(57)【要約】  ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン、ロイシンリッチリピート含有Ｘ１（ＮＬＲＸ１）経路を標的とする１，３，５−トリス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）ベンゼン誘導体および関連化合物が提供される。化合物は、炎症性、免疫介在性、および／または慢性炎症性胃腸疾患、全身性免疫介在性疾患、癌、ならびに感染性疾患を含む複数の状態を治療するために使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ環、Ｂ環、Ｃ環、およびＤ環を有する式Ｚの化合物、またはその塩であって、
Ｚは以下であり、
【化１】
2021529809.tif 000004
各場合におけるＸは、ＮおよびＣＲ6からなる群から独立して選択され、
各場合におけるＹは、ＮＲ6、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から独立して選択され、
各場合におけるＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5は、ＮおよびＣからなる群から独立して選択され、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、存在する場合、各場合において、水素、ヒドロキシ、アセチル、ハロ、およびカルボキシルからなる群；アミノ、アルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、アシル、アシルアミノアリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアルコキシ、ヘテロカルボキシアルキル、ヘテロアシル、ヘテロアシルアミノ、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルからなる群から選択される置換または非置換部分；ならびに前述の任意の組み合わせ、から独立して選択され、但し、所与の環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、および／またはＡ5が、それぞれＮである場合、前記所与の環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、および／またはＲ5のいずれかが存在せず、
各場合におけるＲ7は、＝Ｏ、＝Ｓ、および＝ＮＲ6からなる群から独立して選択される、化合物、またはその塩。
【請求項２】
少なくとも１つのＸはＣであり、
前記Ｄ環と前記Ａ環との間の前記Ｙは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から選択され、
前記Ａ環上のＡ1およびＡ3の少なくとも一方はＣであり、
前記Ａ環上のＡ2はＣであり、
前記Ａ環上のＡ5はＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
各ＸはＣである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｄ環と前記Ａ環との間の前記Ｙは、Ｏである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4は、Ｃである、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
前記Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4の少なくとも１つは水素ではない、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
前記Ａ環上のＲ1およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない、請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
各ＸはＣであり、
前記Ｄ環と前記Ａ環との間の前記ＹはＯであり、
前記Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4は、Ｃであり、
前記Ａ環上のＡ5はＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記Ａ環上のＲ1およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
各ＸはＣであり、
各ＹはＯであり、
前記Ａ環および前記Ｂ環のそれぞれにおけるＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、
前記Ａ環および前記Ｂ環のそれぞれにおけるＡ5はＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記Ａ環上のＲ1およびＲ4の少なくとも一方と、前記Ｂ環上のＲ1およびＲ4の少なくとも一方は、水素ではない、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
少なくとも１つのＸはＣであり、
前記Ｄ環と前記Ａ環との間の前記Ｙは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から選択され、
前記Ａ環上のＡ2およびＡ3はＣであり、
前記Ａ環上のＡ5はＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
少なくとも１つのＸはＣであり、
前記Ａ環上のＡ1およびＡ3の少なくとも一方はＣであり、
前記Ａ環上のＡ2はＣであり、
前記Ａ環上のＡ5はＮであり、
前記Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4の少なくとも１つは水素ではない、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
前記Ａ環上のＡ5はＮであり、
前記Ａ環上のＲ1は水素ではない、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
前記化合物は対称である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物は非対称である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が以下の構造、
【化２】
2021529809.tif 000005
前述のいずれかの塩の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物で動物の状態を治療する方法であって、有効量の前記化合物を前記動物に投与することを含み、前記状態は、炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患；全身性免疫介在性疾患；癌；および感染性疾患からなる群から選択される、方法。
【請求項１９】
前記状態は、炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患であり、前記状態は炎症性腸疾患を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記炎症性腸疾患は、クローン病を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記状態は、炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患であり、前記状態は過敏性腸症候群を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記状態は全身性免疫介在性疾患であり、前記全身性免疫介在性疾患は、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、および乾癬からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記状態は全身性免疫介在性疾患であり、前記全身性免疫介在性疾患は１型糖尿病を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記状態は癌であり、前記癌は結腸直腸癌を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記状態は感染性疾患であり、前記感染性疾患はウイルス感染症および細菌感染症からなる群から選択される感染症を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記感染性疾患はウイルス感染症を含み、前記ウイルス感染症はインフルエンザ感染症を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記感染性疾患は細菌感染症を含み、前記細菌感染症はＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症を含む、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌、細菌、真菌およびウイルス起源の感染性疾患、炎症性腸疾患等の炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患、ならびに全身性免疫介在性疾患の治療および予防等の、ＮＬＲＸ１のリガンドおよびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン、ロイシンリッチリピート含有Ｘ１（ＮＬＲＸ１）（「ＮＯＤ様受容体Ｘ１」または「ＮＬＲファミリーメンバーＸ１」または「ＮＯＤ９」とも称される）は、免疫細胞、消化管、および皮膚、肺、筋肉、内分泌、ならびに生殖組織で発現するシグナル伝達経路タンパク質である［１］。ＮＬＲＸ１分子は３つの異なるドメインを有し、ミトコンドリアに局在している［２］。公開された結果は、炎症性腸疾患のモデルにおいて、ＮＬＲＸ１の喪失が疾患の重症度を悪化させ、免疫細胞の代謝［３］を変化させることを示している［４−６］。ＮＬＲＸ１タンパク質は、ウイルス反応［７−１４］、細菌感染症［１５］、真菌感染症［１６］、癌［１７−２１］、脂肪肝［２２、２３］、２型糖尿病［２４］、脳損傷［２５］、心筋虚血［２６］、慢性閉塞性肺疾患［２７］、および自己免疫性脳脊髄炎［２８］のモデルにも関与している。
【０００３】
ＮＬＲＸ１が関与する疾患の安全で効果的な治療に対する明確かつ満たされていない臨床的ニーズが存在する。これらには、自己免疫疾患、炎症性腸疾患等の慢性および炎症性胃腸疾患、癌、ならびに感染性疾患が含まれる。現在の自己免疫治療では、有効性が低く、安全性が低いため、頻繁なモニタリング、治療パラダイムの転換、および複雑な送達方法が必要である。したがって、疾患の長期管理のために経口投与できる新しい治療薬が必要である。感染性疾患では、様々な微生物の高い突然変異率により、抗菌剤、抗真菌剤、および抗ウイルス剤を使用しない新規非抗菌治療薬の開発が必要とされる。さらに、新しい菌株および流行性感染により、病原体の出現と微生物特異的介入の利用可能性との間に遅延期間が生まれ、新規宿主標的治療の必要性が生じる。感染症および自己免疫疾患の流行を全体として考えると、ＮＬＲＸ１経路は数百万人の患者に重大な影響を与える可能性がある。
【０００４】
ウイルス核酸［２９］および食物脂質は、ＮＬＲＸ１の天然リガンドとして同定されている［５］。治療を個々の疾患に合わせて特別に調整し、それらの有効性を潜在的に最大化できるようにするために、ＮＬＲＸ１経路の新規リガンドを開発する必要がある。
【０００５】
本発明は、ＮＬＲＸ１タンパク質に結合し、したがって、炎症性腸疾患等の炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患、全身性免疫介在性疾患、癌、ならびに細菌、真菌およびウイルス起源の感染性疾患を含むがこれらに限定されない様々な疾患状態に有益な応答を誘導する化合物を提供する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、Ａ環、Ｂ環、Ｃ環、およびＤ環を有する式Ｚの化合物、またはその塩を提供し、
Ｚは以下であり、
【化１】
2021529809.tif 000002
各場合におけるＸは、独立してＮおよびＣＲ6からなる群から選択され、
各場合におけるＹは、独立して、ＮＲ6、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から選択され、
各場合におけるＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5は、独立して、ＮおよびＣからなる群から選択され、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、存在する場合、各場合において、水素、ヒドロキシ、アセチル、ハロ、およびカルボキシル；アミノ、アルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、アシル、アシルアミノアリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアルコキシ、ヘテロカルボキシアルキル、ヘテロアシル、ヘテロアシルアミノ、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルからなる群から選択される置換または非置換部分；ならびに上記の任意の組み合わせからなる群から独立して選択されるが、但し、所与の環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、および／またはＡ5が、それぞれＮである場合、所与の環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、および／またはＲ5のいずれかが存在せず、
各場合におけるＲ7は、独立して、＝Ｏ、＝Ｓ、および＝ＮＲ6からなる群から選択される。
【０００７】
本明細書で提供される式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０００８】
本発明の例示的な化合物は、図１Ａ〜図１Ｔに示される。
【０００９】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物で動物の状態を治療する方法を提供する。この方法は、有効量の化合物を動物に投与することを含む。状態は、炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患、全身性免疫介在性疾患、癌、および感染性疾患からなる群から選択され得る。いくつかの種類では、状態は炎症性腸疾患を含む。いくつかの種類では、炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎を含む。いくつかの種類では、炎症性腸疾患はクローン病を含む。いくつかの種類では、状態は過敏性腸症候群を含む。いくつかの種類では、状態は、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、および乾癬からなる群から選択される。いくつかの種類では、状態は１型糖尿病を含む。いくつかの種類では、状態は結腸直腸癌を含む。いくつかの種類では、状態は、ウイルス感染症および細菌感染症からなる群から選択される感染症を含む。いくつかの種類では、状態はインフルエンザ感染症を含む。いくつかの種類では、状態はＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症を含む。
【００１０】
本発明の目的および利点は、添付の図面と併せてなされる本発明の好ましい実施形態の以下の詳細な説明からより完全に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１Ａ〜図１Ｔ。本発明の例示的な化合物：ＮＸ−５（図１Ａ）、ＮＸ−８（図１Ｂ）、ＮＸ−９（図１Ｃ）、ＮＸ−１０（図１Ｄ）、ＮＸ−１３（図１Ｅ）；ＮＸ−３５（図１Ｆ）；ＮＸ−３７（図１Ｇ）；ＮＸ−３８（図１Ｈ）；ＮＸ−４１（図１Ｉ）；ＮＸ−４３（図１Ｊ）；ＮＸ−４４（図１Ｋ）；ＮＸ−４５（図１Ｌ）；ＮＸ−４６（図１Ｍ）；ＮＸ−４８（図１Ｎ）；ＮＸ−４９（図１Ｏ）；ＮＸ−５０（図１Ｐ）；ＮＸ−５３（図１Ｑ）；ＮＸ−５４（図１Ｒ）；ＮＸ−５５（図１Ｓ）；およびＮＸ−５６（図１Ｔ）。
【図２】図２Ａ〜図２Ｅ。選択された化合物のＮＬＲＸ１への結合の計算による予測（ｋｃａｌ／ｍｏｌ）。
【図３】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いた選択された化合物によるＮＬＲＸ１結合の実験的検証。提示される結果は、マイクロモルに適合させた１：１結合モデルから計算された定常状態解離定数（ＫD）である。
【図４】図４Ａおよび図４Ｂ。ＣＤ４＋脾細胞におけるＮＸ−１３活性の免疫学的検証。ＩＦＮγ＋（図４Ａ）およびＴＮＦα＋（図４Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージは、０．１、１および１０マイクロモルの濃度のＮＸ−１３で細胞をインビトロ処置した後、フローサイトメトリーによって測定された。統計的有意性（ｐ＜０．０５）は、アスタリスクでマークされている。
【図５】図５Ａ〜図５Ｄ。ＣＤ４＋脾細胞におけるＮＸ−４５およびＮＸ−５０活性の免疫学的検証。ＩＦＮγ＋（図５Ａおよび図５Ｃ）およびＴＮＦα＋（図５Ｂおよび図５Ｄ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージは、１０、５０、および１００ナノモル（ＮＸ−４５）または０．１、１および１０マイクロモル（ＮＸ−５０）の濃度で、ＮＸ−４５（図５Ａおよび５Ｂ）またはＮＸ−５０（図５Ｃおよび５Ｄ）で細胞をインビトロ処置した後、フローサイトメトリーによって測定された。統計的有意性（ｐ＜０．０５）は、アスタリスクでマークされている。
【図６】図６Ａ〜図６Ｊ。ＣＤ４＋脾細胞におけるＮＸ−３７、ＮＸ−４３、ＮＸ−４４、およびＮＸ−５３、ＮＸ−５４、ＮＸ−５５、およびＮＸ−５６の免疫学的検証。ＩＦＮγ＋（図６Ａ、図６Ｃ、図６Ｅ、図６Ｇ、図６Ｈ、図６Ｉ、および図６Ｊ）およびＴＮＦα＋（図６Ｂ、図６Ｄおよび図６Ｆ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージは、０．１、１および１０マイクロモルの濃度で、ＮＸ−３７（図６Ａおよび６Ｂ）、ＮＸ−４３（図６Ｃおよび６Ｄ）、ＮＸ−４４（図６Ｅおよび６Ｆ）、ＮＸ−５３（図６Ｇ）、ＮＸ−５４（図６Ｈ）、ＮＸ−５５（図６Ｉ）またはＮＸ−５６（図６Ｊ）で細胞をインビトロ処置した後、フローサイトメトリーによって測定された。統計的有意性（ｐ＜０．０５）は、アスタリスクでマークされている。
【図７】図７Ａ〜図７Ｃ。大腸炎のＤＳＳモデルにおけるＮＸ−１３の有効性のインビボ検証。７日間のＤＳＳチャレンジによる疾患活動性スコア（図７Ａ）、ならびに経口強制飼養により毎日ビヒクルまたはＮＸ−１３で処置したマウスの７日目の結腸固有層内の好中球（図７Ｂ）およびＴｈ１（図７Ｃ）集団のフローサイトメトリー測定。統計的有意性（ｐ＜０．０５）は、アスタリスクでマークされている。
【図８】図８Ａ〜図８Ｄ。ＮＸ−１３で処置した後の結腸遺伝子発現。ＤＳＳで７日間チャレンジし、経口強制飼養により毎日ビヒクルまたはＮＸ−１３で処置したマウスの全結腸ＲＮＡからの定量的リアルタイムＰＣＲによるＩｆｎｇ（図８Ａ）、Ｉｌ１０（図８Ｂ）、Ｔｎｆ（図８Ｃ）、およびＩｌ１７（図８Ｄ）の測定。データはβアクチンに対して正規化されている。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【図９】大腸炎のＭＤＲ１ａ−／−モデルにおけるＮＸ−１３の有効性のインビボ検証。ＭＤＲ１ａ−／−を経口強制飼養により毎日ビヒクルまたはＮＸ−１３で処置した６週間の処置期間にわたる毎週の疾患活動性スコア。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【図１０】図１０Ａおよび図１０Ｂ。ビヒクル（図１０Ａ）またはＮＸ−１３（図１０Ｂ）で６週間処置した後のＭＤＲ１ａ−／−マウスのＨ＆Ｅ染色された結腸切片の代表的な顕微鏡写真。
【図１１】図１１Ａ〜図１１Ｃ。Ｔｈ１（図１１Ａ）、好中球（図１１Ｂ）、およびＴｒｅｇ（図１１Ｃ）細胞集団を検出するために、ビヒクルまたはＮＸ−１３で６週間処置した後のＭＤＲ１ａ−／−マウスの結腸固有層のフローサイトメトリー。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【図１２】図１２Ａおよび図１２Ｂ。潰瘍性大腸炎患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＮＸ−１３のエクスビボ翻訳検証。ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして表される１、１０、５０、および１００ｎＭのＮＸ−１３でエクスビボ処置した後のＴＮＦα＋（図１２Ａ）およびＩＦＮγ＋（図１２Ｂ）細胞のフローサイトメトリー検出。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【図１３】図１３Ａ〜図１３Ｄ。クローン病患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＮＸ−１３の有効性のエクスビボ翻訳検証。ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして表される１、１０、５０、および１００ｎＭのＮＸ−１３でエクスビボ処置した後のＴＮＦα＋（図１３Ａ）、ＩＬ４＋（図１３Ｂ）、ＩＬ１０＋（図１３Ｃ）、およびＩＦＮγ＋（図１３Ｄ）細胞のフローサイトメトリー検出。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【図１４】図１４Ａおよび図１４Ｂ。ＣＴ２６を注射した固形腫瘍モデルにおけるＮＸ−４３の有効性。ＣＴ２６細胞を注射した９日後に開始したＮＸ−４３（４０ｍｇ／ｋｇ）による処置後の直径（図１４Ａ）および質量（図１４Ｂ）による腫瘍サイズ。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【図１５】図１５Ａおよび図１５Ｂ。結腸直腸癌のＡＰＣmin/+モデルにおけるＮＸ−４３の有効性。ＮＸ−４３（４０ｍｇ／ｋｇ、経口）で４週間処置した後の結腸ポリープの数（図１５Ａ）および結腸重量（図１５Ｂ）。統計的有意性（ｐ＜０．０５）はアスタリスクでマークされている。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
