(57)【要約】  本発明は、抗ＨＢｓＡｇ抗体、抗体フラグメント、並びにＢ型肝炎ウイルス感染及び関連疾患の予防及び処置におけるそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗体であって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）（ａ）配列番号９のＨＣＤＲ１（ＣＤＲ相補性決定領域）；（ｂ）配列番号１０のＨＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４１のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号５７のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号５８のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号５９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号７３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号７５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号８９のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号９０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号９１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）（ａ）配列番号１０５のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１０６のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号１２１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１２２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１２３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）（ａ）配列番号１３７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１３８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１３９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号１５３のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１５４のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１５５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉ）（ａ）配列番号１６９のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１７０のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号１８５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１８６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号２０１のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２０２のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２０３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２１７のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２１８のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２１９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号２３３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２３４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２４９のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２５０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２５１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｘ）（ａ）配列番号２６５のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２６６のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２６７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２８１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２８２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２８３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）（ａ）配列番号２９７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２９８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号３１３のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号３１４のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号３１５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉ）（ａ）配列番号３２９のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３３０のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号３４５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号３４６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号３４７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号３６１のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３６２のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３６３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号３７７のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号３７８のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号３７９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号３９３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３９４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号４０９のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４１０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４１１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号４２５のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２６のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４２７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号４４１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４４２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｖ）（ａ）配列番号４５７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４５８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４５９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号４７３のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４７４のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４７５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｘｖｉ）（ａ）配列番号４８９のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４９０のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４９１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号５０５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号５０６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号５０７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む、単離された抗体。
【請求項２】
ＣＤＲ内の１又は２つのアミノ酸は、修飾、欠失又は置換されている、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記可変重鎖領域又は前記可変軽鎖領域のいずれかにわたる少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の同一性を保持する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、ヒト抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は抗体フラグメントである、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）配列番号１８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｉ）配列番号５０を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号６６を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号８２を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号９８を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｖ）配列番号１１４を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号１３０を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖ）配列番号１４６を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号１６２を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖｉ）配列番号１７８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号１９４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖｉｉ）配列番号２１０を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号２２６を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖｉｉｉ）配列番号２４２を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号２５８を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｘ）配列番号２７４を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号２９０を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘ）配列番号３０６を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３２２を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉ）配列番号３３８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３５４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉｉ）配列番号３７０を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３８６を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉｉｉ）配列番号４０２を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号４１８を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉｖ）配列番号４３４を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号４５０を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｖ）配列番号４６６を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号４８２を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；又は
（ｘｖｉ）配列番号４９８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号５１４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）
を含む抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記可変軽鎖又は可変重鎖領域のいずれかにわたる少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の同一性を保持する、請求項５に記載の抗体又はそのフラグメント。
【請求項７】
前記可変軽鎖又は可変重鎖領域内の１、２、３、４又は５つであるが、１０個未満のアミノ酸は、修飾、欠失又は置換されている、請求項５に記載の抗体。
【請求項８】
モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、ヒト抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は抗体フラグメントである、請求項５に記載の抗体。
【請求項９】
引き下げされたグリコシル化を有し、若しくはグリコシル化を有さず、又は低フコシル化されている、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
請求項１に記載の抗体又はそのフラグメントを含み、薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む医薬組成物。
【請求項１１】
前記薬学的に許容可能なキャリアは、ヒスタジン又は糖を含有する、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記糖は、スクロースである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
複数の請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを含む医薬組成物であって、前記組成物中の前記抗体の少なくとも０．０５％、０．１％、０．５％、１％、２％、３％、５％以上は、α２，３−結合シアル酸残基を有する医薬組成物。
【請求項１４】
複数の請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを含む医薬組成物であって、抗体は、二分岐ＧｌｃＮＡｃを含まない医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の抗体又はそのフラグメントを含む医薬組成物であって、凍結乾燥品として調製される医薬組成物。
【請求項１６】
Ｂ型肝炎ウイルス感染を中和する方法であって、注射又は注入を介して必要とする患者に有効量の請求項１に記載の抗体を投与することを含む方法。
【請求項１７】
前記必要とする患者は、Ｂ型肝炎ウイルス尿症又はＢ型肝炎ウイルス血症を有すると診断されている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記必要とする患者は、血液又は血清中にＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）を有すると診断されている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
Ｂ型肝炎ウイルス関連障害を処置し、又はその見込みを引き下げる方法であって、注射又は注入を介して必要とする患者に有効量の請求項１に記載の抗体を投与することを含み、前記障害は、肝不全、肝硬変、又は肝細胞癌である方法。
【請求項２０】
前記抗体又は組成物を、注射又は注入前に再構成させる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体又は医薬組成物を、別の治療薬と組み合わせて投与する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記治療薬は、抗ウイルス剤である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ウイルス剤は、ラミブジン、エンテカビル及びテノホビル又はアルファ−インターフェロンである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記治療薬は、免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦＲからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記治療薬は、追加の抗ＨＢｓＡｇ抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
医薬としての使用のための、請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
【請求項２９】
Ｂ型肝炎ウイルス感染の中和における使用のための、請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
【請求項３０】
肝不全、肝硬変、及び／又は肝細胞癌の処置又はその見込みの引き下げにおける使用のための、請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
【請求項３１】
別の治療薬と組み合わせて投与される、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記治療薬は、抗ウイルス剤である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記抗ウイルス剤は、ラミブジン、エンテカビル及びテノホビル又はアルファ−インターフェロンである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記治療薬は、免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３５】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦＲからなる群から選択される、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記治療薬は、追加の抗ＨＢｓＡｇ抗体である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３８】
請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸。
【請求項３９】
請求項３８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項４０】
請求項３９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４１】
標識されている、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む診断試薬。
【請求項４２】
前記標識は、放射標識、蛍光標識、発色団、イメージング剤、及び金属イオンからなる群から選択される、請求項４１に記載の診断試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年５月３１日出願の米国仮特許出願第６２／６７８，７５６号明細書の優先権の利益を主張し、これらの出願の内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、抗Ｂ型肝炎表面抗原抗体、抗体フラグメント、及びＢ型肝炎ウイルス感染の見込みの引き下げ又は処置におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、肝臓に感染し、慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）、肝硬変及び肝細胞癌（ＨＣＣ）をもたらし得る、エンベロープを有する肝向性ウイルスである。ＨＢＶに対する安全なワクチンが存在する一方、世界中で年間少なくとも６００，０００人の人々がＨＢＶ関連障害によって死亡している。疾患進行は、ウイルス負荷、ゲノタイプ及び特異的ウイルス突然変異によって影響を受ける（Ｂｉｓｗａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．２０１３；８５：１３４０−１３４７）。ＨＢＶは、１０個のゲノタイプに分類され、又はＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）中に見出される抗原決定基に基づき４つのセロタイプ（ａｓｗ、ａｄｒ、ａｙｗ及びａｙｒ）に分類される。
【０００４】
ＨＢＶは、ヘパドナウイルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）科のメンバであり、ヒト及び霊長類にのみ感染し得る。ビリオンは、肝細胞と相互作用するエンベロープによって包囲される小型の３．２ｋｂの部分二本鎖環状ＤＮＡによって構成される。ＨＢＶは、最初に肝細胞上のヘパリン硫酸プロテオグリカンに低親和性で結合する。続いて、大型エンベロープタンパク質のプレＳ１リポペプチドが、肝細胞上のそのより高親和性の受容体、胆汁酸トランスポータＮＣＴＰ（ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド）に結合する。次に、ウイルスはエンドサイトーシスによって細胞質に流入する。
【０００５】
