(57)【要約】  本発明は、アミロイドβ産生抑制作用、特にＢＡＣＥ１阻害作用を有し、アミロイドβタンパク質の産生、分泌および／または沈着により誘発される疾患の治療または予防剤として有用な化合物を提供する。  式（Ｉ）：（式中、Ｒ３は各々独立して（ハロゲン、シアノ、アルキルオキシ、ハロアルキルオキシまたは非芳香族炭素環式基）で置換されていてもよいアルキル等であり、ｔは０〜３の整数であり、Ｒ５は水素原子またはハロゲンであり、Ｒ６は水素原子、ハロゲン、および置換もしくは非置換のアルキルからなる群から選択され；環Ｂは置換もしくは非置換のピラジン等である）で示される化合物またはその製薬上許容される塩。2021522194.tif 000064
2021522194.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2021522194.tif 000056
（式中、
Ｒ３は各々独立して、（ハロゲン、シアノ、アルキルオキシ、ハロアルキルオキシおよび非芳香族炭素環式基）から選択される１以上の基で置換されていてもよいアルキル；またはアルキルで置換されていてもよい複素環式基であり；
同一の炭素原子と結合している２個のＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、（ハロゲン、アルキルおよびハロアルキル）から選択される１以上の基で置換されていてもよい３〜５員環式の非芳香族炭素環を形成してもよく；
ｔは０〜３の整数であり；
Ｒ５は水素原子またはハロゲンであり；
Ｒ６は水素原子、ハロゲン、または置換もしくは非置換のアルキルであり；
【化２】
2021522194.tif 000057
であり；
式中、Ｒ７ａはハロゲン；シアノ；シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、非芳香族炭素環式基および芳香族複素環式基から選択される１以上の基で置換されていてもよいアルキルオキシ；１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキル；シアノおよびハロゲンから選択される１以上の基で置換されていてもよい非芳香族炭素環式基；シアノおよび芳香族複素環式基から選択される１以上の基で置換されていてもよい非芳香族複素環式基；シアノ、ハロゲンおよびヒドロキシから選択される１以上の基で置換されていてもよいアルケニルオキシ；シアノ、ハロゲンおよびヒドロキシから選択される１以上の基で置換されていてもよいアルキニルオキシ；または１以上のアルキルで置換されていてもよい芳香族複素環式基であり；および、
Ｒ７ｂは水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキルまたはアミノである）で示される化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項２】
【化３】
2021522194.tif 000058
である、請求項１記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項３】
Ｒ６がフルオロまたはクロロである、請求項１または２に記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項４】
Ｒ５が水素原子もしくはフルオロである、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項５】
Ｒ３が各々独立して、１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項６】
【化４】
2021522194.tif 000059
である、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項７】
Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルオキシまたはシアノであり、Ｒ７ｂが水素原子またはハロゲンである、請求項６記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項８】
【化５】
2021522194.tif 000060
である、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項９】
Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルであり、Ｒ７ｂが水素原子またはアルキルである、請求項８記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項１０】
【化６】
2021522194.tif 000061
（式中、Ｒ３は１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキル）であり、
Ｒ５が水素原子であり、
Ｒ６がハロゲンであり、
【化７】
2021522194.tif 000062
であり、および、
Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルオキシ
である、請求項１記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項１１】
【化８】
2021522194.tif 000063
からなる群から選択される、請求項１記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩、を含有する医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩、を含有するＢＡＣＥ１阻害剤。
【請求項１４】
ＢＡＣＥ１活性を阻害する方法に使用するための、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項１５】
アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の治療もしくは予防、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病害の進行予防、または、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者における進行予防のための、請求項１２または１３記載の医薬組成物。
【請求項１６】
アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の治療もしくは予防、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の進行予防、または、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者における進行予防に使用するための、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を投与することを含む、ＢＡＣＥ１活性を阻害する方法。
【請求項１８】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を投与することを含む、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の治療もしくは予防、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の進行予防、または、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者における進行予防のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドβ産生抑制活性を有し、アミロイドβタンパク質の産生、分泌および／または沈着により誘発される疾患の治療または予防剤として有用な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病患者の脳内には、アミロイドβタンパク質と呼ばれる約４０個のアミ
ノ酸からなるペプチドが神経細胞外に蓄積した不溶性の斑点（老人斑）が広範に認められ
る。この老人斑が神経細胞を死滅させることによりアルツハイマー病が発症すると考えられており、アルツハイマー病治療剤としてアミロイドβタンパク質の分解促進剤、およびアミロイドワクチン等が研究されている。
【０００３】
セクレターゼは、アミロイドβ前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれるタンパク質を細胞内で切断しアミロイドβタンパク質を生成させる酵素である。アミロイドβタンパク質のＮ末端の生成を制御する酵素はβセクレターゼ（ｂｅｔａ−ｓｉｔｅ  ＡＰＰ−ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  １、ＢＡＣＥ１）と呼ばれている。この酵素を阻害することによりアミロイドβタンパク質生成が低減し、アルツハイマー病の治療剤または予防剤になり得ると考えられる。
【０００４】
特許文献１〜１０には本発明化合物と構造が類似した化合物が記載されている。これらの文献には、各化合物がアルツハイマー病、アルツハイマー関連症状、または糖尿病等の治療剤として有用である旨が開示されているが、実質的に開示された化合物は、いずれも本発明化合物とは異なる構造を有するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】日本特許公開２０１７／０７１６０３号
【特許文献２】国際公開第２０１５／１５６４２１号
【特許文献３】日本特許公開２０１４／１０１３５４号
【特許文献４】国際公開第２０１４／０６５４３４号
【特許文献５】国際公開第２０１４／００１２２８号
【特許文献６】国際公開第２０１３／０４１４９９号
【特許文献７】米国特許公開第２０１３／００７２４７８号
【特許文献８】日本特許公開２０１２／２５０９３３号
【特許文献９】国際公開第２０１２／１０７３７１号
【特許文献１０】国際公開第２０１１／０７１１３５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、アミロイドβタンパク質の産生低減効果、特に選択的ＢＡＣＥ１阻害活性を有し、アミロイドβタンパク質の産生、分泌および／または沈着により誘発される疾患の治療剤として有用な化合物を提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明化合物は、選択的ＢＡＣＥ１阻害活性を有し、アミロイドβタンパク質の産生、分泌または沈着により誘発される、アルツハイマー型認知症等の疾患の治療剤および／または予防剤として有用である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、例えば、以下の項目に記載の発明を提供する。
【０００９】
（１）式（Ｉ）： 
【化１】
2021522194.tif 000003
（式中、
Ｒ３は各々独立して、（ハロゲン、シアノ、アルキルオキシ、ハロアルキルオキシおよび非芳香族炭素環式基）から選択される１以上の基で置換されていてもよいアルキル；またはアルキルで置換されていてもよい複素環式基であり；
同一の炭素原子と結合している２個のＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、（ハロゲン、アルキルおよびハロアルキル）から選択される１以上の基で置換されていてもよい３〜５員環式の非芳香族炭素環を形成してもよく；
ｔは０〜３の整数であり；
Ｒ５は水素原子またはハロゲンであり；
Ｒ６は水素原子、ハロゲン、または置換もしくは非置換のアルキルであり；
【化２】
2021522194.tif 000004
であり；
式中、Ｒ７ａはハロゲン；シアノ；シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、非芳香族炭素環式基および芳香族複素環式基から選択される１以上の基で置換されていてもよいアルキルオキシ；１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキル；シアノおよびハロゲンから選択される１以上の基で置換されていてもよい非芳香族炭素環式基；シアノおよび芳香族複素環式基から選択される１以上の基で置換されていてもよい非芳香族複素環式基；シアノ、ハロゲンおよびヒドロキシから選択される１以上の基で置換されていてもよいアルケニルオキシ；シアノ、ハロゲンおよびヒドロキシから選択される１以上の基で置換されていてもよいアルキニルオキシ；または１以上のアルキルで置換されていてもよい芳香族複素環式基であり；および、
Ｒ７ｂは水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、またはアミノである）で示される化合物またはその製薬上許容される塩。
（１）’式（Ｉ）：
【化３】
2021522194.tif 000005
（式中、
Ｒ３は各々独立して、（ハロゲン、シアノ、アルキルオキシ、ハロアルキルオキシまたは非芳香族炭素環式基）で置換されていてもよいアルキル；およびアルキルで置換されていてもよい芳香族複素環式基からなる群から選択され、
ｔは０〜３の整数であり；
Ｒ５は水素原子またはハロゲンであり；
Ｒ６は水素原子、ハロゲンまたは置換もしくは非置換のアルキルであり；
【化４】
2021522194.tif 000006
であり；
式中、Ｒ７ａはハロゲン；シアノ；シアノ、ハロゲン、ヒドロキシまたは芳香族複素環式基で置換されていてもよいアルキルオキシ；ハロゲンで置換されていてもよいアルキル；シアノまたはハロゲンで置換されていてもよい非芳香族炭素環式基；シアノまたは芳香族複素環式基で置換されていてもよい非芳香族複素環式基；芳香族複素環式基であり；および、
Ｒ７ｂは水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキルまたはアミノである）で示される化合物またはその製薬上許容される塩。
（２）
【化５】
2021522194.tif 000007
である、項目（１）または（１）’記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（２）’
【化６】
2021522194.tif 000008
である、項目（１）または（１）’記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（３）Ｒ６がフルオロまたはクロロである、項目（１）、（２）、（２）’および（１）’のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（３−２）Ｒ６がフルオロである、項目（１）、（２）、（２）’および（１）’のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（４）Ｒ５が水素原子またはフルオロである、項目（１）〜（３）、（１）’、（２）’および（３−２）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（４−２）Ｒ５が水素原子である、項目（４）記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（５）Ｒ３が各々独立して、１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルである、項目（１）〜（４）、（１）’、（２）’、（３−２）および（４−２）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（５−２）Ｒ３がメチルである、項目（５）記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（５−３）Ｒ３がハロメチルである、項目（５）記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（６）
【化７】
2021522194.tif 000009
である、項目（１）〜（５）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）および（５−３）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（７）Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルオキシまたはシアノであり、Ｒ７ｂが水素原子、ハロゲン、またはアミノである、項目（１）〜（６）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）および（５−３）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（７−２）Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいメチルオキシである、項目（７）記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（７−３）Ｒ７ａがＣ１〜Ｃ２アルキルオキシである、項目（７）記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（７−４）Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ２アルキルオキシである、項目（７）記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（８）
【化８】
2021522194.tif 000010
である、項目（１）〜（５）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）および（５−３）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（８−２）Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルであり、Ｒ７ｂが水素原子またはアルキルである、項目（１）〜（５）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）および（８）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（９）
【化９】
2021522194.tif 000011
（式中、Ｒ３は１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキル）であり、
Ｒ５が水素原子であり、
Ｒ６がハロゲンであり、
【化１０】
2021522194.tif 000012
であり、および、
Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されていてもよいアルキルオキシである、項目（１）〜（８）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）および（８−２）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（９−２）化合物が式（ＩＡ）：
【化１１】
2021522194.tif 000013
（式中、各記号は上記項目（１）と同義である）
で示される、項目（１）〜（９）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）および（８−２）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（９−２）’式（ＩＢ）：
【化１２】
2021522194.tif 000014
（式中、各記号は上記項目（１）〜（９）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）および（８−２）のいずれかと同義である）で示される化合物またはその製薬上許容される塩。
（９−３）化合物が式（ＩＡ）：
【化１３】
2021522194.tif 000015
（式中、Ｒ７ａは１以上のハロゲンで置換されていてもよいＣ１〜Ｃ３アルキルオキシであり；Ｒ３は１以上のハロゲンで置換されていてもよいＣ１〜Ｃ３アルキルであり；ｔは０または１である）で示される、項目（１）〜（９）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（９−２）’および（８−２）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（９−４）Ｒ７ａがＣ１〜Ｃ２アルキルオキシである、項目（９）、（９−２）、（９−２）’および（９−３）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（９−５）Ｒ７ａが１以上のハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ２アルキルオキシである、項目（９）、（９−２）、（９−２）’および（９−３）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１０）
【化１４】
2021522194.tif 000016
からなる群から選択される項目（１）〜（９）、（９−２）’、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１０）’
【化１５】
2021522194.tif 000017
からなる群から選択される上記（９−２）’記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１０）’’  Ｉ−００７、Ｉ−００８、Ｉ−００９、Ｉ−０１０、Ｉ−０４７、Ｉ−０５９、Ｉ−０６７およびＩ−０７６からなる群から選択される、項目（１）〜（９）、（１）’、（２）’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１０）’’’  上記「化１５」に記載のいずれかの化合物の光学異性体から選択される、上記項目（１０）’記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１１）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有する医薬組成物。
（１２）項目（１１）記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有するＢＡＣＥ１阻害活性を有する医薬組成物。
（１３）アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病（ｐｒｏｄｒｏｍａｌ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）の治療もしくは予防、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の進行予防、または、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者（ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ  ａｔ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）における進行予防のための、項目（１１）または（１２）記載の医薬組成物。
（１４）ＢＡＣＥ１活性を阻害する方法において使用するための、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１５）アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の治療もしくは予防、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の進行予防、または、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者における進行予防のために使用する、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（１６）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を投与することを含む、ＢＡＣＥ１活性を阻害するための方法。
（１７）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を投与することを含む、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の治療もしくは予防、アルツハイマー型認知症、軽度認知障害もしくは前駆期アルツハイマー病の進行予防、または、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者における進行予防のための方法。
（１８）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有するＢＡＣＥ１阻害剤。
（１９）ＢＡＣＥ１活性を阻害するための医薬を製造するための、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩の使用。
（２０）アミロイドβタンパク質の産生、分泌または沈着により誘発される疾患の治療または予防のための項目（１１）または（１２）記載の医薬組成物。
（２１）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を投与することを含む、アミロイドβタンパク質の産生、分泌または沈着により誘発される疾患の治療または予防のための方法。
（２２）アミロイドβタンパク質の産生、分泌または沈着により誘発される疾患の治療または予防のために使用する、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（２３）アミロイドβタンパク質の産生、分泌または沈着により誘発される疾患の治療または予防のための医薬を製造するための、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩の使用。
（２４）アルツハイマー型認知症の治療または予防のための項目（１１）または（１２）記載の医薬組成物。
（２５）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を投与することを含む、アルツハイマー型認知症の治療または予防のための方法。
（２６）アルツハイマー型認知症の治療または予防のために使用する、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩。
（２７）アルツハイマー型認知症の治療または予防のための医薬を製造するための、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩の使用。
【００１０】
（２８）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有する、経口投与のための医薬組成物。
（２９）錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、フィルム剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、リモナーデ剤、酒精剤、芳香水剤、エキス剤、煎剤またはチンキ剤である、（２８）記載の医薬組成物。
（３０）糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶性コーティング錠、徐放錠、トローチ錠、舌下錠、バッカル錠、チュアブル錠、口腔内崩壊錠、ドライシロップ、ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤または徐放性カプセル剤である、（２９）記載の医薬組成物。
（３１）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有する、非経口投与のための医薬組成物。
