(57)【要約】いくつかのマウスモデルにおける筋線維芽細胞の線維性線維芽細胞への増殖および分化を含むインビボでの線維性肺リモデリングを阻害するために、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（形態β；ＧＳＫ３β）阻害剤、最も好ましくは９−ＩＮＧ−４１に依存する医薬組成物および方法が記載される。臨床的に有用な特異的阻害剤である９−ＩＮＧ−４１によるＧＳＫ−３βの治療的標的化は、インビボでの線維性肺リモデリングを軽減し、９−ＩＮＧ−４１による特異的ＧＳＫ−３β阻害によるヒトＩＰＦの治療様式を提供する。【選択図】図１
2021523951.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物対象における特発性肺線維症（ＩＰＦ）を治療する方法であって、前記方法は、前記哺乳動物対象に、有効量の式Ｉ
2021523951.tif 000007
の化合物、またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物を投与する工程を有し、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である、
方法。
【請求項２】
哺乳動物対象における特発性肺線維症（ＩＰＦ）を治療する方法であって、前記方法は、前記哺乳動物対象に、医薬組成物を投与する工程を有し、前記医薬組成物は、
（ｉ）有効量の式Ｉ
2021523951.tif 000008
の化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物であって、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である、
化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤と
を有する、方法。
【請求項３】
請求項１または２記載の方法において、前記式Ｉの化合物は、９−ＩＮＧ−４１
2021523951.tif 000009
である、方法。
【請求項４】
請求項１、２、または３のいずれか１つに記載の方法において、前記哺乳動物対象はヒトである、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１つに記載の方法において、前記投与する工程は吸入によるものである、方法。
【請求項６】
肺筋線維芽細胞の線維性肺（ＦＬ）線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害するための方法、またはそれを必要とする哺乳動物対象においてＦＬ線維芽細胞の増殖を低減するための方法であって、前記方法は、前記筋線維芽細胞またはＦＬ線維芽細胞を、抗線維化有効量の式Ｉ
2021523951.tif 000010
の化合物、またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物と接触させる工程を有し、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である、
方法。
【請求項７】
肺筋線維芽細胞の線維性肺（ＦＬ）線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害する方法、またはそれを必要とする哺乳動物対象においてＦＬ線維芽細胞の増殖を低減する方法であって、前記方法は、前記筋線維芽細胞またはＦＬ線維芽細胞を医薬組成物と接触させる工程を有し、前記医薬組成物は、
（ｉ）抗線維化有効量の式Ｉ
2021523951.tif 000011
の化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物であって、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である、
化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤と
を有する、方法。
【請求項８】
請求項６または７記載の方法において、前記式Ｉの化合物は、９−ＩＮＧ−４１
2021523951.tif 000012
である、方法。
【請求項９】
請求項６、７、または８のいずれか１つに記載の方法において、前記哺乳動物対象はヒトである、方法。
【請求項１０】
請求項６〜９いずれか１つに記載の方法において、前記接触させる工程が、吸入を介して前記哺乳動物対象に前記化合物または医薬組成物を投与することによって達成される、方法。
【請求項１１】
医薬組成物であって、
（ｉ）抗線維化有効量の式Ｉ
2021523951.tif 000013
の化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物であって、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である、
化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤と
を有する、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１１記載の医薬組成物において、前記式Ｉの化合物は、９−ＩＮＧ−４１
2021523951.tif 000014
である、医薬組成物。
【請求項１３】
吸入による投与のために処方された、請求項１１〜１２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
哺乳動物対象におけるＩＰＦを治療するための、請求項１１〜１３のいずれかに記載の組成物の使用であって、有効量の前記組成物が、ＩＰＦを有する哺乳動物対象に投与される、使用。
【請求項１５】
請求項１４記載の使用において、前記組成物は、
（ｉ）ＧＳＫ−３βを阻害し、
（ｉｉ）肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、および、
（ｉｉ）前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を減少させる、
使用。
【請求項１６】
請求項１４または１５のいずれか１つに記載の使用において、前記組成物は、９−ＩＮＧ−４１、または、その薬学的に許容される塩または溶媒和物を有する、使用。
【請求項１７】
請求項１４〜１６のいずれか１つに記載の使用において、前記化合物は吸入によって投与される、使用。
【請求項１８】
請求項１４〜１７のいずれか１つに記載の使用において、前記哺乳動物対象はヒトである、使用。
【請求項１９】
それを必要とする対象におけるＩＰＦの治療のための薬剤の製造のための、請求項１１〜１３のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２０】
請求項１９記載の使用において、前記組成物は、
（ｉ）ＧＳＫ−３βを阻害し、
（ｉｉ）肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、および、
（ｉｉ）前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を減少させる、
使用。
【請求項２１】
請求項１９または２０のいずれか１つに記載の使用において、前記組成物は、９−ＩＮＧ−４１、または、その薬学的に許容される塩または溶媒和物を有する、使用。
【請求項２２】
請求項１９〜２１のいずれか１つに記載の使用において、前記化合物は吸入によって投与される、使用。
【請求項２３】
請求項１９〜２２のいずれか１つに記載の使用において、前記哺乳動物対象はヒトである、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０１８年５月１７日に出願された米国仮出願第６２／６７２，８６４号に対する優先権の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、国立衛生研究所によって授与された政府の支援（ＮＩＨ  ＨＬ１３０１３３）によってなされた。米国政府は、本発明に関して一定の権利を有している。
【背景技術】
【０００３】
