(57)【要約】本発明はＦＧＦＲ及びＶＥＧＦＲ阻害剤としての化合物の塩形態、結晶形、製造方法及びその医薬使用を開示した。【化１】2021505625.tif 000047
2021505625.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．２６±０．２°、１０．４７±０．２°、２０．９８±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＡ結晶形。
【化１】
2021505625.tif 000043
【請求項２】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．２６±０．２°、７．６５±０．２°、１０．４７±０．２°、１９．７４±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．９８±０．２°、２６．３０±０．２°、２６．９１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項１に記載のＡ結晶形。
【請求項３】
ＸＲＰＤスペクトルは図１で示される通りであることを特徴とする、請求項２に記載のＡ結晶形。
【請求項４】
示差走査熱量曲線は４２．９７℃±３℃、１３９．６３℃±３℃及び２０３．５６℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有し、１４７．４５℃±３℃において一つの放熱ピークの開始点を有することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡ結晶形。
【請求項５】
ＤＳＣスペクトルは図２で示される通りであることを特徴とする、請求項４に記載のＡ結晶形。
【請求項６】
熱重量分析曲線は１２０．００℃±３℃の際に重量が７．０７４％減少し、２１２．９９℃±３℃の際にまた重量が０．４３１７％減少することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡ結晶形。
【請求項７】
ＴＧＡスペクトルは図３で示される通りであることを特徴とする、請求項６に記載のＡ結晶形。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１１．１０±０．２°、１８．００±０．２°、１９．８４±０．２°において特徴的回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＢ結晶形。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．３１±０．２°、１１．１０±０．２°、１１．７３±０．２°、１３．９４±０．２°、１４．７７±０．２°、１６．５２±０．２°、１８．００±０．２°、１９．８４±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項８に記載のＢ結晶形。
【請求項１０】
ＸＲＰＤスペクトルが図４で示される通りであることを特徴とする、請求項９に記載のＢ結晶形。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１０．１９±０．２°、２２．８４±０．２°、２４．３９±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＣ結晶形。
【請求項１２】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１０．１９±０．２°、１１．３２±０．２°、１８．７３±０．２°、１９．７１±０．２°、２２．８４±０．２°、２４．３９±０．２°、３２．１０±０．２°、３４．０２±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項１１に記載のＣ結晶形。
【請求項１３】
ＸＲＰＤスペクトルは図５で示される通りであることを特徴とする、請求項１２に記載のＣ結晶形。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：８．０４±０．２°、１１．５５±０．２°、２４．０６±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＤ結晶形。
【請求項１５】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：８．０４±０．２°、１１．５５±０．２°、１４．９２±０．２°、１５．４６±０．２°、１８．０４±０．２°、１９．０３±０．２°、２２．５２±０．２°、２４．０６±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項１４に記載のＤ結晶形。
【請求項１６】
ＸＲＰＤスペクトルが図６で示される通りであることを特徴とする、請求項１５に記載のＤ結晶形。
【請求項１７】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．３０±０．２°、１５．９３±０．２°、１８．７９±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＥ結晶形。
【請求項１８】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．３０±０．２°、１０．６２±０．２°、１１．１６±０．２°、１４．４７±０．２°、１５．９３±０．２°、１７．３３±０．２°、１８．７９±０．２°、３２．１６±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項１７に記載のＥ結晶形。
【請求項１９】
ＸＲＰＤスペクトルは図７で示される通りであることを特徴とする、請求項１８に記載のＥ結晶形。
【請求項２０】
式（II）で表される化合物。
【化２】
2021505625.tif 000044
【請求項２１】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９８±０．２°、７．４９±０．２°、１９．１８±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）化合物のＦ結晶形。
【請求項２２】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９８±０．２°、７．４９±０．２°、９．８２±０．２°、１２．１５±０．２°、１７．２７±０．２°、１９．１８±０．２°、２０．１０±０．２°、２１．７９±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項２１に記載のＦ結晶形。
【請求項２３】
ＸＲＰＤスペクトルは図８で示される通りであることを特徴とする、請求項２２に記載のＦ結晶形。
【請求項２４】
示差走査熱量曲線は１７２．０７℃±３℃、２７７．０５℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有し、２８４．３７℃±３℃において一つの放熱ピークを有することを特徴とする、請求項２１〜２３の何れか１項に記載のＦ結晶形。
【請求項２５】
ＤＳＣスペクトルは図９に示す通りであることを特徴とする、請求項２４に記載のＦ結晶形。
【請求項２６】
熱重量分析曲線は１５３．１３℃±３℃の際に重量が３．５７８％減少することを特徴とする、請求項２１〜２３の何れか１項に記載のＦ結晶形。
【請求項２７】
ＴＧＡスペクトルは図１０に示す通りであることを特徴とする、請求項２６に記載のＦ結晶形。
【請求項２８】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．３９±０．２°、１９．０７±０．２°、２０．０４±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）化合物のＧ結晶形。
【請求項２９】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．３９±０．２°、１９．０７±０．２°、２０．０４±０．２°、２１．０５±０．２°、２１．７６±０．２°、２５．６４±０．２°、２６．２３±０．２°、２７．１６±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項２８に記載のＧ結晶形。
【請求項３０】
ＸＲＰＤスペクトルは図１１で示される通りであることを特徴とする、請求項２９に記載のＧ結晶形。
【請求項３１】
示差走査熱量曲線は２７８．７０℃±３℃において吸熱ピークの開始点を有し、２８５．４６℃±３℃において放熱ピークの開始点を有することを特徴とする、請求項２８〜３０の何れか１項に記載のＧ結晶形。
【請求項３２】
ＤＳＣスペクトルは図１２に示す通りであることを特徴とする、請求項３１に記載のＧ結晶形。
【請求項３３】
熱重量分析曲線は１２０℃±３℃の際に重量が３．８７０％減少し、２２１．７６℃±３℃の際に重量が１．１７０％減少することを特徴とする、請求項２８〜３０の何れか１項に記載のＧ結晶形。
【請求項３４】
ＴＧＡスペクトルは図１３に示す通りであることを特徴とする、請求項３３に記載のＧ結晶形。
【請求項３５】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９５±０．２°、７．３０±０．２°、１９．０１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）化合物のＨ結晶形。
【請求項３６】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９５±０．２°、７．３０±０．２°、１１．９９±０．２°、１４．３６±０．２°、１６．６６±０．２°、１８．２６±０．２°、１９．０１±０．２°、２１．４９±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項３５に記載のＨ結晶形。
【請求項３７】
ＸＲＰＤスペクトルは図１４で示される通りであるることを特徴とする、請求項３６に記載のＨ結晶形。
【請求項３８】
示差走査熱量曲線は１７２．９７℃±３℃、２７７．３３℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有し、２８３．３８℃±３℃において放熱ピークの開始点を有することを特徴とする、請求項３５〜３７の何れか１項に記載のＨ結晶形。
【請求項３９】
ＤＳＣスペクトルは図１５に示す通りであることを特徴とする、請求項３８に記載のＨ結晶形。
【請求項４０】
熱重量分析曲線は１２０℃±３℃の際に重量が０．８８１９％減少し、２０６．３０℃±３℃の際にまた重量が２．８９２％減少することを特徴とする、請求項３５〜３７の何れか１項に記載のＨ結晶形。
【請求項４１】