（３２）経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、経粘膜、吸入、経鼻、点眼、点耳または膣内投与のための、（３１）記載の医薬組成物。
（３３）注射剤、点滴剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、エアゾール剤、吸入剤、ローション剤、注入剤、塗布剤、含嗽剤、浣腸剤、軟膏剤、硬膏剤、ゼリー剤、クリーム剤、貼付剤、パップ剤、外用散剤または坐剤である、（３１）または（３２）記載の医薬組成物。
（３４）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有する、小児用または高齢者用の医薬組成物。
（３５）項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩と、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗剤、またはその他のアルツハイマー型認知症のための医薬との組み合わせからなる医薬組成物。
（３６）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗剤、またはその他のアルツハイマー型認知症のための医薬との併用療法のための、項目（１）〜（１０）、（１）’、（２）’、（１０）’、（１０）’’、（１０）’’’、（３−２）、（４−２）、（５−２）、（５−３）、（７−２）、（７−３）、（７−４）、（８−２）、（９−２）、（９−２）’、（９−３）、（９−４）および（９−５）のいずれかに記載の化合物またはその製薬上許容される塩を含有する医薬組成物。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下に、実施形態を参照して本発明を説明する。本明細書を通して、特に指定のない限り、単数形の表現はその複数形の概念を包含するものと理解すべきである。これに応じて、単数形の冠詞（例えば、英語における「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」等）は、特に指定のない限り、その複数形の概念を包含するものと理解すべきである。さらに、本明細書において用いられる用語は、特に指定のない限り、当該分野で普通に用いられている意味で用いられることを理解すべきである。したがって、特に断りのない限り、本明細書において用いられるすべての専門用語および科学用語は、本発明が関係する分野の当業者が一般的に理解するものと同一の意味を有する。矛盾がある場合、本明細書（定義を含む）が優先される。
以下に本明細書において用いられる各用語の意味を説明する。各用語は特に断りのない限り、単独で用いられる場合も、または他の用語と組み合わせて用いられる場合も、同一の意味で用いられる。
本明細書中、「からなる」という用語は、構成要件のみを有することを意味する。
本明細書中、「含む」という用語は、構成要件に限定されず、記載されていない要素を排除しないことを意味する。
本明細書中、「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素を包含する。特にフッ素および塩素が好ましい。フッ素がより好ましい。
本明細書中、「アルキル」とは、炭素数１〜１５、例えば炭素数１〜１０、例えば炭素数１〜６、例えば炭素数１〜４、好ましくは炭素数１〜３、より好ましくは炭素数１または２の直鎖または分枝状の炭化水素基を包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−へプチル、イソヘプチル、ｎ−オクチル、イソオクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシル等を包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびｎ−ペンチル等が挙げられる。
１つの態様として、「アルキル」とはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。メチルが好ましい。
【００１２】
「ハロアルキル」という用語は、上記「アルキル」の１以上の炭素原子に結合している１以上の水素原子が１以上の上記「ハロゲン」と置換している基を包含する。例えば、
モノフルオロメチル、モノフルオロエチル、モノフルオロプロピル、
ジフルオロメチル、ジフルオロエチル、ジフルオロプロピル、
トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリフルオロプロピル、ペンタフルオロプロピル、
モノクロロメチル、モノクロロエチル、モノクロロプロピル、
ジクロロメチル、ジクロロエチル、ジクロロプロピル、
トリクロロメチル、トリクロロエチル、トリクロロプロピル、ペンタクロロプロピル、
１−フルオロエチル、２−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、
１−クロロエチル、２−クロロエチル、１，１−ジクロロエチル、２，２−ジクロロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、
１，２−ジブロモエチル、１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル、および２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル等が挙げられる。
例えば、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、１−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、および２，２−ジフルオロエチル等が挙げられる。例えば、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、１−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、および２，２−ジフルオロエチル等が挙げられる。ジフルオロメチル、トリフルオロメチルおよび２，２−ジフルオロエチルが好ましい。
【００１３】
「アルケニル」という用語は、可能な任意の位置に１以上の二重結合を有する、炭素数２〜１５、例えば炭素数２〜１０、例えば炭素数２〜６、例えば炭素数２〜４の直鎖または分枝状のアルケニルを包含する。例えば、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、プレニル、ブタジエニル、ペンテニル、イソペンテニル、ペンタジエニル、ヘキセニル、イソヘキセニル、ヘキサジエニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、トリデセニル、テトラデセニル、およびペンタデセニル等を包含する。例えば、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、およびブテニルが挙げられる。
「アルキニル」という用語は、任意選択の位置に１以上の三重結合を有する、炭素数２〜１５、例えば炭素数２〜１０、例えば炭素数２〜８、例えば炭素数２〜６、例えば炭素数２〜４の直鎖または分枝状のアルキニルを包含する。具体的には、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル、およびデシニル等が挙げられる。これらはさらに、可能な任意の位置に二重結合を有していてもよい。例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、およびペンチニルが挙げられる。
【００１４】
「アルキレン」という用語は、炭素数１〜１５、例えば炭素数１〜１０、例えば炭素数１〜６、例えば炭素数１〜３の直鎖または分枝状の２価の炭素鎖を包含する。例えば、メチレン、ジメチレン、およびトリメチレン等が挙げられる。
式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物のアルキレンの１以上の水素原子は、水素原子の同位体２Ｈ（重水素）と置換され得る。
【００１５】
「アルキルオキシ」という用語は、酸素原子が上記「アルキル」で置換されている基を包含する。例えば、メチルオキシ、エチルオキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、イソブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、およびへキシルオキシ等が挙げられる。
１つの態様として、「アルキルオキシ」はメチルオキシ、エチルオキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロピルオキシまたはｔｅｒｔ−ブチルオキシである。
【００１６】
「アルケニルオキシ」という用語は、酸素原子が上記「アルケニル」で置換されている基を包含する。例えば、ビニルオキシ、アリルオキシ、１−プロペニルオキシ、２−ブテニルオキシ、２−ペンテニルオキシ、２−ヘキセニルオキシ、２−ヘプテニルオキシ、および２−オクテニルオキシ等が挙げられる。
【００１７】
「アルキニルオキシ」という用語は、酸素原子が上記「アルキニル」で置換されている基を包含する。例えば、エチニルオキシ、１−プロピニルオキシ、２−プロピニルオキシ、２−ブチニルオキシ、２−ペンチニルオキシ、２−ヘキシニルオキシ、２−ヘプチニルオキシ、および２−オクチニルオキシ等が挙げられる。
１つの態様として、「アルキニルオキシ」はエチニルオキシ、１−プロピニルオキシおよび２−プロピニルオキシである。
【００１８】
「炭素環」という用語は、非芳香族炭素環および芳香族炭素環を包含する。
「非芳香族炭素環」という用語は、単環のまたは２環以上からなる、飽和炭素環または非芳香族不飽和炭素環を包含する。２環以上の「非芳香族炭素環」は、単環非芳香族炭素環または２環以上の非芳香族炭素環が、上記「芳香族炭素環」における環に縮合した縮合環式基を包含する。
さらに、「非芳香族炭素環」は、以下のように架橋している環式基、またはスピロ環を形成する環式基も包含する。
【化１６】
2021522194.tif 000018
「単環非芳香族炭素環」という用語は、炭素数３〜１６、例えば炭素数３〜１２、例えば炭素数３〜８、例えば炭素数３〜５の基を包含する。例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタン、シクロノナン、シクロデカン、シクロプロペナン、シクロブテナン、シクロペンテナン、シクロヘキセナン、シクロヘプテナン、およびシクロヘキサジエナン等が挙げられる。
２環以上からなる非芳香族炭素環は炭素数６〜１４の基を包含し、例えば、インダン、インデナン、アセナフタレン、テトラヒドロナフタレン、およびフルオレナン等が挙げられる。
「芳香族炭素環」という用語は、単環のまたは２環以上からなる、芳香族炭化水素環基を包含する。例えば、炭素数６〜１４の芳香族炭化水素基であり、具体的には、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、およびフェナントレン等が挙げられる。
１つの態様として、「芳香族炭素環」はベンゼンである。
１つの態様として、「炭素環」はシクロプロパン、シクロブタンおよびシクロペンタンである。
【００１９】
「複素環」という用語は、非芳香族複素環および芳香族複素環を包含する。
「非芳香族複素環」という用語は、Ｏ、ＳおよびＮの原子から独立して選択される１以上のヘテロ原子を有する、単環のまたは２環以上からなる、非芳香族の基を包含する。
２環以上の「非芳香族複素環」は、単環の非芳香族複素環または２環以上の非芳香族複素環が、上記「芳香族炭素環」、「非芳香族炭素環」および／または「芳香族複素環」の環に縮合した縮合環式基を包含する。
さらに、「非芳香族複素環」は、以下のように架橋している環式基、またはスピロ環を形成する環式基も包含する。
【化１７】
2021522194.tif 000019
「単環の非芳香族複素環」という用語は、３〜８員環を包含し、例えば、４員、５員または６員環である。例えば、ジオキサン、チイラン、オキシラン、オキセタン、オキサチオラン、アゼチジン、チアン、チアゾリジン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリニル、モルホリン、チオモルホリン、ジヒドロピリジン、テトラヒドロピリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジヒドロチアゾリン、テトラヒドロチアゾリン、テトラヒドロイソチアゾリン、ジヒドロオキサジン、ヘキサヒドロアゼピン、テトラヒドロジアゼピン、テトラヒドロピリダジン、ヘキサヒドロピリミジン、ジオキソラン、ジオキサジン、アジリジン、ジオキソリン、オキセパン、チオラン、チイン、およびチアジン等が挙げられる。
２環以上の非芳香族複素環としては、９〜１４員環式基を包含し、例えば、インドリン、イソインドリン、クロマン、およびイソクロマン等が挙げられる。
【００２０】
「芳香族複素環」という用語は、Ｏ、ＳおよびＮの原子から独立して選択される１以上のヘテロ原子を有する、単環のまたは２環以上からなる、芳香環を包含する。
２環以上の「芳香族複素環」は、単環の芳香族複素環式基または２環以上からなる非芳香族複素環式基が、上記「芳香族炭素環」に縮合した縮合環式基を包含する。
「単環の芳香族複素環」としては、５〜８員環式基を包含し、例えば５員または６員環である。例えば、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアゾール、トリアジン、テトラゾール、フラン、チオフェン、イソオキサゾール、オキサゾール、オキサジアゾール、イソチアゾール、チアゾール、およびチアジアゾール等が挙げられる。
２環の芳香族複素環としては、９〜１０員環を包含し、例えばインドリン、イソインドリン、インダゾリン、インドリジン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、ナフチリジン、キノキサリン、プリン、プテリジン、ベンズイミダゾール、ベンズイソオキサゾール、ベンズオキサゾール、ベンズオキサジアゾール、ベンズイソチアゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾチアジアゾール、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾトリアゾール、イミダゾピリジン、トリアゾロピリジン、イミダゾチアゾール、ピラジノピリダジン、オキサゾロピリジン、およびチアゾロピリジン等が挙げられる。
３環以上の芳香族複素環としては、１３〜１４員環式基を包含し、例えばカルバゾール、アクリジン、キサンテン、フェノチアジン、フェノキサチイン、フェノキサジン、およびジベンゾフラン等が挙げられる。
１つの態様として、「複素環」は１，４−オキサチアンである。
【００２１】
「置換もしくは非置換のアルキル」の置換基は、例えば以下の置換基群αから選択される１以上の基である。
置換基群αとは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アルキルオキシからなる群である。
「置換もしくは非置換のアルキル」の置換基は、例えばハロゲン等である。
Ｒ２中の「置換もしくは非置換のアルキル」の置換基は、例えばハロゲン等である。
Ｒ３中の「置換もしくは非置換のアルキル」の置換基は、例えばハロゲン、アルキルオキシ等である。
【００２２】
「置換もしくは非置換のアルキルオキシ」の置換基は、例えば以下の置換基群βから選択される１以上の基である。
置換基群βとは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、置換されていてもよいアルキル（置換基：ヒドロキシ、非芳香族炭素環式基、シアノ非芳香族炭素環式基、ハロ非芳香族炭素環式基、非芳香族複素環式基、アルキル非芳香族複素環式基、ハロ非芳香族複素環式基、芳香族複素環式基）からなる群である。
Ｒ２中の「置換もしくは非置換のアルキルオキシ」の置換基は、例えばハロゲン等である。
Ｒ３中の「置換もしくは非置換のアルキルオキシ」の置換基は、例えばハロゲン、アルキルオキシ等である。
Ｒ７ａ中の「置換もしくは非置換のアルキルオキシ」の置換基は、例えば置換されていてもよいアルキル（置換基：ヒドロキシ、非芳香族炭素環式基、シアノ非芳香族炭素環式基、ハロ非芳香族炭素環式基、非芳香族複素環式基、アルキル非芳香族複素環式基、ハロ非芳香族複素環式基、芳香族複素環式基）等である。
【００２３】
「置換もしくは非置換の非芳香族炭素環式基」および「置換もしくは非置換の非芳香族複素環式基」は「オキソ」で置換されていてもよい。以下のように同一の炭素原子に結合する２個の水素原子がオキソと置換されている基を包含する。
【化１８】
2021522194.tif 000020
【００２４】
「置換もしくは非置換の炭素環」または「置換もしくは非置換の複素環」の置換基としては、置換基群αから選択される基が挙げられる。
【００２５】
式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物は、特定の異性体に限定するものではなく、すべての可能な異性体（例えば、ケト−エノール異性体、イミン−エナミン異性体、ジアステレオ異性体、光学異性体、および回転異性体等）、ラセミ体およびそれらの混合物を含む。例えば式（Ｉ）で示される化合物は、以下のような互変異性体を包含する。
【化１９】
2021522194.tif 000021
【００２６】
本明細書において、以下の式で示される基：
【化２０】
2021522194.tif 000022
は、以下の式で示される基：
【化２１】
2021522194.tif 000023
を意味する。
【００２７】
式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物の１以上の水素、炭素および／または他の原子は、それぞれ水素、炭素および／または他の原子の同位体と置換し得る。同位体の例としては、それぞれ２Ｈ（Ｄ）、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉおよび３６Ｃｌのように、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素および塩素の同位体が包含される。式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物は、そのような同位体と置換した化合物も包含する。そのような同位体と置換した化合物は、医薬品としても有用であり、式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物のすべての放射標識化合物を包含する。また該「放射標識化合物」を製造するための「放射標識方法」も本発明に包含され、代謝薬物動態研究、結合アッセイにおける研究および／または診断のツールとして有用である。
式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物の放射標識化合物は、当該技術分野で周知の方法で調製できる。例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示されるトリチウム標識化合物は、例えば、トリチウムを用いた触媒的脱ハロゲン化反応によって、式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される特定の化合物にトリチウムを導入することで調製できる。この方法は、適切な触媒、例えばＰｄ／Ｃの存在下、塩基の存在下または非存在下で、式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物が適切にハロゲン置換された前駆体とトリチウムガスとを反応させることを包含する。他のトリチウム標識化合物を調製するための適切な方法としては、Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１，Ｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （Ｐａｒｔ  Ａ），Ｃｈａｐｔｅｒ  ６  （１９８７年）を参照できる。１４Ｃ−標識化合物は、１４Ｃ炭素を有する出発物質を用いることによって調製できる。
【００２８】
式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物の製薬上許容される塩としては、例えば、アルカリ金属（例えば、リチウム、ナトリウム、およびカリウム）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、およびバリウム）、マグネシウム、遷移金属（例えば、亜鉛、および鉄）、アンモニア、有機塩基（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、ピリジン、ピコリン、キノリン）およびアミノ酸との塩、ならびに無機酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、炭酸、臭化水素酸、リン酸、およびヨウ化水素酸）、および有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、マンデル酸、グルタル酸、リンゴ酸、安息香酸、フタル酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、およびエタンスルホン酸）との塩が挙げられる。特に塩酸、硫酸、リン酸、酒石酸、コハク酸、またはメタンスルホン酸との塩が挙げられる。これらの塩は、通常行われる方法によって形成させることができる。
本発明の式（Ｉ）、（ＩＡ）もしくは（ＩＢ）で示される化合物またはそれらの製薬上許容される塩は、溶媒和物（例えば、水和物等）および／または結晶多形を形成する場合がある。本発明はそのような各種の溶媒和物および結晶多形も包含する。「溶媒和物」は、式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物に任意の数の溶媒分子（例えば、水分子等）が配位したものでもよい。式（Ｉ）で示される化合物またはその製薬上許容される塩を、大気中に放置することにより、化合物が水分を吸収し、吸着水が付着する場合や、水和物を形成する場合がある。式（Ｉ）で示される化合物またはその製薬上許容される塩を、再結晶することでそれらの結晶多形を生成する場合がある。
【００２９】
本発明の式（Ｉ）、（ＩＡ）もしくは（ＩＢ）でと示される化合物またはそれらの製薬上許容される塩は、プロドラッグを形成する場合がある。本発明はそのような各種のプロドラッグも包含する。プロドラッグとは、化学的または代謝的に分解できる基を有する本発明化合物の誘導体であり、加溶媒分解によりまたは生体内の生理条件下で薬学的に活性な本発明化合物に変換される化合物である。プロドラッグは、生体内における生理条件下で酵素的に酸化、還元、加水分解などを受けて式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物に変換される化合物、胃酸などにより加水分解されて式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物に変換される化合物等を包含する。適当なプロドラッグ誘導体を選択する方法および調製する方法は、例えばＤｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５に記載されている。プロドラッグは、それ自身が活性化合物である場合がある。
式（Ｉ）、（ＩＡ）もしくは（ＩＢ）で示される化合物またはそれらの製薬上許容される塩がヒドロキシ基を有する場合は、例えば、ヒドロキシ基を有する化合物と適当なアシルハライド、適当な酸無水物、適当なスルホニルクロライド、適当なスルホニルアンハイドライドおよびミックスドアンハイドライドとを反応させることにより、または縮合剤を用いて反応させることにより調製し得るアシルオキシ誘導体やスルホニルオキシ誘導体のようなプロドラッグが例示される。例えば、ＣＨ３ＣＯＯ−、Ｃ２Ｈ５ＣＯＯ−、ｔ−ＢｕＣＯＯ−、Ｃ１５Ｈ３１ＣＯＯ−、ＰｈＣＯＯ−、（ｍ−ＮａＯＯＣＰｈ）ＣＯＯ−、ＮａＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−、ＣＨ３ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯ−、ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２ＣＯＯ−、ＣＨ３ＳＯ３−、ＣＨ３ＣＨ２ＳＯ３−、ＣＦ３ＳＯ３−、ＣＨ２ＦＳＯ３−、ＣＦ３ＣＨ２ＳＯ３−、ｐ−ＣＨ３Ｏ−ＰｈＳＯ３−、ＰｈＳＯ３−、およびｐ−ＣＨ３ＰｈＳＯ３−等が挙げられる。
【００３０】
式（Ｉ）、（ＩＡ）または（ＩＢ）で示される化合物は、当業者にとって既知の合成方法とともに、下記に記載の方法を用いて調製すればよい。
出発物質は市販品であるか、または既知の方法に従って調製すればよい。
下記の合成のいずれの間でも、いずれの分子でも、感応性または反応性の置換基を保護することが必要な、または好ましい場合がある。この場合、Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００７に記載のもの等の従来の保護基を用いることにより、これらの保護を実施できる。
下記の化合物は、ジアステレオマーおよび／またはエナンチオマーの混合物として生成するが、そうした混合物は、続く手順の適切な段階で、従来の技術、例えば結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、キラルまたはアキラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、およびキラル超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）を用いて分離して、本発明の単一エナンチオマーを与え得ることは、当業者であれば理解されよう。
下記すべての工程について、実施する工程の順序を適宜変更することができる。各工程において、各中間体を単離し、次いで、次工程に用いてもよい。反応時間、反応温度、溶媒、試薬、および保護基等はすべて単なる例示であり、反応に悪影響を及ぼさない限り、特に限定されない。
【００３１】
一般手順Ａ
【化２２】
2021522194.tif 000024
（式中、Ｐはベンゾイル、またはベンジルなどの保護基であり、その他の記号は上記（１）と同義である。）
一般合成法Ａは、化合物Ａ−１から工程１〜工程８の複数工程を経て化合物Ａ−９で示される化合物を調製する方法である。後の工程で用いられる反応条件に応じて保護基Ｐが選択できることは、当業者であれば理解できる。
工程１
１，３−双極子付加環化（１，３−ｄｉｐｏｌａｒ  ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ）により化合物Ａ−２を調製することができる。このような反応はＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６０，８２，５３３９−５３４２またはＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９８，６３、５２７２−５２７４記載の条件と類似の条件を用いることで実施できる。この１，３−双極子付加環化は、環状化合物Ａ−１と、例えばフェニルイソシアネート、フェニルジイソシアネートまたは（Ｂｏｃ）２Ｏなどの適切な脱水剤、および例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリンなどの適切な塩基を使用して、対応するニトロアルカンから反応系内で生成された対応するニトリルオキシドによって実施することができる。別法として、ニトリルオキシドは、対応する塩化ヒドロキシモイルから、例えば、トリエチルアミン、ジプロピルエチルアミン、またはＮ−メチルモルホリン等の適当な塩基を用いて反応系内で生成できる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは室温〜１２０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程２
