(57)【要約】  本開示は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）クランピング因子Ａタンパク質（ＣｌｆＡ）に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片、並びにそのモノクローナル抗体を含む組成物に関する。本開示は、また、抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独で、又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体と組み合わせて対象に投与することにより、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）感染症を治療する方法に関する。ＣｌｆＡ及びＡＴの両方に特異的に結合する二重特異性モノクローナル抗体並びにその使用方法もまた、提供される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）クランピング因子Ａ（ＣｌｆＡ）タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有し、且つ前記抗体又は抗原結合断片は、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを有する、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、（１）ＶＨと、（２）ＶＬと、（３）ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域とを有し；前記ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、（１）ＶＨと、（２）ＶＬと、（３）ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域とを有し；前記ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、ＳＡＲ１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項７】
前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ−決定ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ−決定ＣＤＲ、又はＡｂＭ−決定ＣＤＲである、請求項６に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体又は抗原結合断片が、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を有する、請求項６又は７に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
前記重鎖定常領域が、ＭＨＥＡＣＳＹＨＬＣＱＫＳＬＳＬＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記重鎖定常領域が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖を有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１３】
フィブリノーゲン結合阻害アッセイにおけるＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４のＩＣ５０が、互いに２μｇ／ｍＬ以内である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１４】
フィブリノーゲン結合阻害アッセイにおけるＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４のＩＣ５０が、全て１μｇ／ｍｌ〜５μｇ／ｍｌである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１５】
ＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４の結合親和性（ＫＤ）が、全て２００〜３５０ｐＭである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記抗体又は抗原結合断片が、前記抗体又は抗原結合断片を従来の白色光に２ｋＬｕｘ／時で２３℃にて１４日間曝露した後、５％以下低下するモノマー純度を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１７】
前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトＦｃＲｎマウスで変異がない同じ抗体と比較して半減期を延長する変異を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記抗体又は抗原結合断片が、変異がない同じ抗体と比較して半減期を延長する変異を含み、前記変異が、同じ抗体又は抗原結合断片変異と比較してＯＰＫ活性を阻害しない、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１９】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合し、且つＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する、抗体又は抗原結合断片。
【請求項２０】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを有する、請求項１９に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２１】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項１９又は２０に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を更に有する、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２３】
前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを有する、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２４】
前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２５】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片が、ＳＡＲ７２、ＳＡＲ８０、ＳＡＲ１１３、ＳＡＲ１３２、ＳＡＲ３５２、ＳＡＲ３７２、ＳＡＲ５１０、ＳＡＲ５４７、ＳＡＳ１、ＳＡＳ１９、又はＳＡＳ２０３のＶＨ  ＣＤＲ１と、ＶＨ  ＣＤＲ２と、ＶＨ  ＣＤＲ３と、ＶＬ  ＣＤＲ１と、ＶＬ  ＣＤＲ２と、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２６】
前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ−決定ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ−決定ＣＤＲ、又はＡｂＭ−決定ＣＤＲである、請求項２５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２７】
前記抗体又は抗原結合断片が、（ａ）それぞれ配列番号１７及び１８、（ｂ）それぞれ配列番号３０及び３１、（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３、（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５、（ｅ）それぞれ配列番号３６及び３７、（ｆ）それぞれ配列番号３８及び３９、（ｇ）それぞれ配列番号４０及び４１、（ｈ）それぞれ配列番号４２及び４３、（ｉ）それぞれ配列番号４４及び４５、（ｊ）それぞれ配列番号４６及び４７、又は（ｋ）それぞれ配列番号４８及び４９に記述されているアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖配列を有する、請求項２５又は２６に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２８】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、ＶＨと、ＶＬと、を有し、前記ＶＨは、配列番号１７、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、又は４８に記述されているアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２９】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、ＶＨと、ＶＬと、を有し、前記ＶＬは、配列番号１８、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、又は４９に記述されているアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３０】
前記抗体又はその抗原結合断片が、重鎖定常領域を更に有する、請求項６〜７及び１２〜２９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３１】
前記重鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２重鎖定常領域からなる群から選択される、請求項３０に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３２】
前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域である、請求項３１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３３】
前記重鎖定常領域が、Ｎ３、Ｎ３Ｅ、又はＮ３Ｆ変異を含む、請求項３０に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３４】
前記重鎖定常領域が、ＹＴＥ変異を含む、請求項１〜５、８〜１０、又は３０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３５】
前記抗体又はその抗原結合断片が、軽鎖定常領域を更に有する、請求項１〜１１及び１３〜３４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３６】
前記軽鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される、請求項３５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３７】
前記軽鎖定常領域が、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項３６に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３８】
前記抗体又は抗原結合断片が、モノクローナル抗体又は抗原結合断片である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３９】
前記抗体又は抗原結合断片が、完全長の抗体である、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４０】
前記抗体又は抗原結合断片が、抗原結合断片である、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４１】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、請求項４０に記載の抗体又は抗原結合断片。
【請求項４２】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体であって、配列番号５０に記述されているアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６に記述されているアミノ酸配列を含む軽鎖と、を有する抗体。
【請求項４３】
検出可能な標識を更に含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４４】
請求項１〜４３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む組成物。
【請求項４５】
請求項１〜１８及び２５〜４３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片と、任意選択的に薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
【請求項４６】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを有する、請求項４５又は４６に記載の組成物。
【請求項４８】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖を有する、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
対象のスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を治療又は予防する方法であって、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片又は請求項４４〜５０のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項５２】
対象のスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１８及び２５〜４３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片、並びにＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項５３】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを有する、請求項５２又は５３に記載の方法。
【請求項５５】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖を有する、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項５２〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
請求項１〜１８及び２５〜４３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片、並びにＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、同時に投与される、請求項５２〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
請求項１〜１８及び２５〜４３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片、並びにＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する前記抗体又は抗原結合断片が、逐次的に投与される、請求項５２〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
対象のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の治療又は予防は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連敗血症の阻害、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集の阻害、血栓塞栓性病変形成の阻害、トキシンの中和、オプソニン化貪食作用の誘発、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）フィブリノーゲン結合の阻害、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集の阻害、又は前述のものの任意の組み合わせを含む、請求項５１〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記対象が、糖尿病を有する、請求項５１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記対象がヒトである、請求項５１〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
請求項１〜１８及び２５〜４２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は重鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６４】
前記核酸分子が、配列番号１３のＶＨ又は配列番号２５、５０、又は５２の軽鎖をコードする、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６５】
請求項１〜１８及び２５〜４２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片のＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６６】
前記核酸分子が、配列番号１４のＶＬ又は配列番号２６の軽鎖をコードする、請求項６５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６７】
（ｉ）請求項１〜１８及び２５〜４２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は重鎖、並びに（ｉｉ）請求項１〜１８及び２５〜４２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片のＶＬ又は軽鎖をコードする、核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６８】
請求項６３〜６７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。
【請求項６９】
請求項６３〜６７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項６８に記載のベクター、又は請求項６３若しくは６４に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び請求項６５若しくは６６に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクターを有する宿主細胞。
【請求項７０】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３、及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される、請求項６９に記載の宿主細胞。
【請求項７１】
前記宿主細胞が単離されている、請求項６９又は７０に記載の宿主細胞。
【請求項７２】
抗体又はその抗原結合断片の産生方法であって、前記抗体又はその抗原結合断片が産生されるように、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項７３】
試料のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡ検出方法であって、前記試料を請求項１〜４３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）クランピング因子Ａタンパク質（ＣｌｆＡ）に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片、並びにそのモノクローナル抗体を含む組成物に関する。本開示は、また、抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独で、又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体と組み合わせて対象に投与することにより、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）感染症を治療する方法に関する。ＣｌｆＡ及びＡＴの両方に特異的に結合する二重特異性モノクローナル抗体並びにその使用方法もまた、提供される。
【背景技術】
【０００２】
薬剤耐性（ＡＭＲ）病原菌によって引き起こされる感染症により、公衆衛生に対する脅威が高まっている。進行中のＡＭＲの流行は、部分的には経験的広域スペクトル抗生物質療法によって煽られてきた。これは、深刻な細菌感染を予防又は治療するための、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含む病原体特異的方法の探求につながった。抗生物質耐性菌感染症の予防又は治療のために、現在、多数のモノクローナル抗体が開発されている（例えば、ＤｉＧｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ，Ａ．，ａｎｄ  Ｂ．Ｒ．Ｓｅｌｌｍａｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２７：７８−８５（２０１５）を参照されたい）。このような受動免疫戦略は、標的病原体に対して即時且つ強力な免疫グロブリン応答を提供する。理想的には、モノクローナル抗体又はモノクローナル抗体カクテルは、主要な細菌の病原性メカニズムを中和し、宿主の自然免疫応答を増強するための複数の作用メカニズムを提供し、これにより臨床的成功の最大の機会がもたらされる。
