(57)【要約】本発明は、二次官能性部分に結合された細胞結合部分を含む、細胞標的複合体を調製するための方法に関する。本発明はさらに、前記方法によって得ることができる細胞標的複合体、前記複合体を含む医薬組成物、及び二次官能性部分自体に関する。本発明はまた、癌の治療における細胞標的複合体の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
二次官能性部分に結合された細胞結合部分を含む細胞標的複合体を調製するための方法であって、
ａ．二次官能性部分を提供すること、その二次部分は、第１の配位子として一次官能性部分を有し、第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する遷移金属錯体を含む；
ｂ．細胞結合部分を提供し、第２の配位子を細胞結合部分で置換することにより、二次官能性部分を前記細胞結合部分に結合させること；及び
ｃ．ステップｂ）の細胞標的複合体を求核剤で処理し、形成された細胞標的複合体を精製すること、
を含む上記方法。
【請求項２】
官能性部分に結合された細胞結合部分を含む細胞標的複合体を調製するための方法であって、
ａ．ヨウ化物、臭化物又は塩化物からそれぞれ選択される第１及び第２の脱離配位子を含む遷移金属錯体を提供すること；
ｂ．一次官能性部分を提供し、一次官能性部分による第１の脱離配位子の置換を介して前記官能性部分を遷移金属錯体に結合させること、これにより第１の配位子として前記一次官能性部分を、第２の配位子としてヨウ化物、臭化物、又は塩化物を含む二次官能性部分が得られる；
ｃ．ステップｂ）の二次官能性部分をヨウ化物又は／及び臭化物放出剤と混合して、二次官能性部分の第２の配位子がヨウ化物又は臭化物であるようにすること；
ｄ．細胞結合部分を提供し、二次官能性部分のヨウ化物又は臭化物を細胞結合部分で置換することにより、二次官能性部分を前記細胞結合部分に結合させること；及び
ｅ．ステップｄ）の細胞標的複合体を求核剤で処理し、形成された細胞標的複合体を精製すること
を含む上記方法。
【請求項３】
遷移金属錯体が、一次官能性部分と結合を形成して二次官能性部分が形成されるようにすることができるスペーサー部分を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ステップｃ）及びステップｄ）が１つのステップで組み合わされる、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
二次官能性部分が形成された後、前記部分が単離され、細胞標的複合体の後の形成のために保存される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
遷移金属錯体が白金（ＩＩ）錯体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
遷移金属錯体がシス‐白金（ＩＩ）錯体、好ましくは二座配位子を含むシス‐白金（ＩＩ）錯体である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
遷移金属錯体が１９５ｍＰｔを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
二次官能性部分が、以下の式によって表される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法：
【化１】
2021507947.tif 000212
ここで、Ｍは遷移金属錯体であり；配位子Ｌ１又はＬ２の１つは、ヨウ化物、臭化物、又は塩化物から選択される脱離配位子であり、他の配位子は一次官能性部分であり；Ｎｕは求核基であり、Ｎｕ１及びＮｕ２は同じ基又は異なる基であり得、共に二座配位子を形成する。
【請求項１０】
Ｎｕ１及びＮｕ２が一緒になって、以下の式の１つによって表される二座を形成する、請求項９に記載の方法。
【化２】
2021507947.tif 000213
【化３】
2021507947.tif 000214
【化４】
2021507947.tif 000215
【化５】
2021507947.tif 000216
【化６】
2021507947.tif 000217
【請求項１１】
一次官能性部分が、治療用化合物、診断用化合物、キレート剤、色素又はモデル化合物である、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
治療用化合物が細胞毒性化合物である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞毒性化合物が、アウリスタチン、ドラスタチン、シンプロスタチン、メイタンシノイド、チューブリシン、ＨＴＩ‐２８６、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）、カンプトテシン、アントラサイクリン、アゾナフィド、アマニチン、クリプトフィシン、リゾキシン、エポチロン、スプライセオスタチン、タイランスタチン、コルヒチン、アプリロニン、タキソイド、メトトレキサート、アミノプテリン、ビンカアルカロイド、シュードモナス外毒素‐Ａのフラグメント、スタチン、リシンＡ、ゲロニン、サポリン、インターロイキン‐２、インターロイキン‐１２などのタンパク質性毒素、Ｅ４、ｆ４、アポプチン又はＮＳ１などのウイルス性タンパク質、及びＨＡＭＬＥＴ、ＴＲＡＩＬ又はｍｄａ‐７などの非ウイルス性タンパク質の群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
診断用化合物が、ＰＥＴ画像化可能薬剤、ＳＰＥＣＴ画像化可能薬剤又はＭＲＩ画像化可能薬剤、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、ＤＹ−８００、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）７５０、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）７９０、インドシアニングリーン、ＦＩＴＣ、ＢＯＤＩＰＹ色素又はローダミン色素から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ヨウ化物又は臭化物放出剤が、ＮａＩ、ＫＩ、ＬｉＩ、ＣｓＩ、ＲｂＩ、ＮＨ４Ｉ、ＭｇＩ２、ＣａＩ２、ＳｒＩ２、ＭｎＩ２、ＩｎＩ３、ＡｌＩ３、ＧｅＩ４、ヨウ化グアニジニウム、ヨウ化テトラメチルアンモニウム、ヨウ化アセチルコリン、ヨウ化５‐（２‐ヒドロキシエチル）‐３，４‐ジメチルチアゾリウム、ヨウ化トリメチルスルホキソニウム、ＮａＢｒ、ＫＢｒ、ＬｉＢｒ、又はそれらの混合物、好ましくはＮａＩ又はＫＩ又はそれらの混合物を含む群から選択される、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
ハロゲン化物濃度が、ヨウ化物塩の場合、０．１〜１００ｍＭ、好ましくは１〜３０ｍＭ、より好ましくは１０ｍＭであり、臭化物塩の場合、最も好ましくは５０ｍＭである、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
細胞標的複合体を形成するための二次官能性部分の細胞結合部分への結合中のｐＨが５．５〜１０．０、好ましくは７．５〜８．５の範囲、より好ましくはｐＨが８．１である、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
細胞結合部分が、抗体、一本鎖抗体、抗体フラグメント、モノクローナル抗体、操作されたモノクローナル抗体、一本鎖モノクローナル抗体、標的細胞に特異的に結合するそのフラグメントのモノクローナル抗体、キメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、又は非伝統的なタンパク質スキャフォールド、例えば標的細胞に特異的に結合するアフィボディ、アンチカリン、アドネクチン、ダーピンである、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
細胞標的複合体が１〜１０個の官能性部分を含み、各官能性部分が細胞結合部分に結合されている、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
細胞結合部分が、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、オファツムマブ又はオビヌツズマブの群から選択される抗体である、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
官能性部分と細胞結合部分との間の比が１：１〜１０：１、好ましくは１：１〜５：１の範囲である、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
細胞標的複合体が、それらを調製するために使用される組成物から分離される、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
使用される二次官能性部分が、以下の式の１つによって表される、請求項１〜２２のいずれかに記載の方法：
【化７】
2021507947.tif 000218
ここで、配位子Ｌ１又はＬ２の一方は、ヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物又は臭化物から選択される脱離配位子であり、他方の配位子は、アウリスタチン又はその誘導体、好ましくはアウリスタチンＦである。
【請求項２４】
使用される二次官能性部分が、以下の式の１つによって表される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法：
【化８】
2021507947.tif 000219
ここで、配位子Ｌ１又はＬ２の一方は、ヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物又は臭化物から選択される脱離配位子であり、他方の配位子は、アウリスタチン又はその誘導体、好ましくはアウリスタチンＦである。
【請求項２５】
使用される二次官能性部分が、以下の式の１つによって表される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法：
【化９】
2021507947.tif 000220
ここで、配位子Ｌ１又はＬ２の一方は、ヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物又は臭化物から選択される脱離配位子であり、他方の配位子は、アウリスタチン又はその誘導体、好ましくはアウリスタチンＦである。
【請求項２６】
使用される細胞結合部分がトラスツズマブである、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれかに記載の方法により得られ得る細胞標的複合体及び二次官能性部分。
【請求項２８】
請求項２７に記載の細胞標的複合体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２９】
請求項２７に記載の二次官能性部分及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項３０】
哺乳動物、特にヒトにおける癌の治療に使用するための、請求項２７に記載の細胞標的複合体。
【請求項３１】
結腸直腸癌、乳癌、膵臓癌、及び非小細胞肺癌の治療に使用するための、請求項３０に記載の使用のための細胞標的複合体。
【請求項３２】
乳癌の治療に使用するための、請求項３１に記載の使用のための細胞標的複合体であって、前記乳癌は、Ｈｅｒ２の低い発現レベルを有するものである、上記細胞標的複合体。
【請求項３３】
請求項２に記載の方法によって得られ得る二次官能性部分。
【請求項３４】
第１の配位子として一次官能性部分を有し、第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する遷移金属錯体を含む二次官能性部分。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンカーを介して官能性部分に結合された細胞結合部分を含む、細胞標的複合体の調製及び特性評価のための方法に関する。本発明はさらに、前記方法によって得ることができる細胞標的複合体、及び前記複合体を含む医薬組成物に関する。本発明はまた、癌の治療における細胞標的複合体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体‐薬物複合体（ＡＤＣ）としても知られる細胞標的複合体は、免疫グロブリンの薬物動態、特異性、及び生体内分布と小分子薬物の細胞殺傷特性を組み合わせる効力を備えた比較的新しいクラスの生物療法である。抗体などの免疫グロブリン分子に結合された薬物の送達は、優先的には癌性細胞のみを特異的に標的とし、治療効果を改善し、癌の治療に使用される薬物の全身毒性を低減するための貴重なツールと見なされる。
【０００３】
非標的薬物化合物は通常、全身分布及び細胞膜を介した受動拡散又は受容体媒介取り込みを介して目的の標的細胞に到達するが、標的薬物は主に標的組織に留まり、濃縮する。その結果、標的された薬物はより少ない投薬量を必要とし、その一方で、薬物が標的細胞内で治療的に有効なレベルに到達することを可能にし、したがって治療ウィンドウを改善する。したがって、薬物を特定の細胞にターゲティングすることは、特異性を高め、全身毒性を低減し、全身薬物としてあまり適さない又は不適切な化合物の治療的使用を可能にする概念的に魅力的な方法である。
【０００４】
細胞標的複合体の一般的な概念は単純であるが、それらの臨床使用の成功は、免疫グロブリンの選択、細胞毒性薬の選択、そして重要なことに、細胞毒性薬を免疫グロブリンに結合する方法の選択など、多くの要因に依存するが、これは、細胞標的複合体の薬物動態、特異性、体内分布、及び毒性が、これらのビルディングブロックのいずれかによって影響を受ける可能性があるからである。リンカーは抗体‐薬物複合体の重要な部分であり、それらはとりわけ循環の安定性、薬物動態、対象部位での毒性薬物の放出を説明し、それらは複合体の生物活性（とりわけ、細胞殺傷の効力）に大きな影響を与える可能性がある。そのため、リンカーは細胞標的複合体の特性にかなりの影響を与える可能性があるため、細胞標的複合体の有効性と毒性にとって非常に重要である。
【０００５】
ほとんどの結合技術は、反応性エステル又はマレイミド官能基を介した免疫グロブリンへの有機リンカーの共有結合を利用し、免疫グロブリンのリジン又はシステイン残基への結合をそれぞれ可能にする。しかしながら、上記の共有結合リンカー技術を含む細胞標的複合体は、次善の治療ウィンドウに関連していることが認識されている。
【０００６】
遷移金属錯体の使用は、効果的な細胞標的複合体を生成するための、手軽で洗練された堅牢な手段を提供することが示されている（ＷＯ２０１３／１０３３０１）。遷移金属錯体は、そのユニークな化学的特徴により、従来の共役化学での化学反応基の欠如やペイロード上の不要な化学反応基の存在など、細胞標的複合体の分野でよく遭遇する課題を克服できる。さらに、細胞標的複合体の生成に古典的なリンカーシステムを使用する場合に容易に遭遇する薬物結合後の免疫グロブリンの凝集体形成を減少させることができる。
【０００７】
さらに、免疫グロブリンの改変、例えば、システインを解放するための免疫グロブリンのヒンジ領域のジスルフィド架橋の還元又は遺伝子工学によるシステインの導入は、現在のほとんどの有機リンカー技術で必要とされているように、遷移金属錯体がリンカーとして使用される本方法では必要ない。
【０００８】
遷移金属錯体を使用して毒性薬物を免疫グロブリンに結合すると、生体免疫グロブリンと同様の薬物動態学的特性、特異性、及び生体内分布プロファイルを有する細胞標的複合体を非常に安定にする。これは特に重要である。なぜなら、細胞結合部分（免疫グロブリンなど）の免疫反応性などの機能が十分に高く、その生体内分布プロファイルが変化しない場合にのみ、治療用化合物として複合薬物を体内の目的の場所に送達できるためである。
【０００９】
細胞標的複合体は、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）、及びＢｅｓｐｏｎｓａ（登録商標）の最近の承認により「転換点」に達しているが、これらは細胞標的複合体の分野における第一世代の治療法と見なされるべきである。現状の技術では、薬物と抗体の安定した結合を実現するために、ＡＤＣは、特定の臨床アプリケーションごとに、多くの場合複雑で段階的な結合ルートに従って開発する必要がある。このアプローチは、例えば、開発時間とリソースの使用に関して非効率的であり、ＡＤＣの適用性が、例えば、有効性と毒性のバランス（治療ウィンドウ）に関して制限される結果となる。したがって、ＡＤＣ開発における次のイノベーションの波には、より用途の広いリンカーテクノロジーを使用した細胞標的複合体、より大きな有効性の可能性、及び治療ウィンドウの大幅な改善が必要である。したがって、臨床的に関連する細胞標的複合体のより迅速で効率的で体系的な開発、特性評価、及び製造が明らかに必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＡＤＣの開発及び製造の効率的かつモジュール式のアプローチを可能にする。本発明は、ＡＤＣ開発のための遷移金属錯体に結合した官能性部分の使用を予測する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の第１の態様は、二次官能性部分に結合された細胞結合部分を含む、細胞標的複合体を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ．二次官能性部分を提供すること、その二次官能性部分は、第１の配位子として一次官能性部分を有し、第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する遷移金属錯体を含む；
ｂ．細胞結合部分を提供し、第２の配位子を細胞結合部分で置換することにより、二次官能性部分を前記細胞結合部分に結合させること；及び
ｃ．ステップｂ）の細胞標的複合体を求核剤で処理し、形成された細胞標的複合体を精製すること
を含む。
【００１２】
本発明の第２の態様は、官能性部分に結合された細胞結合部分を含む、細胞標的複合体を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ．ヨウ化物、臭化物又は塩化物からそれぞれ選択される第１及び第２の脱離配位子を含む遷移金属錯体を提供すること；
ｂ．一次官能性部分を提供し、第１の脱離配位子を一次官能性部分で置換することにより一次官能性部分を遷移金属錯体に結合させること、これにより、第１の配位子として一次官能性部分を、及び第２の配位子としてヨウ化物、臭化物又は塩化物を含む二次官能性部分が得られる；
ｃ．ステップｂ）の二次官能性部分をヨウ化物又は／及び臭化物放出剤と混合して、二次官能性部分の第２の配位子がヨウ化物又は臭化物であるようにすること；
ｄ．細胞結合部分を提供し、二次官能性部分のヨウ化物又は臭化物を細胞結合部分で置換することにより、二次官能性部分を前記細胞結合部分に結合させること；及び
ｅ．ステップｄ）の細胞標的複合体を求核剤で処理し、形成された細胞標的複合体を精製すること
を含む。
【００１３】
本方法の発明者らは、二次官能性部分を細胞結合部分（抗体など）に結合させるために、第２の配位子がヨウ化物又は臭化物であることが有利であることを見出した。脱離配位子としてのヨウ化物又は臭化物の使用は、二次官能性部分の細胞標的部分への結合の効率及び二次官能性部分の加水分解安定性の増大にかなりかつ予期せぬ効果を与えることが見出された。この結合効率の向上と、ＡＤＣ分野で使用される典型的な細胞毒性化合物の高コストを考慮すると、細胞標的複合体の製造コストを大幅に削減できる。
【００１４】
本発明の第３の態様は、本発明による方法によって得ることができる細胞標的複合体に関する。
【００１５】
本発明の第４の態様は、前記細胞標的複合体を含む医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明の第５の態様は、癌の治療における前記細胞標的複合体の使用に関する。
【００１７】
本発明の第６の態様は、本発明の方法で使用される二次官能性部分に関する。本発明による二次官能性部分は、白金錯体などの遷移金属錯体を含み、この錯体は、第１の配位子として一次官能性部分（例えば、未修飾又は修飾細胞毒性薬物）及び第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する。第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物基を含む二次官能性部分は、細胞結合部分（例えば抗体）への改善された結合効率を示す。さらに、本発明による二次官能性部分は、加水分解的により安定である。さらに、脱離配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する本発明の二次官能性部分はまた、脱離配位子として塩化物を有する二次官能性部分と比較してより無極性であり、これにより、上述の方法の第２の態様のステップｂ）の後の反応混合物中に依然として存在する可能性がある未反応の一次官能性部分からの対応する二次官能性部分のより効率的な分離（例えば、分取ＨＰＬＣによる）が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】異なるハロゲン化物塩の存在下での結合効率。
【図２】さまざまなモノクローナル抗体の結合効率。注：括弧内に、生物学的標的を示した。
【図３】異なるカチオンを有するヨウ化物塩と臭化物塩の存在下での結合効率。注：ＮａＩＯ３はヨウ素含有非ヨウ化物塩として使用された（陰性対照）。
【図４】異なるｐＨ値における結合効率（１０ｍＭ  ＮａＩを含む異なる２０ｍＭバッファー）；ａ）ｐＨ範囲３．６５〜１０．５５；ｂ）ｐＨ範囲６．５２〜９．４５。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
本明細書で使用される「細胞標的複合体」という用語は、その従来の意味を有し、治療用化合物、診断用化合物、キレート剤、色素などの一次官能性部分、又は抗体のような細胞結合部分にリンカーを介して結合された任意のモデル化合物を指す。抗体を含む細胞標的複合体は、抗体‐薬物複合体とも呼ばれる。しかし、本発明の範囲内では、抗体以外の他のタイプの細胞結合部分を使用できることに留意されたい。
【００２０】
本明細書で使用される「細胞結合部分」という用語は、その従来の意味を有し、特定の結合ペアのメンバー、すなわち、分子のペアの一方が、他の分子の特定の空間及び極性組織に特異的に結合し、したがってそれと相補的であると定義されているその表面の領域又はキャビティを有する、分子のペアのメンバーを指し、その結果、該分子ペアは相互に特異的に結合する特性を持っている。本発明による細胞結合部分の例は、抗体及び抗体フラグメントである。
【００２１】
本明細書で使用される「一次官能性部分」（ＰＦＭ）という用語は、遷移金属錯体と配位結合を形成する構造的能力を有する分子を指す。典型的な官能性部分は、Ｐｔ（ＩＩ）などの金属中心に配位結合を作ることができる適切な配位基を有する、又は備えた治療用化合物（すなわち薬物）又は診断用化合物（すなわちトレーサー又は色素）である。
【００２２】
本明細書で使用される「二次官能性部分」（ＳＦＭ）又は「半最終生成物」という用語は、第１の配位子及び第２の配位子を有する、白金錯体などの遷移金属錯体を含む分子を指し、第１の配位子は上記で定義された「一次官能性部分」（例えば、修飾又は非修飾の細胞毒性薬）であり、及び第２の配位子はヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物又は臭化物である。二次官能性部分が細胞結合部分に結合することを可能にするとき、第２の配位子（例えば、ヨウ化物又は臭化物）は、細胞結合部分によって置換される。したがって、一次官能性部分（たとえば、修飾又は非修飾の細胞毒性薬）と細胞結合部分（たとえば、抗体）が互いに結合している場合、遷移金属錯体はそれらの間のリンカーとして機能する。
【００２３】
本明細書で使用される「リンカー」という用語は、その従来の意味を有し、細胞結合部分と一次官能性部分の間に橋のような構造を形成し、後者の２つが互いに結合するような化学部分を指す。
【００２４】
本明細書で使用される「配位子」という用語は、その従来の意味を有し、中心金属原子又はイオン（Ｐｔ（ＩＩ）など）に結合して配位錯体を形成するイオン（ハロゲン化物など）又は分子（一次官能性部分など）を指す。
【００２５】
本明細書で使用される「遷移金属錯体」という用語は、その従来の意味を有し、配位中心と呼ばれる中心遷移金属原子又はイオン、及び配位子又は錯化剤として知られている結合分子又はイオンの周囲のアレイを指す。本発明で使用される好ましい遷移金属錯体の特定の例は、白金（ＩＩ）錯体である。
【００２６】
本明細書で使用される「Ｌｘ」という用語は、金属中心と二座配位子との組み合わせを含む遷移金属錯体Ｍ（Ｎｕ１‐Ｎｕ２）の構造フラグメントを指す。
【化１】
2021507947.tif 000002
ここで、Ｍは金属イオン又は原子を表し、好ましくはＰｔ（ＩＩ）であり、Ｎｕは求核基であり、Ｎｕ１及びＮｕ２は構造的に同じ基又は異なる基であることができ、Ｎｕ１とＮｕ２の間の点線と共に二座配位子を表す。
【００２７】
発明の詳細な説明
本発明の第１の態様は、二次官能性部分に結合された細胞結合部分を含む、細胞標的複合体を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ．二次官能性部分を提供すること、その二次部分は、一次官能性部分を第１の配位子として、ヨウ化物又は臭化物を第２の配位子として有する遷移金属錯体を含む；
