(57)【要約】本開示は、慢性蕁麻疹の処置のための方法を提供する。具体的には、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体または前記抗体を含む組成物の投与を通じた、慢性蕁麻疹の処置のための方法を提供する。本開示はまた、慢性蕁麻疹の処置のための、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む製品またはキットも提供する。したがって、本開示のある特定の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である、方法に関する。
2021523117.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、前記組成物の投与前に、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、前記個体における前記蕁麻疹が適切に制御されていない、または蕁麻疹症状が残存する、方法。
【請求項２】
前記個体が、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している、または前記慢性蕁麻疹が、抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物の投与前に、前記個体が抗ＩｇＥ抗体ナイーブである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＩｇＥ抗体が、オマリズマブまたはリゲリズマブである、請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、前記組成物の投与前に、前記個体が、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している、または前記個体における前記蕁麻疹が、抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている、方法。
【請求項６】
前記抗ＩｇＥ抗体が、オマリズマブまたはリゲリズマブである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物の投与前に、前記個体における前記蕁麻疹が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない、請求項５または請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物の投与前に、前記個体における前記蕁麻疹が、ラベル投与量または４倍ラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない、請求項１から４および７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物の投与前に、前記個体における前記蕁麻疹が、最大４倍ラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない、請求項１から４および７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記慢性蕁麻疹が、慢性コリン性蕁麻疹、皮膚描記性蕁麻疹、寒冷蕁麻疹、振動蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹、特発性（spontaneous）蕁麻疹、または特発性（idiopathic）蕁麻疹である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記慢性蕁麻疹が、慢性自己免疫性蕁麻疹であり、前記個体が、前記組成物の投与前に、以下の検査：好塩基球ヒスタミン放出アッセイ（ＢＨＲＡ）、好塩基球活性化マーカー発現、自己血清皮膚検査（ＡＳＳＴ）、ならびにＩｇＥおよび／またはＦｃｅＲＩに対するＩｇＧ自己抗体についてのイムノアッセイのうち１つまたは複数において陽性の結果を示している、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記個体が、前記組成物の投与前に、１２未満のＵＣＴスコアを示している、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
慢性蕁麻疹を有する前記個体における１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
自己評価された疾患活動性が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、低減する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
自己評価された疾患活動性が、以下の測定基準：ＵＣＴ、ＵＡＳ７、およびＣｈｏｌＵＡＳ７のうち１つまたは複数によって評価される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
自己評価された生活の質スコアが、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して改善される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
自己評価された生活の質スコアが、以下の測定基準：ＤＬＱＩ、ＣＵ−Ｑ２ｏＬ、ＡＥ−ＱｏＬ、ＳＤ−ＱｏＬ、およびＣｈｏｌＵ−ＱｏＬのうち１つまたは複数によって評価される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
血管性浮腫の発症、じんま疹の数、およびそう痒重症度のうち１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、低減する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
１週間当たりの無症状の日数およびトリガー閾値のうち１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、増加する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記個体由来の血清試料中の好酸球の数、総ＩｇＥ、トリプターゼの発現、好酸球カチオン性タンパク質の発現、および／または好塩基球の数が、前記組成物の投与前に前記個体から得られた血清試料中のベースラインレベルと比較して低減する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物の投与が、処置に対して持続性の応答を生じる、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物の投与が、処置の１０週間後に１２またはそれよりも大きいＵＣＴスコアを生じる、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物の投与が、処置の２２週間後に１２またはそれよりも大きいＵＣＴスコアを生じる、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物の投与が、ＵＡＳ７スコアにおける１０よりも大きい減少を生じる、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、静脈内注入によって投与される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物が、３ヶ月間またはそれよりも長い期間にわたって１ヶ月に１回、静脈内注入によって投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物が、皮下注射によって投与される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記組成物が、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の前記抗体を含む１つまたは複数の用量で、静脈内注入によって投与される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の前記抗体を含む２つまたはそれよりも多くの用量が、約２８日間、約４週間、または毎月の間隔で、前記個体に投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第６の用量を投与するステップを含む、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１の用量が１日目に投与され、前記第２の用量が２９日目に投与され、前記第３の用量が５７日目に投与され、前記第４の用量が８５日目に投与され、前記第５の用量が１１３日目に投与され、前記第６の用量が１４１日目に投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記組成物中の前記抗体の前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの５０％未満が、フコース残基を含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記組成物中の前記抗体の前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの実質的にすべてが、フコース残基を含まない、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗体が、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗体が、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体が、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗体が、
（ａ）（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体が、
（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記抗体が、
（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記抗体が、
（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗体が、
配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／もしくは配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／もしくは配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記非ヒト霊長類が、ヒヒである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、ドメイン１が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３内のエピトープに結合し、ドメイン３が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体が、抗体４Ｆ１１と同じエピトープに結合する、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン２またはドメイン３内のエピトープに結合する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
ドメイン２が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体が、抗体１Ｃ３と同じエピトープに結合する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
ドメイン３が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗体が、抗体１Ｈ１０と同じエピトープに結合する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ−８への結合について、抗体４Ｆ１１と競合する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ−８への結合について、抗体２Ｅ２と競合しない、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗体が、抗体２Ｅ２ではない、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ドメイン１が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項３４から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体が、血中好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する、請求項３４から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項１から６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域が、フコシル化されていないか、またはフコシル化が低減されている、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基が、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を向上させるように操作されている、請求項１から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記抗体が、前記Ｆｃ領域に、ＡＤＣＣ活性を向上させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体の前記重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つが、フコシル化されていない、請求項１から６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記組成物が、慢性蕁麻疹を処置または予防するための１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
慢性蕁麻疹を処置または予防するための前記１つまたは複数の追加の治療剤が、Ｈ−２受容体アンタゴニスト、Ｈ１−抗ヒスタミン剤、Ｈ２−抗ヒスタミン剤、抗ＩｇＥ抗体、コルチコステロイド、ドキセピン、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、シクロスポリン、およびタクロリムスからなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記個体がヒトである、請求項１から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記処置が、前記組成物の単回投与後に、前記個体において完全奏効を生じる、請求項１から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記処置が、処置前の前記個体におけるＵＣＴスコアと比較して、前記個体においてＵＣＴスコアにおける少なくとも３ポイントの改善を生じる、請求項１から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記処置が、処置前の前記個体におけるＵＡＳ７スコアと比較して、前記個体においてＵＡＳ７スコアにおける少なくとも５０％の低減を生じる、請求項１から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記処置が、処置前の前記個体におけるＵＡＳ７スコアと比較して、前記個体においてＵＡＳ７スコアにおける少なくとも１０の低減を生じる、請求項１から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記組成物が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む、請求項１から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を含む医薬と、請求項１から７８のいずれか一項に記載の、前記医薬の投与を必要とする個体における前記医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む、製品。
【請求項８０】
請求項１から７８のいずれか一項に記載の個体における慢性蕁麻疹を処置する方法における使用のための、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項８１】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項８０に記載の使用のための組成物。
【請求項８２】
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項８０に記載の使用のための組成物。
【請求項８３】
前記抗体の前記重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つがフコシル化されていない、請求項８０から８２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年５月４日に出願された米国仮出願第６２／６６７，２４２号；２０１９年１月４日に出願された米国仮出願第６２／７８８，７１９号；２０１９年１月２８日に出願された米国仮出願第６２／７９７，８１７号；２０１９年２月８日に出願された米国仮出願第６２／８０３，２１１号；および２０１９年２月１５日に出願された米国仮出願第６２／８０６，６５７号の優先権を主張し、それらの各々は、その全体が本明細書において参考として援用される。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７０１７１１２０００９４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年５月２日、サイズ：１２３ＫＢ）。
【０００３】
本開示は、慢性蕁麻疹を、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体および前記抗体を含む組成物の投与によって処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
慢性蕁麻疹は、皮膚におけるマスト細胞の不適切な活性化によって引き起こされる一群の炎症性皮膚疾患である。臨床所見には、自発的にまたは一部の物理的トリガーに応答して生じ得る、じんま疹（hives）（膨疹）、血管性浮腫またはそれら両方が含まれる。慢性蕁麻疹は、マスト細胞活性化の特異的なトリガーによって分類される。トリガー（および対応する誘発性蕁麻疹型）には、物理的皮膚擦過（症候性皮膚描記症、皮膚描記性蕁麻疹、または人工蕁麻疹）、圧迫、接触、体温の上昇（コリン性蕁麻疹）、熱、寒冷（寒冷蕁麻疹）、水との接触（水蕁麻疹）、および振動（振動蕁麻疹）が含まれ、一部の蕁麻疹は、未知の原因によって誘発される（特発性（idiopathic）または特発性（spontaneous）蕁麻疹）。たとえば、Moolani,  Y.  et  al.  (2016  Feb.  16)  F1000Res.  F1000  Faculty  Rev-177を参照されたい。蕁麻疹患者の皮膚病変におけるマスト細胞活性化は、病変中への追加の細胞の浸潤によっても強化される。特に、好酸球は、たとえば、外因性凝固カスケードを刺激し、マスト細胞活性を強化することによって、慢性蕁麻疹において重要な役割を果たすと理解されている（たとえば、Asero  et  al  (2009)  WAO  Journal  2:213-217を参照されたい）。
【０００５】
多くの蕁麻疹患者は、高用量抗ヒスタミン剤などの現行の療法によって適切に処置される。慢性蕁麻疹の最も一般的な形態は、慢性特発性（spontaneous）または特発性（idiopathic）蕁麻疹である。このサブタイプは、ＩｇＥが重要な役割を果たすアレルギー性疾患であると考えられる。オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）として販売される）は、承認された用量よりも高い用量であってもＨ１−抗ヒスタミン剤単独では管理できない慢性特発性蕁麻疹における使用のために承認された抗ＩｇＥ抗体である。しかし、一部の患者は、オマリズマブに対して抵抗性であることが実証されている（たとえば、Metz,  M.  et  al.  (2014)  J.  Dermatol.  Sci.  73:57-62を参照されたい）。慢性特発性蕁麻疹におけるオマリズマブに対する奏効率は、承認された用量よりも高い用量が使用される場合、５５％から７０〜８０％までの範囲である。物理的蕁麻疹の場合、奏効率はより低い。特に、Metz  et  al.は、コリン性蕁麻疹を有する患者におけるオマリズマブに対する奏効率が低く、（慢性特発性蕁麻疹についての２５／３０人と比較して、）コリン性蕁麻疹を有する８人の患者のうち５人のみがオマリズマブに対する完全奏効を示したことを記載した。
【０００６】
現在、誘発性蕁麻疹における使用のために承認された生物製剤処置は存在しない。有意な数の患者が、現行の療法、たとえば、Ｈ１−抗ヒスタミン剤および／または抗ＩｇＥ処置から適切な恩恵を受けておらず、それらの制御されない蕁麻疹症状は、生活の質に対して有意な影響を有し得る。そのため、慢性蕁麻疹の根底にある炎症を標的とする、新規な治療的アプローチに対する必要性が依然として存在する。
本明細書において引用されているすべての参考文献は、特許出願、特許公開、および科学文献を含め、それぞれ個々の参考文献が、具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Moolani,  Y.  et  al.  (2016  Feb.  16)  F1000Res.  F1000  Faculty  Rev-177
【非特許文献２】Asero  et  al  (2009)  WAO  Journal  2:213-217
【非特許文献３】Metz,  M.  et  al.  (2014)  J.  Dermatol.  Sci.  73:57-62
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この必要性および他の必要性を満たすために、本開示は、とりわけ、慢性蕁麻疹を、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体および／または前記抗体を含む組成物の投与によって処置または予防する方法に関する。特に、それらの固有の作用機序に一部起因して、本明細書に記載される方法および組成物は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤および／もしくは抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性もしくは不応性である個体、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず適切に制御されていない蕁麻疹もしくは残存する蕁麻疹症状を有する個体、抗ＩｇＥ抗体による処置後に再燃した個体、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している個体、またはその蕁麻疹症状が抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている個体を処置する際に使用され得る。理論に束縛されることは望まないが、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、たとえば、オマリズマブなどの抗ＩｇＥ抗体に対して抵抗性の患者において、自己抗体に対するマスト細胞応答を阻害できると考えられる。自己免疫性蕁麻疹では、罹患した患者は、ＦｃｅＲＩ、ＩｇＥまたはそれら両方に対するＩｇＧ自己抗体を産生し、それらは、ＩｇＥで占有されたまたは占有されていないＦｃｅＲＩと交差結合して、皮膚においてマスト細胞を活性化することができる（たとえば、Konstantinou,  G.N.  et  al.  (2013)  Allergy  68:27-36およびChang,  T.W.  et  al.  (2015)  J.  Allergy  Clin.  Immunol.  135:337-342を参照されたい）。
【０００９】
したがって、本開示のある特定の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を投与するステップを含み、個体が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を投与するステップを含み、蕁麻疹が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されないままである、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず適切に制御されていない、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹症状が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず残存する、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体が、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず症候性のままである、方法に関する。
【００１０】
本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性または不応性であるか、または抗ＩｇＥ抗体による処置の後に再燃を有する、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を投与するステップを含み、個体が、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性または不応性であるか、または抗ＩｇＥ抗体による処置の後に再燃を有する、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を投与するステップを含み、個体が抗ＩｇＥ抗体による処置に不適切な応答を示しているか、または蕁麻疹が抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体が抗ＩｇＥ抗体による処置に不適切な応答を示しているか、または個体における蕁麻疹が抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹が、抗ＩｇＥ抗体による処置にもかかわらず適切に制御されていない、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹症状が、抗ＩｇＥ抗体による処置にもかかわらず残存する、方法に関する。本開示の他の態様は、個体における慢性蕁麻疹を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与前に、個体が、抗ＩｇＥ抗体による処置にもかかわらず症候性のままである、方法に関する。
【００１１】
本開示の他の態様は、慢性蕁麻疹を有する個体においてＵＡＳ７スコアを減少させるための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、組成物の投与が、たとえば、処置前の個体におけるベースラインＵＡＳ７スコアと比較して、ＵＡＳ７スコアにおける１０またはそれよりも大きい減少を生じる、方法に関する。一部の実施形態では、組成物の投与前に、（たとえば、単回または最大４倍投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、個体は、症候性のままである、または不適切に制御されている蕁麻疹を有する。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置にもかかわらず、症候性のままである、または不適切に制御されている蕁麻疹を有する。
【００１２】
一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置の後に再燃している。一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している、または蕁麻疹は、抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体は、抗ＩｇＥ抗体ナイーブである。一部の実施形態では、個体は、組成物またはヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体の投与前に、抗ＩｇＥ抗体で処置されていない。一部の実施形態では、個体は、組成物またはヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体の投与前の少なくとも２ヶ月間にわたって、抗ＩｇＥ抗体で処置されていない。一部の実施形態では、個体は、組成物またはヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体の投与前の少なくとも３ヶ月間にわたって、抗ＩｇＥ抗体で処置されていない。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、オマリズマブである。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、リゲリズマブ（ligelizumab）である。
【００１３】
一部の実施形態では、個体は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による以前の処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない。一部の実施形態では、個体は、単回またはラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、単回またはラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による以前の処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、個体は、４倍投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、最大４倍ラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、個体は、最大４倍ラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による以前の処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、制御されない蕁麻疹を有する個体は、たとえば、（たとえば、単回または４倍投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、１２未満のＵＣＴスコアを報告する。
【００１４】
一部の実施形態では、個体は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性であり、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、単回ラベル投与量または最大４倍ラベル投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性であり、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による以前の処置および抗ＩｇＥ抗体による処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置および（たとえば、単回または４倍投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して不適切な応答を示している、または蕁麻疹は、抗ＩｇＥ抗体による処置および（たとえば、単回または４倍投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置によって不適切に制御されている。
【００１５】
一部の実施形態では、個体は、慢性蕁麻疹を有する、または慢性蕁麻疹であると診断されている。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性誘発性蕁麻疹である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性特発性蕁麻疹である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性コリン性蕁麻疹、皮膚描記性蕁麻疹もしくは人工蕁麻疹、寒冷蕁麻疹、振動蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹、または特発性蕁麻疹である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、症候性皮膚描記症、慢性コリン性蕁麻疹、皮膚描記性蕁麻疹、温熱蕁麻疹、水蕁麻疹、日光蕁麻疹、圧迫蕁麻疹もしくは接触蕁麻疹、寒冷蕁麻疹、振動蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹、または特発性蕁麻疹である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、複数の型の慢性誘発性蕁麻疹である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性コリン性蕁麻疹である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性皮膚描記性蕁麻疹または症候性皮膚描記症である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性自己免疫性蕁麻疹であり、個体は、組成物の投与前に、以下の検査：好塩基球ヒスタミン放出アッセイ（ＢＨＲＡ）、好塩基球活性化マーカー発現、自己血清皮膚検査（ＡＳＳＴ）、ならびにＩｇＥおよび／またはＦｃｅＲＩに対するＩｇＧ自己抗体についてのイムノアッセイのうち１つまたは複数において陽性の結果を示している。一部の実施形態では、個体は、組成物の投与前に、１２未満のＵＣＴスコアを示している。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹を有する個体における１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して低減する。一部の実施形態では、自己評価された疾患活動性は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、低減する。一部の実施形態では、自己評価された疾患活動性は、以下の測定基準：ＵＣＴ、ＵＡＳ７、およびＣｈｏｌＵＡＳ７のうち１つまたは複数によって評価される。一部の実施形態では、自己評価された生活の質スコアは、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して改善される。一部の実施形態では、自己評価された生活の質スコアは、以下の測定基準：ＤＬＱＩ、ＣＵ−Ｑ２ｏＬ、ＡＥ−ＱｏＬ、ＳＤ−ＱｏＬ、およびＣｈｏｌＵ−ＱｏＬのうち１つまたは複数によって評価される。一部の実施形態では、血管性浮腫の発症、じんま疹の数、およびそう痒重症度のうち１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、低減する。一部の実施形態では、個体由来の血清試料中の好酸球の数、総ＩｇＥ、トリプターゼの発現、好酸球カチオン性タンパク質の発現、および／または好塩基球の数は、組成物の投与前に個体から得られた血清試料中のベースラインレベルと比較して低減する。一部の実施形態では、組成物の投与は、処置に対して持続性の応答を生じる。一部の実施形態では、組成物の投与は、ＵＡＳ７スコアにおける１０よりも大きい減少を生じる。一部の実施形態では、組成物の投与は、処置の１０週間後に１２またはそれよりも大きいＵＣＴスコアを生じる。一部の実施形態では、組成物の投与は、処置の２２週目に、１２もしくはそれよりも大きい、１３もしくはそれよりも大きい、または１４もしくはそれよりも大きいＵＣＴスコアを生じる。一部の実施形態では、組成物の投与は、ＵＣＴスコアにおける約１１の平均増加、またはＵＣＴスコアにおける約４００％の平均増加を生じる。一部の実施形態では、組成物の投与は、処置に対して完全奏効を生じる。一部の実施形態では、処置に対する完全奏効は、ＵＣＴスコアにおける３またはそれよりも大きい改善、および１２よりも大きいＵＣＴスコアを指す。一部の実施形態では、組成物の投与は、処置に対して部分奏効を生じる。一部の実施形態では、処置に対する部分奏効は、ＵＣＴスコアにおける３またはそれよりも大きい改善を指す。一部の実施形態では、組成物は、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、３ヶ月間またはそれよりも長い期間にわたって１ヶ月に１回、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、皮下注射によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１つまたは複数の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む２つまたはそれよりも多くの用量が、約２８日間、約４週間、または毎月の間隔で、個体に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、第１の用量は１日目に投与され、第２の用量は２９日目に投与され、第３の用量は５７日目に投与され、第４の用量は８５日目に投与され、第５の用量は１１３日目に投与され、第６の用量が１４１日目に投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体による処置は、抗ＩｇＥ抗体（たとえば、オマリズマブまたはリゲリズマブ）による処置と比較して、１つまたは複数の蕁麻疹症状におけるより大きい低減（たとえば、ＵＡＳ７および／またはＵＣＴスコアによって測定される）をもたらす。一部の実施形態では、個体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体による処置の前には、１６またはそれよりも大きいＵＡＳ７スコアを有し、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体による処置は、抗ＩｇＥ抗体（たとえば、オマリズマブまたはリゲリズマブ）による処置と比較して、ＵＡＳ７スコアにおけるより大きい低減をもたらす。一部の実施形態では、組成物の投与は、処置の２２週目に、４またはそれよりも小さいＵＡＳ７スコアを生じる。一部の実施形態では、組成物の投与は、ＵＡＳ７スコアにおける約１４の平均低減、またはＵＡＳ７スコアにおける約７５％の平均低減を生じる。
【００１６】