【０００３】
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）は、皮膚及び軟組織の感染症、心内膜炎、骨髄炎、肺炎、及び菌血症を含む広範な病気を引き起こす細菌性病原体である（Ｌｏｗｙ，Ｆ．Ｄ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３９（８）：５２０−３２（１９９８））。前臨床試験は、モノクローナル抗体ベースのアプローチがＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の予防及び補助療法に有望であることを示している（例えば、Ｈａｚｅｎｂｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．，９（１０）：ｅ１００３６５３．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００３６５３２０１３（２０１３）；Ｒｏｕｈａ，Ｈ．，ＭＡｂｓ，７（１）：２４３−２５４（２０１５）；Ｆｏｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４２５（１０）：１６４１−１６５４（２０１３）；Ｋａｒａｕｚｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２８７（３０）：２５２０３−１５（２０１２）；及びＨｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５８（２）：１１０８−１７（２０１４）を参照されたい）。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）及びクランピング因子Ａ（ＣｌｆＡ）を標的とするマルチメカニズムモノクローナル抗体の組み合わせにより、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）致死性菌血症モデルにおける各々の個々のモノクローナル抗体と比較して、防御を強化し、菌株の適用範囲を改善することが示された（Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＢｉｏ．，７（３）．ｐｉｉ：ｅ００５２８−１６（２０１６））；しかしながら、試験したＣｌｆＡモノクローナル抗体は、他の２つの始祖配列（ＣｌｆＡ００１及びＣｌｆＡ００４）と比較して、ＣｌｆＡ始祖配列ＣｌｆＡ００２に対して結合親和性及び機能活性の低下を示す。
【０００４】
したがって、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）感染症、特に現在利用可能な抗生物質に耐性のある感染症を治療するための組成物及び方法の必要性が残っている。本開示は、このような組成物及び方法を提供する。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書では、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）クランピング因子Ａ（ＣｌｆＡ）タンパク質に結合する抗体又は抗原結合断片が提供される。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有し、且つ抗体又は抗原結合断片は、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する。
【０００６】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨと、ＶＬと、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域とを有し；ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
【０００７】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨと、ＶＬと、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域とを有し；ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
【０００８】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＲ１１４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を有する。特定の例では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ−決定ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ−決定ＣＤＲ、又はＡｂＭ−決定ＣＤＲである。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を有する。
【０００９】
特定の例では、重鎖定常領域は、ＭＨＥＡＣＳＹＨＬＣＱＫＳＬＳＬＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む。特定の例では、重鎖定常領域は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
【００１０】
特定の例では、フィブリノーゲン結合阻害アッセイにおけるＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４の抗体又はその抗原結合断片のＩＣ５０は、互いに２μｇ／ｍｌ以内である。特定の例では、フィブリノーゲン結合阻害アッセイにおけるＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４の抗体又はその抗原結合断片のＩＣ５０は、全て１μｇ／ｍｌ〜５μｇ／ｍｌである。特定の例では、ＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４の抗体又はその抗原結合断片の結合親和性（ＫＤ）は、全て２００〜３５０ｐＭである。
【００１１】
特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体又は抗原結合断片を従来の白色光に２ｋＬｕｘ／時、２３℃で１４日間曝露した後、５％以下低下するモノマー純度を有する。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、ヒトＦｃＲｎマウスで変異がない同じ抗体と比較して半減期を延長する変異を含む。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、変異がない同じ抗体と比較して半減期を延長する変異を含み、変異は、同じ抗体又は抗原結合断片変異と比較してＯＰＫ活性を阻害しない。
【００１２】
本明細書では、また、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する二重特異性抗体及びその抗原結合断片が提供される。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を更に有する。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを有する。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する。
【００１３】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＲ７２、ＳＡＲ８０、ＳＡＲ１１３、ＳＡＲ１３２、ＳＡＲ３５２、ＳＡＲ３７２、ＳＡＲ５１０、ＳＡＲ５４７、ＳＡＳ１、ＳＡＳ１９、又はＳＡＳ２０３のＶＨ  ＣＤＲ１と、ＶＨ  ＣＤＲ２と、ＶＨ  ＣＤＲ３と、ＶＬ  ＣＤＲ１と、ＶＬ  ＣＤＲ２と、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する。特定の例では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ−決定ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ−決定ＣＤＲ、又はＡｂＭ−決定ＣＤＲである。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、（ａ）それぞれ配列番号１７及び１８、（ｂ）それぞれ配列番号３０及び３１、（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３、（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５、（ｅ）それぞれ配列番号３６及び３７、（ｆ）それぞれ配列番号３８及び３９、（ｇ）それぞれ配列番号４０及び４１、（ｈ）それぞれ配列番号４２及び４３、（ｉ）それぞれ配列番号４４及び４５、（ｊ）それぞれ配列番号４６及び４７、又は（ｋ）それぞれ配列番号４８及び４９に記述されているアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖配列を有する。
【００１４】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨと、ＶＬと、を有し、ＶＨは、配列番号１７、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、又は４８に記述されているアミノ酸配列を含む。
【００１５】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨと、ＶＬと、を有し、ＶＬは、配列番号１８、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、又は４９に記述されているアミノ酸配列を含む。
【００１６】
特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、重鎖定常領域を更に有する。特定の例では、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２重鎖定常領域からなる群から選択される。特定の例では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域である。特定の例では、重鎖定常領域は、Ｎ３、Ｎ３Ｅ、又はＮ３Ｆ変異を含む。特定の例では、重鎖定常領域は、ＹＴＥ変異を含む。
【００１７】
特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖定常領域を更に有する。特定の例では、軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される。特定の例では、軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。
【００１８】
特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【００１９】
特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、完全長の抗体である。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、抗原結合断片である。特定の例では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃを含む。
【００２０】
特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体は、配列番号５０に記述されているアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６に記述されているアミノ酸配列を含む軽鎖と、を有する。
【００２１】
特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、検出可能な標識を更に含む。
【００２２】
本明細書では、また、本明細書で提供される抗体を含む組成物が提供される。特定の例では、組成物は、本明細書で提供される抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む。
【００２３】
特定の例では、組成物は、本明細書で提供される抗体と、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片と、任意選択的に薬学的に許容される担体と、を含む。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
【００２４】
本明細書では、また、本明細書で提供される抗体の使用方法が提供される。特定の例では、対象のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を治療又は予防する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は本明細書で提供される組成物を対象に投与することを含む。
【００２５】
特定の例では、対象のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を治療又は予防する方法は、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片、及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片を対象に投与することを含む。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。特定の例では、本明細書で提供される抗Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡ抗体又は抗原結合断片、及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、同時に投与される。特定の例では、本明細書で提供される抗Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡ抗体又は抗原結合断片、及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、逐次的に投与される。
【００２６】
特定の例では、対象のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の治療又は予防は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連敗血症の阻害、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集の阻害、血栓塞栓性病変形成の阻害、トキシンの中和、オプソニン化貪食作用の誘発、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）フィブリノーゲン結合の阻害、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集の阻害、又は前述の任意の組み合わせを含む。
【００２７】
特定の例では、対象は、糖尿病を有する。特定の例では、対象はヒトである。
【００２８】
本明細書では、また、ポリヌクレオチドが提供される。特定の例では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は重鎖をコードする核酸分子を含む。特定の例では、核酸分子は、配列番号１３のＶＨ又は配列番号２５、５０、若しくは５２の重鎖をコードする。
【００２９】
特定の例では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む。特定の例では、核酸分子は、配列番号１４のＶＬ又は配列番号２６の軽鎖をコードする。
【００３０】
特定の例では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は重鎖及び抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む。
【００３１】
本明細書では、また、ベクターが提供される。特定の例では、単離されたベクターは、本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む。
【００３２】
本明細書では、また、宿主細胞が提供される。特定の例では、宿主細胞は、本明細書で提供されるポリヌクレオチド、本明細書で提供されるベクター、又は本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。特定の例では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３、及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される。特定の例では、宿主細胞は単離されている。
【００３３】
本明細書では、また、抗体又は抗原結合断片の産生方法が提供される。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片の産生方法は、抗体又はその抗原結合断片が産生されるように、本明細書で提供される宿主細胞を培養することを含む。
【００３４】
本明細書では、また、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡの検出方法が提供される。特定の例では、試料におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡ検出方法は、試料を本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、連続希釈された（６６６μＭ〜２．５５μＭの）抗ＣｌｆＡ  ｍＡｂ  １１Ｈ１０（図１Ａ）又はＳＡＲ１１４（図１Ｂ）の存在下で測定された、３つの主要なＣｌｆＡ遺伝子型へのフィブリノーゲン結合の阻害を示す一連のグラフである。データは、３つの独立した実験の代表的なものである。
【図２】図２は、ヒト血漿及び抗ＣｌｆＡｍＡｂの存在下でのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株の凝集を示すグラフである。図２は、細菌凝集を阻害するのに必要とされる１１Ｈ１０及びＳＡＲ１１４  ｍＡｂの最小濃度を示す。データは２つの独立した実験の代表的なものである。ｃ−ＩｇＧは、陰性対照として使用し、２００μｇ／ｍｌではいかなる阻害も示さなかった。
【図３】図３は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株ＡＲＣ６３５（ＳＴ５）（図３Ａ）、ＳＦ８３００（ＳＴ８）（図３Ｂ）、ＮＲＳ３８３（ＳＴ３４６）（図３Ｃ）、ＮＲＳ３８２（ＳＴ５）（図３Ｄ）、ＮＲＳ３８４（ＳＴ８）（図３Ｅ）、及びＡＲＣ２０８１（ＳＴ３０）（図３Ｆ）に対する抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体ＳＡＲ１１４のオプソニン食作用傷害（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｋｉｌｌｉｎｇ）（ＯＰＫ）活性を示す一連のグラフである。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）菌株を、ヒトＨＬ−６０細胞、ヒト血清、及び段階希釈のＳＡＲ１１４（四角）又はｃ−ＩｇＣ（丸）とインキュベートした。グラフは、３つの独立した実験の平均値±標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図４】図４は、ＳＡＲ１１４モノクローナル抗体による複数のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）型の凝集阻害を示すグラフである。４０個の異なる配列型（ＳＴ）及び検出されない一部のもの（ＮＦ）を表す１１２個のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株を、実施例１で記載されるように試験した。
【図５】図５は、ＣｌｆＡ００１遺伝子型への結合についてのＳＡＲ１１４及び１１Ｈ１０の競合を示すグラフである。図５Ａのグラフは、実施例１で記載されたような競合ＥＬＩＳＡ結合アッセイの結果を示す。データは、平均値±標準偏差（ＳＤ）を表す。図５Ｂのグラフは、実施例１で記載されたＯＣＴＥＣＴ（登録商標）結合アッセイの結果を示す。
【図６】図６は、オプソニン食作用傷害（ＯＰＫ）での抗細菌抗体中のＹＴＥ及びＮ３変異の影響を示すグラフを提供する。Ｃａｍ００４（上方の区画）は、抗シュードモナス抗体であり、２Ｆ４（下方の区画）は、抗Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）抗体である。Ｒ３４７抗体は陰性対照として使用した。（実施例２を参照されたい。）
【図７】図７は、Ｎ３変異が、ＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、又はＣｌｆＡ１００４のフィブリノーゲンへの結合を阻害するＳＡＲ１１４の能力を低下させないことを示すグラフを提供する。（実施例２を参照されたい。）
【図８】図８は、凝集及びフィブリノーゲン効力アッセイにおけるＳＡＲ１１４でのＮ３Ｆ及びＮ３Ｙ変異の影響を報告する表を提供する。（実施例３を参照されたい。）
【図９】図９は、ヒトＦｃＲｎのトランスジェニックマウスにおける薬物動態（ＰＫ）に対するＮ３（Ｎ３Ｗ）、Ｎ３Ｆ、及びＮ３Ｙ変異の影響（上方区画）、並びにＳＡＲ１１４のＯＰＫ（下方区画）示すグラフを提供する。（実施例３を参照されたい。）
