(57)【要約】式Ｉの複合体：2021525265.tif 000190  式中、Ａｂが、少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に含む改変した抗体であり、かつ、ＲLL1及びＲLL2のそれぞれが、基：2021525265.tif 000191を含む。
2021525265.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの複合体：
【化１】
2021525265.tif 000125
式中、Ａｂは、各重鎖上に少なくとも１つの遊離複合化部位を有する改変された抗体であり、Ｄは、基Ｄ１またはＤ２のいずれかを表し：
【化２】
2021525265.tif 000126
、
点線は、Ｃ２とＣ３との間の二重結合の任意選択的な存在を示し；
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ2は：
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレン；を含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリール基；
（ｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）
【化３】
2021525265.tif 000127
式中、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、式中、Ｒ2基における炭素原子の合計数が多くて５である；
（ｉｅ）
【化４】
2021525265.tif 000128
式中、Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される；及び
（ｉｆ）
【化５】
2021525265.tif 000129
式中、Ｒ14は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される；からなる群より選択され；
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、Ｒ2は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
【化６】
2021525265.tif 000130
から選択され、式中、Ｒ16a及びＲ16bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており；または、Ｒ16a及びＲ16bの一方がＨであるとき、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され；
Ｄ’は、基Ｄ’１またはＤ’２のいずれかを表し：
【化７】
2021525265.tif 000131
、
式中、点線は、Ｃ２’とＣ３’との間の二重結合の任意選択的な存在を表し；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ22は、
（ｉｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレン；を含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリール基；
（ｉｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル；
（ｉｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル；
（ｉｉｄ）
【化８】
2021525265.tif 000132
式中、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ22基における炭素数の合計が多くて５である；
（ｉｉｅ）
【化９】
2021525265.tif 000133
式中、Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される；及び
（ｉｉｆ）
【化１０】
2021525265.tif 000134
式中、Ｒ24は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される；からなる群より選択され；
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、Ｒ22は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
【化１１】
2021525265.tif 000135
から選択され、式中、Ｒ26a及びＲ26bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており；または、Ｒ26a及びＲ26bの一方がＨであり、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され；
Ｒ6及びＲ9は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから独立して選択され；
Ｒ及びＲ’は、任意選択的に置換されているＣ1-12アルキル、Ｃ3-20ヘテロシクリル及びＣ5-20アリール基から独立して選択され；
Ｒ7は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから選択され；
Ｒ”は、Ｃ3-12アルキレン基であり、かかる鎖は、１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＲN2（式中、ＲN2は、ＨもしくはＣ1-4アルキルである）、及び／または芳香族環、例えば、ベンゼンもしくはピリジンによって中断されていてよく；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨから選択され；
Ｒ11aは、ＯＨ、ＯＲAから選択され、ここでＲAは、Ｃ1-4アルキルであり；
Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’及びＲ１１a’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9及びＲ11aと同じ群から選択され；
ＲLL1及びＲLL2は：
（ｉｉｉａ）：
【化１２】
2021525265.tif 000136
から独立して選択される異なる部位において前記抗体に接続されるリンカーであり、
式中、Ｑは、
【化１３】
2021525265.tif 000137
であり、式中、ＱXは、Ｑが、アミノ酸残基、ジペプチド残基またはトリペプチド残基であるようになっており；
Ｘは、
【化１４】
2021525265.tif 000138
であり、ａ＝０〜５、ｂ＝０〜１６、ｃ＝０または１、ｄ＝０〜５であり；
ＧLLは、基：
【化１５】
2021525265.tif 000139
を含む前記抗体に接続されるリンカーである、前記複合体。
【請求項２】
Ｙ及びＹ’の両方がＯである、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
Ｒ”がＣ3-7アルキレンである、請求項１または請求項２のいずれかに記載の複合体。
【請求項４】
Ｒ”が、式：
【化１６】
2021525265.tif 000140
の基であり、式中、ｒは、１または２である、
請求項１または請求項２のいずれかに記載の複合体。
【請求項５】
Ｒ9が、Ｈである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
Ｒ6が、Ｈである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
Ｒ7が、Ｈ、ＯＨ及びＯＲから選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８】
Ｒ7が、Ｃ1-4アルキルオキシ基である、請求項７に記載の複合体。
【請求項９】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、Ｃ5-7アリール基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０】
Ｒ2が、フェニルである、請求項９に記載の複合体。
【請求項１１】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、Ｃ8-10アリール基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２】
Ｒ2が、１〜３つの置換基を持つ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３】
前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ及びメチル−チオフェニルから選択される、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１４】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
Ｒ2が、メチル、エチルまたはプロピルである、請求項１４に記載の複合体。
【請求項１６】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、Ｃ3-6飽和シクロアルキル基である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１７】
Ｒ2が、シクロプロピルである、請求項１６に記載の複合体。
【請求項１８】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、式：
【化１７】
2021525265.tif 000141
の基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１９】
前記Ｒ2基における炭素原子の合計数が、多くて４である、請求項１８に記載の複合体。
【請求項２０】
前記Ｒ2基における炭素原子の合計数が、多くて３である、請求項１９に記載の複合体。
【請求項２１】
Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから選択される、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２２】
Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから選択される、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２３】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、式：
【化１８】
2021525265.tif 000142
の基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２４】
Ｒ2が、基：
【化１９】
2021525265.tif 000143
である、請求項２３に記載の複合体。
【請求項２５】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、式：
【化２０】
2021525265.tif 000144
の基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２６】
Ｒ14が、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及び、エチニルから選択される、請求項２５に記載の複合体。
【請求項２７】
Ｒ14が、Ｈ、及び、メチルから選択される、請求項２６に記載の複合体。
【請求項２８】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ2が、Ｈである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２９】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ2が、
【化２１】
2021525265.tif 000145
であり、Ｒ16a及びＲ16bの両方がＨである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３０】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ2が
【化２２】
2021525265.tif 000146
であり、Ｒ16a及びＲ16bの両方がメチルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３１】
ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ2が
【化２３】
2021525265.tif 000147
であり、Ｒ16a及びＲ16bのうちの１つがＨであり、他方が、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基が、任意選択的に置換されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３２】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、Ｃ5-7アリール基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３３】
Ｒ22が、フェニルである、請求項３２に記載の複合体。
【請求項３４】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、Ｃ8-10アリール基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３５】
Ｒ22が、１〜３つの置換基を持つ、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３６】
前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及び、メチル−チオフェニルから選択される、請求項３２〜３５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３７】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３８】
Ｒ22が、メチル、エチル、または、プロピルである、請求項３７に記載の複合体。
【請求項３９】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、Ｃ3-6飽和シクロアルキル基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４０】
Ｒ22が、シクロプロピルである、請求項３９に記載の複合体。
【請求項４１】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、式：
【化２４】
2021525265.tif 000148
の基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４２】
前記Ｒ22基における炭素原子の合計数が、多くて４である、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記Ｒ22基における炭素原子の合計数が、多くて３である、請求項４２に記載の複合体。
【請求項４４】
Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから選択される、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４５】
Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから選択される、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４６】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が式：
【化２５】
2021525265.tif 000149
の基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４７】
Ｒ22が、基：
【化２６】
2021525265.tif 000150
である、請求項４６に記載の複合体。
【請求項４８】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、式：
【化２７】
2021525265.tif 000151
の基である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４９】
Ｒ24が、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及び、エチニルから選択される、請求項４８に記載の複合体。
【請求項５０】
Ｒ24が、Ｈ、及び、メチルから選択される、請求項４９に記載の複合体。
【請求項５１】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ22が、Ｈである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５２】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ22が、
【化２８】
2021525265.tif 000152
であり、Ｒ26a及びＲ26bは、両方がＨである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５３】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ22が、
【化２９】
2021525265.tif 000153
であり、Ｒ26a及びＲ26bは、両方がメチルである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５４】
Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ22が
【化３０】
2021525265.tif 000154
であり、Ｒ26a及びＲ26bのうちの１つがＨであり、他方が、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基が、任意選択的に置換されている、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５５】
Ｒ11aがＯＨである、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５６】
Ｒ11aがＯＲAであり、ＲAがＣ1-4アルキルである、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５７】
ＲAがメチルである、請求項５６に記載の複合体。
【請求項５８】
Ｒ6’が、Ｒ6と同じ基から選択され、Ｒ7’が、Ｒ7と同じ基から選択され、Ｒ9’が、Ｒ9と同じ基から選択され、Ｒ11a’が、Ｒ11aと同じ基から選択され、及び、Ｙ’が、Ｙと同じ基から選択される、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５９】
Ｒ6’が、Ｒ6と同じ基であり、Ｒ7’が、Ｒ7と同じ基であり、Ｒ9’が、Ｒ9と同じ基であり、Ｒ11a’が、Ｒ11aと同じ基であり、Ｙ’が、Ｙと同じ基である、請求項５８に記載の複合体。
【請求項６０】
Ｒ22が、Ｒ2と同じ基である、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６１】
式Ｉａ−１、Ｉａ−２またはＩａ−３：
【化３１】
2021525265.tif 000155
【化３２】
2021525265.tif 000156
【化３３】
2021525265.tif 000157
式中、Ｒ2a及びＲ22aは同じであり、かつ：
（ａ）
【化３４】
2021525265.tif 000158
、
（ｂ）
【化３５】
2021525265.tif 000159
、
（ｃ）
【化３６】
2021525265.tif 000160
、
（ｄ）
【化３７】
2021525265.tif 000161
、
（ｅ）
【化３８】
2021525265.tif 000162
、
（ｆ）
【化３９】
2021525265.tif 000163
、
（ｇ）
【化４０】
2021525265.tif 000164
、
及び
（ｈ）
【化４１】
2021525265.tif 000165
から選択され、
Ｒ1aは、メチル、及び、ベンジルから選択され、
ＲLL1、ＲLL2及びＲ11aは、請求項１に定義している通りである、
請求項１に記載の複合体。
【請求項６２】
それぞれの重鎖に少なくとも１つの遊離複合化部位を有する改変された抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、または、ＩｇＧ４抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６３】
それぞれの重鎖に少なくとも１つの遊離複合化部位を有する改変された前記抗体が、ヒト抗体である、請求項６２に記載の複合体。
【請求項６４】
それぞれの重鎖に少なくとも１つの遊離複合化部位を有する改変された前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項６２に記載の複合体。
【請求項６５】
ネイティブの鎖間システイン残基が、チオール基を欠いたアミノ酸残基と置換されている、請求項６２〜６４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６６】
リンカーに対する複合化に適した反応基を含むアミノ酸残基のそれぞれの重鎖に少なくとも１つのさらなる置換を含む、請求項６５に記載の複合体。
【請求項６７】
さらに置換した前記アミノ酸が、システインまたは非天然アミノ酸である、請求項６６に記載の複合体。
【請求項６８】
式ＩＩの複合体：
Ａｂ’−（ＤL）ｐ（ＩＩ）、
式中、ＤLは、式（ＩＩＩ）
【化４２】
2021525265.tif 000166
であり、式中、Ｄ、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｙ、Ｒ”、Ｙ’、Ｄ’、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’、及び、Ｒ12（それぞれ、Ｃ２とＣ３との間、及び、Ｃ２’とＣ３’との間の二重結合の存在または非不在を含む）は、請求項１〜６０のいずれかで定義されている通りのものであり；
Ａｂ’は抗体である；
（ａ）Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＯＨまたはＯＲAであり、式中、ＲAは、Ｃ1-4アルキルである；
（ｂ）Ｒ10’、及び、Ｒ11a’は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に、窒素−炭素二重結合を形成する；または
（ｃ）Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＳＯzＭであり、式中、ｚは、２または３であり、及び、Ｍは、医薬として許容可能な一価のカチオンである、のいずれかである；
ｐは、１〜２０の整数である、前記複合体。
【請求項６９】
Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＯＨまたはＯＲAであり、式中、ＲAは、Ｃ1-4アルキルである、請求項６８に記載の複合体。
【請求項７０】
ＲAは、メチルである、請求項６９に記載の複合体。
【請求項７１】
Ｒ10’、及び、Ｒ11a’は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に、窒素−炭素二重結合を形成する、請求項６８に記載の複合体。
【請求項７２】
Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＳＯzＭであり、式中、ｚは、２または３であり、及び、Ｍは、医薬として許容可能な一価のカチオンである、請求項６８に記載の複合体。
【請求項７３】
ＤLが、式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、または、ＩＩＩｃ：
【化４３】
2021525265.tif 000167
【化４４】
2021525265.tif 000168
【化４５】
2021525265.tif 000169
式中、Ｒ2a、及び、Ｒ22aは、同じであり、かつ：
（ａ）
【化４６】
2021525265.tif 000170
；
（ｂ）
【化４７】
2021525265.tif 000171
；
（ｃ）
【化４８】
2021525265.tif 000172
；
（ｄ）
【化４９】
2021525265.tif 000173
；
（ｅ）
【化５０】
2021525265.tif 000174
；
（ｆ）
【化５１】
2021525265.tif 000175
；
（ｇ）
【化５２】
2021525265.tif 000176
；及び
（ｈ）
【化５３】
2021525265.tif 000177
から選択され；
Ｒ1aは、メチル、及び、ベンジルから選択される：
ＲLL1、及び、ＲLL2は、請求項６８で定義した通りのものである、
請求項６８に記載の複合体。
【請求項７４】
ｐは、１〜８の整数である、請求項６８〜７３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７５】
ＧLLが：
【化５４】
2021525265.tif 000178
（ＧLL1-1）、
【化５５】
2021525265.tif 000179
（ＧLL1-2）、及び
【化５６】
2021525265.tif 000180
（ＧLL2）
から選択される基を含む、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７６】
ＧLLが、ＧLL1-1、及び、ＧLL1-2から選択する基を含む、請求項７５に記載の複合体。
【請求項７７】
ＧLLが、ＧLL1-1を含む、請求項７６に記載の複合体。
【請求項７８】
ＧLL1-1、ＧLL1-2、または、ＧLL2が、Ｘに対して直接に結合している、請求項７５〜７７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７９】
ＧLL1-1、ＧLL1-2、または、ＧLL2が、式ＩＶ：
【化５７】
2021525265.tif 000181
の基を介してＣＢＡに対して結合しており、
式中、Ｇは、前記基が、ＧLL1-1、ＧLL1-2、及び、ＧLL2に対して結合していることを示しており；
ｎｎは、１〜４である；
Ｒaは、飽和または不飽和の分岐または非分岐Ｃ1-6アルキレン鎖を表しており、式中、少なくとも１つの炭素が、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）0-3から選択するヘテロ原子で置換されており、前記鎖は、オキソ、ハロゲン、アミノから独立して選択する１つ以上の基で置換されており；及び
Ｒeは、Ｈ、飽和または不飽和の分岐または非分岐のＣ1-8アルキレン鎖を表しており、式中、１つ以上の炭素が、任意に−Ｏ−に置換されており、かつ、前記鎖は、１つ以上のハロゲン原子、Ｎ3、または、−Ｃ2-5アルキニルで任意に置換されている、請求項７５〜７８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８０】
Ｒaが、−（ＣＨ2）mＣ（Ｏ）−、−ＣＨ2（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）mＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨＣＨＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−、及び、−ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＯＣ（Ｏ）−からなる基から選択され、及び、ｍは、０または１を表している、請求項７９に記載の複合体。
【請求項８１】
Ｒeが、Ｈ、または、−ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ3を表している、請求項７９または請求項８０に記載の複合体。
【請求項８２】
ｎｎが、１である、請求項７９〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８３】
ｎｎが、２である、請求項７９〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８４】
ｎｎが、３である、請求項７９〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８５】
ｎｎが、４である、請求項７９〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８６】
前記基が、式ＡＡ：
【化５８】
2021525265.tif 000182
式中、Ｇは、ＧLL1-1、ＧLL1-2、及び、ＧLL2の前駆体から選択される、非天然アミノ酸を使用して前記抗体に取り込まれる、請求項７９〜８４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８７】
前記非天然アミノ酸が：
【化５９】
2021525265.tif 000183
である、請求項８６に記載の複合体。
【請求項８８】
前記基が、式（ＢＢ）：
【化６０】
2021525265.tif 000184
式中、Ｅは、基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ55、Ｒ55’、−ＮＣ（Ｏ）Ｒ66、−Ｃ2-5アルキレン、ＣＨ2−Ｏ−ＮＨ2、または、ヨードなどのハロゲンである；
Ｒ55は、Ｃ1-6アルキル、スクシンイミド、Ｃ6Ｆ4Ｈ（テトラフルオロヘキシル）、または、Ｈを表している；
Ｒ55’は、硫黄架橋基、例えば、ジブロモマレイミド、ジクロロアセトン、または、それらのいずれかの誘導体を表している、
Ｒ66は：
【化６１】
2021525265.tif 000185
を表し、式中
Ｒ77は、ヒドロキシル、スルホ、アミノ、及び、−（ＯＣＨ2）vＣ2-6アルキレン、及び、ヒドロキシル、スルホ、アミノ、及び、−（ＯＣＨ2）vＣ2-6アルキレンから選択される１つ以上（１つ、２つ、または、３つなど）の基を任意に備えるフェニルから選択される１つ以上（１つ、２つ、または、３つなど）の基を任意で備えるＣ1-6アルキレンであり、
ｖは、整数、１、２、３、４、または、５であり
【化６２】
2021525265.tif 000186
は、前記フラグメントが、前記分子の残余の箇所に結合していることを表している、の基を、前記抗体に複合化して、取り込まれる、請求項７９〜８４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８９】
式ＢＢの化合物が：
【化６３】
2021525265.tif 000187
である、請求項８８に記載の複合体。
【請求項９０】
Ｑxが、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｃｉｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、及び、Ｔｒｐから選択されるアミノ酸残基である、請求項１〜８９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９１】
Ｑxが、
CO−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ａｌａ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ａｌａ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−NH、及び
CO−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−NH
から選択されるジペプチド残基である、請求項１〜８９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９２】
ＱXが、CO−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−NH、CO−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−NH、及び、CO−Ｖａｌ−Ａｌａ−NHから選択される、請求項９１に記載の複合体。
【請求項９３】
Ｑxが、トリペプチド残基である、請求項１〜８９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９４】
ａが、０〜３である、請求項１〜９３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９５】
ａが、０である、請求項９４に記載の複合体。
【請求項９６】
ｂが、０〜１２である、請求項１〜９５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９７】
ｂが、０〜８である、請求項９６に記載の複合体。
【請求項９８】
ｄが、０〜３である、請求項１〜９７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９９】
ｄが、２である、請求項９８に記載の複合体。
【請求項１００】
ａが、０であり、ｃが、１であり、及び、ｄが、２であり、及び、ｂが、０〜８である、請求項１〜９３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０１】
ｂが、０、４または８である、請求項１００に記載の複合体。
【請求項１０２】
式Ｉｄ：
【化６４】
2021525265.tif 000188
式中、ｍが２〜８の整数である、である、請求項１に記載の複合体。
【請求項１０３】
ＤLが、式ＩＩＩｄ：
【化６５】
2021525265.tif 000189
式中、ｍが２〜８の整数である、である、請求項６８に記載の複合体。
【請求項１０４】
治療における使用のための、請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０５】
請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体、及び、医薬として許容可能な希釈剤、担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０６】
対象の増殖性疾患の治療に用いるための、請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体、または、請求項１０５に記載の医薬組成物。
【請求項１０７】
治療すべき前記疾患は、がんである、請求項１０６に記載の使用のための複合体。