一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、組成物中の抗体のＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの５０％未満が、フコース残基を含む。一部の実施形態では、組成物中の抗体のＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの実質的にすべてが、フコース残基を含まない。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または（ｂ）（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域；（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域；または（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／もしくは配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／もしくは配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、ヒヒである。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体４Ｆ１１と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン２またはドメイン３内のエピトープに結合する。一部の実施形態では、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１Ｃ３と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１Ｈ１０と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ−８への結合について、抗体４Ｆ１１と競合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−８への結合について、抗体２Ｅ２と競合しない。一部の実施形態では、抗体は、抗体２Ｅ２ではない。一部の実施形態では、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域は、フコシル化されていない。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ここで、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている。一部の実施形態では、抗体は、血中好酸球を枯渇させる、および／またはマスト細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を向上させるように操作されている。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域に、ＡＤＣＣ活性を向上させ���少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ１と比較して、低減されたフコシル化を有する。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つが、フコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ヒトＩｇＧ１を有し、野生型ヒトＩｇＧ１と比較して、低減されたフコシル化を有する。一部の実施形態では、抗体の重鎖（heaving  chain）のうちの１つまたは２つが、フコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体は、アルファ１，６−フコシルトランスフェラーゼ（Ｆｕｔ８）ノックアウトを有する哺乳動物細胞株において産生される。一部の実施形態では、抗体は、ベータ１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（acetylglycosminyltransferase）ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）を過剰発現する細胞株において産生される。一部の実施形態では、細胞株は、その上、ゴルジμ−マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する。一部の実施形態では、細胞株は、ＣＨＯ細胞株である。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００１７】
一部の実施形態では、組成物または抗体が、慢性蕁麻疹を処置または予防するための１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹を処置または予防するための１つまたは複数の追加の治療剤は、Ｈ−２受容体アンタゴニスト、Ｈ１−抗ヒスタミン剤、Ｈ２−抗ヒスタミン剤、抗ＩｇＥ抗体、コルチコステロイド、ドキセピン、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、シクロスポリン、およびタクロリムスからなる群から選択される。
【００１８】
一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、処置は、処置の休止後に、個体において完全奏効を生じる。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹を有する個体における１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減する。一部の実施形態では、処置は、組成物の単回投与後に、個体において完全奏効を生じる。一部の実施形態では、処置は、処置前の個体におけるＵＣＴスコアと比較して、個体においてＵＣＴスコアにおける少なくとも３ポイントの改善を生じる。一部の実施形態では、処置は、処置前の個体におけるＵＡＳ７スコアと比較して、個体においてＵＡＳ７スコアにおける少なくとも５０％の低減を生じる。
【００１９】
一部の実施形態では、組成物は、抗体および薬学的に許容される担体を含む。
【００２０】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物を含む医薬と、前述の実施形態のいずれか１つによる前記医薬の投与を必要とする個体における前記医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む、製品に関する。本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む医薬と、上記実施形態のいずれか１つによる医薬の投与を必要とする個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む、製品またはキットに関する。
【００２１】
本開示の他の態様は、上記の実施形態のいずれか１つに従う個体における慢性蕁麻疹を処置する方法における使用のための、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む組成物に関する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つがフコシル化されていない。
【００２２】
本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、またはすべてを組み合わせて、本開示の他の実施形態を形成することができることを、理解されたい。本開示のこれらおよび他の態様は、当業者には明らかである。本開示のこれらおよび他の実施形態は、以下の詳細な記載によってさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１Ａ】図１Ａは、蕁麻疹症状を評価するためのＵＣＴおよびＵＡＳ７測定ツールを示す。Zuberbier  et  al.  (2018)  Allergy  73:1393-1414で公開されたＥＡＡＣＩ蕁麻疹ガイドラインから適応させた。
【００２４】
【図１Ｂ】図１Ｂは、慢性蕁麻疹を有する抗ＩｇＥナイーブ患者における平均ＵＣＴスコアに対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果を示す。
【００２５】
【図２Ａ】図２Ａは、慢性蕁麻疹を有する抗ＩｇＥナイーブ患者における平均ＵＡＳ７スコアに対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果を示す。
【００２６】
【図２Ｂ】図２Ｂは、２２週目における、ＵＡＳ７≦６、またはＵＡＳ７＝０を報告する抗ＩｇＥナイーブ患者の割合を示す。
【００２７】
【図２Ｃ】図２Ｃは、２２週目における、０の毎週のじんま疹重症度スコア（Hives  Severity  Score）（ＨＳＳ）、または０の毎週のそう痒重症度スコア（Ｉｔｃｈ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ）（ＩＳＳ）を報告する抗ＩｇＥナイーブ患者の割合を示す。
【００２８】
【図３】図３は、慢性蕁麻疹を有する抗ＩｇＥ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、オマリズマブとしても公知）不応性患者におけるＵＡＳ７スコアに対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果（ベースラインからの変化）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
Ｉ．定義
本開示は、特定の組成物または生物学的系に制限されるものではなく、当然ながら、変動し得ることを理解されたい。本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のものにすぎず、限定することを意図するものではないこともまた、理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、内容により別途明確に指示されない限り、複数形の参照物を含む。したがって、たとえば、「１つの分子」への言及は、必要に応じて、２つまたはそれを上回るそのような分子の組合せなども含む。
【００３０】
「約」という用語は、本明細書において使用されるとき、当該技術分野の当業者に容易に理解される、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書において、「約」ある値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体に関する実施形態を含む（また、それについて記載する）。
【００３１】
本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含むこと」、それら「からなること」、およびそれら「から本質的になること」を含むことが理解される。
【００３２】
「抗体」という用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および一本鎖分子）、ならびに抗体断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）が含まれる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において、「抗体」と互換可能に使用される。
【００３３】
基本的な４本鎖の抗体ユニットは、２つの同一な軽鎖（Ｌ）および２つの同一な重鎖（Ｈ）から構成されるヘテロ四量体の糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と称される追加のポリペプチドを伴う、基本的なヘテロ四量体ユニット５つからなり、１０個の抗原結合部位を含むが、一方でＩｇＡ抗体は、基本的な４本鎖ユニット２〜５個からなり、これらが重合して、Ｊ鎖との組合せで多価集合体が形成され得る。ＩｇＧの場合は、４本鎖ユニットは、一般に、約１５０，０００ダルトンである。それぞれのＬ鎖は、１つの共有結合ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結され、一方で、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに応じて１つまたは複数のジスルフィド結合によって互いに連結されている。それぞれのＨ鎖およびＬ鎖はまた、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有する。それぞれのＨ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて、α鎖およびγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（ＣＨ）を有し、μおよびεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。それぞれのＬ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて、その反対側の末端に、定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖および重鎖の可変ドメイン間の接合部を形成すると考えられている。ＶＨおよびＶＬの対が、一緒になって、単一の抗原結合部位を形成する。様々なクラスの抗体の構造および特性については、たとえば、Basic  and  Clinical  Immunology、第８版、Daniel  P.  Sties、Abba  I.  TerrおよびTristram  G.  Parsolw（編）、Appleton  &  Lange、Norwalk、CT、１９９４年、７１頁、および第６章を参照されたい。
【００３４】
任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖には、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと称される明確に異なる２つの種類のうちの１つが割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンには、異なるクラスまたはアイソタイプが割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがあり、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと表記される重鎖を有する。γおよびαのクラスは、さらに、ＣＨの配列および機能における比較的わずかな違いに基づいて、サブクラスに分けられ、たとえば、ヒトは、以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと称される複数の多型性バリアントで存在し得（JefferisおよびLefranc、２００９年、mAbs、１巻、４号、１〜７頁において概説されている）、それらのいずれも、本開示における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、ａ、ｆ、ｎ、ｚという文字で表記されるものである。
【００３５】
「単離された」抗体は、同定され、その産生環境の成分から（たとえば、天然または組換えにより）分離および／または回収されているものである。一部の実施形態では、単離されたポリペプチドは、その産生環境に由来するすべての他の成分と関連しない。その産生環境の混入成分、たとえば、組換えでトランスフェクトした細胞から生じるものは、抗体の研究、診断上、または治療上の使用を典型的に妨害するであろう材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を挙げることができる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、（１）たとえば、ローリー法によって決定した場合に、抗体の９５重量％を上回って、また一部の実施形態では、９９重量％を上回って、（１）スピニングカップ配列決定装置（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー染色もしくは銀染色を使用して、非還元もしくは還元条件下において、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均質となるまで、精製される。単離された抗体は、その抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体を含む。通常は、しかしながら、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００３６】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用されるとき、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る、可能性のある天然の変異および／または翻訳後修飾（たとえば、異性化、アミド化）を除き、同一である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｃ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において、切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｎ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において、切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異性であり、単一の抗原性部位に指向する。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異性であり、複数の抗原性部位に指向する（たとえば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）。「モノクローナル」という修飾語は、抗体が、実質的に均質な抗体集団から得られているという特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるものではない。たとえば、本開示に従って使用するモノクローナル抗体は、たとえば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部またはすべてを有するヒトもしくはヒト様抗体を動物において産生するための技術を含め、様々な技法によって、作製することができる。
【００３７】
「ネイキッド抗体」という用語は、細胞傷害性部分や放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。
【００３８】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、または「完全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために、互換可能に使用される。具体的には、完全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、天然の配列の定常ドメイン（たとえば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。一部の事例では、インタクトな抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有し得る。
【００３９】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、インタクトな抗体の抗原結合領域および／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Zapataら、Protein  Eng.、８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁［１９９５年］を参照されたい）；一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００４０】
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一な抗原結合性断片と、その残りの容易に結晶化する能力を反映した呼称である「Ｆｃ」断片とが得られた。Ｆａｂ断片は、１つのＬ鎖全体と共にＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、および一方の重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）で構成される。それぞれのＦａｂ断片は、抗原結合に関しては、１価である、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られるが、これは、おおまかには、異なる抗原結合活性を有する２つのＦａｂ断片がジスルフィド結合したものに相当し、依然として抗原に架橋することが可能である。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含め、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にいくつかの追加の残基を有することが、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた、公知である。
【００４１】
Ｆｃ断片は、両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分がジスルフィドによって一緒に結合されたものを含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域は、ある特定の種類の細胞において見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される領域でもある。
【００４２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む、最小限の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインが緊密な非共有結合で結合した二量体からなる。これら２つのドメインのフォールディングにより、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つずつのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性ではあるものの、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【００４３】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、ＶＨおよびＶＬ抗体ドメインが、単一のポリペプチド鎖に接続されたものを含む、抗体断片である。一部の実施形態では、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のために所望される構造を形成するのを可能にする、ポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概説に関しては、Pluckthun、The  Pharmacology  of  Monoclonal  Antibodies、１１３巻、RosenburgおよびMoore編、Springer-Verlag、New  York、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【００４４】
本開示の抗体の「機能性断片」は、一般にはインタクトな抗体の抗原結合領域もしくは可変領域を含む、インタクトな抗体の一部分、またはＦｃＲ結合能力を保持するかもしくはそれが修飾されている抗体のＦｖ領域を含む。抗体断片の例としては、線形抗体、一本鎖抗体分子、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００４５】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的に、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であり、一方で鎖（複数可）の残りの部分が、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体の断片における対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含むが、それらが、所望される生物学的活性を呈する場合に限る（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrisonら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年））。本明細書における目的とされるキメラ抗体としては、抗体の抗原結合領域が、たとえば、マカクザルに目的の抗原で免疫することによって産生された抗体に由来する、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が挙げられる。本明細書において使用されるとき、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００４６】
非ヒト（たとえば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、キメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲに由来する残基が、所望される特異性、親和性、および／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲに由来する残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性など、抗体の性能をさらに洗練するためになされ得る。一般には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここで、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のものに対応するが、ＦＲ領域は、抗体の性能、たとえば、結合親和性、異性化、免疫原性などを改善する、１つまたは複数の個々のＦＲ残基置換を含み得る。一部の実施形態では、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖では６つ以下であり、Ｌ鎖では３つ以下である。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み得る。さらなる詳細については、たとえば、Jonesら、Nature、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Riechmannら、Nature、３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およびPresta、Curr.  Op.  Struct.  Biol.、２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照されたい。たとえば、VaswaniおよびHamilton、Ann.  Allergy,  Asthma  &  Immunol.、１巻：１０５〜１１５頁（１９９８年）；Harris、Biochem.  Soc.  Transactions、２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）；HurleおよびGross、Curr.  Op.  Biotech.、５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号もまた、参照されたい。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、単一の抗原性部位に指向する。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、複数の抗原性部位に指向する。代替的なヒト化の方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
【００４７】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端側のドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」および「ＶＬ」と称され得る。これらのドメインは、一般に、抗体のもっとも可変的な部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含む。
【００４８】
「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書において使用されるとき、配列が超可変であり、かつ／または構造的に定義されるループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然の抗体の場合、Ｈ３およびＬ３は、６つのＨＶＲの中でもっとも多様性を示し、Ｈ３は、特に、抗体に対する微細な特異性を付与する固有の役割を果たすと考えられている。たとえば、Xuら、Immunity、１３巻：３７〜４５頁（２０００年）；JohnsonおよびWu、Methods  in  Molecular  Biology、２４８巻：１〜２５頁（Ｌｏ編、Human  Press、Totowa、NJ、２００３年））を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる天然のラクダ抗体は、軽鎖の非存在下においても機能性であり、安定である。たとえば、Hamers-Castermanら、Nature、３６３巻：４４６〜４４８頁（１９９３年）およびSheriffら、Nature  Struct.  Biol.、３巻：７３３〜７３６頁（１９９６年）を参照されたい。
【００４９】
いくつかのＨＶＲの描写が使用されており、本明細書において包含される。Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づくものであり、もっとも一般的に使用されている（Kabatら、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、第５版、Public  Health  Service、National  Institute  of  Health、Bethesda、MD、（１９９１年））。ＣｈｏｔｈｉａのＨＶＲは、代わりに、構造的ループの位置に言及する（ChothiaおよびLesk、J.  Mol.  Biol.、１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））。「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を、以下に示す。
【表Ａ】
2021523117.tif 000003
【００５０】
別途示されない限り、可変ドメインの残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域の残基）は、Ｋａｂａｔら（上記）に従って番号付けされている。
【００５１】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメインの残基である。
【００５２】
「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるようなアミノ酸位置の番号付け」という表現、およびそれらの変化形は、Ｋａｂａｔら（上記）において、抗体の編集物（compilation）の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されている番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮形に相当する、より少ないアミノ酸を含み得るか、またはそれへの挿入に相当する、追加のアミノ酸を含み得る。たとえば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に、単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に、挿入された残基（たとえば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。所与の抗体に関するＫａｂａｔの残基番号付けは、その抗体の配列の相同性の領域における、「標準的な」Ｋａｂａｔで番号付けした配列とのアラインメントによって、決定され得る。
【００５３】
本明細書の目的での「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含む、フレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、または既存のアミノ酸配列変化を含んでもよい。一部の実施形態では、既存のアミノ酸の変化の数は、１０個もしくはそれよりも少ない、９個もしくはそれよりも少ない、８個もしくはそれよりも少ない、７個もしくはそれよりも少ない、６個もしくはそれよりも少ない、５個もしくはそれよりも少ない、４個もしくはそれよりも少ない、３個もしくはそれよりも少ない、または２個もしくはそれよりも少ない。
【００５４】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインし、最大の配列同一性パーセントが達成されるように、必要に応じてギャップを導入した後に、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義され、いずれの保存的置換も、配列同一性の一部とは考えない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、当業者の技能の範囲内である様々な手段で、たとえば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインするための適切なパラメーターを決定することができる。たとえば、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対する、アミノ酸配列同一性％（これは、代替として、所与のアミノ酸配列Ａが、所与のアミノ酸配列Ｂへ、所与のアミノ酸配列Ｂと、または所与のアミノ酸配列Ｂに対して、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含むとして表記することができる）は、以下のように計算される：
１００を分数Ｘ／Ｙに乗じる
ここで、Ｘは、配列によるそのプログラムでのＡとＢとのアラインメントにおいて、同一なマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合には、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが、理解される。
【００５５】
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに「結合する」、「特異的に結合する」、または「特異的である」抗体とは、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合するものである。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）の、無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ−８ポリペプチドへの結合は、当該技術分野において公知の方法（たとえば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって測定した場合、その抗体のＳｉｇｌｅｃ−８への結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（たとえば、１０−８Ｍもしくはそれを下回る、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、たとえば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００５６】
「抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体」または「ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体」という用語は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のポリペプチドまたはエピトープに、任意の他のポリペプチドまたは無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ−８ポリペプチドのエピトープに実質的に結合することなく、結合する抗体を指す。
【００５７】
「Ｓｉｇｌｅｃ−８」という用語は、本明細書において使用されるとき、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８タンパク質を指す。この用語はまた、スプライスバリアントまたはアレルバリアントを含め、Ｓｉｇｌｅｃ−８の天然に存在するバリアントを含む。例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ−８のアミノ酸配列は、配列番号７２に示されている。別の例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ−８のアミノ酸配列は、配列番号７３に示されている。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトＳｉｇｌｅｃ−８細胞外ドメインを含む。例示的な免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトＳｉｇｌｅｃ−８細胞外ドメインのアミノ酸配列は、配列番号７４に示されている。配列番号７４において下線で示されているアミノ酸配列は、Ｓｉｇｌｅｃ−８  Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列のＦｃ領域を示す。
【化１−１】
2021523117.tif 000004
【化１−２】
2021523117.tif 000005
【００５８】
「アポトーシスを誘導する」かまたは「アポトーシス性」である抗体とは、標準的なアポトーシスアッセイ、たとえば、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞の縮小、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス体と称される）の形成によって判定される、プログラム細胞死を誘導するものである。たとえば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）のアポトーシス活性は、細胞をアネキシンＶで染色することによって示すことができる。
【００５９】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属し得る生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて変動する。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面受容体（たとえば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００６０】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、分泌されたＩｇが、ある特定の細胞傷害性細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合することにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒素により標的細胞を殺滅することを可能にする、細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「装備（ａｒｍ）」し、この機序による標的細胞の殺滅に必要である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血系細胞におけるＦｃの発現は、RavetchおよびKinet、Annu.  Rev.  Immunol.、９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の４６４頁の表３に要約されている。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを強化する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイ、たとえば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号に記載されているものを、行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば、Clynesら、PNAS  USA、９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年