【図１０−１】図１０Ａ−Ｍは、ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊モノクローナル抗体の組み合わせにより、実施例４に記載のとおり、致死性菌血症マウスモデルにおける菌株の適用範囲がもたらされることを示す一連のグラフである。様々な配列型（ＳＴ）からの異なるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株、及び試験されたＣｌｆＡ遺伝子型としては：ＮＲＳ１２３（ＳＴ１、ＣｌｆＡ０１２）、ＮＲＳ３８７（ＳＴ５、ＣｌｆＡ００２）、ＡＲＣ６３５（ＳＴ５、ＣｌｆＡ００２）、３０４９０４３（ＳＴ５、ＣｌｆＡ００２）、３０４９０５７（ＳＴ８、ＣｌｆＡ００１）、ＳＦ８３００（ＳＴ８、Ｃｌｆ  Ａ００１）、３０４９０８８（ＳＴ３０、ＣｌｆＡ００４）、３０４９１１４（ＳＴ３０、ＣｌｆＡ００４）、ＡＲＣ２７８４（ＳＴ１８８、ＣｌｆＡ０１９）、９０４３、９０５７、９１５７、及び２７８４が挙げられる。示されたデータは、３つの独立した実験の代表的なものである。末尾に丸が付いた破線は、ＩｇＧ対照抗体で処理されたマウスを表す。末尾に四角が付いた線は、ＳＡＲ１１４（１５ｍｐｋ）で処理されたマウスを表す。末尾に上向き三角が付いた線は、ＭＥＤＩ４８９３＊（１５ｍｐｋ）で処理されたマウスを表す。末尾に下向き三角が付いた線は、ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊（各々７．５ｍｐｋ）で処理されたマウスを表す。（実施例４を参照されたい。）
【図１０−２】図１０−１の続き。
【図１１】図１１は、ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊モノクローナル抗体の組み合わせが、ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ）におけるＣＡ−ＭＲＳＡ  ＳＦ８３００誘発性ＩＶ致死性菌血症に対して防御することを示す一連のグラフである。下方２つの区画における横棒線は、幾何平均ＣＦＵを表す。データは、３つの独立した実験の代表的なものである。（実施例５を参照されたい。）
【図１２】図１２は、肉眼的病理学（左）又は切片のヘマトキシリン及びエオシン染色後（右）のいずれかにより、ＣＡ−ＭＲＳＡ  ＳＦ８３００誘発性ＩＶ致死性菌血症に曝露されたｄｂ／ｄｂマウスの肝障害に対するＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊モノクローナル抗体の組み合わせの影響を示す画像を提供する。（実施例７を参照されたい。）
【図１３】図１３は、ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊モノクローナル抗体の組み合わせにより、致死性菌血症糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスモデルにおける防御についての菌株適用範囲がもたらされることを示す一連のグラフである。（実施例８を参照されたい。）
【図１４】図１４は、スキャホールドとして抗ＣｌｆＡ  ｍＡｂを使用した二重特異性コンストラクト（図１４Ａ）又は１０−アミノ酸リンカー（ＧＧＧＧｘ２）を介してＣｌｆＡモノクローナル抗体重鎖Ｎ末端とつながった抗ＡＴ  ｍＡｂ  ＭＥＤＩ４８９３＊のｓｃＦｖ（図１４Ｂ）若しくは重鎖Ｃ末端とつながった抗ＡＴ  ｍＡｂ  ＭＥＤＩ４８９３＊のｓｃＦｖ（図１４Ｃ）の略図を提供する。（実施例９を参照されたい。）
【図１５】図１５は、実施例９に記載されるように、抗ＣｌｆＡ  ＳＡＲ１１４又は１１Ｈ１０／ＭＥＤＩ４８９３＊ＢｉＳＡｂのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの特性を示す一連のグラフである。図１５Ａ及び１５Ｄは、ＡＴ媒介ウサギＲＢＣ溶血アッセイにおけるＭＥＤＩ４８９３＊と比較したＢｉＳ２及びＢｉＳ３活性を示す。ＢｉＳＡｂ及びＭＥＤＩ４８９３＊の段階希釈液を、ＡＴ単独（図１５Ａ）又は１０Ｍ過剰のＣｌｆＡ００１（図１５Ｄ）及びＲＢＣとともにインキュベートした。溶血阻害率は、以下のように計算した。１００＊（１００−（ＯＤＡＴ＋ｍＡｂ）／（ＯＤＡＴ単独））。データは、３つの独立した実験の代表的なものである。図１５Ｂ及び１５Ｃは、実施例９に記載されるとおり、固定化フィブリノーゲン（ｆｒｉｂｒｉｎｏｇｅｎ）結合アッセイの結果を示す。ＢｉＳＡｂ、ＳＡＲ１１４、又は１１Ｈ１０の段階希釈液を、ＣｌｆＡ単独（図１５Ｂ）又は１０Ｍ過剰のＡＴ（図１５Ｃ）とともにインキュベートした。データは、３つの別々の実験の平均値標準偏差を表す。結合阻害率は、１００＊（１００−（ＯＤＣｌｆＡ＋ｍＡｂ）／（ＯＤＣｌｆＡ単独））として計算した。
【図１６】図１６は、実施例９に記載されるように、３つの主要なＣｌｆＡ遺伝子型へのフィブリノーゲン結合の阻害を示す一連のグラフである。フィブリノーゲン結合の阻害は、モノクローナル抗体１１Ｈ１０（図１６Ａ）、ＳＡＲ１１４（図１６Ｂ）、又は対応する二重特異性抗体（図１６Ｃ）の段階希釈液の存在下で測定した。同様のアッセイを、１０Ｍ過剰のＡＴ（６．６ｍＭ）の存在下でＡＴｓｃＦｖを飽和させることによって実施した（図１６Ｄ−Ｆ）。
【図１７】図１７は、抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体（ＢｉＳ）のオプソニン食作用傷害（ＯＰＫ）活性を示す一連のグラフである。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎ分離株を、ヒトＨＬ−６０細胞、ヒト血清、及び１１Ｈ１０親モノクローナル抗体若しくは１１Ｈ１０−ＢｉＳ分子の段階希釈液（図１７Ａ）、又はＳＡＲ１１４親モノクローナル抗体若しくはＳＡＲ１１４−ＢｉＳ分子の段階希釈液（図１７Ｂ）とインキュベートした。グラフは、２つの独立した実験の平均値±ＳＤを表す。（実施例９を参照されたい。）
【図１８−１】図１８は、菌血症マウスモデルにおける抗ＣｌｆＡ  ｍＡｂ／ＭＥＤＩ４８９３＊二重特異性抗体の有効性を示す一連のグラフである。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝１０）を、ＳＡＲ１１４／ＭＥＤＩ４８９３＊ＢｉＳ２、ＢｉＳ３、又はＳＡＲ１１４＋ＭＥＤＩ４８９３＊の組み合わせで、示された濃度でＩＰで受動免疫し、２４時間後にＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）分離株ＳＦ８３００（６ｅ７  ｃｆｕ）（図１８Ａ）又は３０４９０５７（５ｅ７  ｃｆｕ）（図１８Ｂ）のＬＤ９０にＩＶ感染させた。１１Ｈ１０／ＭＥＤＩ４８９３＊ＢｉＳ２、ＢｉＳ３、又は１１Ｈ１０＋ＭＥＤＩ４８９３＊ｍＡｂについての防御有効性は、ＳＦ８３００（図１８Ｃ）又は３０４１９０５７（図１８Ｄ）チャレンジに対して評価された。生存を２週間監視した。結果をログランク（Ｍａｎｔｅｌ  Ｃｏｘ）検定で分析した。対ｃ−ＩｇＧの統計分析は、ｐ＜０．０５の場合、統計的に異なると見なされ、アスタリスク（＊）で示された。データは、３つの独立した実験の代表的なものである。（実施例１０を参照されたい。）
【図１８−２】図１８−１の続き。
【図１９】図１９は、ＣｌｆＡが、致死性肺炎マウスモデルにおいてＳＡＲ１１４／ＭＥＤＩ４８９３＊ＢｉＳＡｂを隔離することを示す一連のグラフである。Ｃ５７／Ｂ６マウス（ｎ＝１０）を、ＢｉＳ２、ＢｉＳ３、ＭＥＤＩ４８９３＊、又はＳＡＲ１１４＋ＭＥＤＩ４８９３＊ｍＡｂの組み合わせで、示された濃度でＩＰで受動免疫し、２４時間後に１．５ｅ６ｃｆｕのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）分離株ＳＦ８３００（図１９Ａ）又はＳＦ８３００ΔｃｌｆＡ同質遺伝子変異体（図１９Ｂ）に鼻腔内（ＩＮ）感染させた。生存を６日間監視した。結果をログランク（Ｍａｎｔｅｌ  Ｃｏｘ）検定で分析した。対ｃ−ＩｇＧの統計分析は、ｐ＜０．０５の場合、統計的に異なると見なされた。データは、３つの独立した実験の代表的なものである。（実施例１１を参照されたい。）
【図２０】図２０は、５ｍｇ／ｋｇの抗体投与後の６０日間にわたるカニクイザルのＳＡＲ１１４、ＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｆ、及びＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｙのレベルを示す。
【図２１】図２１は、ｅｘ  ｖｉｖｏでのＰＢＭＣ刺激アッセイを使用した野生型及びＮ３Ｙ  Ｆｃ領域の免疫原性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本開示は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））クランピング因子Ａ（ＣｌｆＡ）タンパク質に結合する（及び任意選択的に、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質にも結合する）抗体及びその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体及びその抗原結合断片）を提供する。本開示は、また、このような抗体又はその断片を含む組成物、並びにこのような抗体、その断片、又は組成物の使用方法を提供する。
【００３７】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介してタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又は前述の組み合わせなどの標的を認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本発明で使用する場合、用語「抗体」は、インタクトポリクローナル抗体、インタクトモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び抗体が所望の生物学的活性を示す限り、任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの５つの主要なクラスのいずれかであり得る：それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる、重鎖定常ドメインの同一性に基づく、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、又はそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる周知のサブユニット構造及び３次元配置を有する。抗体は、ネイキッドであってもよく、又はトキシン、放射性同位体等の他の分子に結合されていてもよい。
【００３８】
用語「モノクローナル抗体」は、本発明で使用する場合、Ｂ細胞の単独クローンによって産生され、同じエピトープに結合する抗体を指す。対照的に、用語「ポリクローナル抗体」は、異なるＢ細胞によって産生され、同じ抗原の異なるエピトープに結合する抗体の集団を指す。
【００３９】
用語「抗体断片」は、インタクト抗体の部分を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合領域」は、抗原に結合するインタクト抗体の一部を指す。抗原結合断片は、インタクト抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有し得る。抗体の抗原結合断片の例としては、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線状抗体、並びに一本鎖抗体が挙げられる。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、又はハムスター）及びヒトなどの任意の動物種から誘導することができるか、又は人工的に生成することができる。
【００４０】
全抗体は、典型的には、４つのポリペプチド：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピー及び軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピーからなる。重鎖の各々は、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域と３つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）領域とを含有し、各軽鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域と１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域とを含有する。軽鎖と重鎖の各ペアの可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。ＶＨ及びＶＬ領域は、同一の一般的構造を有し、各領域は、４つのフレームワーク領域を有しており、その配列は、比較的保存されている。用語「フレームワーク領域」は、本発明で使用する場合、超可変又は相補性決定領域（ＣＤＲ）の間に位置する可変領域内の比較的保存されたアミノ酸配列を指す。各可変ドメインには４つのフレームワーク領域があり、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４と指定されている。フレームワーク領域は、可変領域の構造フレームワークを提供するβシートを形成する（例えば、Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２００１）を参照されたい）。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として知られる３つのＣＤＲは、抗体の「超可変領域」を形成し、抗原結合を担っている。
【００４１】
用語「Ｋａｂａｔ付番」及び同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体の重鎖及び軽鎖可変領域又はこれらの抗原結合断片のアミノ酸残基の付番方式を指す。特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番方式に従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ＆  Ｗｕ  ＴＴ（１９７１）  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９０：３８２−３９１  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔ付番方式を用いると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５に続く１つ又は２つの追加のアミノ酸（Ｋａｂａｔ付番スキームでは、３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）を任意選択的に含めることができるアミノ酸位置３１〜３５（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０〜６５（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置９５〜１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ付番方式を使用して、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置２４〜３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０〜５６（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置８９〜９７（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番スキームに従って決定された。
【００４２】
Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造ループの位置に言及している（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ付番規則を用いて付番したときのＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４で異なる（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ  構造ループとの妥協案に相当し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられている。
【００４３】
【表１】
2021530244.tif 000002
【００４４】
一実施形態では、組成物は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）クランピング因子Ａタンパク質（ＣｌｆＡ）に特異的に結合する第１の抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）と、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する第２の抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）と、を含む。多くのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）表面アドへシンの中でも、クランピング因子Ａ（ＣｌｆＡ）は、深刻な血流感染で重要な役割を果たすことが示されてきた（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１２：４９−６２（２０１４）；及びＭｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎ．，７（Ｓｕｐｐｌ）：５１−５９（２０１１））。ＣｌｆＡはフィブリノーゲンに結合し、フィブリノーゲンの細菌接着、及び細菌クランピングの両方を促進し、その両方が、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）血流感染症の進行における重要な属性である（Ｖａｕｄａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，６３：５８５−５９０（１９９５）；ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１１：２３７−２４８（１９９４）；及びＭｃＤｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４７：４１６−４２４（１９９７））。損傷部位でフィブリン若しくはフィブリノーゲンに結合した、又は留置装置にコーティングされたＣｌｆＡは、細菌のコロニー形成を促進し（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）、細菌のクランピングを促進する可能性があり、これは細菌の侵襲性を高めると考えられている（ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４７：４１６−４２４（１９９７）；ＭｃＡｄｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．，７：ｅ１００２３０７（２０１１）；Ｆｌｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２１：１７８３−１７９４（２０１３）；及びＲｏｔｈｆｏｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７１：５３８９−５３９５（２００３））。ＣｌｆＡは、また、オプソニン食作用細菌傷害（ＯＰＫ）に必要な補体沈着を損なうことも報告されている（Ｈａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，７８：１７１７−１７２７（２０１０））。これらの観察と一致して、同質遺伝子のΔｃｌｆＡ変異体は感染モデルにおいて毒性の低下を示した（ＭｃＡｄｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｊｏｓｅｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，３：ｅ２２０６（２００８）；及びＪｏｓｅｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，１８４：１５７２−１５８０（２００１））。加えて、ヒト抗ＣｌｆＡ濃縮静脈内（ｉ．ｖ．）免疫グロブリン（Ｉｇ）（ＩＮＨ−Ａ２１又はベロネート）又はモノクローナル抗体（テフィバズマブ又はＡｕｒｅｘｉｓ）による受動免疫は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）血流感染を有する患者の疾患転帰を改善した（Ｖｅｒｎａｃｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｃｉｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４７：３４００−３４０６（２００３）；及びＶｅｒｎａｃｈｉｏ  ��ｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５０：５１１−５１８（２００６））。しかし、これらの抗体製剤は、超低出生体重児のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）菌血症を予防又は治療するためのバンコマイシンによる予防又は補助療法の臨床研究の結果を改善することができなかった（ＤｅＪｏｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．，１５１：２６０−２６５（２００７）；Ｃａｐｐａｒｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４９：４１２１−４１２７（２００５）；及びＢｌｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，２４：８５８−８６６（２００５））。ＣｌｆＡの構造及び機能は、例えば、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１１：２３７−２４８（１９９４））に詳細に記載されている。
