(57)【要約】本開示は、がん、感染、アレルギー性、変性および免疫障害のための養子細胞療法のための従来のおよび次世代のキメラ抗原受容体の構築のための多様な抗原結合ドメインおよびプラットフォーム、ならびにがん、感染、アレルギー性、変性および免疫障害のための養子細胞療法のための免疫Ｔ細胞の活性化および増幅のためのアプローチを提供する。
2021525509.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも1つの第1世代または次世代キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)をコードする少なくとも1つの組換えポリヌクレオチドであって、
前記少なくとも1つの組換えポリヌクレオチドが、
(a)         部分的または全体的な膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1の核酸ドメインと、任意に内因性タンパク質の細胞外ドメイン（ここで、該内因性タンパク質がリンパ球の表面上で発現され、リンパ球の活性化および/または増殖を誘発する）；
(b)任意に、ポリヌクレオチドリンカー、および
(c)前記第1の核酸ドメインに作動可能に連結された第2の核酸ドメイン（ここで、前記第2の核酸ドメインは、前記結合ドメインが表３に記載の結合ドメインから選択される1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードする）；
(d)共刺激ドメインをコードする任意の第3の核酸ドメイン；およびアクセサリーモジュールをコードする任意の追加の核酸ドメイン
を含む、少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記第1の核酸が、表１３に記載の少なくとも1つのＴ細胞受容体(ＴＣＲ)鎖を部分的または完全にコードする、請求項1に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記第1の核酸が、前記ＴＣＲ型の細胞質ドメインに作動可能に連結された、表１３中の少なくとも1つの膜貫通ドメインをコードする、請求項2に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド 
【請求項４】
前記ポリヌクレオチドがＣＡＲをコードし、該ＣＡＲが、
(i)配列番号4038〜4063、12602〜12638 から選択される配列と少なくとも75%の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する部分または全体のＴ細胞受容体(ＴＣＲ)定数鎖、および任意の共刺激モジュール；
(ii)任意のリンカー および
(iii)表３に記載の結合ドメインから選択される(i)に連結された1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメイン； 
(iv)任意のアクセサリーモジュールおよび
(v)(i)-(iii)を含むポリペプチドの二量体
を含む、請求項1に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記組換えポリヌクレオチドが、表２の配列のいずれか1つをコードする配列を含む、請求項4に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記アクセサリーモジュールが、配列番号43〜4117および4090〜4096から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1〜5のいずれかに記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記コードされたＣＡＲが、(1)表１のＣＡＲ１〜１６および/または(2)表２の主鎖；および(3)表３の結合ドメインを含む、請求項１〜６のいずれか1項に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項８】
(i)がＣＤ3zＴＣＲ定数鎖である、請求項4に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項９】
2つの第1世代または次世代キメラ抗原受容体をコードする、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項１０】
ＣＤ3z定数鎖の二量体をコードする、請求項１〜６のいずれか1項に記載の組換えポリヌクレオチド 。
【請求項１１】
少なくとも1つの次世代キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)をコードする少なくとも1つの組換えポリヌクレオチドであって、前記少なくとも1つの組換えポリヌクレオチドが： 
(a) 部分的または全体的な膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1の核酸ドメインおよび任意に配列番号4064〜4066、4070〜4072、および4075〜4078からなる群から選択される配列を有する内因性ＣＤ3zタンパク質の細胞外ドメイン（ここで、該内因性タンパク質がリンパ球の表面上で発現され、リンパ球の活性化および/または増殖を誘発する）； 
(b)任意に、ポリヌクレオチドリンカー；および 
(c)前記第1の核酸ドメインに作動可能に連結された第2の核酸ドメイン（ここで、前記第2の核酸ドメインは、前記結合ドメインが表３に記載の結合ドメインから選択される1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードする）； および
(d)共刺激ドメインをコードする任意の第3の核酸ドメイン；およびアクセサリーモジュールをコードする任意の追加の核酸ドメイン 
を含む、少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記内因性ＣＤ3zタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号67および71からなる群から選択される、請求項１１に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。 
【請求項１３】
前記少なくとも1つの次世代ＣＡＲは、2つのＣＡＲを含み、各々のＣＡＲは、ＣＤ3z鎖を含む、請求項１１または１２に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項１４】
抗体のvL断片が2つのＣＤ3z鎖のうちの1つに作動可能に連結され、抗体のvH断片が他方のＣＤ3z鎖に作動可能に連結されている、請求項１３に記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項１５】
前記vL鎖およびvH鎖が、特定の抗原標的についての表３および4中の対から選択される、請求項１４に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項１６】
前記vL/vHおよび/または前記ＣＤ3z鎖の間にリンカーが設けられている、請求項１４または１５に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項１７】
コード化リンカーが、IgCL(配列番号（ＤＮＡ）28および配列番号(PTR)4027およびIgCHドメイン(配列番号(ＤＮＡ)29および配列番号(PTR)4028からなる群から選択される、請求項１６に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。 
【請求項１８】
共刺激モジュールをコードする第3の核酸ドメインをさらに含む、請求項１１に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記共刺激モジュールが、４１BBまたはＣＤ２８タンパク質を含む、請求項１７に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項２０】
前記共刺激モジュールが、配列番号4067および4068からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８または１９に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド 
【請求項２１】
前記共刺激モジュールが、ＣＤ134(OX40)、Dap10、ＣＤ27、ＣＤ2、ＣＤ5、ICAM-1、LFA-1、Lck、TNFR-I、TNFR-II、Fas、ＣＤ30、ＣＤ40およびそれらの組み合わせのいずれか1つまたは複数からのシグナル伝達ドメインを含む、請求項１８に記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項２２】
前記アクセサリーモジュールが、配列番号4013〜4117および4090〜4096から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１〜２１のいずれかに記載の少なくとも1つの組換えポリヌクレオチド 
【請求項２３】
第1世代または次世代キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)のホモまたはヘテロ二量体を発現する組換え細胞であって、前記ホモまたはヘテロ二量体が： 
(a)部分的または全体的な膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1ドメインと、任意に内因性タンパク質の細胞外ドメイン（ここで、該内因性タンパク質がリンパ球の表面上で発現され、リンパ球の活性化および/または増殖を誘発する）；
(b)任意に、ポリヌクレオチドリンカー、および
(c)前記第1ドメインに作動可能に連結された第2ドメイン（ここで、前記第2ドメインは、前記結合ドメインが表３に記載の結合ドメインから選択される1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードする）； および
(d)共刺激ドメインをコードする任意の第3ドメイン
を含み、前記細胞が任意にアクセサリーモジュールを含み、
前記ホモまたはヘテロ二量体が前記組換え細胞の表面に結合している、組換え細胞。
【請求項２４】
前記細胞が、前記少なくとも1つの組換えポリヌクレオチドまたは請求項１〜２２のいずれかで形質転換される、請求項２３に記載の組換え細胞。
【請求項２５】
前記細胞がTリンパ球(Ｔ細胞)である、請求項２３または２４に記載の組換え細胞。
【請求項２６】
前記細胞が、ナイーブＴ細胞、中央メモリＴ細胞、エフェクターメモリＴ細胞、Treg、またはそれらの組み合わせである、請求項２５に記載の組換え細胞。
【請求項２７】
前記細胞がナチュラルキラー(NK)細胞、造血幹細胞(HSC)、胚性幹細胞、または多能性幹細胞である、請求項２３に記載の組換え細胞。
【請求項２８】
前記アクセサリーモジュールが、配列番号4103〜4117および4090〜4096から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２３〜２７のいずれかに記載の組換え細胞。
【請求項２９】
(a)部分的または全体的な膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1ドメインと、任意に内因性タンパク質の細胞外ドメイン（ここで、該内因性タンパク質がリンパ球の表面上で発現され、リンパ球の活性化および/または増殖を誘発する）；
(b)任意に、ポリヌクレオチドリンカー、および
(c)前記第1ドメインに作動可能に連結された第2ドメイン（ここで、前記第2ドメインは、前記結合ドメインが表３に記載の結合ドメインから選択される1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードする）；および 
(d)共刺激ドメインをコードする任意の第3ドメイン
を含む、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)。
【請求項３０】
前記内因性タンパク質が、配列番号4064〜4066、4070-4072、(4075-4078)および12637からなる群から選択される配列を含む、請求項２９に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３１】
前記第1核酸が、表１３に記載の少なくとも1つのＴ細胞受容体(ＴＣＲ)鎖を部分的または完全にコードする、請求項２９に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３２】
前記第1核酸は、対応するＴＣＲ型の細胞質ドメインに作動可能に連結された、表１３の膜貫通ドメインを含む、請求項３１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３３】
前記ＣＡＲが
(i)配列番号4038〜4063、12602〜12638から選択される配列と少なくとも75%の配列同一性を有し、任意の共刺激モジュールを含んでいてもよいアミノ酸配列を有する部分または全体のＴ細胞受容体(ＴＣＲ)定数鎖を含む、請求項２９に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３４】
請求項２９〜３３のいずれかに記載のキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項３５】
請求項３４に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３６】
請求項３５に記載のポリヌクレオチドを含む、ウイルス。
【請求項３７】
前記ウイルスがレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルスまたはヘルペスウイルスである、請求項３６に記載のウイルス。
【請求項３８】
請求項１〜２２に記載の少なくとも1つのポリヌクレオチド、請求項２３〜２８に記載の組換え細胞、請求項２９〜３３の記載のＣＡＲ、請求項３５に記載のベクターまたは請求項３６に記載のウイルスのいずれか1種又は複数種を含む、医薬組成物。
【請求項３９】
がんを治療するために、請求項３８に記載の組成物または請求項２３に記載の組換え細胞を提供する工程と、治療有効量の組成物または細胞を被験体に投与する工程と、を含む、がんの治療方法。
【請求項４０】
前記がんは、血液がんである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記血液がんは、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、リンパ腫、多重腫および急性リンパ性白血病のいずれか1つまたは複数である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも1つの組換えポリヌクレオチドが、HIV-1-vifをコードする配列を含む、請求項２１に記載の少なくとも1つの組換え細胞。
【請求項４３】
前記細胞が、HIV-1-vifをさらに含む、請求項４２に記載の組換え細胞。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本出願は、2006年6月1日に出願された米国仮出願第60/679、741号の優先権を主張し、これらの開示は全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、がん、感染、アレルギー性、変性および免疫疾患のための養子細胞治療のための、従来および次世代キメラ抗原の構築のための、多様な抗原結合ドメインおよび新規なプラットフォームを提供する。がん、感染、アレルギー性、変性および免疫疾患のための養子細胞治療のための免疫Ｔ細胞の活性化および増幅のための新規なアプローチも提供される。
【配列表を参考にした取り込み】
【０００３】
この出願に付随して、2001年6月1日に作成され、かつ、IBM-PC、MS-Windows(登録商標)オペレーティングシステム上でフォーマットされた、80、373、218バイトのデータを有する、"sequencesequence_ST25.txt"という名称のシーケンスリストが記載されている。この配列表は、全ての目的のためにその全体が本明細書中に参考として援用される。
【背景技術】
【０００４】
ＣＡＲは、Ｔ細胞をリダイレクトして腫瘍細胞を選択的に殺すことができる合成免疫受容体である。 HLA-ペプチド複合体に結合する生理学的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）とは異なり、ＣＡＲはペプチドプロセシングやHLA発現の認識を必要としない分子に結合する。初期の第1世代ＣＡＲは、ｓｃＦｖ（一本鎖断片変数）ベースの抗原結合ドメインを、ＣＤ3-ζまたはFc受容体γ鎖に由来する細胞質シグナル伝達ドメインにリンクした不活性ＣＤ8膜貫通ドメインに融合させることで構築された。Ｔ細胞共刺激の欠如を克服するために、第1世代のＣＡＲは、Ｔ細胞共刺激受容体の細胞質シグナル伝達ドメインを組み込むことによってさらに変更された。
【０００５】
ＣＡＲ-Ｔ細胞に成功しているにもかかわらず、このアプローチにはいくつかの制限があり、これには、ヒトサイトカイン放出症候群(CRS)および神経毒性などの毒性が含まれる。ＣＡＲ構築物中に共刺激ドメインを含めることにより、受容体を介する非生理学的シグナル伝達がもたらされ、これは、それらの毒性および持続性の欠如に寄与することができる。
【０００６】
従来の第二世代ＣＡＲ設計上の制限のうちのいくつかを打開するために、Ａｂ−ＴＣＲ（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８Ａ１）、ＴＣＲ受容体融合タンパク質またはＴＦＰ（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１８７３４９Ａ１）、合成免疫受容体（ＳＩＲ）（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１０２７９５Ａ１）、三官能性Ｔ細胞抗原カップラー（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１１７２２９Ａ１）を含む、集合的に次世代ＣＡＲと称されるいくつかの代替の設計について説明されている。これらの代替のＣＡＲ設計は、一般に、共刺激ドメインを欠く。
【発明の概要】
【０００７】
以下の実施形態およびそれらの態様は、システム、組成物、および方法に関連付けて説明および例示するが、それらは代表的な例示であり、範囲を限定するものではないことが意図されている。
【０００８】
特定の実施形態では、本開示は、キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド、がん、感染性、自己免疫性および変性疾患の治療のための養子細胞療法で使用することができる合成免疫受容体(ＳＩＲ)などを含み、遺伝子操作されたエフェクター細胞(NK細胞およびＴ細胞など)を含む組成物を提供する。 
【０００９】
特定の実施形態では、本開示は、2つのＣＤ3z鎖を含むzＳＩＲsと呼ばれる、合成免疫受容体のプラットフォームを提供する。ＳＩＲの構築に用いることができるＣＤ3z鎖のポリヌクレオチド配列は、例えば配列番号67、71に提供される。対応するアミノ酸配列は、配列番号4066、4070にそれぞれ提供される。本開示は、抗体のvL断片を2つのＣＤ3z鎖の一方に結合させることができ、vH断片を他方のＣＤ3z鎖に結合させることができることを提供する。2つのこのような鎖（例えば、vL-ＣＤ3zおよびvH-ＣＤ3z)が同一細胞内で共発現される場合、vLおよびvH断片は、それらの同族の抗原に結合し、Ｔ細胞信号を伝達することができる。特に、同族の標的抗原を発現する細胞株に暴露されたときにこのようなzＳＩＲを発現するＴ細胞は、NFATシグナル伝達を活性化し、IL2産生を誘導し、Ｔ細胞増殖を促進し、Ｔ細胞の活性化を促進し、細胞毒性を発揮することができる。vL/vHとＣＤ3z断片との間にリンカーを組み込むことにより、zＳＩＲの発現および活性をさらに高めることができる。特に、抗体由来の IgCL (配列番号28、4027)およびIgCHドメイン(配列番号29、4028)は、vL/vHとＣＤ3z断片との間の有用なリンカーとして作用する。
【００１０】
本開示はさらに、養子細胞療法における用途のために、従来のＣＡＲ（例：41BB共刺激ドメインを含む第2世代ＣＡＲ）ならびにＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲーＴｒｉ−ＴＡＣおよびＴＦＰなどの次世代ＣＡＲの生成に使用できるいくつかの新しい抗原結合ドメインを提供する。いくつかの実施形態では、これらの抗原結合ドメインは、血液悪性腫瘍および固形腫瘍の両方において発現される抗体および標的抗原から誘導される。これらの抗原結合ドメインのvL、vHおよびｓｃＦｖ断片の配列番号を表３に示す。軽（vL）鎖と重（vH）鎖の相補性決定領域（ＣＤR）の配列番号を表４に示す。例示的な従来のＣＡＲ（すなわち、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第２世代のＣＡＲ）、およびこれらの抗原結合ドメインに基づく次世代のＣＡＲ（例えば、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲおよびＴＦＰ）の核酸およびアミノ酸の配列番号を表６および７に提供する。これらの抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、標的抗原への結合親和性、サイトカイン分泌、増殖、細胞毒性、消耗、長期持続性など、さまざまなin vitroおよびin vivo特性を示す。そのため、これらの標的抗原を含むＣＡＲを使用して、多様な免疫応答を生成することができる。本開示の抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現するポリヌクレオチド、ポリペプチド、発現構築物、組換え操作された細胞、ならびにそのようなポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび細胞の作製方法および使用方法は、当該技術分野で公知の方法およびPCT/US2017/024843、WO2016/183749A1、PCT/US2016/058305、WO2015/117229A1およびPCT/US17/64379に記載されている方法で記載されている。これらの抗原結合ドメインを含む、従来型および次世代のＣＡＲの両方のＣＡＲを発現する免疫細胞は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる当技術分野で知られている方法およびPCT/US2017/024843、WO2014/160030A2、WO2016/187349A1、PCT/US2016/058305、WO2015/117229A1およびPCT/US17/64379に記載の方法を使用して、がん、感染性および免疫障害の養子細胞療法のために生成および使用することができる。
【００１１】
本開示はまた、Ｖｉｆタンパク質およびＣＡＲ（例えば、従来のＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、トリ-Tacまたは組換えＴＣＲなど)またはＶｉｆおよび他の任意の治療遺伝子（例えば、鎌状赤血球貧血の治療のためのβ-グロビン遺伝子)を同時発現することにより、レンチウイルスベクターを用いた遺伝子移入を改善する方法を提供する。ＣＡＲをコードし、Ｖｉｆを共発現する例示的なレンチウイルスベクター（pLenti-EF1a-ＣＤ8SP-hu-ＣＤ19-USC1-LH4-vH-Gly-Ser-リンカ-vL-Myc-ＣＤ8TM-BBz-2A-Ｖｉｆ）は、配列番号11268に提供される。いくつかの態様において、Ｖｉｆタンパク質は、レンチウイルスベクターのパッケージングの際に、パッケージング細胞中のＶｉｆを共発現することによりトランスで提供される。そのような実施形態において、Ｖｉｆタンパク質は、レンチウイルスベクターをコードするＲＮＡと共にウイルス粒子にパッケージされ、そして標的細胞に移される。Ｖｉｆタンパク質は、当技術分野で知られている方法によってパッケージング細胞で発現させることができる。例示的な実施形態では、Ｖｉｆタンパク質は、Ｖｉｆをコードする哺乳動物発現ベクター（例えば、ｐＣＤＮＡ３−Ｖｉｆ；配列番号１１２６９）を、目的の遺伝子をコードするレンチウイルストランスファーベクターおよびレンチウイルスパッケージングベクターと同時トランスフェクトすることにより、パッケージング細胞において発現される。（例えば、pLenti-EF1α-ＣＤ8SP-MYC3-WT1-Ab13-vL-V5-[hＴＣＲb-KACIAH]-F-P2A-SP-WT1-Ab13-vH-Myc4- [hＴＣＲa-CSDVP] -F-F2A-PAＣＤWPRE;配列番号151）。例示的な実施形態では、Ｖｉｆ(例えば、pＣＤＮＡ3-Ｖｉｆ; 配列番号11269)をコードする哺乳動物発現ベクター(pＣＤＮＡ3-Ｖｉｆ)を、目的の遺伝子例えば、pLenti-EF1α-ＣＤ8SP-MYC3-WT1-Ab13-vL-V5-[hＴＣＲb-KACIAH]-F-P2A-SP-WT1-Ab13-vH-Myc4-[hＴＣＲa-CSDVP]-F-F2A-PAＣＤWPRE; 配列番号151)およびレンチウイルスパッケージングベクター(s)をコードするレンチウイルス伝達ベクターと共トランスフェクトすることにより、Ｖｉｆタンパク質をパッケージング細胞中で発現させる。例示的なレンチウイルスパッケージングベクターには、GagおよびPolをコードする第3世代レンチウイルスパッケージングプラスミドであり、効率的なパッケージングのためにpRSV-Rev（Addgene＃12253）およびエンベロープ発現プラスミドpMD2.G（Addgene＃12259）を必要とするpMDLg / pRRE（Addgeneプラスミド12251）が含まれる。もう1つのレンチウイルスパッケージングベクターはpsPAX2（Addgeneプラスミド＃12260）である。これは、第2世代レンチウイルスパッケージングプラスミドであり、エンベロープ発現プラスミドpMD2.G（Addgene＃12259）とともに使用して、第2世代または第3世代レンチウイルスベクターをパッケージ化できる。例示的な実施形態では、Ｖｉｆをコードするプラスミドを、ｐｓＰＡＸ２およびｐＭＤ２．Ｇプラスミドと同時トランスフェクトして、第２世代または第３世代のレンチウイルスベクターをパッケージングすることができる。代替の例示的な実施形態において、Ｖｉｆをコードするプラスミドは、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ、ｐＲＳＶ−ＲｅｖおよびｐＭＤ２．Ｇプラスミドと同時トランスフェクトされて、第３世代レンチウイルスベクターをパッケージ化することができる。Ｖｉｆは、他のレンチウイルスパッケージングタンパク質��gag、Pol、Revなど）をコードする同じベクターから共発現させることもできる。例示的な実施形態では、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２は、当技術分野で知られている方法によってＶｉｆも共発現するように改変される。代替の例示的な実施形態において、ＧａｇおよびＰｏｌをコードする第３世代レンチウイルスパッケージングプラスミドは、Ｖｉｆをコードする核酸配列をＰｏｌをコードする核酸配列とインフレームで融合し、そしてＰ２Ａ切断可能リンカー配列によってそれから分離することによって、Ｖｉｆも発現するように改変される。いくつかの実施形態では、Ｖｉｆは、パッケージングセルで一時的に発現されるが、他の実施形態では、Ｖｉｆは、パッケージングセルで安定して発現される。いくつかの実施形態では、Ｖｉｆは、標的細胞で一時的に発現されるが、他の実施形態では、Ｖｉｆは、標的細胞で安定して発現される。一実施形態では、Ｖｉｆは、Ｖｉｆをコードする哺乳動物発現ベクター（例えば、ｐＣＤＮＡ３−Ｖｉｆ；配列番号１１２６９）のエレクトロポレーションによって、またはＶｉｆポリペプチドのエレクトロポレーションによって、標的細胞（例えば、Ｔ細胞または幹細胞）において一過性に発現される。Ｖｉｆを一過性に発現するタージ細胞（例えば、Ｔ細胞または幹細胞）は、その後、ＣＡＲまたは任意の目的の治療遺伝子（例えば、βグロビン）をコードするレンチウイルスベクターに感染する。
【００１２】
免疫応答のポリクローナル性は、さまざまな感染症の制御に成功するための鍵である。対照的に、現在のＣＡＲ療法は、一般に、単一の抗原および／または単一の抗原の単一のエピトープの標的化に依存している。標的抗原または標的エピトープの喪失は、現在のＣＡＲ療法の失敗の頻繁な原因である。この制限を克服するために、開示は、複数の抗原および単一の抗原の複数のエピトープに対してＣＡＲを提供する。これらのＣＡＲを適切な組み合わせで使用して、がん、感染症、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、変性疾患などの疾患の予防または治療のためのポリクローナルで多様な適応免疫応答を提供できる。
【００１３】
本開示はまた、養子移入されたＴ細胞（例：ＣＡＲ-Ｔ細胞、ＴＣＲ-Ｔ細胞およびTIL）において発現され、それらの生存、増殖、活性化、エフェクター機能（例えば、サイトカイン分泌、細胞毒性など）、消耗およびin vivo持続性に影響を及ぼし得るアクセサリーモジュールを提供する。
【００１４】
本開示は、少なくとも１つの第１世代または次世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを提供し、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドは、以下を含む：（a）内因性タンパク質の部分的または全体の膜貫通および/または細胞質ドメイン、および任意選択で細胞外ドメインをコードする第１の核酸ドメイン。ここで、内因性タンパク質はリンパ球の表面に発現され、リンパ球の活性化および/または増殖を誘発し；（b）任意選択でポリヌクレオチドリンカー;そして（c）第１の核酸ドメインに作動可能に連結された第2の核酸ドメイン。ここで、第2の核酸ドメインは、1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードし、結合ドメインは、表３に記載の結合ドメインから選択され；（d）共刺激ドメインをコードする任意の第3の核酸ドメイン；そして、アクセサリーモジュールをコードする任意の追加の核酸ドメイン。一実施形態では、第１の核酸は、表１３に記載されるように、部分的または完全に少なくとも１つのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖をコードする。別のまたはさらなる実施形態において、第１の核酸は、ＴＣＲ型の細胞質ドメインに作動可能に連結された表１３の少なくとも１つの膜貫通ドメインをコードする。別のまたはさらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＣＡＲをコードし、ここで、ＣＡＲは、以下を含む：（i）配列番号4038〜4063、12602〜12638から選択される配列に対して少なくとも75％の配列同一性を有し、任意の共刺激モジュールを含み得るアミノ酸配列を有する部分的または全体的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常鎖;（ii）任意のリンカー；そして、（iii）表３に記載の結合ドメインから選択された（a）に連結された1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメイン；（iv）任意のアクセサリーモジュール；（v）（i）-（iv）を含むポリペプチドの二量体。別のまたはさらなる実施形態において、組換えポリヌクレオチドは、表２の配列のいずれか１つをコードする配列を含む。別のまたはさらなる実施形態では、アクセサリーモジュールは、配列番号４１０３〜４１１７および４０９０〜4096から選択されるアミノ酸配列を含む。別のまたはさらなる実施形態では、コード化されたＣＡＲは、（１）表１のＣＡＲ１〜１６のいずれか、および／または（２）表２のバックボーン、および（３）表３の結合ドメインを含む。別のまたはさらなる実施形態において、（ｉ）は、ＣＤ３ｚＴＣＲ定常鎖である。別のまたはさらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、２つの第１世代または次世代のキメラ抗原受容体を提供する。別のまたはさらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＣＤ３ｚ定常鎖の二量体をコードする。
【００１５】
本開示はまた、少なくとも１つの次世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを提供し、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドは、以下を含む：（a）内因性タンパク質がリンパ球の表面に発現され、リンパ球の活性化および／または増殖を誘発する、配列番号４０６４〜４０６６、４０７０〜４０７２、および４０７５〜４０７８からなる群から選択される配列を有する部分的または全体の膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1の核酸ドメイン、および場合により内因性ＣＤ3zタンパク質の細胞外ドメイン；（b）任意選択でポリヌクレオチドリンカー;そして、（c）2番目の核酸ドメインは1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードし、結合ドメインは表３に記載の結合ドメインから選択される第1の核酸ドメインに作動可能に連結された第2の核酸ドメイン；（d）共刺激モジュールをコードする任意の第3の核酸ドメイン；およびアクセサリーモジュールをコードする任意の追加の核酸。別のまたはさらなる実施形態において、内因性ＣＤ３ｚタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６７および７１からなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの次世代ＣＡＲは、２つのＣＡＲを含み、各ＣＡＲは、ＣＤ３ｚ鎖を含む。別のまたはさらなる実施形態において、抗体のｖＬ断片は、２つのＣＤ３ｚ鎖のうちの１つに作動可能に連結され、抗体のｖＨ断片は、他のＣＤ３ｚ鎖に作動可能に連結される。別のまたはさらなる実施形態において、ｖＬおよびｖＨ鎖は、特定の抗原標的について表３および４の対から選択される。別のまたはさらなる実施形態において、リンカーは、ｖＬ／ｖＨおよび／またはＣＤ３ｚ鎖の間に提供される。別のまたはさらなる実施形態では、コードされたリンカーは、IgCL（配列番号（ＤＮＡ）：28および配列番号（ＰＲＴ）：4027）およびIgCHドメイン（配列番号（ＤＮＡ）：29および配列番号（ＰＲＴ）：4028）からなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、共刺激モジュールをコードする第３の核酸ドメインをさらに含む。別のまたはさらなる実施形態において、共刺激モジュールは、４１ＢＢまたはＣＤ２８タンパク質を含む。別のまたはさらなる実施形態において、共刺激モジュールは、配列番号４０６７および４０６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別のまたはさらなる実施形態では、共刺激モジュールは、ＣＤ134（OX40）、Dap10、ＣＤ27、ＣＤ2、ＣＤ5、ICAM-1、LFA-1、Lck、TNFR-I、TNFR-II、Fas、ＣＤ30、ＣＤ40およびそれらの組み合わせのいずれか１つまたは複数からのシグナル伝達ドメインを含む。別のまたはさらなる実施形態では、アクセサリーモジュールをさらに含み、アクセサリーモジュールは、配列番号４１０３〜４１１７および４０９０〜４０９６から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１６】
本開示はまた、第１世代または次世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）のホモ二量体またはヘテロ二量体を発現する組換え細胞を提供し、ホモ二量体またはヘテロ二量体は、以下を含み：（a）部分的または全体の膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1のドメイン、および任意で内因性タンパク質の細胞外ドメイン、ここで、内因性タンパク質はリンパ球の表面に発現され、リンパ球の活性化および／または増殖を誘発し；（b）任意選択でペプチドリンカー;（ｃ）第１のドメインに作動可能に連結された第２のドメインであって、第２のドメインは、1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインを含み、結合ドメインは、表３に記載の結合ドメインから選択され；そして（d）共刺激モジュールをコードする任意の第3のドメインであり、細胞は、任意選択で、組換え細胞の表面上でホモ二量体またはヘテロ二量体が会合するアクセサリーモジュールを含む。別のまたはさらなる実施形態において、細胞は、本明細書に記載されるような少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドで形質転換される。別のまたはさらなる実施形態において、細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である。別のまたはさらなる実施形態において、細胞は、ナイーブＴ細胞、中央記憶Ｔ細胞、エフェクター記憶Ｔ細胞、Ｔｒｅｇまたはそれらの組み合わせである。別のまたはさらなる実施形態において、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、胚性幹細胞、または多能性幹細胞である。別のまたはさらなる実施形態では、アクセサリーモジュールは、配列番号４１０３〜４１１７および４０９０〜４０９６から選択されるアミノ酸配列を含む。別のまたはさらなる実施形態において、組換え細胞は、ＨＩＶ１−Ｖｉｆを発現するか、または発現するように操作される。
【００１７】
本開示は、以下を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供し：（a）内因性タンパク質はリンパ球の表面に発現され、リンパ球の活性化および／または増殖を誘発する部分的または全体の膜貫通および/または細胞質ドメインをコードする第1のドメイン、および任意で内因性タンパク質の細胞外ドメイン；（b）任意選択でペプチドリンカー;（ｃ）第１のドメインに作動可能に連結された第２のドメインであって、第２のドメインは、1つまたは複数の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインを含み、結合ドメインは、表３に記載の結合ドメインから選択され；そして、（d）共刺激モジュールをエンコードする任意の第3ドメイン。別のまたはさらなる実施形態において、内因性タンパク質は、配列番号４０６４〜４０６６、４０７０〜４０７２、４０７５〜４０７８および１２６３７からなる群から選択される配列を含む。別のまたはさらなる実施形態において、第１の核酸は、表１３に記載されるように、部分的または完全に少なくとも１つのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖をコードする。別のまたはさらなる実施形態では、第１の実施形態は、対応するＴＣＲ型の細胞質ドメインに作動可能に連結された表１３の膜貫通ドメインを含む。別のまたはさらなる実施形態では、ＣＡＲは（i）配列番号4038から4063、12602-12638から選択される配列と少なくとも75％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する部分的または全体的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常鎖、そして任意の共刺激モジュールを含む。
【００１８】
本開示は、上記および本明細書に記載されるようなキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００１９】
本開示はまた、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【００２０】
本開示はまた、本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドを含むウイルスを提供する。 別のまたはさらなる実施形態において、ウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルスまたはヘルペスウイルスである。
【００２１】
本開示はまた、本明細書に記載の本発明のいずれか１つまたは複数および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
本開示はまた、組成物、本開示の組換え細胞を提供し、がんを治療するために治療有効量の組成物または細胞を対象に投与することを含む、がんを治療するための方法を提供する。別のまたはさらなる実施形態では、がんは血液がんである。別のまたはさらなる実施形態において、血液がんは、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、リンパ腫、多発性骨髄腫、および急性リンパ性白血病のいずれか１つまたは複数である。別の実施形態では、がんは固形腫瘍である。
【００２３】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＳＩＲ（すなわち、次世代ＣＡＲ）をコードする単離された核酸であり、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９を標的とし、ＳＩＲは、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰのコドン最適化変異体（Ｋ１３−ｏｐ ）。 例示的な実施形態では、ＣＤ１９を標的とする単離された核酸断片の配列は、配列番号１４０５６〜１４０５９および１４１０９〜１４１１２に示されている。例示的な実施形態では、ＣＤ１９を標的とし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離されたポリペプチドの配列は、配列番号１５８００−１５８０３および１５８５３−１５８５６に記載されている。いくつかの実施形態において、ＣＤ１９を標的とするｖＬおよびｖＨ断片は、表３に記載され、配列番号（ＤＮＡ）：１２６６２、１２６９３および１２５６５および１２６８７ならびに配列番号（ＰＲＴ）：１４４０６、１４４３７および１４４００および１４４３１に示される。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸によってコードされるポリペプチドも本明細書で提供され、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９を標的とする。本明細書でさらに提供されるのは、ＳＩＲおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターであり、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９を標的とする。例示的な実施形態において、ＣＤ１９を標的とするＳＩＲをコードするベクターは、配列番号１２６４１に提供される。ＳＩＲおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子操作された細胞（Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞など）も本明細書で提供され、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＣＤ１９を標的とする。疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞がＣＤ19を発現する疾患の治療および予防のための方法も提供される。
【００２４】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＳＩＲをコードする単離された核酸であり、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＭＰＬを標的とし、ＳＩＲは任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰのコドン最適化変異体（Ｋ１３−ｏｐｔ）を発現する。例示的な実施形態では、ＭＰＬを標的とする単離された核酸断片の配列は、配列番号１３７９１〜１７９２および１３８４４〜１３８４５に示されている。例示的な実施形態では、ＭＰＬを標的とし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離されたポリペプチドの配列は、配列番号１５５３５−１５５３６および１５５８８〜１５５８９に記載されている通りである。いくつかの実施形態において、ＭＰＬを標的とするｖＬおよびｖＨ断片は、表３に記載され、配列番号（ＤＮＡ）：１２６６５、１２６９６および１２６５８および１２６８９ならびに配列番号（ＰＲＴ）：１４４０９、１４４４０および１４４０２および１４４３３に示される。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸によってコードされるポリペプチドも本明細書で提供され、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＭＰＬを標的とする。本明細書でさらに提供されるのは、ＳＩＲおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターであり、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＭＰＬを標的とする。例示的な実施形態において、ＭＰＬを標的とするＳＩＲをコードするベクターは、配列番号１４３８４に提供される。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子操作された細胞（Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞など）も提供され、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＭＰＬを標的とする。 疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞がMPLを発現する疾患の治療および予防のための方法も提供される。
【００２５】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＳＩＲをコードする単離された核酸であり、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＢＣＭＡを標的とし、ＳＩＲは任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰのコドン最適化変異体（Ｋ１３−ｏｐｔ）を発現する。 例示的な実施形態では、ＢＣＭＡを標的とする単離された核酸断片の配列は、配列番号１２８９０〜１２８９３、１２９４３〜１２９４６、１２９９６〜１２９９９、１３０４９〜１３０５２および１２８３７〜１２８４０に示されている。例示的な実施形態では、ＢＣＭＡを標的とし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離されたポリペプチドの配列は、配列番号１４６３４〜１４６３７、１４６８〜１４６９９０、１４７４０〜１４７４３、１４７９３〜１４７９、および１４５８１〜１４５８４に記載されている。いくつかの実施形態では、BCMAを標的とするvLおよびvH断片を表３に記載し、配列番号（ＤＮＡ）：12670および12701、12669および12700、12671-12702、12657および12688、12654および12685；および配列番号（ＰＲＴ）：１４４１４および１４４４５、１４４１３および１４４４４、１４４１５および１４４４６、１４３９８および１４４２９、ならびに１４４０１および１４４３２に記載する。ＳＩＲをコードし、場合によりＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸によってコードされるポリペプチドも本明細書で提供され、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＢＣＭＡを標的とする。本明細書でさらに提供されるのは、ＳＩＲおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターであり、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＢＣＭＡを標的とする。例示的な実施形態では、ＢＣＭＡを標的とするＳＩＲをコードするベクターは、配列番号１４３７８および１４３８５で提供される。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子操作された細胞（Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞など）も本明細書で提供され、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＢＣＭＡを標的とする。 疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞がBCMAを発現する疾患の治療および予防のための方法も提供される。
【００２６】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＳＩＲをコードする単離された核酸であり、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＭＳＬＮを標的とし、ＳＩＲは任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰ（Ｋ１３−ｏｐ）のコドン最適化変異体を発現する。例示的な実施形態では、ＭＳＬＮを標的とする単離された核酸断片の配列は、配列番号１４２６８〜１４２６９、１４３２１〜１４３２２、および１４３７４〜１４３７５に示されている。例示的な実施形態では、ＭＳＬＮを標的とし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離されたポリペプチドの配列は、配列番号１６０１２〜１６０１３、１６０６５〜１６０６６および１６１１８〜１６１１９に記載されている通りである。いくつかの実施形態では、ＭＳＬＮを標的とするｖＬおよびｖＨ断片は、表３に記載され、配列番号（ＤＮＡ）：１２６６８および１２６９９、１２６６７および１２６９８、および１２６６６〜１２６９７；および配列番号（ＰＲＴ）：１４４１２および１４４４３、１４４１１および１４４４２、ならびに１４４１０および１４４４１に示されている。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸によってコードされるポリペプチドも本明細書で提供され、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＭＳＬＮを標的とする。本明細書でさらに提供されるのは、ＳＩＲおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターであり、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＭＳＬＮを標的とする。例示的な実施形態では、ＭＳＬＮを標的とするＳＩＲをコードするベクターは、配列番号１４３８１および１４３８３で提供される。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子操作された細胞（Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞など）も本明細書で提供され、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＭＳＬＮを標的とする。疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞がＭＳＬＮを発現する疾患の治療および予防のための方法も提供される。
【００２７】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＳＩＲをコードする単離された核酸であり、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２２を標的とし、ＳＩＲは、任意で、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰのコドン最適化変異体（Ｋ１３−ｏｐｔ）を発現する。 例示的な実施形態では、ＣＤ２２を標的とする単離された核酸断片の配列は、配列番号１３３１４〜１３１７、１３４２０〜１３423、１３４７３〜１３４７６、および１４２１５〜１４２１８に示されている。例示的な実施形態において、ＣＤ２２を標的とし、場合によりＫ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離されたポリペプチドの配列は、配列番号１５０５８〜１５０６１、１５１６４−１５１６７、１５２１７−１５２２０、および１５９５９〜１５９６２に記載されている通りである。いくつかの実施形態において、ＣＤ２２を標的とするｖＬおよびｖＨ断片は、表３に記載され、そして配列番号（ＤＮＡ）：12663、12694、12655、12686、12643、12674、12652および12683；および配列番号（ＰＲＴ）：１４４０７、１４４３８、１４３９９、１４４３０、１４３８７、１４４１８、１４３９６および１４４２７に示される。ＳＩＲをコードし、任意選択でＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸によってコードされるポリペプチドも本明細書で提供され、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２２を標的とする。本明細書でさらに提供されるのは、ＳＩＲおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターであり、ここで、ＳＩＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２２を標的とする。例示的な実施形態では、ＣＤ２２を標的とするＳＩＲをコードするベクターは、配列番号１２６４０で提供される。 ＳＩＲをコードし、場合によりＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子操作された細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供され、ＳＩＲの抗原特異的ドメインはＣＤ２２を標的とする。疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞がＣＤ22を発現する疾患の治療および予防のための方法も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】は、さまざまなzＳＩＲの概略図を示している。ＣＤ3z-EＣＤ、ＣＤ3z-TM、ＣＤ3z-CPは、ＣＤ3zの細胞外、膜貫通、および細胞質ドメインを指す。4-1BBおよびＣＤ28は、4-1BBおよびＣＤ28の細胞質共刺激ドメインを指す。
【００２９】
【図２】図２Ａと図２Ｂは、本開示のＣＡＲ-Ｔ細胞をＲＡＪＩ細胞（図２Ａ）およびＮａｌｍ６細胞（図２Ｂ）と共培養したときのＩＦＮγの誘導を示す。
【００３０】
【図３】は、生物発光イメージングを使用して測定された、ＲＡＪＩ細胞の異種移植モデルにおける本開示のＣＡＲ-Ｔ細胞のin vivo有効性を示している。
【００３１】
【図４】は、生物発光イメージングを使用して測定された、Ｎａｌｍ６細胞の異種移植モデルにおける本開示のＣＡＲ-Ｔ細胞のin vivo有効性を示す。
【発明の詳細な説明】
【００３２】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「ある細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」への言及は、複数のかかる細胞を含み、「そのポリヌクレオチド（ｔｈｅ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」への言及は、1つまたは複数のポリヌクレオチドへの言及を含むといった具合である。 
【００３３】
また、「または」の使用は、別途明記されない限り、「および／または」を意味する。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は同義であり、限定するようには意図されていない。
【００３４】
様々な実施形態の記述が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用する場合、当業者であれば、いくつかの特定の例では、実施形態が、「から本質的になる」または「からなる」という言葉を使用してその代わりに記述され得ると理解するであろうことをさらに理解されたい。
【００３５】
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００３６】
「約」という用語は、測定可能な値、例えば、量、時間的持続時間等を指す場合、規定値から±２０％、またはある場合には±１０％、またはある場合には±５％、またはある場合には±１％、またはある場合には±０．１％の変動を包含するよう意図されており、したがって、変動は、開示される方法の実行または本明細書における組成物の記載に適切である。  
【００３７】
「Ａｂ−ＴＣＲ」または「ＡｂＴＣＲ」という用語は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８Ａ１に記載の次世代ＣＡＲプラットフォームを指す。ある実施形態では、Ａｂ−ＴＣＲは、少なくとも１つのＴＣＲシグナル伝達モジュールを動員することができるＴＣＲモジュールに融合した標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。Ａｂ−ＴＣＲの構築に使用され得る例示的なＴＣＲモジュールは、配列番号９５９〜９６４（表６Ｄ）および参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８Ａ１に提供される。BCMAを標的とし、NEMO-K277Aをコードするアクセサリーモジュールを共発現する例示的なAb-ＴＣＲは、配列番号4382-4383に提供されている（表６）。しかしながら、このＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、任意である。本開示に記載の抗原結合ドメイン（すなわち、ｖＬおよびｖＨ断片、リガンド、および受容体等）を有するＡｂ−ＴＣＲは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａなしで構築され得る。したがって、このアクセサリーモジュールは、上流フーリン−ＳＧＳＧ−Ｆ２Ａ配列とともに、Ａｂ−ＴＣＲから欠失し得る。あるいは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、他のタンパク質、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、およびＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ、ＮＥＭＯ−Ｌ６００−ＦＫＢＰｘ２等をコードするアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。さらに、Ａｂ−ＴＣＲに存在するＴＣＲモジュールは、ＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１に記載の他のＴＣＲモジュールに置換される。
【００３８】
「アクセサリーモジュール」という用語は、ＣＡＲ（ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-TAC、ＴＦＰなどの次世代ＣＡＲを含む。）および/またはrＴＣＲと共発現して、ＣＡＲ/rＴＣＲまたはＣＡＲ/rＴＣＲ発現細胞の発現または活性を増加、減少、調節、または改変する要素を指す。発現細胞。例示的なアクセサリーモジュールには、41BBL、ＣＤ40L、HIV1-Ｖｉｆ、vFLIP K13、MC159、cFLIP-L/MRITα、cFLIP-p22、HTLV1 Tax、HTLV2 Tax、HTLV2 Tax-RS変異体、FKBPx2-K13、FKBPx2-のいずれか1つまたは複数が含まれる。HTLV2-Tax、FKBPx2-HTLV2-Tax-RS、IL6R-304-vHH-Alb8-vHH、IL12f、PD1-4H1 ｓｃＦｖ、PD1-5C4 ｓｃＦｖ、PD1-4H1-Alb8-vHH、PD1-5C4-Alb8-vHH、CTLA4-Ipilimumab-ｓｃＦｖ、CTLA4-Ipilimumab-Alb8-vHH、IL6-19A-ｓｃＦｖ、IL6-19A-ｓｃＦｖ-Alb8-vHH、sHVEM、sHVEM-Alb8-vHH、hTERT、Fx06、hNEMO-K277A、Brd4をターゲットとするshRNAそれらの組み合わせ。アクセサリーモジュールは、単一のベクターを使用して、または２つ以上の異なるベクターを使用して、ＣＡＲ／ｒＴＣＲなどと共発現させることができる。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、ＣＡＲおよび/またはＴＣＲなどに関連する毒性を低減または防止する。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、レンチウイルス介在遺伝子移入の効率を向上させる。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、レンチウイルス介在遺伝子移入の効率を向上させる。
【００３９】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原に特異的に結合するタンパク質、または免疫グロブリン分子に由来するポリペプチド配列を指す。抗体は、モノクローナルもしくはポリクローナル、複数鎖もしくは一本鎖、またはインタクトな免疫グロブリンであり得、天然源または組換え源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。抗体は、「ヒト化」、「キメラ」、または非ヒトであり得る。
【００４０】
「抗体断片」という用語は、抗原のエピトープと（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）特異的に相互作用する能力を保持する抗体少なくとも一部分を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’ｈ、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨｌドメインからなるＦｄ断片、直鎖状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、例えば、ｖＬまたはｖＨのいずれか、ラクダ類ｖＨＨドメイン、抗体断片から形成された多重特異性抗体、例えば、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、ならびに抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合断片は、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖに組み込まれる場合もある（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照のこと）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）等のポリペプチドに基づいて足場にグラフトされる場合もある（フィブロネクチンポリペプチドミニホディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。
【００４１】
「抗体重鎖」という用語は、天然に存在する立体構造で抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、その抗体が属するクラスを決定する。
【００４２】
「抗体軽鎖」という用語は、天然に存在する立体構造で抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）軽鎖およびラムダ（λ）軽鎖とは、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【００４３】
「抗がん効果」という用語は、腫瘍体積の減少、がん細胞数の減少、転移数の減少、平均寿命の延長、がん細胞増殖の低減、がん細胞生存の低減、またはがん性状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない。様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。「抗がん効果」は、そもそもがんの発生を予防するためのＣＡＲ、ＳＩＲ、ＴＦＰ、Ａｂ−ＴＣＲーＴｒｉ−Ｔａｃ、ｚＳＩＲなどの能力によっても現れることができる。
【００４４】
「抗がん剤」とは、異常な細胞分裂および成長を抑制するか、新生細胞の移動を抑制するか、侵襲性を抑制するか、またはがんの増殖および転移を予防する薬剤を指す。  
【００４５】
「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。 
【００４６】
「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という用語は、免疫細胞または免疫細胞に結合する抗体によって認識され得る抗原をその表面上に発現する任意の細胞を指す。例えば、ＣＤ19を発現するBリンパ球は、ＣＤ19に対して向けられたＣＡＲを発現するＴ細胞の抗原提示細胞として機能することができます。ＡＰＣは、ＭＨＣ分子とは独立して、またはＭＨＣ分子との関連で抗原を提示し得る。 APCは、主要組織適合遺伝子複合体（MHC）と複合体を形成して抗原を提示する場合があります。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体(ＴＣＲ)を使用して、これらのMHC-抗原複合体を認識することができる。別の実施形態では、APCは、Ｔ細胞上で発現される天然受容体例えば、ＣＤ28または(41BBまたは合成受容体例えば、ＣＡＲ、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴRI-TAC、またはＴＦＰなど)によってMHCとは独立して認識されるその表面上に抗原を提示し得る。
【００４７】
抗原提示基質」または「ＡＰＳ」という用語は、ビーズ、マイクロビーズ、プレート、またはその表面に外来抗原を表示する任意のマトリックスなどの任意の基質を指す。一実施形態では、ＡＰＳは、天然受容体（例えば、ＣＤ２８または４１ＢＢ）または合成受容体（例えば、従来のＣＡＲ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲーＴ細胞に発現するＴＦＰ）。例示的な実施形態において、ＣＤ１９の細胞外ドメインでそれらの表面がコーティングされたビーズは、ＣＤ１９に向けられた従来のＣＡＲ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲまたはＴＦＰを発現するＴ細胞のＡＰＳとして役立つことができる。
【００４８】
「抗感染効果」という用語は、例えば、感染病原体の力価の減少、感染病原体のコロニー計数の減少、感染性状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない、様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。「抗感染効果」は、最初の段階での感染の発症の予防におけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、および抗体の能力によっても現れ得る。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「親和性」は、結合強度の尺度を説明するよう意図されている。親和性は、ある場合には、結合剤とその標的との間（例えば、抗体と抗原（結合ドメインに特異的なエピトープを含む）との間）の立体化学的適合の近似性、それらの間の接触面積のサイズ、および荷電基および疎水基の分布に依存する。親和性は、一般に、結合剤がその標的に結合する「能力」を指す。「親和性」を測定するための多数の方法が当該技術分野に存在する。例えば、親和性を計算するための結合実験の使用を含む、抗体の抗原に対する親和性を計算するための方法が、当該技術分野で既知である。結合親和性は、当該技術分野で既知の様々な技法、例えば、表面プラズモン共鳴、生体層干渉法、二重偏波干渉法、静的光散乱、動的光散乱、等温滴定熱量測定、ＥＬＩＳＡ、分析超遠心、およびフローサイトメトリーを使用して決定され得る。結合親和性を決定するための例示的な方法は、表面プラズモン共鳴を用いる。表面プラズモン共鳴は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）
