(57)【要約】  本明細書には、有害生物（例えば、農業有害生物）の適応度を低減させ、且つ／又は植物の適応度を増加させる方法に有用な複数の植物メッセンジャーパック（例えば、植物小胞（ＥＶ）又はその断片、部分若しくは抽出物を含む）を含む有害生物防除、例えばバイオ農薬又は生物忌避剤組成物が開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、前記複数のＰＭＰの各々は、異種農薬用薬剤を含み、前記組成物は、植物又は植物有害生物への送達のために製剤化される、有害生物防除組成物。
【請求項２】
前記異種農薬用薬剤は、除草剤、抗菌剤、抗真菌剤、殺虫剤、軟体動物駆除剤又は殺線虫剤である、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３】
前記除草剤は、ドキソルビシンである、請求項２に記載の有害生物防除組成物。
【請求項４】
前記除草剤は、グルホシネート、グリホサート、プロパキザホップ、メタミトロン、メタザクロール、ペンジメタリン、フルフェナセト、ジフルフェニカン、クロマゾン、ニコスルフロン、メソトリオン、ピノキサデン、スルコトリオン、プロスルホカルブ、スルフェントラゾドン、ビフェノクス、キンメラック、トリアレート、テルブチラジン、アトラジン、オキシフルオルフェン、ジウロン、トリフルラリン又はクロロトルロンである、請求項２に記載の有害生物防除組成物。
【請求項５】
前記抗菌剤は、ドキソルビシンである、請求項２に記載の有害生物防除組成物。
【請求項６】
前記抗菌剤は、抗生物質である、請求項２に記載の有害生物防除組成物。
【請求項７】
前記抗生物質は、バンコマイシンである、請求項６に記載の有害生物防除組成物。
【請求項８】
前記抗生物質は、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、マクロライド、スルホンアミド、バンコマイシン、ポリミキシン、グラミシジン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、スペクチノマイシン、シプロフロキサシン、イソニアジド、リファンピシン、ピラジナミド、エタンブトール、ミアムブトール又はストレプトマイシンである、請求項６に記載の有害生物防除組成物。
【請求項９】
前記抗真菌剤は、アゾキシストロビン、マンコゼブ、プロチオコナゾール、フォルペット、テブコナゾール、ジフェノコナゾール、カプタン、ブピリメート又はホセチル−Ａｌである、請求項２に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１０】
前記殺虫剤は、クロロニコチル、ネオニコチノイド、カルバメート、有機リン酸エステル、ピレトロイド、オキサジアジン、スピノシン、シクロジエン、有機塩素、フィプロール、メクチン、ジアシルヒドラジン、ベンゾイル尿素、有機スズ、ピロール、ジニトロテルペノール、ＭＥＴＩ、テトロン酸、テトラミン酸又はフタルアミドである、請求項２に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１１】
前記異種農薬用薬剤は、小分子、核酸又はポリペプチドである、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１２】
前記小分子は、抗生物質又は二次代謝物である、請求項１１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１３】
前記核酸は、阻害性ＲＮＡである、請求項１１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１４】
前記異種農薬用薬剤は、前記複数のＰＭＰの各々によって封入される、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１５】
前記異種農薬用薬剤は、前記複数のＰＭＰの各々の表面に埋め込まれる、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１６】
前記異種農薬用薬剤は、前記複数のＰＭＰの各々の表面に共役される、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１７】
前記複数のＰＭＰの各々は、有害生物忌避剤をさらに含む、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１８】
前記複数のＰＭＰの各々は、追加的な農業用薬剤をさらに含む、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項１９】
前記植物有害生物は、細菌又は真菌である、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２０】
前記細菌は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である、請求項１９に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２１】
前記シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）又はシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）である、請求項２０に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２２】
前記真菌は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記植物有害生物は、昆虫、軟体動物又は線虫である、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２４】
前記昆虫は、アブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、請求項２３に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２５】
前記線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、請求項２３に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２６】
室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２７】
前記ＰＭＰは、４℃で少なくとも２４時間、４８時間、７日間又は３０日間にわたって安定している、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２８】
前記ＰＭＰは、少なくとも２０℃、２４℃又は３７℃の温度で安定している、請求項２７に記載の有害生物防除組成物。
【請求項２９】
前記組成物中の前記複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３０】
前記組成物中の前記複数のＰＭＰは、少なくとも１、１０、５０、１００又は２５０μｇＰＭＰタンパク質／ｍＬの濃度である、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３１】
農業的に許容可能な担体を含む、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３２】
前記ＰＭＰを安定化するために製剤化される、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３３】
液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体組成物として製剤化される、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３４】
少なくとも５％のＰＭＰを含む、請求項１に記載の有害生物防除組成物。
【請求項３５】
複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、前記ＰＭＰは、
（ａ）植物又はその部分から初期サンプルを提供するステップであって、前記植物又はその部分は、ＥＶを含む、ステップ；
（ｂ）前記初期サンプルから粗ＰＭＰ画分を単離するステップであって、前記粗ＰＭＰ画分は、前記初期サンプル中のレベルに対して、前記植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップ；
（ｃ）前記粗ＰＭＰ画分を精製し、それにより複数の純粋なＰＭＰを生成するステップであって、前記複数の純粋なＰＭＰは、前記粗ＥＶ画分中のレベルに対して、前記植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップ；
（ｄ）前記複数の純粋なＰＭＰに有害生物防除薬剤をロードするステップ；及び
（ｅ）植物又は植物有害生物への送達のためにステップ（ｄ）の前記ＰＭＰを製剤化するステップ
を含むプロセスによって植物から単離される、有害生物防除組成物。
【請求項３６】
請求項１に記載の有害生物防除組成物を含む植物。
【請求項３７】
請求項１に記載の有害生物防除組成物を含む植物有害生物。
【請求項３８】
有害生物防除組成物を植物に送達する方法であって、前記植物を、請求項１に記載の組成物と接触させるステップを含む方法。
【請求項３９】
植物の適応度を増加させる方法であって、請求項１に記載の組成物を前記植物に送達するステップを含み、非処理植物に対して前記植物の前記適応度を増加させる、方法。
【請求項４０】
前記植物は、植物有害生物による寄生を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記寄生を、非処理植物における前記寄生に対して低減させる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記寄生を、非処理植物における前記寄生に対して実質的に排除する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記植物は、植物有害生物による寄生に対して感受性である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
非処理植物における寄生の可能性に対して前記植物における寄生の可能性を低減させる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記植物有害生物は、細菌又は真菌である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記細菌は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記真菌は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記有害生物は、昆虫、軟体動物又は線虫である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４９】
前記昆虫は、アブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記有害生物防除組成物は、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体として送達される、請求項３８に記載の方法。
【請求項５２】
植物有害生物に有害生物防除組成物を送達する方法であって、前記植物有害生物を、請求項１に記載の組成物と接触させるステップを含む方法。
【請求項５３】
植物有害生物の適応度を低減させる方法であって、請求項１に記載の組成物を前記植物有害生物に送達するステップを含み、非処理植物有害生物に対して前記植物有害生物の前記適応度を低減させる、方法。
【請求項５４】
前記植物有害生物が成長、生息、繁殖、摂食又は寄生する少なくとも１つの生息場所に前記組成物を送達するステップを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記組成物は、前記植物有害生物による摂取のための植物有害生物摂食可能組成物として送達される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記植物有害生物は、細菌又は真菌である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記植物有害生物は、昆虫、軟体動物又は線虫である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
前記昆虫は、アブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記組成物は、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体として送達される、請求項５２に記載の方法。
【請求項６１】
真菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む植物有害生物防除組成物を前記植物に送達するステップを含む方法。
【請求項６２】
真菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む植物有害生物防除組成物を前記植物に送達するステップを含み、前記複数のＰＭＰの各々は、抗真菌剤を含む、方法。
【請求項６３】
前記抗真菌剤は、前記真菌感染を引き起こす真菌の遺伝子の発現を阻害する核酸である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記遺伝子は、ｄｃｌ１及び／又はｄｃｌ２である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記真菌感染は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種に属する真菌によって引き起こされる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種は、スクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）である、請求項６５の方法。
【請求項６７】
前記ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種は、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）である、請求項６５の方法。
【請求項６８】
前記組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）由来のＰＭＰを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
前記真菌感染を低減させるか又は実質的に排除する、請求項６１に記載の方法。
【請求項７０】
細菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記植物に送達するステップを含む方法。
【請求項７１】
細菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記植物に送達するステップを含み、前記複数のＰＭＰの各々は、抗菌剤を含む、方法。
【請求項７２】
前記抗菌剤は、ドキソルビシンである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記細菌感染は、シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）に属する細菌によって引き起こされる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）は、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）由来のＰＭＰを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記細菌感染を低減させるか又は実質的に排除する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７７】
植物有害昆虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記植物有害昆虫に送達するステップを含む方法。
【請求項７８】
植物有害昆虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記植物有害昆虫に送達するステップを含み、前記複数のＰＭＰの各々は、殺虫剤を含む、方法。
【請求項７９】
前記殺虫剤は、ペプチド核酸である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記植物有害昆虫は、アブラムシである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記植物有害昆虫は、鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）は、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
非処理植物有害昆虫に対して前記植物有害昆虫の前記適応度を低減させる、請求項７７に記載の方法。
【請求項８４】
植物有害線虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記植物有害線虫に送達するステップを含む方法。
【請求項８５】
植物有害線虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記植物有害線虫に送達するステップを含み、前記複数のＰＭＰの各々は、殺線虫剤を含む、方法。
【請求項８６】
前記殺線虫剤は、ペプチドである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ペプチドは、Ｍｉ−ＮＬＰ−１５ｂである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記植物有害線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
非処理植物有害線虫に対して前記植物有害線虫の前記適応度を低減させる、請求項８４に記載の方法。
【請求項９０】
雑草の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記雑草に送達するステップを含む方法。
【請求項９１】
雑草の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を前記雑草に送達するステップを含み、前記複数のＰＭＰの各々は、除草剤を含む、方法。
【請求項９２】
非処理雑草に対して前記雑草の前記適応度を低減させる、請求項９０又は９１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
植物病原体（例えば、細菌又は真菌）、無脊椎動物害虫（例えば、昆虫、軟体動物又は線虫）及び雑草を含む植物有害生物は、ヒト環境に蔓延している。これらの有害生物による寄生を防除するために多数の手段が使用されているが、安全且つ効果的な防除戦略に対する需要が高まっている。従って、植物有害生物を防除するための新規の方法及び組成物が当技術分野で求められている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本明細書には、有害生物（例えば、農業有害生物）の適応度を低減させ、且つ／又は植物の適応度を増加させる方法に有用な複数の植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が開示される。
【０００３】
一態様では、本開示は、複数の植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）を含む有害生物防除組成物を特徴とし、ここで、本組成物は、植物への送達のために製剤化され、本組成物は、ｗｔ／ｖｏｌにより測定して少なくとも５％のＰＭＰ、パーセントＰＭＰタンパク質組成物及び／又はパーセント液体組成物（例えば、蛍光標識脂質を測定することによる）を含む。
【０００４】
別の態様では、本開示は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を特徴とし、ここで、本組成物は、植物有害生物への送達のために製剤化され、本組成物は、少なくとも５％のＰＭＰを含む。
【０００５】
有害生物防除組成物の一部の実施形態では、組成物は、室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している。他の実施形態では、組成物は、室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している。一部の実施形態では、組成物は、植物への送達のために製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、植物有害生物への送達のために製剤化される。一部の実施形態では、ＰＭＰは、少なくとも２４時間、４８時間、７日間又は３０日間にわたって安定している。他の実施形態では、ＰＭＰは、少なくとも２４℃、２０℃又は４℃の温度で安定している。さらに別の実施形態では、組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である。
【０００６】
別の態様では、本開示は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を特徴とし、ここで、組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である。
【０００７】
一部の実施形態では、組成物は、植物への送達のために製剤化される。一部の実施形態では、本組成物は、植物有害生物への送達のために製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している。一部の実施形態では、ＰＭＰは、複数のＰＭＰタンパク質を含み、ＰＭＰの濃度は、その中のＰＭＰタンパク質の濃度である。他の実施形態では、組成物中の複数のＰＭＰは、少なくとも０．０１ｎｇ、０．１ｎｇ、１ｎｇ、２ｎｇ、３ｎｇ、４ｎｇ、５ｎｇ、１０ｎｇ、５０ｎｇ、１００ｎｇ、２５０ｎｇ、５００ｎｇ、７５０ｎｇ、１μｇ、１０μｇ、５０μｇ、１００μｇ又は２５０μｇＰＭＰタンパク質／ｍｌの濃度である。また別の実施形態では、組成物は、室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している。
【０００８】
一部の実施形態では、組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である。一部の実施形態では、植物ＥＶは、修飾植物細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の実施形態では、植物ＥＶは、植物エキソソーム又は植物微小小胞体である。一部の実施形態では、複数のＰＭＰは、有害生物忌避剤をさらに含む。
【０００９】
別の態様では、本開示は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を特徴とし、複数のＰＭＰの各々は、異種農薬用薬剤を含み、組成物は、植物又は植物有害生物への送達のために製剤化される。
【００１０】
一部の実施形態では、異種農薬用薬剤は、除草剤、抗菌剤、抗真菌剤、殺虫剤、軟体動物駆除剤又は殺線虫剤である。
【００１１】
一部の実施形態では、除草剤は、ドキソルビシンである。他の実施形態では、除草剤は、グルホシネート、グリホサート、プロパキザホップ、メタミトロン、メタザクロール、ペンジメタリン、フルフェナセト、ジフルフェニカン、クロマゾン、ニコスルフロン、メソトリオン、ピノキサデン、スルコトリオン、プロスルホカルブ、スルフェントラゾドン、ビフェノクス、キンメラック、トリアレート、テルブチラジン、アトラジン、オキシフルオルフェン、ジウロン、トリフルラリン又はクロロトルロンである。
【００１２】
一部の実施形態では、抗菌剤は、ドキソルビシンである。一部の実施形態では、抗菌剤は、抗生物質である。一部の実施形態では、抗生物質は、バンコマイシンである。他の実施形態では、抗生物質は、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、マクロライド、スルホンアミド、バンコマイシン、ポリミキシン、グラミシジン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、スペクチノマイシン、シプロフロキサシン、イソニアジド、リファンピシン、ピラジナミド、エタンブトール、ミアムブトール又はストレプトマイシンである。一部の実施形態では、抗真菌剤は、アゾキシストロビン、マンコゼブ、プロチオコナゾール、フォルペット、テブコナゾール、ジフェノコナゾール、カプタン、ブピリメート又はホセチル−Ａｌである。一部の実施形態では、殺虫剤は、クロロニコチル、ネオニコチノイド、カルバメート、有機リン酸エステル、ピレトロイド、オキサジアジン、スピノシン、シクロジエン、有機塩素、フィプロール、メクチン、ジアシルヒドラジン、ベンゾイル尿素、有機スズ、ピロール、ジニトロテルペノール、ＭＥＴＩ、テトロン酸、テトラミン酸又はフタルアミドである。一部の実施形態では、異種農薬用薬剤は、小分子、核酸又はポリペプチドである。一部の実施形態では、小分子は、抗生物質又は二次代謝物である。一部の実施形態では、核酸は、阻害性ＲＮＡである。一部の実施形態では、異種農薬用薬剤は、複数のＰＭＰの各々によって封入されるか；複数のＰＭＰの各々の表面に埋め込まれるか；又は複数のＰＭＰの各々の表面に共役される。
【００１３】
一部の実施形態では、複数のＰＭＰの各々は、有害生物忌避剤をさらに含む。一部の実施形態では、複数のＰＭＰの各々は、追加的な異種農薬用薬剤をさらに含む。
【００１４】
一部の実施形態では、有害生物は、細菌又は真菌である。一部の実施形態では、細菌は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、例えば緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）又はシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）である。一部の実施形態では、真菌は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種である。他の実施形態では、植物有害生物は、昆虫、例えばアブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）、軟体動物；又は線虫、例えばトウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である。
【００１５】
一部の実施形態では、組成物は、室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している。一部の実施形態では、ＰＭＰは、４℃で少なくとも２４時間、４８時間、７日間又は３０日間にわたって安定している。他の実施形態では、ＰＭＰは、少なくとも２０℃、２４℃又は３７℃の温度で安定している。
【００１６】
一部の実施形態では、組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である。
【００１７】
一部の実施形態では、組成物中の複数のＰＭＰは、少なくとも０．０１ｎｇ、０．１ｎｇ、１ｎｇ、２ｎｇ、３ｎｇ、４ｎｇ、５ｎｇ、１０ｎｇ、５０ｎｇ、１００ｎｇ、２５０ｎｇ、５００ｎｇ、７５０ｎｇ、１μｇ、１０μｇ、５０μｇ、１００μｇ又は２５０μｇＰＭＰタンパク質／ｍＬの濃度である。
【００１８】
一部の実施形態では、組成物は、農業的に許容可能な担体を含み；ＰＭＰを安定化するために製剤化されるか；又は液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル若しくは気体組成物として製剤化される。
【００１９】
一部の実施形態では、組成物は、少なくとも５％のＰＭＰを含む。
【００２０】
別の実施形態では、本開示は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を特徴とし、ここで、ＰＭＰは、（ａ）植物又はその部分から初期サンプルを提供するステップであって、植物又はその部分は、ＥＶを含む、ステップ；（ｂ）初期サンプルから粗ＰＭＰ画分を単離するステップであって、粗ＰＭＰ画分は、初期サンプル中のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップ；（ｃ）粗ＰＭＰを精製し、それにより複数の純粋なＰＭＰを生成するステップであって、複数の純粋なＰＭＰは、粗ＥＶ画分中のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップ；（ｄ）複数の純粋なＰＭＰに有害生物防除薬剤をロードするステップ；及び（ｅ）植物又は植物有害生物への送達のためにステップ（ｄ）のＰＭＰを製剤化するステップを含むプロセスによって植物から単離される。
【００２１】
別の実施形態では、本開示は、本明細書に提供される有害生物防除組成物のいずれか１つを含む植物を特徴とする。
【００２２】
また別の実施形態では、本開示は、本明細書に提供される有害生物防除組成物のいずれか１つを含む植物有害生物を特徴とする。
【００２３】
さらに別の実施形態では、本開示は、有害生物防除組成物を植物に送達する方法であって、植物を、本明細書に記載される組成物のいずれか１つと接触させるステップを含む方法を特徴とする。
【００２４】
さらにまた別の実施形態では、本開示は、植物の適応度を増加させる方法を特徴とし、本方法は、本明細書に記載される組成物のいずれか１つを植物に送達するステップを含み、本方法は、非処理植物に対して植物の適応度を増加させる。
【００２５】
一部の実施形態では、植物は、植物有害生物による寄生を有する。一部の実施形態では、本方法は、寄生を、非処理植物における寄生に対して低減させる。一部の実施形態では、本方法は、寄生を、非処理植物における寄生に対して実質的に排除する。
【００２６】
一部の実施形態では、植物は、植物有害生物による寄生に対して感受性である。一部の実施形態では、本方法は、非処理植物への寄生の可能性に対して植物への寄生の可能性を低減させる。
【００２７】
一部の実施形態では、植物有害生物は、細菌、例えばシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種；又は真菌、例えばスクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種である。
【００２８】
他の実施形態では、植物有害生物は、昆虫、例えばアブラムシ若しくは鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）；軟体動物；又は線虫、例えばトウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である。
【００２９】
一部の実施形態では、有害生物防除組成物は、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体として送達される。
【００３０】
別の態様では、本開示は、有害生物防除組成物を植物有害生物に送達する方法を特徴とし、これは、植物有害生物を、本明細書に記載の組成物のいずれか１つと接触させるステップを含む。
【００３１】
別の態様では、本開示は、植物有害生物の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、本明細書に記載の組成物のいずれか１つを植物有害生物に送達するステップを含み、本方法は、非処理植物有害生物に対して植物有害生物の適応度を低減させる。
【００３２】
一部の実施形態では、本方法は、植物有害生物が成長、生息、繁殖、摂食又は寄生する少なくとも１つの生息場所に組成物を送達するステップを含む。一部の実施形態では、組成物は、植物有害生物による摂取のための植物有害生物摂食可能組成物として送達される。
【００３３】
一部の実施形態では、植物有害生物は、細菌又は真菌である。他の実施形態では、植物有害生物は、昆虫、例えばアブラムシ若しくは鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）；軟体動物；又は線虫、例えばトウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である。一部の実施形態では、組成物は、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体として送達される。
【００３４】
別の態様では、本開示は、真菌感染を有する植物を処理する方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む植物有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含む。
【００３５】
また別の態様では、本開示は、真菌感染を有する植物を処理する方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む植物有害生物防除組成物を送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、抗真菌剤を含む。一部の実施形態では、抗真菌剤は、真菌感染を引き起こす真菌の遺伝子の発現を阻害する核酸である。一部の実施形態では、遺伝子は、ｄｃｌ１及び／又はｄｃｌ２である。一部の実施形態では、真菌感染は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、例えばスクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）；ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、例えばボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）；アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種；フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種；又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種に属する真菌によって引き起こされる。一部の実施形態では、本組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）由来のＰＭＰを含む。一部の実施形態では、本方法は、真菌感染を低減させるか又は実質的に排除する。
【００３６】
別の態様では、本開示は、細菌感染を有する植物を処理する方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含む。
【００３７】
また別の態様では、本開示は、細菌感染を有する植物を処理する方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、抗菌剤を含む。一部の実施形態では、抗菌剤は、ドキソルビシである。一部の実施形態では、細菌感染は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種に属する細菌、例えばシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）によって引き起こされる。一部の実施形態では、組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）由来のＰＭＰを含む。一部の実施形態では、本方法は、細胞感染を低減させるか又は実質的に排除する。
【００３８】
別の態様では、本開示は、植物有害昆虫の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害昆虫に送達するステップを含む。
【００３９】
また別の態様では、本開示は、植物有害昆虫の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害昆虫に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、殺虫剤を含む。一部の実施形態では、殺虫剤は、ペプチド核酸である。
【００４０】
一部の実施形態では、植物有害昆虫は、アブラムシである。一部の実施形態では、植物有害昆虫は、鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）、例えばツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）である。一部の実施形態では、本方法は、非処理植物有害昆虫に対して植物有害昆虫の適応度を低減させる。
【００４１】
別の態様では、本開示は、植物有害線虫の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害線虫に送達するステップを含む。
【００４２】
別の態様では、本開示は、植物有害線虫の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害線虫に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、殺線虫剤を含む。
【００４３】
一部の実施形態では、殺線虫剤は、ペプチド、例えばＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂである。一部の実施形態では、植物有害線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である。一部の実施形態では、本方法は、非処理植物有害線虫に対して植物有害線虫の適応度を低減させる。
【００４４】
別の態様では、本開示は、雑草の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を雑草に送達するステップを含む。
【００４５】
別の態様では、本開示は、雑草の適応度を低減させる方法を特徴とし、本方法は、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を雑草に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、除草剤を含む。一部の実施形態では、本方法は、非処理雑草に対して雑草の適応度を低減させる。本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【００４６】
定義
本明細書で使用されるとき、用語「有害生物防除組成物」は、複数の植物メッセンジャー（ＰＭＰ）パックを含むバイオ農薬又は生物忌避剤組成物を指す。複数のＰＭＰの各々は、農薬用薬剤、例えば異種農薬用薬剤を含み得る。
【００４７】
本明細書で使用されるとき、用語「バイオ農薬組成物」は、複数の植物メッセンジャー（ＰＭＰ）パックを含む農薬組成物を指す。
【００４８】
本明細書で使用されるとき、用語「生物忌避剤組成物」は、複数の植物メッセンジャー（ＰＭＰ）パックを含む有害生物忌避剤組成物を指す。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「送達すること」又は「接触させること」は、植物若しくは植物有害生物に直接適用するか、又は組成物が、植物若しくは植物有害生物の適応度を変化させるのに有効である領域内で植物若しくは植物有害生物と隣接して植物若しくは植物有害生物に適用することのいずれかを指す。組成物を植物と直接接触させる方法では、組成物を植物全体又は植物の一部のみと接触させることができる。
【００５０】
本明細書で使用されるとき、「植物有害生物の適応度を低減させる」は、限定されないが、以下の所望の効果：（１）有害生物の個体群の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％若しくはそれを超える減少；（２）有害生物（例えば、昆虫）の繁殖率の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％若しくはそれを超える減少；（３）有害生物の移動性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％若しくはそれを超える減少；（４）有害生物の体重の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％若しくはそれを超える減少；（５）有害生物の代謝率又は活動の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％若しくはそれを超える減少；又は（６）有害生物による植物寄生の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％若しくはそれを超える減少のいずれか１つ以上を含め、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与がもたらす結果としての有害生物の生理機能の任意の破綻又は前記有害生物により行われるいずれかの活動の任意の破綻を指す。有害生物適応度の低減は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない有害生物に対して決定することができる。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、用語「植物又は植物有害生物への送達のために製剤化される」は、農業的に許容可能な担体を含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を指す。
【００５２】
本明細書で使用されるとき、用語「寄生」は、植物上の不要な有害生物の存在、例えば植物有害生物による植物、その一部又は植物周囲の生息場所のコロニー形成若しくは感染、特に寄生によって植物の適応度が低減する場合を指す。「寄生の減少」又は「寄生の処理」は、非処理の植物に対して、植物上又はその周囲の有害生物の数の（例えば、約１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％の）減少或いは有害生物に直接又は間接的に起因する植物の症状又は兆候の（例えば、約１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％の）減少を指す。寄生又は関連症状は、寄生又は関連症状を見出す任意の手段により見出すことができる。例えば、植物の１つ又は複数の部分における寄生の減少は、「寄生を実質的に排除する」上で十分な量であり得、これは、症状を実質的に解消し、且つ／又は非処理植物に対して植物の適応度を増加させる上で十分な量の寄生の減少を指す。
【００５３】
本明細書で使用されるとき、「植物の適応度を増加させる」は、植物の生産の増加、例えば植物の収量の改善、植物の活力若しくは植物から収穫された産物の品質の向上を指す。植物の収量の改善は、同じ条件下で生産したが、本組成物を適用していない植物の同じ産物の収量に対して又は従来の農薬の適用と比較して、測定可能な量による植物の産物の収量（例えば、植物バイオマス、穀粒、種子若しくは果実収量、タンパク質含量、炭水化物若しくは油含量又は葉面積によって測定される）の増加に関する。例えば、収量は、少なくとも約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％若しくは約１００％超増加し得る。収量は、何らかの基準で植物又は植物の産物の重量若しくは体積当たりの量に関して表すことができる。基準は、時間、栽培面積、生産された植物の重量又は使用した原材料の量に関して表すことができる。植物の適応度の増加は、同じ条件下で生産したが、本組成物を適用していないか、又は従来の農薬を適用して生産された植物の同じ要因と比較して、測定可能な若しくは認識可能な量による、活力評価の増加若しくは改善、作物（単位面積当たりの植物の数）、植物の高さ、茎外周、植物キャノピー、外観（より緑色の葉色など）、根評価、出芽、タンパク質含量、分げつの増加、より大きい葉、より多くの葉、枯れた根出葉の減少、より強い分げつ力、必要な肥料の減少、必要な種子の減少、より高生産性の分げつ、より早期の開花、早期の穀粒若しくは種子成熟、より少ない植物倒伏（ｖｅｒｓｅ）（倒伏）、新芽生育増加、早期の発芽又はこれらの要因の任意の組合せなどの他の手段により測定することもできる。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、置き換え可能であり、長さ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、５００、１０００又はそれを超える核酸）とは関係なく、直鎖状若しくは分岐、一本鎖若しくは二本鎖のＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はそれらのハイブリッドを指す。この用語は、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドも包含する。ヌクレオチドは、典型的に、リン酸ジエステル結合により核酸中で連結されるが、用語「核酸」は、他のタイプの結合又は骨格（例えば、中でも、ホスホロアミド、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、Ｏ−メチルホスホロアミダート、モルホリノ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、グリセロール核酸（ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）及びペプチド核酸（ＰＮＡ）結合又は骨格）を有する核酸類似体も包含する。核酸は、一本鎖、二本鎖であり得るか、又は一本鎖及び二本鎖配列の両方の部分を含有し得る。核酸は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの任意の組合せ並びに例えばアデニン、チミン、シトシン、グアニン、ウラシル及び修飾若しくは非標準塩基（例えば、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、５，６−ジヒドロウラシル、５−メチルシトシン及び５ヒドロキシメチルシトシンシトシンを含む）をはじめとする塩基の任意の組合せを含み得る。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、用語「有害生物」は、植物若しくは他の生物に対して被害をもたらし、不要な場所に存在するか、又はそうでなければ例えばヒトの農業方法若しくは農産物に影響を及ぼすことにより、ヒトに対して有害である生物を指す。有害生物として、例えば無脊椎動物（例えば、昆虫、線虫若しくは軟体動物）、細菌、真菌若しくはウイルスなどの微生物（例えば、植物病原体、内生植物、偏性寄生生物、条件的寄生生物若しくは条件的腐生菌）；又は雑草が挙げられる。
【００５６】
本明細書で使用されるとき、用語「農薬用薬剤」又は「農薬」は、農業、環境又は家庭／住居の有害生物、例えば昆虫、軟体動物、線虫、真菌、細菌若しくはウイルスを防除するか、又はその適応度を低減させる（例えば、殺傷するか、又は成長、繁殖、分裂、生殖若しくは拡大を阻害する）薬剤、組成物、又はそれらに含まれる物質を指す。農薬は、天然に存在する又は合成の殺虫剤（幼虫駆除剤又は成虫駆除剤）、昆虫成長調節物質、殺ダニ剤（ダニ駆除剤）、軟体動物駆除剤、殺線虫剤、外部寄生生物撲滅薬、殺菌剤、殺真菌剤又は除草剤を包含するものと理解される。用語「農薬用薬剤」は、さらに、抗生物質、抗ウイルス薬、農薬、抗真菌剤、駆虫剤、栄養素及び／又は昆虫の運動を停止若しくは緩徐にする薬剤などの他の生物活性分子を含み得る。一部の例では、農薬は、アレロケミカルである。本明細書で使用されるとき、「アレロケミカル」又は「アレロケミカル薬剤」は、別の生物（例えば、有害生物）の生理学的機能（例えば、発芽、成長、生存又は繁殖）に影響を及ぼすことができる生物（例えば、植物）によって産生される物質である。
【００５７】
農業用薬剤は、異種であり得る。本明細書で使用されるとき、用語「異種」は、（１）植物に対して外来性である（例えば、ＰＭＰが産生される植物若しくは植物部分ではない起源に由来する）（例えば、本明細書に記載のロード手法を用いてＰＭＰに添加される）か、又は（２）ＰＭＰが産生される植物細胞若しくは組織に対して外来性であるが、天然に存在するより高い（例えば、天然に存在する植物細胞外小胞中に存在する濃度より高い）濃度でＰＭＰ中に存在する（例えば、本明細書に記載のロード手法、遺伝子操作、インビトロ若しくはインビボ手法を用いてＰＭＰに添加される）かのいずれかである薬剤（例えば、農業用薬剤）を指す。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、用語「忌避剤」は、有害生物が植物に接近又はそこに残留することを防ぐ薬剤、組成物又はそれらに含まれる物質を指す。忌避剤は、例えば、植物上又はその近傍の有害生物の数を減少させ得るが、必ずしも有害生物を殺傷又はその適応度を低減させるわけではない。
【００５９】
本明細書で使用されるとき、用語「ペプチド」、「タンパク質」又は「ポリペプチド」は、長さ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、４０、５０、１００アミノ酸又はそれを超える）、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化又はリン酸化）の有無又は例えばペプチドに共有結合的に連結した１つ以上の非アミノアシル基（例えば、糖、脂質等）の存在に関わらず、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸鎖（Ｄ−アミノ酸又はＬ−アミノ酸のいずれも）を包含し、例えば天然タンパク質、合成若しくは組換えのポリペプチド及びペプチド、ハイブリッド分子、ペプトイド又はペプチドミメティクスが含まれる。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、２つの配列間の「パーセント同一性」は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されるＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムによって決定される。ＢＬＡＳＴ解析の実行用ソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を通じて公的に利用可能である。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、用語「植物」は、全植物、植物器官、植物組織、種子、植物細胞、種子及びその子孫を指す。植物細胞には、限定なしに、種子、浮遊培養物、胚、分裂組織領域、カルス組織、葉、根、シュート、配偶体、胞子体、花粉又は小胞子の細胞が含まれる。植物部位には、限定はされないが、根、茎、シュート、葉、花粉、種子、果実、収穫物、腫瘍組織、樹液（例えば、木部汁液及び師管液）及び様々な形態の細胞及び培養物（例えば、単一細胞、プロトプラスト、胚及びカルス組織）を含めた、分化した及び未分化の組織が含まれる。植物組織は、植物のものであるか、又は植物器官、組織若しくは細胞培養物のものであり得る。加えて、植物は、例えば、本明細書に記載の方法又は組成物におけるいずれかの有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の異種タンパク質若しくはＲＮＡを生産するように遺伝子操作され得る。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、用語「植物細胞外小胞」、「植物ＥＶ」又は「ＥＶ」は、植物中に天然に存在する内包脂質二重層構造を指す。任意選択で、植物ＥＶは、１つ又は複数の植物ＥＶマーカを含む。本明細書で使用されるとき、用語「植物ＥＶマーカ」は、植物タンパク質、タンパク質核酸、植物小分子、植物脂質又はそれらの組合せなどの天然に植物に付随する成分を指し、限定されないが、付録に列挙する植物ＥＶマーカのいずれかを含む。一部の例では、植物ＥＶマーカは、植物ＥＶマーカの識別マーカであるが、農業用薬剤ではない。一部の例では、植物ＥＶマーカは、植物ＥＶマーカの識別マーカであり、且つ農業用薬剤でもある（例えば、複数のＰＭＰと結合しているか若しくはそれらに封入されているか、又は複数のＰＭＰと直接結合していないか若しくはそれらに封入されていない）。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、用語「植物メッセンジャーパック」又は「ＰＭＰ」は、直径が約５〜２０００ｎｍ（例えば、少なくとも５〜１０００ｎｍ、少なくとも５〜５００ｎｍ、少なくとも４００〜５００ｎｍ、少なくとも２５〜２５０ｎｍ、少なくとも５０〜１５０ｎｍ又は少なくとも７０〜１２０ｎｍ）の脂質構造（例えば、脂質二重層、単層、多層構造；例えば、小胞脂質構造）を指し、これは、それらに結合した脂質若しくは非脂質成分（例えば、ペプチド、核酸若しくは小分子）を含め、植物起源又はその断片、部分若しくは抽出物から得られ（例えば、濃縮、単離若しくは精製され）、植物、植物部分又は植物細胞から濃縮、単離若しくは精製されており、この場合、濃縮又は単離は、起源植物から１つ若しくは複数の混入物又は不要な要素を除去することである。ＰＭＰは、天然に存在するＥＶの高度に精製された調製物であり得る。好ましくは、起源植物からの混入物又は不要な要素、起源植物からの１つ若しくは複数の混入物又は不要な要素、例えば植物細胞壁要素；ペクチン；植物オルガネラ（例えば、ミトコンドリア；葉緑体、白色体若しくはアミロプラストなどの色素体；及び核）；植物クロマチン（例えば、植物染色体）；又は植物分子凝集体（例えば、タンパク質凝集体、タンパク質−核酸凝集体、リポタンパク質凝集体若しくは脂質−タンパク質構造）の少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９８％、９９％若しくは１００％）が除去される。好ましくは、ＰＭＰは、重量（ｗ／ｗ）、スペクトルイメージング（％透過率）又は伝導率（Ｓ／ｍ）により測定した場合、起源植物からの１つ若しくは複数の混入物又は不要な要素に対して、少なくとも３０％純粋（例えば、少なくとも４０％純粋、少なくとも５０％純粋、少なくとも６０％純粋、少なくとも７０％純粋、少なくとも８０％純粋、少なくとも９０％純粋、少なくとも９９％純粋若しくは少なくとも１００％純粋）である。
【００６４】
ＰＭＰは、任意選択で、異種機能性薬剤、例えば農業用薬剤、肥料、植物調節剤、治療薬、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又は小分子などの追加薬剤を含み得る。ＰＭＰは、薬剤を標的植物に送達することを可能にする様々な方法において、例えば薬剤の封入、脂質二重層構造内への薬剤の組込み又は脂質二重層構造の表面と薬剤の結合（例えば、共役）により、追加薬剤（例えば異種機能性薬剤）を担持させるか又はそれらと結合させることができる。異種機能性薬剤は、インビボ（例えば、植物中に）又はインビトロ（例えば、組織細胞中、細胞培養物中に若しくは合成により組み込んで）のいずれかでＰＭＰに組み込むことができる。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、用語「安定したＰＭＰ組成物」（例えば、ロード又は非ロードＰＭＰを含む組成物）は、一定の期間（例えば、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも３０日、少なくとも６０日又は少なくとも９０日）にわたり、任意選択で規定の温度範囲（例えば、少なくとも２４℃（例えば、少なくとも２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃若しくは３０℃）、少なくとも２０℃（例えば、少なくとも２０℃、２１℃、２２℃若しくは２３℃）、少なくとも４℃（例えば、少なくとも５℃、１０℃若しくは１５℃）、少なくとも−２０℃（例えば、少なくとも−２０℃、−１５℃、−１０℃若しくは０℃）又は少なくとも−８０℃（例えば、少なくとも−８０℃、−７０℃、−６０℃、−５０℃、−４０℃若しくは−３０℃）の温度）において、（例えば、生成若しくは製剤化時点の）ＰＭＰ組成物中のＰＭＰの数と比較して、ＰＭＰの初期数（例えば、溶液１ｍＬ当たりのＰＭＰ）の少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは１００％）を保持するか；又は任意選択で規定の温度範囲（例えば、少なくとも２４℃（例えば、少なくとも２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃若しくは３０℃）、少なくとも２０℃（例えば、少なくとも２０℃、２１℃、２２℃若しくは２３℃）、少なくとも４℃（例えば、少なくとも５℃、１０℃若しくは１５℃）、少なくとも−２０℃（例えば、少なくとも−２０℃、−１５℃、−１０℃若しくは０℃）又は少なくとも−８０℃（例えば、少なくとも−８０℃、−７０℃、−６０℃、−５０℃、−４０℃若しくは−３０℃）の温度）において、（例えば、生成若しくは製剤化時点の）ＰＭＰの初期活性と比較して、その活性（例えば、農薬及び／又は忌避剤活性）の少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは１００％）を保持する、ＰＭＰ組成物を指す。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、用語「非処理」は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達されていない個別の植物を含め、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物と接触させていないか、又はそれを送達されていない植物又は植物有害生物を指し、処置を受けた同じ植物を、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の送達前の時点で評価するか、又は処置を受けた同じ植物をその植物の非処理部分で評価する。
【００６７】
本明細書で使用されるとき、用語「砂じょう（ｊｕｉｃｅ  ｓａｃ）」又は「砂じょう（ｊｕｉｃｅ  ｖｅｓｉｃｌｅ）」は、ミカン状果、例えば柑橘類の内果皮（心皮）の果汁含有膜結合要素を指す。一部の態様では、砂じょうは、果実の他の部分、例えば皮（外皮若しくはフラベド）、内皮（中果皮、アルベド若しくは髄）、中心柱（プラセンタ）、分割壁又は種子から分離される。一部の態様では、砂じょうは、グレープフルーツ、レモン、ライム又はオレンジの砂じょうである。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１Ａ】ブレンダの使用を含む破壊的搾汁ステップ、続いて超遠心分離及びショ糖勾配精製を用いるグレープフルーツＰＭＰ生成のプロトコルを示す概略図である。１０００×ｇで１０分間の遠心分離後のグレープフルーツ果汁及び１５０，０００×ｇで２時間の超遠心分離後のショ糖勾配バンドパターンの画像が含まれる。
【図１Ｂ】Ｓｐｅｃｔｒａｄｙｎｅ  ＮＣＳ１により測定されるＰＭＰ粒度分布のプロットである。
【図２】メッシュフィルタの使用を含む穏やかな搾汁ステップ、続いて遠心分離及びショ糖勾配精製を用いるグレープフルーツＰＭＰ生成のプロトコルを示す概略図である。１０００×ｇで１０分間の遠心分離後のグレープフルーツ果汁及び１５０，０００×ｇで２時間の超遠心分離後のショ糖勾配バンドパターンの画像が含まれる。
【図３Ａ】超遠心分離、続いてＰＭＰ含有画分を単離するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用するグレープフルーツＰＭＰ生成のプロトコルを示す概略図である。溶出したＳＥＣ画分は、粒子濃度（ＮａｎｏＦＣＭ）、メジアン粒径（ＮａｎｏＦＣＭ）及びタンパク質濃度（ＢＣＡ）について分析される。
【図３Ｂ】溶出されたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）画分中の１ｍＬ当たりの粒子濃度を示すグラフである（ＮａｎｏＦＣＭ）。大部分のＰＭＰを含有する画分（「ＰＭＰ画分」）を矢印で示す。ＰＭＰは、画分２〜４に溶出されている。
【図３Ｃ】ＮａｎｏＦＣＭを用いて測定される通り、選択したＳＥＣ画分についての粒径（ｎｍ）を示す一連のグラフ及び表である。グラフは、画分１、３、５及び８のＰＭＰ粒度分布を示す。
【図３Ｄ】ＢＣＡアッセイを用いて測定される、ＳＥＣ画分中のタンパク質濃度（μｇ／ｍＬ）を示すグラフである。大部分のＰＭＰを含有する画分（「ＰＭＰ画分」）を標識し、矢印は、混入物を含む画分を示す。
【図４Ａ】果汁絞り機、続いて大きい残屑を除去するための分画遠心分離、ＴＦＦを用いる果汁の１００×濃縮及びＰＭＰ含有画分を単離するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用する、１リットルのグレープフルーツ果汁（約７個のグレープフルーツ）からのスケール化ＰＭＰ生成のプロトコルを示す概略図である。ＳＥＣ溶出画分は、粒子濃度（ＮａｎｏＦＣＭ）、メジアン粒径（ＮａｎｏＦＣＭ）及びタンパク質濃度（ＢＣＡ）について分析される。
【図４Ｂ】１０００ｍｌのグレープフルーツ果汁のスケール化出発材料からのＳＥＣ溶出液体積（ｍｌ）のタンパク質濃度（ＢＣＡアッセイ、上のパネル）及び粒子濃度（ＮａｎｏＦＣＭ、下のパネル）を示すグラフの対であり、後期ＳＥＣ溶出体積中の多量の混入物を示している。
【図４Ｃ】最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．１５を有する粗グレープフルーツＰＭＰ画分のインキュベーション、続いて３００ｋＤａ膜を用いる一晩の透析により、２８０ｎｍでの吸光度により示されるように、後期ＳＥＣ溶出画分中に存在する混入物の除去に成功したこと示すグラフである。使用した透析バッファー（カルシウム／マグネシウムを含まないＰＢＳ、ｐＨ７．４、ＭＥＳｐＨ６、トリスｐＨ８．６）に差はなかった。
【図４Ｄ】終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．１５を有する粗グレープフルーツＰＭＰ画分のインキュベーション、続いて３００ｋＤａ膜を用いる一晩の透析により、ＢＣＡタンパク質分析（タンパク質の検出以外に、糖及びペクチンの存在を感知できる）により示されるように、ＳＥＣ後の後期溶出画分中に存在する混入物の除去に成功したこと示すグラフである。使用した透析バッファー（カルシウム／マグネシウムを含まないＰＢＳ、ｐＨ７．４、ＭＥＳｐＨ６、トリスｐＨ８．６）に差はなかった。
【図５Ａ】果汁絞り機、続いて大きい残屑を除去するための分画遠心分離、ペクチン高分子の形成を抑制するためのＥＤＴＡとのインキュベーション、大きい粒子を除去するための連続濾過、ＴＦＦによる５×濃縮／洗浄、混入物除去のための一晩の透析、ＴＦＦによるさらなる濃縮（２０×最終）及びＰＭＰ含有画分を単離するためのＳＥＣを使用する、グレープフルーツ果汁からのＰＭＰ生成のプロトコルを示す概略図である。
【図５Ｂ】複数のＳＥＣカラムを用いる溶出グレープフルーツＳＥＣ画分の２８０ｎｍでの吸光度（Ａ．Ｕ．）を示すグラフである。ＰＭＰは、早期画分４〜６に溶出され、混入物は、後期画分に溶出される。
【図５Ｃ】複数のＳＥＣカラムを用いる溶出グレープフルーツＳＥＣ画分のタンパク質濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。ＰＭＰは、早期画分４〜６に溶出され、混入物は、後期画分に溶出される。
【図５Ｄ】複数のＳＥＣカラムを用いる溶出レモンＳＥＣ画分の２８０ｎｍでの吸光度（Ａ．Ｕ．）を示すグラフである。ＰＭＰは、早期画分４〜６に溶出され、混入物は、後期画分に溶出される。
【図５Ｅ】複数のＳＥＣカラムを用いる溶出レモンＳＥＣ画分のタンパク質濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。ＰＭＰは、早期画分４〜６に溶出され、混入物は、後期画分に溶出される。
【図５Ｆ】０．２２ｕｍ濾過滅菌後のグレープフルーツＰＭＰ含有ＳＥＣ画分中の粒径を示す散布図及びグラフである。上のパネルは、ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、合わせたＳＥＣ画分中の粒子の散布図である。下のパネルは、ゲート化粒子（バックグラウンド除去）の粒度（ｎｍ）分布グラフである。ＰＭＰ濃度（粒子／ｍｌ）及びメジアン粒径（ｎｍ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従い、ビーズ標準を用いて決定した。
【図５Ｇ】０．２２ｕｍ濾過滅菌後のレモンＰＭＰ含有ＳＥＣ画分中の粒径を示す散布図及びグラフである。上のパネルは、ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、合わせたＳＥＣ画分中の粒子の散布図である。下のパネルは、ゲート化粒子（バックグラウンド除去）の粒度（ｎｍ）分布グラフである。ＰＭＰ濃度（粒子／ｍｌ）及びメジアン粒径（ｎｍ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて決定した。
【図５Ｈ】ＮａｎｏＦＣＭにより測定される通り、様々な時点（生成からの日数）でのＰＭＰ濃度（ＰＭＰ粒子／ｍｌ）により決定した、４℃でのグレープフルーツ及びレモンＰＭＰ安定性を示すグラフである。
【図５Ｉ】ＮａｎｏＦＣＭにより測定される通り、表示温度で１週間の保存後のＰＭＰ濃度（ＰＭＰ粒子／ｍｌ）により決定した、４℃で保存したレモンＰＭＰと比較して、−２０℃及び−２０℃で凍結融解サイクル後のレモン（ＬＭ）ＰＭＰの安定性を示す棒グラフである。
【図６Ａ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、溶出ＢＭＳ植物細胞培養物ＳＥＣ画分中の粒子濃度（粒子／ｍｌ）を示すグラフである。ＰＭＰは、ＳＥＣ画分４〜６に溶出された。
【図６Ｂ】ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計で測定される、溶出ＢＭＳ  ＳＥＣ画分中の２８０ｎｍでの吸光度（Ａ．Ｕ．）を示すグラフである。ＰＭＰは、画分４〜６に溶出され；画分９〜１３は、混入物を含有した。
【図６Ｃ】ＢＣＡ分析により決定される通り、溶出ＢＭＳ  ＳＥＣ画分中のタンパク質濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。ＰＭＰは、画分４〜６に溶出され；画分９〜１３は、混入物を含有した。
【図６Ｄ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、合わせたＢＭＳ  ＰＭＰ含有ＳＥＣ画分中の粒子を示す散布図である。ＰＭＰ濃度（粒子／ｍｌ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて決定した。
【図６Ｅ】図６Ｄのゲート化粒子（バックグラウンド除去）のＢＭＳ  ＰＭＰの粒度分布（ｎｍ）を示すグラフである。メジアンＰＭＰ粒径（ｎｍ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。
【図７Ａ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、ＤｙＬｉｇｈｔ８００ｎｍ標識グレープフルーツＰＭＰを示す散布図及びグラフである。上のパネルは、合わせたＳＥＣ画分中の粒子の散布図である。ＰＭＰ濃度（４．４４×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて決定した。下のパネルは、グレープフルーツＤｙＬｉｇｈｔ８００−ＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布グラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアングレープフルーツＤｙＬｉｇｈｔ８００−ＰＭＰ粒径は、７２．６ｎｍ＋／−１４．６ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図７Ｂ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、ＤｙＬｉｇｈｔ８００ｎｍ標識レモンＰＭＰを示す散布図及びグラフである。メジアンＰＭＰ濃度（５．１８×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて決定した。下のパネルは、グレープフルーツＤｙＬｉｇｈｔ８００−ＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布グラフである。ＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアンレモンＤｙＬｉｇｈｔ８００−ＰＭＰ粒径は、６８．５ｎｍ＋／−１４ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図７Ｃ】処理から２時間後の細菌（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びＰ．シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ））並びに酵母（Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））によるグレープフルーツ及びレモン由来ＤｙＬ８００標識ＰＭＰの取込みを示す棒グラフである。取込みは、相対蛍光強度（Ａ．Ｕ．）で決定され、これは、色素単独処理微生物対照の相対蛍光強度に対して正規化した。
【図８Ａ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、精製レモンＰＭＰ（合わせて、ペレット化したＰＭＰ  ＳＥＣ画分）を示す散布図及びグラフである。上のパネルは、合わせたＳＥＣ画分中の粒子の散布図である。最終レモンＰＭＰ濃度（１．５３×１０１３ＰＭＰ／ｍｌ）は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて決定した。下のパネルは、精製レモンＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布グラフである。下のパネルは、ゲート化粒子の粒度（ｎｍ）分布グラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアンレモンＰＭＰ粒径は、７２．４ｎｍ＋／−１９．８ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図８Ｂ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８（ＡＦ４８８）標識レモンＰＭＰを示す散布図及びグラフである。上のパネルは、散布図である。粒子は、非標識粒子及びバックグラウンドシグナルに対し、ＦＩＴＣ蛍光シグナルについてゲート化した。検出された粒子の総数に対して蛍光粒子の数により決定される通り、標識効率は、９９％であった。蛍光粒子の数から、またＮａｎｏＦＣＭの指示に従う既知濃度のビーズ標準を用いて、最終ＡＦ４８８−ＰＭＰ濃度（１．３４×１０１３ＰＭＰ／ｍｌ）を決定した。下のパネルは、ＡＦ４８８標識レモンＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布グラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアンレモンＰＭＰ粒径は、７２．１ｎｍ＋／−１５．９ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図９Ａ】ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計で測定される、様々なＳＥＣカラム（カラムＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）から生成される溶出グレープフルーツＳＥＣ画分の２８０ｎｍでの吸光度（Ａ．Ｕ．）を示すグラフである。ＰＭＰは、画分４〜６に溶出された。
【図９Ｂ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、精製グレープフルーツＰＭＰ（合わせて、ペレット化したＰＭＰ  ＳＥＣ画分）を示す散布図である。ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて、最終グレープフルーツＰＭＰ濃度（６．３４×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）を決定した。
【図９Ｃ】精製グレープフルーツＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布を示すグラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアングレープフルーツＰＭＰ粒径は、６３．７ｎｍ＋／−１１．５ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図９Ｄ】ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計で測定される、使用した様々なＳＥＣカラムの溶出レモンＳＥＣ画分の２８０ｎｍでの吸光度（Ａ．Ｕ．）を示すグラフである。ＰＭＰは、画分４〜６に溶出された。
【図９Ｅ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、精製レモンＰＭＰ（合わせて、ペレット化したＰＭＰ  ＳＥＣ画分）を示す散布図である。ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて、最終レモンＰＭＰ濃度（７．４２×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）を決定した。
【図９Ｆ】精製レモンＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布を示すグラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアンレモンＰＭＰ粒径は、６８ｎｍ＋／−１７．５ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図９Ｇ】ドキソルビシンをアクティブ（超音波／押出し）又はパッシブ（インキュベーション）ロードした、レモン（ＬＭ）及びグレープフルーツ（ＧＦ）ＰＭＰのＤＯＸロード能力（１０００ＰＭＰ当たりのｐｇ  ＤＯＸ）を示す棒グラフである。ロード能力は、ＰＭＰ−ＤＯＸサンプル中のＤＯＸの総濃度（ｐｇ／ｍＬ）（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計を用いる蛍光強度測定（Ｅｘ／Ｅｍ＝４８５／５５０ｎｍ）により評価される）をサンプルの総ＰＭＰ濃度（ＰＭＰ／ｍＬ）で割った商として計算した。
【図９Ｈ】ＮａｎｏＦＣＭにより測定される通り、様々な時点（ローディングからの日数）でのＰＭＰ濃度（ＰＭＰ粒子／ｍｌ）により決定した、４℃でのグレープフルーツ及びレモンＤＯＸロードＰＭＰの安定性を示すグラフである。
【図１０Ａ】ペクチナーゼ及びＥＤＴＡで処理し、３００ｋＤａ  ＴＦＦを用いて５×濃縮し、ＰＢＳの６容量交換により洗浄した後、最終濃度２０×まで濃縮した４リットルのグレープフルーツ果汁からのＰＭＰプロトコル生成を示す概略図である。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、ＰＭＰ含有画分を溶出した。
【図１０Ｂ】使用した９つの異なるＳＥＣカラム（ＳＥＣカラムＡ〜Ｊ）を介して溶出されたＳＥＣ画分の２８０ｎｍでの吸光度（Ａ．Ｕ．）を示すグラフである。ＰＭＰは、画分３〜７に溶出された。
【図１０Ｃ】使用した９つの異なるＳＥＣカラム（ＳＥＣカラムＡ〜Ｊ）を介して溶出されたＳＥＣ画分のタンパク質濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。ＰＭＰは、画分３〜７に溶出された。矢印は、混入物を含有する画分を示す。
【図１０Ｄ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、精製グレープフルーツＰＭＰ（合わせて、ペレット化したＰＭＰ  ＳＥＣ画分）を示す散布図である。ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うビーズ標準を用いて、最終グレープフルーツＰＭＰ濃度（７．５６×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）を決定した。
【図１０Ｅ】精製グレープフルーツＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布を示すグラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアングレープフルーツＰＭＰ粒径は、７０．３ｎｍ＋／−１２．４ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図１０Ｆ】緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のドキソルビシン（ＤＯＸ）ロードグレープフルーツＰＭＰの細胞傷害性作用を示すグラフである。細菌をＰＭＰ−ＤＯＸで０（陰性対照）、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ及び１００μＭの有効ＤＯＸ濃度まで２回反復して処理した。６００ｎｍでのカイネティック吸光度測定（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計）を実施して、表示した時点での培養物のＯＤをモニターした。高濃度の６００ｎｍでのＤＯＸ蛍光漏れ込み（ｂｌｅｅｄ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を正規化するために、まず処理用量当たりの全てのＯＤ値をその用量の最初の時点のＯＤに対して正規化した。細菌に対するＰＭＰ−ＤＯＸの細胞傷害性作用を決定するために、非処理対照（１００％に設定）と比較して、各処理群内で相対ＯＤを決定した。
【図１０Ｇ】大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のドキソルビシン（ＤＯＸ）ロードグレープフルーツＰＭＰの細胞傷害性作用を示すグラフである。細菌をＰＭＰ−ＤＯＸで０（陰性対照）、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ及び１００μＭの有効ＤＯＸ濃度まで２回反復して処理した。６００ｎｍでのカイネティック吸光度測定（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計）を実施して、表示した時点での培養物のＯＤをモニターした。高濃度の６００ｎｍでのＤＯＸ蛍光漏れ込み（ｂｌｅｅｄ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を正規化するために、まず処理用量当たりの全てのＯＤ値をその用量の最初の時点のＯＤに対して正規化した。細菌に対するＰＭＰ−ＤＯＸの細胞傷害性作用を決定するために、非処理対照（１００％に設定）と比較して、各処理群内で相対ＯＤを決定した。
【図１０Ｈ】Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｂｉｓｉａｅ）のドキソルビシン（ＤＯＸ）ロードグレープフルーツＰＭＰの細胞傷害性作用を示すグラフである。酵母細胞をＰＭＰ−ＤＯＸで０（陰性対照）、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ及び１００μＭの有効ＤＯＸ濃度まで２回反復して処理した。６００ｎｍでのカイネティック吸光度測定（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計）を実施して、表示した時点での培養物のＯＤをモニターした。高濃度の６００ｎｍでのＤＯＸ蛍光漏れ込み（ｂｌｅｅｄ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を正規化するために、まず処理用量当たりの全てのＯＤ値をその用量の最初の時点のＯＤに対して正規化した。酵母に対するＰＭＰ−ＤＯＸの細胞傷害性作用を決定するために、非処理対照（１００％に設定）と比較して、各処理群内で相対ＯＤを決定した。
【図１０Ｉ】Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）のドキソルビシン（ＤＯＸ）ロードグレープフルーツＰＭＰの細胞傷害性作用を示すグラフである。細菌をＰＭＰ−ＤＯＸで０（陰性対照）、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ及び１００μＭの有効ＤＯＸ濃度まで２回反復して処理した。６００ｎｍでのカイネティック吸光度測定（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計）を実施して、表示した時点での培養物のＯＤをモニターした。高濃度の６００ｎｍでのＤＯＸ蛍光漏れ込み（ｂｌｅｅｄ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を正規化するために、まず処理用量当たりの全てのＯＤ値をその用量の最初の時点のＯＤに対して正規化した。細菌に対するＰＭＰ−ＤＯＸの細胞傷害性作用を決定するために、非処理対照（１００％に設定）と比較して、各処理群内で相対ＯＤを決定した。
【図１１】Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水（陰性対照）、３ｎｇの遊離ルシフェラーゼタンパク質（タンパク質単独対照）又はルシフェラーゼタンパク質ロードＰＭＰ（ＰＭＰ−Ｌｕｃ）による３ｎｇの有効ルシフェラーゼタンパク質用量でＲＴにおいて２ｈｒ、サンプルを２回反復して処理した緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）細菌の発光（Ｒ．Ｌ．Ｕ．相対発光単位）を示すグラフである。上清及びペレット化した細菌中のルシフェラーゼタンパク質を、ＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた発光により測定し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計で測定した。
【図１２Ａ】ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により測定される通り、ＡＦ４８８標識レモンＰＭＰの粒径を示す散布図及びグラフである。上のパネルは、ＡＦ４８８標識レモンＰＭＰを示す散布図である。粒子は、非標識粒子及びバックグラウンドシグナルに対し、ＦＩＴＣ蛍光シグナルについてゲート化した。検出された粒子の総数に対する蛍光粒子の数により決定される通り、標識効率は、８９．４％であった。蛍光粒子の数から、またＮａｎｏＦＣＭの指示に従う既知濃度のビーズ標準を用いて、最終ＡＦ４８８−ＰＭＰ濃度（２．９１×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）を決定した。下のパネルは、ＡＦ４８８標識レモンＰＭＰの粒度（ｎｍ）分布グラフである。メジアンＰＭＰ粒径は、ＮａｎｏＦＣＭの指示に従うＥｘｏビーズ標準を用いて決定した。メジアンレモンＰＭＰ粒径は、７９．４ｎｍ＋／−１４．７ｎｍ（ＳＤ）であった。
【図１２Ｂ】植物細胞株：グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）（ダイズ）、トリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）（コムギ）及びトウモロコシＢＭＢ細胞培養物による、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８（ＡＦ４８８）で標識したレモン（ＬＭ）ＰＭＰの取込みを示す一連の顕微鏡写真である。明視野パネルは、細胞の位置を示し；「ＧＦＰ」で標識したパネルは、ＡＦ４８８の蛍光を示す。細胞によるＰＭＰの取込みは、細胞中のＡＦ４８８の存在によって示される。遊離ＡＦ４８８（「遊離色素」）を対照として示す。
【図１３】シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗及びアルファルファスプラウトによる、ＤＬ８００標識レモン（ＬＭ）及びグレープフルーツ（ＧＦ）ＰＭＰの取込みを示す概略図の対及び一連の顕微鏡写真である。ＤＬ８００色素の蛍光強度が表示される。シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗について２２ｈｐｔ（処理後の時点）、アルファルファスプラウトについて２４ｈｐｔで蛍光強度を測定した。色素なし（「陰性対照」）及び遊離ＤＬ８００色素（「ＤＬ８００単独対照」）ありでインキュベートした苗を対照として示す。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
本明細書には、植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）、即ち全体又は一部が植物細胞外小胞（ＥＶ）又はその断片、部分若しくは抽出物から産生される脂質集合体を含む有害生物防除、例えば生物忌避剤若しくはバイオ農薬組成物によって植物有害生物を防除するための組成物及び関連方法が記載される。ＰＭＰは、追加薬剤（例えば異種機能性薬剤、例えば農薬用薬剤若しくは忌避剤）を含有せずに農薬用薬剤若しくは昆虫忌避作用を有し得るが、任意選択で、追加の農薬用薬剤若しくは昆虫忌避剤を含有するように修飾され得る。また、ＰＭＰが実質的に純粋な形態又は濃縮された形態でもたらされる製剤も含まれる。本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び製剤は、有害生物寄生を処置又は予防するために直接植物に送達し、これにより農作物などの植物の適応度を増加させることができる。加えて又は代わりに、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、農業又は商業にとって重要な植物に対して有害なものなど、種々の植物有害生物に送達することにより、植物有害生物の適応度を低減させることもできる。
【００７０】
Ｉ．有害生物防除組成物
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、複数の植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）を含む。ＰＭＰは、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物（例えば、脂質抽出物）を含む脂質（例えば、脂質二重層、単層若しくは多層構造）構造である。植物ＥＶとは、植物中に天然に存在する内包脂質二重層構造を指す。植物ＥＶは、直径が約５〜２０００ｎｍであり得る。植物ＥＶは、多様な植物生合成経路を起源とし得る。天然では、植物ＥＶは、植物アポプラストなどの植物の細胞内及び細胞外コンパートメント、原形質膜の外側に位置して、一連の細胞壁と細胞外空間により形成されるコンパートメント内に見られ得る。代わりに、ＰＭＰは、植物細胞からの分泌時に細胞培地中見られる濃縮された植物ＥＶであり得る。植物ＥＶは、本明細書により詳細に記載される様々な方法により、植物から（例えば、アポプラスト液から）分離し、これによりＰＭＰをもたらすことができる。
【００７１】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、追加の農薬用薬剤又は忌避剤をさらに含有することなく、植物有害生物に対する農薬作用又は忌避剤作用を有するＰＭＰを含有することができる。しかし、ＰＭＰは、異種有害生物防除剤、例えば農薬用薬剤又は忌避剤をさらに含有し得、これらは、インビボ若しくはインビトロで導入することができる。このように、ＰＭＰは、農薬作用又は忌避剤作用を有する物質を含み得、これらは、ＰＭＰが産生される植物によってＰＭＰ中若しくは上にロードされる。例えば、インビボでＰＭＰにロードされる農薬用薬剤は、植物に対して内因性の因子又は植物に対して外因性の因子（例えば、遺伝子操作された植物内で異種遺伝子構築物により発現されるような）のいずれでもあり得る。代わりに、ＰＭＰに異種機能性薬剤をインビトロでロードし得る（例えば、本明細書により詳細に記載される様々な方法による生成後）。
【００７２】
ＰＭＰは、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含み得、その場合、植物ＥＶは、直径が約５〜２０００ｎｍである。例えば、ＰＭＰは、約５〜５０ｎｍ、約５０〜１００ｎｍ、約１００〜１５０ｎｍ、約１５０〜２００ｎｍ、約２００〜２５０ｎｍ、約２５０〜３００ｎｍ、約３００〜３５０ｎｍ、約３５０〜４００ｎｍ、約４００〜４５０ｎｍ、約４５０〜５００ｎｍ、約５００〜５５０ｎｍ、約５５０〜６００ｎｍ、約６００〜６５０ｎｍ、約６５０〜７００ｎｍ、約７００〜７５０ｎｍ、約７５０〜８００ｎｍ、約８００〜８５０ｎｍ、約８５０〜９００ｎｍ、約９００〜９５０ｎｍ、約９５０〜１０００ｎｍ、約１０００〜１２５０ｎｍ、約１２５０〜１５００ｎｍ、約１５００〜１７５０ｎｍ又は約１７５０〜２０００ｎｍの平均直径を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、約５〜９５０ｎｍ、約５〜９００ｎｍ、約５〜８５０ｎｍ、約５〜８００ｎｍ、約５〜７５０ｎｍ、約５〜７００ｎｍ、約５〜６５０ｎｍ、約５〜６００ｎｍ、約５〜５５０ｎｍ、約５〜５００ｎｍ、約５〜４５０ｎｍ、約５〜４００ｎｍ、約５〜３５０ｎｍ、約５〜３００ｎｍ、約５〜２５０ｎｍ、約５〜２００ｎｍ、約５〜１５０ｎｍ、約５〜１００ｎｍ、約５〜５０ｎｍ又は約５〜２５ｎｍの平均直径を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有する。特定の例では、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物は、約５０〜２００ｎｍの平均直径を有する。特定の例では、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物は、約５０〜３００ｎｍの平均直径を有する。特定の例では、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物は、約２００〜５００ｎｍの平均直径を有する。特定の例では、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物は、約３０〜１５０ｎｍの平均直径を有する。
【００７３】
一部の例では、ＰＭＰは、少なくとも５ｎｍ、少なくとも５０ｎｍ、少なくとも１００ｎｍ、少なくとも１５０ｎｍ、少なくとも２００ｎｍ、少なくとも２５０ｎｍ、少なくとも３００ｎｍ、少なくとも３５０ｎｍ、少なくとも４００ｎｍ、少なくとも４５０ｎｍ、少なくとも５００ｎｍ、少なくとも５５０ｎｍ、少なくとも６００ｎｍ、少なくとも６５０ｎｍ、少なくとも７００ｎｍ、少なくとも７５０ｎｍ、少なくとも８００ｎｍ、少なくとも８５０ｎｍ、少なくとも９００ｎｍ、少なくとも９５０ｎｍ若しくは少なくとも１０００ｎｍの平均直径を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、１０００ｎｍ未満、９５０ｎｍ未満、９００ｎｍ未満、８５０ｎｍ未満、８００ｎｍ未満、７５０ｎｍ未満、７００ｎｍ未満、６５０ｎｍ未満、６００ｎｍ未満、５５０ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、４５０ｎｍ未満、４００ｎｍ未満、３５０ｎｍ未満、３００ｎｍ未満、２５０ｎｍ未満、２００ｎｍ未満、１５０ｎｍ未満、１００ｎｍ未満若しくは５０ｎｍ未満の平均直径を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有する。当技術分野で標準的な様々な方法（例えば、動的光散乱法）を使用して、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物の粒径を測定することができる。
【００７４】
一部の例では、ＰＭＰは、７７ｎｍ２〜３．２×１０６ｎｍ２（例えば、７７〜１００ｎｍ２、１００〜１０００ｎｍ２、１０００〜１×１０４ｎｍ２、１×１０４〜１×１０５ｎｍ２、１×１０５〜１×１０６ｎｍ２又は１×１０６〜３．２×１０６ｎｍ２）の平均表面積を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、６５ｎｍ３〜５．３×１０８ｎｍ３（例えば、６５〜１００ｎｍ３、１００〜１０００ｎｍ３、１０００〜１×１０４ｎｍ３、１×１０４〜１×１０５ｎｍ３、１×１０５〜１×１０６ｎｍ２、１×１０６〜１×１０７ｎｍ３、１×１０７〜１×１０８ｎｍ３、１×１０８〜５．３×１０８ｎｍ３）の平均体積を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、少なくとも７７ｎｍ２（例えば、少なくとも７７ｎｍ２、少なくとも１００ｎｍ２、少なくとも１０００ｎｍ２、少なくとも１×１０４ｎｍ２、少なくとも１×１０５ｎｍ２、少なくとも１×１０６ｎｍ２若しくは少なくとも２×１０６ｎｍ２）の平均表面積を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、少なくとも６５ｎｍ３（例えば、少なくとも６５ｎｍ３、少なくとも１００ｎｍ３、少なくとも１０００ｎｍ３、少なくとも１×１０４ｎｍ３、少なくとも１×１０５ｎｍ３、少なくとも１×１０６ｎｍ３、少なくとも１×１０７ｎｍ３、少なくとも１×１０８ｎｍ３、少なくとも２×１０８ｎｍ３、少なくとも３×１０８ｎｍ３、少なくとも４×１０８ｎｍ３若しくは少なくとも５×１０８ｎｍ３）の平均体積を有する、植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。
【００７５】
一部の例では、ＰＭＰは、植物ＥＶ又はその断片、抽出物若しくは部分と同じ大きさを有し得る。代わりに、ＰＭＰは、ＰＭＰが産生される初期植物ＥＶと異なる大きさを有し得る。例えば、ＰＭＰは、約５〜２０００ｎｍの直径を有し得る。例えば、ＰＭＰは、約５〜５０ｎｍ、約５０〜１００ｎｍ、約１００〜１５０ｎｍ、約１５０〜２００ｎｍ、約２００〜２５０ｎｍ、約２５０〜３００ｎｍ、約３００〜３５０ｎｍ、約３５０〜４００ｎｍ、約４００〜４５０ｎｍ、約４５０〜５００ｎｍ、約５００〜５５０ｎｍ、約５５０〜６００ｎｍ、約６００〜６５０ｎｍ、約６５０〜７００ｎｍ、約７００〜７５０ｎｍ、約７５０〜８００ｎｍ、約８００〜８５０ｎｍ、約８５０〜９００ｎｍ、約９００〜９５０ｎｍ、約９５０〜１０００ｎｍ、約１０００〜１２００ｎｍ、約１２００〜１４００ｎｍ、約１４００〜１６００ｎｍ、約１６００〜１８００ｎｍ又は約１８００〜２０００ｎｍの平均直径を有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、少なくとも５ｎｍ、少なくとも５０ｎｍ、少なくとも１００ｎｍ、少なくとも１５０ｎｍ、少なくとも２００ｎｍ、少なくとも２５０ｎｍ、少なくとも３００ｎｍ、少なくとも３５０ｎｍ、少なくとも４００ｎｍ、少なくとも４５０ｎｍ、少なくとも５００ｎｍ、少なくとも５５０ｎｍ、少なくとも６００ｎｍ、少なくとも６５０ｎｍ、少なくとも７００ｎｍ、少なくとも７５０ｎｍ、少なくとも８００ｎｍ、少なくとも８５０ｎｍ、少なくとも９００ｎｍ、少なくとも９５０ｎｍ、少なくとも１０００ｎｍ、少なくとも１２００ｎｍ、少なくとも１４００ｎｍ、少なくとも１６００ｎｍ、少なくとも１８００ｎｍ又は少なくとも２０００ｎｍの平均直径を有し得る。当技術分野で標準的な様々な方法（例えば、動的光散乱法）を使用して、ＰＭＰの粒径を測定することができる。一部の例では、ＰＭＰの大きさは、異種機能性薬剤のローディング後又はＰＭＰに対する他の修飾後に決定する。
【００７６】