【００４５】
αトキシン（ＡＴ）は、肺炎、皮膚及び軟組織感染症（ＳＳＴＩ）、菌血症など、いくつかのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の主要な病原性因子である（Ｂｕｂｅｃｋ  Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，Ｊ．ａｎｄ  Ｏ．Ｓｃｈｎｅｅｗｉｎｄ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０５：２８７−２９４（２００８）；Ｉｎｏｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１３２：１５１３−１５１６（２０１２）；及びＦｏｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。抗ＡＴモノクローナル抗体による受動免疫は、肺炎及び皮膚壊死モデルにおける疾患の重症度を軽減し（Ｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５８：１１０８−１１１７（２０１４）；Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：３７７−３８５（２０１２）；及びＲａｇｌｅ，Ｂ．Ｅ．ａｎｄ  Ｊ．Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ  Ｂｕｂｅｃｋ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，７７：２７１２−２７１８（２００９））、マウス致死性菌血症及び肺炎モデルにおける死亡から防御されるＨ３５Ｌ変異（ＡＴＨ３５Ｌ）を含むＡＴトキソイドによるワクチン接種を減少させた（Ｂｕｂｅｃｋ  Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，ｓｕｐｒａ，Ｆｏｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ，Ｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ，Ｒａｇｌｅ，ｓｕｐｒａ，Ｍｅｎｚｉｅｓ，Ｂ．Ｅ．ａｎｄ  Ｄ．Ｓ  Ｋｅｒｎｏｄｌｅ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，７７：２７１２−２７１８（２００９）；及びＡｄｈｉｋａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，７：ｅ３８５６７（２０１２））。ＡＴは、血管の完全性の喪失につながる、敗血症に特徴的な過炎症反応の刺激及びＡＤＡＭ１０媒介内皮密着結合の切断の活性化を含む、菌血症及び敗血症時のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の病因の複数の態様に寄与する（Ｐｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，２０６：３５２−３５６（２０１２）；Ｗｉｌｋｅ，Ｇ．Ａ．及びＪ．Ｂｕｂｅｃｋ  Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０７：１３４７３−１３４７８（２０１０）；及びＢｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎ．，６：６１９−６３１（２０１４））。ＡＴはまた、血小板を標的とすることも実証されており、これは損傷した内皮バリアの修復を妨げ、血小板−好中球凝集体の形成を通じて臓器機能障害を促進する（Ｐｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ，１７：７７５−７８７（２０１５））。αトキシンの構造及び機能は、例えば、Ｂｈａｋｄｉ，Ｓ．ａｎｄ  Ｊ．Ｔｒａｎｕｍ−Ｊｅｎｓｅｎ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．，５５（４）：７３３−７５１（１９９１）に詳細に記載されている。
【００４６】
ＣｌｆＡに結合するモノクローナル及びポリクローナル抗体は、当該技術分野において既知であり（例えば、米国特許第７，３６４，７３８号明細書；Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，７１（１２）：６８６４−６８７０（２００３）；及びＶｅｒｎａｃｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４７（１１）：３４００−３４０６（２００３）を参照されたい）、例えば、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ）などの供給元から市販されている。上述のように、いくつかの抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体（例えば、Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＢｉｏ．，７（３）．ｐｉｉ：ｅ００５２８−１６（２０１６）に記載されている１１Ｈ１０モノクローナル抗体）は、菌血症モデルにおけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症に対する有効性を示し、このような抗体は、ＣｌｆＡに対する親和性の低下、及びメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）の特定の菌株によって発現されるＣｌｆＡ始祖配列（ＣｌｆＡ００２）へのフィブリノーゲン結合の阻害障害を示すことが判明している。そのようなものであるため、本開示は、ＣｌｆＡ００２を含む３つの主要なＣｌｆＡバリアントに対する親和性が１００倍超で増加し、１１２の多様な臨床分離株による細菌凝集の強力な阻害によりＣｌｆＡに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）を提供する。この関連で、一実施形態では、本明細書に記載の組成物の第１の抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、ＣｌｆＡに特異的に結合し、（ｉ）配列番号１の相補性決定領域（ＣＤＲ）１アミノ酸配列、配列番号２のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号３のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドと、（ｉｉ）配列番号４のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号６のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。別の実施形態では、第１の抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の重鎖ポリペプチドは、配列番号１３の可変領域アミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、及び第１の抗体又は抗原結合断片の軽鎖ポリペプチドは、配列番号１４の可変領域アミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。特定の例では、抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、ＣＳＹＨＬＣ（配列番号２１）、ＭＨＥＡＣＳＹＨＬＣＱＫＳＬＳＬＳ（配列番号２３）、又は配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を有する。
【００４７】
ＡＴに結合するモノクローナル及びポリクローナル抗体もまた、当該技術分野において既知であり（例えば、Ｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５８（２）：１１０８−１１１７（２０１４）；及びＯｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８９：２９８７４−２９８８０（２０１４）を参照のこと）、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）及びＡｂＣａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）などの供給元から市販されている。一実施形態では、本明細書で記載される組成物の第２の抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合し、（ｉ）配列番号７のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドと、（ｉｉ）配列番号１０のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１２のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。別の実施形態では、第２の抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の重鎖ポリペプチドは、配列番号１５の可変領域アミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、及び／又は第２のモノクローナル抗体の軽鎖ポリペプチドは、配列番号１６の可変領域アミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。
【００４８】
例示的な抗ＣｌｆＡ及び抗ＡＴ抗体の配列を以下に示す。特定の例では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＣｌｆＡ及び／又はＡＴに結合し、以下の２つの表で列挙された抗体の６つのＣＤＲを有する（即ち、第１の表で列挙された抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲ及び第２の表で列挙された同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）。抗ＡＴ抗体ＭＥＤＩ４８９３は、国際公開第２０１２／１０９２８５号パンフレット及び同第２０１４／０７４５４０号パンフレット（その両方の全体が本明細書に参照により組み込まれる）にて既に記載された「ＬＣ１０」の半減期延長（ＹＴＥ）バージョンである。ＭＥＤＩ４８９３＊は、ＹＴＥ変異を含有しない。
【００４９】
【表２】
2021530244.tif 000003
【００５０】
【表３】
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【００５１】
特定の例では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＣｌｆＡ及び／又はＡＴに結合し、以下の表で列挙された抗体のＶＨを、例えばＶＬと組み合わせて、有する。
【００５２】
【表４】
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【００５３】
特定の例では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＣｌｆＡ及び／又はＡＴに結合し、以下の表で列挙された抗体のＶＬを、例えばＶＨと組み合わせて、任意選択的に前表で列挙された同じ抗体のＶＨを、有する。
【００５４】
【表５】
2021530244.tif 000006
【００５５】
特定の例では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＣｌｆＡ及び／又はＡＴに結合し、以下の表で列挙された抗体の重鎖を、例えば軽鎖と組み合わせて、有する。
【００５６】
【表６】
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2021530244.tif 000008
【００５７】
特定の例では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＣｌｆＡ及び／又はＡＴに結合し、以下の表で列挙された抗体の軽鎖を、例えば重鎖と組み合わせて、任意選択的に前表で列挙された同じ抗体の重鎖を、有する。
【００５８】
【表７】
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【００５９】
特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を指す、Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ＆  Ｌｅｓｋ  ＡＭ，（１９８７），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７−９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：７９９−８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５（１）：１７５−８２；及び米国特許第７，７０９，２２６号明細書を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ付番規則を用いた場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、又は３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在するとともに、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｋａｂａｔ付番規則を用いて付番したときのＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４で異なる（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。
【００６０】
特定の態様では、本明細書において、ＳＡＲ１１４及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗体のＣｈｏｔｈｉａＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを有する抗体及びその抗原結合断片が提供される。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔ  ＣＤＲが、同一のアミノ酸配列を含む、１つ以上のＣＤＲを有する。特定の実施形態では、本明細書において、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片が提供される。
【００６１】
特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７：１３２−１３６  ａｎｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２で記載されているようにＩＭＧＴ付番方式に従って決定することができる。ＩＭＧＴ付番スキームよれば、ＶＨ−ＣＤＲ１は２６〜３５位にあり、ＶＨ−ＣＤＲ２は５１〜５７位にあり、ＶＨ−ＣＤＲ３は９３〜１０２位にあり、ＶＬ−ＣＤＲ１は２７〜３２位にあり、ＶＬ−ＣＤＲ２は５０〜５２位にあり、及びＶＬ−ＣＤＲ３は８９〜９７位にある。特定の実施形態では、本明細書において、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ（１９９９）  ｓｕｐｒａ  ａｎｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）ｓｕｐｒａ）で記載されているように、ＳＡＲ１１４及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗体のＩＭＧＴ  ＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを有する抗体及びその抗原結合断片が提供される。
【００６２】
特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２：７３２−７４５に従って決定され得る。例えば、Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｅｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）もまた参照にされたい。特定の実施形態では、本明細書において、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌにおける方法により決定されたＳＡＲ１１４及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗体のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを有する抗体又はその抗原結合断片が提供される。
【００６３】
特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの妥協案に相当し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって用いられているＡｂＭ超可変領域を指す、ＡｂＭ付番スキームに従って決定することができる。特定の実施形態では、本明細書において、ＡｂＭ付番スキームにより決定されたＳＡＲ１１４及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗体のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを有する抗体又は抗原結合断片が提供される。
【００６４】
別の実施形態では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、エフェクタ機能（例えば、オプソニン食作用細菌傷害（ＯＰＫ））又は組成物中に存在する第１及び／若しくは第２の抗体若しくは抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の半減期を改善するために改変された任意の好適なクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ）の定常領域（Ｆｃ）を有してもよい。例えば、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、変異がない同じ抗体と比較して半減期を延長する変異を含み、変異が、同じ抗体又は抗原結合断片変異と比較してＯＰＫ活性を阻害しないＦｃを有してもよい。Ｆｃ領域遺伝子操作は、治療用抗体の半減期を延長し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの分解から防御するために当該技術分野で広く使用されている。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体又は抗原結合断片のＦｃ領域は、ＩｇＧ異化作用を媒介し、ＩｇＧ分子を分解から防御する胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対するＩｇＧ分子の親和性を高めるために改変することができる。本明細書で記載される抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）のいずれかのＦｃ領域は、ＦｃＲｎに対するＩｇＧ分子の親和性を高めることなどによって、抗体半減期又はエフェクタ機能を改善又は延長させる１つ以上のアミノ酸置換又は改変を含んでもよい。好適なＦｃ領域アミノ酸置換又は改変は、当該技術分野において既知であり、例えば、三重置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅが挙げられる（「ＹＴＥ」と呼ばれる）（例えば、米国特許第７，６５８，９２１号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０３０２０５８号明細書；及びＹｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，６１（１）：ｅ０１０２０−１６（２０１７）を参照されたい）。別の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＨ２中でＹＴＥ変異且つ４３２及び４３７位にシステイン残基を含む、高親和性ＦｃＲｎ結合ＦｃバリアントＮ３Ｅ−ＹＴＥから誘導されてもよい（例えば、Ｂｏｒｒｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２９０（７）：４２８２−４２９０（２０１５）を参照されたい）。例えば、Ｎ３Ｅ−ＹＴＥバリアントは、ＹＴＥ変異を欠いていてもよい（「Ｎ３Ｅ」と呼ばれる）か、又はＦｃ残基４３２（Ｋａｂａｔ付番使用）で、例えば、配列ＣＳＷＨＬＣ（「Ｎ３」；配列番号１９と呼ばれる）、ＣＳＦＨＬＣ（「Ｎ３Ｆ」；配列番号２０と呼ばれる）、若しくはＣＳＹＨＬＣ（「Ｎ３Ｙ」；配列番号２１と呼ばれる）と置換されていてもよい。特に、Ｎ３、Ｎ３Ｆ、及びＮ３Ｙ  Ｆｃバリアントは、ＹＴＥバリアントと比較して、高められた薬物動態（ＰＫ）特性（例えば、血清持続性）及びエフェクタ機能（例えば、オプソニン食作用細菌傷害（ＯＰＫ））を示す。
