(57)【要約】  本発明は、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼを含む水性液体組成物および凍結乾燥組成物のような組成物を提供する。酸性スフィンゴミエリナーゼが欠乏している患者を治療するために組成物を使用するための方法もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ、リン酸ナトリウム、メチオニン、およびスクロースを含む組成物。
【請求項２】
４〜７％ｗ／ｗオリプダーゼアルファ（配列番号２）、
３〜７％ｗ／ｗリン酸ナトリウム、
１５〜２５％ｗ／ｗ  Ｌ−メチオニン、および
６５〜７５％ｗ／ｗスクロースを含む凍結乾燥組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
本質的に：
５．５％ｗ／ｗオリプダーゼアルファ、
２．３％ｗ／ｗリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．６％ｗ／ｗリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
２０．５％ｗ／ｗ  Ｌ−メチオニン、および
６８．６％ｗ／ｗスクロースからなる、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
１〜１０ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
１０〜５０ｍＭリン酸ナトリウム、
７０〜１５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
１〜１０％ｗ／ｖスクロースを含む水性液体組成物であって、
ｐＨ５〜８を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
３〜５ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
１０〜３０ｍＭリン酸ナトリウム、
８０〜１２０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
４〜６％ｗ／ｖスクロースを含む水性液体組成物であって、
ｐＨ６〜７を有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
本質的に：
４ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
２０ｍＭリン酸ナトリウム、
１００ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
５％ｗ／ｖスクロースからなり、
ｐＨ６．５を有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
０．００５％ｗ／ｖポリソルベート８０をさらに含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
請求項４〜７のいずれか１項に記載の水性液体組成物を凍結乾燥することによって得られる、組成物。
【請求項９】
凍結乾燥組成物を製造するための方法であって：
請求項４〜７のいずれか１項に記載の水性液体組成物を得ること、および
水性液体組成物を凍結乾燥することを含む、前記方法。
【請求項１０】
本質的に：
２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、
９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
７９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
２６５ｍｇスクロースからなる凍結乾燥組成物を含む、バイアル。
【請求項１１】
本質的に：
２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、
９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
７９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
２６５ｍｇスクロース
からなる凍結乾燥組成物を、５．１ｍＬの滅菌水中に再構成することによって得られる、水性液体組成物。
【請求項１２】
バイアルであって、本質的に：
４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、
２．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
６０ｍｇスクロースからなる凍結乾燥組成物を含む、前記バイアル。
【請求項１３】
水性液体組成物であって、本質的に：
４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、
リ２．０ｍｇン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
６０ｍｇスクロースからなる凍結乾燥組成物を、１．１ｍＬの滅菌水中に再構成することによって得られる、前記水性液体組成物。
【請求項１４】
請求項１０または１２に記載のバイアルおよび、凍結乾燥組成物を再構成するための滅菌水、０．９％塩化ナトリウム、またはリン酸緩衝生理食塩水を含むバイアルを含む、製造品。
【請求項１５】
ヒト患者における酸性スフィンゴミエリナーゼ欠損症（ＡＳＭＤ）を治療する方法であって、請求項１〜８、１１、および１３のいずれか１項に記載の組成物を患者に投与することを含み、組成物は、それが凍結乾燥組成物である場合、投与前に液体形態に再構成される、前記方法。
【請求項１６】
ヒト患者におけるＡＳＭＤの治療に使用するための、請求項１〜８、１１、および１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
ヒト患者においてＡＳＭＤを治療するための薬剤を製造するための、請求項１〜８、１１、および１３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１８】
ＡＳＭＤはニーマンピック病タイプＡ／ＢまたはタイプＢである、請求項１５に記載の方法、請求項１６に記載の使用のための組成物、または請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
治療はＡＳＭＤの非神経学的症状のためのものである、請求項１８に記載の方法、使用のための組成物、または使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
酸性スフィンゴミエリナーゼ欠損症（ＡＳＭＤ）は、生命を脅かすまれなリソソーム蓄積障害である。それは、リソソーム酵素酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）をコードするＳＭＰＤ１遺伝子の変異に起因する常染色体劣性遺伝病である（非特許文献１）。ＡＳＭＤ患者はスフィンゴミエリンを代謝することができず、その結果、複数の臓器のリソソームに蓄積し、重篤の場合には、内臓疾患と神経変性を引き起こす。ＡＳＭＤ患者は、脾臓、肝臓、肺および骨髄のコレステロールやその他の脂質を増加させる。
【０００２】
乳児内臓神経ＡＳＭＤ（ニーマンピック病タイプＡまたはＮＰＤ  Ａとしても知られる）は、最も重篤な疾患表現型であり、早期発症および急性神経障害型として特徴付けられる。ＮＰＤ  Ａは、成長障害、肝脾腫、および急速に進行する神経変性を引き起こす。患者は幼児期に死亡する（非特許文献２）。
【０００３】
慢性内臓ＡＳＭＤ（ＮＰＤ  Ｂ）および慢性内臓神経ＡＳＭＤ（ＮＰＤ  Ａ／Ｂ）の患者は、乳児期から成人期にわたって発症する（非特許文献３；非特許文献４）。ＮＰＤ  Ｂ患者は通常、小児期、典型的には２歳以降に診断される。ほとんどのＮＰＤ  Ｂ患者は成人期まで生きる。ＮＰＤ  Ａ／Ｂ患者は、神経変性疾患として発症する可能性のある小児期の神経症状を呈する中間型として分類される。肝臓、肺、および造血系疾患による罹患率は、慢性ＡＳＭＤの全ての患者に起こり、肝脾腫、肝機能障害、浸潤性肺疾患、および血小板減少症を含む（非特許文献５；非特許文献６）。小児期の成長制限および低骨密度などの骨障害も慢性ＡＳＭＤの一般的な特徴である（非特許文献７）。これらの患者の主な死因は肺疾患と肝臓疾患である（非特許文献８；非特許文献９）。
【０００４】
ＡＳＭＤの高い罹患率と死亡率の故に、この遺伝病の効果的な治療が緊急に要望されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｃｈｕｃｈｍａｎら、Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｍｅｔａｂ．  １２０（１−２）：２７〜３３頁（２０１７）
