(57)【要約】  本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、およびアルツハイマー病などの神経変性疾患の治療のための式Ｉの化合物の使用を提供する。【化１】2021533105.tif 000019
2021533105.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
2021533105.tif 000015
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ピペリジン環上の２位のメチルが、４位の酸素に対してシス配置にある、請求項１に記載の化合物
【化２】
2021533105.tif 000016
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記化合物が、
【化３】
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またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または請求項２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、
【化４】
2021533105.tif 000018
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
結晶性である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ線回折スペクトルにおいて０．２度の回折角の許容差を有し、１２．１°の回折角２シータでのピークと、１８．５°、１３．０°、および１６．０°からなる群から選択されるピークの１つ以上との組合せにより特徴づけられる、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
患者におけるアルツハイマー病を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項８】
患者における軽度認知障害からアルツハイマー病への進行を予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項９】
患者における進行性核上麻痺を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
療法に使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
アルツハイマー病の治療に使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
軽度認知障害からアルツハイマー病への進行の予防に使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
進行性核上麻痺の治療に使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と共に含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
薬学的組成物を調製するためのプロセスであって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、新規の５−メチル−４−フルオロ−チアゾール−２−イル化合物、この化合物を含む薬学的組成物、この化合物を使用して神経変性障害、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）を治療する方法、およびこの化合物の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。
【０００２】
本発明は、ＡＤ、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、および総称してタウオパチーとして既知のタウ媒介性神経変性症に関与する他の疾患および障害の治療の分野におけるものである。
【０００３】
ＡＤは、世界中で何百万人もの患者を冒す破壊的な神経変性障害である。患者に一過性の症候的利益のみを提供する、市場で現在認可された薬剤の観点から、ＡＤの治療には重大な対処されていないニーズがある。
【０００４】
神経原線維変化（ＮＦＴ）および神経絨毛糸（ＮＴ）を生じさせる、対のらせん状フィラメント（ＰＨＦ）および直線状またはねじれ状フィラメントのような、フィラメント状構造への微小管関連タンパク質タウのオリゴマー化は、ＡＤおよび他のタウオパチーの決定的な病理学的特徴の１つである。ＡＤに罹患している個体の脳内のＮＦＴの数は、この疾患の重症度と密接に相関することが認められており、タウがニューロン機能障害および神経変性において重要な役割を担っていることを示唆している（Ｎｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．，７１（５），３６２−３８１（２０１２））。より侵攻性の疾患経過を伴う症例は、進行がより遅い症例よりもより高いタウ負荷を有する点で、タウの病理は、ＰＳＰの疾患持続期間と相関することが示されてきた。（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ，１３０，１５６６−７６（２００７））。
【０００５】
過去の研究（Ｙｕｚｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ，４（８），４８３−４９０（２００８））は、ＡＤおよび関連するタウ媒介性神経変性障害の治療において、タウ過剰リン酸化および病理学的タウへの凝集を制限するためのＯ−ＧｌｃＮＡｃａｓｅ（ＯＧＡ）阻害剤の治療可能性を支持する。より最近では、ＯＧＡ阻害剤Ｔｈｉａｍｅｔ−Ｇは、ＪＮＰＬ３タウマウスモデルにおける運動ニューロンの喪失を遅らせること（Ｙｕｚｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ，８，３９３−３９９（２０１２））、およびＴｇ４５１０タウマウスモデルにおけるタウ病理およびジストロフィ性神経突起の低減（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，７９，３０７−３１３（２０１４））と関連付けられてきた。したがって、ＯＧＡ阻害剤は、過剰にリン酸化した病理形態のタウの蓄積を低減するための有効な治療アプローチとして認識されている。
【０００６】
ＷＯ２０１８／１０９１９８（Ａ１）およびＷＯ２０１８／１０９２０２（Ａ１）は、ＡＤおよびＰＳＰなどのタウオパチーの治療に有用な特定のＯＧＡ阻害剤を開示している。さらに、ＵＳ２０１６／００３１８７１は、アルツハイマー病を治療するためのある特定のグリコシダーゼ阻害剤を開示している。
【０００７】
脳浸透性であるＯＧＡ阻害剤は、ＡＤおよびＰＳＰなどのタウ媒介性神経変性障害のための治療を提供することが望まれる。本発明は、ＯＧＡの強力な阻害剤である、特定の新規な化合物を提供する。さらに、本発明は、ＡＤおよびＰＳＰなどのタウオパチーを効果的に治療するのに十分に脳浸透性である可能性がある、ＯＧＡの強力な阻害剤である特定の新規化合物を提供する。
【０００８】
したがって、本発明は、式Ｉの化合物
【化１】
2021533105.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００９】
本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与することを含む、そのような治療を必要とするアルツハイマー病の患者を治療する方法を提供する。
