(57)【要約】（ｉ）標的特異的リガンド、（ｉｉ）ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンド、および（ｉｉｉ）Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドを含む三官能分子が提供される。最適化された表面発現、形質導入効率、およびエフェクター機能を示す変異体を含む上記分子の変異体が提供される。変異は、例えば、ＣＤ３εに結合する様々なリガンド（例えば、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、Ｆ６Ａ、ＵＣＨＴ１、およびヒト化ＵＣＨＴ１）、様々なシグナル伝達ドメイン、ならびにドメイン間の様々なリンカーを含む。【選択図】図１Ａ
2021530971.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードする核酸配列であって、
前記核酸配列は：
（ａ）ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；
（ｂ）ＣＤ３に結合するＵＣＨＴ１リガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、
（ｃ）細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含むＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを含み、
ここで、（ａ）によってコードされる成分、（ｂ）によってコードされる成分、および（ｃ）によってコードされる成分は、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される、核酸配列。
【請求項２】
ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項３】
ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１−２のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４】
ＵＣＨＴ１リガンドは単鎖抗体である、請求項１−３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５】
ＵＣＨＴ１リガンドはＹ１８２Ｔ突然変異を含む、請求項１−４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６】
ＵＣＨＴ１リガンドはＵＣＨＴ１のヒト化変異体である（ｈｕＵＣＨＴ１）、請求項１−４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７】
ＵＣＨＴ１リガンドは、Ｙ１７７Ｔ突然変異を含むＵＣＨＴ１のヒト化変異体（ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ））である、請求項１−４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項８】
ＵＣＨＴ１リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１−７のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項９】
細胞質ドメインはＣＤ４細胞質ドメインであり、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインである、請求項１−８のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１０】
第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１−９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１１】
（ａ）によってコードされた成分と（ｃ）によってコードされた成分は、（ｂ）によってコードされた成分に融合される、請求項１−１０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１２】
（ｂ）によってコードされた成分と（ｃ）によってコードされた成分は、（ａ）によってコードされた成分に融合される、請求項１−１０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１３】
少なくとも１つのリンカーは、（ａ）によってコードされた成分を（ｂ）によってコードされた成分に連結する、請求項１−１０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１４】
少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である、請求項１−１０または１３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１５】
少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１−１０または１３−１４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１６】
ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体のものである、請求項１−１５のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１７】
ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす、請求項１−１６のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１８】
ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１−１７のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１９】
ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１−１７のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項２０】
核酸配列は共刺激ドメインをコードしない、請求項１−１９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項２１】
核酸配列は活性化ドメインをコードしない、請求項１−２０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項２２】
ａ）請求項１−２１のいずれか１つの核酸配列；および、（ｂ）哺乳動物細胞で機能的なプロモーターを含む、ベクター構築物。
【請求項２３】
請求項１−２１のいずれか１つの核酸配列を含むＴ細胞。
【請求項２４】
請求項２３のＴ細胞、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２５】
個体におけるＣＤ１９を発現する癌を処置する方法であって、請求項２４の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項２６】
癌はＢ細胞悪性腫瘍である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
癌は、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、または非ホジキンリンパ腫である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
医薬組成物は経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内に、または腹腔内に投与される、請求項２５−２７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２９】
三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）をコードする核酸配列であって、
前記核酸配列は：
（ａ）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチドと；
（ｂ）ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチドと；
（ｃ）Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドとを含み、
ここで、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＯＫＴ３、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋから選択される、核酸配列。
【請求項３０】
（ａ）によってコードされる成分、（ｂ）によってコードされる成分、および（ｃ）によってコードされる成分は、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される、請求項２９に記載の核酸配列。
【請求項３１】
（ａ）によってコードされる成分と（ｂ）によってコードされる成分は、（ｃ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される、請求項２９−３０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３２】
（ｂ）によってコードされる成分と（ｃ）によってコードされる成分は、（ａ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される、請求項２９−３０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３３】
少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である、請求項３０−３２のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３４】
少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項３０−３３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３５】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＯＫＴ３である、請求項２９−３４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３６】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９−３５のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３７】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＦ６Ａである、請求項２９−３４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３８】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９−３４または３７のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項３９】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＬ２Ｋである、請求項２９−３４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４０】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９−３４または３９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４１】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３である、請求項２９−４０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４２】
標的特異的リガンドは腫瘍抗原に選択的に結合する、請求項２９−４１のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４３】
標的特異的リガンドは設計されたアンキリンリピート（ＤＡＲＰｉｎ）ポリペプチド、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項２９−４２のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４４】
標的特異的リガンドはＣＤ１９抗原、ＨＥＲ２抗原、またはＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する、請求項２９−４３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４５】
ＨＥＲ−２抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アド−トラスツズマブエムタンシン、ガンコタマブ、マルゲツキシマブ、チミグツズマブ、およびエルツマキソマブから選択された抗体の抗原結合ドメインを含む、請求項２９−４４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４６】
ＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、ベランタマブ・マフォドチンから選択された抗体の抗原結合ドメイン、およびＧＳＫ２８５７９１６を含む、請求項２９−４４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４７】
ＵＣＨＴ１リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９−４４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４８】
Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含む、請求項２９−４７のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項４９】
細胞質ドメインはＣＤ４細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインであり、あるいは、細胞質ドメインはＣＤ８細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインである、請求項４８に記載の核酸配列。
【請求項５０】
リーダー配列をさらに含む、請求項２９−４９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５１】
リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の核酸配列。
【請求項５２】
ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体のものである、請求項２９−５１のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５３】
ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす、請求項２９−５２のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５４】
Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２９−５３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５５】
Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９−５３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５６】
核酸配列は共刺激ドメインをコードしない、請求項２９−５５のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５７】
核酸配列は活性化ドメインをコードしない、請求項２９−５６のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項５８】
三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）をコードする核酸配列であって、
前記核酸配列は：
（ａ）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチドと；
（ｂ）ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチドと；
（ｃ）Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドとを含み、
ここで、核酸配列はリーダー配列をさらに含み、ならびに、（ａ）によってコードされる成分、（ｂ）によってコードされる成分、および（ｃ）によってコードされる成分は、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される、
核酸配列。
【請求項５９】
標的特異的リガンドは腫瘍抗原に選択的に結合する、請求項５８に記載の核酸配列。
【請求項６０】
標的特異的リガンドは設計されたアンキリンリピート（ＤＡＲＰｉｎ）ポリペプチド、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項５８−５９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６１】
標的特異的リガンドはＣＤ１９抗原、ＨＥＲ２抗原、またはＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する、請求項５８−６０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６２】
ＨＥＲ−２抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アド−トラスツズマブエムタンシン、ガンコタマブ、マルゲツキシマブ、チミグツズマブ、およびエルツマキソマブから選択された抗体の抗原結合ドメインを含む、請求項５８−６１のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６３】
ＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、ベランタマブ・マフォドチンから選択された抗体の抗原結合ドメイン、およびＧＳＫ２８５７９１６を含む、請求項５８−６１のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６４】
標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５８−６１のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６５】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、ｈｕＵＣＨＴ１、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、ＯＫＴ３、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋから選択される、請求項５８−６４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６６】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項５８−６５のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６７】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３である、請求項５８−６６のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６８】
Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含む、請求項５８−６７のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項６９】
細胞質ドメインはＣＤ４細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインであり、あるいは、細胞質ドメインはＣＤ８細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインである、請求項６８に記載の核酸配列。
【請求項７０】
リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５８−６９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７１】
（ａ）によってコードされる成分と（ｂ）によってコードされる成分は、（ｃ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される、請求項５８−７０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７２】
（ｂ）によってコードされる成分と（ｃ）によってコードされる成分は、（ａ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される、請求項５８−７０のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７３】
少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である、請求項５８−７２のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７４】
少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項５８−７３のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７５】
ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３であり、ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体のものである、請求項５８−７４のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７６】
ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす、請求項７５に記載の核酸配列。
【請求項７７】
Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項５８−７６のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７８】
Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５８−７６のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項７９】
核酸配列は共刺激ドメインをコードしない、請求項５８−７８のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項８０】
核酸配列は活性化ドメインをコードしない、請求項５８−７９のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項８１】
請求項１−２１または２９−８０のいずれか１つの核酸配列によってコードされたポリペプチド。
【請求項８２】
ａ）請求項２９−８０のいずれか１つの核酸配列；および、
（ｂ）哺乳動物細胞で機能的なプロモーターを含む、ベクター構築物。
【請求項８３】
請求項２９−８０のいずれか１つの核酸配列を含むＴ細胞。
【請求項８４】
請求項８３のＴ細胞、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項８５】
個体における癌を処置する方法であって、請求項８４の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項８６】
個体が哺乳動物である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
癌が固形癌または液性癌である、請求項８５−８６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８８】
癌は、肺癌、乳癌、多発性骨髄腫、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、尿路上皮癌、子宮内膜癌、または大腸癌である、請求項８５−８７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８９】
癌がＣＤ１９発現癌細胞を含む、請求項８５−８６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９０】
癌がＢ細胞悪性腫瘍である、請求項８５−８６または８９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９１】
癌は、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、または非ホジキンリンパ腫である、請求項８５−８６または８９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９２】
癌はＨＥＲ−２発現癌細胞を含む、請求項８５−８６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９３】
癌は、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、卵巣癌、または胃癌である、請求項８５−８６または９２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９４】
癌はＢＣＭＡ発現癌細胞を含む、請求項８５−８６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９５】
癌は、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である、請求項８５−８６または９４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９６】
医薬組成物は経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内に、または腹腔内に個体に対して投与される、請求項８５−９５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９７】
医薬組成物は単位投与量形態である、請求項８５−９５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９８】
医薬組成物は約０．５−２×１０９Ｔ細胞を含む、請求項８５−９７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９９】
医薬組成物は毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年投与される、請求項８５−９８のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１００】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、ＨＥＲ２三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＨＥＲ２−ＴＡＣ）をコードする核酸配列。
【請求項１０１】
ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００に記載の核酸配列。
【請求項１０２】
核酸配列は共刺激ドメインをコードしない、請求項１００−１０１のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１０３】
核酸配列は活性化ドメインをコードしない、請求項１００−１０２のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１０４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、ＢＣＭＡ三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＢＣＭＡ−ＴＡＣ）をコードする核酸配列。
【請求項１０５】
ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０４に記載の核酸配列。
【請求項１０６】
核酸配列は共刺激ドメインをコードしない、請求項１０４−１０５のいずれか１つに記載の核酸配列。
【請求項１０７】
核酸配列は活性化ドメインをコードしない、請求項１０４−１０６のいずれか１つに記載の核酸配列。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１８年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／６９９，１７３号、２０１８年７月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／７０３，０３７号、２０１８年１１月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／７７３，１２０号、２０１９年３月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／８２６，８５３号、２０１９年４月３日に出願された米国仮特許出願第６２／８２８，８７９号、２０１９年４月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／８３９，２３５号、２０１９年６月１４日に出願された米国仮特許出願第１６／４４２，２７４号、および２０１９年７月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／８７４，４２６号の利益を主張するものであり、これらはそれぞれ全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０１９年７月１７日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、５５２４７７０４６０１＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、１３１，０７２バイトの大きさである。