ＴＧＡスペクトルは図１６に示す通りであることを特徴とする、請求項４０に記載のＨ結晶形。
【請求項４２】
式（III）で表される化合物。
【化３】
2021505625.tif 000045
【請求項４３】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．７３±０．２°、１１．６６±０．２°、１９．５１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（III）化合物のＩ結晶形。
【請求項４４】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．７３±０．２°、１１．６６±０．２°、１４．２８±０．２°、１４．９９±０．２°、１６．３９±０．２°、１９．５１±０．２°、２３．３４±０．２°、２５．６１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項４３に記載のＩ結晶形。
【請求項４５】
ＸＲＰＤスペクトルは図１７で示される通りであることを特徴とする、請求項４４に記載のＩ結晶形。
【請求項４６】
示差走査熱量曲線は３２．９４℃±３℃、２０４．６２℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有することを特徴とする、請求項４３〜４５の何れか１項に記載のＩ結晶形。
【請求項４７】
ＤＳＣスペクトルは図１８に示す通りであることを特徴とする、請求項４６に記載のＩ結晶形。
【請求項４８】
熱重量分析曲線は８５．３９℃±３℃の際に重量が０．８６０１％減少し、１８４．９３℃±３℃の際にまた重量が２．２６４％減少することを特徴とする、請求項４３〜４５の何れか１項に記載のＩ結晶形。
【請求項４９】
ＴＧＡスペクトルは図１９に示す通りであることを特徴とする、請求項４８に記載のＩ結晶形。
【請求項５０】
式（IV）で表される化合物。
【化４】
2021505625.tif 000046
【請求項５１】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９９±０．２°、１１．３２±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（IV）化合物のＪ結晶形。
【請求項５２】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９９±０．２°、６．９０±０．２°、９．９±０．２°、１０．７３±０．２°、１１．３２±０．２°、１４．４１±０．２°、１６．７３±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項５１に記載のＪ結晶形。
【請求項５３】
ＸＲＰＤスペクトルは図２１で示される通りであることを特徴とする、請求項５２に記載のＪ結晶形。
【請求項５４】
示差走査熱量曲線は３３．３４℃±３℃、１９４．８４℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有することを特徴とする、請求項５１〜５３の何れか１項に記載のＪ結晶形。
【請求項５５】
ＤＳＣスペクトルは図２２に示す通りであることを特徴とする、請求項５４に記載のＪ結晶形。
【請求項５６】
熱重量分析曲線は１２０℃±３℃の際に重量が１．３５７％減少し、１７７．１１℃±３℃の際にまた重量が０．８３３０％減少することを特徴とする、請求項５１〜５３の何れか１項に記載のＪ結晶形。
【請求項５７】
ＴＧＡスペクトルは図２３に示す通りであることを特徴とする、請求項５６に記載のＪ結晶形。
【請求項５８】
式（I）、（II）、（III）又は（IV）の化合物をそれぞれ独立的に溶剤に添加して加熱撹拌し、又は再結晶して得る工程を含む、式（I）、（II）、（III）又は（IV）化合物の結晶形の製造方法。
【請求項５９】
前記溶剤がメタノール、エタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、酢酸エチル−エタノール、イソプロピルアルコール又はエタノール−水から選ばれることを特徴とする、請求項５８に記載の製造方法。
【請求項６０】
前記撹拌温度は３５℃〜４５℃であることを特徴とする、請求項５８に記載の製造方法。
【請求項６１】
前記パルピング時間は１２時間〜３６時間であることを特徴とする、請求項５８に記載の製造方法。
【請求項６２】
前記化合物と溶剤の重量比は１：１０〜１：１５であることを特徴とする、請求項５８に記載の製造方法。
【請求項６３】
チロシンキナーゼ阻害剤関連疾患を治療する医薬の製造における、請求項２０、４２又は５０に記載の化合物、又は請求項１〜１９、２１〜４１、４３〜４９又は５２〜５７の何れか１項に記載の結晶形の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［関連出願の引用］
本出願は以下の優先権を要求する：
ＣＮ２０１７１１２８６３９８．Ｘ、出願日：２０１７年１２月０７日。
［技術分野］
本発明は、ＦＧＦＲ及びＶＥＧＦＲ阻害剤としての化合物の塩形態、結晶形およびその製造方法に関する。
【０００２】
［背景技術］
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、発生過程の形態形成及び血管新生などの多くの生理学的プロセスの重要な媒介であると認識されている。線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリーは、細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、疎水性膜貫通領域、及びチロシンキナーゼ領域の細胞質部分からなる糖タンパク質の４つのメンバー（ＦＧＦＲ１〜ＦＧＦＲ４）で構成されている。ＦＧＦの結合はＦＧＦＲの二量体化を引き起こし、その後に受容体の自己リン酸化と下流のシグナル伝達経路の活性化を引き起こす。受容体の活性化は、細胞増殖、細胞代謝、細胞生存などの多様化プロセスが調節する特定の下流シグナル伝達パートナーを回復および活性化するのに十分である。したがって、腫瘍細胞の増殖、遊走、浸潤、及び血管新生に重要な多くの生物学的プロセスにおいて、ＦＧＦ  ／  ＦＧＦＲシグナル伝達経路は複数の効果を有する。
【０００３】
ビニールインドール類は、癌治療の分野で知られ、ＷＯ０２１０１３７及びＷＯ２００３１０１９６８を参照する。ＦＧＦＲ阻害剤も当技術分野で公知であり、ＷＯ２００２０２２５９８を参照する。
【０００４】
［発明の概要］
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．２６±０．２°、１０．４７±０．２°、２０．９８±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＡ結晶形を提供する。
【０００５】
【化１】
2021505625.tif 000003
【０００６】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．２６±０．２°、７．６５±０．２°、１０．４７±０．２°、１９．７４±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．９８±０．２°、２６．３０±０．２°、２６．９１±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【０００７】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図１で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示す通りである：
【０００８】
【表１】
2021505625.tif 000004
【０００９】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形の示差走査熱量曲線は４２．９７℃±３℃、１３９．６３℃±３℃及び２０３．５６℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有し、１４７．４５℃±３℃において一つの放熱ピークの開始点を有する。
【００１０】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形の熱重量分析曲線は１２０．００℃±３℃の際に重量が７．０７４％減少し、２１２．９９℃±３℃の際にまた重量が０．４３１７％減少する。
【００１１】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形のＴＧＡスペクトルは図３で示される通りである。
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１１．１０±０．２°、１８．００±０．２°、１９．８４±０．２°において特徴的回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＢ結晶形を提供する。
【００１２】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．３１±０．２°、１１．１０±０．２°、１１．７３±０．２°、１３．９４±０．２°、１４．７７±０．２°、１６．５２±０．２°、１８．００±０．２°、１９．８４±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００１３】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｂ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図４で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｂ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表２に示す通りである：  
【００１４】
【表２】
2021505625.tif 000005
【００１５】
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１０．１９±０．２°、２２．８４±０．２°、２４．３９±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＣ結晶形を提供する。
【００１６】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１０．１９±０．２°、１１．３２±０．２°、１８．７３±０．２°、１９．７１±０．２°、２２．８４±０．２°、２４．３９±０．２°、３２．１０±０．２°、３４．０２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００１７】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｃ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図５で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｃ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表３に示す通りである：  
