(57)【要約】  本発明は、２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、それらを調製する工程、それらを含有する医薬組成物及びそれらの医薬品としての使用に関する。 2021505639.tif 000036
2021505639.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、それらの幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、同位体及びそれらの混合物、又は医薬的に許容されるそれらの塩、
【化１】
2021505639.tif 000035
式中、
Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、１つ又は２つ以上のハロゲン置換基により任意に置換されている；
Ｒ２はＣ１−４アルキルであり、少なくとも１つのヒドロキシ又はアルコキシの置換基を含有している；及び
Ｒ３はメチル（−ＣＤ３を包含する）である。
【請求項２】
Ｒ１がｉ−ブチル、ｎ−プロピル、２，２−ジフルオロプロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、又は２−フルオロエチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピル又は２，２，２−トリフルオロエチルである請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がヒドロキシメチル、メトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がメトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−である請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
下記の請求項１に記載の化合物、
Ｒ１がｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピル又は２，２，２−トリフルオロエチル部位であり；
Ｒ２がヒドロキシメチル、メトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−であり；及び
Ｒ３が−ＣＨ３又は−ＣＤ３である、化合物。
【請求項７】
下記の請求項６に記載の化合物
Ｒ１がｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピル又は２，２，２−トリフルオロエチルであり；
Ｒ２がメトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又は
ＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−であり；及び
Ｒ３がＣＨ３又はＣＤ３である、化合物。
【請求項８】
下記の化合物を含む群から選択される請求項１〜７のいずれかに記載の化合物：
・（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；
・（４Ｓ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；
・（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン；
・（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリデユーテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；及び
・（４Ｓ）−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン。
【請求項９】
医薬として用いられる請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
有効量の請求項１〜８のいずれかに記載の化合物とともに医薬的に許容される希釈剤又は担体を含む医薬組成物。
【請求項１１】
てんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれん、とくに難治性てんかんの処置に用いられる、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
緒言
本発明は、２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、それらを調製する方法、それらを含有する医薬組成物及びそれらの医薬品（pharmaceuticals）としての使用に関する。
【０００２】
WO2011/047860に開示されている２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体の化合物は下記式Ａのものである：
【化１】
2021505639.tif 000003
式中、
Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、少なくとも１つのハロゲン置換基を有している；
Ｒ２はハロゲン、又はＣ１−４アルキルであり少なくとも１つのハロゲン置換基を有しているもののいずれかである；及び
Ｒ３はＣ１−４アルキルであり、少なくとも１つのヒドロキシ又はアルコキシの置換基を含有している。
【０００３】
発作性疾患（seizure）についての問題が、現在用いえる処置に対する反応が全くないか又は不十分でしかない患者において生じ続けている。かかる患者は処置に対して難治性であり、医学界における大きな課題の対象となっている。推定によれば、約３０％のてんかんの患者が難治性の分類群に属している。新たな薬物治療に対する必要性が、このような患者群を特定の対象として存在する。
前記発明の化合物は医薬（medicament）として用いられ、処置の対象はてんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれんであり、とくに難治性てんかん（refractory seizures）である。
【０００４】
発明の要約
本発明が提供するのは、新たな２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体として下記式（Ｉ）を有するもの、それらの幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、アイソトープ及びそれらの混合物、又は医薬的に許容されるそれらの塩である。
【化２】
2021505639.tif 000004
本発明のさらなる形態について、下記の詳細なる説明により明らかにする。
【０００５】
発明の詳細なる説明
本発明は式（Ｉ）の２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体に関する、
【化３】
2021505639.tif 000005
式中、
Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、１つ又は２つ以上のハロゲン置換基により任意に置換されている；
Ｒ２はＣ１−４アルキルであり、少なくとも１つのヒドロキシ又はアルコキシの置換基を含有している；及び
Ｒ３はメチル（−ＣＤ３を包含する）である。
【０００６】
用語「Ｃ１−４アルキル」として本明細書において用いられるものは、アルキル基として１個〜４個の炭素原子を有するものを示す。本用語により具体的に示される基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルのような基である。「Ｃ１−４アルキル」基はハロゲン、ヒドロキシ又はアルコキシから選択される置換基により置換されていてよい。
用語「ヒドロキシ」として本明細書において用いられるものは、式−ＯＨの基を示す。
用語「アルコキシ」として本明細書において用いられるものは、基−Ｏ−Ｒを示し、Ｒは本明細書の上記において定義された「Ｃ１−４アルキル」を包含する。
用語「ハロゲン」として本明細書において用いられるものは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子を示し、好ましくはフッ素原子及び塩素原子示す。
【０００７】
本発明はその範囲に、互変異性体、幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、同位体、及び混合物、ならびに医薬的に許容される式（Ｉ）の化合物の塩を包含する。例えば、式（Ｉ）において「Ｈ」と示されている部位は水素、又はその同位体、デューテリウム又はトリチウムであってよい。
【０００８】
全体において、Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、１つ又は２つ以上のハロゲン置換基により任意に置換されている。
一つの態様において、Ｒ１は無置換のＣ１−４アルキルである。この態様の第一の形態において、Ｒ１はｎ−プロピルである。この態様の第二の形態においては、Ｒ１はｉ−ブチルである。
他の態様において、Ｒ１は１つ又は２つ以上のハロゲンにより置換されているＣ１−４アルキルである。この態様の第一の形態において、Ｒ１は２−クロロ−２，２−ジフルオロエチルである。この態様の第二の形態においては、Ｒ１は２−クロロ−２，２−ジフルオロエチルである。この態様の第三の形態においては、Ｒ１は２，２−ジフルオロエチルである。この態様の第四の形態においては、Ｒ１は２，２，２−トリフルオロエチルである。この態様の第五の形態においては、Ｒ１は２−フルオロエチルである。
【０００９】
ある特定の態様において、Ｒ１はｉ−ブチル、ｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、又は２，２，２−トリフルオロエチルである。
他の特定の態様において、Ｒ１はｉ−ブチル、ｎ−プロピル、２，２−ジフルオロプロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、又は２−フルオロエチルである。
好ましい態様においては、Ｒ１はｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、又は２，２，２−トリフルオロエチルである。
【００１０】
全体において、Ｒ２はＣ１−４アルキルであり、少なくとも１つのヒドロキシ又はアルコキシの置換基を含有している。