一部の例では、ＰＭＰは、７７ｎｍ２〜１．３×１０７ｎｍ２（例えば、７７〜１００ｎｍ２、１００〜１０００ｎｍ２、１０００〜１×１０４ｎｍ２、１×１０４〜１×１０５ｎｍ２、１×１０５〜１×１０６ｎｍ２又は１×１０６〜１．３×１０７ｎｍ２）の平均表面積を有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、６５ｎｍ３〜４．２×１０９ｎｍ３（例えば、６５〜１００ｎｍ３、１００〜１０００ｎｍ３、１０００〜１×１０４ｎｍ３、１×１０４〜１×１０５ｎｍ３、１×１０５〜１×１０６ｎｍ２、１×１０６〜１×１０７ｎｍ３、１×１０７〜１×１０８ｎｍ３、１×１０８〜１×１０９ｎｍ３又は１×１０９〜４．２×１０９ｎｍ３）の平均体積を有し得る。一部の例では、ＰＭＰは、少なくとも７７ｎｍ２（例えば、少なくとも７７ｎｍ２、少なくとも１００ｎｍ２、少なくとも１０００ｎｍ２、少なくとも１×１０４ｎｍ２、少なくとも１×１０５ｎｍ２、少なくとも１×１０６ｎｍ２又は１×１０７ｎｍ３）の平均表面積を有する。一部の例では、ＰＭＰは、少なくとも６５ｎｍ３（例えば、少なくとも６５ｎｍ３、少なくとも１００ｎｍ３、少なくとも１０００ｎｍ３、少なくとも１×１０４ｎｍ３、少なくとも１×１０５ｎｍ３、少なくとも１×１０６ｎｍ３、少なくとも１×１０７ｎｍ３、少なくとも１×１０８ｎｍ３、少なくとも１×１０９ｎｍ３、少なくとも２×１０９ｎｍ３、少なくとも３×１０９ｎｍ３又は少なくとも４×１０９ｎｍ３）の平均体積を有する。
【００７７】
一部の例では、ＰＭＰは、インタクトな植物ＥＶを含有し得る。代わりに、ＰＭＰは、植物ＥＶの小胞の全表面積の断片、部分又は抽出物（例えば、小胞の全表面積の１００％未満（例えば、９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満若しくは１％未満）を含む断片、部分又は抽出物）を含有し得る。断片、部分又は抽出物は、円周方向断片、球状断片（例えば、半球）、曲線断片、線状断片又は平板型断片など、任意の形状であり得る。断片が、小胞の球状断片である場合、球状断片は、平行線の対に沿った球状小胞の分割から生じたもの又は非平行線の対に沿った球状小胞の分割から生じたものを呈示し得る。従って、複数のＰＭＰは、複数のインタクトな植物ＥＶ、複数の植物ＥＶ断片、部分若しくは抽出物又はインタクトな植物ＥＶ及びその断片の混合物を含み得る。当業者は、インタクト及び断片化植物ＥＶの比が、使用した具体的な単離方法によって変動することは理解されるであろう。例えば、植物若しくはその部分の粉砕又はブレンドにより、真空浸潤法などの非破壊抽出方法よりも高い比率の植物ＥＶ断片、部分又は抽出物を含有するＰＭＰを生成することができる。
【００７８】
ＰＭＰが、植物ＥＶの断片、部分又は抽出物を含有する例では、ＥＶ断片、部分又は抽出物は、インタクトな小胞のそれより小さい平均表面積、例えば７７ｎｍ２、１００ｎｍ２、１０００ｎｍ２、１×１０４ｎｍ２、１×１０５ｎｍ２、１×１０６ｎｍ２又は３．２×１０６ｎｍ２）未満の平均表面積を有し得る。一部の例では、ＥＶ断片、部分又は抽出物は、７０ｎｍ２、６０ｎｍ２、５０ｎｍ２、４０ｎｍ２、３０ｎｍ２、２０ｎｍ２又は１０ｎｍ２）未満の表面積を有する。一部の例では、ＰＭＰは、インタクトな小胞のそれより小さい平均体積、例えば６５ｎｍ３、１００ｎｍ３、１０００ｎｍ３、１×１０４ｎｍ３、１×１０５ｎｍ３、１×１０６ｎｍ３、１×１０７ｎｍ３、１×１０８ｎｍ３又は５．３×１０８ｎｍ３）未満の平均体積を有する植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含有し得る。
【００７９】
ＰＭＰが、植物ＥＶの抽出物を含む例、例えばＰＭＰが、植物ＥＶから抽出された（例えば、クロロホルムで）脂質を含む例では、ＰＭＰは、植物ＥＶから抽出された（例えば、クロロホルムで）脂質の少なくとも１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％以上を含有し得る。多数のＰＭＰは、植物ＥＶ断片及び／又は植物ＥＶ抽出脂質又はそれらの混合物を含有し得る。
【００８０】
本明細書では、ＰＭＰの生成方法、ＰＭＰと結合させることができる植物ＥＶマーカ及びＰＭＰを含む組成物の製剤についての詳細をさらに概説する。
【００８１】
Ａ．生成方法
ＰＭＰは、植物又は植物組織若しくは植物細胞を含むその部分に天然に存在する植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物（例えば、脂質抽出物）から生成することができる。ＰＭＰを生成する例示的な方法は、（ａ）植物又はその部分から初期サンプルを提供するステップであって、植物又はその部分は、ＥＶを含む、ステップと；（ｂ）初期サンプルから粗ＰＭＰ画分を単離するステップであって、粗ＰＭＰ画分は、初期サンプル中のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップとを含む。この方法は、粗ＰＭＰ画分を精製し、それにより複数の純粋なＰＭＰを生成する追加的なステップ（ｃ）であって、複数の純粋なＰＭＰは、粗ＰＭＰ画分のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、追加的なステップ（ｃ）をさらに含み得る。各生成ステップについては、以下にさらに詳細に論じる。ＰＭＰの単離及び精製に関する例示的な方法は、例えば、Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｉｎｎｅｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７；Ｒｕｔｔｅｒ  ｅｔ  Ａｌ，Ｂｉｏ．Ｐｒｏｔｏｃ．７（１７）：ｅ２５３３，２０１７；Ｒｅｇｅｎｔｅ  ｅｔ  Ａｌ，Ｊ  ｏｆ  Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．６８（２０）：５４８５−５４９６，２０１７；Ｍｕ  ｅｔ  Ａｌ，Ｍｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ．，５８，１５６１−１５７３，２０１４並びにＲｅｇｅｎｔｅ  ｅｔ  Ａｌ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．５８３：３３６３−３３６６，２００９に見出され、これらの各々は、参照により本明細書に組み込む。
【００８２】
例えば、（ａ）植物又はその部分から初期サンプルを提供するステップであって、植物又はその部分は、ＥＶを含む、ステップと；（ｂ）初期サンプルから粗ＰＭＰ画分を単離するステップであって、粗ＰＭＰ画分は、初期サンプル中のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベル（例えば、少なくとも１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９８％、９９％若しくは１００％低減したレベル）を有する、ステップと；（ｃ）粗ＰＭＰ画分を精製し、それにより複数の純粋なＰＭＰを生成するステップであって、複数の純粋なＰＭＰは、粗ＥＶ画分に対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベル（例えば、少なくとも１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９８％、９９％若しくは１００％低減したレベル）を有する、ステップとを含むプロセスによって複数のＰＭＰを植物から単離され得る。
【００８３】
本明細書に提供されるＰＭＰは、多様な植物から単離した植物ＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物を含み得る。ＰＭＰは、任意の属の植物（維管束若しくは非維管束）から単離することができ、こうした植物として、限定されないが、被子植物（単子葉及び双子葉植物）、裸子植物、シダ、イワヒバ（ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ）、トクサ、裸茎植物（ｐｓｉｌｏｐｈｙｔｅｓ）、ヒカゲノカズラ（ｌｙｃｏｐｈｙｔｅ）、藻類（例えば、単細胞若しくは多細胞、例えばアーケプラスチダ（ａｒｃｈａｅｐｌａｓｔｉｄａ））又はコケ類が挙げられる。特定の例では、ＰＭＰは、維管束植物、例えば単子葉若しくは双子葉又は裸子植物から生成することができる。例えば、ＰＭＰは、アルファルファ、リンゴ、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、バナナ、オオムギ、カノーラ、トウゴマ、チコリー、キク、クローバー、カカオ、コーヒー、綿、綿実、トウモロコシ、クランベ、クランベリー、キュウリ、デンドロビウム、ヤマイモ、ユーカリ属、ウシノケグサ、亜麻、グラジオラス、ユリ科、亜麻仁、キビ、マスクメロン、カラシ、オーツムギ、アブラヤシ、アブラナ、パパイヤ、ピーナッツ、パイナップル、観賞植物、インゲンマメ、ジャガイモ、ナタネ、コメ、ライムギ、ライグラス、ベニバナ、ゴマ、モロコシ、ダイズ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、イチゴ、タバコ、トマト、芝草、コムギ又はレタス、セロリ、ブロッコリー、カリフラワー、ウリ科植物などの野菜作物；リンゴ、ナシ、モモ、オレンジ、グレープフルーツ、レモン、ライム、アーモンド、ペカン、クルミ、ヘーゼルなどの果実及び堅果樹；ブドウ、キウイ、ホップなどのブドウ；ラズベリー、ブラックベリー、セイヨウスグリなどの果実低木及びキイチゴ；セイヨウトネリコ、マツ、モミ、カエデ、オーク、クルミ、ポプラなどの森林樹；アルファルファ、カノーラ、トウゴマ、トウモロコシ、綿、クランベ、亜麻、亜麻仁、カラシ、アブラヤシ、アブラナ、ピーナッツ、ジャガイモ、コメ、ベニバナ、ゴマ、ダイズ、テンサイ、ヒマワリ、タバコ又はコムギから生成することができる。
【００８４】
ＰＭＰは、全植物（例えば、全ロゼット若しくは苗）又は代替的に１つ若しくは複数の植物部分（例えば、葉、種子、根、果実、野菜、花粉、師管液若しくは木部樹液）から生成することができる。例えば、ＰＭＰは、新芽植物器官／構造（例えば、葉、茎若しくは塊茎）、根、花及び花器／構造（例えば、花粉、包葉、萼片、花弁、雄蕊、心皮、葯若しくは胚珠）、種子（胚、胚乳若しくは種皮を含む）、果実（成熟した子房）、樹液（例えば、師部若しくは木部樹液）、植物組織（例えば、維管束組織、基本組織、腫瘍組織など）並びに細胞（例えば、単細胞、プロトプラスト、胚、カルス組織、孔辺細胞、卵細胞など）又はこれらの子孫から生成することができる。例えば、単離ステップは、（ａ）植物又はその一部を用意することを含み得る。一部の例では、植物部分は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）の葉である。植物は、任意の発育段階のものであり得る。例えば、ＰＭＰは、苗、例えば１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週又は８週齢の苗（例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）の苗）から生成することができる。他の例示的ＰＭＰは、根（例えば、根生姜）、果汁（例えば、グレープフルーツ果汁）、野菜（例えば、ブロッコリー）、花粉（例えば、オリーブ花粉）、師部液（例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）の師部液）又は木部樹液（例えば、トマト植物木部樹液）から生成されたＰＭＰを含み得る。
【００８５】
ＰＭＰは、様々な方法により、植物又はその部分から生成することができる。植物のＥＶ含有アポプラスト画分又はそうでなければ分泌されたＥＶを含むＰＭＰを含有する細胞外画分（例えば、細胞培地）の放出を可能にするいずれの方法も本方法において好適である。ＥＶは、破壊的（例えば、植物若しくは任意の植物部分の粉砕若しくはブレンド）又は非破壊的（植物若しくは任意の植物部分の洗浄若しくは真空浸潤法）方法のいずれかによって植物若しくは植物部分から分離することができる。例えば、植物又はその部分を真空浸潤、粉砕、ブレンド又はこれらの組合せに付して、植物又は植物部分からＥＶを単離し、これによりＰＭＰを生成することができる。例えば、単離ステップは、初期サンプル（例えば、植物、植物部分又は植物若しくは植物部分由来のサンプル）から粗ＰＭＰ画分を単離することを含み得るが、ここで、単離ステップは、植物（例えば、小胞単離バッファーと一緒に）を真空浸潤して、アポプラスト画分を放出させ、収集することを含む。代わりに、単離ステップは、植物を粉砕又はブレンドして、ＥＶを放出させ、これによりＰＭＰを生成することを含む。
【００８６】
植物ＥＶを単離することにより、ＰＭＰを生成したら、ＰＭＰを粗ＰＭＰ画分（例えば、アポプラスト画分）に分離又は収集することができる。例えば、分離ステップは、植物組織残屑、植物細胞若しくは植物細胞オルガネラ（例えば、核若しくは葉緑体）をはじめとする大きい混入物から、ＰＭＰ含量画分を分離するための遠心分離（例えば、分画遠心分離若しくは超遠心分離）及び／又は濾過を用いて、複数のＰＭＰを粗ＰＭＰ画分に分離することを含み得る。従って、粗ＰＭＰ画分は、起源植物又は植物部分からの初期サンプルと比較して、植物組織残屑、植物細胞若しくは植物細胞オルガネラ（例えば、核、ミトコンドリア若しくは葉緑体）を含む、大きい混入物の数が減少することになる。
【００８７】
一部の例では、単離ステップは、植物細胞又は植物組織残屑からＰＭＰ含有画分を分離するための遠心分離（例えば、分画遠心分離若しくは超遠心分離）及び／又は濾過を用いて、複数のＰＭＰを粗ＰＭＰ画分に分離することを含み得る。従って、粗ＰＭＰ画分は、起源植物又は植物部分からの初期サンプルと比較して、植物細胞又は植物組織残屑の数が減少することになる。
【００８８】
複数の純粋なＰＭＰを生成するために、追加の精製方法により粗ＰＭＰ画分をさらに精製することもできる。例えば、超遠心分離により、例えば密度勾配（イオジキサノール若しくはショ糖）の使用及び／又は凝集要素を除去するための他の手法（例えば、沈殿若しくはサイズ排除クロマトグラフィー）の使用により、粗ＰＭＰ画分を他の植物要素から分離することができる。得られた純粋なＰＭＰは、より早期の分離ステップ中に生成された１つ若しくは複数の画分と比較して又は所定の閾値レベル、例えば商業的公開仕様と比較して、起源植物からの低減したレベルの混入物又は不要な要素（例えば、１つ若しくは複数の非ＰＭＰ要素、例えばタンパク質凝集体、核酸凝集体、タンパク質−核酸凝集体、遊離リポタンパク質、脂質−タンパク質構造）、核、細胞壁要素、細胞オルガネラ又はこれらの組合せ）を有し得る。例えば、純粋なＰＭＰは、初期サンプルのレベルに対して、植物オルガネラ又は細胞壁要素の低減したレベル（例えば、約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％若しくは１００％超；又は約２×、４×、５×、１０×、２０×、２５×、５０×、７５×、１００×若しくは１００×超）を有し得る。一部の例では、純粋なＰＭＰは、タンパク質凝集体、核酸凝集体、タンパク質−核酸凝集体、遊離リポタンパク質、脂質−タンパク質構造）、核、細胞壁要素、細胞オルガネラ又はこれらの組合せなどの１つ若しくは複数の非ＰＭＰ要素を実質的に含有しない（例えば、それらの検出不能レベルを有する）。放出及び分離ステップのさらに別の例を実施例１に見出すことができる。ＰＭＰは、例えば、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、５×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３又は１×１０１３ＰＭＰｓ／ｍＬ超の濃度であり得る。
【００８９】
例えば、単離したＰＭＰから、タンパク質凝集体を除去することができる。例えば、単離したＰＭＰ溶液を様々なｐＨ（例えば、ｐＨプローブを用いて測定されるように）に付して、溶液中にタンパク質凝集体を沈殿させることができる。ｐＨは、例えば、水酸化ナトリウム又は塩酸の添加により、例えばｐＨ３、ｐＨ５、ｐＨ７、ｐＨ９又はｐＨ１１に調節することができる。溶液が指定ｐＨに達したら、これを濾過して微粒子を除去することができる。代わりに、単離したＰＭＰ溶液を、Ｐｏｌｙｍｉｎ−Ｐ又はＰｒａｅｓｔｏｌ  ２６４０などの荷電ポリマーの添加により、凝集させることもできる。手短には、Ｐｏｌｙｍｉｎ−Ｐ又はＰｒａｅｓｔｏｌ  ２６４０を溶液に添加し、インペラで混合する。次に、溶液を濾過して微粒子を除去する。代わりに、塩濃度を増加させることにより凝集体を可溶化することもできる。例えば、単離したＰＭＰ溶液にＮａＣｌを、それが例えば、１ｍｏｌ／Ｌになるまで添加することができる。次に、溶液を濾過して、ＰＭＰを単離する。代わりに、昇温によって凝集体を可溶化することもできる。例えば、単離したＰＭＰを混合しながら、溶液が例えば、約５０℃の均一温度に達するまで５分間加熱することができる。次に、ＰＭＰ混合物を濾過して、ＰＭＰを単離することができる。代わりに、標準的手順に従うサイズ排除クロマトグラフィーにより、ＰＭＰ溶液から可溶性混入物を分離することができ、この場合、最初の画分中にＰＭＰを溶出させる一方、タンパク質及びリボ核タンパク質並びに一部のリポタンパク質をのちに溶出させる。タンパク質凝集体除去の効率は、ＢＣＡ／Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質定量を用いて、タンパク質凝集体の除去前後のタンパク質濃度を測定及び比較することにより決定することができる。
【００９０】
生成方法の任意のステップでＰＭＰを特性決定又は同定するために、本明細書に記載される生成方法のいずれにも、当技術分野で公知のいかなる定量的又は定性的方法も追加し得る。ＰＭＰは、ＰＭＰ収率、ＰＭＰ濃度、ＰＭＰ純度、ＰＭＰ組成又はＰＭＰサイズを推定するための多様な分析方法によって特性決定され得る。ＰＭＰは、ＰＭＰの視覚化、定量又は定性的特性決定（例えば、組成物の同定）を可能にする、当技術分野で公知のいくつかの方法、例えば顕微鏡検査（例えば、透過電子顕微鏡）、動的光散乱法、ナノ粒子追跡、分光法（例えば、フーリエ変換赤外分光法）若しくは質量分析法（タンパク質及び脂質分析）により評価することができる。特定の例では、方法（例えば、質量分析法）を用いて、ＰＭＰに存在する植物ＥＶマーカ、例えば付録に開示されるマーカを同定することができる。ＰＭＰ画分の分析及び特性決定を補助するために、ＰＭＰをさらに標識又は染色することができる。例えば、３，３’−ジヘキシルオキサカルボシアニンヨージド（ＤＩＯＣ６）、蛍光親油性色素、ＰＫＨ６７（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏ（登録商標）４８８（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又はＤｙＬｉｇｈｔ（商標）８００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で、ＰＭＰを染色することができる。高度な形態のナノ粒子追跡の非存在下でも、この比較的単純な手法は、総膜含量を定量することから、ＰＭＰの濃度を間接的に測定するために使用することができる（Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｉｎｎｅｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７；Ｒｕｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏ．Ｐｒｏｔｏｃ．７（１７）：ｅ２５３３，２０１７）。より正確な測定のため、またＰＭＰの粒度分布を評価するためには、ナノ粒子追跡を使用することができる。
【００９１】
生成工程中に、任意選択で、ＰＭＰが対照又は初期サンプル中のＥＶレベルに対して高い濃度（例えば、約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％若しくは１００％超；又は約２倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、７５倍、１００倍若しくは１００倍超）であるように、ＰＭＰを調製することができる。単離したＰＭＰは、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の約０．１％〜約１００％、例えば約０．０１％〜約１００％、約１％〜約９９．９％、約０．１％〜約１０％、約１％〜約２５％、約１０％〜約５０％、約５０％〜約９９％又は約７５〜約１００％のいずれか１つを占め得る。一部の例では、組成物は、例えば、ｗｔ／ｖｏｌ、パーセントＰＭＰタンパク質組成物及び／又はパーセント脂質組成物により測定して（例えば、蛍光標識脂質の測定により）；例えば、実施例３を参照されたい）、少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％若しくはそれを超えるＰＭＰのいずれかを含む。一部の例では、市販の製品のような濃縮薬剤を使用し、例えば、最終ユーザは、希釈された薬剤を使用し得、これは、実質的に低い濃度の有効成分を有する。一部の実施形態では、組成物は、有害生物防除濃縮製剤、例えば高濃度少量製剤として製剤化する。
【００９２】
実施例１に説明されるように、多様な植物又はその部分（例えば、葉アポプラスト、種子アポプラスト、根、果実、野菜、花粉、師管液若しくは木部樹液）からＰＭＰを生成することができる。例えば、ＰＭＰは、植物のアポプラスト画分、例えば葉のアポプラスト（例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）葉のアポプラスト）又は種子のアポプラスト（例えば、ヒマワリ種子のアポプラスト）から単離することができる。他の例示的なＰＭＰは、根（例えば、根生姜）、果汁（例えば、グレープフルーツ果汁）、野菜（例えば、ブロッコリー）、花粉（例えば、オリーブ花粉）、師管液（例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）師管液）、木部樹液（例えば、トマト植物木部樹液）又は細胞培養上清（例えば、ＢＹ２タバコ細胞培養上清）から生成される。この実施例は、これらの種々の植物供給源からＰＭＰの生成をさらに示す。
【００９３】
実施例２に説明されるように、様々な方法により、例えば超遠心分離及び／又は凝集混入物を除去する方法、例えば沈殿若しくはサイズ排除クロマトグラフィーと一緒に密度勾配（イオジキサノール若しくはショ糖）を使用することにより、ＰＭＰを精製することができる。例えば、実施例２では、実施例１で概説される分離ステップによって得られたＰＭＰの精製を説明する。さらに、ＰＭＰは、実施例３に説明される方法に従って特性決定することができる。
【００９４】
一部の例では、本組成物及び方法のＰＭＰは、植物又は植物部分から単離することができ、ＰＭＰにさらなる修飾を加えることなく、これを使用することができる。他の例では、本明細書にさらに概説するように、使用前にＰＭＰを修飾することができる。
【００９５】
Ｂ．植物ＥＶマーカ
本組成物及び方法のＰＭＰは、植物ＥＶ（及び／又はその断片、部分若しくは抽出物を含む）から生成されるものとしてＰＭＰを同定する多様なマーカを有し得る。本明細書で使用される場合、用語「植物ＥＶマーカ」は、天然に植物に付随し、植物タンパク質、植物核酸、植物小分子、植物脂質又はそれらの組合せなど、インプランタで植物ＥＶ中若しくは上に組み込まれる要素を指す。植物ＥＶマーカの例は、例えば、Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｉｎｎｅｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７；Ｒａｉｍｏｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．６（２３）：１９５１４，２０１５；Ｊｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ．２１（７）：１３４５−１３５７，２０１３；Ｗａｎｇ  ｅｔ  Ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２２（３）：５２２−５３４，２０１４；及びＲｅｇｅｎｔｅ  ｅｔ  Ａｌ，Ｊ  ｏｆ  Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．６８（２０）：５４８５−５４９６，２０１７に見出すことができ；これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。植物ＥＶマーカのさらに別の例は付録に列挙されており、これらについては、本明細書においてさらに概説する。
【００９６】
植物ＥＶマーカは、植物脂質を含み得る。ＰＭＰに見られ得る植物脂質マーカの例としては、フィトステロール、カンペステロール、β−シトステロール、シグマステロール、アベナステロール、グリコシルイノシトールホスホリルセラミド（ＧＩＰＣ）、糖脂質（例えば、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）若しくはジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）又はそれらの組合せが挙げられる。例えば、ＰＭＰは、ＧＩＰＣを含み得、これは、植物の主要スフィンゴ脂質クラスの代表であり、植物において最も豊富な膜脂質の１つである。他の植物ＥＶマーカは、非生物的又は生物的ストレッサー（例えば、細菌若しくは真菌感染）に応答して植物中に蓄積する脂質、例えばホスファチジン酸（ＰＡ）又はホスファチジルイノシトール−４−リン酸（ＰＩ４Ｐ）を挙げることができる。
【００９７】
代わりに、植物ＥＶマーカは、植物タンパク質を含み得る。一部の例では、タンパク質植物ＥＶマーカは、植物により天然に産生される抗微生物タンパク質であり得、そうしたものとして、非生物的又は生物的ストレッサー（例えば、細菌若しくは真菌感染）に応答して植物が分泌する防御タンパク質がある。植物病原体防御タンパク質としては、可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子結合タンパク質受容体タンパク質（ＳＮＡＲＥ）タンパク質（例えば、Ｓｙｎｔａｘｉｎ−１２１（ＳＹＰ１２１；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿１８７７８８．１若しくはＮＰ＿９７４２８８．１）、Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ１（ＰＥＮ１；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿５６７４６２．１））又はＡＢＣ輸送体Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ３（ＰＥＮ３；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿１９１２８３．２）がある。植物ＥＶマーカの他の例としては、植物中のＲＮＡの長距離輸送を促進するタンパク質があり、こうしたものとして、師部タンパク質（例えば、師部タンパク質２−Ａ１（ＰＰ２−Ａ１）、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿１９３７１９．１）、カルシウム依存性脂質結合タンパク質又はレクチン（例えば、ジャカリン（Ｊａｃａｌｉｎ）関連レクチン、例えばヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ）ジャカリン（Ｈｅｌｊａ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＨＺ８６９７８．１）が挙げられる。例えば、ＲＮＡ結合タンパク質は、グリシンリッチＲＮＡ結合タンパク質−７（ＧＲＰ７；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿１７９７６０．１）であり得る。加えて、プラスモデスマータ機能を調節するタンパク質が、一部の例で、植物ＥＶ中に見られ得るが、こうしたものとして、Ｓｙｎａｐ−Ｔｏｔｇａｍｉｎ  Ａ  Ａ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿５６５４９５．１）がある。一部の例では、植物ＥＶマーカは、ホスホリパーゼＣ又はホスホリパーゼＤなど、脂質機序に関与するタンパク質を含み得る。一部の例では、植物タンパク質ＥＶマーカは、植物の細胞トラフィッキングタンパク質である。植物ＥＶマーカがタンパク質である特定の例では、タンパク質マーカは、分泌タンパク質と典型的に結合するシグナルペプチドが欠失している場合がある。非古典的分泌タンパク質は、（ｉ）リーダ配列の欠失、（ｉｉ）ＥＲ又はゴルジ装置に特異的なＰＴＭの非存在、及び／又は（ｉｉｉ）古典的ＥＲ／ゴルジ依存性分泌経路を遮断するブレフェルディンＡによる影響を受けない分泌のような、いくつかの共通の特徴を有すると思われる。当業者は、一般に自由に利用可能な様々な手段（例えば、ＳｅｃｒｅｔｏｍｅＰ  Ｄａｔａｂａｓｅ；ＳＵＢＡ３（ＳＵＢｃｅｌｌｕｌａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｆｏｒ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ））を使用して、シグナル配列又はその欠失についてタンパク質を評価することができる。
【００９８】
植物ＥＶマーカがタンパク質である例では、タンパク質は、植物ＥＶマーカ、例えば付録に列挙される植物ＥＶマーカのいずれかと、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。例えば、タンパク質は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）由来のＰＥＮ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿５６７４６２．１）と、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。
【００９９】
一部の例では、植物ＥＶマーカは、植物によりコードされる核酸、例えば植物ＲＮＡ、植物ＤＮＡ又は植物ＰＮＡを含む。例えば、ＰＭＰは、植物によりコードされるｄｓＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）又は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含み得る。一部の例では、核酸は、本明細書で論じるように、植物においてＲＮＡの長距離輸送を促進するタンパク質に関連するものであり得る。一部の例では、核酸植物ＥＶマーカは、宿主誘導遺伝子サイレンシング（ＨＩＧＳ）に関与するものであり得、これは、植物が、植物有害生物（例えば、真菌などの病原体）の外来転写物を抑制するプロセスである。例えば、核酸は、細菌又は真菌遺伝子を抑制するものであり得る。一部の例では、核酸は、真菌病原体（例えば、バーティシリウム・ダリエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｄａｈｌｉａｅ））中の遺伝子をターゲティングする、ｍｉＲ１５９又はｍｉＲ１６６などのマイクロＲＮＡであり得る。一部の例では、タンパク質は、植物防御化合物の運搬に関与するもの、例えばグルコシノレート（ＧＳＬ）輸送及び代謝に関与するタンパク質であり得、こうしたものとして、グルコシノレートトランスポータ−１−１（ＧＴＲ１；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿５６６８９６．２）、グルコシノレートトランスポータ−２（ＧＴＲ２；ＮＰ＿２０１０７４．１）又はエピチオ特異的修飾因子１（ＥＳＭ１；ＮＰ＿１８８０３７．１）が挙げられる。
【０１００】
植物ＥＶマーカが核酸である例では、核酸は、植物ＥＶマーカ、例えば付録に列挙される植物ＥＶマーカをコードするものなどと、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し得る。例えば、核酸は、ｍｉＲ１５９又はｍｉＲ１６６と、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を有し得る。
【０１０１】
一部の例では、植物ＥＶマーカは、植物により産生される化合物を含む。例えば、化合物は、非生物的又は生物的ストレッサーに応答して産生される防御化合物、例えば二次代謝物などであり得る。ＰＭＰ中に見られ得るこうした二次代謝物の１つは、グルコシノレート（ＧＳＬ）であり、これは、主にアブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）植物に見られる窒素及びイオウ含有二次代謝物である。他の二次代謝物は、アレロケミカルを含み得る。
【０１０２】
一部の例では、ＰＭＰは、典型的には植物によって産生されないが、一般に他の生物（例えば、動物ＥＶ、細菌ＥＶ若しくは真菌ＥＶのマーカ）に関連する特定のマーカ（例えば、脂質、ポリペプチド若しくはポリヌクレオチド）の欠失に基づいて植物ＥＶから産生されるものとしても同定され得る。例えば、一部の例では、ＰＭＰは、動物ＥＶ、細菌ＥＶ若しくは真菌ＥＶに典型的に見られる脂質を欠失している。一部の例では、ＰＭＰは、動物ＥＶに典型的な脂質（例えば、スフィンゴミエリン）を欠失している。一部の例では、ＰＭＰは、細菌ＥＶ又は細菌膜に典型的な脂質（例えば、ＬＰＳ）を含有しない。一部の例では、ＰＭＰは、真菌膜に典型的な脂質（例えば、エルゴステロール）を欠失している。
【０１０３】
小分子（例えば、質量分光法、質量分析法）、脂質（例えば、質量分光法、質量分析法）、タンパク質（例えば、質量分光法、イムノブロッティング）又は核酸（例えば、ＰＣＲ分析）の同定を可能にする、当技術分野で公知の任意の手法を用いて、植物ＥＶマーカを同定することができる。一部の例では、本明細書に記載のＰＭＰ組成物は、検出可能な量、例えば所定閾値量の本明細書に記載の植物ＥＶマーカを含有する。
【０１０４】
Ｃ．薬剤のローディング
ＰＭＰは、異種機能性薬剤、例えば本明細書に記載するものなどの農薬用薬剤又は忌避剤を含有するように修飾することができる。ＰＭＰは、薬剤を標的植物又は植物有害生物に送達することを可能にする様々な手段で、例えば薬剤の封入、脂質二重層構造内への成分の組込み又はＰＭＰの脂質二重層構造の表面と成分の結合（例えば、共役）により、こうした薬剤を担持させるか又はそれらと結合させることができる。
【０１０５】
異種機能性薬剤は、ＰＭＰと薬剤同士の結合を直接若しくは間接的に可能にする、当技術分野で公知の任意の方法により、ＰＭＰ中若しくは上に組み込むか又はロードすることができる。異種機能性薬剤は、インビボ法（例えば、インプランタ、例えば異種薬剤を含むトランスジェニック植物からのＰＭＰの産生により）若しくはインビトロで（例えば、組織培養若しくは細胞培養で）又はインビボ及びインビトロ法の両方によってＰＭＰに組み込むことができる。
【０１０６】
ＰＭＰに異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤又は忌避剤）をインビボでロードする例では、ＰＭＰは、インプランタで、組織培養物又は細胞培養物にロードされたＥＶ又はその断片、部分若しくは抽出物から産生され得る。インプランタ法は、異種機能性薬剤を発現するように遺伝子修飾された植物における異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤又は忌避剤）の発現を含む。一部の例では、異種機能性薬剤は、植物に対して外性である。代わりに、異種機能性薬剤は、植物中に天然に見られ得るが、非遺伝子修飾植物に見られるレベルより高いレベルで発現され得る。
【０１０７】
一部の例では、ＰＭＰは、インビトロでロードすることができる。限定されないが、物理的、化学的及び／又は生物学的方法を用いて、物質をＰＭＰ上若しくは中にロードすることができる（例えば、ＰＭＰにより封入することができる）。例えば、異種機能性薬剤は、エレクトロポレーション、超音波処理、受動的拡散、攪拌、脂質抽出又は押出しの１つ又は複数によってＰＭＰ中に導入することができる。ロードされた薬剤の存在又はレベルを確認するために、様々な方法、例えばＨＰＣＬ（例えば、小分子評価のため）；イムノブロッティング（例えば、タンパク質評価のため）；及び定量的ＰＣＲ（例えば、ヌクレオチドの評価のため）を用いて、ロードしたＰＭＰを評価することができる。しかし、当業者には、ＰＭＰへの目的の物質のローディングは、上に例示した方法に限定されるわけではないことが理解されるべきである。
【０１０８】
一部の例では、異種機能性薬剤をＰＭＰに共役させることができ、この場合、異種機能性薬剤は、ＰＭＰに間接的又は直接結合若しくは連結される。例えば、１つ又は複数の農薬用薬剤が、ＰＭＰの脂質二重層に直接連結される（例えば、共有結合若しくはイオン結合により）ように、１つ又は複数の農薬用薬剤をＰＭＰに化学的連結させることができる。一部の例では、ＰＭＰに対する種々の農業用薬剤の共役は、最初に、好適な溶媒中で１つ又は複数の異種機能性薬剤を適切な架橋剤（例えば、Ｎ−エチルカルボ−ジイミド（「ＥＤＣ」）；これは、一般に、１級アミンとアミド結合のためのカルボキシル活性化剤として使用され、リン酸基とも反応する）と混合することによって達成することができる。異種機能性薬剤と架橋剤の結合を可能にするのに十分なインキュベーション時間後、架橋剤／異種機能性薬剤混合物をＰＭＰと合わせて、さらなるインキュベーション時間後、ショ糖勾配（例えば、８、３０、４５及び６０％ショ糖勾配）に付して、ＰＭＰに共役した農業用薬剤から遊離異種機能性薬剤及び遊離ＰＭＰを分離することができる。混合物をショ糖勾配と合わせるステップ及び付随の遠心分離ステップの一環として、農薬用薬剤に共役させたＰＭＰは、この時点で、ショ糖勾配中のバンドとして認められ、従って、次に、共役ＰＭＰを収集し、洗浄し、本明細書に記載の使用のために好適な溶液に溶解させることができる。
【０１０９】
一部の例では、例えば植物又は有害生物へのＰＭＰの送達前及び送達後、ＰＭＰを異種機能性薬剤と安定に結合させる。別の例では、例えば植物又は有害生物へのＰＭＰの送達後、異種機能性薬剤がＰＭＰから解離されるように、ＰＭＰを異種機能性と結合させる。
【０１１０】
ＰＭＰは、ＰＭＰの機能的及び構造的特徴をさらに改変するように、他の要素（例えば、脂質、例えばステロール、例えばコレステロール；又は小分子）でさらに修飾することもできる。例えば、ＰＭＰの安定性を高める（例えば、室温で少なくとも１日及び／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している）安定化分子でＰＭＰをさらに修飾することができる。
【０１１１】
ＰＭＰには、具体的な薬剤又は使用に応じて、様々な濃度の異種機能性薬剤をロードすることができる。例えば、一部の例では、本明細書に開示される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が、約０．００１、０．０１、０．１、１．０、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは９５（又は約０．００１から９５までの任意の範囲）以上のｗｔ％の農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤を含むように、ＰＭＰにロードする。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が、約９５、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１．０、０．１、０．０１、０．００１（又は約９５から０．００１までの任意の範囲）以下のｗｔ％の農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤を含むように、ＰＭＰにロードする。例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、約０．００１〜約０．０１ｗｔ％、約０．０１〜約０．１ｗｔ％、約０．１〜約１ｗｔ％、約１〜約５ｗｔ％又は約５〜約１０ｗｔ％、約１０〜約２０ｗｔ％の農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤を含有し得る。一部の例では、ＰＭＰに、約１、５、１０、５０、２００若しくは５００、１，０００、２，０００（又は約１から２，０００までの任意の範囲）以上のμｇ／ｍｌの農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤をロードすることができる。本発明のリポソームには、約２，０００、１，０００、５００、２００、１００、５０、１０、５、１（又は約２，０００から１までの任意の範囲）以下のμｇ／ｍｌの農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤をロードすることができる。
【０１１２】
一部の例では、ＰＭＰには、本明細書に開示される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が、少なくとも０．００１ｗｔ％、少なくとも０．０１ｗｔ％、少なくとも０．１ｗｔ％、少なくとも１．０ｗｔ％、少なくとも２ｗｔ％、少なくとも３ｗｔ％、少なくとも４ｗｔ％、少なくとも５ｗｔ％、少なくとも６ｗｔ％、少なくとも７ｗｔ％、少なくとも８ｗｔ％、少なくとも９ｗｔ％、少なくとも１０ｗｔ％、少なくとも１５ｗｔ％、少なくとも２０ｗｔ％、少なくとも３０ｗｔ％、少なくとも４０ｗｔ％、少なくとも５０ｗｔ％、少なくとも６０ｗｔ％、少なくとも７０ｗｔ％、少なくとも８０ｗｔ％、少なくとも９０ｗｔ％又は少なくとも９５ｗｔ％の農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤をロードする。一部の例では、ＰＭＰには、少なくとも１μｇ／ｍｌ、少なくとも５μｇ／ｍｌ、少なくとも１０μｇ／ｍｌ、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１００μｇ／ｍｌ、少なくとも２００μｇ／ｍｌ、少なくとも５００μｇ／ｍｌ、少なくとも１，０００μｇ／ｍｌ、少なくとも２，０００μｇ／ｍｌの農薬用薬剤及び／若しくは忌避剤をロードすることができる。
【０１１３】
ＰＭＰにロードすることができる具体的な農薬用薬剤又は忌避剤の例は、「異種機能性薬剤」と題するセクションでさらに概説する。
【０１１４】
Ｄ．製剤
適用、取扱い、輸送、貯蔵及び活性を容易にするために、有効物質、ここではＰＭＰを他の物質と一緒に製剤化することができる。ＰＭＰは、例えば、ベイト、濃縮エマルジョン、粉剤、乳剤、燻蒸剤、ゲル、顆粒、マイクロカプセル封入剤、種子処理剤、懸濁剤、サスポエマルジョン剤、錠剤、水溶性液体、水分散性顆粒若しくはドライフロワブル（ｄｒｙ  ｆｌｏｗａｂｌｅ）、水和剤及び極微量溶液に製剤化することができる。製剤の種類に関するさらに詳細な情報については、“Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｄｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ”Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  ｎ°２，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣｒｏｐＬｉｆｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００２）を参照されたい。
【０１１５】
有効物質（例えば、ＰＭＰ、追加の農薬）は、このような物質の濃縮製剤から調製される水性懸濁液又はエマルジョンとして適用することができる。こうした水溶性、水懸濁性又は乳化性製剤は、固体（通常、水和剤として知られる）、又は水分散性顆粒、又は通常、乳剤として知られる液体、又は水性懸濁液のいずれでもあり得る。圧縮して、水分散性顆粒を形成することができる水和剤は、農薬、担体及び界面活性剤の均質混合物を含む。担体は、通常、アタパルジャイト（ａｔｔａｐｕｌｇｉｔｅ）クレイ、モンモリロナイト粘土、珪藻土又は精製ケイ酸から選択される。約０．５％〜約１０％の水和剤を含む、有効な界面活性剤としては、スルホン化リグニン、濃縮ナフタレンスルホネート、ナフタレンスルホネート、アルキルベンゼンスルホネート、スルホン酸アルキル及びアルキルフェノールのエチレンオキシド付加物などの非イオン界面活性剤が挙げられる。
【０１１６】
乳剤は、水溶性溶媒又は水溶性有機溶媒と乳化剤との混合物のいずれかである担体に溶解させた液体１リットル当たり約５０〜約５００グラムといった好適な濃度のＰＭＰを含有し得る。有用な有機溶媒としては、芳香油、特にキシレン及び石油留分、特に石油の高沸点ナフタレン及びオレフィン部分、例えば重質芳香族ナフサが挙げられる。また、他の有機溶媒、例えばロジン誘導体を含むテルペン溶媒、シクロヘキサノンなどの脂肪族ケトン及び２−エトキシエタノールなどの錯体アルコールを使用し得る。乳剤に好適な乳化剤は、一般的な陰イオン及び非イオン界面活性剤から選択される。
【０１１７】
水性懸濁液は、約５％〜約５０重量％の範囲の濃度で水性担体中に分散される水不溶性農薬の懸濁液を含む。懸濁液は、農薬を微粉砕し、これを、水及び界面活性剤を含む担体中に激しく混合することにより調製される。また、水性担体の密度及び粘性を増大するために、無機塩及び合成又は天然ゴムなどの材料を添加し得る。
【０１１８】
ＰＭＰは、顆粒状組成物として適用され得、これは、特に土壌への適用に有用である。顆粒状組成物は、通常、粘土又は類似の物質を含む担体に分散させた約０．５％〜約１０重量％の農薬を含有する。こうした組成物は、通常、好適な溶媒に製剤を溶解させた後、約０．５〜約３ｍｍの範囲の適切な粒径に事前に形成された顆粒状担体に適用することにより調製される。こうした組成物は、担体と化合物のダフ又はペーストを作製し、粉砕した後、乾燥させて、所望の顆粒粒径を得ることによって製剤化され得る。
【０１１９】
本ＰＭＰ製剤を含有する粉剤は、好適な粉末状の担体、例えばカオリンクレイ、摩砕した火山岩などと一緒に粉末状のＰＭＰを均質混合することにより調製される。粉剤は、好適には、パケットの約１％〜約１０％を占め得る。粉剤は、ダストブロワー機で、種子粉衣又は葉適用として適用することができる。
【０１２０】
同様に、好適な有機溶媒、通常、農業化学で広く使用されている石油、例えばスプレーオイル中の溶液の形態の本製剤を適用するのも実用的である。
【０１２１】
ＰＭＰは、エアゾール組成物の形態で適用することもできる。こうした組成物では、パケットを、圧力発生噴霧剤混合物である担体に溶解又は分散させる。エアゾール組成物を容器内にパッケージし、この容器から霧状化弁を介して混合物を投与する。
【０１２２】
別の実施形態は、水中油形エマルジョンであり、ここで、エマルジョンは、油滴を含み、これらは各々、ラメラ液晶コーティングを備え、水相に分散されており、ここで、各油滴は、農業的に有効な少なくとも１つの化合物を含み、（１）少なくとも１つの非イオン親油性界面活性剤、（２）少なくとも１つの非イオン親水性界面活性剤、及び（３）少なくとも１つのイオン界面活性剤を含むモノラメラ又はオリゴラメラ層で個別にコーティングされており、この場合、油滴は、８００ナノメートル未満の平均粒径を有する。上記実施形態に関するさらに詳細な情報は、２００７年２月１日に公開された米国特許出願公開第２００７００２７０３４号明細書に開示されている。使用しやすいように、この実施形態は、「ＯＩＷＥ」と呼ぶ。
【０１２３】
加えて、一般に、上に開示した分子を製剤に使用する場合、こうした製剤は、他の成分も含有することができる。これらの成分として、限定されないが、（これは、非排他的且つ非相互排他的リストである）湿潤剤、展着剤、粘着剤、浸透剤、緩衝剤、金属イオン封鎖剤、ドリフト制御添加剤、適合性薬剤、消泡剤、洗浄剤及び乳化剤が挙げられる。いくつかの成分を以降に記載する。
【０１２４】
湿潤剤は、液体に添加されると、液体と、それが展着される表面との間の界面張力を低減することにより、液体の展着又は浸透力を高める物質である。湿潤剤は、農業化学製剤の２つの主要な機能：処理及び製造工程中、水による粉末の湿潤速度を高めて、可溶性液体のための濃縮物又は懸濁剤を製造し；スプレータンク中で水と製品の混合工程中、水和剤の湿潤時間を短縮して、水分散性顆粒への水の浸透を改善するために使用される。水和剤、懸濁剤及び水分散性顆粒製剤に使用される湿潤剤の例は、ラウリル硫酸ナトリウム；ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム；アルキルフェノールエトキシレート；及び脂肪族アルコールエトキシレートである。
【０１２５】
分散剤は、粒子の表面に吸着して、粒子の分散状態を保存することを促進すると共に、粒子が再凝集することを防ぐ物質である。分散剤は、製造工程中の分散及び懸濁を促進するため、且つスプレータンク内の水中に粒子を確実に再分散させるために農薬製剤に添加される。分散剤は、水和剤、懸濁剤及び水分散性顆粒剤に広く使用されている。分散剤として使用される界面活性剤は、粒子表面に強力に吸着して、粒子の再凝集に対する荷電又は立体障害をもたらす能力がある。最も一般的に使用される界面活性剤は、陰イオン、非イオン又はこれら２種類の混合物である。水和剤の場合、最も一般的な分散剤は、リグノスルホン酸ナトリウムである。懸濁剤の場合、高分子電解質、例えばナトリウムナフタレンスルホン酸ホルムアルデヒド縮合物を使用して、非常に優れた吸着及び安定化が達成される。トリスチリルフェノールエトキシレートリン酸エステルも使用される。アルキルアリールエチレンオキシド縮合物及びＥＯ−ＰＯブロックコポリマーなどの非イオン界面活性剤は、懸濁剤濃縮物として陰イオン界面活性剤と組み合わせる場合もある。近年、新たなタイプの非常に高分子量のポリマー界面活性剤が分散剤として開発されている。これらは、非常に長い疎水性「骨格」と、「コーム」界面活性剤の「歯」を形成する多数のエチレンオキシド鎖を有する。これらの高分子量ポリマーは、疎水性骨格が、粒子表面に多くの固定点を有することから、懸濁剤に対して非常に良好な長期安定性を付与することができる。農薬製剤に使用される分散剤の例は、リグノスルホン酸ナトリウム；ナトリウムナフタレンスルホン酸ホルムアルデヒド縮合物；トリスチリルフェノールエトキシレートリン酸エステル；脂肪族アルコールエトキシレート；アルキルエトキシレート；ＥＯ−ＰＯ（エチレンオキシド−プロピレンオキシド）ブロックコポリマー；及びグラフトコポリマーである。
【０１２６】
乳化剤は、別の液相中の１つの液相の液滴の懸濁を安定化させる物質である。乳化剤がなければ、２つの液体は、２つの非混和性液相中に分離するであろう。最も一般的に使用される乳化剤ブレンドは、１２以上のエチレンオキシド単位を有するアルキルフェノール又は脂肪族アルコールと、ドデシルベンゼンスルホン酸の油溶性カルシウム塩を含有する。８から１８までの親水性−親油性バランス（「ＨＬＢ」）値の範囲が、通常、優れた安定エマルジョンを提供する。エマルジョンの安定性は、時として、少量のＥＯ−ＰＯブロックコポリマー界面活性剤の添加により改善することができる。
【０１２７】
可溶化剤は、臨界ミセル濃度を超える濃度のミセル水溶液を形成する界面活性剤である。そのため、ミセルは、ミセルの疎水性部分内で水不溶性材料を溶解又は可溶化させることができる。可溶化のために通常使用される界面活性剤のタイプは、非イオン界面活性剤、ソルビタンモノオレート、ソルビタンモノオレートエトキシレート及びオレイン酸メチルエステルである。
【０１２８】
標的に対する農薬の生物学的性能を改善するために、界面活性剤が、単独で又はスプレータンクミックスへの補助剤としての鉱油若しくは植物油などの他の添加剤と一緒に使用される場合もある。バイオエンハンスメントのために使用される界面活性剤のタイプは、一般に、農薬の性質及び作用モードに応じて変わる。しかし、これらは、多くの場合、アルキルエトキシレート；直鎖脂肪族アルコールエトキシレート；脂肪族アミンエトキシレートといった非イオン界面活性剤である。
【０１２９】
農薬製剤中の担体又は希釈剤は、必要な強度の製剤を提供するために農薬に添加される材料である。担体は、通常、高い吸収力を備える材料であるのに対し、希釈剤は、通常、低い吸収力を備える材料である。担体及び希釈剤は、粉剤、水和剤、顆粒及び水分散性顆粒の製剤に使用される。
【０１３０】
有機溶媒は、主として、乳剤、水中油形エマルジョン、サスポエマルション及び極少量製剤、また程度は低いが顆粒剤の製剤に使用される。溶媒の混合物が使用される場合もある。溶媒の第１主要グループは、ケロセン又は精製パラフィンなどの脂肪族パラフィン油である。第２の主要グループ（及び最も一般的）は、キシレン及びＣ９及びＣ１０芳香族溶媒のより高分子量の画分などの芳香族溶媒を含む。塩素化炭化水素は、製剤を水に乳化する場合に農薬の結晶化を防止するための共溶媒として有用である。溶解力を高めるための共溶媒として、アルコールが使用される場合もある。他の溶媒としては、植物油、種子油及び植物及び種子油のエステルが挙げられ得る。
【０１３１】
増粘剤又はゲル化剤は、主として、液体のレオロジー又は流動性を変化させるため、且つ分散した粒子又は液滴の分離及び沈殿を防止するために、懸濁剤、エマルジョン及びサスポエマルジョンの製剤に使用される。増粘剤、ゲル化剤及び沈殿防止剤は、概して２つのカテゴリー、即ち水不溶性粒子及び水溶性ポリマーに属する。粘土及びシリカを用いて、懸濁製剤を製造することが可能である。これらのタイプの材料の例として、限定されないが、モンモリロナイト粘土、ベントナイト、ケイ酸アルミニウムマグネシウム及びアタプルガイトが挙げられる。水溶性多糖が、増粘−ゲル化剤として長年使用されている。最も一般的に使用されている多糖のタイプは、種子及び海藻の天然抽出物であるか又はセルロースの合成誘導体である。これらのタイプの材料の例として、限定されないが、グアーガム；ローカストビーンガム；カラギーナン；アルギン酸塩；メチルセルロース；ナトリウムカルボキシメチルセルロース（ＳＣＭＣ）；ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）が挙げられる。他のタイプの沈殿防止剤は、加工デンプン、ポリアクリレート、ポリビニルアルコール及びポリエチレンオキシドを基材とする。別の優れた沈殿防止剤は、キサンタンガムである。
【０１３２】
微生物は、製剤化した製品の腐敗を引き起こし得る。そのため、微生物の作用を排除又は抑制するために、防腐剤が用いられる。こうした薬剤の例として、限定されないが、以下のものが挙げられる：プロピオン酸及びその塩；ソルビン酸及びそのナトリウム又はカリウム塩；安息香酸及びその塩；ｐ−ヒドロキシ安息香酸ナトリウム塩；ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル；並びに１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（ＢＩＴ）。
【０１３３】
界面活性剤の存在は、往々にして、生成及びスプレータンクからの適用での混合工程中に、水性製剤を泡立たせる。泡立つ傾向を軽減するために、生産段階中又は瓶詰め前に消泡剤を添加することが多い。一般に、２種類の消泡剤、即ちシリコーン及び非シリコーンがある。シリコーンは、通常、ジメチルポリシロキサンの水性エマルジョンであり、非シリコーン消泡剤は、水不溶性油、例えばオクタノール及びノナノール又はシリカである。いずれの場合にも、消泡剤の機能は、界面活性剤を空気−水界面から移すことである。
【０１３４】
「グリーン（Ｇｒｅｅｎ）剤」（例えば、助剤、界面活性剤、溶媒）は、作物保護製剤の環境フットプリント全体を低減することができる。グリーン剤は、生分解性であり、一般に、天然及び／又は持続可能な供給源、例えば植物及び動物源由来である。具体的な例は、植物油、種子油及びそれらのエステル、さらにはアルコキシル化アルキルフェノールポリグルコシドである。
【０１３５】
一部の例では、ＰＭＰをフリーズドライ又は凍結乾燥することができる。米国特許第４，３１１，７１２号明細書を参照されたい。ＰＭＰは、後に水又は別の液体と接触させて再構成することができる。凍結乾燥若しくは再構成したリポソームに、他の成分、例えば他の農薬用薬剤、農業的に許容可能な担体又は本明細書に記載の製剤に従う他の物質を添加することができる。
【０１３６】
本組成物の他の任意の特徴は、ＵＶ及び／又は酸性条件から有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を保護する担体又は送達ビヒクルを含む。一部の例では、送達ビヒクルは、ｐＨバッファーを含有する。一部の例では、組成物は、約４．５〜約９．０の範囲内のｐＨを有するように製剤化され、例えば約５．０〜約８．０、約６．５〜約７．５又は約６．５〜約７．０のいずれか１つのｐＨ範囲を含む。
【０１３７】
本組成物は、さらに、有害生物を本組成物の近傍に誘引する誘引物質（例えば、化学誘引物質）と一緒に製剤化され得る。誘引物質としては、フェロモン、動物、特に有害生物により分泌される化学物質又は同じ種の他の生物の挙動若しくは発生に影響を及ぼす化学誘引物質が挙げられる。他の誘引物質としては、砂糖及びタンパク質加水分解物シロップ、酵母及び腐肉が挙げられる。誘引物質は、有効成分と組み合わせて、処理領域内の葉全体又は他の品目に噴霧することもできる。有害生物の餌の探索、産卵又は交配場所若しくは交配相手といった有害生物の挙動に影響を与える多様な誘引物質が知られている。本明細書に記載される方法及び組成物に有用な誘引物質として、例えばオイゲノール、プロピオン酸フェネチル、カルボン酸エチルジメチルイソブチル−シクロプロパン、ベンゾジオキサンカルボン酸プロピル、シス−７，８−エポキシ−２−メチルオクタデカン、トランス−８，トランス−０−ドデカジエノール、シス−９−テトラデセナール（シス−１１−ヘキサデセナールを含む）、トランス−１１−テトラデセナール、シス−１１−ヘキサデセナール、（Ｚ）−１１，１２−ヘキサデカジエナール、酢酸シス−７−ドデセニル、酢酸シス−８−ドデセニル、酢酸シス−９−ドデセニル、酢酸シス−９−テトラデセニル、酢酸シス−１１−テトラデセニル、酢酸トランス−１１−テトラデセニル（シス−１１を含む）、酢酸シス−９，トランス−１１−テトラデセニル（シス−９，トランス−１２を含む）、酢酸シス−９，トランス−１２−テトラデセニル、酢酸シス−７，トランス−１１−ヘキサデカジエニル（シス−７，トランス−１１を含む）、酢酸シス−１３，シス−１３−オクタデカジエニル、酢酸トランス−３，シス−１３−オクタデカジエニル、アネトール及びサリチル酸イソアミルが挙げられる。
【０１３８】
農薬製剤に関するさらに詳細な情報については、以下を参照されたい：“Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｄ．Ａ．Ｋｎｏｗｌｅｓ，ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  １９９８  ｂｙ  Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ。また、以下も参照されたい：“Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ  ｉｎ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ−Ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ”ｂｙ  Ａ．Ｓ．Ｐｅｒｒｙ，Ｉ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｉ．Ｉｓｈａａｙａ，ａｎｄ  Ｒ．Ｐｅｒｒｙ，ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  １９９８  ｂｙ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ。
【０１３９】
ＩＩ．農業方法
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、様々な農業方法において、特に植物有害生物による寄生の予防又は抑制のために有用である。
【０１４０】
本方法は、本明細書に記載され、包含されるものなどの植物又は植物有害生物に、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達することを含む。本組成物及び関連方法を使用して、土壌中若しくは土壌上又は他の植物培地上の植物、植物部分（例えば、根、果実及び種子）に対する植物有害生物による寄生を予防するか又はその数を低減することができる。従って、本組成物及び方法は、例えば、有害生物を殺傷するか、障害するか若しくは活動を緩徐にすることにより、植物に対する植物有害生物の有害作用を低減することができ、これにより植物の適応度を増加することができる。植物有害生物として、例えば昆虫、線虫、軟体動物、細菌、真菌、卵菌、原生動物及び雑草が挙げられる（「植物有害生物」のセクションを参照されたい）。本発明の組成物を用いて、あらゆる発生段階、例えばそれらの卵、若虫、虫齢、幼虫、成虫、幼若体若しくは乾燥形態にある有害生物のいずれかを防除、殺傷、障害、麻痺させるか又はその１つ若しくは複数の活動を抑制することができる。本方法は、さらに、雑草を防除する上でも有用である。これらの方法の各々の詳細については、以下にさらに記載する。
【０１４１】
Ａ．植物への送達
本明細書には、本明細書に開示の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物に送達する方法が提供される。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物又はその部分と接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物に送達するための方法が含まれる。本方法は、例えば、植物有害生物の寄生を処理又は予防することにより、植物の適応度を増加する上で有用であり得る。
【０１４２】
従って、本方法を用いて、植物の適応度を増加することができる。一態様では、植物の適応度を増加する方法が本明細書に提供され、この方法は、非処理植物（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が送達されていない植物）と比較して、植物の適応度を増加するために、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を（例えば、有効量及び有効期間で）植物に送達することを含む。
【０１４３】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物送達の結果としての植物の適応度増加は、いくつかの様式で現れ得るが、例えばそれによって植物の良好な生産、例えば収量の改善、植物の活力又は植物から収穫される産物の質の改善がもたらされる。植物の収量改善は、同じ条件下で生産したが、本組成物を適用していない植物の同じ産物の収量又は従来の農薬の適用と比較して、測定可能な量による植物の産物の収量の増加（例えば、植物バイオマス、穀粒、種子若しくは果実収量、タンパク質含量、炭水化物若しくは油含量又は葉面積により測定されるような）に関する。例えば、収量は、少なくとも約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％若しくは約１００％超増加し得る。収量は、何らかの基準で、植物又は植物の産物の重量若しくは体積当たりの量に関して表すことができる。基準は、時間、栽培面積、生産された植物の重量又は使用した原材料の量に関して表すことができる。例えば、こうした方法は、限定されないが、種子、果汁、穀粒、実、塊茎、根及び葉をはじめとする植物組織の収量を増加し得る。
【０１４４】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物送達の結果としての植物の適応度の増加は、同じ条件下であるが、本組成物を投与していないか、又は従来の農薬を適用して生産された植物の同じ要因と比較して、測定可能な若しくは認識可能な量による、以下の項目の増加若しくは改善：活力評価、作物（単位面積当たりの植物の数）、植物の高さ、茎外周、茎長さ、葉の数、葉の大きさ、植物キャノピー、外観（より緑色の葉色など）、根評価、出芽、タンパク質含量、分げつの増加、より大きい葉、より多くの葉、枯れた根出葉の減少、より強い分げつ力、必要な肥料の減少、必要な種子の減少、より高生産性の分げつ、より早期の開花、早期の穀粒若しくは種子成熟、より少ない植物倒伏（ｖｅｒｓｅ）（倒伏）、新芽生育増加、早期の発芽又はこれらの任意の組合せなどの他の手段により測定することもできる。
【０１４５】
ｉ．有害生物処理
本明細書には、寄生を有する植物における有害生物寄生を低減する方法が含まれ、この方法は、寄生を、非処理植物における寄生に対して低減させるために、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を（例えば、有効量で及び有効期間）植物に送達することを含む。例えば、本方法は、非処理植物に対して、寄生を約１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％又は１００％超低減するのに有効であり得る。一部の例では、本方法は、非処理植物に対して、寄生を約２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、７５倍、１００倍又は１００倍超低減するのに有効である。一部の例では、本方法は、寄生を、非処理植物における寄生に対して実質的に排除する。代わりに、本方法は、植物寄生の進行を緩徐にするか、又は植物寄生に関連する症状の重症度を低減させ得る。本組成物は、対照と比較して、有害生物を例えば少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％以上低減（例えば、殺傷若しくは忌避）する上で十分であり得る。
【０１４６】
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、植物の成長を促進するのに有用であり得る。例えば、有害生物の適応度を低減させることにより、本明細書に提供される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、典型的に有害生物により被害を受ける植物の成長を促進する上で有効であり得る。これは、植物に対する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の直接適用を含む場合もあれば、含まない場合もある。例えば、一次有害生物生息場所が植物成長の領域と異なる例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を一次有害生物生息場所、目的の植物又は両方の組合せのいずれにも適用し得る。
【０１４７】
一部の例では、植物は、穀草類、穀類、マメ科植物、果実若しくは野菜作物等の農業食用作物又は非食用作物、例えば草、顕花植物、綿花、干し草、大麻であり得る。本明細書に記載する組成物は、穀草類、穀類、マメ科植物、果実、野菜又は他の作物の収穫前又は後の任意の時間に作物に送達することができる。作物収量は、作物植物に一般的に用いられる測定量であり、通常、１ヘクタール当たりのメートルトン（又は１ヘクタール当たりのキログラム）で測定される。作物収量は、植物からの実際の種子産生とも称することができる。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない作物）と比較して、作物収量の約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又はそれを超える増大（例えば、１ヘクタール当たりの穀草類、穀類、マメ科植物、果実若しくは野菜のメートルトンの増大及び／又は種子産生の増大）に有効であり得る。
【０１４８】
寄生の低減は、植物上若しくは周囲の有害生物の数の減少又は有害生物により直接又は間接的に引き起こされる植物の症状若しくは兆候の減少を指す。寄生の程度を処置後の任意の時点の植物で測定して、処置時又は処置前の症状と比較することができる。植物は、寄生の症状を示す場合も又は示さない場合もある。例えば、植物は、有害生物に寄生されている可能性があるが、まだ寄生の兆候、例えば過敏感反応（ＨＲ）を示していない。寄生された植物は、植物に対する病徴の観察により識別することができる。発現される病徴は、病害に応じて異なるが、一般に、症状としては、病変、膿疱、壊死、過敏感反応、立ち枯れ病、白化、防御関連遺伝子（例えば、ＳＡＲ遺伝子）の誘導などが挙げられる。
【０１４９】
当業者は、植物有害生物による植物寄生及び病害を決定するための方法が、試験対象の有害生物及び植物に応じて異なることを認識されるであろう。寄生又は関連症状は、寄生又は関連症状を識別する任意の手段により識別することができる。寄生又は関連症状を識別するために、様々な方法が利用可能である。一態様では、方法は、感染及び／若しくは症状の肉眼若しくは顕微鏡スクリーニング、定量的ＰＣＲ又は感染関連遺伝子（例えば、全身獲得抵抗性遺伝子、デフェンシン遺伝子など）の検出のためのマイクロアレイの使用を含み得る。植物の寄生を決定するための肉眼若しくは顕微鏡法は、当技術分野で公知であり、寄生に起因するか、又は病変、壊死、胞子、菌糸、真菌の菌糸体の増殖、立ち枯れ病、胴枯れ病、果実の斑点、腐敗、虫こぶ及び矮小病などの存在による植物組織に対する損傷の識別を含む。こうした症状は、寄生されていない植物又は感染植物の写真若しくはイラスト又はそれらの組合せと比較して、感染の存在若しくは病原体の正体又はその両方を決定することができる。病原体感染の症状の写真及びイラストは、当技術分野で広く入手可能であり、例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎ．５５１２１−２０９７から入手可能である。一部の例では、症状は、肉眼で又は指定倍率（例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍若しくは５０倍）により見ることができる。
【０１５０】
一部の例では、寄生又は関連症状は、植物の有害生物を同定する市販のテストキットを用いて、同定することができる。こうしたテストキットは、例えば、現地農業出張所又は協同組合から入手可能である。一部の例では、処理が必要な作物植物の特定は、病害発生を助長する天候及び環境条件の予測によって行う。一部の例では、植物病害の栽培地を探し出す専門家が、処理が必要な作物を特定する。
【０１５１】
一部の例では、寄生又は関連症状は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づく診断検査を用いて同定することができる。ＰＣＲ検査は、染色体ＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ又はリボソームＲＮＡを含め、有害生物に特異的なＤＮＡ若しくはＲＮＡ配列のＰＣＲ増幅を実施するために使用することができる。具体的な同定方法は、病原体に応じて異なり得る。
【０１５２】
有害生物寄生を有すると、植物を事前に決定することができる。代わりに、本方法は、寄生を有する植物を識別することも含む。従って、植物有害生物に寄生された植物（即ち寄生後）を識別し、寄生が処置されるような有効量の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物と寄生植物を接触させることにより植物有害生物寄生を処置する方法も提供される。寄生は、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。例えば、寄生は、肉眼で又は指定倍率（例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍若しくは５０倍）で見ることができる植物の病変の数を計数することにより測定することができる。他の例では、植物の与えられた面積又は植物周辺の面積にわたる有害生物の濃度を測定することによって作物寄生を測定することができる。
【０１５３】
ｉｉ．有害生物予防
本明細書には、植物（例えば、寄生のリスクがある植物）における植物寄生を予防する方法が含まれ、この方法は、非処理植物における寄生の可能性に対して寄生の可能性を低減させるために、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を（例えば、有効量及び有効期間で）植物に送達することを含む。例えば、本方法は、非処理植物に対して、寄生の可能性を約１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％又は１００％超低減させることができる。一部の例では、本方法は、非処理植物に対して、寄生の可能性を約２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、７５倍、１００倍又は１００倍超低減させることができる。有害生物が病害、関連症状を引き起こすことを予防若しくは低減するか又はその両方が可能である。
【０１５４】
本明細書に記載の方法及び組成物を使用して、植物に寄生する有害生物の適応度を低減させることにより、寄生発生のリスクがある植物における有害生物の寄生を低減又は予防することができる。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない作物）と比較して約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又はそれを超えて作物寄生を低減する（例えば、寄生された植物の数を低減させる、有害生物の個体群の大きさを減少させる、植物に対する損傷を低減させる）のに有効であり得る。他の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない作物）と比較して作物寄生の可能性を約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又はそれを超えて予防又は低減するのに有効であり得る。
【０１５５】
これらの予防方法は、植物有害生物により寄生されるリスクのある植物の寄生を予防するのに有用であり得る。例えば、植物は、植物有害生物に曝露されていないものであり得るが、植物は、有害生物が、植物に感染する可能性が高い状況、例えば有害生物最適天候条件下で感染のリスクにさらされ得る。植物リスクは、生息場所の雑草が除草剤で処理され、枯れた植物から生きている植物への病害交差が起こり得る生息場所に植物が位置する事例ではさらに増加し得る。一部の例では、処理が必要な作物植物の特定は、病害発生を助長する天候及び環境条件の予測によって行う。
【０１５６】
本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物による処理後、一定期間にわたって寄生を予防し得る。例えば、本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の適用後、数週間にわたって植物の寄生を予防し得る。例えば、病害は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物による処理後、少なくとも約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５日間予防され得る。一部の例では、病害は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の送達後、少なくとも約４０日間予防され得る。病害の予防は、任意の再現可能な測定方法により測定することができる。特定の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の送達後、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０日後に寄生を評価する。
【０１５７】
Ｂ．植物有害生物に対する送達
本明細書には、本明細書に開示の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物有害生物に送達する方法が提供される。有害生物を有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物と接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を有害生物に送達する方法が含まれる。本方法は、例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の送達の結果として有害生物寄生を予防又は処置するために、有害生物の適応度を低減させるのに有用であり得る。
【０１５８】
従って、本方法を用いて、有害生物の適応度を低減させることができる。一態様では、本明細書には、有害生物の適応度を低減させる方法が提供され、この方法は、非処理有害生物（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が送達されていない有害生物）と比較して有害生物の適応度を低減させるために、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を（例えば、有効量で及び有効期間）有害生物に送達することを含む。
【０１５９】
一態様では、本明細書には、真菌感染を有する植物における真菌感染を低減させる（例えば、処置する）方法が提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物に送達することを含む。
【０１６０】
別の態様では、本明細書には、真菌感染を有する植物における真菌感染を低減させる（例えば、処置する）方法が提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物に送達することを含み、複数のＰＭＰは、抗真菌剤を含む。一部の例では、抗真菌剤は、真菌感染を引き起こす真菌中の遺伝子（例えば、ｄｃｌ１及びｄｃｌ２（例えば、ｄｃｌ１／２）の発現を阻害する核酸である。一部の例では、真菌感染は、スクレロチニア属種（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）（例えば、スクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ））、ボトリチス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）（例えば、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ））、アスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）又はアオカビ属種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）に属する真菌に起因する。一部の例では、組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＥＶから産生されるＰＭＰを含む。一部の例では、本方法は、真菌感染を低減させるか又は実質的に排除する。
【０１６１】
別の態様では、細菌感染を有する植物における細菌感染を低減させる（例えば、処置する）方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物に送達することを含む。
【０１６２】
別の態様では、細菌感染を有する植物における細菌感染を低減させる（例えば、処置する）方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物に送達することを含み、複数のＰＭＰは、抗菌剤を含む。一部の例では、抗菌剤は、ストレプトマイシンである。一部の例では、細菌感染は、シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）に属する細菌（例えば、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）又は緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））に起因する。一部の例では、組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＥＶから産生されるＰＭＰを含む。一部の例では、本方法は、細菌感染を低減させるか又は実質的に排除する。一部の例では、抗菌剤は、ドキソルビシン又はバンコマイシンである。
【０１６３】
別の態様では、植物有害昆虫の適応度を低減させる方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物有害昆虫に送達することを含む。
【０１６４】
別の態様では、植物有害昆虫の適応度を低減させる方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物有害昆虫に送達することを含み、複数のＰＭＰは、殺虫剤を含む。一部の例では、殺虫剤は、ペプチド核酸である。一部の例では、植物有害昆虫は、アブラムシである。一部の例では、植物有害昆虫は、鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）（例えば、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ））である。一部の例では、本方法は、非処理植物有害昆虫に対して植物有害昆虫の適応度を低減させる。
【０１６５】
別の態様では、植物有害線虫の適応度を低減させる方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物有害線虫に送達することを含む。
【０１６６】
別の態様では、植物有害線虫の適応度を低減させる方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を植物有害線虫に送達することを含み、複数のＰＭＰは、殺線虫剤を含む。一部の例では、殺線虫剤は、神経ペプチド（例えば、Ｍｉ−ＮＬＰ−１５ｂ）である。一部の例では、植物有害線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である。一部の例では、本方法は、非処理植物有害線虫に対して植物有害線虫の適応度を低減させる。
【０１６７】
別の態様では、雑草の適応度を低減させる方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を雑草に送達することを含む。
【０１６８】
別の態様では、雑草の適応度を低減させる方法が本明細書に提供され、この方法は、複数のＰＭＰを含有する有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物のいずれか）を雑草に送達することを含み、複数のＰＭＰは、除草剤（例えば、ドキソルビシン又はグルホシネートＩを含む。一部の例では、雑草は、オヒシバ（Ｉｎｄｉａｎ  ｇｏｏｓｅｇｒａｓｓ）（オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａ））である。一部の例では、本方法は、非処理雑草に対して雑草の適応度を低減させる。
【０１６９】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物送達の結果としての有害生物の適応度低減は、いくつかの様式で現れ得る。一部の例では、有害生物の適応度の低減は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の送達の結果としての有害生物の生理の劣化又は低減（例えば、健康又は生存の低減）として現れ得る。一部の例では、生物の適応度は、限定はされないが、繁殖率、生殖能力、寿命、生存能力、移動性、繁殖力、有害生物成長、体重、代謝率若しくは活動又は生存を含む１つ以上のパラメータにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物との比較で測定され得る。例えば、本明細書に提供される方法又は組成物は、有害生物の全般的な健康を低減させるか又は有害生物の全生存を低減させるのに有効であり得る。一部の例では、有害生物の生存の減少は、参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物で見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超高い。一部の例では、本方法及び組成物は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物に対して有害生物の繁殖（例えば、繁殖率、生殖能力）を減少させるのに有効である。一部の例では、本方法及び組成物は、移動性、体重、寿命、生殖能力又は代謝率などの他の生理学的パラメータを参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物で見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超減少させるのに有効である。
【０１７０】
一部の例では、有害生物適応度の低減は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない有害生物と比較した有害生物内の１つ以上の栄養素（例えば、ビタミン、炭水化物、アミノ酸又はポリペプチド）の産生の低減として現れ得る。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、有害生物における栄養素（例えば、ビタミン、炭水化物、アミノ酸又はポリペプチド）の産生量を参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物で見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超低減させるのに有効であり得る。
【０１７１】
一部の例では、有害生物適応度の低減は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物と比較した、農薬用薬剤に対する有害生物の感受性の上昇及び／又は農薬用薬剤に対する有害生物の抵抗性の減少として現れ得る。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、農薬用薬剤に対する有害生物の感度を参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物で見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超上昇させるのに有効であり得る。農薬用薬剤は、殺虫性薬剤を含め、当技術分野において公知の任意の農薬用薬剤であり得る。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない有害生物に対して、農薬用薬剤を利用可能な基質に代謝又は分解する有害生物の能力を低減させることにより、農薬用薬剤に対する有害生物の感受性を高めることができる。
【０１７２】
一部の例では、有害生物適応度の低減は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物と比較した、アレロケミカル薬剤に対する有害生物の感受性の増加及び／又はアレロケミカル薬剤に対する有害生物の抵抗性の低減として現れ得る。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、アレロケミカル薬剤に対する有害生物の抵抗性を参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物で見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超低減させるのに有効であり得る。一部の例では、アレロケミカル薬剤は、カフェイン、大豆シスタチン、フェニトロチオン、モノテルペン類、ジテルペン酸又はフェノール化合物（例えば、タンニン、フラボノイド）である。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物に対して、有害生物のアレロケミカル薬剤を利用可能な基質に代謝又は分解する能力を低減させることにより、アレロケミカル薬剤に対する有害生物の感受性を増加させることができる。
【０１７３】
一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物に対して、寄生虫又は病原体（例えば、真菌性、細菌性又はウイルス性病原体又は寄生虫）に対する有害生物の抵抗性を低減させるのに有効であり得る。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、病原体又は寄生虫（例えば、真菌性、細菌性又はウイルス性病原体；又は寄生ダニ）に対する有害生物の抵抗性を参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物で見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超低減させるのに有効であり得る。
【０１７４】
一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が投与されていない有害生物に対して、植物病原体（例えば、植物ウイルス（例えば、ＴＹＬＣＶ）又は植物細菌（例えば、アグロバクテリウム属種（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ）））を担持又は伝播する有害生物の能力を低減させるのに有効であり得る。例えば、本明細書に提供される方法又は組成物は、植物病原体（例えば、植物ウイルス（例えば、ＴＹＬＣＶ）又は植物細菌（例えば、アグロバクテリウム属種（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ）））を担持又は伝播する有害生物の能力を、参照レベル（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の投与を受けない有害生物に見られるレベル）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１００％超低減させるのに有効であり得る。
【０１７５】
上記に加えて又はその代わり、ＰＭＰ若しくはその組成物に除草剤が含まれる場合、本方法はさらに、雑草の適応度を低減させるか又は雑草を枯れさせるために使用することもできる。こうした例では、本方法は、雑草の適応度を非処理雑草（例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない雑草）と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又はそれを超えて低減させるのに有効であり得る。例えば、本方法は、雑草を枯れさせる上で有効であり、これにより非処理雑草と比べて約２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又はそれを超えて雑草の個体群を減少させ得る。一部の例では、本方法は、雑草を実質的に排除する。本方法に従って処理することができる雑草の例については、本明細書にさらに記載する。
【０１７６】
一部の例では、有害生物適応度の低減は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与されていない有害生物と比較した、特定の環境因子に対する耐性（例えば、高温若しくは低温耐性）の低減、特定の生息場所で生き延びる能力の低減又は特定の食餌を持続する能力の低減など、他の適応上の不利点として現れ得る。一部の例では、本明細書に提供される方法又は組成物は、本明細書に記載される任意の複数の方法で有害生物適応度を低減させるのに有効であり得る。さらに、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、任意の数の有害生物綱、目、科、属又は種（例えば、１つの有害生物種、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２００、２５０、５００若しくはそれを超える有害生物種）における有害生物適応度を低減させることができる。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、単一の有害生物綱、目、科、属又は種に作用する。
【０１７７】
有害生物適応度は、当技術分野における任意の標準方法を用いて判定され得る。一部の例では、有害生物適応度は、個々の有害生物を評価することにより判定され得る。代わりに、有害生物適応度は、有害生物個体群を評価することにより判定され得る。例えば、有害生物適応度の低減は、他の昆虫との競合の成功の低減として現れ、それが有害生物個体群サイズの減少につながり得る。
【０１７８】
Ｃ．適用方法
組成物の有害生物への送達又は投与を可能にする任意の好適な方法で、本明細書に記載の有害生物を本明細書に記載の組成物のいずれかに曝露することができる。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、単独で又は他の活性物質（例えば、農薬用薬剤）若しくは非活性物質と組み合わせてのいずれでも送達され得、例えば有効濃度の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達するように製剤化された濃縮液、ゲル、溶液、懸濁液、散布液、粉末、ペレット、ブリケット、ブリックなどの形態で、例えば噴霧、インジェクション（マイクロインジェクション）、植物経由、注入、浸漬によって適用され得る。本明細書に記載される組成物の適用量及び適用部位は、概して、有害生物の習性、有害生物を有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物によりターゲティングすることができる生活環ステージであるか、適用が行われる部位並びに有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の物理的及び機能的特性によって決定される。本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、有害生物に経口摂取によって投与され得るが、クチクラを通じた浸透又は有害生物の呼吸器系への浸透を可能にする手段によっても投与され得る。
【０１７９】
一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を含む溶液に、有害生物を単純に「浸漬」するか又は有害生物に溶液を「噴霧」することができる。代わりに、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を有害生物の飼料成分（例えば、摂食可能物）に連結して送達を容易にし、且つ／又は有害生物による有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の取込みを増大することもできる。経口導入方法には、例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を有害生物の飼料と直接混合すること、有害生物の生息場所又は畑に有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を噴霧すること並びに飼料として使用される種が有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を発現するように改変した後、次に影響を与えようとする有害生物に給餌する操作手法が含まれる。一部の例では、例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、有害生物の食餌中に配合するか又は食餌の上にかけることができる。例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、有害生物が生息する作物畑の上に噴霧することができる。
【０１８０】
一部の例では、本組成物は、例えば、背負式散布、空中散布、作物散布／散粉等により、植物、例えば作物の上に直接噴霧される。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が植物に送達される例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を投与される植物は、いずれの植物成長段階でもあり得る。例えば、製剤化された有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、植物成長初期に種子コーティング又は経根処理として又は作物サイクル後期に植物全体の処理として適用することができる。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、局所薬剤として植物に適用され得、これにより、有害生物がその植物を摂取するか、又はそうでなければその植物との相互作用時に植物と接触するようにする。
【０１８１】