【００５０】
「抗原結合ドメイン」または「抗原結合モジュール」または「抗原結合セグメント」または「抗原特異的ドメイン 」とは、一次、二次、または三次配列、翻訳後修飾、および／または電荷のため、高度の特異性で抗原に結合するポリペプチドまたはペプチドを指す。  抗原結合ドメインは、異なる供給源、例えば、抗体、非免疫グロブリン結合タンパク質、リガンドまたは受容体に由来し得る。
【００５１】
「アビディティ」は、結合剤とその標的との間の相互作用の強さ（例えば、抗体とその抗原標的、受容体とその同族体との間の相互作用の強さなど）を指す。抗体および親和性は、機能的アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイおよびTopangaアッセイ）を使用して、表現型を特徴づけ、比較する。 
【００５２】
「会合定数（Ｋａ）」という用語は、受容体とリガンドまたは抗体と抗原との会合の平衡定数として定義される。
「自己抗原」という用語は、自己抗体の産生などの自己免疫応答の産生を刺激する内因性抗原を指す。自己抗原の例には、デスモグレイン１、デスモグレイン３、およびそれらの断片が含まれるが、これらに限定されない。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「バックボーン」という用語は、ＣＡＲ（表１）と表２に記載のアクセサリーモジュールとの特定の組み合わせを指す。例示的な実施形態では、様々なバックボーンを含むＣＡＲとアクセサリーモジュールとの特定の組み合わせが表２に記載される。一実施形態では、ＣＡＲおよびアクセサリーモジュールは、単一の核酸分子によってコードされる。別の実施形態では、ＣＡＲは、第１の核酸分子によってコードされ、アクセサリーモジュールは、第２の核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、アクセサリーモジュール内の成分の数に応じて、１つより多くの核酸分子によってコードされる。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「有益な結果」には、病状の重症度の軽減または緩和、病状の悪化の防止、病状の治癒、病状の発症の防止が含まれ得るが、これらに限定されない。患者が病状を発症する可能性を低くしたり、患者の寿命や期待寿命を延ばしたりする。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「結合ドメイン」または「抗体分子」という用語は、非特異的ドメインよりも高い親和性で標的に結合することができる少なくとも１つのドメイン、例えば免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。この用語は、抗体および抗体断片を含む。
【００５６】
「同じエピトープに結合する」とは、例示される抗体、ｓｃＦｖ、または他の抗原結合ドメインと同じエピトープを有する、標的抗原に結合する抗体、ｓｃＦｖ、または他の抗原結合ドメインの能力を意味する。一例として、例示される抗体、ｓｃＦｖ、または他の結合剤および他の抗体のエピトープは、標準のエピトープマッピング技法を使用して決定され得る。従来のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ（例えば、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、ＴＦＰ、Ｔｒｉ−ＴａｃまたはＡｂ−ＴＣＲ）の抗原結合ドメインによって結合されるエピトープはまた、エピトープビニングアッセイによって決定され得る。エピトープビニングは、標的タンパク質に対するモノクローナル抗体を特徴付けた後にそのライブラリを選別するために使用される競合的免疫アッセイである。抗体が抗原のエピトープへの互いの結合を遮断するかを確認するために、同様の標的に対する抗体がそのライブラリ内の全ての他の抗体に対して対様式で試験される。各抗体がそのライブラリ内の他の抗体の全てに対して作成されたプロファイルを有した後、競合的遮断プロファイルが、そのライブラリ内の他の抗体に対して各抗体に作成される。密接に関連するビニングプロファイルは、これらの抗体が同じまたは密接に関連するエピトープを有し、一緒に「ビニング」される。同様に、立体構造エピトープは、アミノ酸の空間立体構造を決定することによって、例えば、水素／重水素交換、Ｘ線結晶学、および二次元核磁気共鳴等によって容易に特定される。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（上記参照）を参照されたい。タンパク質の抗原性領域は、標準の抗原性およびヒドロパシープロット、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを使用して計算されたもの等を使用することによって特定される場合もある。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルを決定するためのＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法（Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８）、およびヒドロパシープロットのためのＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技法（Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．１５７：１  ０５−１３２）を用いる。標的（例えば、ＣＤ１９）に対する選択されたモノクローナル抗体が特有のエピトープに結合するかを決定するために、各抗体が市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）を使用してビオチン化され得る。非標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用した競合研究が、ＣＤ１９−細胞外ドメインコーティングＥＬＩＳＡプレートを使用して行われ得る。ビオチン化ｍＡｂ結合が、ストレプトアビジン−アルカリ性ホスファターゼプローブを用いて検出され得る。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる非隣接抗原結合部位を意味するよう意図されている。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｉ．Ｃｈｅｒｎ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、およびＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２５  ２６２：７３２−７４５（１９９６）によって説明されており、これらの定義は、互いに比較したときにアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはそのグラフト抗体もしくはバリアントのＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内にあるよう意図されている。本明細書で使用される場合、抗体の異なるＣＤＲは、それらの異なる定義の組み合わせによっても定義され得る。例えば、ｖＨＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔに基づいて定義され得、ＶＨＣＤＲ２は、Ｃｈｏｔｈｉａに基づいて定義され得る。上記の参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、以下の通りである。
ＣＤＲ定義  
2021525509.tif 000003
（残基番号は、それらの特定された参照に相当する）。
【００５８】
「フレームワーク領域」という用語は、より発散する（すなわち、超可変）ＣＤＲの間に存在する抗体可変領域の当技術分野で認識されている部分を指す。
【００５９】
本明細書に記載の結合分子のアミノ酸配列修飾が企図される。例えば、従来のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ（例えば、ＳＩＲ、ｚＳＩＲなど）のｖＬおよび／またはｖＨ断片の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。そのような修飾には、例えば、結合分子のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはその挿入、および／またはその置換が含まれる。最終構築物が所望の特性を有するという条件で、削除、挿入、および置換の任意の組み合わせを行って、最終構築物に到達することができる。アミノ酸の変化はまた、グリコシル化部位の数または位置の変化など、結合分子の翻訳後プロセスを変化させる可能性がある。好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸は、ＣＤＲ内で置換され得、一方、１、２、３、４、５、６、７、８、９、９ 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、または25アミノ酸をフレームワーク領域（FR）内で置換することができます。置換は、本明細書に記載されるような保存的置換であることが好ましい。 さらに、またはその代わりに、1、2、3、4、5、または6個のアミノ酸を各ＣＤR内に挿入または削除できます（もちろん、それらの長さに応じて）が、1、2、3、4、5、6 、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、または25アミノ酸は、各FRI内に挿入または削除できる。
【００６０】
好ましくは、アミノ酸配列挿入は、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10残基の長さのアミノ-および/またはカルボキシル-末端融合物を、100個以上の残基を含むポリペプチド、ならびに単または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。結合分子の挿入変異体は、抗体のnまたはc末端への融合、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【００６１】
別のタイプの変異体は、アミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、好ましくは、結合分子内の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個のアミノ酸残基が異なる残基で置き換えられている。置換突然変異誘発に最も関心のある部位には、重鎖および／または軽鎖のＣＤＲ、特に超可変領域が含まれるが、重鎖および／または軽鎖におけるＦＲ変化もまた企図される。
【００６２】
例えば、ＣＤＲ配列が６個のアミノ酸を含む場合、これらのアミノ酸のうちの１つ、２つ、または３つが置換されることが想定される。同様に、ＣＤＲ配列が１５個のアミノ酸を含む場合、これらのアミノ酸のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つが置換されることが想定される。
【００６３】
一般に、アミノ酸が重鎖および/または軽鎖のＣＤRの1つまたは複数またはすべてで置換されている場合、その時点で得られる「置換」配列は、「元の」ＣＤＲ配列と少なくとも６０％、より好ましくは６５％、さらにより好ましくは７０％、特に好ましくは７５％、より特に好ましくは８０％同一であることが好ましい。これは、それが「置換」配列とどの程度同一であるかというＣＤRの長さに依存することを意味する。例えば、5アミノ酸を有するＣＤRは、少なくとも1つを有するために、その置換配列と80％同一であることが好ましい。したがって、結合分子のＣＤＲは、それらの置換された配列に対して異なる程度の同一性を有し得る、例えば、ＣＤＲＬ１は８０％を有し得、ＣＤＲＬ３は９０％を有し得る。
【００６４】
好ましい置換（または置換）は、保存的置換である。しかしながら、結合分子が標的抗原に結合するその能力を保持している限り、および／またはそのＣＤＲがその時点で置換された配列（「元の」ＣＤRシーケンスと少なくとも60％、65％以上、70％以上、通常は75％以上、または80％以上同一）と同一である限り、任意の置換（非保存的置換または以下にリストされている「例示的置換」からの1つまたは複数を含む）が想定される。
【００６５】
非保存的置換は、1つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。結合分子の適切な立体配座を維持するのに関与しないシステイン残基は、一般的にセリンで置換されて、分子の酸化安定性を改善し、かつ、異常な架橋を防止する。逆に、システイン結合(s)を抗体に添加して安定性を向上させることができる(特に、抗体がfv断片のような抗体断片である場合) 。 
【００６６】
異なる抗原を標的とする開示のＣＡＲ（例えば、第２世代ＣＡＲ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲーＴｒｉ−ＴａｃまたはＴＦＰ)の抗原結合ドメインを構成するために使用することができるvＬおよびvＨセグメントのＣＤRの配列番号を表４に提供する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール（Ｆａｂ様またはＦｖ様抗原結合モジュール等）への言及は、抗原結合モジュールが、（ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００倍、もしくはそれ以上）の親和性で、または（ｂ）他の分子への結合に対するＫｄの約１／１０倍以下（例えば、１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１１７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００倍、もしくはそれ未満）のＫｄで、標的抗原に結合することを意味する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、または放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）等の当該技術分野で既知の方法によって決定され得る。Ｋｄは、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、または例えばＳａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する結合平衡除外アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）等の当該技術分野で既知の方法によって決定され得る。  
【００６８】
「がん」および「がん性」とは、典型的には未調節細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、またはそれを説明する。 がんの例には、B細胞リンパ腫（ホジキンリンパ腫および/または非ホジキンリンパ腫）、精巣がん、肺がん、および白血病が含まれますが、これらに限定されません。他のがんおよび細胞増殖性障害は、当技術分野で容易に認識されるであろう。 「腫瘍」および「がん」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、例えば、両方の用語は、固体および液体、例えば、びまん性または循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用される場合、「がん」または「腫瘍」という用語は、前悪性、ならびに悪性のがんおよび腫瘍を含む。
【００６９】
「化学療法剤」とは、がんの化学療法に使用されることで知られている化合物である。  
【００７０】
「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」とは、養子細胞移入と呼ばれる技法を使用したがん療法としての使用に企図された人工的（天然に存在しない）免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）受容体である。ＣＡＲは、ＣＡＲが結合する特異的抗原に応答してＴ細胞活性化および増殖を刺激するように特異的に構築されている。一般に、ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に発現されると、免疫エフェクター細胞に、標的細胞、典型的には、がん細胞に対する特異性、および細胞内シグナル生成を提供する一組のポリペプチド、最も単純な実施形態では、典型的には２つのポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに刺激分子および／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書で「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）を含む。いくつかの態様では、この一組のポリペプチドは、互いに隣接している。一態様では、刺激分子は、ゼータ鎖Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖である。 一態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下で定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する1つまたは複数の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。一実施形態では、共刺激分子は、本明細書に記載の共刺激分子、例えば、４−ｌＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、および／またはＣＤ２８から選択される。一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意選択的なリーダー配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列をさらに含み、このリーダー配列は、細胞プロセシングおよびＣＡＲの細胞膜への局在化中に、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から任意選択的に切断される。典型的には、キメラ抗原受容体を発現するように操作されたＴ細胞を指す「ＣＡＲ-Ｔ細胞」が使用される。したがって、かかるＣＡＲを持つＴリンパ球は、一般に、ＣＡＲ-Ｔリンパ球と称される。 ＣＤ19を標的とし、ＣＤ8シグナルペプチド、ＣＤ19-AM1 ｓｃＦｖに基づく抗原結合ドメイン、ＣＤ8ヒンジおよび膜貫通ドメイン、4-1BB共刺激ドメインおよびＣＤ3z刺激ドメインを含む第2世代ＣＡＲは、配列番号799で表される。4-1BB共刺激ドメインが別の共刺激ドメイン（ＣＤ28やＣＤ27など）に置き換えられたＣＡＲは、従来のＣＡＲとも呼ばれる。従来のＣＡＲの制限を克服するために、ＴＣＲ受容体融合タンパク質またはＴＦＰ（WO 2016/187349 A1）、抗体ＴＣＲまたはAbＴＣＲ（PCT / US2016 / 058305）を含む、いくつかの代替設計または次世代ＣＡＲが説明されている。Tri-TAC（WO 2015/117229 A1）および合成免疫受容体またはＳＩＲ（US 62 / 429,597およびPCT / US17 / 64379）。本明細書で使用される場合、「ＣＡＲ」または「ＣＡＲ」という用語はまた、細胞に抗原特異性を付与するためのより新しいアプローチ（すなわち、ＴＦＰ、ＡｂＴＣＲーＴｒｉ−Ｔａｃ、ＳＩＲおよびｚＳＩＲなど）を包含する。本開示は、ＣＡＲの生成に使用することができるいくつかの新規の抗原結合ドメインを提供する。明確に記載されていないが、これらの抗原結合ドメイン（例：ｓｃＦｖ、vL、vH、vHHなど。）を使用して、従来の第１世代および第２世代のＣＡ���、ならびに細胞に抗原特異性を付与するためのより新しいアプローチ（つまり、ＴＦＰ、AbＴＣＲーＴri-Tac、ＳＩＲ、zＳＩＲなど）を生成できることが想定される。したがって、特定の抗原結合ドメインのvLおよびvH断片は、これらの断片がＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲまたはｚＳＩＲを含む２つの定常鎖（例：ＴＣＲa / bまたはＴＣＲg / d）に融合される場合、二本鎖ＳＩＲ、二本鎖Ａｂ−ＴＣＲまたは二本鎖ｚＳＩＲを生成するために使用され得る。同じ抗原結合ドメインのvLおよびvH断片は、可撓性リンカーを介して結合して、ｓｃＦｖを生成することができ、これを使用して、当技術分野で知られている方法を使用して、従来の第１または第２の生成ＣＡＲ-ＴＦＰまたはＴｒｉ−ＴＡＣを生成することができる。
【００７１】
「コドン最適化」または「種のコドンバイアスの制御」とは、特定の宿主細胞の好ましいコドン使用を指す。本明細書で使用される場合、「共発現」は、２つ以上の遺伝子の発現を指す。遺伝子は、例えば、単一のタンパク質または単一のポリペプチド鎖としてのキメラタンパク質をコードする核酸であり得る。いくつかの実施形態において、ｚＳＩＲが２つ以上の機能的ポリペプチドユニットからなる場合、異なる機能的ユニットは、1つまたは複数のポリヌクレオチド鎖を使用して共発現される。
【００７２】
別の実施形態では、異なるポリヌクレオチド鎖は、切断可能なリンカー（例えば、Ｔ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａなど）をコードする核酸配列によって連結されている。別の実施形態では、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＳＧＳＧ）モチーフ（配列番号８６−８７および４０８５−８６）もまた、切断可能なリンカー配列の上流に付加されて、切断の効率を高める。
【００７３】
切断可能なリンカーの潜在的な欠点は、N末端タンパク質の末端に残された小さな2Aタグがタンパク質の機能に影響を与えたり、タンパク質の抗原性に寄与したりする可能性があることです。これを克服するために、いくつかの実施形態では、フューリン切断部位（ＲＡＫＲ）（配列番号８８−９０および４０８７−４０８９）がＳＧＳＧモチーフの上流に付加されて、翻訳後の残留２Ａペプチドの切断を促進する。 zＳＩＲの異なるユニットをコードするポリヌクレオチドは、IRES（内部リボソーム侵入部位）配列によって連結され得る。あるいは、zＳＩＲの異なる機能ユニットは、リンカーを介して連結されていないが、代わりに、例えば、2つの異なるベクターによってコードされている2つの異なるポリヌクレオチドによってコードされている。切断可能なリンカーの核酸配列は、配列番号80から配列番号85に提供される。
【００７４】
タンパク質が互いに同一性または相同性を有し、同様または同一の機能を保持し得ることが認識されるであろう。例えば、本開示は、生物学的活性を保持しながら、本明細書に記載の配列のいずれかに対して８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９８．５％、９９％または９９．９％の同一性を有するＣＤ３ｚ鎖を含む。
【００７５】
「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、増殖などであるがこれに限定されない、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。 共刺激分子には、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ８、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、および４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）が含まれるが、これらに限定されない。かかる共刺激分子のさらなる例としては、ＣＤ８、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤｌＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰ０−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。共刺激受容体は、細胞、他のＴ細胞、例えば、ＮＫ細胞またはマクロファージに発現される。
【００７６】
「疾患特異的抗原」または「疾患関連抗原」または「疾患を引き起こす抗原」という用語は、疾患の発症に寄与する細胞上に発現される抗原を指す。
【００７７】
「疾患を引き起こす細胞」または「疾患関連細胞」という用語は、疾患の発症に寄与する細胞を指す。例示的な疾患を引き起こす細胞には、がん細胞およびウイルス感染細胞が含まれる。 Bリンパ球やTリンパ球などの非がん性細胞は、免疫、アレルギー、変性、感染症の病因に関連しており、疾患を引き起こす細胞と見なされている。
【００７８】
「疾患支持抗原」という用語は、疾患を引き起こす細胞の生存、増殖、持続性または活性を支持する細胞上に発現される抗原を指す。いくつかの実施形態において、疾患支持抗原は、間質細胞上に存在する抗原である。理論に束縛されることを望まないが、いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、疾患支持細胞を破壊し、それにより、疾患を引き起こす細胞の成長または生存を間接的に遮断する。例示的な間質細胞抗原には、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）およびテネイシンが含まれる。
【００７９】
「変性障害」という用語は、通常の身体の衰えによるか、運動または食習慣等の生活様式の選択によるかにかかわらず、経時的に次第に悪化するであろう組織または臓器に影響を及ぼす変性細胞変化に基づく連続過程の結果である疾患を指す。例示的な変性疾患としては、アルツハイマー病、シャルコー・マリー・ツース病、クロイツフェルト・ヤコブ病、フリードライヒ失調症、真性糖尿病（ＩＩ型）、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられる。
【００８０】
本明細書で使用される「に由来する」という用語は、第１の分子と第２の分子との間の関係を示す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性を指し、第２の分子に由来する第１の分子に対する過程または源の限定を暗示するものでも含むものでもない。例えば、抗体分子に由来する抗原結合ドメインの場合、抗原結合ドメインは、それが必要な機能、すなわち、抗原に結合する能力を有するように、十分な抗体構造を保持する。
【００８１】
「標的抗原の発現に関連する疾患」または「本明細書に記載の疾患関連抗原」という語句には、本明細書に記載の標的抗原の発現に関連する疾患または本明細書に記載の標的抗原を発現する細胞に関連する状態、例えば、増殖性疾患、例えば、がんもしくは悪性腫瘍もしくは前がん状態、例えば、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病、または本明細書に記載の標的抗原を発現する細胞に関連する非がん関連適応症が含まれるが、これらに限定されない。一態様では、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連するがんは、血液がんである。一態様では、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連するがんは、固形がんである。本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連するさらなる疾患には、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する非定型および／もしくは非古典的がん、悪性腫瘍、前がん状態、または増殖性疾患が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の標的抗原の発現に関連する非がん関連適応症には、例えば、自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギーおよび喘息）、ならびに移植が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、標的抗原発現細胞は、標的抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、または任意の時点で発現される。別の実施形態では、標的抗原発現細胞は、標的抗原タンパク質（例えば、野生型または突然変異体）を産生し、標的抗原タンパク質は、正常なレベルまたは低下したレベルで存在し得る。別の実施形態では、標的抗原発現細胞は、ある時点で検出可能なレベルの標的抗原タンパク質を産生し、その後、実質的に検出不能な標的抗原タンパク質を産生した。
【００８２】
本明細書で使用される「遺伝子修飾された細胞によって標的とされる疾患」は、治療的に有益な結果をもたらすために遺伝子修飾された細胞が罹患細胞を標的とするか健常細胞を標的とするかにかかわらず、本発明の遺伝子修飾された細胞によるいずれかの様式で任意の疾患に関与する任意の細胞の標的を包含する。
【００８３】
「解離定数（Ｋｄ）」という用語は、受容体−リガンド相互作用の解離の平衡定数と定義される。
【００８４】
"コード化"という用語は、遺伝子、ＣＤＮＡまたはmRNAのようなポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の性質を意味し、定義されたヌクレオチド配列例えばrRNA、tRNAおよびmRNA)、または定義されたアミノ酸配列およびそれから得られる生物学的特性のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマーおよび巨大分子の合成のためのテンプレートとして働くる。 従って、遺伝子、ＣＤＮＡ、またはRNAは、その遺伝子に対応するmRNAの転写および翻訳が、細胞または他の生物学的システムにおいてタンパク質を産生する場合に、タンパク質をコードする。コード鎖は、mRNA配列と同一であり、通常、配列表に提供され、遺伝子またはＣＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖は、その遺伝子またはＣＤＮＡのタンパク質または他の生成物をコードするものと称され得る。
【００８５】
特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはRNAをコードするフレーズヌクレオチド配列はまた、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのバージョンでイントロンを含み得る程度までトランスに含まれ得る。
【００８６】
「有効量」または「治療有効量」という用語は、本明細書では互換的に使用され、特定の生物学的結果を達成するのに有効な、本明細書に記載の化合物、製剤、材料、または組成物の量を指す。
【００８７】
「内因性」、「天然」または「天然に存在する」という用語は、生物、細胞、組織またはシステムから、またはそれらの内部で生成される任意の材料を指す。それはまた、細胞に固有であるか、または細胞内で自然に発現される遺伝子、タンパク質、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡなど）またはそれらの断片を指す。
【００８８】
「外因性」という用語は、生物、細胞、組織、またはシステムから導入された、またはその外部で生成された任意の材料を指す。
【００８９】
「発現」という用語は、プロモーターおよび／または他の調節エレメントによって駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳を指す。
【００９０】
「導入ベクター」という用語は、単離された核酸を含み、その単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用され得る物質の組成物を指す。したがって、「導入ベクター」という用語は、自律的に複製するプラスミドまたはウイルスを含む。この用語は、例えば、ポリリジン化合物およびリポソーム等の核酸の細胞への導入を容易にする非プラスミドおよび非ウイルス化合物をさらに含むとも解釈されるべきである。ウイルス導入ベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込んだコスミド、プラスミド（例えば、裸またはリポソームに含まれる）およびウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含む、当技術分野で知られているすべてのものが含まれる。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、免疫応答を誘発することができる抗原の一部分、または抗体もしくは抗体断片に結合する抗原の一部分であると定義される。エピトープは、タンパク質配列または部分配列であり得る。  
【００９３】
「発現ベクター」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッドプラスミドまたはリポソーム内に含有されるプラスミド）、およびウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含む、当該技術分野で既知のもの全てが含まれる。
【００９４】
例えば、ｚＳＩＲの「機能的ポリペプチドユニット（ＦＰＵ）」という用語は、抗原結合ドメインおよび例えば、ＣＤ３ｚ鎖に機能的に連結されたアミノ末端シグナル配列を含むポリペプチドを指す。例えば、抗原結合ドメインはシグナル配列とＣＤ3z鎖の間にある。
【００９５】
例えば、ｚＳＩＲに関して使用される場合の「機能的部分」という用語は、ポリペプチド、例えば、ｚＳＩＲの任意の部分または断片を指し、その部分または断片は、例えば、の所望の分子の生物学的活性を保持する。その一部であるzＳＩＲ（例えば、親zＳＩＲ）。例えば、機能部分は、親zＳＩＲと同程度、同程度、またはより高い程度で、標的細胞を認識する能力、または疾患を検出、治療、または予防する能力を保持するzＳＩＲの部分を包含する。親ｚＳＩＲに関して、機能部分は、例えば、親ｚＳＩＲの約１０％、２５％、３０％、５０％、６８％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上を含むことができる。
【００９６】
本明細書で使用される「遺伝子改変細胞」、「リダイレクト細胞」、「遺伝子操作された細胞」または「改変細胞」は、ＣＡＲ（例えば、従来の第２世代ＣＡＲ-ＴＦＰ、ＡｂＴＣＲ、ＳＩＲ、Ｔｒｉ−ＴａｃおよびｚＳＩＲ）、または組換えＴＣＲを発現するように改変された細胞を指す。例えば、ＣＡＲまたはｚＳＩＲを発現する遺伝子組み換えＴリンパ球は、遺伝子改変細胞である。
【００９７】
「免疫障害」という用語は、免疫系の機能不全を特徴とする疾患を指す。自己免疫疾患は、正常な身体部分に異常な免疫応答に起因する状態である。自己免疫疾患には少なくとも８０種がある。
【００９８】
「免疫エフェクター細胞」は、その用語が本明細書で使用される場合、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例には、Ｔ細胞、例えば、アルファ/ベータＴ細胞およびガンマ/デルタＴ細胞、B細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞が含まれる。
【００９９】
本明細書で使用される「免疫受容体発現細胞」は、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与し、１つまたは複数の免疫受容体を発現する細胞を指す。例えば、内因性ＴＣＲ、組換えＴＣＲまたはＣＡＲ。免疫受容体発現細胞の例には、Ｔ細胞、例えば、アルファ/ベータＴ細胞およびガンマ/デルタＴ細胞およびＮＫＴ細胞が含まれる。
【０１００】
「免疫エフェクター機能または免疫エフェクター応答」は、その用語が本明細書で使用される場合、標的細胞、例えば免疫の免疫攻撃を増強または促進する、例えば免疫エフェクター細胞の機能または応答を指す。エフェクターの機能または応答は、標的細胞の死滅または成長または増殖の阻害を促進するTまたはNK細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激と共刺激は免疫エフェクターの機能または応答の例である。
【０１０１】
本明細書で使用される用語としての「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内シグナル伝達部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＡＲ（例えば、第2世代ＣＡＲ-ＴＦＰ、AbＴＣＲ、ＳＩＲ、Tri-TACおよび/またはzＳＩＲ）含有細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。免疫エフェクター機能の例には、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性およびヘルパー活性が含まれる。ＴＣＲα/β/γ/δ鎖は、それ自体の細胞内シグナル伝達ドメインを持っていませんが、シグナル伝達ドメインを持つＴＣＲシグナル伝達複合体の他の鎖（ＣＤ3z、ＣＤ3e、ＣＤ3d、ＣＤ3gなど）と結合することによってシグナルを伝達する。 別の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナルまたは抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚの細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８または４１ＢＢ等の共受容体または共刺激分子由来の細胞質配列を含み得る。
【０１０２】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして既知のシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ゼータ、一般的なＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦcＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰｌＯ、およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「リンカー」（「リンカードメイン」または「リンカー領域」とも呼ばれる）という用語は、本明細書に開示されているＣＡＲ（例えば、第２世代ＣＡＲ-ＴＦＰ、AbＴＣＲ、ＳＩＲおよびzＳＩＲＣＡＲ-ＴＦＰ）の２つ以上のドメインまたは領域を一緒に結合するオリゴまたはポリペプチドを指す。リンカーの長さは1〜500アミノ酸である。いくつかの実施形態では、「リンカー」は、切断可能または切断不能である。別途特定されない限り、本明細書で使用される「リンカー」という用語は、切断不能なリンカーを意味する。この切断不能なリンカーは、互いに対する隣接するタンパク質ドメインの運動の自由度を可能にする可動性残基で構成され得る。かかる残基の非限定的な例としては、グリシンおよびセリンが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーは、非可動性残基を含み得る。非可撓性リンカーを有するリンカーの例示的な実施形態は、ＥＡＡＡＫ（配列番号４０１１）、Ｅコイル（配列番号４００９）、Ｋコイル（配列番号４０１０）、またはＰＧ４ＳＰ（配列番号４００７）である。他の実施形態において、抗原結合ドメインを結合するリンカーおよびｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖は、同様の長さを共有する。他の態様において、ｚＳＩＲの抗原結合ドメインとＣＤ３ｚ鎖とを結合するリンカーは、20アミノ酸以下、典型的には10アミノ酸以下、好ましくは5アミノ酸以下、より好ましくは2アミノ酸以下の長さである。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインを結合するリンカーおよびｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖は、同一または類似のアミノ酸組成を有する。同一の組成を有する例示的なリンカーは、ＰＧ４ＳＰ（配列番号４００７）およびＰＧ４ＳＰ−ｖ２（配列番号４００８）である。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインおよびｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖を結合するリンカーは、ＰＧ４ＳＰ（ＤＮＡ配列番号８；ＰＲＴ配列番号４００７）およびＰＧ４ＳＰ−ｖ２（ＤＮＡ配列番号９、ＰＲＴ配列番号 ４００８）である。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインを結合するリンカーおよびｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖は、抗体に由来する。一実施形態では、ｚＳＩＲのｖＬ領域とＣＤ３ｚ鎖を結合するリンカーはＩｇＣＬ（ＤＮＡ配列番号28、ＰＲＴ配列番号4027）であり、ｚＳＩＲのｖＨ領域とＣＤ３ｚ鎖を結合するリンカーはＩｇＧ１−ＣＨ１（ＤＮＡ配列番号29および配列番号4028）である。いくつかの実施形態において、それぞれの抗原結合ドメインおＰＲＴよびｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖を結合するリンカーは、ＩｇＣＬ（ＤＮＡ配列番号28; ＰＲＴ配列番号4027）およびＩｇＧ２−０Ｃ−ＣＨ１（ＤＮＡ配列番号３０、ＰＲＴ配列番号４０２９）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、エピトープタグを含み得る。いくつかの実施形態において、エピトープタグは、ＭＹＣタグ、Ｖ５タグ、ＡｃＶ５タグ、ＳｔｒｅｐｔａｇＩＩ、ＦＬＡＧタグ、またはＨＡからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、切断不可能なリンカーは、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にするのに十分な長さである。本開示の一実施形態では、３つのアミノ酸残基（Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｙ）が、抗原結合ドメインとｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖との間に位置するリンカー（例：MycタグまたはV5タグ）のカルボキシ末端に付加される。特定の実施形態において、リンカーは、制限酵素部位などの追加の配列を保有し得る。
【０１０５】
本明細書で使用される「可動性ポリペプチドリンカー」という用語は、ポリペプチド鎖を一緒に（例えば、可変重鎖領域と可変軽鎖領域を一緒に）連結するための、単独でまたは組み合わせて使用されるグリシン残基および／またはセリン残基等のアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎを含み、ここで、ｎは、１以上の正の整数である。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、およびｎ＝１０である。一実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーには、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号5）が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）または（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）の複数の繰り返しを含む。参照により本明細書に組み込まれるＷ０２０１２／１３８４７５に記載のリンカーも本開示の範囲に含まれる。
【０１０６】
「レンチウイルス」という用語は、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅファミリーの属を指す。ＨＩＶ、ＳＩＶ、およびＦＩＶは全て、レンチウイルスの例である。
【０１０７】
「レンチウイルスベクター」という用語は、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．
Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供される特に自己不活性化レンチウイルスベクターを含むレンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、例えば、ＯｘｆｏｒｄＢｉｏＭｅｄｉｃａのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術およびＬｅｎｔｉｇｅｎのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクター系等が挙げられるが、これらに限定されない。レンチウイルスベクターの他の例は、pLENTI-EF1α（配列番号129）、pLENTI-EF1α-DWPRE（配列番号130）およびpCCLc-MNDU3（配列番号12639）である。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「天然に存在しないＴＣＲ抗原結合ドメイン」とは、自然界に存在するＴＣＲに対してキメラであり天然に存在しないＴＣＲ定常領域に作動可能に連結された結合ドメインを指す。換言すれば、天然に存在しないＴＣＲ抗原結合ドメインは、組換え分子生物学技法を使用してＴＣＲに作動可能に連結されるように「操作され」、さらに、抗原結合ドメインは、自然界で見られるＴＣＲとははっきりと異なる分子から得られるか、またはそれに由来する。自然界のＴＣＲとははっきりと異なる抗原結合ドメインには、抗体ｖＨおよびｖＬ断片、ヒト化抗体断片、キメラ抗体断片、受容体リガンド等が含まれる。
【０１０９】
「作動可能に連結された」または「機能的に連結された」という用語は、各成分が機能的になるような第１の成分と第２の成分との間の機能的連結または会合を指す。例えば、「作動可能に連結された」には、異種核酸配列の発現をもたらす調節配列と異種核酸配列との間の会合が含まれる。例えば、第１の核酸配列は、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係に置かれた場合に、第２の核酸配列に作動可能に連結される。作動可能に連結された２つのポリペプチドとの関連で、第１のポリペプチドは、それがいずれの連結とも無関係であろう様式で機能し、第２のポリペプチドは、それがそれらの２つの間の連結を欠くであろうように機能する。
【０１１０】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列との関連で「パーセント同一性」とは、同じである２つ以上の配列を指す。２つの配列は、これらの２つの配列が、最大一致について比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって比較して整列させたときに、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して、または手動アライメントおよび目視検査によって測定される、同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドの特定されたパーセンテージ（例えば、特定された領域にわたって、または特定されていない場合、全配列にわたって、６０％の同一性、任意選択的に、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％，８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性）を有する場合、「実質的に同一」である。任意選択的に、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド長（または１０アミノ酸長）である領域、またはより好ましくは、１００〜５００または１０００またはそれ以上のヌクレオチド長（または２０、５０、２００、またはそれ以上のアミノ酸長）である領域にわたって存在する。
【０１１１】
「ポリヌクレオチド」、「核酸」、または「組換え核酸」という用語は、ヌクレオチドのポリマー、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を指し、適切な場合、リボ核酸（ＲＮＡ）も指す。    
【０１１２】
本明細書で互換的に使用される「タンパク質」または「ポリペプチド」は、ペプチド結合と呼ばれる化学結合によって互いに連結されてアミノ酸のポリマーを形成する、アミノ酸と呼ばれる化学ビルディングブロックの１つまたは複数の鎖を含む。
【０１１３】
本明細書で使用される「難治性」は、治療に反応しない疾患、例えば、がんを指す。実施形態において、難治性がんは、治療の前または開始時に治療に耐性であり得る。他の実施形態では、難治性がんは、治療中に耐性になる可能性がある。難治性のがんは、耐性がんとも呼ばれる。
【０１１４】
本明細書で使用される「再発」は、疾患（例えば、がん）の再発、または改善期間後（例えば、がんの前治療後）のがんなどの疾患の徴候および症状を指す。
【０１１５】
範囲：本開示全体を通して、本発明の様々な態様を範囲形式で提示することができる。範囲形式での説明は、単に便宜上および簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。
【０１１６】
「レトロウイルスベクター」という用語は、レトロウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。レトロウイルスベクターの例としては、ＭＳＣＶｎｅｏ、ＭＳＣＶ−ｐａｃ（またはＭＳＣＶ−ｐｕｒｏ）、ＭＳＣＶ−ｈｙｇｒｏ（ＡｄｄｇｅｎｅまたはＣｌｏｎｔｅｃｈから入手可能）が挙げられる。レトロウイルスベクターの他の例は、MSCV-Bgl2-AvrII-Bam-EcoR1-Xho-BstB1-Mlu-Sal-ClaI.I03（配列番号131）である。
【０１１７】
「Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン」または「Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクター」という用語は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクターの例は、pSBbi-Pur（配列番号133）である。ＳＩＲをコードするＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクターの他の例は、配列番号134および配列番号135に提供されている。
【０１１８】
「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片および重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片を含む融合タンパク質を指し、軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、合成リンカー、例えば、短い可動性ポリペプチドリンカーを介して隣接して連結されており、一本鎖ポリペプチドとして発現されることができ、ｓｃＦｖは、それが由来するインタクトな抗体の特異性を保持する。特定されない限り、本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に対して、ｖＬ可変領域およびｖＨ可変領域をいずれかの順序で有し得、ｓｃＦｖは、ｖＬ−リンカー−ｖＨを含み得るか、またはｖＨ−リンカー−ｖＬを含み得る。本開示では、ｓｃＦｖは、ｖＬ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｉｎｋｅｒ−ｖＨとしても記載されている。例えば、FMC63-vL-Gly-Ser-リンカ-FMC63-vHは、GlyおよびSer残基からなるリンカーを介して連結されたFMC63モノクローナル抗体のvLおよびvH断片を含むｓｃＦｖを指する。あるいは、ｓｃＦｖは、（ｖＬ＋ｖＨ）または（ｖＨ＋ｖＬ）とも称される。例えば、ＦＭＣ６−（ｖＬ ＋ ｖＨ）は、ｖＬ断片がＮ末端に位置するリンカーを介して連結されたＦＭＣ６３抗体のｖＬおよびｖＨ断片を含むｓｃＦｖを指す。
【０１１９】
「シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内に情報を伝達して、第２のメッセンジャーを生成することによって、またはかかるメッセンジャーに応答することによってエフェクターとして機能することによって定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するタンパク質の機能的領域を指す。
【０１２０】
「合成免疫受容体」またはあるいは「ＳＩＲ」という用語は、エフェクター細胞に発現されると、細胞に、標的細胞、典型的にはがん細胞に対する特異性と、細胞内シグナル発生とを提供する一組のポリペプチド、いくつかの実施形態では、典型的には２つの組のポリペプチドを指す。典型的な実施形態では、ＳＩＲは、本明細書に記載の抗原に結合する1つまたは複数の抗原結合ドメイン（例えば、抗体もしくは抗体断片、リガンド、または受容体）を含み、任意選択的なリンカーを介して1つまたは複数のＴ細胞受容体定常鎖または領域に連結される。いくつかの実施形態では、この一組のポリペプチドは、互いに隣接している。いくつかの実施形態では、ＳＩＲは、２つ以上の組の２つ以上のポリペプチドを含む。各組のＳＩＲのポリペプチドは、互い（機能的ポリペプチド単位１）に隣接しているが、他方の組のポリペプチド（機能的ポリペプチド単位２）とは隣接していない。いくつかの態様では、ＳＩＲのＴ細胞受容体定常鎖（または領域）は、ヒトＴ細胞受容体−アルファ（ＴＣＲ−アルファまたはＴＣＲαまたはＴＣＲａまたはｈＴＣＲ−アルファまたはｈＴＣＲαまたはｈＴＣＲａまたはＣα）、ヒトＴ細胞受容体−ベータ１（ＴＣＲ−ベータ１またはＴＣＲβ１またはＴＣＲｂ１またはｈＴＣＲ−ベータ１またはｈＴＣＲβ１またはｈＴＣＲｂ１またはＣβ１）、ヒトＴ細胞受容体−ベータ２（ＴＣＲ−ベータ２またはＴＣＲβ２またはＴＣＲｂ２またはｈＴＣＲ−ベータ２またはｈＴＣＲβ２またはｈＴＣＲｂ２またはＣβ２、ＴＣＲ−ベータ、ＴＣＲβまたはＴＣＲｂまたはＣβとも指定される）、ヒトプレＴ細胞受容体アルファ（（プレＴＣＲ−アルファまたはプレＴＣＲαまたはプレＴＣＲａまたはプレＣα）、ヒトＴ細胞受容体−ガンマ（ＴＣＲ−ガンマまたはＴＣＲγまたはＴＣＲｇまたはｈＴＣＲ−ガンマまたはｈＴＣＲγまたはｈＴＣＲｇまたはｈＴＣＲγ１またはｈＴＣＲガンマ１、またはＣγ）、またはヒトＴ細胞受容体−デルタ（ＴＣＲ−デルタまたはＴＣＲｄまたはＴＣＲδまたはｈＴＣＲ−デルタまたはｈＴＣＲｄまたはｈＴＣＲδまたはＣδ）の定常鎖から選択される。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、それらの野生型ヌクレオチド配列によってコードされ、他の態様では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、野生型ではないヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、それらのコドン最適化配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、野生型ポリペプチド配列をコードし、他の実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、1つまたは複数の突然変異を持つポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、1つまたは複数の突然変異を持つそれらのコドン最適化配列によってコードされる。本明細書に記載のもの等の特異的腫瘍マーカー「Ｘ」を標的とする抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはｖＨＨ）を含むＳＩＲは、Ｘ−ＳＩＲまたはＸＳＩＲとも称される。例えば、ＣＤ１９を標的とする抗原結合ドメインを含むＳＩＲは、ＣＤ１９−ＳＩＲまたはＣＤ１９ＳＩＲと称される。ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖／ドメインは、ＳＩＲが最終的に使用されるであろう同じ���に由来し得る。例えば、ヒトに使用する場合、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖がヒトＴＣＲ定常鎖に由来するか、またはそれから成ることが有益であり得る。しかしながら、ある場合には、ＴＣＲ定常鎖が、ＳＩＲが最終的に使用されるであろう同じ種に由来するが、ＴＣＲ定常鎖の発現を増強するアミノ酸置換を持つように修飾されることが有益である。例えば、ヒトに使用する場合、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖がヒトＴＣＲ定常鎖に由来するか、またはそれから成るが、そこである特定のアミノ酸がマウスＴＣＲ定常鎖由来の対応するアミノ酸に置き換えられることが有益であり得る。かかるマウス化ＴＣＲ定常鎖は、ＳＩＲの増加した発現を提供する。例示的なＴＣＲ定常鎖の核酸配列は、配列番号３９〜６４（表５）に提供されている。例示的なＴＣＲ定常鎖のアミノ酸配列は、配列番号４０３８〜４０６３（表５）に提供されている。ＳＩＲまたはその機能的部分は、アミノ末端もしくはカルボキシ末端に、または両方の末端に追加のアミノ酸を含み得、この追加のアミノ酸は、ＳＩＲを構成するＴＣＲまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列には見られない。望ましくは、この追加のアミノ酸は、ＳＩＲまたは機能的部分の生物学的機能、例えば、標的細胞の認識、がんの検出、がんの治療または予防等を妨害しない。より望ましくは、この追加のアミノ酸は、親ＳＩＲの生物学的活性と比較して、生物学的活性を増強する。
【０１２１】
「刺激」という用語は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）のその同族リガンド（または標的抗原）への結合によって誘導され、それにより、ＴＣＲ／ＣＤ３を介したシグナル伝達等であるが、これに限定されないシグナル伝達事象を媒介する一次応答を指す。刺激は、ある特定の分子の改変された発現を媒介し得る。
【０１２２】
「ＴＣＲ受容体融合タンパク質またはＴＦＰ」という用語は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１８７３４９  Ａ１に記載の次世代ＣＡＲプラットフォームを指す。ある実施形態では、ＴＦＰは、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、またはＴＣＲβ等のＴＣＲ鎖に融合した標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。ＴＦＰの構築に使用することができる例示的なＴＣＲ鎖は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ ２０１７／０７０６０８Ａ１に提供されている。ＣＤ３ε鎖を組み込むＴＦＰは、ＣＤ３εＴＦＰと称される。ＣＤ３γ鎖を組み込むＴＦＰは、ＣＤ３γＴＦＰと称される。ＣＤ３δ鎖を組み込むＴＦＰは、ＣＤ３δＴＦＰと称される。ＣＤ３ε鎖、ＣＤ３γ鎖、またはＣＤ３δ鎖を組み込むＴＦＰは、集合的にＣＤ３ε／γ／δＴＦＰと称される。本開示に記載のＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインＢＣＭＡ−Ａｍ０６−ＨＬを組み込み、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールを共発現する例示的なＴＦＰは、配列番号４３８４−４３８７に提供される（表６）。本開示に記載されている異なる抗原結合ドメインを組み込み、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールを共発現する例示的なＴＦＰを表７に提供する。表７にリストされているさまざまな構成（つまり、ＣＡＲクラス）の順序は、表６にリストされている構成（つまり、ＣＡＲクラス）の順序と同じであるため、これらのＴＦＰの配列番号、抗原結合ドメインおよび標的抗原は表６を参照することによって決定できる。NEMO-K277Aをエンコードするアクセサリーモジュールは任意である。本開示に記載の抗原結合ドメイン（すなわち、ｖＬおよびｖＨ断片、リガンド、および受容体等）を有するＴＦＰは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａなしで構築され得る。したがって、このアクセサリーモジュールは、上流フーリン−ＳＧＳＧ−Ｆ２Ａ配列とともに、ＴＦＰから欠失し得る。あるいは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、他のシグナル伝達タンパク質、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ならびにＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ、ＮＥＭＯ−Ｌ６００−ＦＫＢＰｘ２、およびＣＭＶ−１４１等をコードするアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。
【０１２３】
「刺激分子」という用語は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様について免疫細胞の活性化を刺激的に調節する細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現される分子を指す。
【０１２４】
「対象」という用語は、免疫応答が誘発され得る生きた生物（例えば、いずれの家畜哺乳動物またはヒト）を含むよう意図されている。
【０１２５】
「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」という用語は同義であり、本明細書で同義に使用される。例としては、ナイーブＴ細胞（「リンパ球前駆体」）、中心メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、幹メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞、合成Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
「治療効果」という用語は、例えば、腫瘍体積の減少、がん細胞の数の減少、感染性病原体のコロニー数の減少、および病状に関連する様々な生理学的症状の改善、そもそも病気の発生の予防、または病気の再発の予防を含むがこれらに限定されない様々な手段によって現れることができる生物学的効果を指す。
【０１２７】
本明細書で使用される「治療」および「治療」は、治療的治療および予防的または予防的手段の両方を指す。治療が必要な人には、すでにその状態にある人、その状態になりやすい人、またはその状態を予防する必要がある人が含まれる。
【０１２８】
「ゼータ」（またはギリシャ語の記号「ζ」で定義される）またはあるいは「ゼータ鎖」、「ＣＤ３−ゼータ」または「ＴＣＲ−ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎ  Ａｃｅとして提供されるタンパク質と定義される。非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来のＢＡＧ３６６６４．１または等価残基、および「ゼータ刺激ドメイン」またはあるいは「ＣＤ３−ゼータ刺激ドメイン」または「ＴＣＲ−ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なゼータ鎖の細胞質ドメイン由来のアミノ酸残基またはその機能的誘導体と定義される。一態様では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｅの残基５２〜１６４を含む。非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来のＢＡＧ３６６６４．１または等価残基は、その機能的オルソログである。一態様では、「ゼータ刺激ドメイン」または「ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン」は、ＤＮＡ配列番号１０１およびＰＲＴ配列番号４１００として提供される配列である。
【０１２９】
本明細書で提供されるのは、ＣＡＲおよび任意選択の１つまたは複数のアクセサリーモジュール、ならびにがんを含む疾患を治療するためにそれを使用する方法を含む組成物である。ここで説明するように、ＣＡＲ（表１）と表２で説明するアクセサリーモジュールの特定の組み合わせは、「バックボーン」（表２）を定義する。
【０１３０】
表１：ＣＡＲアーキテクチャ。  第1世代のＣＡＲ（従来のＣＡＲ1またはＣＡＲ I）には、抗原特異的ドメイン（ASD）、細胞内シグナル伝達ドメイン（ISD）（ＣＤ3zなど）があり、共刺激ドメインはない。ＴＣＲ融合タンパク質(ＴＦＰ)は、WO 2016/187349A1に記載されているが、抗原特異的ドメイン(ASD)および細胞内シグナルドメインを有する従来のＣＡＲ1に類似している次世代ＣＡＲである。第2世代ＣＡＲ(従来のＣＡＲ2またはＣＡＲii)は、抗原特異的ドメイン(ASD)、(1つ)の共刺激ドメイン例えば、41BBまたはＣＤ28)および細胞内シグナル(ISD)ドメイン例えば、ＣＤ3z)を含む。第3世代ＣＡＲ(従来のＣＡＲ3またはＣＡＲiii)は、抗原特異的ドメイン(ASD)、(2つ)の共刺激ドメイン例えば、41BBおよびＣＤ28)および細胞内シグナル(ISD)ドメイン例えばＣＤ3z)を含む。AbＴＣＲはデュエルチェーン受容体であり、PCT/US2016/058305に記載されている。cＴＣＲは、ＴＣＲ定常鎖に融合し、Ｔ細胞シグナル伝達の活性化をもたらすvLおよびvH断片に由来する抗原結合ドメインからなる一本鎖、1.5鎖、または二本鎖受容体である。合成免疫受容体は次世代のcＴＣＲであり、US62/429,597およびPCT/US017/064379に記載されている。ＳＩＲは、1つまたは複数のＴＣＲ定常鎖に融合し、リガンド結合時にＴ細胞シグナル伝達の活性化をもたらす1つまたは複数の抗原結合ドメインからなる一本鎖、1つ半、または2本鎖受容体である可能性がある。このアプリケーションでは、zＳＩＲについて説明する。
【０１３１】
zＳＩＲは、2つのＣＤ3-ゼータ（ＣＤ3z）鎖を含む合成免疫受容体（ＳＩＲ）の新しいプラットフォームである。zＳＩＲの構築に使用できるＣＤ3z鎖の核酸およびアミノ酸配列は、ＤＮＡ配列番号67および71ならびにＰＲＴ配列番号4066および4072に提供されている。本開示は、抗体のｖＬ断片が２つのＣＤ３ｚ鎖のうちの１つに結合され得、そしてｖＨ断片が他のＣＤ３ｚ鎖に結合され得ることを提供する。このような2つの鎖（vL-ＣＤ3zとvH-ＣＤ3zなど）が同じ細胞で共発現している場合、vLとvHの断片は互いに結合し、同族の抗原または結合パートナーを認識し、Ｔ細胞シグナルを伝達する。特に、標的抗原を発現する細胞株に曝露されたときにそのようなzＳＩＲを発現するＴ細胞は、NFATシグナル伝達を活性化し、IL2産生を誘導し、細胞毒性を発揮する可能性がある。zＳＩＲの発現と活性は、vL/vHとＣＤ3z断片の間にリンカーを組み込むことでさらに高めることができる。特に、抗体に由来するIgCLおよびIgCHドメインは、vL/vH断片とＣＤ3z断片の間の有用なリンカーとして機能する。zＳＩＲの構築に使用できる例示的なリンカーは、配列番号4004から4037に提供されている（表５）。図1に、本開示で検討されているzＳＩＲの概略例を示す。
【０１３２】
例えば、zＳＩＲ1、ｓｃＦｖのvL断片は1つのＣＤ3z-EＣＤ-TM-CP（細胞外、膜貫通、細胞質ドメイン）に結合され、vH断片は2番目のＣＤ3zEＣＤTMCPに結合されまる。例示的なzＳＩＲ1は配列番号425に提供されている。zＳＩＲ2では、1つのASD（例えば、ｓｃＦｖ断片）が1つのＣＤ3zEＣＤTMCP（細胞外、膜貫通および細胞質ドメイン）に結合され、2番目のASDが2番目のＣＤ3zEＣＤTMCPに結合される。例示的なzSIR2は、配列番号3961に提供されている。2つのASDは、同じまたは異なる抗原または同じ抗原の異なるエピトープを標的とし得る。２つのＡＳＤが２つの異なる抗原を標的とする例示的なｚＳＩＲ２は、配列番号３９６２に提供されている。２つのＡＳＤが同じ抗原の２つのエピトープを標的とする例示的なｚＳＩＲ２は、配列番号３６６１に提供されている。zＳＩＲ3では、ｓｃＦｖのvL断片は免疫グロブリンに由来するcLリンカー（配列番号28および4027）を介して1つのＣＤ3zEＣＤTMCP（細胞外、膜貫通および細胞質ドメイン）に結合され、vH断片はCH1リンカー（配列番号29および4028）を介して2番目のＣＤ3zEＣＤTMCPに結合される。例示的なzＳＩＲ3はＣＤ8-hＣＤ19-EUK5-13-vL-IgCL-Bam-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opＴＦＰ2A-Spe-SP-Bst-hＣＤ19-EUK5-13-vH-IgG1-CH1-KPN-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opt2-F-F2A- Xba-PAC（配列番号3955）である。zＳＩＲの構築に使用できるその他のリンカーを表５に示す。
