(57)【要約】本発明は、Ｂｉｓ−チオール化合物及びその医薬調製物に関する。本発明はさらに、対象における肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法に関し、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含む。【選択図】図３８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記対象は、少なくとも１つの肺感染症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象は、少なくとも２つの肺感染症を有し、前記感染症は順序が同時であるかまたは連続的である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記肺感染症は片方の肺にある、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記肺感染症は両肺にある、請求項２〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記肺感染症は、右肺の３つの肺葉のうち１つ以上にある、請求項２〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記肺感染症は、左肺の２つの肺葉のうち一方または両方にある、請求項２〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である、請求項２〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記肺感染症は１つ以上の細菌病原体及び／または真菌病原体を含んでいる、請求項２〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記肺感染症はＣＦ関連肺感染症である、請求項２〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＣＦ関連肺感染症を治療することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＦ関連肺感染症を管理することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＦ関連肺感染症の重症度を軽減することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記肺感染症は、肺粘膜、気管支、肺胞、マクロファージ、及び／または細気管支の中もしくはその上に位置する、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記肺感染症は、細菌バイオフィルム、凝集細菌、真菌バイオフィルム、細菌及び真菌の両方で構成される複数種もしくは複数門の複合バイオフィルム、または凝集真菌の、表面もしくは内部に位置する、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記肺感染症は喀痰中に位置する、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記細菌病原体は、グラム陽性菌及び／またはグラム陰性菌のうち１つ以上を含む、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌病原体は、細菌バイオフィルム及び／または浮遊細菌のうち１つ以上を含む、請求項９〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法は、（ｉ）前記細菌バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）前記細菌バイオフィルムの増殖を弱めること、（ｉｉｉ）前記細菌バイオフィルムの初期形成を防止すること、及び／または（ｉｖ）前記細菌バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記真菌病原体は、浮遊真菌及び／またはバイオフィルム真菌を含む、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体による前記感染症の予防、及び
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体の低減、及び／または
−喀痰の粘稠度を低下させること、のうち１つまたは全部によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、請求項９〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体または真菌病原体からの外毒素の産生もしくは分泌の阻止、
−前記細菌病原体または真菌病原体の浮遊細胞の細胞生存もしくは細胞増殖の阻害、
−前記細菌病原体または真菌病原体によるバイオフィルム形成の阻害、
−肺組織に対するバイオフィルムの侵襲性の抑制、
−肺組織に対するバイオフィルムの病原性の抑制、及び
−前記細菌病原体または真菌病原体のバイオフィルム形成細胞のバイオフィルム生存もしくはバイオフィルム増殖の阻害、のうちの１つ以上によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、実施形態９〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２３】
前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａから選択される、請求項９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記非結核性抗酸菌は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｒｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎｉから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．は、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｔａｂｉｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｍｂｉｆａｒｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｎｔｈｉｎａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｕｂｏｎｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｒｂｏｒｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔｅｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｅｔａｌｌｉｃａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｅｍｉｎａｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｉｆｆｕｓａから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、単剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、単剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムから選択される、請求項１８、１９及び２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及び／またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓは多剤耐性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記１つ以上の病原体は、アミカシン、アズトレオナム、メチシリン、バンコマイシン、ナフシリン、ゲンタマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、ドキシサイクリン、コリスチン、デラマニド、プレトマニド、クロファジミン、ベダキリン、及びトブラマイシンから選択される抗生物質に対して耐性または抵抗性を示す、請求項９〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗生物質はアミカシンまたはトブラマイシンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記細菌病原体はメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
アミカシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、イミペネム、シプロフロキサシン、セフタジジム、アズトレオナム、チカルシリン−クラブラン酸塩、ジクロキサシリン、アモキシシリン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、セファレキシン、ピペラシリン−タゾバクタム、リネゾリド、ダプトマイシン、バンコマイシン、メトロニダゾール、クリンダマイシン、コリスチン、テトラサイクリン、レボフロキサシン、アモキシシリンとクラブラン酸（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、クロキサシリン、ジクロキサシリン、セフジニル、セフプロジル、セファクロル、セフロキシム、エリスロマイシン／スルフイソキサゾール、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、チゲサイクリン、イミペネム、メロペネム、コリスチメタート／ｃｏｌｉｓｔｉｎ（登録商標）、メチシリン、オキサシリン、ナフシリン、カルベニシリン、アズロシリン、ピペラシリンとタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、セフェピム、エタンブトール、リファンピシン、及びメロペネムから選択される抗生物質を前記対象に併用投与することをさらに含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗生物質は、メロペネム、セフタジジム、トブラマイシン、アミカシン、アズトレオナム、シプロフロキサシン、コリスチン、及びレボフロキサシンから選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記真菌病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、及び／またはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓである、請求項９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＢＴ組成物を、エアロゾル装置を使用して経口または経鼻の吸入により投与することを含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記エアロゾル装置はネブライザーである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＢＴ組成物は、水溶液、水性懸濁液、または乾燥粉末の形態である、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＢＴ組成物は肺組織に局所投与される、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＢＴ組成物は、０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ〜約７５０μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約２５０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬ、もしくは約７５μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬの投与量として投与され、及び／または
肺に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、もしくは約７５μｇ〜約１５０μｇである、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＢＴ組成物は、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの投与量として投与される、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＢＴ組成物は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日に１回、週１回、２週間に１回、月１回、または２か月に１回投与される、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＢＴ組成物は週１回投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記対象において、咳嗽、喘鳴、息切れ、気管支拡張症、鼻ポリープ、喀血、呼吸不全、及び肺増悪という嚢胞性線維症の症状のうち１つ以上が重症度において軽減される、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．４μｍ〜約３μｍ、または約０．５μｍ〜約２μｍ、または約０．７μｍ〜約２μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、請求項４５〜４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、請求項４５〜４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
深肺領域に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、または約７５μｇ〜約１５０μｇである、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記深肺領域は深肺肺胞である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
気体中に複数の分散した液滴を含むエアロゾルであって、前記液滴は、少なくとも１つのＢＴ化合物を中に懸濁させて含むＢＴ組成物を含み、前記ＢＴ化合物は、ビスマス及び／またはビスマス塩及びチオール含有化合物を含み、
前記液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％は、空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである、前記エアロゾル。
【請求項５６】
前記液滴は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約７μｍ、または約０．５μｍ〜約５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．８μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、請求項５５に記載のエアロゾル。
【請求項５７】
前記液滴は、ＭＭＡＤが約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、請求項５６に記載のエアロゾル。
【請求項５８】
前記複数の液滴は、Ｄ９０が約５μｍより小さい、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項５９】
前記複数の液滴は、Ｄ９０が約３μｍより小さい、請求項５８に記載のエアロゾル。
【請求項６０】
前記複数の液滴は連続気相中に分散している、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項６１】
前記ＢＴ化合物は、１つ以上のチオール含有化合物と共有結合で結合しており、及び／またはそれらとの配位錯体になっているビスマス及び／またはビスマス塩を含む、請求項５５〜６０のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項６２】
前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、請求項５５〜６１のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項６３】
前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、請求項５５〜６２のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項６４】
前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、請求項５５〜６３のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項６５】
前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、請求項６４に記載のエアロゾル。
【請求項６６】
前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、請求項６５に記載のエアロゾル。
【請求項６７】
前記空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）は、レーザー飛行時間型及び／またはカスケードインパクターによって決定される、請求項５５に記載のエアロゾル。
【請求項６８】
前記ＢＴ化合物は前記液滴中に懸濁されている、請求項５５〜６７のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項６９】
前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、請求項６８に記載のエアロゾル。
【請求項７０】
前記液滴はさらに、Ｔｗｅｅｎ  ８０（例えば、約０．０５％〜約１％）及び任意選択で
ｐＨが約７．４の緩衝液（例えば、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）、及び／または
塩化ナトリウム、を含む、請求項５５〜６９のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項７１】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも２日である、請求項５５〜７０のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項７２】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも４日である、請求項７１のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項７３】
対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、前記方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を前記対象に投与することを含み、前記組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである微粒子の懸濁液である、前記方法。
【請求項７４】
前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＢＴ組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択でｐＨ約７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ＢＴ組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約１０ｍＭの塩化ナトリウム、及びｐＨ約７．４の約１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約５μｍである、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約７μｍ、または約０．５μｍ〜約５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．８μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記液滴は、ＭＭＡＤが約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記複数の液滴は、Ｄ９０が約３μｍより小さい、請求項７７〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記複数の液滴は、Ｄ９０が約２μｍより小さい、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記複数の液滴は連続気相中に分散している、請求項７７〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ＢＴ化合物は、１つ以上のチオール含有化合物と共有結合で結合しており、及び／またはそれらとの配位錯体になっているビスマス及び／またはビスマス塩を含む、請求項７７〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、請求項７７〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、請求項７７〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、請求項７７〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記ＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
深肺領域に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、または約７５μｇ〜約１５０μｇである、請求項７７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記深肺領域は深肺肺胞である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記深肺肺胞に投与されるＢｉｓＥＤＴを含む前記ＢＴ組成物の総量は約０．６ｍｇ〜約６ｍｇである、請求項７７〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記組成物はネブライザーによりエアロゾル化される、請求項７７〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記ネブライザーはジェット式ネブライザーである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記ジェット式ネブライザーは、Ｐａｒｉ  ＬＣ  Ｐｌｕｓジェット式ネブライザーまたはＰａｒｉ  ＬＣ  ＳＰＲＩＮＴジェット式ネブライザーである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ネブライザーは、入り口圧力が約１０〜約４０ｐｓｉｇである、請求項９３〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記流入量は約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分である、請求項９３〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記排気流量は約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分である、請求項９３〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
対象における１つ以上の肺疾患または感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１００】
前記１つ以上の肺疾患または感染症は、嚢胞性線維症の結果でもなく、それに関連もしていない、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記対象は、少なくとも１つの肺感染症を有し、２つ以上の肺感染症がある場合、前記感染症は順序が同時であるかまたは連続的である、請求項９９または１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記肺感染症は片方の肺にある、請求項１００または１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記肺感染症は両肺にある、請求項１００〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記肺感染症は、右肺の３つの肺葉のうち１つ以上にある、請求項１００〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記肺感染症は、左肺の２つの肺葉のうち一方または両方にある、請求項１００〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である、請求項１００〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記肺感染症は、１つ以上の細菌病原体または真菌病原体を含んでいる、請求項１００〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記肺感染症はＣＦ関連肺感染症である、請求項１０１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＣＦ関連肺感染症を治療することを含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＣＦ関連肺感染症を管理することを含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記ＣＦ関連肺感染症の重症度を軽減することを含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１２】
前記肺感染症は、肺粘膜、気管支及び／または細気管支の中もしくはその上に位置する、請求項１００〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記肺感染症は、細菌バイオフィルム、凝集細菌、真菌バイオフィルム、または凝集真菌の、表面もしくは内部に位置する、請求項１００〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記肺感染症は喀痰中に位置する、請求項１００〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記細菌病原体は、グラム陽性菌及びグラム陰性菌のうち１つ以上を含む、請求項１０７〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記細菌病原体は、細菌バイオフィルム及び浮遊細菌のうち１つ以上を含む、請求項１０７〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記方法は、（ｉ）前記細菌バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）前記細菌バイオフィルムの増殖を弱めること、及び（ｉｉｉ）前記細菌バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記真菌病原体は、浮遊真菌及び／またはバイオフィルム真菌を含む、請求項１０７〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体による前記感染症の予防、及び
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体の低減、及び／または
−喀痰の粘稠度を低下させること、のうち１つまたは全部によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、請求項１０７〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体または真菌病原体からの外毒素の産生もしくは分泌の阻止、
−前記細菌病原体または真菌病原体の浮遊細胞の細胞生存もしくは細胞増殖の阻害、
−前記細菌病原体または真菌病原体によるバイオフィルム形成の阻害、及び
−前記細菌病原体または真菌病原体のバイオフィルム形成細胞のバイオフィルム生存もしくはバイオフィルム増殖の阻害、のうちの１つ以上によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、請求項１０７〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａ  ａｌｂａｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、���ｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａから選択される、請求項１０７〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記非結核性抗酸菌は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｒｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎｉから選択される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．は、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｔａｂｉｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｍｂｉｆａｒｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｎｔｈｉｎａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｕｂｏｎｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｒｂｏｒｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔｅｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｅｔａｌｌｉｃａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｅｍｉｎａｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｉｆｆｕｓａから選択される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、単剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、単剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓから選択される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓから選択される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２６】
前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムから選択される、請求項１１７、１１８、または１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及び／またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓは多剤耐性である、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２８】
前記１つ以上の病原体は、アミカシン、アズトレオナム、メチシリン、バンコマイシン、ナフシリン、ゲンタマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、ドキシサイクリン及びトブラマイシンから選択される抗生物質に対して耐性または抵抗性を示す、請求項１０７〜１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記抗生物質はアミカシンまたはトブラマイシンである、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記細菌病原体はメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
アミカシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、イミペネム、シプロフロキサシン、セフタジジム、アズトレオナム、チカルシリン−クラブラン酸塩、ジクロキサシリン、アモキシシリン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、セファレキシン、ピペラシリン−タゾバクタム、リネゾリド、ダプトマイシン、バンコマイシン、メトロニダゾール、クリンダマイシン、コリスチン、テトラサイクリン、レボフロキサシン、アモキシシリンとクラブラン酸（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、クロキサシリン、ジクロキサシリン、セフジニル、セフプロジル、セファクロル、セフロキシム、エリスロマイシン／スルフイソキサゾール、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、チゲサイクリン、イミペネム、メロペネム、コリスチメタート／ｃｏｌｉｓｔｉｎ（登録商標）、メチシリン、オキサシリン、ナフシリン、カルベニシリン、アズロシリン、ピペラシリンとタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、セフェピム、エタンブトール、リファンピシン、及びメロペネムから選択される抗生物質を前記対象に併用投与またはコンジョイント投与することをさらに含む、請求項９９〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記抗生物質は、メロペネム、セフタジジム、トブラマイシン、アミカシン、アズトレオナム、シプロフロキサシン、コリスチン、及びレボフロキサシンから選択される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記真菌病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、及び／またはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓである、請求項１０７〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
エアロゾル装置を使用して前記ＢＴ組成物を経口または経鼻の吸入により投与することを含む、請求項９９〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記エアロゾル装置はネブライザーである、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記ＢＴ組成物は、水溶液または懸濁液の形態である、請求項１３４または１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記ＢＴ組成物は肺組織に局所投与される、請求項９９〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記ＢＴ組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ〜約７５０μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約２５０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬ、もしくは約７５μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬの投与量として投与され、及び／または
肺に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、もしくは約７５μｇ〜約１５０μｇである、請求項９９〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ＢＴ組成物は、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの投与量として投与される、請求項９９〜１３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ＢＴ組成物は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日に１回、週１回、２週間に１回、月１回、隔月に１回投与される、請求項９９〜１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４１】
前記ＢＴ組成物は週１回投与される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
咳嗽、喘鳴、息切れ、気管支拡張症、鼻ポリープ、喀血、呼吸不全、及び肺増悪という症状のうち１つ以上が前記対象において重症度が軽減される、請求項９９〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、請求項９９〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．４μｍ〜約３μｍ、または約０．５μｍ〜約２μｍ、または約０．７μｍ〜約２μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、請求項１４２〜１４３に記載の方法。
【請求項１４６】
前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、請求項１４２〜１４３に記載の方法。
【請求項１４７】
前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、請求項１４３〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５１】
深肺領域に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、または約７５μｇ〜約１５０μｇである、請求項９９〜１５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記深肺領域は深肺肺胞である、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項５５〜７２のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項１５４】
実質的にすべての前記微粒子は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１５３に記載のエアロゾル。
【請求項１５５】
前記エアロゾル化粒子の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項５５〜７２または１５３〜１５４のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項１５６】
前記組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６μｍ〜約２．５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである微粒子の懸濁液である、請求項５５〜７２または１５３〜１５５のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項１５７】
前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、請求項５５〜７２または１５３〜１５６のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項１５８】
対象への前記エアロゾル化組成物の送達後、前記ＢＴ化合物用量の少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％が肺に沈着する、請求項５５〜７２または１５３〜１５７のいずれか一項に記載のエアロゾル。
【請求項１５９】
前記ＢＴ化合物用量の少なくとも８０％が肺に沈着する、請求項１５８に記載のエアロゾル。
【請求項１６０】
前記ＢＴ化合物用量の少なくとも９０％が肺に沈着する、請求項１５８に記載のエアロゾル。
【請求項１６１】
前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１〜５４または７３〜１５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
実質的にすべての前記微粒子は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
前記エアロゾル化粒子の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６μｍ〜約２．５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである微粒子の懸濁液である、請求項１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、請求項１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも２日である、請求項１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも４日である、請求項１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
対象への前記エアロゾル化組成物の送達後、前記ＢＴ化合物用量の少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％が肺に沈着する、請求項１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
前記ＢＴ化合物用量の少なくとも８０％が肺に沈着する、請求項１６８に記載のエアロゾル。
【請求項１７０】
前記ＢＴ化合物用量の少なくとも９０％が肺に沈着する、請求項１６８に記載のエアロゾル。
【請求項１７１】
対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含むビスマスチオール（ＢＴ）組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＢＴ組成物を投与することは、エアロゾル装置を使用した経口または経鼻による吸入によるものである、前記方法。
【請求項１７２】
前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも７０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍの体積平均直径（ＶＭＤ）を有する、前記複数の微粒子を含む、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
前記微粒子の少なくとも８０％はＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
前記微粒子の少なくとも９０％はＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７５】
前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも７０％は、空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７６】
前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも８０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７７】
前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも９０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７８】
前記ＢＴ組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択でｐＨ約７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７９】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢｉｓＥＤＴ化合物は、平均半減期が約４日である、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１８０】
前記対象は、１つ以上の細菌病原体及び／または真菌病原体が含まれている少なくとも１つの肺感染症を有する、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１８１】
前記方法は、（ｉ）細菌バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）細菌バイオフィルムの増殖を弱めること、（ｉｉｉ）前記細菌バイオフィルムの初期形成を防止すること、及び／または（ｉｖ）前記細菌バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａから選択される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８３】
気体中に複数の分散した液滴を含むエアロゾルであって、前記液滴は、ＢｉｓＥＤＴ化合物を中に懸濁させて含むＢＴ組成物を含み、かつ
前記液滴のうち少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、前記エアロゾル。
【請求項１８４】
エアロゾル化前、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも７０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍのＶＭＤを有する、前記複数の微粒子を含む、請求項１８３に記載のエアロゾル。
【請求項１８５】
前記液滴のうち最低８０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項１８３に記載のエアロゾル。
【請求項１８６】
前記液滴のうち最低９０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、請求項１８３に記載のエアロゾル。
【請求項１８７】
エアロゾル化前、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも８０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍのＶＭＤを有する、前記複数の微粒子を含む、請求項１８５に記載のエアロゾル。
【請求項１８８】
エアロゾル化前、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも９０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍのＶＭＤを有する、前記複数の微粒子を含む、請求項１８６に記載のエアロゾル。
【請求項１８９】
前記液滴はさらに、Ｔｗｅｅｎ  ８０（例えば、約０．０５％〜約１％）及び任意選択でｐＨが約７．４の緩衝液（例えば、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）、及び／または塩化ナトリウムを含む、請求項１８３に記載のエアロゾル。
【請求項１９０】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢｉｓＥＤＴ化合物は、平均半減期が２日を超える、請求項１８３に記載のエアロゾル。
【請求項１９１】
前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢｉｓＥＤＴ化合物は、平均半減期が約４日である、請求項１８３に記載のエアロゾル。
【請求項１９３】
ビスマスチオール（ＢＴ）組成物を含む医薬組成物は、ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含み、前記ＢＴ組成物は複数の微粒子を含み、前記微粒子のＤ９０は約１．６μｍ以下である、前記医薬組成物。
【請求項１９４】
前記微粒子の少なくとも７０％は体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１９３に記載の医薬組成物。
【請求項１９５】
前記微粒子の少なくとも９０％は体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである、請求項１９３に記載の医薬組成物。
【請求項１９６】
対象における１つ以上の肺疾患または感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、ＢｉｓＥＤＴを含むビスマスチオール（ＢＴ）組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、そのうち少なくとも７０％は体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである、前記複数の微粒子を含み、かつ、前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、前記方法。
【請求項１９７】
前記１つ以上の肺疾患または感染症は、嚢胞性線維症の結果でもなく、それに関連もしていない、請求項１９７に記載の方法。
【請求項１９８】
前記肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である、請求項１９８に記載の方法。
【請求項１９９】
前記微粒子のＤ５０は１．０μｍ以下である、請求項１９３に記載の医薬組成物。
【請求項２００】
前記微粒子のＤ１０は０．３９μｍ以下である、請求項１９３に記載の医薬組成物。
【請求項２０１】
約０．１ｍｇ／ｍＬより高い濃度の前記ＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択で約ｐＨ７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１９３〜１９６及び２００〜２０１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０２】
前記医薬組成物はエアロゾルである、請求項１９３〜１９６及び２００〜２０２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０３】
前記エアロゾルはネブライザーによって作り出される、請求項２０３に記載の医薬組成物。
【請求項２０４】
対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理及び／または軽減する方法であって、請求項１９３〜１９６及び２００〜２０４のいずれか一項に記載のビスマスチオール（ＢＴ）組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２０５】
対象における１つ以上の肺疾患または感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理及び／または軽減する方法であって、請求項１９３〜１９６及び２００〜２０４のいずれか一項に記載のビスマスチオール（ＢＴ）組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１８年７月３１日に出願された米国仮出願第６２／７１２，５６３号、及び２０１９年２月４日に出願された米国仮出願第６２／８００，９２５号の利益を主張するものであり、その記載内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、慢性肺感染症ならびに胃腸、栄養、及び他の異常を特徴とする臨床症候群として現れる。ＣＦの遺伝的基盤は、嚢胞性線維性膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）遺伝子の変異から生じる、特徴が十分に明らかな重度の単一遺伝子劣性疾患である。患者は、多くの場合、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ等の慢性肺感染症を患っている。最終的に、ＣＦ患者の８０〜９５％は、慢性細菌感染症及び随伴する気道炎症により引き起こされる呼吸不全に陥る。
【０００３】
ＣＦ患者の肺は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ及びＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ等の生物が乳児期及び幼児期に定着しているかまたはそれらに感染していることが多く、これにより上皮表面が損傷され、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの付着増加及び最終的な菌交代をもたらす。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる慢性感染は、ＣＦ患者の肺機能低下及び最終的な死亡率の主要原因であることが証明されている。慢性Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症は、上皮表面損傷及び気道塞栓を引き起こして、気道コンダクタンスを進行性に障害し、これにより肺機能の低下をもたらす。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａはまた、多くの一般的抗生物質に対して耐性を生じ、これが感染の根絶を極めて困難にしている。耐性が生じる１つの要因は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及び他のＣＦ関連の肺の病原体がバイオフィルムを形成する傾向であり、抗生物質が浸透することが一層困難なバイオフィルムを作り出す傾向である。さらに、感染症一般の治療における抗生物質の高頻度の使用は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ等、細菌の多剤耐性（ＭＤＲ）株を生じさせた。
【０００４】
長期吸入抗生物質療法は現在では安定した患者における慢性維持療法の標準治療である。有効な抗生物質濃度は、噴霧によって気道で達成することができ、静脈内抗生物質の副作用を回避することができる。コリスチンメタン酸ナトリウム、アミカシン、アズトレオナム及びトブラマイシンは、吸入により患者に投与されてきた。しかしながら、広域スペクトルの持続的で、最も耐性のある微生物（例えば、細菌または真菌）種に対しても強力な、ＣＦ患者における肺の微生物（例えば、細菌または真菌）感染症の治療に対する満たされていないニーズがある。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書では、対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法が開示され、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含む。
【０００６】
特定の実施形態では、本開示は、有効量の、本明細書に記載される化合物（例えば、ビスマスチオール化合物、またはその薬学的に許容される塩等、開示の化合物）のいずれかと、１つ以上の薬学的に許容される添加剤とを含む、対象における使用に好適な嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減するための医薬組成物を提供する。