【００１０】
本発明は、軽度認知障害からアルツハイマー病への進行を予防することを必要とする患者においてそれを行う方法であって、患者に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法をさらに提供する。
【００１１】
本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする進行性核上麻痺の患者を治療する方法を提供する。本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与することを含む、タウ媒介性神経変性障害の患者を治療する方法を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、療法における使用、特に、アルツハイマー病の治療における使用、または軽度認知障害のアルツハイマー病への進行の予防における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。加えて、本発明は、進行性核上麻痺の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、タウ媒介性神経変性障害の治療における使用のための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１３】
またさらに、本発明は、アルツハイマー病の治療のため、または軽度認知障害のアルツハイマー病への進行の予防のための医薬の製造に、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。加えて、本発明は、進行性核上麻痺の処置治療のための医薬の製造に、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本発明はまた、タウ媒介性神経変性障害の治療のための医薬の製造に、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１４】
本発明はさらに、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と共に含む、薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、薬学的組成物を調製するためのプロセスを提供する。
【００１５】
軽度認知障害は、経時的に軽度認知障害からアルツハイマー病までを呈する患者の臨床所見および進行に基づき、アルツハイマー病と関連した認知症の潜在的な前駆期として定義されている。「軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を予防する」という用語は、患者における軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、ヒトを指す。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者に単回または複数回投与すると、診断中または治療中の患者に所望の効果を提供する、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の量または投与量を指す。
【００１９】
当業者は、公知の技術を用いて、類似の状況下で得られた結果を観察することにより、有効量を決定することができる。患者のための有効量を決定する際には、患者の人種；患者の大きさ、年齢、および健康状態全般；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の関与度または重症度の程度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与の様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択された投薬計画；併用薬の使用；ならびに他の関連する状況を含むがこれらに限定されない、多数の要因が考慮される。本発明の化合物は、体重１ｋｇあたり約０．１〜約１５ｍｇの範囲内に入る１日当たりの投薬量で有効である。
【００２０】
本発明の化合物は、本化合物を生物学的に利用可能にする、いずれかの経路によって投与される薬学的組成物として製剤化される。好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。このような薬学的組成物およびこれを調製するためのプロセスは、当技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい）。
【００２１】
式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、本発明の治療方法において特に有用であり、特定の配置が好ましい。本発明の化合物の以下のリストは、そのような配置について説明する。これらの選好が、本発明の治療方法および化合物の両方に適用可能であることが理解されるであろう。
【００２２】
本発明の化合物は、
【化２】
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ならびにその薬学的に許容される塩を含む。
【００２３】
ピペリジン環上のメチルおよび酸素置換基がシスまたはトランス立体配置にある式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、本発明の範囲内に含まれ、シス立体配置が好ましい。例えば、当業者は、以下のスキームＡに示すように、ピペリジン環上の２位のメチルが４位の酸素に対してシス配置にあることを理解するであろう。
【化３】
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【００２４】
さらに、当業者は、以下のスキームＢに示すように、ピペリジン環上の２位のメチルが４位の酸素に対してトランス配置にあることを理解するであろう。
【化４】
2021533105.tif 000006
【００２５】
本発明は、全ての個々のエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む上述の化合物のエナンチオマーの混合物を企図するが、式Ｉａの化合物およびその薬学的に許容される塩が特に好ましい。
【００２６】
当業者は、個々のエナンチオマーを、本発明の化合物の合成における任意の好都合な時点で、選択的結晶化技術、キラルクロマトグラフィ（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ  ａｌ．、「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、およびＥ．Ｌ．ＥｌｉｅｌおよびＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４を参照されたい）、または超臨界流体クロマトグラフィ（ＳＦＣ）（例えば、Ｔ．Ａ．Ｂｅｒｇｅｒ；「Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｐｒｉｍｅｒ」、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２０１５年７月を参照されたい）のような方法によって分離または分割し得る。
【００２７】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、当技術分野で周知の標準的な条件下で、本発明の化合物の適切な遊離塩基および適切な薬学的に許容される酸の、好適な溶媒中での反応によって形成され得る。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｓａｌｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，（１９７７）を参照されたい。
