(57)【要約】不十分な血流または循環の様々な状態を処置するための新規の処置を提供する。本明細書に開示される新規の発明は、動脈血管中のNotchシグナリングの増加が、血流または循環および組織再生に対して、ならびに動脈閉塞、狭窄、または他の血流減少後の組織損傷の減少に対して有益な効果を有するという発見に基づく。動脈中のNotchシグナリングの増加は、急性的な血管拡張ならびに／または動脈新生および側副動脈成長を含む、有益な効果を促進し、かつ虚血または他の循環減少状態後の回復を改善する。血管へのNotch活性化剤の送達のための医療デバイスも提供する。2021533095.tif 000003
2021533095.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管状態の処置における使用のためのNotch活性化剤であって、
該血管状態が、
1つまたは複数の血管中において血流が減少する、妨げられる、または遮断される、疾患、状態、または病状
を含む、
前記Notch活性化剤。
【請求項２】
前記血管状態が虚血状態である、請求項1記載のNotch活性化剤。
【請求項３】
前記虚血状態が心虚血である、請求項2記載のNotch活性化剤。
【請求項４】
前記心虚血が、安定狭心症、不安定狭心症、急性冠動脈症候群、狭心症、心筋梗塞、およびアテローム性動脈硬化症に起因する虚血を含む、請求項3記載のNotch活性化剤。
【請求項５】
前記虚血状態が脳虚血である、請求項2記載のNotch活性化剤。
【請求項６】
前記脳虚血が、急性虚血性脳卒中、一過性脳虚血発作、微小梗塞、血管性認知症、または脳血管疾患である、請求項5記載のNotch活性化剤。
【請求項７】
前記虚血状態が肢虚血である、請求項2記載のNotch活性化剤。
【請求項８】
前記虚血状態が頸動脈疾患である、請求項2記載のNotch活性化剤。
【請求項９】
前記血管状態が、末梢動脈疾患；血流低下を包含する腎機能障害または腎疾患；眼の血管状態；脾臓中の血流低下；腸間膜動脈閉塞；腸梗塞；小血管疾患；およびアテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としての血管中の血流減少からなる群より選択される、請求項1記載のNotch活性化剤。
【請求項１０】
Notch 1のアクチベーターである、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１１】
Notch 4のアクチベーターである、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１２】
Notchリガンドである、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１３】
前記Notchリガンドが、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１４】
Notch細胞内ドメインである、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１５】
前記細胞内ドメインが、Notch 1細胞内ドメイン、Notch 2細胞内ドメイン、Notch 3細胞内ドメイン、およびNotch 4細胞内ドメインからなる群より選択される、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１６】
N-メチルヘメアンチジンクロリド（N-methylhemeanthidine chloride）、バルプロ酸、レスベラトロール、トリアセチルレスベラトロール、フェネチルイソチオシアネート、およびYhhu-3792からなる群より選択される、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１７】
Notch活性化タンパク質をコードする核酸構築物またはNotchシグナリングの下流エフェクターをコードする核酸構築物を含む、請求項1〜9のいずれか一項記載のNotch活性化剤。
【請求項１８】
薬物送達デバイスであって、
薬物送達構造体が、1つもしくは複数のNotch活性化剤で官能化されているか、または生理的条件へ曝露されると1つもしくは複数のNotch活性化剤を溶出する組成物でコーティングされている、
前記薬物送達デバイス。
【請求項１９】
前記1つまたは複数のNotch活性化剤がNotch 1のアクチベーターを含む、請求項18記載の薬物送達デバイス。
【請求項２０】
前記1つまたは複数のNotch活性化剤がNotch 4のアクチベーターを含む、請求項18記載の薬物送達デバイス。
【請求項２１】
前記1つまたは複数のNotch活性化剤がNotchリガンドを含む、請求項18記載の薬物送達デバイス。
【請求項２２】