【０００７】
特定の実施形態では、本開示は、気体中に複数の分散した液滴を含むエアロゾルを提供し、前記液滴は、少なくとも１つのＢＴ化合物を中に懸濁させて含むＢＴ組成物を含み、ここで、ＢＴ化合物は、ビスマス及び／またはビスマス塩及びチオール含有化合物を含み、かつ、液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％は、空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである。
【０００８】
特定の実施形態では、本開示は、対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法を提供し、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含み、組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである微粒子の懸濁液である。
【０００９】
特定の実施形態では、本開示は、対象における１つ以上の肺疾患もしくは感染症に関連した症状もしくは感染の重症度を治療、管理または軽減する方法を提供し、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】代表的吸入曝露の概略図を示す。
【図２】ＢｉｓＥＤＴの２．５ｍｇ／ｍＬ溶液のエアロゾル粒度分布を示す。
【図３】ＢｉｓＥＤＴの２５ｍｇ／ｍＬ溶液のエアロゾル粒度分布を示す。
【図４】ＢｉｓＥＤＴの５０ｍｇ／ｍＬ溶液のエアロゾル粒度分布を示す。
【図５】ＢｉｓＥＤＴの７５ｍｇ／ｍＬ溶液のエアロゾル粒度分布を示す。
【図６】ＢｉｓＥＤＴの１００ｍｇ／ｍＬ溶液のエアロゾル粒度分布を示す。
【図７】３００ｍＯｓｍｏｌａｌｉｔｙのリン酸緩衝液に入れた１００ｍｇ／ｍＬのＢｉｓＥＤＴのエアロゾル粒度分布を示す。
【図８】３００ｍＯｓｍｏｌａｌｉｔｙのリン酸緩衝液に入れた５０ｍｇ／ｍＬのＢｉｓＥＤＴのエアロゾル粒度分布を示す。
【図９】３００ｍＯｓｍｏｌａｌｉｔｙのリン酸緩衝液に入れた１０ｍｇ／ｍＬのＢｉｓＥＤＴのエアロゾル粒度分布を示す。
【図１０】３００ｍＯｓｍｏｌａｌｉｔｙのリン酸緩衝液に入れた２．５ｍｇ／ｍＬのＢｉｓＥＤＴのエアロゾル粒度分布を示す。
【図１１】抗生物質の吸入薬物送達により、肺の曝露（Ｂ）は増加するが対応する副作用の全身曝露（Ａ）は減少することを示す。
【図１２】臨床的に関連する様々なＣＦ分離株に対するＢｉｓＥＤＴのＭＩＣ試験の結果を示す。
【図１３】（培地側からの）ＬＤＨ放出及び頂端／空気曝露側からの経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の両方による細胞毒性の評価を示す図である。
【図１４】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの多剤耐性ＣＦ分離株であるＭＲ１４から増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図１５】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのアミノグリコシド耐性ＣＦ分離株であるＡＧ１４から増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図１６】Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ．ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａのＣＦ分離株であるＡＵ１９７から増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図１７】ＣＦ肺感染症の治療を頻繁に複雑にする臨床的に関連するＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＭＡＢＳＣ）のＣＦ分離株を代表するＡＭＴ０１３０−８から増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図１８】マクロライド耐性、アミカシン耐性のＭＡＢＳＣであるＡＭＴ００８９−５から増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図１９】Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ（マクロライド耐性；誘導型）であるＡＴＣＣ−１９９７７から増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図２０】ＣＦ分離株のＭＡＢＳＣから増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図２１】Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐから増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図２２】Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａから増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図２３】Ｅ．ｃｏｌｉから増殖したバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を示す。
【図２４】ヒト気道上皮の完全に分化したモデルであるＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）の概要を示す。
【図２５】１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露時における溶液状ＢｉｓＥＤＴの細胞毒性パーセンテージ（ＬＤＨ測定）を示す。１時間、８時間、２４時間及び４８時間を表すバーは、濃度ごとに左から右へ示されている。
【図２６】１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露時における組織の完全性に対する溶液状ＢｉｓＥＤＴの影響を示す。１時間、８時間、２４時間及び４８時間を表すバーは、濃度ごとに左から右へ示されている。
【図２７】１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露時における固体状ＢｉｓＥＤＴの細胞毒性パーセンテージ（ＬＤＨ測定）を示す。１時間、８時間、２４時間及び４８時間を表すバーは、濃度ごとに左から右へ示されている。
【図２８】１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露時における組織の完全性に対する固体状ＢｉｓＥＤＴの影響を示す。１時間、８時間、２４時間及び４８時間を表すバーは、濃度ごとに左から右へ示されている。
【図２９】１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露時における固体状ＢｉｓＥＤＴの細胞毒性パーセンテージ（ＬＤＨ測定）を示す。１時間、８時間、２４時間及び４８時間を表すバーは、濃度ごとに左から右へ示されている。
【図３０】１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露時における組織の完全性に対する固体状ＢｉｓＥＤＴの影響を示す。１時間、８時間、２４時間及び４８時間を表すバーは、濃度ごとに左から右へ示されている。
【図３１】トブラマイシンの殺菌活性に対する喀痰の効果を示す。
【図３２】ＢｉｓＥＤＴの殺菌活性は、ＣＦ患者の喀痰により部分的に阻害されるように見えることを示す。
【図３３】ＢｉｓＥＤＴの殺菌活性は、ＣＦ患者の喀痰により部分的に阻害されるように見えることを示す。
【図３４】ラットにおける１００μｇ／ｋｇの肺沈着単回投与後の肺組織ＢｉｓＥＤＴ濃度と時間のグラフを示す。
【図３５】全血中ＢｉｓＥＤＴ濃度と時間（１００μｇ／ｋｇのＩＶまたは１００μｇ／ｋｇの吸入または２５０μｇ／ｋｇの経口投与）を示す。
【図３６】単回吸入投与（μｇ／ｋｇ肺沈着）後のラットの血中ＢｉｓＥＤＴと時間を示す。
【図３７】屠殺時（単回吸入投与から２４時間または３０時間後）のラットの肺内ＢｉｓＥＤＴ濃度（ｎｇ／ｇ）を示す。
【図３８】ビヒクルの粒度分布を示す。
【図３９】トブラマイシンの粒度分布を示す。
【図４０】ＢｉｓＥＤＴの粒度分布を示す。
【図４１】イヌの曝露システムの例示的概略図を示す。
【図４２】３日目及び５日目の累積（総）投与用量（肺沈着）を示すラットの有効性データを示す。
【図４３】各化合物を単独（列１２及び行Ｈ）及び様々な薬物濃度比での組み合わせで試験する代表的チェッカーボードアッセイを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
定義
特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本開示の技術分野の当業者が共通して理解する意味を有する。以下の参考文献には、本開示で使用される用語の多くについての一般定義が当業者に提供されている：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）、Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）、Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）、及びＨａｌｅ  ＆  Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用される場合、以下の用語は、他に明記しない限り、下記でそれらに与えられている意味を有する。
【００１２】
本明細書で使用する場合、本記載及び特許請求の範囲で使用される動詞「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びその変形は、その非限定的な意味で使用され、その語に続く項目が含まれるが、具体的に言及されていない項目が除外されないことを意味する。本開示は、特許請求の範囲に記載のステップ、要素、及び／または試薬を好適に「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」か、それら「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）」か、またはそれらから「本質的になって（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」よい。
【００１３】
具体的に記述されるかまたは文脈から明らかでない限り、用語「または」は、本明細書で使用される場合、包括的であることが理解される。具体的に記述されるかまたは文脈から明らかでない限り、用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、本明細書で使用される場合、単数または複数であることが理解される。
【００１４】
本明細書全体を通して、用語「約（ａｂｏｕｔ）」及び／または「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、数値及び／または範囲と組み合わせて使用され得る。用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、記述の値に近い値を意味すると理解される。さらに、「約［値］未満」または「約［値］超」という語句は、本明細書で提供される「約」という用語の定義を考慮して理解されるべきである。用語「約（ａｂｏｕｔ）」及び「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は同じ意味で使用され得る。
【００１５】
「アルキル」基または「アルカン」は、完全に飽和である、直鎖または分岐した非芳香族炭化水素である。典型的に、直鎖または分岐したアルキル基は、別段定義されない限り、１個〜約２０個の炭素原子、例えば、１個〜約１０個の炭素原子を有する。直鎖及び分岐したアルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ペンチル及びオクチルが含まれる。Ｃ１−Ｃ６の直鎖または分岐したアルキル基は、「低級アルキル」基とも呼ばれる。
【００１６】
さらに、明細書、実施例、及び特許請求の範囲を通して使用される「アルキル」（または「低級アルキル」）という用語は、「非置換アルキル」と「置換アルキル」の両方を含むことが意図され、そのうち後者は、炭化水素骨格の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有するアルキル部分を指す。そのような置換基には、他に指定されない場合、例えば、ハロゲン部分、ヒドロキシル部分、カルボニル部分（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル等）、チオカルボニル部分（チオエステル、チオ酢酸塩、またはチオギ酸塩等）、アルコキシ部分、ホスホリル部分、リン酸部分、ホスホン酸部分、ホスフィン酸部分、アミノ部分、アミド部分、アミジン部分、イミン部分、シアノ部分、ニトロ部分、アジド部分、スルフヒドリル部分、アルキルチオ部分、硫酸部分、スルホン酸部分、スルファモイル部分、スルホンアミド部分、スルホニル部分、ヘテロシクリル部分、アラルキル部分、または芳香族部分もしくはヘテロ芳香族部分が含まれ得る。当業者は、炭化水素鎖上の置換される部分は、適切であれば、それら自体が置換され得ることを理解するであろう。例えば、置換アルキルの置換基には、置換及び非置換形態、アミノ基、アジド基、イミノ基、アミド基、ホスホリル基（ホスホン酸基及びホスフィン酸基を含む）、スルホニル基（硫酸基、スルホンアミド基、スルファモイル基及びスルホン酸基を含む）、及びシリル基、ならびにエーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシラート、及びエステルを含む）、−ＣＦ３、−ＣＮ等が含まれ得る。例示的置換アルキルを以下に記載する。シクロアルキルは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル置換アルキル、−ＣＦ３、−ＣＮ等でさらに置換され得る。
【００１７】
用語「Ｃｘ−ｙ」は、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシ等の化学部分と併用される場合、鎖内にｘ個〜ｙ個の炭素を含有する基が含まれることが意図される。例えば、用語「Ｃｘ−ｙアルキル」とは、置換または非置換の飽和炭化水素基を指し、これには、トリフルオロメチル及び２，２，２−トリフルオロエチル等のようなハロアルキル基を含め、鎖内にｘ個〜ｙ個の炭素を含有する直鎖アルキル基及び分岐鎖アルキル基が含まれる。Ｃ０アルキルは、基が末端位置にある場合は水素を、内部にある場合は結合を示す。用語「Ｃ２−ｙアルケニル」及び「Ｃ２−ｙアルキニル」とは、長さ及び可能な置換が上記のアルキルに類似する、置換または非置換の不飽和脂肪族基を指すが、それぞれ、少なくとも１つの二重結合または三重結合を含有する。
【００１８】
用語「アルキルアミノ」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１つのアルキル基で置換されるアミノ基を指す。
【００１９】
用語「アルキルチオ」とは、本明細書で使用される場合、アルキル基で置換されるチオール基を指し、一般式アルキルＳ−によって表され得る。
【００２０】
用語「アミン」及び「アミノ」は、当該技術分野で認識されており、非置換及び置換の両方の、アミン及びその塩、例えば、
【化１】
2021533193.tif 000003
によって表され得る部分を指し、各Ｒ３１は、独立して、水素もしくはヒドロカルビル基を表すか、または２つのＲ３１は、それらが結合しているＮ原子と一緒になって、環構造に４個〜８個の原子を有する複素環を完成させる。用語「アミノアルキル」とは、本明細書で使用される場合、アミノ基で置換されるアルキル基を指す。
【００２１】
本明細書で使用される「アリール」という用語には、環の各原子が炭素である、置換または非置換の単環芳香族基が含まれる。いくつかの実施形態では、環は、５〜７員環、例えば、６員環である。用語「アリール」には、２個以上の炭素が２つの隣接している環に共通している環式環を２つ以上有する多環式環系も含まれ、環のうちの少なくとも１つは芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。アリール基には、ベンゼン基、ナフタレン基、フェナントレン基、フェノール基、アニリン基等が含まれる。
【００２２】
用語「ビスマス」とは、周期表の８３番目の元素、またはその原子もしくはイオンを指す。ビスマスは、金属の状態またはイオン化された状態、例えば、ＩＩＩまたはＶの酸化状態で存在し得る。ビスマスイオンは、陰イオンと共に錯体を形成して、ビスマス塩を作るかまたは錯陰イオンを形成し、その後１つ以上のさらなる陽イオン（複数可）とさらに錯体を形成することができる。ビスマスはまた、イオウ等の他の原子と共有結合を形成することもできる。
【００２３】
本明細書に開示されるように、「ビスマスチオール化合物」または「ＢＴ化合物」は、１つ以上のチオール化合物に存在する他の１個、２個、または３個のイオウ原子と共有結合したビスマス原子を有する化合物である。用語「チオール」とは、−ＳＨ基を含有する炭素含有化合物またはその断片を指し、一般式Ｒ−ＳＨで表され得る。これらのチオール化合物には、１個、２個、３個またはそれ以上のＳ原子を有する化合物が含まれる。チオール化合物は、アルキル、ヒドロキシル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、及び他の置換基等、他の官能性を有し得る。２個以上のＳ原子を有するチオール化合物は、同じ分子からの２個のＳ原子がビスマス原子と共有結合で結合するよう、ビスマス原子をキレート化することができる。例示的ビスマスチオール化合物を以下に示す。
【化２】
2021533193.tif 000004
【００２４】
用語「炭素環」、及び「炭素環式」とは、本明細書で使用される場合、環の各原子が炭素である飽和または不飽和の環を指す。炭素環という用語には、芳香族炭素環と非芳香族炭素環の両方が含まれる。非芳香族炭素環には、すべての炭素原子が飽和であるシクロアルカン環、及び少なくとも１つの二重結合を含有するシクロアルケン環の両方が含まれる。
【００２５】
用語「炭素環」には、５〜７員の単環及び８〜１２員の二環式環が含まれる。二環式炭素環の各環は、飽和環、不飽和環及び芳香環から選択され得る。炭素環には、１個、２個または３個以上の原子が２つの環の間で共有されている二環式分子が含まれる。用語「縮合炭素環」とは、環の各々が２個の隣接する原子を他方の環と共有する二環式炭素環を指す。縮合炭素環の各環は、飽和環、不飽和環及び芳香環から選択され得る。例示的な一実施形態では、芳香環、例えば、フェニルは、飽和または不飽和の環、例えば、シクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクロヘキセンと縮合することができる。価数が許容される場合、飽和、不飽和及び芳香族の二環式環のいかなる組み合わせも、炭素環式の定義に含まれる。例示的「炭素環」には、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５−シクロオクタジエン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタ−３−エン、ナフタレン及びアダマンタンが含まれる。例示的縮合炭素環には、デカリン、ナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタン、４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インデン及びビシクロ［４．１．０］ヘプタ−３−エンが含まれる。「炭素環」は、水素原子を持つことができる任意の１つ以上の位置で置換され得る。
【００２６】
「シクロアルキル」基は、完全に飽和している環状炭化水素である。「シクロアルキル」には、単環式及び二環式の環が含まれる。典型的に、単環式シクロアルキル基は、別段定義されない限り、３個〜約１０個の炭素原子、より典型的には３個〜８個の炭素原子を有する。二環式シクロアルキルの第２の環は、飽和環、不飽和環及び芳香環から選択され得る。シクロアルキルには、１個、２個または３個以上の原子が２つの環の間で共有されている二環式分子が含まれる。用語「縮合シクロアルキル」とは、環の各々が２個の隣接する原子を他方の環と共有する二環式シクロアルキルを指す。縮合二環式シクロアルキルの第２の環は、飽和環、不飽和環及び芳香環から選択され得る。「シクロアルケニル」基は、１つ以上の二重結合を含有する環状炭化水素である。
【００２７】
本明細書で使用される場合の用語「ハロ」及び「ハロゲン」とはハロゲンを意味し、これには、クロロ、フルオロ、ブロモ、及びヨードが含まれる。
【００２８】
用語「ヘタラルキル（ｈｅｔａｒａｌｋｙｌ）」及び「ヘテロアラルキル」とは、本明細書で使用される場合、ヘタリール基で置換されるアルキル基を指す。
【００２９】
用語「ヘテロアルキル」とは、本明細書で使用される場合、飽和または不飽和の、炭素原子と少なくとも１個のヘテロ原子の鎖を指し、２個のヘテロ原子が隣接することはない。
【００３０】
用語「ヘテロアリール」及び「ヘタリール」には、置換または非置換の単一芳香環構造、例えば、５〜７員環、例えば、５〜６員環が含まれ、その環構造には、少なくとも１個のヘテロ原子、例えば、１個〜４個のヘテロ原子、例えば、１個または２個のヘテロ原子が含まれる。用語「ヘテロアリール」及び「ヘタリール」には、２個以上の炭素が２つの隣接している環に共通している環式環を２つ以上有する多環式環系も含まれ、環のうちの少なくとも１つはヘテロ芳香環であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジン等が含まれる。
【００３１】
本明細書で使用される場合の用語「ヘテロ原子」とは、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、及びイオウである。
【００３２】
用語「ヘテロシクリル」、「複素環」、及び「複素環式」とは、置換または非置換の非芳香環構造、例えば、３〜１０員環、さらには、例えば、３〜７員環を指し、その環構造には、少なくとも１個のヘテロ原子、例えば、１個〜４個のヘテロ原子、例えば、１個または２個のヘテロ原子が含まれる。用語「ヘテロシクリル」及び「複素環式」には、２個以上の炭素が２つの隣接している環に共通している環式環を２つ以上有する多環式環系も含まれ、環のうちの少なくとも１つは、複素環式であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロシクリル基には、例えば、ピペリジン系、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタム等が含まれる。
【００３３】
用語「ヘテロシクリルアルキル」とは、本明細書で使用される場合、複素環基で置換されるアルキル基を指す。
【００３４】
用語「ヒドロカルビル」とは、本明細書で使用される場合、＝Ｏまたは＝Ｓ置換基を有していない炭素原子を介して結合している基を指し、典型的には、少なくとも１つの炭素−水素結合及び主に炭素骨格を有するが、任意選択でヘテロ原子を含み得る。したがって、メチル、エトキシエチル、２−ピリジル、及びトリフルオロメチルのような基は、本出願の目的の場合、ヒドロカルビルと見なされるが、アセチル（連結炭素上に＝Ｏ置換基を有する）及びエトキシ（炭素ではなく酸素を介して連結されている）等の置換基は、ヒドロカルビルとは見なされない。ヒドロカルビル基には、アリール、ヘテロアリール、炭素環、ヘテロシクリル、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００３５】
用語「低級」は、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシ等の化学部分と併用される場合、置換基内に１０個以下の非水素原子がある、例えば、６個以下である基が含まれることが意図される。例えば、「低級アルキル」とは、１０個以下の炭素原子、例えば、６個以下の炭素原子を含有するアルキル基を指す。特定の実施形態では、本明細書で定義されるアシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシという置換基はそれぞれ、低級アシル、低級アシルオキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、または低級アルコキシであり、それらが単独で出現するか、またはヒドロキシアルキル及びアラルキル（その場合、例えば、アルキル置換基内の炭素原子を数える場合はアリール基内部の原子は数えられない）の記述における場合のように他の置換基との組み合わせで出現するかを問わない。
【００３６】
用語「ポリシクリル」、「多環」、及び「多環式」とは、２個以上の原子が、２つの隣接している環、例えば、「縮合環」である環に共通している、２つ以上環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリル）を指す。多環の環の各々は、置換または非置換であり得る。特定の実施形態では、多環の各環は、環に３個〜１０個の原子、例えば、５〜７個を含有する。
【００３７】
用語「Ｎ−オキシド」とは、酸化状態が−１の酸素原子に結合した、酸化状態が＋１の窒素原子を含有する双性イオン基を指す。Ｎ−オキシドの非限定的な例は、以下に示すピリジウムＮ−オキシドである。本明細書で使用される場合、用語「Ｎ−オキシド」は、この官能性を有する他の基の置換基を包含する。
【化３】
2021533193.tif 000005
【００３８】
用語「置換される」とは、骨格の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有する部分を指す。「置換」または「〜で置換される」には、そのような置換は、置換される原子と置換基の許容される価数に従っていること、及び置換により安定な化合物、例えば、転位、環化、脱離等の変換を自発的に起こさない化合物を生じること等、暗黙の条件が含まれることが理解されるであろう。本明細書で使用される場合、用語「置換される」は、有機化合物のすべての許容される置換基が含まれることが意図される。広義の態様では、許容される置換基には、非環式及び環式、分岐及び非分岐、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族の、有機化合物の置換基が含まれる。許容される置換基は、適切な有機化合物に対して１つ以上であり得、また同じであっても異なってもよい。本開示の目的において、窒素等のヘテロ原子は、水素置換基及び／またはヘテロ原子の価数を満たす、本明細書に記載される任意の許容される有機化合物の置換基を有することができる。置換基には、本明細書に記載される任意の置換基、例えば、ハロゲン部分、ヒドロキシル部分、カルボニル部分（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル等）、チオカルボニル部分（チオエステル、チオ酢酸塩、またはチオギ酸塩等）、アルコキシ部分、ホスホリル部分、リン酸部分、ホスホン酸部分、ホスフィン酸部分、アミノ部分、アミド部分、アミジン部分、イミン部分、シアノ部分、ニトロ部分、アジド部分、スルフヒドリル部分、アルキルチオ部分、硫酸部分、スルホン酸部分、スルファモイル部分、スルホンアミド部分、スルホニル部分、ヘテロシクリル部分、アラルキル部分、または芳香族部分もしくはヘテロ芳香族部分が含まれ得る。置換基は、適切であれば、それら自体が置換され得ることを当業者は理解するであろう。「非置換」と具体的に記述されない限り、本明細書での化学部分への言及には、置換変異体が含まれることが理解される。例えば、「アリール」基またはアリール部分への言及には、置換及び非置換の変異体が暗黙に含まれる。
【００３９】
用語「チオアルキル」とは、本明細書で使用される場合、チオール基で置換されるアルキル基を指す。上記で論じられた「チオール化合物」には、化合物構造上の置換基としてのチオアルキルが含まれ得る。チオール化合物は、例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のチオアルキル基を有することができる。
【００４０】
用語「チオエーテル」は、本明細書で使用される場合、エーテルと同等であり、酸素がイオウで置き換えられている。
【００４１】
投与が意図される「対象」という用語には、ヒト（すなわち、あらゆる年齢層の男性または女性、例えば、小児対象（例えば、乳児、幼児、青年）または成人対象（例えば、若年成人、中年成人または高齢成人））及び／または他の霊長類（例えば、カニクイザル、アカゲザル）；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、及び／またはイヌ等の商業上関連する哺乳類を含む哺乳類；及び／またはニワトリ、アヒル、ガチョウ、ウズラ、及び／またはシチメンチョウ等の商業上関連する鳥類を含む鳥類が含まれるが、これらに限定されない。好ましい対象はヒトである。
【００４２】
本明細書で使用される場合、語句「コンジョイント投与」とは、２つ以上の異なる治療用化合物の任意の形態の投与を指し、先に投与された治療用化合物が体内で依然として有効なうちに第２の化合物が投与されるようにする（例えば、患者において２つの化合物が同時に有効であり、これには、２つの化合物の相乗作用が含まれ得る）。例えば、異なる治療用化合物は、同じ製剤にするかまたは別個の製剤にして、同時または順次いずれでも投与することができる。特定の実施形態では、異なる治療用化合物は、１時間以内、１２時間以内、２４時間以内、３６時間以内、４８時間以内、７２時間以内、または１週間以内に投与することができる。
【００４３】
「併用投与」とは、患者において２つの薬剤の薬理作用が同時に明らかであるような様態での両薬剤の投与を指す。したがって、同時投与では、両薬剤の投与に単一医薬組成物、同一剤形、さらには同一投与経路が使用されること、または２つの薬剤が正確に同じ時間に投与されることは必要とされない。ただし、状況によっては、併用投与は、同一剤形及び同一投与経路によって、実質的に同じ時間に最も好都合に達成される。
【００４４】
本明細書で使用される場合、障害または状態を「予防する」治療薬とは、統計的試料において、未治療の対照試料と比べて治療された試料における障害または状態の出現を減少させるか、または未治療の対照試料と比べて障害または状態の１つ以上の症状の発症を遅らせるかもしくは重症度を低減する化合物を指す。
【００４５】
用語「治療すること」とは、対象における状態の少なくとも１つの症状を、軽減すること、緩和すること、遅延させること、低下させること、改善すること、または管理することのうちの１つ以上を意味する。用語「治療すること」はまた、ある状態を阻止すること、発症（すなわち、状態の臨床症状前の期間）を遅延させること、または発症もしくは悪化するリスクを低減させることのうちの１つ以上を意味し得る。
【００４６】
用語「管理すること」には、上記で定義される治療的処置が含まれる。管理することには、当該技術分野で公知の方法によって決定される、感染症の定常状態レベルを達成することが含まれる。定常状態には、感染（複数可）の重症度、感染（複数可）の大きさと位置、感染（複数可）に存在する様々な微生物病原体数、抗生物質に耐性（ｔｏｌｅｒａｎｔ）または耐性（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）の微生物病原体の量、本明細書に開示されるＢＴ組成物を用いた場合等の治療に対する反応の程度、バイオフィルム形成と減少の程度、及び対象が経験する副作用、のうちの１つ以上の評価が含まれ得る。感染症の管理中、感染症は、重症度、感染の量もしくは程度、対象が経験する副作用の量、または対象の転帰の他の兆候において増大から軽減へ変動する場合がある。ある期間、例えば、数日、１か月、または数年等にわたり、感染の臨床経過が改善したか、静菌性であるか、または悪化したかを評価するための上記の要因の評価によって感染の管理の程度を決定することができる。いくつかの実施形態では、感染症を管理することには、他の場合には薬物耐性（ｔｏｌｅｒａｎｔ）であるかまたは薬物耐性（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）である微生物病原体（複数可）の治療の成功が含まれる。
【００４７】
感染（複数可）の「重症度を軽減する」という用語とは、任意の測定可能な根拠に基づく感染症の臨床経過の改善を指す。そのような根拠には、感染（複数可）の程度の低減、感染（複数可）が急性と見なされるか否か、感染（複数可）原因の微生物病原体の数と同一性、微生物（例えば、細菌または真菌）によるバイオフィルムの程度、及び対象が経験する副作用等の測定可能な指標が含まれ得る。いくつかの実施形態では、感染症の重症度を軽減することは、喀痰の感染数の減少（例えば、喀痰中ＣＦＵの減少）等の測定によって決定される。いくつかの実施形態では、重症度を軽減することには、転帰の着実な低下を止めて安定した感染（複数可）を達成し、対象を感染（複数可）の管理成功に入らせることを伴う。他の実施形態では、重症度を軽減することにより、感染（複数可）の実質的〜完全な治療がもたらされ得る。いくつかの実施形態では、重症度を軽減することとは、疾患または感染に関連した増悪を軽減すること（例えば、増悪の１％〜９９％の減少）を指す。いくつかの実施形態では、重症度を軽減することとは、肺機能の増大（例えば、肺機能の１％〜９９％の増大）を指し得る。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「増悪」とは、ほとんどの場合に生活の質の低下を伴う、疾患経過中の症状の重症度の増大を指す。増悪は、ＣＦ等の慢性肺疾患患者において頻度が極めて高い。定義としては、増悪は、単に症状が悪化すること及び／または増大である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、感染症及び／または症状の重症度を軽減することは、患者報告による転帰（「ＰＲＯＳ」）に関し得る。ＰＲＯ手段は、患者から引き出される対象の健康状態の任意の尺度と定義され、患者がどのように「自分の健康状態に関して感じ、または機能するか」を決定する。ＰＲＯは、ＣＦの転帰及び症状の重症度が低減または軽減したかの報告において特に有用である。そのような症状は、観察可能な事象、行動、または感情（例えば、速く歩く能力、食欲の欠如、怒りの表現）、または患者しか知らない観察不可能な転帰（例えば、痛みの知覚、抑うつの感情）であり得る。
【００５０】
「有効量」とは、本明細書で使用される場合、所望の生物学的効果を達成するのに十分な量を指す。「治療的有効量」とは、本明細書で使用される場合、所望の治療効果を達成するのに十分な量を指す。例えば、治療的有効量とは、感染症（例えば、呼吸器感染症）の少なくとも１つの徴候または症状を改善するのに十分な量を指し得る。
【００５１】
治療方法に対する「反応」には、特に、陰性症状の減少または改善、感染症またはその症状の進行の低下、有益な症状または臨床転帰の増大、副作用の軽減、感染の安定化、及び感染の一部もしくは完全な治療が含まれ得る。
【００５２】
「抗生物質感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）または感受性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）」とは、細菌が所与の抗生物質によって首尾よく治療されるかどうかを指す。同様に、「抗真菌薬感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）または感受性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）」とは、真菌が所与の抗生物質によって首尾よく治療されるかどうかを指す。感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）の試験は、Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ法、Ｓｔｏｋｅｓ法及び寒天ブロス希釈法等の当該技術分野で公知の方法によってすることができる。細菌を殺すこと、または細菌が増殖するのを防ぐことにおける抗生物質の有効性はそれぞれ、ウェーハ、寒天、またはブロス培養等の培地での細菌増殖の量が減少している領域または安定している領域として観察され得る。
【００５３】
「抗微生物薬耐性（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」とは、細菌または真菌等の微生物が抗生物質による殺滅に自然に抵抗する能力を指す。これは、変異微生物によって引き起こされるのではなく、むしろ一過性の休眠、非分裂状態で存在している微生物細胞によって引き起こされる。抗生物質耐性または薬物耐性は、生残菌と呼ばれる、小さな亜集団の微生物細胞によって引き起こされる。生残菌は、変異体ではなく、むしろ、遺伝学的に同一の兄弟細胞の大部分を殺す抗微生物治療で生き残ることができる休眠細胞である。生残菌細胞は、非増殖性または極めてゆっくりと増殖する生理学的状態に入っており、このため、これらの細胞は、抗微生物薬の作用に対して非感受性（不応性または耐性）になる。同様に、「抗生物質耐性（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」とは、細菌が抗生物質による殺滅に自然に抵抗する能力を指し、「抗真菌耐性（ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」とは、真菌が抗生物質による殺滅に自然に抵抗する能力を指す。
【００５４】
「抗微生物薬耐性（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）」とは、微生物が、かつてはその微生物を首尾よく治療できた薬剤の作用に対して抵抗する能力を指す。複数の抗微生物薬に対して耐性である微生物は、多剤耐性（ＭＤＲ）と呼ばれる。耐性は、特定の種類の細菌の自然耐性、遺伝子変異、またはある種が別の種から耐性を獲得する、という３つの機序のうち１つを介して生じる。変異は、薬物の不活性化、薬物の結合部位の変化、代謝経路の変化、及び薬物透過性の低下をもたらす可能性がある。
【００５５】
本明細書で使用される場合、本開示のＢＴ組成物への言及を伴う「抗菌活性」、「抗真菌活性」及び「抗微生物活性」という用語は、特定の微生物を殺す能力、及び／またはその増殖もしくは生殖を阻害する能力を指す。特定の実施形態では、抗菌または抗微生物活性は、細菌、例えば、グラム陽性菌（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、グラム陰性菌（例えば、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ、及び／またはＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）もしくはグラム陽性にもグラム陰性にも分類されない細菌、または真菌を、標準的技術（例えば、液体培養または寒天プレートで）に従って培養すること、培養物と本開示のＢＴ組成物と接触させること、及び前記接触させることの後、細胞増殖をモニタリングすることにより評価される。例えば、液体培養では、細菌を、培養物の指数関数的増殖の中点を代表する光学濃度（「ＯＤ」）まで増殖させてよく、培養物を、１つ以上の濃度の１つ以上の本開示のＢＴ化合物またはその変異型に曝露し、対照培養物と比べてＯＤをモニターする。対照培養物と比べて低下しているＯＤは、抗菌活性（例えば、溶解性殺活性を示す）の代表となる。同様に、細菌のコロニーを寒天プレート上に形成させて、プレートを本開示のＢＴ組成物またはその変異型に曝露し、その後のコロニーの増殖を対照プレートと比べて評価することができる。コロニーサイズの減少またはコロニー総数の減少は抗菌活性を示す。
【００５６】
「バイオフィルム」は、細胞が、細胞同士、しばしば表面にも接着する、微生物の任意の栄養共生共同体を指す。これらの接着性細胞は、細胞外高分子物質（ＥＰＳ）で構成される粘液性の細胞外基質の内部に包埋される。バイオフィルム形成時、抗生物質に対する微生物の耐性は、浮遊細菌のそれと比較すると最高で１０００倍である。細菌凝集体は、横方向に整列した細胞のクラスターであり、より複雑で密度の高い３Ｄ構造を有するバイオフィルムの発達を開始させることができる。いくつかの実施形態では、バイオフィルムは、細菌（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）の１つ以上の種及び／または１つ以上の異なる門（例えば、細菌、ウイルス及び真菌）を含み得る。
【００５７】
本明細書で使用される場合、細菌病原体または真菌病原体の考察では、肺の病理学的状態に寄与する任意の微生物（細菌及び／または真菌）も包含される。これには、確認されている微生物と確認されていない微生物の両方が含まれ、また、病原体ではないが、病原体とそれらのバイオフィルムの活性及び存在を単に促進する細菌または真菌も含まれ得る。一例として、細菌病原体または真菌病原体の浮遊細胞の細胞生存または細胞増殖の阻害を対象とする実施形態はまた、病原体とそのバイオフィルムの活性及び存在を単に促進する細菌微生物及び／または真菌微生物の浮遊細胞の細胞生存もしくは細胞増殖の阻害にまで拡大される。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「気道表面」及び「肺の表面」には、気管支及び細気管支等の肺気道表面、肺胞表面、ならびに鼻及び副鼻腔の表面が含まれる。
【００５９】
本明細書で使用される「生理食塩水」とは、塩化ナトリウムで構成されているか、それからなるか、または本質的にそれからなる水溶液を指す。生理食塩水は、高張、等張、または低張であり得る。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、塩化ナトリウムを、約０．１重量％〜約４０重量％、またはその中の任意の範囲、例えば、約０．１重量％〜約１０重量％、約０．５重量％〜約１５重量％、約１重量％〜約２０重量％、約５重量％〜約２５重量％、約１０重量％〜約４０重量％、または約１５重量％〜約３５重量％（ｍｇ／１００ｍＬ）等、これらに限定されない量で含むことができる。特定の実施形態では、塩化ナトリウムは、約０．１重量％、０．２重量％、０．３重量％、０．４重量％、０．５重量％、０．６重量％、０．７重量％、０．８重量％、０．９重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３１重量％、３２重量％、３３重量％、３４重量％、３５重量％、３６重量％、３７重量％、３８重量％、３９重量％、４０重量％（ｍｇ／１００ｍＬ）、またはその中の任意の範囲の量で溶液に含まれている。
【００６０】
本明細書で使用される「高張生理食塩水」とは、０．９重量％超の塩化ナトリウムで構成されているか、それからなるか、または本質的にそれからなる水溶液を指す。一般に、塩化ナトリウムは、約０．９重量％〜約４０重量％、またはその中の任意の範囲、例えば、約１重量％〜約１５重量％、約５重量％〜約２０重量％、約５重量％〜約２５重量％、約１０重量％〜約４０重量％、または約１５重量％〜約３５重量％等、これらに限定されない量で溶液に含まれている。特定の実施形態では、塩化ナトリウムは、約０．９重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３１重量％、３２重量％、３３重量％、３４重量％、３５重量％、３６重量％、３７重量％、３８重量％、３９重量％、４０重量％、またはその中の任意の範囲の量で溶液に含まれている。
【００６１】
本明細書で使用される「低張生理食塩水」とは、０．９重量％未満の塩化ナトリウムで構成されているか、それからなるか、または本質的にそれからなる水溶液を指す。いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、約０．９重量％、０．８重量％、０．７重量％、０．６重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、またはその中の任意の範囲の量で溶液に含まれている。
【００６２】
本明細書で使用される「等張生理食塩水」とは、０．９重量％の塩化ナトリウムで構成されているか、それからなるか、または本質的にそれからなる水溶液を指す。
【００６３】
いくつかの実施形態によれば、生理食塩水（例えば、高張生理食塩水）には添加剤が含まれ得る。添加剤は、薬学的に許容される添加剤であり得る。本明細書で使用される「薬学的に許容される」とは、化合物または組成物が、疾患の重症度及び治療の必要性に照らして過度に有害な副作用を伴わずに、本明細書に記載される治療を達成するための対象への投与に好適であることを意味する。例示的添加剤には、緩衝液及び／または緩衝剤（例えば、陰イオン、陽イオン、有機化合物、塩等）が含まれるが、これらに限定されない。例示的緩衝液には、炭酸／炭酸塩／重炭酸塩系緩衝液、フタル酸水素二ナトリウム／オルトリン酸二水素ナトリウム系緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン／塩酸系緩衝液、バルビトンナトリウム／塩酸系緩衝液、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。例示的緩衝剤には、炭酸、炭酸塩、重炭酸塩、フタル酸水素二ナトリウム、オルトリン酸二水素ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、塩酸、バルビトンナトリウム、溶存ＣＯ２（例えば、ｐＨ６．６超で処方されたＣＯ２）、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、生理食塩水は、重炭酸陰イオン（ＨＣＯ３）等の重炭酸緩衝添加剤を含む。いくつかの実施形態では、高張生理食塩水には、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸、及び／またはｐＨ６．５超で処方された溶存ＣＯ２が含まれ得る。以下で詳しく論じられるように、治療される特定の状態に応じて、所望のように追加成分を含めることができる。
【００６４】
本明細書で使用される場合、エアロゾルの「体積中位径」または「ＶＭＤ」という用語は、エアロゾル粒子の集団の半分は直径がＶＭＤより大きい粒子に含まれ、エアロゾル粒子の集団の半分は直径がＶＭＤよりも小さい粒子に含まれるように特定される粒子の大きさの直径である。ＶＭＤは典型的に、レーザー回折により測定される。
【００６５】
「空気動力学的質量中位径」または「ＭＭＡＤ」は、分散エアロゾル粒子の空気動力学的大きさの尺度である。空気動力学的径は、エアロゾル化粒子をその沈降挙動で表すために使用され、通常は空気中で、対象粒子と同じ沈降速度を有する単位密度の球の径である。空気動力学的径は、粒子の粒子形状、密度及び物理的大きさを包含する。本明細書で使用される場合、ＭＭＡＤとは、カスケードインパクション及び／またはレーザー飛行時間及び／またはカスケードインパクターによって決定される、エアロゾル化粒子の空気動力学的粒度分布の中点または中央値を指す。
【００６６】
「質量中位径」または「ＭＭＤ」は、平均粒径の尺度である。平均粒径の測定には、一般的に採用されている技術のうちいくつでも使用することができる。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「Ｄ９０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の９０％値を指す。例えば、Ｄ９０＝１μｍであれば、粒子の９０％は１μｍより小さい。同様に、「Ｄ８０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の８０％値を指し、「Ｄ７０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の７０％値を指し、「Ｄ６０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の６０％値を指し、「Ｄ５０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の５０％値を指し、「Ｄ４０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の４０％値を指し、「Ｄ３０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の３０％値を指し、「Ｄ２０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の２０％値を指し、「Ｄ１０」とは、粒径（微粒子またはエアロゾル化粒子）の１０％値を指す。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「単分散」とは、実質的に均一なＭＭＤ及び／またはＭＭＡＤ及び／またはＶＭＤの粒子を含む、一群の粒子（バルクまたはエアロゾル分散）を指す。
【００６９】
本明細書で使用される場合、用語「沈着効率」とは、目的領域内に沈着する送達用量の割合を指す。したがって、エアロゾル化された薬剤を肺に送達するための方法及び／またはシステムの沈着効率は、肺に沈着したエアロゾルの質量による量を、システムによって鼻孔に送達されたエアロゾルの総量で割ったものである。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「実質的に」または「実質的な」とは、作用、特性（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）、特性（ｐｒｏｐｅｒｔｙ）、状態、構造、項目、または結果の完全またはほぼ完全な範囲または程度を指す。例えば、「実質的に」密封されている物体の場合、その物体が完全に密封されている、またはほぼ完全に密封されていることを意味する。絶対的な完全性からの逸脱について正確に許容される程度は、場合によって、特定の状況により異なり得る。ただし、一般的に言えば、完了の近さは、全体としての結果が、絶対的な全体の完了が得られたかの如く、それと同じ結果になる。「実質的に」の使用は、作用、特性（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）、特性（ｐｒｏｐｅｒｔｙ）、状態、構造、項目、または結果の完全またはほぼ完全な欠如を指すために否定的な意味合いで使用される場合、同様に適用される。例えば、他の活性物質を「実質的に含まない」組成物は、他の活性物質を完全に欠くか、またはそれが他の活性物質を完全に欠いている場合と効果が同じであると考えられるほど他の活性物質をほぼ完全に欠く。言い換えれば、成分または要素または別の活性物質を「実質的に含まない」組成物は、その測定可能な効果がない限り、そのような項目を依然として含有してよい。
【００７１】
使用方法
常染色体性劣性疾患である嚢胞性線維症（ＣＦ）は、ｃＡＭＰで活性化される原形質膜クロライドチャネルである嚢胞性線維性膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）の機能的欠損によって引き起こされ、肺及び他の合併症をもたらす。
【００７２】
嚢胞性線維症患者では、ＣＦＴＲの欠損または機能障害は、外分泌腺機能障害ならびに膵臓機能不全及び吸収不良を特徴とする多臓器疾患、ならびに肺の異常な粘液線毛クリアランス、粘液線毛症、慢性的な肺の感染と炎症、肺機能低下及び最終的に呼吸不全をもたらす。
【００７３】
原形質膜における機能的ＣＦＴＲチャネルの喪失により、イオン恒常性及び気道表面の水和が破壊され、肺機能低下をもたらす。線毛周囲液容量の減少及び粘液の粘稠性の増加により粘液線毛クリアランスが妨げられ、慢性の感染と炎症を生じさせる。
【００７４】
健常な個人では、肺の細菌のクリアランスは、（ｉ）気道上皮の線毛のある頂端表面、及び（ｉｉ）気道内腔を覆う粘液層、という２つの解剖学的特徴の協調作用に依存する。気道の線毛は同調的に運動し、粘液層を鼻咽頭に向かって絶えず上向きに移動させる定常電流を発生させる。粘液層は二相性であり、粒子及び微生物を捕捉する役割を果たす、上部の粘稠性の層と、線毛が運動する、下部のより流動性の層とからなる。正常に機能している場合は、この排出系により異物が粘液に捕捉され、続いて、鼻咽頭へ運搬され、そこで、吐き出されたり、飲み込まれる。
【００７５】
しかしながら、変異ＣＦＴＲタンパク質によって引き起こされるイオン不均衡によるＣＦ気道細胞の異常な分泌特性は、気道の液体の粘稠度を変化させるため、通常は漿液性の「線毛周囲」層が厚くなり、異物を排出するエスカレーター作用を阻害する。細菌は、粘液に捕捉され、肺に感染症を進行させる。
【００７６】
ＣＦ患者は、肺から粘液を排出するよう設計された他の理学療法の助けを借りて、日常的に咳嗽により肺から喀痰を生じる。ＣＦの喀痰から分離される生物の多くは、上気道（例えば、分類不可能なＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）または鼻（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に良性に定着することの多い病原体であるか、または特定の日和見的な状況下でのみ病原体として振る舞う一般的な環境生物（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）である。肺の様々な細菌及び感染レベルは、ＣＦ患者の症状及び転帰を決定し得る。例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの存在及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの不在から、ＣＦ患者の１８歳以降の長期生存が予測される。さらに、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染の抑制に起因するＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの定着増加の可能性は、一部の患者で関連する場合がある。
【００７７】
ＣＦ患者の肺に定着し得るすべての細菌のうち、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる慢性的な気道感染及び随伴する炎症反応は今日ではＣＦ患者の主要な臨床問題である。抗生物質による化学療法及び予防的化学療法では、ＣＦ患者のこの感染症の罹患率及び早期死亡率は低下したが、一般的に使用される多くの抗生物質に対して耐性を生じるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ固有の能力は恐らく、ＣＦ患者の肺からＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを根絶できないことに寄与し、結局は、これらの患者にとってこの微生物が大きな問題となる。
【００７８】
ＣＦ患者は、いかなる時でも気道でＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを獲得する可能性があり、ほとんどの研究で、ＣＦ患者の７０〜８０％が１０代までに感染していることが示されている。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症は恐らく、最初、生後３年以内に生じる。慢性感染症の発症後、患者は、抗生物質による化学療法が有益であり得る一時的な増悪を経験する。感染は、社会的接触に起因する場合もあれば、院内感染性の場合もあるが、ＣＦ患者から分離されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのクローンの多様性は、ほとんどの臨床分離株が環境に由来することを示唆している。慢性的にＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染しているＣＦ患者では、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａがない患者よりも肺機能の低下（経時的な１秒間の努力肺活量（ＦＥＶ１）の低下として表される）が急激である、肺の増悪回数が多い、入院が多い、及び死亡率が高いことが示される。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの影響は、慢性感染症が早期に発症した場合はより重症である。
【００７９】
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症は経時的に変化してムコイド型の表現型を発症し得、これが嚢胞性線維症の慢性感染段階を開始させ得る。ムコイド型の表現型は、細菌による、アルギン酸及びムコイド菌体外多糖（ＭＥＰ）の両方として知られる多糖の産生に起因し、宿主免疫応答の細菌による回避で重要な役割を果たす。ＭＥＰ／アルギン酸それ自体が、宿主免疫エフェクターに直面した場合の細菌の生存を促進することができる。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによるアルギン酸の過剰産生は、肺機能の大幅な低下の発症と相関する。さらに、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａはバイオフィルムとして増殖することができ、これが食作用及び抗生物質の効力に対する菌耐性を増大させる。