適当なアリールリチウム試薬またはＧｒｉｇｎａｒｄ試薬を化合物Ａ−２に求核付加することにより、化合物Ａ−３を調製することができる。このような反応はＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００５，１２７，５３７６−５３８４記載の条件と類似の条件を用いることで実施できる。好ましくは、アリールリチウム試薬またはＧｒｉｇｎａｒｄ試薬は、例えば、ｎ−、ｓｅｃ−もしくはｔｅｒｔ−ブチルリチウム、臭化イソプロピルマグネシウムまたは金属マグネシウム等の適当な塩基を用いて対応する芳香族ハライドから調製でき、次いでこれを例えばＢＦ３−ＯＥｔ２などのルイス酸とともに化合物Ａ−２と反応させて化合物Ａ−３を得ることができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程３
化合物Ａ−３のＮ−Ｏ結合を還元開裂反応することにより、化合物Ａ−４を調製することができる。この還元開裂は、酢酸、ギ酸、または塩酸等の適当な酸とともに亜鉛を用いて実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、水およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−２０℃〜溶媒還流温度である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
別法として、この反応は、水素下で酸化白金などの金属触媒を用いて実施することもできる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、メタノール、エタノール、水およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは室温〜５０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
さらに、このような反応は水素化アルミニウムリチウムを用いて実施することもできる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテルおよびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−２０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程４
化合物Ａ−４から反応系内で対応するチオ尿素を形成し、続く環化反応により、、化合物Ａ−５を調製することができる。このような反応は当業者にとって既知であり、国際公開第２０１４／０６５４３４号に記載の条件下で実施できる。チオ尿素は、例えばベンゾイルイソチオシアネート、またはベンジルイソチオシアネート等の適当なイソチオシアネートを用いて化合物Ａ−４から反応系内で得ることができ、次いで、例えばｍ−ＣＰＢＡ、過酸化水素、またはカルボジイミド試薬（例えばＤＣＣ、ＤＩＣまたはＥＤＣ）などの試薬を加えて環化させることができる。別法として、ヨウ化メチルなどのアルキル化剤、および水素化ナトリウム、重炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウムなどの適当な塩基を用いてもこの環化反応を実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、通常０℃〜６０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程５
化合物Ａ−５の脱保護により、化合物Ａ-６を調製することができる。このような脱保護反応は当業者にとって既知であり、Ｇｒｅｅｎ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第４版に記載の条件下で実施できる。保護基がベンゾイルの場合、硫酸、もしくは塩酸などの酸性条件下で、またはヒドラジン、ＤＢＵ、もしくは水酸化ナトリウムなどの塩基条件下で脱保護反応を実施できる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、メタノール、トルエン、ベンゼンおよびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは室温〜１００℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程６
化合物Ａ−６のニトロ化により、化合物Ａ−７を調製することができる。典型的な手順は、、硫酸およびトリフルオロ酢酸に溶解した化合物Ａ６を、例えば硝酸カリウムまたは硝酸などのニトロニウムイオン源で処理することである。反応温度は、好ましくは−２０℃〜０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜５時間であり、好ましくは３０分〜２時間である。
工程７
化合物Ａ−７の還元により、化合物Ａ−８を調製することができる。還元は、水素雰囲気下で、例えばパラジウム炭素などの適切な触媒によって、または、例えば鉄、亜鉛もしくは塩化スズ（ＩＩ）などの還元剤を使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、水、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、通常、室温〜８０℃であり、好ましくは室温〜６０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程８
化合物Ａ−８の適当な酸性塩を対応するカルボン酸とアミドカップリング反応させることにより、化合物Ａ−９を調製することができる。化合物Ａの酸性塩は、縮合反応を行う前に、ＨＣｌ等の適切な酸１当量で調製することができる。この反応は、当業者に既知の方法で実施することができ、適切なカップリング条件はＣｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１、１１１、６５５７−６６０２に記載されており、ａ）縮合剤を用いる反応；ｂ）酸クロリドまたは酸フルオリドを用いる反応、を包含する。このような反応は、アニリン位置で化学選択的アミドカップリングさせるために、塩基を加えることなしに実施しなければならない。
反応ａ）は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ塩酸塩）、Ｏ−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、および１Ｈ−（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）などの縮合剤を用いて実施できる。ＨＡＴＵおよびＰｙＢＯＰなどのウロニウム塩またはホスホニウム塩を用いる場合、反応はトリエチルアミン、およびジイソプロピルエチルアミンなどの塩基存在下で行うことができる。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）および１−ヒドロキシ−７−アザ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）などの触媒の使用により、本反応を促進できる場合がある。反応に用いる溶媒は、反応を阻害しない限り特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、およびテトラヒドロフランを包含する。反応温度は通常０℃〜５０℃であり、好ましくは室温である。
反応ｂ）は、市販の酸クロライドまたは当業者に既知の方法を用いて合成したものを用い、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、および酢酸エチルなどの溶媒中、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジンなどの塩基存在下で行うことができる。反応温度は通常０℃〜６０℃であり、好ましくは０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは２０分〜６時間である。
【００３２】
一般合成法Ｂ
【化２３】
2021522194.tif 000025
（式中、Ｒ３’およびＲ３’’は各々独立して、（ハロゲン、シアノ、アルキルオキシ、ハロアルキルオキシまたは非芳香族炭素環式基）で置換されていてもよいアルキル、および、アルキルで置換されていてもよい複素環式基からなる群から選択され、その他の記号は前記と同義である）
一般合成法Ｂは、化合物Ｂ−１から複数工程を経て、化合物Ｂ−５を調製する方法である。化合物Ｂ−４を用い、一般合成法Ａに記載の方法に従って化合物Ｂ−５を調製することができる。
工程１
１，３−双極子付加環化により、化合物Ｂ−２を調製することができる。このような反応はＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６０，８２，５３３９−５３４２またはＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９８，６３、５２７２−５２７４記載の条件と類似の条件を用いることで実施できる。この１，３−双極子付加環化は、環状化合物Ｂ−１と、例えばフェニルイソシアネート、フェニルジイソシアネートまたは（Ｂｏｃ）２Ｏなどの適切な脱水剤、および例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリンなどの適切な塩基を使用して対応するニトロアルカンから反応系内で生成された対応するニトリルオキシドによって実施することができる。また、別法として、ニトリルオキシドは、対応する塩化ヒドロキシモイルと、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、またはＮ−メチルモルホリン等の適当な塩基から反応系内で生成できる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは室温〜１２０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程２
Ｒ３’が水素原子である場合、化合物Ｂ−２のカルボニル還元によって化合物Ｂ−３を調製することができる。このような反応は、例えばＤＩＢＡＬ−Ｈ、水素化リチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウム、または水素化ナトリウムビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムなどの適切な金属水素化物を使用して、化合物Ｂ−２に求核水素化物付加させることによって実施することができる。本工程に用いる反応溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
Ｒ３’が水素原子以外である場合、化合物Ｂ−２への求核付加反応によって化合物Ｂ−３を調製することができる。このような反応は、例えば有機リチウム、マグネシウム、亜鉛、またはシリル試薬などの適切な求核試薬を使用して、例えばＢＦ３−ＯＥｔ２、ＡｌＣｌ３、またはＴｉＣｌ４などのルイス酸の存在下または非存在下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程３
Ｒ３’’が水素原子である場合、化合物Ｂ−３の還元によって化合物Ｂ−４を調製することができる。このような反応は、トリエチルシラン、水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を使用して、ＢＦ３−ＯＥｔ２などのルイス酸の存在下または非存在下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−２０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
Ｒ３’’が水素原子以外である場合、化合物Ｂ−２への求核付加反応によって化合物Ｂ−４を調製することができる。このような反応は、例えば有機リチウム、マグネシウム、亜鉛、またはシリル試薬などの適切な求核試薬を使用して、例えばＢＦ３−ＯＥｔ２、ＡｌＣｌ３、またはＴｉＣｌ４などのルイス酸の存在下または非存在下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００３３】
一般合成法Ｃ
【化２４】
2021522194.tif 000026
（式中、Ｐはベンゾイル、またはベンジルなどの保護基であり、Ｒ３’’’はエチルまたはシクロプロピルであり、その他の記号は上記（１）と同義である。）
一般合成法Ｃは、化合物Ｂ−１から複数工程を経て、化合物Ｃ−５を調製する方法である。化合物Ｃ−２およびＣ−５から、一般合成法Ａに記載の方法に従って化合物Ｃ−３および化合物Ｃ−５を調製することができる。
工程１
アリル部位を化合物Ｂ−２のカルボニル基に求核付加することにより、化合物Ｃ−１を調製することができる。このような反応は、例えばアリルシラン、リチウム、マグネシウム、亜鉛試薬などの適切な市販の、または反応系内で生成したアリル試薬を使用して、例えばＢＦ３−ＯＥｔ２、ＡｌＣｌ３、またはＴｉＣｌ４などのルイス酸の存在下または非存在下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程２
化合物Ｃ−１の還元により、化合物Ｃ−２を調製することができる。このような反応は、トリエチルシラン、または水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を使用して、ＢＦ３−ＯＥｔ２などのルイス酸の存在下または非存在下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−２０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程３
Ｒ３’’’がエチルである場合、化合物Ｃ−４の水素化によって化合物Ｃ−５を得ることができる。水素化は、例えばパラジウム炭素などの適切な触媒を水素雰囲気下で使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、水、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、通常、室温〜８０℃であり、好ましくは室温〜６０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
Ｒ３’’’がシクロプロピルである場合、化合物Ｃ−４のシクロプロパン化によって化合物Ｃ−５を得ることができる。このような反応は、ジアゾメタンなどの適切な試薬を使用して、適切な触媒の存在下もしくは非存在下で、または、例えばジヨードメタンとジエチル亜鉛などのシモンズ−スミス反応条件下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、またはそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は通常−３０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００３４】
一般合成法Ｄ
【化２５】
2021522194.tif 000027
（式中、Ｐはベンゾイル、またはベンジルなどの保護基であり、Ｒ３’’’’は、（フッ素またはアルキルオキシ）で置換されたアルキルであり、その他の記号は上記（１）と同義である。）
一般合成法Ｄは、化合物Ｃ−３から複数工程を経て、化合物Ｄ−３を調製する方法である。化合物Ｄ−２から、一般合成法Ａに記載の方法に従って化合物Ｄ−３を調製することができる。
工程１
化合物Ｃ−３をオゾン分解させ、得られたアルデヒドの還元反応を行うことにより、化合物Ｄ−１を調製することができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。オゾン分解は、オゾン雰囲気下、ジクロロメタン、メタノール、およびそれらの混合溶媒などの適切な溶媒中において実施でき、また、窒素雰囲気下トリフェニルホスフィン、ピリジン、ジメチルスルフィド、およびトリメチルアミンなどの適切な試薬を用いて還元的後処理を実施することができる。オゾニドを生成させるための温度は好ましくは−７８℃であり、次いで還元的後処理のために室温に昇温させてもよい。反応時間は特に限定されないが、通常３０分〜５時間であり、好ましくは３０分〜２時間である。得られたアルデヒドの還元反応は、水素化ホウ素ナトリウム、または水素化アルミニウムリチウムなどの適切な還元剤を使用してワンポットで実施することができる。反応温度は、好ましくは０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常３０分〜５時間であり、好ましくは３０分〜２時間である。
工程２
Ｒ３’’’’がＣＦ３、ＣＨＦ２またはＣＨ２Ｆである場合、一連の２工程：化合物Ｄ−１を酸化してアルデヒドもしくはカルボン酸を生成し、後続してフッ素化を行うか、または化合物Ｄ−１を直接フッ素化することにより、化合物Ｄ−２を得ることができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。例えば、ＴＥＭＰＯ、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ、またはＳｗｅｒｎ酸化などの適切な酸化条件下で化合物Ｄ−１を酸化させて対応するアルデヒドを得ることができる。対応するカルボン酸は、得られたアルデヒドの酸化反応により、または例えばＰｉｎｎｉｃｋ、ＴＥＭＰＯ、またはＪｏｎｅｓ酸化などの適切な条件を用いて化合物Ｄ−１を直接酸化させることにより得ることができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。反応温度は通常−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。フッ素化反応は、例えばＤＡＳＴ、Ｄｅｏｘｏｆｌｕｏｒ、または四フッ化硫黄などの適切な試薬を使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜５０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
Ｒ３’’’がアルキルオキシである場合、化合物Ｄ−１の末端アルコールのアルキル化によって化合物Ｄ−２を得ることができる。このような反応は、水素化ナトリウムなどの適切な塩基と、アルキルハライド、メシレート、またはトリフレートなどの対応する求電子試薬を使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、トルエン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは０℃〜１００℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００３５】
一般合成法Ｅ
【化２６】
2021522194.tif 000028
（式中、Ｐはベンゾイル、またはベンジルなどの保護基であり、Ｒ３’’’’’はエチルまたはシクロプロピルであり、Ｘはハロゲン、メシレート、またはトリフレートなどの脱離基であり、その他の記号は上記（１）と同義である。）
一般合成法Ｅは、化合物Ｄ−１から複数工程を経て、化合物Ｅ−４を調製する方法である。化合物Ｅ−２から、一般合成法Ａに記載の方法に従って化合物Ｅ−４を調製することができる。
工程１
化合物Ｄ−１の末端アルコールを脱離基に変換することにより、化合物Ｅ−１を調製することができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。例えばＳＯＸ２、ＰＯＸ３（Ｘ＝ＣｌもしくはＢｒ）を使用するような適切なハロゲン化条件、またはトリフェニルホスフィンとＣＸ４（Ｘ＝ＣｌもしくはＢｒ）もしくはヨウ素などのＡｐｐｅｌ反応条件下で化合物Ｅ−１を得ることができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは０℃〜１００℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程２
化合物Ｄ−１の末端アルコールを脱離基に変換することにより、化合物Ｅ−２を調製することができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。例えばＳＯＸ２、ＰＯＸ３（Ｘ＝ＣｌもしくはＢｒ）を使用するような適切なハロゲン化条件、またはトリフェニルホスフィンとＣＸ４（Ｘ＝ＣｌもしくはＢｒ）もしくはヨウ素などのＡｐｐｅｌ反応条件下で化合物Ｅ−１を得ることができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは０℃〜１００℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程３
化合物Ｅ−１の脱離反応により、化合物Ｅ−２を合成することができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。例えばナトリウムもしくはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＢＵ、またはピリジンなどの適切な塩基を使用して化合物Ｅ−２を得ることができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは０℃〜６０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
工程４
Ｒ３’’’’’がエチルである場合、化合物Ｅ−２の水素化によって化合物Ｅ−３を得ることができる。水素化は、例えばパラジウム炭素などの適切な触媒を水素雰囲気下で使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、水、それらの混合溶媒を包含する。反応温度は、通常、室温〜８０℃であり、好ましくは室温〜６０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
Ｒ３’’’’’がシクロプロピルである場合、化合物Ｃ−４のシクロプロパン化によって化合物Ｅ−３を得ることができる。このような反応は、ジアゾメタンなどの適切な試薬を使用して、適切な触媒の存在下もしくは非存在下で、または、例えばジヨードメタンとジエチル亜鉛などのシモンズ−スミス反応条件下で実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、またはそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は通常−３０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００３６】
一般合成法Ｆ
【化２７】
2021522194.tif 000029
（式中、Ｐはベンゾイル、またはベンジルなどの保護基であり、Ｒ３’’’’’’はフッ素またはアルキルオキシで置換されたアルキルであり、その他の記号は前記と同義である）
一般合成法Ｆは、化合物Ｅ２から複数工程を経て、化合物Ｆ−３を調製する方法である。化合物Ｆ−２から、一般合成法Ａに記載の方法に従って化合物Ｆ−３を調製することができる。
工程１
化合物Ｆ−３をオゾン分解させ、得られたアルデヒドの還元反応を行うことにより、化合物Ｆ−１を調製することができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。オゾン分解は、オゾン雰囲気下、ジクロロメタン、メタノール、およびそれらの混合溶媒などの適切な溶媒中において実施でき、また、窒素雰囲気下トリフェニルホスフィン、ピリジン、ジメチルスルフィド、およびトリメチルアミンなどの適切な試薬を用いて還元的後処理を実施することができる。オゾニドを生成させるための温度は好ましくは−７８℃であり、次いで還元的後処理のために室温に昇温させてもよい。反応時間は特に限定されないが、通常３０分〜５時間であり、好ましくは３０分〜２時間である。得られたアルデヒドの還元反応は、水素化ホウ素ナトリウム、または水素化アルミニウムリチウムなどの適切な還元剤を使用してワンポットで実施することができる。反応温度は、好ましくは０℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常３０分〜５時間であり、好ましくは３０分〜２時間である。
工程２
Ｒ３’’’’’’がＣＦ３、ＣＨＦ２またはＣＨ２Ｆである場合、一連の２工程：化合物Ｆ−１を酸化してアルデヒドもしくはカルボン酸を生成し、フッ素化を行うか、または化合物Ｆ−１を直接フッ素化することにより、化合物Ｆ−２を得ることができる。このような反応は、当業者にとって既知の方法によって実施することができる。例えば、ＴＥＭＰＯ、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ、またはＳｗｅｒｎ酸化などの適切な酸化条件下で化合物Ｆ−１を酸化させて対応するアルデヒドを得ることができる。対応するカルボン酸は、得られたアルデヒドの酸化反応により、または例えばＰｉｎｎｉｃｋ、ＴＥＭＰＯ、Ｊｏｎｅｓ酸化などの適切な条件を用いて化合物Ｆ−１を直接酸化させることにより得ることができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。反応温度は通常−７８℃〜室温である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。フッ素化反応は、例えばＤＡＳＴ、Ｄｅｏｘｏｆｌｕｏｒ、または四フッ化硫黄などの適切な試薬を使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、トルエン、ベンゼン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは−７８℃〜５０℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
Ｒ３’’’’’’がアルキルオキシである場合、化合物Ｆ−１の末端アルコールのアルキル化によって化合物Ｆ−２を得ることができる。このような反応は、水素化ナトリウムなどの適切な塩基と、アルキルハライド、メシレート、またはトリフレートなどの対応する求電子試薬を使用して実施することができる。本工程に用いる溶媒は、反応を阻害しなければ特に限定されない。溶媒の例としては、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、トルエン、およびそれらの混合溶媒を包含する。反応温度は、好ましくは０℃〜１００℃である。反応時間は特に限定されないが、通常５分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００３７】
本発明化合物は、ＢＡＣＥ１阻害活性を有し、アミロイドβタンパク質の産生、分泌または沈着により誘発される疾患の治療および／または予防、症状改善ならびに進行予防に有効である。このような疾患の例としては、アルツハイマー病、アルツハイマー型認知症、アルツハイマー型老年認知症、軽度認知障害（ＭＣＩ）、前駆期アルツハイマー病（例えばアルツハイマー病によるＭＣＩ等）、ダウン症、記憶障害、プリオン病（クロイツフェルト・ヤコブ病）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血、脳アミロイド血管障害、他の変性認知症、アルツハイマー病と血管性認知症の併発などの混合型認知症、パーキンソン病に随伴する認知症、進行性核上麻痺に随伴する認知症、皮質基底核変性症に随伴する認知症、びまん性レビー小体型アルツハイマー病、加齢黄斑変性症、パーキンソン病、アミロイドアンジオパシー等である。
さらに、本発明化合物は、アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の（前臨床期アルツハイマー病の）患者における進行予防にも有効である。
「アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者」は、認識的および機能的には正常であるが、アルツハイマー病の潜在的な超初期兆候もしくは加齢による典型的な変化がみられる（例えばＭＲＩにおいて軽度の白質病変がみられる等）、ならびに／または、脳脊髄液Ａβ１−４２レベルが低いことによって示されるような、アミロイドの沈着のエビデンスがみられる投与対象を包含する。例えば、「アルツハイマー型認知症のリスクを有する無症候性の患者」は、臨床認知症評価法（ＣＤＲ）もしくは臨床認知症評価法−日本版（ＣＤＲ−Ｊ）のスコアが０である、および／または機能評価ステージ（Functional Assessment Staging, FAST）がステージ１もしくは２である投与対象を包含する。
【００３８】
本発明化合物は、ＢＡＣＥ１阻害活性のみならず、医薬としての有用性を備えている。該化合物は、好ましくは下記のいずれか１以上の優れた特徴を有している。
ａ）ＣＹＰ酵素、例えば、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害活性が弱い。
ｂ）高いバイオアベイラビリティー、または低いクリアランス等良好な薬物動態を示す。
ｃ）代謝安定性が高い。
ｄ）ＣＹＰ酵素、例えば、ＣＹＰ３Ａ４に対し、本明細書に記載する測定条件の濃度範囲内で不可逆的阻害を示さない。
ｅ）変異原性を有さない。
ｆ）心血管系のリスクが低い。
ｇ）高い溶解性を示す。
ｈ）脳移行性が高い。
ｉ）経口吸収性が高い。
ｊ）半減期が長い。
ｋ）非タンパク結合率が高い。
ｌ）Ａｍｅｓ試験が陰性である。
ｍ）ＢＡＣＥ２に比してＢＡＣＥ１への選択性が高い。
ｎ）ＣＹＰ酵素に対するメカニズムベース阻害（ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）が弱い。例えば、本化合物の反応性代謝物のＣＹＰ酵素に対する阻害が弱い。
ｏ）反応性代謝物の生成量が少ない。
ｐ）Ｐ−ｇｐ基質性が弱い。
本発明化合物は、ＢＡＣＥ１に対する阻害活性が高い、および／または、他の酵素、例えばＢＡＣＥ２に対する選択性が高いため、副作用が軽減された医薬品となりうる。さらに細胞系でのアミロイドβ産生抑制効果が高い、特に脳内でのアミロイドβ産生抑制効果が高いため、優れた医薬品となりうる。さらに、本化合物を適切な立体化学を有する光学活性化合物とすることで、本化合物は副作用に対するより安全域の広い医薬品となりうる。
【００３９】
本発明の医薬組成物を投与する場合、経口または非経口で投与することができる。経口投与用組成物は、経口固形製剤（例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、フィルム剤等）、経口液体製剤（例えば懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、リモナーデ剤、酒精剤、芳香水剤、エキス剤、煎剤、チンキ剤等）などの通常用いられる剤形で投与することができ、また、通常用いられる方法に従って調製し、投与してもよい。錠剤は糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶性コーティング錠、徐放錠、トローチ錠、舌下錠、バッカル錠、チュアブル錠、または口腔内崩壊錠でもよい。散剤および顆粒剤はドライシロップでもよい。カプセル剤はソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤または徐放性カプセル剤でもよい。
非経口投与用組成物は、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、経粘膜、吸入、経鼻、点眼、点耳または膣内投与等の通常用いられる非経口剤形で好適に投与することができる。非経口投与の場合、注射剤、点滴剤、外用剤（例えば点眼剤、点鼻剤、点耳剤、エアゾール剤、吸入剤、ローション剤、注入剤、塗布剤、含嗽剤、浣腸剤、軟膏剤、硬膏剤、ゼリー剤、クリーム剤、貼付剤、パップ剤、外用散剤、坐剤等）など、通常用いられるいずれの形態でも好ましく投与することができる。注射剤は、Ｏ／Ｗ、Ｗ／Ｏ、Ｏ／Ｗ／Ｏ、Ｗ／Ｏ／Ｗ型等のエマルジョンでもよい。
本発明化合物は経口吸収性が高いため、経口剤形として好ましく投与できる。
必要に応じ、製剤に適した賦形剤、結合剤、崩壊剤、および滑沢剤等の各種医薬用添加剤と、有効量の本発明化合物とを混合し、医薬組成物を製剤化することができる。さらに、本発明化合物の有効量、製剤および／または各種医薬添加剤を適宜変えることで、小児患者、高齢患者、重症例または手術用の医薬組成物としてもよい。小児用の医薬組成物は、１２または１５歳以下の患者に好ましく投与される。さらに、小児用の医薬組成物は、生後２７日以内、生後２８日〜２３か月、２〜１１歳、１２〜１６歳または１８歳の患者に投与することができる。高齢者用の医薬組成物は、６５歳以上の患者に好ましく投与できる。
【００４０】
本発明の医薬組成物の投与量は、患者の年齢および体重、疾病の種類および程度、投与経路等を考慮した上で決定することが望ましい。成人への経口投与量は、通常０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内であり、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。非経口投与の場合、投与量は投与経路により大きく異なるが、通常０．００５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内であり、好ましくは０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。該投与量を１日１回〜数回に分けて投与してもよい。
本発明化合物は、該化合物の活性の増強または該化合物の投与量の低減等を目的として、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤等の他のアルツハイマー病、アルツハイマー型認知症などの治療剤（以下、併用薬剤と略記する）と組み合わせて用いることができる。この際、本発明化合物と併用薬剤の投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、一定時間をおいて投与してもよい。さらに、本発明化合物と併用薬剤とは、それぞれ活性成分を含む２種類の異なる組成物として投与してもよいし、両方の活性成分を含む単一の組成物として投与してもよい。
併用薬剤の用量は、臨床上用いられている用量を基準として適切に選択することができる。また、本発明化合物と併用薬剤の配合比は、投与の対象、投与経路、対象疾患、症状、組み合わせ等を考慮して適切に選択することができる。例えば、投与の対象がヒトである場合、本発明化合物１重量部に対し、併用薬剤を０．０１〜１００重量部の範囲内で用いることができる。
併用薬剤としては、例えば、塩酸ドネペジル、タクリン、ガランタミン、リバスチグミン、ザナペジル、メマンチン、およびビンポセチン等が挙げられる。
【実施例】
【００４１】
以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの例より限定されるものではない。
実施例中で用いる略語は以下の意味を表す。
Ａｃ：  アセチル
Ｅｔ：  エチル
Ｂｚ：  ベンゾイル
ＤＣＣ：  ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＣ：  ジイソプロピルカルボジイミド
ｉＰｒ：  イソプロピル
Ｍｅ：  メチル
Ｐｈ：  フェニル
ｔ−Ｂｕ：  ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＢＳ：  ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＡＩＢＮ：  アゾビスイソブチロニトリル
ＡＤＤＰ：  １，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジン
ＡＩＢＮ：  ２，２’−アゾビス（イソブチロニトリル）
（Ｂｏｃ）２Ｏ：  ニ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
ＢＯＭＣＩ：  塩化ベンジルクロロメチルエーテルオキシメチル
ＤＡＳＴ：  三フッ化Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ硫黄
ＤＢＵ：  １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン
ＤＣＭ：  ジクロロメタン
ＤＥＡＤ：  アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＩＡＤ：  アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＢＡＬ：  水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＰＥＡ：  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：  Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ：  ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：  １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＨＡＴＵ：  Ｏ−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＡｔ：  １−ヒドロキシ−７−アザ−ベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：  １−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール
ＬＤＡ：  リチウムジイソプロピルアミド
ＬＨＭＤＳ：  リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
ｍＣＰＢＡ：  ｍ−クロロ過安息香酸
ＮＣＳ：  Ｎ−クロロスクシンイミド
ＮＭＰ：  Ｎ−メチルピロリドン
ＰＰＴＳ：  ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート
ＰｙＢＯＰ：  １Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＴＥＭＰＯ：  ２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシルフリーラジカル
ＴＦＡ：  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：  テトラヒドロフラン
ＴＨＰ：  ２−テトラヒドロピラニル
【００４２】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚ分光計により記録し、ケミカルシフトは、テトラメチルシランまたは残留溶媒ピーク（ＣＤＣｌ３＝７．２６ｐｐｍ、ＤＭＳＯ−ｄ６＝２．５０ｐｐｍ）に対して示した。
分析ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ  ポジティブまたはネガティブ、保持時間（ＲＴ））データは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＵＦＬＣまたはＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣシステムを用い、以下の条件で記録した。
メソッドＡ
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃ１８（５μｍ、ｉ．ｄ．４．６×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ）
流速：３ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸溶液であり、［Ｂ］はアセトニトリル溶媒中の０．１％ギ酸である。
グラジェント：溶媒［Ｂ］１０％−１００％のリニアグラジエントを３分間で行い、溶媒［Ｂ］１００％を１分間維持した。
メソッドＢ
カラム：Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳ（２．２μｍ、ｉ．ｄ．５０×３．０ｍｍ）（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）
流速：１．６ｍＬ／分
カラムオーブン：５０℃
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］０．１％ギ酸含有水溶液；［Ｂ］０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジェント：溶媒［Ｂ］１０％−１００％のリニアグラジエントを３分間で行い、溶媒［Ｂ］１００％を１分間維持した。
メソッドＣ
カラム：ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は９５％Ｈ２Ｏ＋５％ＣＨ３ＣＮ中で１０ｍＭのＣＨ３ＣＯＯＮＨ４であり、［Ｂ］はアセトニトリルである。
グラジェント：溶媒［Ｂ］５％−９５％のリニアグラジエントを１．３分間で行い、溶媒［Ｂ］９５％を０．７分間維持した。
メソッドＤ
カラム：ＨＳＳ  Ｔ３（１．８μｍ、２．１×１００ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．７ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は９５％Ｈ２Ｏ＋５％ＣＨ３ＣＮ中で１０ｍＭのＣＨ３ＣＯＯＮＨ４であり、［Ｂ］はアセトニトリルである。
グラジェント：溶媒［Ｂ］０％−９５％のリニアグラジエントを２．１分間で行い、溶媒［Ｂ］９５％を０．５分間維持した。
【実施例１】
【００４３】
化合物Ｉ−００７の合成
【化２８】
2021522194.tif 000030
工程１：化合物７−２の合成
３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン  ７−１（６．２０ｇ、７３．７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１０．２ｍｌ、７３．７ｍｍｏｌ）のトルエン（６０ｍｌ）溶液に、エチル（Ｚ）−２−クロロ２−（ヒドロキシイミノ）アセテート（２２．３ｇ、１４７ｍｍｏｌ）のトルエン（１２０ｍｌ）溶液を１００℃で加えた。還流温度で４時間攪拌した後、反応混合液にＥｔ３Ｎ（１０．２ｍｌ、７３．７ｍｍｏｌ）を加えた。還流温度で６時間攪拌した後、反応混合液に、エチル（Ｚ）−２−クロロ２−（ヒドロキシイミノ）アセテート（１１．２ｇ、７３．７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１０．２ｍｌ、７３．７ｍｍｏｌ）を加えた。還流温度で５時間攪拌した後、反応混合液に、エチル（Ｚ）−２−クロロ２−（ヒドロキシイミノ）アセテート（５．５８ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（５．１ｍｌ、３６．９ｍｍｏｌ）を加えた。還流温度で１時間攪拌した後、反応混合液を室温に冷却した。混合液にＨ２Ｏを加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを０％から４０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物７−２（５．１０ｇ、２５．６ｍｍｏｌ、３５％）を橙色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.38 (3H, t, J = 7.2 Hz), 2.07-2.12 (2H, m), 3.43 (1H, dd, J = 14.6, 7.9 Hz), 3.55 (1H, dd, J = 11.8, 7.9 Hz), 3.66 (1H, dt, J = 15.7, 5.3 Hz), 3.77-3.82 (1H, m), 4.04 (1H, dd, J = 11.9, 6.3 Hz), 4.32-4.38 (2H, m), 4.78-4.83 (1H, m).
工程２：化合物７−３の合成
ＮａＢＨ４（３．２６ｇ、８６．０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１４０ｍｌ）溶液に、化合物７−２（１４．３ｇ、７１．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１４０ｍｌ）溶液を０℃で加えた。反応混合液を４０℃で３時間攪拌し、０℃でＡｃＯＨで処理した。反応混合液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを５０％から７０％で溶出した。集めた画分を蒸発させて、化合物７−３（７．２４ｇ、４６．１ｍｍｏｌ、６４％）を無色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.88-2.08 (2H, m), 3.25 (1H, q, J = 6.9 Hz), 3.64-3.76 (3H, m), 3.94 (1H, dd, J = 12.0, 6.0 Hz), 4.44-4.49 (2H, m), 4.67-4.70 (1H, m).
工程３：化合物７−４の合成
化合物７−３（７．２４ｇ、４６．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０９ｍｌ）溶液に、９０％ＤＡＳＴ（１３．５ｍｌ、９２．０ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。反応混合液を室温で２．５時間攪拌し、０℃で炭酸カリウム水溶液で処理した。混合液をＣＨＣｌ３で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを２０％から４０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、、化合物７−４（４．３９ｇ、２７．６ｍｍｏｌ、６０％）を黄色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.91-2.02 (1H, m), 2.02-2.12 (1H, m), 3.29-3.31 (1H, m), 3.62 (1H, dd, J = 12.2, 7.0 Hz), 3.71 (2H, dd, J = 7.0, 4.5 Hz), 3.95 (1H, dd, J = 12.2, 6.0 Hz), 4.70-4.74 (1H, m), 5.12-5.23 (2H, m).
工程４：化合物７−５の合成
１−ブロモ−２−フルオロベンゼン（４．３９ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）のトルエン（１７６ｍＬ）およびＴＨＦ（４４ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．６４Ｍのｎ−ヘキサン溶液、５０．５ｍＬ、８３．０ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、反応混合液を同温度で５分間攪拌した。反応混合液に、ＢＦ３−ＯＥｔ２（４．２ｍｌ、３３．１ｍｍｏｌ）、および、化合物７−４（４．３９ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）のトルエン（９７ｍＬ）溶液を−７８℃で加え、反応混合液を同温度で１０分間攪拌した。反応混合液に、ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを１０％から２０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、、化合物７−５（４．９１ｇ、１９．２ｍｍｏｌ、７０％）を黄色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.91-1.85 (2H, m), 2.89-2.95 (1H, m), 3.60-3.66 (1H, m), 3.69-3.74 (1H, m), 3.76-3.82 (1H, m), 4.01-4.04 (1H, m), 4.08-4.13 (2H, m), 4.54 (1H, dd, J = 47.9, 10.2 Hz), 5.04 (1H, dd, J = 47.2, 10.2 Hz), 6.46 (1H, br s), 7.03-7.09 (1H, m), 7.19-7.22 (1H, m), 7.28-7.34 (1H, m), 7.92-7.96 (1H, m).
工程５：化合物７−６の合成
化合物７−５（４．９１ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（４９ｍｌ）溶液に、Ｚｎ（１２．６ｇ、１９２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。６０℃で１時間攪拌した後、反応混合液を室温に冷却し、セライト（登録商標）パッドでろ過した。ろ液に炭酸カリウム水溶液を加えた。混合液をセライト（登録商標）パッドでろ過し、ろ液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ５０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物７−６（３．８０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、７７％）を無色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.51-1.55 (1H, m), 1.61-1.69 (1H, m), 2.38-2.43 (1H, m), 3.57 (1H, br s), 3.67 (1H, dd, J = 11.0, 5.1 Hz), 3.81-3.87 (1H, m), 3.94 (1H, t, J = 11.2 Hz), 4.02-4.07 (1H, m), 4.45 (1H, dd, J = 47.7, 9.3 Hz), 4.97 (1H, ddd, J = 48.1, 9.3, 3.7 Hz), 7.08 (1H, dd, J = 12.4, 8.2 Hz), 7.22-7.24 (1H, m), 7.33-7.37 (1H, m), 7.62-7.63 (1H, m).
工程６：化合物７−７の合成
化合物７−６（３．８０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３８ｍｌ）溶液に、ベンゾイルイソチオシアナート（２．１８ｍｌ、１６．２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。室温で１９時間攪拌した後、反応混合液にＥＤＣ−ＨＣｌ（５．６６ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）を同温度で加えた。４０℃で３時間攪拌した後、反応混合液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ１０％から４０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物７−７（４．２２ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、７４％）を白色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.85-1.93 (1H, m), 2.04-2.08 (1H, m), 2.87-2.92 (1H, m), 3.74 (1H, t, J = 11.7 Hz), 3.80-3.84 (2H, m), 4.04-4.09 (1H, m), 4.37 (1H, br s), 4.70-4.98 (2H, m), 7.13-7.25 (2H, m), 7.38-7.46 (4H, m), 7.51-7.54 (1H, m), 8.28 (2H, d, J = 7.5 Hz), 12.14 (1H, s).
工程７：化合物７−８の合成
化合物７−７（４．２２ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４２ｍｌ）溶液に、ＤＢＵ（１．８１ｍｌ、１２．０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。６０℃で７時間攪拌した後、反応混合液に２ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌおよびＥｔ２Ｏを加えた。有機層をＨ２Ｏで逆抽出した。水層をＫ２ＣＯ３でアルカリ化（ｐＨ＝８）し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮した。粗生成物をＣＨＣｌ３で粉末化して、化合物７−８（２．３９ｇ、８．４７ｍｍｏｌ、７８％）を黄色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.71-1.85 (2H, m), 2.69-2.74 (1H, m), 3.58-3.65 (2H, m), 3.75 (1H, dd, J = 11.5, 5.0 Hz), 4.00-4.04 (2H, m), 4.25 (2H, s), 4.54-4.74 (2H, m), 7.04 (1H, dd, J = 12.3, 8.2 Hz), 7.14-7.17 (1H, m), 7.27-7.31 (1H, m), 7.43-7.47 (1H, m).
工程８：化合物７−９の合成
化合物７−８（３．００ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（１７．２ｍｌ）溶液に、硫酸（４．２５ｍｌ、８０ｍｍｏｌ）を−１５℃で加えた。同温度で１０分間攪拌した後、反応混合液にＨＮＯ３（０．７１２ｍｌ、１５．９ｍｍｏｌ）を加えた。同温で１５分間攪拌した後、反混合応液をＫ２ＣＯ３水溶液で処理した。水層をＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、化合物７−９を淡黄色固体として得、精製することなしに次工程に使用した。
工程９：化合物７−１０の合成
化合物７−９および１０％Ｐｄ−Ｃ（６７４ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０１ｍｌ）溶液を、Ｈ２雰囲気下、室温で攪拌した。同温で２時間攪拌した後、混合液をセライト（登録商標）パッドでろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物を超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（キラルパック（登録商標）ＩＣ；０．１％のジエチルアミン入り４０％エタノール）により精製して、化合物７−１０（１．３５ｇ、４．５６ｍｍｏｌ、４４％）を黄色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.71-1.85 (2H, m), 2.68-2.73 (1H, m), 3.55-3.64 (4H, m), 3.75 (1H, dd, J = 11.5, 5.1 Hz), 3.98-4.03 (1H, m), 4.07 (1H, br s), 4.25 (2H, br s), 4.49-4.72 (2H, m), 6.53-6.56 (1H, m), 6.74 (1H, dd, J = 6.7, 3.0 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 11.7, 8.6 Hz).