一つの態様において、Ｒ２は少なくとも１つのヒドロキシ置換基を含有しているＣ１−４アルキルである。この態様の第一の形態において、Ｒ２はヒドロキシメチルである。
他の態様において、Ｒ２は少なくとも１つのメトキシ置換基を含有しているＣ１−４アルキルである。この態様の第一の形態において、Ｒ２はメトキシメチルである。この態様の第二の形態において、Ｒ２はＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−である。この態様の第三の形態において、Ｒ２はＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−である。この態様の第四の形態において、Ｒ２はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−である。
さらなる特定の態様において、Ｒ２はヒドロキシメチル、メトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−である。
好ましい態様においては、Ｒ２はメトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−である。
ある特定の態様において、Ｒ２はメトキシメチルである。
【００１１】
全体において、Ｒ３はメチルを表す。一つの形態において、Ｒ３は−ＣＨ３を表す。他の形態においては、Ｒ３は−ＣＤ３を表す。
【００１２】
さらなる特定の態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下を充足するものである：
Ｒ１がｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピル又は２，２，２−トリフルオロエチル部位であり；
Ｒ２がヒドロキシメチル、メトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−であり；及び
Ｒ３が−ＣＨ３又は−ＣＤ３である。
【００１３】
さらなる好ましい特定の態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下充足するものである：
Ｒ１がｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピル又は２，２，２−トリフルオロエチルであり；
Ｒ２がメトキシメチル、ＣＤ３Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３Ｏ−ＣＤ２−又はＣＤ３Ｏ−ＣＤ２−であり；及び
Ｒ３が−ＣＨ３又は−ＣＤ３である。
【００１４】
本発明の特定の化合物は、下記からなる群から選択されるものである：
・（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；
・（４Ｓ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；
・（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン；
・（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリデユーテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；
・（４Ｒ）−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン；及び
・（４Ｓ）−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン。
【００１５】
本発明の化合物は、てんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれんの処置に有益であり、とくに難治性てんかんの処置に有益である。
【００１６】
以下のパラグラフにおいて、種々の化学的部位（chemical moiety）についての定義を与える。該化学的部位により本発明の化合物が構成される。該定義が企図されるのは、本明細書及び特許請求の範囲の全体をとおして一定の適用がなされることである。他に明示の定義により、より広範な定義が与えられる場合はその限りではない。
【００１７】
本発明による「薬学的に許容可能な塩」は、式（Ｉ）の化合物が形成可能である、治療的に活性のある無毒性の酸又は塩基塩形態を含む。
【００１８】
遊離形態で塩基として生じる式（Ｉ）の化合物の酸付加塩形態は、無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸又は臭化水素酸など、硫酸、硝酸、リン酸など；又は有機酸、例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、ヒドロキシ酢酸、プロパン酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸などの適切な酸で遊離塩基を処理することによって得られ得る。
【００１９】
酸性陽イオンを含有する式（Ｉ）の化合物は、適切な有機及び無機塩基での処理によって、それらの治療的に活性がある無毒性の塩基付加塩形態、例えば金属塩又はアミン塩に変換され得る。適切な塩基性塩の形態としては、例えばアンモニウム塩、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩など、有機塩基、例えばＮ−メチル−Ｄ−グルカミンとの塩、ヒドラバミン塩、及びアミノ酸、例えばアルギニン、リジンなどとの塩が挙げられる。
【００２０】
逆に、この塩形態は、適切な塩基又は酸での処理により遊離形態に変換され得る。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの塩は、本発明の範囲内に含まれる溶媒和物の形態であり得る。このような溶媒和物としては、例えば水和物、アルコラートなどが挙げられる。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物及び／又はそれらの中間体は、それらの構造中に少なくとも１個の不斉中心を有し得る。この不斉中心は、Ｒ又はＳ立体配置で存在し得、このＲ及びＳ表示法は、Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ，４５（１９７６）１１−３０に記載の規則に対応して使用される。従って、本発明はまた、式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー及びジアステレオ異性体の形態などの全ての立体異性体又はそれらの混合物（立体異性体の全ての可能な混合物を含む）にも関する。本発明に関して、化合物（単数又は複数）への言及は、特定の異性体形態が具体的に言及されない限り、その可能な異性体形態それぞれであるその化合物及びそれらの混合物を包含することが意図される。「エナンチオマー的に純粋な」という表現は、本明細書中で使用される場合、９５％を超えるエナンチオマー過剰率（ｅｅ）を有する化合物を指す。
【００２３】
本発明による化合物は、異なる多型形態で存在し得る。上記の式では明確に示されないが、このような形態は本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００２４】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、合成有機化学の技術分野の熟練者によって理解されるように、従来の方法と同様に調製され得る。
【００２５】
一態様によれば、一般式（Ｉ）を有する化合物は、以下のスキームに従って、式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）のピロリドンと反応させることにより調製され得る。
【化４】
2021505639.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上で定義されたものと同じ定義を有する）。
【００２６】
この反応は、高温でスルホランなどの非プロトン性溶媒中で、ｐ−トルエンスルホン酸などの酸を使用して実施され得る。
【００２７】
式（ＩＩ）の化合物は、以下のスキームに従って、式（ＩＶ）の化合物をヒドロキシメチル化することにより調製され得る。
【化５】
2021505639.tif 000007
（式中、Ｒ２及びＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上で定義されたものと同じ定義を有する）。
【００２８】
この反応は、１００℃のジオキサンなどの極性溶媒中、酸性条件下でパラホルムアルデヒドなどのホルミル化剤を使用して、又は当業者にとって公知の何らかの他の方法に従って実施され得る。
【００２９】
式（ＩＶ）の化合物は、以下のスキームに従って、式（Ｖ）の化合物を式（ＶＩ）のブロモ誘導体と反応させることによって合成され得る。
【化６】
2021505639.tif 000008
（式中、Ｒ２及びＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上に記載のものと同じ定義を有する）。
【００３０】
この反応は、文献に記載されているか又は当業者にとって公知の手順を使用して実施され得る。
【００３１】
別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、以下のスキームに従って、式（ＩＶ）の化合物と式（ＶＩＩ）のピロリドンとのフリーデル・クラフツ反応により合成され得る。
【化７】
2021505639.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上で定義されたものと同じ定義を有する）。
【００３２】
この反応は、１００〜１２０℃の範囲の温度で、スルホラン又はジオキサンなどの極性溶媒中、塩化亜鉛又は塩化第二鉄などのルイス酸の存在下で、又は文献に記載されるか若しくは当業者にとって公知の何らかの手順に従い、塩素原子又はｐ−トルエンスルホニル基などの脱離基（Ｙ）を有する式（ＶＩＩ）のピロリドンを用いて実施され得る。
【００３３】
式（ＶＩＩ）の化合物は、国際公開第２００６／１２８６９３号に記載の方法に従って、又は当業者にとって公知の何らかの他の方法に従って、式（ＶＩＩＩ）の対応するピロリドンから調製され得る。
【化８】
2021505639.tif 000010
【００３４】
式（ＶＩＩＩ）の化合物の合成は、文献に記載されているか又は当業者にとって公知の手順を使用して実施され得る。