【非特許文献２】ＭｃＧｏｖｅｒｎら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６６（２）：２２８〜２３２頁（２００６）
【非特許文献３】Ｗａｓｓｅｒｓｔｅｉｎら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １１４（６）：ｅ６７２−６７７（２００４）
【非特許文献４】Ｗａｓｓｅｒｓｔｅｉｎら、Ｊ．  Ｐｅｄｉａｔｒ．  １４９（４）：５５４〜５５９頁（２００６）
【非特許文献５】ＭｃＧｏｖｅｒｎら、Ｇｅｎｅｔ．  Ｍｅｄ．  １５（８）：６１８〜６２３頁（２０１３）
【非特許文献６】ＭｃＧｏｖｅｒｎら、Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊ．  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓ．  １２（１）：４１（２０１７）
【非特許文献７】Ｗａｓｓｅｒｓｔｅｉｎら、Ｊ．  Ｐｅｄｉａｔｒ．  １４２（４）：４２４〜４２８頁（２００３）
【非特許文献８】ＭｃＧｏｖｅｒｎら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １２２（２）：ｅ３４１〜３４９（２００８）
【非特許文献９】Ｃａｓｓｉｍａｎら、Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｍｅｔａｂ．  １１８（３）：２０６〜２１３頁（２０１６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ＡＳＭＤを治療するための組換えヒトＡＳＭ（ｒｈＡＳＭ）の組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、ｒｈＡＳＭ、リン酸ナトリウム、メチオニン、およびスクロース（またはトレハロース）を含む。特定の実施形態では、ｒｈＡＳＭはオリプダーゼアルファ（配列番号２）である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
いくつかの実施形態では、組成物は凍結乾燥される。本発明の凍結乾燥組成物は、例えば：
４〜７％ｗ／ｗオリプダーゼアルファ、
３〜７％ｗ／ｗリン酸ナトリウム、
１５〜２５％ｗ／ｗ  Ｌ−メチオニン、および
６５〜７５％ｗ／ｗスクロースを含んでもよい。
【０００８】
特定の実施形態では、本発明の凍結乾燥組成物は：
５．５％ｗ／ｗオリプダーゼアルファ、
２．３％ｗ／ｗリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．６％ｗ／ｗリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
２０．５％ｗ／ｗ  Ｌ−メチオニン、および
６８．６％ｗ／ｗスクロースを含んでもよい。
【０００９】
いくつかの実施形態では、組成物は水性液体組成物である。水性液体組成物は、例えば：
１〜１０ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
１０〜５０ｍＭリン酸ナトリウム、
７０〜１５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
１〜１０％ｗ／ｖスクロースを含んでもよく、
ここで、組成物はｐＨ５〜８を有する。
【００１０】
特定の実施形態では、本発明の水性液体組成物は：
３〜５ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
１０〜３０ｍＭリン酸ナトリウム、
８０〜１２０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
４〜６％ｗ／ｖスクロースを含んでもよく、
ここで、組成物は６〜７のｐＨを有する。
【００１１】
特定の実施形態では、本発明の水性液体組成物は：
４ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
２０ｍＭリン酸ナトリウム、
１００ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
５％ｗ／ｖスクロースを含んでもよく、
ここで、組成物はｐＨ６．５を有する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本発明の水性液体組成物は、０．００５％ｗ／ｖポリソルベート８０をさらに含んでもよい。
【００１３】
本発明はさらに、本明細書に記載の水性液体組成物を乾燥（例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥）することによって得られる組成物を提供する。本発明はまた、本明細書に記載の水性液体組成物を凍結乾燥することを含む、凍結乾燥組成物を製造するための方法を提供する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の凍結乾燥組成物を含むバイアルを提供する。特定の実施形態では、バイアル中の凍結乾燥組成物は、以下を含むか、または本質的に以下からなる：
２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、
９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
７９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
２６５ｍｇスクロース。
【００１５】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥組成物は、水性液体組成物を得るために、５．１ｍＬの滅菌水中に再構成される。
【００１６】
特定の実施形態では、バイアル中の凍結乾燥組成物は、以下を含むか、または本質的に以下からなる：
４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、
２．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
６０ｍｇスクロース。
【００１７】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥組成物は、水性液体組成物を得るために、１．１ｍＬの滅菌水中に再構成される。
【００１８】
本発明はさらに、１）本明細書に記載の凍結乾燥組成物を含むバイアル、および２）凍結乾燥組成物を再構成するための、例えば、滅菌水、０．９％塩化ナトリウム、またはリン酸緩衝生理食塩水を含むバイアルを含む製造品を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、本明細書に記載の組成物を患者に投与することを含む、ヒト患者においてＡＳＭＤを治療する方法を提供し、ここで、組成物は、それが凍結乾燥組成物である場合、投与前に液体形態に再構成される。
【００２０】
本発明はさらに、ヒト患者におけるＡＳＭＤの治療に使用するための本明細書に記載の組成物を提供する。
【００２１】
本発明はさらに、ヒト患者においてＡＳＭＤを治療するための薬剤を製造するための本明細書に記載の組成物の使用を提供する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＳＭＤの治療は、ニーマンピック病タイプＡ／ＢもしくはタイプＢ、またはＡＳＭＤの非神経学的症状のためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１Ａは、様々なｐＨのコハク酸、クエン酸、クエン酸／リン酸、またはリン酸緩衝液中、３０℃で２週間保存した後の比（酵素的）活性によって測定されるｒｈＡＳＭの安定性を示す図である。図１Ｂは、様々なｐＨのコハク酸、クエン酸、クエン酸／リン酸、またはリン酸緩衝液中、３０℃で１週間保存した後の高分子量種のパーセント（％ＨＭＷＳ）によって測定されるｒｈＡＳＭの安定性を示す図である。ＨＭＷＳはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定された。図１Ｃは、様々なｐＨでのクエン酸／リン酸またはリン酸緩衝液中での熱安定性によって測定されたｒｈＡＳＭの安定性を示す図である。熱安定性は、示差走査熱量測定によって決定された。
【図２】図２Ａは、３０℃、ｐＨ６．５の１０ｍＭ、２０ｍＭ、５０ｍＭ、または１００ｍＭリン酸緩衝液中の経時的なｒｈＡＳＭの比活性を示す図である。図２Ｂは、３０℃、ｐＨ６．５の１０ｍＭ、２０ｍＭ、５０ｍＭ、または１００ｍＭリン酸緩衝液中の％ＨＭＷＳによって測定された、経時的なｒｈＡＳＭの物理的安定性を示す図である。