）に開示されているものなどの動物モデルにおいて、評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変化させる他のＦｃバリアントとしては、Ghetieら、Nat  Biotech.、１５巻：６３７〜４０頁、１９９７年；Duncanら、Nature、３３２巻：５６３〜５６４頁、１９８８年；Lundら、J.  Immunol、１４７巻：２６５７〜２６６２頁、１９９１年；Lundら、Mol  Immunol、２９巻：５３〜５９頁、１９９２年；Alegreら、Transplantation、５７巻：１５３７〜１５４３頁、１９９４年；Hutchinsら、Proc  Natl.  Acad  Sci  USA、９２巻：１１９８０〜１１９８４頁、１９９５年；Jefferisら、Immunol  Lett.、４４巻：１１１〜１１７頁、１９９５年；Lundら、FASEB  J、９巻：１１５〜１１９頁、１９９５年；Jefferisら、Immunol  Lett、５４巻：１０１〜１０４頁、１９９６年；Lundら、J  Immunol、１５７巻：４９６３〜４９６９頁、１９９６年；Armourら、Eur  J  Immunol、２９巻：２６１３〜２６２４頁、１９９９年；Idusogieら、J  Immunol、１６４巻：４１７８〜４１８４頁、２００；Reddyら、J  Immunol、１６４巻：１９２５〜１９３３頁、２０００年；Xuら、Cell  Immunol、２００巻：１６〜２６頁、２０００年；Idusogieら、J  Immunol、１６６巻：２５７１〜２５７５頁、２００１年；Shieldsら、J  Biol  Chem、２７６巻：６５９１〜６６０４頁、２００１年；Jefferisら、Immunol  Lett、８２巻：５７〜６５頁、２００２年；Prestaら、Biochem  Soc  Trans、３０巻：４８７〜４９０頁、２００２年；Lazarら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１０３巻：４００５〜４０１０頁、２００６年；米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，８８５，５７３号、同第５，６７７，４２５号、同第６，１６５，７４５号、同第６，２７７，３７５号、同第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，１９４，５５１号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，２７７，３７５号、同第７，３３５，７４２号、および同第７，３１７，０９１号によって開示されているものが挙げられる。
【００６１】
「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、天然配列のＦｃ領域およびバリアントのＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、多様であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０位から、そのカルボキシル末端までの一片として定義される。本開示の抗体において使用するのに好適な天然配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が含まれる。単一のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔの番号付けによるＳ２２８Ｐ、ＩｇＧ４Ｐｒｏと表記される）が、組換えＩｇＧ４抗体において観察される異種性をなくすために導入され得る。Angal,  S.ら、（１９９３年）、Mol  Immunol、３０巻、１０５〜１０８頁を参照されたい。
【００６２】
「フコシル化されていない」または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域に結合した炭水化物構造が、低減したフコースを有するかまたはフコースが欠如している、Ｆｃ領域を含むグリコシル化抗体バリアントを指す。一部の実施形態では、低減しフコースを有するかまたはフコースが欠如している抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。フコシル化されていない抗体またはフコース欠損抗体は、細胞株において産生される同じ抗体におけるフコースの量と比べて、低減したフコースを有する。一部の実施形態では、本明細書において企図されるフコシル化されていない抗体またはフコース欠損抗体の組成物は、組成物中の抗体のＦｃ領域に結合したＮ結合型グリカンのうちの約５０％未満がフコースを含む、組成物である。
【００６３】
「フコシル化」または「フコシル化された」という用語は、抗体のペプチド骨格に結合したオリゴ糖内におけるフコース残基の存在を指す。具体的には、フコシル化された抗体は、抗体のＦｃ領域に結合したＮ結合型オリゴ糖の一方または両方において、もっとも内側のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基、たとえば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインの２９７位のＡｓｎ（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に、α（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免疫グロブリンにおけるわずかな配列変動性に起因して、２９７位からアミノ酸約３個分上流または下流に、すなわち、２９４位と３００位との間に、位置する場合もある。
【００６４】
「フコシル化度」は、当該技術分野において公知の方法によって同定される、たとえば、マトリックス支援レーザー脱離−イオン化飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）によって評価される、Ｎ−グリコシダーゼＦで処置した抗体組成物中の、すべてのオリゴ糖に対するフコシル化されたオリゴ糖の割合である。「完全フコシル化抗体」の組成物においては、本質的にすべてのオリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。一部の実施形態では、完全フコシル化抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化度を有する。したがって、そのような組成物中の個々の抗体は、典型的に、Ｆｃ領域における２つのＮ結合型オリゴ糖のそれぞれに、フコース残基を含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物においては、オリゴ糖は本質的にすべてがフコシル化されておらず、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域における２つのＮ結合型オリゴ糖のいずれにも、フコース残基を含まない。一部の実施形態では、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化度を有する。「部分フコシル化抗体」の組成物においては、オリゴ糖の一部のみが、フコースを含む。そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含まなくてもよく、それらの一方もしくは両方に含んでもよいが、ただし、この組成物が、本質的にすべての個々の抗体がＦｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖にフコース残基が欠如しているものから構成されるのでも、本質的にすべての個々の抗体がＦｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含むものから構成されるのでもないことを条件とする。一実施形態では、部分フコシル化抗体の組成物は、約１０％〜約８０％（たとえば、約５０％〜約８０％、約６０％〜約８０％、または約７０％〜約８０％）のフコシル化度を有する。
【００６５】
「結合親和性」とは、本明細書において使用されるとき、ある分子（たとえば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（たとえば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の強度を指す。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−８（これは、本明細書に記載されるＳｉｇｌｅｃ−８−Ｆｃ融合タンパク質など、二量体であってもよい）に対する抗体の結合親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書において記載されるものを含め、当該技術分野において公知の一般的な方法によって測定することができる。
【００６６】
「結合アビディティー」とは、本明細書において使用されるとき、ある分子（たとえば、抗体）の複数の結合部位と、その結合パートナー（たとえば、抗原）との結合の強度を指す。
【００６７】
本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、同定され、それが産生された環境において通常関連性のある少なくとも１つの混入核酸分子から分離された、核酸分子である。一部の実施形態では、単離された核酸は、産生環境と関連するすべての成分と関係がない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが天然に見出される形態または環境ではない形態をしている。したがって、単離された核酸分子は、細胞において天然に存在している本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする核酸とは区別される。
【００６８】
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効となるのを許容するような形態にあり、製剤が投与されるであろう個体にとって、許容できないほどに毒性である追加の成分を含まない、調製物である。そのような製剤は、無菌である。
【００６９】
「担体」には、本明細書において使用されるとき、用いられる投与量および濃度において、それに曝露される細胞または哺乳動物にとって非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液であることが多い。生理学的に許容される担体の例としては、バッファ、たとえば、ホスフェート、シトレート、および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、たとえば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、たとえば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシン；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；キレート剤、たとえば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、たとえば、マンニトールもしくはソルビトール；塩形成対イオン、たとえば、ナトリウム；ならびに／または非イオン性表面活性物質、たとえば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）が挙げられる。
【００７０】
本明細書において使用されるとき、「処置」または「処置すること」という用語は、臨床病理の過程において、処置されている個体または細胞の天然の経過を変化させるように設計される臨床介入を指す。処置の望ましい作用としては、疾患進行速度の減少、疾患状態の緩和または軽減、ならびに寛解または予後の改善が挙げられる。個体は、たとえば、疾患（たとえば、慢性蕁麻疹）と関連する１つまたは複数の症状が、軽減または排除された場合、「処置」が成功している。たとえば、個体は、処置が、疾患を患っているものの生活の質の向上、疾患を処置するために必要とされる他の医薬の用量の減少、疾患の再発頻度の低減、疾患の重症度の減少、疾患の発症もしくは進行の遅延、ならびに／または個体の生存の延長をもたらす場合、「処置」が成功している。
【００７１】
本明細書において使用されるとき、「と併せて」または「と組み合わせて」とは、１つの処置モダリティを、別の処置モダリティに加えて、投与することを指す。そのため、「と併せて」または「と組み合わせて」とは、１つの処置モダリティを、他の処置モダリティを個体に投与する前、最中、または後に投与することを指す。
【００７２】
本明細書において使用されるとき、「予防（prevention）」または「予防すること」という用語には、個体における疾患の発症または再発に関して、予防法（prophylaxis）を提供することが含まれる。個体は、疾患の素因を有するか、疾患に罹患しやすいか、または疾患を発症する危険性にある可能性があるが、まだ疾患であると診断されていない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、疾患（たとえば、慢性蕁麻疹）の発症を遅延させるために使用される。
【００７３】
本明細書において使用されるとき、疾患（たとえば、慢性蕁麻疹）を発症する「危険性にある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有する場合も有さない場合もあり、本明細書に記載される処置方法の前に検出可能な疾患または疾患の症状を示している場合も示していない場合もある。「危険性にある」とは、個体が、１つまたは複数の危険因子を有することを指し、この危険因子は、当該技術分野において公知のように、疾患（たとえば、慢性蕁麻疹）の発症と相関性がある測定可能なパラメーターである。これらの危険因子のうちの１つまたは複数を有する個体は、これらの危険因子のうちの１つまたは複数を有さない個体よりも、疾患を発症する確率が高い。
【００７４】
「有効量」とは、少なくとも、必要とされる投与量および期間で、治療的結果または予防的結果（prophylactic  result）を含め、所望されるかまたは示される作用を達成するのに有効な量を指す。有効量は、１回または複数回の投与で提供され得る。「治療有効量」は、少なくとも、特定の疾患の測定可能な改善を達成するのに必要な最小限の濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびに抗体が個体において所望される応答を誘起する能力に応じて、変動し得る。治療有効量はまた、抗体の任意の毒性または有害な作用を、治療上有益な作用が上回るものであり得る。「予防有効量」は、必要とされる投与量および期間で、所望される予防的結果を達成するのに有効な量を指す。予防的用量は、疾患の前または早期段階において個体に使用されるため、典型的には、予防有効量は、治療有効量よりも少なくてよいが、必ずしもそうでなくてもよい。
【００７５】
「慢性的な」投与とは、初期の治療的効果（活性）を長期間維持するための、急性モードとは対照的な持続的な医薬（複数可）の投与を指す。「間欠的な」投与とは、中断することなく連続的に行われるのではなく、周期的な性質である処置である。
【００７６】
「添付文書」という用語は、治療製品の商用パッケージに慣例的に含まれる指示を指して使用され、そのような治療製品の使用に関する適応症、使用法、投与量、投与、組合せ療法、禁忌、および／または警告についての情報を含む。
【００７７】
本明細書において使用されるとき、「個体」または「対象」は、哺乳動物である。処置の目的での「哺乳動物」には、ヒト、家庭動物および農場動物、ならびに動物園の動物、競技用の動物、もしくは愛玩用の動物、たとえば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどが含まれる。一部の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
ＩＩ．方法
【００７８】
個体における慢性蕁麻疹を処置および／または予防するための方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載されるヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体）または前記抗体を含む組成物を投与するステップを含む、方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中にある。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【００７９】
一部の実施形態では、個体は、（たとえば、単回ラベル投与量、または最大４倍ラベル投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性である。一部の実施形態では、個体は、（たとえば、単回ラベル投与量、または最大４倍ラベル投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して不応性である。一部の実施形態では、個体は、（たとえば、単回ラベル投与量、または最大４倍ラベル投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性であり、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性または不応性である（または抗ＩｇＥ抗体による処置後に再燃している）。一部の実施形態では、個体は、（たとえば、単回ラベル投与量、または最大４倍ラベル投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹は、（たとえば、単回ラベル投与量、または最大４倍ラベル投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹は、（たとえば、単回ラベル投与量、または最大４倍ラベル投与量での）Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず適切に制御されていない。Ｈ１−抗ヒスタミン剤は、Ｈ１ヒスタミン受容体におけるヒスタミンの作用を遮断または阻害し、Ｈ１ヒスタミン受容体のアンタゴニストまたはインバースアゴニストとして記載されている化合物を指す。一部の実施形態では、Ｈ１−抗ヒスタミン剤は、第１世代Ｈ１−抗ヒスタミン剤である。一部の実施形態では、Ｈ１−抗ヒスタミン剤は、第２世代Ｈ１−抗ヒスタミン剤である。Ｈ１−抗ヒスタミン剤の例示的かつ非限定的な例には、アクリバスチン、アリメマジン、アステミゾール、アゼラスチン、Ｂｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）、ビラスチン、ブロモジフェンヒドラミン、ブロムフェニラミン、ブクリジン、カルビノキサミン、セチリジン（Ｚｙｒｔｅｃ（登録商標））、クロロジフェンヒドラミン（chlorodiphenhydramine）、クロルフェナミン、クレマスチン、シクリジン、シプロヘプタジン、デスロラタジン（desloratidine）、デクスブロムフェニラミン、デクスクロルフェニラミン、ジメンヒドリナート、ジメチジン（dimetidine）、ジフェンヒドラミン、ドキシラミン、エバスチン（たとえば、カレバスチン（carebastine））、エンブラミン（embramine）、フェキソフェナジン、ヒドロキシジン、レボセチリジン、ロラタジン（loratidine）、メクリジン、メキタジン、ミルタザピン、ミゾラスチン、オロパタジン、オルフェナドリン、オキサトミド、フェニンダミン、フェニラミン、フェニルトロキサミン、プロメタジン、ピリラミン、クエチアピン、ルパタジン（rupatidine）、テルフェナジン、トリペレナミン、およびトリプロリジンが含まれる。
【００８０】
一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性である。一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不応性である。一部の実施形態では、個体は、Ｈ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性もしくは不応性である、または抗ＩｇＥ抗体による処置に対して抵抗性もしくは不応性である（または抗ＩｇＥ抗体による処置後に再燃している）。一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している、または抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている蕁麻疹を有する。一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置にもかかわらず、症候性のままである。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹は、抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体における蕁麻疹は、抗ＩｇＥ抗体による処置によって適切に制御されていない。
【００８１】
一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体による処置の後に再燃している。一部の実施形態では、再燃は、じんま疹および／またはそう痒の再発を指す。
【００８２】
一部の実施形態では、個体は、抗ＩｇＥ抗体で以前に処置されていない（たとえば、抗ＩｇＥ抗体ナイーブ個体）。
【００８３】
一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、オマリズマブである。オマリズマブは、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）へのＩｇＥの結合を阻害するヒト化ＩｇＧ１抗ＩｇＥ抗体である。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、以下のような重鎖および／または軽鎖配列（それぞれ、配列番号１２５および１２６）を含む。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、配列番号１２５の重鎖配列由来の重鎖可変ドメイン配列および／または配列番号１２６の軽鎖配列由来の軽鎖可変ドメイン配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、配列番号１２５の重鎖配列由来の１、２もしくは３つのＣＤＲおよび／または配列番号１２６の軽鎖配列由来の１、２もしくは３つのＣＤＲを含む。
重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGYSITSGYSWNWIRQAPGKGLEWVASITYDGSTNYADSVKGRFTISRDDSKNTFYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSHYFGHWHFAVWGQGTLVTVSSGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号１２５）
軽鎖
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASYLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHEDPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF
IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR（配列番号１２６）
【００８４】
一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、リゲリズマブである。リゲリズマブ（ＱＧＥ０３１としても公知）は、ＩｇＥに対してオマリズマブよりも高い親和性を有すると考えられているヒト化ＩｇＧ１抗ＩｇＥ抗体である（Arm,  J.P.  et  al.  (2014)  Clin.  Exp.  Allergy  44:1371-1385）。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、米国特許第７，５３１，１６９号に記載された抗ＩｇＥ抗体である。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、配列番号１２７の重鎖可変ドメイン配列由来の１、２もしくは３つのＣＤＲおよび／または配列番号１２８の軽鎖可変ドメイン配列由来の１、２もしくは３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
ＶＨドメイン
QVQLVQSGAEVMKPGSSVKVSCKASGYTFSWYWLEWVRQAPGHGLEWMGEIDPGTFTTNYNEKFKARVTFTADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARFSHFSGSNYDYFDYWGQGTLVTVSS（配列番号１２７）
ＶＬドメイン
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSIGTNIHWYQQKPGQAPRLLIYYASESISGIPA
RFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQSWSWPTTFGGGTKVEIK（配列番号１２８）
【００８５】
一部の実施形態では、個体は、ラベル投与量（たとえば、必要に応じて蕁麻疹の処置について示された、Ｈ１−抗ヒスタミン剤の承認された投与量）でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、単回投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である。一部の実施形態では、個体は、４倍投与量（たとえば、必要に応じて蕁麻疹の処置について示された、Ｈ１−抗ヒスタミン剤のラベル投与量または承認された投与量の４倍）でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置に対して抵抗性または不応性である。
Ａ．慢性蕁麻疹
【００８６】
本開示のある特定の態様は、慢性蕁麻疹を有する個体に関する。慢性蕁麻疹は、皮膚におけるマスト細胞の不適切な活性化によって引き起こされる一群の炎症性皮膚疾患であり、皮膚上のじんま疹または膨疹、そう痒、刺激、および一部の場合には血管性浮腫の出現を生じる。
【００８７】
慢性蕁麻疹は、マスト細胞活性化の具体的なトリガーによって分類される。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性コリン性蕁麻疹である。コリン性蕁麻疹は、体温および／または発汗における増加によって誘発される。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性皮膚描記性蕁麻疹、症候性皮膚描記症、または人工蕁麻疹である。症候性皮膚描記症または皮膚描記性蕁麻疹は、皮膚の物理的擦過によって誘発され、罹患した個体が、（たとえば、物で引っ掻くことまたは他の擦過によって）それらの皮膚において文字もしくは数字を描く場合があり、それらは次いで、皮膚上に文字／数字形の膨疹として出現するので、そのように命名されている。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性寒冷蕁麻疹（皮膚の寒冷曝露によって誘発される）である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性振動蕁麻疹（皮膚の振動、摩擦、および／または反復的な引き伸ばしによって誘発される）である。一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性特発性（idiopathic）蕁麻疹または慢性特発性（spontaneous）蕁麻疹である。特発性（idiopathic）蕁麻疹は、特発性（spontaneous）蕁麻疹とも呼ばれ、未知の原因によって誘発される、および／または突発性に出現する。
【００８８】
一部の実施形態では、慢性蕁麻疹は、慢性自己免疫性蕁麻疹（自己免疫応答によって誘発される）である。種々の臨床検査および実験室検査が、自己免疫性蕁麻疹の診断のために提唱されている。たとえば、Konstantinou,  G.N.  et  al.  (2013)  Allergy  68:27-36を参照されたい。一部の実施形態では、慢性自己免疫性蕁麻疹であると診断された個体は、以下：好塩基球ヒスタミン放出アッセイ（ＢＨＲＡ）、好塩基球活性化マーカー発現（たとえば、血清ＣＤ６３および／またはＣＤ２０３ｃ）、自己血清皮膚検査（ＡＳＳＴ）、ならびにＩｇＥおよび／またはＦｃｅＲＩに対するＩｇＧ自己抗体についてのイムノアッセイのうち１つまたは複数において陽性の結果を示している。
【００８９】
一部の実施形態では、個体は、慢性コリン性蕁麻疹、皮膚描記性蕁麻疹、寒冷蕁麻疹、振動蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹、または特発性蕁麻疹を有する。一部の実施形態では、個体は、慢性コリン性蕁麻疹、皮膚描記性蕁麻疹、症候性皮膚描記症、寒冷蕁麻疹、振動蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹、または特発性蕁麻疹であると診断されている。一部の実施形態では、個体は、慢性コリン性皮膚描記性蕁麻疹を有する、または慢性コリン性皮膚描記性蕁麻疹であると診断されている。一部の実施形態では、個体は、慢性皮膚描記性蕁麻疹もしくは症候性皮膚描記症を有する、または慢性皮膚描記性蕁麻疹もしくは症候性皮膚描記症であると診断されている。一部の実施形態では、蕁麻疹は、単回または４倍投与量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、制御されないままである、または適切に制御されないままである。
Ｂ．処置に対する応答
【００９０】
一部の実施形態では、本明細書に記載される個体（たとえば、慢性蕁麻疹を有する個体）に、有効量の、本開示の組成物またはヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する本明細書に記載される抗体（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体）を投与するステップは、抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、個体における１つまたは複数の（たとえば、１つまたは複数の、２つまたはそれよりも多い、３つまたはそれよりも多い、４つまたはそれよりも多い、などの）症状を低減させる。
【００９１】
慢性蕁麻疹を有する個体における処置に対する応答は、種々の方法によって評価され得る。たとえば、蕁麻疹コントロールテスト（ＵＣＴ）は、たとえば、処置に対する、患者により報告される転帰を提供するために使用され得る。ＵＣＴは、慢性蕁麻疹における症状コントロールについてのスコアである。たとえば、Weller,  K.  et  al.  (2014)  J.  Allergy  Clin.  Immunol.  133:1365-1372を参照されたい。本明細書に記載される使用に適切な、処置に対する応答を評価するための他の技法または測定基準には、蕁麻疹活動性スコア（Ｕｒｔｉｃａｒｉａ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ）（ＵＡＳ）またはＵＡＳ７（ｗｗｗ．ｉｔｃｈｉｎｇｆｏｒａｎｓｗｅｒｓ．ｃａ／ｄｏｃｓ／ＵＡＳ７−Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ．ｐｄｆを参照されたい）；コリン性蕁麻疹活動性スコア（Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｕｒｔｉｃａｒｉａ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ）（ＣｈｏｌＵＡＳ）またはＣｈｏｌＵＡＳ７（Koch,  K.  et  al.  (2016)  J.  Allergy  Clin.  Immunol.  138:1483-1485を参照されたい）；１週間当たりの無症状の日数；皮膚科学生活の質インデックス（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｌｉｆｅ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）（ＤＬＱＩ；ｗｗｗ．ｂａｄ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｓｈａｒｅｄ／ｇｅｔ−ｆｉｌｅ．ａｓｈｘ？ｉｄ＝１６５３＆ｉｔｅｍｔｙｐｅ＝ｄｏｃｕｍｅｎｔを参照されたい）、慢性蕁麻疹生活の質アンケート（Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｕｒｔｉｃａｒｉａ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＣＵ−Ｑ２ｏＬ；Baiardini,  I.  et  al.  (2005)  Allergy  60:1073-1078を参照されたい）、血管性浮腫生活の質アンケート（Ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＡＥ−ＱｏＬ；Weller,  K.  et  al.  (2016)  Allergy  71:1203-1209を参照されたい）、症候性皮膚描記症生活の質アンケート（Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ  Ｄｅｒｍｏｇｒａｐｈｉｓｍ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＳＤ−ＱｏＬ）、またはコリン性蕁麻疹生活の質アンケート（Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｕｒｔｉｃａｒｉａ  Ｑｕａｌｉｔｙ−ｏｆ−Ｌｉｆｅ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＣｈｏｌＵ−ＱｏＬ；Ruft,  J.  et  al.  (2018)  Clin.  Exp.  Allergy  48:433-444を参照されたい）によって評価される、生活の質スコアにおける変化；血管性浮腫の発症における変化（たとえば、血管性浮腫活動性スコア（Ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ）、ＡＡＳによって評価される；ｍｏｘｉｅ−ｇｍｂｈ．ｄｅ／ｍｅｄｉａ／ｐｄｆ／ａａｓ＿ｓｃｏｒｉｎｇｔｅｍｐｌａｔｅ＿ｍｏｘｉｅ．ｐｄｆを参照されたい）；じんま疹の数における変化；じんま疹重症度スコア（ＨＳＳ）における変化；そう痒重症度における変化；そう痒重症度スコア（ＩＳＳ）における変化；医師の評価における変化；トリガー閾値における変化；完全奏効（ＣＲ）率、部分奏効（ＰＲ）率、および無奏効（ＮＲ）率；血清トリプターゼ、血清好酸球、総血清ＩｇＥ、血清好塩基球、および／または血清好酸球カチオン性タンパク質における変化；ならびに再燃、リバウンド、または持続性の処置効果の比率が含まれるがこれらに限定されない。トリガー閾値およびそれに対する変化は、たとえば、限定なしに、パルス制御エルゴメトリー試験（Ｐｕｌｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｅｒｇｏｍｅｔｒｙ  Ｔｅｓｔ）（ＰＣＥ；Altrichter,  S.  et  al.  (2014)  J.  Dermatol.  Sci.  75:88-93を参照されたい）、ＦｒｉｃＴｅｓｔ（登録商標）（ｍｏｘｉｅ−ｇｍｂｈ．ｄｅ／ｍｅｄｉａ／ｐｄｆ／ｆｒｉｃｔｅｓｔ−ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ−ｆｏｒ−ｕｓｅ．ｐｄｆを参照されたい）、またはＴｅｍｐＴｅｓｔ（登録商標）（ｓｋｉｎｏｂｓ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｅｎ／ｓｕｐｐｌｉｅｒｓ／ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ−ｅｎ／ｔｅｍｐｔｅｓｔ−ｂｙ−ｃｋ−ｔｏ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ−ｃｏｌｄ−ａｎｄ−ｈｅａｔ−ｃｏｎｔａｃｔ−ｕｒｔｉｃａｒｉａ／を参照されたい）によって評価され得る。ＵＡＳスコアは、じんま疹重症度スコア（ＨＳＳ）およびそう痒重症度スコア（ＩＳＳ）へとさらに分割され得、これらは各々、０（なし）から３（強い／重症）までのスケールで定量される。毎週のＨＳＳ７およびＩＳＳ７スコアは、直前の７日間のそれぞれの平均ＨＳＳまたはＩＳＳスコアを合計することによって計算され得る。
【００９２】
一部の実施形態では、個体における自己評価された疾患活動性（たとえば、上記例示的な測定基準のいずれかによって評価される）は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して低減する。一部の実施形態では、自己評価された疾患活動性は、以下の測定基準：ＵＣＴ、ＵＡＳ７、およびＣｈｏｌＵＡＳ７のうち１つまたは複数によって評価される。
【００９３】
一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１２未満のＵＣＴスコアを示している。たとえば、一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１２もしくはそれ未満、１１もしくはそれ未満、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、２もしくはそれ未満、または１のＵＣＴスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与後、たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後には、１２もしくはそれよりも大きい（たとえば、１２もしくはそれよりも大きい、１３もしくはそれよりも大きい、１４もしくはそれよりも大きい、１５もしくはそれよりも大きい、または１６の）ＵＣＴスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１２もしくはそれ未満、１１もしくはそれ未満、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、２もしくはそれ未満、または１のＵＣＴスコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）は、１０もしくはそれよりも大きい、１１もしくはそれよりも大きい、１２もしくはそれよりも大きい、１３もしくはそれよりも大きい、１４もしくはそれよりも大きい、１５もしくはそれよりも大きい、または１６のＵＣＴスコア（処置後のＵＣＴスコアの方が処置前のＵＣＴスコアよりも高いすべての可能なペアワイズのそれらの組合せを含めて）を有する。たとえば、一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＣＴスコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＵＣＴスコアを少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、または１３増加させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＣＴスコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＵＣＴスコアを少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％増加させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＣＴスコアと比較して、（たとえば、処置の２２週目に、）個体のＵＣＴスコアを少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、または少なくとも４００％増加させる。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、４もしくはそれ未満または約３のＵＣＴスコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の２２週目に）は、１４またはそれよりも大きいＵＣＴスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、６もしくはそれ未満または約５のＵＣＴスコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の２２週目に）は、１２またはそれよりも大きいＵＣＴスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、約６のＵＣＴスコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の２２週目に）は、９またはそれよりも大きいＵＣＴスコアを有する。
【００９４】