一般的な定義
特に明記しない限り、本出願全体を通して以下の定義が使用される。
【００１３】
分散分析（ＡＮＯＶＡ）：データセット内の全体的な変動を、変動の要因に基づいて特定のコンポーネントに分割するための算術プロセス。これは、治療群間の数値的差異が統計的に有意であるかどうかを判断するために使用されている。
【００１４】
共役ジエン：単結合で分離された２つの二重結合を含む分子。
【００１５】
エナンチオマー：光学異性体；偏向の平面を時計回り（＋）または反時計回り（−）に回転させる能力に基づく分子の化学的分類。
【００１６】
実質的に純粋：少なくとも９０重量％、好ましくは少なくとも９５重量％、例えば少なくとも９８重量％、９９重量％または約１００重量％の純度を有すること。
【００１７】
ＩＢＤ：炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、消化管の全部または一部の慢性炎症を伴う。ＩＢＤには、主に潰瘍性大腸炎およびクローン病が含まれる。どちらも通常、重度の下痢、疼痛、倦怠感、および体重減少を伴う。ＩＢＤは衰弱をもたらす可能性があり、時には生命を脅かす合併症を引き起こす。
【００１８】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）：ＵＣは、大腸（結腸）および直腸の最も内側の内層に長期にわたる炎症およびただれ（潰瘍）を引き起こすＩＢＤである。
【００１９】
クローン病：クローン病は、消化管の内層の炎症を引き起こすＩＢＤである。クローン病では、炎症が患部組織の奥深くまで広がることが多い。炎症は、消化管の様々な領域（大腸、小腸、またはその両方）に関与し得る。
【００２０】
ＩＬ−１０：ヒトサイトカイン合成阻害因子（ＣＳＩＦ）としても知られるインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）は、抗炎症性サイトカインである。ヒトにおいて、ＩＬ−１０は、ＩＬ１０遺伝子によってコードされている。
【００２１】
ＦＯＸＰ３：ｓｃｕｒｆｉｎとしても知られるＦＯＸＰ３（フォークヘッドボックスＰ３）は、免疫系の応答に関与するタンパク質である。ＦＯＸタンパク質ファミリーのメンバーであるＦＯＸＰ３は、制御性Ｔ細胞の発達および機能においてマスターレギュレーター（転写因子）として機能していると考えられる。
【００２２】
ＴＮＦ−α：腫瘍壊死因子（ＴＮＦ、カケキシン、またはカケクチン、以前は腫瘍壊死因子αまたはＴＮＦαとして知られていた）は、全身性炎症に関与するサイトカインであり、急性期反応を刺激するサイトカイン群のメンバーである。
【００２３】
ＭＣＰ１：単球走化性タンパク質−１。冠状動脈バイパス手術を受けている患者の内皮細胞、マクロファージ、および血管平滑筋細胞に見られる、アテローム性動脈硬化病変の発症に重要なＣＣサイトカインの古い用語。現在、正式に推奨されている用語はケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２である。
【００２４】
インターフェロンガンマ：インターフェロンガンマは、炎症誘発性の二量体化可溶性サイトカインであり、ＩＩ型クラスのインターフェロンの唯一のメンバーである。
【００２５】
白血球浸潤：白血球浸潤は、修復プロセスを開始するために、損傷した組織に白血球を移動または浸潤させるプロセスを指す。
【００２６】
化学的定義
「アルキル」という用語は、それ自体または別の置換基の一部として、特に明記しない限り、完全飽和、直鎖、分岐鎖、もしくは環状の炭化水素ラジカル、またはそれらの組み合わせを意味し、二価および多価ラジカルを含み得、指定された数の炭素原子を有する（例えば、Ｃ〜Ｃ10は１個および１０個を含めて１個〜１０個の炭素原子を意味する）。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）エチル、シクロプロピルメチル、およびそれらの同族体、ならびにそれらの異性体、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等が含まれるが、これらに限定されない。「アルキル」という用語は、特に断りのない限り、シクロアルキルを含む。
【００２７】
「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を含むことを除いて、上記で定義したアルキル基を意味する。アルケニル基の例には、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）等、ならびにより高級な同族体および異性体が含まれる。
【００２８】
「アルキニル」という用語は、それが１つ以上の三重結合を含むことを除いて、上記で定義されているようなアルキルまたはアルケニル基を意味する。アルキニル基の例には、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニル等が含まれ、より高級な同族体および異性体が含まれる。
【００２９】
「アルキレン」、「アルケニレン」、および「アルキニレン」という用語は、単独でまたは別の置換基の一部として、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−で例示されるような、それぞれアルキル、アルケニル、アルキニル基由来の２価のラジカルを意味する。
【００３０】
典型的には、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基は、１〜２４個の炭素原子を有するであろう。本発明では、１０個以下の炭素原子を有するそれらの基が好ましい。「低級」という用語は、「低級アルキル」または「低級アルキレン」のように、これらの基のいずれかに適用される場合、１０個以下の炭素原子を有する基を示す。アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基の例としては、Ｃ1−Ｃ10、Ｃ1−Ｃ8、またはＣ1−Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン基が挙げられる。
【００３１】
「アシル」という用語は、一般式−Ｃ（Ｏ）Ｒのラジカルであり、Ｒはアルキル基である。
【００３２】
「アルコキシ」という用語は、酸素に単独で結合しているアルキル基−Ｏ−Ｒであり、Ｒはアルキル基である。例としては、メトキシ、エトキシ等が挙げられる。
【００３３】
「アリール」という用語は、本明細書では、一緒に縮合しているか、共有結合しているか、またはジアゾ、メチレン、もしくはエチレン部分等の共通の基に結合している単一の芳香環または複数の芳香環であり得る芳香族基を指すために使用される。共通の連結基はまた、ベンゾフェノンのようにカルボニルであってもよい。芳香環（複数可）は、例えば、フェニル、ナフチル、ビフェニル、ジフェニルメチルおよびベンゾフェノン等を含んでもよい。「アリール」という用語は、「置換アリール」を包含する。フェニル基の場合、アリール環はモノ−、ジ−、トリ−、テトラ−、またはペンタ−置換されていてもよい。より大きな環は、非置換であるか、または１つ以上の置換基を有してもよい。
【００３４】
「アリールアルキル」という用語は、本明細書では、アリール基およびアルキル基を含む基を指すために使用される。
【００３５】
「カルボキシアルキル」という用語は、本明細書では、アルキル基およびカルボキシ基を含む基を指すために使用される（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル）。
【００３６】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、本明細書では、フッ素、臭素、塩素、およびヨウ素原子を指すために使用される。
【００３７】
本明細書に記載の任意の部分の名前に付加される「ヘテロ」という用語は、非炭素原子がその部分の炭素原子に置き換わる基を指す。本明細書に記載の任意の部分は、ヘテロ形態で提供され得る。例示的なヘテロ原子には、とりわけ、窒素、酸素、硫黄、リン、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。
【００３８】
本明細書では、「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を指すために使用される。
【００３９】
「アミノ」という用語は、ＮＲＲ’を示すために使用され、ＲおよびＲ’は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはそれらの置換類縁体である。「アミノ」は、「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」を包含し、第二級および第三級アミンを示す。ジアルキルアミノの各アルキル基は、独立して選択され得る。ＲおよびＲ’がＨであるアミノ基は、「非置換アミノ」基と称される。ＲおよびＲ’がＨ以外の部分であるアミノ基は、「置換アミノ」基と称される。
【００４０】
「アシルアミノ」という用語は、本明細書では、基ＲＣ（Ｏ）ＮＲ’−を示すために使用され、Ｒはアシル基であり、Ｒ’は独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはそれらの置換類似体である。
【００４１】
「置換された」とは、低級アルキル、アリール、アシル、ハロゲン（例えば、ＣＦ3等のアルキルハロ）、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオアミド、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプト、チア、アザ、オキソ、飽和および不飽和の両方の環状炭化水素、複素環等の１つ以上の置換基をさらに含む、本明細書に記載の化学基を指す。これらの基は、本明細書に記載のアルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、または他の部分の任意の炭素または置換基に結合してもよい。
【００４２】
カルボン酸等の酸性部分の場合、酸という名称自体が、酸、その共役塩基、ならびにその塩およびエステルを明示的に包含する。
【００４３】
アミノ基等の塩基性部分の場合、塩基という名称自体が、塩基、その共役酸、ならびにその塩および四級化型を明示的に包含する。
【００４４】
立体化学を示さずに表される構造は、その全ての立体異性体を任意の比率で含む（すなわち、エナンチオマーおよびジアステレオマー、それらのラセミ混合物、または任意のエナンチオマー／ジアステレオマー過剰の任意の混合物）。
【００４５】
「塩」は、任意の酸付加塩または塩基付加塩である。本明細書の塩は、好ましくは薬学的に好適な塩である。「薬学的に好適な塩」は、その対イオンが塩の薬学的用量において患者（動物患者を含む）に対して無毒であり、その結果、遊離塩基または遊離酸に固有の有益な薬理学的効果が対イオンに起因する副作用によって損なわれない、任意の酸付加塩または塩基付加塩である。薬学的に好適な塩の宿主は、当技術分野で周知である。塩基性活性成分の場合、たとえ、特定の塩自体が中間生成物としてのみ望まれる場合でも、例えば、塩が精製もしくは同定の目的でのみ形成される場合、またはイオン交換手順によって薬学的に好適な塩を調製する際の中間体として使用される場合であっても、全ての酸付加塩は遊離塩基形態の供給源として有用である。薬学的に好適な塩には、明示的に水素ハロゲン化物を含む、鉱酸および有機酸に由来するもの、例えば、塩酸塩および臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、メチレンビス−ｂ−ヒドロキシナフトエ酸塩、ゲンチジン酸塩、イセチオン酸塩、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、キナ酸塩等が含まれるが、これらに限定されない。塩基付加塩には、アルカリもしくはアルカリ土類金属塩基、またはトリエチルアミン、ピリジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−メチルモルホリン等の従来の有機塩基に由来するものが含まれる。「薬学的に許容される」および「薬学的に好適な」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【００４６】
本明細書での「化合物」へのまたは本明細書で定義される化合物構造への言及は、特にそうではないと明示的に示されない限り、塩および非塩の両方の形態を包含する。
【００４７】
化合物
本発明の化合物は、Ａ環、Ｂ環、Ｃ環、およびＤ環を有する式Ｚの化合物、またはそれらの塩を含み、
Ｚは以下であり、
【化２】
2021529809.tif 000003
各場合におけるＸは、独立してＮおよびＣＲ6からなる群から選択され、
各場合におけるＹは、独立して、ＮＲ6、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から選択され、
各場合におけるＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5は、独立して、ＮおよびＣからなる群から選択され、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、存在する場合、各場合において、水素、ヒドロキシ、アセチル、ハロ、およびカルボキシル；アミノ、アルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、アシル、アシルアミノアリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアルコキシ、ヘテロカルボキシアルキル、ヘテロアシル、ヘテロアシルアミノ、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルからなる群から選択される置換または非置換部分；ならびに上記の任意の組み合わせからなる群から独立して選択されるが、但し、所与の環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、および／またはＡ5が、それぞれＮである場合、所与の環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、および／またはＲ5のいずれかが存在せず、
各場合におけるＲ7は、独立して、＝Ｏ、＝Ｓ、および＝ＮＲ6からなる群から選択される。
【００４８】
いくつかの種類では、Ｄ環の少なくとも１つのＸはＣＲ6である。いくつかの種類では、Ｄ環のＸの少なくとも２つはＣＲ6である。いくつかの種類では、Ｄ環の各ＸはＣＲ6である。
【００４９】
いくつかの種類では、Ｄ環の少なくとも１つのＸはＮである。いくつかの種類では、Ｄ環のＸの少なくとも２つはＮである。いくつかの種類では、Ｄ環の各ＸはＮである。
【００５０】
いくつかの種類では、Ｄ環の少なくとも１つのＸはＣＲ6であり、Ｄ環の少なくとも１つのＸはＮである。いくつかの種類では、Ｄ環の２つのＸはＣＲ6であり、Ｄ環の１つのＸはＮである。いくつかの種類では、Ｄ環の１つのＸはＣＲ6であり、Ｄ環のＸの２つはＮである。
【００５１】
いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹはＮＲ6である。いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹ、およびＤ環とＢ環を接続するＹは、それぞれＮＲ6である。いくつかの種類では、各ＹはＮＲ6である。
【００５２】
いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹはＯである。いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹ、およびＤ環とＢ環を接続するＹは、それぞれＯである。いくつかの種類では、各ＹはОである。
【００５３】
いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹはＳである。いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹ、およびＤ環とＢ環を接続するＹは、それぞれＳである。いくつかの種類では、各ＹはＳである。
【００５４】
いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹはＣ（Ｒ6）2である。いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹ、およびＤ環とＢ環を接続するＹは、それぞれＣ（Ｒ6）2である。いくつかの種類では、各ＹはＣ（Ｒ6）2である。
【００５５】
いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹはＣＲ7である。いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環を接続するＹ、およびＤ環とＢ環を接続するＹは、それぞれＣＲ7である。いくつかの種類では、各ＹはＣＲ7である。
【００５６】
いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5の少なくとも１つはＣである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5の少なくとも１つはＮである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5の少なくとも１つはＣであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5の少なくとも１つはＮである。
【００５７】
いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1はＮである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ2はＮである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ3はＮである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ4はＮである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1およびＡ5はＮである。
【００５８】
いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1はＮであり、Ａ環上のＡ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ2はＮであり、Ａ環上のＡ1、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ3はＮであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ4はＮであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ5はＮであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣである。いくつかの種類では、Ａ環上のＡ1およびＡ5はＮであり、Ａ環上のＡ2、Ａ3、およびＡ4はＣである。
【００５９】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1はＮである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ2はＮである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ3はＮである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ4はＮである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1およびＡ5はＮである。
【００６０】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1はＮであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ2はＮであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ3はＮであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ4はＮであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ5はＮであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣである。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1およびＡ5は、それぞれＮであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ2、Ａ3、およびＡ4はＣである。
【００６１】
いくつかの種類では、各Ａ1はＮである。いくつかの種類では、各Ａ2はＮである。いくつかの種類では、各Ａ3はＮである。いくつかの種類では、各Ａ4はＮである。いくつかの種類では、各Ａ5はＮである。いくつかの種類では、各Ａ1およびＡ5はＮである。いくつかの種類では、各Ａ1はＮであり、各Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、各Ａ2はＮであり、各Ａ1、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、各Ａ3はＮであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、各Ａ4はＮであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、各Ａ5はＮであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣである。いくつかの種類では、各Ａ1およびＡ5はＮであり、各Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣである。
【００６２】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは水素である。
【００６３】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも２つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも２つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも２つは水素である。