さらに、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、植物又は有害動物の組織を通じて吸収され、分布する浸透性薬剤として（例えば、植物が成長する土壌中又は植物の水やりに使用される水中に）適用され得、これにより、それを餌にする有害生物が有効用量の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を摂取するようにする。一部の例では、植物又は飼料生物は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を発現するように遺伝的に形質転換され得、これにより、その植物又は飼料生物を餌にする有害生物が有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を摂取するようにする。
【０１８２】
遅延放出又は継続的放出も、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物又は有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を含む組成物をゼラチンなどの溶解性又は生体内分解性コーティング層で被覆することにより、このコーティングが使用環境内で溶解又は分解し、次に有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物が利用可能になることで達成することができるか、又は薬剤を溶解性又は分解性マトリックス中に分散させることにより達成できる。有利には、こうした継続的放出及び／又は分注手段装置を使用して、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の１つ以上の有効濃度を特定の有害生物生息場所において常に維持することができる。
【０１８３】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、有害生物が成長、生活、繁殖、摂餌又は寄生する媒体に配合することもできる。例えば、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、飼料容器、餌場、保護用ラッピング材又は巣箱に配合することができる。いくつかの適用の場合、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、粉末形態での適用又はトラップ若しくは餌場への適用のための固体支持体に結合し得る。例として、組成物が特定の有害生物のためのトラップにおいて又はベイトとして使用される適用の場合にも、組成物を固体支持体に結合するか又は時限放出材料に封入し得る。例えば、本明細書に記載の組成物は、農業有害生物（例えば、アブラムシ）が成長、生活、繁殖又は摂餌する少なくとも１つの生息場所に組成物を送達することにより投与され得る。
【０１８４】
農薬は、多くの場合、野外適用の場合、１ヘクタール当たりの農薬の量（ｇ／ｈａ若しくはｋｇ／ｈａ）又は１ヘクタール当たりの有効成分若しくは酸同等物の量（ｋｇ  ａ．ｉ．／ｈａ若しくはａ．ｉ．／ｈａ）として推奨される。一部の例では、組成物中にＰＭＰを含まない農薬を適用した場合と同じ結果を達成するために、本組成物中では、より少ない量の農薬が土壌、植物培地、種子植物組織又は植物に適用されることが必要とされ得る。例えば、農薬用薬剤の量は、非ＰＭＰ組成物中に適用される同じ農薬用薬剤、例えば同じ農薬用薬剤の直接適用より約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、５０若しくは１００倍（又は約２から約１００倍までの任意の範囲、例えば約２〜１０倍；約５〜１５倍、約１０〜２０倍；約１０〜５０倍）低いレベルで適用され得る。本発明の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、１ヘクタール当たりの様々な量で、例えば約０．０００１、０．００１、０．００５、０．０１、０．１、１、２、１０、１００、１，０００、２，０００、５，０００（又は約０．０００１〜５，０００の任意の範囲）ｋｇ／ｈａで適用することができる。例えば、約０．０００１〜約０．０１、約０．０１〜約１０、約１０〜約１，０００、約１，０００〜約５，０００ｋｇ／ｈａである。
【０１８５】
ＩＩＩ．植物
多様な植物に本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達するか又はそうした植物をそれで処理することができる。本方法に従って害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達する（即ち「処理する」）ことができる植物として、全植物及びそれらの部分があり、そうした部分として、限定されないが、新芽植物器官／構造（例えば、葉、茎及び塊茎）、根、花及び花器／構造（例えば、包葉、萼片、花弁、雄蕊、心皮、葯及び胚珠）、種子（胚、胚乳、子葉及び種皮を含む）並びに果実（成熟した子房）、植物組織（例えば、維管束組織、基本組織など）並びに細胞（例えば、孔辺細胞、卵細胞など）並びにこれらの子孫が挙げられる。植物部分は、さらに、新芽、根、茎、種子、托葉、葉、花弁、花、胚珠、包葉、枝、葉柄、節間板、樹皮、軟毛、分げつ、根茎、葉状体、葉身、花粉、雄蕊などの植物部分も示し得る。
【０１８６】
本明細書に開示される方法で処理することができる植物の種類は、高等及び下等植物の種類を含み、こうした植物として、被子植物（単子葉及び双子葉植物）、裸子植物、シダ、トクサ、裸茎植物（ｐｓｉｌｏｐｈｙｔｅｓ）、ヒカゲノカズラ（ｌｙｃｏｐｈｙｔｅ）、コケ類及び藻類（例えば、多細胞若しくは単細胞藻類）が挙げられる。本方法に従って処理することができる植物は、さらに、あらゆる維管束植物、例えば単子葉若しくは双子葉又は裸子植物を含み、こうしたものとして、限定されないが、アルファルファ、リンゴ、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、バナナ、オオムギ、カノーラ、トウゴマ、キク、クローバー、カカオ、コーヒー、綿、綿実、トウモロコシ、クランベ、クランベリー、キュウリ、デンドロビウム、ヤマイモ、ユーカリ属、ウシノケグサ、亜麻、グラジオラス、ユリ科、亜麻仁、キビ、マスクメロン、カラシ、オーツムギ、アブラヤシ、アブラナ、パパイヤ、ピーナッツ、パイナップル、観賞植物、インゲンマメ、ジャガイモ、ナタネ、コメ、ライムギ、ライグラス、ベニバナ、ゴマ、モロコシ、ダイズ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、イチゴ、タバコ、トマト、芝草、コムギ並びにレタス、セロリ、ブロッコリー、カリフラワー、ウリ科植物などの野菜作物；リンゴ、ナシ、モモ、オレンジ、グレープフルーツ、レモン、ライム、アーモンド、ペカン、クルミ、ヘーゼルなどの果実及び堅果樹；ブドウ（例えば、ブドウ園）、キウイ、ホップなどのブドウ；ラズベリー、ブラックベリー、セイヨウスグリなどの果実低木及びキイチゴ；セイヨウトネリコ、マツ、モミ、カエデ、オーク、クルミ、ポプラなどの森林樹；さらにはアルファルファ、カノーラ、トウゴマ、トウモロコシ、綿、クランベ、亜麻、亜麻仁、カラシ、アブラヤシ、アブラナ、ピーナッツ、ジャガイモ、コメ、ベニバナ、ゴマ、ダイズ、テンサイ、ヒマワリ、タバコ、トマト及びコムギが挙げられる。本発明の方法に従って処理することができる植物は、あらゆる作物植物、例えば飼料作物、油料種子作物、穀類作物、果実作物、野菜作物、繊維作物、香辛料作物、堅果作物、芝作物、砂糖作物、飲料作物及び森林作物が挙げられる。特定の例では、本方法で処理される作物植物は、ダイズ植物である。他の特定の例では、作物植物は、コムギである。特定の例では、作物植物は、トウモロコシである。特定の例では、作物植物は、綿である。特定の例では、作物植物は、アルファルファである。特定の例では、作物植物は、テンサイである。特定の例では、作物植物は、コメである。特定の例では、作物植物は、ジャガイモである。特定の例では、作物植物は、トマトである。
【０１８７】
特定の例では、植物は、穀類である。こうした穀類植物の例として、限定されないが、単子葉又は双子葉植物があり、こうしたものとして、限定されないが、カエデ属種（Ａｃｅｒ  ｓｐｐ．）、ネギ属種（Ａｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、アマランサス属種（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｓｐｐ．）、パイナップル（Ａｎａｎａｓ  ｃｏｍｏｓｕｓ）、セロリ（Ａｐｉｕｍ  ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）、ラッカセイ属種（Ａｒａｃｈｉｓ  ｓｐｐ）、アスパラガス（Ａｓｐａｒａｇｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ビート（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、アブラナ属種（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｓｐｐ．）（例えば、セイヨウアブラナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）、ブラッシカ・ラパ種（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｒａｐａ  ｓｓｐ．）（カノーラ、ナタネ、アブラナ（ｔｕｒｎｉｐ  ｒａｐｅ））、カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、カンナ・インディカ（Ｃａｎｎａ  ｉｎｄｉｃａ）、大麻サライバ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｌｉｖａ）、トウガラシ属種（Ｃａｐｓｉｃｕｍ  ｓｐｐ．）、クリ属種（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｓｐｐ．）、エンダイブ（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｅｎｄｉｖｉａ）、シトルラス・ラナタス（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）、シトラス属種（Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｐｐ．）、ココス属種（Ｃｏｃｏｓ  ｓｐｐ．）、コフィア属種（Ｃｏｆｆｅａ  ｓｐｐ．）、コリアンドラム・サティヴァム（Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）、コリラス属種（Ｃｏｒｙｌｕｓ  ｓｐｐ．）、クラタエグス属種（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｓｐｐ．）、ククルビタ属種（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ  ｓｐｐ．）、ククミス属種（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｓｐｐ．）、ダウクス・カロタ（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、ファグス属種（Ｆａｇｕｓ  ｓｐｐ．）、フィクス・カリカ（Ｆｉｃｕｓ  ｃａｒｉｃａ）、フラガリア属種（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ギンクゴ・ビロバ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）、グリシン属種（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｓｐｐ．）（例えば、グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）、ソーヤ・ヒスピダ（Ｓｏｊａ  ｈｉｓｐｉｄａ）若しくはソーヤ・マックス（Ｓｏｊａ  ｍａｘ））、ゴシピウム・ヒルスツム（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、ヘリアンタス属種（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ｓｐｐ．）（例えば、ヘリアンタス・アンヌス（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ））、ハイビスカス属種（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  ｓｐｐ．）、ホルデウム属種（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｓｐｐ．）（例えば、ホルデウム・ウルガレ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ））、イポメア・バタタス（Ｉｐｏｍｏｅａ  ｂａｔａｔａｓ）、ジュグランス属種（Ｊｕｇｌａｎｓ  ｓｐｐ．）、ラクツカ・サティバ（Ｌａｃｔｕｃａ  ｓａｔｉｖａ）、リナム・ウシタチシム（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）、リッチ・チネンシス（Ｌｉｔｃｈｉ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、ロータス属種（Ｌｏｔｕｓ  ｓｐｐ．）、ルッファ・アクタングラ（Ｌｕｆｆａ  ａｃｕｔａｎｇｕｌａ）、ルピナス属種（Ｌｕｐｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）、リコペルシコン属種（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｓｐｐ．）（例えば、リコペルシコン・エスクレンタム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｒｎ）、リコペルシ��ン・リコペルシカム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）、リコペルシコン・ピリフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｙｒｉｆｏｒｍｅ））、マルス属種（Ｍａｌｕｓ  ｓｐｐ．）、メディカゴ・サティバ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ  ｓａｔｉｖａ）、メンタ属種（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｐ．）、ミスカンサス・シネンシス（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、モルス・ニグラ（Ｍｏｒｕｓ  ｎｉｇｒａ）、ムサ属種（Ｍｕｓａ  ｓｐｐ．）、ニコチアナ属種（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｓｐｐ．）、オレア属種（Ｏｌｅａ  ｓｐｐ．）、オリザ属種（Ｏｒｙｚａ  ｓｐｐ．）（例えば、オリザ・サティバ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）、オリザ・ラチフォリア（Ｏｒｙｚａ  ｌａｔｉｆｏｌｉａ））、パニカム・ミリアセウム（Ｐａｎｉｃｕｍ  ｍｉｌｉａｃｅｕｍ）、パニカム・ヴィルガツム（Ｐａｎｉｃｕｍ  ｖｉｒｇａｔｕｍ）、パッシフロラ・エドゥリス（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ  ｅｄｕｌｉｓ）、ペトローズリヌム・クリスプム（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ）、ファセオルス属種（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ピヌス属種（Ｐｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）、ピスタシア・ヴェラ（Ｐｉｓｔａｃｉａ  ｖｅｒａ）、ピスム属種（Ｐｉｓｕｍ  ｓｐｐ．）、ポア属種（Ｐｏａ  ｓｐｐ．）、ポプルス属種（Ｐｏｐｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）、プルヌス属種（Ｐｒｕｎｕｓ  ｓｐｐ．）、ピルス・コムニス（Ｐｙｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、ケルクス属種（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ｓｐｐ．）、ラファヌス・サティバス（Ｒａｐｈａｎｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ）、レウム・ラバルバルム（Ｒｈｅｕｍ  ｒｈａｂａｒｂａｒｕｍ）、リベス属種（Ｒｉｂｅｓ  ｓｐｐ．）、リシナス・コムニス（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、ルブス属種（Ｒｕｂｕｓ  ｓｐｐ．）、サッカルム属種（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ  ｓｐｐ．）、サリクス属種（Ｓａｌｉｘ  ｓｐ．）、サンブクス属種（Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｓｐｐ．）、セカレ・セレアレ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）、セサマム属種（Ｓｅｓａｍｕｍ  ｓｐｐ．）、シナピス属種（Ｓｉｎａｐｉｓ  ｓｐｐ．）、ソラナム属種（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｓｐｐ．）（例えば、ソラナム・トゥーベロースム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、ソラナム・インテグリフォリウム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉｕｍ）又はソラナム・リコペルシコン（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ））、ソルガム・バイカラー（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｂｉｃｏｌｏｒ）、ソルガム・ハレペンス（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｅ）、スピナシア属種（Ｓｐｉｎａｃｉａ  ｓｐｐ．）、タマリンヅス・インディカ（Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ  ｉｎｄｉｃａ）、テオブロマ・カカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａｃａｏ）、トリフォリウム属種（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、トリチコセケル・リンパウイ（Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ  ｒｉｍｐａｕｉ）、トリチカム属種（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｓｐｐ．）（例えば、トリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、トリチカム・デュラム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｄｕｒｕｍ）、トリチカム・ツルギダム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｔｕｒｇｉｄｕｍ）、トリチカム・ハイベルナム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｈｙｂｅｒ���ｕｍ）、トリチカム・マチャ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｍａｃｈａ）、トリチカム・サティヴァム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）若しくはトリチカム・バルガレ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ））、バクシニウム属種（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ビキア属種（Ｖｉｃｉａ  ｓｐｐ．）、ビグナ属種（Ｖｉｇｎａ  ｓｐｐ．）、ビオラ・オドラータ（Ｖｉｏｌａ  ｏｄｏｒａｔａ）、ビチス属種（Ｖｉｔｉｓ  ｓｐｐ．）及びゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）から選択される飼料若しくはマメ科牧草、観賞植物、食用作物、樹木又は低木が挙げられる。特定の実施形態では、作物植物は、コメ、アブラナ、カノーラ、ダイズ、トウモロコシ（ｃｏｒｎ）（トウモロコシ（ｍａｉｚｅ））、綿、サトウキビ、アルファルファ、モロコシ又はコムギである。
【０１８８】
特定の例では、本組成物及び方法を使用して、収穫後の植物若しくは植物部分又は飼料製品を処理することができる。一部の例では、食料又は飼料製品は、非植物食料又は飼料製品（例えば、ヒト、動物又は家畜が摂食可能な製品（例えば、キノコ））である。
【０１８９】
本発明で使用される植物又は部分は、あらゆる植物発生段階の植物を含む。特定の例では、送達は、発芽、苗木成長、栄養成長及び生殖成長の段階で行う。特定の例では、植物への送達は、栄養成長及び生殖成長段階で行うことができる。代わりに、送達は、種子に行うことができる。栄養成長及び生殖成長の段階は、本明細書において「成体」又は「成熟」植物とも呼ばれる。
【０１９０】
ＩＶ．有害生物
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、植物有害生物の適応度を低減させ、それにより植物における有害生物寄生を処置又は予防するのに有用である。「有害生物」は、無脊椎動物、例えば昆虫、線虫若しくは軟体動物；細菌、真菌若しくはウイルスなどの微生物（例えば、植物病原体、内生植物、偏性寄生生物、条件的寄生生物若しくは条件的腐生菌）又は雑草を指す。こうした有害生物は、植物又は他の生物に損傷を引き起こし、それらが望まれない場所に存在するか、又はそうでなければヒトの農業方法若しくは産物に影響を及ぼすことにより、ヒトに対して有害である。
【０１９１】
本組成物又は関連方法で処理することができる植物有害生物の例を本明細書にさらに詳細に記載する。
【０１９２】
Ａ．真菌
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、真菌の適応度を低減させる、例えば植物への真菌感染を予防又は処置する上で有用であり得る。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を真菌と接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を真菌に送達する方法が含まれる。加えて又は代わりに、本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物と接触させることにより、真菌感染のリスクがあるか、又は真菌感染を有する植物に有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達することを含む。
【０１９３】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、植物に、以下に挙げる真菌性病害を引き起こす真菌への送達に好適である：
例えば、以下のようなうどんこ病（ｐｏｗｄｅｒｙ  ｍｉｌｄｅｗ）病原体に起因する病害：ブルメリア属（Ｂｌｕｍｅｒｉａ）種、例えばブルメリア・グラミニス（Ｂｌｕｍｅｒｉａ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）；ポドスファエラ属（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ）種、例えばポドスファエラ・レウコトリカ（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ  ｌｅｕｃｏｔｒｉｃｈａ）；スファエロテカ属（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ）種、例えばスファエロテカ・フリギネア（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ  ｆｕｌｉｇｉｎｅａ）；ウンシヌラ属（Ｕｎｃｉｎｕｌａ）種、例えばウンシヌラ・ネカトル（Ｕｎｃｉｎｕｌａ  ｎｅｃａｔｏｒ）；
例えば、以下のようなさび病（ｒｕｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）病原体に起因する病害：ギムノスポランギウム属（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）種、例えばギムノスポランギウム・サビナエ（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓａｂｉｎａｅ）；ヘミレイア属（Ｈｅｍｉｌｅｉａ）種、例えばヘミレイア・バスタトリクス（Ｈｅｍｉｌｅｉａ  ｖａｓｔａｔｒｉｘ）；ファコプソラ属（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ）種、例えばファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）及びファコプソラ・メイボミアエ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｍｅｉｂｏｍｉａｅ）；プッシニア属（Ｐｕｃｃｉｎｉａ）種、例えばプッシニア・レコンジタ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｒｅｃｏｎｄｉｔａ）、Ｐ．トリシチナ（Ｐ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）、Ｐ．グラミニス（Ｐ．ｇｒａｍｉｎｉｓ）又はＰ．ストリフォルミス（Ｐ．ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）若しくはＰ．ホルデイ（Ｐ．ｈｏｒｄｅｉ）；ウロミセス属（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ）種）、例えばウロミセス・アペンジクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）；
例えば、以下のような卵菌類（Ｏｏｍｙｃｅｔｅｓ）の群に属する病原体に起因する病害：アルブゴ属（Ａｌｂｕｇｏ）種、例えばアルグゴ・カンジダ（Ａｌｇｕｂｏ  ｃａｎｄｉｄａ；ブレミア属（Ｂｒｅｍｉａ）種、例えばブレミア・ラクツカエ（Ｂｒｅｍｉａ  ｌａｃｔｕｃａｅ）；ペロノスポラ属（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）種、例えばペロノスポラ・ピシ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｐｉｓｉ）、Ｐ．パラシチカ（Ｐ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）又はＰ．ブラシカエ（Ｐ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ）；フィトフトラ属（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）種、例えばフィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）；プラスモパラ属（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ）種、例えばプラスモパラ・ビチコラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ  ｖｉｔｉｃｏｌａ）；プセウドペロノスポラ属（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）種、例えばプセウドペロノスポラ・フムリ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｈｕｍｕｌｉ）又はプセウドペロノスポラ・クベンシス（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ）；ピシウム属（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種、例えばピシウム・ウルチムム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）；
例えば以下のものに起因する斑点病（ｌｅａｆ  ｂｌｏｔｃｈ  ｄｉｓｅａｓｅ）及び萎凋病（ｌｅａｆ  ｗｉｌｔ）：アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、例えばアルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｏｌａｎｉ）；セルコスポラ属（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ）種、例えばセルコスポラ・ベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｂｅｔｉｃｏｌａ）；クラジオスポルム属（Ｃｌａｄｉｏｓｐｏｒｕｍ）種、例えばクラジオスポリウム・ククメリヌム（Ｃｌａｄｉｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ）；コクリオボルス属（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ）種、例えばコクリオボルス・サチブス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ）（分生子形態：ドレクスレラ属（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ）、同義：ヘルミントスポリウム属（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ））、コクリオボルス・ミヤベアヌス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ  ｍｉｙａｂｅａｎｕｓ）；コレトトリクム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ）種、例えばコレトトリクム・リンデムタニウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｌｉｎｄｅｍｕｔｈａｎｉｕｍ）；シクロコニウム属（Ｃｙｃｌｏｃｏｎｉｕｍ）種、例えばシクロコニウム・オレアギヌム（Ｃｙｃｌｏｃｏｎｉｕｍ  ｏｌｅａｇｉｎｕｍ）；ジアポルテ属（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）種、例えばジアポルテ・シトリ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ  ｃｉｔｒｉ）；エルシノエ属（Ｅｌｓｉｎｏｅ）種、例えばエルシノエ・ファウセッチイ（Ｅｌｓｉｎｏｅ  ｆａｗｃｅｔｔｉｉ）；グロエオスポリウム属（Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ）種、例えばグロエオスポリウム・ラエチコロル（Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌａｅｔｉｃｏｌｏｒ）；グロメレラ属（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ）種、例えばグロメレラ・シングラタ（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ  ｃｉｎｇｕｌａｔａ）；グイグナルジア属（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ）種、例えばグイグナルジア・ビドウェリ（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ  ｂｉｄｗｅｌｌｉ）；レプトスファエリア属（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ）種、例えばレプトスファエリア・マクランス（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｍａｃｕｌａｎｓ）、レプトスファエリア・ノドルム（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｎｏｄｏｒｕｍ）；マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）種、例えばマグナポルテ・グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ  ｇｒｉｓｅａ）；ミクロドキウム属（Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ）種、例えばミクロドキウム・ニバレ（Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ  ｎｉｖａｌｅ）；ミコスファエレラ属（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ）種、例えばミコスファエレラ・グラミニコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、Ｍ．アラキジコラ（Ｍ．ａｒａｃｈｉｄｉｃｏｌａ）及びＭ．フィフィエンシス（Ｍ．ｆｉｆｉｅｎｓｉｓ）；ファエオスファエリア属（Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ）種、例えばファエオスファエリア・ノドルム（Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｎｏｄｏｒｕｍ）；ピレノホラ属（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ）種、例えばピレノホラ・テレス（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ  ｔｅｒｅｓ）、ピレノホラ・トリチシ・レペンチス（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ  ｔｒｉｔｉｃｉ  ｒｅｐｅｎｔｉｓ）；ラムラリア属（Ｒａｍｕｌａｒｉａ）種、例えばラルムラリア・コロ−シグニ（Ｒａｍｕｌａｒｉａ  ｃｏｌｌｏ−ｃｙｇｎｉ）、ラルムラリア・アレオラ（Ｒａｍｕｌａｒｉａ  ａｒｅｏｌａ）；リンコスポリウム属（Ｒｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）種、例えばリンコスポリウム・セカリス（Ｒｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｅｃａｌｉｓ）；セプトリア属（Ｓｅｐｔｏｒｉａ）種、例えばセプトリア・アピイ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ａｐｉｉ）、セプトリア・リコペルシイ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｉ）；チフラ属（Ｔｙｐｈｕｌａ）種、例えばチフラ・インカルナタ（Ｔｙｐｈｕｌａ  ｉｎｃａｒｎａｔａ）；ベンツリア属（Ｖｅｎｔｕｒｉａ）種、例えばベンツリア・イナエクアリス（Ｖｅｎｔｕｒｉａ  ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）；
例えば、以下のものに起因する、根及び茎の病害（ｒｏｏｔ  ａｎｄ  ｓｔｅｍ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）：コルチシウム属（Ｃｏｒｔｉｃｉｕｍ）種、例えばコルチシウム・グラミネアルム（Ｃｏｒｔｉｃｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）；フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、例えばフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）；ガエウマンノミセス属（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ）種、例えばガエウマンノミセス・グラミニス（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）；ガエウマンノミセス属（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ）種、例えばガエウマンノミセス・グラミニス（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）；リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）種、例えばリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）；
サロクラジウム病（Ｓａｒｏｃｌａｄｉｕｍ  ｄｉｓｅａｓｅ）、例えばサロクラジウム・オリゼ（Ｓａｒｏｃｌａｄｉｕｍ  ｏｒｙｚａｅ）に起因するもの；
スクレロチウム病（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｄｉｓｅａｓｅ）、例えばスクレロチウム・オリゼ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｏｒｙｚａｅ）に起因するもの；
タペシア属（Ｔａｐｅｓｉａ）種、例えばタペシア・アクホルミス（Ｔａｐｅｓｉａ  ａｃｕｆｏｒｍｉｓ）；チエラビオプシス属（Ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ）種、例えばチエラビオプシス・バシコラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ  ｂａｓｉｃｏｌａ）；
例えば、以下のものに起因する穂（ｅａｒ  ａｎｄ  ｐａｎｉｃｌｅ）（コーン穂軸を包含する）の病害：アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、例えばアルテルナリア属種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）；アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、例えばアスペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）；クラドスポリウム属（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）種、例えばクラドスポリウム・クラドスポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）；クラビセプス属（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ）種、例えばクラビセプス・プルプレア（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ  ｐｕｒｐｕｒｅａ）；フザリウム属種、例えばフザリウム・クルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）；ジベレラ属（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）種、例えばジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ  ｚｅａｅ）；モノグラフェラ属（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌａ）種、例えばモノグラフェラ・ニバリス（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌａ  ｎｉｖａｌｉｓ）；セプトリア属（Ｓｅｐｔｏｒｉａ）種、例えばセプトリア・ノドラム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｎｏｄｏｒｕｍ）；
例えば、以下の黒穂菌類（ｓｍｕｔ  ｆｕｎｇｉ）に起因する病害：スファセロテカ属（Ｓｐｈａｃｅｌｏｔｈｅｃａ）種、例えばスファセロテカ・レイリアナ（Ｓｐｈａｃｅｌｏｔｈｅｃａ  ｒｅｉｌｉａｎａ）；チレチア属種（Ｔｉｌｌｅｔｉａ）種、例えばチレチア・カリエス（Ｔｉｌｌｅｔｉａ  ｃａｒｉｅｓ）、Ｔ．コントロベルサ（Ｔ．ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａ）；ウロシスチス属（Ｕｒｏｃｙｓｔｉｓ）種、例えばウロシスチス・オクルタ（Ｕｒｏｃｙｓｔｉｓ  ｏｃｃｕｌｔａ）；ウスチラゴ属（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）種、例えばウスチラゴ・ヌダ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｎｕｄａ）、Ｕ．ヌダ・トリチシ（Ｕ．ｎｕｄａ  ｔｒｉｔｉｃｉ）；
例えば、以下のものに起因する果実の腐敗：アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、例えばアスペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）；ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、例えばボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）；ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種、例えばペニシリウム・エキスパンサム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｅｘｐａｎｓｕｍ）及びＰ．プルプロゲナム（Ｐ．ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）；スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、例えばスクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）；ベルチシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍ）種、例えばベルチシリウム・アルボアトラム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍ  ａｌｂｏａｔｒｕｍ）；
例えば、以下のものに起因する種子及び土壌が媒介する腐食、カビ、萎凋、腐敗及び立枯れ性の病害（ｄａｍｐｉｎｇ−ｏｆｆ  ｄｉｓｅａｓｅ）：アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、例えばアルテルナリア・ブラシシコラ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に起因するもの；アファノミセス属（Ａｐｈａｎｏｍｙｃｅｓ）種、例えばアファノミセス・エウテイケス（Ａｐｈａｎｏｍｙｃｅｓ  ｅｕｔｅｉｃｈｅｓ）に起因するもの；アスコキタ属（Ａｓｃｏｃｈｙｔａ）種、例えばアスコキタ・レンチス（Ａｓｃｏｃｈｙｔａ  ｌｅｎｔｉｓ）に起因するもの；アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、例えばア、スペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）に起因するもの；クラドスポリウム属（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）種、例えばクラドスポリウム・ヘルバラム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｈｅｒｂａｒｕｍ）に起因するもの；コクリオボルス属（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ）種、例えばコクリオボルス・サチブス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ）；（分生子形態：ドレクスレラ属（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ）、ビポラリス属（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ）：ヘルミントスポリウム属（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）と同義）に起因するもの；コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ）種、例えばコレトトリカム・コッコデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃｏｃｃｏｄｅｓ）に起因するもの；フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、例えばフザリウム・クルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）に起因するもの；ジベレラ属（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）種、例えばジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ  ｚｅａｅ）に起因するもの；マクロフォミナ属（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）種、例えばマクロフォミナ・ファゼオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）に起因するもの；モノグラフェラ属（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌａ）種）、例えばモノグラフェラ・ニバリス（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｅｌｌａ  ｎｉｖａｌｉｓ）に起因するもの；ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種、例えばペニシリウム・エキスパンサム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｅｘｐａｎｓｕｍ）に起因するもの；フォーマ属（Ｐｈｏｍａ）種、例えばフォーマ・リンガム（Ｐｈｏｍａ  ｌｉｎｇａｍ）に起因するもの；フォモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ）種、例えばフォモプシス・ソジャエ（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｏｊａｅ）に起因するもの；フィトフトラ種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）種、例えばフィトフトラ・カクトラム（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｃａｃｔｏｒｕｍ）に起因するもの；ピレノフォラ属（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ）種、例えばピレノフォラ・グラミネア（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ  ｇｒａｍｉｎｅａ）に起因するもの；ピリクラリア属（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ）種、例えばピリクラリア・オリゼ（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｏｒｙｚａｅ）に起因するもの；フィチウム属（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種、例えばフィチウム・ウルチマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）に起因するもの；リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）種、例えばリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓ��ｌａｎｉ）に起因するもの；リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）種、例えばリゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）に起因するもの；スクレロチウム属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ）種、例えばスクレロチウム・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｒｏｌｆｓｉｉ）に起因するもの；セプトリア属（Ｓｅｐｔｏｒｉａ）種、例えばセプトリア・ノドラム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｎｏｄｏｒｕｍ）に起因するもの；チフラ属（Ｔｙｐｈｕｌａ）種、例えばチフラ・インカルナタ（Ｔｙｐｈｕｌａ  ｉｎｃａｒｎａｔａ）に起因するもの；ベルチシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）種、例えばベルチシリウム・ダーリアエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｄａｈｌｉａｅ）に起因するもの；
例えば、以下のものに起因する癌腫病、虫こぶ及び天狗巣病（ｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ）：ネクトリア属（Ｎｅｃｔｒｉａ）種、例えばネクトリア・ガリゲナ（Ｎｅｃｔｒｉａ  ｇａｌｌｉｇｅｎａ）に起因するもの；
例えば、以下のものに起因する萎凋病（ｗｉｌｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）：モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）種、例えばモニリニア・ラキサ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｌａｘａ）に起因するもの；
例えば、以下のものに起因する葉ぶくれ病（ｌｅａｆ  ｂｌｉｓｔｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）又は葉巻病（ｌｅａｆ  ｃｕｒｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）：エクソバシジウム属（Ｅｘｏｂａｓｉｄｉｕｍ）種、例えばエクソバシジウム・ベキサンス（Ｅｘｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｖｅｘａｎｓ）に起因するもの；
タフリナ属（Ｔａｐｈｒｉｎａ）種、例えばタフリナ・デフォルマンス（Ｔａｐｈｒｉｎａ  ｄｅｆｏｒｍａｎｓ）；
例えば、以下のものに起因する木本植物の変性病害：例えば、ファエモニエラ・クラミドスポラ（Ｐｈａｅｍｏｎｉｅｌｌａ  ｃｌａｍｙｄｏｓｐｏｒａ）、ファエオアクレモニウム・アレオフィラム（Ｐｈａｅｏａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ａｌｅｏｐｈｉｌｕｍ）及びフォミチポリア・メジテラネア（Ｆｏｍｉｔｉｐｏｒｉａ  ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａ）に起因するエスカ病（Ｅｓｃａ  ｄｉｓｅａｓｅ）；例えば、ユータイパ・ラタ（Ｅｕｔｙｐａ  ｌａｔａ）に起因するユータイパ・ダイバック（Ｅｕｔｙｐａ  ｄｙｅｂａｃｋ）；例えば、ガノデルマ・ボニネンセ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｂｏｎｉｎｅｎｓｅ）に起因するガノデルマ病（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｄｉｓｅａｓｅ）；例えば、リギドポルス・リグノサス（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｌｉｇｎｏｓｕｓ）に起因するリギドポルス病（Ｒｉｇｉｄｏｐｏｒｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）；
例えば、ボトリチス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、例えばボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）に起因する花及び種子の病害；
例えば、以下のものに起因する植物塊茎の病害：例えば、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）種、例えばリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）；ヘルミントスポリウム属（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）種、例えばヘルミントスポリウム・ソラニ（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ）；
例えば、プラスモディオフォラ属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ）種、例えばプラスモディオフォラ・ブラシカエ（Ｐｌａｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）に起因する根こぶ；
例えば、以下の細菌性病原体に起因する病害：キサントモナス属（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）種、例えばキサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．オリゼ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ）；シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、例えばシュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．ラクリマンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ）；エルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）種、例えばエルウィニア・アミロボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｍｙｌｏｖｏｒａ）。
【０１９４】
例えば、以下のものなどに起因する、葉、茎、鞘及び種子に対する真菌性病害である：アルテルナリア斑点病（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ）（アルテルナリア属種アトランス・テニュイッシマ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｅｃ．ａｔｒａｎｓ  ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ））、炭疽病（コレトトリクム・グロエオスポロイデス・デマティウム  ｖａｒ．トランケイタム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｏｉｄｅｓ  ｄｅｍａｔｉｕｍ  ｖａｒ．ｔｒｕｎｃａｔｕｍ））、褐紋病（ｂｒｏｗｎ  ｓｐｏｔ）（セプトリア・グリシネス（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ）、紫斑病（ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ  ａｎｄ  ｂｌｉｇｈｔ）（セクロスポラ・キクチイ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｋｉｋｕｃｈｉｉ））、コアネホラ葉枯病（ｃｈｏａｎｅｐｈｏｒａ  ｌｅａｆ  ｂｌｉｇｈｔ）（コアネフォラ・インファンディブリフェラ・トリスポラ（（Ｃｈｏａｎｅｐｈｏｒａ  ｉｎｆｕｎｄｉｂｕｌｉｆｅｒａ  ｔｒｉｓｐｏｒａ（同義）））、ダクチュリオフォラ斑点病（ｄａｃｔｕｌｉｏｐｈｏｒａ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ）（ダクチュリオフォラ・グリシネス（（Ｄａｃｔｕｌｉｏｐｈｏｒａ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、べと病（ｄｏｗｎｙ  ｍｉｌｄｅｗ）（ペロノスポラ・マンシュリカ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｍａｎｓｈｕｒｉｃａ））、ドレクスレラ胴枯病（ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ  ｂｌｉｇｈｔ）（ドレクスレラ・グリシニ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ  ｇｌｙｃｉｎｉ））、斑点病（ｆｒｏｇｅｙｅ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ）（セルコスポラ・ソジナ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｓｏｊｉｎａ））、そばかす病（ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｕｌｉｎａ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ）（レプトスファエルリナ・トリフォリイ（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｕｌｉｎａ  ｔｒｉｆｏｌｉｉ））、灰星病（ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃａ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ）（フィロスティカ・ソジャエコラ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ  ｓｏｊａｅｃｏｌａ））、さや及び茎焼枯病、うどんこ病（ｐｏｗｄｅｒｙ  ｍｉｌｄｅｗ）（ミクロスファエラ・ディフューザ（Ｍｉｃｒｏｓｐｈａｅｒａ  ｄｉｆｆｕｓａ））、ピレノカエタ斑点病（ｐｙｒｅｎｏｃｈａｅｔａ  ｌｅａｆ  ｓｐｏｔ）（ピレノカエタ・グリシネス（Ｐｙｒｅｎｏｃｈａｅｔａ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、リゾクトニア・エリアル（ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ａｅｒｉａｌ）、葉腐病（ｆｏｌｉａｇｅ）及びくもの巣焼枯れ病（ｗｅｂ  ｂｌｉｇｈｔ）（リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ））、さび病（ファコプソラ・パチライジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、ファコプソラ・メイボミアエ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｍｅｉｂｏｍｉａｅ））、黒とう病（ｓｃａｂ）（（スファセロマ・グリシネス（Ｓｐｈａｃｅｌｏｍａ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、ステムフィリウム葉枯病（ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ  ｌｅａｆ  ｂｌｉｇｈｔ）（（ステムフィリウム・ボトリオサム（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ  ｂｏｔｒｙｏｓｕｍ））、紫斑点病（コリネスポラ・カッシイコラ（（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ  ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ））。
【０１９５】
例えば、以下のものに起因する、根及び茎基部に対する真菌性病害：黒根腐病（ｂｌａｃｋ  ｒｏｏｔ  ｒｏｔ）（カロネクトリア・クロタラリアエ（Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａ  ｃｒｏｔａｌａｒｉａｅ））、炭腐病（マクロフォミナ・ファゼオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ））、フザリウム焼枯病又は萎凋病、根腐並びにさや及び頸領腐れ（フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・オルトセラス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｒｔｈｏｃｅｒａｓ）、フザリウム・セミテクタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ）、フザリウム・エクイセチ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｅｑｕｉｓｅｔｉ）、マイコレプトディスカス根腐（マイコレプトディスカス・テレストリス（Ｍｙｃｏｌｅｐｔｏｄｉｓｃｕｓ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ））、ネオコスモスポラ（ｎｅｏｃｏｓｍｏｓｐｏｒａ）（ネオコスモスポラ・バスインフェクタ（Ｎｅｏｃｏｓｍｏｓｐｏｒａ  ｖａｓｉｎｆｅｃｔａ））、さや及び茎焼枯病（ディアポルセ・ファセオロラム（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ  ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ））、茎胴枯れ（ディアポルセ・ファセオロラムｖａｒ．カウリボラ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ  ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ  ｖａｒ．ｃａｕｌｉｖｏｒａ））、フィトフソラ（ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）腐れ（フィトフソラ・メガスペルマ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｍｅｇａｓｐｅｒｍａ））、褐色茎腐れ（フィアロフォラ・グレガータ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ  ｇｒｅｇａｔａ））、ピチウム（ｐｙｔｈｉｕｍ）腐れ（ピチウム・アファニデルマタム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）、ピチウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、ピチウム・デバリアナム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）、ピチウム・ミリオチラム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｍｙｒｉｏｔｙｌｕｍ）、ピチウム・ウルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ））、リゾクトニア根腐れ、茎腐敗及び立枯病（リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ））、スクレロチニア（ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）茎腐敗（スクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ））、スクレロチニア（ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）白絹病（スクレロチニア・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｒｏｌｆｓｉｉ））、チエラビオプシス（ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ）根腐れ（チエラビオプシス・バシコラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ  ｂａｓｉｃｏｌａ））。
【０１９６】
特定の例では、真菌は、スクレロチニア属種（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ）である。特定の例では、真菌は、ボトリチス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ）である。特定の例では、真菌は、アスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ  ｓｐｐ）である。特定の例では、真菌は、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ）である。特定の例では、真菌は、アオカビ属種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ）である。
【０１９７】
本発明の組成物は、様々な真菌防除用途において有用である。前述した組成物を使用して、収穫前の真菌性植物病原体又は収穫後の真菌病原体を防除することができる。一実施形態では、前述した組成物のいずれかを用いて、植物、植物周辺区域又は食用の栽培キノコ、キノコ菌糸又はキノコ堆肥に組成物を適用することにより、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、バーティシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）種、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）種、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）種又はピチウム属（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種などの標的病原体を防除する。別の実施形態では、本発明の組成物を用いて、アオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種、ゲオトリクム属（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）種、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）及びコレトトリクム属（（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ）種などの収穫後病原体を防除する。
【０１９８】
表１は、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法を用いて処置又は予防することができる真菌、それに関連する植物病害のさらなる例を記載する。
【０１９９】
2021523944.tif 000002
【０２００】
2021523944.tif 000003
【０２０１】
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【０２０２】
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【０２０３】
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【０２０４】
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【０２０５】
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【０２０６】
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【０２０７】
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【０２０８】
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【０２０９】
Ｂ．細菌
例えば、植物における細菌感染を予防又は処置するために、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、細菌の適応度を低減させる上で有用であり得る。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を細菌と接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を細菌に送達する方法が含まれる。加えて又は代わりに、本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物と接触させることにより、細菌感染のリスクがあるか、又は細菌感染を有する植物にバイオ農薬を送達することを含む。
【０２１０】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、以下にさらに記載する任意の細菌を含め、細菌又はそれに感染した植物への送達に適している。例えば、細菌は、アクチバクテリア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）又はプロテバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）に属するもの、例えばブルクホルデリア科（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅａｅ）、キサントモナス科（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、シュードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ミクロバクテリウム科（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）及びリゾビウム科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）に属する細菌であり得る。
【０２１１】
一部の例では、細菌は、アシドボラキス・アベナエ  ｓｕｂｓｐ．（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ  ｓｕｂｓｐ．）であり、以下を含む：例えば、アシドボラキス・アベナエ  ｓｕｂｓｐ．アベナエ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ  ｓｕｂｓｐ．ａｖｅｎａｅ）（＝シュードモナス・アベナエ  ｓｕｂｓｐ．アベナエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｖｅｎａｅ  ｓｕｂｓｐ．ａｖｅｎａｅ）、アシドボラキス・アベナエ  ｓｕｂｓｐ．カトレイアエ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ  ｓｕｂｓｐ．ｃａｔｔｌｅｙａｅ）（＝シュードモナス・カトレイアエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃａｔｔｌｅｙａｅ））又はアシドボラキス・アベナエ  ｓｕｂｓｐ．シトルリ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ  ｓｕｂｓｐ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ）（＝シュードモナス・シュードアルカリゲネス  ｓｕｂｓｐ．シトルリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｓｕｂｓｐ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ）、シュードモナス・アベナエ  ｓｕｂｓｐ．シトルリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｖｅｎａｅ  ｓｕｂｓｐ．Ｃｉｔｒｕｌｌｉ）。
【０２１２】
一部の例では、細菌は、ブルクホルデリア属種（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｅｃ．）であり、以下を含む：例えば、ブルクホルデリア・アンドロポゴニス（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓ）（＝シュードモナス・アンドロポゴニス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓ）、シュードモナス・ウッドシイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｗｏｏｄｓｉｉ））、ブルクホルデリア・カリオフィリ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｉ）（＝シュードモナス・カリオフィリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｉ））、ブルクホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）（＝シュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ））、ブルクホルデリア・グラジオリ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）（＝シュードモナス・グラジオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ））、ブルクホルデリア・グラジオリ  ｐｖ．アガリシコラ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ  ｐｖ．ａｇａｒｉｃｉｃｏｌａ）（＝シュードモナス・グラジオリ  ｐｖ．アガリシコラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ  ｐｖ．ａｇａｒｉｃｉｃｏｌａ））、ブルクホルデリア・グラジオリ  ｐｖ．アリイコラ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ  ｐｖ．ａｌｌｉｉｃｏｌａ）（＝シュードモナス・グラジオリ  ｐｖ．アリイコラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ  ｐｖ．ａｌｌｉｉｃｏｌａ）、ブルクホルデリア・グラジオリ  ｐｖ．グラジオリ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ  ｐｖ．ｇｌａｄｉｏｌｉ）（即ちシュードモナス・グラジオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ）、シュードモナス・グラジオリ  ｐｖ．グラジオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌａｄｉｏｌｉ  ｐｖ．ｇｌａｄｉｏｌｉ））、ブルクホルデリア・グルマエ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌｕｍａｅ）（即ちシュードモナス・グルマエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌｕｍａｅ））、ブルクホルデリア・プランタリイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｌａｎｔａｒｉｉ）（即ちシュードモナス・プランタリイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｌａｎｔａｒｉｉ））、ブルクホルデリア・ソラナセアルム（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）（即ちラルストニア・ソラナセアルム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）又はラルストニア属種（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｐｐ．）。
【０２１３】
一部の例では、細菌は、カンジダツス・リベリバクテル属種（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｅｃ．）をはじめとするリベリバクテル属種（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）であり、これは以下を含む：例えば、カンジダツス・リベリバクテル・アシアチクス（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ）、リベリバクテル・アフリカヌス（Ｌａｆ）（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｆｒｉｃａｎｕｓ（Ｌａｆ））、リベリバクテル・アメリカヌス（Ｌａｍ）（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ（Ｌａｍ））、リベリバクテル・アシアチクス（Ｌａｓ）（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ（Ｌａｓ））、リベリバクテル・エウロパエウス（Ｌｅｕ）（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｅｕｒｏｐａｅｕｓ（Ｌｅｕ））、リベリバクテル・プシラウロウス（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｐｓｙｌｌａｕｒｏｕｓ）又はリベリバクテル・ソラナセアルム（Ｌｓｏ）（Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ（Ｌｓｏ））。
【０２１４】
一部の例では、細菌は、コリネバクテリウム属種（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ）であり、これは以下を含む：例えば、コリネバクテリウム・ファシアンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆａｓｃｉａｎｓ）、コリネバクテリウム・フラクムファシエンス  ｐｖ．フラクムファシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｃｃｕｍｆａｃｉｅｎｓ  ｐｖ．ｆｌａｃｃｕｍｆａｃｉｅｎｓ）、コリネバクテリウム・ミチガネンシス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、コリネバクテリウム・ミチガネンシス  ｐｖ．トリシチ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ  ｐｖ．ｔｒｉｔｉｃｉ）、コリネバクテリウム・ミチガネンシス  ｐｖ．ネブラスケンセ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ  ｐｖ．ｎｅｂｒａｓｋｅｎｓｅ）又はコリネバクテリウム・セペドニクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｅｐｅｄｏｎｉｃｕｍ）。
【０２１５】
一部の例では、細菌は、エルウィニア属種（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐｐ．）であり、これは以下のものを包含する：例えば、エルウィニア・アミロボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｍｙｌｏｖｏｒａ）、エルウィニア・アナナス（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｎａｎａｓ）、エルウィニア・カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）（即ちペクトバクテリウム・カロトボルム（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ））、エルウィニア・カロトボラ  ｓｕｂｓｐ．アトロセプチカ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ  ｓｕｂｓｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ）、エルウィニア・カロトボラ  ｓｕｂｓｐ．カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ  ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エルウィニア・クリサンテミ  ｐｖ．ゼアエ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ  ｐｖ．ｚｅａｅ）、エルウィニア・ジソルベンス（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｄｉｓｓｏｌｖｅｎｓ）、エルウィニア・ヘルビコラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｈｅｒｂｉｃｏｌａ）、エルウィニア・ラポンチク（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｒｈａｐｏｎｔｉｃ）、エルウィニア・ステワルチイイ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｔｅｗａｒｔｉｉｉ）、エルウィニア・トラケイフィラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌａ）又はエルウィニア・ウレドボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｕｒｅｄｏｖｏｒａ）。
【０２１６】
一部の例では、細菌は、シュードモナス・シリンガエ  ｓｕｂｓｐ．（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｓｕｂｓｐ．）であり、これは以下を含む：例えば、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．アクチニジアエ（Ｐｓａ）（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ（Ｐｓａ））、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．アトロファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｔｒｏｆａｃｉｅｎｓ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．コロナファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｃｏｒｏｎａｆａｃｉｅｎｓ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．グリシネア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｇｌｙｃｉｎｅａ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．ラクリマンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．マクリコラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｍａｃｕｌｉｃｏｌａ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．パプランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｐａｐｕｌａｎｓ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．ストリアファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｔｒｉａｆａｃｉｅｎｓ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．トマト（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ）又はシュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．タバシ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔａｂａｃｉ）。
【０２１７】
一部の例では、細菌は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）である。
【０２１８】
一部の例では、細菌は、ストレプトミセス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．）であり、これは以下を含む：例えば、ストレプトミセス・アシジスカビエス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ）、ストレプトミセス・アルビドフラブス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｉｄｏｆｌａｖｕｓ）、ストレプトミセス・カンジズス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃａｎｄｉｄｕｓ）（即ちアクチノミセス・カンジズス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｃａｎｄｉｄｕｓ））、ストレプトミセス・カビスカビエス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃａｖｉｓｃａｂｉｅｓ）、ストレプトミセス・コリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｌｌｉｎｕｓ）、ストレプトミセス・エウロパエイスカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｅｕｒｏｐａｅｉｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・インテルメジウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、ストレプトミセス・イポモエアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｉｐｏｍｏｅａｅ）、ストレプトミセス・ルリジスカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｕｒｉｄｉｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・ニベイスカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｎｉｖｅｉｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・プニシスカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｕｎｉｃｉｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・レツクリスカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｒｅｔｕｃｕｌｉｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・スカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・スカビエス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｃａｂｉｅｓ）、ストレプトミセス・セトニイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｅｔｏｎｉｉ）、ストレプトミセス・ステリイスカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｔｅｌｉｉｓｃａｂｉｅｉ）、ストレプトミセス・ツルギジスカビエス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ）又はストレプトミセス・ウェドモレンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｗｅｄｍｏｒｅｎｓｉｓ）。
【０２１９】