ｂ．細胞結合部分を提供し、ヨウ化物又は臭化物である第２の配位子の細胞結合部分での置換を介して、二次官能性部分を前記細胞結合部分に結合させること；及び
ｃ．ステップｂ）の細胞標的複合体を求核剤で処理し、形成された細胞標的複合体を精製すること
を含む。
【００２８】
本方法の発明者らは、二次官能性部分を細胞結合部分（抗体など）に結合するために、第２の配位子がヨウ化物又は臭化物である場合に有利であることを見出した。ヨウ化物又は臭化物を脱離配位子として使用すると、二次官能性部分の細胞標的部分への結合効率及び二次官能性部分の加水分解安定性の向上にかなりの予期せぬ効果を与えることがわかった。この結合効率の向上と、ＡＤＣ分野で使用される典型的な細胞毒性化合物の高コストを考慮すると、細胞標的複合体の製造コストを大幅に削減できる。
【００２９】
本発明の第２の態様は、一次官能性部分に結合した細胞結合部分を含む、細胞標的複合体を調製する方法に関し、この方法は、
ａ．ヨウ化物、臭化物又は塩化物からそれぞれ選択される第１及び第２の脱離配位子を含む遷移金属錯体を提供すること；
ｂ．一次官能性部分を提供し、一次官能性部分による第１の脱離配位子の置換を介して前記官能性部分を遷移金属錯体に結合させること、これにより、第１の配位子として一次官能性部分を、及び第２の配位子としてヨウ化物、臭化物又は塩化物を含む二次官能性部分が得られる；
ｃ．ステップｂ）の二次官能性部分をヨウ化物又は／及び臭化物放出剤と混合して、二次官能性部分の第２の配位子がヨウ化物又は臭化物になるようにすること；
ｄ．細胞結合部分を提供し、二次官能性部分のヨウ化物又は臭化物を細胞結合部分で置換することにより、二次官能性部分を前記細胞結合部分に結合させること；及び
ｅ．ステップｄ）の細胞標的複合体を求核剤で処理し、形成された細胞標的複合体を精製すること
を含む。
【００３０】
本方法の第２の態様は、本方法の第１の態様と同じ利点を享受する。２つの態様の違いは、本方法の第２の態様によれば、脱離配位子として塩化物も含み得る二次官能性部分が使用され得ることである。しかしながら、結合効率を高めるために、それが塩化物である場合、前記二次官能性部分の第２の配位子は、ヨウ化物又は臭化物放出剤の添加によりヨウ化物又は臭化物で置換される。したがって、結合効率の上昇については、二次官能性部分の第２の配位子は、区別されることなく、ヨウ化物、臭化物、又は塩化物であり得る。それらのすべては、必要量のヨウ化物又は臭化物放出剤の添加後に同じ生成物を生成し、結合の効率はすべての場合においてかなり増加する。
【００３１】
本発明によれば、最初にヨウ化物又は／及び臭化物放出剤で、塩化物を第２の配位子として含む二次官能性部分を処理し、それによりハロゲン化物交換を可能にし、続いて細胞結合部分への結合を行うことが可能である。しかしながら、これらのステップを同時に実行すること、すなわち、本発明の第２の態様のステップｃ）及びｄ）を単一のプロセスステップで組み合わせることも可能である。いずれの場合でも、結果は、ヨウ化物又は臭化物を第２の配位子として持つ二次官能性部分が、ヨウ化物又は臭化物放出剤がない場合に塩化物を二次配位子として持つ二次官能性部分よりも高い効率で細胞結合部分に結合する。
【００３２】
第１の配位子として一次官能性部分を有し、第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する態様で定義される遷移金属錯体を含む二次官能性部分も提供される。好ましい実施形態では、第１の配位子は、アウリスタチンＥ及びＦ又はモノメチルアウリスタチンＥ及びＦなどのアウリスタチン誘導体である。好ましくは、アウリスタチンＦが使用される。このような二次官能性部分は、好ましくは、本発明による方法における中間生成物として得ることができる。本発明による二次官能性部分は、白金錯体などの遷移金属錯体を含み、この錯体は、第１の配位子として一次官能性部分（例えば、未修飾又は修飾細胞毒性薬物）及び第２の配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する。ヨウ化物又は臭化物基を第２の配位子として含む二次官能性部分は、細胞結合部分（例：抗体）への改善された結合効率を示す。さらに、本発明による脱離配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する二次官能性部分は、加水分解的により安定である。さらに、脱離配位子としてヨウ化物又は臭化物を有する本発明の二次官能性部分はまた、脱離配位子として塩化物を有する二次官能性部分と比較してより無極性であり、これにより、上述の方法の第２の態様のステップｂ）の後の反応混合物中に依然として存在する可能性がある未反応の一次官能性部分からの対応する二次官能性部分の（例えば、分取ＨＰＬＣによる）より効率的な分離が可能になる。
【００３３】
本発明の一実施形態では、二次官能性部分の遷移金属錯体は、スペーサーを含むことができる。このような場合、一次官能性部分（たとえば、未修飾又は修飾された細胞毒性薬）は、遷移金属の金属中心（優先的には白金（ＩＩ））に直接結合するのではなく、スペーサー遷移金属錯体種に結合する可能性がある。スペーサーの例は、飽和又は不飽和複素環部分、遷移金属錯体の金属中心に結合することができるアミン又は他のドナー基を有する置換又は非置換の非分岐又は分岐の脂肪族又はヘテロ脂肪族鎖である。
【００３４】
さらに、二次官能性部分は、好ましくは、単離された形態で提供され、本発明の方法で使用される前に別々に保存され得る。
【００３５】
二次官能性部分は、少なくとも２つの配位子を有する遷移金属錯体を含む。第１の配位子は一次官能性部分であり、第２の配位子はヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物又は臭化物、最も好ましくはヨウ化物である。使用される遷移金属は、好ましくは白金（ＩＩ）である。さらに、錯体は、好ましくは二座配位子を含み、この二座配位子は、好ましくは、様々な置換又は非置換ジアミン構造を表す。
【００３６】
本発明による二次官能性部分は、以下の式によって表される：
【化２】
2021507947.tif 000003
ここで、Ｌ１又はＬ２は両方とも配位子を表し、配位子Ｌ１又はＬ２の１つは脱離配位子であり、ヨウ化物、臭化物又は塩化物から選択され、他の配位子は一次官能性部分である。Ｎｕは求核基であり、Ｎｕ１とＮｕ２は構造的に同じ基でも異なる基でもよく、Ｎｕ１とＮｕ２の間の点線とともに二座配位子を表す。Ｍは遷移金属原子又は金属イオン、好ましくは白金（ＩＩ）である。
【００３７】
上記の式による二座配位子の特定の例は、エタン‐１，２‐ジアミン（１）、プロパン‐１，２‐ジアミン（２）、ブタン‐２，３‐ジアミン（３）、２‐メチルプロパン‐１，２‐ジアミン（４）、２，３‐ジアミノブタン‐１，４‐ジオール（５）、２，３‐ジアミノプロパン酸（６）、２，３‐ジアミノコハク酸（７）、３，４‐ジアミノブタン酸（８）、Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン（９）、Ｎ１‐メチルエタン‐１，２‐ジアミン（１０）、Ｎ１，Ｎ１‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン（１１）、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２‐トリメチルエタン‐１，２‐ジアミン（１２）、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２、Ｎ２‐テトラメチルエタン‐１，２‐ジアミン（１３）、Ｎ１，Ｎ２‐ジエチルエタン‐１，２‐ジアミン（１４）、Ｎ１，Ｎ２‐ジプロピルエタン‐１，２‐ジアミン（１５）、Ｎ１，Ｎ２‐ジイソプロピルエタン‐１，２‐ジアミン（１６）、２‐（（２‐アミノエチル）アミノ）エタン‐１‐オール（１７）、２、２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール）（１８）、２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（ブタン‐１‐オール）（１９）、２，２’，２’’，２’’’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザントリイル））テトラキス（エタン‐１‐オール）（２０）、３‐（（２‐アミノエチル）アミノ）プロパン‐１‐オール（２１）、（２‐アミノエチル）グリシン（２２）、３‐（（２‐アミノエチル）アミノ）プロパン酸（２３）、２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））二酢酸（２４）、３，３’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ジプロピオン酸（２５）、３‐（（２‐アミノエチル）アミノ）プロパン‐１‐スルホン酸（２６）、Ｎ１‐（２‐アミノエチル）エタン‐１，２‐ジアミン（２７）、Ｎ１‐（２‐アミノエチル）‐Ｎ１‐メチルエタン‐１，２‐ジアミン（２８）、Ｎ１，Ｎ１‐ビス（２‐アミノエチル）エタン‐１，２‐ジアミン（２９）、ピペラジン（３０）、デカヒドロキノキサリン（３１）、デカヒドロキノキサリン‐６‐カルボン酸（３２）、（デカヒドロキノキサリン‐６‐イル）メタノール（３３）、ピロリジン‐２‐イルメタンアミン（３４）、１‐（ピロリジン‐２‐イル）エタン‐１‐アミン（３５）、２，２’‐ビピロリジン（３６）、ピペリジン‐２‐イルメタンアミン（３７）、１‐（ピペリジン‐２‐イル）エタン‐１‐アミン（３８）、２，２’‐ビピペリジン（３９）、ピロリジン‐３‐アミン（４０）、４‐アミノピロリジン‐３‐オール（４１）、ピロリジン‐３‐イルメタンアミン（４２）、シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン（４３）、４‐メチルシクロヘキサン‐１，２‐ジアミン（４４）、Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルシクロヘキサン‐１，２‐ジアミン（４５）、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２、Ｎ２‐テトラメチルシクロヘキサン‐１，２‐ジアミン（４６）、シクロヘキサ‐４‐エン‐１，２‐ジアミン（４７）、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオール（４８）、（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）‐６‐メトキシ‐２‐フェニルヘキサヒドロピラノ［３，２‐ｄ］［１，３］ジオキシン‐７，８‐ジアミン（４９）、シクロペンタン‐１，２‐ジアミン（５０）、シクロブタン‐１，２‐ジアミン（５１）、シクロプロパン‐１，２‐ジアミン（５２）、１‐ベンジルピロリジン‐３，４‐ジアミン（５３）である。前記二座配位子は、以下の化学構造を有する：
【００３８】
【化３】
2021507947.tif 000004
【００３９】
【化４】
2021507947.tif 000005
【化５】
2021507947.tif 000006
【化６】
2021507947.tif 000007
【００４０】
上記の式による二座配位子のさらなる例は、プロパン‐１，３‐ジアミン（５４）、ブタン‐１，３‐ジアミン（５５）、ブタン‐１，３‐ジアミン（５６）、２，４‐ジアミノブタン酸（５７）、２，４‐ジアミノペンタン二酸（５８）、２，２‐ジメチルプロパン‐１，３‐ジアミン（５９）、シクロブタン‐１，１‐ジイルジメタンアミン（６０）、（テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐４，４‐ジイル）ジメタンアミン（６１）、２，２‐ビス（アミノメチル）プロパン‐１，３‐ジオール（６２）、シクロヘキサン‐１，１‐ジイルジメタンアミン（６３）、２‐メチルプロパン‐１，３‐ジアミン（６４）、１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール（６５）、２‐（アミノメチル）‐２‐メチルプロパン‐１，３‐ジアミン（６６）、１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オン（６７）、Ｎ１‐メチルプロパン‐１，３‐ジアミン（６８）、１，３‐ビス（ジメチルアミノ）プロパン‐２‐オール（６９）、１，３‐ビス（メチルアミノ）プロパン‐２‐オール（７０）、（３‐アミノプロピル）グリシン（７１）、２‐（（３‐アミノプロピル）アミノ）エタン‐１‐オール（７２）、２，２’‐（プロパン‐１，３‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール）（７３）、１，４‐ジアゼパン（７４）、１‐アミノ‐３‐（（２‐ヒドロキシエチル）アミノ）プロパン‐２‐オール（７５）、２，２’‐（（２‐ヒドロキシプロパン‐１，３‐ジイル）ビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール）（７６）、Ｎ１‐（３‐アミノプロピル）ブタン‐１，４‐ジアミン（７７）、Ｎ１，Ｎ１’‐（ブタン‐１，４‐ジイル）ビス（プロパン‐１，３‐ジアミン）（７８）である。前記二座配位子は、以下の化学構造を有する：
【００４１】
【化７】
2021507947.tif 000008
【００４２】
上記の式による二座配位子のさらなる例は、ブタン‐１，４‐ジアミン（７９）、２，５‐ジアミノペンタン酸（８０）、２‐メチルブタン‐１，４‐ジアミン（８１）、１，４‐ジアミノブタン‐２，３‐ジオール（８２）、（１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８３）、（２‐メチル‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８４）、（２‐エチル‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８５）、（２‐プロピル‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８６）、（２‐イソプロピル‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８７）、（２‐フェニル‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８８）、（２‐（２‐フルオロフェニル）‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（８９）、（２‐（３‐フルオロフェニル）‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（９０）、（２‐（４‐フルオロフェニル）‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（９１）、（２‐（チオフェン‐２‐イル）‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（９２）、（２‐（フラン‐２‐イル）‐１，３‐ジオキソラン‐４，５‐ジイル）ジメタンアミン（９３）、シクロブタン‐１，２‐ジイルジメタンアミン（９４）、（１ｓ、４ｓ）‐シクロヘキサン‐１，４‐ジアミン（９５）、Ｎ１，Ｎ１’‐（ブタン‐１，４‐ジイル）ビス（プロパン‐１，３‐ジアミン）（９６）である。前記二座配位子は、以下の化学構造を有する：
【００４３】
【化８】
2021507947.tif 000009
【００４４】
本発明の方法で使用される二次官能性部分の一部である一次官能性部分は、好ましくは、細胞毒性薬などの治療用化合物、蛍光色素、又はキレート化合物に連結された放射性トレーサーなどの診断用化合物、又はモデル化合物である。
【００４５】
毒性薬物は、細胞骨格を妨害し、ＤＮＡをアルキル化し、ＤＮＡ二重らせんにインターカレートし、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ又はＩＩＩを阻害するか、又は細胞系におけるシグナル伝達カスケードを阻害する治療用化合物であることが特に好ましい。最も好ましくは、一次官能性部分は細胞毒性化合物である。好ましい一次毒性部分は多数ある。本明細書の好ましい一次毒性部分のいくつかの例は、アウリスタチン、ドラスタチン、シンプロスタチン、メイタンシノイド、チューブリシン、ＨＴＩ‐２８６、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）、カンプトテシン、アントラサイクリン、アドナフィゾ、アマニチン、クリプトフィシン、リゾキシン、エポチロン、スプライセオスタチン、タイランスタチン、コルヒチン、アプリロニン、タキソイド、メトトレキサート、アミノプテリン、ビンカアルカロイドの群から選択される化合物である。また、好ましい毒性部分は、シュードモナス外毒素Ａのフラグメント、スタチン、リシンＡ、ゲロニン、サポリン、インターロイキン‐２、インターロイキン‐１２などのたんぱく質性毒素、Ｅ４、ｆ４、アポプチン又はＮＳ１などのウイルスタンパク質、及びＨＡＭＬＥＴ、ＴＲＡＩＬ、又はｍｄａ‐７などの非ウイルス性タンパク質である。
【００４６】
一次官能性部分は診断用化合物であってもよい。代替の実施形態では、官能性部分は、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、ＤＹ‐８００、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）７５０、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）７９０、インドシアニングリーン、ＦＩＴＣ、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬなどのＢＯＤＩＰＹ色素及びローダミンＢなどのローダミンなどの蛍光色素である。官能性部分として本開示で使用され得る他の診断用化合物は、放射性核種、ＰＥＴ画像化可能薬剤、ＳＰＥＣＴ画像化可能薬剤又はＭＲＩ画像化可能薬剤である。キレート剤（ＥＤＴＡ、ＤＰＴＡ、デフェロキサミン（Ｄｅｓｆｅｒａｌ（登録商標）又はＤＦＯ）など）又は大環状試薬（ＤＯＴＡ又はｐ‐ＳＣＮ‐Ｂｎ‐ＤＯＴＡなど）を官能性部分として金属イオン錯体に結合させることもできる。後続のステップでは、これらのキレート剤に、ベータ放射剤（９０Ｙや１７７Ｌｕなど）、アルファ放射体（２１１Ａｔなど）、ＰＥＴ同位体（８９Ｚｒなど）、ＳＰＥＣＴ同位体（たとえば、９９ｍＴｃ）、又は非放射性金属を担持する。
【００４７】
あるいは、複数の種類の官能性部分を使用することができる。このようにして、異なる官能性部分、例えば、治療用化合物の異なる有用な組み合わせ、又は有用な診断用化合物の異なる組み合わせ、又は両方の異なる組み合わせを、１つの標的部分に対して結合することが可能である。これを行うことにより、治療用化合物の好ましい組み合わせを目的の組織に送達することができる。
【００４８】
二次官能性部分の第２の配位子が脱離配位子として塩化物を含む場合、ヨウ化物又は臭化物放出剤又はそれらの混合物が、二次官能性部分又は二次官能性部分及び細胞結合部分を含む結合混合物に添加され、その結果、塩化物はヨウ化物又は臭化物で置換される。ヨウ化物又は臭化物放出剤は、ＮａＩ、ＫＩ、ＬｉＩ、ＣｓＩ、ＲｂＩ、ＮＨ４Ｉ、ＭｇＩ２、ＣａＩ２、ＳｒＩ２、ＭｎＩ２、ＩｎＩ３、ＡｌＩ３、ＧｅＩ４、ヨウ化グアニジニウム、ヨウ化テトラメチルアンモニウム、ヨウ化アセチルコリン、５‐（２‐ヒドロキシエチル）‐３，４‐ジメチルチアゾリウムヨウ化物、トリメチルスルホキソニウムヨウ化物、ＮａＢｒ、ＫＢｒ、ＬｉＢｒ又はそれらの混合物、より好ましくはＮａＩ又はＫＩ又はそれらの混合物を含む群から選択することができる。
【００４９】
ヨウ化物塩が使用される場合、反応混合物中の前記塩の濃度は、好ましくは０．１〜１００ｍＭ、より好ましくは１〜３０ｍＭの範囲であり、最も好ましくは約１０ｍＭである。しかしながら、臭化物塩が使用される場合、反応混合物中のその濃度は、好ましくは約５０ｍＭである。
【００５０】
さらに、細胞標的複合体を形成するための二次官能性部分の細胞結合部分への結合中の反応混合物のｐＨは、好ましくは５．５〜１０．０、より好ましくは７．５〜８．５の範囲であり、最も好ましくはｐＨは約８．１である。
【００５１】
本発明の方法で使用される細胞結合部分は、好ましくは抗体である。ただし、一本鎖抗体、標的細胞に特異的に結合する抗体フラグメント、モノクローナル抗体、操作されたモノクローナル抗体、一本鎖モノクローナル抗体、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、キメラ抗体、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体フラグメント、及び標的細胞に特異的に結合する非伝統的なタンパク質スキャフォールド（例えば、アフィボディ、アンチカリン、アドネクチン、ダーピン）、バイサイクル（ｂｉｃｙｃｌｅｓ）又はトリサイクル（ｔｒｉｃｙｃｌｅｓ）又は葉酸誘導体のような様々なタイプを使用することができる。
【００５２】
好ましくは、細胞結合部分は、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ１、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＰＳＭＡを標的とする免疫グロブリン、異常な細胞（腫瘍細胞など）の細胞内標的（ＨＬＡ‐ＭＡＧＥ抗原複合体など）に対する抗体の群から選択される抗体である。より好ましくは、細胞結合部分は、トラスツズマブ、セツキシマブ、ブレンツキシマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、又はオビヌツズマブを含む免疫グロブリンの群から選択される抗体である。
【００５３】
１つの実施形態において、細胞標的複合体は、異常な細胞の特異的標的化及び殺傷のために提供され、毒性部分は、遷移金属錯体を介して細胞結合部分抗体に結合される。好ましくは、細胞標的複合体は、トラスツズマブ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）‐アウリスタチンＦ、トラスツズマブ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）‐デュオカルマイシン、トラスツズマブ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）-ツブリシン、トラスツズマブ-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）-ＰＢＤ、トラスツズマブ-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）-マイタンシノイド、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）‐ＰＮＵ‐１５９６８２、抗ＭＡＧＥ‐ＨＬＡペプチド複合抗体-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）‐α‐アマニチン、抗ＭＡＧＥ‐ＨＬＡペプチド複合抗体-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）-  ＰＢＤ、抗ＭＡＧＥ‐ＨＬＡペプチド複合抗体-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）-アルファ‐アマニチン、及びブレンツキシマブ-Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）-アルファ‐アマニチンを含む群から選択される。
【００５４】
本発明の方法において使用される濃度及び条件は、好ましくは、調製された細胞標的複合体が細胞結合部分あたり平均して１〜１０の官能性部分を含むように選択される。細胞結合部分が抗体である場合、これは薬物抗体比（ＤＡＲ）とも呼ばれる。
【００５５】
したがって、ＤＡＲは１：１から１０：１、好ましくは１：１から５：１の範囲である。
【００５６】
本発明による方法において、二次官能性部分は、好ましくは以下の式によって表される：
【化９】
2021507947.tif 000010
ここで、配位子Ｌ１又はＬ２の１つは、ヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物及び臭化物から選択される脱離配位子であり、他の配位子は、アウリスタチンＥ及びＦ又はモノメチルアウリスタチンＥ及びＦなどのアウリスタチン誘導体である。より好ましくはアウリスタチンＦが使用される。さらに、前記二次官能性部分は、本発明の方法に従ってトラスツズマブに結合されることが好ましい。
【００５７】
あるいは、本発明による方法が提供され、ここで、二次官能性部分は、好ましくは、以下の式によって表される：
【化１０】
2021507947.tif 000011
ここで、配位子Ｌ１又はＬ２の１つは、ヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物及び臭化物から選択される脱離配位子であり、他の配位子は、アウリスタチンＥ及びＦ又はモノメチルアウリスタチンＥ及びＦなどのアウリスタチン誘導体である。より好ましくはアウリスタチンＦが使用される。さらに、前記二次官能性部分は、本発明の方法に従ってトラスツズマブに結合されることが好ましい。
【００５８】
あるいは、本発明による方法が提供され、ここで、二次官能性部分は、好ましくは、以下の式によって表される：
【化１１】
2021507947.tif 000012