【００６５】
例示的なＦｃバリアントの配列は、以下で提供される。
【００６６】
【表８】
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【００６７】
本開示は、ＣｌｆＡに結合し（例えば、ＣＤＲ、ＶＨ及び／若しくはＶＬ、重及び／若しくは軽、又は上記表で列挙されたＦｃバリアント配列を有する抗体及び抗原結合断片）、フィブリノーゲン結合阻害アッセイにおけるＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４のＩＣ５０が、互いに２μｇ／ｍｌ以内である、抗体及びその抗原結合断片を提供する。例えば、ＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４の抗体又はその抗原結合断片のＩＣ５０は、全て１μｇ／ｍｌ〜５μｇ／ｍｌであり得る。ＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４の抗体又はその抗原結合断片の結合親和性（ＫＤ）は、全て２００〜３５０ｐＭであり得る。
【００６８】
本開示は、ＣｌｆＡに結合し（例えば、ＣＤＲ、ＶＨ及び／若しくはＶＬ、重及び／若しくは軽、又は上記表で列挙されたＦｃバリアント配列を有する抗体及び抗原結合断片）、従来の白色光に２ｋＬｕｘ／時で２３℃にて１４日間曝露した後、５％以下の低下をするモノマー純度を有する、抗体及びその抗原結合断片を提供する。
【００６９】
本開示は、限定はされないが、上記で記載されたＣｌｆＡ結合抗体又は抗原結合断片、及びＡＴ結合抗体又は抗原結合断片の両方を含む組成物である。実際に、本開示はまた、（ａ）配列番号１のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号３のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドと、（ｂ）配列番号４のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号６のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、
を含む抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）を別々に提供する。
【００７０】
本開示は、また、ＣｌｆＡ及びＡＴの両方に（例えば、同時に）結合する二重特異性抗体又は抗原結合断片を提供する。用語「二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）モノクローナル抗体」（「二重特異性（ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」モノクローナル抗体とも呼ばれる）は、２つの異なる抗原認識ドメインを含み、そのため、同時に２つの異なるエピトープに結合し得るモノクローナル抗体を指す。３つ以上の異なるエピトープを認識して結合するモノクローナル抗体は、当該技術分野では、「多重特異性モノクローナル抗体」と呼ばれる。第１の二重特異性抗体は、２つの抗体分泌細胞の体細胞ハイブリダイゼーションによって産生されたが、親重鎖及び軽鎖がランダムに集合するため、収量が低くなった（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．ａｎｄ  Ａ．Ｃ．Ｃｕｅｌｌｏ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，５：２９９−３０４（１９８４））。一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の発見及び抗体工学の進歩により、二重特異性抗体を開発するための新しい方法論がもたらされた（Ｏｒｃｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２３：２２１−２２８（２０１０）；及びＣｏｌｏｍａ，Ｍ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５：１５９−１６３（１９９７））。現在、ＩｇＧスキャホールド上でｓｃＦｖ番号及び融合位置に基づいて少なくとも５０の異なる二重特異性抗体フォーマットが存在する（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｅ．，ＭＡｂｓ，４：１８２−１９７（２０１２））。二重特異性及び多重特異性抗体は、いくつかの異なる構造フォーマットで製造することができ、限定されないが、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデムダイアボディ、二重可変ドメイン抗体、及びＣＨ１／Ｃｋドメイン又はＤｏｃｋ  ａｎｄ  Ｌｏｃｋモチーフなどのモチーフを使用したヘテロ二量体化が挙げられる（例えば、Ｃｈａｍｅｓ，Ｐ．ａｎｄ  Ｄ．Ｂａｔｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖｅｌ．，１２：２７６−２８３（２００９）を参照されたい）。一実施形態では、本開示は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質及びスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）タンパク質に特異的に結合する抗体（即ち、二重特異性抗体）又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）であって、以下：（ａ）配列番号１のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号３のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第１の重鎖ポリペプチドと、（ｂ）配列番号４のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号６のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第１の軽鎖ポリペプチドと、（ｃ）配列番号７のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第２の重鎖ポリペプチドと、（ｄ）配列番号１０のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１２のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第２の軽鎖ポリペプチドと、
を含むものを提供する。別の実施形態では、上述の二重特異性抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の第１の重鎖ポリペプチド及び第１の軽鎖ポリペプチドは、それぞれ、配列番号１３及び配列番号１４の可変領域アミノ酸配列を含み、上述の二重特異性抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の第２の重鎖ポリペプチド及び第２の軽鎖ポリペプチドは、それぞれ、配列番号１５及び配列番号１６の可変領域アミノ酸配列を含む。このような二重特異性（任意選択的にモノクローナル）抗体（ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３又はＭＥＤＩ４８９３＊配列を含む抗体）は、例えば、ＳＡＲ１１４のＣｌｆＡとの強力な結合の結果として、ＭＥＤＩ４８９３又はＭＥＤＩ４８９３＊のＡＴ−中和活性と比較して、ＡＴ−中和活性が低下し得る。これは、ＭＥＤＩ４８９３又はＭＥＤＩ４８９３＊のＡＴ−中和活性と比較して、ＡＴ−中和活性が有意に減少していない、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡ及びＡＴタンパク質に結合する他の二重特異性（任意選択的にモノクローナル）抗体（例えば、１１Ｈ１０及びＭＥＤＩ４８９３又はＭＥＤＩ４８９３＊配列を含む抗体）とは対照的である。二重特異性又は多重特異性（任意選択的にモノクローナル）抗体の産生方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０（１４）：６４４４−６４４８（１９９３）；Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｕ．ａｎｄ  Ｒ．Ｅ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ、ＭＡｂｓ，９（２）：１８２−２１２（２０１７）；及びＳｅｇａｌ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｂａｓｔ，Ｂ．Ｊ．２００１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６）に記載されている。
【００７１】
本明細書で記載される抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、ヒト抗体、ヒト化抗体、非ヒト抗体、又はキメラ抗体であり得るか、又はそれらから得られ得る。「キメラ」抗体は、ヒト及び非ヒト領域の両方を含む抗体又はその断片を指す。「ヒト化」抗体は、ヒト抗体スキャホールドと、非ヒト抗体から得られる又は誘導される少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体である。非ヒト抗体は、例えば、げっ歯類（例えば、マウス又はラット）などの任意の非ヒト動物から単離される抗体を含む。ヒト化抗体は、非ヒト抗体から得られる又は誘導される１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含み得る。完全ヒト抗体は、非ヒト動物から得られる又は誘導されるいかなるアミノ酸残基も含有しない。完全ヒト抗体及びヒト化抗体は、マウスやキメラ抗体よりもヒトに免疫反応を誘発するリスクが低いと理解されよう（例えば、Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２（３）：２５６−２６（２０１０）を参照されたい）。一実施形態では、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片は、完全ヒト抗体である。
【００７２】
ヒト抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの供給源（例えば、ハイブリドーマ又は組換え的に抗体を産生する細胞株）及びｉｎ  ｖｉｖｏで供給源（例えば、げっ歯類、ヒト扁桃腺）を含む任意の手段で入手することができる。抗体産生方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：５１１−５１９（１９７６）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）；及びＪａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００１））に記載されている。特定の実施形態では、ヒト抗体又はキメラ抗体は、１つ以上の内因性免疫グロブリン遺伝子が１つ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子に置換されているトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いて産生することができる。内因性抗体遺伝子が、効果的にヒト抗体遺伝子に置き換えられているトランスジェニックマウスの例としては、限定されるものではないが、Ｍｅｄａｒｅｘ  ＨＵＭＡＢ−ＭＯＵＳＥ（商標）、Ｋｉｒｉｎ  ＴＣ  ＭＯＵＳＥ（商標）、及びＫｙｏｗａ  Ｋｉｒｉｎ  ＫＭ−ＭＯＵＳＥ（商標）が挙げられる（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２３（９）：１１１７−２５（２００５），ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１８１：６９−９７（２００８）を参照されたい）。ヒト化抗体は、任意の好適な当該技術分野において既知の方法を用いて産生することができ（例えば、Ａｎ，Ｚ．（ｅｄ．），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ．（２００９）を参照されたい）、例えば、非ヒトＣＤＲのヒト抗体スキャホールドへの移植（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６（１）：２５−３４（２００５）；及びＨｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４４（１）：１１５−１２０（２００８）を参照されたい）が挙げられる。一実施形態では、ヒト化抗体は、例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２８７４８５Ａ１号明細書に記載される方法を用いて産生することができる。
【００７３】
本開示は、また、本明細書で記載されるようなＣｌｆＡ結合抗体、ＡＴ結合抗体、若しくはＣｌｆＡ及びＡＴの両方に結合する抗体、又はその抗原結合断片（任意選択的に、ここで抗体又は断片はモノクローナルである）をコードする、１つ以上の単離された核酸配列を提供する。用語「核酸配列」は、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー、即ち、ポリヌクレオチドを包含することが意図され、これは、一本鎖又は二本鎖であり得、非天然又は改変されたヌクレオチドを含み得る。用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、本発明で使用する場合、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）又はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）のいずれかの任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。これらの用語は、分子の一次構造を指し、したがって、二本鎖及び一本鎖ＤＮＡ、並びに二本鎖及び一本鎖ＲＮＡが含まれる。この用語は、同等物として、ヌクレオチド類似体及び修飾されたポリヌクレオチド、例えば、限定されないが、メチル化及び／又はキャップされたポリヌクレオチドから作製されたＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの類似体を含む。核酸は、典型的には、リン酸結合を介して連結されて、核酸配列又はポリヌクレオチドを形成するが、他の多くの連結が当該技術分野で知られている（例えば、ホスホロチオエート、ボラノホスフェートなど）。
【００７４】
本開示は、更に、本明細書で記載されるようなＣｌｆＡ結合抗体、ＡＴ結合抗体、若しくはＣｌｆＡ及びＡＴの両方に結合する抗体、又はそれらの抗原結合断片（任意選択的に、ここで抗体又は断片はモノクローナルである）をコードする、１つ以上の核酸配列を含む１つ以上のベクターを提供する。ベクターは、例えば、プラスミド、エピソーム、コスミド、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス又はアデノウイルス）、又はファージであり得る。好適なベクター及びベクター調製方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９４）を参照のこと）。
【００７５】
本明細書で記載されるＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、又はＣｌｆＡ及びＡＴの両方に結合する抗体若しくは抗原結合断片（任意選択的に、ここで抗体又は断片はモノクローナルである）をコードする核酸配列に加えて、ベクターは、望ましくは、宿主細胞におけるコード配列の発現を提供する、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、転写ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）などの発現制御配列を含む。例示的な発現制御配列は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。
【００７６】
本明細書で記載される抗体又は抗原結合断片のアミノ酸配列（例えば、ＣｌｆＡ結合抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするアミノ酸配列）をコードする核酸を含むベクター（任意選択的に、モノクローナル抗体又は断片）は、任意の好適な原核細胞又は真核細胞を含む、それによってコードされるポリペプチドを発現することができる宿主細胞に導入することができる。そのようなものであるから、本開示は、ベクターを含む単離された細胞を提供する。使用してもよい宿主細胞としては、容易且つ確実に増殖でき、適度に速い増殖速度を有し、十分に特徴付けられた発現系を有し、容易且つ効率的に形質転換又はトランスフェクトすることができるものが挙げられる。好適な原核細胞の例としては、限定されるものではないが、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属（バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）など）、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属（Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）など）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、及びエルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属が挙げられる。特に有用な原核細胞としては、エスケリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（例えば、Ｋ１２、ＨＢ１０１（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．３３６９４）、ＤＨ５ａ、ＤＨ１０、ＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．５３３３８）、及びＣＣ１０２）の様々な菌株が挙げられる。好適な真核細胞は、当該技術分野において既知であり、例えば、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞が挙げられる。一実施形態では、ベクターは哺乳類細胞で発現する。多数の好適な哺乳類宿主細胞が、当該技術分野において既知であり、多くは、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能である。好適な哺乳類細胞の例としては、限定されるわけではないが、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＣＬ６１）、ＣＨＯ  ＤＨＦＲ−細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：４２１６−４２２０（１９８０））、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３又は２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）、及び３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＣＬ９２）が挙げられる。他の好適な哺乳類細胞株は、サルＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１６５０）及びＣＯＳ−７細胞株（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１６５１）、並びにＣＶ−１細胞株（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＣＬ７０）である。哺乳類細胞は、望ましくは、ヒト細胞である。例えば、哺乳類細胞は、ヒトリンパ球又はリンパ球誘導細胞株、例えばプレＢリンパ球系統（ｐｒｅ−Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｏｒｉｇｉｎ）の細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株（Ｃｒｕｃｅｌｌ  Ｈｏｌｌａｎｄ  Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、又はヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３若しくは２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）であり得る。
【００７７】