生化学および医学の分野における本発明は、インビボで線維性肺リモデリングを阻害し、それによって特発性肺線維症（ＩＰＦ）を治療するために、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３、形態β（ＧＳＫ３β）阻害剤、最も好ましくは９−ＩＮＧ−４１を使用するための方法および組成物に関する。
【０００４】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、よく理解されていない進行性で致命的な肺疾患であり、肺移植以外の治療法はほとんどない。肺線維症に対して現在利用可能な治療法は、治癒的であることが知られておらず、疾患の進行を遅らせるだけである。生存期間の中央値（ＭＳＴ）は診断後３年である（診断後５年の生存期間の中央値は２０％未満である）。間質性肺疾患のほとんどの形態および他の形態の肺線維症は、線維性病変、肺胞構造の進行性の歪みが発生し、過剰な細胞外マトリックス（ＥＣＭ）沈着を伴う線維性または瘢痕組織との置換を特徴とし、進行性呼吸困難および肺機能の喪失をもたらす。
【０００５】
ＧＳＫ−３βはセリン／スレオニンキナーゼであり、２つのＧＳＫ−３アイソフォーム（αおよびβ）の１つである。ＧＳＫ−３βは、転写因子を含む多様な標的リストの機能を調節することができる。ＧＳＫ−３βはまた、多くの炎症性メディエーターの転写活性に影響を与える多くのシグナル伝達経路を調節する。
【０００６】
現在の治療法は疾患の進行を遅らせるだけなので、ＩＰＦによる死亡率を大幅に逆転させたり、死亡率を低下させたり、治癒させたりする可能性のあるより優れた治療法と同様に、より効果的な新しい標的の特定が必要である。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、胸膜線維症および肺線維症の両方の治療に関するものである。好ましい実施形態では、これらの方法は、高用量でさえ十分に許容される９−ＩＮＧ−４１の投与を介して達成される。それはまた、胸膜線維症、および本明細書に記載されるように、肺線維症のマウスモデルにおける瘢痕形成を制限する。胸膜線維症に関連する瘢痕および組織再編成の治療のための効果的な治療法はなく、肺線維症に利用可能な既存のアプローチは、単にその進行を遅らせるだけであり、治癒的ではない。９−ＩＮＧ−４１は、インビボでの線維性肺リモデリングを軽減し、肺線維症の効果的な治療の緊急の必要性に対処する。
【０００８】
現在、肺線維症を逆転させる効果的な治療法はない。本発明は、この重要な隔たりに対処し、線維性肺（「ＦＬ」）線維芽細胞（または筋線維芽細胞）を標的にしてＩＰＦを効果的に治療するための新規化合物および方法を提供する。
【０００９】
本発明は、ＩＰＦへの進行において筋線維芽細胞の拡大に寄与する住宅性胸膜中皮細胞（ＰＭＣ）の中皮間質移行（ＭｅｓｏＭＴ）を阻害する方法に関する。
【００１０】
本発明は、それを必要とする哺乳動物対象に、有効量の式Ｉ
【化１】
2021523951.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物を投与することにより、哺乳動物対象における特発性肺線維症（ＩＰＦ）を治療する方法に関するものであり、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルである。
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である。
【００１１】
本発明はまた、それを必要とする哺乳動物対象に、ｉ）有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物、および、ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤を有する医薬組成物を投与することにより、哺乳動物対象におけるＩＰＦを治療する方法に関する。
【００１２】
本発明はまた、肺線維症、最も好ましくはヒトにおけるＩＰＦを特徴とする疾患または状態を有するまたは発症する哺乳動物対象を治療するための方法であって、対象に上記のような有効量の医薬組成物を投与する工程を有する方法に関する。化合物または組成物は、好ましくは、インビトロまたはインビボアッセイとして、９−ＩＮＧ−４１の生物学的または生化学的活性の少なくとも２０％を有する９−ＩＮＧ−４１またはその類似体を有する。最も好ましい化合物は９−ＩＮＧ−４１である。
【００１３】
哺乳動物対象においてＩＰＦを治療する方法の好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、９−ＩＮＧ−４１またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物である。
【００１４】
哺乳動物対象においてＰＦを治療する方法の好ましい実施形態では、哺乳動物対象はヒトである。
【００１５】
哺乳動物対象においてＩＰＦを治療する方法の好ましい実施形態では、投与は吸入によるものである。
【００１６】
肺筋線維芽細胞の線維性肺（ＦＬ）線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、ＦＬ線維芽細胞の増殖を低減するための方法も提供され、前記方法は、それを必要とする哺乳動物対象において筋線維芽細胞およびＦＬ線維芽細胞を、抗線維化有効量の式Ｉの化合物、または、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される賦形剤または担体を有する医薬組成物に接触させる工程を有する。
【００１７】
肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、ＦＬ線維芽細胞の増殖を低減するための方法の好ましい実施形態では、化合物または式Ｉは、好ましくは９−ＩＮＧ−４１またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物である。
【００１８】
肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、ＦＬ線維芽細胞の増殖を低減するための方法の好ましい実施形態では、哺乳動物対象はヒトである。
【００１９】
肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、ＦＬ線維芽細胞の増殖を低減するための方法の好ましい実施形態では、接触は吸入によるものである。
【００２０】
本発明はまた、（ｉ）抗線維化有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤を有する医薬組成物を提供する。
【００２１】
好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物中の式Ｉは９−ＩＮＧ−４１である。
【００２２】
好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、吸入による投与のために処方される。
【００２３】
別の実施形態では、本発明は、哺乳動物対象においてＩＰＦを治療するための上記組成物の使用に関するものであり、ここで、有効量の前記組成物は、ＩＰＦを有する哺乳動物対象に投与される。
【００２４】
好ましい実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３βを阻害し、そして肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、そして前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を減少させる。
【００２５】
好ましい実施形態では、組成物は、有効量の９−ＩＮＧ−４１またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物を有する。
【００２６】
好ましい実施形態では、哺乳動物対象はヒトである。
【００２７】
好ましい実施形態では、組成物は吸入によって投与される。
【００２８】
別の実施形態は、それを必要とする哺乳動物対象、好ましくはヒトにおけるＩＰＦの治療のための薬剤の製造のための上記のような組成物の使用に関する。