【００８０】
細菌バイオフィルムは、互いに付着し、しばしば肺粘膜等の表面に付着する細胞のマトリックスである。細菌細胞は、多糖類、タンパク質、脂質及びＤＮＡ等の細胞外高分子物質から形成される細胞外基質の内部に包埋される。バイオフィルムの細菌細胞は、大量の遺伝子が差次的に制御される浮遊細胞より生理学的に異なっている。バイオフィルムはまた、マトリックスで提供されるシェルターを考えると、抗生物質に対してさらに耐性であり得る。ＣＦ患者の肺に存在するＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及び他の細菌バイオフィルムにより、感染症の管理及び低減の成功がますます難しくなる。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む複数種によるバイオフィルムを形成するＣＦ関連細菌の組み合わせでは、比較可能な単一種によるバイオフィルムよりも耐性、病原性（ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ）及び病原性（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）が高いことが実証されている。ＣＦ患者の肺におけるそのような複合バイオフィルムの存在は、これらの肺感染症の慢性的で持続的な性質の大きな原因であると考えられており、これらの複合バイオフィルムは、罹患が慢性的で進行中であり、かつ進行性があることの原因であるばかりでなく、最終的には、この集団の死亡率の原因でもある。
【００８１】
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに加え、ＣＦ患者の肺に一般的に見られる他の病原体には、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ���Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ  ｓｐｐ．、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｄｅｌｆｔｉａ  ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｐｐ．、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｐが含まれるが、これらに限定されない。
【００８２】
例示的非結核性抗酸菌には、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＭＡＣ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＭＡＢＳＣ）Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｒｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎｉが含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａの例示的な種には、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｔａｂｉｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｍｂｉｆａｒｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｎｔｈｉｎａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｕｂｏｎｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｒｂｏｒｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔｅｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｅｔａｌｌｉｃａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｅｍｉｎａｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｉｆｆｕｓａが含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
いくつかの実施形態では、細菌病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓから選択される。特定の実施形態では、細菌病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓから選択される。特定の実施形態では、細菌病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムから選択される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、細菌病原体は、１つ以上の抗生物質に対して耐性を示す。メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）は、ＣＦ患者及び一般集団において治療するのが困難な単剤耐性株の一例であるが、それよりさらに困難な多剤耐性（ＭＤＲ）株がＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＳ．ａｕｒｅｕｓ等の細菌で生じ得る。例えば、細菌病原体は、アミカシン、アズトレオナム、メチシリン、バンコマイシン、ナフシリン、ゲンタマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、ドキシサイクリン及びトブラマイシンを含め、これらに限定されない抗生物質による既知の標準治療に対して耐性になり得る。いくつかの実施形態では、耐性の抗生物質は、アミカシン、アズトレオナム、またはトブラマイシンである。
【００８６】
ＣＦ関連感染症を治療するための抗生物質を用いた長期反復治療は典型的に、微生物バイオフィルムの存在を特徴とする抗生物質耐性を生じさせる。最近の研究では、多剤耐性（ＭＤＲ）細菌と、より強力で、より多産なバイオフィルム形成能との相関が繰り返し実証されている。肺でのバイオフィルムの関与は、高度に免疫原性であり、肺の構造的損傷を加速すると考えられている。さらに、バイオフィルム内の細菌は抗生物質から保護されているため、そのような抗生物質の最小発育阻止濃度を高める。バイオフィルムは、呼吸器粘膜のｐＨを変化させること、及びベータラクタマーゼ酵素を産生することの両方によって、アミノグリコシド系及びベータラクタム系の抗生物質の抗微生物活性を低下させる傾向がある。ＣＦにおけるバイオフィルム形成細菌の関与は、肺機能低下及び生活の質の低下、抗生物質療法に対する反応低下、増悪の増加、及び時間の経過に伴う生存率の低下と相関する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ネブライザー等のエアロゾル装置を使用した、経口または経鼻による吸入によって投与される。ネブライザーにより、ＢＴ組成物を肺組織に局所的に投与することができ、それらには、肺粘膜、肺胞（例えば、深肺肺胞）、気管支及び／または細気管支が含まれ得る。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、肺（例えば、深肺肺胞）の深肺領域へのＢＴ組成物の投与を提供する。ＢＴ組成物の局部的な局所投与により、全身性の抗生物質療法に対するいくつかの重要な利点が提供される。用語「全身性」とは、体全体の大部分が曝露され得るような、対象の循環系への薬剤の投与を指す。薬剤の全身投与は、経腸的（胃腸管を介した吸収、例えば、経口投与）または非経口的（注射または注入を介した吸収、例えば、静脈内）に行うことができる。
【００８８】
全身性抗感染製品には、限局感染の治療に関連するいくつかの欠点があり、それらには、ａ）局所感染部位において、特に、肺気道等の局所的部位に関連した感染症の場合、治療的有効濃度を達成することが困難であること、（ｂ）体循環を介して曝露された器官系に対する高頻度の意図しない毒性作用、及び（ｃ）体の正常な細菌叢の抗感染剤への広範囲曝露の結果として、抗生物質耐性菌の発生が増加すること、（ｄ）体全体の正常な細菌叢すべての長期の持続的／反復曝露の結果として、そのような抗生物質耐性菌が他人に伝播する可能性が高くなること、及び（ｅ）健康な正常細菌叢による体全体にわたる有益な影響の保存が、広範な全身曝露のために低下すること、が含まれる。
【００８９】
図１１には、経口投与及び経肺投与された薬物の血漿中濃度が示されている。経口投与（Ａ）では、血漿中濃度が高くなり得、これは、毒性、及び患者間で異なる曝露（吸収のばらつき、及び初回通過、肝クリアランスのばらつき）または薬物間相互作用をもたらす場合がある。肺で治療的曝露を達成するためには高い血漿中曝露が必要である。対照的に、肺の局所適応に対する吸入投与では、有効なＭＩＣを達成するために、より低い総投与量ですみ、全身曝露が大幅に少なくなる。吸入投与（Ｂ）では、長期間にわたって薬物のＭＩＣを大幅に超える肺での高い局部的濃度が達成される。高濃度の薬物が直接肺に送達されるため、吸入後に達成される肺での濃度は、経口投与で達成されるものを大きく超え得る。吸入抗生物質を用いた以前の経験から、吸入時の肺での薬物濃度は、同一用量の全身性／経口投与よりも１００倍超大きい。
【００９０】
いくつかの実施形態では、咳嗽、喘鳴、息切れ、気管支拡張症、鼻ポリープ、喀血、呼吸不全、及び肺増悪という症状のうち１つ以上（例えば、嚢胞性線維症関連症状）が対象において重症度が軽減される。非嚢胞性線維症関連の追加の感染症も重症度が軽減され得る。図１１は、吸入抗生物質と全身送達抗生物質で対比した、副作用の重症度及び有効性の相違を実証している。したがって、本明細書に開示されるＢＴ組成物の吸入製剤により、抗生物質治療であって、全身投与される対応する製剤よりも標的化され有効な抗生物質治療が提供される。
【００９１】
ＢＴ化合物は、ＣＦに続発する慢性の、最終的に生命を脅かす肺感染症の治療のための、既知の広域スペクトル抗微生物（及び抗バイオフィルム）小分子医薬品である。その有効性は、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ、市中感染型［ＣＡ］ＭＲＳＡを含む）、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＭＲＳＥ）、及びバンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（ＶＲＥ）を含む、グラム陽性の抗生物質耐性病原体にまで及ぶ。ＢＴ化合物はまた、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（前述のすべての細菌のうち、カルバペネム耐性株を含む）、及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉを含む、多剤耐性（ＭＤＲ）グラム陰性病原体に対しても強力である。
【００９２】
ＢＴ化合物は、ａ）非常に多様化したスペクトルの抗生物質耐性プロファイル（肺気道全体の多くの異なる解剖学的領域における持続性、時間及び隔離によって誘導される進化／多様化のため）、ならびにｂ）抗生物質耐性及びＭＤＲのバイオフィルムを克服する二重の能力を有する。
【００９３】
本明細書では、対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法が開示され、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含む。また、本明細書では、非ＣＦ関連疾患も含め、対象における１つ以上の肺疾患もしくは感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理または軽減する方法が開示され、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＦ関連肺感染症等、少なくとも１つの肺感染症を有する。他の実施形態では、対象は、少なくとも２つの肺感染症を有し、かかる感染症は順序が同時であるかまたは連続的である。肺感染症は、同じ微生物病原体によって引き起こされ得、２つの別々の肺、または肺葉に位置し得ると考えられる。他の実施形態では、肺感染症は、異なる微生物病原体によって引き起こされ得、同じ肺、または肺葉に位置し得ると考えられる。いくつかの実施形態では、肺感染症は片方の肺にあり、他の実施形態では、両肺に存在する。特定の実施形態では、肺感染症は、右肺の３つの肺葉のうち１つ以上にある。他の実施形態では、肺感染症は、左肺の２つの肺葉のうち一方または両方にある。肺の１つ以上の微生物病原体、微生物病原体量、及び感染部位の任意の組み合わせは、「肺感染症」という用語内で意図される。いくつかの実施形態では、肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である。いくつかの実施形態では、肺感染症は、気管支拡張症感染症である。
【００９４】
いくつかの実施形態では、肺感染症は、１つ以上の細菌病原体または真菌病原体を含んでいる。いくつかの実施形態では、開示の方法は、ＣＦ関連肺感染症を治療することを含む。いくつかの実施形態では、開示の方法は、ＣＦ関連肺感染症を管理することを含む。いくつかの実施形態では、開示の方法は、ＣＦ関連肺感染症の重症度を軽減することを含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本発明の方法には、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することによって、対象における１つ以上の肺疾患もしくは感染症に関連した症状もしくは感染の重症度を治療、管理または軽減することが含まれ得る。特定の実施形態では、化合物はＢｉｓＥＤＴである。
【００９６】
特定の実施形態では、肺感染症は、肺粘膜、気管支及び／または細気管支の中もしくはその上に位置する。他の実施形態では、肺感染症は、細菌バイオフィルム、凝集細菌、真菌バイオフィルム、または凝集真菌の表面もしくは内部に位置する。いくつかの実施形態では、肺感染症は喀痰中に位置し、かかる肺感染症は、肺に関連する粘液／喀痰の層を伴い、その中に少なくとも感染の一部が存在する。特定の実施形態では、細菌病原体は、グラム陽性菌及びグラム陰性菌のうち１つ以上を含む。細菌病原体は、細菌バイオフィルム及び浮遊細菌のうち１つ以上を含むことができる。いくつかの実施形態では、真菌病原体は、真菌バイオフィルム及び浮遊真菌のうち１つ以上を含む。特定の実施形態では、真菌病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、及び／またはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓである。
【００９７】
いくつかの実施形態では、方法は、（ｉ）微生物（例えば、細菌または真菌）バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）微生物（例えば、細菌または真菌）バイオフィルムの増殖を弱めること、及び（ｉｉｉ）微生物（例えば、細菌または真菌）バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む。他の実施形態では、ＢＴ組成物は、
−細菌病原体または真菌病原体による感染症の予防、−細菌病原体または真菌病原体からの外毒素の産生もしくは分泌の阻止、
−細菌病原体または真菌病原体の低減（例えば、量または力価による測定）、
−細菌病原体または真菌病原体の浮遊細胞（例えば、実質的に細胞すべて）の細胞生存または細胞増殖の阻害、
−前記細菌病原体または前記真菌病原体によるバイオフィルム形成の阻害、
−細菌病原体または真菌病原体のバイオフィルム形成細胞（例えば、実質的にすべての細胞）のバイオフィルム生存またはバイオフィルム増殖の阻害、及び
−喀痰の粘稠度を低下させること、のうちの１つ以上によって肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む。いくつかの実施形態では、ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである。いくつかの実施形態では、チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４−ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．４μｍ〜約３μｍ、または約０．５μｍ〜約２μｍ、または約０．７μｍ〜約２μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍ、または上記の特定の範囲に挟まれた任意の狭い範囲である。
【００９９】
本願で開示される方法のいくつかの実施形態では、微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％は、体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである。いくつかの実施形態では、実質的にすべての微粒子は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである。いくつかの実施形態では、エアロゾル化粒子の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである。いくつかの実施形態では、組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６μｍ〜約２．５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである微粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態では、ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、以下から選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む。
【表Ａ】
2021533193.tif 000006
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、Ｂｉｓ−ＢＡＬ、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、Ｂｉｓ−ＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、Ｂｉ−ｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む。他の実施形態では、ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される。本明細書で使用される場合、ＭＢ−１Ｂ３（またはＭＢ−１−Ｂ３）はＢｉｓＥＤＴを指し、ＭＢ−６はＢｉｓＢＤＴを指し、ＭＢ−８−２はＢｉｓＢＤＴ／ＰＹＲを指し、ＭＢ−１１はＢｉｓＥＤＴ／ＰＹＲを指す。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ビスマスチオール化合物はＢｉｓＥＤＴであり、以下の構造を有する。
【化４】
2021533193.tif 000007
【０１０３】
併用治療
特定の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、単独で使用することも、別の種類の治療剤と共にコンジョイント投与することもできる。本明細書で使用される場合、語句「コンジョイント投与」とは、２つ以上の異なる治療用化合物の任意の形態の投与を指し、先に投与された治療用化合物が体内で依然として有効なうちに第２の化合物が投与されるようにする（例えば、対象において２つの化合物が同時に有効である）。例えば、異なる治療用化合物は、同じ製剤にするかまたは別個の製剤にして、同時または順次いずれでも投与することができる。特定の実施形態では、異なる治療用化合物は、互いに１時間以内、１２時間以内、２４時間以内、３６時間以内、４８時間以内、７２時間以内、または１週間以内に投与することができる。したがって、そのような治療を受ける対象は、異なる治療用化合物の併用効果による利益を得ることができる。
【０１０４】
特定の実施形態では、開示の化合物と１つ以上の追加の治療剤（複数可）とのコンジョイント投与では、開示の化合物または１つ以上の追加の治療剤（複数可）の各々の個別投与と比べて改善された有効性が得られる。特定のそのような実施形態では、コンジョイント投与により、相加作用または相乗作用が得られ、ここで、相加作用とは、開示の化合物及び１つ以上の追加の治療剤（複数可）の個別投与の効果の各々の和を指す。いくつかの実施形態では、対象は、別の疾患、障害、または状態のための治療薬のコジョイント投与を受ける。いくつかの実施形態では、他の治療薬は、ＣＦＴＲモジュレーターまたは気管支拡張薬である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、アミカシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、イミペナム（ｉｍｉｐｅｎｕｍ）、シプロフロキサシン、セフタジジム、アズトレオナム、チカリシリン（ｔｉｃａｒｉｃｉｌｌｉｎ）−クラブラン酸塩、ジクロキサシリン、アモキシシリン、チカルシリン−クラブラン酸塩、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、セファレキシン、ピペラシリン−タゾバクタム、リネゾリド、ダプトマイシン、バンコマイシン、メトロニダゾール、クリンダマイシン、コリスチン、テトラサイクリン、レボフロキサシン、アモキシシリンとクラブラン酸（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、クロキサシリン、ジクロキサシリン、セフジニル、セフプロジル、セファクロル、セフロキシム、エリスロマイシン／スルフイソキサゾール、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、チゲサイクリン、イミペネム、メリペネム（ｍｅｒｉｐｅｎｅｍ）、コリスチメタート／ｃｏｌｉｓｔｉｎ（登録商標）、メチシリン、オキサシリン、ナフシリン、カベニシリン（ｃａｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）、アズロシリン、ピペラシリンとタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、セフェピム、エタンブトール、リファンピシン、及びメロペネムから選択される抗生物質を対象に併用投与またはコンジョイント投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗生物質は、メロペネム、セフタジジム、トブラマイシン、アミカシン、アズトレオナム、シプロフロキサシン、コリスチン、及びレボフロキサシンから選択される。
【０１０６】
本開示の特定の実施形態では、ビスマスチオール化合物等の開示の化合物と共にコンジョイント投与することができる治療剤には、既知の抗生物質が含まれる。いくつかの実施形態では、抗生物質は、メチシリン、バンコマイシン、ナフシリン、ゲンタマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、ドキシサイクリン、コリスチンアミカシン、アズトレオナム、及びトブラマイシンから選択される。いくつかの実施形態では、抗生物質は、トブラマイシン、イミペネム、テトラサイクリン、及びミノサイクリンから選択される。いくつかの実施形態では、抗生物質は、再置換手術後に全身投与される。いくつかの実施形態では、抗生物質は、再置換手術前に投与される。抗生物質等のコンジョイント投与される治療剤は、任意の好適な頻度及び任意の好適な投与量で投与することができる。そのような投与量の量と頻度は、当業者が決定することができる。
【０１０７】
特定の実施形態では、開示のＢＴ化合物は、１つ以上の開示の他のＢＴ化合物と共にコンジョイント投与することができる。さらに、そのような併用化合物を、他の治療剤と共にコンジョイント投与することができる。
【０１０８】
医薬組成物
本開示の組成物及び方法は、それを必要とする対象を治療するために用いることができる。特定の実施形態では、対象は、ヒト等の哺乳類または非ヒト哺乳類である。ヒト等の対象に投与する場合、組成物または化合物は、好ましくは、例えば、開示の化合物と薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物として投与される。薬学的に許容される担体は、当該技術分野において周知であり、それらには、例えば、水溶液、例えば、水、生理緩衝食塩水、生理緩衝リン酸塩等、または他の溶媒もしくはビヒクル、例えば、グリコール、グリセロール、オリブ油等の油等、または注射可能な有機エステルが含まれる。いくつかの実施形態では、そのような医薬組成物がヒトでの投与用の場合、水溶液は、パイロジェンフリー、または実質的にパイロジェンフリーである。添加剤は、例えば、薬剤の遅延放出をもたらすよう、または１つ以上の細胞、組織もしくは器官を選択的に標的にするよう選択することができる。医薬組成物は、再構成用の凍結乾燥物、粉末、溶液、シロップ、注射液等のような単位剤形であり得る。組成物は、局所投与に好適な溶液中に存在し得る。
【０１０９】
薬学的に許容される担体は、例えば、開示の化合物等の化合物の溶解度を安定化させ、高めるよう、または吸収を高めるよう作用する、生理学的に許容される薬剤を含有することができる。そのような生理学的に許容される薬剤には、例えば、グルコース、スクロース、またはデキストラン等の炭水化物；アスコルビン酸またはグルタチオン等の抗酸化剤；キレート剤；低分子量タンパク質；塩；または他の安定化剤もしくは添加剤が含まれる。生理学的に許容される薬剤を含め、薬学的に許容される担体の選択は、例えば、組成物の投与経路によって異なる。調製物または医薬組成物は、自己乳化型薬物送達システムまたは自己微小乳化型薬物送達システムであり得る。医薬組成物（調製物）はまた、リポソームまたは他のポリマーマトリックスであり得、これは、その中に組み込みまた、例えば開示の化合物を有し得る。リポソームは、例えば、リン脂質または他の脂質を含み、無毒性の生理学的に許容される代謝可能な担体であり、比較的簡便に作製及び投与される。
【０１１０】
「薬学的に許容される」という語句は、本明細書では、正当な医学的判断の範囲内で、過渡の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに対象の組織と接触する使用に好適な、妥当なベネフィット／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すために使用される。
【０１１１】
本明細書で使用される語句「薬学的に許容される担体」とは、液体もしくは固体の賦形剤、希釈剤、添加剤、溶媒または封入材料等の薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、かつ、対象に有害ではないという意味で「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体としての機能を果たし得る材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えば、乳糖、グルコース及びスクロース等、（２）デンプン、例えば、コーンスターチ及びジャガイモデンプン等、（３）セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース及び酢酸セルロース等、（４）トラガント末、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）添加剤、例えば、カカオ脂及び坐剤ワックス等、（９）油、例えば、ピーナツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油等、（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール等、（１１）ポリオール及び糖アルコール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、及びポリエチレングリコール等、（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル等、（１３）寒天、（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等、（１５）アルギン酸、（１６）パイロジェンフリー水、（１７）等張生理食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）リン酸緩衝液、ならびに（２１）医薬製剤に用いられる、塩化ナトリウム等の塩が含まれる他の非毒性適合性物質、が含まれる。
【０１１２】
製剤は、単位剤形中に好都合に存在することができ、薬学の技術分野で周知の任意の方法によって調製することができる。担体材料と組み合わせて単一剤形を製造することができる活性成分の量は、治療される対象、特定の投与方法により異なる。担体材料と組み合わせて単一剤形を製造することができる活性成分の量は一般に、治療効果を生み出す化合物の量である。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、粉末、噴霧、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、溶液、パッチ、懸濁液またはゲルである。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は溶液である。ＢＴ組成物は、任意の好適な濃度のビスマスチオール化合物を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ〜約７５０μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約２５０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬ、もしくは約７５μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬの投与量としてされ、及び／または肺に投与されるＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、もしくは約７５μｇ〜約１５０μｇである。特定の実施形態では、ＢＴ組成物は、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの投与量として投与される。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日に１回、週１回、２週間に１回、月１回、２か月に１回、投与される。特定の実施形態では、ＢＴ組成物は、１日１回投与される。特定の実施形態では、ＢＴ組成物は、週１回投与される。特定の実施形態では、ＢＴ組成物は、２週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、４週間投与／４週間休薬の投与スケジュールで長期的に投与される。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、長期的に、例えば、基礎療法の一部として投与される。当業者により理解されるように、投与頻度は、用量及び投与経路を含め、いくつかの因子に応じて異なる場合がある。例えば、ＢＴ組成物がエアロゾル投与により投与される場合、１００〜１０００μｇ／ｍＬ等の低用量は１日１回または２回投与され得るが、２．５〜１０ｍｇ／ｍＬ等の高用量は、例えば、週１回または２回投与され得る。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物はさらに、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、ポリマー、タルク、ならびに酸化亜鉛から選択される１つ以上の担体を含む。いくつかの実施形態では、担体はメチルセルロースである。いくつかの実施形態では、担体はポリ（メタクリル酸メチル）である。
【０１１６】
組成物は、その中の活性成分が徐放または制御放出されるよう、例えば、所望の放出プロファイルが得られるよう割合を変えたヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／またはミクロスフェア等を使用して、製剤化することができる。それらは、例えば、細菌捕集フィルターを介した濾過によって、イオン照射（例えば、ガンマ線光子）、オートクレーブによって、または使用直前に滅菌水もしくは他の何らかの無菌注射用媒体に溶解可能な滅菌固体組成物形態の滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。
【０１１７】
局所投与に有用な液剤には、薬学的に許容されるエマルジョン、再構成用凍結乾燥物、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、ゲル、シロップ及びエリキシル剤が含まれる。液剤は、活性成分に加えて、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、シクロデキストリン及びその誘導体、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ及びゴマ油等）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ならびにソルビタンの脂肪酸エステル等、ならびにそれらの混合物等を含有することができる。不活性希釈剤の他に、局所用組成物には、湿潤剤、乳化及び懸濁剤、ならびに保存剤等のアジュバントも含まれ得る。
【０１１８】
懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、及びトラガント、ならびにそれらの混合物のような懸濁剤を含有することができる。
【０１１９】
局所投与または経皮吸収投与のための剤形には、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ及び吸入剤が含まれる。活性化合物は、薬学的に許容される担体、及び必要となり得る任意の保存剤または緩衝液と共に、無菌条件下で混合され得る。
【０１２０】
軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、活性化合物に加えて、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、ポリマー、塩、及び酸化亜鉛、またはそれらの混合物等、１つ以上の添加剤もしくは担体を含有することができる。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、水溶液の形態である。いくつかの実施形態では、添加剤は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムから選択される塩を含む。いくつかの実施形態では、添加剤は塩化ナトリウムを含む。
【０１２１】
特定の実施形態では、ＢＴ組成物は、１つ以上のＢＴ化合物のＴｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）及び／または緩衝液（例えば、リン酸ナトリウム緩衝液）の懸濁液である。例えば、いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、１つ以上のＢＴ化合物の、約０．１％Ｔｗｅｅｎ  ８０〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（その間にあるあらゆる範囲を含む）の懸濁液である。例えば、ＢＴ組成物は、１つ以上のＢＴ化合物の約０．１％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．３％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．６％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．７％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．８％Ｔｗｅｅｎ  ８０、約０．９％Ｔｗｅｅｎ  ８０、または約１％Ｔｗｅｅｎ  ８０の懸濁液である。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、１つ以上のＢＴ化合物の約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０の懸濁液である。
【０１２２】
特定の実施形態では、本発明は、ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含むビスマスチオール（ＢＴ）組成物を含む医薬組成物であり得、かかるＢＴ組成物は複数の微粒子を含む。特定の実施形態では、前記微粒子のＤ９０は、４．５μｍ、もしくは４．０μｍ、もしくは３．５μｍ、もしくは３．０μｍ、もしくは２．５μｍ、もしくは２．０μｍ、もしくは１．９μｍ、もしくは１．８μｍ、もしくはμｍ  １．７μｍ、もしくは１．６μｍ、もしくは１．５μｍ以下、または間にある任意の範囲である。特定の実施形態では、前記微粒子のＤ９０は１．９μｍ以下である。別の特定の実施形態では、前記微粒子のＤ９０は１．６μｍ以下である。別の特定の実施形態では、前記微粒子のＤ５０は、２．５μｍ、もしくは２．０μｍ、もしくは１．５μｍ、もしくは１．３μｍ、もしくは１．２μｍ、もしくは１．１μｍ、もしくは１．０μｍ、もしくは０．９μｍ、もしくは０．８７μｍ、もしくは０．７２μｍ以下、または間にある任意の範囲である。別の特定の実施形態では、前記微粒子のＤ１０は、０．９μｍ、もしくは０．８μｍ、もしくは０．７μｍ、もしくは０．６μｍ、もしくは０．５０μｍ、もしくは０．４０μｍ、もしくは０．３９μｍ、もしくは０．３８μｍ、もしくは０．３７μｍ、もしくは０．３６μｍ、もしくは０．３５μｍ、もしくは０．３４μｍ、もしくは０．３３μｍ以下、または間にある任意の範囲である。特定の実施形態では、ビスマスチオール（ＢＴ）組成物を含む医薬組成物は、ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含み、かかるＢＴ組成物は複数の微粒子を含み、前記微粒子のＤ９０は約１．６μｍ以下である。特定の実施形態では、ＢＴ組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択でｐＨ約７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。別の特定の実施形態では、上記組成物は、対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理及び／または軽減するために前記対象に投与すること、または本明細書に記載される嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状の重症度を治療、管理及び／または軽減する任意の特定の方法で投与することができる。別の特定の実施形態では、上記組成物は、対象における１つ以上の肺疾患または感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理及び／または軽減するために対象に投与すること、または本明細書に記載される１つ以上の肺疾患に関連した症状及び感染症の重症度を治療、管理及び／または軽減する特定の方法で投与することができる。
【０１２３】
本開示との関連において多種多様な緩衝液を使用してよく、当業者には容易に明らかとなる。例えば、いくつかの実施形態では、好適な緩衝液には、ナトリウムまたはクエン酸カリウム、クエン酸、リン酸ナトリウム等のリン酸緩衝液、ホウ酸、炭酸水素ナトリウム、ならびにＮａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４及びＫＨ２ＰＯ４の組み合わせが含まれる様々な混合リン酸緩衝液が含まれる。いくつかの実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液が使用される。いくつかの実施形態では、クエン酸ナトリウム緩衝液が使用される。いかなる特定の理論にも拘束されることなく、気道表面の液体ｐＨの変化が、出生直後の嚢胞性線維症における宿主防御の欠陥に寄与する場合がある。肺のｐＨ変化は、気道表面の液体環境に影響を与え、気道防御を改善し、疾患の経過を変化させる場合がある。したがって、製剤のｐＨは、約５から約１０まで異なる場合がある。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨは、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、または約１０である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨは約７．４である。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、１つ以上のＢＴ化合物の、ｐＨが約７．４の約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０含有リン酸ナトリウム緩衝液の懸濁液である。いくつかの実施形態では、１つ以上のＢＴ化合物は、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０００ｍｇ／ｍＬの範囲の、全整数及びその間の範囲を含む濃度で組成物中に存在する。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のＢＴ化合物は、約１００μｇ／ｍＬから、２００μｇ／ｍＬから、３００μｇ／ｍＬから、４００μｇ／ｍＬから、５００μｇ／ｍＬから、６００μｇ／ｍＬから、７００μｇ／ｍＬから、８００μｇ／ｍＬから、９００μｇ／ｍＬから、１０００μｇ／ｍＬから、１０ｍｇ／ｍＬから、２５ｍｇ／ｍＬから、５０ｍｇ／ｍＬから、１００ｍｇ／ｍＬから、１２５ｍｇ／ｍＬから、１５０ｍｇ／ｍＬから、１７５ｍｇ／ｍＬから、２００ｍｇ／ｍＬから、２２５ｍｇ／ｍＬから、２５０ｍｇ／ｍＬから、２７５ｍｇ／ｍＬから、３００ｍｇ／ｍＬから、３２５ｍｇ／ｍＬから、３５０ｍｇ／ｍＬから、３７５ｍｇ／ｍＬから、４００ｍｇ／ｍＬから、４２５ｍｇ／ｍＬから、４５０ｍｇ／ｍＬから、４７５ｍｇ／ｍＬから、５００ｍｇ／ｍＬから、５２５ｍｇ／ｍＬから、５５０ｍｇ／ｍＬから、５７５ｍｇ／ｍＬから、６００ｍｇ／ｍＬから、６２５ｍｇ／ｍＬから、６５０ｍｇ／ｍＬから、６７５ｍｇ／ｍＬから、７００ｍｇ／ｍＬから、７２５ｍｇ／ｍＬから、７５０ｍｇ／ｍＬから、７７５ｍｇ／ｍＬから、８００ｍｇ／ｍＬから、８２５ｍｇ／ｍＬから、８５０ｍｇ／ｍＬから、８７５ｍｇ／ｍＬから、９００ｍｇ／ｍＬから、９２５ｍｇ／ｍＬから、９５０ｍｇ／ｍＬから、９７５ｍｇ／ｍＬから、約１０００ｍｇ／ｍＬまでの範囲の濃度で組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上のＢＴ化合物は、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０００μｇ／ｍＬの範囲の濃度で組成物中に存在する。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、組成物の浸透圧は、所望の浸透圧を達成するために、ＮａＣｌまたはＴＤＡＰＳ等の添加物でさらに調整する必要がある場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、組成物の浸透圧は、塩化ナトリウムで、約１００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜約５００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの範囲の、全整数及びその間の範囲を含む浸透圧に調整される。いくつかの実施形態では、組成物の浸透圧は、約２９０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜約３１０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。例えば、いくつかの実施形態では、組成物の浸透圧は、約２９０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９１ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９２ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９３ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９４ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９６ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９７ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９８ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９９ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０１ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０２ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０３ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０４ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０６ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０７ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０８ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３０９ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、最高約３１０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、浸透圧は約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ＢｉｓＥＤＴの、Ｔｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）含有緩衝液（例えば、リン酸ナトリウム緩衝液）の懸濁液である。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ＢｉｓＥＤＴの、ｐＨ約７．４の約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０含有リン酸ナトリウム緩衝液の懸濁液である。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ＢｉｓＥＤＴの、ｐＨ約７．４の約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０含有リン酸ナトリウム緩衝液の懸濁液であり、かかる組成物は、浸透圧が約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ（例えば、塩化ナトリウムで３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調整）である。いくつかの実施形態では、ＢｉｓＥＤＴは、約１００μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ、７５０μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、経肺送達を意図した懸濁製剤である。例えば、ＢＴ組成物は、最終的に、経口及び／または経鼻による吸入によって投与される懸濁製剤である。したがって、いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、噴霧化等、装置によりエアロゾル化される。
【０１２８】
粉末及びスプレーは、活性化合物に加えて、メチルセルロース、塩化ナトリウム、ＰＭＭＡ、乳糖、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ロイシン、ポリエチレングリコール、またはこれらの物質の混合物等の添加剤を含有することができる。スプレーは、クロロフルオロ炭化水素ならびにブタン及びプロパン等の揮発性の非置換炭化水素等、通例の噴霧剤を追加で含有することができる。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ネブライザー等のエアロゾル装置を使用した、経口または経鼻による吸入によって投与される。ＰＡＲＩ  ＩＣ  Ｐｌｕｓ等の公知のネブライザーでは、開示の組成物を水溶液として、任意選択で緩衝生理食塩水に溶解させて投与することができる。溶液は、ネブライザーで使用するためのアンプルの形態で対象に提供することができる。ネブライザーは再使用が可能であり、ある時間、例えば、約１０〜１５分またはそれ以上にわたり製剤を提供するコンプレッサーが含まれている。ＡＰＲＩ  Ｖｉｏｓ  Ａｉｒ及びＤｅＶｉｌｂｉｓｓ  Ｐｕｌｍｏ−ａｉｄｅ等、公知のコンプレッサーは投与に好適である。ネブライザーにより、製剤が、粘膜、気管支及び／または細気管支、肺胞、深肺肺胞等の肺組織に局所的に投与される。製剤は、肺粘膜及びバイオフィルムに浸透して、微生物（例えば、細菌または真菌）バイオフィルムを減少させること、微生物（例えば、細菌または真菌）バイオフィルムの増殖を弱めること、微生物（例えば、細菌または真菌）バイオフィルムの再形成を防止すること、浮遊性増殖を低下させること、及び／または浮遊性増殖を阻害することができる。
【０１３０】
他の実施形態では、製剤の投与に鼻部エアロゾル装置を使用することができる。
【０１３１】
例示的なＢＴ組成物製剤は、非イオン性界面活性剤を含むＢＴ化合物微粒子の中性ｐＨの等張性緩衝水溶液である。特定の実施形態では、緩衝液は、ＮａＣｌを加えたリン酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、微粒子径は、Ｄ５０が約１〜５μｍである。製剤は、市販の圧縮空気ジェット式ネブライザーを使用して送達することができる。いくつかの実施形態では、製剤の濃度は、約０．１μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本開示は、気体中に複数の分散した液滴を含むエアロゾルを提供し、前記液滴は、少なくとも１つのＢＴ化合物を中に懸濁させて含むＢＴ組成物を含み、ここで、ＢＴ化合物は、ビスマス及び／またはビスマス塩及びチオール含有化合物を含み、かつ、液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、レーザー飛行時間型及び／またはカスケードインパクターにより測定した場合の空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである。いくつかの実施形態では、液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約７μｍ、または約０．５μｍ〜約５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．８μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍであり、それらの間にあるあらゆる範囲が含まれる。いくつかの実施形態では、液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＭＭＡＤが約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍ、及びそれらの間にあるあらゆる範囲である。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約１０μｍより小さい。例えば、いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約１０μｍ、９μｍ、８μｍ、７μｍ、６μｍ、５μｍ、４μｍ、３μｍ、２μｍ、または約１μｍより小さい。いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約３μｍより小さい。いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約１μｍ〜約５μｍ、または約２μｍ〜約６μｍ、または約２μｍ〜約４μｍ、または約２μｍ〜約３μｍ、または約１μｍ〜約４μｍ、または約１μｍ〜約３μｍの範囲である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、複数の液滴は、連続気相中に分散している。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、エアロゾルのＢＴ化合物は、１つ以上のチオール含有化合物と共有結合で結合している、及び／またはそれらとの配位錯体になっている、ビスマス及び／またはビスマス塩を含む。例えば、ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである。いくつかの実施形態では、チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む。いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、エアロゾルのＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである。いくつかの実施形態では、エアロゾルのＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物（例えば、ＢｉｓＥＤＴ）は、液滴中に懸濁されている。本開示のＢＴ化合物は従来の溶媒及びエアロゾル担体への溶解性がほとんどまたは全くなく、そのため、エアロゾルの液滴中に懸濁ＢＴ粒子として実質的に存在する。例えば、いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物（ＢｉｓＥＤＴ等）はエアロゾル担体への可溶性が１％未満であり、そのため、主に（９９％超）固体として存在する。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、液滴はさらに、Ｔｗｅｅｎ  ８０（例えば、約０．０５％〜約１％）及び任意選択でｐＨが約７．４の緩衝液（例えば、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）；及び／または塩化ナトリウムを含む。
【０１３８】
本開示のエアロゾルは、ＭＭＡＤ分布が非常に狭く、これは、粒子集団を目的の粒径範囲に集中させ、吸入可能範囲または「微粉」から外れる、すなわち、典型的には直径０．４μｍ未満の粒子である生成物の量を最小限に抑えるかもしくは排除する必要性があることから有益である。適切な粒径範囲内に狭い液滴径分布を作り出せることにより、初期蒸発率の制御が得られ、高い沈着効率を可能にする。粒子エアロゾル液滴径の下限に関する制限因子は、ＢＴ微粒子径（例えば、ＢｉｓＥＤＴ微粒子径）である。エアロゾル化された液滴は、ＢｉｓＥＤＴ微粒子の径より小さくすることはできない。したがって、ＢＴ微粒子径分布、ならびにＢＴ微粒子径分布の均一性と一貫した再現性は、吸入を目的とした安全で有効かつ効率的なエアロゾル化ＢｉｓＥＤＴ製剤の生成を支える有益で重要な特徴である。したがって、いくつかの実施形態では、本開示のエアロゾルは、３％超、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、より大きい３５％ｍ４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、及び８０％超の沈着効率を実現する。いくつかの実施形態では、沈着効率とは、肺の深肺領域、例えば、深肺肺胞への沈着を指す。いくつかの実施形態では、本開示のエアロゾルは、ネブライザーによるエアロゾル化時に沈着効率を実現する。例えば、ネブライザーは、ジェット式ネブライザーである。いくつかの実施形態では、ジェット式ネブライザーは、Ｐａｒｉ  ＬＣ  Ｐｌｕｓジェット式ネブライザーまたはＰａｒｉ  ＬＣ  ＳＰＲＩＮＴジェット式ネブライザーである。いくつかの実施形態では、ネブライザーは、入り口圧力が約１０〜約４０ｐｓｉｇ（例えば、２０〜２５ｐｓｉｇ）である。いくつかの実施形態では、流入量は、約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分（例えば、５．２Ｌ／分）である。いくつかの実施形態では、排気流量は、約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分（例えば、５Ｌ／分）である。