【発明の概要】
【０００３】
特定の実施形態において、ＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードする核酸配列が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードする核酸配列は、（ａ）ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードする核酸配列は、（ｂ）ＣＤ３に結合するＵＣＨＴ１リガンドをコードする第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードする核酸配列は、（ｃ）細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含むＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第１、第２、および／または第３のポリヌクレオチドによってコードされた成分は、任意の適切な順序などの、および／または任意の適切なリンカーを含む、任意の適切な手法で接続される。いくつかの実施形態では、（ａ）によってコードされる成分、（ｂ）によってコードされる成分、および（ｃ）によってコードされる成分は、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは単鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＹ１８２Ｔ突然変異（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）を含む。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは、ＵＣＨＴ１リガンド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）のヒト化変異体（ｈｕＵＣＨＴ１）である。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは、Ｙ１７７Ｔ突然変異を含むＵＣＨＴ１のヒト化変異体（ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ））（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）である。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞質ドメインはＣＤ４細胞質ドメインであり、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、（ａ）によってコードされた成分と（ｃ）によってコードされた成分は、（ｂ）によってコードされた成分に融合される。いくつかの実施形態では、（ｂ）によってコードされた成分と（ｃ）によってコードされた成分は、（ａ）によってコードされた成分に融合される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、（ａ）によってコードされた成分を（ｂ）によってコードされた成分に連結する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２（Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３として開示された「Ｇ４Ｓ」））、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２（大きなタンパク質ドメイン）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０（長いヘリックス構造）、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８（短いヘリックス構造）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体のものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸配列は共刺激ドメインをコードしない。いくつかの実施形態では、核酸配列は活性化ドメインをコードしない。
【０００４】
本明細書には、特定の実施形態において、ベクター構築物が開示され、上記ベクター構築物は、（ａ）本明細書で開示される核酸配列（例えば、ＣＤ１９−ＴＡＣをコードする核酸配列）；および、（ｂ）哺乳動物細胞で機能的なプロモーターを含む。
【０００５】
特定の実施形態では、本明細書で開示される核酸配列（例えば、ＣＤ１９−ＴＡＣをコードする核酸配列）を含むＴ細胞が本明細書で開示される。
【０００６】
特定の実施形態では、本明細書で開示されるＴ細胞、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が本明細書で開示される。
【０００７】
特定の実施形態では、本明細書で開示された医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体においてＣＤ１９を発現する癌を処置する方法が本明細書で開示される。（例えば、任意の核酸配列、またはＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードするような本明細書に記載される配列などの、本明細書に記載される任意の核酸配列を含むＴ細胞を含む医薬組成物）。いくつかの実施形態において、癌はＢ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、または非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に（ｉｎｔｒａｍｅｄｕｌｉａｒｙ）、筋肉内に、静脈内に、または腹腔内に投与される。
【０００８】
特定の実施形態において、三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＴｒｉーＴＡＣ）をコードする核酸配列が本明細書で開示され、上記核酸配列は、（ａ）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチドと；（ｂ）ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチドと；（ｃ）Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドとを含み、ここで、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＯＫＴ３、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋから選択される。いくつかの実施形態では、（ａ）によってコードされる成分、（ｂ）によってコードされる成分、および（ｃ）によってコードされる成分は、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される。いくつかの実施形態では、（ａ）によってコードされる成分と（ｂ）によってコードされる成分は、（ｃ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、（ｂ）によってコードされる成分と（ｃ）によってコードされる成分は、（ａ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２（Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３として開示された「Ｇ４Ｓ」））、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２（大きなタンパク質ドメイン）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０（長いヘリックス構造）、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８（短いヘリックス構造）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＯＫＴ３である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＦ６Ａである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＬ２Ｋである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは腫瘍抗原に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは設計されたアンキリンリピート（ｄｅｓｉｇｎｅｄ    ａｎｋｙｒｉｎ    ｒｅｐｅａｔ）（ＤＡＲＰｉｎ）（ダルピン）ポリペプチド、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＣＤ１９抗原、ＨＥＲ２抗原、またはＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ−２抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アド−トラスツズマブエムタンシン（Ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｍａｂ  Ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ガンコタマブ（Ｇａｎｃｏｔａｍａｂ）、マルゲツキシマブ（Ｍａｒｇｅｔｕｘｉｍａｂ）、チミグツズマブ（Ｔｉｍｉｇｕｔｕｚｕｍａｂ）、およびエルツマキソマブから選択された抗体の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、ベランタマブ・マフォドチン（Ｂｅｌａｎｔａｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）から選択された抗体の抗原結合ドメイン、およびＧＳＫ２８５７９１６を含む。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、細胞質ドメインはＣＤ４細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインであり、あるいは、細胞質ドメインはＣＤ８細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、核酸配列はリーダー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体のものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と少なく���も８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸配列は共刺激ドメインをコードしない。いくつかの実施形態では、核酸配列は活性化ドメインをコードしない。
【０００９】
特定の実施形態において、三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＴｒｉーＴＡＣ）をコードする核酸配列が本明細書で開示され、上記核酸配列は、（ａ）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチドと；（ｂ）ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチドと；（ｃ）Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドとを含み、ここで、核酸配列はリーダー配列をさらに含み、および、（ａ）によってコードされる成分、（ｂ）によってコードされる成分、および（ｃ）によってコードされる成分は、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは腫瘍抗原に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは設計されたアンキリンリピート（ｄｅｓｉｇｎｅｄ    ａｎｋｙｒｉｎ    ｒｅｐｅａｔ）（ＤＡＲＰｉｎ）（ダルピン）ポリペプチド、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＣＤ１９抗原、ＨＥＲ２抗原、またはＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ−２抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アド−トラスツズマブエムタンシン（Ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｍａｂ  Ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ガンコタマブ（Ｇａｎｃｏｔａｍａｂ）、マルゲツキシマブ（Ｍａｒｇｅｔｕｘｉｍａｂ）、チミグツズマブ（Ｔｉｍｉｇｕｔｕｚｕｍａｂ）、およびエルツマキソマブから選択された抗体の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗原に選択的に結合する標的特異的リガンドは、ベランタマブ・マフォドチン（Ｂｅｌａｎｔａｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）から選択された抗体の抗原結合ドメイン、およびＧＳＫ２８５７９１６を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、ｈｕＵＣＨＴ１、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、ＯＫＴ３、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋから選択される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、細胞質ドメインはＣＤ４細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインであり、あるいは、細胞質ドメインはＣＤ８細胞質ドメインであり、かつ、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）によってコードされる成分と（ｂ）によってコードされる成分は、（ｃ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、（ｂ）によってコードされる成分と（ｃ）によってコードされる成分は、（ａ）によってコードされる成分に直接融合するか、またはリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２（Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３として開示された「Ｇ４Ｓ」））、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２（大きなタンパク質ドメイン）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０（長いヘリックス構造）、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８（短いヘリックス構造）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体のものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同��性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸配列は共刺激ドメインをコードしない。いくつかの実施形態では、核酸配列は活性化ドメインをコードしない。
【００１０】
特定の実施形態では、本明細書で開示される核酸配列によってコードされるポリペプチドが本明細書で開示される。
【００１１】
特定の実施形態では、ベクター構築物が本明細書で開示され、上記ベクター構築物は、（ａ）本明細書で開示される核酸配列；および、（ｂ）哺乳動物細胞で機能的なプロモーターを含む。
【００１２】
特定の実施形態では、本明細書で開示される核酸配列を含むＴ細胞が本明細書で開示される。
【００１３】
特定の実施形態では、本明細書で開示されるＴ細胞、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が本明細書で開示される。
【００１４】
特定の実施形態では、本明細書で開示される医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体における癌を処置する方法が本明細書で開示される。いくつかの実施形態において、被験体は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、癌は固形癌または液性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、乳癌、多発性骨髄腫、膠芽腫、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸癌、尿路上皮癌、子宮内膜癌、または大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ１９発現癌細胞を含む。いくつかの実施形態において、癌はＢ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、または非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、癌はＨＥＲ−２発現癌細胞を含む。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、卵巣癌、または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）である。いくつかの実施形態では、癌はＢＣＭＡ発現癌細胞を含む。いくつかの実施形態では、癌は、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に（ｉｎｔｒａｍｅｄｕｌｉａｒｙ）、筋肉内に、静脈内に、または腹腔内に個体に対して投与される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は単位投与量形態である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は約０．５−２×１０９Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年投与される。
【００１５】
特定の実施形態では、ＣＤ１９三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＣＤ１９−ＴＡＣ）をコードする核酸配列が本明細書で開示され、上記核酸配列は、（ａ）ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（ｂ）ＣＤ３に結合するＹ１７７Ｔ突然変異を含むＵＣＨＴ１リガンドのヒト化変異体（ｈｕＵＣＨＴ１）（ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ））をコードする第２のポリヌクレオチド；および、（ｃ）ＣＤ４細胞質ドメインとＣＤ４膜貫通ドメインを含むポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを含み、ここで、（ａ）によってコードされるリガンド、（ｂ）によってコードされるリガンド、および（ｃ）によってコードされるポリペプチドは、互いに直接融合するか、または少なくとも１つのリンカーによって連結される。いくつかの実施形態では、核酸配列は、共刺激ドメイン、活性化ドメイン、または共刺激ドメインと活性化ドメインの両方をコードしない。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９抗原に選択的に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドは単鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、Ｇ４Ｓフレキシブルリンカー、大きなタンパク質ドメイン、長いヘリックス構造、または短いヘリックス構造である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上で発現される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４の配列を含む。特定の実施形態では、ベクター構築物が本明細書で開示され、上記ベクター構築物は、（ａ）本明細書で開示される核酸配列；および、（ｂ）哺乳動物細胞で機能的なプロモーターを含む。特定の実施形態では、本明細書で開示されるベクター構築物と賦形剤とを含む組成物が本明細書で開示される。特定の実施形態では、本明細書で開示される核酸配列によってコードされるポリペプチドが本明細書で開示される。
【００１６】
特定の実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、ＨＥＲ２三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＨＥＲ２−ＴＡＣ）をコードする核酸配列が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸配列は共刺激ドメインをコードしない。いくつかの実施形態では、核酸配列は活性化ドメインをコードしない。
【００１７】
特定の実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、ＢＣＭＡ三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＢＣＭＡ−ＴＡＣ）をコードする核酸配列が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸配列は共刺激ドメインをコードしない。いくつかの実施形態では、核酸配列は活性化ドメインをコードしない。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本発明の新規な特徴は、とりわけ添付の特許請求の範囲で説明される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が用いられる例示的実施形態を例示する以下の詳細な説明と、以下の添付図面とを引用することによって得られるであろう。
【図１Ａ】天然のＴ細胞活性化の概略図である。
【図１Ｂ】ＣＡＲベースのＴ細胞活性化の概略図である。
【図１Ｃ】三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）ベースのＴ細胞活性化の概略図である。
【図１Ｄ】天然のＴ細胞活性化の概略図である。
【図１Ｅ】ＣＡＲベースのＴ細胞活性化の概略図である。
【図１Ｆ】Ｔｒｉ−ＴＡＣベースのＴ細胞活性化の概略図である。
【図２Ａ】ＵＣＨＴ１ドメインが膜貫通ドメイン（ＴＭ）と抗原結合ドメインとの間に中心がある、Ｔｒｉ−ＴＡＣ構成の概略図である。
【図２Ｂ】ＵＣＨＴ１ドメインがＮ末端であり、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインが続く、Ｔｒｉ−ＴＡＣ配置の概略図である。
【図２Ｃ】一般的な抗原結合ドメインとＵＣＨＴ１ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣ分子の概略図である。
【図３Ａ】一般的な抗原結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣ分子の概略図である。
【図３Ｂ】抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ抗原結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【図３Ｃ】抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ抗原結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【図３Ｄ】抗ＢＣＭＡｓｃＦｖ抗原結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【図３Ｅ】抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ抗原結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣ分子の概略図である。
【図３Ｆ】抗ＢＣＭＡｓｃＦｖ抗原結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣ分子の概略図である。
【図４Ａ】ＤＡＲＰｉｎを使用して、ＨＥＲ−２に対して方向付けられたＴｒｉ−ＴＡＣまたはＣＤ２８ベースのＣＡＲで操作されたＴ細胞を例証する。図４Ａは、キメラ受容体を発現しないＴ細胞と比較して、Ｔｒｉ−ＴＡＣとＣＡＲの表面発現を例証する。
【図４Ｂ】ＤＡＲＰｉｎを使用して、ＨＥＲ−２に対して方向付けられたＴｒｉ−ＴＡＣまたはＣＤ２８ベースのＣＡＲで操作されたＴ細胞を例証する。図４Ｂは、３つの細胞集団の成長を例証する。
【図４Ｃ】ＤＡＲＰｉｎを使用して、ＨＥＲ−２に対して方向付けられたＴｒｉ−ＴＡＣまたはＣＤ２８ベースのＣＡＲで操作されたＴ細胞を例証する。図４Ｃ−図４Ｄは、抗原を用いる刺激後に様々なＴ細胞活性化マーカーに陽性の操作された細胞の割合を例証する。
【図４Ｄ】ＤＡＲＰｉｎを使用して、ＨＥＲ−２に対して方向付けられたＴｒｉ−ＴＡＣまたはＣＤ２８ベースのＣＡＲで操作されたＴ細胞を例証する。図４Ｃ−図４Ｄは、抗原を用いる刺激後に様々なＴ細胞活性化マーカーに陽性の操作された細胞の割合を例証する。
【図５】ＣＤ１９−ＴＡＣタンパク質構造の型を例示する。
【図６Ａ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ａ、図６Ｄ、図６Ｇは、Ｔ細胞形質導入とＨｅｒ２結合能力を例証する（左）。
【図６Ｂ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｂ、図６Ｅ、図６Ｈは脱顆粒を例証する（中央）。
【図６Ｃ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｃ、図６Ｆ、図６Ｉはサイトカイン産生を例証する（右）。
【図６Ｄ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ａ、図６Ｄ、図６Ｇは、Ｔ細胞形質導入とＨｅｒ２結合能力を例証する（左）。
【図６Ｅ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｂ、図６Ｅ、図６Ｈは脱顆粒を例証する（中央）。
【図６Ｆ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｃ、図６Ｆ、図６Ｉはサイトカイン産生を例証する（右）。
【図６Ｇ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ａ、図６Ｄ、図６Ｇは、Ｔ細胞形質導入とＨｅｒ２結合能力を例証する（左）。
【図６Ｈ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｂ、図６Ｅ、図６Ｈは脱顆粒を例証する（中央）。
【図６Ｉ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｃ、図６Ｆ、図６Ｉはサイトカイン産生を例証する（右）。
【図６Ｊ】様々な抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ対照の受容体表面の発現と活性化を例証する。Ｔ細胞は、標的化要素を欠く（−ＤＡＲＰｉｎ）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、ＵＣＨＴ１を欠く（−ＵＣＨＴ１）Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体、または完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作された。図６Ｊは、完全長の抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣだけが細胞毒性反応を誘発することができることを例証する。
【図７Ａ】抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣまたは抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＤ２８ベースのＣＡＲのいずれかで操作されたＴ細胞の抗腫瘍活性、毒性、およびサイトカイン産生を例証する。確立されたＯＶＣＡＲ−３腫瘍を抱えるマウスは、抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣまたは抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＡＲで操作されたＴ細胞で処置された。図７Ａは、Ｔ細胞注入の日（３５日目）に対して腫瘍成長の変化を例証する。
【図７Ｂ】抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣまたは抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＤ２８ベースのＣＡＲのいずれかで操作されたＴ細胞の抗腫瘍活性、毒性、およびサイトカイン産生を例証する。確立されたＯＶＣＡＲ−３腫瘍を抱えるマウスは、抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣまたは抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＡＲで操作されたＴ細胞で処置された。図７Ｂは、同じマウスにおける、体重（毒性の尺度）の変化を例証する。