前記Notchリガンドが、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される、請求項19記載の薬物送達デバイス。
【請求項２３】
前記1つまたは複数のNotch活性化剤がNotch細胞内ドメインを含む、請求項18記載の薬物送達デバイス。
【請求項２４】
前記Notch細胞内ドメインが、Notch 1細胞内ドメイン、Notch 2細胞内ドメイン、Notch 3細胞内ドメイン、およびNotch 4細胞内ドメインからなる群より選択される、請求項23記載の薬物送達デバイス。
【請求項２５】
前記1つまたは複数のNotch活性化剤が、N-メチルヘメアンチジンクロリド、バルプロ酸、レスベラトロール、トリアセチルレスベラトロール、フェネチルイソチオシアネート、およびYhhu-3792からなる群より選択される、請求項18記載の薬物送達デバイス。
【請求項２６】
前記1つまたは複数のNotch活性化剤が、Notch活性化タンパク質をコードする核酸構築物またはNotchシグナリングの下流エフェクターをコードする核酸構築物を含む、請求項18記載の薬物送達デバイス。
【請求項２７】
薬物溶出バルーンである、請求項18〜26のいずれか一項記載の薬物送達デバイス。
【請求項２８】
ステントである、請求項18〜26のいずれか一項記載の薬物送達デバイス。
【請求項２９】
1つまたは複数のNotch活性化剤で機能を持たせた、赤血球。
【請求項３０】
その処置の必要がある対象において血管状態を処置する方法であって、
該血管状態が、
1つまたは複数の血管中において血流が減少する、妨げられる、または遮断される、疾患、状態、または病状
を含み、
該方法が、
薬学的有効量のNotch活性化剤を該対象へ投与する工程
を含む、
前記方法。
【請求項３１】
前記血管状態が虚血状態である、請求項30記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３２】
前記虚血状態が心虚血である、請求項31記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３３】
前記心虚血が、安定狭心症、不安定狭心症、急性冠動脈症候群、狭心症、心筋梗塞、およびアテローム性動脈硬化症に起因する虚血を含む、請求項32記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３４】
前記虚血状態が脳虚血である、請求項31記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３５】
前記脳虚血が、急性虚血性脳卒中、一過性脳虚血発作、微小梗塞、血管性認知症、または脳血管疾患である、請求項34記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３６】
前記虚血状態が肢虚血である、請求項31記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３７】
前記虚血状態が頸動脈疾患である、請求項31記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３８】
前記血管状態が、末梢動脈疾患；血流低下を包含する腎機能障害または腎疾患；眼の血管状態；脾臓中の血流低下；腸間膜動脈閉塞；腸梗塞；小血管疾患；およびアテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としての血管中の血流減少からなる群より選択される、請求項30記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３９】
前記Notch活性化剤がNotch 1のアクチベーターである、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３８】
前記Notch活性化剤がNotch 4のアクチベーターである、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項３９】
前記Notch活性化剤がNotchリガンドである、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４０】
前記Notch活性化剤が、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４１】
前記Notch活性化剤がNotch細胞内ドメインである、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４２】
前記Notch活性化剤が、Notch 1細胞内ドメイン、Notch 2細胞内ドメイン、Notch 3細胞内ドメイン、およびNotch 4細胞内ドメインからなる群より選択される、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４３】