一部の例では、細菌は、キサントモナス・アキソノポジス  ｓｕｂｓｐ．（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｓｕｂｓｐ．）であり、これは以下を含む：例えば、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．アルファルファエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ａｌｆａｌｆａｅ）（＝キサントモナス・アルファルファエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｌｆａｌｆａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．アウランチホリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉｉ）（＝キサントモナス・フスカンス  ｓｕｂｓｐ．アウランチホリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｆｕｓｃａｎｓ  ｓｕｂｓｐ．ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．アリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ａｌｌｉｉ）（＝キサントモナス・カムペストリスｐｖ．アリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ａｌｌｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．アキソノポジス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ）、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．バウヒニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｂａｕｈｉｎｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．バウヒニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｂａｕｈｉｎｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ベゴニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｂｅｇｏｎｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ベゴニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｂｅｇｏｎｉａｅ）、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ベトリコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｂｅｔｌｉｃｏｌａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ベトリコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｂｅｔｌｉｃｏｌａ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ビオフィチ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｂｉｏｐｈｙｔｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ビオフィチ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｂｉｏｐｈｙｔｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．カジャニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃａｊａｎｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．カジャニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃａｊａｎｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．カサバエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃａｓｓａｖａｅ）（＝キサントモナス・カサバエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｓｓａｖａｅ））、キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．カサバエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃａｓｓａｖａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．カシアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃａｓｓｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．カシアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃａｓｓｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｉ）（＝キサントモナス・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃｉｔｒｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．シトルメロ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｉｔｒｕｍｅｌｏ）（＝キサントモナス・アルファルファエ  ｓｕｂｓｐ．シトルメロニス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｌｆａｌｆａｅ  ｓｕｂｓｐ．ｃｉｔｒｕｍｅｌｏｎｉｓ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．クリトリアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｌｉｔｏｒｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．クリトリアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｌｉｔｏｒｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．コラカナエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｏｒａｃａｎａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．コラカナエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｏｒａｃａｎａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．シアモプシジス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｃｙａｍｏｐｓｉｄｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．シアモプシジス））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．デスモジイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．デスモジイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．デスモジイガンゲチシ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉｇａｎｇｅｔｉｃｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．デスモジイガンゲチシ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉｇａｎｇｅｔｉｃｉ）、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．デスモジイラキシフロリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉｌａｘｉｆｌｏｒｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．デスモジイラキシフロリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉｌａｘｉｆｌｏｒｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．デスモジイロツンジホリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．デスモジイロツンジホリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｄｅｓｍｏｄｉｉｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ジエフェンバキアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ジエフェンバキアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．エリトリナエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｅｒｙｔｈｒｉｎａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．エリトリナエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｅｒｙｔｈｒｉｎａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ファシクラリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ファシクラリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．グリシネス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｇｌｙｃｉｎｅｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．グリシネス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．クハヤエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｋｈａｙａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．クハヤエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｋｈａｙａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．レスペデザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｌｅｓｐｅｄｅｚａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．レスペデザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｌｅｓｐｅｄｅｚａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．マクリホリイガルデニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｍａｃｕｌｉｆｏｌｉｉｇａｒｄｅｎｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．マクリホリイガルデニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｍａｃｕｌｉｆｏｌｉｉｇａｒｄｅｎｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．マルバセアルム（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ）（＝キサントモナス・シトリ  ｓｕｂｓｐ．マルバセアルム（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃｉｔｒｉ  ｓｕｂｓｐ．ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．マニホチス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｍａｎｉｈｏｔｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．マニホチス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｍａｎｉｈｏｔｉｓ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．マルチニイコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｍａｒｔｙｎｉｉｃｏｌａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．マルチニイコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｍａｒｔｙｎｉｉｃｏｌａ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．メルフシイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｍｅｌｈｕｓｉｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．メルフシイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｍｅｌｈｕｓｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ナカタエコルコリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｎａｋａｔａｅｃｏｒｃｈｏｒｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ナカタエコルコリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｎａｋａｔａｅｃｏｒｃｈｏｒｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．パシフロラエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐａｓｓｉｆｌｏｒａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．パシフロラエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐａｓｓｉｆｌｏｒａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．パテリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐａｔｅｌｉｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．パテリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐａｔｅｌｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ペダリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｅｄａｌｉｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ペダリイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｅｄａｌｉｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ファセオリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｈａｓｅｏｌｉ）（＝キサントモナス・
カムペストリス  ｐｖ．ファセオリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｈａｓｅｏｌｉ）、キサントモナス・ファセオリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｐｈａｓｅｏｌｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ファセオリ  ｖａｒ．フスカンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｈａｓｅｏｌｉ  ｖａｒ．ｆｕｓｃａｎｓ）（＝キサントモナス・フスカンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｆｕｓｃａｎｓ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．フィランチ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｈｙｌｌａｎｔｈｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．フィランチ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｈｙｌｌａｎｔｈｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．フィサリジコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｈｙｓａｌｉｄｉｃｏｌａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．フィサリジコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｈｙｓａｌｉｄｉｃｏｌａ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ポインセチイコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｏｉｎｓｅｔｔｉｉｃｏｌａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ポインセチイコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｏｉｎｓｅｔｔｉｉｃｏｌａ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．プニカエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｐｕｎｉｃａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．プニカエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｕｎｉｃａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．リンコシアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｒｈｙｎｃｈｏｓｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．リンコシアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｒｈｙｎｃｈｏｓｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．リシニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｒｉｃｉｎｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．リシニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｒｉｃｉｎｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．セスバニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｓｅｓｂａｎｉａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．セスバニアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｓｅｓｂａｎｉａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．タマリンジ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｔａｍａｒｉｎｄｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．タマリンジ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｔａｍａｒｉｎｄｉ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．バスクロルム（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．バスクロルム（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ））、キサントモナス・アキソノポジス  ��ｖ．ベシカトリア（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ベシカトリア（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ）、キサントモナス・ベシカトリア（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ビグナエラジアタエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｖｉｇｎａｅｒａｄｉａｔａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ビグナエラジアタエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｖｉｇｎａｅｒａｄｉａｔａｅ））、キサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ビグニコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｖｉｇｎｉｃｏｌａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ビグニコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｖｉｇｎｉｃｏｌａ））又はキサントモナス・アキソノポジス  ｐｖ．ビチアンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．ｖｉｔｉａｎｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ビチアンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｖｉｔｉａｎｓ））。
【０２２０】
一部の例では、細菌は、キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ムサセアルム（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｍｕｓａｃｅａｒｕｍ）、キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．プルニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｒｕｎｉ）（＝キサントモナス・アルボリコラ  ｐｖ．プルニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｒｂｏｒｉｃｏｌａ  ｐｖ．ｐｒｕｎｉ））又はキサントモナス・フラガリアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｆｒａｇａｒｉａｅ）である。
【０２２１】
一部の例では、細菌は、キサントモナス・トランスルセンスｓｕｂｓｐ．（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｓｕｂｓｐ．）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ホルデイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｈｏｒｄｅｉ））であり、これは以下を含む：例えば、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．アレナテリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．アレナテリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｉ）、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．セレアリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｃｅｒｅａｌｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．セレアリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃｅｒｅａｌｉｓ））、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖグラミニス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｇｒａｍｉｎｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．グラミニス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｇｒａｍｉｎｉｓ））、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．フレイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｐｈｌｅｉ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．フレイ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｈｌｅｉ））、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．フレイプラテンシス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｐｈｌｅｉｐｒａｔｅｎｓｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．フレイプラテンシス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｈｌｅｉｐｒａｔｅｎｓｉｓ））、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．ポアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｐｏａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．ポアエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｐｏａｅ））、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．セカリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｓｅｃａｌｉｓ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．セカリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｓｅｃａｌｉｓ））、キサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．トランスルセンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．トランスルセンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ））又はキサントモナス・トランスルセンス  ｐｖ．ウンズロサ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ  ｐｖ．ｕｎｄｕｌｏｓａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ  ウンズロサ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｕｎｄｕｌｏｓａ））。
【０２２２】
一部の例では、細菌は、キサントモナス・オリザエｓｕｐｓｐ．（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ  ｓｕｂｓｐ．）、キサントモナス・オリザエ  ｐｖ．オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ  ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ．オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ））又はキサントモナス・オリザエ  ｐｖ．オリジコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ  ｐｖ．ｏｒｙｚｉｃｏｌａ）（＝キサントモナス・カムペストリス  ｐｖ  オリジコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｏｒｙｚｉｃｏｌａ））である。
【０２２３】
一部の例では、細菌は、キサントモナス科（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）のキシレラ・ファスチジオサ（Ｘｙｌｅｌｌａ  ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）である。
【０２２４】
表２は、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法を用いて処置又は予防することができる細菌及びそれに関連する病害を示す。
【０２２５】
2021523944.tif 000012
【０２２６】
Ｃ．昆虫
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、植物における昆虫寄生を予防又は処置するために、昆虫の適応度を低減させる上で有用であり得る。用語「昆虫」には、任意の発育段階にある、即ち幼虫及び成虫の、節足動物門（Ａｒｔｈｒｏｐｏｄａ）及び昆虫綱（Ｉｎｓｅｃｔａ）又は蛛形綱（Ａｒａｃｈｎｉｄａ）に属するあらゆる生物が含まれる。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物と昆虫を接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を昆虫に送達する方法が含まれる。加えて又は代わりに、本方法は、植物を、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物と接触させることにより、昆虫寄生のリスクがあるか又は昆虫寄生を有する植物にバイオ農薬を送達することを含む。
【０２２７】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、昆虫による寄生の予防又はそれに寄生された植物の処置に好適であり、昆虫は、以下の目に属する：ダニ目（Ａｃａｒｉ）、クモ目（Ａｒａｎｅａｅ）、シラミ亜目（Ａｎｏｐｌｕｒａ）、コウチュウ目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、トビムシ目（Ｃｏｌｌｅｍｂｏｌａ）、ハサミムシ目（Ｄｅｒｍａｐｔｅｒａ）、網翅目（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒａ）、コムシ目（Ｄｉｐｌｕｒａ）、ハエ目（Ｄｉｐｔｅｒａ）（例えば、オウトウショウジョウバエ（ｓｐｏｔｔｅｄ  ｗｉｎｇ  ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ））、シロアリモドキ目（Ｅｍｂｉｏｐｔｅｒａ）、カゲロウ目（Ｅｐｈｅｍｅｒｏｐｔｅｒａ）、ガロアムシ目（Ｇｒｙｌｌｏｂｌａｔｏｄｅａ）、カメムシ目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）（例えば、アブラムシ、オンシツコナジラミ（ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ  ｗｈｉｔｅｆｌｙ））、ヨコバイ亜目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）、ハチ目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、シロアリ目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、ハジラミ目（Ｍａｌｌｏｐｈａｇａ）、シリアゲムシ目（Ｍｅｃｏｐｔｅｒａ）、アミメカゲロウ目（Ｎｅｕｒｏｐｔｅｒａ）、トンボ亜目（Ｏｄｏｎａｔａ）、バッタ目（Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａ）、ナナフシ目（Ｐｈａｓｍｉｄａ）、カワゲラ目（Ｐｌｅｃｏｐｔｅｒａ）、カマアシムシ目（Ｐｒｏｔｕｒａ）、チャタテムシ目（Ｐｓｏｃｏｐｔｅｒａ）、ノミ目（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ）、シラミ目（Ｓｉｐｈｕｎｃｕｌａｔａ、シミ目（Ｔｈｙｓａｎｕｒａ）、ネジレバネ目（Ｓｔｒｅｐｓｉｐｔｅｒａ）、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、トビケラ目（Ｔｒｉｃｈｏｐｔｅｒａ）又はジュズヒゲムシ目（Ｚｏｒａｐｔｅｒａ）。
【０２２８】
一部の例では、昆虫は、クモ綱（Ａｒａｃｈｎｉｄａ）、例えばアカルス属（Ａｃａｒｕｓ  ｓｐｐ．）、アケリア・シェルドニ（Ａｃｅｒｉａ  ｓｈｅｌｄｏｎｉ）、アクロプス属（Ａｃｕｌｏｐｓ  ｓｐｐ．）、アクルス属（Ａｃｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）、アンブリオンマ属（Ａｍｂｌｙｏｍｍａ  ｓｐｐ．）、アムフィテトラニクス・ビエネンシス（Ａｍｐｈｉｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ）、アルガス属（Ａｒｇａｓ  ｓｐｐ．）、ボオフィルス属（Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ブレビパルプス属（Ｂｒｅｖｉｐａｌｐｕｓ  ｓｐｐ．）、ブリオビア・グラミヌム（Ｂｒｙｏｂｉａ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、ブリオビア・プラエチオサ（Ｂｒｙｏｂｉａ  ｐｒａｅｔｉｏｓａ）、セントルロイデス属（Ｃｅｎｔｒｕｒｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）、コリオプテス属（Ｃｈｏｒｉｏｐｔｅｓ  ｓｐｐ．）、デルマニスス・ガリナエ（Ｄｅｒｍａｎｙｓｓｕｓ  ｇａｌｌｉｎａｅ）、デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ）、デルマトファゴイデス・ファリナエ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）、デルマセントル属（Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒ  ｓｐｐ．）、エオテトラニクス属（Ｅｏｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、エピトリメルス・ピリ（Ｅｐｉｔｒｉｍｅｒｕｓ  ｐｙｒｉ）、エウテトラニクス属（Ｅｕｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、エリオフィエス属（Ｅｒｉｏｐｈｙｅｓ  ｓｐｐ．）、グリシファグス・ドメスチクス（Ｇｌｙｃｙｐｈａｇｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ハロチデウス・デストルクトル（Ｈａｌｏｔｙｄｅｕｓ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）、ヘミタロソネムス属（Ｈｅｍｉｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｓｐｐ．）、ヒアロンマ属（Ｈｙａｌｏｍｍａ  ｓｐｐ．）、イキソデス属（Ｉｘｏｄｅｓ  ｓｐｐ．）、ラトロデクツス属（Ｌａｔｒｏｄｅｃｔｕｓ  ｓｐｐ．）、ロキソスケレス属（Ｌｏｘｏｓｃｅｌｅｓ  ｓｐｐ．）、メタテトラニクス属（Ｍｅｔａｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、ネウトロムビクラ・アウツムナリス（Ｎｅｕｔｒｏｍｂｉｃｕｌａ  ａｕｔｕｍｎａｌｉｓ）、ヌフェルサ属（Ｎｕｐｈｅｒｓａ  ｓｐｐ．）、オリゴニクス属（Ｏｌｉｇｏｎｙｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、オルニトドルス属（Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）、オルニトニスス属（Ｏｒｎｉｔｈｏｎｙｓｓｕｓ  ｓｐｐ．）、パノニクス属（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、フィロコプトルタ・オレイボラ（Ｐｈｙｌｌｏｃｏｐｔｒｕｔａ  ｏｌｅｉｖｏｒａ）、ポリファゴタルソネムス・ラツス（Ｐｏｌｙｐｈａｇｏｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｌａｔｕｓ）、ソロプテス属（Ｐｓｏｒｏｐｔｅｓ  ｓｐｐ．）、リピセファルス属（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ  ｓｐｐ．）、リゾグリフス属（Ｒｈｉｚｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｓｐｐ．）、サルコプテス属（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｐｐ．）、スコルピオ・マウルス（Ｓｃｏｒｐｉｏ  ｍａｕｒｕｓ）、ステネオタルソネムス属（Ｓｔｅｎｅｏｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｓｐｐ．）、ステネオタルソネムス・スピンキ（Ｓｔｅｎｅｏｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｓｐｉｎｋｉ）、タルソネムス属（Ｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｓｐｐ．）、テトラニクス属（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、トロムビクラ・アルフレズゲシ（Ｔｒｏｍｂｉｃｕｌａ  ａｌｆｒｅｄｄｕｇｅｓｉ）、バエジョビス属（Ｖａｅｊｏｖｉｓ  ｓｐｐ．）又はバサテス・リコペルシシ（Ｖａｓａｔｅｓ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ）由来である。
【０２２９】
一部の例では、昆虫は、ムカデ綱（Ｃｈｉｌｏｐｏｄａ）、例えばゲオフィルス属（Ｇｅｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｐ．）又はスクチゲラ属（Ｓｃｕｔｉｇｅｒａ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３０】
一部の例では、昆虫は、トビムシ目（Ｃｏｌｌｅｍｂｏｌａ）、例えばオニキウルス・アルマツス（Ｏｎｙｃｈｉｕｒｕｓ  ａｒｍａｔｕｓ）由来である。
【０２３１】
一部の例では、昆虫は、ヤスデ綱（Ｄｉｐｌｏｐｏｄａ）に属するもの、例えばブラニウルス・グッツラツス（Ｂｌａｎｉｕｌｕｓ  ｇｕｔｔｕｌａｔｕｓ）；昆虫（Ｉｎｓｅｃｔａ）綱に属するもの、例えばゴキブリ目（Ｂｌａｔｔｏｄｅａ）に属するもの、例えばブラッテラ・アサヒナイ（Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ａｓａｈｉｎａｉ）、ブラッテラ・ゲルマニカ（Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、ブラッタ・オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、レウコファエア・マデラエ（Ｌｅｕｃｏｐｈａｅａ  ｍａｄｅｒａｅ）、パンクロラ属（Ｐａｎｃｈｌｏｒａ  ｓｐｐ．）、パルコブラッタ属（Ｐａｒｃｏｂｌａｔｔａ  ｓｐｐ．）、ペリプラネタ属（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ｓｐｐ．）又はスペラ・ロンギパルパ（Ｓｕｐｅｌｌａ  ｌｏｎｇｉｐａｌｐａ）である。
【０２３２】
一部の例では、昆虫は、コウチュウ目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、例えばアカリンマ・ビタツム（Ａｃａｌｙｍｍａ  ｖｉｔｔａｔｕｍ）、アカントセリデス・オブテクツス（Ａｃａｎｔｈｏｓｃｅｌｉｄｅｓ  ｏｂｔｅｃｔｕｓ）、アドレツス属（Ａｄｏｒｅｔｕｓ  ｓｐｐ．）、アゲラスチカ・アルニ（Ａｇｅｌａｓｔｉｃａ  ａｌｎｉ）、アグリオテス属（Ａｇｒｉｏｔｅｓ  ｓｐｐ．）、アルフィトビウス・ジアペリヌス（Ａｌｐｈｉｔｏｂｉｕｓ  ｄｉａｐｅｒｉｎｕｓ）、アムフィマロン・ソルスチチアリス（Ａｍｐｈｉｍａｌｌｏｎ  ｓｏｌｓｔｉｔｉａｌｉｓ）、アノビウム・プンクタツム（Ａｎｏｂｉｕｍ  ｐｕｎｃｔａｔｕｍ）、アノプロホラ属（Ａｎｏｐｌｏｐｈｏｒａ  ｓｐｐ．）、アントノムス属（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ  ｓｐｐ．）、アントレヌス属（Ａｎｔｈｒｅｎｕｓ  ｓｐｐ．）、アピオン属（Ａｐｉｏｎ  ｓｐｐ．）、アポゴニア属（Ａｐｏｇｏｎｉａ  ｓｐｐ．）、アトマリア属（Ａｔｏｍａｒｉａ  ｓｐｐ．）、アタゲヌス属（Ａｔｔａｇｅｎｕｓ  ｓｐｐ．）、ブルキジウス・オブテクツス（Ｂｒｕｃｈｉｄｉｕｓ  ｏｂｔｅｃｔｕｓ）、ブルクス属（Ｂｒｕｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、カッシダ属（Ｃａｓｓｉｄａ  ｓｐｐ．）、セロトマ・トリフルカタ（Ｃｅｒｏｔｏｍａ  ｔｒｉｆｕｒｃａｔａ）、セウトリンクス属（Ｃｅｕｔｏｒｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、カエトクネマ属（Ｃｈａｅｔｏｃｎｅｍａ  ｓｐｐ．）、クレオヌス・メンジクス（Ｃｌｅｏｎｕｓ  ｍｅｎｄｉｃｕｓ）、コノデルス属（Ｃｏｎｏｄｅｒｕｓ  ｓｐｐ．）、コスモポリテス属（Ｃｏｓｍｏｐｏｌｉｔｅｓ  ｓｐｐ．）、コステリトラ・ゼアランジカ（Ｃｏｓｔｅｌｙｔｒａ  ｚｅａｌａｎｄｉｃａ）、クテニセラ属（Ｃｔｅｎｉｃｅｒａ  ｓｐｐ．）、クルクリオ属（Ｃｕｒｃｕｌｉｏ  ｓｐｐ．）、クリプトレステス・フェルギネウス（Ｃｒｙｐｔｏｌｅｓｔｅｓ  ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｓ）、クリプトリンクス・ラパチ（Ｃｒｙｐｔｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｌａｐａｔｈｉ）、シリンドロコプツルス属（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｏｐｔｕｒｕｓ  ｓｐｐ．）、デルメステス属（Ｄｅｒｍｅｓｔｅｓ  ｓｐｐ．）、ジアブロチカ属（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ  ｓｐｐ．）（例えば、トウモロコシの根切り虫）、ジコクロシス属（Ｄｉｃｈｏｃｒｏｃｉｓ  ｓｐｐ．）、ジクラジスパ・アルミゲラ（Ｄｉｃｌａｄｉｓｐａ  ａｒｍｉｇｅｒａ）、ジロボデルス属（Ｄｉｌｏｂｏｄｅｒｕｓ  ｓｐｐ．）、エピラクナ属（Ｅｐｉｌａｃｈｎａ  ｓｐｐ．）、エピトリキス属（Ｅｐｉｔｒｉｘ  ｓｐｐ．）、ファウスチヌス属（Ｆａｕｓｔｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）、ギビウム・プシロイデス（Ｇｉｂｂｉｕｍ  ｐｓｙｌｌｏｉｄｅｓ）、グナトセルス・コルヌツス（Ｇｎａｔｈｏｃｅｒｕｓ  ｃｏｒｎｕｔｕｓ）、ヘルラ・ウンダリス（Ｈｅｌｌｕｌａ  ｕｎｄａｌｉｓ）、ヘテロニクス・アラトル（Ｈｅｔｅｒｏｎｙｃｈｕｓ  ａｒａｔｏｒ）、ヘテロニキス属（Ｈｅｔｅｒｏｎｙｘ  ｓｐｐ．）、ヒラモルファ・エレガンス（Ｈｙｌａｍｏｒｐｈａ  ｅｌｅｇａｎｓ）、ヒロトルペス・バジュルス（Ｈｙｌｏｔｒｕｐｅｓ  ｂａｊｕｌｕｓ）、ヒペラ・ポスチカ（Ｈｙｐｅｒａ  ｐｏｓｔｉｃａ）、ヒポメセス・スクアモスス（Ｈｙｐｏｍｅｃｅ���  ｓｑｕａｍｏｓｕｓ）、ヒポテネムス属（Ｈｙｐｏｔｈｅｎｅｍｕｓ  ｓｐｐ．）、ラクノステルナ・コンサングイネア（Ｌａｃｈｎｏｓｔｅｒｎａ  ｃｏｎｓａｎｇｕｉｎｅａ）、ラシドデルマ・セリコルネ（Ｌａｓｉｏｄｅｒｍａ  ｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ）、ラテチクス・オリザエ（Ｌａｔｈｅｔｉｃｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、ラトリジウス属（Ｌａｔｈｒｉｄｉｕｓ  ｓｐｐ．）、レマ属（Ｌｅｍａ  ｓｐｐ．）、レプチノタルサ・デセムリネアタ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ  ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ）、レウコプテラ属（Ｌｅｕｃｏｐｔｅｒａ  ｓｐｐ．）、リッソロプトルス・オリゾフィルス（Ｌｉｓｓｏｒｈｏｐｔｒｕｓ  ｏｒｙｚｏｐｈｉｌｕｓ）、リキスス属（Ｌｉｘｕｓ  ｓｐｐ．）、ルペロデス属（Ｌｕｐｅｒｏｄｅｓ  ｓｐｐ．）、リクツス属（Ｌｙｃｔｕｓ  ｓｐｐ．）、メガセリス属（Ｍｅｇａｓｃｅｌｉｓ  ｓｐｐ．）、メラノツス属（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ  ｓｐｐ．）、メリゲテス・アエネウス（Ｍｅｌｉｇｅｔｈｅｓ  ａｅｎｅｕｓ）、メロロンタ属（Ｍｅｌｏｌｏｎｔｈａ  ｓｐｐ．）、ミグドルス属（Ｍｉｇｄｏｌｕｓ  ｓｐｐ．）、モノカムス属（Ｍｏｎｏｃｈａｍｕｓ  ｓｐｐ．）、ナウパクツス・キサントグラフス（Ｎａｕｐａｃｔｕｓ  ｘａｎｔｈｏｇｒａｐｈｕｓ）、ネクロビア属（Ｎｅｃｒｏｂｉａ  ｓｐｐ．）、ニプツス・ホロレウクス（Ｎｉｐｔｕｓ  ｈｏｌｏｌｅｕｃｕｓ）、オリクテス・リノセロス（Ｏｒｙｃｔｅｓ  ｒｈｉｎｏｃｅｒｏｓ）、オリザエフィルス・スリナメンシス（Ｏｒｙｚａｅｐｈｉｌｕｓ  ｓｕｒｉｎａｍｅｎｓｉｓ）、オリザファグス・オリザエ（Ｏｒｙｚａｐｈａｇｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、オチオリンクス属（Ｏｔｉｏｒｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、オキシセトニア・ジュクンダ（Ｏｘｙｃｅｔｏｎｉａ  ｊｕｃｕｎｄａ）、ファエドン・コクレアリアエ（Ｐｈａｅｄｏｎ  ｃｏｃｈｌｅａｒｉａｅ）、フィロファガ属（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ  ｓｐｐ．）、フィロファガ・ヘレリ（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ  ｈｅｌｌｅｒｉ）、フィロトレタ属（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ  ｓｐｐ．）、ポピリア・ジャポニカ（Ｐｏｐｉｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、プレムノトリペス属（Ｐｒｅｍｎｏｔｒｙｐｅｓ  ｓｐｐ．）、プロステファヌス・トルンカツス（Ｐｒｏｓｔｅｐｈａｎｕｓ  ｔｒｕｎｃａｔｕｓ）、プシリオデス属（Ｐｓｙｌｌｉｏｄｅｓ  ｓｐｐ．）、プチヌス属（Ｐｔｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）、リゾビウス・ベントラリス（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｓ  ｖｅｎｔｒａｌｉｓ）、リゾペルタ・ドミニカ（Ｒｈｉｚｏｐｅｒｔｈａ  ｄｏｍｉｎｉｃａ）、シトフィルス属（Ｓｉｔｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｐ．）、シトフィルス・オリザエ（Ｓｉｔｏｐｈｉｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、スフェノホルス属（Ｓｐｈｅｎｏｐｈｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）、ステゴビウム・パニセウム（Ｓｔｅｇｏｂｉｕｍ  ｐａｎｉｃｅｕｍ）、ステルネクス属（Ｓｔｅｒｎｅｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、シムフィレテス属（Ｓｙｍｐｈｙｌｅｔｅｓ  ｓｐｐ．）、タニメクス属（Ｔａｎｙｍｅｃｕｓ  ｓｐｐ．）、テネブリオ・モリトル（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ  ｍｏｌｉｔｏｒ）、テネブリオイデス・マウレタニクス（Ｔｅｎｅｂｒｉｏｉｄｅｓ  ｍａｕｒｅｔａｎｉｃｕｓ）、トリボリウム属（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、トロゴデルマ属（Ｔｒｏｇｏｄｅｒｍａ  ｓｐｐ．）、チキウス属（Ｔｙｃｈｉｕｓ  ｓｐｐ．）、キシロトレクス属（Ｘｙｌｏｔｒｅｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）又はザブルス属（Ｚａｂｒｕｓ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３３】
一部の例では、昆虫は、ハエ目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、例えばアエデス属種（Ａｅｄｅｓ  ｓｐｐ．）、アグロミザ属（Ａｇｒｏｍｙｚａ  ｓｐｐ．）、アナストレファ属（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ  ｓｐｐ．）、アノフェレス属（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｐｐ．）、アスホンジリア属（Ａｓｐｈｏｎｄｙｌｉａ  ｓｐｐ．）、バクトロセラ属（Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ  ｓｐｐ．）、ビビオ・ホルツラヌス（Ｂｉｂｉｏ  ｈｏｒｔｕｌａｎｕｓ）、カリホラ・エリトロセファラ（Ｃａｌｌｉｐｈｏｒａ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｅｐｈａｌａ）、カリホラ・ビシナ（Ｃａｌｌｉｐｈｏｒａ  ｖｉｃｉｎａ）、セラチチス・カピタタ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ  ｃａｐｉｔａｔａ）、キロノムス属（Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｓｐｐ．）、クリソミア属（Ｃｈｒｙｓｏｍｙｉａ  ｓｐｐ．）、クリソプス属（Ｃｈｒｙｓｏｐｓ  ｓｐｐ．）、クリソゾナ・プルビアリス（Ｃｈｒｙｓｏｚｏｎａ  ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）、コクリオミア属（Ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａ  ｓｐｐ．）、コンタリニア属（Ｃｏｎｔａｒｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、コルジロビア・アントロポファガ（Ｃｏｒｄｙｌｏｂｉａ  ａｎｔｈｒｏｐｏｐｈａｇａ）、クリコトプス・シルベストリス（Ｃｒｉｃｏｔｏｐｕｓ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）、クレキス属（Ｃｕｌｅｘ  ｓｐｐ．）、クリコイデス属（Ｃｕｌｉｃｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）、クリセタ属（Ｃｕｌｉｓｅｔａ  ｓｐｐ．）、クテレブラ属（Ｃｕｔｅｒｅｂｒａ  ｓｐｐ．）、ダクス・オレアエ（Ｄａｃｕｓ  ｏｌｅａｅ）、ダシネウラ属（Ｄａｓｙｎｅｕｒａ  ｓｐｐ．）、デリア属（Ｄｅｌｉａ  ｓｐｐ．）、デルマトビア・ホミニス（Ｄｅｒｍａｔｏｂｉａ  ｈｏｍｉｎｉｓ）、ドロソフィラ属（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｓｐｐ．）、エキノクネムス属（Ｅｃｈｉｎｏｃｎｅｍｕｓ  ｓｐｐ．）、ファンニア属（Ｆａｎｎｉａ  ｓｐｐ．）、ガステロフィルス属（Ｇａｓｔｅｒｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｐ．）、グロッシナ属（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｓｐｐ．）、ハエマトポタ属（Ｈａｅｍａｔｏｐｏｔａ  ｓｐｐ．）、ヒドレリア属（Ｈｙｄｒｅｌｌｉａ  ｓｐｐ．）、ヒドレリア・グリセオラ（Ｈｙｄｒｅｌｌｉａ  ｇｒｉｓｅｏｌａ）、ヒレミア属（Ｈｙｌｅｍｙａ  ｓｐｐ．）、ヒッポボスカ属（Ｈｉｐｐｏｂｏｓｃａ  ｓｐｐ．）、ヒポデルマ属（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａ  ｓｐｐ．）、リリオミザ属（Ｌｉｒｉｏｍｙｚａ  ｓｐｐ．）、ルシリア属（Ｌｕｃｉｌｉａ  ｓｐｐ．）、ルトゾミイア属（Ｌｕｔｚｏｍｙｉａ  ｓｐｐ．）、マンソニア属種（Ｍａｎｓｏｎｉａ  ｓｐｐ．）、ムスカ属（Ｍｕｓｃａ  ｓｐｐ．）（例えば、ムスカ・ドメスチカ（Ｍｕｓｃａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ））、オエストルス属（Ｏｅｓｔｒｕｓ  ｓｐｐ．）、オシネラ・フリト（Ｏｓｃｉｎｅｌｌａ  ｆｒｉｔ）、パラタニタルスス属（Ｐａｒａｔａｎｙｔａｒｓｕｓ  ｓｐｐ．）、パララウテルボルニエラ・スブシンクタ（Ｐａｒａｌａｕｔｅｒｂｏｒｎｉｅｌｌａ  ｓｕｂｃｉｎｃｔａ）、ペゴミイア属（Ｐｅｇｏｍｙｉａ  ｓｐｐ．）、フレボトムス属（Ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｕｓ  ｓｐｐ．）、ホルビア属（Ｐｈｏｒｂｉａ  ｓｐｐ．）、ホルミア属（Ｐｈｏｒｍｉａ  ｓｐｐ．）、ピオフィラ・カセイ（Ｐｉｏｐｈｉｌａ  ｃａｓｅｉ）、プロジプロシス属（Ｐｒ���ｄｉｐｌｏｓｉｓ  ｓｐｐ．）、プシラ・ロサエ（Ｐｓｉｌａ  ｒｏｓａｅ）、ラゴレチス属（Ｒｈａｇｏｌｅｔｉｓ  ｓｐｐ．）、サルコファガ属（Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ  ｓｐｐ．）、シムリウム属（Ｓｉｍｕｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ストモキス属（Ｓｔｏｍｏｘｙｓ  ｓｐｐ．）、タバヌス属（Ｔａｂａｎｕｓ  ｓｐｐ．）、テタノプス属（Ｔｅｔａｎｏｐｓ  ｓｐｐ．）又はチプラ属（Ｔｉｐｕｌａ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３４】
一部の例では、昆虫は、カメムシ亜目（Ｈｅｔｅｒｏｐｔｅｒａ）、例えばアナサ・トリスチス（Ａｎａｓａ  ｔｒｉｓｔｉｓ）、アンテスチオプシス属（Ａｎｔｅｓｔｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、ボイセア属（Ｂｏｉｓｅａ  ｓｐｐ．）、ブリスス属（Ｂｌｉｓｓｕｓ  ｓｐｐ．）、カロコリス属（Ｃａｌｏｃｏｒｉｓ  ｓｐｐ．）、カムピロンマ・リビダ（Ｃａｍｐｙｌｏｍｍａ  ｌｉｖｉｄａ）、カベレリウス属（Ｃａｖｅｌｅｒｉｕｓ  ｓｐｐ．）、シメキス属（Ｃｉｍｅｘ  ｓｐｐ．）、コラリア属（Ｃｏｌｌａｒｉａ  ｓｐｐ．）、クレオンチアデス・ジルツス（Ｃｒｅｏｎｔｉａｄｅｓ  ｄｉｌｕｔｕｓ）、ダシヌス・ピペリス（Ｄａｓｙｎｕｓ  ｐｉｐｅｒｉｓ）、ジケロプス・フルカツス（Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ  ｆｕｒｃａｔｕｓ）、ジコノコリス・ヘウェッチ（Ｄｉｃｏｎｏｃｏｒｉｓ  ｈｅｗｅｔｔｉ）、ジスデルクス属（Ｄｙｓｄｅｒｃｕｓ  ｓｐｐ．）、エウスキスツス属（Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ  ｓｐｐ．）、エウリガステル属（Ｅｕｒｙｇａｓｔｅｒ  ｓｐｐ．）、ヘリオペルチス属（Ｈｅｌｉｏｐｅｌｔｉｓ  ｓｐｐ．）、ホルシアス・ノビレルス（Ｈｏｒｃｉａｓ  ｎｏｂｉｌｅｌｌｕｓ）、レプトコリサ属（Ｌｅｐｔｏｃｏｒｉｓａ  ｓｐｐ．）、レプトコリサ・バリコルニス（Ｌｅｐｔｏｃｏｒｉｓａ  ｖａｒｉｃｏｒｎｉｓ）、レプトグロッスス・フィロプス（Ｌｅｐｔｏｇｌｏｓｓｕｓ  ｐｈｙｌｌｏｐｕｓ）、リグス属（Ｌｙｇｕｓ  ｓｐｐ．）、マクロペス・エキスカバツス（Ｍａｃｒｏｐｅｓ  ｅｘｃａｖａｔｕｓ）、ミリダエ（Ｍｉｒｉｄａｅ）、モナロニオン・アトラツム（Ｍｏｎａｌｏｎｉｏｎ  ａｔｒａｔｕｍ）、ナザラ属（Ｎｅｚａｒａ  ｓｐｐ．）、オエバルス属（Ｏｅｂａｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ペンタトミダエ（Ｐｅｎｔａｔｏｍｉｄａｅ）、ピエズマ・クアドラータ（Ｐｉｅｓｍａ  ｑｕａｄｒａｔａ）、ピエゾドラス属（Ｐｉｅｚｏｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）、サルス属（Ｐｓａｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）、シューダシスタ・ぺルセア（Ｐｓｅｕｄａｃｙｓｔａ  ｐｅｒｓｅａ）、ロドニウス属（Ｒｈｏｄｎｉｕｓ  ｓｐｐ．）、サールベルゲラ・シンギュラリス（Ｓａｈｌｂｅｒｇｅｌｌａ  ｓｉｎｇｕｌａｒｉｓ）、スカプトコリス・カスタネア（Ｓｃａｐｔｏｃｏｒｉｓ  ｃａｓｔａｎｅａ）、スコチノフォラ属（Ｓｃｏｔｉｎｏｐｈｏｒａ  ｓｐｐ．）、ステファニティス・ナシ（Ｓｔｅｐｈａｎｉｔｉｓ  ｎａｓｈｉ）、ティブラカ属（Ｔｉｂｒａｃａ  ｓｐｐ．）又はトリアトマ属（Ｔｒｉａｔｏｍａ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３５】
一部の例では、昆虫は、同翅亜目（Ｈｏｍｉｐｔｅｒａ）、例えばアシジア・アカシアエバイレイアナエ（Ａｃｉｚｚｉａ  ａｃａｃｉａｅｂａｉｌｅｙａｎａｅ）、アシジア・ドドナエアエ（Ａｃｉｚｚｉａ  ｄｏｄｏｎａｅａｅ）、アシジア・ウンカトイデス（Ａｃｉｚｚｉａ  ｕｎｃａｔｏｉｄｅｓ）、アクリダ・ツリタ（Ａｃｒｉｄａ  ｔｕｒｒｉｔａ）、アシルトシポン属（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｏｎ  ｓｐｐ．）、アクロゴニア属（Ａｃｒｏｇｏｎｉａ  ｓｐｐ．）、アエネオラミア属（Ａｅｎｅｏｌａｍｉａ  ｓｐｐ．）、アゴノセナ属（Ａｇｏｎｏｓｃｅｎａ  ｓｐｐ．）、アレイロデス・プロレテラ（Ａｌｅｙｒｏｄｅｓ  ｐｒｏｌｅｔｅｌｌａ）、アレウロロブス・バロデンシス（Ａｌｅｕｒｏｌｏｂｕｓ  ｂａｒｏｄｅｎｓｉｓ）、アレウロトリクス・フロコスス（Ａｌｅｕｒｏｔｈｒｉｘｕｓ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｓ）、アロカリダラ・マライエンシス（Ａｌｌｏｃａｒｉｄａｒａ  ｍａｌａｙｅｎｓｉｓ）、アムラスカ属（Ａｍｒａｓｃａ  ｓｐｐ．）、アヌラフィス・カルズイ（Ａｎｕｒａｐｈｉｓ  ｃａｒｄｕｉ）、アオニジエラ属（Ａｏｎｉｄｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、アファノスチグマ・ピニ（Ａｐｈａｎｏｓｔｉｇｍａ  ｐｉｎｉ）、アフィス属（Ａｐｈｉｓ  ｓｐｐ．）（例えば、アピス・ゴシピイ（Ａｐｉｓ  ｇｏｓｓｙｐｉｉ））、アルボリジア・アピカリス（Ａｒｂｏｒｉｄｉａ  ａｐｉｃａｌｉｓ）、アリタイニラ属（Ａｒｙｔａｉｎｉｌｌａ  ｓｐｐ．）、アスピジエラ属（Ａｓｐｉｄｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、アスピジオツス属（Ａｓｐｉｄｉｏｔｕｓ  ｓｐｐ．）、アタヌス属（Ａｔａｎｕｓ  ｓｐｐ．）、アウラコルツム・ソラニ（Ａｕｌａｃｏｒｔｈｕｍ  ｓｏｌａｎｉ）、ベミシア・タバシ（Ｂｅｍｉｓｉａ  ｔａｂａｃｉ）、ブラストプシラ・オッシデンタリス（Ｂｌａｓｔｏｐｓｙｌｌａ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、ボレイオグリカスピス・メラレウカエ（Ｂｏｒｅｉｏｇｌｙｃａｓｐｉｓ  ｍｅｌａｌｅｕｃａｅ）、ブラキカウズス・ヘリクリシ（Ｂｒａｃｈｙｃａｕｄｕｓ  ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｉ）、ブラキコルス属（Ｂｒａｃｈｙｃｏｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ブレビコリネ・ブラシカエ（Ｂｒｅｖｉｃｏｒｙｎｅ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、カコプシラ属（Ｃａｃｏｐｓｙｌｌａ  ｓｐｐ．）、カリギポナ・マルギナタ（Ｃａｌｌｉｇｙｐｏｎａ  ｍａｒｇｉｎａｔａ）、カルネオセファラ・フルギダ（Ｃａｒｎｅｏｃｅｐｈａｌａ  ｆｕｌｇｉｄａ）、セラトバクナ・ラニゲラ（Ｃｅｒａｔｏｖａｃｕｎａ  ｌａｎｉｇｅｒａ）、セルコピダエ（Ｃｅｒｃｏｐｉｄａｅ）、セロプラステス属（Ｃｅｒｏｐｌａｓｔｅｓ  ｓｐｐ．）、カエトシホン・フラガエホリイ（Ｃｈａｅｔｏｓｉｐｈｏｎ  ｆｒａｇａｅｆｏｌｉｉ）、キオナスピス・テガレンシス（Ｃｈｉｏｎａｓｐｉｓ  ｔｅｇａｌｅｎｓｉｓ）、クロリタ・オヌキイ（Ｃｈｌｏｒｉｔａ  ｏｎｕｋｉｉ）、コンドラクリス・ロセア（Ｃｈｏｎｄｒａｃｒｉｓ  ｒｏｓｅａ）、クロマフィス・ジュグランジコラ（Ｃｈｒｏｍａｐｈｉｓ  ｊｕｇｌａｎｄｉｃｏｌａ）、クリソムファルス・フィクス（Ｃｈｒｙｓｏｍｐｈａｌｕｓ  ｆｉｃｕｓ）、シカズリナ・ムビラ（Ｃｉｃａｄｕｌｉｎａ  ｍｂｉｌａ）、コッコミチルス・ハリイ（Ｃｏｃｃｏｍｙｔｉｌｕｓ  ｈａｌｌｉ）、コックス属（Ｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、クリプトミズス・リビス（Ｃｒｙｐｔｏｍｙｚｕｓ  ｒｉｂｉｓ）、クリプトネオサ属（Ｃｒｙｐｔｏｎｅｏｓｓａ  ｓｐｐ．）、クテナリタイナ属（Ｃｔｅｎａｒｙｔａｉｎａ  ｓｐｐ．）、ダルブルス属（Ｄａｌｂｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ジアレウロデス・キテンデニ（Ｄｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ  ｃｉｔｒｉ）、ジアレウロデス・シトリ（Ｄｉａｐｈｏｒｉｎａ  ｃｉｔｒｉ）、ジアスピス属（Ｄｉａｓｐｉｓ  ｓｐｐ．）、ドロシカ属（Ｄｒｏｓｉｃｈａ  ｓｐｐ．）、ジサフィス属（Ｄｙｓａｐｈｉｓ  ｓｐｐ．）、ジスミコックス属（Ｄｙｓｍｉｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、エムポアスカ属（Ｅｍｐｏａｓｃａ  ｓｐｐ．）、エリオソマ属（Ｅｒｉｏｓｏｍａ  ｓｐｐ．）、エリトロネウラ属（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｅｕｒａ  ｓｐｐ．）、エウカリプトリマ属（Ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌｙｍａ  ｓｐｐ．）、エウフィルラ属（Ｅｕｐｈｙｌｌｕｒａ  ｓｐｐ．）、エウセリス・ビロバツス（Ｅｕｓｃｅｌｉｓ  ｂｉｌｏｂａｔｕｓ）、フェリシア属（Ｆｅｒｒｉｓｉａ  ｓｐｐ．）、ゲオコックス・コフェアエ（Ｇｅｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｆｆｅａｅ）、グリカスピス属（Ｇｌｙｃａｓｐｉｓ  ｓｐｐ．）、ヘテロプシラ・クバナ（Ｈｅｔｅｒｏｐｓｙｌｌａ  ｃｕｂａｎａ）、ヘテロプシラ・スピヌロサ（Ｈｅｔｅｒｏｐｓｙｌｌａ  ｓｐｉｎｕｌｏｓａ）、ホマロジスカ・コアグラタ（Ｈｏｍａｌｏｄｉｓｃａ  ｃｏａｇｕｌａｔａ）、ホマロジスカ・ビトリペンニス（Ｈｏｍａｌｏｄｉｓｃａ  ｖｉｔｒｉｐｅｎｎｉｓ）、ヒアロプテルス・アルンジニス（Ｈｙａｌｏｐｔｅｒｕｓ  ａｒｕｎｄｉｎｉｓ）、イセリア属（Ｉｃｅｒｙａ  ｓｐｐ．）、イジオセルス属（Ｉｄｉｏｃｅｒｕｓ  ｓｐｐ．）、イジオスコプス属（Ｉｄｉｏｓｃｏｐｕｓ  ｓｐｐ．）、ラオデルファキス・ストリアテルス（Ｌａｏｄｅｌｐｈａｘ  ｓｔｒｉａｔｅｌｌｕｓ）、レカニウム属（Ｌｅｃａｎｉｕｍ  ｓｐｐ．）、レピドサフェス属（Ｌｅｐｉｄｏｓａｐｈｅｓ  ｓｐｐ．）、リパフィス・エリシミ（Ｌｉｐａｐｈｉｓ  ｅｒｙｓｉｍｉ）、マクロシフム属（Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｕｍ  ｓｐｐ．）、マクロステレス・ファシフロンス（Ｍａｃｒｏｓｔｅｌｅｓ  ｆａｃｉｆｒｏｎｓ）、マハナルバ属（Ｍａｈａｎａｒｖａ  ｓｐｐ．）、メラナフィス・サッカリ（Ｍｅｌａｎａｐｈｉｓ  ｓａｃｃｈａｒｉ）、メトカルフィエラ属（Ｍｅｔｃａｌｆｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、トポロフィウム・ジロズム（Ｍｅｔｏｐｏｌｏｐｈｉｕｍ  ｄｉｒｈｏｄｕｍ）、モネリア・コスタリス（Ｍｏｎｅｌｌｉａ  ｃｏｓｔａｌｉｓ）、モネリオプシス・ペカニス（Ｍｏｎｅｌｌｉｏｐｓｉｓ  ｐｅｃａｎｉｓ）、ミズス属（Ｍｙｚｕｓ  ｓｐｐ．）、ナソノビア・リビスニグリ（Ｎａｓｏｎｏｖｉａ  ｒｉｂｉｓｎｉｇｒｉ）、ネホテッチキス属（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｔｉｘ  ｓｐｐ．）、ネチゴニセラ・スペクトラ（Ｎｅｔｔｉｇｏｎｉｃｌｌａ  ｓｐｅｃｔｒａ）、ニラパルバタ・ルゲンス（Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ  ｌｕｇｅｎｓ）、オンコメトピア属（Ｏｎｃｏｍｅｔｏｐｉａ  ｓｐｐ．）、オルテジア・プラエロンガ（Ｏｒｔｈｅｚｉａ  ｐｒａｅｌｏｎｇａ）、オキシヤ・キネンシス（Ｏｘｙａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、パキプシラ属（Ｐａｃｈｙｐｓｙｌｌａ  ｓｐｐ．）、パラベミシア・ミリカエ（Ｐａｒａｂｅｍｉｓｉａ  ｍｙｒｉｃａｅ）、パラトリオザ属（Ｐａｒａｔｒｉｏｚａ  ｓｐｐ．）、パルラトリア属（Ｐａｒｌａｔｏｒｉａ  ｓｐｐ．）、ペムフィグス属（Ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ  ｓｐｐ．）、ペンタトミダエ属（Ｐｅｎｔａｔｏｍｉｄａｅ  ｓｐｐ．）（例えば、クサギカメムシ（Ｈａｌｙｏｍｏｒｐｈａ  ｈａｌｙｓ））、ペレグリヌス・マイジス（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｕｓ  ｍａｉｄｉｓ）、フェナコックス属（Ｐｈｅｎａｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、フロエオミズス・パッセリニイ（Ｐｈｌｏｅｏｍｙｚｕｓ  ｐａｓｓｅｒｉｎｉｉ）、ホロドン・フムリ（Ｐｈｏｒｏｄｏｎ  ｈｕｍｕｌｉ）、フィロキセラ属（Ｐｈｙｌｌｏｘｅｒａ  ｓｐｐ．）、ピンナスピス・アスピジストラエ（Ｐｉｎｎａｓｐｉｓ  ａｓｐｉｄｉｓｔｒａｅ）、プラノコックス属（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、プロソピドプシラ・フラバ（Ｐｒｏｓｏｐｉｄｏｐｓｙｌｌａ  ｆｌａｖａ）、プロトプルビナリア・ピリホルミス（Ｐｒｏｔｏｐｕｌｖｉｎａｒｉａ  ｐｙｒｉｆｏｒｍｉｓ）、プセウダウラカスピス・ペンタゴナ（Ｐｓｅｕｄａｕｌａｃａｓｐｉｓ  ｐｅｎｔａｇｏｎａ）、プセウドコックス属（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、プシロプシス属（Ｐｓｙｌｌｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、プシラ属（Ｐｓｙｌｌａ  ｓｐｐ．）、プテロマルス属（Ｐｔｅｒｏｍａｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ピリラ属（Ｐｙｒｉｌｌａ  ｓｐｐ．）、クアドラスピジオツス属（Ｑｕａｄｒａｓｐｉｄｉｏｔｕｓ  ｓｐｐ．）、クエサダ・ギガス（Ｑｕｅｓａｄａ  ｇｉｇａｓ）、ラストロコックス属（Ｒａｓｔｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、ロパロシフム属（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ  ｓｐｐ．）、サイセチア属（Ｓａｉｓｓｅｔｉａ  ｓｐｐ．）、スカホイデウス・チタヌス（Ｓｃａｐｈｏｉｄｅｕｓ  ｔｉｔａｎｕｓ）、スキザフィス・グラミヌム（Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、セレナスピズス・アルチクラツス（Ｓｅｌｅｎａｓｐｉｄｕｓ  ａｒｔｉｃｕｌａｔｕｓ）、ソガタ属（Ｓｏｇａｔａ  ｓｐｐ．）、ソガテラ・フルシフェラ（Ｓｏｇａｔｅｌｌａ  ｆｕｒｃｉｆｅｒａ）、ソガトデス属（Ｓｏｇａｔｏｄｅｓ  ｓｐｐ．）、スチクトセファラ・フェスチナ（Ｓｔｉｃｔｏｃｅｐｈａｌａ  ｆｅｓｔｉｎａ）、シホニヌス・フィリレアエ（Ｓｉｐｈｏｎｉｎｕｓ  ｐｈｉｌｌｙｒｅａｅ）、テナラファラ・マライエンシス（Ｔｅｎａｌａｐｈａｒａ  ｍａｌａｙｅｎｓｉｓ）、テトラゴノセフェラ属（Ｔｅｔｒａｇｏｎｏｃｅｐｈｅｌａ  ｓｐｐ．）、チノカリス・カリアエホリアエ（Ｔｉｎｏｃａｌｌｉｓ  ｃａｒｙａｅｆｏｌｉａｅ）、トマスピス属（Ｔｏｍａｓｐｉｓ  ｓｐｐ．）、トキソプテラ属（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ  ｓｐｐ．）、トリアレウロデス・バポラリオルム（Ｔｒｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ  ｖａｐｏｒａｒｉｏｒｕｍ）、トリオザ属（Ｔｒｉｏｚａ  ｓｐｐ．）、チフロシバ属種（Ｔｙｐｈｌｏｃｙｂａ  ｓｐｐ．）、ウナスピス属（Ｕｎａｓｐｉｓ  ｓｐｐ．）、ビテウス・ビチホリイ（Ｖｉｔｅｕｓ  ｖｉｔｉｆｏｌｉｉ）、ジギナ属（Ｚｙｇｉｎａ  ｓｐｐ．）由来；
ハチ目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、例えばアクロミルメキス属（Ａｃｒｏｍｙｒｍｅｘ  ｓｐｐ．）、アタリア属（Ａｔｈａｌｉａ  ｓｐｐ．）、アッタ属（Ａｔｔａ  ｓｐｐ．）、ジプリオン属（Ｄｉｐｒｉｏｎ  ｓｐｐ．）、ホプロカムパ属（Ｈｏｐｌｏｃａｍｐａ  ｓｐｐ．）、ラシウス属（Ｌａｓｉｕｓ  ｓｐｐ．）、モノモリウム・ファラオニス（Ｍｏｎｏｍｏｒｉｕｍ  ｐｈａｒａｏｎｉｓ）、シレキス属（Ｓｉｒｅｘ  ｓｐｐ．）、ソレノプシス・インビクタ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｉｎｖｉｃｔａ）、タピノマ属（Ｔａｐｉｎｏｍａ  ｓｐｐ．）、ウロセルス属（Ｕｒｏｃｅｒｕｓ  ｓｐｐ．）、ベスパ属（Ｖｅｓｐａ  ｓｐｐ．）又はキセリス属（Ｘｅｒｉｓ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３６】
一部の例では、昆虫は、ワラジムシ目（Ｉｓｏｐｏｄａ）、例えばアルマジリジウム・ブルガレ（Ａｒｍａｄｉｌｌｉｄｉｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、オニスクス・アセルス（Ｏｎｉｓｃｕｓ  ａｓｅｌｌｕｓ）又はポルセリオ・スカベル（Ｐｏｒｃｅｌｌｉｏ  ｓｃａｂｅｒ）由来である。
【０２３７】
一部の例では、昆虫は、シロアリ目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、例えばコプトテルメス属（Ｃｏｐｔｏｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｐ．）、コルニテルメス・クムランス（Ｃｏｒｎｉｔｅｒｍｅｓ  ｃｕｍｕｌａｎｓ）、クリプトテルメス属（Ｃｒｙｐｔｏｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｐ．）、インシシテルメス属（Ｉｎｃｉｓｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｐ．）、ミクロテルメス・オベシ（Ｍｉｃｒｏｔｅｒｍｅｓ  ｏｂｅｓｉ）、オドントテルメス属（Ｏｄｏｎｔｏｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｐ．）又はレチクリテルメス属（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３８】
一部の例では、昆虫は、チョウ目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、例えばアクロイア・グリセラ（Ａｃｈｒｏｉａ  ｇｒｉｓｅｌｌａ）、アクロニクタ・マジョル（Ａｃｒｏｎｉｃｔａ  ｍａｊｏｒ）、アドキソフィエス属（Ａｄｏｘｏｐｈｙｅｓ  ｓｐｐ．）、アエジア・レウコメラス（Ａｅｄｉａ  ｌｅｕｃｏｍｅｌａｓ）、アグロチス属（Ａｇｒｏｔｉｓ  ｓｐｐ．）、アラバマ属（Ａｌａｂａｍａ  ｓｐｐ．）、アミエロイス・トランシテラ（Ａｍｙｅｌｏｉｓ  ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ）、アナルシア属（Ａｎａｒｓｉａ  ｓｐｐ．）、アンチカルシア属（Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ  ｓｐｐ．）、アルギロプロセ属（Ａｒｇｙｒｏｐｌｏｃｅ  ｓｐｐ．）、バラトラ・ブラシカエ（Ｂａｒａｔｈｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、ボルボ・シンナラ（Ｂｏｒｂｏ  ｃｉｎｎａｒａ）、ブックラトリキス・ツルベリエラ（Ｂｕｃｃｕｌａｔｒｉｘ  ｔｈｕｒｂｅｒｉｅｌｌａ）、ブパルス・ピニアリウス（Ｂｕｐａｌｕｓ  ｐｉｎｉａｒｉｕｓ）、ブッセオラ属（Ｂｕｓｓｅｏｌａ  ｓｐｐ．）、カコエシア属（Ｃａｃｏｅｃｉａ  ｓｐｐ．）、カロプチリア・テイボラ（Ｃａｌｏｐｔｉｌｉａ  ｔｈｅｉｖｏｒａ）、カプア・レチクラナ（Ｃａｐｕａ  ｒｅｔｉｃｕｌａｎａ）、カルポカプサ・ポモネラ（Ｃａｒｐｏｃａｐｓａ  ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）、カルポシナ・ニポネンシス（Ｃａｒｐｏｓｉｎａ  ｎｉｐｏｎｅｎｓｉｓ）、ケイマトビア・ブルマタ（Ｃｈｅｉｍａｔｏｂｉａ  ｂｒｕｍａｔａ）、キロ属（Ｃｈｉｌｏ  ｓｐｐ．）、コリストネウラ属（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ  ｓｐｐ．）、クリシア・アムビグエラ（Ｃｌｙｓｉａ  ａｍｂｉｇｕｅｌｌａ）、クナファロセルス属（Ｃｎａｐｈａｌｏｃｅｒｕｓ  ｓｐｐ．）、クナファロクロシス・メジナリス（Ｃｎａｐｈａｌｏｃｒｏｃｉｓ  ｍｅｄｉｎａｌｉｓ）、クネファシア属（Ｃｎｅｐｈａｓｉａ  ｓｐｐ．）、コノポモルファ属（Ｃｏｎｏｐｏｍｏｒｐｈａ  ｓｐｐ．）、コノトラケルス属（Ｃｏｎｏｔｒａｃｈｅｌｕｓ  ｓｐｐ．）、コピタルシア属（Ｃｏｐｉｔａｒｓｉａ  ｓｐｐ．）、シジア属（Ｃｙｄｉａ  ｓｐｐ．）、ダラカ・ノクツイデス（Ｄａｌａｃａ  ｎｏｃｔｕｉｄｅｓ）、ジアファニア属（Ｄｉａｐｈａｎｉａ  ｓｐｐ．）、ジアトラエア・サッカラリス（Ｄｉａｔｒａｅａ  ｓａｃｃｈａｒａｌｉｓ）、エアリアス属（Ｅａｒｉａｓ  ｓｐｐ．）、エクジトロファ・アウランチウム（Ｅｃｄｙｔｏｌｏｐｈａ  ａｕｒａｎｔｉｕｍ）、エラスモパルプス・リグノセルス（Ｅｌａｓｍｏｐａｌｐｕｓ  ｌｉｇｎｏｓｅｌｌｕｓ）、エルダナ・サッカリナ（Ｅｌｄａｎａ  ｓａｃｃｈａｒｉｎａ）、エフェスチア属（Ｅｐｈｅｓｔｉａ  ｓｐｐ．）、エピノチア属（Ｅｐｉｎｏｔｉａ  ｓｐｐ．）、エピフィアス・ポストビッタナ（Ｅｐｉｐｈｙａｓ  ｐｏｓｔｖｉｔｔａｎａ）、エチエラ属（Ｅｔｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、エウリア属（Ｅｕｌｉａ  ｓｐｐ．）、エウポエシリア・アムビグエラ（Ｅｕｐｏｅｃｉｌｉａ  ａｍｂｉｇｕｅｌｌａ）、エウプロクチス属（Ｅｕｐｒｏｃｔｉｓ  ｓｐｐ．）、エウキソア属（Ｅｕｘｏａ  ｓｐｐ．）、フェルチア属（Ｆｅｌｔｉａ  ｓｐｐ．）、ガレリア・メロネラ（Ｇａｌｌｅｒｉａ  ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）、グラシラリア属（Ｇｒａｃｉｌｌａｒｉａ  ｓｐｐ．）、グラホリタ属（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔｈａ  ｓｐｐ．）、ヘジレプタ属（Ｈｅｄｙｌｅｐｔａ  ｓｐｐ．）、ヘリコベルパ属（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｓｐｐ．）、ヘリオチス属（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｓｐｐ．）、ホフマンノフィラ・プセウドスプレテラ（Ｈｏｆｍａｎｎｏｐｈｉｌａ  ｐｓｅｕｄｏｓｐｒｅｔｅｌｌａ）、ホモエオソマ属（Ｈｏｍｏｅｏｓｏｍａ  ｓｐｐ．）、ホモナ属（Ｈｏｍｏｎａ  ｓｐｐ．）、ヒポノメウタ・パデラ（Ｈｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ  ｐａｄｅｌｌａ）、カキボリア・フラボファシアタ（Ｋａｋｉｖｏｒｉａ  ｆｌａｖｏｆａｓｃｉａｔａ）、ラフィグマ属（Ｌａｐｈｙｇｍａ  ｓｐｐ．）、ラスペイレシア・モレスタ（Ｌａｓｐｅｙｒｅｓｉａ  ｍｏｌｅｓｔａ）、レウシノデス・オルボナリス（Ｌｅｕｃｉｎｏｄｅｓ  ｏｒｂｏｎａｌｉｓ）、レウコプテラ属（Ｌｅｕｃｏｐｔｅｒａ  ｓｐｐ．）、リトコレチス属（Ｌｉｔｈｏｃｏｌｌｅｔｉｓ  ｓｐｐ．）、リトファネ・アンテンナタ（Ｌｉｔｈｏｐｈａｎｅ  ａｎｔｅｎｎａｔａ）、ロベシア属（Ｌｏｂｅｓｉａ  ｓｐｐ．）、ロキサグロチス・アルビコスタ（Ｌｏｘａｇｒｏｔｉｓ  ａｌｂｉｃｏｓｔａ）、リマントリア属（Ｌｙｍａｎｔｒｉａ  ｓｐｐ．）、リオネチア属（Ｌｙｏｎｅｔｉａ  ｓｐｐ．）、マラコソマ・ネウストリア（Ｍａｌａｃｏｓｏｍａ  ｎｅｕｓｔｒｉａ）、マルカ・テスツラリス（Ｍａｒｕｃａ  ｔｅｓｔｕｌａｌｉｓ）、マムストラ・ブラシカエ（Ｍａｍｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、メラニチス・レダ（Ｍｅｌａｎｉｔｉｓ  ｌｅｄａ）、モシス属（Ｍｏｃｉｓ  ｓｐｐ．）、モノピス・オブビエラ（Ｍｏｎｏｐｉｓ  ｏｂｖｉｅｌｌａ）、ミチムナ・セパラタ（Ｍｙｔｈｉｍｎａ  ｓｅｐａｒａｔａ）、ネマポゴン・クロアセルス（Ｎｅｍａｐｏｇｏｎ  ｃｌｏａｃｅｌｌｕｓ）、ニムフラ属（Ｎｙｍｐｈｕｌａ  ｓｐｐ．）、オイケチクス属（Ｏｉｋｅｔｉｃｕｓ  ｓｐｐ．）、オリア属（Ｏｒｉａ  ｓｐｐ．）、オルタガ属（Ｏｒｔｈａｇａ  ｓｐｐ．）、オストリニア属（Ｏｓｔｒｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、オウレマ・オリザエ（Ｏｕｌｅｍａ  ｏｒｙｚａｅ）、パノリス・フランメア（Ｐａｎｏｌｉｓ  ｆｌａｍｍｅａ）、パルナラ属種（Ｐａｒｎａｒａ  ｓｐｐ．）、ペクチノホラ属（Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ  ｓｐｐ．）、ペリレウコプテラ属（Ｐｅｒｉｌｅｕｃｏｐｔｅｒａ  ｓｐｐ．）、フトリマエア属（Ｐｈｔｈｏｒｉｍａｅａ  ｓｐｐ．）、フィロクニスチス・シトレラ（Ｐｈｙｌｌｏｃｎｉｓｔｉｓ  ｃｉｔｒｅｌｌａ）、フィロノリクテル属（Ｐｈｙｌｌｏｎｏｒｙｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）、ピエリス属（Ｐｉｅｒｉｓ  ｓｐｐ．）、プラチノタ・スツルタナ（Ｐｌａｔｙｎｏｔａ  ｓｔｕｌｔａｎａ）、プロジア・インテルプンクテラ（Ｐｌｏｄｉａ  ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ）、プルシア属（Ｐｌｕｓｉａ  ｓｐｐ．）、プルテラ・キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、プライス属（Ｐｒａｙｓ  ｓｐｐ．）、プロデニア属（Ｐｒｏｄｅｎｉａ  ｓｐｐ．）、プロトパルセ属（Ｐｒｏｔｏｐａｒｃｅ  ｓｐｐ．）、プセウダレチア属（Ｐｓｅｕｄａｌｅｔｉａ  ｓｐｐ．）、プセウダレチア・ウニプンクタ（Ｐｓｅｕｄ��ｌｅｔｉａ  ｕｎｉｐｕｎｃｔａ）、プセウドプルシア・インクルデンス（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｕｓｉａ  ｉｎｃｌｕｄｅｎｓ）、ピラウスタ・ヌビラリス（Ｐｙｒａｕｓｔａ  ｎｕｂｉｌａｌｉｓ）、ラキプルシア・ヌ（Ｒａｃｈｉｐｌｕｓｉａ  ｎｕ）、スコエノビウス属（Ｓｃｈｏｅｎｏｂｉｕｓ  ｓｐｐ．）、シルポファガ属（Ｓｃｉｒｐｏｐｈａｇａ  ｓｐｐ．）、シルポファガ・インノタタ（Ｓｃｉｒｐｏｐｈａｇａ  ｉｎｎｏｔａｔａ）、スコチア・セゲツム（Ｓｃｏｔｉａ  ｓｅｇｅｔｕｍ）、セサミア属（Ｓｅｓａｍｉａ  ｓｐｐ．）、セサミア・インフェレンス（Ｓｅｓａｍｉａ  ｉｎｆｅｒｅｎｓ）、スパルガノチス属（Ｓｐａｒｇａｎｏｔｈｉｓ  ｓｐｐ．）、スポドプテラ属（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｓｐｐ．）、スポドプテラ・プラエフィカ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｐｒａｅｆｉｃａ）、スタトモポダ属（Ｓｔａｔｈｍｏｐｏｄａ  ｓｐｐ．）、ストモプテリキス・スブセシベラ（Ｓｔｏｍｏｐｔｅｒｙｘ  ｓｕｂｓｅｃｉｖｅｌｌａ）、シナンテドン属（Ｓｙｎａｎｔｈｅｄｏｎ  ｓｐｐ．）、テシア・ソラニボラ（Ｔｅｃｉａ  ｓｏｌａｎｉｖｏｒａ）、テルメシア・ゲンマタリス（Ｔｈｅｒｍｅｓｉａ  ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ）、チネア・クロアセラ（Ｔｉｎｅａ  ｃｌｏａｃｅｌｌａ）、チネア・ペリオネラ（Ｔｉｎｅａ  ｐｅｌｌｉｏｎｅｌｌａ）、チネオラ・ビッセリエラ（Ｔｉｎｅｏｌａ  ｂｉｓｓｅｌｌｉｅｌｌａ）、トルトリキス属（Ｔｏｒｔｒｉｘ  ｓｐｐ．）、トリコファガ・タペトゼラ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈａｇａ  ｔａｐｅｔｚｅｌｌａ）、トリコプルシア属（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｓｐｐ．）、トリポリザ・インセルツラス（Ｔｒｙｐｏｒｙｚａ  ｉｎｃｅｒｔｕｌａｓ）、ツタ・アブソルタ（Ｔｕｔａ  ａｂｓｏｌｕｔａ）又はビラコラ属（Ｖｉｒａｃｈｏｌａ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２３９】
一部の例では、昆虫は、バッタ目（Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａ）又はサルタトリア（Ｓａｌｔａｔｏｒｉａ）、例えばアケタ・ドメスチクス（Ａｃｈｅｔａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ジクロプルス属（Ｄｉｃｈｒｏｐｌｕｓ  ｓｐｐ．）、グリロタルパ属（Ｇｒｙｌｌｏｔａｌｐａ  ｓｐｐ．）、ヒエログリフス属（Ｈｉｅｒｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｓｐｐ．）、ロクスタ属（Ｌｏｃｕｓｔａ  ｓｐｐ．）、メラノプルス属（Ｍｅｌａｎｏｐｌｕｓ  ｓｐｐ．）又はスキストセルカ・グレガリア（Ｓｃｈｉｓｔｏｃｅｒｃａ  ｇｒｅｇａｒｉａ）由来である。
【０２４０】
一部の例では、昆虫は、シラミ目（Ｐｈｔｈｉｒａｐｔｅｒａ）、例えばダマリニア属種（Ｄａｍａｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、ハエマトピヌス属（Ｈａｅｍａｔｏｐｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）、リノグナツス属（Ｌｉｎｏｇｎａｔｈｕｓ  ｓｐｐ．）、ペジクルス属（Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）、プチルス・プビス（Ｐｔｉｒｕｓ  ｐｕｂｉｓ）、トリコデクテス属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｃｔｅｓ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２４１】
一部の例では、昆虫は、チャタテムシ目（Ｐｓｏｃｏｐｔｅｒａ）、例えばレピナツス属（Ｌｅｐｉｎａｔｕｓ  ｓｐｐ．）又はリポセリス属（Ｌｉｐｏｓｃｅｌｉｓ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２４２】
一部の例では、昆虫は、ノミ目（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ）、例えばセラトフィルス属（Ｃｅｒａｔｏｐｈｙｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）、クテノセファリデス属（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）、プレキス・イリタンス（Ｐｕｌｅｘ  ｉｒｒｉｔａｎｓ）、ツンガ・ペネトランス（Ｔｕｎｇａ  ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）又はキセノプシラ・ケオプシス（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａ  ｃｈｅｏｐｓｉｓ）由来である。
【０２４３】
一部の例では、昆虫は、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、例えばアナホトリプス・オブスクルス（Ａｎａｐｈｏｔｈｒｉｐｓ  ｏｂｓｃｕｒｕｓ）、バリオトリプス・ビホルミス（Ｂａｌｉｏｔｈｒｉｐｓ  ｂｉｆｏｒｍｉｓ）、ドレパノトリプス・レウテリ（Ｄｒｅｐａｎｏｔｈｒｉｐｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、エンネオトリプス・フラベンス（Ｅｎｎｅｏｔｈｒｉｐｓ  ｆｌａｖｅｎｓ）、フランクリニエラ属（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、ヘリオトリプス属（Ｈｅｌｉｏｔｈｒｉｐｓ  ｓｐｐ．）、ヘルシノトリプス・フェモラリス（Ｈｅｒｃｉｎｏｔｈｒｉｐｓ  ｆｅｍｏｒａｌｉｓ）、リピホロトリプス・クルエンタツス（Ｒｈｉｐｉｐｈｏｒｏｔｈｒｉｐｓ  ｃｒｕｅｎｔａｔｕｓ）、シルトトリプス属（Ｓｃｉｒｔｏｔｈｒｉｐｓ  ｓｐｐ．）、タエニノトリプス・カルダモミ（Ｔａｅｎｉｏｔｈｒｉｐｓ  ｃａｒｄａｍｏｍｉ）又はトリプス属（Ｔｈｒｉｐｓ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２４４】
一部の例では、昆虫は、シミ目（Ｚｙｇｅｎｔｏｍａ）（＝シミ目（Ｔｈｙｓａｎｕｒａ））、例えばクテノレピスマ属（Ｃｔｅｎｏｌｅｐｉｓｍａ  ｓｐｐ．）、レピスマ・サッカリナ（Ｌｅｐｉｓｍａ  ｓａｃｃｈａｒｉｎａ）、レスピモデス・インクイリヌス（Ｌｅｐｉｓｍｏｄｅｓ  ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ）又はテルモビア・ドメスチカ（Ｔｈｅｒｍｏｂｉａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）由来である。
【０２４５】
一部の例では、昆虫は、コムカデ綱（Ｓｙｍｐｈｙｌａ）、例えばスクチゲレラ属（Ｓｃｕｔｉｇｅｒｅｌｌａ  ｓｐｐ．）由来である。
【０２４６】
一部の例では、昆虫は、シクラメンホコリダニ（Ｐｈｙｔｏｎｅｍｕｓ  ｐａｌｌｉｄｕｓ）、チャノホコリダニ（Ｐｏｌｙｐｈａｇｏｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｌａｔｕｓ）、スジブトホコリダニ（Ｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ  ｂｉｌｏｂａｔｕｓ）等のホコリダニ（Ｔａｒｓｏｎｅｍｉｄ）；ハクサイダニ（Ｐｅｎｔｈａｌｅｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ）、ムギダニ（Ｐｅｎｔｈａｌｅｕｓ  ｍａｊｏｒ）等のユーポジド（Ｅｕｐｏｄｉｄ）ダニ；イネハダニ（Ｏｌｉｇｏｎｙｃｈｕｓ  ｓｈｉｎｋａｊｉｉ）、ミカンハダニ（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ  ｃｉｔｒｉ）、クワオオハダニ（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ  ｍｏｒｉ）、リンゴハダニ（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ  ｕｌｍｉ）、カンザワハダニ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｋａｎｚａｗａｉ）、ナミハダニ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｕｒｔｉｃａｅ）等のハダニ；チャノナガサビダニ（Ａｃａｐｈｙｌｌａ  ｔｈｅａｖａｇｒａｎｓ）、チューリップサビダニ（Ａｃｅｒｉａ  ｔｕｌｉｐａｅ）、トマトサビダニ（Ａｃｕｌｏｐｓ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ）、ミカンサビダニ（Ａｃｕｌｏｐｓ  ｐｅｌｅｋａｓｓｉ）、リンゴサビダニ（Ａｃｕｌｕｓ  ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｌｉ）、ニセナシサビダニ（Ｅｒｉｏｐｈｙｅｓ  ｃｈｉｂａｅｎｓｉｓ）、シトラスラストマイト（Ｐｈｙｌｌｏｃｏｐｔｒｕｔａ  ｏｌｅｉｖｏｒａ）等のフシダニ；ロビンネダニ（Ｒｈｉｚｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｒｏｂｉｎｉ）、ケナガコナダニ（Ｔｙｒｏｐｈａｇｕｓ  ｐｕｔｒｅｓｃｅｎｔｉａｅ）、ホウレンソウケナガコナダニ（Ｔｙｒｏｐｈａｇｕｓ  ｓｉｍｉｌｉｓ）等のコナダニ；ミツバチヘギイタダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｊａｃｏｂｓｏｎｉ）、ミツバチヘギイタダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）等の蜂幼虫（Ｂｅｅ  ｂｒｏｏｄ）ダニ；オウシマダニ（Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｌｕｓ）、クリイロコイタマダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ  ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）、フタトゲチマダニ（Ｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｉｓ  ｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓ）、カタダニ（Ｈａｅｍｏｐｈｙｓａｌｉｓ  ｆｌａｖａ）、ツリガネチマダニ（Ｈａｅｍｏｐｈｙｓａｌｉｓ  ｃａｍｐａｎｕｌａｔａ）、ヤマトマダニ（Ｉｘｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、シュルツェマダニ（Ｉｘｏｄｅｓ  ｐｅｒｓｕｌｃａｔｕｓ）、キララマダニ属（Ａｍｂｌｙｏｍｍａ  ｓｐｐ．）、カクマダニ属（Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒ  ｓｐｐ．）等のマダニ（Ｉｘｏｄｉｄｅｓ）；イヌツメダニ（Ｃｈｅｙｌｅｔｉｅｌｌａ  ｙａｓｇｕｒｉ）、ネコツメダニ（Ｃｈｅｙｌｅｔｉｅｌｌａ  ｂｌａｋｅｉ）等のツメダニ科（Ｃｈｅｙｌｅｔｉｄａｅ）；イヌニキビダニ（Ｄｅｍｏｄｅｘ  ｃａｎｉｓ）、ネコニキビダニ（Ｄｅｍｏｄｅｘ  ｃａｔｉ）等のニキビダニ科（Ｄｅｍｏｄｉｃｉｄａｅ）；ヒツジキュウセンダニ（Ｐｓｏｒｏｐｔｅｓ  ｏｖｉｓ）等のキュウセンダニ科（Ｐｓｏｒｏｐｔｉｄａｅ）；ヒゼンダニ（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ）、ネコヒゼンダニ（Ｎｏｔｏｅｄｒｅｓ  ｃａｔｉ）、クネミドコプテス属（Ｋｎｅｍｉｄｏｃｏｐｔｅｓ  ｓｐｐ．）等のスカルコプチダエ科（Ｓｃａｒｃｏｐｔｉｄａｅ）を含むが、これらに限定されないダニである。
【０２４７】
図３は、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法を用いて、処置又は予防することができる寄生を引き起こす昆虫の例をさらに示す。
【０２４８】
2021523944.tif 000013
【０２４９】
2021523944.tif 000014
【０２５０】
2021523944.tif 000015
【０２５１】
2021523944.tif 000016
【０２５２】
Ｄ．軟体動物
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、例えば、植物における軟体動物寄生を予防又は処置するために、軟体動物の適応度を低減させる上で有用であり得る。用語「軟体動物」は、軟体動物（Ｍｏｌｌｕｓｃａ）門に属するあらゆる生物を含む。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を軟体動物と接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を軟体動物に送達する方法が含まれる。加えて又は代わりに、本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物と接触させることにより、軟体動物寄生のリスクがあるか、又は軟体動物寄生を有する植物にバイオ農薬を送達することを含む。
【０２５３】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、農業及び園芸において陸生腹足綱（Ｇａｓｔｒｏｐｏｄｓ）（例えば、ナメクジ及びカタツムリ）寄生を予防又は処置する上で好適である。これらは、農業及び園芸作物において主に多食性害虫として発生する全ての陸生ナメクジ及びカタツムリを含む。例えば、軟体動物は、アフリカマイマイ科（Ａｃｈａｔｉｎｉｄａｅ）、ノハラナメクジ科（Ａｇｒｉｏｌｉｍａｃｉｄａｅ）、リンゴガイ科（Ａｍｐｕｌｌａｒｉｉｄａｅ）、オオコウラナメクジ科（Ａｒｉｏｎｉｄａｅ）、オナジマイマイ科（Ｂｒａｄｙｂａｅｎｉｄａｅ）、マイマイ科（Ｈｅｌｉｃｉｄａｅ）、ミズツボ科（Ｈｙｄｒｏｍｉｉｄａｅ）、モノアラガイ科（Ｌｙｍｎａｅｉｄａｅ）、ニワコウラナメクジ科（Ｍｉｌａｃｉｄａｅ）、コウラナメクジ科（Ｕｒｏｃｙｃｌｉｄａｅ）又はアシヒダナメクジ科（Ｖｅｒｏｎｉｃｅｌｌｉｄａｅ）に属し得る。
【０２５４】