【請求項１０８】
医療的治療方法における、請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体、または、請求項１０５に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１０９】
患者に、請求項１０５に記載の医薬組成物を投与することを含む、医療的治療方法。
【請求項１１０】
前記医療的治療方法が、がんの治療のためのものである、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記患者に対して、前記複合体と併用して、化学療法薬を投与する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
増殖性疾患の治療のための医薬の製造方法における、請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項１１３】
増殖性疾患を有する哺乳類の治療方法であって、治療上有効量の請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体、または、請求項１０５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロベンゾジアゼピン、及び、関連する二量体（ＰＢＤ）を含む複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）の中には、ＤＮＡの特定配列を認識して結合する能力を有するものがあり、好適な配列はＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９３−５７９５（１９６５）、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１−５７９３（１９６５））。それ以来、天然に存在するＰＢＤがいくつか報告されており、多様な類似体を合成する１０を超える合成経路が開発されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４））。このファミリーに属するものとして、アベイマイシン（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５−１４８（１９８７））、チカマイシン（Ｋｏｎｉｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００−２０６（１９８４）），ＤＣ−８１（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｐａｔｅｎｔ  ５８−１８０ ４８７、Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６，７６７−７７２（１９９０）、Ｂｏｓｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１−７５８（１９９２））、マゼトラマイシン（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０））、ネオトラマイシンＡ及びＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６））、ポロトラマイシン（Ｔｓｕｎａｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６−１３７３（１９８８））、プロトラカルシン（Ｓｈｉｍｉｚｕ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２−２５０３（１９８２）、Ｌａｎｇｌｅｙ  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１−９７（１９８７））、シバノマイシン（ＤＣ−１０２）（Ｈａｒａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２−７０４（１９８８）、Ｉｔｏｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１−１２８４（１９８８））、シビロマイシン（Ｌｅｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０，２９９２−２９９３（１９８８））、ならびにトママイシン（Ａｒｉｍａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７−４４４（１９７２））が挙げられる。ＰＢＤは、以下の一般式のものである。
【０００３】
【化１】
2021525265.tif 000003
【０００４】
ＰＢＤは、その芳香環Ａ及びピロロ環Ｃの両方で、置換基の個数、種類、及び位置が異なるとともに、環Ｃの飽和度も異なる。環Ｂでは、Ｎ１０−Ｃ１１の位置が、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノ−ルアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノ−ルアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかになっており、ここがＤＮＡアルキル化の原因となる求電子中心である。既知の天然産物は全て、キラルなＣ１１ａ位に（Ｓ）型配置を有し、このため、ＰＢＤを環Ｃから環Ａに向かって見たときに、これらは右巻きになっている。このことが、ＰＢＤに、Ｂ型ＤＮＡの副溝との螺旋性一致（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）（イソらせん性）に適切な三次元形状を与え、その結果、結合部位でのぴったりとした一致をもたらす（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０−２３７（１９８６））。副溝で付加体を形成するＰＢＤの能力により、ＰＢＤはＤＮＡプロセシングに干渉することができ、したがって、ＰＢＤを抗腫瘍剤として使用することが可能となる。
【０００５】
この分子の生物活性は、２つのＰＢＤ単位をこれらのＣ８／Ｃ’−ヒドロキシル官能基と一緒に、可撓性アルキレンリンカーを介して結合させることによって増強され得ることが以前に開示されている（Ｂｏｓｅ，Ｄ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１４，４９３９−４９４１（１９９２）、Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６１，８１４１−８１４７（１９９６））。ＰＢＤ二量体は、配列選択性ＤＮＡ損傷、例えば、生物活性の主な原因となると考えられている、回帰性の５’−Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ−３’鎖間架橋を形成すると考えられている（Ｓｍｅｌｌｉｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４２，８２３２−８２３９（２００３）、Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４４，４１３５−４１４７）。
【０００６】
ＰＢＤ二量体の一例は、ＳＧ２０００（ＳＪＧ−１３６）：
【化２】
2021525265.tif 000004
であり（Ｇｒｅｇｓｏｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，７３７−７４８（２００１）、Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６７００−６７０６（２００４）、Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６６９３−６６９９（２００４））、スタンドアロン薬剤、例えば、ＮＣＴ０２０３４２２７として臨床検査に関与しており、急性骨髄性白血病及び慢性リンパ性白血病を治療する際のその使用を調査している（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０２０３４２２７を参照）。
【０００７】
Ｃ２アリール置換基を有する二量体ＰＢＤ化合物、例えば、ＳＧ２２０２（ＺＣ−２０７）は、ＷＯ２００５／０８５２５１：
【化３】
2021525265.tif 000005
及びＷＯ２００６／１１１７５９に開示されており、このようなＰＢＤ化合物の亜硫酸水素塩は、例えば、ＳＧ２２８５（ＺＣ−４２３）：
【化４】
2021525265.tif 000006
である。
【０００８】
これらの化合物は、非常に有用な細胞毒性剤として示されている（Ｈｏｗａｒｄ，Ｐ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００９），ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２００９．０９．０１２）。
【０００９】
ＷＯ２００７／０８５９３０は、抗体などの細胞結合剤への接続のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物を記載している。当該リンカーは、二量体の単量体ＰＢＤ単位を連結する架橋において存在する。
【００１０】
抗体などの細胞結合剤への接続のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物は、ＷＯ２０１１／１３０５９８に記載されている。これらの化合物におけるリンカーは、利用可能なＮ１０位のうちの１つに結合されており、リンカー基における酵素の作用によって概して開裂される。非結合Ｎ１０位がキャッピング基によって保護されているとき、例示されているキャッピング基は、抗体へのリンカーと同じ開裂誘因を有している。
【００１１】
ＷＯ２０１４／０５７０７４には、１つの単量体においてＮ１０位を介して結合されていて、他方のＰＢＤ単量体がイミン形態である、２つの特定のＰＢＤ二量体複合体が記載されている。開示される薬物リンカーのうちの１つは、ＳＧ３２４９、テシリンである：
【化５】
2021525265.tif 000007
これは、抗ＤＬＬ３ロバルピツズマブに複合化されるときに、ロバルピツズマブ−テシリン（Ｒｏｖａ−Ｔ）として知られており、現在、小細胞肺癌の治療について評価中である（Ｔｉｂｅｒｇｈｉｅｎ，Ａ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０１６，７（１１），９８３−９８７；ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓｍｅｄｃｈｅｍｌｅｔｔ．６ｂ０００６２）。さらに、トラツズマブ（ｔｒａｔｕｚｕｍａｂ）の設計されたバ−ジョン及びヒトＣＤ１９に対するヒト化抗体と、この薬物リンカーの複合体は、ＡＤＣ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ＳＡによって２０１７年早期に治験を開始した（Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ＃５１  ａｎｄ  ＃５２  ｉｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ  ５８，Ａｐｒｉｌ  ２０１７）。
【００１２】
ＷＯ２０１５／０５２３２２には、１つの単量体においてＮ１０位を介して結合されていて、他方のＰＢＤ単量体がイミン形態である、特定のＰＢＤ二量体複合体が記載されている。また、１つの単量体においてＮ１０位を介して結合されていて、他方のＰＢＤ単量体が、抗体へのリンカーと同じ開裂誘因を持つキャッピング基を有している、特定のＰＢＤ二量体複合体も記載されている。
【化６】
2021525265.tif 000008
【発明の概要】
【００１３】
ある態様では、本発明は、ＰＢＤ二量体複合体を提供しており、当該ＰＢＤは、少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に含むように改変されている抗体に結合されており、そこでの結合は、リンカーを経てＰＢＤの各Ｎ１０基を介しており、そして、共役反応は、シクロヘキセン環を形成するディールス反応である。
【００１４】
発明者らは、単一のＰＢＤ、または関連した二量体を単一の抗体に２つのリンカーによって結合することが不可能であったということをよそに、驚くほど効果的であるこれらのような複合体を見出した。
【００１５】
別の態様では、本発明は、ＰＢＤ二量体複合体を提供しており、当該ＰＢＤは、リンカーを経て、ＰＢＤのＮ１０基を介して抗体に結合されており、そして、共役反応は、シクロヘキセン環を形成するディールス反応である。
【００１６】
本発明の第１の態様は、式Ｉの複合体：
【化７】
2021525265.tif 000009
を提供する。
式中：
Ａｂは、少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に有する改変された抗体であり；
Ｄは、基Ｄ１またはＤ２のいずれかを表し：
【化８】
2021525265.tif 000010
、
点線は、Ｃ２とＣ３との間の二重結合の任意選択的な存在を示し、
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ2は、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリール基、
（ｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｉｄ）
【化９】
2021525265.tif 000011
式中、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、式中、Ｒ2基における炭素原子の合計数が多くて５である、
（ｉｅ）
【化１０】
2021525265.tif 000012
式中、Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される基である、ならびに
（ｉｆ）
【化１１】
2021525265.tif 000013
式中、Ｒ14は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される、からなる群より選択され、
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ2は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
【化１２】
2021525265.tif 000014
から選択され、Ｒ16a及びＲ16bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており；またはＲ16a及びＲ16bの一方がＨであるとき、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され；
Ｄ’は、基Ｄ’１またはＤ’２のいずれかを表し：
【化１３】
2021525265.tif 000015
、
点線は、Ｃ２’とＣ３’との間の二重結合の任意選択的な存在を表し、
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ12は、
（ｉｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリール基、
（ｉｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｉｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｉｉｄ）
【化１４】
2021525265.tif 000016
式中、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ12基における炭素数の合計が多くて５である、
（ｉｉｅ）
【化１５】
2021525265.tif 000017
式中、Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される、ならびに
（ｉｉｆ）
【化１６】
2021525265.tif 000018
式中、Ｒ24は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される、からなる群より選択され、
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ12は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
【化１７】
2021525265.tif 000019
から選択され、Ｒ26a及びＲ26bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており、または、Ｒ26a及びＲ26bの一方がＨであるとき、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され、
Ｒ6及びＲ9は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ここでＲ及びＲ’は、任意選択的に置換されているＣ1-12アルキル、Ｃ3-20ヘテロシクリル及びＣ5-20アリール基から独立して選択され、
Ｒ7は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから選択され、
Ｒ”は、Ｃ3-12アルキレン基であり、かかる鎖は、１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＲN2（式中、ＲN2は、ＨもしくはＣ1-4アルキルである）、及び／または芳香族環、例えば、ベンゼンもしくはピリジンによって中断されていてよく、
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨから選択され、
Ｒ11aは、ＯＨ、ＯＲAから選択され、ここでＲAは、Ｃ1-4アルキルであり、
Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’及びＲ11a’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9及びＲ11aと同じ基から選択され、及び
ＲLL1及びＲLL2は、
【化１８】
2021525265.tif 000020
から独立して選択される異なる部位で抗体に接続されるリンカーであり、
式中、Ｑは：
【化１９】
2021525265.tif 000021
であり、式中、ＱXは、Ｑがアミノ酸残基、ジペプチド残基またはトリペプチド残基であるようになっており；
Ｘは：
【化２０】
2021525265.tif 000022
であり、ａ＝０〜５、ｂ＝０〜１６、ｃ＝０または１、ｄ＝０〜５であり；
ＧLLは、基：
【化２１】
2021525265.tif 000023
を含む抗体に接続されるリンカーである。
【００１７】
１の薬物抗体比（ＤＡＲ）を効率的に有する、これらのようなＡＤＣが、より高いＤＡＲを有する不均一な混合物からなるＡＤＣにわたる最小有効量要件を減少させることによって、低下したオフターゲット毒性、及び増強された治療濃度域を有する著しい利点を提示することができると考えられている。
【００１８】
本発明の第２の態様は、式ＩＩの複合体：
Ａｂ’−（ＤL）ｐ（ＩＩ）、式中、ＤLは、式（ＩＩＩ）
【化２２】
2021525265.tif 000024
であり、式中、Ｄ、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｙ、Ｒ”、Ｙ’、Ｄ’、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’、及び、Ｒ12（それぞれ、Ｃ２とＣ３との間、及び、Ｃ２’とＣ３’との間の二重結合の存在または非不在を含む）は、本発明の第１の態様で定義されている通りのものであり；
Ａｂ’は抗体である；
（ａ）Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＯＨまたはＯＲAであり、式中、ＲAは、Ｃ1-4アルキルである；
（ｂ）Ｒ10’、及び、Ｒ11a’は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に、窒素−炭素二重結合を形成する；または
（ｃ）Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＳＯzＭであり、式中、ｚは、２または３であり、及び、Ｍは、医薬として許容可能な一価のカチオンである、のいずれかである；
ｐは、１〜２０の整数である。
【００１９】
本発明の第１及び第２の両方の態様は、当該ＰＢＤ二量体と当該抗体との間のリンカーに、基：
【化２３】
2021525265.tif 000025
を有する。このような基は、当該ＰＢＤ二量体に結合したマレイミド基と、式：
【化２４】
2021525265.tif 000026
のスピロシクロプロピル−シクロペンタジエンとの間のディールス−アルダー反応によって形成される。そのような基は、リンカーの追加を介して、または、非天然アミノ酸をポリペプチド配列に組み込むことで、抗体に取り込ませることができる。
【００２０】
そのような基は、架橋したシクロヘキセン環で、当該抗体と当該ＰＢＤ二量体との間に安定した結合を提供する。
【００２１】
本発明の第３の態様は、増殖性疾患を治療するための医薬の製造における、本発明の第１または第２の態様の複合体の使用を提供する。第３の態様はまた、増殖性疾患の治療に用いるための、本発明の第１または第２の態様の複合体も提供する。第３の態様はまた、増殖性疾患を治療する方法であって、これを必要とする患者に、治療上有効量の、本発明の第１または第２の態様の複合体を投与することを含む、上記方法も提供する。
【００２２】
当業者なら、候補の複合体が任意の特定細胞型について増殖性症状を治療するかどうかを、容易に決定することができる。例えば、特定化合物により提供される活性を査定するのに都合良く用いることができるアッセイを、以下の実施例で記載する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１．１は、実施例４で説明したスピロシクロペンタジエン架橋剤（Ａ）、及び、スピロシクロペンタジエンＮＮＡＡ（Ｂ）の一般的なデザインである。
【図２】図２．１は、ＣＰ２−ＮＨＳとの反応前（Ａ）と反応後（Ｂ）のインタクトな脱グリコシル化質量スペクトルを示している。（Ｂ）のピークの下の数字は、ｍＡｂに導入されたＣＰ２リンカー基の数を示す。ピーク強度によるＣＰ２リンカー導入を推定すると、３．２９のＣＰ２リンカー／ｍＡｂが得られる。
【図３−１】図３．１は、変異型または野生型のｔＲＳを含む哺乳類細胞での発現後の１２Ｇ３Ｈ１１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの力価と細胞生存率を示している。
【図３−２】図３．２は、１Ｃ１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの脱グリコシル化質量スペクトルを示している。
【図３−３】図３．３は、１Ｃ１  Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの脱グリコシル化質量分析を示している。
【図３−４】図３．４は、１Ｃ１野生型ｍＡｂの脱グリコシル化質量分析を示している。
【図３−５】図３．５は、単量体産物が得られた１Ｃ１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂのＳＥＣ分析を示している。
【図３−６】図３．６は、単量体産物が得られた１Ｃ１  Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂのＳＥＣ分析を示している。
【図３−７】図３．７は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる、１Ｃ１−Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂ、及び、１Ｃ１−Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの分析を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
定義
医薬として許容可能なカチオン
医薬として許容可能な一価のカチオンの例は、参照により本明細書に援用される、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）に記載されている。
【００２５】
医薬として許容可能なカチオンは、無機または有機とし得る。
【００２６】
医薬として許容可能な一価の無機カチオンの例として、Ｎａ+及びＫ+などのアルカリ金属イオンがあるが、これらに限定されない。医薬として許容可能な二価の無機カチオンの例として、Ｃａ2+及びＭｇ2+などのアルカリ土類カチオンがあるが、これらに限定されない。医薬として許容可能な有機カチオンの例として、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ4+）、及び、置換されたアンモニウムイオン（例えば、ＮＨ3Ｒ+、ＮＨ2Ｒ2+、ＮＨＲ3+、ＮＲ4+）があるが、これらに限定されない。一部の適切な置換アンモニウムイオンの例として：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、トロメタミン、ならびに、リジン、及び、アルギニンなどのアミノ酸に由来するものがある。一般的な四級アンモニウムイオンの例として、Ｎ（ＣＨ3）4+がある。
【００２７】
置換基
本明細書で使用する句「任意選択的に置換されている」は、非置換であっても置換されていてもよい親基に関する。
【００２８】
他に断りのない限り、本明細書で使用する用語「置換されている」は、１つ以上の置換基を持つ親基に関する。用語「置換基」は、本明細書において、従来の意味で使用されており、親基に、共有結合的に結合している、場合によっては、縮合している化学的部分を指す。多種多様の置換基が周知されており、また、種々の親基の形成及びこれらへの導入方法も周知されている。
【００２９】
置換基の例を、より詳細に以下に記載する。
【００３０】
Ｃ1-12アルキル：本明細書で使用する用語「Ｃ1-12アルキル」は、脂肪族であっても脂環式であってもよく、また、飽和であっても不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）であってもよい、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分に関する。本明細書で使用する用語「Ｃ1-4アルキル」は、脂肪族であっても脂環式であってもよく、また、飽和であっても不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）であってもよい、１〜４個の炭素原子を有する炭化水素化合物の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分に関する。ゆえに、用語「アルキル」は、以下に考察されている、サブクラスのアルケニル、アルキニル、シクロアルキルなどを含む。
【００３１】
飽和アルキル基の例として、メチル（Ｃ1）、エチル（Ｃ2）、プロピル（Ｃ3）、ブチル（Ｃ4）、ペンチル（Ｃ5）、ヘキシル（Ｃ6）及びヘプチル（Ｃ7）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
飽和直鎖アルキル基の例として、メチル（Ｃ1）、エチル（Ｃ2）、ｎ−プロピル（Ｃ3）、ｎ−ブチル（Ｃ4）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ5）、ｎ−ヘキシル（Ｃ6）及びｎ−ヘプチル（Ｃ7）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３３】
飽和分岐鎖アルキル基の例として、イソ−プロピル（Ｃ3）、イソ−ブチル（Ｃ4）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ4）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ4）、イソ−ペンチル（Ｃ5）、及びネオ−ペンチル（Ｃ5）が挙げられる。
【００３４】
Ｃ2-12アルケニル：本明細書で使用する用語「Ｃ2-12アルケニル」は、１つ以上の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基に関する。
【００３５】
不飽和アルケニル基の例として、エテニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ2）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ3）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ2）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨ2）、ブテニル（Ｃ4）、ペンテニル（Ｃ5）、及びヘキセニル（Ｃ6）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
Ｃ2-12アルキニル：本明細書で使用する用語「Ｃ2-12アルキニル」は、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基に関する。
【００３７】
不飽和アルキニル基の例として、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、及び、２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
Ｃ3-12シクロアルキル：本明細書で使用する用語「Ｃ3-12シクロアルキル」は、環式炭化水素（炭素環式）化合物の１つの脂環式環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、３〜７個の環原子を含めた３〜７個の炭素原子を有する、上記部分であり、シクリル基でもあるアルキル基に関する。
【００３９】
シクロアルキル基の例として、以下に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない：
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ3）、シクロブタン（Ｃ4）、シクロペンタン（Ｃ5）、シクロヘキサン（Ｃ6）、シクロヘプタン（Ｃ7）、メチルシクロプロパン（Ｃ4）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ5）、メチルシクロブタン（Ｃ5）、ジメチルシクロブタン（Ｃ6）、メチルシクロペンタン（Ｃ6）、ジメチルシクロペンタン（Ｃ7）及びメチルシクロヘキサン（Ｃ7）、
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ3）、シクロブテン（Ｃ4）、シクロペンテン（Ｃ5）、シクロヘキセン（Ｃ6）、メチルシクロプロペン（Ｃ4）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ5）、メチルシクロブテン（Ｃ5）、ジメチルシクロブテン（Ｃ6）、メチルシクロペンテン（Ｃ6）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ7）及びメチルシクロヘキセン（Ｃ7）、ならびに
飽和多環式炭化水素化合物：
ノルカラン（Ｃ7）、ノルピナン（Ｃ7）、ノルボルナン（Ｃ7）。
【００４０】
Ｃ3-20ヘテロシクリル：本明細書で使用する用語「Ｃ3-20ヘテロシクリル」は、複素環式化合物の１つの環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、３〜２０個の環原子を有し、このうち１〜１０個が環ヘテロ原子である、上記部分に関する。好ましくは、各環が、３〜７個の環原子を有し、このうち１〜４個が環ヘテロ原子である。
【００４１】
この文脈において、接頭語（例えば、Ｃ3-20、Ｃ3-7、Ｃ5-6など）は、炭素原子またはヘテロ原子にかかわらず、環原子数または環原子数の範囲を示す。例えば、本明細書で使用する用語「Ｃ5-6ヘテロシクリル」は、５または６個の環原子を有するヘテロシクリル基に関する。
【００４２】
単環式ヘテロシクリル基の例として、以下に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ1：アジリジン（Ｃ3）、アゼチジン（Ｃ4）、ピロリジン（テトラヒドロピロ−ル）（Ｃ5）、ピロリン（例えば、３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロ−ル）（Ｃ5）、２Ｈ−ピロ−ルまたは３Ｈ−ピロ−ル（イソピロ−ル、イソアゾ−ル）（Ｃ5）、ピペリジン（Ｃ6）、ジヒドロピリジン（Ｃ6）、テトラヒドロピリジン（Ｃ6）、アゼピン（Ｃ7）、
Ｏ1：オキシラン（Ｃ3）、オキセタン（Ｃ4）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ5）、オキソ−ル（ジヒドロフラン）（Ｃ5）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ6）、ジヒドロピラン（Ｃ6）、ピラン（Ｃ6）、オキセピン（Ｃ7）、
Ｓ1：チイラン（Ｃ3）、チエタン（Ｃ4）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ5）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ6）、チエパン（Ｃ7）、
Ｏ2：ジオキソラン（Ｃ5）、ジオキサン（Ｃ6）、及びジオキセパン（Ｃ7）、
Ｏ3：トリオキサン（Ｃ6）、
Ｎ2：イミダゾリジン（Ｃ5）、ピラゾリシン（ジアゾリジン）（Ｃ5）、イミダゾリン（Ｃ5）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾ−ル）（Ｃ5）、ピペラジン（Ｃ6）、
Ｎ1Ｏ1：テトラヒドロオキサゾ−ル（Ｃ5）、ジヒドロオキサゾ−ル（Ｃ5）、テトラヒドロイソオキサゾ−ル（Ｃ5）、ジヒドロイソオキサゾ−ル（Ｃ5）、モルホリン（Ｃ6）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ6）、ジヒドロオキサジン（Ｃ6）、オキサジン（Ｃ6）、
Ｎ1Ｓ1：チアゾリン（Ｃ5）、チアゾリジン（Ｃ5）、チオモルホリン（Ｃ6）、
Ｎ2Ｏ1：オキサジアジン（Ｃ6）、
Ｏ1Ｓ1：オキサチオ−ル（Ｃ5）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ6）、ならびに、
Ｎ1Ｏ1Ｓ1：オキサチアジン（Ｃ6）。
【００４３】
置換されている単環式ヘテロシクリル基の例として、環式形態の単糖類、例えば、フラノ−ス（Ｃ5）、例えば、アラビノフラノ−ス、リキソフラノ−ス、リボフラノ−ス、及びキシロフラノ−ス、ならびにピラノ−ス（Ｃ6）、例えば、アロピラノ−ス、アルトロピラノ−ス、グルコピラノ−ス、マンノピラノ−ス、グロピラノ−ス、イドピラノ−ス、ガラクトピラノ−ス及びタロピラノ−スに由来するものが挙げられる。