【図３】図３Ａは、凍結乾燥前（液体）および凍結乾燥後（ｌｙｏ）の４ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＡＳＭの比（酵素的）活性に対する５％ｗ／ｖマンニトール、スクロース、またはトレハロースの効果を示す図である。図３Ｂは、凍結乾燥前（液体）および凍結乾燥後（ｌｙｏ）の％ＨＭＷＳにより測定された４ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＡＳＭの物理的安定性に対する５％ｗ／ｖマンニトール、スクロース、およびトレハロースの効果を示す図である。
【図４】図４Ａは、５℃での経時的なｒｈＡＳＭの比活性を示す図である。ｒｈＡＳＭは、５％マンニトール、５％スクロース、または３％マンニトールおよび２％スクロース（全てｗ／ｖ濃度）を含む溶液から凍結乾燥された。図４Ｂは、％ＨＭＷＳによって測定された５℃での経時的なｒｈＡＳＭの物理的安定性を示す図である。ｒｈＡＳＭは、５％マンニトール、５％スクロース、または３％マンニトールおよび２％スクロース（全てｗ／ｖ濃度）を含む溶液から凍結乾燥された。
【図５】図５Ａは、５℃での経時的なｒｈＡＳＭの比活性を示す図である。ｒｈＡＳＭは、１００ｍＭメチオニン（全てｗ／ｖ濃度）を含むかまたは含まない５％スクロースを含む溶液から凍結乾燥された。図５Ｂは、％ＨＭＷＳによって測定された５℃での経時的なｒｈＡＳＭの物理的安定性を示す図である。ｒｈＡＳＭは、１００ｍＭメチオニンを含むかまたは含まない５％ｗ／ｖスクロースを含む溶液から凍結乾燥された。
【図６】図６は、２〜８℃での液体ｒｈＡＳＭ組成物における経時的な二量体のパーセンテージに対するｐＨ、タンパク質濃度、メチオニン濃度、およびスクロース濃度の影響を示す図である。
【図７】図７は、２〜８℃での液体組成物における経時的なｒｈＡＳＭ比活性に対するｐＨ、タンパク質濃度、メチオニン濃度、およびスクロース濃度の影響を示す図である。
【図８】図８は、ｐＨ、タンパク質濃度、メチオニン濃度、およびスクロース濃度を変化させた液体ｒｈＡＳＭ組成物における２〜８℃での経時的な％ＨＭＷＳを示す図である。製剤番号をグラフの右側に示す。
【図９】図９は、様々なｐＨ、タンパク質濃度、メチオニン濃度、およびスクロース濃度での液体ｒｈＡＳＭ組成物における２〜８℃での経時的な凝集％を示す図である。製剤番号をグラフの右側に示す。
【図１０】図１０は、様々なｐＨでの液体ｒｈＡＳＭ組成物における２５℃での二量体％、凝集％、および比活性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、組換えヒトＡＳＭ、例えば、オリプダーゼアルファ、および１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物を提供する。本開示の組成物は、他の組成物と比較して、改善された安定性および貯蔵寿命を有する。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、医薬組成物、すなわち、そのような形態であるか、または有効成分の生物学的活性が有効である一方で、重大な毒性であるか、さもなければ患者において有効成分とは関係のない望ましくない副作用を引き起こす追加の成分を含まないような形態になるように調製され得る組成物である。「医薬組成物」および「医薬製剤」という用語は、本明細書において互換的に使用される。本発明の医薬組成物は、以下にさらに記載されるように、ＡＳＭ欠損症の患者を治療するのに有用である。
【００２５】
組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ
ＡＳＭは、スフィンゴミエリンのセラミドとホスホリルコリンへの分解を触媒する酵素である。「組換えヒトＡＳＭ」は、組換え手段によって調製される、野生型配列と比較して特定のアミノ酸修飾を伴うかまたは伴わないヒトＡＳＭを指す。例えば、組換えヒトＡＳＭは、培養哺乳動物宿主細胞において（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、３Ｔ３、２９３Ｔ、ＮＳ０、ＳＰ２／０、またはＨｕＴ  ７８細胞など）またはヒトＡＳＭコーディング配列に対してトランスジェニックな動物において発現される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、組換えヒトＡＳＭは、オリプダーゼアルファである。オリプダーゼアルファは、ＣＨＯ細胞において生産されるヒトＡＳＭ（ＥＣ−３．１．４．１２）のグリコフォームアルファである。成熟オリプダーゼアルファは、天然のヒトタンパク質の酵素的およびリソソーム標的化活性を保持する５７０アミノ酸のポリペプチドである。リーダー配列（残基１〜５７）を含むオリプダーゼアルファのアミノ酸配列は、以下に配列番号１として示されており、ここでリーダー配列はイタリック体で太字である。成熟オリプダーゼアルファ配列（配列番号１の残基５８〜６２７にかかる配列番号２）には、リーダー配列がない。
【００２７】
【化１】
2021525083.tif 000002
【００２８】
他の実施形態では、本発明において有用なヒトＡＳＭは、アミノ酸配列がオリプダーゼアルファに対して９９％、９８％、９７％、９６％、または９５％同一である。例えば、組成物中のヒトＡＳＭは、米国特許第６，５４１，２１８号に示される配列を有することができ、その開示は、その全体を本明細書に組み入れる。その配列（配列番号３）は、リーダー配列（残基１〜５９）をイタリック体および太字として以下に示されており、ここで成熟タンパク質（配列番号３の残基６０〜６２９にかかる配列番号４）にはリーダー配列がない。
【００２９】
【化２】
2021525083.tif 000003
【００３０】
組成物中のヒトＡＳＭはまた、アミノ酸配列において、配列Ｐ１７４０５−１またはその多型変異体としてＵＮＩＰＲＯＴデータベースに開示されているヒトＡＳＭと同一であってもよい。Ｐ１７４０５−１配列は、リーダー配列（残基１〜５９）をイタリック体および太字として以下に示されており（配列番号５）、ここで成熟タンパク質（配列番号５の６０〜６２９の残基にかかる配列番号６）にはリーダー配列がない。
【００３１】
【化３】
2021525083.tif 000004
【００３２】
組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ組成物
本発明の組成物は、組換えヒトＡＳＭを含み、酵素に関して優れた安定性を示す。「安定」または「安定性」は、保存中、および／または物理的または化学的ストレスに供した際に、その物理的安定性、化学的安定性、および／または生物学的活性を保持する組成物中の有効成分の能力を指す。安定性は、選択された温度、例えば冷蔵条件下（例えば、２〜８℃）、または室温（例えば、２３〜２５℃）で、選択された期間、例えば１６週間、２４週間、３６週間、４か月、６か月、１年、２年、３年、またはそれ以上の状況におけるものであり得る。タンパク質の安定性は、より短い期間内に実践されるがその結果が臨床設定における安定性を示すアッセイで、測定される。そのようなアッセイには、タンパク質組成物が１つまたはそれ以上の凍結融解サイクルに供される凍結／解凍アッセイ；または、タンパク質組成物が所定の期間にわたって機械的攪拌処理に供される攪拌アッセイが含まれる。タンパク質の安定性は、タンパク質組成物を指定された保存温度（２〜８℃など）で選択された期間保存し、二量体化または凝集の程度（例えば、サイズ排除ＨＰＬＣまたはタンパク質ゲルで測定された）、タンパク質分解（例えば、サイズ排除ＨＰＬＣまたはタンパク質ゲルで測定された）、組成物の色の変化、液体組成物の透明度、酵素活性、グリカン含有量および組成、受容体結合親和性、メチオニン残留酸化、および組成物の生物学的活性などのその構造的および機能的属性を分析することによって決定できる。
【００３３】
本発明の組成物は、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。「賦形剤」とは、薬物の有効成分の希釈剤、ビヒクル、担体、防腐剤、結合剤、または安定剤として使用される不活性物質を指す。例えば、組成物は、緩衝剤、等張剤、および／または抗酸化剤などの安定剤を含み得る。場合によっては、１つの薬剤がこれらの目的の複数を果たすこともある。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、オリプダーゼアルファなどの組換えヒトＡＳＭ、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムなどの緩衝剤、Ｌ−メチオニンなどの安定剤、およびスクロースまたはトレハロースなどの非還元糖を含む。ヒトＡＳＭは、組成物の特定の構成により、安定性が改善している。本発明の組成物は、水溶液または凍結乾燥調製物であり得る。