【００２９】
好ましい実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３β活性を阻害し、そして肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、そして前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を減少させる。
【００３０】
この使用において、化合物は、好ましくは、９−ＩＮＧ−４１またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物である。上記の使用において、薬剤の製造は、ＩＰＦの治療のためにヒトへの吸入による投与のためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１Ａ−Ｂは、９−ＩＮＧ−４１によるＧＳＫ−３β阻害が肺線維症を軽減したことを示すグラフである。Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスにブレオマイシン硫酸塩（０．８Ｕ／ｋｇ）を気管内投与した。１４日後、マウスをＤＭＳＯ（ビヒクル）またはＧＳＫ−３β阻害剤９−ＩＮＧ−４１（３０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかで、次の１４日間透析腹腔内注射により治療した。２８日の時間経過が完了すると、Ｓｃｉｒｅｑ  ｆｌｅｘｉｖｅｎｔを使用して肺コンプライアンス（図１Ａ）が決定された。肺のレンディションもゲートＣＴスキャンによって収集され、肺気量を決定するために使用された（図１Ｂ）。
【図２】図２Ａ−２Ｂは、ＤＭＳＯビヒクル（図２Ｂ）および９−ＩＮＧ−４１処理（図２Ａ）マウスの肺組織切片（５μｍ）を示している。切片を免疫染色して、共焦点顕微鏡でコラーゲン沈着（灰色で表示）を視覚化した。実線の矢印は、コラーゲン−１の沈着が増加している領域を示している。画像は３０フィールド／スライド／状態を表している。ｎ＝６匹のマウス。
【図３】図３は、肺線維症を誘発するために気管内に投与されたＴＧＦ−βアデノウイルスのマウスの肺コンプライアンスを示すグラフである。７日後、マウスは次の７日間、９−ＩＮＧ−４１（３０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を毎日受けた。１４日の時間経過の完了時に、肺コンプライアンスが決定された。データは平均±ＳＥＭとして表される。ｎ＝６マウス／状態。＊は、対照ＧＦＰ−アデノウイルスおよびＤＭＳＯ処理と比較した、マンホイットニーＵ検定によるｐ<０．０５の統計的有意性を示す。＄は、ＧＦＰアデノウイルス９−ＩＮＧ−４１処理と比較してｐ<０．０５を示す。
【図４】図４Ａ−４Ｂは、ＴＧＦ−βアデノウイルスが肺線維症を誘発したマウスの肺組織切片を示している。マウスをＤＭＳＯ（図４Ａ）または９−ＩＮＧ−４１（図４Ｂ）で処理した（図３の説明を参照）。損傷およびコラーゲンの領域を示すために、切片を三色染色した。実線の矢印は、損傷の領域とコラーゲン沈着の増加を示している。画像は３０フィールド／スライド／状態を表している。ｎ＝６匹のマウス。
【図５】図５Ａ−５Ｆは、ビヒクル（図５Ａ−５Ｃ）および９−ＩＮＧ−４１処置（図５Ｄ−５Ｆ）マウスからの肺組織切片（５μｍ）を示している。肺の構造とコラーゲン沈着の変化を検出するために、切片を脱パラフィンし、三色染色した（青色染色）。画像は２０倍で撮影され、３０フィールド／スライド／マウス、ｎ＝６動物／治療を表している。線維性病巣は黄色の実線の矢印で示されている。
【図６】図６Ａ−６Ｂは、コラーゲン１（Ｃｏｌ−１）沈着について免疫染色され、４０倍で共焦点顕微鏡法によって画像化された、ビヒクル（図６Ｂ）および９−ＩＮＧ−４１処置（図６Ａ）マウスからの肺切片を示す。実線の矢印は、損傷した肺内のコラーゲン沈着の領域を示している。これらのデータは、９−ＩＮＧ−４１によるＧＳＫ−３β阻害が線維性肺損傷におけるコラーゲン沈着を減少させたことを示している。
【図７】図７Ａ−７Ｂは、筋線維芽細胞分化のマーカーであるα−ＳＭＡについて免疫染色されたビヒクル（図７Ｂ）および９−ＩＮＧ−４１処置（図７Ａ）マウスからの肺切片を示す。画像は４０倍の共焦点顕微鏡で撮影された。実線の矢印は、コラーゲンα−ＳＭＡ発現の領域を示している。画像は３０フィールド／マウスおよびｎ＝３マウス／治療を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
ＧＳＫ−３β阻害剤としての９−ＩＮＧ−４１
本発明の方法において有用な化合物には、参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第８，２０７，２１６号（Ｋｏｚｉｋｏｗｓｋｉら）に記載されている９−ＩＮＧ−４１が含まれる。
【００３３】
また、本発明において有用なのは、ＧＳＫ−３β阻害の特性を共有する、より広い属のベンゾフラン−３−イル−（インドール−３−イル）マレイミドファミリーである。このような化合物は、式Ｉ
【化２】
2021523951.tif 000004
に含まれ、式中、
Ｘは独立して−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔであり、
Ｒ１は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルであり、
Ｒ２は−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルである。
Ｙは独立して−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である。
【００３４】
式Ｉの化合物において、Ｘは、独立して、−Ｈ、ハロ、５，６−メチレンジオキシ、−ＣＮ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔである。置換基Ｘは、独立して、式Ｉのインドール環の位置４、５、６、または７のうちの１つまたは複数に存在し得る。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ＸはＨである。
【００３６】
他の実施形態では、Ｘはハロ（すなわち、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ）である。いくつかの実施形態では、Ｘは５−Ｆである。他の実施形態では、Ｘは５−Ｂｒである。他の実施形態では、Ｘは５−Ｉである。
【００３７】
いくつかの実施形態では、Ｘは５−Ｆ、６−Ｃｌである。他の実施形態では、Ｘは５，７−ジブロモである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、Ｘは５，６−メチレンジオキシである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＮである。
【００４０】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＯＭｅ（すなわち、−Ｏ−ＣＨ３）である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＯＨである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＯＢｎ（すなわち、−Ｏ−ベンジル）である。
【００４３】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＦ３である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＨ２ＯＨである。
【００４５】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＨ２ＯＭｅである。
【００４６】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
【００４７】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔである。
【００４８】