ここで、配位子Ｌ１又はＬ２の１つは、ヨウ化物、臭化物又は塩化物、好ましくはヨウ化物及び臭化物から選択される脱離配位子であり、他の配位子は、アウリスタチンＥ及びＦ又はモノメチルアウリスタチンＥ及びＦなどのアウリスタチン誘導体である。より好ましくはアウリスタチンＦが使用される。さらに、前記二次官能性部分は、本発明の方法に従ってトラスツズマブに結合されることが好ましい。
【００５９】
本発明の第３の態様は、本発明による方法によって得ることができる細胞標的複合体に関する。
【００６０】
本発明の第４の態様は、前記細胞標的複合体を含む医薬組成物に関する。
【００６１】
本発明の第５の態様は、哺乳動物、特にヒトにおける癌及び他の慢性疾患の治療における前記細胞標的複合体の使用に関する。前記細胞標的複合体は、結腸直腸癌、乳癌、膵臓癌、及び非小細胞肺癌の治療において特に有用であり得る。本発明による細胞標的複合体を乳癌の治療に使用することが特に有用であり得、前記乳癌はＨｅｒ２の低い発現レベルを有する。
【００６２】
本発明の第６の態様は、二次官能性部分に１９５ｍＰｔなどの放射性核種をさらに含む、本発明の細胞標的複合体を含む組成物に関する。１９５ｍＰｔを使用すると、１９５ｍＰｔカウンティングと８９Ｚｒ‐イムノ‐ＰＥＴイメージングを組み合わせたデュアルラベリングアプローチを使用して、生体内でのＬｘベースの細胞標的複合体の特性評価と検証が可能になる。８９Ｚｒと１９５ｍＰｔを組み合わせて使用することで、抗体や一次官能性部分とは別に、Ｌｘリンカー、薬物又は診断薬を高感度で直接検出できる。したがってデュアルラベリング戦略は、ＤＡＲの関数としての腫瘍及び正常臓器における細胞標的複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ取り込み、及び細胞標的複合体の保持、及び体内での白金ベースのリンカー（Ｌｘ）の隔離を実証することができる。
【００６３】
本発明は、ここで、以下の非限定的な実施例によってさらに解明されるであろう。
【実施例】
【００６４】
例１：Ｃｌ‐Ｌｘ‐ＰＦＭ複合体（クロリドＬｘ‐「半最終生成物」）の合成に使用されるＬｘＣｌ２複合体の例
【化１２】
2021507947.tif 000013
化合物１ａはＳｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ、製品コード４０４３２２、［５２６９１‐２４‐４］から購入した。
【００６５】
例２：Ｂｒ‐Ｌｘ‐ＰＦＭ複合体（ブロミドＬｘ‐「半最終生成物」）の合成に使用されるＬｘＢｒ２複合体の例
【化１３】
2021507947.tif 000014
【００６６】
２．１．ＰｔＢｒ２（エタン‐１，２‐ジアミン）（２ａ）の合成と分析的特性評価
【化１４】
2021507947.tif 000015
ＫＢｒ（２．３８ｇ、２０ｍｍｏｌ）を水（２５ｍＬ）中のＫ２ＰｔＣｌ４（４１５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を室温で２４時間撹拌し、次に得られた茶色の混合物を濾過し、エタン‐１，２‐ジアミン（８１μＬ、１．２ｍｍｏｌ）を濾液に加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。沈殿物を濾過により収集し、水で完全に洗浄し、最初に吸引下でフィルター上で１時間乾燥させた。次に、フィルターケーキ（黄色の固体３３５ｍｇ）をフラスコに移し、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）で１時間スラリー洗浄し、ろ過して集め、フィルターケーキをＭｅＯＨで洗浄し、次いで減圧下で１２時間乾燥させ、黄色の固体（２９８ｍｇ、７２％収率）を取得した。
【００６７】
【数１】
2021507947.tif 000016
【００６８】
例３：Ｉ‐Ｌｘ‐ＰＦＭ複合体の合成に使用されるＬｘＩ２複合体の例（ヨージドＬｘ‐「半最終生成物」）
【化１５】
2021507947.tif 000017
【００６９】
３．１．錯体ＰｔＩ２（二座配位子）３ａ‐ｈ及び３ｊ‐ｌ（錯体３ａの例）の一般的な合成と錯体Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）の分析データ
【化１６】
2021507947.tif 000018
ＫＩ（３３．２ｇ、０．２ｍｏｌ）を水（２００ｍＬ）中のＫ２ＰｔＣｌ４（４．１５ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を室温で２２時間撹拌した後、得られた暗色の混合物を濾過し、エタン‐１，２‐ジアミン（８００μＬ、１２ｍｍｏｌ）を濾液に加え、混合物を室温で２３時間撹拌した。エタン‐１，２‐ジアミンを加えるとすぐに黄色の沈殿物が形成し始めた。沈殿物を濾過により収集し、水で十分に洗浄し、最初にフィルター上で吸引して３〜４時間、次に減圧下で１２時間乾燥させて、黄色の固形物（４．８５ｇ、収率９５％）を得た。
【００７０】
【数２】
2021507947.tif 000019
【００７１】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８、２５ｘ４．６ｍｍ、５μｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間９．８分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍでの測定）。
【００７２】
以下の錯体Ｐｔ（二座配位子）Ｉ２  ３も同様の方法で得られた。
【表１】
2021507947.tif 000020
【００７３】
３．１．１．錯体Ｐｔ（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｂ）の分析データ
【化１７】
2021507947.tif 000021
【数３】
2021507947.tif 000022
【００７４】
３．１．２．錯体Ｐｔ（（１Ｓ，２Ｓ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｃ）の分析データ
【化１８】
2021507947.tif 000023
【数４】
2021507947.tif 000024
【００７５】
３．１．３．錯体Ｐｔ（（１Ｒ，２Ｓ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｄ）の分析データ
【化１９】
2021507947.tif 000025
【数５】
2021507947.tif 000026
【００７６】
３．１．４．錯体Ｐｔ（Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｅ）の分析データ
【化２０】
2021507947.tif 000027
【数６】
2021507947.tif 000028
【００７７】
３．１．５．錯体ＰｔＩ２（プロパン‐１，３‐ジアミン）（３ｆ）の分析データ
【化２１】
2021507947.tif 000029
単離及び初期乾燥工程の後、材料をさらにＭｅＯＨでスラリー洗浄し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、乾燥させた。
【００７８】
【数７】
2021507947.tif 000030
【００７９】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８、２５ｘ４．６ｍｍ、５μｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１３．６分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２２３ｎｍで測定）。
【００８０】
３．１．６．錯体Ｐｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ２（３ｇ）の分析データ
【化２２】
2021507947.tif 000031
単離及び初期乾燥工程の後、材料をさらにＭｅＯＨでスラリー洗浄し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、乾燥させた。
【００８１】
【数８】
2021507947.tif 000032
【００８２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８、２５ｘ４．６ｍｍ、５μｍ）により、生成物が１００％の純度であることが示された（保持時間１２．１分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍでの測定）。
【００８３】
３．１．７．錯体Ｐｔ（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）Ｉ２（３ｈ）の分析データ
【化２３】
2021507947.tif 000033
単離及び初期乾燥工程の後、材料をさらにＭｅＯＨでスラリー洗浄し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、乾燥させた。
【００８４】
【数９】
2021507947.tif 000034
【００８５】
３．１．８．錯体Ｐｔ（（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）‐６‐メトキシ‐２‐フェニルヘキサヒドロピラノ［３，２‐ｄ］［１，３］ジオキシン‐７，８‐ジアミン）Ｉ２（３ｊ）の分析データ
【化２４】
2021507947.tif 000035
【００８６】
【数１０】
2021507947.tif 000036
【００８７】
３．１．９．錯体Ｐｔ（２‐（（２‐アミノエチル）アミノ）エタン‐１‐オール）Ｉ２（３ｋ）の分析データ
【化２５】
2021507947.tif 000037
【００８８】
【数１１】
2021507947.tif 000038
【００８９】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８、２５ｘ４．６ｍｍ、５μｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１１．２分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）。
【００９０】
３．１．１０．錯体Ｐｔ（２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール））Ｉ２（３ｌ）の分析データ
【化２６】
2021507947.tif 000039
【数１２】
2021507947.tif 000040
【００９１】
３．２．錯体Ｐｔ（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオール）Ｉ２（３ｉ）の合成
【化２７】
2021507947.tif 000041
Berger et al。、ChemMedChem 2007、2、505-514に従って調製。
【００９２】
ＫＩ（５３１ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）を、水（１．３ｍＬ）中のＫ２ＰｔＣｌ４（２６６ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次に得られた暗色の混合物を濾過し、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオールジヒドロクロリド（２５０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＫＯＨ（９８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを通して濾過した水（４００μＬ）中への溶液を濾液に添加した。混合物を室温で２２時間撹拌した。（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオールの溶液を加えるとすぐに沈殿物が形成し始めた。沈殿物を濾過により収集し、冷水（１．５ｍＬ）、続いて冷アセトン（１ｍＬ）で洗浄し、最初にフィルター上で１時間吸引し、次に減圧下で１２時間乾燥して、暗褐色の固体を得た（１６２ｍｇ、４３％収率）。
【００９３】
【数１３】
2021507947.tif 000042
【００９４】
例４：クロリドＬｘ‐「半最終生成物」Ｃｌ‐Ｌｘ‐ＰＦＭ（クロリドＳＦＭ）の例
【化２８】
2021507947.tif 000043
【化２９】
2021507947.tif 000044
【００９５】
４．１．［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（４ａ）の合成及び分析的特性評価は、Sijbrandi et al., Cancer Res. 2017, 72, 257-267に記載されている。
【００９６】
４．２．［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｙ）（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）］＋ＴＦＡ−（４ｂ）の合成と分析的特性評価
【化３０】
2021507947.tif 000045
【００９７】
４．２．１．配位子（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｙ（Ｌ１）の合成
【化３１】
2021507947.tif 000046
Verel et al., J. Nucl. Med. 2003, 44, 1271-1281にしたがって調製。
【００９８】
Ｎ‐スクシニルデスフェラール‐Ｆｅ（ＩＩＩ）（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ；８９ｍｇ、１２４μｍｏｌ）をＤＭＦ（１．２ｍＬ）に溶解し、ＨＯＢｔ（２５．２ｍｇ、１８６μｍｏｌ）、ＥＤＣｘＨＣｌ（３５．７ｍｇ、１８６μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４３μＬ、２４８μｍｏｌ）及びピリジン‐４‐イルメタンアミン（１４μＬ、１３７μｍｏｌ）を順次加えた。混合物を２０時間撹拌し、濃縮し、残留物を水に溶解し、Ｓｅｐ‐Ｐａｋ  Ｃ１８  Ｐｌｕｓカラムで精製した。生成物はカラムから溶出され、凍結乾燥されて暗赤色の固体（１２４ｍｇ、８３％収率）が得られた。
【００９９】
【数１４】
2021507947.tif 000047
【０１００】
４．２．２．錯体［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｙ）（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）］＋ＴＦＡ−（４ｂ）の合成
【化３２】
2021507947.tif 000048
【０１０１】
ＡｇＮＯ３（４１ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＰｔＣｌ２（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）（１ａ）（８７ｍｇ、０．２２９ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。２４時間攪拌した後、灰色の沈殿物をセライトでろ過し、次いでセライトをＤＭＦ（２ｘ０．５ｍＬ）ですすいだ。次に、この溶液３５７μＬ（活性化Ｐｔ錯体１．１当量）を（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｙ（Ｌ１）（３０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）に加えた。混合物をアルゴン下で２４時間撹拌した後、ＨＰＬＣは完全な変換を示した。溶媒を減圧下で蒸発させた後、残留物を水とメタノールの混合物に溶解した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：１５〜２５％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を氷上で収集し、すぐに凍結及び凍結乾燥して、暗赤色の固体（１０ｍｇ、２１％収率）を得た。
【０１０２】
【数１５】
2021507947.tif 000049
【０１０３】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．２％の純度（保持時間１４．２分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長４３０ｎｍで測定）であることを示した。
【０１０４】
４．３．Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｃｌ（エタン‐１，２‐ジアミン）（４ｃ）の合成と分析的特性評価は、Sijbrandi et al., Cancer Res. 2017, 72, 257-267に記載されている。
【０１０５】
４．４．［ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ‐ＰＥＧ２‐ｐｙ‐ＰｔＣｌ（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）］＋ＴＦＡ−（４ｄ）の合成と分析的特性評価
【化３３】
2021507947.tif 000050
【０１０６】
４．４．１．ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬメチルエステルの合成
【化３４】
2021507947.tif 000051
Gieβler et al., Eur. J. Org. Chem 2010, 3611-3620に従って調製。
【０１０７】
３‐（１Ｈ‐ピロール‐２‐イル）プロパン酸メチル（７８０ｍｇ、４．８４ｍｍｏｌ、１．０当量）及び３，５‐ジメチル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルバルデヒド（６９０ｍｇ、５．３２ｍｍｏｌ、１．１当量）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。この混合物に、ＤＣＭ（５ｍＬ）中のＰＯＣｌ３（５００μＬ、５．３６ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液を滴加した。反応混合物を０℃で３０分間、そして室温で６時間撹拌した。得られた黒色の溶液を再び０℃に冷却し、ＢＦ３ｘＯＥｔ２（２．４ｍＬ、１９．５ｍｍｏｌ、４．０当量）とＤＩＰＥＡ（３．５ｍＬ、２０．１ｍｍｏｌ、４．２当量）で処理し、徐々に温めながら室温にまで１２時間攪拌した。次に、混合物を０℃に冷却し、水（１００ｍＬ）を加えた。混合物を、ＤＣＭ（４ｘ２５ｍＬ）ですすいだセライトを通して濾過し、濾液相を分離し、水層をＤＣＭ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。残留物をセライトに吸収させ、カラムクロマトグラフィー（溶離液：１０‐０％石油エーテル／ＤＣＭ）で精製して、赤色の固体（１．００ｇ、６８％収率）を得た。
【０１０８】
【数１６】
2021507947.tif 000052
【０１０９】
４．４．２．ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬの合成
【化３５】
2021507947.tif 000053
Gieβler et al., Eur. J. Org. Chem 2010, 3611-3620に従って調製。
【０１１０】
ＢＯＤＩＰＹメチルエステル（４９４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（７５ｍＬ）及び４．５ｍ  ＨＣｌ（７５ｍＬ）に溶解した。この混合物を室温で４７時間撹拌した。続いて、ＤＣＭ（３００ｍＬ）を加え、相を分離した。水層をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：０‐０．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋０．１％ＡｃＯＨ）で精製し、続いてｎ‐ペンタンで沈殿させて、赤色の固体（２７６ｍｇ、５９％収率）を得た。
【０１１１】
【数１７】
2021507947.tif 000054
【０１１２】
４．４．３．Ｎ‐（２‐（２‐（２‐アミノエトキシ）エトキシ）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（ＰＥＧ２‐ｐｙスペーサー）の合成
【化３６】
2021507947.tif 000055
２‐（ピリジン‐４‐イル）酢酸塩酸塩（１８３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）及び２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（オキシ））ジエタンアミン（７４７μＬ、５．０ｍｍｏｌ、５．０当量）を乾燥し脱気したトルエン（５ｍＬ）に溶解した。続いて、トルエン中のＡｌＭｅ３の２Ｍ溶液（０．５ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、得られた反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。次に、反応混合物を１時間かけて室温まで冷却させ、さらに０℃まで冷却した後、イソプロパノール（１ｍＬ）とＭｅＯＨ（０．１４ｍＬ）中ＮＨ３の７Ｍ溶液を加え、室温まで温めた。黄色の混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去して、緑色の油を得た。この油をＤＣＭに溶解し、形成された沈殿物を再び濾過により除去した。溶媒を減圧下で除去した後、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ．１００：９：１から１００：９：１．５）で精製して、淡黄色の油（１２９ｍｇ、４８％収率）を得た。
【０１１３】
【数１８】
2021507947.tif 000056
【０１１４】
【数１９】
2021507947.tif 000057
【０１１５】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１５．２分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０１１６】
４．４．４．ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ‐ＰＥＧ２‐ｐｙ配位子（Ｌ２）の合成
【化３７】
2021507947.tif 000058
ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ（３３ｍｇ、１１２μｍｏｌ、１．０当量）、ＥＤＣｘＨＣｌ（２４ｍｇ、１２３μｍｏｌ、１．１当量）、及びＨＯＢｔ水和物（１９ｍｇ、１２３μｍｏｌ、１．１当量）をＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解し、５分間攪拌した。この混合物にＰＥＧ２‐ｐｙスペーサー（３０ｍｇ、１１２μｍｏｌ、１．０当量）を添加し続いてＤＩＰＥＡ（４１．０μＬ、２３６μｍｏｌ、２．１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。続いて、混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、０．１４Ｍ  ＮａＯＨ（３２ｍＬ）で洗浄した。２つの相を分離し、水層をＤＣＭ（５ｘ５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＤＣＭ中の１‐５．５％ＭｅＯＨ）で精製して、赤色の油（３０ｍｇ、４９％収率）を得た。
【０１１７】
【数２０】
2021507947.tif 000059
【０１１８】
【数２１】
2021507947.tif 000060
【０１１９】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１０．２分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長４８８ｎｍで測定）。
【０１２０】
４．４．５．［ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ‐ＰＥＧ２‐ｐｙ‐ＰｔＣｌ（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）］＋ＴＦＡ−（４ｄ）の合成
【化３８】
2021507947.tif 000061
ＰｔＣｌ２（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）（１ａ）（５０ｍｇ、１３１μｍｏｌ）とＡｇＮＯ３（２６ｍｇ、１５３μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、光を遮断して室温で２２時間攪拌した（反応フラスコは暗くされている）。続いて、混合物を０．２μｍシリンジフィルターで濾過して、活性化Ｐｔ錯体の１３．２ｍＭストック溶液を得た。次に、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ‐ＰＥＧ２‐ｐｙ（Ｌ２）（１４ｍｇ、２６μｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（２００μＬ）溶液に、活性化Ｐｔ錯体の１３．２ｍＭストック溶液（５．２０ｍＬ、６８．４μｍｏｌ、２．６当量）を添加し、続いてトリエチルアミン（７．２１μＬ、５２ｍｏｌ、２．０当量）を加え、反応の過程をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を、光を排除しながら室温で５時間撹拌した（反応フラスコは暗くされている）。この時点で、反応混合物は６４．７％の生成物を含み、出発物質を含んでいなかった。