【０１３３】
別の実施形態では、共刺激ドメインもまた、ｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖に組み込まれる。例示的な共刺激ドメインには、４１ＢＢ（配列番号６９および配列番号４０６８）およびＣＤ２８（配列番号６９および配列番号４０６７）の共刺激ドメインが含まれる。41BB（BB）（上記の概略図「C」を参照）およびＣＤ28（上記の概略図「D」を参照）共刺激ドメインを含むＣＤ3z鎖は配列番号（ＤＮＡ）：７６〜７９および配列番号（ＰＲＴ）：４０７５〜４０７８に示されている。ＣＤ28刺激ドメインを含むＣＤ3zを用いた例示的なzＳＩＲはＣＤ8SP-BCMA-Am06-HL-vL- [ＣＤ3zEＣＤTM-28z-opt] -F-P2A-SP-BCMA-Am06-HL-vH- [ＣＤ3zEＣＤTM-28z-opt2]（配列番号（ＤＮＡ）：３９７１および（配列番号（ＰＲＴ）：７９７１）によって提示される。41BB刺激ドメインを含むＣＤ3zを使用した例示的なzＳＩＲは、ＣＤ8SP-BCMA-Am06-HL-vL- [ＣＤ3zEＣＤTM-BBz-opt] -F-P2A-SP-BCMA-Am06-HL-vH- [ＣＤ3zEＣＤTM-BBz-opt2]（配列番号（ＤＮＡ）：３７７２および（配列番号（ＰＲＴ）：７９７２）によって提示される。zＳＩＲ 4〜9は、ＣＤ3zEＣＤTMCPをＣＤ3zEＣＤTM-BBzまたはＣＤ3zEＣＤTM-28zドメインで置換することを除いて、zＳＩＲ1〜3に似ている。
【０１３４】
表１
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【０１３５】
表２：使用可能なバックボーン
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【０１３６】
表３：ＣＡＲの構築に使用される異なる抗原を標的とするｖＬ、ｖＨおよびｓｃＦｖ断片の配列リスト。
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【０１３７】
表４：異なる抗原を標的とする異なる抗原結合ドメインに属するｖＬおよびｖＨ領域の様々なＣＤＲの配列表。
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【０１３８】
表５
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【０１３９】
表６：ＢＣＭＡ-Ａｍ０６-ＨＬ抗原結合ドメインに基づく異なるＣＡＲクラスの配列表。 ＣＡＲタイプとアクセサリーモジュールも示されている。ＣＡＲクラス16および17は、二本鎖ＳＩＲの1つの鎖を表し、それらの相補鎖（つまり、それぞれＣＡＲクラス18および19）と共発現した場合にのみ生物活性を示す。 ＣＡＲクラス13〜15（シングルチェーンＳＩＲ）は、弱いアクティビティのみを示す。
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【０１４０】
表７：異なる抗原結合ドメインを含む様々なＣＡＲ構築物の配列表。BCMA-Am06-HLベースのＣＡＲの場合、さまざまなＣＡＲの構造の順序は表６に示されている。
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【０１４１】
表８．例示的なｚＳＩＲ、ＳＩＲおよびその他の構築物
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【０１４２】
表９：例示的なＶｉｆ構築物
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【０１４３】
表１０．異なる抗原を標的とする例示的な二重特異性抗体。
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【０１４４】
表１１
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【０１４５】
表１２
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【０１４６】
表１３：様々な実施形態で有用なＴＣＲ鎖：
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【０１４７】
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＡＲ１〜１５（表１）をコードする核酸を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、参照により本明細書に組み込まれる、PCT/US2017/064379の表３または表５〜６に記載されるような1つまたは複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態において、組成物は、ＣＡＲ１〜１５（表１）をコードする核酸を含み、ここで、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に組み込まれるPCT/US2017/064379の表３または表５〜６に記載されるような1つまたは複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書およびPCT/US2017/064379の表３または表５-６に記載されるように、コードされるＣＡＲの抗原特異的ドメインが1つまたは複数の特異的抗原を標的とする、バックボーン１〜６０（表２）のいずれか1つまたは複数をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン−１をコードする核酸を含み、バックボーン−１のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書およびＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表３または表５〜６に記載されるように、1つまたは複数のがん特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン-8をコードする核酸を含み、バックボーン-1のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書およびPCT/US2017/064379の表３または表５〜6に記載される1つまたは複数のがん特異的抗原を標的とする。
【０１４８】
様々な実施形態において、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする単離された核酸分子は、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の抗原特異的ドメイン（ＡＳＤ）をコードする。
【０１４９】
様々な実施形態において、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする単離された核酸分子は、０、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の共刺激ドメインをコードする。
【０１５０】
様々な実施形態において、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする単離された核酸分子は、０、１、２、３、またはそれ以上の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする。
【０１５１】
様々な実施形態において、ＣＡＲおよび本明細書に記載のバックボーンをコードする単離された核酸分子は、０、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアクセサリーモジュールをコードする。
【０１５２】
本明細書に記載のＣＡＲおよびアクセサリーモジュールの所望の成分をコードする核酸配列は、当技術分野で知られている組換え方法を使用して得ることができる。あるいは、目的とする核酸は、クローン化されるのではなく、合成的に産生され得る。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変細胞および本明細書に記載のアクセサリー成分はまた、ＣＡＲの毒性を低減する薬剤を発現する。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変細胞および本明細書に記載のアクセサリー成分はまた、ＣＡＲの活性を増強する薬剤を発現する。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変細胞および本明細書に記載のアクセサリー成分はまた、ＣＡＲの持続性を増強する薬剤を発現する。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変細胞および本明細書に記載のアクセサリー成分は、ＣＡＲの枯渇を防止する薬剤も発現する。
【０１５７】
本明細書に記載の様々なバックボーンを含む組成物は、本明細書に記載のがん関連抗原に特異的に結合する１つまたは複数のＡＳＤを含むＣＡＲを含む。ASDの配列は、ＣＡＲの1つまたは複数の鎖の残りをコードする核酸配列と隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。
【０１５８】
ポリペプチド、ポリペプチド、発現構築物、本開示の抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する組換え操作された細胞、ならびにそのようなポリペプチド、ポリペプチドおよび細胞を作製および使用する方法は、PCT/US2017/024843、WO2014/160030A2、WO2016/187349A1、PCT/US2016/058305、WO2015/117229A1、PCT/US17/64379に記載されている、および当技術分野で知られている方法。これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５９】
本開示は、養子細胞療法における用途のためのＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１〜１５およびバックボーン１〜６０）の生成に使用することができるいくつかの抗原結合ドメインを提供する。 いくつかの実施形態において、これらの抗原結合ドメインは、がん、非がん増殖性障害（例えば、子宮内膜症）および／または免疫障害において発現される抗体および標的抗原に由来する。 これらの抗原結合ドメインのvL、vHおよびｓｃＦｖ断片の標的抗原、配列番号（ＤＮＡ）および配列番号（ＰＲＴ）を表３に示す。異なる抗原を標的とする抗原結合ドメインのvLおよびvH断片のＣＤRは 表４に示す。 
【０１６０】
いくつかの実施形態では、  特定の抗原を標的とするＣＡＲポリペプチドのコードされた抗原結合ドメインは、表３にリストされているように、9アミノ酸残基までの10アミノ酸以下がその他のアミノ酸残基または配列番号4118〜4190、9631〜9660、または11460〜11462および14386〜14415のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して８０〜１００％の同一性を有する配列、または配列番号配列番号4118〜4190、9631〜9660、または11460〜11462および14386〜14415のいずれかの相補性決定領域（ＣＤR）に対して８５〜１００％の同一性を有する配列によって置き換えられる、その抗原を標的とする配列番号4118〜4190、9631〜9660および11460〜11462、14386〜14415の軽鎖可変ドメイン（vLまたはVL）アミノ酸配列のいずれか1つまたは複数を含む。配列番号4118〜4190、9631〜9660、または11460〜11462のvL断片のＣＤR1、ＣＤR2、およびＣＤR3は、それぞれ配列番号11961〜12066、12068〜12173、12175〜12280で示される（表４）。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ（従来のＣＡＲおよび次世代ＣＡＲ、例えば、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-TacおよびＴＦＰ）ポリペプチドのコード化された1つまたは複数の抗原結合ドメインは、表３に記載されるようにその抗原を標的とする配列番号4192〜4264、9662〜9691、11464〜11466および14417〜14446の重鎖可変ドメイン（vHまたはVH）アミノ酸配列のいずれか1つまたは複数を含み、ここで、10アミノ酸以下は、その他のアミノ酸残基または配列番号4192〜4264、9662〜9691、11464〜11466、および14417〜14446のアミノ酸配列に対する80-100％の同一性を有する配列または配列番号4192〜4264、9662〜9691、11464〜11466、および14417〜14446のいずれかの相補性決定領域（ＣＤＲ）に対する85-100％の同一性を有する配列によって置き換えられる。配列番号4192〜4264、9662〜9691、11464〜11466、および14417〜14446のvH断片のＣＤR1、ＣＤR2、およびＣＤR3は、それぞれ配列番号12282〜12387、12389〜12494、12497〜12602 、16219〜16310示される（表４）。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ 1〜15およびバックボーン1〜60ポリペプチドのコード化された1つまたは複数の抗原結合ドメインは、9アミノ酸残基までであるが10アミノ酸以下が、その他のアミノ酸残基または配列番号4266〜4338、9693〜9722、11468〜11470、および14448-14477のアミノ酸配列に対して８０〜１００％の同一性を有する配列または配列番号4266〜4338、9693〜9722、11468〜11470、および14448-14477の相補性決定領域（ＣＤR）に対して８５〜１００％の同一性を有する配列によって置換される配列番号4266〜4338、9693〜9722、11468〜11470、および14448-14477の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）アミノ酸配列のいずれか1つまたは複数を含む。 配列番号4266〜4338、9693〜9722、11468〜11470、および14448-14477を有するｓｃＦｖ断片のvL領域のＣＤR1、ＣＤR2およびＣＤR3は、それぞれ配列番号11961〜12066、12068〜12173、12175〜12280、16126〜16217（表４）で示される。配列番号4266〜4338、9693〜9722、11468〜11470、および14448-14477を有するｓｃＦｖ断片のvH領域のＣＤR1、ＣＤR2およびＣＤR3は、それぞれ配列番号12282〜12387、12389〜12494、12497〜12602および16219〜16310（表４）で示される。
【０１６３】
ｓｃＦｖ断片中のｖＬおよびｖＨ断片の順序は、ｖＬ−ｖＨまたはｖＨ−ｖＬのいずれかであり得ることが理解されるべきである。 したがって、表３に示される例示的なｓｃＦｖ断片は、ｖＬ−ｖＨまたはｖＨ−ｖＬ配向のいずれかを表すが、相補的配向を有するｓｃＦｖ断片（すなわち、ｖＨ−ｖＬおよびｖＬ−ｖＨ）もまた、方法または組成物において使用され得る。
【０１６４】
異なるＣＡＲ１〜１５およびバックボーン１〜６０の構築に使用することができる例示的な要素のＤＮＡおよびＰＲＴ配列番号を表５に列挙する。例示的な従来のＣＡＲ（例：41BB共刺激ドメインを含む第2世代ＣＡＲ）、およびＢＣＭＡ−ＡＭ０６−ＨＬ ｓｃＦｖに由来するｖＬおよびｖＨ断片に基づく次世代ＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ）の核酸およびアミノ酸配列番号を表６に提供する。例示的な従来のＣＡＲ（例えば、41BB共刺激ドメインを含む第2世代のＣＡＲ）、および他のｓｃＦｖ断片に由来するｖＬおよびｖＨ断片に基づく次世代ＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ）の核酸およびアミノ酸配列番号は、BCMA-AM06-HL ｓｃＦｖのvLおよびvH断片を、表３にリストされているｓｃＦｖ断片のvLおよびvH断片で置き換えることによって導出できる。異なる抗原結合ドメインを含むプログラム可能なＣＡＲ構築物の配列を表７に示する。表７の異なる抗原結合ドメインの順序は、BCMA-Am06-HLベースのＣＡＲについて表６に示すとおりです。 したがって、配列番号４７５によって表されるＣＡＲ構築物は、抗原結合ドメインＢＣＭＡ−Ａｍ０６−ＨＬに対応するｖＬおよびｖＨ断片がｖＬおよびｖＨで置き換えられることを除いて、配列番号３７７によって表されるＣＡＲ構築物に類似してい 抗原結合ドメインBCMA-Am14-HLに対応する断片。 同様に、配列番号４７６によって表されるＣＡＲ構築物は、抗原結合ドメインＢＣＭＡ−Ａｍ０６−ＨＬに対応するｖＬおよびｖＨ断片が抗原結合ドメインBCMA-Am14-HLに対応するｖＬおよびｖＨ断片で置き換えられることを除いて、配列番号３７８によって表されるＣＡＲ構築物に類似している。
【０１６５】
様々な実施形態において、本開示の抗原結合ドメインは、ＣＡＲ（すなわち、従来のＣＡＲおよび次世代のＣＡＲ）の構築に使用される場合、標的抗原への結合親和性、サイトカイン分泌、増殖、細胞毒性、消耗、および長期持続性などの優れたin vitroおよびin vivo特性を示す。様々な実施形態において、本開示の抗原結合ドメインは、ＣＡＲ（すなわち、従来のＣＡＲおよび次世代のＣＡＲ）の構築に使用される場合、標的抗原への結合親和性、サイトカイン分泌、増殖、細胞毒性、消耗、および長期持続性などの多様なin vitroおよびin vivo特性を示す。様々な実施形態において、これらの標的抗原を含むＣＡＲは、多様な免疫応答を生成するために使用され得る。
【０１６６】
本開示はさらに、同じ抗原を標的とするが、異なる抗原結合ドメインを有し、それらが標的とする抗原のエピトープに部分的に依存する多様な生物学的特性を有し得るＣＡＲを企図する。したがって、配列番号２４３５〜２４８３および配列番号２３８６〜２４３４によって表されるＣＡＲを標的とするHer2の２つのグループ（表７の行１２〜１３を参照）は、異なるＴ細胞活性化、サイトカイン分泌および細胞毒性などの生物学的特性を示している。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、コードされたＣＡＲ分子の抗原特異的ドメインは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨもしくはＶＬドメイン、またはラクダ科ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、マウス配列のｓｃＦｖ（これをヒト化する）に比べて、ヒト化されているｓｃＦｖ抗体断片である。
【０１６８】
いくつかの事例では、ｓｃＦｖは当該技術分野において既知の方法に従って調製できる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６  ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３）。ｓｃＦｖ分子は、フレキシブルポリペプチドリンカーを用いて、ＶＨおよびＶＬ領域を一緒に連結することにより作製できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長さおよび／またはアミノ酸組成を備えたリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長さは、ｓｃＦｖの可変領域が折り畳まれ、相互作用する方法に大きく影響し得る。例えば、短いポリペプチドリンカーが使用される場合（例えば、5〜10アミノ酸の間）、鎖内折り畳みが防止される。鎖間フォールディングは、2つの可変領域をまとめて機能的なエピトープ結合部位を形成するのに役立つ場合があります。リンカーの配向およびサイズの例については、例えば、Hollinger et al、1993 Proc NatlAcadを参照されたい。科学U.S.A. 90：6444-6448、米国特許出願公開番号2005/0100543、2005/0175606、2007/0014794、およびPCT公開番号WO2006/020258およびWO2007/024715であり、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６９】
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に、少なくとも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれを超えるアミノ酸残基を含み得る。リンカー配列は、任意の天然アミノ酸を含んでよい。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、アミノ酸のグリシンおよびセリンを含む。別の実施形態では、リンカー配列は、一連のグリシンおよびセリン反復、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号２５２、配列番号２５３）を含み、ｎは、１以上の正の整数である。 一実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３またはウィットローリンカーであり得る。 リンカー長さの変動は、活性を維持または高め得、活性試験に優れた効力をもたらす。
【０１７０】
一実施形態では、特定の抗原を標的とするＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の抗原結合ドメインの1つ、2つ、または3つすべてのvH（重鎖）ＣＤR（つまり、vH-ＣＤR1、vH-ＣＤR2、およびvH-ＣＤR3）（表４）、および／または本明細書に記載の抗原結合ドメインの１つ、２つ、または３つすべてのｖＬ（軽鎖）ＣＤＲ（つまり、vL-ＣＤR1、vL-ＣＤR2、およびvL-ＣＤR3）を含む（表４）。
【０１７１】
別の実施形態では、抗原特異的ドメインは、ヒト化抗体または抗体断片を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片である。 他の実施形態では、抗体断片は、それが由来する抗体と比較して抗原に対する結合親和性が低いが、本明細書に記載の生物学的応答を提供するという点で機能的である。一実施形態では、ＣＡＲ分子は、標的抗原に対して１０−４Ｍから１０−８Ｍ、１０−５Ｍから１０−７Ｍ、１０−６Ｍまたは１０−８Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗体断片を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する。 ヒト白血球抗原（HLA）-A1またはHLA-A2との関連でウイルスまたは腫瘍抗原に由来するペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている。 例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーなどのライブラリーのスクリーニングから同定することができる。 
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体の機能的断片（ｓｃＦｖ断片を含む）を含むＣＡＲが標的抗原に結合すると、熟練した職人によって理解されるように、免疫応答の活性化、サイトカイン産生、細胞毒性などの生物学的応答が誘導される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、単独でまたはアクセサリーモジュールと共に発現される場合に従来のＣＡＲ（例：第2世代のＣＡＲ）、次世代ＣＡＲ（例：zＳＩＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-TAC、ＴＦＰなど）およびｒＴＣＲによって標的とされ得る疾患に特異的な抗原には、ＣＤ5、ＣＤ19、ＣＤ123、ＣＤ22、ＣＤ30、ＣＤ171、CS-1（ＣＤ2サブセット1、CRACC、SLAMF7、ＣＤ319、および19A24とも呼ばれる）、BAFF-R、C型レクチン様分子-1（CLL-1またはCLECL1）; ＣＤ33; MPL;上皮成長因子受容体変異体III（EGFRviii）;ガングリオシドG2（GD2）;ガングリオシドGD3（aNeu5Ac（2-8）aNeu5Ac（2-3）bDGalp（l-4）bDGlcp（l-l）Cer）; TNF受容体ファミリーメンバーB細胞成熟（BCMA）; Tn抗原（（Tn Ag）または（GalNAcα-Ser/ Thr））;前立腺特異的膜抗原（PSMA）;受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体1（ROR1）; FmsLikeチロシンキナーゼ3（FLT3）;腫瘍関連糖タンパク質72（TAG72）; ＣＤ38; ＣＤ44v6;急性白血病またはリンパ腫で発現するが造血前駆細胞では発現しないグリコシル化ＣＤ43エピトープ、非造血がんで発現するグリコシル化ＣＤ43エピトープ、がん胎児性抗原（CEA）；上皮細胞接着分子（EPCAM）; B7H3（ＣＤ276）;キット（ＣＤ117）;インターロイキン-13受容体サブユニットアルファ-2（IL-13Ra2またはＣＤ213A2）;メソテリン;インターロイキン11受容体アルファ（IL-llRa）;前立腺幹細胞抗原（PSCA）;プロテアーゼセリン21（テスティシンまたはPRSS21）;血管内皮増殖因子受容体2（VEGFR2）;ルイス（Y）抗原; ＣＤ24;血小板由来成長因子受容体ベータ（PDGFR-ベータ）;病期特異的胚性抗原-4（SSEA-4）; ＣＤ20;葉酸受容体アルファ;受容体型チロシンプロテインキナーゼERBB2（Her2 / neu）;ムシン1、関連する細胞表面（MUC1）;上皮成長因子受容体（EGFR）;神経細胞接着分子（NCAM）;プロスターゼ;前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）;伸長因子2変異（ELF2M）;エフリンB2;線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（FAP）;インスリン様成長因子1受容体（IGF-I受容体）、炭酸脱水酵素IX（CAlX）;プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）サブユニット、ベータタイプ、9（LMP2）;糖タンパク質100（gpl00）;ブレークポイントクラスター領域（BCR）とアベルソンマウス白血病ウイルス腫瘍遺伝子ホモログ1（Abl）（bcr-abl）からなるがん遺伝子融合タンパク質。チロシナーゼ;エフリンA型受容体2（EphA2）;フコシルGM1;シアリルルイス接着分子（sLe）;ガングリオシドGM3（aNeu5Ac（2-3）bDClalp（l-4）bDGlcp（l-1）Cer）;トランスグルタミナーゼ5（TGS5）; 高分子量メラノーマ関連抗原（HMWMAA）; o-アセチル-GD2ガングリオシド（OAcGD2）;腫瘍内皮マーカー1（TEM1 / ＣＤ248）;腫瘍内皮マーカー7関連（TEM7R）;クローディン6（CLDN6）;甲状腺刺激ホルモン受容体（TSHR）; Gタンパク質共役型受容体クラスCグループ5、メンバーD（GPRC5D）; X染色体オープンリーディングフレーム61（CXORF61）; ＣＤ97; ＣＤ179a;未分化リンパ腫キナーゼ（ALK）;ポリシアル酸;胎盤特異的1（PLAC1）; globoHグリコセラミド（GloboH）の六糖部分。乳腺分化抗原（NY-BR-1）;ウロプラキン2（UPK2）; A型肝炎ウイルス細胞受容体1（HAVCR1）;アドレナリン受容体ベータ3（ADRB3）;パネキシン3（PANX3）; Gタンパク質共役型受容体20（GPR20）;リンパ球抗原6複合体、遺伝子座K 9（LY6K）;嗅覚受容体51E2（OR51E2）; ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（TARP）;ウィルムス��瘍タンパク質（WT1）;がん/精巣抗原1（NY-ES0-1）;がん/精巣抗原2（LAGE-1a）;黒色腫関連抗原1（MAGE-A1）;染色体12p（ETV6-AML）にあるETS転座変異遺伝子6。精子タンパク質17（SPA17）; X抗原ファミリー、メンバー1A（XAGE1）;アンジオポエチン結合細胞表面受容体2（Tie 2）;黒色腫がん精巣抗原-1（MAD-CT-1）;黒色腫がん精巣抗原-2（MAD-CT-2）; Fos関連抗原1;腫瘍タンパク質p53（p53）; p53変異体;プロスタイン;生き残る;テロメラーゼ;前立腺がん腫瘍抗原-1（PCT A-1またはガレクチン8）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原1（MelanAまたはMARTI）;ラット肉腫（Ras）変異体;ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（hTERT）;肉腫転座ブレークポイント;アポトーシスの黒色腫阻害剤（ML-IAP）; ERG（膜貫通プロテアーゼ、セリン2（TMPRSS2）ETS融合遺伝子）; N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼV（NA17）;ペアボックスタンパク質Pax-3（PAX3）;アンドロゲン受容体;サイクリンBl; v-mycトリ骨髄球腫症ウイルス腫瘍遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（MYCN）; Ras HomologファミリーメンバーC（RhoC）;チロシナーゼ関連タンパク質2（TRP-2）;シトクロムP450lB 1（CYPlB 1）; CCCTC結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）のような（BORISまたは印刷された部位の調節因子の兄弟）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮がん抗原3（SART3）;ペアボックスタンパク質Pax-5（PAX5）;プロアクロシン結合タンパク質sp32（OY-TES1）;リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（LCK）;キナーゼアンカータンパク質4（AKAP-4）;滑膜肉腫、Xブレークポイント2（SSX2）;終末糖化産物の受容体（RAGE-1）;腎臓ユビキタス1（RU1）;腎臓ユビキタス2（RU2）;レグマイン;ヒトパピローマウイルスE6（HPV E6）;ヒトパピローマウイルスE7（HPV E7）;腸のカルボキシルエステラーゼ;熱ショックタンパク質70-2変異（mut hsp70-2）; ＣＤ79a; ＣＤ79b; ＣＤ72;白血球関連免疫グロブリン様受容体1（LAIR1）; IgA受容体のFc断片（FＣＡＲまたはＣＤ89）;白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーAメンバー2（LILRA2）; ＣＤ300分子のようなファミリーメンバーf（ＣＤ300LF）; C型レクチンドメインファミリー12メンバーA（CLEC12A）;骨髄間質細胞抗原2（BST2）; EGFのようなモジュールを含むムチンのようなホルモン受容体のような2（EMR2）;リンパ球抗原75（LY75）;グリピカン-3（GPC3）; Fc受容体様5（FCRL5）;および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド1（IGLL1）、MPL、ビオチン、c-MYCエピトープタグ、ＣＤ34、LAMP1 TROP2、GFRalpha4、ＣＤH17、ＣＤH6、NYBR1、ＣＤH19、ＣＤ200R、Slea（CA19.9; Sialyl Lewis Antigen）フコシル- GM1、PTK7、gpNMB、ＣＤH1-ＣＤ324、DLL3、ＣＤ276/B7H3、IL11Ra、IL13Ra2、ＣＤ179b-IGL11、ALK ＴＣＲgamma-delta、NKG2D、ＣＤ32（FCGR2A）、CSPG4-HMW-MAA、Tim1-/HVCR1、CSF2RA（GM -CSFR-alpha）、TGFbetaR2、VEGFR2/KDR、Lews Ag、ＴＣＲ-beta1チェーン、ＴＣＲ-beta2チェーン、ＴＣＲ-gammaチェーン、ＴＣＲ-deltaチェーン、FITC、白血球刺激ホルモン受容体（LHR）、濾胞刺激ホルモン受容体（FSHR）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（CGHR）、CCR4、SLAMF6、SLAMF4、HIV1エンベロープ糖タンパク質、HTLV1-Tax、CMV pp65、EBV-EBNA3c、インフルエンザA血球凝集素（HA）、GAD、PDL1、グアニリルシクラーゼC（GCC）、KSHV-K8.1タンパク質、KSHV-gHタンパク質、デスモグレイン3に対する自己抗体（Dsg3）、デスモグレイン1に対する自己抗体（Dsg1）、HLA、HLA-A、HLA-A2、HLA-B、HLA-C、HLA-DP 、HLA-DM、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ、HLA-DR、HLA-G��IGE、ＣＤ99、RAS G12V、Tissue Factor 1（TF1） 、AFP、GPRC5D、claudin18.2（CLD18A2またはCLDN18A.2）、P糖タンパク質、STEAP1、LIV1、NECTIN-4、CRIPTO、MPL、GPA33、BST1 / ＣＤ157、低コンダクタンスクロライドチャネル、インテグリンB7、Muc17、C16ORF54、 VISTA、Muc5Ac、FCRH5、CLDN6、MMP16、UPK1B、BMPR1B、Ly6E、WISP1およびSLC34A2のいずれか1つまたは複数が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、単独でまたは本明細書に記載のアクセサリーモジュールと発現された場合、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲによって標的とされ得る疾患に特異的な抗原には、４−１ＢＢ、５Ｔ４、腺がん抗原、アルファ−フェトプロテイン、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４  ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ＣＮＴＯ８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチン細胞外ドメイン−Ｂ、葉酸受容体１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌ１−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＬＡＭＰ１、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  α、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺がん細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、またはそれらの組み合わせのうちのいずれか1つまたは複数が含まれるが、これらに限定されない。がんに特異的な他の抗原は当業者には明らかであり、本開示の代替実施形態に関連して使用され得る。    
【０１７７】
いくつかの実施形態では、単独で、または本明細書に記載のアクセサリーモジュールと共に発現される場合、ＣＡＲによって標的とされ得るがんに関連するまたはがんに特異的な抗原には、BCMA、FLT3、ＣＤ19、ＣＤ20（MS4A1）、ＣＤ22、STERAP1、ＣＤ79b、インテグリンB7、Her2、Her3、Liv1、TSHR（甲状腺刺激ホルモン受容体）、PSMA、MSLN（メソセリン）、EGFRviii、ネクチン4、プロラクチン受容体（PRLR）、Muc17、Muc5Ac、ＣＤ70、ＣＤ179b、ＣＤH19、ＣＤ16ORF54、VISTA（Vセット免疫調節受容体またはVＳＩＲ）、GPC3（グリピカン3）、DLL3（標準的なNotchリガンド3のようなデルタ）、PTK7、FCRH5（5のようなFc受容体）、LYPD1（1を含むLY6 / PLAURドメイン）、EMR2（接着Gタンパク質共役型受容体E2またはADGRE2）、gpNMB（糖タンパク質nmb）、リングフィンガータンパク質43（RNF43）、Robo4、CEA、Her3、葉酸受容体1（FOLR1）、CLDN6（クローディン6）、MMP16（マトリックスメタロプロテアーゼ16）、ウロプラキン1B（UPK1B）、骨形成タンパク質受容体タイプ1B（BMPR1B）、Ly6E、WISP1、SLC34A2、Cripto、gpA33、ROR1、CLL1、IL1RAP、BST1、ＣＤ133およびそれらの組み合わせのいずれか1つまたは複数が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはBCMA、FLT3、ＣＤ19、ＣＤ20（MS4A1）、ＣＤ22、STEAP1、ＣＤ79b、インテグリンB7、Her2、Her3、Liv1、TSHR（甲状腺刺激ホルモン受容体）、PSMA、MSLN（メソセリン）、EGFRviii、ネクチン4、プロラクチン受容体（PRLR）、Muc17、Muc5Ac、ＣＤ70、ＣＤ179b、ＣＤH19、ＣＤ16ORF54、VISTA（Vセット免疫調節受容体またはVＳＩＲ）、GPC3（グリピカン3）、DLL3（標準的なNotchリガンド3のようなデルタ）、PTK7、FCRH5（5のようなFc受容体）、LYPD1（1を含むLY6 / PLAURドメイン）、EMR2（接着Gタンパク質共役受容体E2またはADGRE2）、gpNMB（糖タンパク質nmb）、リングフィンガータンパク質43（RNF43）、Robo4、CEA、Her3、葉酸受容体1（FOLR1）、CLDN6（クローディン6）、MMP16（マトリックスメタロプロテアーゼ16）、ウロプラキン1B（UPK1B）、骨形成タンパク質受容体タイプ1B（BMPR1B）、Ly6E、WISP1、SLC34A2、Cripto、gpA33、ROR1、CLL1、IL1RAP、BST1およびＣＤ133に特異的である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、その配列番号が表３に示されるｓｃＦｖ配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、その配列番号が表４に示されるＣＤＲ配列を含む。
【０１７８】
様々な実施形態において、これらの抗原結合ドメインを含む、従来型および次世代のＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の両方のＣＡＲを発現する免疫細胞は、当技術分野で知られている方法および全体を参照によって本明細書に組み込まれるPCT/US2017/024843、WO2014/160030A2、WO2016/187349A1、PCT/US2016/058305およびPCT/US17/64379に記載の方法を使用して、がん、感染性および免疫障害の養子細胞療法のために生成および使用することができる。
【０１７９】
ＣＡＲ（例：ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-TAC、ＴＦＰなど）は、単独でまたは本明細書に記載のアクセサリーモジュールと使用される場合、疾患支持抗原（例えば、本明細書に記載の疾患支持抗原）に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体または抗体断片）を含み得る。いくつかの実施形態では、疾患支持抗原は、病原細胞の生存および増殖を支持する細胞に存在する抗原である。いくつかの実施形態では、疾患支持抗原は、間質細胞または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に存在する抗原である。間質細胞は、成長因子およびサイトカインを分泌して、微環境下で細胞増殖を促進することができる。ＭＤＳＣ細胞は、Ｔ細胞増殖および活性化を阻止することができる。理論によって束縛されることを望むことなく、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-TAC、ＴＦＰなど）発現細胞は、疾患支持細胞を破壊し、それにより、病原細胞の成長または生存を間接的に阻止する。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、間質細胞抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、およびテネイシンのうちの1つまたは複数から選択される。ある実施形態では、ＦＡＰ特異的抗体は、シブロツヅマブであるか、それと結合について競合するか、またはそれと同じＣＤＲを有する。実施形態では、ＭＤＳＣ抗原は、ＣＤ３３、ＣＤｌｌｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５、およびＣＤ６６ｂのうちの1つまたは複数から選択される。したがって、いくつかの実施形態では、疾患支持抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）またはテネイシン、ＣＤ３３、ＣＤｌｌｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５、およびＣＤ６６ｂのうちの1つまたは複数から選択される。
【０１８１】
別の実施形態では、ＣＡＲの各抗原特異的領域（例えば、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、二価（または二価）の一本鎖可変断片（ジ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ）を含み得る。 いくつかの実施形態において、少なくとも２つの抗原特異的標的化領域を含むＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、２つの抗原のそれぞれに特異的な２つのｓｃＦｖを発現するであろう。結果として生じるASDは、ヒンジ領域と膜貫通ドメインを介して共刺激ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインに結合される。2つの抗原を標的とする例示的なＣＡＲ（zＳＩＲ）は、配列番号3962で表され、ＣＤ19およびＣＤ123を標的とする。
【０１８２】
追加の実施形態では、ＣＡＲの各ＡＳＤは、ダイアボディを含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、その配列番号および標的抗原が表３に記載されているVL断片を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）のＡＳＤは、その配列番号および標的抗原が表３にリストされているVH断片を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）のＡＳＤは、その配列番号および標的抗原が表３にリストされているｓｃＦｖを含む。
【０１８６】
一実施形態では、 標的抗原に対するＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、その配列番号が表４に記載されているこの抗原を標的とするｖＬおよびｖＨ断片の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０１８７】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、この抗原を標的とするｓｃＦｖのｖＬおよびｖＨ断片の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲであり、その配列番号は表４に記載されている。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、ＶＨＨ断片（ナノボディ）を含む。
【０１８９】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメイン（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、この抗原を標的とする非免疫グロブリン足場の抗原結合部分である。
【０１９０】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメイン（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、この標的抗原に結合することが知られている受容体の抗原結合部分である。
【０１９１】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原結合特異的ドメイン（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、この標的抗原に結合することが知られているリガンドの抗原結合部分である。
【０１９２】
本開示は、同じ抗原を標的とするＣＡＲが、それらが結合する抗原の特定のエピトープに応じて異なる生物学的特性を有し得ることを実証している。したがって、２つのＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号９１６および８１８）は、それらが結合する異なるＣＤ１９エピトープに応じて、異なる生物学的特性（例えば、細胞毒性、増殖またはサイトカイン分泌など）を有し得る。一実施形態では、本開示は、本開示（すなわち、本開示のいずれかのＣＡＲとの異なる標的への結合について交差競合する能力を有するＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど））のいずれかのＣＡＲと同様に、表３にリストされた異なる標的上の同じエピトープに結合するＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を提供する。いくつかの実施形態において、これらのＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、抗体のｖＬ断片、ｖＨ断片、またはｓｃＦｖ断片に由来し得る。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照抗体は、その抗原を標的とし、配列番号4266-4338、9693-9722および11468-11470に示されるような配列を有するｓｃＦｖである（表３）。例示的な実施形態では、配列番号4266で表される参照ｓｃＦｖBCMA-Am14-HLは、BCMA-Am14-HLベースのＣＡＲおよび本開示のバックボーンによって認識される標的エピトープを決定するための競合研究で使用することができる。いくつかの実施形態では、異なる標的に対する交差競合研究のための参照ＣＡＲは、配列番号が表７に示されているＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）である。
【０１９３】
例示的な実施形態では、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖは、配列番号：4269-4270、4272、4298、4299、4338、14462（表３）に示されるような配列を有するｓｃＦｖである。
【０１９４】
例示的な実施形態では、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ＣＡＲは、配列番号4830-4871、4781-4829、4872-4920、4732-4780、4683-4731、4970-5018、および4921-4969（表７）に示されるような配列を有するＣＡＲである。
【０１９５】
別の実施形態では、本発明のＣＤ２０標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＣＤ２０を標的とし、かつ表３に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０１９６】
別の実施形態では、本発明のＣＤ20標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＣＤ20 を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９７】
別の実施形態では、本発明のＣＤ２2標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＣＤ２２を標的とし、かつ表３に列記される配列番号１４４４９〜１４４５８、１４４６０、１４４６９〜７０を有するｓｃＦｖである。
【０１９８】
別の実施形態では、本発明のＣＤ２2標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＣＤ２２を標的とし、かつ表３に列記される配列番号１４４４９〜１４４５８、１４４６０、１４４６９〜７０を有するｓｃＦｖである。
【０１９９】
別の実施形態では、本発明のＣＤ22標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＣＤ22を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０２００】
別の実施形態において、本発明のBAFF-R標的型ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）はBAFF-Rを標的とするｓｃＦｖであり、表３に記載の配列番号 14465-14467を有する。
【０２０１】
別の実施形態では、本発明のBAFF-R標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、BAFF-Rを標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０２０２】
別の実施形態では、本発明のDLL3標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、DLL3を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０２０３】
別の実施形態では、本発明のDLL-3標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、DLL-3を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０２０４】
別の実施形態では、本発明のPTK7標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、PTK7を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０２０５】
別の実施形態では、本発明のPTK7標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、PTK7を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０２０６】
別の実施形態では、本発明のMSLN（メソテリン）標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、MSLNを標的とし、かつ表３に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０２０７】
実施形態において、MSLN-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：4284-4285、4293-4295、9715および9716で表される。
【０２０８】
別の実施形態では、本発明の MSLN 標的ＣＡＲ （例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、MSLNを標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０２０９】
別の実施形態では、本発明のHer2標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、Her2を標的とし、かつ表３に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０２１０】
実施形態において、Her2-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)はSED NO:4276-4279で表される。
【０２１１】
別の実施形態では、本発明のHer2標的型ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための基準ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)はHer2を標的とするＣＡＲであり、は配列番号：6244-6292、6391-6439、6342-6390、および6293-6341で表される（表７）。
【０２１２】
別の実施形態において、本発明のTSHR標的型ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）はTSHRを標的とするｓｃＦｖであり、表３に記載の配列番号：4280を有する。
【０２１３】
別の実施形態では、本発明のTSHR標的型ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための基準ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)はTSHRを標的とするＣＡＲであり、配列番号：7567-7615で表される（表７）。
【０２１４】
別の実施形態では、本発明のEGFRviii標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、EGFRviiiを標的とし、かつ表３に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０２１５】
別の実施形態では、本発明のEGFR-viii標的型ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための基準ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等) はEGFR-viiiを標的とするＣＡＲであり、配列番号：5607-5655、5705-5753、5754-5802および5656-5704 で表される。
【０２１６】
別の実施形態では、本発明のPRLR（プロラクチン受容体）標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、PRLR（プロラクチン受容体）を標的とし、かつ表３に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである。
【０２１７】
実施形態において、PRLR-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：4296おいび4309で表される。
【０２１８】
別の実施形態において、本発明のPRLR標的型ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための参照ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)はPRLRを標的とするＣＡＲであり、表７に記載の配列番号：7077-7125および7126-7174を有する。
【０２１９】
別の実施形態では、本開示のPSMA標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号7273-7321、7224-7272および7175-7223）は、表３にリストされたPSMA標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4281-4283）である。実施形態において、PSMA-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：4281-4283 で表される。
【０２２０】
別の実施形態では、ＰＳＭＡ標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ＣＡＲ本開示の中には、表７に列挙しているＰＳＭＡ ＣＡＲが含まれる（例えば、配列番号７２７３−７３２１、７２２４−７２７２および７１７５−７２２３）。
【０２２１】
別の実施形態では、本開示のDLL3標的化ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖは、リストされたDLL3標的化ｓｃＦｖである（表３参照：例えば、配列番号４209および４291）。 
【０２２２】
別の実施形態では、本開示のFOLR1標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号5999-6047および6048-6096）は、表３にリストされたFOLR1標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4323-4324）である。実施形態において、FOLR1-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：5999-6047および6048-6096)で表される。
【０２２３】
別の実施形態では、本開示のGPC3標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号6097-6145および6146-6194）は、表３にリストされたGPC3標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4307-4308）である。実施形態において、GPC3-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：6097-6145および6146-6194)で表される。
【０２２４】
別の実施形態では、本開示のWISP1標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号7812-7860および7861-7909）は、表３にリストされたWISP1標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4335-4336）である。実施形態において、WISP1-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：7812-7860および7861-7909で表される。
【０２２５】
別の実施形態では、本開示のEMR2標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号5803-5851、5852-5900および5901-5949）は、表３にリストされたEMR2標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4313、4314および4315）である。実施形態において、EMR2-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等) は 配列番号：4803-5851, 585-5900, 5901-5949で表される。
【０２２６】
別の実施形態では、本開示のUPK1B標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号7616-7664、7665-7713）は、表３にリストされたUPK1B標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4328-4329）である。実施形態において、UPK1B-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：7616-7664、7665-7713で表される。
【０２２７】
別の実施形態では、本開示のBMPR1B標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4536-4584、4585-4633）は、表３にリストされたBMPR1B標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4330-4331）である。実施形態において、BMPR1B-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：4536-4584、4585-4633で表される。
【０２２８】
別の実施形態では、本発明のBMPR1B標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、BMPR1Bを標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号4536-4584、4585-4633）。
【０２２９】
別の実施形態では、本開示のＣＤH19標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号5264-5312、5313-5361）は、表３にリストされたＣＤH19標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4302-4303）である。実施形態において、ＣＤH19-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：5264-5312、5313-5361で表される。
【０２３０】
別の実施形態では、本発明のＣＤH19標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＣＤH19を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号5264-5312、5313-5361）。
【０２３１】
別の実施形態では、本開示のＶＩＳＴＡ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号7763-7811、7714-7762）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖは、表３にリストされたＶＩＳＴＡ標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４３０５および４３０６）である。実施形態において、VISTA-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：7763-7811,7714-7762で表される。
【０２３２】
別の実施形態では、本発明のVISTA標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、VISTAを標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号7763-7811、7714-7762）。
【０２３３】
別の実施形態では、本発明のIL13Ra2標的ＣＡＲs（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、IL13Ra2を標的とし、かつ表３に列記される配列番号を有するｓｃＦｖである （例えば、配列番号１４４４８）。
【０２３４】
別の実施形態では、本発明のIL13Ra2標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、IL13Ra2を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号15857-15909）。
【０２３５】
別の実施形態では、本開示のＦＬＴ３標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１０６０６−１０６５４、１０５５７−１０６０５）は、表３にリストされたＦＬＴ３標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号９７１０および９７１１）である。実施形態において、FLT3-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：10557-10605、10606-10654で表される。
【０２３６】
別の実施形態では、本発明のFLT3標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、FLT3を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号10557-10605、10606-10654）。
【０２３７】
別の実施形態では、本開示のCLDN6標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号5411−5459、5460-5508）は、表３にリストされたCLDN6標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4325および4326）である。実施形態において、CLDN6-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：5411-5459、5460-5508で表される。
【０２３８】
別の実施形態では、本発明のCLDN6標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、CLDN6を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号5411-5459、5460-5508）。
【０２３９】
別の実施形態では、本開示のROBO4標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号7420−7468）は、表３にリストされたROBO4標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4320）である。実施形態において、ROBO4-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：7420-7468で表される。
【０２４０】
別の実施形態では、本発明のROBO4標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ROBO4を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号7420-7468）。
【０２４１】
別の実施形態では、本開示のIL1RAP標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１10802-10850、10851-10899、10900-10948）は、表３にリストされたIL1RAP標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号9712、9713および9714）である。実施形態において、IL1RAP-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号：10802-10850、10851-10899、10900-10948で表される。
【０２４２】
別の実施形態では、本発明のIL1RAP標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、IL1RAPを標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである （例えば、配列番号10802-10850、10851-10899、10900-10948）。
【０２４３】
別の実施形態では、本開示のＣＤ22標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１5068-5115, 10361-10409）は、表３にリストされたＣＤ22標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4271、9693、12502）である。実施形態において、ＣＤ22-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等) は 配列番号：5068-5115、10361-10409 で表される。
【０２４４】
別の実施形態では、本発明のＣＤ22標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＣＤ22を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号5068-5115、10361-10409）。
【０２４５】