式Ｉの化合物において、Ｒ１は、Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルである。
【００４９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はＨである。
【００５０】
他の実施形態では、Ｒ１は低級アルキルである。本明細書で使用される場合、低級アルキルは、飽和した直鎖または分岐炭化水素基を指す。低級アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルなどが含まれる。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ３（すなわち、メチル）である。
【００５１】
他の実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシで置換された低級アルキルである。
【００５２】
他の実施形態では、Ｒ１は、−ＮＨ２で置換された低級アルキルである。
【００５３】
式Ｉの化合物において、Ｒ２は、−Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、または−ＮＨ２で置換された低級アルキルである。
【００５４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨである。
【００５５】
他の実施形態では、Ｒ２は低級アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２は、−ＣＨ３（すなわち、メチル）である。
【００５６】
他の実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシで置換された低級アルキルである。
【００５７】
他の実施形態では、Ｒ２は、−ＮＨ２で置換された低級アルキルである。
【００５８】
式Ｉの化合物において、Ｙは、独立して、−Ｈ、ハロ、−ＯＭｅ、−ＯＨ、−ＯＢｎ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＭｅ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−Ｃ＝ＣＨ２である。置換基Ｙは、独立して、式Ｉのベンゾフラン環の１つ以上の位置４、５、６、または７に存在し得る。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ＹはＨである。
【００６０】
他の実施形態では、Ｙはハロ（すなわち、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ）である。いくつかの実施形態では、Ｙは５−Ｆである。他の実施形態では、Ｙは５−Ｂｒである。他の実施形態では、Ｙは５−Ｉである。
【００６１】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＣＮである。
【００６２】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＯＭｅ（すなわち、−Ｏ−ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ｙは７−ＯＣＨ３である。
【００６３】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＯＨである。
【００６４】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＯＢｎ（すなわち、−Ｏ−ベンジル）である。
【００６５】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＣＦ３である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＣＨ２ＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｙは６−ＣＨ２ＯＨである。
【００６７】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＣＨ２ＯＭｅである。
【００６８】
いくつかの実施形態では、Ｙは−Ｃ＝ＣＨ２である。
【００６９】
いくつかの実施形態では、Ｙは−ＮＯ２である。
【００７０】
式Ｉの化合物のいくつかの実施形態では、Ｘは好ましくは５，６−メチレンジオキシ（９−ＩＮＧ−４１の置換基）である。
【００７１】
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、−ＮＨ２で置換された低級アルキルからなる群から選択され、好ましくはメチルである；
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、低級アルキル、ヒドロキシで置換された低級アルキル、−ＮＨ２で置換された低級アルキルからなる群から選択され、好ましくはＨである；
いくつかの実施形態において、Ｙは、５−または６−ハロ基、５−または６−ＮＯ２、−ＣＮ、および−Ｃ＝ＣＨ２、基からなる群から選択される。Ｙは好ましくは５−フッ素（５−Ｆ）である。
【００７２】
式Ｉの化合物のいくつかの実施形態では、Ｘは５，６−メチレンジオキシであり、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨであり、および、Ｙは５−Ｆである。この実施形態は９−ＩＮＧ−４１であり、これは以下の式ＩＩに示される構造を有する。
【化３】
2021523951.tif 000005
【００７３】
式Ｉにおいて９−ＩＮＧ−４１とは異なる置換基を有する上記の化合物は、それらの類似体と見なされる。
【００７４】
式Ｉの化合物を合成する一般的な方法は当技術分野で知られており、そのいくつかは上記の「２１６特許」に記載されている。
【００７５】
組成物のインビトロ試験
本発明の化合物は、その生物学的活性、例えば抗線維化活性、酵素ＧＳＫ３βを阻害する能力、および／または増殖およびコラーゲン産生性線維芽細胞／筋線維芽細胞を阻害する能力、または線維化性肺線維芽細胞を阻害する能力について、本明細書に記載および／または例示された方法またはアッセイ、または当技術分野で周知の他の方法のいずれか１つを使用して試験される。
【００７６】
組成物のインビボ試験
ＢＬＭまたは構成的に活性なＴＧＦ−βアデノウイルスベクター（実施例ＶＩを参照）で処置された動物、好ましくはマウスの肺線維症を阻害する化合物の能力は、化合物の機能的／薬剤的活性を評価するための好ましい試験である。同じタイプの活動を測定する当技術分野で知られている他の試験も使用することができる。
【００７７】
肺の損傷および線維症を予防または治療する方法
本明細書に記載の化合物および組成物は、酵素ＧＳＫ３βを阻害し、インビトロまたはインビボでコラーゲン産生線維芽細胞／筋線維芽細胞の増殖を阻害し、肺線維症／ＩＰＦを治療する方法で使用される。
【００７８】
医薬および治療的組成物およびそれらの投与
本発明の医薬組成物に使用することができる化合物には、上記の化合物、好ましくは９−ＩＮＧ−４１、ならびにそれらの類似体、およびこれらの化合物の薬学的に許容される塩または溶媒和物が含まれる。「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、適切な非毒性有機または無機酸または有機または無機塩基から形成される従来の酸付加塩または塩基付加塩を指す。サンプルの酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来するもの、およびｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸などの有機酸に由来するものが含まれる。
【００７９】
サンプルの塩基付加塩には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、および第四級アンモニウム水酸化物、例えば、テトラメチルアンモニウム水酸化物に由来するものが含まれる。医薬化合物（すなわち、薬物）の塩への化学修飾は、化合物の改善された物理的および化学的安定性、吸湿性、流動性および溶解性を得るために医薬品化学者によく知られている技術である。例えば、H. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)の、例えばpp. 196および1456-1457を参照。