前記Notch活性化剤が、N-メチルヘメアンチジンクロリド、バルプロ酸、レスベラトロール、トリアセチルレスベラトロール、フェネチルイソチオシアネート、およびYhhu-3792からなる群より選択される、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４４】
前記Notch活性化剤が、Notch活性化タンパク質をコードする核酸構築物またはNotchシグナリングの下流エフェクターをコードする核酸構築物を含む、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４５】
前記処置が予防的処置である、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４６】
前記処置が静脈内投与される、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４７】
前記Notch活性化剤が薬物溶出バルーンによって投与される、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４８】
前記Notch活性化剤がステント上にて投与される、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【請求項４９】
前記Notch活性化剤が、Notch活性化剤で機能を持たせた、赤血球、血小板、またはその合成模倣体である、請求項31〜38のいずれか一項記載の血管状態を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2018年7月26日に出願された、「Improving Circulation by Notch Signaling」という表題の、米国仮出願第62/703,872号の優先権の恩典を主張し；この内容は参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
連邦政府支援の研究または開発に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所によって与えられた助成金番号HL075033およびNS067420、ならびにUnited States Army Medical Research and Materiel Commandによって与えられた助成金番号W81XWH-16-1-0665の下で、政府支援によってなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
狭小化、狭窄、閉鎖および／または閉塞は、大動脈または小動脈、細動脈、毛細血管、細静脈および静脈中を含む、全身の循環系の血管中において生じ得る。これらの血管狭窄および閉塞は、アテローム性動脈硬化症、血栓症、血餅、塞栓症、疣贅、または他の遮断に起因して、ならびに他の血管異常に起因して起こり得、特定の組織もしくは器官への血液供給を減少させ、循環不良、低灌流、虚血、および／または梗塞を生じさせる。狭窄または閉塞が起こると、それは、動脈閉塞性疾患、末梢動脈疾患、重症肢虚血、跛行、頸動脈疾患、脳卒中、軽度脳卒中、脳血管疾患、心臓発作、冠動脈疾患、および他の虚血性血管疾患を含む、血流の回復を必要とする状態をもたらし得る。脳内における軽度脳卒中、微小梗塞、または低灌流は、臓器機能を損ない得、認知症、アルツハイマー病または他の認知低下のような状態に至るかまたは寄与する。
【０００４】
動脈の狭窄および／または閉塞は米国人の最大35%に影響を与えている。閉塞性状態のリスクがある糖尿病患者、高血圧、および高齢化人口の割合が増加しており、効果的な予防および治療戦略が開発されない限り、これらの疾患の発生率は増加し得る。
【０００５】
血管閉塞、狭窄、低灌流、不十分な血流、または他の不十分な循環の処置において、目的は、正常な血流を回復させ、循環を改善することである。現在、これらの状態についての治療選択肢は、主に、遮断された動脈部分を除去または切開することを目的とする外科手術である。例えば、重症肢虚血についての現在の処置は、外科的血行再建術、経皮的血管形成術、またはステント留置術のような侵襲的外科手術を含む。しかし、そのような手術自体が血管を本質的に損傷する。さらに、多くの患者はこれらの手術に適していない場合があり、また他の患者は複数かつ繰り返しの手術を必要とし得る。予防的ケアの場合、選択肢には、禁煙、身体活動の増加および減量のような生活様式の変更が含まれるが、これらの選択肢は可変的な成功しか有さず、何故ならば、それらは患者の順守を必要とし、それらは血管系に間接的に作用し、またそれらは遺伝、年齢、性別、環境、または他の非生活様式の危険因子を変えないためである。
【０００６】