【００２８】
本発明の化合物またはその塩は、当業者に既知の種々の手順によって調製することができ、そのうちのいくつかを、以下のスキーム、調製物、および実施例で例示する。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィ、濾過、粉砕、および結晶化を含む、当技術分野で周知の従来の方法によって回収することができる。以下のスキームにおいて、すべての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義されたとおりである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、以下のスキーム、調製物、および実施例を、本発明をさらに例示するために提供する。さらに、当業者は、当業者が調製することができる、対応する所望の立体化学的配置を有する出発材料または中間体を使用することによって、式Ｉの化合物を調製し得ることを理解する。
【００２９】
特定の略語は次のように定義される。「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指す。「Ａｃ」はアセチルを指す。「ＡｃＯＨ」は酢酸を指す。「Ａｃ２Ｏ」は無水酢酸を指す。「ＢＯＣ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを指す。「ＣＡＳ番号」はケミカルアブストラクト登録番号を指す。「ＤＣＭ」は、塩化メチレンまたはジクロロメタンを指す。「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを指す。「ＤＭＥＡ」はジメチルエチルアミンを指す。「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指す。「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指す。「ＥＤＴＡ」は、エチレンジアミン四酢酸を指す。「ＥＳ／ＭＳ」はエレクトロスプレー質量分析を指す。「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指す。「ＥｔＯＨ」はエタノールまたはエチルアルコールを指す。「ｈ」は時間（複数可）を指す。「ＩＰＡ」はイソプロパノールまたはイソプロピルアルコールを指す。「ＩＰＡｍ」はイソプロピルアミンを指す。「ＬｉＨＭＤＳ」はリチウムビス（トリメチルシリル）アミドを指す。「ＫＯｔＢｕ」はカリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドを指す。「Ｍｅ」はメチルを指す。「ＭＴＢＥ」はメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指す。「ｍｉｎ」は分（複数可）を指す。「ＮａＯｔＢｕ」はナトリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドを指す。「ｎ−ＢｕＬｉ」はｎ−ブチルリチウムを指す。「ＯＡｃ」はアセテートまたはアセトキシを指す。「ＲＴ」は室温を指す。「ＳＣＸ」は選択的カチオン交換を指す。「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィを指す。「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指す。「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指す。「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。「ＴＭＡ」はトリメチルアミンを指す。「ＴＭＥＤＡ」はテトラメチルエチレンジアミンを指す。「Ｔｒｉｓ」は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンまたは２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオールを指す。「［α］Ｄ２０」は、２０℃、５８９ｎｍでの特定の光学回転を指し、ここで、ｃはｇ／ｍＬ単位での濃度である。
【化５】
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【００３０】
スキーム１は、５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリルの合成を示す。求核芳香族置換は文献でよく知られている。したがって、スキーム１、ステップＡにおいて、約１当量のｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（ＣＡＳ番号７９０６６７−９９−１）および約１．５当量の５−クロロピラジン−２−カルボニトリル（ＣＡＳ番号３６０７０−７５−４）をＴＨＦまたは１，４−ジオキサンなどの適切な有機溶媒に溶解し、これをＮａＨ、ＮａＯｔＢｕ、またはＫＯｔＢｕなどの約２当量の適切な塩基で、約０℃で約６０分間、処理してもよい。得られた反応混合物を約３〜１２時間撹拌しつつ、ＲＴまで温めてもよい。得られた反応生成物を、抽出、沈殿および濾過などの当技術分野で周知の技術によって単離し得る。例えば、反応混合物は、飽和塩化アンモニウム水溶液と、ＤＣＭ、ＭＴＢＥ、またはＥｔＯＡｃなどの好適な有機溶媒で希釈されてもよく、層を分離してもよく、有機抽出物は、飽和ＮａＣｌで洗浄してもよく、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮してもよい。得られた残渣を約１０％ＭＴＢＥ／ヘプタン中で合わせ、約４５℃に約３０分間加熱し、撹拌しながらＲＴに冷却してもよい。得られた固体を濾過により収集して、スキーム１、ステップＡの生成物であるｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラートを得てもよい。あるいは、抽出後の粗生成物を、有機溶媒の適切な混合物、例えば１：０から０：１のイソヘキサン：ＥｔＯＡｃを使用して、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって単離して、クロマトグラフィ画分の蒸発後、スキーム１、ステップＡの生成物を得てもよい。
【００３１】
ＢＯＣ保護基の除去は、当技術分野で十分に説明されている。したがって、スキーム１のステップＡの生成物である約１当量のｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラートを、ＤＣＭなどの適切な有機溶媒に溶解し、極性非プロトン性溶媒（例えば、１，４−ジオキサン、またはＴＦＡ）中、無溶媒、または極性有機溶媒中、過剰な酸溶液（例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、またはｉＰｒＯＨなどのアルコール溶媒中のＨＣｌ、ＨＣｌで、約０℃からＲＴで約０．１〜８時間、処理してもよい。反応生成物を、抽出、沈殿および濾過などの当技術分野で周知の技術によって単離し得る。例えば、反応混合物を、ＤＣＭ、２−メチルテトラヒドロフラン、ＭＴＢＥ、またはそれらの混合物などの適切な有機溶媒の混合物と水との混合物の間で分配されてもよく、層を分離してもよく、水性抽出物を、例えばＮａＯＨ、ＫＯＨ、またはＮａ２ＣＯ３などの適切な水性塩基で中和してもよい。塩基性水性混合物を、ＤＣＭなどの適切な有機溶媒で抽出してもよく、層を分離してもよく、有機抽出物を減圧下で濃縮してもよい。得られた残渣を、約１０％シクロペンチルメチルエーテル／ヘプタンの混合物中で加熱し、約４５℃に約３０分間加熱し、ＲＴで約３０分間撹拌してもよい。得られた固体を濾過により収集して、スキーム１、ステップＢの生成物である５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリルを得てもよい。さらに、当業者は、対応するＨＣｌ塩を、スキーム１のステップＡの生成物であるｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラートを上述の有機溶媒中のＨＣｌで処理することによって得られてもよく、続いて減圧下で溶媒を蒸発させ、５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリルのＨＣｌ塩を得てもよい。