例えば、一部の例では、軟体動物は、アフリカマイマイ属（Ａｃｈａｔｉｎａ  ｓｐｐ．）、アルチャチャチーナ属（Ａｒｃｈａｃｈａｔｉｎａ  ｓｐｐ．）（例えば、ベニアフリカマイマイ（Ａｒｃｈａｃｈａｔｉｎａ  ｍａｒｇｉｎａｔａ））、アグリロリマックス属（Ａｇｒｉｏｌｉｍａｘ  ｓｐｐ．）、アリオン属（Ａｒｉｏｎ  ｓｐｐ．）（例えば、Ａ．アター（Ａ．ａｔｅｒ）、Ａ．サーカムクリプツス（Ａ．ｃｉｒｃｕｍｓｃｒｉｐｔｕｓ）、Ａ．ジスチンクツス（Ａ．ｄｉｓｔｉｎｃｔｕｓ）、Ａ．ファシアツス（Ａ．ｆａｓｃｉａｔｕｓ）、Ａ．ホルテンシス（Ａ．ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）、Ａ．インテルメディウス（Ａ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、Ａ．ルーフス（Ａ．ｒｕｆｕｓ）、Ａ．サブフスカス（Ａ．ｓｕｂｆｕｓｃｕｓ）、Ａ．シルバチカス（Ａ．ｓｉｌｖａｔｉｃｕｓ）、Ａ．ルシタニカス（Ａ．ｌｕｓｉｔａｎｉｃｕｓ））、アルリオマックス（Ａｒｌｉｏｍａｘ  ｓｐｐ．）（例えば、アリオリマックス・コルンビアヌス（Ａｒｉｏｌｉｍａｘ  ｃｏｌｕｍｂｉａｕｓ）、ビオンファラリア属（Ｂｉｏｍｐｈａｌａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ブラジバエナ属（Ｂｒａｄｙｂａｅｎａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｂ．フルチクム（Ｂ．ｆｒｕｔｉｃｕｍ））、ブリヌス属（Ｂｕｌｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）、カンタレウス属（Ｃａｎｔａｒｅｕｓ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｃ．アスペルセス（Ｃ．ａｓｐｅｒｓｅｓ））、セパエア属（Ｃｅｐａｅａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｃ．ホルテンシス（Ｃ．ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）、Ｃ．ネモラリス（Ｃ．ｎｅｍｏｒａｌｉｓ）、Ｃ．ホルテンシス（Ｃ．ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ））、セルヌエラ属（Ｃｅｒｎｕｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、コクリセラ属（Ｃｏｃｈｌｉｃｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、コクロディナ属（Ｃｏｃｈｌｏｄｉｎａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｃ．ラミナタ（Ｃ．ｌａｍｉｎａｔａ））、デロセラス属（Ｄｅｒｏｃｅｒａｓ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｄ．アグレスティス（Ｄ．ａｇｒｅｓｔｉｓ）、Ｄ．エムピリコルム（Ｄ．ｅｍｐｉｒｉｃｏｒｕｍ）、Ｄ．リーブ（Ｄ．ｌａｅｖｅ）、Ｄ．パノルニマツム（Ｄ．ｐａｎｏｒｎｉｍａｔｕｍ）、Ｄ．レチキュラツム（Ｄ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ））、ディスカス属（Ｄｉｓｃｕｓ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｄ．ロツンダツス（Ｄ．ｒｏｔｕｎｄａｔｕｓ））、ユーオムフアリア属（Ｅｕｏｍｐｈａｌｉａ  ｓｐｐ．）、ガルバ属（Ｇａｌｂａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｇ．トランキュラタ（Ｇ．ｔｒｕｎｃｕｌａｔａ））、ヘリセラ属（Ｈｅｌｉｃｅｌｌａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｈ．イタラ（Ｈ．ｉｔａｌａ）、Ｈ．オブビア（Ｈ．ｏｂｖｉａ））、ヘリシゴナ属（Ｈｅｌｉｃｉｇｏｎａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｈ．アルブストルム（Ｈ．ａｒｂｕｓｔｏｒｕｍ））、ヘリコジカス属（Ｈｅｌｉｃｏｄｉｓｃｕｓ  ｓｐｐ．）、ヘリクス属（Ｈｅｌｉｘ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｈ．アペルタ（Ｈ．ａｐｅｒｔａ）、Ｈ．アスペルサ（Ｈ．ａｓｐｅｒｓａ）、Ｈ．ポマチア（Ｈ．ｐｏｍａｔｉａ））、リマクス属（Ｌｉｍａｘ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｌ．シネレオニガー（Ｌ．ｃｉｎｅｒｅｏｎｉｇｅｒ）、Ｌ．フラバス（Ｌ．ｆｌａｖｕｓ）、Ｌ．マルギナツス（Ｌ．ｍａｒｇｉｎａｔｕｓ）、Ｌ．マキシムス（Ｌ．ｍａｘｉｍｕｓ）、Ｌ．テネルス（Ｌ．ｔｅｎｅｌｌｕｓ））、リミコラリア属（Ｌｉｍｉｃｏｌａｒｉａ  ｓｐｐ．）（例えば、リミコラリア・アウロラ（Ｌｉｍｉｃｏｌａｒｉａ  ａｕｒｏｒａ）、リムナエア属（Ｌｙｍｎａｅａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｌ．スタグリナス（Ｌ．ｓｔａｇｎａｌｉｓ））、メソドン属（Ｍｅｓｏｄｏｎ）（モシキカレハマイマイ（Ｍｅｓｏｎ  ｔｈｙｒｏｉｄｕｓ）、モナデニア属（Ｍｏｎａｄｅｎｉａ  ｓｐｐ．）（例えば、モナデニア・フィデリス（Ｍｏｎａｄｅｎｉａ  ｆｉｄｅｌｉｓ），ミラクス属（Ｍｉｌａｘ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｍ．ガガテス（Ｍ．ｇａｇａｔｅｓ）、Ｍ．マルギナツス（Ｍ．ｍａｒｇｉｎａｔｕｓ）、Ｍ．ソウェルビイ（Ｍ．ｓｏｗｅｒｂｙｉ）、Ｍ．ブダペンテンシス（Ｍ．ｂｕｄａｐｅｓｔｅｎｓｉｓ））、オンコメラニア属（Ｏｎｃｏｍｅｌａｎｉａ  ｓｐｐ．）、ネオヘリックス属（Ｎｅｏｈｅｌｉｘ  ｓｐｐ．）（例えば、ネオヘリックス・アルボラブリス（Ｎｅｏｈｅｌｉｘ  ａｌｂｏｌａｂｒｉｓ））、オペアス属（Ｏｐｅａｓ  ｓｐｐ．）、オタラ属（Ｏｔａｌａ  ｓｐｐ．）（例えば、オタラ・ラクテアル）（Ｏｔａｌａ  ｌａｃｔｅａｌ））、オキシロマ属（Ｏｘｙｌｏｍａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｏ．フェイフェリ（Ｏ．ｐｆｅｉｆｆｅｒｉ））、ポマセア属（Ｐｏｍａｃｅａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｐ．カナリキュラタ（Ｐ．ｃａｎａｌｉｃｕｌａｔａ））、スクシネア属（Ｓｕｃｃｉｎｅａ  ｓｐｐ．）、タンドニア属（Ｔａｎｄｏｎｉａ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｔ．ブダペンテンシス（Ｔ．ｂｕｄａｐｅｓｔｅｎｓｉｓ）、Ｔ．ソウェルビイ（Ｔ．ｓｏｗｅｒｂｙｉ））、テーバ属（Ｔｈｅｂａ  ｓｐｐ．）、バロニア属（Ｖａｌｌｏｎｉａ  ｓｐｐ．）又はゾニトイデス属（Ｚｏｎｉｔｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）（例えば、Ｚ．ニチダス（Ｚ．ｎｉｔｉｄｕｓ））である。
【０２５５】
Ｅ．線虫
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、例えば、植物における線虫寄生を予防又は処置するために、線虫の適応度を低減させる上で有用であり得る。用語「線虫」は、線虫門（Ｎｅｍａｔｏｄａ）に属するあらゆる生物を含む。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を線虫と接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を線虫に送達する方法が含まれる。加えて又は代わりに、本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を植物と接触させることにより、線虫寄生のリスクがあるか、又は線虫寄生を有する植物にバイオ農薬を送達することを含む。
【０２５６】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、植物に被害をもたらす線虫による寄生を予防又は処置するのに好適であり、こうした線虫として、例えばメロイドギネ属（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｓｐｐ．）（ネコブ（ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ））、ヘテロデラ属（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．）、グロボデラ属（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．）、プラチレンクス属（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、ヘリコチレンクス属（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、ラドフォルス・シミリス（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ  ｓｉｍｉｌｉｓ）、ジチレンクス・ジプサシ（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｉｐｓａｃｉ）、ロチレンクルス・レニホルミス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、キシフィネマ属（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ｓｐｐ．）、アフェレンコイデス属（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）及びベロノライムス・ロンギカウダツス（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ  ｌｏｎｇｉｃａｕｄａｔｕｓ）が挙げられる。一部の例では、線虫は、植物寄生線虫及び土壌中に生息する線虫である。植物寄生線虫としては、限定はされないが、キシフィネマ属（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ｓｐｐ．）、ロンギドルス属（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）及びトリコドルス属（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）などの外部寄生虫；チレンクルス属（Ｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）などの半寄生虫；プラチレンクス属（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、ラドホルス属（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ  ｓｐｐ．）及びスクテロネマ属（Ｓｃｕｔｅｌｌｏｎｅｍａ  ｓｐｐ．）などの移動性内部寄生虫；ヘテロデラ属（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．）、グロボデラ属（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．）及びメロイドギネ属（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｓｐｐ．）などの固着性寄生虫並びにジチレンクス属（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）、アフェレンコイデス属（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）及びヒルシュマニエラ属（Ｈｉｒｓｈｍａｎｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）などの茎葉内部寄生虫が挙げられる。特に有害な根寄生土壌線虫は、ヘテロデラ属（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ）若しくはグロボデラ属（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ）のシスト形成センチュウ及び／又はメロイドギネ属（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ）のネコブセンチュウなどである。これらの属の有害な種は、例えば、メロイドギネ・インゴグニタ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）、ヘテロデラ・グリシネス（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ）（ダイズシストセンチュウ）、グロボデラ・パリダ（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｐａｌｌｉｄａ）及びグロボデラ・ロストキエンシス（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｒｏｓｔｏｃｈｉｅｎｓｉｓ）（ジャガイモシストセンチュウ）であり、これらの種は、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を用いて効果的に防除される。しかし、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物の使用は、これらの属又は種に何ら限定されるものではなく、同様に他の線虫にも拡張される。
【０２５７】
本明細書に記載される方法及び組成物によって標的とされ得る線虫の他の例として、限定はされないが、例えば以下のものが挙げられる：アグレンクス・アグリコラ（Ａｇｌｅｎｃｈｕｓ  ａｇｒｉｃｏｌａ）、アンギナ・トリチシ（Ａｎｇｕｉｎａ  ｔｒｉｔｉｃｉ）、アフェレンコイデス・アラキディス（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ  ａｒａｃｈｉｄｉｓ）、アフェレンコイデス・フラガリア（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇａｒｉａ）及び茎葉内部寄生虫であるアフェレンコイデス属（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）全般、ベロノライムス・グラシリス（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｓ）、ベロノライムス・ロンギカウダタス（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ  ｌｏｎｇｉｃａｕｄａｔｕｓ）、ベロノライムス・ノルトニ（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ  ｎｏｒｔｏｎｉ）、ブルサフェレンクス・ココフィルス（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｃｏｃｏｐｈｉｌｕｓ）、ブルサフェレンクス・エレムス（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｅｒｅｍｕｓ）、ブルサフェレンクス・キシロフィルス（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ブルサフェレンクス・ムクロナツス（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ）及びブルサフェレンクス属（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、カコパウルス・ペスティス（Ｃａｃｏｐａｕｒｕｓ  ｐｅｓｔｉｓ）、クリコネメラ・カルバタ（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｅｌｌａ  ｃｕｒｖａｔａ）、クリコネメラ・オノエンシス（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｅｌｌａ  ｏｎｏｅｎｓｉｓ）、クリコネメラ・オルナタ（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｅｌｌａ  ｏｒｎａｔａ）、クリコネメラ・ルシウム（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｅｌｌａ  ｒｕｓｉｕｍ）、クリコネメラ・キセノプラクス（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｅｌｌａ  ｘｅｎｏｐｌａｘ）（＝メソクリコネマ・キセノプラクス（Ｍｅｓｏｃｒｉｃｏｎｅｍａ  ｘｅｎｏｐｌａｘ））及びクリコネメラ属（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｅｌｌａ  ｓｐｐ．）全般、クリコネモイデス・フェルニエ（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ  ｆｅｍｉａｅ）、クリコネモイデス・オノエンス（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ  ｏｎｏｅｎｓｅ）、クリコネモイデス・オルナタム（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ  ｏｒｎａｔｕｍ）及びクリコネモイデス属（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）全般、ジチレンクス・デストラクター（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）、ジチレンクス・ジプサシ（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｉｐｓａｃｉ）、ジチレンクス・ミセリオファガス（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｍｙｃｅｌｉｏｐｈａｇｕｓ）及び茎葉内部寄生虫であるジチレンクス属（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、ドリコドルス・ヘテロセファルス（Ｄｏｌｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｈｅｔｅｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ）、グロボデラ・パリダ（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｐａｌｌｉｄａ）（＝ヘテロデラ・パリダ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｐａｌｌｉｄａ））、グロボデラ・ロストチエンシス（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｒｏｓｔｏｃｈｉｅｎｓｉｓ）（ジャガイモシストセンチュウ）、グロボデラ・ソラナセルム（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、グロボデラ・タバクム（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｔａｂａｃｕｍ）、グロボデラ・バージニア（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｖｉｒｇｉｎｉａ）及び固着性シスト形成寄生虫であるグロボデラ属（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．）全般、ヘリコチレンクス・ジゴニクス（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｉｇｏｎｉｃｕｓ）、ヘリコチレンクス・ジヒステラ（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｉｈｙｓｔｅｒａ）、ヘリコチレンクス・エリスリン（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）、ヘリコチレンクス・マルチシンクタス（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｍｕｌｔｉｃｉｎｃｔｕｓ）、ヘリコチレンクス・ナヌス（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｎａｎｎｕｓ）、ヘリコチレンクス・シュードロブスタス（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｐｓｅｕｄｏｒｏｂｕｓｔｕｓ）及びヘリコチレンクス属（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、ヘミクリコネモイデス（Ｈｅｍｉｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ）、ヘミシクリオフォラ・アレナリア（Ｈｅｍｉｃｙｃｌｉｏｐｈｏｒａ  ａｒｅｎａｒｉａ）、ヘミシクリオフォラ・ヌダタ（Ｈｅｍｉｃｙｃｌｉｏｐｈｏｒａ  ｎｕｄａｔａ）、ヘミシクリオフォラ・パルバナ（Ｈｅｍｉｃｙｃｌｉｏｐｈｏｒａ  ｐａｒｖａｎａ）、ヘテロデラ・アベナエ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ａｖｅｎａｅ）、ヘテロデラ・クルシフェラエ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）、ヘテロデラ・グリシネス（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ）（ダイズシストセンチュウ）、ヘテロデラ・オリゼー（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｏｒｙｚａｅ）、ヘテロデラ・シャクチ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｓｃｈａｃｈｔｉｉ）、ヘテロデラ・ゼアエ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｚｅａｅ）及び固着性シスト形成寄生虫であるヘテロデラ属（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．）全般、ヒルシュマニエラ・グラシリス（Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｉｅｌｌａ  ｇｒａｃｉｌｉｓ）、ヒルシュマニエラ・オリゼー（Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｉｅｌｌａ  ｏｒｙｚａｅ）、ヒルシュマニエラ・スピニカウダタ（Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｉｅｌｌａ  ｓｐｉｎｉｃａｕｄａｔａ）及び茎葉内部寄生虫であるヒルシュマニエラ属（Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）全般、ホプロライムス・エジプチ（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ａｅｇｙｐｔｉｉ）、ホプロライムス・カリフォルニクス（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ｃａｌｉｆｏｍｉｃｕｓ）、ホプロライムス・コルンブス（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ｃｏｌｕｍｂｕｓ）、ホプロライムス・ガレアタス（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ｇａｌｅａｔｕｓ）、ホプロライムス・インディクス（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ｉｎｄｉｃｕｓ）、ホプロライムス・マグニスチルス（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ｍａｇｎｉｓｔｙｌｕｓ）、ホプロライムス・パラロブスタス（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ  ｐａｒａｒｏｂｕｓｔｕｓ）、ロンギドルス・アフリカヌス（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ａｆｒｉｃａｎｕｓ）、ロンギドルス・ブレビアヌラタス（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ｂｒｅｖｉａｎｎｕｌａｔｕｓ）、ロンギドルス・エロンガタス（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ｅｌｏｎｇａｔｕｓ）、ロンギドルス・ラエビカピタタス（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ｌａｅｖｉｃａｐｉｔａｔｕｓ）、ロンギドルス・ビネアコラ（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ｖｉｎｅａｃｏｌａ）及び外部寄生虫であるロンギドルス属（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）全般、メロイドギネ・アクロネア（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ａｃｒｏｎｅａ）、メロイドギネ・アフリカナ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ａｆｒｉｃａｎａ）、メロイドギネ・アレナリア（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ａｒｅｎａｒｉａ）、メロイドギネ・アレナリア・タメシ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ａｒｅｎａｒｉａ  ｔｈａｍｅｓｉ）、メロイドギネ・アルチエラ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ａｒｔｉｅｌｌａ）、
メロイドギネ・チトウッディ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｃｈｉｔｗｏｏｄｉ）、メロイドギネ・コフェイコラ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｃｏｆｆｅｉｃｏｌａ）、メロイドギネ・エチオピカ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｅｔｈｉｏｐｉｃａ）、メロイドギネ・エクシグア（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｅｘｉｇｕａ）、メロイドギネ・ファラクス（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｆａｌｌａｘ）、メロイドギネ・グラミニコラ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、メロイドギネ・グラミニス（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）、メロイドギネ・ハプラ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｈａｐｌａ）、メロイドギネ・インコグニタ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）、メロイドギネ・インコグニタ・アクリタ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ  ａｃｒｉｔａ）、メロイドギネ・ジャバニカ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｊａｖａｎｉｃａ）、メロイドギネ・キクイエンシス（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｋｉｋｕｙｅｎｓｉｓ）、メロイドギネ・マイナー（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｍｉｎｏｒ）、メロイドギネ・ナアシ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｎａａｓｉ）、メロイドギネ・パラナエンシス（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｐａｒａｎａｅｎｓｉｓ）、メロイドギネ・タメシ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｔｈａｍｅｓｉ）及び固着性寄生虫であるメロイドギネ属（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｓｐｐ．）全般、メロイネマ属（Ｍｅｌｏｉｎｅｍａ  ｓｐｐ．）、ナコブス・アベランス（Ｎａｃｏｂｂｕｓ  ａｂｅｒｒａｎｓ）、ネオチレンクス・ビギシ（Ｎｅｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｖｉｇｉｓｓｉ）、パラフェレンクス・シュードパリエチヌス（Ｐａｒａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｐｓｅｕｄｏｐａｒｉｅｔｉｎｕｓ）、パラトリコドルス・アリウス（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ａｌｌｉｕｓ）、パラトリコドルス・ロバタス（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｌｏｂａｔｕｓ）、パラトリコドルス・マイナー（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｍｉｎｏｒ）、パラトリコドルス・ナヌス（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｎａｎｕｓ）、パラトリコドルス・ポロサス（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｐｏｒｏｓｕｓ）、パラトリコドルス・テレス（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｔｅｒｅｓ）及びパラトリコドルス属（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）全般、パラチレンクス・ハマタス（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｈａｍａｔｕｓ）、パラチレンクス・ミヌタス（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｍｉｎｕｔｕｓ）、パラチレンクス・プロジェクタス（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｐｒｏｊｅｃｔｕｓ）及びパラチレンクス属（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、プラチレンクス・アギリス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ａｇｉｌｉｓ）、プラチレンクス・アレニ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ａｌｌｅｎｉ）、プラチレンクス・アンジヌス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ａｎｄｉｎｕｓ）、プラチレンクス・ブラキュルス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｂｒａｃｈｙｕｒｕｓ）、プラチレンクス・セレアリス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、プラチレンクス・コフェアエ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｃｏｆｆｅａｅ）、プラチレンクス・クレナタス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｃｒｅｎａｔｕｓ）、プラチレンクス・デラトレイ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｅｌａｔｔｒｅｉ）、プラチレンクス・ギイビカウダタス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｇｉｉｂｂｉｃａｕｄａｔｕｓ）、プラチレンクス・ゴーデイ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｇｏｏｄｅｙｉ）、プラチレンクス・ハマタス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｈａｍａｔｕｓ）、プラチレンクス・ヘキシンシサス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｈｅｘｉｎｃｉｓｕｓ）、プラチレンクス・ローシ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｌｏｏｓｉ）、プラチレンクス・ネグレクタス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｎｅｇｌｅｃｔｕｓ）、プラチレンクス・ペネトランス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）、プラチレンクス・プラテンシス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）、プラチレンクス・スクリブネリ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｃｒｉｂｎｅｒｉ）、プラチレンクス・テレス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｔｅｒｅｓ）、プラチレンクス・トルネイ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｔｈｏｒｎｅｉ）、プラチレンクス・バルヌス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｖｕｌｎｕｓ）、プラチレンクス・ゼアエ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｚｅａｅ）及び移動性内部寄生虫であるプラチレンクス属（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、シュードハレンクス・ミヌタス（Ｐｓｅｕｄｏｈａｌｅｎｃｈｕｓ  ｍｉｎｕｔｕｓ）、シレンクス・マグニデンス（Ｐｓｉｌｅｎｃｈｕｓ  ｍａｇｎｉｄｅｎｓ）、シレンクス・ツミダス（Ｐｓｉｌｅｎｃｈｕｓ  ｔｕｍｉｄｕｓ）、プンクトデラ・チャコエンシス（Ｐｕｎｃｔｏｄｅｒａ  ｃｈａｌｃｏｅｎｓｉｓ）、クイニスルシウス・アクタス（Ｑｕｉｎｉｓｕｌｃｉｕｓ  ａｃｕｔｕｓ）、ラドフォルス・シトロフィルス（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ  ｃｉｔｒｏｐｈｉｌｕｓ）、ラドフォルス・シミリス（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ  ｓｉｍｉｌｉｓ）、移動性内部寄生虫であるラドフォルス属（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ  ｓｐｐ．）全般、ロチレンクルス・ボレアリス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｂｏｒｅａｌｉｓ）、ロチレンクルス・パルブス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｐａｒｖｕｓ）、ロチレンクルス・レニフォルミス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）及びロチレンクルス属（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）全般、ロチレンクス・ラウレンチヌス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｌａｕｒｅｎｔｉｎｕｓ）、ロチレンクス・マクロドラタス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｍａｃｒｏｄｏｒａｔｕｓ）、ロチレンクス・ロブスタス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｒｏｂｕｓｔｕｓ）、ロチレンクス・ユニフォルミス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）及びロチレンクス属（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、スクテロネマ・ブラキュルム（Ｓｃｕｔｅｌｌｏｎｅｍａ  ｂｒａｃｈｙｕｒｕｍ）、スクテロネマ・ブラディス（Ｓｃｕｔｅｌｌｏｎｅｍａ  ｂｒａｄｙｓ）、スクテロネマ・クラスリカウダタム（Ｓｃｕｔｅｌｌｏｎｅｍａ  ｃｌａｔｈｒｉｃａｕｄａｔｕｍ）及び移動性内部寄生虫であるスクテロネマ属（Ｓｃｕｔｅｌｌｏｎｅｍａ  ｓｐｐ．）全般、スバンギナ・ラジ���オラ（Ｓｕｂａｎｇｕｉｎａ  ｒａｄｉｃｉｏｌａ）、テチレンクス・ニコチアナエ（Ｔｅｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）、トリコドルス・シリンドリクス（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｓ）、トリコドルス・マイナー（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｍｉｎｏｒ）、トリコドルス・プリミチブス（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｐｒｉｍｉｔｉｖｕｓ）、トリコドルス・プロキシムス（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｐｒｏｘｉｍｕｓ）、トリコドルス・シミリス（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｓｉｍｉｌｉｓ）、トリコドルス・スパルサス（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｓｐａｒｓｕｓ）及び外部寄生虫であるトリコドルス属（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ  ｓｐｐ．）全般、チレンコリンクス・アグリ（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ａｇｒｉ）、チレンコリンクス・ブラシカエ（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、チレンコリンクス・クラルス（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｃｌａｒｕｓ）、チレンコリンクス・クレイトニ（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｃｌａｙｔｏｎｉ）、チレンコリンクス・ジギタタス（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｄｉｇｉｔａｔｕｓ）、チレンコリンクス・エブリエンシス（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｅｂｒｉｅｎｓｉｓ）、チレンコリンクス・マキシムス（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｍａｘｉｍｕｓ）、チレンコリンクス・ヌダス（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｎｕｄｕｓ）、チレンコリンクス・ブルガリス（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）及びチレンコリンクス属（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．）全般、チレンクルス・セミペネトランス（Ｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｓｅｍｉｐｅｎｅｔｒａｎｓ）及び半寄生虫であるチレンクルス属（Ｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｓｐｐ．）全般、キシフィネマ・アメリカナム（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）、キシフィネマ・ブレビコレ（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ｂｒｅｖｉｃｏｌｌｅ）、キシフィネマ・ジモルフィカウダツム（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ｄｉｍｏｒｐｈｉｃａｕｄａｔｕｍ）、キシフィネマ・インデックス（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ｉｎｄｅｘ）及び外部寄生虫であるキシフィネマ属（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ  ｓｐｐ．）全般。
【０２５８】
有害線虫の他の例としては、ワセンチュウ科（Ｃｒｉｃｏｎｅｍａｔｉｄａｅ）、ベロノライムス科（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｉｄａｅ）、ホプロアイミダエ科（Ｈｏｐｌｏａｉｍｉｄａｅ）、ヘテロデラ科（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒｉｄａｅ）、ロンギドルス科（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｉｄａｅ）、プラティレンクス科（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｉｄａｅ）、トリコドルス科（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｉｄａｅ）又はアシナシトカゲ科（Ａｎｇｕｉｎｉｄａｅ）に属宇する種が挙げられる。
【０２５９】
表４は、本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法を用いて処置又は予防することができる線虫及び関連する病害をさらに示す。
【０２６０】
2021523944.tif 000017
【０２６１】
2021523944.tif 000018
【０２６２】
Ｆ．ウイルス
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、例えば、植物におけるウイルス感染を予防又は処置するために、ウイルスの適応度を低減させる上で有用であり得る。有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物をウイルスと接触させることにより、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物をウイルスに送達する方法が含まれる。加えて又は代わりに、本方法は、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物をウイルスと接触させることにより、ウイルス感染のリスクがあるか、又はウイルス感染を有する植物に有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を送達することを含む。
【０２６３】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び関連方法は、表５に挙げるウイルス及び病害を含め、植物のウイルス性病害の原因となるウイルスへの送達に好適である。
【０２６４】
2021523944.tif 000019
【０２６５】
2021523944.tif 000020
【０２６６】
2021523944.tif 000021
【０２６７】
2021523944.tif 000022
【０２６８】
2021523944.tif 000023
【０２６９】
2021523944.tif 000024
【０２７０】
2021523944.tif 000025
【０２７１】
2021523944.tif 000026
【０２７２】
2021523944.tif 000027
【０２７３】
2021523944.tif 000028
【０２７４】
2021523944.tif 000029
【０２７５】
2021523944.tif 000030
【０２７６】
2021523944.tif 000031
【０２７７】
Ｇ．雑草
本明細書で使用される場合、用語「雑草」は、それが望まれない場所に成長する植物を指す。こうした植物は、典型的に侵入性であり、ときに有害であるか又は有害となるリスクがある。雑草を本有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物で処理して、その植物の存在、生存能力若しくは生殖を低減又は排除することができる。例えば、限定されないが、本方法を用いて、植物を損傷させることがわかっている雑草をターゲティングすることができる。例えば、限定されないが、雑草は、以下の科の任意のメンバーであり得る：イネ科（Ｇｒａｍｉｎｅａｅ）、セリ科（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）、蝶形花亜科（Ｐａｐｉｌｉｏｎａｃｅａｅ）、アブラナ科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）、アオイ科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ）、トウダイグサ科（Ｅｕｆｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）、アカザ科（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅａｅ）、ケシ科（Ｆｕｍａｒｉａｃｅａｅ）、カリオフィラセアエ科（Ｃｈａｒｙｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）、サクラソウ科（Ｐｒｉｍｕｌａｃｅａｅ）、フクロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）、タデ科（Ｐｏｌｙｇｏｎａｃｅａｅ）、イグサ科（Ｊｕｎｃａｃｅａｅ）、カヤツリグサ科（Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ）、ハマミズナ科（Ａｉｚｏａｃｅａｅ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）、ヒルガオ科（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ）、ウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）、トウダイグサ科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）、タデ科（Ｐｏｌｙｇｏｎａｃｅａｅ）、スベリヒユ科（Ｐｏｒｔｕｌａｃｅａｅ）、ナス科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）、ニガキ科（Ｓｉｍａｒｏｕｂａｃｅａｅ）、アケビ科（Ｌａｒｄｉｚａｂａｌａｃｅａｅ）、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）、ヒユ科（Ａｍａｒａｎｔｈａｃｅａｅ）、ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）、サクラソウ科（Ｐｒｉｍｕｌａｃｅａｅ）、キョウチクトウ科（Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ）、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）、ナデシコ科（Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）、ガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）、ニシキギ科（Ｃｅｌａｓｔｒａｃｅａｅ）、ケシ科（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ）、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）、ツユクサ科（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａｃｅａｅ）、ゴマノハグサ科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）、マツムシソウ科（Ｄｉｐｓａｃａｃｅａｅ）、ムラサキ科（Ｂｏｒａｇｉｎａｃｅａｅ）、トクサ科（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）、アサ科（Ｃａｎｎａｂａｃｅａｅ）、オトギリソウ科（Ｈｙｐｅｒｉａｃａｃｅａｅ）、ツリフネソウ科（Ｂａｌｓａｍｉｎａｃｅａｅ）、ミゾカクシ科（Ｌｏｂｅｌｉａｃｅａｅ）、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）、オシロイバナ科（Ｎｙｃｔａｇｉｎａｃｅａｅ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）、ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）、イラクサ科（Ｕｒｔｉｃａｃｅａｅ）、ウラボシ科（Ｐｏｌｙｐｏｄｉａｃｅａｅ）、ウルシ科（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ）、サルトリイバラ科（Ｓｍｉｌａｃａｃｅａｅ）、サトイモ科（Ａｒａｃｅａｅ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）、オミナエシ科（Ｖａｌｅｒｉａｎａｃｅａｅ）、クマツヅラ科（Ｖｅｒｂｅｎａｃｅａｅ）、スミレ科（Ｖｉｏｌａｃｅａｅ）。例えば、限定されないが、雑草は、以下のものからなる群の任意のメンバーであり得る：ロリウム・リジヅム（Ｌｏｌｉｕｍ  Ｒｉｇｉｄｕｍ）、アマランサス・パルメリ（Ａｍａｒａｍｔｈｕｓ  ｐａｌｍｅｒｉ）、アブチロン・テオプラツィ（Ａｂｕｔｉｌｏｎ  ｔｈｅｏｐｒａｔｓｉ）、ソルガム・ハレペンセ（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｅ）、コニザ・カナデンシス（Ｃｏｎｙｚａ  Ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、セタリア・ベルチシラタ（Ｓｅｔａｒｉａ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔａ）、カプセラ・パストリス（Ｃａｐｓｅｌｌａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）及びシペルス・ロツンダス（Ｃｙｐｅｒｕｓ  ｒｏｔｕｎｄａｓ）。別の雑草として、例えばミモサピグラ（Ｍｉｍｏｓａｐｉｇｒａ）、サンショウモ（ｓａｌｖｉｎｉａ）、イガニガクサ（ｈｙｐｔｉｓ）、センナ（ｓｅｎｎａ）、大オナモミ（ｎｏｏｇｏｏｒａ）、バー（ｂｕｒｒ）、ジャトロファ・ゴシピフォルフリア（Ｊａｔｒｏｐｈａ  ｇｏｓｓｙｐｉｆｏｌｉａ）、パーキンソニア・アクレアタ（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａ  ａｃｕｌｅａｔｅ）、ヒマワリヒヨドリ（Ｃｈｒｏｍｏｌａｅｎａ  ｏｄｏｒａｔａ）、オオバナアサガオ（Ｃｒｙｐｔｏｓｌｅｇｉａ  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ）又はアンドロポゴン・ガヤヌス（Ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎ  ｇａｙａｎｕｓ）。雑草は、単子葉植物（例えば、ヌカボ属（Ａｇｒｏｓｔｉｓ）、スズメノテッポウ属（Ａｌｏｐｅｃｕｒｕｓ）、カラスムギ属（Ａｖｅｎａ）、スズメノチャヒキ属（Ｂｒｏｍｕｓ）、カヤツリグサ属（Ｃｙｐｅｒｕｓ）、メヒシバ属（Ｄｉｇｉｔａｒｉａ）、ヒエ属（Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ）、ドクムギ属（Ｌｏｌｉｕｍ）、ミズアオイ属（Ｍｏｎｏｃｈｏｒｉａ）、ツノアイアシ属（Ｒｏｔｔｂｏｅｌｌｉａ）、オモダカ属（Ｓａｇｉｔｔａｒｉａ）、ホタルイ属（Ｓｃｉｒｐｕｓ）、セタリア属（Ｓｅｔａｒｉａ）、シダ属（Ｓｉｄａ）若しくはモロコシ属（Ｓｏｒｇｈｕｍ））又は双子葉植物（アブチロン属（Ａｂｕｔｉｌｏｎ）、アマランサス属（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ）、アカザ属（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ）、キク属（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ）、イズハハコ属（Ｃｏｎｙｚａ）、カエムグラ属（Ｇａｌｉｕｍ）、サツマイモ属（Ｉｐｏｍｏｅａ）、キンレンカ属（Ｎａｓｔｕｒｔｉｕｍ）、シナピス属（Ｓｉｎａｐｉｓ）、ナス属（Ｓｏｌａｎｕｍ）、ハコベ属（Ｓｔｅｌｌａｒｉａ）、ベロニカ（Ｖｅｒｏｎｉｃａ）、ビオラ属（Ｖｉｏｌａ）若しくはオナモミ属（Ｘａｎｔｈｉｕｍ））を含み得る。
【０２７８】
Ｖ．異種機能性薬剤
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、異種有効薬剤（例えば、農薬用薬剤又は忌避剤）などの異種機能性薬剤をさらに含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる農薬用薬剤及び／又は忌避剤を含む。一部の例では、異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤及び／又は忌避剤）は、ＰＭＰ中に含有される。例えば、ＰＭＰは、異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤及び／又は忌避剤）を封入し得る。代わりに、異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤及び／又は忌避剤）は、ＰＭＰの表面に埋め込むか又はその表面と共役させることができる。
【０２７９】
他の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤及び／又は忌避剤）を含むように製剤化することができ、その場合、必ずしもＰＭＰと結合されるわけではない。製剤及びこれらの製剤から調製される使用形態中に、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、農薬用薬剤（例えば、殺虫剤、滅菌剤、殺ダニ剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤、殺菌剤、殺真菌剤、殺ウイルス剤若しくは除草剤）、誘引剤又は忌避剤などの追加の有効化合物を含み得る。
【０２８０】
農薬用薬剤は、抗真菌剤、抗菌剤、殺虫剤、軟体動物駆除剤、殺線虫剤、殺ウイルス剤又はこれらの組合せであり得る。農薬用薬剤は、化学物質、例えば当技術分野で公知のものなどであり得る。代わりに又は加えて、農薬用薬剤は、ペプチド、ポリペプチド、核酸、ポリヌクレオチド又は小分子であり得る。農薬用薬剤は、多様な植物有害生物の適応度を低減させることができる任意の薬剤であるか、又は１つ若しくは複数の特定の標的植物有害生物（例えば、特定の種若しくは属の有害生物）をターゲティングするものであり得る。
【０２８１】
一部の例では、異種機能性薬剤（例えば、化学、核酸分子、ペプチド、ポリペプチド若しくは小分子）を修飾することができる。例えば、修飾は、化学修飾、例えばマーカ、例えば蛍光マーカ若しくは放射性マーカに対する共役であり得る。他の例では、修飾は、薬剤、例えば脂質、グリカン、ポリマー（例えば、ＰＥＧ），カチオン部分の安定性、送達、ターゲティング、生体利用可能性又は半減期を増大する部分との共役若しくは機能的連結を含み得る。
【０２８２】
本明細書に開示される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物及び方法に使用することができる異種機能性薬剤（例えば、農薬用薬剤若しくは忌避剤）の例を以下に概説する。
【０２８３】
Ａ．抗菌剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに抗菌剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる抗菌剤を含む。例えば、抗菌剤は、植物有害細菌（例えば、細菌性植物病原体）の適応度を低減させる（例えば、成長を低減するか又は殺傷する）ことができる。本明細書に記載される抗生物質を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的有害生物内若しくは有害生物上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の抗生物質濃度を達成し；且つ（ｂ）標的有害生物の適応度を低減させるのに十分な量及び時間で、標的有害生物又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の抗菌剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０２８４】
本明細書で使用されるとき、用語「抗菌剤」は、植物病原菌などの細菌を殺傷するか、又はその成長、増殖、分裂、繁殖若しくは拡大を阻害する物質を指し、殺細菌剤（例えば、消毒剤化合物、防腐剤若しくは抗生物質）又は静菌剤（例えば、化合物若しくは抗生物質）が挙げられる。殺菌抗生物質は、細菌を殺傷するが、静菌抗生物質は、それらの成長又は繁殖を緩徐にするのみである。
【０２８５】
殺菌剤は、消毒剤、防腐剤若しくは抗生物質を含み得る。最も使用される消毒剤は、以下を含み得る：活性塩素（即ち次亜塩素酸塩（例えば、次亜塩素酸ナトリウム）、クロラミン、ジクロロイソシアヌル酸塩及びトリクロロイソシアヌル酸塩、液体塩素、塩素ジオキシドなど）、活性酸素（過酸化物、例えば過酸、過硫酸カリウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム及びウレアパーヒドレート）、ヨウ素（ヨードポビドン（ｉｏｄｐｏｖｉｄｏｎｅ）（ポビドンヨード、Ｂｅｔａｄｉｎｅ）、ルゴール溶液、ヨウ素チンキ剤、ヨウ化非イオン界面活性剤）、濃縮アルコール（主に、エタノール、１−プロパノール（ｎ−プロパノールとも呼ばれる）及び２−プロパノール（イソプロパノールと呼ばれる）並びにそれらの混合物；さらに、２−フェノキシエタノール並びに１−フェノキシプロパノール及び２−フェノキシプロパノールが使用される）、フェノール物質（例えば、フェノール（炭酸とも呼ばれる）、クレゾール（液体カリウムセッケンと組み合わせてＬｙｓｏｌｅと呼ばれる）、ハロゲン化（塩素化、臭素化）フェノール、例えばヘキサクロロフェン、トリクロサン、トリクロロフェノール、トリブロモフェノール、ペンタクロロフェノール、ジブロモール（Ｄｉｂｒｏｍｏｌ）及びそれらの塩）、陽イオン界面活性剤、例えばいくつかの四級アンモニウムカチオン（例えば、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム又は塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム）及びその他；非四級化合物、例えばクロルヘキシジン、グルコプロタミン、二塩酸オクテニジンなど）；強力な酸化剤、例えばオゾン及び過マンガン酸溶液；重金属及びその塩、例えばコロイド銀、硝酸銀、塩化水銀、フェニル水銀塩、硫酸銅、酸化銅−塩化銅、水酸化銅、オクタン酸銅、オキシ塩化硫酸銅、硫酸銅、硫酸銅五水和物など。重金属及びそれらの塩は最も毒性が高く、環境に有害な殺菌剤であるため、それらの使用は強く抑圧されるか又は取り消され；さらに、適切に濃縮された強酸（リン酸、硝酸、硫酸、アミド硫酸、トルエンスルホン酸）及びアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム）である。
【０２８６】
防腐剤（即ちヒト又は動物の身体、皮膚、粘膜、創傷などに使用することができる抗菌剤）として、上に挙げた消毒剤のいくつかを、適切な条件（主に、濃度、ｐＨ、温度及びヒト／動物に対する毒性）下で使用することができる。中でも、以下のものが重要である：適切に希釈された塩素調製物（即ちデーキン液、ｐＨ７〜８に調節された０．５％次亜塩素酸ナトリウム若しくはカリウム溶液又はベンゼンスルホクロラミドナトリウムの０．５〜１％溶液（クロラミンＢ））、いくつかのヨウ素調製物、例えば様々なガレヌス製剤（軟膏、溶液、創傷石膏）中のヨードポビドン、過去にはルゴール液、ウレアパーヒドレート及びｐＨ緩衝０．１〜０．２５％過酸溶液などの過酸化物、主に皮膚消毒に使用される消毒添加物を含むか若しくは含まないアルコール、ソルビン酸などの弱有機酸、安息香酸、乳酸及びサリチル酸、一部のフェノール酸化合物、例えばヘクサクロロフェン、トリクロサン及びジブロモール（Ｄｉｂｒｏｍｏｌ）並びに陽イオン活性化合物、例えば０．０５〜０．５％ベンザルコニウム、０．５〜４％クロルヘキシジン、０．１〜２％オクテニジン溶液。
【０２８７】
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、抗生物質を含み得る。当技術分野で公知の任意の抗生物質を使用することができる。抗生物質は、一般に、その作用機序、化学構造又は活性スペクトルに基づいて分類される。
【０２８８】
本明細書に記載される抗生物質は、あらゆる細菌機能又は成長プロセスをターゲティングすることができ、静菌性（例えば、細菌の成長を緩徐にするか若しくは予防する）又は殺菌性（例えば、殺菌する）のいずれでもあり得る。一部の例では、抗生物質は、殺菌性抗生物質である。一部の例では、殺菌性抗生物質は、細菌細胞壁をターゲティングするもの（例えば、ペニシリン及びセファロスポリン）；細胞膜をターゲティングするもの（例えば、ポリミキシン）；又は実質的な細菌酵素を阻害するもの（例えば、リファマイシン、リピアルマイシン（ｌｉｐｉａｒｍｙｃｉｎ）、キノロン及びスルホンアミド）である。一部の例では、殺菌性抗生物質は、アミノグリコシド（例えば、カスガマイシン）である。一部の例では、抗生物質は、静菌性抗生物質である。一部の例では、静菌性抗生物質は、タンパク質合成をターゲティングする（例えば、マクロライド、リンコサミド及びテトラサイクリン）。本明細書で使用することができる別のクラスの抗生物質としては、環状リポペプチド（例えば、ダプトマイシン）、グリシルサイクリン（例えば、チゲサイクリン）、オキサゾリジノン（例えば、リネゾリド）又はリピアルマイシン（例えば、フィダキソマイシン）が挙げられる。抗生物質の例としては、リファンピシン、シプロフロキサシン、ドキシサイクリン、アンピシリン及びポリミキシンＢが挙げられる。本明細書に記載の抗生物質は、任意のレベルの標的特異性（例えば、狭又は広スペクトル）を有し得る。一部の例では、抗生物質は、狭スペクトル抗生物質であり、従って、グラム陰性菌又はグラム陽性菌などの特定の種類の細菌をターゲティングする。代わりに、抗生物質は、多様な細菌をターゲティングする広スペクトル抗生物質である。一部の例では、抗生物質は、ドキソルビシン又はバンコマイシンである。
【０２８９】
抗生物質の他の非限定的な例を表６に記載する。当業者は、組成物中の各抗生物質の好適な濃度が、抗生物質の有効性、安定性、個別の抗生物質の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０２９０】
2021523944.tif 000032
【０２９１】
Ｂ．抗真菌剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに抗真菌剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる抗真菌剤を含む。例えば、抗真菌剤は、植物有害真菌の適応度を低減させる（例えば、成長を低減するか又は殺傷する）ことができる。本明細書に記載される抗真菌剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的真菌内若しくは真菌上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の抗生物質濃度を達成し；且つ（ｂ）標的真菌の適応度を低減させるのに十分な量及び時間で、標的有害真菌又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の抗真菌剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０２９２】
本明細書で使用されるとき、用語「殺真菌剤」又は「抗真菌剤」は、植物病原真菌などの真菌を殺傷するか、又はその成長、増殖、分裂、繁殖若しくは拡大を阻害する物質を指す。多くの様々な種類の抗真菌剤が商業的に製造されている。抗真菌剤の非限定的な例として、アゾキシストロビン、マンコゼブ、プロチオコナゾール、フォルペット、テブコナゾール、ジフェノコナゾール、カプタン、ブピリメート又はホセチル−Ａｌが挙げられる。さらに別の例示的な殺真菌剤として、限定されないが、ストロビルリン、アゾキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン、フルオキサストロビン、クレソキシム−メチル、メトミノストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、オリサストロビン、カルボキサミド、カルボキサニリド、ベナラキシル、ベナラキシル−Ｍ、ベノダニル、カルボキシン、メベニル、メプロニル、フェンフラン、フェンヘキサミド、フルトラニル、フララキシル、フルカルバニル、フラメトピル、メタラキシル、メタラキシル−Ｍ（メフェノキサム）、メトフロキサム、メトスルホバクス、オフレース（ｏｆｕｒａｃｅ）、オキサジキシル、オキシカルボキシン、ペンチオピラド、ピラカルボリド、サリチルアニリド、テクロフタラム、チフルザミド、チアジニル、Ｎ−ビフェニルアミド、ビキサフェン、ボスカリド、カルボン酸モルホリド、ジメトモルフ、フルモルフ、ベンズアミド、フルメトベル、フルオピコリド（ピコベンズアミド）、ゾキサミド、カルボキサミド、カルプロパミド、ジクロシメト、マンジプロパミド、シルチオファム、アゾール、トリアゾール、ビテタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、エニルコナゾール、エポキシコナゾール、フンブコナゾール、フルシラゾール、フルキノコナゾール、フルトリアフォール、ヘキサコナゾール、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、シメコナゾール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリアジメノール、トリアジメフォン、トリチコナゾール、イミダゾール、シアゾファミド、イマザリル、ペフラゾエート、プロクロラズ、トリフルミゾール、ベンズイミダゾール、ベノミル、カルベンダジム、フベリダゾール、チアベンダゾール、エタボキサム、エトリジアゾール、ヒメキサゾール、窒素含有ヘテロシクリル化合物、ピリジン、フアジナム、ピリフェノクス、ピリミジン、ブピリメート、シプロジニル、フェリムゾン、フェナリモール、メパニピリム、ヌアリモール、ピリメタニル、ピペラジン、トリホリン、ピロール、フルジオキソニル、フェンピクロニル、モルホリン、アルジモルフ、ドデモルフ、フェンプロピモルフ、トリデモルフ、ジカルボキシミド、イプロジオン、プロシミドン、ビンクロゾリン、アシベンゾラル−Ｓ−メチル、アニラジン、カプタン、カプタホール、ダゾメト、ジクロメジン、フェノキサニル、フォルペト、フェンプロピジン、ファモキサドン、フェナミドン、オクチリノン、プロベナゾール、プロキナジド、ピロキロン、キノキシフェン、トリシクラゾール、カルバメート、ジチオカルバメート、フェバム、マンコゼブ、マネブ、メチラム、メタム、プロピネブ、チラム、ジネブ、ジラム、ジエトフェンカルブ、フルベンチアバリカルブ、イプロバリカルブ、プロパモカルブ、グアニジン、ドジン、イミノクタジン、グアザチン、カスガマイシン、ポリオキシン、ストレプトマイシン、バリダマイシンＡ、有機金属化合物、フェンチン塩、イオウ含有ヘテロシクリル化合物、イソプロチオラン、ジチアノン、有機リン化合物、エジフェンホス、ホセチル、ホセチル−アルミニウム、イプロベンホス、ピラゾホス、トルクロホス−メチル、有機塩素化合物、チオファネート−メチル、クロロタロニル、ジクロフルアニド、トリルフルアニド、フルスルファミド、フタリド、ヘキサクロロベンゼン、ペンシクロン、キントゼン、ニトロフェニル誘導体、ビナパクリル、ジノカップ、ジノブトン、スピロキサミン、シフルフェナミド、シモキサニル、メトラフェノン、Ｎ−２−シアノフェニル−３，４−ジクロロイソチアゾール−５−カルボキサミド（イソチアニル）、Ｎ−（３’，４’，５’−トリフルオロビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロメチル−１−メチルピラゾール−４−カルボキサミド、３−［５−（４−クロロフェニル）−２，３−ジメチルイソキサゾリジン−３−イル］−ピリジン、Ｎ−（３’，４’−ジクロロ−４−フルオロビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロメチル−１−メチルピラゾール−４−カルボキサミド、５−クロロ−７−（４−メチルピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）−［１，２，４］トリア−ゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピルクロメン−４−オン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルインドール−１−スルホニル）−［１，２，４］トリアゾ−ル−１−スルホンアミド、カルボン酸メチル−（２−クロロ−５−［１−（３−メチルベンジルオキシイミノ）−エチル］ベンジル）、カルボン酸メチル−（２−クロロ−５−［１−（６−メチルピリジン−２−イルメトキシ−イミノ）エチル］ベンジル）、プロピオン酸メチル３−（４−クロロフェニル）−３−（２−イソプロポキシカルボニルアミノ−３−メチルブチリル−アミノ）、カルバミン酸４−フルオロフェニルＮ−（１−（１−（４−シアノフェニル）エタンスルホニル）ブト−２−イル）、Ｎ−（２−（４−［３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−イニルオキシ］−３−メトキシフェニル）エチル）−２−メタ−ネスルホニルアミノ−３−メチルブチルアミド、Ｎ−（２−（４−［３−（４−クロロフェニル）プロプ−２−イニルオキシ］−３−メトキシフェニル）エチル）−２−エタン−エスルホニルアミノ−３−メチルブチルアミド、Ｎ−（４’−ブロモビフェニル−２−イル）−４−ジフルオロメチル−２−メチルチアゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−２−イル）−４−ジフルオロメチル−２−メチルチアゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロ−３’−フルオロビフェニル−２−イル）−４−ジフルオロメチル−２−メチルト−ヒアゾール−５−カルボキサミド又は２−（オルト−（（２，５−ジメチルフェニルオキシ−メチレン）フェニル）−３−メトキシアクリル酸メチルが挙げられる。当業者は、組成物中の各抗真菌剤の好適な濃度が、抗真菌剤の有効性、安定性、個別の抗真菌剤の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０２９３】
Ｃ．殺虫剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに殺虫剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる殺虫剤を含む。例えば、殺虫剤は、植物有害昆虫の適応度を低減させる（例えば、成長を低減するか又は殺傷する）ことができる。本明細書に記載される殺虫剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的昆虫内若しくは昆虫上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の殺虫剤濃度を達成し；且つ（ｂ）標的昆虫の適応度を低減させるのに十分な量及び時間で、標的有害昆虫又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の殺虫剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０２９４】
本明細書で使用されるとき、用語「殺虫剤」又は「殺虫薬剤」は、農業有害昆虫などの昆虫を殺傷するか、又はその成長、繁殖、生殖若しくは拡大を阻害する物質を指す。殺虫剤の非限定的な例を表７に示す。好適な殺虫剤のさらに別の非限定的な例として、アザジラクチン、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ）種、ボーベリア属（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）種、コドレモン、メタリジウム属（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種、ペシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）種、チューリンゲンシス（ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）及びバーティシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）種などの生物剤、ホルモン又はフェロモン並びに燻蒸剤のように作用機構が不明若しくは不明瞭である有効化合物（例えば、リン化アルミニウム、臭化メチル及びフッ化スルフリルなど）及び選択性摂餌阻害剤（例えば、氷晶石、フロニカミド及びピメトロジンなど）が挙げられる。当業者は、組成物中の各殺虫剤の好適な濃度が、殺虫剤の有効性、安定性、個別の殺虫剤の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０２９５】
2021523944.tif 000033
【０２９６】
2021523944.tif 000034
【０２９７】
2021523944.tif 000035
【０２９８】
Ｄ．殺線虫剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに殺線虫剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる殺線虫剤を含む。例えば、殺線虫剤は、植物有害線虫の適応度を低減させる（例えば、成長を低減するか又は殺傷する）ことができる。本明細書に記載される殺線虫剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的線虫内若しくは線虫上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の殺線虫剤濃度を達成し；且つ（ｂ）標的線虫の適応度を低減させるのに十分な量及び時間で、標的有害線虫又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の殺線虫剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０２９９】
本明細書で使用されるとき、用語「殺線虫剤」又は「殺線虫性薬剤」は、農業有害線虫などの線虫を殺傷するか、又はその成長、繁殖、生殖若しくは拡大を阻害する物質を指す。殺線虫剤の非限定的な例を表８に示す。当業者は、組成物中の各殺線虫剤の好適な濃度が、殺線虫剤の有効性、安定性、個別の殺線虫剤の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０３００】
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【０３０１】
Ｅ．軟体動物駆除剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに軟体動物駆除剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる軟体動物駆除剤を含む。例えば、軟体動物駆除剤は、植物有害軟体動物の適応度を低減させる（例えば、成長を低減するか又は殺傷する）ことができる。本明細書に記載される軟体動物駆除剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的軟体動物内若しくは軟体動物上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の軟体動物駆除剤濃度を達成し；且つ（ｂ）標的軟体動物の適応度を低減させるのに十分な量及び時間で、標的有害軟体動物又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の軟体動物駆除剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０３０２】
本明細書で使用されるとき、用語「軟体動物駆除剤」又は「軟体動物駆除薬剤」は、農業有害軟体動物などの軟体動物を殺傷するか、又はその成長、繁殖、生殖若しくは拡大を阻害する物質を指す。いくつかの化学物質を軟体動物駆除剤として使用することができ、そうしたものとして、リン酸鉄（ＩＩＩ）、硫酸アルミニウム及び鉄ナトリウムＥＤＴＡ，［３］［４］などの金属塩、メタルデヒド、メチオカルブ又はアセチルコリンステラーゼ阻害剤が挙げられる。当業者は、組成物中の各軟体動物駆除剤の好適な濃度が、軟体動物駆除剤の有効性、安定性、個別の軟体動物駆除剤の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０３０３】
Ｆ．殺ウイルス剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに殺ウイルス剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる殺ウイルス剤を含む。例えば、殺ウイルス剤は、ウイルス性植物病原体の適応度を低減させる（例えば、低減又は排除する）ことができる。本明細書に記載される殺ウイルス剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の殺ウイルス剤濃度を達成し；且つ（ｂ）標的ウイルスを低減又は排除するのに十分な量及び時間で、標的有害ウイルス又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の殺ウイルス剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０３０４】
本明細書で使用されるとき、用語「殺ウイルス剤」又は「抗ウイルス剤」は、農業ウイルス性病原体などのウイルスを殺傷するか、又はその成長、増殖、繁殖、発生若しくは拡大を阻害する物質を指す。いくつかの薬剤を殺ウイルス剤として使用することができ、そうしたものとして、化学物質又は生物剤（例えば、核酸、例えばｄｓＲＮＡ）がある。当業者は、組成物中の各殺ウイルス剤の好適な濃度が、殺ウイルス剤の有効性、安定性、個別の殺ウイルス剤の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０３０５】
Ｇ．除草剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに、１種以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる除草剤を含み得る。例えば、除草剤は、雑草の適応度を低減させる（例えば、低減又は排除する）ことができる。本明細書に記載される除草剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）植物上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の除草剤濃度を達成し；且つ（ｂ）雑草の適応度を低減させるのに十分な量及び時間で、標的雑草と接触させることができる。本明細書に記載の除草剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０３０６】
本明細書で使用されるとき、用語「除草剤」は、雑草を殺傷するか、又はその成長、繁殖、生殖若しくは拡大を阻害する物質を指す。いくつかの薬剤を除草剤として使用することができ、そうしたものとして、グルホシネート、プロキザホップ、メタミトロン、メタザクロル、ペンジメタリン、フルフェナセト、ジフルフェニカン、クロマゾン、ニコスルフロン、メソトリオン、ピノキサデン、スルコトリオン、プロスルホカルブ、スルフェントラゾドン、ビフェノクス、キンメラック、トリアレート、テルブチラジン、アトラジン、オキシフルオルフェン、ジウロン、トリフルラリン又はクロロトルロンが挙げられる。除草剤のさらなる例として、限定されないが、ジカンバエステルなどの安息香酸除草剤、２，４−Ｄ、ＭＣＰＡ及び２，４−ＤＢエステルなどのフェノキシアルカン酸除草剤、クロジナホップ、シハロホップ、フェノキサプロプ、フルアジホップ、ハロキシホップ及びキザロホップエステルなどのアリールオキシフェノキシプロピオン酸除草剤、アミノピラリド、ピコロラム及びクロピラリドエステルなどのピリジンカルボン酸除草剤、アミノシクロピラクロルエステルなどのピリミジンカルボン酸除草剤、フルオロキシピル及びトリクロピルエステルなどのピリジルオキシアルカン酸除草剤並びにブロモキシニル及びアイオキシニルエステルなどのヒドロキシベンゾニトリル除草剤並びに米国特許第７，３１４，８４９号明細書、同第７，３００，９０７号明細書及び同第７，６４２，２２０号明細書（これらの各々は、その全体を参照により本明細書に組み込む）に開示される一般構造のアリールピリジンカルボン酸及びアリールピリミジンカルボン酸のエステルが挙げられる。特定の実施形態では、除草剤は、以下のものからなる群から選択することができる：２，４−Ｄ、２，４−ＤＢ、アセトクロル、アシフルオルフェン、アラクロル、アメトリン、アミトロール、アスラム、アトラジン、アザフェニジン、ベネフィン、ベンスルフロン、ベンスリド、ベンタゾン、ブロマシル、ブロモキシニル、ブチレート、カルフェントラゾン、クロラムベン、クロリムロン、クロルプラハム、クロルスルフロン、クレトジム、クロマゾン、クロピラリド、クロランスラム、シアナジン、シクロエート、ＤＣＰＡ、デスメジファム、ジクロベニル、ジクロホップ、ジクロスラム、ジエタチル、ジフェンゾコート（ｄｉｆｅｎｚｏｑｕａｔ）、ジフルフェンゾピル、ジメテナミド−ｐ、ジクワット（ｄｉｑｕａｔ）、ジウロン、ＤＳＭＡ、エンドタール、ＥＰＴＣ、エタルフラリン、エタメトスルフロン、エトフメセート、フェノキサプロプ、フルアジホップ−Ｐ、フルカルバゾン、フルフェナセト、フルメトスラム、フルミクロラク、フルミオキサジン、フルオメツロン、フルオキシピル、フルチアセト、フォメサフェン、フォラムスルフロン、グルホシネート、グリホセート、ハロスルフロン、ハロキシホップ、ヘキサジノン、イマザメタベンズ、イマザモックス、イマザピック、イマザキン、イマゼタピル、イソキサベン、イソキサフルトール、ラクトフェン、リヌロン、ＭＣＰＡ、ＭＣＰＢ、メソトリオン、メタゾール、メトラクロル−ｓ、メトリブジン、メトスルフロン、モリネート、ＭＳＭＡ、ナプロパミド、ナプタラム、ニコスルフロン、ノルフラゾン、オリザリン、オキサジアゾン、オキサスルフロン、オキシフルオルフェン、パラコート、ペブレート、ペラルゴン酸、ペンジメタリン、フェンメジファム、ピクロラム、プリミスルフロン、プロジアミン、プロメトリン、プロナミド、プロパクロル、プロパニル、プロスルフロン、ピラゾン、ピリデート、ピリチオバック、キンクロラック、キザロホップ、リムスルフロン、セトキシジム、シデュロン、シマジン、スルフェントラゾン、スルホメツロン、スルホスルフロン、テブチルオン、テルバシル、チアゾピル、チフェンスルフロン、チオベンカルブ、トラルコキシジム、トリアレート、トリアスルフロン、トリベヌロン、トリクロピル、トリフラリン、トリフルスルフロン、ベルノレート。一部の例では、除草剤は、ドキソルビシンである。当業者は、組成物中の各除草剤の好適な濃度が、除草剤の有効性、安定性、個別の除草剤の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動することは理解されるであろう。
【０３０７】
Ｈ．忌避剤
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、さらに忌避剤を含み得る。一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、２種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは１０超）の異なる忌避剤を含む。例えば、忌避剤は、本明細書に記載の有害生物（例えば、昆虫、線虫若しくは軟体動物）；微生物（例えば、植物病原体若しくは内生菌、例えば細菌、真菌若しくはウイルス）；又は雑草のいずれかを忌避することができる。本明細書に記載される忌避剤を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の忌避剤濃度を達成し；且つ（ｂ）非処理植物に対して、植物に対する有害生物のレベルを低減させるのに十分な量及び時間で、標的植物又は寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の忌避剤は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０３０８】
一部の例では、忌避剤は、昆虫忌避剤である。公知の昆虫忌避剤のいくつかの例として、以下のものが挙げられる：ベンジル；安息香酸ベンジル；２，３，４，５−ビス（ブチル−２−エン）テトラヒドロフルフラル（ＭＧＫ  Ｒｅｌｅｌｌｅｎｔ  １１）；ブトキシポリプロピレングリコール；Ｎ−ブチルアセタニリド；ノルマル−ブチル−６，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−１，４−ピロン−２−カルボキシレート（Ｉｎｄａｌｏｎｅ）；アジピン酸ジブチル；フタル酸ジブチル；コハク酸ジ−ノルマル−ブチル（Ｔａｂａｔｒｅｘ）；Ｎ，Ｎ−ジメチル−メタ−トルアミド（ＤＥＥＴ）；ジメチルカルベート（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｃａｒｂａｔｅ）（エンド，エンド）−ジメチルビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−２，３−ジカルボキシレート）；フタル酸ジメチル；２−エチル−２−ブチル−１，３−プロパンジオール；２−エチル−１，３−ヘキサンジオール（Ｒｕｔｇｅｒｓ  ６１２）；ジ−ノルマル−プロピルイソシンコメロネート（ＭＧＫ  Ｒｅｌｅｌｌｅｎｔ  ３２６）；２−フェニルシクロヘキサノール；ｐ−メタン−３，８−ジオール及びノルマル−プロピルＮ，Ｎ−ジエチルスクシナメート。他の忌避剤として、シトロネラ油、フタル酸メチル、ノルマル−ブチルメシチルオキシドオキサレート及び２−エチルヘキサンジオール−１，３が挙げられる（Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｖｏｌ．１１：７２４−７２８；及びＴｈｅ  Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，ｐ７５６を参照されたい）。
【０３０９】
昆虫忌避剤は、合成又は非合成昆虫忌避剤であり得る。合成昆虫忌避剤の例としては、メチルアントラニレート及び他のアントラニレート基剤昆虫忌避剤、ベンズアルデヒド、ＤＥＥＴ（Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド）、ジメチルカルベート、フタル酸ジメチル、イカリジン（即ちピカリジン、Ｂａｙｒｅｐｅｌ及びＫＢＲ３０２３）、インダロン（例えば、「６−２−２」混合物（６０％フタル酸ジメチル、２０％インダロン、２０％エチルヘキサンジオール）中に使用されるような）、ＩＲ３５３５（３−［Ｎ−ブチル−Ｎ−アセチル］−アミノプロピオン酸、エチルエステル）、メトフルトリン、ペルメトリン、ＳＳ２２０又はトリシクロデセニルアリルエーテルが挙げられる。天然の昆虫忌避剤の例としては、ビューティーベリー（ｂｅａｕｔｙｂｅｒｒｙ）（カリカルバ（Ｃａｌｌｉｃａｒｐａ））葉、カバの木の樹皮、ボクマートル（ｂｏｇ  ｍｙｒｔｌｅ）（ヤチヤナギ（Ｍｙｒｉｃａ  Ｇａｌｅ））、キャトニップオイル（例えば、ネペタラクトン）、シトロネラオイル、レモンユーカリ（レモンユーカリ（Ｃｏｒｙｍｂｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ））；例えば、ｐ−メンタン−３，８−ジオール（ＰＭＤ））の精油、ニームオイル、レモングラス、ティーツリー（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ  ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）の葉由来のティーツリーオイル、タバコ又はそれらのエキスが挙げられる。
【０３１０】
Ｉ．生物剤
ｉ．ポリペプチド
本明細書に記載される有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物（例えば、ＰＭＤ）は、ポリペプチド、例えば抗菌剤、抗真菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤、殺ウイルス剤又は除草剤であるポリペプチドを含み得る。一部の例では、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、有害生物における経路をターゲティングする、ポリペプチド又はその機能性断片若しくは誘導体を含む。例えば、ポリペプチドは、植物有害生物の適応度を低減させることができる。本明細書に記載されるポリペプチドを含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）のポリペプチド濃度を達成し；且つ（ｂ）標的有害生物を低減又は排除するのに十分な量及び時間で、標的有害生物又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載のポリペプチドは、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０３１１】
本発明で使用することができるポリペプチドの例として、酵素（例えば、代謝リコンビナーゼ、ヘリカーゼ、インテグラーゼ、ＲＮＡｓｅ、ＤＮＡｓｅ若しくはユビキチン化タンパク質）、孔形成タンパク質、シグナル伝達リガンド、細胞膜透過ペプチド、転写因子、受容体、抗体、ナノボディ、遺伝子編集タンパク質（例えば、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系、ＴＡＬＥＮ若しくはジンクフィンガー）、リボタンパク質、タンパク質アプタマー又はシャペロンが挙げられ得る。
【０３１２】
本発明に含まれるポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド又は組換えにより作製された変異体を含み得る。一部の例では、ポリペプチドは、その機能性断片又は変異体（例えば、酵素として活性の断片又はその変異体）であり得る。例えば、ポリペプチドは、例えば、特定の領域にわたり又は配列全体にわたり、本明細書に記載されるポリペプチド又は天然に存在するポリペプチドの配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する本明細書に記載される任意のポリペプチドの機能的に活性な変異体であり得る。一部の例では、ポリペプチドは、目的のタンパク質と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９９％又はそれを超える）同一性を有し得る。
【０３１３】
本明細書に記載のポリペプチドは、本明細書に記載される使用のいずれかのために組成物に配合することができる。本明細書に開示される組成物は、任意の数又は種類（例えば、クラス）のポリペプチド、例えば少なくとも約１つのポリペプチド、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくはそれを超えるポリペプチドを含み得る。組成物中の各ポリペプチドの好適な濃度は、ポリペプチドの有効性、安定性、組成物中の個別のポリペプチドの数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動する。一部の例では、液体組成物中の各ポリペプチドは、約０．１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである。一部の例では、固体組成物中の各ポリペプチドは、約０．１ｎｇ／ｇ〜約１００ｍｇ／ｇである。
【０３１４】
ポリペプチドを作製する方法は、当技術分野においてルーティンである。一般的に、Ｓｍａｌｅｓ＆Ｊａｍｅｓ（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２００５）；及びＣｒｏｍｍｅｌｉｎ，Ｓｉｎｄｅｌａｒ＆Ｍｅｉｂｏｈｍ（Ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１３）を参照されたい。
【０３１５】
ポリペプチドを作製する方法は、植物細胞での発現を含むが、適切なプロモータの制御下、昆虫細胞、酵母、細菌、哺乳動物細胞又は他の細胞を用いて、組換えタンパク質を作製することもできる。哺乳動物発現ベクターは、複製起点などの非転写エレメント、好適なプロモータ及びエンハンサー並びに他の５’若しくは３’フランキング非転写配列及び必要なリボソーム結合部位などの５’若しくは３’非転写配列、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位並びに終結配列を含み得る。ＳＶ４０ウイルスゲノム由来のＤＮＡ配列、例えばＳＶ４０起点、早期プロモータ、エンハンサー、スプライス及びポリアデニル化部位を用いて、異種ＤＮＡ配列の発現に必要な他の遺伝子エレメントを提供することもできる。細菌、真菌、酵母及び哺乳動物細胞宿主と一緒に使用するのに適切なクローニング及び発現ベクターは、Ｇｒｅｅｎ＆Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２０１２）に記載されている。
【０３１６】
様々な哺乳動物細胞培養系を使用して、組換えポリペプチド薬剤を発現させて、製造することができる。哺乳動物発現系の例としては、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬＡ及びＢＨＫ細胞株が挙げられる。タンパク質治療薬生産のための宿主細胞培養の方法は、例えば、Ｚｈｏｕ  ａｎｄ  Ｋａｎｔａｒｄｊｉｅｆｆ（Ｅｄｓ．），Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１４）に記載されている。タンパク質の精製については、Ｆｒａｎｋｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１３）；及びＣｕｔｌｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１０）に記載されている。タンパク質治療薬の製剤化については、Ｍｅｙｅｒ（Ｅｄ．），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃ，Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｓｅｒｉｅｓ（２０１２）に記載されている。
【０３１７】
一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、抗体又はその抗原結合断片を含む。例えば、本明細書に記載される薬剤は、有害生物の１要素の活動及び／若しくは機能を遮断又は増強する抗体であり得る。抗体は、有害生物中のポリペプチド（例えば、酵素若しくは細胞受容体）のアンタゴニスト又はアゴニストとして作用し得る。有害生物の標的抗原に対する抗体の作製及び使用は、当技術分野において公知である。例えば、抗体操作、変性オリゴヌクレオチドの使用、５’−ＲＡＣＥ、ファージディスプレイ及び突然変異誘発；抗体試験及び特性決定；抗体薬物動態及び薬物力学；抗体精製及び保存；並びにスクリーニング及び標識技法を含む、組換え抗体を作製する方法については、以下を参照されたい：Ｚｈｉｑｉａｎｇ  Ａｎ（Ｅｄ．），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ，１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，２００９、さらにはＧｒｅｅｎｆｉｅｌｄ（Ｅｄ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０１３。