ＨＢＶクリアランス及び発病は、主に、ＨＢＶ感染における適合免疫応答によって媒介される（Ｇｕｉｄｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．２００６；１：２３−６１）。ＨＢＶ持続のため、それは応答を誘導してはならず、又は回避し、若しくは応答を克服しなければならない。興味深いことに、ＨＢＶは、単に自然免疫応答を誘導しないことによって、自然免疫応答を「回避する」（Ｗｉｅｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００４；１０１（１７）：６６６９−７４）。他方、ウイルス持続性は、ＨＢＶ特異的Ｔ細胞の相対的低応答性の状態によって特徴付けられる（Ｃｈｉｓａｒｉ  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５；１３：２９−６０）。いくつかのウイルスタンパク質は、ＨＢＶに対する適応免疫応答を調節することが示されており、このことは、ＨＢＶが適応免疫応答を標的化する活性回避方針を用い得ることを示唆する（Ｔｈｉｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２００３；７７（１）：６８−７６）。抗ウイルス処置は、慢性ＨＢＶ感染におけるＣＤ８＋Ｔ細胞低応答性を克服し得ることが既に報告されており、このことはＴ細胞がそれらの対象中に存在するが、疲弊していることを示唆する（Ｂｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００１；３３（４）：９６３−７１）。有効なＨＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の誘導は、ウイルス接種材料のサイズによって調節される早期ＣＤ４＋Ｔ細胞プライミングに依存的であり得る（Ａｓａｂｅ  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２００９；８３（１９）：９６５２−６２）。
【０００６】
現在承認されている抗ウイルス治療薬は、アルファ−インターフェロン（ＩＦＮ−α）及び５つのヌクレオシド類似体の２つの製剤である。ヌクレオシドは、ＨＢＶ  ＤＮＡポリメラーゼ活性を変動効力及び耐性の障壁を伴い阻害する一方、治療はウイルスを排除せず、患者は生涯にわたりこの治療を受け続ける。したがって、Ｂ型肝炎感染を阻害するより良好な治療薬が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、Ｂ型肝炎に対する中和抗体及び／又はそのフラグメント、並びにＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の量を引き下げる抗体に関する。
【０００８】
抗体であって、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０００９】
抗体であって、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。一実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＨＢｓＡｇ及びその突然変異物に結合する。
【００１０】
抗体であって、Ｂ型肝炎に特異的に結合し、それを中和する抗体又はその抗原結合フラグメント。一実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｂ型肝炎及びＨＢｓＡｇ中の突然変異を含有するＢ型肝炎を中和する。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＨＢｓＡｇの量を引き下げる。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、血液中の循環ＨＢｓＡｇの量を引き下げる。
【００１１】
単離された抗体であって、（ｉ）（ａ）配列番号９のＨＣＤＲ１（ＣＤＲ−相補性決定領域）、（ｂ）配列番号１０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに（ｄ）配列番号２５のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２６のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号５７のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号７３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号８９のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号９０のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号９１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）（ａ）配列番号１０５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１０６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１０７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号１２１のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１２２のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１２３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）（ａ）配列番号１３７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１３８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１３９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号１５３のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１５４のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１５５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉ）（ａ）配列番号１６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号１８５のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１８６のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１８７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号２０１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２０２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２１７のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１８のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２１９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号２３３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２３４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２４９のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２５０のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２５１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｘ）（ａ）配列番号２６５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２６６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２６７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号２８１のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２８２のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２８３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）（ａ）配列番号２９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号３１３のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１４のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３１５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉ）（ａ）配列番号３２９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３３０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号３４５のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３４６のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３４７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号３６１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３６２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３６３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号３７７のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７８のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３７９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号３９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号４０９のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４１０のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４１１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号４２５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４２６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４２７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号４４１のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４４２のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｖ）（ａ）配列番号４５７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４５８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号４７３のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４７４のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４７５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｘｖｉ）（ａ）配列番号４８９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４９０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４９１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｄ）配列番号５０５のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５０６のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５０７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１２】
ＣＤＲ内の１又は２つのアミノ酸は、修飾、欠失又は置換されている、前記抗体。
【００１３】
前記可変重鎖領域又は前記可変軽鎖領域のいずれかにわたる少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の同一性を保持する、前記抗体。
【００１４】
モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、ヒト抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は抗体フラグメントである、前記抗体。
【００１５】
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）配列番号１８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｉ）配列番号５０を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号６６を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号８２を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号９８を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｖ）配列番号１１４を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号１３０を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖ）配列番号１４６を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号１６２を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖｉ）配列番号１７８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号１９４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖｉｉ）配列番号２１０を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号２２６を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｖｉｉｉ）配列番号２４２を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号２５８を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｉｘ）配列番号２７４を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号２９０を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘ）配列番号３０６を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３２２を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉ）配列番号３３８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３５４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉｉ）配列番号３７０を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号３８６を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉｉｉ）配列番号４０２を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号４１８を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｉｖ）配列番号４３４を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号４５０を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；
（ｘｖ）配列番号４６６を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号４８２を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）；又は
（ｘｖｉ）配列番号４９８を含む重鎖可変領域（ｖＨ）、及び配列番号５１４を含む軽鎖可変領域（ｖＬ）
を含む抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１６】
前記可変軽鎖又は可変重鎖領域のいずれかにわたる少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の同一性を保持する、前記抗体又はそのフラグメント。
【００１７】
前記可変軽鎖又は可変重鎖領域内の１、２、３、４又は５つであるが、１０個未満のアミノ酸は、修飾、欠失又は置換されている、前記抗体。
【００１８】
モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、ヒト抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は抗体フラグメントである、前記抗体。
【００１９】
引き下げられたグリコシル化を有し、若しくはグリコシル化を有さず、又は低フコシル化されている、前記抗体又はそのフラグメント。
【００２０】
前記抗体又はそのフラグメントを含み、薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む医薬組成物。
【００２１】
前記薬学的に許容可能なキャリアは、ヒスタジン又は糖を含有する、前記医薬組成物。
【００２２】
前記糖は、スクロースである、前記医薬組成物。
【００２３】
複数の前記抗体又は抗原結合フラグメントを含む医薬組成物であって、前記組成物中の前記抗体の少なくとも０．０５％、０．１％、０．５％、１％、２％、３％、５％以上は、α２，３−結合シアル酸残基を有する医薬組成物。
【００２４】
複数の前記抗体又は抗原結合フラグメントを含む医薬組成物であって、抗体は、二分岐ＧｌｃＮＡｃを含まない医薬組成物。
【００２５】
前記抗体又はそのフラグメントを含む医薬組成物であって、凍結乾燥品として調製される医薬組成物。
【００２６】
Ｂ型肝炎ウイルス感染を中和する方法であって、注射又は注入を介して必要とする患者に有効量の前記抗体を投与することを含む方法。
【００２７】
前記必要とする患者は、Ｂ型肝炎ウイルス尿症又はＢ型肝炎ウイルス血症を有すると診断されている、前記方法。
【００２８】
前記必要とする患者は、血液又は血清中にＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）を有すると診断されている、前記方法。
【００２９】
Ｂ型肝炎ウイルス関連障害を処置し、又はその見込みを引き下げる方法であって、注射又は注入を介して必要とする患者に有効量の前記抗体を投与することを含み、前記障害は、肝不全、肝硬変、又は肝細胞癌である方法。
【００３０】
前記抗体又は組成物を、注射又は注入前に再構成させる、前記方法。
【００３１】
前記抗体又は医薬組成物を、別の治療薬との組合せで投与する、前記方法。
【００３２】
前記治療薬は、抗ウイルス剤である、前記方法。
【００３３】
前記抗ウイルス剤は、ラミブジン、エンテカビル及びテノホビル又はアルファ−インターフェロンである、前記方法。
【００３４】
前記治療薬は、免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストである、前記方法。
【００３５】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦＲからなる群から選択される、前記方法。
【００３６】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、前記方法。
【００３７】
前記治療薬は、追加の抗ＨＢｓＡｇ抗体である、前記方法。
【００３８】
医薬としての使用のための、前記抗体又はそのフラグメント。
【００３９】
Ｂ型肝炎ウイルス感染の中和における使用のための、前記抗体又はそのフラグメント。
【００４０】
肝不全、肝硬変、及び／又は肝細胞癌の処置又はその見込みの引き下げにおける使用のための、前記抗体又はそのフラグメント。
【００４１】
別の治療薬との組合せで投与する、上記のいずれかの使用。
【００４２】
前記治療薬は、抗ウイルス剤である、上記のいずれかの使用。
【００４３】
前記抗ウイルス剤は、ラミブジン、エンテカビル及びテノホビル又はアルファ−インターフェロンである、上記のいずれかの使用。
【００４４】
前記治療薬は、免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストである、上記のいずれかの使用。
【００４５】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦＲからなる群から選択される、上記のいずれかの使用。
【００４６】
前記免疫チェックポイントインヒビタのアンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、上記の使用。
【００４７】
前記治療薬は、追加の抗ＨＢｓＡｇ抗体である、上記のいずれかの使用。
【００４８】
前記抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸。
【００４９】
前記核酸を含むベクター。
【００５０】
前記ベクターを含む宿主細胞。
【００５１】
標識されている、前記抗体又はその抗原結合フラグメントを含む診断試薬。
【００５２】
前記標識は、放射標識、蛍光標識、発色団、イメージング剤、及び金属イオンからなる群から選択される、前記診断試薬。
【００５３】
定義
特に明記されない限り、本明細書中で用いられる以下の用語及びフレーズは、以下の意味を有することが意図される。
【００５４】
本明細書中で用いられる用語「抗体」は、対応する抗原に非共有結合的に可逆的に、且つ特異的に結合し得る免疫グロブリンファミリのポリペプチドを指す。例えば、天然に存在するＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む四量体である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと省略した）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと省略した）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に再分割され得、より保存されている、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散在する。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで以下の順序で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの、宿主の組織又は因子への結合を媒介し得る（免疫系の種々の細胞（例えばエフェクタ細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が挙げられる）。
【００５５】
用語「抗体」は、以下に限定されないが、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ抗体、キメラ抗体、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例として、例えば、本開示の抗体に対する抗Ｉｄ抗体）を含む。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）のものであり得る。
【００５６】