混合物を減圧下で濃縮し、水／ＭｅＯＨ（２．５：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜８５％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡを３６分で）により行った。生成物画分を凍結乾燥すると、明るいオレンジ色の固体（１３ｍｇ、収率５０％）が得られた。
【０１２１】
【数２２】
2021507947.tif 000062
【０１２２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９３．６％の純度であることを示した（保持時間１２．２分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長４８８ｎｍで測定）。
【０１２３】
例５：ブロミドＬｘ‐「半最終生成物」Ｂｒ‐Ｌｘ‐ＰＦＭ（ブロミドＳＦＭ）の例
【化３９】
2021507947.tif 000063
【化４０】
2021507947.tif 000064
【０１２４】
５．１．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（５ａ）の合成と分析的特性評価
【化４１】
2021507947.tif 000065
【０１２５】
５．１．１．配位子Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（ｉｎｄ‐ｐｙ、Ｌ３）の合成
【化４２】
2021507947.tif 000066
２‐（ピリジン‐４‐イル）酢酸塩酸塩（３６５ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）に懸濁し、トリプタミン（３９２ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、続いてＨＡＴＵ（１．１６ｇ、４．０ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．４ｍＬ、８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間攪拌した後、混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、溶媒を減圧下で除去した後、残留物をセライトに吸着させ、シリカでクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ＝１００：１：１〜１００：２：１〜１００：３：１）で精製した。乾燥後、オレンジ色のガラス（３８８ｍｇ、収率７０％）が得られた。
【０１２６】
【数２３】
2021507947.tif 000067
【０１２７】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９８．５％の純度であることを示した（保持時間１４．９分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１２８】
５．１．２．錯体［ｉｎｄ‐ｐｙ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（５ａ）の合成
【化４３】
2021507947.tif 000068
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔＢｒ２（エタン‐１，２‐ジアミン）（２ａ）（３１．１ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（５００μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で４２時間撹拌し、次に温度を７０℃に上げ、反応混合物をさらに２０時間撹拌した。この時点で、反応混合物は９４．４％の生成物と１．２％の出発物質を含んでいた。
【０１２９】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１２．９ｍｇ、収率３５．５％）が得られた。
【０１３０】
【数２４】
2021507947.tif 000069
【０１３１】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）により、生成物は９８．８％の純度であることを示した（保持時間１７．８分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２２３ｎｍで測定）。
【０１３２】
５．２．ｉｎｄ‐ｐｉｐ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）（５ｂ）の合成と分析的特性評価
【化４４】
2021507947.tif 000070
【０１３３】
５．２．１．配位子Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピペリジン‐４‐イル）アセトアミド（ｉｎｄ‐ｐｉｐ、Ｌ４）の合成
【化４５】
2021507947.tif 000071
トリプタミン（４９１ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解したＢＯＰ（１．３７ｇ、３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（５２３μＬ、３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、続いてＤＭＦ（５ｍＬ）中の２‐（１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）ピペリジン‐４‐イル）酢酸（７４５ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加した。室温で２４時間撹拌した後、混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３ｘ１５ｍＬ）で抽出し、溶媒を減圧下で除去した後、残渣をセライトに吸着させ、溶離液として酢酸エチル／シクロヘキサン１：１を使用してシリカでクロマトグラフィーで精製した。減圧下で乾燥した後、褐色の油（約２．１ｇ）が得られた。
【０１３４】
ＴＦＡ（５ｍＬ）を材料に加え、混合物を室温で３０分間撹拌した後、氷／水で冷却した１ＮＮａＯＨ（５０ｍＬ）溶液にゆっくりと加えた。ＤＣＭを加え、混合物を０℃で撹拌した。少量のＭｅＯＨを加えた後、相を分離し、水層をジクロロメタン（９×２５ｍＬ）で抽出した。蒸発後、残留物（約１．２ｇの茶色の油）をセライトに吸収させ、シリカでクロマトグラフィー（溶離液：イソプロパノール／ＮＨ３ａｑ＝１００：１〜１００：２〜１００：３〜１００：４）で精製した。次に、得られた物質をＭｅＯＨ／ジクロロメタン／ｎ‐ペンタンから再結晶化し、乾燥させた後、無色の固体（２０４ｍｇ、２４％の収率）が得られた。
【０１３５】
【数２５】
2021507947.tif 000072
【０１３６】
【数２６】
2021507947.tif 000073
【０１３７】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１５．１分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１３８】
５．２．２．錯体［ｉｎｄ‐ｐｉｐ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（５ｂ）の合成
【化４６】
2021507947.tif 000074
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピペリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ４）（ｉｎｄ‐ｐｉｐ；１４．３ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔＢｒ２（エタン‐１，２‐ジアミン）（２ａ）（２０．８ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（６．９８μＬ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で４２時間撹拌した。この時点で、反応混合物は８８．６％の生成物と最大２．６％の出発物質を含んでいた。
【０１３９】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（９．０ｍｇ、２４．５％収率）が得られた。
【０１４０】
【数２７】
2021507947.tif 000075
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９５．６％の純度（保持時間１７．４分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２２３ｎｍで測定）であることを示した。
【０１４１】
５．３．ｉｎｄ‐ｉｍｉ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）（５ｃ）の合成と分析的特性評価
【化４７】
2021507947.tif 000076
【０１４２】
５．３．１．配位子Ｎ‐（３‐（１Ｈ‐イミダゾール‐１‐イル）プロピル）‐３‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）プロパンアミド（ｉｎｄ‐ｉｍｉ、Ｌ５）の合成
【化４８】
2021507947.tif 000077
３‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）プロパン酸（３９８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ‐（クロロメチレン）‐Ｎ‐メチルメタンアミニウムクロリド（２６７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を室温で加え、４０℃で３０分間撹拌した。次に、室温に冷却して１．５時間撹拌した後、３‐（１Ｈ‐イミダゾール‐１‐イル）プロパン‐１‐アミン（２４３μＬ、２．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、続いてＤＩＰＥＡ（１．７ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。室温で２２時間撹拌した後、混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、溶媒を減圧下で除去した後、残留物をセライトに吸着させ、シリカでクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ＝１００：１：１〜１００：２：１〜１００：３：１〜１００：４：１）で精製した。乾燥後、黄色の油（３８３ｍｇ、収率６５％）が得られた。
【０１４３】
【数２８】
2021507947.tif 000078
【０１４４】
【数２９】
2021507947.tif 000079
【０１４５】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１４．５分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１４６】
５．３．２．錯体［ｉｎｄ‐ｉｍｉ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（５ｃ）の合成
【化４９】
2021507947.tif 000080
【０１４７】
Ｎ‐（３‐（１Ｈ‐イミダゾール‐１‐イル）プロピル）‐３‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）プロパンアミド（Ｌ５）（ｉｎｄ‐ｉｍｉ；１４．８ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔＢｒ２（エタン‐１，２‐ジアミン）（２ａ）（３１．１ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（５００μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２０時間撹拌し、次に温度を７０℃に上げ、反応混合物をさらに２０時間撹拌した。この時点で、反応混合物は５３．９％の所望の生成物及び５．２％の出発物質を含んでいた。
【０１４８】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（７．７ｍｇ、収率２０．７％）が得られた。
【０１４９】
【数３０】
2021507947.tif 000081
【０１５０】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９８．８％の純度であることを示した（保持時間１７．２分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２２３ｎｍの波長で測定）。
【０１５１】
５．４．［（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｐｉｐ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（５ｄ）の合成と分析的特性評価
【化５０】
2021507947.tif 000082
【化５１】
2021507947.tif 000083
【０１５２】
５．４．１．（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃの合成
【化５２】
2021507947.tif 000084
手順は、Vugts et al., Bioconjugate Chem. 2011, 22, 2072-2081から採用した。
【０１５３】
ＦｅＣｌ３（０．５Ｍ  ＨＣｌに４００ｍｇ／ｍＬ）の溶液を準備し、この溶液９０μＬを０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３（２．６４ｍＬ）中のＮ‐スクシニルデスフェラール（ＤＦＯ‐ｓｕｃ、１２０ｍｇ、１８２μｍｏｌ）及び０．９％ＮａＣｌ（２．３１ｍＬ）の混合物に滴加した。得られた混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物をさらに後処理又は精製することなく次のステップで使用した。
【０１５４】
５．４．２．（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ＴＦＰの合成
【化５３】
2021507947.tif 000085
【０１５５】
手順はVugts et al., Bioconjugate Chem. 2011, 22, 2072-2081から採用した。
【０１５６】
（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ（１３０ｍｇ、１８２μｍｏｌ）を含む反応混合物に、０．９％ＮａＣｌ（５ｍＬ）、ＭｅＣＮ（１．８ｍＬ）及びＭｅＣＮ（２００μＬ）中の２，３，５，６‐テトラフルオロフェノール（２９０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を加えた。次に、ＥＤＣｘＨＣｌ（５５０ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。続いて、ＥＤＣｘＨＣｌ（５００ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）の２番目の部分を追加し、混合物をさらに１５分間撹拌した。反応混合物を２つの等しいバッチに分け、０．９％ＮａＣｌ（各３０ｍＬ）に注ぎ、得られた混合物を２つの活性化されたダブルＳｅｐ‐Ｐａｋ  Ｃ１８  Ｐｌｕｓカラムにトラップした。これら２つのダブルＳｅｐ‐Ｐａｋ  Ｃ１８  Ｐｌｕｓカラムを水（各３ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、生成物を２ｘ１．５ｍＬ  ＭｅＣＮで溶出した。したがって、２つの生成物バッチが収集され、それぞれが約３ｍＬの溶媒に生成物を含んでいた。
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、バッチ１が９４．８％の純度、バッチ２が９５．２％の純度（保持時間２０．４分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、４３０ｎｍの波長で２０分測定）であることを示した。収率は約８０％であると想定された（Vugts et al., Bioconjugate Chem. 2011, 22, 2072-2081によって得られた結果に基づく）。生成物を含む２つの溶液を、さらに後処理又は精製せずに次のステップで使用した。
【０１５７】
５．４．３．（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ‐Ｂｏｃ（Ｌ６‐Ｂｏｃ）の合成
【化５４】
2021507947.tif 000086
ｔｅｒｔ‐ブチル４‐（アミノメチル）ピペリジン‐１‐カルボキシラート（２３．５ｍｇ、１１０μｍｏｌ）をＭｅＣＮ（３００μＬ）に懸濁し、混合物を（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ＴＦＰ（バッチ２；約６３ｍｇ、ＭｅＣＮ  ３ｍＬに７３μｍｏｌ；純度９５．２％）に加えた。続いて、ＤＩＰＥＡ（２５．５μＬ、１４６μｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温で攪拌した。ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、７５分間攪拌した後、生成物が＞９５％の純度であることを示した（保持時間１８．４分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、４３０ｎｍの波長で測定）。Ｌ６‐Ｂｏｃを含む反応混合物を蒸発させ、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【０１５８】
５．４．４．配位子（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ（Ｌ６）の合成
【化５５】
2021507947.tif 000087
粗材料Ｌ６‐Ｂｏｃ（約６７ｍｇ、７３μｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（３ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１．５時間撹拌し、濃縮し、得られた残留物をＭｅＯＨに溶解した。この溶解した物質を、ＤＣＭで活性化したＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＳＣＸ‐２カラムにロードした。カラムをＭｅＯＨで洗浄し、続いてＭｅＯＨ中の０．２５Ｍ  ＮＨ３（ａｑ）で洗浄した。生成物を、ＭｅＯＨ中の１Ｍ  ＮＨ３（ａｑ）で、続いてＭｅＯＨ中の７Ｍ  ＮＨ３（ａｑ）で溶出した。溶媒を蒸発させ、生成物を水に溶解し、凍結乾燥して、赤色の固体（４０．１ｍｇ、５０．０μｍｏｌ、ＤＦＯ‐ｓｕｃから４段階で約５５％）を得た。
【０１５９】
【数３１】
2021507947.tif 000088
【０１６０】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．５％の純度であることを示した（保持時間１１．８分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長４３０ｎｍで測定）。
【０１６１】
５．４．５．錯体［（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｐｉｐ‐ＰｔＢｒ（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（５ｄ）の合成
【化５６】
2021507947.tif 000089
Ｌ６（１６ｍｇ、２０μｍｏｌ）を充填したＨＰＬＣバイアルに、ＤＭＦ（２００μＬ）、ＰｔＢｒ２（エタン‐１，２‐ジアミン）（１２．３ｍｇ、３０μｍｏｌ）、及びＴＥＡ（４．１３μＬ、３０μｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で２４時間振とうした。反応混合物を水／ＭｅＯＨ（７：３、３ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３０〜５０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を収集し、初期容量の約２／３に濃縮した。水（約２ｍＬ）を加え、混合物を凍結乾燥し、赤色の固体（１４ｍｇ、収率５６．３％）を得た。生成物を２０ｍＭ  ＮａＢｒ水溶液に溶解し、５ｍＭ溶液として保存した。
【０１６２】
【数３２】
2021507947.tif 000090
【０１６３】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）により、生成物は９５．６％の純度であることを示した（保持時間１３．１分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長４３０ｎｍで測定）。
【０１６４】
例６：ヨージドＬｘ‐「半最終生成物」Ｉ‐Ｌｘ‐ＰＦＭ（ヨージドＳＦＭ）の例
【化５７】
2021507947.tif 000091
【化５８】
2021507947.tif 000092
【化５９】
2021507947.tif 000093
【化６０】
2021507947.tif 000094
【化６１】
2021507947.tif 000095
【化６２】
2021507947.tif 000096
【化６３】
2021507947.tif 000097
【化６４】
2021507947.tif 000098
【化６５】
2021507947.tif 000099
【化６６】
2021507947.tif 000100
【化６７】
2021507947.tif 000101
【化６８】
2021507947.tif 000102
【化６９】
2021507947.tif 000103
【０１６５】
６．１．［ノルエレアグニン‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ａ）の合成と分析的特性評価
【化７０】
2021507947.tif 000104
２，３，４，９‐テトラヒドロ‐１Ｈ‐ピリド［３，４‐ｂ］インドール（ノルエレアグニン；９．１ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２５．４ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を乾燥ＤＭＦ（３３３μｍｏｌ）に溶解した。トリエチルアミン（６．９８μＬ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２４時間撹拌した。この時点で、反応混合物は８４．１％の所望の生成物及び４．４％の出発物質を含んでいた（保持時間１４．４分）。
【０１６６】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（１９：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：２０〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１９．９ｍｇ、収率５９．６％）が得られた。
【０１６７】
【数３３】
2021507947.tif 000105
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．９％の純度（保持時間１９．９分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）であることを示した。
【０１６８】
６．２．［７‐アザインドール‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｂ）の合成と分析的特性評価
【化７１】
2021507947.tif 000106
１Ｈ‐ピロロ［２，３‐ｂ］ピリジン（７‐アザインドール；６．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２５．４ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を乾燥ＤＭＦ（３３３μｍｏｌ）に溶解した。トリエチルアミン（６．９８μＬ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２４時間撹拌した。この時点で、反応混合物は７２．８％の所望の生成物及び２６．９％の出発物質を含んでいた（保持時間４．５分）。
【０１６９】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（１９：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：２０〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１２．２ｍｇ、３９．８％収率）が得られた。