【００４４】
Ｃ5-20アリール：本明細書で使用する用語「Ｃ5-20アリール」は、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、３〜２０個の環原子を有する上記部分に関する。本明細書で使用する用語「Ｃ5-7アリール」は、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、５〜７個の環原子を有する当該部分に関し、本明細書で使用する用語「Ｃ5-10アリール」は、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、５〜１０個の環原子を有する上記部分に関する。好ましくは、各環は、５〜７個の環原子を有する。
【００４５】
この文脈において、接頭語（例えば、Ｃ3-20、Ｃ5-7、Ｃ5-6、Ｃ5-10など）は、炭素原子またはヘテロ原子にかかわらず、環原子数または環原子数の範囲を示す。例えば、本明細書で使用する用語「Ｃ5-6アリール」は、５または６個の環原子を有するアリール基に関する。
【００４６】
上記環原子は、「カルボアリール基」におけるように、全て炭素原子であってよい。
【００４７】
カルボアリール基の例として、ベンゼン（すなわちフェニル）（Ｃ6）、ナフタレン（Ｃ10）、アズレン（Ｃ10）、アントラセン（Ｃ14）、フェナントレン（Ｃ14）、ナフタセン（Ｃ18）、及びピレン（Ｃ16）に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
縮合環を含み、その少なくとも１つが芳香族環であるアリール基の例として、インダン（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン）（Ｃ9）、インデン（Ｃ9）、イソインデン（Ｃ9）、テトラリン（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン）（Ｃ10）、アセナフテン（Ｃ12）、フルオレン（Ｃ13）、フェナレン（Ｃ13）、アセフェナントレン（Ｃ15）、及びアセアントレン（Ｃ16）に由来する基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
代替的には、上記環原子は、「ヘテロアリール基」におけるように１つ以上のヘテロ原子を含んでいてよい。単環式ヘテロアリール基の例として、以下に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ1：ピロ−ル（アゾ−ル）（Ｃ5）、ピリジン（アジン）（Ｃ6）、
Ｏ1：フラン（オキソ−ル）（Ｃ5）、
Ｓ1：チオフェン（チオ−ル）（Ｃ5）、
Ｎ1Ｏ1：オキサゾ−ル（Ｃ5）、イソオキサゾ−ル（Ｃ5）、イソキサジン（Ｃ6）、
Ｎ2Ｏ1：オキサジアゾ−ル（フラザン）（Ｃ5）、
Ｎ3Ｏ1：オキサトリアゾ−ル（Ｃ5）、
Ｎ1Ｓ1：チアゾ−ル（Ｃ5）、イソチアゾ−ル（Ｃ5）、
Ｎ2：イミダゾ−ル（１，３−ジアゾ−ル）（Ｃ5）、ピラゾ−ル（１，２−ジアゾ−ル）（Ｃ5）、ピリダジン（１，２−ジアジン）（Ｃ6）、ピリミジン（１，３−ジアジン）（Ｃ6）（例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）（Ｃ6）、
Ｎ3：トリアゾ−ル（Ｃ5）、トリアジン（Ｃ6）、及び、
Ｎ4：テトラゾ−ル（Ｃ5）。
【００５０】
縮合環を含むヘテロアリールの例として：
ベンゾフラン（Ｏ1）、イソベンゾフラン（Ｏ1）、インドール（Ｎ1）、イソインドール（Ｎ1）、インドリジン（Ｎ1）、インドリン（Ｎ1）、イソインドリン（Ｎ1）、プリン（Ｎ4）（例えば、アデニン、グアニン）、ベンズイミダゾ−ル（Ｎ2）、インダゾ−ル（Ｎ2）、ベンズオキサゾ−ル（Ｎ1Ｏ1）、ベンズイソオキサゾ−ル（Ｎ1Ｏ1）、ベンゾジオキソ−ル（Ｏ2）、ベンゾフラザン（Ｎ2Ｏ1）、ベンゾトリアゾ−ル（Ｎ3）、ベンゾチオフラン（Ｓ1）、ベンゾチアゾ−ル（Ｎ1Ｓ1）、ベンゾチアジアゾ−ル（Ｎ2Ｓ）に由来する（２つの縮合環を含む）Ｃ9、
クロメン（Ｏ1）、イソクロメン（Ｏ1）、クロマン（Ｏ1）、イソクロマン（Ｏ1）、ベンゾジオキサン（Ｏ2）、キノリン（Ｎ1）、イソキノリン（Ｎ1）、キノリジン（Ｎ1）、ベンゾキサジン（Ｎ1Ｏ1）、ベンゾジアジン（Ｎ2）、ピリドピリジン（Ｎ2）、キノキサリン（Ｎ2）、キナゾリン（Ｎ2）、シンノリン（Ｎ2）、フタラジン（Ｎ2）、ナフチリジン（Ｎ2）、プテリジン（Ｎ4）に由来する（２つの縮合環を含む）Ｃ10、
ベンゾジアゼピン（Ｎ2）に由来する（２つの縮合環を含む）Ｃ11、
カルバゾ−ル（Ｎ1）、ジベンゾフラン（Ｏ1）、ジベンゾチオフェン（Ｓ1）、カルボリン（Ｎ2）、ペリミジン（Ｎ2）、ピリドインドール（Ｎ2）に由来する（３つの縮合環を含む）Ｃ13、ならびに、
アクリジン（Ｎ1）、キサンテン（Ｏ1）、チオキサンテン（Ｓ1）、オキサントレン（Ｏ2）、フェノキサチイン（Ｏ1Ｓ1）、フェナジン（Ｎ2）、フェノキサジン（Ｎ1Ｏ1）、フェノチアジン（Ｎ1Ｓ1）、チアントレン（Ｓ2）、フェナントリジン（Ｎ1）、フェナントロリン（Ｎ2）、フェナジン（Ｎ2）に由来する（３つの縮合環を含む）Ｃ14
が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
単独であるか、または、別の置換基の一部であるかにかかわらず、上記基は、それ自体が、それ自体及び以下に列挙するさらなる置換基から選択される１つ以上の基によって任意選択的に置換されていてよい。
【００５２】
ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、及び−Ｉ。
【００５３】
ヒドロキシ：−ＯＨ。
【００５４】
エーテル：−ＯＲ、式中、Ｒは、エーテル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基（Ｃ1-7アルコキシ基とも称される、以下に考察されている）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基（Ｃ3-20ヘテロシクリルオキシ基とも称される）、またはＣ5-20アリール基（Ｃ5-20アリールオキシ基とも称される）、好ましくはＣ1-7アルキル基である。
【００５５】
アルコキシ：−ＯＲ、式中、Ｒは、アルキル基、例えば、Ｃ1-7アルキル基である。Ｃ1-7アルコキシ基の例として、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓｅｃ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及び−Ｏ（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
アセタール：−ＣＨ（ＯＲ1）（ＯＲ2）、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アセタール置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、もしくはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基であり、または、「環式」アセタール基の場合、Ｒ1及びＲ2は、これらが結合している２つの酸素原子、及びこれらが結合している炭素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有する複素環式環を形成している。アセタール基の例として、−ＣＨ（ＯＭｅ）2、−ＣＨ（ＯＥｔ）2、及び−ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
ヘミアセタール：−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ1）、式中、Ｒ1は、ヘミアセタール置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。ヘミアセタール基の例として、−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
ケタール：−ＣＲ（ＯＲ1）（ＯＲ2）、式中、Ｒ1及びＲ2は、アセタールについて定義されている通りであり、Ｒは、水素以外のケタール置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。ケタール基の例として、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）2、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）2、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）2、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）2、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
ヘミケタール：−ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ1）、式中、Ｒ1は、ヘミアセタールについて定義されている通りであり、Ｒは、水素以外のヘミケタール置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。ヘミアセタール基の例として、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
オキソ（ケト、−オン）：＝Ｏ。
【００６１】
チオン（チオケトン）：＝Ｓ。
【００６２】
イミノ（イミン）：＝ＮＲ、式中、Ｒは、イミノ置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは水素またはＣ1-7アルキル基である。エステル基の例として、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ、及び＝ＮＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
ホルミル（カルボアルデヒド、カルボキシアルデヒド）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。
【００６４】
アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、式中、Ｒは、アシル置換基、例えば、Ｃ17アルキル基（別名、Ｃ1-7アルキルアシル、または、Ｃ1-7アルカノイル）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基（別名、Ｃ3-20ヘテロシクリルアシル）、またはＣ5-20アリール基（別名、Ｃ5-20アリールアシル）、好ましくはＣ1-7アルキル基である。アシル基の例として、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ3）3（ｔ−ブチリル）、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。
【００６６】
チオカルボキシ（チオカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。
【００６７】
チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。
【００６８】
チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。
【００６９】
イミド酸：−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。
【００７０】
ヒドロキサム酸：−Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。
【００７１】
エステル（カルボキシラート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、式中、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは、Ｃ1-7アルキル基である。エステル基の例として、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ2ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ3）3、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
アシルオキシ（逆エステル）：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ、式中、Ｒは、アシルオキシ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。アシルオキシ基の例として、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ3（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ3）3、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｐｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
オキシカルボイルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ、式中、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。エステル基の例として、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ2ＣＨ3、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ3）3、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
アミノ：−ＮＲ1Ｒ2、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基（別名、Ｃ1-7アルキルアミノ、または、ジ−Ｃ1-7アルキルアミノ）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＨまたはＣ1-7アルキル基であり、あるいは、「環式」アミノ基の場合、Ｒ1及びＲ2は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有する複素環式環を形成している。アミノ基は、第一級（−ＮＨ2）、第二級（−ＮＨＲ1）、または第三級（−ＮＨＲ1Ｒ2）であってよく、カチオン形態では、第四級（−+ＮＲ1Ｒ2Ｒ3）であってよい。アミノ基の例として、−ＮＨ2、−ＮＨＣＨ3、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2、−Ｎ（ＣＨ3）2、−Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、及び−ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。環式アミノ基の例として、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。アミド基の例として、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ2ＣＨ3、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、ならびに、Ｒ1及びＲ2が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、及びピペラジノカルボニルにおけるように複素環式構造を形成しているアミド基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７６】
チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ1Ｒ2、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。アミド基の例として、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ3、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ3）2、及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ1Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、式中、Ｒ1は、アミド置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは水素またはＣ1-7アルキル基であり、Ｒ2は、アシル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは水素またはＣ1-7アルキル基である。アシルアミド基の例として、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3、及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈが挙げられるが、これらに限定されない。Ｒ1及びＲ2は、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジル：
【化２５】
2021525265.tif 000027
におけるように、一緒になって環式構造を形成していてよい。
【００７８】
アミノカルボニルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。アミノカルボニルオキシ基の例として、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ2、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ2、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ2が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
ウレイド：−Ｎ（Ｒ1）ＣＯＮＲ2Ｒ3、式中、Ｒ2及びＲ3は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基であり、Ｒ1は、ウレイド置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは水素またはＣ1-7アルキル基である。ウレイド基の例として、−ＮＨＣＯＮＨ2、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ2、−ＮＨＣＯＮＥｔ2、−ＮＭｅＣＯＮＨ2、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ2、及び−ＮＭｅＣＯＮＥｔ2が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
グアニジノ：−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2。
【００８１】
テトラゾリル：４個の窒素原子及び１個の炭素原子を有する５員の芳香族環：
【化２６】
2021525265.tif 000028
【００８２】
イミノ：＝ＮＲ、式中、Ｒは、イミノ置換基、例えば、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＨまたはＣ1-7アルキル基である。イミノ基の例として、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、及び＝ＮＥｔが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
アミジン（アミジノ）：−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ2、式中、各Ｒは、アミジン置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＨまたはＣ1-7アルキル基である。アミジン基の例として、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ2、及び−Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ2が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
ニトロ：−ＮＯ2。
【００８５】
ニトロソ：−ＮＯ。
【００８６】
アジド：−Ｎ3。
【００８７】
シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：−ＣＮ。
【００８８】
イソシアノ：−ＮＣ。
【００８９】
シアナト：−ＯＣＮ。
【００９０】
イソシアナト：−ＮＣＯ。
【００９１】
チオシアノ（チオシアナト）：−ＳＣＮ。
【００９２】
イソチオシアノ（イソチオシアナト）：−ＮＣＳ。
【００９３】
スルフヒドリル（チオ−ル、メルカプト）：−ＳＨ。
【００９４】
チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ、式中、Ｒは、チオエーテル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基（別名、Ｃ1-7アルキルチオ基）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。Ｃ1-7アルキルチオ基の例として、−ＳＣＨ3及び−ＳＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９５】
ジスルフィド：−ＳＳ−Ｒ、式中、Ｒは、ジスルフィド置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基（本明細書においてＣ1-7アルキルジスルフィドとも称される）である。Ｃ1-7アルキルジスルフィド基の例として、−ＳＳＣＨ3及び−ＳＳＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、式中、Ｒは、スルフィン置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィン基の例として、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ3及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ、式中、Ｒは、スルホン置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは、例えば、フッ素化もしくは過フッ素化Ｃ1-7アルキル基を含めたＣ1-7アルキル基である。スルホン基の例として、−Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ3（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）2ＣＦ3（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ3（エシル）、−Ｓ（＝Ｏ）2Ｃ4Ｆ9（ノナフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＦ3（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2（タウリル）、−Ｓ（＝Ｏ）2Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４−ブロモフェニルスルホニル（ブロシル）、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレンスルホナート（ナプシル）、及び５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−イルスルホナート（ダンシル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
スルフィン酸（スルフィノ）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＯ2Ｈ。
【００９９】
スルホン酸（スルホ）：−Ｓ（＝Ｏ）2ＯＨ、−ＳＯ3Ｈ。
【０１００】
スルフィナート（スルフィン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ；式中、Ｒは、スルフィナート置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィナート基の例として、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ3（メトキシスルフィニル；メチルスルフィナート）及び−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ2ＣＨ3（エトキシスルフィニル；エチルスルフィナート）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
スルホナート（スルホン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）2ＯＲ、式中、Ｒは、スルホナート置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルホナート基の例として、−Ｓ（＝Ｏ）2ＯＣＨ3（メトキシスルホニル；メチルスルホナート）及び−Ｓ（＝Ｏ）2ＯＣＨ2ＣＨ3（エトキシスルホニル；エチルスルホナート）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
スルフィニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ、式中、Ｒは、スルフィニルオキシ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィニルオキシ基の例として、−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ3及び−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
スルホニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）2Ｒ、式中、Ｒは、スルホニルオキシ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルホニルオキシ基の例として、−ＯＳ（＝Ｏ）2ＣＨ3（メシラート）及び−ＯＳ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ3（エシラート）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
サルフェート：−ＯＳ（＝Ｏ）2ＯＲ、式中、Ｒは、サルフェート置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。サルフェート基の例として、−ＯＳ（＝Ｏ）2ＯＣＨ3及び−ＳＯ（＝Ｏ）2ＯＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
スルファミル（スルファモイル、スルフィン酸アミド、スルフィンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。スルファミル基の例として、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ2、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ3）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ3）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、及び−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
スルホンアミド（スルフィナモイル、スルホン酸アミド、スルホンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＲ1Ｒ2、式中、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。スルホンアミド基の例として、−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨ2、−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨ（ＣＨ3）、−Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（ＣＨ3）2、−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ3）、−Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、及び−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０７】
スルファミノ：−ＮＲ1Ｓ（＝Ｏ）2ＯＨ、式中、Ｒ1は、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。スルファミノ基の例として、−ＮＨＳ（＝Ｏ）2ＯＨ及び−Ｎ（ＣＨ3）Ｓ（＝Ｏ）2ＯＨが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
スルホンアミノ：−ＮＲ1Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ、式中、Ｒ1は、アミノ基について定義されているアミノ置換基であり、Ｒは、スルホンアミノ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルホンアミノ基の例として、−ＮＨＳ（＝Ｏ）2ＣＨ3及び−Ｎ（ＣＨ3）Ｓ（＝Ｏ）2Ｃ6Ｈ5が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
スルフィンアミノ：−ＮＲ1Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、式中、Ｒ1は、アミノ基について定義されているアミノ置換基であり、Ｒは、スルフィンアミノ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィンアミノ基の例として、−ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ3及び−Ｎ（ＣＨ3）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ6Ｈ5が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１０】
ホスフィノ（ホスフィン）：−ＰＲ2、式中、Ｒは、ホスフィノ置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、またはＣ5-20アリール基である。ホスフィノ基の例として、−ＰＨ2、−Ｐ（ＣＨ3）2、−Ｐ（ＣＨ2ＣＨ3）2、−Ｐ（ｔ−Ｂｕ）2、及び−Ｐ（Ｐｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１１】
ホスホ：−Ｐ（＝Ｏ）2。
【０１１２】
ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ2、式中、Ｒは、ホスフィニル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくはＣ1-7アルキル基またはＣ5-20アリール基である。ホスフィニル基の例として、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ3）2、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ2ＣＨ3）2、−Ｐ（＝Ｏ）（ｔ−Ｂｕ）2、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
ホスホン酸（ホスホノ）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）2。
【０１１４】
ホスホナート（ホスホノエステル）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）2、式中、Ｒは、ホスホナート置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、またはＣ5-20アリール基である。ホスホナート基の例として、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ3）2、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2、及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１５】
リン酸（ホスホノオキシ）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）2。
【０１１６】
ホスフェート（ホスホノオキシエステル）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）2、式中、Ｒは、ホスフェート置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、またはＣ5-20アリール基である。ホスフェート基の例として、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ3）2、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１７】
亜リン酸：−ＯＰ（ＯＨ）2。
【０１１８】
ホスファイト：−ＯＰ（ＯＲ）2、式中、Ｒは、ホスファイト置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、またはＣ5-20アリール基である。ホスファイト基の例として、−ＯＰ（ＯＣＨ3）2、−ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、−ＯＰ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2、及び−ＯＰ（ＯＰｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