「相補性決定ドメイン」又は「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、互換的に、ＶＬ及びＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗体鎖の標的タンパク質結合部位であり、これは、そのような標的タンパク質に対する特異性を保有する。３つのＣＤＲ（Ｎ末端から順に番号を付けられる、ＣＤＲ１〜３）が、ヒトの各ＶＬ又はＶＨ中に存在し、合計で可変ドメインの約１５〜２０％を構成する。ＣＤＲは、その領域及び順序によって呼ばれ得る。例えば、「ＶＨＣＤＲ１」又は「ＨＣＤＲ１」は双方とも、重鎖可変領域の第１のＣＤＲを指す。ＣＤＲは、構造的に、標的タンパク質のエピトープと相補的であるので、結合特異性を直接担う。ＶＬ又はＶＨの残りの範囲、いわゆるフレームワーク領域は、アミノ酸配列においてあまり変異を示さない（Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ４．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００）。
【００５７】
ＣＤＲ及びフレームワーク領域の位置は、当該技術分野における種々の周知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、及びＡｂＭ（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２９：２０５−２０６（２００１）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７９９−８１７（１９９２）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２９：２０７−２０９（２００１）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−７４８（１９９７）参照）を用いて判定され得る。抗原結合部位の定義は、以下にも記載されている：Ｒｕｉｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２８：２１９−２２１（２０００）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２−７４５（１９９６）；及びＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：９２６８−９２７２（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３：１２１−１５３（１９９１）；及びＲｅｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１−１７２（１９９６）。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの組合せナンバリングスキームにおいて、一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、又はその両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、一部の実施形態において、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば、哺乳類ＶＨ、例えば、ヒトＶＨ中のアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣ  ＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣ  ＣＤＲ３）；並びにＶＬ、例えば、哺乳類ＶＬ、例えば、ヒトＶＬ中のアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣ  ＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＬＣ  ＣＤＲ３）に対応する。ＩＭＧＴ下では、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、おおよそ２６〜３５（ＣＤＲ１）、５１〜５７（ＣＤＲ２）、及び９３〜１０２（ＣＤＲ３）と番号を付けられ、そしてＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基は、おおよそ２７〜３２（ＣＤＲ１）、５０〜５２（ＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＣＤＲ３）と番号を付けられる（「Ｋａｂａｔ」に従うナンバリング）。ＩＭＧＴ下では、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ  Ａｌｉｇｎを用いて判定され得る。
【００５８】
軽鎖及び重鎖は双方とも、構造的相同領域及び機能的相同領域に分割される。用語「定常」及び「可変」は、機能的に用いられる。この点に関して、軽（ＶＬ）鎖部分及び重（ＶＨ）鎖部分の双方の可変ドメインが、抗原認識及び特異性を決定することは勿論である。逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）の定常ドメインは、重要な生物学的特性、例えば、分泌、経胎盤運動能、Ｆｃ受容体結合、補体結合などを付与する。表記規則によって、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位又はアミノ末端から遠位になるにつれ、増大する。Ｎ末端は可変領域であり、Ｃ末端では定常領域である；ＣＨ３ドメイン及びＣＬドメインはそれぞれ、実際に、重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端ドメインを含む。
【００５９】
本明細書中で用いられる用語「抗原結合フラグメント」は、抗原のエピトープと特異的に（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）相互作用する能力を保持する抗体の１つ以上の部分を指す。結合フラグメントの例として、以下に限定されないが、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド架橋Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメント；Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域にてジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体のシングルアームのＶＬドメイン及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）；並びに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は抗体の他のエピトープ結合フラグメント。
【００６０】
さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いて、合成リンカーによって結合され得、これは、２つのドメインを、ＶＬ領域及びＶＨ領域が対形成して、一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として製造することを可能にする（単一鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，１９８８；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３，１９８８参照）。そのような単鎖抗体もまた、用語「抗原結合フラグメント」内に包含されることが意図される。これらの抗原結合フラグメントは、当業者に知られている従来の技術を用いて得られ、そして当該フラグメントは、無傷の抗体であるのと同じ様式で、実用性の有無に関してスクリーニングされる。
【００６１】
抗原結合フラグメントはまた、単一のドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、及びビス−ｓｃＦｖ中に組み込まれてもよい（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５参照）。抗原結合フラグメントは、ポリペプチドに基づくスカフォールド、例えばフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）中に融合（ｇｒａｆｔｅｄ）されてよい（米国特許第６，７０３，１９９号明細書（フィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載）参照）。
【００６２】
抗原結合フラグメントは、一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む単鎖分子中に組み込まれてよく、これは、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって、一対の抗原結合領域を形成する（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：１０５７−１０６２，１９９５；及び米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。
【００６３】
本明細書中で用いられる用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、ポリペプチドを指し、実質的に同じアミノ酸配列を有し、又は同じ遺伝的源に由来する抗体及び抗原結合フラグメントが挙げられる。当該用語はまた、単一の分子組成の抗体分子の調製物を含む。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。
【００６４】
本明細書中で用いられる用語「ヒト抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の双方が、ヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含有するならば、定常領域もまた、例えば、ヒト生殖細胞系配列、若しくはヒト生殖細胞系配列の突然変異バージョン、又は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：５７−８６，２０００に記載されている、ヒトフレームワーク配列分析に由来する抗体含有コンセンサスフレームワーク配列のようなヒト配列に由来する。
【００６５】
本開示のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的な突然変異誘発によって、又はインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異、あるいは安定性又は製造を促進する保存的置換）を含んでよい。
【００６６】
本明細書中で用いられる用語「認識する」は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、そのエピトープを見つけ出してそれと相互作用する（例えば結合する）ことを指し、当該エピトープは、直鎖状であるか立体配座的であるかは問わない。用語「エピトープ」は、本開示の抗体又は抗原結合フラグメントが特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接アミノ酸、又はタンパク質の三次折畳みによって並べられる非隣接アミノ酸の双方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒への曝露直後に保持されるが、三次折畳みによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒による処理直後に失われる。エピトープは典型的に、特有の空間的立体配座において少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的立体配座を判定する方法として、当該技術における技術、例えば、Ｘ線結晶解析及び二次元核磁気共鳴（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）、又は電子顕微鏡法が挙げられる。「パラトープ」は、抗原のエピトープを認識する抗体の部分である。
【００６７】
抗原（例えばタンパク質）と、抗体、抗体フラグメント、又は抗体由来の結合剤との相互作用を説明する文脈において用いられる場合のフレーズ「特異的に結合する」又は「選択的に結合する」は、タンパク質及び他の生物製剤の不均一集団における、例えば、生体サンプル、例えば、血液、血清、血漿、又は組織サンプルにおける、抗原の存在で決定的となる結合反応を指す。ゆえに、指定された特定の免疫アッセイ条件下で、特定の結合特異性を有する抗体又は結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも２倍結合し、実質的に、サンプル中に存在する他の抗原に多量に結合しない。一態様において、指定された免疫アッセイ条件下で、特定の結合特異性を有する抗体又は結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも１０倍結合し、実質的に、サンプル中に存在する他の抗原に多量に結合しない。そのような条件下での抗体又は結合剤への特異的な結合は、抗体又は剤が、その、特定のタンパク質に対する特異性について、選択されていることを必要とする場合がある。所望され、又は適切であるならば、この選択は、分子と交差反応する抗体を、他の種（例えば、マウス又はラット）又は他のサブタイプから取り去ることによって、達成され得る。これ以外にも、一部の態様において、特定の所望の分子と交差反応する抗体又は抗体フラグメントが選択される。
【００６８】
本明細書中で用いられる用語「親和性」は、単一の抗原部位での抗体と抗原との相互作用の強度を指す。各抗原部位内で、抗体「アーム」の可変領域は、抗原と、多数の部位にて、弱い非共有結合力を介して相互作用する；相互作用が多いほど、親和性は強い。
【００６９】
用語「単離された抗体」は、抗原特異性が異なる他の抗体が実質的にない抗体を指す。しかしながら、ある抗原に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原への交差反応性を有する場合がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞の物質及び／又は化学物質が実質的にない場合もある。
【００７０】
用語「対応するヒト生殖細胞系の配列」は、ヒト生殖細胞系の免疫グロブリン可変領域配列によってコードされる他の全ての知られている又は推察される可変領域のアミノ酸配列との比較において判定された、参照可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列との最も高いアミノ酸配列同一性を共有する、ヒト可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列をコードする核酸配列を指す。対応するヒト生殖細胞系の配列はまた、評価された他の全ての可変領域アミノ酸配列との比較において、参照可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列とのアミノ酸配列同一性が最も高い、ヒト可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列を指し得る。対応するヒト生殖細胞系の配列は、フレームワーク領域のみ、相補性決定領域のみ、フレームワーク及び相補性決定領域、可変セグメント（先で定義される）、又は可変領域を含む配列若しくはサブ配列の他の組合せであってよい。配列同一性が、本明細書中に記載される方法を用いて判定され得、例えば、当該技術において知られているＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、又は別のアラインメントアルゴリズムを用いて２つの配列をアラインするものがある。対応するヒト生殖細胞系の核酸配列又はアミノ酸配列は、参照可変領域の核酸配列又はアミノ酸配列との配列同一性が、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であり得る。
【００７１】
種々の免疫アッセイフォーマットが、特定のタンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに用いられてよい。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイが、タンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するのにルーチン的に用いられる（特異的な免疫反応性を判定するのに用いられ得る免疫アッセイのフォーマット及び条件の説明について、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９９８）参照）。典型的には、特異的な、又は選択的な結合反応が、シグナルを、バックグラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの少なくとも１０〜１００倍生じさせることとなる。
【００７２】
用語「平衡解離定数（Ｋｄ、Ｍ）」は、会合速度定数（ｋａ、ｔｉｍｅ−１、Ｍ−１）で割った解離速度定数（ｋｄ、ｔｉｍｅ−１）を指す。平衡解離定数は、当該技術において知られているあらゆる方法を用いて測定され得る。本開示の抗体は通常、平衡解離定数が約１０−７又は１０−８Ｍ未満、例えば約１０−９Ｍ又は１０−１０Ｍ未満、一部の態様では、約１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍ、又は１０−１３Ｍ未満となるであろう。
【００７３】
用語「バイオアベイラビリティ」は、患者に投与される薬物の所定の量の全身的アベイラビリティ（すなわち血液／血漿レベル）を指す。バイオアベイラビリティは、投与された剤形から全身循環系に達する薬物の時間（速度）及び総量（程度）の双方の測定値を示す絶対値である。
【００７４】
本明細書中で用いられるフレーズ「から本質的になる」は、方法又は組成物中に含まれる活性薬剤の属又は種、及び当該方法又は組成物の使用目的について不活性のあらゆる賦形剤を指す。一部の態様において、フレーズ「から本質的になる」は明示的に、本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体以外の１つ以上の追加の活性剤の包含を除外する。一部の態様において、フレーズ「から本質的になる」は明示的に、本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体及び同時投与される第２の剤以外の１つ以上の追加の活性剤の包含を除外する。
【００７５】
用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸、合成アミノ酸、及び非天然のアミノ酸、並びにアミノ酸類似体、及び天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸模擬物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝的コードによってコードされるアミノ酸、並びに後に修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα−炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えばノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模擬物は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。
【００７６】
用語「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸配列及び核酸配列の双方に用いられる。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同じ、若しくは本質的に同じアミノ酸配列をコードする核酸を、又は、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同じ配列を指す。遺伝的コードの縮重によって、多数の機能的に同じ核酸が、所定のいずれかのタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵは全て、アミノ酸アラニンをコードする。ゆえに、コドンによってアラニンが特定される全ての位置にて、コドンは、記載される対応するコドンのいずれかに変更され得、コードされるポリペプチドを変更することはない。そのような核酸変異は「サイレント変異」であり、これは、保存的に修飾された変異の一種である。また、ポリペプチドをコードする本明細書中の全ての核酸配列が、核酸の全ての可能なサイレント変異を記載する。当業者であれば、核酸中の各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧ以外）が、機能的に同じ分子を産するように修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異が、記載される各配列内に潜在する。
【００７７】
ポリペプチド配列について、「保存的に修飾された変異体」は、化学的に類似するアミノ酸でアミノ酸を置換する、ポリペプチド配列に対する個々の置換、欠失、又は付加を含む。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換の表が、当該技術において周知である。そのような保存的に修飾された変異体は、多型の変異体、異種間相同体、及び対立遺伝子にも加えられ、これらを排除しない。以下の８つの群が、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）参照）。一部の態様において、用語「保存的配列修飾」は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に大きく影響を及ぼさない、又はこれを大きく変更しないアミノ酸修飾を指すのに用いられる。
【００７８】
本明細書中で用いられる用語「最適化された」は、産生細胞又は産生生物、通常真核細胞、例えば、酵母細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属細胞、真菌細胞、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、又はヒト細胞において好まれるコドンを用いてアミノ酸配列をコードするように変更されたヌクレオチド配列を指す。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている出発ヌクレオチド配列によって元々コードされるアミノ酸配列を完全に、又は可能な限り保持するように操作されている。
【００７９】
２つ以上の核酸配列又はポリペプチド配列の文脈における用語「同じパーセント」又は「パーセント同一性」は、２つ以上の配列又はサブ配列が同じである程度を指す。２つの配列は、比較される領域にわたってアミノ酸又はヌクレオチドの配列が同じであるならば、「同じである」。２つの配列は、比較ウィンドウ、又は指定された領域上で、以下の配列比較アルゴリズムの１つを用いて、又は手動のアラインメント及び視覚による検査によって測定されて、最大一致について比較且つアラインされた場合に、アミノ酸残基又はヌクレオチドの特定のパーセンテージが同じである（すなわち、特定の領域にわたって、又は、特定されない場合には、配列全体にわたって、６０％の同一性、場合によっては６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％の同一性）ならば、「実質的に同じである」。場合によっては、同一性は、長さが少なくとも約３０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）である領域、より好ましくは長さが１００〜５００ヌクレオチド又は１０００ヌクレオチド以上（又は２０、５０、２００アミノ酸以上）である領域にわたって存在する。
【００８０】
配列比較について、典型的には、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを用いて、試験配列及び参照配列がコンピュータに入力されて、必要に応じて、サブ配列座標（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）が指定されて、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。デフォルトのプログラムパラメータが用いられてもよいし、代替パラメータが指定されてもよい。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を算出する。
【００８１】
本明細書中で用いられる「比較ウィンドウ」は、２つの配列が最適にアラインされた後に、配列が、同じ数の隣接位置の参照配列と比較され得る、２０〜６００、通常約５０〜約２００、さらに通常約１００〜約１５０からなる群から選択される隣接位置の数のいずれか１つのセグメントへの言及を含む。比較のための配列アラインメント方法が、当該技術において周知である。比較のための最適な配列アラインメントが、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃ（１９７０）の局所的相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化されたインプリメンテーション（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおける、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、又は手動アラインメント及び視覚による検査（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３参照）によって行われ得る。