工程１０：化合物Ｉ−００７の合成
化合物７−１０（３１．６ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍｌ）溶液に、５−（フルオロメトキシ）ピラジン−２−カルボン酸（１８．３ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）および２ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ（０．０５３ｍＬ、０．１０６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合液に、ＥＤＣ−ＨＣｌ（９．８６ｍｇ、０．０３７０ｍｍｏｌ）を同温度で加えた。室温で３０分間攪拌した後、反応混合液をＮａＨＣＯ３水溶液で処理した。水層をＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよび食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をＡｃＯＥｔ／ヘキサンで粉末化して、化合物Ｉ−００７（３２．１ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ、６７％）を黄色固体として得た。
MS (方法B) : m/z = 452 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) δ: 1.73-1.84 (2H, m), 2.74-2.78 (1H, m), 3.58-3.66 (2H, m), 3.75-3.79 (1H, m), 4.00-4.05 (1H, m), 4.09 (1H, br s), 4.32 (2H, br s), 4.63 (2H, d, J = 46.9 Hz), 6.15 (2H, dd, J = 51.1, 7.5 Hz), 7.10 (1H, dd, J = 11.4, 9.0 Hz), 7.49 (1H, dd, J = 6.9, 2.6 Hz), 7.98-8.03 (1H, m), 8.29 (1H, s), 9.08 (1H, s), 9.50 (1H, s).
【実施例２】
【００４４】
化合物Ｉ−００８の合成
【化２９】
2021522194.tif 000031
工程１：化合物８−２の合成
既知の手順に従って調製した化合物８−１（４．１０ｇ、３６．６ｍｍｏｌ）およびフェニルイソシアネート（１２．０ｍｌ、１１０ｍｍｏｌ）のトルエン（８０ｍｌ）溶液に、２−（２−ニトロエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（９．６２ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．３２０ｍｌ、１．８３ｍｍｏｌ）のトルエン（３０ｍｌ）溶液を１１０℃で加えた。還流温度で２時間攪拌した後、反応混合液に、ＤＩＰＥＡ（０．６３９ｍｌ、３．６６ｍｍｏｌ）およびフェニルイソシアネート（１２．０ｍｌ、１１０ｍｍｏｌ）を加えた。還流温度で４時間攪拌した後、反応混合液を室温に冷却した。混合液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを１０％から３０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物８−２（８．０５ｇ、２９．９ｍｍｏｌ、８２％）を橙色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.41 (3H, dd, J = 6.3, 1.5 Hz), 1.60-1.74 (5H, m), 1.78-1.86 (2H, m), 2.17-2.21 (1H, m), 3.53-3.57 (1H, m), 3.82-3.94 (1H, m), 4.25 (1H, dd, J = 12.5, 6.9 Hz), 4.37-4.41 (1H, m), 4.50-4.59 (2H, m), 4.70-4.76 (1H, m), 5.07-5.11 (1H, m).
工程２：化合物８−３の合成
化合物８−２（８．０５ｇ、２９．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（８１ｍｌ）溶液に、ＰＰＴＳ（１．５０ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。６０℃で２時間攪拌した後、反応混合液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを１０％から８０％で溶出した。集めた画分を蒸発させて、化合物８−３（４．４６ｇ、２９．９ｍｍｏｌ、８１％）を茶色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.44 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.83-1.91 (1H, m), 2.21-2.25 (1H, m), 2.47-2.50 (1H, m), 4.41 (1H, d, J = 10.9 Hz), 4.51 (2H, dd, J = 13.9, 6.7 Hz), 4.55-4.63 (1H, m), 5.06-5.10 (1H, m).
工程３：化合物８−４の合成
化合物８−３（４．９３ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４９ｍｌ）溶液に、９０％ＤＡＳＴ（５．８６ｍｌ、３９．９ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。反応混合液を室温で２時間攪拌し、炭酸カリウム水溶液で処理した。混合液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを１０％から３０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物８−４（４．５０ｇ、２４．１ｍｍｏｌ、９０％）を黄色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.43 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.85-1.92 (1H, m), 2.25 (1H, d, J = 15.3 Hz), 4.39 (1H, dd, J = 11.0, 3.0 Hz), 4.54-4.58 (1H, m), 5.16-5.27 (3H, m).
工程４：化合物８−５の合成
化合物８−４（４．５０ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４５ｍｌ）溶液に、ＤＩＢＡＬ（１．０３ｍｏｌ／Ｌのヘキサン溶液、２４．５ｍｌ、１０．９ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。同温度で２０分間攪拌した後、反応混合液にロッシェル塩を加えた。室温で３時間攪拌した後、混合液に２ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ（ｐＨ＝４）を加えた。混合液にＮａＣｌを加え、次いでＣＨ２Ｃｌ２およびＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを３０％から５０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物８−５（２．６５ｇ、１４．０ｍｍｏｌ、５８％）を白色固体のジアステレオマー混合物として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.30 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.76-1.84 (1H, m), 2.11-2.15 (1H, m), 3.06 (1H, t, J = 7.7 Hz), 3.14 (1H, d, J = 4.5 Hz), 3.83-3.91 (1H, m), 4.71-4.74 (1H, m), 4.77 (1H, dd, J = 7.1, 4.7 Hz), 5.16-5.26 (2H, m).
工程５：化合物８−６の合成
化合物８−５（２．５５ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン（１０．８ｍｌ、６７．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４１ｍｌ）およびＭｅＣＮ（４１ｍｌ）溶液に、ＢＦ３−ＯＥｔ２（８．５６ｍｌ、６７．５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。同温度で４０分間攪拌した後、反応混合液を炭酸ナトリウム水溶液で処理した。水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、化合物８−６を黄色オイルとして得、精製することなしに次工程に使用した。
工程６：化合物８−７の合成
１−ブロモ−２−フルオロベンゼン（６．１１ｇ、３４．９ｍｍｏｌ）のトルエン（１２８ｍＬ）およびＴＨＦ（１６ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．６４Ｍのｎ−ヘキサン溶液、２１．３ｍＬ、３４．９ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、反応混合液を同温度で５分間攪拌した。反応混合液にＢＦ３−ＯＥｔ２（１．７７ｍｌ、１４．０ｍｍｏｌ）を加えた。同温で１０分間攪拌した後、混合液に、粗化合物８−６のＴＨＦ（１６ｍｌ）およびトルエン（３２ｍｌ）溶液を−７８℃で加え、反応混合液を同温度で１５分間攪拌した。反応混合液に、ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを０％から２０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物８−７（３．１９ｇ、１１．８ｍｍｏｌ、８５％）を黄色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.18 (3H, d, J = 6.1 Hz), 1.45-1.54 (1H, m), 1.91-1.94 (1H, m), 2.89-2.95 (1H, m), 3.58-3.66 (1H, m), 3.68-3.76 (1H, m), 3.92-3.93 (1H, m), 4.15-4.21 (1H, m), 4.49 (1H, dd, J = 48.2, 10.4 Hz), 5.03 (1H, dd, J = 46.9, 10.4 Hz), 6.50 (1H, br s), 7.04-7.10 (1H, m), 7.19-7.23 (1H, m), 7.29-7.34 (1H, m), 7.90-7.94 (1H, m).
工程７：化合物８−８の合成
化合物８−７（３．１９ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（３１．９ｍｌ）溶液に、Ｚｎ（７．７４ｇ、１１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。６０℃で２時間攪拌した後、反応混合液を室温に冷却し、セライト（登録商標）パッドでろ過した。ろ液を炭酸カリウム水溶液で処理し、混合液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮して、化合物８−８（３．０７ｇ）を得、それ以上精製することなしに次反応に使用した。
工程８：化合物８−９の合成
粗化合物８−８（１１．３ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０．７ｍｌ）溶液に、ベンゾイルイソチオシアネート（１．６７ｍｌ、１２．５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。室温で１４時間攪拌した後、反応混合液にＥＤＣ−ＨＣｌ（４．３４ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）を加えた。４０℃で５時間攪拌した後、反応混合液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ＣＨＣｌ３／ＡｃＯＥｔを２０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物８−９（３．７３ｇ、９．３２ｍｍｏｌ、８２％）を黄色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.20 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.50 (1H, td, J = 10.0, 4.8 Hz), 2.10-2.14 (1H, m), 2.83-2.86 (1H, m), 3.80 (1H, t, J = 11.7 Hz), 3.86-3.94 (1H, m), 4.07 (1H, dd, J = 12.7, 6.1 Hz), 4.36 (1H, br s), 4.70-4.82 (1H, m), 4.92 (1H, dd, J = 46.2, 9.5 Hz), 7.16 (1H, dd, J = 12.3, 8.3 Hz), 7.20-7.24 (1H, m), 7.38-7.46 (4H, m), 7.50-7.54 (1H, m), 8.27-8.29 (2H, m), 12.13 (1H, br s).
工程９：化合物８−１０の合成
化合物８−９（３．７３ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３７ｍｌ）およびＴＨＦ（３７ｍｌ）溶液に、ヒドラジン水和物（４．５３ｍｌ、９３．０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。同温で１４時間攪拌した後、反応混合液を濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを４０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物８−１０（２．３０ｇ、７．７７ｍｍｏｌ、８３％）を白色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.16 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.37-1.44 (1H, m), 1.82-1.77 (1H, m), 2.64-2.68 (1H, m), 3.65-3.73 (2H, m), 4.00-4.04 (2H, m), 4.25 (2H, br s), 4.59-4.71 (2H, m), 7.04 (1H, dd, J = 12.3, 8.0 Hz), 7.14-7.17 (1H, m), 7.29-7.31 (1H, m), 7.43-7.47 (1H, m).
工程１０：化合物８−１１の合成
化合物８−１０（２．３０ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（１２．６ｍｌ）溶液に、硫酸（３．１０ｍｌ、５８．２ｍｍｏｌ）を−１７℃で加えた。同温度で１０分間攪拌した後、反応混合液にＨＮＯ３（０．５２０ｍｌ、１１．６ｍｍｏｌ）を加えた。同温度で２０分間攪拌した後、反応混合液をＫ２ＣＯ３水溶液で処理し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、減圧下で濃縮して、化合物８−１１（２．８３ｇ）を得、それ以上精製することなしに次反応に使用した。
工程１１：化合物８−１２の合成
粗化合物８−１１（２．８３ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ−Ｃ（５６６ｍｇ）のＭｅＯＨ（８５ｍｌ）溶液を、Ｈ２雰囲気下、室温で攪拌した。同温で２時間攪拌した後、混合液をセライト（登録商標）パッドでろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。残渣をＡｃＯＥｔで粉末化し、次いで得られた固体を集め、ＡｃＯＥｔで洗浄し、減圧下で乾燥して、化合物８−１２（１．５０ｇ、４．８３ｍｍｏｌ、６２％）を白色固体として得た。ろ液を濃縮し、次いで残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲルＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製して、化合物８−１２（３７４ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、１６％）を白色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.16 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.38-1.45 (1H, m), 1.78-1.83 (1H, m), 2.62-2.67 (1H, m), 3.58 (2H, br s), 3.62-3.73 (2H, m), 3.99-4.03 (1H, m), 4.07 (1H, br s), 4.23 (2H, br s), 4.51-4.71 (2H, m), 6.52-6.56 (1H, m), 6.74 (1H, dd, J = 6.7, 2.9 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 11.8, 8.5 Hz).
工程１２：化合物Ｉ−００８の合成
化合物８−１２（５０．１ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３．０ｍｌ）溶液に、５−（フルオロメトキシ）ピラジン−２−カルボン酸（２７．７ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）および２ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ（０．０８０ｍＬ、０．１７７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合液に、ＥＤＣ−ＨＣｌ（３３．９ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）を同温度で加えた。室温で３０分間攪拌した後、反応混合液をＮａＨＣＯ３水溶液で処理した。水層をＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよび食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを５０％から１００％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮した。残渣をＡｃＯＥｔ／ヘキサンで粉砕して、化合物８−１３（４５．５ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ、６１％）を白色固体として得た。
MS (メソッドB) : m/z = 466 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) δ: 1.17 (3H, d, J = 6.0 Hz), 1.40-1.47 (1H, m), 1.80-1.84 (1H, m), 2.68-2.73 (1H, m), 3.65-3.74 (2H, m), 4.01-4.08 (2H, m), 4.32 (2H, br s), 4.64 (2H, d, J = 47.2 Hz), 6.07-6.23 (2H, m), 7.10 (1H, dd, J = 11.4, 8.7 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 6.8, 2.8 Hz), 7.98-8.02 (1H, m), 8.29 (1H, d, J = 1.3 Hz), 9.08 (1H, d, J = 1.3 Hz), 9.51 (1H, br s).
【実施例３】
【００４５】
化合物Ｉ−００９の合成
【化３０】
2021522194.tif 000032
工程１：化合物９−５の合成
化合物９−５は、上記プロトコル（実施例７の工程１から工程４）と類似の方法で化合物９−１から合成した。
工程２：化合物９−６の合成
化合物９−５（８．８５ｇ、５０．５０ｍｍｏｌ）およびアリルトリメチルシラン（２８．９０ｇ、２５３．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１７７ｍｌ）およびＭｅＯＨ（１７７ｍｌ）混合溶液に、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（３２．０ｍｌ、２５３．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合液を室温で１時間攪拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理した。混合液をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを３０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物９−６（６．４３ｇ、３２．２８ｍｍｏｌ、６４％）を無色オイルとして得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 2.04-2.07 (2H, m), 2.25-2.32 (1H, m), 2.50 (1H, d, J = 16.2 Hz), 2.98 (1H, dd, J = 9.6, 7.7 Hz), 3.29-3.34 (1H, m), 3.59 (1H, td, J = 11.1, 4.6 Hz), 3.91-3.95 (1H, m), 4.57-4.60 (1H, m), 5.05-5.26 (4H, m), 5.82-5.92 (1H, m).
工程３：化合物９−７の合成
化合物９−７は、上記プロトコル（実施例１の工程７）と同様の方法で調製した（収率：６３％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.78-1.89 (2H, m), 2.33-2.41 (1H, m), 2.58-2.67 (2H, m), 3.53 (1H, td, J = 11.0, 5.1 Hz), 3.77 (2H, ddd, J = 11.0, 7.4, 5.1 Hz), 3.95 (1H, dd, J = 7.4, 3.4 Hz), 4.48 (1H, dd, J = 48.9, 11.0 Hz), 5.08-5.22 (3H, m), 5.93-6.03 (1H, m), 6.50 (1H, d, J = 3.1 Hz), 7.04-7.07 (1H, m), 7.21 (1H, td, J = 7.9, 1.8 Hz), 7.29-7.35 (1H, m), 7.94 (1H, td, J = 7.9, 1.8 Hz).
工程４：化合物９−８の合成
化合物９−８は、上記プロトコル（実施例１の工程８）と同様の方法で調製した（収率：未精製）。
MS (メソッドB) : m/z = 298 [M+H]+.
工程５：化合物９−９の合成
化合物９−９は、上記プロトコル（実施例１の工程９）と同様の方法で調製した（収率：７０％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.76-1.84 (1H, m), 2.01-2.06 (1H, m), 2.38-2.45 (1H, m), 2.59 (2H, dt, J = 13.6, 5.5 Hz), 3.84 (3H, tt, J = 13.6, 5.5 Hz), 4.41 (1H, d, J = 2.8 Hz), 4.90-5.00 (2H, m), 5.17-5.20 (2H, m), 5.92-6.03 (1H, m), 7.12-7.24 (2H, m), 7.38-7.46 (4H, m), 7.53-7.58 (1H, m), 8.28 (2H, t, J = 4.1 Hz), 12.10 (1H, s).
工程６：化合物９−１０の合成
化合物９−９（６．４０ｇ、１５．０１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２２４ｍｌ）溶液中に−７８℃でＯ３をバブリングさせた。１．５時間後、反応温度を徐々に室温まで上げながら、１．５時間、この溶液中にＮ２をバブリングさせた。ＰＰｈ３（９．０５ｇ、３４．５０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合液を室温で攪拌した。１時間後、ＭｅＯＨ（６４ｍｌ）およびＮａＢＨ４（１．７０ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合液を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。混合液をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを７０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物９−１０（４．８４ｇ、１１．２４ｍｍｏｌ、７５％）を白色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.78-1.97 (2H, m), 2.08 (1H, t, J = 1.8 Hz), 2.41-2.44 (1H, m), 2.59 (1H, dd, J = 10.3, 2.4 Hz), 3.84-3.89 (5H, m), 4.04 (1H, t, J = 10.3 Hz), 4.41 (1H, d, J = 2.4 Hz), 4.91 (2H, d, J = 46.7 Hz), 7.17 (1H, dd, J = 12.4, 8.0 Hz), 7.21-7.25 (1H, m), 7.38-7.54 (5H, m), 8.28 (2H, t, J = 4.3 Hz), 12.09 (1H, s).
工程７：化合物９−１１の合成
化合物９−１０（４．４１ｇ、１０．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８８ｍｌ）溶液に、ＰＰｈ３（５．３７ｇ、２０．４９ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１．４０ｇ、２０．４９ｍｍｏｌ）およびヨウ素（５．２０ｇ、２０．４９ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合液を同温度で１時間攪拌し、２％ＮａＨＳＯ３水溶液で処理した。混合液をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムに付し、ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃを２０％で溶出した。集めた画分を減圧下で濃縮し、化合物９−１１（５．２２ｇ、９．６６ｍｍｏｌ、９４％）を白色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.75-1.87 (1H, m), 2.07-2.16 (2H, m), 2.23-2.31 (1H, m), 2.52 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.35-3.39 (2H, m), 3.78-3.84 (3H, m), 4.40 (1H, d, J = 2.8 Hz), 4.90 (2H, d, J = 46.7 Hz), 7.16 (1H, dd, J = 12.5, 8.0 Hz), 7.23 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.42-7.51 (5H, m), 8.29 (2H, d, J = 7.3 Hz), 12.13 (1H, s).
工程８：化合物９−１２の合成
化合物９−１２は、上記プロトコル（実施例１の工程１１）と同様の方法で調製した（収率：９８％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.84-1.88 (1H, m), 2.05-2.07 (1H, m), 2.70 (1H, dd, J = 10.3, 1.8 Hz), 3.85-3.97 (2H, m), 4.13-4.18 (1H, m), 4.43 (1H, d, J = 2.8 Hz), 4.70-4.97 (2H, m), 5.54 (2H, dd, J = 38.6, 13.7 Hz), 6.00-6.09 (1H, m), 7.16-7.21 (2H, m), 7.38-7.47 (4H, m), 7.53 (1H, tt, J = 7.3, 1.7 Hz), 8.29-8.30 (2H, m), 12.13 (1H, s).
工程９：化合物９−１３の合成
化合物９−１３は、上記プロトコル（実施例２の工程１）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 415 [M+H]+.
工程１０：化合物９−１４の合成
化合物９−１４は、上記プロトコル（実施例１の工程１５）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 311 [M+H]+.
工程１１：化合物９−１５の合成
化合物９−１５は、上記プロトコル（実施例１の工程１６）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 356 [M+H]+.
工程１２：化合物９−１６の合成
化合物１６は、上記プロトコル（実施例１の工程１７）と同様の方法で調製した。粗生成物を超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（キラルパック（登録商標）ＩＣ；４０％エタノール（０．１％のジエチルアミンを含む））により精製して、化合物９−１６（収率：３６％、４工程）を得た。
MS (メソッドB) : m/z = 326 [M+H]+.