ホスホロアミダイト：−ＯＰ（ＯＲ1）−ＮＲ22、式中、Ｒ1及びＲ2は、ホスホロアミダイト置換基、例えば、−Ｈ、（任意選択的に置換されている）Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、またはＣ5-20アリール基である。ホスホロアミダイト基の例として、−ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ3）−Ｎ（ＣＨ3）2、−ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ3）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）2、及び−ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２０】
ホスホロアミダート：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ1）−ＮＲ22、式中、Ｒ1及びＲ2は、ホスホロアミダート置換基、例えば、−Ｈ、（任意選択的に置換されている）Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、またはＣ5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、またはＣ5-20アリール基である。ホスホロアミダート基の例として、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）−Ｎ（ＣＨ3）2、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）2、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２１】
アルキレン
Ｃ3-12アルキレン：本明細書で使用する用語「Ｃ3-12アルキレン」は、脂肪族であっても脂環式であってもよく、また、飽和、部分不飽和、または完全不飽和であってよい、３〜１２個の炭素原子（他に断りの無い限り）を有する炭化水素化合物の２つの水素原子であって、両方が同じ炭素原子からであるか、２つの異なる炭素原子のそれぞれからのものであるかのいずれかである当該２つの水素原子を除去することによって得られる二座部分に関する。ゆえに、用語「アルキレン」には、以下に考察されている、サブクラスのアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンなどが含まれる。
【０１２２】
直鎖飽和Ｃ3-12アルキレン基の例として、ｎが３〜１２の整数である−（ＣＨ2）n−、例えば、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−（プロピレン）、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−（ブチレン）、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−（ペンチレン）及び−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ−2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−（ヘプチレン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２３】
分岐鎖飽和Ｃ3-12アルキレン基の例として、−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−、−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）−、−ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2−、及び−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2−が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
直鎖部分不飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12アルケニレン、及びアルキニレン基）として、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−、−ＣＨ2−ＣＨ＝ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ＝ＣＨ−、及び−ＣＨ2−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ2−が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
分岐鎖部分不飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12アルケニレン及びアルキニレン基）の例として、−Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨ−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ3）−及び−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ3）−が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
脂環式飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12シクロアルキレン）の例として、シクロペンチレン（例えば、シクロペンタ−１，３−イレン）、及びシクロヘキシレン（例えば、シクロヘキサ−１，４−イレン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２７】
脂環式部分不飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12シクロアルキレン）の例として、シクロペンテニレン（例えば、４−シクロペンテン−１，３−イレン）、シクロヘキセニレン（例えば、２−シクロヘキセン−１，４−イレン、３−シクロヘキセン−１，２−イレン、２，５−シクロヘキサジエン−１，４−イレン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２８】
リガンド単位
本発明の第１の態様で使用するリガンド単位は、細胞結合剤、より具体的には、スピロシクロプロピル−シクロペンタジエンを含む各重鎖上に少なくとも１つの複合化部位を含む、改変された抗体、またはその抗原結合フラグメントである。本発明に従う使用に適している特定の改変された抗体の例は、参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２／０６４７３３（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５９７７５として出願されている）に開示されている。開示した抗体は、後出の実施例に記載したように、スピロシクロプロピル−シクロペンタジエン部分を提供するために、さらなる改変を必要とする。
【０１２９】
本発明の第２の態様で使用するリガンド単位は、細胞結合剤、より具体的には、スピロシクロプロピル−シクロペンタジエンを含む少なくとも１つの結合部位を有する改変された抗体、または、その抗原結合断片である。
【０１３０】
第１及び第２の態様の一部の実施形態では、当該ＰＢＤは、当該抗体のＳ２３９位に結合する。
【０１３１】
抗体
本明細書で使用する用語「抗体」は、最も広義の意味で用いられ、具体的には、モノクロ−ナル抗体、ポリクロ−ナル抗体、二量体、多量体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、及び抗体フラグメントを包含するが、ただし、それらが所望の生物活性を示す限りにおいてである（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または他の種由来抗体が可能である。抗体とは、免疫系により産生される、特定の抗原を認識してそれに結合することができるタンパク質である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、複数の抗体のＣＤＲで認識される多数の結合部位、別名、エピトープを有する。異なるエピトープに特異的に結合する抗体は、それぞれ異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は、１つ以上の対応する抗体を有する可能性がある。抗体として、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、注目している標的の抗原に免疫学的に結合する抗原結合部位、または、その一部分を有する分子が挙げられ、そのような標的として、癌細胞または自己免疫疾患に関連した自己免疫抗体を産生する細胞が挙げられるが、これらに限定されない。免疫グロブリンは、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及び、ＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及び、ＩｇＡ２）、または、サブクラスの免疫グロブリン分子が可能である。免疫グロブリンは、任意の種由来のものが可能であり、ヒト、マウス、またはウサギ起原が挙げられる。
【０１３２】
「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部分、一般的には、全長抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例として、Ｆ（ａｂ’）2、及びｓｃＦｖフラグメント、及び上記のもののいずれかの、癌細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫学的に結合する二量体のエピトープ結合フラグメント、単鎖抗体分子；ならびに、抗体フラグメントから形成される多特異性抗体が挙げられる。
【０１３３】
本発明の実施形態で使用される腫瘍関連抗原及び同族の抗体を、以下に列挙し、本明細書に援用されるＷＯ／２０１７／１８６８９４の１４〜８６頁にさらに詳細に記述する。
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質タンパク質受容体ＩＢ型）
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通型上皮抗原）
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６）
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、ｓｅｍａドメイン、７回トロンボスポンジン反復配列（ｓｅｖｅｎ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ  ｒｅｐｅａｔｓ）（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通型上皮抗原２、６回膜貫通型前立腺タンパク質）
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位カチオン５チャンネル、サブファミリーＭ、メンバー４）
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形腫由来増殖因子）
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２）
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連β）、Ｂ２９）
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質  ５  １ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６）
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１）
（２０）ＩＬ２０Ｒ−アルファ（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７）
（２１）ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ）
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５）
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ）
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体）
（２５）ＧＥＤＡ
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４）
（２７ａ）ＣＤ２２（ＣＤ２２分子）
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９アルファ）、免疫グロブリン関連アルファ、Ｂ細胞特異的タンパク質（Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合で相互作用し、表面でＩｇＭ分子と複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達する）、ｐＩ：４．８４、ＭＷ：２５０２８、ＴＭ：２［Ｐ］、遺伝子染色体：１９ｑ１３．２）。
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインにより活性化されるＧタンパク質共役受容体、このＧタンパク質共役受容体は、リンパ球遊走及び体液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染、ならびに恐らくはＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において役割を果たす）。３７２ａａ、ｐｌ：８．５４、ＭＷ：４１９５９、ＴＭ：７［Ｐ］、遺伝子染色体：１１ｑ２３．３。
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合して、２０個のそのペプチドをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提供するＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、２７３ａａ、ｐＩ：６．５６、ＭＷ：３０８２０、ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：６ｐ２１．３）
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャンネル５、細胞外ＡＴＰにより開口するイオンチャンネルであり、このチャンネルは、シナプス伝達及び神経新生に関与している可能性があり、この不全が突発性排尿筋不安定という病態生理の一因である可能性がある）、４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３、ＭＷ：４７２０６、ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：１７ｐ１３．３）。
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）；３５９ａａ、ｐＩ：８．６６、ＭＷ：４０２２５、ＴＭ：１５［Ｐ］、遺伝子染色体：９ｐ１３．３）。
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンに富む反復配列（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質であり、Ｂ細胞活性化及びアポト−シスを制御し、この機能喪失は、全身性エリトマトーデスの患者で疾患活性の上昇を伴う）。６６１ａａ、ｐＩ：６．２０、ＭＷ：７４１４７、ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：５ｑ１２）。
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、免疫グロブリンＦｃドメインの推定受容体であり、Ｃ２型Ｉｇ様ドメイン及びＩＴＡＭドメインを含有し、Ｂリンパ球分化において役割を果たす可能性がある）；４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、ＭＷ：４６９２５  ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２）
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞発達及びリンパ腫形成で役割を担っている可能性がある推定免疫受容体である。転位置による遺伝子の調節解除が、ある種のＢ細胞悪性腫瘍で生じる）。９７７ａａ、ｐＩ：６．８８、ＭＷ：１０６４６８、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１）
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレギュリン（ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ）、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定膜貫通プロテオグリカン、増殖因子及びフォリスタチンのＥＧＦ／ヘレグリンファミリーと関連）。３７４ａａ）
（３７）ＰＳＭＡ−ＦＯＬＨ１（葉酸ヒドロラーゼ（前立腺特異的膜抗原）１）
（３８）ＳＳＴ（ソマトスタチン受容体；注、５つのサブタイプが存在する）
（３８．１）ＳＳＴＲ２（ソマトスタチン受容体２）
（３８．２）ＳＳＴＲ５（ソマトスタチン受容体５）
（３８．３）ＳＳＴＲ１
（３８．４）ＳＳＴＲ３
（３８．５）ＳＳＴＲ４
ＡｖＢ６−両方のサブユニット（３９＋４０）
（３９）ＩＴＧＡＶ（インテグリン、アルファＶ）
（４０）ＩＴＧＢ６（インテグリン、ベータ６）
（４１）ＣＥＡＣＡＭ５（癌胎児抗原関連細胞接着分子５）
（４２）ＭＥＴ（ｍｅｔ癌原遺伝子；肝細胞増殖因子受容体）
（４３）ＭＵＣ１（ムチン１、細胞表面関連）
（４４）ＣＡ９（炭酸脱水酵素ＩＸ）
（４５）ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、転写物変異型３）
（４６）ＣＤ３３（ＣＤ３３分子）
（４７）ＣＤ１９（ＣＤ１９分子）
（４８）ＩＬ２ＲＡ（インタ−ロイキン２受容体、アルファ）、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００４１７．２）
（４９）ＡＸＬ（ＡＸＬ受容体チロシンキナーゼ）
（５０）ＣＤ３０−ＴＮＦＲＳＦ８（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー８）
（５１）ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）−ＴＮＦＲＳＦ１７（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー１７）
（５２）ＣＴ Ａｇｓ−ＣＴＡ（癌精巣抗原）
（５３）ＣＤ１７４（ルイス式Ｙ）−ＦＵＴ３（フコシルトランスフェラーゼ３（ガラクトシド３（４）−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ、ルイス式血液型群）
（５４）ＣＬＥＣ１４Ａ（Ｃ型レクチンドメインファミリー１４、メンバーＡ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ１７５０６０）
（５５）ＧＲＰ７８−ＨＳＰＡ５（熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（グルコ−ス制御タンパク質、７８ｋＤａ）
（５６）ＣＤ７０（ＣＤ７０分子）Ｌ０８０９６
（５７）幹細胞特異的抗原。例えば、以下：
・５Ｔ４（以下のエントリ−（６３）を参照）
・ＣＤ２５（上記エントリ−（４８）を参照）
・ＣＤ３２
・ＬＧＲ５／ＧＰＲ４９
・プロミニン（Ｐｒｏｍｉｎｉｎ）／ＣＤ１３３
（５８）ＡＳＧ−５
（５９）ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ３）
（６０）ＰＲＲ４（プロリンリッチ４（涙腺））
（６１）ＧＣＣ−ＧＵＣＹ２Ｃ（グアニル酸シクラーゼ２Ｃ（熱安定性エンテロトキシン受容体）
（６２）Ｌｉｖ−１−ＳＬＣ３９Ａ６（溶質担体ファミリー３９（亜鉛輸送体）、メンバー６）
（６３）５Ｔ４、トロホブラスト糖タンパク質、ＴＰＢＧ−ＴＰＢＧ（トロホブラスト糖タンパク質）
（６４）ＣＤ５６−ＮＣＭＡ１（神経細胞接着分子１）
（６５）ＣａｎＡｇ（腫瘍関連抗原ＣＡ２４２）
（６６）ＦＯＬＲ１（葉酸受容体１）
（６７）ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質（膜貫通型）ｎｍｂ）
（６８）ＴＩＭ−１−ＨＡＶＣＲ１（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１）
（６９）ＲＧ−１／前立腺腫瘍標的ミンディン−ミンディン／ＲＧ−１
（７０）Ｂ７−Ｈ４−ＶＴＣＮ１（Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１）
（７１）ＰＴＫ７（ＰＴＫ７タンパク質チロシンキナーゼ７）
（７２）ＣＤ３７（ＣＤ３７分子）
（７３）ＣＤ１３８−ＳＤＣ１（シンデカン１）
（７４）ＣＤ７４（ＣＤ７４分子、主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩＩインバリアント鎖）
（７５）クローディン−ＣＬ（クローディン）
（７６）ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）
（７７）Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ３）−ＥＲＢＢ３（ｖ−ｅｒｂ−ｂ２赤芽球性白血病ウイルス性癌遺伝子ホモログ３（トリ））
（７８）ＲＯＮ−ＭＳＴ１Ｒ（マクロファ−ジ刺激１受容体（ｃ−ｍｅｔ関連チロシンキナーゼ））
（７９）ＥＰＨＡ２（ＥＰＨ受容体Ａ２）
（８０）ＣＤ２０−ＭＳ４Ａ１（４回膜貫通ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１）
（８１）テネイシンＣ−ＴＮＣ（テネイシンＣ）
（８２）ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質、α）
（８３）ＤＫＫ−１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ１ホモログ（アフリカツメガエル））
（８４）ＣＤ５２（ＣＤ５２分子）
（８５）ＣＳ１−ＳＬＡＭＦ７（ＳＬＡＭファミリーメンバー７）
（８６）エンドグリン−ＥＮＧ（エンドグリン）
（８７）アネキシンＡ１−ＡＮＸＡ１（アネキシンＡ１）
（８８）Ｖ−ＣＡＭ（ＣＤ１０６）−ＶＣＡＭ１（血管細胞接着分子１）
【０１３４】
治療方法
本発明の化合物は、治療方法で使用することができる。治療方法も提供されており、本方法は、治療を必要としている治療対象に、治療上有効量の式Ｉの複合体を投与することを含む。用語「治療上有効量」は、患者で有益性を示すのに十分な量である。そのような有益性とは、少なくとも１種の症状の少なくとも改善であってもよい。実際に投与される量ならびに投与の速度及び時間経過は、治療されようとしているものの性質及び重篤度に依存するだろう。治療の処方（例えば、投薬量の決定）は、一般医及び他の医師の責任能力の範囲内である。
【０１３５】
複合体は、治療しようとする症状に応じて、単独で投与することも、または他の治療と、同時または順次で併用投与することもできる。治療及び療法の例として、化学療法（例えば、薬物をはじめとする活性作用剤の投与、手術；及び、放射線療法が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３６】
本発明による、及び本発明に従って使用するための、医薬組成物は、活性成分、すなわち式Ｉの複合体の他に、当業者に周知である医薬として許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、または他の材料を含むことができる。そのような材料は、無毒でなければならず、かつ活性成分の効力に干渉してはならない。担体または他の材料の詳細な性質は、投与経路に依存するだろう。投与経路は、経口であってもよいし、注射、例えば皮膚注射、皮下注射、または静脈内注射によるものでもよい。
【０１３７】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、粉剤、または液状の形状が可能である。錠剤は、固形担体またはアジュバントを含むことができる。液状医薬組成物は、一般に、液状担体、例えば、水、石油、動物油もしくは植物油、鉱物油、または合成油を含む。生理食塩水、ブドウ糖もしくは他の糖溶液、またはグリコ−ル、例えばエチレングリコ−ル、プロピレングリコ−ル、またはポリエチレングリコ−ルも含めることができる。カプセル剤は、固形担体、例えばゼラチンを含むことができる。
【０１３８】
静脈内注射、皮膚注射、または皮下注射、あるいは患部への注射用として、活性成分は、非経口で許容可能な水溶液の形をとることができ、この水溶液は、発熱物質を含まず、かつ適切なｐＨ、等張力、及び安定性を有する。当業者なら、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性ビヒクルを用いて適切な溶液を調製することが容易にできる。保存剤、安定剤、緩衝液、抗酸化剤、及び／または他の添加剤も、必要に応じて、含ませることができる。
【０１３９】
複合体は、増殖性疾患及び自己免疫疾患を治療するのに使用され得る。用語「増殖性疾患」は、過剰細胞または異常細胞の望ましくないまたは制御不能の細胞増殖に関係し、そのような増殖は、インビトロ、または、インビボにおける、望ましくない、例えば腫瘍形成または過形成性の増殖である。
【０１４０】
増殖性症状の例として、良性、前悪性、及び悪性の細胞増殖が挙げられるが、これらに限定されず、そのような細胞増殖として、新生物及び腫瘍（例えば、組織球腫、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫）、がん（例えば、肺癌、小細胞肺癌、胃腸癌、腸癌、大腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、黒色腫)、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖性障害（例えば、結合組織のもの）、及び粥状動脈硬化が挙げられるが、これらに限定されない。対象となる他のがんとして、血液系、悪性腫瘍、例えば、白血病及びリンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫、ならびにサブタイプ、例えば、ＤＬＢＣＬ、辺縁帯、マントル層及び小胞、ホジキンリンパ腫、ＡＭＬ、ならびにＢまたはＴ細胞由来の他のがんが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４１】
自己免疫疾患の例として以下が挙げられる：関節リウマチ、自己免疫脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、アレルギ−性脳脊髄炎）、乾癬性関節炎、内分泌性眼障害、ぶどう膜網膜炎、全身性紅斑性狼瘡、重症筋無力症、グレーブス病、糸球体腎炎、自己免疫肝臓障害、炎症性腸疾患（例えば、クロ−ン病）、アナフィラキシ−、アレルギ−反応、シェ−グレン症候群、Ｉ型糖尿病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナ−肉芽腫症、線維筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性内分泌腺不全、シュミット症候群、自己免疫性ブドウ膜炎、アジソン病、副腎炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、胃の萎縮症、慢性肝炎、ルポイド肝炎、粥状動脈硬化、亜急性皮膚エリテマト−デス、副甲状腺機能低下症、ドレスラ−症候群、自己免疫性血小板減少症、突発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、尋常性天疱瘡、天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円形脱毛症、類天疱瘡、強皮症、進行性全身性硬化症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レイノ−現象、食道運動障害、手指硬化症、及び毛細血管拡張症）、男性及び女性の自己免疫性不妊症、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、混合性結合組織病、結節性多発動脈炎、全身性壊死性血管炎、アトピ−性皮膚炎、アトピ−性鼻炎、グッドパスチャ−症候群、シャ−ガス病、サルコイド−シス、リウマチ熱、喘息、再発性流産、抗リン脂質症候群、農夫肺、多形性紅斑、心術後症候群、クッシング症候群、自己免疫性慢性活動性肝炎、愛鳥家肺、中毒性表皮壊死症、アルポ−ト症候群、肺胞炎、アレルギ−性肺胞炎、線維化性肺胞炎、間質性肺疾患、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、輸血反応、高安動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、側頭動脈炎、住血吸虫症、巨細胞性動脈炎、回虫症、アスペルギルス症、サムタ−症候群、湿疹、リンパ腫様肉芽腫症、ベーチェット病、キャプラン症候群、川崎病、デング熱、脳脊髄炎、心内膜炎、心内膜心筋線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、乾癬、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シュルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、慢性毛様体炎、異慢性毛様体炎、フックス毛様体炎、ＩｇＡ腎症、ヘノッホ−シェ−ンライン紫斑病、移植片対宿主病、移植拒絶反応、心筋症、イ−トン−ランバ−ト症候群、再発性多発性軟骨炎、クリオグロブリン血症、ワルデンストレームマクログロブリン血症、エバンス症候群、及び自己免疫性腺機能不全。
【０１４２】
一部の実施形態では、自己免疫疾患は、Ｂリンパ球の障害（例えば、全身性紅斑性狼瘡、グッドパスチャ−症候群、関節リウマチ、及びＩ型糖尿病）、Ｔｈ１リンパ球の障害（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェ−グレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナ−肉芽腫症、結核、もしくは移植片対宿主病）、またはＴｈ２リンパ球の障害（例えば、アトピ−性皮膚炎、全身性紅斑性狼瘡、アトピ−性喘息、鼻結膜炎、アレルギ−性鼻炎、オ−メン症候群、全身性硬化症、もしくは慢性移植片対宿主病）である。一般に、樹状細胞が関与する障害は、Ｔｈ１リンパ球またはＴｈ２リンパ球の障害を含む。一部の実施形態では、自己免疫性疾患は、Ｔ細胞媒介免疫障害である。
【０１４３】
一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１〜約４ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１〜約３ｍｇ／ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０１４４】
薬物積載量
薬物積載量（ｐ）は、細胞結合剤、例えば、抗体あたりのＰＢＤ薬物の平均数である。
【０１４５】
本発明の第１の態様では、これは、常に１である。しかしながら、いずれかの組成物は、ＰＢＤを複合化する抗体、及びＰＢＤを複合化しない抗体を含むことができる。したがって組成物に対して、薬物積載量（または、ＤＡＲ）は、１未満、例えば、０．７５以上、０．８０以上、０．８５以上、０．９０以上、または０．９５以上であることができる。
【０１４６】
第２の態様では、薬物積載量を、ｐで表している。この薬物積載量は、細胞結合剤あたり、１〜８個の薬物（Ｄ）の範囲、すなわち、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、及び、８つの薬物部分が、当該細胞結合剤に共有結合する。複合体の組成物は、細胞結合剤の集団、例えば、１〜８つの薬物と結合した抗体を含む。
【０１４７】
共役反応由来のＡＤＣの調製での抗体あたりの薬物の平均数は、ＵＶ、逆相ＨＰＬＣ、ＨＩＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、及び、電気泳動などの従来の手段で特徴決定することができる。ｐに関して、ＡＤＣの定量的分布も決定し得る。ＥＬＩＳＡによって、ＡＤＣの特定の調製物でのｐの平均値を決定し得る（Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２）。しかしながら、ｐ（薬物）値の分布は、ＥＬＩＳＡの抗体−抗原結合、及び、検出限界では識別できない。また、抗体−薬物複合体の検出のためのＥＬＩＳＡアッセイでは、重鎖または軽鎖フラグメントなどの薬物部分が抗体に結合している箇所、または、特定のアミノ酸残基は決定しない。一部の事例では、ｐが他の薬物積載量であるＡＤＣに由来する特定の値を示す均質なＡＤＣの分離、精製、及び、特徴決定は、逆相ＨＰＬＣ、または、電気泳動などの手段によって達成し得る。このような技術は、他のタイプの複合体にも適用可能である。
【０１４８】
１つの実施形態では、細胞結合剤あたりの二量体ピロロベンゾジアゼピン基の平均数は、１〜２０の範囲である。一部の実施形態では、この範囲は、１〜８、２〜８、２〜６、２〜４、及び、４〜８から選択する。
【０１４９】
一般的な合成経路
ＰＢＤ化合物の合成は、以下の参照文献において広く論じられており、これらの考察は、参照により本明細書に援用される：
ａ）ＷＯ００／１２５０８（頁１４〜３０）、
ｂ）ＷＯ２００５／０２３８１４（頁３〜１０）、
ｃ）ＷＯ２００４／０４３９６３（頁２８〜２９）、及び
ｄ）ＷＯ２００５／０８５２５１（頁３０〜３９）。
【０１５０】
合成経路
式１：
【化２７】
2021525265.tif 000029
式中、ＲL1及びＲL2は、抗体に結合するとＲLL1及びＲLL2とを形成する基である、本発明の第１の態様の複合体を作り出すために使用する薬物−リンカーは、式２の化合物：
【化２８】
2021525265.tif 000030