【００８２】
パーセント配列同一性及び配列類似性を判定するのに適したアルゴリズムの２つの例として、ＢＬＡＳＴアルゴリズム及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムがあり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９７７；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアが、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから一般に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、高いスコアリング配列対（ＨＳＰ）を、クエリ配列中の長さＷのショートワードを特定することによって特定することを包含し、これは、データベース配列において同じ長さのワードとアラインされた場合に、一部の正の値の閾値スコアＴにマッチし、又はこれを満たすものである。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）。これらの最初の近隣ワードヒットは、これを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索を開始させる基礎として機能する。ワードヒットは、累積アラインメントスコアが増大し得る限り、各配列に沿って両方向に延長される。累積スコアが、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一対のマッチング残基についての報酬スコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチング残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を用いて算出される。アミノ酸配列について、スコアリングマトリックスが、累積スコアを算出するのに用いられる。各方向におけるワードヒットの延長は、次の場合に停止する：累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘ落ちた場合；累積スコアが、１つ以上の負の値のスコアリング残基アラインメントの蓄積に起因して、ゼロ以下になった場合；又はいずれかの配列の端部に達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を判定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の予想（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び双方の鎖の比較を用いる。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして３のワード長、及び１０の予想（Ｅ）、並びにＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５参照）は、５０のアラインメント（Ｂ）、１０の予想（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び双方の鎖の比較を用いる。
【００８３】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計学的分析を実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５７８７，１９９３参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の一尺度が、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列又はアミノ酸配列間のマッチが偶然によって起こるであろう確率の指標を提供する。例えば、核酸は、参照核酸に対する試験核酸の比較において最小和確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満であれば、参照配列に類似すると考える。
【００８４】
２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７（１９８８）のアルゴリズムを用いて（これは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている）、ＰＡＭ１２０加重残留表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを用いて判定され得る。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３，１９７０，アルゴリズムを用いて（これは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈ  Ｆｌｏｒｉｄａ
から入手可能）において、ＧＡＰプログラムに組み込まれている）、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス、並びに１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ加重及び１、２、３、４、５、又は６の長さ加重を用いて判定され得る。
【００８５】
先で注目された配列同一性のパーセンテージ以外の、２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同じであることの別の指標として、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、下記のように、免疫学的に、第２の核酸によってコードされるポリペプチドに対して高められた抗体と交差反応性であることがある。ゆえに、ポリペプチドは典型的に、第２のポリペプチドと、例えば、２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、実質的に同じである。２つの核酸配列が実質的に同じであることの別の指標として、下記のように、２つの分子又はそれらの相補体が、ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることがある。２つの核酸配列が実質的に同じであることのさらに別の指標として、配列を増幅させるのに同じプライマーが用いられ得ることがある。
【００８６】
用語「核酸」は、本明細書中で、用語「ポリヌクレオチド」と互換的に用いられ、一本鎖の形態又は二本鎖の形態のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド、及びそれらのポリマーを指す。当該用語は、知られているヌクレオチド類似体又は修飾された骨格残基若しくは結合を含有する核酸を包含し、これらは、合成核酸、天然に存在する核酸、及び天然に存在しない核酸であり、参照核酸と類似の結合特性を有し、そして参照ヌクレオチドと類似の様式で代謝される。そのような類似体の例として、限定されないが、ホスホロチオアート、ホスホロアミダート、メチルホスホナート、キラルメチルホスホナート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００８７】
特に明記されない限り、特定の核酸配列はまた、暗に、その保存的に修飾された変異体（例えば縮重コドン置換）及び相補配列、並びに明示的に示される配列を包含する。具体的には、以下で詳述されるように、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３の位置が、混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を生じさせることによって、達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８）。
【００８８】
核酸の文脈における用語「作動可能に結合される」は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えばＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。典型例として、転写調節配列の、転写される配列との機能的関係を指す。例えば、プロモータ又はエンハンサ配列は、適切な宿主細胞又は他の発現系において、コード配列の転写を刺激又は調節するならば、コード配列に作動可能に結合されている。通常、転写される配列に作動可能に結合されるプロモータ転写調節配列は、転写される配列に物理的に隣接している、すなわちシス作用性である。しかしながら、一部の転写調節配列、例えばエンハンサは、転写を増強するコード配列に物理的に隣接する必要もないし、それに近接して位置決めされる必要もない。
【００８９】
用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すのに、本明細書中で互換的に用いられる。当該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学模擬物であるアミノ酸ポリマーに、そして天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに用いられる。特に明記されない限り、特定のポリペプチド配列はまた、暗に、その保存的に修飾された変異体を包含する。
【００９０】
用語「対象」は、ヒト及び非ヒト動物を含む。非ヒト動物として、全ての脊椎動物、例えば哺乳類及び非哺乳類、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類が挙げられる。示される場合以外は、用語「患者」又は「対象」は、本明細書中で互換的に用いられる。
【００９１】
用語「Ｂ型肝炎」、「Ｂ型肝炎ウイルス」又は「ＨＢＶ」は、ヘパドナウイルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）科、オルトヘパドナウイルス（Ｏｒｔｈｏｈｅｐａｄｎａｖｉｒｕｓ）属のメンバを指す。ＨＢＶは、二本鎖ＤＮＡウイルスである。このウイルスは、ＨＢｓＡｇに基づき４つの主要なセロタイプ（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ、ａｙｗ）に分けられる。
【００９２】
用語「Ｂ型肝炎表面抗原」、「ＨＢｓＡｇ」又は「ＨＢＶｓＡｇ」は、Ｂ型肝炎ウイルスによって産生されるタンパク質を指す。
【００９３】
【表１】
2021525071.tif 000002
【００９４】
「ＩＣ５０」（半数阻害濃度）は、ベースライン対照と最大可能シグナルとの間の中間シグナル（５０％）を誘導する特定の抗体の濃度を指す。
【００９５】
「ＥＣ５０」（半数有効濃度）は、既定の曝露又は処理時間後のベースライン対照と最大可能効果との間の中間応答（５０％）を誘導する特定の抗体の濃度を指す。例えば、ＥＣ５０は、ウイルス感染が５０％だけ中和される抗体の濃度である。
【００９６】
「ＥＣ９０」は、既定の曝露又は処理時間後の最大可能効果の９０％に対応する応答を誘導する特定の抗体の濃度を指す。例えば、ＥＣ９０は、ウイルス感染が９０％だけ中和される抗体の濃度である。
【００９７】
「中和」は、ウイルス遺伝子発現の不存在によって実証される、宿主細胞のウイルス感染の阻害を指す。任意の１つの理論に拘束されるものではないが、特定の抗体による中和の機序は、ウイルスキャプシドタンパク質と細胞表面受容体との相互作用の遮断又は宿主細胞の核へのウイルスゲノムの送達前の流入及びトラフィキングプロセスの任意の段階の破壊を含み得る。
【００９８】
本明細書中で用いられる用語、いずれかの疾患又は障害を「処置する」、「処置すること」、又はその「処置」は、一態様において、疾患又は障害を改善すること（すなわち、疾患の進行、又はその臨床病徴の少なくとも１つを遅らせ、抑制し、又は軽減すること）を指す。別の態様において、「処置する」、「処置すること」、又は「処置」は、患者によって識別され得ないものを含む少なくとも１つの物理的パラメータを軽減又は改善することを指す。さらに別の態様において、「処置する」、「処置すること」、又は「処置」は、物理的に（例えば、識別できる病徴の安定化）、生理的に（例えば、物理的パラメータの安定化）、又は両方で、疾患又は障害を調節することを指す。
【００９９】
フレーズ「見込みを引き下げること」は、疾患、感染又は障害の発症又は発生又は進行を遅延させることを指す。
【０１００】
用語「治療的に許容可能な量」又は「治療的に有効な用量」は、互換的に、所望の結果（すなわち、腫瘍サイズの引下げ、腫瘍増殖の阻害、転移の予防、ウイルス、細菌、真菌、又は寄生虫感染の阻害又は予防）をもたらすのに十分な量を指す。一部の態様において、治療的に許容可能な量は、不所望の副作用を誘導も引起しもしない。治療的に許容可能な量は、最初に低い用量を投与してから、当該用量を、所望の効果が達成されるまで段々に増大させることによって、決定され得る。本開示の分子の「予防的に有効な投薬量」、及び「治療滴に有効な投薬量」はそれぞれ、病徴、例として、ポリオーマウイルス感染関連病徴の発症を予防することができ、又は病徴の重症度を軽減することができる。
【０１０１】
用語「同時投与」は、個人の血液中での２つの活性剤の同時の存在を指す。同時投与される活性剤は、同時に送達されても、順次送達されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】図１Ａ／Ｂ〜１６Ａ／Ｂは、ＡＤ及びＡＹ  ＨＢＶセロタイプについてのＫｄを示す、抗体の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ／Ｂｉａｃｏｒｅ）測定値である。
【図２】（上記の通り。）
【図３】（上記の通り。）
【図４】（上記の通り。）
【図５】（上記の通り。）
【図６】（上記の通り。）
【図７】（上記の通り。）
【図８】（上記の通り。）
【図９】（上記の通り。）
【図１０】（上記の通り。）
【図１１】（上記の通り。）
【図１２】（上記の通り。）
【図１３】（上記の通り。）
【図１４】（上記の通り。）
【図１５】（上記の通り。）
【図１６】（上記の通り。）
【図１７】図１７〜３３は、抗体がＨＢＶ感染を中和することを実証する。
【図１８】（上記の通り。）
【図１９】（上記の通り。）
【図２０】（上記の通り。）
【図２１】（上記の通り。）
【図２２】（上記の通り。）
【図２３】（上記の通り。）
【図２４】（上記の通り。）
【図２５】（上記の通り。）
【図２６】（上記の通り。）
【図２７】（上記の通り。）
【図２８】（上記の通り。）
【図２９】（上記の通り。）
【図３０】（上記の通り。）
【図３１】（上記の通り。）
【図３２】（上記の通り。）
【図３３】（上記の通り。）
【図３４】図３４〜５０は、４つのゲノタイプ（Ａ〜Ｄ）に対する抗体のＩＣ５０を示す。
【図３５】（上記の通り。）
【図３６】（上記の通り。）
【図３７】（上記の通り。）
【図３８】（上記の通り。）
【図３９】（上記の通り。）
【図４０】（上記の通り。）
【図４１】（上記の通り。）
【図４２】（上記の通り。）
【図４３】（上記の通り。）
【図４４】（上記の通り。）
【図４５】（上記の通り。）
【図４６】（上記の通り。）
【図４７】（上記の通り。）
【図４８】（上記の通り。）
【図４９】（上記の通り。）
【図５０】（上記の通り。）
【図５１】図５１〜６６は、４つの異なる臨床突然変異に対する抗体のＩＣ５０を示す。
【図５２】（上記の通り。）
【図５３】（上記の通り。）
【図５４】（上記の通り。）
【図５５】（上記の通り。）
【図５６】（上記の通り。）
【図５７】（上記の通り。）
【図５８】（上記の通り。）
【図５９】（上記の通り。）
【図６０】（上記の通り。）
【図６１】（上記の通り。）
【図６２】（上記の通り。）
【図６３】（上記の通り。）
【図６４】（上記の通り。）
【図６５】（上記の通り。）
【図６６】（上記の通り。）
【図６７】ＦＲＧＮマウスモデルにおけるＨＢｓＡｇの量を引き下げる、抗体の有効性を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０３】
本開示は、Ｂ型肝炎に結合し、それを中和する抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。さらに、本開示は、所望の薬理学的特徴及び他の所望の特質を有し、したがって、Ｂ型肝炎関連肝不全、肝硬変又は肝細胞癌の見込みの引き下げ又はその処置に用いることができる抗体を提供する。本開示はさらに、抗体を含む医薬組成物並びにそのような医薬組成物を製造する方法、及びそのような医薬組成物をＢ型肝炎感染及び関連障害の予防及び処置に用いる方法を提供する。
【０１０４】
抗ＨＢｓＡｇ抗体
本開示は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。本開示の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）として、以下に限定されないが、以下の実施例に記載の通り単離されたヒトモノクローナル抗体又はそのフラグメントが挙げられる。
【０１０５】
特定の態様における本開示は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、配列番号１８、５０、８２、１１４、１４６、１７８、２１０、２４２、２７４、３０６、３３８、３７０、４０２、４３４、４６６、又は４９８（表２）のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。本開示はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表２に列記されるＶＨ  ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含む抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。特定の態様において、本開示は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表２に列記されるＶＨ  ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１、２、３つ以上のＶＨ  ＣＤＲを含む（又は代わりに、これらからなる）抗体を提供する。
【０１０６】
本開示は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、配列番号３４、６６、９８、１３０、１６２、１９４、２２６、２５８、２９０、３２２、３５４、３８６、４１８、４５０、４８２又は５１４（表２）のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。本開示はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表２に列記されるＶＬ  ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含む抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。特に、本開示は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表２に列記されるＶＬ  ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１、２、３つ以上のＶＬ  ＣＤＲを含む（又は代わりに、これらからなる）抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。
【０１０７】
本開示の他の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗体結合フラグメント）は、突然変異しているが、表２に記載される配列中に示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５パーセントの同一性をＣＤＲ領域内に有するアミノ酸を含む。一部の態様において、これは、表２に記載される配列中に示されるＣＤＲ領域と比較した場合に、１、２、３、４、又は５つ以下のアミノ酸がＣＤＲ領域内で突然変異している突然変異アミノ酸配列を含む。
【０１０８】
本開示はまた、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体のＶＨ、ＶＬ、全長重鎖、及び全長軽鎖をコードする核酸配列を提供する。そのような核酸配列は、哺乳類細胞中での発現のために最適化され得る。
【０１０９】
【表２】
2021525071.tif 000003
【０１１０】
【表３】
2021525071.tif 000004
【０１１１】
【表４】
2021525071.tif 000005
【０１１２】
【表５】
2021525071.tif 000006
【０１１３】
【表６】
2021525071.tif 000007
【０１１４】
【表７】
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【０１１５】
【表８】
2021525071.tif 000009
【０１１６】
【表９】
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【０１１７】
【表１０】
2021525071.tif 000011
【０１１８】
【表１１】
2021525071.tif 000012
【０１１９】
【表１２】
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【０１２０】
【表１３】
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【０１２１】
【表１４】
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【０１２２】
【表１５】
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【０１２３】
【表１６】
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【０１２４】
【表１７】
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【０１２５】
【表１８】
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【０１２６】
【表１９】
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【０１２７】
【表２０】
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【０１２８】
【表２１】
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【０１２９】
【表２２】
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【０１３０】
【表２３】
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【０１３１】
【表２４】
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【０１３２】
【表２５】
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【０１３３】
【表２６】
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【０１３４】
【表２７】
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【０１３５】
【表２８】
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【０１３６】
【表２９】
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【０１３７】
【表３０】
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【０１３８】
【表３１】
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【０１３９】
【表３２】
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【０１４０】
【表３３】
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【０１４１】
【表３４】
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【０１４２】
【表３５】
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【０１４３】
【表３６】
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【０１４４】
【表３７】
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【０１４５】
【表３８】
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【０１４６】
【表３９】
2021525071.tif 000040
【０１４７】