一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１６よりも大きいＵＡＳ７スコアを示している。たとえば、一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１６もしくはそれよりも大きい、１７もしくはそれよりも大きい、１８もしくはそれよりも大きい、１９もしくはそれよりも大きい、２０もしくはそれよりも大きい、２１もしくはそれよりも大きい、２２もしくはそれよりも大きい、２３もしくはそれよりも大きい、２４もしくはそれよりも大きい、２５もしくはそれよりも大きい、２６もしくはそれよりも大きい、２７もしくはそれよりも大きい、２８もしくはそれよりも大きい、２９もしくはそれよりも大きい、または３０もしくはそれよりも大きいＵＡＳ７スコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与後、たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後には、１６もしくはそれ未満、１５もしくはそれ未満、１４もしくはそれ未満、１３もしくはそれ未満、１２もしくはそれ未満、１１もしくはそれ未満、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、または２もしくはそれ未満のＵＡＳ７スコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１６もしくはそれよりも大きい、１７もしくはそれよりも大きい、１８もしくはそれよりも大きい、１９もしくはそれよりも大きい、２０もしくはそれよりも大きい、２１もしくはそれよりも大きい、２２もしくはそれよりも大きい、２３もしくはそれよりも大きい、２４もしくはそれよりも大きい、２５もしくはそれよりも大きい、２６もしくはそれよりも大きい、２７もしくはそれよりも大きい、２８もしくはそれよりも大きい、２９もしくはそれよりも大きい、または３０もしくはそれよりも大きいＵＡＳ７スコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）は、１６もしくはそれ未満、１５もしくはそれ未満、１４もしくはそれ未満、１３もしくはそれ未満、１２もしくはそれ未満、１１もしくはそれ未満、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、または２もしくはそれ未満のＵＡＳ７スコア（処置前のＵＡＳ７スコアの方が処置後のＵＡＳ７スコアよりも高いすべての可能なペアワイズのそれらの組合せを含めて）を有する。たとえば、一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＡＳ７スコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＵＡＳ７スコアを少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または３５減少させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＡＳ７スコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＵＡＳ７スコアを少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％減少させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＡＳ７スコアと比較して、（たとえば、処置の２２週目に、）個体のＵＡＳ７スコアを少なくとも７５％減少させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＵＡＳ７スコアと比較して、個体のＵＡＳ７スコアを１０またはそれよりも大きく減少させる。ＵＡＳ測定基準の例示的な説明については、たとえば、Mathias,  S.D.  et  al.  (2012)  Ann.  Allergy  Asthma  Immunol.  108:20-24を参照されたい。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１７もしくはそれよりも大きいまたは約１８のＵＡＳ７スコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の２２週目に）は、４またはそれ未満のＵＡＳ７スコアを有する。
【００９５】
一部の実施形態では、完全奏効は、１２〜１６のＵＣＴスコア、およびベースラインからの３またはそれよりも大きい変化を指す。一部の実施形態では、部分奏効は、ベースラインからの３またはそれよりも大きい、ＵＣＴスコアにおける変化を指す。一部の実施形態では、無奏効は、ベースラインからの３未満の、ＵＣＴスコアにおける変化を指す。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、慢性特発性蕁麻疹を有する抗ＩｇＥ抗体（たとえば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、オマリズマブとしても公知）ナイーブ個体において、８０％、８５％、または９０％よりも高い完全奏効率を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、慢性特発性蕁麻疹を有する抗ＩｇＥ抗体（たとえば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、オマリズマブとしても公知）ナイーブ個体において、８０％、８５％、または９０％よりも高い奏効率を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、コリン性蕁麻疹を有する個体において、８０％よりも高い完全奏効率を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、コリン性蕁麻疹を有する個体において、８０％よりも高い奏効率を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、症候性皮膚描記症を有する個体において、少なくとも７０％の奏効率を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、抗ＩｇＥ抗体（たとえば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、オマリズマブとしても公知）不応性の慢性特発性蕁麻疹を有する個体において（たとえば、抗ＩｇＥ抗体による処置に対して不適切な応答を示している、または慢性蕁麻疹が、抗ＩｇＥ抗体による処置によって不適切に制御されている、慢性特発性蕁麻疹を有する個体において）、５０％よりも高い奏効率を生じる。
【００９６】
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前に１〜３のＨＳＳおよび／またはＩＳＳスコアを有する個体において、０のＨＳＳおよび／またはＩＳＳスコアを生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、個体においてトリガー閾値における低減を生じる。たとえば、一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前に陽性ＦｒｉｃＴｅｓｔ（登録商標）を有する個体において、陰性のＦｒｉｃＴｅｓｔ（登録商標）結果を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前に陽性のＰＣＥ検査を有する個体において、陰性のＰＣＥ検査結果を生じる。
【００９７】
一部の実施形態では、個体における自己評価された生活の質スコア（たとえば、上記例示的な測定基準のいずれかによって評価される）は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して改善される。一部の実施形態では、自己評価された生活の質スコアは、以下の測定基準：ＤＬＱＩ、ＣＵ−Ｑ２ｏＬ、ＡＥ−ＱｏＬ、ＳＤ−ＱｏＬ、およびＣｈｏｌＵ−ＱｏＬのうち１つまたは複数によって評価される。
【００９８】
一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１０よりも大きいＤＬＱＩスコアを示している。たとえば、一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１０もしくはそれよりも大きい、１１もしくはそれよりも大きい、１２もしくはそれよりも大きい、１３もしくはそれよりも大きい、１４もしくはそれよりも大きい、１５もしくはそれよりも大きい、１６もしくはそれよりも大きい、１７もしくはそれよりも大きい、１８もしくはそれよりも大きい、１９もしくはそれよりも大きい、２０もしくはそれよりも大きい、２１もしくはそれよりも大きい、２２もしくはそれよりも大きい、２３もしくはそれよりも大きい、２４もしくはそれよりも大きい、または２５もしくはそれよりも大きいＤＬＱＩスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与後、たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後には、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、または２もしくはそれ未満のＤＬＱＩスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、１０もしくはそれよりも大きい、１１もしくはそれよりも大きい、１２もしくはそれよりも大きい、１３もしくはそれよりも大きい、１４もしくはそれよりも大きい、１５もしくはそれよりも大きい、１６もしくはそれよりも大きい、１７もしくはそれよりも大きい、１８もしくはそれよりも大きい、１９もしくはそれよりも大きい、２０もしくはそれよりも大きい、２１もしくはそれよりも大きい、２２もしくはそれよりも大きい、２３もしくはそれよりも大きい、２４もしくはそれよりも大きい、または２５もしくはそれよりも大きいＤＬＱＩスコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）は、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、または２もしくはそれ未満のＤＬＱＩスコア（処置前のＤＬＱＩスコアの方が処置後のＤＬＱＩスコアよりも高いすべての可能なペアワイズのそれらの組合せを含めて）を有する。たとえば、一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＤＬＱＩスコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＤＬＱＩスコアを少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０減少させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＤＬＱＩスコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＤＬＱＩスコアを少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％減少させる。
【００９９】
一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、０．６０よりも大きい、０．６５よりも大きい、０．７０よりも大きい、０．７５よりも大きい、０．８０よりも大きい、０．８５よりも大きい、または０．９０よりも大きいＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアを示している。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与後、たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後には、０．６０もしくはそれ未満、０．５５もしくはそれ未満、０．５０もしくはそれ未満、０．４５もしくはそれ未満、０．４０もしくはそれ未満、０．３５もしくはそれ未満、０．３０もしくはそれ未満、０．２５もしくはそれ未満、または０．２０もしくはそれ未満のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアを有する。一部の実施形態では、個体は、本開示の組成物または抗体の投与前に、０．５０よりも大きい、０．５５よりも大きい、０．６０よりも大きい、０．６５よりも大きい、０．７０よりも大きい、０．７５よりも大きい、０．８０よりも大きい、０．８５よりも大きい、または０．９０よりも大きいＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアを有し、本開示の組成物または抗体の投与後に（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）は、０．６０もしくはそれ未満、０．５５もしくはそれ未満、０．５０もしくはそれ未満、０．４５もしくはそれ未満、０．４０もしくはそれ未満、０．３５もしくはそれ未満、０．３０もしくはそれ未満、０．２５もしくはそれ未満、または０．２０もしくはそれ未満のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコア（処置前のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアの方が処置後のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアよりも高いすべての可能なペアワイズのそれらの組合せを含めて）を有する。たとえば、一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアを少なくとも０．０５、少なくとも０．１０、少なくとも０．１５、少なくとも０．２０、少なくとも０．２５、少なくとも０．３０、少なくとも０．３５、少なくとも０．４０、少なくとも０．４５、または少なくとも０．５０減少させる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、処置前の個体のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアと比較して、（たとえば、処置の４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間後に）個体のＣＵ−Ｑ２ｏＬスコアを少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％減少させる。
【０１００】
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、組成物または抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、血管性浮腫の発症、じんま疹の数、およびそう痒重症度のうち１つまたは複数における低減をもたらす。
【０１０１】
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置は、たとえば、組成物もしくは抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、または適切な参照値と比較して、１週間当たりの無症状の日数およびトリガー閾値のうち１つまたは両方における増加をもたらす。
【０１０２】
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置に対する応答は、個体から得られた試料（たとえば、血清試料）中の好酸球および／または好塩基球の数をカウントすることによって評価される。たとえば、一部の実施形態では、個体由来の血清試料中の好酸球の数および／または好塩基球の数は、たとえば、組成物もしくは抗体の投与前に個体から得られた血清試料中のベースラインレベルと比較して、または適切な参照値と比較して、低減する。
【０１０３】
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体による処置に対する応答は、個体から得られた試料（たとえば、血清試料）中の１つもしくは複数の遺伝子またはポリペプチドの発現レベルによって評価される。たとえば、一部の実施形態では、個体由来の試料（たとえば、血清試料）中のトリプターゼ、好酸球カチオン性タンパク質、および／または総ＩｇＥは、たとえば、組成物もしくは抗体の投与前に個体から得られた血清試料中のベースラインレベルと比較して、または適切な参照値と比較して、低減する。
【０１０４】
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体の投与は、処置に対して持続性の応答を生じる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体の投与は、（たとえば、処置の休止後に、または単回用量の抗体もしくは組成物の後に、）処置に対して完全奏効を生じる。
【０１０５】
本明細書において互換可能に使用される「ベースライン」または「ベースライン値」という用語は、療法（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体）の投与の前または療法の投与の開始時における、症状の測定または特徴付けを指し得る。ベースライン値は、本明細書において企図される慢性蕁麻疹の症状の低減または改善を決定するために、参照値と比較することができる。参照値および／またはベースライン値は、１つの個体から、２つの異なる個体から、または個体の群（たとえば、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくはそれよりも多くの個体の群）から得ることができる。
【０１０６】
本明細書において互換可能に使用される「参照」または「参照値」という用語は、慢性蕁麻疹を有さない個体（またはそのような個体の群）における値または症状の測定または特徴付けを指し得る。「参照値」は、絶対値、相対値、上限および／または下限を有する値、値の範囲、平均値（ａｖｅｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ）、中央値、平均値（ｍｅａｎ  ｖａｌｕｅ）、またはベースライン値と比較した値であり得る。同様に、「ベースライン値」は、絶対値、相対値、上限および／または下限を有する値、値の範囲、平均値（ａｖｅｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ）、中央値、平均値（ｍｅａｎ  ｖａｌｕｅ）、または参照値と比較した値であり得る。参照値は、１つの個体から、２つの異なる個体から、または個体の群（たとえば、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくはそれよりも多くの個体の群）から、得ることができる。一部の実施形態では、参照値は、当該技術分野における標準値またはベンチマーク値を指す。一部の実施形態では、参照値は、１つまたは複数の個体（たとえば、慢性蕁麻疹を有さない）からｄｅ  ｎｏｖｏで計算された値を指す。
Ｃ．投与
【０１０７】
疾患の予防または処置について、活性薬剤の適切な投与量は、上記に定義されるような処置しようとする疾患の種類、疾患の重症度および経過、薬剤が予防目的で投与されるのか治療目的で投与されるのか、これまでの治療歴、個体の臨床病歴および薬剤に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存する。薬剤は、好適には、１回、または一連の処置にわたって、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）の投与間の間隔は、約１ヶ月間であるか、またはそれよりも長い。一部の実施形態では、投与間の間隔は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間であるか、またはそれよりも長い。本明細書において使用されるとき、投与間の間隔とは、抗体の１回の投与と、抗体の次回の投与との間の期間を指す。本明細書において使用されるとき、約１ヶ月間の間隔には、４週間が含まれる。したがって、一部の実施形態では、投与間の間隔は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間であるか、またはそれよりも長い。一部の実施形態では、処置には、抗体の複数回の投与が含まれ、ここで、投与間の間隔は、変動してもよい。たとえば、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、後続の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態では、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、第２の投与と第３の投与との間の間隔は、約２ヶ月間であり、後続の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、固定用量（flat  dose）で投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ〜約１８００ｍｇの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、１用量当たり、およそで０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、および１８００ｍｇのうちのいずれかの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、１用量当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、１用量当たり、およそで１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ��３５０ｍｇ、４００ｍｇ、および４５０ｍｇのうちのいずれかの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇの投与量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、およそで０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、または１０．０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかの投与量で、個体に投与される。上記に記載される投薬頻度のうちのいずれかを、使用することができる。上記に記載される任意の投薬頻度を、本明細書に記載される方法および組成物の使用において、使用することができる。本明細書に記載される抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）での処置の有効性は、１週間ごとから３ヶ月間ごとの範囲の間隔で、本明細書に記載される方法またはアッセイのうちのいずれかを使用して、評価することができる。一部の実施形態では、処置の有効性（たとえば、１つまたは複数の症状の低減または改善）は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体の投与の後、約１ヶ月間ごと、約２ヶ月間ごと、約３ヶ月間ごと、約４ヶ月間ごと、約５ヶ月間ごと、約６ヶ月間ごと、またはそれよりも長い期間ごとに、評価される。一部の実施形態では、処置の有効性（たとえば、１つまたは複数の症状の低減または改善）は、約１週間ごと、約２週間ごと、約３週間ごと、約４週間ごと、約５週間ごと、約６週間ごと、約７週間ごと、約８週間ごと、約９週間ごと、約１０週間ごと、約１１週間ごと、約１２週間ごと、約１６週間ごと、約２０週間ごと、約２４週間ごと、またはそれよりも長い期間ごとに、評価される。
【０１０８】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、約０．１ｍｇ／ｋｇから約４．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１つまたは複数の用量で、（たとえば、静脈内注入によって）個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体、たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体、約０．５ｍｇ／ｋｇの抗体、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、約１．５ｍｇ／ｋｇの抗体、約２．０ｍｇ／ｋｇの抗体、約２．５ｍｇ／ｋｇの抗体、または約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む１つまたは複数の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約２８日間の間隔で、２つまたはそれよりも多くの用量（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）で、（たとえば、静脈内注入によって）個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、２つまたはそれよりも多くの用量（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）で、（たとえば、静脈内注入によって）個体に毎月投与される。一部の実施形態では、抗体は、約４週間の間隔で、２つまたはそれよりも多くの用量（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）で、（たとえば、静脈内注入によって）個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、２つまたはそれよりも多くの用量（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）で、（たとえば、静脈内注入によって）個体に毎月投与される。一部の実施形態では、抗体は、以下のスケジュール：１日目、２９日目、５７日目、８５日目、１１３日目、および１４１日目に従って、（たとえば、静脈内注入によって）個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、以下のスケジュール：１日目に約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体、２９日目に約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、５７日目に約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、８５日目に約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体、１１３日目に約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体、および１４１日目に約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体に従って、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、８５日目、１１３日目、または１４１日目に与えられる用量は、以下に基づいて選択される：個体が症状改善および／または≧１２のＵＣＴスコアを経験している場合、１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、または個体が＜１２のＵＣＴスコアを有する場合、３．０ｍｇ／ｋｇの抗体。
【０１０９】
本明細書に記載されるヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、単独または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで、本明細書に記載される方法において使用することができる。たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、慢性蕁麻疹を処置および／または予防するための１つまたは複数の（たとえば、１つもしくは複数、２つもしくはそれを上回る、３つもしくはそれを上回る、４つもしくはそれを上回るなどの）追加の治療剤と、共投与され得る。本明細書において企図される治療剤には、Ｈ−２受容体アンタゴニスト、Ｈ１−抗ヒスタミン剤、Ｈ２−抗ヒスタミン剤、抗ＩｇＥ抗体（たとえば、オマリズマブ）、コルチコステロイド、ドキセピン、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、シクロスポリン、およびタクロリムスが含まれるがこれらに限定されない。本開示の抗体は、たとえば、Ｈ１−抗ヒスタミン剤および／または抗ＩｇＥ抗体（たとえば、オマリズマブ）に対して抵抗性もしくは不応性である（またはそれによる処置後に再燃した）個体を処置する際に使用され得るが、Ｈ１−抗ヒスタミン剤および／または抗ＩｇＥ抗体処置は、一部の場合には、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の非存在下でのＨ１−抗ヒスタミン剤および／または抗ＩｇＥ抗体による処置が最適未満に有効であるとしても、本開示の抗体と組み合わせて使用され得る。
【０１１０】
上記に示されるような組合せ療法には、組合せ投与（２つまたはそれを上回る治療剤が、同じかまたは別個の製剤に含まれる）および別個の投与が包含され、別個の投与の場合には、本開示の抗体の投与は、１つまたは複数の追加の治療剤の投与の前、それと同時、および／またはその後に、行い得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の投与および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、約２ヶ月以内、約３ヶ月以内、約４ヶ月以内、約５ヶ月以内、または約６ヶ月以内に行う。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の投与および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１週間以内、約２週間以内、または約３週間以内に行う。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の投与および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１日以内、約２日以内、約３日以内、約４日以内、約５日以内、または約６日以内に行う。
【０１１１】
抗Ｓｉｇｌｅｃ８抗体および／または１つもしくは複数の追加の治療剤は、当該技術分野において公知の任意の好適な投与経路によって投与することができ、これには、経口投与、舌下投与、頬側投与、局所投与（ｔｏｐｉｃａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、直腸投与、吸入によるもの、経皮投与、皮下注射、皮内注射、静脈内（ＩＶ）注射、動脈内注射、筋肉内注射、心臓内注射、骨内注射、腹腔内注射、経粘膜投与、膣投与、硝子体内投与、関節内投与、関節周囲投与、局所投与（ｌｏｃａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、皮膚上投与、またはこれらの任意の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｄ．抗体
【０１１２】
本開示のある特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する単離された抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合するアゴニスト抗体）を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を有する：（１）ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合すること、（２）ヒトＳｉｇｌｅｃ−８の細胞外ドメインに結合すること、（３）ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に、マウス抗体２Ｅ２および／もしくはマウス抗体２Ｃ４よりも高い親和性で結合すること、（４）ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に、マウス抗体２Ｅ２および／もしくはマウス抗体２Ｃ４よりも高いアビディティーで結合すること、（５）サーマルシフトアッセイにおいて、約７０℃〜７２℃もしくはそれよりも高いＴｍを有すること、（６）低減されたフコシル化度を有するか、もしくはフコシル化されていないこと、（７）好酸球上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導すること、（８）マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、マスト細胞を枯渇させるかもしくはその数を低減させること、（９）マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、マスト細胞のＦｃεＲＩ依存性活性（たとえば、ヒスタミンの放出、ＰＧＤ２の放出、Ｃａ２＋フラックス、および／もしくはβ−ヘキソサミニダーゼの放出など）を阻害すること、（１０）ＡＤＣＣ活性を向上させるように操作されていること、（１１）マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅すること（ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／もしくはｉｎ  ｖｉｖｏで）、（１２）ヒトおよび非ヒト霊長類のＳｉｇｌｅｃ−８に結合すること、（１３）ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１、ドメイン２、および／もしくはドメイン３に結合するか、またはヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１、ドメイン２、および／もしくはドメイン３を含むＳｉｇｌｅｃ−８ポリペプチド（たとえば、本明細書に記載される融合タンパク質）に結合すること、ならびに（１４）マウス抗体２Ｅ２または２Ｃ４のＥＣ５０よりも低いＥＣ５０で、活性化した好酸球を枯渇させること。米国特許第９，５４６，２１５号および／または国際公開第ＷＯ２０１５０８９１１７号に記載されている抗体のうちのいずれも、本明細書に提供される方法、組成物、およびキットにおいて使用を見出し得る。
【０１１３】
一態様では、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、マスト細胞を枯渇させるか、またはその数を低減させる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、マスト細胞により媒介される活性を阻害する。
【０１１４】
一態様では、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン２内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８の細胞外ドメイン内の線形エピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８の細胞外ドメイン内の立体構造エピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、好酸球上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、マスト細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、マスト細胞により媒介される活性を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現するヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合し、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体は、活性化した好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体（たとえば、フコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体）は、血中好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書の抗体（たとえば、フコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体）は、末梢血から好酸球を枯渇させ、マスト細胞活性化を阻害する。
【０１１５】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。霊長類交差反応性を有する抗体の同定は、非ヒト霊長類における抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の前臨床試験に有用であろう。一態様では、本発明は、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を提供する。一態様では、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８は、配列番号１１８のアミノ酸配列またはその一部分を含む。一部の実施形態では、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８は、配列番号１１９のアミノ酸配列またはその一部分を含む。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、ヒヒ（たとえば、Ｐａｐｉｏ  Ａｎｕｂｉｓ）である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３内のエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、マウス抗体である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である。
【０１１６】
一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、モノクローナル抗体である。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片である。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片を含む。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体のいずれかは、精製されている。
【０１１７】
一態様では、Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合するマウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、提供される。マウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と同じエピトープに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体もまた、提供される。Ｓｉｇｌｅｃ−８に対するマウス抗体である２Ｅ２抗体および２Ｃ４抗体は、米国特許第８，２０７，３０５号、米国特許第８，１９７，８１１号、米国特許第７，８７１，６１２号、および米国特許第７，５５７，１９１号に記載されている。
【０１１８】
一態様では、Ｓｉｇｌｅｃ−８への結合について、本明細書に記載される任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、提供される。本明細書に記載される任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と同じエピトープに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体もまた、提供される。
【０１１９】
本開示の一態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体をコードするポリヌクレオチドが、提供される。ある特定の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが、提供される。ある特定の実施形態では、そのようなベクターを含む宿主細胞が、提供される。本開示の別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が、提供される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、慢性蕁麻疹の処置のための医薬製剤である。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、慢性蕁麻疹の予防のための医薬製剤である。
【０１２０】
一態様では、マウス抗体２Ｃ４のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、マウス抗体２Ｅ２のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。