【０１７０】
【数３４】
2021507947.tif 000107
【０１７１】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９．５％の純度であることを示した（保持時間１４．８分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１７２】
６．３．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｃ）の合成と分析的特性評価
【化７２】
2021507947.tif 000108
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２５．４ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（６．９８μＬ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２３時間撹拌した。この時点で、反応混合物は９５．０％の生成物と５．０％の出発物質を含んでいた。
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：２０〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（２５．２ｍｇ、６５．１％収率）が得られた。
【０１７３】
【数３５】
2021507947.tif 000109
【０１７４】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９．６％の純度であることを示した（保持時間１８．８分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１７５】
６．４．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン））Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｄ）の合成と分析的特性評価
【化７３】
2021507947.tif 000110
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン））Ｉ２（３ｂ）（４２．２ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４６μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を４０℃で６８時間、次に５０℃で２４時間撹拌した。この時点で、反応混合物は９０．２％の生成物と４．０％の出発物質を含んでいた。
【０１７６】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１９．７ｍｇ、収率４７．６％）が得られた。
【０１７７】
【数３６】
2021507947.tif 000111
【０１７８】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９．６％の純度であることを示した（保持時間１２．５分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１７９】
６．５．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（ｃｉｓ‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｅ）の合成と分析的特性評価
【化７４】
2021507947.tif 000112
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（ｃｉｓ‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）Ｉ２（３ｄ）（４２．４ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を４０℃で１９時間撹拌した。この時点で、反応混合物は８８．４％の生成物及び６．０％の出発物質を含んでいた。
【０１８０】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１５．４ｍｇ、３７．２％収率）が得られた。
【０１８１】
【数３７】
2021507947.tif 000113
【０１８２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物は９９．６％の純度であることを示した（保持時間１２．３分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２７３ｎｍで測定）。
【０１８３】
６．６．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｆ）の合成と分析的特性評価
【化７５】
2021507947.tif 000114
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｅ）（４０．３ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を４０℃で２０時間撹拌した。この時点で、反応混合物は８９．９％の生成物と１１．５％の出発物質を含んでいた。
【０１８４】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１２．４ｍｇ、収率３０．９％）が得られた。
【０１８５】
【数３８】
2021507947.tif 000115
【０１８６】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間１１．６分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２２３ｎｍの波長で測定）。
【０１８７】
６．７．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐ＰｔＩ（プロパン‐１，３‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（６ｇ）の合成と分析的特性評価
【化７６】
2021507947.tif 000116
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔＩ２（プロパン‐１，３‐ジアミン）（３ｆ）（３９．２ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を２５℃で１６．５時間撹拌し、次に３０℃で５時間、４０℃で１８時間、最後に５０℃で５時間続けた。この時点で、反応混合物は９７．３％の生成物と２．７％の出発物質を含んでいた。
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥して、無色の固体（５．２ｍｇ、１３．２％収率）を得た。
【０１８８】
【数３９】
2021507947.tif 000117
【０１８９】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．９％の純度（保持時間１９．６分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、２２３ｎｍの波長で測定）であることを示した。
【０１９０】
６．８．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｈ）の合成と分析的特性評価
【化７７】
2021507947.tif 000118
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ２（３ｇ）（４０．４ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を２５℃で１６．５時間撹拌し、次に３０℃で５時間、４０℃で１８時間、最後に５０℃で５時間続けた。この時点で、反応混合物は９３．４％の生成物と２．１％の出発物質を含んでいた。
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（１６．１ｍｇ、４０．０％収率）が得られた。
【０１９１】
【数４０】
2021507947.tif 000119
【０１９２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．９％の純度（保持時間１８．７分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、１８分、２２３ｎｍの波長で測定）であることを示した。
【０１９３】
６．９．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｉ）の合成と分析的特性評価
【化７８】
2021507947.tif 000120
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）Ｉ２（３ｈ）（４２．２ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３３３μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を４０℃で２０時間撹拌した。この時点で、反応混合物は６９．３％の生成物と１７．０％の出発物質を含んでいた。
【０１９４】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜８０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（４．８ｍｇ、収率１１．６％）が得られた。
【０１９５】
【数４１】
2021507947.tif 000121
【０１９６】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９５．９％の純度（保持時間１３．２分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２７３ｎｍで測定）であることを示した。
【０１９７】
６．１０．［ｉｎｄ‐ｐｙ‐Ｐｔ（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオール）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｊ）の合成と分析的特性評価
【化７９】
2021507947.tif 000122
Ｎ‐（２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）エチル）‐２‐（ピリジン‐４‐イル）アセトアミド（Ｌ３）（ｉｎｄ‐ｐｙ；１４．０ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオール）Ｉ２（３ｉ）（４７．０ｍｇ、７５μｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（５００μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１０．４５μＬ、７５μｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を５０℃で２５時間撹拌した。この時点で、反応混合物は８２．６％の生成物と５．８％の出発物質を含んでいた。
【０１９８】
反応混合物を３５％ＭｅＯＨ／水（２．０ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜７０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、ベージュ色の固体（２１．０ｍｇ、収率４７．１％）が得られた。
【０１９９】
【数４２】
2021507947.tif 000123
【０２００】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９．２％の純度であることを示した（注：生成物は位置異性体とエピマーの混合物として得られたため、いくつかのピークが観察された。保持時間１６．８〜１７．６分；勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、波長２７３ｎｍで１８分測定）。
【０２０１】
６．１１．錯体［Ｐｔ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｋ）の合成と分析的特性評価
【化８０】
2021507947.tif 000124
【０２０２】
（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ（Ｌ６）（１６ｍｇ、２０μｍｏｌ、１．０当量）を充填したＨＰＬＣバイアルに、ＤＭＦ（２００μＬ）、Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（１５．１ｍｇ、３０μｍｏｌ、１．５当量）、及びＴＥＡ（４．１３μＬ、３０μｍｏｌ、１．５当量）を加えた。得られた混合物を６０℃で２０時間振とうした。反応混合物を水／ＭｅＯＨ（７：３、３ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３０〜５０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を収集し、初期容量の約２／３に減らした。水（約５ｍＬ）を加え、混合物を凍結乾燥し、赤色の固体（１１ｍｇ、４２．７％収率）を得た。生成物を２０ｍＭ  ＮａＩ水溶液に溶解し、５ｍＭ溶液として保存した。
【０２０３】
【数４３】
2021507947.tif 000125
【０２０４】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９５．７％の純度であることを示した（保持時間１３．８分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長４３０ｎｍで測定）
【０２０５】
６．１２．錯体［（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｙ‐Ｐｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｌ）の合成と分析的特性評価
【化８１】
2021507947.tif 000126
【０２０６】
（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｙ（Ｌ１）（１０．０ｍｇ、１２μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ２（３ｆ）（２６．４ｍｇ、４８μｍｏｌ、４当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（３７５μＬ）に溶解した。トリエチルアミン（６．９２μＬ、４８μｍｏｌ、４当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を４０℃で１６時間撹拌した。この時点で、反応混合物は８１．０％の生成物を含み、出発物質を含まなかった 
【０２０７】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３０〜５５％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を凍結乾燥すると、無色の固体（７．６ｍｇ、４６．０％収率）が得られた。
【０２０８】
【数４４】
2021507947.tif 000127
【０２０９】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９６．０％の純度であることを示した（保持時間１４．０分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長４３０ｎｍで測定）。
【０２１０】
６．１３．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ２‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｍ）の合成と分析的特性評価
【化８２】
2021507947.tif 000128
【０２１１】
６．１３．１．配位子ＡＦ‐ＰＥＧ２‐ウレア‐ｐｉｐ（Ｌ７）の合成
【化８３】
2021507947.tif 000129
【０２１２】
ＤＭＦ（１．３３ｍＬ）に溶解したアウリスタチンＦ（ＡＦ）（４０．０ｍｇ、５４μｍｏｌ、１．０当量）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｔｅｒｔ‐ブチル４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２、４‐ジアザドデシル）ピペリジン‐１‐カルボキシラート（６２．５ｍｇ、１６１μｍｏｌ、３．０当量；合成は、Sijbrandi et al., Cancer Res. 2017, 72, 257-267に記載されている）に添加した。続いて、ＨＡＴＵ（４０．８ｍｇ、１０７μｍｏｌ、２．０当量）とＤＩＰＥＡ（２９μＬ、１６１μｍｏｌ、３．０当量）を加え、混合物を氷浴中で１．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、水／ＭｅＣＮ（３．５：１、３ｍＬ）に溶解し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３０〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の固体（５６ｍｇ、収率８５％）をもたらした。
【０２１３】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物化合物Ｌ７‐Ｂｏｃが１００％の純度であることを示した（保持時間１９．８分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２１０ｎｍで測定）。
【０２１４】
【数４５】
2021507947.tif 000130
【０２１５】
得られた化合物Ｌ７‐ＢｏｃをＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（２ｍＬ）を加えた。混合物を室温で４５分間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残留物を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で前洗浄したＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＳＣＸ‐２カラムにロードした。カラムを１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２０ｍＬ）で洗浄し、生成物をＤＣＭ（１：１）中の１Ｍメタノール性アンモニアで溶出した。合わせた生成物画分を減圧下で濃縮し、ＭｅＯＨと数回共蒸発させて痕跡量のアンモニアを除去し、無色の固体（３４ｍｇ、７３％収率）を得た。
【０２１６】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９％の純度であることを示した（保持時間９．２分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２１７】
【数４６】
2021507947.tif 000131
【０２１８】
６．１３．２．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｍ）の合成
【化８４】
2021507947.tif 000132
【０２１９】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１５．０ｍｇ、１５μｍｏｌ、１．０当量）とＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２２．５ｍｇ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）にアルゴン雰囲気下で溶解した。ジイソプロピルアミン（７．７１μＬ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。この時点で、反応混合物は１００．０％の生成物を含んでいた。
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１８．０ｍｇ、７５．０％収率）。
【０２２０】
【数４７】
2021507947.tif 000133
【０２２１】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９８．９％の純度であることを示した（保持時間１０．３分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２２２】
【数４８】
2021507947.tif 000134
【０２２３】
６．１４．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｎ）の合成
【化８５】
2021507947.tif 000135
【０２２４】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１５．０ｍｇ、１５μｍｏｌ、１．０当量）とＰｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン））Ｉ２（３ｂ）（２４．８ｍｇ、４４μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（７．７１μＬ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で４時間撹拌した。この時点で、反応混合物は１００．０％の生成物を含んでいた。
【０２２５】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１５．６ｍｇ、５９．０％収率）。
【０２２６】
【数４９】
2021507947.tif 000136
【０２２７】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９．４％の純度であることを示した（保持時間１１．０分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２２８】
６．１５．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（（１Ｓ，２Ｓ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｏ）の合成
【化８６】
2021507947.tif 000137
【０２２９】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１６．０ｍｇ、１６μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（（１Ｓ，２Ｓ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン））Ｉ２（３ｃ）（２６．１ｍｇ、４７μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（８．２３μＬ、４７μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した。この時点で、反応混合物は１００．０％の生成物を含んでいた。反応混合物を水／ＭｅＯＨ溶液（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１８．４ｍｇ、７１．１％収率）。
【０２３０】
【数５０】
2021507947.tif 000138
【０２３１】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９６．６％の純度であることを示した（保持時間１１．３分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２３２】
６．１６．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（（１Ｒ，２Ｓ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｐ）の合成
【化８７】
2021507947.tif 000139
【０２３３】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；２０．０ｍｇ、２０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（１Ｒ，２Ｓ）‐シクロヘキサン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｄ）（３３．２ｍｇ、５９μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（１０．２８μＬ、５９μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：４０分で３５〜１００％Ｂ、Ａ：９５／５  水／ＭｅＯＨ＋０．１％ＴＦＡ及びＢ：５／９５  水／ＭｅＯＨ＋０．１％ＴＦＡ）。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（２２．１ｍｇ、収率６６．９％）。