【０１３９】
肺の肺胞領域は、血流と内腔を隔てる厚さが最小限である（０．５μｍ〜２．５μｍ）ため、肺胞上皮に沈着する従来の肺用薬剤は、全身吸収のために肺滞留時間が極めて短い。したがって、従来の肺の治療剤では典型的に、組織レベルで薬物の適切なレベルを維持するために頻回投与が必要となる。しかしながら、驚くべきことに、本開示のエアロゾル化粒子は、従来の肺の治療剤に比して、肺での極めて長い滞留時間（半減期として測定）を有すること、及び粘液線毛クリアランスとマクロファージ取り込みが低下していること発見された。さらに、現在のエアロゾルの長い滞留時間により、全身性の活性及び関連する全身性の副作用が最小限に抑えられる。いかなる特定の理論にも拘束されることなく、エアロゾル化微粒子は、肺内腔で緩徐に溶出し、そのため全身曝露は、溶出速度により制限されると考えられる。さらに、肺滞留時間が長くなることで、ＢＴ微粒子が絶えず存在することによる微生物コロニーの大幅な減少がもたらされる。
【０１４０】
したがって、いくつかの実施形態では、エアロゾルが肺（例えば、深肺肺胞）に沈着する場合、ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも２日である。例えば、ＢＴ化合物は、平均半減期が約２日、３日、４日、または５日である。いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである。特定の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は、３０時間以上、４０時間以上、５０時間以上、６０時間以上、７０、時間以上、８０時間以上、９０時間以上、１００時間以上、１１０時間以上、１２５時間以上、または１５０時間以上である。特定の実施形態では、肺組織での半減期は、吸入による単回投与後である。別の特定の実施形態では、肺組織はラット由来である。別の特定の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は、本明細書の実施例８の場合のようなプロトコルの使用によって決定される。
【０１４１】
別の実施形態では、本明細書に記載される製剤をラットに投与するためにＰａｒｉ  ＬＣ  ｐｌｕｓジェット式ネブライザーを使用して１００μｇ／ｋｇ肺の単回投与をラットに行った場合、ＢｉｓＥＤＴの肺組織半減期は８０時間以上である。別の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は９０時間以上である。別の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は１００時間以上である。
【０１４２】
別の実施形態では、対象へのエアロゾル化組成物の送達後、口腔咽頭領域及び誘導気道とは対照的に、用量の少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％が肺に沈着する。特定の実施形態では、口腔咽頭領域及び誘導気道とは対照的に、用量の少なくとも８０％が肺に沈着する。別の特定の実施形態では、口腔咽頭領域及び誘導気道とは対照的に、用量の少なくとも９０％が肺に沈着する。
【０１４３】
エアロゾル化された肺の治療薬では、継続的治療のために極めて長い肺滞留時間と併せて高い沈着効率を実現し、かつ、全身吸収がほとんどまたは全くない、分布の狭いエアロゾル粒子を有することは、これまでにないことであった。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法を提供し、かかる方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することを含み、組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである微粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択でｐＨ約７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約１０ｍＭの塩化ナトリウム、及びｐＨ約７．４の約１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。本明細書の方法の別の実施形態では、ＢＴ組成物はエアロゾル化によって投与される。いくつかの実施形態では、エアロゾルが肺（例えば、深肺肺胞）に沈着する場合、ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも２日である。例えば、ＢＴ化合物は、平均半減期が約２日、３日、４日、または５日である。いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである。特定の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は、３０時間以上、４０時間以上、５０時間以上、６０時間以上、７０、時間以上、８０時間以上、９０時間以上、１００時間以上、１１０時間以上、１２５時間以上、または１５０時間以上である。特定の実施形態では、肺組織での半減期は、吸入による単回投与後である。別の特定の実施形態では、肺組織はラット由来である。別の特定の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は、本明細書の実施例８の場合のようなプロトコルの使用によって決定される。
【０１４５】
別の実施形態では、対象へのエアロゾル化組成物の送達後、口腔咽頭領域及び誘導気道とは対照的に、用量の少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、または９５％が肺に沈着する。特定の実施形態では、口腔咽頭領域及び誘導気道とは対照的に、用量の少なくとも８０％が肺に沈着する。別の特定の実施形態では、口腔咽頭領域及び誘導気道とは対照的に、用量の少なくとも９０％が肺に沈着する。特定の実施形態では、対象はラットである。別の特定の実施形態では、沈着パーセントは、本明細書に記載される製剤をラットに投与するためにＰａｒｉ  ＬＣ  ｐｌｕｓジェット式ネブライザーを使用して決定される。
【０１４６】
別の実施形態では、本明細書に記載される製剤をラットに投与するためにＰａｒｉ  ＬＣ  ｐｌｕｓジェット式ネブライザーを使用して１００μｇ／ｋｇ肺の単回投与をラットに行った場合、ＢｉｓＥＤＴの肺組織半減期は８０時間以上である。別の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は９０時間以上である。別の実施形態では、ＢｉｓＥＤＴの肺組織での半減期は１００時間以上である。
【０１４７】
別の実施形態では、本発明の方法には、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を対象に投与することによって、対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減することが含まれ得、かかる組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである微粒子の懸濁液である。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである微粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態では、微粒子の少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＶＭＤが約０．４μｍ〜約５μｍ、または約０．６μｍ〜約２．５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．７μｍ〜約３．０μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍ、及びそれらの間にあるあらゆる範囲である。いくつかの実施形態では、微粒子の少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍ、及びそれらの間にあるあらゆる範囲である。いくつかの実施形態では、微粒子は、Ｄ９０が約１０μｍより小さい。例えば、いくつかの実施形態では、微粒子は、Ｄ９０が約１０μｍ、９μｍ、８μｍ、７μｍ、６μｍ、５μｍ、４μｍ、３μｍ、２μｍ、または約１μｍより小さい。いくつかの実施形態では、微粒子は、Ｄ９０が約３μｍより小さい。いくつかの実施形態では、微粒子は、Ｄ９０が約１μｍ〜約５μｍ、または約２μｍ〜約６μｍ、または約２μｍ〜約４μｍ、または約２μｍ〜約３μｍ、または約１μｍ〜約４μｍ、または約１μｍ〜約３μｍの範囲である。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物はエアロゾル化され、エアロゾル化された液滴は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約５μｍである。いくつかの実施形態では、液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約７μｍ、または約０．５μｍ〜約５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．８μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍ、及びそれらの間にあるあらゆる範囲である。いくつかの実施形態では、液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＭＭＡＤが約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍ、及びそれらの間にあるあらゆる範囲である。いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約１０μｍより小さい。例えば、いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約１０μｍ、９μｍ、８μｍ、７μｍ、６μｍ、５μｍ、４μｍ、３μｍ、２μｍ、または約１μｍより小さい。いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約３μｍより小さい。いくつかの実施形態では、複数の液滴は、Ｄ９０が約１μｍ〜約５μｍ、または約２μｍ〜約６μｍ、または約２μｍ〜約４μｍ、または約２μｍ〜約３μｍ、または約１μｍ〜約４μｍ、または約１μｍ〜約３μｍの範囲である。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、複数の液滴は、連続気相中に分散している。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、エアロゾルのＢＴ化合物は、１つ以上のチオール含有化合物と共有結合で結合している、及び／またはそれらとの配位錯体になっている、ビスマス及び／またはビスマス塩を含む。例えば、ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである。いくつかの実施形態では、チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む。いくつかの実施形態では、ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、エアロゾルのＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである。いくつかの実施形態では、エアロゾルのＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである。
【０１５２】
本願で開示される組成物のいくつかの実施形態では、微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、または９５％は、体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである。いくつかの実施形態では、実質的にすべての微粒子は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである。いくつかの実施形態では、エアロゾル化粒子の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである。いくつかの実施形態では、組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６μｍ〜約２．５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである微粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態では、ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、組成物は、ネブライザーによりエアロゾル化される。例えば、ネブライザーは、ジェット式ネブライザーまたは振動型メッシュ式ネブライザーである。いくつかの実施形態では、ジェット式ネブライザーは、Ｐａｒｉ  ＬＣ  Ｐｌｕｓジェット式ネブライザーまたはＰａｒｉ  ＬＣ  ＳＰＲＩＮＴジェット式ネブライザーである。いくつかの実施形態では、ネブライザーは、入り口圧力が約１０〜約４０ｐｓｉｇ（例えば、２０〜２５ｐｓｉｇ）である。いくつかの実施形態では、流入量は、約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分（例えば、５．２Ｌ／分）である。いくつかの実施形態では、排気流量は、約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分（例えば、５Ｌ／分）である。
【０１５４】
開示の医薬組成物で利用可能な水性及び非水性の好適な担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物、オリーブ油等の植物性油、ならびにオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが含まれる。適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング材料の使用によって、分散液の場合は要求される粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【０１５５】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含有することもでき、糖、塩化ナトリウム等の等張剤等を組成物に含めることが望ましい場合もあり得る。さらに、注射用製剤の持続吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等、吸収を遅らせる物質を含めることによってもたらされ得る。
【０１５６】
場合によっては、薬物の効果を延長させるために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物吸収を遅くすることが望ましい。これは、難水溶性の結晶質または非晶質の材料の液体懸濁液の使用によって達成することができる。その結果、薬物の吸収速度はその溶出速度に依存し、ひいては、結晶サイズと結晶形態に依存し得る。別法として、非経口投与された薬物形態の吸収遅延は、薬物を油性ビヒクルに溶解または懸濁させることにより達成される。
【０１５７】
医薬組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、患者にとって毒性を伴わずに、特定の患者、組成物、及び投与方法に対する所望の治療効果を達成するのに有効な活性成分量が得られるよう、変えることができる。
【０１５８】
選択用量レベルは、使用する特定の化合物もしくは化合物の組み合わせ、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物（複数可）の排泄速度、治療期間、使用される特定の化合物（複数可）と併用される他の薬物、化合物及び／または材料、治療される対象の年齢、性別、体重、状態、全体的健康状態及び以前の病歴、ならびに医療分野で周知の同様の因子を含む、様々な因子によって異なる。
【０１５９】
当該技術分野で通常の技能を有する医師または獣医は、必要とされる医薬組成物の治療的有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医は、医薬組成物または化合物の投与を、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加することができるであろう。「治療的有効量」とは、所望の治療効果を発揮するのに十分な化合物の濃度を意味する。化合物の有効量は、対象の体重、性別、年齢、及び病歴によって異なることが一般に理解される。有効量に影響する他の因子には、対象の状態の重症度、治療される障害、化合物の安定性、及び所望される場合は、開示の化合物と共に投与される別の種類の治療剤が含まれ得るが、これらに限定されない。薬剤の多回投与によって、さらに多い総用量を送達することができる。有効性及び投与量を決定する方法は、当業者に公知である（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １３  ｅｄ．，１８１４−１８８２、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６０】
一般に、開示の組成物及び方法に使用される活性化合物の好適な用量は、治療効果を生じるために有効な最低用量である化合物量となる。そのような有効量は一般に、上記の因子によって異なる。
【０１６１】
本開示には、本開示の組成物及び方法における、開示の化合物の薬学的に許容される塩の使用が含まれる。特定の実施形態では、意図される開示の塩には、アルキル、ジアルキル、トリアルキルまたはテトラアルキルのアンモニウム塩が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、意図される開示の塩には、Ｌ−アルギニン、ベネンタミン（ｂｅｎｅｎｔｈａｍｉｎｅ）、ベンザチン、ベタイン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、リチウム、Ｌ−リジン、マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン、ピペラジン、カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、及び亜鉛塩が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、意図される開示の塩には、Ｎａ、Ｃａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｚｎまたは他の金属の塩が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６２】
薬学的に許容される酸付加塩もまた、水、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド等との様々な溶媒和物として存在することができる。そのような溶媒和物の混合物もまた調製可能である。そのような溶媒和物の源は、結晶化の溶媒からできるか、調製もしくは結晶化の溶媒に内在するか、またはそのような溶媒にとって外来性であり得る。
【０１６３】
ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム等、湿潤剤、乳化剤及び滑沢剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、矯味剤及び香料、保存剤、ならびに抗酸化剤もまた組成物中に存在し得る。
【０１６４】
薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、二亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等、（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール、等、及び（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が含まれる。
【０１６５】
実施形態
１．対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【０１６６】
２．前記対象は少なくとも１つの肺感染症を有する、実施形態１に記載の方法。
【０１６７】
３．前記対象は少なくとも２つの肺感染症を有し、前記感染症は順序が同時であるかまたは連続的である、実施形態２に記載の方法。
【０１６８】
４．前記肺感染症は片方の肺にある、実施形態２または３に記載の方法。
【０１６９】
５．前記肺感染症は両肺にある、実施形態２〜４のいずれか１つに記載の方法。
【０１７０】
６．前記肺感染症は、右肺の３つの肺葉のうち１つ以上にある、実施形態２〜５のいずれか１つに記載の方法。
【０１７１】
７．前記肺感染症は、左肺の２つの肺葉のうち一方または両方にある、実施形態２〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１７２】
８．前記肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である、実施形態２〜７のいずれか１つに記載の方法。
【０１７３】
９．前記肺感染症は１つ以上の細菌病原体及び／または真菌病原体を含んでいる、実施形態２〜８のいずれか１つに記載の方法。
【０１７４】
１０．前記肺感染症はＣＦ関連肺感染症である、実施形態２〜９のいずれか１つに記載の方法。
【０１７５】
１１．前記ＣＦ関連肺感染症を治療することを含む、実施形態１０に記載の方法。
【０１７６】
１２．前記ＣＦ関連肺感染症を管理することを含む、実施形態１０に記載の方法。
【０１７７】
１３．前記ＣＦ関連肺感染症の重症度を軽減することを含む、実施形態１０に記載の方法。
【０１７８】
１４．前記肺感染症は、肺粘膜、気管支、肺胞、マクロファージ、及び／または細気管支の中もしくはその上に位置する、実施形態２〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【０１７９】
１５．前記肺感染症は、細菌バイオフィルム、凝集細菌、真菌バイオフィルム、細菌及び真菌の両方で構成される複数種もしくは複数門の複合バイオフィルム、または凝集真菌の、表面もしくは内部に位置する、実施形態２〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【０１８０】
１６．前記肺感染症は喀痰中に位置する、実施形態２〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【０１８１】
１７．前記細菌病原体は、グラム陽性菌及び／またはグラム陰性菌のうち１つ以上を含む、実施形態９〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８２】
１８．前記細菌病原体は、細菌バイオフィルム及び／または浮遊細菌のうち１つ以上を含む、実施形態９〜１７のいずれか１つに記載の方法。
【０１８３】
１９．前記方法は、（ｉ）前記細菌バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）前記細菌バイオフィルムの増殖を弱めること、（ｉｉｉ）前記細菌バイオフィルムの初期形成を防止すること、及び／または（ｉｖ）前記細菌バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む、実施形態１８に記載の方法。
【０１８４】
２０．前記真菌病原体は、浮遊真菌及び／またはバイオフィルム真菌を含む、実施形態９〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８５】
２１．前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体による前記感染症の予防、及び
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体の低減、及び／または
−喀痰の粘稠度を低下させること、のうち１つまたは全部によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、実施形態９〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【０１８６】
２２．前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体または前記真菌病原体からの外毒素の産生もしくは分泌の阻止、
−前記細菌病原体または前記真菌病原体の浮遊細胞の細胞生存もしくは細胞増殖の阻害、
−前記細菌病原体または前記真菌病原体によるバイオフィルム形成の阻害、
−肺組織に対するバイオフィルムの侵襲性の抑制、
−肺組織に対するバイオフィルムの病原性の抑制、及び
−前記細菌病原体または前記真菌病原体のバイオフィルム形成細胞のバイオフィルム生存もしくはバイオフィルム増殖の阻害、のうちの１つ以上によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、実施形態９〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【０１８７】
２３．前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａから選択される、実施形態９〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０１８８】
２４．前記非結核性抗酸菌は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｒｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎｉから選択される、実施形態２３に記載の方法。
【０１８９】
２５．前記Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．は、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｔａｂｉｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｍｂｉｆａｒｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｎｔｈｉｎａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｕｂｏｎｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｒｂｏｒｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔｅｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｅｔａｌｌｉｃａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｅｍｉｎａｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｉｆｆｕｓａから選択される、実施形態２３に記載の方法。
【０１９０】
２６．前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、単剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、単剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓから選択される、実施形態２３に記載の方法。
【０１９１】
２７．前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓから選択される、実施形態２３に記載の方法。
【０１９２】
２８．前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムから選択される、実施形態１８、１９及び２２のいずれか１つに記載の方法。
【０１９３】
２９．前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及び／またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓは多剤耐性である、実施形態２７に記載の方法。
【０１９４】
３０．前記１つ以上の病原体は、アミカシン、アズトレオナム、メチシリン、バンコマイシン、ナフシリン、ゲンタマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、ドキシサイクリン、コリスチン、デラマニド、プレトマニド、クロファジミン、ベダキリン、及びトブラマイシンから選択される抗生物質に対して耐性または抵抗性を示す、実施形態９〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０１９５】
３１．前記抗生物質はアミカシンまたはトブラマイシンである、実施形態３０に記載の方法。
【０１９６】
３２．前記細菌病原体はメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである、実施形態３０に記載の方法。
【０１９７】
３３．アミカシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、イミペネム、シプロフロキサシン、セフタジジム、アズトレオナム、チカルシリン−クラブラン酸塩、ジクロキサシリン、アモキシシリン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、セファレキシン、ピペラシリン−タゾバクタム、リネゾリド、ダプトマイシン、バンコマイシン、メトロニダゾール、クリンダマイシン、コリスチン、テトラサイクリン、レボフロキサシン、アモキシシリンとクラブラン酸（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、クロキサシリン、ジクロキサシリン、セフジニル、セフプロジル、セファクロル、セフロキシム、エリスロマイシン／スルフイソキサゾール、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、チゲサイクリン、イミペネム、メロペネム、コリスチメタート／ｃｏｌｉｓｔｉｎ（登録商標）、メチシリン、オキサシリン、ナフシリン、カルベニシリン、アズロシリン、ピペラシリンとタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、セフェピム、エタンブトール、リファンピシン、及びメロペネムから選択される抗生物質を前記対象に併用投与することをさらに含む、実施形態１〜３２のいずれか１つに記載の方法。
【０１９８】
３４．前記抗生物質は、メロペネム、セフタジジム、トブラマイシン、アミカシン、アズトレオナム、シプロフロキサシン、コリスチン、及びレボフロキサシンから選択される、実施形態３３に記載の方法。
【０１９９】
３５．前記真菌病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、及び／またはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓである、実施形態９〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０２００】
３６．前記ＢＴ組成物を、エアロゾル装置を使用して経口または経鼻の吸入により投与することを含む、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【０２０１】
３７．前記エアロゾル装置はネブライザーである、実施形態３６に記載の方法。
【０２０２】
３８．前記ＢＴ組成物は、水溶液、水性懸濁液、または乾燥粉末の形態である、実施形態３６または３７に記載の方法。
【０２０３】
３９．前記ＢＴ組成物は肺組織に局所投与される、実施形態１〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０２０４】
４０．前記ＢＴ組成物は、０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ〜約７５０μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約２５０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬ、もしくは約７５μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬの投与量として投与され、及び／または
肺に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、もしくは約７５μｇ〜約１５０μｇである、実施形態１〜３９のいずれか１つに記載の方法。
【０２０５】
４１．前記ＢＴ組成物は、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの投与量として投与される、実施形態１〜４０のいずれか１つに記載の方法。
【０２０６】
４２．前記ＢＴ組成物は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日に１回、週１回、２週間に１回、月１回、または２か月に１回投与される、実施形態１〜４１のいずれか１つに記載の方法。
【０２０７】
４３．前記ＢＴ組成物は週１回投与される、実施形態４２に記載の方法。
【０２０８】
４４．前記対象において、咳嗽、喘鳴、息切れ、気管支拡張症、鼻ポリープ、喀血、呼吸不全、及び肺増悪という嚢胞性線維症の症状のうち１つ以上が重症度において軽減される、実施形態１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０２０９】
４５．前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、実施形態１〜４４のいずれか１つに記載の方法。
【０２１０】
４６．前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．４μｍ〜約３μｍ、または約０．５μｍ〜約２μｍ、または約０．７μｍ〜約２μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、実施形態４５に記載の方法。
【０２１１】
４７．前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、実施形態４５〜４６に記載の方法。
【０２１２】
４８．前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、実施形態４５〜４６に記載の方法。
【０２１３】
４９．前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、実施形態４５〜４８のいずれか１つに記載の方法。
【０２１４】
５０．前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、実施形態４９に記載の方法。
【０２１５】
５１．前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、実施形態５０に記載の方法。
【０２１６】
５２．前記ＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである、実施形態５０に記載の方法。
【０２１７】
５３．深肺領域に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、または約７５μｇ〜約１５０μｇである、実施形態１〜５２のいずれか１つに記載の方法。
【０２１８】
５４．前記深肺領域は深肺肺胞である、実施形態５３に記載の方法。
【０２１９】
５５．気体中に複数の分散した液滴を含むエアロゾルであって、前記液滴は、少なくとも１つのＢＴ化合物を中に懸濁させて含むＢＴ組成物を含み、前記ＢＴ化合物は、ビスマス及び／またはビスマス塩及びチオール含有化合物を含み、
前記液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％は、空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである、前記エアロゾル。
【０２２０】
５６．前記液滴は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約７μｍ、または約０．５μｍ〜約５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．８μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、実施形態５５に記載のエアロゾル。
【０２２１】
５７．前記液滴は、ＭＭＡＤが約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、実施形態５６に記載のエアロゾル。
【０２２２】
５８．前記複数の液滴は、Ｄ９０が約５μｍより小さい、実施形態５５〜５７のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２２３】
５９．前記複数の液滴は、Ｄ９０が約３μｍより小さい、実施形態５８に記載のエアロゾル。
【０２２４】
６０．前記複数の液滴は連続気相中に分散している、実施形態５５〜５９のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２２５】
６１．前記ＢＴ化合物は、１つ以上のチオール含有化合物と共有結合で結合しており、及び／またはそれらとの配位錯体になっているビスマス及び／またはビスマス塩を含む、実施形態５５〜６０のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２２６】
６２．前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、実施形態５５〜６１のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２２７】
６３．前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、実施形態５５〜６２のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２２８】
６４．前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、実施形態５５〜６３のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２２９】
６５．前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、実施形態６４に記載のエアロゾル。
【０２３０】
６６．前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、実施形態６５に記載のエアロゾル。
【０２３１】
６７．前記空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）は、レーザー飛行時間型及び／またはカスケードインパクターによって決定される、実施形態５５に記載のエアロゾル。
【０２３２】
６８．前記ＢＴ化合物は前記液滴中に懸濁されている、実施形態５５〜６７のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２３３】
６９．前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、実施形態６８に記載のエアロゾル。
【０２３４】
７０．前記液滴はさらに、Ｔｗｅｅｎ  ８０（例えば、約０．０５％〜約１％）及び任意選択で
ｐＨが約７．４の緩衝液（例えば、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）、及び／または塩化ナトリウム、を含む、実施形態５５〜６９のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２３５】
７１．前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも２日である、実施形態５５〜７０のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２３６】
７２．前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも４日である、実施形態７１のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０２３７】
７３．対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、前記方法は、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を前記対象に投与することを含み、前記組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．４μｍ〜約５μｍである微粒子の懸濁液である、前記方法。
【０２３８】
７４．前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、実施形態７３に記載の方法。
【０２３９】
７５．前記ＢＴ組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択でｐＨ約７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態７４に記載の方法。
【０２４０】
７６．前記ＢＴ組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約１０ｍＭの塩化ナトリウム、及びｐＨ約７．４の約１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態７５に記載の方法。
【０２４１】
７７．前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約５μｍである、実施形態７３〜７６のいずれか１つに記載の方法。
【０２４２】
７８．前記液滴のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、ＭＭＡＤが約０．４μｍ〜約７μｍ、または約０．５μｍ〜約５μｍ、または約０．７μｍ〜約４μｍ、または約０．７μｍ〜約３．５μｍ、または約０．８μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、実施形態７７に記載の方法。
【０２４３】
７９．前記液滴は、ＭＭＡＤが約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約３．５μｍ、または約０．９μｍ〜約３μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、実施形態７８に記載の方法。
【０２４４】
８０．前記複数の液滴は、Ｄ９０が約３μｍより小さい、実施形態７７〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０２４５】
８１．前記複数の液滴は、Ｄ９０が約２μｍより小さい、実施形態８０に記載の方法。
【０２４６】
８２．前記複数の液滴は連続気相中に分散している、実施形態７７〜８１のいずれか１つに記載の方法。
【０２４７】
８３．前記ＢＴ化合物は、１つ以上のチオール含有化合物と共有結合で結合しており、及び／またはそれらとの配位錯体になっているビスマス及び／またはビスマス塩を含む、実施形態７７〜８２のいずれか１つに記載の方法。
【０２４８】
８４．前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、実施形態７７〜８３のいずれか１つに記載の方法。
【０２４９】
８５．前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、実施形態７７〜８４のいずれか１つに記載の方法。
【０２５０】
８６．前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、実施形態７７〜８５のいずれか１つに記載の方法。
【０２５１】
８７．前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、実施形態８６に記載の方法。
【０２５２】
８８．前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、実施形態８７に記載の方法。
【０２５３】
８９．前記ＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである、実施形態８７に記載の方法。
【０２５４】
９０．深肺領域に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、または約７５μｇ〜約１５０μｇである、実施形態７７〜８９のいずれか１つに記載の方法。
【０２５５】
９１．前記深肺領域は深肺肺胞である、実施形態９０に記載の方法。
【０２５６】
９２．前記深肺肺胞に投与されるＢｉｓＥＤＴを含む前記ＢＴ組成物の総量は約０．６ｍｇ〜約６ｍｇである、実施形態７７〜９１のいずれか１つに記載の方法。
【０２５７】
９３．前記組成物はネブライザーによりエアロゾル化される、実施形態７７〜９２のいずれか１つに記載の方法。
【０２５８】
９４．前記ネブライザーはジェット式ネブライザーである、実施形態９３に記載の方法。
【０２５９】
９５．前記ジェット式ネブライザーは、Ｐａｒｉ  ＬＣ  Ｐｌｕｓジェット式ネブライザーまたはＰａｒｉ  ＬＣ  ＳＰＲＩＮＴジェット式ネブライザーである、実施形態９４に記載の方法。
【０２６０】
９６．前記ネブライザーは、入り口圧力が約１０〜約４０ｐｓｉｇである、実施形態９３〜９５のいずれか１つに記載の方法。
【０２６１】
９７．前記流入量は約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分である、実施形態９３〜９６のいずれか１つに記載の方法。
【０２６２】
９８．前記排気流量は約３Ｌ／分〜約８Ｌ／分である、実施形態９３〜９７のいずれか１つに記載の方法。
【０２６３】
９９．対象における１つ以上の肺疾患または感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、少なくとも１つのビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含むＢＴ組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【０２６４】
１００．前記１つ以上の肺疾患または感染症は、嚢胞性線維症の結果でもなく、それに関連もしていない、実施形態９９に記載の方法。
【０２６５】
１０１．前記対象は、少なくとも１つの肺感染症を有し、２つ以上の肺感染症がある場合、前記感染症は順序が同時であるかまたは連続的である、実施形態９９または１００に記載の方法。
【０２６６】
１０２．前記肺感染症は片方の肺にある、実施形態１００または１０１に記載の方法。
【０２６７】
１０３．前記肺感染症は両肺にある、実施形態１００〜１０２のいずれか１つに記載の方法。
【０２６８】
１０４．前記肺感染症は、右肺の３つの肺葉のうち１つ以上にある、実施形態１００〜１０３のいずれか１つに記載の方法。
【０２６９】
１０５．前記肺感染症は、左肺の２つの肺葉のうち一方または両方にある、実施形態１００〜１０４のいずれか１つに記載の方法。
【０２７０】
１０６．前記肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である、実施形態１００〜１０５のいずれか１つに記載の方法。
【０２７１】
１０７．前記肺感染症は、１つ以上の細菌病原体または真菌病原体を含んでいる、実施形態１００〜１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２７２】
１０８．前記肺感染症はＣＦ関連肺感染症である、実施形態１０１〜１０７のいずれか１つに記載の方法。
【０２７３】
１０９．前記ＣＦ関連肺感染症を治療することを含む、実施形態１０８に記載の方法。
【０２７４】
１１０．前記ＣＦ関連肺感染症を管理することを含む、実施形態１０８に記載の方法。
【０２７５】
１１１．前記ＣＦ関連肺感染症の重症度を軽減することを含む、実施形態１０８に記載の方法。
【０２７６】
１１２．前記肺感染症は、肺粘膜、気管支及び／または細気管支の中もしくはその上に位置する、実施形態１００〜１１１のいずれか１つに記載の方法。
【０２７７】
１１３．前記肺感染症は、細菌バイオフィルム、凝集細菌、真菌バイオフィルム、または凝集真菌の、表面もしくは内部に位置する、実施形態１００〜１１１のいずれか１つに記載の方法。
【０２７８】
１１４．前記肺感染症は喀痰中に位置する、実施形態１００〜１１１のいずれか１つに記載の方法。
【０２７９】
１１５．前記細菌病原体は、グラム陽性菌及びグラム陰性菌のうち１つ以上を含む、実施形態１０７〜１１４のいずれか１つに記載の方法。
【０２８０】
１１６．前記細菌病原体は、細菌バイオフィルム及び浮遊細菌のうち１つ以上を含む、実施形態１０７〜１１５のいずれか１つに記載の方法。
【０２８１】
１１７．前記方法は、（ｉ）前記細菌バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）前記細菌バイオフィルムの増殖を弱めること、及び（ｉｉｉ）前記細菌バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む、実施形態１１６に記載の方法。
【０２８２】
１１８．前記真菌病原体は、浮遊真菌及び／またはバイオフィルム真菌を含む、実施形態１０７〜１１４のいずれか１つに記載の方法。
【０２８３】
１１９．前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体による前記感染症の予防、及び
−前記細菌病原体もしくは真菌病原体の低減、及び／または
−喀痰の粘稠度を低下させること、のうち１つまたは全部によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、実施形態１０７〜１１８のいずれか１つに記載の方法。
【０２８４】
１２０．前記ＢＴ組成物は、
−前記細菌病原体または真菌病原体からの外毒素の産生もしくは分泌の阻止、
−前記細菌病原体または真菌病原体の浮遊細胞の細胞生存もしくは細胞増殖の阻害、
−前記細菌病原体または真菌病原体によるバイオフィルム形成の阻害、及び
−前記細菌病原体または真菌病原体のバイオフィルム形成細胞のバイオフィルム生存もしくはバイオフィルム増殖の阻害、のうちの１つ以上によって前記肺感染症の重症度を治療、管理または軽減する、実施形態１０７〜１１８のいずれか１つに記載の方法。
【０２８５】
１２１．前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａ  ａｌｂａｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎ���ａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａから選択される、実施形態１０７〜１２０のいずれか１つに記載の方法。
【０２８６】
１２２．前記非結核性抗酸菌は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｒｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎｉから選択される、実施形態１２１に記載の方法。
【０２８７】
１２３．前記Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．は、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｔａｂｉｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｍｂｉｆａｒｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｎｔｈｉｎａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌａｄｉｏｌｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｕｂｏｎｅｎｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｒｂｏｒｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔｅｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｌａｔａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｅｔａｌｌｉｃａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｅｍｉｎａｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｉｆｆｕｓａから選択される、実施形態１２１に記載の方法。
【０２８８】
１２４．前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、単剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、単剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｄｏｌｏｓａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓから選択される、実施形態１２１に記載の方法。
【０２８９】
１２５．前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓから選択される、実施形態１２１に記載の方法。
【０２９０】
１２６．前記１つ以上の病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムから選択される、実施形態１１７、１１８、または１２０のいずれか１つに記載の方法。
【０２９１】
１２７．前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及び／またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓは多剤耐性である、実施形態１２５に記載の方法。
【０２９２】
１２８．前記１つ以上の病原体は、アミカシン、アズトレオナム、メチシリン、バンコマイシン、ナフシリン、ゲンタマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、ドキシサイクリン及びトブラマイシンから選択される抗生物質に対して耐性または抵抗性を示す、実施形態１０７〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０２９３】
１２９．前記抗生物質はアミカシンまたはトブラマイシンである、実施形態１２８に記載の方法。
【０２９４】
１３０．前記細菌病原体はメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである、実施形態１２８に記載の方法。
【０２９５】
１３１．アミカシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、ピペラシリン、メズロシリン、チカルシリン、イミペネム、シプロフロキサシン、セフタジジム、アズトレオナム、チカルシリン−クラブラン酸塩、ジクロキサシリン、アモキシシリン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、セファレキシン、ピペラシリン−タゾバクタム、リネゾリド、ダプトマイシン、バンコマイシン、メトロニダゾール、クリンダマイシン、コリスチン、テトラサイクリン、レボフロキサシン、アモキシシリンとクラブラン酸（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、クロキサシリン、ジクロキサシリン、セフジニル、セフプロジル、セファクロル、セフロキシム、エリスロマイシン／スルフイソキサゾール、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、チゲサイクリン、イミペネム、メロペネム、コリスチメタート／ｃｏｌｉｓｔｉｎ（登録商標）、メチシリン、オキサシリン、ナフシリン、カルベニシリン、アズロシリン、ピペラシリンとタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、セフェピム、エタンブトール、リファンピシン、及びメロペネムから選択される抗生物質を前記対象に併用投与またはコンジョイント投与することをさらに含む、実施形態９９〜１３０のいずれか１つに記載の方法。