【０１２１】
一態様では、マウス抗体１Ｃ３のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、マウス抗体４Ｆ１１のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、マウス抗体１Ｈ１０のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。
【０１２２】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン２内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。
【０１２３】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。
【０１２４】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン２内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。
【０１２５】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する。
【０１２６】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する。
【０１２７】
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１２８】
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１２９】
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１３０】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１３１】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１３２】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１３３】
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１３４】
本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、任意の好適なフレームワーク可変ドメイン配列を含み得るが、ただし、抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する能力を保持することを条件とする。本明細書において使用されるとき、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と表記され、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と表記される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号２６、３４、３８、および４５の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、およびＨＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号４８、５１、５５、および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号４８、５１、５８、および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。
【０１３５】
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）、および配列番号４５または４６（ＨＣ−ＦＲ４）のＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）、および配列番号４５または４６（ＨＣ−ＦＲ４）のＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）、および配列番号６０（ＬＣ−ＦＲ４）のＬＣ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）、および配列番号６０（ＬＣ−ＦＲ４）のＬＣ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
【０１３６】
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ−Ｈ１（ＩＹＧＡＨ（配列番号６１））；
ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２（ＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳ（配列番号６２））；および
ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３（ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＹ（配列番号６３）；ＤＧＳＳＰＹＹＹＧＭＥＹ（配列番号６７）；ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＤＹ（配列番号６８）；ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＶ（配列番号６９）；またはＤＧＳＳＰＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号７０））
【０１３７】
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ−Ｈ１（ＳＹＡＭＳ（配列番号８８）；ＤＹＹＭＹ（配列番号８９）；またはＳＳＷＭＮ（配列番号９０））；
ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２（ＩＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＳＤＳＶＫＧ（配列番号９１）；ＲＩＡＰＥＤＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９２）；またはＱＩＹＰＧＤＤＹＴＮＹＮＧＫＦＫＧ（配列番号９３））；およびｃ）ＨＶＲ−Ｈ３（ＨＥＴＡＱＡＡＷＦＡＹ（配列番号９４）；ＥＧＮＹＹＧＳＳＩＬＤＹ（配列番号９５）；またはＬＧＰＹＧＰＦＡＤ（配列番号９６））
【０１３８】
一部の実施形態では、重鎖ＦＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＣ−ＦＲ１（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴ（配列番号２６）；ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号２７）；ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳ（配列番号２８）；またはＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号２９））；
ｂ）ＨＣ−ＦＲ２（ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号３１）；ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＧ（配列番号３２）；ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＳ（配列番号３３）；ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号３４）；ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３５）；またはＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧ（配列番号３６））；
ｃ）ＨＣ−ＦＲ３（ＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３８）；ＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３９）；ＲＬＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４０）；ＲＦＳＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４１）；ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４２）；またはＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３））；および
ｄ）ＨＣ−ＦＲ４（ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４５）；またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４６））
【０１３９】
一部の実施形態では、軽鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ−Ｌ１（ＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号６４））；
ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２（ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号６５））；および
ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３（ＱＱＲＳＳＹＰＦＴ（配列番号６６）；またはＱＱＲＳＳＹＰＹＴ（配列番号７１））
【０１４０】
一部の実施形態では、軽鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ−Ｌ１（ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号９７）；ＲＡＳＱＤＩＴＮＹＬＮ（配列番号９８）；またはＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹ（配列番号９９））；
ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２（ＤＴＳＫＬＡＹ（配列番号１００）；ＦＴＳＲＬＨＳ（配列番号１０１）；またはＤＴＳＳＬＡＳ（配列番号１０２））；および
ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３（ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号１０３）；ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（配列番号１０４）；またはＱＱＷＮＳＤＰＹＴ（配列番号１０５））
【０１４１】
一部の実施形態では、抗体は、
（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変領域
を含む。
【０１４２】
一部の実施形態では、軽鎖ＦＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＬＣ−ＦＲ１（ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号４８）；またはＥＩＩＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号４９））；
ｂ）ＬＣ−ＦＲ２（ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号５１）；ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹ（配列番号５２）；またはＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号５３））；
ｃ）ＬＣ−ＦＲ３（ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５５）；ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５６）；ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５７）；またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５８））；および
ｄ）ＬＣ−ＦＲ４（ＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫ（配列番号６０））
【０１４３】
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体）が、本明細書において提供され、ここで、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、抗体は、
（ａ）重鎖可変ドメインであって、
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む、重鎖可変ドメイン、
ならびに／または
（ｂ）軽鎖可変ドメインであって、
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む、軽鎖可変ドメイン
を含む。
【０１４４】
一態様では、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号２〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６もしくは２１から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１４５】
一態様では、配列番号１０６〜１０８から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９〜１１１から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１０６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１０７の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１０の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１０８の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１１の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【０１４６】
一部の実施形態では、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、配列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入、または欠失を含むが、そのアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失（たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入、または欠失を含むが、そのアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失（たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号１６または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１４８】
一態様では、本開示は、（ａ）表１に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ  ＨＶＲ、および／または（ｂ）表１に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ  ＨＶＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を提供する。
【０１４９】
一態様では、本開示は、（ａ）表２に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ  ＨＶＲ、および／または（ｂ）表２に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ  ＨＶＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を提供する。
【０１５０】
一態様では、本開示は、（ａ）表３に示されるものから選択される１つ、２つ、３つ、もしくは４つのＶＨ  ＦＲ、および／または（ｂ）表３に示されるものから選択される１つ、２つ、３つ、もしくは４つのＶＬ  ＦＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を提供する。
【０１５１】
一部の実施形態では、表４に示される抗体、たとえば、ＨＡＫＡ抗体、ＨＡＫＢ抗体、ＨＡＫＣ抗体などの重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。
【表１】
2021523117.tif 000006
【表２】
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【表３−１】
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【表３−２】
2021523117.tif 000009
【表３−３】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
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【０１５２】
免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがあり、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと表記される重鎖を有する。γおよびαのクラスは、さらに、サブクラスに分けられ、たとえば、ヒトは、以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと称される複数の多型性バリアントで存在し得（JefferisおよびLefranc、２００９年、mAbs、第１巻、４号、１〜７頁において概説されている）、それらのいずれも、本明細書における実施形態の一部における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、ａ、ｆ、ｎ、ｚという文字、またはそれらの組合せで表記されるものである。本明細書における実施形態のいずれでも、抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含み得る。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ここで、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、活性化した好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、休止中の好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、活性化した好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、マスト細胞を枯渇させるかまたは低減させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、マスト細胞を枯渇させるかまたはその数を低減させる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅する。一部の実施形態では、抗体は、組織におけるＳｉｇｌｅｃ−８を発現するマスト細胞を枯渇させるかまたは低減させる。一部の実施形態では、抗体は、生物学的流体におけるＳｉｇｌｅｃ−８を発現するマスト細胞を枯渇させるかまたは低減させる。
１．抗体の親和性
【０１５４】
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４と比較して、およそ同じかまたはより高い親和性および／またはより高いアビディティーで、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（たとえば、１０−８  Ｍもしくはそれを下回る、たとえば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、たとえば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも、約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍高い親和性で、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１５５】
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイによって、決定することができる。たとえば、ＫｄまたはＫｄ値は、固定した抗原ＣＭ５チップにより、約１０の応答ユニット（ＲＵ）で２５℃においてＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することによって、測定することができる。簡単に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示（instruction）に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。捕捉抗体（たとえば、抗ヒトＦｃ）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈した後、３０μｌ／分の流速で注入し、さらに、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を固定する。動態測定のために、二量体Ｓｉｇｌｅｃ−８の２倍連続希釈物を、２５℃において、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中に注入する。結合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な一対一のラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、結合および解離のセンサグラムを同時に当てはめることによって、計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。たとえば、Chen,  Y.ら、（１９９９年）、J.  Mol.  Biol.、２９３巻：８６５〜８８１頁を参照されたい。
【０１５６】
別の実施形態では、バイオレイヤー干渉法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−８に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の親和性を決定してもよい。例示的なアッセイにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ−８−Ｆｃタグ化タンパク質を、抗ヒト捕捉センサーに固定し、漸増濃度のマウス、キメラ、またはヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−８  Ｆａｂ断片とともにインキュベートして、たとえば、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ３８４  Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）などの機器を使用して親和性測定値を得る。
【０１５７】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の結合親和性は、たとえば、関連技術分野において周知の標準的な技法を使用して、Munsonら、Anal.  Biochem.、１０７巻：２２０頁（１９８０年）に記載されているスキャッチャード解析によっても決定することができる。Scatchard,  G.、Ann.  N.Y.  Acad.  Sci.、５１巻：６６０頁（１９４７年）もまた、参照されたい。
２．抗体のアビディティー
【０１５８】
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の結合アビディティーは、表面プラズモン共鳴アッセイによって、決定することができる。たとえば、ＫｄまたはＫｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ１００を使用することによって測定することができる。捕捉抗体（たとえば、ヤギ抗ヒトＦｃおよびヤギ抗マウスＦｃ）を、ＣＭ５チップに固定する。フローセルには、抗ヒト抗体または抗マウス抗体を固定することができる。アッセイは、ある特定の温度および流速、たとえば、２５℃において３０μｌ／分の流速で、行われる。二量体Ｓｉｇｌｅｃ−８を、様々な濃度、たとえば、１５ｎＭ〜１．８８ｐＭの範囲の濃度で、アッセイ緩衝液中に希釈する。抗体が捕捉され、高性能注入を行った後、解離が行われる。フローセルは、緩衝液、たとえば、５０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５により再生される。結果は、空の参照セルおよび複数回のアッセイ緩衝液注入でブランクとし、１：１のグローバルフィットパラメーターを用いて分析する。
３．競合アッセイ
【０１５９】
競合アッセイを使用して、２つの抗体が、同一もしくは立体的にオーバーラップするエピトープを認識することによって同じエピトープに結合するか、または１つの抗体が、別の抗体の抗原への結合を競合的に阻害するかを決定することができる。これらのアッセイは、当該技術分野において公知である。典型的に、抗原または抗原を発現する細胞を、マルチウェルプレートに固定し、未標識抗体が、標識抗体の結合を遮断する能力を、測定する。そのような競合アッセイの一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、本明細書に記載される２Ｅ２抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、本明細書に記載される２Ｃ４抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、配列番号２（米国特許第８，２０７，３０５号に見出される）のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４（米国特許第８，２０７，３０５号に見出される）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
４．熱安定性
【０１６０】
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８は、サーマルシフトアッセイにおいて、少なくとも約７０℃、少なくとも約７１℃、または少なくとも約７２℃の融解温度（Ｔｍ）を有する。例示的なサーマルシフトアッセイにおいて、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を含む試料は、Ｔｍを決定するために、ｑＰＣＲサーマルサイクラーにおいて、１サイクル当たり１℃の増加で７１サイクルの間、蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ）とともにインキュベートされる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、マウス２Ｅ２抗体および／またはマウス２Ｃ４抗体と比較して、同様または高いＴｍを有する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、キメラ２Ｃ４抗体と比較して、同じかまたは高いＴｍを有する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と比較して、同じかまたは高いＴｍを有する。
５．生物学的活性のアッセイ
【０１６１】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、好酸球を枯渇させ、マスト細胞を阻害する。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイ、たとえば、アネキシンＶでの染色およびＴＵＮＮＥＬアッセイは、当該技術分野において周知である。
【０１６２】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によって、Ｓｉｇｌｅｃ−８を発現する好酸球を殺滅する。一部の実施形態では、組成物は、フコシル化されていない（すなわち、無フコシル化（afucosylated））抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるフコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を含む組成物は、部分的にフコシル化されている抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を含む組成物と比較して、Ｓｉｇｌｅｃ−８を発現する好酸球に対するＡＤＣＣ活性が強化される。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、当該技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。例示的なアッセイでは、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または細胞表面上にＦｃ受容体を有する白血球、たとえば、好中球、好酸球、およびマクロファージが挙げられる。エフェクター細胞は、目的の疾患（たとえば、慢性蕁麻疹）を有する個体を含め、任意の供給源から単離することができる。標的細胞は、評価しようとする抗体が認識することができる抗原を細胞表面上に発現する任意の細胞である。そのような標的細胞の例は、細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−８を発現する好酸球である。そのような標的細胞の別の例は、細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−８を発現する細胞株（たとえば、Ｒａｍｏｓ細胞株）である（たとえば、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０））。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識することができる。標識するための試薬の例としては、放射活性物質、たとえば、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２５１ＣｒＯ４）が挙げられる。たとえば、Immunology、１４巻、１８１頁（１９６８年）；J.  Immunol.  Methods.、１７２巻、２２７頁（１９９４年）；およびJ.  Immunol.  Methods.、１８４巻、２９頁（１９９５年）を参照されたい。
【０１６３】
マスト細胞に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体のＡＤＣＣおよびアポトーシス活性を評価するための例示的なアッセイにおいて、ヒトマスト細胞は、公開されているプロトコールに従ってヒト組織もしくは生物学的流体から単離されるか（Guhlら、Biosci.  Biotechnol.  Biochem.、２０１１年、７５巻：３８２〜３８４頁；Kulkaら、Current  Protocols  in  Immunology、２００１年(John  Wiley  &  Sons,  Inc.)）、またはたとえばYokoiら、J  Allergy  Clin  Immunol.、２００８年、１２１巻：４９９〜５０５頁によって記載されているように、ヒト造血幹細胞から分化される。精製されたマスト細胞を、滅菌の９６ウェルＵ底プレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地中に再懸濁させ、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の存在下または非存在下において、３０分間、０．０００１ｎｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌの範囲の濃度で、インキュベートする。試料を、ＡＤＣＣを誘導するために、精製されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新鮮なＰＢＬありおよびなしで、さらに４〜４８時間インキュベートする。アポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞の殺滅は、マスト細胞を検出するための蛍光コンジュゲート抗体（ＣＤ１１７およびＦｃεＲ１）、ならびに生存細胞および死細胞または死滅していく細胞を区別するためのアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤを使用して、フローサイトメトリーによって分析する。アネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤでの染色は、製造業者の指示に従って行われる。
【０１６４】
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、マスト細胞により媒介される活性を阻害する。マスト細胞トリプターゼは、マスト細胞の総数および活性化のバイオマーカーとして使用されている。たとえば、総トリプターゼおよび活性トリプターゼ、ならびにヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、および１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２を、血液または尿において測定して、マスト細胞の低減を評価することができる。例示的なマスト細胞活性アッセイについては、たとえば、米国特許出願公開第２０１１０２９３６３１号を参照されたい。
Ｅ．抗体の調製
【０１６５】
本明細書に記載される抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）は、抗体を生成するための当該技術分野において利用可能な技法を使用して調製され、その例示的な方法は、以下の節においてより詳細に記載されている。
１．抗体断片
【０１６６】
本開示は、抗体断片を包含する。抗体断片は、従来の手段、たとえば、酵素消化によって、または組換え技法によって、生成することができる。ある特定の状況では、抗体全体ではなく、抗体断片を使用することに利点がある。ある特定の抗体断片の概説については、Hudsonら、（２００３年）、Nat.  Med.、９巻：１２９〜１３４頁を参照されたい。
【０１６７】
抗体断片の産生のために、様々な技法が開発されている。従来的には、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解による消化を介して得られていた（たとえば、Morimotoら、Journal  of  Biochemical  and  Biophysical  Methods、２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２年）およびBrennanら、Science、２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は、現在では、組換え宿主細胞によって、直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体断片は、すべて、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現されＥ．ｃｏｌｉから分泌され得るため、これらの断片を大量に容易に産生することが可能である。抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収することができ、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Carterら、Bio/Technology、１０巻：１６３〜１６７頁（１９９２年））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、増加したｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかである。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開第ＷＯ９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号、および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域がないインタクトな結合部位を有する唯一の種であり、したがって、これらは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用中に、非特異的な結合を低減させるのに好適であり得る。ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに、エフェクタータンパク質の融合をもたらすように、ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築することができる。Antibody  Engineering、Borrebaeck編（上記）を参照されたい。抗体断片はまた、たとえば、例として、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されている、「線形抗体」であってもよい。そのような線形抗体は、単一特異性であっても二重特異性であってもよい。
２．ヒト化抗体
【０１６８】
本開示は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、当該技術分野において公知である。たとえば、ヒト化抗体は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、非ヒトである供給源から導入されていてもよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「インポート」残基と称されることが多く、これらは、典型的に、「インポート」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Jonesら、（１９８６年）、Nature、３２１巻：５２２〜５２５頁；Riechmannら、（１９８８年）、Nature、３３２巻：３２３〜３２７頁；Verhoeyenら、（１９８８年）、Science、２３９巻：１５３４〜１５３６頁）に従って、超可変領域配列で、ヒト抗体の対応する配列を置換することによって、行われ得る。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ないものが、非ヒト種に由来する対応する配列で置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部の超可変領域残基および可能性としては一部のＦＲ残基が、げっ歯類抗体における類似の部位に由来する残基によって置換された、ヒト抗体である。
【０１６９】
ヒト化抗体を作製するのに使用する、軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減するために重要であり得る。いわゆる「ベストフィット」方法によると、げっ歯類（たとえば、マウス）抗体の可変ドメインの配列が、公知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対して、スクリーニングされる。げっ歯類の配列にもっとも近いヒト配列が、次いで、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして許容される（Simsら、（１９９３年）、J.  Immunol.、１５１巻：２２９６頁；Chothiaら、（１９８７年）、J.  Mol.  Biol.、１９６巻：９０１頁。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る（Carterら、（１９９２年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８９巻：４２８５頁；Prestaら、（１９９３年）、J.  Immunol.、１５１巻：２６２３頁。