【図７Ｃ】抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣまたは抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＤ２８ベースのＣＡＲのいずれかで操作されたＴ細胞の抗腫瘍活性、毒性、およびサイトカイン産生を例証する。確立されたＯＶＣＡＲ−３腫瘍を抱えるマウスは、抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣまたは抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＡＲで操作されたＴ細胞で処置された。図７Ｃは、Ｔ細胞注入７日後のマウスの血清中のサイトカイン濃度を例示する。
【図８Ａ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ａは、ＵＣＨＴ１またはＯＫＴ３抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのいずれかと対にした、抗ＨＥＲ−２  ＤＡＲＰｉｎを利用したＴＡＣ受容体構築物の略図を提供する。
【図８Ｂ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｂは、ＣＤ８＋ＮＧＦＲ＋（左）またはＣＤ４＋ＮＧＦＲ＋Ｔ細胞（右）のＨＥＲ−２  ＴＡＣ表面発現を例示する。
【図８Ｃ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｃ、図８Ｃ１は、抗原陽性のＳＫ−ＯＶ−３腫瘍細胞で刺激されたＨＥＲ−２特異的ＴＡＣ−Ｔ細胞によるサイトカイン産生を例示する。
【図８Ｃ１】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｃ、図８Ｃ１は、抗原陽性のＳＫ−ＯＶ−３腫瘍細胞で刺激されたＨＥＲ−２特異的ＴＡＣ−Ｔ細胞によるサイトカイン産生を例示する。
【図８Ｄ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｄは、ＨＥＲ−２ＴＡＣおよびベクター対照（ｔＮＧＦＲのみを抱えるベクター）Ｔ細胞によるＳＫ−ＯＶ−３腫瘍細胞の殺傷を例示する。ベクター対照Ｔ細胞（丸）は、ＵＣＨＴ１（四角）またはＯＫＴ３（三角形）を有するＨＥＲ−２特異的ＴＡＣ−Ｔ細胞と比較される。
【図８Ｅ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｅは、ｈｕＵＣＨＴ１、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのいずれかと対にした、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを利用したＴＡＣ受容体構築物の略図を提供する。
【図８Ｆ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｆは、ＣＤ８＋ＮＧＦＲ＋（左）またはＣＤ４＋ＮＧＦＲ＋Ｔ細胞（右）のＣＤ１９−ＴＡＣ表面発現を示す。
【図８Ｇ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｇ、図８Ｇ１は、抗原陽性Ｒａｊｉ腫瘍細胞で刺激されたＣＤ１９特異的ＴＡＣ−Ｔ細胞によるサイトカイン産生を例示する。サイトカイン産生細胞は、ｈｕＵＣＨＴ１（正方形）、Ｆ６Ａ（三角形）、またはＬ２Ｋ（ダイヤモンド）を有するＴＡＣ−Ｔ細胞から比較される。
【図８Ｇ１】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｇ、図８Ｇ１は、抗原陽性Ｒａｊｉ腫瘍細胞で刺激されたＣＤ１９特異的ＴＡＣ−Ｔ細胞によるサイトカイン産生を例示する。サイトカイン産生細胞は、ｈｕＵＣＨＴ１（正方形）、Ｆ６Ａ（三角形）、またはＬ２Ｋ（ダイヤモンド）を有するＴＡＣ−Ｔ細胞から比較される。
【図８Ｈ】ＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ−ＣＤ３動員ドメインの様々な代替物を用いて設計されたＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。図８Ｈは、ＣＤ１９  ＴＡＣとベクター対照（ｔＮＧＦＲのみを有するベクター）Ｔ細胞によるＮＡＬＭ−６腫瘍細胞の殺傷を例示する。ベクター対照Ｔ細胞（丸）は、ｈｕＵＣＨＴ１（四角）、Ｆ６Ａ（三角形）、またはＬ２Ｋ（ダイヤモンド）を有するＣＤ１９特異的ＴＡＣ−Ｔ細胞と比較される。
【図９Ａ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ａ、図９Ｅは、対照ベクター（ｔＮＧＦＲ）、ＵＣＨＴ１、またはＯＫＴ３  ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞のＴＣＲ表面発現を例示する。
【図９Ｂ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ｂ、図９Ｆは、ＯＫＴ３−ＴＡＣで操作されたＴ細胞がＵＣＨＴ１−ＴＡＣに対するＴＣＲ表面発現を著しく減少させたことを例示する。
【図９Ｃ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ｃ、図９Ｇは、対照ベクター（ｔＮＧＦＲ）、ｈｕＵＣＨＴ１、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋ  ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞のＴＣＲ表面発現を例示する。
【図９Ｄ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ｄ、図９Ｈは、Ｌ２Ｋ  ＴＡＣで操作されたＴ細胞がｈｕＵＣＨＴ１−ＴＡＣに対するＴＣＲ表面発現を著しく減少させたことをする。
【図９Ｅ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ａ、図９Ｅは、対照ベクター（ｔＮＧＦＲ）、ＵＣＨＴ１、またはＯＫＴ３  ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞のＴＣＲ表面発現を例示する。
【図９Ｆ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ｂ、図９Ｆは、ＯＫＴ３−ＴＡＣで操作されたＴ細胞がＵＣＨＴ１−ＴＡＣに対するＴＣＲ表面発現を著しく減少させたことを例示する。
【図９Ｇ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ｃ、図９Ｇは、対照ベクター（ｔＮＧＦＲ）、ｈｕＵＣＨＴ１、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋ  ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞のＴＣＲ表面発現を例示する。
【図９Ｈ】ＴＣＲ表面発現に対する様々な抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの効果を例示する。図９Ｄ、図９Ｈは、Ｌ２Ｋ  ＴＡＣで操作されたＴ細胞がｈｕＵＣＨＴ１−ＴＡＣに対するＴＣＲ表面発現を著しく減少させたことをする。
【図１０Ａ】コネクタドメイン変異体を例示する。抗原結合ドメインをＴＣＲ動員ドメインに接続するドメインは、コネクタドメインと名付けられる。図１０Ａは、様々なコネクタドメイン：（ｉ）フレキシブルコネクタ、（ｉｉ）（細胞外ＣＤ４ドメインに由来するドメイン３と４から構築された）大きなドメインコネクタ、（ｉｉｉ）長いヘリックスコネクタ、および（ｉｖ）短いヘリックスコネクタを有するＴＡＣ変異体の概略を提供する。
【図１０Ｂ】コネクタドメイン変異体を例示する。抗原結合ドメインをＴＣＲ動員ドメインに接続するドメインは、コネクタドメインと名付けられる。図１０Ｂは、図１０Ａで表されたドメインの例示的なアミノ酸配列を提供する。（それぞれ登場してくる順で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ６９、２８、３０、および３２）。
【図１１Ａ−１】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ａは、ＣＤ４およびＣＤ８細胞の両方のＴＡＣ変異体表面発現を例示する。
【図１１Ａ−２】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ａは、ＣＤ４およびＣＤ８細胞の両方のＴＡＣ変異体表面発現を例示する。
【図１１Ａ−３】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ａは、ＣＤ４およびＣＤ８細胞の両方のＴＡＣ変異体表面発現を例示する。
【図１１Ｂ】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ｂは、ヘリックスまたは大きなドメインコネクタを含む、ＴＡＣに対するフレキシブルコネクタを含むＴＡＣの表面発現を例示する。
【図１１Ｃ】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ｃは、フレキシブルコネクタに対して代替的なコネクタを含むＴＡＣの全体的な形質導入を例示する。
【図１１Ｄ】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ｄ、図１１Ｅは、抗原陽性Ｒａｊｉ細胞に対する相対的な細胞反応性を例示する。
【図１１Ｅ】様々なコネクタ変異体で操作されたＣＤ１９  ＴＡＣの例示的なインビトロのパラメータを例証する。図１１Ｄ、図１１Ｅは、抗原陽性Ｒａｊｉ細胞に対する相対的な細胞反応性を例示する。
【図１２Ａ】様々なコネクタで操作されたＢＣＭＡＴｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの細胞毒性を例示する。
【図１２Ｂ】短いヘリックスコネクタと比較して、フレキシブルコネクタで操作されたＢＣＭＡＴｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビボの腫瘍制御を例示する。
【図１３Ａ】ＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣ  ｓｃＦｖ抗  ＨＥＲ−２とＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣ  ＤＡＲＰｉｎ抗−ＨＥＲ−２の特性を例示する。図１３Ａ、図１３Ｃは表面発現を例示する。
【図１３Ｂ】ＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣ  ｓｃＦｖ抗  ＨＥＲ−２とＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣ  ＤＡＲＰｉｎ抗−ＨＥＲ−２の特性を例示する。図１３Ｂはサイトカイン産生を例示する。
【図１３Ｃ】ＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣ  ｓｃＦｖ抗  ＨＥＲ−２とＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣ  ＤＡＲＰｉｎ抗−ＨＥＲ−２の特性を例示する。図１３Ａ、図１３Ｃは表面発現を例示する。
【図１４Ａ】ＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の概略を提供する。  抗ＨＥＲ−２−ＤＡＲＰｉｎは例示的な抗原結合ドメインとして使用され、ＵＮＣＨＴ１  ＣＤ３動員ドメインは例示的な動員ドメインとして使用される。図１４Ａは、ＣＤ４膜貫通ドメインと細胞質ドメイン（左）、およびＣＤ８α／ＣＤ８βヘテロダイマー（右）の匹敵可能な領域を含むＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。共受容体機能の重要な領域（アルギニンリッチドメインとＣＸＣＰモチーフ）が強調されている。
【図１４Ｂ】ＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の概略を提供する。  抗ＨＥＲ−２−ＤＡＲＰｉｎは例示的な抗原結合ドメインとして使用され、ＵＮＣＨＴ１  ＣＤ３動員ドメインは例示的な動員ドメインとして使用される。図１４Ｂは、単量体受容体分布を確保するためのシステインからセリンへの突然変異、およびＣＤ８α細胞質ドメインを含むＣＤ８α  Ｔｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【図１４Ｃ】ＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の概略を提供する。  抗ＨＥＲ−２−ＤＡＲＰｉｎは例示的な抗原結合ドメインとして使用され、ＵＮＣＨＴ１  ＣＤ３動員ドメインは例示的な動員ドメインとして使用される。図１４Ｃは、単量体受容体分布を確保するためのシステインからセリンへの突然変異、および、ＣＤ８αアルギニンリッチ領域がＣＤ８βアルギニンリッチ領域と取り替えられたキメラＣＤ８α細胞質ドメインを含む、ＣＤ８α＋ＲβＴｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【図１４Ｄ】ＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の概略を提供する。  抗ＨＥＲ−２−ＤＡＲＰｉｎは例示的な抗原結合ドメインとして使用され、ＵＮＣＨＴ１  ＣＤ３動員ドメインは例示的な動員ドメインとして使用される。図１４Ｄは、単量体受容体分布を確保するためのシステインからセリンへの突然変異、および、Ｌｃｋ結合モチーフを含むＣＤ８αＣＸＣＰドメインが、ＣＤ８β細胞質ドメインのＣ末端に加えられたキメラＣＤ８β細胞質ドメインを含む、ＣＤ８β＋Ｌｃｋ  Ｔｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【図１５Ａ】原型のＴｒｉ−ＴＡＣ含有ＣＤ４領域に対するＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの特徴づけを例示する。図１５Ａ−図１５Ｂは、原型のＴｒｉ−ＴＡＣに対するＣＤ８−Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の表面発現を例示する。
【図１５Ｂ】原型のＴｒｉ−ＴＡＣ含有ＣＤ４領域に対するＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの特徴づけを例示する。図１５Ａ−図１５Ｂは、原型のＴｒｉ−ＴＡＣに対するＣＤ８−Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の表面発現を例示する。
【図１５Ｃ】原型のＴｒｉ−ＴＡＣ含有ＣＤ４領域に対するＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの特徴づけを例示する。図１５Ｃは、ＬＯＸ  ＩＭＶＩ（ＨＥＲ−２陰性）またはＡ５４９、ＳＫＯＶ３、ＳＫＢＲ３、あるいはＭＢＡ  ＭＢ２３１（ＨＥＲ−２陽性）と共培養されたＣＤ８−Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロ細胞毒性を例示する。
【図１５Ｄ】原型のＴｒｉ−ＴＡＣ含有ＣＤ４領域に対するＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの特徴づけを例示する。図１５Ｄは、ＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体または原型Ｔｒｉ−ＴＡＣのいずれかで操作されたＴ細胞の細胞分裂を示す。
【図１５Ｅ】原型のＴｒｉ−ＴＡＣ含有ＣＤ４領域に対するＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの特徴づけを例示する。図１５Ｅは、ＣＤ８  Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体または原型Ｔｒｉ−ＴＡＣのいずれかを含む操作されたＴ細胞のＴＣＲ表面発現を例示する。
【図１６】様々なＴｒｉ−ＴＡＣを例示する。
【図１７】ｐＣＣＬレンチウイルスベクター中のＴＡＣ−ＣＤ１９挿入物を例示する。図１７は、ＴＡＣ−ＣＤ１９（ＣＤ８ａリーダー、ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖ、Ｍｙｃタグ、ｈｕＵＣＨＴ１  Ｙ１７７Ｔ突然変異体、および切断したＣＤ４アンカー共受容体ドメイン）の様々なドメインを例示する。
【図１８】様々なドナーから生成されたＴＡＣ−ＣＤ１９のインビボの有効性を例示する。
【図１９Ａ】腫瘍株に対するＴＡＣ−ＣＤ１９細胞毒性のインビトロの例を例示する。図１９ＡはＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）、図１９ＢはＪｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）、および図１９ＣはＲａｊｉ（バーキットリンパ腫）。
【図１９Ｂ】腫瘍株に対するＴＡＣ−ＣＤ１９細胞毒性のインビトロの例を例示する。図１９ＡはＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）、図１９ＢはＪｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）、および図１９ＣはＲａｊｉ（バーキットリンパ腫）。
【図１９Ｃ】腫瘍株に対するＴＡＣ−ＣＤ１９細胞毒性のインビトロの例を例示する。図１９ＡはＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）、図１９ＢはＪｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）、および図１９ＣはＲａｊｉ（バーキットリンパ腫）。
【図１９Ｄ】ＮＲＧマウス中の３つの様々なインビボ腫瘍モデルの概略を例示する。
【図１９Ｅ】ＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）図１９Ｅ、Ｊｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）図１９Ｆ、およびＲａｊｉ（バーキットリンパ腫）図１９ＧにおけるＣＤ１９−ＴＡＣのインビボの有効性を例示する。
【図１９Ｆ】ＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）図１９Ｅ、Ｊｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）図１９Ｆ、およびＲａｊｉ（バーキットリンパ腫）図１９ＧにおけるＣＤ１９−ＴＡＣのインビボの有効性を例示する。
【図１９Ｇ】ＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）図１９Ｅ、Ｊｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）図１９Ｆ、およびＲａｊｉ（バーキットリンパ腫）図１９ＧにおけるＣＤ１９−ＴＡＣのインビボの有効性を例示する。
【図２０Ａ】ＮＡＬＭ−６腫瘍を有するＴＡＣ−ＣＤ１９で処置したマウスの実験セットアップを例示する。実験に成功後、マウスに、ＮＡＬＭ−６（ＣＤ１９陽性）またはＫＭＳ１１（ＣＤ１９陰性）腫瘍細胞のいずれかを再負荷する。
【図２０Ｂ】ＴＡＣ−ＣＤ１９で処置されたマウスのインビボの有効性を例示する。
【図２１Ａ】投与レジメン、および有効性と細胞伸長に対する投与の影響を評価する実験設計を例示する。
【図２１Ｂ】単回または分割投与量のＴＡＣ−ＣＤ１９のいずれかで処置されたＮＡＬＭ−６を抱えるマウスのインビボでの生存を例示する。
【図２２Ａ−１】分割用量投与後のＴＡＣ−ＣＤ１９のインビボの拡張に関する実験セットアップとデータを例示する。図２２Ａは、マウス血液中のＴ細胞を同定するために使用されるゲーティング戦略を例証する。
【図２２Ａ−２】分割用量投与後のＴＡＣ−ＣＤ１９のインビボの拡張に関する実験セットアップとデータを例示する。図２２Ａは、マウス血液中のＴ細胞を同定するために使用されるゲーティング戦略を例証する。
【図２２Ｂ】分割用量投与後のＴＡＣ−ＣＤ１９のインビボの拡張に関する実験セットアップとデータを例示する。図２２Ｂは、血液中のＴ細胞拡張のインビボの結果を例示する。
【図２３Ａ】マウス中のＴＡＣ−ＣＤ１９に関する長期のインビボ試験を例示する。図２３Ａは、２つの投与量レベルの様々な対照とＴＡＣ−ＣＤ１９で処置されたＮＡＬＭ−６を抱えるマウスの実験プロトコルを例示する。
【図２３Ｂ】マウス中のＴＡＣ−ＣＤ１９に関する長期のインビボ試験を例示する。図２３Ｂは、ＴＡＣ−ＣＤ１９処置群の対照対２つの投与量レベルのインビボの有効性を例示する。
【図２３Ｃ】マウス中のＴＡＣ−ＣＤ１９に関する長期のインビボ試験を例示する。図２３Ｃは、低用量ＴＡＣ−ＣＤ１９で処置されたマウスの長期生存を例証する。
【図２４】ＴＡＣ−ＣＤ１９または形質導入されていないＴ細胞で処置されたマウスからの臨床化学分析結果を例証する。
【図２５】ＴＡＣ−ＣＤ１９または形質導入されていないＴ細胞による処置後のマウス血液中で放出されたヒトサイトカインを例示する。
【図２６Ａ】様々な配置のＢＣＭＡ−ＴＡＣの有効性を例示する。図２６Ａは実験設計を例示する。図２６Ａ−図２６Ｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３として「Ｇ４Ｓ」を開示する。
【図２６Ｂ】様々な配置のＢＣＭＡ−ＴＡＣの有効性を例示する。図２６Ｂは様々な対照と被験物質を例示する。図２６Ａ−図２６Ｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３として「Ｇ４Ｓ」を開示する。
【図２６Ｃ】様々な配置のＢＣＭＡ−ＴＡＣの有効性を例示する。図２６Ｃは様々なＴＡＣ構築物のインビボ有効性を例示する。図２６Ａ−図２６Ｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３として「Ｇ４Ｓ」を開示する。
【図２７】ＴＡＣは細胞上の抗原に遭遇したときに増殖するが、抗原が人工ビーズ上に提示されたときには増殖しない；しかし、ＣＡＲは抗原がビーズまたは細胞上で提示されても関係なく増殖することを例示する。
【図２８Ａ】ＴＡＣ操作されたＴ細胞はインビボで増殖して長期保護をもたらし、骨髄腫のモデルにおいて細胞持続性を示している。図２８Ａ−図２８Ｂは、ＢＣＭＡ−ＴＡＣ  Ｔ細胞が、ＮａｎｏＬｕｃで操作されたＫＭＳ−１１異種移植片モデル（ＫＭＳ  １１−ＮａｎｏＬｕｃ）において多発性骨髄腫腫瘍を拒絶する（ＢＣＭＡｐｏｓ）を例示する。腫瘍移植後、マウスｗｐＢＣＭＡ  ＴＡＣ−Ｔ細胞（ホタルルシフェラーゼを有する）で処置した。ＴＡＣ−Ｔ細胞は、投与後に著しく増殖する。これは腫瘍縮小と相関する。処置されたマウスは腫瘍再負荷に耐性があり、ＴＡＣ−Ｔ細胞の長期持続性を示している。
【図２８Ｂ】ＴＡＣ操作されたＴ細胞はインビボで増殖して長期保護をもたらし、骨髄腫のモデルにおいて細胞持続性を示している。図２８Ａ−図２８Ｂは、ＢＣＭＡ−ＴＡＣ  Ｔ細胞が、ＮａｎｏＬｕｃで操作されたＫＭＳ−１１異種移植片モデル（ＫＭＳ  １１−ＮａｎｏＬｕｃ）において多発性骨髄腫腫瘍を拒絶する（ＢＣＭＡｐｏｓ）を例示する。腫瘍移植後、マウスｗｐＢＣＭＡ  ＴＡＣ−Ｔ細胞（ホタルルシフェラーゼを有する）で処置した。ＴＡＣ−Ｔ細胞は、投与後に著しく増殖する。これは腫瘍縮小と相関する。処置されたマウスは腫瘍再負荷に耐性があり、ＴＡＣ−Ｔ細胞の長期持続性を示している。
【図２９】ＴＡＣ−ＣＤ１９または形質導入されていないＴ細胞による処置後のマウス血液中で放出されたヒトサイトカインを例示する。
【図３０】ＣＤ４およびＣＤ８操作Ｔ細胞におけるＴＡＣ受容体表面発現の例示的なヒストグラムを示す。細胞を、ｍｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ  （ＥＦ１αプロモーター）、ｈｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ  （ＭＳＣＶプロモーター）、およびｍｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ  （ＭＳＣＶプロモーター）で操作した。操作後、Ｔ細胞をＴＡＣ特異的な試薬で染色し、フローサイトメトリーを使用して測定した。すべての構築物は、表面発現の同等なレベルを示しており、ＥＦ１αで駆り立てられる発現はＭＳＣＶ構築物と比較して高い。
【図３１】ＯＶＣＡＲ３（ＨＥＲ２陽性）細胞またはＬＯＸ  ＩＭＶＩ（ＨＥＲ２陰性）細胞との共培養後のＴＮＦα、ＩＦＮγ、またはＩＬ−２のいずれかを発現するＴ細胞の相対的な割合を示している。Ｔ細胞は、ＭｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ（ＥＦ１αプロモーター）、ＨＥＲ２結合ドメインを欠くＴＡＣ構築物（Δ結合ＴＡＣ；ＥＦ１αプロモーター）、ｈｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ（ＭＳＣＶプロモーター）、またはＭｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ（ＭＳＣＶプロモーター）で操作された。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ（ＨＥＲ２ｎｅｇ）と共培養した場合、Δ結合ＴＡＣ対照およびＨＥＲ２  ＴＡＣ細胞は、意味のあるサイトカイン発現を示さない。ＯＶＣＡＲ３（ＨＥＲ２ｐｏｓ）と共培養したすべてのＨＥＲ２  ＴＡＣ操作構築物はサイトカインを産生する同様の能力を示すが、Δ結合ＴＡＣで操作された対照Ｔ細胞は意味のあるサイトカイン産生を示さない。
【図３２】ＯＶＣＡＲ３固形腫瘍モデルにおけるＴＡＣ操作Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性を例示する。Ｔ細胞は、Δ結合ＴＡＣ（ＥＦ１αプロモーター）、ＭｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ（ＥＦ１αプロモーター）、ｈｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ（ＭＳＣＶプロモーター）、またはＭｕＩｇＧ  ＨＥＲ２  ＴＡＣ（ＭＳＣＶプロモーター）で操作された。マウスは、ＯＶＣＡＲ３（ＨＥＲ−２−陽性）腫瘍を皮下に接種された。これらを約１００ｍｍ３の大きさに成長させた。その後、マウスは、尾静脈注射を介して、合計６００万のＨＥＲ２  ＴＡＣ操作Ｔ細胞またはΔ結合ＴＡＣ対照Ｔ細胞の分割投与量で４８時間間隔で処置された。腫瘍の進行には隔週の測定を伴った。Δ結合ＴＡＣは、いかなる腫瘍制御や腫瘍退縮も示さなかった。すべてのＨＥＲ２  ＴＡＣ操作Ｔ細胞は、対照マウスと比較して、腫瘍退縮を含む腫瘍進行の有意な減少を示した。すべてのＨＥＲ２  ＴＡＣ操作Ｔ細胞は、同様の抗腫瘍活性を有していた。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
癌は健康上の大きな問題であり、カナダだけでも１５万人以上の癌の症例が診断されると予想されている。早期癌患者はしばしば、従来の治療法（手術、放射線、化学療法）によって効果的に治療されるが、進行癌の患者にはほとんど選択肢がなく、これらの選択肢は一般的に緩和的なものである。
【００２０】
積極的な免疫療法は、患者の免疫系を利用して腫瘍を除去しようとするものであり、従来の治療に失敗した患者に選択肢を提供するものである。一般的に、この処置は、患者に大量の腫瘍特異的Ｔ細胞を注入することを含む。この方法は、メラノーマ、骨髄腫、白血病、リンパ腫、および滑膜肉腫を含む多くの疾患の早期臨床試験で成功していることが証明されている。具体的な例として、いくつかの臨床研究では、進行したメラノーマを抱える患者においてＴ細胞を用いる免疫療法が治癒的であることが実証されており、このアプローチの有用性が確認されている。さらに、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）と急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）に苦しんでいる患者も、Ｔ細胞免疫療法によって効果的に治療され、治癒されている。
【００２１】
養子Ｔ細胞療法の臨床応用が直面している重要な課題は、Ｔ細胞の供給源である。一般的に、腫瘍を有する患者から単離されたＴ細胞は、エクスビボで大量に増殖し、強固な抗腫瘍免疫反応を誘導するために患者に再投与される。腫瘍特異性は、（ｉ）患者から自然に発生する腫瘍特異性Ｔ細胞を単離すること；または、（ｉｉ）末梢血からのバルクＴ細胞を操作して、腫瘍特異的受容体を発現させることのいずれかによって達成される  。自然に存在する腫瘍特異的Ｔ細胞はまれであり、そのような細胞を癌患者から治療用の量で単離することは、手間がかかり、費用もかかる。対照的に、遺伝子操作により、腫瘍特異的受容体を有する容易に入手可能な末梢血Ｔ細胞を操作することのほうが効率的になってきている。この操作プロセスのための技術が開発されており、臨床的に実行可能であり、いくつかの臨床試験では、癌の処置のための遺伝子操作されたＴ細胞の実現可能性と有効性が実証されている。
【００２２】
この時点までに、Ｔ細胞の遺伝子改変を含むほとんどの操作されたＴ細胞療法は、以下のような結果をもたらす：（ｉ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の強制的な発現；または、（ｉｉ）腫瘍上の抗原標的に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。現在までに、Ｔ細胞を操作するために使用されるキメラ抗原受容体は、以下からなる：（ｉ）標的化ドメイン、通常は一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および、（ｉｉｉ）Ｔ細胞受容体および関連タンパク質からのシグナル伝達要素を含む細胞質ドメイン。このようなキメラ抗原受容体は、「Ｔ体」または「キメラ免疫受容体」（ＣＩＲ）とも呼ばれてきたが、現在、ほとんどの研究者は「ＣＡＲ」という用語を使用している。ＣＡＲアプローチの１つの利点は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に依存しない手法で、任意の患者の免疫細胞を任意の望ましい標的に対して標的化することができることである。ＭＨＣの提示は、腫瘍細胞においてしばしば欠陥であるので、これは魅力的である。
