(57)【要約】  本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましんの予防または治療のための組成物、免疫原性またはワクチン組成物、および薬学的組成物に関する。さらに、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましんを予防または治療するための方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子、および
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの抗原を含む、好ましくはそれらからなる、組成物であって、前記少なくとも１つの抗原が、ウマ科のインターロイキン−５抗原（ｅＩＬ−５抗原）であり、前記ｅＩＬ−５抗原が、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である、  （ａ）および（ｂ）が、少なくとも１つの非ペプチド共有結合により前記少なくとも１つの第１の付着部位および前記少なくとも１つの第２の付着部位を介して結合しており、
ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法で使用するためであり、好ましくは、有効量の前記組成物が、前記ウマ科の哺乳動物、好ましくは前記ウマに投与される、組成物。
【請求項２】
前記じんましんの予防または治療が、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの虫刺され過敏症（ＩＢＨ）の予防または治療ではない、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記じんましんの予防または治療が、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの虫刺され過敏症（ＩＢＨ）によって引き起こされるじんましんの予防または治療ではない、請求項１または請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記組成物が、ウマ科のインターロイキン−３１抗原（ｅＩＬ−３１抗原）を含まず、好ましくは前記ｅＩＬ−３１抗原が、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記方法が、前記ウマ科の哺乳動物、好ましくは前記ウマへの、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物の投与を含まない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
前記方法が、前記ウマ科の哺乳動物、好ましくは前記ウマへの、ｅＩＬ−３１抗原の投与を含まない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記ｅＩＬ−５抗原が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、および配列番号５から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記コア粒子が、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換えＶＬＰであり、さらに好ましくは前記ＶＬＰが、植物ウイルスに由来する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記ＶＬＰが、少なくとも１つの改変ＶＬＰポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなる改変ＶＬＰであり、前記改変ＶＬＰポリペプチドが、
（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および
（ｂ）Ｔヘルパー細胞エピトープ
を含むか、または好ましくはそれからなり、前記ＶＬＰポリペプチドが、
（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、前記変異されるアミノ酸配列が、ウイルスの前記コートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コートタンパク質が、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す、請求項６または７のいずれかに記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記ＶＬＰが、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰが、少なくとも１つの改変ＣＭＶを含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなり、前記改変ＣＭＶポリペプチドが、
（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および
（ｂ）Ｔヘルパー細胞エピトープ
を含む、または好ましくはそれからなり、前記ＣＭＶポリペプチドが、
（ｉｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、前記変異されるアミノ酸配列が、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質が、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す、請求項６〜８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記Ｔヘルパー細胞エピトープが、前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域を置換し、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域が、配列番号６のアミノ酸２〜１２に対応する、請求項９に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
前記ＣＭＶポリペプチドが、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、前記アミノ酸配列が、配列番号６、または配列番号６の少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、前記アミノ配列が、配列番号１７を含む、請求項９または１０のいずれに記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
前記Ｔヘルパー細胞エピトープが、前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域を置換し、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置換されたＮ末端領域が、１１〜１３個の連続したアミノ酸、好ましくは１１個の連続したアミノ酸からなり、さらに好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域が、配列番号６のアミノ酸２〜１２に対応する、請求項１１に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記改変ＣＭＶポリペプチドが、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなる、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記組成物の前記投与が、前記投与前の前記じんましん、好ましくは再発性じんましんに関連する少なくとも１つのパラメーターまたは症状と比較して、前記じんましん、好ましくは再発性じんましんに関連する前記少なくとも１つのパラメーターまたは症状を低減し、さらに好ましくは、前記じんましん、好ましくは再発性じんましんに関連する前記少なくとも１つのパラメーターまたは症状が、じんましん（ｈｉｖｅｓ）の領域による前記じんましんのレベルまたは重症度グレードであり、および再びさらに好ましくは、じんましんの領域による前記じんましんの前記レベルまたは重症度グレードが、じんましん活性スコアリング試験によって決定され、好ましくは、前記じんましん活性スコアリング試験が、実施例１に記載されるように実行される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの慢性再発性じんましんの予防または治療のための組成物、免疫原性またはワクチン組成物、および薬学的組成物に関する。さらに、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましんを予防または治療するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
独立した、またはアレルギーに関連する再発性（慢性）じんましんは、一般的にウマに見られる（Ｙｕ，ＡＡ  ＡＡＥＰ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，Ｅｑｕｉｎｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．（２００６）５２，４８５−４８９）。ウマの再発性じんましんは、皮膚における浮腫性膨疹に現れる。
【０００３】
真性じんましんとも呼ばれるウマのじんましんの臨床症状は、しこり、膨疹、または輪のある明確な隆起領域であり、表層の真皮に発生する。重症例では、例えば、顔全体が腫れ得る。じんましんの病因は、好塩基球の脱顆粒を伴うＩ型アレルギーの肥満細胞の脱顆粒と同様に含む。したがって、ヒスタミン、ヘパリン、サイトカイン、プロスタグランジン、ロイクトリアンなどの化学的メディエーターは、血管透過性（血管性浮腫）および炎症を引き起こす膨疹形成、特徴的なじんましん病変を引き起こす（ＤＷ  Ｓｃｏｔｔ，ＷＨ  Ｍｉｌｌｅｒ，Ｓｋｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｓｋｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３），４２０−４２７、ＲＲＲ  Ｐａｓｃｏｅ，ＤＣ  Ｋｎｏｔｔｅｂｂｅｌｔ，Ｉｍｍｕｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ／ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｅｑｕｉｎｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（１９９９），１５６−１６０、ＣＥ  Ｇｒａｔｔａｎ，ＲＡ  Ｓａｂｒｏｅ，ＭＷ  Ｇｒｅａｖｅｓ，Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｕｒｔｉｃａｒｉａ，Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２），４６（５）：６４５−６４７、Ｓ  Ｒｕｆｅｎａｃｈｔ，Ｅ  Ｍａｒｔｉ，Ｃ  ｖｏｎ  Ｔｓｃｈａｒｎｅｒ，Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｅ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｓｋｉｎ  ｂｉｏｓｐｉｅｓ  ｏｆ  ｈｏｒｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｕｒｔｉｃａｒｉａ（２００５），Ｖｅｔ  Ｄｅｒｍａｔｏ  １６（２）：９４−１０１、Ｌ  Ａｋｕｃｅｗｉｃｈ，Ｇ．Ｋｕｎｋｌｅ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  Ｅｑｕｉｎｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００７）１００−１１１、Ａ．Ｄｉｅｓｅｌ：Ｅｑｕｉｎｅ  ｕｒｔｉｃａｒｉａ：ａ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ、Ｉｎ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，（２０１４）Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．６，２９５−３００）。そのような膨疹および病変は、それぞれ、通常、直径が数ミリメートルから数センチメートルであり、高さが数ミリメートルであり、指の圧力で穴が開いている。じんましんおよびそのような膨疹は、奇妙な形およびパターンとして現れ得、しばしば、合体して広い領域を覆い、プラークとして現れ得る。病変は、どこにでも現れ得るが、それらは、首、体幹、および近位端で最も一般的である。個々の病変は、２４〜４８時間存在するが、慢性じんましんのエピソードは、少なくとも６〜８週間継続し得る。皮膚生検では、軽度から中等度の血管周囲から間質性の皮膚炎が明らかになり、多数の好酸球およびリンパ球、ならびに可変の真皮浮腫が見られる（ＤＱ  Ｓｃｏｔｔ，ＷＨ  Ｍｉｌｌｅｒ，Ｅｑｕｉｎｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１０），Ｓｋｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｓｋｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８）。
【０００４】
じんましんの原因は、さまざまであり、免疫学的原因および非免疫学的原因が含まれる。長期的な臨床管理および治療の課題は、根本的な原因の特定である。
【０００５】
免疫学的原因は、特に、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、吸入アレルゲン、虫刺され過敏症、特に、虫刺され、ワクチンおよび薬物（ペニシリン、テトラサイクリン、スルホンアミド、ネオマイシン、シプロフロキサシン、ストレプトマイシン、アスピリン、フェニルブタゾン、フルニキシン、フェノチアジン、グアイフェネシン、イベルメクチン、モキシデクチン、ペチジン、鉄、デキストラン、ホルモン、ビタミンＢ複合体、および肝臓抽出物）によって引き起こされる過敏性反応、血管炎、物質または材料との接触、感染症（細菌（例えば、腺疫（ｓｔｒａｎｇｌｅｓ））、ウイルス（例えば、馬痘）、真菌、寄生虫（例えば、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｅｑｕｉ  ｐｅｒｄｕｍ）、原生動物）、ヘビ咬傷である。
【０００６】
非免疫学的原因には、皮膚描画症および圧力、低温、熱、日光、心理的ストレス、運動が含まれる（Ｌ  Ａｋｕｃｅｗｉｃｈ，Ｇ．Ｋｕｎｋｌｅ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  Ｅｑｕｉｎｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００７）１００−１１１）。
【０００７】
示されているように、根本的な原因および病因の特定は、長期的な臨床管理および治療の課題であり、再発が一般的であるため、治療は、しばしば苛立たしいものである（Ｙｕ，ＡＡ  ＡＡＥＰ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ，Ｅｑｕｉｎｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．（２００６）５２，４８５−４８９）。さらに、いくつかの要因および根本的な原因が、ウマのじんましん病変として現れ得、特定のトリガーの特定は、獣医およびウマの所有者の両方にとってかなり困難であり得る（Ａ．Ｄｉｅｓｅｌ：Ｅｑｕｉｎｅ  ｕｒｔｉｃａｒｉａ：ａ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ；Ｉｎ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，（２０１４）Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．６，２９５−３００）。骨粗鬆症および蹄葉炎などの重篤な副作用が発生し得るが、急性徴候は、しばしば、全身性ステロイドで治療される（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．２００８，Ｖｅｔ．Ｊ．１７７：３３４−３４４）。
【０００８】
したがって、じんましん、特に再発性じんましんの影響を受けるウマ科の動物、特にウマの予防および治療の選択肢が必要である。
【０００９】
最近、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの「皮膚掻痒（ｓｗｅｅｔ  ｉｔｃｈ）」または「夏季湿疹（ｓｕｍｍｅｒ  ｅｃｚｅｍａ）」としても知られている虫刺され過敏症（ＩＢＨ）の予防または治療のために、ウマ科のＩｌ−５抗原が結合したウイルス様粒子を含む組成物が記載されている（ＷＯ２０１７／０４２２１２）。