別の実施形態では、本開示のCLL1標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号10459-10507、10410-10458）は、表３にリストされたCLL1標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号9708および9703）である。実施形態において、CLL1-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等は、配列番号:10410-10458、10459-10507で表される。
【０２４６】
別の実施形態では、本発明のCLL1標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、CLL1を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号10410-10458、10459-10507）。
【０２４７】
別の実施形態では、本開示のBST1標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号10116-10164、10165-10212、10213-10262）は、表３にリストされたBST1標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号9718、9719、および9720）である。実施形態において、BST1-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号:10116-10164、10165-10212、10213-10262で表される。
【０２４８】
別の実施形態では、本発明のBST1標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、BST1を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号10116-10164、10165-10212、10213-10262）。
【０２４９】
別の実施形態では、本開示のネクチン-4(NECTIN-4)標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号7028-7076、11096-11242）は、表３にリストされたNECTIN-4標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号4292、9696）である。実施形態において、NECTIN-4-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号:7028-7076、11096-11242で表される。
【０２５０】
別の実施形態では、本発明のNECTIN-4標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、NECTIN-4を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号7028-7076、11096-11242）。
【０２５１】
別の実施形態では、本開示のGPA33標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号10655-10703）は、表３にリストされたGPA33標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号9698）である。実施形態において、GPA33-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号:10655-10703で表される。
【０２５２】
別の実施形態では、本発明のGPA33標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、GPA33を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号10655-10703）。
【０２５３】
別の実施形態では、本開示のROR1標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号11145-11193）は、表３にリストされたROR1標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号9699）である。実施形態において、ROR1-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等) は配列番号:11145-11193で表される。
【０２５４】
別の実施形態では、本発明のROR1標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ROR1を標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号11145-11193）。
【０２５５】
別の実施形態では、本開示のCRIPTO標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための参照ｓｃＦｖ（例えば、配列番号10508-10556）は、表３にリストされたCRIPTO標的化ｓｃＦｖ（例えば、配列番号9697）である。実施形態において、CRIPTO-ＣＡＲで認識される標的エピトープを決定するためのクロス競合研究のための本開示の参照ｓｃＦｖ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等)は配列番号:10508-10556で表される。
【０２５６】
別の実施形態では、本発明のCRIPTO標的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、CRIPTOを標的とし、かつ表７に列記される配列番号を有するＣＡＲである（例えば、配列番号10508-10556）。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの２つ以上の機能ドメイン（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、１つまたは複数のリンカーによって分離されている。リンカーは、本開示の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）のドメイン／領域のうちのいずれかを一緒に連結する、約１〜１００アミノ酸長のオリゴペプチドまたはポリペプチド領域である。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、５〜１２アミノ酸長、５〜１５アミノ酸長、または５〜２０アミノ酸長であり得る。リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが互いに対して自由に動くことができるように、グリシンおよびセリン等の可動性残基で構成され得る。より長いリンカー、例えば、１００アミノ酸長を超えるものが本開示の代替実施形態に関連して使用され得、例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に妨害しないことを確実にするように選択され得る。 いくつかの例示的なリンカーの配列番号を表５に列挙する（例えば、配列番号４００７から４０１２を参照のこと）。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ バックボーンの一部を形成する）は、抗原特異的ドメインと膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域またはリンカー領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、抗体、またはその機能的等価物、断片、もしくは誘導体のヒトＣＤ８αまたはＦｃ断片、ヒトＣＤ８αまたは抗体、またはその機能的等価物、断片、もしくは誘導体のヒンジ領域、抗体のＣＨ２領域、抗体のＣＨ３領域、人工的スペーサー配列、およびそれらの組み合わせのうちのいずれか1つまたは複数を含む。例示的な実施形態では、ヒンジ領域は、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域およびＣＨ２領域、（ｉｖ）ＣＤ８αのヒンジ領域、（ｖ）ＩｇＧ１のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域およびＣＨ２領域、または（ｖｉｉ）それらの組み合わせのうちのいずれか1つまたは複数を含む。
【０２５９】
本明細書に記載されるように、本明細書に記載のＣＡＲは(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）（バックボーンの一部を形成する）、膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型膜貫通タンパク質のうちのいずれかを含む、膜貫通ドメインを有するいずれかのタンパク質由来の膜貫通配列を含み得る。膜貫通ドメインは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型膜貫通タンパク質のうちのいずれかを含む、膜貫通ドメインを有するいずれかのタンパク質由来の膜貫通配列を含み得る。本開示のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の膜貫通ドメインは、人工的疎水性配列も含み得る。本明細書に記載のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインが二量体化しないように選択され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは (例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、またはゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒ  ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを有する本明細書に記載のバックボーンのうちのいずれかを含む。
【０２６０】
膜貫通ドメインは、隣接する1つまたは複数の追加のアミノ酸から膜貫通領域、例えば、膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域に関連する１つまたは複数のアミノ酸（例えば、細胞外領域の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10から15アミノ酸まで）および／または膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域に関連する1つまたは複数の追加のアミノ酸（例えば、細胞内領域の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10から15アミノ酸まで）を含み得る。態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の他のドメインのうちの１つと隣接している。 実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン、またはヒンジドメインが由来する同じタンパク質由来であり得る。別の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の任意の他のドメインが由来する同じタンパク質に由来しない。
【０２６１】
本明細書に記載されるように、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）（バックボーンの一部を形成する）は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。このドメインは、細胞質であり得、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞にその特殊化された機能を果たすように指示し得る。細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、Ｔ細胞受容体のζ鎖またはその相同体のうちのいずれか（例えば、η鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＦｃεＲ１γ、およびβ鎖、ＭＢ１（Ｉｇα）鎖、Ｂ２９（Ｉｇβ）鎖等）、ＣＤ３ポリペプチド（Δ、δ、およびε）、ｓｙｋファミリーチロシンキナーゼ（Ｓｙｋ、ＺＡＰ  ７０等）、ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼ（Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ等）、ならびにＴ細胞形質導入に関与する他の分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ５、およびＣＤ２８が挙げられるが、これらに限定されない。具体的には、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃεＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質尾部、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、またはそれらの組み合わせであり得る。追加の細胞内シグナル伝達ドメインは当業者には明らかであり、本発明の代替実施形態に関連して使用され得る。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃｇＲＩＩＩ、ＦｃｅＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質尾部、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、およびそれらの組み合わせのうちの1つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含む。
【０２６２】
本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）（バックボーンの一部を形成する）は、共刺激ドメインを含む。例示的な実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０およびそれらの組み合わせのうちのいずれか1つまたは複数由来のシグナル伝達ドメインを含む。
【０２６３】
本明細書に記載の切断可能なリンカーには、2Aリンカー（例えば、T2A）、2A様リンカーまたはそれらの機能的同等物、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態では、リンカーには、ピコルナウイルス２Ａ様リンカー、ブタテッショウウイルス（Ｐ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、ゾセアアシグナウイルス（Ｔ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、またはそれらの組み合わせ、バリアント、および機能的等価物が含まれる。他の実施形態では、リンカー配列は、Ａｓｐ−Ｖａｌ ／ Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｘ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（２Ａ）−Ｐｒｏ（２Ｂ）モチーフを含み得、これは、２Ａグリシンと２Ｂプロリンとの間の切断をもたらす。いくつかの例示的な切断可能なリンカーの核酸配列は、配列番号８０から配列番号８５で提供され、いくつかの例示的なリンカーのアミノ酸配列は、配列番号４０７９から配列番号４０８４で提供される。本明細書で使用され得る他の切断可能なリンカーは、当業者によって容易に理解される。ある実施形態では、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＳＧＳＧ）モチーフ（（配列番号931-932および配列番号4844-4845）も、切断の効率を増強するために、切断可能なリンカー配列の上流に付加される。切断可能なリンカーの潜在的な欠点は、Ｎ末端タンパク質の終端に残存する小さい２Ａタグがタンパク質機能に影響を及ぼし得るか、またはタンパク質の抗原性に寄与し得る可能性である。この制限を打開するために、いくつかの実施形態では、フーリン切断部位（ＲＡＫＲ）（配列番号88-90および4087-4089）がＳＧＳＧモチーフの上流に付加されて、翻訳後の残留２Ａペプチドの切断を容易にする。実施形態では、切断可能なリンカーは、ＣＡＲをコードするポリペプチドとアクセサリーモジュールをコードするポリペプチドとの間に配置される。切断可能なリンカーの部位での切断は、2つのポリペプチドの分離をもたらす。 
【０２６４】
本明細書で使用される「アクセサリーモジュール」は、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するＴ細胞の活性を増強、低減または改変するか、またはＣＡＲ例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）に関連する毒性を低減して、ＣＡＲの治療応答が増強される薬剤を指す。アクセサリーモジュールはまた、標的細胞、例えば免疫エフェクター細胞におけるＣＡＲコードカセットへの遺伝子導入および/またはその発現を増強し得る。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクター（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、（ｉ）ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するＴ細胞の寿命を延ばし；（ii）Ｔ細胞の増殖を刺激し；および／または（ｉｉｉ）ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するＴ細胞をアポトーシスから保護し；（iv）ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）構築物のパッケージング、遺伝子導入および/または発現を増強するウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含み得る。例示的な実施形態では、そのようなタンパク質には、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス由来のvFLIP-K13（配列番号（ＤＮＡ）：108; 配列番号（ＰＲＴ）：4107）およびHIV-1 Ｖｉｆ（配列番号： 118および4117）。
【０２６６】
一実施形態では、ＣＡＲをコードするベクター（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３をさらにコードする。 一実施形態では、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３ヌクレオチド配列は、コドン最適化されている。 コドン最適化されたｖＦＬＩＰ Ｋ１３を共発現する例示的なＣＡＲ（すなわち、ＳＩＲ）は、配列番号１４０５７によって表される。一実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、ＨＩＶ−１ Ｖｉｆをさらにコードする。代替の実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、ｖＦＬＩＰ Ｋ１３およびＨＩＶ−１ Ｖｉｆの両方をさらにコードする。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、アクセサリー分子は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によってコードされるベクターとは異なるベクターによってコードされる。 いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードするベクター（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を含むエフェクター細胞はまた、アクセサリー分子をコードするベクターを含む。いくつかの実施形態では、アクセサリー分子は、対応する内因性タンパク質をコードするゲノム遺伝子座を改変することによってコードされる。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を含むベクターは、サイトカインに特異的なＳＩＲＮＡまたはｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。例示的な実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＦＮまたはそれらの組み合わせのうちの任意の1つまたは複数である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、ＩＬ６受容体αおよびヒト血清アルブミンに結合する分泌された二重特異性抗体断片と共発現される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、ＩＬ６に結合する分泌されたｓｃＦｖ断片と共発現される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、ＣＡＲ療法に関連する毛細血管漏出を軽減するために、ペプチドＦＸ０６と共発現される。 
【０２６９】
さらなる実施形態では、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、内因性ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＴＣＲ−γ、ＴＣＲ−デルタ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３−デルタを標的とするＳＩＲＮＡまたはヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。さらなる実施形態において、内因性ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＴＣＲ−γ、ＴＣＲ−デルタ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３−デルタを標的とするＳＩＲＮＡまたはヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドは、ＣＡＲをコードするベクター以外のベクターによってコードされる（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど ）。
【０２７０】
さらなる実施形態において、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を含むベクターは、選択可能なマーカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。例示的な実施形態では、選択可能なマーカーは、ピューロマイシンまたはカルシニューリン阻害剤（例えば、ＣＮＢ３０）に対する耐性を付与する遺伝子などの薬剤耐性遺伝子をコードすることができる。いくつかの実施形態において、選択可能なマーカーは、ヒトＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９（配列番号９６および４０９５）、ＢＣＭＡ（配列番号９７および４０９６）、ＥＧＦＲ（配列番号９５および４０９４）、ＣＤ３４、または細胞表面に発現し、その標的抗原を発現する細胞を排除するために使用できる抗体によって認識できる任意のタンパク質またはタンパク質断片の細胞外および膜貫通ドメインをコードし得る。例示的な実施形態では、抗ＥＧＦＲモノクローナルであるセツキシマブを使用して、短縮型ＥＧＦＲを共発現する本開示のＣＡＲ発現細胞を排除する。選択可能なマーカーを使用して、ＣＡＲを発現する細胞（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を濃縮し、高レベルのＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する細胞を選択すること、および／またはＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する細胞のクローン多様性を低減することができる。さらなる実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードするポリヌクレオチドは、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の細胞外ドメイン上に発現されるエピトープタグ（例えば、Ｍｙｃタグ）をコードし得る。前記コードするポリヌクレオチドを用いて、ＣＡＲを発現する細胞（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど））を濃縮することができる。または高レベルのＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する細胞を選択すること、および/またはＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する細胞のクローン多様性を低減することができる。ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する同種異系Ｔ細胞のクローン多様性を低下させると、移植片対宿主病（GVHD）の発生率が低下するＣＡＲ-Ｔ細胞治療のための同種異系Ｔ細胞の使用を可能にする。
【０２７１】
アクセサリーモジュールは、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の活動のために任意であることに留意されたい。表６および表７のいくつかの例示的なＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）構築物（すなわち、バックボーン）のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、ＰＡＣ、K13、および/またはhNEMO-K277A-フラグなどのアクセサリーモジュールを含む。開示の代替実施形態において、これらのＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰ等) の構成体は、アクセサリーモジュールおよび介在する切開性リンカー(例えば、P2AまたはF2AまたはT2A)なしで使用することができる。 
【０２７２】
特定の実施形態では、本開示は、２つのＣＤ３ｚ鎖を含む、ｚＳＩＲと呼ばれる合成免疫受容体の新規プラットフォームを提供する。zＳＩＲの構築に使用できるＣＤ3z鎖の核酸配列は、配列番号67および71に提供されている。対応するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号4066および4070に提供されている。本開示は、抗体のｖＬ断片が２つのＣＤ３ｚ鎖のうちの１つに結合され得、そしてｖＨ断片が他のＣＤ３ｚ鎖に結合され得ることを提供する。このような2つの鎖（vL-ＣＤ3zとvH-ＣＤ3zなど）が同じ細胞で共発現している場合、vLとvHの断片はそれらの同族の抗原に結合してＴ細胞シグナルを伝達することができます。特に、同族の標的抗原を発現する細胞株に曝露されたときにそのようなzＳＩＲを発現するＴ細胞は、NFATシグナル伝達を活性化し、IL2産生を誘導し、Ｔ細胞増殖を促進し、Ｔ細胞活性化を促進し、細胞毒性を発揮することができる。zＳＩＲの発現と活性は、vL/vHとＣＤ3z断片の間にリンカーを組み込むことでさらに高めることができる。特に、抗体に由来するＩｇＣＬ（配列番号（ＤＮＡ）：２８および配列番号（ＰＲＴ）：４０２７）およびＩｇＣＨドメイン（配列番号（ＤＮＡ）：２９および配列番号（ＰＲＴ）：４０２８）は、vL/vH断片とＣＤ3z断片間の有用なリンカーとされている。
【０２７３】
別の実施形態では、共刺激ドメインもまた、ｚＳＩＲのＣＤ３ｚ鎖に組み込まれる。 例示的な共刺激ドメインには、41BBおよびＣＤ28の共刺激ドメインが含まれる。 41BBおよびＣＤ28共刺激ドメインを含むＣＤ3z鎖は、それぞれ配列番号4076、4078および4075、4077に示されている（表５）。まとめると、上記の結果は、ＳＩＲの設計上の制限のいくつかを克服し、ＳＩＲへの補完的なアプローチを提供する養子細胞療法のための新しいプラットフォームを提供する。
【０２７４】
本明細書に記載のｚＳＩＲの２つの鎖は、単一のポリヌクレオチド鎖によってコードされ、単一のポリペプチド鎖に翻訳され得、これは、その後、異なるタンパク質に切断される。本明細書に記載のzＳＩＲの2つの鎖は、2つの異なるプロモーターを使用して発現され、2つの別個のポリヌクレオチド鎖によってコードされ得る。本明細書に記載のｚＳＩＲの２つの鎖は、単一のベクトルによってコード化され得る。本明細書に記載のｚＳＩＲの２つの鎖は、２つの異なるベクトルによってコード化され得る。zＳＩＲをコードする核酸分子は、1つまたは複数のリーダー配列（シグナルペプチドとしても知られている）を含むことができる。一実施形態では、zＳＩＲの各機能ユニット（例えば、ＣＤ3z鎖に結合した抗原結合ドメインとFurine-SGSGで切断可能なリンカー）の前に、zＳＩＲをI型膜貫通タンパク質として細胞表面に向けるリーダー配列を付けることができる。一実施形態では、ｚＳＩＲの抗原結合ドメインは細胞外に面している。いくつかの実施形態において、リーダー配列は、配列番号１から４のいずれかの核酸配列および配列番号４０００から配列番号４００３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、制限酵素部位を含む短い核酸配列（3〜9個の核酸）は、ｚＳＩＲの異なるサブユニットの間、例えば、シグナル配列とｚＳＩＲの抗原結合ドメインとの間、または抗原結合とＣＤ３ｚ鎖との間に位置する。
【０２７５】
本明細書に提供されるのは、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）１〜１５（表１）または本明細書に記載のバックボーン１〜６０（表２）のいずれか1つまたは複数をコードする1つまたは複数の核酸分子によってコードされる1つまたは複数のポリペプチドである。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、がん細胞などの標的細胞上の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の抗原に特異的である。本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の各構成要素は隣接しており、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の他の構成要素と同じリーディングフレーム内にある。いくつかの実施形態では、バックボーンを含むＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）が複数の抗原特異的ドメインを含む場合、抗原特異的ドメインのそれぞれは隣接しており、同じＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）内の他の抗原特異的ドメインと同じリーディングフレーム内にある。
【０２７７】
本明細書には、本明細書に記載のＣＡＲIおよびK13-vFLIPを含むバックボーン-1をコードする1つまたは複数の核酸分子によってコードされる1つまたは複数のポリペプチドも提供される。いくつかの実施形態では、バックボーン−１を含むＣＡＲの抗原特異的ドメインは、がん細胞などの標的細胞上の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の抗原に特異的である。本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、ＣＡＲの各構成要素は隣接しており、バックボーン−１を含むＣＡＲの他の構成要素と同じリーディングフレーム内にある。 いくつかの実施形態では、バックボーン−１を含むＣＡＲは、２つ以上の抗原特異的ドメインを含み、抗原特異的ドメインのそれぞれは隣接しており、同じＣＡＲ内の他の抗原特異的ドメインと同じリーディングフレーム内にある。
【０２７８】
本明細書には、本明細書に記載のＣＡＲ ＩＩ（ＣＡＲ２）およびＨＩＶ−１ Ｖｉｆを含むバックボーン−８をコードする１つまたは複数の核酸分子によってコードされる１つまたは複数のポリペプチドも提供される。 いくつかの実施形態において、バックボーン−８を含むＣＡＲの抗原特異的ドメインは、がん細胞などの標的細胞上の１つ、２つ、３つ以上の抗原に特異的である。本明細書で説明されるように、ＣＡＲの各構成要素は、隣接しており、ＣＡＲの他の構成要素と同じリーディングフレーム内にある。いくつかの実施形態では、バックボーン−８を含むＣＡＲにおいて、２つ以上の抗原特異的ドメインを含み、抗原特異的ドメインのそれぞれは隣接しており、同じＣＡＲ内の他の抗原特異的ドメインと同じリーディングフレーム内にある。
【０２７９】
様々な実施形態において、ＣＡＲ１から１５の一部であるＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸分子によってコードされるポリペプチド（参照、 表１）またはバックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０などの本明細書に記載のバックボーンの一部は、２つ、３つ、またはそれ以上の抗原特異的ドメインを含む。
【０２８０】
様々な実施形態において、ＣＡＲ１から１５の一部であるＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸分子によってコードされるポリペプチド（参照、 表１）またはバックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０などの本明細書に記載のバックボーンの一部は、２つ、３つ、またはそれ以上の共刺激ドメインを含む。
【０２８１】
様々な実施形態において、 ＣＡＲ１から１５（表１を参照）の一部であるＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸分子によってコードされるポリペプチド、またはバックボーン-1、バックボーン-2、バックボーン-32またはバックボーン-60などの本明細書に記載のバックボーンの一部は、ゼロ、1、2、3、またはそれ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２８２】
様々な実施形態において、バックボーン-1、バックボーン-2、バックボーン-32またはバックボーン-60などの本明細書に記載のバックボーンの一部である、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、またはそれ以上のウイルスおよび/または細胞シグナル伝達タンパク質を含む。
【０２８３】
本明細書に記載のＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の所望の成分をコードする核酸配列は、例えば、核酸分子を発現する細胞からのライブラリーのスクリーニングによって、同じものを含むことが知られているベクターから核酸分子を誘導することによって、または標準的な技術を使用して、それを含む細胞および組織から直接単離することによってなど、当技術分野で知られている組換え方法を使用して得ることができる。あるいは、目的の核酸は、クローン化されるのではなく、合成的に生成され得る。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ 1〜15の一部（表１を参照）またはここで説明されているバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）によってコードされるポリペプチド、例えばバックボーン-1、バックボーン-2、バックボーン-32またはバックボーン−６０であり、ＣＡＲの抗原特異的ドメイン（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は表３に記載されるように標的に特異的である。
【０２８５】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、その配列番号が表３および４に示されているこの抗原を標的とするｖＬおよびｖＨ断片の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２８６】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、この抗原を標的とするｖＨＨ断片の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２８７】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメイン（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、この抗原を標的とする非免疫グロブリン足場の抗原結合部分である。
【０２８８】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメイン（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、この標的抗原に結合することが知られている受容体の抗原結合部分である。
【０２８９】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原結合特異的ドメイン（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、この標的抗原に結合することが知られているリガンドの抗原結合部分である。
【０２９０】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、この抗原を標的とするｓｃＦｖのｖＬおよびｖＨ断片の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲであり、その配列番号は表３に示されている。ＣＤＲの配列番号は表４に示されている。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、 本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ 1〜15の一部（表１などを参照してください）であるか、またはＣＡＲの抗原特異的ドメインが表３に示すターゲットに特異的である、バックボーン-1、バックボーン-2、バックボーン-32またはバックボーン−６０などの本明細書に記載のバックボーンの一部である、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドである。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９に特異的である。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ20に特異的である。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ22に特異的である。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、BCMAに特異的である。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、インテグリンB7に特異的である。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Her2に特異的である。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、TSHRに特異的である。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、PSMAに特異的である。
【０３００】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、MSLNに特異的である。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、EGFRviiiに特異的である。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、DLL3に特異的である。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Nectin-4に特異的である。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、プロラクチン受容体（PRLR）に特異的である。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Muc17に特異的である。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ70に特異的である。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤH19に特異的である。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ16ORF54に特異的である。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、VISTAに特異的である。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、GPC3に特異的である。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Muc5Acに特異的である。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、FCRH5に特異的である。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、LYPDIに特異的である。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、EMR2に特異的である。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、gpNMBに特異的である。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、RNF43に特異的である。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ44v6に特異的である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Robo4に特異的である。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、CEAに特異的である。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Her3に特異的である。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、FOLR1に特異的である。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、CLDN6に特異的である。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、MMP16に特異的である。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、UPK1Bに特異的である。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、BMPR1Bに特異的である。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Ly6Eに特異的である。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ79bに特異的である。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、WISP1に特異的である。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、SLC34A2に特異的である。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Liv1に特異的である。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、Criptoに特異的である。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、gpA33に特異的である。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ROR1に特異的である。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、CLL1に特異的である。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、FLT3に特異的である。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、IL1RAP1に特異的である。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、BST1に特異的である。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、のＣＡＲ 1〜15（例えば、表１を参照）の一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン60などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインは、ＣＤ133に特異的である。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤ200Rに特異的である。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤ276に特異的である。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤ３２４に特異的である。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣS1に特異的である。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインは ALK1に特異的である。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはROR1に特異的である。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤH6に特異的である。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤH16に特異的である。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤH17に特異的である。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインは 葉酸受容体ベータに特異的である。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはCLEC5Aに特異的である。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはNY-ESO/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはWT1/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはAFP/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはHPV16-E7/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはgp100/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはhTERT/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはMART1/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはHTLV1-Tax/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはPR1/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはHIV1-gag/MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはHIV1-エンベロープgp120に特異的である。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはPTK7に特異的である。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはTROP2に特異的である。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはBAFF-Rに特異的である。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはLAMP1に特異的である。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはTim1に特異的である。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＴＣＲガンマデルタに特異的である。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＴＣＲベータ1コンスタントチェーンに特異的である。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＴＣＲベータ２定常鎖に特異的である。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはGCCに特異的である。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはB7H4に特異的である。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはLHRに特異的である。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはTn-Muc1に特異的である。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはTSLPRに特異的である。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインは 組織因子に特異的である。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはSSEA-4に特異的である。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＳＬｅａに特異的である。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはMuc1 / MHCクラスI複合体に特異的である。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはMuc16に特異的である。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはNYBR-1に特異的である。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはIL13Ra2に特異的である。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはIL11Raに特異的である。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはL1CAMに特異的である。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはEpCAM1に特異的である。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはgpNMBに特異的である。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはGRP78に特異的である。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはGPC3に特異的である。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはGRPC5Dに特異的である。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはGFRa4に特異的である。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはFITCに特異的である。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤ79bに特異的である。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはLym1に特異的である。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはLym2に特異的である。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはCLD18A2に特異的である。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインは白血病細胞で発現するＣＤ43エピトープに特異的である。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子によってコードされるポリペプチドであり（例えば、表１を参照）、抗原特異的ドメインはＣＤ179aに特異的である。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される、ＣＡＲs 1-6をコードする核酸分子によってコードされるポリペプチド(例えば、表１を参照)またはバックボーン-1、バックボーン-2、バックボーン-32またはバックボーン60のような本明細書に記載されているバックボーンの一部であり、抗原特異的ドメインが表３に記載されている。
【０３９７】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸分子および／または本明細書に記載のアクセサリー分子は、メッセンジャーＲＮＡ（ mRNA）転写物。 別の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはアクセサリー分子をコードする核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。  
【０３９８】
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。いくつかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。ウイルスベクターの例には、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルスベクターまたは睡眠美トランスポゾンベクターが含まれるが、これらに限定されない。 様々な実施形態において、本開示は、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物、ならびに細胞に直接形質導入することができるアクセサリー分子を含む。
本発明はまた、細胞中に直接遺伝子導入できるＲＮＡ構築物も含む。遺伝子導入に使用するためのｍＲＮＡを生成する方法は、特別に設計したプライマーと共にテンプレートのin vitro転写（ＩＶＴ）と、それに続くポリＡ付加により、３’および５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）（例えば、本明細書に記載の３’および／または５’ＵＴＲ）、５’キャップ（例えば、本明細書に記載の５’キャップ）および／または配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、本明細書に記載のＩＲＥＳ）、発現される核酸、およびポリＡテール、通常５０〜２０００塩基長を含む構築物の生成を含む。このように、ＲＮＡは異なる種類の細胞に効率的に遺伝子導入できる。一実施形態では、テンプレートはＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）のための配列を含む。ある実施形態では、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターは、電気穿孔により、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。 別の実施形態において、ＲＮＡ ＣＡＲベクターまたは次世代ＣＡＲベクターは、ＷＯ２０１３ ／ ０５９３４３Ａ１（ＰＣＴ ／ ＵＳ２０１２ ／ ０６０６４６）に記載されたマイクロ流体デバイスを使用して細胞膜に一過性の摂動を引き起こすことによって、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に導入される。 目的の分子をコードするポリヌクレオチド配列は、当該技術分野において既知の組換え法を用いて、例えば、遺伝子を発現している細胞由来のライブラリーを選別することにより、遺伝子をそれが含まれていることが既知であるベクターから取り出すことにより、または標準的技術を用いて、それを含む細胞および組織から直接に単離することにより、得ることができる。あるいは、目的の遺伝子は、クローン化ではなく、合成的に作製できる。
【０３９９】
本発明はまた、本発明のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードするＤＮＡが挿入されているベクターを提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、長期遺伝子導入を達成するのに好適なツールである。理由は、それらが、長期の、安定な導入遺伝子の組み込みおよび娘細胞へのその伝播を可能とするためである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコレトロウイルス由来のベクターに比べて、さらなる利点を有する。それらはまた、低免疫原性というさらなる利点も有する。代表的レンチウイルスベクターは、配列番号129-130および12639に与えられている。レトロウイルスベクターは、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであってもよい。ガンマレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（Ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つまたは複数（例えば、２つ）の長末端反復配列（ＬＴＲ）、および目的の導入遺伝子、例えば、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする遺伝子を含み得る。レトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖなどのウイルス構造遺伝子を欠いていてもよい。代表的ガンマレトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾臓フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、および骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、およびそれら由来のベクターが挙げられる。別の実施形態では、本発明の目的のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。
【０４００】
ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする天然または合成核酸の発現は通常、ＣＡＲ （例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）ポリペプチドまたはその一部をコードする核酸をプロモーターに操作可能なように連結し、構築物を発現ベクター中に組み込むことにより達成される。本開示のＣＡＲをコードする例示的なレンチウイルスベクターは、配列番号１２６４０〜４１および１４３７８、１４３８０〜８５に提供されている。ベクターは、真核生物の複製および統合に好適なものとすることができる。典型的なクローニングベクターは、転写および翻訳ターミネーター、開始配列、および目的の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。ベクターは、単一のプロモーターまたは複数のプロモーターを含み得る。 いくつかの実施形態において、ＣＡＲの２つ以上の機能的ユニット（例えば、ＳＩＲまたはｚＳＩＲまたはＡｂ−ＴＣＲの２つの機能的ポリペプチドユニットをコードするヌクレオチド）は、別個のプロモーターの制御下にある。本発明の発現構築物はまた、標準的遺伝子導入プロトコルを用いて、核酸免疫化および遺伝子治療にも使用し得る。 遺伝子導入の方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第号５，３９９，３４６号、同５，５８０，８５９号、同５，５８９，４６６号を参照されたい。これらの特許は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４０１】
クローニングおよび発現方法は、当業者には明らかであろう。
【０４０２】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入する物理的方法、例えば、リン酸カルシウム法などは、当該技術分野において周知であり、当業者には明らかであろう。別の実施形態では、ＣＡＲ （例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）ベクターは、国際公開第２０１３／０５９３４３Ａ１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６０６４６）およびＤｉｎｇ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１，００３９（２０１７）に記載のマイクロ流体装置を用いて、細胞膜に一時的な摂動を生じさせることにより、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。これらの文献のそれぞれの内容は、あたかも本明細書で記述されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４０３】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）による改変のための、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を含む細胞は、治療を望む対象から得てよい。Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞は、組織常在性ガンマ−デルタＴ細胞であり得、これは、ＣＡＲ (例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の発現の前にin vitroで培養および増殖できる。
【０４０４】
態様では、本発明は、いくつかのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供し、該ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）は、疾患関連抗原、例えば、本明細書に記載の腫瘍抗原に特異的に結合するように遺伝子改変された抗原結合ドメイン（例えば、抗体または抗体断片、ＴＣＲまたはＴＣＲ断片）を含む。一態様では、本発明は、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、遺伝子改変免疫エフェクター細胞は治療特性を示す。一態様では、本発明は、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、遺伝子改変免疫エフェクター細胞は抗がん特性を示す。一態様では、細胞は、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）で形質転換され、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）が細胞表面上に発現される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードするウイルスベクターで形質導入される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。いくつかのこのような実施形態では、細胞はＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を安定に発現し得る。別の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）は、ＣＡＲまたは第２世代ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸、例えば、ｍＲＮＡ、ＣＤＮＡ、ＤＮＡを遺伝子導入される。このような実施形態では、該細胞はＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を一時的に発現し得る。
【０４０５】
本発明は、免疫エフェクター細胞を疾患細胞または疾患関連細胞に向ける１種または複数のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を含むように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞ままたはＮＫ細胞）を提供する。これは、ＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-Tac、ＴＦＰなど）上のがん関連抗原に特異的な抗原結合ドメインにより実現される。本発明のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲーＴri-Tac、ＴＦＰなど）により標的とされ得るがん関連抗原（腫瘍抗原）には次の２つの種類がある：（１）がん細胞の表面上に発現されたがん関連複合体；および（２）がん関連抗原であって、それ自体は細胞内にあるが、この抗原（ペプチド）の断片がＭＨＣ（主要組織適合遺伝子複合体）によりがん細胞の表面上に提示されているがん関連抗原である。
【０４０６】
本発明は、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、遺伝子改変免疫エフェクター細胞は、抗腫瘍特性などの抗疾患特性を示す。 好ましい抗原は、本明細書に記載のがん関連抗原（すなわち、腫瘍抗原）である。態様では、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原結合ドメインは、部分的にヒト化された抗体断片を含む。一態様では、ＣＡＲ（(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原結合ドメインは、部分的にヒト化されたｓｃＦｖを含む。したがって、本発明は、ヒト化抗原結合ドメインを含み、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に組み込まれたＣＡＲ（(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）、および養子療法のためのそれらの使用方法を提供する。
【０４０７】