【００３４】
液体組成物
いくつかの実施形態では、組成物は、１〜１０ｍｇ／ｍＬ（例えば、３〜５ｍｇ／ｍＬ）ｒｈＡＳＭ（例えば、オリプダーゼアルファ）；１０〜５０ｍＭ（例えば、１０〜３０ｍＭ）リン酸ナトリウム；７０〜１５０ｍＭ（例えば、８０〜１２０ｍＭ）メチオニン（例えば、Ｌ−メチオニン）；および１〜１０％（例えば、４〜６％）ｗ／ｖスクロースまたはトレハロースを含む水性液体組成物である。水性液体組成物のｐＨは、５〜８（例えば、６〜７）であり得る。
【００３５】
いくつかの実施形態では、水性液体組成物は、本明細書に記載の水性液体組成物の凍結乾燥中または後にヒトＡＳＭの凝集を著しく増加させる可能性があるため、検出可能な量のマンニトール、最も容易に使用される結晶性賦形剤を含まない。
【００３６】
いくつかの実施形態では、水性液体組成物は、０．００４〜０．００８％、０．００５〜０．００７％、または０．００５％ｗ／ｖの界面活性剤を含む。例示的な界面活性剤には、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０および８０）およびポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。特定の実施形態では、水性液体組成物は、０．００５％ポリソルベート８０を含む。場合によっては、界面活性剤の存在は、液体組成物の濁度を減少することに役立つ可能性がある。
【００３７】
いくつかの実施形態では、水性液体組成物は、０．０５、０．０１、または０．００５ｍＭ以下のＥＤＴＡおよびＥＧＴＡなどのキレート剤を含み；例示的な実施形態では、水性液体組成物は、検出可能な量のキレート剤を含まない。場合によっては、例えば０．０５ｍＭまたは０．１ｍＭを超える濃度でのキレート剤の存在は、特には、例えば１２〜１６週間のような長期の保存期間の後、または例えば２５℃での非冷蔵条件下で、ヒトＡＳＭの凝集を増加させ、その安定性を低下させる可能性がある。
【００３８】
いくつかの実施形態では、水性液体組成物は、０〜５０ｐｐｍ（例えば、１５〜３０ｐｐｍ）の亜鉛を含むことができ、これは、例えば、製造プロセスから持ち越されるか、または外部から添加される。
【００３９】
特定の実施形態では、水性液体組成物は、４ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭメチオニン、および５％（ｗ／ｖ）スクロースを含むか、または本質的にそれらからなり、ｐＨ６．５を有する。「本質的にからなる」という用語は、組成物が検出可能な量で他の成分を含まないか、またはタンパク質製造プロセスに由来する微量の特定の物質のみを含み、そのような物質が酵素の生物学的活性に影響を及ぼさないか、またはヒト患者の害にならないことを意味する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、組成物は、１〜２０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１０ｍｇ／ｍＬ）ｒｈＡＳＭ（例えば、オリプダーゼアルファ）および１０〜５０ｍＭ（例えば、２０ｍＭ）リン酸ナトリウムを含む水性液体組成物である。特定の実施形態では、水性液体組成物は、メチオニン（例えば、Ｌ−メチオニン）およびスクロースまたはトレハロースをさらに含む。特定の実施形態では、水性液体組成物は、８０〜１２０ｍＭ（例えば、１００ｍＭ）メチオニンおよび４〜６％（例えば、５％）（ｗ／ｖ）スクロースをさらに含む。特定の実施形態では、水性液体組成物は、ｐＨ６．５を有する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、組成物は、１〜５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、３．８、１８、または４９ｍｇ／ｍＬ）ｒｈＡＳＭ（例えば、オリプダーゼアルファ）および１０〜５０ｍＭ（例えば、２０ｍＭ）リン酸ナトリウムを含む水性液体組成物である。特定の実施形態では、水性液体組成物は、１〜１５％（例えば、５％、６％、７％、または８％）スクロースまたはトレハロースをさらに含む。特定の実施形態では、水性液体組成物は、８０〜１２０ｍＭ（例えば、１００ｍＭ）メチオニンをさらに含む。特定の実施形態では、水性液体組成物は、ｐＨ６．５を有する。組成物は、例えば、３．８ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＡＳＭ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、および５％スクロース；１８ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＡＳＭ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、および５％スクロース；または４９ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＡＳＭ、２０ｍＭリン酸塩、および８％スクロースを含んでもよい。
【００４２】
水性液体組成物は、組換え技術によって生成され、続いて宿主細胞から精製されたヒトＡＳＭを本明細書に記載の賦形剤と水中で混合し、得られた混合物を所望のｐＨに調整することによって調製することができる。例えば、ヒトＡＳＭおよび所望の賦形剤は、所望のリン酸ナトリウム濃度およびｐＨを有するリン酸ナトリウム緩衝液に、添加または緩衝液交換される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、水性液体組成物は、以下でさらに詳細に記載される本発明の凍結乾燥組成物を再構成することによって調製することができる。再構成は、滅菌水、生理食塩水（例えば、０．９％塩化ナトリウム）、またはリン酸緩衝生理食塩水などの薬学的に許容される液体を用いて行うことができる。
【００４４】
凍結乾燥組成物
本発明はまた、凍結乾燥組成物を提供する。そのような組成物は、本明細書に記載の水性液体組成物を凍結乾燥することによって調製することができる。凍結乾燥組成物は、長期間の保存に適する。凍結乾燥は、当該技術分野で知られている方法に従って実行することができる。例えば、液体組成物は、凍結が起きるゼロ以下（摂氏）の温度（例えば、−５℃から−８０℃）に冷やされ、次に低圧（部分真空）チャンバー内に設置して昇華を起こさせてもよい（一次乾燥）；ここでは必要に応じ、不要な水分子をさらに除去するために、乾燥の第２段階（二次乾燥）で組成物の温度を上昇させてもよい。いくつかの実施形態では、凍結乾燥プロセスの完了後、容器を密封する前に、窒素などの不活性ガスが組成物の容器（例えば、ガラスバイアル）内に導入される。
【００４５】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の水性液体組成物を、例えば、噴霧乾燥することによって調製することができる粉末組成物を提供する。噴霧乾燥された組成物は、長期間の保存に適する。噴霧乾燥は、当技術分野で知られている方法に従って実行することができる。例えば、液体組成物は、噴霧器またはスプレーノズルを通して制御されたサイズの小液滴としてチャンバー内の高温ガス流中に強制的に分散させ、その結果、液体組成物を急速に乾燥させて粉末にすることができる。その後、乾燥した粉末を乾燥チャンバーの底に集めることができる。粉末組成物を調製するための他の乾燥方法もまた企図される。
【００４６】
本発明者らは、本明細書に記載の量で存在するスクロース（またはトレハロース）およびメチオニンが凍結乾燥中に優れた結果を提供することを予期せずに発見した；凍結乾燥産物は、保存中、ヒトＡＳＭの安定性を保ちながら、エレガントケーキ（ｅｌｅｇａｎｔ  ｃａｋｅｓ）を形成する。本発明の凍結乾燥組成物中のヒトＡＳＭは、冷蔵条件下（例えば、０〜１０℃、２〜８℃、または４℃）で、少なくとも４ヶ月（例えば、少なくとも６ヶ月、または少なくとも１２ヶ月）、凝集することなく、生物学的活性を維持することができる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、４〜５０％オリプダーゼアルファ、３〜７％リン酸ナトリウム、および４５〜９０％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む凍結乾燥医薬組成物である。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、５．５％オリプダーゼアルファ、２０．６％  Ｌ−メチオニン、２．３％リン酸ナトリウム二塩基性七水和物、２．６％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および６９．