【０２３４】
【数５１】
2021507947.tif 000140
【０２３５】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９８．６％の純度であることを示した（保持時間１１．４分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２３６】
６．１７．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｑ）の合成
【化８８】
2021507947.tif 000141
【０２３７】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；２０．０ｍｇ、２０μｍｏｌ、１．０当量）とＰｔ（Ｎ１，Ｎ２‐ジメチルエタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ｅ）（３１．７ｍｇ、５９μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（１０．２８μＬ、５９μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：４０分で３５〜１００％Ｂ、Ａ：９５／５  水／ＭｅＯＨ＋０．１％ＴＦＡ及びＢ：５／９５  水／ＭｅＯＨ＋０．１％ＴＦＡ）によって行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（２７．６ｍｇ、８４．８％収率）。
【０２３８】
【数５２】
2021507947.tif 000142
【０２３９】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．０％の純度であることを示した（保持時間１１．０分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２４０】
６．１８．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（プロパン‐１，３‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｒ）の合成
【化８９】
2021507947.tif 000143
【０２４１】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１６．０ｍｇ、１６μｍｏｌ、１．０当量）とＰｔＩ２（プロパン‐１，３‐ジアミン）（３ｆ）（２４．７ｍｇ、４７μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（８．２３μＬ、４７μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１５．４ｍｇ、収率５９．６％）。
【０２４２】
【数５３】
2021507947.tif 000144
【０２４３】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９２．０％の純度であることを示した（保持時間１０．５分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２４４】
６．１９．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｓ）の合成
【化９０】
2021507947.tif 000145
【０２４５】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１５．０ｍｇ、１５μｍｏｌ、１．０当量）とＰｔ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）Ｉ２（３ｇ）（２３．９ｍｇ、４４μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（７．７１μＬ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。この時点で、反応混合物は１００．０％の生成物を含んでいた。
【０２４６】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１４．５ｍｇ、５９．４％収率）。
【０２４７】
【数５４】
2021507947.tif 000146
【０２４８】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９４．４％の純度であることを示した（保持時間１０．１分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２４９】
６．２０．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｔ）の合成
【化９１】
2021507947.tif 000147
【０２５０】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１５．０ｍｇ、１５μｍｏｌ、１．０当量）とＰｔ（（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）Ｉ２（３ｈ）（２４．８ｍｇ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を、アルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（７．７１μＬ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。この時点で、反応混合物は１００．０％の生成物を含んでいた。
【０２５１】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（８．６ｍｇ、３４．７％収率）。
【０２５２】
【数５５】
2021507947.tif 000148
【０２５３】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）により、生成物は９８．７％の純度であることを示した（保持時間１１．６分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２５４】
６．２１．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオール）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｕ）の合成
【化９２】
2021507947.tif 000149
【０２５５】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１５．０ｍｇ、１５μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）‐３，４‐ジアミノ‐６‐（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピラン‐２，５‐ジオール）Ｉ２（３ｉ）（２７．８ｍｇ、４４μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピルエチルアミン（７．７１μＬ、４４μｍｏｌ、３．０当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で３．５時間撹拌した。この時点で、反応混合物は63.7％の生成物を含んでいた。
【０２５６】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１０．５ｍｇ、収率４０．８％）。
【０２５７】
【数５６】
2021507947.tif 000150
【０２５８】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９８．９％の純度であることを示した（注：生成物は、位置異性体とエピマーの混合物として得られ、幅広いピークとして観察された。保持時間９．５分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２５９】
６．２２．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）‐６‐メトキシ‐２‐フェニルヘキサヒドロピラノ［３，２‐ｄ］［１，３］ジオキシン‐７，８‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｖ）の合成
【化９３】
2021507947.tif 000151
【０２６０】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１６．０ｍｇ、１６μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）‐６‐メトキシ‐２‐フェニルヘキサヒドロピラノ［３，２‐ｄ］［１，３］ジオキシン‐７，８‐ジアミン）Ｉ２（３ｊ）（３４．４ｍｇ、４７μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（８．２３μＬ、４７μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（２１．６ｍｇ、収率７４．３％）。
【０２６１】
【数５７】
2021507947.tif 000152
【０２６２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９６．３％の純度であることを示した（注：生成物は位置異性体の混合物として得られたため、２つのピークが観察された。保持時間１２．８分と１３．２分。勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２６３】
６．２３．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（２‐（（２‐アミノエチル）アミノ）エタン‐１‐オール）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｗ）の合成
【化９４】
2021507947.tif 000153
【０２６４】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１６．０ｍｇ、１６μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（２‐（（２‐アミノエチル）アミノ）エタン‐１‐オール）Ｉ２（３ｋ）（２６．１ｍｇ、４７μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（８．２３μＬ、４７μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１７．４ｍｇ、収率６６．２％）。
【０２６５】
【数５８】
2021507947.tif 000154
【０２６６】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９８．８％の純度であることを示した（注：生成物はおそらく（位置）異性体の混合物として得られたため、３つのピークが観察された；保持時間９．０分  、１０．１分、１０．４分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２１０ｎｍで測定）。
【０２６７】
６．２４．錯体［ＡＦ‐ＰＥＧ2‐ウレア‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール））Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｘ）の合成
【化９５】
2021507947.tif 000155
【０２６８】
Ｎ‐（３‐オキソ‐１‐（ピペリジン‐４‐イル）‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデカン‐１２‐イル）ＡＦアミド（Ｌ７）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１６．０ｍｇ、１６μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール））Ｉ２（３ｌ）（２８．２ｍｇ、４７μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（８．２３μＬ、４７μｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（１０．５ｍｇ、収率３８．９％）。
【０２６９】
【数５９】
2021507947.tif 000156
【０２７０】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９３．７％の純度であることを示した（注：生成物はおそらく立体異性体の混合物として得られたため、２つのピークが観察された；保持時間９．０分と１０．２分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２１０ｎｍで測定）。
【０２７１】
６．２５．錯体［ＡＦ‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｙ）の合成と分析的特性評価
【化９６】
2021507947.tif 000157
【０２７２】
６．２５．１．配位子ＡＦ‐ｐｉｐ（Ｌ８）の合成
【化９７】
2021507947.tif 000158
【０２７３】
ＤＭＦ（１．００ｍＬ）に溶解したアウリスタチンＦ（ＡＦ）（３０．０ｍｇ、４０μｍｏｌ、１．０当量）を、４‐（アミノメチル）ピペリジン‐１‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチル（２２．９ｍｇ、６０μｍｏｌ、１．５当量）に加えた。続いて、ＨＡＴＵ（１２．９ｍｇ、６０μｍｏｌ、１．５当量）とＤＩＰＥＡ（１３．９６μＬ、１０１μｍｏｌ、２．５当量）を加え、混合物を氷浴で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、水／ＭｅＣＮ（３．５：１、３ｍＬ）に溶解し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を濃縮して、無色の固体（４４．５ｍｇ、定量）を得た。
【０２７４】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物化合物Ｌ８‐Ｂｏｃが１００．０％の純度であることを示した（９５．９％化合物Ｌ８‐Ｂｏｃ：保持時間１４．９分及び４．１％Ｂｏｃ‐脱保護化合物化合物Ｌ８：保持時間９．３分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、波長２１０ｎｍで測定）。
【０２７５】
得られた化合物Ｌ８‐ＢｏｃをＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（２ｍＬ）を加えた。混合物を室温で４５分間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残留物を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で前洗浄したＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＳＣＸ‐２カラムにロードした。カラムを１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２０ｍＬ）で洗浄し、生成物をＤＣＭ（１：１）中の１Ｍメタノール性アンモニアで溶出した。合わせた生成物画分を濃縮し、ＭｅＯＨで数回共蒸発させて、痕跡量のアンモニアを除去し、無色の固体（２２．７ｍｇ、収率６３．０％）を得た。
【０２７６】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が１００％の純度であることを示した（保持時間９．３分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２７７】
【数６０】
2021507947.tif 000159
【０２７８】
６．２５．２．錯体［ＡＦ‐ｐｉｐ‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｙ）の合成
【化９８】
2021507947.tif 000160
【０２７９】
アウリスタチンＦピペリジニルアミド（Ｌ８）（ＡＦ‐ｐｉｐ；１５．０ｍｇ、１８μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２７．２ｍｇ、５３μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解した。Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピルエチルアミン（９．３３μＬ、５３μｍｏｌ、３．０当量）を加え、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を６０℃で３．５時間撹拌した。この時点で、反応混合物は１００．０％の生成物を含んでいた。
【０２８０】
反応混合物を水／ＭｅＯＨ（２：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ、勾配：３５〜１００％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を濃縮して、無色の油を得た（１５．３ｍｇ、５９．１％収率）。
【０２８１】
【数６１】
2021507947.tif 000161
【０２８２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９７．５％の純度であることを示した（保持時間１０．５分；勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２８３】
６．２６．錯体［Ｎ‐（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパンアミド‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｚ）の合成及び分析的特性
【化９９】
2021507947.tif 000162
【０２８４】
６．２６．１．  ２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパノアートの合成
【化１００】
2021507947.tif 000163
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の２，３，５，６‐テトラフルオロフェノール（５７６ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液に、３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパン酸（４７７ｍｇ、３．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。反応混合物を室温で５分間攪拌し、ＥＤＣ（７２６ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ、１．２当量）を室温で加えた。得られた懸濁液を室温で６０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、混合物を０．１ｍ  ＨＣｌ水溶液（水２２．５ｍＬ及び１Ｍ  ＨＣｌ  ２．５ｍＬから調製）で洗浄した。その後、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３溶液とブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥、蒸発乾固して、粗生成物を無色の固体（３１７ｍｇ、収率３３．６％）として得た。
【０２８５】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９６．５％の純度であることを示した（保持時間１０．９分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２８６】
【数６２】
2021507947.tif 000164
【０２８７】
６．２６．２．配位子Ｎ‐（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパンアミド（Ｎ３‐ＰＥＧ４‐ｐｙ、Ｌ９）の合成
【化１０１】
2021507947.tif 000165
１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデカン‐１‐アミン（４７．３μＬ、２０１μｍｏｌ、１．０当量）及び２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパノアート（６０ｍｇ、２０１μｍｏｌ、１．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＭｅＣＮ（２ｍＬ）に溶解した。この混合物を２．５時間撹拌した（反応の進行は、溶離液としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：２及びｉＰｒＯＨ／ＮＨ３（ａｑ．）＝１０：１を使用するＴＬＣによって監視した）。次に、ＴＥＡ（２７．９μＬ、２０１μｍｏｌ、１．０当量）を加え、混合物を２０時間撹拌した。その後、溶媒を減圧下で除去して、無色の油状残留物（１１９ｍｇ）を得た。これを、続いてカラムクロマトグラフィー（溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３（ａｑ．）＝１００：５：１→１００：７．５：１→１００：１０：１を使用した段階的勾配）で精製した。生成物含有画分を減圧下で蒸発させて、無色の油を得た（６６ｍｇ、８３％収率）。
【０２８８】
【数６３】
2021507947.tif 000166
【０２８９】
６．２６．３．錯体［Ｎ‐（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパンアミド‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｚ）の合成
【化１０２】
2021507947.tif 000167
【０２９０】
Ｎ‐（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパンアミド（Ｌ９）（Ｎ３‐ＰＥＧ４‐ｐｙ；２２．５ｍｇ、５７μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（８７．０ｍｇ、１７１μｍｏｌ、３．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（５００μＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（２９．７μＬ、１７１μｍｏｌ、３．０当量）を加え、反応混合物を４０℃で２４時間撹拌し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。反応混合物を１０ｍＭ  ＮａＩ／ＭｅＯＨ混合物（４：１、２．５ｍＬ）で希釈し、０．２μｍシリンジフィルターでろ過した。精製は、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２２ｘ２５０ｍｍ；勾配：２０〜７５％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、３６分）で行った。生成物画分を減圧下で濃縮して、無色の油を得た（３６．８ｍｇ、７２．６％収率）。
【０２９１】
【数６４】
2021507947.tif 000168
【０２９２】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９５．７％の純度であることを示した（保持時間１６．６分、勾配：５〜５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２１０ｎｍの波長で測定）。
【０２９３】
６．２７．錯体［Ｎ１，Ｎ３‐ビス（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐Ｎ５‐（ピリジン‐４‐イルメチル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキサミド‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ａａ）の合成と分析的特性評価
【化１０３】
2021507947.tif 000169
【０２９４】
６．２７．１．トリス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキシラートの合成
【化１０４】
2021507947.tif 000170
【０２９５】
アルゴン雰囲気下で、ＤＩＰＥＡ（１３．９ｍＬ、８０ｍｍｏｌ、４．０当量）及び２，３，５，６‐テトラフルオロフェノール（１０．３ｇ、６０．４ｍｍｏｌ、３．０当量）を乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、続いて０℃で乾燥ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中のベンゼン‐１，３，５‐トリカルボニルトリクロリド（３．５７ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の激しく攪拌された溶液に２．５時間かけて滴加した。添加後、混合物を４０分間撹拌し、６℃まで温めた後、周囲温度まで徐々に加熱し、さらに１時間撹拌した。次に、反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌ（３２０ｍＬ）及び１Ｍ  ＮａＯＨ（３２０ｍＬ）で洗浄した。アルカリ性水層をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。溶媒を除去した後、淡褐色の固体（１２．１ｇ、収率９３％）が得られた。