式中、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’、Ｙ、Ｙ’及びＲ”は、本発明の第１の態様で定義されている通りであり、Ｒpre-L1は、ＲL1の前駆体であり、Ｒpre-L2は、ＲL2の前駆体である、から合成することができる――この方法は、ＲL1及びＲL2が式ＩＩＩａのものである式Ｉの化合物に特に適用可能である。これらの化合物について、Ｒpre-L1及びＲpre-L2は、一般的には、ＲL1及びＲL2の部分、例えば、式ＩＩＩａ’の基である：
【化２９】
2021525265.tif 000031
。かかる場合において、反応は、基ＧL（結合すると、ＧLLの一部を形成する基）を付加することを含む。
【０１５１】
式２の化合物は、式３の化合物を脱保護することによって作製され得る：
【化３０】
2021525265.tif 000032
式中、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’、Ｙ、Ｙ’及びＲ”は、式Ｉの化合物について定義されている通りであり、Ｒpre-L1Protは、Ｒpre-L1の保護されたバ−ジョンであり、Ｒpre-L2Protは、Ｒpre-L2の保護されたバ−ジョンであり、プロットは、適切なカルボキシ／ヒドロキシ保護基を表している。
【０１５２】
式３の化合物は、式４の化合物の閉環によって作製され得る：
【化３１】
2021525265.tif 000033
ここで、閉環は、例えば、Ｓｗｅｒｎによる酸化によって行われる。
【０１５３】
式４の化合物は、２つのアミノ保護基の付加によって式５の化合物から合成され得る：
【化３２】
2021525265.tif 000034
これらの基が異なる場合、段階的付加は、１つのアミノ基の単純な保護により（例えば、Ｆｍｏｃにより）、続いて、他のアミノ基における所望の保護基の導入により達成され得る。これは、簡単な保護基の除去と、後続の他の所望のアミノ保護基の導入に従い得る。
【０１５４】
式５の化合物は、既知の方法、例えば、ＷＯ２０１１／１３０５９８に開示されている方法によって合成されてよい。
【０１５５】
本発明の第２の態様の複合体を形成するために使用する薬物リンカーは、ＷＯ２０１８／０６９４９０、Ｗ０２０１４／０５７０７４、ＷＯ２０１１／１３０５９８など、当該技術分野での説明にしたがって、合成することができる。
【０１５６】
薬物複合体の合成
抗体は、実施例で記載されているようにして、一般的に、薬物リンカー化合物に複合化することができる。
【０１５７】
さらなる優先事項
以下の優先事項は、上記した本発明のすべての態様に適用されてよく、または、単一の態様に関するものとし得る。優先事項は、任意の組み合わせで一つに組み合わされてよい。
【０１５８】
Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’及びＹ’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a及びＹと同じ基から選択される。一部の実施形態では、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’及びＹ’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a及びＹと同じである。
【０１５９】
一部の実施形態では、Ｒ12は、Ｒ2と同じである。
【０１６０】
二量体連結
一部の実施形態では、Ｙ及びＹ’は、両方がＯである。
【０１６１】
一部の実施形態では、Ｒ”は、置換基を有さないＣ3-7アルキレン基である。これらの実施形態の一部では、Ｒ”は、Ｃ3、Ｃ5またはＣ7アルキレンである。特に、Ｒ”は、Ｃ3またはＣ5アルキレンであってよい。
【０１６２】
他の実施形態では、Ｒ”は、以下の式の基であり：
【化３３】
2021525265.tif 000035
式中、ｒは、１または２である。
【０１６３】
Ｒ6〜Ｒ9
一部の実施形態では、Ｒ9は、Ｈである。
【０１６４】
一部の実施形態では、Ｒ6は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＮＨ2、ニトロ、及び、ハロから選択され、そして、Ｈまたはハロから選択され得る。これらの実施形態の一部では、Ｒ6は、Ｈである。
【０１６５】
一部の実施形態では、Ｒ7は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、及びハロから選択される。これらの実施形態の一部では、Ｒ7は、Ｈ、ＯＨ及びＯＲから選択され、式中、Ｒは、任意選択的に置換されているＣ1-7アルキル、Ｃ3-10ヘテロシクリル及びＣ5-10アリール基から選択される。Ｒは、より好ましくは、Ｃ1-4アルキル基であってよく、置換されていても置換されていなくてもよい。対象となる置換基は、Ｃ5-6アリール基（例えば、フェニル）である。７位における特に好ましい置換基は、ＯＭｅ及びＯＣＨ2Ｐｈである。特定の対象となる他の置換基は、ジメチルアミノ（すなわち、−ＮＭｅ2）、−（ＯＣ2Ｈ4）qＯＭｅ（ｑは、０〜２である）、モルホリノ、ピペリジニル、及び、Ｎ−メチル−ピペラジニルを含めた窒素含有Ｃ6ヘテロシクリルである。
【０１６６】
これらの実施形態及び優先事項は、それぞれＲ9’、Ｒ6’及びＲ7’に適用される。
【０１６７】
Ｄ及びＤ’
一部の実施形態では、Ｄ及びＤ’は、それぞれＤ１及びＤ’１である。
【０１６８】
一部の実施形態では、Ｄ及びＤ’は、それぞれＤ２及びＤ’２である。
【０１６９】
Ｒ2
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ2は、以下から選択される：
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル、及び、ビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリール基、
（ｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｄ）
【化３４】
2021525265.tif 000036
式中、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、式中、Ｒ2基における炭素原子の合計数が多くて５である、
（ｅ）
【化３５】
2021525265.tif 000037
式中、Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が：ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される基である、ならびに
（ｆ）
【化３６】
2021525265.tif 000038
式中、Ｒ14は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及び、チオフェニルから選択される。
【０１７０】
Ｒ2は、Ｃ5-10アリール基であるとき、Ｃ5-7アリール基であってよい。Ｃ5-7アリール基は、フェニル基またはＣ5-7ヘテロアリール基、例えばフラニル、チオフェニル及びピリジルであってよい。一部の実施形態では、Ｒ2は、好ましくはフェニルである。他の実施形態では、Ｒ2は、好ましくはチオフェニル、例えば、チオフェン−２−イル及びチオフェン−３−イルである。
【０１７１】
Ｒ2は、Ｃ5-10アリール基であるとき、Ｃ8-10アリール、例えば、キノリニルまたはイソキノリニル基であってよい。キノリニルまたはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位を通してＰＢＤコアに結合されていてよい。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル及びキノリン−８−イルであってよい。これらのうち、キノリン−３−イル、及び、キノリン−６−イルが好ましい場合がある。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、及び、イソキノリン−８−イルであってよい。これらのうち、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルが好ましい場合がある。
【０１７２】
Ｒ2は、Ｃ5-10アリール基であるとき、任意の数の置換基を持っていてよい。１〜３個の置換基を持つことが好ましく、１及び２がより好ましく、単独で置換されている基が最も好ましい。置換基は、任意の位置であってよい。
【０１７３】
Ｒ2がＣ5-7アリール基であるとき、単一の置換基が、化合物の残部への結合に隣接しない環原子上にあることが好ましく、すなわち、化合物の残部への結合に対してβまたはγであることが好ましい。そのため、Ｃ5-7アリール基がフェニルであるとき、置換基は、好ましくはメタまたはパラ位にあり、より好ましくはパラ位にある。
【０１７４】
Ｒ2は、Ｃ8-10アリール基、例えば、キノリニルまたはイソキノリニルであるとき、キノリンまたはイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を持っていてよい。一部の実施形態では、Ｒ2は、１つ、２つ、または、３つの置換基を持ち、これらが、近位及び遠位環のいずれか、または両方（１個超の置換基があるとき）にあってよい。
【０１７５】
Ｒ2が、Ｃ5-10アリール基であるときのＲ2置換基
Ｒ2が、Ｃ5-10アリール基であるときのＲ2上の置換基がハロであるとき、当該置換基は、好ましくは、ＦまたはＣｌ、より好ましくは、Ｃｌである。
【０１７６】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるときのＲ2上の置換基がエーテルであるとき、当該置換基は、一部の実施形態では、アルコキシ基、例えば、Ｃ1-7アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ）であってよく、または、一部の実施形態では、Ｃ5-7アリールオキシ基（例えば、フェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であってよい。アルコキシ基は、それ自体が、例えば、アミノ基（例えば、ジメチルアミノ）によってさらに置換されていてよい。
【０１７７】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるときのＲ2上の置換基がＣ1-7アルキルであるとき、当該置換基は、好ましくは、Ｃ1-4アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であってよい。
【０１７８】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるときのＲ2上の置換基がＣ3-7ヘテロシクリルであるとき、当該置換基は、一部の実施形態では、Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルであってよい。これらの基は、窒素原子を介してＰＢＤ部分の残部に結合していてよい。これらの基は、例えば、Ｃ1-4アルキル基によってさらに置換されていてよい。Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルであるとき、上記のさらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあってよい。
【０１７９】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるときのＲ2上の置換基がビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレンであるとき、当該置換基は、好ましくは、ビス−オキシ−メチレンまたはビス−オキシ−エチレンである。
【０１８０】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるときのＲ2上の置換基がエステルであるとき、当該置換基は、好ましくは、メチルエステルまたはエチルエステルである。
【０１８１】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるとき特に好ましい置換基として、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ及びメチル−チオフェニルが挙げられる。Ｒ2についての他の特に好ましい置換基は、ジメチルアミノプロピルオキシ及びカルボキシである。
【０１８２】
Ｒ2がＣ5-10アリール基であるとき特に好ましい置換されているＲ2基として、４−メトキシ−フェニル、３−メトキシフェニル、４−エトキシ−フェニル、３−エトキシ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３，４−ビスオキシメチレン−フェニル、４−メチルチオフェニル、４−シアノフェニル、４−フェノキシフェニル、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イル、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イル、２−チエニル、２−フラニル、メトキシナフチル、及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。別の可能な置換されているＲ12基は、４−ニトロフェニルである。特定の対象となるＲ12基として、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル及び３，４−ビスオキシメチレン−フェニルが挙げられる。
【０１８３】
Ｒ2は、Ｃ1-5飽和脂肪族アルキルであるとき、メチル、エチル、プロピル、ブチルまたはペンチルであってよい。一部の実施形態では、これは、メチル、エチルまたはプロピル（ｎ−ペンチルもしくはイソプロピル）であってよい。これらの実施形態の一部では、これは、メチルであってよい。他の実施形態では、これは、ブチルまたはペンチルであってよく、これらは、直鎖または分岐鎖であってよい。
【０１８４】
Ｒ2は、Ｃ3-6飽和シクロアルキルであるとき、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであってよい。一部の実施形態では、Ｒ2は、シクロプロピルであってよい。
【０１８５】
Ｒ2が、
【化３７】
2021525265.tif 000039
であるとき、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、式中、Ｒ2基における炭素原子の合計数は、多くて５である。一部の実施形態では、Ｒ2基における炭素原子の合計数は、多くて４または多くて３である。
【０１８６】
一部の実施形態では、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。
【０１８７】
他の実施形態では、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。
【０１８８】
一部の実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。これらの実施形態の一部では、Ｈではない基は、メチルである。
【０１８９】
一部の実施形態では、Ｒ11は、Ｈである。
【０１９０】
一部の実施形態では、Ｒ12は、Ｈである。
【０１９１】
一部の実施形態では、Ｒ13は、Ｈである。
【０１９２】
一部の実施形態では、Ｒ11及びＲ12は、Ｈである。
【０１９３】
一部の実施形態では、Ｒ11及びＲ13は、Ｈである。
【０１９４】
一部の実施形態では、Ｒ12及びＲ13は、Ｈである。
【０１９５】
特定の対象となるＲ2基は：
【化３８】
2021525265.tif 000040
である。
【０１９６】
Ｒ2が
【化３９】
2021525265.tif 000041
であるとき、Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が：ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。一部の実施形態では、Ｈではない基は、任意選択的に置換されているフェニルである。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、当該置換基は、好ましくはフルオロである。一部の実施形態では、フェニル基は、置換されていない。
【０１９７】
Ｒ2が
【化４０】
2021525265.tif 000042
であるとき、Ｒ14は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロメチル、メトキシから選択される基によって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、当該置換基は、好ましくはフルオロである。一部の実施形態では、フェニル基は、置換されていない。
【０１９８】
一部の実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される。これらの実施形態の一部では、Ｒ14は、Ｈ及びメチルから選択される。
【０１９９】
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ2は、Ｈもしくは
【化４１】
2021525265.tif 000043
であり、式中、Ｒ16a及びＲ16bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており、または、Ｒ16a及びＲ16bの一方がＨであるとき、他方は、ニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択される。
【０２００】
一部の実施形態では、Ｒ2は、Ｈである。
【０２０１】
一部の実施形態では、Ｒ2は
【化４２】
2021525265.tif 000044
である。
【０２０２】
一部の実施形態では、Ｒ16a及びＲ16bの両方がＨであることが好ましい。
【０２０３】
他の実施形態では、Ｒ16a及びＲ16bの両方がメチルであることが好ましい。
【０２０４】
さらなる実施形態では、Ｒ16a及びＲ16bのうちの一方がＨであり、他方が、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基が、任意選択的に置換されていることが好ましい。これらのさらなる実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択されることがさらに好ましい場合がある。
【０２０５】
Ｒ22
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ22は、以下から選択される：
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリール基、
（ｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｄ）
【化４３】
2021525265.tif 000045
式中、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ22基における炭素数の合計が多くて５である、
（ｅ）
【化４４】
2021525265.tif 000046
式中、Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される基である、ならびに
（ｆ）
【化４５】
2021525265.tif 000047
式中、Ｒ24は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルである、から選択される。
【０２０６】
Ｒ22は、Ｃ5-10アリール基であるとき、Ｃ5-7アリール基であってよい。Ｃ5-7アリール基は、フェニル基またはＣ5-7ヘテロアリール基、例えば、フラニル、チオフェニル及びピリジルであってよい。一部の実施形態では、Ｒ22は、好ましくは、フェニルである。他の実施形態では、Ｒ22は、好ましくは、チオフェニル、例えば、チオフェン−２−イル、及び、チオフェン−３−イルである。
【０２０７】
Ｒ22は、Ｃ5-10アリール基であるとき、Ｃ8-10アリール、例えば、キノリニルまたはイソキノリニル基であってよい。キノリニルまたはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位を通してＰＢＤコアに結合されていてよい。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４−イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、及び、キノリン−８−イルであってよい。これらのうち、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルが好ましい場合がある。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、及び、イソキノリン−８−イルであってよい。これらのうち、イソキノリン−３−イル、及び、イソキノリン−６−イルが好ましい場合がある。
【０２０８】
Ｒ22は、Ｃ5-10アリール基であるとき、任意の数の置換基を持っていてよい。１〜３個の置換基を持つことが好ましく、１及び２がより好ましく、単独で置換されている基が最も好ましい。置換基は、任意の位置であってよい。
【０２０９】
Ｒ22がＣ5-7アリール基であるとき、単一の置換基が、化合物の残部への結合に隣接しない環原子上にあることが好ましく、すなわち、化合物の残部への結合に対してβまたはγであることが好ましい。そのため、Ｃ5-7アリール基がフェニルであるとき、置換基は、好ましくはメタまたはパラ位にあり、より好ましくはパラ位にある。
【０２１０】
Ｒ22は、Ｃ8-10アリール基、例えば、キノリニルまたはイソキノリニルであるとき、キノリンまたはイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を持っていてよい。一部の実施形態では、これは、１つ、２つ、または、３つの置換基を持ち、これらが、近位及び遠位環のいずれか、または両方（１個超の置換基があるとき）にあってよい。
【０２１１】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22置換基
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22上の置換基がハロであるとき、当該置換基は、好ましくはＦまたはＣｌ、より好ましくはＣｌである。
【０２１２】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22上の置換基がエーテルであるとき、当該置換基は、一部の実施形態では、アルコキシ基、例えば、Ｃ1-7アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ）であってよく、または、一部の実施形態では、Ｃ5-7アリールオキシ基（例えば、フェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であってよい。アルコキシ基は、それ自体が、例えばアミノ基（例えば、ジメチルアミノ）によってさらに置換されていてよい。
【０２１３】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22上の置換基がＣ1-7アルキルであるとき、当該置換基は、好ましくはＣ1-4アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であってよい。
【０２１４】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22上の置換基がＣ3-7ヘテロシクリルであるとき、当該置換基は、一部の実施形態では、Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルであってよい。これらの基は、窒素原子を介してＰＢＤ部分の残部に結合していてよい。これらの基は、例えば、Ｃ1-4アルキル基によってさらに置換されていてよい。Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルであるとき、上記のさらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあってよい。
【０２１５】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22上の置換基がビス−オキシ−Ｃ1-3アルキレンであるとき、当該置換基は、好ましくは、ビス−オキシ−メチレン、または、ビス−オキシ−エチレンである。
【０２１６】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるときのＲ22上の置換基がエステルであるとき、当該置換基は、好ましくは、メチルエステルまたはエチルエステルである。
【０２１７】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるとき特に好ましい置換基として、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ及びメチル−チオフェニルが挙げられる。Ｒ22についての他の特に好ましい置換基は、ジメチルアミノプロピルオキシ及びカルボキシである。
【０２１８】
Ｒ22がＣ5-10アリール基であるとき特に好ましい置換されているＲ22基の例として、４−メトキシ−フェニル、３−メトキシフェニル、４−エトキシ−フェニル、３−エトキシ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３，４−ビスオキシメチレン−フェニル、４−メチルチオフェニル、４−シアノフェニル、４−フェノキシフェニル、キノリン−３−イル、及び、キノリン−６−イル、イソキノリン−３−イル、及び、イソキノリン−６−イル、２−チエニル、２−フラニル、メトキシナフチル、及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。別の可能な置換されているＲ22基は、４−ニトロフェニルである。特定の対象となるＲ22基として、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル、及び、３，４−ビスオキシメチレン−フェニルが挙げられる。
【０２１９】
Ｒ22は、Ｃ1-5飽和脂肪族アルキルであるとき、メチル、エチル、プロピル、ブチルまたはペンチルであってよい。一部の実施形態では、これは、メチル、エチルまたはプロピル（ｎ−ペンチル、または、イソプロピル）であってよい。これらの実施形態の一部では、Ｒ12は、メチルであってよい。他の実施形態では、Ｒ12は、ブチルまたはペンチルであってよく、これらは、直鎖または分岐鎖であってよい。
【０２２０】
Ｒ22は、Ｃ3-6飽和シクロアルキルであるとき、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであってよい。一部の実施形態では、Ｒ12は、シクロプロピルであってよい。
【０２２１】
Ｒ22が、
【化４６】
2021525265.tif 000048
であるとき、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから独立して選択され、Ｒ22基における炭素数の合計が多くて５である。一部の実施形態では、Ｒ22基における炭素原子の合計数は、多くて４または多くて３である。
【０２２２】
一部の実施形態では、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから選択される。
【０２２３】
他の実施形態では、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル、及び、シクロプロピルから選択される。
【０２２４】
一部の実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。これらの実施形態の一部では、Ｈではない基は、メチルである。
【０２２５】
一部の実施形態では、Ｒ31は、Ｈである。
【０２２６】
一部の実施形態では、Ｒ32は、Ｈである。
【０２２７】
一部の実施形態では、Ｒ33は、Ｈである。
【０２２８】
一部の実施形態では、Ｒ31及びＲ32は、Ｈである。
【０２２９】
一部の実施形態では、Ｒ31及びＲ33は、Ｈである。
【０２３０】
一部の実施形態では、Ｒ32及びＲ33は、Ｈである。
【０２３１】
特定の対象となるＲ22基は：
【化４７】
2021525265.tif 000049
である。
【０２３２】
Ｒ22が
【化４８】
2021525265.tif 000050
であるとき、Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及び、チオフェニルから選択される。一部の実施形態では、Ｈではない基は、任意選択的に置換されているフェニルである。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、当該置換基は、好ましくは、フルオロである。一部の実施形態では、フェニル基は、置換されていない。
【０２３３】
Ｒ22が
【化４９】
2021525265.tif 000051
であるとき、Ｒ24は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロメチル、メトキシから選択される基によって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及び、チオフェニルから選択される。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、当該置換基は、好ましくは、フルオロである。一部の実施形態では、フェニル基は、置換されていない。一部の実施形態では、Ｒ24は、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及び、エチニルから選択される。これらの実施形態の一部では、Ｒ24は、Ｈ、及び、メチルから選択される。
【０２３４】
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ22は、Ｈもしくは
【化５０】
2021525265.tif 000052
であり、式中、Ｒ26a及びＲ26bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド、及び、Ｃ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており、または、Ｒ26a及びＲ26bの一方がＨであるとき、他方は、ニトリル、及び、Ｃ1-4アルキルエステルから選択される。
【０２３５】
一部の実施形態では、Ｒ22は、Ｈである。
【０２３６】
一部の実施形態では、Ｒ22は
【化５１】
2021525265.tif 000053
である。
【０２３７】
一部の実施形態では、Ｒ26a及びＲ26bの両方がＨであることが好ましい。
【０２３８】
他の実施形態では、Ｒ26a及びＲ26bの両方がメチルであることが好ましい。
【０２３９】
さらなる実施形態では、Ｒ26a及びＲ26bのうちの１つがＨであり、他方が、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル、及び、アルケニル基が、任意選択的に置換されていることが好ましい。これらのさらなる実施形態では、Ｈではない基は、メチル、及び、エチルから選択されることがさらに好ましい場合がある。
【０２４０】
Ｒ11
一部の実施形態では、Ｒ11aは、ＯＨである。
【０２４１】
一部の実施形態では、Ｒ11aは、ＯＲAであり、ここでＲAは、Ｃ1-4アルキルである。これらの実施形態の一部では、ＲAは、メチルである。
【０２４２】
本発明の第１の態様の複合体の一部の実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ、または、Ｉｃのものがあり：
【化５２】
2021525265.tif 000054
【化５３】
2021525265.tif 000055
【化５４】
2021525265.tif 000056
、
式中、Ｒ2a及びＲ22aは同じであり、以下：
（ａ）
【化５５】
2021525265.tif 000057
、
（ｂ）
【化５６】
2021525265.tif 000058
、
（ｃ）
【化５７】
2021525265.tif 000059
、
（ｄ）
【化５８】
2021525265.tif 000060
、
（ｅ）
【化５９】
2021525265.tif 000061
、
（ｆ）
【化６０】
2021525265.tif 000062
、
（ｇ）
【化６１】
2021525265.tif 000063
及び
（ｈ）
【化６２】
2021525265.tif 000064
から選択され、
Ｒ1aは、メチル及びベンジルから選択され、
ＲLL1、ＲLL2及びＲ11aは、上記した定義の通りである。
【０２４３】
本発明の第２の態様の複合体の一部の実施形態では、式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、または、ＩＩＩｃ：
【化６３】
2021525265.tif 000065
【化６４】
2021525265.tif 000066
【化６５】
2021525265.tif 000067
のＤLを有しており、式中、Ｒ2a、及び、Ｒ22aは、同じであり、かつ：
（ａ）
【化６６】
2021525265.tif 000068
；
（ｂ）
【化６７】
2021525265.tif 000069
；
（ｃ）
【化６８】
2021525265.tif 000070
；
（ｄ）
【化６９】
2021525265.tif 000071
；
（ｅ）
【化７０】
2021525265.tif 000072
；
（ｆ）
【化７１】
2021525265.tif 000073
；
（ｇ）
【化７２】
2021525265.tif 000074
；及び
（ｈ）
【化７３】
2021525265.tif 000075
から選択され；
Ｒ1aは、メチル、及び、ベンジルから選択される：
ＲLL1、及び、ＲLL2は、上記した定義の通りである。
【０２４４】
本発明の一部の実施形態では、Ｒ2及びＲ22は、両方が、多くて３個の炭素原子を含む。
【０２４５】
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するこれらの実施形態では、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、
（ｉｉｉ）プロピル、
（ｉｖ）シクロプロピル、
（ｖ）
【化７４】
2021525265.tif 000076
、
（ｖｉ）
【化７５】
2021525265.tif 000077
、
及び
（ｖｉ）
【化７６】
2021525265.tif 000078
。
【０２４６】
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態では、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
【化７７】