０％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、６．６％オリプダーゼアルファ、３．０％リン酸ナトリウム二塩基性七水和物、３．３％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および８７．１％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、２５．２％オリプダーゼアルファ、２．４％リン酸ナトリウム二塩基性七水和物、２．６％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および６９．９％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、４７．８％オリプダーゼアルファ、１．７％リン酸ナトリウム二塩基性七水和物、１．８％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および４８．８％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、４〜７％オリプダーゼアルファ、１５〜２５％  Ｌ−メチオニン、３〜７％リン酸ナトリウム、および６５〜７５％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む凍結乾燥医薬組成物である。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、５．５％オリプダーゼアルファ、２０．５％  Ｌ−メチオニン、２．３％リン酸ナトリウム二塩基性七水和物、２．６％リン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および６８．６％スクロース（全てｗ／ｗパーセント）を含む。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物はまた、例えば、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、または１．０％の水分を含み得る。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明は、１５〜２５ｍｇオリプダーゼアルファ、７５〜８５ｍｇ  Ｌ−メチオニン、１５〜２５ｍｇリン酸ナトリウム、および２５０〜３００ｍｇスクロースを含む、凍結乾燥医薬組成物を含む、バイアルを提供する。使用する前に、組成物を４〜６ｍＬの滅菌水で再構成することができる。
【００５０】
いくつかの実施形態では、バイアルは、２１．２ｍｇ、２０．１ｍｇ、９５．４ｍｇ、または２５９．７ｍｇのオリプダーゼアルファ；９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物；１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物；および２６５ｍｇスクロースを含むか、またはそれらからなる凍結乾燥医薬組成物を含む。凍結乾燥組成物は、場合により、７９．１ｍｇ  Ｌ−メチオニンを含んでもよい。凍結乾燥医薬組成物は、場合により、０〜０．３ｍｇ（例えば、０．０８〜０．１６ｍｇ）の亜鉛を含んでもよく、これは、例えば、製造プロセスから持ち越されるか、または外部から添加される。特定の実施形態では、バイアルは、内部が無菌の窒素で満たされた雰囲気を有してもよい。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物を５．１ｍＬの滅菌水で再構成して、それぞれオリプダーゼアルファ約４．０ｍｇ／ｍＬ、３．８ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、または４９ｍｇ／ｍＬの濃度を得ることができる。再構成された組成物は、特定の容量に、投与される用量に基づいて０．９％塩化ナトリウム溶液でさらに希釈される。
【００５１】
特定の実施形態では、バイアルは、２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、７９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および２６５ｍｇスクロースを含むかまたはそれらからなる凍結乾燥医薬組成物を含む。凍結乾燥医薬組成物は、場合により、０〜０．３ｍｇ（例えば、０．０８〜０．１６ｍｇ）の亜鉛を含んでもよく、これは、例えば、製造プロセスから持ち越されるか、または外部から添加される。特定の実施形態では、凍結乾燥医薬組成物は、ケーキまたは凍結乾燥された粉末の形態である。特定の実施形態では、バイアルは、内部が無菌の窒素で満たされた雰囲気を有してもよい。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、５．１ｍＬの滅菌水中に再構成されて、約４．０ｍｇ／ｍＬのオリプダーゼアルファ濃度を得ることができる。再構成された組成物は、特定の容量に、投与される用量に基づいて０．９％塩化ナトリウム溶液でさらに希釈される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、３〜５ｍｇオリプダーゼアルファ、１５〜１７ｍｇ  Ｌ−メチオニン、３〜５ｍｇリン酸ナトリウム、および５０〜６０ｍｇスクロースを含む、凍結乾燥医薬組成物を含む、バイアルを提供する。使用する前に、組成物を０．８〜１．２ｍＬの滅菌水中に再構成してもよい。
【００５３】
特定の実施形態では、バイアルは、４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、２．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および６０ｍｇスクロースを含むか、またはそれらからなる凍結乾燥医薬組成物を含む。特定の実施形態では、凍結乾燥医薬組成物は、ケーキまたは凍結乾燥された粉末の形態である。凍結乾燥組成物は、場合により、０〜０．０６ｍｇの亜鉛を含んでもよく、これは、例えば、製造プロセスから持ち越されるか、または外部から添加される。特定の実施形態では、バイアルは、内部が無菌の窒素で満たされた雰囲気を有してもよい。特定の実施形態では、凍結乾燥組成物は、１．１ｍＬの滅菌水中に再構成されて、約４．０ｍｇ／ｍＬのオリプダーゼアルファ濃度を得ることができる。再構成された組成物は、特定の容量に、投与される用量に基づいて０．９％塩化ナトリウム溶液でさらに希釈される。
【００５４】
製造品
本発明の組成物は、ＡＳＭ障害を治療するための使用説明書、および場合により、他の治療薬を含む製造品（例えば、キット）で供給することができる。製品中の医薬的に活性な成分（例えば、ｒｈＡＳＭ）は、本明細書に記載の投与計画に従って容易に投与することができる量で供給することができる。例えば、「スターターキット」は、用量漸増レジメンで使用するための様々な量のｒｈＡＳＭの複数バイアルを含んでもよい。
【００５５】
例えば、製造品は、オ１５〜２５ｍｇリプダーゼアルファ、７５〜８５ｍｇ  Ｌ−メチオニン、１５〜２５ｍｇリン酸ナトリウム、および２５０〜３００ｍｇスクロースを含む、バイアルを含んでもよい。特定の実施形態では、製造品は、２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、７９ｍｇメチオニン、９．０ｍｇ、リン酸ナトリウム二塩基性七水和物、１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および２６５ｍスクロース２６５ｍｇを含む凍結乾燥組成物を提供する。
【００５６】
別の例として、製造品は、３〜５ｍｇオリプダーゼアルファ、１５〜１７ｍｇ  Ｌ−メチオニン、３〜５ｍｇリン酸ナトリウム、およびス５０〜６０ｍｇクロースを含む、バイアルを含んでもよい。特定の実施形態では、製造品は、４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、リ２．０ｍｇン酸ナトリウム二塩基性七水和物、２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、および６０ｍｇスクロースを含む凍結乾燥組成物を提供する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、製造品は、凍結乾燥組成物を再構成するための、および／または患者に投与する前に再構成された組成物をさらに希釈するための溶液（例えば、滅菌水、０．９％塩化ナトリウム、および／またはリン酸緩衝生理食塩水）をさらに含んでもよい。
【００５８】
酸性スフィンゴミエリナーゼ組成物の使用
