(57)【要約】腫瘍細胞または循環癌細胞上／中に発現されたＤＣＬＫ１を標的とするＣＡＲ細胞およびヒト化抗体が、癌処置の新しい方法として記載されている。これらの抗体および細胞は、患者内において安全かつ効果的であり、ＤＣＬＫ１タンパク質を発現している癌を処置するために使用することができる。本開示は、ヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）細胞およびこれらを含む組成物ならびに固形腫瘍の処置を含む治療のためにこれらを使用する方法に関する。
2021505663.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）配列番号１〜９および／もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の群から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と、および／または
（ｉｉ）配列番号１１〜１４および／もしくは２６〜３０もしくはこれらの各々の等価物の群から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と、
を含むヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体。
【請求項２】
（ａ）請求項１に記載の抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインおよび／または配列番号１０および／もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の群より選択される配列を含む配列を含む重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および／または配列番号１５および／もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の群より選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と、（ｂ）ヒンジドメインと、（ｃ）膜貫通ドメインと、（ｄ）ならびに細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項３】
（ａ）請求項１に記載の抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインおよび／または配列番号１０および／もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の群から選択される配列を含む配列を含む重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および／または配列番号１５および／もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の群より選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と、（ｂ）ＣＤ８αまたはＩｇＧ１ヒンジドメインと、（ｃ）ＣＤ２８またはＣＤ８α膜貫通ドメインと、（ｄ）１またはそれを超える共刺激シグナル伝達領域と、ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、をさらに含む、請求項２に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
前記１またはそれを超える共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−ＩＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２ＣおよびＢ７−Ｈ３より選択される、請求項３に記載のＣＡＲ。
【請求項５】
抗ＤＣＬＫ１  ＨＣ可変領域と抗ＤＣＬＫ１  ＬＣ可変領域の間に位置するリンカーポリペプチドをさらに含む、請求項２〜４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記ＣＡＲのリンカーポリペプチドが、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎのポリペプチドを含み、ｎが１〜６の整数である、請求項５に記載のＣＡＲ。
【請求項７】
等価物が、ポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドまたは１０−１２Ｍ未満もしくは約１０−１２ＭのＤＣＬＫ１ペプチドに対する結合親和性を有する前記ポリペプチドおよび／または抗体をコードするポリヌクレオチドの相補物に対して高いストリンジェンシーの条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む、請求項１に記載の抗体または請求項２〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項８】
検出可能なマーカーまたは精製マーカーをさらに含む、請求項１に記載の抗体または請求項２〜７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項９】
核酸配列が、本明細書に開示されている配列の任意の１つまたはこれらの各々の等価物より選択され、ならびに必要に応じてプロモーターおよび／またはエンハンサー要素に機能的に連結されている配列を含む、単離された核酸配列。
【請求項１０】
請求項１に記載の抗体または請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする単離された核酸配列。
【請求項１１】
抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置するシグナルペプチドポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項９または１０に記載の単離された核酸配列。
【請求項１２】
前記ＣＡＲをコードする単離された核酸が、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインまたはエンハンサーの上流に位置するコザックコンセンサスポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１０または１１に記載の単離された核酸配列。
【請求項１３】
前記ＣＡＲをコードする単離された核酸が、前記抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置する２Ａ自己切断型ペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の単離された核酸配列。
【請求項１４】
前記ＣＡＲをコードする単離された核酸が、抗生物質耐性をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の単離された核酸配列。
【請求項１５】
前記ＣＡＲをコードする単離された核酸が、前記ＣＡＲの発現および／または活性化を調節するためのスイッチ機構をさらに含む、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の単離された核酸配列。
【請求項１６】
請求項９〜１５のいずれか一項に記載の前記単離された核酸配列を含むベクター。
【請求項１７】
前記ベクターがプラスミドまたはウイルスベクターである、請求項１６に記載のベクター。
【請求項１８】
前記ベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群より選択される、請求項１９に記載のベクター。
【請求項１９】
前記ベクターがＣＲＩＳＰＲベクターである、請求項１６に記載のベクター。
【請求項２０】
請求項１に記載の抗体、請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ、および／または請求項９〜１５のいずれか一項に記載の単離された核酸、および／または請求項１６〜１９のいずれか一項に記載のベクターを含む単離された細胞。
【請求項２１】
前記単離された細胞が免疫細胞である、請求項２０に記載の単離された細胞。
【請求項２２】
前記免疫細胞がＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項２１に記載の単離された細胞。
【請求項２３】
担体と、請求項１に記載の抗体、請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ、および／または請求項９〜１５のいずれか一項に記載の単離された核酸、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載のベクター、および／または請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の単離された細胞の１つまたはそれより多くと、を含む組成物。
【請求項２４】
ＤＣＬＫ１タンパク質またはその断片を結合することが可能な抗原結合断片をさらに含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記抗体または抗原結合断片が細胞に付随している、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記抗体または抗原結合断片が固体支持体に結合されている、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
前記抗体または抗原結合断片が溶液中に配置されている、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２８】
前記抗体または抗原結合断片がマトリックスに付随している、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２９】
組換えＤＮＡ技術、ファージディスプレイ技術、リンパ球集団中におけるインビボでの産生を誘導することまたは組換え免疫グロブリンライブラリーもしくは高度に特異的な結合試薬のパネルをスクリーニングすることの適用を含む、請求項１に記載の抗ＤＣＬＫ１抗体を作製する方法。
【請求項３０】
（ｉ）請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を免疫細胞の集団に導入すること、および
（ｉｉ）工程（ｉ）の前記核酸配列で首尾よく形質導入された免疫細胞の亜集団を選択し、これにより抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を作製すること、
を含む、抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法。
【請求項３１】
前記免疫細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記免疫細胞の集団が、内在性免疫細胞受容体の発現を低下または除去するように改変されている、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記免疫細胞の集団が、ＲＮＡ干渉またはＣＲＩＳＰＲを使用する方法を用いて改変された、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
腫瘍の増殖を阻害し、および／または癌を処置し、および／または癌の再発を予防することを必要とする被験体において、腫瘍の増殖を阻害し、および／または癌を処置し、および／または癌の再発を予防する方法であって、有効量の請求項３０〜３３のいずれか一項にしたがって生成された抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞および／または有効量の請求項１に記載の抗ＤＣＬＫ１抗体を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
前記抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞が、処置されている被験体にとって自家または同種異系である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記腫瘍、癌または癌幹細胞がＤＣＬＫ１を発現または過剰発現する、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記癌が、結腸癌、直腸癌、腸癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、子宮頸癌もしくは卵巣癌、または繊維肉腫、多発性骨髄腫、肺癌、肝臓癌、食道癌、乳癌、大唾液腺癌腫、神経芽細胞腫または腎細胞癌腫である、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記腫瘍が固形腫瘍である、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記被験体が、ヒト、動物、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ヒツジ、マウス、ウマまたはウシである、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
癌細胞または癌幹細胞の増殖を阻害する方法であって、有効量の請求項３０〜３３のいずれか一項にしたがって生成された抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞および／または有効量の請求項１に記載の抗ＤＣＬＫ１抗体と前記細胞を接触させることを含む、方法。
【請求項４１】
前記癌細胞または癌幹細胞が、接着性癌細胞または非接着性癌細胞である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記癌細胞または癌幹細胞が、結腸直腸癌細胞、膵臓癌細胞、繊維肉腫細胞、前立腺癌細胞、多発性骨髄腫細胞、子宮頸癌細胞、卵巣癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、食道癌細胞、乳癌細胞、大唾液腺癌腫細胞、神経芽細胞腫細胞または腎細胞癌腫細胞である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
抗ＤＣＬＫ１治療のための被験体を選択する方法であって、前記被験体から単離された試料を請求項１に記載の抗体と接触させること、および前記試料中の抗体−細胞複合体を検出することを含み、前記複合体の存在が前記治療のための前記被験体を選択する、方法。
【請求項４４】
有効量の、請求項１に記載の抗体または請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲを前記被験体に投与することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４５】
被験体中の抗ＤＣＬＫ１治療をモニタリングする方法であって、前記被験体から単離された試料を請求項１に記載の抗体と接触させること、および前記試料中の抗体−細胞複合体を検出すること、を含む、方法。
【請求項４６】
前記方法が、有効量の、請求項１に記載の抗体または請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲの前記被験体への投与前および／または投与後に実施される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
請求項１に記載の抗体、請求項２〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ；および／または請求項９〜１５のいずれか一項に記載の単離された核酸；請求項１６〜１９のいずれか一項に記載のベクター；請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の単離された細胞；および／または請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の組成物の１つまたはそれより多くと、使用説明書と、を備えるキット。
【請求項４８】
前記使用説明書が、請求項２９〜４２のいずれか一項に記載の方法を実施するための指示を与える、請求項４７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１７年１２月４日に出願された米国仮出願第６２／５９４，４６４号の米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づく恩典を主張し、その内容は、参照により本開示中に組み入れられる。
【０００２】
技術分野
本開示は、ヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）細胞およびこれらを含む組成物ならびに固形腫瘍の処置を含む治療のためにこれらを使用する方法に関する。ＤＣＬＫ１に対する免疫原性決定基を含有する単離されたペプチドおよび融合タンパク質も本明細書において提供される。
【背景技術】
【０００３】
背景
本開示の背景の以下の論述は、読者が本開示を理解する上での補助を与えるために提供されているにすぎず、本開示の従来技術を記載しまたは構成することを認めたものではない。
【０００４】
結腸、直腸、腸、胃および膵臓癌中の固形腫瘍などの固形腫瘍は、容易に処置可能なものから高度に悪性なものまで様々である。バイオマーカーおよび症候を予後診断指標として使用することができ、例えば、大腸癌では、癌胎児抗原（ＣＥＡ）および／または炭水化物抗原１９−９（ＣＡ１９−９）の処置前血清レベルの上昇は、負の予後に対応し、腸の癌では、Ｍｕｓａｓｈｉ−１（Ｍｓｉ−１）が腸の腫瘍のマーカーとしての役割を果たし得る。さらに、循環する腫瘍細胞を検出するために、癌の起源と関連する特定の細胞系列のマーカーを使用することができる。（背景の部においてこれらの癌をさらに詳しく論述する）米国特許第９，６６３，５８５号を参照のこと。
癌を検出する上で、多大な進歩が遂げられてきたが、癌の安全で効果的な処置に対する要望がなお存在する。本開示はこの要望を満たし、関連する利点も提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第９，６６３，５８５号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
要旨
遺伝的に改変操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞での自家処置を使用して、Ｂ細胞リンパ腫および白血病において最近前例のない結果が得られているため、数多くの研究室がこのアプローチを固形腫瘍に応用し始めた。ＣＡＲ改変された細胞は、モノクローナル抗体のＨＬＡ非依存性標的特異性と、活性化されたＴ細胞の細胞溶解活性、増殖およびホーミング特性を併せ持つが、チェックポイント抑制には応答しない。抗原発現標的を直接死滅させる能力の故に、ＣＡＲ細胞は任意の抗原陽性細胞または組織に対して極めて有毒であり、高度に特異的な抗体を用いてＣＡＲを構築する必要がある。このため、一態様において、本開示は、癌の処置のための標的としてＤＣＬＫ１を提供する。ＤＣＬＫ１は、しばしば、腫瘍細胞上で発現される。このため、一態様において、組成物は、ＤＣＬＫ１を発現または過剰発現する固形腫瘍または対応する循環癌細胞の処置において特に有用である。一態様において、新規ＤＣＬＫ１抗体ならびに診断および治療での新規ＤＣＬＫ１抗体の使用方法が本明細書に開示されている。これに関して、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列から本質的になる、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列からなる単離された抗体であって、ＤＣＬＫ１のアイソフォームに結合する単離された抗体が本明細書に提供されている。
【０００７】
一態様において、本開示は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列から本質的になる、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列からなる単離されたヒト化抗体であって、前記抗体がＤＣＬＫ１のエピトープに結合する単離されたヒト化抗体を提供する。さらなる態様において、本開示は、単独でのまたはＤＣＬＫ１抗原またはその断片と組み合わせた、本明細書に開示されているとおりの単離された抗ＤＣＬＫ１抗体またはその断片および検出可能な標識または精製標識を提供する。この抗原／抗体複合体を含み、またはこの抗原／抗体複合体から本質的になり、またはこの抗原／抗体複合体からなるエクソビボ細胞が本明細書においてさらに提供される。
【０００８】
いくつかの態様において、ヒト化重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１〜９もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１〜９もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１〜９もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【０００９】
別の態様において、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下の核酸配列：配列番号３２〜４０によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下の核酸配列：配列番号３２〜４０によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下の核酸配列：配列番号３２〜４０によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【００１０】
さらなる態様において、軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１１〜１４もしくは２６〜３０の１つもしくはそれより多くもしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１１〜１４もしくは２６〜３０の１つもしくはそれより多くもしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１１〜１４もしくは２６〜３０の１つもしくはそれより多くもしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【００１１】
さらなる態様において、軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下の核酸配列：配列番号４１〜４５によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下の核酸配列：配列番号４１〜４５によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下の核酸配列：配列番号４１〜４５によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【００１２】
マウス抗体配列からヒト化されている、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列も本明細書において提供される。一態様において、ヒト化マウス抗体の重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１０もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４６もしくは４７の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物を含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１０もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４６もしくは４７の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１０もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４６もしくは４７の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物からなる。
【００１３】
別の態様において、ヒト化されたマウス抗体の軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１５もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４８もしくは４９の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物を含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１５もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４８もしくは４９の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１５もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４８もしくは４９の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物からなる。
【００１４】
本開示の態様は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）膜貫通ドメインおよび（ｄ）細胞内ドメインを含む、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）膜貫通ドメインおよび（ｄ）細胞内ドメインから本質的になる、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）膜貫通ドメインおよび（ｄ）細胞内ドメインからなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。
【００１５】
本開示のさらなる態様は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１もしくはそれを超える共刺激領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物を含む、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１もしくはそれを超える共刺激領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物から本質的になる、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１もしくはそれを超える共刺激領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物からなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。さらなる態様において、本開示は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物を含む、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物から本質的になる、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物からなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【００１６】
ヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１〜１０もしくは１６〜２５の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物を含む、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１〜１０もしくは１６〜２５の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になる、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１〜１０もしくは１６〜２５の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物からなる重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメインアミノ酸配列をコードする単離された核酸配列が本明細書においてさらに提供される。さらなる態様において、本開示は、ヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物を含む、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になる、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物からなる軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメインアミノ酸配列をコードする単離された核酸配列を提供する。別の態様において、本開示は、抗ＤＣＬＫ１抗体または抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列を提供する。
【００１７】
抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列を含む、または抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列から本質的になる、または抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列からなるベクターも本明細書において提供される。一態様において、本開示は、抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列を含む、または抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列から本質的になる、または抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列からなるベクターを提供する。
【００１８】
別の態様において、本開示は、担体と、抗ＤＣＬＫ１抗体；および／もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ；および／もしくは抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲをコードする単離された核酸；および／もしくは抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１をコードする単離された核酸配列を含む、もしくは抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１をコードする単離された核酸配列から本質的になる、もしくは抗ＤＣＬＫ１抗体もしくは抗ＤＣＬＫ１をコードする単離された核酸配列からなるベクター；および／もしくは抗ＤＣＬＫ１構築物を含む、もしくは抗ＤＣＬＫ１構築物から本質的になる、もしくは抗ＤＣＬＫ１構築物からなる単離された細胞のうちの１つもしくはそれより多くとを含む、または担体と、前記のうちの１つもしくはそれより多くとから本質的になる、または担体と、前記のうちの１つもしくはそれより多くとからなる組成物を提供する。
【００１９】
本開示の他の態様は、抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、または抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、または抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞およびこのような細胞を作製する方法に関する。本開示のさらに他の方法態様は、抗ＤＣＬＫ１抗体を作製する方法に関し、および有効量の単離された細胞を投与することを含む、または有効量の単離された細胞を投与することから本質的になる、または有効量の単離された細胞を投与することからなる方法によって、癌細胞または腫瘍、例えば固形腫瘍の増殖を阻害し、癌患者細胞を処置する方法に関する。
【００２０】
一態様において、本開示は、担体と、抗体もしくはその断片、抗体もしくはその断片をコードする核酸、抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞；および／もしくはＣＡＲをコードする単離された核酸；および／もしくはＣＡＲをコードする核酸を含む、もしくはＣＡＲをコードする核酸から本質的になる、もしくはＣＡＲをコードする核酸からなるベクター；および／もしくは抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを発現する単離された細胞；および／もしくは抗ＤＣＬＫ１抗体のうちの１つもしくはそれより多くとを含む、または担体と、前記のうちの１つもしくはそれより多くとから本質的になる、または担体と、前記のうちの１つもしくはそれより多くとからなる組成物を提供する。
【００２１】
抗ＤＣＬＫ１抗体または抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ細胞を作製および使用するための材料を含有するキットも本明細書において提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、抗ＤＣＫＬ１ヒト化抗体のセンサーグラムを図示する。
【００２３】
【図２】図２は、還元条件および非還元条件で各々２μｇの様々なヒト化ＣＢＴ−１５Ａ抗体を用いて実行したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【００２４】
【図３】図３は、ＥＬＩＳＡ上での様々な抗ＤＣＫＬ１抗体の抗原結合を示す。
【００２５】
【図４】図４は、ｏｃｔｅｔ分析に供された抗ＤＣＫＬ１抗体の速度論的結合の追跡を図示する。
【００２６】
【図５】図５は、ビオチン標識されたＤＣＬＫ１を用いたＦＡＣＳによる、レンチウイルスＤＣＬＫ１−ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞中におけるヒト（右パネル）またはマウス（右パネルから２番目）ＤＣＬＫ１−ＣＡＲの発現を示す。Ｔ細胞は、ヒトまたはマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲで効果的に形質導入された。ビオチン標識されたＤＣＬＫ１を用いたＦＡＣＳによって、ＣＡＲの発現を確認し、陰性対照である非形質導入Ｔ細胞（左パネル）と比較した。
【００２７】
【図６】図６は、抗Ｆ（ａｂ）’２抗体を用いたＦＡＣＳによる、レンチウイルスＤＣＬＫ１−ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞中でのヒト（右パネル）またはマウス（右パネルから２番目）ＤＣＬＫ１−ＣＡＲの発現を図示する。Ｔ細胞は、ヒトまたはマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲで効果的に形質導入された。抗マウスＦ（ａｂ）’２または抗ヒトＦａｂ’２のいずれかを用いたＦＡＣＳによって、ＣＡＲの発現を確認し、陰性対照である非形質導入Ｔ細胞（左パネル）と比較した。
【００２８】
【図７】図７は、ヒト化抗ＤＣＬＫ１ｍＡｂの異なるバリアントを用いた様々な細胞株のＦＡＣｓ分析を示す。ヒト結腸直腸癌細胞株：ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９、ＳＷ６２０；ヒト膵臓癌細胞株ＢｘＰＣ３；ヒト繊維肉腫細胞株ＨＴ１０８０；ヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ；ヒト多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６；ヒト胎児由来腎臓細胞２９３ＦＴ；およびヒト末梢血単核球を含む様々な癌細胞株。ヒト化ＤＣＬＫ１ｍＡｂの１２のバリアントを用いるＦＡＣＳに、ＰＢＭＣを供した。使用したｍＡｂに対して、パーセントＤＣＬＫ１陽性細胞をプロットした。
【００２９】
【図８】図８は、ほぼ全ての癌細胞中でＤＣＬＫ１  ＣＡＲ−Ｔ細胞がＩＦＮ−γを誘導したことを示しており、明白なＩＦＮ−γ依存性細胞溶解を示している。様々な癌細胞株（ヒト結腸直腸癌細胞株：ＣａＣｏ２、ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９、ＬＳ１２３およびＬｏＶｏ；ヒト子宮頸癌細胞株ＨｅＬａ；またはヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３）を、Ｔ細胞中のヒト（薄い灰色のバー）またはマウス（濃い灰色のバー）ＤＣＬＫ１−ＣＡＲのいずれかで処置し、ＩＦＮ−γを測定した。
【００３０】
【図９】図９は、非トランスデューサー細胞と比較して、処置後にマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−ＴがＩＦＮ−γを誘導したことを示す。ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ−３を、Ｔ細胞中のヒト（薄い灰色のバー）またはマウス（濃い灰色のバー）ＤＣＬＫ１−ＣＡＲのいずれかで処置し、ＩＦＮ−γを測定した。
【００３１】
【図１０】図１０は、エフェクター細胞なしと比べて、全ての癌細胞において、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ−ＴがＩＦＮ−γを誘導したことを図示しており、明確なＩＦＮ−γ依存性細胞溶解を示している。様々なヒト多発性骨髄腫細胞株（ＲＰＭＩ８２２６、ＭＭ１ＳおよびＫ５６２）を、ヒトＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞（灰色のバー）のいずれかで処置し、ＩＦＮ−γを測定した。
【００３２】
【図１１】図１１は、Ｔ細胞と比較して、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ−ＴがＩＦＮ−γを誘導したことを図示しており、明白なＩＦＮ−γ依存性細胞溶解を示している。ヒト多発性骨髄腫細胞株（ＲＰＭＩ８２２６）を、ヒトＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞（濃い灰色のバー）またはＴ細胞（薄い灰色のバー）のいずれかで処置し、ＩＦＮ−γを測定した。
【００３３】
【図１２】図１２は、リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣＡ）アッセイによって、ヒトおよびマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞が効果的にＢｘＰＣ３癌細胞株を死滅させたことを図示する。ＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞によって誘導された細胞傷害性は、ＢｘＰＣ３細胞中で、偽のＣＡＲ−Ｔ細胞より著しく高かった。Ｔ細胞のみでは、ＢｘＰＣ３癌細胞を著しく死滅させなかった。
【００３４】
【図１３】図１３は、リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣＡ）アッセイによって、ヒトおよびマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞が効果的にＨＣＴ１１６ヒト結腸直腸癌細胞株を死滅させたことを示す。ＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞によって誘導された細胞傷害性は、ＨＣＴ１１６細胞中で、偽のＣＡＲ−Ｔ細胞より著しく高かった。Ｔ細胞のみでは、ＨＣＴ１１６癌細胞を著しく死滅させなかった。
【００３５】
【図１４】図１４は、リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣＡ）アッセイによって、ヒトおよびマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞が効果的にＨＴ２９ヒト結腸直腸癌細胞株を死滅させたことを示す。ＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞によって誘導された細胞傷害性は、ＨＴ２９細胞中で、偽のＣＡＲ−Ｔ細胞より著しく高かった。Ｔ細胞のみでは、ＨＴ２９癌細胞を著しく死滅させなかった。
【００３６】
【図１５】図１５は、リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣＡ）アッセイによって、ヒトおよびマウスＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞が効果的にＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞株を死滅させたことを示す。ＤＣＬＫ１−ＣＡＲ−Ｔ細胞によって誘導された細胞傷害性は、ＨｅＬａ細胞中で、偽のＣＡＲ−Ｔ細胞より著しく高かった。Ｔ細胞のみでは、ＨｅＬａ癌細胞を著しく死滅させなかった。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
詳細な説明
定義
本開示は、記載されている特定の態様に限定されるものではなく、したがって、もちろん、変化し得ることが理解されなければならない。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書において使用される用語は特定の態様を記載することのみを目的としており、限定を意図していないことも理解されなければならない。
【００３８】
別段の定義がなければ、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本技術の実施または試験において、本明細書に記載されているものと同様のまたは等価なあらゆる方法および材料を使用することができるが、ここでは、好ましい方法、機器および材料が記載されている。本明細書に引用されている全ての技術刊行物および特許刊行物は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書のいかなる記述も、事前開示によって、本技術がかかる開示に先行する権利を有しないことを認めたものと解釈してはならない。
【００３９】
別段の記述がなければ、本技術の実施は、本分野の技術に属する、組織培養、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学および組換えＤＮＡの慣用技術を使用する。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ  ｅｄｓ．（２００１）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．（２００７）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  ＰＣＲ  １：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  ＰＣＲ  ２：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  ｅｄｓ．（１９９９）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２００５）  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，  ５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｇａｉｔ  ｅｄ．（１９８４）  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．（１９８４）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９９）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．（１９８４）  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６））；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ  ｅｄｓ．（１９８７）  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍａｋｒｉｄｅｓ  ｅｄ．（２００３）  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ；Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄｓ．（１９８７）  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；ａｎｄ  Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ（１９９６）  Ｗｅｉｒ’ｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照のこと。
【００４０】
範囲を含む全ての数的表記、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度および分子量は、適宜、１．０または０．１の増分によって、または＋／−１５％、または＋／−１０％、または＋／−５％、または＋／−２％の変動によって、（＋）または（−）に変動される近似値である。常に明示的に述べられているわけではないが、全ての数的表記には、「約」という用語が前置されていることが理解されるべきである。常に明示的に述べられているわけではないが、本明細書に記載されている試薬は単に例示であること、およびこのようなものと同等な試薬が本分野において知られていることも理解されるべきである。
【００４１】
本技術がポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドまたは抗体に関する場合には、かかるものの等価物または生物学的等価物が本技術の範囲に属することが意図されることが、別段の意図がなければ、明確な記述なしに推定されるべきである。
【００４２】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に反対の意味を指示しなければ、複数表記を含む。例えば、「１つの細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」という用語は、複数の細胞を含み、細胞の混合物を含む。
【００４３】
本明細書において使用される場合、「含む」という用語は、組成物および方法が表記された要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味することが意図される。組成物および方法を定義するために使用される場合、「から本質的になる」とは、意図される使用のための組み合わせにとってなんらかの本質的な重要性を有する他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、本明細書に定義されている要素から本質的になる組成物は、単離および精製法由来の微量夾雑物および薬学的に許容され得る担体、例えばリン酸緩衝生理食塩水、防腐剤などを除外しない。「からなる」とは、微量を超えるその他の成分および本明細書に開示されている組成物を投与するための実質的な方法工程を除外することを意味するものとする。これらの移行語の各々によって定義される態様は、本開示の範囲に属する。
【００４４】
本明細書において使用される場合、「動物」という用語は、例えば、哺乳動物および鳥類が含まれるカテゴリーである生きた多細胞脊椎生物を表す。「哺乳動物」という用語には、ヒトおよびヒト以外の哺乳動物の両方が含まれる。
【００４５】
「被験体」、「宿主」、「個体」および「患者」という用語は、本明細書において、動物、典型的には哺乳動物を表すために互換的に使用される。本明細書に記載されている方法、細胞または組成物によって、任意の適切な哺乳動物を処置することが可能である。哺乳動物の非限定的な例として、ヒト、ヒト以外の霊長類（例えば、類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、サル、マカクなど）、飼育動物（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）および実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）が挙げられる。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。哺乳動物は、任意の年齢または任意の発達段階（例えば、成体、青年（ｔｅｅｎ）、小児、乳幼児または子宮内の哺乳動物）であり得る。哺乳動物は、雄（ｍａｌｅ）または雌（ｆｅｍａｌｅ）であり得る。哺乳動物は、妊娠した雌であり得る。いくつかの実施形態において、被験体はヒトである。いくつかの実施形態において、被験体は、癌または新生物障害を有するまたは有すると疑われる。
【００４６】
「真核細胞」は、モネラ（ｍｏｎｅｒａ）を除く全ての生物界を含む。真核細胞は、膜に囲まれた核を通じて容易に識別することができる。動物、植物、真菌および原生生物は、真核生物、すなわち、内部の膜および細胞骨格によって、その細胞が複雑な構造へと組織されている生物である。最も特徴的な膜に囲まれた構造は核である。具体的に記載されていなければ、「宿主」という用語には、例えば、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物の細胞を含む、真核生物宿主が含まれる。真核細胞または宿主の非限定的な例には、サル、ウシ、ブタ、マウス、ラット、トリ、爬虫類およびヒトが含まれる。
【００４７】
本明細書において使用される場合、「細胞の集団」は、表現型および／または遺伝子型が同一である（クローン）または同一でない１を超える細胞の集合物を意図する。
【００４８】
本明細書において使用される場合、「実質的に均一な」細胞の集団は、予め選択されたマーカー、表現型またはゲノムの形質によって測定された場合に、少なくとも７０％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一の表現型を有する集団である。一態様において、集団はクローン集団である。
【００４９】
本明細書において使用される場合、「不均一な」細胞の集団は、予め選択されたマーカー、表現型またはゲノムの形質によって測定された場合に、最大６９％、または最大６０％、または最大５０％、または最大４０％、または最大３０％、または最大２０％、または最大１０％、または最大５％、または最大４％、または最大３％、または最大２％、または最大６１％、または最大０．５％同一の表現型を有する集団である。
【００５０】
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様分子、例えば、限定することなく、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、これらの組み合わせ、ならびに、任意の脊椎動物、例えば、ヒト、ヤギ、ウサギおよびマウスなどの哺乳動物中、およびサメ免疫グロブリンなどの非哺乳動物種中での免疫応答の間に産生される類似の分子などを総称する。具体的に別段の記載がなければ、「抗体」という用語は、他の分子への結合を実質的に除外して、関心対象の分子（または関心対象の高度に類似した分子の群）に特異的に結合する未変化の免疫グロブリンおよび「抗体断片」または「抗原結合断片」を含む（例えば、生物学的試料中の他の分子に対する結合定数より、少なくとも１０３Ｍ−１大きい、少なくとも１０４Ｍ−１大きいまたは少なくとも１０５Ｍ−１大きい、関心対象の分子に対する結合定数を有する抗体および抗体断片）。ある種の態様において、抗体は、１０−６Ｍ未満もしくは約１０−６Ｍ、または約１０−７Ｍ未満、または１０−８Ｍ未満もしくは約１０−８Ｍ、または１０−９Ｍ未満もしくは約１０−９Ｍ、または１０−１０Ｍ未満もしくは約１０−１０Ｍ、または１０−１１Ｍ未満もしくは約１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍ未満もしくは約１０−１２Ｍの親和性で結合する。
【００５１】
「抗体」という用語は、キメラ抗体（例えば、ヒト化されたマウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（二重特異性抗体など）などの遺伝的に改変操作された形態も含む。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．）；Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄＥｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９７も参照のこと。抗体の「抗原結合断片」とは、抗体の標的抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の一部である。
【００５２】