【００１８】
【表３】
2021505625.tif 000006
【００１９】
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：８．０４±０．２°、１１．５５±０．２°、２４．０６±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＤ結晶形を提供する。
【００２０】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：８．０４±０．２°、１１．５５±０．２°、１４．９２±０．２°、１５．４６±０．２°、１８．０４±０．２°、１９．０３±０．２°、２２．５２±０．２°、２４．０６±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００２１】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｄ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図６で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｄ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表４に示す通りである：  
【００２２】
【表４】
2021505625.tif 000007
【００２３】
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：５．３０±０．２°、１５．９３±０．２°、１８．７９±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（I）化合物のＥ結晶形を提供する。
【００２４】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｅ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．３０±０．２°、１０．６２±０．２°、１１．１６±０．２°、１４．４７±０．２°、１５．９３±０．２°、１７．３３±０．２°、１８．７９±０．２°、３２．１６±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００２５】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｅ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図７で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｅ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表５に示す通りである：
【００２６】
【表５】
2021505625.tif 000008
【００２７】
本発明は式（II）で表される化合物を提供する、
【００２８】
【化２】
2021505625.tif 000009
【００２９】
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９８±０．２°、７．４９±０．２°、１９．１８±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）化合物のＦ結晶形を提供する。
【００３０】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９８±０．２°、７．４９±０．２°、９．８２±０．２°、１２．１５±０．２°、１７．２７±０．２°、１９．１８±０．２°、２０．１０±０．２°、２１．７９±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００３１】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図８で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表６に示す通りである：
【００３２】
【表６】
2021505625.tif 000010
【００３３】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形の示差走査熱量曲線は１７２．０７℃±３℃、２７７．０５℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有し、２８４．３７℃±３℃において一つの放熱ピークを有する。
【００３４】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形のＤＳＣスペクトルは図９に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形の熱重量分析曲線は１５３．１３℃±３℃の際に重量が３．５７８％減少する。
【００３５】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｆ結晶形のＴＧＡスペクトルは図１０に示す通りである。
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：７．３９±０．２°、１９．０７±０．２°、２０．０４±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）化合物のＧ結晶形を提供する。
【００３６】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．３９±０．２°、１９．０７±０．２°、２０．０４±０．２°、２１．０５±０．２°、２１．７６±０．２°、２５．６４±０．２°、２６．２３±０．２°、２７．１６±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００３７】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図１１で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表７に示す通りである：
【００３８】
【表７】
2021505625.tif 000011
【００３９】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形の示差走査熱量曲線は２７８．７０℃±３℃において吸熱ピークの開始点を有し、２８５．４６℃±３℃において放熱ピークの開始点を有する。
【００４０】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形のＤＳＣスペクトルは図１２に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形の熱重量分析曲線は１２０℃±３℃の際に重量が３．８７０％減少し、２２１．７６±３℃℃の際に重量が１．１７０％減少する。
【００４１】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｇ結晶形のＴＧＡスペクトルは図１３に示す通りである。
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９５±０．２°、７．３０±０．２°、１９．０１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）化合物のＨ結晶形を提供する。
【００４２】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９５±０．２°、７．３０±０．２°、１１．９９±０．２°、１４．３６±０．２°、１６．６６±０．２°、１８．２６±０．２°、１９．０１±０．２°、２１．４９±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００４３】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図１４で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表８に示す通りである：
【００４４】
【表８】
2021505625.tif 000012
【００４５】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形の示差走査熱量曲線は１７２．９７℃±３℃、２７７．３３℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有し、２８３．３８℃±３℃において放熱ピークの開始点を有する。
【００４６】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形のＤＳＣスペクトルは図１５に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形の熱重量分析曲線は１２０℃±３℃の際に重量が０．８８１９％減少し、２０６．３０℃±３℃の際にまた重量が２．８９２％減少する。
【００４７】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｈ結晶形のＴＧＡスペクトルは図１６に示す通りである。
本発明は式（III）で表される化合物を提供する、
【００４８】
【化３】
2021505625.tif 000013
【００４９】
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：６．７３±０．２°、１１．６６±０．２°、１９．５１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（III）化合物のＩ結晶形を提供する。
【００５０】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．７３±０．２°、１１．６６±０．２°、１４．２８±０．２°、１４．９９±０．２°、１６．３９±０．２°、１９．５１±０．２°、２３．３４±０．２°、２５．６１±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００５１】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図１７で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表９に示す通りである：