【００２３】
ＣＡＲはモジュール式の用語（ｉｎ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｔｅｒｍｓ）で考えられており、科学者たちは、ＣＡＲの機能に対する異なる細胞質シグナル伝達ドメインの影響について莫大な時間をかけて研究してきた。従来のＣＡＲは一般的に２つの主要な構成要素：（ｉ）Ｔ細胞活性化に重要な免疫チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むＣＤ３ゼータ細胞質ドメイン；および、（ｉｉ）Ａｋｔ経路などの重要な生存経路を引き金とする同時刺激受容体の構成要素を共有している。
【００２４】
第一世代のＣＡＲは、ＣＤ３ζまたはＦｃεＲＩγのいずれかからの単一のシグナル伝達ドメインを採用した。第二世代のＣＡＲは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインと、受容体のＣＤ２８またはＴＮＦＲファミリーからのいずれかの同時刺激受容体の細胞質ドメインを組み合わせた。現在臨床試験が行われているほとんどのＣＡＲ操作Ｔ細胞は、ＣＤ３ζがＣＤ２８またはＣＤ１３７のいずれかの細胞質ドメインに結合された第２世代のＣＡＲを採用している。これらの第二世代ＣＡＲは、ＣＤ１９陽性腫瘍において抗腫瘍活性を示した。第三世代のＣＡＲは複数の同時刺激ドメインを組み合わせたが、第三世代のＣＡＲは抗原特異性を失う可能性があると懸念されている。
【００２５】
ＣＡＲで設計されたＴ細胞は、臨床応用においてかなりの有望性を示しているが、それらは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によって提供されるネイティブ活性化シグナルを置換するための合成方法に依存している。この合成受容体は、ＴＣＲと会合するシグナル伝達成分（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε上のＩＴＡＭ）のすべてを送達しないので、Ｔ細胞がＣＡＲによって最適に活性化されるかどうか、あるいはＣＡＲの活性化がＴ細胞の分化（例えば、記憶への進行）にどのように影響を与えるかは不明である。さらに、ＣＡＲシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲの構造のまさにその性質によって天然の調節パートナーから切り離されているため、ＣＡＲが低レベルの構成的活性化を引き起こす可能性があり、それがオフターゲット毒性をもたらしかねないという固有のリスクがある。したがって、原型のＣＡＲの合成的性質は、ＴＣＲ活性化を制限する定型的なメカニズムを破壊し、従来のＣＡＲ  Ｔ細胞の治療用量にしばしば関連付けられる重篤な毒性を支えている可能性がある。
【００２６】
これらの制限を考えると、Ｔ細胞を、その天然のＴＣＲを介して腫瘍を攻撃するように再誘導することが好ましい。この目的のために、「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｅｎｇａｇｅｒｓ）」（ＢｉＴＥｓ）（ＢｉＴＥｓ）と呼ばれる組換えタンパク質のクラスが作成された。これらのタンパク質は、Ｔ細胞のＴＣＲ受容体を標的抗原と架橋させるために、二重特異的な抗体断片を採用している。これは、効率的なＴ細胞活性化をもたらし、細胞毒性を誘発する。同様に、この目的を達成する二重特異性抗体も生成されており、一部の科学者は化学的結合を利用して抗ＣＤ３抗体を腫瘍特異的抗体と単純に結合させている。これらの二重特異的タンパク質はインビトロではある程度の活性を示しているが、ＧＭＰ産生、短い生物学的半減期、および限られたバイオアベイラビリティーが、これらの分子を癌治療に使用する上での大きな課題である。加えて、これらの分子はＴＣＲ共受容体（ＣＤ８とＣＤ４）に結合しないため、天然のＴＣＲシグナル伝達を適切に再現することもできない。
【００２７】
上記のような観点から、活性と安全性を増強したキメラ受容体のニーズが依然としてある。
【００２８】
三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（Ｔｒｉ−ＴＡＣまたはＴＡＣ）受容体と呼ばれる代替的なキメラ受容体は、腫瘍を攻撃するためにＴ細胞を誘導するべく異なる生物学的手法を用いて開発された。ＣＡＲが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達複合体の構成要素をまとめる完全合成受容体であるのに対し、ＴＡＣ受容体は、ＴＣＲを腫瘍標的に向けて再指示し、ネイティブＴＣＲシグナル伝達構造を再現する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたＴＡＣは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して天然の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）シグナル伝達を活性化しつつ、ＭＨＣ非限定的な標的化を保持する。さらに、本明細書で開示されるＴＡＣは、共受容体刺激と組み合わせてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を動員する。さらに、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたＴｒｉ−ＴＡＣは、増強した活性および安全性を示す。
【００２９】
特定の用語
本明細書で使用される「Ｔ細胞」という用語は、細胞媒介免疫において中心的な役割を果たすタイプのリンパ球を指す。Ｔリンパ球とも呼ばれるＴ細胞は、細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在によって、Ｂ細胞やナチュラルキラー細胞などの他のリンパ球とは区別される。Ｔ細胞には、限定されないが、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞を含む異なる機能を持ついくつかのサブセットがある。
【００３０】
「Ｔ細胞抗原カプラ」との用語またはＴＡＣは、「三官能性Ｔ細胞抗原カプラ」またはＴｒｉ−ＴＡＣと互換的に使用され、Ｔ細胞上で発現したときに、特定の抗原へのＴ細胞の標的化を促進するのに役立つ、操作された核酸構築物またはポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体と会合するタンパク質に結合するリガンド、および（ｃ）Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインを含む。
【００３１】
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」および／または「核酸配列」および／または「核酸」との用語は、塩基、糖、および糖間（バックボーン）連結からなるヌクレオシドまたはヌクレオチドのモノマーの配列を指す。この用語は、非天然に存在するモノマーまたはその一部を含む修飾または置換された配列を含む。本出願の核酸配列は、デオキシリボ核酸配列（ＤＮＡ）またはリボ核酸配列（ＲＮＡ）であってもよく、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、およびウラシルを含む天然に存在する塩基を含んでもよい。この配列はさらに、修飾された塩基を含んでもよい。こうした修飾塩基の例としては、アザアデニンおよびデアザアデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ならびにウラシル；そして、キサンチンとヒポキサンチンが挙げられる。本開示の核酸は、生物から単離されてもよく、遺伝子組換えの実験室的方法によって形成されてもよく、化学合成または核酸を作成するための他の既知のプロトコルによって得られてもよい。
【００３２】
本明細書で使用される「単離されたポリヌクレオチド」または「単離された核酸配列」との用語は、組換えＤＮＡ技術によって生成された場合には細胞材料または培養液を実質的に含まない、あるいは化学的に合成された場合には化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない核酸を指す。単離された核酸はさらに、核酸が由来する核酸に自然に隣接する配列（すなわち、核酸の５’末端と３’末端に位置する配列）を実質的に含まない。「核酸」との用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡを含むことが意図されており、二本鎖または一本鎖のいずれかであり、センス鎖またはアンチセンス鎖を表す。さらに、「核酸」との用語は、相補的な核酸配列を含む。
【００３３】
本明細書で使用される「組換え核酸」または「操作された核酸」という用語は、生物には存在しない核酸またはポリヌクレオチドを指す。例えば、組換え核酸は、他の方法では自然界には存在しないであろう配列を作成するために、遺伝子組換え（分子クローニングなど）の実験室的方法によって形成されてもよい。組換え核酸はさらに、化学合成、または核酸を作成するための他の既知のプロトコルによって作成されてもよい。
【００３４】
本明細書で使用される「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、アミノ酸の鎖を記述している。本開示のポリペプチドまたはタンパク質は通常、アミノ酸の鎖を記述するペプチドである。本明細書で使用されるように、「タンパク質」という用語は、１本以上のアミノ酸鎖を含む大きな分子を記述し、実施形態によっては、タンパク質の断片またはドメイン、または完全長タンパク質である。さらに、本明細書で使用されるように、タンパク質という用語は、アミノ酸の直鎖を指すか、またはアミノ酸の鎖が加工されて機能性タンパク質に折り畳まれたものを指す。タンパク質の構造は、４つの異なるレベルに分けられる：（１）一次構造−ポリペプチド鎖のアミノ酸配列を指す、（２）二次構造−α−らせんおよびβ−シートなどのポリペプチド骨格鎖上の規則的な局所的な部分構造を指し、（３）三次構造−単量体および多量体のタンパク質分子の場合の三次元構造を指し、（４）四次構造−単一の機能単位として動作する２つ以上の個々のポリペプチド鎖の集合体を含む三次元構造を指す。本開示のタンパク質は、いくつかの実施形態において、天然に生成される細胞からのタンパク質の単離および精製、酵素的（例えば、タンパク質分解的）切断、および／または本開示のタンパク質または断片をコードする核酸の発現による組換えによって得られる。本開示のタンパク質および／または断片は、いくつかの実施形態では、化学合成またはタンパク質および断片を生成するための他の既知のプロトコルによって得られる。
【００３５】
「単離されたポリペプチド」との用語は、組換えＤＮＡ技術によって生成された場合には細胞材料または培養液を実質的に含まない、あるいは化学的に合成された場合には化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まないポリペプチドを指す。
【００３６】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、および抗体融合体を含むことが意図されている。抗体は、組換え源からのものであってもよく、および／またはトランスジェニック動物中で生成されたものであってもよい。本明細書で使用される「抗体断片」という用語は、限定することなく、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、二量体、ミニボディ、ジアボディ、およびこれらの多量体、多特異的抗体断片、およびドメイン抗体を含むことが意図されている。
【００３７】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、核酸を細胞内に送達するために使用されるポリヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、ベクターは、細胞内で発現されるべき核酸に動作可能に連結された発現制御配列（例えば、プロモーター）を含む発現ベクターである。当該技術分野で知られているベクターとしては、限定されないが、プラスミド、ファージ、コスミド、およびウイルスが挙げられる。
【００３８】
本明細書で使用される「腫瘍抗原」または「腫瘍関連抗原」との用語は、宿主における免疫応答を誘発する腫瘍細胞内で生成される抗原性物質（例えば、ＭＨＣ複合体によって提示される）を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の表面上にある。
【００３９】
本明細書で使用されるように、「Ｔ細胞受容体」またはＴＣＲとの用語は、抗原の結合に応答してＴ細胞の活性化に関与する、内在性膜タンパク質の複合体を指す。ＴＣＲは、通常は不変のＣＤ３（分化クラスター３）鎖分子との複合体の一部として発現される、高可変性のアルファ（α）鎖とベータ（β）鎖からなるジスルフィド結合された、膜に固定されたヘテロ二量体である。この受容体を発現するＴ細胞は、α：β（またはαβ）Ｔ細胞と呼ばれるが、少数のＴ細胞はγδＴ細胞と呼ばれる可変ガンマ（γ）鎖とδ（δ）鎖で形成される別の受容体を発現する。ＣＤ３は、４つの異なる鎖から構成されるタンパク質複合体である。哺乳動物では、複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、および２つのＣＤ３ζ鎖を含む。
【００４０】
本明細書で使用されるように、「膜貫通ドメインと細胞質ドメイン」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体と会合するタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、こうした膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、限定されないが、（ａ）脂質ラフトと会合し、および／または（ｂ）Ｌｃｋに結合するタンパク質ドメインを含み得る。
【００４１】
本明細書で使用されるように、「ＴＣＲ共受容体」は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が抗原提示細胞と連通するのを促す分子を指し、ＴＣＲの活性化に結びつく最初のシグナルの一部と考えられ得る。ＴＣＲ共受容体の例としては、限定されないが、ＣＤ４、ＬＡＧ３、およびＣＤ８が挙げられる。
【００４２】
本明細書で使用されるように、「ＴＣＲ共刺激因子」とは、抗原に対するＴ細胞の応答を増強する分子を指し、ＴＣＲの活性化につながる第２のシグナルとみなされ得る。ＴＣＲ共刺激因子の例としては、限定されないが、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、リンパ球フィクション関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。
【００４３】
本明細書で使用される「ＴＣＲ共阻害剤」または「チェックポイント受容体」とは、抗原に対するＴ細胞の応答を阻害する分子を指す。ＴＣＲ共阻害剤の例としては、限定されないが、ＰＤ−１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、およびＣＤ３７が挙げられる。
【００４４】
「レシピエント」、「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」との用語は、本明細書で互換的に使用され、いくつかの実施形態では、診断、処置、または治療が望ましい任意の哺乳動物被験体、特にヒトを指す。処置の目的のための「哺乳動物」とは、ヒト、家庭動物と家畜、および、研究室、動物園、スポーツ、またはペットの動物として分類される動物を指し、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サルなどである。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。これらの用語のいずれも、医療関係者の監督を必要としない。
【００４５】
本明細書で使用されるように、「処置」、「処置すること」などの用語は、いくつかの実施形態では、効果を得るための薬剤の投与または手順の実行を指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防ぐという観点から予防的なこともあれば、および／または、疾患および／または疾患の症状の部分的または完全な治癒を達成するという観点から治療的なこともある。「処置」は、本明細書で使用されるように、哺乳動物、特にヒトの疾患または障害（例えば、癌）の処置を含み、以下を含む：（ａ）（例えば、原発性疾患に関連するまたはそれにより引き起こされ得る疾患を含む）疾患にかかりやすいが、まだ疾患にかかっていると診断されていない被験体に生じる疾患またはその症状を予防すること；（ｂ）疾患を阻害、すなわち、疾患の進行を阻止すること；および（ｃ）疾患を軽減、すなわち、疾患の退行を引き起こすこと。処置は、癌の処置または改善または予防における成功の徴候を指すこともあり、これは、緩和；寛解；症状の軽減；または病状を患者にとってより寛容なものにすること；変性または衰退の速度の低下；あるいは、退化の最終点をあまり衰弱しにくくすることなどの任意の客観的または主観的なパラメータを含む。症状の処置または改善は、医師による検査の結果を含む、１以上の客観的または主観的なパラメータに基づく。従って、「処置すること」との用語は、癌に関連する症状または状態の進行を予防し、遅らせ、緩和し、阻止し、または阻害するための本発明の化合物または薬物の投与を含む。「治療効果」との用語は、被験体の疾患、疾患の症状、または疾患の副作用の低減、排除、または予防を指す。
【００４６】
本明細書で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に指定していない限り、複数の内容を含む。したがって、例えば、「抗体」への言及は、複数の抗体を含み、いくつかの実施形態では、「抗体」への言及は多数の抗体などを含む。
【００４７】
本明細書で使用されるように、すべての数値または数値範囲は、文脈が明確に別のことを指定していない限り、そのような範囲内またはそれを包含する整数、および上記範囲内またはそれを包含する数値または整数の端数を含む。したがって、例えば、９０−１００％の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９６％、９７％などの他に、９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％などを含む。別の例では、１−５，０００倍の範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍などのほか、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５倍など、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍なども含む。
【００４８】
本明細書で使用されるように、「約」という数字は、その数字を含む範囲を指し、その数字の１０％未満からその数字の１０％以上までの範囲を指す。“約”範囲とは、範囲の下限の１０％未満から範囲の上限の１０％以上までの範囲を指す。
【００４９】
「パーセント（％）同一性」とは、２つの配列（ヌクレオチドまたはアミノ酸）がアラインメントにおいて同じ位置に同じ残基を有する程度を意味する。例えば、「アミノ酸配列がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：ＹとＸ％同一である」とは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：Ｙに対するアミノ酸配列の％同一性を指し、アミノ酸配列中の残基のＸ％がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：Ｙに開示されている配列の残基と同一であるように精緻化される。このような計算には、一般にコンピュータプログラムが用いられる。配列の対を比較して整列させる例示的なプログラムとしては、ＡＬＩＧＮ（Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，  １９８８）、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，  １９８８；  Ｐｅａｒｓｏｎ，  １９９０）、およびギャップＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、またはＧＣＧ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８４）が挙げられる。
【００５０】
本明細書で使用されるように、「選択的結合」との用語は、分子（例えば、ＴＡＣの標的結合リガンドなどのタンパク質）がその標的分子（例えば、ＨＥＲ−２、ＢＣＭＡ、またはＣＤ１９などの標的抗原）と、他の分子よりも高い親和性で結合することを指す。
【００５１】
Ｔ細胞抗原カプラ（Ｔｒｉ−ＴＡＣまたはＴＡＣ）
特定の実施形態において、三官能性Ｔ細胞抗原カプラ（ＴｒｉーＴＡＣ）をコードする核酸が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣをコードする核酸は：（ａ）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（ｂ）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（ｃ）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴｒｉーＴＡＣをコードする核酸は共刺激ドメインをコードしない。いくつかの実施形態では、ＴｒｉーＴＡＣをコードする核酸は共活性化ドメインをコードしない。
【００５２】
標的特異的リガンド
抗原結合ドメインとも呼ばれる標的特異的リガンドは、標的細胞に直接または間接的に結合する任意の物質または分子を指す。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、標的細胞上の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、限定されないが、癌、血液悪性腫瘍、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または濾胞性リンパ腫から生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む疾患状態に関連する細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、腫瘍細胞上の腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に結合する。いくつかの実施形態では、標的抗原は腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、タンパク質性の場合の腫瘍抗原は、完全なタンパク質までの８以上のアミノ酸の配列である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）で提示される完全長タンパク質の少なくとも１つの抗原断片を含む８つ〜完全長タンパク質のアミノ酸の任意の数である。腫瘍抗原の例としては、限定されないが、ＣＤ１９、ＨＥＲ−２（ｅｒｂＢ−２）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ−１２５、ＭＵＣ−１、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、チロシナーゼ、メラノーマ関連抗原（ＭＡＧＥ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、神経膠腫関連抗原、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、チログロブリン、ＲＡＧＥ−１、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、Ｍ−ＣＳＦ、プロスターゼ（ｐｒｏｓｔａｓｅ）、ＰＡＰ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ｐ５３、プロステイン（ｐｒｏｓｔｅｉｎ）、ＰＳＭＡ、サバイビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）およびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、ＣＤ２２、インスリン成長因子（ＩＧＦ）−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ならびにメソセリンが挙げられる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、限定されないが、抗体およびその断片、例えば、標的細胞および／または抗原に結合する一本鎖抗体（ｓｃＦｖｓ）などの一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ペプチド、ペプチドミメティクス、タンパク質、糖タンパク質、またはプロテオグリカンを含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、限定されないが、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、レクチン、ノッティン、セントリン、アンチカリン、または腫瘍抗原に対して天然に存在するリガンド、例えば、成長因子、酵素基質、受容体、または結合タンパク質などを含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、限定されないが、炭水化物、脂質、核酸、または低分子を含む、標的細胞および／または抗原に結合する非タンパク質化合物を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、特定の細胞および／または抗原を標的とする設計されたアンキリンリピート（ＤＡＲＰｉｎ）である。  いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、特定の細胞および／または抗原に標的化された一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）である。
【００５４】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原はＨＥＲ−２抗原である。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ−２特異的リガンドは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アド−トラスツズマブエムタンシン（Ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｍａｂ  Ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ガンコタマブ（Ｇａｎｃｏｔａｍａｂ）、マルゲツキシマブ（Ｍａｒｇｅｔｕｘｉｍａｂ）、チミグツズマブ（Ｔｉｍｉｇｕｔｕｚｕｍａｂ）、およびエルツマキソマブから選択された抗体の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＨＥＲ−２（ｅｒｂＢ−２）抗原に選択的に結合するＤＡＲＰｉｎである。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＨＥＲ−２（ｅｒｂＢ−２）抗原に特異的に結合するＤＡＲＰｉｎである。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ−２（ｅｒｂ−２）に標的とされたＤＡＲＰｉｎは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７のヌクレオチド配列を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８のアミノ酸配列を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原はＢＣＭＡ抗原である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的リガンドは、ベランタマブ・マフォドチンから選択された抗体の抗原結合ドメイン、およびＧＳＫ２８５７９１６を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＢＣＭＡに選択的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＢＣＭＡに特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡに結合するｓｃＦｖは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のヌクレオチド配列を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む。
【００６０】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原はＣＤ１９抗原である。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＣＤ１９に選択的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドはＣＤ１９に特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５のヌクレオチド配列を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含む。
【００６３】
ＴＣＲ複合体に結合するリガンド
いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＴＣＲのタンパク質に直接または間接的に結合する物質を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＴＣＲのタンパク質に選択的に結合する物質を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＴＣＲのタンパク質に特異的に結合する物質を含む。ＴＣＲと会合するタンパク質としては、限定されないが、ＴＣＲアルファ（α）鎖、ＴＣＲベータ（β）鎖、ＴＣＲガンマ（γ）鎖、ＴＣＲデルタ（δ）鎖、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、およびＣＤ３ε鎖が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＴＣＲアルファ（α）鎖、ＴＣＲベータ（β）鎖、ＴＣＲガンマ（γ）鎖、ＴＣＲデルタ（δ）鎖、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および／またはＣＤ３ε鎖に対する抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３εである。ＣＤ３抗体の例としては、限定されないが、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に結合する抗体は、単鎖抗体、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲに結合するリガンドは、抗ＣＤ３抗体またはその断片、例えば、ムロモナブ、オテリキシズマブ、テプリズマブ、ビジリズマブ、ＣＤ３−１２、ＭＥＭ−５７、４Ｄ１０Ａ６、ＣＤ３Ｄ、またはＴＲ６６などである。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３は第２のポリヌクレオチドを発現する細胞上のＴＣＲ複合体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３の結合は、第２のポリヌクレオチドを発現する細胞の活性化を引き起こす。
【００６５】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１またはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、またはそのホモログ）である。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４によってされる。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは突然変異する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１リガンドは、Ｙ１８２Ｔ突然変異（ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）とも呼ばれる）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）を含む。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７１によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７２を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドはヒト化ＵＣＨＴ１（ｈｕＵＣＨＴ１）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ｈｕＵＣＨＴ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４、またはそのホモログ）である。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４３によってコードされる。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４によってされる。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１は、Ｙ１７７Ｔ突然変異（ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）とも呼ばれる）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を有する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４５によってコードされる。いくつかの実施形態では、ｈｕＵＣＨＴ１リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４６を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のヌクレオチド配列を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１のヌクレオチド配列を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３のヌクレオチド配列を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５のヌクレオチド配列を含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に結合するリガンドはＯＫＴ３である。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、マウスのＯＫＴ３リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ３リガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のヌクレオチド配列を含む。
【００７６】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に結合するリガンドはＦ６Ａである。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、マウスのＦ６ＡリガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３によってコードされる。いくつかの実施形態では、Ｆ６ＡリガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２４を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のヌクレオチド配列を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含む。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に結合するリガンドはＬ２Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＣＤ３に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＣＤ３εに結合する。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＣＤ３εに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、マウスのＬ２ＫリガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５によってコードされる。いくつかの実施形態では、Ｌ２ＫリガンドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のヌクレオチド配列を含む。
【００８２】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含む。
【００８３】
膜貫通ドメインと細胞質ドメイン
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞抗原カプラはＴ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞質ドメインと膜貫通ドメインはリンカーによって随意に連結される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドはＴＣＲ共受容体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドはＴＣＲ共刺激ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドはＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインおよび／または細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共受容体はＣＤ４、ＣＤ８、ＬＡＧ３、またはそのキメラ変異である。
【００８４】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共受容体はＣＤ４である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７によってコードされたＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８を含むＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【００８５】
いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７のヌクレオチド配列を含む。
【００８６】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８のアミノ酸配列を含む。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共受容体はＣＤ８である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共受容体はＣＤ８αである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７によってコードされたＣＤ８α共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含むＣＤ８α共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【００８８】
いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７のヌクレオチド配列を含む。
【００８９】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８のアミノ酸配列を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、共受容体からの配列またはドメインのキメラを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＣＤ８αとＣＤ８βのキメラを含み、ここで、ＣＤ８αアルギニンリッチ領域はＣＤ８βアルギニンリッチ域と取り替えられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９によってコードされたＣＤ８α＋Ｒ（β）共受容体キメラの膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０によって提供されたＣＤ８α＋Ｒ（β）共受容体キメラの膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドはＣＤ８αとＣＤ８βのキメラを含み、Ｌｃｋ結合モチーフを含有しているＣＤ８αＣＸＣＰドメインは、ＣＤ８βの細胞質ドメインのＣ末端に加えられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１によってコードされたＣＤ８β＋Ｌｃｋ共受容体キメラの膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２によって提供されたＣＤ８β＋Ｌｃｋ共受容体キメラの膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９のヌクレオチド配列を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０のアミノ酸配列を含む。
【００９３】
いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１のヌクレオチド配列を含む。
【００９４】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドはＴＣＲ共受容体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＩＣＯＳである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ２７である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子は４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＯＸ４０（ＣＤ１３４）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ３０である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はリンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ２である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ７である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＬＩＧＨＴである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＮＫＧ２Ｃである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＢ７−Ｈ３である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激因子はＣＤ８３に特異的に結合するリガンドである。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＴＣＲ共阻害剤の膜貫通ドメインおよび／または細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＰＤ−１である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＴＩＭ３である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＬＡＧ−３である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＴＩＧＩＴである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＢＴＬＡである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＣＤ１６０である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共阻害剤はＣＤ３７である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＴＣＲ共受容体または共刺激因子タンパク質の細胞質ドメインと膜貫通ドメインの両方を含む。いくつかの実施形態では、細胞質ドメインと膜貫通ドメインは、同じ共受容体または共刺激因子、あるいは異なる共受容体または共刺激因子からのものである。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、Ｔ細胞を標的とするか活性化するために、直接または間接的に作用する他のポリペプチドをさらに含む。
【００９８】
リンカー、コネクタ、および構成
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される核酸は：（１）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（２）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（３）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドの順序である。いくつかの実施形態では、本明細書で開示される核酸は：（１）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（２）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（３）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドの順序であり、ここで、順序は５’末端から３’末端までである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示される核酸は：（１）標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（２）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（３）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドの順序であり、ここで、順序は３’末端から５’末端までである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核酸は：（１）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（２）標的特異的リガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（３）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドの順序である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核酸は：（１）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（２）標的特異的リガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（３）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドの順序であり、ここで、順序は５’末端から３’末端までである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核酸は：（１）ＴＣＲ複合体に結合するリガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；（２）標的特異的リガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；および、（３）膜貫通ドメインと細胞質ドメインをコードする第３のポリヌクレオチドの順序であり、ここで、順序は３’末端から５’末端までである。
【００９９】
いくつかの実施形態では、第１の核酸は第１のポリペプチドをコードし、第２の核酸は第２のポリペプチドをコードし、および第３の核酸は第３のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、および第３のポリペプチドは、直接融合する。例えば、標的特異的リガンドとＴ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドは両方とも、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドに融合する。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、および第３のポリペプチドは、少なくとも１つのリンカーによって連結される。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは直接融合し、リンカーによって第３のポリペプチドに連結される。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドと第３のポリペプチドは直接融合し、リンカーによって第１のポリペプチドに連結される。
【０１００】
いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１〜４０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１〜３０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１〜１５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１〜１０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１〜６のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは３０〜４０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは３２〜３６のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは５〜３０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは５つのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは２０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは２５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは３０のアミノ酸を含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーはＧ４Ｓ３リンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、１２、１５、１６、１９、および２０、またはその変異体あるいは断片を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体（例えば、ＵＣＨＴ１）に結合するリガンドに標的特異的リガンドを連結するペプチドリンカーは、このタンパク質ドメインをＴｒｉ−ＴＡＣ中の他のリンカーと区別するコネクタとして知られている。コネクタは任意のサイズである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドと標的特異的リガンドとの間のコネクタは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ＩＤ：２８を含む短いヘリックスである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドと標的特異的リガンドとの間のコネクタは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ＩＤ：２７によってコードされた短いヘリックスである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドと標的特異的リガンドとの間のコネクタは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ＩＤ：３０を含む長いヘリックスである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドと標的特異的リガンドとの間のコネクタは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ＩＤ：２９によってコードされた長いヘリックスである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドと標的特異的リガンドとの間のコネクタは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ＩＤ：３２を含む大きなドメインである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体に結合するリガンドと標的特異的リガンドとの間のコネクタは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ＩＤ：３１によってコードされた大きなドメインである。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される核酸はリーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、４７、または４９のヌクレオチド配列を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される核酸はリーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リーダー配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、４８、または５０のアミノ酸配列を含む。
【０１０５】
Ｔｒｉ−ＴＡＣは、本明細書で開示されるように、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＴＣＲ複合体に結合するリガンド、および（ｃ）ＴＣＲシグナル伝達ドメインの様々な構成と組み合わせで存在すると企図される。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＣＤ３εに結合する単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＣＤ３εに結合する単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ４共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ｓｃＦｖ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）標的特異的リガンド、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｆ６Ａ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＢＣＭＡ特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）ＯＫＴ３、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｆ６Ａと（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、（ａ）ＣＤ１９特異的なＳｃＦｖ、（ｂ）Ｌ２Ｋ、および（ｃ）ＣＤ８共受容体の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、天然のＭＨＣ結合と同様に、Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＣＤ３とＴＣＲを膜の脂質ラフト領域に引き込み、ＴＣＲの近接にＬｃｋを持ち込む。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣは、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎＴｒｉ−ＴＡＣ（構成１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および２とも呼ばれる）であり：
ｉ）抗ＨＥＲ２  Ｔｒｉ−ＴＡＣリーダー配列（分泌シグナル）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５および６）
ｉｉ）ＨＥＲ２抗原に特異的なＤＡＲＰｉｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７および８）
ｉｉｉ）Ｍｙｃタグ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９および１０）
ｉｖ）コネクタ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１および１２）
ｖ）ＵＣＨＴ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３および１４）
ｖｉ）リンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５および１６）
ｖｉｉ）ＣＤ４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７および１８）を順に含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣはＨＥＲ２−ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５のヌクレオチド配列を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣはＨＥＲ２−ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７のヌクレオチド配列を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８のアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣはＨＥＲ２−ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５のヌクレオチド配列を含む。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣはＢＣＭＡ−ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、５７、５９、または６１のヌクレオチド配列を含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、５８、６０、または６２のアミノ酸配列を含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣはＣＤ１９−ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも７０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも７５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３のヌクレオチド配列を含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９−ＴＡＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