本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、Ｂリンパ球の単一クローンによってまたは単一の抗体の軽鎖および重鎖遺伝子がその中に形質移入されている細胞によって産生される抗体を表す。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、骨髄腫細胞の免疫脾臓細胞との融合からハイブリッド抗体形成細胞を作製することによって産生される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体およびヒト抗体が含まれる。
【００５３】
抗体構造に関して、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって相互結合された重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。ラムダ（λ）およびカッパ（κ）という２種類の軽鎖が存在する。抗体分子の機能的活性を決定する５つの主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥが存在する。各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域（これらの領域は、「ドメイン」としても知られる。）を含有する。組み合わせて、重鎖および軽鎖可変領域は、抗原を特異的に結合する。軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも称される３つの超可変領域によって分断された「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は定義されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照、参照により本明細書に組み入れられる。）。Ｋａｂａｔデータベースは、現在では、オンラインで整備されている。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で相対的に保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち、構成要素である軽鎖および重鎖のフレームワーク領域を合わせたものは、概ね、βシート立体構造を取っており、ＣＤＲは、βシート構造を接続し、一部の事例ではβシート構造の一部を形成するループを形成する。このため、フレームワーク領域は、鎖間、非共有相互作用によって、正しい配向にＣＤＲを配置させる足場を形成するように作用する。
【００５４】
ＣＤＲは、抗原のエピトープへの結合に主として関与している。各鎖のＣＤＲは、Ｎ末端から始まって連続して付番され、通例ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と表され、通例、当該ＣＤＲがその中に位置している鎖によっても特定される。このため、ＶＨＣＤＲ３は、これがその中に見出される抗体の重鎖の可変ドメイン中に位置するのに対して、ＶＬＣＤＲ１は、これがその中に見出される抗体の軽鎖の可変ドメイン由来のＣＤＲ１である。ＤＣＬＫ１を結合する抗体は、特異的なＶＨ領域とＶＬ領域配列を有し、したがって、特異的なＣＤＲ配列を有するであろう。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体ごとに変動するのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接関与している。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。
【００５５】
抗体に関して使用される場合、「ヒト化」という用語は、抗体のアミノ酸配列が、アクセプターヒト免疫グロブリン分子中の所望の抗原に特異的に結合する１またはそれを超える相補性決定領域（ＣＤＲ）の非ヒトアミノ酸残基（例えば、マウス、ラット、ヤギ、ウサギなど）と、ＣＤＲに隣接するアミノ酸残基である、Ｆｖフレームワーク領域（ＦＲ）中の１またはそれを超えるヒトアミノ酸残基とを有することを意味する。このような抗体は、１またはそれを超えるＣＤＲがそこから得られたまたはそれを基礎としている非ヒト親抗体と比べて、典型的には、低下した免疫原性を有し、したがって、より長いヒトでの半減期を有する。
【００５６】
本明細書において使用される場合、「抗原」という用語は、抗体分子またはＴ細胞受容体などの特異的な液性免疫または細胞性免疫の産物によって特異的に結合され得る化合物、組成物または物質を表す。抗原は、例えば、ハプテン、単純な中間代謝物、糖（例えば、オリゴ糖）、脂質およびホルモンならびに複合糖質（例えば、多糖）、リン脂質およびタンパク質などの高分子を含む、あらゆる種類の分子であり得る。抗原の一般的なカテゴリーには、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物およびその他の寄生生物抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患、アレルギーおよび移植片拒絶に関与する抗原、毒素および他の種々雑多な抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
本明細書において使用される場合、「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原標的に特異的に結合することができる任意のタンパク質またはポリペプチドドメインを表す。
【００５８】
核酸またはアミノ酸配列の文脈において、「キメラ」という用語は、その配列が、他の異なる物理的もしくは化学的実体に由来し、他の異なる物理的または化学的実体から取得もしくは単離され、または他の異なる物理的もしくは化学的実体に基づいている少なくとも１つの構成成分単位（例えば、断片、領域、部分、ドメイン、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）を含有し、構成されることを意図する。例えば、２またはそれを超える異なるタンパク質のキメラは、細胞シグナル伝達分子の膜貫通ドメインに融合された抗体由来の可変領域ドメインの配列を含み得る。いくつかの態様において、キメラは、その配列が少なくとも２つの異なる種由来の配列から構成されることを意図する。
【００５９】
本明細書において使用される場合、「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）という用語は、抗原に結合することができる細胞外ドメインと、細胞外ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来する膜貫通ドメインと、少なくとも１つの細胞内ドメインとを含む融合タンパク質を表す。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、「キメラ受容体」、「Ｔボディ（Ｔ−ｂｏｄｙ）」または「キメラ免疫受容体（ＣＩＲ）」と呼ばれることもある。「抗原に結合することができる細胞外ドメイン」は、ある種の抗原に結合することができる任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。「細胞内ドメイン」は、細胞中の生物学的過程の活性化または阻害を引き起こすためにシグナルを伝達するドメインとして機能することが知られている任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。ある実施形態において、細胞内ドメインは、主要なシグナル伝達ドメインに加えて、１もしくはそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインを含み得、または１もしくはそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインから本質的になり得、または１もしくはそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。「膜貫通ドメイン」は、細胞膜を貫通することが知られ、細胞外ドメインとシグナル伝達ドメインを連結するように機能することができる任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。キメラ抗原受容体は、必要に応じて、細胞外ドメインと膜貫通ドメイン間のリンカーとしての役割を果たす「ヒンジドメイン」を含み得る。各ドメインの成分をコードする非限定的な例示的ポリヌクレオチド配列が、本明細書に開示されている、例えば：
【００６０】
ヒンジドメイン：ＩｇＧ１重鎖ヒンジ配列：
CTCGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCG
【００６１】
膜貫通ドメイン：ＣＤ２８膜貫通領域：
TTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTG
【００６２】
細胞内ドメイン：４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域：
AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG
【００６３】
細胞内ドメイン：ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域：
AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC
【００６４】
細胞内ドメイン：ＣＤ３ζシグナル伝達領域：
AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA
【００６５】
各例示的なドメイン成分のさらなる実施形態には、上に開示されている核酸配列によってコードされるタンパク質と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する他のタンパク質が含まれる。さらに、このようなドメインの非限定的な例が、本明細書に提供されている。
【００６６】
本明細書において使用される場合、「ＤＣＬＫ１」という用語は、この名称が付されたダブルコルチンおよびＣａ２＋／カルモジュリン依存性キナーゼ様１タンパク質ならびに、アイソフォーム１〜４を含むがこれらに限定されないそのいくつかのバリアントのいずれか１つを含むがこれらに限定されない任意のＤＣＬＫ１バリアントと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、または少なくとも９５％の配列同一性を共有する類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ＤＣＬＫ１配列の例は本分野において公知であり、このようなものの非限定的な例は、ＧｅｎｅＣａｒｄｓ  Ｒｅｆ．Ｎｏ．：ＧＣ１３Ｍ０３５７６８；ＨＧＮＣ  Ｒｅｆ．Ｎｏ：２７００；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｆ．Ｎｏ．：９２０１，Ｅｎｓｅｍｂｌ  Ｒｅｆ．Ｎｏ．：ＥＮＳＧ０００００１３３０８３、ＯＭＩＭ  Ｒｅｆ．Ｎｏ．：６０４７４２；およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｒｅｆ．Ｎｏ．：Ｏ１５０７５の参照番号で見出されるものを含むがこれらに限定されない、様々な遺伝子データベース中に開示されている。アイソフォーム１〜４のそれぞれの非限定的な例示的配列が以下に挙げられる：配列番号５０〜５３およびこれらの各々の等価物。指定されたＤＣＬＫ１サブタイプを含むがこれに限定されない、名称ＤＣＬＫ１に対応する列記された参照およびＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒのそれぞれが付された配列またはその等価物は、さらなる非限定的な例として、参照により本明細書に組み入れられる。
【００６７】
本明細書において使用される場合、「第一世代ＣＡＲ」は、抗原に結合することができる細胞外ドメインと、細胞外ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来する膜貫通ドメインと、少なくとも１つの細胞内ドメインとを含むＣＡＲを表す。「第二世代ＣＡＲ」は、１つの共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢまたはＣＤ２８）をさらに含む第一世代ＣＡＲを表す。「第三世代ＣＡＲ」は、２つの共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢまたはＯＸ４０）をさらに含む第一世代ＣＡＲを表す。「第四世代ＣＡＲ」（「ＴＲＵＣＫ」としても知られる。）は、さらなる因子（例えば、炎症促進性サイトカインＩＬ−１２）を分泌するようにさらに改変操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞を表す。これらのＣＡＲ技術および細胞治療の総説は、Ｍａｕｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２２（３）：１８７５−８４（２０１６）に見出される。
【００６８】
本明細書において使用される場合、「シグナルペプチド」または「シグナルポリペプチド」という用語は、新たに合成された分泌性または膜ポリペプチドまたはタンパク質のＮ末端終端に通常存在するアミノ酸配列を意図する。シグナルペプチドまたはシグナルポリペプチドは、細胞膜を横切ってまたは細胞膜中にポリペプチドを誘導するように作用し、次いで、その後に取り除かれる。このようなものの例は、本分野において周知である。非限定的な例は、米国特許第８，８５３，３８１号および同第５，９５８，７３６号に記載されているものである。
【００６９】
制御ポリヌクレオチドに関して本明細書において使用される場合、「機能的に連結された」という用語は、特異的なタンパク質が制御ポリヌクレオチドに結合したときに、その連結されたポリヌクレオチドが転写されるような、制御ポリヌクレオチドとその制御ポリヌクレオチドが連結されているポリヌクレオチド配列との間での会合を表す。
【００７０】
「組成物」は、典型的には、活性因子、例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞またはＣＡＲ  ＮＫ細胞、抗体、化合物または組成物と天然に存在するもしくは天然に存在しない、不活性（例えば、検出可能な因子または標識）または活性な担体、例えばアジュバント、希釈剤、結合剤、安定化剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、防腐剤、アジュバントなどとの組み合わせを意図し、薬学的に許容され得る担体を含む。担体には、単独でまたは組み合わせて存在することができ、単独でまたは組み合わせて１〜９９．９９重量％または体積％を占める、薬学的賦形剤および添加物タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物（例えば、単糖、二、三、四オリゴ糖およびオリゴ糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化された糖などの誘導体化された糖；および多糖または糖ポリマーなどの糖）も含まれる。例示的なタンパク質賦形剤には、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組み換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどの血清アルブミンが含まれる。緩衝能力においても機能することができる代表的なアミノ酸／抗体成分には、アラニン、アルギニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが含まれる。炭水化物賦形剤も、本技術の範囲に属することが意図され、その例には、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖；ラフィノース、メレチトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖；ならびにマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）およびミオイノシトールなどのアルジトールが含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
細胞、処置、治療、因子、薬物および薬学的製剤を含む本開示にしたがって使用される組成物は、投与の容易さおよび投薬の均一性のために投薬単位形態にまとめることができる。「単位用量」または「投薬量」という用語は、被験体中での使用に適した物理的に分離した単位を表し、各単位は、その投与、すなわち適切な経路および投与計画に伴って所望の応答を生じるように計算された組成物の所定量を含有する。処置の数および単位用量の両方にしたがって、投与されるべき量は、所望される結果および／または保護に依存する。組成物の正確な量は、臨床医の判断にも依存し、各個体に特有である。用量に影響を及ぼす要因には、被験体の身体的および臨床的状態、投与の経路、処置の意図される最終目標（症候の緩和対治癒）ならびに当該組成物の効力、安定性および毒性が含まれる。製剤化されると、溶液は、投与製剤と適合する様式でおよび治療的にまたは予防的に効果的な量で投与されるであろう。製剤は、本明細書に記載されている注射可能溶液の種類など、様々な剤形で容易に投与される。
【００７２】
本明細書において使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、一連の複数の配列を整列させることによって決定され、複数の配列の各対応する位置におけるアミノ酸または塩基の優勢な選択を表す理想化された配列を規定するアミノ酸または核酸配列を表す。複数の配列の系列の配列に応じて、その系列に対するコンセンサス配列は、配列の各々と、ゼロ、１つ、数個またはそれを超える置換だけ異なり得る。また、複数の配列の系列の配列に応じて、１を超えるコンセンサス配列がその系列に対して決定され得る。コンセンサス配列の生成は、徹底した数学的分析の対象となってきた。コンセンサス配列を決定するために、様々なソフトウェアプログラムを使用することができる。
【００７３】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ８αヒンジドメイン」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＣＤ８αヒンジドメイン配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ヒト、マウスおよびその他の種に対するＣＤ８αヒンジドメインの例示的配列は、Ｐｉｎｔｏ，Ｒ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１１０：１６９−１７７に挙げられている。このようなものの非限定的な例には、以下のものが含まれる。
ヒトＣＤ８αヒンジドメイン：
PAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY
マウスＣＤ８αヒンジドメイン：
KVNSTTTKPVLRTPSPVHPTGTSQPQRPEDCRPRGSVKGTGLDFACDIY
ネコＣＤ８αヒンジドメイン：
PVKPTTTPAPRPPTQAPITTSQRVSLRPGTCQPSAGSTVEASGLDLSCDIY
【００７４】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ８α膜貫通ドメイン」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＣＤ８α膜貫通ドメイン配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ヒトＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８α鎖のアミノ酸位置１８３〜２０３（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＰ＿００１７５９．３）またはマウスＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８α鎖のアミノ酸位置１９７〜２１７（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＰ＿００１０７４５７９．１）およびラットＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８α鎖（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＰ＿１１３７２６．１）のアミノ酸位置１９０〜２１０を伴う断片配列は、ＣＤ８α膜貫通ドメインのさらなる例示的配列を与える。列記されているＮＣＢＩのそれぞれを伴う配列が、以下のように提供される。
ヒトＣＤ８α膜貫通ドメイン：
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT
マウスＣＤ８α膜貫通ドメイン：
IWAPLAGICVALLLSLIITLI
ラットＣＤ８α膜貫通ドメイン：
IWAPLAGICAVLLLSLVITLI
【００７５】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ２８膜貫通ドメイン」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＣＤ２８膜貫通ドメイン配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、または少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＸＭ＿００６７１２８６２．２およびＸＭ＿００９４４４０５６．１が付された断片配列は、ＣＤ２８膜貫通ドメインのさらなる非限定的な例示的配列を与える。列記されているアクセッション番号のそれぞれを伴う配列は、本明細書中に組み入れられる。
【００７６】
本明細書において使用される場合、「４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されている４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域の例示的配列は、米国特許出願第１３／８２６，２５８号に提供されている。米国特許出願第１３／８２６，２５８号に開示されている、関連する４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域の配列は、以下のように列記されている。
４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域：
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
【００７７】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。例示的なＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインは、米国特許第５，６８６，２８１号；Ｇｅｉｇｅｒ，Ｔ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９８：２３６４−２３７１（２００１）；Ｈｏｍｂａｃｈ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７：６１２３−６１３１（２００１）；Ｍａｈｅｒ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０：７０−７５（２００２）；Ｈａｙｎｅｓ，Ｎ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：５７８０−５７８６（２００２）；Ｈａｙｎｅｓ，Ｎ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １００：３１５５−３１６３（２００２）に提供されている。非限定的な例には、以下のＣＤ２８配列の残基１１４〜２２０：
MLRLLLALNL  FPSIQVTGNK  ILVKQSPMLV  AYDNAVNLSC  KYSYNLFSRE  FRASLHKGLDSAVEVCVVYG  NYSQQLQVYS  KTGFNCDGKL  GNESVTFYLQ  NLYVNQTDIY  FCKIEVMYPPPYLDNEKSNG  TIIHVKGKHL  CPSPLFPGPS  KPFWVLVVVG  GVLACYSLLVTVAFIIFWVR  SKRSRLLHSD  YMNMTPRRPG  PTRKHYQPYA  PPRDFAAYRSおよびその等価物が含まれる。
【００７８】
本明細書において使用される場合、「ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域の非限定的な例示的配列は、米国特許公開第２０１５／００１７１４１Ａ１号に提供されており、例示的なポリヌクレオチド配列が以下に提供されている。
ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域：
ACAAAAAAGA  AGTATTCATC  CAGTGTGCAC  GACCCTAACG  GTGAATACAT  GTTCATGAGA  GCAGTGAACA  CAGCCAAAAA  ATCCAGACTC  ACAGATGTGA  CCCTA
【００７９】
本明細書において使用される場合、「ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、または好ましくは９０％の配列同一性、または少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域の非限定的な例示的配列は、米国特許公開第２０１２／２０１４８５５２Ａ１号に開示されており、以下に提供されている例示的な配列が含まれる。
ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域：
AGGGACCAG  AGGCTGCCCC  CCGATGCCCA  CAAGCCCCCT  GGGGGAGGCA  GTTTCCGGAC  CCCCATCCAA  GAGGAGCAGG  CCGACGCCCA  CTCCACCCTG  GCCAAGATC
【００８０】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン」という用語は、この名称が付けられた特定のタンパク質断片および本明細書中に示されているＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインの例示的な配列は、米国特許公開第２０１３／０２６６５５１Ａ１号に提供されている。ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを伴う配列が以下に列記されている：
ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
【００８１】
本明細書において使用される場合、「自殺遺伝子」という用語は、細胞アポトーシスを誘導することができる遺伝子であり、非限定的な例には、ＨＳＶ−ＴＫ（単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ）、シトシンデアミナーゼ、ニトロ還元酵素、カルボキシルエステラーゼ、チトクロムＰ４５０またはＰＮＰ（プリンヌクレオシドホスホリラーゼ）、末端切断されたＥＧＦＲまたは誘導性カスパーゼ（「ｉＣａｓｐ」）が含まれる。自殺遺伝子は、様々な経路に沿って機能し得、いくつかの事例において、小分子などの誘導因子によって誘導可能であり得る。例えば、ｉＣａｓｐ自殺遺伝子は、誘導因子に結合するように最適化されたタンパク質に機能的に連結されたカスパーゼタンパク質の一部を含み、自殺遺伝子を含む細胞中への誘導因子の導入は、カスパーゼの活性化およびそれに続く前記細胞のアポトーシスをもたらす。
【００８２】
本明細書において使用される場合、「ＣＡＲの発現および／または活性化を調節するためのスイッチ機構」という用語は、細胞外ドメインが標的細胞上でまたは標的細胞によって発現されている標的抗原以外の分子に対して特異的である標識、結合ドメインまたはタグを含む標的特異的結合要素を含む、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを表す。ＣＡＲの特異性は、標的抗原結合ドメイン（例えば、抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片またはＤＣＬＫ１とＣＡＲ上の標識またはタグとを結合する二重特異性抗体）と、ＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグによって認識されるまたはＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグに結合するドメインとを含む第二の構築物によって提供される。例えば、国際公開第２０１３／０４４２２５号、国際公開第２０１６／０００３０４号、国際公開第２０１５／０５７８３４号、国際公開第２０１５／０５７８５２号、国際公開第２０１６／０７００６１号、米国特許第９，２３３，１２５号、米国特許公開第２０１６／０１２９１０９号を参照のこと。このようにして、ＣＡＲを発現するＴ細胞は被験体に投与することができるが、ＤＣＬＫ１特異的結合ドメインを含む第二の組成物が投与されるまで、その標的抗原（すなわち、ＤＣＬＫ１）を結合することができない。
【００８３】
本明細書において使用される場合、「Ｂ細胞」という用語は、適応免疫系の液性免疫中のリンパ球の一種を表す。Ｂ細胞は、主として、抗体を作製するように機能し、抗原提示細胞としての役割を果たし、サイトカインを放出し、抗原相互作用による活性化後にメモリーＢ細胞を発達させる。Ｂ細胞は、細胞表面上のＢ細胞受容体の存在によって、Ｔ細胞などの他のリンパ球から区別される。Ｂ細胞は、商業的に入手可能な源から単離または取得され得る。商業的に入手可能なＢ細胞株の非限定的な例には、ＡＨＨ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−８１４６（商標））、ＢＣ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２３０（商標））、ＢＣ−２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２３１（商標））、ＢＣ−３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２２７７（商標））、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６４８（商標））、ＤＧ−７５  ［Ｄ．Ｇ．−７５］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２６２５（商標））、ＤＳ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１１１０２（商標））、ＥＢ−３  ［ＥＢ３］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−８５（商標））、Ｚ−１３８（ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−３００１）、ＤＢ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２８９）、Ｔｏｌｅｄｏ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３１）、Ｐｆｉｆｆｅｒ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３２）、ＳＲ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６２）、ＪＭ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０４２１）、ＮＦＳ−５  Ｃ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９３）；  ＮＦＳ−７０  Ｃ１０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９４）、ＮＦＳ−２５  Ｃ−３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６９５）およびＳＵＰ−Ｂ１５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９２９）株が含まれる。さらなる例には、未分化大細胞リンパ腫由来の細胞株、例えば、ＤＥＬ、ＤＬ−４０、ＦＥ−ＰＤ、ＪＢ６、Ｋａｒｐａｓ  ２９９、Ｋｉ−ＪＫ、Ｍａｃ−２Ａ  Ｐｌｙ１、ＳＲ−７８６、ＳＵ−ＤＨＬ−１、−２、−４，−５，−６，−７，−８，−９，−１０および−１６、ＤＯＨＨ−２、ＮＵ−ＤＨＬ−１、Ｕ−９３７、Ｇｒａｎｄａ  ５１９、ＵＳＣ−ＤＨＬ−１、ＲＬ；ホジキンリンパ腫、例えば、ＤＥＶ、ＨＤ−７０、ＨＤＬＭ−２、ＨＤ−ＭｙＺ、ＨＫＢ−１、ＫＭ−Ｈ２、Ｌ４２８、Ｌ５４０、Ｌ１２３６、ＳＢＨ−１、ＳＵＰ−ＨＤ１、ＳＵ／ＲＨ−ＨＤ−１が含まれるが、これらに限定されない。このような商業的に入手可能な細胞株のための非限定的な例示的な入手源には、アメリカ培養細胞系統保存機関すなわちＡＴＣＣ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびドイツ微生物細胞培養コレクション（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。
【００８４】
本明細書において使用される場合、「ＣＲＩＳＰＲ」という用語は、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート経路に依拠する配列特異的遺伝子操作の技術を表す。ＣＲＩＳＰＲは、遺伝子編集および／または遺伝子制御を実施するために、ならびに特異的なゲノムの位置へ単にタンパク質を標的誘導するために使用することができる。「遺伝子編集」は、標的ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、該ポリヌクレオチド配列への欠失、挿入、一本鎖もしくは二本鎖切断または塩基置換の導入を通じて改変される遺伝子改変操作の一種を表す。いくつかの態様において、ＣＲＩＳＰＲによって媒介される遺伝子編集は、編集を実施するために非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同的組換えの経路を使用する。遺伝子制御は、タンパク質またはＲＮＡなどの特異的な遺伝子産物の産生を増加させることまたは減少させることを表す。
【００８５】
本明細書において使用される場合、「ｇＲＮＡ」または「ガイドＲＮＡ」という用語は、ＣＲＩＳＰＲ技術を使用する遺伝子編集のために特異的ポリヌクレオチド配列を標的とするために使用されるガイドＲＮＡ配列を表す。標的特異性のためにｇＲＮＡおよびドナー治療用ポリヌクレオチドを設計する技術は、本分野において周知である。例えば、Ｄｏｅｎｃｈ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０１４；３２（１２）：１２６２−７，Ｍｏｈｒ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２０１６）ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２８３：３２３２−３８およびＧｒａｈａｍ，  Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．２０１５；１６：２６０。ｇＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む融合ポリヌクレオチド；もしくはＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含むポリヌクレオチドを含み、またはＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む融合ポリヌクレオチド；もしくはＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含むポリヌクレオチドから本質的になり、またはＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む融合ポリヌクレオチド；もしくはＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含むポリヌクレオチドからなる。いくつかの態様において、ｇＲＮＡは、合成される（Ｋｅｌｌｅｙ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３３（２０１６）７４−８３）。
【００８６】
「Ｃａｓ９」という用語は、この名前によって表されるＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼを表す。非限定的な例示的Ｃａｓ９には、スタフィロコッカス・オーレウスＣａｓ９、ヌクレアーゼデッドＣａｓ９ならびにこれらの各々のオルソログおよび生物学的等価物が含まれる。オルソログには、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９（「ｓｐＣａｓ９」）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ）、レジオネラ・ニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、ナイセリア・ラクタミカ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、フランシセラ・ノビシダ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｎｏｖｉｃｉｄａ）由来のＣａｓ９およびアシドアミノコッカス（Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）属種およびフランシセラ・ノビシダ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｎｏｖｉｃｉｄａ）Ｕ１１２を含む様々な細菌種由来のＣｐｆ１（Ｃａｓ９と類似の切断機能を発揮する）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８７】
キメラ抗原受容体細胞の産生に対して適用される場合の「形質導入する」または「形質導入」という用語は、外来ヌクレオチド配列を細胞中に導入する過程を表す。いくつかの実施形態において、この形質導入はベクターを介して行われる。
【００８８】
本明細書において使用される場合、「ベクター」という用語は、プラスミド、ウイルス、コスミド、ファージ、ＢＡＣ、ＹＡＣなどを含むがこれらに限定されない異なる宿主間での転移のために設計された核酸構築物を表す。「ウイルスベクター」は、インビボ、エクソビボまたはインビトロのいずれかで、宿主細胞中に送達されるべきポリヌクレオチドを含む組換え的に産生されたウイルスまたはウイルス粒子として定義される。いくつかの実施形態において、プラスミドベクターは、商業的に入手可能なベクターから調製され得る。他の実施形態において、ウイルスベクターは、本分野において公知の技術にしたがって、バキュロウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、ＡＡＶなどから作製され得る。一実施形態において、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。ウイルスベクターの例には、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、アルファウイルスベクターなどが含まれる。感染性タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）ベースのベクターは、タンパク質を製造するために使用することが可能であり、タバコの葉の中でグリフィスシン（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓｉｎ）を発現することが報告されている（Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０６（１５）：６０９９−６１０４）。セムリキ森林ウイルスベースのベクターおよびシンドビスウイルスベースのベクターなどのアルファウイルスベクターも、遺伝子治療および免疫治療において使用するために開発されてきた。Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ＆Ｄｕｂｅｎｓｋｙ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５：４３４−４３９およびＹｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５（７）：８２３−８２７を参照のこと。遺伝子導入がレトロウイルスベクターによって媒介される態様において、ベクター構築物は、レトロウイルスゲノムまたはその一部と、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドなど関心対象の遺伝子とを含むポリヌクレオチドを表す。遺伝子導入において使用するためのベクターの現代的方法についてのさらなる詳細は、例えば、Ｋｏｔｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｕｔｌｏｏｋ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １７中に見出し得る。プロモーターと、ポリヌクレオチドをその中に機能的に連結することができるクローニング部位とを両方を含有するベクターは、本分野において周知である。このようなベクターは、ＲＮＡをインビトロまたはインビボで転写することが可能であり、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，Ｃａｌｉｆ．）およびＰｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）などの入手先から商業的に入手可能である。
【００８９】
本明細書において使用される場合、「Ｔ２Ａ」および「２Ａペプチド」という用語は、任意の２Ａペプチドもしくはその断片、任意の２Ａ様ペプチドもしくはその断片、またはコンセンサスポリペプチドモチーフＤ−Ｖ／Ｉ−Ｅ−Ｘ−Ｎ−Ｐ−Ｇ−Ｐ（Ｘは、一般に自己切断型であると考えられている任意のアミノ酸を表す。）を含有する（ウイルスの起源に応じて、２０アミノ酸長ほどの）相対的に短いペプチド配列中に必要なアミノ酸を含む人工のペプチドを表すために互換的に使用される。
【００９０】
「免疫細胞」には、ＨＳＣ、白血球細胞（白血球）、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。）および骨髄系由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）を含むがこれらに限定されない造血幹細胞（ＨＳＣ）によって産生される全ての細胞が含まれる。「白血球」には、リンパ球、顆粒球、単球およびマクロファージが含まれるが、これらに限定されない。
【００９１】
本明細書において使用される場合、「免疫応答」またはそれと同等の「免疫学的応答」という語句は、細胞によって媒介される（例えば、抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介される）応答の発生を表す。細胞性免疫応答は、ウイルス感染を処置もしくは予防し、抗原特異的Ｂ−ｒｅｇ細胞、ＴＣ１、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞および／またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞および／または疾患によって作出される自己調節的Ｔ細胞およびＢ細胞「メモリー」細胞を拡大増殖させるために、クラスＩまたはクラスＩＩ  ＭＨＣ分子を伴ったポリペプチドエピトープの提示によって惹起される。この応答は、他の成分の活性化も伴い得る。いくつかの態様において、「免疫応答」という用語は、免疫細胞の制御性ネットワークの形成を包含するために使用され得る。このため、「制御性ネットワーク形成」という用語は、免疫細胞、好ましくはＴ細胞、より好ましくは制御性Ｔ細胞が、Ｂ細胞または抗原提示細胞−その非限定的な例には、樹状細胞、単球およびマクロファージが含まれる−などの、但しこれらに限定されないその他の免疫細胞のさらなる分化の引き金を引くように惹起された免疫応答を表し得る。ある実施形態において、制御性ネットワーク形成は、制御性Ｂ細胞へ分化されているＢ細胞を伴い、ある実施形態において、制御性ネットワーク形成は、免疫寛容原性抗原提示細胞の形成を伴う。
【００９２】
本明細書において使用される場合、「炎症性応答」および「炎症」という用語は、病原体、損傷された細胞もしくは刺激物質および／または炎症促進性サイトカインなどの炎症性シグナルなどの外因性または内因性刺激に対する、個体または被験体の免疫細胞、液性因子および血管組織の複雑な生物学的応答を示す。炎症性応答には、サイトカインの、より具体的には炎症促進性サイトカイン、すなわち、活性化された免疫細胞によって主に産生され、炎症性反応の増幅に関与するサイトカインの分泌が含まれる。例示的な炎症促進性サイトカインおよびケモカインには、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７（ファミリーメンバーＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆを含む。）、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＴＧＦ−βが含まれるが、これらに限定されない。例示的な抗炎症性サイトカインには、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒα、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＮＦ−αが含まれるが、これらに限定されない。サイトカインは、具体的な生物学的状況に応じて、炎症促進性および抗炎症性特性のいずれをも有し得る（Ｃａｖａｉｌｌｏｎ，Ｊ．Ｍ（２００１）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ４７（４）：６９５−７０２）。例示的な炎症には、急性炎症および慢性炎症が含まれる。急性炎症は、血漿および白血球による組織の浸潤に起因する炎症の古典的徴候（腫脹、発赤、疼痛、熱および機能の喪失）によって特徴付けられる短期過程を示す。急性炎症は、典型的には、傷害性刺激が存在する限り起こり、刺激が除去され、分解されまたは瘢痕によって囲まれると（繊維症）、停止する。慢性炎症は、同時発生的な活動性炎症、組織破壊および修復の試みによって特徴付けられる症状を示す。慢性炎症は、上に列記されている急性炎症の古典的徴候によっては特徴付けられない。代わりに、慢性炎症組織は、単核免疫細胞（単球、マクロファージ、リンパ球および形質細胞）の浸潤、組織破壊ならびに血管新生および繊維症を含む治癒の試みによって特徴付けられる。炎症は、個体中で炎症と関連する複雑な生物学的応答を形成する事象のうちの任意の１つに影響を与えることによって、特に阻害することによって、本開示において阻害することができる。
【００９３】
本明細書において使用される場合、「Ｔ細胞」という用語は、胸腺中で成熟するリンパ球の一種を表す。Ｔ細胞は、細胞性免疫において重要な役割を果たし、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在によって、Ｂ細胞などの他のリンパ球から区別される。Ｔ細胞は、商業的に入手可能な入手源から単離または取得され得る。「Ｔ細胞」には、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ）およびγδＴ細胞を含む、ＣＤ３を発現する全ての種類の免疫細胞が含まれる。「細胞傷害性細胞」には、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および好中球が含まれ、これらの細胞は、細胞傷害性応答を媒介することが可能である。商業的に入手可能なＴ細胞株の非限定的な例には、ＢＣＬ２（ＡＡＡ）  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０２（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ７０Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）  ＣＲＬ−２９００（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ８７Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０１（商標））、ＢＣＬ２  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９９（商標））、Ｎｅｏ  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９８（商標））、ＴＡＬＬ−１０４細胞傷害性ヒトＴ細胞株（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１１３８６）株が含まれる。さらなる例には、成熟Ｔ細胞株、例えば、Ｄｅｇｌｉｓ、ＥＢＴ−８、ＨＰＢ−ＭＬｐ−Ｗ、ＨＵＴ  ７８、ＨＵＴ  １０２、Ｋａｒｐａｓ  ３８４、Ｋｉ  ２２５、Ｍｙ−Ｌａ、Ｓｅ−Ａｘ、ＳＫＷ−３、ＳＭＺ−１およびＴ３４など；ならびに未成熟Ｔ細胞株、例えば、ＡＬＬ−ＳＩＬ、Ｂｅ１３、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ、ＣＭＬ−Ｔ１、ＤＮＤ−４１、ＤＵ．５２８、ＥＵ−９、ＨＤ−Ｍａｒ、ＨＰＢ−ＡＬＬ、Ｈ−ＳＢ２、ＨＴ−１、ＪＫ−Ｔ１、Ｊｕｒｋａｔ、Ｋａｒｐａｓ  ４５、ＫＥ−３７、ＫＯＰＴ−Ｋ１、Ｋ−Ｔ１、Ｌ−ＫＡＷ、Ｌｏｕｃｙ、ＭＡＴ、ＭＯＬＴ−１、ＭＯＬＴ  ３、ＭＯＬＴ−４、ＭＯＬＴ  １３、ＭＯＬＴ−１６、ＭＴ−１、ＭＴ−ＡＬＬ、Ｐ１２／Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｐｅｅｒ、ＰＥＲ０１１７、ＰＥＲ−２５５、ＰＦ−３８２、ＰＦＩ−２８５、ＲＰＭＩ−８４０２、ＳＴ−４、ＳＵＰ−Ｔ１〜Ｔ１４、ＴＡＬＬ−１、ＴＡＬＬ−１０１、ＴＡＬＬ−１０３／２、ＴＡＬＬ−１０４、ＴＡＬＬ−１０５、ＴＡＬＬ−１０６、ＴＡＬＬ−１０７、ＴＡＬＬ−１９７、ＴＫ−６、ＴＬＢＲ−１、−２、−３および−４、ＣＣＲＦ−ＨＳＢ−２（ＣＣＬ−１２０．１）、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５３）、Ｊ４５．０１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９９０）、Ｊ．ＣａＭ１．６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２０６３）、ＲＳ４；１１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１８７３）、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣ  ＣＲＭ−ＣＣＬ−１１９）；皮膚Ｔ細胞リンパ腫株、例えばＨｕＴ７８（ＡＴＣＣ  ＣＲＭ−ＴＩＢ−１６１）、ＭＪ［Ｇ１１］（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８２９４）、ＨｕＴ１０２（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１６２）が含まれるが、これらに限定されない。ＲＥＨ、ＮＡＬＬ−１、ＫＭ−３、Ｌ９２−２２１を含むがこれらに限定されないヌル白血病細胞株は、Ｋ５６２赤白血病、ＴＨＰ−１単核球白血病、Ｕ９３７リンパ腫、ＨＥＬ赤白血病、ＨＬ６０白血病、ＨＭＣ−１白血病、ＫＧ−１白血病、Ｕ２６６骨髄腫などのその他の白血病およびリンパ腫に由来する細胞株と同様に、別の商業的に入手可能な免疫細胞の源である。このような商業的に入手可能な細胞株のための非限定的な例示的な入手先には、アメリカ培養細胞系統保存機関すなわちＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびドイツ微生物細胞培養コレクション（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。
【００９４】
ナチュラルキラー細胞としても知られる、本明細書において使用される場合、「ＮＫ細胞」という用語は、骨髄を起源とし、自然免疫系において重要な役割を果たすリンパ球の一種を表す。ＮＫ細胞は、抗体および細胞表面上の主要組織適合複合体の不存在下でさえ、ウイルス感染細胞、腫瘍細胞またはその他のストレスを受けた細胞に対して迅速な免疫応答を与える。ＮＫ細胞は、商業的に入手可能な入手源から単離または取得され得る。商業的なＮＫ細胞株の非限定的な例には、ＮＫ−９２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０７（商標））、ＮＫ−９２ＭＩ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０８ＴＭ）株が含まれる。さらなる例には、ＮＫ株、ＨＡＮＫ１、ＫＨＹＧ−１、ＮＫＬ、ＮＫ−ＹＳ、ＮＯＩ−９０およびＹＴが含まれるが、これらに限定されない。このような商業的に入手可能な細胞株のための非限定的な例示的な入手先には、アメリカ培養細胞系統保存機関すなわちＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）およびドイツ微生物細胞培養コレクション（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。