【化６】
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【００３２】
スキーム２は、式１ａの化合物の調製を示している。当技術分野でよく理解されているように、置換アミンと芳香族アルデヒドとの間の還元的アミノ化は、様々な条件下で達成され得る。例えば、約１当量のＮ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミドおよび約１当量の５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリル（または対応するＨＣｌ塩）を、ＥｔＯＡｃ、ＥｔＯＨまたはＤＣＭなどの適切な有機溶媒に溶解し、さらに、約３当量の適切な非求核性有機アミン（例えばＤＩＰＥＡまたはピリジン）を含有するものを、約ＲＴから３０℃で約１．５時間〜１８時間、約３当量の適切な水素化ホウ素、例えば、Ｎａ（ＯＡｃ）３ＢＨで処理してもよい。反応生成物を、濾過、抽出、クロマトグラフィおよび沈殿／濾過などの当技術分野で周知の技術によって単離し得る。例えば、反応混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃなどの適切な極性有機溶媒で抽出してもよく、有機層を分離してもよく、有機抽出物を減圧下で濃縮してもよい。得られた残渣を、約１：０から９５：５のｉＰｒＯＨ／ＤＣＭ、または約１：０から１：１のヘキサン：約１０％ＭｅＯＨを含有するＥｔＯＡｃで溶出しつつ、シリカゲルでの順相フラッシュクロマトグラフィに供し、溶媒を蒸発した後、残渣を得る。残渣を約１：１のＥｔＯＨ／ヘプタンに溶解し、約５０℃に約３０分間加熱し、ＲＴで約１０〜３０分間撹拌してもよい。得られた固体を濾過により収集して、Ｎ−［５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−１−ピペリジル］メチル］−４−フルオロ−チアゾール−２−イル］アセトアミド（式Ｉａ）を得てもよい。
【００３３】
調製例および実施例
以下の調製例および実施例は、本発明をさらに説明し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬および出発材料は、当業者によって容易に入手可能であるか、または容易に合成され得る。調製例および実施例は、限定ではなく例示として示され、当業者により種々の変更が行われ得ることを理解されたい。
【００３４】
ＬＣ−ＥＳ／ＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１１００液体クロマトグラフィシステムにおいて行われる。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブおよび／またはネガティブモードで取得される）は、ＨＰ１１００ＨＰＬＣとインターフェース接続するＭａｓｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ四重極質量分析計で行われる。ＬＣ−ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ  ３．０μｍ、勾配：５〜１００％Ｂで３分間、次に１００％Ｂで０．７５分間、カラム温度：５０℃±１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨ含有脱イオン水、溶媒Ｂ：０．１％ギ酸含有ＡＣＮ、波長２１４ｎｍ。代替ＬＣ−ＭＳ条件（高ｐＨ）：カラム：ＸＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳ  Ｃ１８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ、勾配：５％の溶媒Ａで０．２５分間、勾配：５％〜１００％の溶媒Ｂで３分間、および１００％の溶媒Ｂで０．５分間、または１０％〜１００％の溶媒Ｂで３分間、および１００％の溶媒Ｂで０．７５分間、カラム温度：５０℃±１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３  ｐＨ９、溶媒Ｂ：ＡＣＮ、波長：２１４ｎｍ。
【００３５】
調製例１
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート
【化７】
2021533105.tif 000009
スキーム１、ステップＡ：ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（３５０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）の溶液に、０℃でＫＯｔＢｕ（２７４ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を一度に加え、混合物を４５分間撹拌した。５−クロロピラジン−２−カルボニトリル（３４０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、室温で１２時間さらに撹拌しながら、４５分かけてゆっくりと室温に温める。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×５０）で抽出する。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗油状物を得る。得られた残渣をＤＣＭに溶解し、１：０から０：１のイソヘキサン：ＥｔＯＡｃの勾配で溶出しつつ、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィにより精製し、プールしたクロマトグラフィ画分の溶媒を蒸発させた後、表題化合物（２０５ｍｇ、収率４０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６３（Ｍ＋Ｈ−Ｃ４Ｈ９）．
【００３６】
調製例１の代替手順
フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（４０．１ｇ、１８６ｍｍｏｌ）、５−クロロピラジン−２−カルボニトリル（３９．０ｇ、２７９ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（４０１ｍＬ）をＲＴで加える。反応混合物をＮａＣｌ／氷水浴（内部温度−５℃）中で撹拌し、添加中は内部温度を１０℃未満に維持しつつ、混合物にＮａＯｔＢｕ（３６．９ｇ、３７２ｍｍｏｌ）を１０分かけて少しずつ加える。反応混合物をＮａＣｌ／氷水浴（内部温度−５℃）中で１時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を５分かけて加える。混合物を分液漏斗に移し、ＭＴＢＥ（２×４００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを１０％ＭＴＢＥ／ヘプタン（３５０ｍＬ）と合わせる。得られた混合物を４５℃の加熱ブロック内で３０分間激しく撹拌し、室温で３０分間撹拌し、濾過する。濾過した固体を真空下４０℃で乾燥させて、表題化合物を淡褐色の固体として得る（６０ｇ、９９％を超える収率）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４１（Ｍ＋Ｎａ）．