【００５２】
【表９】
2021505625.tif 000014
【００５３】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形の示差走査熱量曲線は３２．９４℃±３℃、２０４．６２℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形のＤＳＣスペクトルは図１８に示す通りである。
【００５４】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形の熱重量分析曲線は８５．３９℃±３℃の際に重量が０．８６０１％減少し、１８４．９３℃±３℃の際にまた重量が２．２６４％減少する。
【００５５】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形のＴＧＡスペクトルは図１９に示す通りである。
本発明は式（IV）で表される化合物を提供する、
【００５６】
【化４】
2021505625.tif 000015
【００５７】
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２°、１１．３２±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（IV）化合物のＪ結晶形を提供する。
【００５８】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｉ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９９±０．２°、６．９０±０．２°、９．９±０．２°、１０．７３±０．２°、１１．３２±０．２°、１４．４１±０．２°、１６．７３±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００５９】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｊ結晶形のＸＲＰＤスペクトルが図２１で示される通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｊ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１０に示す通りである：
【００６０】
【表１０】
2021505625.tif 000016
【００６１】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｊ結晶形の示差走査熱量曲線は３３．３４℃±３℃、１９４．８４℃±３℃においてそれぞれ一つの吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｊ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２２に示す通りである。
【００６２】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｊ結晶形の熱重量分析曲線は１２０℃±３℃の際に重量が１．３５７％減少し、１７７．１１℃±３℃の際にまた重量が０．８３３０％減少する。
【００６３】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｊ結晶形のＴＧＡスペクトルは図２３に示す通りである。
本発明は式（I）、（II）、（III）又は（IV）の化合物をそれぞれ独立的に溶剤に添加して加熱撹拌し、又は再結晶する工程を含む、式（I）、（II）、（III）又は（IV）の化合物の製造方法を提供する。
【００６４】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記溶剤がメタノール、エタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、酢酸エチル−エタノール、イソプロピルアルコール又はエタノール−水から選ばれる。
【００６５】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記撹拌温度は３５℃〜４５℃である。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記パルピング時間は１２時間〜３６時間である。
【００６６】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記化合物と溶剤の重量比が１：１０〜１：１５である。
本発明は更に式（I）化合物をエタノールに添加し、塩酸／酢酸エステルを反応瓶に滴下して加熱撹拌し、室温に温度を下げ、ろ過して得る工程を含む、式（II）化合物のＧ結晶形製造方法を提供する。
【００６７】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）化合物のＧ結晶形の加熱撹拌温度は８５℃〜９５℃である。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記化合物及び結晶形チロシンキナーゼ阻害剤関連疾患を治療する薬物における、前記化合物及び結晶形の使用である。
【００６８】
［定義及び説明］
特に断りのない限り、本明細書に用いられる以下の用語と句は下記の意味を含む。一つの特定の句又は用語は、特に定義されていない場合、不確定か不明であると考えられるものではなく、一般的な意味で理解すべきである。本明細書に商品名が現れる場合、その対応する商品又はその活性成分を表すことが意図される。
【００６９】
本発明の中間体化合物は、以下に挙げられる具体的な実施の態様、他の化学合成法と組み合わせた実施の態様、及び当業者に周知である等価の置き換え方式を含む、当業者に周知である複数の合成方法により調製することができる。好ましい実施の態様は、本発明の実施例が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００７０】
本発明の具体的な実施の態様の化学反応は適当な溶剤において完成されるものであり、前記溶剤は本発明の化学変化及びその必要な試薬及び材料に適しなければならない。本発明の化合物を得るために、当業者は従来の実施の態様に基づき合成ステップ又は反応フローを変形又は選択する必要があることがある。
【００７１】
以下に実施の形態により本発明を詳しく説明するが、これらの実施の形態は本発明を何らか制限するものではない。
本発明に用いられる全ての溶剤は市販されるものであり、さらに精製することなく使用できる。
【００７２】
本発明は下記の略語を用いる。ｒ．ｔ．は室温、ＴＨＦはテトラヒドロフラン、ＮＭＰはＮ−メチルピロリドン、ＭｅＳＯ３Ｈはメタンスルホン酸、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテル、ＤＣＭはジクロロメタン、Ｘｐｈｏｓは２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’、４’、６’−トリイソプロピルビフェニル、ＥｔＯＡｃは酢酸エチル、ＭｅＯＨはメタノール、ａｃｅｔｏｎｅはアセトン、２−Ｍｅ−ＴＨＦは２−メチルテトラヒドロフラン、ＩＰＡはイソプロピルアルコール、ｍ−ＣＰＢＡは３−クロロ過安息香酸、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２は［１、１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド、ＤＩＥＡはＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシド、ＨＥＰＥＳは４−ヒドロキシエチルピペラジニルエタンスルホン酸、ＥＧＴＡはエチレングリコールビス（２−アミノエチルエーテル））−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸、ＴＨＰはテトラヒドロピラニルである。
【００７３】
化合物は手動で名付けられ、又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアで名付けられ、市販化合物はベンダー名を用いる。
本発明に係る粉末Ｘ線回折（Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
計器の型番：ブルカーＤ８  ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回折計
測定方法：約１０〜２０ｍｇのサンプルをＸＲＰＤの検出に用いる。
【００７４】
詳細なＸＲＰＤパラメーターは下記の通りである。
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Å）．
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４〜４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
サンプルパン回転数：１５ｒｐｍ
本発明に係る示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
計器の型番：ＴＡ  Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：サンプル（約１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に量り取り測定を行い、５０ｍＬ／ｍｉｎ  Ｎ２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを３０℃（室温）から３００℃（又は３５０℃）まで加熱する。
【００７５】
本発明に係る熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
計器の型番：ＴＡ  Ｑ５０００ＩＲ熱重量分析計
測定方法：サンプル（２〜５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に量り取り測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを室温から３００℃まで、又は重量が２０％減少するまで加熱する。
【００７６】
本発明に係る動的水蒸気吸着測定（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｖａｐｏｒ  Ｓｏｒｐｔｉｏｎ、ＤＶＳ）方法
計器の型番：ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的水蒸気吸着測定装置
測定条件：サンプル（１０〜１５  ｍｇ）をＤＶＳサンプルパンに取って測定する。