【発明の概要】
【００１０】
驚くべきことに、本発明の組成物は、じんましんに慢性的に冒されたウマにおけるじんましんエピソードの再発を防ぐことができたことが見出された。詳細には、毎年再発するじんましんに罹患しているウマに、治療なしの１年後およびプラセボによる治療の２年後の３年目に、本発明の好ましい組成物でワクチン接種した。すべてのウマは、未治療の年およびプラセボ治療の年にじんましん（ｕｒｔｉｃａｒｉａ  ｈｉｖｅｓ）を発症したが、本発明の好ましい組成物でワクチン接種した３年目に、すべてのウマはじんましんの臨床的兆候を示さなかった。さらに、重要なことに、約２年間、ほぼ断続的に、特に１年の四季すべての間にじんましんに罹患しているウマ患者を、本発明の好ましい組成物で首尾よくワクチン接種した。したがって、２回目のワクチン接種後、ウマにはじんましんの臨床的兆候は見られなかった。したがって、本発明の組成物は、再発性じんましんの予防および治療に有効である。
【００１１】
したがって、第１の態様において、本発明は、（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子、および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの抗原を含む、好ましくはそれらからなる組成物を提供し、当該少なくとも１つの抗原が、ウマ科のインターロイキン−５抗原（ｅＩＬ−５抗原）であり、当該ｅＩＬ−５抗原が、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、（ａ）および（ｂ）は、少なくとも１つの非ペプチド共有結合により当該少なくとも１つの第１の付着部位および当該少なくとも１つの第２の付着部位を介して結合しており、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法で使用するためであり、好ましくは有効量の当該組成物は、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマに投与され、当該組成物の当該投与は、典型的かつ好ましくは、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマにおいて、当該じんましん、好ましくは当該再発性じんましんを予防または治療する。
【００１２】
さらなる態様において、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法で使用するための、当該組成物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供し、好ましくは有効量の当該薬学的組成物が当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマに投与され、当該薬学的組成物の当該投与は、典型的かつ好ましくは、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマにおいて、当該じんましん、好ましくは当該再発性じんましんを予防または治療する。
【００１３】
さらなる態様において、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法を提供し、当該方法は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマに、有効量の本発明の組成物または本発明の薬学的組成物を投与することを含む。
【００１４】
別の態様において、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療のための薬剤の製造のための本発明の組成物または当該本発明の薬学的組成物の使用を提供し、典型的かつ好ましくは、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマに、有効量の当該本発明の組成物または当該本発明の薬学的組成物が、投与される。
【００１５】
この説明を続けると、本発明のさらなる態様および実施形態が明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】：ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０のカップリング反応の分析。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる。タンパク質はクマシーブルーで染色された：ｅＩＬ−５モノマー（ｅＩＬ−５、ｍ）、ｅＩＬ−５ダイマー（ｅＩＬ−５、ｄ）、ＣＭＶ（ＣＭＶ、ｍ）、カップリング（ｃ）。レーンＭ、サイズマーカー（青、染色済み、ＮｕＰＡＧＥ、Ｎｏｖｅｘ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを参照）、レーン１、ＴＣＥＰ活性化ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ、レーン２、化学架橋剤ＳＭＰＨで誘導体化後のＣＭＶｔｔ８３０−ＶＬＰ、レーン３、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０カップリング反応。
【図１Ｂ】：ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０のカップリング反応の分析。ウエスタンブロットによる。α−Ｈｉｓ抗体で染色：ｅＩＬ−５モノマー（ｅＩＬ−５、ｍ）、ｅＩＬ−５ダイマー（ｅＩＬ−５、ｄ）、カップリング（ｃ）。レーンＭ、サイズマーカー（青、染色済み、ＮｕＰＡＧＥ、Ｎｏｖｅｘ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを参照）、レーン１、ＴＣＥＰ活性化ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ、レーン２、化学架橋剤ＳＭＰＨで誘導体化後のＣＭＶｔｔ８３０−ＶＬＰ、レーン３、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０カップリング反応。
【図２Ａ】：ウマにおける抗ｅＩＬ−５抗体価のＥＬＩＳＡ。ウマからの血清。ウマのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑ  βワクチンによる２回目のワクチン接種後（５６日目から数日後）の免疫前および血清を収集した。ｅＩＬ−５に対する抗体について血清を分析した。０、２８、５６、および８４日目に４頭のウマを、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑβで免疫した。データは、免疫前の値を差し引いた血清のＯＤ５０値を示す。
【図２Ｂ】：ウマにおける抗Ｑβ抗体価のＥＬＩＳＡ。ウマからの血清。ウマのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑβワクチンによる２回目のワクチン接種後（５６日目から数日後）の免疫前および血清を収集した。Ｑβに対する抗体について血清を分析した。０、２８、５６、および８４日目に４頭のウマを、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑβで免疫した。データは、免疫前の値を差し引いた血清のＯＤ５０値を示す。
【図２Ｃ】：ウマにおける抗ｅＩＬ−５抗体価のＥＬＩＳＡ。ウマからの血清。ウマのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンによる２回目のワクチン接種後（５６日目から数日後）の免疫前および血清を収集した。ｅＩＬ−５に対する抗体について血清を分析した。０、２８、および１３３日目に１３頭のウマを、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０で免疫した。データは、免疫前の値を差し引いた血清のＯＤ５０値を示す。
【図２Ｄ】：ウマにおける抗ＣＭＶｔｔ８３０抗体価のＥＬＩＳＡ。ウマからの血清。ウマのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンによる２回目のワクチン接種後（５６日目から数日後）の免疫前および血清を収集した。ＣＭＶｔｔ８３０に対する抗体について血清を分析した。０、２８、および１３３日目に１３頭のウマを、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０で免疫した。データは、免疫前の値を差し引いた血清のＯＤ５０値を示す。
【図２Ｅ】：ウマにおける抗ｅＩＬ−５抗体価のＥＬＩＳＡ。ウマからの血清。ウマのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンによる２回目のワクチン接種後（５６日目から数日後）の免疫前および血清を収集した。ｅＩＬ−５に対する抗体について血清を分析した。０、２８、および１３３日目に３頭の再発性じんましんに罹患したウマ（ウマ１、ウマ２、およびウマ３、図４および５を参照）を、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０で免疫した。データは、免疫前の値を差し引いた血清のＯＤ５０値を示す。
【図２Ｆ】：ウマにおける抗ＣＭＶｔｔ８３０抗体価のＥＬＩＳＡ。ウマからの血清。ウマのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンによる２回目のワクチン接種後（５６日目から数日後）の免疫前および血清を収集した。ＣＭＶｔｔ８３０に対する抗体について血清を分析した。０、２８、および１３３日目に３頭の再発性じんましんのウマ（ウマ１、ウマ２、およびウマ３、図４および５を参照）を、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０で免疫した。データは、免疫前の値を差し引いた血清のＯＤ５０値を示す。
【図３】：ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種による抗ｅＩＬ−５抗体産生時の血中好酸球レベルの低下。血中好酸球レベルは、プラセボ治療した年（１）およびｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種した年（２）でモニタリングした。
【図４Ａ】：１年目、未治療時（１）、２年目、プラセボ治療時（２）、３年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（３）、および４年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（４）のウマ１のじんましん活性スコア（ＵＡＳ、ｙ軸）。
【図４Ｂ】：１年目、未治療時（１）、２年目、プラセボ治療時（２）、３年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（３）、および４年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（４）のウマ２のじんましん活性スコア（ＵＡＳ、ｙ軸）。
【図４Ｃ】：１年目、未治療時（２）、２年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（３）、および４年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（４）のウマ３のじんましん活性スコア（ＵＡＳ、ｙ軸）。
【図５Ａ】：２年目、プラセボ治療時（１）、および３年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（２）のウマ１のじんましんまたは健康な皮膚。
【図５Ｂ】：２年目、プラセボ治療時（１）、および３年目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種時（２）のウマ３のじんましんまたは健康な皮膚。
【図６Ａ】：ウマ４、未治療。２０１７年８月、２０１８年１０月、および２０１８年１２月のワクチン接種前のじんましん膨疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ  ｗｈｅｅｌｓ）の写真。
【図６Ｂ】：２０１９年１月および２０１９年２月に予防接種を受けたウマ４。ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０の２回目のワクチン接種後の写真。
【図６Ｃ】：ワクチン接種前（１）、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種を用いた２回目の免疫付与後（２）、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種を用いた３回目の免疫付与後（３）のウマ４のじんましん活性スコア（ＵＡＳ、ｙ軸）。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００１８】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）：本明細書で使用される「ウイルス様粒子（ＶＬＰ）」という用語は、非複製性もしくは非感染性、好ましくは非複製性および非感染性のウイルス粒子を指すか、または非複製性もしくは非感染性、好ましくは非複製性および非感染性のウイルス粒子に似た構造体、好ましくはウイルスのキャプシドを指す。本明細書で使用される「非複製」という用語は、ＶＬＰによって含まれるゲノムを複製することができないことを指す。本明細書で使用される「非感染性」という用語は、宿主細胞に入ることができないことを指す。本発明によるウイルス様粒子は、ウイルスゲノムまたはゲノム機能の全部または一部を欠いているため、非複製性および非感染性である。本発明によるウイルス様粒子は、それらのゲノムとは異なる核酸を含有し得る。組換え生成ウイルス様粒子は、典型的には、宿主細胞由来のＲＮＡを含有する。本発明によるウイルス様粒子の典型的かつ好ましい実施形態は、本発明のポリペプチドで構成されるウイルスキャプシドである。ウイルス様粒子は、典型的には、ウイルス様粒子あたり６０、１２０、１８０、２４０、３００、３６０、または３６０超のタンパク質サブユニットを含む、典型的には、ウイルスコートタンパク質で構成される巨大分子集合体である。典型的かつ好ましくは、これらのサブユニットの相互作用は、固有の反復組織を有するウイルスキャプシドまたはウイルスキャプシド様構造の形成をもたらす。ウイルス様粒子の１つの特徴は、そのサブユニットのその非常に規則正しい反復配列である。
【００１９】
ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子：本明細書で使用される、「ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子」という用語は、ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、変異体、またはそれらの断片を含む、または好ましくは本質的にそれらからなる、またはそれらからなるウイルス様粒子を指す。加えて、ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子は、ＲＮＡバクテリオファージの構造に似ており、非複製性および／または非感染性であり、かつ少なくともＲＮＡバクテリオファージの複製機構をコードする遺伝子（複数可）を欠き、かつ典型的には、宿主へのウイルス接着もしくは宿主への侵入に関与するタンパク質（複数可）をコードする遺伝子（複数可）も欠いている。前述の遺伝子（複数可）は依然として存在するが不活性であり、したがって、ＲＮＡバクテリオファージの非複製性および／または非感染性ウイルス様粒子をもたらすＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子も含まれる。ＲＮＡバクテリオファージに由来する好ましいＶＬＰは、正二十面体対称性を示し、１８０個のサブユニット（モノマー）からなる。ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子を非複製性および／または非感染性にさせる好ましい方法は、ＵＶ照射、ホルムアルデヒド処理などの物理的、化学的不活性化、典型的かつ好ましくは、遺伝子操作によるものである。
【００２０】
