中性コーティングされたキャピラリーを有するＳｃｉｅｘ  ＰＡ８００プラス機器（Ｓｃｉｅｘ  ＰＮ４７７４４１）を使用して、Ａｂ４１７及びその突然変異体のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を行った。全ての実験は、三連複で行った。それぞれの材料のＰＩ値を、３２Ｋａｒａｔソフトウェアを使用して決定した。表１１は、Ａｂ４１７抗体のｐＩ値が９．６２であり、Ａｂ６１２のｐＩ値が９．２５であり、Ａｂ４Ｈ５のｐＩ値が８．９６であり、Ａｂ２Ｃ２のｐＩ値が８．９６であり、Ａｂ４Ｈ６のｐＩ値が９．０３であり、Ａｂ５Ｄ１２のｐＩ値が９．０４であったことを示す。
【表１１−１】
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【表１１−２】
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【０３２７】
実施例１０．Ａｂ４１７変異体の腫瘍成長阻害効果の分析
Ａｂ６１２抗体の抗腫瘍効果を調査するために、雄のＢａｌｂ／ｃヌードマウスに、ヒト由来胆管癌細胞株Ｃｈｏｉ−ＣＫを移植した。構築したＣｈｏｉ−Ｃｋ腫瘍組織（３×３×３ｍｍ３）をマウスの背部に接種した。腫瘍体積が１００ｍｍ３（群あたりｎ＝８）に達した後、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＡｂ４１７抗体、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＡｂ６１２抗体、３．３ｍｇ／ｋｇの用量の対照ｈＦｃ抗体、及び陰性対照（ＰＢＳ）または（ビヒクル）を週に３回、３週間にわたって静脈内注射した。腫瘍体積、マウスの体重、及び腫瘍重量を測定し、それぞれ図１Ａ〜図１Ｃに示す。
【０３２８】
図３Ａ及び図３Ｃは、Ａｂ６１２処置群が３１１ｍｍ３の平均腫瘍体積及び０．２０ｇの腫瘍重量を示したのに対し、Ａｂ４１７処置群が３８７ｍｍ３の平均腫瘍体積及び０．４１ｇの腫瘍重量を示したことを示す。模擬処置した対照マウスは、１０９６ｍｍ３の平均腫瘍体積及び０．９３ｇの腫瘍重量を示した。結果は、腫瘍重量に基づいて、Ａｂ６１２（７８．２％腫瘍成長阻害率（ＩＲ））がＡｂ４１７（５５．５％のＩＲ）と比較して１．４倍高い腫瘍成長阻害を示したことを示す（図３Ｃ）。図３Ｄは、図３Ａ〜図３Ｃに記載されるように、実験の終了後に犠牲にした８匹のマウスの各群の腫瘍画像を示す。Ａｂ６１２抗体で処置した８匹のマウスから抽出したがん組織のサイズは、Ａｂ４１７抗体で処置したものよりも小さい。Ａｂ６１２抗体の抗がん効果は、インビボで良好に機能し、がん組織または免疫細胞に基づく強襲環境への抗体浸潤を通じて腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の向上をもたらすように思われる。
【０３２９】
したがって、本明細書に開示されるＡｂ６１２抗体で処置した群は、陰性対照で投与した群と比較して、腫瘍成長に対する有意な阻害効果を示した。加えて、投与中にマウスにおいて体重減少は観察されず、抗体の投与による毒性は観察されなかった。
【０３３０】
特定の態様の前述の説明は、本発明の一般的な概念から逸脱することなく、過度の実験なしに、当該技術分野の技術の範囲内の知識を適用することによって、他者がかかる特定の態様の様々な用途に対して容易に修正及び／または適応させることができるように、本発明の一般的な性質を十分に明らかにするであろう。したがって、かかる適応及び修正は、本明細書に提示される教示及びガイダンスに基づいて、開示される態様の同等物の意味及び範囲内であることが意図される。本明細書における語法または専門用語は、本明細書の専門用語または語法が、教示及びガイダンスに照らして熟練者によって解釈されるように、説明を目的とし、限定を目的とするものではないことを理解されたい。
【０３３１】
本発明の他の態様は、本明細書に開示される本発明の仕様及び実施の考慮から当業者には明白であろう。本明細書及び実施例は、単なる例示として見なされることが意図され、本発明の真の範囲及び趣旨は、以下の特許請求の範囲によって示される。
【０３３２】
本明細書に開示される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されたかのように同じ程度で参照により組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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