【００９５】
本明細書において使用される場合、「核酸配列」および「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかである、任意の長さのヌクレオチドのポリマー性形態を表すために互換的に使用される。このため、本用語には、一本鎖、二本鎖もしくは多重鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドまたはプリンおよびピリミジン塩基もしくは他の天然の、化学的にもしくは生化学的に修飾された、非天然のもしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーが含まれるが、これらに限定されない。
【００９６】
核酸配列に対して適用される場合の「コードする」という用語は、その原型の状態でまたは当業者に周知の方法によって操作された場合に、転写および／または翻訳されてポリペプチドおよび／またはその断片に対するｍＲＮＡを産生することができれば、ポリペプチドを「コードする」と称されるポリヌクレオチドを表す。アンチセンス鎖は、このような核酸の相補物であり、コード配列はアンチセンス鎖から推定することができる。
【００９７】
本明細書において使用される場合、シグナルペプチドまたはシグナルポリペプチドという用語は、新たに合成された分泌性または膜ポリペプチドまたはタンパク質のＮ末端終端に通常存在するアミノ酸配列を意図する。シグナルペプチドまたはシグナルポリペプチドは、細胞膜を横切ってまたは細胞膜中にポリペプチドを誘導するように作用し、次いで、その後に取り除かれる。このようなものの例は、本分野において周知である。非限定的な例は、米国特許第８，８５３，３８１号および同第５，９５８，７３６号に記載されているものである。
【００９８】
本明細書において使用される場合、「プロモーター」という用語は、遺伝子などのコード配列の発現を制御する任意の配列を表す。プロモーターは、例えば、恒常的、誘導性、抑制可能または組織特異的であり得る。「プロモーター」は、そこにおいて転写の開始および速度が調節されるポリヌクレオチド配列の領域である調節配列である。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などの調節タンパク質および分子がそこに結合し得る遺伝要素を含有し得る。
【００９９】
本明細書において使用される場合、「単離された細胞」という用語は、組織の他の細胞から実質的に分離されている細胞を一般的に表す。「免疫細胞」には、例えば、骨髄中で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球細胞（白血球）、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、骨髄系由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）ならびに免疫系列になることが決められたこれらの前駆体が含まれる。Ｔ細胞の前駆体は、成熟Ｔ細胞を産生するように分化することができる系列が限定された幹細胞および前駆細胞である。Ｔ細胞の前駆体には、ＨＳＣ、長期ＨＳＣ、短期ＨＳＣ、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、リンパ系多能性前駆細胞（ＬＭＰＰ（ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｐｒｉｍｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ））、早期リンパ前駆細胞（ＥＬＰ（ｅａｒｌｙ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ））、共通リンパ前駆細胞（ＣＬＰ（ｃｏｍｍｏｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ））、Ｐｒｏ−Ｔ細胞（ＰｒｏＴ）、早期Ｔ系列前駆体（ｅａｒｌｙ  Ｔ−ｌｉｎｅａｇｅ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）／二重陰性１細胞（ＥＴＰ／ＤＮ１）、二重陰性（ＤＮ）２ａ、ＤＮ２ｂ、ＤＮ３ａ、ＤＮ３ｂ、ＤＮ４および二重陽性（ＤＰ）細胞が含まれる。ヒトにおけるこのようなＴ細胞前駆体のマーカーには、ＨＳＣ：ＣＤ３４＋および必要に応じて、ＣＤ３８−；長期ＨＳＣ：  ＣＤ３４＋ＣＤ３８−および細胞系列陰性、ここで、細胞系列陰性は、ＴＥＲ１１９、Ｍａｃ１、Ｇｒ１、ＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０、ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８の群より選択される１またはそれを超える細胞系列特異的マーカーに関して陰性であることを意味する；ＭＰＰ：ＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ９０−および必要に応じて、細胞系列陰性；ＣＬＰ：  ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋ＣＤ１０＋および必要に応じて、細胞系列陰性；  ＬＭＰＰ／ＥＬＰ：ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ３８−および必要に応じて、細胞系列陰性；ＤＮ１：ＣＤ１１７−ＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ１ａ−；ＤＮ２：ＣＤ１１７＋ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋ＣＤ１ａ−；ＤＮ３：ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋ＣＤ１ａ＋；ＤＮ４：ＣＤ４＋ＣＤ３−；ＤＰ：ＣＤ４＋ＣＤ８＋および必要に応じて、ＣＤ３＋が含まれるが、これらに限定されない。ＮＫ細胞の前駆体は、成熟ＮＫ細胞を産生するように分化することができる系列限定された幹細胞および前駆細胞である。ＮＫ前駆体には、ＨＳＣ、長期ＨＳＣ、短期ＨＳＣ、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、共通骨髄系前駆体（ＣＭＰ）、顆粒球−マクロファージ前駆体（ＧＭＰ）、プロＮＫ、プレＮＫおよび未成熟ＮＫ（ｉＮＫ）が含まれる。このようなＮＫ前駆体のマーカーには、ＣＭＰ：ＣＤ５６−ＣＤ３６−ＣＤ３３＋ＣＤ３４＋ＮＫＧ２Ｄ−ＮＫｐ４６−；ＧＭＰ：ＣＤ５６−ＣＤ３６−ＣＤ３３＋ＣＤ３４＋ＮＫＧ２Ｄ−ＮＫｐ４６−；プロＮＫ：ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ１０＋ＣＤ１１７−ＣＤ１６１−；プレＮＫ：ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ１０−ＣＤ１１７＋ＣＤ１６１＋／−；およびｉＮＫ：ＣＤ３４−ＣＤ１１７＋ＣＤ１６１＋ＮＫｐ４６−ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ−が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、ＮＫ細胞前駆体のマーカーには、ＣＤ１１７＋ＣＤ１６１＋ＣＤ２４４＋ＣＤ３３＋ＣＤ５６−ＮＣＲ−ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ−およびＬＦＡ−１−が含まれるが、これらに限定されない。前駆体細胞表面マーカーを検出するための表現型決定試薬は、例えば、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）およびＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手可能である。「Ｔ細胞」には、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ）およびγδＴ細胞を含む、ＣＤ３を発現する全ての種類の免疫細胞が含まれる。「細胞傷害性細胞」には、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および好中球が含まれ、これらの細胞は、細胞傷害性応答を媒介することが可能である。
【０１００】
キメラ抗原受容体細胞の産生に対して適用される場合の「形質導入する」または「形質導入」という用語は、外来ヌクレオチド配列を細胞中に導入する過程を表す。いくつかの実施形態において、この形質導入はベクターを介して行われる。
【０１０１】
本明細書において使用される場合、細胞に関する「自家」という用語は、単離され、同じ被験体（レシピエントまたは宿主）中に注入して戻される細胞を表す。「同種異系」は、非自家細胞を表す。
【０１０２】
「有効量」または「効果的な量」は、哺乳動物またはその他の被験体の処置のために投与されたときに、疾患に対するこのような処置に影響を及ぼすのに十分である、１つの因子の量または２もしくはそれを超える因子の組み合わされた量を表す。「有効量」は、薬剤、疾患およびその重度ならびに処置されるべき被験体の年齢、体重などに応じて変動するであろう。
【０１０３】
本明細書において使用される場合、「癌」は、異常な調節されない複製を示す細胞の被験体中での存在によって特徴付けられる疾患状態であり、「腫瘍」という用語と互換的に使用され得る。いくつかの実施形態において、癌は、結腸癌、直腸癌、腸癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、子宮頸癌もしくは卵巣癌、または繊維肉腫、肺癌、肝臓癌、食道癌、乳癌、大唾液腺癌腫、神経芽細胞腫もしくは腎細胞癌腫または白血病（ｌｅｕｋｅｍｉａｎ）および多発性骨髄腫などの血液癌である。結腸および直腸癌または結腸直腸癌は、大腸（結腸）または直腸（結腸の末端）で始まる癌を表す。結腸直腸癌細胞の非限定的な例は、ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９、ＳＷ６２０  ＣａＣｏ２、ＬＳ１２３またはＬｏＶｏ細胞である。これらの結腸直腸癌細胞の表現型は、Ａｈｍｅｄ，Ｄ  ｅｔ  ａｌ．”Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ２４  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ”Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｖｏｌ．２，９ｅ７１．（２０１３）に記載されている。
【０１０４】
腸癌は、小腸中で始まる癌を表す。胃の癌または胃癌は、胃の中で、一般的には胃の内壁を形成している細胞中で発症する癌を表す。膵臓癌は、膵臓中で始まる癌を表す。膵臓癌細胞の非限定的な（Ｎｏｎ−ｌｉｍｉｎｇ）例は、ＢｘＰＣ３細胞である。これらの膵臓癌細胞の表現型はＤｅｅｒ，Ｅｍｉｌｙ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．”Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ”Ｐａｎｃｒｅａｓ  ｖｏｌ．３９，４：４２５−３５（２０１０）に記載されている。
【０１０５】
子宮頸癌は、子宮頸部中で発症する癌を表す。子宮頸癌細胞の非限定的な例は、ＨｅＬａ細胞である。これらの子宮頸癌細胞の表現型は、Ｃｈｅｎ  ＴＲ．（１９８８）  “Ｒｅ−ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨｅＬａ，  ＨｅＬａ  Ｓ３，  ａｎｄ  ＨＥｐ−２  ｋａｒｙｏｔｙｐｅｓ”  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．４８：１９−２４，およびＭａｃｖｉｌｌｅ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ａｎｄ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｓｐｅｃｔｒａｌ  ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：１４１−１５０に記載されている。
【０１０６】
繊維肉腫は、繊維芽細胞中で始まる癌を表す。繊維肉腫細胞の非限定的な例は、ＨＴ１０８０細胞である。これらの繊維肉腫細胞の表現型は、Ｒａｓｈｅｅｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｓａｒｃｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ（ＨＴ−１０８０）”  Ｃａｎｃｅｒ  ３３，１０２７−１０３３（１９７４）およびＨｕ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓａｒｃｏｍａ  ｃｅｌｌｓ：  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｓ  ａｎ  ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．５７：３５７７−３５８４（１９９７）に記載されている。
【０１０７】
多発性骨髄腫は、血液中の形質細胞中で始まる癌を表す。多発性骨髄腫細胞の非限定的な例は、ＲＰＭＩ８２２６、ＭＭ１ＳまたはＫ５６２細胞である。これらの多発性骨髄腫細胞の表現型は、Ｍｏｏｒｅ  ＧＥ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｍｙｅｌｏｍａ”Ｎ．Ｙ．Ｓｔａｔｅ  Ｊ．Ｍｅｄ．６８：２０５４−２０６０（１９６８），Ｐｅｌｌａｔ−Ｄｅｃｅｕｎｙｎｋ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．“Ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ａｓ  ａ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ａ  ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ  １８  ｙｅａｒｓ  ａｆｔｅｒ”  Ｂｌｏｏｄ  ８６：４００１−４００２（１９９５），Ｇｏｌｄｍａｎ−Ｌｅｉｋｉｎ  ＲＥ，ｅｔ  ａｌ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ，  ＭＭ．１”Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１１３（３）：３３５−３４５（１９８９），Ｇｒｅｅｎｓｔｅｉｎ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＭ．１  ｈｕｍａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ（ＭＭ）  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ：Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  ｅｌｕｃｉｄａｔｅ  ｔｈｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，  ｂｅｈａｖｉｏｒ，  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  −ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ＭＭ  ｃｅｌｌｓ”  Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．：３１：２７１−２８２（２００３），Ｍｏａｌｌｉ  ＰＡ，ｅｔ  ａｌ．“Ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍＲＮＡ”Ｂｌｏｏｄ．７９：２１３−２２２（１９９２），ＨＰ  Ｋｏｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．“Ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ”Ｂｌｏｏｄ  ５６：３４４−３５０（１９８０），Ｌｏｚｚｉｏ  ＢＢ  ｅｔ  ａｌ．“Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｒｉｇｉｎａｌ  Ｋ−５６２  ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ”  Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．３：３６３−３７０  （１９７９），Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  ＬＣ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｋ５６２−−ａ  ｈｕｍａｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２３：１４３−１４７（１９７９），およびＬｏｚｚｉｏ  ＢＢ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ（Ｋ−５６２）  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｒｉｇｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１６６：５４６−５５０（１９８１）に記載されている。
【０１０８】
「卵巣癌」という用語は、卵巣の組織（ｉｓｓｕｅｓ）中で形成し、癌内の細胞を宿主生物に対して病的にし、身体の他の部分に浸潤しまたは拡散する能力を有する悪性形質転換を経た癌の一種を表す。本明細書での卵巣癌は、低組織学的グレードのＩ型癌およびより高い組織学的グレードのＩＩ型癌を含む。特に、卵巣癌には、上皮癌腫、漿液性癌腫、明細胞癌腫、性索間質性腫瘍、胚細胞性腫瘍、未分化胚細胞腫、混合腫瘍、続発性卵巣癌、低悪性度腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。卵巣癌細胞の非限定的な例は、ＳＫＯＶ３またはＯＶＣＡＲ−３細胞である。これらの卵巣癌細胞の表現型は、Ｆｏｇｈ  Ｊ．“Ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ”Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；（１９７５），Ｗｉｅｃｈｅｎ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．“Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃ−ｅｒｂＢ−２  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｂｉｌｉｔｉｅｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｔｈｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｏｆ  ＳＫ−ＯＶ−３  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ”Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８１：７９０−７９５（１９９９）およびＨａｍｉｌｔｏｎ  ＴＣ，ｅｔ  ａｌ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ（ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３）  ｗｉｔｈ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ａｎｄ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４３：５３７９−５３８９，（１９８３）に記載されている。
【０１０９】
「前立腺癌」という用語は、雄性生殖系中の腺である前立腺中に発症する癌の一種を表す。本明細書中の前立腺癌には、腺癌、肉腫、小細胞癌腫、神経内分泌腫瘍、移行上皮癌腫が含まれるが、これらに限定されない。前立腺癌細胞の非限定的な（Ｎｏｎ−ｌｉｍｉｎｇ）例は、ＬＮＣａＰ細胞である。これらの前立腺癌細胞の表現型は、“Ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ”３７  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｌｉｓｓ；（１９８０），Ｇｉｂａｓ  Ｚ，  ｅｔ  ａｌ．“Ａ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  （ＬＮＣａＰ）”Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．１１：３９９−４０４，（１９８４），Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚ  ＪＳ，ｅｔ  ａｌ．“ＬＮＣａＰ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４３：１８０９−１８１８，（１９８３）およびＳｉｅｈ，  Ｓｈｉｒｌｙ  ｅｔ  ａｌ．“Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ＬＮＣａＰ  ｃｅｌｌｓ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｗｉｔｈｉｎ  ａ  ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ”ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ｖｏｌ．７，９：ｅ４０２１７（２０１２）に記載されている。
【０１１０】
本明細書において使用される場合、「肺癌」、「肝臓癌」、「食道癌」および「乳癌」という用語は、それぞれ、肺、肝臓、食道および乳房中で開始する癌を表す。
【０１１１】
「腎細胞癌腫」は、腎臓の尿細管中で始まる癌を表す。
【０１１２】
「大唾液腺癌腫」は、耳下腺唾液腺または顎下唾液腺または舌下唾液腺の１つまたはそれより多くの中で発症する癌を表す。
【０１１３】
「神経芽細胞腫」は、身体のいくつかの領域中に見出される未成熟神経細胞から発症する癌を表す。その周囲に神経芽細胞腫が発症する領域の非限定的な例は、副腎、腹部、胸部、頸部および脊椎である。
【０１１４】
「固形腫瘍」は、通常は嚢胞または液体領域を含有しない組織の異常な腫瘤である。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。固形腫瘍の異なる種類は、固形腫瘍を形成する細胞の種類に対して命名されている。固形腫瘍の例には、肉腫、癌腫およびリンパ腫が含まれる。
【０１１５】
「Ｂ細胞リンパ腫または白血病」という用語は、リンパ系または骨髄の組織（ｉｓｓｕｅｓ）中で形成し、癌内の細胞を宿主生物に対して病的にし、身体の他の部分に浸潤しまたは拡散する能力を有する悪性形質転換を経た癌の一種を表す。
【０１１６】
「甲状腺癌」という用語は、甲状腺中で発症する癌の種類を表す。
【０１１７】
本明細書において使用される場合、「検出可能なマーカー」という用語は、検出可能なシグナルを直接的にまたは間接的に生成することが可能な少なくとも１つのマーカーを表す。このマーカーの包括的でないリストには、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコース−６−リン酸脱水素酵素などの、例えば比色分析、蛍光、発光によって検出可能なシグナルを生成する酵素、蛍光性、発光性色素などの発色団、電子顕微鏡によってまたは伝導度、電流測定、ボルタンメトリー、インピーダンスなどのその電気的特性によって検出される電子密度を有する基、検出可能な基であって、例えば、その分子が、その物理的および／または化学的特性に検出可能な修飾を誘導するのに十分なサイズであり、このような検出が、回折、表面プラズモン共鳴、表面変化、接触角の変化などの光学的方法または原子間力顕微鏡、トンネル効果または３２Ｐ、３５Ｓもしくは１２５Ｉなどの放射性分子などの物理的方法によって達成され得る検出可能な基が含まれる。
【０１１８】
本明細書において使用される場合、「精製マーカー」という用語は、精製または同定のために有用な少なくとも１つのマーカーを表す。このマーカーの包括的でないリストには、Ｈｉｓ、ｌａｃＺ、ＧＳＴ、マルトース結合タンパク質、ＮｕｓＡ、ＢＣＣＰ、ｃ−ｍｙｃ、ＣａＭ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ｃｈｅｒｒｙ、チオレドキシン、ポリ（ＮＡＮＰ）、Ｖ５、Ｓｎａｐ、ＨＡ、キチン結合タンパク質、Ｓｏｆｔａｇ１、Ｓｏｆｔａｇ３、ＳｔｒｅｐまたはＳ−プロテインが含まれる。適切な直接的または間接的蛍光マーカーは、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｃｈｅｒｒｙ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＤＮＰ、ＡＭＣＡ、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｔａｍｒａ、テキサスレッド、ローダミン、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒｓ、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣまたは任意の他の蛍光性色素またはハプテンを含む。
【０１１９】
本明細書において使用される場合、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドがｍＲＮＡに転写される過程および／または転写されたｍＲＮＡが、続いて、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質に翻訳される過程を表す。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は真核細胞中でのｍＲＮＡのスプライシングを含み得る。遺伝子の発現レベルは、細胞または組織試料中のｍＲＮＡまたはタンパク質の量を測定することによって決定され得る。一態様において、１つの試料からの遺伝子の発現レベルは、対照または参照試料からのその遺伝子の発現レベルと直接比較され得る。別の態様において、１つの試料からの遺伝子の発現レベルは、化合物の投与後の同じ試料からのその遺伝子の発現レベルと直接比較され得る。「上方制御する」および「下方制御する」という用語およびこれらの変形語は、遺伝子発現に関連して使用される場合、一般的には細胞に対して、または特に細胞のサブタイプに対して正常なまたは予測される閾値発現に比した遺伝子発現の増加および減少をそれぞれ表す。
【０１２０】
本明細書において使用される場合、「の発現および／または機能を低下させまたは除去する」という用語は、前記ポリヌクレオチドのｍＲＮＡへの転写を低下させもしくは除去すること、または前記ｍＲＮＡのペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳を低下させもしくは除去すること、または前記ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質の機能を低下させもしくは除去することを表す。非限定的な例において、ポリヌクレオチドのｍＲＮＡへの転写は、野生型細胞中に見出されるその正常なレベルの少なくとも半分に低下する。
【０１２１】
本明細書において使用される場合、「の発現を増加する」という用語は、前記ポリヌクレオチドのｍＲＮＡへの転写を増加させること、または前記ｍＲＮＡのペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳を増加させること、または前記ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質の機能を増加させることを表す。非限定的な例において、ポリヌクレオチドのｍＲＮＡへの転写は、野生型細胞中に見出されるその正常なレベルの少なくとも２倍に増加する。
【０１２２】
「第一次」または「第二次」または「第三次」という語句は、患者が受ける処置の順序を表す。第一次治療計画は最初に与えられる処置であるのに対して、第二次または第三次治療は、それぞれ、第一次治療後にまたは第二次治療後に与えられる。国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）は、第一次治療を、「疾患または症状に対する第一の処置として定義する。癌を有する患者において、一次的処置は手術、化学療法、放射線療法またはこれらの治療の組み合わせであり得る。第一次治療は、当業者により「一次治療および一次処置」とも称される。２０１７年１１月１５日に最後に閲覧された、国立癌研究所のウェブサイトｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと。患者が第一次治療に対して良好な臨床的な応答または無症候性の応答を示さなかったため、または第一次治療が停止したため、典型的には、患者はそれに続く化学療法計画が与えられる。
【０１２３】
一態様において、抗体の「等価物」または「生物学的等価物」という用語は、ＥＬＩＳＡまたは他の適切な方法によって測定された場合に、抗体がそのエピトープタンパク質またはその断片に選択的に結合する能力を意味する。生物学的に等価な抗体には、基準抗体と同じエピトープに結合する、抗体、ペプチド、抗体断片、抗体バリアント、抗体誘導体および抗体模倣物が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２４】
本開示がポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドまたは抗体に関する場合には、かかるものの等価物または生物学的等価物が本開示の範囲に属することが意図されることが、別段の意図がなければ、明示の記述がなくても推定されるべきである。本明細書において使用される場合、「その生物学的等価物」という用語は、「その等価物」と同義であることが意図され、基準タンパク質、抗体、ポリペプチドまたは核酸を参照する場合、最小の相同性を有するが、所望の構造または機能性をなお維持するものを意図する。本明細書に具体的に引用されていなければ、本明細書に挙げられている任意のポリヌクレオチド、ポリペプチドまたはタンパク質には、これらの等価物も含まれることが想定される。例えば、等価物は、少なくとも約７０％の相同性もしくは同一性、または少なくとも８０％の相同性もしくは同一性、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または９８％のパーセント相同性もしくは同一性を意図し、基準タンパク質、ポリペプチドまたは核酸と実質的に等価な生物学的活性を示す。または、ポリヌクレオチドを参照する場合、その等価物は、基準ポリヌクレオチドまたはその相補物に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドである。
【０１２５】
別の配列に対してあるパーセンテージ（例えば、８０％、８５％、９０％または９５％）の「配列同一性」を有するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドもしくはポリペプチド領域）は、整列されたときに、２つの配列を比較すると、そのパーセンテージの塩基（またはアミノ酸）が同一であることを意味する。アラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、本分野において公知のソフトウェアプログラム、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９８７）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ３０、セクション７．７．１８、表７．７．１に記載されているものを用いて決定することができる。好ましくは、アラインメントのために、初期設定パラメータが使用される。好ましいアラインメントプログラムは、初期設定パラメータを使用するＢＬＡＳＴである。特に、好ましいプログラムは、以下の初期設定パラメータを使用するＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである：遺伝コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；予測＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；表示＝５０配列；ソート＝ハイスコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、以下のインターネットアドレス：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴに見出すことができる。
【０１２６】
本明細書において使用される場合、２またはそれを超える核酸またはポリペプチド配列という文脈において使用されるとき、「相同性」または「同一の」、パーセント「同一性」または「類似性」とは、同一である２もしくはそれを超える配列もしくはサブ配列、または指定されたパーセンテージの同一であるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する、例えば指定された領域（例えば、本明細書に記載されている抗体をコードするヌクレオチド配列または本明細書に記載されている抗体のアミノ酸配列）にわたって、少なくとも６０％の同一性、好ましくは少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い同一性を有する２つもしくはそれを超える配列もしくはサブ配列を表す。相同性は、比較のために整列され得る各配列中の位置を比較することによって決定することができる。比較された配列中の位置が同一の塩基またはアミノ酸によって占められるときに、その分子はその位置において相同である。配列間の相同性の程度は、これらの配列によって共有される合致または相同な位置の数の関数である。アラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、本分野において公知のソフトウェアプログラム、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９８７）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ３０、セクション７．７．１８、表７．７．１に記載されているものを用いて決定することができる。好ましくは、アラインメントのために、初期設定パラメータが使用される。好ましいアラインメントプログラムは、初期設定パラメータを使用するＢＬＡＳＴである。特に、好ましいプログラムは、以下の初期設定パラメータを使用するＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである：遺伝コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；予測＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；表示＝５０配列；ソート＝ハイスコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、以下のインターネットアドレス：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴに見出すことができる。「相同性」または「同一の」、パーセント「同一性」または「類似性」という用語は、試験配列の相補物も表し、または試験配列の相補物に対して適用することもできる。これらの用語は、置換を有する配列の他に、欠失および／または付加を有する配列も含む。本明細書に記載されているように、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを考慮することができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約２５アミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって、またはより好ましくは、少なくとも５０〜１００アミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって、存在する。「無関係の」または「非相同な」配列は、本明細書に開示されている配列の１つと４０％未満の同一性、または２５％未満の同一性を共有する。
【０１２７】
「ハイブリダイゼーション」は、１またはそれを超えるポリヌクレオチドが反応してヌクレオチド残基の塩基間の水素結合を介して安定化された複合体を形成する反応を表す。水素結合は、ワトソン・クリック塩基対形成、フーグスティーン結合によって、または任意の他の配列特異的様式で起こり得る。複合体は、二本鎖構造を形成する２つの鎖、多重鎖複合体を形成する３またはそれを超える鎖、単一の自己ハイブリッド形成鎖またはこれらの任意の組み合わせを含み得る。ハイブリダイゼーション反応は、ＰＣＲ反応の開始またはリボザイムによるポリヌクレオチドの酵素的切断などの、より大規模な過程中の工程を構成し得る。
【０１２８】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例としては、約２５℃〜約３７℃のインキュベーション温度；約６×ＳＳＣ〜約１０×ＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液濃度；約０％〜約２５％のホルムアミド濃度；および約４×ＳＳＣ〜約８×ＳＳＣの洗浄溶液が挙げられる。穏やかなハイブリダイゼーション条件の例としては、約４０℃〜約５０℃のインキュベーション温度；約９×ＳＳＣ〜約２×ＳＳＣの緩衝液濃度；約３０％〜約５０％のホルムアミド濃度；および約５×ＳＳＣ〜約２×ＳＳＣの洗浄溶液が挙げられる。高いストリンジェンシーの条件の例としては、約５５℃〜約６８℃のインキュベーション温度；約１×ＳＳＣ〜約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度；約５５％〜約７５％のホルムアミド濃度；および約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣの洗浄溶液または脱イオン水が挙げられる。一般に、ハイブリダイゼーションのインキュベーション時間は、５分から２４時間であり、１、２またはそれを超える洗浄工程を有し、洗浄のインキュベーション時間は、約１、２または１５分である。ＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌおよび１５ｍＭシトレート緩衝液である。他の緩衝液系を使用するＳＳＣの等価物を使用できることが理解される。
【０１２９】
「腫瘍組織型に対応する正常な細胞」は、腫瘍組織と同じ組織の種類から得られる正常な細胞を表す。非限定的な例は、肺腫瘍を有する患者から得られる正常な肺細胞であり、または結腸腫瘍を有する患者から得られる正常な結腸細胞である。
【０１３０】
本明細書において使用される場合、「単離された」という用語は、実質的に他の材料が存在しない分子または生物製剤または細胞性材料を表す。一態様において、「単離された」という用語は、それぞれ、天然源中に存在するその他のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官から分離された、ＤＮＡもしくはＲＮＡなどの核酸、またはタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、抗体またはその誘導体）、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官を表す。「単離された」という用語は、組換えＤＮＡ技術によって産生されたときに、細胞性材料、ウイルス性材料もしくは培養培地を実質的に含まない、または化学的に合成されたときに化学的前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まない核酸またはペプチドも表す。さらに、「単離された核酸」は、断片として天然に存在せず、天然の状態において見出されない核酸断片を含むことを意図している。本明細書において、「単離された」という用語は、他の細胞性タンパク質から単離されているポリペプチドを表すためにも使用され、精製されたポリペプチドおよび組換えポリペプチドの両方を包含することが意図される。本明細書において、「単離された」という用語は、他の細胞または組織から単離されている細胞または組織を表すためにも使用され、培養された細胞または組織と改変操作された細胞または組織の両方を包含することが意図される。
【０１３１】
本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、Ｂリンパ球の単一クローンによってまたは単一の抗体の軽鎖および重鎖遺伝子がその中に形質移入されている細胞によって産生される抗体を表す。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、骨髄腫細胞の免疫脾臓細胞との融合からハイブリッド抗体形成細胞を作製することによって産生される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体が含まれる。
【０１３２】
「タンパク質」、「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は互換的に使用され、これらの最も広い意味において、２またはそれを超えるサブユニットアミノ酸、アミノ酸類縁体またはペプチド模倣物の化合物を表す。サブユニットは、ペプチド結合によって連結され得る。別の態様において、サブユニットは、他の結合、例えば、エステル、エーテルなどによって連結され得る。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列またはペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数に制限はない。本明細書において使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシンならびにＤおよびＬ型光学異性体の両方、アミノ酸類縁体およびペプチド模倣物を含む、天然および／または非天然もしくは合成アミノ酸のいずれをも表す。
【０１３３】
「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマー性形態を表し、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはこれらの類縁体のいずれかである。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することができ、既知または既知でない任意の機能を発揮し得る。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子断片（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類縁体などの修飾されたヌクレオチドを含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリヌクレオチドの組み立ての前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、例えば標識成分との接合によって、重合後にさらに修飾することができる。本用語は、二本鎖および一本鎖分子の両方も表す。別段の指定または必要がなければ、ポリヌクレオチドである本技術の任意の態様は、二本鎖形態および二本鎖形態を構成することが知られたまたは予測される２つの相補的一本鎖形態の各々の両方を包含する。
【０１３４】
本明細書において使用される場合、「精製された」という用語は、絶対的な純度を必要とせず、むしろ、相対的な用語として意図される。このため、例えば、精製された核酸、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体またはその他の活性化合物とは、タンパク質またはその他の夾雑物から完全にまたは部分的に単離されているものである。一般的には、本開示の中で使用するための実質的に精製されたペプチド、タンパク質、生物学的複合体またはその他の活性化合物は、治療的投与のための完全な薬学的製剤中に、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体またはその他の活性化合物を、薬学的担体、賦形剤、緩衝剤、吸収強化剤、安定化剤、防腐剤、アジュバントまたはその他の共成分と混合しまたは製剤化する前に調製物中に存在する全ての高分子種の８０％超を占める。より典型的には、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体またはその他の活性化合物は、他の製剤成分との混合前に、精製された調製物中に存在する全ての高分子種の９０％超、多くの場合９５％超に相当するように精製される。他の事例において、精製された調製物は、本質的に均一であり得、この場合、他の高分子種は慣用技術によって検出することができない。
【０１３５】
本明細書において使用される場合、「特異的結合」という用語は、例えば、１０−６Ｍ未満のまたは約１０−６Ｍの本明細書に開示されているとおりの結合親和性での、抗体または抗原結合ドメインと抗原との間の接触を意味する。ある態様において、抗体は、１０−７Ｍ未満または約１０−７Ｍ、好ましくは約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍの親和性で結合する。
【０１３６】
本明細書において使用される場合、「組換えタンパク質」という用語は、一般に、ポリペプチドをコードするＤＮＡが適切な発現ベクター中に挿入され、次いで、異種タンパク質を産生するように宿主細胞を形質転換するために該発現ベクターが使用される組換えＤＮＡ技術によって作製されるポリペプチドを表す。
【０１３７】
本明細書において使用される場合、被験体中の疾患の「処置する」または「処置」は、（１）疾患の症候に対する素因があるまたは疾患の症候をいまだ示していない被験体中で症候または疾患が起こることを予防すること、（２）疾患を阻止しもしくはその発達もしくは再発を停止すること、または（３）疾患もしくは疾患の症候を軽減しもしくは疾患もしくは疾患の症候の後退を引き起こすことを表す。本分野において理解されるとおり、「処置」は、臨床的結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本技術において、有益なまたは所望の結果としては、１またはそれを超える症候の緩和または軽減、症状（疾患を含む）の程度の縮小、症状（疾患を含む）の安定化された（すなわち、悪化しない）状態、症状（疾患を含む）の遅延または減速、症状（疾患を含む）の進行、軽減または寛解、検出可能かまたは検出不能かを問わない状態および緩解（部分的であるか、完全であるかを問わない）の１つまたはそれより多くを含むことができるが、これらに限定されない。疾患が癌である場合、以下の臨床的評価項目が非限定的な処置の例である：腫瘍負荷量の低下、腫瘍増殖の減速、より長い全生存、腫瘍進行までのより長い時間、転移の阻止または腫瘍の転移の低減。一態様において、処置は予防を除外する。
【０１３８】
細胞、組織または器官に関して本明細書において使用される場合、「過剰発現する」という用語は、対照細胞、対照組織（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｓｓｕｅ）または器官中で産生される量より多い量のタンパク質を表す。過剰発現されるタンパク質は、宿主細胞に内在し得る、または宿主細胞に外在し得る。
【０１３９】
本明細書において使用される場合、「リンカー配列」という用語は、１〜１０回、または約８回、または約６回、または約５回、または４回または３回または２回反復され得る、１〜１０個、または８個のアミノ酸、または６個のアミノ酸、または５個のアミノ酸を含む任意のアミノ酸配列に関する。例えば、リンカーは、３回反復されるペンタペプチドからなる最大１５個のアミノ酸残基を含み得る。一態様において、リンカー配列は、ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｓｅｒの３つのコピーを含む（グリシン４セリン）３柔軟なポリペプチドリンカーまたはその等価物である。リンカー配列の非限定的な例は本分野において公知であり、例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（およびその等価物）；トリペプチドＥＦＭ；またはＧｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔおよびこれらの各々の等価物である。
【０１４０】
本明細書において使用される場合、「エンハンサー」という用語は、本明細書において使用される場合、発現されるべき核酸配列に対するその位置および配向にかかわらず、核酸配列の転写を増強し、改善し、または回復させる配列要素を表す。エンハンサーは、単一のプロモーターからの転写を増強し得、または１を超えるプロモーターからの転写を同時に増強し得る。転写を向上するこの機能が保持されまたは実質的に保持される限り（例えば、野生型活性、すなわち、完全長配列の活性の少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％）、野生型エンハンサー配列の任意の末端切断された、変異されたまたはその他改変されたバリアントも上記定義の中に含まれる。
【０１４１】
エンハンサー配列の例は、ＷＰＲＥである。本明細書において使用される場合、「ＷＰＲＥ」または「ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＰ）転写後制御因子」という用語は、この名前が付けられた特定のヌクレオチド断片および本明細書に示されているとおりのＷＰＲＥ配列と少なくとも７０％、または少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する、類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を表す。例えば、ＷＰＲＥは、ウッドチャック肝炎ウイルスゲノム配列（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｊ０４５１４）中に存在するヒトＢ型肝炎ウイルス転写後制御因子（ＨＢＶＰＲＥ）と類似の領域およびこのゲノム配列の位置１０９３から１６８４までの５９２ヌクレオチドが転写後制御領域に対応することを表す（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７２，ｐ．５０８５−５０９２，１９９８）。レトロウイルスベクターを用いた分析は、関心対象の遺伝子の３’末端非翻訳領域中に挿入されたＷＰＲＥが産生されるタンパク質の量を５〜８倍増加させることを明らかにした。ＷＰＲＥの導入がｍＲＮＡ分解を抑制することも報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７３，ｐ．２８８６−２８９２，１９９９）。広い意味において、ｍＲＮＡを安定化することによるアミノ酸翻訳の効率を増加させるＷＰＲＥなどの因子もエンハンサーであると考えられる。
【０１４２】
「接触させること」という用語は、２またはそれを超える実体間（例えば、標的細胞集団と抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞間）の直接的または間接的な結合または相互作用を意味する。直接的な相互作用の具体例は結合である。間接的な相互作用の具体例は、１つの実体が中間の分子に対して作用し、次いで、中間の分子が第二の参照される実体に対して作用する場合である。本明細書において使用される場合、接触には、溶液中、固相中、インビトロ、エクソビボ、細胞中およびインビボが含まれる。インビボで接触させることは、投与することまたは投与と表すことができる。
【０１４３】
本明細書において使用される場合、「結合する」または「抗体結合」または「特異的結合」という用語は、１０−５Ｍ未満の結合親和性（ＫＤ）での、抗体、抗体断片、ＣＡＲ、ＴＣＲ、改変操作されたＴＣＲ、ＢＣＲ、ＭＨＣ、免疫グロブリン様分子、ｓｃＦｖ、ＣＤＲまたはその他の抗原提示分子の抗原結合ドメインと抗原、エピトープまたはペプチドとの間の接触を意味する。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、抗原とＭＨＣ分子の両方の複合体の両方に結合する。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、約１０−６Ｍ未満、または約１０−７Ｍ未満、または約１０−８Ｍ未満、または約１０−９Ｍ未満、または約１０−１０Ｍ未満、または約１０−１１Ｍ未満、または約１０−１２Ｍ未満の親和性で結合する。
【０１４４】