【０２９６】
１３２．前記抗生物質は、メロペネム、セフタジジム、トブラマイシン、アミカシン、アズトレオナム、シプロフロキサシン、コリスチン、及びレボフロキサシンから選択される、実施形態１３１に記載の方法。
【０２９７】
１３３．前記真菌病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、及び／またはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓである、実施形態１０７〜１２０のいずれか１つに記載の方法。
【０２９８】
１３４．エアロゾル装置を使用して前記ＢＴ組成物を経口または経鼻の吸入により投与することを含む、実施形態９９〜１３３のいずれか１つに記載の方法。
【０２９９】
１３５．前記エアロゾル装置はネブライザーである、実施形態１３４に記載の方法。
【０３００】
１３６．前記ＢＴ組成物は、水溶液または懸濁液の形態である、実施形態１３４または１３５に記載の方法。
【０３０１】
１３７．前記ＢＴ組成物は肺組織に局所投与される、実施形態９９〜１３６のいずれか１つに記載の方法。
【０３０２】
１３８．前記ＢＴ組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ〜約７５０μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約２５０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬ、もしくは約７５μｇ／ｍＬ〜約１５０μｇ／ｍＬの投与量として投与され、及び／または
肺に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、もしくは約７５μｇ〜約１５０μｇである、実施形態９９〜１３７のいずれか１つに記載の方法。
【０３０３】
１３９．前記ＢＴ組成物は、約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの投与量として投与される、実施形態９９〜１３８のいずれか１つに記載の方法。
【０３０４】
１４０．前記ＢＴ組成物は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日に１回、週１回、２週間に１回、月１回、隔月に１回投与される、実施形態９９〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０３０５】
１４１．前記ＢＴ組成物は週１回投与される、実施形態１４０に記載の方法。
【０３０６】
１４２．咳嗽、喘鳴、息切れ、気管支拡張症、鼻ポリープ、喀血、呼吸不全、及び肺増悪という症状のうち１つ以上が前記対象において重症度が軽減される、実施形態９９〜１４１のいずれか１つに記載の方法。
【０３０７】
１４３．前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、実施形態９９〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
【０３０８】
１４４．前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．４μｍ〜約３μｍ、または約０．５μｍ〜約２μｍ、または約０．７μｍ〜約２μｍ、または約０．８μｍ〜約１．８μｍ、または約０．８μｍ〜約１．６μｍ、または約０．９μｍ〜約１．４μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約１．８μｍである、実施形態１４３に記載の方法。
【０３０９】
１４５．前記ビスマス塩は、硝酸ビスマス、次硝酸ビスマス、または塩化ビスマスである、実施形態１４２〜１４３に記載の方法。
【０３１０】
１４６．前記チオール含有化合物は、１，２−エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、ピリチオン、ジチオエリトリトール、３，４ジメルカプトトルエン、２，３−ブタンジチオール、１，３−プロパンジチオール、２−ヒドロキシプロパンチオール、１−メルカプト−２−プロパノール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール、システアミン、及びアルファ−リポ酸から選択される１つ以上の薬剤を含む、実施形態１４２〜１４３に記載の方法。
【０３１１】
１４７．前記ＢＴ組成物は、ＢｉｓＢＡＬ、ＢｉｓＥＤＴ、Ｂｉｓ−ジメルカプロール、ＢｉｓＤＴＴ、Ｂｉｓ−２−メルカプトエタノール、Ｂｉｓ−ＤＴＥ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、Ｂｉｓ−ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＢＤＴ、ＢｉｓＰｙｒ／ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／ＰＤＴ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ／Ｅｒｙ、ビスマス−１−メルカプト−２−プロパノール、ＢｉｓＥＤＴ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＰＹＲ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＢＡＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、ＢｉｓＴＯＬ／ＣＳＴＭＮ（１：１）、及びＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールから選択される１つ以上のＢＴ化合物を含む、実施形態１４３〜１４６のいずれか１つに記載の方法。
【０３１２】
１４８．前記ＢＴ化合物は、Ｂｉｓ−ＥＤＴ、Ｂｉｓ−Ｂａｌ、Ｂｉｓ−Ｐｙｒ、Ｂｉｓ−Ｅｒｙ、Ｂｉｓ−Ｔｏｌ、Ｂｉｓ−ＢＤＴ、またはＢｉｓ−ＥＤＴ／２−ヒドロキシ−１−プロパンチオールのうち１つ以上から選択される、実施形態１４７に記載の方法。
【０３１３】
１４９．前記ＢＴ化合物はＢｉｓＥＤＴである、実施形態１４８に記載の方法。
【０３１４】
１５０．前記ＢＴ化合物は、ＢｉｓＢＤＴまたはＢｉｓＢＡＬである、実施形態１４８に記載の方法。
【０３１５】
１５１．深肺領域に投与される前記ＢＴ組成物の総量は、約０．２５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．８ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、２．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約６ｍｇ〜約１０ｍｇ、０．６ｍｇ〜約６ｍｇ、約４ｍｇ〜約１５ｍｇ、約６ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、約７５μｇ〜約５００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約１００μｇ〜約１５０μｇ、または約７５μｇ〜約１５０μｇである、実施形態９９〜１５０のいずれか１つに記載の方法。
【０３１６】
１５２．前記深肺領域は深肺肺胞である、実施形態１５１に記載の方法。
【０３１７】
１５３．前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態５５〜７２のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０３１８】
１５４．実質的にすべての前記微粒子は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１５３に記載のエアロゾル。
【０３１９】
１５５．前記エアロゾル化粒子の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態５５〜７２または１５３〜１５４のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０３２０】
１５６．前記組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６μｍ〜約２．５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである微粒子の懸濁液である、実施形態５５〜７２または１５３〜１５５のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０３２１】
１５７．前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、実施形態５５〜７２または１５３〜１５６のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０３２２】
１５８．対象への前記エアロゾル化組成物の送達後、前記ＢＴ化合物用量の少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％が肺に沈着する、実施形態５５〜７２または１５３〜１５７のいずれか１つに記載のエアロゾル。
【０３２３】
１５９．前記ＢＴ化合物用量の少なくとも８０％が肺に沈着する、実施形態１５８に記載のエアロゾル。
【０３２４】
１６０．前記ＢＴ化合物用量の少なくとも９０％が肺に沈着する、実施形態１５８に記載のエアロゾル。
【０３２５】
１６１．前記微粒子のうち少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、もしくは９５％は、体積平均直径が、約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１〜５４または７３〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
【０３２６】
１６２．実質的にすべての前記微粒子は、ＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１６１に記載の方法。
【０３２７】
１６３．前記エアロゾル化粒子の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態１〜５４、７３〜１５２、または１６１及び１６２のいずれか１つに記載の方法。
【０３２８】
１６４．前記組成物は、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６μｍ〜約２．５μｍ及び／または空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである微粒子の懸濁液である、実施形態１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０３２９】
１６５．前記ビスマスチオール組成物は、ビスマスチオール（ＢＴ）化合物を含む複数の微粒子を含み、実質的にすべての前記微粒子が、体積平均直径が約０．４μｍ〜約５μｍであり、前記ＢＴ化合物は、ビスマスまたはビスマス塩及びチオール含有化合物を含む、実施形態１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６４のいずれか１つに記載の方法。
【０３３０】
１６６．肺（例えば、深肺領域）に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも２日である、実施形態１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６５のいずれか１つに記載の方法。
【０３３１】
１６７．前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢＴ化合物は、平均半減期が少なくとも４日である、実施形態１６６のいずれか１つに記載の方法。
【０３３２】
１６８．対象への前記エアロゾル化組成物の送達後、前記ＢＴ化合物用量の少なくとも６０％、６５％、７０、７５％、８０％、９０％、または９５％が肺に沈着する、実施形態１〜５４、７３〜１５２、または１６１〜１６７のいずれか１つに記載の方法。
【０３３３】
１６９．前記ＢＴ化合物用量の少なくとも８０％が肺に沈着する、実施形態１６８に記載のエアロゾル。
【０３３４】
１７０．前記ＢＴ化合物用量の少なくとも９０％が肺に沈着する、実施形態１６８に記載のエアロゾル。
【０３３５】
１７１．対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）の症状及び感染症の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含むビスマスチオール（ＢＴ）組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＢＴ組成物を投与することは、エアロゾル装置を使用した経口または経鼻による吸入によるものである、前記方法。
【０３３６】
１７２．前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも７０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍの体積平均直径（ＶＭＤ）を有する、前記複数の微粒子を含む、実施形態１７１に記載の方法。
【０３３７】
１７３．前記微粒子の少なくとも８０％はＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１７２に記載の方法。
【０３３８】
１７４．前記微粒子の少なくとも９０％はＶＭＤが約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１７２に記載の方法。
【０３３９】
１７５．前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも７０％は、空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）が約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態１７２に記載の方法。
【０３４０】
１７６．前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも８０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態１７３に記載の方法。
【０３４１】
１７７．前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも９０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態１７４に記載の方法。
【０３４２】
１７８．前記ＢＴ組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度のＢｉｓＥＤＴ、約０．０５％〜約１．０％Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、約０．０５〜４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び任意選択でｐＨ約７．４の約２〜２０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態１７１に記載の方法。
【０３４３】
１７９．前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢｉｓＥＤＴ化合物は、平均半減期が約４日である、実施形態１７１に記載の方法。
【０３４４】
１８０．前記対象は、１つ以上の細菌病原体及び／または真菌病原体が含まれている少なくとも１つの肺感染症を有する、実施形態１７１に記載の方法。
【０３４５】
１８１．前記方法は、（ｉ）細菌バイオフィルムを減少させること、（ｉｉ）細菌バイオフィルムの増殖を弱めること、（ｉｉｉ）前記細菌バイオフィルムの初期形成を防止すること、及び／または（ｉｖ）前記細菌バイオフィルムの再形成を防止すること、のうちの少なくとも１つを含む、実施形態１８０に記載の方法。
【０３４６】
１８２．前記１つ以上の病原体は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｗａｒｎｅｒｉ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｌｌｅｒｉ／ａｎｇｉｎｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、非結核性抗酸菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｉｔｔｍａｎｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、薬物耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｉｎｑｕｉｌｉｎｕｓ  ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｍａｎｎｉｔｏｌｉｌｙｔｉｃａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ａｐｉｓｔａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｎｏｍｅｎｕｓａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｏｒｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉ、Ｃｕｐｒｉａｄｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｐａｕｃｕｌｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｒｅｓｐｉｒａｃｕｌｉ、Ｄｅｌｆｔｉａ  ａｃｉｄｉｖｏｒｄａｎｓ、Ｅｘｏｐｈｉｌｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｆｒｉｓｉｎｇｅｎｓｅ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｎｏｒｉｍｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｐｕｌｍｏｎｉｃｏｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｉｎｓｉｄｉｏｓａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＮＤＭ−１陽性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、クリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｄｏｒａｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、及びＰｒｅｖｏｔｅｌｌａから選択される、実施形態１８０に記載の方法。
【０３４７】
１８３．気体中に複数の分散した液滴を含むエアロゾルであって、前記液滴は、ＢｉｓＥＤＴ化合物を中に懸濁させて含むＢＴ組成物を含み、かつ
前記液滴のうち少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、前記エアロゾル。
【０３４８】
１８４．エアロゾル化前、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも７０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍのＶＭＤを有する、前記複数の微粒子を含む、実施形態１８３に記載のエアロゾル。
【０３４９】
１８５．前記液滴のうち最低８０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態１８３に記載のエアロゾル。
【０３５０】
１８６．前記液滴のうち最低９０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、実施形態１８３に記載のエアロゾル。
【０３５１】
１８７．エアロゾル化前、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも８０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍのＶＭＤを有する、前記複数の微粒子を含む、実施形態１８５に記載のエアロゾル。
【０３５２】
１８８．エアロゾル化前、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、その少なくとも９０％が約０．６μｍ〜約２．５μｍのＶＭＤを有する、前記複数の微粒子を含む、実施形態１８６に記載のエアロゾル。
【０３５３】
１８９．前記液滴はさらに、Ｔｗｅｅｎ  ８０（例えば、約０．０５％〜約１％）及び任意選択でｐＨが約７．４の緩衝液（例えば、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）、及び／または塩化ナトリウムを含む、実施形態１８３に記載のエアロゾル。
【０３５４】
１９０．前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢｉｓＥＤＴ化合物は、平均半減期が２日を超える、実施形態１８３に記載のエアロゾル。
【０３５５】
１９１．前記深肺領域に沈着した場合に、前記ＢｉｓＥＤＴ化合物は、平均半減期が約４日である、実施形態１８３に記載のエアロゾル。
【０３５６】
１９３．ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含むビスマスチオール（ＢＴ）組成物を含む医薬組成物であって、前記ＢＴ組成物は複数の微粒子を含み、前記微粒子のＤ９０は１．９μｍ以下である、前記医薬組成物。
【０３５７】
１９４．ビスマスチオール（ＢＴ）組成物を含む医薬組成物は、ＢｉｓＥＤＴを中に懸濁させて含み、前記ＢＴ組成物は複数の微粒子を含み、前記微粒子のＤ９０は約１．６μｍ以下である。
【０３５８】
１９５．前記微粒子の少なくとも７０％は体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１９３に記載の医薬組成物。
【０３５９】
１９６．前記微粒子の少なくとも９０％は体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである、実施形態１９３に記載の医薬組成物。
【０３６０】
１９７．対象における１つ以上の肺疾患または感染症に関連した症状及び感染の重症度を治療、管理または軽減する方法であって、ＢｉｓＥＤＴを含むビスマスチオール（ＢＴ）組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＢＴ組成物は、複数の微粒子であって、そのうち少なくとも７０％は体積平均直径が約０．６μｍ〜約２．５μｍである、前記複数の微粒子を含み、かつ、前記ＢＴ組成物がエアロゾル化される場合、前記エアロゾル化された液滴の少なくとも７０％は、ＭＭＡＤが約０．９μｍ〜約３μｍである、前記方法。
【０３６１】
１９８．前記１つ以上の肺疾患または前記感染症は、嚢胞性線維症の結果でもなく、それに関連もしていない、実施形態１９７に記載の方法。
【０３６２】
１９９．前記肺感染症は、気管支拡張症感染症、肺炎、渓谷熱、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、人工呼吸器関連肺炎、院内肺炎、市中肺炎、人工呼吸器関連気管気管支炎、下気道感染、非結核性抗酸菌、炭疽、レジオネラ症、百日咳、気管支炎、細気管支炎、ＣＯＰＤ関連感染、及び肺移植後である、実施形態１９８に記載の方法。
【実施例】
【０３６３】
以下の実施例は、本開示を説明するために提供され、それらを限定するものと解釈されるべきではない。追加の実験手順と詳細は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２３１０８号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２３５４９号、及び第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４７４９０号に見ることができ、それらは、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０３６４】
実施例１：Ｂｉｓ−ＥＤＴの一般合成
これらの化合物の調製に使用される出発物質及び試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｂａｃｈｅｍ等のような商業的供給業者から入手可能であり、また当該技術分野において周知の方法で作製することもできる。反応の、出発物質及び中間体及び最終生成物は、単離して、所望される場合は、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィー等を含め、これらに限定されない従来技術を使用して精製することができ、物理定数及びスペクトルデータを含む、従来の手段を使用して特徴付けを行うことができる。他に明記しない限り、本明細書に記載される反応は、約−７８℃〜約１５０℃の温度範囲で大気圧にて行われる。
【化５】
2021533193.tif 000008
【０３６５】
微粒子ビスマス−１，２−エタンジチオール（Ｂｉｓ−ＥＤＴ、可溶性ビスマス調製物）を以下のとおり調製した：室温にて、１５Ｌポリプロピレンカーボイに入った過剰量（１１．４Ｌ）の５％水性ＨＮＯ３に、０．３３１Ｌ（約０．５７５モル）のＢｉ（ＮＯ３）３水溶液（４３％Ｂｉ（ＮＯ３）３（ｗ／ｗ）、５％硝酸（ｗ／ｗ）、５２％水（ｗ／ｗ）、Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ、製品番号２３６２；δ約１．６ｇ／ｍＬ）を、撹拌しながら滴加によりゆっくりと加え、次いで無水エタノール（４Ｌ）をゆっくりと加えた。いくらかの白色沈殿物が生成したが、撹拌を継続することによって溶解した。その後、別個に、１．５Ｌの無水エタノールに、６０ｍＬシリンジを使用して７２．１９ｍＬ（０．８６３モル）の１，２−エタンジチオールを加え、１，２−エタンジチオール（ＣＡＳ５４０−６３−６）のエタノール溶液（約１．５６Ｌ、約０．５５Ｍ）を調製し、５分間撹拌した。その後、Ｂｉ（ＮＯ３）３／ＨＮＯ３水溶液に１，２−エタンジチオール／ＥｔＯＨ試薬を滴加によりゆっくりと５時間かけて加え、撹拌を一夜継続した。形成された生成物を沈殿物として約１５分間沈降させ、その後、蠕動ポンプを使用して３００ｍＬ／分で濾液を除去した。その後、生成物を、１５ｃｍ径のブフナー漏斗に置いた微細な濾紙で濾過することにより収集し、エタノール、ＵＳＰ水、及びアセトンをそれぞれ５００ｍＬの容量で順次用いて３回洗浄し、ＢｉｓＥＤＴ（６９４．５１ｇｍ／モル）を非晶質の黄色粉末固体として得た。生成物を５００ｍＬアンバーガラス瓶に入れ、高真空下、ＣａＣｌ２で４８時間乾燥させた。回収された物質（収量約２００ｇ）はチオール特有の臭いを発した。粗生成物を７５０ｍＬの無水エタノールに再溶解して３０分間撹拌した後、濾過し、順次５０ｍＬのエタノールで３回、５０ｍＬのアセトンで２回洗浄し、５００ｍＬのアセトンで再び洗浄した。再洗浄した粉末を１Ｍ  ＮａＯＨ（５００ｍＬ）内でトリチュレートして濾過し、２２０ｍＬの水で３回、５０ｍＬのエタノールで２回、及び４００ｍＬのアセトンで１回洗浄し、１５６．７４ｇｍの精製ＢｉｓＥＤＴを得た。本質的に同じ方法で調製した後続バッチでは、約７８〜９１％の収率がもたらされた。
【０３６６】
生成物は、１Ｈ及び１３Ｃ核磁気共鳴法（ＮＭＲ）、赤外分光法（ＩＲ）、紫外分光法（ＵＶ）、質量分析法（ＭＳ）及び元素分析からのデータの分析により上記に示す構造を有するとして特徴付けられた。ＨＰＬＣ法を展開して、ＤＭＳＯに試料を調製する（０．５ｍｇ／ｍＬ）ＢｉｓＥＤＴの化学的純度を決定した。ＢｉｓＥＤＴのＤＭＳＯ溶液を１９０〜６００ｎｍでスキャンしてλｍａｘを決定した。１ｍＬ／分でのアイソクラティックＨＰＬＣ溶出を、ＹＭＣ  Ｐａｃｋ  ＰＶＣ  Ｓｉｌ  ＮＰ（５μｍ、内径２５０×４．６ｍｍ）分析カラム（Ｗａｔｅｒｓ）を備えた、２６５ｎｍにて（λｍａｘ）モニタリングするＵＶ検出器付きＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）製クロマトグラフのモデル２６９５（注入容量：２μＬ）で、移動相を０．１％ギ酸含有アセトニトリル：水（９：１）にして雰囲気温度で実施したところ、単一ピークが検出され、１００±０．１％の化学的純度を反映していた。元素分析は上記に示すＢｉｓＥＤＴの構造と一致していた。乾燥した粒子状物質を特徴付けして粒径特性を評価した。簡単に言えば、微粒子を２％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８（ＢＡＳＦ，Ｍｔ．Ｏｌｉｖｅ，ＮＪ）に再懸濁させ、懸濁液を水浴式ソニケーターで標準設定にて１０分間超音波処理してから、Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ／Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ−Ｓ粒子分析装置（モデル：ＺＥＮ１６００（ゼータ電位測定機能なし）、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を製造者の推奨事項に従って使用して分析を行った。２つの測定で収集したデータから、微粒子は、検出可能なすべてのイベントに関して単峰性の分布を示し、体積平均直径（ＶＭＤ）が約０．６ミクロン〜４ミクロンの間であり、ピークＶＭＤは約１．３ミクロンであった。
【０３６７】
実施例２：微粒子ビスマス−１−２−エタンジチオール（Ｂｉｓ−ＥＤＴ）の調製
微粒子ビスマス−１，２−エタンジチオール（Ｂｉｓ−ＥＤＴ）を以下のとおり調製した：水（２５．５Ｌ）と７０％硝酸（１８００ｍＬ）をＮａｌｇｅｎｅリアクターで併せて混合した。次いで、水（２３００ｍＬ）を三角フラスコに加え、続いて次硝酸ビスマス（５３２ｇ）を加え、混合物を撹拌した。混合物に７０％硝酸（７５０ｍＬ）を加えて澄明な溶液を得た。この溶液をＮａｌｇｅｎｅリアクターに移し、得られた混合物を２０分間撹拌した。その後、９．５Ｌの９５％ＥｔＯＨをリアクターに３回に分けて加えた。
【０３６８】
別個に、１，２−エタンジチオール、９８％、（２２９ｍＬ）を瓶に加えた後、２５０ｍＬのＥｔＯＨを２回、撹拌しながら加えた。さらに５ＬのＥｔＯＨを撹拌しながら瓶に加えた。その後、１，２−エタンジチオール溶液を、撹拌しながら約４時間かけてリアクター加えた。１８時間撹拌した後、固形物を２時間沈降させた。ＥｔＯＨ（２０Ｌ）を加え、混合物を２４時間撹拌した。固形物を１．５時間沈降させてから、混合物の濾過により分離し、その後、ＥｔＯＨですすいだ。
【０３６９】
空のリアクターに、９ＬのＥｔＯＨ及び濾過した固形物を加え、それを１８時間撹拌した。固形物を１時間沈降させてから、混合物の濾過により分離し、その後、ＥｔＯＨですすいだ。次に、空のリアクターに９Ｌのアセトン（９９．５％）及び濾過した固形物を投入し、それを１５時間撹拌した。固形物を１．５時間沈降させてから、混合物の濾過により分離し、その後、アセトンですすいだ。再び、空のリアクターに９Ｌのアセトン（９９．５％）及び濾過した固形物を投入し、それを１．４時間撹拌した。固形物を濾過し、６９時間風乾した後、４時間真空乾燥した。固形物を混合した後、１０メッシュ（２ｍｍ）、次いで１８メッシュ（１ｍｍ）のふるいに通してふるいにかけ、ＢｉｓＥＤＴを得た。
【０３７０】
実施例３：追加のビスマスチオール化合物の合成
以下のビスマスチオール化合物は、実施例１及び２の方法に従って調製することができる。
【表Ｂ】
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【０３７１】
実施例４：ＣＦ吸入薬用製剤（複数可）
目的：本試験の目的は、げっ歯類用のＢｉｓＥＤＴの鼻部吸入曝露の方法を開発することであった。エアロゾルを、懸濁製剤であるＢｉｓＥＤＴ含有水性媒体（０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０含有リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４）から発生させた。市販の圧縮空気ジェット式ネブライザーでげっ歯類の鼻部吸入曝露システム内にエアロゾルを発生させた。未希釈ＡＰＩを０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０含有リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）と共に用いて超音波処理により懸濁製剤を創製した。これをさらに、ビヒクルを３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの浸透圧に調節することによって精製した。エアロゾルを、粒度分布及びエアロゾル濃度について特徴付けした。エアロゾルフィルター試料の示差質量化学分析によってエアロゾル濃度を決定した。
【０３７２】
１つのＢｉｓＥＤＴ製剤用に２．５〜１００ｍｇ／ｍＬの懸濁液濃度を評価したところ、それぞれ１８．５〜７１９μｇ／Ｌの範囲であった。新たなＢｉｓＥＤＴ製剤を用いて、２．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬの懸濁液濃度でさらに試験を実施したところ、それぞれ、１８．４μｇ／Ｌ、９７．７μｇ／Ｌ、１５９μｇ／Ｌ、及び１３００μｇ／Ｌというエアロゾル濃度が得られた。粒径は、懸濁液濃度と共に約１μｍ〜３．５μｍのＭＭＡＤに増大したため、これは、げっ歯類の吸入曝露では吸入可能である。
【０３７３】
可能性のあるラットでの用量設定試験を支持するためには、鼻部吸入曝露は典型的に３０〜１８０分間が推奨される。したがって、これらの懸濁製剤からの肺の沈着用量範囲は４２μｇ／ｋｇ〜１７．５ｍｇ／ｋｇである。適宜、懸濁液濃度及び／または曝露時間を調節して肺の沈着用量を調整することができる。
【０３７４】
材料及び方法：ＢｉｓＥＤＴ−ビスマスエタンジチオール、ＢｉｓＥＤＴの２つの別々のロットを受け取ったまま使用した。方法開発の初期段階はロット番号ＥＤ２６８−１−１１−０１で実施し、最終段階をロット番号ＸＬ−４７−１２５で実施し、これは曝露に備えて輸送された。２つの材料の挙動はわずかに異なり、曝露時間の最終決定で変更を要した。
【０３７５】
エアロゾル法：製剤−ＢｉｓＥＤＴの懸濁製剤を０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０含有リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に調製した。Ｃｏｖａｒｉｓソニケーターで超音波処理することによって２．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬの懸濁液を調製した。後の試験では、ビヒクルを塩化ナトリウムで調整して３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの浸透圧を達成した。懸濁液を２．５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、及び１００ｍｇ／ｍＬで調製した。
【０３７６】
エアロゾル送達システム：図１は、これらの試験中に使用されたエアロゾルの発生及び曝露システムの概略図を示す。Ｐａｒｉ  ＬＣ  Ｐｌｕｓ圧縮空気ジェット式ネブライザー（Ｐａｒｉ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．，Ｍｉｄｌｏｔｈｉａｎ，ＶＡ）を２０ｐｓｉの入り口圧力で使用してエアロゾルを発生させた。エアロゾルは、約８．５Ｌ／分の流入空気流量及び約７．１Ｌ／分の排気流量で運転したげっ歯類の鼻部吸入曝露システムに移行した。ネブライザーにより発生したエアロゾルは、１段式フローパスト型鼻部吸入曝露システムに送達された。
【０３７７】
エアロゾルを４７ｍｍフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ａメンブレンフィルター）に捕集して、曝露システムの呼吸ゾーンでのエアロゾル濃度を測定した。フィルター試料は、公称流量の０．３Ｌ／分で捕集した。エアロゾルの質量濃度をフィルター試料の示差重量分析によって決定した。その後、フィルターを、ＨＰＬＣを使用した分析のため分析化学実験室に移した。分析化学の方法の詳細は、分析方法ＡＣＭ−１０４６−０（ＨＰＬＣ−ＵＶによる製剤中及びフィルター抽出物中のＢｉｓＥＤＴの測定）に含まれている。
【０３７８】
粒度分布測定：Ｉｎ−Ｔｏｘ  Ｍｅｒｃｅｒ  ２．０Ｌ／分カスケードインパクター（Ｉｎ−Ｔｏｘ，ＬＬＣ，Ｍｏｒｉａｒｔｙ，ＮＭ）を使用して曝露の粒度分布を測定した。
【０３７９】
沈着用量の算出：最初の２つ方程式を使用して、それぞれ、提示エアロゾル用量及び理論沈着用量を算出した。これらの計算では、平均エアロゾル濃度（化学）及びラットの推定体重が使用される。
【数１】
2021533193.tif 000010
式中：ＤＰ：提示用量；ＤＤ：沈着用量；ＡＣ：エアロゾル曝露濃度；ＲＭＶ：分時換気量（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ．ＤＪ，ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｉｎｈａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．；２０（１３）：１１７９−８９）；Ｔ：曝露時間；ＢＷ：体重；ＤＦ：肺沈着率（１０％と仮定、Ｔｅｐｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｔｏｘｉｃｏｌ；３５（４）：３７６−３９２）；時間は３０〜１８０分で変動。
【０３８０】
結果
エアロゾル濃度と粒径：第１のＢｉｓＥＤＴ製剤（ロット番号ＥＤ２６８−１−１１−０１）での製剤の平均総エアロゾル濃度、ＢｉｓＥＤＴエアロゾル濃度及び粒径を表１に示す。第２のＢｉｓＥＤＴ製剤（ロット番号ＸＬ−４７−１２５）での同様の表を表２に示す。カスケードインパクターを介して取得した濃度２．５ｍｇ／ｍＬでの粒度分布のヒストグラムの例を図２に示す。ＡＰＳを介して取得した濃度が２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、及び１００ｍｇ／ｍＬでの粒度分布のヒストグラムの例をそれぞれ、図３、図４、図５、及び図６に示す。第２のＢｉｓＥＤＴ製剤での粒度分布についての反復試験を、１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、及び２．５ｍｇ／ｍＬについてそれぞれ図７、図８、図９、及び図１０に示す。
【表１】
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＊２．５ｍｇ／ｍＬの製剤を除き、全粒径データはＡＰＳで収集
＋：２５ｍｇ／ｍＬ溶液のフィルターのうち１つでは、化学抽出で期待濃度より低い濃度のＢｉｓＥＤＴが得られた。６４．４μｇ／Ｌは、抽出された全濃度の平均値であり、８７．９μｇ／Ｌは、この外れ値を除いた平均である。
【表２】
2021533193.tif 000012
【０３８１】
表１及び表２のエアロゾルは、Ｐａｒｉ  ＬＣ  Ｐｌｕｓ（登録商標）Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅネブライザーで発生させた。１．２バールのコンプレッサーを用いてネブライザーを試験し、Ｍａｌｖｅｒｎ  ＭａｓｔｅｒＳｉｚｅｒ  Ｘを用いて、相対的湿度５０％、０．９ＮａＣｌ溶液、呼気流量２０Ｌ／分、２３℃にての連続噴霧、充填容量２．５ｍＬで測定した。
【０３８２】
肺の沈着用量：肺の沈着用量は、エアロゾル濃度及び／または曝露時間により調節することができる。げっ歯類の鼻部吸入曝露の場合、曝露時間は典型的に３０〜１８０分が目標とされる。エアロゾルの性能及び上記の肺用量方程式を使用すると、第１のＢｉｓＥＤＴ製剤の肺の沈着用量範囲は４２μｇ／ｋｇ〜９．６ｍｇ／ｋｇとなると考えられる。第２の製剤はＢｉｓＥＤＴを沈着させる効率がより高く、最大１７．５ｍｇ／ｋｇの用量を与えることができる。
【０３８３】
ＢｉｓＥＤＴの製剤及びエアロゾル発生の方法が開発された。これらの方法により４２μｇ／ｋｇ〜１７．５ｍｇ／ｋｇの肺の沈着用量が支持される。これらの曝露条件は、げっ歯類の吸入曝露に適している。
【０３８４】
実施例５：インビトロ試験
この実施例では、ＣＦ関連肺感染症の治療用吸入製剤としてのビスマスチオール、特にＢｉｓＥＤＴの開発の適性及び実行可能性を評価する一連の実験について記載する。ＣＦに関連する範囲の感染性細菌病原体を、そのような病原体の高度耐性株及びバイオフィルム形成株を含めて、ビスマスチオールに対する感受性について試験した。さらに、肺気道上皮細胞に対する毒性のインビトロでの評価を行った。
【０３８５】
一連の臨床上最も困難な高度耐性ＣＦ分離株に対し、標準化された微生物学的感受性試験を２つのビスマスチオール化合物を用いて行った。Ｅ．ｃｏｌｉ（２５９２２）及びＳ．ａｕｒｅｕｓ（２９２１３）のＡＴＣＣ株を使用してＭＩＣ試験を標準化した。
【０３８６】
この試験の結果から、ＢｉｓＥＤＴは、アミノグリコシド耐性ならびにＭＤＲのＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂ．ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、及びＳ．ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａを含め、試験した全ＣＦ分離株に対して一貫して強力であり、すべての被験生物で１μｇ／ｍＬより小さいＭＩＣが示されたことが実証された（図１２参照）。
【０３８７】
これを発展させるため、試験した細菌を拡張させて、より多くのＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．を含め、また、より広範囲のＣＦ分離株と抗生物質耐性株を試験した。
【０３８８】
一連のＣＦ分離株のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓが含められたことにより、非結核性抗酸菌（ＮＴＭ）に対する活性の理解が可能になる。この試験の結果を以下に示す。ＢｉｓＥＤＴ及びＢｉｓＢＤＴを含む、２つの別個のビスマスチオール化合物を評価した。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ分離株はＭＩＣが高いことが見出されたが、ＢｉｓＥＤＴは、これらのＮＴＭ細菌に対してＢｉｓＢＤＴよりも低いＭＩＣを示した。Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｓｐｐ．及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．の両方を含む、臨床的に大きく関連するＣＦ分離株は、両方とも一貫してＢｉｓＥＤＴ及びＢｉｓＢＤＴに対しはるかに感受性が高いことが見出された。この試験では、ＣＦ分離株であるＮＴＭとＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．の両方に対する非常に説得力のあるＭＩＣデータが示され、このレベルとスペクトルの活性を有する市販の抗生物質はほとんどない。
【表３Ａ】
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【表３Ｂ】
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【０３８９】
完全に分化したヒト気道上皮に対する潜在的な細胞毒性に関し、ＢｉｓＥＤＴの制御されたインビトロでの評価を行った。ＢｉｓＥＤＴの可溶化形態と固体（粉末／粒子）形態はいずれも、独自のインビトロ完全分化ヒト気道上皮試験系（ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標））を利用した、この形態の細胞毒性評価を専門とする開発業務受託機関（ＣＲＯ）であるＥｐｉｔｈｅｌｉｘによって、細胞毒性が評価された。ＭｕｃｉｌＡｉｒシステムにより、ＬＤＨ放出（培地側から）と頂端／空気曝露側からの経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の両方による細胞毒性の評価、ならびに曝露前後の形態学的な変化についての顕微鏡検査が容易に行われた（図１３）。
【０３９０】
可溶化ＢｉｓＥＤＴの６つの濃度の評価に関しては、４つの異なる時点（最大４８時間）での細胞形態に変化は認められず、またＬＤＨ放出とＴＥＥＲの変化も認められなかったことから、最高試験濃度の３０ｕＭ（２０．８３ｕｇ／ｍＬ、これは、Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ（アミカシン耐性株及びクラリスロマイシン／マクロライド耐性株を含む）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．（ベータラクタム耐性株、フルオロキノロン耐性株、及びスルファメトキサゾール耐性株を含む）、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（多剤耐性（ＭＤＲ）株を含む）、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、及びＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡを含む））を含め、試験したほとんどのＣＦ細菌分離株に対し、最近得られたＭＩＣよりも約２０〜３４７高い）でさえ、いずれの時点でも毒性作用が観察されなかったことを示している。最高試験濃度の２０．８３μｇ／ｍＬはまた、試験したどのＣＦ分離株よりもＢｉｓＥＤＴに関するＭＩＣが比較的高かったＭ．ａｖｉｕｍに対するＭＩＣより約２．５〜１０倍高い。さらに、可溶化ＢｉｓＥＤＴの最高濃度ですらも毒性の気配が示されなかったため、より高い濃度でも非毒性／安全／忍容性が高いと判断され得ることが可能である。
【０３９１】
担体としてのデキストランに希釈した粒子状ＢｉｓＥＤＴの５つの濃度（重量／面積）の評価に関して、より低い２つの濃度では、４つの異なる時点（最高４８時間）における細胞形態に変化は生じず、ＬＤＨ放出とＴＥＥＲの変化も認められなかったことから、４つのどの時点でも毒性作用が観察されなかったことを示している。
【０３９２】
形態に関して、上位３つの濃度で変化が示され、上位２つの濃度ではより顕著であった。上位３つの濃度に関して、１時間の時点ではこれらの濃度のいずれにおいてもＴＥＥＲに関して大幅な影響は認められなかったが、８時間、２４時間、及び４８時間ではＴＥＥＲ、組織の完全性の喪失が３つのすべての最高濃度で生じた。同様に、ＬＤＨ放出に対する影響は、より低い２つの濃度ではどの時点でも認められず、また上位３つの濃度では１時間においては認められなかったが、１時間の時点を超えると、時間と用量に依存的なＬＤＨ放出の増加及びＴＥＥＲ減少があり、これらの条件下での細胞毒性を示している。第１相ヒト臨床試験において、最高で２５００μｇ／ｃｍ２の濃度（このインビトロ試験で試験された最高濃度である３３３μｇ／ｃｍ２よりも約８倍高い）までは、ヒトに６時間局所投与した場合に忍容性が高く、最高７５μｇ／ｃｍ２の濃度（３３．３μｇ／ｃｍ２と３３３μｇ／ｃｍ２の中間）までは、ヒトに正常な皮膚と擦過のある皮膚で２１日間にわたり連続曝露して局所投与した場合に忍容性があったことは、注目に値する。このことは、インビトロモデルの条件の方がインビボの生理学的条件よりも粒子形態に対する感受性がはるかに高い可能性があり、そのため粒子形態の細胞毒性の真のリスクが過剰に表されていることを示している。それにもかかわらず、このインビトロ細胞毒性モデルで試験したＢｉｓＥＤＴの両形態の最高非毒性発現濃度は、粒子形態または可溶化形態を問わず、広域スペクトル抗生物質に耐性で治療することが困難なＣＦ細菌病原体に対して有効であるために必要としたＭＩＣの２５〜３４５倍を提供する。
【０３９３】
本試験のデータは、ＢｉｓＥＤＴの可溶化型は、予想される臨床用量の十分な倍数において安全であることを実証している。
【０３９４】
ＣＦ分離株のバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性
ＣＦ分離株から増殖させたバイオフィルムに対するＢＴ化合物の活性を試験した。ＭＲ１４は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの多剤耐性（ＭＤＲ）ＣＦ分離株である。２５ｎｇ／ｍＬにて、バイオフィルムの細胞生存率の２ログ（ＭＢ−６）から４ログ（ＭＢ−１−Ｂ３）の低下が起こった（図１４）。ビスマスチオール化合物は、０．２５μｇ／ｍＬでの２４時間処理による阻止濃度以下での抗バイオフィルム効果を有することがこれまでに文献で報告されている。これに匹敵するものは科学文献にはない。
【０３９５】
ＡＧ１４は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのアミノグリコシド耐性ＣＦ分離株である。０．２５μｇ／ｍＬにて、バイオフィルムの細胞生存率の２ログ（ＭＢ−６）から約３．５ログ（ＭＢ−１−Ｂ３）の低下が起こった。やはり、２４時間処理の場合の非常に高度なレベルの抗バイオフィルム活性（６ログの低下）は０．２５μｇ／ｍＬで起こり、この強力なレベルの活性は、ビスマスチオール化合物に特有である可能性が非常に高い（図１５）。
【０３９６】
併せて、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓのバイオフィルム（ＭＲ１４及びＡＧ１４）に対する試験の結果は、抗生物質耐性及び多剤耐性（ＭＤＲ）のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対する高度な、おそらく特有のレベルの抗バイオフィルム活性を示しており、これは、嚢胞性線維症に関連した肺感染症の治療における重要な新しい治療活性と臨床戦略を表し得る。
【０３９７】
ＡＵ１９７は、Ｂ．ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａのＣＦ分離株である。この場合、抗バイオフィルム活性は、（先のＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの例の場合のような）阻止レベル以下では起こらないが、それでも、このレベルの抗バイオフィルム活性（ＢｉｓＥＤＴ濃度２．５μｇ／ｍＬにて６ログの低下）は極めて強力であり、治療で達成され得る可能性が非常に高い（図１６）。
【０３９８】
ＡＭＴ０１３０−８は、臨床的に関連するＭＡＢＳＣのＣＦ分離株を表し、ＣＦ肺感染症の治療を頻繁に複雑にする。この場合、ＢｉｓＢＤＴは、バイオフィルムの細胞生存率のごくわずかな低下しか示さなかったが、ＢｉｓＥＤＴはここでも２．５μｇ／ｍＬでの６ログの低下、ならびに２．５ｎｇ／ｍＬ〜２．５μｇ／ｍＬの用量反応を示した。興味深いことに、この菌株に対するＭＩＣは、ＢｉｓＥＤＴ（０．１２５μｇ／ｍＬ）よりもＢｉｓＢＤＴ（０．０６２５μｇ／ｍＬ）の方が低いことが示され、それでもＢｉｓＥＤＴの抗バイオフィルム活性の方が、はるかに強力であることが見かけ上は示され、別個のビスマスチオール化合物間で活性にそのような相違が見られることは驚くべきことではないが、この特別なＭＡＢＳＣという株が明らかに技術的に扱いが困難であり（図の下の箇条書き事項を参照のこと）、そのことも、そのような（見かけの）活性の相違の要因になっている可能性がある（図１７）。
【０３９９】
ＡＭＴ００８９−５は、マクロライド耐性、アミカシン耐性のＭＡＢＳＣである。ＣＦ患者の肺感染症におけるＭＡＢＳＣのそのような抗生物質耐性株の関与は極めて問題となる。ここで、ＢｉｓＥＤＴは、濃度２．５μｇ／ｍＬにて生存バイオフィルム細胞の２．５ログの減少を示したが、ＢｉｓＢＤＴは、濃度２．５μｇ／ｍＬにて生存バイオフィルム細胞減少が６ログであることを示した（図１８）。
【０４００】
ＡＴＣＣ−１９９７７は、Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ（マクロライド耐性；誘導型）である。用量反応は、２．５μｇ／ｍＬにて生存バイオフィルム細胞の３ログの減少を示すことが示されている  ＡＴＣＣ−１９９７７は、Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ（マクロライド耐性；誘導型）である。用量反応は、以下に示され、２．５μｇ／ｍＬにて生存バイオフィルム細胞は３ログ減少している（図１９）。
【０４０１】
ビスマスチオールは、ＣＦ分離株のＭＡＢＳＣにより形成されたバイオフィルムに対して活性であることは観察されなかったが、この菌株は増殖が非常に遅く、ビスマスチオール化合物へのより長い曝露が活性を示すためには必要であった可能性がある（図２０）。
【０４０２】
ＢｉｓＥＤＴ及びＢｉｓＢＤＴの両方で濃度２５０μｇ／ｍＬを最高としてＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．を試験したところ、生存バイオフィルム細胞の５ログの減少がもたらされた。用量反応もまた、両化合物と明らかに関連している（図２１）。
【０４０３】
残念なことに、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａに対しては、どちらのビスマスチオール化合物でも活性が明確ではなかった（図２２）。
【０４０４】
最後に、両化合物の最高濃度でＥ．ｃｏｌｉに対して試験したところ、抗バイオフィルム活性も実証された（５ログの低下）（図２３）。
【０４０５】
ＢｉｓＥＤＴ及びＢｉｓＢＤＴのいずれも、Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、ＭＤＲ  Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．に対するＭＩＣ値が非常に低いことを示している。前回同様、ＡＴＣＣの対照株を利用してデータを標準化する。ただし、今回の評価では、ビスマスチオールを、アミカシン及びクラリスロマイシン（臨床上重要なマクロライド系抗生物質）と直接比較した。下記表４の今回のデータから分かるように、ビスマスチオールは、アミカシン及びクラリスロマイシンの両方よりも顕著かつ一貫して強力である（マクロライド耐性に誘導されたＭＡＢＳＣ株であるＡＴＣＣ１９９７７の場合で考えると最も著しい）。
【表４Ａ】
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【表４Ｂ】
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【０４０６】
完全分化ヒト気道上皮での細胞毒性に対するＢＴ化合物の影響の評価（ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標））
本試験の目的は、ＢｉｓＥＤＴの気道上皮に対する潜在的な局所毒性作用を評価することである。プロジェクトは、試験１：溶液状ＢｉｓＥＤＴの急性毒性試験と、試験２：固体としてのＢｉｓＥＤＴの急性毒性試験の２段階に分かれている。
【０４０７】
本試験に使用するアッセイシステムは、Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘ独自の技術のＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）である。ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）は、完全に分化した、即時使用が可能なヒト気道上皮の３Ｄモデルであり、鼻、気管または気管支の生検から新鮮分離された初代ヒト上皮細胞で構成されている。ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）（図２４）は、形態学的及び機能的に分化しているだけでなく、恒常性の状態で長期間維持することもできる（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０４０８】
ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）は、基底細胞、線毛細胞及び粘液細胞で構成される。これらの様々な細胞型の割合は、インビボで観察されるものと比べて維持されている（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。さらに上皮は脱分化した細胞から開始される。細胞は時間と共に漸進的に分化する。培養の４５日後、上皮には完全に線毛があり、粘液を分泌し、電気的にタイト（ＴＥＥＲ＞２００Ω．ｃｍ２）である。ＣＦＴＲ、ＥｎａＣ、Ｎａ／Ｋ  ＡＴＰａｓｅ等の主要な上皮イオンチャネルの活性は維持されており、上皮は、炎症誘発性刺激であるＴＮＦ−αに対し、制御され、かつ方向性を持って応答することが示されている（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）でサイトカイン、ケモカイン及びメタロプロテイナーゼの大型パネルが検出された（例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＭＰ−９、ＧＲＯ−α）。
【０４０９】
溶液状ＢｉｓＥＤＴの急性毒性試験
この段階の目的は溶液状ＢｉｓＥＤＴの潜在的な急性毒性を、完全分化ヒト気道上皮の３Ｄモデル（ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標））の頂端表面に適用してから１時間曝露、８時間曝露、２４時間曝露及び４８時間曝露の後で評価することである。
【表５】
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【表６】
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【０４１０】
ＢｉｓＥＤＴ（ＭＢ−１−Ｂ３）をＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）の頂端表面に１時間、８時間、２４時間及び４８時間にわたり適用した（図１３）。０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ及び３０μＭの６つの濃度の効果を試験した。化合物を、０．５％ＤＭＳＯを添加した緩衝生理食塩溶液（０．９％ＮａＣｌ−１．２５ｍＭのＣａＣｌ２−１０ｍＭのＨＥＰＥＳ）に希釈した。選択濃度の３０μｌの溶液をＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）の頂端表面に適用した。陰性対照は、ビヒクル溶液（０μＭ）及び未処理培養物に対応する。陽性対照は、緩衝生理食塩溶液に希釈した１０％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００への５０μｌに対応する。試験は３連で実施された。
【０４１１】
試験期間中、インサートはＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％）内に維持した。以下のエンドポイントを決定した。
・組織完全性のモニタリング：Ｄ０、Ｄ１及びＤ２での経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）測定（定量的）。
・細胞毒性のモニタリング：Ｄ０、Ｄ１及びＤ２でのＬＤＨ検査（定量的）。
・形態：コントラスト顕微鏡下で検査したＤ０、Ｄ１及びＤ２での細胞及び組織の完全性。
【０４１２】
実験の３日前、各上皮で以下の品質管理を実施した。
・洗浄：インサートを２００μｌのＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）培地で洗浄した。洗浄により、検査の妨げとなり得る、組織表面に蓄積した粘液を除去する。
・経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）：被験物質の適用前に、すべての選択インサートに密な上皮性関門があり、組織自体が破壊されていないこと確認するため、ＴＥＥＲを測定した。
・組織形態：上皮の品質を保証し、線毛の動きが認められることを定性的に決定するため、各インサートを従来の倒立顕微鏡下で検査した。粘液の存在は頂端表面の屈折面により検出された。
【０４１３】
結果
以下のグラフのエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を指す。比較はすべて、陰性対照（ビヒクル溶液、０μＭ）との対比である。
【０４１４】
曝露前：上皮の品質を保証するため、各インサートを従来の倒立顕微鏡下で検査した。すべての選択インサートで線毛運動がはっきりと認められた。粘液の存在は頂端表面の屈折面により検出された。
【０４１５】
曝露後：ビヒクル対照及び試験したすべての濃度と時点で形態変化は観察されなかった。
【０４１６】
細胞毒性評価：図２５は、１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露における細胞毒性のパーセンテージ（ＬＤＨ測定）を示す。対照（０μＭ、ビヒクル溶液）は、ＬＤＨの生理学的放出（＜５％）に対応する。ＬＤＨ放出は、試験したすべての濃度及びすべての時点で、ＢｉｓＥＤＴへの曝露後も変化しなかった。したがって、毒性作用は何も観察されなかった。
【０４１７】
組織の完全性評価：図２６は、Ｄ１でのＴＥＥＲのモニタリングを示す。ＴＥＥＲは、いくつかの因子による影響を受ける可能性のある動的パラメータであることに留意すべきである。イオンチャネル活性の低下はＴＥＥＲの増大につながる可能性があり、イオンチャネルの活性化はＴＥＥＲ値を低下させる可能性がある。上皮が損傷している場合、ＴＥＥＲの低下にはＬＤＨ放出の増加が伴うことが考えられる。ＢｉｓＥＤＴは、試験したどの濃度と時点においてもＴＥＥＲに対する大幅な影響は示さなかった。
【０４１８】
固体としてのＢｉｓＥＤＴの急性毒性試験：実験の第１セット
本試験の目的は、完全分化ヒト気道上皮の３Ｄモデル（ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標））の頂端表面に適用してから１時間曝露、８時間曝露、２４時間曝露及び４８時間曝露の後の、固体としてのＢｉｓＥＤＴ（０．０３３、０．３３、３．３３、３３．３、３３３（μｇ／ｃｍ２））の潜在的な急性毒性を評価することである。
【表７】
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【表８】
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【０４１９】
化合物ＢｉｓＥＤＴをＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）の頂端表面に適用した。０．０３３、０．３３，３．３３、３３．３、３３３μｇ／ｃｍ２の５つの濃度について１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露の後の効果を試験した。化合物を目標濃度でデキストランパウダーに希釈し、圧縮して錠剤を得た。試験は３連で実施された。試験期間中、インサートはＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％）内に維持した。１時間及び２４時間の曝露の後、粘液線毛クリアランス分析を実施した。
【０４２０】
頂端表面の品質管理と洗浄：実験の３日前、各上皮で以下の品質管理を実施した。
・洗浄：インサートを２００μｌのＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）培地で洗浄した。洗浄により、検査の妨げとなり得る、組織表面に蓄積した粘液を除去する。
・経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）：被験物質の適用前に、すべての選択インサートに密な上皮性関門があり、組織自体が破壊されていないこと確認するため、ＴＥＥＲを測定した。
・組織形態：上皮の品質を保証し、線毛の動きが認められることを定性的に決定するため、各インサートを従来の倒立顕微鏡下で検査した。粘液の存在は頂端表面の屈折面により検出された。
【０４２１】
結果
以下のグラフのエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を指す。比較はすべて、陰性対照（担体、デキストラン）との対比である。
【０４２２】
曝露前：上皮の品質を保証するため、各インサートを従来の倒立顕微鏡下で検査した。すべての選択インサートで線毛運動がはっきりと認められた。粘液の存在は頂端表面の屈折面により検出された。
【０４２３】
曝露後：未処理及びビヒクル対照群で形態変化は観察されなかった。
・０．０３３及び０．３３μｇ／ｃｍ２：形態学的変容は何も観察されなかった。
・３．３３μｇ／ｃｍ２：頂端に適用された錠剤は、曝露から２４時間後及び４８時間後、上皮でほとんど溶解しなかった。細胞は丸みを帯びており、インサート周辺は不透明であった。徐々に細胞は互いに脱離した。基底側から上がってくる培地の出現が頂端表面で観察された。
・３３．３及び３３３μｇ／ｃｍ２：頂端に適用された錠剤は、曝露から８時間後、２４時間後及び４８時間後、上皮でほとんど溶解しなかった。細胞は丸みを帯びており、インサート上では不透明であった。徐々に細胞は互いに脱離した。培地が頂端側へ漏出した。
【０４２４】
細胞毒性評価：図２７は、Ｄ１における細胞毒性のパーセンテージ（ＬＤＨ測定）を示す。対照（デキストラン）は、ＬＤＨの生理学的放出（＜５％）に対応する。０．０３３μｇ／ｃｍ２及び０．３３μｇ／ｃｍ２では試験したすべての時点でＬＤＨ放出に対する大幅な影響はなかった。時間と用量に依存的な細胞毒性が、３．３μｇ／ｃｍ２；３３．３μｇ／ｃｍ２及び３３３μｇ／ｃｍ２にて観察された。
【０４２５】
組織の完全性評価：図２８は、Ｄ１でのＴＥＥＲのモニタリングを示す。ＴＥＥＲは、いくつかの因子による影響を受ける可能性のある動的パラメータであることに留意すべきである。イオンチャネル活性の低下はＴＥＥＲの増大につながる可能性があり、イオンチャネルの活性化はＴＥＥＲ値を低下させる可能性がある。上皮が損傷している場合、ＴＥＥＲの低下にはＬＤＨ放出の増加が伴うことが考えられる。０．０３３μｇ／ｃｍ２及び０．３３μｇ／ｃｍ２では試験したすべての時点でＴＥＥＲに対する大幅な影響は観察されなかった。１時間の曝露後、試験したすべての用量で、ＴＥＥＲに対する大幅な影響は観察されない。８時間、２４時間及び４８時間の曝露後、３．３３μｇ／ｃｍ２、３３．３μｇ／ｃｍ２及び３３３μｇ／ｃｍ２で組織の完全性の喪失が観察された。
【０４２６】
固体としてのＢｉｓＥＤＴの急性毒性試験：実験の第２セット
この段階の目的は、完全分化ヒト気道上皮の３Ｄモデル（ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標））の頂端表面に適用してから１時間曝露、８時間曝露、２４時間曝露及び４８時間曝露の後の固体としてのＢｉｓＥＤＴ（１μｇ／ｃｍ２）の潜在的な急性毒性を評価することである。
【表９】
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【表１０】
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【０４２７】
試験戦略とプロトコル：化合物ＢｉｓＥＤＴをＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）の頂端表面に適用した。濃度１μｇ／ｃｍ２の１時間、８時間、２４時間及び４８時間の曝露の後の効果を試験した。化合物を目標濃度でデキストランパウダーに希釈し、圧縮して錠剤を得た。試験は３連で実施された。試験期間中、インサートはＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％）内に維持した。１時間及び２４時間の曝露の後、粘液線毛クリアランス分析を実施した。
【０４２８】
頂端表面の品質管理と洗浄：実験の３日前、各上皮で以下の品質管理を実施した。
・洗浄：インサートを２００μｌのＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）培地で洗浄した。洗浄により、検査の妨げとなり得る、組織表面に蓄積した粘液を除去する。
・経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）：被験物質の適用前に、すべての選択インサートに密な上皮性関門があり、組織自体が破壊されていないこと確認するため、ＴＥＥＲを測定した。
・組織形態：上皮の品質を保証し、線毛の動きが認められることを定性的に決定するため、各インサートを従来の倒立顕微鏡下で検査した。粘液の存在は頂端表面の屈折面により検出された。
【０４２９】
結果
以下のグラフのエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を指す。比較はすべて、陰性対照（担体  デキストラン）との対比である。
【０４３０】
形態
形態、曝露前：上皮の品質を保証するため、各インサートを従来の倒立顕微鏡下で検査した。すべての選択インサートで線毛運動がはっきりと認められた。粘液の存在は頂端表面の屈折面により検出された。
【０４３１】
形態、曝露後：未処理対照群及びビヒクル対照群で形態変化は観察されなかった。１μｇ／ｃｍ２：１時間及び８時間の曝露後、重要な形態学的な変化は観察されなかった。２４時間の曝露後、３つのインサート中２つで上皮細胞が死滅した。４８時間後、全３つのインサートで上皮細胞が死滅した。
【０４３２】
細胞毒性評価：図２９は、Ｄ１における細胞毒性のパーセンテージ（ＬＤＨ測定）を表す。対照（デキストラン）は、ＬＤＨの生理学的放出（＜５％）に対応する。１μｇ／ｃｍ２では１時間の曝露後、ＬＤＨ放出に対する大幅な影響はなかった。時間と用量に依存的な細胞毒性が曝露から８時間、２４時間及び４８時間の後に観察された。
【０４３３】
組織の完全性評価：図３０は、Ｄ１でのＴＥＥＲのモニタリングを表す。ＴＥＥＲは、いくつかの因子による影響を受ける可能性のある動的パラメータであることに留意すべきである。イオンチャネル活性の低下はＴＥＥＲの増大につながる可能性があり、イオンチャネルの活性化はＴＥＥＲ値を低下させる可能性がある。上皮が損傷している場合、ＴＥＥＲの低下にはＬＤＨ放出の増加が伴うことが考えられる。
【０４３４】
１時間の曝露後、１μｇ／ｃｍ２でのＴＥＥＲに対する大幅な影響は観察されなかった。８時間、２４時間及び４８時間の曝露後、１μｇ／ｃｍ２で組織の完全性の喪失が観察された。４８時間の曝露後、上皮はもはや密ではなくなっていた。
【０４３５】
結論
本試験の目的は、液体または固溶体でのＢｉｓＥＤＴの気道上皮に対する潜在的な局所毒性作用を評価することである。気液界面で培養された完全に分化したヒトの鼻上皮に対するＢｉｓＥＤＴ曝露の潜在的影響を評価するため、２つのセットの実験、すなわち、溶液状ＢｉｓＥＤＴまたは固体としてのＢｉｓＥＤＴの実験を行った。
【０４３６】
一般に、本試験内では、溶液状ＢｉｓＥＤＴ化合物は、試験した異なる濃度（０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、３０μＭ）と曝露時間（１時間、８時間、２４時間、及び４８時間）において、気道上皮に対する局所毒性を示さなかった。上皮の形態、ＴＥＥＲ及びＬＤＨ放出に対する影響は観察されなかった。
【０４３７】
化合物を固体として低用量（０．０３３及び０．３３μｇ／ｃｍ２で１時間、８時間、２４時間、及び４８時間の曝露）で適用した場合も同様の結果が得られた。しかしながら、１μｇ／ｃｍ２及び３．３３μｇ／ｃｍ２では、ＢｉｓＥＤＴは２４時間及び４８時間の曝露で細胞毒性を誘導し、これは、ＬＤＨ放出の増加とＴＥＥＲ値の低下によって示された。より高い濃度（３３．３μｇ／ｃｍ２、３３３μｇ／ｃｍ２）では、多量のＬＤＨ放出、非常に低いＴＥＥＲ値及び重要な形態学的な変化を伴う強い毒性が観察された。
【０４３８】
参考文献
Ｈｕａｎｇ，Ｓ；Ｃａｕｌ−Ｆｕｔｙ，Ｍ；“Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｅｌｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｉｒｗａｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ”３Ｒ−Ｉｎｆｏ−Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．４１，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００９．
【０４３９】
Ｈｕａｎｇ，Ｓ．，Ｗｉｓｚｎｉｅｗｓｋｉ，Ｌ．，＆  Ｃｏｎｓｔａｎｔ，Ｓ．（２０１１）．Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ３Ｄ  ｃｅｌｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ−Ｐｒｅｓｅｎｔ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ
【０４４０】
実施例６：喀痰試験
被験化合物が喀痰によって不活性化されるか否かを決定するため、嚢胞性線維症患者の３つの喀痰の存在下、ＢｉｓＥＤＴ及びＢｉｓＢＤＴによる殺菌曲線を作成した。アッセイは、Ｋｉｎｇ  Ｐ、Ｌｏｍｏｖｓｋａｙａ  Ｏ、Ｇｒｉｆｆｉｔｈ  ＤＣ、Ｂｕｒｎｓ  ＪＬ、Ｄｕｄｌｅｙ  ＭＮ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ａｅｒｏｓｏｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｕｎｄｅｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｒｅｌｅｖａｎｔ  ｔｏ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，５４：１４３−８，２０１０に記載されている。
【０４４１】
妥当なＩＲＢによる承認後、最近の抗生物質への曝露のない、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者のボランティアから喀痰を採取した。喀痰をＵＶ照射で滅菌し、培養により滅菌を確認した。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株であるＰＡ０１の一夜培養物を使用して、陽イオン調整ミューラーヒントン液体培地または陽イオン調整ミューラーヒントン液体培地に１０％ＣＦ患者喀痰を加えたものに新鮮培養物を接種した。個々の培養チューブに薬物を喀痰と共に、または喀痰なしで、以下の最終濃度で加えた。
ＢｉｓＥＤＴ：０．１μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、及び２０μｇ／ｍＬ
ＢｉｓＢＤＴ：０．１μｇ／ｍＬ、４μｇ／ｍＬ、及び２０μｇ／ｍＬ
【０４４２】
１μｇ／ｍＬのトブラマイシンを、患者の喀痰により部分的に不活性化されることが知られている比較対照薬として使用した。培養物を３７℃で振盪しながらインキュベートし、１時間ごとに一定分量を取り除いて、段階希釈とトリプティックソイ寒天への播種により１ｍＬあたりのコロニー形成単位（ＣＦＵ／ｍＬ）を定量し、これを合計６時間行った。３７℃で一夜のプレートのインキュベーションの後、ＣＦＵを計数した。
【０４４３】
このアッセイの対照群は予測どおりの挙動であった。ＰＡ０１の増殖は、細菌培養物への追加薬物が存在しない場合に無菌患者喀痰の添加によって明確に阻害も増強もされなかった（図３１、黒丸と白丸）。示されているように、喀痰は、トブラマイシンの殺菌活性を部分的に阻害し、喀痰を含む培養のほとんどの時点において、喀痰を含まない培養と比べてＣＦＵ／ｍＬが約０．５〜１ログ高い。
【０４４４】
このアッセイに基づくと、ＢｉｓＥＤＴの殺菌活性はＣＦ患者の喀痰によって部分的に阻害されるようである（図３２）。ＢｉｓＥＤＴは、０．１μｇ／ｍＬではＰＡ０１に対して殺菌性ではない。２μｇ／ｍＬでのＢｉｓＥＤＴでは、喀痰の添加により殺菌が３〜６時間で約１〜２ログのＣＦＵ／ｍＬ低下する。ＢｉｓＥＤＴの濃度をさらに２０μｇ／ｍＬまで高めた場合、喀痰による殺菌阻害はさほど顕著ではなく、初期の時点（１〜３時間）では、喀痰存在下の殺菌は、喀痰のない培養よりもＣＦＵ／ｍＬがわずか０．５〜１ログ遅れる。最終的に、試験したこの最高用量では、喀痰を含む培養での細菌は、喀痰のない試料よりも１時間早く検出限界未満まで減少し、これは、より高い薬物濃度では、喀痰によるＢｉｓＥＤＴの阻害が大きく克服されることを示唆している。
【０４４５】
同様に、ＢｉｓＢＤＴの殺菌活性は、ＣＦ患者の喀痰により部分的に阻害されるようである（図３３）。０．１μｇ／ｍＬでのＢｉｓＢＤＴはＰＡ０１に対して殺菌性ではない。喀痰がない場合、４μｇ／ｍＬのＢｉｓＢＤＴは、ＰＡ０１に対して非常にゆっくりとした殺菌活性を示し、殺菌は、６時間にわたるアッセイでわずか約１ログであり、喀痰を含む培養では、３〜６時間でのＣＦＵ／ｍＬは約０．５〜０．８ログ多く生存していることが示された。試験したＢｉｓＢＤＴの最高濃度である２０μｇ／ｍＬでは、喀痰を含む場合に１〜２時間においてＰＡ０１の殺菌に初期の遅れがあるが、喀痰を含む試料と含まない試料のどちらも５時間までには検出限界未満に滅菌される。
【０４４６】
ＢｉｓＥＤＴとＢｉｓＢＤＴの両化合物は、このアッセイではＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株であるＰＡ０１に対して殺菌性であり、この殺菌活性は、ＣＦ患者の喀痰の存在下で部分的に阻害される。この殺菌活性の部分的阻害は、被験化合物の濃度を高めることにより克服することができる。したがって、喀痰が存在する領域では、喀痰のない体区画と比較して、より高濃度のビスマスチオール化合物が必要とされ得る。
【０４４７】
実施例７：Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ臨床分離株に対するビスマスチオールと比較対照薬のインビトロ活性
本実施例では、肺炎、中耳炎、結膜炎、及び髄膜炎が含まれる呼吸器疾患の高頻度に見られる病原体であるＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する３つのビスマスチオール化合物の活性を評価する。
【０４４８】
試験及び対照薬剤：Ｍｉｃｒｏｍｙｘから被験化合物（ＢｉｓＥＤＴ、及び類似体であるＢｉｓＢＤＴ／ＰＹＲとＢｉｓＥＤＴ／ＰＹＲ）が輸送され、アッセイまで−２０℃で保存した。全被験化合物の溶媒は１００％ＤＭＳＯであり、貯蔵濃度は２５６０μｇ／ｍＬ、及び試験範囲は６４〜０．０６μｇ／ｍＬであった。全貯蔵液を使用前に少なくとも１時間放置して自己殺菌させた。
【０４４９】
比較対照薬はＭｉｃｒｏｍｙｘにより提供された。供給元、ロット番号、希釈剤、貯蔵濃度、及び試験範囲は以下のとおりであった。
【表Ｃ】
2021533193.tif 000023
【０４５０】
被験生物
被験生物を−８０℃で凍結維持した。生物はもともとＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎまたは臨床的研究機関から入手したものであった。分離株をチョコレート寒天プレート（Ｒｅｍｅｌ；Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ）で継代培養し、５％ＣＯ２で３５℃にて一夜インキュベートした。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ＡＴＣＣ４９２４７を、比較対照化合物の品質管理を目的として試験した。
【０４５１】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイ培地：微量液体希釈法によるＭＩＣアッセイに用いられた培地は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ；１）により推奨されている、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ試験培地（ＨＴＭ；Ｒｅｍｅｌ；Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ；カタログ番号Ｒ１１２３８０；ロット番号０５６７３７）であった。
【０４５２】
液体希釈法による最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイ手順：ＣＬＳＩ（１、２）により推奨されている、微量液体希釈法を使用してＭＩＣ値を決定した。自動液体ハンドラー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ；Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００及びＢｉｏｍｅｋ  Ｆ／Ｘ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ  ＣＡ）を使用して段階希釈を行い、液体移送を行った。
【０４５３】
標準９６ウェル微量希釈プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９５；Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）のウェルに１５０μＬの適切な溶媒を列２〜列１２にＭｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４で充填した。このプレートを使用して薬物の「母プレート」を調製し、ここから複製「娘プレート」用に薬物の段階希釈を得た。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して、母プレートの列１のウェルから各貯蔵液を１５０μｌずつ移し、その後の２倍段階希釈を１０回行った。列１２のウェルには薬物は含有されておらず、生物増殖の対照ウェルであった。各母プレートは、合計１５枚の娘プレートを作り出すことができる。
【０４５４】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４を使用して娘プレートに１８５μＬのＨＴＭを添加した。娘プレートのウェルには最終的に、１８５μＬのＨＴＭ、５μＬの薬物溶液、及び１０μＬの接種物が含有された。娘プレートはＢｉｏｍｅｋ  Ｆ／Ｘ装置で調製され、この装置で母プレートの各ウェルから５μＬの薬物溶液が各娘プレートの対応する各ウェルに１回のステップで移された。
【０４５５】
各生物の標準化した接種物をＣＬＳＩの方法（１）に従って調製した。各生物ごとの接種物を、長さ方向に分割されている滅菌リザーバー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）に分注し、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用してプレートに接種した。娘プレートは、薬物濃度の低いものから高いものへ順に接種が行われるようＢｉｏｍｅｋ  ２０００の作業面に逆向きに置かれた。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００で１０μＬの標準化接種物が各ウェルに送達された。これらの希釈により、娘プレートの最終細胞濃度として約５．０×１０５コロニー形成単位／ｍＬが得られた。
【０４５６】
プレートを３枚積み重ねて最上段のプレートに蓋をし、ビニール袋に入れ、３５℃で約２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、マイクロプレートをインキュベーターから取り出し、プレートビューアーを使用して下から見た。未接種の溶解性用対照プレートを薬物沈殿の証拠について観察した。ＭＩＣを読み取り、生物の目に見える大幅な増殖を阻害する薬物最低濃度として記録した。
【０４５７】
結果
未接種の薬物溶解性プレートの検査から、評価した薬剤のいずれでも試験した濃度範囲で沈殿がないことが明らかになった。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ＡＴＣＣ４９２４７に対して、評価した比較対照薬は、該当する場合、ＣＬＳＩ（２）によって確立された品質管理でＭＩＣは許容範囲内であった。
【０４５８】
全ビスマスチオール被験化合物とも、ベータ−ラクタマーゼ陰性アンピシリン耐性（ＢＬＮＡＲ）である分離株を含め、他の薬剤に対する耐性とは関係なく、評価した全Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株に対して活性であった。ＢｉｓＥＤＴ及び類似体のＢｉｓＥＤＴ／ＰＹＲとＢｉｓＢＤＴ／ＰＹＲのＭＩＣは、試験で評価した最低濃度以下（＜０．０６μｇ／ｍＬ）であった。この活性は、アジスロマイシン（ＭＩＣ５０及びＭＩＣ９０は２μｇ／ｍＬ）、アンピシリン（ＭＩＣ５０は２μｇ／ｍＬ、及びＭＩＣ９０は４μｇ／ｍＬ）、及びセフロキシム（ＭＩＣ５０は４μｇ／ｍＬ、及びＭＩＣ９０は１６μｇ／ｍＬ）より高かった。品質管理を目的として０．００１μｇ／ｍＬという低濃度で試験したレボフロキサシンは、ＭＩＣ５０及びＭＩＣ９０は０．０１５μｇ／ｍＬであった。本試験では０．０６〜６４μｇ／ｍＬでビスマスチオール化合物を試験し、それらのＭＩＣは０．０６μｇ／ｍＬ未満であったため、それらの活性が、概して０．０１５μｇ／ｍＬというＭＩＣを有するレボフロキサシンの活性を超えるか否かは不明である。
【０４５９】
この試験では、試験したビスマスチオール化合物が、アンピシリン、アジスロマイシン、及びセフロキシムのレベルを超えるレベルでＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対して効力が高いことが実証された。この活性は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅが、このクラスの新規治療剤の場合にインビトロで示される広い活性スペクトルの一部として含まれていることを説明している。
【０４６０】
参考文献
１．）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  Ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ０７−Ａ９［ＩＳＢＮ  １−５６２３８−７８４−７］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１２．
【０４６１】
２．）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ；Ｔｗｅｎｔｙ−Ｓｅｃｏｎｄ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．ＣＬＳＩ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ１００−Ｓ２２［ＩＳＢＮ  １−５６２３８−７８６−３］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７  ＵＳＡ，２０１２。
【０４６２】
実施例８：インビボ試験
目的：本試験の主な目的は、Ｆ３４４ラットにおいて、鼻部吸入曝露後のＢｉｓＥＤＴ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；ロット番号ＥＤ２６８−１−１１−０１、室温で保存）の忍容性を評価することである。動物は、異なる濃度（低、中、高）に最高１８０分間曝露される。ＢｉｓＥＤＴの全身性の存在について分析するため、所定の時点で血液が採取される。試験終了時（曝露から２４時間後）、動物を安楽死させ、剖検を行い、その場合、それ以降に実施され得る分析用に肺を洗浄して採取する。鼻腔、喉頭、咽頭、鼻咽頭、気管、気管支、及び気管分岐部等、気道関連の追加の組織も採取する。洗浄液は、細胞数及び差異を含めた臨床化学及び血液学のパラメータについて分析される。肝臓、腎臓、食道、胃、小腸、及び大腸もまた、それ以降に実施され得る分析用に採取される。
【０４６３】
動物：本試験ではＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡから提供された雄及び雌のＦ３４４ラットを使用した。ラットは、到着時は約７〜９週齢であり、試験開始時には８〜１０週齢であった。個々の動物の体重は群平均の±２０％であった。動物は、体重、無作為化、及び治療の管理のため、尾部に数字でマーキングすることにより（Ｓｈａｒｐｉｅ（登録商標）等の消えないインクで記入）個体別に識別される。色分けされたケージカードもケージに配置される。雄及び雌の合計四十（４０）匹のＦ３４４ラット（雄２０匹／雌２０匹）（予備を含む）を試験用に注文した。三十六（３６）匹の動物を、各群が１２匹の動物（雄６匹／雌６匹）からなる３つの試験群に無作為化した。残りの４匹の動物（雄２匹、雌１２匹）を予備とした。検疫から除外されると、三十六（３６）匹のラットは、体重層別化により各群が１２匹の動物（雄６匹／雌６匹）からなる３つの試験群に無作為化される。未使用の予備は安楽死させるかまたは別の承認された研究プロトコルへ運搬される。曝露の開始前に、動物を鼻部曝露チューブに馴化させる。
【０４６４】
動物飼育法：動物は、Ａｌｐｈａ  Ｄｒｉまたは広葉樹チップ床敷を入れたポリカーボネート製靴箱型ケージで、ケージあたり最高２匹、最低７日間飼育される。ケージと床敷はオートクレーブ処理した。注射の前に、動物を、尾静脈投与の際に使用される拘束管に少なくとも１回導入した。動物飼料は２０１６Ｃ  Ｈａｒｌａｎ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｃｈｏｗ，（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｎｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）であり、試験手順中を除いては無制限に摂取させた。飼料の各バッチは製造者により混入物質について分析されており、製造者の指定貯蔵寿命以内に使用される。動物には市水（午後５時、１時、及び０．２時に濾過）が与えられ、試験手順中を除いては無制限に摂取させた。健康な動物のみを本試験に使用した。実験動物の獣医または受託機関は、動物が検疫から解放される前に目視検査をした。
【０４６５】
環境条件：飼育室環境及び光周期の目標条件は、以下のとおりである：温度：１８〜２６℃；湿度：３０〜７０％；明周期：１２時間。光、湿度、及び温度の逸脱は、特定の範囲から外れる３時間を超える持続的な読み取り値と定義される。
【０４６６】
実験計画：本試験の実験計画は以下のとおりである。群１：低用量；吸入；雄６匹及び雌６匹；曝露から０．５時間後、２時間後及び８時間後、ならびに２４時間後（終了時）に採血；ならびに吸入から２４時間後に剖検。群２：中間量；吸入；雄６匹及び雌６匹；曝露から０．５時間後、２時間後及び８時間後、ならびに２４時間後（終了時）に採血；ならびに吸入から２４時間後に剖検。群３：高用量；吸入；雄６匹及び雌６匹；曝露から０．５時間後、２時間後及び８時間後、ならびに２４時間後（終了時）に採血；ならびに吸入から２４時間後に剖検。動物の体重を測定し、検疫期間後に試験群に無作為化した。動物を、各群が雄６匹及び雌６匹からなる３つの群に分けた。群を、３つの異なる用量レベルのＢｉｓＥＤＴに曝露した。初回曝露は、１００ｍｇ／ｍＬの製剤濃度に６０分の曝露時間であったが、方法開発に基づくと、これは３ｍｇ／ｋｇという用量になると予想される。曝露の最大持続時間は１８０分間であり、最大製剤濃度は１００ｍｇ／ｍＬであった。
【０４６７】
曝露後、曝露から０．５時間後、２時間後、及び８時間後に性別ごとに２匹ずつの動物で非終末部の採血を実施した。試験終了時（曝露から２４時間後）、動物を安楽死させ、剖検を行った。それ以降に実施され得る分析用に右肺を洗浄してフラッシュ凍結し、採取した。それ以降に実施され得る分析用に左肺をフラッシュ凍結した。鼻腔、喉頭、咽頭、鼻咽頭、気管、気管支、及び気管分岐部等、気道関連の追加の組織を採取した。洗浄液を、細胞数及び差異を含めた臨床化学及び血液学のパラメータについて分析した。それ以降に実施され得る分析用に肝臓、腎臓、食道、胃、小腸、及び大腸を採取した。これらの臓器の組織試料をフラッシュ凍結し、試験完了までそのまま保存した。洗浄液を、臨床病理学及び血液学（細胞数及び差異を含む）について分析した。最大の全血採血も剖検時に採取された。血液試料を臨床化学及び血液学について分析し、ＢｉｓＥＤＴについて実施され得る分析用に一定分量を瞬間凍結した。
【０４６８】
吸入曝露：ＢｉｓＥＤＴ（ビスマス−１，２−エタンジチオール）の初回曝露は、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）に懸濁させた、１００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ溶液（約３００ｍＯｓｍに調整）として処方された。２０ｐｓｉの入り口圧力で運転する市販の圧縮空気ジェット式ネブライザーＰａｄ  ＬＣ  Ｐｌｕｓでエアロゾルを発生させた。概略図を図１に示す。エアロゾルはげっ歯類の鼻部吸入曝露システムに移行した。曝露システムは５．２Ｌ／分の流入空気流量及び５Ｌ／分の排気流量で運転された。これは、各ポートに対し、ラットの分時換気量の１．５倍よりわずかに多い０．３１Ｌ／分となった。
【０４６９】
曝露濃度と粒径のモニタリング：呼吸ゾーンでＧＦ／ａフィルターに捕集することによりエアロゾル濃度をモニターした。フィルターを、示差質量及び当該技術分野で公知の他の方法により分析した。ＴＳＩ  Ａｅｒｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅｒ（モデル３３２１、ＴＳＩ，Ｉｎｃ．，Ｓｈｏｒｅｖｉｅｗ，ＭＮ）またはＩｎ−Ｔｏｘ  Ｍｅｒｃｅｒ  ２．０Ｌ／分カスケードインパクターを使用してエアロゾルの粒径を測定した。
【０４７０】
観察及び測定：観察事項は、ＰｒｏｖａｎｔｉｓデータベースまたはＡｎｉｍａｌ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＡＭＳ，ＬＲＲＩ，Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ）に記録された。
【０４７１】
臨床観察及び死亡／罹病：詳細な臨床観察を投与開始日から記録し、曝露前、曝露中、曝露後に動物がそれぞれの飼育ケージに戻された時、及び曝露後の午後に、観察事項を記録した。観察は、標準用語集（ＳＯＰ  ＴＸＰ−１５３２−Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌｓ）に従って記録される。一般的な観察には、無呼吸、努力性呼吸、倦怠、顕著な鼻汁等が含まれるが、これらに限定されない。気道に関連した臨床徴候には特別な注意が払われた。重度の苦痛の徴候を示す動物は、獣医スタッフと相談して試験管理責任者の判断で直ちに安楽死させた。検査はまた、（１）死亡した、衰弱している、または瀕死の動物を特定すること、及び（２）いかなる異常な臨床徴候もその発症と進行を記録すること、に向けられた。瀕死または死亡した動物は発見された後できるだけ早く、かつ、発見から１６時間以内に剖検した。
【０４７２】
体重：検疫からの解放後、全動物の体重を測定し、その体重が、動物を用量群に無作為化するために使用される試験前体重となる。曝露前の朝、及び剖検時にもう一度、体重を測った。
【０４７３】
臨床化学及び血液学のための採血：剖検中、血液学及び臨床化学のための血液試料を採取した。絶対数に差がある全血球計算（ＣＢＣ）では、全血（目標０．５ｍＬ）を採取して、抗凝固薬としてのエチレンジアミン四酢酸三カリウム（Ｋ３ＥＤＴＡ）の入ったチューブ内に入れた。血液学試料を自動化された（ＡＤＶＩＡ（商標）１２０  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）分析により分析した。血液学パラメータは以下のとおりである：赤血球数（ＲＢＣ）１０６／μＬ；ヘモグロビン（ＨＧＢ）ｇ／ｄＬ；ヘマトクリット（ＨＣＴ）％；平均赤血球容積（ＭＣＶ）ｆＬ；濃度（ＭＣＨＣ）ｇ／ｄＬ；平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）ｐｇ；血小板数（ＰＬＴ）（１０３／μＬ）；網状赤血球（ＲＥＴＩＣ）パーセント  ＲＢＣ％；白血球数（ＷＢＣ）１０３／μＬ；好中球（ＰＭＮ）１０３／μＬ；リンパ球（ＬＹＭ）１０３／μＬ；単球（ＭＯＮＯ）１０３／μＬ；好酸球（ＥＯＳ）１０３／μＬ；好塩基球（ＢＡＳＯ）１０３／μＬ；大型非染色性細胞（ＬＵＣ）１０３／μＬ。
【０４７４】
臨床化学分析では、全血（≧０．５ｍＬ）を血清分離チューブまたは血栓チューブに入れて遠心分離にかけ、細胞と血清の画分に分離した。血清試料をＨｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で分析した。測定または計算した臨床化学パラメータは以下のとおりである：アラニンアミノトランスフェラーゼ（アラニントランスアミナーゼ）−血清（ＡＬＴ）ＩＵ／Ｌ；アルブミン（ＡＬＢ）ｇ／ｄＬ；アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）−血清（ＡＳＴ）ＩＵ／Ｌ；ビリルビン（総）（ＢＩＬＩ−Ｔ）ｍｇ／ｄＬ；血中尿素窒素（ＢＵＮ）ｍｇ／ｄＬ；カルシウム（ＣＡ）ｍｇ／ｄＬ；塩化物（血清）（ＣＬ−Ｓ）ｍｍｏｌ／Ｌ；コレステロール（総）（ＣＨＯＬ）ｍｇ／ｄＬ；クレアチニン（血清）（ＣＲＥ−Ｓ）ｍｇ／ｄＬ；グルコース（ＧＬＵ）ｍｇ／ｄＬ；ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）ＩＵ／Ｌ；アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）ＩＵ／Ｌ；リン酸塩（ＰＨＯＳ）ｍｇ／ｄＬ；カリウム（血清）（Ｋ−Ｓ）ｍｍｏｌ／Ｌ；タンパク質（総）（ＴＰ）ｇ／ｄＬ；ナトリウム（血清）（ＮＡ−Ｓ）ｍｍｏｌ／Ｌ；トリグリセリド（ＴＲＩＧ）ｍｇ／ｄＬ；アルブミン／グロブリン（Ａ／Ｇ）単位なし；血中尿素窒素／クレアチニン（ＢＵＮ／ＣＲＥ）単位なし；グロブリン（ＧＬＯＢＮ）ｇ／ｄＬ。
【０４７５】
十分な試料容量が得られ、かつ、分析上の問題が発生していない全試験動物で血液学及び臨床化学の評価を実施した。目的の採取容量が得られない、または評価が実施されない場合は、理由と注釈を生データに含める。残っている血液試料または血清は分析後に廃棄される。
【０４７６】
生物学的分析による分析のための採血：曝露後、曝露から０．５時間後、２時間後、及び８時間後に性別ごとに２匹ずつの動物で非終末部の採血を実施した。約１ｍＬの全身全血を頸静脈により抗凝固薬としてのＫ３ＥＤＴＡの入ったチューブに採取した。チューブを液体窒素でフラッシュ凍結し、ＢｉｓＥＤＴの代替としてのビスマスの定量のためのＩＣＰ−ＭＳアッセイを使用する分析用に輸送されるまで、処理せずに−７０〜−９０℃で保存した。
【０４７７】
安楽死及び剖検：動物は、予定された剖検（曝露から２４時間後）の前に一夜絶食させた。予定された剖検時または罹病の場合、過剰量のバルビツール酸塩系鎮静薬の腹腔内注射により動物を安楽死させた。詳細な肉眼的剖検を全動物（死んで発見された動物、瀕死の動物、または剖検が予定されている動物）で実施し、これは、身体開口部と頭蓋、胸部、及び腹部の臓器及び組織を含めた、外部と内部の完全な検査で構成される。すべての肉眼所見を説明的用語で記録する。剖検時、生物学的分析による分析、血液学、及び臨床化学のために全血を採取した。肺を回収して秤量した。それ以降に実施され得る分析用に左葉を縛ってフラッシュ凍結した。右葉は、１回の洗浄につきリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）４ｍＬを使用して３回洗浄した。洗浄完了後、それ以降に実施され得る分析用に右葉を液体窒素でフラッシュ凍結した。
【０４７８】
本実施例には、吸入、ＩＶ、及び経口による投与と比較した、ＢｉｓＥＤＴ単回投与ラットＰＫ試験の結果が記載されている。主な重要事項は、（１）吸入投与後、ＢｉｓＥＤＴは肺組織に残り、半減期は約４日である（図３４）、（２）経口投与後の血中濃度は非常に低いが、持続的で測定可能である、（３）ＩＶ投与は、組織内での１８時間の初期分布、続く、緩徐な全身からの消失相の二相性パターンに従うようである、（４）ＢｉｓＥＤＴは、ＩＶまたは経口での投与後、肺組織内には認め得るほどは分配せず、−経口投与後は肺でのレベルは検出されず、ＩＶ投与後は肺で低レベルで検出され（吸入群に対して５％未満）、レベルは約２４時間の半減期で急速に低下する、ということである。これは、全身性ＢｉｓＥＤＴは肺組織に分配されないこと、及び吸入投与後に測定された肺でのレベルは、頂端表面に沈着した薬物粒子によるものであることを示し、（５）吸入投与後、どの時点でも比較的安定した濃度で持続的な中程度の血液曝露があり、これは、肺内の薬物がデポとして作用していることを示しており、（６）１００μｇ／ｋｇでの吸入とＩＶ、及び２５０μｇ／ｋｇの経口では、ＢｉｓＥＤＴは忍容性があった。これらのデータに基づいて、連日または１日おきで与えられる低用量では、非常に安定した薬物レベルが組織及び血液中で提供されると考えられる（最低と最大の間の差はわずか）。ＧＬＰの毒性学的試験及び／または臨床試験中に安全域が十分に大きいことが実証された場合は、投与間隔を延長し、それに応じて用量を増やすことが可能である。用量及び間隔を増大させることは、ピーク値（投与後）とトラフ値（投与前）の間で組織及び血中の濃度の変動がより大きくなることにつながる。
【０４７９】
既存の、インビボとインビトロでの毒性学データならびにラットでのＰＫ及びインビトロでのＭＩＣデータに基づくと、吸入用ＢｉｓＥＤＴ懸濁液は、忍容性のある、有効な肺レベルが提供される用量で信頼して投与することができ、したがって、実行可能な臨床開発候補である。上記のように、ＢｉｓＥＤＴは、吸入投与後、長く肺組織に留まり、半減期が約４日である（図３５）。単回吸入投与から２４時間後、肺組織で４，０９３ｎｇ／ｇ（肺液中１２３μｇ／ｍＬに等しい）が測定され、単回投与から４日（９６時間）後、２，６００ｎｇ／ｇ（肺液中７８μｇ／ｍＬに等しい）が肺組織で測定された。いかなる特定の理論にも拘束されることなく、ＢｉｓＥＤＴの低溶解性が肺表面液での緩徐な溶出と長時間曝露を提供し、肺上皮を介した拡散により全身曝露が制限されていると考えられる。肺は、肺で見られたレベルより全身レベルが約１０倍低い、緩徐な全身曝露のためのデポ剤として作用しているようである。終末段階のＩＶデータは、初期の組織分布後、ゆっくりとした消失を示すようである（図３６）。
【０４８０】
以下の表１１及び表１２はそれぞれ、全血中ＢｉｓＥＤＴと時間データとの対比、及び肺内ＢｉｓＥＤＴ濃度と屠殺時時間データを示す。これらの結果はまた、図３７及び図３８にグラフで示されている。
【表１１】
2021533193.tif 000024
【表１２】
2021533193.tif 000025
【０４８１】
ラットＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ肺感染症モデルで、肺感染症に関連した肺の細菌負荷を減少させることにおけるＢｉｓＥＤＴの有効性を評価した。結果は以下のとおりである。
【０４８２】
エアロゾル濃度：エアロゾル濃度（重量分析及び化学分析）の結果を表１３に示す。予想どおり、ビヒクルの化学的分析ではＢｉｓＥＤＴは検出されなかった。重量分析が記載されている。陽性対照（トブラマイシン）濃度を重量分析により決定し、どの曝露雰囲気でも変化はコホート及び全曝露日の両方を通じて１０％未満であった。化学的分析によって決定された被験物質濃度は、すべての曝露コホート及び曝露日で変化は５．１％未満であり、１１．５μｇ／Ｌであった。
【表１３】
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【０４８３】
送達用量：表１４及び表１５では、本試験で動物に送達された、提示された沈着用量及び理論上の沈着用量を計算したものを示す。提示された用量は、副鼻腔、喉、口腔咽頭領域、肺に沈着した物質、ならびに呼気物質を含む、物質の総吸入量と定義される。理論上の沈着用量、または肺表面に実際に沈着する物質の量は、ラットにおいて提示された用量の１０％であるとされる（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＩｎｈａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００８  Ｏｃｔ；２０（１３）：１１７９−８９．ｄｏｉ：１０．１０８０／０８９５８３７０８０２２０７３１８）。各動物の現在の体重及び曝露条件を、用量決定のための上記方程式の要素に入れた。群３及び群４の曝露はそれぞれ、持続時間が１３分及び３０分であった。ビヒクルのフィルターをＢｉｓＥＤＴについて化学的に分析したところ、全フィルターとも検出限界未満であった。陽性対照（トブラマイシン）のフィルターを重量分析により分析したところ、すべてのコホート及び日での平均提示用量は２９．０ｍｇ／ｋｇであり、試験プロトコルで特定された値の２０ｍｇ／ｋｇよりも高かった。ＢｉｓＥＤＴの低濃度群及び高濃度群の平均提示用量はそれぞれ０．１１４ｍｇ／ｋｇ及び０．２６４ｍｇ／ｋｇであった。試験プロトコルでは、それらの群について０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．２５ｍｇ／ｋｇの用量を定めていた。曝露群が受けた日及びコホートによる用量の詳細は、以下の表１４及び表１５に記載されている。
【表１４】
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【表１５】
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【０４８４】
粒度分布：Ｉｎ−Ｔｏｘ  Ｍｅｒｃｅｒ  Ｉｍｐａｃｔｏｒを使用して、各曝露条件での粒度分布（図３８〜図４０）を決定した。図３９は、試験中に測定されたＢｉｓＥＤＴのエアロゾル粒度分布を示す。表１６は、曝露の種類ごとの粒度分布（ＰＳＤ）及び幾何標準偏差（ＧＳＤ）の概要を示す。
【表１６】
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【０４８５】
図４２は、３日目及び５日目の累積（総）投与用量（肺沈着）を示すラットの有効性データを示す。この図から分かるように、送達された薬物の質量比はトービイと比較して圧倒的である。
【０４８６】
結論：動物を４つの実験吸入処置群に分け、１）群１、０日目、２日目、及び４日目に生理食塩水で処置される陰性対照群；２）群２、トブラマイシン（目標２０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、１日目〜４日目）で処置される陽性対照群；３）群３、ＢｉｓＥＤＴ（目標０．１ｍｇ／ｋｇ、１日１回、０日目、２日目、４日目）；及び群４、ＢｉｓＥＤＴ（目標０．２５ｍｇ／ｋｇ、１回、１日目）とした。動物をさらに２つのコホートに分け、その数の動物の曝露及び治療に適応させるため１日あけた。群１及び群３のコホート２を除いたすべての動物をプロトコルに従って曝露させた。群１及び群３のコホート２の動物は、０日目、２日目、４日目ではなく０日目、１日目、及び４日目に曝露させた。
【０４８７】
生理食塩水（陰性対照）を処置された動物ではＢｉｓＥＤＴは検出されなかった。トブラマイシンで１日２回（８用量）処置された動物は平均で２９．０ｍｇ／ｋｇという用量を投与された。この用量は、目標用量の１４５％に相当する。トブラマイシンは、被験物質の活性について、直接比較または競合としてではなく、むしろモデル機能を保証するための陽性対照として使用されるため、用量増大が試験に影響することはない。目標とした用量である０．１ｍｇ／ｋｇのＢｉｓＥＤＴで３回処置された動物は、平均で目標用量の１１４％に相当する０．１１４ｍｇ／ｋｇの投与を受けた。群３（目標とした用量は０．１ｍｇ／ｋｇ）では、コホート１及び２のそれぞれの日の平均用量それぞれ０．１１４及び０．１１５であった。３日の処置日の平均用量を比較する対応のないｔ検定（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０）では、コホート間の差は著しくないことが示された（ｐ値＝０．９３）。予防的目標用量である０．２５ｍｇ／ｋｇを単回投与された動物は、ほぼ同一用量の０．２６３ｍｇ／ｋｇ（コホート１）及び０．２６４ｍｇ／ｋｇ（コホート２）のＢｉｓＥＤＴ、またはそれぞれ目標用量の１０５％及び１０６％を受けた。
【０４８８】
曝露用に発生させた粒子は吸入可能と見なされた。陽性対照（トブラマイシン）の平均ＭＭＡＤは２．８１μｍ、ＧＳＤは１．８７μｍである。陰性対照（生理食塩水）処置及び被験物質（ＢｉｓＥＤＴ）処置のエアロゾル粒子のＭＭＡＤはそれぞれ、１．２６μｍ及び１．５４μｍ、またＧＳＤはそれぞれ１．８１及び１．８３であった。
【０４８９】
実施例９：ビーグル犬でのフェイスマスク吸入後のＢｉｓＥＤＴの試験
試験の目的は、雄と雌のビーグル犬において、吸入ビスマスエタンジチオール（ＢｉｓＥＤＴ）の最大耐用量（ＭＴＤ）または投与可能な最大用量（ＭＦＤ）を、フェイスマスク吸入曝露（最高６０分の曝露）後に決定することである。動物は曝露初日から最高１４日間モニターされ、ＢｉｓＥＤＴの薬物動態を分析するため所定の時点で採血される。さらに、剖検前に凝固パネルが実施される。試験終了時、動物を安楽死させて剖検を行い、その間、生物学的分析及び組織病理学による分析用に気道が採取される。得られた結果から追跡反復投与ＧＬＰ試験についての情報が得られる。この被験物質は現在、嚢胞性線維症患者の肺感染症の処置に適応となる広域スペクトル抗微生物／抗バイオフィルム剤の新規製剤として開発中である。
【０４９０】
材料：ＢｉｓＥＤＴはＤａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；ロット番号ＥＤ２６８−Ｉ−ＩＩ−Ｏ  Ｉより供給され、室温で保存された。本試験に使用されたビヒクルは、室温で保存された、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）含有ＮａＣｌ水（約３００ｍＯｓｍに調整）であった。
【０４９１】
イヌ：５〜７か月齢のビーグル犬の雄と雌のイヌを本試験で使用した。雄は体重が６〜１０ｋｇであり、雌は体重が５〜９ｋｇであった。雄６匹と雌６匹を使用した。
【０４９２】
ハウジング：屋内または屋外の犬小屋で動物を飼育する。
【０４９３】
馴化：動物を、拘束とフェイスマスクに馴化させる。
【０４９４】
飼料：２０２５Ｃ  Ｈａｒｌａｎ  Ｇｌｏｂａｌ  ２５％  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｉｅｔ  （Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を１日１回（馴化中及び吸入曝露中を除く）。すべてのイヌは、血液学、臨床化学、及び凝固の分析用のすべての血液試料を採取する前の夕方に絶食させる。飼料の各バッチは製造者により混入物質について分析され、製造者の指定貯蔵寿命以内に使用される。混入物質は、試験結果に影響を与えると考えられるレベルで存在してはならない。馴化中及び吸入曝露中を除き、無制限にアクセスできる市水を使用した。
【０４９５】
環境条件：犬舎の温度及び光周期の目標条件は、以下のとおりである：温度：１８〜２９℃；明周期：１２時間（曝露の各日に、血液試料採取に合わせるために明周期を延長してよい）。
【０４９６】
罹患及び死亡：１日２回、罹患及び死亡について動物を観察する。瀕死の状態が見られた場合は、承認されている安楽死用の溶液の過剰投与により動物を安楽死させる。健康な動物のみを試験した。
【０４９７】
拘束器及びフェイスマスクに適切に馴化させた後、動物を個々に被験物質エアロゾルに曝露する。実験計画を表１７に示す。動物は、ランプ試験デザインで被験物質エアロゾルに対して最高６０分間のフェイスマスク吸入単回曝露を受ける。曝露中と曝露後の動物観察により吸入ＢｉｓＥＤＴエアロゾルの忍容性が決定される。
【０４９８】
群１（ビヒクル）をビヒクル雰囲気に３０分間曝露する。群２（５０μｇ／ｋｇ）をＢｉｓＥＤＴに３０分間曝露する。群３〜群５の目標の濃度と曝露時間は、臨床観察または肉眼的剖検所見による毒性の存在に基づく。群３〜群５のそれぞれにおいて、有害な毒性の臨床徴候が観察されない場合、次の群の曝露はより高い目標用量で行われる。有害な毒性の臨床徴候が観察された場合、次の群の曝露はより低い目標用量で行われる。この手法をＢｉｓＥＤＴの全用量で繰り返す。最終的な記録された曝露時間が、最大耐用量または投与可能な最大用量である。
【０４９９】
薬物動態（ＰＫ）分析、血液学、臨床化学、及び凝固の分析用に採血する。
【０５００】
予定された各時点で（または罹病の場合）動物を安楽死させる。
【表１７】
2021533193.tif 000030
ＢｉｓＥＤＴ製剤：最初の５．０ｍｇ／ｍｌのＢｉｓＥＤＴ製剤を、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）含有ＮａＣｌ（約３００ｍＯｓｍに調整）に調製する。各曝露日に製剤を分析する。
【０５０１】
被験物質投与：代表的概略図を図４１に示す。エアロゾルの発生システムでは、市販の圧縮空気ジェット式ネブライザーと、エアロゾルの動物への移行を可能にするチャンバーとが連結されている。曝露は、上記試験デザインに従ったフェイスマスク吸入によるものである。曝露時間は６０分間を超えない。必要に応じ、製剤の濃度及び曝露時間を調節して目標用量を達成する。