【００８０】
上記のように、本発明の化合物は、酵素ＧＳＫ３βを阻害する能力を有し、肺線維症の治療に利用される。
【００８１】
本発明の化合物、ならびにその薬学的に許容される塩または溶媒和物は、カプセル、含浸ウエハー、錠剤、または好ましくは注射可能な調製物などの便利な剤形に組み込むことができる。固体または液体の薬学的に許容される担体を使用することができる。薬学的に許容される担体、賦形剤などの「薬学的に許容される」とは、特定の化合物が投与される対象に対して薬理学的に許容され、実質的に無毒であることを意味する。
【００８２】
固形担体には、デンプン、乳糖、硫酸カルシウム二水和物、テラアルバ、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が含まれる。液体担体には、シロップ、落花生油、オリーブ油、生理食塩水、水、デキストロース、グリセロールなどが含まれる。同様に、担体または希釈剤は、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの任意の徐放性材料を、単独でまたはワックスと共に含み得る。 液体担体が使用される場合、調製物は、シロップ、エリキシル、乳濁液、ソフトゼラチンカプセル、アンプルなどの無菌の注射可能な液体（例えば、溶液）、または水性または非水性の液体懸濁液の形態であり得る。そのような医薬組成物の要約は、例えば、Gennaro, AR, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins Publishers; 21st Ed, 2005 (または最新版)に見いだされる。
【００８３】
医薬調製物は、混合、造粒、圧縮などの工程を含む医薬品化学の従来の技術に従って作られ、錠剤形態のために必要な場合、または経口、非経口、局所、経皮、経膣、膣内、陰茎内、鼻腔内、気管支内、頭蓋内、眼内、耳内および直腸投与のための所望の製品を与えるために、必要に応じて、成分を混合、充填、および溶解する。医薬組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などのような少量の非毒性の補助物質を含み得る。
【００８４】
本発明の医薬組成物は、多数の動物の属および種のいずれかの治療に使用することができ、ヒトまたは獣医学の実践においても同様に適用可能である。したがって、医薬組成物は、鳥類、より好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトを含む家畜および商業動物の治療に使用することができる。
【００８５】
本発明の組成物は、経口（orally）、経口（perorally）、吸入、皮下、筋肉内、静脈内、経皮、経膣、直腸、またはそれらの任意の組み合わせを含む、任意の適切な投与経路によって対象に投与することができる。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、経口（orally）、経口（perorally）に、吸入、皮下、筋肉内、または静脈内に投与される。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は経口（orally）投与される。
【００８８】
他の実施形態では、本発明の組成物は経口（perorally）投与される。
【００８９】
他の実施形態では、本発明の組成物は、吸入によって投与される。
【００９０】
他の実施形態では、本発明の組成物は皮下投与される。
【００９１】
他の実施形態では、本発明の組成物は筋肉内投与される。
【００９２】
他の実施形態では、本発明の組成物は静脈内投与される。
【００９３】
「全身投与」という用語は、対象の循環系への化合物の導入をもたらすか、そうでなければ静脈内（ｉ．ｖ．）注射または注入などの体全体へのその化合物の拡散を可能にする方法での治療化合物の投与を指す。「局部的」投与は、肺への点滴注入または吸入、好ましい経路、または胸膜内、腹腔内、髄腔内、硬膜下、または特定の器官などの、特定の、いくらかより限定された解剖学的空間への投与を指す。他の例には、肺への点滴注入または吸入、気管支内、耳内または眼内などに対応する１つの経路である鼻腔内が含まれる。
「局所投与」という用語は、皮下（ｓ．ｃ．）注射、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射などの限定された、または制限された解剖学的空間への組成物または薬物の投与を指す。当技術分野の熟練者であれば、局所投与または局部的投与は、しばしば循環系への組成物の進入をもたらすので、ｓ．ｃ．またはｉ．ｍ．もまた全身投与のための経路であることを理解するであろう。点滴可能、注射可能または注入可能な調製物は、溶液または懸濁液、注射または注入前の液体中の溶液または懸濁液に適した固体形態、または乳濁液のいずれかとして、従来の形態で調製することができる。好ましい局部的投与経路は肺への投与であるが、医薬組成物は、肺への点滴注入または吸入とは別に、またはそれと同時に、全身的または局所的または経皮的に投与され得る。
【００９４】
本発明の組成物のための他の薬学的に許容される担体は、リポソーム、脂質層に付着した水性同心層からなる小体に分散してまたは様々に存在する活性ポリペプチドが含まれる医薬組成物である。活性化合物は、好ましくは、水層および脂質層、内側または外側、あるいはいずれにせよ、一般にリポソーム懸濁液として知られている不均一系に存在する。疎水性層、または脂質層は、一般に、レシチン、スフィンゴミエリンなどのリン脂質、コレステロールなどのステロイド、ジセチルホスフェート、ステアリルアミン、ホスファチジン酸などの多かれ少なかれイオン性の表面活性物質、および／または疎水性の他の物質からなるが、これに限定されるものではない。当業者は、本発明のリポソーム製剤の他の適切な実施形態を理解するであろう。
【００９５】
投与される治療用量は、当業者に知られているか、または容易に確認できるように、治療的に有効な量である。用量はまた、レシピエントの年齢、健康、および体重、同時治療の種類、もしあれば、治療の頻度、および望まれる効果の性質に依存する。
【００９６】
治療法
本発明の方法は、それを必要とする対象においてＩＰＦとも呼ばれる肺線維症を治療するために使用され得る。「治療する」という用語は、少なくとも以下を含むように広く定義される：再発までの頻度および／または時間、または治療または予防されている疾患または状態の症状の重症度を含む、発生または再発を阻害すること、軽減すること、改善すること、予防すること、軽減すること。これは、上皮細胞死の阻害、線維芽細胞の増殖の阻害、IPFに関連する、またはIPFの原因であるとして本明細書に開示される他の生物学的または生化学的メカニズムのいずれかの結果として起こり得る。
【００９７】
ベンゾフラン−３−イル−（インドール−３−イル）マレイミドＧＳＫ３β阻害剤（すなわち、式Ｉの化合物）、最も好ましくは、９−ＩＮＧ−４１またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物は、好ましくは、上述のように医薬組成物として投与される。
【００９８】
化合物の用量は、好ましくは、有効量の９−ＩＮＧ−４１を有する医薬投薬単位を含む。投薬単位形態は、哺乳動物対象のための単位投薬として適した物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要な医薬担体と関連して、所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活物質を含む。本発明の投薬単位形態の仕様は、（ａ）活物質の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果、および（ｂ）個々の対象の治療および感受性のためにそのような活性化合物を配合する技術に固有の制限によって決定され、かつ直接依存する。
【００９９】
「有効量」とは、インビボで局所濃度または定常状態濃度を達成するのに十分な量を意味し、これにより、疾患の関連するパラメーターの測定可能な減少がもたらされる。