本明細書において使用される場合、「投与する」および「投与すること」という用語は、治療剤（例えば、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、改変された細胞、集団）を被験体中に導入することを意味するために使用される。この物質の治療的投与は、任意の症候を和らげる、またはさらなる症候が発生することを妨げる役割を果たす。投与が、自己免疫疾患または障害を発症する可能性を予防または低減するという目的である場合には、その物質は、なんらかの目に見えるまたは検出可能な症候に先立って与えられる。投与の経路としては、経口（錠剤、カプセルまたは懸濁液など）、局所、経皮、鼻腔内、膣、直腸、皮下静脈内、動脈内、筋肉内、骨内、腹腔内、硬膜外およびくも膜下腔内が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
キメラ抗原受容体細胞などの改変された細胞を作製する方法に対して適用される「導入する」という用語は、外来（すなわち、外因性または細胞外）因子を宿主細胞中に導入し、これにより、外来因子を含む細胞を作製する過程を表す。核酸を導入する方法には、形質導入、レトロウイルス遺伝子導入、形質移入、電気穿孔、形質転換、ウイルス感染および本分野において公知のその他の組換えＤＮＡ技術が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、形質導入はベクター（例えば、ウイルスベクター）を介して行われる。いくつかの実施形態において、形質移入は、化学的担体、ＤＮＡ／リポソーム複合体またはミセル（例えば、リポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））を介して行われる。いくつかの実施形態において、ウイルス感染は、関心対象のポリヌクレオチドを含むウイルス粒子（例えば、ＡＡＶ）に細胞を感染させることを介して行われる。いくつかの実施形態において、導入は、ＣＲＩＳＰＲを介した遺伝子編集またはＴＡＬ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ−ｌｉｋｅ）エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を介した遺伝子編入をさらに含む。非核酸外来因子（例えば、可溶性因子、サイトカイン、タンパク質、ペプチド、酵素、増殖因子、シグナル伝達分子、小分子阻害剤）を導入する方法には、外来因子の存在下で細胞を培養すること、細胞に外来因子を接触させること、外来因子と賦形剤を含む組成物に細胞を接触させること、および外来因子を含む小胞またはウイルス粒子に細胞を接触させることが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４６】
「接着細胞」という用語は、その増殖の表面または培養表面に接着する細胞を表す。インビトロで接着細胞を培養する方法は、本分野において周知である。接着細胞を培養する方法のいくつかの非限定的な例は、Ｓｍａｌｌｅｙ  ＫＳ  ｅｔ  ａｌ．“Ｌｉｆｅ  ｉｓｎ’ｔ  ｆｌａｔ：ｔａｋｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｎｅｘｔ  ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ”  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  Ａｎｉｍ  ４２：２４２−２４７（２００６），Ｑｕｒｅｓｈｉ−Ｂａｉｇ，Ｋｏｍａｌ  ｅｔ  ａｌ．“Ｗｈａｔ  Ｄｏ  Ｗｅ  Ｌｅａｒｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｐｈｅｒｏｉｄ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ？  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅｓ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｉｓｓｕｅ”ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ｖｏｌ．１１，１  ｅ０１４６０５２．（２０１６）およびＮａｔｈ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ：  Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｓｐｈｅｒｏｉｄ  ｍｏｄｅｌ”  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｖｏｌ．１６３：９４−１０８（２０１６）に記載されている。「非接着細胞」という用語は、その増殖の表面または培養表面に接着しない細胞を表す。インビトロで非接着細胞を増殖させる方法は、本分野において周知である。インビトロで非接着細胞を増殖させる方法の非限定的な例は、Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｇａｉｔ  ｅｄ．（１９８４）に記載されている。
【０１４７】
「培養する」という用語は、細胞の拡大および増殖に適した条件下で、培養培地中において細胞を増殖させることを表す。「培養培地」または「培地」という用語は本分野において認知されており、生きた細胞の培養のために使用される任意の物質または調製物を一般的に表す。細胞培養を参照して使用される場合、「培地」という用語は、細胞を取り囲む環境の成分を含む。培地は、固体、液体、気体であり得、または相および材料の混合物であり得る。培地には、液体増殖培地および細胞増殖を維持しない液体培地が含まれる。培地には、寒天、アガロース、ゼラチンおよびコラーゲンマトリックスなどのゼラチン状培地も含まれる。例示的な気体状培地には、ペトリ皿またはその他の固体もしくは半固体支持体上で増殖している細胞が曝されている気相が含まれる。「培地」という用語は、たとえいまだ細胞と接触していなくても、細胞培養中で使用することが予定される材料も表す。換言すれば、培養のために調製された栄養素に富む液体は培地である。同様に、水またはその他の液体と混合されたときに、細胞培養に適するようになる粉末混合物は、「粉末化された培地」という用語で称され得る。「既知組成培地」は、化学的に既知組成の（通常は精製された）成分から作られた培地を表す。「既知組成培地」は、酵母抽出物および牛肉肉汁などの性質がよく決定されていない生物学的抽出物を含有しない。「富栄養培地」には、特定の種のほとんどまたは全ての生きた形態の増殖を支えるように設計された培地が含まれる。富栄養培地は、しばしば、複雑な生物学的抽出物を含む。「高密度培養の増殖に適した培地」は、他の条件（温度および酸素移動速度など）がそのような増殖を許容する場合に、細胞培養が３またはそれを超えるＯＤ６００に達することを許容する任意の培地である。「基本培地」という用語は、特別な栄養素の補充を一切必要としない多くの種類の微生物の増殖を促進する培地を表す。多くの基本培地は、一般に、アミノ酸、炭水化物、無機塩およびビタミンという４つの基本的な化学群から構成される。一般に、基本培地は、血清、緩衝剤、増殖因子、脂質などの補充物が添加される、より複雑な培地に対する基礎としての役割を果たす。一態様において、増殖培地は、細胞の自己再生能を維持しながら、本開示の細胞の増殖および拡大を支持するための必要な増殖因子を有する複雑な培地であり得る。基本培地の例には、イーグル基本培地、最小必須培地、ダルベッコ変法イーグル培地、培地１９９、栄養混合物ハムＦ−１０およびハムＦ−１２、マッコイ５Ａ、ダルベッコＭＥＭ／Ｆ−Ｉ２、ＲＰＭＩ１６４０およびイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４８】
「凍結保護物質」は本分野において公知であり、例えば、スクロース、トレハロースおよびグリセロールが含まれるが、これらに限定されない。生物学的系において低い毒性を示す凍結保護物質が一般的に使用される。
略号のリスト
【０１４９】
ＣＡＲ：キメラ抗原受容体
【０１５０】
ＩＲＥＳ：配列内リボソーム進入部位
【０１５１】
ＭＦＩ：平均蛍光強度
【０１５２】
ＭＯＩ：感染多重度
【０１５３】
ＰＢＭＣ：末梢血単核球
【０１５４】
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
【０１５５】
ｓｃＦｖ：一本鎖可変断片
【０１５６】
ＷＰＲＥ：ウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御因子
本開示を実施するための様式
【０１５７】
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）またはリガンドがＴ細胞活性化を促進することが可能なＴ細胞シグナル伝達ドメインに付着されている、遺伝的に改変操作された自家Ｔ細胞である（Ｍａｈｅｒ，Ｊ．（２０１２）ＩＳＲＮ  Ｏｎｃｏｌ．２０１２：２７８０９３；Ｃｕｒｒａｎ，  Ｋ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊ．Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ．１４：４０５−４１５；Ｆｅｄｏｒｏｖ，Ｖ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．２０：１６０−１６５；Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｄ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６５：３３３−３４７）。ＣＡＲは、モノクローナル抗体のＨＬＡ非依存性標的特異性と、活性化されたＴ細胞の細胞溶解活性およびホーミング特性を併せ持つ。これらの特性は、腫瘍が宿主免疫応答を逃れるために使用する２つの主要な方法である、低下されたＨＬＡ発現または下方制御された抗原プロセッシング経路を有する標的細胞の認識を可能にする（Ｊａｋｏｂｓｅｎ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｅｍｐｈａｓｉｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：２２２−２２８；Ｌｏｕ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１４：１４９４−１５０１；Ｓｉｎｇｈ，  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７：１８８７−１８９２）。ＣＡＲ修飾されたＴ細胞は、癌を含む様々な疾患における新規治療薬として、前臨床および臨床状況において非常に有望であることが示されてきた。
【０１５８】
本開示は、ＤＣＬＫ１に対して特異的な抗体ならびにその使用および製造に関連する方法および組成物を提供する。さらに、本開示は、いくつかの態様において、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインである、ＤＣＬＫ１に対して特異的な抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびにその使用および製造に関連する方法および組成物を提供する。
【０１５９】
これらの原理および発見と一致して、本開示は以下の実施形態を提供する。
抗体およびその使用
【０１６０】
抗体の一般的な構造は本分野において公知であり、ここでは、簡単に要約するに留める。免疫グロブリンの単量体は、ジスルフィド結合によって接続された２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。各重鎖は、ジスルフィド結合を介して直接結合されている軽鎖の１つと対を成している。各重鎖は、定常領域（抗体のアイソタイプに応じて変動する）および可変領域を含む。可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３と表記され、フレームワーク領域内に支持された３つの超可変領域（または相補性決定領域）を含む。各軽鎖は、定常領域と可変領域を含み、可変領域は、重鎖の可変領域と同様に、フレームワーク領域によって支持された３つの超可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３と表記される。）を含む。
【０１６１】
抗体の定常領域も変化され得る。例えば、抗体は、任意のアイソタイプのＦｃ領域を有して提供され得る：ＩｇＡ（ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭ。定常領域配列の非限定的な例には、配列番号６０〜６８またはこれらの各々の等価物が含まれる。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号６０〜６８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である重鎖定常領域を含む。
【０１６３】
重鎖および軽鎖の各対の超可変領域は、標的抗原を結合することが可能な抗原結合部位を与えるために互いに協力する。重鎖および軽鎖の対の結合特異性は、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列によって規定される。このため、特定の結合特異性を生じさせるＣＤＲ配列の組（すなわち、重鎖および軽鎖に対するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列）が決定されると、原理上、同じ抗原結合特異性を有する異なる抗体を与えるために、任意の抗体定常領域と連結された任意の他の抗体フレームワーク領域内の適切な位置の中に、前記ＣＤＲ配列の組を挿入することができる。
【０１６４】
一実施形態において、本開示は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列から本質的になる、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列からなる単離された抗体であって、ＤＣＬＫ１のエピトープに結合する単離された抗体を提供する。
抗ＤＣＬＫ１抗体
【０１６５】
一態様において、本開示は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列から本質的になる、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列からなる単離された抗体であって、重鎖および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列がＤＣＬＫ１のエピトープに結合する抗原結合部位を形成する、単離された抗体を提供する。一態様において、抗体は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性を有する。ある態様において、抗体は、少なくとも約１０−７Ｍ、およびあるいは、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、または少なくとも約１０−１２Ｍの親和性で結合する。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲＨ１配列は、カルボキシ末端に、さらなる５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸もしくは約３０アミノ酸もしくは約２０アミノ酸もしくは約１０アミノ酸もしくは約５アミノ酸もしくは約４もしくは３もしくは２もしくは１アミノ酸が続く本明細書に開示されているＨＣ配列の任意の１つのＣＤＨＲ１領域のアミノ酸配列もしくはその等価物を含み、または該アミノ酸配列もしくはその等価物から本質的になり、または該アミノ酸配列もしくはその等価物からなる。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲＨ２配列は、カルボキシ末端に、さらなる５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸もしくは約３０アミノ酸もしくは約２０アミノ酸もしくは約１０アミノ酸もしくは約５アミノ酸もしくは約４もしくは３もしくは２もしくは１アミノ酸が続く本明細書に開示されているＨＣ配列の任意の１つのＣＤＨＲ２領域のアミノ酸配列もしくはその等価物を含み、または該アミノ酸配列もしくはその等価物から本質的になり、または該アミノ酸配列もしくはその等価物からなる。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲＨ３配列は、カルボキシ末端に、さらなる５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸もしくは約３０アミノ酸もしくは約２０アミノ酸もしくは約１０アミノ酸もしくは約５アミノ酸もしくは約４もしくは３もしくは２もしくは１アミノ酸が続く続く本明細書に開示されているＨＣ配列の任意の１つのＣＤＨＲ３領域のアミノ酸配列もしくはその等価物を含み、または該アミノ酸配列もしくはその等価物から本質的になり、または該アミノ酸配列もしくはその等価物からなる。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：配列番号１〜１０もしくは１６〜２５もしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物の１つを含み、または下記のアミノ酸配列：配列番号１〜１０もしくは１６〜２５もしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物の１つから本質的になり、または下記のアミノ酸配列：配列番号１〜１０もしくは１６〜２５もしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物の１つからなる。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、下記のポリヌクレオチド配列：配列番号３２〜４０もしくは４６〜４７の１つによってコードされるポリペプチドもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物を含み、または下記のポリヌクレオチド配列：配列番号３２〜４０もしくは４６〜４７の１つによってコードされるポリペプチドもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物から本質的になり、または下記のポリヌクレオチド配列：配列番号３２〜４０もしくは４６〜４７の１つによってコードされるポリペプチドもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物からなる。一態様において、抗ＤＣＬＫ１抗体可変領域は、下記のアミノ酸配列：配列番号１および１１もしくは配列番号１および１２もしくは配列番号１および１３もしくは配列番号１および１４もしくは配列番号１および１５もしくは配列番号２および１１もしくは配列番号２および１２もしくは配列番号２および１３もしくは配列番号２および１４もしくは配列番号２および１５もしくは配列番号３および１１もしくは配列番号３および１２もしくは配列番号３および１３もしくは配列番号３および１４もしくは配列番号３および１５もしくは配列番号４および１１もしくは配列番号４および１２もしくは配列番号４および１３もしくは配列番号４および１４もしくは配列番号４および１５もしくは配列番号５および１１もしくは配列番号５および１２もしくは配列番号５および１３もしくは配列番号５および１４もしくは配列番号５および１５もしくは配列番号６および１１もしくは配列番号６および１２もしくは配列番号６および１３もしくは配列番号６および１４もしくは配列番号６および１５もしくは配列番号７および１１もしくは配列番号７および１２もしくは配列番号７および１３もしくは配列番号７および１４もしくは配列番号７および１５もしくは配列番号８および１１もしくは配列番号８および１２もしくは配列番号８および１３もしくは配列番号８および１４もしくは配列番号８および１５もしくは配列番号９および１１もしくは配列番号９および１２もしくは配列番号９および１３もしくは配列番号９および１４もしくは配列番号９および１５もしくは配列番号１０および１１もしくは配列番号１０および１２もしくは配列番号１０および１３もしくは配列番号１０および１４もしくは配列番号１０および１５の１つもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物を含み、または上記アミノ酸配列の１つもしくはそれらの抗原結合断片もしくはそれらの各々の等価物から本質的になり、または上記アミノ酸配列の１つもしくはそれらの抗原結合断片もしくはそれらの各々の等価物からなる。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１配列は、カルボキシ末端に、さらなる５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸もしくは約３０アミノ酸もしくは約２０アミノ酸もしくは約１０アミノ酸もしくは約５アミノ酸もしくは約４もしくは３もしくは２もしくは１アミノ酸が続く本明細書に開示されているＬＣ配列の任意の１つのＣＤＬＲ１領域のアミノ酸配列もしくはその等価物を含み、または該アミノ酸配列もしくはその等価物から本質的になり、または該アミノ酸配列もしくはその等価物からなる。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域のＣＤＲＬ２配列は、カルボキシ末端に、さらなる５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸もしくは約３０アミノ酸もしくは約２０アミノ酸もしくは約１０アミノ酸もしくは約５アミノ酸もしくは約４もしくは３もしくは２もしくは１アミノ酸が続く本明細書に開示されているＬＣ配列の任意の１つのＣＤＬＲ２領域のアミノ酸配列もしくはその等価物を含み、または該アミノ酸配列もしくはその等価物から本質的になり、または該アミノ酸配列もしくはその等価物からなる。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域のＣＤＲＬ３配列は、カルボキシ末端に、さらなる５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸もしくは約３０アミノ酸もしくは約２０アミノ酸もしくは約１０アミノ酸もしくは約５アミノ酸もしくは約４もしくは３もしくは２もしくは１アミノ酸が続く本明細書に開示されているＬＣ配列の任意の１つのＣＤＬＲ３領域のアミノ酸配列もしくはその等価物を含み、または該アミノ酸配列もしくはその等価物から本質的になり、または該アミノ酸配列もしくはその等価物からなる。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１もしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物の１つを含み、または下記のアミノ酸配列：配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１もしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物の１つから本質的になり、または下記のアミノ酸配列：配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１もしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物の１つからなる。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、以下のポリヌクレオチド配列：配列番号４１〜４５もしくは４８〜４９の１つによってコードされるポリペプチドもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物を含み、または以下のポリヌクレオチド配列：配列番号４１〜４５もしくは４８〜４９の１つによってコードされるポリペプチドもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物から本質的になり、または以下のポリヌクレオチド配列：配列番号４１〜４５もしくは４８〜４９の１つによってコードされるポリペプチドもしくはこれらの抗原結合断片もしくはこれらの各々の等価物からなる。
【０１７５】
本技術の別の態様において、単離された抗体は、以下の特徴の１つまたはそれより多くを含む：
（ａ）軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示された軽鎖配列のいずれかの軽鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５％同一である１もしくはそれを超えるＣＤＲを含み、または開示された軽鎖配列のいずれかの軽鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５％同一である１もしくはそれを超えるＣＤＲから本質的になり、または開示された軽鎖配列のいずれかの軽鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５％同一である１もしくはそれを超えるＣＤＲからなる；
（ｂ）重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示された重鎖配列のいずれかの重鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５％同一である１もしくはそれを超えるＣＤＲを含み、または開示された重鎖配列のいずれかの重鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５％同一である１もしくはそれを超えるＣＤＲから本質的になり、または開示された重鎖配列のいずれかの重鎖可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５％同一である１もしくはそれを超えるＣＤＲからなる；
（ｃ）軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示された軽鎖配列のいずれかの軽鎖可変ドメインと少なくとも８５％同一である；
（ｄ）ＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列が、開示された軽鎖配列のいずれかの重鎖可変ドメインと少なくとも８５％同一である；
（ｅ）抗体が、開示された配列のいずれかによって結合されるエピトープと重複するエピトープを結合する。
【０１７６】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体は、または約１０−４Ｍ未満、または約１０−５Ｍ未満、または約１０−６Ｍ未満、または約１０−７Ｍ未満、または約１０−８Ｍ未満、または約１０−９Ｍ未満、または約１０−１０Ｍ未満、または約１０−１１Ｍ未満、または約１０−１２Ｍもしくは１０−１２Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＤＣＬＫ１を結合する。本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗原結合部位はＤＣＬＫ１に特異的に結合する。
抗体の特徴および機能
【０１７７】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体は可溶性Ｆａｂである。
【０１７８】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は同じポリペプチド鎖の構成要素である。本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は異なるポリペプチド鎖の構成要素である。
【０１７９】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体は完全長抗体である。他の態様において、抗体の抗原結合断片が提供される。
【０１８０】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体はモノクローナル抗体である。
【０１８１】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体はキメラでありまたはヒト化されている。
【０１８２】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖおよびＦｖからなる群より選択される。
【０１８３】
本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体はＦｃドメインを含む。本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体はウサギ抗体である。本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、抗体はヒト抗体もしくはヒト化抗体であり、またはヒトにおいて非免疫原性である。本明細書に提供される抗体の態様のいくつかにおいて、ヒト抗体フレームワーク領域を含む。
【０１８４】
他の態様において、本明細書に提供される抗体のＣＤＲ中の１またはそれを超えるアミノ酸残基は、別のアミノ酸で置換される。置換は、同一ファミリー内でのアミノ酸の置換であるという意味で「保存的」であり得る。天然に存在するアミノ酸は、以下の４つのファミリーに分類され得、保存的置換は、それらのファミリー内で起こる：
１）塩基性側鎖を有するアミノ酸：リジン、アルギニン、ヒスチジン；
２）酸性側鎖を有するアミノ酸：アスパラギン酸、グルタミン酸；
３）帯電していない極性側鎖を有するアミノ酸：アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン；
４）非極性側鎖を有するアミノ酸：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、システイン。
【０１８５】
別の態様において、１またはそれを超えるアミノ酸残基が、抗体の１もしくはそれを超えるＣＤＲに付加され、または抗体の１もしくはそれを超えるＣＤＲから欠失される。このような付加または欠失は、ＣＤＲのＮ末端もしくはＣ末端でまたはＣＤＲ内の位置で起こる。
【０１８６】
アミノ酸の付加、欠失または置換により抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を変動させることによって、標的抗原に対する増加した結合親和性などの様々な効果が取得され得る。
【０１８７】
このような変化したＣＤＲ配列を含み、またはこのような変化したＣＤＲ配列から本質的になり、またはこのような変化したＣＤＲ配列からなる本開示の抗体は、開示された抗体と類似の特異性および感度プロファイルでＤＣＬＫ１をなお結合することを理解すべきである。これは、結合アッセイによって試験され得る。
【０１８８】
抗体の定常領域も変化され得る。例えば、抗体は、任意のアイソタイプのＦｃ領域を有して提供され得る：ＩｇＡ（ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭ。定常領域配列の非限定的な例には、配列番号６０〜６８またはこれらの各々の等価物が含まれる。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、本開示の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号６０〜６８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である重鎖定常領域を含む。
【０１９０】
いくつかの態様において、抗体は、本明細書に開示されているもののいずれか１つと少なくとも８０％同一である重鎖定常領域を含み、または本明細書に開示されているもののいずれか１つと少なくとも８０％同一である重鎖定常領域から本質的になり、または本明細書に開示されているもののいずれか１つと少なくとも８０％同一である重鎖定常領域からなる。
【０１９１】
いくつかの態様において、抗体は、本明細書に開示されているもののいずれか１つと少なくとも８０％同一である軽鎖定常領域を含み、または本明細書に開示されているもののいずれか１つと少なくとも８０％同一である軽鎖定常領域から本質的になり、または本明細書に開示されているもののいずれか１つと少なくとも８０％同一である軽鎖定常領域からなる。
【０１９２】
本明細書に提供される抗体のいくつかの態様において、抗体は、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために構造的修飾を含有する。いくつかの態様において、ＤＣＬＫ１抗体は、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために抗体のＣＨ２定常重鎖領域中に欠失を含有する。いくつかの態様において、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために、Ｆａｂ断片が使用される。いくつかの態様において、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために、Ｆ（ａｂ）’２断片が使用される。
【０１９３】
抗体、断片およびこれらの等価物は、担体、例えば薬学的に許容され得る担体または使用および／もしくは保存用の製剤を与えるための他の因子と組み合わせることができる。
【０１９４】
さらに、ＤＣＬＫ１に結合する抗体を生成するのに有用であるＤＣＬＫ１のアミノ酸配列もしくはその断片を含む、またはＤＣＬＫ１に結合する抗体を生成するのに有用であるＤＣＬＫ１のアミノ酸配列もしくはその断片から本質的になる、またはＤＣＬＫ１に結合する抗体を生成するのに有用であるＤＣＬＫ１のアミノ酸配列もしくはその断片からなる単離されたポリペプチドおよびそれらをコードする単離されたポリヌクレオチドが提供される。配列番号１〜３１を含み、または配列番号１〜３１から本質的になり、または配列番号１〜３１からなる単離されたポリペプチド配列も、本明細書において提供される。
【０１９５】
一態様において、単離されたポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、さらに、標識もしくは選択マーカーおよび／もしくはポリペプチドもしくはポリヌクレオチドに機能的に結合された隣接ポリペプチド配列（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）キャリアタンパク質）（またはポリヌクレオチドの場合には、隣接ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド）を含み、または標識もしくは選択マーカーおよび／もしくはポリペプチドもしくはポリヌクレオチドに機能的に結合された隣接ポリペプチド配列（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）キャリアタンパク質）（またはポリヌクレオチドの場合には、隣接ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド）から本質的になり、または標識もしくは選択マーカーおよび／もしくはポリペプチドもしくはポリヌクレオチドに機能的に結合された隣接ポリペプチド配列（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）キャリアタンパク質）（またはポリヌクレオチドの場合には、隣接ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド）からなる。ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、様々な担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水と組み合わせることができる。さらに、前記単離されたポリペプチドもしくはポリヌクレオチドを含む、または前記単離されたポリペプチドもしくはポリヌクレオチドから本質的になる、または前記単離されたポリペプチドもしくはポリヌクレオチドからなる宿主細胞、例えば、原核または真核細胞、例えば、細菌、酵母、哺乳動物（ラット、サル、ハムスターまたはヒト）が提供される。宿主細胞は、担体と組み合わせることができる。
【０１９６】
さらに、本明細書に開示されている抗体およびその断片をコードする単離された核酸が提供される。一態様において、単離された核酸配列は、配列番号３２〜４９を含み、または配列番号３２〜４９から本質的になり、または配列番号３２〜４９からなる。単離された核酸は、ベクターもしくは適切な宿主細胞および／または診断もしくは治療用途のための適切な担体と組み合わせることができる。一態様において、核酸は、ポリペプチドおよびタンパク質の組換え産生のために宿主細胞と組み合わされる。宿主細胞は、真核または原核であり得る。
抗体を調製するための過程
【０１９７】
抗体、その製造および使用は周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｄ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９に開示されている。抗体は、本分野において公知の標準的な方法を用いて生成され得る。抗体の例には、モノクローナル、一本鎖および抗体の機能的断片が含まれる（但し、これらに限定されない）。このような抗体を生成するための方法は本分野において公知であり、例えば、Ｃｏｌｌａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８３（１０）：６３３８−６３４５，Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９，４２８５−４２８９およびＢａｌｄｉ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２１：１４８−１５３を参照のこと。
【０１９８】
抗体は、幅広い宿主、例えば、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒトおよびその他の中で産生され得る。一態様において、抗体は、本明細書に開示されているとおり、宿主細胞中でのＣＤＲ、例えば重鎖および軽鎖をコードするポリヌクレオチドの発現、細胞を増殖し、細胞を発現し、次いで、ポリヌクレオチドによって発現された抗体を精製することによって調製される。ポリヌクレオチドはベクター中に挿入することができ、抗ＤＣＫＬ１抗体のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された制御配列、例えば、発現系に対して選択されたプロモーターおよびエンハンサーをさらに含むことができる。
【０１９９】
抗体は、標的抗原またはＤＣＬＫ１のＣ末端断片単離されたそのポリペプチドなどの、宿主中で免疫原性特性を有する標的抗原の断片もしくはオリゴペプチドを注射することによって調製することができる。宿主の種に応じて、免疫学的応答を増加させるために、様々なアジュバントが添加され、使用され得る。このようなアジュバントには、フロイント、水酸化アルミニウムなどのミネラルゲル、ならびにリゾレシチン、プルロニック（登録商標）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニンおよびジニトロフェノールなどの界面活性物質が含まれるが、これらに限定されない。ヒトにおいて使用されるアジュバントの中では、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）が特に有用である。この本開示は、単離されたポリペプチドおよびアジュバントも提供する。
【０２００】
ある態様において、本開示の抗体はポリクローナルである、すなわち、異なるアミノ酸配列を有する複数種の抗ＤＣＬＫ１抗体の混合物である。一態様において、ポリクローナル抗体は、異なるＣＤＲを有する複数種の抗ＤＣＬＫ１抗体の混合物を含む。したがって、異なる抗体を産生する細胞の混合物が培養され、得られた培養物から精製された抗体を使用することができる（国際公開第２００４／０６１１０４号参照）。
【０２０１】
モノクローナル抗体の作製。ＤＣＬＫ１に対するモノクローナル抗体は、培養下の連続細胞株によって抗体分子を作製する任意の技術を用いて調製され得る。このような技術には、ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７（１９７５）参照）；トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ４：７２（１９８３）参照）およびヒトモノクローナル抗体を作製するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（例えば、Ｃｏｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６（１９８５）参照）が含まれるが、これらに限定されない。本技術の実施において、ヒトモノクローナル抗体を使用することができ、ヒトハイブリドーマを使用することによって（例えば、Ｃｏｔｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０：２０２６−２０３０（１９８３）参照）またはインビトロでエプスタイン・バーウイルスによりヒトＢ細胞を形質転換することによって（例えば、Ｃｏｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６（１９８５）参照）作製することができる。例えば、抗体の領域をコードする核酸の集団を単離することができる。集団から抗体の一部をコードする配列を増幅し、次いで、増幅された配列から抗体または可変ドメインなどの抗体の断片をコードするＤＮＡを再構築するために、抗体の保存領域をコードする配列に由来するプライマーを使用するＰＣＲが使用される。ファージまたは細菌上での融合ポリペプチドの発現およびディスプレイのために、このような増幅された配列は、他のタンパク質、例えば、バクテリオファージ外被または細菌の細胞表面タンパク質をコードするＤＮＡに融合させることもできる。次いで、増幅された配列を発現させ、例えば、ＤＣＬＫ１ポリペプチド上に存在する抗原またはエピトープに対する発現された抗体またはその断片の親和性に基づいて、さらに選択または単離することができる。
【０２０２】
または、例えば、ＤＣＬＫ１のアミノ酸配列もしくはその断片を含み、またはＤＣＬＫ１のアミノ酸配列もしくはその断片から本質的になり、またはＤＣＬＫ１のアミノ酸配列もしくはその断片からなる単離されたポリペプチドで被験体を免疫し、次いで、定型的な方法を用いて被験体の脾臓からハイブリドーマを単離することによって、抗ＤＣＬＫ１モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマを調製することができる。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ他（Ｇａｌｆｒｅ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ７３：３−４６（１９８１））を参照のこと。標準的な方法を用いてハイブリドーマをスクリーニングすることは、変動する特異性（すなわち、異なるエピトープに対する）および親和性のモノクローナル抗体をもたらすであろう。所望の特性、例えばＤＣＬＫ１結合を有する選択されたモノクローナル抗体は、（ｉ）ハイブリドーマによって発現されたとおりに使用することができ、（ｉｉ）その特性を変化させるためにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの分子に結合することができ、または（ｉｉｉ）様々な様式でモノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡを単離し、配列決定し、操作することができる。一態様において、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノム、または不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子から本質的になるゲノム、または不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子からなるゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって、抗ＤＣＬＫ１モノクローナル抗体が産生される。ハイブリドーマ技術には、本分野において公知であり、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，３４９（１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，５６３−６８１（１９８１）に教示されているものが含まれる。
【０２０３】
ファージディスプレイ技術。上述されているように、本開示の抗体は、組換えＤＮＡおよびファージディスプレイ技術の適用を通じて作製することができる。例えば、抗ＤＣＬＫ１抗体は、本分野において公知の様々なファージディスプレイ法を用いて調製することができる。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメインは、これをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。所望の結合特性を有するファージは、抗原、典型的には固体表面またはビーズに結合または捕捉された抗原を用いて直接選択することによって、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から選択される。これらの方法において使用されるファージは典型的には、Ｆａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化されたＦｖ抗体ドメインがファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え的に融合されている、ｆｄおよびＭ１３などの繊維状ファージである。さらに、ＤＣＬＫ１ポリペプチド、例えば、ポリペプチドまたはその誘導体、断片、類縁体もしくは相同体に対して所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ効果的な同定を可能にするために、方法はＦａｂ発現ライブラリーの構築に適合させることができる（例えば、Ｈｕｓｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１，１９８９を参照）。本開示の単離されたヒト化抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の他の例には、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９−５８８３（１９８８）；Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８７：１０６６−１０７０（１９９０）；Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；国際公開第９０／０２８０９号；国際公開第９１／１０７３７号；国際公開第９２／０１０４７号；国際公開第９２／１８６１９号；国際公開第９３／１１２３６号；国際公開第９５／１５９８２号；国際公開第９５／２０４０１号；国際公開第９６／０６２１３号；国際公開第９２／０１０４７号（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｅｔ  ａｌ．）；国際公開第９７／０８３２０号（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）；国際公開第９２／０１０４７号（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；国際公開第９１／１７２７１号（Ａｆｆｙｍａｘ）；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号および同第５，７３３，７４３号に開示されているものが含まれる。
【０２０４】
ジスルフィド結合を介してポリペプチドを付着させることによって、バクテリオファージ粒子の表面上にポリペプチドをディスプレイするための有用な方法は、Ｌｏｈｎｉｎｇ、米国特許第６，７５３，１３６号によって記載されている。上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後に、ファージ由来の抗体コード領域を単離し、ヒト抗体などの全抗体または任意の他の所望の抗原結合断片を生成するために使用し、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌など任意の所望の宿主中で発現させることができる。例えば、国際公開第９２／２２３２４号；Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ，，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１２：８６４−８６９（１９９２）；Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＪＲＩ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１０４１−１０４３（１９８８）に開示されている方法などの本分野で公知の方法を用いて、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片を組換え的に作製するための技術を使用することもできる。
【０２０５】
抗体または抗体断片はファージまたはファージミド粒子の表面上に存在するので、良好な結合活性を維持したバリアントを同定するために、一般的には、ディスプレイベクター中にクローニングされているハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体断片は、適切な抗原に対して選択することができる。例えば、Ｂａｒｂａｓ  ＩＩＩ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）を参照されたい。しかしながら、選択および／またはスクリーニングのために溶解性ファージベクター（改変されたＴ７またはラムダＺａｐ系）中に抗体断片ライブラリーをクローニングするなど、他のベクター形式をこの過程に対して使用することもできるであろう。
【０２０６】
別の抗体作製法。リンパ球集団中でのインビボ産生を誘導することによって、または組換え免疫グロブリンライブラリーもしくは高度に特異的な結合試薬のパネルをスクリーニングすることによっても、抗体は作製され得る（Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ８６：３８３３−３８３７（１９８９）；Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４９：２９３−２９９（１９９１））。
【０２０７】
または、一本鎖抗体を作製するための技術が使用され得る。一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、リンカーペプチド（典型的には、およそ５〜２５アミノ酸の長さ）で接続された１つの重鎖可変領域と１つの軽鎖可変領域を含む。このような技術の非限定的な例は、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９，４２８５−４２８９およびＢａｌｄｉ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２１：１４８−１５３に開示されている。ｓｃＦｖにおいて、重鎖および軽鎖の可変領域は、同一の抗体または異なる抗体に由来し得る。ｓｃＦｖは、組換え技術を用いて、例えば、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）などの宿主生物中でのｓｃＦｖをコードするベクターの発現によって合成され得る。上記抗体の重鎖または重鎖の可変領域をコードするＤＮＡおよび上記抗体の軽鎖または軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡから選択されるＤＮＡの全体または所望のアミノ酸配列をコードする部分的ＤＮＡをテンプレートとして使用して、部分的ＤＮＡの両端を画するプライマー対を使用するＰＣＲによって増幅を実施し、およびリンカーの両端をそれぞれ重鎖および軽鎖に連結するために、ポリペプチドリンカー部分をコードするＤＮＡとリンカーの両端を画するプライマー対とを組み合わせる増幅をさらに実施することによって、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを取得することができる。ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを含有する発現ベクターおよび該発現ベクターによって形質転換された宿主は、本分野において公知の慣用の方法にしたがって取得することができる。
【０２０８】
抗原結合断片、例えば、抗体分子のペプシン消化によって作製することができるＦ（ａｂ’）２断片およびＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成され得るＦａｂ断片も生成され得る。または、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ簡単な同定を可能にするために、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築し得る（Ｈｕｓｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１２７５−１２８１（１９８９））。
【０２０９】
抗体修飾。本開示の抗体は、抗原に対する親和性を増加させるために多量体化され得る。多量体化されるべき抗体は、１種類の抗体または同一の抗原の複数のエピトープを認識する複数の抗体であり得る。抗体の多量体化の方法としては、２つのｓｃＦｖ分子へのＩｇＧ  ＣＨ３ドメインの結合、ストレプトアビジンへの結合、ヘリックス・ターン・ヘリックスモチーフの導入などを例示することができる。