【００３５】
式（Ｖ）及び式（ＶＩ）の化合物は、市販されているか又は当業者にとって公知の何らかの方法に従って合成され得るかのいずれかである。
【００３６】
本発明の化合物は、てんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれん、特に難治性てんかんの処置に有益である。
【００３７】
従って、別の態様において、本発明は、医薬としての使用のための、上で定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００３８】
その態様の一形態において、本発明はまた、てんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれん、特に難治性てんかんの処置及び／又は予防での使用のための、上で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩も提供する。
【００３９】
さらなる態様において、本発明は、てんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれんの処置及び／又は予防用の、特に難治性てんかんの処置用の、医薬の製造のための、上で定義されるような式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【００４０】
最大許容投与量で２つ以上の抗てんかん薬を使用した最先端の処置を１２か月以上実施しても患者が発作フリーを達成できない場合、発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）は難治性として分類され得る。Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｅａｇｕｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｅｐｉｌｅｐｓｙ（ＩＬＡＥ）は、薬剤抵抗性てんかんを「持続性の発作フリーを達成するために、２種類の、忍容性があり、適切に選択され、使用されるＡＥＤスケジュール（単独療法として又は併用でのいずれか）の妥当な試行の失敗」と定義してきた。
【００４１】
本発明の方法は、上記の状態又は障害に罹患している哺乳動物（好ましくはヒト）への、障害又は状態を緩和又は予防するのに十分な量の本発明による化合物の投与を含む。
【００４２】
従って、本発明は、その範囲内で、てんかん、てんかん発作、発作性疾患、けいれんの、特に難治性てんかんの処置及び／又は予防のための方法も含み、これは、上で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の有効量を、このような処置の必要がある患者に投与することを含む。
【００４３】
本化合物は、何らかの適切な単位剤型で都合よく投与され、これには、単位剤型あたり１〜２０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇ、より好ましくは１〜５００ｍｇの活性成分を含有するものが含まれるが限定されない。
【００４４】
用語「処置」として本明細書において用いられるものは、治癒的処置及び予防的処置を含む。
【００４５】
「治癒的」とは、障害又は状態の現在の症候エピソードの処置における有効性を意味する。
【００４６】
「予防的」とは、障害又は状態の発生又は再発の防止を意味する。
【００４７】
用語「てんかん」として本明細書において用いられるものは、非誘発性の再発性てんかん発作を特徴とする慢性神経学的状態を指す。てんかん発作は、一連の脳ニューロンの異常及び過剰な同期放電の顕在化であり；その臨床症状は突発性であり、一過性である。用語「てんかん」として本明細書において用いられるものは、発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）の周期的な発生を特徴とする脳機能の障害も指し得る。発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）は、高熱又は毒素への曝露などの状態によって正常な脳において誘発される場合は「非てんかん性」であり得、又は明らかな誘発なしに惹起される場合は「てんかん」であり得る。
【００４８】
用語「発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）」として本明細書において用いられるものは、脳ニューロンの集団の異常な、同期的で律動的である発火による行動の一過性変化を指す。
【００４９】
本発明のさらなる形態は、薬学的に許容可能な希釈剤又は担体と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物の有効量を含む医薬組成物を指す。
【００５０】
上記の適応症のいずれかにおける活性は、言うまでもなく、特定の適応症に対する関連技術分野の熟練者にとって公知の方法で、及び／又は一般的に臨床試験の設計で、適切な臨床試験を実施することによって決定され得る。
【００５１】
疾患を処置するために、式（Ｉ）の化合物又はそれらの薬学的に許容可能な塩が有効な１日投与量で使用され、医薬組成物の形態で投与され得る。
【００５２】
従って、本発明の別の態様は、医薬的に許容可能な希釈剤又は担体と組み合わせた式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の有効量を含む医薬組成物に関する。
【００５３】
本発明による医薬組成物を調製するために、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の１つ以上は、熟練者にとって公知の従来の医薬配合技術に従って医薬希釈剤又は担体と十分に混合される。
【００５４】
適切な希釈剤及び担体は、所望の投与経路、例えば経口、直腸、非経口又は鼻腔内経路、に応じて、様々な形態を取り得る。
【００５５】
本発明による化合物を含む医薬組成物は、例えば、経口、非経口、即ち静脈内、筋肉内又は皮下に、くも膜下腔内に、経皮（パッチ）で、吸入により、又は鼻腔内に投与され得る。
【００５６】
経口投与に適した医薬組成物は、固体又は液体であり得、例えば、錠剤、丸剤、糖衣錠、ゼラチンカプセル、溶液、シロップ、チューインガムなどの形態であり得る。
【００５７】
この目的のために、活性成分は、不活性希釈剤又はデンプン若しくはラクトースなどの無毒性の薬学的に許容可能な担体と混合され得る。場合によっては、これらの医薬組成物は、微結晶性セルロース、トラガカントガム又はゼラチンなどの結合剤、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤、スクロース又はサッカリンなどの甘味料又は着色剤又はペパーミント若しくはサリチル酸メチルなどの香味剤も含有し得る。
【００５８】
本発明は、制御された方式で活性物質を放出し得る組成物も企図する。
【００５９】
非経口投与に使用され得る医薬組成物は、アンプル、使い捨てシリンジ、ガラス又はプラスチックバイアル又は注入容器に一般に含有される水性若しくは油性溶液又は懸濁液などの従来の形態である。
【００６０】
活性成分に加えて、これらの溶液又は懸濁液は、場合によっては、滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒など、抗菌剤、例えばベンジルアルコールなど、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなど、キレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸など、緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩など、及び浸透圧を調整するための薬剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロースなども含有し得る。
【００６１】
これらの剤型は、薬剤師により日常的に使用される方法を使用して調製される。
【００６２】
医薬組成物中の活性成分の量は、広範囲の濃度内に入り得、患者の性別、年齢、体重及び医学的状態並びに投与方法などの様々な要因に依存する。従って、経口投与用の組成物中の式（Ｉ）の化合物の量は、少なくとも０．５重量％であり、本組成物の総重量に対して最大８０重量％であり得る。
【００６３】
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩は、単独で、又は他の薬学的に活性である成分と組み合わせて投与し得ることも分かった。本発明による化合物と組み合わせて使用するために列挙され得るこのようなさらなる化合物の非限定例は、抗ウイルス薬、鎮痙薬（例えばバクロフェン）、制吐薬、抗躁気分安定剤、鎮痛薬（例えばアスピリン、イブプロフェン、パラセタモール）、麻薬性鎮痛薬、局所麻酔薬、オピオイド鎮痛薬、リチウム塩、抗うつ薬（例えばミアンセリン、フルオキセチン、トラゾドン）、三環系抗うつ薬（例えばイミプラミン、デシプラミン）、抗けいれん薬（例えばバルプロ酸、カルバマゼピン、フェニトイン）、統合失調症治療薬（例えばリスペリドン、ハロペリドール）、神経遮断薬、ベンゾジアゼピン（例えばジアゼパム、クロナゼパム）、フェノチアジン（例えばクロルプロマジン）、カルシウムチャネル遮断薬、アンフェタミン、クロニジン、リドカイン、メキシレチン、カプサイシン、カフェイン、クエチアピン、セロトニンアンタゴニスト、β遮断薬、抗不整脈薬、トリプタン、麦角誘導体及びアマンタジンである。
【００６４】
経口組成物の場合、１日投与量は、式（Ｉ）の化合物１ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲である。好ましくは、式（Ｉ）の化合物１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲、最も好ましくは１ｍｇ〜５００ｍｇである。
【００６５】
非経口投与用の組成物において、存在する式（Ｉ）の化合物の量は、少なくとも０．５重量％であり、本組成物の総重量に対して最大３３重量％であり得る。好ましい非経口組成物の場合、投与量単位は、式（Ｉ）の化合物１ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲である。
【００６６】