ポリペプチドおよびベクター構築物
ある実施形態では、本明細書で開示される核酸配列によってコードされるポリペプチドが本明細書で開示される。本明細書で開示される核酸配列を含むベクターが本明細書でさらに開示される。いくつかの実施形態では、ベクターは、プロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは哺乳動物細胞において機能的である。プロモーター（特定の核酸配列の転写を開始するＤＮＡの領域）は、当技術分野において公知である。「哺乳動物細胞において機能的なプロモーター」とは、哺乳動物細胞において関連する核酸配列の発現を駆動するプロモーターを指す。核酸配列の発現を駆動するプロモーターは、核酸配列に「動作可能に接続される」ものとして言及される。
【０１３１】
本明細書に記載される核酸を細胞に導入するために、様々な送達ベクターおよび発現ビヒクルが使用される。
【０１３２】
ある実施形態では、本明細書においてベクターとも呼ばれるベクター構築物を提供するための、ベクター中に含まれるポリヌクレオチドが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本開示は：
ａ．標的特異的リガンドをコードする第１のポリヌクレオチド；
ｂ．ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドをコードする第２のポリヌクレオチド；
ｃ．Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチド；および、
ｄ．哺乳動物細胞において機能的であるプロモーター、を含むベクターを提供する。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドの標的は、ＨＥＲ２、ＢＣＭＡ、またはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＨＥＲ２（ｅｒｂＢ−２）抗原に選択的に結合するＤＡＲＰｉｎである。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＨＥＲ２（ｅｒｂＢ−２）抗原に特異的に結合するＤＡＲＰｉｎである。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２（ｅｒｂ−２）に標的化されたＤＡＲＰｉｎは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＢＣＭＡに選択的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡに結合するｓｃＦｖは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４を含む。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＣＤ１９に選択的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的特異的リガンドは、ＣＤ１９を特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１、ヒト化ＵＣＨＴ１（ｈｕＵＣＨＴ１）、ＯＫＴ３、Ｆ６Ａ、またはＬ２Ｋである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１、またはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＵＣＨＴ１であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドはＵＣＨＴ１であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するＵＣＨＴ１リガンドは、Ｙ１８２Ｔ突然変異（ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ））を有し、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＵＣＨＴ１（Ｙ１８２Ｔ）であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ヒト化ＵＣＨＴ１（ｈｕＵＣＨＴ１）、またはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ヒト化ＵＣＨＴ１（ｈｕＵＣＨＴ１）であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ｈｕＵＣＨＴ１であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するｈｕＵＣＨＴ１リガンドは、Ｙ１７７Ｔ突然変異（ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ））を有し、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＯＫＴ３、またはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＯＫＴ３であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、ＯＫＴ３であり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２を含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、Ｆ６Ａ、またはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、Ｆ６Ａであり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、Ｆ６Ａであり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、Ｌ２Ｋ、またはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、Ｌ２Ｋであり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質に結合するリガンドは、Ｌ２Ｋであり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ複合体と会合するタンパク質はＣＤ３εである。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインポリペプチドは、ＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインおよび／または細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共受容体は、ＣＤ４、ＣＤ８、ＬＡＧ３、またはそのキメラ変異である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドと第３のポリヌクレオチドは、第２のポリヌクレオチドに融合され、コード配列はプロモーターに動作可能に接続される。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドと第３のポリヌクレオチドは、第１のポリヌクレオチドに融合され、コード配列はプロモーターに動作可能に接続される。いくつかの実施形態では、ベクターは、Ｔ細胞などの哺乳動物細胞における発現のために設計されている。いくつかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターである。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、有用なベクターは、レンチウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、ポックスウイルス、オンコレトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスに由来するベクターを含む。有用な他の送達ベクターは、単純ヘルペスウイルス、トランスポゾン、ワクシニアウイルス、ヒトパピローマウイルス、サル免疫不全ウイルス、ＨＴＬＶ、ヒト泡沫状ウイルス、およびそれらの変異体に由来するベクターを含む。さらに、有用なベクターは、スプーマウイルス、哺乳類Ｂ型レトロウイルス、哺乳類Ｃ型レトロウイルス、トリＣ型レトロウイルス、哺乳類Ｄ型レトロウイルス、およびＨＴＬＶ／ＢＬＶ型レトロウイルスに由来するベクターを含む。開示された組成物および方法に有用なレンチウイルスベクターの一例は、ｐＣＣＬ４ベクターである。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、核酸は組換え核酸、または操作された核酸である。いくつかの実施形態では、第１、第２、および／または第３のポリヌクレオチドは、組換えポリヌクレオチド、あるいは操作されたポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、コードされたポリペプチドの機能、および／または、Ｔ細胞抗原カプラの機能、活性、および／または発現を最適化するために修飾あるいは変異させられる。いくつかの実施形態では、核酸はポリペプチドをコードする。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、修飾は、本明細書で開示されるベクター配列およびポリペプチド配列を含むポリヌクレオチド配列に対して行われる。修飾は、ヌクレオチドまたはアミノ酸の置換、挿入、あるいは欠失、あるいは、ヌクレオチドまたはアミノ酸の相対位置もしくは順序の変更を含む。
【０１４４】
Ｔ細胞における発現
ある実施形態では、本明細書で開示される核酸配列、または本明細書で開示されるベクターを含む、操作されたＴ細胞が本明細書で開示される。ある実施形態では、本明細書で開示されるＴｒｉ−ＴＡＣを発現するように操作されたヒトＴ細胞が、本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、本明細書で開示されるＴｒｉ−ＴＡＣを発現する。Ｔ細胞抗原カプラで、またはＴｒｉ−ＴＡＣを含むベクターで形質導入されるか、あるいはトランスフェクトされたＴ細胞が、本明細書でさらに開示される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は単離されたＴ細胞である。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣを発現するように操作されたヒトＴ細胞は、インビトロで従来のＣＡＲと同等の機能性を示す。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞は、インビトロで従来のＣＡＲより優れている機能性を示す。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲと比較して増強された安全性を示す、Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたヒトＴ細胞が本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、Ｔｒｉ−ＴＡＣを発現するように操作されたヒトＴ細胞は、従来のＣＡＲと比較して、増強された安全性を示す。
【０１４６】
Ｔ細胞は、いくつかの実施形態では、限定されないが、血液（例えば、末梢血単核細胞）、骨髄、胸腺組織、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、脾臓組織、または腫瘍を含む、多くのソースから得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はＴ細胞の細胞株から得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はドナー（同種異系Ｔ細胞）から得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、胚または成体幹細胞の分化によって、あるいは人工多能性幹細胞から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞のソースにかかわらず、Ｔ細胞は、それが内因性ＴＣＲを欠くように、および／または、ＭＨＣ／ＨＬＡ分子（万能ドナーのＴ細胞）の発現を永久的にあるいは一時的に欠くように、改変されている。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は被験体に対して自己由来である。いくつかの実施形態では、細胞は、被験体に対して同種異系、同系、または異種である。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、いったん得られると、インビトロで随意に濃縮される。いくつかの実施形態では、細胞の集団は、陽性または陰性の選択によって濃縮される。さらに、Ｔ細胞は、随意に凍結または冷凍保存され、その後、後日解凍される。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞にＴｒｉ−ＴＡＣを導入する前あるいは後に、活性化および／または増殖される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤と、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドとが付着する、表面との接触によって増殖する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体シグナル伝達および共刺激分子シグナル伝達を刺激する、１つ以上の可溶性薬剤との接触によって増殖する。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、核酸配列で形質導入またはトランスフェクトされる。形質導入またはトランスフェクトされたＴ細胞は、トランスフェクトまたは形質導入された核酸配列によってコードされたタンパク質を発現する。核酸は、物理的手段、化学的手段、または生物学的手段によって、細胞へ導入され得る。物理的手段としては、限定されないが、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、粒子衝突、リポフェクション、およびリン酸カルシウム沈澱が挙げられる。生物学的手段としては、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。
【０１５０】
レトロウイルスベクターを含むウイルスベクターは、核酸をＴ細胞へ導入して発現させるために使用される。ウイルスベクターは、レンチウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスに由来するベクターを含む。ベクターは、Ｔ細胞（例えば、ＣＭＶプロモーター、ｅＦ１ａプロモーター、またはＭＳＣＶプロモーター）において形質導入された核酸分子の発現を駆動するプロモーターを随意に含む。
【０１５１】
Ｔ細胞における形質導入された核酸配列および／または核酸によってコードされたポリペプチドの存在および／または発現を確認するために、任意の適切なアッセイが使用される。アッセイとしては、限定されないが、サザンおよびノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲとＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、およびフローサイトメトリーが挙げられる。
【０１５２】
ＴＡＣを発現するＴ細胞は、ＴＡＣを発現しないＴ細胞と比較して、および／または、従来のＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、抗原の存在下においてＴ細胞活性化を増大させた。増加したＴ細胞活性化は、限定されないが、腫瘍細胞株殺傷の増加、サイトカイン産生の増加、細胞崩壊の増加、脱顆粒の増加、および／または、ＣＤ１０７α、ＩＦＮγ、ＩＬ２、あるいはＴＮＦαなどの活性化マーカーの発現の増加を含む、多数の方法によって確認される。いくつかの実施形態では、増加は、個々の細胞あるいは細胞の集団において測定される。
【０１５３】
用語「増加」または「増加させる」とは、本明細書で使用される場合、ＴＡＣを発現しないＴ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、および／または、従来のＣＡＲを発現するＴ細胞またはＴ細胞の集団と比較して、ＴＡＣを発現するＴ細胞またはＴ細胞の集団における少なくとも、１％、２％、５％、１０％、２５％、５０％、１００％、あるいは２００％の増加を指す。
【０１５４】
医薬組成物
ある実施形態では、本明細書に開示される操作されたＴ細胞（ＴＡＣで形質導入されたおよび／またはＴＡＣを発現する）と、薬学的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物が本明細書に開示される。薬学的に許容可能な担体としては、限定されないが、緩衝液、例えば、中性の緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水など；炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロース、またはデキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドあるいはアミノ酸、例えば、グリシン；抗酸化剤；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡあるいはグルタチオン；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；または、防腐剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、静脈内投与のために製剤化される。
【０１５５】
医薬組成物は、処置される（または、予防される）べき疾患に適切な方法で投与される。投与の量および頻度は、患者の状態、および患者の疾患のタイプおよび重症度などの要因によって決定されるが、適切な用量は臨床試験によって決定される。「免疫学的に有効な量」、「抗腫瘍に有効な量」、「腫瘍阻害に有効な量」、または「治療量」が示される場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者（被験体）の状態における個体差を考慮して、医師によって決定される。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される改変されたＴ細胞および／または医薬組成物は、体重１ｋｇ当たり１０１〜１０１５の細胞、体重１ｋｇ当たり１０４〜１０９の細胞、随意に、体重１ｋｇ当たり１０５〜１０８の細胞、体重１ｋｇ当たり１０６〜１０７の細胞、あるいは体重１ｋｇ当たり１０５〜１０６の細胞の投与量（それらの範囲内の整数値をすべて含む）で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される改変されたＴ細胞および／または医薬組成物は、体重１ｋｇ当たり１０１の細胞を超える投与量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される改変されたＴ細胞および／または医薬組成物は、体重１ｋｇ当たり１０１５の細胞未満の投与量で投与される。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される改変されたＴ細胞および／または医薬組成物は、０．５ｘ１０６細胞、２ｘ１０６細胞、４ｘ１０６細胞、５ｘ１０６細胞、１．２ｘ１０７細胞、２ｘ１０７細胞、５ｘ１０７細胞、２ｘ１０８細胞、５ｘ１０８細胞、２ｘ１０９細胞、０．５−２０００ｘ１０６細胞、０．５−２ｘ１０６細胞、０．５−２ｘ１０７細胞、０．５−２ｘ１０８細胞、または０．５−２ｘ１０９細胞の投与量（それらの範囲内の整数値をすべて含む）で投与される。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞組成物は、これらの投与量で複数回投与される。いくつかの実施形態では、投与量は、単回または複数回で、例えば、毎日、毎週、隔週、あるいは毎月、一時間ごとに投与されるか、または、処置されている癌が、再発、悪化、もしくは進行すると投与される。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫療法で一般的に知られている注入技術（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．  Ｊ．  ｏｆ  Ｍｅｄ．  ３１９：１６７６，  １９８８を参照）を使用することによって投与される。
【０１５９】
医薬組成物は、例えば、内生毒素、ミコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残存抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コーティングビーズ（ｒｅｓｉｄｕａｌ  ａｎｔｉ−ＣＤ３／ａｎｔｉ−ＣＤ２８  ｃｏａｔｅｄ  ｂｅａｄｓ）、マウス抗体、プールされたヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培地成分、ベクターパッケージング細胞あるいはプラスミド成分、細菌、真菌、ミコプラズマ、ＩＬ−２、およびＩＬ−７からなる群から選択される、検出可能なレベルの汚染物質を実質的に含まない、例えば、検出可能なレベルの汚染物質が存在しない。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される操作されたＴ細胞は被験体に投与され、その後、血液を再度採取し（あるいはアフェレシスを実施し）、採取した血液からのＴ細胞は活性化されて、操作されたＴ細胞とともに患者に再度注入される。いくつかの実施形態では、このプロセスは、数週間毎に複数回行なわれる。Ｔ細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化される。Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化される。
【０１６１】
改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、エアロゾル吸入、注射、注入、食物摂取、輸血、埋め込み、あるいは移植を含む方法によって投与される。改変されたＴ細胞および／または医薬組成物は、被験体に、経動脈的、皮下、皮内、腫瘍内、節間、脊髄内、筋肉内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、あるいは静脈内（ｉ．ｖ．）注入によって、または腹腔内に投与される。改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、皮内注射または皮下注射によって患者に投与される。改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、静脈内注射によって投与される。改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染の部位に直接注射される。
【０１６２】
改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、約５ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、８０ｍＬ、９０ｍＬ、１００ｍＬ、１１０ｍＬ、１２０ｍＬ、１３０ｍＬ、１４０ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、３００ｍＬ、４００ｍＬ、あるいは５００ｍＬの量で投与される。
【０１６３】
改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、最大約５ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、８０ｍＬ、９０ｍＬ、１００ｍＬ、１１０ｍＬ、１２０ｍＬ、１３０ｍＬ、１４０ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、３００ｍＬ、４００ｍＬ、あるいは５００ｍＬを超える量で投与される。
【０１６４】
改変された／操作されたＴ細胞および／または医薬組成物は、少なくとも約５ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、８０ｍＬ、９０ｍＬ、１００ｍＬ、１１０ｍＬ、１２０ｍＬ、１３０ｍＬ、１４０ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、３００ｍＬ、４００ｍＬ、あるいは５００ｍＬの量で投与される。
【０１６５】
医薬組成物は、有効な量のＴ細胞が薬学的に許容可能な担体と混合して組み合わされるように、被験体に投与される薬学的に許容可能な組成物の調製のための既知の方法それ自体によって調製される。適切な担体は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎの医薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２０ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  ＵＳＡ，  ２０００））に記載される。これに基づいて、組成物は、排他的ではないが、１つ以上の薬学的に許容可能な担体あるいは希釈液と関連する物質の溶液を含み、それは、適切なｐＨ、および生理液との等浸透圧性を有する緩衝液に含有される。
【０１６６】
適切な薬学的に許容可能な担体は、医薬組成物の生物学的活性の有効性を妨げない、本質的に、化学的に不活性で無毒な組成物を含む。適切な医薬品担体の例としては、限定されないが、水、生理食塩水、グリセリン溶液、Ｎ−（１（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、ジオレシルホスホチジル（ｄｉｏｌｅｓｙｌｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌ）−エタノールアミン（ＤＯＰＥ）、およびリポソームが挙げられる。いくつかの実施形態では、そのような組成物は、適切な量の担体と一緒に、治療上有効な量の化合物を含有し、患者への直接投与のための形態を提供する。
【０１６７】
医薬組成物は、限定されることなく、凍結乾燥された粉体あるいは水性または非水性の滅菌注射可能な溶液もしくは懸濁液を含み、これらは、組成物を意図したレシピエントの組織または血液と実質的に適合させる抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および溶質をさらに含有する場合がある。そのような組成物中に存在し得る他の成分としては、例えば、水、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎなど）、アルコール、ポリオール、グリセリン、および植物油が挙げられる。即時の注射溶液および懸濁液は、無菌の粉体、顆粒、錠剤、あるいは濃縮された溶液または懸濁液から調製され得る。
【０１６８】
本明細書に開示される医薬組成物は、様々な形態に製剤化され、多くの様々な手段によって投与される。医薬製剤は、必要に応じて、従来容認可能な担体、アジュバント、およびビヒクルを含有する製剤で、経口的に、直腸に、あるいは非経口的に投与される。用語「非経口的」とは、本明細書で使用される場合、皮下、静脈内、筋肉内、または胸骨内の注射技術および注入技術を含む。投与は、動脈内、心臓内、脳室内、皮内、十二指腸内、髄内、筋肉内、骨内、腹腔内、鞘内、血管内、静脈内、硝子体内、硬膜外、および皮下、吸入、経皮的、口腔粘膜、舌下、バッカル、ならびに局所的（含んで、上皮上、真皮性、浣腸、目薬、点耳液、鼻腔内、膣）の投与を含む、注射または注入を含む。いくつかの例示的な実施形態では、投与経路は、筋肉内、静脈内、皮下、または腹腔内の注射などの注射を介する。
【０１６９】
液体製剤は、経口製剤、静脈内製剤、鼻腔内製剤、眼製剤、耳製剤、エアロゾルなどを含む。ある実施形態では、様々な製剤の組み合わせが投与される。ある実施形態では、組成物は持続放出プロファイルのために製剤化される。
【０１７０】
処置および使用の方法
ある実施形態では、個体の癌の処置において本明細書に開示されるＴｒｉ−ＴＡＣを使用する方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＴＡＣの標的特異的リガンドは、腫瘍細胞上の腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＴＡＣの標的特異的リガンドは、腫瘍細胞上の腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＴＡＣの標的特異的リガンドは、腫瘍細胞上の腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的抗原は腫瘍抗原である。腫瘍抗原の例としては、限定されないが、ＣＤ１９、ＨＥＲ２（ｅｒｂＢ−２）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ−１２５、ＭＵＣ−１、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、神経膠腫関連抗原、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、チログロブリン、ＲＡＧＥ−１、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸のカルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、Ｍ−ＣＳＦ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、サバイビンとテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、ＣＤ２２、インスリン成長因子（ＩＧＦ）−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体、およびメソテリンが挙げられる。
【０１７１】