【０１７０】
さらに、一般には、抗体を、抗原に対する高い親和性の保持および他の望ましい生物学的特性を保持してヒト化することが望ましい。この目標を達成するために、１つの方法によると、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列および様々な概念上のヒト化産物の分析のプロセスによって、調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者には熟知されている。選択された候補免疫グロブリン配列の予想される三次元立体構造を図示および表示する、コンピュータプログラムが、利用可能である。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が、可能となる。このようにして、所望される抗体の特徴、たとえば、標的抗原（複数可）に対する親和性の増加が達成されるように、ＦＲ残基を、レシピエント配列およびインポート配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基が、抗原結合への影響に、直接的かつもっとも実質的に、関与している。
３．ヒト抗体
【０１７１】
本開示のヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を、公知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって、構築することができる。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、ハイブリドーマ方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株について、たとえば、Kozbor  J.  Immunol.、１３３巻：３００１頁（１９８４年）；Brodeurら、Monoclonal  Antibody  Production  Techniques  and  Applications、５１〜６３頁（Marcel  Dekker,  Inc.、New  York、１９８７年）；およびBoernerら、J.  Immunol.、１４７巻：８６頁（１９９１年）によって、記載されている。
【０１７２】
免疫した場合に、内因性免疫グロブリン産生の非存在下においてヒト抗体の全レパートリーを産生することができる、トランスジェニック動物（たとえば、マウス）を産生することが、可能である。たとえば、キメラおよび生殖系変異体マウスにおける抗体の重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが、記載されている。そのような生殖系変異体マウスにおけるヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入により、抗原負荷した場合に、ヒト抗体の産生が生じる。たとえば、Jakobovitsら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Jakobovitsら、Nature、３６２巻：２５５頁（１９９３年）；Bruggermannら、Year  in  Immunol.、７巻：３３頁（１９９３年）を参照されたい。
【０１７３】
また、遺伝子シャッフリングを使用して、非ヒト（たとえば、げっ歯類）抗体から、ヒト抗体を得ることができるが、ここで、このヒト抗体は、出発物である非ヒト抗体に類似する親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング（ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）」とも称されるこの方法によると、本明細書に記載されるファージディスプレイ技法によって得られた非ヒト抗体断片の重鎖または軽鎖いずれかの可変領域が、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、非ヒト鎖／ヒト鎖のｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団が作製される。抗原での選択により、非ヒト鎖／ヒト鎖のキメラｓｃＦｖまたはＦａｂの単離をもたらし、ここで、ヒト鎖は、初代ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖の除去の際に破壊された抗原結合部位を修復する、すなわち、エピトープが、ヒト鎖パートナーの選択を支配する。残りの非ヒト鎖を置き換えるためにこのプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ国際公開第ＷＯ９３／０６２１３号を参照されたい）。従来のＣＤＲグラフトによる非ヒト抗体のヒト化とは異なり、この技法では、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も有さない、完全ヒト抗体が得られる。
４．二重特異性抗体
【０１７４】
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、Ｓｉｇｌｅｃ−８に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−８の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、細胞傷害性剤を、Ｓｉｇｌｅｃ−８を発現する細胞に局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（たとえば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として、調製することができる。
【０１７５】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野において公知である。MilsteinおよびCuello、Nature、３０５巻：５３７頁（１９８３年）、１９９３年５月１３日に公開された国際公開第ＷＯ９３／０８８２９号、ならびにTrauneckerら、EMBO  J.、１０巻：３６５５頁（１９９１年）を参照されたい。二重特異性抗体を生成することに関するさらなる詳細については、たとえば、Sureshら、Methods  in  Enzymology、１２１巻：２１０頁（１９８６年）を参照されたい。二重特異性抗体には、架橋型抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体が含まれる。たとえば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方が、アビジンに結合され得、他方がビオチンに結合され得る。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の従来の架橋方法を使用して作製することができる。好適な架橋剤は当該技術分野で周知であり、多数の架橋技法とともに米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
５．単一ドメイン抗体
【０１７６】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分を含む、単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；たとえば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照されたい）。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてまたは一部分からなる。
６．抗体バリアント
【０１７７】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が、企図される。たとえば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切な変更を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製することができる。そのような修飾としては、たとえば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失および／または挿入および／または置換が挙げられる。最終的な構築物に到達するように、欠失、挿入、および置換の任意の組合せを行うことができるが、ただし、最終的な構築物が、所望される特徴を有することを条件とする。アミノ酸の改変は、配列が作製される時点で、対象抗体のアミノ酸配列に導入され得る。
【０１７８】
変異誘発に好ましい位置である、抗体のある特定の残基または領域の同定に有用な方法は、CunninghamおよびWells、（１９８９年）、Science、２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって記載されている「アラニンスキャニング変異誘発」と称される。本明細書では、残基または標的残基の群が同定され（たとえば、荷電残基、たとえば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ）、中性または負に荷電したアミノ酸（たとえば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、アミノ酸と抗原との相互作用に影響する。置換に対する機能的感受性を示すこれらのアミノ酸の位置は、次いで、置換の部位にまたはそれに代えて、さらなるバリアントまたは他のバリアントを導入することによって、洗練される。したがって、アミノ酸配列の変動を導入するための部位は事前に決定されるが、変異自体の性質は、事前に決定されるわけではない。たとえば、所与の部位における変異の性能を分析するために、アラニンスキャニングまたはランダム変異誘発が、標的コドンまたは領域において行われ、発現する免疫グロブリンが、所望される活性についてスクリーニングされる。
【０１７９】
アミノ酸配列の挿入には、長さが１個の残基から、１００個もしくはそれを上回る残基を含むポリペプチドまでの範囲に及ぶ、アミノ末端および／またはカルボキシ末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドに対して抗体のＮ末端またはＣ末端への融合体が挙げられる。
【０１８０】
一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｃ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において、切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｎ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において、切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体のトランケート型形態は、組換え技法によって作製することができる。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、炭水化物部分の、アスパラギン残基の側鎖への結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、炭水化物部分の、アスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列であり、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である。したがって、これらのトリペプチド配列のうちのいずれかがポリペプチドに存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が生じる。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン（N-aceylgalactosamine）、ガラクトース、またはキシロースのうちの一つが、ヒドロキシアミノ酸に結合することを指し、ヒドロキシアミノ酸は、もっとも一般的にはセリンまたはスレオニンであるが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用可能である。
【０１８２】
抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、便宜上、（Ｎ結合型グリコシル化部位については）上述のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数が、作製されるかまたは除去されるように、アミノ酸配列を改変させることによって、達成される。改変はまた、（Ｏ結合型グリコシル化部位については）１つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基の、元の抗体の配列への付加、欠失、または置換によって、作製することもできる。
【０１８３】
抗体がＦｃ領域を含む場合は、そこに結合する炭水化物を、改変してもよい。たとえば、フコースが欠如している成熟炭水化物構造が抗体のＦｃ領域に結合している抗体が、米国特許出願第２００３／０１５７１０８号（Presta,  L.）に記載されている。また、同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に結合した炭水化物においてバイセクト型Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔらの国際公開第ＷＯ２００３／０１１８７８号およびＵｍａｎａらの米国特許第６，６０２，６８４号において言及されている。抗体のＦｃ領域に結合したオリゴ糖において少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体は、Ｐａｔｅｌらの国際公開第ＷＯ１９９７／３００８７号において報告されている。改変された炭水化物が抗体のＦｃ領域に結合している抗体については、国際公開第ＷＯ１９９８／５８９６４号（Raju,  S.）および同第ＷＯ１９９９／２２７６４号（Raju,  S.）も参照されたい。修飾されたグリコシル化を有する抗原結合性分子については、米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）もまた、参照されたい。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域を含み、ここで、Ｆｃ領域に結合した炭水化物構造は、フコースが欠如している。そのようなバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。必要に応じて、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善するその中の１つまたは複数のアミノ酸置換、たとえば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および／または３３４位における置換（残基のＥｕ番号付け）をさらに含む。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体に関連する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第ＷＯ２０００／６１７３９号、同第ＷＯ２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、同第ＷＯ２００３／０８４５７０号、同第ＷＯ２００５／０３５５８６号、同第ＷＯ２００５／０３５７７８号、同第ＷＯ２００５／０５３７４２号、Okazakiら、J.  Mol.  Biol.、３３６巻：１２３９〜１２４９頁（２００４年）；Yamane-Ohnukiら、Biotech.  Bioeng.、８７巻：６１４頁（２００４年）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ripkaら、Arch.  Biochem.  Biophys.、２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）、Presta,  Lの米国特許出願第２００３／０１５７１０８号Ａ１、およびＡｄａｍｓらの国際公開第ＷＯ２００４／０５６３１２号Ａ１、特に実施例１１）、ならびにノックアウト細胞株、たとえば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Yamane-Ohnukiら、Biotech.  Bioeng.、８７巻：６１４頁（２００４年））、ならびにβ１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（acetylglycosminyltransferase）ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
【０１８５】
野生型ＣＨＯ細胞において産生される同じ抗体におけるフコースの量と比べて、低減したフコースを有する抗体が、本明細書において企図される。たとえば、抗体は、天然のＣＨＯ細胞（たとえば、天然のグリコシル化パターンをもたらすＣＨＯ細胞、たとえば、天然のＦＵＴ８遺伝子を含むＣＨＯ細胞）によって産生された場合に別段有するであろうものよりも低い量のフコースを有する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、その抗体上のＮ結合型グリカンのうちの約５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満がフコースを含む、抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体は、その抗体上のＮ結合型グリカンのうちのいずれも、フコースを含まない抗体、すなわち、抗体は、完全にフコースがないか、またはフコースを有さないか、またはフコシル化されていないか、または無フコシル化である。フコースの量は、たとえば、国際公開第ＷＯ２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合しているすべての糖構造（たとえば、複合体構造、ハイブリッド構造、または高マンノース構造）の合計と比べて、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のおよそ２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）、しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体におけるわずかな配列の変動に起因して、２９７位からアミノ酸±約３個分上流または下流、すなわち、２９４位から３００位の間に、位置し得る。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つは、フコシル化されていない。
【０１８６】
一実施形態では、抗体は、その血清半減期を改善するように改変される。抗体の血清半減期を増加させるために、たとえば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に組み込むことができる。本明細書において使用されるとき、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ血清半減期を増加させることに関与する、ＩｇＧ分子（たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（米国出願公開第２００３／０１９０３１１号、米国特許第６，８２１，５０５号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，８３４，５９７号）。
【０１８７】
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、抗体分子における少なくとも１つのアミノ酸残基が、異なる残基によって置き換えられている。置換変異誘発の目的の部位としては、超可変領域が挙げられるが、ＦＲの改変もまた、企図される。保存的置換は、表５において、「好ましい置換」の題目で示されている。そのような置換が、生物学的活性の望ましい変化をもたらす場合、表５において「例示的な置換」と称されているか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載されている、さらなる実質的な変化を導入し、その産物をスクリーニングしてもよい。
【表５】
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【０１８８】
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）置換の範囲における、たとえば、シートもしくはヘリックス構成としてのポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、またはｃ）側鎖のかさ高さを維持することに対する作用が有意に異なる置換を選択することによって達成される。アミノ酸は、側鎖の特性における類似性によって分類することができる（A.  L.  Lehninger、Biochemistry、第２版、７３〜７５頁、Worth  Publishers、New  York、（１９７５年））。
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
【０１８９】
あるいは、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて群に分けることができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１９０】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの一つのメンバーを、別のクラスと交換することを必要とする。そのように置換された残基はまた、保存的置換部位、または残りの（保存されていない）部位に導入され得る。
【０１９１】
１つの種類の置換バリアントは、親抗体（たとえば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる開発に選択される、結果として得られるバリアント（複数可）は、それらが生成された親抗体と比べて、修飾された（たとえば、改善された）生物学的特性を有する。そのような置換バリアントを生成するための便宜的な手段には、ファージディスプレイを使用した親和性成熟が含まれる。簡単に述べると、いくつかの超可変領域部位（たとえば、６〜７個の部位）を、それぞれの部位においてすべての可能性のあるアミノ酸置換を生成するように変異させる。そのようにして生成した抗体は、それぞれの粒子内にパッケージングされたファージコートタンパク質（たとえば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部との融合体として、線維状ファージ粒子により提示される。ファージにより提示されたバリアントは、次いで、それらの生物学的活性（たとえば、結合親和性）について、スクリーニングされる。修飾の候補となる超可変領域部位を同定するために、スキャニング変異誘発（たとえば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定することができる。代替として、または追加として、抗体と抗原との間の接触点を同定するために、抗原−抗体の複合体の結晶構造を分析することが、有益な場合がある。そのような接触残基および隣接する残基は、本明細書に詳述されているものを含め、当該技術分野において公知の技法による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されると、バリアントのパネルを、本明細書に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の技法を使用してスクリーニングに供し、１つまたは複数の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体を、さらなる開発に選択することができる。
【０１９２】
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該技術分野において公知の様々な方法によって調製される。これらの方法としては、天然の供給源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）からの単離、またはオリゴヌクレオチドに媒介される（もしくは部位指向的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、および抗体の初期調製バリアントもしくは非バリアントバージョンのカセット変異誘発が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９３】
本開示の抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸修飾を導入し、それによって、Ｆｃ領域バリアントを生成することが、望ましい場合がある。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインのアミノ酸修飾（たとえば、置換）を含む、１つまたは複数のアミノ酸位置において、アミノ酸修飾（たとえば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（たとえば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ここで、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている。
【０１９４】
この説明および当該技術分野の教示によると、一部の実施形態では、本開示の抗体が、野生型対応物抗体と比較して、たとえば、Ｆｃ領域において、１つまたは複数の改変を含み得ることが、企図される。これらの抗体は、いずれにせよ、その野生型対応物と比較して、治療上の有用性に必要とされる同じ特徴を実質的に保持するであろう。たとえば、国際公開第ＷＯ９９／５１６４２号に記載されているように、改変された（すなわち、改善されたかまたは減少したかのいずれかの）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすであろうある特定の改変が、Ｆｃ領域に行われ得ることが、考えられる。また、Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、DuncanおよびWinter、Nature、３２２巻：７３８〜４０頁（１９８８年）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、および国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号も参照されたい。国際公開第ＷＯ００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ）および同第ＷＯ２００４／０５６３１２号（Ｌｏｗｍａｎ）は、ＦｃＲへの結合が改善または減少した抗体バリアントについて記載している。これらの特許公開の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。Shieldsら、J.  Biol.  Chem.、９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁（２００１年）もまた、参照されたい。半減期が増加し、母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Guyerら、J.  Immunol.、１１７巻：５８７頁（１９７６年）およびKimら、J.  Immunol.、２４巻：２４９頁（１９９４年））は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する、その抗体中に１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加もしくは減少したＣ１ｑ結合能力を有するポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１号Ｂ１、国際公開第ＷＯ９９／５１６４２号に記載されている。それらの特許公開の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。Idusogieら、J.  Immunol.、１６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）もまた、参照されたい。
７．ベクター、宿主細胞、および組換え方法
【０１９５】
本開示の抗体の組換え産生のために、それをコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために、複製ベクターに挿入する。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（たとえば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離し、配列決定される。多数のベクターが、利用可能である。ベクターの選択は、使用する宿主細胞に、部分的に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に、哺乳動物）のいずれかを起源とする。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常領域を含め、任意のアイソタイプの定常領域を、この目的で使用することができること、ならびにそのような定常領域が、任意のヒトまたは動物種から得ることができることが、理解される。
原核生物宿主細胞を使用した抗体の生成
ａ）ベクターの構築
【０１９６】
本開示の抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技法を使用して、得ることができる。所望されるポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離し、配列決定することができる。あるいは、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技法を使用して、合成することができる。得られた後、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製し、発現することができる、組換えベクターに挿入される。当該技術分野において利用可能であり、公知である、多数のベクターを、本開示の目的で使用することができる。適切なベクターの選択は、主として、ベクターに挿入する核酸のサイズ、およびベクターで形質転換する具体的な宿主細胞に依存する。それぞれのベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、またはその両方）およびそれが存在する具体的な宿主細胞との適合性に応じて、様々な成分を含む。ベクターの成分としては、一般に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸インサート、および転写終結配列が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９７】
一般に、宿主細胞と適合性のある種に由来するレプリコンおよび制御配列を含むプラスミドベクターが、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位、ならびに形質転換される細胞における表現型選択を提供することができるマーキング配列を有する。たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉは、典型的に、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して、形質転換される。ｐＢＲ３２２は、遺伝子コーディングアンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）耐性を含み、したがって、形質転換された細胞を同定する容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その誘導体、または他の微生物プラスミドもしくはバクテリオファージはまた、微生物（microbial  organism）が内因性タンパク質の発現のために使用することができるプロモーターを含み得るか、またはそれを含むように修飾され得る。特定の抗体の発現に使用されるｐＢＲ３２２誘導体の例は、Ｃａｒｔｅｒらの米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。
【０１９８】
加えて、宿主微生物と適合性のあるレプリコンおよび制御配列を含むファージベクターを、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用することができる。たとえば、λＧＥＭ．ＴＭ．−１１などのバクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＥ３９２などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えベクターの作製に利用され得る。
【０１９９】
本開示の発現ベクターは、ポリペプチド成分のそれぞれをコードする２つまたはそれを上回るプロモーター−シストロン対を含み得る。プロモーターは、シストロンに対して上流（５’）に位置し、その発現を調整する、非翻訳調節配列である。原核生物プロモーターは、典型的に、誘導性および構成性の２つのクラスに入る。誘導性プロモーターは、その制御下において、培養条件における変化、たとえば、栄養素の存在もしくは非存在または温度の変化に応答して、増加したレベルのシストロンの転写を開始させる、プロモーターである。
【０２００】
可能性のある様々な宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが、周知である。選択されたプロモーターは、制限酵素消化によって供給源のＤＮＡからプロモーターを取り出し、単離したプロモーター配列を本開示のベクターに挿入することによって、軽鎖または重鎖をコードするシストロンＤＮＡに、作動可能に連結することができる。天然のプロモーター配列および多数の異種プロモーターの両方を、標的遺伝子の増幅および／または発現を導くために使用することができる。一部の実施形態では、異種プロモーターは、一般に、天然の標的ポリペプチドプロモーターと比較して、標的遺伝子のより多くの転写およびそのより高収量の発現が可能であるため、異種プロモーターが利用される。
【０２０１】
原核生物宿主で使用するのに好適なプロモーターとしては、ＰｈｏＡプロモーター、β−ガラクタマーゼ、およびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにハイブリッドプロモーター、たとえば、ｔａｃまたはｔｒｃプロモーターが挙げられる。しかしながら、細菌において機能する他のプロモーター（たとえば、他の公知の細菌プロモーターまたはファージプロモーター）も、同様に好適である。それらのヌクレオチド配列は、公開されており、それによって、当業者は、任意の必要とされる制限部位を供給するリンカーまたはアダプターを使用して、それらを、標的軽鎖および重鎖をコードするシストロンに作動可能にライゲーションすることができる（Siebenlistら、（１９８０年）、Cell、２０巻：２６９頁）。
【０２０２】
本開示の一態様では、組換えベクター内のそれぞれのシストロンは、膜を越えて発現するポリペプチドの転移を導く、分泌シグナル配列成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはシグナル配列は、ベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部であり得る。本開示の目的で選択されるシグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものでなければならない。異種ポリペプチドにとって固有のシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞については、シグナル配列は、たとえば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡ、およびＭＢＰからなる群から選択される、原核生物シグナル配列によって置換される。本開示の一実施形態では、発現系の両方のシストロンにおいて使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
【０２０３】
別の態様では、本開示による免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において生じ得、したがって、それぞれのシストロン内の分泌シグナル配列の存在を必要としない。これに関して、免疫グロブリン軽鎖および重鎖は、細胞質内で、発現され、フォールディングされ、アセンブルされて、機能性免疫グロブリンが形成される。ある特定の宿主株（たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｔｒｘＢ株）は、ジスルフィド結合の形成に好ましい細胞質条件を提供し、それによって、発現するタンパク質サブユニットの適切なフォールディングおよびアセンブリを可能にする。ProbaおよびPluckthun、Gene、１５９巻：２０３頁（１９９５年）。
【０２０４】
本開示の抗体はまた、分泌され、適切にアセンブルされる本開示の抗体の収量を最大にするために、発現するポリペプチド成分の定量的な比を調整することができる発現系を使用することによって、産生することができる。そのような調整は、少なくとも部分的に、ポリペプチド成分の翻訳強度を同時に調整することによって、達成される。
【０２０５】
翻訳強度を調整する（modulating）ための１つの技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に開示されている。その技法は、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリアントを利用する。所与のＴＩＲについて、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントを、ある範囲の翻訳強度で作製し、それによって、特定の鎖の所望される発現レベルにこの因子を調整する（adjust）ための便宜的な手段を提供することができる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列を改変させ得るコドンの変化をもたらす従来の変異誘発技法によって、生成することができる。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列における変化は、サイレントである。ＴＩＲにおける改変としては、たとえば、シグナル配列における改変とともに、シャインダルガーノ配列の数または間隔における改変を挙げることができる。変異体シグナル配列を生成するための１つの方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントである）、コーディング配列の開始のときにおける「コドンバンク」の生成である。これは、それぞれのコドンの第３のヌクレオチド位置を変化させることによって達成することができ、追加として、一部のアミノ酸、たとえば、ロイシン、セリン、およびアルギニンは、バンク作製の際に複雑性を追加し得る複数の第１および第２の位置を有する。この変異誘発の方法は、Yansuraら、（１９９２年）、METHODS:  A  Companion  to  Methods  in  Enzymol.、４巻：１５１〜１５８頁に詳細に記載されている。
【０２０６】
一実施形態では、ベクターのセットは、その中に含まれるそれぞれのシストロンに対してある範囲のＴＩＲ強度で生成される。この限定されたセットは、それぞれの鎖の発現レベルの比較、ならびに様々なＴＩＲ強度の組合せにおける所望される抗体産物の生成をもたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されている、レポーター遺伝子の発現レベルを定量することによって、決定することができる。翻訳強度の比較に基づいて、所望される個々のＴＩＲを選択して、それらを本開示の発現ベクター構築物において組み合わせる。
【０２０７】