工程１３：化合物Ｉ−００９の合成
化合物Ｉ−００９は、上記プロトコル（実施例１の工程１８）と類似の方法で調製した（収率：７７％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.06 (3H, t, J = 7.2 Hz), 1.56-1.89 (4H, m), 2.41 (1H, d, J = 10.2 Hz), 3.61-3.71 (3H, m), 4.12 (1H, s), 4.39 (2H, br s), 4.66-4.78 (2H, m), 6.15 (2H, dd, J = 51.1, 9.3 Hz), 7.09 (1H, dd, J = 10.9, 9.3 Hz), 7.46 (1H, dd, J = 6.8, 2.3 Hz), 7.99-8.00 (1H, m), 8.27 (1H, s), 9.06 (1H, s), 9.50 (1H, s).
【実施例４】
【００４６】
化合物Ｉ−０１０の合成
【化３１】
2021522194.tif 000033
工程１：化合物１０−２の合成
化合物１０−２は、上記プロトコル（実施例７の工程５）と同様の方法で調製した（収率：７７％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.79-1.84 (1H, m), 2.05-2.08 (1H, m), 2.23-2.25 (1H, m), 2.87 (1H, dd, J = 10.3, 2.5 Hz), 3.75-3.99 (5H, m), 4.45 (1H, d, J = 2.5 Hz), 4.93 (2H, dd, J = 46.7, 2.5 Hz), 7.16 (1H, dd, J = 12.3, 8.0 Hz), 7.23 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.38-7.55 (4H, m), 7.67 (1H, dt, J = 12.3, 4.3 Hz), 8.27 (2H, t, J = 4.3 Hz), 12.10 (1H, s).
工程２：化合物１０−３の合成
化合物１０−３は、上記プロトコル（実施例３の工程１）と同様の方法で調製した（収率：３２％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.85-1.88 (1H, m), 2.04-2.06 (1H, m), 2.97 (1H, dd, J = 10.4, 1.9 Hz), 3.90-3.97 (3H, m), 4.48 (1H, s), 4.78-4.98 (4H, m), 7.17 (1H, dd, J = 11.9, 8.2 Hz), 7.22-7.24 (1H, m), 7.41-7.45 (4H, m), 7.53 (1H, t, J = 7.3 Hz), 8.27 (2H, d, J = 7.3 Hz), 12.10 (1H, s).
工程３：化合物１０−４の合成
化合物１０−４は、上記プロトコル（実施例１の工程１５）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 315 [M+H]+.
工程４：化合物１０−５の合成
化合物１０−５は、上記プロトコル（実施例１の工程１６）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 360 [M+H]+.
工程５：化合物１０−６の合成
化合物１０−６は、上記プロトコル（実施例１の工程１７）と同様の方法で調製した。粗生成物を超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（キラルパック（登録商標）ＩＣ；４０％イソプロパノール（０．１％のジエチルアミンを含む））により精製して、化合物１０−６（収率：５０％）を得た。
MS (メソッドB) : m/z = 330 [M+H]+.
工程６：化合物Ｉ−０１０の合成
化合物１０−７は、上記プロトコル（実施例１の工程１８）と同様の方法で調製した（収率：７１％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.73-1.84 (2H, m), 2.75-2.77 (1H, m), 3.75-3.87 (3H, m), 4.19 (1H, d, J = 2.5 Hz), 4.41 (2H, s), 4.54-4.92 (4H, m), 6.15 (2H, dd, J = 51.1, 8.3 Hz), 7.10 (1H, dd, J = 11.3, 8.8 Hz), 7.54 (1H, dd, J = 6.8, 2.8 Hz), 7.95 (1H, dt, J = 8.8, 2.8 Hz), 8.28 (1H, d, J = 1.3 Hz), 9.07 (1H, d, J = 1.3 Hz), 9.50 (1H, s).
【実施例５】
【００４７】
化合物Ｉ−０１１の合成
【化３２】
2021522194.tif 000034
工程１：化合物１１−２の合成
化合物１１−２は、上記プロトコル（実施例１の工程１３）と同様の方法で調製した（収率：８８％）。
MS (方法B) : m/z = 527 [M+H]+.
工程２：化合物１１−３の合成
化合物１１−３は、上記プロトコル（実施例１の工程１４）と同様の方法で調製した（収率：７５％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.47 (3H, d, J = 5.8 Hz), 1.77-1.85 (1H, m), 2.02-2.06 (1H, m), 2.46 (1H, d, J = 9.9 Hz), 3.78-3.91 (3H, m), 4.39 (1H, d, J = 2.5 Hz), 4.84-4.99 (2H, m), 7.16 (1H, dd, J = 12.3, 8.2 Hz), 7.23 (1H, td, J = 7.6, 1.0 Hz), 7.38-7.46 (4H, m), 7.50-7.54 (1H, m), 8.28 (2H, t, J = 4.3 Hz), 12.10 (1H, s).
工程３：化合物１１−４の合成
化合物１１−４は、上記プロトコル（実施例１の工程１５）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 297 [M+H]+.
工程４：化合物１１−５の合成
化合物１１−５は、上記プロトコル（実施例１の工程１６）と同様の方法で調製した。生成物は精製することなしに次工程に使用したため、収率は決定されなかった。
MS (メソッドB) : m/z = 342 [M+H]+
工程５：化合物１１−６の合成
化合物１１−６は、上記プロトコル（実施例1の工程１７）と同様の方法で調製した。粗生成物を超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（キラルパック（登録商標）ＩＣ；４０％エタノール（０．１％のジエチルアミンを含む））により精製して、化合物１１−６（収率：３２％、３工程）を得た。
MS (メソッドB) : m/z = 312 [M+H]+
工程６：化合物Ｉ−０１１の合成
化合物１１−８は、上記プロトコル（実施例１の工程１８）と同様の方法で調製した（収率：７１％）。
1H NMR (CDCl3) δ: 1.45 (3H, d, J = 5.8 Hz), 1.73 (2H, s), 2.32 (1H, d, J = 9.9 Hz), 3.64-3.79 (3H, m), 4.11 (1H, s), 4.59-4.76 (4H, m), 6.15 (2H, dd, J = 51.1, 9.2 Hz), 7.09 (1H, dd, J = 10.9, 9.4 Hz), 7.50 (1H, t, J = 3.3 Hz), 7.98-7.99 (1H, m), 8.25 (1H, s), 9.05 (1H, s), 9.51 (1H, s).
【００４８】
上記と同様にして以下の化合物を合成する。表中、ｔＲはＬＣ／ＭＳ保持時間（分）を表す。
【００４９】
【表１】
2021522194.tif 000035
【００５０】
【表２】
2021522194.tif 000036
【００５１】
【表３】
2021522194.tif 000037
【００５２】
【表４】
2021522194.tif 000038
【００５３】
【表５】
2021522194.tif 000039
【００５４】
【表６】
2021522194.tif 000040
【００５５】
【表７】
2021522194.tif 000041
【００５６】
【表８】
2021522194.tif 000042
【００５７】
【表９】
2021522194.tif 000043
【００５８】
【表１０】
2021522194.tif 000044
【００５９】
【表１１】
2021522194.tif 000045
【００６０】
【表１２】
2021522194.tif 000046
【００６１】
【表１３】
2021522194.tif 000047
【００６２】
【表１４】
2021522194.tif 000048
【００６３】
以下に、本発明化合物の試験例を記載する。
薬理例
本発明で提供される化合物は、ｂｅｔａ−ｓｉｔｅ  ＡＰＰ−ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  １（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。アスパラギン酸プロテアーゼであるＢＡＣＥ１の阻害は、アルツハイマー病（ＡＤ）の治療に適切であると考えられている。βアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からのβアミロイドペプチド（Ａβ）の産生および蓄積は、ＡＤの発症および進行に重要な役割を果たすと考えられている。ＢＡＣＥ１およびγセクレターゼそれぞれによるＡβドメインのＮ−およびＣ−末端での一連の切断により、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からＡβが産生される。
本発明化合物は、ＢＡＣＥ２に比較してＢＡＣＥ１へ選択的に結合し、ＢＡＣＥ２に比較してＢＡＣＥ１の酵素活性を阻害することが可能であり、ＢＡＣＥ２に比較してＢＡＣＥ１に対して選択的に効果を有することが予想される。下記の競合的放射性リガンド結合生化学アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づく生化学アッセイ、および細胞αＬｉｓａアッセイは該化合物の同定に適切であり、これらを利用して該阻害剤の挙動を試験する。
（試験例１：ＢＡＣＥ１およびＢＡＣＥ２競合的放射性リガンド結合生化学アッセイ）
ＢＡＣＥ２に対するＢＡＣＥ１酵素選択性を探索するために、各精製酵素への結合親和性（Ｋｉ）を競合的放射性リガンド結合アッセイ、すなわちトリチウム標識非選択的ＢＡＣＥ１／ＢＡＣＥ２阻害剤を用いた競合において決定した。
簡潔には、試験管中で、対象の化合物を放射性リガンドおよびＢＡＣＥ１またはＢＡＣＥ２含有するＨＥＫ２９３由来膜と合わせた。競合的結合反応をｐＨ６．２で行い、平衡状態に達するまで室温でインキュベートした。その後、Ｂｒａｎｄｅｌｌ  ９６ハーベスターによるろ過で遊離放射性リガンドを結合放射性リガンドから分離した。フィルターを洗浄用バッファーで４回洗浄し、フィルターシートをシンチレーションバイアル中に打ち抜いた。Ｕｌｔｉｍａ  Ｇｏｌｄシンチレーションカクテルを加え、サンプルを振盪させた。翌日に、Ｔｒｉｃａｒｂシンチレーションカウンターでバイアルを計数して、結合放射性リガンドの壊変毎分（ｄｐｍ）を得た。
％ＣＴＬ＝（サンプル／ＨＣ）＊１００を算出し、式中、ＨＣはＨｉｇｈ  ｃｏｎｔｒｏｌ、すなわち、放射性リガンドの総結合であり、試験化合物の種々の用量のデータ点を通る曲線に適合させた。ｐＩＣ５０またはＩＣ５０を算出し、式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（［ＲＬ］／Ｋｄ））によってＫｉに変換した。、式中、［ＲＬ］は放射性リガンドの使用濃度であり、Ｋｄは放射性リガンド−膜複合体で決められた解離定数である。
（試験例２）
（１）ＢＡＣＥ１ＦＲＥＴ生化学アッセイ
このアッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイ用の基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）βセクレターゼ切断部位の「スウェーデン」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ変異を含有するＡＰＰ由来の１３個のアミノ酸ペプチドである。この基質は２つの蛍光団も含有する。（７−メトキシクマリン−４−）酢酸（Ｍｃａ）は、励起波長３２０ｎｍおよび発光４０５ｎｍの蛍光性ドナーであり、２，４−ジニトロフェノール（Ｄｎｐ）は独自の消光アクセプターである。この２つの団の間の距離は、光励起の際、共鳴エネルギー移動でアクセプターによりドナー蛍光エネルギーが有意に消光されるように選択された。ＢＡＣＥ１によって切断されると、蛍光団Ｍｃａが消光団Ｄｎｐから分離され、ドナーの全蛍光収率が回復する。蛍光収率の増加は、タンパク質分解率に線形に相関する。
簡潔にいえば、３８４−ウェル形式で最終濃度０．０４μｇ／ｍＬの組み換えＢＡＣＥ１タンパク質を、化合物の非存在下または存在下、インキュベーション緩衝液（最終濃度：３３．３ｍＭクエン酸緩衝液  ｐＨ５．０、０．０３３％ＰＥＧ、３％ＤＭＳＯ）中で２０μＭ基質とともに室温で４５０分間インキュベートした。次に、Ｔ＝０’〜１２０’およびＴ＝４５０’（励起３２０ｎｍ、および発光４０５ｎｍ）で蛍光測定して、タンパク質分解量を直接測定した。結果を、Ｔ４５０およびＴｘ間の差としてＲＦＵ（相対蛍光単位）で表した（Ｔｘは、０〜１２０分の反応速度に応じて選択する）。
最適曲線を、二乗法の最小和によって、％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ対化合物濃度のプロットに適合させた。これにより、ＩＣ５０値（５０％の阻害活性を生じさせる阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝Ｌｏｗ  ｃｏｎｔｒｏｌ中央値
＝Ｌｏｗ  Ｃｏｎｔｒｏｌ：酵素が非存在下での反応
ＨＣ＝Ｈｉｇｈ  ｃｏｎｔｒｏｌ中央値
＝Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｒｏｌ：酵素が存在下での反応
％Ｅｆｆｅｃｔ＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００］
％Ｃｏｎｔｒｏｌ＝（サンプル／ＨＣ）＊１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００
本発明化合物は、ＢＡＣＥ１阻害活性を有することが予想され、化合物がＢＡＣＥ１受容体を阻害できるのに十分である。
具体的には、上記プロトコルにより、ＩＣ５０は、好ましくは５０００ｎＭ以下、より好ましくは１０００ｎＭ以下、さらに好ましくは１００ｎＭ以下である。
（２）ＢＡＣＥ２ＦＲＥＴ生化学アッセイ
このアッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイ用の基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）βセクレターゼ切断部位の「スウェーデン」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ変異を含有する。この基質は２つの蛍光団も含有する。（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）は、励起波長３２０ｎｍおよび発光４０５ｎｍの蛍光性ドナーであり、２，４−ジニトロフェノール（Ｄｎｐ）は独自の消光アクセプターである。この２つの団の間の距離は、光励起の際、共鳴エネルギー移動でアクセプターによりドナー蛍光エネルギーが有意に消光されるように選択される。βセクレターゼによって切断されると、蛍光団Ｍｃａが消光団Ｄｎｐから分離され、ドナーの全蛍光収率が回復する。蛍光収率の増加は、タンパク質分解率に線形に相関する。
簡潔にいえば、３８４−ウェル形式で最終濃度０．４μｇ／ｍＬの組み換えＢＡＣＥ２タンパク質を、化合物の非存在下または存在下、インキュベーション緩衝液（最終濃度：３３．３ｍＭクエン酸緩衝液  ｐＨ５．０、０．０３３％ＰＥＧ、３％ＤＭＳＯ）中で１０μＭ基質とともに室温で４５０分間インキュベートした。次に、Ｔ＝０およびＴ＝４５０（励起３２０ｎｍ、および発光４０５ｎｍ）で蛍光測定して、タンパク質分解量を直接測定した。結果を、Ｔ４５０およびＴ０間の差としてＲＦＵ（相対蛍光単位）で表した。
最適曲線を、二乗法の最小和によって、％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ対化合物濃度のグラフに適合させた。これにより、ＩＣ５０値（５０％の阻害活性を生じさせる阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝Ｌｏｗ  ｃｏｎｔｒｏｌ中央値
＝Ｌｏｗ  Ｃｏｎｔｒｏｌ：酵素が非存在下での反応
ＨＣ＝Ｈｉｇｈ  ｃｏｎｔｒｏｌ中央値
＝Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｒｏｌ：酵素が存在下での反応
％Ｅｆｆｅｃｔ＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００］
％Ｃｏｎｔｒｏｌ＝（サンプル／ＨＣ）＊１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００
以下の例示化合物を本質的に上記のとおりに試験し、以下の活性を示した：
【００６４】
【表１５】
2021522194.tif 000049
【００６５】
【表１６】
2021522194.tif 000050
【００６６】
（試験例３−１：ラット脳内βアミロイド減少作用）
本発明化合物を０．５％メチルセルロースに懸濁させ、最終濃度２ｍｇ／ｍＬとなるように調整し、雄性Ｃｒｌ：ＳＤラット（７〜９週齢）に対し、１０ｍｇ／ｋｇとなるように経口投与する。媒体対照群は０．５％メチルセルロースのみを投与し、各群３〜８匹の動物で投与試験を実施する。投与３時間後に脳を摘出し、大脳半球を摘出し、その重量を測定し、速やかに液体窒素中にて凍結させ、抽出日まで−８０℃にて保存する。凍結した大脳半球を氷冷下テフロン（登録商標）製ホモゲナイザーに移し、重量の４倍容量の抽出バッファー（１％ＣＨＡＰＳ（｛３−［（３−クロルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート｝）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（Ｒｏｃｈｅ社製）プロテアーゼ阻害剤含有）を加え、上下動を繰り返し２分間ホモゲナイズして可溶化する。懸濁液を遠心用のチューブに移し、３時間以上氷上にて放置し、その後、１００，０００ｘｇ、４℃、２０分間遠心する。遠心後、上清をβアミロイド４０測定用のＥＬＩＳＡプレート（和光純薬工業製：製品番号２９４−６２５０１）に移す。ＥＬＩＳＡ測定は添付の説明書に従い行う。減少作用は各試験の基剤対照群の脳内βアミロイド４０レベルに対する比として算出する。
【００６７】
（試験例３−２：マウス脳内βアミロイド減少作用）
本発明化合物を２０％ヒドロキシルベータシクロデキストリンに溶解し、最終濃度２ｍｇ／ｍＬとなるように調整し、Ｃｒｌ：ＣＤ１（ＩＣＲ）雄マウス（６〜８週齢）に対し、１〜１０ｍｇ／ｋｇとなるように経口投与した。媒体対照群は２０％ヒドロキシルベータシクロデキストリンのみを投与し、各群３〜６匹で投与試験を実施した。投与１〜６時間後に脳を摘出し、大脳半球を摘出し、その重量を測定し、速やかに液体窒素中にて凍結させ、抽出日まで-８０℃にて保存した。