2021525265.tif 000079
、
（ｉｉｉ）
【化７８】
2021525265.tif 000080
及び
（ｉｖ）
【化７９】
2021525265.tif 000081
。
【０２４７】
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するこれらの実施形態では、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、
（ｉｉｉ）プロピル、
（ｉｖ）シクロプロピル、
（ｖ）
【化８０】
2021525265.tif 000082
、
（ｖｉ）
【化８１】
2021525265.tif 000083
、及び
（ｖｉｉ）
【化８２】
2021525265.tif 000084
。
【０２４８】
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態では、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
【化８３】
2021525265.tif 000085
、
（ｉｉｉ）
【化８４】
2021525265.tif 000086
、及び
（ｉｖ）
【化８５】
2021525265.tif 000087
。
【０２４９】
これらの実施形態の一部では、Ｒ2及びＲ22は、両方が、多くて２個の炭素原子を含む。
【０２５０】
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するこれらの実施形態では、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、及び
（ｖｉ）
【化８６】
2021525265.tif 000088
。
【０２５１】
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態では、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
【化８７】
2021525265.tif 000089
、及び
（ｉｉｉ）
【化８８】
2021525265.tif 000090
。
【０２５２】
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するこれらの実施形態では、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、及び
（ｖｉ）
【化８９】
2021525265.tif 000091
。
【０２５３】
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態では、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
【化９０】
2021525265.tif 000092
、及び
（ｉｉｉ）
【化９１】
2021525265.tif 000093
。
【０２５４】
これらの実施形態のさらなるものにおいて、Ｒ2及びＲ22は、両方が、多くて１個の炭素原子を含む。
【０２５５】
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するこれらの実施形態では、Ｒ2は、メチルであってよい。ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態では、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、及び
（ｉｉ）
【化９２】
2021525265.tif 000094
。
【０２５６】
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するこれらの実施形態では、Ｒ22は、メチルであってよい。ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態では、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、及び
（ｉｉ）
【化９３】
2021525265.tif 000095
。
【０２５７】
理論によって拘束されることを望まないが、ＰＢＤ二量体のＣ２位における置換基が小さいとき、これらの薬物リンカーにおけるグルクロニドキャッピング単位の使用は、薬物リンカーの親水性を有意に増加させて、薬物リンカーがリガンド単位に複合化することを容易にするため、特に有利であるとされている。
【０２５８】
これらの実施形態及び優先事項は、必要に応じて、本発明の第２の態様にも適用される。
【０２５９】
Ｒ10‘及びＲ11a’
当該第２の対応の１つの実施形態では、Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＯＨまたはＯＲAであり、式中、ＲAは、Ｃ1-4アルキルである。これらの実施形態の一部では、ＲAは、メチルである。
【０２６０】
当該第２の対応の別の実施形態では、Ｒ10’、及び、Ｒ11a’は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に、窒素−炭素二重結合を形成する。
【０２６１】
当該第２の対応の別の実施形態では、Ｒ10’は、Ｈであり、かつ、Ｒ11a’は、ＳＯzＭであり、式中、ｚは、２または３であり、及び、Ｍは、医薬として許容可能な一価のカチオンである。
【０２６２】
Ｍ
Ｍは、Ｎａ+が好ましい。
【０２６３】
リンカー（ＲLL）
ＧLL
ＧLLは：
【化９４】
2021525265.tif 000096
（ＧLL1-1）
【化９５】
2021525265.tif 000097
（ＧLL1-2）
【化９６】
2021525265.tif 000098
（ＧLL2）
（式中、Ａｒは、Ｃ5-6アリーレン基、例えば、フェニレンを表す）
から選択する基を含み得る。
【０２６４】
一部の実施形態では、ＧLLが、ＧLL1-1、及び、ＧLL1-2から選択する基を含む。これらの実施形態の一部では、ＧLLが、ＧLL1-1を含む。
【０２６５】
一部の実施形態では、上記した基（ＧLL1-1、ＧLL1-2、及び、ＧLL2）が、Ｘに対して直接的に結合し得る。
【０２６６】
上記した基（ＧLL1-1、ＧLL1-2、及び、ＧLL2）が、式ＩＶの基を介してＣＢＡに対して結合し得るものであり：
【化９７】
2021525265.tif 000099
式中、Ｇは、当該基が、ＧLL1-1、ＧLL1-2、及び、ＧLL2に対して結合していることを示しており；
ｎｎは、１〜４である；
Ｒaは、飽和または不飽和（特に、飽和）の分岐または非分岐Ｃ1-6アルキレン鎖を表しており、式中、少なくとも１つの炭素（例えば、１つ、２つ、または、３つの炭素原子）が、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）0-3から選択するヘテロ原子で置換されており、当該鎖は、オキソ、ハロゲン、アミノから独立して選択する１つ以上の基で置換されており；及び
Ｒeは、Ｈ、飽和または不飽和（特に、飽和）の分岐または非分岐のＣ1-8アルキレン鎖を表しており、式中、１つ以上の炭素が、任意に−Ｏ−に置換されており、かつ、当該鎖は、１つ以上のハロゲン原子（ヨードなど）、Ｎ3、または、−Ｃ2-5アルキニルで任意に置換されている。
【０２６７】
一部の実施形態では、Ｒaが、−（ＣＨ2）mＣ（Ｏ）−、−ＣＨ2（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）mＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨＣＨＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−、または、−ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＯＣ（Ｏ）−であり、かつ、ｍは、０または１を表している。
【０２６８】
一部の実施形態では、Ｒeが、Ｈ、または、−ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ3を表している。
【０２６９】
一部の実施形態では、ｎｎが、１である。他の実施形態では、ｎｎが、２である。他の実施形態では、ｎｎが、３である。他の実施形態では、ｎｎが、４である。
【０２７０】
一部の実施形態では、当該基は、非天然アミノ酸を使用して当該抗体に取り込まれる。そのような非天然アミノ酸は、式ＡＡ：
【化９８】
2021525265.tif 000100
式中、Ｇは、ＧLL1-1、ＧLL1-2、及び、ＧLL2の前駆体から選択される。
【０２７１】
一部の実施形態では、当該非天然アミノ酸が：
【化９９】
2021525265.tif 000101
である。
【０２７２】
別の実施形態では、当該基は、式（ＢＢ）の基を当該抗体に結合させて取り込ませる。結合部位は、天然アミノ酸（システイン、または、リジン）、または、非天然アミノ酸：
【化１００】
2021525265.tif 000102
であり、
式中、Ｅは、基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ55、Ｒ55’、−ＮＣ（Ｏ）Ｒ66、−Ｃ2-5アルキレン、ＣＨ2−Ｏ−ＮＨ2、または、ヨードなどのハロゲンである；
Ｒ55は、Ｃ1-6アルキル、スクシンイミド、Ｃ6Ｆ4Ｈ（テトラフルオロヘキシル）、または、Ｈを表している：
Ｒ55’は、硫黄架橋基、例えば、ジブロモマレイミド、ジクロロアセトン、または、それらのいずれかの誘導体を表している、
Ｒ66は：
【化１０１】
2021525265.tif 000103
を表し、式中
Ｒ77は、ヒドロキシル、スルホ、アミノ、及び、−（ＯＣＨ2）vＣ2-6アルキレン、及び、ヒドロキシル、スルホ、アミノ、及び、−（ＯＣＨ2）vＣ2-6アルキレンから選択される１つ以上（１つ、２つ、または、３つなど）の基を任意に備えるフェニルから選択される１つ以上（１つ、２つ、または、３つなど）の基を任意で備えるＣ1-6アルキレンであり、
ｖは、整数、１、２、３、４、または、５であり
【化１０２】
2021525265.tif 000104
は、当該フラグメントが、当該分子の残余の箇所に結合していることを表している。
【０２７３】
１つの実施形態では、式ＢＢの化合物は：
【化１０３】
2021525265.tif 000105
である。
【０２７４】
Ｘ
Ｘは、
【化１０４】
2021525265.tif 000106
であり、式中、ａ＝０〜５、ｂ＝０〜１６、ｃ＝０または１、ｄ＝０〜５である。
【０２７５】
ａは、０、１、２、３、４または５であってよい。一部の実施形態では、ａは、０〜３である。これらの実施形態の一部では、ａは、０または１である。さらなる実施形態では、ａは、０である。
【０２７６】
ｂは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または、１６であってよい。一部の実施形態では、ｂは、０〜１２である。これらの実施形態の一部では、ｂは、０〜８であり、０、２、４または８であってよい。
【０２７７】
ｃは、０または１であってよい。
【０２７８】
ｄは、０、１、２、３、４または５であってよい。一部の実施形態では、ｄは、０〜３である。これらの実施形態の一部では、ｄは、１または２である。さらなる実施形態では、ｄは、２である。
【０２７９】
Ｘの一部の実施形態では、ａは、０であり、ｃは、１であり、ｄは、２であり、ｂは、０〜８であってよい。これらの実施形態の一部では、ｂは、０、４または８である。
【０２８０】
ＱX
１つの実施形態では、ＱXは、アミノ酸残基である。アミノ酸を、天然アミノ酸または非天然アミノ酸とし得る。
【０２８１】
１つの実施形態では、ＱXは：Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｃｉｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、及びＴｒｐから選択され、Ｃｉｔは、シトルリンである。
【０２８２】
１つの実施形態では、ＱXは、ジペプチド残基を含む。ジペプチドにおけるアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組み合わせであってよい。一部の実施形態では、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーであるとき、ジペプチドは、カテプシン媒介開裂の作用部位である。ジペプチドは、次いでカテプシンの認識部位となる。
【０２８３】
１つの実施形態では、ＱXは、
CO−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ａｌａ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ａｌａ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−NH、
CO−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−NH、及び
CO−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−NH
から選択され、Ｃｉｔはシトルリンである。
【０２８４】
好ましくは、ＱXは、
CO−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ａｌａ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ａｌａ−Ｌｙｓ−NH、
CO−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−NH
から選択される。
【０２８５】
最も好ましくは、ＱXは、CO−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−NH、CO−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−NH及びCO−Ｖａｌ−Ａｌａ−NHから選択される。
【０２８６】
対象となる他のジペプチド組み合わせとして、
CO−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−NH、
CO−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−NH、及び
CO−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−NH
が挙げられる。
【０２８７】
本明細書の一部を構成するものとして援用する、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１３，８５５−８６９に記載されているものなど、他のジペプチド組み合わせが使用され得る。
【０２８８】
一部の実施形態では、ＱXは、トリペプチド残基である。トリペプチドにおけるアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組み合わせであってよい。一部の実施形態では、トリペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーであるとき、トリペプチドは、カテプシン媒介開裂の作用部位である。トリペプチドは、次いでカテプシンの認識部位となる。
【０２８９】
１つの実施形態では、適切な場合、アミノ酸側鎖が化学的に保護されている。側鎖保護基は、以下に考察されている基であってよい。保護されているアミノ酸配列は、酵素によって開裂可能である。例えば、Ｂｏｃ側鎖保護Ｌｙｓ残基を含むジペプチド配列は、カテプシンによって開裂可能である。
【０２９０】
アミノ酸の側鎖のための保護基は、当該技術分野において周知であり、上記したように、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃａｔａｌｏｇに記載されている。
【０２９１】
１つの特定の実施形態では、本発明の第１の態様は、式Ｉｄの複合体：
【化１０５】
2021525265.tif 000107
を含み、式中、ｍは、２〜８の整数である。
【０２９２】
一部の実施形態では、ＲLL1及びＲLL2は、異なる。
【０２９３】
一部の実施形態では、ＲLL1及びＲLL2は、同じである。
【０２９４】
特に、連結基が異なる実施形態では、Ｇ基においてのみ相違し得るので、連結基の残りは、同じである（このため、開裂トリガーが同じとなる）。
【０２９５】
１つの特定の実施形態では、本発明の第２の態様は、ＤLが式ＩＩＩｄ：
【化１０６】
2021525265.tif 000108
である複合体を含み、式中、ｍは、２〜８の整数である。
【０２９６】
本発明の一部の実施形態では、Ｃ１１置換基は、隣接する基に対して以下の立体化学的配置にあってよい。
【化１０７】
2021525265.tif 000109
【０２９７】
他の実施形態では、Ｃ１１置換基は、隣接する基に対して以下の立体化学的配置にあってよい。
【化１０８】
2021525265.tif 000110
【０２９８】
特定の対象となる化合物として、実施例のものが挙げられる。
【実施例】
【０２９９】
フラッシュクロマトグラフィ−を、圧力下のシリカゲルを使用して実施した。画分は、純度について、アルミニウムプレートに蛍光指示薬を付けてあるＭｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４シリカゲルを用いて薄層クロマトグラフィ−（ＴＬＣ）により確認した。他に特に断りが無い限りは、ＴＬＣの視覚化は、ＵＶ光またはヨウ素蒸気で行った。抽出及びクロマトグラフィ−の溶媒は、ＶＷＲ，Ｕ．Ｋ．から購入し、精製することなく使用した。他に特に断りが無い限りは、すべての高純度化合物は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ＰＥＧ化試薬は、Ｓｔｒａｔｅｃｈ  ＵＫを通してＱｕａｎｔａ  ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  ＵＳから、または、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒを通してＰｉｅｒｃｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得た。
【０３００】
1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ（登録商標）４００分光計において得た。カップリング定数を、ヘルツ（Ｈｚ）で引用する。化学シフトを、百万分率（ｐｐｍ）で、テトラメチルシランからのダウンフィールドで記録する。スピン多重度を、ｓ（一重項）、ｂｓ（ブロード一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、及び、ｍ（多重項）として記載する。
【０３０１】
（反応モニタリング、及び、純度決定のための）分析用のＬＣ／ＭＳ条件は以下の通りであった。ポジティブモードエレクトロスプレー質量分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｎｅｘｅｒａ（登録商標）／Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（登録商標）ＬＣＭＳ−２０２０を使用して実施した。使用した移動相は、溶媒Ａ（０．１％ギ酸を含むＨ2Ｏ）、及び、溶媒Ｂ（０．１％ギ酸を含むＣＨ3ＣＮ）であった。定期的な３分間実行のための勾配：初期組成の５％Ｂを２５秒間かけて保持し、次いで、５％Ｂから１００％Ｂに１分３５秒の期間をかけて増加させた。この組成を、１００％Ｂで５０秒間保持し、次いで、５％Ｂへと５秒で戻し、そこで５秒間保持した。勾配実行の合計継続時間は、３．０分であった。１５分間実行のための勾配：初期組成の５％Ｂを、１．２５分間かけて保持し、次いで、５％Ｂから１００％Ｂに８．７５分の期間をかけて増加させた。この組成を、１００％Ｂで２．５分間保持し、次いで、５％Ｂへと３０秒で戻し、そこで２分間保持した。勾配実行の合計継続時間は、１５．０分であった。流速は、０．８ｍＬ／分（３分間実行）、及び、０．５ｍＬ／分（１５分間実行）であった。検出は、２５４ｎｍであった。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＶａｎＧｕａｒｄプレカラム、１３０Ａ、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５ｍｍを装備した５０℃のＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ（定期的な３分間実行）；及び、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＶａｎＧｕａｒｄプレカラム、１３０Ａ、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５ｍｍを装備したＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μ、２．１×１００ｍｍ（１５分間実行）。
【０３０２】
分取ＨＰＬＣ条件は以下の通りであった：逆相超高速液体クロマトグラフィ−（ＵＦＬＣ）を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸ  ５μＣ１８カラム（５０℃）：１５０×２１．２ｍｍを使用したＳｈｉｍａｚｄｚｕ  Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（登録商標）機において行った。使用した溶出液は、溶媒Ａ（０．０５％ギ酸を含むＨ2Ｏ）、及び、溶媒Ｂ（０．０５％ギ酸を含むＣＨ3ＣＮ）であった。すべてのＵＦＬＣ実験を、以下の勾配条件で実施した：初期組成の１３％Ｂ、この組成は、次いで、合計１７分間かけて所望の分離を引き起こすのに適している勾配で、１００％Ｂに増加させ、ついで、１００％Ｂで１分間保持し、そして、０．１分で１３％Ｂに戻し、そこで、１．９分間保持した。勾配実行の合計継続時間は、２０．０分であった。流速は、２０．０ｍＬ／分であり、検出は、２５４及び２８０ｎｍであった。
【０３０３】
実施例１
【化１０９−１】
2021525265.tif 000111
【化１０９−２】
2021525265.tif 000112
【化１０９−３】
2021525265.tif 000113
（ａ）（Ｓ）−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−イル）（４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロフェニル）メタノン（２）
酢酸リチウム二水和物（３．５２ｇ、３４．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）を、ＤＭＦ／Ｈ2Ｏ（３００ｍＬ／４ｍＬ）中のＴＩＰＳエーテル（１）（１９．９６ｇ、３４．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）の撹拌溶液に添加した。得られた赤色溶液を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で希釈し、１Ｍクエン酸溶液（２×２５０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（２×２５０ｍＬ）、飽和ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。この溶媒を減圧下で蒸発させ、黄色固体として生成物（１４．５７ｇ、１００％）を得た。この生成物をさらに精製することなく使用した。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．７４分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）４２３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）；４４５（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、７５）。 
【０３０４】
（ｂ）（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（５−メトキシ−２−ニトロ−４，１−フェニレン））ビス（（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−イル）メタノン）（３）
炭酸カリウム（５．０３ｇ、３６．４４ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）を、ＤＭＦ（２５０ｍＬ）中のフェノ−ル（２）（１４ｇ、３３．１３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及び１，５ジヨ−ドペンタン（２１．４６ｇ、９．８６ｍＬ、６６．２６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）の撹拌溶液に加えた。この溶液を７０℃で３．５時間加熱した。この溶液を氷／水の混合物（８００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（４×５００ｍＬ）によって抽出した。組み合わされた抽出物をＨ2Ｏ（２×５００ｍＬ）、飽和ブライン（４００ｍＬ）によって洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させ、茶色油を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ−［ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １０％きざみで４０％から８０％］による精製により、黄色発泡物として生成物（１２．７ｇ、８５％）を得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ２．１６分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）９１３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）；９３５（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、１００）。
【０３０５】
（ｃ）（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−アミノ−５−メトキシ−４，１−フェニレン））ビス（（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−イル）メタノン）（４）
亜鉛末（１９．９ｇ、３０４ｍｍｏｌ、４０ｅｑ．）を１ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）で処理し、室温で１０分間撹拌した。混合物を次いで１０分間超音波処理し、活性化亜鉛を真空濾過によって収集し、次いで、１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（ｐＨ６から７まで）、ＭｅＯＨで洗浄し、フィルタ−パッドにおいて真空乾燥した。活性化亜鉛を、ビスニトロ化合物（３）（６．９４ｇ、７．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ／４ｍＬ／６０ｍＬ）に溶解させた激しく撹拌された溶液に室温で添加した。反応混合物を５％ｖ／ｖ  ＨＣＯ2ＨのＭｅＯＨ溶液（７６ｍＬ）で滴下処理した。緑色からメタリックグレーへの色の変化、及び４２℃への発熱が観察された。発熱が３０℃まで鎮静すると、ＬＣ／ＭＳは反応が完了しなかったことを示した。ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中に５％のｖ／ｖ  ＨＣＯ2Ｈのさらなる部分を添加し、さらに発熱を観察した（３４℃）。反応混合物を室温まで冷却させ、この時点で、ＬＣ／ＭＳによる分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。混合物を、セライト（登録商標）を通して濾過し、パッドをＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（２×３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）、飽和ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過及び真空蒸発させて、ビス−アニリンを黄色発泡物（６．２２ｇ、９６％）として得た。この生成物をさらに精製することなく使用した。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ２．１２分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）８５３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１５）。
【０３０６】
（ｄ）ビス（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド（ｐｒｏｐａｎａｍｉｄｏ））ベンジル）  （（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（６−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−カルボニル）−４−メトキシ−３，１−フェニレン））ジカルバメ−ト（６)
トリエチルアミン（０．１７１ｇ、２３５μＬ、１．６９ｍｍｏｌ、４．４ｅｑ．）を、アルゴン雰囲気下で乾燥ＴＨＦ中のビスアニリン（４）（０．３３ｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びトリホスゲン（０．０８２ｇ、０．２８ｍｍｏｌ、０．７２ｅｑ．）の撹拌溶液にシリンジを通して添加した。得られた懸濁液を４０℃まで加温し、５分後にＭｅＯＨ中でＬＣ／ＭＳについてビスメチルカルバメ−ト（ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）９６９（［Ｍ＋Ｈ］+.、８０）；９９２（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、１００）としてサンプリングした。ジラウリン酸ジブチルスズ（０．０２４ｇ、２３μＬ、３８μｍｏｌ、０．１ｅｑ．）、次いで固体リンカー（５）（０．３１９ｇ、０．８５ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）及びトリメチルアミン（０．０８５ｇ、１１８μＬ、０．８５ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を添加し、この混合物をアルゴン雰囲気下で５時間撹拌しながら４０℃で加温した。反応混合物を冷却させて濾過し、ＴＨＦを減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィ−［ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ  ０％、１％、１．５％、２％、勾配溶出］によって残留物を精製し、黄色発泡物として生成物（０．４２ｇ、６６％）を得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ２．１６分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６６０（［Ｍ＋Ｈ］+.、６０）；１６８２（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、６５）。
【０３０７】
（ｅ）ビス（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（６−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−カルボニル）−４−メトキシ−３，１−フェニレン））ジカルバメ−ト（７）
ｐ−トルエンスルホン酸（０．２９６ｇ、１．７ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を、ＴＨＦ中の１０％  ｖ／ｖ  Ｈ2Ｏ中のビス−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル（６）（１．２６ｇ、０．７６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）の撹拌溶液に添加した。この溶液を室温で１８時間撹拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和したＮａＨＣＯ3溶液（２×１００ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィ−［ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ、１％増分で０％から５％］によって残留物を精製し、白色発泡物として生成物（０．８９６ｇ、９２％）を得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．６１分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４３２（［Ｍ＋Ｈ］+.、５）；１４５４（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、５）。
【０３０８】
（ｆ）ビス（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−ビス（１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート）（８）
Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨ−ジナン（０．２４ｇ、０．５７ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）を、乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）中でビス−アルコ−ル（７）を撹拌した溶液に加えた。得られた白色懸濁液を室温で２４時間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２×１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィ−［ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ、０．５％増分で０％から３％］用いる精製により、生成物を白色発泡物（０．２８ｇ、６９％）として得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．５８分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４２８（［Ｍ＋Ｈ］+.、２０）；１４５０（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、３０）。