【００３７】
調製例２ａ
５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリル塩酸塩
【化８】
2021533105.tif 000010
スキーム１、ステップＢ：ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（２０５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、１，４−ジオキサン中のＨＣｌの４Ｍ溶液（５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物をＲＴで３．５時間撹拌する。得られた懸濁液を減圧下で濃縮し、真空下に６時間置いて、さらなる精製なしでの使用に適した表題化合物（２２５ｍｇ、９５％を超える収率）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１９（Ｍ＋Ｈ）．
【００３８】
調製例２ｂ
５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリル
スキーム１、ステップｂ：フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（６０ｇ、１８８ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（２４０ｍＬ）をＲＴで加える。スラリーを氷水浴（内部温度５℃）で撹拌し、ＴＦＡ（２４０ｍＬ、３１７４ｍｍｏｌ）を、添加中は内部温度を１０℃未満に維持しつつ、気体発生を伴って１５分かけて滴下する。反応混合物を氷水浴中で１０分間（内部温度５℃）撹拌し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を氷水浴中で撹拌し、ＭＴＢＥ（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）と合わせる。混合物を分液漏斗に移し、層を分離する。有機層を１％ＴＦＡ水溶液（２×１００ｍＬ）で抽出し、さらに０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２×１００ｍＬ）で抽出し、有機層を取っておく。合わせた水層を氷水浴中で撹拌し、添加中は内部温度を２０℃未満に維持しつつ、５０％のＮａＯＨ水溶液（４２．８ｍＬ、７５４ｍｍｏｌ）を５分かけて加える。得られた塩基性混合物をＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質の第１のバッチを得る。後処理の第１の部分からの有機層を、２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２×１００ｍＬ）でさらに抽出する。合わせた水層を氷水浴中で撹拌し、添加中は内部温度を２０℃未満に維持しつつ、５０％のＮａＯＨ水溶液（２４．４ｍＬ、４３０ｍｍｏｌ）を５分かけて加える。得られた塩基性混合物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質の第２のバッチを得る。粗物質の２つのバッチを１０％シクロペンチルメチルエーテル／ヘプタン（１８１ｍＬ）と合わせ、混合物を４５℃の加熱ブロックで３０分間激しく撹拌し、ＲＴに冷却し、３０分間撹拌し、得られた沈殿物を濾過により集める。濾過した固体を真空下、４０℃で１時間乾燥させて、表題化合物をクリーム色固体として得る（２９．２ｇ、収率７１％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１９（Ｍ＋Ｈ）．
【００３９】
調製例２ｂの代替手順
フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（１．２ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加える。フラスコを氷水浴に沈め、５Ｍ  ＨＣｌのｉＰｒＯＨ溶液（７．２ｍＬ、３６．２ｍｍｏｌ）を２分かけて加える。反応混合物をＲＴで１．５時間撹拌し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をＤＣＭ（１０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）との間で分配し、層を分離する。水層をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）および２−メチルテトラヒドロフラン（４×１０ｍＬ）で抽出する。併せた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣（８０４ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）を、同様の純度の別のロット（７６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）と合わせる。混合したロットを１０％シクロペンチルメチルエーテル／ヘプタン（４．４ｍＬ）と合わせ、混合物を４５℃の加熱ブロックで２０分間激しく撹拌し、ＲＴに温め、５分間撹拌し、得られた沈殿物を濾過により集める。濾過した固体を真空下、４０℃で１時間乾燥させて、表題化合物を淡褐色の固体として得た（６４９ｍｇ、２つの合わせたロットから収率７４％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１９（Ｍ＋Ｈ）．
【００４０】
調製例３
ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマート
【化９】
2021533105.tif 000011
ＣｓＦ（２２７ｇ、１４８０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−（４−クロロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマート（３８．８ｇ、１４８ｍｍｏｌ、例えば、Ｎ．Ｍａｓｕｄａ，ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、１２、６１７１−６１８２（２００４）を参照）のＤＭＳＯ（７７６ｍＬ）溶液にＲＴで加える。反応混合物を１４５℃のヒートブロック中で、内部温度を１３３℃に保ちながら４８時間撹拌し、混合物を氷水浴中で冷却する。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加する。混合物をＲＴで１０分間撹拌し、次いで珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で洗浄する。濾液を分液漏斗に移し、層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液（１Ｌ）で洗浄し、水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出する。併せた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣をＤＣＭ（１．５Ｌ）中の５％ＥｔＯＡｃで溶出しつつ、シリカゲルパッド（３３０ｇ）に通し、濾液を濃縮して残渣を得る。得られた残渣をＩＰＡ（３０３ｍＬ）に溶解し、濾過し、ＩＣカラム（セルロース多糖誘導体：トリス（３，５−ジクロロフェニルカルバマート、３０×２５０ｍｍ、５μ）を使用し、１０％ＩＰＡで溶出しつつ、１８０ｍＬ／分、３ｍＬ注入でＳＦＣにより精製する。生成物含有画分を減圧下で濃縮して、表題化合物（１６．１ｇ、収率４９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４７（Ｍ＋Ｈ）．