ＣＭＶのウイルス様粒子：「ＣＭＶのウイルス様粒子」またはＣＭＶ  ＶＬＰという用語は、少なくとも１つのＣＭＶポリペプチドを含むか、または好ましくは本質的にそれからなるか、または好ましくはそれからなるウイルス様粒子を指す。好ましくは、ＣＭＶのウイルス様粒子は、主として、さらにより好ましくは、キャプシド構造の唯一のタンパク質成分として当該ＣＭＶポリペプチドを含む。典型的かつ好ましくは、ＣＭＶのウイルス様粒子は、ＣＭＶのキャプシドの構造に似ている。ＣＭＶのウイルス様粒子は、非複製性および／または非感染性であり、少なくともＣＭＶの複製機構をコードする遺伝子（複数可）を欠いており、典型的には、宿主へのウイルス接着もしくは宿主への侵入に関与するタンパク質（複数可）をコードする遺伝子（複数可）も欠いている。この定義はまた、前述の遺伝子（複数可）は依然として存在するが不活性であるウイルス様粒子も含む。ＣＭＶのウイルス様粒子を非複製性および／または非感染性にさせる好ましい方法は、ＵＶ照射、ホルムアルデヒド処理などの物理的または化学的不活性化によるものである。好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、ＣＭＶの複製機構をコードする遺伝子（複数可）を欠いており、宿主へのウイルス接着もしくは宿主への侵入に関与するタンパク質（複数可）をコードする遺伝子（複数可）も欠いている。再びより好ましくは、非複製性および／または非感染性ウイルス様粒子は、組換え遺伝子技術によって得られる。本発明によるＣＭＶの組換え生成ウイルス様粒子は、典型的かつ好ましくは、ウイルスゲノムを含まない。しばしば、モザイクＶＬＰと呼ばれる、１種を超えるポリペプチドを含むウイルス様粒子もまた、本発明によって包含される。したがって、一実施形態において、本発明によるウイルス様粒子は、少なくとも２つの異なる種のポリペプチドを含み、当該種のポリペプチドの少なくとも１つが、ＣＭＶポリペプチドである。好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、典型的には、ＶＬＰあたり１８０個のコートタンパク質サブユニットを含むＣＭＶコートタンパク質で構成される巨大分子集合体である。典型的かつ好ましくは、本明細書で使用されるＣＭＶのＶＬＰは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなり、変異されるアミノ酸配列が、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列が、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００２１】
抗原：本明細書で使用される「抗原」という用語は、ＭＨＣ分子によって提示される場合、抗体またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって結合することが可能な分子を指す。本明細書で使用される「抗原」という用語はまた、Ｔ細胞エピトープを指す。抗原は、さらに、免疫系によって認識されることが可能であり、かつ／またはＢリンパ球および／もしくはＴリンパ球の活性化をもたらす体液性免疫応答ならびに／または細胞性免疫応答を誘導することが可能である。しかしながら、これは、少なくとも特定の場合において、抗原がＴｈ細胞エピトープを含有するか、またはＴｈ細胞エピトープに結合され、かつ／またはアジュバントで与えられることが必要であり得る。抗原は、１つ以上のエピトープ（Ｂ−およびＴ−エピトープ）を有し得る。上記で言及した特異的反応は、抗原が、好ましくは、その対応する抗体またはＴＣＲと、典型的には高度に選択的な様式で反応し、他の抗原によって誘発され得る多数の他の抗体またはＴＣＲと反応しないことを示すことを意味する。特に示さない場合、本明細書で使用される「抗原」という用語は、本発明の組成物、免疫原性もしくはワクチン組成物、および／または薬学的組成物に含有されるコア粒子またはウイルス様粒子を指すものではない。
【００２２】
コートタンパク質：「コートタンパク質」という用語は、ウイルスタンパク質、好ましくはウイルス、好ましくはＲＮＡバクテリオファージまたは植物ウイルスの天然キャプシドのサブユニットを指し、ウイルスキャプシドまたはＶＬＰに組み込まれることが可能である。コートタンパク質という用語は、天然に存在するコートタンパク質ならびに組換え発現コートタンパク質を包含する。コートタンパク質の変異体および断片がさらに包含され、当該変異体および断片は、ＶＬＰを形成する能力を保持する。
【００２３】
ポリペプチド：本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合（アミド結合としても知られる）によって直鎖状に結合されているアミノ酸モノマーで構成されるポリマーを指す。ポリペプチドという用語は、アミノ酸の連続鎖を指し、生成物の特定の長さを指すものではない。したがって、ペプチドおよびタンパク質は、ポリペプチドの定義内に含まれる。
【００２４】
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）ポリペプチド：本明細書で使用される「キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）ポリペプチド」という用語は、（ｉ）キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれらからなるポリペプチドを指し、変異されるアミノ酸配列が、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列、すなわちＣＭＶの当該コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。典型的かつ好ましくは、ＣＭＶポリペプチドは、発現時に、自己集合によってＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
【００２５】
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）：本明細書で使用される「キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）」という用語は、天然に存在するキュウリモザイクウイルスのコートタンパク質を指す。キュウリモザイクウイルスの非常に広い宿主範囲により、ＣＭＶの多くの異なる株および単離株が知られており、また、当該株および単離株のコートタンパク質の配列は、決定され、したがって、当業者に知られている。ＣＭＶの当該コートタンパク質（ＣＰ）の配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ，ｗｗｗ．ｄｐｖｗｅｂ．ｎｅｔ、またはｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／などの既知のデータベースに記載されており、そこから検索可能である。例は、ＥＰ出願第１４１８９８９７．３号に記載されている。ＣＭＶコートタンパク質のさらなる例は、配列番号１５〜１７に提供されている。これらの株および分離株が、コートタンパク質のＮ末端を含む異なるタンパク質ドメインに非常に類似したコートタンパク質配列を有することは注目に値する。特に、すべて完全に配列決定されたＣＭＶ分離株の９８．１％は、それらのコートタンパク質配列の最初の２８個のアミノ酸内に８５％超の配列同一性を共有し、さらに、すべて完全に配列決定されたＣＭＶ単離株の７９．５％は、それらのコートタンパク質配列の最初の２８個のアミノ酸内に９０％超の配列同一性を共有している。典型的かつ好ましくは、本発明に使用されるＣＭＶのコートタンパク質は、発現時に、自己集合によってＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。好ましくは、本発明に使用されるＣＭＶのコートタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現時に、自己集合によってＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
【００２６】
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ウイルス様粒子（ＶＬＰ）：本明細書で使用される「キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ウイルス様粒子（ＶＬＰ）」という用語は、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含むか、または好ましくは本質的にそれからなるか、または好ましくはそれからなるように改変されたものであるＣＭＶのＶＬＰを指し、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶポリペプチドおよびＴヘルパー細胞エピトープを含むか、または好ましくはそれからなる。典型的かつ好ましくは、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、（ｉ）当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端と融合するか、（ｉｉ）当該ＣＭＶポリペプチドのＣ末端と融合するか、（ｉｉｉ）当該ＣＭＶポリペプチドの連続したアミノ酸の領域と置換し、当該ＣＭＶポリペプチドの連続したアミノ酸の当該置換領域とＴヘルパー細胞エピトープとの間の配列同一性が、少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％であるか、または（ｉｖ）当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域と置換し、当該ＣＭＶポリペプチドの当該置換されたＮ末端領域は、５〜１５個の連続したアミノ酸からなる。好ましくは、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域と置換し、当該ＣＭＶポリペプチドの当該置換されたＮ末端領域は、５〜１５個の連続アミノ酸、好ましくは９〜１４個の連続アミノ酸、より好ましくは、１１〜１３個の連続アミノ酸、および最も好ましくは１１、１２、または１３個の連続アミノ酸からなる。好ましくは、本発明のＣＭＶの当該改変ＶＬＰは、ＣＭＶの組換え改変ＶＬＰである。
【００２７】
改変ＣＭＶポリペプチド：本明細書で使用される「改変ＣＭＶポリペプチド」という用語は、本明細書で定義されるように改変されたＣＭＶポリペプチドを指し、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶポリペプチドおよびＴヘルパー細胞エピトープを含むか、または好ましくはそれらからなる。典型的には、改変ＣＭＶポリペプチドは、発現時に、自己集合によってＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。好ましくは、改変ＣＭＶポリペプチドは、組換え改変ＣＭＶポリペプチドであり、Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現時に、自己集合によってＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
【００２８】
ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域：本明細書で使用される「ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域」という用語は、当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端、特に、ＣＭＶのコートタンパク質のＮ末端、または当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端の領域、またはＣＭＶの当該コートタンパク質のいずれかを指すが、当該ＣＭＶポリペプチドまたは当該コートタンパク質がＮ末端メチオニン残基を含む場合、当該ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの当該コートタンパク質のＮ末端の第２のアミノ酸から始まる。好ましくは、当該ＣＭＶポリペプチドまたは当該コートタンパク質が、Ｎ末端メチオニン残基を含む場合には、実用的な観点から、メチオニンをコードする開始コドンは、通常、除去され、Ｔｈ細胞エピトープのＮ末端に付加される。さらに好ましくは、１つ、２つ、または３つの追加のアミノ酸、好ましくは１つのアミノ酸は、任意に、クローニングの目的のために、記載のメチオニンとＴｈ細胞エピトープの間に挿入されてよい。本明細書で使用される「ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶコートタンパク質の変異アミノ酸配列のＮ末端領域」という用語は、当該ＣＭＶポリペプチドもしくはＣＭＶの当該コートタンパク質の当該変異アミノ酸配列のＮ末端、または当該ＣＭＶポリペプチドもしくはＣＭＶの当該コートタンパク質の当該変異アミノ酸配列のＮ末端領域のいずれかを指すが、当該変異アミノ酸配列がＮ末端メチオニン残基を含む場合、当該ＣＭＶポリペプチドもしくはＣＭＶの当該コートタンパク質の当該変異アミノ酸配列のＮ末端の２番目のアミノ酸から始まる。好ましくは、当該ＣＭＶポリペプチドまたは当該コートタンパク質が、Ｎ末端メチオニン残基を含む場合には、実用的な観点から、メチオニンをコードする開始コドンは、通常、除去され、Ｔｈ細胞エピトープのＮ末端に付加される。さらに好ましくは、１つ、２つ、または３つの追加のアミノ酸、好ましくは１つのアミノ酸は、任意に、クローニングの目的のために、記載のメチオニンとＴｈ細胞エピトープの間に挿入されてよい。
【００２９】
組換えポリペプチド：本発明の文脈において、用語「組換えポリペプチド」という用語は、組換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスによって得られるポリペプチドを指す。典型的かつ好ましくは、組換えポリペプチドは、原核生物発現系で生成される。Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核生物発現系で発現される組換え生成ポリペプチドは、Ｎ末端メチオニン残基を含み得ることは、当業者には明らかである。Ｎ末端メチオニン残基は、典型的には、組換えポリペプチドの成熟中に、発現宿主における組換えポリペプチドから切断される。しかしながら、Ｎ末端メチオニンの切断は、不完全であってもよい。したがって、組換えポリペプチドの調製物は、Ｎ末端メチオニン残基の有無にかかわらず、他の点では同一のポリペプチドの混合物を含んでよい。典型的かつ好ましくは、組換えポリペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、およびさらにより好ましくは１％未満のＮ末端メチオニン残基を有する組換えポリペプチドを含む。
【００３０】
組換えＣＭＶポリペプチド：「組換えＣＭＶポリペプチド」という用語は、組換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスによって得られる、上記で定義されたＣＭＶポリペプチドを指す。典型的かつ好ましくは、組換えＣＭＶポリペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、およびさらにより好ましくは１％未満のＮ末端メチオニン残基を有する組換えＣＭＶポリペプチドを含む。したがって、本発明の組換えウイルス様粒子は、Ｎ末端メチオニン残基の有無にかかわらず、他の点では同一の組換えポリペプチドを含んでよい。
【００３１】
組換え改変ＣＭＶポリペプチド：「組換え改変ＣＭＶポリペプチド」という用語は、組換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスによって得られる、上記で定義された改変ＣＭＶポリペプチドを指す。典型的かつ好ましくは、組換え改変ＣＭＶポリペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、およびさらにより好ましくは１％未満のＮ末端メチオニン残基を有する組換え改変ＣＭＶポリペプチドを含む。したがって、本発明の組換えウイルス様粒子は、Ｎ末端メチオニン残基の有無にかかわらず、他の点では同一の組換えポリペプチドを含んでよい。
【００３２】
組換えウイルス様粒子：本発明の文脈において、「組換えウイルス様粒子」という用語は、組換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスによって得られるウイルス様粒子（ＶＬＰ）を指す。典型的かつ好ましくは、組換えＶＬＰは、宿主、好ましくは細菌細胞における組換えウイルスコートタンパク質の発現によって得られる。典型的かつ好ましくは、組換えウイルス様粒子は、少なくとも１つの組換えポリペプチド、好ましくは組換えＣＭＶポリペプチドまたは組換え改変ＣＭＶポリペプチドを含む。最も好ましくは、組換えウイルス様粒子は、組換えＣＭＶポリペプチドまたは組換え改変ＣＭＶポリペプチドで構成されるか、またはそれからなる。結果として、本発明の文脈において、本発明の組換えＶＬＰの定義が、Ｎ末端メチオニン残基を含む特定のアミノ酸配列を参照して行われる場合、これらの本発明の組換えＶＬＰの範囲は、当該Ｎ末端メチオニン残基を含まない当該特定のアミノ酸配列によって形成されるＶＬＰを包含するが、同様に、本明細書に示されているように、典型的には少量ではあるが、当該Ｎ末端メチオニンを有する当該特定のアミノ酸配列によって形成されるＶＬＰを包含する。さらに、本発明の組換えＶＬＰの定義が、Ｎ末端メチオニン残基を含む特定のアミノ酸配列を参照して行われる場合、依然として当該Ｎ末端メチオニン残基を含むアミノ酸配列とＮ末端メチオニン残基を欠くアミノ酸配列の両方を含むＶＬＰが包含されることは本発明の範囲内である。
【００３３】