【０５０２】
動物は曝露室に運ばれ、拘束ハーネスを付けて曝露台の上に乗せられる。チャンバーに接続されたフェイスマスクは、曝露期間が始まる直前に動物に付けられる。温度及び曝露チャンバーの酸素（％）は曝露中を通してモニターされる。
【０５０３】
濃度モニタリング：エアロゾル濃度のモニタリングは、事前に重量を測定したＧＦ／Ａ４７ｍｍフィルターにエアロゾルを捕集することによって行う。曝露中を通して曝露チャンバーからフィルターのサンプリングを行う。ＧＦ／Ａフィルターを通過するエアロゾルサンプリング流量は、０．５±０．１Ｌ／分に維持される。試料採取後、フィルターの重量を測定して曝露システムの総エアロゾル濃度を決定する。フィルターを取り出して分析する。ＢｉｓＥＤＴの平均曝露エアロゾル濃度に基づき、沈着用量を算出する。
【０５０４】
粒径決定：エアロゾルの粒度分布は、Ｍｅｒｃｅｒ−ｓｔｙｌｅ、７段式カスケードインパクター（Ｉｎｔｏｘ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ）によって曝露チャンバーの呼吸ゾーンから測定する。空気動力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）及び幾何標準偏差（ＧＳＤ）に関して粒度分布を決定する。カスケードインパクター試料を、２．０±０．１Ｌ／分の流量で採取する。
【０５０５】
肺用量の決定：以下の方程式を使用して沈着用量を算出する。この計算では、特定の曝露日ごとの個々の動物の体重と共に、曝露から測定された平均エアロゾル濃度が使用される。このようにして、肺に沈着する推定ＢｉｓＥＤＴ量が、測定したＢｉｓＥＤＴエアロゾル濃度を使用して計算される。
【数２】
2021533193.tif 000031
式中：
沈着用量＝（ＤＤ）μｇ／ｋｇ
分時換気量（ＲＭＶ）＝０．６０８×ＢＷ０．８５２（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＤＪ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）
エアロゾル曝露濃度（ＡＣ）＝ＢｉｓＥＤＴエアロゾル濃度（μｇ／Ｌ）
沈着率（ＤＦ）＝沈着率２５％と仮定
ＢＷ＝試験中の個々の動物の体重（ｋｇ）
【０５０６】
観察及び測定
臨床観察及び死亡／罹病：詳細な臨床観察を投与開始日から記録し、到着から曝露日まで１日２回（午前と午後）観察事項を記録する。一般的な観察には、無呼吸、努力性呼吸、倦怠、顕著な鼻汁等が含まれるが、これらに限定されない。気道に関連した臨床徴候には特別な注意を払う。重度の苦痛の徴候を示す動物は、試験管理責任者の判断で、かつ獣医スタッフと相談した上で安楽死させる。検査は、（１）死亡した、衰弱している、または瀕死の動物を特定すること、及び（２）いかなる異常な臨床徴候もその発症と進行を記録すること、に向けられる。瀕死または死亡した動物は発見された後できるだけ早く、かつ、発見から１６時間以内に剖検する。
【０５０７】
体重：検疫からの解放後、全動物の体重を測定し、その体重が、動物を用量群に無作為化するために使用される試験前体重となる。曝露前の朝及び剖検時に体重を測る。
【０５０８】
採血及び生物学的分析による分析：薬物動態（ＰＫ）分析用に曝露前に採血し、その後、曝露から４時間（±５分）後、さらに再び１日目、２日目、７日目（曝露前及び曝露から４時間（±５分）後）、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、及び１４日目に採血する。合計０．２５ｍＬが各時点で採取される。ビヒクル対照（群１）動物からはＰＫ用の血液は採取せず、ＢｉｓＥＤＴに曝露した動物でのみＰＫ分析用に採血する。採取試料は、生物学的分析による分析のためのＭｅｄｐａｃｅへの輸送用に、処理せずにフラッシュ凍結する。血液学（１ｍＬ）及び臨床化学（１ｍＬ）のために、ベースライン時、７日目（曝露前）、さらに安楽死時に全群の全動物から追加の血液を採取する。剖検時、凝固分析（ｄ−ダイマー、フィブリノゲン、ＰＴ、及びＰＴＴ）用に全動物から血液（２〜２ｍＬ）を採取する。
【０５０９】
頸静脈または別の末梢静脈（橈側皮静脈または伏在静脈）から血液試料を採取する。
【０５１０】
薬物動態分析用の血液（０．２５ｍＬ）を抗凝固薬としてのＫ３ＥＤＴＡの入ったチューブに採取する。チューブを液体窒素でフラッシュ凍結し、ＢｉｓＥＤＴの代替としてのビスマスの定量のためのＩＣＰ−ＭＳアッセイを使用する分析用に輸送されるまで、処理せずに−７０〜−９０℃で保存する。
【０５１１】
血液学分析には、抗凝固薬としてのＫ３ＥＤＴＡが入ったバキュテナーで全血（１ｍｌ）が採取される。
【０５１２】
臨床化学分析では、全血（１ｍＬ）を血清分離チューブまたは血栓チューブに入れ、２〜８℃で最低１３００ｇにて１０（±１）分間遠心分離にかけて処理し、血漿を得る。血漿試料を分析まで−７０〜−９０℃で保存する。
【０５１３】
凝固分析では、血液（２〜２ｍＬの試料）を、抗凝固薬のクエン酸ナトリウムの入ったチューブに採取し、処理して、クエン酸血漿を凍結し、分析用に維持する。プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）、ｄ−ダイマー、及びフィブリノゲンを各動物で分析する。試料は遠心分離（１５００ｒｐｍ、１５分）にかけられ、血漿を超低温バイアルに分注し、分析まで凍結保存する（−７０〜−９０℃）。
【０５１４】
血液学及び臨床化学：すべてのイヌは、血液学、臨床化学、及び凝固の分析用のすべての血液試料を採取する前の夕方に絶食させる。
【０５１５】
血液学試料を自動化された（ＡＤＶＩＡ（商標）１２０  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）分析により分析する。処理が、試料処理フォームに記録される。血液学のパラメータを表１８に示す。
【０５１６】
臨床化学試料をＨｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で分析する。臨床化学パラメータを表１９に示す。
【０５１７】
血液学または臨床化学の分析に必要な目的の採取容量が得られない場合、その動物については分析は実施されない。さらに、評価を実施することができない場合は、理由と注釈を試験ファイルに含める。
【表１８】
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【表１９】
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【０５１８】
安楽死、剖検、及び組織学
安楽死：予定された剖検時（１４日目または２１日目それぞれの）または瀕死の場合、動物は獣医またはそれらにより鎮静され、安楽死させられる。アセプロマジン（０．０２〜０．２ｍｇ／ｋｇ、ＩＭ）及びブトルファノール（≧０．３３ｍｇ／ｋｇ、ＩＭ）の投与によって動物を鎮静させる。鎮静後、ケタミン／ジアゼパムカクテルの投与が入るよう静脈カテーテルを配し、生理食塩水で洗い流す。カクテルは、１ｍＬのケタミン（１００ｍｇ／ｍＬ）及び１ｍＬのジアゼパム（５ｍｇ／ｍＬ）の配分の混合物である。次いで、カクテルを１ｍＬ／９ｋｇ体重以上の用量で投与する。注意：イヌがアセプロマジン及びブトルファノールの使用後に十分に鎮静している場合、ケタミン／ジアゼパムカクテルの投与は必要とされないかまたは投与されない場合があり、文書で記録される。その後、動物を、過剰量のバルビツール酸塩系鎮静薬（Ｅｕｔｈａｓｏｌ（登録商標）、≧１ｍＬ／４．５ｋｇ、ＩＶ）で安楽死させ、生理食塩水で洗い流す。必要であれば、放血が実施され得る。
【０５１９】
剖検：詳細な肉眼的剖検を全動物で実施し、これは、身体開口部（耳、鼻孔、口、肛門等）ならびに頭蓋、胸部、及び腹部の臓器と組織を含めた、外部と内部の完全な検査で構成される。すべての肉眼所見を説明的用語で記録し、典型的には、位置（複数可）、サイズ（ｍｍ）、形状、色、硬さ、及び数を含める。死んで発見された動物は、剖検が実施可能になるまで冷蔵される。可能であれば死因を決定する。
【０５２０】
左肺葉は組織病理学に使用され、１０％ＮＢＦに固定される。右中葉からは約１グラムの切片３枚が採取され、生物学的分析による分析用に液体窒素でフラッシュ凍結され、試料は、ＢｉｓＥＤＴの代替としてのビスマスの定量のためのＩＣＰ−ＭＳアッセイを使用する分析用に輸送されるまで、−７０〜−９０℃で保存される。肝臓、脾臓、腎臓、脳、心臓、及び気道を採取し、それ以降に実施され得る分析用に固定する。
【０５２１】
組織学及び病理：肺を準備して包埋、カットしてからスライドに封入し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、病理学者が評価する。さらに、剖検中に観察され、採取された代表的病変を評価してよい。群１及び群４で組織学分析を行い、追加の分析は、承認された試験プロトコルの改訂（Ａｍｅｎｄｍｅｎｔ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔｕｄｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によって行ってよい。
【０５２２】
結果
表２０は、試験されたイヌの肺におけるＢｉｓＥＤＴの実際の沈着用量を示す。表２１は試験されたイヌの血液学の結果を示し、表２２は臨床化学の結果を示す。
【表２０】
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【表２１−１】
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【表２１−２】
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【表２２−１】
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【表２２−２】
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【０５２３】
参考文献
Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＤＪ，Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＣＪ，Ｃｏｏｍｂｓ  ＤＷ，Ｇｉｌｋｉｓｏｎ，ＩＳ，Ｈａｒｄｙ，ＣＪ，Ｈｅａｌｅｙ，Ｇ，Ｋａｒａｎｔａｂｉａｓ，Ｇ，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｎ，Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ａ，Ｋｉｌｇｏｕｒ，ＪＤ，ａｎｄ  ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｐ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｓｔｓ  （ＡＩＴ）ｗｏｒｋｉｎｇ  ｐａｒｔｙ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ｄｏｓｅ  ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｅｒｏｓｏｌ  ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ；２０（１３）：１１７９−８９，２００８．
【０５２４】
Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，２０１１．Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ．
【０５２５】
Ｔｅｐｐｅｒ，ＪＳ，Ｋｕｅｈｌ，ＰＫ，Ｃｒａｃｋｎｅｌｌ，Ｓ，Ｎｉｋｕｌａ，ＫＪ，Ｐｅｉ，Ｌ，ａｎｄ  Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，ＪＤ．２０１６．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｕｍｍａｒｙ：“Ｂｒｅａｔｈ  Ｉｎ，Ｂｒｅａｔｈ  Ｏｕｔ，Ｉｔｓ  Ｅａｓｙ：Ｗｈａｔ  Ｙｏｕ  Ｎｅｅｄ  ｔｏ  Ｋｎｏｗ  Ａｂｏｕｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  Ｉｎｈａｌｅｄ  Ｄｒｕｇｓ．”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３５（４）３７６−３９２．
【０５２６】
実施例１０：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ  Ｃｏｍｐｌｅｘによって引き起こされる嚢胞性線維症感染症を治療するために使用される薬剤とのＢｉｓＥＤＴの抗微生物相互作用
緒言：ＢｉｓＥＤＴと、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者の治療で使用される様々な薬剤との相互作用をＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．に対して評価した。チェッカーボードアッセイで併用時発育阻止濃度（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＩＣ）を測定して抗微生物相互作用を決定した。
【０５２７】
材料及び方法
被験物質：ＢｉｓＥＤＴは乾燥粉末として提供され、試験前、暗所で室温にて保存された。比較対照化合物は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ；１、２）によるガイドラインに従って取り扱われた。個々の薬物ロット及び試験濃度範囲に関する具体的な情報を以下の表２３に示す。
【表２３】
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最高試験濃度の４０倍で調製された薬物に適切な溶媒を加えた。貯蔵液は、試験に使用する前に、暗所で室温にて約１時間放置して自己殺菌させた。比較対照の薬物ストックを凍結し、−８０℃で保存した。
【０５２８】
生物：被験生物は、以前にＭｉｃｒｏｍｙｘまたはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手していた臨床分離株であった。Ｍｉｃｒｏｍｙｘにて受領されると、分離株は、好適な条件下で各生物に適した寒天培地に画線された。生物を３５℃で１８〜２４時間インキュベートした。これらの増殖板から採取されたコロニーを凍結保護剤を含有する適切な培地に再懸濁させた。その後、各懸濁液の一定分量を−８０℃で凍結した。アッセイ前、生物を、５％ヒツジ血液を加えたトリプチケースソイ寒天培地（ＢＤ；Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ；ロット番号８１７９５０６）に画線し、上記のようにインキュベートした。
【０５２９】
試験培地：アッセイに使用した培地は、陽イオン調整ミューラーヒントンブロス（ＭＨＢ  ＩＩ；Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ；ロット番号８０９６５７４）であった。ＣＬＳＩガイドライン（２）に従って培地を調製した。
【０５３０】
ＭＩＣアッセイの方法：ＣＬＳＩの微量液体希釈法の手法（１、２）を使用してＭＩＣアッセイプレートを調製した。自動液体ハンドラー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００及びＢｉｏｍｅｋ  ＦＸ）を使用して段階希釈及び液体移送を行った。標準９６ウェル微量希釈プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９５）の列２から列１２までの全ウェルに１５０μＬの適切な希釈剤を充填した。３００μＬの各被験薬（４０倍）をプレートの列１の各ウェルに加えた。このプレートを使用して薬物の「母プレート」を調製し、ここから複製「娘プレート」用に薬物の段階希釈を得た。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して、母プレートでの列１１までの段階移送を完了させた。列１２のウェルには薬物は含有されておらず、生物増殖の対照ウェルであった。
【０５３１】
娘プレートに、ウェルあたり１８５μＬの記載のＣＡＭＨＢをＭｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４を使用して添加した。娘プレートはＢｉｏｍｅｋ  ＦＸ装置で完成され、この装置で母プレートの各ウェルから５μＬの薬物溶液が各娘プレートの対応する各ウェルに１回のステップで移された。
【０５３２】
各生物の標準化した接種物をＣＬＳＩの方法に従って調製した（２）。懸濁液を０．５マクファーランド標準液と等しくなるよう調製し、続いて試験培地で１：２０に希釈した。接種物を長さ方向に分割されている滅菌リザーバー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）に分注し、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用してプレートに接種した。娘プレートは、薬物濃度の低いものから高いものへ順に接種が行われるようＢｉｏｍｅｋ  ２０００の作業面に逆向きに置かれた。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００で１０μＬの希釈懸濁液が各ウェルに送達され、最終濃度は約５×１０５ＣＦＵ／ｍＬになった。プレートを３〜４枚積み重ねて最上段のプレートに滅菌蓋をし、ビニール袋に入れ、３５℃で約１８時間インキュベートした。
【０５３３】
プレートビューアーを使用してマイクロプレートを下から見て、ＭＩＣを読み取った。ＭＩＣを、生物の目に見える増殖を阻害する薬物最低濃度として記録した。未接種の溶解性用対照プレートもまた薬物沈殿の証拠について観察した。
【０５３４】
ＦＩＣアッセイ手順：ＦＩＣの試験範囲は微量液体希釈法によるＭＩＣ試験データに基づいて設定された。ＦＩＣアッセイプレートを、ＣＬＳＩの微量液体希釈法の手法（１、２）及び自動液体ハンドラー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００及びＢｉｏｍｅｋ  ＦＸ）を使用して調製し、段階希釈及び液体移送を行った。
【０５３５】
標準９６ウェル微量希釈プレート（Ｃｏｓｔａｒ）のウェルに１５０μＬの適切な希釈剤を列２から列１２まで充填した。試験される最高最終濃度の４０倍の一定分量３００μＬをプレートの列１の各ウェルに加えた。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して、「併用薬剤の母」プレートで列２から列１１まで１１の２倍段階希釈を行った。
【０５３６】
「被験薬剤の母」プレートのウェルに１５０μＬの希釈剤を行Ｂ〜行Ｈまで充填した。このプレートの行Ａに、試験される最高最終濃度の４０倍の３００μＬの被験薬剤貯蔵液を充填した。その後、段階２倍希釈を、マルチチャンネルピペットを使用して手作業で行Ｂから行Ｇまで調製した。
【０５３７】
「娘プレート」に１８０μＬのＣＡＭＨＢをＭｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４を使用して添加した。Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸを使用して併用薬剤の母プレートの各ウェルから５μＬの薬物溶液をすべての娘プレートの対応するウェルに１回のステップで移した。その後、被験薬剤の母プレートの各ウェルから５μＬの一定分量を娘プレートの対応するウェルにＢｉｏｍｅｋ  ＦＸで移した。行Ｈ及び列１２の各々にはそれぞれ、ＭＩＣの決定用に併用薬剤単独及び被験薬剤単独の段階希釈が含有された。この手順を被験薬剤及び評価される併用薬剤で繰り返した。
【０５３８】
各生物の標準化した接種物をＣＬＳＩの方法に従って調製した（２）。コロニーを初代プレートからピッキングし、０．５マクファーランド濁度標準液と等しくなるよう懸濁液を調製した。懸濁液をさらに１：２０に希釈した。１０μＬの標準化された接種物は、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して低濃度から高濃度に向かって各ウェルに送達された。これらの接種により、娘プレートの最終細胞濃度として各ウェルで約５×１０５ＣＦＵ／ｍＬが得られた。
【０５３９】
試験フォーマットにより８×１２のチェッカーボードが作り出され、ここで、各化合物を単独（列１２及び行Ｈ）の場合と薬物濃度比を変えて組み合わせた場合とで試験した（図４３参照）。
【０５４０】
プレートを３〜４枚積み重ねて最上段のプレートに滅菌蓋をし、ビニール袋に入れ、３５℃で約１８時間インキュベートした（１８時間において増殖不良のため４２時間インキュベートしたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ分離株８７９８を除く）。プレートビューアーを使用してプレートを下から見た。作成された読み取りシートには、併用薬剤のＭＩＣ（行Ｈ）、被験薬剤のＭＩＣ（列１２）、及び被験薬剤と併用薬剤が様々な比で含有されたウェルの増殖−非増殖境界にあるウェルに印が付けられた。ＦＩＣを読み取り、薬剤を組み合わせて試験した行（行Ｂから行Ｇ）で生物の増殖を示さない薬物最低濃度として記録した。極めて小さな跡は増殖として解釈しなかった。
【０５４１】
ＦＩＣ／ＦＩＣＩ計算：ＦＩＣは、適用できる場合は基本的にＥｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，ｅｔ  ａｌ．（３）により記載されているように算出した。
【０５４２】
パネルの関連する行それぞれについて、ＦＩＣ指数（ＦＩＣＩ）を下記のように算出した。
ＦＩＣ薬物Ａ／ＭＩＣ薬物Ａ＋ＦＩＣ薬物Ｂ／ＭＩＣ薬物Ｂ＝ＦＩＣ指数（ＦＩＣＩ）
組み合わせについて平均ＦＩＣＩを決定した。
【０５４３】
被験薬剤のうちの１つでＭＩＣがスケール外であった（評価した最高試験濃度より高い、例えば、３２ｐｇ／ｍＬ超）場合、ＦＩＣ決定のためにＭＩＣを次に高い２倍濃度に設定した（例えば、ＭＩＣが３２μｇ／ｍＬ超であった場合、６４μｇ／ｍＬというＭＩＣに基づいてＦＩＣを算出した）。
【０５４４】
Ｏｄｄｓ（４）により記載されている基準を使用して、組み合わせの平均ＦＩＣＩは以下のとおり解釈される：０．５以下＝相乗的、０．５超〜４＝相加的／中立的、及び４超＝拮抗的。
【０５４５】
「相乗的」という解釈は、いずれかの化合物単独のＭＩＣを大幅に下回る濃度（４倍超）での組み合わせによる生物増殖の阻害に従っており、ＦＩＣＩ値は低くなる（０．５０以下）。「中立的」という解釈は、個々の化合物単独のＭＩＣ値またはそれよりわずかに上回る／下回る値の濃度での増殖阻害に従っており、ＦＩＣＩ値は０．５０超であるが４．０以下になる。「拮抗的」という解釈は、生物増殖を阻害するために必要とされる併用化合物の濃度が、化合物個々で必要とされる濃度よりも実質的に大きい（４倍超）場合に生じ、ＦＩＣＩ値は４．０超になる。
【０５４６】
結果及び考察
初回ＭＩＣ試験中に観察された、被験生物に対する評価した薬剤の微量液体希釈によるＭＩＣ値を表２４にまとめている。ＢｉｓＥＤＴ及び他の被験薬剤のＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ２７８５３に対するＭＩＣ値は、ＣＬＳＩ  ＱＣ範囲（１）内であった。ＢｉｓＥＤＴは、評価された分離株全体で、他の薬剤に対する高度な耐性にもかかわらず活性を維持した。得られた表現型に基づいて、ＢｉｓＥＤＴと他の被験薬剤とを併用するチェッカーボードアッセイでのその後の評価には、灰色に網掛けされた分離株が選択された。
【０５４７】
ＦＩＣ試験中に観察されたＭＩＣ値を表２５にまとめている。予想どおり、これらの結果は、初回ＭＩＣ試験中に観察されたもの（表２４）と一致していた（典型的には同一または２倍以内）。ＭＩＣ値が初回ＭＩＣ試験中に観察されたものと４倍異なっているまれな例には灰色で網掛けされている。初回ＭＩＣ試験中同様、ＢｉｓＥＤＴ及び他の被験薬剤では、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ２７８５３についてのＭＩＣ値はＱＣ範囲内であった。６つのチェッカーボードパネル全体で観察されたＢｉｓＥＤＴのＭＩＣ中央値をＭＩＣ範囲と併せて表２５に報告する。ＢｉｓＥＤＴで観察されたＭＩＣ値は、予想どおり、ＦＩＣ試験中のチェッカーボードパネル全体で一貫していた。
【０５４８】
ＦＩＣパネルからの全試験データを生物ごとに表２８〜表８７に示す。選択分離株全体で、すべての評価薬剤と組み合わせたＢｉｓＥＤＴで観察された平均ＦＩＣＩ値を表２６にまとめている。チェッカーボードパネルの個々のＦＩＣＩ値で相乗的／拮抗的が示された場合もまた記される。
【０５４９】
コリスチン及びシプロフロキサシンを除き、ＦＩＣＩによりＢｉｓＥＤＴと他の薬剤との間で観察された大部分の相互作用は相加的／中立的であり、チェッカーボードパネル全体での平均ＦＩＣＩ値及び個々のＦＩＣＩ値は概ね０．５〜４であった。分離株のサブセットでは、ＢｉｓＥＤＴとコリスチンの間の相乗作用は平均ＦＩＣＩ値≦０．５０に基づいて観察され、それらは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの唯一のコリスチン−Ｒ（分離株８７９８）、両方のＢ．ｃｅｐａｃｉａ分離株、及びＢ．ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａの１つの分離株（分離株０５４８）であった。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの１つの株（分離株９１０８）では、ＢｉｓＥＤＴとシプロフロキサシンとの間の拮抗作用が平均ＦＩＣＩ値＞４に基づき観察された。ＢｉｓＥＤＴとシプロフロキサシンの組み合わせでは、拮抗作用を示すＦＩＣＩ値のある行がＦＩＣパネルに少なくとも１つある追加の分離株が３株あった。また、メロペネムと組み合わせたＢｉｓＥＤＴの拮抗作用を示すＦＩＣＩ値のある行が１つある、Ｂ．ｃｅｐａｃｉａの分離株も１株（分離株１７９３）あった。
【０５５０】
以上をまとめると、ＢｉｓＥＤＴと、ＣＦを治療するために使用される他の薬剤との全体的な相互作用は、コリスチンと組み合わせたＢｉｓＥＤＴの相乗作用が明らかであった選択例及びシプロフロキサシンと組み合わせたＢｉｓＥＤＴの拮抗作用が明らかであった選択例を除いては、ＣＦ病原体であるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＢ．ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘに対して相加的／中立的であった。これらの例が、これらの組み合わせの真の相乗作用または拮抗作用を示しているのか否かについては、時間−殺菌動態分析によるさらなる研究が必要である。
【表２４】
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【表２５】
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ＭＥＭ＝メロペネム、ＴＯＢ＝トブラマイシン、ＡＭＫ＝アミカシン、ＣＩＰ＝シプロフロキサシン、ＡＺＴ＝アズトレオナム、ＣＯＬ＝コリスチン、−Ｒ＝耐性、−Ｉ＝中間
１表現型は、ＣＬＳＩブレイクポイント（１）に従うかまたはコリスチン及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの場合はＥＵＣＡＳＴブレイクポイント（ｖ．８．１）に従ったＭＩＣ解釈に基づいている
Ｂ．ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘは本質的にアミノグリコシド、アズトレオナム、及びコリスチン（１）に対して耐性であることに注意
２該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
ＦＩＣ試験には灰色に網掛けされた細胞を選択した
【表２６】
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ＭＥＭ＝メロペネム、ＴＯＢ＝トブラマイシン、ＡＭＫ＝アミカシン、ＣＩＰ＝シプロフロキサシン、ＡＺＴ＝アズトレオナム、ＣＯＬ＝コリスチン、−Ｒ＝耐性、−Ｉ＝中間
１表現型は表１に示される初回ＭＩＣ試験に基づいて決定された
Ｂ．ｃｅｐａｃｉａ  ｃｏｍｐｌｅｘは本質的にアミノグリコシド、アズトレオナム、及びコリスチン（１）に対して耐性であることに注意
２ＡＴＣＣ２５９２２の場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す；ＡＴＣＣ２５９２２は併用でのチェッカーボードパネルでは試験されず、各薬剤はＱＣを目的として単剤のみで試験された
３品質管理（ＱＣ範囲は括弧内に示される）を目的として１つの複製のみ試験したＡＴＣＣ２５９２２を除いて、ＢｉｓＥＤＴのＭＩＣの結果は、６つの異なるＦＩＣパネル全体で観察されたＭＩＣ範囲と様態を表す。
【表２７】
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ＭＥＭ＝メロペネム、ＴＯＢ＝トブラマイシン、ＡＭＫ＝アミカシン、ＣＩＰ＝シプロフロキサシン、ＡＺＴ＝アズトレオナム、ＣＯＬ＝コリスチン、−Ｒ＝耐性、−Ｉ＝中間
１表現型は、表１に示される初回ＭＩＣ試験に基づいて決定された
＊＊は、試験パネルの少なくとも１つの行で個々のＦＩＣＩ値が０．５以下（相乗作用を示す）であったこと示す
＊は、試験パネルの少なくとも１つの行で個々のＦＩＣＩ値が＞４（拮抗作用を示す）であったことを示す
【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
2021533193.tif 000049
【表３４】
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【表３５】
2021533193.tif 000051
【表３６】
2021533193.tif 000052
【表３７】
2021533193.tif 000053
【表３８】
2021533193.tif 000054
【表３９】
2021533193.tif 000055
【表４０】
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【表４１】
2021533193.tif 000057
【表４２】
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【表４３】
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【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
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【表４７】
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【表４８】
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【表４９】
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【表５０】
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【表５１】
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【表５２】
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【表５３】
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【表５４】
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【表５５】
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【表５６】
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【表５７】
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【表５８】
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【表５９】
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【表６０】
2021533193.tif 000076
【表６１】
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【表６２】
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【表６３】
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【表６４】
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【表６５】
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【表６６】
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【表６７】
2021533193.tif 000083
【表６８】
2021533193.tif 000084
【表６９】
2021533193.tif 000085
【表７０】
2021533193.tif 000086
【表７１】
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【表７２】
2021533193.tif 000088
【表７３】
2021533193.tif 000089
【表７４】
2021533193.tif 000090
【表７５】
2021533193.tif 000091
【表７６】
2021533193.tif 000092
【表７７】
2021533193.tif 000093
【表７８】
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【表７９】
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【表８０】
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【表８１】
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【表８２】
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【表８３】
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【表８４】
2021533193.tif 000100
【表８５】
2021533193.tif 000101
【表８６】
2021533193.tif 000102
【表８７】
2021533193.tif 000103
【０５５１】
参考文献
１．）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ．２８ｔｈ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍ１００．ＣＬＳＩ，９５０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  ２５００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７  ＵＳＡ，２０１８．
【０５５２】
２．）ＣＬＳＩ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  Ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−１１ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＣＬＳＩ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍ０７．ＣＬＳＩ，９５０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  ２５００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７  ＵＳＡ，２０１８．
【０５５３】
３．）Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  Ｇ  ａｎｄ  Ｒ  Ｍｏｅｌｌｅｒｉｎｇ．１９９１．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ．Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｖ  Ｌｏｒｉａｎ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，ｐｐ．４３２−４９２．
【０５５４】
４．）Ｏｄｄｓ  ＦＣ．２００３．Ｓｙｎｅｒｇｙ，ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ，ａｎｄ  ｗｈａｔ  ｔｈｅ  ｃｈｅｑｕｅｒｂｏａｒｄ  ｐｕｔｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅｍ．Ｊ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ５２（１）：１．
【０５５５】
実施例１１：薬物耐性グラム陽性及びグラム陰性細菌ならびに酵母に対するビスマスチオールと比較対照薬のインビトロ活性
緒言：ＥＳＫＡＰＥ病原体（２、３）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、耐性ｇｏｎｏｃｏｃｃｉ、及びアゾール耐性Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．を含め、Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＤＣ；１）によって米国で最も薬物耐性の高い脅威として現在特定されている生物に対する３つのビスマスチオール化合物のインビトロでの活性を評価した。ビスマスチオール化合物であるＭＢ−１−Ｂ３、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６、ならびに関連する比較対照薬に対する試験分離株の感受性をＣｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ；４〜８）によるガイドラインに従って評価した。
【０５５６】
材料及び方法
被験薬剤及び比較対照薬剤：被験薬剤はアッセイされるまで室温で保存された。すべての被験薬剤を懸濁させて１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で希釈し、最終的に最終濃度０．０６〜６４μｇ／ｍＬで試験した。貯蔵液を使用前に少なくとも１時間放置して自己殺菌させた。
比較対照薬は、確立された品質管理範囲とブレイクポイントに及ぶ濃度範囲にわたり試験された。試験中に使用された比較対照化合物に関する情報を下記表８８に記載する。
【表８８】
2021533193.tif 000104
【０５５７】
被験生物：被験生物は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）からの参照株またはＭＭＸリポジトリからの臨床分離株で構成された。評価した生物のスペクトル及びそれらの対応する表現型情報を表８９〜表９５に示す。ＣＬＳＩ（４〜８）で指定されているように、関連する品質管理生物が試験の各日に含められた。試験前、分離株を適切な寒天培地に継代培養した。
【０５５８】
試験培地：試験培地は、ＣＬＳＩ（４、６、７）によるガイドラインに従って調製及び保存された。好気性細菌の微量液体希釈感受性試験は、ＣＡＭＨＢに５％（ｖ／ｖ）ウマ溶血液（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂａｔｈ，ＯＨ；ロット番号３２２７９９）を添加したｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉを除いては、陽イオン調整ミューラーヒントンブロス（ＣＡＭＨＢ；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ［ＢＤ］，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ；ロット番号６１１７９９４）を使用して実施された。１％ＩｓｏＶｉｔａｌｅＸ（ＢＤ；ロット番号５２４６８４３）が添加されたＧＣ培地ベース（ＢＤ；ロット番号４２７４６１８）からなる寒天を使用して、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅを寒天希釈により評価した。
【０５５９】
５μｇ／ｍＬのヘミン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ロット番号１０８Ｋ１０８８）、１μｇ／ｍＬのビタミンＫ１、及び５％（ｖ／ｖ）ヒツジ溶血血液（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂａｔｈ，ＯＨ；ロット番号３２２７９９）が添加されたＢｒｕｃｅｌｌａ寒天（ＢＤ／ＢＢＬ；ロット番号５２３７６９２）を使用して寒天希釈により嫌気性細菌の感受性を決定した。
【０５６０】
０．１６５ＭのＭＯＰＳ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ；ロット番号２６９４９６２）で緩衝化したＲＰＭＩ培地（ＨｙＣｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ；ロット番号ＡＺＣ１８４０４１Ｂ）で微量液体希釈法により酵母分離株の感受性を決定した。１Ｎ  ＮａＯＨで培地のｐＨを７．０に調整し、０．２μｍのＰＥＳフィルターを使用してフィルター滅菌し、使用時まで４℃で保存した。
【０５６１】
微量液体希釈ＭＩＣ試験（好気性細菌及び酵母）：好気性細菌（寒天希釈で評価したＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅを除く）及び酵母の感受性試験には本質的にＣＬＳＩ（３、４、７、８）に記載の手順に従った微量液体希釈アッセイ法が使用され、自動液体ハンドラーを使用して段階希釈び液体移送が実施された。自動液体ハンドラーは、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）及びＢｉｏｍｅｋ  ２０００（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ  ＣＡ）が含まれる。標準９６ウェル微量希釈プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９５）の列２〜列１２のウェルに１５０μｌの正しい希釈剤を充填した。これらが「母プレート」となり、ここから「娘」プレートまたは試験プレートが調製される。薬物（試験プレートで所望される最高濃度の４０倍濃度にて３００μＬ）を母プレートの列１の適切なウェルに分注した。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して「母プレート」の列１１まで２倍段階希釈を行った。列１２のウェルには薬物は含有されておらず、最終的に生物増殖の対照ウェルとして使用された。
【０５６２】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４を使用して娘プレートにウェルあたり１８５μＬの適切な試験培地を添加した。娘プレートはＢｉｏｍｅｋ  ＦＸを使用して調製され、この装置で母プレートの各ウェルから５μＬの薬物溶液が正しい娘プレートの対応するウェルに１回のステップで移された。
【０５６３】
各生物の標準化した接種物をＣＬＳＩの方法に従って調製した（３、７）。各試験分離株の分離されたコロニーを初代プレートからピッキングし、０．５マクファーランド濁度標準液と等しくなるよう懸濁液を調製した。その後、標準化された懸濁液を試験培地で１：１００に希釈した（酵母は１：１００、細菌は１：２０）。希釈後、次いで接種物懸濁液を長さ方向に分割されている滅菌リザーバー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）の区画に移し、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して全プレートに接種した。娘プレートは、薬物濃度の低いものから高いものへ順にプレートに接種されるよう逆向きにＢｉｏｍｅｋ  ２０００に置かれた。
【０５６４】
追加の１：２０の希釈用に、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００で１０μＬの標準化接種物が適切な娘プレートの各ウェルに送達された。娘プレートのウェルには最終的に、１８５μＬの適切な培地、５μＬの薬物溶液、及び１０μＬの接種物が含有され、これは、試験ウェルあたり、０．５〜２．５×１０３ＣＦＵ／ｍＬの酵母及び約５×１０５ＣＦＵ／ｍＬの細菌という最終接種物濃度に相当した。試験ウェル内のＤＭＳＯ（溶媒として使用する場合）の最終濃度は２．５％であった。
【０５６５】
プレートを４枚積み重ねて最上段のプレートに蓋をし、ビニール袋に入れ、酵母の全分離株は約２４〜４８時間、及び好気性細菌は１６〜２４時間３５℃にてインキュベートした。プレートビューアーを使用してプレートを下から見た。未接種の溶解性用対照プレートを薬物沈殿の証拠について観察した。被験薬剤及び対照化合物のＭＩＣのエンドポイントをＣＬＳＩ基準（３、７）に従って読み取った。
【０５６６】
寒天希釈によるＭＩＣ試験（嫌気性細菌及びＧｏｎｏｃｏｃｃｉ）：嫌気性細菌のＭＩＣ値を、ＣＬＳＩにより記載されているように（６）参照寒天希釈法を使用して決定した。生物を、アッセイ前にＢａｃｔｒｏｎ  ＩＩ  Ａｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｃｈａｍｂｅｒ（Ｓｈｅｌ  Ｌａｂ，Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ，ＯＲ）で３５℃にて約４８時間増殖させた。薬物希釈物及び薬物添加寒天プレートをＣＬＳＩ（６）に従って調製した。プレートを室温で１時間放置して寒天表面を乾燥させ、接種前に嫌気性チャンバーで約１時間、前還元させる。各分離株を、濁度計（Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  ＭｉｃｒｏＳｃａｎ，Ｗｅｓｔ  Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）を使用して０．５マクファーランド標準液と同等になるようＢｒｕｃｅｌｌａブロスに懸濁させた。その後、各細菌細胞懸濁液をＢｒｕｃｅｌｌａブロスで１：１０に希釈してステンレス鋼製レプリケーターブロックのウェルに移し、これを使用して試験プレートに接種した。レプリケーターのプロングにより約１〜２μｌの接種物が寒天表面に送達される。得られた接種スポットには約１×１０５ＣＦＵ／スポットが含有された。接種物が乾燥した後、接種薬物が添加された寒天プレート及び薬物不含増殖対照プレートを嫌気性チャンバーで３５℃にて４２〜４８時間インキュベートした。ＣＬＳＩガイドライン（６）に従ってＭＩＣを読み取った。
【０５６７】
Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅのＭＩＣ値を、ＣＬＳＩ（４）により記載されているように参照寒天希釈法を使用して決定した。この方法は、寒天プレートに１％ＩｓｏＶｉｔａｌｅＸ添加ＧＣ培地ベースが含有されたこと、及び接種後、プレートを好気的に５％ＣＯ２で３５℃にて２０〜２４時間インキュベートしたことを除いては、嫌気性菌用の上記の同じ寒天希釈法に従った。
【０５６８】
結果及び考察
ビスマスチオール被験薬剤であるＭＢ−１−Ｂ３、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６ならびに比較対照薬の活性を、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（表８９）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（表９０）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．（表９１）、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ（表９２）、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ（表９３）、嫌気性菌（表９４）、ならびにＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．（表９５）について以下に示す。評価されたすべての生物全体で、比較対照薬剤のＭＩＣの結果は、関連するＡＴＣＣ  ＱＣ分離株（５、８）について確立されたＣＬＳＩ  ＱＣ範囲内であった。
【０５６９】
評価したＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（表１）は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ  ＱＣ分離株、ＥＳＢＬ陽性のＥ．ｃｏｌｉとＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ＫＰＣ陽性Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ならびにＮＤＭ−１陽性のＥ．ｃｏｌｉ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、及びＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅで構成された。感受性であったＥ．ｃｏｌｉのＡＴＣＣ  ＱＣ分離株を除いては、比較対照薬の活性はこれらの分離株の薬物耐性の性質を示している。高度の薬物耐性に関係なく、評価したビスマスチオール被験薬剤はすべての分離株全体で一定の活性を有していた。ＭＢ−１−Ｂ３（ＭＩＣ値は０．５〜４μｇ／ｍＬ）及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は０．５〜２μｇ／ｍＬ）は同様の活性を有しており、この活性は典型的に、ＭＢ−２Ｂで観察された活性（ＭＩＣ値は２〜３２μｇ／ｍＬ）よりも２〜１６倍低かった。
【０５７０】
評価されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ（表９０）は、感受性Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ  ＱＣ分離株、及びメタロ−ベータ−ラクタマーゼ耐性または多剤耐性の様々な分離株で構成された。ＱＣ分離を除いては、比較対照薬の活性はこれらの分離株の薬物耐性の性質を示している。高度の薬物耐性に関係なく、評価したビスマスチオール被験薬剤はすべての分離株全体で一定の活性を有していた。ＭＢ−１−Ｂ３及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は０．５〜２μｇ／ｍＬ）は同様の活性を有しており、この活性は典型的に、ＭＢ−２Ｂで観察された活性（ＭＩＣ値は２〜１６μｇ／ｍＬ）よりも２〜３２倍低かった。
【０５７１】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．に対し（表９１）、耐性表現型（Ｓ．ａｕｒｅｕｓではＭＲＳＡ、及びＥ．ｆａｅｃａｌｉｓとＥ．ｆａｅｃｉｕｍではＶＲＥ）にかかわらず、３つのビスマスチオール被験化合物はすべて強力な活性を有していた。評価されたＭＲＳＡは、バンコマイシン及びゲンタマイシンに対し広く感受性であったが、残りの比較対照薬に対しては耐性であった。ＱＣ分離株及びＭＲＳＡ  ＭＭＸ９２０３（ＭＩＣ値はそれぞれ０．５μｇ／ｍＬ及び０．２５μｇ／ｍＬ）を除き、耐性にかかわらず、ＭＢ−１−Ｂ３及びＭＢ−６はＭＲＳＡに対するＭＩＣ値が０．０６μｇ／ｍＬ未満であり、ＭＢ−２ＢもまたＭＩＣ値が０．０６μｇ／ｍＬ未満であった。ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉに対しては、評価された比較対照薬で活性はほとんど観察されなかった。ビスマスチオール被験薬剤は活性であったが、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍに対するＭＩＣ値はバンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓの場合と比較してわずかに高かった。グラム陰性好気性分離株の場合と同様に、ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉに対し、ＭＢ−１−Ｂ３（ＭＩＣ値は０．２５〜２μｇ／ｍＬ）及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は０．２５〜１μｇ／ｍＬ）は同様の活性を有しており、この活性は典型的に、ＭＢ−２Ｂで観察された活性（ＭＩＣ値は２〜４μｇ／ｍＬ）よりも４〜８倍低かった。
【０５７２】
評価されたｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ（表９２）は、感受性Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＱＣ分離株、多剤耐性ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉ、マクロライド耐性Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、及びクリンダマイシン耐性Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅで構成された。薬物耐性の表現型に関係なく、ビスマスチオール被験薬剤ではｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉに対して活性は維持された。３つのビスマスチオール被験薬剤のうちＭＢ−１−Ｂ３及びＭＢ−６では、ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉに対するＭＩＣ値がベータ溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉの場合よりわずかに高くなる傾向があった。ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉに対し、ＭＢ−１−Ｂ３（ＭＩＣ値は０．５〜１μｇ／ｍＬ）及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は０．５〜８μｇ／ｍＬ）は同様の活性を有しており、この活性は典型的に、ＭＢ−２Ｂで観察された活性（ＭＩＣ値は１〜８μｇ／ｍＬ）よりも８〜１６倍低かった。ベータ溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉに対し、ＭＢ−１−Ｂ３（ＭＩＣ値は０．０３〜１μｇ／ｍＬ）及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は０．０３〜２μｇ／ｍＬ）は同様の活性を有しており、この活性は典型的に、ＭＢ−２Ｂで観察された活性（ＭＩＣ値は０．２５〜８μｇ／ｍＬ）よりも４〜１６倍低かった。
【０５７３】
表９３に示すように、ビスマスチオール被験薬剤は、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅの感受性ＱＣ分離株、シプロフロキサシン耐性分離株３株、及びセフトリアキソン非感受性分離株１株に対して強力な活性を有していた。同様の活性が、ＭＢ−１−Ｂ３（ＭＩＣ値は０．０６〜０．１２μｇ／ｍＬ）及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は０．０６〜０．２５μｇ／ｍＬ）で観察され、この活性は、ＭＢ−２Ｂ（ＭＩＣ値は０．１２〜０．５μｇ／ｍＬ）で観察された活性よりわずかに高かった。
【０５７４】
感受性のＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅのＱＣ分離株ならびに０２７（強毒性株）が含まれる臨床上重要な様々なリボタイプのあるＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅで構成された、評価された嫌気性菌（表９４）に対しては、ＭＢ−１−Ｂ３（ＭＩＣ値は０．２５〜２μｇ／ｍＬ）及びＭＢ−６（ＭＩＣ値は１〜４μｇ／ｍＬ）は同様の活性を有しており、この活性は典型的に、ＭＢ−２Ｂ（ＭＩＣ値は２〜１６μｇ／ｍＬ）で観察された活性よりわずかに高かった。比較対照薬であるクリンダマイシン、メトロニダゾール、及びフィダキソマイシンに対する耐性は、ビスマスチオール被験薬剤の活性に影響はないようであった。