【００６４】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも３つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも３つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも３つは水素である。
【００６５】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも４つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも４つは水素である。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも４つは水素である。
【００６６】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。いくつかの種類では、各Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００６７】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは水素ではない。
【００６８】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも２つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも２つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも２つは水素ではない。
【００６９】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも３つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも３つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも３つは水素ではない。
【００７０】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも４つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも４つは水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも４つは水素ではない。
【００７１】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素ではない。
【００７２】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1は水素ではなく、Ａ環上のＲ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００７３】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００７４】
いくつかの種類では、各Ｒ1は水素ではない。いくつかの種類では、各Ｒ1は水素ではなく、各Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００７５】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ4は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環のＲ4は水素ではなく、Ａ環のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００７６】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ4は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ4は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００７７】
いくつかの種類では、各Ｒ4は水素ではない。いくつかの種類では、各Ｒ4は水素ではなく、各Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ5は、存在する場合、水素である。
【００７８】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1またはＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1またはＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００７９】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８０】
いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８１】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1またはＲ4の一方は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1またはＲ4の一方は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではなく、水素ではないＡ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８２】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の一方は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の一方は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではなく、水素ではないＡ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８３】
いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の一方は水素ではなく、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1またはＲ4の一方は水素ではなく、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではなく、水素ではないＡ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８４】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環上のＲ1は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環上のＲ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８５】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８６】
いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上の各Ｒ1は水素ではなく、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上の各Ｒ1は水素ではなく、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８７】
いくつかの種類では、Ａ環上のＲ4は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環上のＲ4は水素ではなく、Ａ環上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８８】
いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ4は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ4は水素ではなく、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環およびＢ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００８９】
いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上の各Ｒ4は水素ではなく、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上の各Ｒ4は水素ではなく、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ3およびＲ4の少なくとも一方は水素ではなく、水素ではないＡ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれの上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ5のそれぞれは、存在する場合、水素である。
【００９０】
いくつかの種類では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6のいずれか１つ以上は、存在する場合、水素、ヒドロキシ、ハロ、非置換アミノ、置換アミノ、非置換アルキル、置換アルキル、および上記の任意の組み合わせからなる群から独立して選択される。いくつかの種類では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6のいずれか１つ以上は、存在する場合、水素、ヒドロキシ、ハロ、置換または非置換アミノ、および置換または非置換アルキルからなる群から独立して選択される。いくつかの種類では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6のいずれか１つ以上は、存在する場合、水素、ヒドロキシ、ハロ、非置換アミノ、および非置換アルキルからなる群から独立して選択される。
【００９１】
任意のＲ基（例えば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、および／またはＲ6）が「水素ではない」と指定されている種類では、Ｒ基は、ヒドロキシ、アセチル、ハロ、およびカルボキシル；アミノ、アルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、アシル、アシルアミノアリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアルコキシ、ヘテロカルボキシアルキル、ヘテロアシル、ヘテロアシルアミノ、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルからなる群から選択される置換または非置換部分；ならびに上記の任意の組み合わせからなる群から独立して選択される。いくつかの種類では、「水素ではない」と指定された各Ｒ基は、ヒドロキシ、ハロ、非置換アミノ、置換アミノ、非置換アルキル、置換アルキル、および上記の任意の組み合わせからなる群から独立して選択される。いくつかの種類では、「水素ではない」と指定された各Ｒ基は、ヒドロキシ、ハロ、置換または非置換アミノ、および置換または非置換アルキルからなる群から独立して選択される。いくつかの種類では、「水素ではない」と指定された各Ｒ基は、ヒドロキシ、ハロ、非置換アミノ、および非置換アルキルからなる基から独立して選択される。
【００９２】
いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ1は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ2は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ3は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ4は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ5は同じである。
【００９３】
いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ1は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ2は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ3は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ4は同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ5は同じである。
【００９４】
いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれとの間のＹは同じである。
【００９５】
いくつかの種類では、化合物は対称である。このことは、いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ1が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ2が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ3が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ4が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＡ5が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ1が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ2が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ3が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ4が同じであり、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環のそれぞれにおけるＲ5が同じであり、かつ各Ｙが同じであることを意味する。
【００９６】
いくつかの種類では、化合物は非対称である。このことは、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおける対応するＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5それぞれとは異なり、かつ／または、少なくとも１つのＹが少なくとももう１つのＹとは異なることを意味する。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5のすくなくとも１つが、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおける対応するＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5それぞれとは異なることを意味する。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のすくなくとも１つは、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおける対応するＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のそれぞれとは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ1は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＡ1とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ2は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＡ2とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ3は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＡ3とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ4は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＡ4とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＡ5は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＡ5とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＲ1は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＲ1とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＲ2は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＲ2とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＲ3は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＲ3とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＲ4は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＲ4とは異なる。いくつかの種類では、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとも１つにおけるＲ5は、Ａ環、Ｂ環、およびＣ環の少なくとももう１つにおけるＲ5とは異なる。いくつかの種類では、Ｄ環とＡ環との間のＹは、Ｄ環とＢ環およびＣ環の少なくとも一方との間のＹとは異なる。いくつかの種類では、Ｄ環とＢ環との間のＹは、Ｄ環とＡ環およびＣ環の少なくとも一方との間のＹとは異なる。いくつかの種類では、Ｄ環とＣ環との間のＹは、Ｄ環とＡ環およびＢ環の少なくとも一方との間のＹとは異なる。
【００９７】
Ｘ間の違いは、化合物が本明細書で定義されているように対称であるか非対称であるかを決定するものではない。したがって、１つ以上のＸに差を有する化合物は、上に概説したように、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5のそれぞれおよびＹの同一性に依存して対照または非対称であり得る。
【００９８】
上で概説した様式で対称化合物を指定する文脈における「同じ」という用語は、同一の構造配置の同一の原子からなる部分を指す。上で概説した様式で非対象化合物を指定する文脈における「異なる」という用語は、非同一の原子または非同一の構造配置の同一の原子からなる部分を指す。「同じ」および「異なる」という用語の上記の定義は、環間の酸、塩基、イオン、または塩のあらゆる潜在的な異なる形成が、定義において考慮されないという条件で修飾される。したがって、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2-、および−ＣＯ2Ｎａ部分は、本明細書では「同じ」であると見なされる。−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、および−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3等の部分は、本明細書では「異なる」と見なされる。
【００９９】
いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ｄ環とＢ環との間のＹはＯであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、各ＹはＯであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、およびＡ5はＣである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１００】
いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ｄ環とＢ環との間のＹはＯであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、各ＹはＯであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、各Ａ5はＮである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１０１】
いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ5はＣであり、Ａ環上のＡ4はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ｄ環とＢ環との間のＹはＯであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ5はＣであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ4はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、各ＹはＯであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ5はＣであり、各Ａ4はＮである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１０２】
いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ4、およびＡ5はＣであり、Ａ環上のＡ3はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ｄ環とＢ環との間のＹはＯであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ4、およびＡ5はＣであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ3はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、各ＹはＯであり、各Ａ1、Ａ2、Ａ4、およびＡ5はＣであり、各Ａ3はＮである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１０３】
いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ａ環上のＡ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ1およびＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ｄ環とＢ環との間のＹはＯであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1およびＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、各ＹはＯであり、各Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、各Ａ1およびＡ5はＮである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１０４】
いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＮＲ6であり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＳであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＣ（Ｒ6）2であり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、各ＸはＣＲ6であり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＣＲ7であり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、よびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１０５】
いくつかの種類では、Ｘのいずれか１つ、いずれか２つ、または３つ全てがＮであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＮＲ6であり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、Ｘのいずれか１つ、いずれか２つ、または３つ全てがＮであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＳであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、Ｘのいずれか１つ、いずれか２つ、または３つ全てがＮであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＣ（Ｒ6）2であり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかの種類では、Ｘのいずれか１つ、いずれか２つ、または３つ全てがＮであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＣＲ7であり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。これらの特徴を含む式Ｚの化合物は、ＮＬＲＸ１のリガンドである。
【０１０６】
いくつかの種類では、少なくとも１つのＸはＣであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から選択され、Ａ環上のＡ1およびＡ3の少なくとも一方はＣであり、Ａ環上のＡ2はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかのそのような種類において、各Ｘは任意選択的にＣであり、Ｄ環とＡ環との間のＹは任意選択的にＯであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4は任意選択的にＣであり、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4の少なくとも１つは任意選択的に水素ではなく、かつ／またはＡ環上のＲ1およびＲ4の少なくとも一方は任意選択的に水素ではない。
【０１０７】
いくつかの種類では、各ＸはＣであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯであり、Ａ環上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。いくつかのそのような種類において、Ａ環上のＲ1およびＲ4の少なくとも一方は水素ではない。
【０１０８】
いくつかの種類では、各ＸはＣであり、各ＹはＯであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ1、Ａ2、Ａ3、およびＡ4はＣであり、Ａ環およびＢ環のそれぞれの上のＡ5はＮである。いくつかのそのような種類において、Ａ環上のＲ1およびＲ4の一方と、Ｂ環上のＲ1およびＲ4の一方は任意選択的に水素ではない。
【０１０９】
いくつかの種類では、少なくとも１つのＸはＣであり、Ｄ環とＡ環との間のＹはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｒ6）2、およびＣＲ7からなる群から選択され、Ａ環上のＡ2およびＡ3はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮである。
【０１１０】
いくつかの種類では、少なくとも１つのＸはＣであり、Ａ環上のＡ1およびＡ3の少なくとも一方はＣであり、Ａ環上のＡ2はＣであり、Ａ環上のＡ5はＮであり、Ａ環上のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4の少なくとも１つは水素ではない。
【０１１１】
いくつかの種類では、Ａ環上のＡ5はＮであり、Ａ環上のＲ1は水素ではない。
【０１１２】
本明細書に記載の化合物の任意の種類は、組み合わせが明らかに矛盾しない限り、本明細書に記載の化合物の他の任意の種類と組み合わせることができる。
【０１１３】
投与
本発明の方法の過程で、治療有効量の本発明の化合物を、多くの様式で哺乳動物およびヒトを含む動物に投与し得る。好ましい実施形態では、本発明の化合物は経口的または非経口的に投与されるが、医療用化合物またはエアロゾル等による他の投与形態も企図される。
【０１１４】
経口投与の場合、化合物の有効量を、例えば、固体、半固体、液体、または気体の状態で投与してもよい。特定の例には、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤が含まれる。しかしながら、化合物はこれらの形態に限定されない。
【０１１５】
本発明の化合物を錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、または懸濁液に製剤化するために、化合物は、好ましくは、結合剤、崩壊剤および／または潤滑剤と混合される。必要に応じて、得られた組成物を、既知の方法を使用して、希釈剤、緩衝剤、浸潤剤、保存剤および／または香料と混合してもよい。結合剤の例としては、結晶セルロース、セルロース誘導体、コーンスターチ、シクロデキストリン、およびゼラチンが挙げられる。崩壊剤の例としては、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。滑沢剤の例としては、タルク、ステアリン酸マグネシウムが挙げられる。さらに、乳糖、マンニトール等の従来から使用されている添加剤も使用してもよい。
【０１１６】
非経口投与の場合、本発明の化合物を注射により直腸投与してもよい。直腸投与には、坐剤を使用してもよい。坐剤は、本発明の化合物を、体温で融解するが、室温で固体のままである薬学的に好適な賦形剤と混合することによって調製してもよい。例には、カカオバター、カーボンワックス、およびポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。得られた組成物は、当該分野で公知の方法を使用して、任意の所望の形態に成形されてもよい。
【０１１７】
注射による投与の場合、本発明の化合物を、皮下、皮内、静脈内、または筋肉内に注射してもよい。そのような注射用の医薬品を、例えば植物油、合成樹脂酸のグリセリド、高級脂肪酸のエステル、または既知の方法によるプロピレングリコール等水性または非水性溶媒に本発明の化合物を、溶解、懸濁または乳化することにより調製してもよい。また、必要に応じて、従来から使用されている可溶化剤、浸透圧調整剤、乳化剤、安定剤、防腐剤等の添加剤をまた、添加してもよい。必須ではないが、組成物は無菌または滅菌されていることが好ましい。
【０１１８】
本発明の化合物を懸濁液、シロップ、またはエリキシルに製剤化するために、薬学的に好適な溶媒を使用してもよい。これらの中に含まれているのは水の非限定的な例である。
【０１１９】
本発明の化合物はまた、医薬品を調製するために、他の薬学的に好適な活性を有する追加の化合物と一緒に使用されてもよい。本発明の化合物を独立型化合物としてまたは組成物の一部として含む薬物を、それを必要とする対象の治療に使用してもよい。
【０１２０】
本発明の化合物を、化合物を液体または微粉末の形態で、気体または液体の噴霧剤および、必要に応じて、膨張剤等の既知の補助剤と一緒に、エアゾール容器またはネブライザー等の非加圧容器に装填することにより調製されるエアロゾルまたは吸入剤の形態で投与してもよい。例えば、ジクロロフルオロメタン、プロパンまたは窒素の加圧ガスを、噴霧剤として使用してもよい。
【０１２１】
本発明の化合物を、それを必要とする哺乳動物およびヒトを含む動物に、錠剤、カプセル、溶液、または乳濁液等の医薬組成物として投与してもよい。本発明に記載される他の形態の化合物の、そのエステル、その薬学的に好適な塩、その代謝産物、その構造的に関連する化合物、その類似体、およびそれらの組み合わせを含む、単回用量または複数回用量での投与もまた、本発明によって企図される。
【０１２２】
本発明の化合物はまた、それを必要とする動物に、食品または栄養補助食品のいずれかとしての栄養添加物として投与することができる。
【０１２３】
本明細書で使用される「予防する」、「治療する」、または「改善する」という用語および同様の用語には、予防および完全なまたは部分的な治療が含まれる。この用語には、症状の軽減、症状の改善、症状の重症度の軽減、疾患の発生率の低下、または治療結果を改善する患者の状態のいずれかの他の変化も含まれる。
【０１２４】
本発明に記載される化合物は、好ましくは、組成物の形態で使用および／または投与される。好適な組成物は、好ましくは、医薬組成物、食材、または栄養補助食品である。これらの組成物は、化合物を送達するための便利な形態を提供する。本発明の組成物は、酸化または溶解度に関する化合物の安定性を増加させるのに有効な量の抗酸化剤を含んでもよい。
【０１２５】
本発明の方法で投与される、または本発明の使用において投与するための化合物の量は、任意の好適な量である。それは、１日当たり、好ましくは１ｎｇ／ｋｇ体重〜２０ｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは１μｇ／ｋｇ体重〜１ｇ／ｋｇ体重の範囲、例えば１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の化合物である。好適な組成物は、適宜、製剤化され得る。生物学的に活性な薬剤の投与の分野の当業者は、既知の十分に理解されているパラメータに基づいて、様々な対象のために特定の投与レジメンを開発することができるであろう。
【０１２６】
本発明による好ましい組成物は、錠剤、丸剤、カプセル、カプレット、多粒子（顆粒、ビーズ、ペレットおよびマイクロカプセル化粒子を含む）、粉末、エリキシル、シロップ、懸濁液、および溶液の形態等の医薬組成物である。医薬組成物は、典型的には、薬学的に許容される希釈剤または担体を含むであろう。医薬組成物は、好ましくは、非経口的または経口的投与に適合される。経口投与可能な組成物は、固体または液体の形態であってもよく、とりわけ、錠剤、粉末、懸濁液、およびシロップの形態をとってもよい。必要に応じて、組成物は、１つ以上の香味剤および／または着色剤を含む。一般に、治療および栄養組成物は、対象に対する化合物の作用を著しく妨害しない任意の物質を含んでもよい。
【０１２７】
そのような組成物における使用に好適な薬学的に許容される担体は、製薬業界でよく知られている。本発明の組成物は、０．０１〜９９重量％の本発明の化合物を含んでもよい。本発明の組成物は、一般に、単位剤形で調製される。好ましくは、本発明に記載の化合物の単位投与量は、０．１ｍｇ〜２０００ｍｇであり、より好ましくは５０ｍｇ〜１０００ｍｇである。これらの組成物の調製に使用される賦形剤は、当技術分野で既知の賦形剤である。
【０１２８】
組成物の製品形態のさらなる例は、ゼラチン、デンプン、加工デンプン、デンプン誘導体、例えばグルコース、スクロース、乳糖、果糖からなる群から選択された封入材料を含む軟らかいゲルまたは硬いカプセルの形態等の栄養補助食品である。封入材料は、架橋剤または重合剤、安定剤、抗酸化剤、感光性フィルを保護するための光吸収剤、防腐剤等を任意に含んでもよい。好ましくは、本発明に記載の化合物の単位投与量は、０．１ｍｇ〜２０００ｍｇであり、より好ましくは、５０ｍｇ〜１０００ｍｇである。
【０１２９】
一般に、担体という用語は、本出願を通して、記載された化合物が混合されても、それが医薬担体、食品、栄養補助食品、または栄養補助食品であってもよい組成物を表すために使用されてもよい。上記の材料は、本発明の目的のための担体と見なされてもよい。本発明の特定の実施形態では、担体は、本発明の化合物に対して生物学的活性を殆どまたは全く有さない。
【０１３０】
用量：本発明の方法は、それを必要とする動物に治療有効量の化合物を投与することを含み得る。化合物の有効量は、投与される化合物の形態、投与期間、投与経路（例えば、経口または非経口）、動物の年齢、ならびに哺乳動物およびヒトを含む動物の状態に依存する。
【０１３１】
例えば、動物における潰瘍性大腸炎、クローン病、胃腸の炎症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症、結腸直腸癌、または本明細書に記載の他の状態を治療または予防するのに有効な化合物の量は、１ｎｇ／ｋｇ／日〜２０ｇ／ｋｇ／日の範囲であり得る。化合物の好ましい有効量は５０μｇ／ｋｇ／日〜５ｇ／ｋｇ／日であり、より好ましい用量は１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。有効量の化合物は、約１〜１０００日間に及ぶ期間（好ましい期間は７〜３００日であり、最も好ましい期間は３０〜９０日である）動物に投与されたときに、動物において、炎症性腸疾患全般、潰瘍性大腸炎、クローン病、胃腸の炎症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症、または結腸直腸癌を治療または予防するのに最も効果的であり、それにより、最も効果的なのは、有益な応答の誘導の特定として定義される。慢性疾患において有益な応答を維持するために、これらの期間を超えて有効量の化合物を継続することができる。
【０１３２】
免疫系の過剰活性化を防ぐのに最も効果的な化合物の量は、１ｎｇ／ｋｇ／日〜２０ｇ／ｋｇ／日の範囲であり得、好ましい用量は１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１３３】
有効量の本発明の化合物が栄養用、治療用、医療用、または獣医用組成物で投与される場合、好ましい用量は、食品または栄養補助食品に対して約０．０１〜２．０％重量／重量の範囲である。
【０１３４】
特定の他の実施形態では、本発明は、ＮＬＲＸ１結合化合物および構造的にも関連する化合物、例えば、化合物、そのエステル、その薬学的に好適な塩、その代謝産物、その構造的に関連する化合物、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される化合物の、ＩＢＤおよび消化管（ＧＩ）炎症の治療および予防における使用を提供する。
【０１３５】
さらに、一般に、本発明は、消化管における炎症の阻害または活性化に関し、関連する構成要素には、食道、胃、小腸、盲腸、大腸、および直腸が含まれる。この効果は、生物学的効果を誘発する、体内のさまざまな種類の細胞への化合物の曝露がもたらす。細胞は、消化管組織、免疫細胞（すなわち、マクロファージ、単球、リンパ球）、または上皮細胞由来のものを含んでもよい。特定の実施形態において、本発明は、クローン病または潰瘍性大腸炎のいずれかの炎症性腸疾患に関連する炎症を軽減または予防するために、例えば栄養補助食品として、本発明の化合物で対象を治療することを提供する。本発明はまた、腸内の細胞接着および走化性分子の発現を抑制するために、本発明の化合物を消化管に投与することを企図する。
【０１３６】
実施する場合、本発明の方法は、上記のように、任意の許容可能な形態を使用して、任意の許容可能な投与経路を介して対象に化合物を投与し、対象の体が自然なプロセスを通して化合物を標的細胞に分配することを可能にすることにより得る。上記のように、投与は、同様に、標的細胞（すなわち、処理される細胞）を含む部位（例えば、臓器、組織）への直接注射によるものであり得る。
【０１３７】
さらに、投与は任意の数のレジメンにしたがい得る。したがって、それは、実験化合物の単回用量もしくは投薬、またはある期間にわたる複数回用量もしくは投薬を含み得る。したがって、治療は、所望の結果が達成されるまで、投与ステップを１回以上繰り返すことを含み得る。特定の実施形態では、治療は、数週間、数ヶ月、または数年等の長期間にわたって継続し得る。投与レジメンは、好ましくは、１日６回〜１週間に１回の化合物の投与を伴うことができ、より好ましいレジメンは、１日３回〜１日１回である。当業者は、当技術分野における既知のパラメータに基づいて、個人に好適な投与計画を容易に開発することが十分に可能である。本発明の化合物の投薬量は、本発明のこれらの実施形態の方法において使用されてもよい。ＩＢＤ、消化管炎症の治療、または腸内の細胞接着分子の発現抑制のために、化合物は、約１００ｎｇ／日〜１０ｇ／日の量で投与されることが好ましい。
【０１３８】
投与される量は、対象、疾患または障害の段階、対象の年齢、対象の一般的な健康状態、および医学分野の当業者によって既知でありかつ日常的に考慮されている他の様々なパラメータに応じて変化するであろう。一般的な問題として、消化管の炎症の量に検出可能な変化をもたらすために十分な量の化合物が投与されるが、ＩＢＤの場合、それは大抵、個体が経験している疼痛の量に関連する。現在ＩＢＤ症状を経験していない患者の場合、期待される変化は、血中のＴＮＦαまたはＣ反応性タンパク質レベル、血中の制御性Ｔ細胞の割合、または糞便中のカルプロテクチンの濃度等の免疫細胞パラメータを含み得る。好適な量は、本明細書に開示されており、追加の好適な量は、本明細書に開示された量に基づいて、過度のまたは過剰の実験を行うことなく当業者によって特定され得る。
【０１３９】
一態様において、本発明は、ＩＢＤに罹患している対象、または恐らくクローン病もしくは潰瘍性大腸炎についての遺伝的素因を有する健康な個体が、ＩＢＤを発症するのを治療または予防する方法を提供する。この方法はまた、寛解型のＩＢＤを有するものを治療することを含んでもよい。本発明によれば、「ＩＢＤに罹患している対象」という用語は、ＩＢＤに典型的な１つ以上の臨床症状を示す疾患または障害を有する対象（例えば、動物、ヒト）を意味するために使用される。一般に、本発明のこの態様による治療または予防方法は、ＩＢＤの１つ以上の症状もしくは臨床症状の治療もしくは予防、またはそのような症状（複数可）もしくは徴候（複数可）の発症の予防に有効な量の化合物または細胞療法を対象に施すことを含む。
【０１４０】
したがって、本発明の方法によれば、本発明は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症および自己免疫疾患に関連する炎症の治療方法を提供することができる。治療方法は予防的方法であり得る。特定の実施形態では、方法は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症および自己免疫疾患に関連する炎症を治療する方法である。他の実施形態では、方法は、ＩＢＤを予防する方法である。実施形態では、方法は、寛解型のＩＢＤがアクティブになるのを防止する方法である。さらに他の実施形態では、方法は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症および自己免疫疾患に関連する炎症に罹患している対象の健康状態を改善する方法である。胃腸感染症を引き起こす微生物には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、赤痢菌、サルモネラ菌、病原性ビブリオ菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｙｅｒｓｉｎａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａおよびＧｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａが含まれるが、これらに限定されない。したがって、特定の実施形態では、本発明は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症および自己免疫疾患に関連するまたはＩＢＤを発症する危険性がある炎症、腸内感染症に関連する炎症および自己免疫疾患に関連する炎症に罹患している対象の健康、臓器、および／または組織を保護する方法を提供する。
【０１４１】
本発明の一実施形態では、ＩＢＤを治療する方法は、顕著な体重増加、全身性免疫抑制、クッシング様外観、骨減少症／骨粗しょう症、または現在利用可能なＩＢＤ治療（すなわち、コルチコステロイド、腫瘍壊死因子アルファ阻害剤）に共通する膵炎等の識別可能な副作用を引き起こすことなくＩＢＤを治療することを含む。すなわち、一部の細胞におけるＮＬＲＸ１の発現および／または活性化に影響を与えることによって少なくとも部分的に治療効果を提供する本発明による治療方法は、治療を受けていない他の同様の対象と比較して、治療されている対象における、例えば体液貯留による著しい体重増加を引き起こすことなく、有益な効果を提供することが見出された。
【０１４２】