本明細書に記載のポリヌクレオチドおよび／または ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を含む、遺伝子改変細胞がさらに本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、細胞はＴリンパ球（Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、胚性幹細胞、または多能性幹細胞である。本発明のＣＡＲを含み、発現し得る遺伝子改変細胞には、治療的に適切な成果をもたらすことができる、Ｔ−リンパ球（Ｔ細胞）、ナイーブＴ細胞（ＴＮ）、メモリーＴ細胞（例えば、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ））、ナチュラルキラー細胞、造血幹細胞および／または多能性胚性／誘導性幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある実施形態では、遺伝子改変細胞は、自己細胞である。ある実施形態では、遺伝子改変細胞は、同種細胞である。例えば、本発明の個々のＴ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ４−／ＣＤ８＋、ＣＤ４−／ＣＤ８−、またはＣＤ４＋／ＣＤ８＋であり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−およびＣＤ４−／ＣＤ８＋細胞の混合群、または単一クローン群であり得る。本発明のＣＤ４＋Ｔ細胞は、標的抗原を発現する細胞（例えば、ＣＤ２０＋および／またはＣＤ１９＋腫瘍細胞）とin vitroで共培養された場合、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、および他のＴ細胞エフェクターサイトカインを産生し得る。本発明のＣＤ８＋Ｔ細胞は、標的細胞とin vitroで共培養された場合、抗原特異的標的細胞を溶解し得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ナイーブ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ６２Ｌ＋セントラルメモリー細胞、ＣＤ６２Ｌ−  エフェクターメモリー細胞、またはそれらの組み合わせ内のいずれか１種または複数であり得る（Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９  ２１（２）２２４−２３２）。遺伝子改変細胞は、本明細書のＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードするＤＮＡを細胞に安定に遺伝子導入することによって産生され得る。
【０４０８】
遺伝子操作された細胞は、内因性ＴＣＲ鎖、例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδまたはプレＴＣＲα鎖の発現をノックアウトするように操作され得る。内因性ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδまたはpre-ＴＣＲα鎖のノックアウトは、CRISP/Cas9およびZnフィンガーヌクレアーゼの使用など、当技術分野で知られている多くの技術を使用して達成することができる。例示的な実施形態において、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ遺伝子座を標的とするｇＲＮＡは、Ｃａｓ９ｍＲＮＡと共にＴ細胞またはｉＰＳＣまたは幹細胞に導入されて、内因性ＴＣＲαおよびＴＣＲβ鎖の発現をノックアウトすることができる。そのようなＴＣＲα/βノックアウト細胞を使用して、本開示のＣＡＲを導入することができる。機能性内因性ＴＣＲを欠如するＴ細胞は、例えば、表面に機能性内因性ＴＣＲを一切発現しないように改変されてもよいし、機能性内因性ＴＣＲを有する1つまたは複数のサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ１、ＴＣＲβ２、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、または前ＴＣＲ）を発現しないように改変されてもよいし、表面に機能性内因性ＴＣＲを極めて僅かしか生産しないように改変されてもよい。あるいは、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲの1つまたは複数のサブユニット変異型または切断型の発現により、実質的に阻害された内因性ＴＣＲを発現してもよい。「実質的に阻害されたＴＣＲ」と言う用語は、斯かるＴＣＲは宿主で都合の悪い免疫反応を誘発しないことを意味している。実施形態では、同種異系Ｔ細胞または同種異系ＮＫＴ細胞は、機能的ＴＣＲおよび／または機能的ＨＬＡの発現を欠くか、または発現が低い。
【０４０９】
種々の方法は、本発明のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する安定な遺伝子導入体を生成する。一実施形態では、細胞に安定に遺伝子導入し、細胞をリダイレクトする方法は、ネイキッドＤＮＡを使用するエレクトロポレーションによるものである。ネイキッドＤＮＡを使用することによって、リダイレクトされた細胞を生成するために必要とされる時間は、著しく低減され得る。本発明のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードするネイキッドＤＮＡを使用して細胞を遺伝子改変するためのさらなる方法には、（例えば、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、および／または陽イオンポリマーを使用する）化学形質転換法、非化学形質転換法（例えば、エレクトロポレーション、光学形質転換、遺伝子エレクトロトランスファー、細胞膜中で一時的な摂動および／またはハイドロダイナミックデリバリー）、および／または粒子ベースの方法（例えば、遺伝子銃を使用するインペールフェクションおよび／またはマグネトフェクション）が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子導入された細胞は、単一の組み込まれた非再配列ベクターおよびＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の発現の存在を示す遺伝子導入された細胞は、ex vivoで増殖され得る。一実施形態では、ex vivo増殖のために選択された細胞は、ＣＤ８＋であり、抗原特異的標的細胞を特異的に認識し、その細胞を溶解する能力を示す。
【０４１０】
ウイルス形質導入法もまた、本発明のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するリダイレクトされた細胞を生成するために使用され得る。本発明のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する遺伝子改変細胞を生成するために使用され得る細胞型には、治療的に適切な成果をもたらすことができるＴリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー細胞、造血幹細胞、および／または多能性胚性／誘導性幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０４１１】
適切な条件下での抗原によるＴ細胞の刺激は、細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）（増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ））および／またはＩＬ−２の産生をもたらす。本発明のＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を含む細胞は、１種または複数の抗原の、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的標的化領域への結合に応答して、数を増大する。本発明はまた、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する細胞を作製し、増殖させる方法を提供する。方法は、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するベクターを細胞に遺伝子導入するか、または形質導入すること、およびその細胞を、受容体に対する標的抗原、組換え標的抗原、または受容体に対する抗体を発現する細胞で刺激して、Ｔ細胞を作製し、増やすようにその細胞を増殖させる。ある実施形態では、細胞は、治療的に適切な成果をもたらすことができる、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、または多能性胚性／誘導性幹細胞の内のいずれか１種または複数であり得る。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の種々のバックボーンを発現し、バックボーンのＣＡＲ成分は、ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の抗原特異的ドメインに基づいて標的特異性を決定する。
【０４１３】
一実施形態では、遺伝子操作された細胞は、バックボーン-1、バックボーン-2、バックボーン-32またはバックボーン-６０などの本明細書に記載のバックボーンの一部であるＣＡＲ 1〜15をコードする核酸分子（例えば、表１を参照）を含み、ここで、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表３および/または7の抗原標的に特異的であり、表３および/または7に記載の抗原結合ドメイン配列を含む。
【０４１４】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＭＰＬに特異的である。
【０４１５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＭＰＬに特異的である。
【０４１６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ19に特異的である。
【０４１７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ19に特異的である。
【０４１８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ20に特異的である。
【０４１９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ20に特異的である。
【０４２０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、BCMAに特異的である。
【０４２１】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、BCMAに特異的である。
【０４２２】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ22に特異的である。
【０４２３】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ22に特異的である。
【０４２４】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、BAFF-Rに特異的である。
【０４２５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、BAFF-Rに特異的である。
【０４２６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、インテグリン-7に特異的である。
【０４２７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ネクチン-4に特異的である。
【０４２８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、プロラクチン受容体に特異的である。
【０４２９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、Muc17に特異的である。
【０４３０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ70に特異的である。
【０４３１】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ70に特異的である。
【０４３２】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、VISTAに特異的である。
【０４３３】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、GPC3に特異的である。
【０４３４】
I実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、GPC3に特異的である。
【０４３５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、EMR2に特異的である。
【０４３６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、EMR2に特異的である。
【０４３７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、gpNMBに特異的である。
【０４３８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、RNFA4に特異的である。
【０４３９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、STEAP1に特異的である。
【０４４０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、Robo4に特異的である。
【０４４１】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、CLDN6に特異的である。
【０４４２】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ44v6に特異的である。
【０４４３】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、MMP16に特異的である。
【０４４４】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、UPK1Bに特異的である。
【０４４５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、BMPR1Bに特異的である。 
【０４４６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、Ly6Eに特異的である。 
【０４４７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ79bに特異的である。
【０４４８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ79bに特異的である。
【０４４９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、WISP1に特異的である。
【０４５０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、Criptoに特異的である。
【０４５１】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、gpA33に特異的である。
【０４５２】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、IL1RAPに特異的である。
【０４５３】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、BST1に特異的である。
【０４５４】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ133に特異的である。
【０４５５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ123に特異的である。
【０４５６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ123に特異的である。
【０４５７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ138に特異的である。
【０４５８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ138に特異的である。
【０４５９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、CLL1に特異的である。
【０４６０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載のバックボーン、例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０の一部である、ＣＡＲ１から１５をコードする核酸分子を含み、ここで、抗原特異的ドメインは、CLL1に特異的である。
【０４６１】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＴＣＲ-beta1定数チェーンに特異的である。
【０４６２】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＴＣＲ-beta2定数チェーンに特異的である。
【０４６３】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ALKに特異的である。
【０４６４】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、PTK7に特異的である。
【０４６５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、DLL3に特異的である。
【０４６６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、TROP2に特異的である。
【０４６７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、Tim1に特異的である。
【０４６８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、LAMP1に特異的である。
【０４６９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、CS1に特異的である。
【０４７０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、Lym1に特異的である。
【０４７１】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、Lym2に特異的である。
【０４７２】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、TSHRに特異的である。
【０４７３】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、NY-ESO / MHCクラスI複合体に特異的である。
【０４７４】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、WT1 / MHCクラスI複合体に特異的である。 
【０４７５】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、Ras / MHCクラスI複合 体に特異的である。 
【０４７６】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、ＣＤ179aに特異的である。
【０４７７】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、CLD18A2に特異的である。
【０４７８】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、白血病細胞に発現するＣＤ43-エピトープに特異的である。
【０４７９】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、HIV1エンベロープ糖タンパク質gp120に特異的である。 
【０４８０】
実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＡＲ７〜１５の一部であるｚＳＩＲをコードする核酸分子を含み（例えば、表１を参照）、ここで、抗原特異的ドメインは、免疫グロブリンのFc領域に特異的である。
【０４８１】
一実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現エフェクター細胞は、同じまたは異なる標的に対する異なる抗原結合ドメインを含み得る第２のＣＡＲをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、第１のＣＡＲと同じまたは異なる細胞型を標的とし得る。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、第１のＣＡＲと同じクラス（すなわち、ＣＡＲ１からＣＡＲ１５）であり得る。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、第１のＣＡＲとは異なるクラスのものである。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、第１のＣＡＲと同じバックボーンを有する。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、第１のＣＡＲとは異なるバックボーンを有する。
【０４８２】
一実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ 7-15）発現エフェクター細胞は、同じまたは異なる抗原結合ドメイン、任意選択で同じまたは異なる標的を有する異なるクラスのＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１またはＣＡＲ２など）をさらに含むことができる。
【０４８３】
いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１、ＣＡＲ２など）は、第１のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ７〜１５）と同じまたは異なる細胞型を標的とし得る。一実施形態では、ＣＡＲは、疾患関連抗原と同じ疾患細胞型（例えば、がん）で発現される標的への抗原結合ドメインを含む。一実施形態では、細胞を発現するＣＡＲ（例：ＣＡＲ 7-15、例：zＳＩＲ）は、第１の抗原を標的とするＣＡＲ、および第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有さないが共刺激シグナル伝達ドメインを有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２の抗原特異的受容体（例えば、ＣＡＲ）を含む。理論に縛られることを望まないが、共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば4-1BB、ＣＤ28、ＣＤ27またはOX-40を抗原特異的受容体に配置すると、両方の標的が発現している細胞のＣＡＲ（例：ＣＡＲ 7-15、例：zＳＩＲ）活性を調節することができる。一実施形態では、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ 7-15、例：zＳＩＲ）発現細胞は、i）本明細書に記載の標的抗原に結合する1つまたは複数の抗原結合ドメインを含む第1の疾患関連抗原ＣＡＲ；およびii）異なる標的抗原（例えば、最初の標的抗原と同じ疾患関連（例えば、がん）細胞型で発現される抗原）を標的とするＣＡＲ）を含み、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および一次シグナル伝達ドメイン、ならびに共刺激ドメインを含む。この構成を有する例示的な構築物の核酸およびアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号14380および配列番号16124に示されている。この構築物のＳＩＲの抗原結合ドメインは、BCMAを標的とするBCMAAm06モノクローナル抗体に由来するvLおよびvH断片で構成され、ＣＡＲの抗原結合ドメインはPD1の細胞外ドメインで構成される。 この構築物のＣＡＲの一次シグナル伝達ドメインはＣＤ3zサイトゾルドメインで構成され、共刺激ドメインは4-1BBサイトゾルドメインで構成される。別の実施形態では、細胞を発現するＣＡＲ（例：ＣＡＲ 7-15、例：zＳＩＲ）は、i）本明細書に記載の標的抗原に結合する1つまたは複数の抗原結合ドメインを含む第1の疾患関連抗原ＣＡＲ、およびii）異なる標的抗原を標的とするＣＡＲ（例えば、最初の標的抗原と同じ疾患関連（例えばがん）細胞タイプで発現する抗原）を含み、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および共刺激ドメインを含むが、一次シグナル伝達または活性化ドメインを含まない。この構成を有する例示的な構築物の核酸およびアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号14379および配列番号16123に示されている。この構築物は、ＣＡＲがＣＤ3zドメインを欠いていることを除いて、配列番号14380に示される構築物に類似している。さらに別の実施形態では、細胞を発現するＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ ７〜１５、例えば、ｚＳＩＲ）は、i）本明細書に記載の標的抗原に結合する1つまたは複数の抗原結合ドメインを含む第1の疾患関連抗原ＣＡＲ；およびii）異なる標的抗原（例えば、最初の標的抗原と同じ疾患関連（例えば、がん）細胞型で発現される抗原）を標的とするＣＡＲ）を含み、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および一次シグナル伝達ドメインを含むが、共刺激ドメインを含まない。
【０４８４】
１つの実施形態において、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内信号伝達ドメイン（例えば、限定されないが、４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ２８、Ｄａｐ１０、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−１、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、またはそれらの組み合わせからの1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン）、および／または一次シグナル伝達ドメイン（例えば、限定されないが、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）を有する。ＣＡＲを共発現する例示的なＳＩＲは、配列番号３２１７から３２１９ならびに配列番号３２２１および３２２２に示されている。
【０４８５】
本明細書に記載のＣＡＲを含むＴ細胞およびＮＫ細胞などの免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号に記載されている方法を一般的に使用して活性化および拡大することができる（6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; および米国特許出願公開第20060121005号）。
【０４８６】
疾患関連抗原またはがん関連抗原の発現に関連する疾患の治療方法が本明細書で提供される。 
【０４８７】
一実施形態では、本明細書に記載の治療有効量の、抗原特異的ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）単独を、または抗原特異的ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）および補助分子を発現するように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することにより、処置を必要としている対象の疾患を処置する方法が本明細書で提供され、該抗原は本明細書に記載の疾患特異的抗原であり、病原性細胞または疾患関連細胞は前記疾患特異的抗原を発現する。
【０４８８】
一実施形態では、本明細書に記載の治療有効量の、抗原特異的ＣＡＲ(例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Tri-Tac、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）単独を、または抗原特異的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）および補助分子を発現するように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することにより、処置を必要としている対象のがんを処置する方法が本明細書で提供され、該抗原は本明細書に記載のがん特異的抗原であり、がん細胞は前記腫瘍抗原を発現する。
【０４８９】
実施形態では、がん特異的抗原は、正常細胞およびがん細胞の両方上に発現されるが、正常細胞上には、より低いレベルで発現される。一実施形態では、前記方法は、抗原特異的ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）ががん細胞に結合して、死滅されることを可能とする親和性で目的のがん特異的抗原に結合するＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ＣＡＲは、がん細胞を死滅させるが、がん抗原を発現している正常細胞の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、またはそれ未満を死滅させる。例示的な実施形態において、抗原特異的ＣＡＲによって殺された細胞のパーセンテージは、本明細書に記載の細胞死アッセイ（例えば、マタドールアッセイ）を使用して決定され得る。
【０４９０】
いくつかの実施形態において、本開示は、従来のＣＡＲを発現するように操作された治療有効量の遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法を提供する。ここで、ＣＡＲのＡＳＤは、がん細胞で発現される抗原に特異的であり（例えば、抗原は、がん細胞と比較して正常細胞でより低いレベルで発現される）、その配列番号は表３に記載されている。
【０４９１】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲのＡＳＤががん細胞（例えば、抗原はがん細胞と比較して正常細胞でより低いレベルで発現される）上に発現され、その配列番号が表３に記載されている抗原に特異的である、従来のＣＡＲ IとアクセサリーモジュールK13-vFLIPを含むバックボーン−１を発現するように操作される治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法（例：Ｔ細胞、NK細胞）を提供する。
【０４９２】
いくつかの実施形態では、本開示は、従来のＣＡＲIIとアクセサリーモジュールHIV1-Ｖｉｆを含むバックボーン−１２を含むように操作された治療有効量の遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法を提供し、ここで、ＣＡＲのＡＳＤは、疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞（例えば、抗原はがん細胞と比較して正常細胞でより低いレベルで発現される）で発現される抗原に特異的である。
【０４９３】
いくつかの実施形態では、本開示は、従来のＣＡＲ ＩＩおよびアクセサリーモジュールＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２を含むように操作された治療有効量の遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することを含む、それを必要とする対象のがんを治療する方法を提供し、ここで、ＣＡＲのＡＳＤは、がん細胞上で発現される抗原に特異的である（例えば、抗原はがん細胞と比較して正常細胞でより低いレベルで発現される）。
【０４９４】
例示的な実施形態では、本明細書に記載の治療方法の標的となり得る抗原には、以下のいずれか１つ、２つ、３つ、４つ以上が含まれるが、これらに限定されない: ＣＤ19; ＣＤ5、ＣＤ123; ＣＤ22; ＣＤ30; ＣＤ171; CS1（ＣＤ2サブセット1、CRACC、SLAMF7、ＣＤ319、および19A24とも呼ばれる）；C型レクチン様分子-1（CLL-1またはCLECL1）; BAFF-R; ＣＤ33;上皮成長因子受容体変異体III（EGFRviii）;ガングリオシドG2（GD2）;ガングリオシドGD3（aNeu5Ac（2-8）aNeu5Ac（2-3）bDGalp（l-4）bDGlcp（l-l）Cer）; TNF受容体ファミリーメンバーB細胞成熟（BCMA）; Tn抗原（（Tn Ag）または（GalNAcα-Ser/ Thr））;前立腺特異的膜抗原（PSMA）;受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体1（ROR1）; Fms Like Tyrosine Kinase 3（FLT3）;腫瘍関連糖タンパク質72（TAG72）; ＣＤ38; ＣＤ44v6;急性白血病またはリンパ腫で発現するが造血前駆細胞では発現しないグリコシル化ＣＤ43エピトープ、非造血がんで発現するグリコシル化ＣＤ43エピトープ、がん胎児性抗原（CEA）。上皮細胞接着分子（EPCAM）; B7H3（ＣＤ276）;キット（ＣＤ117）;インターロイキン-13受容体サブユニットアルファ-2（IL-13Ra2またはＣＤ213A2）;メソテリン;インターロイキン11受容体アルファ（IL-llRa）;前立腺幹細胞抗原（PSCA）;プロテアーゼセリン21（テスティシンまたはPRSS21）;血管内皮増殖因子受容体2（VEGFR2）;ルイス（Y）抗原; ＣＤ24;血小板由来成長因子受容体ベータ（PDGFR-ベータ）；病期特異的胚性抗原-4（SSEA-4）; ＣＤ20;葉酸受容体アルファ（FRaまたはFR1）;葉酸受容体ベータ（FRb）;受容体型チロシンプロテインキナーゼERBB2（Her2 / neu）;ムシン1、関連する細胞表面（MUC1）;上皮成長因子受容体（EGFR）;神経細胞接着分子（NCAM）;プロスターゼ;前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）;伸長因子2変異（ELF2M）;エフリンB2;線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（FAP）;インスリン様成長因子1受容体（IGF-I受容体）、炭酸脱水酵素IX（CAlX）;プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）サブユニット、ベータタイプ、9（LMP2）;糖タンパク質100（gpl00）;ブレークポイントクラスター領域（BCR）とアベルソンマウス白血病ウイルス腫瘍遺伝子ホモログ1（Abl）（bcr-abl）からなるがん遺伝子融合タンパク質。チロシナーゼ;エフリンA型受容体2（EphA2）;シアリルルイス接着分子（sLe）;ガングリオシドGM3（aNeu5Ac（2-3）bDClalp（l-4）bDGlcp（l-1）Cer）;トランスグルタミナーゼ5（TGS5）;高分子量-黒色腫関連抗原（HMWMAA）; o-アセチル-GD2ガングリオシド（OAcGD2）;腫瘍内皮マーカー1（TEM1 / ＣＤ248）;腫瘍内皮マーカー7関連（TEM7R）;クローディン6（CLDN6）;甲状腺刺激ホルモン受容体（TSHR）; Gタンパク質共役型受容体クラスCグループ5、メンバーD（GPRC5D）; X染色体オープンリーディングフレーム61（CXORF61）; ＣＤ97; ＣＤ179a;未分化リンパ腫キナーゼ（ALK）;ポリシアル酸;胎盤特異的1（PLAC1）; globoHグリコセラミド（GloboH）の六糖部分。乳腺分化抗原（NY-BR-1）;ウロプラキン2（UPK2）; A型肝炎ウイルス細胞受容体1（HAVCR1）;アドレナリン受容体ベータ3（ADRB3）;パネキシン3（PANX3）; Gタンパク質共役型受容体20（GPR20）;リンパ球抗原6複合体、遺伝子座K 9（LY6K）; 嗅覚受容体51E2（OR51E2）; ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（TARP）;ウィルムス腫瘍タンパク質（WT1）;がん/精巣抗原1（NY-ES0-1）;がん/精巣抗原2（LAGE-1a）;黒色腫関連抗原1（MAGE-A1）;染色体12p（ETV6-AML）に��るETS転座変異遺伝子6。精子タンパク質17（SPA17）; X抗原ファミリー、メンバー1A（XAGE1）;アンジオポエチン結合細胞表面受容体2（Tie 2）;黒色腫がん精巣抗原-1（MAD-CT-1）;黒色腫がん精巣抗原-2（MAD-CT-2）; Fos関連抗原1;腫瘍タンパク質p53（p53）; p53変異体;プロスタイン;サバイビン;テロメラーゼ;前立腺がん腫瘍抗原-1（PCT A-1またはガレクチン8）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原1（MelanAまたはMARTI）;ラット肉腫（Ras）変異体;ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（hTERT）;肉腫転座ブレークポイント;アポトーシスの黒色腫阻害剤（ML-IAP）; ERG（膜貫通プロテアーゼ、セリン2（TMPRSS2）ETS融合遺伝子）; N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼV（NA17）;ペアボックスタンパク質Pax-3（PAX3）;アンドロゲン受容体;サイクリンBl; v-mycトリ骨髄球腫症ウイルス腫瘍遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（MYCN）; Ras HomologファミリーメンバーC（RhoC）;チロシナーゼ関連タンパク質2（TRP-2）;シトクロムP450lB 1（CYPlB 1）; CCCTC結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）のような（BORISまたは印刷された部位の調節因子の兄弟）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮がん抗原3（SART3）;ペアボックスタンパク質Pax-5（PAX5）;プロアクロシン結合タンパク質sp32（OY-TES1）;リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（LCK）;キナーゼアンカータンパク質4（AKAP-4）;滑膜肉腫、Xブレークポイント2（SSX2）;高度な糖化最終産物の受容体（RAGE-1）;腎臓ユビキタス1（RU1）;腎臓ユビキタス2（RU2）;レグマイン;ヒトパピローマウイルスE6（HPV E6）;ヒトパピローマウイルスE7（HPV E7）;腸のカルボキシルエステラーゼ;熱ショックタンパク質70-2変異（mut hsp70-2）; ＣＤ79a; ＣＤ79b; ＣＤ72;白血球関連免疫グロブリン様受容体1（LAIR1）; IgA受容体のFc断片（FＣＡＲまたはＣＤ89）;白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーAメンバー2（LILRA2）; ＣＤ300分子のようなファミリーメンバーf（ＣＤ300LF）; C型レクチンドメインファミリー12メンバーA（CLEC12A）;骨髄間質細胞抗原2（BST2）; EGFのようなモジュールを含むムチンのようなホルモン受容体のような2（EMR2）;リンパ球抗原75（LY75）;グリピカン-3（GPC3）; Fc受容体様5（FCRL5）;免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド1（IGLL1）、MPL、ビオチン、c-MYCエピトープタグ、ＣＤ34、LAMP1 TROP2、GFRalpha4、ＣＤH17、ＣＤH6、NYBR1、ＣＤH19、ＣＤ200R、Slea（CA19.9;シアリルルイス抗原）;フコシル-GM1、PTK7、gpNMB、ＣＤH1-ＣＤ324、DLL3、ＣＤ276 / B7H3、IL11Ra、IL13Ra2、ＣＤ179b-IGL11、ＴＣＲgamma-delta、NKG2D、ＣＤ32（FCGR2A）、Tn ag、Tim1- / HVCR1、CSF2RA（GM-CSFR -alpha）、TGFbetaR2 、、 Lews Ag、ＴＣＲ-beta1チェーン、ＴＣＲ-beta2チェーン、ＴＣＲ-gammaチェーン、ＴＣＲ-deltaチェーン、FITC、ロイテナイジングホルモン受容体（LHR）、濾胞刺激ホルモン受容体（FSHR）、ゴナドトロピンホルモン受容体（CGHRまたはGR）、CCR4、GD3、SLAMF6、SLAMF4、HIV1エンベロープ糖タンパク質、HTLV1-Tax、CMV pp65、EBV-EBNA3c、KSHV K8.1、KSHV-gH、インフルエンザA血球凝集素（HA）、GAD、PDL1、 グアニリルシクラーゼC（GCC）、デスモグレイン3（Dsg3）に対する自己抗体、デスモグレイン1（Dsg1）に対する自己抗体、HLA、HLA-A、HLA-A2、HLA-B、HLA-C、HLA-DP、HLA-DM 、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ、HLA-DR、HLA-G、IgE、ＣＤ99、Ras G12V、Tissue Factor 1（TF1）、AFP、GPRC5D、Claudin18.2（CLD18A2またはCLDN18A.2）、CLDN6、P-糖タンパク質、STEAP1、Liv1、ネクチン-4、ク���プト、MPL、gpA33、BST1/ＣＤ157、低コンダクタンス塩化物チャネル、およびTNT抗体によって認識される抗原。
【０４９５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、その配列番号が表３に示されているｓｃＦｖ配列を含む。
【０４９６】
例示的な実施形態では、本明細書に記載の治療方法の標的となり得る抗原には、表３に記載の標的のいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上が含まれるが、これらに限定されない。
【０４９７】
本開示は、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）分子、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）分子を発現する細胞、またはＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）分子をコードする核酸を有する細胞を被験者へ投与する工程を含む方法も提供する。１つの実施形態において、被験者は、本明細書記載の疾患を有する（例えば、被験者は、本明細書記載の標的抗原を発現するがん、感染症、アレルギー疾患、変性性疾患、または自己免疫疾患を患っている）。更に１つの実施形態では、被験者は本明細書記載の疾患を患う危険性が増大している（例えば、被験者は、本明細書記載の標的抗原を発現するがん、感染症、アレルギー疾患、変性性疾患、または自己免疫疾患を患う危険性が増大している）。１つの実施形態では、被験者はヒトである。１つの実施形態では、被験者は動物である。更に別の実施形態では、被験者はイヌなどのペット動物である。
【０４９８】
本開示は、本明細書記載の病気関連抗原の発現に関連した病気を治療または予防する方法を提供する。
【０４９９】
１つの実施形態において、本開示は、病気を治療または予防する方法であって、それを必要とする被験者へ、標的のＸ−ＣＡＲを発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）、または免疫エフェクター細胞を発生し得る幹細胞を提供することにより、病気を治療または予防する方法を提供し、この場合、Ｘは本明細書記載の病気関連抗原を示し、病気を引き起こす細胞または病気関連細胞は上記Ｘ抗原を発現する。表１１は、斯かる抗原を標的とするＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現する免疫エフェクター細胞を用いて、予防、阻害、または治療し得る例示的病気の一覧を提供する。
【０５００】
一実施形態では、本開示は、ＣＡＲのＡＳＤが配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成される、表３に示される異なる抗原に特異的なＣＡＲ１から１５（例えば、表１を参照）またはバックボーン（例えば、バックボーン1、バックボーン2、バックボーン32、またはバックボーン60）（表２などを参照してください）を発現するように操作されるそれを必要とする対象に免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を提供することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を提供する。
【０５０１】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはＣＤ19に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がＣＤ19を発現し、 ＣＤ19-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。実施形態において、治療するがんは、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、B細胞悪性腫瘍、非ホジキンスリンパ腫、びまん性大細胞性B細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または、多発性骨髄腫である。一実施形態において、治療される疾患は、免疫疾患(例えば、ウルプス、SLE、ITP等) またはアレルギー疾患である。
【０５０２】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはＣＤ２０に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がＣＤ２０を発現し、 ＣＤ20-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。実施形態において、治療するがんは、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、B細胞悪性腫瘍、非ホジキンスリンパ腫、びまん性大細胞性リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である。一実施形態では、治療される疾患は、免疫性（例えば、狼瘡、ＳＬＥ、ＩＴＰなど）またはアレルギー性疾患である。
【０５０３】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはＣＤ２2に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がＣＤ２2を発現し、 ＣＤ22-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。 実施形態において、治療するがんは、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、B細胞悪性腫瘍、非ホジキンスリンパ腫、びまん性大細胞性リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である。一実施形態では、治療される疾患は、免疫性（例えば、狼瘡、ＳＬＥ、ＩＴＰなど）またはアレルギー性疾患である。
【０５０４】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはBCMAに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がBCMAを発現し、 BCMA-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患は、がんまたは免疫またはアレルギー性疾患である。 一実施形態では、治療または予防されるがんは、形質細胞悪性腫瘍または多発性骨髄腫または原発性滲出性リンパ腫またはびまん性大細胞型リンパ腫である。 一実施形態では、治療される疾患は、免疫性（例えば、狼瘡、ＳＬＥ、ＩＴＰなど）またはアレルギー性疾患である。
【０５０５】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはMPLに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がMPLを発現し、MPL-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療されるがんは、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群である。
【０５０６】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはBAFF-Rに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がBAFF-Rを発現し、BAFF-R-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療されるがんは、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、および急性白血病である。
【０５０７】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはIL13Ra2に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がIL13Ra2を発現し、IL13Ra2-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療されるがんは脳腫瘍である。
【０５０８】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはＣＤ79bに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がＣＤ79bを発現し、ＣＤ79b-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。 一実施形態では、治療されるがんは、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群または多発性骨髄腫である。一実施形態では、治療される疾患は、免疫性（例えば、狼瘡、ＳＬＥ、ＩＴＰなど）またはアレルギー性疾患である。
【０５０９】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはHer2に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がHer2を発現し、Her2-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療されるがんは、乳がんまたは胃がんである。
【０５１０】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはMSLNに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がMSLNを発現し、MSLN-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。 一実施形態では、治療されるがんは、中皮腫、肺がん、膵臓がん、胃腸がん、または卵巣がんである。
【０５１１】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはTSHRに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がTSHRを発現し、TSHR-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。 一実施形態では、治療されるがんは、甲状腺がんまたはＴ細胞白血病／リンパ腫である。
【０５１２】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはPRLRに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がPRLRを発現し、PRLR-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療されるがんは、乳がんまたは色素性腎細胞がんである。
【０５１３】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）または葉酸受容体1(FOLR1)に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がFOLR1を発現し、FOLR1-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療されるがんは、卵巣がん、肺がん、子宮内膜がん、または他の固形腫瘍である。
【０５１４】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはPTK7に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がPTK7を発現し、PTK7-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、黒色腫、肺がん、または卵巣がんである。
【０５１５】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはDLL3に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がDLL3を発現し、DLL3-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、黒色腫、肺がん、または卵巣がんである。
【０５１６】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはEGFRviiiに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がEGFRviiiを発現し、EGFRviii -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、脳がんまたは肺がんまたは他の固形腫瘍である。
【０５１７】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはPSMAに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がPSMAを発現し、PSMA -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防されるがんは前立腺がんである。
【０５１８】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはUPK1Bに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がUPK1Bを発現し、UPK1B -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。 一実施形態では、治療または予防されるがんは膀胱がんである。
【０５１９】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはWISP1に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がWISP1を発現する。一実施形態では、ＷＩＳＰ１−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、神経膠芽細胞腫または乳がんである。
【０５２０】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはMMP16に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がMMP16を発現する。一実施形態では、ＭＭＰ１６−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３にリストされているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、神経膠芽腫、黒色腫、小細胞肺がんまたは神経芽細胞腫である。
【０５２１】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはBMPR1Bに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がBMPR1Bを発現する。一実施形態では、ＢＭＰＲ１Ｂ−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、前立腺がん、乳がん、または卵巣がんである。
【０５２２】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはSLC34A2に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がSLC34A2を発現する。一実施形態では、ＳＬＣ３４Ａ２−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、肺がん、卵巣がん、または子宮内膜がんである。
【０５２３】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはgpA33に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がgpA33を発現し、gpA33 -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、結腸直腸がん、卵巣がん、または子宮内膜がんである。
【０５２４】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはBST1に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がBST1を発現し、BST1 -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは血液がんである。
【０５２５】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはＣＤ133に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がＣＤ133を発現し、ＣＤ133 -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、肺がんまたは脳がんである。
【０５２６】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはEMR2に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がEMR2を発現し、EMR2-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、急性白血病、リンパ腫、乳がん、および結腸がんである
【０５２７】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはGPC3に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がGPC3を発現し、GPC3 -ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、肝臓がん、乳がん、および肺がんである。
【０５２８】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはgpNMBに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がgpNMBを発現し、gpNMB-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、黒色腫、脳がん、乳がん、肺がん、および他の固形腫瘍である。
【０５２９】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはIL1RAPに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がIL1RAPを発現し、IL1RAP-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患は、がんまたは子宮内膜症である。一実施形態では、治療または予防されるがんは、肝臓がん、子宮頸がん、結腸がん、卵巣がんおよび他の固形腫瘍である。
【０５３０】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはネクチン-4に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がネクチン-4を発現し、ネクチン-4-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患は、がんまたは子宮内膜症である。一実施形態では、治療または予防されるがんは、膀胱がん、腎がん、頭頸部がん、卵巣がん、乳がん、肺がん、および他の固形腫瘍である。
【０５３１】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはCriptoに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がCriptoを発現し、Cripto-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がんおよび他の固形腫瘍である。
【０５３２】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはRNF43に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がRNF43を発現し、RNF43-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、結腸直腸がん、乳がん、子宮内膜がん、および他の固形腫瘍である。
【０５３３】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはROR1に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がROR1を発現し、ROR1-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、血液がん、ＣＬＬおよびリンパ腫である。
【０５３４】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはFLT3に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がFLT3を発現し、FLT3-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは血液がんである。
【０５３５】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはCLL1に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がCLL1を発現し、CLL1-ＣＡＲのASDは、配列番号が表３に記載されているvLおよびvH断片で構成されている。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは血液がんである。
【０５３６】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはRobo4に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がRobo4を発現する。一実施形態では、Ｒｏｂｏ４−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、腎がん、結腸がん、乳がん、または他の固形腫瘍である。
【０５３７】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはCLDN6に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がCLDN6を発現する。一実施形態では、ＣＬＤＮ６−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、卵巣がん、肝臓がん、または他の固形腫瘍である。
【０５３８】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはMuc5Acに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がMuc5Acを発現する。一実施形態では、Ｍｕｃ５Ａｃ−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、膵臓がん、胃がん、結腸がん、または他の固形腫瘍である。
【０５３９】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはMuc17に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がMuc17を発現する。一実施形態では、Ｍｕｃ１７−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、膵臓がん、胃がん、結腸がん、または他の固形腫瘍である。
【０５４０】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはLy6Eに特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がLy6Eを発現する。一実施形態では、Ｌｙ６Ｅ−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膵臓がんまたは他の固形腫瘍である。
【０５４１】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはインテグリンＢ７に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がインテグリンＢ７を発現する。一実施形態では、インテグリンＢ７−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、治療または予防されるがんは、形質細胞新生物または原発性滲出液リンパ腫である。
【０５４２】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはSTEAP1に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がSTEAP1を発現する。一実施形態では、ＳＴＥＡＰ１−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、胃がん、前立腺がん、またはリンパ腫を治療または予防するがん。
【０５４３】
別の実施形態では、ＣＡＲタイプ１から１５を発現するように遺伝子操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）を標的細胞に投与することによって、がん、自己免疫またはアレルギー性疾患を治療する方法を考案した（表１参照）またはLiv1に特異的なべクターバックボーン（例えば、バックボーン−１、バックボーン−２、バックボーン−３２またはバックボーン−６０）（例えば、表２を参照）であって、疾患に関連する細胞がLiv1を発現する。一実施形態では、Ｌｉｖ１−ＣＡＲのＡＳＤは、その配列番号が表３に記載されているｖＬおよびｖＨ断片から構成される。一実施形態では、治療または予防される疾患はがんである。一実施形態では、がんは、乳がん、前立腺がん、または固形腫瘍である。
【０５４４】
増殖を阻害することができる例示的がんとしては、免疫療法に通常応答性であるがんが挙げられる。治療するがんの非限定的な例としては、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、腎臓がん（例えば、明細胞がん）、前立腺がん（例えば、ホルモン難治性前立腺がん）、乳がん、結腸がんおよび肺がん（例えば、非小細胞肺がん）が挙げられる。さらに、本明細書に記載される分子を用いて難治性または再発性の悪性腫瘍を治療することができる。最後に、子宮内膜症などの非悪性疾患は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を使用して治療することができる。