本明細書で記載される抗体又は抗原結合断片（任意選択的に、モノクローナル抗体又は断片）のいずれかのアミノ酸をコードする核酸配列は、細胞に「トランスフェクション」、「形質転換」、又は「形質導入」によって導入してもよい。「トランスフェクション」、「形質転換」、又は「形質導入」は、本発明で使用する場合、物理的又は化学的方法を使用することによる、宿主細胞への１つ以上の外因性ポリヌクレオチドの導入を指す。多くのトランスフェクション技術が、当該技術分野において既知であり、例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈が挙げられる（例えば、Ｍｕｒｒａｙ  Ｅ．Ｊ．（ｅｄ．），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１））；ＤＥＡＥ−ｄｅｘｔｒａｎ；ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ；ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ；ｔｕｎｇｓｔｅｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ−ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：７７６−７７７  （１９９０））；及びｓｔｒｏｎｔｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ＤＮＡ  ｃｏ−ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  （Ｂｒａｓｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，７：２０３１−２０３４（１９８７）を参照されたい）。ファージ又はウイルスベクターは、その多くが市販されている、好適なパッケージング細胞で感染性粒子を増殖させた後、宿主細胞に導入することができる。
【００７８】
本開示は、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片のいずれか１つ又は組み合わせの有効量と、薬学的に許容される担体と、を含む組成物を提供する。一実施形態では、例えば、組成物は、上記のようなＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する第１の抗体若しくはその抗原結合断片（任意選択的にはモノクローナル）、及び上記のようなＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する第２の抗体若しくはその抗原結合断片（任意選択的にはモノクローナル）と、薬学的に許容される担体と、を含み得る。或いは、組成物は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合する抗体若しくはその抗原結合断片、又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴタンパク質に特異的に結合する抗体若しくはその抗原結合断片のいずれかと、薬学的に許容される担体と、を含み得る。更に別の実施形態では、組成物は、ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、及び／若しくは抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片をコードする核酸配列、又はこのような核酸配列を含む１つ以上のベクターを含んでもよい。一実施形態では、組成物は、薬学的に許容される（例えば、生理学的に許容される）組成物であり、これは、薬学的に許容される（例えば、生理学的に許容される）担体などの担体、及びＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片、核酸配列、又はベクターを含む。任意の好適な担体は、本開示の文脈の範囲内で使用することができ、このような担体は当該技術分野において周知である。担体の選択は、部分的には、組成物を投与することができる特定の部位及び組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定されるであろう。組成物は、任意選択的に、無菌であり得る。組成物は、保存のために冷凍又は凍結乾燥することができ、使用前に好適な無菌担体で再構成できる。組成物は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（２００１）で記載される従来の技術に従って、生成することができる。
【００７９】
組成物は、望ましくは、ＣｌｆＡ結合抗体及び／若しくはＡＴ結合抗体、及び／若しくは抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体、又はそれらの抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）を、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の治療又は予防に有効な量で含む。したがって、本開示は、対象（例えば、ヒト）のスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を治療又は予防する方法であって、それを必要とする対象に本明細書で記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）のいずれか１つ又は組み合わせを含む組成物を投与し、その結果Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症が対象で治療又は予防されることを含む方法を提供する。本開示は、また、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を治療又は予防するための医薬の製造における、本明細書で記載されるＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、及び／若しくは抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片、又は本明細書で記載される抗体若しくはその断片のいずれか１つ又は組み合わせを含む組成物の使用を提供する。本明細書にて言及されるように、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）は、広範囲の臨床感染症を引き起こす主要なヒト病原体である。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、菌血症及び感染性心内膜炎、並びに骨関節、皮膚及び軟組織、胸膜肺芽腫、及びデバイス関連感染症の主な原因である。およそ３０％のヒト個体群は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）でコロニー形成されている（Ｗｅｒｔｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，５：７５１−７６２  （２００５））。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）皮膚感染症の症状としては、例えば、腫脹、蜂窩織炎（ｃｅｌｌｕｌｉｔｓ）、及び膿痂疹が挙げられる。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、また、食中毒、菌血症（バクテリア血症としても知られている）、毒素性ショック症候群、及び敗血症性関節炎を引き起こすことがある。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の疫学、病態生理学、及び臨床症状は、例えば、Ｔｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．，２８（３）：６０３−６６１（２０１５）で詳細に記載されており、いくつかの異なるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）株のゲノムは、配列決定されている（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ受け入れ番号ＢＸ５７１８５６、ＢＸ５７１８５７、ＢＸ５７１８５８、ＦＮ４３３５９６、ＦＮ４３３５９７、ＦＮ４３３５９８、ＨＥ６８１０９７、ＦＲ８２１７７７、ＦＲ８２１７７８、ＦＲ８２１７７９、及びＦＲ８２１７８０）。本明細書にて議論されるように、対象（例えば、ヒト対象）は、糖尿病を有し得る。
【００８０】
本発明で使用する場合、用語「治療」、「治療すること」などは、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。一実施形態では、効果は治療的である、即ち、効果は、疾患及び／又は疾患に起因する有害な症状を部分的又は完全に治癒する。この目的のため、本開示の方法は、「治療有効量」のＣｌｆＡ結合抗体、ＡＴ結合抗体、及び／若しくは抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体、若しくはそれらの抗原結合断片、又は上述の抗体若しくは断片（モノクローナル抗体又は断片を含む）のいずれか１つ若しくは組み合わせを含む組成物を投与することを含む。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投与量及び期間で有効な量を指す。治療有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する抗体又は抗原結合断片の能力などの要因によって異なり得る。例えば、治療有効量のＣｌｆＡ結合抗体若しくはその抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくはその抗原結合断片、又はＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体若しくはその抗原結合断片は、ヒトにおいて、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）−関連敗血症を阻害するか、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集を阻害するか、血栓塞栓性病変形成を阻害するか、αトキシンを中和するか、オプソニン化貪食作用を誘発するか、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）フィブリノーゲン結合を阻害するか、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集を阻害するか、又は前述のものの任意の組み合わせである量である。
【００８１】
或いは、薬理学的及び／又は生理学的効果は予防的であり得る、すなわち、その効果は、疾患又はその症状を完全に又は部分的に予防する。この点において、本開示の方法は、「予防有効量」のＣｌｆＡ結合抗体、ＡＴ結合抗体、及び／若しくは抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体、又はそれらの抗原結合断片（モノクローナル抗体又は断片を含む）を投与することを含む。「予防有効量」は、所望の予防結果（例えば、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症又は発病の予防）を達成するために、必要な投与量及び期間で有効な量を指す。
【００８２】
治療的又は予防的有効性は、治療された患者の中期的な評価によって監視することができる。病態に応じて、数日以上の反復投与の場合、疾患症状の所望の抑制が起こるまで治療が繰り返され得る。しかし、他の投与レジメンが有用である可能性があり、本開示の範囲内である。所望の投与量は、組成物の単回ボーラス投与、組成物の複数回ボーラス投与、又は組成物の持続注入投与によって送達させることができる。
【００８３】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の治療又は予防方法は、本明細書で記載されるＣｌｆＡ結合抗体、本明細書で記載されるＡＴ結合抗体、本明細書で記載されるＣｌｆＡ結合及びＡＴ結合抗体の両方、若しくは本明細書で記載されるＣｌｆＡ−ＡＴ二重特異性抗体、又はそれらの抗原結合断片を投与することを含み得る。ＣｌｆＡ結合及びＡＴ結合抗体又は断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の両方が対象に投与される実施形態では、各抗体又は断片は、同じ組成物又は別々の組成物中に存在し得る。別々の組成物が対象に投与される場合、組成物の各々は、同時に又は任意の順序で逐次的に投与され得る。
【００８４】
本明細書で記載される抗体若しくはその抗原結合断片、前述のもののいずれかをコードする核酸配列、又は核酸配列を含むベクターのいずれか１つ又は組み合わせの有効量を含む組成物は、静脈内、腹腔内、皮下、及び筋肉内の投与経路を含む標準的な投与技術を用いて、ヒトなどの対象に投与され得る。組成物は、非経口的投与に好適であり得る。用語「非経口の」は、本発明で使用する場合、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内、腹腔内、又は皮下注射による末梢全身送達を使用して、対象に投与される。
【００８５】
ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、及び／若しくは抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片、又は同じものを含む組成物は、単独又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の治療に従来使用される他の薬剤（例えば、アジュバントとして）と組み合わせて投与され得る。ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、又はＣｌｆＡ−ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片を含む組成物は、例えば、ペニシリナーゼ耐性β−ラクタム抗生物質（例えば、オキサシリン又はフルクロキサシリン）などの１つ以上の抗生物質と組み合わせて使用され得る。ゲンタマイシンを使用して、心内膜炎などの深刻な感染症を治療してもよい。しかしながら、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のほとんどの菌株は、現在ペニシリンに耐性があり、１００人に２人がＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のメチシリン耐性菌（ＭＲＳＡ）を保有している。ＭＲＳＡ感染症は、典型的には、バンコマイシンで治療され、軽度の皮膚感染症は３剤の抗生物質軟膏で治療され得る。
【００８６】
治療上の使用に加えて、本明細書で記載される抗体のいずれか１つ又は組み合わせは、診断又は研究用途で使用することができる。この点において、ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、又はＣｌｆＡ−ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片は、対象のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を監視するためのアッセイで使用され得る。研究用途としては、例えば、ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、又はＣｌｆＡ−ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片及び標識を利用して例えば、ヒト体液中又は細胞若しくは組織抽出物中の試料のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を検出する方法が挙げられる。ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、又はＣｌｆＡ−ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片は、検出可能な成分による共有結合又は非共有結合の標識など、修飾の有無にかかわらず使用され得る。例えば、検出可能な成分は、放射性同位体（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、又は１２５Ｉ）、蛍光又は化学発光化合物（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、又はルシフェリン）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、又はセイヨウワサビペルオキシダーゼ）、又は補欠分子族であり得る。抗体又はその抗原結合断片を検出可能な部分に別々に結合させるための当該技術分野で既知の任意の方法を、本開示の文脈において用いてもよい（例えば、Ｈｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９４：４９５−４９６（１９６２）；Ｄａｖｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：１０１４−１０２１（１９７４）；Ｐａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，４０：２１９−２３０（１９８１）；及びＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，３０：４０７−４１２（１９８２）を参照されたい）。
【００８７】
本明細書で記載される抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）、前述のもののいずれかをコードする核酸配列、その核酸配列を含むベクターのいずれか１つ若しくは組み合わせ、又は前述のもののいずれかを含む組成物は、キット、即ち、診断アッセイを実施するための説明書を含む所定量の試薬のパッケージ化された組み合わせで提供され得る。ＣｌｆＡ結合抗体若しくは抗原結合断片、ＡＴ結合抗体若しくは抗原結合断片、又はＣｌｆＡ−ＡＴ二重特異性抗体若しくは抗原結合断片を酵素で標識する場合、キットには、酵素に必要な基質と補因子が含まれていることが望ましい（例えば、検出可能な発色団又はフルオロフォアを提供する基質前駆体）。加えて、安定剤、バッファ（例えば、ブロッキングバッファ又は細胞溶解バッファ）などのその他の添加剤がキットに含まれてもよい。様々な試薬の相対量を変化させて、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供することができる。試薬は、乾燥粉末（典型的には、凍結乾燥した）として提供されてもよく、溶解すると適切な濃度の試薬溶液を提供する賦形剤を含む。
【００８８】
以下の実施例は、本発明を更に説明するが、もちろん、その範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８９】
［実施例１］
本実施例は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣｌｆＡタンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体の選択及び特性を示す。
【００９０】
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）致死性菌血症モデルの個々のｍＡｂに対して、抗ＣｌｆＡ  ｍＡｂ（「１１Ｈ１０」と呼ばれる）と組み合わせた抗Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）αトキシン（ＡＴ）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（「ＬＣ１０」として国際公開第２０１２／１０９２８５号パンフレット及び同第２０１４／０７４５４０号パンフレットに記載されている「ＭＥＤＩ４８９３＊」と称される）による予防によって得られる強化された防御能力及び分離株適用範囲が、既に報告されている（Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＢｉｏ．，７（３）．ｐｉｉ：ｅ００５２８−１６（２０１６））。（ＹＴＥ変異は、ヒトのＩｇＧ半減期を増加させるが、マウスの血清曝露を減少させるため、ＭＥＤＩ４８９３＊には存在しないＹＴＥ変異を含有するＭＥＤＩ４８９３は、マウスでは使用されなかったことに注意する。）１１Ｈ１０は、強力な抗ＣｌｆＡ活性を示したが、図１Ａ及び表１に示すように、他のＣｌｆＡ始祖配列ＣｌｆＡ００１及びＣｌｆＡ００４と比較して、フィブリノーゲン結合阻害アッセイで、１０００倍超の親和性の低下（Ｋｏｎは検出限界を下回り、表１のＮＤである）及びＣｌｆＡ始祖配列ＣｌｆＡ００２のＩＣ５０の約４０倍の増加を示した。ＣｌｆＡ００２は、主要なＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）院内感染ＭＲＳＡ（ＨＡ−ＭＲＳＡ；ＵＳＡ１００又は配列型５（ＳＴ５））により発現される（Ｓｈａｒｍａ−Ｋｕｉｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，５３：２２７−２３６（２０１５）；及びＭｅｎｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，５０：３６９４−３７０２（２０１２））。
【００９１】
【表９】
2021530244.tif 000011
【００９２】