【０３１８】
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、バクテリオシンを含み得る。一部の例では、バクテリオシンは、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）又は乳酸菌（ＬＡＢ、例えばラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ））などのグラム陽性細菌によって天然に生産される。一部の例では、バクテリオシンは、ハフニア・アルベイ（Ｈａｆｎｉａ  ａｌｖｅｉ）、シトロバクター・フロインディ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｆｒｅｕｎｄｉｉ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、セラチア・プリミチクム（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｌｙｍｉｔｈｉｃｕｍ）、キサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、エルウィニア・カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、ラルストニア・ソラナセアルム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）又は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）などのグラム陰性細菌によって天然に生産される。例示的バクテリオシンとしては、限定はされないが、クラスＩ〜ＩＶ  ＬＡＢ抗生物質（ランチビオティックなど）、コリシン、ミクロシン及びピオシンが挙げられる。
【０３１９】
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、抗菌ペプチド（ＡＭＰ）を含み得る。微生物を阻害するのに好適な任意のＡＭＰを使用することができる。ＡＭＰは、様々な群の分子であり、これらは、そのアミノ酸の組成及び構造に基づいて亜群に分けられる。ＡＭＰは、天然にＡＭＰを産生する任意の生物に由来するか又はそれらから産生され、そうしたものとして、植物由来（例えば、コプシン）、昆虫由来（例えば、マストパラン、ポネラトキシン、セクロピン、モリシン、メリッチン）、カエル由来（例えば、マガイニン、デルマセプチン、アウレイン）及び哺乳動物由来（例えば、カテリシジン、デフェンシン及びプロテグリン）のＡＭＰが挙げられる。
【０３２０】
ｉｉ．核酸
本明細書に記載される組成物及び方法において多数の核酸が有用である。本明細書に開示される組成物は、任意の数又は種類（例えば、クラス）の核酸（例えば、ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡ、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）若しくは阻害性ＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ若しくはｍｉＲＮＡ）又はハイブリッドＤＮＡ−ＲＮＡ分子）、例えば少なくとも約１クラス又は変異体の核酸、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくはそれを超えるクラス又は変異体の核酸を含み得る。組成物中の各核酸の好適な濃度は、核酸の有効性、安定性、個別の核酸の数、配合、組成物の適用方法などの要因に応じて変動する。本発明で有用な核酸の例として、ダイサー基質低分子干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、（非対称干渉ＲＮＡ）ａｉＲＮＡ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、モルホリノ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ｐｉｗｉ−干渉ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、リボザイム、デオキシリボザイム（ＤＮＡｚｙｍｅ）、アプタマー（ＤＮＡ、ＲＮＡ）、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）又はＤＮＡ分子を含む。
【０３２１】
本明細書に記載される核酸を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の核酸濃度を達成し；且つ（ｂ）標的有害生物を低減又は排除するのに十分な量及び時間で、標的有害生物又はそれに寄生された植物と接触させることができる。本明細書に記載の核酸は、本明細書に記載の方法のいずれかのために有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物に配合され得、特定の例ではそのＰＭＰと結合され得る。
【０３２２】
（ａ）ポリペプチドをコードする核酸
一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、ポリペプチドをコードする核酸を含む。ポリペプチドをコードする核酸は、約１０〜約５０，０００ヌクレオチド（ｎｔ）、約２５〜約１００ｎｔ、約５０〜約１５０ｎｔ、約１００〜約２００ｎｔ、約１５０〜約２５０ｎｔ、約２００〜約３００ｎｔ、約２５０〜約３５０ｎｔ、約３００〜約５００ｎｔ、約１０〜約１０００ｎｔ、約５０〜約１０００ｎｔ、約１００〜約１０００ｎｔ、約１０００〜約２０００ｎｔ、約２０００〜約３０００ｎｔ、約３０００〜約４０００ｎｔ、約４０００〜約５０００ｎｔ、約５０００〜約６０００ｎｔ、約６０００〜約７０００ｎｔ、約７０００〜約８０００ｎｔ、約８０００〜約９０００ｎｔ、約９０００〜約１０，０００ｎｔ、約１０，０００〜約１５，０００ｎｔ、約１０，０００〜約２０，０００ｎｔ、約１０，０００〜約２５，０００ｎｔ、約１０，０００〜約３０，０００ｎｔ、約１０，０００〜約４０，０００ｎｔ、約１０，０００〜約４５，０００ｎｔ、約１０，０００〜約５０，０００ｎｔ又はこれらの間の任意の範囲の長さを有し得る。
【０３２３】
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、目的の核酸配列の機能的に活性の変異体も含み得る。一部の例では、核酸の変異体は、例えば、目的の核酸の配列と、指定領域にわたって又は配列全体にわたって少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。一部の例では、本発明は、本明細書に記載される通りの核酸変異体によりコードされる機能的に活性のポリペプチドを含む。一部の例では、核酸変異体によりコードされる機能的に活性のポリペプチドは、例えば、目的のポリペプチドの配列又は天然由来のポリペプチド配列と、指定領域にわたって又はアミノ酸配列全体にわたって少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。
【０３２４】
タンパク質をコードする核酸を発現させるいくつかの方法は、適切なプロモータの制御下で、昆虫、酵母、細菌又は他の細胞をはじめとする細胞における発現を含み得る。発現ベクターは、複製起点などの非転写エレメント、好適なプロモータ及びエンハンサー並びに他の５’若しくは３’フランキング非転写配列及び必要なリボソーム結合部位などの５’若しくは３’非転写配列、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位並びに終結配列を含み得る。ＳＶ４０ウイルスゲノム由来のＤＮＡ配列、例えばＳＶ４０起点、早期プロモータ、エンハンサー、スプライス及びポリアデニル化部位を用いて、異種ＤＮＡ配列の発現に必要な他の遺伝子エレメントを提供することもできる。細菌、真菌、酵母及び哺乳動物細胞宿主と一緒に使用するのに適切なクローニング及び発現ベクターは、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２に記載されている。
【０３２５】
組換え方法を用いた遺伝子修飾は、当技術分野で公知である。所望の遺伝子をコードする核酸配列は、当技術分野で公知の組換え方法を用いて、例えば遺伝子を発現する細胞からのライブラリーのスクリーニング、それを含むことが分かっているベクターからのその遺伝子の誘導又は標準技術を用いた、それを含む細胞及び組織からの直接単離などによって取得することができる。代わりに、目的の遺伝子をクローニングではなく、合成により作製することもできる。
【０３２６】
天然又は合成核酸の発現は、典型的に、目的の遺伝子をコードする核酸をプロモータと作動可能に連結して、構築物を発現ベクターに組み込むことにより、達成される。発現ベクターは、細菌内での複製及び組込みに好適であり得る。発現ベクターは、真核生物内での複製及び発現にも好適であり得る。典型的なクローニングベクターは、転写及び翻訳ターミネータ、開始配列並びに所望の核酸配列の発現に有用なプロモータを含む。
【０３２７】
更なるプロモータエレメント、例えばエンハンサーが、転写開始の頻度を調節する。典型的に、これらは、開始部位の３０〜１１０塩基対（ｂｐ）上流に位置するが、近年、いくつかのプロモータは、開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが判明している。プロモータエレメント同士の間隔は、多くの場合、柔軟であり、エレメントが互いに対して反転又は移動した場合も、プロモータ機能は保存される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモータの場合、プロモータエレメント同士の間隔は、活性が低減し始めるまで、最大５０ｂｐに増加することができる。プロモータに応じて、個別のエレメントは、転写を活性化するために、共同又は独立のいずれかで機能し得ると思われる。
【０３２８】
好適なプロモータの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ配列である。このプロモータ配列は、そこに作動可能に連結した任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモータ配列である。好適なプロモータの別の例は、伸長成長因子−１α（ＥＦ−１α）である。しかし、他の構成的プロモータ配列を使用することもでき、限定はされないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモータ、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモータ、ＭｏＭｕＬＶプロモータ、トリ白血病ウイルスプロモータ、エプスタイン・バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルス前初期プロモータ、ラウス肉腫ウイルスプロモータ並びにヒト遺伝子プロモータ、例えば、限定はされないが、アクチンプロモータ、ミオシンプロモータ、ヘモグロビンプロモータ及びクレアチンキナーゼプロモータが挙げられる。
【０３２９】
代わりに、プロモータは、誘導性プロモータであり得る。誘導性プロモータの使用は、そのような発現が要望される場合、それが作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、又は発現が求められない場合には発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモータの例として、限定はされないが、メタロチオニンプロモータ、グルココルチコイドプロモータ、プロゲステロンプロモータ及びテトラサイクリンプロモータが挙げられる。
【０３３０】
導入しようとする発現ベクターは、ウイルスベクターを介してトランスフェクト又は感染させようとする細胞の個体群からの発現細胞の同定及び選択を促進するために、選択性マーカ遺伝子若しくはリポータ遺伝子のいずれか又はその両方を含有し得る。他の態様では、選択性マーカをＤＮＡの個別の部分に担持させて、同時トランスフェクション法に使用し得る。宿主細胞での発現を可能にするために、選択性マーカ及びリポータ遺伝子の両方を適切な調節配列とフランキングさせ得る。有用な選択性マーカとして、例えばｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子がある。
【０３３１】
潜在的に形質転換された細胞を同定するため及び調節配列の機能性を評価するために、リポータ遺伝子を用いることができる。一般に、リポータ遺伝子は、レシピエント供給源に存在しないか、又はそれにより発現される遺伝子であり、何らかの容易に検出可能な特性、例えば酵素活性によって発現が呈示されるポリペプチドをコードする。リポータ遺伝子の発現は、ＤＮＡをレシピエント細胞に導入した後、好適な時点でアッセイする。好適なリポータ遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２，２０００）。好適な発現系は、よく知られており、公知の技術を用いて調製することができるか又は市販のものを取得し得る。一般に、リポータ遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物は、プロモータとして同定される。こうしたプロモータ領域は、リポータ遺伝子に連結することができ、プロモータ駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用することができる。
【０３３２】
一部の例では、生物を遺伝子修飾して、１つ以上のタンパク質の発現を改変することができる。１つ以上のタンパク質の発現は、特定の時点、例えば生物の発育又は分化状態について改変することができる。一例では、本発明は、１つ以上のタンパク質、例えば活性、構造又は機能の発現に影響するタンパク質の発現を改変するための組成物を含む。１つ以上のタンパク質の発現を特定の位置に限定することも又は生物全体に広げることもできる。
【０３３３】
（ｂ）合成ｍＲＮＡ
有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、合成ｍＲＮＡ分子、例えばポリペプチドをコードする合成ｍＲＮＡ分子を含み得る。合成ｍＲＮＡ分子は、例えば、化学的に修飾することができる。ｍＲＮＡ分子は、例えば、化学的に合成するか又はインビトロで転写することができる。ｍＲＮＡ分子は、プラスミド、例えばウイルスベクター、細菌ベクター又は真核生物発現ベクターに配置することができる。一部の例では、ｍＲＮＡ分子は、トランスフェクション、エレクトロポレーション又は形質導入（例えば、アデノウイルス若しくはレンチウイルス形質導入）により、細胞に送達することができる。
【０３３４】
一部の例では、本明細書に記載される目的の修飾ＲＮＡ薬剤は、修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを有する。こうした修飾は、公知であり、例えば国際公開第２０１２／０１９１６８号パンフレットに記載されている。更なる修飾は、例えば国際公開第２０１５／０３８８９２号パンフレット；同第２０１５／０３８８９２号パンフレット；同第２０１５／０８９５１１号パンフレット；同第２０１５／１９６１３０号パンフレット；同第２０１５／１９６１１８号パンフレット及び同第２０１５／１９６１２８  Ａ２号パンフレットに記載されている。
【０３３５】
一部の例では、目的のポリペプチドをコードする修飾ＲＮＡは、１つ以上の末端修飾、例えば５’キャップ構造及び／又はポリＡテール（例えば、１００〜２００ヌクレオチド長）を有する。５’キャップ構造は、ＣａｐＯ、Ｃａｐｌ、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎｌ−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン及び２−アジド−グアノシンからなる群から選択され得る。一部のケースでは、修飾ＲＮＡは、少なくとも１つのコザック（Ｋｏｚａｋ）配列を含む５’ＵＴＲと、３’ＵＴＲとを含有する。こうした修飾は、公知であり、例えば国際公開第２０１２／１３５８０５号パンフレット及び同第２０１３／０５２５２３号パンフレットに記載される。更なる末端修飾は、例えば、国際公開第２０１４／１６４２５３号パンフレット及び同第２０１６／０１１３０６号パンフレット、国際公開第２０１２／０４５０７５号パンフレット及び同第２０１４／０９３９２４号パンフレットに記載されている。少なくとも１つの化学修飾を含み得るキャップＲＮＡ分子（例えば、修飾ｍＲＮＡ）を合成するためのキメラ酵素は、国際公開第２０１４／０２８４２９号パンフレットに記載されている。
【０３３６】
一部の例では、修飾ｍＲＮＡを環状化又はコンカテマー化して、ポリＡ結合タンパク質と５’末端結合タンパク質との相互作用を補助する翻訳コンピテント分子を作製することができる。環状化又はコンカテマー化のメカニズムは、少なくとも３つの異なる経路：１）化学、２）酵素、及び３）リボザイム触媒を通して起こり得る。新たに形成される５’−／３’−結合は、分子内又は分子間のいずれでもあり得る。こうした修飾は、国際公開第２０１３／１５１７３６号パンフレットに記載されている。
【０３３７】
修飾ＲＮＡを作製及び精製する方法は、当技術分野で公知である。例えば、修飾ＲＮＡは、インビトロ転写（ＩＶＴ）酵素合成のみを用いて作製される。ＩＶＴポリヌクレオチドを作製する方法は、当技術分野で公知であり、国際公開第２０１３／１５１６６６号パンフレット、同第２０１３／１５１６６８号パンフレット、同第２０１３／１５１６６３号パンフレット、同第２０１３／１５１６６９号パンフレット、同第２０１３／１５１６７０号パンフレット、同第２０１３／１５１６６４号パンフレット、同第２０１３／１５１６６５号パンフレット、同第２０１３／１５１６７１号パンフレット、同第２０１３／１５１６７２号パンフレット、同第２０１３／１５１６６７号パンフレット及び同第２０１３／１５１７３６．Ｓ号パンフレットに記載されている。精製方法には、複数のチミジン若しくはその誘導体及び／又は複数のウラシル若しくはその誘導体（ポリＴ／Ｕ）に連結させた表面とサンプルを、ＲＮＡ転写物が表面に結合するような条件下で接触させた後、表面から精製ＲＮＡ転写物を溶出させることにより、ポリＡテールを含むＲＮＡ転写物を精製する方法（国際公開第２０１４／１５２０３１号パンフレット）；スケーラブルな方法で１０，０００ヌクレオチド長までの長いＲＮＡの分離を可能にするイオン（例えば、アニオン）交換クロマトグラフィーを用いる方法（国際公開第２０１４／１４４７６７号パンフレット）；並びに修飾ｍＲＮＡサンプルをＤＮＡｓｅ処理に付す方法（国際公開第２０１４／１５２０３０号パンフレット）を含む。
【０３３８】
修飾ＲＮＡの製剤は公知であり、例えば国際公開第２０１３／０９０６４８号パンフレットに記載されている。例えば、製剤は、限定はされないが、ナノ粒子、ポリ乳酸・グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）ミクロスフェア、リポドイド、リポプレクス、リポソーム、ポリマー、炭水化物（単糖を含む）、カチオン性脂質、フィブリンゲル、フィブリンハイドロゲル、フィブリングルー、フィブリンシーラント、フィブリノーゲン、トロンビン、急速排出脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）及びこれらの組合せであり得る。
【０３３９】
ヒトの疾患、抗体、ウイルス及び様々なインビボ環境の分野におけるポリペプチドをコードする修飾ＲＮＡは、公知であり、例えば国際公開第２０１３／１５１６６６号パンフレット、同第２０１３／１５１６６８号パンフレット、同第２０１３／１５１６６３号パンフレット、同第２０１３／１５１６６９号パンフレット、同第２０１３／１５１６７０号パンフレット、同第２０１３／１５１６６４号パンフレット、同第２０１３／１５１６６５号パンフレット、同第２０１３／１５１７３６号パンフレットの表６；国際公開第２０１３／１５１６７２号パンフレットの表６及び表７；国際公開第２０１３／１５１６７１号パンフレットの表６、表１７８及び表１７９；国際公開第２０１３／１５１６６７号パンフレットの表６、表１８５及び表１８６に開示されている。前述のいずれかは、ＩＶＴポリヌクレオチド、キメラポリヌクレオチド又は環状ポリヌクレオチドとして合成され得、それぞれ１つ以上の修飾ヌクレオチド又は末端修飾を含み得る。
【０３４０】
（ｃ）阻害性ＲＮＡ
一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、阻害性ＲＮＡ分子、例えばＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を介して作用する阻害性ＲＮＡ分子を含む。一部の例では、阻害性ＲＮＡ分子は、有害生物における遺伝子発現のレベルを低減させ、且つ／又は有害生物におけるタンパク質のレベルを低減させる。一部の例では、阻害性ＲＮＡ分子は、有害生物遺伝子の発現を阻害する。例えば、阻害性ＲＮＡ分子は、有害生物の１遺伝子をターゲティングする低分子干渉ＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ及び／又はマイクロＲＮＡを含み得る。特定のＲＮＡ分子は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の生物学的プロセスを介して遺伝子発現を阻害することができる。ＲＮＡｉ分子は、典型的に、１５〜５０塩基対（例えば、約１８〜２５塩基対）を含むＲＮＡ又はＲＮＡ様構築物を含み、細胞内の発現された標的遺伝子中のコード配列と同一（相補的）であるか又はほぼ同一（実質的に相補的）なヌクレオ塩基配列を有する。ＲＮＡｉ分子としては、限定はされないが、ダイサー基質低分子干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、部分二重鎖（ｍｅｒｏｄｕｐｌｅｘ）、ダイサー基質及び多価ＲＮＡ干渉（米国特許第８，０８４，５９９号明細書、同第８，３４９，８０９号明細書、同第８，５１３，２０７号明細書及び同第９，２００，２７６号明細書）が挙げられる。ｓｈＲＮＡは、ＲＮＡｉを介して標的遺伝子の発現を低減するヘアピンターンを含むＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション又は形質導入により）、プラスミド、例えばウイルス若しくは細菌ベクターの形態で細胞に送達することができる。マイクロＲＮＡは、典型的に、約２２ヌクレオチド長を有するノンコーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ分子上の標的部位に結合し、例えばｍＲＮＡの切断、ｍＲＮＡの不安定化又はｍＲＮＡの翻訳の阻害を引き起こすことにより、ｍＲＮＡを抑制する。一部の例では、阻害性ＲＮＡ分子は、機能の負調節因子のレベル及び／又は活性を低減させる。他の例では、阻害性ＲＮＡ分子は、機能の正調節因子のレベル及び／又は活性を低減させる。阻害性ＲＮＡ分子は、例えば、化学的に合成するか又はインビトロで転写することができる。
【０３４１】
一部の例では、核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はＰＮＡである。一部の例では、ＲＮＡは、阻害性ＲＮＡである。一部の例では、阻害性ＲＮＡは、植物有害生物における遺伝子発現を阻害する。一部の例では、核酸は、ｍＲＮＡ、修飾ｍＲＮＡ又は有害生物において酵素（例えば、代謝リコンビナーゼ、ヘリカーゼ、インテグラーゼ、ＲＮＡｓｅ、ＤＮＡｓｅ又はユビキチン化タンパク質）の発現を増大するＤＮＡ分子、孔形成タンパク質、シグナル伝達リガンド、細胞膜透過ペプチド、転写因子、受容体、抗体、ナノボディ、遺伝子編集タンパク質（例えば、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系、ＴＡＬＥＮ若しくはジンクフィンガー）、リボタンパク質、タンパク質アプタマー又はシャペロンである。一部の例では、核酸は、ｍＲＮＡ、修飾ｍＲＮＡ又は酵素（例えば、代謝酵素、リコンビナーゼ酵素、ヘリカーゼ酵素、インテグラーゼ酵素、ＲＮＡｓｅ酵素、ＤＮＡｓｅ酵素又はユビキチン化タンパク質）の発現を増大するＤＮＡ分子、孔形成タンパク質、シグナル伝達リガンド、細胞膜透過ペプチド、転写因子、受容体、抗体、ナノボディ、遺伝子編集タンパク質（例えば、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系、ＴＡＬＥＮ若しくはジンクフィンガー）、リボタンパク質、タンパク質アプタマー又はシャペロンである。一部の例では、有害生物における発現の増大は、参照レベル（例えば、非処理有害生物における発現）に対して約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％若しくは１００％超の発現増大である。一部の例では、有害生物における発現の増大は、参照レベル（非処理有害生物における発現）に対して約２倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約２５倍、約５０倍、約７５倍又は約１００倍以上の発現増大である。
【０３４２】
一部の例では、核酸は、アンチセンスＲＮＡ、ｄｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ａｉＲＮＡ、ＰＮＡ、モルホリノ、ＬＮＡ、ｐｉＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡｚｙｍｅ、アプタマー（ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ｃｉｒｃＲＮＡ、ｇＲＮＡ又は有害生物において酵素（代謝酵素、リコンビナーゼ酵素、ヘリカーゼ酵素、インテグラーゼ酵素、ＲＮＡｓｅ酵素、ＤＮＡｓｅ酵素、ポリメラーゼ酵素、ユビキチン化タンパク質、スーパーオキシド管理酵素若しくはエネルギー生産酵素）の発現を低減するように作用するＤＮＡ分子（例えば、アンチセンスポリヌクレオチド）、転写因子、分泌タンパク質、構造因子（アクチン、キネシン若しくはチューブリン）、リボタンパク質、タンパク質アプタマー、シャペロン、受容体、シグナル伝達リガンド又は輸送因子である。一部の例では、有害生物における発現の低減は、参照レベル（非処理有害生物における発現）に対して約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％若しくは１００％超の発現低減である。一部の例では、有害生物における発現の低減は、参照レベル（例えば、非植物有害生物における発現）に対して約２倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約２５倍、約５０倍、約７５倍又は約１００倍以上の発現低減である。
【０３４３】
ＲＮＡｉ分子は、標的遺伝子の全部又は断片と実質的に相補的であるか又は完全に相補的な配列を含む。ＲＮＡｉ分子は、イントロンとエキソンとの間の境界における配列を補足して、転写のためにｍＲＮＡへの特定の遺伝子の新しく生成されたＲＮＡ転写物の成熟を阻止し得る。特定の遺伝子と相補的なＲＮＡｉ分子は、標的遺伝子のｍＲＮＡとハイブリダイズして、その翻訳を阻止することができる。アンチセンス分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はその誘導体若しくはハイブリッドであり得る。こうした誘導体分子の例として、限定はされないが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）及びデオキシリボ核酸グアニジン（ＤＮＧ）又はリボ核酸グアニジン（ＲＮＧ）などのホスホロチオエートベースの分子が挙げられる。
【０３４４】
ＲＮＡｉ分子は、インビトロで合成された直ちに使用可能なＲＮＡとして又は転写時にＲＮＡｉ分子を産生する細胞にトランスフェクトされたアンチセンス遺伝子として提供することができる。ｍＲＮＡとのハイブリダイゼーションにより、ＲＮＡｓｅ  Ｈによるハイブリダイズ分子の分解及び／又は翻訳複合体の形成の阻害が起こる。いずれによっても、起源遺伝子の産物の生産ができなくなる。
【０３４５】
目的の転写物にハイブリダイズするＲＮＡｉ分子の長さは、約１０ヌクレオチド、約１５〜３０ヌクレオチド又は約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０ヌクレオチド若しくはそれを超える長さであり得る。標的転写物に対するアンチセンス配列の同一性の程度は、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５であり得る。
【０３４６】
ＲＮＡｉ分子は、オーバーハング、即ち典型的に不対の突出したヌクレオチドも含み得、これらは、本明細書で定義するセンス鎖対及びアンチセンス鎖対のコア配列によって通常形成される二重螺旋構造に直接関与しない。ＲＮＡｉ分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖の各々とは独立に、約１〜５塩基の３’及び／又は５’オーバーハングを含有し得る。一部の例では、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、３’及び５’オーバーハングを含有する。一部の例では、一方の鎖塩基の１つ以上の３’オーバーハングヌクレオチドは、他方の鎖の１つ以上の５’オーバーハングヌクレオチドと対合する。他の例では、一方の鎖塩基の１つ以上の３’オーバーハングヌクレオチドは、他方の鎖の１つ以上の５’オーバーハングヌクレオチドと対合しない。ＲＮＡｉ分子のセンス及びアンチセンス鎖は、同数のヌクレオチド塩基を含んでも又は含まなくてもよい。アンチセンス及びセンス鎖は、５’末端のみが平滑末端を有するか、３’末端のみが平滑末端を有するか、５’及び３’末端の両方が平滑末端であるか、又は５’及び３’末端のいずれも平滑末端ではないデュプレックスを形成し得る。別の例では、オーバーハング中の１つ以上のヌクレオチドは、チオリン酸エステル、ホスホロチオエート、デオキシヌクレオチド逆位（３’−３’結合）ヌクレオチドを含むか、又は修飾リボヌクレオチド若しくはデオキシヌクレオチドである。
【０３４７】
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子は、標的ｍＲＮＡの約１５〜約２５の連続的ヌクレオチドと同一のヌクレオチド配列を含む。一部の例では、ｓｉＲＮＡ配列は、ジヌクレオチドＡＡで開始し、約３０〜７０％（約３０〜６０％、約４０〜６０％又は約４５〜５５％）のＧＣ含量を含み、例えば標準的ＢＬＡＳＴ検索により決定される通り、それを導入しようとするゲノム中の標的以外のいずれのヌクレオチド配列に対しても高い同一性パーセンテージを含まない。
【０３４８】
ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡは、内在性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）遺伝子のプロセシング経路における中間体と類似している（Ｂａｒｔｅｌ，Ｃｅｌｌ  １１６：２８１−２９７，２００４）。一部の例では、ｓｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡとして機能することができ、逆も同様である（Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ９：１３２７−１３３３，２００２；Ｄｏｅｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７：４３８−４４２，２００３）。外性ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡに対してシード相補性を有するｍＲＮＡを下方制御する（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３：１９９−２０４，２００６）。３’ＵＴＲ内の複数の標的部位は、より強力な下方制御をもたらす（Ｄｏｅｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７：４３８−４４２，２００３）。
【０３４９】
既知の有効なｓｉＲＮＡ配列及び同種結合部位も関連文献に詳細に記載されている。ＲＮＡｉ分子は、容易に設計され、当技術分野において公知の技術により作製される。加えて、有効且つ特異的な配列モチーフを見出す機会を高める計算ツールもある（Ｐｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３（９）：６７０−６７６，２００６；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２（３）：３２６−３３０，２００４；Ｋｈｖｏｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１０（９）：７０８−７１２，２００３；Ｓｃｈｗａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １１５（２）：１９９−２０８，２００３；Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３２（３）：９３６−９４８，２００４；Ｈｅａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３３（３）：ｅ３０，２００５；Ｃｈａｌｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１９（１）：２６４−２７４，２００４；及びＡｍａｒｚｇｕｉｏｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１６（４）：１０５０−１０５８，２００４）。
【０３５０】
ＲＮＡｉ分子は、遺伝子によりコードされるＲＮＡの発現を調節する。複数の遺伝子が、互いにある程度の配列相同性を共有できることから、一部の例では、ＲＮＡｉ分子は、十分な配列相同性を有する遺伝子のクラスを標的とするように設計することができる。一部の例では、ＲＮＡｉ分子は、異なる遺伝子標的の間で共有されるか、又は特定の遺伝子標的についてユニークな配列に対して相補性を有する配列を含み得る。一部の例では、ＲＮＡｉ分子は、いくつかの遺伝子同士で相同性を有するＲＮＡ配列の保存領域を標的とし、それにより遺伝子ファミリー内のいくつかの遺伝子（例えば、異なる遺伝子アイソフォーム、スプライス変異体、突然変異遺伝子など）を標的とするように設計することができる。一部の例では、ＲＮＡｉ分子は、単一の遺伝子の特定のＲＮＡ配列に対してユニークな配列を標的とするように設計することができる。
【０３５１】
阻害性ＲＮＡ分子は、例えば、修飾ヌクレオチド、例えば２’−フルオロ、２’−ｏ−メチル、２’−デオキシ、アンロックド核酸、２’−ヒドロキシ、ホスホロチオエート、２’−チオウリジン、４’−チオウリジン、２’−デオキシウリジンを含有するように修飾することができる。理論に拘束されるわけではないが、こうした修飾は、ヌクレアーゼ抵抗性及び／又は血清安定性を増大し得るか、又は免疫原性を低減させ得ると考えられる。
【０３５２】
一部の例では、ＲＮＡｉ分子は、生理的に不安定な結合又はリンカーを介して送達ポリマーに連結される。生理的に不安定なリンカーは、それが特定の生理的条件下で存在するとき、化学変換（例えば、切断）を被るように選択される（例えば、ジスルフィド結合は、細胞質の還元的環境で切断される）。生理的に不安定な結合の切断によるポリマーからの分子の放出は、活動のために適切な細胞構成要素とその分子の相互作用を促進する。
【０３５３】
ＲＮＡｉ分子−ポリマーコンジュゲートは、ポリマーと分子を共有結合させることによって形成され得る。ポリマーは、それが反応性基Ａを含有するように重合又は修飾される。ＲＮＡｉ分子は、それが反応性基Ｂを含有するようにも重合又は修飾される。反応性基Ａ及びＢは、当技術分野で公知の方法を用いて、それらが可逆的共有結合を介して連結され得るように選択される。
【０３５４】
ＲＮＡｉ分子とポリマーの共役は、過剰のポリマーの存在下で実施することができる。ＲＮＡｉ分子とポリマーは、共役の間に反対電荷となり得るため、過剰ポリマーの存在により、コンジュゲートの凝集を低減又は排除することができる。代わりに、ポリカチオンなどの過剰の担体ポリマーを使用することもできる。過剰ポリマーは、コンジュゲートの投与前に共役ポリマーから除去することができる。代わりに、過剰ポリマーは、コンジュゲートと一緒に同時投与することもできる。
【０３５５】
母昆虫への二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の注入により、胚形成中のそれらの子孫の遺伝子発現を効率的に抑制する。例えば、Ｋｈｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｇｅｎｅｔ．５（７）：ｅ１０００５８３，２００９；及びＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３１（７）：１５１５−１５２７，２００４を参照されたい。Ｍａｔｓｕｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  １１２（３０）：９３７６−９３８１，２０１５）は、Ｕｂｘの抑制により、バクテリオサイト及びバクテリオサイトの共生体局在化が排除されることを明らかにしている。
【０３５６】
リボザイム、ＲＮＡｓｅ  Ｐ、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡなどのノンコーディングＲＮＡに基づく阻害剤の作製及び使用も、例えば、Ｓｉｏｕｄ，ＲＮＡ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）．Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１０）に記載されているように、当技術分野で公知である。
【０３５７】
（ｇ）遺伝子編集
本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、遺伝子編集系の１要素を含み得る。例えば、薬剤は、有害生物における１遺伝子に改変（例えば、挿入、欠失（例えば、ノックアウト）、転座、反転、単一点突然変異又は他の突然変異）を導入することができる。例示的な遺伝子編集系として、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクチベータ様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）及びクラスター化され規則的に間隔を置いた短鎖回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）系が挙げられる。ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ及びＣＲＩＳＰＲに基づく方法は、例えば、Ｇａｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（７）：３９７−４０５，２０１３に記載されている。
【０３５８】
典型的なＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系では、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡ配列を標的とする配列特異的、ノンコーディングガイドＲＮＡにより、エンドヌクレアーゼは、標的ヌクレオチド配列（例えば、配列編集しようとするゲノム内の部位）に向けられる。３つのクラス（Ｉ〜ＩＩＩ）のＣＲＩＳＰＲ系が同定されている。クラスＩＩ  ＣＲＩＳＰＲ系は、単一のＣａｓエンドヌクレアーゼ（複数のＣａｓタンパク質ではなく）を使用する。１つのクラスＩＩ  ＣＲＩＳＰＲ系は、Ｃａｓ９などのＩＩ型Ｃａｓエンドヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）及びトランス−活性化型ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む。ｃｒＲＮＡは、ガイドＲＮＡ、即ち典型的には標的ＤＮＡ配列に対応する約２０ヌクレオチドＲＮＡ配列を含有する。ｃｒＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡに結合する領域も含んで、ＲＮａｓｅＩＩＩにより切断される部分的二本鎖構造を形成し、ｃｒＲＮＡ／ｔｒａｃｒＲＮＡハイブリッドをもたらす。ＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質を指令して、スペーサ配列に応じて、特定のＤＮＡ／ＲＮＡ配列を抑制するガイドの役割を果たす。例えば、Ｈｏｒｖａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２７：１６７−１７０，２０１０；Ｍａｋａｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｄｉｒｅｃｔ  １：７，２００６；Ｐｅｎｎｉｓｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８３３−８３６，２０１３を参照されたい。標的ＤＮＡ配列は、一般に、所与のＣａｓエンドヌクレアーゼに対して特異的なプロトスペーサ隣接モチーフ（ＰＡＭ）に隣接していなければならないが；ＰＡＭ配列は、所与のゲノム全体を通して出現する。種々の原核生物種から同定されたＣＲＩＳＰＲエンドヌクレアーゼは、ユニークなＰＡＭ配列要件を有し；ＰＡＭ配列の例として、５’−ＮＧＧ（配列番号７８）（化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、５’−ＮＮＡＧＡＡ（配列番号７９）（ストレブトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＲＩＳＰＲ１）、５’−ＮＧＧＮＧ（配列番号８０）（ストレブトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＲＩＳＰＲ３）及び５’−ＮＮＮＧＡＴＴ（配列番号８１）（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））が挙げられる。いくつかのエンドヌクレアーゼ、例えばＣａｓ９エンドヌクレアーゼは、ＧリッチＰ（の５’側）ＡＭ部位、例えば５’−ＮＧＧ（配列番号７８）と結合して、ＰＡＭ部位から３ヌクレオチド上流の位置で標的ＤＮＡの平滑末端切断を実施する。別のクラスＩＩ  ＣＲＩＳＰＲ系は、Ｖ型エンドヌクレアーゼＣｐｆ１を含み、これは、Ｃａｓ９より小さく；例として、ＡｓＣｐｆ１（アシダミノコッカス属種（Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）由来）及びＬｂＣｐｆ１（ラクノスピラ科種（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ  ｓｐ．）由来）が挙げられる。Ｃｐｆ１結合ＣＲＩＳＰＲアレイは、ｔｒａｃｒＲＮＡの要件なしに成熟型ｃｒＲＮＡにプロセシングされ；言い換えれば、Ｃｐｆ１系は、標的ＤＮＡ配列を切断するために、Ｃｐｆ１ヌクレアーゼ及びｃｒＲＮＡのみを必要とする。Ｃｐｆ１エンドヌクレアーゼは、ＴリッチＰＡＭ部位、例えば５’−ＴＴＮと結合している。Ｃｐｆ１は、５’−ＣＴＡ  ＰＡＭモチーフも認識する。Ｃｐｆ１は、４’−若しくは５−ヌクレオチド５’オーバーハングを含むオフセット又はスタッガード二本鎖切断を導入することによりＤＮＡを切断し、例えばコーディング鎖のＰＡＭ部位（の３’側）から１８ヌクレオチド下流及び相補鎖のＰＡＭ部位から２３ヌクレオチド下流に位置する５−ヌクレオチドオフセット又はスタッガード切断で標的ＤＮＡを切断し、こうしたオフセット切断から生じる５−ヌクレオチドオーバーハングは、相同組換えによるＤＮＡ挿入により、平滑末端切断ＤＮＡでの挿入によるものよりも正確なゲノム編集を可能にする。例えば、Ｚｅｔｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １６３：７５９−７７１，２０１５を参照されたい。
【０３５９】
遺伝子編集の目的で、所望の標的ＤＮＡ配列に対応する１つ又は複数のガイドＲＮＡ配列を含有するように、ＣＲＩＳＰＲアレイを設計することができる；例えば、Ｃｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８１９−８２３，２０１３；Ｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ８：２２８１−２３０８，２０１３を参照されたい。Ｃａｓ９によりＤＮＡ切断を起こすためには、ｇＲＮＡ配列の少なくとも約１６又は１７ヌクレオチドが必要であり；Ｃｐｆ１の場合、検出可能なＤＮＡ切断を実施するために、ｇＲＮＡ配列の少なくとも約１６ヌクレオチドが必要である。実際に、ガイドＲＮＡ配列は、概して、１７〜２４ヌクレオチド（例えば、１９、２０若しくは２１ヌクレオチド）の長さと、標的とされる遺伝子又は核酸配列との相補性とを有するように設計される。カスタムｇＲＮＡ作製装置及びアルゴリズムは、有効なガイドＲＮＡの設計に使用するために市販されている。遺伝子編集は、キメラシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、即ち天然のｃｒＲＮＡ−ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体を模倣し、ｔｒａｃｒＲＮＡ（ヌクレアーゼとの結合のため）と少なくとも１つのｃｒＲＮＡ（編集の標的とされる配列にヌクレアーゼを誘導するため）との両方を含有する操作（合成）単一ＲＮＡ分子を用いても達成されている。また、化学修飾ｓｇＲＮＡも、ゲノム編集に有効であることが実証されており；例えば、Ｈｅｎｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９８５−９９１，２０１５を参照されたい。
【０３６０】
野生型Ｃａｓ９は、ｇＲＮＡが標的とする特定のＤＮＡ配列で二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成するが、修飾された機能性を有するいくつかのＣＲＩＳＰＲエンドヌクレアーゼが利用可能であり、例えば：Ｃａｓ９のニッカーゼバージョンは、一本鎖切断のみを生成し；触媒能のないＣａｓ９（ｄＣａｓ９）は、標的ＤＮＡを切断しないが、立体障害によって転写を妨害する。ｄＣａｓ９は、さらにエフェクターと融合させて、標的遺伝子の発現を抑制（ＣＲＩＳＰＲｉ）又は活性化（ＣＲＩＳＰＲａ）することもできる。例えば、Ｃａｓ９を転写リプレッサ（例えば、ＫＲＡＢドメイン）又は転写アクチベータ（例えば、ｄＣａｓ９−ＶＰ６４融合）と融合させることができる。Ｆｏｋｌヌクレアーゼと融合した触媒能のないＣａｓ９（ｄＣａｓ９）（ｄＣａｓ９−Ｆｏｋｌ）を用いて、２つのｇＲＮＡと相同性の標的配列でＤＳＢを生成することができる。例えば、Ａｄｄｇｅｎｅリポジトリ（Ａｄｄｇｅｎｅ，７５  Ｓｉｄｎｅｙ  Ｓｔ．，Ｓｕｉｔｅ  ５５０Ａ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ  ０２１３９；ａｄｄｇｅｎｅ．ｏｒｇ／ｃｒｉｓｐｒ／）に開示され、そこから一般に入手可能な多数のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９プラスミドを参照されたい。各々が個別のガイドＲＮＡにより指令される２つの個別の二本鎖切断を導入するダブルニッカーゼＣａｓ９は、Ｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １５４：１３８０−１３８９，２０１３により、より正確なゲノム編集を達成するものとして記載されている。
【０３６１】
真核生物の遺伝子を編集するためのＣＲＩＳＰＲ技術は、米国特許出願公開第２０１６／０１３８００８  Ａ１号明細書及び同第２０１５／０３４４９１２  Ａ１号明細書並びに米国特許第８，６９７，３５９号明細書、同第８，７７１，９４５号明細書、同第８，９４５，８３９号明細書、同第８，９９９，６４１号明細書、同第８，９９３，２３３号明細書、同第８，８９５，３０８号明細書、同第８，８６５，４０６号明細書、同第８，８８９，４１８号明細書、同第８，８７１，４４５号明細書、同第８，８８９，３５６号明細書、同第８，９３２，８１４号明細書、同第８，７９５，９６５号明細書及び同第８，９０６，６１６号明細書に開示されている。Ｃｐｆ１エンドヌクレアーゼ及び対応するガイドＲＮＡ並びにＰＡＭ部位は、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２４３  Ａ１号明細書に開示されている。
【０３６２】
一部の例では、所望のゲノム修飾は、相同組換えを含み、この場合、ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼ及びガイドＲＮＡにより、標的ヌクレオチド配列に１つ以上の二本鎖ＤＮＡ切断が生成された後、相同組換え機構を用いた切断の修復（相同組換え修復）が起こる。こうした例では、二本鎖切断において挿入又はノックインしようとする所望のヌクレオチド配列をコードするドナーテンプレートが、細胞又は対象に提供され；好適なテンプレートの例として、一本鎖ＤＮＡテンプレート及び二本鎖ＤＮＡテンプレート（例えば、本明細書に記載のポリペプチドに連結される）が挙げられる。一般に、約５０ヌクレオチド未満の領域にわたってヌクレオチド変更をコードするドナーテンプレートは、一本鎖ＤＮＡの形態で提供され；より大きいドナーテンプレート（例えば、１００ヌクレオチド超）は、多くの場合、二本鎖ＤＮＡプラスミドとして提供される。一部の例では、ドナーテンプレートは、所望の相同組換え修復を達成するのに十分であるが、所与の期間後（例えば、１つ以上の細胞分裂周期後）、細胞又は対象において持続しない量で、細胞又は対象に供給される。一部の例では、ドナーテンプレートは、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０又はそれを超えるヌクレオチドだけ標的ヌクレオチド配列と異なるコアヌクレオチド配列（例えば、相同的内在性ゲノム領域）を有する。このコア配列は、標的ヌクレオチド配列と高い配列同一性の相同性アーム又は領域によってフランキングされ；一部の例では、高い配列同一性の領域は、コア配列の両側に少なくとも１０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７５０又は少なくとも１０００ヌクレオチドを含む。ドナーテンプレートが一本鎖ＤＮＡの形態である一部の例では、コア配列は、コア配列の両側で、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０又は少なくとも１００ヌクレオチドを含む相同性アームによりフランキングされる。ドナーテンプレートが二本鎖ＤＮＡの形態である一部の例では、コア配列は、コア配列の両側で、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００又は少なくとも１０００ヌクレオチドを含む相同性アームによりフランキングされる。一例では、ダブルニッカーゼＣａｓ９を用いて、２つの個別の二本鎖切断を細胞又は対象の標的ヌクレオチド配列に導入した（Ｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １５４：１３８０−１３８９，２０１３を参照されたい）後、ドナーテンプレートの送達が行われる。
【０３６３】
一部の例では、組成物は、ｇＲＮＡと標的ヌクレアーゼ、例えばＣａｓ９、例えば野生型Ｃａｓ９、ニッカーゼＣａｓ９（例えば、Ｃａｓ９Ｄ１０Ａ）、不活性型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）、ｅＳｐＣａｓ９、Ｃｐｆ１、Ｃ２Ｃ１若しくはＣ２Ｃ３又はこうしたヌクレアーゼをコードする核酸を含む。ヌクレアーゼ及びｇＲＮＡの選択は、標的突然変異が、ヌクレオチドの欠失、置換又は付加、例えば標的配列へのヌクレオチドの欠失、置換又は付加であるかどうかによって決定される。（１つ以上の）エフェクタードメインの全部又は一部（例えば、生物学的に活性の部分）とテザリングした触媒能のないエンドヌクレアーゼ、例えば不活性型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９、例えばＤ１０Ａ；Ｈ８４０Ａ）の融合により、キメラタンパク質を作出し、これをポリペプチドと連結させて、１つ以上のＲＮＡ配列（ｓｇＲＮＡ）により組成物を特定のＤＮＡ部位に誘導して、１つ以上の標的核酸配列の活性及び／又は発現を調節することができる。
【０３６４】
複数の例では、薬剤は、遺伝子編集の目的でＣＲＩＳＰＲ系に使用するガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む。一部の例では、薬剤は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又は有害生物における１遺伝子の核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）をターゲティング（例えば、切断）するＺＦＮをコードするｍＲＮＡを含む。一部の例では、薬剤は、ＴＡＬＥＮ又は有害生物における１遺伝子の核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）をターゲティング（例えば、切断）するＴＡＬＥＮをコードするｍＲＮＡを含む。
【０３６５】
例えば、ＣＲＩＳＰＲ系にｇＲＮＡを使用して、有害生物における遺伝子の改変を操作することができる。他の例では、ＺＦＮ及び／又はＴＡＬＥＮを用いて、有害生物における遺伝子の改変を操作することができる。例示的な改変として、挿入、欠失（例えば、ノックアウト）、転座、反転、単一点突然変異又は他の突然変異が挙げられる。改変は、細胞の遺伝子に例えばインビトロ、エクスビボ又はインビボで導入することができる。一部の例では、改変は、有害生物における遺伝子のレベル及び／又は活性を増大する。他の例では、改変は、有害生物における遺伝子のレベル及び／又は活性を低減させる（例えば、ノックダウン若しくはノックアウトする）。また別の例では、改変は有害生物における遺伝子の欠陥（例えば、欠陥を引き起こす突然変異）を修正する。
【０３６６】
一部の例では、ＣＲＩＳＰＲ系を用いて、有害生物における標的遺伝子を編集する（例えば、塩基対を付加するか又は欠失させる）。他の例では、ＣＲＩＳＰＲ系を用いて、未成熟終止コドンを導入し、例えばこれにより標的遺伝子の発現を低減する。また別の例では、ＣＲＩＳＰＲ系を用いて、例えばＲＮＡ干渉と同様に、可逆的方法で標的遺伝子をオフにする。一部の例では、ＣＲＩＳＰＲ系を用いて、Ｃａｓを遺伝子のプロモータに向け、これによりＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断する。
【０３６７】
一部の例では、ＣＲＩＳＰＲ系は、例えば、米国特許出願公開第２０１４００６８７９７号明細書、Ｃｏｎｇ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８１９−８２３，２０１３；Ｔｓａｉ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：６  ５６９−５７６，２０１４；米国特許第８，８７１，４４５号明細書；同第８，８６５，４０６号明細書；同第８，７９５，９６５号明細書；同第８，７７１，９４５号明細書；及び同第８，６９７，３５９号明細書に記載される技術を用いて、有害生物における遺伝子を編集するように生成することができる。
【０３６８】
一部の例では、ＣＲＩＳＰＲ干渉（ＣＲＩＳＰＲｉ）技術は、有害生物の特定の遺伝子の転写抑制のために使用することができる。ＣＲＩＳＰＲｉの場合、操作Ｃａｓ９タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ−ヌルｄＣａｓ９又はｄＣａｓ９融合タンパク質、例えばｄＣａｓ９−ＫＲＡＢ若しくはｄＣａｓ９−ＳＩＤ４Ｘ融合物）を配列特異的ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と対合させることができる。Ｃａｓ９−ｇＲＮＡ複合体は、ＲＮＡポリメラーゼを遮断することができ、それにより、転写伸長を妨害する。この複合体は、転写因子結合を妨害することにより、転写開始も遮断することができる。ＣＲＩＳＰＲｉ法は、最小オフターゲット効果を固有に有し、且つマルチプレクサブル（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘａｂｌｅ）であり、例えば同時に２つ以上の遺伝子を抑制することができる（例えば、複数のｇＲＮＡを用いて）。また、ＣＲＩＳＰＲｉ方法は、可逆的遺伝子抑制も可能にする。
【０３６９】
一部の例では、例えば有害生物の遺伝子の転写活性化のために、ＣＲＩＳＰＲ媒介性遺伝子活性化（ＣＲＩＳＰＲａ）を用いることができる。ＣＲＩＳＰＲａ技術では、ｄＣａｓ９融合タンパク質が、転写アクチベータを動員する。例えば、ｄＣａｓ９をＶＰ６４又はｐ６５活性化ドメイン（ｐ６５Ｄ）などのポリペプチド（例えば、活性化ドメイン）と融合させ、ｓｇＲＮＡ（例えば、単一のｓｇＲＮＡ又は複数のｓｇＲＮＡ）と一緒に用いて、有害生物の１つ又は複数の遺伝子を活性化することができる。複数のｓｇＲＮＡを用いることにより、複数のアクチベータを動員することができ、これは、活性化効率を高め得る。様々な活性化ドメイン及び単一又は複数の活性化ドメインを使用することができる。アクチベータを動員するためにｄＣａｓ９を操作する以外に、ｓｇＲＮＡも、アクチベータを動員するように操作することができる。例えば、ＲＮＡアプタマーをｓｇＲＮＡに組み込むことにより、ＶＰ６４などのタンパク質（例えば、活性化ドメイン）を導入することができる。一部の例では、転写活性化のために相乗的活性化メディエータ（ＳＡＭ）系を用いることができる。ＳＡＭでは、ＭＳ２アプタマーをｓｇＲＮＡに付加する。ＭＳ２は、ｐ６５ＡＤ及びヒートショック因子１（ＨＳＦ１）と融合したＭＳ２コートタンパク質（ＭＣＰ）を動員する。
【０３７０】
ＣＲＩＳＰＲｉ及びＣＲＩＳＰＲａ技術について、さらに詳細には、Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：５−１５，２０１６（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。加えて、Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，に記載されているように、ｄＣａｓ９媒介性のエピジェネティクス修飾並びに同時活性化及びＣＲＩＳＰＲ系による抑制を用いて、有害生物における遺伝子を調節することができる。
【０３７１】
ｉｉｉ．小分子
一部の例では、有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、小分子、例えば生体小分子を含む。本明細書に記載される方法及び組成物において多数の小分子剤が有用である。
【０３７２】
小分子としては、限定されないが、低分子ペプチド、ペプチド模倣薬（例えば、ペプトイド）、アミノ酸、アミノ酸類似体、合成ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、一般に、１モル当たり約５，０００グラム未満の分子量を有する有機及び無機化合物（ヘテロ有機及び有機金属化合物を含む）、例えば１モル当たり約２，０００グラム未満の分子量を有する有機及び無機化合物、例えば１モル当たり約１，０００グラム未満の分子量を有する有機及び無機化合物、例えば１モル当たり約５００グラム未満の分子量を有する有機及び無機化合物並びにこうした化合物の塩、エステル及び他の薬学的に許容可能な形態を含む。
【０３７３】
本明細書に記載される小分子は、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物又はその関連方法のいずれかのために、組成物に配合するか又はＰＭＰと結合させることができる。本明細書に開示される組成物は、任意の数又は種類（例えば、クラス）の小分子、例えば少なくとも約１つの、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくはそれを超える小分子を含み得る。組成物中の各小分子の好適な濃度は、小分子の有効性、安定性、個別の小分子の数、配合及び組成物の適用方法などの要因に応じて変動する。組成物が少なくとも２種類の小分子を含有する一部の例では、各種小分子の濃度は、同じであるか又は異なり得る。
【０３７４】
本明細書に記載の小分子を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的有害生物又はそれに寄生された植物内部若しくは上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の小分子濃度を達成し；且つ（ｂ）標的有害生物の適応度を低減するのに十分な量及び時間で、標的有害生物と接触させることができる。
【０３７５】
一部の例では、本明細書に記載される組成物及び方法の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、二次代謝物を含む。二次代謝物は、生物により産生される有機分子に由来する。二次代謝物は、（ｉ）細菌、真菌、アメーバ、植物、昆虫及び大型動物に対して使用される競合物質として；（ｉｉ）金属輸送剤として；（ｉｉｉ）微生物と植物、昆虫及び高等動物との間の共生用物質として；（ｉｖ）性ホルモンとして；並びに（ｖ）分化エフェクターとして作用し得る。
【０３７６】
本明細書で使用される二次代謝物は、二次代謝物の任意の既知群からの代謝物を含み得る。例えば、二次代謝物は、次の群に分類することができる：アルカロイド、テルペノイド、フラボノイド、グリコシド、天然フェノール（例えば、ゴシポール酢酸）、エナール（例えば、トランス−シンナムアルデヒド）、フェナジン、ビフェノール及びジベンゾフラン、ポリケチド、脂肪酸シンターゼペプチド、非リボソームペプチド、リボソームにより合成されて、翻訳後修飾されたペプチド、ポリフェノール、多糖（例えば、キトサン）及びバイオポリマー。二次代謝物の詳細な論評については、例えば、Ｖｉｎｉｎｇ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４４：３９５−４２７，１９９０を参照されたい。
【０３７７】
本明細書に記載の二次代謝物を含む有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物は、（ａ）標的有害生物又はそれに寄生された植物内部若しくは上で標的レベル（例えば、所定若しくは閾値レベル）の二次代謝物濃度を達成し；且つ（ｂ）標的有害生物の適応度を低減するのに十分な量及び時間で、標的有害生物と接触させることができる。
【０３７８】
ＶＩ．キット
本発明は、植物病害の防除、予防又は処置のためのキットも提供し、このキットは、本明細書に記載の有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を有する容器を含む。キットは、本発明の方法に従って植物有害生物寄生を防除、予防又は処置するための有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を適用又は送達する（例えば植物若しくは植物有害生物に）ための教材をさらに含み得る。当業者は、本発明の方法で有害生物防除（例えば、バイオ農薬又は生物忌避剤）組成物を適用する上での説明が、あらゆる形態の説明であり得ることが理解されるであろう。こうした指示としては、限定されないが、文書教材（例えば、ラベル、冊子、パンフレット）、口述教材（例えば、カセットテープ若しくはＣＤ）又はビデオ教材（例えば、ビデオテープ若しくはＤＶＤ）が挙げられる。
【実施例】
【０３７９】
以下は、本発明の方法の例である。上に提供した概説を考慮して、他の様々な実施形態が実施され得ることは理解される。
【０３８０】
実施例１：植物からの植物メッセンジャーパックの単離
この実施例は、葉アポプラスト、種子アポプラスト、根、果実、野菜、花粉、師管液、木部樹液及び植物細胞培地を含め、様々な植物起源からの粗植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）の単離を説明する。
【０３８１】
実験計画：
ａ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）葉のアポプラストからのＰＭＰ単離
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）（シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ  Ｃｌ−０））種子を５０％漂白剤で表面滅菌した後、０．８％寒天を含有する０．５３ムラシゲスクーグ培地上に平板培養する。これらの種子を４℃で２日間春化処置した後、短日条件（明期９ｈ、２２℃、１５０μＥｍ−２）に移す。１週間後、苗をＰｒｏ−Ｍｉｘ  ＰＧＸに移す。植物を４〜６週間成長させた後、収穫する。
【０３８２】
Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  ＩｎｎｅｓによりＰｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７に記載されているように、４〜６週齢のシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）ロゼットのアポプラスト洗浄液からＰＭＰを単離する。手短には、全ロゼットを根から収穫し、小胞単離バッファー（２０ｍＭ  ＭＥＳ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２及び０．１  Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６）と一緒に真空浸潤する。浸潤した植物を注意深くブロットして、余剰の液体を除去し、３０ｍＬシリンジ内に導入してから、５０ｍＬ円錐チューブにおいて２℃で２０分間遠心分離することにより、ＥＶを含有するアポプラスト細胞外液を収集する。次に、アポプラスト細胞外液を０．８５μｍフィルタで濾過することにより、大きい粒子を除去した後、実施例２に記載するように、ＰＭＰを精製する。
【０３８３】
ｂ）ヒマワリ種子のアポプラストからのＰＭＰ単離
インタクトなヒマワリ種子（ヒマワリ（Ｈ．ａｎｎｕｕｓ  Ｌ．）に水を２時間吸収させ、皮を剥いで、果皮を除去した後、Ｒｅｇｅｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．５８３：３３６３−３３６６，２００９から改変した修正真空浸潤−遠心分離手順によりアポプラスト細胞外液を抽出する。手短には、種子を小胞単離バッファー（２０ｍＭ  ＭＥＳ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２及び０．１  Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６）に浸潤させてから、３回の１０秒の真空パルスに付し、３０秒間隔の４５ｋＰａの圧力により分離する。浸潤した種子を回収し、濾紙上で乾燥させ、フリットガラス濾過器に配置し、４℃、４００ｇで２０分間遠心分離する。アポプラスト細胞外液を回収し、０．８５μｍフィルタで濾過することにより、大きい粒子を除去した後、実施例２に記載するように、ＰＭＰを精製する。
【０３８４】
ｃ）根生姜からのＰＭＰ単離
新鮮な生姜（ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ））根茎根を現地の供給者から購入し、ＰＢＳで３回洗浄する。計２００グラムの洗浄済の根をミキサー（Ｏｓｔｅｒｉｚｅｒ  １２速ブレンダ）により最大速で１０分間（ブレンド１分毎に１分の休止）粉砕した後、Ｚｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｖｅｓｉｃｌｅｓ．４（１）：２８７１３，２０１５に記載されているように、ＰＭＰを単離する。手短には、生姜汁を１，０００ｇで１０分、３，０００ｇで２０分及び１０，０００ｇで４０分と順次遠心分離することにより、ＰＭＰ含有上清から大きい粒子を除去する。実施例２に記載のように、ＰＭＰを精製する。
【０３８５】
ｄ）グレープフルーツ果汁からのＰＭＰ単離
新鮮なグレープフルーツ（グレープフルーツ（Ｃｉｔｒｕｓ×ｐａｒａｄｉｓｉ））を現地の供給者から購入し、その皮を除去し、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２２（３）：５２２−５３４，２０１４に記載されているように（若干の修正を加えた）、果実を手で圧搾するか、又はミキサー（Ｏｓｔｅｒｉｚｅｒ  １２速ブレンダ）により最大速で１０分間（ブレンド１分毎に１分の休止）粉砕することにより、果汁を収集する。手短には、果汁／果汁パルプを１，０００ｇで１０分、３，０００ｇで２０分及び１０，０００ｇで４０分と順次遠心分離することにより、ＰＭＰ含有上清から大きい粒子を除去する。実施例２に記載のように、ＰＭＰを精製する。
【０３８６】
ｅ）ブロッコリーヘッドからのＰＭＰ単離
ブロッコリー（ブロッコリー（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ））ＰＭＰは、以前記載されている（Ｄｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２５（７）：１６４１−１６５４，２０１７）ように単離する。手短には、新鮮なブロッコリーを現地の供給者から購入し、ＰＢＳで３回洗浄してから、ミキサー（Ｏｓｔｅｒｉｚｅｒ  １２速ブレンダ）により最大速で１０分間（ブレンド１分毎に１分の休止）粉砕する。次に、ブロッコリー汁を１，０００ｇで１０分、３，０００ｇで２０分及び１０，０００ｇで４０分と順次遠心分離することにより、ＰＭＰ含有上清から大きい粒子を除去する。実施例２に記載のように、ＰＭＰを精製する。
【０３８７】
ｆ）オリーブ花粉からのＰＭＰ単離
オリーブ（オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ））花粉ＰＭＰは、Ｐｒａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｌａｎｔ．７（３）：５７３−５７７，２０１４に以前記載されているように単離する。手短には、オリーブ花粉（０．１ｇ）を室温の加湿チャンバー内で３０分間水和した後、２０ｍｌの発芽培地：１０％ショ糖、０．０３％Ｃａ（ＮＯ３）２、０．０１％ＫＮＯ３、０．０２％ＭｇＳＯ４及び０．０３％Ｈ３ＢＯ３を含有するペトリ皿（直径１５ｃｍ）に移す。花粉を３０℃の暗所において１６ｈ発芽させる。花粉粒は、チューブが花粉粒の直径より長くなったときに初めて発芽したとみなされる。ＰＭＰを含有する培地を収集し、遠心分離による０．８５ｕｍフィルタでの２回の連続濾過によって花粉残屑を除去する。実施例２に記載のように、ＰＭＰを精製する。
【０３８８】
ｇ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）師管液からのＰＭＰ単離
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）（シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ  Ｃｏｌ−０））種子を５０％漂白剤で表面滅菌した後、０．８％寒天を含有する０．５３ムラシゲスクーグ培地上に平板培養する。これらの種子を４℃で２日間春化処置した後、短日条件（明期９ｈ、２２℃、１５０μＥｍ−２）に移す。１週間後、苗をＰｒｏ−Ｍｉｘ  ＰＧＸに移す。植物を４〜６週間成長させた後、収穫する。
【０３８９】
Ｔｅｔｙｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，により、ＪｏＶＥ．８０，２０１３に記載されているように、４〜６週齢のシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）ロゼット葉からの師管液を収集する。手短には、葉柄の基部から葉を切断し、重ねてから、創傷の封止を防ぐために、２０ｍＭ  Ｋ２−ＥＤＴＡを含有する反応チューブ内に暗所で１時間配置する。葉を容器から穏やかに取り出し、蒸留水で入念に洗浄し、全てのＥＤＴＡを除去して、清浄なチューブ内に配置した後、暗所において師管液を５〜８時間かけて収集する。葉を廃棄し、師管液を０．８５μｍフィルタで濾過して、大きい粒子を除去してから、実施例２に記載するように、ＰＭＰを精製する。
【０３９０】
ｈ）トマト植物木部樹液からのＰＭＰ単離
トマト（トマト（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ））種子をＳｕｎｓｈｉｎｅ  Ｍｉｘ（Ｓｕｎ  Ｇｒｏ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ａｇａｗａｍ，ＭＡ）などの有機質土壌の入った単一ポットに植え、２２℃〜２８℃の温室内に維持する。発芽から約２週間後、即ち２本葉期（ｔｗｏ  ｔｒｕｅ−ｌｅａｆ  ｓｔａｇｅ）に、９０％砂及び１０％有機物ミックスを含む滅菌砂質土を充填したポット（直径１０ｃｍ、深さ１７ｃｍ）に苗を個別に移植する。２２℃〜２８℃の温室内に植物を４週間維持する。
【０３９１】
Ｋｏｈｌｅｎ  ｅｔ  Ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．１５５（２）：７２１−７３４，２０１１に記載されているように、４週齢のトマト植物からの木部樹液を収集する。手短には、トマト植物の胚軸から上を切断し、プラスチックリングを茎の周りに取り付ける。切断から９０分にわたって蓄積する木部樹液を収集する。木部樹液を０．８５μｍフィルタで濾過して、大きい粒子を除去してから、実施例２に記載するように、ＰＭＰを精製する。
【０３９２】
ｉ）タバコＢＹ−２細胞培地からのＰＭＰ単離
３０ｇ／Ｌショ糖、２．０ｍｇ／Ｌのリン酸二水素カリウム、０．１ｇ／Ｌのミオ−イノシトール、０．２ｍｇ／Ｌの２，４−ジクロロフェノキシ酢酸及び１ｍｇ／ＬのチアミンＨＣｌを補充したＭＳ塩（Ｄｕｃｈｅｆａ，Ｈａａｒｌｅｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、♯Ｍ０２２１）を含むＭＳ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ  ａｎｄ  Ｓｋｏｏｇ，１９６２）ＢＹ−２培地（ｐＨ５．８）中で、１８０ｒｐｍのシェーカに載せ、タバコＢＹ−２（タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ  Ｌ  ｃｖ．）ブライトイエロー２）細胞を２６℃の暗所において培養する。７日齢細胞培養物の５％（ｖ／ｖ）を１００ｍＬの新鮮な液体培地に移すことにより、ＢＹ−２細胞を毎週二次培養する。７２〜９６時間後、ＢＹ−２培地を収集し、４℃、３００ｇで１０分間遠心分離することにより、細胞を除去する。ＰＭＰを含有する上清を収集し、０．８５ｕｍフィルタでの濾過により、残屑を除去する。実施例２に記載するように、ＰＭＰを精製する。
【０３９３】
実施例２：精製植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）の生成
この実施例は、サイズ排除クロマトグラフィー、密度勾配（イオジキサノール若しくはショ糖）と組み合わせて限外濾過及び沈殿又はサイズ排除クロマトグラフィーによる凝集体の除去を用いた、実施例１に記載の粗ＰＭＰ画分から精製ＰＭＰの生成を説明する。
【０３９４】
実験計画：
ａ）サイズ排除クロマトグラフィーと組み合わせて限外濾過を用いた精製グレープフルーツＰＭＰの生成
１００−ｋＤＡ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）Ａｍｉｃｏｎスピンフィルタ（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、実施例１ａからの粗グレープフルーツＰＭＰ画分を濃縮する。次に、濃縮した粗ＰＭＰ溶液をＰＵＲＥ−ＥＶサイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＨａｎｓａＢｉｏＭｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ）にロードし、製造者の指示に従って単離する。精製済ＰＭＰ含有画分を、溶出後プールする。任意選択で、１００−ｋＤＡ  ＭＷＣＯ  Ａｍｉｃｏｎスピンフィルタを用いて又はタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により、ＰＭＰをさらに濃縮することもできる。実施例３に記載のように、精製ＰＭＰを分析する。
【０３９５】
ｂ）イオジキサノール勾配を用いた精製シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰの生成
実施例１ａに記載のように、粗シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）葉アポプラストＰＭＰを単離し、Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｉｎｎｅｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７に記載されているように、精製ＰＭＰを生成する。不連続イオジキサノール勾配（ＯｐｔｉＰｒｅｐ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を調製するために、小胞単離バッファー（ＶＩＢ；２０ｍＭ  ＭＥＳ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２及び０．１  Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６）で水性６０％ＯｐｔｉＰｒｅｐストック溶液を希釈することにより、４０％（ｖ／ｖ）、２０％（ｖ／ｖ）及び５％（ｖ／ｖ）イオジキサノールの溶液を作製する。勾配は、３ｍｌの４０％溶液、３ｍＬの２０％溶液、３ｍＬの１０％溶液、２ｍＬの５％溶液を積層することにより形成する。実施例１ａからの粗アポプラストＰＭＰ溶液を４℃、４０，０００ｇで６０分間遠心分離する。ペレットを０．５ｍｌのＶＩＢに再懸濁させてから、勾配の上部に重ねる。４℃、１００，０００ｇで１７ｈ遠心分離を実施する。勾配の上部の最初の４．５ｍｌを廃棄した後、アポプラストＰＭＰを含有する０．７ｍｌの３容量を収集し、ＶＩＢを用いて３．５ｍＬにして、４℃、１００，０００ｇで６０分間遠心分離する。ペレットを３．５ｍｌのＶＩＢで洗浄した後、同じ遠心分離条件を用いて再ペレット化する。実施例３に記載の通り、次の分析のために精製ＰＭＰペレットを合わせる。
【０３９６】
ｃ）ショ糖勾配を用いた精製グレープフルーツＰＭＰの生成
実施例１ｄに記載のように粗グレープフルーツ果汁ＰＭＰを単離し、１５０，０００ｇで９０分間遠心分離した後、記載されている（Ｍｕ  ｅｔ  Ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ＆Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５８（７）：１５６１−１５７３，２０１４）ように、ＰＭＰ含有ペレットを１ｍｌのＰＢＳに再懸濁させる。再懸濁させたペレットをショ糖ステップ勾配（８％／１５％／３０％／４５％／６０％）に移し、１５０，０００ｇで１２０分間遠心分離して、精製ＰＭＰを生成する。３０％／４５％界面から精製グレープフルーツＰＭＰを収集し、後に実施例３に記載のように分析する。
【０３９７】
ｄ）グレープフルーツＰＭＰからの凝集体の除去
実施例１ｄに記載の通り生成したグレープフルーツＰＭＰ又は実施例２ａ〜ｃからの精製ＰＭＰからタンパク質凝集体を除去するために、追加の精製ステップを加えることができる。生成したＰＭＰ溶液を様々なｐＨに通過させて、溶液中にタンパク質凝集体を沈殿させる。ｐＨは、水酸化ナトリウム又は塩酸の添加により３、５、７、９若しくは１１に調節する。較正ｐＨプローブを用いてｐＨを測定する。溶液が指定のｐＨに達したら、濾過して粒子を除去する。代わりに、単離したＰＭＰ溶液を、Ｐｏｌｙｍｉｎ−Ｐ又はＰｒａｅｓｔｏｌ  ２６４０などの荷電ポリマーの添加により、凝結させることもできる。手短には、１Ｌ当たり２〜５ｇのＰｏｌｙｍｉｎ−Ｐ又はＰｒａｅｓｔｏｌ  ２６４０を溶液に添加し、インペラで混合する。次に、溶液を濾過して、粒子を除去する。代わりに、塩濃度を高めることにより、凝集体を可溶化する。ＮａＣｌを、１ｍｏｌ／Ｌに達するまでＰＭＰ溶液に添加する。次に、溶液を濾過して、ＰＭＰを精製する。代わりに、温度を上昇させることにより、凝集体を可溶化する。単離したＰＭＰ混合物を、５０℃の均質温度に達するまで混合しながら５分加熱する。次に、ＰＭＰ混合物を濾過して、ＰＭＰを単離する。代わりに、ＰＭＰ溶液からの可溶性混入物は、標準的方法に従うサイズ排除クロマトグラフィーカラムにより分離するが、その場合、ＰＭＰは、第１画分に溶出するのに対して、タンパク質及びリボ核タンパク質及び一部のリポタンパク質は、遅れて溶出される。タンパク質凝集体除去の効率は、ＢＣＡ／Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質定量により、タンパク質凝集体の除去前及び後のタンパク質濃度を測定し、比較することにより決定される。生成したＰＭＰは、実施例３に記載のように分析する。
【０３９８】
実施例３：植物メッセンジャーパックの特性決定
この実施例は、実施例１又は実施例２に記載の通りに生成されたＰＭＰの特性決定を説明する。
【０３９９】
実験計画：
ａ）ＰＭＰ濃度の決定
ＰＭＰ粒子濃度は、Ｍａｌｖｅｒｎ  ＮａｎｏＳｉｇｈｔを用いるナノ粒子追跡分析（Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＮＴＡ）又はｉＺｏｎ  ｑＮａｎｏを用いる調整可能抵抗パルスセンシング（Ｔｕｎａｂｌｅ  Ｒｅｓｉｓｔｉｖｅ  Ｐｕｌｓｅ  Ｓｅｎｓｉｎｇ）（ＴＲＰＳ）により、製造者の指示に従って決定する。精製ＰＭＰのタンパク質濃度は、ＤＣタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）の使用により決定する。精製ＰＭＰの脂質濃度は、Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  ＩｎｎｅｓによりＰｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７に記載のように、ＤｉＯＣ６（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）などの蛍光親油性色素を用いて決定する。手短には、実施例２からの精製ＰＭＰペレットをＭＥＳバッファー（２０ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ６）で希釈した１００ｍｌの１０ｍＭ  ＤｉＯＣ６（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）並びに１％植物プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）及び２ｍＭ  ２，２９−ジピリジルジスルフィドに再懸濁させる。再懸濁ＰＭＰを３７℃で１０分間インキュベートし、３ｍＬのＭＥＳバッファーで洗浄し、再ペレット化し（４℃で、４００，０００ｇ、６０分）、新鮮なＭＥＳバッファーに再懸濁させる。ＤｉＯＣ６蛍光強度を４８５ｎｍ励起及び５３５ｎｍ発光で測定する。
【０４００】
ｂ）ＰＭＰの生物物理学的及び分子特性決定
Ｗｕ  ｅｔ  Ａｌ．，Ａｎａｌｙｓｔ．１４０（２）：３８６−４０６，２０１５のプロトコルに従って、ＪＥＯＬ  １０１０透過型電子顕微鏡での電子及び低温電子顕微鏡法によりＰＭＰを特性決定する。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ又はｉＺｏｎ  ｑＮａｎｏを用い、製造者の指示に従ってＰＭＰのサイズ及びゼータ電位も測定する。クロロホルム抽出を用いて、ＰＭＰから脂質を単離し、Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ．２２（１０）：３１９３−３２０５，２０１０に説明されているように、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで特性決定する。グリコシルイノシトールホスホリルセラミド（ＧＩＰＣ）脂質を抽出し、Ｃａｃａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．１７０：３６７−３８４，２０１６に記載のように精製した後、前述したようにＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより解析する。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ製のＱｕａｎｔ−Ｉｔキットを用いて、指示に従い、全ＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質を特性決定する。Ｒｕｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｉｎｎｅｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７３（１）：７２８−７４１，２０１７に記載のプロトコルに従い、ＰＭＰのタンパク質をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより特性決定する。トリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ）を用いて、ＲＮＡ及びＤＮＡを抽出し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ製のＲｉｂｏ−Ｚｅｒｏ  Ｐｌａｎｔキット及びＮｅｘｔｅｒａ  Ｍａｔｅ  Ｐａｉｒ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔを用いて、ＴｒｕＳｅｑ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを含むライブラリに調製した後、製造者の指示に従い、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑでシーケンシングする。
【０４０１】
実施例４：植物メッセンジャーパック安定性の特性決定
この実施例は、様々な保存及び生理学的条件下でのＰＭＰの安定性の測定を実証する。
【０４０２】
実験計画：
実施例１及び２に記載通りに生成したＰＭＰを様々な条件に付す。水、５％ショ糖若しくはＰＢＳにＰＭＰを懸濁させ、−２０℃、４℃、２０℃及び３７℃で１、７、３０及び１８０日間放置する。また、ＰＭＰを水に懸濁させ、ロータリエバポレータ装置を用いて乾燥させ、４℃、２０℃及び３７℃で１、７及び３０並びに１８０日間放置する。また、ＰＭＰを水又は５％ショ糖溶液に懸濁させ、液体窒素で急速冷凍後、凍結乾燥させた。１、７、３０及び１８０日後、乾燥及び凍結乾燥ＰＭＰを水に再懸濁させる。０℃を超える温度での条件を含む３つの先行実験物は、模擬屋外ＵＶ条件での満足な安全性を決定するために、人工太陽光シミュレータにも曝露する。さらには、１単位のトリプシンが添加された若しくは添加されていないｐＨ１、３、５、７及び９の緩衝溶液又は他の人工胃液中で３７℃、４０℃、４５℃、５０℃及び５５℃の温度に１、６及び２４時間ＰＭＰを曝露する。
【０４０３】
これら各々の処理後、ＰＭＰを２０℃に戻し、ｐＨ７．４に中和した後、実施例３に記載の方法の一部又は全部を用いて特性決定する。
【０４０４】
実施例５：植物メッセンジャーパックによる真菌の処理
この実施例は、真菌を直接処理するか、又は真菌への曝露前にシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）葉へのアポプラストＰＭＰ溶液を噴霧することにより、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）ロゼットなどの植物から産生されるＰＭＰが、病原真菌、例えばＳ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）の適応度を低減させる能力を実証する。この実施例では、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）をモデル植物として使用し、Ｓ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）をモデル病原真菌として使用する。
【０４０５】
侵襲性真核生物病原体、例えば真菌及び卵菌類などによりトリガーされる植物病害は、世界的に相当の作物損失をもたらす。例えば、非常に多様な病原真菌：ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）及びスクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）は、収穫期前及び後にそれぞれ灰色かび病若しくは白かび病を引き起こすことにより、ほぼ全ての野菜及び果実並びに多くの花に深刻な脅威を呈している。殺真菌剤処理は、健康な作物及び信頼できる高品質な収穫を維持するために不可欠である。
【０４０６】
治療計画：
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液には、１０ｍｌの滅菌水又はＰＢＳ中０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇの実施例１ａからのＰＭＰタンパク質／ｍｌを配合した。
【０４０７】
実験計画：
ａ）親油性膜色素によるアポプラストＰＭＰの標識
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）アポプラストＰＭＰを単離し、実施例１〜２に記載の通りに精製した後、ＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ）で、製造者の指示に従い（一部変更して）標識する。手短には、ＰＫＨ２６標識キットの１ｍＬの希釈物Ｃ中５０ｍｇのアポプラストＰＭＰを２ｍｌの１ｍＭＰＫＨ２６と混合し、３７℃で５分インキュベートする。１ｍＬの１％ＢＳＡの添加により標識を停止する。１５０，０００ｇで９０分間の遠心分離により全ての非標識色素を洗い流し、標識ＰＭＰペレットを滅菌水に再懸濁させる。
【０４０８】
ｂ）Ｓ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）子嚢胞子によるアポプラストＰＭＰの取込み
Ｓ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）（ＡＴＣＣ、＃１８６８７）子嚢胞子によるアポプラストＰＭＰの取込みを決定するために、１０，０００個の子嚢胞子を、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌのＰＫＨ２６標識アポプラスト由来ＰＭＰと一緒に、スライドガラス上で直接インキュベートする。ＰＢＳ対照以外に、Ｓ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）子嚢胞子をＰＫＨ２６色素（最終濃度５μｇ／ｍｌ）の存在下でインキュベートする。室温での５分、３０分及び１ｈのインキュベーション後、高解像度蛍光顕微鏡で画像を取得する。胞子の細胞質が、ＰＫＨ２６色素による細胞膜の排他的染色に対して赤く変化するとき、アポプラスト由来ＰＭＰは、胞子により取り込まれている。ＰＢＳ及びＰＫＨ２６色素単独の対照処理と比較して、赤色の細胞質を有するＰＭＰ処理胞子のパーセンテージを記録する。
【０４０９】
ｃ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液によるインビトロでのＳ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）処理
真菌胞子の発芽に対するＰＭＰ処理の効果を決定するために、約１５００個のＳ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）子嚢胞子を４％ショ糖及び０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌのＰＭＰと一緒に、最終容量２０μｌで、Ｒｅｇｅｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  ｏｆ  Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．６８（２０）：５４８５−５４９６，２０１７に記載のように、標準プロトコルに従って、マイクロスライド上でインキュベートする。２５℃及び１００％相対湿度で１６ｈのインキュベーション後、高解像度光学顕微鏡法を用い、菌糸の存在及び形態についてスライドを評価する。スケールバーを用いて、菌糸の長さを記録し、ＰＭＰ処理後の相対成長を陰性対照と比較して決定する。真菌の死滅を判定するために、エバンズブルー（Ｅｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ）色素を０．０５％ｗ／ｖの最終濃度まで添加し、室温で１０分間インキュベートした後、顕微鏡で観察する（真菌は、青く変化したとき、死滅したとみなす）。真菌の生存性を決定するために、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を５０μｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、蛍光顕微鏡で観察する（真菌は、ＰＩのために陽性染色（赤色）されたとき、生存しているとみなす）。非処理対照に対するＰＭＰ処理同士の相対生存性を決定する。
【０４１０】
ｄ）インプランタでのシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液によるＳ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）処理
真菌増殖に対する外部適用されたアポプラストＰＭＰのインプランタでの効果を決定するために、真菌感染の２日、１日及び２時間前に、４週齢シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）Ｃｏｌ−０植物に、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの範囲の濃度でシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ（１０ｍＬの滅菌水に配合）を噴霧する。
【０４１１】
Ｗｅｉｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４２（６１５４）：１１８−１２３，２０１３に記載のように、２×１０５胞子／ｍｌのＳ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）を用いて、単一の２０μｌ液滴を適用するか又は植物全体を噴霧接種することにより、植物の葉をＳ．スクレロチオラム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）に感染させる。
【０４１２】