【表４０】
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【０１４８】
【表４１】
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【０１４９】
【表４２】
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【０１５０】
【表４３】
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【０１５１】
【表４４】
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【０１５２】
本開示の他の抗体として、アミノ酸、又はアミノ酸をコードする核酸が突然変異しているが、表２に記載される配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５パーセントの同一性を有するものが挙げられる。一部の態様において、これは、表２に記載される配列中に示される可変領域と比較した場合に、１、２、３、４、又は５つ以下のアミノ酸が可変領域内で突然変異している突然変異アミノ酸配列を含む一方、実質的に同じ治療活性を保持する。
【０１５３】
これらの抗体は、ＨＢｓＡｇに結合することができるので、ＶＨ、ＶＬ、全長軽鎖、及び全長重鎖の配列（アミノ酸配列、及びアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列）は、他のＨＢｓＡｇ−結合抗体を生じさせるように「混合且つマッチ」され得る。そのような「混合且つマッチ」されたＨＢｓＡｇ−結合抗体は、当該技術において知られている結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ及び実施例の項において記載される他のアッセイ）を用いて試験され得る。これらの鎖が混合且つマッチされる場合、特定のＶＨ／ＶＬ対由来のＶＨ配列が、構造的に類似するＶＨ配列で置換されるべきである。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖対由来の全長重鎖配列が、構造的に類似する全長重鎖配列で置換されるべきである。同様に、特定のＶＨ／ＶＬ対由来のＶＬ配列が、構造的に類似するＶＬ配列で置換されるべきである。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖対由来の全長軽鎖配列が、構造的に類似する全長軽鎖配列で置換されるべきである。したがって、一態様において、本開示は：配列番号１８、５０、８２、１１４、１４６、１７８、２１０、２４２、２７４、３０６、３３８、３７０、４０２、４３４、４６６、又は４９８（表２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；並びに配列番号３４、６６、９８、１３０、１６２、１９４、２２６、２５８、２９０、３２２、３５４、３８６、４１８、４５０、４８２又は５１４（表２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する単離された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供し；当該抗体は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する。
【０１５４】
別の態様において、本開示は、（ｉ）配列番号２０、５２、８４、１１６、１４８、１８０、２１２、２４４、２７６、３０８、３４０、３７２、４０４、４３６、４６８、又は５００（表２）からなる群から選択される哺乳類の細胞中での発現のために最適化されたアミノ酸配列を含む全長重鎖及び配列番号３６、６８、１００、１３２、１６４、１９６、２２８、２６０、２９２、３２４、３５６、３８８、４２０、４５２、４８４又は５１６（表２）からなる群から選択される哺乳類の細胞中での発現のために最適化されたアミノ酸配列を含む全長軽鎖を有する単離されたモノクローナル抗体又は（ｉｉ）その抗原結合部分を含む機能タンパク質を提供する。
【０１５５】
別の態様において、本開示は、表２に記載される重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せを含むＨＢｓＡｇ−結合抗体を提供する。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＨ  ＣＤＲ１（又はＨＣＤＲ１）のアミノ酸配列は、配列番号９、４１、７３、１０５、１３７、１６９、２０１、２３３、２６５、２９７、３２９、３６１、３９３、４２５、４５７又は４８９に示される。抗体のＶＨ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０、４２、７４、１０６、１３８、１７０、２０２、２３４、２６６、２９８、３３０、３６２、３９４、４２６、４５８又は４９０に示される。抗体のＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１、４３、７５、１０７、１３９、１７１、２０３、２３５、２６７、２９９、３３１、３６３、３９５、４２７、４５９又は４９１に示される。抗体のＶＬ  ＣＤＲ１（のアミノ酸配列は、配列番号２５、５７、８９、１２１、１５３、１８５、２１７、２４９、２８１、３１３、３４５、３７７、４０９、４４１、４７３又は５０５に示される。抗体のＶＬ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２６、５８、９０、１２２、１５４、１８６、２１８、２５０、２８２、３１４、３４６、３７８、４１０、４４２、４７４又は５０６に示される。抗体のＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２７、５９、９１、１２３、１５５、１８７、２１９、２５１、２８３、３１５、３４７、３７９、４１１、４４３、４７５又は５０７に示される。
【０１５６】
これらの抗体はそれぞれ、ＨＢｓＡｇに結合することができ、そしてその抗原−結合特異性が主に、ＣＤＲ１、２、及び３の領域によって提供されるならば、ＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３の配列、並びにＶＬ  ＣＤＲ１、２、及び３の配列は、「混合且つマッチ」され得る（すなわち、各抗体が、ＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３、並びにＶＬ  ＣＤＲ１、２及び３を含有して、他のＨＢｓＡｇ−結合抗体を生じさせなければならないが、様々な抗体由来のＣＤＲが混合且つマッチされ得る）。そのような「混合且つマッチ」されたＨＢｓＡｇ−結合抗体は、当該技術において知られている結合アッセイ、及び実施例において記載されているアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を用いて試験され得る。ＶＨ  ＣＤＲ配列が混合且つマッチされる場合、特定のＶＨ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３の配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列で置換されるべきである。同様に、ＶＬ  ＣＤＲ配列が混合且つマッチされる場合、特定のＶＬ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３の配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列で置換されるべきである。１つ以上のＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の配列を、本開示のモノクローナル抗体について、本明細書中で示されるＣＤＲ配列由来の構造的に類似する配列で置換することによって、新規のＶＨ配列及びＶＬ配列が生じ得ることは、当業者に容易に明らとなろう。
【０１５７】
したがって、本開示は、配列番号９、４１、７３、１０５、１３７、１６９、２０１、２３３、２６５、２９７、３２９、３６１、３９３、４２５、４５７又は４８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号１０、４２、７４、１０６、１３８、１７０、２０２、２３４、２６６、２９８、３３０、３６２、３９４、４２６、４５８又は４９０；からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；配列番号：１１、４３、７５、１０７、１３９、１７１、２０３、２３５、２６７、２９９、３３１、３６３、３９５、４２７、４５９又は４９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；配列番号：２５、５７、８９、１２１、１５３、１８５、２１７、２４９、２８１、３１３、３４５、３７７、４０９、４４１、４７３又は５０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２６、５８、９０、１２２、１５４、１８６、２１８、２５０、２８２、３１４、３４６、３７８、４１０、４４２、４７４又は５０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；並びに配列番号２７、５９、９１、１２３、１５５、１８７、２１９、２５１、２８３、３１５、３４７、３７９、４１１、４４３、４７５又は５０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合領域を提供し；当該抗体は、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する。
【０１５８】
特定の態様において、ＨＢｓＡｇに特異的に結合する抗体は、表２に記載の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）である。
【０１５９】
１．抗体の同定
本開示は、ＨＢｓＡｇに結合する抗体及び抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。特定の態様において、抗体及び抗体フラグメントは、４つ全てのＢ型肝炎セロタイプ内の同じエピトープに結合し得る。
【０１６０】
本開示はまた、表２に記載のＨＢｓＡｇ抗体と同じエピトープに結合する抗体及び抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。したがって、追加の抗体及び抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、結合アッセイにて他の抗体と交差競合する（例えば、統計的に有意に他の抗体の結合を競合阻害する）それらの能力に基づき同定され得る。ＨＢｓＡｇへの本開示の抗体及び抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）の結合を阻害する試験抗体の能力は、試験抗体がＨＢｓＡｇへの結合についてその抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）と競合し得ること；そのような抗体は、非限定的な理論に従って、競合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）と同じ、又は関連する（例えば、構造的に類似する、又は空間的に近位の）、ＨＢｓＡｇ上のエピトープに結合し得ることを実証する。特定の態様において、本開示の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）と同じ、ＨＢｓＡｇ上のエピトープに結合する抗体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。そのようなヒト又はヒト化モノクローナル抗体は、本明細書中で記載されるように調製且つ単離され得る。
【０１６１】
２．Ｆｃ領域のフレームワークのさらなる変更
本開示は、特異的ＨＢｓＡｇ抗体を開示した。これらの抗体は、例えば、抗体の特性を向上させるような、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基の修飾をさらに含む、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。典型的には、そのようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるようになされる。例えば、一アプローチとして、１つ以上のフレームワーク残基を、対応する生殖細胞系配列に「復帰突然変異させる」ものがある。より具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖細胞系配列と異なるフレームワーク残基を含有し得る。そのような残基は、抗体フレームワーク配列を抗体が由来する生殖細胞系配列と比較することによって、特定され得る。フレームワーク領域配列を、それらの生殖細胞系の構成に戻すため、体細胞突然変異を例えば、部位特異的突然変異誘発によって生殖細胞系配列に「復帰突然変異」させることができる。そのような「復帰突然変異」した抗体も、包含されることが意図される。
【０１６２】
別のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内の、又は１つ以上のＣＤＲ領域内の、１つ以上の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去することによって、抗体の潜在的免疫原性を引き下げることを包含する。このアプローチは、「脱免疫化」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３／０１５３０４３号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６３】
フレームワーク又はＣＤＲ領域内になされる修飾に加えて、又はその代わりに、抗体は、典型的には、抗体の１つ以上の機能的特性、例えば、血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗原依存的細胞毒性を変更するためのＦｃ領域内の修飾を含むように操作され得る。さらに、抗体は、ここでも抗体の１つ以上の機能的特性を変更するように、化学的に修飾されてもよい（例えば、１つ以上の化学部分が、抗体に取り付けられてよい）し、そのグリコシル化を変更するように修飾されてもよい。これらの態様のそれぞれが、以下でさらに詳細に説明される。
【０１６４】
一態様において、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が、変更、例えば増減されるように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，６７７，４２５号明細書においてさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖のアセンブリを促進して、又は抗体の安定性を増大させ、若しくは低下させるように、変更される。
【０１６５】
別の態様において、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を低下させるように突然変異される。より具体的には、抗体が天然Ｆｃ−ヒンジドメインのブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）結合と比べて損傷したＳｐＡ結合を有するように、１つ以上のアミノ酸突然変異がＦｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域中に導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６６】
さらに他の態様において、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクタ機能を変更するために少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することによって変更される。例えば、抗体がエフェクタリガンドについて変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、１つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸残基で置換され得る。親和性が変更されるエフェクタリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、例えば、両方ともＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書に記載されている。
【０１６７】
別の態様において、抗体が変更されたＣ１ｑ結合及び／又は引き下げられ、若しくは停止された補体依存的細胞毒性（ＣＤＣ）を有するように、アミノ酸残基から選択される１つ以上のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基で置換され得る。このアプローチは、例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に記載されている。
【０１６８】
別の態様において、１つ以上のアミノ酸残基は、補体を固定する抗体の能力を変更させるように変更される。このアプローチは、例えば、Ｂｏｄｍｅｒらによる国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに記載されている。具体的な態様において、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントの１つ以上のアミノ酸は、ＩｇＧ１サブクラス及びカッパアイソタイプについての１つ以上のアロタイプアミノ酸残基で置換される。アロタイプアミノ酸残基として、以下に限定されないが、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ．１：３３２−３３８（２００９）によって記載される通り、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３のサブクラスの重鎖の定常領域並びにカッパアイソタイプの軽鎖の定常領域も挙げられる。
【０１６９】
さらに別の態様において、Ｆｃ領域は、抗体依存的細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増大させ、及び／又はＦｃγ受容体についての抗体の親和性を増大させるように、１つ以上のアミノ酸を修飾することによって修飾される。このアプローチは、例えば、Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号パンフレットに記載されている。さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎについてのヒトＩｇＧ１上の結合部位はマッピングされており、改善された結合を有する変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４，２００１参照）。
【０１７０】
さらに別の態様において、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体を製造することができる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、「抗原」についての抗体の親和性を増大させるように変更され得る。そのような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変更することによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位を排除する１つ以上のアミノ酸置換をなしてそれによってその部位におけるグリコシル化を排除することができる。そのような非グリコシル化は、抗原についての抗体の親和性を増大させ得る。そのようなアプローチは、例えば、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書に記載されている。
【０１７１】
さらに又は代わりに、変更されたグリコシル化のタイプを有する抗体、例えば、引き下げられた量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体又は増大された二分岐ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体を製造することができる。そのような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を増大させることが実証されている。そのような炭水化物修飾は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該技術分野において記載されており、組換え抗体を発現する宿主細胞として用いてそれによって変更されたグリコシル化を有する抗体を産生することができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書は、細胞系中で発現される抗体が低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞系を記載している。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９７）結合炭水化物に付着させる能力が引き下げられ、宿主細胞中で発現される抗体の低フコシル化をももたらす変異体ＣＨＯ細胞系、Ｌｅｃｌ３細胞を記載している（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０も参照）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／５４３４２号パンフレットは、操作細胞系中で発現される抗体が抗体の増大されたＡＤＣＣ活性をもたらす増大された二分岐ＧｌｃＮａｃ構造を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）−ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞系を記載している（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０，１９９９も参照）。
【０１７２】
別の態様において、抗体は、その生物学的半減期を増大させるように修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、Ｗａｒｄの米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記載の通り、以下の突然変異の１つ以上：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆが導入され得る。これ以外にも、生物学的半減期を増大させるため、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書及び同第６，１２１，０２２号明細書に記載の通り、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨ１又はＣＬ領域内で変更され得る。
【０１７３】
抗体のＡＤＣＣ活性を最小化するため、Ｆｃ領域中の特異的突然変異は、エフェクタ細胞との最小の相互作用を有する「Ｆｃサイレント」抗体をもたらす。一般に、「ＩｇＧ  Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域、例として、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を定義するために使用される。ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、一般に、ＩｇＧ抗体のＣ２２６から又はＰ２３０位からカルボキシル末端までのアミノ酸残基を含むと定義される。Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（残基Ｋ４４７）は、例えば、抗体の産生又は精製の間に除去され得る。
【０１７４】
エフェクタ機能のサイレント化は抗体のＦｃ領域中の突然変異によって得られ得、当該技術分野において記載されている：ＬＡＬＡ及びＮ２９７Ａ（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．ｖｏｌ．２０（６）：６８５−６９１）；及びＤ２６５Ａ（Ｂａｕｄｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８１：６６６４−６９）、Ｈｅｕｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２０１２０６５９５０号パンフレットも参照。サイレントＦｃ  ＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１  Ｆｃアミノ酸配列中のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を含むＬＡＬＡ突然変異体である。サイレントＩｇＧ１抗体の別の例は、ＤＡＰＡ（Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ）突然変異（米国特許第６，７３７，０５６号明細書）である。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、非グリコシル化抗体をもたらすＮ２９７Ａ突然変異を含む。