ＤＶＳパラメーターの詳細は以下の通りである。
温度：２５℃
平衡化：ｄｍ／ｄｔ＝０．０１  ％／ｍｉｎ（最短：１０  ｍｉｎ、最長：１８０  ｍｉｎ）
乾燥：０％  ＲＨで１２０  ｍｉｎ乾燥する
ＲＨ（％）勾配の測定：１０％
ＲＨ（％）勾配の測定範囲：０％−９０％−０％
吸湿性評価の分類は以下の通りである：
【００７７】
【表１１】
2021505625.tif 000017
【００７８】
高速液体クロマトグラフ（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ、ＨＰＬＣ）
化合物の含有量解析方法のクロマトグラフは表１１の通りである。
【００７９】
【表１２】
2021505625.tif 000018
【００８０】
［発明の効果］
本発明の化合物の優れたＦＧＦＲ１キナーゼ阻害活性及びＳＮＵ−１６細胞阻害活性は、小分子のチロシンキナーゼ阻害剤として使用することができ；細胞増殖と血管新生を阻害する効果を有し、優れた抗腫瘍活性を有し、様々な哺乳類（ヒトを含む）の治療に優れた効果を有する。
【００８１】
本発明のいくつかの塩溶解度データは、水相では塩酸塩の溶解度が最大であり、模擬腸液及び模擬胃液では、３つの塩の溶解度が近い；遊離アルカリは、３つのバイオメディアでの溶解度は良好であるが、水での溶解は非常に困難であることを示した。Ｇ結晶形、Ｉ結晶形及びＪ結晶形は、熱安定性と加速条件下での安定性が優れ、光の条件下ではわずかな不純物が生成され、遮光条件下では安定性は良好であった。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】式（I）化合物のＡ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図２】式（I）化合物のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図３】式（I）化合物のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図４】式（I）化合物のＢ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図５】式（I）化合物のＣ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図６】式（I）化合物のＤ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図７】式（I）化合物のＥ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図８】式（II）化合物のＦ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図９】式（II）化合物のＦ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図１０】式（II）化合物のＦ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図１１】式（II）化合物のＧ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図１２】式（II）化合物のＧ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図１３】式（II）化合物のＧ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図１４】式（II）化合物のＨ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図１５】式（II）化合物のＨ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図１６】式（II）化合物のＨ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図１７】式（III）化合物のＩ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図１８】式（III）化合物のＩ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図１９】式（III）化合物のＩ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図２０】式（III）化合物のＩ結晶形のＤＶＳ等温線である。
【図２１】式（IV）化合物のＪ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。
【図２２】式（IV）化合物のＪ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図２３】式（IV）化合物のＪ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図２４】式（IV）化合物のＪ結晶形のＤＶＳ等温線である。
【発明を実施するための形態】
【００８３】
本発明の内容がよりよく分かるように、以下に具体的な実施の形態を参照しながらさらに説明するが、具体的な実施の態様は本発明の内容を制限するものではない。
【００８４】
【化５】
2021505625.tif 000019
【００８５】
【化６】
2021505625.tif 000020
【００８６】
０℃の条件下で、６−ギ酸メチル−１−メチルピリジン（２０  ｇ、０．１３  ｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルスルホキシド（２００  ｍｌ）溶液にヨウ素単体（３３．５  ｇ、０．１３  ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（３５．３  ｍｌ、０．４  ｍｍｏｌ）を添加し、１時間攪拌し、次に温度を１４０℃に上げて２．５時間撹拌した。０℃に冷却し、飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（３０  ｍｌ）でクエンチし、３０分間攪拌し、水層を酢酸エチル（１５０  ｍｍｏｌ  ×３）で抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水（５０  ｍｍｏｌ  ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮し、残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し精製して実施例１Ａを得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）  ｐｐｍ  ：１０．１４  （ｓ、１Ｈ）、９．３６  （ｓ、１Ｈ）、８．４７  （ｄｄ、Ｊ＝１．３、８．０  Ｈｚ、１Ｈ）、８．０３  （ｄ、Ｊ＝８．０  Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５  −  ３．９４  （ｓ，３Ｈ）．
【００８７】
【化７】
2021505625.tif 000021
【００８８】
０℃の条件下で、実施例１Ａ（２０  ｇ、１２０  ｍｍｏｌ）のオルトギ酸トリメチル（４００  ｍｌ）の溶液にギ酸（４０  ｍｌ）をゆっくりと滴下し、該温度下で３０分間攪拌し、次に濃硫酸（１．２  ｍｌ）を滴下し、滴下完了後、温度を５０℃に上げて３０分間攪拌し、その後、温度を２５℃に下げて３時間攪拌した。室温に冷却し、水（１００  ｍｌ）に入れ、水層を酢酸エチル（２００  ｍｍｏｌ  ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（１００  ｍｌ  ×  ２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して実施例１Ｂを得、直接次の工程に使用した。
【００８９】
【化８】
2021505625.tif 000022
【００９０】
０℃窒素ガスの保護下で、実施例１Ｂ（８  ｇ、３８  ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１２０  ｍｌ）溶液に、バッチに水素化アルミニウムリチウム（４．４  ｇ、１１４  ｍｍｏｌ）を添加し、添加完了後、当該温度下で１時間攪拌した。水（４．４  ｍｌ）、１５％水酸化ナトリウム（４．４  ｍｌ）次にまた水（１３．２  ｍｌ）を入れてクエンチし、３０分間攪拌した後ろ過し、真空濃縮して実施例１Ｃを得、直接次の工程に使用した直接次の工程に使用した。
【００９１】
【化９】
2021505625.tif 000023
【００９２】
実施例１Ｃ（５  ｇ、２７  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１２０  ｍｌ）溶液に二酸化マンガン（１９  ｇ、２１６  ｍｍｏｌ）を添加し、次に温度を４０℃に上げて１６時間撹拌した。室温に冷却し、ろ過し、真空濃縮し、残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して実施例１Ｄを得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）  ｐｐｍ  １０．１  （ｓ、１Ｈ）、９．０４−９．１３  （ｍ、１Ｈ）、８．２２  （ｄｄ、Ｊ＝２．０１、８．０３  Ｈｚ、１Ｈ）、７．７５  （ｄ、Ｊ＝８．０３  Ｈｚ、１Ｈ）、５．４４  （ｓ、１Ｈ）、３．４３  （ｓ、６Ｈ）．
【００９３】
【化１０】
2021505625.tif 000024
【００９４】
５℃窒素ガスの保護下で、実施例１Ｄ（２．７  ｇ、５  ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８０  ｍｌ）溶液にバッチに水素ナトリウム（６００  ｍｇ、６０％、１４．５  ｍｍｏｌ）を添加し、完了後、該温度下で３０分間攪拌し、実施例１Ｊ（２  ｇ、１０．６  ｍｍｏｌ）を入れ、温度を７０℃に上げて１６時間撹拌した。室温に冷却し、氷水（５０  ｍｌ）に入れ、水層を酢酸エチル（４０  ｍｌ  ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０  ｍｌ  ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーで精製して実施例１  Ｅを得た。
この混合物をキラルＨＰＬＣで分離して、シス−トランス異性体を得、キラルカラム：  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−３  １５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．、３μｍ、移動相：エタノール（０．０５％  ＤＥＡ）  −ＣＯ２、５％から４０％、流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ、  波長：２２０ｎｍであった。