潜在的な臨床分離株適用範囲を拡大するために、ヒト扁桃腺Ｂ細胞ライブラリーをスクリーニングして、より広範囲に反応する抗ＣｌｆＡｍＡｂを検索した。具体的には、メモリーＢ細胞を、フィコエリトリン（ＰＥ）−Ｃｙ７標識ＣＤ１９マイクロビーズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して扁桃腺から分離された凍結保存リンパ球から単離し、続いて、抗ＰＥビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で染色し、ＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）でのセルソーティングによりＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡを運ぶ細胞を枯渇させた。細胞は、Ｔｒａｇｇｉａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１０：８７１−８７５（２００４）に記載のようにエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）を用いてクローン条件下で細胞を不死化させた。２週間後、培養上清を、３８４ウェルベースのＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＣｌｆＡ００１特異的モノクローナル抗体の存在についてスクリーニングした。要約すると、抗ＣｌｆＡｍＡｂの段階希釈（１：２又は１：６００）を、ＣｌｆＡコーティングプレートに加え、続いてビオチン化１１Ｈ１０を加えた（１：６００）。競合パーセントは、１００＊（ＯＤｍＡｂ＋１１Ｈ１０ｂｉｏｔ）／（ＯＤ１１Ｈ１０ｂｉｏｔ））として計算した。陽性培養物を完全ＲＰＭＩ培地で増殖させ、ＣｌｆＡ遺伝子型００１、００２、及び００４に高い親和性で結合する能力について選択した。ＶＨ及びＶＬ配列は、ＲＴ−ＰＣＲにより検索された。
【００９３】
この試みから、ＣｌｆＡ００１、００２、及び００４について高い親和性（ＫＤ＝１．１５〜４４．７ｐＭ、表１）、及び図１Ｂに示されるとおりの３つの主要な始祖ＣｌｆＡ遺伝子型によるフィブリノーゲン結合の強力な阻害（ＩＣ５０約２０μＭ）を示すモノクローナル抗体を同定した（「ＳＡＲ１１４」と呼ばれる）。ＳＡＲ１１４は、また、図３Ａ〜３Ｆに示されるとおり、いくつかのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株に対するオプソニン食作用傷害（ＯＰＫ）活性を示し（例えば、Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ  ｆｏｒ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ＯＰＫ  ｋｉｌｌｉｎｇを参照されたい）、以下の図２、図４、及び表２に示すように、１１Ｈ１０と比較してヒト血漿における細菌凝集の阻害を改善した。ヒト血漿における凝集阻害は、１１２個のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株をトリプシン大豆ブロス（ＴＳＢ）で一晩培養し、ＰＢＳで洗浄し、氷冷ＰＢＳで元の容量の１０分の１に懸濁することによって測定した。抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体を２００μｇ／ｍｌから開始して３０μｌのＰＢＳで段階希釈（２倍）し、９６ウェルＵ底プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で３０μｌのクエン酸ヒト血漿と混合した。細菌を加え（３０μｌ）、３７℃で５分間インキュベートした。各ウェルを目視評価し、細菌が凝集した最低のモノクローナル抗体濃度を記録した。Ｒ３４７、ヒト抗ｇｐ１２０モノクローナル抗体を、アイソタイプ対照ヒトＩｇＧ１（ｃ−ＩｇＧ）として利用した。ヒト陰性対照モノクローナル抗体（ｃ−ＩｇＧ）は、２００μｇ／ｍｌまでいかなる阻害効果も示さなかった。
【００９４】
【表１０】
2021530244.tif 000012
【００９５】
ＳＡＲ１１４抗体の重鎖ポリペプチドは、配列番号１のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号３のＣＤＲ３アミノ酸配列とともに、配列番号１３の可変領域アミノ酸配列を含むように決定された。ＳＡＲ１１４抗体の軽鎖ポリペプチドは、配列番号４のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号６のＣＤＲ３アミノ酸配列とともに、配列番号１４の可変領域アミノ酸配列を含むように決定された。１１Ｈ１０及びＳＡＲ１１４は、図５Ａ及び５Ｂにて示すように、ＥＬＩＳＡ及びＯｃｔｅｔ系競合アッセイにより、ＣｌｆＡ００１への結合をめぐって競合することが判明した。要約すると、ＰＢＳで５μｇ／ｍｌに希釈したｍＡｂを、アミノプロピルシラン（ＡＰＳ）バイオセンサで７分間捕捉した。コーティングされたバイオセンサをブロッキングバッファ（ＰＢＳ，１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））含有ウェルに６分間移し、遊離センサ結合部位をブロックし、ブロッキングバッファで希釈した２．５μｇ／ｍｌのＣｌｆＡ００１とともに７分間インキュベートし、最後にブロッキングバッファで５μｇ／ｍｌに希釈した競合ｍＡｂを含むウェルに移した。ＯＣＴＥＴ（登録商標）データ取得及び解析ソフトウェア（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＬＬＣ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を使用して、データを解析した。競合するｍＡｂの会合がない場合、競合がもたらされ、そのため、同じ抗原部位が認識される一方で、第２のｍＡｂの会合が検出された場合は非競合が観察された。
【００９６】
本実施例の結果は、抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体１１Ｈ１０及びＳＡＲ１１４が、ＣｌｆＡ００１上の重複するエピトープに結合することを示し、これは、ＣｌｆＡ００２に対する活性の違いが異なる結合親和性に起因する可能性があることを示唆する。
【００９７】
［実施例２］
本実施例は、ＳＡＲ１１４と比較して半減期が増加したＳＡＲ１１４−Ｎ３の産生について記載する。
【００９８】
抗体のＦｃ領域はそれらの半減期で役割を果たし、Ｆｃ遺伝子操作は治療用生物製剤の半減期を操作するために使用されてきたことは周知である。例えば、三重アミノ酸置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（「ＹＴＥ」置換と称する）は、抗Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＥＤＩ４８９３抗体を含む抗体のＦｃ領域中に遺伝子操作されており、これは、半減期が３〜４倍に増加する可能性がある。しかし、ＹＴＥ変異は、また、Ｃ１ｑ及びＦｃγＲへの結合を減少させ、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性などのエフェクタ機能の減少を示した。（Ｍｏｎｎｅｔ  Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３９（２０１５）。）ＹＴＥ変異は、また、抗細菌抗体のオプソニン食作用傷害（ＯＰＫ）を減少させる（ＹＴＥ置換が、抗シュードモナス抗体Ｃａｍ００４のＯＰＫを減少させることを示す図６を参照されたい）。したがって、半減期の延長は、抗ＣｌｆＡ抗体にとって望ましいが、ＹＴＥ変異は、ＳＡＲ１１４に好適ではない。
【００９９】
Ｂｏｒｒｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２９０（７）：４２８２−４２９０（２０１５）．）は、「Ｎ３」バリアントを含む他のＦｃ改変の影響を研究した。「Ｎ３」バリアントは、それらの同じ位置で野生型配列（ＬＨＮＨＹＴ；配列番号２２）の代わりにＣＨ３ドメインに配列ＣＳＷＨＬＣ（配列番号１９）を含有する。このＦｃバリアントは、また、半減期を増加させる（図９、上方区画を参照されたい）が、図６で示されるように、抗細菌抗体Ｃａｍ００４（上方区画）又は２Ｆ４（下方区画）のＯＰＫ傷害を減少させない。
【０１００】
したがって、ＳＡＲ１１４の結合に対するＮ３変異の影響を評価した。これらの実験において、Ｂｉａｃｏｒｅプラットフォームを使用して、ＣＬＦＡ００１、ＣＬＦＡ００２、及びＣＬＦＡ００４タンパク質に対する親抗体及びＦｃ変異抗体と、それぞれＳＡＲ−１１４及びＳＡＲ１１４−Ｎ３との結合についての速度論的速度／親和性（ＫＤ）定数を決定した。結果を以下の表３に示す。
【０１０１】
【表１１】
2021530244.tif 000013
【０１０２】
１：１結合モデルへの速度論的適合は適切であった。ＳＡＲ１１４及びＳＡＲ１１４−Ｎ３は両方が、同じ親和性で、ＣＬＦＡ００１、ＣＬＦＡ００２、及びＣＬＦＡ００４に結合する。しかし、ＳＡＲ１１４の全てのＣＬＦＡタンパク質への結合（ＫＤ）は、ＳＡＲ１１４−Ｎ３よりも約１０倍タイトであった。ＳＡＲ１１４−Ｎ３の結合が弱いのは、オフレートが速いからである。
【０１０３】
フィブリノーゲン結合を阻害するＳＡＲ１１４−Ｎ３の能力もまた評価した。これらのアッセイにおいて、ＣｌｆＡのフィブリノーゲンへの結合は、段階希釈（２００〜０．５μｇ／ｍｌ）のＳＡＲ１１４、ＳＡＲ１１４−Ｎ３、又は対照ＩｇＧ抗体の存在下で測定した。結果を図７及び以下の表４に示す。
【０１０４】
【表１２】
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【０１０５】
これらのデータは、ＳＡＲ１１４−Ｎ３が、３つの主要なＣｌｆＡ遺伝子型のフィブリノーゲンへの結合を阻害することを示す。
【０１０６】
［実施例３］
本実施例は、ＳＡＲ１１４−Ｎ３と比較して安定性が改善したＳＡＲ１１４−Ｎ３Ｙの産生について記載する。
【０１０７】
しかし、「Ｎ３」バリアントは、ＦｃＲｎ親和性の向上に寄与するトリプトファン（Ｗ４３４）を含有するが、通常の光条件では１週間で約２０％のモノマー損失をもたらし、同じ期間での強い光条件では６０％超のモノマー損失が発生するような光感度をもたらした。酸化不可能な疎水性残基（Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ａ、及びＳ）をトリプトファン（Ｗ４３４）と置換し、ＳＡＲ１１４の半減期、ＯＰＫ、及び光感度に対するそれらの影響を評価した。Ｆ及びＹ置換は、結合の点からＳＡＲ１１４  Ｎ３と最も類似しており、どちらもＮ３改変と同様の半減期延長を示した（図９、上方区画を参照されたい）。光安定性評価は、Ｆ（「Ｎ３Ｆ」；配列番号２０）及びＹ（「Ｎ３Ｙ」；配列番号２１）改変を用いたＳＡＲ１１４抗体で実施した。この評価において、ｍＡｂを２ｋＬｕｘ／時間（強度測定）のＣＷＬ（従来の白色光）に２３℃で１４日間曝露し、観察されたモノマー純度を以下の表５にまとめる。
【０１０８】
【表１３】
2021530244.tif 000015
【０１０９】
結果は、Ｎ３Ｙが優れた光安定性を有することを示す。凝集及びフィブリノーゲン効力アッセイは、また、図８に示すように、Ｎ３ＹがＮ３Ｆよりも優れた活性を有することを示した。マウスにおける抗体レベルの測定は、Ｎ３Ｙ及びＮ３ＦがどちらもＮ３変異体と同様のｐＫ値を有し（図９、上方区画）、Ｎ３ＹバリアントのＯＰＫ傷害が、変化がない（図９、下方区画）ことを示した。
【０１１０】
［実施例４］
本実施例は、ネズミ菌血症モデルにおける、ＳＡＲ１１４又はＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｙ抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独の影響、又は抗αトキシン（ＡＴ）モノクローナル抗体と組み合わせた影響を記載する。
【０１１１】
６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｅｎｖｉｇｏ，Ｈｕｎｔｉｎｇｄｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）１０匹の群を、アイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体、及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗ＡＴモノクローナル抗体の腹腔内（ＩＰ）注射で受動免疫した。２４時間後にＬＤ９０のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株の静脈内（ＩＶ）注射でマウスにチャレンジした。生存を２週間にわたって監視した。ｃ−ＩｇＧに対する特異的抗ブドウ球菌抗原の統計分析を、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ  Ｃｏｘ）検定で実施した。ｐ＜０．０５の場合、データは統計的に異なると見なされた。
【０１１２】
ＳＡＲ１１４（１５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））の予防は、図１０に示すように、それぞれ、ＣｌｆＡ遺伝子型ＣｌｆＡ００１、００２、及び００４をコードすることが確認される配列型（ＳＴ）ＳＴ８、ＳＴ５、又はＳＴ３０を表す、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）分離株でチャレンジ後のアイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）と比較して生存率の増加をもたらした。１１Ｈ１０及びＭＥＤＩ４８９３＊抗体の組み合わせと同様に、ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊（各７．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））の組み合わせによる予防は、試験した全ての菌株でチャレンジ後、ｃ−ＩｇＧと比較して生存率が大幅に増加し、いくつかの菌株に対する対応する個々のモノクローナル抗体よりも利点がもたらされた（Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。
【０１１３】
この実験結果は、抗ＣｌｆＡ  ＳＡＲ１１４モノクローナル抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏで機能的であることを示し、ＳＡＲ１１４及び抗ＡＴモノクローナル抗体の組み合わせにより、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）予防についてのより広い菌株適用範囲がもたらされることを示唆する。
【０１１４】
［実施例５］
本実施例は、糖尿病ネズミ致死性菌血症モデルにおける、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独の影響、又は抗αトキシン（ＡＴ）モノクローナル抗体と組み合わせた影響を記載する。
【０１１５】
６週齢の糖尿病ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ雄マウスの群を、アイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体、及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗ＡＴモノクローナル抗体の腹腔内（ＩＰ）注射で受動免疫した。２４時間後にＬＤ９０（５ｅ７ＣＦＵ）のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株ＳＦ８３００の静脈内（ＩＶ）注射でマウスにチャレンジした。生存を２週間にわたって監視した。図１１、上方区画。腎臓（図１１、中央区画）及び肝臓（図１１、下方区画）における細菌の数え上げのために、４８時間後に１０匹の動物を安楽死させた。ｃ−ＩｇＧに対する特異的抗ブドウ球菌抗原の統計分析を、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ  Ｃｏｘ）検定で実施した。ｐ＜０．０５の場合、データは統計的に異なると見なされた。
【０１１６】
ＳＡＲ１１４（１５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））の予防は、チャレンジ後のアイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）と比較して生存率の増加をもたらし、ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊（各７．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））の組み合わせによる予防は、チャレンジ後のｃ−ＩｇＧと比較して生存率が有意に増加した。図１１、上方区画。ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊（各７．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））の組み合わせは、また、腎臓（図１１、中央区画）及び肝臓（図１１、下方区画）において、有意に細菌を減少させた。
【０１１７】
この実験結果は、抗ＣｌｆＡ  ＳＡＲ１１４モノクローナル抗体はｉｎ  ｖｉｖｏで機能的であることを示し、ＳＡＲ１１４及び抗ＡＴモノクローナル抗体の組み合わせにより、糖尿病マウスｄｂ／ｄｂにおけるＣＡ−ＭＲＳＡ  ＳＦ８３００誘発性致死性菌血症からの防御がもたらされることを示唆する。
【０１１８】
［実施例６］
本実施例は、ネズミ菌血症モデルにおける、炎症性サイトカインレベルに対する、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独の影響、又は抗αトキシン（ＡＴ）モノクローナル抗体と組み合わせた影響を記載する。
【０１１９】
６週齢の糖尿病（ｄｂ）ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ雄マウス（ｎ＝２０）及び非糖尿病Ｃ５７／Ｂ６（Ｂ６）雄マウス（ｎ＝２０）の群を、アイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体、及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗ＡＴモノクローナル抗体の腹腔内（ＩＰ）注射で免疫した。２４時間後にＬＤ９０のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株ＳＦ８３００の静脈内（ＩＶ）注射でマウスにチャレンジした。８時間又は２４時間後、１群当たり１０匹の動物を安楽死させ、心臓穿刺から採血した。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ炎症促進性サイトカインキットを使用して、血漿から炎症促進性サイトカインを測定した。群間の統計的差異は、マン・ホイットニーＵ検定で分析され、ｐ＜０．０５の場合は統計的に異なると見なされた。
【０１２０】
ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊の組み合わせは、表６に示されるように、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、２４時間で、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、及びＫＣレベルを有意に減少させた。
【０１２１】
【表１４】
2021530244.tif 000016
【０１２２】
その組み合わせは、また、非糖尿病Ｃ５７／Ｂ６マウスにおいて、２４時間で、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、及びＫＣレベルを有意に減少させた。
【０１２３】
［実施例７］
本実施例は、糖尿病ネズミ菌血症モデルにおける、肝障害に対する、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独の影響、又は抗αトキシン（ＡＴ）モノクローナル抗体と組み合わせた影響を記載する。
【０１２４】
６週齢の糖尿病ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ雄マウス（ｎ＝１０）の群を、アイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体（１５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））、ＭＥＤＩ４８９３＊抗ＡＴモノクローナル抗体（１５ｍｐｋ）、又はＳＡＲ１１４＋ＭＥＤＩ４８９３＊（各１５ｍｐｋ）の組み合わせの腹腔内（ＩＰ）注射で受動免疫した。２４時間後にＬＤ９０のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株ＳＦ８３００の静脈内（ＩＶ）注射でマウスにチャレンジした。感染から４８時間後、マウスを安楽死させ、肝臓を回収した。肉眼的病理を写真で記録し（図１２、左区画）、１０％ホルマリンで固定した後、肝臓切片をヘマトキシリン／エオシンで染色した（図１２、右区画）。ＳＡＲ１１４抗体、ＭＥＤＩ４８９３＊抗体、及びＳＡＲ１１４＋ＭＥＤＩ４８９３＊の組み合わせは、全て、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に曝露された糖尿病マウスの肝障害を予防した。
【０１２５】
［実施例８］
本実施例は、ネズミ糖尿病菌血症モデルにおける、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体単独の影響、又は抗αトキシン（ＡＴ）モノクローナル抗体と組み合わせた影響を記載する。
【０１２６】
６週齢の糖尿病ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ雄マウス（ｎ＝１０）の群を、アイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃ−ＩｇＧ）、ＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体、及び／又はＭＥＤＩ４８９３＊抗ＡＴモノクローナル抗体の腹腔内（ＩＰ）注射で免疫した。２４時間後にＬＤ９０のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）臨床分離株の静脈内（ＩＶ）注射でマウスにチャレンジした。生存を２週間にわたって監視した。図１３。
【０１２７】