【０１００】
「抗線維化有効量」とは、肺筋線維芽細胞の線維性肺（ＦＬ）線維芽細胞への増殖および／または分化、またはＦＬ線維芽細胞の増殖を阻害または低減するのに十分な量を意味する。
【０１０１】
投与される活性化合物の量は、選択された化合物（例えば、９−ＩＮＧ−４１）、正確な疾患または状態、投与経路、レシピエントの健康および体重、もしあれば他の同時治療の存在、治療の頻度、所望の効果の性質、および熟練した当業者の判断に依存する。
【０１０２】
対象、好ましくは哺乳動物、より好ましくはそれから生じるＩＰＦに罹患している、または感受性のあるヒトを治療するために１日１回与えられる好ましい単回用量は、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇの間（例えば、０．２、０．４、０．６、０．８、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、または２５０ｍｇ／ｋｇの活性化合物）、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの間；約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの間；約１ｍｇ／ｋｇから約３ｍｇ／ｋｇの間、好ましくは、例えば吸入を介して、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間である。そのような用量は、約３日から１週間以上のどこにでも毎日投与することができる。当技術分野でよく理解されているように、用量を下方に調整する必要があるかもしれないが、慢性投与も可能である。しかしながら、個々の治療レジメンの変数の数が多く、これらの好ましい値からのかなりの逸脱が予想されるため、前述の範囲は示唆的である。
【０１０３】
例えば、以下に記載される実験のいくつかで使用された浸透圧ポンプなどのポンプシステムによる連続投与の場合、約１〜２週間の時間経過の総投与量は、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲（例えば、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、または１０００ｍｇ／ｋｇ）であり、好ましくは２０〜３００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５０〜２００ｍｇ／ｋｇである。そのような連続投与レジメンの後、活性化合物の総濃度は、好ましくは、約０．５〜約５０μＭの範囲（例えば、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０μＭ）であり、好ましくは約１〜約１０μＭである。
【０１０４】
インビトロでのＧＳＫ−３βを阻害するか、または筋線維芽細胞および線維性肺線維芽細胞の増殖を防止するための活性化合物の有効濃度は、約０．５μＭ〜約１００μＭの範囲（例えば、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００μＭ）であり、より好ましくは約２μＭ〜約２０μＭである。有効濃度、用量、および最適な用量範囲は、本明細書に記載の方法を使用してインビトロで決定することができる。
【０１０５】
本発明の方法において、化合物または組成物は、経口（orally）、経口（perorally）、吸入、皮下、筋肉内、静脈内、経皮、膣、直腸、またはそれらの任意の組み合わせを含む、任意の適切な投与経路によって対象に投与され得る。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、化合物または組成物は、経口的（orally）に、経口的（perorally）に、吸入により、皮下に、筋肉内に、または静脈内に投与される。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、化合物または組成物は経口（orally）投与される。
【０１０８】
他の実施形態では、化合物または組成物は経口（perorally）投与される。
【０１０９】
他の実施形態では、化合物または組成物は吸入によって投与される。
【０１１０】
他の実施形態では、化合物または組成物は皮下投与される。
【０１１１】
他の実施形態では、化合物または組成物は筋肉内投与される。
【０１１２】
他の実施形態では、化合物または組成物は静脈内投与される。
【０１１３】
本発明を一般的に説明したので、同じことが、例示として提供され、特定されない限り、本発明を限定することを意図しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解されるであろう。実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれている。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能するために発明者によって発見された技術を表し、したがって、その実施のための好ましい様式を構成すると見なすことができることを当業者は理解すべきである。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示される特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでも本発明の精神および範囲から逸脱することなく同様または同様の結果を得ることができることを理解すべきである。
【０１１４】
実施例Ｉ
材料と方法および２つの肺線維症モデル
すべての動物実験は、タイラーにあるテキサス大学ヘルスサイエンスセンターの施設内動物管理使用委員会によって承認された。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１０〜１２週齢、≒２０ｇ（ジャクソン研究所、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ  ＭＥから））を、最初に腹腔内（ＩＰ）注射によりキシラジン／ケタミンで麻酔した。次に、（Sisson TH et al., Am J Pathol 2015, 185:969-860）に従って、いくつかの変更を加えて肺損傷を開始した。ブレオマイシン硫酸塩（Ｔｅｖａ、０．８単位／ｋｇ）を、気管内カニューレを介して気管内投与した。動物は、呼吸困難、有意な体重減少または瀕死状態の兆候について毎日監視された。対照群は同じ条件下で通常の生理食塩水を受けた。
【０１１５】
損傷の開始から１４日後に治療を開始した。ＧＳＫ−３β阻害剤の試験のために、３０ｍｇ／ｋｇでの９−ＩＮＧ−４１（Ａｕｃｔｕａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐａｔｉｃｓ，Ｆｔ.Ｗｏｒｔｓ，ＴＸから提供）、または４０μｌの容量でのビヒクル対照ジメチルスルホキシド／ＤＭＳＯでの処置を、ＩＰ注射によって毎日、最大１４日投与した。
【０１１６】
２８日間の時間経過の完了時に、マウスは、エラスタンスとコンプライアンスを含む呼吸機能の変化についてｆｌｅｘｉｖｅｎｔ（Tucker T et al., Am J Respir Cell Mol Biol 2019 (doi: 10.1165/rcmb.2018-0121OC. 印刷前のEpub); Kamata H et al., Sci Rep 2017, 7:4556; Boren J et al., supra; Tucker TA et al., 2014, supra; Tucker TA et al., Clin Transl Med 5: 17, 2016）によって評価された。手短に言えば、マウスをケタミン/キシラジン混合物で麻酔した。麻酔をかけたマウスは、声帯を通して気管に滅菌した２０ゲージの静脈内カニューレを挿入することによって挿管され、呼吸機能検査中にイソフルランを使用して麻酔下に維持された。測定は、ｆｌｅｘｉＶｅｎｔシステム（ＳＣＩＲＥＱ、Ｔｅｍｐｅ  ＡＺ）を使用して実行された。「スナップショット摂動法」は、メーカーの仕様に従って、肺コンプライアンスを決定するために使用された。２８日目に、マウスを安楽死させ、肺をまとめて採取した。肺形態計測は、上記の参考文献に記載されているように、５μｍの肺組織切片の三色染色によって決定された。すべての組織切片を最初に脱パラフィンし、クエン酸緩衝液を使用して９５℃で２０分間抗原を回収した。組織分析、コラーゲン沈着および局在化は、最初に三色染色によって評価された。免疫蛍光法を使用してα−ＳＭＡ（ＭＡＢ１４２０、Ｒ&Ｄ）を視覚化し、次に共焦点顕微鏡法を使用して免疫蛍光法とマーカーの共局在を視覚化した。説明したように、ＬＳＭ  ５１０  Ｍｅｔａ共焦点システム（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ）を４０倍で使用して、視野から０．４μｍのｚ軸増分で画像を取得した。