【０３０９】
（ｇ）ビス（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）−８，８’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−ビス（１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート）（９）
Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（８ｍｇ、７μｍｏｌ、０．０４ｅｑ．）を、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のビス−Ａｌｌｏｃ誘導体（８）（０．２５ｇ、０．１７６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びピロリジン（３１ｍｇ、３６μＬ、０．４４ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）に加える。この溶液を室温で２時間撹拌した。この反応混合物を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）とＤＣＭ（５０ｍＬ）との間で分配した。ＤＣＭを分離し、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。固体残留物をＥｔ2Ｏ（３×１５ｍＬ）で粉砕／超音波処理し、真空乾燥させ、白色固体として生成物（０．２０７ｇ、９３％）を得た。この生成物をさらなる精製なしで使用した。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．０６分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）６３０（［Ｍ＋２Ｈ］+.、１００）。
【０３１０】
（ｈ）ビス（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−イル）−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，３５−トリオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３，６，３４−トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル）８，８’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−ビス（１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート）（１０）
ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（５６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を、ＣＨＣｌ3（１５ｍＬ）中でビス−アミン（９）（０．１２３ｇ、９８μｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＭａｌｄＰＥＧ（登録商標）ＯＨ（０．１２８ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を撹拌した溶液に加えた。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、ＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。分取ＨＰＬＣによる精製後に凍結乾燥を伴ったことにより、白色発泡物として生成物（０．０４７ｇ、２０％）を得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ６．６１分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１２０５（［Ｍ＋２Ｈ］+.、５５）。
【０３１１】
実施例２
【化１１０】
2021525265.tif 000114
ビス（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−２５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−イル）−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，２３−トリオキソ−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３，６，２２−トリアザペンタコサンアミド）ベンジル）８，８’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−ビス（１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート）（１１）
ＤＩＰＥＡ（３０ｍｇ、４２μＬ、０．２３ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を、ＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）中でビス−アミン（９）（９８ｍｇ、７８μｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＭａｌＰＥＧ4ＯＳｕ（８８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を撹拌した溶液に加えた。この反応混合物を室温で７２時間撹拌した後、ＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。分取ＨＰＬＣによる精製後に凍結乾燥を伴ったことにより、白色発泡物として生成物（０．０４３ｇ、２５％）を得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ６．１１分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１０２８（［Ｍ＋２Ｈ］+.、８０）。
【０３１２】
実施例３
【化１１１】
2021525265.tif 000115
ビス（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ−ル−１−イル）ヘキサンアミド（ｈｅｘａｎａｍｉｄｏ））−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−ビス（１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート）（１２）
ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を、ＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）中でビス−アミン（９）（０．１０９ｇ、８６．５μｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＭＣＯＳｕ（４０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、２．２  ｅｑ．）を撹拌した溶液に加えた。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、ＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。分取ＨＰＬＣによる精製後に凍結乾燥を伴ったことにより、白色発泡物として生成物（０．０４５ｇ、３２％）を得た。
分析デ−タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ６．８２分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６４６（［Ｍ＋Ｈ］+.、２０）；１６６７（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、３０）。
【０３１３】
実施例４
スピロシクロペンタジエン含有架橋剤、及び、非天然アミノ酸（ＮＮＡＡ）は、以下に示す一般構造で調製した：
図１．１．実施例４に記載したスピロシクロペンタジエン架橋剤（Ａ）、及び、スピロシクロペンタジエンＮＮＡＡ（Ｂ）。
【０３１４】
ＣＰ２−ＮＮＡＡ（１６）の合成は、Ｃａｒｒｅｉｒａの反応（Ｌｅｄｆｏｒｄ，Ｂ．Ｅ．；Ｃａｒｒｅｉｒａ，Ｅ．Ｍ．，Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  （＋）−Ｔｒｅｈａｚｏｌｉｎ：Ｏｐｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｓｐｉｒｏｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｄｉｅｎｅｓ  ａｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｉｔｏｌｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １９９５，  １１７，  １１８１１−１１８１２)の変法で、市販のＮａＣｐ溶液とエピクロロヒドリンとを反応させることから始め、ラセミエピクロロヒドリンを使用したが、エナンチオピュアなエピクロロヒドリンを使用すると、９１％ｅｅで１３を合成することができる。１３と４−ニトロフェニルクロロホルメートとの反応は、活性化カルバメート１４を生成した。１４を、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨと反応させると、Ｆｍｏｃで保護された１５が生成され、ピペリジンを使用して脱保護すると、ＮＮＡＡ１６を得ることができる。合成での中間体では、−２０℃で保存した場合に、二量化や分解は認められなかった。
【０３１５】
ＣＰ２で官能化したＮＨＳ−エステル１８の合成は、１３と無水コハク酸とを反応させて、酸１７を生成することから始めた。酸１７を、ＥＤＣ−ＨＣｌ、及び、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、ＮＨＳエステル１８を得た。化合物１８は、室温で数日間保管しても、二量化は認められなかった。
【０３１６】
材料と方法：特に断りが無い限り、反応は、試薬グレードの溶媒を使用して、Ｎ2の雰囲気下で行った。ＤＣＭ、及び、トルエンを、３Å分子篩で保存した。ＴＨＦを、活性アルミナのカラムに通した。市販の試薬は、すべて、そのまま使用した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｅ．Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０  Ｆ２５４プレコートプレート（０．２５ｍｍ）で行い、そして、ＵＶ光（２５４ｎｍ）へ曝露して可視化するか、あるいは、ｐ−アニスアルデヒド、ニンヒドリン、または、過マンガン酸カリウムで染色した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、順相シリカゲル（６０Å、０．０４０〜０．０６３ｍｍ、Ｇｅｄｕｒａｎ）を使用して実施した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ分光計（４００、５００、または、６００ＭＨｚ）で記録し、そして、重水素化溶媒シグナルと比較して報告する。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルのデータは、以下のように報告する：化学シフト（δｐｐｍ）、多重度、結合定数（Ｈｚ）、及び、積分。13Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ分光計（１００、１２５、または、１５０ＭＨｚ）で記録した。13Ｃ  ＮＭＲスペクトルのデータは、化学シフト（δｐｐｍ）に関して報告する。質量スペクトルは、ＵＣ  Ｓａｎｔａ  Ｂａｒｂａｒａ質量分析施設での電解脱離（ＦＤ）源を有する（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）ＧＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ高分解能Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ質量分析計から得た。
【０３１７】
（ｉ）ＣＰ２−ＮＮＡＡ（１６）の合成
【化１１２】
2021525265.tif 000116
【０３１８】
（ａ）スピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン−１−イルメタノール（１３）
ナトリウムシクロペンタジエニド（ＴＨＦでの２Ｍ溶液、１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、４当量）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に加え、そして、０℃に冷却した。エピクロロヒドリン（０．３９ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、１当量）を滴加し、そして、反応物を、０℃で、１．５時間撹拌し、次に、室温で、さらに２時間撹拌した。この反応を、Ｈ2Ｏ（４０ｍＬ）でクエンチし、次いで、分離漏斗に移した。ＮａＨＣＯ3を含むＨ2Ｏ（４０ｍＬ）、及び、エーテル（４０ｍＬ）の飽和溶液を加え、そして、それらの層を分離した。有機層を、食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過した後に、溶媒を除去した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、２：１）に供したところ、褐色油として１３（０．４８ｇ、７８％）が得られた。Ｒｆ  （ヘキサン：ＥｔＯＡｃ，  ２：１）：  ０．２２；  1Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  ６．６４  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．６，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．５１  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．７，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．２７  （ｔｄｄ，  Ｊ  ＝  １．０，  ２．１，  ５．２  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．１２  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．７，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．０８  −  ３．８８  （ｍ，  １  Ｈ），  ３．５９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．８，  １１．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．４８  −  ２．４０  （ｍ，  １  Ｈ），  １．８７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．３，  ８．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．６９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．４，  ７．０  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．５７  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ｐｐｍ；  13Ｃ  ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  １３９．４，  １３３．９，  １３１．７，  １２８．６，  ６４．９，  ４１．９，  ３０．０，  １７．６  ｐｐｍ．
【０３１９】
（ｂ）４−ニトロフェニルスピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン−１−イルメチルカーボネート（１４）
１３（２．８０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）に加え、そして、０℃に冷却した。ピリジン（４．６１ｍＬ、５７．３ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、続いて、クロロギ酸４−ニトロフェニル（５．０８ｇ、２５．２ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。出発物質が消費されるまで（ＴＬＣ、３０分間）、この反応を、０℃で、撹拌した。反応物を、分液漏斗に注ぎ、ＮＨ4Ｃｌを含むＨ2Ｏ（１００ｍＬ）の飽和溶液で洗浄した。水層を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、そして、溶媒を除去した。残留物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、６：１〜４：１）に供したところ、１４（５．１７ｇ、７９％）を、琥珀色の油として得た。Ｒｆ  （ヘキサン：ＥｔＯＡｃ，  ４：１）：  ０．２８；  1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  ８．２８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ７．３７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ６．６２  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．７，  ５．２  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．５３  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．７，  ４．８  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．２５  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  ５．５  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．１１  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．６，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．５３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  １１．５  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．４，  １１．３  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．５２  （五重項，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．９２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．７，  ８．６  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．７６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．７，  ６．７  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ｐｐｍ；  13Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  １５５．４，  １５２．３，  １４５．３，  １３８．６，  １３３．８，  １３１．７，  １２９．４，  １２５．２，  １２１．７，  ７０．９，  ４１．５，  ２４．６，  １６．９  ｐｐｍ．
【０３２０】
（ｃ）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（スピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン−１−イルメチルカーボネート）−ＯＨ（１５）
１４（５．１２ｇ、１７．８ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（４０ｍＬ）に加え、続いて、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（７．８７ｇ、２１．４ｍｍｏｌ、１．２当量）、及び、ＤＩＰＥＡ（７．４４ｍＬ、４２．７ｍｍｏｌ、２．４当量）を加えた。出発物質が消費されるまで（ＮＭＲ、３．５時間）、反応物を撹拌し、次いで、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）及びＨ2Ｏ（１４０ｍＬ）に注いだ。水層を、ＨＣｌ（１Ｍ、１００ｍＬ）で、ｐＨ２〜３に酸性化し、分液漏斗に注ぎ、そして、それらの層を分離した。水層を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、そして、溶媒を除去した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、３：１、次いで、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ、８９：１０：１）に供し、そして、溶媒を除去した。残留ＡｃＯＨ及びＤＭＦは、産物をＤＣＭに懸濁し、食塩水で洗浄し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過することで除去し、次いで、溶媒を除去したところ、１５（７．４３ｇ、８１％）が、淡黄色泡沫として得られた。
Ｒｆ  （ＤＣＭ：ＭｅＯＨ，  ９０：１０）：  ０．３９；  1Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  ８．６２  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ７．７５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ７．６６  −  ７．４９  （ｍ，  ２  Ｈ），  ７．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ７．３０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ６．５４  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ６．４７  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ６．２１  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ６．０４  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ５．７４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．９１  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ４．５３  −  ４．００  （ｍ，  ５  Ｈ），  ３．２１  −  ３．００  （ｍ，  ２  Ｈ），  ２．９７  （ｓ，  １  Ｈ），  ２．９０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ０．８  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．４７  −  ２．３１  （ｍ，  １  Ｈ），  １．９５  −  １．２７  （ｍ，  ６  Ｈ）  ｐｐｍ；  13Ｃ  ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  １６３．２，  １５６．７，  １４３．６，  １４１．２，  １３８．９，  １３４．５，  １３０．９，  １２８．９，  １２７．６，  １２７．０，  １２５．１，  １１９．９，  １１５．６，  ６７．０，  ６６．５，  ５３．５，  ４７．１，  ４１．６，  ４０．４，  ３６．８，  ３１．８，  ２９．２，  ２５．７，  ２２．２，  ２１．４，  １７．１  δ  ｐｐｍ．
【０３２１】
（ｄ）ＣＰ２−ＮＮＡＡ（１６）
９（５．５０ ｇ、１０．６ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（１５０ｍＬ）に加え、続いて、ピペリジン（１６．８ｍＬ）を加えた。出発物質が消費されるまで反応を撹拌し（ＴＬＣ、９０分間）、次いで、溶媒を除去した。Ｅｔ2Ｏ（１００ｍＬ）を残渣に加え、そして、懸濁液を、５分間、超音波処理した。この懸濁液を、濾過し、そして、Ｈ2Ｏ（２×１００ｍＬ）とＥｔ2Ｏ（１００ｍＬ）とで濯いだ。この固形物を、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に懸濁し、穏やかに温めながら（約４０℃）、１０分間撹拌し、Ｅｔ2Ｏ（４０ｍＬ）を加え、この懸濁液を濾過し、Ｅｔ2Ｏ（２×５０ｍＬ）で濯いだ。この化合物を、真空下で乾燥させたところ、１０（２．２４ｇ、７１％）が、白色粉末として得られた。
Ｒｆ  （ＤＣＭ：ＭｅＯＨ，  ８５：１５）：  ０．２９；  1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ6  ＋  １  滴  ＴＦＡ）  δ  ８．２０  （ｂｒ．  ｓ．，  ３  Ｈ），  ７．１６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．４８  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．４０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．３２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．１２  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．９，  ４．９  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．２４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．７，  １１．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ３．９９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  １１．５  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ３．８８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．９４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．９  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ２．３７  （五重項，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．８３  −  １．６３  （ｍ，  ４  Ｈ），  １．４４  −  １．１９  （ｍ，  ４  Ｈ）  ｐｐｍ；  13Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ6  ＋  １  滴  ＴＦＡ）：
１７１．２，  １５６．２，  １３９．３，  １３５．２，  １３０．４，  １２８．３，  ６５．３，  ５１．９，  ４２．０，  ２９．７，  ２８．９，  ２５．７，  ２１．６，  １６．４；  ＭＳ  （ＥＩ）  Ｃ15Ｈ22Ｎ2Ｏ4  ［Ｍ］+に対する正確な質量計算値：  ２９４．１５８０，  実測値：  ２９４．１５７１．
【０３２２】
（ｉｉ）ＣＰ２−ＮＨＳ（１８）の合成
【化１１３】
2021525265.tif 000117
（ａ）４−オキソ−４−（スピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン−１−イルメトキシ）ブタン酸（１７）
ＤＣＭ（１．５ｍＬ）を、１３（０．３７ｇ、３．０ｍｍｏｌ、１当量）を含むバイアルに加えた。Ｅｔ3Ｎ（０．４２ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＭＡＰ（３７ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、０．１当量）、及び、無水コハク酸（０．３３ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、この反応物を、空気雰囲気下でキャップし、そして、室温で、出発物質が消費されるまで（ＴＬＣ、１．７５時間）撹拌した。この反応混合物を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）と共に分液漏斗に注ぎ、そして、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、５０ｍＬ）で洗浄した。水層を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、溶媒を除去したところ、次の反応に十分な純度の１７を得た。
Ｒｆ  （ＥｔＯＡｃ）：  ０．５６；  1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  １０．６０  （ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ６．５７  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．９，  ５．３  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．５０  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．２１  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．７，  ５．２  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．０７  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．３７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．４，  １１．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．２０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １１．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．７４  −  ２．５７  （ｍ，  ４  Ｈ），  ２．４２  （五重項，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．８５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．５，  ８．４  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．６９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．３，  ７．０  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ｐｐｍ．
【０３２３】
（ｂ）ＣＰ２−ＮＨＳ（１８）
ＴＨＦ（１０ｍＬ）を、１７（テオ３．０ｍｍｏｌ、１当量）を含むバイアルに加えた。ＮＨＳ（０．４８ｇ、４．２ｍｍｏｌ、１．４当量）、ＥＤＣ−ＨＣｌ（０．６９ｇ、３．６ｍｍｏｌ、１．２当量）、及び、ＤＣＭ（５ｍＬ）を加え、反応物を、空気雰囲気下でキャップし、室温で、一晩、撹拌した。溶媒を除去し、そして、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、１：１）に供したところ、無色の粘稠な油として１８（０．５９ｇ、２段階で６２％）を得た。
Ｒｆ  （ヘキサン：ＥｔＯＡｃ，  １：１）：  ０．３４；  1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  ６．５６  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．４８  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  ５．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．２１  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．６，  ３．４  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．０６  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １．６，  ３．４  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．３６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．４，  １１．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．２１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．４，  １１．７  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．９３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ２．８３  （ｓ，  ４  Ｈ），  ２．７３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ２．４２  （五重項，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．８３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．３，  ８．６  Ｈｚ，  １  Ｈ），  １．６８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．５，  ６．８  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ｐｐｍ；  13Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  １７０．８，  １６８．９，  １６７．６，  １３８．８，  １３４．３，  １３１．２，  １２９．０，  ６６．６，  ４１．５，  ２８．６，  ２６．２，  ２５．５，  ２５．１，  １７．３  ｐｐｍ．