ＳＡＲ１１４及びＭＥＤＩ４８９３＊（各７．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））の組み合わせにより、試験したほとんどの菌株でチャレンジ後のｃ−ＩｇＧと比較して生存率の増加がもたらされ、また、ほとんどの菌株において対応する個々のモノクローナル抗体よりも有益性がもたらされた。
【０１２８】
この実験結果は、抗ＣｌｆＡ  ＳＡＲ１１４モノクローナル抗体がｉｎ  ｖｉｖｏで機能的であることを示し、ＳＡＲ１１４及び抗ＡＴモノクローナル抗体の組み合わせにより、糖尿病マウスにおけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）予防についてのより広い菌株適用範囲がもたらされることを示唆する。
【０１２９】
［実施例９］
本実施例は、ＣｌｆＡ及びＡＴの両方に特異的に結合する二重特異性モノクローナル抗体の産生、並びにそのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの有効性について記載する。
【０１３０】
抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体及び抗ＡＴモノクローナル抗体の組み合わせによる受動免疫により、致死性菌血症における菌株適用範囲についての有益性がもたらされ、ネズミ皮膚壊死及び肺炎モデルにおける抗ＡＴ防御能力が保持されるため（Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）、ＣｌｆＡ及びＡＴに対する二重特異性抗体（ＢｉＳＡｂ）を産生して、そのような二重特異性抗体が対応する個々の抗体の組み合わせよりも有益性がもたらされるかを判断した。この目的のために、ＢｉＳＡｂは前述のように遺伝子操作した（例えば、Ｄｉｍａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３９３：６７２−６９２（２００９）；及びＣｏｌｏｍａ，Ｍ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５：１５９−１６３（１９９７）を参照されたい）。要約すると、抗ＣｌｆＡ  ｍＡｂ  １１Ｈ１０又はＳＡＲ１１４は、ＩｇＧスキャホールドとして使用され、ＭＥＤＩ４８９３＊はｓｃＦｖフォーマットで移植された。ＭＥＤＩ４８９３＊ｓｃＦｖは、軽可変ドメイン及び重可変ドメインの間に２０アミノ酸（ＧＧＧＧＳｘ４）リンカーを使用してＶＬ−ＶＨフォーマットで合成した（ＧｅｎｅＡｒｔ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）．「ＢｉＳ２」抗体は、１１Ｈ１０又はＳＡＲ１１４抗ＣｌｆＡ  ＩｇＧ１の重鎖のＮ末端にＭＥＤＩ８９３＊ｓｃＦｖ配列を融合させることにより構築した。「ＢｉＳ３」コンストラクトは、１１Ｈ１０又はＳＡＲ１１４の重鎖のＣ末端にＭＥＤＩ４８９３＊のリンカー−ｓｃＦｖを付加することにより産生した。ＢｉＳ２及びＢｉＳ３コンストラクトは、図１４にて概略的に図示されている。ＢｉＳ２及びＢｉＳ３分子を、２９３個の細胞で一過性トランスフェクションによって発現し、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーにより精製し、サイズ排除クロマトグラフィーにより磨いた。各分子の完全性は、質量分析法並びにインタクト質量及びペプチドマッピングによって評価され、操作された内因性のジスルフィド結合の適切な形成を検証した。ＳｃＦｖはＩｇＧの異なる位置に位置しており、あるフォーマットが別のフォーマットよりも有利であるかどうかを判断する唯一の方法は、目的の抗体特異性について経験的にテストすることであるため、ＢｉＳ２及びＢｉＳ３フォーマットが選択された。
【０１３１】
ＢｉＳＡｂが対応する個々のモノクローナル抗体の機能的活性を保持するかどうかを判断するために、ＡＴ依存性ウサギ赤血球（ＲＢＣ）溶解を阻害する、並びにＣｌｆＡ００１、ＣｌｆＡ００２、及びＣｌｆＡ００４へのフィブリノーゲン結合を阻害する各ＢｉＳＡｂの能力を評価した。ウサギＲＢＣ溶血アッセイは、ＢｉＳ  Ａｂ及びＭＥＤＩ４８９３＊の段階希釈液（５００〜１．７ｎＭ）をＡＴ（０．１μｇ／ｍｌ＝３ｎＭ）と混合し、５０μｌの洗浄ウサギＲＢＣ（ピールフリーズ）を３７℃で１時間インキュベートすることにより実施した。いくつかのアッセイでは、ＢｉＳＡｂの抗ＡＴ  ｓｃＦｖを、１０Ｍ過剰のＣｌｆＡ（５μＭ）で飽和させた。次いで、プレートを、１２００ｒｐｍで３分間遠心分離にかけ、５０μｌの上清を新しいプレートに移した。非特異性ヒトＩｇＧ１  Ｒ３４７は、陰性対照（ｃ−ＩｇＧ）として使用した（例えば、Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：３７７−３８５（２０１２）を参照されたい）。分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で、ＯＤ４５０ｎｍを測定した。溶血の阻害は、次式を使用して計算した。
１００−（１００＊［ＯＤＡＴ＋ｍＡｂ］／［ＯＤＡＴ］）。
【０１３２】
フィブリノーゲン結合アッセイについて、ＮＵＮＣ  ＭＡＸＩＳＯＲＰ（商標）プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を、２μｇ／ｍｌのヒトフィブリノーゲン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で４℃にて一晩コーティングし、０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ（洗浄バッファ）で３回洗浄し、２００μｌ／ウェルのカゼイン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で室温（ＲＴ）にて１時間ブロックした。３回の洗浄後、プレートを、５０μｌのＡｖｉタグＣｌｆＡ２２１−５５９（２μｇ／ｍｌ）及び抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体又はＢｉＳ抗体の段階希釈液の１００μｌ最終用量ＰＢＳ中混合物でＲＴにて１時間インキュベートした。いくつかのアッセイでは、ＢｉＳＡｂの抗ＣｌｆＡ  ＩｇＧ１を、１０Ｍ過剰のＡＴ（６．６ｍＭ）で飽和させた。洗浄後、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ストレプトアビジン（１：２００００，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）及び１００μｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（ＫＰＬ）を使用して、結合ＣｌｆＡを検出した。１０分後、１００μｌの０．２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で反応を停止させた。ＯＤ４５０ｎｍの分光光度計でプレートを読み取った。フィブリノーゲンへのＣｌｆＡ結合阻害率は、以下の式を使用して計算した：１００−（１００＊［ＯＤＣｌｆＡ＋ｍＡｂ］／［ＯＤＣｌｆＡ，ｎｏ  ｍＡｂ］）。
【０１３３】
１１Ｈ１０−ＢｉＳ２及びＢｉＳ３抗体並びにＳＡＲ１１４−ＢｉＳ２抗体は、ＡＴ溶血アッセイにおいて、ＭＥＤＩ４８９３＊と同様のＩＣ５０値を示し、一方でＳＡＲ１１４−ＢｉＳ３は、図１５Ａで示すとおり、ＡＴ中和活性の減少を示した。１１Ｈ１０  ＢｉＳＡｂ及びＳＡＲ１１４  ＢｉＳ３Ａｂのどちらも、フィブリノーゲン結合阻害アッセイにおいて、それぞれの親抗ＣｌｆＡ  ＩｇＧと同様のＩＣ５０値を示す一方で、ＳＡＲ１１４  ＢｉＳ２Ａｂは、図１５Ｂ、図１６、及び表７に示すように、ＣｌｆＡ００２に対して一部の活性を失ったが、それでも１１Ｈ１０より優れていた。ＢｉＳＡｂはまた、図１７で示されるように、親抗ＣｌｆＡＩｇＧとして、同様のオプソニン食作用細菌傷害（ＯＰＫ）を媒介した。重要なことには、図１５Ｃに示すように、１０Ｍ過剰のＡＴの存在下での抗ＡＴ  ｓｃＦｖの飽和は、フィブリノーゲン結合アッセイにおける抗ＣｌｆＡ活性を妨害しなかった。同様に、１０Ｍ過剰のＣｌｆＡによるＣｌｆＡ結合の飽和は、図１５Ｄに示すように、溶血アッセイにおけるＢｉＳＡｂのＡＴ中和活性を減少させなかった。
【０１３４】
【表１５】
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【０１３５】
本実施例の結果は、抗ＣｌｆＡ／ＡＴ  ＢｉＳ分子が、ほとんどの場合、親ＩｇＧと同様のｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能活性を保持しており、この活性は、ＢｉＳＡｂによって認識される他の抗原の１０倍モル過剰の存在下では減少しなかったことを示す。
【０１３６】
［実施例１０］
本実施例は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）致死性菌血症モデルにおける抗ＣｌｆＡ／ＡＴ二重特異性抗体の防御効果を記載する。
【０１３７】
実施例４に記載するように、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）菌株ＳＦ８３００によるＩＶ感染の２４時間前に、抗ＣｌｆＡ  ＳＡＲ１１４抗体及びＭＥＤＩ４８９３＊モノクローナル抗体の組み合わせ（各７．５ｍｐｋ又は１ｍｐｋ）又は等モル用量のＢｉＳＡｂ（それぞれ、９又は１．２ｍｐｋ）でマウスを受動免疫し、生存を１４日間監視した。図１８Ａに示すように、９ｍｐｋのＳＡＲ１１４−ＢｉＳＡｂはどちらも、各々７．５ｍｐｋのモノクローナル抗体の組み合わせと比較して、減少したが有意に異なる防御を示さなかった（ＢｉＳ２ではｐ＝０．２３４、ＢｉＳ３ではｐ＝０．４１２）。１ｍｐｋ（ｐ＝０．００５１対ｃ−ＩｇＧ）のモノクローナル抗体組み合わせ及び１．２ｍｐｋ（ｐ＝０．０３３６対ｃ−ＩｇＧ）のＳＡＲ１１４−ＢｉＳ２は、ｃ−ＩｇＧと比較して生存率を有意に増加させた。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで観察されたＡＴ中和活性の喪失と一致して（図１５Ａを参照されたい）、ＳＡＲ１１４−ＢｉＳ３は１．２ｍｐｋで投与された場合に生存率を有意に増加させなかった（ｐ＝０．６５７、図１８Ａ）。どちらのモノクローナル単独も有意な防御に十分ではない株Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）菌株３０４９０５７（ＭＲＳＡ、ＳＴ８）に対して試験した場合（図１０を参照されたい）、１．２ｍｐｋのＳＡＲ１１４−ＢｉＳ分子はｃ−ＩｇＧ（ｐ＝０．４３１０）と比較して生存率を有意に増加させなかった一方、等モル濃度（１ｍｐｋ）のモノクローナル抗体の組み合わせは、図１８Ｂに示すように生存率を増加させた（ｐ＝０．０３４８対ｃ−ＩｇＧ）。この結果は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＳＡＲ１１４−ＢｉＳ２抗体の欠陥を示唆した。興味深いことに、１１Ｈ１０−ＢｉＳＡｂによる受動免疫は、図１８Ｃ及び１８Ｄで示されるとおり、試験した両方の用量（９ｍｐｋ及び１．２ｍｐｋ）でモノクローナル組み合わせと同様の防御をもたらし、ＣｌｆＡ００１発現株ＳＦ８３００及び３０４９０５７の両方に対してｃ−ＩｇＧと比較して生存率を有意に増加させた。
【０１３８】
本実施例の結果は、抗ＣｌｆＡ／ＡＴ  ＢｉＳＡｂが、対応する個々の抗体の組み合わせよりも有益性がもたらされないことを示す。むしろ、ＳＡＲ１１４／ＭＥＤＩ４８９３＊二重特異性抗体は、対応する個々のモノクローナル抗体が防御をもたらすのに十分ではない場合、菌株に対する低用量での防御の損失を示した。
【０１３９】
［実施例１１］
本実施例は、致死性肺炎モデルにおけるＳＡＲ１１４／ＭＥＤＩ４８９３＊二重特異性抗体の有効性を試験する実験について記載する。
【０１４０】
ＳＡＲ１１４は１１Ｈ１０よりも約１０００倍高い親和性でＣｌｆＡ００１に結合するため（表１）、ＣｌｆＡに結合するＳＡＲ１１４は細菌表面でＳＡＲ１１４／ＭＥＤＩ４８９３＊ＢｉＳＡｂを隔離し、分泌される時にＡＴの捕捉及び中和が不十分になると仮定された。ＡＴは、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）肺炎の重要な病原性因子であり（Ｂｕｂｅｃｋ  Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，Ｊ．ａｎｄ  Ｏ．Ｓｃｈｎｅｅｗｉｎｄ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０５：２８７−２９４（２００８））、抗ＡＴモノクローナル抗体単独による受動免疫は、致死性Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）肺炎からマウスを防御する（Ｆｏｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４２５（１０）：１６４１−１６５４（２０１３）；Ｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５８：１１０８−１１１７（２０１４）；及びＲａｇｌｅ，Ｂ．Ｅ．，ａｎｄ  Ｊ．Ｂｕｂｅｃｋ  Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，７７：２７１２−２７１８（２００９））。更に、抗ＣｌｆＡモノクローナル抗体は、肺炎モデルにおいて、生存に影響を与えず、抗ＣｌｆＡ及び抗ＡＴモノクローナル抗体の組み合わせは、抗ＡＴ  ｍＡｂ単独と同様の防御をもたらす（Ｔｋａｃｚｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。したがって、致死性菌血症モデルにおけるＳＡＲ１１４−ＢｉＳ２Ａｂで観察された防御の低下が、不十分なＡＴ中和に起因する可能性があるかどうかを判断するために、雌のＣ５７／Ｂ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＭＥＤＩ４８９３＊単独又はＳＡＲ１１４、若しくはＳＡＲ１１４  ＢｉＳ２若しくはＢｉＳ３分子との組み合わせをＩＰ注射した。肺炎は、Ｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ．で記載されているように、ＳＦ８３００（１ｅ８ＣＦＵ）による鼻腔内感染により引き起こされた。動物の生存を６日間監視した。ｃ−ＩｇＧに対する統計分析を、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ  Ｃｏｘ）検定で実施した。ｐ＜０．０５の場合、データは統計的に異なると見なされた。
【０１４１】
ＭＥＤＩ４８９３＊（１５ｍｐｋ）単独又はＳＡＲ１１４との組み合わせによる受動免疫は、ＳＦ８３００でチャレンジ後１００％防御をもたらした。しかし、ＳＡＲ１１４−ＢｉＳ２又はＢｉＳ３による受動免疫は、図１９Ａで示されるように、それぞれ、３０％及び０％の生存をもたらした。興味深いことに、ＣｌｆＡに対する親和性が約１０００倍減少した１１Ｈ１０ＢｉＳ２による受動免疫（表１）は、１００％の生存をもたらした。これらの結果は、細菌表面のＣｌｆＡへの結合がＳＡＲ１１４−ＢｉＳＡｂを隔離し、したがってＡＴ中和を損なうという結論を裏付ける。この仮説を更に試験するために、ＣｌｆＡ同質遺伝子変異体ＳＦ８３００Δｃｌｆａによる鼻腔内（ＩＮ）感染の前に、マウスをＢｉＳ２分子で受動免疫した。ＳＡＲ１１４−ＢｉＳＡｂによる予防により、図１９Ｂで示されるように、ＭＥＤＩ４８９３＊と同様のＳＦ８３００Δｃｌｆａに対する防御がもたらされた。
【０１４２】
本実施例の結果は、表面に局在するＣｌｆＡに結合するＳＡＲ１１４−ＢｉＳＡｂが可溶性ＡＴの効果的な中和を妨げるというさらなる証拠を提供する。
【０１４３】
［実施例１２］
本実施例は、カニクイザルにおけるＳＡＲ１１４抗体の薬物動態（ｐＫ）を試験する実験について記載する。５ｍｇ／ｋｇのＳＡＲ１１４、ＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｆ、又はＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｙによる静脈内（ＩＶ）投与によりサルを処理し、抗体レベルを６０日間にわたって血中で測定した。結果を図２０にて示し、以下の表８にて報告する。
【０１４４】
【表１６】
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【０１４５】
上記データは、ＳＡＲ１１４の改変バージョン、特にＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｙが、霊長類での半減期の増加を示すことを示す。上記データは、ヒトＦｃＲＮのトランスジェニックマウスにおける半減期延長研究から予測されるものと一致する。霊長類における半減期の効果的な延長は、ＳＡＲ１１４  Ｎ３Ｙの半減期が適切に延長され、ヒトのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連疾患の適切な投与、治療、及び予防にとって重要であることを示す。
【０１４６】
［実施例１３］
本実施例は、Ｎ３Ｙ  Ｆｃの免疫原性を試験する実験について記載する。
【０１４７】
治療用タンパク質の免疫原性は、中和、治療薬のクリアランスの加速、及び／又は有害事象を含む問題を引き起こす可能性がある。抗体フレームワーク領域などのヒトタンパク質は、ほとんどが非免疫原性であると同時に、抗体のＦｃ領域における変異は、免疫応答の潜在的なリスクを提示する。ヒトＣＤ４  Ｔ−細胞を用いた機能的活性アッセイは、免疫原性応答におけるヘルパーＴ細胞の主な役割の結果として、現在、免疫原性予測の証明と見なされる。したがって、Ｔ細胞活性化に対するＩｇＧ１のＦｃ領域のＮ３Ｙの影響を分析した。
【０１４８】
これらの実験では、フィコール勾配を使用して３９のヒト全血コレクションから、ＰＭＢＣを分離した。次いで、正の選択を使用してＣＤ８細胞を抽出し、５つの異なるペプチドプールで刺激し、ＩＬ−２で１０日間ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させることにより細胞を濃縮した。次いで、ＣＤ４用のＥＬＩｓｐｏｔプレート内の個々のペプチドライブラリで細胞を再刺激した。図２１で示される結果は、ＮＹ３変異が、野生型Ｆｃ領域と比較して免疫原性を有意に増加させないことを示す。
【０１４９】
本明細書に引用される、刊行物、特許出願及び特許を含む参照は全て、各参照が参照により組み込まれることが個別且つ具体的に示され、本明細書にその全体が記載されている場合と同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５０】
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」及び「少なくとも１つの（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」並びに本発明を説明する文脈における（特に以下の請求項の文脈における）同様の指示対象の使用は、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈されるべきである。１つ以上の項目のリストに続く用語「少なくとも１つの」の使用（例えば、「Ａ及びＢの少なくとも１つ」）は、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、リストされた項目（Ａ又はＢ）から選択された１つの項目、又はリストされた項目の２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈されるべきである。用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、別途注記のない限り、非限定的用語として解釈されるべきである（即ち、「含むが、限定されない」を意味する）。本明細書の値の範囲の列挙は、本明細書で別段の指示がない限り、範囲内にある各個別の値を個別に参照する簡略化された方法として役立つことを単に意図し、各個別の値は、本明細書に個別に引用されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載した全ての方法は、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈によって別に明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書で提供されるありとあらゆる例、又は例示的な言葉（例えば「などの」）の使用は、本発明を、単に、より明らかにするためのものであり、別に主張されない限り、本発明の範囲に対する制限を与えない。本明細書中の言葉は、本発明の実施に不可欠であるものとしてのいずれかの主張されていない要素を示すと解釈されるべきではない。
【０１５１】
本発明の好ましい実施形態は、本発明を実施するために発明者に知られているベストモードを含めて、本明細書に記載されている。それらの好ましい実施形態の変形は、前述の説明を読むと、当業者には明らかになり得る。本発明者らは、当業者がそのような変形を適切に使用することを期待し、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で本発明を実施することを意図している。したがって、本発明は、適用可能な法律によって許可されるように、本明細書に添付された特許請求の範囲に記載された主題の全ての修正及び同等物を含む。更に、その全ての可能な変形における上記の要素の任意の組み合わせは、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、本発明に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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