【０１１７】
２番目のモデルでは、肺線維症は、構成的に活性なＴＧＦ−βアデノウイルスベクター（Mackinnon AC et al., Am J Respir Crit Care Med 2012, 185:537-46によって報告されたＣ２２３Ｓ／Ｃ２２５Ｓ変異を有するＡｄ−ＴＧＦ−β）にいくつかの変更を加えたものを気管内注入して開始された。簡単に説明すると、３×１０８ｐｆｕのＡｄ−ＴＧＦ−βまたはｅＧＦＰアデノウイルスコントロールベクター（Ａｄ−ｅＧＦＰ）を４０μｌの容量で気管内投与した。次に、１４日間の時間経過が完了するまでマウスを毎日監視した。ＧＳＫ−３β阻害研究では、マウスはアデノウイルスベクターの投与の７日後に毎日９−ＩＮＧ−４１治療を受けた。時間経過の終わりに、肺機能検査とＣＴスキャンが説明されているように実行された（Tucker T et al., 2019, supra; Kamata H et al., 2017, supra; Boren J et al., 2017, supra; Tucker TA et al., 2016, supra）。
【０１１８】
動物実験のすべての統計分析は、マンホイットニーＵ検定を使用して実行された。（スチューデントのｔ検定は、インビトロ研究に使用された）。０．０５未満のｐ値は有意であると見なされた。
【０１１９】
実施例ＩＩ
９−ＩＮＧ−４１は、ブレオマイシンを介した肺機能と肺容積の減少を改善する。
図１と図２に示すように、９−ＩＮＧ−４１によるＧＳＫ−３β阻害は肺線維症を軽減した。ブレオマイシン硫酸塩（０．８Ｕ／ｋｇ）を気管内投与し、１４日後にＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスを、ＤＭＳＯ（ビヒクル）またはＧＳＫ−３β阻害剤９−ＩＮＧ−４１（３０ｍｇ／ｋｇ）で処理した。薬物は、腹腔内（ｉｐ）注射により、４０μｌの容量で最大１４日間送達された。２８日間の時間経過の完了時に、Ｓｃｉｒｅｑｆｌｅｘｉｖｅｎｔを使用して肺コンプライアンスを決定した。肺のレンディションもゲートＣＴスキャンによって収集された。次に、これらの表現を使用して肺気量を決定した。９−ＩＮＧ−４１治療は、肺コンプライアンス（ｐ＝０．０４）と容量（ｐ＝０．０２６）の減少を大幅に改善した。
【０１２０】
実施例ＩＩＩ
９−ＩＮＧ−４１治療は、ブレオマイシン誘発性肺線維症におけるコラーゲン沈着をブロックする：三色染色
肺組織切片（５μｍ）は、ビヒクルから調製し、９−ＩＮＧ−４１で処理した。肺の構造とコラーゲン沈着の変化を検出するために、切片を脱パラフィンし、三色染色した（三色画像は示していない）。画像は２０倍で撮影され、３０フィールド／スライド／マウス、ｎ＝６動物／治療を表している。
【０１２１】
ブレオマイシン誘発性肺線維症と一致する線維性病巣が、損傷した肺全体に見られた。マトリックス沈着の領域は、肺全体に容易かつ均一に存在していた。９−ＩＮＧ−４１で治療されたマウスも、損傷領域を示した。しかしながら、これらの領域は、ビヒクルで処理された動物に見られるものと比較して、数が少なく、小さかった。さらに、線維性病変内のコラーゲン沈着は、一般に、ＤＭＳＯで処理された対照（図２Ｂ）と比較して、９−ＩＮＧ−４１で処理されたマウス（図２Ａ）で減少した。また、図５Ａ−５Ｆも参照されたい。
【０１２２】
実施例ＩＶ
９−ＩＮＧ−４１治療は肺線維症におけるコラーゲン沈着をブロックする：コラーゲン画像化
ビヒクルおよび９−ＩＮＧ−４１処置マウスからの肺切片を、筋線維芽細胞分化のマーカーであるα−ＳＭＡについて免疫染色した。画像（図６Ａおよび６Ｂ）は、４０倍の共焦点顕微鏡で撮影された。９−ＩＮＧ−４１処理は、ビヒクル処理対照（ＤＭＳＯ）と比較した場合、９−ＩＮＧ−４１処理マウスのα−ＳＭＡ発現を減少させた。実線の矢印は、コラーゲンα−ＳＭＡ発現の領域を示している。画像は、３０フィールド／マウスおよびｎ＝３マウス／治療を表している。
【０１２３】
ビヒクルおよび９−ＩＮＧ−４１処置マウスからの肺切片をコラーゲン１沈着について免疫染色し、４０倍の共焦点顕微鏡法によって画像化した。９−ＩＮＧ−４１は、ブレオマイシン損傷肺におけるコラーゲン１沈着の減少を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理した対照と比較した。これらの結果は、９−ＩＮＧ−４１によるＧＳＫ−３β阻害が、線維性肺損傷におけるコラーゲン沈着を減少させることを示した。
【０１２４】
実施例Ｖ
９−ＩＮＧ−４１は、ＭｅｓｏＭＴのマーカーを減らすように見える：α−ＳＭＡ
ビヒクルおよび９−ＩＮＧ−４１処置マウスからの肺切片を、筋線維芽細胞分化のマーカーであるα−ＳＭＡについて免疫染色した。画像（図７Ａおよび７Ｂ）は、４０倍の共焦点顕微鏡で撮影された。実線の矢印は、コラーゲンα−ＳＭＡ発現の領域を示している。画像は３０フィールド／マウスおよびｎ＝３マウス／治療を表している。９−ＩＮＧ−４１治療は、ビヒクル治療対照と比較した場合、薬物治療マウスにおけるα−ＳＭＡ発現を減少させた。
【０１２５】
実施例ＶＩ
９−ＩＮＧ−４１は、ＴＧＦ−β−アデノウイルス誘発性の肺損傷を改善する
肺線維症は、構成的に活性なＴＧＦ−βアデノウイルスベクター（Mackinnon AC et al., Am J Respir Crit Care Med 2012, 185:537-46によって報告されたＣ２２３Ｓ／Ｃ２２５Ｓ変異を有するＡｄ−ＴＧＦ−β）にいくつかの変更を加えたものを気管内注入して開始された。簡単に説明すると、Ａｄ−ＴＧＦ−βまたはｅＧＦＰアデノウイルスコントロールベクター（Ａｄ−ｅＧＦＰ）の３×１０８プラーク形成ユニット（ｐｆｕ）を４０μｌの容量で気管内投与した。次に、１４日間の時間経過が完了するまでマウスを毎日監視した。ＧＳＫ−３β阻害研究では、マウスはアデノウイルスベクターの投与の７日後に毎日９−ＩＮＧ−４１治療を受けた。時間経過の終わりに、肺機能検査とＣＴスキャンが説明されているように実行された（Tucker T et al., 2019, supra; Kamata H et al., 2017, supra; Boren J et al., 2017, supra; Tucker TA et al., 2016, supra）。
【０１２６】
結果を図３に示す。９−ＩＮＧ−４１で治療したマウスは、さまざまなビヒクルで治療した対照または偽のベクターで治療した対照と比較して、肺コンプライアンスが大幅に改善したことを示した。図４Ａ／４Ｂは、ＤＭＳＯで処理した対照と比較して、９−ＩＮＧ−４１で処理したマウスの損傷領域が減少し、コラーゲン沈着が増加したことを示している。
【０１２７】
ＩＰＦは、筋線維芽細胞の存在の増加と、それに続くコラーゲンやフィブロネクチンなどの細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質の沈着の増加を特徴としている。ＩＰＦの現在のモデルでは、ブレオマイシン硫酸塩およびＴＧＦ−βアデノウイルスは、堅牢で一貫した傷害をもたらす方法である気管内カニューレ挿入によって導入された（したがって、統計的に有意な結果を得るために必要な動物が少なくなる）。
【０１２８】
ブレオマイシンおよびＴＧＦ−βアデノウイルスを介した線維症は、肺の瘢痕化、正常な肺構造の喪失、および肺機能障害に寄与するコラーゲンおよび他のＥＣＭマトリックスタンパク質を含む線維性病巣の存在によって特徴づけられた。さらに、これらの線維性病巣はまた、増加する数の筋線維芽細胞を含み、これは、増加したＥＣＭ沈着の主要な原因であると考えられている。