【０５４５】
例示的実施形態では、本明細書に記載される方法により治療されるがんとしては、様々な臓器系の肉腫、腺がんおよびがん腫などの固形腫瘍、例えば肝臓、肺、乳房、リンパ系、胃腸管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎尿路上皮細胞）、前立腺および咽頭を冒す固形腫瘍などが挙げられる。腺がんとしては、悪性腫瘍、例えばほとんどの結腸がん、直腸がん、腎細胞がん、肝臓がん、非小細胞肺がん、小腸がんおよび食道がんなどが挙げられる。一実施形態では、がんはメラノーマ、例えば進行期メラノーマである。同様にがんの転移性病変もまた、本開示の方法および組成物を使用して治療または予防することができる。
【０５４６】
治療することができるその他のがんの例としては、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内悪性メラノーマ、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、ファロピウス管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰部がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含めた慢性または急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓または尿管のがん、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘発されるがんを含めた環境により誘発されるがんおよび前記がんの組み合わせが挙げられる。本明細書に記載される抗体分子を用いて転移性がん、例えばＰＤ−Ｌ１を発現する転移性がん（Ｉｗａｉら（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）の治療を実施することができる。さらに、本明細書に記載されるがん関連抗原の発現に関連する疾患としては、特に限定されないが、例えば、本明細書に記載されるがん関連抗原の発現に関連する非定型および／または非古典的がん、悪性腫瘍、前がん状態あるいは増殖性疾患が挙げられる。最後に、子宮内膜症などの非悪性疾患は、本明細書に記載のＣＡＲを使用して治療することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現Ｔ細胞またはＮＫ細胞により、本明細書に記載されるがん関連抗原を発現する細胞に関連する血液がんまたは別のがんを有する対象の細胞および／またはがん細胞の量、数、量または割合が、陰性対照と比較して少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％または少なくとも９９％減少する。一実施形態では、対象はヒトである。
【０５４７】
一態様では、本開示は、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患、感染症またはアレルギー性疾患または変性疾患）の増殖を阻害する方法に関し、ＣＡＲ-Ｔが抗原に応答して活性化され、疾患を引き起こすまたは疾患に関連する細胞を標的とし、疾患を引き起こすまたは疾患に関連する細胞の増殖が阻害されるように,疾患を引き起こす細胞または疾患に関連する細胞を、ＣＡＲ（ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）またはアクセサリーモジュールを備えたＣＡＲ（つまり、バックボーン1〜60、表２を参照）を発現する本開示の遺伝子改変細胞と接触させることを含む。一態様では、本開示は、疾患のリスクのある患者に、ＣＡＲ-Ｔが抗原に応答して活性化され、疾患を引き起こすまたは疾患に関連する細胞を標的とし、疾患を引き起こすまたは疾患に関連する細胞の増殖が防止されるように、ＣＡＲまたは次世代のＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）発現細胞、または本開示のＣＡＲ発現細胞を生成することができる細胞を投与することを含む、疾患を予防する方法に関する。
【０５４８】
一態様では、疾患は、がん、感染症、免疫疾患、アレルギー性疾患、または変性疾患である。
【０５４９】
一態様では、この疾患は自己免疫疾患である。一実施形態では、自己免疫疾患は、後天性免疫不全症候群（AIDS）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（AIED）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ALPS）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ATP）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルー-ヘペチフォルミス性皮膚炎;慢性疲労免疫機能障害症候群（CFIDS）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（CIPD）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎-若年性、円板状エリテマトーデス、本質的な混合クリオグロブリン血症、線維筋痛症-線維筋痛症。バセドウ病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少症（ΓΡ）、IgA腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スティル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、永続性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多発性腺症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（PSS）、全身性硬化症（SS）としても知られる）、シェーグレン症候群、スティッフパーソン症候群、全身性エリテマトーデス（SLE）、高安動脈炎、側頭動脈炎/巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０５５０】
本開示の実施形態には、エフェクター細胞を生じさせることができるエフェクター細胞（Ｔ細胞やNK細胞など）または幹細胞が本明細書に記載のＣＡＲを発現するように遺伝子改変され、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ（例：ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）発現Ｔ細胞またはＮＫＴ細胞がそれを必要とするレシピエントに注入される細胞療法の一種が含まれる。注入された細胞はレシピエント内で腫瘍細胞を死滅させることができる。様々な態様では、患者に投与した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）またはその子孫は、患者にＴ細胞またはＮＫ細胞を投与後、患者内に少なくとも４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１４か月間、１５か月間、１６か月間、１７か月間、１８か月間、１９か月間、２０か月間、２１か月間、２２か月間、２３か月間、２年間、３年間、４年間または５年間存在し続ける。
【０５５１】
本開示はまた、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）が、例えば、in vitro転写されたＲＮＡによって改変されて、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）またはアクセサリーモジュールを有するＣＡＲ（例：バックボーン1〜60）を一時的に発現するタイプの細胞療法を含む。Ｔ細胞またはＮＫＴ細胞は、それを必要とするレシピエントに注入される。必要とするレシピエントにＴ細胞またはＮＫ細胞を注入する。注入された細胞はレシピエント内で疾患関連細胞（例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞）を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者にＴ細胞またはＮＫ細胞を投与後１か月未満、例えば、３週間、２週間、１週間存在し続ける。
【０５５２】
本開示はまた、免疫エフェクター細胞（例：Ｔ細胞またはNK細胞）を生じさせることができる幹細胞（例：造血幹細胞またはリンパ系幹細胞または胚性幹細胞、または人工多能性幹細胞）が、アクセサリーモジュール（例：バックボーン1〜60; 表２を参照してください）と共にＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）またはＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するように改変され、それを必要とするレシピエントに投与される細胞療法の一種を含む。投与された幹細胞はレシピエント内に移植された後、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を生じさせ、それ（すなわち、免疫エフェクター細胞）は疾患関連細胞を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ発現幹細胞の投与後に患者内で産生される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者に遺伝子改変幹細胞を投与後、患者内に少なくとも１週間、２週間、３週間、１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１４か月間、１５か月間、１６か月間、１７か月間、１８か月間、１９か月間、２０か月間、２１か月間、２２か月間、２３か月間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間または２０年間存在し続ける。本開示はまた、免疫エフェクター細胞（例：Ｔ細胞またはＮＫＴ細胞）を生じさせることができる幹細胞がＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）またはアクセサリーモジュールを備えたＣＡＲ（例： バックボーン1-60; 表２を参照してください）を発現するように改変され、そしてそれを必要とするレシピエントに注入される免疫エフェクター細胞を生成するためにin vitroで分化される細胞療法の一種を含む。注入された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、レシピエント内への注入後、レシピエント内で疾患関連細胞を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、患者に投与される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者内に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１４か月間、１５か月間、１６か月間、１７か月間、１８か月間、１９か月間、２０か月間、２１か月間、２２か月間、２３か月間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間または２０年間存在し続ける。
【０５５３】
本開示はまた、特定の抗原を標的とする調節免疫エフェクター細胞（例えば、ＴＲＥＧ、またはＣＤ２５ ＋ Ｔ細胞）は、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するように改変される）またはアクセサリーモジュール（例えば、バックボーン１〜６０）を有するＣＡＲであるタイプの細胞療法を含む。このようなＣＡＲ-ＴＲＥＧを患者に投与して特定の抗原に対する免疫応答を抑制する。ＣＡＲ-ＴＲＥＧを自己免疫疾患の予防および治療ならびに免疫寛容の増強に用いることができる。
【０５５４】
ＣＡＲまたは次世代のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例：Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）によって誘発される抗腫瘍免疫応答は、能動的または受動的免疫応答である可能性があり、あるいは直接的対間接的免疫応答に起因する可能性がある。一態様では、ＣＡＲまたは次世代のＣＡＲで伝達された免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞、NK細胞など）は、本明細書に記載の疾患関連抗原を発現するヒト疾患細胞（例：がんまたは感染細胞）に応答して特定の炎症誘発性サイトカイン分泌および強力な細胞溶解活性を示し、本明細書に記載の可溶性疾患関連抗原に抵抗し、傍観者の殺害を媒介し、がんを含む確立されたヒト疾患の退行を媒介する。
【０５５５】
ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ改変免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）により引き起こされる抗腫瘍免疫応答は、能動免疫応答または受動免疫応答であり得、あるいは直接的免疫応答対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様では、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、本明細書に記載される疾患関連抗原を発現するヒト疾患細胞（例えば、がん細胞または感染細胞）に応答して特異的炎症誘発性サイトカイン分泌および強力な細胞溶解活性を示し、本明細書に記載される可溶性の疾患関連抗原に抵抗し、バイスタンダー殺作用を媒介し、がんを含めた確立されたヒト疾患の消退を媒介する。
【０５５６】
本開示はまた、免疫エフェクター細胞（例：Ｔ細胞またはNK細胞）を生じさせることができる免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞やＮＫＴ細胞など）または幹細胞が、ＣＡＲ（例：ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）またはアクセサリーモジュール（例：バックボーン1〜60）を有するＣＡＲを発現するように改変され、エクスビボで疾患関連細胞（例： がん細胞）の骨髄または末梢血造血幹細胞をパージするために使用される細胞療法の一種を含む。一例として、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するＴ細胞と、急性リンパ球性白血病または非ホジキンリンパ腫を有する患者から採取した骨髄または末梢血の幹細胞試料とを共培養して、骨髄または末梢血の幹細胞調製物中に存在するあらゆる白血病またはリンパ腫細胞を死滅させる。６時間〜数日の範囲であり得る適切なin vitro（ex vivo）培養期間の後、パージされた骨髄および末梢血の試料を患者の自家移植に用いる。
【０５５７】
一例として、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）を発現するＴ細胞と、急性リンパ球性白血病または非ホジキンリンパ腫を有する患者から採取した骨髄または末梢血の幹細胞試料とを共培養して、骨髄または末梢血の幹細胞調製物中に存在するあらゆる白血病またはリンパ腫細胞を死滅させる。６時間〜数日の範囲であり得る適切なin vitro（ex vivo）培養期間の後、パージされた骨髄および末梢血の試料を患者の自家移植に用いる。
【０５５８】
造血幹細胞および造血前駆細胞の体外増幅ついては、米国特許第５，１９９，９４２号に既に記載されているとともに、参照により本明細書に組み込まれ、本発明の細胞に適用することができる。ただし、本発明は細胞の体外増幅のいかなる特定の方法にも限定されず、当該技術分野で公知の他の適切な方法を用いることができる。簡潔に述べれば、ex vivo培養および造血幹細胞の増幅は、（１）哺乳動物由来のＣＤ３４＋造血幹細胞および造血前駆細胞を末梢血採取物または骨髄外植片から収集すること；ならびに（２）このような細胞をex vivoで増幅することを含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載されている細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３およびｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子も細胞の培養および増幅に用いることができる。
【０５５９】
ex vivo免疫感作に細胞ベースのワクチンを用いることに加えて、本発明は、患者に抗原に対する免疫応答を誘発するin vivo免疫感作のための組成物および方法も提供する。
【０５６０】
いくつかの実施形態において、本開示の完全ヒトＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ修飾遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞など）は、哺乳動物（例えば、ヒト）のex vivo免疫感作および／またはin vivo療法のための一種のワクチンであり得る。ex vivo免疫感作に関して、細胞を哺乳動物内に投与する前に以下のうち少なくとも１つのもの、すなわち、ｉ）細胞の増幅、ｉｉ）ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入またはｉｉｉ）細胞の凍結保存をin vitroで実施する。ex vivoの方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されているように、当該技術分野で周知である。
【０５６１】
ex vivo免疫感作に細胞ベースのワクチンを用いることに加えて、本発明は、患者に抗原に対する免疫応答を誘発するｖｉｖｏ免疫感作のための組成物および方法も提供する。
【０５６２】
本明細書でさらに説明するのは、患者に投与したときにＣＡＲ-Ｔ細胞の活性を制御するための方法である。いくつかの実施形態では、これらの方法を使用して、サイトカイン放出症候群、毛細血管漏出症候群、および神経学的合併症などのＣＡＲ-Ｔ細胞の副作用を制御することができる。いくつかの実施形態では、この方法は、チロシンキナーゼ、具体的にはＳｃｒファミリーキナーゼ、特にＬｃｋキナーゼの阻害剤の投与を含む。一実施形態では、この方法は、Ａｂｌファミリーチロシンキナーゼおよびｐ５６Ｌｃｋ（Ｌｃｋ）を含めたＳｒｃファミリーチロシンキナーゼ（ＳＦＫ）の経口小分子阻害剤であるダサチニブ（Ｌｅｅ  ＫＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２０１０）２４，８９６−９００）の投与を含む。 一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にＳｒｃキナーゼ阻害剤を投与して、ＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にＬｃｋ阻害剤を投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、Ｌｃｋ阻害剤はＡ−７７００４１である。
【０５６３】
一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にダサチニブを投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ダサチニブを少なくとも１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、２１０ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日または２８０ｍｇ／日の用量で経口投与する。
【０５６４】
一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にポナチニブを投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ポナチニブを少なくとも１５ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４５ｍｇ／日、６０ｍｇ／日の用量で経口投与する。
【０５６５】
この目的に適した例示的なタンパク質には、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ヒトヘルペスウイルス8としても知られる）によってコードされるウイルスFLICE阻害タンパク質（vFLIP）K13が含まれる。 
【０５６６】
本明細書ではさらに、養子細胞療法の目的で、末梢血単核球およびＴ細胞の生存および増殖を促進し、その複製老化を防止して免疫細胞（例えば、リンパ球およびＮＫ細胞）の寿命を延ばす方法が企図される。この方法は、生存および増殖を促進し活性化誘導細胞死を阻止するウイルスおよび細胞タンパク質の異所性発現を伴うものである。この目的に適した例示的なタンパク質には、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ヒトヘルペスウイルス8としても知られる）によってコードされるウイルスFLICE阻害タンパク質（vFLIP）K13が含まれる。いくつかの実施形態では、上記のウイルスおよび細胞タンパク質が免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）内にその天然の状態で、または小さいエピトープタグを有する状態で発現し、恒常的に機能的活性を示す。他の実施形態では、上記のウイルスおよび細胞タンパク質が免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）内に１コピーまたは複数コピーのスイッチドメイン（または二量体化ドメイン）、例えばＦＫＢＰおよびＦＫＢＰ×２などと融合した状態で発現する。他の実施形態では、ＦＫＢＰまたはＦＫＢＰ×２ドメインは、融合タンパク質を細胞膜に係留するためのＮ末端ミリソチル化（ｍｙｒｉｓｏｔｙｌａｔｉｏｎ）（Ｍｙｒ）配列をさらに有し得る。スイッチドメインを保有する融合タンパク質は、それらの基底状態では機能的に不活性であるが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ2017／０２４８４３に記載されるＡＰ２０１８７などの二量体化剤の添加時に活性化される。
【０５６７】
本明細書でさらに企図されるのは、レンチウイルス媒介性の形質導入および／または外来遺伝子および／またはＣＤＮＡの発現を促進するための方法である。この方法は、HIV1-Ｖｉｆタンパク質の発現を伴う。いくつかの実施形態において、Ｖｉｆタンパク質は、外来遺伝子および／またはＣＤＮＡと同じベクター上にコードされている。いくつかの実施形態において、Ｖｉｆタンパク質は、外来遺伝子／ＣＤＮＡとは異なるベクター上にコードされている。HIV1 Ｖｉｆタンパク質の共発現によって転移および/または発現を増強することができる例示的な外来遺伝子/ＣＤＮＡには、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ I、ＣＡＲ II、ＳＩＲ、zＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ）、組換えＴＣＲ、グロビン、およびアデノシンデアミナーゼなどが含まれる。いくつかの実施形態において、ＨＩＶ１ Ｖｉｆタンパク質の共発現は、レンチウイルス媒介性の形質導入および／または任意のコードされた遺伝子／ＣＤＮＡまたは核酸断片の発現を促進するために使用され得る。いくつかの実施形態において、ＨＩＶ１ Ｖｉｆタンパク質は、目的の遺伝子／ＣＤＮＡと同じベクター上にコードされている。ＣＡＲおよびＨＩＶ１ Ｖｉｆタンパク質を共発現する例示的なベクターは、配列番号１１２６８に示されている。ＣＡＲおよびＨＩＶ Ｖｉｆをコードする例示的な核酸カセットは、配列番号１１２４４〜１１２６７に示されている。いくつかの実施形態において、ＨＩＶ１ Ｖｉｆタンパク質は、目的の遺伝子／ＣＤＮＡとして異なるベクター上にコードされている。HIV1 Ｖｉｆタンパク質は、哺乳類細胞における遺伝子導入/発現を増強するために使用できる。いくつかの実施形態において、HIV1 Ｖｉｆタンパク質は、末梢血単核細胞、Ｔ細胞、NK細胞、ＮＫＴ細胞、B細胞、造血幹細胞、誘導多能性幹細胞、肝細胞、脳細胞または皮膚細胞への遺伝子導入/発現を増強するために使用される。
【０５６８】
一実施形態では、K13-vFLIP (配列番号: 4107), MC159 (配列番号:4108), cFLIP-L/MRIT-alpha (配列番号: 4109), cFLIP-p22 (配列番号: 4110), HIV1-Vif (配列番号: 4117), HTLV1-TAX (配列番号: 4113), HTLV2-TAX (配列番号: 4114), HTLV2-TAX-RS (配列番号: 4115)の群から選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質、または前記のタンパク質のアミノ酸配列と70〜99％の同一性を有するタンパク質を異所的に発現する、疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞を提供する。
【０５６９】
一実施形態では、１つまたは複数のスイッチドメイン、例えば、ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰｘ２またはＭｙｒ−ＦＫＢＰを含む融合タンパク質、およびK13-vFLIP (配列番号: 4107), MC159 (配列番号:4108), cFLIP-L/MRIT-alpha (配列番号: 4109), cFLIP-p22 (配列番号: 4110), HIV1-Vif (配列番号: 4117), HTLV1-TAX (配列番号: 4113), HTLV2-TAX (配列番号: 4114), HTLV2-TAX-RS (配列番号: 4115)の群から選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質を異所的に発現する、疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞を提供する。
【０５７０】
一実施形態では、K13-vFLIP (配列番号: 4107), MC159 (配列番号:4108), cFLIP-L/MRIT-alpha (配列番号: 4109), cFLIP-p22 (配列番号: 4110), HIV1-Vif (配列番号: 4117), HTLV1-TAX (配列番号: 4113), HTLV2-TAX (配列番号: 4114), HTLV2-TAX-RS (配列番号: 4115)の群から選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質、または前記のタンパク質のアミノ酸配列と70〜99％の同一性を有するタンパク質を部分的または完全にコードする核酸と細胞を接触させることを含む、養子細胞療法に適した免疫エフェクター細胞を産生する方法を提供する。
【０５７１】
一実施形態では、本開示は、１つまたは複数のスイッチドメイン、例えば、ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰｘ２またはＭｙｒ−ＦＫＢＰを含む融合タンパク質、およびK13-vFLIP (配列番号: 4107), MC159 (配列番号:4108), cFLIP-L/MRIT-alpha (配列番号: 4109), cFLIP-p22 (配列番号: 4110), HIV1-Vif (配列番号: 4117), HTLV1-TAX (配列番号: 4113), HTLV2-TAX (配列番号: 4114), HTLV2-TAX-RS (配列番号: 4115)の群から選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質、または前記のタンパク質のアミノ酸配列と70〜99％の同一性を有するタンパク質をコードする核酸と細胞を接触させることを含む、養子細胞療法に適した免疫エフェクター細胞を産生する方法を提供する。
【０５７２】
いくつかの側面では、本開示は、1つまたは複数のスイッチドメイン（FKBP、FKBPx2、Myr-FKBPなど）を含む融合タンパク質をコードする核酸と細胞を接触させることを含む養子細胞療法に適した免疫エフェクター細胞を生産するの方法を提供し、1つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質は、K13-vFLIP（配列番号4107）、MC159（配列番号4108）、cFLIP-L / MRIT-alpha（配列番号4109）、cFLIP-p22（配列番号4110）、HIV1-Ｖｉｆ（配列番号4117）、HTLV1-TAX（配列番号4113）、HTLV2-TAX（配列番号4114）、HTLV2-TAX-RS（配列番号4115）、または上記のタンパク質のアミノ酸配列と70〜99％の同一性を持つタンパク質の群から選択される。
【０５７３】
一実施形態では、養子細胞療法に適した細胞は、天然または合成の免疫受容体を発現する。例示的なそのような免疫受容体には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラＴ細胞受容体（ｃＴＣＲ）、合成Ｔ細胞受容体、ＴＣＲ融合タンパク質（ＴＦＰ）、Ａｂ−ＴＣＲおよび 合成ノッチ受容体。一実施形態では、細胞は、天然または合成免疫受容体をコードする構築物と接触する前、同時に、または接触した後に、ウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させることができる。一実施形態では、細胞は、天然または合成免疫受容体をコードする構築物と接触する前、同時に、または接触した後に、スイッチまたは二量体化ドメインを含むウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させることができる。
【０５７４】
一態様では、本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の集団を作製する方法を特徴とする。 一実施形態では、この方法は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団を提供し、免疫エフェクター細胞の集団を免疫受容体（例えば、ＣＡＲ-ＴＣＲ、合成ＴＣＲ）をコードする核酸と接触させることを含む。免疫受容体とウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質の共発現を可能にする条件下で、免疫エフェクター細胞の集団をウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させる。
【０５７５】
一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸はＤＮＡである。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸は、ウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質の発現を駆動することができるプロモーターを含む。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸および免疫受容体をコードする核酸は、同じベクターから発現される。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸および免疫受容体をコードする核酸は、別々のベクターから発現される。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸（サブユニット１）および免疫受容体をコードする核酸（サブユニット２）は、2番目のサブユニットの翻訳を可能にする内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含む同じポリヌクレオチド断片から発現される。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸（サブユニット１）および免疫受容体をコードする核酸（サブユニット２）は、コードする単一のポリヌクレオチド断片から発現され、異なるサブユニットは切断可能なリンカーによって分離される。
【０５７６】
一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸は、in vitroで転写されたＲＮＡである。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質（サブユニット１）および免疫受容体（サブユニット２）は、第２のサブユニットの翻訳を可能にする内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含む同じＲＮＡから発現される。一実施形態では、ウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質（サブユニット１）および免疫受容体（サブユニット２）は、単一のＲＮＡから発現され、異なるサブユニットは、切断可能なリンカーによって分離される。
【０５７７】
一実施形態では、細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸は、遺伝的または化学的手段によるそのプロモーターの活性化によって活性化される前記タンパク質のゲノムコピーである。
【０５７８】
本明細書に記載の治療方法は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）をコードする核酸を含む遺伝子改変細胞を含む組成物を使用することを含む。様々な実施形態では、本明細書に記載される治療方法を既存の治療法および薬剤と組み合わせ得る。本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど)をコードする核酸を含む遺伝子改変細胞を含む本明細書に記載の治療用組成物を少なくとも１つの追加の既知の治療法または治療剤とともに対象に投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物と追加の治療法または治療剤を連続的に投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物と追加の治療法または治療剤を同時に投与する。本明細書に記載される組成物の投与と既存の治療法の実施の最適な順序は、医師などの当業者には明らかであろう。
【０５７９】
本明細書に記載のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ発現細胞と少なくとも１つの追加の治療剤は、同時に、同じまたは別個の組成物として、または連続的に投与することができる。連続投与には、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を最初に投与し、次に追加の薬剤を投与することができ、あるいは投与順序を逆にすることもできる。
【０５８０】
疾患の持続期間にわたって対象に併用療法を実施し得る。疾患の持続期間は診断から治療の結果までを含み、治療により症状の軽減および／または症状の消失がもたらされる。様々な実施形態では、２つの治療の作用は、部分的な相加作用であるか、完全な相加作用であるか、相加作用を上回るものであり得る。送達は、２つ目の治療を実施するとき、最初に実施した治療の効果が依然として検出可能であるようなものであり得る。
【０５８１】
ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）療法および／または他の治療薬、手順またはモダリティは、活動性障害の期間中、または寛解期または活動性の低い疾患。ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）療法は、他の治療の前に、治療と同時に、治療後、または障害の寛解中に投与することができる。
【０５８２】
組み合わせて実施する場合、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）治療剤および追加の薬剤（例えば、第二または第三の薬剤）または全部を、各薬剤を例えば単独療法として個別に用いる場合の量または用量より多い、少ない、またはこれと同じ量または用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）治療剤、追加の薬剤（例えば、第二または第三の薬剤）または全部を投与する量または用量は、各薬剤を例えば単独療法として個別に用いる場合の量または用量より（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％）少ない。他の実施形態では、所望の効果（例えば、がんの治療）が得られるＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）治療剤、追加の薬剤（例えば、第二または第三の薬剤）または全部の量または用量は、各薬剤を例えば単独療法として個別に用いて同じ治療効果を得るのに必要な量または用量より少ない（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％少ない）。
【０５８３】
さらなる方法の態様は、それぞれがＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）分子を含む有効量の細胞、例えば免疫エフェクター細胞またはその集団を、任意選択で免疫細胞の有効性および／または安全性を増大させる薬剤と組み合わせて対象に投与することに関するものである。さらなる態様では、免疫細胞の有効性および／または安全性を増大させる薬剤は、（ｉ）タンパク質ホスファターゼ阻害剤；（ｉｉ）キナーゼ阻害剤；（ｉｉｉ）サイトカイン；（ｉｖ）免疫抑制分子の阻害剤；あるいは（ｖ）ＴＲＥＧ細胞のレベルまたは活性を低下させる薬剤；ｖｉ）ＣＡＲ改変細胞の増殖および／または持続性を増大させる薬剤；ｖｉｉ）ケモカイン；ｖｉｉｉ）ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の発現を増大させる薬剤；ｉｘ）ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の発現または活性の制御を可能にする薬剤；ｘ）ＣＡＲ改変細胞の生存および／または持続の制御を可能にする薬剤；ｘｉ）ＣＡＲ改変細胞による副作用を制御する薬剤；ｘｉｉ）Ｂｒｄ４阻害剤；ｘｉｉｉ）疾患部位に治療剤（例えば、ｓＨＶＥＭ）または予防的剤を送達する薬剤；ｘｉｖ）ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ Ｉ、ＣＡＲ ＩＩ、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰなど）が対象とする標的抗原の発現を増大させる薬剤；ｘｖ）アデノシンＡ２ａ受容体アンタゴニストのうちの１つまたは複数のものであ; ｘｖi）単球および/またはマクロファージを枯渇させる薬剤; xvii）エトポシドである。
【０５８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子改変細胞を外科手術、化学療法、放射線照射、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸およびＦＫ５０６など、抗体またはその他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体またはその他の抗体治療剤、サイトキシン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカインなどならびに放射線照射、ペプチドワクチン、例えばＩｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載されているものなどと併用する治療レジメンで使用し得る。一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を化学療法剤と併用することができる。例示的化学療法剤としては、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン（ｄｅＣＡＲｂａｚｉｎｅ）、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツザマブ（ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよびアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン）を含む）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシンまたはボルテゾミブ）、免疫調節剤、例えばサリドマイドまたはサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）が挙げられる。
【０５８５】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をシクロホスファミドおよびフルダラビンと組み合わせて対象に投与する。
【０５８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、骨髄破壊的化学療法およびリンパ球枯渇化学療法の両方を以前に投与された対象に投与される。
【０５８７】
例示的な骨髄破壊的およびリンパ球除去コンディショニングレジメンには、FCE（フルダラビン25mg / m2 /日、-7〜-3日;シクロホスファミド200mg / m2 /日、-7〜-3日;およびエトポシド250mg / m2 /日、-4〜-3日、FCIE（フルダラビン25 mg / m2 /日、-7〜-3日、シクロホスファミド200 mg / m2 /日、-7〜-3日;イダルビシン12 mg / m2 /日、-7〜-3日-5およびエトポシド250mg / m2 /日、-4〜-3日）、FluCyE（フルダラビン30 mg / m2 /日、シタラビン1.5 g / m2 /日、フルダラビンおよびエトポシド100 mg / m2 /日をそれぞれに投与-6日目から-1日目に投与される薬剤）、またはFE（-5日目から-1日目にフルダラビン30mg / m2 /日およびエトポシド100mg / m2 /日）が含まれる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、化学療法の最後の投与後１日から５日の間に対象に投与される。
【０５８８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、以前にエトポシドを投与された対象に投与される。いくつかの実施形態において、エトポシドは、５０ｍｇ／ｍ２／日から２５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で１〜５日間静脈内投与される。いくつかの実施形態において、エトポシドは、１から５回の用量の間、用量あたり５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、エトポシドの最後の投与後１日から５日の間に対象に投与される。
【０５８９】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をベンダムスチンおよびリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。 
【０５９０】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよび／または副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（Ｒ−ＣＨＯＰ）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、対象はびまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。
【０５９１】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシンおよび／またはリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシンおよびリツキシマブ（ＥＰＯＣＨ−Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を用量を調整したＥＰＯＣＨ−Ｒ（ＤＡ−ＥＰＯＣＨ−Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、対象はＢ細胞リンパ腫、例えばＭｙｃ再構成中悪性度Ｂ細胞リンパ腫を有する。
【０５９２】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をブレンツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ブレンツキシマブは、抗ＣＤ３０抗体とモノメチルアウリスタチンＥの抗体薬物コンジュゲートである。諸実施形態では、対象はホジキンリンパ腫（ＨＬ）、例えば、再発性または難治性ＨＬを有する。諸実施形態では、対象はＣＤ３０＋ＨＬを有する。諸実施形態では、対象は自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けたことがある。
【０５９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をＣＤ２０阻害剤、例えば抗ＣＤ２０抗体（例えば、抗ＣＤ２０単一特異性または二重特異性抗体）またはその断片と組み合わせて対象に投与する。
【０５９４】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスなどのラパログと組み合わせて対象に投与する。一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤を細胞のアフェレーシスの前に投与することができる。一実施形態では、対象はＣＬＬを有する。
【０５９５】
一実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、キナーゼ阻害剤と組み合わせて使用することができる。一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば、本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤、例えば、パルボシクリブまたはＰＤ０３３２９９１などのＣＤ４ ／ ６阻害剤である。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はＢＴＫ阻害剤、例えば本明細書に記載されるＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブなどである。いくつかの実施形態では、イブルチニブを約３００〜６００ｍｇ／日（例えば、約３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０または５５０〜６００ｍｇ／日、例えば約４２０ｍｇ／日または約５６０ｍｇ／日）の用量で、例えば経口的に投与する。諸実施形態では、イブルチニブを約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇまたは５６０ｍｇ）の用量で、一定期間にわたって連日、例えば、２１日のサイクルにわたって連日または２８日のサイクルにわたって連日投与する。一実施形態では、イブルチニブを１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクルまたはそれ以上投与する。
【０５９６】
一実施形態では、キナーゼ阻害剤はｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシンアナログ、ＯＳＩ−０２７などである。一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、本明細書に記載されるＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ二重阻害剤、例えばＰＦ−０４６９５１０２などである。
【０５９７】
一実施形態では、キナーゼ阻害剤はＳｒｃキナーゼ阻害剤である。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はダサチニブである。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にＳｒｃキナーゼ阻害剤を投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にダサチニブを投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ダサチニブを少なくとも１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日または２１０ｍｇ／日の用量で経口投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。
【０５９８】
カルシウム依存性ホスファターゼであるカルシニューリン（シクロスポリンおよびＦＫ５０６）阻害する薬物または増殖因子誘導性シグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬物（ラパマイシン）（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ６６：８０７−８１５，１９９１；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ．７３：３１６−３２１，１９９１；Ｂｉｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３−７７３，１９９３）も使用することができる。さらなる態様では、本発明の細胞組成物を骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤を用いるＴ細胞除去療法、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドおよび／またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰ  ＡＴＨなどの抗体とともに（例えば、前、同時または後に）患者に投与し得る。一態様では、本発明の細胞組成物をＣＤ２０と反応する薬剤、例えばＲｉｔｕｘａｎなどのＢ細胞除去療法の後に投与する。例えば、一実施形態では、対象に高用量化学療法による標準治療の後、末梢血幹細胞移植を実施し得る。ある特定の実施形態では、移植後、対象に増幅した本発明の免疫細胞の注入を実施する。さらなる実施形態では、増幅した細胞を外科手術の前または後に投与する。
【０５９９】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を自家幹細胞移植、同種幹細胞移植、自家骨髄移植または同種骨髄移植と組み合わせて対象に投与する。
【０６００】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を微小移植またはＨＬＡミスマッチ同種細胞療法（Ｇｕｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１２  Ｎｏｖ  ２０；３０（３３）：４０８４−９０）と組み合わせて対象に投与する。
【０６０１】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。
【０６０２】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）のモジュレーターと組み合わせて対象に投与する。
【０６０３】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をＢｒｄ４またはＢＥＴ（ブロモドメインおよび特異的末端モチーフ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。ＣＡＲ発現細胞と組み合わせて投与することができる例示的Ｂｒｄ４阻害剤としては、特に限定されないが、ＪＱ１、ＭＳ４１７、ＯＴＸＯ１５、ＬＹ３０３５１１および米国特許出願公開第２０１４０２５６７０６（Ａ１）号に記載されているＢｒｄ４阻害剤ならびにその任意のアナログが挙げられる。
【０６０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチドまたはＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔｉＬ−１５（Ａｄｍｕｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、ｈｅｔ−ＩＬ−１５を皮下投与する。
【０６０５】
一実施形態では、対象にＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用を軽減または改善する薬剤を投与することができる。ＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用としては、特に限定されないが、ＣＲＳおよびマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）が挙げられる。
【０６０６】
したがって、本明細書に記載される方法は、対象に本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与することと、ＣＡＲ発現細胞による治療に起因する可溶性因子のレベル上昇を管理するため１つまたは複数の薬剤をさらに投与することとを含み得る。一実施形態では、対象で上昇する可溶性因子は、ＩＦＮ−ｙ、ＴＮＦａ、ＩＬ−２およびＩＬ−６のうちの１つまたは複数のものである。一実施形態では、対象で上昇する可溶性因子は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびフラクタルカイン（ｆｒａｋｔａｌｋｉｎｅ）のうちの１つまたは複数のものである。したがって、この副作用を治療するために投与する薬剤は、これらの可溶性因子のうちの１つまたは複数のものを中和する薬剤であり得る。一実施形態では、これらの可溶型のうちの１つまたは複数のものを中和する薬剤は、抗体またはその抗原結合断片である。このような薬剤の例としては、特に限定されないが、ステロイド（例えば、副腎皮質ステロイド）、Ｓｒｃ阻害剤（例えば、ダサチニブ）、ＴＮＦａ阻害剤およびＩＬ−６阻害剤が挙げられる。ＴＮＦａ阻害剤の例には、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴルおよびゴリムマブなどの抗ＴＮＦａ抗体分子がある。ＴＮＦａ阻害剤のまた別の例には、エンタネルセプト（ｅｎｔａｎｅｒｃｅｐｔ）などの融合タンパク質がある。ＩＬ−６阻害剤の例には、抗ＩＬ−６抗体分子または抗ＩＬ−６受容体抗体分子、例えばトシリズマブ（ｔｏｅ）、サリルマブ、エルシリモマブ、ＣＮＴＯ３２８、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ−９４５４２９、ＣＮＴＯ１３６、ＣＰＳＩ−２３６４、ＣＤＰ６０３８、ＶＸ３０、ＡＲＧＸ−１０９、ＦＥ３０１およびＦＭ１０１がある。一実施形態では、抗ＩＬ−６受容体抗体分子はトシリズマブである。一実施形態では、ＩＬ−６阻害剤は、ＩＬ６Ｒおよびヒト血清アルブミンと結合するラクダ二重特異性抗体（例えば、ＩＬ６Ｒ−３０４−Ａｌｂ８）である。ＩＬ−１Ｒベースの阻害剤の例にはアナキンラがある。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞による副作用を治療するために投与する薬剤は、Ｓｒｃ阻害剤（例えば、ダサチニブ）である。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞による副作用を治療するために投与する薬剤は、Ｓｒｃ阻害剤ダサチニブである。諸実施形態では、ダサチニブを約１０ｍｇ／日〜２４０ｍｇ／日（例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１１０ｍｇ／日、１２０ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、２１０ｍｇ／日、２４０ｍｇ／日または３００ｍｇ／日）の用量で投与する。
【０６０７】
一実施形態では、対象にＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を投与することができる。例えば、一実施形態では、阻害分子を阻害する薬剤を投与することができる。阻害分子、例えばプログラム死１（ＰＤ−１）は、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下させ得る。阻害分子の例としては、ＰＤ−１、ＰＤＬｌ、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４およびＴＧＦＲベータが挙げられる。例えばＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害によりＣＡＲ発現細胞の性能が最大限に高まり得る。諸実施形態では、阻害核酸、例えば阻害核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばＳＩＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）または亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、例えば本明細書に記載されるものを用いて、ＣＡＲ発現細胞での阻害分子の発現を阻害することができる。一実施形態では、阻害剤はｓｈＲＮＡである。一実施形態では、阻害分子はＣＡＲ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態では、阻害分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子がＣＡＲの構成要素、例えば全構成要素をコードする核酸と連結している。一実施形態では、阻害シグナルの阻害剤は、例えば、阻害分子と結合する抗体または抗体断片であり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ４と結合する抗体または抗体断片（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０およびＭＤＸ−１０１とも呼ばれ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）として市販されている；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社；トレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６として知られ、Ｐｆｉｚｅｒ社から入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体））であり得る。一実施形態では、薬剤は、ＴＩＭ３と結合する抗体または抗体断片である。一実施形態では、薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ（ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）と結合する抗体または抗体断片である。一実施形態では、薬剤はＬＡＧ３と結合する抗体または抗体断片である。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の抗体、抗体断片およびその他の阻害剤が当該技術分野で入手可能であり、本明細書に記載される本発明のＣＡＲと併用し得る。ペムブロリズマブはＰＤ−１と結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤はＣＥＡＣＡＭ阻害剤（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５阻害剤）である。
【０６０８】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの活性を増強する薬剤は、ＣＡＲが対象とする標的抗原の発現を増大させるまた別の薬剤である。本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与する対象に投与することができる薬剤としては、亜ヒ酸、ＡＴＲＡ（全トランスレチノイン酸）、化合物２７、４０、４９（Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ；２０１６年１０月１２日にオンラインで先行出版）、ＩＤＨ２阻害剤（例えば、ＡＧ−２２１）またはその組み合わせが挙げられる。一実施形態では、薬剤をＣＡＲ発現細胞の投与前に、投与と同時に、または投与後に投与する。好ましい実施形態では、これらの薬剤をＣＡＲ発現細胞の投与前に投与する。好ましい実施形態では、上記の薬剤とともに投与するＣＡＲ発現細胞はＢ細胞抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ２２など）を標的とする。
【０６０９】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの活性を増強する薬剤は可溶性受容体である。本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与する対象に投与することができる可溶性受容体としては、ｓＨＶＥＭ、ｓＨＶＥＭ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ融合タンパク質またはその組み合わせが挙げられる。可溶性受容体は、１日１回または１日２回以上、例えば、１日２回、１日３回または１日４回投与することができる。可溶性受容体は２日間以上投与することができ、例えば、可溶性受容体を２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間または４週間投与する。例えば、可溶性受容体を１日１回、７日間投与する。
【０６１０】
一実施形態では、正常組織に対するＣＡＲ発現細胞の毒性から保護する薬剤を対象に投与することができる。ＣＡＲ-Ｔ細胞療法の限界の１つとして、正常組織に対する毒性が考えられる。例えば、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲは、同じくＣＤ１９抗原を発現する正常Ｂ細胞の長期間にわたる枯渇を引き起こす可能性がある。一実施形態では、ＣＤ１９  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ１９のノックアウトまたは変異と組み合わせることができる。一実施形態では、内因性ＣＤ１９のノックアウトまたは変異は、ＣＲＩＰＳ／Ｃａｓ９、Ｔａｌｏｎまたは当該技術分野で公知の他の適切な遺伝子編集方法を用いて達成される。現在臨床使用されているＣＤ１９  ＣＡＲ-Ｔ細胞が結合するＣＤ１９のエピトープは、エキソン２〜４にマッピングされている。一実施形態では、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、Ｚｎフィンガーヌクレアーゼ、Ｔａｌｏｎまたは当該技術分野で公知の他の方法を用いて、自家または同種造血幹細胞のエキソン２（またはＣＡＲ-Ｔ細胞が標的とするＣＤ１９により認識される他の適切なエキソン／領域）にミスセンスまたはナンセンス変異を生じさせる。一実施形態では、対象の疾患を抑えるＣＤ１９ＣＡＲ-Ｔ細胞注入およびＣＤ１９が枯渇／変異した造血幹細胞を用いる自家または同種幹細胞移植を実施する。改変幹細胞から生じるＢ細胞がＣＤ１９−ＣＡＲ-Ｔ細胞の標的になることはないため、患者はＣＤ１９  ＣＡＲ-Ｔ細胞による副作用としてよくみられるＢ細胞無形成を回避できる。別の実施形態では、ＭＰＬ  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＭＰＬのノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ１２３  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ１２３のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ３３  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ３３のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ２０  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ２０のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ２２  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ２２のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＳ１  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＳ１のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＢＣＭＡのノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ４５  ＣＡＲ-Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞または免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の内因性ＣＤ４５のノックアウトまたは変異と組み合わせる。基本的に、ＣＡＲが標的とする抗原が正常造血幹細胞またはその子孫の１つにも発現する場合であれば、正常組織に対するＣＡＲ-Ｔ細胞の毒性を軽減するのに同様の方法を用いることが可能である。
【０６１１】
別の実施形態では、ＣＡＲ-Ｔ細胞療法は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）または幹細胞において、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲによって標的とされる内因性遺伝子またはタンパク質のノックアウトまたは突然変異と組み合わされる。免疫エフェクター細胞に。例えば、ＣＤ４５を標的とするＣＡＲ-Ｔ細胞は、ＣＤ４５があらゆる造血細胞に発現するため、近接するＣＤ４５−ＣＡＲＴ細胞によって死滅させられ、生じにくくなる。しかし、Ｔ細胞のＣＤ４５  ＣＡＲ発現を、ＣＤ４５  ＣＡＲを発現するＴ細胞の内因性ＣＤ４５のノックダウンまたは欠失と組み合わせれば、このような細胞を生じさせることができる。基本的に、免疫エフェクター細胞に発現する他の抗原を標的とするＣＡＲを生じさせるのに同様の方法を用いることができる。例示的なこのような抗原としては、特に限定されないが、ＣＤ５、ＴＣＲα、ＴＣＲβ１、ＴＣＲβ２、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、プレＴＣＲαおよびＮＫ細胞上に発現する様々な受容体が挙げられる。
【０６１２】
本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与する対象に投与することができるサイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＬＩＧＨＴおよびＩＬ−２１またはその組み合わせが挙げられる。好ましい実施形態では、投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５もしくはＩＬ−２１、ＩＬ１２Ｆまたはその組み合わせである。サイトカインは、１日１回または１日２回以上、例えば、１日２回、１日３回または１日４回投与することができる。サイトカインは２日間以上投与することができ、例えば、サイトカインを２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間または４週間投与する。例えば、サイトカインを１日１回、７日間投与する。ＣＡＲ発現細胞療法に対する応答が最適未満の対象にサイトカインを投与することにより、ＣＡＲ発現細胞の効果または抗がん活性が改善される。好ましい実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後に投与するサイトカインはＩＬ−７である。
【０６１３】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、Ｂｒｄ４阻害剤またはＴｏｌａｎｉ，Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２９；３３（２２）：２９２８−３７．ＰＭＩＤ：２３７９２４４８（Ｔｏｌａｎｉ，Ｇｏｐａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｐｕｎｊ，ＭａｔｔａおよびＣｈａｕｄｈａｒｙ，２０１４）に記載されているＢＲＤ４を標的とするＳＩＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡである。
【０６１４】