本発明の医薬組成物は、酵素代替療法としてそれを必要とする患者に非経口的に投与することができる。「非経口投与」とは、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与手段を指す。非経口投与には、静脈内注入または注射、ならびに筋肉内、皮内、腹腔内、および皮下注射が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、医薬組成物は、静脈内注入を介して投与される。
【００５９】
本明細書に記載の医薬組成物の適切な投与量レベルは、患者の年齢、体重、病状、一般的な健康状態、および病歴、ならびに薬物投与の経路および頻度、薬剤、および患者が同時に服用している可能性のある任意の他の薬剤中のＡＳＭ有効成分の薬力学と薬物動態を含む様々な要因に基づいて決定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、米国特許第９，６５５，９５４号（Ｓｃｈｕｃｈｍａｎら）に記載されている投与量レジメンに従って投与することができる。例えば、患者は、患者の年齢および状態に依存して、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ以下で始まり、３ｍｇ／ｋｇ（維持用量）以下で終わる用量強度で、漸増用量のヒトＡＳＭを受けることができる。いくつかの実施形態では、最初の１回または２回の用量は、小児患者については０．０３ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇ、または成人患者については０．１ｍｇ／ｋｇの用量強度で与えられてもよい；患者が０．０３および／または０．１ｍｇ／ｋｇで１回または２回の用量を受けた後、患者はその後、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、および３．０ｍｇ／ｋｇの連続用量を与えられる。特定の実施形態では、前記用量のいずれかを繰り返すことができる（例えば、１．０ｍｇ／ｋｇおよび２．０ｍｇ／ｋｇでの用量）。一部の患者については、３．０ｍｇ／ｋｇの用量強度が維持用量として適しているが、他の患者については、より低い用量強度が維持に十分である場合がある。連続用量の間隔は、臨床医によって適切であると決定された場合、２週間、または２週間より短くても長くてもよい。
【００６０】
本発明は、それを必要とする患者においてＡＳＭＤを治療するために本明細書に記載の医薬組成物を使用する方法、それを必要とする患者のＡＳＭＤの治療における使用のための本明細書に記載の医薬組成物、およびそれを必要とする患者においてＡＳＭＤを治療するための薬剤の製造のための本明細書に記載の医薬組成物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥組成物であってもよく、これは、滅菌水、０．９％塩化ナトリウム溶液、またはリン酸緩衝生理食塩水などの医薬的に許容される液体中で再構成される。
【００６１】
患者は成人（例えば、６５歳以上の老人患者を含む１８歳以上の患者）であってもよい。患者は小児患者（１８歳未満である患者、例えば、新生児から６歳、６歳から１２歳、または１２歳から１８歳である患者）であってもよい。いくつかの実施形態では、患者はＮＰＤ  Ａ／ＢまたはＮＰＤ  Ｂを有する場合がある。いくつかの実施形態では、患者はＮＰＤ  Ａを有する場合がある。特定の実施形態では、医薬組成物は、慢性内臓ＡＳＭＤ（ＮＰＤ  Ｂ）を有する成人または小児患者を治療するためのものである。特定の実施形態では、医薬組成物は、成人または小児患者におけるＡＳＭＤの非神経学的症状を治療するためのものである。
【００６２】
例示的な実施形態
本発明のさらなる特定の実施形態を以下に記載する。
１．組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ、リン酸ナトリウム、メチオニン、およびスクロースを含む組成物。
２．組成物は：
４〜７％ｗ／ｗオリプダーゼアルファ（配列番号２）、
３〜７％ｗ／ｗリン酸ナトリウム、
１５〜２５％ｗ／ｗ  Ｌ−メチオニン、および
６５〜７５％ｗ／ｗスクロースを含む凍結乾燥組成物である、実施形態１に記載の組成物。
３．本質的に：
５．５％ｗ／ｗオリプダーゼアルファ、
２．３％ｗ／ｗリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．６％ｗ／ｗリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
２０．５％ｗ／ｗ  Ｌ−メチオニン、および
６８．６％ｗ／ｗスクロースからなる、実施形態２の組成物。
４．組成物は：
１〜１０ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
１０〜５０ｍＭリン酸ナトリウム、
７０〜１５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
１〜１０％ｗ／ｖスクロースを含む水性液体組成物であって、
組成物はｐＨ５〜８を有する、実施形態１の組成物。
５．組成物は：
３〜５ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
１０〜３０ｍＭリン酸ナトリウム、
８０〜１２０ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
４〜６％ｗ／ｖスクロースを含む水性液体組成物であって、
組成物はｐＨ６〜７を有する、実施形態４の組成物。
６．本質的に：
４ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファ、
２０ｍＭリン酸ナトリウム、
１００ｍＭ  Ｌ−メチオニン、および
５％ｗ／ｖスクロースからなる、実施形態４の組成物であって、
ｐＨ６．５を有する、組成物。
７．０．００５％ｗ／ｖポリソルベート８０をさらに含む、実施形態４〜６のいずれか１つの組成物。
８．実施形態４〜７のいずれか１つの水性液体組成物を凍結乾燥することによって得られる組成物。
９．凍結乾燥組成物を製造するための方法であって：
実施形態４〜７のいずれか１つの水性液体組成物を得ること、および
水性液体組成物を凍結乾燥することを含む、方法。
１０．本質的に：
２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、
９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
７９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
２６５ｍｇスクロースからなる凍結乾燥組成物を含む、バイアル。
１１．本質的に：
２１．２ｍｇオリプダーゼアルファ、
９．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
１０．０ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
７９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
２６５ｍスクロース
からなる凍結乾燥組成物を、５．１ｍＬの滅菌水中に再構成することによって得られる、水性液体組成物。
１２．本質的に：
４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、
２．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
６０ｍｇスクロースからなる凍結乾燥組成物を含む、バイアル。
１３．本質的に：
４．８ｍｇオリプダーゼアルファ、
２．０ｍｇリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、
２．３ｍｇリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、
１７．９ｍｇ  Ｌ−メチオニン、および
６０ｍｇスクロースからなる凍結乾燥組成物を、１．１ｍＬの滅菌水中に再構成することによって得られる、水性液体組成物。
１４．実施形態１０または１２のバイアルおよび、凍結乾燥組成物を再構成するための滅菌水、０．９％塩化ナトリウム、またはリン酸緩衝生理食塩水を含むバイアルを含む、製造品。
１５．ヒト患者における酸性スフィンゴミエリナーゼ欠損症（ＡＳＭＤ）を治療する方法であって、実施形態１〜８、１１、および１３のいずれか１つの組成物を患者に投与することを含み、組成物は、それが凍結乾燥組成物である場合、投与前に液体形態に再構成される、方法。
１６．ヒト患者におけるＡＳＭＤの治療に使用するための、実施形態１〜８、１１、および１３のいずれか１つの組成物。
１７．ヒト患者においてＡＳＭＤを治療するための薬剤を製造するための、実施形態１〜８、１１、および１３のいずれか１つの組成物の使用。