本開示の抗体の発現に好適な原核生物宿主細胞としては、古細菌および真正細菌、たとえば、グラム陰性またはグラム陽性生物が挙げられる。有用な細菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（たとえば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（たとえば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ、またはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態では、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本開示の宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、Ｗ３１１０株（Bachmann、Cellular  and  Molecular  Biology、第２巻（Washington,  D.C.:  American  Society  for  Microbiology、１９８７年）、１１９０〜１２１９頁、ＡＴＣＣ受託番号２７，３２５）およびその誘導体が挙げられ、遺伝子型Ｗ３１１０  ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３  ｌａｃ  Ｉｑ  ｌａｃＬ８  ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ−ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１  ｋａｎＲを有する３３Ｄ３株を含む（米国特許第５，６３９，６３５号）。他の株およびその誘導体、たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ２９４（ＡＴＣＣ  ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ  λ  １７７６（ＡＴＣＣ  ３１，５３７）、およびＥ．ｃｏｌｉ  ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ  ３１，６０８）もまた、好適である。これらの例は、制限するものではなく例示である。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のうちのいずれかの誘導体を構築するための方法は、当該技術分野において公知であり、たとえば、Bassら、Proteins、８巻：３０９〜３１４頁（１９９０年）に記載されている。一般に、細菌の細胞におけるレプリコンの複製能を考慮して、適切な細菌を選択することが必要である。たとえば、周知のプラスミド、たとえば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７、またはｐＫＮ４１０を使用してレプリコンを供給する場合、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種を、宿主として好適に使用することができる。典型的に、宿主細胞は、分泌するタンパク質分解酵素の量は最小限であるべきであり、追加のプロテアーゼ阻害剤が、細胞培養に組み込まれ得ることが望ましい場合がある。
ｂ）抗体の産生
【０２０８】
宿主細胞を、上記の発現ベクターで形質転換し、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望される配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜修飾した従来の栄養培地において培養する。
【０２０９】
形質転換とは、ＤＮＡが複製可能となるように、染色体外エレメントとしてまたは染色体組込み体によって、ＤＮＡを、原核生物宿主に導入することを意味する。使用される宿主細胞に応じて、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技法を使用して行われる。実質的な細胞壁障壁を含む細菌細胞については、一般に、塩化カルシウムを用いたカルシウム処置が使用される。形質転換のための別の方法では、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、エレクトロポレーションである。
【０２１０】
本開示のポリペプチドを産生するのに使用される原核生物細胞は、当該技術分野において公知でかつ選択された宿主細胞の培養に好適な培地で成長させる。好適な培地の例としては、ルリアブロス（ＬＢ）に必要な栄養補充物質を加えたものが挙げられる。一部の実施形態では、培地はまた、発現ベクターを含む原核生物細胞の成長を選択的に可能にするように、発現ベクターの構築に基づいて選択される、選択剤を含有する。たとえば、アンピシリン耐性遺伝子を発現する細胞の成長のために、アンピシリンが、培地に添加される。
【０２１１】
炭素、窒素、および無機リン酸源以外の任意の必要な補充物質もまた、単独で、または別の補充物質もしくは培地との混合物、たとえば、複合窒素源として導入されて、適切な濃度で含まれ得る。必要に応じて、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリスリトール、およびジチオスレイトールからなる群から選択される、１つまたは複数の還元剤を含有し得る。
【０２１２】
原核生物宿主細胞は、好適な温度で培養される。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉの成長について、成長温度は、約２０℃〜約３９℃、約２５℃〜約３７℃、または約３０℃の範囲である。培地のｐＨは、主として宿主生物に応じて、約５〜約９の範囲の任意のｐＨであり得る。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉについては、ｐＨは、約６．８〜約７．４、または約７．０である。
【０２１３】
誘導性プロモーターが、本開示の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質の発現は、プロモーターの活性化に好適な条件下において誘導される。本開示の一態様では、ポリペプチドの転写を制御するために、ＰｈｏＡプロモーターが使用される。したがって、形質転換された宿主細胞は、誘導のために、リン酸塩制限培地において培養される。ある特定の実施形態では、リン酸塩制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（たとえば、Simmonsら、J.  Immunol.  Methods、（２００２年）、２６３巻：１３３〜１４７頁を参照されたい）。当該技術分野において公知のように、利用されるベクター構築物に応じて、様々な他の誘導物質を使用することができる。
【０２１４】
一実施形態では、本開示の発現するポリペプチドは、宿主細胞の周縁質内に分泌され、そこから回収される。タンパク質回収は、典型的に、一般に、浸透圧ショック、超音波処理、または溶解などの手段によって、微生物を破壊することを伴う。細胞が破壊されると、細胞残屑または細胞全体を、遠心分離または濾過によって除去することができる。タンパク質は、たとえば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。あるいは、タンパク質を、培養培地へと移し、そこで単離することができる。細胞は、培養物から除去され得、培養上清は、産生されたタンパク質のさらなる精製のために、濾過および濃縮され得る。発現するポリペプチドは、さらに、一般に知られている方法、たとえば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウエスタンブロットアッセイを使用して、単離および同定することができる。
【０２１５】
本開示の一態様では、抗体の産生は、発酵プロセスによって大量に行われる。様々な大規模な流加発酵手順が、組換えタンパク質の産生に利用可能である。大規模な発酵は、少なくとも１０００リットルの容量を有し、ある特定の実施形態では、約１，０００〜１００，０００リットルの容量を有する。これらの発酵槽は、酸素および栄養素、特に、グルコースを分配するために、撹拌インペラを使用する。小規模な発酵とは、一般に、容量がおよそ１００リットル以下であり、約１リットル〜約１００リットルの範囲であり得る発酵槽における発酵を指す。
【０２１６】
発酵プロセスにおいて、タンパク質発現の誘導は、典型的に、細胞が、好適な条件下において、所望される密度まで、たとえば、ＯＤ５５０の約１８０〜２２０に、成長した後に開始され、この段階では、細胞は、静止期初期にある。当該技術分野において公知であり、上述されているように、利用されるベクター構築物に応じて、様々な誘導物質を使用することができる。細胞は、誘導前に、より短い期間成長させてもよい。細胞は、通常、約１２〜５０時間誘導されるが、より長いかまたは短い誘導時間を使用してもよい。
【０２１７】
本開示のポリペプチドの産生収量および品質を改善するために、様々な発酵条件を、修正することができる。たとえば、分泌される抗体ポリペプチドの適正なアセンブリおよびフォールディングを改善するために、シャペロンタンパク質、たとえば、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、および／もしくはＤｓｂＧ）、またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルシス、トランスイソメラーゼ）を過剰発現する追加のベクターを使用して、宿主原核生物細胞を共形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞において産生される異種タンパク質の適正なフォールディングおよび可溶性を促進することが実証されている。Chenら、（１９９９年）、J.  Biol.  Chem.、２７４巻：１９６０１〜１９６０５頁、Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第６，０８３，７１５号、Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第６，０２７，８８８号、BothmannおよびPluckthun、（２０００年）、J.  Biol.  Chem.、２７５巻：１７１００〜１７１０５頁；RammおよびPluckthun、（２０００年）、J.  Biol.  Chem.、２７５巻：１７１０６〜１７１１３頁；Arieら、（２００１年）、Mol.  Microbiol.、３９巻：１９９〜２１０頁。
【０２１８】
発現する異種タンパク質（特に、タンパク質分解に感受性のもの）のタンパク質分解を最小限に抑えるために、タンパク質分解酵素が欠損しているある特定の宿主株を、本開示に使用することができる。たとえば、宿主細胞株を、公知の細菌性プロテアーゼ、たとえば、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩ、およびこれらの組合せをコードする遺伝子における遺伝子変異（複数可）を達成するように修飾することができる。一部のＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損株が、利用可能であり、たとえば、Jolyら、（１９９８年）、上記、Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第５，２６４，３６５号、Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第５，５０８，１９２号、Haraら、Microbial  Drug  Resistance、２巻：６３〜７２頁（１９９６年）に記載されている。
【０２１９】
一実施形態では、タンパク質分解酵素が欠損しており、１つまたは複数のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドが形質転換されている、Ｅ．ｃｏｌｉ株が、本開示の発現系において宿主細胞として使用される。
ｃ）抗体の精製
【０２２０】
一実施形態では、本明細書において産生される抗体タンパク質は、さらなるアッセイおよび使用のために、実質的に均質である調製物が得られるように、さらに精製される。当該技術分野において公知の標準的なタンパク質精製方法を、利用することができる。以下の手順は、好適な精製手順の例である：免疫親和性もしくはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカもしくはカチオン交換樹脂、たとえば、ＤＥＡＥでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、およびたとえば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用したゲル濾過。
【０２２１】
一態様では、固相に固定したプロテインＡが、本開示の抗体産物の免疫親和性精製に使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高い親和性で結合するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅａｓ由来の４１ｋＤの細胞壁タンパク質である。Lindmarkら、（１９８３年）、J.  Immunol.  Meth.、６２巻：１〜１３頁。プロテインＡを固定する固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラムであり得るか、または制御された細孔ガラスカラムもしくはケイ酸カラムであり得る。一部の適用では、カラムは、できる限り混入物質の非特異的な粘着を防止するために、試薬、たとえば、グリセロールでコーティングされる。
【０２２２】
精製の第１のステップとして、上述の細胞培養物に由来する調製物を、プロテインＡを固定した固相に適用して、目的の抗体を、プロテインＡに特異的に結合させる。固相を、次いで、洗浄して、固相に非特異的に結合した混入物質を除去する。最後に、目的の抗体を、溶出によって、固相から回収する。
真核生物宿主細胞を使用した抗体の生成
【０２２３】
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、一般に、以下の非限定的な成分のうちの１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
ａ）シグナル配列成分
【０２２４】
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターはまた、成熟タンパク質または目的のポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドを含み得る。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであり得る。哺乳動物細胞における発現の場合、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、たとえば、単純ヘルペスｇＤシグナルが、利用可能である。そのような前駆体領域のＤＮＡを、リーディングフレームにおいて、抗体をコードするＤＮＡにライゲーションする。
ｂ）複製起点
【０２２５】
一般に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクターには必要ない。たとえば、ＳＶ４０起点は、典型的に、初期プロモーターを含むという理由でのみ使用され得る。
ｃ）選択遺伝子成分
【０２２６】
発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択可能なマーカーとも称される、選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、たとえば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連する場合には、栄養要求性欠損を補うタンパク質、または（ｃ）複合培地から利用可能ではない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
【０２２７】
選択スキームの１つの例は、宿主細胞の成長を停止させる薬物を利用する。異種遺伝子の形質転換が成功した細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、そのため、選択レジメンを生き残る。そのような優勢選択の例は、薬物であるネオマイシン、ミコフェノール酸、およびハイグロマイシンを使用する。
【０２２８】
哺乳動物細胞の好適な選択可能なマーカーの別の例は、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするもの、たとえば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−ＩおよびＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
【０２２９】
たとえば、一部の実施形態では、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、まず、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地において、すべての形質転換体を培養することによって、同定される。一部の実施形態では、野生型ＤＨＦＲが利用される場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である（たとえば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）。
【０２３０】
あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、および別の選択可能なマーカー、たとえば、アミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列で形質転換または共形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含む野生型宿主）は、選択可能なマーカーの選択剤、たとえば、アミノグリコシド抗生物質、たとえば、カナマイシン、ネオマイシン、またはＧ４１８を含有する培地における細胞成長によって、選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞としては、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶ、または誘導体を挙げることができ、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）が欠損した細胞株が含まれる。哺乳動物細胞の選択可能なマーカーとしてＧＳを使用するための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。
ｄ）プロモーター成分
【０２３１】
発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、目的のポリペプチド（たとえば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結される、プロモーターを含む。プロモーター配列は、真核生物については公知である。たとえば、事実上すべての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始部から７０〜８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、ここで、Ｎは、任意のヌクレオチドであり得る。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、ＡＡＴＡＡＡ配列があり、これは、コーディング配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加のシグナルであり得る。ある特定の実施形態では、これらの配列のうちのいずれかまたはすべては、好適なことに、真核生物発現ベクターに挿入することができる。
【０２３２】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、たとえば、ウイルス、たとえば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（たとえば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから、異種哺乳動物プロモーター、たとえば、アクチンプロモーターもしくは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られたプロモーターによって、制御されるが、ただし、このようなプロモーターが、宿主細胞系と適合性があることを条件とする。
【０２３３】
ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、便宜的に、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含む、ＳＶ４０制限断片として得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、便宜的に、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して、哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修正形は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。Reyesら、Nature、２９７巻：５９８〜６０１頁（１９８２年）もまた参照されたく、これは、単純ヘルペスウイルスに由来するチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現について記載している。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長鎖末端反復配列を、プロモーターとして使用してもよい。
ｅ）エンハンサーエレメント成分
【０２３４】
より高次の真核生物による本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加することが多い。現在では、哺乳動物遺伝子に由来する多くのエンハンサー配列が、公知である（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、およびインスリン）。しかしながら、典型的には、真核生物細胞ウイルスに由来するエンハンサーを使用する。例としては、複製起点の後期側（塩基対１００〜２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントについて記載しているYaniv、Nature、２９７巻：１７〜１８頁（１９８２年）もまた、参照されたい。エンハンサーは、スプライシングされて抗体ポリペプチドをコードする配列の５’または３’の位置でベクターに入り得るが、一般には、プロモーターの５’部位に位置する。
ｆ）転写終結成分
【０２３５】
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含み得る。そのような配列は、通常、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’、場合によって３’の非翻訳領域から得ることができる。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分に、ポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開第ＷＯ９４／１１０２６号およびそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。
ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
【０２３６】
本明細書におけるベクターにおいてＤＮＡをクローニングまたは発現させるのに好適な宿主細胞としては、脊椎動物宿主細胞を含む、本明細書に記載される高次真核生物細胞が挙げられる。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手技となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胎児腎臓株（２９３または懸濁培養における成長のためにサブクローニングした２９３細胞、Grahamら、J.  Gen  Virol.、３６巻：５９頁（１９７７年））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaubら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、７７巻：４２１６頁（１９８０年））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather、Biol.  Reprod.、２３巻：２４３〜２５１頁（１９８０年））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Matherら、Annals  N.Y.  Acad.  Sci.、３８３巻：４４〜６８頁（１９８２年））；ＭＲＣ  ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞、または誘導体、ならびにヒト肝臓癌株（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。
【０２３７】
宿主細胞を、抗体産生のための上記の発現ベクターまたはクローニングベクターで形質転換し、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望される配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜修飾した従来の栄養培地において培養する。
ｈ）宿主細胞の培養
【０２３８】
本開示の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地において培養され得る。市販の培地、たとえば、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）が、宿主細胞を培養するのに好適である。加えて、Hamら、Meth.  Enz.、５８巻：４４頁（１９７９年）、Barnesら、Anal.  Biochem.、１０２巻：２５５頁（１９８０年）、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号、または同第５，１２２，４６９号、国際公開第ＷＯ９０／０３４３０号、同第ＷＯ８７／００１９５号、または米国特許再発行出願第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを、宿主細胞の培養培地として使用してもよい。これらの培地のいずれかには、必要な場合ホルモンおよび／または他の成長因子（たとえば、インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子）、塩（たとえば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝物質（たとえば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（たとえば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（たとえば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬）、微量元素（マイクロモル濃度範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源が、補充され得る。任意の他の補充物質もまた、当業者に公知であろう適切な濃度で含まれ得る。培養条件、たとえば、温度、ｐＨなどは、発現に選択される宿主細胞でこれまでに使用されているものであり、当業者には明らかである。
ｉ）抗体の精製
【０２３９】
組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得るか、または培地内に直接分泌され得る。抗体が、細胞内で産生される場合、第１のステップとして、宿主細胞または溶解した断片のいずれかである微粒子残屑が、たとえば、遠心分離または限外濾過によって、除去され得る。抗体が培地内に分泌される場合、そのような発現系からの上清を、まず、市販のタンパク質濃縮フィルター、たとえば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニットを使用して、濃縮してもよい。タンパク質分解を阻害するために、プロテアーゼ阻害剤、たとえば、ＰＭＳＦが、前述のステップのうちのいずれかに含まれてもよく、外来性の混入物質の成長を防止するために、抗生物質が含まれてもよい。
【０２４０】
細胞から調製された抗体組成物は、たとえば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して、精製され得るが、親和性クロマトグラフィーが、便宜的な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの好適性は、抗体に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用することができる（Lindmarkら、J.  Immunol.  Methods、６２巻：１〜１３頁（１９８３年））。すべてのマウスアイソタイプおよびヒトγ３については、プロテインＧが推奨される（Gussら、EMBO  J.、５巻：１５６７〜１５７５頁（１９８６年））。親和性リガンドが結合するマトリックスは、アガロースであり得るが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス、たとえば、制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースで達成できるよりも高速の流速および短い処理時間を可能にする。抗体が、ＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。タンパク質精製のための他の技法、たとえば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン交換樹脂またはカチオン交換樹脂（たとえば、ポリアスパラギン酸カラム）でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿もまた、回収しようとする抗体に応じて利用可能である。
【０２４１】
任意の予備的な精製ステップ（複数可）に続いて、目的の抗体および混入物質を含む混合物を、たとえば、約２．５〜４．５のｐＨで溶出緩衝液を使用して、低い塩濃度（たとえば、約０〜０．２５Ｍの塩）で行われる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、さらなる精製に供してもよい。
【０２４２】
一般に、上述の方法と一致する、および／または当業者により目的とされる特定の抗体にとって適切であるとみなされる、研究、試験、および臨床使用に使用するための抗体を調製するための様々な方法は、当該技術分野において十分に確立されている。
フコシル化されていない抗体の産生
【０２４３】
低減したフコシル化度を有する抗体を調製するための方法が、本明細書において提供される。たとえば、本明細書において企図される方法としては、タンパク質フコシル化が欠損している細胞株（たとえば、Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現し、さらにゴルジμ−マンノシダーゼＩＩを過剰発現する細胞など）の使用、ならびに抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコース類似体（複数可）の添加が挙げられるが、これらに限定されない。Ripkaら、Arch.  Biochem.  Biophys.、２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；Presta,  Lの米国特許出願第２００３／０１５７１０８号Ａ１；国際公開第ＷＯ２００４／０５６３１２号Ａ１；Yamane-Ohnukiら、Biotech.  Bioeng.、８７巻：６１４頁（２００４年）；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含量を低減させるためのさらなる技法には、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術が含まれる。抗体のフコース含量を低減させるためのさらなる技法にはまた、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１つまたは複数のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含まれる。グリコシダーゼ阻害剤としては、α−グルコシダーゼＩ、α−グルコシダーゼＩＩ、およびα−マンノシダーゼＩが挙げられる。一部の実施形態では、グリコシダーゼ阻害剤は、α−マンノシダーゼＩの阻害剤である（たとえば、キフネシン）。
【０２４４】
本明細書において使用されるとき、「コアフコシル化」とは、Ｎ結合型グリカンの還元末端における、Ｎ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。そのような方法によって産生される抗体およびその組成物もまた、提供される。
【０２４５】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合した複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が、低減する。本明細書において使用されるとき、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、典型的に、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号付けによる）に結合するが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖は、他のアスパラギン残基にも結合し得る。「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、マンノースのみがコア構造の非還元末端に組み込まれる高マンノース型の糖鎖は除外されるが、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１つまたは複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、必要に応じて、シアル酸、バイセクト型Ｎ−アセチルグルコサミンなどを有する、複合型、または２）コア構造の非還元末端側が、高マンノースＮ−グリコシド結合型糖鎖および複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖の両方の分枝を有する、ハイブリッド型は含まれる。
【０２４６】
一部の実施形態では、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）を有さないか、またはその１つもしく複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、必要に応じて、シアル酸、バイセクト型Ｎ−アセチルグルコサミンなどといった構造をさらに有する、複合型を含む。
【０２４７】
本方法によると、典型的に、ごくわずかな量のフコースが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖に組み込まれる。たとえば、様々な実施形態では、組成物中、抗体のうちの約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、組成物中、抗体の実質的にすべてが、フコースによるコアフコシル化を有さない（すなわち、約０．５％未満）。一部の実施形態では、組成物中、抗体のうちの約４０％を上回る、約５０％を上回る、約６０％を上回る、約７０％を上回る、約８０％を上回る、約９０％を上回る、約９１％を上回る、約９２％を上回る、約９３％を上回る、約９４％を上回る、約９５％を上回る、約９６％を上回る、約９７％を上回る、約９８％を上回る、また約９９％を上回るものが、フコシル化されていない。
【０２４８】
一部の実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にすべてが、フコース残基を含まない（すなわち、約０．５％未満）抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つがフコシル化されていない抗体が、本明細書において提供される。
【０２４９】
上述のように、様々な哺乳動物宿主発現ベクター系を、抗体を発現させるために使用することができる。一部の実施形態では、培養培地には、フコースが補充されていない。一部の実施形態では、有効量のフコース類似体が、培養培地に添加されている。この文脈において、「有効量」とは、抗体の複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖へのフコースの組込みを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％減少させるのに十分な、類似体の量を指す。一部の実施形態では、本方法によって産生される抗体は、フコース類似体の非存在下において培養された宿主細胞から産生された抗体と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％の、コアフコシル化されていないタンパク質を含む（たとえば、コアフコシル化が欠如している）。
【０２５０】
糖鎖の還元末端においてフコースがＮ−アセチルグルコサミンに結合していない糖鎖の、糖鎖の還元末端においてフコースがＮ−アセチルグルコサミンに結合している糖鎖に対する含量（content）（たとえば、比）は、たとえば、実施例に記載のように決定することができる。他の方法としては、ヒドラジン分解または酵素消化（たとえば、Biochemical  Experimentation  Methods  ２３巻：Method  for  Studying  Glycoprotein  Sugar  Chain  (Japan  Scientific  Societies  Press)、Reiko  Takahashi編、（１９８９年）を参照されたい）、放出された糖鎖を蛍光標識または放射性同位体標識した後に、クロマトグラフィーによって標識された糖鎖を分離することが挙げられる。また、放出された糖鎖の組成は、ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ方法により鎖を分析することによって、決定することができる（たとえば、J.  Liq  Chromatogr.、６巻：１５５７頁（１９８３年）を参照されたい）。（概して、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照されたい）。
ＩＩＩ．組成物
【０２５１】
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、Ｓｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）のうちのいずれかを含む、組成物（たとえば、医薬組成物）もまた、本明細書において提供される。一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの約５０％未満が、フコース残基を含む、組成物が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、ここで、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、または約１５％未満が、フコース残基を含む。一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの実質的にすべてが、フコース残基を含まない、組成物が、本明細書において提供される。
【０２５２】
治療用製剤は、所望される程度の純度を有する活性成分を、随意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、保管用に調製される（Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２０版、Lippincott  Williams  &  Wiklins刊、Gennaro編、Philadelphia、Pa.、２０００年）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、これらには、緩衝物質、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む抗酸化剤；保存剤、等張剤、安定剤、金属複合体（たとえば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；キレート剤、たとえば、ＥＤＴＡ、ならびに／または非イオン性表面活性物質が含まれる。