本明細書には、キメラ抗原受容体、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ベクター、ウイルスならびに／あるいは本明細書に記載される遺伝子操作細胞および／または化学物質のうちのいずれか１つあるいは複数のものと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物も提供される。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および保存剤を含み得る。本発明の組成物は、一態様では静脈内投与用に製剤化されている。
【０６１５】
本発明の医薬組成物は、治療する疾患に適した方法で投与し得る。投与の量および頻度は、患者の状態ならびに患者の疾患の種類および重症度などの因子によって決まるが、臨床試験により適切な用量が決定され得る。
【０６１６】
「治療有効量」が示される場合、投与するべき本発明の組成物の正確な量は、医師が患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の範囲および状態の個人差を考慮に入れて決定するものであり得る。一般に、本明細書に記載される遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物は、範囲内のあらゆる整数値を含めた１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの場合には１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の用量で投与され得ると言える。Ｔ細胞組成物は、これらの用量で複数回投与してもよい。細胞は、免疫療法で一般に知られている注入技術を用いて投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０６１７】
いくつかの実施形態では、対象に活性化させた遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与し、次いで血液を再び採取し（またはアフェレーシスを実施し）、その遺伝子改変細胞を活性化させ、その活性化し増幅した遺伝子改変細胞を患者に再注入するのが望ましいものであり得る。この工程は、数週間毎に複数回実施することができる。ある特定の態様では、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採取物から免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化させることができる。ある特定の態様では、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃまたは１００ｃｃの採血物から免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化させる。
【０６１８】
「薬学的に許容される補形剤」は、医薬組成物の調製に有用であり、一般に安全で無毒性で望ましい補形剤を意味し、ヒトの製薬学的用途のみならず獣医学的使用にも許容される補形剤が含まれる。このような補形剤は、固体、液体、半固体であり得、エアゾール組成物の場合、ガス状であり得る。
【０６１９】
様々な実施形態では、本発明による医薬組成物を任意の投与経路による送達に合わせて製剤化し得る。「投与経路」は、特に限定されないが、エアゾール、経鼻、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、経粘膜、経皮、非経口、埋込み型ポンプ、持続注入、局所適用、カプセルおよび／または注射を含めた当該技術分野で公知の任意の投与経路を指し得る。
【０６２０】
本発明による医薬組成物は、任意の薬学的に許容される担体も含有し得る。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、目的の化合物をある組織、器官または身体の一部から別の組織、器官または身体の一部に運搬または輸送するのに関与する薬学的に許容される材料、組成物または賦形剤を指す。例えば、担体は、液体または固体の充填剤、希釈剤、補形剤、溶媒もしくは封入材料またはその組み合わせであり得る。担体の各成分は、それが製剤の他の成分と適合性があるものでなければならないという点で、「薬学的に許容される」ものでなければならない。また、それが接触し得る任意の組織または器官と接触させて使用するのに適したものでもなければならない、つまり、その治療利益を過剰に上回る中毒、刺激、アレルギー反応、免疫原性またはその他の合併症のリスクを伴うものであってはならない。
【０６２１】
本発明による医薬組成物は、経口投与用にカプセル化する、錠剤化する、またはエマルションもしくはシロップに製剤化することもできる。組成物を増強もしくは安定化させる、または組成物を製剤化しやすくするため、薬学的に許容される固体または液体の担体を添加し得る。液体担体としては、シロップ、ラッカセイ油、オリーブ油、グリセリン、生理食塩水、アルコールおよび水が挙げられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム、二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天またはゼラチンが挙げられる。担体としては、徐放材料、例えば単独で、またはロウとともに用いるモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなども挙げられる。
【０６２２】
医薬製剤は、錠剤形態には、必要に応じて粉砕、混合、造粒および圧縮；または硬ゼラチンカプセル形態には粉砕、混合および充填を含めた従来の製薬技術により作製する。液体担体を使用する場合、製剤は、シロップ剤、エリキシル剤、エマルションまたは水性もしくは非水性懸濁剤の形態になる。このような液体製剤は、経口で直接、または軟ゼラチンカプセルに充填して投与し得る。
【０６２３】
本発明による医薬組成物は治療有効量で送達し得る。正確な治療有効量は、所与の対象に治療効果の点で最も効果的な結果をもたらす組成物の量である。この量は、特に限定されないが、治療用化合物の特徴（活性、薬物動態、薬力学およびバイオアベイラビリティを含む）、対象の生理的状態（年齢、性別、疾患の種類および段階、全般的健康状態、所与用量に対する応答性ならびに投薬の種類を含む）、製剤中の薬学的に許容される１つまたは複数の担体の性質ならびに投与経路を含めた様々な因子によって異なり得る。臨床分野および薬理学分野の当業者であれば、慣例的な実験により、例えば、化合物投与に対する対象の応答をモニターし、それに応じて用量を調整することにより治療有効量を決定することができるであろう。さらなる指針については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，ＵＳＡ）（２０００）を参照されたい。
【０６２４】
対象組成物の投与は、エアゾール吸入、注射、輸液、埋植または移植によるものを含めた任意の好都合な方法で実施し得る。本明細書に記載される組成物は、経動脈的に、患者の皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、または腹腔内に投与し得る。一態様では、本発明のＴ細胞組成物を真皮内または皮下注射により患者に投与する。一態様では、本発明のＴ細胞組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節または感染部位内に直接注射し得る。
【０６２５】
特定の例示的態様では、対象に白血球除去を実施してよく、ここでは、白血球を採取し、ex vivoで濃縮または枯渇させて目的の細胞、例えばＴ細胞を選択および／または単離する。これらのＴ細胞分離株は、当技術分野で知られている方法によって拡大され得、本開示の1つまたは複数のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ構築物が導入され得、それにより本開示のＣＡＲ-Ｔ細胞を作製し得るように処理され得る。次いで、必要とする対象に高用量化学療法による標準治療、次いで末梢血幹細胞移植を実施し得る。ある特定の態様では、移植後または移植と同時に、対象に増幅した本発明のＣＡＲ-Ｔ細胞の注入を実施する。さらなる態様では、増幅した細胞を外科手術の前または後に投与する。
【０６２６】
一実施形態では、例えばin vitro転写を用いて、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）内に導入し、対象（例えば、ヒト）に本発明のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の最初の投与とそれに続く１回または複数回の本発明のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を実施し、ここでは、１回または複数回の投与を前回の投与後１５日未満、例えば投与から１４日後、１３日後、１２日後、１１日後、１０日後、９日後、８日後、７日後、６日後、５日後、４日後、３日後または２日後に実施する。一実施形態では、１週間当たり２回以上の本発明のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を対象（例えば、ヒト）に実施し、例えば、１週間当たり２回、３回または４回の本発明のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を実施する。一実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に１週間当たり２回以上のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与（例えば、１週間当たり２回、３回または４回の投与）（本明細書ではサイクルとも呼ぶ）を実施し、次の１週間はＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を一切実施せず、その後、対象に追加で１回または複数回のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与（例えば、１週間当たり２回以上のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与）を実施する。別の実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に２サイクル以上のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与し、各サイクルの間の時間は１０日未満、９日未満、８日未満、７日未満、６日未満、５日未満、４日未満または３日未満である。一実施形態では、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を１週間当たり３回、隔日で投与する。一実施形態では、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を少なくとも２週間、２週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間またはそれ以上投与する。
【０６２７】
一過性に発現するＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）（特にマウスｓｃＦｖを有するＣＡＲ-Ｔ）を用いて治療を実施する患者に発生し得る問題として、複数回治療した後のアナフィラキシーが考えられる。 
【０６２８】
この理論に束縛されるものではないが、そのようなアナフィラキシー応答は、体液性抗ＣＡＲ応答、すなわち、抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体を発現する患者により引き起こされるのではないかと考えられる。抗原への曝露に１０〜１４日間の休止があると患者の抗体産生細胞に（アナフィラキシーを引き起こさない）ＩｇＧアイソタイプからＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチが起こるものと考えられる。
【０６２９】
患者にＣＡＲ療法に対するアナフィラキシー応答が発現するリスクまたはＣＡＲ療法の過程でＩｇＥ型ＣＡＲ抗体応答が生じるリスクが高い場合、ＣＡＲ療法の前に、またはＣＡＲ療法の過程でオマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ）を投与することができる。
【０６３０】
一過性ＣＡＲ療法の過程で患者に抗ＣＡＲ抗体応答（ＲＮＡ形質導入により生じるものなど）が生じるリスクが高い場合、ＣＡＲＴ注入の休止が１０〜１４日より長く続かないようにするべきである。
【０６３１】
本発明を実施するキットも提供される。例えば、対象のがんを治療するキットまたは本明細書に開示されるＣＡＲまたは次世代ＣＡＲを１つまたは複数発現するＣＡＲ-Ｔ細胞を作製するキット。キットは、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲをコードする核酸分子もしくはポリペプチド分子またはＣＡＲまたは次世代ＣＡＲをコードするベクターを、免疫エフェクター細胞内に核酸を導入する方法とともに含み得る。キットは、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスと、ウイルス形質導入を促進するポリブレンなどの化学物質とを含み得る。キットは、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲを発現させるＴ細胞を単離するための構成要素を含み得る。あるいは、キットは、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）または幹細胞を含み得る。キットには本開示のＣＡＲが２つ以上含まれ得る。キットは、容器と、容器上にあるか、または容器に付随するラベルまたは添付文書とを含み得る。
【０６３２】
適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されたものであり得る。容器は、典型的には、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲを発現する核酸分子、ウイルス、ベクター、Ｔ細胞のうちの1つまたは複数を含む組成物を保持する。いくつかの実施形態では、容器は無菌接続口を有し得る（例えば、容器は、皮下注射針を突き通すことが可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書には、組成物が特定の状態を治療するために使用されることが示されている。ラベルまたは添付文書は、典型的には、例えば、腫瘍を治療または予防する方法、または製造する方法において、開示された核酸分子、ＣＡＲまたは次世代ＣＡＲまたはＣＡＲまたは次世代ＣＡＲを発現するＴ細胞の使用に関する指示をさらに含む。ＣＡＲ-Ｔ細胞。添付文書には通常、市販の治療薬のパッケージに通例記載され、適応症、用法、用量、投与、禁忌に関する情報および／またはそのような治療薬の使用に関する注意書きを含む指示が記載されている。指示資料は、電子形態（コンピュータディスケットまたはコンパクトディスクなど）の書面であってもよく、また、視覚的なもの（動画ファイルなど）であってもよい。キットは、キットが設計された特定の用途を容易にするためのほかの構成要素も含み得る。したがって、例えば、キットは、Ｔ細胞上のＣＡＲまたは次世代ＣＡＲの発現を測定するための、またはＣＡＲを発現するＴ細胞の数またはパーセンテージを決定するための、またはＣＡＲ-Ｔ細胞の機能を決定するための手段をさらに含み得る。キットは、特定の方法の実施に慣例的に用いられる緩衝剤およびその他の試薬をさらに含み得る。このようなキットおよび適切な内容物は当業者に周知である。
【０６３３】
ＣＡＲ活性を測定するのに動物モデルを使用してもよい。例えば、本明細書記載のヒトがん関連抗原特異的ＣＡＲ＋Ｔ細胞を用いる異種移植片モデルが、免疫不全マウスにおける原発性ヒト前Ｂ−ＡＬＬを治療するのに使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（Ｓ）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。
【０６３４】
用量依存性のＣＡＲ治療応答が評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（Ｓ）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。
【０６３５】
サイトカインの増殖および生産の評価は、以前に、例えば、Ｍｉｌｏｎｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（Ｓ）：１４５３−１４６４（２００９）に記載されている。
【０６３６】
細胞毒性は、マタドールアッセイによって、または標準的な５１Ｃｒ放出アッセイを使用して評価することができる。 例えば、Milone et al。、Molecular Therapy 17（8）：1453-1464（2009）を参照されたい。
【０６３７】
撮像技術が、腫瘍罹患動物モデルで、zＳＩＲの特定の運搬および増殖の評価に使用できる。斯かるアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２２：１５７５−１５８６（２０１１）に記載されている。
【０６３８】
本明細書の実施例のセクション並びに当業界で周知のアッセイを含む他のアッセイも、本明細書記載のＣＡＲの評価に使用できる。
【実施例】
【０６３９】
ＣＡＲの活性は、本明細書記載のいくつかのin vitroおよびin vivoアッセイによって試験可能である。適切なＣＡＲの作成、選択、および使用に関する一般スキームが以下に提供される。
【０６４０】
ＣＡＲ 生成のための標的の同定
ＣＡＲを設計するための適切な標的が、文献または遺伝子発現データベースの検索に基づいて選択される。一般的に、ＣＡＲの適切な標的は、通常の健康な細胞と比べて、病気を引き起こす細胞または病気関連細胞でより多く発現される。
【０６４１】
ＣＡＲの作成
ＣＡＲの候補標的抗原が特定されたら、ＣＡＲの抗原結合ドメインが文献で入手可能な情報に基づいて設計される。一般的に、ＳＩＲの抗原結合ドメインは、通常、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、またはラクダ科動物のｖＨＨドメインに基づいている。抗体の重鎖（ｖＨ）および軽鎖（ｖＬ）の可変鎖、ラクダ科動物ｖＨＨドメイン、並びに種々の受容体およびリガンドの配列は、配列決定により、あるいは公的に利用可能なデータベースにより入手可能であり、異なる実施例で示されるように、本明細書記載の方法を用いて、ＣＡＲの合成に使用可能である。ＳＩＲの抗原結合ドメインを含む配列は、公的に利用可能なソフトウェア（例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒまたはＩＤＴ）および商用ベンダー（例えば、ＩＤＴ）を用いて、コドン最適化され、人工的に合成される。その結果得られる断片はＰＣＲ増幅され、標準の分子生物学の技術を用いて、異なるＣＡＲバックボーン構造を有する異なるベクターでクローン化される。一般的に、ＣＡＲ構築物は、通常、レンチウイルスベクターでクローン化される。ＣＡＲ構築物の配列は、自動配列決定を用いて確認される。異なるＣＡＲバックボーンは、WO 2016/187349 A1、PCT/US2016/058305、US62/429,597、PCT/US17/64379、およびPCT/US2017/024843に記載されており、これらは参照により完全に本明細書に組み込まれる。一般に、ＣＡＲ構築物は通常レンチウイルスベクターにクローン化される。構築物の配列は、自動配列決定を使用して確認される。
【０６４２】
zＳＩＲをコードする別の例示的な構築物は、pLenti-EF1α-ＣＤ8SP-BCMA-Am06-HL-vL-IgCL-Bam-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opＴＦＰ2A-Spe-SP-Bst-BCMA-Am06-HL-vH-IgG1-CH1-KPN-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opt2-F-F2A-Xba-PAＣＤWPRE（配列番号154）である 。この構築物は、抗原結合ドメイン断片（例えば、vLおよびvHドメイン）を切り出し、他の抗原を標的とする抗原結合ドメイン断片で置き換えることができるように、多くの便利な制限部位を有する。このベクターは、ＣＤ8シグナルペプチド（ＣＤ8SP）の上流にNhe Iサイトを有する。これは、Xho Iサイトと一緒に使用して、5 'シグナルペプチドを運ぶ新しいvL断片にクローニングすることもできる。BstBIおよびMluIサイトを使用して、vH断片を置き換えることができる。XhoIおよびSpeIサイトを使用して、IgCL- [IgCL-Bam-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opＴＦＰ2Aをエンコードするモジュールを別のモジュールに置き換えることができる。同様に、MluIおよびXbaサイトを使用して、IgG1-CH1-KPN-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opt2-F-F2Aを含むモジュールを置き換えることができる。PACをエンコードするアクセサリーモジュールは、Xba I（またはNde I）およびSalI制限サイトを使用して置き換えることができる。したがって、当技術分野の通常のスキルを有する人は、このベクターおよび抗原結合ドメインの配列（例えば、抗体のｖＬおよびｖＨドメイン）を使用して、他の任意の新しい抗原を標的とするｚＳＩＲを生成することができる。
【０６４３】
分泌型抗原-NLuc融合タンパク質および抗原結合ドメイン（ABD）-NLuc融合タンパク質の生成（任意のステップ）。
【０６４４】
分泌型抗原-NLuc融合タンパク質および抗原結合ドメイン（ABD）-NLuc融合タンパク質は、PCT/US2017/025602に記載されているように生成および使用され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。高レベルのＳＩＲ標的を発現する（従ってＳＩＲの活性を試験するのに使用可能な）細胞株を特定するため、ＡＢＤ−ＮＬｕｃ融合タンパク質への結合に関して、細胞株のパネルが試験される。表Ａは、本開示のＣＡＲの活性をアッセイするのに使用可能な異なる抗原標的を発現する細胞株の例示的リストを提供する。ＣＡＲの標的を発現する細胞株は、代替方法、例えば、文献検索、商業的に入手可能な抗体による免疫染色、または公的に利用可能な遺伝子発現データベースを用いて特定してもよい。
【０６４５】
ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞は、機能的ＣＡＲを同定するために以下のアッセイで試験される。
【０６４６】
(A) Topanga Assay （Ａ）ＮＬｕｃ結合アッセイ
【０６４７】
対照ベクターおよびＳＩＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰまたはＴ細胞が（上述のような）標的抗原ＮＬｕｃ融合タンパク質で染色され、標的抗原に結合する能力がＮＬｕｃ活性を測定することにより分析される。例えば、ＣＤ１９を標的とするＦＭＣ６３ベースＳＩＲを発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞は、Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞または親Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞を発現する対照ベクターと比較して、ＣＤ１９−ＮＬｕｃ融合タンパク質への結合が増大している。
【０６４８】
Ｂ）ＮＦＡＴプロモーター駆動ＧＦＰ発現の誘導
上述の標的抗原を発現する細胞株と一緒に４〜２４時間共培養された対照ベクターおよびＳＩＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰおよび標的抗原に結合する能力が、フローサイトメトリーを用いてＧＦＰ発現の誘導を測定することにより分析される。細胞の上澄み液が回収され、サイトカイン（例えば、ＩＬ２）の誘導が分析される。
【０６４９】
(Ｃ）サイトカイン生成のアッセイ
対照ベクターおよびＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰまたはＴ細胞が、標的細胞株と一緒に４〜９６時間共培養され、上澄み液が、ＥＬＩＳＡを用いて、サイトカイン（例えば、ＩＬ２、ＩＦＮγ、ＴＮＦαなど）発現の誘導に関して検査される。
【０６５０】
(D) in vitroおよびin vivoにおける細胞毒活性のアッセイ
非感染Ｔ細胞、または対照ベクターまたはＣＡＲを発現する細胞は、ルシフェラーゼ（ＧＬｕｃ、ＮＬｕｃ、Ｔｕｒｂｏｌｕｃ２６など）の非分泌形態を発現する標的細胞株と４〜９６時間共培養され、細胞溶解の誘導が、ＰＣＴ／ＵＳ１７／５２３４４記載の方法でルシフェラーゼ活性を測定することにより検査される。細胞毒活性の代替測定方法（例えば、５１Ｃｒ放出アッセイまたはＬＤＨ放出アッセイ）も同様に使用できる。ＣＡＲを発現するＴ細胞の活性も、免疫不全マウスにおける適切な異種移植片を用いてin vivoで分析できる。
【０６５１】
上述の方法に基づいて、当業者は、任意の抗原に対して適切に機能するＣＡＲまたはＣＡＲのプールを容易に設計、構築、試験、および選択できる。ＣＡＲまたはＣＡＲのプールは、種々の病状の予防及び治療のため、ヒト臨床試験及び臨床使用に用いることができる。表１１は、本開示のＣＡＲを用いて治療可能なヒトの病状の例示的一覧表を提供する。
【０６５２】
限定されないが、病気を引き起こす細胞および病気関連細胞における標的抗原の罹患率および発現レベル、疫病負荷、および病気の進行率を含む種々の要因に基づいて、異なるＣＡＲまたはＣＡＲのサブセットを異なる病状に最適に適合させることが可能である。効用、毒性プロファイル、および患者の病状次第では、異なるＣＡＲを異なる患者の単一の病状に最適に適合させてもよい。本開示は、種々の養子免疫反応生成における重大な技術的障害および物流面での障害への解決策を提供する。
【０６５３】
遺伝子再配列によって通常のＴＣＲ多様性が生じる。胸腺における厳密な陽性および陰性の選択プロセスにより、低親和性範囲内で自己ププチド／ＭＨＣの認識に限定されるαβＴＣＲを発現するＴ細胞だけが、確実に周縁部に存在可能となる。従って、胸腺の環境により、自己規制的であって自己反応性ではないαβＴ細胞のプールの生成が可能となる。
【０６５４】
異なる抗原結合ドメインから広範囲なＣＡＲプールを生成するのは、複数の抗原結合ドメインの生成および試験における技術的障害および財政的障害により制限される。更に重要なことは、抗原結合ドメイン（例えば、抗原のｖＬおよびｖＨ断片）の各々は他の抗原に結合し、標的外の毒性を引き起こす可能性を有しているので、複数の抗原結合ドメインだけに基づくＣＡＲの広範囲なプールは、毒性のリスクを増大させる可能性を秘めている。従って、斯かるプールの潜在的多様性は、標的外の毒性を減少させるように限定されるべきである。本開示は、単一のまたは僅かな数の抗原結合ドメインをＴＣＲ鎖の異なる変異体へ結合することによりＣＡＲの種々のプールを生成しているので、斯かる問題を解決している。ＣＡＲプールの多様性は、異なるリンカーの使用により更に増やすことができる。プールを発現するＴ細胞の多様性は、異なるアクセサリーモジュールおよび本開示記載の治療コントロールの使用により更に増やすことができる。
【０６５５】
ＣＡＲの多様なプールは、上記抗原を発現する病気を引き起こす細胞または病気関連細胞に対する様々な免疫応答を提供するのに使用できる。あるいは、ＣＡＲの多様なプールは、当業界の技術を用いて任意にＤＮＡバーコーディングを行い（配列番号123-128）、後に、それを用いて、最適な生物および臨床特性を有する単一のＣＡＲまたはＣＡＲのサブグループを選択してもよい。斯かる特性には、限定されないが、in vitro生物アッセイ（例えば、細胞毒性、サイトカイン分泌、結合親和性、細胞表面発現、標的外効果、Ｔ細胞増殖、枯渇マーカーの発現、および末端分化など）、in vivoアッセイのパフォーマンス（例えば、生存率、腫瘍減少、Ｔ細胞持続性、Ｔ細胞増殖など）、および臨床経験（例えば、病気寛解、再発率、毒性など）が含まれる。開示のＣＡＲは、単独で、または当技術分野で知られている他の他の天然および合成免疫受容体と組み合わせて使用して、それらの標的抗原を発現する細胞によって引き起こされるまたは関連する様々な病状の予防および治療のための免疫エフェクター細胞の多様なプールを生成することができる。異なるシグナルペプチド、抗体結合ドメイン、リンカー、ＴＣＲ定常鎖、切断可能リンカー、および選択マーカー（例えば、ＰＡＣ、ＥＧＦＰ、ＣＮＢ２０など）は、商業用のサプライヤ（ＩＤＴ）を用いて単一断片または複数断片で人工的に合成され、適切な制限酵素を含むプライマーとのＰＣＲ反応でテンプレートとして使用された。増幅された断片を適切な制限酵素で消化し、標準的な分子生物学技術を使用してpLENTI-EF1α（配列番号129）、pLENTI-EF1α-DWPRE（配列番号130）、pCCLc-MNDU3-WPRE（配列番号12639）またはMSCV-Bgl2-AvrII-Bam-EcoR1-Xho-BstB1-Mlu-Sal-ClaI.I03（配列番号131）ベクターにクローニングした。ＣＡＲ断片は、pLENTI-EF1α（配列番号129）、pLENTI-EF1α-DWPRE（配列番号130）、pCCLc-MNDU3-WPRE（配列番号12639）ベクターのNheIサイトとSalIサイトの間にクローン化された。その結果得られる断片は、適切な制限酵素を含むプライマーとのＰＣＲ反応でテンプレートとして使用できる。増幅された断片は適切な制限酵素で消化され、次に、標準の分子生物学技術を用いて適切なベクター内でクローン化される。
【０６５６】
異なる細胞表面および細胞内抗原を標的にする異なる構築物の細胞毒性を測定するためのルシフェラーゼ（例えば、ＧＬｕｃまたはＮＬｕｃ）を発現するように改変された細胞株が表Ａに提供される。この実験で使用された細胞株、細胞株の標的抗原、およびその増殖培地が以下の表Ａに示される。細胞は５％のＣＯ２加湿型培養器で培養された。細胞株はＡＴＣＣ、ＮＩＨ、ＡＩＤＳ試薬プログラムから入手された、または実験室で入手可能であった。
表A:
2021525509.tif 000043
2021525509.tif 000044
2021525509.tif 000045
【０６５７】
ＮＦＡＴ依存ＧＦＰレポーター遺伝子で改変されたＪｕｒｋａＴ細胞株（クローンＥ６−１）は、ＵＣＳＦのＤｒ．  Ａｒｔｈｕｒ  Ｗｅｉｓｓからのギフトである。ＪｕｒｋａＴ細胞は、１０％ＰＢＳ、ペニシリン、およびストレプトマイシンで補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地で維持された。
【０６５８】
（レンチウイルスおよびレトロウイルスの作製）
レンチウイルスは、実質的に前出されたように（Ｍａｔｔａ，  Ｈｏｚａｙｅｖ，  Ｔｏｍａｒ，  Ｃｈｕｇｈ  ＆  Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，  ２００３）、２９３ＦＴ細胞におけるリン酸カルシウムベースのトランスフェクションによって作製された。２９３ＦＴ細胞は、１０％ＦＣＳ４ｍＭＬ−グルタミン、０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸、および１ｍＭ  ＭＥＭピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ（ＤＭＥＭ−１０と呼ばれる）で繁殖させた。 レンチウイルスを作製するため、トランスフェクションの日に約８０コンフルエントとなるように、１０ｃｍ組織培養プレートのＤＭＥＭ−１０培地１０ｍＬで、抗生物質なしに、２９３ＦＴを培養した。次の日、異なる遺伝子をコードするレンチウイルス発現プラスミド１０μｇ、ＰＳＰＡＸ２プラスミド７．５μｇ、およびＰＬＰ／ＶＳＶＧプラスミド２μｇを用いて、リン酸カルシウムトランスフェクション法により、細胞にトランスフェクションを行った。 いくつかの実験では、トランスフェクション混合物は、2.5〜5μgのHIV1 Ｖｉｆコード化プラスミド（配列番号11269）も含んでいた。トランスフェクションの約１５〜１６時間後、培地９ｍＬを除去し、新鮮な培地５ｍＬで置き換えた。トランスフェクションの約４８時間後、５ｍＬの上澄み液を回収（第一回収）し、５ｍＬの新鮮な培地で置き換えた。トランスフェクションの約７２時間後、全ての培地を回収した（第二回収、通常約６ｍＬ）。回収された上澄み液はプールされ、細胞残骸物および非接着性細胞を除去するため、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離を行った。無細胞上澄み液は、０．４５μｍのシリンジフィルターで濾過した。ある場合には、上澄み液は、４℃で２時間、１８５００ｒｐｍの超遠心で更に濃縮した。ウイルスペレットを最初の容積の１／１０のＸＶＩＶＯ培地に再懸濁した。ウイルスは新鮮なまま標的細胞を感染させるのに使用するか、あるいは−８０℃でアリコート中に冷凍保存された。
【０６５９】
Ｔ細胞およびＰＢＭＣの感染
ロサンジェルスの小児病院の血液銀行から、健康な匿名の成人ドナー由来のバッフィーコート細胞を取得し、それを使用して、フィコールハイパック比重遠心法により、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。ＰＢＭＣはそのまま使用された、あるいはＣＤ３磁気マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用い、製造元の指示に従ってＴ細胞を単離するのに使用された。ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞は、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、および１００ＩＵ組換えヒトＩＬ−２で補充されたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ）に再懸濁された。細胞は、５％のＣＯ２加湿型培養器で、３７℃で培養された。細胞は、レンチウイルスベクターを感染させる前、１日間、上記培地で活性化させた。一般的に、一次細胞（例えば、Ｔ細胞）は、朝、スピン感染（８μｇ／ｍＬのＰｏｌｙｂｒｅｎｅ（登録）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ９２６８）の存在下でＸＶＩＶＯ培地に再懸濁させた濃縮ウイルス３００μＬを用いて、３７℃で９０分間、１８００ｒｐｍで行われた）を用いて感染させた。培地は夕方取り替え、感染は更に２日間（合計３感染）繰り返えされた。３度目の感染後、細胞はペレット化され、１０ｎｇ／ｍLのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、および１００ＩＵ組換えヒトＩＬ−２を含む新鮮なＸＶＩＶＯ培地に再懸濁され、（指示されている場合は）それぞれの抗生物質で補充され、別の規定がない限り、選択用の細胞培養フラスコに配置された。細胞は、薬剤選択がない場合には上記培地で１０〜１５日間、薬剤選択が使用された場合には２０〜３０日間、培養された。ＥＧＦＰを発現するレンチウイルスで細胞を感染させる場合、細胞は薬剤選択なしに増殖させるか、あるいは流動選別により、ＥＧＦＰ発現細胞の濃縮が行われた。がん細胞株の感染に関しては、約５００，０００の細胞を２ｍＬの非濃縮ウイルス上澄み液（Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ（登録）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ９２６８）を含む合計容積３ｍＬ）で感染させた。翌朝、細胞をペレット化し、それぞれの抗生物質を含む培地に再懸濁し、それを選択用の細胞培養フラスコに配置した。
【０６６０】
レンチウイルスベクター作製に関して上述された内容と実質的に同様な手順を用いて、レトロウイルスベクターの作製が行われたが、この場合、２９３ＦＴ細胞は、一般的に、１０μｇのレトロウイルス構築物、４μｇのｐＫＡＴ、および２μｇのＶＳＶＧプラスミドを用いて、１０ｃｍ組織培養プレートのＤＭＥＭ−１０培地１０ｍＬでトランスフェクションが行われた。ウイルス回収および標的細胞の感染は、レンチウイルスベクターに関する上記内容と実質的に同じ内容で行われた。
【０６６１】
抗生物質および医薬品
ジギトニンはＳｉｇｍａ（カタログ番号Ｄ１４１）から購入され、１００ｍｇ／ｍＬの原液がＤＭＳＯ中で調製された。１ｍｇ／ｍＬの希釈原液がＰＢＳ中で調製された。細胞溶解に使用されたジギトニンの最終濃度は、別の規定がない限り、３０μｇ／ｍＬであった。
【０６６２】
臨床グレードのＣＡＲ-Ｔの製造と管理
臨床グレードのＣＡＲ-Ｔ製造の場合、ＣＡＲをコードするcGMPグレードのレンチウイルスは、商用ソース（Lentigen、Lonzaなど）を使用して生成される。Ｔ細胞は、白血球アフェレーシスを使用してドナー（自家または同種）から収集される。ＣＡＲ-Ｔ細胞は、CLINIMAC Prodigy（Miltenyi Biotech）自動閉鎖システムを使用して（Zhu F、Shah N et al、Cytotherapy、2017）、製造元の指示に従って製造されている。5から10の間の感染多重度（MOI）が使用される。コクーン（ロンザ）および手動オープンシステムなどの臨床グレードのＣＡＲ-Ｔ製造のための代替方法は、当技術分野で知られており、本発明の代替実施形態で使用することができる。ＣＡＲ-Ｔ細胞は、リンパ球枯渇化学療法の後に、約1x106 ＣＤ3ＣＡＲ-Ｔ細胞/kgから始まる漸増用量で患者に投与される。
【０６６３】
ＩＬ２ＥＬＩＳＡ
ヒトＩＬ２、 IFNγ、IL6、が、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）の ELISAキットを用いて、製造元の推薦に従い、２４〜９６時間特定の標的細胞株と共培養されたＣＡＲ 発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰエフェクター細胞またはＴ細胞の細胞培養上澄み液で測定された。
【０６６４】
ＦＡＣＳ分析 
マウス抗ヒトｃ−ＭｙｃＡＰＣ共役モノクロナール抗体（カタログ番号ＩＣ３６９６Ａ）をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）から得た。ビオチニル化ＰｒｏｔｅｉｎＬは、ＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  ＮＪ）から購入し、リン酸緩衝生理食塩水中１ｍｇ／ｍＬで再構成され、４℃で保存された。ストレプトアビジンＡＰＣ（ＳＡ１００５）はＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。
【０６６５】
Ｍｙｃ染色を用いたＣＡＲおよびＳＩＲの検出のため、１ｘ１０６細胞を回収し、４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）洗浄緩衝液を含む氷冷した１ｘＰＢＳ３ｍＬで三回洗浄した。洗浄後、細胞は、ＡＰＣ共役Ｍｙｃ抗体１０μＬを含む氷冷した洗浄緩衝液０．１ｍＬに再懸濁し、暗所で１時間培養し、氷冷した洗浄緩衝液で二回洗浄した。  
【０６６６】
ＰｒｏｔｅｉｎＬ染色を用いたＣＡＲの検出のため、１ｘ１０６細胞を回収し、４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）洗浄緩衝液を含む氷冷した１ｘＰＢＳ３ｍＬで三回洗浄した。洗浄後、細胞は、１μｇのＰｒｏｔｅｉｎＬを含む氷冷した洗浄緩衝液０．１ｍＬに、４℃で１時間再懸濁した。細胞は氷冷した洗浄緩衝液で三回洗浄し、洗浄緩衝液０．１ｍＬ中のＡＰＣ共役ストレプトアビジン１０μＬと一緒に（暗所で）培養し、洗浄緩衝液で二回洗浄した。ＦＡＣＳは、ＢＤ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓのＦＡＣＳＶｅｒｓｅ分析器を用いて行われた。
【０６６７】
細胞死アッセイ
細胞死を測定するため、ＰＣＴ／ＵＳ１７／５２３４４に記載（「Ａ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｔｙ  Ａｓｓａｙ」）されている、ＧｌｕｃまたはＮＬｕｃの異所性細胞質ゾル発現に基づく新しいアッセイが用いられた。
【０６６８】
ＣＡＲとその抗原の発現を検出するためのアッセイの開発
ＣＡＲおよびそれらの標的抗原の発現を検出するために、PCT/US2017/025602「抗原検出のための高感度かつ特異的なルシフェラーゼベースのレポーターアッセイ」に記載されているように、トパンガアッセイと呼ばれるルシフェラーゼベースのレポーターアッセイを利用した。
【０６６９】
合成免疫受容体用のＪｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴ−ＧＦＰアッセイ
ＮＦＡＴ結合部位を有するＩＬ−２プロモーターがＧＦＰ遺伝子の上流にクローン化されるように、Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞が改変される。斯かる細胞は、ＴＣＲおよびＣＡＲを通した信号伝達を研究するのに使用されている。レンチウイルス仲介の遺伝子導入、その後のピューロマイシンによる選択により、異なるＣＡＲがＪｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞で安定的に発現された。ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞が、Ｅ対Ｔ比約１対２で４時間から１８時間、標的細胞と一緒に共培養された。ＣＡＲとその標的抗原との間の相互作用によりＮＦＡＴ経路の活性化が行われると、ＧＦＰ発現が誘発される。従って、ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞は、ＣＡＲの受容体を発現する標的細胞株と相互作用する場合に、増加レベルのＧＦＰ発現を示す。
【０６７０】
異なるＣＡＲ構築物を発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰと異なる標的細胞との共培養によるＧＦＰの誘発が、本質的に前出の記載（Ｗｕ，  Ｒｏｙｂａｌ，  Ｐｕｃｈｎｅｒ，  Ｏｎｕｆｆｅｒ  ＆  Ｌｉｍ，  ２０１５）に従って研究された。ＧＦＰ発現はＦＡＣＳ分析でモニターされた。Jurkat-NFAT-GFP（親）細胞をコントロールとして使用しました。さまざまなＣＡＲでの結果は、次の要約表１４に要約されている。 異なるＣＡＲの名前、それらの配列番号、構成要素の抗原結合ドメイン、およびＴＣＲ鎖は、表１４を参照することによって決定することができる。ＳＩＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞が、親Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞と比較して、標的細胞株との培養で高いＧＦＰ陽性細胞％を示した場合、ＳＩＲはアッセイで陽性であると考えられる。 したがって、配列番号495で表されるBCMA ＣＡＲを発現するJurkat-NFAT-GFP細胞は、親のJurkat-NFAT-GFP細胞と比較して、L363およびU266細胞と共培養した場合にGFP発現のより大きな誘導を示した。細胞株の後ろの＋／−、＋、２＋などの記号は、Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞を発現するＣＡＲとその細胞株との培養後のＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞アッセイ（ＧＦＰ陽性細胞％で測定）における相対的陽性度を示す。 結果はまた、同じ抗体に由来する結合ドメインを含む異なるＣＡＲが、ＣＡＲの種類に応じて、同一の細胞株に曝露された場合に、このアッセイを使用してNFATシグナル伝達を活性化する能力に大きな多様性を示すことを示している。加えて、同じ標的細胞株に対する応答の非常に多様性は、ＣＡＲが同じＣＡＲアーキテクチャを共有している場合でも（例：BBz ＣＡＲまたはＳＩＲ）、同じ抗原を標的とする異なる抗原結合ドメインを含むＣＡＲ（例えば、異なるBCMA抗体から誘導された抗原結合ドメインを有するＣＡＲ）を発現するジャーカット細胞で観察される。最後に、異なる抗原（例えば、ＣＤ１９対ＣＤ２０）を標的にするＣＡＲを発現するＪｕｒｋａＴ細胞は、同じ標的細胞株に接触させた場合、多様な応答を示す。従って、ＣＡＲを異なるＴＣＲ鎖、リンカー、抗原結合ドメイン、および標的特異性と組み合わせることにより、単一の標的細胞に対して、多様な免疫応答を生成できる。表１４は、標的細胞株と接触させた場合に、異なるＣＡＲで観察されるＧＬｕｃベースＴ細胞細胞毒性アッセイの結果も要約している。＋／−、＋、２＋などの記号は、標的細胞株をＣＡＲ発現Ｔ細胞と一緒に４〜９６時間共培養した後Ｇｌｕｃ毒性アッセイを用いて観察された細胞毒性の程度を示し、アッセイを同様な条件下で行った場合に、対照Ｔ細胞、すなわちＣＡＲを全く発現しないＣＡＲまたは無関係なＳＩＲ（例えば、特定の標的細胞株では発現しない抗原を標的にするＣＡＲ）と比較した。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞で観察された結果同様、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞が、標的抗原を発現する細胞に接触した場合、ＴＣＲ鎖、リンカー、抗原結合ドメイン、標的特異性、および標的細胞株次第で、細胞毒性を生じる能力に大きな多様性を示す。類似の条件下で標的細胞株に接触させた場合、ＴＣＲ鎖、リンカー、抗原結合ドメイン、標的特異性、および標的細胞株次第で、サイトカイン生産（例え��、ＩＬ２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ）を誘発する能力面で、同様な多様性が異なるＣＡＲを発現するＴ細胞間で観察された。
【０６７１】
この分析の結果に基づいて、さまざまな抗原結合ドメイン（ｓｃＦｖなど）、リンカー、ＣＡＲのタイプとクラス、およびNFAT-GFPとＴ細胞の細胞傷害性アッセイで陽性であったＴＣＲ鎖とそれらの構成を選択した。
【０６７２】
表１４：
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【０６７３】
異なる抗原結合ドメインを持つＣＤ19ＣＡＲの比較分析
Ｔ細胞は、異なる抗原結合ドメインを含むが、同様のバックボーンを持つＣＡＲに感染している。それぞれhuＣＤ19-mROO5-1（配列番号14406および14437）およびhuＣＤ19-USC3（配列番号14400および14431）からの第2世代のＣＡＲバックボーン（例えば、配列番号16317）および二本鎖ＳＩＲバックボーン（例えば、配列番号14056および14109）上でＣＡＲを発現し、抗原結合ドメインを含むＴ細胞（例：vLおよびvH断片、vL-ＣＤR1-3およびvH-ＣＤR-1-3）は、hu-ＣＤ19-USC1-LH4（配列番号4190および4264）、ＣＤ19-9B7（配列番号4151および4225）およびhu-Bu-13（配列番号9655および9686）からの抗原結合ドメイン（vLおよびvH断片など）を含む対応するＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、優れたin vitro細胞毒性およびサイトカイン分泌を示す。したがって、hu-ＣＤ19-USC1-LH4、ＣＤ19-9B7、およびhu-Bu-13に由来する抗原結合ドメインは、ＣＡＲ（例えば、第2世代ＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の構築には選択されなかった。
【０６７４】
ＣＤ19ＣＡＲ-Ｔ細胞を用いたin vitroおよびin vivo研究
【０６７５】
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞を、ＣＤ19を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号16311、16317および16318）を発現するレンチウイルスに感染させた。これらのＣＡＲのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６３３５、１６３４１および１６３４２によって表される。 配列番号で表されるＣＡＲ; 16311は、FMC63抗体に由来する抗原結合ドメインを持つ第2世代のＣＡＲであり、41BB共刺激ドメインとＣＤ3z活性化ドメインを含みます。 配列番号１６３１７によって表されるＣＡＲは、低親和性ヒト化抗ＣＤ１９抗体から誘導された抗原結合ドメインを有する第２世代のＣＡＲであり、４１ＢＢ共刺激ドメインおよびＣＤ３ｚ活性化ドメインを含む。対照的に、配列番号１６３１８によって表されるＣＡＲは、ヒト化低親和性抗ＣＤ１９抗体に由来する抗原結合ドメインを含む二本鎖ＳＩＲである。このＳＩＲ構築物はまた、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３のコドン最適化バージョン（配列番号１２７３４）をコードするアクセサリーモジュールを発現した。すべてのＣＡＲ構築物はpCCLc-MNDU3-WPREベクター（配列番号12639）にクローン化された。ＣＡＲ-Ｔ細胞は、組換えIL2およびＣＤ3/ＣＤ28ビーズを添加したXVIVO培地で21日間in vitroで増殖させた。感染後5日目にAPC複合タンパク質Lで染色し、続いてフローサイトメトリーを行うと、細胞表面にＣＡＲ構築物の配列番号16311および配列番号16317が強く発現し、細胞の約45〜50％がタンパク質L染色を示した。対照的に、配列番号１６３１８によって表されるＣＡＲの細胞表面発現はごくわずかしか見られず、細胞の２％未満がプロテインＬによる表面染色を示した。培養3週間後、GLucを安定して発現するRAJIおよびNALM細胞を、エフェクター：ターゲット（E：T）比1：1で異なるＣＡＲを発現するＴ細胞と48時間共培養した。上清を収集し、ELISAによるIFNγの測定に使用した。図2Aは、すべてのＣＡＲ-Ｔ細胞を高レベルのＣＤ19を発現するRAJI細胞と共培養すると、IFNγ産生が大幅に増加することを示している。図2Bは、構築物配列番号16318を発現するＣＡＲ-Ｔが、中程度のレベルのＣＤ19を発現するNalm6細胞と共培養した場合、構築物配列番号16311を発現するＣＡＲ-Ｔと比較して高いIFNγ誘導を示すことを示している。TNFα産生を測定するために実験を繰り返した場合、本質的に同様の結果が得られた。さまざまなＣＡＲ-Ｔ細胞のin vivoでの有効性をテストするために、NSGマウスにホタルルシフェラーゼ（RAJI-Luc）を安定して発現する0.5x106個のRAJI細胞を尾静脈から注射した。３日後、ＣＡＲ構築物（配列番号１６３１１、１６３１７および１６３１８）を発現する４×１０６のＴ細胞をマウスに注射した。D-ルシフェリンの注射後、生物発光イメージングによって動物を毎週イメージングした。図3は、Ｔ細胞またはコントロールＴ細胞を与えられていない動物に有意な腫瘍増殖があり、23日目までにすべて死亡したことを示している。配列番号16311および16317を発現するＴ細胞を与えられた動物は、最初に疾患をクリアしたが、28日後に疾患の再発を示した。対照的に、配列番号16318でＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられた動物は51日目まで無病のままであった。配列番号１６３１８でＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられたマウスは、Ｔ細胞を与えられなかったマウス、対照Ｔ細胞を与えられたマウス、また���配列番号１６３１１を発現するＴ細胞を与えられたマウスと比較して、生存が改善された。配列番号16317を発現するＴ細胞を与えられたマウスは中程度の生存を示した。
【０６７６】
ＣＤ19ＣＡＲ-Ｔ細胞を用いたin vitroおよびin vivo研究
【０６７７】
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞を、ＣＤ19を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号16311および14056）を発現するレンチウイルスに感染させた。配列番号１６３１１によって表されるＣＡＲが記載されている。対照的に、配列番号１４０５６によって表されるＣＡＲは、ヒト化低親和性抗体に由来する抗原結合ドメインを含む二本鎖ＳＩＲである。この構築物のアミノ酸配列は、配列番号15800によって表される。両方のＣＡＲ構築物は、pCCLc-MNDU3-WPREベクター（配列番号12639）にクローン化された。 配列番号14056のＣＡＲをコードするpCCLc-MNDU3-WPREベクターの核酸配列は、配列番号12641で表される。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで増殖されました。感染後6日目にAPC複合タンパク質Lで染色し、続いてフローサイトメトリーを行うと、細胞表面にＣＡＲ構築物配列番号16311が強く発現し、細胞の約71.07％がタンパク質L染色を示しました。対照的に、配列番号14056で表されるＣＡＲの細胞表面発現は少なく、22.04％の細胞がプロテインLで表面染色を示した。培養1週間後、GLucを安定して発現するRAJIおよびNALM細胞を、エフェクター：ターゲット（E：T）比1：1で異なるＣＡＲを発現するＴ細胞と48時間共培養した。上清を回収し、ELISAによるIFNγ、TNFα、IL2の測定に使用した。配列番号14056で表される次世代ＣＡＲ（すなわち、二本鎖ＳＩＲ）を発現するＴ細胞は、RAJI細胞と共培養するとIFNγ、TNFα、およびIL2の強力な産生を示し、FMC63-BBz ＣＡＲを発現するＴ細胞（配列番号 NO：16311）は、これらのサイトカインの弱い誘導を示した。実験は、IL2およびＣＤ3およびＣＤ28抗体の存在下でXVIVO培地で培養したＣＡＲ-Ｔ細胞の4週間の増殖後に繰り返された。配列番号14056で表されるＣＡＲを発現するＴ細胞は、RAJI細胞と共培養した場合、IFNγ、TNFα、およびIL2の強力な産生を示し続けることが観察された。FMC63-BBz ＣＡＲ（配列番号16311）を発現するＴ細胞は、これらのサイトカインの誘導が非常に低いか無視できることを示し、機能的消耗の証拠を示唆している。さまざまなＣＡＲ-Ｔ細胞のin vivoでの有効性をテストするために、NSGマウスにホタルルシフェラーゼ（NALM6-Luc）を安定して発現する0.5x106 NALM6細胞（B細胞急性リンパ性白血病）を尾静脈から注射した。３日後、マウスに、in vitroで２〜３週間増殖させたＣＡＲ構築物（配列番号１６３１１および１４０５６）を発現する３×１０６のＴ細胞を注射した。D-ルシフェリンの注射後、生物発光イメージングによって動物を毎週イメージングした。図4は、対照Ｔ細胞を投与した動物またはＴ細胞を投与しなかった動物に有意な腫瘍増殖があり、29日目までにすべて死亡したことを示している。配列番号16311を発現するＴ細胞を投与した動物は、最初は疾患を解消しましたが、29日後に疾患の再発を示しました。対照的に、配列番号14056のＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられた動物は36日目まで無病のままであった。配列番号14056でＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられたマウスは、対照Ｔ細胞を与えられたマウス、または配列番号１６３１１を発現するＴ細胞を与えられたマウス、またはＴ細胞を与えられなかったマウスと比較して、生存が改善された。ＳＩＲ（配列番号１６３３０）を発現するＴ細胞を、Ｎａｌｍ６細胞を異種移植したＮＳＧマウスに投与した場合、本質的に同様の結果が得られる。
【０６７８】
ＣＤ19を標的としたＣＡＲ、ＳＩＲ、ＴＦＰによる抗原マスキングの比較
【０６７９】
従来の第2世代ＣＤ19ＣＡＲを単一のB細胞に誤って挿入した急性リンパ性白血病細胞は、白血病細胞で発現したＣＡＲポリペプチドによる白血病細胞で発現したＣＤ19のマスキングにより、疾患の再発を引き起こすことが最近示された（Ruella M et al、 Nat Med.2018 Oct; 24（10）：1499-1503）。これにより、ＣＡＲ-Ｔ細胞がＣＡＲを発現している白血病細胞を認識して殺すことができなくなり、クローンの増殖、疾患の再発、患者の死亡に繋がった。次世代のＣＡＲもこの問題の影響を受けやすいかどうかをテストするために、第2世代のＣＡＲ（配列番16311、16317）、ＳＩＲ（配列番号14035、14056、14065、14109、16330）およびＴＦＰ（配列番号16328および14098）は、ＣＤ19を発現するRAJIおよびNalm6細胞で安定して発現する。続いて、ＣＡＲ発現細胞をPE結合ＣＤ19抗体（FMC63-PEなど）で染色する。第２世代のＣＡＲ（配列番号１６３１１、１６３１７）、およびＴＦＰ（配列番号１６３２８および１４０９８）の発現が、ＲＡＪＩおよびＮａｌｍ６細胞上のＣＤ１９のマスキングをもたらすことが観察される。これは、ＣＤ19-PE抗体との結合およびフローサイトメトリーによって決定されるＣＤ19の細胞表面染色の減少によって明らかになる。対照的に、ＳＩＲ（配列番号14035、14056、14065、14109および16330）の発現は、RAJIおよびNalm6細胞におけるＣＤ19の発現に有意な影響を及ぼさない。さらに、第２世代のＣＡＲ（配列番号１６３１１、１６３１７）を発現するＲＡＪＩ細胞、およびＴＦＰ（配列番号１６３２８および１４０９８）は、対応するＣＡＲおよびＴＦＰを発現するＴ細胞による殺傷の減少を示す。ＳＩＲ（配列番号14035、14056、14065、14109および16330）を発現するRAJI細胞は、対応するＳＩＲを発現するＴ細胞による殺傷に対する感受性を保持している。
【０６８０】
サイトカイン放出症候群（CRS）モデルを使用したＣＡＲの比較
さまざまなＣＤ19ＣＡＲ構築物がCRSを誘導する能力は、最近説明されたマウスモデルを使用してテストされた（Giavridis T et al、Nature Medicine、2018）。 簡単に説明すると、SCID-Biegeマウスに1日目に300万個のRaji-pLenti-Luc細胞を腹腔内（腹腔内）注射した。ＣＡＲ（配列番号１６３１５および１６３３０）を発現する３０００万のＣＡＲ-Ｔが２１日目に注射された（腹腔内）。公開された研究（Giavridis T et al、Nature Medicine）と同様に、第2世代のＣＡＲ（配列番号16315）を与えられた動物の3分の1は、ＣＡＲ-Ｔ細胞の注射後に死亡した。ＳＩＲ（配列番号16330）を受けた動物はいずれも死亡しなかった。本質的に、ＳＩＲ（配列番号14056）を発現するＴ細胞を使用して実験を繰り返すと、同様の結果が得られる。 
【０６８１】
異なる抗原結合ドメインを有するMPLＣＡＲの比較分析
Ｔ細胞は、異なる抗原結合ドメインを含むが、同様のバックボーンを持つＣＡＲに感染している。それぞれhu-161-2（配列番号14409および14440）およびhu-161-3（配列番号14402および14433）からの異なるＣＡＲバックボーン（例えば、配列番号16315、13761-13770、13780-13794）上でMPL ＣＡＲを発現し、抗原結合ドメインを含むＴ細胞（例：vLおよびvH断片、vL-ＣＤR1-3およびvH-ＣＤR-1-3）は、WO2019067805に記載されているMPL-178、MPL-12E10およびMPL-AB317由来の抗原結合ドメイン（vLおよびvH断片など）を含む対応するＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、優れたin vitro細胞毒性およびサイトカイン分泌を示す。したがって、MPL-178、MPL-12E10、およびMPL-AB317に由来する抗原結合ドメインは、MPLを標的とするＣＡＲ（例えば、第2世代ＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の構築には選択されなかった。代わりに、hu-161-2（配列番号14409および14440）およびhu-161-3（配列番号14402および14433）に由来する抗原結合ドメイン、および対応するＣＤR領域を含むvLおよびvHをMPL標的ＣＡＲ用に選択した（例：第2世代のＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）。配列番号13791および13793のＣＡＲを比較し、配列番号13791のＣＡＲは、配列番号13793のＣＡＲと比較して優れたin vitro細胞毒性およびサイトカイン産生を示すことが示されている。配列番号13791のＣＡＲは、同じバックボーン上の対応するＣＡＲよりも優れているが、WO2019067805に記載されているようにマウスMPL-161に由来する抗原結合ドメインを含むこともわかっている。
【０６８２】
MPLＣＡＲ-Ｔ細胞を用いたin vitroおよびin vivo研究
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞を、ヒトMPL（トロンボポエチン受容体）を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号16315および13791）を発現するレンチウイルスに感染させた。配列番号で表されるＣＡＲ（ＣＤ8SP-MPL-hu-161-2-BBz）。16315は、ヒト化MPL抗体に由来する抗原結合ドメインを持つ第2世代のＣＡＲであり、41BB共刺激ドメインとＣＤ3z活性化ドメインを含む。対照的に、配列番号１３７９１で表されるＣＡＲは、ヒト化ＭＰＬ抗体に由来する抗原結合ドメインを含む二本鎖ＳＩＲである。両方のＣＡＲ構築物をpCCLc-MNDU3-WPREベクター（配列番号12639）にクローン化した。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで最大2〜4週間増殖した。GLucを安定して発現するHEL.92.1.7細胞を、異なるＣＡＲを1：1のE：T比で発現するＴ細胞と48時間共培養した。マタドールアッセイを使用して細胞死を測定した。配列番号13791で表される次世代ＣＡＲ（すなわち、二本鎖ＳＩＲ）を発現するＴ細胞は、標的細胞死およびサイトカイン産生の強力な誘導を示し、MPL-hu-161-2-BBzＣＡＲを発現するＴ細胞（配列番号 NO：16315）は、標的細胞死およびサイトカイン産生の弱い誘導を示した。さまざまなＣＡＲ-Ｔ細胞のin vivoでの有効性をテストするために、NSGマウスにホタルルシフェラーゼ（HEL-Luc）を安定して発現する0.5 x 106 HEL.92.1.7細胞（急性骨髄性白血病）を尾静脈から注射した。３日後、マウスに、in vitroで２〜３週間増殖させたＣＡＲ構築物（配列番号１６３１５および１３７９１）を発現する３×１０６のＴ細胞を注射した。配列番号でＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられたマウス; 13791は、対照Ｔ細胞を与えられたマウスまたは配列番号16315を発現するＴ細胞を与えられたマウスまたはＴ細胞を与えられなかったマウスと比較して、改善された生存を示した。
【０６８３】
MPLを標的としたＣＡＲ、AIR、ＴＦＰによる抗原マスキングの比較
HEL.92.1.7細胞は、ヒトMPLを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号16315、13780、および13791）を発現するレンチウイルスに感染している。MPLのマスキングに対するＣＡＲ発現の影響は、MPL抗体（1.6.1）による免疫蛍光染色とFACS分析によって決定される。あるいは、非結合MPLの発現は、161-ｓｃＦｖ-Nluc融合タンパク質（WO2017173403に記載されている配列番号2245、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）と結合することによって決定される。161-ｓｃＦｖ-Nluc融合タンパク質には、NLucに融合したMPL標的抗体（1.6.1）に由来する抗原結合ドメインが含まれている。HEL.92.1.7細胞における配列番号16315および13780のＣＡＲの発現は抗原マスキングをもたらすが、配列番号13791のＣＡＲの発現はMPLの有意なマスキングをもたらさないことが見出されている。 
【０６８４】
異なる抗原結合ドメインを有するBCMAＣＡＲの比較分析
Ｔ細胞は、異なる抗原結合ドメインを含むが、同様のバックボーンを持つＣＡＲに感染している。それぞれBCMA-huC13-F12（配列番号14413および14444）、BCMA-huC12A3-L3H3（配列番号14414および14445）、BCMA-J6M0（配列番号14415および14446）、BCMA-huJ22-10（配列番号14398および14229）およびBCMA-hu72（配列番号14401 14432）に由来する異なるＣＡＲバックボーン（例えば、配列番号12913、12916-12946）上でBCMA ＣＡＲを発現し、抗原結合ドメイン（例えば、vLおよびvH断片、vL-ＣＤR1-3およびvH-ＣＤR-1-3）を含むＴ細胞は、優れたin vitro細胞毒性とサイトカイン分泌を示す。したがって、上記の抗原結合ドメインから誘導された抗原結合ドメイン、およびそれらの対応するＣＤR領域を含むvLおよびvHが、BCMA標的ＣＡＲ（例えば、第2世代ＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）のために選択された。
【０６８５】
BCMAＣＡＲ-Ｔ細胞を用いたin vitroおよびin vivo研究
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞を、ヒトBCMAを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号（ＤＮＡ）：16316および12890、12943）を発現するレンチウイルスに感染させた。これらの構築物の対応するアミノ酸配列は、配列番号(16340、14634および14687）によって表される。配列番16316で表されるＣＡＲは、ヒト化BCMA抗体に由来する抗原結合ドメインを持つ第2世代のＣＡＲであり、41BB共刺激ドメインとＣＤ3z活性化ドメインを含む。対照的に、配列番号１２８９０および１２９４３によって表されるＣＡＲは、二本鎖ＳＩＲである。両方のＣＡＲ構築物をpCCLc-MNDU3-WPREベクター（配列番号12639）にクローン化した。ＣＡＲの配列番号１２８９０および１２９４３をコードするレンチウイルスベクターの完全な核酸配列は、それぞれ、配列番号１４３７８〜１４３８５によって表される。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで最大2〜4週間増殖した。GLucを安定して発現するL363細胞を、異なるＣＡＲを1：1のE：T比で発現するＴ細胞と48時間共培養した。マタドールアッセイを使用して細胞死を測定した。すべてのＣＡＲ-Ｔ細胞は、標的細胞死とサイトカイン（IFNγおよびTNFα）産生の適度な誘導を示した。さまざまなＣＡＲ-Ｔ細胞のin vivoでの有効性をテストするために、NSGマウスにホタルルシフェラーゼ（L363-Luc）を安定して発現する0.5 x 106 L363（形質細胞白血病）を尾静脈から注射し、2日後に2 x 106 in vitroで2〜3週間増殖させたＣＡＲ構築物（配列番号16316および12890、12943）を発現するＴ細胞を注射した。配列番号16316および12890、12943のＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられたマウスは、対照Ｔ細胞を与えられたマウスと比較して生存率が改善された。本質的に同様の結果が、配列番号13049、12996、および12837によって表されるＣＡＲを発現するＴ細胞を使用して得られる。
【０６８６】
ＢＣＭＡ抗原をマスクする異なるＣＡＲ構築物の能力は、Ｌ３６３およびＵ２６６細胞株において配列番号１６３１６および１２８９０、２２９４３を有するＣＡＲ構築物を安定して発現することによって試験される。ＣＡＲ 16316の安定した発現はBCMAの抗原マスキングをもたらすが、配列番号12890、12943の構築物の安定した発現では有意な抗原マスキングは観察されないことが観察される。同様に、配列番号13049、12996、および12837のＣＡＲは、BCMAを発現するL363またはU266細胞で発現した場合、抗原マスキングを引き起こさない。
【０６８７】
異なる抗原結合ドメインを有するメソセリン（ＭＳＬＮ）ＣＡＲの比較分析