【０２９６】
【数６５】
2021507947.tif 000171
【０２９７】
６．２７．２．ビス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）５‐（（ピリジン‐４‐イルメチル）カルバモイル）イソフタラートの合成
【化１０５】
2021507947.tif 000172
【０２９８】
トリス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキシラート（５．００ｇ、７．６４ｍｍｏｌ、３．０当量）をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解した。この溶液に、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のピリジン‐４‐イルメタンアミン（２５９μＬ、２．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）とＴＥＡ（７１０μＬ、５．０９ｍｍｏｌ、２．０当量）の混合物を、激しく攪拌しながら１４０分かけて滴加した。次に、混合物をさらに１．５時間撹拌した後、ＴＬＣ（溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３（ａｑ．）＝１００：１０：１）は、ピリジン‐４‐イルメタンアミンの完全な消費を示した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（３：１２、１５ｍＬ）に懸濁し、超音波浴で超音波処理し、濾過し、フィルターケーキをシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：２、４ｍＬ）で洗浄した。ＴＬＣにより、フィルターケーキにトリス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキシラートの出発物質が含まれ、濾液にはこの出発物質と一緒に生成物が含まれることが明らかになった。したがって、濾液を減圧下で蒸発させ、粗残留物をシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１．５：６、７．５ｍＬ）に懸濁し、超音波浴で超音波処理し、濾過し、フィルターケーキをシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：４、３ｍＬ）で洗浄した。回収されたトリス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキシラートの収量は１．６７ｇ（適用量の３３．３％）であった。最後に、濾液を減圧下で蒸発させ、残留物をシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１、１２ｍＬ）に溶解し、カラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２：１→１：１を溶離液として使用する段階的勾配）で精製した。収集した生成物含有画分を減圧下で蒸発させ、残留物をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解した。得られた有機相を１Ｍ  ＮａＯＨ（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて無色の固形物（６９１ｍｇ、４６％収率）を得た。
【０２９９】
【数６６】
2021507947.tif 000173
【０３００】
６．２７．３．配位子Ｎ１，Ｎ３‐ビス（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐Ｎ５‐（ピリジン‐４‐イルメチル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキサミド（ビス‐Ｎ３‐ＰＥＧ４‐ベンゼン‐ｐｙ、Ｌ１０）
【化１０６】
2021507947.tif 000174
【０３０１】
ビス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）５‐（（ピリジン‐４‐イルメチル）カルバモイル）イソフタラート（８８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）を乾燥ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（５：２、７ｍＬ）に溶解し、続いて、１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデカン‐１‐アミン（７９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、２．０当量、ＥｔＯＡｃ（０．５ｍＬ）に溶解）、及びＴＥＡ（６１．７μＬ、０．４４ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。得られた混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で２０時間撹拌した。ＴＬＣ（溶離液としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１：２及びＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３（ａｑ．）＝１００：１０：１）は、ビス（２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）５‐（（ピリジン‐４‐イルメチル）カルバモイル）イソフタラート及び１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデカン‐１‐アミンの両方の完全な消費を示した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１→１００：２→１００：３→１００：５→１００：７）。溶媒を蒸発させた後、収集された生成物含有画分は、淡いオレンジ色の油（９６ｍｇ、８２％収率）を与えた。
【０３０２】
【数６７】
2021507947.tif 000175
【数６８】
2021507947.tif 000176
【０３０３】
６．２７．４．錯体Ｎ１，Ｎ３‐ビス（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐Ｎ５‐（ピリジン‐４‐イルメチル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキサミド‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ａａ）の合成
【化１０７】
2021507947.tif 000177
【０３０４】
Ｎ１，Ｎ３‐ビス（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐Ｎ５‐（ピリジン‐４‐イルメチル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキサミド（Ｌ１０）（ビス‐Ｎ３‐ＰＥＧ４‐ベンゼン‐ｐｙ；３９．５ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）及びＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２５．４ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＭＦ（５００μＬ）に溶解して均一な黄色の混合物をもたらした。反応混合物を５０℃で１９時間撹拌し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。次に、追加のＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２５．４ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を反応混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２４時間撹拌し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。その後、追加のＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）（２５．４ｍｇ、５０μｍｏｌ、１．０当量）を反応混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２４時間撹拌し、反応の経過をＨＰＬＣで追跡した。この時点で、反応混合物は９８．１％の生成物を含んでいた。
【０３０５】
反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、濾紙で濾過して、沈殿した過剰なＰｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ２（３ａ）を除去した。濾液をＲＰ‐Ｃ１８（ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）、１５‐２５μｍ；５００ｍｇ、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）で前洗浄）を含むカラムに適用した。ランアウトは捨てた。その後、カラムを水／ＭｅＯＨ（９：１、９ｍＬ）で、及び水／ＭｅＯＨ（８：２、５ｍＬ）で洗浄した。その後、生成物を水／ＭｅＯＨ（２：８、４ｍＬ）で溶出した。ＨＰＬＣ分析は、この画分が９９．６％の生成物を含むことを示した。この画分を、水（１ｍＬ）中のＮａＩ（１３．２ｍｇ）溶液と混合した。混合物を水（５ｍＬ）でさらに希釈し、減圧下で濃縮した。凍結後、混合物を凍結乾燥して黄色のフィルムを得た（６２．０ｍｇ、ＮａＩ含有量を補正：４８．８ｍｇ、７６．０％収率）。この材料を使用して、１０ｍＭ  ＮａＩ水溶液で５ｍＭ溶液を調製した。この形で材料が使用され、保管された。
【０３０６】
【数６９】
2021507947.tif 000178
【０３０７】
ＨＰＬＣ（Ｇｒａｃｅ  Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μｍカラム、２５ｘ４．６ｍｍ）は、生成物が９９．０％の純度であることを示した（保持時間１１．２分、勾配：２０〜１００％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ水溶液／０．１％ＴＦＡ、２０分、２２３ｎｍの波長で測定）。
【０３０８】
異なるハロゲン化物塩（ヨウ化物、臭化物又は塩化物放出剤）を使用した結合効率の比較
【化１０８】
2021507947.tif 000179
【０３０９】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；３５．５μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管用バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、水（１５μＬ）、異なるハロゲン化物塩を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（６．１５μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し（Ａ：添加剤なし、Ｂ：２０００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．１；Ｃ：５００ｍＭ  ＮａＢｒ、ｐＨ８．１；Ｄ：１００ｍＭ  ＮａＩ、ｐＨ８．１）、［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（４ａ）（５．０μＬ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ中５ｍＭ、５．０当量）を加えた。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で１時間、２時間、４時間、６時間、及び２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（６１．７μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分インキュベートした。
【０３１０】
結合効率は４３０ｎｍのＵＶ検出でＳＥＣによって決定され、タンパク質に結合した（Ｆｅ）ＤＦＯキレート画分の、結合していない低ＭＷ画分も含む（Ｆｅ）ＤＦＯ総量に対するパーセンテージとして定義された。
【０３１１】
２４時間の結合時間後、結合効率は４０％（Ａ：追加のハロゲン化物塩なし）、３７％（Ｂ：２００ｍＭ  ＮａＣｌ）、５８％（Ｃ：５０ｍＭ  Ｂｒ）、及び７９％（Ｄ：１０ｍＭ  ＮａＩ；図１）であった。
【０３１２】
さまざまなモノクローナル抗体（細胞結合部分）を使用した結合効率の比較
【化１０９】
2021507947.tif 000180
【０３１３】
モノクローナル抗体を、その製剤バッファーからＰＢＳにスピンろ過（３５．５μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）で再バッファーし、ヨウ化ナトリウム（１００ｍＭ  ＮａＩ；反応混合物中のＮａＩの最終濃度は１０ｍＭ）を含有する２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（６．１５μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（４ａ）（２０．０μＬ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ中１．２５ｍＭ、５．０当量）を加えた。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（６１．７μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。
【０３１４】
結合効率は４３０ｎｍのＵＶ検出でＳＥＣによって決定され、タンパク質に結合した（Ｆｅ）ＤＦＯキレート画分の、結合していない低ＭＷ画分も含む（Ｆｅ）ＤＦＯ総量に対するパーセンテージとして定義された。
【０３１５】
２４時間の結合時間後、結合効率は７８％（トラスツズマブ）、７５％（セツキシマブ）、７４％（リツキシマブ）、７７％（オファツムマブ）、７８％（オビヌツズマブ）、７１％（ｃＵ３６）、及び６９％（ＩｇＧ‐Ｂ１２）；図２）であった。
【０３１６】
異なるヨウ化物又は臭化物塩（異なるカチオンを有するヨウ化物又は臭化物放出剤）を使用した結合効率の比較
【化１１０】
2021507947.tif 000181
【０３１７】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；３５．５μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）をスピンろ過により製剤バッファーからＰＢＳに再バッファーし、ヨウ化物塩（１００ｍＭ  Ｉ−塩；反応混合物中のＩ−の最終濃度は、カチオンに応じて１０〜４０ｍＭであった）又は臭化物塩（（５００ｍＭ  Ｂｒ−塩；反応混合物中のＢｒ−の最終濃度は５０ｍＭであった））を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（６．１５μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（４ａ）（２０．０μＬ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ中１．２５ｍＭ、５．０当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（６１．７μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。
【０３１８】
結合効率は４３０ｎｍのＵＶ検出でＳＥＣによって決定され、タンパク質に結合した（Ｆｅ）ＤＦＯキレート画分の、結合していない低ＭＷ画分も含む（Ｆｅ）ＤＦＯ総量に対するパーセンテージとして定義された。
【０３１９】
２４時間の結合時間後、結合効率は次のとおりであった：４０％（塩なし）、３６％（陰性対照としてのＮａＩＯ３）、５３％（ＮａＢｒ）、５４％（ＫＢｒ）、５４％（ＬｉＢｒ）、７３％（ＮａＩ）、７３％（ＫＩ）、７３％（ＬｉＩ）、７３％（ＣｓＩ）、７１％（ＲｂＩ）、５５％（ＮＨ４Ｉ）、６５％（ＭｇＩ２）、６５％（ＣａＩ２）、６１％（ＳｒＩ２）、６８％（ＭｎＩ２）、７１％（ＡｌＩ３）、７０％（ＩｎＩ３）、６８％（ＧｅＩ４）、７０％（ＣＨ６Ｎ３Ｉ、ヨウ化グアニジウム）、７１％（（ＣＨ３）４ＮＩ、ヨウ化テトラメチルアンモニウム）、５１％（Ｃ７Ｈ１２ＮＳＯＩ、５‐（２‐ヒドロキシエチル）‐３，４‐ジメチルチアゾール‐３‐イウムヨウ化物）、及び７１％（（ＣＨ３）３ＳＯＩ、ヨウ化トリメチルスルホキソニウム）；図３）。
【０３２０】
異なるｐＨ値（異なるバッファーを使用）での結合効率の比較
【化１１１】
2021507947.tif 000182
【０３２１】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；３５．５μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、その製剤バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＮａＩ（１００ｍＭ；反応混合物中のＩ−の最終濃度は１０ｍＭであった）を含む２００ｍＭバッファー（６．１５μＬ、最終バッファー濃度は２０ｍＭであった；ｐＨはｐＨメーターで測定した）で希釈し、［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（４ａ）（２０．０μＬ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ中１．２５ｍＭ、５．０当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（６１．７μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。
【０３２２】
結合効率は４３０ｎｍのＵＶ検出でＳＥＣによって決定され、タンパク質に結合した（Ｆｅ）ＤＦＯキレート画分の、結合していない低ＭＷ画分も含む（Ｆｅ）ＤＦＯ総量に対するパーセンテージとして定義された。
【０３２３】
２４時間の結合時間後、結合効率は次のとおりであった:３％（酢酸バッファー、ｐＨ３．６５）、７％（酢酸バッファー、ｐＨ４．１３）、１４％（酢酸バッファー、ｐＨ４．７３）、４４％（酢酸バッファー、ｐＨ５．１６）、５９％（酢酸バッファー、ｐＨ５．５７）；４６％（リン酸バッファー、ｐＨ５．７９）、５３％（リン酸バッファー、ｐＨ６．１０）、５７％（リン酸バッファー、ｐＨ６．５２）、６６％（リン酸バッファー、ｐＨ６．９９）、６９％（リン酸バッファー、ｐＨ７．４１）、７３％（リン酸バッファー、ｐＨ７．８５）、７３％（リン酸バッファー、ｐＨ８．２７）；６３％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ６．９０）、６２％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ６．９７）、６８％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．１６）、６８％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．４２）、７２％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．６６）、７６％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．８６）、７６％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ８．０１）、７６％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ８．１３）、７６％（ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ８．２７）；６８％（トリシンバッファー、ｐＨ７．４８）、７０％（トリシンバッファー、ｐＨ７．５９）、７２％（トリシンバッファー、ｐＨ７．８７）、７５％（トリシンバッファー、ｐＨ８．０２）、７５％（トリシンバッファー、ｐＨ８．１３）、７４％（トリシンバッファー、ｐＨ８．２５）、７４％（トリシンバッファー、ｐＨ８．３７）、７７％（トリシンバッファー、ｐＨ８．５７）、７８％（トリシンバッファー、ｐＨ８．７６）；７５％（炭酸バッファー、ｐＨ８．９５）、７２％（炭酸バッファー、ｐＨ９．４５）、６８％（炭酸バッファー、ｐＨ９．９３）、及び６２％（炭酸バッファー、ｐＨ１０．５５）；図４）。
【０３２４】
実施例７：トラスツズマブ‐Ｌｘ複合体７ａ‐ｊの例
【化１１２】
2021507947.tif 000183
【化１１３】
2021507947.tif 000184
【化１１４】
2021507947.tif 000185
【化１１５】
2021507947.tif 000186
【化１１６】
2021507947.tif 000187
【０３２５】
７．１．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］ｎ（７ａ）；ｎ＝０〜６の合成と分析的特性評価。
【化１１７】
2021507947.tif 000188
【０３２６】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；３５．５μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、１００ｍＭ  ＮａＩを含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（６．１５μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、［ＰｔＣｌ（（Ｆｅ）ＤＦＯ‐ｓｕｃ‐ｐｉｐ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］＋ＴＦＡ−（４ａ）（２０．０μＬ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ中に８２５μＭ、３．３当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（６１．７μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３２７】
抗体の完全性は（ＥＤＴＡを使用してＦｅ（ＩＩＩ）を除去した後）ＳＥＣによって制御された：９６．８％モノマー。複合体７ａの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を実行して、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝２．１８（６６％の結合効率に対応）。トラスツズマブのフラグメントの錯体分布は、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ／ホスホルイメージャー分析によって決定された：％Ｈｃ＝８７％、％Ｌｃ＝１３％、％Ｆ（ａｂ‘）２＝３０％。
【０３２８】
７．２．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（エタン‐１，２‐ジアミン）］ｎ（７ｂ）；ｎ＝０〜６の合成と分析的特性評価
【化１１８】
2021507947.tif 000189
【０３２９】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；３５．５μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンフィルターで再バッファーし、１００ｍＭ  ＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（６．１５μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｃｌ（エタン‐１，２‐ジアミン）（４ｃ）（２０．０μＬ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ中８２５μＭ、３．３当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（６１．７μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３３０】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．２％のモノマー。複合体７ｂの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を実行して、ＤＡＲ及びトラスツズマブのフラグメントの錯体分布を決定した：ＤＡＲ＝２．８１（８５％の結合効率に対応）、％Ｈｃ＝８７％、％Ｌｃ＝１３％、％Ｆ（ａｂ’）２＝２２％、％Ｆａｂ＝１５％、％Ｆｃ＝８５％。