【０１２９】
好ましいＧＳＫ−３β阻害化合物である９−ＩＮＧ−４１  ＩＰＦの有効性を評価するために、肺の構造と機能の変化が検出された時点で介入が行われた。予備研究に基づいて、ブレオマイシン損傷研究には１４日間、ＴＧＦ−βアデノウイルス研究には７日間が選択された。時間経過（それぞれ２８日および１４日）の完了までに、両方のモデルの９−ＩＮＧ−４１処置マウスは、肺機能の改善を示しただけでなく、肺気量の増加も示した。
【０１３０】
上記で議論および例示された組織病理学的分析に基づいて、本発明者らは、瘢痕の減少と組み合わせた線維性病巣の数の減少が、９−ＩＮＧ−４１治療の結果として肺機能の回復に寄与すると結論付けた。共焦点顕微鏡分析はさらに、９−ＩＮＧ−４１処置マウスに見られる線維性病巣は、ビヒクル処置対照動物よりも数が少なく、小さく、そして著しく少ないコラーゲンを含むことを示した。肺線維症の２つの独立したモデルにおけるこれらの同様の所見は、９−ＩＮＧ−４１治療がＩＰＦの結果を有意に改善したことを示している。さらに、この効果は、少なくとも部分的には線維芽細胞−筋線維芽細胞の分化の減弱に起因すると考えられていた。現在の結果は、９−ＩＮＧ−４１によるＧＳＫ−３βの阻害がＩＰＦの新しい治療法であることを示している。
【０１３１】
これらは、ＧＳＫ−３βシグナル伝達経路が筋線維芽細胞の分化の誘導に重要であることを実証した最初の研究である。これらの研究は、ＧＳＫ−３βの治療標的が肺線維症の進行を弱めることも示していり。この効果は、ヒトの対象でも発生すると予想される。この研究は、ＧＳＫ−３βの治療標的がインビボでの線維性肺リモデリングを軽減するため、線維芽細胞−筋線維芽細胞の分化と肺線維症の結果を制御するためにＧＳＫ−３βシグナル伝達経路を標的とするための基礎を提供する。９−ＩＮＧ−４１によって大幅に改善されたコンプライアンスと量は、特にマウスモデルでのＩＰＦの治療におけるその有効性の重要な指標であり、ヒトＩＰＦ患者でも発生すると予想される。
【０１３２】
上記で引用された参考文献は、具体的に組み込まれているかどうかにかかわらず、すべて参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３３】
本発明は完全に説明されているので、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、また過度の実験なしに、同じことが広範囲の同等のパラメーター、濃度、および条件内で実行できることを理解するであろう。
【０１３４】
本開示はまた、以下の態様を包含する：
【０１３５】
態様１．  （ｉ）酵素グリコーゲンシンターゼキナーゼ３、形態β（ＧＳＫ３β）を阻害するベンゾフラン−３−イル−（インドール３−イル）マレイミド化合物であって、インビトロまたはインビボアッセイで９−ＩＮＧ−４１の生物学的または生化学的活性の少なくとも２０％を有する化合物と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤と
を有する注射または肺点滴注入用に処方される抗線維性医薬組成物。
【０１３６】
態様２．  態様１の医薬組成物において、前記化合物は、化学式が
【化４】
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である９−ＩＮＧ−４１であるか、または、インビトロまたはインビボアッセイで９−ＩＮＧ−４１の生物学的または生化学的活性の少なくとも２０％を有する９−ＩＮＧ−４１の類似体である、医薬組成物。
【０１３７】
態様３．  態様２の医薬組成物において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１である、医薬組成物。
【０１３８】
態様４．  肺点滴注入用に処方された態様１〜３のいずれかの医薬組成物。
【０１３９】
態様５．  肺筋線維芽細胞の線維性肺（ＦＬ）線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を低減するための方法であって、前記筋線維芽細胞およびＦＬ線維芽細胞に、有効なＧＳＫ３β阻害量の態様１〜４のいずれかの化合物または組成物を提供する工程を有する、方法。
【０１４０】
態様６．  態様５の方法において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１、またはその類似体である、方法。
【０１４１】
態様７.  態様６の方法において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１である、方法。
【０１４２】
態様８．  態様７の方法において、前記組成物は肺点滴注入用に処方されたものである、方法。
【０１４３】
態様９．  態様５〜８のいずれかの方法において、前記提供する工程は、インビボである、方法。
【０１４４】
態様１０.  態様９の方法において、前記提供する工程は、肺点滴注入によるものである、方法。
【０１４５】
態様１１．  態様９または１０の方法において、前記提供する工程は、ヒトに対するものである、方法。
【０１４６】
態様１２．  特発性肺線維症（ＩＰＦ）を特徴とする疾患または状態を有するまたは発症している哺乳動物対象を治療するための方法であって、態様１〜４のいずれかの有効量の医薬組成物を対象に投与する工程を有する、方法。
【０１４７】
態様１３．  態様１２の方法において、前記化合物または組成物が、９−ＩＮＧ−４１、または、インビトロまたはインビボアッセイで９−ＩＮＧ−４１の生物学的または生化学的活性の少なくとも２０％を有する９−ＩＮＧ−４１の類似体を有する、方法。
【０１４８】
態様１４．  態様１３の方法において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１である、方法。
【０１４９】
態様１５．  態様１２〜１４のいずれか１つの方法において、前記対象はヒトである、方法。
【０１５０】
態様１６．  哺乳動物対象におけるＩＰＦを治療するための態様１〜４のいずれかの組成物の使用において、前記化合物は、ＧＳＫ３βを阻害し、肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を減少させるものであり、有効量の前記組成物が、ＩＰＦを有する対象に投与される、使用。
【０１５１】
態様１７．  態様１６記載の使用において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１またはその類似体である、使用。
【０１５２】
態様１８．  態様１７記載の使用において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１である、使用。
【０１５３】
態様１９．  態様１６〜１８のいずれかに記載の使用において、前記組成物が肺点滴注入によって投与される、使用。
【０１５４】
態様２０．  それを必要とする対象におけるＩＰＦの治療のための薬剤の製造のための態様１〜４に記載の組成物の使用であって、前記化合物は、ＧＳＫ３β活性を阻害し、肺筋線維芽細胞のＦＬ線維芽細胞への増殖および／または分化を阻害し、前記ＦＬ線維芽細胞の増殖を減少させるものである、使用。
【０１５５】
態様２１．  態様２０記載の使用において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１、または、インビトロまたはインビボアッセイで９−ＩＮＧ−４１の生物学的または生化学的活性の少なくとも２０％を有する９−ＩＮＧ−４１の類似体である、使用。
【０１５６】
態様２２．  態様２１記載の使用において、前記化合物は、９−ＩＮＧ−４１である、使用。
【０１５７】
態様２３．  ＩＰＦの治療における肺点滴注入用の薬剤の製造のための態様２０〜２２のいずれかに記載の使用。
【０１５８】
態様２４．  態様２０〜２４のいずれかに記載の使用において、対象がヒトである、使用。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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