Ｔ細胞は、異なる抗原結合ドメインを含むが、同様のバックボーンを持つＣＡＲに感染している。それぞれMSLN-3-HL-AM（配列番号4136および4210）、MSLN-5（配列番号14412および14443）、MSLN-7D9-HL（配列番号14411および14442）、およびMSLN-hu22A10（配列番号14410および14441）に由来する異なるＣＡＲバックボーン（例えば、配列番号14291-14323）上でMSLN ＣＡＲを発現し、抗原結合ドメイン（例えば、vLおよびvH断片、vL-ＣＤR1-3およびvH-ＣＤR-1-3）を含むＴ細胞は、MSLN-HuAM15およびMSLN76923-HLに由来する抗原結合ドーメインと比較して、優れたin vitro細胞毒性およびサイトカイン分泌を示す。したがって、対応するＣＤR領域を含むMSLN-3-HL-AM（配列番号4136および4210）、MSLN-5（配列番号14412および14443）、MSLN-7D9-HL（配列番号14411および14442）、およびMSLN-hu22A10（配列番号14410および14441）およびvLおよびvHに由来する抗原結合ドメインは、MSLNを標的とするＣＡＲ（例えば、第2世代のＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）用に選択された。
【０６８８】
異なる抗原結合ドメインおよびバックボーンを有するメソセリン（ＭＳＬＮ）ＣＡＲの比較分析。
異なる抗原結合ドメインを含み、異なるＣＡＲバックボーン（配列番号16312-16314; 16361-16363）上にMSLN ＣＡＲを発現するＴ細胞は、pCCLc-MNDU3-WPREベクター（配列番号12639）を含む遺伝子導入を使用して生成された。ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、マタドールアッセイを使用して細胞毒性とサイトカインの産生についてSKOV3細胞に対してテストされた。 すべてのＣＡＲ-Ｔ細胞は、SKOV3細胞との共培養時に、軽度から中程度の細胞毒性とさまざまなレベルのサイトカイン産生を示した。次に、ＣＡＲ-Ｔ細胞をNSGマウスのSKOV3異種移植モデルでテストした。この目的のために、1x106 SKOV3-Luc細胞を皮下注射し、1週間後に3 x 106ＣＡＲ発現Ｔ細胞を静脈内注射した。腫瘍の成長は、生物発光イメージングと腫瘍体積測定によって監視された。腫瘍増殖の軽度から中程度の阻害が、配列番号16312-16314および16361-16362のＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられたマウスで見られた。
【０６８９】
次、異なる抗原結合ドメインを含み、異なるＣＡＲバックボーン（配列番号16313-16314; 16331-16334; 14268-14269; 14321、および14374）上にMSLN ＣＡＲを発現するＴ細胞は、pCCLc-MNDU3-WPREベクター（配列番号12639）を含む遺伝子導入を使用して生成された。これらのＣＡＲ構築物のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号16337-16338; 16354-16357; 16012-16013, 16065および16118によって表される。ＣＡＲの配列番号14374、14321および14268をコードするレンチウイルスベクターの完全な核酸配列は、それぞれ、配列番号14381-14383によって表される。ＣＡＲを発現するＴ細胞は、細胞毒性とサイトカインの産生についてMatadorアッセイを使用して、SKOV3細胞に対してテストされた。すべてのＣＡＲ-Ｔ細胞は、1：1のE：T比でSKOV3細胞と72時間共培養すると、中程度の細胞毒性とさまざまなレベルのサイトカイン産生を示した。ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＡＲ 16331-16334, 14268-14269; 14321、および14374を発現するＴ細胞には存在しなかったIFNγおよびTNFαの高いベースライン産生を示した。次に、ＣＡＲ-Ｔ細胞をNSGマウスのSKOV3異種移植モデルでテストした。この目的のために、1 x 106 SKOV3-Luc細胞を皮下注射し、1週間後に3 x 106 ＣＡＲ発現Ｔ細胞を静脈内注射した。腫瘍の成長は、生物発光イメージングと腫瘍体積測定によって監視された。配列番号16313-16314のＣＡＲを発現するＴ細胞を与えられたマウスは腫瘍を制御できなかった。配列番号16331-16334、14268-14269、14321、および14374のＣＡＲを与えられたマウスは、18日後に腫瘍を完全に根絶し、67日目までこれらの動物で測定可能な腫瘍は観察されなかった。結果は生物発光イメージングを使用して確認された。これにより、配列番号16331-16334、14268-14269、14321、および14374のＣＡＲを与えられた動物の生存率が大幅に改善された。
【０６９０】
異なる抗原結合ドメインを持つＣＤ22ＣＡＲの比較分析
Ｔ細胞は、異なる抗原結合ドメインを含むが、同様のバックボーンを持つＣＡＲに感染している。それぞれＣＤ22-INO（配列番号14387および14418）、ＣＤ22-hu-HA22-2（配列番号14399および14430）ＣＤ22-h10F4v2（配列番号14407および14438）、およびＣＤ22-hu-RFB4（配列番号14396および14427）に由来する第2世代ＣＡＲバックボーン（例えば、配列番号13443、13390、13284および14185）および二本鎖ＳＩＲバックボーン（例：配列番号13473、13420、13314、14215）上でＣＤ22 ＣＡＲを発現し、抗原結合ドメイン（例：vLおよびvH断片、vL-ＣＤR1-3およびvH-ＣＤR-1-3）を含むＴ細胞は、hu-HA22-1（配列番号4123および4197）およびＣＤ22-CELL7（配列番号14390および14421）に由来する抗原結合ドメイン（例えば、vLおよびvH断片）を含む対応するＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、優れたin vitro細胞毒性およびサイトカイン分泌を示す。したがって、hu-HA22-1およびＣＤ22-CELL7に由来する抗原結合ドメインは、ＣＤ22を標的とするＣＡＲ（例えば、第2世代ＣＡＲ、ＳＩＲ、Ab-ＴＣＲ、ＴＦＰなど）の構築には選択されなかった。代わりに、対応するＣＤR領域を含むフォームＣＤ22-INO（配列番号14387および14418）、ＣＤ22-hu-HA22-2（配列番号14399および14430）ＣＤ22-h10F4v2（配列番号14407）、および14438）およびＣＤ22-hu-RFB4（配列番号14396および14427）およびvLおよびvHに由来する抗原結合ドメインが、ＣＤ22を標的とするＣＡＲ用に選択された。
【０６９１】
葉酸受容体１（ＦＲ１またはＦＯＬＲ１）ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＦＲ１を発現するＳＫＯＶ３細胞において細胞毒性を誘導する。
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、FR1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号2062-2102; 2111-2140）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するSKOV3細胞を、ＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。 ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９２】
BAFF-R ＣＡＲを発現するＴ細胞は、BAFF-Rを発現するJeko-1およびREC-1細胞において細胞毒性を誘導する。
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、BAFF-Rを標的とする、異なるＣＡＲ構築物（配列番号 13922-13953, 13848-13858, 13869-13900, 13954-13964, 13975-14006）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。 hGLucを安定して発現するJeko-1およびREC-1細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。IFNγとTNFαの産生はELISAによって決定される。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスでJeko-1異種移植モデルを使用して実証されている。ＣＡＲを発現するＴ細胞（例えば、配列番号13897、13950、14003など）は、BAFF-R陽性細胞が遭遇したときにＴ細胞シグナル伝達を活性化することが示されている。
【０６９３】
メソセリン（ＭＳＬＮ）ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＭＳＬＮを発現するＳＫＯＶ３細胞において細胞毒性を誘導する。
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、MSLNを標的とする、異なるＣＡＲ構築物（配列番号2748-2777; 2797-2826; 2846-2875; 2895-2924; 2944-2973; 9386-9415; 9435- 9464）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。hGLucを安定して発現するSKOV3細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９４】
Ｈｅｒ２ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、Ｈｅｒ２発現ＭＣＦ７細胞において細胞毒性を誘導する。
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ＣＡＲ構築物（配列番号2346、2356-2385; 2395、2405-2434; 2444、2454-2483; 9092-9121; 9141-9170）を発現するレンチウイルスに感染する。Her2 ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMCF7細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９５】
ＥＧＦＲｖｉｉｉ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＥＧＦＲｖｉｉｉを発現するＵ８７ＭＧ細胞において細胞毒性を誘導する。
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、EGFRviiiを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1660、1670-1699、1709、1719-1748、1758、1768-1797、1807、1817-1846）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するU87MG-EGFRviii細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。 ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９６】
ＥＭＲ２ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＥＭＲ２発現細胞において細胞毒性を誘導する。
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、EMR2を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1856、1866-1895、1905、1915-1944、1954、1964-1993）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMolm13細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９７】
DLL3 ＣＡＲを発現するＴ細胞は、DLL3発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、DLL3を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1553-1650）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するSK-MEL-37細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９８】
ＣＤ１９ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ１９発現細胞において細胞毒性を誘導する。 ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ＣＤ19を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号769-817、720-768、867-915、965-1013、818-866、8632-8680）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するRAJIまたはNALM6細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０６９９】
ＣＤ２０ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ２０発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ＣＤ20を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1063-1111、1014-1062）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するRAJIまたはNALM6細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７００】
ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＢＣＭＡ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、BCMAを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号377-572、8093-8484）を発現するレンチウイルスに感染している。 ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するU266およびL363細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０１】
ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＦＬＴ３発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、FLT3を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号8926-9023）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するRS4; 11およびMV4; 11細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０２】
ＣＬＬ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＬＬ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、CLL1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号8779-8876）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するRAJIおよびU937細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０３】
ＢＳＴ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＢＳＴ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、BST1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号8485-8631）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するKG1細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０４】
ＩＬ１ＲＡＰ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＩＬ１ＲＡＰ発現細胞において細胞毒性を誘導する。 ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、IL1RAPを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号9171-9317）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するTHP-1細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０５】
ｇｐＡ３３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ｇｐＡ３３発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、gpA33を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号9024-9072）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMolm-13細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０６】
ＧＰＣ３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＧＰＣ３発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、GPC3を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号9024-9072）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するHepG2細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０７】
ＣＬＤＮ６ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＬＤＮ６発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、CLDN6を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1455-1552）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するHepG2細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０８】
ＵＰＫ１Ｂ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＵＰＫ１Ｂ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、UPK1Bを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1455-1552）を発現するレンチウイルスに感染する。 ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するOVＣＡＲ-3細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７０９】
ＢＭＰＲ１Ｂ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＢＭＰＲ１Ｂ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、BMPR1Bを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号573-670）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。 GLucを安定して発現するLNCaPおよびCOV434細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１０】
ＷＩＳＰ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＷＩＳＰ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、WISP1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3856-3953）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMDA-MB-453細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１１】
ＣＤ１３３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ１３３発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ＣＤ133を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号11312-11458）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するRehおよびRS4; 11細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１２】
プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＰＲＬＲ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、PRLRを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3121-3218）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMCF7細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１３】
ＩＬ１３Ｒａ２ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＩＬ１３Ｒａ２発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、IL13Ra2を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号14132-14165）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するU87MG細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１４】
ネクチン−４ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ネクチン−４発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ネクチン-4を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3072-3120、9465-9513）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMCF7細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１５】
ＰＳＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＰＳＭＡ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、PSMAを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3219-3365）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するPC3細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１６】
ＴＳＨＲ（甲状腺刺激ホルモン受容体）ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＴＳＨＲ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、TSHRを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3611-3659）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するTＴ細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１７】
ＣＤＨ１９ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤＨ１９発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ＣＤH19を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1308-1405）を発現するレンチウイルスに感染する。 ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMEL-624細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１８】
ＶＩＳＴＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＶＩＳＴＡ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、VISTAを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3758-3855）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMOLM-13細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７１９】
ＲＯＲ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＲＯＲ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ROR1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号9514-9562）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するJEKO-1細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２０】
Ｌｉｖ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、Ｌｉｖ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、Liv1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号9514-9562）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMCF7細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２１】
インテグリンＢ７ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、インテグリンＢ７発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、インテグリンB7を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号2533-2581）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するU266細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２２】
ＳＬＣ３４Ａ２ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＳＬＣ３４Ａ２発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、SLC34A2を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3562-3610）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するOVＣＡＲ-3およびOVＣＡＲ-4細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２３】
ＬＹ６Ｅ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＬＹ６Ｅ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、LY6Eを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号2582-2630）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するMolm13細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で4時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２４】
ＬＹＰＤ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＬＹＰＤ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、LYPD1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号2631-2679）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するOVＣＡＲ-3細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２５】
ＳＴＥＡＰ１ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＳＴＥＡＰ１発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、STEAP1を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3513-3561、9563-9611）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するPC3およびLNCaP細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２６】
Ｍｕｃ５Ａｃ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、Ｍｕｃ５Ａｃ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、Muc5Acを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号2974-3022）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。Capan-1（膵臓がん）およびGLucを安定して発現するNCI-H1437細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２７】
Ｍｕｃ１７ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、Ｍｕｃ１７発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、Muc17を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3023-3071）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。同様にGLucを発現するSW1463およびSW403細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２８】
ＲＮＦ４３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＲＮＦ４３発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、RNF43を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3366-3463）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するLovo細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７２９】
Ｒｏｂｏ４ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、Ｒｏｂｏ４発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、Robo4を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号3464-3512）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するME-1細胞を、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７３０】
ｇＰＮＭＢ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ｇＰＮＭＢ発現細胞において細胞毒性を誘導する。ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、gPNMBを標的とするＣＡＲ構築物（配列番号2239-2287）を発現するレンチウイルスに感染している。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現するU87MG細胞は、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養される。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７３１】
ＦＣＲＨ５ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＦＣＲＨ５発現細胞において細胞毒性を誘導する。 ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、FCRH5を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号1994-2042）を発現するレンチウイルスに感染する。ＣＡＲ-Ｔ細胞はin vitroで10〜14日間増殖する。GLucを安定して発現しているREC-1細胞を、異なるＣＡＲを発現しているＴ細胞とE：T比10：1で48時間共培養する。標的細胞の溶解の誘導を媒介するＣＡＲ-Ｔ細胞は、GLuc活性の測定によるマタドールアッセイを使用してアッセイされる。ＣＡＲのin vivo活性は、NSGマウスの異種移植モデルを使用して実証されている。
【０７３２】
ＣＤ１９を標的とするＣＡＲのin vivo有効性。 
ＣＤ3磁気ビーズを使用して単離されたヒト末梢血Ｔ細胞は、ＣＤ19 ＣＡＲ構築物（例えば、配列番号8633-8680）を発現するレンチウイルスに感染している。NSGマウス（ジャクソン研究所）は、175cGyの線量で亜致死的に照射される。照射後約24時間（2日目）に、マウスに尾静脈を介して2.5x104個のRAJI細胞を注射する。
【０７３３】
3日目に、マウス（各グループでn=5）を500万個のＣＤ19ＣＡＲ-Ｔ細胞で治療する。対照マウス（n=5）は、Ｔ細胞を受け取らないか、感染していないＴ細胞を受け取る。対照群のすべてのマウスが死亡するまで、マウスは1日おきにヒトIL2（400 IU腹腔内）を投与される。ＣＤ19 ＣＡＲ-Ｔ細胞で処理されたマウスは、コントロールマウスよりも長く生存する。本質的に同様のアプローチを使用して、表Aに示すようにそれらの標的抗原を発現する細胞株の異種移植片を使用するか、または文献で入手可能な情報を使用して、本開示の他のＣＡＲＴ細胞のインビボ有効性を試験する。
【０７３４】
養子細胞療法のためのＣＡＲ-Ｔ細胞の使用
本開示のＣＡＲ-Ｔ細胞は、養子細胞療法に使用することができる。一例として、再発した急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病（CLL)、または高リスクの中等度B細胞リンパ腫 を有する患者は、ＣＤ19を標的とする養子移入されたＣＡＲ-Ｔ細胞を用いて免疫療法を受けることができる。各患者から集められた白血球アフェレシス産物に関しては、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＢｉｏｔｅｃのＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録）Ｓｙｓｔｅｍを使用し、製造元の推薦に従って、ＣＤ３陽性Ｔリンパ球の選別が行われる。細胞は臨床グレードのＣＤ19-ＣＡＲウイルス（例えば、配列番号14056、配列番号14109、配列番号16330、配列番号903、配列番号791）で形質導入され、ＣＡＲ-Ｔ細胞の選択と増殖が閉鎖系で起こる。その結果得られた細胞産物が品質管理試験（無菌試験、腫瘍特異的な細胞毒性試験を含む）を受けた後、凍結保存される。その間、白血球アフェレシスの後、研究参加者は、リンパ球枯渇化学療法（３０ｍｇ／ｍ２／日フルダラビン＋５００ｍｇ／ｍ２／日シクロホスファミドｘ３日）を開始する。リンパ球枯渇レジメンの完了後１日目に、以前に保存されているＣＡＲ-Ｔ細胞産物が運搬され、解凍され、患者のベッドサイドで注入される。研究参加者には、静注されたＣＡＲ形質導入リンパ球、次に高用量（７２０，０００ＩＵ／ｋｇ）のＩＬ−２（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ，  Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）が８時間毎に許容量まで投与される。ＣＡＲ-Ｔ産物の用量は、研究プロトコールに従って、１ｘ１０４ＣＡＲ＋ｖｅＣＤ３細胞／ｋｇから５ｘ１０９ ＋ｖｅＣＡＲＣＤ３細胞／ｋｇまで様々である。ＣＡＲ-Ｔ産物は、単回注入で投与されてもよいし、分割注入で投与されてもよい。研究参加者は、Ｔ細胞注入の少なくとも３０分前に、１５ｍｇ／ｋｇのアセタミノフェン（経口）（最高６５０ｍｇ）および０．５〜１ｍｇ／ｋｇのジフェンヒドラミン（静注）（最高用量５０ｍｇ）で前投薬されてもよい。研究参加者は、ヒトＩＬ−２を毎日任意に注射されてもよい。次に、臨床および実験の相関追跡試験が医師の自由裁量により行われてもよく、その中には、Ｃ１９発現ＡＬＬ／リンパ腫細胞および／または養子免疫伝達Ｔ細胞に関する定量的ＲＴ−ＰＣＲ研究、ＦＤＧ−ＰＥＴおよび／またはＣＴスキャン、病気特異的な病理学的評価のための骨髄検査、リンパ管生検、および／またはＦＤＡのＢｉｏｌｏｇｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅが設定したガイドラインに基づき遺伝子導入に適用される長期フォローアップなどが含まれてもよい。本質的に同様のアプローチを使用して、本開示のＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して他の疾患を治療することができ、ここで、ＣＡＲは、疾患を引き起こす細胞または疾患関連細胞で発現される１つまたは複数の抗原を標的とする。
【０７３５】
養子細胞療法のための複数の抗原を標的とするＣＡＲ-Ｔ細胞の使用。
多くのがんの患者は、さまざまな疾患の原因となる抗原または疾患に関連する抗原を標的とする養子移入されたＣＡＲ-Ｔ細胞を用いた免疫療法のIRB承認第I相臨床試験に登録されている。異なる病気用のＣＡＲが、病気を引き起こす細胞または病気関連細胞における標的抗原の既知の発現に基づいて選択される。可能ならば、病気を引き起こす細胞または病気関連細胞におけるＳＩＲの標的の発現は、ＡＢＤ−ＧＧＳ−ＮＬｕｃ融合タンパク質（ＣＡＲの抗原結合ドメインが、可撓性リンカーを通して、ＮＬｕｃタンパク質の非分泌形態に融合している）との結合により確認される。あるいは、病気を引き起こす細胞または病気関連細胞におけるＣＡＲの標的の発現は、商業的に入手可能な抗体を用いる免疫組織化学またはフローサイトメトリーを用いて確認される。Ｔ細胞は、白血球アフェレシスを用いて回収され、適切なＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入され、閉鎖系においてＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いてエクスビボで繁殖させる。その結果得られた細胞産物が品質管理試験（無菌試験、腫瘍特異的な細胞毒性試験を含む）を受けた後、凍結保存される。その間、研究参加者は、リンパ球枯渇化学療法（３０ｍｇ／ｍ２／日フルダラビン＋５００ｍｇ／ｍ２／日シクロホスファミドｘ３日）を開始する。リンパ球枯渇レジメンの完了後１日目に、研究参加者には、静注された形質導入リンパ球、次に高用量（７２０，０００ＩＵ／ｋｇ）のＩＬ−２（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ，  Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）が８時間毎に許容量まで投与される。以前に保存されているＣＡＲ-Ｔ細胞産物が運搬され、解凍され、患者のベッドサイドで注入される。ＣＡＲ-Ｔ産物の用量は、研究プロトコールに従って、１ｘ１０４ＣＡＲ＋ｖｅＣＤ３細胞／ｋｇから５ｘ１０９ＣＡＲ＋ｖｅＣＤ３細胞／ｋｇまで様々である。ＣＡＲ-Ｔ産物は、単回注入で投与されてもよいし、分割注入で投与されてもよい。研究参加者は、Ｔ細胞注入の少なくとも３０分前に、１５ｍｇ／ｋｇのアセタミノフェン（経口）（最高６５０ｍｇ）および０．５〜１ｍｇ／ｋｇのジフェンヒドラミン（静注）（最高用量５０ｍｇ）で前投薬されてもよい。研究参加者は、ヒトＩＬ−２を毎日任意に注射されてもよい。次に、臨床および実験の相関追跡試験が医師の自由裁量により行われてもよい。
【０７３６】
養子細胞療法の前の骨髄破壊的およびリンパ球枯渇化学療法の両方の使用。
研究参加者が骨髄破壊的およびリンパ球枯渇化学療法レジメンの両方を受けることを除いて、前の実施例に記載されたものと本質的に同様のプロトコルが使用される。例示的な骨髄破壊的コンディショニングレジメンには、FCE（フルダラビン25mg / m2 /日、-7日から-3日;シクロホスファミド200mg / m2 /日、-7日から-3日;およびエトポシド250mg / m2 /日、-4日から-3日）、FCIE（フルダラビン25 mg / m2 /日、-7日から-3日;シクロホスファミド200 mg / m2 /日、-7日から-3日;イダルビシン12 mg / m2 /日、-7日から-5日およびエトポシド250mg / m2 /日、-4から-3日）、FluCyE（フルダラビン30 mg / m2 /日、シタラビン1.5 g / m2 /日、フルダラビンおよびエトポシド100 mg / m2 /日を各薬剤とともに投与-6日目から-1日目に投与）、またはFE（フルダラビン30mg / m2 /日および-5日目から-1日目にエトポシド100mg / m2 /日）またはエトポシド（50-100mg / m2 /日） -5日目から-1日目）が含まれる。対象は、化学療法の完了後24〜72時間でＣＡＲ-Ｔ細胞産物を受け取る。サイトカイン放出症候群と神経毒性の発生率と重症度は、ＣＡＲ-Ｔ細胞の投与前に骨髄破壊的化学療法とリンパ球枯渇化学療法の両方を受けている患者で減少する。
【０７３７】
ｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲ-Ｔ細胞との併用
研究は前述の実施例の記載同様に行われるが、ＣＡＲ-Ｔ細胞の注入後1日目に始まって、研究参加者には、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばアロステリック阻害剤（例えば、ＲＡＤ００１）を標的トラフ値が０．１〜３ｎｇ／ｍＬを提供する用量で投与する点が異なっている（この場合、トラフ値とは、次の用量直前における血漿中の薬剤濃度、または２つの用量間の最低薬剤濃度を意味する）。
【０７３８】
イブルチニブとＣＡＲ-Ｔ細胞との併用
研究は前述の実施例の記載同様に行われるが、ＣＡＲ-Ｔ細胞の注入後1日目に始まって、研究参加者には、１４０ｍｇ／ｄ〜４２０ｍｇ／ｄの用量でイブルチニブを経口投与する点が異なっている。イブルチニブを投与される研究参加者は、イブルチニブなしでＣＡＲ-Ｔ細胞を投与される参加者と比較して、重篤なサイトカイン放出症候群の発生数が少ない。
【０７３９】
養子細胞療法のための同種異系ＣＡＲ-Ｔ細胞の使用。
再発性骨髄腫および原発性滲出液リンパ腫の患者は、養子移入された同種異系ＣＡＲ-Ｔ細胞による免疫療法を受ける可能性がある。HLA適合ドナーから収集された白血球アフェレーシス製品は、ミルテニーバイオテクのCliniMACSProdigy（登録商標）システムを使用し、メーカーの推奨に従ってＣＤ3陽性Tリンパ球の選択を受ける。BCMA特異的ＣＡＲ（配列番号12837、12890、12943または13049）は、本質的にEyquem J et al（Nature、543（7643）：113-117）による研究に記載されているように、Ｔ細胞のTRAC遺伝子座に向けられている。細胞は閉鎖系で9-12日間増殖す。その結果得られた細胞産物が品質管理試験（無菌試験、腫瘍特異的な細胞毒性試験を含む）を受けた後、凍結保存される。その間、研究参加者は、リンパ球枯渇化学療法（３０ｍｇ／ｍ２／日フルダラビン＋５００ｍｇ／ｍ２／日シクロホスファミドｘ３日）を開始する。リンパ球枯渇レジメンの完了後１日目に、研究参加者には、静注された形質導入リンパ球、次に高用量（７２０，０００ＩＵ／ｋｇ）のＩＬ−２（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ，  Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）が８時間毎に許容量まで投与される。ＳＩＲ−Ｔ細胞産物が運搬され、解凍され、患者のベッドサイドで注入される。ＣＡＲ-Ｔ産物の用量は、研究プロトコールに従って、１ｘ１０４ＣＡＲ＋ｖｅＣＤ３細胞／ｋｇから５ｘ１０９ＣＡＲ＋ｖｅＣＤ３細胞／ｋｇまで様々であってよい。ＣＡＲ産物は、単回注入で投与されてもよいし、分割注入で投与されてもよい。研究参加者は、ＣＡＲ-Ｔ細胞注入の少なくとも３０分前に、１５ｍｇ／ｋｇのアセタミノフェン（経口）（最高６５０ｍｇ）および０．５〜１ｍｇ／ｋｇのジフェンヒドラミン（静注）（最高用量５０ｍｇ）で前投薬されてもよい。次に、臨床および実験の相関追跡試験が医師の自由裁量により行われてもよく、その中には、Ｃ１９発現ＡＬＬ／リンパ腫細胞および／または養子免疫伝達Ｔ細胞に関する定量的ＲＴ−ＰＣＲ研究、ＦＤＧ−ＰＥＴおよび／またはＣＴスキャン、病気特異的な病理学的評価のための骨髄検査、リンパ管生検、および／またはＦＤＡのＢｉｏｌｏｇｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅが設定したガイドラインに基づき遺伝子導入に適用される長期フォローアップなどが含まれてもよい。免疫抑制剤の使用も医師の自由裁量に任される。本開示のＣＡＲを発現するように改変された同種免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を用いて他の病気を治療するのにも、本質的に同様なアプローチ（すなわち、病気を引き起こす細胞または病気関連の細胞で発現する抗原（複数も可））を、ＣＡＲが標的にするアプローチ）が使用できる。
【０７４０】
ＣＡＲ-Ｔ細胞肝動脈注入。         
ＣＡＲ-Ｔ細胞は、静注に加えて、高濃度のＣＡＲ-Ｔ細胞を病気関連の局部または器官に提供するため、動注されてもよい。以下の実施例では、本アプローチは、メソテリン（MSLN) を発現する消化器系がんの肝臓転移を患う患者の場合に使用される。他の腫瘍抗原を標的にするＣＡＲ-Ｔ細胞の動注にも、本質的に同様なアプローチが使用できる。
【０７４１】
治療開始時に、マッピング血管造影図が、右総大腿動脈アプローチで得られる。胃十二指腸動脈および胃動脈が、他の潜在的な肝臓外灌流源に加えて、マイクロコイルで塞栓される。 ＭＳＬＮ ＣＡＲを単独でまたは組み合わせて発現するＴ細胞の投与についても、同じ動脈アクセス手順が実施される（配列番号１６３３１〜１６３３４； １４２６８〜１４２６９； １４３２１、または１４３７４）。Ｔ細胞は０日目に回収され、ＣＡＲをコードするレンチウイルスで感染させ、前述の実施例に記載されるように繁殖される。ＣＡＲ-Ｔ細胞は、用量漸増方式で１４日目（１０８ＣＡＲ-Ｔ細胞）、２８日目（１０９ＣＡＲ-Ｔ細胞）、および４４日目（１０１０ＣＡＲ-Ｔ細胞）に投与される。ＣＡＲ-Ｔ細胞は、６０ｃｃ注射器を用いて、２ｃｃ／秒未満の速度で、手動で注入される。全注入量は約１００ｃｃである。動脈流の維持を確認するため、調整済み造影剤流量を有する血管造影法が最初の５０ｃｃ注入後、並びにＣＡＲ-Ｔ注入の完了時点で行われる。可能ならば、注入は適切な肝臓動脈に対して行われる。ある患者は異常な肝臓動脈構造を有しており、右か左の肝臓動脈が適切な肝臓動脈から隆起していない。斯かる場合、ＣＡＲ-Ｔ細胞の用量は、肝臓葉体積計算に基づいて分割される。斯かる場合、釣り合いの取れたＣＡＲ-Ｔが両肝臓葉へ確実に運搬されるように、分割用量は右および左の肝臓動脈に別々に送られる。臨床評価が、治療開始時、注入日、および注入後の１日目、２日目、４日目、および７日目に行われる。
【０７４２】
ＣＡＲ-Ｔ細胞の腹腔内投与
ＣＡＲ-Ｔは、実質的にＫｏｎｅｒｕ  Ｍら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；  ２０１５；  １３：１０２）記載のように、腹腔内投与してもよい。以下の例において、斯かるアプローチが、葉酸受容体アルファ（ＦＲ１）を発現する卵巣がんにより腹膜の病変を患っている患者の場合に使用される。他の腫瘍抗原を標的にするＣＡＲ-Ｔ細胞の腹腔内注射にも、本質的に同様なアプローチが使用できる。
ＦＲ１（ＦＯＬＲ１）発現のがんを試験するため、高リスクで重篤な再発卵巣がんを患っている患者にスクリーニングのインフォームドコンセントが提供されるであろう。ＦＲ１の発現が免疫組織化学により確認された場合、患者には、末梢血から得られる白血球アフェレシス産物が与えられるであろう。過剰な血小板および赤血球の混入が白血球アフェレシス産物から除去され、該産物は凍結される。本研究の治療段階において、白血球アフェレシス産物は解凍および洗浄される。その後、ＣＤ３＋Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いた磁気分離により、解凍された白血球アフェレシス産物から単離されるであろう。活性化されたＴ細胞は、FOLR1 ＣＡＲ [配列番号2120または2121]でレンチウイルス的に形質導入され、ＣＤ3 / ＣＤ28ビーズ増幅プロトコルを使用してさらに増幅される。
【０７４３】
これらの自己Ｔ細胞は、ＦＯＬＲ１ ＣＡＲ ［配列番号２１２０または２１２１］を発現するように遺伝子操作されるであろう。 層状（パラフィン包埋）腫瘍または新たに生検された腫瘍の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析により確認されるＦＲ１抗原を発現する、高リスクで重篤な再発性卵巣がん、原発性腹膜がん、または卵管がんの患者は、潜在的に本研究の対象となる資格を得るであろう。
【０７４４】
最大耐量（ＭＴＤ）を確立するため、３〜６人の患者のコホートに、漸増用量の修飾Ｔ細胞が注入されるであろう。4つの計画された用量レベルがあります：3×105、1×106、3×106、および1×107 FOLR1ＣＡＲ-Ｔ細胞/ kg。コホートIおよびIIは、3×10５FOLR1 [配列番号：2120または2121] ＣＡＲ-Ｔ細胞/ kgで治療されるが、コホートIIの患者はリンパ球枯渇性シクロホスファミドも投与される。コホートＩＩ〜Ｖには、シクロホスファミドで前治療された後、漸増用量の修飾Ｔ細胞が投与されるであろう。用量７５０ｍｇ／ｍ２のリンパ球枯渇性シクロホスファミドは、最初のＴ細胞注入の２〜４日前に投与されるであろう。その後、標準の３＋３用量漸増スキームが行われる。最初の用量レベルがMTDを超える場合、3〜6人の患者の後続のコホートは、リンパ球枯渇シクロホスファミドを追加せずに、1×105 FOLR1ＣＡＲ-Ｔ細胞/ kgの-1用量レベルで治療される（コホート-I）。
【０７４５】
Ｔ細胞注入前に、ＩＰカテーテルが配置されるであろう。カテーテルは、修飾Ｔ細胞の投与準備が整った時点で配置されるであろう。患者は、ＣＡＲ-Ｔ細胞の第一注入前に病院の入院患者ユニットへの入院が許可され、ＣＡＲ-Ｔ細胞の第二注入の少なくとも３日目まで入院を続けるであろう。治療対象の第一コホートの患者およびその後の各コホートで治療される第一患者は、集中治療室（ＩＣＵ）への入院が許可され、その後の患者は、腫瘍内科入院患者サービスへの入院が許可されるかもしれない（治療医師の臨床判断に任される）。患者には、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞で治療を開始する２〜４日前に、リンパ球枯渇性シクロホスファミド（７５０ｍｇ／ｍ２ＩＶ）化学療法の単一用量が与えられる。形質導入されたＴ細胞は、注入前に、数、純度、生育可能性、および無菌性の品質試験が行われる。全患者が、遺伝子組換えＴ細胞の用量の５０％を静注されるであろう。患者は毒性に関して注意深く監視されるであろう。１〜３日後、Ｔ細胞の残りの用量が腹腔内注射として投与されるであろう。
【０７４６】
血液試料が処置前後に全患者から回収され、毒性、治療効果、および遺伝子組換えＴ細胞の生存が評価される。
【０７４７】
腫瘍内注入のための、ＣＡＲ-Ｔ細胞の使用
更に、ＣＡＲ-Ｔ細胞は、実質的にＢｒｏｗｎ  ＣＥら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ２０１５年９月１５日；２１（１８）：４０６２−４０７２に記載される方法で、腫瘍内に投与されてもよい。以下の実施例では、本アプローチは、EGFRviiiを発現する再発性膠芽細胞腫（ＧＢＭ）の患者の場合に使用される。他の腫瘍抗原を標的にするＣＡＲ-Ｔ細胞の腫瘍内注射にも、本質的に同様なアプローチが使用できる。
【０７４８】
再発性ＧＢＭにおいて、（配列番号1699または1700）ＣＡＲを発現するＴ細胞を試験するため、パイロット安全性および実行可能性研究が行われるであろう。参加患者は全員、文書によるインフォームドコンセントを提供するように求められるであろう。
【０７４９】
適格患者には、再発性または難治性の単源性グレードＩＩＩまたはＩＶテント上膠芽腫（腫瘍は、心室／ＣＳＦ経路とのコミュニケーションを示しておらず、しかも切除可能である）の患者が含まれる。 患者は、高グレード膠芽腫（ＷＨＯグレードＩＩＩまたはＩＶ）の初期診断後に登録され、その時点で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）回収のために白血球アフェレシスが行われるであろう。 これらの細胞は、前の例で説明したように、対応するレンチウイルスベクターでの感染後にEGFRviii ＣＡＲ（配列番号1699または1700）を発現するようにＴ細胞を操作するために使用される。あるいは、ＣＡＲ-Ｔ細胞は、レトロウイルスベクターで感染後、またはｓｌｅａｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙトランスポゾンを用いて、またはＩＶＴ  ｍＲＮＡのトランスフェクションにより作製してもよい。その後、遊離試験済み治療用ＳＩＲ−Ｔ細胞は、冷凍され、後の使用のために保存される。最初の腫瘍再発の時点で、研究参加者は、Ｒｉｃｋｈａｍリザーバ／カテーテルの配置と共に、腫瘍の切除が行われるであろう。 同時に、治療用ＳＩＲ-Ｔ細胞は解凍され、ＣＤ3 / ＣＤ28ビーズベースの急速増殖プロトコルを使用してin vitroで再増殖される。手術からの回復およびベースライン後のMRイメージングに続いて、ＣＡＲ-Ｔ細胞は、基本的に説明されているように、留置カテーテルを介して切除腔に直接投与される（Ｂｒｏｗｎ  ＣＥら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ２０１５年９月１５日；２１（１８）：４０６２−４０７２）。細胞は、２１ゲージバタフライ針を用いて、２ｍＬの容積を５〜１０分かけて注入し、その後、保存剤フリーの通常の生理食塩水と一緒に２ｍＬを５分かけてフラッシングすることにより、Ｒｉｃｋｈａｍリザーバに手動で注入されるであろう。プロトコール治療計画は、５週間かけて頭蓋内に投与される１２ＣＡＲ-Ｔ細胞用量の標的に関して、週毎の治療サイクルで構成される患者内用量漸増計画を明記するであろう。サイクル１、２、４、および５中は、Ｔ細胞注入はサイクル週の１日目、３日目、および５日目に行なわれ、３週目はサイクルが休みとなるであろう。安全性のため、サイクル１において、患者内用量漸増戦術を利用するであろう（ＳＩＲ−Ｔ細胞の用量は、１日目、３日目、および５日目に投与される注入当たり、それぞれ１０７、５ｘ１０７、および１０８細胞である）。その後、４週間に亘り、９回の追加注入により１０８のＣＡＲ-Ｔ細胞が投与されるであろう。応答を評価するための撮像が、３週目の休憩サイクルおよび５週目の後に行われるであろう。その後、毒性の監視および有害事象報告のため、ＮＣＩ共通毒性基準第２．０版（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｔｅｐ．ｉｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌ）に提供されるガイドラインが実行されるであろう。
【０７５０】
移植前の骨髄または末梢血幹細胞調製物のex vivoパージのためのＣＡＲ-Ｔ細胞の使用。 骨髄または幹細胞移植前のがん細胞の末梢血幹細胞調製物をパージするのに、ＣＡＲ-Ｔ細胞が使用できる。 次の例では、BCMAを発現するＣＡＲ-Ｔ細胞を使用して、自家幹細胞（または骨髄）移植の前に多発性骨髄腫の患者から得られた骨髄または末梢血幹細胞をパージする。本質的に同様のアプローチを使用して、がん細胞で発現し、正常な造血幹細胞では発現しないか無視できる他の適切な抗原を標的とするＣＡＲ-Ｔ細胞を使用して骨髄または末梢血幹細胞調製物をパージすることができる。
【０７５１】
患者には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を回収するため、白血球アフェレシスが行われる。Ｔ細胞はＣＤ３ビーズを用いて精製される。
【０７５２】
これらの細胞は、前の例で説明したように、対応するレンチウイルスベクターに感染した後、ピューロマイシンレジスタン遺伝子（PAC）を含むBCMA ＣＡＲ ＣＤ8SP-BCMA-BB-ＣＡＲ02-vL-[hＴＣＲa-CSDVP]-F-F2A-SP-BCMA-BB-ＣＡＲ02-vH-[hＴＣＲb-KACIAH]-F-P2A-Xba-PAC [SEQ ID NO: 546]を発現するようにＴ細胞を操作するために使用される。このＣＡＲは、骨髄腫細胞に発現する抗原であるBCMAを標的としている。ＣＡＲ ＣＤ8SP-BCMA-BB-ＣＡＲ02-vL- [hＴＣＲb-KACIAH] -F-P2A-SP-BCMA-BB-ＣＡＲ02-vH- [hＴＣＲa-CSDVP] -F-F2A-PAC [SEQ ID NO： 552]またはＣＤ8SP-BCMA-BB-ＣＡＲ02-vL-IgCL-Bam-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opＴＦＰ2A-Spe-SP-Bst-BCMA-BB-ＣＡＲ02-vH-IgG1-CH1-KPN-ＣＤ3zEＣＤTMCP-opt2-F-F2A -Xba-PAC [配列番号553]を発現するＣＡＲ-Ｔは、代替として、またはBCMAを標的とする上記のＣＡＲ-Ｔ細胞と組み合わせて使用される。あるいは、ＣＡＲ-Ｔ細胞は、レトロウイルスベクターで感染後、またはｓｌｅａｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙトランスポゾンを用いて、またはＩＶＴ  ｍＲＮＡのトランスフェクションにより作製してもよい。その後、遊離試験済み治療用ＣＡＲ-Ｔ細胞は、冷凍され、後の使用のため、または新鮮な使用のために保存される。骨髄細胞および末梢血前駆細胞産物は、標準の手法を用いて、多発性骨髄腫の患者から回収される。末梢血幹細胞の動員のため、患者には、シクロホスファミドの２４時間後に始まって、フェレシスが完了するまで、毎日、３ｍｇ／ｍ２のシクロホスファミド、次に１０μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを皮下注射される。末梢血幹細胞は、末梢血ＣＤ３４＋の細胞数が１５細胞／マイクロＬになったら回収されるであろう。回収目標は、１日当たり３血液量を処理し、処理後、最低２．０ｘ１０６ＣＤ３４＋細胞／ｋｇに達するまでとなるであろう。骨髄および末梢血幹細胞産物に関しては、任意に赤血球の枯渇が行われるであろう、および／またはＭｉｌｔｅｎｙｉ  ＢｉｏｔｅｃのＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録）Ｓｙｓｔｅｍを使用し、製造元の推薦に従って、ＣＤ３４発現細胞の濃縮が行われるであろう。該産物は、新鮮なエクスビボパージングに使用されるであろう、あるいは凍結乾燥されるであろう。骨髄および末梢血幹細胞産物は、パージングのため、エフェクター対標的（Ｅ対Ｔ）比５対１から３０対１の範囲で、４〜２４時間、１００ＩＵの組換えヒトＩＬ２で補充されたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ）において、解凍されたＳＩＲ−Ｔ細胞と共培養されるであろう。細胞は、５％のＣＯ２加湿型培養器で、３７℃で培養されるであろう。共培養期間の終わりに、細胞のアリコートが、無菌および品質試験（ＣＦＵ−ＧＭの測定、ＣＤ３４およびＣＤ１３８陽性細胞のフローサイトメトリーを含む）のために回収されるであろう。残りの試料は、以前に骨髄破壊的化学療法（例えば、７０ｍｇ／ｍ２の２分割用量、全用量１４０ｍｇ／ｍ２の高用量メルファラン）を受けたことのある患者に静注されるであろう。
【０７５３】
望ましい特性を有するＳＩＲを選択するための、in vitroおよびin vivo選択の使用。表７に記載されているＣＤ１９を標的とするＣＡＲのプールは、ＴＲＡＣ ｇＲＮＡおよび当技術分野で知られている技術を使用して、Ｔ細胞のＴＲＡＣ遺伝子座を標的としている。ターゲティングベクターは、ＣＡＲインサートの終止コドンの下流にあるＤＮＡバーコードも持っている。Ｔ細胞は末梢血由来であってよい。代替実施形態では、Ｔ細胞は、業界で周知の技術を用いて、ｉＰＳＣまたは造血器幹細胞由来の単一クローンであってもよい。ＣＡＲのプールを発現するＴ細胞は、１〜２１日間、in vitroでＲＡＪＩ細胞と共培養される。ＣＡＲ-Ｔ細胞プールの分取部分が標的細胞との培養前に回収され、更に共培養後、様々な日に回収される。試料は、標的細胞へ接触させた後、異なるＣＡＲの相対頻度を決定するため、次世代シーケンシングへ回される。標的細胞との共培養後、増殖応答の改善されたＣＡＲを決定するのに、バイオインフォ―マティクス分析が使用される。in vivoでＴ細胞上の増殖可能性の高いＣＡＲ、および／またはin vivoで長期継続するＣＡＲ，および／または腫瘍に負けた動物と比較して生存動物における頻度（初期Ｔ細胞母集団の頻度に対して標準化された頻度）の高いＣＡＲを決定するのに、本質的に同様のアプローチが使用される。本開示の代替実施形態において、ヒトの臨床サンプルにおいても、異なる特性および／または結果（限定されないが、改善された長期生存率、サイトカイン放出症候群の低い発生頻度、低い神経毒性、および／または改善された長期継続性）に関連するＣＡＲを同定するのに、本質的に同様のアプローチが使用される。斯かるＣＡＲは、その後、異なる病状および異なる患者を治療するための多様な特性を有する多様なＣＡＲのサブプール（同じまたは異なる抗原結合ドメインを標的にするＣＡＲを含む）を開発するのに、単独で、または種々の組み合わせで使用できる。別の実施形態では、ＣＡＲ-Ｔ細胞は標的細胞株に接触させ、その後、フローサイトメトリーで決定される細胞内ＩＦＮγの程度に基づいて、異なるセットに分類される。低／高ＩＦＮγ母集団における異なるＣＡＲの頻度は、次世代シーケンシングにより決定され、対照ＣＡＲ-Ｔ細胞母集団（すなわち、標的細胞株に接触していないＣＡＲ-Ｔ細胞、またはＣＡＲの標的を発現しない細胞に接触したＣＡＲ-Ｔ細胞）の頻度に対して標準化される。斯かる分析に基づいて、異なるレベルのＩＮＦα生産に関連しているＣＡＲが決定される。同様なアプローチが、任意の望ましい特性または属性（限定されないが、低いＴＮＦα生産、枯渇マーカーの低い発現、最終分化のマーカーの低い発現、および／または細胞毒性のマーカーの高い発現などが含まれる）、あるいはそれらの組み合わせを有するＣＡＲをスクリーニングまたは選別するのに使用される。
【０７５４】
ＨＩＶ−１ Ｖｉｆタンパク質は、レンチウイルス媒介性の遺伝子導入および発現を増強する。
【０７５５】
２９３ＦＴ細胞は、トランスフェクションの日に約８０％コンフルエントになるように、１０ｃｍの組織培養プレート中の抗生物質を含まない１０ｍｌのＤＭＥＭ−１０培地にプレーティングされた。 次の日、細胞は、配列番号11244をコードする10μgのレンチウイルス発現プラスミドまたはＣＤ19を標的とし、HIV-1 Ｖｉｆタンパク質（配列番号11245）とパッケージングプラスミド（7.5μgのPSPAX2プラスミドと2μgのPLP / VSVG）を共発現する第2世代ＣＡＲを使用するリン酸カルシウムトランスフェクション法によってトランスフェクトされた。トランスフェクションの約15〜16時間後、9 mlの培地を除去し、5mlの新鮮な培地と交換する。トランスフェクションの約48時間後、5 mlの上清を収集し（最初の収集）、新しい5mlの培地と交換する。トランスフェクションの約72時間後に、すべての培地を収集しました（2回目の収集、通常は約6 ml）。収集した上清をプールし、1000 rpmで1分間遠心分離して、細胞破片や非接着細胞を除去する。無細胞上清を0.45μmシリンジフィルターでろ過する。レンチウイルスの力価は、p24ELISAを使用して測定される。バフィーコート細胞は、血液銀行の健康な匿名化された成人ドナーから入手し、Ficoll-Hypaque勾配遠心分離によって末梢血単核細胞（PBMC）を分離するために使用される。Ｔ細胞は、ＣＤ3磁気マイクロビーズ（Miltenyi Biotech）を使用し、製造元の指示に従ってPBMCから分離される。Ｔ細胞は、10 ng / ml ＣＤ3抗体、10 ng / ml ＣＤ28抗体、および100 IU組換えヒトIL2を含むXVIVO培地（Lonza）に再懸濁される。ＣＤ19を標的とする第2世代ＣＡＲ（配列番号11244）またはＣＤ19を標的としHIV-1 Ｖｉｆタンパク質を共発現する第2世代ＣＡＲ（配列番号11245）のいずれかをコードする等量のレンチウイルスベクターを使用して、精製Ｔ細胞を感染させる。両方のＣＡＲ構築物はMYCエピトープタグも持っている。Ｔ細胞上のＣＡＲの発現は、APC結合MYC抗体による免疫染色と感染後48時間のFACS分析によって調べられる。Ｖｉｆ発現のないＣＡＲ構築物と比較して、有意に高い割合のＴ細胞がＶｉｆを共発現するＣＡＲ構築物に感染していることが見出されている。
【０７５６】
ＦＡＣＳ分析は、感染後３日で繰り返される。この場合も、Ｖｉｆ発現のないＣＡＲ構築物と比較して、有意に高い割合のＴ細胞がＶｉｆを共発現するＣＡＲ構築物に感染していることが見出されている。
【０７５７】
実験はまた、BC-1細胞株において繰り返される。この場合も、Ｖｉｆを発現しないＣＡＲ構築物と比較して、Ｖｉｆを共発現するＣＡＲ構築物に感染しているBC-1細胞の割合が大幅に高いことがわかる。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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