したがって、本発明の方法は、炎症を軽減する方法を提供することができる。この方法は、全身的に（すなわち、対象の体全体で）または局所的に（例えば、細胞およびマクロファージを含むがこれらに限定されない、投与の部位または炎症細胞の部位で）炎症を軽減し得る。本発明の方法による炎症の治療または予防において、見られ得る１つの効果は、腸に浸潤する血液単球またはマクロファージおよびリンパ球の数の減少である。もう１つは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞等の制御性免疫細胞集団の増加、またはリンパ球もしくはマクロファージの制御特性の増加（例えば、ＩＬ−１０の増加、またはＴＮＦ−αおよびＩＬ−６の減少）である。もう１つは、炎症性遺伝子および／または接着分子の存在の減少であってもよい。したがって、方法はまた、化合物療法が施される対象の免疫応答に影響を与えるまたはそれを変化させる方法と見なすことができる。対象は、Ｔ細胞の免疫調節または細胞接着分子のダウンレギュレーションが望ましい結果である、炎症性腸疾患または別の状態を有する可能性がある。
【０１４３】
本発明は、本明細書に記載の化合物を用いて、炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患を治療する方法を提供する。炎症性、免疫介在性、または慢性の胃腸疾患の非限定的な例には、とりわけ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好酸球性胃腸疾患、セリアック病、壊死性腸炎、原発性硬化性胆管炎、慢性びらん性胃炎、過敏性腸症候群、小腸アミロイドーシス、虚血性大腸炎、放射線性大腸炎、憩室炎、リンパ球性大腸炎、膠原性大腸炎が含まれる。
【０１４４】
本発明は、本明細書に記載の化合物を用いて全身性免疫介在性疾患を治療する方法を提供する。全身性免疫介在性疾患の非限定的な例には、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、および乾癬が含まれる。
【０１４５】
炎症およびエフェクター免疫応答の低減、炎症性、免疫介在性、もしくは慢性の胃腸疾患の治療、または全身性免疫介在性疾患の治療に適した化合物には、ＮＬＲＸ１のアゴニストが含まれる。ＮＬＲＸ１のアゴニストには、式Ｚの対称化合物とその塩が含まれる。ＮＬＲＸ１のアゴニストはまた、式Ｚの非対称化合物およびその塩を含み、非対称性は、以下のうちの１つのみに起因する：（１）別のＡ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の対応する構成要素（すなわち、それぞれ、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、もしくはＡ5の１つ以上）に対する、Ａ環、Ｂ環、もしくはＣ環の１つの上の１つ以上の構成要素（すなわち、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、もしくはＡ5の１つ以上）におけるＣからＮもしくはＮからＣへの変化、または（２）別のＡ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の対応する構成要素（すなわち、それぞれ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、もしくはＲ5の１つ以上）に対する、Ａ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の１つの上の１つ以上の置換基（すなわち、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、もしくはＲ5の１つ以上）における所与の部分から隣接する同族体への変化。本明細書の目的のために、水素を含む、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、および／またはＲ5の任意の定義された部分は、それが存在する環の置換基を構成すると見なされる。本明細書で使用される場合、「隣接する同族体」は、単一のメチレン（−ＣＨ2−）基の存在または非存在によってのみ異なる２つの部分を指す。したがって、隣接する同族体の非限定的な例には、水素（−Ｈ）およびメチル（−ＣＨ3）、メチル（−ＣＨ3）およびエチル（−ＣＨ2ＣＨ3）、−ＯＨおよび−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび−ＣＯＯＣＨ3、ならびに−ＣＯＯＣＨ3および−ＣＨ2ＣＯＯＣＨ3が含まれる。明確にするために、水素として定義されるＲ基およびメチルとして定義されるＲ基は、本明細書では隣接する同族体であると見なされる。対照的に、隣接する同族体でない部分の例としては、水素（−Ｈ）およびエチル−ＯＨ、−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ3、および−ＣＨ2ＣＯＯＣＨ3のいずれか；メチル（−ＣＨ3）およびプロピル（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）；ならびに−ＣＯＯＨおよび−ＣＨ2ＣＯＯＣＨ3が挙げられる。
【０１４６】
アゴニストはまた、例えば、アゴニストが共生細菌株の増殖を促進し、それによって競合阻害を介して病原菌株を制御することにより、病原性細菌の胃腸感染症を治療するのに適している。
【０１４７】
本発明の方法は、炎症を増加させる方法を提供することができる。この方法は、全身的に（すなわち、対象の体全体で）または局所的に（例えば、Ｔ細胞およびマクロファージを含むがこれらに限定されない、投与の部位または炎症細胞の部位で）炎症を増加させることができる。本発明の方法に従って炎症を治療または予防する際に見られる可能性のある１つの効果は、ＣＤ４＋Ｔｂｅｔ＋Ｔヘルパー１細胞もしくは好中球等の免疫細胞集団の増加、またはＴＮＦ−αもしくはＩＦＮ−γ等の炎症性サイトカイン産生の増加である。したがって、方法はまた、化合物療法が施される対象の免疫応答を支持する方法と見なすことができる。対象は、免疫系の活性化が疾患の治療に有益である感染症または癌を有する可能性がある。
【０１４８】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物を用いて感染性疾患を治療する方法を提供する。そのような感染性疾患の非限定的な例には、ウイルス感染症、細菌感染症、および真菌感染症が含まれる。
【０１４９】
ウイルス感染症の非限定的な例には、アデノウイルス等のアデノウイルス科のウイルス、単純ヘルペス、１型、単純ヘルペス、２型、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、および８型等のヘルペスウイルス科のウイルス、ヒトパピローマウイルス等のパピローマウイルス科のウイルス、ＢＫウイルスおよびＪＣウイルス等のポリオーマウイルス科のウイルス、天然痘等のポックスウイルス科のウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス等のヘパドナウイルス科のウイルス、ヒトボカウイルスおよびパルボウイルスＢ１９等のパルボウイルス科のウイルス、ヒトアストロウイルス等のアストロウイルス科のウイルス、ノーウォークウイルス等のカリシウイルス科のウイルス、コクサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、およびライノウイルス等のピコルナウイルス科のウイルス、急性呼吸器症候群ウイルス等のコロナウイルス科のウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、および西ナイルウイルス等のフラビウイルス科のウイルス、風疹ウイルス等のトガウイルス科のウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス等のヘペウイルス科のウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）等のレトロウイルス科のウイルス、インフルエンザウイルス等のオルソミクソウイルス科のウイルス、グアナリトウイルス、ジュニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、およびサビアウイルス等のアリーナウイルス科のウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス等のブニヤウイルス科のウイルス、エボラウイルスおよびマールブルグウイルス等のフィロウイルス科のウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヘンドラウイルス、およびニパウイルス等のパラミクソウイルス科のウイルス、狂犬病ウイルス等のラブドウイルス科のウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス等の割り当てられていないウイルス、ならびに、ロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス、およびバンナウイルス等のレオウイルス科のウイルスからの感染症が含まれる。
【０１５０】
細菌感染症の非限定的な例には、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｃａｎｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ  Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｏｐｈｅｒｙｍａ  ｗｈｉｐｐｅｌｉｉ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  Ｗｈｉｐｐｌｅ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、および上記の生物の属からの他の種に加えて、上記の細菌による感染症が含まれる。
【０１５１】
真菌感染症の非限定的な例には、アスペルギルス症を引き起こす、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ等のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の真菌、ブラストミセス症を引き起こすＢｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ等のＢｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ属の真菌、カンジダ症を引き起こすＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ等のＣａｎｄｉｄａ属の真菌、コクシジオイデス症（渓谷熱）を引き起こすＣｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ属の真菌、クリプトコッカス症を引き起こすＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓおよびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｇａｔｔｉｉ等のＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の真菌、白癬を引き起こす皮膚糸状菌の真菌、Ｆｕｓａｒｉｕｍ種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｃａｎｄｉｄａ種等の真菌性角膜炎を引き起こす真菌、ヒストプラズマ症を引き起こすＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ等のＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ属の真菌、ムコール菌症を引き起こすＭｕｃｏｒａｌｅｓの真菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ等のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の真菌、ニューモシスチス肺炎を引き起こすＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ等のＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ属の真菌、スポロトリクム症を引き起こすＳｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ等のＳｐｏｒｏｔｈｒｉｘ属の真菌による感染症が含まれる。
【０１５２】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物を用いて癌を治療する方法を提供する。癌の非限定的な例には、とりわけ、結腸直腸癌、喉癌、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、肝細胞癌、消化管間質腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄増殖性疾患が含まれる。
【０１５３】
炎症およびエフェクター免疫応答を増加させるか、または感染性疾患もしくは癌を治療するのに適した化合物には、ＮＬＲＸ１のアンタゴニストが含まれる。ＮＬＲＸ１のアンタゴニストには、上で提供されるアゴニストの定義に該当しない式Ｚの非対称化合物が含まれる。ＮＬＲＸ１のアゴニストの例は、式Ｚの非対称化合物およびその塩を含み、非対称性は、以下に起因する：（１ａ）別のＡ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の対応する構成要素（すなわち、それぞれ、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、もしくはＡ5の１つ以上）に対する、Ａ環、Ｂ環、もしくはＣ環の１つの上の１つ以上の構成要素（すなわち、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、もしくはＡ5の１つ以上）におけるＣからＮもしくはＮからＣへの変化、および（１ｂ）別のＡ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の対応する構成要素（すなわち、それぞれ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、もしくはＲ5の１つ以上）に対する、Ａ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の１つの上の１つ以上の置換基（すなわち、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、もしくはＲ5の１つ以上）における所与の部分から隣接する同族体への変化、または（２）別のＡ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の対応する構成要素（すなわち、それぞれ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、もしくはＲ5の１つ以上）に対する、Ａ環、Ｂ環、もしくはＣ環の上の１つの上の１つ以上の置換基（すなわち、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、もしくはＲ5の１つ以上）における所与の部分から隣接する同族体以外の部分への変化。
【０１５４】
上記の方法を考慮して、本発明が、対象の細胞の治療等の細胞との接触に使用するためのＮＬＲＸ１結合化合物療法を提供することは明らかであるはずである。上記の議論は、医薬的または医学的設定と一般に考えられるものに使用するための組成物の一部としての本発明の化合物の使用に焦点を当てている。
【０１５５】
ＩＢＤ、消化管炎症、および記載される他の状態の治療のための本発明に記載される化合物は、薬学的、栄養組成物、機能性食品組成物、または栄養補助剤として製剤化され得る。
【０１５６】
ＮＬＲＸ１のリガンドとして、本明細書に記載の化合物は、ＮＬＲＸ１への結合を試験するアッセイにおける陽性対照として使用することができる。そのようなアッセイには、実施例に記載されているような表面プラズモン共鳴アッセイ、または他の方法が含まれる。
【０１５７】
本明細書に記載の要素および方法のステップは、明示的に記載されているか否かにかかわらず、任意の組み合わせで使用することができる。
【０１５８】
本明細書で使用される方法のステップのすべての組み合わせは、言及された組み合わせが行われる文脈によって別段に指定されていないか、またはそうではないことが明確に暗示されていない限り、任意の順序で実行することができる。
【０１５９】
本明細書で使用されているように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明確に他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【０１６０】
本明細書で使用される数値範囲は、具体的に開示されているか否かにかかわらず、その範囲内に含まれるすべての数および数のサブセットを含むことが意図されている。さらに、これらの数値範囲は、その範囲内の任意の数または数のサブセットに向けられた請求項のサポートを提供するものとして解釈されるべきである。例えば、１から１０までの開示は、２から８まで、３から７まで、５から６まで、１から９まで、３．６から４．６まで、３．５から９．９まで等の範囲をサポートすると解釈されるべきである。
【０１６１】
本明細書に引用されているすべての特許、特許公開、および査読済みの出版物（すなわち、「参考文献」）は、あたかも各個別の参考文献が参照により組み込まれていると具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に、参照により明示的に組み込まれている。本開示と組み込まれた参考文献との間に矛盾がある場合、本開示が支配する。
【０１６２】
本発明は、本明細書で図示しかつ説明している部品の特定の構造および配置に限定されず、特許請求の範囲内にあるそのような変更形態を包含することが理解される。
【実施例】
【０１６３】
分子モデリング
実施例１ＮＬＲＸ１リガンドの分子モデリング
ウイルスＲＮＡおよび食物脂質（プニカ酸およびドコサヘキサエン酸）を含む、前述のＮＬＲＸ１のリガンドを使用して、ＮＬＲＸ１タンパク質上の２つの高電位結合部位の存在を決定した［５］。重要な結合残基を確立するために、ＮＬＲＸ１（ｐｄｂ：３ＵＮ９）のＣ末端の公開された構造にこれらのリガンドをドッキングした。
【０１６４】
方法
バーチャルスクリーニング。予備的な足場への追加の洞察を提供するために、ＡｕｔｏＤｏｃｋ  Ｖｉｎａを使用してリガンドデータベースをＮＬＲＸ１にドッキングし、２つの部位のそれぞれで（５８×４０×４０オングストローム）のサイズの直方体検索グリッドを使用してリガンドの予測される結合親和性およびコンフォメーションを提供した。結合親和性は、リガンドの分子量に対して正規化された。結合ポーズをさらに調べるために、上位のリガンドを選択した。
【０１６５】
化合物の生成。同定された残基および予測された生化学的相互作用から、高親和性ＮＬＲＸ１リガンドの構造を生成した。構造は、ＷｅｂＭｏを使用して生成され、化学的に最適化された。構造ファイルは．ｐｄｂ形式で生成され、Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ法による電荷の計算によって．ｐｄｂｑｔ形式に変換された。ＡｕｔｏＤｏｃｋ  Ｖｉｎａを使用して構造をドッキングし、結合親和性を確認した。
【０１６６】
分析。総分子間エネルギー、総内部エネルギー、およびねじれ自由エネルギーの最小化によって、最も好ましい結合ポーズを表す分子量に対して正規化された最低の予測結合親和性によって、化合物を事前にランク付けした。次いで、ＮＬＲＸ１上の重要な結合残基までの好ましい距離に基づいて化合物に優先順位を付けた。
【０１６７】
結果
新規化学物質（ＮＣＥ）の仮想スクリーニングおよび最適化から、１２０°回転対称の化合物、および本明細書に開示される式Ｚの同様の疑似対称誘導体が、ＮＬＲＸ１に対して強い結合親和性を有すると特定された。図１Ａ〜図１Ｐを参照されたい。これらのＮＣＥは、中央のベンゼン環またはアザベンゼン環が単一リンカー原子によって３つの外側の環構造に接続された化合物で構成されていた。選択されたファミリーメンバーの結合親和性は、図２Ａ〜図２Ｄに提供されている。それぞれの最低エネルギー結合構成で予測される結合親和性は、−８．９ｋｃａｌ／ｍｏｌ〜−１１．７ｋｃａｌ／ｍｏｌの範囲であった。提示された全ての化合物は、−６．２ｋｃａｌ／ｍｏｌの結合親和性が公開されている低親和性ＮＬＲＸ１リガンドであるプニカ酸よりも高い予測結合親和性を有する。このクラスのＮＣＥの高親和性結合化合物は、ＮＸ−４３と称される２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチルピリジン）であることが観察された。高親和性結合の完全対称化合物は、−１０．６ｋｃａｌ／ｍｏｌのＮＸ−１３と称される１，３，５−トリス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）ベンゼンであることが観察された。ＮＸ−１３の酸素リンカーをメチレン（ＮＸ−３８）、カルボニル（ＮＸ−４６）、または硫黄（ＮＸ−４８）で置き換えると、予測された結合がわずかに減少したが、結合は依然として予測されたリガンドの閾値を上回っていた。結合結果および予測された物理化学的特性に基づいて、合成および機能試験のためにこのクラスから化合物を選択した。
【０１６８】
医薬品化学
実施例２ＮＸ−１３
ジメチルホルムアミド中のベンゼン−１，３，５−トリオールおよび２−ブロモ−６−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加え、反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、１，３，５−トリス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）ベンゼンを得た。ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．７６７−７．７２８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、３Ｈ）、７．０４２−７．０２４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、６．８４９−６．８２９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、３Ｈ）、６．６６７（ｓ、３Ｈ）、２．３５２（ｓ、９Ｈ）。