【０２１０】
本明細書に開示されている抗体組成物は、これらの抗体のいずれかと別の因子との間で形成されたコンジュゲート（免疫複合体）の形態であり得る。一態様において、本明細書に開示されている抗体は、放射性材料にコンジュゲートされる。別の態様において、本明細書に開示されている抗体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの様々な種類の分子に結合することができる。
【０２１１】
抗体スクリーニング。所望の特異性を有する抗体を同定するためのスクリーニングのために、様々なイムノアッセイが使用され得る。確立された特異性を有するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれかを用いる競合的結合アッセイまたは免疫放射定量測定アッセイのための多数のプロトコールが、本分野において周知である。このようなイムノアッセイは、典型的には、ＤＣＬＫ１または任意のその断片もしくはオリゴペプチドとその特異的抗体との間の複合体形成の測定を含む。２つの非干渉ＤＣＬＫ１エピトープに対して特異的なモノクローナル抗体を使用する２部位、モノクローナルベースのイムノアッセイが使用され得るが、競合的結合アッセイも使用され得る（Ｍａｄｄｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１５８：１２１１−１２１６（１９８３））。
【０２１２】
Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ（ＶＭＳＩ）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＴおよびスライドガラス上のホルマリン固定、パラフィン包埋されたヒト組織を用いて、抗ＤＣＬＫ１抗体候補の自動化された免疫組織化学（ＩＨＣ）スクリーニングを実施することができる。組織試料は、まず、脱パラフィン、抗原賦活化を経た後、抗ＤＣＬＫ１抗体候補および検出抗体を添加する。検出抗体は、ＶＭＳＩから得られる色素原検出試薬を用いて可視化される。染色されたスライドは、顕微鏡下において手作業でスクリーニングされる。正しい一次抗体染色パターンを有する試料が、可能性を有する抗ＤＣＬＫ１候補として選択される。
【０２１３】
抗体精製。本明細書に開示されている抗体は、均一な状態まで精製することができる。抗体の分離および精製は、慣用のタンパク質分離および精製方法を使用することによって実施することができる。
【０２１４】
単に例として、抗体は、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外ろ過、塩析、透析、調製用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動などの使用を適切に選択し、組み合わせることによって、分離および精製することができる。Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）。
【０２１５】
クロマトグラフィーの例には、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが含まれる。一態様において、クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣまたはＦＰＬＣなどの液体クロマトグラフィーを使用することによって実施することができる。
【０２１６】
一態様において、アフィニティークロマトグラフィーでは、プロテインＡカラムまたはプロテインＧカラムが使用され得る。他の例示的なカラムには、プロテインＡカラム、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳ、セファロースＦ．Ｆ．（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などが含まれる。
使用の方法
【０２１７】
全般。本明細書に開示されている抗体は、（例えば、適切な生理的試料内のＤＣＬＫ１ポリペプチドのレベルの測定において使用するために、診断方法において使用するために、ポリペプチドを画像化する際に使用するためになど）ＤＣＬＫ１ポリペプチドの位置確認および／または定量に関する本分野で公知の方法において有用である。本明細書に開示されている抗体は、アフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降などの標準的な技術によってＤＣＬＫ１ポリペプチドを単離する上で有用である。本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体は、生物学的試料、例えば哺乳動物の血清または細胞からの天然のＤＣＬＫ１ポリペプチドの精製および宿主系内で発現された組換え的に産生されたＤＣＬＫ１ポリペプチドの精製を容易にすることができる。このような技術の非限定的な例は、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９，４２８５−４２８９およびＢａｌｄｉ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２１：１４８−１５３に開示されている。さらに、ＤＣＬＫ１抗体は、ＤＣＬＫ１ポリペプチドの発現の存在量および発現のパターンを評価するために、（例えば、血漿、細胞溶解物または細胞上清中の）ＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出するために使用することができる。本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体は、臨床試験手技の一部として組織中のＤＣＬＫ１レベルをモニターするために、例えば、所与の処置計画の有効性を判定するために、診断的に使用することができる。本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体を検出可能な物質に結合する（すなわち、物理的に連結する）ことによって、検出を容易にすることができる。
【０２１８】
別の態様において、本明細書に開示されている抗体もしくは抗原結合断片を含む、または本明細書に開示されている抗体もしくは抗原結合断片から本質的になり、または本明細書に開示されている抗体もしくは抗原結合断片からなる組成物が本明細書において提供される。組成物は、例えば、ヒトＤＣＬＫ１タンパク質もしくはその断片を含む、または例えば、ヒトＤＣＬＫ１タンパク質もしくはその断片から本質的になる、または例えば、ヒトＤＣＬＫ１タンパク質もしくはその断片からなるペプチドをさらに含むことができる。一態様において、ペプチドは、細胞に付随している。例えば、組成物は、本明細書に開示されている抗体もしくは抗体断片で標識されている脱凝集された細胞試料を含み得、または本明細書に開示されている抗体もしくは抗体断片で標識されている脱凝集された細胞試料から本質的になり得、または本明細書に開示されている抗体もしくは抗体断片で標識されている脱凝集された細胞試料からなり得、この組成物は、例えば、細胞を単離するためのアフィニティークロマトグラフィー法において、またはフローサイトメトリーをベースとする細胞分析もしくは細胞選別のために有用である。別の例として、組成物は、本明細書に開示されている抗体もしくは抗体断片で標識された固定組織試料もしくは細胞塗抹標本を含み得、または本明細書に開示されている抗体もしくは抗体断片で標識された固定組織試料もしくは細胞塗抹標本から本質的になり得、または本明細書に開示されている抗体もしくは抗体断片で標識された固定組織試料もしくは細胞塗抹標本からなり得、この組成物は、例えば、免疫組織化学または細胞学的分析において有用である。別の態様において、抗体または抗体断片は、固体支持体に結合されており、これは、例えば、ＥＬＩＳＡ；ＤＣＬＫ１タンパク質もしくはその断片、ＤＣＬＫ１陽性細胞、またはＤＣＬＫ１およびその他の細胞成分を含有する複合体を単離するためのアフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降法において有用である。別の態様において、ペプチドは固体支持体に結合されている。例えば、ペプチドは、例えばサンドイッチＥＬＩＳＡにおいて有用である該ペプチドに対して特異的な二次抗体を介して固体支持体に結合され得る。別の例として、ペプチドはクロマトグラフィーカラムに結合され得、これは、例えば、本技術にしたがう抗体の単離または精製において有用である。別の態様において、ペプチドは、溶解溶液または分画された細胞の細胞内画分を含有する溶液などの溶液中に配置され、これは、例えば、ＥＬＩＳＡおよびＤＣＬＫ１タンパク質もしくはその断片またはＤＣＬＫ１とその他の細胞成分を含有する複合体を単離するアフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降法において有用である。別の態様において、ペプチドは、マトリックス、例えば、ゲル電気泳動ゲルまたはウェスタンブロッティングに対して一般的に使用されるマトリックス（ニトロセルロースまたはフッ化ポリビニリデン製の膜など）に付随しており、この組成物は、電気泳動技術および／またはウェスタンブロッティングなどのイムノブロッティング技術にとって有用である。
【０２１９】
ＤＣＬＫ１ポリペプチドの検出。生物学的試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドのレベルを検出するための例示的な方法は、被験体から生物学的試料を取得すること、およびＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出することが可能な本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体と生物学的試料を接触させることを含む。これは、処置を監視し、または処置のための被験体を同定するために使用することができる。
【０２２０】
一態様において、開示されている抗体またはその断片は、検出可能に標識されている。抗体に関する「標識された」という用語は、検出可能な物質を抗体に結合する（すなわち、物理的に連結する）ことによる抗体の直接的な標識化および直接標識されている別の化合物との反応性による抗体の間接的な標識化を包含することが意図される。間接的な標識化の非限定的な例には、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出できるようなビオチンでのＤＮＡプローブの末端標識化が含まれる。
【０２２１】
本開示の検出方法は、インビトロおよびインビボで、生物学的試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドの発現レベルを検出するために使用することができる。ＤＣＬＫ１ポリペプチドの検出のためのインビトロ技術には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫沈降、ラジオイムノアッセイおよび免疫蛍光（例えば、ＩＨＣ）が含まれる。さらに、ＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出するためのインビボ技術としては、標識された抗ＤＣＬＫ１抗体を被験体中に導入することが挙げられる。単に例として、抗体は、標準的な画像化技術によって被験体中でのその存在および位置を検出することができる放射性マーカーで標識することができる。一態様において、生物学的試料は、試験被験体からのポリペプチド分子を含有する。
【０２２２】
イムノアッセイおよび画像化。本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体は、抗体をベースとした技術を用いて、生物学的試料（例えば、ヒト血漿）中のＤＣＬＫ１ポリペプチドレベルをアッセイするために使用することができる。例えば、組織中のタンパク質発現は、古典的な免疫組織化学（ＩＨＣ）染色法を用いて調べることができる。Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用なその他の抗体をベースとする方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などのイムノアッセイが含まれる。適切な抗体アッセイ標識は本分野において公知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）およびテクネチウム（９９ｍＴｃ）などの放射性同位体またはその他の放射性因子、フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光性標識ならびにビオチンが挙げられる。
【０２２３】
生物学的試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドレベルをアッセイすることに加えて、ＤＣＬＫ１ポリペプチドレベルは、画像化によって、インビボで検出することもできる。ＤＣＬＫ１ポリペプチドレベルのインビボでの画像化のために抗ＤＣＬＫ１抗体とともに取り込ませることができる標識には、Ｘ線撮影、ＮＭＲまたはＥＳＲによって検出可能な標識が含まれる。Ｘ線撮影のために、適切な標識には、検出可能な放射線を発するが、被験体にとって明白に有害でないバリウムまたはセシウムなどの放射性同位体が含まれる。ＮＭＲおよびＥＳＲのための適切なマーカーには、適切なｓｃＦｖクローンに対する栄養素の標識化によってＤＣＬＫ１抗体中に取り込ませることができる、重水素などの検出可能な特徴的スピンを有するマーカーが含まれる。
【０２２４】
ＤＣＬＫ１抗体または該抗体をコードするポリヌクレオチドは、放射性同位体（例えば、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）、放射線不透過性物質または核磁気共鳴によって検出可能な材料などの適切な検出可能な画像化部分で標識することが可能であり、被験体中に（例えば、非経口的に、皮下にまたは腹腔内に）導入される。被験体の大きさおよび使用される画像化系が、診断画像を生成するために必要とされる画像化部分の量を決定することが本分野において理解されるであろう。放射性同位体部分の場合には、ヒト被験体に対しては、注射される放射線の量は、通常、約５〜２０ミリキュリーの９９ｍＴｃの範囲であろう。標識されたＤＣＬＫ１抗体は、次いで、特異的な標的ポリペプチドを含有する細胞の部位に優先的に蓄積する。例えば、インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １３（１９８２）に記載されている。
【０２２５】
いくつかの態様において、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進する構造的修飾を含有するＤＣＬＫ１抗体は、インビボ画像化検出法において有用である。いくつかの態様において、ＤＣＬＫ１抗体は、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために抗体のＣＨ２定常重鎖領域中に欠失を含有する。いくつかの態様において、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために、Ｆａｂ断片が使用される。いくつかの態様において、迅速な結合および細胞取り込みならびに／または遅い放出を促進するために、Ｆ（ａｂ）’２断片が使用される。
【０２２６】
ＤＣＬＫ１抗体の診断上の使用。本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体組成物は、診断法および予後診断法において有用である。したがって、本開示は、被験体中のＤＣＬＫ１関連医学的症状の診断において、本明細書に開示されている抗体を使用するための方法を提供する。本明細書において開示されている抗体は、ＤＣＬＫ１ポリペプチドに対して高いレベルのエピトープ結合特異性および高い結合親和性を有するように選択され得る。一般に、抗体の結合親和性が高いほど、標的ポリペプチドを除去することなく非特異的に結合された材料を除去するために、イムノアッセイにおいて、よりストリンジェントな洗浄条件を実施することができる。したがって、診断アッセイにおいて有用な本技術のＤＣＬＫ１抗体は、通常、１０−６未満もしくは約１０−６または約１０−７または約１０−８または約１０−９または約１０−１０または約１０−１１または約１０−１２Ｍ（ｏｒ  １  ｏｒ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ  ａｂｏｕｔ  ０−１２Ｍ）の結合親和性を有する。ある態様において、診断試薬として使用されるＤＣＬＫ１抗体は、標準的な条件下で、少なくとも１２時間、少なくとも５時間、少なくとも１時間または少なくとも３０分で平衡に達するのに十分な速度論的オン速度を有する。
【０２２７】
本技術のいくつかの方法は、診断試薬として抗ＤＣＬＫ１抗体のポリクローナル調製物およびポリクローナル抗ＤＣＬＫ１抗体組成物を使用し、他の方法はモノクローナル単離物を使用する。上記方法にしたがって調製されるポリクローナルヒト抗ＤＣＬＫ１抗体を使用する方法において、調製物は、典型的には、各種のＤＣＬＫ１抗体、例えば標的ポリペプチドに対して異なるエピトープ特異性を有する抗体を含有する。本開示のモノクローナル抗ＤＣＬＫ１抗体は、密接に関連した抗原の存在下でまたは密接に関連した抗原が存在する可能性下で単一の抗原を検出するために有用である。
【０２２８】
本開示のＤＣＬＫ１抗体は、任意の種類の生物学的試料に対する診断試薬として使用することができる。一態様において、本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体は、ヒト生物学的試料に対する診断試薬として有用である。ＤＣＬＫ１抗体は、様々な標準的なアッセイ形式でＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出するために使用することができる。このような形式には、免疫沈降、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、フローサイトメトリー、ＩＨＣおよび免疫測定アッセイが含まれる。Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８）；米国特許第３，７９１，９３２号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８７９，２６２号；同第４，０３４，０７４、同第３，７９１，９３２号；同第３，８１７，８３７号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８５０，５７８号；同第３，８５３，９８７号；同第３，８６７，５１７号；同第３，８７９，２６２号；同第３，９０１，６５４号；同第３，９３５，０７４号；同第３，９８４，５３３号；同第３，９９６，３４５号；同第４，０３４，０７４号；および同第４，０９８，８７６号を参照のこと。生物学的試料は、被験体の任意の組織（生検を含む。）、細胞または体液（ｂｏｄｙ  ｆｌｕｉｄ）から取得され得る。
【０２２９】
ＤＣＬＫ１抗体の予後診断上の使用。本開示は、被験体が増加したＤＣＬＫ１ポリペプチド発現または活性を伴う医学的疾患または症状を発症するリスクがあるかどうかを判定するための予後診断（または予想）アッセイ（例えば、前癌性細胞の検出）も提供する。このようなアッセイは、予後診断または予測目的のために使用することができ、それにより、ＤＣＬＫ１ポリペプチド発現によって特徴付けられるまたはＤＣＬＫ１ポリペプチド発現を伴う医学的疾患または症状の開始前に、個体を予防的に処置することができる。
【０２３０】
本開示の別の態様は、被験体中のＤＣＬＫ１発現を決定するための方法であって、それにより、その被験体に対する適切な治療的または予防的化合物を選択するための方法を提供する。
【０２３１】
または、予後診断アッセイは、癌および／または固形腫瘍を有するまたは発症するリスクがある被験体を特定するために使用することができる。ある実施形態において、癌および／もしくは腫瘍は、甲状腺、乳房、結腸、前立腺、卵巣の癌および／もしくは腫瘍であり、またはより具体的には、絨毛癌腫（ｃｈｒｉｏ−ｃａｒｃｉｎｏｍａ）もしくは癌であり、および／または癌はＢ細胞リンパ腫もしくは白血病である。他の実施形態において、癌および／もしくは腫瘍は、結腸直腸癌、膵臓癌、繊維肉腫細胞、多発性骨髄腫または子宮頸癌である。したがって、本開示は、増加したＤＣＬＫ１ポリペプチド発現レベルを伴う疾患または症状を特定する方法であって、試験試料が被験体から得られ、ＤＣＬＫ１ポリペプチドが検出され、対照試料と比較されたＤＣＬＫ１ポリペプチドの増加したレベルの存在が、増加したＤＣＬＫ１ポリペプチド発現レベルを伴う疾患または症状を有するまたは発症するリスクがある被験体の予測である、方法を提供する。いくつかの態様において、増加したＤＣＬＫ１ポリペプチド発現レベルを伴う疾患または症状は、癌および／または固形腫瘍からなる群より選択される。ある実施形態において、癌および／または腫瘍は、甲状腺、乳房、結腸、前立腺、卵巣の癌および／もしくは腫瘍、または絨毛癌腫またはＢ細胞リンパ腫もしくは白血病である。他の実施形態において、癌および／もしくは腫瘍は、結腸直腸癌、膵臓癌、繊維肉腫細胞、多発性骨髄腫または子宮頸癌である。
【０２３２】
別の態様において、本開示は、被験体が、増加したＤＣＬＫ１ポリペプチド発現を伴う障害または症状に対する化合物で効果的に処置され得るかどうかを判定する方法であって、生物学的試料が被験体から取得され、ＤＣＬＫ１ポリペプチドがＤＣＬＫ１抗体を用いて検出される、方法を提供する。被験体から得られた生物学的試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドの発現レベルが決定され、この疾患を持たない被験体から得られたまたは患者集団から単離された生物学的試料中に見出されるＤＣＬＫ１発現レベルと比較される。健康な被験体から得られた試料と比較された、疾患または症状を有すると疑われる被験体から得られた試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドの上昇したレベルは、試験されている被験体中のＤＣＬＫ１関連疾患または症状を示唆する。疾患を持たない患者から得た１つまたは複数の患者試料中のポリペプチドまたはタンパク質の発現レベルと比較して、ＤＣＬＫ１ポリペプチドの増加した発現は、本開示のＣＡＲ  Ｔ細胞またはＣＡＲ  ＮＫ細胞治療に対して患者が応答する可能性が高いことを示唆し、上昇した発現の欠如は、ＣＡＲ  Ｔ細胞またはＣＡＲ  ＮＫ細胞治療に対して患者が応答しない可能性が高いことを示唆する。試料の非限定的な例には、例えば、痰、血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、便、脳脊髄液、腹水（ａｓｃｉｔｅ  ｆｌｕｉｄ）または血液を含むがこれらに限定されない、および身体組織の生検試料を含む、例えば任意の体液が含まれる。試料は、腫瘍細胞でもある。上記方法において使用される試験試料は、アッセイ形式、検出方法の性質およびアッセイされるべき試料として使用される組織、細胞または抽出物に基づいて変動する。
【０２３３】
特定の態様において、本開示は、患者がＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療に対して応答する可能性が高いか、または応答しない可能性が高いかどうかを判定する方法に関する。特定の実施形態において、この方法は、患者から単離された腫瘍試料を、有効量のＤＣＬＫ１結合因子、例えばＤＣＬＫ１抗体と接触させること、および腫瘍試料に結合された任意の因子もしくは抗体の存在を検出することを含み、または患者から単離された腫瘍試料を、有効量のＤＣＬＫ１結合因子、例えばＤＣＬＫ１抗体と接触させること、および腫瘍試料に結合された任意の因子もしくは抗体の存在を検出することから本質的になり、または患者から単離された腫瘍試料を、有効量のＤＣＬＫ１結合因子、例えばＤＣＬＫ１抗体と接触させること、および腫瘍試料に結合された任意の因子もしくは抗体の存在を検出することからなる。さらなる実施形態において、腫瘍試料に結合された因子または抗体の存在は、患者がＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療に対して応答する可能性が高いことを示唆し、腫瘍試料に結合した抗体の不存在は、患者がＤＣＬＫ１治療に応答する可能性が高くないことを示唆する。試料の非限定的な例には、例えば、痰、血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、便、脳脊髄液、腹水（ａｓｃｉｔｅ  ｆｌｕｉｄ）または血液を含むがこれらに限定されない、および身体組織の生検試料を含む、例えば任意の体液が含まれる。試料は、腫瘍細胞でもある。上記方法において使用される試験試料は、アッセイ形式、検出方法の性質およびアッセイされるべき試料として使用される組織、細胞または抽出物に基づいて変動する。いくつかの実施形態において、この方法は、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療に対して応答する可能性が高いと判定されている患者に、有効量のＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療を投与するさらなる工程を含み、または該工程から本質的になり、または該工程からなる。いくつかの実施形態において、患者は、ＤＣＬＫ１を発現する腫瘍および／または癌。
【０２３４】
ＤＣＬＫ１ポリペプチドの上昇した発現レベルが、その疾患を有する被験体が特定の種類の治療または処置に対して応答する可能性が高いかどうかの指標であることが知られている多数の疾患状態が存在する。かかる疾患状態の非限定的な例には、癌、例えば、癌腫、肉腫または白血病が含まれる。このため、生物学的試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出する方法は、例えば被験体が治療または処置に対して応答する可能性を評価するために、予後診断の方法として使用することができる。被験体からの適切な組織または体液試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドのレベルが決定され、適切な対照、例えば、同一の疾患を有するが、処置に対して好ましく応答した被験体中のレベルと比較される。試料の非限定的な例には、例えば、痰、血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、便、脳脊髄液、腹水（ａｓｃｉｔｅ  ｆｌｕｉｄ）または血液を含むがこれらに限定されない、および身体組織の生検試料を含む、例えば任意の体液が含まれる。試料は、腫瘍細胞でもある。上記方法において使用される試験試料は、アッセイ形式、検出方法の性質およびアッセイされるべき試料として使用される組織、細胞または抽出物に基づいて変動する。細胞のタンパク質抽出物または膜抽出物を調製する方法は本分野において公知であり、使用されている系と適合的な試料を取得するために容易に改変することができる。
【０２３５】
一態様において、本開示は、ＤＣＬＫ１ポリペプチドの発現に対する因子（例えば、薬物、化合物または小分子）の影響をモニタリングする方法を提供する。このようなアッセイは、基礎的な薬物スクリーニングにおいておよび臨床試験において適用することができる。例えば、ＤＣＬＫ１ポリペプチドレベルを減少させる薬剤の有効性は、ＤＣＬＫ１の上昇した発現を示す被験体、例えば、癌と診断された患者の臨床試験においてモニターされ得る。ＤＣＬＫ１ポリペプチドの発現に影響を及ぼす因子は、該因子を投与し、応答を観察することによって同定することができる。このように、ＤＣＬＫ１ポリペプチドの発現パターンは、因子に対する被験体の生理学的応答を示唆するマーカーとしての役割を果たすことができる。したがって、この応答状態は、因子での被験体の処置の前および処置の間の様々な時点で判定され得る。いくつかの実施形態において、この方法は、さらなる治療を必要とすると判定されている患者に、有効量のＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療を投与するさらなる工程をさらに含み、またはさらに該工程から本質的になり、またはさらに該工程からなる。
【０２３６】
本開示のさらなる態様は、患者がＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療に対して応答する可能性が高いか、または可能性が高くないかを判定する方法に関する。特定の実施形態において、この方法は、患者から単離された腫瘍試料を、有効量のＤＣＬＫ１抗体と接触させること、および腫瘍試料に結合された任意の抗体の存在を検出することを含み、または患者から単離された腫瘍試料を、有効量のＤＣＬＫ１抗体と接触させること、および腫瘍試料に結合された任意の抗体の存在を検出することから本質的になり、または患者から単離された腫瘍試料を、有効量のＤＣＬＫ１抗体と接触させること、および腫瘍試料に結合された任意の抗体の存在を検出することからなる。さらなる実施形態において、腫瘍試料に結合された抗体の存在は、患者がＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療に対して応答する可能性が高いことを示唆し、腫瘍試料に結合した抗体の不存在は、患者がＤＣＬＫ１治療に応答する可能性が高くないことを示唆する。いくつかの実施形態において、この方法は、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療に対して応答する可能性が高いと判定されている患者に、有効量のＤＣＬＫ１  ＣＡＲ治療を投与するさらなる工程を含み、または該工程から本質的になり、または該工程からなる。いくつかの実施形態において、患者は、Ｂ７−Ｈ４を発現する腫瘍および／または癌。いくつかの実施形態において、腫瘍および／または癌は、固形腫瘍、例えば、乳房、結腸、前立腺、甲状腺または絨毛癌腫である。いくつかの実施形態において、癌／腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫または白血病である。他の実施形態において、癌および／もしくは腫瘍は、結腸直腸癌、膵臓癌、繊維肉腫細胞、多発性骨髄腫または子宮頸癌である。
【０２３７】
自動化された実施形態。当業者は、本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体を使用する方法の態様は自動化できることを理解するであろう。ＤＣＬＫ１染色手技の特定の態様は、様々な自動化された過程を用いて実施することができる。
治療上の応用。
【０２３８】
本開示のＤＣＬＫ１抗体は、腫瘍および癌を処置するために使用され得る。本開示のＤＣＬＫ１抗体は、単独で、または希釈剤、公知の抗癌治療薬とおよび／またはサイトカインなどのその他の成分もしくは免疫賦活性であるその他の細胞集団と組み合わせて投与され得る。
【０２３９】
腫瘍の増殖を阻害し、および／または癌を処置し、および／または癌の再発を予防することを必要とする被験体において、腫瘍の増殖を阻害し、および／または癌を処置し、および／または癌の再発を予防する方法であって、有効量の本明細書に開示された方法のいずれかにしたがって作出されたＤＣＬＫ１抗体を前記被験体に投与することを含む、方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、処置を必要とする被験体中の腫瘍または癌は、ＤＣＬＫ１を発現または過剰発現する。一態様において、処置を必要とする被験体中の腫瘍は固形腫瘍である。
【０２４０】
したがって、本開示の方法の態様は、腫瘍の増殖を阻害することを必要とする被験体中の腫瘍の増殖を阻害する方法および／または癌の処置を必要とする癌患者を処置する方法に関する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、固形腫瘍またはＢ細胞リンパ腫または白血病である。他の実施形態において、腫瘍／癌は、甲状腺、乳房、結腸、絨毛癌腫（ｃｈｉｒｏ−ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、卵巣もしくは前立腺腫瘍／癌またはＢ細胞リンパ腫もしくは白血病である。さらなる実施形態において、癌および／または腫瘍は、結腸直腸癌、膵臓癌、繊維肉腫細胞、多発性骨髄腫、子宮頸癌、肺癌、肝臓癌、食道癌、乳癌、大唾液腺癌腫、神経芽細胞腫または腎細胞癌腫である。いくつかの実施形態において、腫瘍または癌は、ＤＣＬＫ１を発現または過剰発現する。ＤＣＬＫ１を発現する癌の非限定的な例は、Ｗｅｓｔｐｈａｌｅｎ，Ｃ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．”Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｃｌｋ１  ａｎｄ  Ｄｃｌｋ１−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ”  Ｓｍａｌｌ  ＧＴＰａｓｅｓ，８（３），１６４−１７１（２０１６）に挙げられている。ＤＣＬＫ１を発現する癌または腫瘍の非限定的な例には、結腸直腸癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、食道癌、乳癌、大唾液腺癌腫、神経芽細胞腫および腎細胞癌腫が含まれる。別の態様において、癌または腫瘍は反応性が低下しているとして特徴付けられる。
【０２４１】
さらなる態様において、腫瘍はＤＣＬＫ１抗原を発現し、被験体は、本明細書に記載されている診断薬などの診断薬による治療のために選択されている。
【０２４２】
さらなる態様において、癌または腫瘍細胞集団に対する免疫応答を刺激する方法であって、該方法は免疫応答を刺激するのに有効な量で、本開示のＤＣＬＫ１抗体を被験体に投与することを含み、または免疫応答を刺激するのに有効な量で、本開示のＤＣＬＫ１抗体を被験体に投与することから本質的になり、または免疫応答を刺激するのに有効な量で、本開示のＤＣＬＫ１抗体を被験体に投与することからなる。一態様において、被験体は、癌または腫瘍に対する処置を有し、有していた、または必要とする。別の態様において、癌は反応性が低下しているとして特徴付けられる。癌または腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激する方法であって、癌もしくは腫瘍細胞集団を本開示のＤＣＬＫ１抗体と接触させることを含み、または癌もしくは腫瘍細胞集団を本開示のＤＣＬＫ１抗体と接触させることから本質的になり、または癌もしくは腫瘍細胞集団を本開示のＤＣＬＫ１抗体と接触させることからなる方法が、本明細書においてさらに提供される。さらなる態様において、癌または腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激する方法が提供され、該方法は、標的細胞集団をＤＣＬＫ１抗体と接触させることを含み、または標的細胞集団をＤＣＬＫ１抗体と接触させることから本質的になり、または標的細胞集団をＤＣＬＫ１抗体と接触させることからなり、前記接触はインビトロまたはインビボである。直接的な相互作用の具体例は結合である。間接的な相互作用の具体例は、１つの実体が中間の分子に対して作用し、次いで、中間の分子が第二の参照される実体に対して作用する場合である。本明細書において使用される場合、接触には、溶液中、固相中、インビトロ、エクソビボ、細胞中およびインビボが含まれる。インビボで接触させることは、投与することまたは投与と表すことができる。別の態様において、癌または腫瘍は反応性が低下しているとして特徴付けられる。一態様において、ＤＣＬＫ１抗体は、癌または腫瘍細胞への特異的結合に関して選択される。細胞は、任意の種、例えば、哺乳動物またはヒトの細胞に由来し得る。細胞は、被験体から（例えば、生検から）または培養された細胞から単離することができる。別の態様において、癌または腫瘍細胞はＤＣＬＫ１を発現しまたは過剰発現する。
【０２４３】
被験体中に抗腫瘍免疫を供する方法も本明細書において提供され、該方法は、被験体に免疫を供するのに有効な量で本開示のＤＣＬＫ１抗体を被験体に投与することを含み、または被験体に免疫を供するのに有効な量で本開示のＤＣＬＫ１抗体を被験体に投与することから本質的になり、または被験体に免疫を供するのに有効な量で本開示のＤＣＬＫ１抗体を被験体に投与することからなる。ＤＣＬＫ１抗体は、素因がある被験体または癌の症候をいまだ示していない被験体中に症候または癌が起こることを予防するために与えられる。
【０２４４】
細胞を有効量のＤＣＬＫ１抗体と接触させることを含む、癌細胞または癌幹細胞の増殖を阻害する方法も本明細書に開示されている。一態様において、阻害されている癌細胞または癌幹細胞は、接着性癌細胞である。別の態様において、阻害されている癌細胞または癌幹細胞は、非接着性癌細胞である。さらなる態様において、癌細胞または癌幹細胞は、結腸直腸癌細胞、膵臓癌細胞、繊維肉腫細胞、前立腺癌細胞、多発性骨髄腫細胞、子宮頸癌細胞、または卵巣癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、食道癌細胞、乳癌細胞、大唾液腺癌腫細胞、神経芽細胞腫細胞または腎細胞癌腫細胞である。
【０２４５】
これらの方法は、ヒト、ヒト以外の霊長類（例えば、類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、サル、マカクなど）、飼育動物（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）および実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）などの被験体を処置するのに有用である。哺乳動物は、任意の年齢または任意の発達段階（例えば、成体、青年（ｔｅｅｎ）、小児、乳幼児または子宮内の哺乳動物）であり得る。哺乳動物は、雄（ｍａｌｅ）または雌（ｆｅｍａｌｅ）であり得る。ある実施形態において、被験体は、新生物障害、新形成、腫瘍、悪性病変または癌を有するまたは有すると疑われる。
【０２４６】
本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体は、単独で、または希釈剤、公知の抗癌治療薬とおよび／またはサイトカインなどのその他の成分もしくは免疫賦活性であるその他の細胞集団と組み合わせて投与され得る。本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体は、第一次治療、第二次治療、第三次治療またはさらなる治療として投与され得る。したがって、開示されているＤＣＬＫ１抗体は、他の治療（例えば、化学療法、放射線、手術など）と組み合わされ得る。さらなる治療の非限定的な例には、化学療法薬または生物薬（ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）が含まれる。適切な処置計画は、処置している医師または獣医師によって決定される。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、開示されたＤＣＬＫ１抗体は、腫瘍組織の切除によって形成された空洞中に（すなわち、空洞内送達）または切除前に腫瘍中に直接（すなわち、腫瘍内送達）送達または投与され得る。いくつかの実施形態において、開示されたＤＣＬＫ１抗体は、静脈内に、くも膜下腔内に、腹腔内に、筋肉内に、皮下に、または他の適切な投与手段によって投与され得る。
【０２４８】
本開示の薬学的組成物は、処置されまたは予防されるべき疾患に対して適切な様式で投与され得る。投与の量および頻度は、患者の症状、ならびに患者の疾患の種類および重度などの因子によって決定されるが、適切な投薬量は臨床試験によって決定され得る。
【０２４９】
上記方法については、有効量が投与され、細胞または集団の投与が、任意の症候を減弱し、またはさらなる症候の発生を予防する役割を果たす。投与が、癌の再発または転移の可能性を予防または低減するという目的である場合には、細胞または組成物は、なんらかの目に見えるまたは検出可能な症候に先立って投与することができる。投与の経路としては、経口（錠剤、カプセルまたは懸濁液など）、局所、経皮、鼻腔内、膣、直腸、皮下静脈内、動脈内、筋肉内、骨内、腹腔内、硬膜外およびくも膜下腔内が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５０】
前記方法は、（１）疾患の症候に対する素因があるまたは疾患の症候をいまだ示していない被験体中で症候または疾患が起こることを予防すること、（２）疾患を阻止しもしくはその発達を停止すること、または（３）疾患もしくは疾患の症候を軽減しもしくは疾患もしくは疾患の症候の後退または再発を引き起こすことの１つまたはそれより多くを提供する。本分野において理解されるとおり、「処置」は、臨床的結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本技術において、有益なまたは所望の結果としては、１またはそれを超える症候の緩和または軽減、症状（疾患を含む）の程度の縮小、症状（疾患を含む）の安定化された（すなわち、悪化しない）状態、症状（疾患を含む）の遅延または減速、症状（疾患を含む）の進行、軽減または寛解、検出可能かまたは検出不能かを問わない状態および緩解（部分的であるか、完全であるかを問わない）の１つまたはそれより多くを含むことができるが、これらに限定されない。開示された組成物および方法を含有する処置は、第一次、第二次、第三次、第四次、第五次治療であり得、唯一の治療として、または他の適切な治療、例えば、外科的後退（ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｒｅｃｅｓｓｉｏｎ）、化学療法、放射線と組み合わせて使用されることが意図される。一態様において、処置は予防を除外する。
キット
【０２５１】
本明細書に記載されているように、本開示は、ＤＣＬＫ１の発現レベルを決定するための診断方法を提供する。１つの特定の態様において、本開示は、これらの方法を実施するためのキット、ならびに組織を収集することおよび／またはスクリーニングを実施すること、および／または結果を分析することなど、本開示の方法を実施するための説明書を提供する。
【０２５２】
キットは、本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体組成物（例えば、モノクローナル抗体）および使用説明書を備え、または本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体組成物（例えば、モノクローナル抗体）および使用説明書から本質的になり、または本明細書に開示されているＤＣＬＫ１抗体組成物（例えば、モノクローナル抗体）および使用説明書からなる。キットは、生物学的試料中の、例えば、痰、血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、便、脳脊髄液、腹水（ａｃｉｔｉｃ  ｆｌｕｉｄ）または血液を含むがこれらに限定されない、および身体組織の生検試料を含む、例えば任意の体液中のＤＣＬＫ１ポリペプチドの存在を検出するのに有用である。試験試料は、腫瘍細胞、腫瘍に隣接する正常な細胞、腫瘍組織型に対応する正常な細胞、血液細胞、末梢血リンパ球またはこれらの組み合わせでもあり得る。上記方法において使用される試験試料は、アッセイ形式、検出方法の性質およびアッセイされるべき試料として使用される組織、細胞または抽出物に基づいて変動する。細胞のタンパク質抽出物または膜抽出物を調製する方法は本分野において公知であり、使用されている系と適合的な試料を取得するために容易に改変することができる。
【０２５３】
いくつかの態様において、キットは、生物学的試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドを結合することができる１またはそれを超えるＤＣＬＫ１抗体（例えば、抗体またはＤＣＬＫ１抗体の同じ抗原結合特異性を有するその抗原結合断片と、試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドの量を決定するための手段と、および試料中のＤＣＬＫ１ポリペプチドの量を標準と比較するための手段とを備えることができ、またはこれらから本質的になることができ、またはこれらからなることができる。ＤＣＬＫ１抗体の１またはそれより多くは、標識され得る。キット成分（例えば、試薬）は、適切な容器中に収容することができる。キットは、さらに、ＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出するためにキットを使用するための説明書を備えることができ、またはＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出するためにキットを使用するための説明書から本質的になることができ、またはＤＣＬＫ１ポリペプチドを検出するためにキットを使用するための説明書からなることができる。ある態様において、キットは、ＤＣＬＫ１ポリペプチドに結合する、例えば固体支持体に付着された第一の抗体と、必要に応じて、２）ＤＣＬＫ１ポリペプチドもしくは第一の抗体のいずれかに結合し、検出可能な標識にコンジュゲートされている第二の異なる抗体とを含むことができ、またはＤＣＬＫ１ポリペプチドに結合する、例えば固体支持体に付着された第一の抗体と、必要に応じて、２）ＤＣＬＫ１ポリペプチドもしくは第一の抗体のいずれかに結合し、検出可能な標識にコンジュゲートされている第二の異なる抗体とから本質的になることができ、またはＤＣＬＫ１ポリペプチドに結合する、例えば固体支持体に付着された第一の抗体と、必要に応じて、２）ＤＣＬＫ１ポリペプチドもしくは第一の抗体のいずれかに結合し、検出可能な標識にコンジュゲートされている第二の異なる抗体とからなることができる。
【０２５４】
キットは、例えば、緩衝剤、防腐剤もしくはタンパク質安定化剤も含むことができ、または緩衝剤、防腐剤もしくはタンパク質安定化剤からも本質的になることができ、または緩衝剤、防腐剤もしくはタンパク質安定化剤からもなることができる。キットは、さらに、検出可能な標識を検出するために必要な成分、例えば、酵素もしくは基質を含むことができ、または検出可能な標識を検出するために必要な成分、例えば、酵素もしくは基質から本質的になることができ、または検出可能な標識を検出するために必要な成分、例えば、酵素もしくは基質からなることができる。キットは、アッセイし、試験試料と比較することができる対照試料または一連の対照試料も含有することができる。キットの各成分は、個別の容器中に封入することができ、キットを用いて行われたアッセイの結果を解釈するための説明書とともに、様々な容器の全てを単一の包装に入れることができる。本開示のキットは、キット容器上またはキット容器中に表示（ｗｒｉｔｔｅｎ  ｐｒｏｄｕｃｔ）を含んでもよい。表示は、キット中に含有される試薬を使用する方法を記載する。
【０２５５】
適切な場合、これらの提案されるキット成分は、当業者による使用にとって通例の様式で梱包され得る。例えば、これらの提案されるキット成分は、溶液中にまたは液体分散液などとして提供され得る。
担体
【０２５６】
本開示の抗体およびポリヌクレオチド、ベクターまたは宿主細胞は、多くの異なる担体に結合させることもできる。このため、本開示は、抗体および活性または不活性な別の物質を含有する組成物も提供する。周知の担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然のおよび改変されたセルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよび磁鉄鉱が挙げられる。担体の性質は、本開示の目的上、可溶性または不溶性のいずれかであり得る。当業者は、抗体を結合するための他の適切な担体を知っており、または定型的な実験作業を用いて、このような担体を突き止めることができるであろう。
【０２５７】
キメラ抗原受容体およびその使用
組成物
本開示は、細胞外、膜貫通および細胞内ドメインを含む細胞活性化部分を含む、細胞外、膜貫通および細胞内ドメインを含む細胞活性化部分からなる、または細胞外、膜貫通および細胞内ドメインを含む細胞活性化部分から本質的になる、ＤＣＬＫ１に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。細胞外ドメインは、抗原結合ドメインとも別称される標的特異的結合要素を含む。細胞内ドメインまたは細胞質ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域およびζ鎖部分を含む。
【０２５８】
一態様において、本開示は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列から本質的になる、または重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列からなる単離されたヒト化抗体であって、前記抗体がＤＣＬＫ１のエピトープに結合する単離されたヒト化抗体を提供する。
【０２５９】
いくつかの態様において、ヒト化重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１〜９もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１〜９もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１〜９もしくは１６〜２４もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【０２６０】
別の態様において、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下の核酸配列：配列番号３２〜４０によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下の核酸配列：配列番号３２〜４０によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下の核酸配列：配列番号３２〜４０によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【０２６１】
さらなる態様において、軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１１〜１４もしくは２６〜３０の１つもしくはそれより多くもしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１１〜１４もしくは２６〜３０の１つもしくはそれより多くもしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１１〜１４もしくは２６〜３０の１つもしくはそれより多くもしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【０２６２】
さらなる態様において、軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下の核酸配列：配列番号４１〜４５によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くを含み、または以下の核酸配列：配列番号４１〜４５によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くから本質的になり、または以下の核酸配列：配列番号４１〜４５によってコードされる１もしくはそれを超えるアミノ酸配列もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くからなる。
【０２６３】
マウス抗体配列からヒト化されている、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列も本明細書において提供される。一態様において、ヒト化マウス抗体の重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１０もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４６もしくは４７の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物を含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１０もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４６もしくは４７の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１０もしくは２５もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４６もしくは４７の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物からなる。
【０２６４】
別の態様において、ヒト化されたマウス抗体の軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、以下のアミノ酸配列：配列番号１５もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４８もしくは４９の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物を含み、または以下のアミノ酸配列：配列番号１５もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４８もしくは４９の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になり、または以下のアミノ酸配列：配列番号１５もしくは３１もしくはこれらの各々の等価物の１つもしくはそれより多くおよび／もしくは以下の核酸配列：配列番号４８もしくは４９の１つもしくはそれより多くによってコードされる配列もしくはこれらの各々の等価物からなる。
【０２６５】