変異アミノ酸配列：「変異アミノ酸配列」という用語は、変異されるアミノ酸配列に定義されたセットの変異を導入することによって得られるアミノ酸配列を指す。本発明の文脈において、当該変異されるアミノ酸配列は、典型的かつ好ましくは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列である。したがって、変異アミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸残基がＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列とは異なり、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９０％の配列同一性を示す。典型的かつ好ましくは、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示す。好ましくは、当該変異アミノ酸配列および当該変異される配列は、最大で１１、１０、９、８、７、６、４、３、２、または１個のアミノ酸残基が異なり、さらに好ましくは、当該違いは、挿入、欠失、およびアミノ酸交換から選択される。好ましくは、変異アミノ酸配列は、少なくとも１個のアミノ酸において、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列とは異なり、好ましくは、当該違いは、アミノ酸交換である。
【００３４】
．．．残基に対応する位置：別のアミノ酸配列の所与の残基に対応するアミノ酸配列上の位置は、配列アラインメントによって、典型的かつ好ましくはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを用いることによって、最も好ましくは、標準的な設定を用いて特定することができる。典型的かつ好ましい標準設定は、期待閾値：１０；ワードサイズ：３；クエリ範囲の最大一致：０；マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在１１、伸長１；組成調整：条件付き組成スコアマトリックス調整である。
【００３５】
配列同一性：２つの所定のアミノ酸配列の配列同一性は、両方の配列のアラインメントに基づいて決定される。配列同一性の決定するためのアルゴリズムは、当業者に利用可能である。好ましくは、２つのアミノ酸配列の配列同一性は、「ＢＬＡＳＴ」プログラム（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）または「ＣＬＵＳＴＡＬＷ」（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／）などの公的に利用可能なコンピューター相同性プログラムを用いて、かつ本明細書では、好ましくは、ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉのＮＣＢＩのホームページ上で提供される「ＢＬＡＳＴ」プログラムにより、その中で設けられたデフォルト設定を使用して決定される。典型的かつ好ましい標準設定は、期待閾値：１０；ワードサイズ：３；クエリ範囲の最大一致：０；マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在１１、伸長１；組成調整：条件付き組成スコアマトリックス調整である。
【００３６】
アミノ酸交換：アミノ酸交換という用語は、異なる化学構造を有する任意の他のアミノ酸残基による、好ましくは、別のタンパク質を構成するアミノ酸残基による、アミノ酸配列中の所定のアミノ酸残基の交換を指す。したがって、アミノ酸の挿入または欠失とは対照的に、アミノ酸交換は、当該アミノ酸配列のアミノ酸の総数を変化させない。当該変異されるアミノ酸配列のアミノ酸残基とリシン残基またはシステイン残基との交換が、本発明の文脈において非常に好ましい。
【００３７】
エピトープ：エピトープという用語は、抗原、好ましくはポリペプチドの連続または不連続部分を指し、当該部分は、ＭＨＣ分子の文脈内で抗体またはＴ細胞受容体によって特異的に結合させることができる。抗体に関しては、特異的結合は、非特異的結合を排除するが、必ずしも交差反応性を排除するものではない。エピトープは、典型的には、抗原部位に固有の空間的立体構造に５〜２０個のアミノ酸を含む。
【００３８】
Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞エピトープ：本明細書で使用される「Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞エピトープ」という用語は、ヘルパーＴｈ細胞によって認識することができるエピトープを指す。別の好ましい実施形態において、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、ユニバーサルＴヘルパー細胞エピトープである。
【００３９】
ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ：本明細書で使用される「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、少なくとも１つ、好ましくは２つ以上のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるＴｈ細胞エピトープを指す。ペプチド配列が、ユニバーサルＴｈ細胞エピトープであるかどうかを判断する最も簡単な方法は、個々のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するペプチドの能力を測定することである。これは、ＭＨＣクラスＩＩ分子への公知のＴｈ細胞エピトープペプチドの結合と競合するペプチドの能力によって測定することができる。ＨＬＡ−ＤＲ分子の代表的な選択は、例えば、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：７５１−７６１に記載されている。ＭＨＣクラスＩＩ分子に対するＴｈ細胞エピトープの親和性は、少なくとも１０−５Ｍであるべきである。Ｔｈ細胞エピトープの「普遍性」を決定するための代替のより面倒ではなく、より関連性の高い方法により、大部分の人々（＞３０％）において、免疫化およびＩＦＡに製剤化されたＴｈ細胞エピトープを含有するタンパク質による１カ月後の予防接種およびブースティングの際に、測定可能なＴ細胞応答が生じることが実証されている。異なる個体中に存在するＭＨＣクラスＩＩ分子の代表的なコレクションは、Ｐａｎｉｎａ−Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８９）１９：２２３７−２２４２の中で与えられている。結果として、本明細書で使用される「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、好ましくは、Ｐａｎｉｎａ−Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８９）１９：２２３７−２２４２に記載のように、選択された個体群の３０％超の予防接種およびブースティングの際（ＩＦＡに製剤化されたＴｈ細胞エピトープを含有するタンパク質による１カ月後）に測定可能なＴ細胞応答をもたらすＴｈ細胞エピトープを指す。さらに、および再びさらに好ましくは、本明細書で使用される「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、好ましくは、ＤＲ１、ＤＲ２ｗ２ｂ、ＤＲ３、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲ５２ａ、ＤＲｗ５３、ＤＲ２ｗ２ａから選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、およびさらにより好ましくは少なくとも３つのＤＲ対立遺伝子に、少なくとも５００ｎＭの親和性で結合することができるＴｈ細胞エピトープを指し（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：７５１−７６１および本明細書で引用される参考文献に記載のように）、当該親和性を評価するための好ましい結合アッセイは、Ｓｅｔｔｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８９）１４２：３５−４０に記載のものである。さらに再びより好ましい様式では、本明細書で使用される「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、ＤＲ１、ＤＲ２ｗ２ｂ、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲｗ５３、ＤＲ２ｗ２ａから選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、およびさらにより好ましくは少なくとも３つのＤＲ対立遺伝子に、少なくとも５００ｎＭの親和性で結合することができるＴｈ細胞エピトープを指し（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：７５１−７６１および本明細書で引用される参考文献に記載のように）、当該親和性を評価するための好ましい結合アッセイは、Ｓｅｔｔｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８９）１４２：３５−４０に記載のものである。
【００４０】
ユニバーサルＴｈ細胞エピトープは、例えば、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：７５１−７６１、Ｐａｎｉｎａ−Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８９）１９：２２３７−２２４２、Ｃａｌｖｏ−Ｃａｌｌｅ  ＪＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９７）１５９：１３６２−１３７３、およびＶａｌｍｏｒｉ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）１４９：７１７−７２１によって記載されており、当業者に公知である。
【００４１】
アジュバント：本明細書で使用される「アジュバント」という用語は、宿主において免疫応答の非特異的刺激因子またはデポーが生じるのを可能にする物質を指し、本発明のワクチンおよび薬学的組成物のそれぞれと組み合わせた時に、さらに増強された免疫応答を提供することができる。好ましいアジュバントは、完全および不完全フロイントアジュバント、アルミニウム含有アジュバント、好ましくは水酸化アルミニウム、および改変ムラミルジペプチドである。さらに好ましいアジュバントは、水酸化アルミニウムなどのミネラルゲル、リゾレシチンなどの界面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウムパルブムなどのヒトアジュバントである。そのようなアジュバントはまた、当技術分野でよく知られている。本発明の組成物と共に投与され得るさらなるアジュバントには、モノホスホリル脂質免疫調節物質、ＡｄｊｕＶａｘ  １００ａ、ＱＳ−２１、ＱＳ−１８、ＣＲＬ１００５、アルミニウム塩（ミョウバン）、ＭＦ−５９、ＯＭ−１７４、ＯＭ−１９７、ＯＭ−２９４、およびビロソームアジュバント技術が含まれるが、これらに限定されない。アジュバントはまた、これらの物質の混合物を含んでよい。ウイルス様粒子は、一般的にアジュバントとして記載されている。しかしながら、本出願の文脈内で使用される「アジュバント」という用語は、本発明のウイルス様粒子ではないアジュバントを指す。むしろ、「アジュバント」は、本発明の組成物、ワクチン組成物、または薬学的組成物の追加の別個の成分に関する。
【００４２】
有効量：本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマに投与された時に、有益または所望の結果をもたらすのに十分な、活性成分、典型的かつ好ましくは、本発明による組成物の量を指す。有効量は、１つ以上の投与、適用、または投薬量で投与することができる。組成物、または代替的に薬学的組成物の有効量は、この選択された結果を達成する量であり、そのような量は当業者によって日常的な事柄として決定することができる。好ましくは、本明細書で使用される「有効量」という用語は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療に関連する１つ以上のパラメーターに客観的に測定された変化をもたらす量を指す。再びさらに好ましくは、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療に関連する当該１つ以上のパラメーターは、じんましん（ｈｉｖｅｓ）の領域によるじんましん（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）のレベルまたは重症度グレードである。再びさらに好ましくは、じんましんの領域によるじんましんの当該レベルまたは重症度グレードの当該低下は、じんましん活性スコアリング試験によって決定される。有効量は、特定のウマ科の哺乳動物、好ましくはウマ、および治療される状態、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの体重および年齢、疾患または症状状態の重症度、選択される特定の組成物、従うべき投与レジメン、投与のタイミング、投与の様式などに応じて変化し得、これらはすべて、過度の実験を必要とせずに、当業者によって容易に決定することができる。
【００４３】
治療：本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」、「治療される」、または「治療すること」という用語は、予防および／または治療を指す。一実施形態において、「治療」、「治療する」、「治療される」、または「治療すること」という用語は、治療的処置を指す。別の実施形態において、「治療」、「治療する」、「治療される」、または「治療すること」という用語は、予防的処置を指す。典型的かつ好ましくは、治療を必要とするウマ科の哺乳動物、好ましくはウマには、すでに障害を有するもの、ならびに障害が予防されるべきものが含まれる。したがって、好ましくは、本発明による疾患、病態、または障害の「治療」、「治療する」、「治療される」、または「治療すること」という用語は、疾患、病態、もしくは障害に対して予防もしくは保護すること（すなわち、症状を発生しないようにすること）、疾患、病態、もしくは障害を阻害すること（すなわち、症状の発生を阻止もしくは抑制すること）、および／または疾患、病態、もしくは障害を緩和させること（すなわち、症状を退行させること）を含む。最終的な誘導事象（複数可）が未知または潜在的である可能性があるため、疾患、病態、または障害の「予防すること」と「抑制すること」とが必ずしも区別可能であるとは限らないことが理解されよう。したがって、「予防」という用語は、「予防すること」と「抑制すること」の両方を包含する一種の「治療」を構成すると理解されるであろう。したがって、「治療」という用語は、「予防」を含む。
【００４４】
本明細書で使用される「予防」という用語は、疾患もしくは状態および／または疾患もしくは状態に起因する症状の発症を予防または遅延させる手段を指す。
【００４５】
第１の付着部位：本明細書で使用される場合、「第１の付着部位」という語句は、ウイルス様粒子と共に天然に生じるか、またはウイルス様粒子に人工的に付加され、かつ第２の付着部位が結合することができる要素を指す。第１の付着部位は、好ましくは、タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、ペプチド、糖、ポリヌクレオチド、天然または合成ポリマー、二次代謝産物または化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオン、フェニルメチルスルホニルフルオリド）、またはアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、グアニジニル基、ヒスチジニル基、もしくはこれらの組み合わせなどの化学反応基である。第１の付着部位である化学反応基の好ましい実施形態は、アミノ酸残基、好ましくはリジン残基のアミノ基である。第１の付着部位は、典型的には、表面上、好ましくはＶＬＰの外表面上に位置する。複数の第１の付着部位が、表面上、好ましくはＶＬＰの外表面上、典型的には反復形状で存在する。好ましい実施形態において、第１の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介してＶＬＰと結合する。さらに好ましい実施形態において、第１の付着部位は、ＶＬＰと共に天然に存在する。あるいは、好ましい実施形態において、第１の付着部位は、人工的にＶＬＰに付加される。非常に好ましい実施形態において、当該第１の付着部位は、当該ＶＬＰポリペプチドのアミノ酸配列のリジン残基のアミノ基である。
【００４６】