最初の感染から１、２、３及び５日後、病変サイズを測定することにより病害を評価し、Ｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｓｏｍｓｓｉｃｈ，Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２（１）：４８，２０１６に記載のように、ＤＮＡベースのリアルタイムＰＣＲアッセイを使用して、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）葉バイオマスに対するＳ  スクレロチオラム（Ｓ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）増殖の定量を行う。６つの個別の植物からの６枚の葉由来のＤＮＡを採取し、ＦａｓｔＤＮＡ  ＳＰＩＮ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  ｓｏｉｌ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を用いて、製造者の指示に従い、ＤＮＡを抽出する。ｑＰＣＲ分析のために、３３ｎｇのＤＮＡを０．４ｍＭ遺伝子特異的プライマー：Ｓ  スクレロチオラム（Ｓ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）真菌バイオマス（ＡＦ３４２２４３，Ｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｔｔｅｒｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．６２（５）：３７９−３８５，２０１６）：センスＣＣＴＡＣＡＴＴＣＴＡＣＴＴＧＡＴＣＴＡＧＴＡ、アンチセンスＧＴＴＧＧＴＡＧＴＴＧＴＧＧＧＴＴＡ；シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）植物バイオマス（Ａｔ４ｇ２６４１０，Ｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｓｏｍｓｓｉｃｈ，Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２（１）：４８，２０１６）、センスＧＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＣＴＴＣＣＡＴＧＡＣ、アンチセンスＧＧＴＣＣＧＡＣＡＴＡＣＣＣＡＴＧＡＴＣＣ）と混合し、ＰｏｗｅｒＵｐ（商標）ＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用い、次のプロトコル：９５℃で３分の変性、９５℃で２０秒、６１℃で２０秒及び７２℃で１５秒の４０反復に従う３回の技術的反復で、ｑＰＣＲを実施する。
【０４１３】
真菌由来ＰＣＲ産物の存在量を植物由来ＰＣＲ産物の存在量に対して正規化する。真菌増殖に対するシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰのインプランタ効果を、ΔΔＣｔ値を計算し、陰性ＰＢＳ対照での正規化真菌増殖をＰＭＰ処理サンプルでの正規化真菌増殖と比較することにより決定する。
【０４１４】
実施例６：植物メッセンジャーパックによる細菌の処理
この実施例は、細菌を直接処理するか又は細菌曝露前にシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）葉へのアポプラストＰＭＰ溶液を噴霧することにより、細菌によって取り込まれる、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）ロゼットなどの植物から産生されるアポプラストＰＭＰが、病原菌、例えばシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）の適応度を低減させる能力を実証する。この実施例では、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）をモデル植物として使用し、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）をモデル病原菌として使用する。
【０４１５】
細菌病原体によりトリガーされる植物病害は、世界的に相当の作物損失をもたらす。例えば、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）及びキサントモナス・カムペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）などの非常に多様な病原菌は、全世界の作物生産に深刻な脅威を呈している。殺菌剤処理は、健康な作物及び信頼できる高品質な収穫を維持するために不可欠である。
【０４１６】
治療計画：
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液には、１０ｍｌの滅菌水中０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇのＰＭＰタンパク質／ｍｌを配合する。
【０４１７】
ａ）親油性膜色素によるアポプラストＰＭＰの標識
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）アポプラストＰＭＰは、実施例１〜２に記載の通りに生成したＰＭＰであり、これらを、ＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ）で、製造者の指示に従い（一部変更して）標識する。手短には、ＰＫＨ２６標識キットの１ｍＬの希釈物Ｃで５０ｍｇのＰＭＰを希釈し、２ｍｌの１ｍＭ  ＰＫＨ２６と混合し、３７℃で５分インキュベートする。１ｍＬの１％ＢＳＡの添加により標識を停止する。１５０，０００ｇで９０分間の遠心分離により非標識色素を全て洗い流し、標識ＰＭＰペレットを滅菌水に再懸濁させた後、実施例３に記載の通り分析する。
【０４１８】
ｂ）Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）によるアポプラストＰＭＰの取込み
シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．トマトｓｔｒ．（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ  ｓｔｒ．）ＤＣ３０００菌をＡＴＣＣ（＃ＢＡＡ−８７１）から取得し、５０ｍｇ／ｍｌのリファンピシンを含むキング（Ｋｉｎｇ）Ｂ培地寒天上で、製造者の指示に従い増殖させる。Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）によるＰＭＰの取込みを決定するために、１ｍｌの一晩細菌懸濁液の１０ｕｌを０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌのＰＫＨ２６標識アポプラストＰＭＰと一緒に、スライドガラス上で直接インキュベートする。水対照以外に、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）菌をＰＫＨ２６色素（最終濃度５μｇ／ｍｌ）の存在下でインキュベートする。室温での５分、３０分及び１ｈのインキュベーション後、高解像度蛍光顕微鏡で画像を取得する。細菌の細胞質が、ＰＫＨ２６色素による細胞膜の排他的染色に対して赤く変化するとき、アポプラストＰＭＰは、細菌により取り込まれている。ＰＢＳ及びＰＫＨ２６色素単独による対照処理と比較して、赤色の細胞質を有するＰＫＨ２６−ＰＭＰ処理細菌のパーセンテージを記録してＰＭＰ取込みを決定する。
【０４１９】
ｃ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液によるインビトロでのＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）処理
Ｈｏｅｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．２４（１０）：１２３８−１２４９，２０１７に記載のように、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）の増殖にシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰが作用する能力を決定する。手短には、静止期のＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）培養物を、遠心分離及び培地への再懸濁によってＯＤ６００＝４まで濃縮させる。１．５ｍＬの濃縮Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）培養物を４．５ｍＬの寒天と混合し、２５ｍＬの寒天プレートに均一に塗布する。凝固後、３ｕＬの０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌのＰＭＰを上層にスポッティングし、乾燥させる。プレートを一晩インキュベートし、写真撮影した後、スキャンする。斑点領域の周りの溶解ゾーン（細菌が存在しない領域）の直径を測定する。対照及びＰＭＰ処理溶解ゾーンを比較して、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰの殺菌効果を決定する。
【０４２０】
ｄ）インプランタでのシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液によるＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）処理
細菌増殖に対する外部適用されたアポプラストＰＭＰのインプランタでの効果を決定するために、細菌感染の２日、１日及び２時間前に、４週齢シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）Ｃｏｌ−０植物に、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの範囲の濃度でシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ（１０ｍＬの滅菌水に配合）を噴霧する。
【０４２１】
Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）をキングＢ培地寒天上の菌叢として３０℃で一晩増殖させる。菌叢をプレートから掻き取り、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び０．０１％Ｓｉｌｗｅｔ  Ｌ７７を用いて６００ｎｍで０．２の光学密度まで再懸濁させる。Ｃｏｌ−０シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）植物に、細菌溶液又は細菌を含まない対照溶液を噴霧する。高湿度を維持するために、プラスチックドームで植物を一晩覆い、翌朝取り外す。
【０４２２】
最初の感染から１、２、３及び５日後、Ｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｓｏｍｓｓｉｃｈ，Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２（１）：４８，２０１６により記載される通り、ＤＮＡベースのリアルタイムＰＣＲアッセイを使用して、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）葉バイオマスに対するシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）増殖の定量を行う。６つの個別の植物からの６枚の葉由来のＤＮＡを採取し、ＦａｓｔＤＮＡ  ＳＰＩＮ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  ｓｏｉｌ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を用いて、製造者の指示に従い、ＤＮＡを抽出する。ｑＰＣＲ分析のために、３３ｎｇのＤＮＡを０．４ｍＭ遺伝子特異的プライマー（Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）菌バイオマス：センスＡＡＣＴＧＡＡＡＡＡＣＡＣＣＴＴＧＧＧＣ、アンチセンスＣＣＴＧＧＧＴＴＧＴＴＧＡＡＧＴＧＧＴＡ（ＮＣ＿００４５７８．１）；シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）植物バイオマス：シロイヌナズナ（Ａ．ｔｈａｌｉａｎａ）発現タンパク質Ａｔ４ｇ２６４１０、センスＧＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＣＴＴＣＣＡＴＧＡＣ、アンチセンスＧＧＴＣＣＧＡＣＡＴＡＣＣＣＡＴＧＡＴＣＣ）と混合し、ＰｏｗｅｒＵｐ（商標）ＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用い、次のプロトコル：９５℃で３分の変性、９５℃で２０秒、６１℃で２０秒及び７２℃で１５秒の４０反復に従う３回の技術的反復で、ｑＰＣＲを実施する。
【０４２３】
細菌由来ＰＣＲ産物の存在量を植物由来ＰＣＲ産物の存在量に対して正規化する。細菌増殖に対するシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰのインプランタ効果を、ΔΔＣｔ値を計算し、陰性対照での正規化細菌増殖をＰＭＰ処理サンプルでの正規化細菌増殖と比較することにより決定する。
【０４２４】
実施例７：植物メッセンジャーパックによる樹液吸引昆虫の処理
この実施例は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）ロゼットなどの植物から産生されるアポプラストＰＭＰの溶液でアブラムシを処理することにより、アブラムシを殺傷するか又はその適応度を低減させる能力を実証する。昆虫は、アブラムシによる寄生前に直接処理するか又は作物の葉への溶液の噴霧により処理する。この実施例では、アブラムシを、樹液吸引昆虫のモデル生物として使用する。
【０４２５】
アブラムシは、最も重要な農業害虫の１つである。アブラムシは、作物に直接的な給餌障害をもたらし、植物ウイルスの媒介物として機能する。加えて、アブラムシ甘露は、すす病菌の増殖を促進し、有害なアリを引き付ける。化学処理の使用は、耐性個体の選択を招き、その根絶がますます困難となる。
【０４２６】
治療計画：
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液には、１０ｍｌの滅菌水又はＰＢＳ中に０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇのＰＭＰタンパク質／ｍｌを配合する。
【０４２７】
実験計画：
ａ）アブラムシの培養
処理の準備のため、アブラムシを実験室環境及び培地中で成長させる。環境制御された室内において（１６時間光周期；６０±５％ＲＨ；２０±２℃）、２４℃において１６ｈ明期及び８ｈ暗期でソラマメ植物をバーミキュライトとパーライトとの混合物中で成長させる。母性効果又は植物間の健康の差を抑制するため、異なる植物からの５〜１０匹の成虫を１０本の２週齢植物に分配し、高密度になるまで５〜７日間増殖させる。実験のため、健康植物から２齢及び３齢アブラムシを採集し、各処理が採集植物の各々からほぼ同じ数の個体を受け取るように処理に分ける。
【０４２８】
ｂ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液による３齢アブラムシの処理
各レプリケート処理のために、３０〜５０匹の２齢及び３齢アブラムシを９６ウェルプレートのウェルに個別に置き、給餌サシェプレートを逆さにしてその上に被せることにより、昆虫を、パラフィルムを通じて摂餌させると共に、個々のウェルに拘束しておく。実験用アブラムシは、アブラムシコロニーと同じ環境条件下に保つ。アブラムシに２４ｈ給餌した後、給餌サシェを、滅菌人工食又は１、１０、５０、１００若しくは２５０μｇ／ｍｌのアポプラストＰＭＰを補充した滅菌人工食が入った新しいサシェに交換し、４日間にわたって２４時間毎に新しい滅菌サシェを提供する。サシェの交換時、アブラムシの死亡に関しても確認する。アブラムシは、褐色に変化していた場合又はウェルの底にいて、観察している間に動かない場合に死んでいると見なす。アブラムシが給餌サシェのパラフィルム上にいるものの動かない場合、摂餌中で生きていると考える。
【０４２９】
ＰＭＰ溶液で処理したアブラムシの生存率を陰性対照で処理したアブラムシと比較する。発育のあらゆる遅れを観察するために、アブラムシの発育段階及びサイズを毎日記録する。
【０４３０】
ｃ）インプランタでのシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液によるアブラムシ処理
アブラムシ適応度に対する外部適用されたアポプラストＰＭＰのインプランタでの効果を決定するために、４週齢ソラマメ植物から葉を採取し、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの範囲の濃度のＰＭＰ（１０ｍＬの滅菌水に配合）を含有するエッペンドルフチューブ内に挿入する。代わりに、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｌａｎｔｓ．２（１０）：１６１５１，２０１６に記載のプロトコルに従って、葉に噴霧する。次に、植物の葉を１００匹の２齢及び３齢アブラムシに感染させる。
【０４３１】
ＰＭＰ溶液で処理したアブラムシの生存率を陰性対照で処理したアブラムシと比較する。発育のあらゆる遅れを観察するために、アブラムシの発育段階及びサイズを毎日記録する。
【０４３２】
実施例８：植物メッセンジャーパックによるトウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）の処理
この実施例は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）ロゼットなどの植物から単離したアポプラストＰＭＰ溶液で線虫を処理することにより、線虫、例えばトウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）、メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）を殺傷するか又はその適応度を低減させる能力を実証する。この実施例では、メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）をモデル病原線虫として使用する。
【０４３３】
線形動物門（Ｎｅｍａｔｏｄａ）の、根こぶ病を引き起こす線虫（メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ））、シスト（ヘテロデラ属（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ））、レニフォーム（ロチレンクルス属（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ））及び柑橘類の根に感染する線虫（ミカンネセンチュウ（Ｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｓｅｍｉｐｅｎｅｔｒａｎｓ））は、農業生産に対する脅威である。植物寄生線虫は、生きた植物の根組織を摂餌し（数種は、葉を侵襲する）、口針を用いて、植物細胞に孔をあけ、その内容物を吸う。線虫は、栄養又は水不足に起因するものと類似の症状、例えば収穫減、黄変、立ち枯れ及び直接の摂餌被害によって引き起こされる根の奇形などを引き起こす。加えて、植物寄生線虫による侵入は、線虫活性が、そうでなければ進入不可能であった進入路を形成するために、細菌又は真菌などの他の微生物の感染経路をもたらすことも多い。この有害生物の処理は、典型的にアルジカルブなどの化学殺線虫剤を含むが、これは、数種の化学殺線虫剤の登録抹消が広がっているため、ヒトの健康安全性及び環境への影響について懸念される濃度で適用される。
【０４３４】
治療計画：
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液には、実施例１ａからの１０ｍｌの滅菌水中０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇのＰＭＰタンパク質／ｍｌを配合する。
【０４３５】
実験計画：
ａ）メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の培養
処理の準備のために、トマトの種子を、Ｓｕｎｓｈｉｎｅ  Ｍｉｘ（Ｓｕｎ  Ｇｒｏ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ａｇａｗａｍ，ＭＡ）などの有機質土壌の入った単一ポットに植え、２２℃〜２８℃の温室内に維持する。発芽から約２週間後、即ち２本葉期に、９０％砂及び１０％有機物ミックスを含む滅菌砂質土を充填したポット（直径１０ｃｍ、深さ１７ｃｍ）に苗を個別に移植する。２２℃〜２８℃の温室内に植物を２週間維持する。
【０４３６】
Ｊ２期（孵化直後）の約３０００匹のメロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫を使用して、植物を接種する。線虫は、６ｍＬの水に懸濁させる。鉛筆を用いて、砂中の各トマト根系の周りに、ポットの深さ半分ほどの穴を３つあける。ピペットを用いて、Ｊ２を３つの穴に送達することにより、各植物を接種する。その後、孔を覆う。植物を２４〜２７℃の温室内に６〜８週間維持する。
【０４３７】
ｂ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰによるメロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）卵の処理
メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の卵に対するＰＭＰ溶液の殺線虫活性を評価するために、インビトロ孵化試験を実施する。感染した根からメロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の卵塊を取得する。平均３００〜３５０個の卵を含む複数の単一卵塊をシラキュース（Ｓｙｒａｃｕｓｅ）皿内に配置し、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの濃度のＰＭＰ溶液２ｍｌで処理した後、様々な曝露時間にわたって２８±１℃で維持する。卵から出てきた幼体の数を２４、４８及び７２ｈ後に計数する。卵孵化への影響を、滅菌水対照から出てきた幼体のパーセンテージをＰＭＰ処理からの幼体のパーセンテージと比較することにより、決定する。ＰＭＰ溶液で処理した線虫卵の孵化率は、対照と比較して低減している。
【０４３８】
ｃ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰによるメロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）幼体の処理
メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の幼体に対するＰＭＰ溶液の殺線虫活性を評価するために、インビトロ致死試験を実施する。感染した根からメロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の卵塊を取得し、水中で３日間インキュベートして、卵を孵化させる。３日後、１００匹の第２期幼体を、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの濃度のＰＭＰ溶液２ｍｌを含有するシラキュース（Ｓｙｒａｃｕｓｅ）皿に添加した後、２８±１℃で維持する。ステレオスコープを用いて、２４、４８及び７２ｈ間隔で、幼体の死滅について観察を記録する。その後、ＰＭＰ溶液で処理した幼体を蒸留水に移し、２４ｈ後に再度観察して、それらの死滅を確認する。ＰＭＰ溶液で処理した線虫の生存率を陰性対照で処理した線虫と比較する。ＰＭＰ溶液で処理した線虫卵の生存率は、対照と比較して低減している。
【０４３９】
実施例９：植物メッセンジャーパックによる草食性昆虫の処理
この実施例は、植物、例えばシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）ロゼットなどの植物から単離したアポプラストＰＭＰ溶液で処理することにより、草食性昆虫、例えばハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）を殺傷するか又はその適応度を低減させる能力を実証する。鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）は、害虫による寄生前に直接又は作物の葉にシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液を噴霧することによって処理することができる。この実施例では、ハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）を草食性病原害虫のモデル生物として使用する。
【０４４０】
ハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）は、米国、アジア、オセアニア及びインドにおいて深刻な多食性害虫である。この種は、幼虫の旺盛な摂食パターンにより植物に寄生し、往々にして葉を完全に破壊する。このガによる影響は、かなり壊滅的であり、経済的に重要な農業作物を壊滅させ、一部の植物の収穫を完全に減少させる。多くの様々な栽培作物、ひいては現地の農業経済に対するそれらの影響のために、害虫防除のための本格的な取り組みがなされるに至った。
【０４４１】
治療計画：
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液には、１０ｍｌの滅菌水中０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇのＰＭＰタンパク質／ｍｌを配合する。
【０４４２】
実験計画：
ａ）タバコ植物でのハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）の培養
ハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）をタバコ植物で連続２世代にわたって維持する。種子発芽及び新しい土壌混合物に移すための十分な苗の成長のために、タバコ植物は、強度約１６００ｌｕｘの白色蛍光ランプにより供給される光の１６／８ｈ（明期／暗期）光周期の下、２８±１℃で１５日間維持する。
【０４４３】
ハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）卵は、Ｇｅｎｒａｌｐｅｓｔから供給される。孵化後、第１齢幼虫をＳｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｓｐｈｅｒｅ．１３９：４４１−４５１，２０１５に記載の通りの人工餌で飼育する。飼育は、人工気候室内において、２７℃、６５％相対湿度及び１２時間暗期／１２時間明期光周期の定条件下で実施する。蛹及び成虫も同じ条件下で維持する。
【０４４４】
ｂ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰによるハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）卵の処理
ハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）発育に対するアポプラストＰＭＰの効果を決定するために、孵化及び致死試験を実施する。孵化試験の場合、複数の単一卵塊をシラキュース（Ｓｙｒａｃｕｓｅ）皿内に配置し、滅菌水中に配合した０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの濃度のＰＭＰ溶液２ｍｌで処理した後、様々な曝露時間にわたって２６±１℃で維持する。卵から出てきた幼体の数を２４、４８及び７２ｈ後に計数する。
【０４４５】
致死試験の場合、卵塊を採取し、３日間水中でインキュベートして、卵を孵化させる。３日後、１００匹の第２期幼体を、滅菌水中に配合した０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌの濃度のＰＭＰ溶液２ｍｌを含有するシラキュース（Ｓｙｒａｃｕｓｅ）皿に添加した後、２６±１℃でインキュベートする。ステレオスコープを用いて、２４、４８及び７２ｈの間隔で幼体の死滅について観察を記録する。その後、ＰＭＰ溶液で処理した幼体を蒸留水に移し、２４ｈ後に再度観察して、それらの死滅を確認する。ＰＭＰ溶液で処理したハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）の生存率、孵化率、蛹化率を、陰性対照で処理した鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）と比較する。ＰＭＰ溶液で処理したハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）の適応度は、対照と比較して低減し、適応度は各発育段階でマイナスの影響を受けている。
【０４４６】
ｃ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰによるハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）幼虫の処理
ハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）適応度に対するアポプラストＰＭＰの効果を決定するために、ウェットカメルヘアブラシを用いて、卵塊から１００個の新鮮なハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）卵を注意深く採取し、卵１０個／ペトリ皿（１．０×５．０ｃｍ）で分配する。孵化後、接種の２時間前に、０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌのシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰの溶液で噴霧処理したタバコの葉を入れたプラスチックバイアルに、幼虫を個別に移す。新鮮な葉を毎日供給する。幼虫の発育、蛹の形成及び成虫の羽化の成功並びに繁殖力に関する観察を２週間にわたって毎日記録する。また、幼虫、蛹及び成虫など、各発育段階での齢別致死率も記録する。
【０４４７】
ｃ）インプランタでのシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰ溶液によるハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｌｉｔｕｒａ）成虫の処理
ハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）成虫適応度に対するアポプラストＰＭＰの効果を決定するために、非感染４〜６週齢タバコ植物に、実施例１〜２に記載の通り単離及び精製した０（陰性対照）、１、１０、５０、１００又は２５０μｇ／ｍｌのシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰの溶液を噴霧する。噴霧接種から２時間後、孵化から４８ｈ後に採取した同期化ハスモンヨトウ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）蛹を処理植物に移し、２６±１℃に維持する。７２ｈ後、成虫を植物から採取し、計数して、それらの適応度を、サイズ及び形態的特徴により、その発育段階について評価する。次に、成虫をモスリン地で覆った３０×３０×４５ｃｍの木製ケージに移して、その繁殖力を評価する。前夜に繁殖用ケージに一緒に入れておいた５対のガ（雌５匹及び雄５匹）を１９．００ｈに上記ケージ内に放つ。翌朝、ガをケージから取り出し、ケージ内の葉及びモスリン地に産卵された卵を計数する。雌は各々１回のみ使用し、各試験を５回反復する。卵が孵化したら、幼虫の体重を陰性対照と比べて、様々な濃度のＰＭＰで給餌した昆虫の間で比較する。
【０４４８】
実施例１０：低分子核酸をロードした植物の植物メッセンジャーパックによる真菌の処理
この実施例は、ＰＭＰ脂質を単離し、低分子核酸を含有する小胞にそれらを合成することにより、低分子核酸を有害生物に送達するＰＭＰの能力を実証する。この実施例では、収穫後生産などの植物の双方における病原真菌、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）の病原性因子をノックダウンするために、低分子二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）ロードＰＭＰを使用する。また、本実施例は、低分子核酸ロードＰＭＰが、多様な処理及び環境条件について安定し、且つその活性を保持することも実証する。この実施例では、ｄｓＲＮＡをモデル核酸として使用し、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）をモデル病原真菌として使用し、ブドウをモデル果実として使用する。
【０４４９】
治療用量：
ｄｓＲＮＡをロードしたＰＭＰを、滅菌水中０、１、５、１０及び２０ｎｇ／μｌの有効なｄｓＲＮＡ用量の当量を送達する濃度まで水に配合。
【０４５０】
実験プロトコル：
ａ）グレープフルーツ由来ＰＣＲからの脂質単離
Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ，２２（５）：１４６３−１４８２，２０１０から改変し、実施例１〜２に記載の通り、精製したＰＭＰから脂質を単離する。手短には、３．７５ｍｌの２：１（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３をＰＢＳ中の１ｍｌのＰＭＰに添加し、ボルテックスする。ＣＨＣｌ３（１．２５ｍｌ）及びｄｄＨ２Ｏ（１．２５ｍｌ）を順次添加し、ボルテックスする。次に、混合物をガラスチューブ内に２２℃において２，０００ｒｐｍで１０分遠心分離して、混合物を２相（水相及び有機相）に分離する。有機相の収集のために、水相からガラスピペットを弱い正圧で挿入し、底の相（有機相）を吸引して、新しいガラスチューブ内に注入する。有機相サンプルをアリコートに分け、窒素下（２ｐｓｉ）加熱することにより乾燥させる。
【０４５１】
ｂ）ｄｃｌ１／２ｄｓＲＮＡをロードしたグレープフルーツＰＭＰの合成
Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍ．，４：１８６７，２０１３からの修正プロトコルに従って、低分子核酸をＰＭＰにロードする。手短には、実施例１〜２に従って精製ＰＭＰをグレープフルーツから生成し、実施例１０ａに記載のように、グレープフルーツＰＭＰ脂質を単離する。Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｌａｎｔｓ．２（１０）：１６１５１，２０１６に指定される通りの配列を有するボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）ｄｃｌ１／２をターゲティングする低分子二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）及びスクランブル化ｄｓＲＮＡ対照をＩＤＴから取得する。ｄｓＲＮＡロードＰＭＰは、脂質及び低分子核酸を混合することにより標的及び対照ｄｓＲＮＡの両方から合成し、これらを乾燥させて、薄膜を形成する。この膜をＰＢＳに分散させ、超音波処理して、ロードされたリポソーム配合物を形成する。実施例２に記載のショ糖勾配を用いて、ＰＭＰを精製し、使用前に超遠心分離により洗浄して、非結合核酸を除去する。実施例３に記載の方法を用いて、両方のサンプルの小部分を特性決定し、Ｑｕａｎｔ−Ｉｔ  ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ  ＲＮＡアッセイキットを用いてＲＮＡ含量を測定し、実施例４に記載のようにそれらの安定性を試験する。
【０４５２】
ｃ）インプランタで真菌適応度を低減するためのｄｃｌ１／２ターゲティングｄｓＲＮＡロードグレープフルーツＰＭＰによるボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）の処理
実施例１０ｂからのｄｓＲＮＡロードＰＭＰを用いて、真菌遮断の有効性を決定するために、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）植物を、細菌接種の２日、１日及び２ｈ前に、滅菌水中０、１、５、１０及び２０ｎｇ／μｌの有効ｄｓＲＮＡ用量を含むＰＭＰ溶液で噴霧する。
【０４５３】
ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）株Ｂ０５を麦芽エキス寒天（２％麦芽エキス、１％Ｂａｃｔｏペプトン）上で培養する。胞子を１％サブロー（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ）麦芽糖ブロスバッファーで最終濃度１０５胞子／ｍｌまで希釈し、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｌａｎｔｓ．２（１０）：１６１５１，２０１６から修正した、４〜６週齢シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）葉に噴霧接種する。ｄｃｌ１／２ロードＰＭＰ及び２０ｎｇ／μｌのｄｃｌ１／２  ｓｈＲＮＡによる処理の効果及び有効性をスクランブル化及び陰性対照と比較する。
【０４５４】
最初の感染から１、２、３及び５日後、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｌａｎｔｓ．２（１０）：１６１５１，２０１６からのプロトコルを用いて、単離したシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）葉中のノックダウンされたＢｃ−ＤＣＬ１／２転写物の量を定量することにより病害を評価する。収集したサンプルを、Ｆｉｓｈｅｒ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ（商標）ＳｕｒｅＰｒｅｐ（商標）Ｐｌａｎｔ／Ｆｕｎｇｉ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いたＲＮＡ抽出、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いたｃＤＮＡ合成並びに定量的ＲＴ−ＰＣＲ定量に付す。合成Ｂｃ−ＤＣＬ１／２−ｄｓＲＮＡの処理後のＢ．シネレア（Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ）でのＢｃ−ＤＣＬ１及びＢｃ−ＤＣＬ２の発現を、以下のプライマー：Ｂｃ−ＤＣＬ１−ｆｗ  ＡＣＡＡＴＣＣＴＡＴＣＴＴＴＣＧＧＡＡＧＣ、Ｂｃ−ＤＣＬ１−ｒｅｖ  ＡＧＡＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＣＡＧ、Ｂｃ−ＤＣＬ２−ｆｗ  ＧＡＴＴＧＴＧＣＡＡＡＧＴＣＴＣＡＡＣＡ及びＢｃ−ＤＣＬ２−ｒｅｖ  ＡＴＴＧＧＧＴＴＴＧＡＣＴＡＴＡＴＧＴＣＴＴＡを用いて測定する。
【０４５５】
さらに、Ｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｓｏｍｓｓｉｃｈ，Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２（１）：４８，２０１６に記載の通り、ＤＮＡベースのリアルタイムＰＣＲアッセイを使用して、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）葉バイオマスに対するＢ．シネレア（Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ）増殖を定量する。６つの個別の植物からの６枚の葉由来のＤＮＡを採取し、ＦａｓｔＤＮＡ  ＳＰＩＮ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  ｓｏｉｌ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を用いて、製造者の指示に従い、ＤＮＡを抽出する。ｑＰＣＲ分析のために、３３ｎｇのＤＮＡを０．４ｍＭ遺伝子特異的プライマー（Ｂ．シネレア（Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ）真菌バイオマス（Ｂｃ３Ｆ，Ｓｕａｒｅｚ  ｅｔ  Ａｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｉｏｃｈ．４２（１１）：９２４−９３４，２００５）：ｆｗ−ＧＣＴＧＴＡＡＴＴＴ  ＣＡＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＴＣＣ、ｒｅｖ−ＧＧＡＧＣＡＡ  ＣＡＡＴＴＡＡＴＣＧＣＡＴＴＴＣ；シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）植物バイオマス（Ａｔ４ｇ２６４１０，Ｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｓｏｍｓｓｉｃｈ，Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２（１）：４８，２０１６）、ｆｗ−ＧＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＣＴＴＣＣＡＴＧＡＣ、ｒｅｖ−ＧＧＴＣＣＧＡＣＡＴＡＣＣＣＡＴＧＡＴＣＣ）と混合し、ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を用い、次のプロトコル：９５℃で３分の変性、９５℃で２０秒、６１℃で２０秒及び７２℃で１５秒の４０反復に従う３回の技術的反復で、ｑＰＣＲを実施する。
【０４５６】
真菌由来ＰＣＲ産物の存在量を植物由来ＰＣＲ産物の存在量に対して正規化する。真菌増殖に対するシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アポプラストＰＭＰのインプランタ効果を、ΔΔＣｔ値を計算し、陰性ＰＢＳ対照での正規化真菌増殖をＰＭＰ処理サンプルでの正規化真菌増殖と比較することにより決定する。
【０４５７】
ｄ）収穫後ブドウ真菌適応度を低減するためのｄｃｌ１／２ターゲティングｄｓＲＮＡロードグレープフルーツ由来ＰＭＰによるボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）の処理
収穫後果実における真菌増殖に対するｄｃｌ１／２  ターゲティングｄｓＲＮＡロードグレープフルーツＰＭＰの効果を決定するために、ブドウを現地のスーパーマーケットから購入し、使用前に入念に洗浄した。
【０４５８】
Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｌａｎｔｓ．２（１０）：１６１５１，２０１６に従って、１０５胞子／ｍｌの２０μｌ液滴接種によるボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）真菌感染の５日、３日、１日及び２ｈ前に、滅菌水中０、１、５、１０及び２０ｎｇ／μｌの有効ｄｓＲＮＡの用量を含むｄｓＲＮＡロードＰＭＰ溶液又は２０ｎｇ／μｌのｄｃｌ１／２若しくはスクランブル化ｄｓＲＮＡをブドウに噴霧する。接種から５日後、感染ブドウサンプルの相対病変サイズを測定し、ＩｍａｇｅＪにより定量する。実施例１０ｃに記載のような定量的ＰＣＲによりＢ．シネレア（Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ）の相対的なＤＮＡ含量（相対バイオマス）を測定する。ｄｃｌ１／２ロードＰＭＰ及びｄｃｌ１／２  ｓｈＲＮＡによる処理の作用及び有効性をスクランブル化及び陰性対照と比較する。
【０４５９】
実施例１１：ペプチド核酸（ＰＮＡ）ロード植物メッセンジャーパックによる昆虫の処理
この実施例は、害虫の遺伝子、例えばツマジロクサヨトウ（スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ））のウルトラスピラクル（Ｕｌｔｒａｓｐｉｒａｃｌｅ）（ＵＳＰ）をノックダウンすることにより昆虫の適応度を低減させる目的で、ＰＭＰにペプチド核酸構築物をロードすることを実証するものであり、これは、他の鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）において、幼虫の生存率及び蛹化率を低減させることが実証されている。この実施例は、ＰＮＡロードＰＭＰが、多様な処理及び環境条件にわたって安定しており、且つその活性を保持することも実証する。この実施例では、ＰＮＡをモデルタンパク質として使用し、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）をモデル病原昆虫として使用する。
【０４６０】
治療用量：
ｄｓＲＮＡをロードしたＰＭＰを、滅菌水中０、０．１、１、５及び１０μＭの有効ＰＮＡ容量の当量を送達する濃度まで水に配合。
【０４６１】
実験プロトコル：
ａ）スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）に対するペプチド核酸構築物の同定
スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ウルトラスピラクルタンパク質（ＵＳＰ）に対する１０のＰＮＡを、適切な供給業者により設計及び合成させる。Ｓｆ２１及びＳｆ９スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞株は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから取得し、製造者の培養指示に従い、懸濁培養物として維持する。ｅｌｃ  ｅｔ  ａｌ，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．１０（３），ｅ０１１９２８３，２０１５から改変したプロトコルを用いて、細胞のエレクトロポレーションによりＰＮＡをインビトロで試験する。ＵＳＰノックダウンは、適切な供給業者から設計されたプローブを用いて、ＲＴ−ｑＰＣＲにより測定する。ＵＰＳノックダウン有効性に関して最も良好に機能するＰＮＡを、さらなる実験のために選択する。
【０４６２】
ｂ）ペプチド核酸によるグレープフルーツＰＭＰのローディング
グレープフルーツ由来のＰＭＰを実施例１に従って単離する。ＰＭＰを、ＰＢＳ中ＰＮＡを含む溶液に導入する。次に、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍ．，４：１８６７，２０１３からのプロトコルに従って、溶液を超音波処理して、ＰＭＰにポレーション及び拡散を誘導する。代わりに、Ｈａｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．，２０７：１８−３０，２０１５からのプロトコルに従って、溶液を脂質エキストルーダに通過させることもできる。代わりに、Ｗａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．４０（１７）：ｅ１３０，２０１２からのプロトコルに従ってこれらをエレクトロポレートし得る。１時間後、ショ糖勾配を用いて、ＰＭＰを精製してから、使用前に、実施例２に記載の通り超遠心分離により洗浄して、非結合核酸を除去する。
【０４６３】
実施例３に記載の方法を用いて、サイズ、ゼータ電位及び粒子計数を測定し、実施例４に記載のようにそれらの安定性を試験する。Ｎｉｋｒａｖｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１５（８）：１５３７−１５４２，２００７に記載のプロトコルに従う電気泳動ゲルシフトアッセイを用いて、ＰＭＰ中のＰＮＡを定量する。手短には、ＰＮＡに対するアンチセンスＤＮＡを、デタージェントで処理したＰＮＡ−ＰＭＰと混合して、ＰＮＡを放出する。ＰＮＡ−ＤＮＡ混合物をゲル上に泳動させ、ｓｓＤＮＡ色素で視覚化する。次に、蛍光イメージングにより二重螺旋を定量する。ロード及び非ロードＰＭＰを比較して、ロード効率を決定する。
【０４６４】
ｃ）昆虫の適応度を低減させるためのＰＮＡロードグレープフルーツＰＭＰによるスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）の処理
上で同定されたＵＳＰ  ＰＮＡをロードしたＰＭＰ及びスクランブル化ＰＮＡ対照を、前述した方法に従ってＰＭＰにロードする。スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）は好適な供給業者から取得し、供給業者の指示に従って維持する。Ｙａｎｇ  ａｎｄ  Ｈａｎ，Ｊ．Ｉｎｔｅｇ．Ａｇ．１３（１）：１１５−１２３，２０１４から改変した給餌プロトコルに従って、ＵＳＰに対するＰＮＡ及び対照ＰＮＡを幼虫に給餌する。効果を決定するために、生存率及び蛹化率を測定する。
【０４６５】
実施例１２：小分子ロード植物メッセンジャーパックによる細菌の処理
この実施例は、細菌、例えばシュードモナス・シリンガエ  ｐｖトマト（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ  ｔｏｍａｔｏ）の適応度を低減させる目的で、小分子、本実施形態では、ストレプトマイシンをＰＭＰにロードする方法を実証する。Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）は、多くの重要な野菜病害の主要接種源として作用する種子伝染性植物病原菌のクラスを代表するものである。これらの細菌性病害は、それぞれの宿主に対して経済的に重大であり、ほとんどの場合、感染した種子及び苗が、温室及び畑において伝染病の主要接種源の役割を果たす。この実施例は、さらに、トマト（トマト（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）種子に対するストレプトマイシンロードＰＭＰを含むコーティングの適用が、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）の適応度を低減させることも実証する。また、小分子ロードＰＭＰが、多様な処理及び環境条件にわたって安定しており、且つその活性を保持することも実証する。この実施例では、ストレプトマイシンをモデル小分子として使用し、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）をモデル病原菌として使用する。
【０４６６】
治療用量：
小分子をロードしたＰＭＰを、０、２．５、１０、５０又は２００ｍｇ／ｍｌの有効なストレプトマイシン硫酸塩用量の当量を送達する濃度まで水に配合。
【０４６７】
ａ）小分子によるグレープフルーツＰＭＰのローディング
前述の通り生成したＰＭＰを、可溶化ストレプトマイシンを含むＰＢＳ溶液に導入する。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．Ｓｅｐ；１８（９）：１６０６−１４，２０１０に記載のプロトコルに従って、溶液を２２℃で１時間放置する。代わりに、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍ．，４：１８６７，２０１３からのプロトコルに従って、溶液を超音波処理して、ポレーション及び拡散をエキソソーム中に誘導する。代わりに、Ｈａｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．，２０７：１８−３０，２０１５からのプロトコルに従って、溶液を脂質エキストルーダに通過させることもできる。代わりに、Ｗａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，４０（１７）：ｅ１３０，２０１２からのプロトコルに従ってこれらをエレクトロポレートし得る。１時間後、ショ糖勾配を用いて、ロードＰＭＰを精製してから、実施例２に記載の通り超遠心分離により洗浄して、使用前に非結合小分子を除去する。実施例３に記載の方法を用いて、サイズ及びゼータ電位について、ストレプトマイシンロードＰＭＰを特性決定する。少量のＰＭＰは、ストレプトマイシン含量であり、標準曲線を用いた１９５ｎｍで、ＵＶ−Ｖｉｓを用いて評価する。手短には、目的とする様々な濃度のストレプトマイシンのストック溶液を作製し、１００マイクロリットルの溶液を平底の透明９６ウェルプレート内に導入する。ＵＶ−Ｖプレートリーダを用いて、１９５ｎｍでの吸光度を測定する。また、サンプルをプレートに載せ、回帰を用いて、その濃度が標準に一致し得るかを決定する。不十分な高さの濃度の場合、Ｋｕｒｏｓａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，３４３：３７９−３８５，１９８５からのプロトコルを用いて、ＨＰＬＣによりストレプトマイシン含量を測定する。ストレプトマイシンロードＰＭＰ安定性は、実施例４に記載のように試験する。
【０４６８】
ｂ）細菌の適応度を低減させるためのストレプトマイシンロードグレープフルーツＰＭＰによるシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）の処理
Ｐ．シリンガエ  ｐｖ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ）は、ＡＴＣＣから取得し、実施例６に記載のように、製造者の指示に従って増殖させる。有効濃度のストレプトマイシン、ＰＭＰ及びストレプトマイシンロードＰＭＰを、Ｈｏｅｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．２４（１０）：１２３８−１２４９，２０１７から改変したプロトコルに従って、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）の増殖を阻止する能力について試験する。手短には、静止期のＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）培養物を遠心分離によりＯＤ６００＝４まで濃縮させてから、培地に再懸濁させる。１．５ｍＬの濃縮Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）培養物を４．５ｍＬの寒天と混合し、２５ｍＬの寒天プレートに均一に塗布する。凝固後、３ｕＬの０（陰性対照）、２．５、１０、５０、１００又は２００ｍｇ／ｍｌの有効用量のストレプトマイシンロードＰＭＰを上層にスポッティングし、乾燥させる。プレートを一晩インキュベートし、写真撮影した後、スキャンする。斑点領域の周りの溶解ゾーン（細菌が存在しない領域）の直径を測定する。対照（ＰＢＳ）、ストレプトマイシン、ＰＭＰ及びストレプトマイシンロードＰＭＰで処理した溶解ゾーンを比較して、殺菌効果を決定する。凝固後、処理物の有効用量（マイクロリットル）を上層にスポッティングし、乾燥させる。プレートを一晩インキュベートし、写真撮影した後、スキャンする。溶解ゾーン（細菌が存在しない領域）のサイズを測定して、有効性を決定する。
【０４６９】
ｃ）細菌の適応度を低減させるためのストレプトマイシンロードグレープフルーツＰＭＰによるトマト種子の処理
１群当たり２００個のマイクロ−トム（Ｍｉｃｒｏ−Ｔｏｍ）トマト種子（ＵＳＤＡ）をストレプトマイシン単独の懸濁液又は０、２．５、１０、５０、１００若しくは２００ｍｇ／ｍｌの有効用量でＰＭＰにロードしたストレプトマイシンの懸濁液に室温で２時間浸漬し、浸漬後すぐに播いた。１、２及び５日のインキュベーション後、約１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌを含有するＰ．シリンガエ  ｐｖ．トマト（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ）懸濁液にサンプルを真空下で３０分間浸漬することにより、種子を感染させる。真空を急激に放出して、種子空洞に病原体が進入しやすくなるようにする。Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）バイオマスに対する、ストレプトマイシン又は対照処理単独と比較したストレプトマイシンロードＰＭＰ種子処理の相対効果を、ｑＰＣＲにより、且つ実施例６ｄに記載の通りに決定した。トマト種子の発芽に対するストレプトマイシンロードＰＭＰ種子処理の効果は、ストレプトマイシン単独又は非処理対照と比較して、発芽時間及び苗生育速度を３〜４週間にわたって記録することにより評価した。
【０４７０】
実施例１３：タンパク質／ペプチドロード植物メッセンジャーパックによる線虫の処理
この実施例は、寄生線虫の適応度を低減させる目的で、ペプチド構築物をＰＭＰにロードすることを実証する。この実施例は、ＧＦＰをロードしたＰＭＰが、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）の消化管に取り込まれること及びＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂニューロペプチドをロードしたＰＭＰが、トマト植物のサツマイモネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）線虫の侵入を低減することを実証する。これは、ペプチドロードＰＭＰが、多様な処理及び環境条件にわたって安定しており、且つその活性を保持することも実証する。この実施例では、ＧＦＰ及び殺線虫ペプチドＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂをモデルペプチドとして使用し、サツマイモネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）及びＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）をモデル線虫として使用する。
【０４７１】
植物寄生線虫（ＰＰＮ）は、世界中の食物安全性を深刻に脅かしている。通常、ＰＰＮ管理に対する総合型アプローチは、カルバミン酸塩、有機リン酸塩及び燻蒸剤殺線虫剤に大きく依存してきたが、これらは、現在、環境の健全性及び安全性の懸念から回収されている。この段階的な回収により、経済的に重大な寄生動物を管理する能力は著しく不足したままとなり、新規の頑健な防除法の必要性が浮き彫りになる。
【０４７２】
治療用量：
ペプチドをロードしたＰＭＰを、滅菌水中０（対照）、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、５０μＭ及び１００μＭの有効ペプチドの当量を送達する濃度まで水に配合。ＧＦＰをロードしたＰＭＰを、ＰＭＰにロードされた０（非ロードＰＭＰ対照）、１０、１００、１０００μｇ／ｍｌのＧＦＰタンパク質を送達する濃度まで水に配合。
【０４７３】
実験プロトコル：
ａ）タンパク質又はペプチドによるグレープフルーツＰＭＰのローディング
ＰＢＳ中のタンパク質又はペプチドを含む溶液にＰＭＰを導入する。タンパク質又はペプチドが不溶性であれば、それが可溶性になるまでｐＨを調節する。タンパク質又はペプチドが、依然として不溶性であれば、不溶性タンパク質又はペプチドを使用する。次に、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍ．，４：１８６７，２０１３からのプロトコルに従って、溶液を超音波処理して、エキソソーム中にポレーション及び拡散を誘導する。代わりに、Ｈａｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．，２０７：１８−３０，２０１５からのプロトコルに従って、溶液を脂質エキストルーダに通過させることもできる。代わりに、Ｗａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．４０（１７）：ｅ１３０，２０１２からのプロトコルに従ってこれらをエレクトロポレートし得る。１時間後、ショ糖勾配を用いて、ＰＭＰを精製してから、非結合タンパク質を除去するために、使用前に実施例１に記載のように超遠心分離により洗浄する。ＰＭＰ由来リポソームを実施例３に記載のように特定決定し、実施例４に記載のようにそれらの安定性を試験する。タンパク質又はペプチドのローディングを測定するために、ロード及び非ロードＰＭＰの小さいサンプルについてＰｉｅｒｃｅ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｓｓａｙを使用する。
【０４７４】
ｂ）Ｍｉ−ＮＬＰ−１５ｂニューロペプチドロードグレープフルーツＰＭＰによるサツマイモネコブセンチュウ（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）卵の処理
実施例１〜２に従って、グレープフルーツからＰＭＰを単離する。Ｗａｒｎｏｃｋ，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，１３（２）：ｅ１００６２３７，２０１７で同定された殺線虫合成ニューロペプチドＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂ（配列：ＳＦＤＳＦＴＧＰＧＦＴＧＬＤ）を商業的供給業者により合成させる。次に、前述した方法に従ってペプチドをＰＭＰにロードする。また、スクランブル化ペプチドも対照としてロードする。サツマイモネコブセンチュウ（Ｍ．ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）をトマト植物内に維持し、実施例８に記載のように卵及び幼体を採取した。
【０４７５】
メロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の卵に対するＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂニューロペプチドロードグレープフルーツＰＭＰ溶液の殺線虫活性を評価するために、インビトロ孵化試験を実施する。感染した根からメロイドギネ属（Ｍｅｌｉｏｄｏｇｙｎｅ）線虫の卵塊を取得する。平均３００〜３５０個の卵を含む複数の単一卵塊をシラキュース皿内に配置し、ネイキッドＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂ、スクランブル化ペプチドの０（対照）、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、５０μＭ若しくは１００μＭの濃度で２ｍｌのＰＭＰ溶液、又は有効用量のＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂロードＰＭＰ、スクランブル化ペプチドロードＰＭＰ、又は非ロードＰＭＰで処理した後、様々な曝露時間にわたって２８±１℃で維持する。卵から出てきた幼体の数を２４、４８及び７２ｈ後に計数する。卵孵化への影響は、滅菌水対照から出てきた幼体のパーセンテージをＰＭＰ処理からの幼体のパーセンテージと比較することにより決定する。
【０４７６】
ｃ）インプランタでのＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂニューロペプチドロードグレープフルーツＰＭＰによるサツマイモネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）幼体の処理
サツマイモネコブセンチュウ（Ｍ．ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）をトマト植物内に維持し、実施例８に記載のように卵及び幼体を採取する。Ｗａｒｎｏｃｋ，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，１３（２）：ｅ１００６２３７，２０１７により示されるように、サツマイモネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）感染を測定して、ニューロペプチドロードＰＭＰが、線虫感染を低減させる能力を評価する。手短には、トマト種子を０．５％ムラシゲスクーグプレート上に発芽させ、２日齢のトマト苗を、０（対照）、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、５０μＭ及び１００μＭのネイキッドＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂ、スクランブル化ペプチド、又は有効用量のＭｉ−ＮＬＰ−１５ｂロードＰＭＰ、ＰＭＰにロードされたスクランブル化ペプチド、又は非ロードＰＭＰで噴霧処理するか若しくはそれらに浸漬した後、感染前の２ｈ、６ｈ、１ｄ及び２ｄ放置して乾燥させる。６ウェルプレート内で５００匹の前処理サツマイモネコブセンチュウ（Ｍ．ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）Ｊ２を寒天スラリー及び単回処理トマト苗と混合することにより、侵入アッセイを実施する。１６ｈ明期及び８ｈ暗期の周期で２４ｈアッセイを放置する。酸性フクシンを用いて、苗を染色し、根内部の線虫の数を計数し、ニューロペプチドロードＰＭＰ処理を対照と比較する。感染アッセイでは、１条件につき少なくとも５つの苗を使用する。
【０４７７】
ｄ）線虫に対するモデル線虫の送達
実施例１に従って、グレープフルーツからＰＭＰを単離する。緑色蛍光タンパク質は、商業的に合成されており、これをＰＢＳに溶解させる。次に、前述の方法に従って、これをＰＭＰにロードし、ウエスタンブロット又は蛍光によりＰＭＰのＧＦＰ封入を測定した。Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）野生型Ｎ２ブリストル（Ｂｒｉｓｔｏｌ）株（Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｃｅｎｔｅｒ）は、線虫増殖培地（ＮＧＭ）寒天プレート（３ｇ／ｌ  ＮａＣｌ、１７ｇ／ｌの寒天、２．５ｇ／ｌのペプトン、５ｍｇ／ｌのコレステロール、２５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ６．０）、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＳＯ４）上の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（菌株ＯＰ５０）菌叢上に、２０℃で、Ｌ１からＬ４期まで維持する。
【０４７８】
１日齢Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）を新しいプレートに移し、Ｃｏｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，１０９：２６．３．１−３０  ２０１５に記載の給餌プロトコルに従って、０（非ロードＰＭＰ対照）、１０、１００、１０００ｕｇ／ｍｌのＧＦＰロードＰＭＰを給餌する。次に、これらを、ＰＭＰ又は滅菌水対照との比較で、消化管に沿う緑色蛍光について蛍光顕微鏡下で検査する。
【０４７９】
実施例１４：除草剤ロード植物メッセンジャーパックによる植物の処理
この実施例は、植物の適応度に影響を与える目的での、ＰＭＰ中の除草剤グルホシネートのローディング及び送達を実証する。この実施例は、さらに、小分子ロードＰＭＰが、多様な処理及び環境条件にわたって安定しており、且つその活性を保持することも実証する。この実施例では、グルホシネートをモデル小分子除草剤として使用し、オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａ）をモデル雑草として使用する。
【０４８０】
オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａ）（Ｌ．）（オヒシバ）は、世界で最も有害な雑草の１つで、非常に競合的であると共に、全世界に分布する種である。オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａ）は多産で、広範な土壌及び気温にわたって見いだされ、綿、トウモロコシ、コメ、サトウキビ並びに多種の果樹及び野菜園を含む極めて多様な作物に寄生する。除草剤過剰使用の毒性副作用から環境を保護しながら、雑草による大規模な作物収量減少を防ぐために有効且つ安全な除草剤が必要である。
【０４８１】
治療用量：
小分子グルホシネートをロードしたＰＭＰを、０、０．２５、０．５、１、３又は６ｍｇ／ｍｌのグルホシネートの有効用量の当量を送達する濃度まで水に配合。
【０４８２】
実験プロトコル：
ａ）小分子除草剤グルホシネートによるグレープフルーツＰＭＰのローディング
実施例１〜２に従って、ＰＭＰをグレープフルーツから生成する。固体又は可溶化グルホシネート（ＣＡＳ  ７７１８２−８２−２，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含むＰＢＳ溶液中に導入する。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  Ｓｅｐ；１８（９）：１６０６−１４に記載のプロトコルに従って、溶液を２２℃で１時間放置する。
【０４８３】
代わりに、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍ．，４：１８６７，２０１３からのプロトコルに従って、溶液を超音波処理して、エキソソーム中にポレーション及び拡散を誘導する。代わりに、Ｈａｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．，２０７：１８−３０，２０１５からのプロトコルに従って、溶液を脂質エキストルーダに通過させることもできる。代わりに、Ｗａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．４０（１７）：ｅ１３０，２０１２からのプロトコルに従ってこれらをエレクトロポレートし得る。１時間後、ショ糖勾配を用いて、ロードＰＭＰを精製してから、使用前に実施例２に記載の通り超遠心分離により洗浄して、非結合小分子を除去する。実施例３に記載の方法を用いて、サイズ及びゼータ電位について、グルホシネートロードＰＭＰを特性決定する。
【０４８４】
グルホシネート封入を定量するために、Ｂｌｉｇｈ−Ｄａｙｅｒ法を用いて、グルホシネートロードＰＭＰを分解し、グルホシネートを上相に溶解させる。Ｃｈａｎｇａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，５２（４）：７８５−７９２，２００５に記載の方法に従い、ダイオードアレイ検出付きの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ）を用いてグルホシネートを決定する。手短には、非吸収グルホシネートのプレカラム誘導体化のために、クロロギ酸９−フルオレニルメチル（ＦＭＯＣ−Ｃｌ）を使用する。ｐＨ９の２５ｍＭホウ酸塩バッファーを用い１２分のＨＰＬＣ−ＤＡＤによりサンプルを分離した後、２６０ｎｍのＵＶ検出器により決定する。
【０４８５】
ｂ）グルホシネートロードＰＭＰによるオヒシバの処理
グルホシネート処理の除草剤効果をオヒシバ植物（オヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａ））において測定する。０．２％硝酸カリウム（ＫＮＯ３）を含有する水−固化０．６％寒天上でオヒシバ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａ）種子を発芽させる（Ｉｓｍａｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｗｅｅｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２（４）：１７７−１８５，２００２）。３〜５葉期で、０（陰性対照）、０．２５、０．５、１、３若しくは６ｍｇ／ｍｌのグルホシネート又は０（非ロードＰＭＰ対照）、０．２５、０．５、１、３若しくは６ｍｇ／ｍｌのグルホシネートロードＰＭＰを、１群当たり３植物、１植物当たり１ｍｌの溶液で、全植物に噴霧することにより、苗を様々なグルホシネート処理に付す。処理から２２及び３５日後、グルホシネート活性を表現型（白化及び立ち枯れ病、壊死、枯死の兆候）により評価した。第３５日に、地上部の新芽を採取し、乾燥重量測定のために、３日間オーブン（６５℃）で乾燥させ、グルホシネートロードＰＭＰ処理を、ＰＭＰ単独の対照及びグルホシネート対照と比較する。
【０４８６】
実施例１５：超遠心分離及びショ糖勾配精製を用いたブレンド果汁からのＰＭＰ生成
この実施例は、果実をブレンドし、残屑を除去するための連続的遠心分離、粗ＰＭＰをペレット化するための超遠心分離の組合せを用い、さらにはＰＭＰ精製のためのショ糖密度勾配を用いることにより、ＰＭＰを果実から生成することができることを実証する。この実施例では、グレープフルーツをモデル果実として使用した。
【０４８７】
ａ）超遠心分離及びショ糖密度勾配精製によるグレープフルーツＰＭＰの生成
ブレンダ、超遠心分離及びショ糖勾配精製を用いたグレープフルーツＰＭＰ生成のためのワークフローを図１Ａに示す。１個のレッドグレープフルーツを現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から購入し、アルベド、フラベド及びセグメント膜を除去して、砂じょうを収集し、これらを、最大速のブレンダを１０分使用してホモジナイズした。１００ｍＬの果汁をＰＢＳで５倍希釈した後、１０００×ｇで１０分、３０００×ｇで２０分及び１０，０００×ｇで４０分間の遠心分離に付すことにより、大きい残屑を除去した。２８ｍＬの清澄化した果汁を、Ｓ５０−ＳＴ（４×７ｍＬ）スイングバケットロータを用い、４℃において、１５０，０００×ｇのＳｏｒｖａｌｌ（商標）ＭＸ  １２０  Ｐｌｕｓ  Ｍｉｃｒｏ−Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅで９０分間超遠心分離して、粗ＰＭＰペレットを取得し、これをＰＢＳ  ｐＨ７．４に再懸濁させた。次に、ショ糖勾配をトリス−ＨＣＬ  ｐＨ７．２中に調製し、粗ＰＭＰをショ糖勾配（上から下に：８、１５、３０、４５及び６０％ショ糖）の上部に重ねてから、Ｓ５０−ＳＴ（４×７ｍＬ）スイングバケットロータを用い、４℃、１５０，０００×ｇで１２０分間の超遠心分離によりスピンダウンした。１ｍＬの画分を収集し、ＰＭＰを３０〜４５％界面で単離した。ＰＢＳを用いて、４℃、１５０，０００×ｇで１２０分間の超遠心分離により、画分を洗浄し、ペレットを最小量のＰＢＳに溶解させた。
【０４８８】
ＴＳ−４００カートリッジ（図１Ｂ）を用い、Ｓｐｅｃｔｒａｄｙｎｅ  ｎＣＳ１（商標）粒径分析装置を使用して、ＰＭＰ濃度（１×１０９ＰＭＰ／ｍＬ）及びメジアンＰＭＰ粒径（１２１．８ｎｍ）を決定した。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｕｌｔｒａを用いてゼータ電位を測定したところ、−１１．５＋／−０．３５７ｍＶであった。
【０４８９】
この実施例は、ショ糖勾配精製法と組み合わせた超遠心分離を用いて、グレープフルーツＰＭＰを単離することができることを実証する。しかし、この方法は、全てのＰＭＰ生成ステップ及び最終ＰＭＰ溶液中においてサンプルの著しいゲル化を誘導した。
【０４９０】
実施例１６：超遠心分離及びショ糖勾配精製を用いたメッシュ圧搾果汁からのＰＭＰ生成
この実施例は、より穏やかな搾汁法（メッシュストレイナ）を使用することによりＰＭＰ生成工程中に細胞壁及び細胞膜混入物を減少させることができることを実証する。この実施例では、グレープフルーツをモデル果実として使用した。
【０４９１】
ａ）穏やかな搾汁により、グレープフルーツＰＭＰからのＰＭＰ生成中のゲル化を低減する
実施例１５に記載の通りにレッドグレープフルーツから砂じょうを単離した。ＰＭＰ生成中のゲル化を低減するために、破壊的ブレンド法を用いるのではなく、茶漉しメッシュに砂じょうを軽く押し付けて、果汁を収集し、細胞壁及び細胞膜混入物を低減した。分画遠心分離後、果汁は、ブレンダの使用後よりも清澄になり、ショ糖密度勾配遠心分離後に３０〜４５％インターセクションで１つの純粋ＰＭＰ含有ショ糖バンドを観察した（図２）。全体としてＰＭＰ生成中及び後のゲル化は少なかった。
【０４９２】
本発明者らのデータは、穏やかな搾汁ステップを使用すると、ブレンドを含む方法に比べ、ＰＭＰ生成中の混入物に起因するゲル化が低減することを証明している。
【０４９３】
実施例１７：超遠心分離及びサイズ排除クロマトグラフィーを用いたＰＭＰ生成
この実施例は、超遠心分離（ＵＣ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）の使用による果実からのＰＭＰの生成を記載する。この実施例では、グレープフルーツをモデル果実として使用する。
【０４９４】
ａ）ＵＣ及びＳＥＣを用いたグレープフルーツＰＭＰの生成
実施例１５ａに記載の通りにレッドグレープフルーツから砂じょうを単離し、茶漉しメッシュに軽く押し付けて、２８ｍｌの果汁を収集した。ＵＣ及びＳＥＣを用いるグレープフルーツＰＭＰ生成のワークフローを図３Ａに描く。手短には、果汁を、１０００×ｇで１０分、３０００×ｇで２０分及び１０，０００×ｇで４０分の分画遠心分離に付すことにより、大きい残屑を除去した。２８ｍｌの清澄化した果汁を、Ｓ５０−ＳＴ（４×７ｍＬ）スイングバケットロータを用い、４℃において、１００，０００×ｇのＳｏｒｖａｌｌ（商標）ＭＸ  １２０  Ｐｌｕｓ  Ｍｉｃｒｏ−Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅで６０分間超遠心分離して、粗ＰＭＰペレットを取得し、これをＭＥＳバッファー（２０ｍＭ  ＭＥＳ、ＮａＣｌ、ｐＨ６）に再懸濁させた。ペレットをＭＥＳバッファーで２回洗浄した後、最終ペレットを１ｍｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４に再懸濁させた。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出した。製造者により提供される濃度及び粒径標準を用いて、ＰＭＰ粒径及び濃度を決定するために、ＮａｎｏＦＣＭを用いたナノ−フローサイトメトリーによりＳＥＣ溶出画分を分析した。さらに、どの画分にＰＭＰが溶出されているかを識別するために、ＳＥＣ画分について、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））及びタンパク質濃度（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を決定した（図３Ｂ〜３Ｄ）。ＰＭＰ含有画分として、ＳＥＣ画分２〜４を識別した。早期及び後期溶出画分の分析から、ＳＥＣ画分３が、主要ＰＭＰ含有画分であることがわかり、濃度は、２．８３×１０１１ＰＭＰ／ｍＬ（全粒子の５７．２％が、５０〜１２０ｎｍ粒度範囲にある）、メジアン径は、８３．６ｎｍ＋／−１４．２ｎｍ（ＳＤ）であった。後期溶出画分８〜１３は、ＮａｎｏＦＣＭにより示される通り、非常に低い濃度の粒子を有したが、これらの画分には、ＢＣＡ分析によりタンパク質混入物が検出された。
【０４９５】
本発明者らのデータは、ＴＦＦ及びＳＥＣを使用して、後期溶出混入物から精製ＰＭＰを単離することができること並びに本実施例で使用した分析方法の組合せにより、後期溶出混入物からＰＭＰ画分を識別することができることを証明している。
【０４９６】
実施例１８：混入物を低減するためにＥＤＴＡ／透析と組み合わせてタンジェンシャルフロー濾過及びサイズ排除クロマトグラフィーを用いたスケール化ＰＭＰ生成
この実施例は、ペクチン高分子の形成を低減するためのＥＤＴＡインキュベーション及び混入物を低減するための一晩の透析と組み合わせて、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いることによる、果実からのＰＭＰのスケール化生成（ｓｃａｌｅｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）を説明する。この実施例では、グレープフルーツをモデル果実として使用する。
【０４９７】
ａ）ＴＦＦ及びＳＥＣを用いたグレープフルーツＰＭＰの生成
レッドグレープフルーツを現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から購入し、果汁絞り機で１０００ｍｌの果汁を単離した。ＴＦＦ及びＳＥＣを用いたグレープフルーツＰＭＰの生成のためのワークフローを図４Ａに描く。果汁を、１０００×ｇで１０分、３０００×ｇで２０分及び１０，０００×ｇで４０分の分画遠心分離に付すことにより、大きい残屑を除去した。清澄化したグレープフルーツ果汁を、ＴＦＦ（孔径５ｎｍ）を用いて、２ｍＬ（１００×）まで１回濃縮及び洗浄した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、ＰＭＰ含有画分を溶出した。製造者により提供される濃度及び粒径標準を用いて、ＰＭＰ濃度を決定するために、ＮａｎｏＦＣＭを用いたナノ−フローサイトメトリーによりＳＥＣ溶出画分を分析した。さらに、どの画分にＰＭＰが溶出されているかを識別するために、ＳＥＣ画分について、タンパク質濃度（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を決定した。１リットルの果汁（１００倍濃縮）からのスケール化生成では、ＢＣＡアッセイにより後期ＳＥＣ画分中にやはり濃縮された多量の混入物を検出することができる（図４Ｂ、上方パネル）。全体の合計ＰＭＰ収量（図４Ｂ、下方パネル）は、単回グレープフルーツ単離と比較して、スケール化生成の方が低かったが、これは、ＰＭＰの喪失を示し得る。
【０４９８】
ｂ）ＥＤＴＡインキュベーション及び透析による混入物の低減
レッドグレープフルーツを現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から購入し、果汁絞り機を用いて８００ｍｌの果汁を単離した。果汁を、１０００×ｇで１０分、３０００×ｇで２０分及び１０，０００×ｇで４０分の分画遠心分離に付すことにより、大きい残屑を除去した後、１μｍ及び０．４５μｍフィルタで濾過して、大きい粒子を除去した。清澄化したグレープフルーツ果汁を、各々１２５ｍｌの果汁を含有する４つの異なる処理群に分割した。処理群１は、実施例１８ａに記載のように処理し、最終濃度６３×まで濃縮及び洗浄（ＰＢＳ）し、ＳＥＣに付した。ＴＦＦ前に鉄をキレート化すると共に、ペクチン高分子の形成を低減するために、４７５ｍｌの果汁を、最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．１５と一緒にＲＴで１．５ｈｒインキュベートした。その後、果汁を３つの処理群に分け、これらをＰＢＳ（カルシウム／マグネシウムを含まない）ｐＨ７．４、ＭＥＳ  ｐＨ６又はトリスｐＨ８．６洗浄液のいずれかと一緒に最終果汁濃度６３×までＴＦＦ濃縮に付した。次に、３００ｋＤａ膜を用い、同じ洗浄バッファー中で、サンプルを４℃で一晩透析した後、ＳＥＣに付した。２８０ｎｍの吸光度（図４Ｃ）及びＢＣＡタンパク質分析（これは糖及びペクチンの存在に対して感受性である）（図４Ｄ）により示されるように、ＴＦＦ単独の対照の後期溶出画分中の高い混入物ピークと比較して、ＥＤＴＡインキュベーション後に一晩透析すると、混入物を大幅に低減した。使用した透析バッファー（カルシウム／マグネシウムを含まないＰＢＳ  ｐＨ７．４、ＭＥＳ  ｐＨ６、トリスｐＨ８．６）に差はなかった。
【０４９９】
本発明者らのデータは、ＥＤＴＡインキュベーション及びそれに続く透析は、同時精製した混入物の量を低減し、スケール化ＰＭＰ生成を促進することを示している。
【０５００】
実施例１９：ＰＭＰ安定性
この実施例は、ＰＭＰが、様々な環境条件で安定していることを実証する。この実施例では、グレープフルーツ及びレモンＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用する。
【０５０１】
ａ）ＳＥＣと組み合わせてＴＦＦを用いるグレープフルーツＰＭＰの生成
レッドオーガニックグレープフルーツ（Ｆｌｏｒｉｄａ）は、現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から取得した。ＰＭＰ生成のワークフローを図５Ａに描く。果汁絞り機を用いて１リットルのグレープフルーツ果汁を収集した後、３０００×ｇで２０分、続いて１０，０００×ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６を最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７まで添加し、カルシウムをキレート化すると共に、ペクチン高分子の形成を防止するために、溶液を３０分間インキュベートした。続いて、果汁を１１μｍ、１μｍ及び０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁をタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）（孔径５ｎｍ）により４００ｍｌ（２．５×）まで濃縮及び洗浄（５００ｍｌのＰＢＳ）した後、３００ｋＤａ透析膜を用いてＰＢＳ  ｐＨ７．４中で一晩透析して（１回の培地交換を含む）、混入物を除去した。その後、透析した果汁をＴＦＦにより５０ｍｌの最終濃度（２０×）まで濃縮した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））及びタンパク質濃度アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により分析して、ＰＭＰ含有画分と、混入物を含有する後期画分を確認した（図５Ｂ及び５Ｃ）。ＳＥＣ画分４〜６は、精製ＰＭＰを含有しており（画分８〜１４は、混入物を含有した）、これらを一緒にプールして、０．８μｍ、０．４５μｍ及び０．２２μｍシリンジフィルタを用いた連続濾過により濾過滅菌した。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用い、ＮａｎｏＦＣＭにより、合わせた滅菌ＰＭＰ含有画分の最終ＰＭＰ濃度（１．３２×１０１１ＰＭＰ／ｍＬ）及びメジアンＰＭＰ粒径（７１．９ｎｍ＋／−１４．５ｎｍ）を決定した。
【０５０２】
ｂ）ＳＥＣと組み合わせてＴＦＦを用いるレモンＰＭＰの生成
レモンは、現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から取得した。果汁絞り機を用いて１リットルのレモン果汁を収集した後、３０００ｇで２０分、続いて１０，０００ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６を最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７まで添加し、カルシウムをキレート化すると共に、ペクチン高分子の形成を防止するために、溶液を３０分間インキュベートした。続いて、果汁をコーヒーフィルタ、１μｍ及び０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁をタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）（孔径５ｎｍ）により４００ｍｌ（２．５×濃縮）まで濃縮した後、３００ｋＤａ透析膜を用いてＰＢＳ  ｐＨ７．４中で一晩透析して、混入物を除去した。その後、透析した果汁をＴＦＦにより、５０ｍｌの最終濃度（２０×）までさらに濃縮した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））及びタンパク質濃度アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により分析して、ＰＭＰ含有画分及び混入物を含有する後期画分を確認した（図５Ｄ及び５Ｅ）。ＳＥＣ画分４〜６は、精製ＰＭＰを含有しており（画分８〜１４は、混入物を含有した）、これらを一緒にプールして、０．８μｍ、０．４５μｍ及び０．２２μｍシリンジフィルタを用いた連続濾過により濾過滅菌した。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用い、ＮａｎｏＦＣＭにより、合わせた滅菌ＰＭＰ含有画分の最終ＰＭＰ濃度（２．７×１０１１ＰＭＰ／ｍＬ）及びメジアンＰＭＰ粒径（７０．７ｎｍ＋／−１５．８ｎｍ）を決定した。
【０５０３】
ｃ）４℃でのグレープフルーツ及びレモンＰＭＰの安定性
実施例１９ａ及び１９ｂに記載のように、グレープフルーツ及びレモンＰＭＰを生成した。ＮａｎｏＦＣＭを用いた、サンプル中の総ＰＭＰの濃度（ＰＭＰ／ｍｌ）の経時的測定により、ＰＭＰの安定性を評価した。安定性試験は、４℃の暗所において４６日間実施した。ＰＭＰのアリコートを４℃で保存し、所定の日にＮａｎｏＦＣＭにより分析した。サンプル中の総ＰＭＰの濃度を分析した（図５Ｈ）。４６日の実験の開始及び終了点の間のレモン及びグレープフルーツＰＭＰの相対測定ＰＭＰ濃度は、それぞれ１１９％及び１０７％であった。本発明者らのデータは、ＰＭＰが４℃で少なくとも４６日間にわたって安定していることを示している。
【０５０４】
ｄ）レモンＰＭＰの凍結融解安定性
ＰＭＰの凍結融解安定性を決定するために、現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）で購入した有機レモンからレモンＰＭＰを生成した。果汁絞り機を用いて１リットルのレモン果汁を収集した後、３０００ｇで２０分、続いて１０，０００ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６を最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５まで添加し、カルシウムをキレート化すると共に、ペクチン高分子の形成を防止するために、３０分間インキュベートした。続いて、果汁を１１μｍ、１μｍ及び０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁をタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により４００ｍｌの最終濃度（２．５×濃縮）まで濃縮すると共に４００ｍｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄した後、３００ｋＤａ透析膜を用いてＰＢＳ  ｐＨ７．４中で一晩透析して、混入物を除去した。その後、透析した果汁をＴＦＦにより、６０ｍｌの最終濃度（約１７×）までさらに濃縮した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））及びタンパク質濃度アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により分析して、ＰＭＰ含有画分と、混入物を含有する後期画分を確認した。ＳＥＣ画分４〜６は、精製ＰＭＰを含有しており（画分８〜１４は、混入物を含有した）、これらを一緒にプールして、０．８μｍ、０．４５μｍ及び０．２２μｍシリンジフィルタを用いた連続濾過により濾過滅菌した。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用いて、ＮａｎｏＦＣＭにより、合わせた滅菌ＰＭＰ含有画分の最終ＰＭＰ濃度（６．９２×１０１２ＰＭＰ／ｍＬ）を決定した。
【０５０５】
レモンＰＭＰを−２０℃又は−８０℃で１週間凍結し、室温で解凍した後、ＮａｎｏＦＣＭにより濃度を測定した（図５Ｉ）。データは、レモンＰＭＰが、−２０℃又は−８０℃で１週間の保存後、１回の凍結融解サイクル後に安定していることを示している。
【０５０６】
実施例２０：植物細胞培地からのＰＭＰ生成
この実施例は、植物細胞培地からＰＭＰを生成することができることを実証する。この実施例では、ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）ブラック・メキシカン・スイート（Ｂｌａｃｋ  Ｍｅｘｉｃａｎ  ｓｗｅｅｔ）（ＢＭＳ）細胞株をモデル植物細胞株として使用する。
【０５０７】
ａ）ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）ＢＭＳ細胞株ＰＭＰの生成
ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）ブラック・メキシカン・スイート（Ｂｌａｃｋ  Ｍｅｘｉｃａｎ  ｓｗｅｅｔ）（ＢＭＳ）細胞株をＡＢＲＣから購入し、２４℃で、４．３ｇ／Ｌのムラシゲスクーグ塩基塩混合物（Ｓｉｇｍａ  Ｍ５５２４）、２％ショ糖（Ｓ０３８９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）、１×ＭＳビタミン溶液（Ｍ３９００，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）、２ｍｇ／Ｌの２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（Ｄ７２９９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）及び２５０ｕｇ／ＬのチアミンＨＣＬ（Ｖ−０１４，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）を含有するムラシゲスクーグ塩基培地ｐＨ５．８中で、攪拌（１１０ｒｐｍ）しながら増殖させ、７日おきに、２０％容積／容積で継代培養した。
【０５０８】
継代から３日後、１６０ｍｌのＢＭＳ細胞を収集し、５００×ｇで５分スピンダウンして、細胞を除去し、続いて１０，０００×ｇでスピンダウンして、大きい残屑を除去した。培地を０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去し、濾過した培地をＴＦＦ（孔径５ｎｍ）により４ｍＬ（４０×）まで、濃縮及び洗浄（１００ｍｌ  ＭＥＳバッファー、２０ｍＭ  ＭＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣＬ、ｐＨ６）した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））及びタンパク質濃度アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により分析して、ＰＭＰ含有画分と、混入物を含有する後期画分を確認した（図６Ａ〜６Ｃ）。ＳＥＣ画分４〜６は、精製ＰＭＰを含有しており（画分９〜１３は、混入物を含有した）、これらを一緒にプールした。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用い、ＮａｎｏＦＣＭにより、合わせたＰＭＰ含有画分の最終ＰＭＰ濃度（２．８４×１０１０ＰＭＰ／ｍｌ）及びメジアンＰＭＰ粒径（６３．２ｎｍ＋／−１２．３ｎｍ  ＳＤ）を決定した。
【０５０９】
これらのデータは、植物液体培地からＰＭＰを単離、精製及び濃縮することができることを示している。
【０５１０】
実施例２１：細菌及び真菌によるＰＭＰの取込み
この実施例は、細菌及び真菌と結合し、且つそれらに取り込まれるＰＭＰの能力を実証する。この実施例では、グレープフルーツ及びレモンＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用し、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）をモデル病原菌として使用し、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）をモデル病原真菌として使用する。
【０５１１】
ａ）ＤｙＬｉｇｈｔ  ８００  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒによるグレープフルーツ及びレモンの標識
グレープフルーツ及びレモンＰＭＰは、実施例１９ａ及び１９ｂに記載のように生成した。ＤｙＬｉｇｈｔ  ８００  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃４６４２１）共有結合膜色素（ＤｙＬ８００）でＰＭＰを標識した。手短には、ＤｙＬ８００をＤＭＳＯに最終濃度１０ｍｇ／ｍｌまで溶解させてから、２００μｌのＰＭＰを５μｌの色素と混合し、室温のシェーカ上で１ｈインキュベートした。４℃、１００，０００×ｇで１ｈｒの超遠心分離により、標識ＰＭＰを２〜３回洗浄した後、ペレットを１．５ｍｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水で再懸濁させた。潜在的な色素凝集体の存在を照査するために、ＰＭＰの代わりに２００μｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水を添加して、同じ手順に従い、色素単独の対照サンプルを調製した。最終ＤｙＬ８００標識ＰＭＰペレット及びＤｙＬ８００色素単独対照を最小量のＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させ、ＮａｎｏＦＣＭにより特性決定した。グレープフルーツＤｙＬ８００標識ＰＭＰの最終濃度は、４．４４×１０１２ＰＭＰ／ｍｌで、メジアンＤｙＬ８００−ＰＭＰ粒径は、７２．６ｎｍ＋／−１４．６ｎｍ（図７Ａ）であり、レモンＤｙＬ８００標識ＰＭＰの最終濃度は、５．１８×１０１２ＰＭＰ／ｍｌで、平均ＤｙＬ８００−ＰＭＰ粒径は、６８．５ｎｍ＋／−１４ｎｍ（図７Ｂ）であった。