【０５７５】
最後に、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、及びＣ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓを含め、臨床上高頻度に見られるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．のアゾール耐性分離株（表９５）に対して、ビスマスチオール被験薬剤は活性であった。被験薬剤のＭＩＣ値が高くなる傾向は、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ及びＣ．ｇｌａｂｒａｔａと比べてＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓの場合に観察された。３つのビスマスチオール被験薬剤はいずれも酵母に対して同様の活性を有しており、２４時間においてＭＩＣ値は、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ及びＣ．ｇｌａｂｒａｔａに対しては０．２５〜０．５μｇ／ｍＬ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対しては１〜４μｇ／ｍＬ、ならびにＣ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓに対しては１〜１６μｇ／ｍＬであった。
【０５７６】
以上をまとめると、本試験で評価したビスマスチオール被験薬剤の広域スペクトル活性は明らかであり、感受性ＱＣ分離株に対して観察された活性は、評価された生物または耐性表現型に関係なく、薬物耐性分離株に対して維持された。ビスマスチオール被験薬剤は、ＭＩＣ値に基づくと、ＭＲＳＡ、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、及びベータ溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉに対して最も活性であったが、グラム陰性好気性菌、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、及び酵母に対しても高度に活性であった。一般に、３つの化合物のどれも活性プロファイルが同様であった、酵母及び程度は低いもののＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅを除いて、被験薬剤のＭＢ−１−Ｂ３及びＭＢ−６はＭＩＣによる活性が同様であり、どちらもＭＢ−２Ｂより強力であった。
【表８９−１】
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【表８９−２】
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ＱＣ＝品質管理；ＥＳＢＬ＝基質特異性拡張型ベータ−ラクタマーゼ；ＫＰＣ＝Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅカルバペネマーゼ；ＮＤＭ＝ニューデリー・メタロ−ベータ−ラクタマーゼ
ＬｅｖＲ＝レボフロキサシン耐性；ＭＥＭＲ＝メロペネム耐性；ＣＡＺＲ＝セフタジジム耐性；ＧｍＲ＝ゲンタマイシン耐性
１該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
【表９０−１】
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【表９０−２】
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ＱＣ＝品質管理；ＶＩＭ／ＩＭＰ＝メタロ−ベータ−ラクタマーゼの型；ＯＸＡ＝Ｄ型の基質特異性拡張型ベータ−ラクタマーゼ；ＭＤＲ＝多剤耐性（少なくとも３つの異なるクラスの抗生物質に対する耐性に基づく）；ＬｅｖＲ＝レボフロキサシン耐性；ＣＩｐＲ＝シプロフロキサシン耐性；ＭＥＭＩ＝メロペネム中間耐性；ＭＥＭＲ＝メロペネム耐性；ＣＡＺＲ＝セフタジジム耐性；ＣＡＺＩ＝セフタジジム中間耐性；ＣＡＺＲ＝ゲンタマイシン耐性；ＧｍＩ＝ゲンタマイシン中間耐性。
１該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
【表９１−１】
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【表９１−２】
2021533193.tif 000110
ＱＣ＝品質管理；ＭＳＳＡ＝メチシリン感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ；ＭＲＳＡ＝メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ；ＶＲＥ＝バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ；ｖａｎＡ＝ｖａｎＡ型ＶＲＥ（バンコマイシン耐性及びテイコプラニン耐性の表現型に基づく）；ＬｅｖＲ＝レボフロキサシン耐性；ＣｉｐＲ＝シプロフロキサシン耐性；ＣＣＲ＝クリンダマイシン耐性；ＥｒｙＲ＝エリスロマイシン耐性；ＯｘＲ＝オキサシリン耐性
１該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
２ＭＲＳＡにはセフタジジム及びメロペネムのブレイクポイントがなく、耐性が推定される。
【表９２−１】
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【表９２−２】
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ＱＣ＝品質管理；Ｔｒｉｍｅｔｈ＝トリメトプリム；Ｓｕｌｆａ＝スルファメトキサゾール；ＭＤＲ＝多剤耐性（少なくとも３つの異なるクラスの抗生物質に対する耐性に基づく）；
ＥｒｙＲ＝エリスロマイシン耐性；ＣＣＲ＝クリンダマイシン耐性；ＳＸＴＲ＝トリメトプリム／スルファメトキサゾール耐性；ＭＥＭＲ＝メロペネム耐性；
ＰｅｎＲ＝ペニシリン耐性
１該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
【表９３】
2021533193.tif 000113
ＱＣ＝品質管理；ＣｉｐＲ＝シプロフロキサシン耐性；ＣＴＸ  ＮＳ＝セフトリアキソン非感受性
１該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
【表９４】
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ＱＣ＝品質管理；ＣＣＩ＝クリンダマイシン中間耐性；ＣＣＲ＝クリンダマイシン耐性；ＭＥＴＲ＝メトロニダゾール耐性
１該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
【表９５】
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ＱＣ＝品質管理；ＦＬＵＲ＝フルコナゾール耐性
１インキュベーションの２４時間後及び４８時間後に報告されたＭＩＣ
２該当する場合にＣＬＳＩ  ＱＣ範囲を括弧内に示す
【０５７７】
参考文献
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３．）Ｒｉｃｅ  ＬＢ．Ｆｅｄｅｒａｌ  ｆｕｎｄｉｎｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ：ｎｏ  ＥＳＫＡＰＥ．Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２００８；１９７：１０７９−１０８１．
４．）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  Ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｔｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ０７−Ａ１０．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１５．
５．）ＣＬＳＩ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ；Ｔｗｅｎｔｙ−Ｓｉｘｔｈ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．ＣＬＳＩ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ１００−Ｓ２６．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７  ＵＳＡ，２０１６．
６．）ＣＬＳＩ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉａ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＣＬＳＩ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ１１−Ａ８．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１２．
２．）ＣＬＳＩ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｂｒｏｔｈ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＣＬＳＩ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ２７−Ａ３．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２００８．
８．）ＣＬＳＩ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｂｒｏｔｈ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ；Ｆｏｕｒｔｈ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．ＣＬＳＩ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ２７−Ｓ４．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１２．
【０５７８】
実施例１２：バンコマイシン低感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ及びβ−ラクタマーゼ産生グラム陰性菌に対する３つのビスマスチオールの感受性試験
緒言
ＢｉｓＥＤＴ及び２つの追加のビスマスチオール治験薬剤（ＭＢ−２Ｂ及びＭＢ−６）のインビトロでの活性を、基質特異性拡張型β−ラクタマーゼ（ＥＳＢＬ）及び／またはカルバペネム耐性が明らかにされているＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉの分離株について決定した。さらに、バンコマイシン低感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＶＩＳＡ）を評価した。現在の試験で試験した大部分の分離株は、少なくとも３つの異なる抗生物質クラスに対する耐性により定義される多剤耐性（ＭＤＲ）であった。治験化合物及び関連する比較対照薬に対する感受性を、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによるガイドライン（ＣＬＳＩ；２，３）に従って実施した微量液体希釈法により決定した。
【０５７９】
材料及び方法
被験化合物：被験薬剤であるＢｉｓＥＤＴ（ＭＢ−１−Ｂ３；ロット番号ＥＤ２６８−１−１１−０１）、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６は、アッセイされるまで暗所で室温にて保存された。被験薬剤の溶媒及び希釈剤はＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ロット番号ＳＨＢＢ９３１９Ｖ）であり、調製した貯蔵濃度は６，４６４μｇ／ｍＬ（最終試験濃度の１０１倍）であった。
比較対照薬が供給され、以下の表９６に示す。
【表９６】
2021533193.tif 000116
【０５８０】
被験化合物を０．０６〜６４μｇ／ｍＬの濃度範囲で評価した。グラム陰性試験分離株では、アミカシン及びセフタジジム（単独及びクラブラン酸塩と共に４μｇ／ｍＬの固定濃度にて）を０．０６〜６４μｇ／ｍＬの濃度範囲にわたり評価し、メロペネム及びレボフロキサシンを０．００８〜８μｇ／ｍＬの濃度範囲にわたり評価した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓの試験では、クリンダマイシン、ダプトマイシン、レボフロキサシン及びバンコマイシンを０．００８〜８μｇ／ｍＬの濃度範囲で評価し、リネゾリドを０．０３〜３２μｇ／ｍＬで試験した。
【０５８１】
生物：被験生物は、表９７〜表１０１に示すように、Ｍｉｃｒｏｍｙｘ（ＭＭＸ）リポジトリからの臨床分離株、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＮＣＴＣ；Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｎｇｌａｎｄ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，ＵＫ）、Ｎｅｔｗｏｒｋ  ｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＮＡＲＳＡ；ＢＥＩ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）及びｔｈｅ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＣＤＣ；Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ）からの参照株から構成される。被験生物を−８０℃で凍結維持した。試験前、分離株を、トリプティックソイ寒天に５％ヒツジ血液を加えて（ＢＡＰ；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ［ＢＤ］／ＢＢＬ；Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ；ロット番号９０８０６５０及び９１０８５６３）で３５℃にて培養した。ＣＬＳＩガイドライン（３）に従って、関連するＡＴＣＣ品質管理（ＱＣ）生物（表１０２）が試験中に含まれた。分離株の遺伝子特性解析に関するさらなる詳細は、利用可能な場合、表１０３に見出すことができる。
【０５８２】
培地：陽イオン調整ミューラーヒントンブロス（ＣＡＭＨＢ；ＢＤ；ロット番号８１９０５８６）を試験用培地として使用した（２、３）。ダプトマイシンの試験では、カルシウムが２５ｍｇ／ｍＬ  Ｃａ２＋で添加され、最終濃度は５０ｍｇ／ｍＬ  Ｃａ２＋になった（２、３）。
【０５８３】
ＭＩＣアッセイ手順：ＣＬＳＩにより記載されている微量液体希釈法の手法を使用してＭＩＣ値を決定した（２、３）。自動液体ハンドラー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ；Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００及びＢｉｏｍｅｋ  ＦＸ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ  ＣＡ）を使用して段階希釈及び液体移送を行った。
【０５８４】
複製娘プレートのための薬物の段階希釈を得ることになる薬物母プレートを調製するため、標準９６ウェル微量希釈プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９５）の列２から列１２までのウェルに、薬物の各行について１５０μｌの適切な希釈剤を充填した。被験物質及び比較対照化合物（試験される最高濃度の１０１倍にて３００μｌ）を列１の適切なウェルに分注した。その後、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して、母プレートで列１から列１１まで２倍段階希釈を行った。列１２のウェルには薬物は含有されておらず、アッセイの生物増殖対照ウェルとして使用された。
【０５８５】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４を使用して娘プレートにウェルあたり１９０μＬのＲＰＭＩを添加した。試験パネルはＢｉｏｍｅｋ  ＦＸ装置で調製され、この装置で母プレートの各ウェルから２μＬの薬物溶液が各娘プレートの対応するウェルに１回のステップで移された。
【０５８６】
各被験生物の標準化された接種物をＣＬＳＩの方法に従って０．５マクファーランド標準液と等しくなるよう調製し、次いで、１：２０に希釈した。その後、プレートに１０μＬの希釈接種物を、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して薬物濃度の低いものから高いものへ順に接種し、最終濃度は約５×１０５ＣＦＵ／ｍＬになった。
【０５８７】
プレートを３〜４枚積み重ねて最上段のプレートに蓋をし、ビニール袋に入れ、３５℃で１６〜２０時間インキュベートした（バンコマイシンは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓについて２４時間のインキュベーション時間後に読み取られた）。ＭＩＣを、生物の目に見える増殖を阻害する薬物最低濃度として記録した。
【０５８８】
結果及び考察
表１０２に示すように、ＢｉｓＥＤＴ及び比較対照薬での結果は、関連するＡＴＣＣ  ＱＣ分離株に対してはＣＬＳＩで確立されたＱＣ範囲内であったため、試験中に実施された感受性試験が検証された。
【０５８９】
耐性グラム陰性桿菌に対するＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６の活性を種ごとに表９７〜表１００に示す。ＢｉｓＥＤＴは、ＭＩＣが４μｇ／ｍＬであったＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＣＤＣ２４１）の分離株１株（表９９）、及びＭＩＣ値が４〜８μｇ／ｍＬであったＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのいくつかの分離株（表９８）を除いては、分離株全体で０．５〜２μｇ／ｍＬというＭＩＣ値の強力な活性を維持した。
ＢｉｓＥＤＴの活性は、β−ラクタマーゼ産生またはアミノグリコシド系（アミカシンではＭＩＣ≧６４μｇ／ｍＬ）、フルオロキノロン系（レボフロキサシンではＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉでのＭＩＣはそれぞれ、≧２、≧４、及び８≧６４）に対する耐性の影響を受けなかった。
【０５９０】
全体として、ＭＢ−６は、ＭＩＣ値がＢｉｓＥＤＴで観察されたものと同一であるかまたは２倍以内であったが、例外として、ＭＢ−６のＭＩＣ値がＢｉｓＥＤＴのものよりも低かった選択Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが含まれる。ＢｉｓＥＤＴ及びＭＢ−６の活性は、特にＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａとＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉでは、ＭＢ−２Ｂのものより高かった。グラム陰性桿菌に対してＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ及びＭＢ−６で観察されたＭＩＣ値は、以前の研究で観察されたもの（１、４）と同等であった。
【０５９１】
ＶＩＳＡに対するＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６の活性を表１０１に示す。ＢｉｓＥＤＴは、これらの分離株に対して強力なＭＩＣ値≦０．０６〜０．２５μｇ／ｍＬを有していた。グラム陰性桿菌の場合と同様、ＢｉｓＥＤＴの活性は、ＭＢ−６で観察されたものと同等であり、ＭＢ−２Ｂで観察されたのものより高かった。注目すべきことに、ＮＡＲＳＡからのＶＩＳＡ分離株のうちの２株（ＮＲＳの１３と２７）は、バンコマイシンのＭＩＣ値が２μｇ／ｍＬであり、これは、本試験での試験中にそれらの株がバンコマイシン感受性として試験されたことが示された。バンコマイシンのＭＩＣ値が感受性範囲にある他の２つの分離株（ＮＲＳの２と２４）は、バンコマイシンＭＩＣ値が変動することが既知のヘテロＶＩＳＡ（ｈＶＩＳＡ）である。レボフロキサシン及びクリンダマイシンに対する耐性（ＭＩＣ値≧４μｇ／ｍＬ）はＮＲＳ１３以外の全分離株で観察され、ＢｉｓＥＤＴの活性には影響を与えなかった。分離株のうち２株はまた、ダプトマイシン（ＮＲＳの１３と２２）に対して非感受性であり、すべての株がリネゾリドに対して感受性であった（ＭＩＣ値≦４μｇ／ｍＬ）。本試験においてＢｉｓＥＤＴで観察された活性は、以前に観察されたものと同等であった（１、４）。
【０５９２】
以上をまとめると、ＢｉｓＥＤＴは、大部分がＭＤＲである、遺伝子特性が明らかにされているβ−ラクタム耐性グラム陰性桿菌、及びＶＩＳＡの参照分離株に対して強力な活性を示した。ＢｉｓＥＤＴの活性は、β−ラクタムまたは本試験で評価した他の任意のクラスに対する耐性による影響を受けなかった。最後に、ＢｉｓＥＤＴ及びＭＢ−６の活性は、評価された細菌に対して同等であり、ＭＢ−２Ｂで観察されたものを超えていた。
【表９７】
2021533193.tif 000117
ＡＴＣＣ＝Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＭＭＸ＝Ｍｉｃｒｏｍｙｘ、ＣＤＣ＝Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、
ＥＳＢＬ＝基質特異性拡張型β−ラクタマーゼ、ＫＰＣ＝Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅカルバペネマーゼ、ＮＤＭ＝ニューデリー・メタロ−β−ラクタマーゼ、
ＣＡＺ＝セフタジジム、ＣＬＡＶ＝クラブラン酸塩、ＭＥＭ＝メロペネム、ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＡＭＫ＝アミカシン
【表９８】
2021533193.tif 000118
ＡＴＣＣ＝Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＭＭＸ＝Ｍｉｃｒｏｍｙｘ、ＣＤＣ＝Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、
ＥＳＢＬ＝基質特異性拡張型β−ラクタマーゼ、ＫＰＣ＝Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅカルバペネマーゼ、ＮＤＭ＝ニューデリー・メタロ−β−ラクタマーゼ、
ＶＩＭ＝メタロ−β−ラクタマーゼ、ＯＸＡ＝クラスＤカルバペネマーゼ、ＣＡＺ＝セフタジジム、ＣＬＡＶ＝クラブラン酸塩、ＭＥＭ＝メロペネム、
ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＡＭＫ＝アミカシン
【表９９】
2021533193.tif 000119
ＣＤＣ＝Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、ＫＰＣ＝Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅカルバペネマーゼ、ＮＤＭ＝ニューデリー・メタロ−β−ラクタマーゼ、
ＩＭＰ＝メタロ−β−ラクタマーゼ、ＶＩＭ＝メタロ−β−ラクタマーゼ、ＯＸＡ＝クラスＤカルバペネマーゼ、ＡｍｐＣ＝クラスＣセファロスポリナーゼ、
ＣＡＺ＝セフタジジム、ＣＬＡＶ＝クラブラン酸塩、ＭＥＭ＝メロペネム、ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＡＭＫ＝アミカシン
【表１００】
2021533193.tif 000120
ＮＣＴＣ＝Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ、ＣＤＣ＝Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、ＥＳＢＬ＝基質特異性拡張型β−ラクタマーゼ、
ＯＸＡ＝クラスＤカルバペネマーゼ、ＣＡＺ＝セフタジジム、ＣＬＡＶ＝クラブラン酸塩、ＭＥＭ＝メロペネム、ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＡＭＫ＝アミカシン
【表１０１】
2021533193.tif 000121
ＮＲＳ＝Ｎｅｔｗｏｒｋ  ｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＭＭＸ＝Ｍｉｃｒｏｍｙｘ、
ＶＩＳＡ＝バンコマイシン低感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、ｈＶＩＳＡ＝不均一バンコマイシン低感受性Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ、ＶＡＮ＝バンコマイシン、ＤＡＰ＝ダプトマイシン、ＣＬＩ＝クリンダマイシン、ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＬＺＤ＝リネゾリド
【表１０２】
2021533193.tif 000122
ＡＴＣＣ＝Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＣＡＺ＝セフタジジム、ＣＬＡＶ＝クラブラン酸塩、ＭＥＭ＝メロペネム、ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＡＭＫ＝アミカシン、ＶＡＮ＝バンコマイシン、ＤＡＰ＝ダプトマイシン、ＣＬＩ＝クリンダマイシン、ＬＶＸ＝レボフロキサシン、ＬＺＤ＝リネゾリド  ＱＣ範囲は括弧内
【表１０３−１】
2021533193.tif 000123
【表１０３−２】
2021533193.tif 000124
【０５９３】
参考文献
１．）Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｅ，Ｗｏｌｆｅ  Ｃ，Ｐｉｌｌａｒ  Ｃ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｓｍｕｔｈ  Ｔｈｉｏｌｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒａｔｏｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｇｒａｍ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  −ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ａｎｄ  Ｙｅａｓｔ．Ｆｉｎａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ０８−２４−２０１６−  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｎ  ２２．Ｍｉｃｒｏｍｙｘ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，ＭＩ．２０１６．
２．）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  Ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；１１ｔｈ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍ０７．ＣＬＳＩ，９５０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  ２５００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７  ＵＳＡ，２０１８．
３．）ＣＬＳＩ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ；２９ｔｈ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍ１００．ＣＬＳＩ，９５０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  ２５００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７  ＵＳＡ，２０１９．
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【０５９４】
実施例１３：酵母（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．）及びカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）に対する３つの被験化合物の感受性試験
緒言
ＢｉｓＥＤＴ及び２つの追加のビスマスチオール治験薬剤（ＭＢ−２Ｂ及びＭＢ−６）のインビトロでの活性を、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、及びＣ．ａｕｒｉｓ）及びＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．（Ａ．ｎｉｇｅｒ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ及びＡ．ｆｌａｖｕｓ）について決定した。比較対照薬には、アムホテリシンＢ、フルコナゾール、ボリコナゾール、カスポファンギン及びミカファンギンが含まれた。感受性は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによるガイドライン（ＣＬＳＩ；２，３）に従って行った微量液体希釈法によって決定された。
【０５９５】
材料及び方法
被験化合物：被験薬剤であるＢｉｓＥＤＴ（ＭＢ−１−Ｂ３；ロット番号ＥＤ２６８−１−１１−０１）、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６は輸送され、アッセイされるまで暗所で室温にて保存された。被験薬剤の溶媒及び希釈剤はＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ロット番号ＳＨＢＢ９３１９Ｖ）であり、調製した貯蔵濃度は６，４６４μｇ／ｍＬ（酵母及び真菌での最終試験濃度の１０１倍）であった。比較対照薬を以下の表１０４に示す。
【表１０４】
2021533193.tif 000125
【０５９６】
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｎ被験化合物、アムホテリシンＢ、及びフルコナゾールを酵母及びカビについて０．０６〜６４μｇ／ｍＬの濃度範囲にわたり評価した。カスポファンギン、ミカファンギン、及びボリコナゾールは０．００８〜８μｇ／ｍＬが試験された。
【０５９７】
生物：被験生物は、Ｍｉｃｒｏｍｙｘ（ＭＭＸ）リポジトリからの臨床分離株及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）からの参照株で構成された。被験生物を−８０℃で凍結維持した。試験前、酵母をサブローデキストロース寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ；ロット番号９０３２６２５、９０７４６７２）で３５℃にて継代培養した。カビは、Ｍｉｃｒｏｍｙｘにて以前に調製された真菌ストック一覧から入手し、使用するまで０．１％Ｔｗｅｅｎ生理食塩水に４℃で保存した。Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ  ＡＴＣＣ６２５８、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ  ＡＴＣＣ２２０１９、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＡＴＣＣ  ＭＹＡ−３６２６、及びＡ．ｆｌａｖｕｓ  ＡＴＣＣ２０４３０４が品質管理を目的として（４、５）含まれた。
【０５９８】
培地：酵母及びカビの分離株の試験に使用した培地は、Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製ＲＰＭＩ  １６４０（Ｌｏｇａｎ，ＵＴ；ロット番号ＡＣ１０２５７９６６Ａ）をＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製ＭＯＰＳ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ；ロット番号３１７３５８８）で緩衝化したものであった（２、３）。
【０５９９】
ＭＩＣアッセイ手順：ＣＬＳＩにより記載されている微量液体希釈法の手法を使用してＭＩＣ値を決定した（２、３）。自動液体ハンドラー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ；Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００及びＢｉｏｍｅｋ  ＦＸ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ  ＣＡ）を使用して段階希釈及び液体移送を行った。
【０６００】
複製娘プレートのための薬物の段階希釈を得ることになる薬物母プレートを調製するため、標準９６ウェル微量希釈プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９５）の列２から列１２までのウェルに、薬物の各行について１５０μｌのＤＭＳＯを充填した。被験物質及び比較対照化合物（試験される最高濃度の１０１倍にて３００μｌ）を列１の適切なウェルに分注した。その後、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用して、母プレートで列１から列１１まで２倍段階希釈を行った。列１２のウェルには薬物は含有されておらず、アッセイの生物増殖対照ウェルとして使用された。
【０６０１】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４を使用して娘プレートにウェルあたり１９０μＬのＲＰＭＩを添加した。娘プレートは、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸ装置で調製され、この装置で母プレートの各ウェルから２μＬの薬物溶液が各娘プレートの対応するウェルに１回のステップで移された。
【０６０２】
各生物の標準化した接種物をＣＬＳＩの方法に従って調製した（２、３）。酵母では、コロニーを画線プレートからピッキングし、０．５マクファーランド標準液と等しくなるよう生理食塩水に懸濁液を調製した。この懸濁液をＲＰＭＩで１：１００に希釈し、アッセイでは、最終濃度は約０．５〜２．５×１０３ＣＦＵ／ｍＬになった。カビでは、各Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．分離株の胞子懸濁液から以前に決定された胞子数（ＣＦＵ／ｍＬ）に基づいて、アッセイで約０．２〜２．５×１０４ＣＦＵ／ｍＬの最終濃度が達成されるよう、懸濁液をＲＰＭＩで希釈した。各生物ごとの接種物を、長さ方向に分割されている滅菌リザーバー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）に分注し、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００を使用してプレートに接種した。娘プレートは、薬物濃度の低いものから高いものへ順に接種が行われるようＢｉｏｍｅｋ  ２０００の作業面に逆向きに置かれた。Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００で１０μＬの標準化接種物が各ウェルに送達された。ＤＭＳＯは、最終濃度１％で試験ウェルに存在した。
【０６０３】
プレートを４枚積み重ねて最上段のプレートに蓋をし、ビニール袋に入れ、３５℃でインキュベートした。Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．及びＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ分離株を、インキュベーション２４時間後、及び再度４８時間後に読み取った。
【０６０４】
プレートビューアーを使用してマイクロプレートを下から見た。各母プレートでは、未接種の溶解性用対照プレートを薬物沈殿の証拠について観察した。酵母の場合、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｎ被験物質、アムホテリシンＢ、及びボリコナゾールでは、生物の目に見える増殖を完全に阻害する薬物最低濃度としてＭＩＣ０が報告され、また、すべてのＭｉｃｒｏｂｉｏｎ被験物質、ミカファンギン、カスポファンギン、及びフルコナゾールでは、増殖対照に対して５０％阻害を示した最低濃度は、ＭＩＣ２として報告された。カビの場合、ＭＩＣ値は、目に見える増殖が阻害された最低濃度として報告され、最小有効濃度（ＭＥＣ）は、カスポファンギン、ミカファンギン及びＭｉｃｒｏｂｉｏｎ被験薬剤の場合に、増殖対照ウェルにおいて培地全体に見られた菌糸成長と比較して、ウェルの下層で増殖が小さく丸いコンパクトな菌糸形にシフトした最低濃度として報告された。ＭＥＣは観察された場合にのみ報告された。
【０６０５】
結果及び考察
表１１０に示すように、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ  ＡＴＣＣ６２５８に対する４８時間におけるアムホテリシンＢを除いては、ＢｉｓＥＤＴ及び比較対照薬での結果は、関連するＡＴＣＣ  ＱＣ分離株に対し、ＣＬＳＩで確立されたＱＣ範囲内であった。この場合、アムホテリシンＢは、同じ分離株では２４時間においてＱＣ範囲内であり、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ  ＡＴＣＣ２２０１９、Ａ．ｆｌａｖｕｓ  ＡＴＣＣ２０４３０４、及びＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＭＹＡ−３６２６では４８時間においてＱＣ範囲内であった。これらの結果から試験中に行われる感受性試験が検証される。
【０６０６】
酵母に対するＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６の活性を種ごとに表１０５〜表１０８に示す。ＢｉｓＥＤＴは、強力な活性を維持し、種全体で０．２５〜１μｇ／ｍＬの５０％阻害（ＭＩＣ２値）が観察され、ＭＩＣ０値が１〜８μｇ／ｍＬであったＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを除く全種で０．５〜２μｇ／ｍＬの１００％阻害（ＭＩＣ０値）が観察された。ＢｉｓＥＤＴの活性は、抗真菌剤のエキノカンジンまたはアゾールに対する耐性による影響を受けておらず、特に、多剤耐性及びアゾール耐性が特に問題となるＣ．ａｕｒｉｓに対して維持された（６）。ＭＢ−２Ｂ及びＭＢ−６の活性はＢｉｓＥＤＴの活性と同様であり、ＭＩＣ値は、ＢｉｓＥＤＴと同一であるかまたは２倍以内であった。酵母に対してＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６で観察されたＭＩＣ値は、以前の研究で観察されたものと同等であった（１）。
【０６０７】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．に対するＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６の活性を表１０９に示す。全体として、ＢｉｓＥＤＴでは、２４時間において完全阻害という結果が得られ、ほとんどの分離株でＭＩＣ０値が２〜８μｇ／ｍＬであった。しかしながら、Ａ．ｆｌａｖｕｓ  ＭＭＸ７９３５では完全阻害は観察されず（ＭＩＣ０＞６４μｇ／ｍＬ）、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ  ＭＭＸ８２２９に対して０．５μｇ／ｍＬのＭＩＣ０が観察された。インキュベーションの４８時間後、ＢｉｓＥＤＴによる完全阻害は、試験分離株全体でさほど観察されなかったが、ＭＩＣ０値が明らかではない場合、ＭＥＣ値が明らかであり、これらの値は典型的に２４時間において報告されたＭＩＣ０値と一致していた。酵母の場合と同様、ＢｉｓＥＤＴの活性は、ＭＢ−２Ｂ及びＭＢ−６で観察されたものと同等であった。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．に対して比較対照薬全体で観察された活性は典型的に、予想どおり不活性であったフルコナゾールを除いては、ＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６よりも強力であった。
【０６０８】
以上をまとめると、ＢｉｓＥＤＴは、治療困難であることが周知のＣ．ａｕｒｉｓを含むＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．、及びＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．の両方に対して強力な活性を示した。酵母に対するＢｉｓＥＤＴの活性は、アゾール耐性またはエキノカンジン耐性による影響を受けなかった。最後に、評価された酵母及びカビに対し、ＢｉｓＥＤＴ、ＭＢ−２Ｂ、及びＭＢ−６の活性は同等であった。
【表１０５】
2021533193.tif 000126
ＭＩＣ２＝５０％阻害、ＭＩＣ０＝完全阻害、ＡＭＰＢ＝アンホテリシンＢ、ＦＬＵ＝フルコナゾール、ＶＯＲＩ＝ボリコナゾール、
ＣＡＳＰ＝カスポファンギン、ＭＩＣＡ＝ミカファンギン、Ｉ＝中間、Ｒ＝耐性
ａ５０％阻害エンドポイントを決定するには２４時間での増殖が不十分だったため、インキュベーション４８時間後の結果を報告
＊酵母ではＡＭＰ  ＢのＣＬＳＩブレイクポイントはない（４）
【表１０６】
2021533193.tif 000127
ＭＩＣ２＝５０％阻害、ＭＩＣ０＝完全阻害、ＡＭＰ  Ｂ＝アムホテリシンＢ、ＦＬＵ＝フルコナゾール、ＶＯＲＩ＝ボリコナゾール、ＣＡＳＰ＝カスポファンギン、ＭＩＣＡ＝ミカファンギン、Ｉ＝中間、Ｒ＝耐性
＊酵母ではＡＭＰ  ＢのＣＬＳＩブレイクポイントはなく、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａではＶＯＲＩブレイクポイントはない（４）
【表１０７】
2021533193.tif 000128
ＭＩＣ２＝５０％阻害、ＭＩＣ０＝完全阻害、ＡＭＰ  Ｂ＝アムホテリシンＢ、ＦＬＵ＝フルコナゾール、ＶＯＲＩ＝ボリコナゾール、ＣＡＳＰ＝カスポファンギン、ＭＩＣＡ＝ミカファンギン、Ｉ＝中間、Ｒ＝耐性
＊酵母ではＡＭＰ  ＢのＣＬＳＩブレイクポイントはなく、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉではＦＬＵブレイクポイントはない（４）
【表１０８】
2021533193.tif 000129
ＭＩＣ２＝５０％阻害、ＭＩＣ０＝完全阻害、ＡＭＰ  Ｂ＝アムホテリシンＢ、ＦＬＵ＝フルコナゾール、ＶＯＲＩ＝ボリコナゾール、ＣＡＳＰ＝カスポファンギン、ＭＩＣＡ＝ミカファンギン、アゾール−Ｒ＝アゾール耐性、ＮＤ＝不検出（明らかなＭＩＣ２なし）
ａ５０％阻害エンドポイントを決定するには２４時間での増殖が不十分だったため、インキュベーション４８時間後の結果を報告
ｂ観察されたイーグル効果（ＭＩＣ２エンドポイントは明確であるが、より高い試験濃度で再増殖し、誘導耐性またはインビトロでの化合物沈殿による可能性が高い）
ｃＬｏｃｋｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７（６）により公開されているブレイクポイントに基づく；Ｃ．ａｕｒｉｓのＣＬＳＩブレイクポイントは確立されていない
【表１０９】
2021533193.tif 000130
ＭＩＣ０＝完全阻害、ＭＥＣ＝最小有効濃度、ＡＭＰＢ＝アンホテリシンＢ、ＦＬＵ＝フルコナゾール、ＶＯＲＩ＝ボリコナゾール、ＣＡＳＰ＝カスポファンギン、ＭＩＣＡ＝ミカファンギン
ａ４８時間において示された結果はＭＥＣであり、この時点での完全阻害（ＭＩＣ０）は観察されなかった
ｂ４８時間での結果のみを報告、２４時間での読み取りには増殖不十分であった
＊Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．のＣＬＳＩブレイクポイントはない（５）
【表１１０−１】
2021533193.tif 000131
【表１１０−２】
2021533193.tif 000132
【０６０９】
参考文献：
１．）Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｅ，Ｗｏｌｆｅ  Ｃ，Ｐｉｌｌａｒ  Ｃ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｓｍｕｔｈ  Ｔｈｉｏｌｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒａｔｏｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｇｒａｍ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  −ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ａｎｄ  Ｙｅａｓｔ．Ｆｉｎａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ０８−２４−２０１６−  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｎ  ２２．Ｍｉｃｒｏｍｙｘ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，ＭＩ．２０１６．
２．）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｂｒｏｔｈ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ．４ｔｈ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍ２７．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１７．
３．）ＣＬＳＩ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｂｒｏｔｈ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  Ｆｕｎｇｉ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ．３ｒｄ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍ３８．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１７．
４．）ＣＬＳＩ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ．１ｓｔ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍ６０．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１７．
５．）ＣＬＳＩ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  Ｆｕｎｇｉ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ．１ｓｔ  ｅｄ．ＣＬＳＩ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍ６１．ＣＬＳＩ，９４０  Ｗｅｓｔ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ  １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９０８７−１８９８  ＵＳＡ，２０１７．
６．）Ｌｏｃｋｈａｒｔ  ＳＲ，Ｅｔｉｅｎｎｅ  ＫＡ，Ｖａｌｌａｂｈａｎｅｎｉ  Ｓ，Ｆａｒｏｏｑｉ  Ｊ，Ｃｈｏｗｄｈａｒｙ  Ａ，Ｇｏｖｅｎｄｅｒ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｃａｎｄｉｄａ  ａｕｒｉｓ  ｏｎ  ３  Ｃｏｎｔｉｎｅｎｔｓ  Ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ  ｂｙ  Ｗｈｏｌｅ−Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ．Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２０１７；６４：１３４−１４０．
【０６１０】
実施例１４：ＢｉｓＥＤＴの粒度分布に対する処理条件に関する試験
反応温度及び１，２エタンジチオール添加の速度の慎重な制御が、ＢｉｓＥＤＴの粒度分布に対して顕著な影響を与えることが観察された。２０℃にて１，２−エタンをシリンジポンプにより１．２５時間添加して合成されたＢｉｓＥＤＴ、及び１５℃にて１，２−エタンをシリンジポンプにより１時間添加して合成されたＢｉｓＥＤｔの代表的合成を以下に示す。以下の表１１１は、粒度分布において、温度条件は重要な役割を果たし、２０〜３０℃の範囲の処理温度の場合、粒径が小さく、かつ均一な（２ミクロン未満のＤ９０等）ＢｉｓＥＤＴ粒度分布を得られることを示す。
【０６１１】
２０℃にてチオールをシリンジポンプにより１．２５時間添加してポリプロピレン布で濾過する、ＢｉｓＥＤＴの代表的合成  ＢｉｓＥＤＴ合成は１０ｇスケールで実施された。１Ｌのジャケット付きリアクターにＵＳＰ水（４８０ｍＬ、４８ｖｏｌ）を投入し、次いで、７０％ＨＮＯ３（３４ｍＬ、３．４ｖｏｌ）を投入した。次硝酸ビスマス（１０ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）の水溶液（４３ｍＬ、４．３ｖｏｌ）及び７０％ＨＮＯ３（１４ｍＬ、１．４ｖｏｌ）を２０℃で加えた。反応混合物を１５℃に冷却して、９５％エタノールを加えた。その後、９５％エタノール（１８０ｍＬ、１８ｖｏｌ）をゆっくりと加えた。（エタノール添加は放熱性であり、温度は２２℃に達した）。その後、温度を調整して２０℃に戻した。この後、１，２エタンジチオール（９４ｍＬ、９．４ｖｏｌの９５％エタノール中４．３ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）の滴加を、バッチ温度を２０℃にして１．２５時間の時間をかけて行い、この間に、黄色懸濁液に変わった。反応物を２０℃で一夜撹拌した。反応混合物をポリプロピレン布に通して濾過し、９５％エタノール（４５ｍＬ、４．５ｖｏｌ）で洗浄した。ウェットケーキをリアクターに戻し入れ、９５％エタノール（３８０ｍＬ、３８ｖｏｌ）中で２０℃にて２時間スラリー状にした。その後、懸濁液を濾過（同じ布）し、９５％エタノール（３０ｍＬ、３ｖｏｌ）で洗浄した。ウェットケーキを９５％ＥｔＯＨ（１７０ｍＬ、１７ｖｏｌ）中で２０℃にて再びスラリー状にして濾過（同じ布）し、９５％エタノール（３０ｍＬ、３ｖｏｌ）で洗浄した。その後、ウェットケーキをアセトン（１７０ｍＬ、１７ｖｏｌ）中で２０℃にて一夜スラリー状にし、その後、濾過（同じ布）及びアセトン洗浄（２０ｍＬ、２ｖｏｌ）を行った。アセトン（１７０ｍｌ、１７ｖｏｌ）処理を固形物に繰り返し、２時間撹拌した。懸濁液を濾過（同じ布）してアセトン（３０ｍＬ、３ｖｏｌ）で洗浄し、４５℃で止め、４５℃で乾燥（１８時間）させて、カナリヤイエローの固体（１０．８１ｇ９１．０％）を得た。
【０６１２】
１５℃にてチオールをシリンジポンプにより１時間添加してポリプロピレン布で濾過する、ＢｉｓＥＤＴの代表的合成：ＢｉｓＥＤＴ合成を１０ｇスケールで実施し、温度プロファイルをデータロガーで検討した。エタンジチオールをシリンジポンプにより１５℃で１時間かけて加え、ＰＰ濾布を使用して濾過を実施した。１Ｌのジャケット付きリアクターにＵＳＰ水（４８０ｍＬ、４８ｖｏｌ）を投入して１５℃に冷却し、次いで、７０％ＨＮＯ３（３４ｍＬ、３．４ｖｏｌ）を投入した。次硝酸ビスマス（１０ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）の水溶液（４３ｍＬ、４．３ｖｏｌ）及び７０％ＨＮＯ３（１４ｍＬ、１．４ｖｏｌ）を同じ温度で加えた。その後、９５％エタノール（１８０ｍＬ、１８ｖｏｌ）をゆっくりと加えた。（エタノール添加は放熱性であり、温度は２２．５℃に達した）。その後、それを１５℃に冷却させた。この後、１，２エタンジチオール（９４ｍＬ、９．４ｖｏｌの９５％エタノール中４．３ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）の滴加を、バッチ温度を１５℃にして１時間かけて行った。反応物は１５℃で一夜撹拌された。反応混合物をポリプロピレン布に通して濾過し、９５％エタノール（４５ｍＬ、４．５ｖｏｌ）で洗浄した。ウェットケーキをリアクターに戻し入れ、９５％エタノール（３８０ｍＬ、３８ｖｏｌ）中で２０℃にて２時間スラリー状にした。その後、懸濁液を濾過（同じ布）し、９５％エタノール（３０ｍＬ、３ｖｏｌ）で洗浄した。ウェットケーキを９５％ＥｔＯＨ（１７０ｍＬ、１７ｖｏｌ）中で２０℃にて再びスラリー状にして濾過（同じ布）し、９５％エタノール（３０ｍＬ、３ｖｏｌ）で洗浄した。その後、ウェットケーキをアセトン（１７０ｍＬ、１７ｖｏｌ）中で２０℃にて一夜スラリー状にし、その後、濾過（同じ布）及びアセトン洗浄（２０ｍＬ、２ｖｏｌ）を行った。アセトン（１７０ｍｌ、１７ｖｏｌ）処理を固形物に繰り返し、２時間撹拌した。懸濁液を濾過（同じ布）してアセトン（３０ｍＬ、３ｖｏｌ）で洗浄し、４５℃で止め、４５℃で乾燥（１８時間）させて、カナリヤイエローの固体（１０．４３ｇ８７．８％）を得た。
【表１１１】
2021533193.tif 000133
【０６１３】
参照による組み込み
本明細書で言及されたすべての刊行物及び特許は、個々の刊行物または特許が各々参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかの如く、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾がある場合は、本明細書のいかなる定義も含めて、本出願が優先する。
【０６１４】
均等物
対象開示の具体的な実施形態が論じられてきたが、上記の明細書は例示的であり、制限するものではない。開示の多くの変形は、本明細書及び以下の特許請求の範囲の再考察時に当業者に明らかとなるであろう。開示の全範囲は、特許請求の範囲とそれらの全範囲の均等物、及び明細書とそのような変形を参照することによって決定されるべきである。
【図１】
2021533193.tif 000134
【図２】
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【図３】
2021533193.tif 000136
【図４】
2021533193.tif 000137
【図５】
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【図６】
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【図７】
2021533193.tif 000140
【図８】
2021533193.tif 000141
【図９】
2021533193.tif 000142
【図１０】
2021533193.tif 000143
【図１１】
2021533193.tif 000144
【図１２】
2021533193.tif 000145
【図１３】
2021533193.tif 000146
【図１４】
2021533193.tif 000147
【図１５】
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【図１６】
2021533193.tif 000149
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【国際調査報告】
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