第２の付着部位：本明細書で使用される場合、「第２の付着部位」という語句は、抗原と共に天然に存在するか、または抗原に人工的に付加され、かつ第１の付着部位が結合することができる要素を指す。抗原の第２の付着部位は、好ましくは、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、アミノ酸、ペプチド、糖、ポリヌクレオチド、天然または合成ポリマー、二次代謝産物または化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオン、フェニルメチルスルホニルフルオリド）、またはアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、グアニジニル基、ヒスチジニル基、もしくはこれらの組み合わせなどの化学反応基である。第２の付着部位である化学反応基の好ましい実施形態は、スルフヒドリル基、好ましくはアミノ酸システインのスルフヒドリル基、最も好ましくはシステイン残基のスルフヒドリル基である。したがって、「少なくとも１つの第２の付着部位を有する抗原」という用語は、抗原および少なくとも１つの第２の付着部位を含む構築物を指す。しかしながら、特に、抗原内に天然に存在しない第２の付着部位については、そのような構築物は、典型的かつ好ましくは、「リンカー」をさらに含む。別の好ましい実施形態において、第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介して抗原と結合する。さらなる実施形態において、第２の付着部位は、抗原内に天然に存在する。別のさらに好ましい実施形態において、第２の付着部位は、リンカーを介して人工的に抗原に付加され、当該リンカーは、システインを含むか、または代替的にシステインからなる。好ましくは、リンカーは、ペプチド結合によって抗原に融合される。
【００４７】
結合する：本明細書で使用される「結合する」または「結合」という用語は、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位が一緒に結合されるすべての可能な方法、好ましくは化学的相互作用を指す。化学的相互作用は、共有結合性相互作用および非共有結合性相互作用を含む。非共有結合性相互作用の典型的な例は、イオン相互作用、疎水性相互作用、または水素結合であるが、共有結合性相互作用は、例として、エステル、エーテル、リン酸エステル、炭素−リン結合、チオエーテルなどの炭素−硫黄結合またはイミド結合などの共有結合に基づく。ある特定の好ましい実施形態において、第１の付着部位および第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つの非ペプチド結合を介して、さらにより好ましくは排他的に非ペプチド結合（複数可）を介して結合する。しかしながら、本明細書で使用される「結合する」という用語は、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位の直接的な結合を指すだけでなく、代替的かつ好ましくは、中間体分子（複数可）を介して、典型的かつ好ましくは、本明細書では、少なくとも１つの、好ましくは、１つのヘテロ二官能性架橋剤を使用することによる、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位の間接的な結合も指す。他の好ましい実施形態において、第１の付着部位および第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介して、さらにより好ましくは排他的にペプチド結合（複数可）を介して結合する。
【００４８】
リンカー：本明細書で使用される「リンカー」は、抗原と第２の付着部位を結合するか、またはすでに第２の付着部位を含むか、本質的にそれからなる、もしくはそれからなる。好ましくは、本明細書で使用される「リンカー」は、すでに第２の付着部位を、典型的かつ好ましくは、必ずしもそうではないが、１個のアミノ酸残基として、好ましくはシステイン残基として含む。好ましいリンカーは、アミノ酸リンカー、すなわち、少なくとも１個のアミノ酸残基を含有するリンカーである。アミノ酸リンカーという用語は、そのようなリンカーがもっぱらアミノ酸残基からなることを意味するものではない。しかしながら、もっぱらアミノ酸残基からなるリンカーは、本発明の好ましい実施形態である。リンカーのアミノ酸残基は、好ましくは、天然に存在するアミノ酸または当該技術分野で公知の非天然アミノ酸、すべてＬまたはすべてＤまたはそれらの混合物で構成されている。本発明によるリンカーのさらに好ましい実施形態は、スルフヒドリル基またはシステイン残基を含む分子であり、したがって、そのような分子も本発明に包含される。抗原とリンカーの結合は、好ましくは、少なくとも１つの共有結合により、より好ましくは少なくとも１つのペプチド結合によるものである。
【００４９】
ウマ科の哺乳動物：本明細書で使用される「ウマ科の哺乳動物」は、ウマ、ポニー、ロバ（ａｓｓ）（ロバ（ｄｏｎｋｅｙ））、およびシマウマを含むウマ科に含まれる哺乳動物である。好ましくは、本明細書で使用される「ウマ科の哺乳動物」という用語は、ウマ、ポニー、ロバ（ａｓｓ）（ロバ（ｄｏｎｋｅｙ））、およびシマウマを指す。再びより好ましくは、本明細書で使用される「ウマ科の哺乳動物」という用語は、ウマを指す。
【００５０】
本発明のいくつかの態様が本明細書に開示されている。本明細書でさらに言及される実施形態および好ましい実施形態は、明示的に言及されていない場合でも、本明細書で開示される本発明の各態様および任意の態様にそれぞれ適用可能である。
【００５１】
本発明の組成物は、じんましんに慢性的に冒されたウマにおけるじんましんエピソードの再発を防ぐことができた。毎年再発するじんましんに罹患しているウマに、治療なしの１年後およびプラセボによる治療の２年後の３年目に、本発明の好ましい組成物でワクチン接種した。すべてのウマは、未治療の年およびプラセボ治療の年にじんましんを発症したが、本発明の好ましい組成物でワクチン接種した３年目に、すべてのウマはじんましんの臨床的兆候を示さなかった。したがって、本発明の組成物は、再発性じんましんの予防および治療に有効である。
【００５２】
したがって、第１の態様において、本発明は、（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子、および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの抗原を含む、好ましくはそれらからなる組成物を提供し、当該少なくとも１つの抗原が、ウマ科インターロイキン−５抗原（ｅＩＬ−５抗原）であり、当該ｅＩＬ−５抗原が、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、（ａ）および（ｂ）は、少なくとも１つの非ペプチド共有結合により当該少なくとも１つの第１の付着部位および当該少なくとも１つの第２の付着部位を介して結合しており、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法で使用するためであり、好ましくは有効量の当該組成物は、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマに投与され、当該組成物の当該投与は、典型的かつ好ましくは、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマにおいて、当該じんましん、好ましくは当該再発性じんましんを予防または治療する。
【００５３】
さらなる態様において、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法で使用するための、当該組成物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供し、好ましくは有効量の当該薬学的組成物が当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマに投与され、当該薬学的組成物の当該投与は、典型的かつ好ましくは、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマにおいて、当該じんましん、好ましくは当該再発性じんましんを予防または治療する。
【００５４】
さらなる態様において、本発明は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんの予防または治療の方法であって、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマに、有効量の本発明の組成物または本発明の薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００５５】
好ましい実施形態において、じんましんの当該予防または治療は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの虫刺され過敏症（ＩＢＨ）の予防または治療ではない。別の好ましい実施形態において、じんましんの当該予防または治療は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの虫刺され過敏症（ＩＢＨ）によって引き起こされるじんましんの予防または治療ではない。別の好ましい実施形態において、じんましんの前記予防または治療は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマの虫刺され過敏症（ＩＢＨ）によって誘発されるじんましんの予防または治療ではない。別の好ましい実施形態において、じんましんの当該予防または治療は、虫刺されによって引き起こされる過敏性反応によって引き起こされない。別の好ましい実施形態において、じんましんの当該予防または治療は、虫刺されによって引き起こされる過敏性反応によって誘発されない。
【００５６】
別の好ましい実施形態において、当該方法は、ウマ科の哺乳動物、好ましくはウマのじんましん、好ましくは再発性じんましんを予防する方法である。
【００５７】
別の好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、および配列番号５から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。さらに好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。さらに好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号２のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。さらに好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号３のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。さらに好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号４のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。さらに好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号５のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００５８】
別の好ましい実施形態において、使用するための当該組成物は、ウマ科のインターロイキン−３１抗原（ｅＩＬ−３１抗原）を含まない。さらに好ましい実施形態において、使用するための当該組成物は、ウマ科のエオタキシン抗原（ｅエオタキシン抗原）を含まない。別の好ましい実施形態において、使用するための当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原またはｅエオタキシン抗原を含まない。別の好ましい実施形態において、使用するための当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原およびｅエオタキシン抗原を含まない。別の好ましい実施形態において、使用するための当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。さらに好ましい実施形態において、当該コア粒子に結合された当該少なくとも１つのｅＩＬ−５抗原は、じんましんの当該予防または治療のための当該組成物の唯一の有効成分である。
【００５９】
別の好ましい実施形態において、当該方法は、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマへの、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物の投与を含まない。さらに好ましい実施形態において、当該方法は、ｅエオタキシン抗原を含む組成物を投与することを含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原またはｅエオタキシン抗原を含む組成物の投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原およびｅエオタキシン抗原を含む組成物の投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物の投与を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００６０】
さらに好ましい実施形態において、当該方法は、少なくとも２つの異なる組成物（当該少なくとも２つの異なる組成物の１つは、ｅＩＬ−５抗原を含み、当該少なくとも２つの異なる組成物のもう１方は、ｅＩＬ−３１抗原を含む）の投与の当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマへの併用治療を含まない。
【００６１】
さらに好ましい実施形態において、当該方法は、少なくとも２つの異なる組成物（当該少なくとも２つの異なる組成物の１つは、ｅＩＬ−５抗原を含み、当該少なくとも２つの異なる組成物のもう１方は、ｅＩＬ−３１抗原を含む）の投与の当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマへの併用治療を含まず、当該併用治療は、同じもしくは異なる時間に、および／または同じもしくは異なる投与もしくは注射部位での当該少なくとも２つの異なる組成物の投与である。
【００６２】
さらに好ましい実施形態において、当該方法は、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマへの、ｅＩＬ−３１抗原の投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅエオタキシン抗原の投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原またはｅエオタキシン抗原の投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原およびｅエオタキシン抗原の投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原の投与を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００６３】
さらに好ましい実施形態において、当該方法は、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマへの、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物の同時投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅエオタキシン抗原を含む組成物の同時投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原またはｅエオタキシン抗原を含む組成物の同時投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物およびｅエオタキシン抗原を含む組成物の同時投与を含まない。別の好ましい実施形態において、当該方法は、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物の同時投与を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００６４】
好ましい実施形態において、当該方法は、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマにおいて使用するための本発明の当該投与の少なくとも８週間前および少なくとも８週間後に、好ましくは当該ウマ科の哺乳動物おいて使用するための本発明の当該投与の少なくとも３カ月前および少なくとも３カ月後に、当該ウマ科の哺乳動物、好ましくは当該ウマへの、ｅＩＬ−３１抗原を含む組成物の投与を含まない。
【００６５】