ある実施形態では、個体において標的抗原を発現する癌を処置する方法が本明細書に開示され、上記方法は、本明細書に開示される操作されたＴ細胞を固体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、標的抗原はＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、個体においてＣＤ１９を発現する癌を処置する方法は、ＣＤ１９標的化リガンドを含むＴＡＣを含む操作されたＴ細胞を上記個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９標的化リガンドを含むＴＡＣによって処置される癌の例としては、限定されないが、Ｂ細胞悪性腫瘍が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９標的化リガンドを含むＴＡＣによって処置される癌の例としては、限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９標的化リガンドを含むＴＡＣによって処置される癌の例としては、限定されないが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）が挙げられる。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、標的抗原はＨＥＲ２である。いくつかの実施形態では、癌細胞が個体においてＨＥＲ２を発現する癌を処置する方法は、ＨＥＲ２標的化リガンドを含むＴＡＣを含む、操作されたＴ細胞を上記個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２標的化リガンドを含むＴＡＣによって処置される癌の例としては、限定されないが、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、卵巣癌、および胃癌が挙げられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、標的抗原はＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、癌細胞が個体においてＢＣＭＡを発現する癌を処置する方法は、ＢＣＭＡ標的化リガンドを含むＴＡＣを含む、操作されたＴ細胞を上記個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ標的化リガンドを含むＴＡＣによって処置される癌の例としては、限定されないが、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫が挙げられる。
【０１７４】
個体の癌を治療するための薬剤の調製における、本明細書で開示される操作されたＴ細胞の使用が、本明細書でさらに開示される。改変または非改変細胞を含むか、あるいは、非改変細胞の有無にかかわらずに改変細胞の様々な集団を含む、Ｔ細胞の混合物の使用が、本明細書でさらに開示される。当業者ならば、治療量の改変されたＴ細胞は本来、均質である必要がないことを理解する。
【０１７５】
ある実施形態では、本明細書で開示される操作されたＴ細胞は併用療法の一部である。いくつかの実施形態では、本明細書で開示される治療の有効性は複数回評価される。いくつかの実施形態では、患者は本明細書で開示される処置に対する反応に基づいて層別化される。いくつかの実施形態では、処置の有効性は治験への許可を決定する。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＴＡＣのいずれか１つを含む操作されたＴ細胞によって処置される癌は、腫瘍性疾患の任意の形態を含む。いくつかの実施形態では、処置される癌の例としては、限定されないが、乳癌、肺癌、白血病、例えば、混合型白血病（ＭＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、処置される癌の例としては、限定されないが、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または濾胞性リンパ腫から生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が挙げられる。他の癌は、細胞腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、血液癌、リンパ性腫瘍、良性腫瘍と悪性腫瘍、および悪性病変を含む。いくつかの実施形態では、癌は非固形腫瘍または固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、処置される癌は、血管新生化されていないか、または実質的にまだ血管新生化されていない腫瘍、および、血管新生された腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、癌は固形癌であるか、または固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、癌は液性癌であるか、または液性腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、乳癌、大腸癌、多発性骨髄腫、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、尿路上皮癌、子宮内膜癌、または黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、癌は膠芽腫である。いくつかの実施形態では、癌は胃癌である。いくつかの実施形態では、癌は卵巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は胃癌である。いくつかの実施形態では、癌は結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は尿路上皮癌である。いくつかの実施形態では、癌は子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。
【０１７７】
【表１−１】
2021530971.tif 000003
【０１７８】
【表１−２】
2021530971.tif 000004
【実施例】
【０１７９】
以下の例は、本発明の様々な実施形態を例証する目的で与えられ、いかなる方法でも本発明を制限することを意図していない。本明細書に記載される方法とともに、本実施例は、好ましい実施形態の代表的なものであり、例証するものであり、および、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。請求項の範囲によって定義される本発明の精神内に包含されるその変化および他の使用が、当業者に想定される。
【０１８０】
実施例１．Ｔｒｉ−ＴＡＣ技術の特性付け
Ｔｒｉ−ＴＡＣ技術の概要が図１Ａ−図１Ｃで提供される。
【０１８１】
図１Ａは、様々な受容体の共集合およびそれらの関連タンパク質パートナーに基づいた、ＣＤ８Ｔ細胞活性化の例を示す。最初に、主要組織適合遺伝子複合体Ｉは抗原（らせん状物）を提示している。これは抗原に結合することができるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体によって認識される。ＴＣＲ複合体はいくつかの個々のサブユニットを含有している。α／βドメインは、ＭＨＣ−Ｉ上で提示される抗原と直接相互作用することができる。その後、α／βドメインは、他のいくつかのドメイン（ε、γ、δ、およびζ）と相互作用し、それらのすべては、様々な細胞内活性化ドメインを介したＴ細胞活性化に関与する。ＴＣＲ複合体は、ＣＤ８共受容体と同時にＭＨＣ−Ｉと相互作用する。ＣＤ８共受容体は、抗原非依存的様式でＭＨＣ−Ｉに結合する。ＣＤ８は、ＴＣＲ受容体複合体の活性化にとって重要なタンパク質キナーゼであるＬｃｋと直接相互作用する。ＣＤ８とＬｃｋの相互作用はさらに、脂質ラフト（膜部分）ミクロドメインとのそれらの関連を確かなものにし、上記のミクロドメインは、他の関連するシグナル伝達部分（暗色球形）を組織し、封じ込めると仮定される。その後、後期の活性化はＣＤ２８の動員をもたらす。この相互作用カスケードが平行して数回生じる場合、Ｔ細胞は活性化されるようになり、それらの細胞毒性を発揮することができる。
【０１８２】
図１Ｂは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概要を提供する。ＣＡＲは、単一の合成的に操作された分子において、ＣＤ３ζおよびＣＤ２８などのいくつかの重要な活性化ドメインを組み合わせることにより、Ｔ細胞活性化の複雑なメカニズムを再現しようとする。その後、ＣＡＲは、特異的結合ドメインを使用して、最適な抗原と直接相互作用する。アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）がここで示される。平行して生じるいくつかのそのような相互作用は、Ｔ細胞活性化をもたらすと考えられる。
【０１８３】
図１Ｃは、天然の活性化プロセスを模倣するＴｒｉ−ＴＡＣ技術の概要である。Ｔｒｉ−ＴＡＣは、ＭＨＣの非制限的な標的化を保持しながら、ＴＣＲを介した天然のシグナル伝達をより良く再現するために開発された。Ｔ細胞活性化は、ＭＨＣ分子内の保存領域に同時に結合するＴＣＲおよびＴ細胞共受容体（ＣＤ４またはＣＤ８のいずれか）による、ＭＨＣのライゲーション後に起こる。共受容体は、ＴＣＲシグナル複合体形成にとって特に重要な膜ミクロドメインである「脂質ラフト」内に特異的に局在化される。ＴＣＲ活性化複合体の正確なミクロドメイン局在化を確かなものにすることに加えて、これらの共受容体はさらに、Ｔ細胞活性化の重要なタンパク質キナーゼであるＬｃｋに直接結合する。従来のキメラ受容体も二官能性タンパク質も、共受容体分子またはＬｃｋに結合しない。脂質ラフトに局在化し、かつＬｃｋに結合するＣＤ４共受容体の膜貫通および細胞内の領域が、ＣＤ３（ＵＣＨＴ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、１４、およびそのホモログ）に結合する単鎖抗体にそれぞれ融合された分子を作製した。この構築物は、天然のＭＨＣ結合と同様に、ＣＤ３分子およびＴＣＲを脂質ラフトの領域に引き込み、ＴＣＲの近接にＬｃｋを持ち込むように設計されている。この受容体を標的とするために、設計されたアンキリンリピート（ＤＡＲＰｉｎ）をＣＤ４−ＵＣＨＴ１キメラに連結し、三官能性Ｔ細胞−抗原カプラ（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）を生成した。この例では、ＤＡＲＰｉｎは癌原遺伝子、ＨＥＲ２（ｅｒｂＢ−２）に特異的であった。
【０１８４】
複数のＴｒｉ−ＴＡＣ構成が可能である（図２Ａおよび図２Ｂ）。構成１（図２Ａ）では、抗原結合ドメインはＮ末端にあり、ＣＤ３リガンド結合ドメインに接続され、その後、共受容体ドメインに接続される。構成２（図２Ｂ）では、ＣＤ３リガンド結合ドメインはＮ末端にあり、抗原結合ドメインに接続され、それが共受容体ドメインに接続する。
【０１８５】
複数のクラスのリガンド結合ドメインは、Ｔｒｉ−ＴＡＣ分子に取り込まれ得る（図３Ａ−図３Ｄ）。ここでの例は、構成１のＴｒｉ−ＴＡＣ（図３Ａ）、ＨＥＲ２特異的ＤＡＲＰｉｎを有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図３Ｂ）、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖを有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図３Ｃ）、およびＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖを有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図３Ｄ）の一般的な概要を示す。
【０１８６】
図４Ａ−図４Ｄは、ＨＥＲ２特異的ＤＡＲＰｉｎを有するＴｒｉ−ＴＡＣの機能性を説明する。ヒトＴ細胞を、本明細書に開示されるＴｒｉ−ＴＡＣまたは同じＤＡＲＰｉｎを有する従来のＣＡＲのいずれかを発現するように操作した。すべて面において、Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞は、従来のＣＡＲと少なくとも同等の機能性を示したことが決定された。興味深いことには、２つのパラメータ（ＴＮＦ−α産生およびＣＤ１０７ａ動員）に関して、ある状況下においてＴｒｉ−ＴＡＣが従来のＣＡＲよりも活性であったことが観察された。
【０１８７】
図４Ａは、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＡＲ、および対照Ｔ細胞と比較した、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  Ｔｒｉ−ＴＡＣの表面発現を示す。組換えＨＥＲ２を用いたインキュベーションによって、キメラ受容体を検出した。抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  Ｔｒｉ−ＴＡＣは、操作されたＴ細胞の表面上でよく発現された。図４Ｂは、操作されたＴ細胞培養物の成長を示す。Ｔ細胞を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８のダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）で活性化し、Ｔｒｉ−ＴＡＣをコードするレンチウイルス、ＣＡＲをコードするレンチウイルス、または受容体を有していないレンチウイルス（対照）で操作した。２週間後に、ＣＡＲおよび対照の培養物は同様の数に増加したが、Ｔｒｉ−ＴＡＣ培養物はわずかにゆっくりと増加した。図４Ｃおよび図４Ｄは、操作されたＴ細胞の機能性の属性を示す。ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎを保有するＴｒｉ−ＴＡＣまたはＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞を、プレート結合抗原で刺激した。Ｔｒｉ−ＴＡＣとＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞は、測定された機能（ＴＮＦ−α産生、ＩＦＮ−γ産生、およびＣＤ１０７ａ動員、図３Ｃならびに図３Ｄ）をすべて詳述することができる。Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞は、ＣＡＲ（図３Ｄ）で操作されたＴ細胞と比較して、刺激の後にＣＤ１０７ａ陽性細胞の頻度が高くなることを示し、細胞ごとに細胞毒性が増強されたこと示唆している。
【０１８８】
図６Ａ−図６Ｊは、Ｔｒｉ−ＴＡＣ機能性に対するリガンド結合ドメインおよびＵＣＨＴ１  ＣＤ３結合ドメインの両方の重要性を確認するデータを提供する。Ｔ細胞を、ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎを保有する完全長のＴｒｉ−ＴＡＣ（図６Ｇ、図６Ｈ、図６Ｉ、下段）、ＤＡＲＰｉｎを欠いているＴｒｉ−ＴＡＣ変異体（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、上段）、またはＵＣＨＴ１を欠いているＴｒｉ−ＴＡＣ変異体（図６Ｄ、図６Ｅ、図６Ｆ、中段）で操作した。３つすべての操作されたＴ細胞集団を、ＨＥＲ２陽性腫瘍細胞で刺激した。完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞は、刺激後にＩＦＮｇ、ＴＮＦ−およびＩＬ−２を産生することができたが、変異体は、刺激後にサイトカインを産生しなかった。３つのＴ細胞集団をさらに、４：１のエフェクター：標的で、Ｄ２Ｆ２／Ｅ２細胞（ＨＥＲ２発現）またはＤ２Ｆ２細胞（ＨＥＲ２陰性）と共培養した（図６Ｊ）。完全長のＴｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞は、Ｄ２Ｆ２／Ｅ２細胞に対する頑強な殺傷（ｒｏｂｕｓｔ  ｋｉｌｌｉｎｇ）を示したが、Ｄ２Ｆ２細胞を殺傷しなかった。ＤＡＲＰｉｎまたはＵＣＨＴ１のいずれかを欠いている別のＴｒｉ−ＴＡＣ変異体は、殺傷を示さなかった。
【０１８９】
図７Ａ−図７Ｃは、マウスをベクター対照（ＮＧＦＲ）、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＡＲ、または抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  Ｔｒｉ−ＴＡＣで処置した結果を示す。異種移植片マウスモデルを使用した。ＯＶＣＡＲ−３腫瘍細胞をマウスの皮下に投与し、腫瘍が１００−２００ｍｍ３のサイズに達するまで成長させた。図７Ａは、処置日に腫瘍サイズに正規化された相対的な腫瘍進行を示す。抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞は、腫瘍体積の急速な減少を引き起こし、対照は効果がなく、ＣＡＲ細胞は腫瘍成長を遅くし、腫瘍サイズの遅れた減少を示した。図７Ｂは、Ｔ細胞注入後の体重の相対的な変化を示す。対照と、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作された細胞の両方は、処置後のマウス体重において有意な変化を示さない。これに対して、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎ  ＣＡＲで処置されたマウスは、体重の有意な減少を示し、このことは重度の毒性を示している。図７Ｃは、Ｔ細胞注入から７日後のマウスの血清中のサイトカイン濃度を示す。Ｔｒｉ−ＴＡＣで処置されたマウスと比較して、ＣＡＲで処置されたマウスにおけるサイトカインレベルはより高かった。
【０１９０】
実施例２．ＵＣＨＴ１の置換はＴｒｉ−ＴＡＣ機能に影響を及ぼす
図８Ａ−図８Ｈは、代替ＣＤ３結合ドメインを有するＴｒｉ−ＴＡＣの機能を示す。上記ドメインは、図８Ａおよび図８Ｅで列挙される。ＵＣＨＴ１を含有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図８Ｂ）、ＯＫＴ３を含有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図８Ｂ）、およびｈｕＵＣＨＴ１を含有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図８Ｆ）は高い表面発現を示したが、Ｆ６Ａを含有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図８Ｆ）およびＬ２Ｋを含有するＴｒｉ−ＴＡＣ（図８Ｆ）は低い表面発現を示した。ＯＫＴ３を含有するＴｒｉ−ＴＡＣを発現する細胞は、Ｔｒｉ−ＴＡＣライゲーション時に、低いサイトカイン産生（図８Ｃ、図８Ｃ１）および中間の細胞毒性（図８Ｄ）を示した。Ｆ６Ａを含有するＴｒｉ−ＴＡＣを発現する細胞は、Ｔｒｉ−ＴＡＣライゲーション後に、強力なサイトカイン産生（図８Ｇ、図８Ｇ１）および細胞毒性（図８Ｈ）を示した。Ｌ２Ｋを含有するＴｒｉ−ＴＡＣを発現する細胞は、低いサイトカイン産生（図８Ｇ、図８Ｇ１）および中間の細胞毒性（図８Ｈ）を示した。
【０１９１】
図９Ａ−図９Ｈは、図８Ａおよび図８Ｅに示される様々なＴｒｉ−ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞におけるＴＣＲ表面発現を示す。ＯＫＴ３（図９Ａ、図９Ｅおよび図９Ｂ、図９Ｆ）またはＬ２Ｋ（図９Ｃ、図９Ｇおよび図９Ｄ、図９Ｈ）を含有するＴｒｉ−ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞は、Ｔｒｉ−ＴＡＣを含むＵＣＨＴ１またはｈｕＵＣＨＴ１で操作されたＴ細胞と比較して、より低いＴＣＲ表面発現をそれぞれ示した。これに対して、Ｆ６Ａを含有するＴｒｉ−ＴＡＣ変異体で操作されたＴ細胞は、ｈｕＵＣＨＴ１（図９Ｃ、図９Ｇおよび図９Ｄ、図９Ｈ）を有するＴｒｉ−ＴＡＣと比較して、ＴＣＲダウンレギュレーションを示さなかった。Ｆ６Ａ置換は、中程度のサイトカイン産生および細胞毒性を維持しながら、Ｔｒｉ−ＴＡＣ受容体の表面発現を減少させた。Ｌ２Ｋ置換は、表面発現を適度に減少させ、サイトカイン産生を減少させたが、中間の細胞毒性を維持した。ＯＫＴ３置換は、高いＴｒｉ−ＴＡＣ表面発現、低いサイトカイン産生、および中間の細胞毒性を結果としてもたらした。これらのデータは、Ｔｒｉ−ＴＡＣの表面発現およびＴ細胞エフェクター機能が本質的に比例しないこと、Ｔｒｉ−ＴＡＣドメイン置換は、場合によっては、表面発現レベルとは無関係にエフェクター機能を変化させることを示す。細胞毒性が減少し、表面発現が低いＴＡＣ変異体は、ある臨床応用において価値がある可能性があると考えられる。
【０１９２】
大抵の場合、ｓｃＦｖ置換は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２を産生する操作されたＴ細胞の能力を弱めたが、操作されたＴ細胞は、標的細胞を殺傷する能力を保持していた。過剰なサイトカイン産生は、臨床現場における有害事象に関連し、生死に関わる疾患に対する現在のＣＡＲ技術を制限している。中程度の細胞毒性を保持しながら、ＴＡＣ分子を修飾してサイトカイン産生を減少させる能力により、臨床適用と安全性を満たすために必要な反応性の正確なレベルを有するＴｒｉ−ＴＡＣ受容体の生成が可能になる。
【０１９３】
細胞毒性を保持しながらＴＣＲ表面発現およびサイトカイン産生を抑える、ＯＫＴ３を含有するＴｒｉ−ＴＡＣ変異体の能力は、ＴＣＲの抑制が移植片対宿主疾患を抑えることができる同種異系の状況において非常に価値があり得る。
【０１９４】
これらのデータは、ＵＣＨＴ１のｓｃＦｖ置換がＴｒｉ−ＴＡＣの機能に影響を及ぼすことを示している。さらなる修飾は、各種用途（例えば、腫瘍内科学、自己免疫、アレルギー）に有用なＴｒｉ−ＴＡＣを結果としてもたらす。
【０１９５】
実施例３．ＴＣＲ複合体を標的結合リガンドドメインに結合するリガンドを接続する、様々なリンカーの導入
図１０Ａ−図１０Ｂは、ＴＣＲ複合体および標的結合リガンドドメインを結合するリガンドを接続する様々なリンカーを有するいくつかのＴＡＣ変異体を示す。フレキシブルコネクタは、２つのドメイン間の動作を可能にする。大きなドメインコネクタは、２つの折り畳まれたドメインを含有しており、非常に大きく、強固である。小さく長いヘリックスコネクタも強剛性を導入するが、大きなドメインリンカーと比較すると拘束性が小さい。
【０１９６】
図１１Ａ−図１１Ｅは、Ｔｒｉ−ＴＡＣライゲーション時の、Ｔｒｉ−ＴＡＣの表面発現、Ｔｒｉ−ＴＡＣ形質導入効率、およびサイトカイン産生に対する、コネクタ置換の影響を示す。図１１Ａおよび図１１Ｂは、ヘリックスリンカーが、フレキシブルリンカーと比較して、表面発現と形質導入効率を増強する一方、大きなドメインコネクタが、表面発現ではなく形質導入効率を増強することを示す。図１１Ｄ、図１１Ｅは、短いヘリックス、長いヘリックス、または大きなドメインコネクタを有するＴｒｉ−ＴＡＣを発現する細胞による、サイトカイン産生を示す。
【０１９７】
図１２Ａは、短いヘリックスコネクタを有するＴｒｉ−ＴＡＣを発現するＴ細胞の増強されたインビトロの細胞毒性を示す。図１２Ｂは、短いヘリックスコネクタを有するＴｒｉ−ＴＡＣを発現するＴ細胞の増強されたインビボの腫瘍制御を示す。短いヘリックスコネクタは、高いインビトロの細胞毒性および有効なインビボの腫瘍制御に関連した。
【０１９８】
実施例４．ＣＤ８α／βの細胞質ドメインを導入する
図１３Ａは、抗ＨＥＲ２  ｓｃＦｖと対になったＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣの表面発現を示し、または図１３Ｃは、抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎと対になったＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣの表面発現を示す。図１３Ｂは、抗ＨＥＲ２  ｓｃＦｖまたは抗ＨＥＲ２  ＤＡＲＰｉｎと対になったＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣを発現するＴ細胞による、サイトカイン産生を示す。
【０１９９】
図１４Ａは、ＣＤ４Ｔｒｉ−ＴＡＣ単量体およびＣＤ８α／βヘテロ二量体を示す。ＣＤ４とＣＤ８両方のＴＣＲ共受容体は、共受容体機能性にとって重要な機能ドメインを保有する。これらの領域は、脂質ラフト会合に重要であると仮定されるアルギニンリッチ領域およびＬｃｋ結合に必要なＣＸＣＰモチーフを含む。単量体であるＣＤ４とは異なり、ＣＤ８共受容体は、αサブユニットおよびβサブユニットからなるヘテロ二量体である（図１４Ａ）。αＣＤ８サブユニットおよびβＣＤ８サブユニットの両方は、アルギニンリッチ領域を含有するが、αサブユニットのみがＣＸＣＰモチーフを含有している。
【０２００】
図１４Ｂ−図１４Ｄは、図１４Ａで示されるＣＤ８共受容体の要素を取り込む、Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の概略図を提供する。ＣＤ８αおよびＣＤ８βの二量体化の原因であるシステインは、すべてのＣＤ８Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体においてアラニンと置き換えられた。図１４Ｂは、単量体受容体分布を確保するためのシステインからセリンへの突然変異と、ＣＤ８αの細胞質ドメインとを含む、ＣＤ８αＴｒｉ−ＴＡＣの概略図である。図１４Ｃは、単量体受容体分布を確保するためのシステインからセリンへの突然変異と、ＣＤ８αアルギニンリッチ領域がＣＤ８βアルギニンリッチ領域と置き換えられる、キメラＣＤ８α細胞質ドメインとを含む、ＣＤ８α＋ＲβＴｒｉ−ＴＡＣの概略図である。図１４Ｄは、単量体受容体分布を確保するためのシステインからセリンへの突然変異と、Ｌｃｋ結合モチーフを含有するＣＤ８αＣＸＣＰドメインがＣＤ８β細胞質ドメインのＣ末端に加えられた、キメラＣＤ８β細胞質ドメインとを含む、ＣＤ８β＋Ｌｃｋ  Ｔｒｉ−ＴＡＣの概略図である。
【０２０１】
図１５Ａ−図１５Ｄは、プロトタイプＴｒｉ−ＴＡＣに対する、ＣＤ８ベースのＴｒｉ−ＴＡＣ変異体の様々な表現型および官能性の属性を示す。図１５Ａ−図１５Ｂは、プロトタイプＴｒｉ−ＴＡＣに対する、ＣＤ８−Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体の表面発現を示す。表面発現は様々なＴｒｉ−ＴＡＣ間で同等であった。図１５Ｃは、ＬＯＸ  ＩＭＶＩ（ＨＥＲ２陰性）およびＡ５４９、ＳＫＯＶ３、ＳＫＢＲ３、またはＭＢＡ  ＭＢ  ２３１（すべてＨＥＲ２陽性）と共培養された、ＣＤ８Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビトロの細胞毒性を示す。Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞はすべて、細胞毒性を示した。図１５Ｄは、ＣＤ８Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体またはプロトタイプＴｒｉ−ＴＡＣのいずれかで操作されたＴ細胞の細胞分裂を示す（図１５Ｄ）。図１５Ｅは、ＣＤ８Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体またはプロトタイプＴｒｉ−ＴＡＣを含む操作されたＴ細胞のＴＣＲ表面発現を示す。Ｔｒｉ−ＴＡＣ変異体はすべて、ＴＣＲ発現に対して同様の効果を有していた。ＣＤ４共受容体は、ｓｃＦｖおよびＤＡＲＰｉｎ抗ＨＥＲ２の両方を有する、良好な表面発現および機能性を示したが、ＣＤ８α構築物は、ＤＡＲＰｉｎ抗原結合ドメインの状況下においてのみ活性を示した。様々なＣＤ８α細胞質ドメインを試験する場合、すべての構成は共受容体機能に関連する報告された重要な配列属性を含有していた（アルギニンリッチ領域およびＣＸＣＰ）。ＣＤ４プロトタイプと比較する場合、ＣＤ８α／β構築物はすべて同様の能力を示した。これは、脂質ラフト親和性およびＬｃｋ結合などの特定の生化学的性質の保持が、特定の細胞質ポリペプチド配列よりも、Ｔｒｉ−ＴＡＣの能力を決定するのにより重要であることを強調する。
【０２０２】
ＣＤ８α＋Ｒ（β）およびＣＤ８β＋Ｌｃｋ  Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞の成長は、他の変異で操作されたＴ細胞の成長と比較して有意に損なわれた。成長への有意な影響にもかかわらず、これらのＴｒｉ−ＴＡＣはすべて、Ｔ細胞を活性化する同等の能力を示した。ＣＤ８α＋Ｒ（β）およびＣＤ８β＋Ｌｃｋ  Ｔｒｉ−ＴＡＣの成長の低下は、最大のＴ細胞増殖が望ましくない特定の用途に有利な場合がある。
【０２０３】
実施例５．ＣＤ１９−ＴＡＣ構築物の開発
図１６は、ＣＤ１９−ＴＡＣ構築物の段階的な開発を示す。レンチウイルスベクターのいくつかの世代を、ＣＤ１９特異性、適切なＴＡＣ発現、およびＧＭＰグレードのレンチウイルス産生を確実にするために、設計要素を様々に変更して作製する。それぞれのボックスはレンチウイルスベクターを表し、３つの主要な設計要素：（Ａ）抗原結合ドメイン、（Ｂ）ＴＣＲ／ＣＤ３結合ドメイン、および（Ｃ）共受容体ドメインを指定する。網掛け部分は、ベクター開発プロセス中の修飾の対照であったドメインを示す。
【０２０４】
第１工程のＴＡＣは、ＨＥＲ２特異的に設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、マウスＵＣＨＴ１のＣＤ３特異的ｓｃＦｖ、および柔軟な膜貫通ならびに細胞質ＣＤ４ポリペプチドを含む。ＴＡＣをｐＣＣＬ４レンチウイルスベクターにクローン化する。
【０２０５】
ＣＤ１９特異的Ｔｒｉ−ＴＡＣを生成するために、ＨＥＲ２特異的なＤＡＲＰｉｎを、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖに融合したＮ末端ＣＤ８ａリーダーペプチドを含むポリペプチドと置き換えた。ＣＤ１９  ｓｃＦｖの重鎖と軽鎖を、グリシン−セリンのリンカー領域を介して接続した。
【０２０６】
免疫原性を低減させるために、ＵＣＨＴ１ドメインを、ヒト化バージョン（ｈｕＵＣＨＴ１）と置き換えた。このＴＡＣ構築物は、その前駆体よりも優れた表面発現レベルを示した。
【０２０７】
機能を損なわずに、Ｔ細胞の細胞表面上の受容体発現をさらに改善するために、２つの別個の修飾を平行して評価した。単鎖安定化を増大させるために、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで使用されるＧ４Ｓリンカー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）を、より構造化したＷｈｉｔｌｏｗリンカーと置き換えた。個別に、Ｙ１７７Ｔ突然変異をｈｕＵＣＨＴ１ドメインに導入した。両方の戦略によりＴＡＣ受容体の発現が増強され、ＷｈｉｔｌｏｗリンカーとＹ１７７Ｔ突然変異の両方を用いて受容体を生成した。