【０１７５】
Ｆｃサイレント抗体は、ＡＤＣＣ活性をもたらさず、又は低いＡＤＣＣ活性をもたらし、このことは、Ｆｃサイレント抗体が５０％未満の特異的細胞溶解（低ＡＤＣＣ活性）又は１％未満の特異的細胞溶解（ＡＤＣＣ活性なし）のＡＤＣＣ活性を示すことを意味する。
【０１７６】
３．抗体の生成
抗ＨＢｓＡｇ抗体及びその抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、当該技術において知られているあらゆる手段によって生成され得、以下に限定されないが、組換え発現、化学合成、及び抗体四量体の酵素的消化が挙げられ、ここで、全長モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ生成又は組換え生成によって得られ得る。組換え発現は、当該技術において知られている適切なあらゆる宿主細胞、例えば、哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞などに由来し得得る。
【０１７７】
本開示はさらに、本明細書中に記載される抗体をコードするポリヌクレオチド、例えば、本明細書中に記載される、相補性決定領域を含む重鎖又は軽鎖の可変領域又は可変セグメントをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の態様において、重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９、５１、８３、１１５、１４７、１７９、２１１、２４３、２７５、３０７、３３９、３７１、４０３、４３５、４６７又は４９９からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の態様において、軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３５、６７、９９、１３１、１６３、１９５、２２７、２５９、２９１、３２３、３５５、３８７、４１９、４５１、４８３又は５１５からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【０１７８】
一部の態様において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２１、５３、８５、１１７、１４９、１８１、２１３、２４５、２７７、３０９、３４１、３７３、４０５、４３７、４６９又は５０１のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の態様において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３７、６９、１０１、１３３、１６５、１９７、２２９、２６１、２９３、３２５、３５７、３８９、４２１、４５３、４８５、又は５１７のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【０１７９】
本開示のポリヌクレオチドは、抗ＨＢｓＡｇ抗体の可変領域配列のみをコードし得る。これらはまた、抗体の可変領域及び定常領域の双方をコードし得る。ポリヌクレオチド配列の一部は、例示の抗ＨＢｓＡｇ抗体の１つの重鎖及び軽鎖の双方の可変領域を含むポリペプチドをコードする。一部の他のポリヌクレオチドは、それぞれ抗体の１つの重鎖及び軽鎖の可変領域と実質的に同じ２つのポリペプチドセグメントをコードする。
【０１８０】
ポリヌクレオチド配列は、抗ＨＢｓＡｇ抗体又はその結合フラグメントをコードする既存の配列のデノボ固相ＤＮＡ合成によって、又はＰＣＲ突然変異誘発によって生成され得る。核酸の直接的化学合成が、当該技術において知られている方法によって達成され得、例えば、Ｎａｒａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０，１９７９のホスホトリエステル法；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９，１９７９のホスホジエステル法；Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：１８５９，１９８１のジエチルホスホロアミダイト法；及び米国特許第４，４５８，０６６号明細書の固体支持法がある。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入は、例えば、ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９２；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；Ｍａｔｔｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：９６７，１９９１；及びＥｃｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  １：１７，１９９１に記載されるようにして実行され得る。
【０１８１】
また、本開示において提供されるのが、上述の抗ＨＢｓＡｇ抗体を生成するための発現ベクター及び宿主細胞である。種々の発現ベクターを使用して、抗ＨＢｓＡｇ抗体の鎖又はその結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを発現させることができる。ウイルスベースの発現ベクター及び非ウイルス発現ベクターの双方が、哺乳類宿主細胞において抗体を生成するのに用いられ得る。非ウイルスベクター及び非ウイルス系として、プラスミド又はエピソームベクター（典型的には、タンパク質又はＲＮＡを発現するための発現カセットを有する）及びヒト人工染色体が挙げられる（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．１５：３４５，１９９７参照）。例えば、哺乳類（例えばヒト）細胞における抗ＨＢｓＡｇポリヌクレオチド及びポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターとして、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ａ，Ｂ  ＆  Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ａ，Ｂ  ＆  Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、及び他のタンパク質を発現させるための当該技術において知られている多数の他のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとして、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバールウイルスに基づくベクター、ワクシニアウイルスベクター、及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．、前掲；Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：８０７，１９９５；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６８：１４３，１９９２参照。
【０１８２】
発現ベクターの選択は、ベクターが発現されることとなる意図される宿主細胞に依存する。典型例として、発現ベクターは、抗ＨＢｓＡｇ抗体の鎖又はフラグメントをコードするポリヌクレオチドに作動可能に結合されているプロモータ及び他の調節配列（例えばエンハンサ）を含有する。一部の態様において、誘導プロモータを使用して、挿入された配列の発現を、誘導条件下以外では防止する。誘導プロモータとして、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモータ、又はヒートショックプロモータが挙げられる。形質転換された生物の培養体は、非誘導条件下で、集団を、発現産物が宿主細胞によってより良好に許容されるコード配列について偏らせることなく、増殖し得る。また、プロモータに加えて、他の調節要素が、抗ＨＢｓＡｇ抗体又はフラグメントの効率的な発現に必要とされてよく、又は所望されてよい。当該要素として、典型的に、ＡＴＧ開始コドン及び隣接するリボソーム結合部位又は他の配列が挙げられる。加えて、発現の効率が、使用される細胞系に適したエンハンサの包含によって増強され得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５，１９９４；及びＢｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６，１９８７参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサ又はＣＭＶエンハンサを用いて、哺乳類宿主細胞における発現を増大させることができる。
【０１８３】
発現ベクターはまた、挿入された抗ＨＢｓＡｇ抗体配列によってコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成するように、分泌シグナル配列位置を提供し得る。多くの場合、挿入される抗ＨＢｓＡｇ抗体配列は、ベクター内に含まれる前に、シグナル配列に結合される。また、抗ＨＢｓＡｇ抗体の軽鎖及び重鎖の可変ドメインをコードする配列を受け入れるのに用いられることとなるベクターは時折、定常領域又はその部分をコードする。そのようなベクターは、定常領域との融合タンパク質として可変領域を発現することによって、無傷の抗体又はそのフラグメントを生成し得る。典型的に、そのような定常領域はヒトである。
【０１８４】
抗ＨＢｓＡｇ抗体の鎖を保有且つ発現させるための宿主細胞は、原核生物であっても真核生物であってもよい。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本開示のポリヌクレオチドをクローニングして発現させるのに有用な一原核生物宿主である。使用に適した他の微生物宿主として、桿菌、例えば枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、並びに他の腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えばサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、及び種々のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属の種が挙げられる。これらの原核生物宿主において、当業者であれば発現ベクターを構築することもでき、これは典型的に、宿主細胞と適合する発現制御配列（例えば複製起点）を含有する。加えて、任意の数の種々の周知のプロモータが存在することとなり、例えば、ラクトースプロモータ系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモータ系、ベータ−ラクタマーゼプロモータ系、又はファージラムダ由来のプロモータ系がある。プロモータは典型的に、場合によってはオペレータ配列と共に、発現を制御し、そしてリボソーム結合部位配列等を有しており、転写及び翻訳を開始して完了させる。また、他の微生物、例えば酵母を使用して、抗ＨＢｓＡｇ抗体を発現させることもできる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞を用いることもできる。
【０１８５】
他の態様において、哺乳類宿主細胞を用いて、本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体を発現させて生成することができる。例えば、哺乳類宿主細胞は、内因性の免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株（例えば、実施例に記載されている骨髄腫ハイブリドーマクローン）であってもよいし、外因性の発現ベクターを保有する哺乳類の細胞株であってもよい。これらとして、死に至る標準的な、又は不死の標準的若しくは異常な、あらゆる動物細胞又はヒト細胞が挙げられる。例えば、無傷の免疫グロブリンを分泌することができる適切ないくつかの宿主細胞株が開発されており、ＣＨＯ細胞株、種々のＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換されたＢ細胞、及びハイブリドーマが挙げられる。ポリペプチドを発現させるための哺乳類組織細胞培養の使用が、概して、例えば、Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７において考察されている。哺乳類宿主細胞用の発現ベクターは、発現制御配列、例えば、複製起点、プロモータ、及びエンハンサ（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９−６８，１９８６参照）、並びに必須のプロセシング情報部位、例えば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネータ配列を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳類の遺伝子に、又は哺乳類のウイルスに由来するプロモータを含有する。適切なプロモータは、構成的であり得、細胞型特異的であり得、ステージ特異的であり得、且つ／又は調整可能若しくは調節可能であり得る。有用なプロモータとして、以下に限定されないが、メタロチオネインプロモータ、構成的アデノウイルス主要後期プロモータ、デキサメタゾン誘導ＭＭＴＶプロモータ、ＳＶ４０プロモータ、ＭＲＰ  ｐｏｌＩＩＩプロモータ、構成的ＭＰＳＶプロモータ、テトラサイクリン誘導ＣＭＶプロモータ（例えばヒト即初期ＣＭＶプロモータ）、構成的ＣＭＶプロモータ、及び当該技術において知られているプロモータ−エンハンサの組合せが挙げられる。
【０１８６】
対象となるポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の型に応じて変わる。例えば、塩化カルシウム形質移入が、原核細胞に一般的に利用されるが、リン酸カルシウム処理又は電気穿孔法が、他の細胞宿主に用いられ得る（概して、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、前掲参照）。他の方法として、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、注射及びマイクロインジェクション、バリスティック法、ウイロゾーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸結合体、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合（Ｅｌｌｉｏｔ  ａｎｄ  Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｃｅｌｌ  ８８：２２３，１９９７）、剤によるＤＮＡ吸収増強（ａｇｅｎｔ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｕｐｔａｋｅ  ｏｆ  ＤＮＡ）、並びにイクスビボ形質導入が挙げられる。多くの場合、組換えタンパク質の長期的多収産生のために、安定した発現が所望されることとなる。例えば、抗ＨＢｓＡｇ抗体の鎖又はその結合フラグメントを安定して発現する細胞株が、ウイルスの複製起点又は内因性の発現要素を含有する発現ベクター及び選択マーカー遺伝子を用いて、調製され得る。ベクターの導入後、細胞を、富化培地中で１〜２日間増殖させてから、選択培地にスイッチすることができる。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、そしてその存在により、選択培地において、導入された配列を首尾よく発現する細胞の成長が可能となる。耐性を示す、安定して形質移入された細胞が、細胞型に適した組織培養技術を用いて増殖され得る。
【０１８７】
治療及び診断的使用
本開示の抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、種々の用途、例として、以下に限定されないが、Ｂ型肝炎ウイルス感染及び疾患において有用である。特定の態様において、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、Ｂ型肝炎感染の中和及び肝硬変又は肝臓癌の予防又は処置に有用である）。使用の方法は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボ方法であり得る。
【０１８８】
一態様において、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、生物サンプル中のＨＢｓＡｇの存在の検出に有用である。本明細書中で用いられる用語「検出すること」は、定量的又は定性的検出を包含する。特定の態様において、生物サンプルは、細胞又は組織を含む。特定の態様において、そのような組織として、他の組織と比べて高いレベルのＨＢｓＡｇを発現する正常及び／又は癌性組織が挙げられる。
【０１８９】
一態様において、本開示は、生物サンプル中のＨＢｓＡｇ又はＢ型肝炎の存在を検出する方法を提供する。特定の態様において、方法は、生物サンプルを抗ＨＢｓＡｇ抗体と、抗原への抗体の結合を許容する条件下で接触させること、並びに抗体及び抗原間で複合体が形成されるか否かを検出することを含む。生物サンプルとして、以下に限定されないが、尿又は血液サンプルを挙げることができる。
【０１９０】
ＨＢｓＡｇの発現と関連する障害を診断する方法も含まれる。特定の態様において、方法は、試験細胞を抗ＨＢｓＡｇ抗体と接触させること；ＨＢｓＡｇへの抗体の結合を検出することによって、試験細胞中のＨＢｓＡｇの発現のレベルを（定量的又は定性的のいずれかで）決定すること；及び試験細胞中の感染のレベルを、対照細胞（例えば、試験細胞と同じ組織起源の正常細胞又は非ウイルス感染細胞）中のＢ型肝炎ウイルスの感染のレベルと比較することを含み、対照細胞と比較して試験細胞中のより高いレベルのＨＢｓＡｇの存在は、Ｂ型肝炎による感染と関連する障害の存在を示す。特定の態様において、試験細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス感染を有することが疑われる個体から得られる。
【０１９１】
特定の態様において、診断又は検出の方法、例えば、上記の方法は、Ｂ型肝炎ウイルス感染細胞へのＨＢｓＡｇ抗体の結合を検出することを含む。Ｂ型肝炎感染細胞への抗ＨＢｓＡｇ抗体の結合を検出するための例示的アッセイは、「ＦＡＣＳ」アッセイである。
【０１９２】
特定の他の方法を用いて抗ＨＢｓＡｇ抗体の結合を検出することができる。そのような方法として、以下に限定されないが、当該技術分野において周知の抗原結合アッセイ、例えば、ウエスタンブロット、放射性免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテインＡ免疫アッセイ、及び免疫組織化学検査（ＩＨＣ）が挙げられる。
【０１９３】
特定の態様において、抗ＢｓＡｇ抗体は、標識される。標識として、以下に限定されないが、直接的に検出される標識又は部分（例えば、蛍光、発色、高電子密度、化学発光、及び放射標識）、及び間接的に、例えば、酵素反応又は分子相互作用を介して検出される部分、例えば、酵素又はリガンドが挙げられる。
【０１９４】
特定の態様において、抗ＨＢｓＡｇ抗体は、不溶性マトリックス上で固定化される。固定化は、溶液中で遊離したままの任意のＢ型肝炎タンパク質からの抗ＨＢｓＡｇ抗体の分離を伴う。これは、慣用的に、不水溶性マトリックス若しくは表面への吸着による（Ｂｅｎｎｉｃｈら、米国特許第３，７２０，７６０号明細書）、若しくは共有結合（例えば、グルタルアルデヒド架橋を用いる）によるアッセイ手順前の抗ＨＢｓＡｇ抗体の不溶化、又は例えば、免疫沈降による抗ＨＢｓＡｇ抗体及びＨＢｓＡｇタンパク質間の複合体の形成後の抗ＨＢｓＡｇ抗体の不溶化によって達成される。
【０１９５】
上記の診断又は検出の態様のいずれも、別の抗ＨＢｓＡｇ抗体に代えて、又はそれに加えて本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体を用いて実施され得る。
【０１９６】
一態様において、本開示は、疾患を処置し、その見込みを引き下げ、又はそれを改善する方法であって、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を患者に投与し、それによって疾患を処置することを含む方法を提供する。特定の態様において、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）によって処置される疾患は、Ｂ型肝炎ウイルス感染である。処置及び／又は予防することができるＢ型肝炎疾患の例として、以下に限定されないが、肝不全、肝硬変、及び肝細胞癌が挙げられる。特定の態様において、感染は、抗ＨＢｓＡｇ抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）が特異的に結合し得るＨＢｓＡｇ発現細胞によって特徴付けられる。
【０１９７】
本開示は、Ｂ型肝炎ウイルス感染並びに肝不全、肝硬変、及び／又は肝細胞癌を処置する方法であって、治療有効量の抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を投与することを含む方法を提供する。特定の態様において、対象は、ヒトである。
【０１９８】
特定の態様において、Ｂ型肝炎ウイルス感染を引き下げる方法は、対象に治療有効量の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を投与することを含む。特定の態様において、対象は、ヒトである。特定の態様において、対象は、免疫抑制され、免疫不全であり、又は引き下げられた免疫機能を有する。免疫抑制対象について、免疫抑制の量は、抗ＨＢｓＡｇ抗体の治療効果に起因して増大され、又は低下され得る。
【０１９９】
Ｂ型肝炎ウイルス感染の処置のため、ＨＢｓＡｇ抗体、又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）の適切な投薬量は、種々の因子、例えば、処置すべき感染のタイプ、感染の重症度及び過程、感染の応答性、治療に対するウイルス耐性の生成、前治療、患者の病歴などに依存する。抗体は、１回又は数日間から数ヵ月まで続く一連の処置にわたり、又は治癒が現れるまで、若しくは感染の縮小（例えば、ウイルス尿症又は肝臓のウイルス損傷の引き下げ）が達成されるまで投与され得る。最適な投与スケジュールは、患者の体内の薬物蓄積の測定値から計算され得、個々の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）の相対的な効力に応じて変動する。特定の態様において、投薬量は、体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１００ｍｇ（例えば、０．０１ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．ｌｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ又は１００ｍｇ）であり、１日、週、月又は年１回以上与えられ得る。特定の態様において、本開示の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回与えられる。処置する医師は、測定された半減期及び体液又は組織中の抗体の濃度に基づき投与についての反復割合を推定することができる。
【０２００】
併用療法
特定の例において、本開示の抗体又は抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、他の治療薬、例えば、他の抗ウイルス剤、抗アレルギー剤、制吐剤（又は鎮吐薬）、鎮痛剤、細胞保護剤、免疫抑制剤及びそれらの組合せと併用される。
【０２０１】
本明細書中で用いられる用語「医薬的組合せ」は、一投薬量単位形態の固定された組合せ、又は併用投与用の非固定組合せ若しくはパーツのキットを指し、２つ以上の治療薬は、同時に独立して、又はある時間間隔内で別々に投与され得、とりわけ当該時間間隔により、組合せパートナーは、協働的な効果、例えば相乗効果を示し得る。
【０２０２】
用語「併用療法」は、本開示に記載される治療の症状又は感染を処置するための、２つ以上の治療薬の投与を指す。そのような投与は、実質的に同時の、例えば、活性成分の比率が固定されている単一のカプセルでの、当該治療薬の同時投与を包含する。これ以外にも、そのような投与は、各活性成分について複数回の、又は別々のコンテナ（例えば、カプセル、粉末、及び液体）での同時投与を包含する。粉末及び／又は液体が、投与前に所望の用量に再構成されても希釈されてもよい。加えて、そのような投与はまた、各タイプの治療薬の、おおよそ同時での、又は異なる時点での、逐次的な使用を包含する。いずれにせよ、処置レジメンは、本明細書中に記載される症状又は障害を処置する際に、薬物組合せの有益な効果を提供することとなる。
【０２０３】
併用療法は、「相乗効果」を提供し得、且つ「相乗効果的」であること、すなわち、活性成分が一緒に用いられる場合に達成される効果が、個々の成分を別々に用いることに由来する効果の和よりも大きいことを立証し得る。活性成分が：（１）同時調合されて、組み合わされた、ユニット投薬量の製剤で同時に投与若しくは送達され；（２）交互に、若しくは別々の製剤として同時に送達され；又は（３）他の何らかのレジメンによる場合に、相乗効果が達成され得る。交互療法で送達される場合、個々の成分が、例えば別々のシリンジでの異なる注射によって、順次投与又は送達される場合に、相乗効果が達成され得る。一般に、交互療法の間、各活性成分の有効な投薬量が順次、すなわち連続的に投与されるが、併用療法において、２つ以上の活性成分の有効な投薬量が、一緒に投与される。