さらに好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換えＶＬＰである。再びさらに好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、植物ウイルスまたはバクテリオファージに由来し、好ましくは、当該バクテリオファージは、ＲＮＡバクテリオファージである。したがって、さらに好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）であり、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージに由来する。本発明のコア粒子としてＲＮＡバクテリオファージの組換えＶＬＰが、さらに好ましい。さらに好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージの組換えコートタンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなり、好ましくは、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージＱβまたはＲＮＡバクテリオファージＡＰ２０５の組換えコートタンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなり、さらに好ましくは、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージＱβの組換えコートタンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなる。さらに好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、（ａ）配列番号１４、（ｂ）配列番号１４と配列番号１５の混合物、または（ｃ）配列番号１６から選択されるアミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれらからなる組換えコートタンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、あるいはそれからなる。さらに好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージＱβのＶＬＰである。さらに好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージＱβの組換えコートタンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなる。再びさらに好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、配列番号１４を含むか、または好ましくはそれからなる組換えコートタンパク質を含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなる。
【００６６】
別の好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）であり、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージＱβのＶＬＰであり、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージＱβの組換えコートタンパク質を含むか、本質的になるか、または代替的にそれからなり、当該組換えコートタンパク質は、配列番号１４を含むか、または好ましくはそれからなる。
【００６７】
一実施形態において、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージのＶＬＰではなく、好ましくは、当該ＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージの組換えＶＬＰではない。一実施形態において、当該ウイルス様粒子は、ＲＮＡバクテリオファージＱβのウイルス様粒子ではない。
【００６８】
さらに好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）であり、当該ＶＬＰは、植物ウイルスに由来する。別の好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、組換えＶＬＰであり、好ましくは、当該組換えＶＬＰは、植物ウイルスに由来する。別の好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のＶＬＰである。
【００６９】
好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＶＬＰポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなる改変ＶＬＰであり、当該改変ＶＬＰポリペプチドは、（ａ）ＶＬＰポリペプチドおよび（ｂ）Ｔヘルパー細胞エピトープを含むか、または好ましくは、それらからなり、当該ＶＬＰポリペプチドは、（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、変異されるアミノ酸配列は、ウイルスの当該コートタンパク質のアミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列およびウイルスの当該コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００７０】
好ましい実施形態において、当該ＶＬＰは、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの当該改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなり、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）Ｔヘルパー細胞エピトープを含むか、または好ましくはそれらからなり、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、変異されるアミノ酸配列は、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列およびＣＭＶの当該コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００７１】
好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなる。別の好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、変異アミノ酸配列を含み、好ましくはそれからなり、変異されるアミノ酸配列は、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列およびＣＭＶの当該コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。典型的かつ好ましくは、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列は、少なくとも１個、最大で１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個のアミノ酸残基が異なり、好ましくは、これらの違いは、（ｉ）挿入、（ｉｉ）欠失、（ｉｉｉ）アミノ酸交換、および（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の任意の組み合わせから選択される。
【００７２】
別の好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）（ａ）配列番号６を含むか、もしくは好ましくはそれからなる、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号６と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、再びさらに好ましくは少なくとも９０％、再びより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、を含むか、または好ましくはそれからなり、当該変異されるアミノ酸配列は、この項（ｉ）で定義されるような当該アミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００７３】
別の好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）配列番号６を含むか、もしくは好ましくはそれからなる、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号６と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、再びさらに好ましくは少なくとも９０％、再びより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、および再びさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含むか、または好ましくはそれからなる。
【００７４】
別の好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）（ａ）配列番号１７を含む、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号１７と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、再びさらに好ましくは少なくとも９０％、再びより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、および再びさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列領域を含むＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、を含むか、または好ましくはそれからなり、当該変異されるアミノ酸配列は、この項（ｉ）で定義されるような当該アミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００７５】
さらに好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）配列番号１７を含む、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号１７と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、再びさらに好ましくは少なくとも９０％、再びより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、および再びさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列領域を含むＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、を含むか、または好ましくはそれからなる。
【００７６】
別の好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）（ａ）配列番号６を含む、もしくは好ましくはそれからなる、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号６と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、再びさらに好ましくは少なくとも９０％、再びより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、および再びさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列（（ａ）もしくは（ｂ）で定義されるような当該アミノ酸配列は、配列番号１７を含むか、または（ａ）もしくは（ｂ）で定義されるような当該アミノ酸配列は、配列番号１７と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、再びさらに好ましくは少なくとも９０％、再びより好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列領域を含む）、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、を含むか、または好ましくはそれからなり、当該変異されるアミノ酸配列は、この項（ｉ）で定義されるような当該アミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列および当該変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００７７】
別の好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）配列番号６を含むか、もしくは好ましくはそれからなる、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含むか、または好ましくはそれからなり、この項（ａ）もしくは（ｂ）で定義されるような当該アミノ配列は、配列番号１７を含むか、またはこの項（ａ）もしくは（ｂ）で定義されるような当該アミノ配列は、配列番号１７と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列領域を含む。
【００７８】
別の好ましい実施形態において、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域を置換する。別の好ましい実施形態において、当該置換されたＮ末端領域のアミノ酸の数は、当該Ｔヘルパー細胞エピトープがなるアミノ酸の数と等しいか、またはそれより少ない。
【００７９】
さらに非常に好ましい実施形態において、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域を置換し、当該置換されたＮ末端領域のアミノ酸の数は、当該Ｔヘルパー細胞エピトープがなるアミノ酸の数と等しいか、またはそれより少ない。典型的かつ好ましくは、当該ＣＭＶポリペプチドの当該置換されたＮ末端領域は、５〜１５個の連続したアミノ酸、好ましくは９〜１４個の連続したアミノ酸、より好ましくは１１〜１３個の連続したアミノ酸からなる。
【００８０】
さらに非常に好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドの当該Ｎ末端領域は、配列番号６のアミノ酸２〜１２に対応する。
【００８１】
別の非常に好ましい実施形態において、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、ユニバーサルＴヘルパー細胞エピトープである。別の好ましい実施形態において、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、最大で２０個のアミノ酸からなる。
【００８２】
非常に好ましい実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、ＰＡＤＲＥ配列である。さらに非常に言及された実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、好ましくはそれからなる。別の非常に好ましい実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、ＰＡＤＲＥ配列であり、当該Ｔｈ細胞エピトープは、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、好ましくはそれからなる。
【００８３】
別の好ましい実施形態において、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、ヒトワクチンに由来する。非常に好ましい実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来する。さらに非常に言及された実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、配列番号９のアミノ酸配列を有し、好ましくはそれからなる。別の非常に好ましい実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、当該Ｔｈ細胞エピトープは、配列番号９のアミノ酸配列を有し、好ましくはそれからなる。
【００８４】
非常に好ましい実施形態において、当該Ｔｈ細胞エピトープは、ＰＡＤＲＥ配列であり、当該Ｔｈ細胞エピトープは、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、好ましくはそれからなるか、または当該Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、当該Ｔｈ細胞エピトープは、配列番号９のアミノ酸配列を有し、好ましくはそれからなる。
【００８５】
非常に好ましい実施形態において、当該ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、当該アミノ酸配列は、配列番号６もしくは配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、当該アミノ配列は、配列番号１７を含み、当該Ｔヘルパー細胞エピトープは、当該ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域を置換し、当該ＣＭＶポリペプチドの当該置換されたＮ末端領域は、１１〜１３個の連続したアミノ酸、好ましくは１１個の連続したアミノ酸からなり、さらに好ましくは、当該ＣＭＶポリペプチドの当該Ｎ末端領域は、配列番号６のアミノ酸２〜１２に対応する。