凍結した大脳半球を、８倍容量の抽出バッファー（０．４％ＤＥＡ（ジエチルアミン）、５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、Ｃｏｍｐｌｅｔｅプロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ社製）含有）とセラミックビーズが入ったホモジナイズチューブに移し、２０分間氷上でインキュベートした。その後、ＭＰ  ＢＩＯ  ＦａｓｔＰｒｅｐ（登録商標）−２４を用い、Ｌｙｓｉｎｇ  ｍａｔｒｉｘ  Ｄ（１．４ｍｍセラミックビーズ）でホモジナイズした（６ｍ／秒、２０秒間）。次いで、チューブを１分間遠心沈殿させ、上清を遠心用のチューブに移し、２２１，０００ｘｇ、４℃、５０分間遠心した。遠心後、総βアミロイド測定のため、上清をβアミロイドのＮ末端に対する抗体でコートしたＮｕｎｃマキシソープ（登録商標）プレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に移し、４℃で一晩インキュベートした。プレートをＴＢＳ−Ｔ（０．０５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００含有トリス緩衝食塩水）で洗浄し、０．１％カゼインを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解したＨＲＰ標識４Ｇ８をプレートに添加し４℃で１時間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔで洗浄後、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡルミノメーター用化学発光基質（Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）をプレートに添加した。次いで、化学発光をＡＲＶＯ（登録商標）ＭＸ１４２０マルチラベルカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社製）で速やかに測定した。減少作用は各試験の基剤対照群の脳内総βアミロイドに対する比として算出した。
【００６８】
（試験例４−１：ＣＹＰ３Ａ４蛍光ＭＢＩ試験）
ＣＹＰ３Ａ４蛍光ＭＢＩ試験は、代謝反応による化合物のＣＹＰ３Ａ４阻害の増強を調べる試験である。ＣＹＰ３Ａ４酵素（大腸菌発現酵素）により７−ベンジルオキシトリフルオロメチルクマリン（７−ＢＦＣ）が脱ベンジル化され、蛍光を発する代謝物７−ハイドロキシトリフルオロメチルクマリン（７−ＨＦＣ）が生じる。７−ＨＦＣ生成反応を標識反応として試験を実施する。
反応条件は以下のとおりである：基質、５．６μｍｏｌ／Ｌ  ７−ＢＦＣ；プレ反応時間、０または３０分；基質反応時間、１５分；反応温度、２５℃（室温）；ＣＹＰ３Ａ４含量（大腸菌発現酵素）、プレ反応時６２．５ｐｍｏｌ／ｍＬ、反応時６．２５ｐｍｏｌ／ｍＬ（１０倍希釈）；本発明化合物濃度、０．６２５、１．２５、２．５、５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ（６点）。
９６ウェルプレートにプレ反応液として、酵素を含むＫ−Ｐｉ緩衝液（ｐＨ７．４）および本発明化合物溶液をプレ反応の組成で加える。別の９６ウェルプレートにプレ反応液の一部を移し、基質を含むＫ−Ｐｉ緩衝液で１０倍希釈する。補酵素であるＮＡＤＰＨを添加して標識反応を開始する（プレインキュベーション無）。所定時間の標識反応後、アセトニトリル／０．５ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ（トリスヒドロキシアミノメタン）＝４／１（ｖ／ｖ）溶液を加えることによって標識反応を停止した。また残りのプレ反応液にもＮＡＤＰＨを添加してプレ反応を開始する（プレインキュベーション有）。所定時間のプレ反応後、別の９６ウェルプレートに一部を移し、基質を含むＫ−Ｐｉ緩衝液で１０倍希釈して標識反応を開始する。所定時間の標識反応後、アセトニトリル／０．５ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ（トリスヒドロキシアミノメタン）＝４／１（ｖ／ｖ）溶液を加えることによって標識反応を停止した。それぞれの標識反応を行ったプレートにおいて、代謝物である７−ＨＦＣの蛍光値を蛍光プレートリーダーで測定する（Ｅｘ＝４２０ｎｍ、Ｅｍ＝５３５ｎｍ）。
ＤＭＳＯが本発明化合物を溶解する溶媒として用いられるため、本発明化合物溶液の代わりにＤＭＳＯを反応系に添加したサンプルをコントロール（１００％）とした。溶液として加えられた本発明化合物のそれぞれの濃度における残存活性（％）を算出し、濃度と阻害率を用いて、ロジスティックモデルによる逆推定によりＩＣ５０値を算出する。プレインキュベーション無のＩＣ５０値からプレインキュベーション有のＩＣ５０値を引いて求めた差が５μＭ以上の場合を陽性（＋）とした。差が３μＭ以下の場合を陰性（−）とした。
【００６９】
（試験例４−２：ＣＹＰ３Ａ４（ＭＤＺ）ＭＢＩ試験）
ＣＹＰ３Ａ４（ＭＤＺ）ＭＢＩ試験は、化合物のＣＹＰ３Ａ４阻害に関して機序に基づく阻害（ＭＢＩ）能を評価する試験である。ＣＹＰ３Ａ４阻害は、プールされたヒト肝ミクロソームによるミダゾラム（ＭＤＺ）の１−水酸化反応を標識反応として用いて評価する。
反応条件は以下のとおりであった：基質、１０μｍｏｌ／Ｌ  ＭＤＺ；プレ反応時間、０または３０分；基質反応時間、２分；反応温度、３７℃；プールされたヒト肝ミクロソームのタンパク質含量、プレ反応時０．５ｍｇ／ｍＬ、反応時０．０５ｐｍｇ／ｍＬ（１０倍希釈時）；本発明化合物濃度、１、５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ（４点）。
９６ウェルプレートにプレ反応液として、Ｋ−Ｐｉ緩衝液（ｐＨ７．４）中にプールしたヒト肝ミクロソーム、および本発明化合物溶液をプレ反応の組成で加えた。別の９６ウェルプレートにプレ反応液の一部を移し、基質を含むＫ−Ｐｉ緩衝液で１０倍希釈した。補酵素であるＮＡＤＰＨを添加して標識反応を開始した（プレインキュベーション無）。所定時間の標識反応後、メタノール／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）溶液を加えることによって標識反応を停止した。また残りのプレ反応液にもＮＡＤＰＨを添加してプレ反応を開始した（プレインキュベーション有）。所定時間のプレ反応後、別の９６ウェルプレートに一部を移し、基質を含むＫ−Ｐｉ緩衝液で１０倍希釈して標識反応を開始した。所定時間の標識反応後、メタノール／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）溶液を加えることによって標識反応を停止した。３０００ｒｐｍで１５分間遠心した後、上清中の１−ヒドロキシミダゾラムをＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより定量する。
ＤＭＳＯが本発明化合物を溶解した溶媒として用いられるため、本発明化合物溶液の代わりに、ＤＭＳＯを反応系に添加したサンプルをコントロール（１００％）とした。溶液として加えられた本発明化合物のそれぞれの濃度における残存活性（％）を算出し、濃度と阻害率を用いて、ロジスティックモデルによる逆推定によりＩＣ５０値を算出した。「プレインキュベーション無のＩＣ値（０分）／プレインキュベーション有のＩＣ値（３０分）」を、Ｓｈｉｆｔｅｄ  ＩＣ値として算出した。Ｓｈｉｆｔｅｄ  ＩＣ値が１．５以上の場合を陽性とし、Ｓｈｉｆｔｅｄ  ＩＣ値が１．１以下の場合を陰性とした。
【００７０】
【表１７】
2021522194.tif 000051
【００７１】
（試験例５：ＣＹＰ阻害試験）
ＣＹＰ阻害試験は、ヒト肝ミクロソームのＣＹＰ酵素の典型的基質代謝反応に対する本発明化合物の阻害効果を評価する試験である。ヒト主要ＣＹＰ５酵素（ＣＹＰ１Ａ２、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６、および３Ａ４）の標識反応として以下を用いた；７−エトキシレゾルフィンのＯ−脱エチル化（ＣＹＰ１Ａ２）、トルブタミドのメチル−水酸化（ＣＹＰ２Ｃ９）、メフェニトインの４’−水酸化（ＣＹＰ２Ｃ１９）、デキストロメトルファンのＯ脱メチル化（ＣＹＰ２Ｄ６）、およびテルフェナジンの水酸化（ＣＹＰ３Ａ４）。市販のプールされたヒト肝ミクロソームを酵素源として用いた。
反応条件は以下のとおりであった：基質、０．５μｍｏｌ／Ｌ  エトキシレゾルフィン（ＣＹＰ１Ａ２）、１００μｍｏｌ／Ｌ  トルブタミド（ＣＹＰ２Ｃ９）、５０μｍｏｌ／Ｌ  Ｓ−メフェニトイン（ＣＹＰ２Ｃ１９）、５μｍｏｌ／Ｌ  デキストロメトルファン（ＣＹＰ２Ｄ６）、１μｍｏｌ／Ｌ  テルフェナジン（ＣＹＰ３Ａ４）；反応時間、１５分；反応温度、３７℃；酵素、プールされたヒト肝ミクロソーム  ０．２ｍｇ  タンパク質／ｍＬ；本発明化合物濃度、１、５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ（４点）。
９６ウェルプレートに反応溶液として、５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液中に５種の基質、ヒト肝ミクロソーム、および本発明化合物溶液を上記組成で加えた。補酵素であるＮＡＤＰＨをこの９６ウェルプレートに添加して標識反応を開始した。３７℃、１５分間反応させた後、メタノール／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）溶液を添加することで標識反応を停止した。３０００ｒｐｍ、１５分間の遠心操作後、上清中のレゾルフィン（ＣＹＰ１Ａ２代謝物）を蛍光プレートリーダーまたはＬＣ／ＭＳ／ＭＳで定量し、ヒドロキシトルブタミド（ＣＹＰ２Ｃ９代謝物）、４’−ヒドロキシメフェニトイン（ＣＹＰ２Ｃ１９代謝物）、デキストロルファン（ＣＹＰ２Ｄ６代謝物）、およびテルフェナジンアルコール代謝物（ＣＹＰ３Ａ４代謝物）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳで定量した。
ＤＭＳＯが本発明化合物を溶解した溶媒として用いられるため、本発明化合物溶液の代わりに、ＤＭＳＯを反応系に添加したサンプルをコントロール（１００％）とした。本発明化合物のそれぞれの濃度での残存活性（％）を算出し、濃度と阻害率を用いて、ロジスティックモデルによる逆推定によりＩＣ５０値を算出した。
【００７２】
（試験例６：Ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎ  Ａｍｅｓ  ｔｅｓｔ）
凍結保存しているネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ  ＴＡ９８株、およびＴＡ１００株）それぞれ２０μＬを、１０ｍＬの液体栄養培地（２．５％  Ｏｘｏｉｄ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｂｒｏｔｈ  Ｎｏ．２）に接種し、培養液を３７℃にて１０時間、振盪培養する。７．７０〜８．００ｍＬのＴＡ９８株培養液を遠心（２０００×ｇ、１０分間）して培地を除去し、７．７０ｍＬのＭｉｃｒｏ  Ｆ緩衝液（Ｋ２ＨＰＯ４：３．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４：１ｇ／Ｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４：１ｇ／Ｌ、クエン酸三ナトリウム二水和物：０．２５ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０：０．１ｇ／Ｌ）に菌を懸濁し、懸濁液を１２０ｍＬのＥｘｐｏｓｕｒｅ培地（ビオチン：８μｇ／ｍＬ、ヒスチジン：０．２μｇ／ｍＬ、グルコース：８ｍｇ／ｍＬを含むＭｉｃｒｏ  Ｆ緩衝液）に添加する。３．１０〜３．４２ｍＬのＴＡ１００培養液をＥｘｐｏｓｕｒｅ培地１３０ｍＬに添加して、試験菌液を調製する。本発明化合物ＤＭＳＯ溶液（最高用量５０ｍｇ／ｍＬから２〜３倍比で数段階希釈）、陰性対照としてＤＭＳＯ、ＴＡ９８の非代謝活性化条件の陽性対照として５０μｇ／ｍＬの４−ニトロキノリン−１−オキシドＤＭＳＯ溶液、ＴＡ１００の非代謝活性化条件の陽性対照として０．２５μｇ／ｍＬの２−（２−フリル）−３−（５−ニトロ−２−フリル）アクリルアミドＤＭＳＯ溶液、ＴＡ９８の代謝活性化条件の陽性対照として４０μｇ／ｍＬの２−アミノアントラセンＤＭＳＯ溶液、またはＴＡ１００の代謝活性化条件の陽性対照として２０μｇ／ｍＬの２−アミノアントラセンＤＭＳＯ溶液それぞれ１２μＬと試験菌液５８８μＬ（代謝活性化条件では試験菌液４９８μＬとＳ９ｍｉｘ  ９０μＬの混合液）を混和する。混合液を３７℃にて９０分間、振盪培養する。本発明化合物に曝露した菌液４６０μＬを、Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ培地（ビオチン：８μｇ／ｍＬ、ヒスチジン：０．２μｇ／ｍＬ、グルコース：８ｍｇ／ｍＬ、ブロモクレゾールパープル：３７．５μｇ／ｍＬを含むＭｉｃｒｏ  Ｆ緩衝液）２３００μＬに混和し、５０μＬずつマイクロプレート４８ウェル／用量に分注し、３７℃にて３日間、静置培養する。アミノ酸（ヒスチジン）合成酵素をコードする遺伝子の突然変異によって増殖能を獲得した菌を含むウェルは、ｐＨ変化により紫色から黄色に変色する。１用量あたり全４８ウェル中の黄色に変色したウェルを計数し、陰性対照群と比較して変異原性を評価する。変異原性が陰性のものを（−）、陽性のものを（＋）として示す。
【００７３】
（試験例７：溶解性試験）
各本発明化合物の溶解度は、１％ＤＭＳＯ添加条件下で測定した。ＤＭＳＯにて１０ｍｍｏｌ／Ｌ化合物溶液を調製し、ＪＰ−１液（塩化ナトリウム２．０ｇ、および塩酸７．０ｍＬに水を加えて１０００ｍＬとした）、およびＪＰ−２液（リン酸二水素カリウム３．４０ｇおよび無水リン酸水素二ナトリウム３．５５ｇを水に溶かし１０００ｍＬとしたもの１容量に水１容量を加えた）１９８μＬに本発明化合物溶液２μＬをそれぞれ添加した。混合液を２５℃で１６時間静置または室温で１時間振盪させた後、混合液を吸引ろ過した。ろ液をメタノール／水＝１／１（ｖ／ｖ）またはＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（＝１／１／２）により１０または１００倍希釈し、ＬＣ／ＭＳまたは固相抽出（ＳＰＥ）／ＭＳを用いて絶対検量線法によりろ液中の化合物濃度を測定した。
【００７４】
（試験例８：代謝安定性試験）
市販のプールヒト肝ミクロソームと本発明化合物を一定時間反応させ、反応サンプルと未反応サンプルの比較により残存率を算出し、それによって肝臓で代謝される程度を評価した。
ヒト肝ミクロソーム０．５ｍｇタンパク質／ｍＬを含む０．２ｍＬの緩衝液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  塩化カリウム、１０ｍｍｏｌ／Ｌ  塩化マグネシウム）中で、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮＡＤＰＨ存在下で３７℃、０分または３０分間反応させた（酸化的反応）。反応後、メタノール／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）溶液１００μＬに反応液５０μＬを添加、混合し、３０００ｒｐｍで１５分間遠心した。上清中の本発明化合物をＬＣ／ＭＳ／ＭＳまたは固相抽出（ＳＰＥ）／ＭＳにて定量し、反応後の本発明化合物の残存量を、０分反応時の化合物量を１００％として算出した。
【００７５】
【表１８】
2021522194.tif 000052
【００７６】
（試験例９：ｈＥＲＧ試験）
心電図ＱＴ間隔延長リスク評価を目的として、ヒト遅延整流性カリウムイオンチャネル遺伝子（ｈｕｍａｎ  ｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅ）（ｈＥＲＧ）チャネルを発現させたＣＨＯ細胞を用いて、心室再分極過程に重要な役割を果たす遅延整流Ｋ＋電流（ＩＫｒ）に対する本発明化合物の効果を検討した。
全自動パッチクランプシステム（ＱＰａｔｃｈ；Ｓｏｐｈｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ａ／Ｓ）を用い、ホールセルパッチクランプ法により、細胞を−８０ｍＶの膜電位に保持した。−５０ｍＶのリーク電位を与えた後、＋２０ｍＶの脱分極刺激を２秒間、さらに−５０ｍＶの再分極刺激を２秒間与えた際に誘発されるＩＫｒを記録した。
発生する電流が安定した後、本発明化合物を目的の濃度で溶解させた細胞外液（ＮａＣｌ：１４５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＣｌ：４ｍｍｏｌ／Ｌ、ＣａＣｌ２：２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＭｇＣｌ２：１ｍｍｏｌ／Ｌ、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）：１０ｍｍｏｌ／Ｌ、グルコース：１０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝７．４）を室温条件下で、１０分間細胞に適用させた。記録されたＩＫｒから、解析ソフト（ＱＰａｔｃｈ  ａｓｓａｙ  ｓｏｆｔｗａｒｅ；Ｓｏｐｈｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ａ／Ｓ）を使用して、保持膜電位における電流値を基準に最大テール電流の絶対値を測定した。さらに、本発明化合物適用前の最大テール電流に対する阻害率を算出し、媒体適用群（０．１％ジメチルスルホキシド溶液）と比較して、本発明化合物のＩＫｒへの影響を評価した。
以下のデータは、本発明化合物の３μＭにおける阻害を示す。
【００７７】
【表１９】
2021522194.tif 000053
【００７８】
（試験例１０：粉末溶解度試験）
適当な容器に本発明化合物を適量入れた。各容器にＪＰ−１液（塩化ナトリウム２．０ｇ、塩酸７．０ｍＬに水を加えて１０００ｍＬとする）２００μＬ、ＪＰ−２液（リン酸二水素カリウム３．４０ｇおよび無水リン酸水素二ナトリウム３．５５ｇを水に溶かし１０００ｍＬとしたもの１容量に水１容量を加える）２００μＬ、空腹時人工腸液（ｆａｓｔｅｄ  ｓｔａｔｅ  ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ：ＦａＳＳＩＦ）２００μＬ、および摂食時人工腸液（ｆｅｄ  ｓｔａｔｅ  ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ：ＦｅＳＳＩＦ）２００μＬを添加した。試験液添加後に本発明化合物の全量が溶解した場合には、適宜、本発明化合物を追加した。容器を密閉し、３７℃で１時間および／または２４時間振盪した。混合液をろ過し、各ろ液（１００μＬ）にメタノール１００μＬを添加して、ろ液の２倍希釈  
を行った。希釈倍率は、必要に応じて変更してもよい。希釈液に気泡および析出物がないかを確認後、容器を密閉し、振盪した。絶対検量線法によりＨＰＬＣを用いて本発明化合物を定量した。
【００７９】
（試験例１１：薬物動態試験）
経口吸収性の検討実験材料と方法
（１）使用動物：マウスまたはラット
（２）飼育条件：マウスまたはラットは、水道水および固形飼料を自由摂取させた。
（３）用量およびグループ分けの設定：経口投与、または静脈内投与を所定の用量により投与した。グループ分けは以下の通りであった（用量は化合物に依存する）。
経口投与：約１〜３０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝２〜３）