【０１６９】
実施例３ＮＸ−３７
２−（３，５−ビス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）フェノキシ）−４，６−ジメチルピリミジン（ＮＸ−３７）の合成は、以下に詳述するように５段階のプロセスであった。
【０１７０】
ジメチルホルムアミド中の５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび６−フルオロ−２−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加え、反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、６，６’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（２−メチルピリジン）を得た。
【０１７１】
エチレングリコール中の６，６’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（２−メチルピリジン）の溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物を１２０℃で１６時間加熱した。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２−（３，５−ビス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）フェノキシ）エタノールを得た。
【０１７２】
ジメチルスルホキシド中の２−（３，５−ビス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）フェノキシ）エタノールの溶液に水酸化カリウムを加え、１００℃で３時間加熱した。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、３，５−ビス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）フェノールを得た。
【０１７３】
三塩化ホスホリルを４，６−ジメチルピリミジン−２−オールに０℃で加え、１１０℃で１６時間加熱した。反応混合物から溶媒を蒸発させた。反応を氷冷水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２−クロロ−４，６−ジメチルピリミジンを得た。
【０１７４】
ジメチルホルムアミド中の３，５−ビス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）フェノールおよび２−クロロ−４，６−ジメチルピリミジンに炭酸カリウムを加え、反応混合物にマイクロ波を２００℃で３時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２−（３，５−ビス（６−メチルピリジン−２−イルオキシ）フェノキシ）−４，６−ジメチルピリミジンを得た。ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３−ｄ6）：７．５６（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、６．８３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．７８−６．７７（ｍ、２Ｈ）、６．７２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．４６（ｓ、６Ｈ）、２．４０（ｓ、６Ｈ）。
【０１７５】
実施例４ＮＸ−４３
２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチルピリジン）（ＮＸ−４３）の合成は、以下に詳述するように２段階のプロセスであった。
【０１７６】
ジメチルホルムアミド中の５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび２−フルオロ−３−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチルピリジン）を得た。
【０１７７】
ＤＭＦ中の２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチルピリジン）、フェノール、触媒ヨウ化銅およびジメチルグリシンの溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物にマイクロ波を１５０℃で３時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチルピリジン）を得た。Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３−ｄ６）：８．０２（ｄ、Ｊ＝３．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３５−７．３１（ｍ、２Ｈ）、７．１２−７．１０（ｍ、３Ｈ）、６．９３−６．９０（ｍ、２Ｈ）、６．６１−６．６０（ｍ、１Ｈ）、６．５６６−６．５６（ｔ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．２９（Ｓ、６Ｈ）。
【０１７８】
実施例５ＮＸ−４４
６，６’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（５−メチル−３−ピリジノール）（ＮＸ−４４）の合成は、以下に詳述するように４段階のプロセスであった。
【０１７９】
５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび２−フルオロ−３−メチル−５−ニトロピリジンの溶液に炭酸カリウムを加え、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチル−５−ニトロピリジン）を得た。
【０１８０】
ＤＭＦ中の２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチル−５−ニトロピリジン）、フェノール、触媒ヨウ化銅およびジメチルグリシンの溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物にマイクロ波を１５０℃で３時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチル−５−ニトロピリジン）を得た。
【０１８１】
メタノール中の２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（３−メチル−５−ニトロピリジン）の撹拌溶液にＰｔＯ2を加えた。反応混合物を水素雰囲気下、室温で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物をセライト床で濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、６，６’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（５−メチルピリジン−３−アミン）を得た。
【０１８２】
硫酸水溶液中の６，６’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（５−メチルピリジン−３−アミン）の撹拌溶液に、亜硝酸ナトリウムを８０℃で１時間加えた。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、６，６’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（５−メチル−３−ピリジノール）を得た。
【０１８３】
実施例６ＮＸ−４５
６，６’，６’ ’ −（ベンゼン−１，３，５−トリイルトリス（オキシ））トリス（５−メチルピリジン−３−アミン）（ＮＸ−４５）の合成は、以下に詳述するように２段階のプロセスであった。
【０１８４】
ジメチルホルムアミド中のベンゼン−１，３，５−トリオールおよび２−フルオロ−３，６−ジメチル−５−ニトロピリジンの溶液に炭酸カリウムを加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、１，３，５−トリス（３−メチル−５−ニトロピリジン−２−イルオキシ）ベンゼンを得た。
【０１８５】
メタノール中の１，３，５−トリス（３−メチル−５−ニトロピリジン−２−イルオキシ）ベンゼンの撹拌溶液にＰｔＯ2を加えた。反応混合物を水素雰囲気下、室温で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物をセライト床で濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、６，６’，６’ ’ −（ベンゼン−１，３，５−トリイルトリス（オキシ））トリス（５−メチルピリジン−３−アミン）を得た。Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．３９０（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、３Ｈ）、６．９１（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、３Ｈ）、６．０１９（ｓ、３Ｈ）、５．１３０（ｂｒ  ｓ、６Ｈ）、２．０５１（ｓ、９Ｈ）。
【０１８６】
実施例７ＮＸ−５０
ＤＭＳＯ中のベンゼン−１，３，５−トリオールの撹拌溶液に、２時間かけてＮａＨを少しずつ加えた。その後、２−ブロモ−３−メチルピリジンを滴下して加え、１５０℃で一晩撹拌した。反応の進行をモニターした。出発物質の変換後、反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、１，３，５−トリス（３−メチルピリジン−２−イルオキシ）ベンゼンを得た。
【０１８７】
実施例８ＮＸ−５３
２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）（ＮＸ−５３）の合成は、以下に詳述するように２段階のプロセスであった。
【０１８８】
ジメチルホルムアミド中の５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび２−フルオロ−６−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１８９】
ＤＭＦ中の２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）、フェノール、触媒ヨウ化銅およびジメチルグリシンの溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物にマイクロ波を１５０℃で３時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−フェノキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９０】
実施例９ＮＸ−５４
２，２’−（５−（ピリジン−２−イルオキシ）−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）（ＮＸ−５４）の合成は、以下に詳述するように４段階のプロセスであった。
【０１９１】
ジメチルホルムアミド中の５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび２−フルオロ−６−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９２】
２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）およびエチレングリコールの溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物にマイクロ波を１３０℃で６時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−エタノールオキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９３】
ジメチルスルホキシド中の２，２’−（５−エタノールオキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）の溶液に水酸化カリウムを加え、反応混合物を１２０℃で撹拌した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（１，３−フェン−５−オール）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９４】
ジメチルホルムアミド中の２，２’−（１，３−フェン−５−オール）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）および６−クロロピリジンの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−（ピリジン−２−イルオキシ）−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９５】
実施例１０ＮＸ−５５
２，２’−（５−（６−メチルフェノキシ）−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）（ＮＸ−５５）の合成は、以下に詳述するように２段階のプロセスであった。
【０１９６】
ジメチルホルムアミド中の５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび２−フルオロ−６−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９７】
ＤＭＦ中の２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）、６−メチルフェノール、触媒ヨウ化銅およびジメチルグリシンの溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物にマイクロ波を１５０℃で３時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−（６−メチルフェノキシ）−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０１９８】
実施例１１ＮＸ−５６
２，２’−（５−（フェン−６−オール）オキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）（ＮＸ−５６）の合成は、以下に詳述するように４段階のプロセスであった。
【０１９９】
ジメチルホルムアミド中の５−ブロモベンゼン−１，３−ジオールおよび２−フルオロ−６−メチルピリジンの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０２００】
２，２’−（５−ブロモ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）およびエチレングリコールの溶液に炭酸セシウムを加え、反応混合物にマイクロ波を１３０℃で６時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−エタノールオキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０２０１】
ジメチルスルホキシド中の２，２’−（５−エタノールオキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）の溶液に水酸化カリウムを加え、反応混合物を１２０℃で撹拌した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（１，３−フェン−５−オール）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０２０２】
ジメチルホルムアミド中の２，２’−（１，３−フェン−５−オール）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）および６−クロロピリジン−２−オールの溶液に炭酸カリウムを加えた。反応混合物にマイクロ波を２００℃で４時間照射した。反応混合物を氷冷水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、２，２’−（５−（フェン−６−オール）オキシ−１，３−フェニレン）ビス（オキシ）ビス（６−メチルピリジン）を得た。
【０２０３】
受容体結合
実施例１２ＮＬＲＸ１への表面プラズモン共鳴結合
序論
バーチャルスクリーニングおよびインシリコ実験は、治療標的の新しい小分子リガンドを設計する際に、目的の足場を特定して優先順位を付けるための貴重な手段である。これらの知見を検証するために、目的のタンパク質に対する小分子の親和性を決定するための多数のインビトロ法が存在する。１つの特定の方法は、表面プラズモン共鳴であり、これは、固定化された精製タンパク質上にリガンドの懸濁液を流すことによって定常状態の結合を推定する能力である。この方法は、有望なＮＬＲＸ１リガンドを評価するために使用された。
【０２０４】
方法
ＮＬＲＸ１の生成および精製。ヒトＮＬＲＸ１（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ８６ＵＴ６（ＮＬＲＸ１＿ＨＵＭＡＮ））をＥ．ｃｏｌｉにクローニングし、増幅してＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓにトランスフェクトした。Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓをアデニン選択培地に播種した。安定したトランスフェクトコロニーを選択し、ＹＰＤブロス中３０℃で２４時間、２４０ＲＰＭで振とうしながら増殖させた。種菌を使用して、ビオチンを含み、リン酸カリウムで緩衝された基本培地（１％酵母エキス、２％ペプトン、１％ソルビトール、２％酵母窒素塩基）に接種した。接種した基本培地を３０℃、２４０ＲＰＭで４８時間インキュベートした。次いで、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓを遠心分離によりペレット化し、ビオチンを含み、リン酸カリウムで緩衝された発現培地（１％ソルビトール、２％酵母窒素塩基）に再懸濁した。メタノールの添加によりタンパク質生成のために培養を毎日誘導し、２８℃、２４０ＲＰＭで合計４日間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離によりペレット化し、超音波処理により溶解した。組換えＮＬＲＸ１タンパク質は、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーを使用した高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＡｋｔａＰｒｉｍｅ）により精製した。タンパク質の画分を１ｍＬのアリコートで溶出し、ＮＬＲＸ１の含有量について評価した。変異ＮＬＲＸ１タンパク質は、同様の方法を使用して生成し、４つの残基をアラニン（Ｄ６７７Ａ、Ｆ６８０Ａ、Ｆ６８１Ａ、およびＥ６８４Ａ）に変更することにより、予測される結合部位内の結合を妨害した。
【０２０５】
表面プラズモン共鳴。Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００を使用して、ＮＬＲＸ１タンパク質への結合を評価した。ＮＬＲＸ１−ＷＴおよびＮＬＲＸ１−Ｍｕｔａｎｔは、ＣＭ５センサーチップに固定化するためのタンパク質として使用した。ＮＬＲＸ１−ＷＴは、ｐＨ４．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に希釈し、標準的なアミンカップリング化学を使用して、フローセルに約３７００ＲＵのレベルで固定化した。ＮＬＲＸ１−Ｍｕｔａｎｔは、ｐＨ４．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に希釈し、標準的なアミンカップリング化学を使用して、フローセルに約３１００ＲＵのレベルで固定化した。２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ酢酸ナトリウム、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ８．０緩衝液（泳動用緩衝液）を固定化泳動用緩衝液として使用した。固定化された応答値に基づいて、理論上のＲmax値を計算した。Ｒmax値は、１：１の相互作用機序を想定している。固定化されたタンパク質に結合する全ての分析物について、一晩の動力学を実施した。動力学的実験は、泳動用緩衝液＋１％ＤＭＳＯの存在下で実施した。全ての溶液の流量は５０μＬ／分に維持した。分析物の濃度は、０μＭ、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、および４０μＭであった。
【０２０６】
結果
表面プラズモン共鳴は、ＮＸ−１３、ＮＸ−３７およびＮＸ−４３のＮＬＲＸ１への予測される結合を検証した（図３）。特に、ＮＸ−１３、ＮＸ−３７、およびＮＸ−４３は、異なる親和性および物理化学的特性でＮＬＲＸ１に結合する小分子として同定された。変異したＮＬＲＸ１タンパク質への結合の喪失（図３）から、予測された結合がこれらのリガンドの結合の主要部位であることが検証された。ＮＸ−１３は、３０．２μＭのＫDでＮＬＲＸ１タンパク質に結合した（図３）。
【０２０７】
実験的研究
実施例１３インビトロでの免疫学的スクリーニング
序論
多くの自己免疫疾患の病因の中心は、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の機能不全である［３］。これらの細胞は、個体の健康を維持し、免疫反応を増幅し、恒常性を促進する上で重要である。しかしながら、自己免疫疾患および炎症性疾患の場合、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、過活動状態になり得るか、刺激が存在しない場合に活性化され得るか、または炎症を解消できない場合がある。これらのシナリオでは、炎症を軽減または予防することができる治療薬は、疾患を管理するための貴重な処置法である。この目的で、この細胞型における抗炎症性ＮＬＲＸ１リガンドの機能的治療可能性を検証した。
【０２０８】