【００９５】
【化１１】
2021505625.tif 000025
【００９６】
室温下で、実施例１Ｅ  （９００  ｍｇ、１．５３  ｍｍｏｌ）のアセトン（４  ｍｌ）、水（４  ｍｌ）混合液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２９１  ｍｇ、１．５３  ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を５０℃まで加熱して１０時間攪拌した。反応終了後、水（４  ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（３０  ｍｌ  ｘ  ３）を入れて抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０  ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで干燥し、ろ過し、蒸発して実施例１Ｆを得、黄色の固体であった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ５４１  ［Ｍ＋１］  ＋．
【００９７】
【化１２】
2021505625.tif 000026
【００９８】
窒素ガスの保護下で、室温で実施例１Ｆ（８５０  ｍｇ、  １．５７ｍｍｏｌ）のメタノール（８ｍｌ）溶液にバッチに水素化ホウ素ナトリウム（１１９  ｍｇ、  ３．１４  ｍｍｏｌ）を添加し、１時間攪拌した。水（３０  ｍｌ）を入れてクエンチし、酢酸エチル（４０  ｍｌ  ｘ  ３）を入れて抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水（２０  ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで干燥し、ろ過し、蒸発して実施例１Ｇを得、黄色の液体であった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ５４３  ［Ｍ＋１］  ＋．
【００９９】
【化１３】
2021505625.tif 000027
【０１００】
室温の窒素ガスの保護下で、実施例１Ｇ（９００  ｍｇ、粗製品）のメタノール（２  ｍｌ）溶液に、新しく調製した塩化アセチル（２  ｍｌ）、メタノール（６  ｍｌ）溶液を添加した。反応液を４０℃で３時間攪拌した。真空で溶液を除去したのは実施例１Ｈであって、黄色の固体であった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ４５９  ［Ｍ＋１］  ＋．
【０１０１】
【化１４】
2021505625.tif 000028
【０１０２】
室温の窒素ガスの保護下で、実施例１Ｈ（７４８  ｍｇ、１．６３  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１２  ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（４９５  ｍｇ、４．８９  ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３５６  ｍｇ、１．６３    ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２０  ｍｇ、０．１６  ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で３０分間攪拌した。反応が終わり、１Ｍ塩酸でｐＨを７左右に調整し、ジクロロメタン（２０  ｍｌ  ｘ  ３）を入れて抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０  ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで干燥し、ろ過し、蒸発し、残留物をフラッシュクロマトグラフィーによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して実施例１Ｉを得、黄色の固体であった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ５５９  ［Ｍ＋１］  ＋．
【０１０３】
【化１５】
2021505625.tif 000029
【０１０４】
室温下で、実施例１Ｉ（２８０  ｍｇ、０．５  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６  ｍｌ）溶液に、バッチにデスマーチン試薬（３１８．  ｍｇ、０．７５  ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で２時間攪拌し、反応完了後、反応液を氷浴で冷却し、白色の固体が析出し、ろ過し、ろ過液を蒸し干して実施例１Ｊを得、黄色の固体であった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ５５７  ［Ｍ＋１］  ＋．
【０１０５】
【化１６】
2021505625.tif 000030
【０１０６】
室温下で、実施例１Ｊ（５０  ｍｇ、９０  μｍｏｌ）、テトラヒドロ−２ヒドロ−ピラン−４アミン（１８  ｍｇ、  １８０μｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン（２．５  ｍｌ）溶液に、酢酸（約０．１  ｍｌ）を添加してｐＨを５左右に調整し、２時間攪拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１２  ｍｇ、１８０μｍｏｌ）を室温下で反応液に添加し、続いて１時間攪拌し、水（５  ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（２０ｍｌ  ｘ  ３）を添加して抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で（２０  ｍｌ）洗浄し、硫酸ナトリウムで干燥し、ろ過し、蒸発し、残留物をフラッシュクロマトグラフィーによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して実施例１Ｋを得た。固体サンプルをキラルカラム分離に使用して、実施例１Ｋ−Ｒ配置（８  ｍｇ）、実施例１Ｋ−Ｓ配置（８  ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ６４２  ［Ｍ＋１］  ＋。
キラルカラム方法：キラルカラム、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ  ２５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相、メタノール（０．０５％  ＤＥＡジエチルアミン））−ＣＯ２は５％  から  ４０％；流速、２．３５ｍＬ／ｍｉｎ；波長、２８０ｎｍ。
【０１０７】
【化１７】
2021505625.tif 000031
【０１０８】
室温の窒素ガスの保護下で、実施例１Ｋ−Ｓ配置（１５ｍｇ、２３μｍｏｌ）（実施例１Ｋの調製方法に従って、２００ｍｇの規模に反応を拡大して、１５ｍｇの１Ｋ−Ｓ配置生成物を得た）のメタノール（１  ｍｌ）溶液に、新しく調製した塩化アセチル（１  ｍｌ）、メタノール（３  ｍｌ）溶液を添加した。反応液を４０℃で３時間攪拌した。溶液を真空中で除去したのは実施例１Ｌであった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ５４２  ［Ｍ＋１］  ＋．１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）  ｐｐｍ  ９．０４  （ｓ、１Ｈ）、８．５０  （ｂｒ．  ｓ．、２Ｈ）、８．２３  （ｄ、Ｊ＝７．０３  Ｈｚ、１Ｈ）、７．６４  （ｄ、Ｊ＝８．０３  Ｈｚ、１Ｈ）、７．４９  （ｄ、Ｊ＝８．５３  Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８−７．２６  （ｍ、２Ｈ）、７．０４  （ｓ、２Ｈ）、６．１２  （ｑ、Ｊ＝６．５３  Ｈｚ、１Ｈ）、４．５３  （ｓ、２Ｈ）、４．０８  （ｄｄ、Ｊ＝４．０２、１１．５４  Ｈｚ、２Ｈ）、３．５６−３．６６  （ｍ、７Ｈ）、２．１５  （ｄ、Ｊ＝１１．０４  Ｈｚ、２Ｈ）、１．８３  （ｄ、Ｊ＝６．５３  Ｈｚ、４Ｈ）、１．１８  （ｔ、Ｊ＝７．０３  Ｈｚ、９Ｈ）．
【０１０９】
【化１８】
2021505625.tif 000032
【０１１０】
実施例１Ｌに記載の方法と同様に、室温の窒素ガスの保護下で、実施例１Ｋ−Ｒ配置（１５  ｍｇ、２３μｍｏｌ）（反応を２００  ｍｇの規模に拡大して、１Ｋ−Ｒ配置生成物１５  ｍｇを得た）のメタノール（１  ｍｌ）溶液に、新しく調製した塩化アセチル（１  ｍｌ）、メタノール（３  ｍｌ）溶液を添加した。反応溶液を４０℃で３時間撹拌した。溶液を真空中で除去したのは実施例１であった。ＬＣＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ５４２［Ｍ＋１］  ＋．  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）  ｐｐｍ  ８．９５−９．１２  （ｍ、１Ｈ）、８．４４−８．５９  （ｍ、１Ｈ）、８．２５  （ｂｒ．  ｓ．、１Ｈ）、７．６８  （ｂｒ．  ｓ．、１Ｈ）、７．５１  （ｄ、Ｊ＝８．７８  Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５  （ｄ、Ｊ＝１５．０６  Ｈｚ、２Ｈ）、６．９１−７．１０  （ｍ、１Ｈ）、６．１３  （ｄ、Ｊ＝５．７７  Ｈｚ、１Ｈ）、４．５４  （ｂｒ．  ｓ．、２Ｈ）、４．０７  （ｄ、Ｊ＝１０．５４  Ｈｚ、２Ｈ）、３．４２−３．５７  （ｍ、３Ｈ）、２．１５  （ｄ、Ｊ＝１０．７９  Ｈｚ、２Ｈ）、１．８３  （ｍ、５Ｈ）．
実施例１をメタノールに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で解離し、ジクロロメタンで抽出した後、有機相をスピン乾燥して、式（Ｉ）の化合物を得た。
【０１１１】
実施例２：式（I）化合物のＡ結晶形の製造
実施例１をメタノールに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で解離し、ジクロロメタンで抽出し、有機相をスピン乾燥し、次に少量のメタノールを加えてスラリー化精製し、ろ過して固体を得た。ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａを得た。