【０２０８】
図１７は、ｐＣＣＬレンチウイルスベクターにおけるＣＤ１９−ＴＡＣ挿入物を示す。ｐＣＣＬベクターは、ｍＣＭＶプロモーターの制御下のΔＮＧＦＲ（ｈｕ）と、ＥＦ−１αプロモーターによって駆動されているＴＡＣ発現を伴う双方向プロモーター系を特徴とする。ΔＮＧＦＲ（ｈｕ）は、膜貫通ドメインを有するが細胞質シグナル伝達ドメインを欠いている、切断されたヒトＣＤ２７１（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１６）である。レンチウイルス形質導入を定量化するためにΔＮＧＦＲ（ｈｕ）発現産物を使用する。ＣＤ１９−ＴＡＣ＃９２１オープンリーディングフレームはＴＡＣ構築物の重要な要素：ＣＤ８αリーダー、ＦＭＣ６３単鎖（抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ）、ヒトｃ−Ｍｙｃタグ、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）、およびΔＣＤ４ドメインを示すために拡大されている。マウスＵＣＨＴ１  ＣＤ３イプシロン結合面のｒｅｓｉｄｅｓにランダムに導入された点突然変異を検査することにより、ｈｕＵＣＨＴ１（Ｙ１７７Ｔ）突然変異を同定した。スクリーンでは、（Ｙ１７７Ｔ）突然変異の同定に成功した。（Ｙ１７７Ｔ）突然変異は、Ｔ細胞活性化を保持しながら、Ｔｒｉ−ＴＡＣ表面発現を結果としてもたらした。ΔＣＤ４は、４つのＣＤ４細胞外免疫グロブリン様ドメインを欠いており、細胞外リンカー、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインを保持する。
【０２０９】
ＧＭＰグレードのレンチウイルスベクターを生成するために、ＣＤ１９  Ｔｒｉ−ＴＡＣ構築物を、ＭＳＣＶプロモーターの制御下で新しいレンチウイルスベクターにクローン化した。ＣＤ１９  Ｔｒｉ−ＴＡＣ構築物は図１７に示されるものと同じである。
【０２１０】
実施例６．様々なドナー材料からＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞を製造する能力
図１８は、複数のドナーから製造されたＣＤ１９  ＴＡＣ発現Ｔ細胞の有効性を示す。ＣＤ１９  ＴＡＣ発現Ｔ細胞を、３つの異なるドナーからのＴ細胞を使用して産生し、ＮＡＬＭ−６腫瘍モデルにおいて試験した。確立されたＮＡＬＭ−６腫瘍を保有するマウスを、４×１０６のＣＤ１９  ＴＡＣ発現Ｔ細胞の単回投与で処置した。対照マウスは急速な腫瘍の増殖を示し、すべてのマウスは試験の終了までにエンドポイントに到達した。ドナー１および２のＴ細胞産物は、すべてのマウスにおいて完全な制御をもたらした。ドナー３のＴ細胞産物は、すべてのマウスにおいて頑強な腫瘍制御を結果としてもたらし、処置されたマウスの２／４において長期的な制御を結果としてもたらした。この試験により、複数の健康なドナーに由来するＣＤ１９  ＴＡＣ発現Ｔ細胞によって腫瘍拒絶が達成されることが確認された。図１８におけるＮＡＬＭ−６腫瘍モデルの結果は、有効なＣＤ１９  ＴＡＣが複数のドナーソース材料から産生されることを示唆している。
【０２１１】
実施例７．ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞のインビトロの細胞毒性およびインビボの有効性
様々なＣＤ１９陽性細胞に有効に結合するＣＤ１９−ＴＡＣの能力を評価するために、Ｔｒｉ−ＴＡＣで操作されたＴ細胞を、ＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）、Ｒａｊｉ（バーキットリンパ腫）、またはＪｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）のいずれかと共培養した。ＮＡＬＭ−６細胞、Ｊｅｋｏ−１細胞、およびＲａｊｉ細胞を、増強されたホタルルシフェラーゼで操作することで、生物発光イメージングによる、インビトロおよび生きている動物の腫瘍量のトラッキングを可能にした。
【０２１２】
図１９Ａ−図１９Ｃは、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞による腫瘍細胞株の殺傷を示す。その効果は用量依存的であり、エフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）の比が増加するにつれて増加した。陰性対照として、ΔＴＡＣ（抗原結合ドメインを欠く）で操作された細胞または形質導入されていないＴ細胞を使用した。これらの結果は、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞がＣＤ１９陽性腫瘍細胞を殺傷することを示している。
【０２１３】
図１９Ｄ−図１９Ｇは、ＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）、Ｒａｊｉ（バーキットリンパ腫）、またはＪｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）の液性腫瘍のいずれかで操作されたマウスにおける、ＣＤ１９−ＴＡＣの有効性を評価するインビボ試験の設計と結果を示す。ＮＡＬＭ−６、Ｒａｊｉ、およびＪｅｋｏ−１の腫瘍を引き起こすために、ＮＡＬＭ−６細胞、Ｒａｊｉ細胞、またはＪｅｋｏ−１細胞をそれぞれマウスに接種し、４日あるいは７日間収容して、腫瘍の生着を可能にした。４あるいは７日目に、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞を静脈内尾静脈注射として与えた。腫瘍量を週間隔で測定し、そのデータを平均輝度［ｐ／ｓ／ｃｍ＾２／ｓｒ］としてプロットする。
【０２１４】
図１９Ｅ−図１９Ｇは、ＣＤ１９−ＴＡＣで操作されたＴ細胞が、ＮＡＬＭ−６（急性リンパ芽球性白血病）、Ｒａｊｉ（バーキットリンパ腫）、またはＪｅｋｏ−１（マントル細胞リンパ腫）の液性腫瘍における、腫瘍退縮と長期的腫瘍制御の誘導に効果的であることを示す。
【０２１５】
図１９Ａ−図１９ＧでのＮＡＭＬ−６、Ｒａｊｉ、またはＪｅｋｏ−１の腫瘍モデルの結果は、ＣＤ１９−ＴＡＣが、様々なＣＤ１９陽性腫瘍モデルにおいて効果的であることを示唆している。
【０２１６】
実施例８．ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の持続性および永続的な腫瘍免疫性
図２０Ａ−図２０Ｂは、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞を受けるマウスにおける、腫瘍免疫性の持続性および再負荷に対する耐性を示す。確立されたＮＡＬＭ−６腫瘍を保有するマウスを、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞で処置した。
【０２１７】
図２０Ａは、マウスにおけるＣＤ１９−ＴＡＣの持続性を決定するための実験準備（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｓｅｔ  ｕｐ）を示す。マウスにＮＡＬＭ−６細胞を最初に接種し、４日の生着期間後にそのマウスをＣＤ１９−ＴＡＣで処置した。マウスはすべて、腫瘍退縮および完全な腫瘍制御を示した。最初の処置から５６日後に、ＮＡＬＭ−６（ＣＤ１９陽性）またはＫＭＳ１１（ＣＤ１９陰性）の液性腫瘍のいずれかでマウスを再負荷した。すべての場合において、ナイーブマウスに腫瘍細胞を同時注入し、陰性対照として使用した。発光シグナルを介して腫瘍量を追跡する。
【０２１８】
図２０Ｂ：確立されたＮＡＬＭ−６腫瘍を保有するマウスを、合計４×１０６の操作された細胞の分割投与として与えられるＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞で処置した。処置されていない動物の群を対照として使用した。ＡＣＴ後に、処置されたマウスは耐久性のある抗腫瘍反応を提示した。これに対して、対照マウスは、腫瘍体積の指数関数的な増加を示し、腫瘍量に関連するエンドポイントに到達した。ＡＣＴ後５６日目に、マウスを、ＮＡＬＭ−６腫瘍細胞（ＣＤ１９陽性）またはＫＭＳ１１腫瘍細胞（ＣＤ１９陰性）のいずれかで再負荷した。ＣＤ１９−ＴＡＣで処置したマウスは、ＮＡＬＭ−６（ＣＤ１９陽性）腫瘍細胞から保護されたままであるが、ＫＭＳ１１（ＣＤ１９陰性）腫瘍細胞からは保護されない。
【０２１９】
図２０Ａおよび図２０Ｂでの再負荷実験の結果は、ＣＤ１９−ＴＡＣが、場合によっては、抗腫瘍特性を保持する長寿命メモリー細胞に分化することを示唆している。
【０２２０】
実施例９．ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞のインビボの増殖および用量依存性
図２１および図２２は、ＮＡＬＭ−６癌モデルにおける用量依存性、投与計画（分割または単回）、およびＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の増殖を示す。図２１Ａは実験計画を示す。マウスは、腫瘍接種後４日目のＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の単回投与、または７日間あけた分割投与のいずれかを受けた。複数のＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の投与用量を試験した：０．５ｘ１０６、１ｘ１０６、および４ｘ１０６細胞。図２１Ｂのマウスの対照群は４×１０６の形質導入されていない細胞を受けるか、あるいは凍結培地（ビヒクル対照）を受ける。
【０２２１】
図２１Ｂは、ＮＡＬＭ−６注射およびＣＤ１９−ＴＡＣ注射後のマウスの生存を示す。生存の用量依存的な促進が単回投与群および分割投与群の両方で観察され、最高の単回投与量が腫瘍成長を制限し、マウスの生存を促進した。
【０２２２】
図２２Ａは、Ｔ細胞増殖を評価するために使用されたゲーティング戦略を示す。リンパ球集団を選択するために、前方散乱および側方散乱に基づいて細胞を最初に選択した。シングレット細胞（Ｓｉｎｇｌｅｔ  ｃｅｌｌｓ）を、高さゲート上の前方散乱領域を介して同定した。近赤外ゲーティング（ｎｅａｒ  ＩＲ  ｇａｔｉｎｇ）を介して生細胞を同定した。ｈＣＤ４５ゲートを介してヒト細胞を同定した。結果として生じる細胞のサブセットを、ＣＤ３陽性細胞へとさらに分割した。その後、これらの細胞をＣＤ４／ＣＤ８およびプロテインＬ上でゲート（ｇａｔｅ）した。染色策略は、マウス血液細胞を同定するためのｍｕＣＤ４５＿１も含有していた。ＮＡＬＭ−６細胞の染色のためのＣＤ１９が含まれていた。
【０２２３】
図２２Ｂは、分割投与の養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）後のマウスにおけるＴ細胞の増殖を示す。ＡＣＴ後、血液サンプルを定期的に得て、フローサイトメトリーによって分析した。値をＡＣＴ１後の血液中に存在するＴ細胞の合計数に正規化した。採血の差を説明するために、値をＣＤ４５．１＋（マウス）細胞の合計数にさらに正規化した。ＣＤ１９−ＴＡＣで操作された細胞で処置されたマウスにおけるＴ細胞は、第１のＡＣＴ後およそ１−２週間以内にレシピエントマウスで増殖することが示された（図２２Ｂ）。形質導入されていない細胞は増殖しなかった（図２２Ｂ）。
【０２２４】
様々な用量、投与レジメン（図２１Ｂ）、およびＴ細胞数（図２２Ｂ）の結果は、ＣＤ１９−ＴＡＣ有効性が用量依存的であること、操作されたＴ細胞がインビボで増殖すること、ならびに、この増殖がＣＤ１９陽性腫瘍を保有する動物におけるＣＤ１９−ＴＡＣで操作された細胞に特異的であること、を示唆している。
【０２２５】
実施例１０：ＣＤ１９−ＴＡＣ処置のインビボの有効性、長期有効性、および安全性
図２３−図２５は、長期的な安全性と有効性（図２３）、および任意の急性処置に関連する毒性がない状態（図２４−図２５）を示す。
【０２２６】
図２３Ａは実験計画を示す。マウスに０．５×１０６の増強されたルシフェラーゼで操作されたＮＡＬＭ−６細胞を注射し、それを４日間生着させた。その後、そのマウスを、単回投与で、ＣＤ１９−ＴＡＣで操作されたＴ細胞の２つの投与レベル（４×１０６および１２×１０６の操作された細胞）で処置する。次に、定期的な発光計測によって腫瘍成長を追跡する。マウスの健康を、マウスの行動および物理的特性（毛づくろい、運動性、毛皮の完全性（ｆｕｒ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ））の検査によって定期的に評価した。
【０２２７】
図２３Ｂは、ビヒクルのみ（凍結培地）、操作されていない対照細胞（最も高度に操作された処置群の総Ｔ細胞投与と等しい総Ｔ細胞投与）、および４×１０６または１２×１０６のいずれかの操作されたＣＤ１９−ＴＡＣで操作されたＴ細胞での処置後の発光による腫瘍量を示す。両方の対照は、急速な腫瘍増殖を示すが、抗腫瘍効果は示さない。対照投与は、おそらくは、生着ニッチのための高用量Ｔ細胞と腫瘍細胞との間での競合ゆえに、ビヒクルのみと比較して、腫瘍増殖の遅延を結果としてもたらす。操作されたＴ細胞はすべての場合で腫瘍退縮を示す。高用量処置群はすべての場合で完全な腫瘍制御を示す。４×１０６の処置群は、完全な制御を有する３匹のマウス、遅延した腫瘍増殖を有する１匹のマウス、および制御されているが高い腫瘍量を有する１匹のマウスを示す。
【０２２８】
図２３Ｃは、様々な処置群の全生存期間を示す。ビヒクルと操作されていない対照のマウスの両方において、すべてのマウスは２３〜３５日内に腫瘍にそれぞれ屈した。高用量ＣＤ１９−ＴＡＣ処置の場合には、すべてのマウスがＧｖＨＤ症状を示し、６１日以内にＧｖＨＤに屈した。ＧｖＨＤは、改変されたＴ細胞での処置ではなく、マウスモデル自体の結果である。低用量マウスは、９０日の試験の終わりまでに３匹のマウスの生存を示し、１匹のマウスは高い腫瘍量に屈し、１匹のマウスはＧｖＨＤに屈する。
【０２２９】
図２４および図２５は、ビヒクル対照マウス、操作されていないマウス、ＣＤ１９−ＴＡＣ（４×１０６ならびに１２×１０６の有効なＣＤ１９−ＴＡＣで操作された細胞）で処置されたマウスの臨床化学パラメータおよびサイトカインレベルを示す。マウスを３３日間追跡し、ＡＣＴ後５、１２、および３３日目に血液サンプルを採取した。ＣＤ１９−ＴＡＣで処置されたマウスのみが３３日間生き残った。ビヒクル対照マウスは、３回目の血液サンプルが採取される前に腫瘍量に屈し、操作されていない細胞は、マウスが腫瘍量関連エンドポイントに到達する直前の２６日目に早期に屠殺した。すべての血液サンプルを、いくつかの臨床化学パラメータおよびサイトカインレベルについて分析した。
【０２３０】
図２４は、５日目および１２日目に、ＣＤ１９−ＴＡＣで処置されたマウスが、対照群と比較して有意に高いパラメータを示さないことを示す。一部のマウスが、２６日目にサンプリングされた操作されていない細胞で処置されたマウスと同様に、高レベルを経験するアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を例外として、３３日目では、処置されたマウスはすべて、初期処置時点に匹敵する臨床化学パラメータを示す。
【０２３１】
図２５は、５、１２、および３３日のサイトカイン応答を示す。ＡＣＴ後５日目に、対照のマウスではなく、ＣＤ１９−ＴＡＣマウスが、試験されたすべてのサイトカインの上昇を示す。サイトカインの上昇は、抗原陽性ＮＡＬＭ−６腫瘍細胞を認識し、それに応答するＣＤ１９−ＴＡＣで操作されたＴ細胞の炎症反応に一致する。最初の反応が１２日目まで続いた後、サイトカインレベルが鎮まり、これはその時までに誘発された腫瘍退縮および一般に低い細胞量と相関する。１２日目に、処置されたＣＤ１９−ＴＡＣ間のサイトカインレベルは、ＩＬ１０を除いて、操作されていないＴ細胞と同様であるか、またはそれよりも低い。後期段階で、形質導入されていないＴ細胞またはＣＤ１９−ＴＡＣで操作されたＴ細胞で処置されたすべてのマウスは、おそらくＧｖＨＤの発症に関連するサイトカインの上昇を示す。５、１２、２６、および３３日目のサイトカイン応答を示す図２９をさらに参照する。
【０２３２】
ＣＤ１９−ＴＡＣで処置されたマウスの長期追跡調査の結果およびそれらの臨床化学プロファイルは、操作されたＴ細胞が使用に安全であり、かつＣＤ１９−ＴＡＣ操作によって特異的に引き起こされた毒性の兆候を示さないことを実証する。サイトカイン試験の結果は、すべてのサイトカインレベルの低下に続く、抗腫瘍効果に関連する初期の炎症反応を示し、制御された炎症反応を示唆している。
【０２３３】
実施例１１．いくつかのＢＣＭＡＴｒｉ−ＴＡＣ変異体のインビボの有効性
図２６は、様々なＢＣＭＡＴｒｉ−ＴＡＣ構築物に関するインビボの有効性研究を示す。図２６Ａは全体的な実験計画を示す。１００万のルシフェラーゼで操作されたＫＭＳ１１（ＢＣＭＡ陽性）腫瘍細胞を、１２日間生着させた。その後、マウスを４００万のＢＣＭＡ構築物および対照（図２６Ｂ）の単回有効量で処置した。腫瘍量を発光測定によって定期的に評価した。その後、腫瘍退縮および腫瘍制御を示したすべてのマウスを、ＡＣＴ後２５日目に１００万のＫＭＳ１１細胞で再負荷した。
【０２３４】
図２６Ｃ：ＡＣＴ後に、対照マウスは、１９〜２５日内に腫瘍関連エンドポイントに到達する腫瘍細胞の急速な増殖を示した。これに対して、ＢＣＭＡ−ＴＡＣで処置されたマウスはすべて、初期の腫瘍退縮を示した。腫瘍制御は構築物間で異なり、Ｇ４Ｓ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）３６２５ＶＨ−ＶＬは初期の腫瘍制御の最低レベルを示し、短いヘリックス３６２５  ＶＬ−ＶＨは初期の腫瘍制御の最高レベルを示す。再負荷後、２５日目まで腫瘍制御を維持したすべての構築物の大半は、再負荷から保護され続けた。
【０２３５】
このインビボ試験の結果は、様々なＢＣＭＡ  Ｔｒｉ−ＴＡＣ構築物が、ＫＭＳ１１（ＢＣＭＡ陽性）液性腫瘍を制御するのに効果的であることを実証する。しかし、その特定の好ましい構成は優れた有効性をもたらす。一般的に、ヘリックスコネクタ領域は、同じｓｃＦｖ構成内のフレキシブルリンカーと比較して、相対的な利点をもたらした。
【０２３６】
実施例１２．ＴＡＣ−Ｈｅｒ２のインビボ
マウスの後側腹部にＯＶＣＡＲ３固形腫瘍を接種する。腫瘍を１００ｍｍ３のサイズに確立および成長させる。その後、マウスを、ＴＡＣ−Ｈｅｒ２で操作されたＴ細胞の静脈内尾静脈注射で処置した。腫瘍体積を定期的に測定する。
【０２３７】
実施例１３．臨床試験
臨床研究を実施し、その臨床試験では、ＡＳＣＴを含む少なくとも２つの前治療に失敗したことがあるか、またはＡＳＣＴに不適格である、ＣＤ１９陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を有する少なくとも１８歳の被験体をＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞で処置する。試験は、非盲検、単一群、１／２相の２段階試験であり、最大耐量（ＭＴＤ）あるいは第ＩＩ相臨床試験の推奨用量（ＲＰｈ２Ｄ）を決定するための用量漸増段階、その後の選択された投与による拡大コホートを特徴とする。
【０２３８】
登録に際して、被験体は、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の製造のためのＴ細胞を得るために、白血球除去を受ける。製造が成功すると、被験体は処置段階に入る。この段階は、フルダラビンとシクロホスファミドを用いたリンパ球枯渇（ｌｙｍｐｈｏｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）化学療法、その後のＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の静脈内（ＩＶ）投与を含む。ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞での処置後、被験体は処置後経過観察に入り、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の最後の投与から２年間、安全性、疾患状態、および生存について追跡する。試験終了後、被験体を、別個の長期追跡調査プロトコルにおいて、ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の最後の投与から最大１５年、生存、長期毒性、およびウイルスベクター安全性について追跡する。
【０２３９】
すべての群において、試験全体にわたって安全性を評価する。ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の初回投与から細胞がもはや検出できなくなるまで、Ｔ細胞増殖を評価する。Ｘ線疾患評価を、処置前、およびＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の最後の投与からおよそ３、６、９、１２、１８、ならびに２４ヶ月後に、あるいは進行性疾患まで、あるいはさらなる抗癌治療による処置まで、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）および／またはコンピューター断層撮影法（ＣＴ）によって実施する。
【０２４０】
実施例１４．ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の薬物製品の生産
ＣＤ１９−ＴＡＣ発現Ｔ細胞の薬物製品の製造工程は、白血球除去産物からＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞を選択すること、ＣＤ４／ＣＤ８陽性細胞を活性化すること、ＣＤ１９−ＴＡＣ構築物（実施例５に記載される）を含むレンチウイルスベクターで細胞を形質導入すること、形質導入された細胞を提案された投与スケジュールに適切なレベルに増殖させること、および最終生産物を収集し、凍結保存することを含む。
【０２４１】
その関連する固有の被験体識別子（ＵＰＮ）を伴う患者の白血球除去材料が、製造現場で受け取られ、固有の検体番号（ＩＳＮ）が与えられる。ＣＤ４／ＣＤ８細胞を選択し、培養プロセス工程の開始まで凍結保存する。
【０２４２】
凍結保存されたＣＤ４／ＣＤ８のポジティブに選択されたＴ細胞を３７°Ｃで解凍し、適切な培地に再懸濁し、活性化試薬とともに培養バッグに播種し、培養物を３７°Ｃ／５％のＣＯ２で一晩インキュベートする。
【０２４３】
細胞を、適切な感染多重度（ＭＯＩ）で、ＣＤ１９−ＴＡＣレンチウイルスベクターで形質導入し、３７°Ｃ／５％のＣＯ２で一晩インキュベートする。次の日に、培養物を完全培地で補足して所望の細胞濃度を維持し、トランスファーバッグ（ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂａｇｓ）に最終的にプールし、ペレット化し、再懸濁し、標的細胞密度でより大きな培養バッグに播種した。
【０２４４】
薬物製品製剤については、集めた細胞懸濁液を賦形剤に再懸濁し、制御速度の（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｒａｔｅ）冷凍装置で凍結保存し、その後、ＬＮ２ストレージに移す。
【０２４５】
上記製品を冷凍状態で臨床現場に出荷し、ベッドサイドで解凍し、静脈内投与する。
【０２４６】
臨床試験前に、エンジニアリング製造ラン（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｒｕｎ）を、健康なドナー白血球除去材料を使用するすべての製造過程および放出試験を含めて行う。製造過程および放出試験に加えて、規制当局への提出書類を裏付ける試験を、これらのエンジニアリングランからの最終薬物製品に対して行う。これらの試験は、解凍後の安定性、長期安定性の開始、成長促進サイトカインのクリアランスを保証する残留試験、および潜在的な機能／効能の初期評価を示すアッセイを含む。
【０２４７】
実施例１５．ＢＣＭＡ陽性悪性腫瘍の処置のためのＢＣＭＡ特異的なＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）治療の前臨床開発
図２７は、ＴＡＣが細胞上の抗原に遭遇する場合に増殖するが、抗原が人工ビーズ上で提示される場合は増殖せず；しかし、ＣＡＲは、抗原がビーズ上で提示されるか細胞上で提示されるかに関係なく増殖することを示す。
【０２４８】
図２８Ａ−図２８Ｂは、ＴＡＣで操作されたＴ細胞がインビボで増殖し、長期の保護をもたらすことを示し、骨髄腫モデルにおける細胞持続性を示している。図２８Ａ−図２８Ｂは、ＢＣＭＡ−ＴＡＣ  Ｔ細胞が、ＮａｎｏＬｕｃ（ＫＭＳ  １１−ＮａｎｏＬｕｃ）（ＢＣＭＡｐｏｓ）で操作されたＫＭＳ−１１異種移植モデルにおいて多発性骨髄腫腫瘍を拒絶することを示す。腫瘍移植後に、マウスをＢＣＭＡ  ＴＡＣＴ細胞（ホタルルシフェラーゼを保有する）で処置した。ＴＡＣＴ細胞は投与後に有意に増殖した。このことは腫瘍退縮と相関する。処置されたマウスは、腫瘍再負荷に耐性を示しており、ＴＡＣＴ細胞の長期持続性を示している。
【０２４９】
データは、ＴＡＣ−Ｔ細胞が、おそらくＴ細胞活性化の天然のプロセスを模倣するメカニズムによって、腫瘍細胞を破壊することを示す。ＴＡＣ技術は、１）液体中の強力な有効性、２）インビボの増殖、３）再負荷からマウスを保護するＴ細胞の持続性、４）Ｔ細胞の投与後の細胞増殖を例示する。
【０２５０】
実施例１６．ＭＳＣＶまたはＥＦ１αプロモーターを有するｈｕ−あるいはｍｕＩｇκＨＥＲ２−ＴＡＣのインビボおよびインビトロの活性
ＣＤ４およびＣＤ８のＴ細胞を、様々なＴＡＣ発現ウイルスで操作した。１セットの細胞を、マウスＩｇＧシグナルペプチド［ｍｕＩｇＧ  ＴＡＣ］（ＭＳＣＶ）を利用したＨＥＲ２に特異的なＴＡＣを発現させるために、ＭＳＣＶプロモーターを利用したレンチウイルスで操作した。第２のセットの細胞を、ヒトＩｇＧシグナルペプチド［ｈｕＩｇＧ  ＴＡＣ］（ＭＳＣＶ）を利用したＨＥＲ２に特異的なＴＡＣを発現させるために、ＭＳＣＶプロモーターを利用したレンチウイルスで操作した。第３のセットの細胞を、マウスＩｇＧシグナルペプチド［ｍｕＩｇＧ  ＴＡＣ（ＥＦ１α）］を利用したＨＥＲ２に特異的なＴＡＣを発現させるために、ＥＦ１αプロモーターを利用したレンチウイルスで操作した。陰性対照として、ＨＥＲ２結合ドメイン（Δ結合ドメインＴＡＣ）を欠くＴＡＣ構築物を使用した。その後、操作された細胞を、再表面発現（ｒｅｓｕｒｆａｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）および比活性についてインビトロで、および、ＯＶＣＡＲ３  ＨＥＲ２陽性固形腫瘍モデルにおける活性についてインビボで特徴づけた。
【０２５１】
図３０は、ＭＣＳＶまたはＥＦ１αのプロモーターの制御下での、ヒトあるいはマウスのいずれかのＩｇＧリーダーＨＥＲ２  ＴＡＣ受容体Ｔ細胞の表面発現を説明する。表面発現は生物学的活性の重要な要件であり、このことは、ＨＥＲ２  ＴＡＣ受容体発現が、ＩｇＧシグナルペプチドの種源によって影響を受けないことを示す。
【０２５２】
図３１は、ＭＣＳＶまたはＥＦ１αのプロモーターの制御下での、ヒトあるいはマウスのいずれかのＩｇＧリーダーＨＥＲ２  ＴＡＣ構築物で操作されたＴ細胞が、ＨＥＲ２陽性標的細胞（ＯＶＣＡＲ３）と共培養される場合にはサイトカイン産生を誘導するが、ＨＥＲ２陰性細胞（ＬＯＸ  ＩＭＶＩ）と共培養される場合はサイトカイン産生を誘導しないことを示す。このことは、ＨＥＲ２  ＴＡＣ受容体で操作されたＴ細胞が、ＨＥＲ２発現標的細胞に特異的に結合することができるが、抗原陰性細胞に対しては非反応性であることを示している。
【０２５３】
図３２は、ＭＣＳＶまたはＥＦ１αのプロモーターの制御下での、ヒトあるいはマウスのＩｇＧリーダーＨＥＲ２  ＴＡＣ構築物のインビボの有効性を示す。操作されたＴ細胞の分割投与後に、ＨＥＲ２  ＴＡＣで操作された細胞は、陰性対照Δ結合ＴＡＣと比較して、腫瘍退縮を含む腫瘍成長への有意な影響を示す。このインビボ実験は、ＨＥＲ２  ＴＡＣで操作された細胞すべてが、インビボで固形腫瘍モデルに対して有意な活性を示すことを実証する。
【０２５４】
本発明の好ましい実施形態が本明細書で示され、記載されてきたが、こうした実施形態がほんの一例として提供されているに過ぎないということは当業者にとって明白である。当業者であれば、多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく思いつくだろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用され得ることを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。
【図１Ａ】
2021530971.tif 000005
【図１Ｂ】
2021530971.tif 000006
【図１Ｃ】
2021530971.tif 000007
【図１Ｄ】
2021530971.tif 000008
【図１Ｅ】
2021530971.tif 000009
【図１Ｆ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｃ１】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｇ１】
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【図８Ｈ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ−１】
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【図１１Ａ−２】
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【図１１Ａ−３】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図１９Ｅ】
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【図１９Ｆ】
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【図１９Ｇ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ−１】
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【図２２Ａ−２】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７】
2021530971.tif 000104
【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
2021530971.tif 000106
【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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