【０５１２】
ｂ．酵母によるＤｙＬ８００標識グレープフルーツ及びレモンＰＭＰの取込み
サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）（ＡＴＣＣ、＃９７６３）を酵母エキスペプトンデキストロースブロス（ＹＰＤ）上で増殖させ、３０℃で維持した。酵母によりＰＭＰが取り込まれ得るか否かを決定するために、新鮮な５ｍｌの酵母培養物を３０℃で一晩増殖させ、細胞を１５００×ｇで５分ペレット化した後、１０ｍｌの水に再懸濁させた。酵母細胞を１０ｍｌの水で１回洗浄し、１０ｍｌの水に再懸濁させ、振盪しながら３０℃で２ｈインキュベートすることにより、細胞を栄養飢餓にした。次に、９５ｕｌの酵母細胞を５ｕｌの水（陰性対照）、ＤｙＬ８００色素単独対照（色素凝集体対照）又はＤｙＬ８００−ＰＭＰのいずれかと、１．５ｍｌチューブ内に最終濃度５×１０１０ＤｙＬ８００−ＰＭＰ／ｍｌまで混合した。サンプルを振盪しながら３０℃で２ｈインキュベートした。次に、処理した細胞を１ｍｌの洗浄バッファー（０．５％トリトンＸ−１００を補充した水）で洗浄し、５分インキュベートした後、１５００×ｇで５分スピンダウンした。上清を除去し、酵母細胞をさらに３回洗浄して、細胞により取り込まれていないＰＭＰを除去し、最後に水でデタージェントを除去した。酵母細胞を１００ｕｌの水に再懸濁させ、透明底の９６ウェルプレートに移し、８００ｎｍ励起での相対蛍光強度（Ａ．Ｕ．）をＯｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ＣＬｘ  ｓｃａｎｎｅｒ（Ｌｉ−Ｃｏｒ）で測定した。
【０５１３】
酵母によるＤｙＬ８００−ＰＭＰ取込みを評価するために、サンプルをＤｙＬ８００色素単独対照に対して正規化し、グレープフルーツ及びレモンＤｙＬ８００−ＰＭＰ相対蛍光強度を比較した。本発明者らのデータは、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）がＰＭＰを取り込むことを示し、レモン及びグレープフルーツＤｙＬ８００−ＰＭＰの間に取込みの差は見られなかった（図７Ｃ）。
【０５１４】
ｃ）細菌によるＤｙＬ８００標識グレープフルーツ及びレモンＰＭＰの取込み
細菌及び酵母株を供給者の指示の通りに維持した：大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（Ｅｃ、ＡＴＣＣ、＃２５９２２）は、３７℃においてトリプチケースソイ寒天培地／ブロス上で増殖させ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（Ｐａ，ＡＴＣＣ）は、３７℃において５０ｍｇ／ｍｌのリファンピシンを含むトリプチックソイ寒天培地／ブロス上で増殖させ、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．トマトｓｔｒ．ＤＣ３０００（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ  ｓｔｒ．ＤＣ３０００）細菌（Ｐｓ、ＡＴＣＣ、＃ＢＡＡ−８７１）は、３０℃において５０ｍｇ／ｍｌのリファンピシンを含むキングＢ培地寒天上で増殖させた。
【０５１５】
細菌によってＰＭＰが取り込まれ得るか否かを決定するために、新鮮な５ｍｌの細菌培養物を一晩で増殖させ、細胞を３０００×ｇで５分ペレット化した後、５ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に再懸濁させ、５ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２で１回洗浄してから、５ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に再懸濁させた。インキュベータを約２００ｒｐｍで振盪しながら３７℃（Ｅｃ）又は３０℃（Ｐａ、Ｐｓ）で２ｈインキュベートすることにより、細胞を栄養飢餓にした。ＯＣ６００を測定して、細胞密度を約１０×１０９ＣＦＵ／ｍｌに調節した。次に、９５ｕｌの細菌細胞を５ｕｌの水（陰性対照）、ＤｙＬ８００色素単独対照（色素凝集体対照）又はＤｙＬ８００−ＰＭＰのいずれかと、１．５ｍｌチューブ内に最終濃度５×１０１０ＤｙＬ８００−ＰＭＰ／ｍｌにおいて混合した。サンプルを振盪しながら３０℃で２ｈインキュベートした。次に、処理した細胞を１ｍｌの洗浄バッファー（０．５％トリトンＸ−１００を含む１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）で洗浄し、５分インキュベートした後、３０００×ｇで５分スピンダウンした。上清を除去し、酵母細胞をさらに３回洗浄して、細胞により取り込まれていないＰＭＰを除去し、１ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２でもう１回デタージェントを除去した。細菌細胞を１００ｕｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に再懸濁させ、透明底の９６ウェルプレートに移し、８００ｎｍ励起での相対蛍光強度（Ａ．Ｕ．）をＯｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ＣＬｘ  ｓｃａｎｎｅｒ（Ｌｉ−Ｃｏｒ）で測定した。
【０５１６】
細菌によるＤｙＬ８００−ＰＭＰ取込みを評価するために、サンプルをＤｙＬ８００色素単独対照に対して正規化し、グレープフルーツ及びレモンＤｙＬ８００−ＰＭＰ相対蛍光強度を比較した。本発明者らのデータは、試験した全ての細菌種がＰＭＰを取り込むことを示す（図７Ｃ）。一般に、レモンＰＭＰが優先的に取り込まれた（グレープフルーツＰＭＰより高いシグナル強度）。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が、最も高いＤｙＬ８００−ＰＭＰ取込みを示した。
【０５１７】
実施例２２：昆虫細胞によるＰＭＰ取込み
この実施例は、昆虫細胞と結合し、それによって取り込まれるＰＭＰの能力を実証する。この実施例では、ｓｆ９ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（昆虫）細胞及びＳ２キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（昆虫）細胞株をモデル昆虫細胞として使用し、レモンＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用する。
【０５１８】
ａ）レモンＰＭＰの生成
現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）からレモンを取得した。果汁絞り機を用いてレモン果汁（３．３Ｌ）を収集した後、ＮａＯＨでｐＨをｐＨ４に調節し、０．５Ｕ／ｍｌのペクチナーゼ（Ｓｉｇｍａ，１７３８９）と一緒にインキュベートして、ペクチン混入物を除去した。攪拌しながら、果汁を室温で１時間インキュベートし、４℃で一晩保存した後、３０００ｇで２０分、続いて１０，０００ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、カルシウムをキレート化すると共に、ペクチン高分子の形成を防止するために、処理果汁を、最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５まで、５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６と一緒に室温で３０分インキュベートした。続いて、ＥＤＴＡ処理果汁を１１μｍ、１μｍ及び０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁を洗浄し（ＴＦＦ工程中、３００ｍｌのＰＢＳ）、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により総体積１３５０ｍｌまで２×濃縮した後、３００ｋＤａ透析膜を用いて一晩透析した。続いて、透析した果汁をさらに洗浄し（ＴＦＦ工程中、５００ｍｌのＰＭＳ）、ＴＦＦにより、１６０ｍｌの最終濃度（約２０×）まで濃縮した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））を分析して、混入物を含有する後期溶出画分からのＰＭＰ含有画分を決定する。精製ＰＭＰを含有するＳＥＣ画分４〜７を一緒にプールして、０．８５μｍ、０．４μｍ及び０．２２μｍシリンジフィルタを用いた連続濾過により濾過滅菌し、４０，０００×ｇで１．５ｈｒにわたりＰＭＰをペレット化することによりさらに濃縮し、最後にペレットをＵｌｔｒａｐｕｒｅ水に再懸濁させる。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用いて、ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により、最終ＰＭＰ濃度（１．５３×１０１３ＰＭＰ／ｍｌ）及びメジアンＰＭＰ粒径（７２．４ｎｍ＋／−１９．８ｎｍ  ＳＤ）（図８Ａ）を決定し、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡアッセイ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によりＰＭＰタンパク質濃度（１２．３１７ｍｇ／ｍｌ）を決定した。
【０５１９】
ｂ）Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  ＮＨＳ  ＥｓｔｅｒによるレモンＰＭＰの標識
レモンＰＭＰをＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、共有結合膜色素（ＡＦ４８８）で標識した。手短には、ＡＦ４８８を最終濃度１０ｍｇ／ｍｌまでＤＭＳＯに溶解させ、２００μｌのＰＭＰ（１．５３×１０１３ＰＭＰ／ｍｌ）を５μｌの色素と混合し、室温において、シェーカ上で１ｈインキュベートした後、４℃で１ｈｒの１００，０００×ｇの超遠心分離により、標識ＰＭＰを２〜３回洗浄した後、ペレットを１．５ｍｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させた。潜在的な色素凝集体の存在を照査するために、ＰＭＰの代わりに２００ｕｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水を添加して、同じ手順に従い、色素単独の対照サンプルを調製した。最終ＡＦ４８８標識ＰＭＰペレット及びＡＦ４８８色素単独対照を最小量のＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させ、ＮａｎｏＦＣＭにより特性決定した。ＡＦ４８８標識ＰＭＰの最終濃度は、１．３３×１０１３ＰＭＰ／ｍｌで、メジアンＡＦ４８８−ＰＭＰ粒径は、７２．１ｎｍ＋／−１５．９ｎｍ  ＳＤであり、９９％の標識効率が達成された（図８Ｂ）。
【０５２０】
ｃ）レモンＡＦ４８８−ＰＭＰによる昆虫細胞の処理
実施例２２ａ及び２２ｂに記載のように、レモンＰＭＰを生成及び標識した。ｓｆ９ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞株をＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（＃Ｂ８２５０１）から取得し、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を補充したＴＮＭ−ＦＨ昆虫培地（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｔ１０３２）に維持した。Ｓ２キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）細胞株は、ＡＴＣＣ（＃ＣＲＬ−１９６３）から取得し、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を補充したシュナイダー昆虫培地（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ’ｓ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｄｉｕｍ）に維持した。両細胞株を２６℃で増殖させた。ＰＭＰ処理のために、２ｍｌの完全培地の入った２４ウェルプレート内の滅菌０．０１％ポリ−ｌ−リシン塗布ガラスカバースリップ上にＳ２／Ｓｆ９細胞を５０％密集において接種し、一晩かけてカバースリップに接着させた。次に、１０ｕｌのＡＦ４８８色素単独（色素凝集物対照）、レモンＰＭＰ（ＰＭＰ単独対照）又はＡＦ４８８−ＰＭＰを添加することにより細胞を処理して、サンプルを２回反復して調製し、これらを２６℃で２ｈインキュベートした。最終濃度は、１ウェル当たり１．３３×１０１１ＰＭＰ／ＡＦ４８８−ＰＭＰであった。次に、細胞を１ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中の４％ホルムアルデヒドで１５分固定した。続いて、細胞をＰＢＳ＋０．０２％トリトンＸ−１００で１５分間透過処理した後、核を１：１０００  ＤＡＰＩ溶液で３０分染色した。細胞をＰＢＳで１回洗浄してから、光退色を低減するために、カバースリップをＰｒｏＬｏｎｇ（商標）Ｇｏｌｄ  Ａｎｔｉｆａｄｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と一緒にスライドガラスに載せた。樹脂を一晩配置し、１００×対物レンズを用いるＯｌｙｍｐｕｓ落射蛍光顕微鏡で細胞を検査し、０．２５ｕｍインクリメントで１０ｕｍのＺ−ｓｔａｃｋイメージを撮影した。Ｓ２キイロショウジョウバエ（Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）及びＳ９Ｌ．フルギペルダ（Ｌ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の双方について類似の結果が得られた。ＡＦ４８８色素単独対照及びＰＭＰ単独対照には緑色蛍光輝点は観察されなかったが、ＡＦ４８８−ＰＭＰで処理した昆虫細胞のほぼ全てが、昆虫細胞内に緑色蛍光輝点を示した。エンドソームコンパートメント上に複数の明るく、より大きい輝点の徴候を有する細胞質に強いシグナルがあった。４８８チャネル内のＤＡＰＩの漏れ込み（ｂｌｅｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ）のために、核内のＡＦ４８８−ＰＭＰの存在を評価することは不可能であった。ｓｆ９細胞の場合、試験細胞の９４．４％（ｎ＝３８）が緑色蛍光輝点を示したが、これは、対照サンプルであるＡＦ４８８色素単独（ｎ＝６８）又はＰＭＰ単独（ｎ＝４２）対照には観察されなかった。
【０５２１】
本発明者らのデータは、ＰＭＰが、昆虫細胞膜と結合することができ、且つ昆虫細胞により効率的に取り込まれ得ることを示している。
【０５２２】
実施例２３：小分子によるＰＭＰのローディング
この実施例は、様々なＰＭＰ供給源及び封入方法を用いて、薬剤を送達する目的で、モデル小分子をＰＭＰにロードすることを実証する。この実施例では、ドキソルビシンをモデル小分子として使用し、レモン及びグレープフルーツＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用する。
【０５２３】
本発明者らは、ドキソルビシンをＰＭＰに効率的にロードすることができること及びロードＰＭＰが４℃で少なくとも８週間にわたって安定していることを証明する。
【０５２４】
ａ）ＳＥＣと組み合わせてＴＦＦを用いるグレープフルーツＰＭＰの生成
ホワイトグレープフルーツ（Ｆｌｏｒｉｄａ）は、現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から取得した。果汁絞り機を用いて１リットルのグレープフルーツ果汁を収集した後、３０００×ｇで２０分、続いて１０，０００×ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６を最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７まで添加し、カルシウムをキレート化すると共に、ペクチン高分子の形成を防止するために、３０分間インキュベートした。続いて、果汁をコーヒーフィルタ並びに１μｍ及び０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁をタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ、孔径５ｎｍ）により４００ｍｌまで濃縮した後、３００ｋＤａ透析膜を用いてＰＢＳ  ｐＨ７．４中で一晩透析して、混入物を除去した。その後、透析した果汁をＴＦＦにより、５０ｍｌの最終濃度（２０×）までさらに濃縮した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍ吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））により分析して、ＰＭＰ含有画分と、混入物を含有する後期画分を確認した（図９Ａ）。精製ＰＭＰを含有するＳＥＣ画分４〜６を一緒にプールして、１．５ｈｒの４０，００００×ｇでＰＭＰをペレット化し、Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水にペレットを再懸濁させることによりさらに濃縮した。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用いて、ＮａｎｏＦＣＭにより、最終ＰＭＰ濃度（６．３４×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）及びメジアンＰＭＰ粒径（６３．７ｎｍ＋／−１１．５ｎｍ（ＳＤ））を決定した（図９Ｂ及び９Ｃ）。
【０５２５】
ｂ）ＳＥＣと組み合わせてＴＦＦを用いるレモンＰＭＰの生成
レモンは、現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から取得した。果汁絞り機を用いて１リットルのレモン果汁を収集した後、３０００ｇで２０分、続いて１０，０００ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６を最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７まで添加し、カルシウムをキレート化し、ペクチン高分子の形成を防止するために、３０分間インキュベートした。続いて、果汁をコーヒーフィルタ、１ｕｍ及び０．４５ｕｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁をタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ、孔径５ｎｍ）により４００ｍｌまで濃縮した後、３００ｋＤａ透析膜を用いてＰＢＳ  ｐＨ７．４中で一晩透析して、混入物を除去した。その後、透析した果汁をＴＦＦにより、５０ｍｌの最終濃度（２０×）までさらに濃縮した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））により分析して、ＰＭＰ含有画分と、混入物を含有する後期画分を確認した（図９Ｄ）。精製ＰＭＰを含有するＳＥＣ画分４〜６を一緒にプールして、４０，００００×ｇでＰＭＰを１．５ｈｒペレット化し、Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水にペレットを再懸濁させることによりさらに濃縮した。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用いて、ＮａｎｏＦＣＭにより、最終ＰＭＰ濃度（７．４２×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）及びメジアンＰＭＰ粒径（６８ｎｍ＋／−１７．５ｎｍ（ＳＤ））を決定した（図９Ｅ及び９Ｆ）。
【０５２６】
ｃ）レモン及びグレープフルーツＰＭＰへのドキソルビシンのパッシブローディング
ドキソルビシン（ＤＯＸ）をロードするために、グレープフルーツ（実施例２３ａ）及びレモン（実施例２３ｂ）ＰＭＰを使用した。ドキソルビシン（ＤＯＸ，Ｓｉｇｍａ  ＰＨＲ１７８９）のストック溶液を、Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水（ＵｌｔｒａＰｕｒｅ（商標）ＤＮａｓｅ／ＲＮａｓｅ−Ｆｒｅｅ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  Ｗａｔｅｒ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，１０９７７０２３）中１０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、濾過滅菌（０．２２μｍ）した後、４℃で保存した。０．５ｍＬのＰＭＰを０．２５ｍＬのＤＯＸ溶液と混合した。混合物中の最終ＤＯＸ濃度は、３．３ｍｇ／ｍＬであった。グレープフルーツ（ＧＦ）ＰＭＰの初期粒子濃度は、９．８×１０１２ＰＭＰ／ｍＬであり、レモン（ＬＭ）ＰＭＰについて１．８×１０１３ＰＭＰ／ｍＬであった。暗所において、混合物を２５℃、１００ｒｐｍで４時間攪拌した。次に、混合物をＵｌｔｒａｐｕｒｅ水で３．３倍希釈し（混合物中のＤＯＸの最終濃度は１ｍｇ／ｍｌ）、２つの等量部分（パッシブローディングのための１．２５ｍＬと、アクティブローディングのための１．２５ｍＬ）に分割した（実施例２３ｄ）。両方のサンプルを暗所において、２５℃、１００ｒｐｍでさらに２３ｈインキュベートした。ステップは全て、滅菌条件下で実施した。
【０５２７】
ＤＯＸのパッシブローディングのために、非ロード又は結合の弱いＤＯＸを除去するためにサンプルを超遠心分離により精製した。混合物を６つの等量部分（各々２００ｕＬ）に分割し、滅菌水（１．３ｍＬ）を添加した。１．５ｍＬ超遠心機用チューブ内でサンプルをスピンダウン（４０，０００×ｇ、１．５ｈ、４℃）した。ＰＭＰ−ＤＯＸペレットを滅菌水に再懸濁させてから、２回スピンダウンした。サンプルを４℃で３日間維持した。使用前に、ＤＯＸロードＰＭＰを超遠心分離（４０，０００×ｇ、１．５ｈ、４℃）によりもう１回洗浄した。最終ペレットを滅菌ＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させた後、後の使用まで４℃で保存した。ＰＭＰ中のＤＯＸの濃度は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ分光光度計（Ｅｘ／Ｅｍ＝４８５／５５０ｎｍ）により決定し、粒子の総数の濃度は、ナノフローサイトメトリー（ＮａｎｏＦＣＭ）により決定した。
【０５２８】
ｄ）レモン及びグレープフルーツＰＭＰへのドキソルビシンのアクティブローディング
ドキソルビシン（ＤＯＸ）のローディングのために、グレープフルーツ（実施例２３ａ）及びレモン（実施例２３ｂ）ＰＭＰを使用した。ドキソルビシン（ＤＯＸ，Ｓｉｇｍａ  ＰＨＲ１７８９）のストック溶液を、Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，１０９７７０２３）中１０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、滅菌（０．２２ｕｍ）した後、４℃で保存した。０．５ｍＬのＰＭＰを０．２５ｍＬのＤＯＸ溶液と混合した。混合物中の最終ＤＯＸ濃度は、３．３ｍｇ／ｍＬであった。グレープフルーツ（ＧＦ）ＰＭＰの初期粒子濃度は、９．８×１０１２ＰＭＰ／ｍＬであり、レモン（ＬＭ）ＰＭＰについて１．８×１０１３ＰＭＰ／ｍＬであった。暗所において、混合物を２５℃、１００ｒｐｍで４時間攪拌した。次に、混合物をＵｌｔｒａｐｕｒｅ水で３．３倍希釈し（混合物中のＤＯＸの最終濃度は１ｍｇ／ｍｌであった）、２つの等量部分（パッシブローディング（実施例２３ｃ）のための１．２５ｍＬと、アクティブローディングのための１．２５ｍＬ）に分割した。両方のサンプルを暗所において、２５℃、１００ｒｐｍでさらに２３ｈインキュベートした。全てのステップを滅菌条件下で実施した。
【０５２９】
２５℃で１日のインキュベーション後、混合物を４℃で４日間維持した。次に、混合物を４２℃の超音波浴（Ｂｒａｎｓｏｎ  ２８００）で３０分超音波処理し、ボルテックスした後、もう１回２０分超音波処理した。次に、混合物を滅菌水で２倍に希釈し、Ａｖａｎｔｉ  Ｍｉｎｉ  Ｅｘｔｒｕｄｅｒ（Ａｖａｎｔｉ  Ｌｉｐｉｄｓ）を用いて押し出した。脂質二重層の数及び全体の粒径を低減するために、漸減方式：グレープフルーツ（ＧＦ）ＰＭＰの場合、８００ｎｍ、４００ｎｍ及び２００ｎｍ；及びレモン（ＬＭ）ＰＭＰの場合、８００ｎｍ、４００ｎｍで、ＤＯＸロードＰＭＰを押し出した。非ロード又は結合の弱いＤＯＸを除去するために、サンプルを超遠心分離アプローチにより洗浄した。具体的には、サンプル（１．５ｍＬ）を滅菌ＵｌｔｒａＰｕｒｅ水（計６．５ｍＬ）で希釈し、７ｍＬ超遠心機用チューブにおいて、４℃、４０，０００×ｇで１ｈ、２回スピンダウンした。最終ペレットを滅菌ＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させた後、後の使用まで４℃で保存した。
【０５３０】
ｅ）パッシブ及びアクティブローディングにより調製されたＤＯＸロードＰＭＰのロード能力の決定
ＰＭＰにおけるＤＯＸのロード能力を評価するために、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計を用いた蛍光強度測定（Ｅｘ／Ｅｍ＝４８５／５５０ｎｍ）により、ＤＯＸ濃度を評価した。０〜８３．３ｕｇ／ｍＬの遊離ＤＯＸの較正曲線を使用した。ＤＯＸロードＰＭＰ及びＤＯＸ複合体（π−πスタッキング）を解離するために、蛍光測定前に、サンプル及び標準を１％ＳＤＳと一緒に３７℃で３０分間インキュベートした。ロード能力（１０００粒子当たりのｐｇ  ＤＯＸ）は、ＤＯＸの濃度（ｐｇ／ｍＬ）をＰＭＰの総濃度（ＰＭＰ／ｍＬ）で割った商として計算した（図９Ｇ）。パッシブロードされたＰＭＰのロード能力は、１０００ＰＭＰについて０．５５ｐｇ  ＤＯＸ（ＧＦ  ＰＭＰ−ＤＯＸ）及び０．２５ｐｇ  ＤＯＸ（ＬＭ  ＰＭＰ−ＤＯＸ）であった。アクティブロードされたＰＭＰのロード能力は、１０００ＰＭＰにつき、０．２３ｐｇ  ＤＯＸ（ＧＦ  ＰＭＰ−ＤＯＸ）及び０．２７ｐｇ  ＤＯＸ（ＬＭ  ＰＭＰ−ＤＯＸ）であった。
【０５３１】
ｆ）ドキソルビシンロードグレープフルーツ及びレモンＰＭＰの安定性
ＤＯＸロードＰＭＰの安定性は、ＮａｎｏＦＣＭを用いて、サンプル中の総ＰＭＰの濃度（ＰＭＰ／ｍｌ）の経時的測定により評価した。安定性試験を４℃の暗所で８週間実施した。ＰＭＰ−ＤＯＸのアリコートを４℃で保存し、所定の日にＮａｎｏＦＣＭにより分析した。ＰＭＰ−ＤＯＸの粒径は、有意に変化しなかった。従って、パッシブロードＧＦ  ＰＭＰの場合、平均粒径の範囲は、２ヶ月にわたって７０〜８０ｎｍであった。サンプル中の総ＰＭＰの濃度を分析した（図９Ｈ）。パッシブロードＧＦ  ＰＭＰの濃度範囲は、４℃で８週間にわたり、２．０６×１０１１〜３．０６×１０１１ＰＭＰ／ｍｌであり、アクティブロードＧＦ  ＰＭＰについて５．５５×１０１１〜９．９７×１０１１ＰＭＰ／ｍｌであり、パッシブロードＬＭ  ＰＭＰについて８．５２×１０１１〜１．７６×１０１２ＰＭＰ／ｍｌであった。本発明者らのデータは、ＤＯＸロードＰＭＰが、４℃で８週間にわたって安定していることを示す。
【０５３２】
実施例２４：小分子ロードＰＭＰによる細菌及び真菌の処理
この実施例は、病原菌及び病原真菌の適応度を低減させる目的で小分子をロードし得るＰＭＰの能力を実証する。この実施例では、グレープフルーツＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）及び緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）をモデル病原菌として使用し、酵母Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）をモデル病原真菌として使用し、ドキソルビシンをモデル小分子として使用する。ドキソルビシンは、ストレプトマイセス・ペウセティウスｖａｒ．カエシウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓ）の培養物から単離した細胞傷害性アントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンは、インターカレーションによりＤＮＡと相互作用し、ＤＮＡ複製及びＲＮＡ転写の両方を阻害する。ドキソルビシンは、抗生物質活性を有することが明らかにされている（Ｗｅｓｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ，１９（１０）：１２５５−１２６４，２０１２）。
【０５３３】
ａ）ＳＥＣと組み合わせてＴＦＦを用いるグレープフルーツＰＭＰの生成
レッドオーガニックグレープフルーツは、現地のＷｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ  Ｍａｒｋｅｔ（登録商標）から取得した。ＰＭＰ生成のワークフローを概要を図１０Ａに記載する。果汁絞り機を用いて４リットルのグレープフルーツ果汁を収集し、ＮａＯＨでｐＨ４にｐＨ調節し、１Ｕ／ｍｌのペクチナーゼ（Ｓｉｇｍａ，１７３８９）と一緒にインキュベートして、ペクチン混入物を除去した後、３，０００ｇで２０分、続いて１０，０００ｇで４０分遠心分離することにより、大きい残屑を除去した。次に、カルシウムをキレート化し、ペクチン高分子の形成を防止するために、処理した果汁を５００ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．６（最終濃度５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．７まで）と一緒に３０分間インキュベートした。続いて、ＥＤＴＡ処理した果汁を１１μｍ、１μｍ及び０．４５μｍフィルタに通して大きい粒子を除去した。濾過した果汁を、３００ｋＤａ  ＴＦＦを用いるタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により洗浄及び濃縮した。果汁を５×濃縮した後、ＰＢＳを用いた６容量交換洗浄を実施し、最終濃度１９８ｍＬ（２０×）までさらに濾過した。次に、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＰＭＰ含有画分を溶出し、これを、２８０ｎｍでの吸光度（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標））及びタンパク質濃度（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ  ａｓｓａｙ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により分析して、ＰＭＰ含有画分と、混入物を含有する後期画分を確認した（図１０Ｂ及び１０Ｃ）。ＳＥＣ画分３〜７は、精製ＰＭＰを含有しており（画分９〜１２は、混入物を含有した）、これらを一緒にプールして、０．８μｍ、０．４５μｍ及び０．２２μｍシリンジフィルタを用いた連続濾過により濾過滅菌した後、ＰＭＰを４０，０００×ｇで１．５ｈｒにわたってペレット化し、４ｍｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ（商標）ＤＮａｓｅ／ＲＮａｓｅ−Ｆｒｅｅ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  Ｗａｔｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，１０９７７０２３）にペレットを再懸濁させることにより、さらに濃縮した。製造者によって提供される濃度及び粒径標準を用い、ＮａｎｏＦＣＭにより、最終ＰＭＰ濃度（７．５６×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）及び平均ＰＭＰ粒径（７０．３ｎｍ＋／−１２．４ｎｍ  ＳＤ）を決定した（図１０Ｄ及び１０Ｅ）。生成されたグレープフルーツＰＭＰは、ドキソルビシンをロードするために使用した。
【０５３４】
ｂ）グレープフルーツＰＭＰへのドキソルビシンのローディング
実施例２４ａで生成したグレープフルーツＰＭＰをドキソルビシン（ＤＯＸ）のローディングに使用した。ドキソルビシン（Ｓｉｇｍａ  ＰＨＲ１７８９）のストック溶液を、Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水中１０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、濾過滅菌（０．２２μｍ）した。滅菌グレープフルーツＰＭＰ（粒子濃度７．５６×１０１２ＰＭＰ／ｍｌで３ｍＬ）を１．２９ｍＬのＤＯＸ溶液と混合した。混合物中の最終ＤＯＸ濃度は、３ｍｇ／ｍＬであった。４０℃まで昇温させながら、混合物を超音波浴（Ｂｒａｎｓｏｎ  ２８００）で２０分超音波処理した後、超音波のない浴中でさらに１５分維持した。暗所において混合物を２４℃、１００ｒｐｍで４時間攪拌した。次に、混合物を、Ａｖａｎｔｉ  Ｍｉｎｉ  Ｅｘｔｒｕｄｅｒ（Ａｖａｎｔｉ  Ｌｉｐｉｄｓ）を用いて押し出した。脂質二重層の数及び全体の粒径を低減するために、漸減方式：８００ｎｍ、４００ｎｍ及び２００ｎｍで、ＤＯＸロードＰＭＰを押し出した。押し出したサンプルを、ＴＣフード内で、０．８μｍ及び０．４５μｍフィルタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，直径１３ｍｍ）に順次通過させることにより、濾過滅菌した。非ロード又は結合の弱いＤＯＸを除去するために、超遠心分離アプローチを用いて、サンプルを精製した。具体的には、１．５ｍＬ超遠心機用チューブにおいて、１００，０００×ｇ、４℃で１ｈスピンダウンした。上清をさらなる分析のために収集し、４℃で保存した。ペレットを滅菌水に再懸濁させ、同じ条件下で超遠心分離させた。このステップを４回繰り返した。最終ペレットを滅菌ＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させた後、次の使用まで４℃で保存した。
【０５３５】
次に、粒子の濃度及びＰＭＰのロード能力を決定した。ＮａｎｏＦＣＭを用いて、サンプル中のＰＭＰの総数（４．７６×１０１２ＰＭＰ／ｍｌ）及びメジアン粒径（７２．８ｎｍ＋／−２１ｎｍ  ＳＤ）を決定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計を用いた蛍光強度測定（Ｅｘ／Ｅｍ＝４８５／５５０ｎｍ）により、ＤＯＸ濃度を評価した。０〜５０ｕｇ／ｍＬの遊離ＤＯＸの較正曲線を滅菌水中で作製した。ＤＯＸロードＰＭＰ及びＤＯＸ複合体（π−πスタッキング）を解離するために、蛍光測定前に、サンプル及び標準を１％ＳＤＳと一緒に３７℃で４５分間インキュベートした。ロード能力（１０００粒子当たりのｐｇ  ＤＯＸ）は、ＤＯＸの濃度（ｐｇ／ｍｌ）をＰＭＰの総数（ＰＭＰ／ｍｌ）で割った商として計算した。ＰＭＰ−ＤＯＸロード能力は、１０００ＰＭＰにつき１．２ｐｇ  ＤＯＸであった。しかし、ロード効率（ＰＭＰの総数に対するＤＯＸロードＰＭＰの％）は、ＤＯＸ蛍光スペクトルをＮａｎｏＦＣＭで検出することができなかったため、評価できなかったことに留意すべきである。
【０５３６】
本発明者らの結果は、ＰＭＰが、小分子を効率的にロードすることができることを示している。
【０５３７】
ｃ）ＤｏｘロードグレープフルーツＰＭＰによる細菌及び酵母の処理
ＰＭＰが、細胞傷害性薬剤を送達することができることを立証するために、いくつかの微生物種を実施例２４ｂからのドキソルビシンロードグレープフルーツＰＭＰ（ＰＭＰ−ＤＯＸ）で処理した。
【０５３８】
供給者により指示される通りに、細菌及び酵母株を維持した：大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＡＴＣＣ、＃２５９２２）は、３７℃においてトリプチケースソイ寒天培地／ブロス上で増殖させ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＡＴＣＣ）は、３７℃において５０ｍｇ／ｍｌのリファンピシンを含むトリプチックソイ寒天培地／ブロス上で増殖させ、シュードモナス・シリンガエ  ｐｖ．トマトｓｔｒ．ＤＣ３０００（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ  ｓｔｒ．ＤＣ３０００）細菌（ＡＴＣＣ、＃ＢＡＡ−８７１）は、３０℃において５０ｍｇ／ｍｌのリファンピシンを含むキングＢ培地寒天上で増殖させ、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）（ＡＴＣＣ、＃９７６３）は、酵母エキスペプトンデキストロースブロス（ＹＰＤ）上で増殖させ、３０℃で維持した。処理前に新鮮な１日培養物を一晩増殖させ、使用前の培地でＯＤ（６００ｎｍ）を０．１ＯＤに調節し、細菌／酵母を処理用の９６ウェルプレートに移した（サンプルを２回反復して調製、１００μｌ／ウェル）。細菌／酵母を０（陰性対照）、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ及び１００μＭの有効ＤＯＸ濃度までのＵｌｔｒａｐｕｒｅ水中の５０μｌのＰＭＰ−ＤＯＸ溶液（１ウェル当たりの最終体積は、１５０μｌであった）で処理した。プレートをアルミニウムホイルで被覆し、３７℃（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））又は３０℃（Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ））でインキュベートし、２２０ｒｐｍで攪拌した。
【０５３９】
６００ｎｍでのキネティック吸光度測定をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計で実施して、ｔ＝０ｈ、ｔ＝２ｈ、ｔ＝３ｈ、ｔ＝４．５ｈ、ｔ＝１６ｈ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））又はｔ＝０．５ｈ、ｔ＝１．５ｈ、ｔ＝２．５ｈ、ｔ＝３．５ｈ、ｔ＝４ｈ、ｔ＝１６ｈ（Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））において培養物のＯＤをモニターした。ドキソルビシンは、高ＤＯＸ濃度で６００ｎｍ吸光度に一部が漏れ込む（ｂｌｅｅｄ  ｉｎｔｏ）広域蛍光スペクトルを有することから、処理用量毎の全てのＯＤ値をまず、その用量の最初の時点（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）についてｔ＝０、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）についてｔ＝０．５）のＯＤに対して正規化した。
【０５４０】
各処理群内で、様々な細菌及び酵母株に対するＰＭＰ−ＤＯＸ処理の細胞傷害作用を比較するために、非処理対照（１００％に設定）と比較して、相対ＯＤを決定した。試験した全ての微生物種は、変動する程度の、ＰＭＰ−ＤＯＸにより誘導される細胞傷害性を示し（図１０Ｆ〜１０Ｉ）、これは、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を除き、用量依存性であった。Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）は、ＰＭＰ−ＤＯＸに対して最も感受性が高く、処理から２．５ｈｒ後に細胞傷害性応答を示し、処理から１６時間後には、試験した最も低い有効用量（５ｕＭ）でＩＣ５０に達し、これは、このシリーズで試験した他の全ての微生物に対し１０倍超感受性が高い。Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）は、インキュベーションから１６時間後に５０μＭ及び１００μＭでＩＣ５０に達した。処理から３時間後、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、１００μＭについてのみＩＣ５０に達した。緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は、ＰＭＰ−ＤＯＸに対して最も感受性が低く、５０及び１００μＭの有効ＤＯＸ用量で３７％の最大増殖低減を示した。本発明者らは、遊離ドキソルビシンも試験し、同じ用量を用いて、細胞傷害性は、ＰＭＰ−ＤＯＸ送達よりも早期に誘導されることを見出した。これは、小さいドキソルビシン分子が、脂質膜ＰＭＰと比較して、単細胞生物中に容易に拡散することを示しており、脂質膜ＰＭＰは、そのカーゴを放出するために、微生物の細胞壁を通過して、原形質膜と直接結合するか、又は細胞内取込み後にエンドソーム膜を介して、標的細胞膜と融合する必要がある。
【０５４１】
本発明者らのデータは、小分子をロードしたＰＭＰが、多様な細菌及び酵母の適応度にマイナスの影響を与え得ることを示している。
【０５４２】
実施例２５：タンパク質ロードＰＭＰによる微生物の処理
この実施例は、ＰＭＰにタンパク質を外因的にロードすることができ、ＰＭＰが、そのカーゴを分解から保護すると共に、ＰＭＰが、その機能性カーゴを生物に送達することができることを実証する。この実施例では、グレープフルーツＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用し、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）細菌をモデル生物として使用し、ルシフェラーゼタンパク質をモデルタンパク質として使用する。
【０５４３】
タンパク質及びペプチドベースの薬剤は、抵抗性であるか、又は処理しにくい多様な病原菌及び病原真菌の適応度に影響を与える大きい可能性を有するが、そうした薬剤の不安定性及び製剤化の課題のために、それらの普及は成功していない。
【０５４４】
ａ）グレープフルーツＰＭＰへのルシフェラーゼタンパク質のローディング
グレープフルーツＰＭＰは、実施例２４ａに記載したように生成した。ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）タンパク質は、ＬＳＢｉｏ（ｃａｔ．ｎｏ．ＬＳ−Ｇ５５３３−１５０）から購入し、最終濃度３００μｇ／ｍＬまでＰＢＳ、ｐＨ７．４に溶解させた。濾過滅菌したＰＭＰに、Ｒａｃｈａｅｌ  Ｗ．Ｓｉｒｉａｎｎｉ  ａｎｄ  Ｂａｈａｒｅｈ  Ｂｅｈｋａｍ（ｅｄｓ．），Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１８３１から改変したプロトコルを用いて、エレクトロポレーションによりルシフェラーゼタンパク質をロードした。ＰＭＰ単独（ＰＭＰ対照）、ルシフェラーゼタンパク質単独（タンパク質対照）又はＰＭＰ＋ルシフェラーゼタンパク質（タンパク質ロードＰＭＰ）を４．８×エレクトロポレーションバッファー（ＵｌｔｒａＰｕｒｅ水中１００％Ｏｐｔｉｐｒｅｐ（Ｓｉｇｍａ，Ｄ１５５６））と混合して、反応混合物中で最終２１％Ｏｐｔｉｐｒｅｐ濃度を得た（表９を参照されたい）。最終ＰＭＰ−Ｌｕｃペレットは水で希釈したため、Ｏｐｔｉｐｒｅｐの代わりにＵｌｔｒａＰｕｒｅ水とルシフェラーゼタンパク質を混合することにより、タンパク質対照を調製した（タンパク質対照）。サンプルを冷却キュベット内に移し、０．４００ｋＶ、１２５μＦ（０．１２５ｍＦ）、Ｂｉｏｒａｄ  ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ（登録商標）を用いて２つのパルス（４〜１０ｍｓ）を有する抵抗低１００Ω〜高６００Ωで、エレクトロポレートした。反応物を氷上に１０分配置し、予め氷冷した１．５ｍｌ超遠心機用チューブに移した。ＰＭＰを含有する全てのサンプルを、１．４ｍｌの超純水の添加により３回洗浄した後、超遠心分離（４℃、１００，０００×ｇで１．５ｈ）を実施した。最終ペレットを最小量のＵｌｔｒａＰｕｒｅ水（５０μＬ）に再懸濁させ、使用まで４℃で維持した。エレクトロポレーション後、ルシフェラーゼタンパク質のみを含むサンプルは遠心分離により洗浄せずに、使用まで４℃で保存した。
【０５４５】
ＰＭＰロード能力を決定するために、１マイクロリットルのルシフェラーゼロードＰＭＰ（ＰＭＰ−Ｌｕｃ）と、１マイクロリットルの非ロードＰＭＰを使用した。ＰＭＰにロードされたルシフェラーゼタンパク質の量を決定するために、ルシフェラーゼタンパク質（ＬＳＢｉｏ，ＬＳ−Ｇ５５３３−１５０）標準曲線を作製した（１０、３０、１００、３００及び１０００ｎｇ）。ＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１１０）を使用し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計を用いて発光を測定して、全てのサンプル及び標準のルシフェラーゼ活性を検定した。ＰＭＰにロードされたルシフェラーゼタンパク質の量は、ルシフェラーゼタンパク質（ＬＳＢｉｏ，ＬＳ−Ｇ５５３３−１５０）の標準曲線を用いて決定し、非ロードＰＭＰサンプル中の発光に対して正規化した。ロード能力（１Ｅ＋９粒子当たりのｎｇルシフェラーゼタンパク質）は、ルシフェラーゼタンパク質濃度（ｎｇ）をロードＰＭＰ（ＰＭＰ−Ｌｕｃ）の数で割った商として計算した。ＰＭＰ−Ｌｕｃロード能力は、２．７６ｎｇルシフェラーゼタンパク質／１×１０９ＰＭＰであった。
【０５４６】
本発明者らの結果は、ＰＭＰが、封入後に活性を保持するモデルタンパク質でロードされ得ることを示している。
【０５４７】
2021523944.tif 000037
【０５４８】
ｂ）ルシフェラーゼタンパク質ロードグレープフルーツＰＭＰによる緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の処理
緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＡＴＣＣ）は、供給者の指示に従って、５０ｕｇ／ｍｌのリファンピシンを補充したトリプチックソイブロスで３０℃で一晩増殖させた。３，０００×ｇで５分間の遠心分離により、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（総量５ｍｌ）を収集した。細胞を１０ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２で２回洗浄した後、５ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に再懸濁させた。ＯＤ６００を測定し、０．５に調節した。
【０５４９】
処理は、３ｎｇのＰＭＰ−Ｌｕｃ（Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水で希釈）、３ｎｇの遊離ルシフェラーゼタンパク質（タンパク質単独対照；Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水で希釈）又はＵｌｔｒａｐｕｒｅ水（陰性対照）のいずれかを補充した５０μｌの再懸濁緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）細胞を含有する１．５ｍｌエッペンドルフチューブ中で２回反復して実施した。Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ水を７５μｌまで全てのサンプルに添加した。サンプルを混合し、室温で２ｈインキュベートした後、アルミホイルで被覆した。次に、サンプルを６，０００×ｇで５分遠心分離した後、７０μｌの上清を回収し、ルシフェラーゼ検出のために取っておいた。続いて、０．５％トリトンＸ−１００を含有する５００μｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２で細菌ペレットを３回洗浄して、取り込まれていないＰＭＰを除去／バーストした。１ｍｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２による最終洗浄を実施して、残留トリトンＸ−１００を除去した。９７０μｌの上清を除去した（３０ｕｌ洗浄バッファー中にペレットを残して）後、２０μｌの１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び２５μｌのＵｌｔｒａｐｕｒｅ水を添加して、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ペレットを再懸濁させた。ＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１１０）を用いて、製造者の指示に従い、ルシフェラーゼタンパク質を測定した。サンプル（細菌ペレット及び上清サンプル）を１０分間インキュベートした後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）分光光度計で発光を測定した。
【０５５０】
ルシフェラーゼタンパク質ロードグレープフルーツＰＭＰで処理した緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は、遊離ルシフェラーゼタンパク質単独又はＵｌｔｒａｐｕｒｅ水対照（陰性対照）による処理に対して１９．３倍高いルシフェラーゼ発現を有し、これは、ＰＭＰがそのタンパク質カーゴを細菌中に効率的に送達し得ることを示している（図１１）。さらに、上清及び細菌ペレット中の両方で遊離ルシフェラーゼタンパク質レベルは非常に低いため、ＰＭＰは、ルシフェラーゼタンパク質を分解から保護すると思われる。処理用量が３ｎｇのルシフェラーゼタンパク質であったことを考慮し、ルシフェラーゼタンパク質標準曲線に基づき、水中で２時間のＲＴインキュベーション後の上清又は細菌ペレット中の遊離ルシフェラーゼタンパク質は、＜０．１ｎｇのルシフェラーゼタンパク質に相当し、これは、タンパク質分解を示している。
【０５５１】
本発明者らのデータは、ＰＭＰが、タンパク質カーゴを生物に送達することができること並びにＰＭＰは、そのカーゴを環境による分解から保護し得ることを示している。
【０５５２】
実施例２６：植物細胞によるＰＭＰの取込み
この実施例は、植物細胞と結合し、且つそれらに取り込まれるＰＭＰの能力を実証する。この実施例では、レモンＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用し、ダイズ、コムギ及びトウモロコシ細胞株をモデル植物細胞として使用する。
【０５５３】
ａ）Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  ＮＨＳ  ＥｓｔｅｒによるレモンＰＭＰの標識
レモンＰＭＰは、実施例１９ｂに記載のように生成した。ＰＭＰをＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８（登録商標）ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、共有結合膜色素（ＡＦ４８８））で標識した。手短には、ＡＦ４８８を最終濃度１０ｍｇ／ｍｌまでＤＭＳＯに溶解させ、２００ｕｌのＰＭＰ（１．５３Ｅ＋１３ＰＭＰ／ｍｌ）を５ｕｌの色素と混合し、室温において、シェーカ上で１ｈインキュベートした後、４℃で１ｈｒの１００，０００×ｇの超遠心分離により、標識ＰＭＰを２〜３回洗浄した。ペレットを１．５ｍｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させた。潜在的な色素凝集体の存在を照査するために、ＰＭＰの代わりに２００ｕｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水を添加して、同じ手順に従い、色素単独の対照サンプルを調製した。最終ＡＦ４８８標識ＰＭＰペレット及びＡＦ４８８色素単独対照を最小量のＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させ、ＮａｎｏＦＣＭにより特性決定した。レモン４８８標識ＰＭＰの最終濃度は、２．９１×１０１２ＰＭＰ／ｍｌで、メジアンＡＦ４８８−ＰＭＰ粒径は、７９．４ｎｍ＋／−１４．７ｎｍであり、８９．４％の標識効率であった（図１２Ａ）。
【０５５４】
ｂ）植物細胞によるＡＦ４８８標識レモンＰＭＰの取込み
植物細胞株は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ）（グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）、♯ＰＣ−１０２６；トリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、♯ＰＣ−９９８）及びＡＢＲＣ（ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）、ブラック・メキシカン・スイート（Ｂｌａｃｋ  Ｍｅｘｉｃａｎ  ｓｗｅｅｔ）（ＢＭＳ）から購入し、２４℃の暗所において、バッフル付きベント型２５０ｍＬフラスコ内で、攪拌（１１０ｒｐｍ）しながら増殖させた。グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）及びトリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）は、供給者の指示に従い、２％ショ糖及び２ｍｇ／Ｌの２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４Ｄ）（Ｄ７２９９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）が添加され、Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ補充（Ｇ５８９３，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）ｐＨ５．５を含む３．２ｇ／ＬのガンボーグＢ−５基礎培地（Ｇａｍｂｏｒｇ’ｓ  Ｂ−５  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）で増殖させた。ＢＭＳ細胞は、４．３ｇ／Ｌのムラシゲスクーグ塩基塩混合物（Ｓｉｇｍａ  Ｍ５５２４）、２％ショ糖（Ｓ０３８９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）、１×ＭＳビタミン溶液（Ｍ３９００，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）、２ｍｇ／Ｌの２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（Ｄ７２９９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）及び２５０ｕｇ／ＬのチアミンＨＣＬ（Ｖ−０１４，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）を含有するムラシゲスクーグ培地ｐＨ５．８中で増殖させた。
【０５５５】
ＡＦ４８８−ＰＭＰによる処理のために、５ｍＬの細胞懸濁液を採取して、％パック細胞容積（ＰＣＶ）を決定した。ＰＣＶは、細胞の容積を細胞培養物アリコートの総容積で割った商として定義され、パーセンテージとして表示される。細胞を３９００ｒｐｍで５分遠心分離し、細胞ペレットの容積を決定した。ＢＭＳ、グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）及びトリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）の％ＰＣＶは、それぞれ、２０％、１５％及び１８％であった。取込み実験のために、細胞をその適切な培地で希釈することにより、培養物の％ＰＣＶを２％に調節した。次に、１２５μｌの植物細胞懸濁液を２４ウェルプレートに添加し、二重サンプルを、１２５μｌのＭＥＳバッファー（２００ｍＭ  ＭＥＳ＋１０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６）単独（陰性対照）、ＡＦ４８８色素単独（色素単独対照）又は１２５μｌまでＭＥＳバッファーで希釈した最終濃度の１×１０１２ＡＦ４８８−ＰＭＰ／ｍＬで処理した。細胞を２４℃の暗所において２時間インキュベートし、１ｍＬのＭＥＳバッファーで３回洗浄して、取り込まれなかったＡＦ４８８−ＰＭＰ又は遊離色素を除去した後、落射蛍光顕微鏡（ＥＶＯＳ  ＦＬ  Ａｕｔｏ  ２，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でのイメージングのために３００μＬのＭＥＳバッファーに再懸濁させた。検出可能な蛍光がなかったＡＦ４８８色素単独対照と比較して、全ての植物細胞株において、ＰＭＰ取込みを示すまちまちの蛍光シグナルを検出することができた（図１２Ｂ）。トリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）細胞が、最も強い蛍光シグナルを呈示し、試験した３つの植物細胞株のうち、これらがＡＦ４８８標識レモンＰＭＰの最も高い取込みを有したことを示す。
【０５５６】
本発明者らのデータは、ＰＭＰが、植物細胞によりインビトロで取り込まれ得ることを示している。
【０５５７】
実施例２７：植物におけるＰＭＰの取込み
この実施例は、ＰＭＰが、インプランタで取り込まれ、体系的に輸送される能力を実証する。この実施例では、グレープフルーツ、レモン及びシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗ＰＭＰをモデルＰＭＰとして使用し、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）苗及びアルファルファスプラウトをモデル植物として使用する。
【０５５８】
ａ）ＤｙＬｉｇｈｔ  ８００  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒによるレモン及びグレープフルーツＰＭＰの標識
グレープフルーツ及びレモンＰＭＰは、実施例１９ａ及び１９ｂに記載のように生成した。ＤｙＬｉｇｈｔ  ８００  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃４６４２１）共有結合膜色素（ＤｙＬ８００）でＰＭＰを標識した。手短には、Ｄｙｌ８００をＤＭＳＯに最終濃度１０ｍｇ／ｍｌまで溶解させてから、２００μｌのＰＭＰを５μｌの色素と混合し、室温のシェーカ上で１ｈインキュベートした後、４℃、１００，０００×ｇで１ｈｒの超遠心分離により、標識ＰＭＰを２〜３回洗浄し、ペレットを１．５ｍｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水で再懸濁させた。潜在的な色素凝集体の存在を照査するために、ＰＭＰの代わりに２００μｌのＵｌｔｒａＰｕｒｅ水を添加して、同じ手順に従い、色素単独の対照サンプルを調製した。最終ＤｙＬ８００標識ＰＭＰペレット及びＤｙＬ８００色素単独対照を最小量のＵｌｔｒａＰｕｒｅ水に再懸濁させ、ＮａｎｏＦＣＭにより特性決定した。グレープフルーツＤｙＬ８００標識ＰＭＰの最終濃度は、４．４４×１０１２ＰＭＰ／ｍｌで、レモンＤｙＬ８００標識ＰＭＰの最終濃度は、５．１８×１０１２ＰＭＰ／ｍｌであった。標識効率は、ＮａｎｏＦＣＭが赤外線を検出することができないため、ＮａｎｏＦＣＭを用いて決定することはできなかった。
【０５５９】
ｂ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗の発芽及び成長
野生型シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）Ｃｏｌ−０種子をＡＢＲＣから取得し、７０％エタノールで表面滅菌してから、５０％漂白剤／０．１％トリトンＸ−１００と一緒に１０分インキュベートした後、４回の滅菌ｄｄＨ２Ｏ洗浄により、漂白剤溶液を除去した。種子を４℃の暗所において１ｄかけて層別化した。２０ｍＬの０．５×ＭＳ培地（２．１５ｇ／Ｌのムラシゲスクーグ塩、１％ショ糖、ｐＨ５．８）を含有する１００ｃｍ２プレート（水中０．５％ウシ胎仔血清で予めコーティングされている）当たり約２５０個の種子を発芽させ、３Ｍ外科用テープで密封し、２３℃の１６ｈ明期／２１℃の８ｈ暗期の光周期を用いてインキュベータ内で成長させた。
【０５６０】
ｃ）シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）及びアルファルファ（Ａｌｆａｌｆａ）によるＤｙＬ８００標識グレープフルーツ、レモン及びＡｔ  ＰＭＰの取込み
インプランタでＰＭＰが取り込まれ、体系的に輸送され得るか否かを決定するために、メッシュフィルタの上部に、実施例２７ｂに記載の通りにシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）苗を液体培地に発芽させて、根がメッシュを通って成長するようにし、ＰＭＰ溶液に対するＡｔ苗の部分的な曝露を可能にする。アルファルファスプラウトは現地のスーパーマーケットから取得した。９日齢のシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）苗及びアルファルファスプラウトを、０．５×ＭＳ培地中の水（陰性対照）、ＤｙＬ８００色素単独（色素対照）、ＤｙＬ８００標識グレープフルーツＰＭＰ（１．６×１０１０ＰＭＰ／ｍｌ）又はレモン（５．１×１０１０ＰＭＰ／ｍｌ）の０．５ｍｌ溶液で、部分的根曝露（ＰＭＰ溶液中に浮遊するメッシュ内の苗に又はアルファルファスプラウトでは１．５ｍｌエッペンドルフチューブ内の部分的根曝露により）により、２３℃で、それぞれ２２若しくは２４時間処理した。次に、植物をＭＳ培地で３回洗浄してから、Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ＣＬｘ  ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｉｍａｇｅｒ（Ｌｉ−Ｃｏｒ）で撮像した。
【０５６１】
陰性（アルファルファスプラウト葉に幾分かの自家蛍光）及び色素単独対照と比較して、全てのＰＭＰ供給源が、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）苗及びアルファルファスプラウトの両方で蛍光シグナルを示した（白色は高い蛍光シグナルであり、黒色はシグナルがない）（図１３）。ＰＭＰ溶液に曝露しなかったシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）葉又はアルファルファ茎領域における蛍光シグナルの存在は、インプランタでのＰＭＰの活発な輸送を示している。ＤｙＬ８００処理濃度は、この実験では正規化しなかったため、供給源／標的取込み効率の差を評価することはできない。
【０５６２】
本発明者らのデータは、様々な植物源由来のＰＭＰが、インプランタで取り込まれ、輸送され得ることを示している。
【０５６３】
実施例２８：ＤＯＸロードグレープフルーツＰＭＰによるシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗の処理
この実施例は、植物の適応度を低減させる目的で、ＰＭＰが小分子をロードされる能力を実証する。この実施例では、ドキソルビシンを小分子として使用し、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）をモデル植物として使用する。ドキソルビシンは、ストレプトマイセス・ペウセティウスｖａｒ．カエシウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓ）の培養物から単離される細胞傷害性アントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンは、インターカレーションによりＤＮＡと相互作用し、ＤＮＡ複製及びＲＮＡ転写の両方を阻害する。ドキソルビシンは、植物において細胞傷害性であることが明らかにされている（Ｃｕｌｉａｒｅｚ−Ｍａｃ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｌａｎｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，（５）：１５５−１６４，１９８７）。
【０５６４】
除草剤の過剰使用による有毒な副作用から環境を保護しながら、雑草による重大な作物収量損失を防ぐために、有効且つ安全な除草剤が必要である。
【０５６５】
ａ）ドキソルビシンロードＰＭＰによるシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗の処理
実施例２４ａ及び２４ｂに記載の通りに、グレープフルーツＰＭＰを生成し、ドキソルビシンをロードした。野生型シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）Ｃｏｌ−０種子をＡＢＲＣから取得し、５０％漂白剤で表面滅菌してから、４℃で１〜３ｄかけて層別化した後、０．８％寒天を含み、０．５％ショ糖、２．５ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ５．６を補充した１／２濃度（０．５×）ムラシゲスクーグ（ＭＳ）培地で、２３℃の１６ｈ明期／２１℃の８ｈ暗期の光周期を用い、発芽させた。
【０５６６】
ＰＭＰが小分子カーゴをインプランタで送達することができるか否かを試験するために、７日齢のシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）苗を２４ウェルプレート（１ウェル当たり１苗）内の０．５×液体ＭＳ培地に移してから、０（陰性対照）、２５μＭ、５０μＭ及び１００μＭの封入ＤＯＸ用量の遊離ＤＯＸ又はＤＯＸロードＰＭＰで処理した。プレートをアルミホイルで被覆し、２４時間インキュベートした。ＤＯＸ含有培地を除去し、苗を１／２×ＭＳ培地で２回洗浄した後、新鮮な培地を添加した。苗を正常な光周期（１６ｈ明期２３℃／８ｈ暗期２１℃）下でさらに３日間インキュベートした。次に、苗をプレートから取り出し、イメージングのためにタオルで乾かした後、葉の活力、葉の色及び根の長さを分析することにより、細胞傷害性を評価した。細胞傷害性は、非処理苗対照と比較して、根の短縮、葉の活力喪失及び葉の退色（緑色ではなく黄色）により定義される。１００μＭ  ＤＯＸでのみ細胞傷害性（根の短縮及び葉の退色）を示した遊離ＤＯＸと比較して、ＤＯＸをロードしたＰＭＰは、５０μＭ及び１００μＭ  ＤＯＸで細胞傷害性であった。５０μＭ  ＰＭＰ−ＤＯＸで処理した苗は、葉の活力低減及び根の短縮と共に、著しい葉の黄変を示した。本発明者らのデータは、ＰＭＰがインプランタで小分子をロードされ、且つ小分子を送達し得ること並びにドキソルビシンをロードしたＰＭＰが、遊離ドキソルビシンの２倍効率的に細胞傷害性応答を誘導することを示している。
【０５６７】
他の実施形態
本発明の一部の実施形態は、以下の番号のパラグラフに含まれる。
１．複数の植物メッセンジャーパック（ＰＭＰ）を含む有害生物防除組成物であって、植物への送達のために製剤化され、少なくとも５％のＰＭＰを含む、有害生物防除組成物。
２．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、植物有害生物への送達のために製剤化され、少なくとも５％のＰＭＰを含む、有害生物防除組成物。
３．室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している、パラグラフ１又は２に記載の有害生物防除組成物。
４．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している、有害生物防除組成物。
５．植物への送達のために製剤化される、パラグラフ４に記載の有害生物防除組成物。
６．植物有害生物への送達のために製剤化される、パラグラフ４に記載の有害生物防除組成物。
７．ＰＭＰは、少なくとも２４時間、４８時間、７日間又は３０日間にわたって安定している、パラグラフ１〜６のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
８．ＰＭＰは、少なくとも２４℃、２０℃又は４℃の温度で安定している、パラグラフ７に記載の有害生物防除組成物。
９．組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である、パラグラフ１〜８のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
１０．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である、有害生物防除組成物。
１１．植物への送達のために製剤化される、パラグラフ１０に記載の有害生物防除組成物。
１２．植物有害生物への送達のために製剤化される、パラグラフ１０に記載の有害生物防除組成物。
１３．室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している、パラグラフ１０〜１２のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
１４．ＰＭＰは、複数のＰＭＰタンパク質を含み、ＰＭＰの濃度は、その中のＰＭＰタンパク質の濃度である、パラグラフ９〜１３のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
１５．組成物中の複数のＰＭＰは、少なくとも０．０１ｎｇ、０．１ｎｇ、１ｎｇ、２ｎｇ、３ｎｇ、４ｎｇ、５ｎｇ、１０ｎｇ、５０ｎｇ、１００ｎｇ、２５０ｎｇ、５００ｎｇ、７５０ｎｇ、１μｇ、１０μｇ、５０μｇ、１００μｇ又は２５０μｇＰＭＰタンパク質／ｍｌの濃度である、パラグラフ９〜１４のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
１６．複数のＰＭＰの各々は、精製された植物細胞外小胞（ＥＶ）又はその断片若しくは抽出物を含む、パラグラフ１〜１５のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
１７．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、ＰＭＰの各々は、植物ＥＶ又はその断片若しくは抽出物であり、組成物は、植物への送達のために製剤化される、有害生物防除組成物。
１８．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、ＰＭＰは、植物ＥＶ又はその断片若しくは抽出物であり、組成物は、有害生物への送達のために製剤化される、有害生物防除組成物。
１９．室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している、パラグラフ１７又は１８に記載の有害生物防除組成物。
２０．組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である、パラグラフ１７〜１９のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
２１．植物ＥＶは、修飾植物細胞外小胞（ＥＶ）である、パラグラフ１６〜２０のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
２２．単離植物ＥＶは、植物エキソソーム又は植物微小小胞体である、パラグラフ２１に記載の有害生物防除組成物。
２３．複数のＰＭＰは、有害生物忌避剤をさらに含む、パラグラフ１〜２２のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
２４．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、複数のＰＭＰの各々は、異種農薬用薬剤を含み、組成物は、植物又は植物有害生物への送達のために製剤化される、有害生物防除組成物。
２５．異種農薬用薬剤は、除草剤、抗菌剤、抗真菌剤、殺虫剤、軟体動物駆除剤又は殺線虫剤である、パラグラフ１に記載の有害生物防除組成物。
２６．除草剤は、ドキソルビシンである、パラグラフ２に記載の有害生物防除組成物。
２７．除草剤は、グルホシネート、グリホサート、プロパキザホップ、メタミトロン、メタザクロール、ペンジメタリン、フルフェナセト、ジフルフェニカン、クロマゾン、ニコスルフロン、メソトリオン、ピノキサデン、スルコトリオン、プロスルホカルブ、スルフェントラゾドン、ビフェノクス、キンメラック、トリアレート、テルブチラジン、アトラジン、オキシフルオルフェン、ジウロン、トリフルラリン又はクロロトルロンである、パラグラフ２に記載の有害生物防除組成物。
２８．抗菌剤は、ドキソルビシンである、パラグラフ２に記載の有害生物防除組成物。
２９．抗菌剤は、抗生物質である、パラグラフ２に記載の有害生物防除組成物。
３０．抗生物質は、バンコマイシンである、パラグラフ６に記載の有害生物防除組成物。
３１．抗生物質は、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、マクロライド、スルホンアミド、バンコマイシン、ポリミキシン、グラミシジン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、スペクチノマイシン、シプロフロキサシン、イソニアジド、リファンピシン、ピラジナミド、エタンブトール、ミアムブトール又はストレプトマイシンである、パラグラフ６に記載の有害生物防除組成物。
３２．抗真菌剤は、アゾキシストロビン、マンコゼブ、プロチオコナゾール、フォルペット、テブコナゾール、ジフェノコナゾール、カプタン、ブピリメート又はホセチル−Ａｌである、パラグラフ２に記載の有害生物防除組成物。
３３．殺虫剤は、クロロニコチル、ネオニコチノイド、カルバメート、有機リン酸エステル、ピレトロイド、オキサジアジン、スピノシン、シクロジエン、有機塩素、フィプロール、メクチン、ジアシルヒドラジン、ベンゾイル尿素、有機スズ、ピロール、ジニトロテルペノール、ＭＥＴＩ、テトロン酸、テトラミン酸又はフタルアミドである、パラグラフ２に記載の有害生物防除組成物。
３４．異種農薬用薬剤は、小分子、核酸又はポリペプチドである、パラグラフ１に記載の有害生物防除組成物。
３５．小分子は、抗生物質又は二次代謝物である、パラグラフ１１に記載の有害生物防除組成物。
３６．核酸は、阻害性ＲＮＡである、パラグラフ１１に記載の有害生物防除組成物。
３７．異種農薬用薬剤は、複数のＰＭＰの各々によって封入される、パラグラフ１〜１３のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
３８．異種農薬用薬剤は、複数のＰＭＰの各々の表面に埋め込まれる、パラグラフ１〜１３のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
３９．異種農薬用薬剤は、複数のＰＭＰの各々の表面に共役される、パラグラフ１〜１３のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
４０．複数のＰＭＰの各々は、有害生物忌避剤をさらに含む、パラグラフ１〜１６のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
４１．複数のＰＭＰの各々は、追加的な異種農薬用薬剤をさらに含む、パラグラフ１〜１７のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
４２．植物有害生物は、細菌又は真菌である、パラグラフ１〜１８のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
４３．細菌は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である、パラグラフ１９に記載の有害生物防除組成物。
４４．シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）又はシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）である、パラグラフ２０に記載の有害生物防除組成物。
４５．真菌は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種である、パラグラフ１９に記載の方法。
４６．植物有害生物は、昆虫、軟体動物又は線虫である、パラグラフ１〜２８のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
４７．昆虫は、アブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、パラグラフ２３に記載の有害生物防除組成物。
４８．線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、パラグラフ２３に記載の有害生物防除組成物。
４９．室温で少なくとも１日にわたって安定しており、且つ／又は４℃で少なくとも１週間にわたって安定している、パラグラフ１〜２５のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５０．ＰＭＰは、４℃で少なくとも２４時間、４８時間、７日間又は３０日間にわたって安定している、パラグラフ１〜２５のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５１．ＰＭＰは、少なくとも２０℃、２４℃又は３７℃の温度で安定している、パラグラフ２７に記載の有害生物防除組成物。
５２．組成物中の複数のＰＭＰは、植物有害生物の適応度を低減させるのに有効な濃度である、パラグラフ１〜２８のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５３．組成物中の複数のＰＭＰは、少なくとも０．０１ｎｇ、０．１ｎｇ、１ｎｇ、２ｎｇ、３ｎｇ、４ｎｇ、５ｎｇ、１０ｎｇ、５０ｎｇ、１００ｎｇ、２５０ｎｇ、５００ｎｇ、７５０ｎｇ、１μｇ、１０μｇ、５０μｇ、１００μｇ又は２５０μｇＰＭＰタンパク質／ｍＬの濃度である、パラグラフ１〜２９のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５４．農業的に許容可能な担体を含む、パラグラフ１〜３０のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５５．ＰＭＰを安定化するために製剤化される、パラグラフ１〜３１のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５６．液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体組成物として製剤化される、パラグラフ１〜３２のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物。
５７．少なくとも５％のＰＭＰを含む、パラグラフ１に記載の有害生物防除組成物。
５８．複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物であって、ＰＭＰは、（ａ）植物又はその部分から初期サンプルを提供するステップであって、植物又はその部分は、ＥＶを含む、ステップ；（ｂ）初期サンプルから粗ＰＭＰ画分を単離するステップであって、粗ＰＭＰ画分は、初期サンプル中のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップ；（ｃ）粗ＰＭＰ画分を精製し、それにより複数の純粋なＰＭＰを生成するステップであって、複数の純粋なＰＭＰは、粗ＥＶ画分中のレベルに対して、植物又はその部分からの少なくとも１つの混入物又は不要な成分の低減したレベルを有する、ステップ；（ｄ）複数の純粋なＰＭＰに有害生物防除薬剤をロードするステップ；及び（ｅ）植物又は植物有害生物への送達のためにステップ（ｄ）のＰＭＰを製剤化するステップを含むプロセスによって植物から単離される、有害生物防除組成物。
５９．パラグラフ１〜３５のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物を含む植物。
６０．パラグラフ１〜３５のいずれか１つに記載の有害生物防除組成物を含む植物有害生物。
６１．有害生物防除組成物を植物に送達する方法であって、植物を、パラグラフ１〜３５のいずれか１つに記載の組成物と接触させるステップを含む方法。
６２．植物の適応度を増加させる方法であって、パラグラフ１〜３５のいずれか１つに記載の組成物を植物に送達するステップを含み、非処理植物に対して植物の適応度を増加させる、方法。
６３．植物は、植物有害生物による寄生を有する、パラグラフ３８又は３９に記載の方法。
６４．寄生を、非処理植物における寄生に対して低減させる、パラグラフ４０に記載の方法。
６５．寄生を、非処理植物における寄生に対して実質的に排除する、パラグラフ４０に記載の方法。
６６．植物は、植物有害生物による寄生に対して感受性である、パラグラフ３８又は３９に記載の方法。
６７．非処理植物における寄生の可能性に対して植物における寄生の可能性を低減させる、パラグラフ４３に記載の方法。
６８．植物有害生物は、細菌又は真菌である、パラグラフ４０〜４４のいずれか１つに記載の方法。
６９．細菌は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である、パラグラフ４５に記載の方法。
７０．真菌は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種である、パラグラフ４５に記載の方法。
７１．植物有害生物は、昆虫、軟体動物又は線虫である、パラグラフ４０〜４４のいずれか１つに記載の方法。
７２．昆虫は、アブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、パラグラフ４８に記載の方法。
７３．線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、パラグラフ４８に記載の方法。
７４．有害生物防除組成物は、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体として送達される、パラグラフ３８〜５０のいずれか１つに記載の方法。
７５．植物有害生物に有害生物防除組成物を送達する方法であって、植物有害生物を、パラグラフ１〜３６のいずれか１つに記載の組成物と接触させるステップを含む方法。
７６．植物有害生物の適応度を低減させる方法であって、パラグラフ１〜３６のいずれか１つに記載の組成物を植物有害生物に送達するステップを含み、非処理植物有害生物に対して植物有害生物の適応度を低減させる、方法。
７７．植物有害生物が成長、生息、繁殖、摂食又は寄生する少なくとも１つの生息場所に組成物を送達するステップを含む、パラグラフ５２又は５３に記載の方法。
７８．組成物は、植物有害生物による摂取のための植物有害生物摂食可能組成物として送達される、パラグラフ５２〜５４のいずれか１つに記載の方法。
７９．植物有害生物は、細菌又は真菌である、パラグラフ５２〜５５のいずれか１つに記載の方法。
８０．植物有害生物は、昆虫、軟体動物又は線虫である、パラグラフ５２〜５５のいずれか１つに記載の方法。
８１．昆虫は、アブラムシ又は鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、パラグラフ５７に記載の方法。
８２．線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、パラグラフ５７に記載の方法。
８３．組成物は、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル又は気体として送達される、パラグラフ５２〜５９のいずれか１つに記載の方法。
８４．真菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含む方法。
８５．真菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、抗真菌剤を含む、方法。
８６．抗真菌剤は、真菌感染を引き起こす真菌の遺伝子の発現を阻害する核酸である、パラグラフ６２に記載の方法。
８７．遺伝子は、ｄｃｌ１及び／又はｄｃｌ２である、パラグラフ６３に記載の方法。
８８．真菌感染は、スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種又はアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種によって引き起こされる、パラグラフ６１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
８９．スクレロチニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種は、スクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）である、パラグラフ６５に記載の方法。
９０．ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種は、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）である、パラグラフ６５に記載の方法。
９１．組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）由来のＰＭＰを含む、パラグラフ６１〜６７のいずれか１つに記載の方法。
９２．真菌感染を低減させるか又は実質的に排除する、パラグラフ６１〜６８のいずれか１つに記載の方法。
９３．細菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含む方法。
９４．細菌感染を有する植物を処理する方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、抗菌剤を含む、方法。
９５．抗菌剤は、ドキソルビシンである、パラグラフ７１に記載の方法。
９６．細菌感染は、シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）に属する細菌によって引き起こされる、パラグラフ７０〜７２のいずれか１つに記載の方法。
９７．シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）は、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）である、パラグラフ７３に記載の方法。
９８．組成物は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）由来のＰＭＰを含む、パラグラフ７０〜７４のいずれか１つに記載の方法。
９９．細菌感染を低減させるか又は実質的に排除する、パラグラフ７０〜７５のいずれか１つに記載の方法。
１００．植物有害昆虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害昆虫に送達するステップを含む方法。
１０１．植物有害昆虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害昆虫に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、殺虫剤を含む、方法。
１０２．殺虫剤は、ペプチド核酸である、パラグラフ７８に記載の方法。
１０３．植物有害昆虫は、アブラムシである、パラグラフ７７〜７９のいずれか１つに記載の方法。
１０４．植物有害昆虫は、鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である、パラグラフ７７〜７９のいずれか１つに記載の方法。
１０５．鱗翅目（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）は、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）である、パラグラフ８１に記載の方法。
１０６．非処理植物有害昆虫に対して植物有害昆虫の適応度を低減させる、パラグラフ７７〜８２のいずれか１つに記載の方法。
１０７．植物有害線虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害線虫に送達するステップを含む方法。
１０８．植物有害線虫の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を植物有害線虫に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、殺線虫剤を含む、方法。
１０９．殺線虫剤は、ペプチドである、パラグラフ８５に記載の方法。
１１０．ペプチドは、Ｍｉ−ＮＬＰ−１５ｂである、パラグラフ８６に記載の方法。
１１１．植物有害線虫は、トウモロコシネコブセンチュウ（ｃｏｒｎ  ｒｏｏｔ−ｋｎｏｔ  ｎｅｍａｔｏｄｅ）である、パラグラフ８４〜８８のいずれか１つに記載の方法。
１１２．非処理植物有害線虫に対して植物有害線虫の適応度を低減させる、パラグラフ８４〜８８のいずれか１つに記載の方法。
１１３．雑草の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を雑草に送達するステップを含む方法。
１１４．雑草の適応度を低減させる方法であって、複数のＰＭＰを含む有害生物防除組成物を雑草に送達するステップを含み、複数のＰＭＰの各々は、除草剤を含む、方法。
１１５．非処理雑草に対して雑草の適応度を低減させるパラグラフ９０又は９１に記載の方法。
【０５６８】
前述の本発明は、理解を明確にするために説明及び例としてある程度詳細に記載されているが、そうした記載及び例が本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、全体として参照により明示的に援用される。
【０５６９】
他の実施形態は、特許請求の範囲に含まれる。
【０５７０】
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【０５７１】
2021523944.tif 000039
【０５７２】
2021523944.tif 000040
【０５７３】
2021523944.tif 000041
【０５７４】
2021523944.tif 000042
【０５７５】
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【０５７６】
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【０５７７】
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【０５７８】
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【０５７９】
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【０５８０】
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【０５８１】
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【０５８２】
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【０５８３】
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【０５８４】
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【０５８５】
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【０５８６】
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【０５８７】
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【０５８８】
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【０５８９】
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【０５９０】
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【０５９１】
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【０５９２】
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【０５９３】
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【０５９４】
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【０５９５】
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【０５９６】
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【０５９７】
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【０５９８】
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【０５９９】
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【０６００】
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【０６０１】
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【０６０２】
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【０６０３】
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【０６０４】
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【０６０５】
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【０６０６】
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【０６０７】
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【０６０８】
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【０６０９】
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【０６１０】
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【０６１１】
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【０６１２】
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【０６１３】
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【０６１４】
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【０６１５】
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【０６１６】
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【０６１７】
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【０６１８】
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【０６１９】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１０Ｇ】
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【図１０Ｈ】
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【図１０Ｉ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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