【０１１２】
実施例３：式（I）化合物のＢ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物３０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、４００μＬのメタノールを添加して懸濁液にした。上記の懸濁液サンプルをマグネチックスターラー（４０℃）に入れ、遮光攪拌試験を行った。懸濁液サンプルを４０℃で２日間攪拌した後、遠心分離し、残りのサンプルを真空オーブン（４０℃）に入れ、一晩乾燥し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを得た。
【０１１３】
実施例４：式（I）化合物のＣ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物３０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、４００μＬの酢酸エチル−エタノール（３：２）を添加して懸濁液にした。上記の懸濁液サンプルをマグネチックスターラー（４０℃）に入れ、遮光攪拌試験を行った。懸濁液のサンプルを４０℃で２日間撹拌した後、遠心分離し、残りのサンプルを真空オーブン（４０℃）に入れ、一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｃを得た。
【０１１４】
実施例５：式（I）化合物のＤ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物３０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、４００μＬのアセトンを加えて懸濁液にした。上記の懸濁液サンプルをマグネチックスターラー（４０℃）に入れ、遮光攪拌試験を行った。懸濁液サンプルを４０℃で２日間攪拌した後、遠心分離し、残りのサンプルを真空オーブン（４０℃）に入れ、一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｄを得た。
【０１１５】
実施例６：式（I）化合物のＥ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物３０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、イソプロパノール４００μＬを添加して懸濁液にした。上記の懸濁液サンプルをマグネチックスターラー（４０℃）に入れ、遮光攪拌試験を行った。懸濁液サンプルを４０℃で２日間攪拌した後、遠心分離し、残留サンプルを真空オーブン（４０℃）に入れ、一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｅを得た。
【０１１６】
実施例７：式（II）化合物のＦ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物６０  ｍｇをガラス瓶に量り入れ、磁子を添加し、マグネチックスターラーに入れ、酢酸エチル１．８  ｍＬを加え、５０℃に加熱して全部溶解し、塩酸のエタノール（１．２  ｍＬ）溶液（式（Ｉ）化合物と酸のモル比は１：２）をゆっくりと添加した；現象を観察し、塩酸を加えた後、５０℃で２時間攪拌した後、室温で一晩攪拌し、沈殿が生じ、遠心分離した。次に、残りのサンプルを真空乾燥箱（４０℃）に入れて乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（II）化合物の結晶形Ｆを得た。
【０１１７】
実施例８：式（II）化合物のＧ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物の塩酸塩（実施例１）３０  ｍｇをガラス瓶に量り入れ、４００μＬのメタノールを添加した。溶解したサンプルをすばやく遠心し、上澄みを遠心管に取り、アルミホイルで管口を縛り、刺して小さな穴を開け、ドラフト内に入れて揮発させた；懸濁液のサンプルをマグネチックスターラー（４０℃）に置き、攪拌（遮光）した。２日後、それを素早く遠心分離し、上澄みをドラフト内に置いて揮発乾固させた。前記遠心分離によって得られた残りのサンプル及び揮発によって得られた固体を収集し、３０℃の真空オーブンで一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（II）化合物の結晶形Ｇを得た。
【０１１８】
実施例９：式（II）化合物のＧ結晶形の製造
エタノール（１．２５  Ｌ）を式（Ｉ）化合物（４１．７  ｇ）が入っている三口フラスコ（３  Ｌ）に添加した；反応溶液を９０℃に加熱し、塩酸／酢酸エチル（３８．４  ｍＬ）を反応フラスコに滴下した；９０℃で２時間攪拌した後、反応液を室温に下げて２０時間攪拌した；反応液をろ過し、得られた固体を０．１Ｌのエタノールで洗浄した；最終的に得られた固体はロータリーエバポレーター（５０℃、６時間）で含有する少量のエタノール溶液を蒸発させた；最終的に式（ＩＩ）化合物の結晶形Ｇを得た。
【０１１９】
実施例１０：式（II）化合物のＨ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物の塩酸塩（実施例１）３０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、４００μＬのエタノールを添加した。溶解したサンプルをすばやく遠心し、上澄みを遠心分離チューブに取り、アルミホイルでチューブ口を縛り、刺して小さな穴を開け、ドラフト内に入れて揮発させた；懸濁液のサンプルをマグネチックスターラー（４０℃）に置き、攪拌（遮光）した。２日後、それを素早く遠心分離し、上澄みをドラフト内に置いて揮発乾固させた。遠心分離により得られた残りのサンプル及び揮発により得られた固体を回収し、３０℃の真空乾燥箱で一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（II）化合物の結晶形Ｈを得た。
【０１２０】
実施例１１：式（III）化合物のＩ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物６０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、磁子を添加し、マグネチックスターラーに入れ、１．８  ｍＬの酢酸エチルを加え、５０℃に加熱して溶解させ、適切な量のクエン酸のエタノール（１．２  ｍＬ）溶液（式（Ｉ）の化合物と酸のモル比は１：２）をゆっくりと加えた；現象を観察し、塩酸を加えた後、５０℃で２時間攪拌し、室温で一晩攪拌して、沈殿が生じ、遠心分離させた。その後、残りのサンプルを真空乾燥箱（４０℃）に入れて乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（III）化合物の結晶形Ｉを得た。
【０１２１】
実施例１２：式（IV）化合物的Ｊ結晶形の製造
式（Ｉ）化合物６０  ｍｇをガラス瓶に量り取り、磁子を添加し、マグネチックスターラーに入れ、１．８  ｍＬの酢酸エチルを加え、５０℃に加熱して全部溶解させ、適切な量のＬ−リンゴ酸のエタノール（１．２  ｍＬ）溶液（式（Ｉ）化合物と酸のモル比は１：２）をゆっくりと加えた；現象を観察し、塩酸を加えた後、５０℃で２時間攪拌し、室温で一晩攪拌して、沈殿が生じ、遠心分離させた。次に、残りのサンプルを真空オーブン（４０℃）に入れて乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出し、式（IV）化合物の結晶形Ｊを得た。
【０１２２】
実験例１：式（I）、（II）、（III）又は（IV）化合物の溶解度試験
対照品溶液の調製（式（Ｉ）の化合物を対照サンプルとする）
式（Ｉ）化合物を約５  ｍｇを量り取り、正確に計量し、サンプルボトルに入れ、１０  ｍＬのアセトニトリルを添加し、５分間超音波処理し、室温になるまで放置した後よく混ぜた。同様に二つを準備し、ＳＴＤ−１およびＳＴＤ−２とマークした。
【０１２３】
線形溶液の準備
対照品溶液ＳＴＤ−１を１、５、１０、１００、および１０００倍に段階的に希釈し、線形溶液Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４およびＬ５としてマークした。
【０１２４】
式（I）化合物、及びその塩の溶解度試験
式（I）化合物、及びその塩が４つの異なるｐＨの媒介での溶解度をテストした。式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物をそれぞれ約１０  ｍｇ量り取り、５．０  ｍＬの異なる媒介（水、ＳＧＦ、ＦａＳＳＩＦ、ＦｅＳＳＩＦ）に添加し、懸濁液に混合した。上記懸濁液に磁子を添加し、マグネチックスターラーに入れて攪拌した。２時間、４時間、２４時間攪拌した後、サンプリングして遠心分離を行い、下層の残りのサンプルに対してＸＲＰＤを測定し、上層のサンプルはＨＰＬＣによりその濃度とｐＨを測定した。溶解度の結果は表１２及び１３に示した。
【０１２５】
【表１３】
2021505625.tif 000033
・ＦａＳＳＩＦ：  １．  水酸化ナトリウム０．０４２  ｇ、リン酸二水素ナトリウム０．３４３８  ｇ、及び塩化ナトリウム０．６１８６  ｇを量り取り、９０  ｍＬの純水に添加してよく混ぜた後、１  Ｎ塩酸または１  Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨを６．５に調整し、純水で１００  ｍＬに定容し、２．  ５０  ｍＬの上記緩衝液を取り、０．２２４  ｇのＦａＳＳＩＦ  ／  ＦｅＳＳＩＦ  ／  ＦａＳＳＧＦ市販の粉末（Ｂｉｏｒｅｌｅｖａｎｔ．ｃｏｍ）を添加し、溶解するまで攪拌し、純水で１００  ｍＬに定容した。調製した緩衝液を室温になるまで置き、２時間静置した後、緩衝液が薄い乳白色になると、使用可能であった。
・ＦｅＳＳＩＦ：１．  ０．４０４  ｇの水酸化ナトリウム、０．８６５  ｇの氷酢酸、１．１８７４  ｇの塩化ナトリウムを量り取り、９０  ｍＬの純水に添加してよく混ぜ、１  Ｎ塩酸または１  Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調整し、純水で１００  ｍＬに定容した；２．  ５０  ｍＬの上記緩衝液を取り、１．１２  ｇのＦａＳＳＩＦ  ／  ＦｅＳＳＩＦ  ／  ＦａＳＳＧＦ市販の粉末（Ｂｉｏｒｅｌｅｖａｎｔ．ｃｏｍ）を添加し、溶解するまで攪拌し、純水で１００  ｍＬに定容した。調製した緩衝液を室温になるまで置き、２時間静置した後、緩衝液が透明な液になると、使用可能であった。
・ＦａＳＳＧＦ（ＳＧＦ）：  １．  ０．２  ｇの塩化ナトリウムを量り取り、９０  ｍＬの純水に入れてよく混ぜてから、１  Ｎ塩酸でｐＨを１．８に調整し、純水で１００  ｍＬに定容し、室温になるまでに静置した。