本開示の態様は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）膜貫通ドメインおよび（ｄ）細胞内ドメインを含む、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）膜貫通ドメインおよび（ｄ）細胞内ドメインから本質的になる、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）膜貫通ドメインおよび（ｄ）細胞内ドメインからなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。
【０２６６】
本開示のさらなる態様は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１もしくはそれを超える共刺激領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物を含む、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１もしくはそれを超える共刺激領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物から本質的になる、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１もしくはそれを超える共刺激領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物からなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。さらなる態様において、本開示は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物を含む、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物から本質的になる、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、（ｄ）ＣＤ２８および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびに（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびその代替物からなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【０２６７】
ヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１〜１０もしくは１６〜２５の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物を含む、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１〜１０もしくは１６〜２５の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になる、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１〜１０もしくは１６〜２５の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物からなる重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメインアミノ酸配列をコードする単離された核酸配列が本明細書においてさらに提供される。さらなる態様において、本開示は、ヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物を含む、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物から本質的になる、またはヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体の配列番号１１〜１５もしくは２６〜３１の群から選択される配列もしくはこれらの各々の等価物からなる軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメインアミノ酸配列をコードする単離された核酸配列を提供する。別の態様において、本開示は、抗ＤＣＬＫ１抗体または抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸配列を提供する。
【０２６８】
スペーサードメイン。必要に応じて、ＣＡＲは、最大３００アミノ酸、好ましくは１０〜１００アミノ酸、より好ましくは２５〜５０アミノ酸のスペーサードメインをさらに含み得、またはさらにかかるスペーサードメインから本質的になり得、またはさらにかかるスペーサードメインからり得る。例えば、スペーサーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０アミノ酸であり得る。スペーサードメインは、例えば、ヒトＦｃドメイン、ＣＨ３ドメイン、もしくはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧもしくはＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンのヒンジ領域の一部、またはこれらのバリアントを含み得る。例えば、いくつかの実施形態は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅおよび／またはＮ２９７Ｑ変異（Ｋａｂａｔ付番にしたがう）ありまたはなしのＩｇＧ４ヒンジを含み得る。さらなるスペーサーには、ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ領域が含まれるが、これらに限定されない。
【０２６９】
抗原結合ドメイン。ある態様において、本開示は、抗原結合ドメイン特異的ＤＣＬＫ１を含む、抗原結合ドメイン特異的ＤＣＬＫ１からなる、または抗原結合ドメイン特異的ＤＣＬＫ１から本質的になるＣＡＲを提供する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインを含み、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインから本質的になり、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインからなる。さらなる実施形態において、抗ＤＣＬＫ１抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、抗原結合ドメイン抗ＤＣＬＫ１抗体を含み、または抗原結合ドメイン抗ＤＣＬＫ１抗体から本質的になり、または抗原結合ドメイン抗ＤＣＬＫ１抗体からなる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的特異的抗体（すなわち、抗ＤＣＬＫ１抗体）の断片、例えば、ｓｃＦｖを含み、標的特異的抗体（すなわち、抗ＤＣＬＫ１抗体）の断片、例えば、ｓｃＦｖからなり、または標的特異的抗体（すなわち、抗ＤＣＬＫ１抗体）の断片、例えば、ｓｃＦｖから本質的になる。本開示のＣＡＲは、ＭＵＣ−１６に対する抗体またはメソテリンに対する抗体に由来する抗原結合ドメインをさらに含むことができ、またはさらにかかる抗原結合ドメインから本質的になることができ、またはさらにかかる抗原結合ドメインからなることができる。
【０２７０】
ｓｃＦｖ領域は、短いリンカーペプチドで接続された、免疫グロブリンの重鎖の可変領域（ＶＨ）および軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含むことができる。リンカーペプチドは、１〜５０アミノ酸、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０アミノ酸であり得る。いくつかの実施形態において、リンカーは、グリシンに富むが、セリンまたはスレオニンも含有し得る。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、抗体の重鎖可変領域は、本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物を含み、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物から本質的になり、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物からなり、および／または本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物を含む、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物から本質的になる、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物からなる１もしくはそれを超えるＣＤＲ領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体の軽鎖可変領域は、本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物を含み、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物から本質的になり、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物からなり、および／または本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物を含む、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物から本質的になる、もしくは本明細書に開示されているものの配列もしくはそのそれぞれの等価物からなる１もしくはそれを超えるＣＤＲ領域を含む。
【０２７２】
膜貫通ドメイン：膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来し得る。天然源である場合には、ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。本開示において特に有用な膜貫通領域は、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲに由来し得る。または、膜貫通ドメインは合成であり得、この場合には、主として、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含むであろう。好ましくは、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンの３つ組が、合成膜貫通ドメインの各末端に見出されるであろう。必要に応じて、好ましくは２〜１０アミノ酸の長さの短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインの間の連結を形成し得る。グリシン・セリンの２つ組は、特に適切なリンカーを与える。
【０２７３】
細胞質ドメイン。ＣＡＲの細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲがその中に配置されている免疫細胞の伝統的なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達し、免疫細胞にその特異的機能を発揮するように指示するタンパク質の部分を表す。末端切断された部分がエフェクター機能シグナルを伝達するのに十分である限り、完全なシグナル伝達ドメインまたはその末端切断された一部が使用され得る。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および共受容体の細胞質配列ならびにその誘導体またはバリアントは、ＣＡＲ中で使用するための細胞内シグナル伝達ドメインとして機能することができる。本開示において特に有用な細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲ、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤＳ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄに由来し得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含み、またはＣＤ３ζシグナル伝達ドメインから本質的になり、またはＣＤ３ζシグナル伝達ドメインからなる。
【０２７４】
ＴＣＲを通じて生成されたシグナルは、単独ではＴ細胞の完全な活性化には不十分であるので、第二のまたは共刺激シグナルも必要とされ得る。このため、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−ＩＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３またはＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含むがこれらに限定されない少なくとも１つの共刺激シグナル伝達分子の細胞内領域も、ＣＡＲの細胞質ドメイン中に含められ得る。本開示のＣＡＲは、１もしくはそれを超える共刺激ドメインを含むことができ、または１もしくはそれを超える共刺激ドメインから本質的になることができ、または１もしくはそれを超える共刺激ドメインからなることができる。例えば、ＣＡＲは、シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）に加えて、１つ、２つもしくはそれを超える共刺激ドメインを含み得、または１つ、２つもしくはそれを超える共刺激ドメインから本質的になり得、または１つ、２つもしくはそれを超える共刺激ドメインからなり得る。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体の細胞活性化部分は、ＣＤ８タンパク質、ＣＤ２８タンパク質、４−１ＢＢタンパク質、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ３ζタンパク質からなる群より選択される１もしくはそれを超えるタンパク質もしくはその断片を含むＴ細胞シグナル伝達ドメイン、またはＣＤ８タンパク質、ＣＤ２８タンパク質、４−１ＢＢタンパク質、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ３ζタンパク質からなる群より選択される１もしくはそれを超えるタンパク質もしくはその断片から本質的になるＴ細胞シグナル伝達ドメイン、またはＣＤ８タンパク質、ＣＤ２８タンパク質、４−１ＢＢタンパク質、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ３ζタンパク質からなる群より選択される１もしくはそれを超えるタンパク質もしくはその断片からなるＴ細胞シグナル伝達ドメインである。
【０２７６】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）の抗原結合ドメインと、ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域と、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含み、または抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）の抗原結合ドメインと、ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域と、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインから本質的になり、または抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）の抗原結合ドメインと、ＣＤ８αもしくはＩｇＧ１ヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域と、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインからなる。さらなる実施形態において、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域の一方もしくは両方を含み、またはＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域の一方もしくは両方から本質的になり、またはＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域の一方もしくは両方からなる。
【０２７７】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、抗ＤＣＬＫ１  ＨＣ可変領域と抗ＤＣＬＫ１  ＬＣ可変領域の間に位置するリンカーポリペプチドをさらに含み、またはさらに、抗ＤＣＬＫ１  ＨＣ可変領域と抗ＤＣＬＫ１  ＬＣ可変領域の間に位置するリンカーポリペプチドから本質的になり、またはさらに、抗ＤＣＬＫ１  ＨＣ可変領域と抗ＤＣＬＫ１  ＬＣ可変領域の間に位置するリンカーポリペプチドからなる。一態様において、ＣＡＲのリンカーポリペプチドは、ｎが１〜６の整数である配列（ＧＧＧＧＳ）ｎのポリペプチドを含み、またはｎが１〜６の整数である配列（ＧＧＧＧＳ）ｎのポリペプチドから本質的になり、またはｎが１〜６の整数である配列（ＧＧＧＧＳ）ｎのポリペプチドからなる。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、検出可能なマーカーもしくは精製マーカーをさらに含むことができ、または検出可能なマーカーもしくは精製マーカーから本質的になることができ、または検出可能なマーカーもしくは精製マーカーからなることができる。
【０２７９】
スイッチ機構。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの発現および／もしくは活性化を調節するためのスイッチ機構も含み得、またはＣＡＲの発現および／もしくは活性化を調節するためのスイッチ機構から本質的になり得、またはＣＡＲの発現および／もしくは活性化を調節するためのスイッチ機構からなり得る。例えば、ＣＡＲは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み得、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインからなり得、または細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインから本質的になり得、細胞外ドメインは標的細胞上でまたは標的細胞によって発現されている標的抗原以外の分子に対して特異的である標識、結合ドメインまたはタグを含む標的特異的結合因子を含む。このような実施形態において、ＣＡＲの特異性は、標的抗原結合ドメイン（例えば、抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片またはＤＣＬＫ１とＣＡＲ上の標識またはタグとを結合する二重特異性抗体）と、ＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグによって認識されるもしくはＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグに結合するドメインとを含む、標的抗原結合ドメイン（例えば、抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片またはＤＣＬＫ１とＣＡＲ上の標識またはタグとを結合する二重特異性抗体）と、ＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグによって認識されるもしくはＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグに結合するドメインとからなる、または標的抗原結合ドメイン（例えば、抗ＤＣＬＫ１抗体もしくはその断片またはＤＣＬＫ１とＣＡＲ上の標識またはタグとを結合する二重特異性抗体）と、ＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグによって認識されるもしくはＣＡＲ上の標識、結合ドメインもしくはタグに結合するドメインとから本質的になる第二の構築物によって提供される。例えば、国際公開第２０１３／０４４２２５号、国際公開第２０１６／０００３０４号、国際公開第２０１５／０５７８３４号、国際公開第２０１５／０５７８５２号、国際公開第２０１６／０７００６１号、米国特許第９，２３３，１２５号、米国特許公開第２０１６／０１２９１０９号を参照のこと。このようにして、ＣＡＲを発現するＴ細胞は被験体に投与することができるが、ＤＣＬＫ１特異的結合ドメインを含む第二の組成物が投与されるまで、その標的抗原（すなわち、ＤＣＬＫ１）を結合することができない。
【０２８０】
本開示のＣＡＲは、同様に、そのシグナル伝達機構を活性化するために多量体化を必要とし得（例えば、米国特許公開第２０１５／０３６８３４２号、米国特許公開第２０１６／０１７５３５９号、米国特許公開第２０１５／０３６８３６０号参照）、および／またはＴ細胞応答を惹起するために小分子薬物などの外因性シグナルを必要とし得る（米国特許公開第２０１６／０１６６６１３号、Ｙｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１５）。
【０２８１】
さらに、開示されるＣＡＲは、処置後にＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞死を誘導するために（Ｂｕｄｄｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１３）または標的抗原への結合後にＣＡＲの発現を下方制御するために（国際公開第２０１６／０１１２１０号）「自殺スイッチ」を含むことができ、または「自殺スイッチ」から本質的になることができ、または「自殺スイッチ」からなることができる。
【０２８２】
さらなる態様において、本開示は、その標的細胞に結合されたＤＣＬＫ１  ＣＡＲ細胞を含む、またはその標的細胞に結合されたＤＣＬＫ１  ＣＡＲ細胞から本質的になる、またはその標的細胞に結合されたＤＣＬＫ１  ＣＡＲ細胞からなる複合体を提供する。さらなる態様において、複合体は検出可能に標識される。検出可能な標識は本分野において公知であり、本明細書中に簡潔に記載されている。
ＣＡＲを調製するための過程
【０２８３】
（ｉ）単離された細胞の集団を本明細書に記載されているＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入する工程と、および（ｉｉ）工程（ｉ）の前記核酸配列で首尾よく形質導入された前記単離された細胞の亜集団を選択し、これによりＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を作製する工程とを含む、または工程（ｉ）と工程（ｉｉ）から本質的になる、または工程（ｉ）と工程（ｉｉ）からなる、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法も、本明細書において提供される。一態様において、単離された細胞は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞からなる群より選択される。
【０２８４】
本開示の態様は、ＤＣＬＫ１特異的ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１特異的ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１特異的ＣＡＲからなる単離された細胞およびこのような細胞を作製する方法に関する。細胞は、原核細胞または真核細胞である。一態様において、細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。真核細胞は、任意の好ましい種に由来し得、例えば、動物細胞、ヒト、ネコまたはイヌ細胞などの哺乳動物細胞であり得る。
【０２８５】
本開示のいくつかの態様において、本明細書に記載されているＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入された単離された細胞の集団は、ＮＫ前駆体細胞および／またはＴ細胞前駆体細胞の集団である。前駆体細胞の形質導入は、ＣＡＲ  Ｔ細胞および／またはＣＡＲ  ＮＫ細胞へ分化することができる細胞の長寿命集団をもたらす。Ｔ細胞前駆体には、ＨＳＣ、長期ＨＳＣ、ＭＰＰ、ＣＬＰ、ＬＭＰＰ／ＥＬＰ、ＤＮ１、ＤＮ２、ＤＮ３、ＤＮ４、ＤＰが含まれるが、これらに限定されない。ＮＫ前駆体には、ＨＳＣ、長期ＨＳＣ、ＭＰＰ、ＣＭＰ、ＧＭＰ、プロＮＫ、プレＮＫおよびｉＮＫ細胞が含まれるが、これらに限定されない。特定の態様において、単離された細胞の集団は、被験体中に移植するための、短寿命エフェクターＣＡＲ  Ｔ細胞と長寿命ＣＡＲ  Ｔ細胞前駆体の両方を提供するために、成熟Ｔ細胞とＴ細胞前駆体の両方を含む。別の態様において、単離された細胞の集団は、被験体中に移植するための、短寿命エフェクターＣＡＲ  ＮＫ細胞と長寿命ＣＡＲ  ＮＫ前駆体の両方を提供するために、成熟ＮＫ細胞とＮＫ前駆体の両方を含む。
【０２８６】
特定の実施形態において、単離された細胞は、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む、またはこれらから本質的になる、またはこれらからなる外因性ＣＡＲを含み、またはかかる外因性ＣＡＲから本質的になり、またはかかる外因性ＣＡＲからなる。ある実施形態において、単離された細胞は、Ｔ細胞、例えば、動物Ｔ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、ネコＴ細胞、イヌＴ細胞またはヒトＴ細胞である。ある実施形態において、単離された細胞は、ＮＫ細胞、例えば、動物ＮＫ細胞、哺乳動物ＮＫ細胞、ネコＮＫ細胞、イヌＮＫ細胞またはヒトＮＫ細胞である。
【０２８７】
ある実施形態において、（ｉ）単離された細胞の集団をＤＣＬＫ１  ＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入すること、および（ｉｉ）工程（ｉ）の前記核酸配列で首尾よく形質導入された細胞の亜集団を選択することを含む、または（ｉ）と（ｉｉ）から本質的になる、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を作製する方法が開示される。いくつかの実施形態において、単離された細胞は、Ｔ細胞、動物Ｔ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、ネコＴ細胞、イヌＴ細胞またはヒトＴ細胞であり、それにより、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を産生する。ある実施形態において、単離された細胞は、ＮＫ細胞、例えば、動物ＮＫ細胞、哺乳動物ＮＫ細胞、ネコＮＫ細胞、イヌＮＫ細胞またはヒトＮＫ細胞であり、これにより、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ  ＮＫ細胞を作製する。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、開示されたＣＡＲを発現するＴ細胞は、内在性ＴＣＲの発現を低減または除去するためにさらに改変され得る。内在性ＴＣＲの低減または除去は、オフターゲット効果を低減し、Ｔ細胞の有効性を増加させることができる。機能的ＴＣＲの発現を安定的に欠如するＴ細胞は、様々なアプローチを用いて作製され得る。Ｔ細胞は、休止しているＴ細胞中では約１０時間の半減期で、刺激されたＴ細胞中では３時間の半減期で、Ｔ細胞受容体全体を複合体として内部に取り込み、選別し、分解する（ｖｏｎ  Ｅｓｓｅｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：３８４−３９３）。ＴＣＲ複合体が適切に機能するには、ＴＣＲ複合体を構成するタンパク質の適切な化学量論比を必要とする。ＴＣＲ機能は、ＩＴＡＭモチーフを有する２つの機能するＴＣＲζタンパク質も必要とする。そのＭＨＣ−ペプチドリガンドの会合に際したＴＣＲの活性化には、同じＴ細胞上の数個のＴＣＲの会合が必要であり、それらは全て適切にシグナルを伝達しなければならない。このため、ＴＣＲ複合体が、適切に会合していないまたはシグナルを最適に伝達することができないタンパク質で不安定化されると、Ｔ細胞は、細胞応答を開始するのに十分には活性化されないであろう。
【０２８９】
したがって、いくつかの実施形態において、ＴＣＲ発現は、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）、ＣＲＩＳＰＲ、または初代Ｔ細胞中の、特異的なＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β）および／もしくはＣＤ３鎖をコードする核酸を標的とするその他の方法を用いて除去され得る。これらのタンパク質の１またはそれより多くの発現を遮断することによって、Ｔ細胞は、ＴＣＲ複合体の鍵となる成分の１またはそれより多くをもはや産生せず、これにより、ＴＣＲ複合体を不安定化し、機能的ＴＣＲの細胞表面発現を抑制する。ＲＮＡ干渉を使用すると、いくつかのＴＣＲ複合体は細胞表面にリサイクルされることができるが、ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）はＴＣＲタンパク質の新たな産生を抑制し、ＴＣＲ複合体全体の分解および除去をもたらし、機能的ＴＣＲ発現が安定的に欠乏したＴ細胞の産生をもたらす。
【０２９０】
初代Ｔ細胞中での阻害性ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）の発現は、任意の慣用の発現系、例えばレンチウイルス発現系を用いて達成することができる。休止している初代Ｔ細胞を標的とするために、レンチウイルスは有用であるが、全てのＴ細胞がｓｈＲＮＡを発現するわけではない。これらのＴ細胞のいくつかは、Ｔ細胞の機能的活性を変化させるためにＴＣＲ発現の十分な阻害を許容するのに十分な量のＲＮＡを発現し得ない。このため、ウイルス形質導入後に中度ないし高度のＴＣＲ発現を保持するＴ細胞は、残存するＴ細胞が細胞表面ＴＣＲまたはＣＤ３を欠損するように例えば、細胞選別または分離技術によって除去することができ、機能的なＴＣＲまたはＣＤ３の発現が欠損したＴ細胞の単離された集団の拡大を可能にする。
【０２９１】
初代Ｔ細胞中でのＣＲＩＳＰＲの発現は、慣用のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系および標的ＴＣＲに対して特異的なガイドＲＮＡを用いて達成することができる。適切な発現系、例えば、レンチウイルスまたはアデノウイルス発現系が、本分野において公知である。阻害剤ＲＮＡの送達と同様に、休止している初代Ｔ細胞またはＣＡＲ細胞治療のためのその他の適切な免疫細胞を特異的に標的とするために、ＣＲＩＳＰＲ系を使用することができる。さらに、ＣＲＩＳＰＲ編集が不成功である限りにおいて、細胞は、上に開示されている方法にしたがって、成功に関して選択することができる。例えば、上記のように、ウイルス形質導入後に中度ないし高度のＴＣＲ発現を保持するＴ細胞は、残存するＴ細胞が細胞表面ＴＣＲまたはＣＤ３を欠損するように、例えば、細胞選別または分離技術によって除去することができ、機能的なＴＣＲまたはＣＤ３の発現が欠損したＴ細胞の単離された集団の拡大を可能にする。ＣＲＩＳＰＲ編集構築物は、内在性ＴＣＲをノックアウトすること、および本明細書に開示されているＣＡＲ構築物をノックインすることの両方において有用であり得ることがさらに理解される。したがって、ＣＲＩＳＰＲ系は、これらの目的の一方または両方を達成するように設計できることが理解される。
【０２９２】
上記技術の多くはＴ細胞に関して記載されているが、ここにおよび本開示全体を通じて記載されている使用ならびに作製および改変の方法はＴ細胞に限定されず、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および関連する幹細胞などの免疫細胞を含むが、これらに限定されない任意の関連する細胞に拡張され得ることが理解される。
【０２９３】
単離された細胞の源。本明細書に開示されている細胞の拡大増殖および遺伝的改変の前に、細胞は、例えば、自家治療を伴う実施形態において、被験体から取得され得、または、例えば、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手可能である商業的に入手可能な培養物から取得され得る。
【０２９４】
細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む、被験体中の多数の源から取得することができる。
【０２９５】
適切な細胞を単離する方法は本分野において周知であり、本願に対して容易に適合させることが可能であり、例示的な方法は以下の実施例に記載されている。本開示に関連する使用のための単離方法としては、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）系、ＳＴＥＭｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＥａｓｙＳｅｐ（商標）、ＲｏｂｏＳｅｐ（商標）、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）、ＳｅｐＭａｔｅ（商標）；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＭＡＣＳ（商標）細胞分離キットならびにその他の商業的に入手可能な細胞分離および単離キットが挙げられるが、これらに限定されない。免疫細胞および前駆体の特定の亜集団は、蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）、ビーズ、またはユニークな細胞表面マーカーに対して特異的な、このようなキットで利用可能な他の結合剤の使用を通じて単離され得る。例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を単離するために、ＭＡＣＳ（商標）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓが使用され得る。
【０２９６】
または、細胞は、Ｔ細胞については、株ＢＣＬ２（ＡＡＡ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０２（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ７０Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９００（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ８７Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２９０１（商標））、ＢＣＬ２  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９９（商標））、Ｎｅｏ  Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８９８（商標））、ＮＫ細胞については、株ＮＫ−９２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０７（商標））、ＮＫ−９２ＭＩ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２４０８（商標））を含むがこれらに限定されない、商業的に入手可能な細胞培養物を通じて取得され得る。
【０２９７】
いくつかの態様においては、被験体から細胞を取得する前に、被験体は、末梢血中への前駆体細胞の動員を誘導するための前処置治療計画が投与され得る。例えば、被験体は、有効量の、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ）、ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ）およびモゾビル（Ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ）の少なくとも１つを、被験体からの細胞の単離前にまたは同時に最長２週間、投与され得る。動員された前駆体細胞は、前処置治療計画の投与から１〜１４日後に、例えば、白血球除去を含む本分野において公知の任意の方法によって、被験体から取得することができる。いくつかの実施形態において、特異的な前駆体細胞集団が、さらに、によって単離される。
【０２９８】
ベクター。ＣＡＲは、ベクターを用いて調製され得る。本開示の態様は、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲをコードする単離された核酸配列ならびにＣＡＲをコードする単離された核酸配列およびその相補物およびこれらの各々の等価物を含むベクター、またはＣＡＲをコードする単離された核酸配列およびその相補物およびこれらの各々の等価物から本質的になるベクター、またはＣＡＲをコードする単離された核酸配列およびその相補物およびこれらの各々の等価物からなるベクターに関する。
【０２９９】
例示的なベクターの調製および前記ベクターを用いたＣＡＲ発現細胞の生成は、以下の実施例で詳しく論述されている。要約すると、ＣＡＲをコードする天然のまたは合成の核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸またはその一部をプロモーターに機能的に連結し、構築物を発現ベクター中に組み込むことによって達成される。ベクターは、複製および組み込み真核生物に対して適切であり得る。
【０３００】
いくつかの実施形態において、単離された核酸配列は、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインから本質的になるＣＡＲ、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインからなるＣＡＲをコードする。特定の実施形態において、単離された核酸配列は、（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、これに続く、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、これに続く（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、これに続く（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをコードする配列を含み、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、これに続く、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、これに続く（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、これに続く（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをコードする配列から本質的になり、または（ａ）抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメイン、これに続く、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメイン、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメイン、これに続く（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および／もしくは４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、これに続く（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをコードする配列からなる。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、単離された核酸配列は、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインをコードする配列もしくはエンハンサーの上流に位置するコザックコンセンサス配列を含み、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインをコードする配列もしくはエンハンサーの上流に位置するコザックコンセンサス配列から本質的になり、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインをコードする配列もしくはエンハンサーの上流に位置するコザックコンセンサス配列からなる。いくつかの実施形態において、単離された核酸は、抗生物質耐性を付与するポリヌクレオチドを含み、または抗生物質耐性を付与するポリヌクレオチドから本質的になり、または抗生物質耐性を付与するポリヌクレオチドからなる。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、単離された核酸配列は、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置するシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置するシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列から本質的になり、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置するシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列からなる。
【０３０３】
１つの特定の実施形態において、単離された核酸配列は、抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置する２Ａ自己切断型ペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列を含み、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置する２Ａ自己切断型ペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列から本質的になり、または抗ＤＣＬＫ１抗体の抗原結合ドメインの上流に位置する２Ａ自己切断型ペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列からなる。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、単離された核酸配列はベクター中に含まれる。ある実施形態において、ベクターはプラスミドである。他の実施形態において、ベクターはウイルスベクターである。特定の実施形態において、ベクターはレンチウイルスベクターである。
【０３０５】
例示的なベクターの調製および前記ベクターを用いたＣＡＲ発現細胞の生成は、以下の実施例で詳しく論述されている。要約すると、ＣＡＲをコードする天然のまたは合成の核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸またはその一部をプロモーターに機能的に連結し、構築物を発現ベクター中に組み込むことによって達成される。ベクターは、複製および組み込み真核生物に対して適切であり得る。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を作製する方法は、本分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
【０３０６】
一態様において、「ベクター」という用語は、非分裂細胞および／またはゆっくり分裂する細胞に感染および形質導入し、標的細胞のゲノム中に組み込む能力を保持する組換えベクターを意図する。いくつかの態様において、ベクターは、野生型ウイルスに由来し、または野生型ウイルスに基づく。さらなる態様において、ベクターは、野生型レンチウイルスに由来し、または野生型レンチウイルスに基づく。このようなものの例には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）およびネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）が含まれるが、これらに限定されない。または、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）など、他のレトロウイルスをベクター骨格のための基礎として使用できることが想定される。本開示によるウイルスベクターは、特定のウイルスの成分に限定される必要はないことが明らかであろう。ウイルスベクターは、２またはそれを超える異なるウイルスに由来する成分を含み得、合成成分も含み得る。標的細胞特異性などの所望の特徴を得るために、ベクター成分は操作することができる。
【０３０７】
本開示の組換えベクターは、霊長類および非霊長類に由来し得る。霊長類レンチウイルスの例には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因因子およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれる。非霊長類レンチウイルスの群には、原型「遅発性ウイルス」ビスナ／マエディウイルス（ＶＭＶ）ならびに関連するヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）およびより最近に記載されたネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）およびウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）が含まれる。従来技術の組換えレンチウイルスベクターが本分野において公知であり、例えば、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第６，９２４，１２３号；同第７，０５６，６９９号；同第７，０７，９９３号；同第７，４１９，８２９号および同第７，４４２，５５１号を参照のこと。
【０３０８】
米国特許第６，９２４，１２３号は、ある種のレトロウイルスの配列が、標的細胞ゲノム中への組み込みを促進することを開示している。この特許は、各レトロウイルスゲノムが、ビリオンタンパク質および酵素をコードするｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖと称される遺伝子を含むことを教示する。これらの遺伝子の両端には、末端反復配列（ＬＴＲ）と称される領域が隣接している。ＬＴＲは、プロウイルスの組み込みおよび転写に関与する。ＬＴＲは、エンハンサー−プロモーター配列としての役割も果たす。換言すれば、ＬＴＲは、ウイルスの遺伝子の発現を調節することができる。レトロウイルスのＲＮＡのキャプシド形成は、ウイルスゲノムの５’末端に位置するｐｓｉ配列によっておこる。ＬＴＲ自体は、Ｕ３、ＲおよびＵ５と称される３つの要素に分割することができる同一の配列である。Ｕ３は、ＲＮＡの３’末端に固有の配列に由来する。Ｒは、ＲＮＡの両端で反復する配列に由来し、Ｕ５は、ＲＮＡの５’末端に固有の配列に由来する。３つの要素の大きさは、異なるレトロウイルス間でかなり変動し得る。ウイルスゲノムについては、ポリ（Ａ）付加の部位（末端）は、右手側ＬＴＲ中のＲとＵ５の間の境界にある。Ｕ３は、プロウイルスの転写調節要素の多くを含有し、プロモーターおよび細胞の転写活性化タンパク質、いくつかの事例では、ウイルスの転写活性化因子タンパク質に対して応答する複数のエンハンサー配列を含む。
【０３０９】
構造遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ自体に関しては、ｇａｇはウイルスの内部構造タンパク質をコードする。ｇａｇタンパク質は、タンパク分解性にプロセッシングされて、成熟したタンパク質ＭＡ（マトリックス）、ＣＡ（キャプシド）およびＮＣ（ヌクレオキャプシド）になる。ｐｏｌ遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼ、付随するＲＮアーゼＨおよびインテグラーゼ（ＩＮ）を含有する、ゲノムの複製を媒介する逆転写酵素（ＲＴ）をコードする。
【０３１０】
ウイルスベクター粒子の産生のために、ベクターＲＮＡゲノムは、これをコードするＤＮＡ構築物から宿主細胞中で発現される。ベクターゲノムによってコードされない粒子の成分は、宿主細胞中で発現される追加の核酸配列（通常、ｇａｇ／ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子の一方または両方を含む「パッケージング系」）によって、トランスに提供される。ウイルスベクター粒子の産生のために必要とされる配列の組は、一過性形質移入によって宿主細胞中に導入され得、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得、または様式の混合で提供され得る。関連する技術は、当業者に公知である。
【０３１１】
本開示において使用するためのレトロウイルスベクターには、Ｌｅｎｔｉｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．によって製造されるＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのｐＬｅｎｔｉシリーズバージョン４、６および６．２「ＶｉｒａＰｏｗｅｒ」システム；Ｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｐｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって研究室で生成および使用されるｐＨＩＶ−７−ＧＦＰ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈによって製造される「Ｌｅｎｔｉ−Ｘ」レンチウイルスベクター、ｐＬＶＸ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって製造されるｐＬＫＯ．１−ｐｕｒｏ；Ｏｐｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって製造されるｐＬｅｍｉＲ；Ｃｈａｒｉｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（ＣＢＦ）、ベルリン、ドイツによって研究室で生成および使用されるｐＬＶが含まれるが、これらに限定されない。
【０３１２】
外来性核酸を宿主細胞中に導入するためにまたはその他細胞を本開示の阻害剤に曝露するために使用される方法にかかわらず、宿主細胞中の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが実施され得る。このようなアッセイには、例えば、サザンおよびノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲなどの、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ；例えば、本開示の範囲に属する因子を同定するために、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウェスタンブロット）によってまたは本明細書に記載されているアッセイによって、特定のペプチドの存在または不存在を検出するなどの、「生化学的」アッセイが含まれる。
【０３１３】
パッケージングベクターおよび細胞株。ＣＡＲは、パッケージングベクターおよび細胞株を使用することによって、レンチウイルスまたはレトロウイルスパッケージング系中にパッケージすることができる。パッケージングプラスミドには、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。パッケージングベクターは、細胞中への遺伝子材料の送達を促進する要素および配列を含有する。例えば、レトロウイルス構築物は、複製不全レトロウイルスベクターをパッケージするために必要とされる全てのビリオンタンパク質をトランスにコードする複製不全レトロウイルスゲノム由来の少なくとも１つのレトロウイルスヘルパーＤＮＡ配列を含む、複製能を有するヘルパーウイルスの産生なしに高い力価で複製不全レトロウイルスベクターをパッケージングすることが可能なビリオンタンパク質を産生するためのパッケージングプラスミドである。レトロウイルスＤＮＡ配列は、ウイルスのウイルス５’ＬＴＲの原型エンハンサーおよび／またはプロモーターをコードする領域を欠き、ヘルパーゲノムをパッケージングすることに関与するｐｓｉ機能配列と３’ＬＴＲの両方を欠くが、外来のポリアデニル化部位、例えばＳＶ４０ポリアデニル化部位ならびにそこでのウイルス産生が所望される細胞種内での効率的な転写を指示する外来のエンハンサーおよび／プロモーターをコードする。レトロウイルスは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）などの白血病ウイルスである。外来のエンハンサーおよびプロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）最初期（ＩＥ）エンハンサーおよびプロモーター、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭＭＳＶ）のエンハンサーおよびプロモーター（Ｕ３領域）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）のＵ３領域、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）のＵ３領域または固有のモロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）プロモーターに連結されたＨＣＭＶ  ＩＥエンハンサーであり得る。レトロウイルスパッケージングプラスミドは、プラスミドベースの発現ベクターによってコードされる２つのレトロウイルスヘルパーＤＮＡ配列からなり得、例えば、第一のヘルパー配列が同種指向性ＭＭＬＶまたはＧＡＬＶのｇａｇおよびｐｏｌタンパク質をコードするｃＤＮＡを含有し、第二のヘルパー配列がｅｎｖタンパク質をコードするｃＤＮＡを含有する。宿主域を決定するＥｎｖ遺伝子は、異種指向性、両指向性、同種指向性、多指向性（ミンクフォーカス形成）もしくは１０Ａ１マウス白血病ウイルスｅｎｖタンパク質、またはテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ  ｅｎｖタンパク質、ヒト免疫不全ウイルスｅｎｖ（ｇｐ１６０）タンパク質、水疱性口内炎（Ｓｔｏｍａｔｉｔｕｓ）ウイルス（ＶＳＶ）Ｇタンパク質、ヒトＴ細胞白血病（ＨＴＬＶ）Ｉ型およびＩＩ型ｅｎｖ遺伝子産物をコードする遺伝子、上記ｅｎｖ遺伝子の１つまたはそれより多くの組み合わせに由来するキメラエンベロープ遺伝子または上記ｅｎｖ遺伝子産物の細胞質および膜貫通ならびに所望の標的細胞上の特異的な表面��子に対して作られたモノクローナル抗体をコードするキメラエンベロープ遺伝子に由来し得る。