自己免疫疾患とは対照的に、特定の感染性疾患および癌は、疾患の原因を効率的に制御または排除するために炎症反応の増加を必要とする［３０］。したがって、治療薬は、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の反応に影響を与え、免疫応答を高め、炎症を引き起こすことができる。これらの場合、Ｔヘルパー１およびＴヘルパー１７細胞等のエフェクター細胞型の増加は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、およびＩＬ−６の産生の増加を通して個体に利益をもたらし得る。癌モデルにおけるＮＬＲＸ１の公開された結果［１７、１８、２１］によって証明されるように、ＮＬＲＸ１経路の調節はこれらの応答を生成することができる。
【０２０９】
方法
細胞培養。Ｃ５７ＢＬ／６マウスから脾臓を切除した。脾臓を顕微鏡スライドのつや消し端の間で押しつぶし、濾過して細胞懸濁液を得た。赤血球を低張溶解によって溶解した。残りの細胞を洗浄し、濾過した。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、磁気選別ベースのネガティブセレクションを使用して懸濁液内で濃縮した。細胞を採取し、抗ＣＤ３でコーティングされた９６ウェルプレート内に播種し、ＮＸ−１３、ＮＸ−３７、ＮＸ−４３、ＮＸ−４４、もしくはＮＸ−５０の存在下で０、０．１、１、もしくは１０マイクロモルで；ＮＸ−５３、ＮＸ−５４、ＮＸ−５５、もしくはＮＸ−５６の存在下で０、０．１、もしくは１マイクロモルで；またはＮＸ−４５の存在下で１０、５０、もしくは１００ナノモルで４８時間培養した。培養の最後の６時間の間に、細胞をホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシンで刺激した。
免疫学的分析。細胞を９６ウェルプレートから採取し、フローサイトメトリーによる免疫表現型検査のために抗体のカクテルで染色した。培養上清を採取し、サイトメトリービーズアレイによってサイトカイン濃度についてアッセイした。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａでデータをキャプチャし、ＦａｃｓＤｉｖａを使用して分析した。
【０２１０】
結果
ＮＸ−１３は、野生型細胞培養内でＩＦＮγ産生およびＴＮＦα産生ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を減少させた（図４Ａおよび４Ｂ）。ＮＬＲＸ１が存在しない場合、これらの効果は失われた（図４Ａおよび４Ｂ）。
【０２１１】
ＮＸ−４５は、インビトロで１０、５０および１００ナノモルで試験した（図５Ａおよび５Ｂ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞では、ＮＸ−４５はＴＮＦα＋（図５Ｂ）およびＩＦＮγ＋（図５Ａ）細胞を減少させる。ＴＮＦα＋細胞の有意な減少は、１０ｎＭ以上の濃度で発生し、ＩＦＮγ＋細胞の有意な減少は５０ｎＭ以上の濃度で発生する。ＮＸ−５０はまた、より高い濃度ではあったが、ＩＦＮγ＋およびＴＮＦα＋細胞を減少させた（図５Ｃおよび５Ｄ）。ＮＸ−５５は、ＩＦＮγ産生細胞のわずかな減少のみを提供し（図６Ｉ）、ＮＸ−５４は、高濃度で最小限の効果を提供した（図６Ｈ）。
【０２１２】
炎症性サイトカインの下方制御から、これらの結果は、ＮＸ−１３、ＮＸ−４５、およびＮＸ−５０がＮＬＲＸ１の活性化因子であることを示している。ＮＬＲＸ１欠損細胞での活性の喪失を考慮すると、分子ファミリーはＮＬＲＸ１経路を介して作用する。インシリコおよびインビトロ結合の結果と組み合わせると、ＮＬＲＸ１経路を介した作用はＮＬＲＸ１への直接結合の結果である。
【０２１３】
ＮＸ−３７、ＮＸ−４３、ＮＸ−４４は両方とも、明確な特徴を有する炎症反応の増加に効果的である（図６Ａ−６Ｆ）。両方の場合において、ＮＸ−３７（図６Ａおよび６Ｂ）、ＮＸ−４３（図６Ｃおよび６Ｄ）、ＮＸ−４４（図６Ｅおよび６Ｆ）は、フローサイトメトリーによって測定されるように、ＴＮＦα（図６Ｂ、６Ｄ、６Ｆ）およびＩＦＮγ（図６Ａ、６Ｃ、６Ｅ）産生細胞の割合を増加させた。ＮＸ−５３およびＮＸ−５６は、ＩＦＮγ産生細胞をわずかに増加させた（図６Ｇおよび６Ｊ）。ＮＸ−４３は、ＴＮＦα産生細胞およびＩＦＮγ産生細胞に対してＮＸ−３７よりも高い効果を有することが観察されたが、ＮＸ−３７は、試験した範囲内で用量依存的な効果を示す。どちらの小分子もＩＬ−１０産生細胞の変化を誘発しなかった。
【０２１４】
ＮＬＲＸ１経路に関して記載される結果および公開された知識に基づいて、ＮＸ−３７、ＮＸ−４３、およびＮＸ−４４は、直接結合を介してＮＬＲＸ１の特異的阻害剤として機能する。これらの阻害剤による処置で観察された炎症反応の増加は、ＮＬＲＸ１の欠損がより大きな炎症をもたらすという観察と一致している。
【０２１５】
実施例１４ＩＢＤの急性モデルにおけるＮＸ−１３の使用
序論
炎症性腸疾患は、上皮バリアの作用または機能不全によって開始される多くの疾患プロセスを伴う多因子性疾患である［３１］。この疾患の代表的な受け入れられている動物モデルは、マウスの飲料水にデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を投与することによって誘発される。ＤＳＳの摂取は、遠位消化管、特に結腸の上皮バリアを破壊および破損するように作用する。上皮バリアの破壊は、結腸粘膜へのマイクロバイオームの浸潤と、それに続く免疫細胞の動員および活性化を可能にする。このモデルは、腸の炎症の制御されたシステムにおける新しい治療薬の評価を可能にする。
【０２１６】
以前は、ＤＳＳモデルを使用して、ＮＬＲＸ１を欠損したマウスが、ＮＬＲＸ１を発現する野生型マウスと比較して疾患の重症度を悪化させたことを確認していた［３、４］。さらに、野生型マウスにおけるＮＬＲＸ１の発現をＤＳＳの時間経過全体で評価した場合、ＮＬＲＸ１は高炎症の期間に抑制されることから、分子の薬理学的活性化がこの発現低下を防ぎ、有益な抗炎症作用を誘発することができることが示唆される。
【０２１７】
方法
ＤＳＳモデル。上皮層の破壊を誘発するために、マウスに飲料水中の８％（ｗ／ｖ）ＤＳＳを７日間与えた。プロジェクト開始時、マウスは８週齢であり、８％ＤＳＳを与えてから２４時間後に投与を開始した。毎日マウスの体重を測定し、疾患の症状（下痢、直腸出血、直腸炎症、全体的な行動）についてスコア化した。
【０２１８】
治療薬投与。ＮＸ−１３は、０．５％メチルセルロース（１２〜１５ｃＰ）溶液内で調製した。使用した投与量は２０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回投与した。投与製剤を更新するために、マウスの体重を毎週測定した。投与量は、各性別の平均体重に基づいて計算した。経口投与量は、体積０．２ｍＬの投与量の経口胃管栄養法によって送達された。
【０２１９】
フローサイトメトリー。結腸は、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）およびＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳ緩衝液中に採取した。組織を３７℃で撹拌しながら６０分間消化した。得られた細胞懸濁液を１００μｍ濾過器で濾過し、遠心分離（３００×ｇ、８分）し、新鮮なＲＰＭＩで洗浄した。得られた単一細胞懸濁液を濾過した後、７０％パーコール溶液に重層した細胞を含む４０％パーコールのパーコール勾配により免疫細胞を精製した。遠心分離後、界面相を採取して洗浄し、濃縮された結腸固有層細胞画分を得た。細胞は、９６ウェルプレートでの連続生体染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４）および細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ１７、ＩＬ１０）抗体の混合物で標識した。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得した。
【０２２０】
遺伝子発現。結腸および細胞からの全ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙミニキットを使用して生成された。ｃＤＮＡは、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キットを使用して生成された。標準曲線は、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いた標準ＰＣＲ反応からの精製産物の連続希釈と、それに続くＱｉａｇｅｎ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ精製キットを使用した精製によって生成された。発現レベルは、ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６サーマルサイクラーでＳｙｂｒＧｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを用いた定量的リアルタイムＰＣＲの後、βアクチンの発現に対して正規化することにより得られた。
【０２２１】
結果
経口ＮＸ−１３による処置は、ＤＳＳでチャレンジされた野生型マウスの疾患活動性を低下させる。この大腸炎モデルにおける疾患活動性は、体重減少、直腸出血の存在および重症度、糞便の硬さ、疼痛の症状、ならびにマウスの全体的な行動の要約スコアである。ＮＸ−１３は、チャレンジの過程全体を通して疾患活動性を低下させ、６日目に最大５０％の低下が観察された（図７Ａ）。
【０２２２】
ＤＳＳモデル内では、疾患は上皮で開始されるが、結腸固有層内の免疫細胞の存在および存在量によって調節される。このモデルにおける炎症および組織損傷の主な要因は、Ｔヘルパー１細胞および好中球である。経口ＮＸ−１３による処置は、フローサイトメトリーによって測定されるように、結腸固有層のＴｈ１細胞および好中球細胞の数を著しく減少させた。ＤＳＳチャレンジの７日目に、好中球（図７Ｂ）とＴｈ１細胞（図７Ｃ）の両方が５０％以上減少した。しかしながら、ＮＸ−１３は、組織恒常性に関与する結腸の一次細胞型であるＦＯＸＰ３＋調節ＣＤ４＋Ｔ細胞の数を減少させなかった。
【０２２３】
ＤＳＳチャレンジの７日目に、ビヒクルおよびＮＸ−１３で処置したマウスの結腸全体からＲＮＡを単離した。ＲＮＡを使用して、炎症性および抗炎症性サイトカインの遺伝子発現を測定した（図８Ａ〜図Ｄ）。ＮＸ−１３による処置は、結腸全体におけるＩｆｎｇ（図８Ａ）、Ｔｎｆａ（図８Ｃ）、およびＩｌ１７（図８Ｄ）の発現を減少させる一方で、Ｉｌ１０（図８Ｂ）の発現を増加させた。重要なことに、ＩＦＮγおよびＴＮＦαは、ＩＢＤの炎症の２つの主要な要因である。ＮＸ−１３による経口処置後の結腸レベルでのこれらのサイトカインの減少は、有効性の重要なマーカーである。
【０２２４】
実施例１５ＩＢＤの慢性モデルにおけるＮＸ−１３の使用
序論
クローン病および潰瘍性大腸炎は、未解明の炎症性フレアが散発的に発生し、その結果として腸粘膜に進行性の損傷をもたらす慢性疾患である［３２、３３］。マウスでＭｄｒ１ａが失われると、上皮細胞が老廃物を正しく処理して排出する能力が損なわれ、自発的な大腸炎が引き起こされる［３４］。これらのマウスの大腸炎は慢性的であり、腸の層全体に浸透する。したがって、Ｍｄｒ１ａ−／−モデルは、免疫担当動物の使用、上皮細胞機構の内因性機能障害、顕著な炎症反応、およびヒトＩＢＤにおける新たなリスク対立遺伝子としてのＭＤＲ１遺伝子の翻訳関連性に起因する疾患重症度の低下の誘導および維持のための治療薬の長期投与を試験するための理想的なモデルである［３５］［３６］。
【０２２５】
方法
ＭＤＲ１ａ−／−モデル。ＭＤＲ１ａを欠損したマウスは自発的に大腸炎を発症する。ＭＤＲ１ａ−／−は、４週齢でＮＸ−１３による処置（経口、２０ｍｇ／ｋｇ）を受け始め、１０週齢まで処置を続けた。毎週マウスの体重を測定してスコア化した。
【０２２６】
治療薬投与。ＮＸ−１３は、０．５％メチルセルロース（１２〜１５ｃＰ）溶液内で調製した。使用した投与量は２０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回投与した。投与製剤を更新するために、マウスの体重を毎週測定した。投与量は、各性別の平均体重に基づいて計算した。経口投与量は、体積０．２ｍＬの投与量の経口胃管栄養法によって送達された。
【０２２７】
フローサイトメトリー。結腸は、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）およびＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳ緩衝液中に採取した。組織を３７℃で撹拌しながら６０分間消化した。得られた細胞懸濁液を１００μｍ濾過器で濾過し、遠心分離（３００×ｇ、８分）し、新鮮なＲＰＭＩで洗浄した。得られた単一細胞懸濁液を濾過した後、７０％パーコール溶液に重層した細胞を含む４０％パーコールのパーコール勾配により免疫細胞を精製した。遠心分離後、界面相を採取して洗浄し、濃縮された結腸固有層細胞画分を得た。細胞は、９６ウェルプレートでの連続生体染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４）および細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ１７、ＩＬ１０）抗体の混合物で標識した。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得した。
【０２２８】
組織病理学。Ｈ＆Ｅ染色された結腸切片は、１０％緩衝ホルマリン中に採取され、パラフィン中に包埋された結腸の部分から調製された。スライドは、Ｏｌｙｍｐｕｓの顕微鏡により当局認定の獣医病理学者によって検査され、画像はＩｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェアで収集された。白血球の浸潤、上皮の侵食、および粘膜の肥厚について、試料をスコア化した（０〜４）。
【０２２９】
結果
経口ＮＸ−１３による処置は、Ｍｄｒ１ａ−／−マウスの疾患活動性を低下させる。この大腸炎モデルにおける疾患活動性は、体重減少、直腸出血の存在および重症度、糞便の硬さ、疼痛の症状、ならびにマウスの全体的な行動の要約スコアである。ＮＸ−１３は、チャレンジの過程全体を通して疾患活動性を低下させ、処置の６週目に最大７０％の低下が観察された（図９）。
【０２３０】
ＭＤＲ１ａ−／−マウスでは、経口ＮＸ−１３は結腸の病状を大幅に軽減した（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。６週間の処置後、ＮＸ−１３は、白血球凝集体の発生および粘膜の肥厚を防いた。さらに、ＮＸ−１３は、全体的な白血球浸潤および上皮びらんを減少させた。
【０２３１】
経口ＮＸ−１３は、結腸固有層内の免疫細胞割合を著しく変化させる（図１１Ａおよび図１０Ｂ）。特に、ＮＸ−１３は、結腸粘膜の炎症に関与する細胞の２つの主要なサブセットであるＴｈ１（図１１Ａ）および好中球（図１１Ｂ）の割合を低下させる。さらに、Ｆ４／８０ｈｉマクロファージならびにＩＬ−１７およびＩＦＮγ産生Ｔ細胞の数が、ＮＸ−１３処置により大幅に減少した。制御性ＣＤ４＋Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞（図１１Ｃ）の割合も結腸で増加した。これらの知見は、ＮＸ−１３が大腸炎マウスの結腸における炎症反応と抗炎症反応のバランスを回復することができることを示している。
【０２３２】
実施例１６。ヒト末梢血単核細胞におけるＮＸ−１３の有効性
序論
クローン病および潰瘍性大腸炎に苦しむヒトは、胃腸管内で局所的におよび血液内で全身的に炎症性サブセットの高い保有率を伴う過活動性免疫細胞を呈する。したがって、ＩＢＤ患者の末梢血（ＰＢＭＣ）から単離された単核細胞は、それらが曝露される環境および個体の全ての細胞内に存在する遺伝的異常のために消化管粘膜で観察される強力な炎症反応の多くを示すことが多い。潰瘍性大腸炎およびクローン病患者のＰＢＭＣにおいてＮＸ−１３の翻訳アプリケーションを調べ、ヒト細胞におけるＮＸ−１３による処置の抗炎症効果を確認した。
【０２３３】
方法
ＰＢＭＣの分離。試料は、中程度から重度の疾患を有すると臨床的に分類された男性および女性のドナーから得られた。年齢および現在の投薬は除外基準として使用されなかった。全血をヘパリン処理した真空管に採取した。滅菌リン酸緩衝生理食塩水で全血を１：３の体積に希釈した。ＬｅｕｃｏＳｅｐ（Ｇｒｅｉｎｅｒ）は、リンパ球分離培地を加えた後、最大速度で１５秒間遠心分離することにより調製した。希釈した全血をＬｅｕｃｏＳｅｐチューブに加えた。遠心分離（２０００×ｇ、２０分）後、パスツールピペットによって界面相からＰＢＭＣを採取した。残りの赤血球を低張溶解により溶解し、懸濁液を１００μＭ細胞濾過器で濾過した。ＰＢＭＣを洗浄し、滅菌細胞培地、１０％ウシ胎児血清、２．５％Ｈｅｐｅｓ溶液、１％Ｌ−グルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１％ピルビン酸ナトリウム、および１％必須アミノ酸を含むＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ）（完全ＲＰＭＩ）に再懸濁した。
【０２３４】
細胞培養。標的細胞を完全ＲＰＭＩ培地で、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞は、１ｎＭ〜１００ｎＭの濃度範囲のＮＸ−１３の存在下でインキュベートした。ＮＸ−１３ストック溶液はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で１００ｍＭに調製し、培地にて所望の濃度に希釈した。ＤＭＳＯ濃度は、全ての用量およびビヒクル処置で等しくなるように調整した。アッセイの６時間前に、細胞をホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシンで刺激して細胞の活性化を刺激した。２４時間で細胞を所望のデータについてアッセイした。
【０２３５】
フローサイトメトリー。採取する前に、細胞をＢＤ  ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（３ｍＬの総培地に対する２μＬのＧｏｌｇｉＳｔｏｐ）でインキュベートして、サイトカインの細胞内蓄積を可能にした。順次、細胞を細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ）および細胞内（ＦＯＸＰ３、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）で生体染色した。データはＢＤＦＡＣ  Ｃｅｌｅｓｔａで取得し、ＦＡＣＳＤｉｖａを使用して分析した。生存不能および一重項でない細胞は分析から除外された。データは、ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージまたは生存率、一重項として表される。
【０２３６】
結果
潰瘍性大腸炎の試料では、ＮＸ−１３は、ＴＮＦα（図１２Ａ）およびＩＦＮγ（図１２Ｂ）を産生するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを減少させ、１０ｎＭ以上の濃度で両方の集団に有意な減少が観察された。ＴＮＦにおいて１ｎＭでは有意な減少は観察されなかったが、減少した傾向は、より高い濃度で観察されたものと一致していた（図１２Ａ）。対照的に、たとえ１ｎＭであってもＩＦＮγの有意な減少が観察された（図１２Ｂ）。さらに、ＮＸ−１３は、平均蛍光強度によって測定されるように、各細胞に存在するＴＮＦαの量を用量依存的に減少させた。
【０２３７】
ＵＣ試験と同様に、ＮＸ−１３は、クローン病患者からのＰＢＭＣにおいて、１０ｎＭという低い濃度でＴＮＦαおよびＩＬ−４産生ＣＤ４＋Ｔ細胞を強力に減少させた（図１３Ａおよび１３Ｂ）。さらに、ＮＸ−１３による処置は、５０ｎＭ以上の濃度でＩＬ１０＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを増加させたことから（図１３Ｃ）、ＮＸ−１３が、エフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞に対する直接的な抗炎症効果に加えて、調節促進的にも作用できることが示唆される。５０ｎＭを超えるＮＸ−１３では、ＩＦＮγ＋細胞に用量依存的な減少が観察された（図１３Ｄ）。
【０２３８】
これらの結果は、ＮＸ−１３が、ヒト細胞でＮＬＲＸ１を活性化し、炎症反応を阻害するための生存可能な小分子であることを示している。
【０２３９】
実施例１７腺癌のマウスモデルにおけるＮＸ−４３の有効性
序論
結腸直腸癌の症例の９５パーセントは腺癌である。腺腫またはポリープは、通常の結腸内視鏡検査で特定されない場合、上皮から腸壁に広がり、最終的には血液またはリンパ液に移動した後に転移する可能性がある。アメリカがん協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）によれば、ポリープまたは患部の切除によって一般的に治療できるステージ１の結腸癌を除いて、５年生存率は、ステージ２の癌の６３〜８７％からステージ４の癌の１１％の範囲と見通しが暗い。癌の発症には、遺伝的不安定性、無制限の増殖、およびアポトーシス抵抗性を超えた原因要素が必要であるという明確な証拠が増えている。局所的な血管新生、代謝の変化、および免疫回避等のこれらの要因により、中期および進行期の予後を改善する能力を備えた新世代の癌治療薬が生まれた。腸の免疫細胞と上皮細胞の両方で重要な機能を有する免疫調節因子として、ＮＬＲＸ１は結腸直腸癌の治療のための強力な標的として機能し得る。
【０２４０】
方法
マウスモデル。成体ＢＡＬＢ／ｃマウスの後側腹に５×１０6のＣＴ２６癌細胞を皮下注射した。９日目から開始して、強制飼養により４０ｍｇ／ｋｇのＮＸ−４３で毎日マウスを処置した。マウスの体重を毎日測定し、２１日目まで３日ごとに腫瘍の直径を測定した。剖検時に体重を測定したときに腫瘍を採取した。２番目のマウスモデルが使用された。ＡＰＣmin/+マウスには、５週齢から開始して、飲料水中のＤＳＳを投与した。標準的な飲料水に戻す前に、マウスを合計５日間ＤＳＳでチャレンジした。ＤＳＳ後、経口強制飼養によりＮＸ−４３（４０ｍｇ／ｋｇ）で４週間マウスを処置した。４週間後、結腸を切除して洗浄した。ポリープの数を数え、結腸の重量を得た。
【０２４１】