虚血性脳卒中は世界中で数百万人もの人々を苦しめ、多くの国において主な死亡原因である。脳卒中は、組織プラスミノゲン活性化因子(TPA)などの血栓溶解薬、神経保護薬、および外科的介入によって処置され得る。これらの処置の治療的有用性にもかかわらず、かなりの死亡率、罹患率、およびこの状態の関連費用があり、脳卒中の予防および治療のための改善された処置についての必要性が存在するままである。
【０００７】
アテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としてのものを含む、血流低下を包含する腎機能障害または腎疾患；アテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としてのものを含む、血流低下を伴う眼の疾患；および血流遮断に起因する脾梗塞を含む、不十分な血流に関連する多数の他の医学的状態がある。
【０００８】
従って、血流減少が関与する多数の疾患および状態に対処するための新しい予防および治療選択肢についての当技術分野における必要性、満たされていない医学的必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００９】
第一の局面において、本発明の範囲は、不十分な血流または循環の様々な状態を処置するために血流または循環を改善するための新規の処置を包含する。本明細書に開示される新規の発明は、動脈血管中のNotchシグナリングの増加が、血流または循環および組織再生に対して、ならびに動脈閉塞、狭窄、または他の血流減少後の組織損傷の減少に対して有益な効果を有するという発見に基づく。動脈中のNotchシグナリングの増加は、急性的な血管拡張ならびに／または動脈新生および側副動脈成長を含む、有益な効果を促進し、ここで、小さな側副血管が閉塞を迂回して導管動脈へと再構築され、これは虚血組織への灌流の回復において不可欠である。動脈中のNotchシグナリングの増加は、血管のコンダクタンスを増強し、血管の抵抗を低下させる。動脈中のNotchシグナリングの増加はまた、他の機序によって作用し得、血流または循環の改善をもたらす。従って、動脈血管中のNotchシグナリングを増加させることは、血管閉塞、狭窄、不十分な血流、または不十分な循環を包含する様々な疾患および状態を処置するために使用することができる。
【００１０】
一局面において、本発明の範囲は、動脈血管中のNotchシグナリングを増加させる薬剤の投与による、血流または循環の喪失または減少によって特徴付けられる状態、例えば、血管閉塞または狭窄によって引き起こされる状態の処置を包含する。
【００１１】
別の局面において、本発明の範囲は、動脈血管中のNotchシグナリングを増加させる薬剤の投与による、不十分な血流、または不十分な循環によって特徴付けられる状態、例えば虚血の処置を包含する。
【００１２】
さらに別の局面において、本発明の範囲は、動脈血管中のNotchシグナリングを増加させる薬剤の投与による、血管閉塞または循環障害のリスクがある対象の予防的処置を包含する。
【００１３】
本発明の範囲は、血管へのNotch活性化剤の送達のための新規の医療デバイスをさらに包含する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】Notch1細胞内ドメイン(ICD)発現を通してのNotchシグナリングのBmx-CreERT2媒介活性化は、遠位中大脳動脈閉塞(dMCAO)マウスモデルにおいて、神経学的回復を促進し、梗塞体積を減少させる。図1A：Notch1シグナリングのBmx-CreERT2媒介活性化は、dMCAOによる脳卒中誘発後の神経学的回復を改善した。改変bedersonグレーディング（modified bederson’s grading）、持ち上げボディースイング試験（elevated body swing test）、ラダー試験（ladder test）、および粘着試験（adhesive test）によって、神経学的機能を評価した。BMX-Notch1 ICD (Bmx-CreERT2; ROSA:LNL:tTA; TRE-Notch1 ICD)マウスは、対照マウスと比較して、dMCAO手術後のより良い神経学的回復を実証した。三角：BMX-Notch1 ICD、円：対照。対照, n=12、BMX-Notch1 ICD; n=13。*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。図1B：梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch1 ICDマウスにおいて有意により少ない(p<0.01)梗塞体積を示した。各々n=6。
【図１Ｂ】図1Aの説明を参照のこと。