【００４１】
調製例４
Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミド
【化１０】
2021533105.tif 000012
ジャケット付き容器中で、ＺｎＢｒ２（９１．９ｇ、４０８ｍｍｏｌ）を、ＲＴで、ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマート（３３．５ｇ、１３６ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５０３ｍＬ）の混合物に一度に加える。反応混合物を内部温度３７℃で一晩撹拌し、次いでジャケット温度を−１０℃に設定し、内部温度を６℃未満に維持しつつ、ＴＨＦ（１１１ｍＬ）を１５分かけて滴下する。次いでジャケット温度を−３０℃に設定し、内部温度を５℃未満に維持しつつ、ピリジン（１１０ｍＬ、１３６０ｍｍｏｌ）を５分かけて滴下する。ジャケット温度を０℃に設定し、Ａｃ２Ｏ（１１６ｍＬ、１２２０ｍｍｏｌ）を５分かけて滴下する。反応混合物を内部温度３７℃で一晩撹拌し、ＲＴに冷却し、ＴＨＦ（５００ｍＬ）で溶出しつつ、珪藻土の短いパッドを通過させる。濾液をフラスコに移し、混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これをトルエン（５０ｍＬ）から濃縮する。得られた残渣に水（４００ｍＬ）および２−メチルテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）中のクエン酸一水和物（５７．２ｇ、２７２ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を４０℃で５分間撹拌し、２−メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で溶出しつつ、短い珪藻土パッドに通す。濾液を分液漏斗に移し、層を分離する。水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２×２５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を水（５００ｍＬ）で希釈する。混合物に、気体の発生が止まるまで、撹拌しつつ、固体ＮａＨＣＯ３を５分間かけて少しずつ添加する。混合物を分液漏斗に移し、層を分離し、水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２００ｍＬおよび１００ｍＬ）で抽出する。併せた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。得られた残渣を２−メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、混合物を２−メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）で溶出しつつ、短いシリカゲル（２５０ｇ）パッドに通す。濾液を減圧下で濃縮して残渣を得て、これをＤＣＭとヘプタンの１：１混合物（２０２ｍＬ）中で懸濁する。混合物を室温で３０分間撹拌し、得られた固体を濾過により収集し、濾過した固体を真空下、４０℃で２時間乾燥させて、表題化合物（１８ｇ、収率７０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８９．０（Ｍ＋Ｈ）．
【００４２】
調製例４の代替手順
不活性雰囲気下で、フッ化テトラメチルアンモニウム四水和物（１００ｋｇ、６０５ｍｏｌ）をＩＰＡ（４５３〜４５９ｋｇ）に溶解し、７０℃未満の温度で、減圧下、体積が約１５０〜１８０Ｌになるまで濃縮する。ＩＰＡ（４５３〜４５９ｋｇ）を加え、減圧下で１５０〜１８０Ｌになるまで濃縮する。混合物のＫＦが０．２％未満になるまで繰り返す。ＤＭＦ（５４６〜５５２ｋｇ）を加え、９０℃に加熱し、減圧下で約１５０Ｌになるまで濃縮する。再度ＤＭＦ（４５３〜４５９ｋｇ）を加え、減圧下で１５０Ｌになるまで濃縮する。混合物が６０ｐｐｍ未満の残留ＩＰＡ限度を有するまで、繰り返す。Ｎ−（４−クロロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミド（１５ｋｇ、７３．３ｍｏｌ）およびＤＭＦ（１４９ｋｇ）を加え、２〜４時間、１００℃に加熱する。温度を２０〜２５℃に調整し、２−メチルテトラヒドロフラン（２４８ｋｇ）を加える。２５重量％のＮＨ４Ｃｌ水溶液（４５８ｋｇ）を加え、３０分間撹拌する。層を分離し、追加の２−メチルテトラヒドロフラン（２４８ｋｇ）で水層を洗浄する。得られた層を分離し、合わせた有機抽出物を２５重量％のＮＨ４Ｃｌ水溶液（２×４５８ｋｇ）で洗浄し、３０分間撹拌する。ＥｔＯＡｃ（１８０ｋｇ）を加え、反応混合物を１時間加熱還流して、透明な溶液を得る。混合物を減圧下、５５℃未満で体積が約３０Ｌになるまで濃縮する。ＥｔＯＡｃ（５４ｋｇ）を加え、混合物を減圧下、５５℃未満で体積が約３０Ｌになるまで濃縮する。混合物を窒素下、２０〜２５℃で２時間撹拌する。得られた固体を濾過により収集し、真空下、５５〜６５℃で１０〜１２時間乾燥させて、表題化合物（４．５ｋｇ、純度８２．５％）を得る。
【００４３】
実施例１
Ｎ−［５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−１−ピペリジル］メチル］−４−フルオロ−チアゾール−２−イル］アセトアミド
【化１１】
2021533105.tif 000013
スキーム２：Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミド（１６６ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）および５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリル塩酸塩（２２５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液にＤＩＰＥＡ（０．４６ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液をＲＴで１．７５時間撹拌する。この溶液にＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（５６１ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液をＲＴで１６時間撹拌する。反応を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）でゆっくりとクエンチし、水層をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。得られた残渣をＤＣＭに溶解し、１：０から０：１のヘキサン：ＥｔＯＡｃの勾配で溶出し、その後、１：１から０：１のヘキサン：１０％ＭｅＯＨを含有するＥｔＯＡｃで溶出しつつ、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィにより精製し、表題化合物（５２ｍｇ、収率１５％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋Ｈ）．［α］Ｄ２０＝＋３８°（ｃ＝１．０，ＭｅＯＨ）．