遺伝子発現。腫瘍およびリンパ節からの全ＲＮＡは、ＱｉａｇｅｎＲＮｅａｓｙミニキットを使用して生成することができる。ｃＤＮＡは、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔｃＤＮＡ合成キットを使用して生成することができる。標準曲線は、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いた標準ＰＣＲ反応からの精製産物の連続希釈と、それに続くＱｉａｇｅｎ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ精製キットを使用した精製によって生成することができる。発現レベルは、ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６サーマルサイクラーでＳｙｂｒＧｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを用いた定量的リアルタイムＰＣＲの後、βアクチンの発現に対して正規化することにより得ることができる。遺伝子発現は、炎症性サイトカインおよび表面受容体等の免疫活性化、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＡＲＧ−１等の免疫抑制、ならびに腫瘍の成長および転移を示す遺伝子について測定することができる。
【０２４２】
組織病理学。Ｈ＆Ｅ染色された腫瘍およびリンパ節切片は、１０％緩衝ホルマリン中に採取され、パラフィンに包埋された組織から調製することができる。スライドは、Ｏｌｙｍｐｕｓの顕微鏡により当局認定の獣医病理学者によって検査され得、画像はＩｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェアで収集される。試料は、腫瘍浸潤性白血球の存在、壊死の領域、および増殖中の腫瘍細胞の割合についてスコア化および評価することができる。
【０２４３】
フローサイトメトリー。腫瘍およびリンパ節は、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）およびＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳ緩衝液中に採取することができる。組織を３７℃で撹拌しながら６０分間消化させることができる。得られた細胞懸濁液を１００μｍ濾過器で濾過し、遠心分離（３００×ｇ、８分）し、新鮮なＲＰＭＩで洗浄することができる。得られた単一細胞懸濁液を濾過した後、７０％パーコール溶液に重層した細胞を含む４０％パーコールのパーコール勾配により免疫細胞を精製することができる。遠心分離後、界面相を採取および洗浄して、濃縮された免疫細胞画分を得ることができる。細胞は、９６ウェルプレートでの連続生体染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４）および細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ１７、ＩＬ１０、グランザイムＢ、ｉＮＯＳ）抗体の混合物で標識することができる。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得することができる。
【０２４４】
結果
ＣＴ２６固形腫瘍モデルは、癌腫の免疫原性の高いモデルであり、新規治療薬の評価において貴重なモデルとなっている。ＮＸ−４３等のＮＬＲＸ１阻害剤は、未処理の対照と比較して腫瘍サイズを縮小する（図１４Ａおよび図１４Ｂ）。重要なことに、腫瘍直径の減少は、ＮＸ−４３による処置の開始後１０日以内に観察された。一方、１２日間の処置後、全体的な腫瘍質量が７０％超減少したことが観察された。結腸直腸癌のＡＰＣmin/+モデル（図１５Ａおよび図１５Ｂ）では、ＮＸ−４３による炎症後処置により、（結腸重量から明らかなように）結腸ポリープの数および全体的な腫瘍量が減少した。組織学的には、これらの効果は腫瘍浸潤性白血球の割合の増加と相関することが予想される。免疫活性化遺伝子の発現は上昇すると予想され、抑制遺伝子は下方制御されると予想される。フローサイトメトリーにより、Ｔｒｅｇまたは骨髄由来サプレッサー細胞等の抑制性細胞型の数は減少することが予想され、活性化された細胞傷害性Ｔ細胞およびグランザイムＢ＋細胞の数は増加することが予測される。
【０２４５】
実施例１８モデルウイルス感染症におけるＮＸ−４３の有効性
序論
ウイルス核酸のセンサー、ならびにＭＡＶＳおよびＳＴＩＮＧ経路のモジュレーターとして、ＮＬＲＸ１はウイルスへの応答の中核を担っている。実際、ネイティブウイルス応答におけるＮＬＲＸ１の重要性は、インフルエンザ、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、およびヘルペスウイルスのモデルで確認されている［７、９、１２、１４］。全体的な免疫応答の複雑さはウイルスによって様々であるが、ＮＬＲＸ１を介した機構がそれぞれに存在し、Ｉ型インターフェロンの発現およびウイルスクリアランスに下流の影響を与えることは明らかである。この場合、特定の阻害剤によるＮＬＲＸ１の阻害は、免疫応答を活性化し、宿主の回避および免疫抑制を防ぎ、ウイルスクリアランスの経路を開始することが予測される。ＮＸ−４３の有効性を検証するために、インフルエンザウイルス感染症のマウスモデルを使用することができる。
【０２４６】
方法
マウスモデル。８〜１０週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、イソフルラン吸入により麻酔することができる。マウスは、３５０ｐｆｕ／マウスのチャレンジ力価のインフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）で鼻腔内感染させることができる［３７］。強制飼養により経口的に、または尾静脈注射により静脈内に、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇの用量のＮＸ−４３で毎日マウスを処置することができる。マウスの体重を測定し、１４日間にわたって毎日スコア化することができる。３、７、１１、１４日目にマウスを安楽死させ、遺伝子発現およびフローサイトメトリーにより肺内のウイルスの力価および免疫応答の生成を測定することができる。
【０２４７】
ウイルス力価。肺ホモジネートは、未処理マウスおよびＮＸ−４３処理マウスから調製することができる。ＭＤＣＫ細胞は、６ウェルプレート内でコンフルエントになるまで増殖させることができる。曝露前に、細胞から血清含有培地を洗い流すことができる。ウイルス試料の段階希釈は、フラクションＶ  ＢＳＡを含む無血清増殖培地で行うことができる。細胞は、１ｍＬのウイルス希釈液とともに３７℃で１時間インキュベートすることができる。上清を除去し、細胞を洗浄することができる。細胞をＭＥＭ寒天混合物で覆い、７２時間インキュベートすることができる。オーバーレイを取り除くことができ、ウェルをクリスタルバイオレットで染色することができる。少なくとも５０プラークの最低希釈を数えることができる。
【０２４８】
遺伝子発現。肺からの全ＲＮＡは、ＱｉａｇｅｎＲＮｅａｓｙミニキットを使用して生成することができる。ｃＤＮＡは、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔｃＤＮＡ合成キットを使用して生成することができる。標準曲線は、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いた標準ＰＣＲ反応からの精製産物の連続希釈と、それに続くＱｉａｇｅｎ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ精製キットを使用した精製によって生成することができる。発現レベルは、ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６サーマルサイクラーでＳｙｂｒＧｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを用いた定量的リアルタイムＰＣＲの後、βアクチンの発現に対して正規化することにより得ることができる。遺伝子発現は、ＩＬ−６、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、Ｓｔａｔ２、Ｏａｓ１ａ、ＲＩＧ−Ｉ、およびＭＡＶＳについて測定することができる。
【０２４９】
フローサイトメトリー。肺を小片に切り刻み、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）およびＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳ／ＣａＣｌ2緩衝液中に採取することができる。組織は３７℃で撹拌しながら６０〜９０分間消化させることができる。得られた細胞懸濁液を１００μｍ濾過器で濾過し、遠心分離（３００×ｇ、８分）し、新鮮なＲＰＭＩで洗浄することができる。赤血球は、低張溶解によって溶解し、濾過によって除去することができる。フローサイトメトリー染色のために、細胞を洗浄して播種することができる。細胞は、９６ウェルプレートでの連続生体染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、Ｇｒ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４、ＳｉｇｌｅｃＦ、Ｌｙ６Ｃ）および細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＦＮｂ）抗体の混合物で標識することができる。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得することができる。
【０２５０】
結果
このインフルエンザＡ感染モデルにおけるＮＸ−４３の主な有効性は、ウイルス力価の評価であり得る。ＮＬＲＸ１の阻害により、より高い免疫活性化およびインターフェロン応答が予測され、これにより、肺のウイルスレベルが低下し、未処理マウスよりも早くクリアランスが得られると予測される。述べたように、このクリアランスは、１型インターフェロン、およびＩＬ−６等の炎症性サイトカインの発現増加によって可能になると予測される。ウイルスのクリアランスが促進されると、感染の初期段階後の体重回復が早まることが予測される。活性化された免疫応答により、感染中の肺における炎症性Ｔ細胞、マクロファージ、および好中球のパーセンテージが高くなると予測される。
【０２５１】
実施例１９モデル細菌感染症としてのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症におけるＮＸ−１３の有効性
序論
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症は、抗生物質の使用、抗生物質耐性株の出現、および高率再発との関連により、腸内感染症の治療が困難である。Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは、ネイティブ共生細菌株によって促進される競合阻害によって制御することができる。抗生物質後のこれらの細菌の再増殖を促進するために、ＮＬＲＸ１の活性化は寛容原性環境に対する免疫応答を調節することが予測される。ＮＸ−１３の有効性を検証するために、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症のマウスモデルを使用することができる。
【０２５２】
方法
マウスモデル。野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウスは、強制飼養により経口的にＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅに感染させることができる。強制飼養により経口的に、または尾静脈注射により静脈内に、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇの用量のＮＸ−１３で毎日マウスを処置することができる。マウスの体重を測定し、１２日間にわたって毎日スコア化することができる。４、８、および１２日目にマウスを安楽死させ、遺伝子発現およびフローサイトメトリーにより腸内のＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ数および免疫応答の生成を測定することができる。
【０２５３】
Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ数。糞便ホモジネートは、未処理マウスおよびＮＸ−４３処理マウスから調製することができ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの数は標準的な方法を使用して決定することができる。
【０２５４】
遺伝子発現。腸からの全ＲＮＡは、ＱｉａｇｅｎＲＮｅａｓｙミニキットを使用して生成することができる。ｃＤＮＡは、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔｃＤＮＡ合成キットを使用して生成することができる。標準曲線は、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いた標準ＰＣＲ反応からの精製産物の連続希釈と、それに続くＱｉａｇｅｎ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ精製キットを使用した精製によって生成することができる。発現レベルは、ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６サーマルサイクラーでＳｙｂｒＧｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを用いた定量的リアルタイムＰＣＲの後、βアクチンの発現に対して正規化することにより得ることができる。遺伝子発現は、ＩＬ１０、ＩＬ６、Ｓ１００Ａ８、Ｓ１００Ａ９、およびＤｅｆＢ１について測定することができる。
【０２５５】
フローサイトメトリー。腸を小片に切り刻み、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）およびＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳ／Ｈｅｐｅｓ緩衝液中に採取することができる。組織は３７℃で撹拌しながら６０分間消化させることができる。得られた細胞懸濁液を１００μｍ濾過器で濾過し、遠心分離（３００×ｇ、８分）し、新鮮なＲＰＭＩで洗浄することができる。赤血球は、低張溶解によって溶解し、濾過によって除去することができる。フローサイトメトリー染色のために、細胞を洗浄して播種することができる。細胞は、９６ウェルプレートでの連続生体染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、Ｇｒ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４、ＳｉｇｌｅｃＦ、Ｌｙ６Ｃ）および細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＬ１７）抗体の混合物で標識することができる。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得することができる。
【０２５６】
結果
このＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症モデルにおけるＮＸ−１３の主な有効性は、腸内の細菌数の評価であり得る。ＮＬＲＸ１の活性化により、より高い免疫寛容およびＩＬ−１０応答が予測され、これにより、共生菌株の再増殖促進を通して腸内の病原菌のレベルが低下することが予測される。この寛容促進により、処置したマウスの結腸のＴｈ１７細胞に関するＴｒｅｇ応答の増加の結果として、より低いレベルの組織損傷が予想される。Ｔｈ１７の減少により、より少ない結腸好中球および抗菌ペプチドの発現が予想される。ＮＸ−１３によって誘発される免疫学的および微生物学的変化は、体重減少および疾患活動性スコアを低下させ、重症度の低い疾患および迅速な回復を可能にすることが予想される。
【０２５７】
実施例２０：１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）を治療するためのＮＸ−１３の使用
序論
ＮＸ−１３およびＮＬＲＸ１の他のアゴニストは、１型糖尿病を効果的に治療することが予測される。
【０２５８】
方法
マウス。ＮＯＤマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、特定の病原体のない条件下で換気ラックに収容することができる。マウスは動物施設内に維持することができる。全ての実験プロトコルは、施設内の動物管理および使用委員会によって承認され、国立衛生研究所の実験動物福祉および公衆衛生局の方針のガイドラインを満たしているか、上回っている。
【０２５９】
体重および耐糖能の評価。全てのマウスは、試験開始前に正常血糖（空腹時血糖値が２５０ｍｇ／ｄｌ未満）であり、同様の体重（２０±１．５ｇ）を有すると確認することができる。マウスの体重を毎週測定し、盲検化された観察者によって疾患の臨床徴候を調べることができる。標準の１２時間の絶食後、ＡＣＣＵ−ＣＨＥＫ（登録商標）血糖計（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用して血糖値を測定することができる。血液は外側尾静脈から採取し、毛細血管採血管に配置することができる。
【０２６０】
組織病理学。マウスにおけるＮＯＤ試験からの膵臓切片を、１０％緩衝中性ホルマリン中で固定し、その後パラフィンに包埋し、次いで切片化（５μｍ）して、組織学的検査のためにＨ＆Ｅ染色で染色することができる。切片は、リンパ球浸潤、細胞損傷、および組織侵食に応じて、０〜４のスコアでランク付けすることができ、データは正規化された複合スコアとして分析することができる。
【０２６１】
統計分析。パラメトリックデータは、ＡＮＯＶＡとそれに続くＳｃｈｅｆｆｅの多重比較法を使用して分析することができる。ノンパラメトリックデータは、マン・ホイットニーのＵ検定とそれに続くダンの多重比較検定を使用して分析することができる。ＡＮＯＶＡは、ＳＡＳリリース６．０．３（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）の一般線形モデル手順を使用して実行することができる。統計的有意性はＰ≦０．０５で評価され得る。
【０２６２】
結果
ＮＸ−１３は、１型糖尿病のマウスモデルにおいて、空腹時血糖値を低下させ、インスリンを増加させると予測される。
【０２６３】
Ｔ１Ｄのマウスモデルの血糖値の調節におけるＮＸ−１３の効果を判定するために、試験開始後０、１、３、４、５、１０、および１１週目に空腹時血糖試験を行うことができる。結果は、ＮＸ−１３で処置したマウスが、１２時間の絶食期間後により低い血中グルコースレベルをどのように有しているかを示すことが予測される。並行して、５週目にインスリンレベルを評価することができ、結果は、ＮＸ−１３で処置したマウスが、有意に増加した血漿中のインスリンレベルをどのように有しているかを示すことが予測される。
【０２６４】
ＮＸ−１３は、マウスＮＯＤモデルにおいて臨床組織病理学的膵臓病変および炎症を改善することが予測される。Ｔ１Ｄのマウスモデルにおける組織病理学的病変を評価するために、膵臓を採取し、１０％ホルマリンで固定することができる。次いで、膵臓切片をＨ＆Ｅで染色し、顕微鏡下で観察することができる。結果は、ＮＸ−１３による処置が、ビヒクルで処置したマウスと比較した場合に、マウスの膵臓における臨床組織病理学的病変をどのように有意に減少させるかを示すと予測される。
【０２６５】
参考文献
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【図１Ａ】
2021529809.tif 000006
【図１Ｂ】
2021529809.tif 000007
【図１Ｃ】
2021529809.tif 000008
【図１Ｄ】
2021529809.tif 000009
【図１Ｅ】
2021529809.tif 000010
【図１Ｆ】
2021529809.tif 000011
【図１Ｇ】
2021529809.tif 000012
【図１Ｈ】
2021529809.tif 000013
【図１Ｉ】
2021529809.tif 000014
【図１Ｊ】
2021529809.tif 000015
【図１Ｋ】
2021529809.tif 000016
【図１Ｌ】
2021529809.tif 000017
【図１Ｍ】
2021529809.tif 000018
【図１Ｎ】
2021529809.tif 000019
【図１Ｏ】
2021529809.tif 000020
【図１Ｐ】
2021529809.tif 000021
【図１Ｑ】
2021529809.tif 000022
【図１Ｒ】
2021529809.tif 000023
【図１Ｓ】
2021529809.tif 000024
【図１Ｔ】
2021529809.tif 000025
【図２Ａ】
2021529809.tif 000026
【図２Ｂ】
2021529809.tif 000027
【図２Ｃ】
2021529809.tif 000028
【図２Ｄ】
2021529809.tif 000029
【図２Ｅ】
2021529809.tif 000030
【図３】
2021529809.tif 000031
【図４Ａ】
2021529809.tif 000032
【図４Ｂ】
2021529809.tif 000033
【図５Ａ】
2021529809.tif 000034
【図５Ｂ】
2021529809.tif 000035
【図５Ｃ】
2021529809.tif 000036
【図５Ｄ】
2021529809.tif 000037
【図６Ａ】
2021529809.tif 000038
【図６Ｂ】
2021529809.tif 000039
【図６Ｃ】
2021529809.tif 000040
【図６Ｄ】
2021529809.tif 000041
【図６Ｅ】
2021529809.tif 000042
【図６Ｆ】
2021529809.tif 000043
【図６Ｇ】
2021529809.tif 000044
【図６Ｈ】
2021529809.tif 000045
【図６Ｉ】
2021529809.tif 000046
【図６Ｊ】
2021529809.tif 000047
【図７Ａ】
2021529809.tif 000048
【図７Ｂ】
2021529809.tif 000049
【図７Ｃ】
2021529809.tif 000050
【図８Ａ】
2021529809.tif 000051
【図８Ｂ】
2021529809.tif 000052
【図８Ｃ】
2021529809.tif 000053
【図８Ｄ】
2021529809.tif 000054
【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【国際調査報告】
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