【０３３１】
７．３．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）］ｎ（７ｃ）の合成と分析的特性評価
【化１１９】
2021507947.tif 000190
【０３３２】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３３．４μＬ）で、及び１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（（１Ｒ，２Ｒ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）（６ｎ）（６．６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．３当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３３３】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．１％モノマー。複合体７ｃの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を行って、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝３．３（定量的結合効率に対応）。
【０３３４】
７．４．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（（１Ｓ，２Ｓ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン）］ｎ（７ｄ）の合成と分析的特性評価
【化１２０】
2021507947.tif 000191
【０３３５】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３４μＬ）で、及び１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（（（１Ｓ，２Ｓ）‐（−）‐１，２‐ジアミノシクロヘキサン））（６ｏ）（６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．０当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３３６】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．５％モノマー。ＳＥＣ‐ＭＳ分析を複合体７ｄの精製後に行い、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝３．０（９１％の結合効率に対応）。
【０３３７】
７．５．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（プロパン‐１，３‐ジアミン）］ｎ（７ｅ）の合成と分析的特性評価
【化１２１】
2021507947.tif 000192
【０３３８】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３４μＬ）で、及び１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（プロパン‐１，３‐ジアミン）（６ｒ）（６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．０当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３３９】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９６．３％のモノマー。複合体７ｅの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を実行して、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝２．７（９０％の結合効率に対応）。
【０３４０】
７．６  バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（１，３‐ジアミノプロパン‐２）‐オール）］ｎ（７ｆ）の合成と分析的特性評価
【化１２２】
2021507947.tif 000193
【０３４１】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；２３８μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンフィルターで再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（１０５．６μＬ）で、及び１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（４１．２μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（１，３‐ジアミノプロパン‐２‐オール）（６ｓ）（２８．５μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、４．２当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（４１１μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３４２】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．９％モノマー。複合体７ｆの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を実施して、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝２．７（６４％の結合効率に対応）。
【０３４３】
７．７．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）］ｎ（７ｇ）の合成と分析的特性評価
【化１２３】
2021507947.tif 000194
【０３４４】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３３．４μＬ）で、及び１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（（１Ｒ，２Ｒ）‐シクロブタン‐１，２‐ジイル）ジメタンアミン）（６ｔ）（６．６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．３当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３４５】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．０％モノマー。複合体７ｇの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を実行して、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝３．０（９１％の結合効率に対応）。
【０３４６】
７．８．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）‐６‐メトキシ‐２‐フェニルヘキサヒドロピラノ［３，２‐ｄ］［１，３］ジオキシン‐７，８‐ジアミン］ｎ（７ｈ）の合成と分析的特性評価
【化１２４】
2021507947.tif 000195
【０３４７】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３４μＬ）で、及び１００ｍＭ  ＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）‐６‐メトキシ‐２‐フェニルヘキサヒドロピラノ［３，２‐ｄ］［１，３］ジオキシン‐７，８‐ジアミン）（６ｖ）（６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．０当量）が添加された。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３４８】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９６．７％モノマー。ＳＥＣ‐ＭＳ分析は、複合体７ｈの精製後に実施され、ＤＡＲが決定された：ＤＡＲ＝２．２（７３％の結合効率に対応）。
【０３４９】
７．９．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（２‐（（２‐アミノエチル）アミノ）エタン‐１‐オール］ｎ（７ｉ）の合成と分析的特性評価
【化１２５】
2021507947.tif 000196
【０３５０】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３４μＬ）で、及び１００ｍＭ  ＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（２‐（（２‐アミノエチル）アミノ）エタン‐１‐オール）（６ｗ）（６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．０当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３５１】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．４％モノマー。複合体７ｉの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を行って、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝２．８（９３％の結合効率に対応）。
【０３５２】
７．１０．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））（２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール）］ｎ（７ｊ）の合成と分析的特性評価
【化１２６】
2021507947.tif 000197
【０３５３】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；７１μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、ＭｉｌｌｉＱ水（３４μＬ）で、及び１００ｍＭ  ＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（１２．３μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、Ｐｔ（アウリスタチンＦ‐（４‐（１２‐アミノ‐３‐オキソ‐７，１０‐ジオキサ‐２，４‐ジアザドデシル）ピペリジン））Ｉ（２，２’‐（エタン‐１，２‐ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン‐１‐オール））（６ｘ）（６μＬ、２０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、３．０当量）を加えた。サンプルをサーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（１２３．３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで４回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３５４】
抗体の完全性はＳＥＣによって制御された：９８．３％モノマー。複合体７ｊの精製後にＳＥＣ‐ＭＳ分析を実施して、ＤＡＲを決定した：ＤＡＲ＝２．６（８７％の結合効率に対応）。
【０３５５】
例８：銅を含まないクリックケミストリーで使用するための「半最終」化合物（ＳＦＭ）６ｚ及び６ａａから得られたアジドを含むトラスツズマブ‐Ｌｘ複合体８ａ‐ｂの例
【化１２７】
2021507947.tif 000198
【０３５６】
８．１．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（Ｎ３‐ＰＥＧ４‐ｐｙ）（エタン‐１，２‐ジアミン）］ｎ（８ａ）の合成と分析的特性評価
【化１２８】
2021507947.tif 000199
【０３５７】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；２３８μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ、３３ｎｍｏｌ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（４１．２μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、［Ｎ‐（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐３‐（ピリジン‐４‐イル）プロパンアミド‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ｚ）（２１．８μＬ、１０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、１０９ｎｍｏｌ、３．３当量）を添加した。サンプルをさらにｍｉｌｌｉＱ水（１１２．２μＬ）で希釈し、サーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（４１３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで１回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３５８】
８．２．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（Ｎ１，Ｎ３‐ビス（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル）‐Ｎ５‐（ピリジン‐４‐イルメチル）ベンゼン‐１，３，５‐トリカルボキサミド）（エタン‐１，２‐ジアミン）］ｎ（８ｂ）の合成と分析的特性評価
【化１２９】
2021507947.tif 000200
【０３５９】
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；２３８μＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ、３３ｎｍｏｌ、１．０当量）を、薬局保管バッファーからＰＢＳにスピンろ過により再バッファーし、１００ｍＭのＮａＩ溶液を含む２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（４１．２μＬ、ｐＨ８．１）で希釈し、［Ｎ１，Ｎ３‐ビス（１４‐アジド‐３，６，９，１２‐テトラオキサテトラデシル‐Ｐｔ（エタン‐１，２‐ジアミン）Ｉ］＋ＴＦＡ−（６ａａ）（２１．８μＬ、１０ｍＭ  ＮａＩ中５ｍＭ、１０９ｎｍｏｌ、３．３当量）を添加した。サンプルをｍｉｌｌｉＱ水（１１２．２μＬ）でさらに希釈し、サーモシェーカーで４７℃で２４時間インキュベートした後、チオ尿素溶液（４１３μＬ、Ｈ２Ｏ中２０ｍＭ）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製した後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで１回洗浄）を使用してスピンろ過し、その後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。
【０３６０】
例９：銅を含まないクリックケミストリーを介して複合体８ａから得られたトラスツズマブ‐Ｌｘ複合体９ａ‐ｆの例
【化１３０】
2021507947.tif 000201
【化１３１】
2021507947.tif 000202
【化１３２】
2021507947.tif 000203
【化１３３】
2021507947.tif 000204
【０３６１】
９．１．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（フルオロ５４５‐ＰＥＧ４‐ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４‐ピリジン）］ｎ（９ａ）の合成
【化１３４】
2021507947.tif 000205
【０３６２】
バイオ複合体８ａ（３０３μＬ、４．９５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ、１０ｎｍｏｌ、１．０当量）をＰＢＳ（２９７μＬ）で希釈し、ジベンゾシクロオクチン‐ＰＥＧ４‐Ｆｌｕｏｒ５４５（ＤＢＣＯ‐ＰＥＧ４‐Ｆｌｕｏｒ５４５；１０μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、２００ｎｍｏｌ、２０．０当量）を加えた。サンプルをサーモシェーカーで３７℃で２時間インキュベートした後、複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製し、その後３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで１回洗浄）を使用してスピン濾過し、その後、再構成され、ＰＢＳバッファーに保存された。結合により、９８．４％モノマーの複合体が得られた。
【０３６３】
９．２．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ‐ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４‐ピリジン）］ｎ（９ｂ）の合成
【化１３５】
2021507947.tif 000206
【０３６４】
バイオ複合体８ａ（５７．６μＬ、４．３４ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ、１．６５ｎｍｏｌ、１．０当量）をＤＭＳＯ（５７．６μＬ）で希釈し、ＢＤＰ  ＦＬ  ＤＢＣＯ（２μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、２０ｎｍｏｌ、１２．１当量）が添加された。サンプルをサーモシェーカーで３７℃で２時間インキュベートした後、複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製し、その後３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで１回洗浄）を使用してスピン濾過し、その後、再構成され、ＰＢＳバッファーに保存された。結合により、１００％モノマーの複合体が得られた。
【０３６５】
９．３．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（Ｃｙａｎｉｎｅ５  ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４‐ピリジン）］ｎ（９ｃ）の合成
【化１３６】
2021507947.tif 000207
【０３６６】
バイオ複合体８ａ（５７．６μＬ、４．３４ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ、１．６５ｎｍｏｌ、１．０当量）をＤＭＳＯ（５７．６μＬ）で希釈し、Ｃｙａｎｉｎｅ５  ＤＢＣＯ（２μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、２０ｎｍｏｌ、１２．１当量）を添加した。サンプルをサーモシェーカーで３７℃で２時間インキュベートした後、複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製し、その後３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで１回洗浄）を使用してスピン濾過し、その後、再構成され、ＰＢＳバッファーに保存された。結合により、９９．１％モノマーの複合体が得られた。
【０３６７】
９．４．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（ＤＦＯ‐ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４‐ピリジン）］ｎ（９ｄ）の合成
【化１３７】
2021507947.tif 000208
【０３６８】
バイオ複合体８ａ（３００μＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ、１０ｎｍｏｌ、１．０当量）をデフェロキサミン‐ＤＢＣＯ（ＤＦＯ‐ＤＢＣＯ；４μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、４０ｎｍｏｌ、４．０当量）と混合した。サンプルをサーモシェーカーで２５℃で２時間インキュベートした後、３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（０．９％ＮａＣｌで４回洗浄）を使用したスピンろ過により複合体を精製した後、再構成して０．９％ＮａＣｌバッファに保存した。結合により、９７．８％モノマーの複合体が得られた。
【０３６９】
９．５．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（ＭＭＡＦ‐ＰＥＧ４‐ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４‐ピリジン）］ｎ（９ｅ）の合成
【化１３８】
2021507947.tif 000209
【０３７０】
バイオ複合体８ａ（３００μＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ、１０ｎｍｏｌ、１．０当量）をＤＢＣＯ‐ＰＥＧ４‐ＭＭＡＦ（４μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、４０ｎｍｏｌ、４．０当量）と混合した。サンプルをサーモシェーカーで２５℃で２時間インキュベートした後、複合体を３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳで４回洗浄）を使用したスピンろ過で精製した後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。結合により、モノマーが９７．４％であり、ＤＡＲが２．４である複合体が得られた。
【０３７１】
９．６．バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（ＭＭＡＦ‐ＰＡＢ‐ｖｃ‐ＰＥＧ４‐ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４‐ピリジン）］ｎ（９ｆ）の合成
【化１３９】
2021507947.tif 000210
【０３７２】
バイオ複合体８ａ（３００μＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ、１０ｎｍｏｌ、１．０当量）をＤＢＣＯ‐ＰＥＧ４‐ｖｃ‐ＰＡＢ‐ＭＭＡＦ（４μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、４０ｎｍｏｌ、４．０当量）と混合した。サンプルをサーモシェーカーで２５℃で２時間インキュベートした後、複合体を３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳで４回洗浄）を使用したスピンろ過で精製した後、再構成してＰＢＳバッファーに保存した。結合により、モノマーが９７．４％であり、ＤＡＲが２．４である複合体が得られた。
【０３７３】
例１０：銅を含まないクリックケミストリーを介して複合体８ｂから得られたトラスツズマブ‐Ｌｘ複合体１０ａの例
１０．１  バイオ複合体トラスツズマブ‐［Ｐｔ（（Ｆｌｕｏｒ５４５‐ＰＥＧ４‐ＤＢＣＯ‐トリアゾール‐ＰＥＧ４）２‐ベンゼン‐ピリジン）］ｎ（１０ａ）の合成
【化１４０】
2021507947.tif 000211
【０３７４】
バイオ複合体８ｂ（３０３μＬ、４．９５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ、１０ｎｍｏｌ、１．０当量）をＰＢＳ（２９７μＬ）で希釈し、ジベンゾシクロオクチン‐ＰＥＧ４‐Ｆｌｕｏｒ５４５（ＤＢＣＯ‐ＰＥＧ４‐Ｆｌｕｏｒ５４５；２０μＬ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ、２００ｎｍｏｌ、２０．０当量）を加えた。サンプルをサーモシェーカーで３７℃で２時間インキュベートした後、複合体をＰＤ‐１０カラム（リン酸緩衝生理食塩水で平衡化）で精製し、その後３０ｋＤ  ＭＷＣＯフィルター（ＰＢＳバッファーで１回洗浄）を使用してスピン濾過し、その後、再構成され、ＰＢＳバッファーに保存された。結合により、９８．６％モノマーの複合体が得られた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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