【００４４】
実施例１の代替手順
フラスコに、５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシ］ピラジン−２−カルボニトリル（３５．６ｇ、１６３ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＡｃ（７６８ｍＬ）、ピリジン（２６．４ｍＬ、３２６ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１０４ｇ、４９０．７ｍｍｏｌ）をＲＴで加える。反応混合物を３１℃の加熱ブロック（内部温度３０℃）中で撹拌し、Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミド（３０．７ｇ、１６３ｍｍｏｌ）を２分かけて少しずつ加える。反応混合物を３１℃の加熱ブロックで一晩（内部温度３０℃）撹拌し、撹拌しながら氷水浴で冷却する。得られた混合物に、添加中の内部温度を１０℃未満に維持しつつ、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（５００ｍＬ）を５分間かけて添加する。得られた混合物をＲＴで１５分間撹拌し、水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）との間で分配し、混合物を分液漏斗に移す。得られた層を分離する。水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２×３００ｍＬ）で抽出する。併せた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３００ｍＬ）と合わせ、混合物をＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で抽出し、茶色のぼろぼろした層を水相に残す。併せた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、０〜５％のｉＰｒＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出しつつ、シリカでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、生成物を含む画分を合わせ、減圧下で濃縮する。得られた残渣をヘプタン（２×５０ｍＬ）から濃縮する。得られた固体を５０％ＥｔＯＨ／ヘプタン（３１８ｍＬ）と合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で３０分間激しく撹拌し、撹拌しながら１０分間かけて室温に冷却する。得られた沈殿物を濾過により収集し、フィルターケーキをヘプタン（２５ｍＬ）で洗浄する。収集した固体を真空下、ＲＴで５分間乾燥し、真空下、４０℃で一晩乾燥して、表題化合物Ｎ−［５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（５−シアノピラジン−２−イル）オキシ−２−メチル−１−ピペリジル］メチル］−４−フルオロ−チアゾール−２−イル］アセトアミドを淡いクリーム色の結晶性固体として得る（４７ｇ、収率７２％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋Ｈ）．［α］Ｄ２０＝＋４７．２°（ｃ＝０．２５，ＭｅＯＨ）．
【００４５】
Ｘ線粉末回折：
結晶性固体のＸＲＤパターンは、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備え、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動する、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計にて得られる。試料は、２θにおける０．００８７°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、０．６ｍｍの発散スリット、５．２８ｍｍの固定散乱防止スリット、および９．５ｍｍ検出スリットを用いて、２θ（２シータ）における４〜４０°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダーに充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形に関して、結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ  Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ３５−Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ３０  Ｃｈａｐｔｅｒ＜９４１＞Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ａｎｄ  ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｓｏｌｉｄｓ  ｂｙ  Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＰＤ）Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １、２０１２年５月１日、２０１３を参照されたい。さらに、所与の任意の結晶形態について、角ピーク位置がわずかに変化し得ることも、結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、サンプルが分析される温度もしくは湿度の変動、サンプルの変位、または内部標準の有無に起因して変動し得る。本発明の場合、２θの±０．２のピーク位置の変動は、示された結晶形の明確な同定を妨げることなくこれらの潜在的な変動を考慮する。結晶形の確認は、特徴的なピーク（２θ度の単位で）、典型的にはより顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行われ得る。周囲温度および相対湿度で集められた結晶形の回析パターンは、８．８５および２６．７７の２−θ度にあるＮＩＳＴ  ６７５基準ピークに基づいて調整する。
【００４６】
したがって、実施例１の結晶性サンプルは、以下の表１に記載の回析ピーク（２θ値）を有するものとして、ＣｕＫα放射線を用いるＸＲＤパターンによって特徴付けられる。具体的には、パターンは、０．２度の回折角の許容差を有し、１８．５°、１３．０°、および１６．０°からなる群から選択されるピークの１つ以上とともに、１２．１°のピークを含む。
【表１】
2021533105.tif 000014
【００４７】
インビトロヒトＯＧＡ酵素アッセイ
ＯＧＡ酵素の生成
全長ヒトＯ−ＧｌｃＮＡｃ−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＭ＿０１２２１５）をコードするヌクレオチド配列を、Ｎ末端ポリヒスチジン（ＨＩＳ）タグと共にｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。バキュロウイルス生成を、Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ  Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プロトコルに従って行う。Ｓｆ９細胞を、培養液１リットル当たり１０ｍＬのＰ１ウイルスを用いて１．５×１０６個／ｍＬで感染させ、２８℃で４８時間インキュベートする。細胞を遠心沈降させ、ＰＢＳですすぎ、ペレットを−８０℃で保存する。