１日用量は、式（Ｉ）の化合物の幅広い投与量単位の範囲内に入り得、一般的には１〜２０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇの範囲である。ただし、医師の裁量により、個々の要件に応じて、具体的な用量を特定のケースに適合させ得ることが理解されるべきである。
【００６７】
本発明によって提供されるＳＶ２タンパク質結合化合物及びその標識付き誘導体は、ＳＶ２タンパク質に結合する試験化合物（例えば医薬品の候補）の能力を決定する際に標準物質及び試薬として有用であり得る。
【００６８】
本発明によって提供されるＳＶ２タンパク質のリガンドの標識付き誘導体はまた、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングのため、又は単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）のための放射性トレーサーとしても有用であり得る。
【００６９】
従って、本発明は、さらに、医薬品候補の探索のために、特に、本明細書中で示される状態の処置及び予防のために、ＳＶ２タンパク質へのより強力な結合に基づき、組織においてＳＶ２タンパク質の位置を特定するために、及び精製ＳＶ２タンパク質の特徴を調べるために、化学物質ライブラリをスクリーニングするためのツールとして標識付きリガンドを提供する。ＳＶ２タンパク質には、ＳＶ２Ａ、ＳＶ２Ｂ及びＳＶ２Ｃが含まれ、ＳＶ２Ａは、抗けいれん薬のレベチラセタム及びその類似体に対する結合部位である。ＳＶ２アイソフォームＳＶ２Ａ、ＳＶ２Ｂ又はＳＶ２Ｃは、ヒト、ラット又はマウスを含むいずれかの哺乳動物種からの組織、特に脳に由来し得る。或いは、アイソフォームは、ヒト、ラット及びマウスを含むいずれかの哺乳動物種のクローニングバージョンであり、異種発現され、アッセイに使用され得る。スクリーニング方法は、哺乳動物若しくはヒト脳膜などの脳膜、又はＳＶ２タンパク質若しくはその断片、特にＳＶ２Ａ及びＳＶ２Ｃを発現するがＳＶ２Ｂを含む細胞株を推定薬剤に曝露し、膜又はタンパク質又は断片及び薬剤を式（Ｉ）の標識付き化合物と温置することを含む。この方法はさらに、タンパク質への式（Ｉ）の化合物の結合が推定薬剤により阻害されるか否かを決定し、それによりタンパク質に対する結合パートナーを同定することを含む。従って、スクリーニングアッセイにより、ＳＶ２タンパク質と相互作用する新しい薬物又は化合物の同定が可能になる。本発明はまた、ＳＶ２タンパク質の光活性化可能なリガンドも提供する。
【００７０】
標識付きリガンドは、可溶化、精製及びクロマトグラフィー後のＳＶ２タンパク質の立体構造状態を評価するためのツールとしても使用され得る。標識リガンドは、直接的又は間接的に標識され得る。適切な標識の例としては、３Ｈなどの放射性標識、蛍光標識、酵素、ユーロピウム、ビオチン及びこのタイプのアッセイのための他の従来の標識が含まれる。
【００７１】
式（Ｉ）の標識化合物は、ＳＶ２タンパク質（ＳＶ２Ａ、ＳＶ２Ｂ及びＳＶ２Ｃ）に結合する新しい化合物又は薬剤をスクリーニングするためのアッセイにおけるプローブとしてこの方法において有用である。このようなアッセイの態様において、リガンドは、修飾なしで使用され得るか、又は、例えば検出可能なシグナルを直接若しくは間接的に提供する部分を共有結合若しくは非共有結合により連結することなど、標識することにより、様々な方法で修飾され得る。これらのアッセイのいずれにおいても、材料を直接的又は間接的のいずれかで標識し得る。直接標識のための候補としては、［３Ｈ］、［１４Ｃ］、［３２Ｐ］、［３５Ｓ］又は［１２５Ｉ］を含むが限定されない放射性標識、ペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼなどの酵素、及び、フルオレセイン又はローダミンを含むが限定されない、蛍光強度、波長シフト又は蛍光偏光の変化を監視可能な蛍光標識などの標識基が挙げられる。間接標識のための候補としては、１つの構成要素のビオチン化と、それに続く上記の標識基の１つにカップリングされるアビジンへの結合又は抗リガンド抗体の使用が挙げられる。本化合物が固体支持体に結合されるべきである場合、本化合物は、スペーサー又はリンカーも含み得る。ＳＶ２タンパク質（特にＳＶ２Ａ及びＳＶ２Ｃ）への結合について本発明による標識付きリガンドと競合又は相互作用する薬剤又は化合物を同定するために、ＳＶ２Ａ又はＳＶ２Ｃを含有するインタクトな細胞、細胞片若しくは膜断片又はＳＶ２タンパク質全体若しくはその断片を使用し得る。標識付きレベチラセタム又はその類似体若しくは誘導体との温置前に、それと同時に、又はその後に、薬剤又は化合物を細胞、膜、ＳＶ２タンパク質又は断片と温置し得る。レベチラセタムの結合又はＳＶ２タンパク質又はその断片へのその誘導体又は類似体の結合を監視するハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイを含め、何らかの利用可能な形式でアッセイを改変又は準備し得る。化合物のライブラリを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムにおいて、所定の期間に調査される化合物の数を最大化するために、ハイスループットアッセイが望ましい。このようなスクリーニングアッセイは、インタクトな細胞、ＳＶ２を含有する細胞片若しくは膜断片並びに無細胞又は膜不含系、例えば精製若しくは半精製タンパク質により得られ得るものなど、を使用し得る。ＳＶ２又は精製ＳＶ２タンパク質及びペプチドを含有する膜断片を用いたアッセイの長所は、試験化合物の細胞毒性及び／又はバイオアベイラビリティの影響が一般的に無視され得ることであり、このアッセイは代わりに、例えば２個の分子間の結合の阻害において顕在化し得るので、分子標的に対する薬物の効果に主に焦点を当てている。本アッセイは、ＳＶ２又はＳＶ２断片への本発明による標識付きリガンドの結合、又はＳＶ２若しくはＳＶ２タンパク質断片への標識付きレベチラセタム又はその誘導体若しくは類似体の結合を阻害するための試験薬剤又は化合物の能力を検出するために組み立てられ得る。複合体形成の阻害は、ろ過アッセイ、Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅｓ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ、ＧＥ）���どの様々な技術により検出され得る。ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に対して、生体膜で被覆されたミクロスフェア又は生体膜で被覆されたフラッシュプレートを使用するシンチレーション近接アッセイは、分離又は洗浄段階を必要としない強力な方法である。
【００７２】
治療での使用のために化合物を開発する際に直面し得る問題は、本発明の化合物（ビクティム薬物（ｖｉｃｔｉｍ  ｄｒｕｇ）と一緒に同時投与され得る、特定の化合物（パーペトレーター薬物（ｐｅｒｐｅｔｒａｔｏｒ  ｄｒｕｇ））の、ＣＹＰ４５０酵素、特にＣＹＰ３Ａ４／５を誘発する能力である。パーペトレーター薬物（ｐｅｒｐｅｔｒａｔｏｒ  ｄｒｕｇ）によるこのような酵素の誘導は、主にＣＹＰ４５０酵素及び特にＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝される場合、ビクティム薬物（ｖｉｃｔｉｍ  ｄｒｕｇ）の曝露に影響を与え得、それによりそれらの有効性プロファイルが変化する可能性がある。従って、ＣＹＰ３Ａ４／５酵素による代謝に対する可能性が限定的である化合物を開発することが望ましい。
【００７３】
本発明による化合物の総代謝に対するＣＹＰ３Ａ４／５の寄与は、アザムリンなどの選択的ＣＹＰ３Ａ４／５阻害剤の非存在下と存在下とでのヒト肝細胞クリアランス間の比率を計算することにより評価されてきた。
【００７４】
本特許出願に記載のプロトコールに従ってこのアッセイで試験する場合、本発明による化合物は、ＣＹＰ３Ａ４／５（Ｆｍ，ＣＹＰ３Ａ４／５）によって代謝される分画が通常４０％よりも低く、従ってＣＹＰ４５０誘導因子と同時投与される場合、薬物と薬物との相互作用に対するリスクが最小限に抑えられる。
【００７５】
さらに、本発明による化合物が低い固有クリアランスを示すことは有益であり得る。
【００７６】
実験セクション
略語／繰り返し使用される試薬
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ブライン：塩化ナトリウム飽和水溶液
ｎＢｕ：ｎ−ブチル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
Ｂｚ：ベンゾイル
ＣＶ：カラム体積
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｔ：エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ｈ：時間
ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー
ＬＣ：液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ．：分
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
ＰＴＳＡ：ｐ−トルエンスルホン酸
ＲＴ：室温
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
【００７７】
分析方法
空気又は湿気に感受性がある試薬を含む反応は全て、乾燥溶媒及びガラス器具を使用して、窒素又はアルゴン雰囲気下で実施した。マイクロ波照射を必要とする実験は、オペレーティングソフトウェアのバージョン２．０にアップグレードされたＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  Ｓｉｘｔｙマイクロ波オーブンにおいて実施する。できる限り早く必要な温度に到達するように実験を行う（最大照射力：４００Ｗ、外部冷却なし）。市販の溶媒及び試薬は一般的に、適宜、無水溶媒（一般的にはＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＣｏｍｐａｎｙのＳｕｒｅ−Ｓｅａｌ（商標）製品又はＡＣＲＯＳ  ＯｒｇａｎｉｃｓのＡｃｒｏＳｅａｌ（商標））を含め、さらに精製せずに使用した。一般に、反応後に、薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ又は質量分析を行った。
【００７８】