【０２０４】
一態様において、本開示は、Ｂ型肝炎感染の処置を必要とする対象に抗ＨＢｓＡｇ抗体を免疫抑制治療薬と一緒に投与することによって、Ｂ型肝炎感染を処置する方法を提供する。抗ＨＢｓＡｇ抗体は、循環中のＨＢｓＡｇの量を引き下げ、免疫系が、投与前又は後に免疫抑制療法から生じるＢ型肝炎ウイルス感染に対する応答を開始させるのを可能とする。免疫抑制療法薬の例として、以下に限定されないが、モノホスフェートデヒドロゲナーゼインヒビタ、プリン合成インヒビタ、カルシニューリンインヒビタ又はｍＴＯＲインヒビタが挙げられる。免疫抑制療法薬の具体例として、以下に限定されないが、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ミコフェノール酸ナトリウム、アザチオプリン、タクロリムス、シロリムス及びシクロスポリンが挙げられる。
【０２０５】
一実施形態において、抗ＨＢｓＡｇ抗体組合せは、ＰＤ−１インヒビタ、例えば、国際公開第２０１５／０２６６８４号パンフレット又は国際公開第２０１６／０５７８４６号パンフレットに記載のものと用いられる。一部の実施形態において、ＰＤ−１インヒビタは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ又はピジリズマブから選択される抗ＰＤ−１抗体である。
【０２０６】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブについての代替名称として、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、又はＢＭＳ−９３６５５８が挙げられる。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。ニボルマブは、ＰＤ１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）及びＰＤ１に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示されている。一実施形態において、ＰＤ−１のインヒビタは、ニボルマブであり、それに開示される配列（又は、それと実質的に同じ又は類似の配列、例えば、特定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％以上同じ配列）を有する。
【０２０７】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブ（ラムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５又はＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）；Ｍｅｒｃｋとも称される）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９（２）：１３４−４４、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示されている。
【０２０８】
一実施形態において、ＰＤ−１のインヒビタは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示されており、それに開示される配列（又は、それと実質的に同じ又は類似の配列、例えば、特定の配列と８５％、９０％、９５％以上同じ配列）を有するペムブロリズマブである。
【０２０９】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ピジリズマブである。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットに開示されている。他の抗ＰＤ１抗体として、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、とりわけ、例えば、米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書、及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書に開示される抗ＰＤ１抗体が挙げられる。
【０２１０】
一部の実施形態において、ＰＤ−１インヒビタは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域に融合しているＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態において、ＰＤ−１インヒビタは、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示）であり、ＰＤ−１及びＢ７−Ｈ１間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。
【０２１１】
一実施形態において、抗ＨＢｓＡｇ抗体組合せは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、国際公開第２０１６／０６１１４２号パンフレットに記載のものと使用される。一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである。一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットに開示されるアテゾリズマブである。一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、国際公開第２０１１／０６６３８９号パンフレットに開示されるデュルバルマブである。他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体として、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに開示されるＭＤＸ−１１０５としても知られているＢＭＳ−９３６５５９及び国際公開第２０１０／０２７４２３号パンフレットに開示されるＧＳＫ２６６１３８０としても知られているＡＭＰ−２２４が挙げられる。
【０２１２】
医薬組成物
抗ＨＢｓＡｇ抗体を含む医薬組成物又は滅菌組成物を調製するため、本開示の抗体は、薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤と混合される。組成物は、Ｂ型肝炎感染の中和に好適な１つ以上の他の治療薬をさらに含有し得る。
【０２１３】
治療薬及び診断薬の製剤が、例えば凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローション、又は懸濁液の形態の、生理的に許容可能なキャリア、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２００１；Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２０００；Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ，１９９３；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ，１９９０；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ，１９９０；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ，Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２０００参照）。
【０２１４】
具体的な態様において、抗ＨＢｓＡｇ抗体は、抗体を含有するバイアル中の凍結乾燥品である。凍結乾燥品は、水又は注射に好適な薬学的に許容可能なキャリアによって再構成され得る。後続の静脈内投与のため、得られた溶液は、通常、キャリア溶液中にさらに希釈される。
【０２１５】
本明細書に開示の抗体は、肝不全、肝硬変、及び／又は肝細胞癌を罹患する患者におけるＢ型肝炎の中和において有用であり、そのため、ＣｙｔｏＧａｍ（登録商標）を受容する骨髄移植患者にて従来使用されるスクロース及びヒトアルブミンの医薬キャリアを用いることができる（ＤｅＲｉｅｎｚｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  ２０００；２０：１１７５−８）。これ以外にも、抗ＨＢｓＡｇ抗体は、別の抗ウイルス抗体、国際公開第２００３／１０５８９４号パンフレットに記載のＳｙｎａｇｉｓ（登録商標）について記載の通り医薬キャリアを介して移植患者中に導入され得る。この刊行物において、医薬キャリアは、ヒスチジン及び／又はグリシン、糖（例えば、スクロース）及びポリオール（例えば、ポリソルベート）を含んだ。
【０２１６】
治療薬についての投与レジメンの選択は、いくつかの因子に依存し、感染の重症度、病徴のレベル、及び生体マトリックス内での標的細胞のアクセシビリティが挙げられる。特定の態様において、投与レジメンは、患者に送達される治療薬の量を、副作用の許容可能なレベルに合わせて最大にする。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の実体、及び処置されることとなる症状の重症度に部分的に依存する。抗体、サイトカイン、及び小分子の適切な用量を選択するガイダンスが入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ，１９９６；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９１；Ｂａｃｈ（ｅｄ．），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３；Ｂａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８，２００３；Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３，１９９９；Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２，２００１；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９，２０００；Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２，２００３；Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２，２０００参照）。
【０２１７】
適切な用量の決定は、例えば、当該技術において知られている、又は推測される、処置に影響を及ぼす、又は処置に影響を及ぼすと予測されるパラメータ又は因子を用いて、臨床医によってなされる。通常、用量は、適量よりも幾分少ない量から始めて、その後、所望の、又は最適な効果が達成されるまで、あらゆる負の副作用に対して、小さな増分で増やされる。重要な診断尺度として、例えば、注入反応の、病徴の尺度が挙げられる。
【０２１８】
抗ＨＢｓＡｇ抗体を有する医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成物、及び投与様式にとって所望される治療反応を、患者に有毒であることなく達成するのに有効である活性成分の量を得るように変わり得る。選択される投薬量レベルは、抗体の中和、投与経路、投与の時点、患者における抗体の半減期、処置の期間、使用される特定の組成物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物、及び／又は材料、処置されることとなる患者の年齢、性別、体重、症状、健康状態、及び先の病歴、並びに当該医療技術において知られているような因子が挙げられる、種々の薬物動態学的因子に依存することとなる。
【０２１９】
抗体又はそのフラグメントを含む組成物は、連続注入によって、或いは、例えば、１日、１週の間隔での、又は１週あたり１〜７回の投与によって提供され得る。用量は、静脈内、皮下、局所、経口、鼻腔、直腸、筋肉内、脳内で、又は吸入によって提供され得る。具体的な用量プロトコルは、不所望な大きな副作用を回避する最大用量又は用量頻度を包含するものである。
【０２２０】
本発明に記載される抗体について、患者に投与される投薬量は、０．０００１ｍｇ／患者の体重ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってよい。投薬量は、０．０００１ｍｇ／患者の体重ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、又は０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇであってよい。抗体又はそのフラグメントの投薬量は、患者の体重キログラム（ｋｇ）に、投与されることとなる用量ｍｇ／ｋｇを乗じて算出され得る。
【０２２１】
本発明の抗体の服用が繰り返されてもよく、そして投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２ヵ月、７５日、３ヵ月、又は少なくとも６ヵ月区切られてよい。
【０２２２】
特定の患者に有効な量は、処置されることとなる症状、患者の総合的な健康、投与の方法、経路及び用量、並びに副作用の重症度等の要因に応じて変わり得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９９６；Ｄｅｎｔ，Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，２００１参照）。
【０２２３】
投与経路は、例えば、局所塗布又は皮膚塗布、皮下注射又は皮下注入、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病巣内によってもよいし、持続的放出系又はインプラントによってもよい（例えば、Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６，１９８３；Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７，１９８１；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５，１９８２；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２，１９８５；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４，１９８０；米国特許第６，３５０，４６６号明細書及び米国特許第６，３１６，０２４号明細書参照）。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤若しくは局所的麻酔薬、例えば注射部位の痛みを和らげるリドカイン、又は双方を含んでもよい。加えて、肺投与も使用され得、例えば、インヘラ又はネブライザの使用、及びエアロゾル化剤での調合によるものがある。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、米国特許第５，９８５，３２０号明細書、米国特許第５，９８５，３０９号明細書、米国特許第５，９３４，２７２号明細書、米国特許第５，８７４，０６４号明細書、米国特許第５，８５５，９１３号明細書、米国特許第５，２９０，５４０号明細書、及び米国特許第４，８８０，０７８号明細書；並びに国際公開第９２／１９２４４号パンフレット、国際公開第９７／３２５７２号パンフレット、国際公開第９７／４４０１３号パンフレット、国際公開第９８／３１３４６号パンフレット、及び国際公開第９９／６６９０３号パンフレット参照（これらの出願はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。
【０２２４】
本開示の組成物はまた、当該技術分野において知られている種々の方法の１つ以上を用いる１つ以上の投与経路を介して投与され得る。当業者によって認識される通り、投与経路及び／又は方式は、所望の結果に応じて変動する。選択される抗体についての投与経路として、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄又は他の非経口投与経路、例えば、注射若しくは注入によるものが挙げられる。非経口投与は、通常、注射による腸内及び局所投与以外の投与方式を表し得、それとして、以下に限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。これ以外にも、本開示の組成物は、非経口経路、例えば、局所、表皮又は粘膜の投与経路を介して、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下又は局所投与され得る。一態様において、本開示の抗体は、注入によって投与される。別の態様において、抗体は、皮下投与される。
【０２２５】
本開示の抗体が制御放出又は持続的放出系で投与される場合、ポンプを用いて制御放出又は持続的放出を達成することができる（Ｌａｎｇｅｒ，前掲；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ  Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０，１９８７；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７，１９８０；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４，１９８９参照）。ポリマー材料を用いて抗体の治療薬の制御放出又は持続的放出を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９７４；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１，１９８３参照；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０，１９８５；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１，１９８９；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７  １：１０５，１９８９；米国特許第５，６７９，３７７号明細書；米国特許第５，９１６，５９７号明細書；米国特許第５，９１２，０１５号明細書；米国特許第５，９８９，４６３号明細書；米国特許第５，１２８，３２６号明細書；国際公開第９９／１５１５４号パンフレット；及び国際公開第９９／２０２５３号パンフレットも参照。持続的放出製剤中で用いられるポリマーの例として、以下に限定されないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられる。一態様において、持続的放出製剤中で用いられるポリマーは、不活性であり、溶出性不純物を含まず、貯蔵時に安定的であり、無菌であり、且つ生分解性である。制御放出又は持続的放出系は、予防又は治療標的に近接して配置され得、したがって、わずかな全身用量のみを要求する（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前掲，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８，１９８４参照）。
【０２２６】
制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３，１９９０）による概説に考察されている。当業者に知られている任意の技術を用いて１つ以上の本開示の抗体を含む持続的放出製剤を産生することができる。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書、国際公開第９１／０５５４８号パンフレット、国際公開第９６／２０６９８号パンフレット、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９，１９９６；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７，１９９５；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４，１９９７；及びＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０，１９９７参照（これらの出願はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。
【０２２７】
本開示の抗体が局所投与される場合、それらは、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ、ローション剤、ゲル剤、噴霧剤、エアロゾル剤、液剤、乳剤の形態、又は当業者に周知の他の形態で配合され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）参照。噴霧不可能な局所剤形のため、局所適用と適合性のキャリア又は１つ以上の賦形剤を含み、一部の例において、水よりも大きい動的粘度を有する粘性半固体又は固体形態が典型的に用いられる。好適な製剤として、以下に限定されないが、液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、散剤、リニメント剤、膏薬などが挙げられ、それらは所望により、滅菌され、又は種々の特性、例えば、浸透圧などに影響を与えるために助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤、又は塩）と混合される。他の好適な局所剤形として、一部の例において、固体又は液体不活性キャリアと組み合わせられる活性成分が加圧揮発物質（例えば、ガス状噴射剤、例えば、ｆｒｅｏｎ）との混合物中で、又はスクイーズボトル中でパッケージングされた噴霧可能なエアロゾル調製物が挙げられる。所望により、保湿剤又はヒューメクタントも医薬組成物及び剤形に添加され得る。そのような追加の成分の例は、当該技術分野において周知である。
【０２２８】
抗体を含む組成物が鼻腔内投与される場合、それは、エアロゾル形態、噴霧剤、ミスト剤で、又は滴剤の形態で配合され得る。特に、本開示による使用のための予防又は治療薬は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適なガス）の使用によって、加圧パック又はネブライザからのエアロゾル噴霧提供物の形態で簡便に送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投薬量単位は、計量された量を送達するための弁を提供することによって決定することができる。化合物及び好適な粉末基剤、例えば、ラクトース又はデンプンの粉末混合物を含有する、インヘラ又は吸入器における使用のためのカプセル剤及びカートリッジ剤（例えば、ゼラチンから構成される）が配合され得る。
【０２２９】
第２の治療薬、例えば、免疫抑制剤、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、又は放射線との同時投与又は同時処置方法が、当該技術分野において知られている（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．；Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．参照）。有効な量の治療薬が、病徴を少なくとも１０％；少なくとも２０％；少なくとも約３０％；少なくとも４０％、又は少なくとも５０％低下させ得る。
【０２３０】
抗ＨＢｓＡｇ抗体と組み合わせて施され得る追加的な治療（例えば、予防又は治療薬）が、本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体から５分未満離れて、３０分未満離れて、１時間離れて、約１時間離れて、約１〜約２時間離れて、約２時間〜約３時間離れて、約３時間〜約４時間離れて、約４時間〜約５時間離れて、約５時間〜約６時間離れて、約６時間〜約７時間離れて、約７時間〜約８時間離れて、約８時間〜約９時間離れて、約９時間〜約１０時間離れて、約１０時間〜約１１時間離れて、約１１時間〜約１２時間離れて、約１２時間〜１８時間離れて、１８時間〜２４時間離れて、２４時間〜３６時間離れて、３６時間〜４８時間離れて、４８時間〜５２時間離れて、５２時間〜６０時間離れて、６０時間〜７２時間離れて、７２時間〜８４時間離れて、８４時間〜９６時間離れて、又は９６時間〜１２０時間離れて施されてよい。２つ以上の治療が、１回の同じ患者来院中に施されてよい。
【０２３１】
特定の態様において、抗ＨＢｓＡｇ抗体は、適切なインビボ分布を確保するように配合され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高親水性化合物を排除する。（所望により）抗ＨＢｓＡｇ抗体がＢＢＢを横断することを確保するため、それらは、例えば、リポソーム中で配合され得る。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書；同第５，３７４，５４８号明細書；及び同第５，３９９，３３１号明細書参照。リポソームは、特定の細胞又は器官中に選択的に輸送され、したがって、標的薬物送達を向上させる１つ以上の部分を含み得る（例えば、Ｒａｎａｄｅ，（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５参照）。例示的な標的化部分として、ホレート又はビオチン（例えば、Ｌｏｗらの米国特許第５，４１６，０１６号明細書参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；サーファクタントプロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ，（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられ；Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照。