【０２５３】
緩衝物質は、特に、安定性がｐＨ依存性である場合に、治療有効性を最適化する範囲にｐＨを制御するために使用することができる。緩衝物質は、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本開示での使用に好適な緩衝剤としては、有機および無機両方の酸、ならびにそれらの塩が挙げられる。たとえば、シトレート、ホスフェート、スクシネート、タータレート、フマレート、グルコネート、オキサレート、ラクテート、アセテート。加えて、緩衝物質は、ヒスチジンおよびトリメチルアミン塩、たとえば、Ｔｒｉｓから構成されてもよい。
【０２５４】
保存剤は、微生物の増殖を防止するために添加され得、典型的には、約０．２％〜１．０％（重量／体積）の範囲で存在する。本開示での使用に好適な保存剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；ベンザルコニウムハロゲン化物（たとえば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、たとえば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾールが挙げられる。
【０２５５】
「安定剤」として知られていることも多い、等張剤は、組成物中の液体の等張性を調整または維持するために存在し得る。大型の荷電した生体分子、たとえば、タンパク質および抗体とともに使用される場合、それらは、荷電したアミノ酸側鎖群と相互作用し、それによって、分子間および分子内での相互作用の可能性を減少させることができるため、「安定剤」と称されることが多い。等張剤は、他の成分の相対的な量を考慮して、約０．１重量％〜約２５重量％、または約１〜約５重量％の任意の量で存在し得る。一部の実施形態では、等張剤としては、多価糖アルコール、三価またはそれを上回る価数の糖アルコール、たとえば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールが挙げられる。
【０２５６】
追加の賦形剤としては、以下のうちの１つまたは複数の機能を果たし得る剤が挙げられる：（１）増量剤、（２）可溶性増強剤、（３）安定剤、および（４）変性または容器の壁部への付着を防止する剤。そのような賦形剤としては、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アミノ酸、たとえば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど；有機糖または糖アルコール、たとえば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクシトール、グリセロール、シクリトール（たとえば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、たとえば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、たとえば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリドン；単糖類（たとえば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖類（たとえば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖類、たとえば、ラフィノース；ならびに多糖類、たとえば、デキストリンまたはデキストランが挙げられる。
【０２５７】
非イオン性表面活性物質または界面活性剤（「湿潤剤」としても知られている）は、治療剤を可溶化させるのを補助するため、ならびに治療用タンパク質を撹拌に誘導される凝集から保護するために、存在し得、これらは、活性な治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤をせん断表面応力に曝露することを可能にする。非イオン性表面活性物質は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在する。一部の実施形態では、非イオン性表面活性物質は、約０．００１％〜約０．１％重量／体積または約０．０１％〜約０．１％重量／体積または約０．０１％〜約０．０２５％重量／体積の範囲で存在する。
【０２５８】
好適な非イオン性表面活性物質としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油１０、５０、および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができるアニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムが挙げられる。カチオン性界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
【０２５９】
製剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用するためには、製剤は、滅菌でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、滅菌にすることができる。本明細書における治療用組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、たとえば、皮下注射針による穿刺可能なストッパーを有する静注溶液バッグまたはバイアルに、入れられる。
【０２６０】
投与の経路は、公知かつ許容されている方法に従い、たとえば、単回もしくは複数回のボーラス、または好適な様式での長期間にわたる注入、たとえば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、もしくは関節内の経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、または持続放出もしくは徐放手段によるものがある。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体は、３ヶ月間またはそれよりも長い期間にわたって１ヶ月に１回、静脈内注入によって投与される。
【０２６１】
本明細書における製剤はまた、処置されている特定の適応症に必要な場合、１つより多い活性化合物、好ましくは、互いに有害に作用しない相補的な活性を有するものを含有してもよい。そのような活性化合物は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて存在することが好ましい。
ＩＶ．製品またはキット
【０２６２】
別の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）を含む製品またはキットが、提供される。製品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための指示をさらに含んでもよい。したがって、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、個体に有効量のヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を投与するステップを含む、個体における慢性蕁麻疹を処置および／または予防するための方法において、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を使用するための指示を含む。ある特定の実施形態では、製品は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む医薬と、慢性蕁麻疹を処置および／または予防するために前記医薬の投与を必要とする個体に前記医薬を投与するための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、慢性蕁麻疹を有する個体における１つまたは複数の症状を、医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、低減するのに有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、個体は、抗体を含む医薬の投与の前に、慢性蕁麻疹を有すると診断されている。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０２６３】
製品またはキットは、さらに、容器を含み得る。好適な容器としては、たとえば、ボトル、バイアル（たとえば、二腔バイアル）、シリンジ（たとえば、単腔または二腔シリンジ）、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成することができる。容器により、製剤が保持される。
【０２６４】
製品またはキットは、容器上または容器に付随し、製剤の再構成および／または使用に関する指示（direction）を示し得る、ラベルまたは添付文書をさらに含み得る。ラベルまたは添付文書は、さらに、製剤が、皮下、静脈内、または他の投与様式で、個体における慢性蕁麻疹を処置および／または予防するのに有用であるか、またはそれに意図されることを示し得る。製剤を保持している容器は、単回使用のバイアルまたは複数回使用のバイアルであってもよく、後者は、再構成された製剤の反復投与を可能にする。製品またはキットは、さらに、好適な希釈剤を含む第２の容器を含み得る。製品またはキットは、他の緩衝物質、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、および使用の指示（instruction）を伴う添付文書を含め、商業上、治療上、およびユーザーの視点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０２６５】
特定の実施形態では、本開示は、単回用量の投与単位のキットを提供する。そのようなキットは、単一または複数チャンバのプレフィルドシリンジの両方を含む、治療用抗体の水性製剤の容器を含む。例示的なプレフィルドシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ  ＧｍｂＨ、Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能である。
【０２６６】
別の実施形態では、オートインジェクターデバイスでの投与のための本明細書に記載される製剤を含む製品またはキットが、本明細書において提供される。オートインジェクターは、作動すると、患者または投与者による追加の必要な作業なしに、その内容物を送達する、注射デバイスとして説明することができる。これらは、送達の速度が一定でなければならず、送達の時間が、いくらか長い場合の、治療用製剤の自己投薬に好適である。
【０２６７】
別の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）を含む製品またはキットが、提供される。製品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための指示をさらに含んでもよい。したがって、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、個体に有効量のヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を投与するステップを含む、個体における慢性蕁麻疹を処置または予防するための方法において、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を使用するための指示を含む。ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む医薬と、慢性蕁麻疹を処置および／または予防するために前記医薬の投与を必要とする個体に前記医薬を投与するための指示を含む添付文書とを含む。
【０２６８】
本開示はまた、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体）を、個体における慢性蕁麻疹を処置または予防するための１つまたは複数の追加の医薬（たとえば、第２の医薬）と組み合わせて含む、製品またはキットも提供する。製品またはキットは、本開示の方法において、抗体を、１つまたは複数の追加の医薬と組み合わせて使用するための指示をさらに含んでもよい。たとえば、本明細書における製品またはキットは、必要に応じて、第２の医薬を含む容器をさらに含み、その場合、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、第１の医薬であり、その製品またはキットは、有効量の第２の医薬で個体を処置するためのラベルまたは添付文書での指示をさらに含む。したがって、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を、個体における慢性蕁麻疹を処置または予防するための方法において、１つまたは複数の追加の医薬と組み合わせて使用するための指示を含む。ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ−８に結合する抗体を含む医薬（たとえば、第１の医薬）、１つまたは複数の追加の医薬、および第１の医薬を１つまたは複数の追加の医薬（たとえば、第２の医薬）と組み合わせて投与するための指示を含む添付文書を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の治療剤には、Ｈ−２受容体アンタゴニスト、Ｈ１−抗ヒスタミン剤、Ｈ２−抗ヒスタミン剤、抗ＩｇＥ抗体、コルチコステロイド、ドキセピン、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、シクロスポリン、およびタクロリムスが含まれ得るがこれらに限定されない。
【０２６９】
本明細書に記載される態様および実施形態は、例示目的のものにすぎないこと、ならびにその様々な修正または変化が、当業者には示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲内に含まれることが、理解される。
【実施例】
【０２７０】
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より完全に理解される。実施例は、しかしながら、本開示の範囲を限定するとみなされるものではない。本明細書に記載される実施例および実施形態は、例示目的のものにすぎないこと、ならびにその様々な修正または変化が、当業者には示唆され、本出願の趣旨および範囲内および添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが、理解される。
（実施例１）
抗ヒスタミン剤抵抗性慢性蕁麻疹を有する患者における、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の有効性および安全性を評価するための非盲検パイロット研究の構造
【０２７１】
慢性蕁麻疹は、皮膚におけるマスト細胞の不適切な活性化によって引き起こされる一群の炎症性皮膚疾患である。慢性蕁麻疹は、マスト細胞活性化の特異的なトリガーによって分類される。トリガー（および対応する蕁麻疹型）には、物理的皮膚擦過（皮膚描記性蕁麻疹）および体温の上昇（コリン性蕁麻疹）が含まれ、一部の蕁麻疹は、未知の原因によって誘発される（特発性（idiopathic）または特発性（spontaneous）蕁麻疹）。
【０２７２】
多くの蕁麻疹患者は、高用量抗ヒスタミン剤などの現行の療法によって適切に処置される。しかし、有意な数の患者が、現行の療法から適切な恩恵を受けておらず、それらの制御されない蕁麻疹症状は、生活の質に対して有意な影響を有し得る。この研究は、抗ヒスタミン剤抵抗性慢性蕁麻疹を有する患者における、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の安全性および有効性を試験するように設計される。
【０２７３】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）を、３回の投与について、最大１ｍｇ／ｋｇで、毎月の静脈内注入として患者に投与する。すべての登録患者は、３回の毎月注入を受け、次いで、もう８週間追跡される。合計で４０人の患者を登録する。
【０２７４】
あるいは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）を、静脈内注入として患者に投与する。抗体を、１日目、２９日目、５７日目、８５日目、１１３日目、および１４１日目に投与する。対象を、もう８週間追跡する。一次目標および二次目標を、２２週目、２４週目、および２８週目に評価する。合計でおよそ４８人の患者を登録する。コホートは、コリン性蕁麻疹を有するおよそ１２人の患者、人工蕁麻疹（ＵＦ）を有するおよそ１２人の患者、抗ＩｇＥ（たとえば、オマリズマブ）処置ナイーブであるおよそ１２人の患者、および抗ＩｇＥ（たとえば、オマリズマブ）処置に対して適切な応答を達成しなかった、慢性特発性蕁麻疹を有するおよそ１２人の患者を含む。
【０２７５】
コリン性蕁麻疹を有する患者を試験する。患者に、１ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内注入によってＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）を投与する。蕁麻疹症状は、以下にさらに詳細に記載されるように、患者が評価する。患者に日記を渡し、その日記に、膨疹の数およびそう痒症の重症度を、療法の開始の直前に最大４週間にわたって、および療法後に、毎日記録する。一次および二次評価項目は、以下に記載される。
【０２７６】
慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）を有する患者もまた試験する。患者に、上記のように、０．３ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内注入によってＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）を投与する。患者に日記を渡し、その日記に、膨疹の数およびそう痒症の重症度を、療法の開始の直前に少なくとも２７日間にわたって、および療法後に、毎日記録する。
【０２７７】
あるいは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体を、以下の投与スケジュール：０週目（１日目）に０．３ｍｇ／ｋｇ、４週目（２９日目）に１．０ｍｇ／ｋｇ、８週目（５７日目）に１．０ｍｇ／ｋｇ、１２週目（８５日目）に１．０または３．０ｍｇ／ｋｇ、１６週目（１１３日目）に１．０または３．０ｍｇ／ｋｇ、および２０週目（１４１日目）に１．０または３．０ｍｇ／ｋｇに従って、患者に投与する。１２週目、１６週目、および２０週目に、ＵＣＴスコアが１２未満である場合、および／もしくは治験責任医師（investigator）の判断で、用量を３．０ｍｇ／ｋｇに増加させ、または患者が適切な症状改善を経験している場合、１．０ｍｇ／ｋｇの用量を使用する。
【０２７８】
一次および二次評価項目は、以下に記載される。
【０２７９】
組入れ基準は、以下のものを含む：
（ａ）年齢（１８歳以上かつ８５歳以下）；
（ｂ）１８５ｋｇ未満または１２５ｋｇ未満の体重；
（ｃ）単回または４倍投与量での抗ヒスタミン剤処置に対して不応性の、少なくとも３ヶ月間にわたる慢性蕁麻疹の診断；
（ｄ）登録時の制御されない慢性蕁麻疹（ＵＣＴ＜１２）；および
（ｅ）妊娠検査が陰性であること（女性）。
【０２８０】
除外基準は、以下のものを含む：
（ａ）急性蕁麻疹；
（ｂ）ベースラインの前４週間または５半減期（5  half-lives）のいずれか長い方以内の、免疫抑制薬（たとえば、シクロスポリン、メトトレキサート、ダプソンなど）による併用／進行中の処置；
（ｃ）患者を免疫不全状態にする、有意な医学的状態；
（ｄ）直近の３ヶ月以内、または直近の２ヶ月以内のオマリズマブの使用；
（ｅ）ベースラインの前３０日間に静脈内ＩｇＧ療法を受けたこと；
（ｆ）ベースラインの前３０日間のプラスマフェレーシス；
（ｇ）ベースラインの前１４日間のドキセピンの使用（毎日または一日おき）；
（ｈ）ベースラインの前３０日間に不活性または弱毒生ワクチンを受けたこと；
（ｉ）ベースラインの前７日間のＨ２抗ヒスタミン剤の使用；
（ｊ）登録の前７日以内のロイコトリエンアンタゴニストの摂取；
（ｋ）登録の前１４日以内の全身的コルチコステロイド（たとえば、経口またはデポー）の摂取；
（ｌ）ベースライン時の卵および寄生虫をスクリーニングする検査で陽性であること；
（ｍ）陽性のＨＩＶ血清学；
（ｎ）スクリーニングの６ヶ月以内の駆虫性寄生虫の処置；
（ｏ）ワクチン接種した患者または過去に肝炎を有したが消散した患者を除き、ベースラインにおける陽性の肝炎血清学；および
（ｐ）研究薬物の投与の前５６日以内の＞５００ｍＬの血液の供血もしくは喪失、または薬物の投与の前７日以内の血漿供血。
【０２８１】
一次評価項目は、１日目（ベースライン）から１０週目までまたは１日目（ベースライン）から２２週目までの、抗体処置後の蕁麻疹コントロールテスト（ＵＣＴ）における変化である。ＵＣＴは、慢性蕁麻疹における症状コントロールについてのスコアである。
【０２８２】
二次評価項目は、以下のものを含む：
（ａ）連続する７日間にわたって合計した自己報告型の自己評価スコア（ＵＡＳ７）に基づく蕁麻疹活動性スコア（ＵＡＳ）によって評価される、疾患活動性における変化；
（ｂ）連続する７日間にわたって合計した自己報告型の自己評価スコア（ＣｈｏｌＵＡＳ７）に基づくコリン性蕁麻疹活動性スコア（ＣｈｏｌＵＡＳ）によって評価される、疾患活動性における変化；
（ｃ）患者の日記ベースのスコアによって評価される、１週間当たりの無症状の日数における変化；
（ｄ）皮膚科学生活の質インデックス（ＤＬＱＩ）、慢性蕁麻疹生活の質アンケート（ＣＵ−Ｑ２ｏＬ）、血管性浮腫生活の質アンケート（ＡＥ−ＱｏＬ）、ＳＤ−ＱｏＬ、またはコリン性蕁麻疹生活の質アンケート（ＣｈｏｌＵ−ＱｏＬ）によって評価される、生活の質スコアにおける変化；
（ｅ）血管性浮腫活動性スコア（ＡＡＳ）によって評価される、血管性浮腫（存在する場合）の発症における変化；
（ｆ）じんま疹の数における変化（ＵＡＳ７／ＣｈｏＵＡＳ７から）；
（ｇ）そう痒重症度における変化（ＵＡＳ７／ＣｈｏＵＡＳ７から）；
（ｈ）患者または医師の包括的評価における変化；
（ｉ）パルス制御エルゴメトリー試験（ＰＣＥ）、ＦｒｉｃＴｅｓｔ（登録商標）、またはＴｅｍｐＴｅｓｔ（登録商標）によって評価される、トリガー閾値における変化；
（ｊ）ＱｏＬ、ＵＣＴ、またはＵＡＳ７／ＣｈｏｌＵＡＳ７に基づく、完全奏効（ＣＲ）率、部分奏効（ＰＲ）率、および無奏効（ＮＲ）率；
（ｋ）トリプターゼ、好酸球、総ＩｇＥ、好塩基球、および好酸球カチオン性タンパク質を含む、バイオマーカーのベースラインにおける血清レベル、および血清レベルの変化；および
（ｌ）再燃、リバウンド、または持続性の処置効果を有する、処置された患者の比率。
（実施例２）
抗ヒスタミン剤処置に対して不適切な応答を有する抗ＩｇＥナイーブ患者における、慢性蕁麻疹に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果
【０２８３】
実施例１は、抗ヒスタミン剤抵抗性慢性蕁麻疹を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の安全性および有効性を決定するように設計された臨床試験の設計を記載する。この実施例は、抗ＩｇＥ療法（たとえば、オマリズマブ処置）に対してナイーブであった患者のコホートに焦点を当てた、実施例１に記載される研究から得られた結果を記載する。
【０２８４】
この研究は、最大４倍ラベル表示投与量の用量でのＨ１−抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、１２未満のＵＣＴスコアを有する制御されない慢性蕁麻疹を有する、４５人の患者を登録した。患者を、蕁麻疹の形態および以前の処置に依存して、４つのコホートに登録した：慢性特発性蕁麻疹Ｘｏｌａｉｒナイーブ（Ｎ＝１３）、慢性特発性蕁麻疹Ｘｏｌａｉｒ失敗（Ｎ＝１１）、コリン性蕁麻疹（Ｎ＝１１）、および皮膚描記性蕁麻疹（Ｎ＝１０）。抗ヒスタミン剤薬物療法を、スクリーニング期間および研究を通じて維持した。ＵＣＴを含むベースライン症状スコアを、４週間のスクリーニング期間にわたって収集した。１２未満のベースラインＵＣＴスコアを有する患者を、この研究に登録し、毎月与えた最大６用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体で処置した。
【０２８５】
Ｘｏｌａｉｒナイーブコホート中の患者は、年齢が３０〜７５の範囲であり、中央値年齢は６３．０であった。患者を、以下の投与スケジュール：０週目（１日目）に０．３ｍｇ／ｋｇ、４週目（２９日目）に１．０ｍｇ／ｋｇ、８週目（５７日目）に１．０ｍｇ／ｋｇ、１２週目（８５日目）に１．０または３．０ｍｇ／ｋｇ、１６週目（１１３日目）に１．０または３．０ｍｇ／ｋｇ、および２０週目（１４１日目）に１．０または３．０ｍｇ／ｋｇに従って、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）で処置した。有効性を、蕁麻疹コントロールテスト（ＵＣＴ）における変化、ならびに蕁麻疹活動性スコア（ＵＡＳ７）によって評価される疾患活動性における変化によって評価した。一次エンドポイントは、２２週目とし、２４週目および２８週目に追跡した。
【０２８６】
コントロール不良の蕁麻疹を示す、１２未満のベースラインＵＣＴスコアを有する患者を、この研究に登録した。ＵＣＴスコアは、０から１６までの範囲である（０は、最も重症であり、１６は、完全な疾患コントロールを示す）。この研究で処置した患者はすべて、３．２の平均スコアで、ベースラインにおいて１２未満のＵＣＴスコアを有し、患者の８５％が、６またはそれ未満のスコアを報告した。ＵＡＳ７スコアは、０から４２までの範囲であり、より大きいスコアは、より高い疾患重症度を示す。この研究で処置した患者は、１８．０の平均ＵＡＳ７スコアを有した。
【０２８７】
図１Ａおよび１Ｂならびに表Ａ１に示されるように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置は、抗ＩｇＥナイーブ患者において、ＵＣＴスコアにおける劇的な増加（疾患重症度における減少を反映する）をもたらした。平均ＵＣＴスコアは、ベースラインにおける３．２から２２週目における１４．２まで増加した。
【表Ａ１】
2021523117.tif 000017
UCT完全奏効は、ベースラインからの3ポイントよりも大きい改善、かつ12よりも大きいスコアとして定義した。
UCT部分奏効は、ベースラインからの3ポイントよりも大きい改善として定義した。
【０２８８】
個々のＵＣＴスコアの分析は、疾患重症度におけるこの劇的な低減をさらに説明した。注目すべきことに、抗ＩｇＥナイーブ患者の９２％（１２／１３）は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置に対して完全奏効を示した。
【０２８９】
図２Ａに示されるように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置は、抗ＩｇＥナイーブ患者において、ＵＡＳ７スコアにおける劇的な低減（疾患重症度における減少を反映する）もまたもたらした。平均ＵＡＳ７スコアは、ベースラインにおける１８．５から２２週目における４．６まで減少した。ベースラインと比較して、ＵＡＳ７スコアにおける７５％の低減が、２２週目において、最終用量の投与によって観察された。抗Ｓｉｇｌｅｃ−８処置は、２２週目における６よりも低いもしくはそれと等しい、または０の（or）ＵＡＳ７スコアを有する患者の割合によって示され（図２Ｂ）、２２週目における０の毎週のじんま疹重症度スコア（ＨＳＳ）または０の毎週のそう痒重症度スコア（ＩＳＳ）を有する患者の割合によってさらに示されるように（図２Ｃ）、症状コントロールをもたらした。抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置に対する抗ＩｇＥナイーブ患者の応答は、表Ａ２に要約される。
【表Ａ２】
2021523117.tif 000018
UCT完全奏効は、ベースラインからの3ポイントよりも大きい改善、かつ12よりも大きいスコアとして定義した。
UCT部分奏効は、12未満であるが、ベースラインからの3ポイントよりも大きい改善として定義した。
【０２９０】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置は概して、十分な耐容性が示された。最も一般的な有害事象は、最初の注入の間に大部分が生じた、軽度から中程度の注入関連反応（紅潮、熱感、頭痛、悪心、およびめまい）であった。ＩＲＲは、後続の注入では減少した、または生じなかった。
（実施例３）
その症状が抗ヒスタミン剤処置によって適切に制御されていない、コリン性および症候性皮膚描記症を有する患者における、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果
【０２９１】
慢性特発性蕁麻疹のトリガーは同定されていないが、他の慢性蕁麻疹は、皮膚との物理的接触（症候性皮膚描記症または皮膚描記性蕁麻疹と呼ばれる）、または受動的もしくは能動的な体温の上昇（コリン性蕁麻疹）などのトリガーによって引き起こされる。米国人口の０．５〜１．０％が、慢性蕁麻疹の一形態に罹患していると推定されている。
【０２９２】
実施例１は、抗ヒスタミン剤抵抗性慢性蕁麻疹を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の安全性および有効性を決定するように設計された臨床試験の設計を記載する。この実施例は、コリン性蕁麻疹または皮膚描記性（たとえば、症候性皮膚描記症）蕁麻疹を有する患者のコホートに焦点を当てた、実施例１に記載される研究から得られた結果を記載する。
【０２９３】
コリン性蕁麻疹および皮膚描記性蕁麻疹コホートは、最大４倍ラベル表示投与量の用量でのＨ１抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず制御されない蕁麻疹を有する、それぞれ、１１人および１０人の患者を登録した。抗ヒスタミン剤薬物療法を、スクリーニング期間を通じて、および研究の間、維持した。蕁麻疹コントロールテスト（ＵＣＴ）によって測定したベースライン症状スコアを、４週間のスクリーニング期間にわたって収集した。コントロール不良の蕁麻疹を示す、１２未満のベースラインＵＣＴスコアを有する患者を、この研究に登録し、毎月１回与えた最大６用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）で処置した。患者は、ベースラインにおいて０．３ｍｇ／ｋｇの初回用量を受け、その後、２８日目に１．０ｍｇ／ｋｇの用量を受け、次いで、応答に依存して１．０ｍｇ／ｋｇまたは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの毎月用量を、合計で６用量受けた。一次有効性エンドポイントは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の最終用量の２週間後である２２週目において評価した、ＵＣＴにおけるベースラインからの変化であった。
【０２９４】
臨床試験からのトップラインデータは、表Ｂ１に示される。抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置に対する皮膚描記性蕁麻疹患者の応答は、表Ｂ２に要約される。抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置に対するコリン性蕁麻疹患者の応答は、表Ｂ３に要約される。
【表Ｂ１】
2021523117.tif 000019
UCT完全奏効は、ベースラインからの3ポイントよりも大きい改善、かつ12またはそれよりも大きいスコアとして定義した。UCT部分奏効は、12未満であるが、ベースラインからの3ポイントよりも大きい改善として定義した。
【表Ｂ２】
2021523117.tif 000020
【表Ｂ３】
2021523117.tif 000021
【０２９５】
これらのデータは、実施例２で観察された９２％の完全奏効率と組み合わせて、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、複数の型の蕁麻疹にわたって高度に活性であり、慢性特発性蕁麻疹ならびに誘発性蕁麻疹についての新たな有望な処置を提示し得ることを示している。これらのデータは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体が、マスト細胞に駆動される炎症を広く阻害することを示しており、これは、好酸球に対するその証明された活性と一緒に、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置が、好酸球性疾患およびマスト細胞に駆動される疾患における広い有用性を有し得ることを示唆している。
（実施例４）
Ｘｏｌａｉｒ不応性慢性特発性蕁麻疹を有する患者における、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果
【０２９６】
米国人口の０．５〜１．０パーセントが、慢性蕁麻疹の一形態に罹患していると推定されている。第１選択処置は、Ｈ１抗ヒスタミン剤薬物療法からなる；しかし、有意な数の患者が、ラベル表示用量の４倍であっても、適切な恩恵を受けていない。ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）は、抗ヒスタミン剤不応性慢性特発性蕁麻疹について承認された唯一の薬剤であるが、他の形態の慢性蕁麻疹には適応されない。
【０２９７】
実施例１は、抗ヒスタミン剤抵抗性慢性蕁麻疹を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の安全性および有効性を決定するように設計された臨床試験の設計を記載する。この実施例は、抗ＩｇＥ処置（たとえば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、オマリズマブとしても公知）に対する適切な応答を達成しなかった、慢性特発性蕁麻疹を有する患者のコホートに焦点を当てた、実施例１に記載される研究から得られた結果、ならびに実施例２および３に記載されるＸＯＬＡＩＲ（登録商標）ナイーブ、コリン性蕁麻疹、および症候性皮膚描記症コホートからの追加の結果を記載する。
【０２９８】
ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）失敗コホートは、以前のＸＯＬＡＩＲ（登録商標）処置に対して適切な応答を有することに失敗した１１人の患者を登録した。このコホートは、平均１０ヶ月間のＸＯＬＡＩＲ（登録商標）処置を受け、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）でのそれらの平均ＵＣＴスコアは、１ヶ月当たり６００ｍｇの高い用量で、４．０であった。患者は、スクリーニングの前に少なくとも２ヶ月間にわたってＸＯＬＡＩＲ（登録商標）を中断しなければならなかったが、スクリーニング期間および研究を通じて、最大４倍ラベル表示投与量の用量のＨ１抗ヒスタミン剤を継続することができた。蕁麻疹コントロールテスト（ＵＣＴ）および蕁麻疹活動性スコア（ＵＡＳ７）によって測定したベースライン症状スコアを、４週間のスクリーニング期間にわたって収集した。コントロール不良の蕁麻疹を示す、１２未満のベースラインＵＣＴスコアを有する患者を、この研究に登録し、ベースラインにおいて０．３ｍｇ／ｋｇの初回用量で処置し、その後、２８日目に１．０ｍｇ／ｋｇの用量で処置し、次いで、応答に依存して１．０ｍｇ／ｋｇまたは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの毎月用量を、最大６用量与えた。一次有効性エンドポイントは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体の最終用量の２週間後である２２週目において評価した、ＵＣＴにおけるベースラインからの変化であった。
【０２９９】
このコホートからのデータは、表Ｃ１およびＣ２に示される。
【表Ｃ１】
2021523117.tif 000022
【表Ｃ２】
2021523117.tif 000023
【０３００】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置は、ＵＡＳ７スコアにおける５２％の平均低減で、このコホートからの患者において５５％（６／１１）の奏効率を示した。このコホート中の各患者について、抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の２２週目に観察された、ＵＡＳ７スコアにおけるベースラインからの変化は、図３に示される。
【０３０１】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）は概して、十分な耐容性が示された。最も一般的な有害事象は、最初の注入の間に大部分が生じた、軽度から中程度の注入関連反応（紅潮、熱感、頭痛、悪心、およびめまい）であった。
（実施例５）
制御されない慢性蕁麻疹を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体処置の効果についての、非盲検第２相研究からの追加のデータ
【０３０２】
この実施例は、実施例１に記載される研究についての追加のデータを提供する。
【０３０３】
この研究は、最大４倍ラベル表示投与量の用量でのＨ１抗ヒスタミン剤による処置にもかかわらず、１２未満のＵＣＴスコアを有する制御されない慢性蕁麻疹を有する、４５人の患者を登録した。患者は、１８〜７５歳の範囲で、４４歳の中央値年齢を有した。患者の７５％は、女性であった。
【０３０４】
患者を、蕁麻疹の形態および以前の処置に依存して、４つのコホートに登録した：慢性特発性蕁麻疹Ｘｏｌａｉｒナイーブ（Ｎ＝１３）、慢性特発性蕁麻疹Ｘｏｌａｉｒ失敗（Ｎ＝１１）、コリン性蕁麻疹（Ｎ＝１１）および症候性皮膚描記症（Ｎ＝１０）。抗ヒスタミン剤薬物療法を、スクリーニング期間および研究を通じて維持した。ＵＣＴを含むベースライン症状スコアを、４週間のスクリーニング期間にわたって収集した。１２未満のベースラインＵＣＴスコアを有する患者を、この研究に登録し、毎月与えた最大６用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ−８抗体ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）で処置した。
【０３０５】
患者は、０．３ｍｇ／ｋｇの初回用量、２８日目の１．０ｍｇ／ｋｇを受け、次いで、１．０ｍｇ／ｋｇまたは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの毎月用量を、合計で６用量受けた。用量４、５、および６について、ＵＣＴスコアが１２未満であった場合、用量を１．０ｍｇ／ｋｇから３．０ｍｇ／ｋｇに増加させた。有効性を、蕁麻疹コントロールテスト（ＵＣＴ）およびＵＡＳ７（慢性特発性蕁麻疹を有する患者についてのみ）を使用して、２２週目に評価した。ＵＣＴ完全奏効は、ベースラインからの３ポイントよりも大きい改善、かつ１２よりも大きいスコアとして定義した。ＵＣＴ部分奏効は、ベースラインからの３ポイントよりも大きい改善として定義した。
【０３０６】
この研究からの追加のデータは、表Ｄに示される。各コホートからのベースラインＵＣＴおよびＵＡＳ７スコアは、表Ｅに示される。
【表Ｄ】
2021523117.tif 000024
【表Ｅ】
2021523117.tif 000025
配列
すべてのポリペプチド配列は、別途示されない限り、Ｎ末端からＣ末端の方向で提示する。
すべての核酸配列は、別途示されない限り、５’から３’の方向で提示する。
【化２−１】
2021523117.tif 000026
【化２−２】
2021523117.tif 000027
【化２−３】
2021523117.tif 000028
【化２−４】
2021523117.tif 000029
【化２−５】
2021523117.tif 000030
【化２−６】
2021523117.tif 000031
【化２−７】
2021523117.tif 000032
【化２−８】
2021523117.tif 000033
【図１Ａ】
2021523117.tif 000034
【図１Ｂ】
2021523117.tif 000035
【図２Ａ】
2021523117.tif 000036
【図２Ｂ】
2021523117.tif 000037
【図２Ｃ】
2021523117.tif 000038
【図３】
2021523117.tif 000039
【配列表】
2021523117000001.app
【国際調査報告】
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