ＨＰＬＣ分析は、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＭＳ  Ｃ１８、５ｐｍ、１５０Ｘ４．６ｍｍカラムを搭載したＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して実施する。勾配は、６分間で１００％溶媒Ａ（水／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム溶液８５／５／１０（ｖ／ｖ／ｖ））から１００％溶媒Ｂ（水／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム溶液５／８５／１０（ｖ／ｖ／ｖ）で行い、１００％Ｂで５分間保持する。流速は、８ｍＬ／分で６分間に設定し、次に、３ｍＬ／分で２分間上昇させ、３ｍＬ／分で３分間保持する。ＡＰＩソースの直前に、１／２５のスプリットを使用する。クロマトグラフィーを４５℃で行う。ギ酸アンモニウム溶液（ｐＨ約８．５）は、水（１Ｌ）中でギ酸アンモニウム（６３０ｍｇ）を溶解させ、３０％水酸化アンモニウム（５００μＬ）を添加することにより調製する。
【００７９】
異なる分析条件が使用される場合、ＬＣデータについて異なる保持時間が得られ得ることは、当業者にとって明らかであろう。
【００８０】
ＬＣＭＳモードでの質量分析測定は次のように実行する：
−塩基性溶出の場合、分析は以下を使用して実施する：
【００８１】
ＬＣＭＳ分析に対して、ＱＤＡ  Ｗａｔｅｒｓの単純な（ｓｉｍｐｌｅ）四重極質量分析計を使用する。この分光計には、ＥＳＩ光源及びダイオードアレイ検出器（２００〜４００ｎｍ）付きのＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈｃｌａｓｓが備えられる。塩基性溶出によりポジティブモードでｍ／ｚ７０〜８００のフルＭＳスキャンでデータを取得する。塩基性溶出のためにＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨＣ１８  １．７μｍ（２．１ｘ５０ｍｍ）カラムにおいて４５℃で逆相分離を実施する。勾配溶出は、水／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）（溶媒Ａ）及びＡＣＮ／水／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）（溶媒Ｂ）で行う。注入体積：１μＬ。ＭＳでフルフロー。
【表１】
2021505639.tif 000011
【表２】
2021505639.tif 000012
−酸性溶出の場合、分析は以下を使用して実施する：
【００８２】
ＬＣＭＳ分析に対して、ＱＤＡ  Ｗａｔｅｒｓの単純な（ｓｉｍｐｌｅ）四重極質量分析計を使用する。この分光計には、ＥＳＩ光源及びダイオードアレイ検出器（２００〜４００ｎｍ）付きのＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈｃｌａｓｓが備えられる。酸性溶出によりポジティブモードでｍ／ｚ７０〜８００のフルＭＳスキャンでデータを取得する。逆相分離は、酸性溶出用のＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１ｘ５０ｍｍ）カラムにおいて４５℃で実行する。勾配溶出は、水／ＡＣＮ／ＴＦＡ（９５／５／０．５ｍＬ／Ｌ）（溶媒Ａ）及びＡＣＮ（溶媒Ｂ）で行う。注入体積：１μＬ。ＭＳでフルフロー。
【表３】
2021505639.tif 000013
【表４】
2021505639.tif 000014
【００８３】
順相クロマトグラフィー、（酸性又は塩基性）逆相クロマトグラフィー、キラル分離又は再結晶によって粗製物質を精製し得る。
【００８４】
通常の逆相クロマトグラフィーは、シリカゲルカラム（１００：２００メッシュシリカゲル又はＰｕｒｉｆｌａｓｈ（登録商標）−５０ＳＩＨＣ−ＪＰカラム、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍより）を使用して実施する。
【００８５】
分取逆相クロマトグラフィーは次のように実施する：
−ＬＣＭＳ精製については、ＳＱＤ又はＱＭ  Ｗａｔｅｒｓトリプル四重極質量分析計を使用したＬＣＭＳ精製（基本モード、ＬＣＭＳ  ｐｒｅｐ）を使用する。この分光計には、ＥＳＩ光源及びダイオードアレイ検出器（２１０〜４００ｎｍ）付きのＰｒｅｐ  ＬＣ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ  Ｗａｔｅｒｓクオータナリポンプが備えられる。
【００８６】
ＭＳパラメータ：ＥＳＩキャピラリー電圧３ｋＶ。コーン及び引き出し電圧１０。ソースブロック温度１２０℃。脱溶媒和温度３００℃。コーンガス流量３０Ｌ／ｈ（窒素）、脱溶媒和気体流量６５０Ｌ／ｈ。酸性又は塩基性溶出によりポジティブモードでｍ／ｚ１００〜７００のフルＭＳスキャンでデータを取得する。
【００８７】
ＬＣパラメータ：逆相分離は、ＸＢｒｉｄｇｅ  ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム（５μｍ、３０ｘ５０ｍｍ）でｒｔにて実施する（塩基性溶出）。勾配溶出は、水（溶媒Ａ）、ＡＣＮ（溶媒Ｂ）、水中重炭酸アンモニウム８ｇ／Ｌ＋５００μＬ／Ｌ  ＮＨ４ＯＨ３０％（溶媒Ｃ）（ｐＨ約８．５）で行う。ＨＰＬＣ流量：３５ｍＬ／分〜６０ｍＬ／分、注入体積：１ｍＬ。スプリット比はＭＳに対して＋／−１／６０００に設定する。
【表５】
2021505639.tif 000015
【００８８】
分取キラルクロマトグラフィー分離は、液相クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）機器を使用して、低級アルコール及びＣ５〜Ｃ８の直鎖、分岐鎖又は環状アルカンの様々な混合物を３６０ｍＬ／分で使用して行う。溶媒混合液並びにカラムは個々の手順で記載する。
【００８９】
製品は通常、最終分析及び生物学的試験への提出前に、真空下で乾燥させた。
【００９０】
ＮＭＲスペクトルは、Ｔｏｐｓｐｉｎ  ３．２ソフトウェアを実行するＷｉｎｄｏｗｓ  ７  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌワークステーション及び５ｍｍの二重共鳴ブロードバンドプローブ（ＰＡＢＢＩ  １Ｈ／１９Ｆ−ＢＢ  Ｚ−ＧＲＤ  Ｚ８２０２１／００７５）又は１ｍｍトリプル共鳴プローブ（ＰＡＴＸＩ  １Ｈ／Ｄ−１３Ｃ／１５Ｎ  Ｚ−ＧＲＤ  Ｚ８６８３０１／００４）を備えたＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥＩＩＩ  ４００ＭＨｚ−Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ  ＮＭＲ分光計で記録する。本化合物は、ＤＭＳＯ−ｄ６又はＣＤＣｌ３溶液中、３００Ｋのプローブ温度及び１０ｍｇ／ｍＬの濃度で試験した。機器は、ＤＭＳＯ−ｄ６又はＣＤＣｌ３の重水素シグナルでロックされる。化学シフトは、内部標準として取られたＴＭＳ（テトラメチルシラン）から低磁場へ、ｐｐｍで与える。
【００９１】
キュベット（ｌ＝１ｄｍ）中でＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭＥＲ旋光計３４１において１０ｍｇ／ｍＬの濃度で、具体的な例で言及する温度にて、５８９ｎｍ（ナトリウムランプ）で旋光度（［α］Ｄ）を測定した。
【００９２】
以下の例は、式（Ｉ）により包含される化合物がどのように合成され得るかを例示する。これらは例示目的でのみ提供され、本発明を限定することを何ら意図しておらず、またそのように解釈されるべきではない。当業者は、本発明の精神又は範囲を超えることなく、以下の例の通例の変更及び改変をなし得ることを理解するであろう。
【００９３】
例１．（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン１Ａの合成
【化９】
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１．１  ２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＩの合成
１００℃でＤＭＦ（９５ｍＬ）中の５−（メトキシメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−アミンＩ（ＣＡＳ：１５８８４−８６−３、国際公開第２０１１／０４７８６０号、１．０当量、７．０ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＦ（５ｍＬ）中のブロモアセトン（１．０当量、４．２ｍＬ、４６．２ｍｍｏｌ、９７％純度）の溶液を滴下して添加した。反応混合物を１００℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温（ＲＴ）に冷却し、高真空下で溶媒を蒸発乾固して、褐色油状物質を得た。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１４ＣＶにわたり、ジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの勾配で、１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）により精製し、純粋な分画を蒸発乾固し、黄色／橙色の固体として２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＩ（５．０ｇ、２５．１１ｍｍｏｌ）を得た。
収率：５２％
【数１】
2021505639.tif 000017
【００９４】
１．２［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＩＩＩの合成