１８．ＡＳＭＤはニーマンピック病タイプＡ／ＢまたはタイプＢである、実施形態１５の方法、実施形態１６の使用のための組成物、または実施形態１７の使用。
１９．治療はＡＳＭＤの非神経学的症状のためのものである、実施形態１８の方法、使用のための組成物、または使用。
【００６３】
本明細書で言及される全ての刊行物および他の参考文献は、その全体を参照によって組み入れる。多くの文献が本明細書で引用されているが、この引用は、これらの文献のいずれかが当該技術分野における一般的な知識の一部を形成していることを認めるものではない。本明細書に別段の定義が無い限り、本発明に関連して使用される科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。例示的な方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料もまた、本発明の実行または試験に使用することができる。矛盾する場合は、定義を含む本明細書が支配する。一般に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、微生物学、遺伝学、分析化学、合成有機化学、医薬化学、ならびにタンパク質および核酸化学に関連して使用される命名法およびそれらの技術は、当該技術分野でよく知られており、一般的に使用されている。酵素反応および精製技術は、当該技術分野で一般的に達成されているように、または本明細書に記載されているように、製造業者の仕様に従って実行される。さらに、文脈上別段の要求がない限り、単数形には複数形が含まれ、複数形には単数形が含まれるものとする。本明細書および実施形態を通して、「有する」および「含む」という単語、または「有する」、「有している」、「含む」、または「含まれる」などの変形は、記載された整数または整数のグループを含むことを意味するが、他の整数または整数のグループを除外することを意味しないことは理解されるであろう。
【実施例】
【００６４】
本発明をより良く理解するために、以下の実施例を示す。これらの例は、例示のみを目的としており、いかなる様式でも本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例１】
【００６５】
組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ製剤
この例では、様々なオリプダーゼアルファ水性液体および凍結乾燥組成物の安定性を評価した研究を記載する。
【００６６】
材料および方法
溶液の濁度
溶液の乳白光は、分光学的濁度アッセイによって評価された。特定のＮＴＵ値でのヨーロッパ薬局方参照懸濁液に基づき、以前に確立された乳白色のカテゴリの範囲を設定するために、３４０〜３６０ｎｍの範囲の光学密度を使用した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４マイクロプレート分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）で分析を行った。
【００６７】
凝集
ＳＥＣによって、凝集および二量体分析を行った。ＨＰＬＣバイアルにロードする前に、各サンプルを５回の穏やかなピペット循環により混合した。ＳＥＣ分析は、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ（東ソーバイオサイエンス社、東京、日本）分析カラムおよび対応するガードカラムを備えた１１００／１２００シリーズＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ社、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）で行った。使用した移動相は、ｐＨ６の２０ｍＭリン酸ナトリウム、０．５ｍＬ  ｍｉｎ−１の流速で３５分間に設定した２００ｍＭ塩化ナトリウムであった。各サンプルに対して３回のおよそ８０μｇの注入を行った。検出は、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって実行した。
【００６８】
オリプダーゼアルファ関連高分子量種（ＨＭＷＳ）のレベルは、非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用し、続いてクマシーブルーで染色することにより決定した。オリプダーゼアルファ参照標準は、各ゲルに含まれる。オリプダーゼアルファサンプルをサンプル緩衝液と混合し、分子量マーカーとともに４〜２０％Ｔｒｉｓ−Ｇｌｙｃｉｎｅ勾配ゲルにロードした。１２５Ｖの標的でおよそ２時間電気泳動した後、ゲルをクマシーブルーで染色し、メタノール、酢酸およびＨＰＬＣグレードの水で脱色した。デンシトメトリー分析を行い、観察された全てのバンドに対してＨＭＷＳバンドのパーセンテージについての定量的結果を提供した。
【００６９】
酵素活性
ｒｈＡＳＭサンプルを１．２ｍＬライブラリーチューブ中で２０００：１に希釈した。この手順では、ｒｈＡＳＭによって触媒される３７℃での２−（Ｎ−ヘキサデカノイルアミノ）−４−ニトロフェニルホスホリルコリン（ＨＤＡ−ＰＣ）の加水分解速度を測定した。放出された発色団は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４マイクロプレート分光光度計を使用して４１５ｎｍでの吸光度によって測定された。ｒｈＡＳＭ活性の１単位は、指定されたアッセイ条件下でＨＤＡ−ＰＣから１分あたり１μｍｏｌの２−（Ｎ−ヘキサデカノイルアミノ）−４−ニトロフェノールを生成する酵素の量として定義される。
【００７０】
タンパク質濃度
ｒｈＡＳＭサンプルのタンパク質濃度は、２８０ｎｍでの吸光度によって決定された。対応する緩衝液を使用して、サンプルを１：１０および１：２０に重複して希釈した。２８０ｎｍでの吸光度は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４マイクロプレート分光光度計で測定した。
【００７１】
ｐＨ
サンプルのｐＨ分析は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｐｒｏｂｅ  ｐＨメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）で行った。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｏｒｉｏｎ  ８２０３ＢＮ  ＰｅｒＨｅｃＴ  Ｒｏｓｓセミマイクロガラスプローブ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用した。
【００７２】
示差走査熱量計
示差走査熱量計（ＤＳＣ）分析は、ＣＡＰ−ＶＰ−ＤＳＣマイクロカロリメーター（ＭｉｃｒｏＣａｌ−ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）を使用して行った。サンプルは、対応する緩衝液で０．４ｍｇ／ｍＬに希釈された。サンプルは、１５〜１００℃で２００℃／時のスキャン速度で行われた。データ分析は、ＤＳＣ分析アドオン（ＭｉｃｒｏＣａｌ−ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を備えたＯｒｉｇｉｎ  ７．０（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ社、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）で行われた。
【００７３】
結果
緩衝液およびｐＨ評価
ｒｈＡＳＭの安定性に対する影響について、様々な緩衝液のｐＨおよび緩衝液の種類を評価した。アッセイは、４ｍｇ／ｍｌオリプダーゼアルファを２０ｍＭ緩衝液中、３０℃で２週間インキュベートし、酵素の物理的および機能的安定性を評価することにより行った（図１Ａ〜１Ｃ）。
【００７４】
物理的および機能的の両方で重大な不安定性がｐＨ６．０未満のオリプダーゼアルファにおいて観察された。酵素活性は、ｐＨ６．０未満では急激に減少したが、ｐＨ６．０以上では比較的一定のままであった（図１Ａ）。凝集傾向は、ｐＨ５．５から６．５の間で最低であった。ｐＨ５．５未満で凝集の急激な増加が観察され、ｐＨ６．５を超えると凝集の緩やかな増加が観察された（図１Ｂ）。同等のｐＨ値では、クエン酸／リン酸緩衝液と比較するとリン酸緩衝液の方が安定性は高かった。これらの安定性の傾向は冷蔵温度で保存されたサンプルから得られたデータと一致していた。ｐＨ６．５を超えて観察された緩やかに増加する凝集速度は、ＤＳＣ分析によって裏付けられ、これは、リン酸緩衝液中のより高いｐＨで熱安定性の低下を示した（図１Ｃ）。これらのデータに基づいて、ｒｈＡＳＭ製剤に適した緩衝システムとしてｐＨ約６．５のリン酸ナトリウム緩衝液が特定された。
【００７５】