【０１２６】
【表１４】
2021505625.tif 000034
【０１２７】
結論：生物媒介におけるいくつかの塩の溶解度データは、水相では塩酸塩の溶解度が最大で、模擬腸液と模擬胃液では、３つの塩の溶解度は近い；遊離アルカリは、３つの生物媒介での溶解度は良好であったが、水では溶解することが非常に困難だったことを示した。  
実験例２：Ｇ結晶形、Ｉ結晶形及びＪ結晶形の固体安定性試験
４０ｍｌガラスサンプル瓶の底にそれぞれ約１０  ｍｇのＧ結晶形、Ｉ結晶形、またはＪ結晶形を正確に計量し、薄層に広げ、開口のサンプルはアルミホイルで管口を縛り、刺して小さな穴を開けてサンプルが周囲の空気と十分に接触できるようにし、閉じたサンプルをボトルキャップで締め、シーリングフィルムで包んだ。各条件の時点で２つのサンプルを並行して計量し、適量のサンプル（計量なし）を取ってＸＲＰＤ検出により、準備したサンプルを各条件下に置き、各条件の時点でサンプリングして分析した。０日目のサンプルを５つ並行して計量し、分析するまで−２０℃の冷蔵庫に保管した。同じ方法で光照サンプルを準備して４０ｍｌのガラスサンプル瓶の底に置き、ガラス瓶の開口をライトボックスに垂直するように置いた。また、適量の２つのサンプルを取って遮光サンプルとし、開口を垂直するように置き、ガラス瓶をアルミホイルで包んだ。総照度は１．２ｘ１０６  Ｌｕｘ．ｈｒ、近紫外線は２００ｗ．ｈｒ／ｍ２で完全に照らした後、サンプルは分析のために−２０℃の冷蔵庫に保管した。
【０１２８】
考察用化合物を以下の条件下に置き、異なる時点でサンプリングして物理的性質を検出、ＨＰＬＣにより含有量と総不純物を分析した。研究条件及び検出項目は表１４〜１６の通りであった。
【０１２９】
【表１５】
2021505625.tif 000035
2021505625.tif 000036
【０１３０】
【表１６】
2021505625.tif 000037
2021505625.tif 000038
【０１３１】
【表１７】
2021505625.tif 000039
2021505625.tif 000040
【０１３２】
結論：影響要素と加速実験いずれも、Ｇ結晶形、Ｉ結晶形、およびＪ結晶形の熱安定性及び加速条件下での安定性は優れ、光照条件下でわずかな不純物が生成し、避光条件下では安定性は優れたことを示した。
【０１３３】
実験例３．式（III）化合物のＩ結晶形の吸湿性試験
実験材料：
ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  動的水蒸気吸着測定
実験方法：
式（III）化合物のＩ結晶形を１０〜１５  ｍｇ取り、ＤＶＳサンプル皿に入れてテストした。
実験結果：
式（III）化合物のＩ結晶形のＤＶＳスペクトルは図２０に示す通りで、△Ｗ＝２．１３４％であった。
実験結論：
式（III）化合物のＩ結晶形は２５±１℃および８０±２％ＲＨにおいて吸湿性重量増加は２．１３４％で、吸湿性を有した。
【０１３４】
実験例４．式（IV）化合物的Ｊ結晶形の吸湿性試験
実験材料：
ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  動的水蒸気吸着測定装置
実験方法：
式（IV）化合物のＪ結晶形を１０〜１５  ｍｇ取り、ＤＶＳサンプル皿に入れてテストした。
実験結果：
式（IV）化合物のＪ結晶形のＤＶＳスペクトルは図２４に示す通りで、△Ｗ＝５．２２７％であった。
実験結論：
式（IV）化合物のＪ結晶形は２５±１℃および８０±２％ＲＨにおいて吸湿性重量増加は５．２２７％で、吸湿性を有した。
【０１３５】
実験例５：本発明の化合物の体外酵素活性試験
実験目的：
Ｚ´−ＬＹＴＥ（登録商標）  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙにより酵素活性を検出し、化合物のＩＣ５０値を指標として、ＦＧＦＲ１に対する化合物の阻害効果を評価する。
実験材料：
ＦＧＦＲ１  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃  ＰＶ４１０５）
Ｔｙｒ４  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−ＰＲ５０５３Ｕ）
ＡＴＰ  （Ｓｉｇｍａ−Ａ７６９９）
ＤＭＳＯ  （Ｓｉｇｍａ  ｃａｔ  ＃  ３４８６９−１００ＭＬ）
反応緩衝液：  ５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  （ｐＨ  ７．５）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０１％  Ｂｒｉｊ−３５、１ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２
３８４反応プレート  （Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ  ３５７３）
３８４化合物プレート  （Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＃  ７８１２８０）
・Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｒｅａｇｅｎｔ  Ｂ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃  ＰＲ５１９３Ｄ）
・Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｂｕｆｆｅｒ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃  ＰＲ４８７６Ｂ）
遠心分離機  （Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＃５８１０Ｒ）
電子ピストンストロークピペット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ液体ワークステーション（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）
Ｂｒａｖｏ自動液体ワークステーション  （Ａｇｉｌｅｎｔ）
Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  （Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）
【０１３６】
実験手順及び方法：
A.酵素／基質混合物の準備
０．６  ｎＭ  ＦＧＦＲ１、２  μｍ  Ｔｙｒ４  ｐｅｐｔｉｄｅ及び１０  μｍ  ＡＴＰを反応緩衝液（５０  ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  、ｐＨ７．５、  １０  ｍＭ  ＭｇＣｌ２、  ０．０１％  ＢＲＩＪ−３５、１  ｍＭ  ＥＧＴＡ、４  ｍＭ  ＭｎＣｌ２、２  ｍＭ  ＤＴＴ  ）に添加した。
B.化合物のサンプルローディング：
a.化合物をＤＭＳＯで１０  ｍＭ、３倍希釈、１１個勾配、およびダブルウェルに希釈した
b.Ｂｒａｖｏ自動液体ワークステーションで化合物を１：２５に希釈し、中間プレートに移した。次に、更に、２．５ｕｌを反応プレートに移して、ＤＭＳＯの最終濃度を１％に保障した
c.５μｌのトランスフェラーゼ／基質の緩衝液を各ウェルに移した
d.Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ液体ワークステーションを利用してＡＴＰ溶液を順次に各ウェルに添加した
e.１０００ｒｐｍで１分間遠心分離した
f.反応プレートを２３℃の恒温箱に置き、６０分間反応させた。
【０１３７】
C.発色反応実験：
a.１：１２８の比で発色試薬Ｂ（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｒｅｇｅｎｔ  Ｂ）と発色緩衝液（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｂｕｆｆｅｒ）の混合液を調製した。
b.各ウェルに５ｕｌを入れ、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離した。
c.遠心分離した後、反応プレートを恒温箱（２３℃）に９０分間置き、取り出してＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダーでデータを読み取った。
D.分析データ：ＸＬＦＩＴ（ＩＤＢＳ）によりてデータを分析し、化合物のＩＣ５０値を計算した。
実験結果は表１７の通りであった：
【０１３８】
【表１８】
2021505625.tif 000041
結論：本発明の化合物がＦＧＦＲ１に対する阻害効果は有意であった。
【０１３９】
実験例６：本発明の化合物の腫瘍増殖抑制（ＴＧＩ）分析
腫瘍の進化的成長は、腫瘍体積と時間の関係によって評価された。皮下腫瘍の長軸（Ｌ）と短軸（Ｗ）をノギスで週に２回測定し、腫瘍体積（ＴＶ）を式（（ＬｘＷ２）／２）で計算した。ＴＧＩは、溶剤群のマウス腫瘍体積の中央値と薬投与群のマウス腫瘍体積の中央値の差で計算し、溶媒対照群の腫瘍体積の中央値でパーセンテージを計算して表し、
以下の公式を通じて計算した：
％ＴＧＩ＝（（中間腫瘍体積（対照）−中間腫瘍体積（薬投与群）／中間腫瘍体積（対照群））ｘ１００
ローデータ統計分析は、分散分析を繰り返し行うことによって行われた。次に、Ｓｃｈｅｆｆｅ  ｐｓｏｔ  ｈ℃実験方法によって複数の比較をした。単独溶剤０．５％（メチルセルロース＋０．２％ツィーン水溶液）は陰性対照であった。
実験結果は表１８の通りである：
【０１４０】
【表１９】
2021505625.tif 000042
【０１４１】
本発明の化合物の優れた体外ＦＧＦＲ１キナーゼ阻害活性は、小分子のチロシンキナーゼ阻害剤として利用でき；細胞増殖及び血管生成の阻害効果を有し、良好な抗腫瘍活性を有し、様々な哺乳動物（ヒトを含む）を治療するのに良い効果がある。
【図１】
2021505625.tif 000048
【図２】
2021505625.tif 000049
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2021505625.tif 000054
【図８】
2021505625.tif 000055
【図９】
2021505625.tif 000056
【図１０】
2021505625.tif 000057
【図１１】
2021505625.tif 000058
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【国際調査報告】
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