【０３２４】
実施例５
架橋剤−改変ｍＡｂを介したＡＤＣの調製のためのＣＰ２ジエン−マレイミド複合体
生体共役反応のためのスピロシクロペンタジエン−マレイミド反応の実現可能性を、評価した。スピロシクロペンタジエン基を、アミン反応性ヘテロ二官能性リンカーを介して導入した。
【０３２５】
ｍＡｂへのＣＰ２機能の導入：リジン第１級アミンと、ＮＨＳ−エステルで活性化したＣＰ２ジエンとの反応によって、ＣＰ２ジエン機能を、ＩｇＧ１  ｍＡｂに導入した。この手法は、ランダムに共役したアミド結合シクロペンタジエン基をもたらした。得られた抗体を、ｍＡｂ−ＣＰ２−リンカーと称するが、図では、ｍＡｂ−ＣＰ２とも表記し得る。説明については、図での説明を参照されたい。一般的なｍＡｂ改変反応を、以下に記載する。Ｍａｂ溶液を、ＰＢＳ、ｐＨ７．２で、５ｍｇ／ｍＬ（３ｍＬ、１５ｍｇ  ｍＡｂ、１００ｎｍｏｌ、１当量）に調整し、続いて、１０％ｖ／ｖの１Ｍ  ＮａＨＣＯ3を加えた。この溶液を、氷上で冷却し、そして、３５μＬのＣＰ２−ＮＨＳ（ＤＭＡｃでの１０ｍＭストック、３５０ｎｍｏｌ、３．５当量）を加えた。反応を、氷上で５分間進行させ、続いて、室温で、１時間反応を続けながら、混合した。反応したｍＡｂを、ＰＢＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４に対して、０℃、２４時間、透析（Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ）して精製した。ＣＰ２の導入を、以下に説明するインタクトな脱グリコシル化質量分析で定量を行い、そして、この例では、ＣＰ２−ＮＨＳから抗体複合体への９４％変換に対応する、３．２９のＣＰ２リンカー／ｍＡｂ（したがって、ジエン）であると認められた。
【化１１４】
2021525265.tif 000118
スキーム５．１．ＣＰ２−ＮＨＳによるｍＡｂの改変
【０３２６】
質量分析：まず、５０μＬの試料（１ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ）を、５μＬのグリコ緩衝剤１（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）と、次いで、５μＬのＲｅｍｏｖｅ−ｉＴ  ＥｎｄｏＳ（ＰＢＳでの１：１０希釈、２０，０００単位／ｍＬ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）と合わせ、続いて、３７℃で、１時間インキュベートすることで、ｍＡｂまたはｍＡｂ複合体を、ＥｎｄｏＳ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）を用いて脱グリコシル化した。５μＬのＢｏｎｄ−Ｂｒｅａｋｅｒ  ＴＣＥＰ溶液（０．５Ｍ、Ｔｈｅｒｍｏ  ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加え、そして、３７℃で、１０分間インキュベートして、還元試料を調製した。質量分析は、ＲＰ−ＨＰＬＣカラム（ＺＯＲＢＡＸ  ３００  Ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ＲＲＨＤ、１．８ミクロン、２．１ｍｍ×５０ｍｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ６５２０Ｂ  Ｑ−ＴＯＦ質量分析計を使用して行った。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のパラメーターは、以下の通りである：流速、０．５ｍｌ／分；移動相Ａは、ＨＰＬＣグレードＨ2Ｏでの０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸であり、かつ、移動相Ｂは、アセトニトリルでの０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸であった。このカラムを、９０％Ａ／１０％Ｂで平衡化し、ｍＡｂ試料の脱塩にも使用し、続いて、２０％Ａ／８０％Ｂで溶出した。質量分析データを、１００〜３０００ｍ／ｚ、正極性、３５０℃のガス温度、４８  ｌｂ／平方インチのネブライザ圧力、及び、５，０００Ｖのキャピラリ電圧に関して収集した。ベンダーから提供を受けた（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｖ．Ｂ．０４．００）ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用してデータの解析を行い、そして、分離スペクトル由来のピーク強度を使用して、それぞれのサンプルでの種の相対比率を導いた。
【０３２７】
図２．１．  ＣＰ２−ＮＨＳとの反応前（Ａ）及び反応後（Ｂ）のインタクトな脱グリコシル化質量スペクトル。（Ｂ）のピークの下の数字は、ｍＡｂに導入されたＣＰ２−ジエン基の数を示す。ピーク強度によってＣＰ２リンカー導入の推定を行うと、３．２９のＣＰ２−ジエン／ｍＡｂが得られる。
【表１】
2021525265.tif 000119
【０３２８】
実施例６
ＣＰ２−ＮＮＡＡの抗体への取り込み
抗ＥｐｈＡ２（１Ｃ１）抗体のＫ２７４またはＳ２３９位置へのＣＰ２−ＮＮＡＡの取り込み、発現したｍＡｂの品質、及び、抗体取り込み後のＣＰ２−ＮＮＡＡジエンの反応性を評価した。
【０３２９】
ＣＰ２  ＮＮＡＡ原液の調製：ＣＰ２  ＮＮＡＡ（０．５ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を、７．８ｍＬの０．２Ｍ  ＮａＯＨを含むＨ2Ｏと混合した。得られたスラリーを、すべての固体が溶解するまで（１０分間）、室温で、攪拌した。完全に溶解した後に、淡黄色の溶液を、０．２μｍフィルターに通し、等分し、そして、使用するまで、−８０℃で保存した。この手順により、８．２ｍＬの２１６ｍＭ  ＣＰ２  ＮＮＡＡ原液が得られた。
【化１１５】
2021525265.tif 000120
ＣＰ２−ＮＮＡＡの構造
【０３３０】
抗体発現：Ｆｃ位置Ｋ２７４またはＳ２３９にアンバー変異を有する１２Ｇ３Ｈ１１または１Ｃ１  ＩｇＧ１抗体遺伝子を、独自のｐＯＥ抗体発現ベクターにクローニングした。当該構築物を、ＰｙＩＲＳ二重変異体（Ｙ３０６Ａ／Ｙ３８４Ｆ）、または、野生型ＰｙＩＲＳをコードするプラスミド、及び、ｔＲＮＡ発現カセットのタンデムリピートを含むプラスミド（ｐＯＲＩＰ  ９Ｘ  ｔＲＮＡ）と共に、ＰＥＩｍａｘ（１．５ＬのＧ２２細胞）によって、ＣＨＯ−Ｇ２２にトランスフェクトした。トランスフェクションの４時間後に、３．３％の栄養源Ｆ９（独自）と、０．２％の栄養源Ｆ１０（独自）を細胞に添加し、そして、これらの細胞を、さらに３４度でインキュベートした。翌日、１Ｃ１  Ｋ２７４、及び、１Ｃ１  Ｓ２３９トランスフェクト細胞に対して、ＣＰ２−ＮＮＡＡを、０．２６ｍＭの最終濃度で添加した。３日目と７日目に、細胞に対して、６．６％の栄養源Ｆ９と、０．４％の栄養源Ｆ１０を改めて与えた。１１日目に細胞を遠心沈殿し、上清を回収した。この上清を、ＩｇＳｅｌｅｃｔアフィニティーカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈ  ＣａｒｅＬｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）で精製した。この抗体を、５０ｍＭグリシン、３０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ３．５溶出緩衝剤で溶出し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ緩衝剤ｐＨ７．５で中和し、そして、ＰＢＳ、ｐＨ７．２で透析した。溶出した抗体の濃度を、２８０ｎｍでの吸光度測定で決定した。逆算して得た力価は、１Ｃ１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡについては５７ｍｇ／Ｌであり、また、１Ｃ１  Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡについては７６ｍｇ／Ｌであった。１２Ｇ３Ｈ１１  ｍＡｂを、ＣＰ２−ＮＮＡＡ供給濃度を変化させて、小規模で、同様の方法で発現させた。回収した抗体を、標準的な方法を使用して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。また、抗体は、後述するようにして、サイズ排除クロマトグラフィー、及び、質量分析によって分析をした。ＣＰ２−ＮＮＡＡを組み込んだ抗体は、ｍＡｂ−ＣＰ１−リンカー構築物と区別するために、ｍＡｂ−ＣＰ１−ＮＮＡＡ、または、ｍＡｂ−［ｐｏｓｉｔｉｏｎ］ＣＰ２−ＮＮＡＡと表記しており、［ｐｏｓｉｔｉｏｎ］とは、ＣＰ２−ＮＮＡＡに対して変異させたアミノ酸番号とアミノ酸記号を示している。
【０３３１】
サイズ排除クロマトグラフィー：＿ＳＥＣ分析は、トリプル検出器アレイ（Ｖｉｓｃｏｔｅｋ  ３０１，Ｖｉｓｃｏｔｅｋ，Ｈｏｕｓｏｎ，ＴＸ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＬＣシステムを使用して行った：波長を、２８０ｎｍに設定し、そして、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ６．８、１ｍＬ／分の流速を使用する、ＴＳＫ−ＧＥＬ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＰＡ）に試料を供した。
【０３３２】
質量分析：脱グリコシル化したｍＡｂの分析については、ＥｎｄｏＳ（５μＬのＲｅｍｏｖｅ−ｉＴ  ＥｎｄｏＳ（ＰＢＳでの１：１０希釈、２０，０００単位／ｍＬ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）を、５０μＬの試料（１ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ）と、次いで、５μＬのグリコ緩衝剤１（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）と合わせ、続いて、３７℃で、１時間インキュベートした。５μＬのＢｏｎｄ−Ｂｒｅａｋｅｒ  ＴＣＥＰ溶液（０．５Ｍ、Ｔｈｅｒｍｏ  ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加え、そして、３７℃で、１０分間インキュベートして、還元試料を調製した。質量分析は、ＲＰ−ＨＰＬＣカラム（ＺＯＲＢＡＸ  ３００  Ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ＲＲＨＤ、１．８ミクロン、２．１ｍｍ×５０ｍｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ６５２０Ｂ  Ｑ−ＴＯＦ質量分析計を使用して行った。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のパラメーターは、以下の通りである：流速、０．５ｍｌ／分；移動相Ａは、ＨＰＬＣグレードＨ2Ｏでの０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸であり、かつ、移動相Ｂは、アセトニトリルでの０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸であった。このカラムを、９０％Ａ／１０％Ｂで平衡化し、ｍＡｂ試料の脱塩にも使用し、続いて、２０％Ａ／８０％Ｂで溶出した。質量分析データを、１００〜３０００ｍ／ｚ、正極性、３５０℃のガス温度、４８  ｌｂ／平方インチのネブライザ圧力、及び、５，０００Ｖのキャピラリ電圧に関して収集した。ベンダーから提供を受けた（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｖ．Ｂ．０４．００）ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用してデータの解析を行い、そして、分離スペクトル由来のピーク強度を使用して、それぞれのサンプルでの種の相対比率を導いた。
【０３３３】
図３．１．  変異型または野生型のｔＲＳを含む哺乳動物細胞での発現後の１２Ｇ３Ｈ１１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの力価と細胞生存率。培地でのＣＰ２−ＮＮＡＡの最終濃度を、図の凡例に示している。変異型ｔＲＳを有する１２Ｇ３Ｈ１１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡｍＡｂの発現は、野生型ｔＲＳを有するアジドリジンに匹敵しており、その毒性は最小限であった。
【表２】
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【０３３４】
図３．２．  脱グリコシル化した１Ｃ１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの質量分析分析。Ａ）インタクトｍＡｂ、Ｂ）軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）を示すように拡大した還元ｍＡｂ。認められたインタクトな質量は、インタクトなｍＡｂ構造に２つのＣＰ２−ＮＮＡＡが組み込まれていると仮定して計算したインタクトな質量（１４７５４６．０３）と、ほぼ一致していた。認められた重鎖質量は、１つのＣＰ２−ＮＮＡＡが抗体重鎖に組み込まれていると仮定して計算した重鎖質量（５０３２５．９３）と、ほぼ一致していた。ｍＡｂ軽鎖へのＣＰ２−ＮＮＡＡの取り込みは認められなかった。１Ｃ１野生型ｍＡｂについてのの類似スペクトルを、図３．４に示す。
【０３３５】
図３．３．  脱グリコシル化した１Ｃ１  Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂの質量分析分析。Ａ）インタクトｍＡｂ、Ｂ）軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）を示すように拡大した還元ｍＡｂ。認められたインタクトな質量は、インタクトなｍＡｂ構造に２つのＣＰ２アミノ酸が組み込まれていると仮定して計算したインタクトな質量（１４７６２８．２３）と、ほぼ一致していた。認められた重鎖質量は、ＣＰ２−ＮＮＡＡが抗体重鎖に組み込まれていると仮定して計算した重鎖質量（５０３６７．０３）と、ほぼ一致していた。ｍＡｂ軽鎖へのＣＰ２−ＮＮＡＡの取り込みは認められなかった。１Ｃ１野生型ｍＡｂについてのの類似スペクトルを、図３．４に示す。
【０３３６】
図３．４．  脱グリコシル化した１Ｃ１野生型ｍＡｂの質量分析分析。Ａ）インタクトｍＡｂ、Ｂ）軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）を示すように拡大した還元ｍＡｂ。Ａ）インタクトｍＡｂを示す質量範囲、Ｂ）軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を示す質量範囲。
【表３】
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【０３３７】
図３．５．  １Ｃ１  Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂのＳＥＣ分析は、単量体産物が得られたことを示している。高分子量種（ＨＭＷＳ）が、示されている。
【０３３８】
図３．６．  １Ｃ１  Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡｍＡｂのＳＥＣ分析は、単量体産物が得られたことを示している。
【０３３９】
図３．７．  ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる１Ｃ１−Ｋ２７４ＣＰ２−ＮＮＡＡ  ｍＡｂ、及び、１Ｃ１−Ｓ２３９ＣＰ２−ＮＮＡＡｍＡｂの分析。
【０３４０】
位置Ｋ２７４及びＳ２３９での抗体へのＣＰ２−ＮＮＡＡの取り込みを、質量分析で確認した。回収した抗体は高品質であり、欠失した産物ではなく、また、凝集体は、ほとんど無かった。１Ｃ１抗体の２Ｌ生産規模で達成された力価は、細胞に供給されたＣＰ２−ＮＮＡＡの量が少ないことを考慮すると、かなり大きかった。
【０３４１】
実施例７−化合物１０を有する抗体薬物複合体：ＣｏｎｊＡ
化合物１０を、ＤＭＳＯ溶液（０．５ｍＬ  ＤＭＳＯにて、３モル当量／抗体、０．２マイクロモル）として、ＰＢＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４（１０．０ｍｇ、６６．７ナノモル）での１Ｃ１  Ｓ２３９ＣＰ２抗体溶液の４．０ｍＬ、及び、１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ６．０の０．５ｍＬに対して加え、１０％（ｖ／ｖ）最終ＤＭＳＯ濃度、及び、最終ｐＨ６．０とした。この溶液を残し、室温で、一晩、穏やかに振盪させながら反応させた。複合体を、Ｎ−アセチルシステイン（３．３マイクロモル、１００ｍＭに３３μＬ）の添加でクエンチし、そして、溶出緩衝剤としてＰＢＳ  ｐＨ７．４を使用したＦＰＬＣ、及び、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００２６／６００カラムを使用した分取サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。９５％を上回る単量体を含む画分をプールして濃縮し、１５ｍＬ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ  ５０ｋＤａ  ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過で、緩衝剤を、２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭスクロース、ｐＨ６．０に交換し、滅菌濾過して分析した。
【０３４２】
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ  ＨＩＣ  Ｂｕｔｙｌ−ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＣｏｎｊＡの純試料を、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び、２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、複合化していない抗体、及び、薬物/抗体比（ＤＡＲ）が、０．９５分子の化合物１０／抗体と一致している、単独で複合化した、及び、二重に複合化した化合物１０の混合物を示す。
【０３４３】
Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ  ｍＡｂ  ＨＴＰ  ４μｍ  ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ  ３．０×２０ｍｍガ−ドカラムを含む）を用いて、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム、及び、１０％イソプロパノ−ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分の無菌濾過したＳＥＣ緩衝剤で、ＣｏｎｊＡの純試料を２８０ｎｍで溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ  ＳＥＣ分析により、３．９ｍＬにて１．９５ｍｇ／ｍＬの最終ＣｏｎｊＡ濃度が得られ、ＣｏｎｊＡについて得た質量は、７．６ｍｇ（７６％収率）である。
【０３４４】
実施例８−化合物１１を有する抗体薬物複合体：ＣｏｎｊＢ
化合物１１を、ＤＭＳＯ溶液（０．５ｍＬ  ＤＭＳＯにて、１．５モル当量／抗体、０．１マイクロモル）として、ＰＢＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４（１０．０ｍｇ、６６．７ナノモル）での１Ｃ１Ｓ２３９ＣＰ２抗体溶液の４．０ｍＬ、及び、１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ６．０の０．５ｍＬに対して加え、１０％（ｖ／ｖ）最終ＤＭＳＯ濃度、及び、最終ｐＨ６．０とした。この溶液を残し、室温で、一晩、穏やかに振盪させながら反応させた。複合体を、Ｎ−アセチルシステイン（１．７マイクロモル、１００ｍＭに１７μＬ）の添加でクエンチし、そして、溶出緩衝剤としてＰＢＳ  ｐＨ７．４を使用したＦＰＬＣ、及び、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００２６／６００カラムを使用した分取サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。９５％を上回る単量体を含む画分をプールして濃縮し、１５ｍＬ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ  ５０ｋＤａ  ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過で、緩衝剤を、２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭスクロース、ｐＨ６．０に交換し、滅菌濾過して分析した。
【０３４５】
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ  ＨＩＣ  Ｂｕｔｙｌ−ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＣｏｎｊＢの純試料を、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び、２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、複合化していない抗体、及び、薬物/抗体比（ＤＡＲ）が、０．９７分子の化合物１１／抗体と一致している、単独で複合化した、及び、二重に複合化した化合物１１の混合物を示す。
【０３４６】
Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ  ｍＡｂ  ＨＴＰ  ４μｍ  ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ  ３．０×２０ｍｍガ−ドカラムを含む）を用いて、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム、及び、１０％イソプロパノ−ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分の無菌濾過したＳＥＣ緩衝剤で、ＣｏｎｊＢの純試料を２８０ｎｍで溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ  ＳＥＣ分析により、４．０ｍＬにて１．９７ｍｇ／ｍＬの最終ＣｏｎｊＢ濃度が得られ、ＣｏｎｊＢについて得た質量は、７．９ｍｇ（７９％収率）である。
【０３４７】
実施例９−化合物１２を有する抗体薬物複合体：ＣｏｎｊＣ
化合物１２を、ＤＭＳＯ溶液（０．５ｍＬ  ＤＭＳＯにて、５モル当量／抗体、０．１７マイクロモル）として、ＰＢＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４（５．０ｍｇ、３３．３ナノモル）での１Ｃ１Ｓ２３９ＣＰ２抗体溶液の１．７５ｍＬ、及び１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ６．０の０．２５ｍＬに対して加え、１０％（ｖ／ｖ）最終ＤＭＳＯ濃度、及び、最終ｐＨ６．０とした。この溶液を残し、３７℃で、４８時間、穏やかに振盪させながら反応させた。複合体を、Ｎ−アセチルシステイン（１．６７マイクロモル、１００ｍＭに１６．７μＬ）の添加でクエンチし、そして、１Ｍ  （ＮＨ４）2ＳＯ4、２５ｍＭ  リン酸カリウムｐＨ６．０、及び、２５ｍＭ  リン酸カリウムｐＨ６．０の勾配を与えるＦＰＬＣとＨＰ−Ｂｕｔｙｌカラム（５ｍＬ）を使用した疎水性相互作用クロマトグラフィーで精製した。９５％を上回るＤＡＲ１を含む画分をプールして濃縮し、１５ｍＬ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ  ５０ｋＤａ  ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過で、緩衝剤を、２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭスクロース、ｐＨ６．０に交換し、滅菌濾過して分析した。
【０３４８】
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ  ＨＩＣ  Ｂｕｔｙｌ−ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＣｏｎｊＣの純試料を、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び、２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、ごくわずかの複合化していない抗体、及び、薬物/抗体比（ＤＡＲ）が、０．９６分子の化合物１２／抗体と一致している、大半が単独で複合化した化合物１２を示す。
【０３４９】
Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ  ｍＡｂ  ＨＴＰ  ４μｍ  ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ  ３．０×２０ｍｍガ−ドカラムを含む）を用いて、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム、及び、１０％イソプロパノ−ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分の無菌濾過したＳＥＣ緩衝剤で、ＣｏｎｊＣの純試料を２８０ｎｍで溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、９８％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ  ＳＥＣ分析により、０．７５ｍＬにて１．２０ｍｇ／ｍＬの最終ＣｏｎｊＣ濃度が得られ、ＣｏｎｊＣについて得た質量は、０．９ｍｇ（１８％収率）である。
【０３５０】
実施例１０−化合物Ｘを有する抗体薬物複合体：ＣｏｎｊＤ
化合物Ｘ：
【化１１６】
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は、ＷＯ２０１４／０５７０７４の化合物Ｂである。
【０３５１】
化合物Ｘを、ＤＭＳＯ溶液（０．４３ｍＬ  ＤＭＳＯにて、１０モル当量／抗体、０．６７マイクロモル）として、ＰＢＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４（１０．０ｍｇ、６６．７ナノモル）での１Ｃ１Ｓ２３９ＣＰ２抗体溶液の４．５ｍＬに対して加え、１０％（ｖ／ｖ）最終ＤＭＳＯ濃度とした。この溶液を残し、室温で、一晩、穏やかに振盪させながら反応させた。複合体を、Ｎ−アセチルシステイン（３．３マイクロモル、１００ｍＭに３３μＬ）の添加でクエンチし、溶出用緩衝剤として、ＰＢＳ  ｐＨ７．４を有するＦＰＬＣ、及び、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ２６／６００を使用した分取サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。９５％を上回る単量体を含む画分をプールして濃縮し、１５ｍＬ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ  ５０ｋＤａ  ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過で、緩衝剤を、２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭスクロース、ｐＨ６．０に交換し、滅菌濾過して分析した。
【０３５２】
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ  ＨＩＣ  Ｂｕｔｙｌ−ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＣｏｎｊＤの純試料を、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び、２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、複合化していない抗体、及び、薬物/抗体比（ＤＡＲ）が、１．９１分子の化合物Ｘ／抗体と一致している、単独で複合化した、及び、二重に複合化した化合物Ｘの混合物を示す。
【０３５３】
Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ  ｍＡｂ  ＨＴＰ  ４μｍ  ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ  ３．０×２０ｍｍガ−ドカラムを含む）を用いて、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム、及び、１０％イソプロパノ−ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分の無菌濾過したＳＥＣ緩衝剤で、ＣｏｎｊＤの純試料を２８０ｎｍで溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ  ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析は、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ  ＳＥＣ分析により、４．０ｍＬにて１．４９ｍｇ／ｍＬの最終ＣｏｎｊＤ濃度が得られ、ＣｏｎｊＤについて得た質量は、６．０ｍｇ（６０％収率）である。
【０３５４】
実施例１１−ＡＤＣについての細胞毒性分析
Ｔ７５フラスコでのサブ密集（８０〜９０％の密集度）ＰＣ３細胞の培地を吸引し、フラスコをＰＢＳ（約２０ｍｌ）で濯ぎ、空にした。トリプシン−ＥＤＴＡ（５ｍｌ）を添加し、フラスコを、３７℃の、ガスが供給されたインキュベーターに最大約５分間戻し、次いで、激しくたたいてプラスチックから細胞を取り除いて分離させた。細胞懸濁液を、無菌の５０ｍｌのねじ口遠心管に移し、成長培地によって１５ｍｌの最終濃度まで希釈し、次いで、遠心分離した（５分間で４００ｇ）。上清を吸引し、ペレットを１０ｍｌ培地に再懸濁した。単分散細胞懸濁液を生成するのに繰り返しのピペット操作が必要となる場合がある。トリパンブルー細胞染色細胞の細胞濃度及び生存度を、ＬＵＮＡＩＩを用いて測定する。細胞を１５００細胞／ウェルに希釈し、白色の９６ウェル平底プレートに分配し（５０μｌ／ウェル）、使用前に一晩インキュベートした。
【０３５５】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）（２０μｇ／ｍｌ）の原液（１ｍｌ）を、フィルタ滅菌したＡＤＣの細胞培養液中での希釈によって作った。ＡＤＣ原液の８×１０倍希釈液セットを、９００μｌの細胞培養液に対する１００μｌの連続移行によって２４ウェルプレートに作った。ＡＤＣ希釈液を、前日に播種した５０μｌ細胞懸濁液を含む９６ウェルプレートの４つの複製ウェルに分配した（５０μｌ／ウェル）。対照ウェルに、５０μｌ細胞培養液を入れた。細胞及びＡＤＣを含む９６ウェルプレートを、３７℃で、６日間、ＣＯ2ガスを供給したインキュベータ内でインキュベートした。インキュベーション期間の終了時に、プレートを室温に３０分間平衡化した後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、各ウェルに分注した（１００μｌ／ウェル）。プレートを、オービタルシェーカー上に２分間置き、その後、室温で、１０分間安定化させた。ウェル発光を測定し、４つの対照未処理ウェルでの平均発光（１００％）と比較して、４つのＡＤＣ処理ウェルでの平均発光から細胞生存率を計算した。非線形曲線適合アルゴリズム：シグモイド型用量反応、Ｘを、ｌｏｇ（濃度）とするＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して、ＩＣ50を、用量反応デ−タから決定した。ＰＣ３用の細胞増殖培地は：グルタミンを含むＦ１２Ｋ、１０％（ｖ／ｖ）ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ウシ胎仔血清であった。
【表４】
2021525265.tif 000124
【０３５６】
上記したすべての文書、及び、その他の参考文献は、参照によって本明細書に援用する。
【図１】
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【図２】
2021525265.tif 000193
【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
2021525265.tif 000196
【図３−４】
2021525265.tif 000197
【図３−５】
2021525265.tif 000198
【図３−６】
2021525265.tif 000199
【図３−７】
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【国際調査報告】
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2021525265.tif 000202