上記ＯＧＡタンパク質（Ｈｉｓ−ＯＧＡ）を、次のように精製する。４Ｌの細胞を、５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、１ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、４錠のプロテアーゼ阻害剤（完全ＥＤＴＡ非含有、Ｒｏｃｈｅ）を含有する２００ｍＬの緩衝液中で、４℃で４５分間溶解する。次いで、この細胞溶解物を４℃で、１６５００ｒｐｍで４０分間遠心沈降させ、上清を６ｍＬのＮｉ−ＮＴＡ樹脂（ニッケル−ニトリロ三酢酸）と共に４℃で２時間インキュベートする。
【００４８】
次に、樹脂をカラムに充填し、５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、１ｍＭのＤＴＴ、続いて５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴで洗浄する。タンパク質を５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３００ｍＭのイミダゾール、１０％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴで溶出させる。プールしたＨｉｓ−ＯＧＡ含有画分を６ｍｌに濃縮し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５（１６／６０）に入れる。タンパク質を５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、２ｍＭのＤＴＴで溶出させる。Ｈｉｓ−ＯＧＡ含有画分をプールし、タンパク質濃度をＢＣＡ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ）で測定する。
【００４９】
ＯＧＡ酵素アッセイ
ＯＧＡ酵素は、核細胞質タンパク質からのＯ−ＧｌｃＮＡｃの除去を触媒する。この活性を測定するために、フルオロセイン  ジ−Ｎ−アセチル−β−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニド（ＦＤ−ＧｌｃＮＡｃ，Ｋｉｍ，Ｅｕｎ  Ｊｕ；Ｋａｎｇ，Ｄａｅ  Ｏｏｋ；Ｌｏｖｅ，Ｄｏｎａ  Ｃ．；Ｈａｎｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ａ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００６）、３４１（８）、９７１−９８２）を６．７μＭの最終濃度で基質として使用する。この蛍光発生基質は、ＯＧＡによる切断の際に蛍光性となるので、酵素活性は、５３５ｎｍ（４８５ｎｍでの励起）で検出される蛍光の増大によって測定することができる。
【００５０】
アッセイ緩衝液を調製し、５０ｍＭのＨ２ＮａＰＯ３−ＨＮａ２ＰＯ３、０．０１％のウシ血清アルブミン、および０．０１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００の水中での最終濃度、ｐＨ７を得る。試験すべき化合物を、１０点濃度応答曲線を用いて、純粋なジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に希釈する。反応混合物中の最大化合物濃度は、３０または１μＭである。基質の添加によって反応が始まる前に、適切な濃度の化合物をＯＧＡ酵素と共に３０分間プレインキュベートする。最終酵素濃度は、最大化合物濃度が３０または１μＭの場合、それぞれ３．２４ｎＭまたは０．５ｎＭである。反応を室温で６０分間進行させておく。次いで、反応を停止させることなく蛍光を読み取る。ＩＣ５０値は、正規化データ対化合物のｌｏｇをプロットし、４パラメータロジスティック方程式を用いてデータを当てはめることによって計算する。
【００５１】
実施例１の化合物を本質的に上述の通り試験したところ、０．３４３＋０．１４１ｎＭ（ｎ＝３）のＩＣ５０を呈した。これらの結果は、実施例１の化合物がＯＧＡ酵素活性をインビトロで阻害することを実証している。
【手続補正書】
【提出日】令和3年1月28日(2021.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
2021533105.tif 000020
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ピペリジン環上の２位のメチルが、４位の酸素に対してシス配置にある、請求項１に記載の化合物
【化２】
2021533105.tif 000021
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記化合物が、
【化３】
2021533105.tif 000022
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または請求項２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、
【化４】
2021533105.tif 000023
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
結晶性である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ線回折スペクトルにおいて０．２度の回折角の許容差を有し、１２．１°の回折角２シータでのピークと、１８．５°、１３．０°、および１６．０°からなる群から選択される１つ以上のピークとの組合せにより特徴づけられる、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
患者におけるアルツハイマー病を治療するための薬学的組成物であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項８】
患者における軽度認知障害からアルツハイマー病への進行を予防するための薬学的組成物であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
患者における進行性核上麻痺を治療するための薬学的組成物であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項１０】
アルツハイマー病の治療薬の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１１】
軽度認知障害からアルツハイマー病への進行の予防薬の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
進行性核上麻痺の治療薬の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と共に含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
薬学的組成物を調製するためのプロセスであって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、プロセス。
【国際調査報告】
2021533105.tif 000024
2021533105.tif 000025