密閉チューブにおいて、２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＩ（１．０当量、５．０ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（６．０当量、４．５０ｇ、１５０ｍｍｏｌ）及び塩酸の水溶液（４Ｎ）（２当量、１２．５５ｍＬ、５０．２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１２．５ｍＬ）中で混合した。混合物を１００℃で１８時間撹拌し、次に粗製混合物をＲＴに温め、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液をｐＨ＝６〜７になるまで添加した。水層を酢酸エチルで抽出し（３回）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾固した。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１２ＣＶにわたりジクロロメタン中０％〜５％メタノールの勾配で１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）により精製した。最も純粋な分画を蒸発乾固し、［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＩＩＩ（４．０ｇ、１８．５７ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。
収率：７４％
【数２】
2021505639.tif 000018
【００９５】
１．３（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン１Ａの合成
スルホラン（８６ｍＬ）中の［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＩＩＩ（１．０当量、３．６５ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）及び（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）ピロリジン−２−オンＩＶ（ＣＡＳ：１２９４０００−８９−７、国際公開第２０１１／０４７８６０号、１．２当量、４．１４ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）の混合物にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、３．３ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で１６時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、次に水を添加し、水層をＭＴＢＥで抽出した（４回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し（４回）、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾固した。得られた粗製物をアキラルＳＦＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＳｉＯ２  Ｂｅｔａ  １０μｍ、Ｄ＝５ｃｍ  Ｌ＝３４ｃｍ、３００ｇ／ＣＯ２／ＭｅＯＨ共溶媒勾配１％〜４０％／１５０ｂａｒ／３６０ｍＬ／分）により精製し、（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン（２．３２ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）を褐色油状物質として得た。
収率：３６％
【数３】
2021505639.tif 000019
【００９６】
（４Ｓ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン１Ｂは、［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＩＩＩ（１．０当量、７００ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）及びラセミ４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）ピロリジン−２−オンＩＶ−ｒａｃ（ＣＡＳ：１２９４０００−８８−６、国際公開第２０１１／０４７８６０号、７２０ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）から出発して、同じ手順に従い調製した。
【化１０】
2021505639.tif 000020
【００９７】
得られた粗製混合物を逆相フラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（ＳＮＡＰ６０ｇ／Ｃ１８カラム、１５ＣＶにわたり水中５％〜９５％アセトニトリルの勾配）により精製した。最も純粋な分画を蒸発乾固して黄色油状物質（６５０ｍｇ）を得て、これをアキラルＳＦＣ（ＤＩＯＬ  ５μｍ  Ｄ＝５ｃｍ  Ｌ＝２５ｃｍ  ３００ｇ、共溶媒メタノール５％）により再精製し、透明な黄色油状物質（２２０ｍｇ）を得た。次に、エナンチオマーの混合物をキラル逆相クロマトグラフィー（ＡＳ  ５０ｘ２６５、５μｍ、３００ｇ、ＥｔＯＨ／ヘプタン５０／５０、１００ｍＬ／分、３５℃）により精製し、（４Ｓ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン１Ｂ（第２の溶出ピーク、保持時間＝１８分、８３ｍｇ、０，２１７ｍｍｏｌ）を透明な油状物質として得た。
収率：６．６％
【数４】
2021505639.tif 000021
キラルＨＰＬＣ（ＡＳ，ＥｔＯＨ／ヘプタン５０／５０，３０℃，１．５ｍＬ／分．）：１Ａ：２．０１分．；１Ｂ：３．０２分．
【００９８】
例２．（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン２Ａ及び（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン２Ｂの合成
【化１１】
2021505639.tif 000022
２．１（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール  ５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン２Ａ及び（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン２Ｂの合成  スルホラン（４．７ｍＬ）中の［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＩＩＩ（１．０当量、２００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）及び４−プロピルピロリジン−２−オンＶ（ＣＡＳ：８９８９５−１９−２、１．８当量、２１４ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）の混合物にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、１７８ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で１６時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、逆相分取ＨＰＬＣ（塩基性条件）により直接精製してベージュ色の固体（１３０ｍｇ）を得て、これに対してアキラルＳＦＣ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ２−エチルピリジン５μｍ  ＳｉＯ２  ５ｃｍ−２００ｇ／ＣＯ２／ＭｅＯＨ共溶媒、１％〜４０％／１５０ｂａｒ／３６０ｍＬ／分の勾配）により２回目の精製を行い、褐色油状物質（９３ｍｇ）として予想される化合物を得た。２つのエナンチオマーをキラルＳＦＣ（ＡＤ５０ｘ２７９ｍｍ、ＣＯ２／ＭｅＯＨ共溶媒１０％／３６０ｍＬ／分、３０℃）で分離して、（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン２Ａ（３１ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）及び（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−プロピル−ピロリジン−２−オン２Ｂ（２６ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を褐色油状物質として得た。２Ａ及び２Ｂの絶対立体化学は、（４Ｒ）−４−プロピルピロリドン（ＣＡＳ：９３０１２３−３７−８；国際公開第２００７０３１２６３号）から出発して同じ手順に従い合成された２Ｂの基準試料とのアルファＤ比較によって明確に評価した。
推定収率：１０及び９％
【数５】
2021505639.tif 000023
【００９９】
例３．（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン３Ａの合成
【化１２】
2021505639.tif 000024
３．１（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン３Ａの合成
スルホラン（２．３ｍＬ）中の［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＩＩＩ（１．０当量、１００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及び（４Ｒ）−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オンＶＩ（ＣＡＳ：１２９４００１−３４−５、国際公開第２０１１／４７８６０号、１．８当量、１４１ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の混合物にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、９０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で３．５時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、逆相分取ＨＰＬＣ（塩基性条件）により直接精製してベージュ色の固体（１２５ｍｇ）を得て、これに対して逆相分取ＨＰＬＣ（ＫＲＯＭＡＳＩＬ−Ｅｔｅｒｎｉｔｙ  ＸＴ  Ｃ１８  １０μｍ、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ勾配、３０／７０／０．１〜６０／４０／０．１）により２回目の精製を行った。最も純粋な分画を蒸発乾固して、（４Ｒ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン３Ａ（６９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を褐色油状物質として得た。