【０３１４】
パッケージング過程において、高力価組換えレトロウイルス含有上清を産生するために、ヒト胎児由来腎臓細胞、例えば、２９３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３、ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．）などの、ウイルスを産生することが可能な哺乳動物細胞の第一集団中に、ＤＣＬＫ１を発現するパッケージングプラスミドおよびレトロウイルスベクターが一過性に同時形質移入される。本開示の別の方法では、この一過性に形質移入された細胞の第一集団は、次いで、標的細胞を外来遺伝子により高い効率で形質導入するために、哺乳動物の標的細胞、例えばヒトリンパ球とともに共培養される。本開示のさらに別の方法において、上記一過性に形質移入された細胞の第一集団由来の上清は、標的細胞を外来遺伝子により高い効率で形質導入するために、哺乳動物の標的細胞、例えばヒトリンパ球または造血幹細胞とともにインキュベートされる。
【０３１５】
別の態様において、パッケージングプラスミドは、ヒト胎児由来腎臓細胞、例えば、２９３細胞などの、ウイルスを産生することが可能な哺乳動物細胞の第一集団中で安定的に発現される。レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、選択可能なマーカーでの同時形質移入または偽型ウイルスでの感染のいずれかによって細胞中に導入される。いずれの場合にも、ベクターは組み込まれる。または、ベクターは、エピソームとして維持されるプラスミド中に導入され得る。高力価組換えレトロウイルス含有上清が産生される。
【０３１６】
Ｔ細胞の活性化および拡大増殖。所望のＣＡＲを発現するためにＴ細胞を遺伝子改変する前であれ、または後であれ、細胞は、米国特許第６，３５２，６９４号；同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１号に記載されている方法などの一般的に知られた方法を用いて、活性化し、拡大増殖することができる。エクソビボでのＤＣＬＫ１抗原による刺激は、選択されたＣＡＲ発現細胞亜集団を活性化し、拡大増殖させることができる。または、細胞は、ＤＣＬＫ１抗原との相互作用によってインビボで活性化され得る。
【０３１７】
適切な細胞を活性化する方法は本分野において周知であり、本願に対して容易に適合させることが可能であり、例示的な方法は以下の実施例に記載されている。本開示に関連して使用するための単離方法としては、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）系活性化および拡大増殖キット；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈｏｓｆｌｏｗ（商標）活性化キット、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＭＡＣＳ（商標）活性化／拡大増殖キットならびに関連する細胞の活性化部分に特異的なその他の商業的に入手可能な細胞キットが含まれるが、これらに限定されない。免疫細胞の特定の亜集団は、このようなキット中で利用可能なビーズまたはその他の因子の使用を通じて活性化または拡大増殖され得る。例えば、単離されたＴ細胞の集団を活性化および拡大増殖するために、α−ＣＤ３／α−ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）が使用され得る。
使用の方法
【０３１８】
治療上の適用。本開示のＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍および癌を処置するために使用され得る。本開示のＣＡＲ−Ｔ細胞は、単独で、または希釈剤、公知の抗癌治療薬とおよび／またはサイトカインなどのその他の成分もしくは免疫賦活性であるその他の細胞集団と組み合わせて投与され得る。
【０３１９】
腫瘍の増殖を阻害し、および／または癌を処置し、および／または癌の再発を予防することを必要とする被験体において、腫瘍の増殖を阻害し、および／または癌を処置し、および／または癌の再発を予防する方法であって、有効量の、本明細書に開示された方法のいずれかにしたがって生成された抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を前記被験体に投与することを含む、方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、前記抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞が、処置されている被験体にとって自家または同種異系である。いくつかの態様において、処置を必要とする被験体中の腫瘍または癌は、ＤＣＬＫ１を発現または過剰発現する。一態様において、処置を必要とする被験体中の腫瘍は固形腫瘍である。
【０３２０】
したがって、本開示の方法の態様は、腫瘍の増殖を阻害することを必要とする被験体中の腫瘍の増殖を阻害する方法および／または癌の処置を必要とする癌患者を処置する方法に関する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、固形腫瘍またはＢ細胞リンパ腫または白血病である。他の実施形態において、腫瘍／癌は、甲状腺、乳房、結腸、絨毛癌腫（ｃｈｉｒｏ−ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、卵巣もしくは前立腺腫瘍／癌またはＢ細胞リンパ腫もしくは白血病である。さらなる実施形態において、癌および／または腫瘍は、結腸直腸癌、膵臓癌、繊維肉腫細胞、多発性骨髄腫、子宮頸癌、肺癌、肝臓癌、食道癌、乳癌、大唾液腺癌腫、神経芽細胞腫または腎細胞癌腫である。いくつかの実施形態において、腫瘍または癌は、ＤＣＬＫ１を発現または過剰発現する。ＤＣＬＫ１を発現する癌の非限定的な例は、Ｗｅｓｔｐｈａｌｅｎ，Ｃ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．”Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｃｌｋ１  ａｎｄ  Ｄｃｌｋ１−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ”  Ｓｍａｌｌ  ＧＴＰａｓｅｓ，８（３），１６４−１７１（２０１６）に挙げられている。ＤＣＬＫ１を発現する癌または腫瘍の非限定的な例には、結腸直腸癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、食道癌、乳癌、大唾液腺癌腫、神経芽細胞腫および腎細胞癌腫が含まれる。別の態様において、癌または腫瘍は反応性が低下しているとして特徴付けられる。
【０３２１】
ある実施形態において、これらの方法は、有効量の単離された細胞を被験体もしくは患者に投与することを含む、または有効量の単離された細胞を被験体もしくは患者に投与することから本質的になる、または有効量の単離された細胞を被験体もしくは患者に投与することからなる。さらなる実施形態において、この単離された細胞は、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含み、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になり、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる。さらなる実施形態において、単離された細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。いくつかの実施形態において、単離された細胞は、処置されている被験体または患者にとって自家である。さらなる態様において、腫瘍はＤＣＬＫ１抗原を発現し、被験体は、本明細書に記載されている診断薬などの診断薬による治療のために選択されている。
【０３２２】
さらなる態様において、癌または腫瘍細胞集団に対する免疫応答を刺激する方法であって、該方法は免疫応答を刺激するのに有効な量で、本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を被験体に投与することを含み、または免疫応答を刺激するのに有効な量で、本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を被験体に投与することから本質的になり、または免疫応答を刺激するのに有効な量で、本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を被験体に投与することからなる。一態様において、被験体は、癌または腫瘍に対する処置を有し、有していた、または必要とする。別の態様において、癌は反応性が低下しているとして特徴付けられる。癌または腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激する方法であって、癌もしくは腫瘍細胞集団を本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることを含み、または癌もしくは腫瘍細胞集団を本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることから本質的になり、または癌もしくは腫瘍細胞集団を本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることからなる方法が、本明細書においてさらに提供される。さらなる態様において、癌または腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激する方法が提供され、該方法は、標的細胞集団を本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることを含み、または標的細胞集団を本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることから本質的になり、または標的細胞集団を本開示の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることからなり、前記接触はインビトロまたはインビボである。直接的な相互作用の具体例は結合である。間接的な相互作用の具体例は、１つの実体が中間の分子に対して作用し、次いで、中間の分子が第二の参照される実体に対して作用する場合である。本明細書において使用される場合、接触には、溶液中、固相中、インビトロ、エクソビボ、細胞中およびインビボが含まれる。インビボで接触させることは、投与することまたは投与と表すことができる。別の態様において、癌または腫瘍は反応性が低下しているとして特徴付けられる。一態様において、抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞は、癌または腫瘍細胞への特異的結合に関して選択される。細胞は、任意の種、例えば、哺乳動物またはヒトの細胞に由来し得る。細胞は、被験体から（例えば、生検から）または培養された細胞から単離することができる。別の態様において、癌または腫瘍細胞はＤＣＬＫ１を発現しまたは過剰発現する。
【０３２３】
被験体中に抗腫瘍免疫を供する方法も本明細書において提供され、該方法は、被験体に免疫を供するのに有効な量で本開示のＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を被験体に投与することを含み、または被験体に免疫を供するのに有効な量で本開示のＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を被験体に投与することから本質的になり、または被験体に免疫を供するのに有効な量で本開示のＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞を被験体に投与することからなる。ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞は、素因がある被験体または癌の症候をいまだ示していない被験体中に症候または癌が起こることを予防するために与えられる。
【０３２４】
細胞を有効量の抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ発現細胞と接触させることを含む、癌細胞または癌幹細胞の増殖を阻害する方法も本明細書に開示されている。一態様において、阻害されている癌細胞または癌幹細胞は、接着性癌細胞である。別の態様において、阻害されている癌細胞または癌幹細胞は、非接着性癌細胞である。さらなる態様において、癌細胞または癌幹細胞は、結腸直腸癌細胞、膵臓癌細胞、繊維肉腫細胞、前立腺癌細胞、多発性骨髄腫細胞、子宮頸癌細胞、または卵巣癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、食道癌細胞、乳癌細胞、大唾液腺癌腫細胞、神経芽細胞腫細胞または腎細胞癌腫細胞である。
【０３２５】
これらの方法は、ヒト、ヒト以外の霊長類（例えば、類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、サル、マカクなど）、飼育動物（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）および実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）などの被験体を処置するのに有用である。哺乳動物は、任意の年齢または任意の発達段階（例えば、成体、青年（ｔｅｅｎ）、小児、乳幼児または子宮内の哺乳動物）であり得る。哺乳動物は、雄（ｍａｌｅ）または雌（ｆｅｍａｌｅ）であり得る。ある実施形態において、被験体は、新生物障害、新形成、腫瘍、悪性病変または癌を有するまたは有すると疑われる。
【０３２６】
本明細書に開示されているＣＡＲ細胞は、単独で、または希釈剤、公知の抗癌治療薬とおよび／またはサイトカインなどのその他の成分もしくは免疫賦活性であるその他の細胞集団と組み合わせて投与され得る。それらは、第一次治療、第二次治療、第三次治療またはさらなる治療として投与され得る。したがって、開示されているＣＡＲは、他の治療（例えば、化学療法、放射線、手術など）と組み合わされ得る。さらなる治療の非限定的な例には、化学療法薬または生物薬（ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）が含まれる。適切な処置計画は、処置している医師または獣医師によって決定される。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、開示されたＣＡＲは、腫瘍組織の切除によって形成された空洞中に（すなわち、空洞内送達）または切除前に腫瘍中に直接（すなわち、腫瘍内送達）送達または投与され得る。いくつかの実施形態において、開示されたＣＡＲは、静脈内に、くも膜下腔内に、腹腔内に、筋肉内に、皮下に、または他の適切な投与手段によって投与され得る。
【０３２８】
本開示の薬学的組成物は、処置されまたは予防されるべき疾患に対して適切な様式で投与され得る。投与の量および頻度は、患者の症状、ならびに患者の疾患の種類および重度などの因子によって決定されるが、適切な投薬量は臨床試験によって決定され得る。
【０３２９】
上記方法については、有効量が投与され、細胞または集団の投与が、任意の症候を減弱し、またはさらなる症候の発生を予防する役割を果たす。投与が、癌の再発または転移の可能性を予防または低減するという目的である場合には、細胞または組成物は、なんらかの目に見えるまたは検出可能な症候に先立って投与することができる。投与の経路としては、経口（錠剤、カプセルまたは懸濁液など）、局所、経皮、鼻腔内、膣、直腸、皮下静脈内、動脈内、筋肉内、骨内、腹腔内、硬膜外およびくも膜下腔内が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３０】
前記方法は、（１）疾患の症候に対する素因があるまたは疾患の症候をいまだ示していない被験体中で症候または疾患が起こることを予防すること、（２）疾患を阻止しもしくはその発達を停止すること、または（３）疾患もしくは疾患の症候を軽減しもしくは疾患もしくは疾患の症候の後退または再発を引き起こすことの１つまたはそれより多くを提供する。本分野において理解されるとおり、「処置」は、臨床的結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本技術において、有益なまたは所望の結果としては、１またはそれを超える症候の緩和または軽減、症状（疾患を含む）の程度の縮小、症状（疾患を含む）の安定化された（すなわち、悪化しない）状態、症状（疾患を含む）の遅延または減速、症状（疾患を含む）の進行、軽減または寛解、検出可能かまたは検出不能かを問わない状態および緩解（部分的であるか、完全であるかを問わない）の１つまたはそれより多くを含むことができるが、これらに限定されない。開示された組成物および方法を含有する処置は、第一次、第二次、第三次、第四次、第五次治療であり得、唯一の治療として、または他の適切な治療、例えば、外科的後退（ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｒｅｃｅｓｓｉｏｎ）、化学療法、放射線と組み合わせて使用されることが意図される。一態様において、処置は予防を除外する。
担体
【０３３１】
本開示のさらなる態様は、担体と、本明細書に開示された実施形態に記載されている生成物（例えば、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞、単離された核酸、ベクター、任意の抗ＤＣＬＫ１抗体またはＣＡＲ細胞の単離された細胞、抗ＤＣＬＫ１）の１つもしくはそれより多くとを含む、または担体と、本明細書に開示された実施形態に記載されている生成物（例えば、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞、単離された核酸、ベクター、任意の抗ＤＣＬＫ１抗体またはＣＡＲ細胞の単離された細胞、抗ＤＣＬＫ１）の１つもしくはそれより多くとから本質的になる、または担体と、本明細書に開示された実施形態に記載されている生成物（例えば、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞、単離された核酸、ベクター、任意の抗ＤＣＬＫ１抗体またはＣＡＲ細胞の単離された細胞、抗ＤＣＬＫ１）の１つもしくはそれより多くとからなる組成物に関する。
【０３３２】
簡潔に述べると、特許請求の範囲に記載された組成物の任意の１つを含むが、これらに限定されない本開示の薬学的組成物は、１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団を含み得、または１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団から本質的になり得、または１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団からなり得る。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含み得、または中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤から本質的になり得、または中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤からなり得る。本開示の組成物は、経口、静脈内、局所、経腸および／または非経口投与用に製剤化され得る。ある実施形態において、本開示の組成物は、静脈内投与用に製剤化される。
【０３３３】
細胞または組成物の投与は、処置の間を通じて、継続的にまたは断続的に、１用量で達成することができる。投与の最も有効な手段および投薬量を決定する方法は、当業者に公知であり、治療のために使用される組成物、治療の目的および処置されている被験体によって変動する。処置を行う医師によって選択される用量レベルおよびパターンで、単回または複数回の投与が実施され得る。適切な投与製剤および薬剤を投与する方法は本分野において公知である。さらなる態様において、本開示の細胞および組成物は、他の処置と組み合わせて投与することができる。
【０３３４】
細胞および細胞の集団は、本分野において公知の方法を用いて宿主に投与され、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６４１９１号に記載されている。本開示の細胞または組成物のこの投与は、実験用アッセイおよびスクリーニングアッセイのために、所望される疾患、障害または症状の動物モデルを作製するために行うことができる。
【０３３５】
本開示のさらなる態様は、担体と、本明細書に開示された実施形態に記載されている生成物（例えば、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞、単離された核酸、ベクター、任意の抗ＤＣＬＫ１抗体またはＣＡＲ細胞の単離された細胞、抗ＤＣＬＫ１）の１つもしくはそれより多くとを含む、または担体と、本明細書に開示された実施形態に記載されている生成物（例えば、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞、単離された核酸、ベクター、任意の抗ＤＣＬＫ１抗体またはＣＡＲ細胞の単離された細胞、抗ＤＣＬＫ１）の１つもしくはそれより多くとから本質的になる、または担体と、本明細書に開示された実施形態に記載されている生成物（例えば、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲを含む、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲから本質的になる、またはＤＣＬＫ１  ＣＡＲからなる単離された細胞、単離された核酸、ベクター、任意の抗ＤＣＬＫ１抗体またはＣＡＲ細胞の単離された細胞、抗ＤＣＬＫ１）の１つもしくはそれより多くとからなる組成物に関する。
【０３３６】
簡潔に述べると、特許請求の範囲に記載された組成物の任意の１つを含むが、これらに限定されない本開示の薬学的組成物は、１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団を含み得、または１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団から本質的になり得、または１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団からなり得る。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含み得、または中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤から本質的になり得、または中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤からなり得る。本開示の組成物は、経口、静脈内、局所、経腸および／または非経口投与用に製剤化され得る。ある実施形態において、本開示の組成物は、静脈内投与用に製剤化される。
【０３３７】
簡潔に述べると、特許請求の範囲に記載された組成物の任意の１つを含むが、これらに限定されない本開示の薬学的組成物は、１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団を含み得、または１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団から本質的になり得、または１もしくはそれを超える薬学的にもしくは生理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わされた、本明細書に記載されている標的細胞集団からなり得る。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含み得、または中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤から本質的になり得、または中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドもしくはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤からなり得る。本開示の組成物は、好ましくは、静脈内投与用に製剤化される。
【０３３８】
本開示の薬学的組成物は、処置されまたは予防されるべき疾患に対して適切な様式で投与され得る。投与の量および頻度は、患者の症状、ならびに患者の疾患の種類および重度などの因子によって決定されるが、適切な投薬量は臨床試験によって決定され得る。
【０３３９】
以下の実施例は、本開示を実施する上での様々な事例において使用することができる手技を例示する。
【実施例】
【０３４０】
実施例１−ヒト化抗体の生成
親抗体配列の選択した部分をヒトフレームワーク配列と融合する複数のハイブリッド配列を作製することによって、ヒト化抗体を設計した。３Ｄモデルを使用して、抗原結合を保持する可能性が最も高い配列を単離するために、これらのヒト化配列を肉眼およびコンピュータモデリングによって系統的に分析した。最終目標は、元の抗体特異性を保持しながら、最終のヒト化抗体中のヒト配列の量を最大化することであった。
【０３４１】
２つの異なる重鎖および軽鎖ヒトアクセプターフレームワークに基づいて、３つのヒト化軽鎖および３つのヒト化重鎖を設計した（表１参照）。それぞれに対する第一のヒト化された鎖は第一のそれぞれのフレームワークを使用し、最小の親抗体フレームワーク配列を有する最高のヒト配列を含有する（ＨＣ１、ＬＣ１）。それぞれに対する第二のヒト化された鎖は、前記と同じフレームワークを使用するが、さらなる親配列を含有する（ＨＣ２、ＬＣ２）。それぞれに対する第三のヒト化された鎖は、ＨＣ２／ＬＣ２と同様に、第二のそれぞれのフレームワークを使用し、ヒトフレームワークと融合されたさらなる親配列も含有する（ＨＣ３、ＬＣ３）。
【表１】
2021505663.tif 000003
【０３４２】
バリアントの完全にヒト化された抗体を作製するために、このヒト化された軽鎖および重鎖が組み合わされる。そこから由来したキメラ親抗体と同様に機能する抗体を同定するために、発現レベルおよび抗原結合親和性に関して、これらの組み合わせを試験した。
【０３４３】
「ヒト化度（ｈｕｍａｎｎｅｓｓ）」スコアは、Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｈｕｍａｎｎｅｓｓ  ｓｃｏｒｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１３：５５に記載されている方法にしたがって計算した。このスコアは、抗体可変領域配列がどの程度ヒト様に見えるかを表し、抗体をヒト化するときの重要な要素である。親抗体およびヒト化抗体に対するヒト化度スコアが以下に示されている。本発明者らの方法に基づくと、重鎖に関しては、７９以上のスコアはヒト様であるように見えることの指標であり、κ軽鎖に関しては、８６以上のスコアはヒト様であるように見えることの指標である。
【表２】
2021505663.tif 000004
【０３４４】
まず、可変領域配列を合成することによって、完全長抗体遺伝子を構築した。哺乳動物細胞中での発現に関して、該配列を最適化した。次いで、ヒトＦｃドメインを既に含有する発現ベクター中に、これらの可変領域配列をクローニングした。さらに、比較のために、同じ骨格Ｆｃ配列を用いて、親重鎖および軽鎖の可変領域を完全長キメラ鎖として構築した。
【０３４５】
次いで、ヒト化抗体は、０．０３リットルの産生を経た。また、直接の比較のために、キメラ親抗体をスケールアップした。抗体を作製するために血清の不存在下で化学的に既知組成の培地を用いて、懸濁ＨＥＫ２９３細胞中に、表記重鎖および軽鎖に対するプラスミドを形質移入した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ培地（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、馴化培地中の全抗体を精製した。試験された抗体による結果が、以下に示されている。
【表３】
2021505663.tif 000005
【０３４６】
Ｏｃｔｅｃｔ分析も行った。全ての実験は、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上で行った。このアッセイフォーマットでは、抗ヒトＩｇＧＦｃ  Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）速度論的等級バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、＃１８−５０６４）をアッセイ緩衝液中で水和し、ｐＨ１．７グリシン中で予め馴化した。１０μｇ／ｍＬの濃度で１８０秒間、各抗体をＡＨＣバイオセンサー上に固定化した。抗体がバイオセンサーに安定に結合されることを確保するために、ＡＨＣ搭載後に解離緩衝液を用いて、短いベースライン（６０秒）を確立した。次いで、３００ｎＭから始まる抗原の、８点１：３希釈系列中に、抗体を搭載したＡＨＣバイオセンサーを浸した。分析物カラムの最後の希釈点は、緩衝液と搭載されたバイオセンサー間の非特異的結合について試験するために、アッセイ緩衝液のみを含有した。会合を１８０秒間観察し、その後、３００秒の解離を観察した。抗原の同じ８点希釈系列中に浸された搭載されていない裸のセンサーを使用することによって、平行参照基準を記録した。データ処理の間には、標準化のために二重の参照基準を使用した。各抗体に対する抗原の結合親和性は、一価結合モデル（１：１結合）に速度論的センサーグラムをフィッティングすることによって性質決定された。図１。
【０３４７】
さらなるヒト化配列を生成し、類似の手段によって試験した。
【０３４８】
実施例２−抗体のヒト化および試験
ＣＢＴ−１５Ａ  ＶＨは、マウス生殖系列ＶＨ５−６−２である。ＣＤＲ移植のための「アクセプター」フレームワークとして、ヒトＶＨ３−２３を選択した。ＣＢＴ−１５Ａ  ＶＫは、マウス生殖系列ＶＫ８−２０である。ＣＤＲ移植のための「アクセプター」フレームワークとして、ヒトＶＫ４−１を選択した。
【０３４９】
ヒト化ＶＨを以下のように整列した。
【化１】
2021505663.tif 000006
【０３５０】
ＪＨ４を有するＶＨ３−２３は、ヒト生殖系列アクセプターであった。Ｈ１−６は、０〜３個の逆突然変異を含有するヒト化ＶＨバリアントである。ＣＤＲ−Ｈ２中に存在するＮＧモチーフは、高い脱アミド化傾向を示す。
【０３５１】
ヒト化ＶＫを以下のように整列した。
【化２】
2021505663.tif 000007
【０３５２】
ＪＫ２を有するＶＫ４−１は、ヒト生殖系列アクセプターであった。Ｌ１−２は、ヒト化ＶＨバリアントである。Ｌ２およびＬ２は、それぞれ、０個および２個の逆突然変異を含有する。
【０３５３】
表４は、プラスミド、使用されたＶＨ／ＶＫおよびＣＨ／ＣＫドメイン、プロモーター配列ならびに使用された選択マーカーを含む、ヒト化ＣＢＴ−１５Ａバリアントのクローニングを示す。
【表４】
2021505663.tif 000008
【０３５４】
２９３細胞中での一過性の産生を評価するために、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  Ｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１００ｍＬの２９３Ｆ細胞を形質移入し、４日後に、馴化培地を採集した。プロテインＡカラムを用いて、抗体を精製した。下表５および表６に示されているように、ＣＢ１５−Ａ  Ｈ５による抗体発現は極めて低かった。
【表５】
2021505663.tif 000009
【表６】
2021505663.tif 000010
【０３５５】
図２は、還元条件および非還元条件での様々なヒト化ＣＢＴ−１５Ａ抗体の各々２μｇを用いて実行されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの結果を示す。
【０３５６】
ＤＣＬＫ１  Ｃ末端ペプチド（１５０ｎｇ／ウェル）でＥＬＩＳＡプレイス（ｐｌａｃｅ）を被覆し、ヒト化ＣＢＴ１５Ａの２倍希釈（１μｇ／ｍＬ）をＥＬＩＳＡプレートに添加した。陽性対照として、ＣＢＴ１５−Ａキメラ３７４／３７５を使用した。抗ヒトκＨＲＰを用いて、抗原結合を検出した。Ｌ１／Ｈ４およびＬ２／Ｈ６は、約５０ｎｇ／ｍＬ（３５０ｐＭ）のＥＣ５０で、キメラＣＢＴ−１５Ａと同様の強い結合を示した。Ｌ１／Ｈ６は、約６０ｎｇ／ｍＬ（４２０ｐＭ）のＥＣ５０で、若干弱い結合を示した。図３。
【０３５７】
結合速度論を測定するために、抗体３７４／３７５、Ｌ１／Ｈ４、Ｌ１／Ｈ６およびＬ２／Ｈ６をＯｃｔｅｔ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ）分析に供した。図４。抗ヒトＦｃバイオセンサー上に抗体を搭載し、次いで、３００ｎＭから始まる抗原の３倍希釈系列中に浸した。下表７に示されているように、４つの抗体全てが、極めて高い結合親和性、すなわち、１０−１２Ｍ未満を示した。
【表７】
2021505663.tif 000011
【０３５８】
下表８は、本開示のヒト化ＤＣＬＫ１抗体は精製されたＤＣＬＫ１に対する高い結合親和性を有することを示している。
【表８】
2021505663.tif 000012
【０３５９】
結果は、マウスＩｇＡ抗体ＣＢＴ−１５ＡのヒトＩｇＧ１へのヒト化が成功したことを示す。合計１２のヒト化抗体が２９３細胞から産生され、キメラＣＢＴ−１５Ａと比較して、結合を評価した。少なくとも３つの抗体（Ｌ１／Ｈ４、Ｌ１／Ｈ６およびＬ２／Ｈ６）が、ＥＬＩＳＡおよびＯｃｔｅｔの両方で、キメラ抗体と比較して、同様の高い結合親和性を示した。
【０３６０】
実施例３−ＣＡＲおよびＣＡＲ発現細胞の生成
実施例１および／または実施例２で生成されたヒト化抗ＤＣＬＫ１抗体に対するＤＮＡ配列を取得し、ＣＡＲベクター、例えば、以下のタンデム遺伝子コザックコンセンサス配列；ＣＤ８シグナルペプチド；抗ＤＣＬＫ１重鎖可変領域；（グリシン４セリン）３柔軟ポリペプチドリンカー；それぞれの抗ＤＣＬＫ１可変領域；ＣＤ８ヒンジおよび膜貫通ドメイン；ならびにＣＤ２８、４−１ＢＢおよびＣＤ３ζ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインからなるベクター中に組み込む。ヒンジ、膜貫通およびシグナル伝達ドメインＤＮＡ配列は、Ｃａｒｌ  Ｊｕｎｅによる特許から確認される（米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８Ａ１号参照）。ベクター宿主にアンピシリン耐性を付与するｂｌａ遺伝子を含有するｐＵＣ５７ベクター骨格内に、Ｇｅｎｅｗｉｚ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ）によって、抗ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ遺伝子を合成する。
【０３６１】
ＮｏｖａＢｌｕｅ  Ｓｉｎｇｌｅｓ（商標）化学的に形質転換受容性の大腸菌細胞を抗ＤＣＬＫ１プラスミドｃＤＮＡで形質転換する。形質転換された大腸菌細胞の増殖後に、ＣＡＲプラスミドを精製し、一晩のＴ４ＤＮＡリガーゼ反応（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）を介して、ＨＩＶ−１末端反復配列（ＬＴＲ）、パッケージングシグナル（Ψ）、ＥＦ１αプロモーター、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）およびウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御因子（ＷＰＲＥ）を含有するＨＩＶ−１をベースとするレンチウイルスベクター中に挿入するために、適切な制限酵素で消化した。次いで、得られた抗ＤＣＬＫ１含有レンチウイルスプラスミドで、ＮｏｖａＢｌｕｅ  Ｓｉｎｇｌｅｓ（商標）化学的に形質転換受容性の大腸菌細胞を形質転換する。
【０３６２】
形質移入の前に、１０ｍＬ完全−Ｔｅｔ−ＤＭＥＭ中、４．０×１０６細胞／１００ｍｍ組織培養処置されたプレートでＨＥＫ２９３Ｔ細胞を播種し、加湿された５％ＣＯ２恒温槽中において、３７℃で一晩インキュベートした。８０〜９０％の集密度になったら、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を結合するプラスミド含有ナノ粒子の形成を促進するための独自の反応緩衝液およびポリマーに加えて、ＣＡＲ遺伝子レンチウイルスプラスミドと、レンチウイルスのエンベロープおよびキャプシド成分を形成するのに必要な遺伝子を含有するレンチウイルスパッケージングプラスミドとを、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質移入する。形質移入されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞培養物を３７℃で４時間インキュベートした後、形質移入培地を１０ｍＬの新鮮な完全ＴｅｔＤＭＥＭと交換する。次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をさらに４８時間インキュベートし、その後、細胞上清を採集して、主要なレンチウイルスキャプシドタンパク質であるｐ２４に対するサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、レンチウイルス粒子に対して試験する。レンチウイルス含有上清を分取し、標的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の形質導入に使用するまで、−８０℃で保存する。
【０３６３】
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を用いる密度勾配遠心によって、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を濃縮し、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳを用いる遠心によって、回収し、洗浄する。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を陽性選択するための磁気的に活性化されたＬＳカラムを用いて、これらのヒトＴ細胞サブセットを単離するために、ＭＡＣＳ  ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）キットを使用する。次いで、磁気ＭＡＣＳ分離装置から、磁気的に結合されたＴ細胞を取り出し、ＬＳカラムから流し、新鮮な完全培地中で洗浄する。Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ａｔｔｕｎｅ（登録商標）Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを使用するフローサイトメトリーによって、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団の純度を評価し、必要であれば、ＵＳＣのフローサイトメトリー中核施設で行われる蛍光標示式細胞分取によって濃縮する。適切な細胞培養容器中にて、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２が補充された完全培地中で、１．０×１０６細胞／ｍＬの密度に、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を維持し、培養されたＴ細胞を活性化するために、これに、α−ＣＤ３／α−ＣＤ２８Ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｓｌｂａｄ、ＣＡ）を添加する。ＣＡＲ−レンチウイルス粒子での形質導入前に、３７℃で、５％ＣＯ２恒温槽中にて、２日間、Ｔ細胞をインキュベートする。
【０３６４】
活性化されたＴ細胞を収集し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心またはＭＡＣＳ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）の使用によって、死細胞を除去する。６ウェルプレート中に、１．０×１０６細胞／ｍＬ完全培地の濃度で、活性化されたＴ細胞を播種する。様々なウェルへ、１、５、１０および５０などの様々な感染多重度（ＭＯＩ）で、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ含有レンチウイルス粒子を細胞懸濁液に添加する。レンチウイルス粒子と標的細胞表面間の相互作用を促進することによって形質導入を補助する陽イオン性ポリマーであるポリブレンを、４μｇ／ｍＬの最終濃度で添加する。８００×ｇで１時間、３２℃で、プレートを遠心する。遠心後に、レンチウイルス含有培地を吸引し、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を加えた新鮮な完全培地中に細胞沈渣を再懸濁する。３７℃で一晩、５％ＣＯ２の加湿された恒温槽中に細胞を入れる。形質導入の３日後に、細胞を沈渣とし、ＩＬ−２および４００μｇ／ｍＬジェネティシン（Ｇ４１８サルフェート）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を加えた新鮮な完全培地中に再懸濁する。形質導入手技の成功を実証するために、フローサイトメトリーおよびサザンブロット分析によって、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ改変されたＴ細胞を評価する。インビトロおよびインビボアッセイの前に、ＦＡＣＳによって、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を濃縮し、インビボ研究のために１：１で混合する。
【０３６５】
実施例４−インビトロおよびインビボモデルでのＣＡＲ発現細胞の試験
ＤＣＬＫ１抗原陽性および陰性ヒト細胞株を収集し、洗浄し、１．０×１０６細胞／ｍＬの濃度で、完全培地中に再懸濁する。カルセイン−アセトキシメチル（ＡＭ）を、１５μＭで標的細胞試料に添加し、次いで、５％ＣＯ２の加湿された恒温槽中において、３０分間、３７℃でインキュベートする。染色された陽性および陰性標的細胞を２回洗浄し、遠心によって、完全培地中に再懸濁し、１．０×１０４細胞／ウェルで、９６ウェルプレートに添加する。５０：１、５：１および１：１のエフェクター対標的細胞比率で、完全培地中のプレートに、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を添加する。完全培地および２％ｔｒｉｔｏｎＸ−１００を加えた完全培地中に懸濁された染色された標的細胞は、それぞれ、自発的放出対照および最大放出対照としての役割を果たす。恒温槽中に３時間戻す前に、３６５×ｇおよび２０℃で２分間、プレートを遠心する。次いで、プレートを１０分遠心し、黒色ポリスチレン９６ウェルプレート上の各ウェルに細胞上清を分取し、それぞれ、４８５／２０ｎｍおよび５２８／２０ｎｍの励起および発光で、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ（登録商標）Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）ＨＴマイクロプレートリーダー上において、蛍光を評価する。
【０３６６】
研究室で日常的に行われている標準的手技を用いて、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性化の指標としてのサイトカイン分泌に関してＤＣＬＫ１  ＣＡＲ改変されたＴ細胞ならびにＤＣＬＫ１陽性および陰性腫瘍細胞株の上清を測定する。バックグラウンド活性を特定するために、データを培地のみおよび非活性化ヒトＴ細胞を使用する培養物と比較する。ＩＬ−２、ＩＦＮ−ｇ、ＩＬ−１２およびその他の妥当なサイトカインの濃度を、インキュベーション過程の間に経時的に測定する。
【０３６７】
２つの異なるヒト腫瘍細胞株異種移植腫瘍モデルを用いて、ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞をインビボでさらに評価する。両方に対して、６〜８週齢の雌のヌードマウス中に、５×１０６のＤＣＬＫ１陽性またはＤＣＬＫ１陰性固形腫瘍細胞株の注射によって、固形腫瘍を皮下に確立する。腫瘍が０．５ｃｍの直径に達したときに、マウスの群（ｎ＝５）を、陰性対照としての１または３×１０７のヒトＴ細胞またはインビトロ研究結果に基づいて最も活性が高いＤＣＬＫ１抗体から構築されたＤＣＬＫ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞で、静脈内に処置する。次いで、週に３回、キャリパーによって腫瘍体積を測定し、対照を上回る実験的処置の有効性を実証するために、体積増殖曲線を作成する。
【０３６８】
ＤＣＬＫ１は、ＣＡＲ  Ｔ細胞開発のための卓越した標的であることが見出される。ＮＫ細胞などの他の関連する免疫細胞に対して、この実験を繰り返し、同様の結果を得る。
【０３６９】
実施例５−ＣＡＲ構築物の非限定的な（Ｎｏｎ−Ｌｉｍｉｎｇ）例
ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物１の配列
シグナルペプチドヒトＣＤ８：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ
【０３７０】
ＮｈｅＩ部位配列：ＡＳ
【０３７１】
抗ＤＣＬＫ１のｓｃＦｖ
【０３７２】
ＶＨ配列：配列番号３
【０３７３】
ＶＬ配列：配列番号１１
【０３７４】
Ｘｈｏ  Ｉ部位配列：ＬＥ
【０３７５】
必要に応じて、ＶＬの後に、Ｆｌａｇタグ配列を挿入する：ＤＹＫＤＤＤＤＫ
【０３７６】
ＣＤ８ヒンジ配列：
【０３７７】
Ｆｌａｇタグを付加された構築物中でのみ使用された２つのＳ（セリン）がシステイン（Ｃ）（下線および太字）に変化されたＣＤ８ヒンジ配列：
ＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＳＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＳＤＫＰ
【０３７８】
ＣＤ２８タンパク質配列：
【化３】
2021505663.tif 000013
【０３７９】
ＣＤ２８タンパク質配列全体がここに示されている。膜貫通セグメントＴＭ２８は、斜字体、太字で表記され、下線が付され、２つの結合モチーフＹＭＮＭおよびＰＹＡＰは太字で表記され、Ｔ１９５には下線が付されている。
【０３８０】
膜貫通ドメインＴＭ２８配列：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
【０３８１】
共刺激ドメインＣＤ２８−ＷＴ配列：
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
【０３８２】
共刺激ドメインＣＤ２８ＤＤ配列：本発明の一実施形態において、２つの結合モチーフ（ＹＭＮＭおよびＰＹＡＰ）は、以下の配列に示されているように、直ちに反復されている（太字）：
【化４】
2021505663.tif 000014
【０３８３】
共刺激ドメインＣＤ２８  ＤＤ  Ｔ１９５Ｐ配列：
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMYMNMPPRRPGPTRKHYQYAPPYAPPRDFAAYRS
【０３８４】
活性化ドメインＣＤ３ζ配列：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMETGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
ＤＣＬＫ１  ＣＡＲ構築物２の配列
【０３８５】
シグナルペプチドヒトＣＤ８：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ
【０３８６】
ＮｈｅＩ部位配列：ＡＳ
【０３８７】
抗ＤＣＬＫ１のｓｃＦｖ
【０３８８】
ＶＨ配列：配列番号７
【０３８９】
ＶＬ配列：配列番号１３
【０３９０】
Ｘｈｏ  Ｉ部位配列：ＬＥ
【０３９１】
必要に応じて、ＶＬの後に、Ｆｌａｇタグ配列を挿入する：ＤＹＫＤＤＤＤＫ
【０３９２】
ＣＤ８ヒンジ配列：
【０３９３】
Ｆｌａｇタグを付加された構築物中でのみ使用された２つのＳ（セリン）がシステイン（Ｃ）に変化されたＣＤ８ヒンジ配列（下線および太字）：
KPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEASRPAAGGAVHTRGLDFASDKP
【０３９４】
ＣＤ２８タンパク質配列：
【化５】
2021505663.tif 000015
【０３９５】
ＣＤ２８タンパク質配列全体がここに示されている。膜貫通セグメントＴＭ２８は、斜字体、太字で表記され、下線が付され、２つの結合モチーフＹＭＮＭおよびＰＹＡＰは太字で表記され、Ｔ１９５には下線が付されている。
【０３９６】
膜貫通ドメインＴＭ２８配列：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
【０３９７】
共刺激ドメインＣＤ２８−ＷＴ配列：
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
【０３９８】
共刺激ドメインＣＤ２８ＤＤ配列：本発明の一実施形態において、２つの結合モチーフ（ＹＭＮＭおよびＰＹＡＰ）は、以下の配列に示されているように、直ちに反復されている（太字）：
【化６】
2021505663.tif 000016
【０３９９】
共刺激ドメインＣＤ２８  ＤＤ  Ｔ１９５Ｐ配列：
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMYMNMPPRRPGPTRKHYQYAPPYAPPRDFAAYRS
【０４００】
活性化ドメインＣＤ３ζ配列：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMETGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
【０４０１】
材料および方法
細胞株
ＡＴＣＣからＨｅｌａ細胞を購入し、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＤＭＥＭ中で培養した。ＣＤ１９の安定な発現を有するＨｅｌａ−ＣＤ１９細胞を、１０％ＦＢＳ、ピューロマイシンおよびペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＤＭＥＭ中で維持した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ溶液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するＩＲＢによって承認されたプロトコールにしたがって、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓｔａｎｆｏｒｄ、ＣＡにおいて得られた全血から、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。１０％ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ中で、ＡｌＳｔｅｍ（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）から得たＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を培養したＡＴＣＣからＳＫＯＶ−３細胞株を取得し、１０％ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ中で培養した。Ｌｏｎｚａ社から正常なヒトケラチン生成細胞を取得し、製造業者のプロトコールにしたがって、ケラチン生成細胞培地（Ｌｏｎｚａ）中で培養した。ＡＴＣＣからＢｘＰＣ３、ＰＡＮＣ−１、Ａ１８４７、Ａ３７５、Ａ５４９およびＨｅｐ−３Ｂを取得し、１０％ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＤＭＥＭ中で培養した。細胞特異的表面マーカーを用いて本発明者らの研究室において、フローサイトメトリーによって、またはＡＴＣＣによって、細胞株を認証した。ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９、ＳＷ６２０  ＣａＣｏ２、ＬＳ１２３、ＬｏＶｏ、ＨＴ１０８０、ＬＮＣａＰ、ＲＰＭＩ８２２６、ＭＭ１Ｓ、Ｋ５６２およびＯＶＣＡＲ−３をＡＴＣＣから購入した。