【０２３２】
本開示は、医薬組成物の投与プロトコルであって、それを必要とする対象への、抗体を単独で、又は他の治療と組み合わせて含む投与プロトコルを提供する。併用療法（予防又は治療薬）は、対象に、同時に施されてもよいし、順次施されてもよい。併用療法の治療（予防又は治療薬）はまた、周期的に施されてもよい。サイクリング治療は、第１の治療（第１の予防又は治療薬）をしばらくの間施してから、第２の治療（第２の予防又は治療薬）をしばらくの間施し、そしてこの逐次的な施しを繰り返して（すなわちサイクル）、治療（例えば剤）の１つに対する耐性の発達を低下させて、治療（例えば剤）の１つの副作用を回避し、若しくは和らげ、且つ／又は治療の有効性を向上させることを包含する。
【０２３３】
本開示の併用療法の治療（予防又は治療薬）は、対象に同時に施されてよい。用語「同時に」は、正確に同時に治療を施すことに限られず、むしろ、抗体が、他の治療と一緒に作用して、普通に施されるよりも利益が増すような順序で、且つ時間間隔内で、抗体又はそのフラグメントを含む医薬組成物が対象に投与されることを意味する。例えば、各療法は、同時に、又は異なる時点にてあらゆる順序で順次、対象に施されてよい；しかしながら、同時に施されないならば、所望の治療効果又は予防効果をもたらすほど十分に近い時間で施されるべきである。各療法は、対象に別々に、あらゆる適切な形態で、且つあらゆる適切な経路によって投与され得る。種々の態様において、治療（予防又は治療薬）は、１５分未満、３０分未満、１時間未満離れて、約１時間離れて、約１時間〜約２時間離れて、約２時間〜約３時間離れて、約３時間〜約４時間離れて、約４時間〜約５時間離れて、約５時間〜約６時間離れて、約６時間〜約７時間離れて、約７時間〜約８時間離れて、約８時間〜約９時間離れて、約９時間〜約１０時間離れて、約１０時間〜約１１時間離れて、約１１時間〜約１２時間離れて、２４時間離れて、４８時間離れて、７２時間離れて、又は１週離れて、対象に投与される。他の態様において、２つ以上の治療（予防又は治療薬）が、同じ患者来院中に施される。
【０２３４】
併用療法の予防又は治療薬は、対象に、同じ医薬組成物で施されてよい。これ以外にも、併用療法の予防又は治療薬は、対象に、別個の医薬組成物で同時に投与されてもよい。予防又は治療薬は、同じ投与経路又は異なる投与経路によって、対象に投与されてよい。
【実施例】
【０２３５】
実施例１：抗ＨＢｓＡｇウイルス抗体の生成
ＨＢＶワクチン接種ドナーからのヒト記憶Ｂ細胞をインビトロで増殖させ、ＨＢｓＡｇに対するＩｇＧ抗体を分泌するそれらの能力について選択した。特異的Ｂ細胞を溶解させ、ＶＨ（重）鎖及びＶＬ（軽）鎖をＲＴ−ＰＣＲによって増幅させ、続いてシーケンシングし、分析して重要な翻訳後修飾（ＰＴＭ）部位を同定した。次に、ＶＨ及びＶＬ鎖のプラスミドをＣＨＯ哺乳類細胞系中に、完全ＩｇＧ１抗体の発現のためのＩｇＧ１骨格ベクター中で形質移入した。
【０２３６】
ファージディスプレイ技術を用いるモノクローナル抗体の生成方法は、当該技術分野において知られている（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．９０１，２０１２，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３：３３）。手短に言えば、ＣＤＲ−Ｈ３中でランダム化されたＦａｂフォーマットにおける合成ヒト生殖細胞系フレームワーク抗体ライブラリを、ビオチン化組換えＨＢｓＡｇ（ＴＲＩＮＡ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｉｖｅｓ  ＡＧ、Ｃａｔ＃Ｃ０２８−３００１９９４７７４（ＡＤセロタイプ）、Ｃ０２８−３００１９９４７７４（ＡＹセロタイプ）又はＢｉｏｒｂｙｔｅ、Ｃａｔ＃ｏｒｂ８２５３６（ＡＤアイソタイプ））と複合体化されたストレプトアビジン結合磁気ビーズによる溶液パニングによって、ストリンジェンシーを増大させる３回の選択ラウンドにわたり抗ＨＢｓＡｇ抗体についてスクリーニングした。単離物を最初にＦａｂとして発現させ、ＥＬＩＳＡによってＨＢｓＡｇセロタイプＡＤ及びセロタイプＡＹの双方への結合についてスクリーニングした。次に、選択単離物をクローニングし、ＩｇＧ１として発現させ、ＥＬＩＳＡによってＨＢｓＡｇ（セロタイプＡＤ及びＡＹ）への結合について、及び中和アッセイにおいて機能的活性について再分析し、最後に完全ＩｇＧ１抗体の発現のためにＣＨＯ哺乳類細胞系中に形質移入した。抗ＨＢｓＡｇ抗体を、ＣＤＲ特異的突然変異誘発によって親和性成熟させた。有益な突然変異は、ディープシーケンシングによって初回突然変異誘発ライブラリに関して２回のファージディスプレイのラウンド後の濃縮を比較することによって同定した。次に、選択された有益な突然変異を単独で、及び組合せでクローニングし、ＩｇＧ１として発現させ、ＥＬＩＳＡによってＨＢｓＡｇ（セロタイプＡＤ及びＡＹ）への結合について、及び中和アッセイにおいて機能的活性について再分析し、最後に完全ＩｇＧ１の発現のためにＣＨＯ哺乳類細胞系中に形質移入した。
【０２３７】
抗ＨＢｓＡｇ抗体の変化を表３に提供する。
【０２３８】
【表４５】
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【０２３９】
【表４６】
2021525071.tif 000047
【０２４０】
実施例２：ＨＢｓＡｇへの抗ＨＢｓＡｇ抗体の結合
抗ＨＢｓＡｇ抗体と、ＨＢｓＡｇの２つの主要なセロタイプＡＹ及びＡＤとの結合親和性相互作用（ＫＤ）を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を利用して決定した。ＨＢｓＡｇ粒子を約８００ＲＵにてＳｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５センサーチップ上に固定化し、抗ＨＢｓＡｇ抗体を１２８ｎＭにて始まる２倍段階希釈物上で流動させてＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００装置（ＧＥ  Ｈｅａｔｈｃａｒｅ、Ｃａｔ＃２８９７５００１、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）を利用して結合を評価した。ＫＤは、プロットを１：１フィットモデルとフィッティングすることによって決定した（Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９３；２１２：４５７−４６８；Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｆａｅｌｔ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９７；２００：１２１−１３３）。
【０２４１】
Ｂｉａｃｏｒｅは、抗ＨＢｓＡｇ抗体の１１０ｐＭから４０ｎＭまでの範囲のＫＤ値を測定し、試験抗体のそれぞれについて２つの主要なセロタイプ（ＡＤ及びＡＹ）にわたり同等であった。抗ＨＢｓＡｇ抗体についてのＢｉａｃｏｒｅ親和性データのまとめは表４に見出され、ＳＰＲ追跡は図１Ａ／Ｂ〜１６Ａ／Ｂに見出される。
【０２４２】
【表４７】
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【０２４３】
実施例３：抗ＨＢｓＡｇ抗体によるＢ型肝炎ウイルス感染の中和
感染性ＨＢＶウイルスを、ゲノタイプＤ、セロタイプａｙｗ細胞培養由来ＨＢＶから記載（Ｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  Ｈｅｐａｔ．２０１７；２４：６６２−６７１）の通り精製した。抗ＨＢｓＡｇ抗体をウイルスと３７℃にて１時間プレインキュベートして結合及び中和を可能とした。次に、記載（Ｔｒｏｐｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１５；１１２：Ｅ５７１５−Ｅ５７２４）の通りインハウスで生成したＨｅｐＧ２−ｈＮＴＣＰ１細胞をウイルス−抗体混合物に２４時間曝露し、フレッシュな培地で置換し、さらに６日間インキュベートしてウイルスの流入、ｃｃｃＤＮＡ確立、及びウイルスタンパク質発現を可能とした。上清を回収し、ＨＢｅＡｇレベルをカスタムメイドのインハウスｅＡｇ  ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｂｒｉｄｇｅｖｉｌｌｅ  ＰＡ）によって分析した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｃａｔ＃２１０５−００１０、Ｂｒｉｄｇｅｖｉｌｌｅ  ＰＡ）を用いてデータを分析し、非処理対照ウェルに対する感染のパーセントとして提示した。
【０２４４】
全ての抗体は、１７ｐＭから７４０ｐＭまでの範囲のＥＣ５０値でＨＢＶによる感染を中和し得、これを表５に示し、図１７〜３３にグラフとして示す。
【０２４５】
【表４８】
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【０２４６】
実施例４：Ｂ型肝炎ゲノタイプ結合
ＨＢＶの４つの主要なゲノタイプ（Ａ〜Ｄ）への抗ＨＢｓＡｇ抗体の結合を、サンドイッチＥＬＩＳＡによって分析した。手短に言えば、ＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃１５０３１）を、５μｇ／ｍｌのウマポリクローナル−ＨＢｓＡｇ捕捉抗体（ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、Ｃａｔ＃ＭＢＳ３１５００２）で３７℃にて２時間コーティングし、次に５％ミルクで４℃にて一晩ブロッキングした。ｐｃＤＮＡ３．１骨格（ゲノタイプＡ：ＡＹ９３４７７２、ゲノタイプＢ：ＡＦ１２１２４５、ゲノタイプＣ：ＤＱ０８７９６０、ゲノタイプＤ：ＤＱ２１９８１１．１）中のＨＢＶ細胞培養由来ゲノタイプから収集した上清を、抗体コーティングプレートに１時間結合させた。プレートを洗浄し（Ａｌｐｈａ  ｄｉａｇｏｎｏｓｔｉｃｓ洗浄バッファ、Ｃａｔ＃８００８０）、ＬｏｗＣｒｏｓｓバッファ（Ｃａｎｄｏｒ、Ｃａｔ＃１００５００）中で抗ＨＢｓＡｇ抗体の段階希釈物と室温にて１時間インキュベートした。抗ＨＢｓＡｇ抗体インキュベーション後、プレートを洗浄し、希釈バッファ（ＬｏｗＣｒｏｓｓバッファ、Ｃａｎｄｏｒ、Ｃａｔ＃１００５００）中で１：２０００に希釈された二次抗体（ＨＲＰ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆａｂフラグメント、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ、Ｃａｔ＃１０９−０３５−０９７）と室温にて１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｃａｔ＃８００９１）を用いて反応を発現させた。
【０２４７】
抗ＨＢｓＡｇ抗体ＮＯＶ３８３４〜３６は、ゲノタイプＡ（２から３．３ｎＭまでの範囲のＩＣ５０）、ゲノタイプＢ（１．２から１．７ｎＭまでの範囲のＩＣ５０）、及びゲノタイプＤ（１．３から８．２ｎＭまでの範囲のＩＣ５０）への類似の結合を示したが、ゲノタイプＣ（１２から１６ｎＭまでの範囲のＩＣ５０）への引き下げられた結合を示した。対照的に、残りの抗ＨＢｓＡｇ抗体は、４つの主要なゲノタイプにわたり類似の結合を示した（ゲノタイプＡについて０．０２３から２．３ｎＭまでの範囲、ゲノタイプＢについて０．０１７から１．５ｎＭまでの範囲、ゲノタイプＣについて０．０１５から３．６ｎＭまでの範囲、及びゲノタイプＤについて０．０２６から１．３ｎＭまでの範囲のＩＣ５０）。例えば、ＮＯＶ３８３２は、ゲノタイプＡについて０．０５ｎＭ、ゲノタイプＢについて０．０２ｎＭ、ゲノタイプＣについて０．０１５ｎＭ及びゲノタイプＤについて０．０４３ｎＭのＩＣ５０を有した。表６の抗体の全てについてのＩＣ５０を、図３４〜５０にグラフとして示す。
【０２４８】
【表４９】
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【０２４９】
実施例５：Ｂ型肝炎臨床突然変異の抗ＨＢｓＡｇ認識
４つの十分に特徴付けられたワクチン及び／又はＨＢｓＡｇのＨＢｓＡｇ臨床突然変異物（Ｇ１４５Ｒ、Ｄ１４４Ａ、Ｔ１２６Ｓ、Ｍ１３３Ｌ）への抗ＨＢｓＡｇ抗体の結合を、サンドイッチＥＬＩＳＡによって分析した。突然変異は、ＨＢＶゲノタイプＤ、（ａｙｗセロタイプ）に沿ってＱ５部位特異的突然変異誘発（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｃａｔ＃Ｅ０５５４Ｓ）によって生成し、ＨＢｓＡｇ配列を安定的細胞系の生成のためのｐＣｌ−ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃Ｅ１８４１）中にクローニングした。手短に言えば、ＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃１５０３１）を５μｇ／ｍｌのウマポリクローナルＨＢｓＡｇ捕捉抗体（ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、Ｃａｔ＃ＭＢＳ３１５００２）で３７℃にて２時間コーティングし、次に、５％ミルクで４℃にて一晩ブロッキングした。ＨＢｓＡｇ細胞培養由来臨床突然変異安定株（Ｇ１４５Ｒ、Ｄ１４４Ａ、Ｔ１２６Ｓ、Ｍ１３３Ｌ）から収集した上清を抗体コーティングプレートに１時間結合させた。プレートを洗浄し（Ａｌｐｈａ  ｄｉａｇｏｎｏｓｔｉｃｓ洗浄バッファ、Ｃａｔ＃８００８０）、ＬｏｗＣｒｏｓｓバッファ（Ｃａｎｄｏｒ、Ｃａｔ＃１００５００）中の抗ＨＢｓＡｇ抗体の段階希釈物と室温にて１時間インキュベートした。抗ＨＢｓＡｇ抗体インキュベーション後、プレートを洗浄し、希釈バッファ（ＬｏｗＣｒｏｓｓバッファ、Ｃａｎｄｏｒ、Ｃａｔ＃１００５００）中の１：２０００に希釈された二次抗体（ＨＲＰ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆａｂフラグメント、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ、Ｃａｔ＃１０９−０３５−０９７）と室温にて１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｃａｔ＃８００９１）を用いて反応を発現させた。
【０２５０】
表７に示される通り、抗ＨＢｓＡｇ抗体ＮＯＶ２６０３、ＮＯＶ３２１２、ＮＯＶ３３５７、及びＮＯＶ３５４０は、４つ全ての臨床突然変異物に結合し得る（Ｇ１４５ＲのＩＣ５０値は０．０３３から５．５ｎＭまでの範囲であり、Ｄ１４４Ａは０．０７９から２．１ｎＭまでの範囲であり、Ｔ１２６Ｓは０．０６から０．２２ｎＭからの範囲であり、Ｍ１３３Ｌは０．０１２から０．６７ｎＭまでの範囲である）。抗体ＮＯＶ３８３１、ＮＯＶ３８３２、ＮＯＶ３８３３、ＮＯＶ３８３８、ＮＯＶ３８３９、ＮＯＶ３８４１及びＮＯＶ３８４２は、Ｇ１４５Ｒ突然変異物への結合の損失を示すが、他の３つの臨床突然変異物への結合を保持する（Ｄ１４４ＡのＩＣ５０値は０．０１２から７．８ｎＭまでの範囲であり、Ｔ１２６Ｓは０．０１から０．１１ｎＭまでの範囲であり、Ｍ１３３Ｌは０．０１３から０．１５ｎＭまでの範囲である）。対照的に、抗ＨＢｓＡｇ抗体ＮＯＶ３８３４〜３６は、４つの突然変異物へのいずれの結合も示さず（ＮＯＶ３８３５、ＮＯＶ３８３６）、又は臨床突然変異パネルの２つのみ（Ｔ１２６Ｓ、Ｍ１３３Ｌ）への極めて引き下げられた結合を示す（ＮＯＶ３８３５）（Ｔ１２６ＳのＩＣ５０値７．４ｎＭ、Ｍ１３３ＬのＩＣ５０値９．２ｎＭ）。表７に示される結果も図５１〜６６にグラフとして提示する。
【０２５１】
【表５０】
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【０２５２】
実施例６：抗ＨＢｓＡｇ抗体は、ＦＲＧＮマウスモデルにおける有効性を示す
抗ＨＢｓＡｇ抗体についてのインビボ有効性を、ＨＢＶ感染ＦＲＧＮマウスモデルにて抗体投与後のＨＢｓＡｇの損失を監視することによって決定した。ヒト肝移入（ｈｕｍａｎ  ｌｉｖｅｒ  ｐｏｐｕｌａｔｅｄ）ＦＲＧＮマウスをＹｅｃｕｒｉｓ（ＮＯＤ上のＦＲＧＮ  ＫＯ、Ｃａｔ＃１０−００１３）から購入し、それに１．７×１０７コピーのＨＢＶ（ゲノタイプＣ）を感染させた。安定的感染後、マウスを０日目及び２１日目にて２０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＢｓＡｇ抗体（１群あたりｎ＝２）で処理し、血清を初回抗体処理の０、０．０２、０．３、１、３、７、１４、２１、２４、及び２８日後の時点にて収集した。遊離ＨＢｓＡｇレベルを、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ．ａｌ．，Ｇｕｔ  ２０１６；（４）６５：６５８−６７１からのプロトコルを介して監視した。手短に言えば、血清をサンプル希釈剤（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃａｔ＃４１１０において提供）中で１：５に希釈し、０．５容量の溶解バッファを添加し（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣＬバッファ−ｐＨ８．０中１５％ドデシル硫酸ナトリウム）、サンプルを３７℃にて１時間インキュベートした。２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣＬバッファ−ｐＨ８．０中に溶解させた５容量の４％ＣＨＡＰＳの添加によってサンプルを中和し、ＨＢｓＡｇ市販ＥＬＩＳＡキット（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃａｔ＃４１１０）を製造業者のプロトコルに従って利用してＨＢｓＡｇレベルを監視した。ＨＢｓＡｇレベルを０時点にて収集された前採血レベルからのｌｏｇ倍率変化としてグラフ化した。このモデルについての最大ｌｏｇ倍率変化は、−３．９であった。
【０２５３】
抗ＨＢｓＡｇ抗体ＮＯＶ３２１２、ＮＯＶ３３５７、ＮＯＶ３５４０、ＮＯＶ３８３１、ＮＯＶ３８３２、ＮＯＶ３８３４、ＮＯＶ３８３８、ＮＯＶ３８４１及びＮＯＶ３８４２は、表８に示される通り、−３．９から−２．８までの範囲の最大ｌｏｇ降下でＨＢｓＡｇのレベルを全て有意に降下させた。対照的に、ＮＯＶ２６０３は、ＨＢｓＡｇの中程度のｌｏｇ降下のみを示した（−１．１）。例えば、図６７において、ＮＯＶ３８３２は０．３日目の時点においてＨＢｓＡｇを大幅に引き下げ、引き下げられたＨＢｓＡｇレベルを７日間保持し、１４日目までのＨＢｓＡｇレベルの緩慢な増大のみを示した。２１日目におけるＮＯＶ３８３２の２回目の投与後、ＨＢｓＡｇレベルは再度引き下げられ、２８日目の試験終了まで引き下げられたままであった。したがって、この試験は、本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体がインビボで血清中のＨＢｓＡｇを大幅に引き下げ得ることを実証した。
【０２５４】
【表５１】
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【０２５５】
実施例７：抗ＨＢｓＡｇ細胞毒性
ＡＴＰ濃度を介して細胞の代謝活性を監視するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃Ｇ７５７０）を利用して、デノボＨＢＶ感染及び非感染ＨｅｐＧ２−ｈＮＴＣＰ１細胞（Ｔｒｏｐｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１５；１１２：Ｅ５７１５−Ｅ５７２４）の双方に対する抗ＨＢｓＡｇ抗体の細胞毒性を測定した。手短に言えば、ＨｅｐＧ２−ｈＮＴＣＰ１細胞に、記載（Ｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  Ｈｅｐａｔ．２０１７；２４：６６２−６７１）の通りゲノタイプＤ（セロタイプａｙｗ）細胞培養由来ＨＢＶからの精製ウイルス又はモックウイルスのいずれかを感染させた。細胞を感染後４日間培養してウイルス流入、ｃｃｃＤＮＡ確立、及びウイルスタンパク質発現を可能とし、培地を除去し、３．３μＭから始まる抗ＨＢｓＡｇ抗体の段階希釈物を含有するフレッシュな培地で置換した。細胞を抗体混合物とさらに４日間インキュベートし、次にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬で製造業者のプロトコルに従ってアッセイした。ＰＨＥＲＡｓｔａｒマイクロプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ、Ｃａｒｙ  ＮＣ）を用いて発光読出しを実施し、生存パーセントを陰性（抗体なし）対照に対して提示した。
【０２５６】
本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体の全ては、ウイルスの存在下でも不存在下でも細胞生存に対する効果を示さない。手短に言えば、本開示の抗ＨＢｓＡｇ抗体は、毒性を示さない。これは、細胞毒性（非感染ＨｅｐＧ２−ＮＴＣＰ１について２．２４から２．８６ｕＭまでの範囲、及びＨＢＶ感染ＨｅｐＧ２−ＮＴＣＰ１について２．０９から２．１１ｕＭまでの範囲のＣＣ５０）を示す２つの公開抗体、ＣＲ８０９７及びＨＢ４８−５９と対照的である。ＣＲ８０９７及びＨＢ４８−５９抗体は、感染細胞と同じレベルにおける非感染細胞に対する毒性を示すため、これはこれらの抗体がオフターゲット正常細胞タンパク質に結合していることを示す。
【０２５７】
【表５２】
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【０２５８】
実施例８：抗ＨＢｓＡｇ抗体についてのＳＰＲによるエピトープビニング
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を利用して、ＨＢｓＡｇの２つの主要なセロタイプＡＹ及びＡＤを用いる抗ＨＢｓＡｇ抗体のエピトープビニングを実施した。抗原ＨＢｓＡｇ  ＡＤ及びＡＹ（ＴＲＩＮＡ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｉｖｅｓ  ＡＧ、Ｃａｔ＃０８２４［ＡＤセロタイプ］、＃０８２３［ＡＹセロタイプ］、Ｎａｅｎｉｋｏｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、約８００ＲＵにて別個のセル中でＣＭ５チップの表面上でアミンカップリングによって固定化した。抗体のそれぞれのペアを、それらの抗原上のエピトープへの一方の別の結合のブロッキングについて、続いて一方の抗体を第１の（飽和）抗体として、次に他方を第２の（競合）抗体としてアプライする（又はその逆）ことによって試験した。飽和抗体を５００ｎＭにて１２０秒間アプライした。競合抗体は同じ条件を利用したが、それに第１の抗体を５００ｎＭにて補給して飽和を維持した。参照セルシグナルを減算することによって、結合シグナルを補正した。飽和抗体の存在下での競合抗体の特異的結合を、飽和抗体とバッファ参照シグナルを減算することによって計算した。全てのシグナルを、固定化リガンドの１００ＲＵに対して正規化した。競合抗体としてのアプライから得られた特異的結合シグナルは、１００％の結合とみなした飽和（第１の）抗体としての同じ抗体のアプライから得られた結合シグナルの割合として表現した。４０％未満の結合値は、第１及び第２の抗体が同じ領域をカバーすることを示し、６０％超の値は異なるエピトープを表す。結果は、抗体ＮＯＶ３５４０、ＮＯＶ３８３２、ＮＯＶ３８４１及びＮＯＶ３８４２がＣＲ８０８７抗体ともＨＢＣ３４抗体とも競合しないことを示す。したがって、ＮＯＶ３５４０、ＮＯＶ３８３２、ＮＯＶ３８４１及びＮＯＶ３８４２は、ＣＲ８０８７又はＨＢＣ３４と異なるエピトープに結合する。結果を以下に表１０に示す。
【０２５９】
【表５３】
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【０２６０】
実施例９：製剤
本明細書に記載の抗ＨＢｓＡｇウイルス抗体は、モノクローナル抗体、カッパ又はラムダ軽鎖を有するＩｇＧ１アイソタイプであり、凍結乾燥され得る。後続の静脈内投与のため、得られた溶液は通常、キャリア溶液中に、即時使用可能な注入用抗体溶液まで希釈される。最も安定的な製剤を選択する重要な安定性を示す分析方法は、とりわけ、凝集レベルを決定するためのサイズ排除クロマトグラフィ、肉眼では見えない粒子状物質試験、及び効力試験を包含した。
【０２６１】
本明細書中に記載される実施例及び態様は、説明の目的でしかないこと、そしてそれを考慮した種々の修飾又は変更が、当業者に示唆されることとなり、且つ本願及び添付の特許請求の範囲の精神及び範囲内に含まれ得ることが理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【国際調査報告】
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