次に、リン酸ナトリウム濃度を１０ｍＭから１００ｍＭまで変化させることにより、安定性に対するイオン強度または緩衝液濃度の影響を調査した。図２Ａおよび２Ｂにおいて示されるように、低緩衝液濃度（１０ｍＭ、２０ｍＭ、または５０ｍＭ）でのイオン強度は、オリプダーゼアルファの酵素活性および物理的安定性にほとんど影響を及ぼさなかった。リン酸ナトリウム、ｐＨ６．５でのオリプダーゼアルファの安定性は、５０ｍＭ以下の緩衝液濃度で比較的一致していた。しかしながら、リン酸ナトリウムの濃度を１００ｍＭに増加すると、安定性の著しい低下があった。そのような濃度は、凝集種の急速な増加および付随する活性の低下をもたらした（図２Ａおよび２Ｂ）。３０℃でのデータは、冷蔵条件下でのオリプダーゼアルファの保存中に見られるデータと一致していた。緩衝液濃度として２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度を選択したが、これは低いものの、十分な緩衝能を確保していた。
【００７６】
賦形剤の評価
様々な薬学的に許容される賦形剤を、液体および凍結乾燥組成物中のオリプダーゼアルファの安定性に対するそれらの影響について評価した。液体の安定性においての優先的排除メカニズムを介して作用する既知の安定剤の影響をまず調査した（例えば、Ｔｉｍａｓｈｅｆｆ，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９９：  ９７２１〜９７２６頁（２００２）；およびＬｅｅら，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５６：７１９３〜７２０１頁（１９８１））。スクロース、トレハロース、およびプロピレングリコールを２０ｍＭリン酸ナトリウム、０．００５％ＰＳ８０、ｐＨ６．５の基本製剤に添加し、４ｍｇ／ｍＬオリプダーゼアルファの酵素活性および物理的安定性に対する影響を評価した。データは、これらの優先的排除安定剤のいずれの存在も、５℃または３０℃での液体状態のオリプダーゼアルファの安定性を増強しなかったことを示した（データは示さず）。研究した全ての条件下で酵素活性および物理的安定性の損失があったが、スクロースはトレハロースやプロピレングリコールよりもわずかに好ましいようであった。
【００７７】
次に、凍結乾燥中のオリプダーゼアルファの安定性に対するスクロースおよびトレハロースの影響を調査した。マンニトールは、凍結乾燥で一般的に使用される増量剤であるため、調査された（図３Ａおよび３Ｂ）。３つのポリオールは、液体組成物に５％ｗ／ｖで含まれ、その後、凍結乾燥された。図３Ａのデータは、マンニトールの添加が凍結乾燥後のオリプダーゼアルファの酵素活性を減少させたことを示す。図３Ｂのデータは、マンニトールの添加が、凍結乾燥後のタンパク質凝集の大幅な増加をもたらしたことを示す。スクロースおよびトレハロースの存在下での凝集の増加は最小限であった。凍結防止剤として、スクロースを、液体組成物中、５％ｗ／ｖの濃度で選択し、これはその後凍結乾燥することができた。
【００７８】
マンニトールの存在下での経時的な凍結乾燥オリプダーゼアルファ製剤の安定性も調べた。オリプダーゼアルファは、２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）、０．００５％ＰＳ８０、ならびに（ｉ）５％ｗ／ｖマンニトール、（ｉｉ）５％ｗ／ｖスクロース、または（ｉｉｉ）３％マンニトールおよび２％スクロースを含む液体組成物から凍結乾燥した。データは、マンニトールは、単独で使用した場合、凍結乾燥中のタンパク質凝集の即時ならびに継続的な増加をもたらしただけでなく、６ヶ月間スクロースと組み合わせて使用された場合にもそのような結果をもたらしたことを示す（図３Ｂおよび４Ｂ）。６ヶ月目での酵素活性もまた、マンニトールの非存在下よりもマンニトールの存在下で低かった（図４Ｂ）。したがって、マンニトールは、凍結乾燥ｒｈＡＳＭ製剤には不適切な増量剤と見なされた。
【００７９】
マンニトールは凍結乾燥中のｒｈＡＳＭの安定性に有害であることが判明したため、メチオニンを潜在的な増量剤として評価した。Ｌ−メチオニンの存在下でのオリプダーゼアルファの液体保存中の酵素活性および物理的安定性を評価したところ、１００ｍＭ  Ｌ−メチオニンの添加は、５℃におけるオリプダーゼアルファの液体安定性を改善することも悪影響も与えることもないことがわかった。図５Ａおよび５Ｂに示されるように、１００ｍＭＬ−メチオニンを含む液体組成物から調製された凍結乾燥組成物は、オリプダーゼアルファの安定した凍結乾燥構成物をもたらした。５℃で６ヶ月の保存の間、活性や凝集の変化は観察されなかった。さらに、メチオニンおよびスクロースの存在下での凍結乾燥オリプダーゼアルファから得られたケーキは、スクロースのみで凍結乾燥されたものに対して外観が改善されていた。
【００８０】
凍結乾燥について適切な量のメチオニンの同定は、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）、５％ｗ／ｖスクロース、および増加する量のＬ−メチオニンを含む液体組成物から凍結乾燥したオリプダーゼアルファケーキのＸ線回折（ＸＲＤ）によって行った（データは示さず）。メチオニンを含まないサンプルは完全にアモルファスであった。３３ｍＭメチオニンを含むサンプルには結晶化の証拠がいくつかあり、６６ｍＭおよび１００ｍＭメチオニンを含むサンプルにはさらなる結晶化の証拠があった。１００ｍＭ未満のメチオニンレベル（例えば、１０ｍＭおよび３３ｍＭ）でのオリプダーゼアルファの凍結乾燥は、窪んで崩壊した（収縮した）ように見えるバイアルをもたらした。したがって、１００ｍＭメチオニンを凍結乾燥ｒｈＡＳＭ製剤の増量剤として選択した。
【実施例２】
【００８１】
オリプダーゼアルファ組成物の堅牢性
オリプダーゼアルファ、スクロース、およびＬ−メチオニンを含む組成物の堅牢性を評価するために、各々のこれらの成分を、２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中、対照と比較した５つの異なるレベル（低、中低、中央（対照）、中高、および高）に設定した（表１）。
【００８２】
【表１】
2021525083.tif 000005
【００８３】
合計２６の液体製剤変種を生成した（表２）。製剤２および７は、対照製剤または中心点を表す。残りの２４の配合変種は、中心点周辺の様々な条件を表す。全ての２６変種を２〜８℃（２４週間または最大１２ヶ月）および２５℃（１６週間）で保存し、それらの安定性をモニターした。
【００８４】
【表２】
2021525083.tif 000006
【００８５】
試験期間の終了時には、以下のパラメーターが組成物の安定性を示すであろう：（１）透明無色の外観；（２）ｐＨ６．０〜７．０；（３）凝集３．０％以下；（４）３．５〜４．５ｍｇ／ｍＬタンパク質；（５）ＨＭＷＳ  １５％以下；および（６）比活性１１〜４２Ｕ／ｍｇ。図６〜８は、２〜８℃で２４週間保存した後の、それぞれ２６の製剤変種における％二量体、比活性、および％ＨＭＷＳに対する異なる要因の効果を示す。データは、％二量体、比活性、または％ＨＭＷＳに関して変種間に有意な差はなく、したがって、２４の変種全てが２つの対照製剤とともに２〜８℃で２４週間安定であったことを示している。
【００８６】
いくつかの変種では、３６週間を通して、％二量体および比活性に対する様々なｐＨおよび成分濃度の有意な影響がなかったことも観察された。図９は、３６週間目で全ての変種が同様な凝集であったことを示している。
【００８７】
２５℃の加速温度では、１６週間にわたる安定性に対する賦形剤の影響も試験した範囲でほとんどなかった。最も顕著な影響は、異なるｐＨを有する変種で観察された（図１０）。より高いｐＨ（６．８から７．０）でオリプダーゼアルファの安定性が高く、より低いｐＨ（６．５以下）ではより多くの凝集および二量体があった。
【００８８】
本研究は、２〜８℃での変種製剤が、選択された成分範囲で堅牢かつ安定であることを示す。
【図１】
2021525083.tif 000007
【図２】
2021525083.tif 000008
【図３】
2021525083.tif 000009
【図４】
2021525083.tif 000010
【図５】
2021525083.tif 000011
【図６】
2021525083.tif 000012
【図７】
2021525083.tif 000013
【図８】
2021525083.tif 000014
【図９】
2021525083.tif 000015
【図１０】
2021525083.tif 000016
【配列表】
2021525083000001.app
【国際調査報告】
2021525083.tif 000017
2021525083.tif 000018
2021525083.tif 000019
2021525083.tif 000020