【００８６】
別の非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。別の非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列からなる。別の非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。別の非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列からなる。
【００８７】
非常に好ましい実施形態において、当該第１の付着部位および当該第２の付着部位は、少なくとも１つの共有の非ペプチド結合を介して結合する。別の非常に好ましい実施形態において、当該第１の付着部位は、アミノ基、好ましくはリジンのアミノ基を含むか、または好ましくはそのようなアミノ基である。さらに非常に好ましい実施形態において、当該第２の付着部位は、スルフヒドリル基、好ましくはシステインのスルフヒドリル基を含むか、または好ましくはそのようなスルフヒドリル基である。
【００８８】
非常に好ましい実施形態において、少なくとも１つの第１の付着部位は、アミノ基、好ましくはリジン残基のアミノ基であり、少なくとも１つの第２の付着部位は、スルフヒドリル基、好ましくはシステイン残基のスルフヒドリル基、または本発明の少なくとも１つの抗原に化学的に結合されているスルフヒドリル基である。さらに好ましい実施形態において、当該第２の付着部位のうちの１つのみが、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して当該第１の付着部位と結合すると、当該改変ウイルス様粒子への当該抗原の結合の単一かつ均一な形をもたらし、当該第１の付着部位と結合する当該１つのみの第２の付着部位がスルフヒドリル基であり、当該抗原および当該改変ウイルス様粒子は、当該結合を介して相互作用し、規則的で反復性の抗原アレイを形成する。
【００８９】
本発明の好ましい一実施形態において、抗原は、化学的架橋によって、典型的かつ好ましくは、ヘテロ二官能性架橋剤を使用することによって改変されたＶＬＰに結合する。好ましい実施形態において、ヘテロ二官能性架橋剤は、改変ＶＬＰの好ましい第１の付着部位と、好ましくはアミノ基と、より好ましくはリジン残基（複数可）のアミノ基と反応することができる官能基を含有し、好ましい第２の付着部位と、すなわち、好ましくは、該抗原に固有のまたは該抗原に人工的に付加され、任意に、還元による反応にも利用できるようにされたシステイン（複数可）残基のスルフヒドリル基と反応することができるさらなる官能基を含有する。いくつかのヘテロ二官能性架橋剤は、当該技術分野で公知である。これらには、好ましい架橋剤ＳＭＰＨ（Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｓｕｌｆｏ−ＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳ、Ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ−ＳＩＡＢ、Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＰＢ、Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ、Ｓｕｌｆｏ−ＫＭＵＳ  ＳＶＳＢ、ＳＩＡ、ならびに、例えば、ｔｈｅ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能で、アミノ基に対して反応性のある１つの官能基およびスルフヒドリル基に対して反応性のある１つの官能基を有する他の架橋剤が含まれる。上述した架橋剤はすべて、アミノ基との反応およびスルフヒドリル基とのチオエーテル結合後にアミド結合を形成する。本発明の実施に適する別のクラスの架橋剤は、カップリングの際に、抗原と改変ＶＬＰとの間にジスルフィド結合を導入することによって特徴付けられる。このクラスに属する好ましい架橋剤には、例えば、ＳＰＤＰおよびＳｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）が含まれる。
【００９０】
上記の好ましい方法に従ってヘテロ二官能性架橋剤を使用することによる改変ＶＬＰへの抗原の結合は、配向様式で改変ＶＬＰへの抗原のカップリングを可能にする。改変ＶＬＰへの抗原の結合の他の方法には、該抗原が、カルボジイミドＥＤＣ、およびＮＨＳを用いて改変ＶＬＰに架橋される方法が含まれる。抗原はまた、例えば、ＳＡＴＡ、ＳＡＴＰ、またはイミノチオランとの反応によって最初にチオール化されてもよい。次いで、抗原は、必要であれば脱保護した後に、以下のように改変ＶＬＰにカップリングさせてよい。過剰なチオール化試薬の分離後に、抗原は、システイン反応性部分を含むヘテロ二官能性架橋剤で事前に活性化させた改変ＶＬＰと反応し、したがって、上記のように、チオール化抗原が反応することができるシステイン残基に対して反応性のある少なくとも１つまたはいくつかの官能基を提示する。任意に、少量の還元剤が反応混合物に含まれる。さらなる方法において、ホモ二官能性架橋剤、例えば、グルタルアルデヒド、ＤＳＧ、ＢＭ￥［ＰＥＯ］４、ＢＳ３、（Ｐｉｅｒｃｅ）、または改変ＶＬＰのアミノ基もしくはカルボキシル基に対して反応性のある官能基を有する他の公知のホモ二官能性架橋剤を用いて、抗原を、改変ＶＬＰに結合させる。
【００９１】
本発明の非常に好ましい実施形態において、抗原は、改変ウイルス様粒子のリジン残基に、抗原のＮ末端もしくはＣ末端のいずれかに付加されるシステイン残基、または抗原内の天然システイン残基を介して結合する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、リンカーをさらに含み、当該リンカーは、当該抗原を当該第２の付着部位と結合させ、好ましくは、当該リンカーは、当該第２の付着部位を含むか、または代替的にそれからなる。
【００９２】
本発明のさらに非常に好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換えＶＬＰであり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明のさらに非常に好ましい実施形態において、当該コア粒子は、本発明による改変ＶＬＰ、好ましくは組換え改変ＶＬＰであり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９５％、および好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９５％、および好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号２のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号３のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号４のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号５のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００９３】
本発明のさらに非常に好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ＶＬＰ、好ましくは組換えＶＬＰであり、当該ＶＬＰは、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの当該改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、または代替的にそれからなり、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）Ｔヘルパー細胞エピトープを含むか、または好ましくはそれらからなり、当該ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、変異されるアミノ酸配列は、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、当該変異アミノ酸配列およびＣＭＶの当該コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、および再びより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示し、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びより好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９５％、および好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号２のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号３のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号４のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号５のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００９４】
本発明のさらに非常に好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ＶＬＰ、好ましくは組換えＶＬＰであり、当該ＶＬＰは、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの当該改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含む、本質的にそれからなる、または代替的にそれからなり、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、または好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９５％、および好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号２のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号４のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号５のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質であり、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００９５】
本発明のさらに非常に好ましい実施形態において、当該コア粒子は、ＶＬＰ、好ましくは組換えＶＬＰであり、当該ＶＬＰは、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの当該改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含む、本質的にそれからなる、または代替的にそれからなり、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号１のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号２のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号３のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号４のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。本発明の再び非常に好ましい実施形態において、当該改変ＣＭＶポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、好ましくはそれからなり、当該ｅＩＬ−５抗原は、配列番号５のアミノ配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。好ましくは、当該組成物は、ｅＩＬ−３１抗原を含まず、当該ｅＩＬ−３１抗原は、配列番号１３から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または配列番号１３と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、および再びさらに好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含むか、または好ましくはそのようなタンパク質である。
【００９６】
さらに好ましい実施形態において、当該組成物の当該投与は、当該投与前の、当該じんましん、好ましくは再発性じんましんに関連する少なくとも１つのパラメーターまたは症状と比較して、当該じんましん、好ましくは再発性じんましんに関連する当該少なくとも１つのパラメーターまたは症状を低減する。再びさらに好ましい実施形態において、当該じんましん、好ましくは再発性じんましんに関連する当該少なくとも１つのパラメーターまたは症状は、じんましんの領域によるじんましんのレベルまたは重症度グレードであり、好ましくは、じんましんの領域によるじんましんの当該レベルまたは重症度グレードの当該低下は、じんましん活性スコアリング試験によって決定され、典型的かつ好ましくは、当該じんましん活性スコアリング試験は、実施例１に記載されるように実行される。
【実施例】
【００９７】
本発明で使用される好ましいコア粒子は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、特に組換えＶＬＰである。一実施形態において、ＶＬＰは、配列番号１４のＲＮＡバクテリオファージＱβの組換えコートタンパク質を含む、好ましくはそれからなるＲＮＡバクテリオファージＱβのＶＬＰである。ＲＮＡバクテリオファージのそのようなウイルス様粒子は、ＷＯ０２／０５６９０５に開示されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特に、ＷＯ０２／０５６９０５の実施例１８は、ＲＮＡバクテリオファージＱβのＶＬＰ粒子の調製の詳細な説明を含む。非常に好ましい実施形態において、ＶＬＰは、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のＶＬＰ、特に、ＣＭＶの改変ＶＬＰであり、Ｔヘルパー細胞エピトープは、ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域を置換する。非常に好ましい実施形態において、ＶＬＰは、本明細書に記載されているように、およびＷＯ２０１６／０６２７２０に開示されているとおりに、配列番号１１の改変ＣＭＶポリペプチドを含むＣＭＶｔｔ８３０、または配列番号１２の改変ＣＭＶポリペプチドを含むＣＭＶ−Ｎｐａｄｒ、好ましくは配列番号１１の改変ＣＭＶポリペプチドを含むＣＭＶｔｔ８３０である。特に、ＷＯ２０１６／０６２７２０の実施例１〜６は、配列番号１１および配列番号１２の改変ＣＭＶポリペプチドのＶＬＰ粒子の調製の詳細な説明を含む。
【００９８】
本発明の非常に好ましい組成物であり、以下の実施例で使用されるのは、ウマ科のインターロイキン−５（ｅＩＬ−５）抗原が共有結合されている上記のＣＭＶｔｔ８３０−ＶＬＰである。これらの組成物の調製は、ＷＯ２０１７／０４２２１２に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。したがって、ウマ科のインターロイキン−５（ｅＩＬ−５）のクローニング、発現、および精製は、ＷＯ２０１７／０４２２１２の実施例１に記載されており、ＷＯ２０１７／０４２２１２の実施例１０において、ｅＩＬ−５抗原の異なるＶＬＰへのカップリングは、参照によりその全体が具体的に本明細書に組み込まれる。
【００９９】
実施例１
じんましん活性スコア（ＵＡＳ）
じんましんの領域ごとのじんましんの重症度およびウマの罹患皮膚の掻痒の重症度を調べるじんましん活性スコア（ＵＡＳ）が適用されている。スコアは、０〜３の範囲であり、０は、じんましんがないことに相当し、１は、じんましんおよび軽度の掻痒を伴う単一の身体部分に相当し、２は、じんましんを伴う中等度およびほぼ半分の身体部分に相当し、３は、じんましんおよび重度の掻痒を伴うほぼ全身の部分に相当する。じんましんの症状を決定するための同様の試験およびスコアが、ヒトのじんましんについて確立されている（Ｚｕｂｅｒｂｉｅｒ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｌｅｒｇｙ（２０１４）６９：８６８−８８７、Ｚｕｂｅｒｂｉｅｒ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｌｅｒｇｙ（２０１８）７３：１３９３−１４１４）。
【０１００】
実施例２
ウマ科のインターロイキン−５（ｅＩＬ−５）のクローニング、発現、および精製