【０４０２】
ＣＡＲレンチウイルス調製
Ｂｅｒａｈｏｖｉｃｈ  Ｒ，Ｘｕ  Ｓ，Ｚｈｏｕ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．に記載されているように、２９３ＦＴ細胞、Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｍｉｘおよび形質移入剤（ＡＬＳＴＥＭ）を用いるレンチウイルスの生成のために、レンチウイルスＣＡＲを使用した。ＦＬＡＧタグを付加されたＣＤ１９特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ１９を有する固形腫瘍細胞をインビトロおよびインビボで除去する。Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ（Ｌａｎｄｍａｒｋ  Ｅｄ）２０１７；２２：１６４４−１６５４。
【０４０３】
製造業者のプロトコールにしたがってＬｅｎｔｉ−ＸｑＲＴ−ＰＣＲキット（Ｔａｋａｒａ）を用いる定量的ＲＴ−ＰＣＲおよび７９００ＨＴサーマルサイクラー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）によって、ウイルス力価を決定した。レンチウイルス力価はｐｆｕ／ｍｌで表され、１〜１０×１０８ｐｆｕ／ｍｌの範囲であった。
【０４０４】
ＣＡＲ−Ｔ細胞拡大増殖
３００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）とともに１０％ＦＢＳを含有するＡＩＭ  Ｖ−ＡｌｂｕＭＡＸ培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）中に、１×１０６細胞／ｍｌでＰＢＭＣを懸濁した。等しい数のＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＰＢＭＣを活性化し、処理されていない２４ウェルプレート中で培養した。２４時間および４８時間に、１μｌのＴｒａｎｓＰｌｕｓ形質導入エンハンサー（ＡｌＳｔｅｍ）とともに、５の感染多重度（ＭＯＩ）で、レンチウイルスを培養物に添加した。２〜３日おきに、ＣＡＲ−Ｔ細胞を計数し、１×１０６細胞／ｍｌの細胞密度を維持するために、３００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２を加えた新鮮な培地を培養物に添加した。
【０４０５】
フローサイトメトリー
ＣＡＲ発現を測定するために、５×１０５細胞を１００ｍｌの緩衝液（０．５％ＢＳＡを加えた１×ＰＢＳ）中に懸濁し、１ｍｌのヒト血清（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）とともに氷上で、１０分間インキュベートした。次いで、１ｍｌのアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識された抗ＣＤ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、２ｍｌの７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）および２ｍｌの抗Ｆ（ａｂ）２またはそのアイソタイプ対照を添加し、氷上で３０分間、細胞をインキュベートした。細胞を緩衝液ですすぎ、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で取得した。まず、光散乱対７−ＡＡＤ染色に対して、細胞を分析し、次いで、ＣＤ３染色体対Ｆ（ａｂ）２染色またはアイソタイプ対照染色に対して、７−ＡＡＤ−生きたゲートされた細胞をプロットした。いくつかの実験では、抗Ｆ（ａｂ）２染色のみを行った。マウス腫瘍研究のために、１ｍｌのＡＰＣ抗ＣＤ３、２ｍｌのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識された抗ＣＤ８ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、２ｍｌの７−ＡＡＤにより、室温で３０分間、１００ｍｌの血液を染色した。３．５ｍｌのＲＢＣ溶解溶液（１５０ｍＭ  ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８）で赤血球を溶解し、次いで、遠心によって白血球を集め、取得前に、２ｍｌの冷たい緩衝液ですすいだ。ＤＣＬＫ１の発現のために、１０ｍｇ／ｍｌ濃度でマウスまたはヒト抗体（ＣＯＡＲＥ  Ｈｏｌｄｉｎｇｓ  Ｉｎｃ．，）を使用した。（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から１０ｍｇ／ｍｌで、アイソタイプＩｇＧ１アイソタイプ抗体を使用した。
【０４０６】
リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣＡ）
９６ウェルＥ−プレート（Ａｃｅａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）中に、１×１０４細胞／ウェルで、接着性標的細胞を播種し、インピーダンスベースのリアルタイム細胞分析（ＲＴＣＡ）ｉＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Ａｃｅａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、一晩、培養しながらモニターした。翌日、培地を除去し、１０％ＦＢＳ±１×１０５エフェクター細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞または形質導入されていないＴ細胞）を含有するＡＩＭ  Ｖ−ＡｌｂｕＭＡＸ培地と３つ組で交換した。ＲＴＣＡシステムを用いて、細胞をさらに２日間モニターし、インピーダンスを経時的にプロットした。（エフェクター細胞なしの標的細胞のインピーダンス−エフェクター細胞ありの標的細胞のインピーダンス）×１００／エフェクター細胞なしの標的細胞のインピーダンスとして、細胞溶解を計算した。
【０４０７】
サイトカインＥＬＩＳＡアッセイ
３つ組で、１０％ＦＢＳを含有する２００μｌのＡＩＭ  Ｖ−ＡｌｂｕＭＡＸ培地を加えたＵ底９６ウェルプレート中において、１：１の比率で（それぞれ１×１０４細胞）、エフェクター細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞または形質導入されていないＴ細胞）とともに標的細胞を培養した。１６時間後に、１５０μｌの上側培地をＶ底９６ウェルプレートに移し、残存する全ての細胞を沈渣にするために、３００ｇで５分間遠心した。いくつかの実験において、サイトカインＥＬＩＳＡアッセイのために、Ｅ：Ｔ＝１０：１でのＲＴＣＡアッセイ後の上清を使用した。新しい９６ウェルプレートに上清を移し、製造業者のプロトコールにしたがい、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから得たキットを用いて、ヒトサイトカインレベル（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−６）について、ＥＬＩＳＡにより分析した。
【０４０８】
ヒト化およびマウスＤＣＬＫ−１  ｓｃＦｖを用いた結合アッセイ
マウスまたはヒト化ＤＣＬＫ−１  ｓｃＦｖは、Ｇ４Ｓｘ３リンカーで連結されたＶＬおよびＶＨ配列を含有した。組換えＤＣＬＫ−１  ｓｃＦｖタンパク質発現のために使用されたｐＹＤ１１ベクター内のＣ末端ヒトＦｃと、ｓｃＦｖをインフレームで融合した。哺乳動物の発現されたＳｃＦｖタンパク質を有する上清を、等量で結合アッセイのために使用した。抗ヒトＦｃ抗体を用いたウェスタンブロットによって、発現に関して、全てのｓｃＦｖをチェックした。ヒトＤＣＬＫ−１タンパク質のヒト細胞外ドメインをマウスＦｃと融合し、ＤＣＬＫ−１  ｓｃＦｖを用いるＥＬＩＳＡアッセイのために使用した。結合を検出するために、４５０ｎｍでのＯＤ読み取りを使用した。マウス配列に基づいて、ヒト化ＶＨおよびＶＬ配列に対して、コンピュータシミュレーションモデルを生成した。
【０４０９】
統計解析
Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて、データを解析し、プロットした。二群間の比較は、対応のないスチューデントのｔ検定によって行い、三群間の比較は、注記されている場合を除き、チューキーの事後検定を用いる片側ＡＮＯＶＡによって行った。ｐ値＜０．０５のとき、差を有意と考えた。
【０４１０】
配列表
配列番号１  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLELVSAINSNGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTMVTVSS
【０４１１】
配列番号２  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ２
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKRLELVSAINSNGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTMVTVSS
【０４１２】
配列番号３  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ３
EVKLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKRLELVSAINSNGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTTVTVSS
【０４１３】
配列番号４  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ４
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４１４】
配列番号５  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ５
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４１５】
配列番号６  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ６
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４１６】
配列番号７  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ７
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLELVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４１７】
配列番号８  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ８
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAINSSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４１８】
配列番号９  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ９
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLELVAAINSSGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４１９】
配列番号１０  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＨＣ１０
DVKLVESGGGLVKLGGSLKLSCAASGFTFSSYYMSWVRQTPEKRLELVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCARHGGNYWYFDVWGAGTTVTVSS
【０４２０】
配列番号１１  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ１
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
【０４２１】
配列番号１２  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ２
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
【０４２２】
配列番号１３  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ３
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
【０４２３】
配列番号１４  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ４
DIVMSQSPDSLAVSLGERATISCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
【０４２４】
配列番号１５  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＬＣ５
DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPYTFGGGTKLEIK
【０４２５】
配列番号１６  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１１
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLELVSAINSNGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG**
【０４２６】
配列番号１７  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１２
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKRLELVSAINSNGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG**
【０４２７】
配列番号１８  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１３
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGEVKLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKRLELVSAINSNGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG**
【０４２８】
配列番号１９  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１４
MEFGLSWLFLVAKIKGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４２９】
配列番号２０  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１５
MEFGLSWLFLVAKIKGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４３０】
配列番号２１  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１６
MEFGLSWLFLVAKIKGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４３１】
配列番号２２  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１７
MEFGLSWLFLVAKIKGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLELVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４３２】
配列番号２３  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１８
MEFGLSWLFLVAKIKGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAINSSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４３３】
配列番号２４  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１９
MEFGLSWLFLVAKIKGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLELVAAINSSGGSTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
【０４３４】
配列番号２５  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＨＣ２０
MNFGLRLIFLVLVLKGVLCDVKLVESGGGLVKLGGSLKLSCAASGFTFSSYYMSWVRQTPEKRLELVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCARHGGNYWYFDVWGAGTTVTVSS
【０４３５】
配列番号２６  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ６
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
【０４３６】
配列番号２７  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ７
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
【０４３７】
配列番号２８  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ８
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
【０４３８】
配列番号２９  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ９
MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
【０４３９】
配列番号３０  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ１０
MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMSQSPDSLAVSLGERATISCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
【０４４０】
配列番号３１  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＬＣ１１
MDSQAQVLMLLLLWVSGTCGDIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPYTFGGGTKLEIK
【０４４１】
配列番号３２  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１１ポリヌクレオチド配列
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCCGGAGGCGGACTGGTGCAGCCCGGAGGTAGCCTTAGGCTGAGCTGTGCCGCAAGTGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTACATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGCTGGTGAGCGCCATCAACAGCAACGGCGGCAGCACCTACTACCCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAATAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCAGGCATGGCGGCAACTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGTCAAGGAACAATGGTGACAGTTAGTTCCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGCAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGATAGTAA
【０４４２】
配列番号３３  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１２ポリヌクレオチド配列
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCCGGAGGCGGACTGGTGCAGCCCGGAGGTAGCCTTAGGCTGAGCTGTGCCGCAAGTGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTACATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGCGCCTGGAGCTGGTGAGCGCCATCAACAGCAACGGCGGCAGCACCTACTACCCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAATAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCAGGCATGGCGGCAACTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGTCAAGGAACAATGGTGACAGTTAGTTCCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGCAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGATAGTAA
【０４４３】
配列番号３４  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１３ポリヌクレオチド配列
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCGAGGTGAAACTGTTGGAGTCCGGAGGCGGACTGGTGCAGCCCGGAGGTAGCCTTAGGCTGAGCTGTGCCGCAAGTGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTACATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGCGCCTGGAGCTGGTGAGCGCCATCAACAGCAACGGCGGCAGCACCTACTACCCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAATAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCAGGCATGGCGGCAACTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGTCAAGGAACAACTGTGACAGTTAGTTCCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGCAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGATAGTAA
【０４４４】
配列番号３５  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１４ポリヌクレオチド配列
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTAAAATAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAACTCCAACGGTGGTAGCACATACTACCCAGACACCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACATGGGGGTAACTACTGGTACTTTGACGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
【０４４５】
配列番号３６  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１５ポリヌクレオチド配列
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTAAAATAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAACTCCAACGGTGGTAGCACATACTACCCAGACACCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTTGACGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
【０４４６】
配列番号３７  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１６ポリヌクレオチド配列
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTAAAATAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCAGCTATTAACTCCAACGGTGGTAGCACATACTACCCAGACACCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTTGACGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
【０４４７】
配列番号３８  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１７ポリヌクレオチド配列
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTAAAATAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGCTGGTCGCAGCTATTAACTCCAACGGTGGTAGCACATACTACCCAGACACCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTTGACGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
【０４４８】
配列番号３９  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１８ポリヌクレオチド配列
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTAAAATAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAACTCCAGCGGTGGTAGCACATACTACGCTGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTTGACGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
【０４４９】
配列番号４０  抗ＤＣＬＫ１抗体ＨＣ１９ポリヌクレオチド配列
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTAAAATAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGCTGGTCGCAGCTATTAACTCCAGCGGTGGTAGCACATACTACCCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTTGACGTCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
【０４５０】
配列番号４１  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ６ポリヌクレオチド配列
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACATCGTGATGACCCAAAGCCCCGACTCCCTGGCGGTTAGCCTGGGCGAGAGGGCCACGATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTGTTGTACAGCAGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCCAACCCCCGAAGCTGCTCATCTACTGGGCCAGCACCCGGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGTGGGAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCTTGCAGGCTGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCTACCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
【０４５１】
配列番号４２  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ７ポリヌクレオチド配列
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACATCGTGATGACCCAAAGCCCCGACTCCCTGGCGGTTAGCCTGGGCGAGAGGGCCACGATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTGTTGTACAGCAGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCCAATCCCCGAAGCTGCTCATCTACTGGGCCAGCACCCGGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGTGGGAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCTTGCAGGCTGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCTACCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
【０４５２】
配列番号４３  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ８ポリヌクレオチド配列
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACATCGTGATGACCCAAAGCCCCGACTCCCTGGCGGTTAGCCTGGGCGAGAGGGCCACGATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTGTTGTACAGCAGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCCAACCCCCGAAGCTGCTCATCTACTGGGCCAGCACCCGGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGTGGGAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCGTGCAGGCTGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCTACCCCTACACCTTCGGCGGAGGCACCAAAGTGGAGATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
【０４５３】
配列番号４４  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ９ポリヌクレオチド配列
ATGGTGTTGCAGACCCAGGTCTTCATTTCTCTGTTGCTCTGGATCTCTGGTGCCTACGGGGACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTTTGTTATACAGCTCCAACCAGAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTTACCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
【０４５４】
配列番号４５  抗ＤＣＬＫ１抗体ＬＣ１０ポリヌクレオチド配列
ATGGTGTTGCAGACCCAGGTCTTCATTTCTCTGTTGCTCTGGATCTCTGGTGCCTACGGGGACATCGTGATGTCCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCTCCTGCAAGTCCAGCCAGAGTTTGTTATACAGCTCCAACCAGAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTTACCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
【０４５５】
配列番号４６  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＨＣ２０ポリヌクレオチド配列
ATGAACTTCGGGCTCAGATTGATTTTCCTTGTCCTTGTTTTAAAAGGTGTCCTGTGCGACGTGAAGCTCGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCTTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATTACATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCAGAGAAGAGGCTGGAGTTGGTCGCAGCCATTAATAGTAATGGTGGTAGCACCTACTATCCAGACACTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCTTGTATTACTGTGCAAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
【０４５６】
配列番号４７  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＨＣ１０ポリヌクレオチド配列
GACGTGAAGCTCGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCTTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATTACATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCAGAGAAGAGGCTGGAGTTGGTCGCAGCCATTAATAGTAATGGTGGTAGCACCTACTATCCAGACACTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCTTGTATTACTGTGCAAGACATGGGGGTAACTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
【０４５７】
配列番号４８  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＬＣ１１ポリヌクレオチド配列
ATGGATTCACAGGCCCAGGTTCTTATGTTACTGCTGCTATGGGTATCTGGTACCTGTGGGGACATTGTGATGTCACAGTCTCCATCCTCCCTAGCTGTGTCAGTTGGAGAGAAGGTTACTATGAGCTGCAAGTCCAGTCAGAGCCTTTTATATAGTAGCAATCAAAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATTTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGTGAAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGCTATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
【０４５８】
配列番号４９  抗ＤＣＬＫ１抗体マウスＬＣ５ポリヌクレオチド配列
GACATTGTGATGTCACAGTCTCCATCCTCCCTAGCTGTGTCAGTTGGAGAGAAGGTTACTATGAGCTGCAAGTCCAGTCAGAGCCTTTTATATAGTAGCAATCAAAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATTTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGTGAAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGCTATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
【０４５９】
配列番号５０  ＤＣＬＫ１アイソフォーム１
MSFGRDMELEHFDERDKAQRYSRGSRVNGLPSPTHSAHCSFYRTRTLQTLSSEKKAKKVRFYRNGDRYFKGIVYAISPDRFRSFEALLADLTRTLSDNVNLPQGVRTIYTIDGLKKISSLDQLVEGESYVCGSIEPFKKLEYTKNVNPNWSVNVKTTSASRAVSSLATAKGSPSEVRENKDFIRPKLVTIIRSGVKPRKAVRILLNKKTAHSFEQVLTDITDAIKLDSGVVKRLYTLDGKQVMCLQDFFGDDDIFIACGPEKFRYQDDFLLDESECRVVKSTSYTKIASSSRRSTTKSPGPSRRSKSPASTSSVNGTPGSQLSTPRSGKSPSPSPTSPGSLRKQRSSQHGGSSTSLASTKVCSSMDENDGPGEEVSEEGFQIPATITERYKVGRTIGDGNFAVVKECVERSTAREYALKIIKKSKCRGKEHMIQNEVSILRRVKHPNIVLLIEEMDVPTELYLVMELVKGGDLFDAITSTNKYTERDASGMLYNLASAIKYLHSLNIVHRDIKPENLLVYEHQDGSKSLKLGDFGLATIVDGPLYTVCGTPTYVAPEIIAETGYGLKVDIWAAGVITYILLCGFPPFRGSGDDQEVLFDQILMGQVDFPSPYWDNVSDSAKELITMMLLVDVDQRFSAVQVLEHPWVNDDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIALDHGFTIKRSGSLDYYQQPGMYWIRPPLLIRRGRFSDEDATRM
【０４６０】
配列番号５１  ＤＣＬＫ１アイソフォーム２
MSFGRDMELEHFDERDKAQRYSRGSRVNGLPSPTHSAHCSFYRTRTLQTLSSEKKAKKVRFYRNGDRYFKGIVYAISPDRFRSFEALLADLTRTLSDNVNLPQGVRTIYTIDGLKKISSLDQLVEGESYVCGSIEPFKKLEYTKNVNPNWSVNVKTTSASRAVSSLATAKGSPSEVRENKDFIRPKLVTIIRSGVKPRKAVRILLNKKTAHSFEQVLTDITDAIKLDSGVVKRLYTLDGKQVMCLQDFFGDDDIFIACGPEKFRYQDDFLLDESECRVVKSTSYTKIASSSRRSTTKSPGPSRRSKSPASTSSVNGTPGSQLSTPRSGKSPSPSPTSPGSLRKQRSSQHGGSSTSLASTKVCSSMDENDGPGEEVSEEGFQIPATITERYKVGRTIGDGNFAVVKECVERSTAREYALKIIKKSKCRGKEHMIQNEVSILRRVKHPNIVLLIEEMDVPTELYLVMELVKGGDLFDAITSTNKYTERDASGMLYNLASAIKYLHSLNIVHRDIKPENLLVYEHQDGSKSLKLGDFGLATIVDGPLYTVCGTPTYVAPEIIAETGYGLKVDIWAAGVITYILLCGFPPFRGSGDDQEVLFDQILMGQVDFPSPYWDNVSDSAKELITMMLLVDVDQRFSAVQVLEHPWVNDDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIATTALDKERQVFRRRRNQDVRSRYKAQPAPPELNSESEDYSPSSSETVRSPNSPF
【０４６１】
配列番号５２  ＤＣＬＫ１アイソフォーム３
MLELIEVNGTPGSQLSTPRSGKSPSPSPTSPGSLRKQRSSQHGGSSTSLASTKVCSSMDENDGPGEEVSEEGFQIPATITERYKVGRTIGDGNFAVVKECVERSTAREYALKIIKKSKCRGKEHMIQNEVSILRRVKHPNIVLLIEEMDVPTELYLVMELVKGGDLFDAITSTNKYTERDASGMLYNLASAIKYLHSLNIVHRDIKPENLLVYEHQDGSKSLKLGDFGLATIVDGPLYTVCGTPTYVAPEIIAETGYGLKVDIWAAGVITYILLCGFPPFRGSGDDQEVLFDQILMGQVDFPSPYWDNVSDSAKELITMMLLVDVDQRFSAVQVLEHPWVNDDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIALDHGFTIKRSGSLDYYQQPGMYWIRPPLLIRRGRFSDEDATRM
【０４６２】
配列番号５３  ＤＣＬＫ１アイソフォーム４
MLELIEVNGTPGSQLSTPRSGKSPSPSPTSPGSLRKQRSSQHGGSSTSLASTKVCSSMDENDGPGEEVSEEGFQIPATITERYKVGRTIGDGNFAVVKECVERSTAREYALKIIKKSKCRGKEHMIQNEVSILRRVKHPNIVLLIEEMDVPTELYLVMELVKGGDLFDAITSTNKYTERDASGMLYNLASAIKYLHSLNIVHRDIKPENLLVYEHQDGSKSLKLGDFGLATIVDGPLYTVCGTPTYVAPEIIAETGYGLKVDIWAAGVITYILLCGFPPFRGSGDDQEVLFDQILMGQVDFPSPYWDNVSDSAKELITMMLLVDVDQRFSAVQVLEHPWVNDDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIATTALDKERQVFRRRRNQDVRSRYKAQPAPPELNSESEDYSPSSSETVRSPNSPF
【０４６３】
配列番号５４  アイソフォーム１のＤＣＬＫ１アミノ酸６４８〜７２９
DDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIALDHGFTIKRSGSLDYYQQPGMYWIRPPLLIRRGRFSDEDATRM
【０４６４】
配列番号５５  アイソフォーム１のＤＣＬＫ１アミノ酸７００〜７２９
DYYQQPGMYWIRPPLLIRRGRFSDEDATRM
【０４６５】
配列番号５６  アイソフォーム１のＤＣＬＫ１アミノ酸６８０〜７０９
AGVSVIALDHGFTIKRSGSLDYYQQPGMYW
【０４６６】
配列番号５７  アイソフォーム２のＤＣＬＫ１アミノ酸６４８〜７４０
DDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIATTALDKERQVFRRRRNQDVRSRYKAQPAPPELNSESEDYSPSSSETVRSPNSPF
【０４６７】
配列番号５８  アイソフォーム３のＤＣＬＫ１アミノ酸３４１〜４２２
DDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIALDHGFTIKRSGSLDYYQQPGMYWIRPPLLIRRGRFSDEDATRM
【０４６８】
配列番号５９  アイソフォーム４のＤＣＬＫ１アミノ酸３４１〜４３３
DDGLPENEHQLSVAGKIKKHFNTGPKPNSTAAGVSVIATTALDKERQVFRRRRNQDVRSRYKAQPAPPELN
【０４６９】
配列番号６０  ヒトＩｇＤ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８８０
APTKAPDVFPIISGCRHPKDNSPVVLACLITGYHPTSVTVTWYMGTQSQPQRTFPEIQRRDSYYMTSSQLSTPLQQWRQGEYKCVVQHTASKSKKEIFRWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDHGPMK
【０４７０】
配列番号６１  ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５７
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０４７１】
配列番号６２  ヒトＩｇＧ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５９
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０４７２】
配列番号６３  ヒトＩｇＧ３定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６０
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVNHKPSNTKVDKRVELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
【０４７３】
配列番号６４  ヒトＩｇＭ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７１
GSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITLSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLICQATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLGQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVPDQDTAIRVFAIPPSFASIFLTKSTKLTCLVTDLTTYDSVTISWTRQNGEAVKTHTNISESHPNATFSAVGEASICEDDWNSGERFTCTVTHTDLPSPLKQTISRPKGVALHRPDVYLLPPAREQLNLRESATITCLVTGFSPADVFVQWMQRGQPLSPEKYVTSAPMPEPQAPGRYFAHSILTVSEEEWNTGETYTCVAHEALPNRVTERTVDKSTGKPTLYNVSLVMSDTAGTCY
【０４７４】
配列番号６５  ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６１
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
【０４７５】
配列番号６６  ヒトＩｇＡ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７６
ASPTSPKVFPLSLCSTQPDGNVVIACLVQGFFPQEPLSVTWSESGQGVTARNFPPSQDASGDLYTTSSQLTLPATQCLAGKSVTCHVKHYTNPSQDVTVPCPVPSTPPTPSPSTPPTPSPSCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGVTFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAEPWNHGKTFTCTAAYPESKTPLTATLSKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY
【０４７６】
配列番号６７  ヒトＩｇＡ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７７
ASPTSPKVFPLSLDSTPQDGNVVVACLVQGFFPQEPLSVTWSESGQNVTARNFPPSQDASGDLYTTSSQLTLPATQCPDGKSVTCHVKHYTNPSQDVTVPCPVPPPPPCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGATFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAQPWNHGETFTCTAAHPELKTPLTANITKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRMAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY
【０４７７】
配列番号６８  ヒトＩｇ  ｋａｐｐａ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８３４
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０４７８】
均等物
別段の定義がなければ、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
【０４７９】
本明細書中に例示的に記載されている本技術は、本明細書に具体的に開示されていない、いずれかの１または複数の要素、１または複数の限定の不存在下で適切に実施され得る。したがって、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などの用語は、拡張的に、限定なしに読まれるべきである。さらに、本明細書で用いられる用語および表現は、限定の用語でなく、記述の用語として使用されており、このような用語および表現の使用において、示されたおよび記載された特徴またはその一部のいずれの均等物をも除外する意図は存在せず、特許請求の範囲に記載された本技術の範囲内で様々な修飾が可能であることが認められる。
【０４８０】
したがって、ここに提供されている材料、方法および実施例は、好ましい態様を代表し、例示的であり、本技術の範囲に対する限定として意図されていないことが理解されるべきである。
【０４８１】
本技術は、本明細書において、広く、包括的に記載されている。一般的な開示の中に属するより狭い種および包括より下位の群の各々も本技術の一部を形成する。これには、削除された材料が本明細書中に具体的に挙げられているかどうかを問わず、属からなんらかの主題を除去する但し書きまたは負の限定による本技術の包括的記載が含まれる。
【０４８２】
さらに、本技術の特徴または態様がマーカッシュ群の用語で記載されている場合、当業者は、本技術が、これにより、マーカッシュ群の任意の各構成要素または構成要素の亜群に関しても記載されていることを認識するであろう。
【０４８３】
本明細書中に挙げられている全ての刊行物、特許出願、特許およびその他の参考文献は、それぞれが個別に参照により組み込まれているのと同じ程度まで、それらの全体が参照により明示的に組み込まれる。抵触する場合、定義を含む本明細書が優先される。
【０４８４】
他の態様は、以下の特許請求の範囲内に記載されている。
【図１】
2021505663.tif 000017
【図２】
2021505663.tif 000018
【図３】
2021505663.tif 000019
【図４】
2021505663.tif 000020
【図５】
2021505663.tif 000021
【図６】
2021505663.tif 000022
【図７】
2021505663.tif 000023
【図８】
2021505663.tif 000024
【図９】
2021505663.tif 000025
【図１０】
2021505663.tif 000026
【図１１】
2021505663.tif 000027
【図１２】
2021505663.tif 000028
【図１３】
2021505663.tif 000029
【図１４】
2021505663.tif 000030
【図１５】
2021505663.tif 000031
【配列表】
2021505663000001.app
【国際調査報告】
2021505663.tif 000032
2021505663.tif 000033
2021505663.tif 000034
2021505663.tif 000035