静脈内投与：約０.５〜１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝２〜３）
（４）投与製剤：経口投与には溶液または懸濁液の状態で。静脈内投与には可溶化状態で。
（５）投与方法：経口投与では、フレキシブル経口ゾンデを付けたシリンジにより強制的に投与した。静脈内投与では、注射針を付けたシリンジにより尾静脈から投与した。
（６）評価項目：予定時刻に採血し、本発明化合物の血漿中濃度をＬＣ/ＭＳ/ＭＳを用いて測定した。
（７）統計解析：血漿中本発明化合物濃度推移について、台形法を用いて血漿中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）を算出し、経口投与群と静脈内投与群のＡＵＣから本発明化合物のバイオアベイラビリティ（ＢＡ）を算出した。
【００８０】
（試験例１２：脳移行性試験）
ラットに約０．５ｍｇ／ｍＬ／ｋｇの投与量で本発明化合物を静脈内投与した。３０分後にイソフルラン麻酔下で腹大動脈より全採血により放血死させた。
脳を摘出し、蒸留水で２０〜２５％のそのホモジネートを調製した。
得られた血液は遠心処理後、血漿とした。脳サンプルにはコントロール血漿を１：１で添加した。血漿サンプルにはコントロール脳ホモジネートを１：１で添加した。それぞれのサンプルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて測定した。得られた測定時の面積比（脳／血漿）を脳Ｋｐ値とした。
【００８１】
（試験例１３：Ａｍｅｓ試験）
サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５、ＴＡ１５３７および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ＷＰ２ｕｖｒＡを試験菌株として用い、プレインキュベーション法による非代謝活性化条件下または代謝活性化条件下においてＡｍｅｓ試験を実施して、本発明化合物の遺伝子突然変異誘発性の有無を調べる。
【００８２】
（試験例１４：Ｐ−ｇｐ基質試験）
１．細胞株：
ａ．ＭＤＲ１／ＬＬＣ−ＰＫ１（ベクトン・ディッキンソン）
ｂ．ＬＬＣ−ＰＫ１（ベクトン・ディッキンソン）
２．基準基質：
ａ．ジゴキシン（２μＭ）
方法および手順
１．ＭＤＲ１発現ＬＬＣ−ＰＫ１細胞およびその親細胞をＡ培地（１９９培地（インビトロジェン）に１０％ＦＢＳ（インビトロジェン）、ゲンタマイシン（０．０５ｍｇ／ｍＬ、インビトロジェン）およびハイグロマイシンＢ（１００μｇ／ｍＬ、インビトロジェン）を補充）で３７℃、５％ＣＯ２／９５％Ｏ２ガス下で通常培養した。輸送実験のため、これらの細胞はトランスウェル（商標）インサート（９６ウェル、孔径：０．４μｍ、コースター）に１．４×１０４細胞／インサートの密度で播種し、Ｂ培地（１９９培地に１０％ＦＢＳおよびゲンタマイシン０．０５ｍｇ／ｍＬを補充）をフィーダートレイに添加した。これらの細胞はＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２／９５％Ｏ２ガス、３７℃）でインキュベートし、播種後４８〜７２時間ごとに頂端側および側底側の培地を交換した。これらの細胞を播種後４〜６日で使用した。
２．ＭＤＲ１発現細胞または親細胞を播種した培養インサートの培地を吸引により除き、ＨＢＳＳでリンスした。頂端側（１４０μＬ）または側底側（１７５μＬ）を、基準基質および本発明化合物を含む輸送バッファーで置換し、その後、基準基質および本発明化合物の初期濃度を求めるために，ドナー側の一定分量（５０μＬ）の輸送バッファーを採取した。３７℃で一定時間インキュベーションした後、ドナー側およびレシーバー側の一定分量（５０μＬ）の輸送バッファーを採取した。アッセイは２回または３回繰り返し実施した。
３．一定分量中の基準基質および本発明化合物を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて定量した。
計算
単層のＭＤＲ１発現細胞と親細胞を通過した膜透過量を決定し、膜透過係数（Ｐｅ）をＥｘｃｅｌ  ２００３を用い、以下の式により算出した： 
Ｐｅ（ｃｍ／秒）＝膜透過量（ｐｍｏｌ）／細胞膜面積（ｃｍ２）／初期濃度（ｎＭ）／インキュベーション時間（秒）
ここで、膜透過量は所定時間（秒）のインキュベーション後の基質の透過濃度（ｎＭ、レシーバー側の濃度）に量（ｍＬ）を乗じて算出し、細胞膜面積は０．１４３３（ｃｍ２）とした。
外向きフラックス比（Ｅｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ）は以下の式により算出した：
Ｅｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ＝側底側から頂端側方向のＰｅ／頂端側から側底側方向のＰｅ
正味フラックス（Ｎｅｔ  ｆｌｕｘ）は以下の式により算出した： 
Ｎｅｔ  ｆｌｕｘ＝ＭＤＲ１発現細胞のＥｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ／親細胞のＥｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ
【００８３】
【表２０】
2021522194.tif 000054
【００８４】
（試験例１５：Ｐ−ｇｐ輸送の阻害効果）
材料
１．細胞株： 
ａ．ＭＤＲ１／ＬＬＣ−ＰＫ１（ベクトン・ディッキンソン）
ｂ．ＬＬＣ−ＰＫ１（ベクトン・ディッキンソン）
２．基準基質： 
ａ．［３Ｈ］ジゴキシン（１μＭ）
ｂ．［１４Ｃ］マンニトール（１μＭ）
３．基準阻害物質： 
ベラパミル（１μＭ）
方法および手順
１．ＭＤＲ１発現ＬＬＣ−ＰＫ１細胞およびその親細胞をＡ培地（１９９培地（インビトロジェン）に１０％ＦＢＳ（インビトロジェン）、ゲンタマイシン（０．０５ｍｇ／ｍＬ、インビトロジェン）およびハイグロマイシンＢ（１００μｇ／ｍＬ、インビトロジェン）を補充）で３７℃、５％ＣＯ２／９５％Ｏ２ガス下で通常培養した。輸送実験のため、これらの細胞はトランスウェル（商標）インサート（９６ウェル、孔径：０．４μｍ、コースター）に１．４×１０４細胞／インサートの密度で播種し、Ｂ培地（１９９培地に１０％ＦＢＳおよびゲンタマイシン０．０５ｍｇ／ｍＬを補充）をフィーダートレイに添加した。これらの細胞はＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２／９５％Ｏ２ガス、３７℃）でインキュベートし、播種後４８〜７２時間ごとに頂端側および側底側の培地を交換した。これらの細胞を播種後６〜９日で使用した。
２．ＭＤＲ１発現細胞または親細胞を播種した培養インサートの培地を吸引により除き，ＨＢＳＳでリンスした。頂端側（１５０μＬ）または側底側（２００μＬ）を、基準基質を含み、本発明化合物の存在下または非存在下の輸送バッファーで置換し、その後、基準基質の初期濃度を求めるために、ドナー側の一定分量（５０μＬ）の輸送バッファーを採取した。３７℃で一定時間インキュベーションした後、ドナー側およびレシーバー側の一定分量（５０μＬ）の輸送バッファーを採取した。アッセイは３回繰り返し実施した。
３．一定分量（５０μＬ）の輸送バッファーを５ｍＬのシンチレーションカクテルと混合し、液体シンチレーションカウンターにより放射能を測定した。
計算
単層のＭＤＲ１発現細胞と親細胞を通過した膜透過量を決定し、膜透過係数（Ｐｅ）をＥｘｃｅｌ  ２００３を用い、以下の式により算出した：
Ｐｅ（ｃｍ／秒）＝膜透過量（ｐｍｏｌ）／細胞膜面積（ｃｍ２）／初期濃度（ｎＭ）／インキュベーション時間（秒）
ここで、膜透過量は所定時間（秒）のインキュベーション後の基質の透過濃度（ｎＭ、レシーバー側の濃度）に量（ｍＬ）を乗じて算出し、細胞膜面積は０．３３（ｃｍ２）とした。
外向きフラックス比は以下の式により算出する：
Ｅｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ＝側底側から頂端側方向のＰｅ／頂端側から側底側方向のＰｅ
正味フラックスは以下の式により算出する： 
Ｎｅｔ  ｆｌｕｘ＝ＭＤＲ１発現細胞のＥｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ／親細胞のＥｆｆｌｕｘ  Ｒａｔｉｏ
コントロールに対する％は、本発明化合物存在下の基準化合物対非存在下の基準化合物の正味フラックス比として求めた。
ＩＣ５０値は曲線適合プログラムＸＬｆｉｔを用いて算出した。
【００８５】
（試験例１６：ｍｄｒ１ａ／１ｂ（−／−）Ｂ６マウスを用いたＰ−ｇｐ基質試験）
材料
動物：ｍｄｒ１ａ／１ｂ（−／−）Ｂ６マウス（ＫＯマウス）またはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（野生型マウス）
方法および手順
１．動物は本発明化合物の投与前に食餌を摂取させてもよい。
２．本発明化合物は３匹の動物に各時点で投与し、血液および脳サンプルは投与後の所定時点（例：１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間または２４時間）で採取する。血液（０．３〜０．７ｍＬ）は血液凝固防止剤（ＥＤＴＡおよびヘパリン）を含むシリンジを用い、体幹採血で採取する。血液および組織（脳など）サンプルは直ちに氷冷する。
３．血液サンプルは遠心（１７８０ｘｇ、１０分間）し細胞を除去して、血漿を得る。その後、血漿サンプルを清潔なチューブに移し、分析するまで−７０℃の冷凍庫で保存する。
４．組織（脳など）サンプルは組織重量：蒸留水（ｍｌ）比＝１：３でホモジナイズし、清潔なチューブに移し、分析するまで−７０℃の冷凍庫で保存する。
５．血漿および組織（脳など）サンプルをタンパク質沈殿を用いて調製し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析する。解析方法は、ブランクの血漿または脳サンプルと既知量の分析物で構築した標準曲線を含めることにより較正する。測定法の真度および精度の確認を行うためにクオリティーコントロール用サンプルを用いる。
６．血漿および脳の濃度値（ｎｇ／ｍＬおよびｎｇ／ｇ）を、薬物動態パラメーターを算出するための適切な数学的ツールに導入する。一般的なプラットフォームは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）薬物動態解析ソフトウェアモデル化プログラムである。
計算 
Ｋｐ；組織／血漿中濃度比
Ｋｐ比＝ＫＯマウスのＫｐ値／野生型マウスのＫｐ値
組織ＡＵＣ／血漿ＡＵＣのＫＯ／野生型比
＝｛組織ＡＵＣ／血漿ＡＵＣ（ＫＯマウス）｝／｛組織ＡＵＣ／血漿ＡＵＣ（野生型マウス）｝
【００８６】
（試験例１７：麻酔モルモット心血管系試験）
動物種：モルモット（Ｓｌｃ：Ｈａｒｔｌｅｙ、４〜５週齢、雄性）、Ｎ＝４
試験デザイン：
投与量：３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ（原則）
（本発明化合物は累積的に投与する）
製剤：
媒体組成：ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）：ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）：蒸留水（Ｄ．Ｗ．）＝１：７：２（原則）
本発明化合物をＤＭＡに溶解し、次いで、ＰＥＧ４００および蒸留水（Ｄ．Ｗ．）を添加する。最終的に、１．５、５および１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製する。
投与経路および投与スケジュール：
１０分間の静脈内注射（２ｍＬ／ｋｇ）
０〜１０分：３ｍｇ／ｋｇ、３０〜４０分：１０ｍｇ／ｋｇ、６０〜７０分：３０ｍｇ／ｋｇ
媒体も上記と同様のスケジュールで投与する。
群の構成： 
媒体群および本発明化合物群（各群４匹のモルモット）
評価方法：
評価項目：
平均血圧（ｍｍＨｇ）、心拍数（血圧波形より計測（拍／分））、ＱＴｃ（ｍｓ）およびトキシコキネティクス
試験手順：
モルモットをウレタン（１．４ｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）による麻酔下におき、ポリエチレンチューブを頸動脈（血圧測定および血液サンプリングのため）および頸静脈（試験化合物の注入のため）に挿入する。電極を皮下に装着する（第ＩＩ誘導）。血圧、心拍数および心電図（ＥＣＧ）をＰｏｗｅｒＬａｂ（登録商標）システム（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて測定する。
トキシコキネティクス：
各評価時点で、約０．３ｍＬの血液（血漿として約１２０μＬ）を頸動脈からヘパリンナトリウムを含むシリンジを用いて採取し、直ちに氷冷する。遠心（４℃、１００００ｒｐｍ、９３００×ｇ、２分）して血漿サンプルを得る。血漿の分離手順は氷冷下または４℃で行う。得られた血漿（ＴＫサンプル）は超低温庫（設定温度：−８０℃）で保管する。
分析方法：平均血圧および心拍数は各評価時点で３０秒間の平均値をとる。ＥＣＧパラメーター（ＱＴ間隔（ｍｓ）およびＱＴｃ）は評価時点における１０秒間の連続拍動の平均波形より計測する。ＱＴｃ（Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａの補正式；ＱＴｃ＝ＱＴ／（ＲＲ）１／３））はＰｏｗｅｒＬａｂ（登録商標）システムを用いて算出する。不整脈の発生率は４匹の全動物において、（投与０．５時間前から試験終了までの）すべてのＥＣＧ記録から目視で評価する。
評価時点：
前（投与前）ならびに最初の投与から１０、２５、４０、５５、７０および８５分後
ＱＴｃデータ解析：
投与前値からのＱＴｃの変化率（％）を算出する（投与前値を１００％とみなす）。同一の評価時点において、相対するＱＴｃを媒体値と比較する。
【００８７】
（試験例１８：ビーグル犬における薬理試験）
単回投与後のイヌの脳脊髄液（ＣＳＦ）のβアミロイドプロファイルに対する影響を評価するために、薬物動態（ＰＫ）フォローアップおよび一部の安全性の評価と併せて、試験化合物を試験した。
以下に示す化合物において、２匹または４匹のビーグル犬（雄性１もしくは２匹、雌性１もしくは２匹）に対し、媒体（２０％シクロデキストリン水溶液１ｍＬ／ｋｇ）を投与し、用量群あたり４匹のビーグル犬（雄性２匹、雌性２匹）に対し、表２０に示す投与量（ｍｇ／ｋｇで表す用量と同一のｍｇ／ｍＬで表される２０％シクロデキストリン水溶液媒体）の試験化合物を空腹状態で投与した。
投与前ならびに投与から４、８、２５および４９時間後、頭蓋骨に挿入され、皮下組織及び皮膚で覆われたカニューレを通じ、無麻酔の動物の側脳室からＣＳＦを直接採取した。投与から８時間後、動物は３０分間の通常食餌が与えられた。ＰＫフォローアップ用に（０．５、１、２、４、８、２５および４９時間に）血液を採取し、生化学試験用に血清サンプルを投与前ならびに投与から８、および２５時間後に採取した。ＣＳＦサンプルは、Ａβ１−３７、Ａβ１−３８、Ａβ１−４０およびＡβ１−４２の測定に使用した。結果を以下の表にまとめる。
【００８８】
【表２１】
2021522194.tif 000055
減少率は、８時間後および影響のある減少（２０％超の減少率）が観察された最終時点を示す。
【００８９】
（試験例１９：ダンシルＧＳＨトラッピング試験）
ダンシルグルタチオン（グルタチオン）トラッピング試験は、反応性代謝物を調べる試験である。
反応条件は以下のとおりであった：基質、５０μｍｏｌ／Ｌ  本発明化合物；トラッピング剤、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ  ダンシルＧＳＨ；プールヒト肝ミクロソームのタンパク質含量、１ｍｇ／ｍＬ；プレ反応時間、５分；反応時間、６０分；反応温度、３７℃。
９６ウェルプレートにプレ反応液としてＫ−Ｐｉ緩衝液（ｐＨ７．４）中にプールヒト肝ミクロソーム、および本発明化合物溶液を加えた。補酵素であるＮＡＤＰＨを添加して反応を開始した。所定時間の反応後、別の９６ウェルプレートに一部を移行し、５ｍｍｏｌ／Ｌジチオスレイトールを含むアセトニトリル溶液を加えることによって反応を停止した。３０００ｒｐｍで１５分間遠心した後、ダンシルＧＳＨと結合した代謝物の蛍光ピーク面積を、ＨＰＬＣを用いて蛍光検出により定量した。
【００９０】
（試験例２０：［１４Ｃ］−ＫＣＮトラッピング試験）
［１４Ｃ］−シアン化カリウム（ＫＣＮ）トラッピング試験は、反応性代謝物を調べる試験である。
反応条件は以下のとおりであった：基質、１０または５０μｍｏｌ／Ｌ  本発明化合物；トラッピング剤、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ［１４Ｃ］−ＫＣＮ（１１．７μＣｉ／チューブ）；プールヒト肝ミクロソームのタンパク質含量、１ｍｇ／ｍＬ；プレ反応時間、５分；反応時間、６０分；反応温度、３７℃。
９６ウェルプレートにプレ反応液としてＫ−Ｐｉ緩衝液（ｐＨ７．４）中にプールヒト肝ミクロソーム、および本発明化合物溶液を加えた。補酵素であるＮＡＤＰＨを添加して反応を開始した。所定時間後、代謝反応を停止し、スピンカラムによって［１４Ｃ］−ＫＣＮと結合した代謝物をメタノール溶液１００μＬに抽出した。［１４Ｃ］−ＫＣＮ捕捉代謝物の放射ピーク面積をＲａｄｉｏ−ＨＰＬＣシステムにより定量する。
【００９１】
製剤例
以下に示す製剤例は例示にすぎないものであり、本発明の範囲を何ら限定することを意図するものではない。
製剤例１：  錠剤
本発明化合物                      １５ｍｇ
乳糖                              １５ｍｇ
ステアリン酸カルシウム            ３ｍｇ
ステアリン酸カルシウム以外のすべての上記成分を均一に混合する。次いで、混合物を破砕造粒し、乾燥して、適当な大きさの顆粒を得る。次にステアリン酸カルシウムを顆粒に添加する。最後に、圧縮成形して錠剤とする。
【００９２】
製剤例２：  カプセル剤
本発明化合物                      １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          １０ｍｇ
乳糖                              ８０ｍｇ
上記成分を均一に混合して粉末または細粒状とし、次いで、得られた混合物をカプセルに充填する。
【００９３】
製剤例３：  顆粒剤
本発明化合物                      ３０ｇ
乳糖                            ２６５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム            ５ｇ
上記成分を均一に混合した後、混合物を圧縮成形する。圧縮成形物を破砕造粒し、篩別して適当な大きさの顆粒剤を得る。
【００９４】
製剤例４：  口腔内崩壊錠
本発明化合物および結晶セルロースを混合し、造粒後打錠して口腔内崩壊錠とする。
【００９５】
製剤例５：  ドライシロップ
本発明化合物および乳糖を混合し、粉砕、整粒、篩別して適当な大きさのドライシロップとする。
【００９６】
製剤例６：  注射剤
本発明化合物およびリン酸緩衝液を混合して、注射剤とする。
【００９７】
製剤例７：  点滴剤
本発明化合物およびリン酸緩衝液を混合して、注射剤とする。
【００９８】
製剤例８：  吸入剤
本発明化合物および乳糖を混合し細かく粉砕することにより、吸入剤とする。
【００９９】
製剤例９：  軟膏剤
本発明化合物およびワセリンを混合して、軟膏剤とする。
【０１００】
製剤例１０：  貼付剤
本発明化合物および粘着プラスターなどの基剤を混合して、貼付剤とする。
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
本発明化合物は、アミロイドβタンパク質の産生、分泌および／または沈着により誘発される疾患の治療または予防剤として有用な医薬となり得る。
【国際調査報告】
2021522194.tif 000065
2021522194.tif 000066