Ａ．ｅＩＬ−５−Ｃ−ＨｉｓのクローニングおよびＥ．ｃｏｌｉでの封入体としての発現
ウマ科のインターロイキン−５（ｅＩＬ−５）のクローニング、発現、および精製は、ＷＯ２０１７／０４２２１２の実施例１に記載されるように実施した。したがって、成熟ｅＩＬ−５（成熟インターロイキン−５、ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ；ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｏ０２６９９）をコードするＤＮＡ配列およびその断片を、遺伝子合成によって作製した。配列番号１。加えて、リンカー（ＧＧＣ）をＣ末端に加えた。この挿入は、５’ＮｄｅＩおよび３’ＸｈｏＩに隣接しており、これを、インフレームで８個のＨｉｓタグ（精製を容易にする）および終止コドンを含有するｐＥＴ  ４２ｂ（＋）に組み込んだ。Ｅ．ｃｏｌｉで発現される組換えタンパク質は、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ（配列番号２）と呼ばれる。同様に、配列番号３、配列番号４、および配列番号５を、調製している。Ｃ末端にリンカー（ＧＧＣ）および（配列番号５を除く）Ｈｉｓタグを含む配列番号３、配列番号４、および配列番号５。配列番号２、配列番号３、および配列番号４、特に配列番号２および配列番号３は、本明細書では交換可能に「ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ」と呼ばれる。さらに、この実施例の項および説明された図内でｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓと呼ばれる場合、これらのｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ組換えタンパク質のうちの１つが、様々な実施例で使用し、さらに１つを超えるまたはすべてを繰り返される実験に使用した。非常に好ましい使用されるｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓは、配列番号２および配列番号３である。
【０１０１】
Ｂ．ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓの精製およびリフォールディング
ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓの精製およびリフォールディングは、ＷＯ２０１７／０４２２１２の実施例１に記載されているように実行した。
【０１０２】
Ｃ．組換えホモダイマーに富むｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓの構造
ＷＯ２０１７／０４２２１２の実施例１に記載されているように、組換えｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓの適切なリフォールディングを確認した。
【０１０３】
実施例３
ＣＭＶｔｔ８３０ＶＬＰに対するｅＩＬ−５抗原のカップリング、ウマの予防接種、および再発性じんましんを起こしやすいウマにおける有効性の実証
Ａ．ＱβのＶＬＰに対するｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓのカップリング
配列番号１４のコートタンパク質を含むＱβ  ＶＬＰに対するｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓのカップリングを、ＷＯ２０１７／０４２２１２の実施例１０に記載されているように実行した。
【０１０４】
Ｂ．ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰに対するｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓのカップリング
配列番号１１の改変ＣＭＶポリペプチドを含むＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰを、ＷＯ２０１６／０６２７２０の実施例４に記載されるように生成し、１０倍モル過剰のヘテロ二官能性架橋剤スクシンイミジル−６（β−マレイミドプロピオンアミド）−ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）（Ｐｉｅｒｃｅ）と反応させた。未反応の架橋剤を、ＰＤ−１０脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通すことによって除去した。組換え、精製、およびリフォールディングｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓを、リンカーに含まれるシステイン残基を還元するために、等モル過剰量のＰＢＳ、または２０ｍＭのＮａ２ＰＯ４／２ｍＭのＥＤＴＡ中のトリ（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）ｐＨ７．５で１時間還元した。次いで、還元されたｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓを、誘導体化されたＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰと、ＶＬＰモノマー対ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓタンパク質のモル比が１：２で混合し、２２℃で４時間、同時インキュベートして、架橋させた。任意に、この反応を、３００ｋＤａのカットオフ透析膜を使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）または２０ｍＭのＮａ２ＰＯ４／２ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．５）に対して１２時間透析するか、またはカップリングしていないｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓを、１００ｋＤａのＭＷＣＯを使用してサイズ排除クロマトグラフィーまたは接線流濾過によって除去した。
【０１０５】
分析：ＳＤＳ−ＰＡＧＥのクマシー染色（図４Ｃ）：ＣＭＶｔｔ８３０、ｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ、ｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。続いて、ゲルをクマシーブルー（０．０２５％クマシーブリリアントブルーＲ−２５０、４０％メタノール、１０％酢酸）で染色し、脱色剤（４０％メタノール、１０％酢酸）で脱染した。
【０１０６】
抗Ｈｉｓ抗体を用いたウエスタンブロット染色（図４Ｄ）：ＣＭＶ−ｔｔ８３０、ｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ、ｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロース膜上にエレクトロブロットした。膜を、ＰＢＳＴ中の５（ｗ／ｖ）％のＢＳＡ粉末を用いて１時間ブロッキングし、次いで、ＰＢＳＴ中の１（ｗ／ｖ）％のＢＳＡ粉末中の１０ｍｌの１：１０００希釈した抗Ｈｉｓ抗体（モノクローナル抗Ｈｉｓタグ抗体ＨＲＰＯコンジュゲート、Ｎｏｖａｇｅｎカタログ番号７１８４０）とインキュベートした。膜をＰＢＳＴで１５分間洗浄し、次いで、ＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて発色させ、写真フィルムに感光した。
【０１０７】
ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰに対するｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓの共有結合化学カップリングを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット分析によって評価した。カップリング反応のクマシーブルー染色ゲルは、ＣＭＶ−ｔｔ８３０と共有結合したウマ科のＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓについて予測されるものに対応する分子量のバンドの出現が実証された（図１Ａ）。さらに、抗Ｈｉｓ抗体で染色した場合に、ウエスタンブロット分析は、これらのバンドの共局在化を示した（図１Ｂ）。
【０１０８】
Ｃ．予防接種プロトコル
ウマ、プラセボ。ウマに、０日目、２８日目、および１３３日目に、アジュバントの非存在下で１，０００μｌのＰＢＳを皮下注射した。予防接種前、および予防接種プロトコルの少なくとも５６日目および８４日目、および８４日後の様々なさらなる時点で、ウマから採血した。血清をＥＬＩＳＡによって分析した。
【０１０９】
ウマ、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑβ  ＶＬＰ。ウマ科のＩＬ−５に対する自己反応性抗体を作製するために、０、２８、５６、および８４日目に、アジュバントの非存在下で１，０００μｌのＰＢＳ中の３００μｇのｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑβ  ＶＬＰを、ウマに皮下注射した。予防接種前、および予防接種プロトコルの少なくとも５６日目、８４日目、および８４日後の様々なさらなる時点で、ウマから採血した。血清をＥＬＩＳＡによって分析した。
【０１１０】
ウマ、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０。ウマ科のＩＬ−５に対する自己反応性抗体を作製するために、０、２８、および１３３日目に、アジュバントの非存在下で１，０００μｌのリン酸ナトリウム緩衝液中の３００μｇのｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰを、ウマに皮下注射した。予防接種前、および予防接種プロトコルの少なくとも５６日目および８４日目、および８４日後の様々なさらなる時点で、ウマから採血した。血清をＥＬＩＳＡによって分析した。２回目のワクチン接種の年に、１年後および４２日後に、アジュバントの非存在下で１，０００μｌのリン酸ナトリウム緩衝液中の３００μｇのｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰを、ウマに単一のブースターワクチン接種を施した。ブースター注射前、および予防接種プロトコルの５６日目、および８４日後の様々なさらなる時点で、ウマから採血した。
【０１１１】
Ｄ．ＥＬＩＳＡによる血清分析
Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ）を、５０μｌの精製ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ、Ｑβ、または精製ＣＭＶｔｔ８３０（５μｇ／ｍｌ）で一晩コーティングした。プレートを、ＰＢＳ中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でブロックされたＰＢＳＴで３回、室温で２時間洗浄した。次いで、プレートを、ＰＢＳＴで３回洗浄し、ウマ血清の３倍希釈液を、ＰＢＳ中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に添加し、室温で２時間インキュベートした。続いて、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＨＲＰとコンジュゲートした抗ウマＩｇＧ（希釈率１：２０００）と室温で３０分間インキュベートした。プレートを、再びＰＢＳで４回洗浄し、５０μｌ／ウェルの現像液（ＴＭＢ）を添加した。室温での反応の約２分後に、ウェルあたり２５μｌの５％  Ｈ２ＳＯ４でＥＬＩＳＡを停止させた。吸光度をＴｅｃａｎ  Ｍ２００分光光度計（Ｔｅｃａｎ，Ａｕｓｔｒｉａ）で、４５０ｎｍで測定した。
【０１１２】
ｅＩＬ５−Ｃ−Ｈｉｓ−Ｑβ  ＶＬＰでワクチン接種したウマの免疫前の血清および予防接種後の様々な血清を収集し、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓに対する抗体（図２Ａ）およびＱβ  ＶＬＰに対する抗体（図２Ｂ）についてＥＬＩＳＡによって分析した。ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０  ＶＬＰでワクチン接種したウマの免疫前の血清および予防接種後の様々な血清を、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓに対する抗体（図２Ｃ、２Ｅ）およびＣＭＶｔｔ８３０に対する抗体（図２Ｄ、２Ｆ）について分析した。ウマ血清を、対応するナイーブ血清希釈を差し引いた各希釈についてＯＤ４５０値から計算されたデルタＯＤ５０（ΔＯＤ５０）値としてブロットした。ウマにおけるワクチン接種の結果は、自己抗原ＩＬ−５に対する免疫学的寛容が克服されたことを示す。反応のピーク時の抗ＩＬ−５の最大の半分の力価は、１：１，０００〜１：１０，０００の範囲であった。
【０１１３】
Ｅ．ウマにおけるインビボでの有効性
ウマにおける血中の好酸球レベルを、その後２年間、プラセボ治療１年とｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンを使用した治療１年、したがって抗自己ｅＩＬ−５抗体の存在下でモニタリングした。さらに、再発性じんましんに罹患している３頭のアイスランドウマを、ＵＡＳ（じんましん活性スコア−実施例１）で４年間：未治療の１年目、プラセボ治療の２年目、ならびにｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種を使用した３年目および４年目にスコアリングした。さらに、ｅＩＬ−５およびＣＭＶｔｔ８３０に対する抗体価を定量化し、これらの３頭の再発性じんましんに罹患しているウマの血中好酸球レベルを記録した。プラセボで治療した年（図３、１列目、灰色）およびｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンを用いて治療した年（図３、２列目、黒色）に、１３頭のウマの血中の好酸球レベルを、モニタリングし、ワクチン接種および抗ｅＩＬ−５抗体力価の存在時に血中の好酸球レベルの統計的に有意な減少を示した（図２Ｃ）。したがって、ウマにおけるワクチン誘発性の抗自己ｅＩＬ−５抗体は、その後の血中の好酸球レベルの低下をもたらした（図３）。
【０１１４】
同時に、毎年再発性じんましんに罹患している３頭のウマ（ウマ１、ウマ２、およびウマ３）に、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンでワクチン接種し、示されているように、抗ｅＩＬ−５抗体（図２Ｅ）およびワクチン接種時の抗ＣＭＶｔｔ８３０抗体（図２Ｆ）を開発した。
【０１１５】
ＵＡＳ（じんましん活性スコア−実施例１を参照）を、未治療の１年目、プラセボ治療した２年目、ならびにｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種した３年目および４年目に記録した。３頭のウマはすべて、未治療年およびプラセボ治療した年にじんましんを発症した（図４Ａ、ウマ１、図４Ｂ、ウマ２、図４Ｃ、ウマ３：１列目、未治療年、２列目、プラセボ治療年）が、一方、３頭のウマはすべて、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０を使用してワクチン接種した３年目および４年目にはじんましんの臨床的兆候を示さなかった（図４Ａ、ウマ１、図４Ｂ、ウマ２、図４Ｃ、ウマ３：３列目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種した年、４列目、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチン接種した年）。
【０１１６】
さらに、ウマ１および３からの写真は、プラセボ治療した年の期間中のじんましんを示した（図５Ａ、ウマ１、図５Ｂ、ウマ３：レーン１）が、ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０ワクチンで治療した場合の同等の時期からの健康な皮膚を示した（図５Ａ、ウマ１、図５Ｂ、ウマ３：レーン２）。
【０１１７】
別のウマ患者（＊２０１１、Ｆｅｌｌポニー／アパルーサ混合品種、ウマ４）は、ほぼ断続的に約２年間、特に１年の４シーズンすべての間、じんましんに苦しんでいた（図６Ａ）。ｅＩＬ−５−Ｃ−Ｈｉｓ−ＣＭＶｔｔ８３０を使用した２回目以降のワクチン接種後、ウマにはいかなるじんましんの臨床的兆候も見られなかった（図６Ｂ）。ワクチン接種前に、ウマ４は、最大ＵＡＳスコア３を示し（図６Ｃ、１、ＵＡＳ＝３）、２回および３回のワクチン接種で臨床的兆候は消失した（図６Ｃ、２、ＵＡＳ＝０および３、ＵＡＳ＝０）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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