収率：４１％
【数６】
2021505639.tif 000025
【０１００】
（４Ｓ）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オン３Ｂは、（４Ｓ）−４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−２−オンＶＩＩから出発して同じ手順に従い調製される。収率：３２％
【０１０１】
例４．（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリデューテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン４
【化１３】
2021505639.tif 000026
４．１  １−ブロモ−１，１，３，３，３−ペンタデューテリオ−プロパン−２−オンＶＩＩＩの合成
０℃でメタノール（２５ｍＬ）中の１，１，１，３，３，３−ヘキサデューテリオプロパン−２−オン（１．０当量、１．５ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）の混合物に臭素（１．０当量、１．２ｍＬ、２３．０ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、混合物を０℃で３時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。水層をジエチルエーテルで抽出し（３回）、合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾固し（２０℃）、１−ブロモ−１，１，３，３，３−ペンタデューテリオ−プロパン−２−オン（２．１６ｇ、１５．２５ｍｍｏｌ、６５％収率）を淡黄色油状物質として得て、これをさらに分析及び精製せずに次の段階でそのまま使用した。
【０１０２】
４．２Ｂ  ２−（メトキシメチル）−６−（トリデューテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＸの合成
１００℃で、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の５−（メトキシメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−アミンＩ（１．０当量、８．０ｇ、５５．１ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＦ（２０ｍＬ）中の１−ブロモ−１，１，３，３，３−ペンタデューテリオ−プロパン−２−オンＶＩＩＩ（１．０５当量、８．２２ｇ、５７．９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して添加した。反応混合物を１１０℃で２時間３０分撹拌した。次に混合物をＲＴに冷却し、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液を添加し、溶媒を蒸発乾固した。次に、得られた粗製物をＥｔＯＡｃ中で希釈し、ろ過し、ろ液を蒸発乾固して、褐色油状物質（９．５ｇ）を得た。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１４ＣＶにわたり、ジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの勾配で１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）により精製し、純粋な分画を蒸発乾固し、２−（メトキシメチル）−６−（トリデューテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＸ（３．０５ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）を黄色固体として得た。
収率：２８％
【数７】
2021505639.tif 000027
【０１０３】
４．３（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリデューテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン４
０℃でジクロロメタン（３ｍＬ）中の（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−オンＸ（ＣＡＳ：１２９４０００−９７−７、国際公開第２０１１／０４７８６０号、１．０当量、１５０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）の混合物に塩化チオニル（３当量、０．３１７ｍＬ、２．１６ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、反応混合物をＲＴで２時間撹拌した。次に、混合物を蒸発乾固して、橙色の油状物質、主に（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−（クロロメチル）ピロリジン−２−オンＸＩ（ＣＡＳ：１２９４００１−０６−１、国際公開第２０１１／０４７８６０号、１６０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、９８．２％収率）を得て、これを精製せずに次の段階で直接使用した。
【０１０４】
ＲＴで１，４−ジオキサン（３ｍＬ）中の得られた化合物（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−（クロロメチル）ピロリジン−２−オンＸＩ（１当量、１６０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）の溶液に、２−（メトキシメチル）−６−（トリデューテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＸ（１．０当量、１３０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）及び塩化亜鉛（０．１当量、１０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃で１８時間撹拌し、次に冷却し、ろ過し、蒸発乾固し、暗色の油状物質を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１２ＣＶにわたり、ジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの勾配で１０ｇＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）により精製した。最も純粋な分画を蒸発乾固し、逆相分取ＨＰＬＣ（ＫＲＯＭＡＳＩＬ−Ｅｔｅｒｎｉｔｙ  ＸＴ  Ｃ１８  １０μｍ、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ勾配、３０／７０／０．１〜６０／４０／０．１）により精製し、（４Ｒ）−４−（２−クロロ−２，２−ジフルオロ−エチル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリデューテリオメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン４（７１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を黄色油状物質として得た。
収率：２６％
【数８】
2021505639.tif 000028
【０１０５】
例５．４−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン５Ａ及び５Ｂ
【化１４】
2021505639.tif 000029
５．１  ４−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン５Ａ及び５Ｂの合成
０℃でジクロロメタン（５ｍｌ）中の４−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−オンＸＩＩ（ＣＡＳ：１２９４０００−９２−２、国際公開第２０１１／０４７８６０号、１．０当量、２５０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化チオニル（３．０当量、２６０μｌ、３．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。粗製混合物を濃縮乾固した。得られた黄色油状物質に、１，４−ジオキサン（７ｍｌ）中の２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＩ（０．９当量、２１０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液及び塩化亜鉛（０．１当量、１４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００℃で２２時間撹拌した。次に、混合物に水を添加し、水層を酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾固して、黄色油状物質を得た。
【０１０６】
黄色油状物質を基本モードの逆相ＬＣ／ＭＳにより精製し、透明な油状物質を得て、これをアキラルＳＦＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＳｉＯ２  Ｂｅｔａ  １０μｍ  Ｄ＝５ｃｍ  Ｌ＝３４ｃｍ  ３００ｇｒ、共溶媒ＭｅＯＨ１０％）により再精製して、ラセミ混合物として純粋な５を得た。
【０１０７】
エナンチオマーの混合物をキラルＳＦＣ（Ｌｕｘｃｅｌｌ４＊ＭｅＯＨ２５％、３６０ｍＬ／分．、３５℃）により分離して、４−（２，２−ジフルオロプロピル）−１−［［２−（メトキシメチル）−６−メチル−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］−チアジアゾール−５−イル］メチル］ピロリジン−２−オン５Ａ（最初に溶出、６．２８分、７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１．６％収率）及び５Ｂ（２番目に溶出、８．６３分、８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、収率１．８％）を得た。
収率：３．３％（１．８％＋１．６％）
【数９】
2021505639.tif 000030
【０１０８】
キラルＨＰＬＣ（ＳＦＣ，ＬｕｘＣｅｌｌ４，３μｍ，３ｍＬ／分．，３０℃，２０％ＭｅＯＨ）：５Ａ：２．２４分；５Ｂ：３．０９分．
【０１０９】
表（Ｉ）は、化合物のＩＵＰＡＣ名（又はＡｃｃｅｌｅｒｙｓ  Ｄｒａｗ  ４．０から生成される名称）、質量分析で観測されたイオンピーク及び１Ｈ  ＮＭＲの説明を示す。
表Ｉ：例となる化合物の物性
【表６−１】
2021505639.tif 000031
【表６−２】
2021505639.tif 000032
【表６−３】
2021505639.tif 000033
【０１１０】
例５．ＳＶ２Ａ及びＳＶ２Ｃへの結合アッセイ
ヒトＳＶ２Ａ及びＳＶ２Ｃタンパク質をヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞で発現させた。ＨＥＫ  ＳＶ２Ａ及びＨＥＫ  ＳＶ２Ｃ膜調製物は、Ｇｉｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６，５３６，１０２−１０８）に記載のように調製した。非標識化合物の親和性を測定するために、以下のように競合実験を行った：ＳＶ２タンパク質を発現する膜（１回のアッセイあたり５〜１５μｇタンパク質）を２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％ジメチルスルホキシド及び１０段階の漸増濃度の非標識試験化合物（０．１ｎＭ〜１０μＭ）を含有する０．２ｍｌの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中の［３Ｈ］−２−［４−（３−アジドフェニル）−２−オキソ−１−ピロリジニル］ブタンアミド（５ｎＭ）及び／又は［３Ｈ］−４Ｒ−（２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル）−１−｛［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル｝ピロリジン−２−オン（２５ｎＭ）のいずれかとともに３７℃で６０分間温置した。温置期間の最後に、０．１％ポリエチレンイミン中に予め浸しておいたＧＦ／Ｃグラスファイバーフィルターを通じた迅速なろ過によって、膜結合放射性リガンドを回収した。膜をアッセイ体積の少なくとも４倍の氷冷５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した。フィルターを乾燥させ、放射活性を液体シンチレーションにより測定した。ろ過段階全体は１０秒を越えなかった。親和性ｐＩＣ５０測定値は、Ｃｈｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｕｓｏｆｆ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９７３，２２（２３），３０９９−３１０８）に従ってｐＫｉに対して補正した。
【０１１１】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、典型的には、少なくとも６．５のｐＫｉ  ＳＶ２Ａ値及び少なくとも６．０のｐＫｉ  ＳＶ２Ｃ値を示す。
【０１１２】
例６．発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）モデル
全ての実験において、体重２２〜３２ｇの雄ＮＭＲＩマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用する。午前６：００に点灯し、１２／１２時間の明／暗サイクルでこのマウスを維持し、２０〜２１℃に維持した温度及び約４０％の湿度で収容する。マウスはケージ（タイプＩＩＩ）あたり１０匹の群で収容する。動物は全て、それぞれ１０匹のマウスからなる実験群に無作為に割り当てる前に、標準的なペレット飼料及び水を自由に摂取させる。動物実験は全て、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｕｌｅｓ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓに従って実施し、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  Ｃｏｕｎｃｉｌ指針２０１０／６３／ＥＵのガイドラインに従って遂行する。地元の倫理委員会が実験プロトコールを承認した。
【０１１３】
６．１  ６Ｈｚ発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）モデル
６Ｈｚモデルは、以前に記載のプロトコール（Ｋａｍｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ（２００４），４５，８６４−８６７）に従って行う。簡潔に述べると、定電流装置（ＥＣＴ  Ｕｎｉｔ  ５７８００；Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｃｏｍｅｒｉｏ，Ｉｔａｌｙ）によって角膜刺激（４４ｍＡ、０．２ｍｓ持続時間、単極矩形波パルス、６Ｈｚで３秒間）を送る。電気刺激前に０．４％オキシブプロカイン塩酸塩（Ｕｎｉｃａｉｎｅ，Ｔｈｅａ，Ｆｒａｎｃｅ）を眼に１滴点眼する。刺激中、マウスを手作業で拘束し、電流印加の直後に観察ケージ（３８ｘ２６ｘ１４ｃｍ）に放す。発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）に先行して短時間（〜約２〜３秒）の激しい自発運動興奮（暴走及び跳躍）が発生することが多い。次に、動物は、立ち上がり、前肢の自動運動及びクローヌス、感覚毛の攣縮及び挙尾が付随する「気絶」姿勢を呈する。発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）の終了時に、動物は通常の探索行動を再開する。実験エンドポイントは、発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）に対する防御である。刺激から７秒以内に通常の探索行動を再開する場合、動物は防御されていると見なす。
【０１１４】
試験化合物に対して決定されたインビボ活性は通常、単回ＩＰ投与後、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの間に含まれる。
【０１１５】
６．２  ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）発作性疾患（ｓｅｉｚｕｒｅ）モデル
ペンチレンテトラゾールを以前に確立された８９ｍｇ／ｋｇのＣＤ９７用量で使用するが；これはマウスの９７％で全四肢の間代性けいれんを誘発するけいれん用量である（Ｋｌｉｔｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９８），３５３，１９１−２０６）。ペンチレンテトラゾール注射の直後に、マウスを個別にＰｅｒｓｐｅｘケージに入れ、全四肢における間代性けいれん及び強直性後肢伸展の有無について６０分間観察する。
【０１１６】
試験化合物に対して決定されたインビボ活性は通常、単回ＩＰ投与後、０．５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間に含まれる。
【０１１７】
例７．アザムリンアッセイ
凍結保存ヒト肝細胞（２０名のドナーのプール、Ｃｅｌｓｉｓ／ＩＶＴ／ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎからのＢＳＵバッチ）を提供者の情報に従って解凍した。生存率（トリパンブルー排除）は７５％より高かった。穏やかな撹拌下（振動撹拌機、Ｔｉｔｒａｍａｘ  １００、約３００ｒｐｍ）、インキュベーター（５％ＣＯ２）中で＋３７℃にて４８ウェルプレートにおいて、２ｍＭグルタミン及び１５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓを含有するウィリアムズ培地を使用して、３０分間、予備温置を行った（肝細胞２ｘ１０６個／ｍＬの２５０μＬ肝細胞懸濁液）。予備温置後、アザムリン（６μＭ−特異的ＣＹＰ３Ａ４／５阻害剤）あり又はなしでＵＣＢ化合物（１μＭ）又はミダゾラム（陽性対照）を含有する２５０μＬの培養用培地（上記組成を参照）を肝細胞に添加することにより、温置を開始した。温置中のＵＣＢ化合物及びアザムリンの最終濃度は、それぞれ０．５μＭ及び３μＭである。２回のピペットでの出し入れ操作により細胞懸濁液を迅速に再均一化した。０、３０、６０、１２０、１８０及び２４０分の温置後、５０μｌの温置物を、内部標準としてのケトコナゾール１μＭ入りの５０μＬの氷冷アセトニトリルを含有する９６ウェルプレートから適切なウェルに移すことによって反応を停止させた。各試料採取の前に、細胞培養物を２回のピペットでの出し入れ操作により再均一化する。
【０１１８】
温置が終了したら、９６ウェルプレートを約３７００ｒｐｍ、＋４℃で１５分間遠心分離する。５０μＬの上清を他のディープウェルプレートのウェルに移し、そこに１５０μＬのＨ２Ｏ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅを添加した。これらの試料は、親の消失及び代謝産物形成の監視のためにマイクロＵＰＬＣ／ＨＲ−ＭＳにより分析した。
【０１１９】
ＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝される分画（ｆｍ，ＣＹＰ３Ａ４／５）として知られるＣＹＰ３Ａ４／５の寄与は、以下の式を使用することにより、アザムリンの非存在下及び存在下でのＣＬｉｎｔ（親薬物消失に基づく）間の比率から各化合物について計算した：
【数１０】
2021505639.tif 000034
【０１２０】
試験化合物のＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝される分画（ｆｍ，ＣＹＰ３Ａ４／５）は通常０〜４０％を構成する。
【国際調査報告】
2021505639.tif 000037
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