【図２Ａ】Notch4*発現を通してのNotchシグナリングのBmx-CreERT2活性化は、遠位中大脳動脈閉塞(dMCAO)マウスモデルにおいて、神経学的回復を促進し、梗塞体積を減少させる。図2A：Notch4の活性化はdMCAO後の神経学的回復を改善した。改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験によって、神経学的機能を評価した。三角：BMX-Notch4*、円：対照。図2B：梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch4*マウスにおいて有意により少ない(p<0.01)梗塞体積を示した。各々n=9。
【図２Ｂ】図2Aの説明を参照のこと。
【図３Ａ】虚血性傷害後に開始された、Notch1 ICD発現を通しての、脳卒中後Notchシグナリング活性化は、神経学的回復および梗塞体積減少を促進した。図3A：虚血傷害後のNotch1のBmx-CreERT2活性化は、神経学的回復を改善した。dMCAO後に改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験によって、神経学的機能を評価した。三角：BMX-Notch1 ICD、円：対照。図3B：HE染色によって決定された梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch1 ICDマウスにおいて有意により少ない梗塞体積を示した。対照, n=7、BMX-Notch1 ICD; n=9。
【図３Ｂ】図3Aの説明を参照のこと。
【図４Ａ】虚血性傷害後に開始された、Notch4*発現を通しての、脳卒中後Notchシグナリング活性化は、神経学的回復および梗塞体積減少を促進した。図4A：虚血傷害後のNotch4の動脈中活性化は、神経学的回復を改善した。dMCAO後に改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験によって、神経学的機能を評価した。三角：BMX-Notch4*、円：対照。図4B：HE染色によって決定された梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch4*マウスにおいて有意により少ない梗塞体積を示した。対照, n=8、BMX-Notch4*; n=7。
【図４Ｂ】図4Aの説明を参照のこと。
【図５Ａ】Notch1 ICDの動脈発現は、側副枝の成長を促進し、脳血流の回復を促進した。図5Aは、dMCAO前14日でのNotch1 ICD発現の開始、およびdMCAO後14日でのNotch1 ICDのオフについての実験プロトコルを描写する。図5B：実験時間経過中の側副動脈直径、速度、およびフラックス；垂線は、Notch1 ICD発現がオフにされた時を示す。三角：BMX-Notch1 ICD、円：対照。
【図５Ｂ】図5Aの説明を参照のこと。
【図６Ａ】Notch活性化リガンドDLL4での処置は、dMCAO後、側副枝の成長を改善し、脳血流を保ち、ならびに神経学的機能を改善する。図6Aは、実験の時間経過を描写し、組換えDLL4をdMCAO脳卒中誘発の1日前およびdMCAO脳卒中誘発後の7日間投与した。図6B：側副動脈直径、速度、およびフラックス；垂線間の領域はDLL4投与の期間を意味する。三角：rDLL4、円：対照。対照, n=5、処置; n=5。*P<0.05、**P<0.01。図6Cは、実験的脳卒中後15〜17日で行動試験に供されたマウスについてのラダー試験結果を描写し、スコアは2つの測定の平均値である。
【図６Ｂ】図6Aの説明を参照のこと。
【図６Ｃ】図6Aの説明を参照のこと。
【図７Ａ】Notch4*の発現による肢虚血マウスモデルにおける改善された回復。Notch 4*誘導はEFAOの14日前に始まった。図7A、血流は、EFAO後5週間にわたってBMX-Notch4*マウスにおいて有意に優れていた。足灌流は、レーザードップラー灌流イメージング(LDPI)によって測定される、右(対照)足に対する左(虚血)の比率として表現される。三角：BMX-Notch 4*、円：対照。データは平均値 ± SEMである；**p<0.01、***p<0.001。図7B：対照およびNotch4*発現マウスであるBMX-Notch4*についての左および右脚における、EFAOから21日後の、側副動脈直径の比較。図7C、EFAO後の側副動脈直径の変化の比率。各々について、n=8、*P<0.05。
【図７Ｂ】図7Aの説明を参照のこと。
【図７Ｃ】図7Aの説明を参照のこと。
【図８】2週間のNotch4*発現に続く、EFAO後7日目での筋壊死の定量化を描写し、これは、Notch4発現突然変異体における壊死の統計的に有意な減少を示す。
【図９】EFAO後の、14日間にわたってNotch4*を発現するマウスにおける足灌流の永続的改善。Notch4発現を、左後肢においてEFAOの14日前に突然変異マウスにおいて開始した。足灌流を、EFAO前および後に処置左足および未処置右足において測定した。処置および未処置足における灌流値の比率を経時的に追跡した。Notch4*発現をEFAO後14日目にオフにした。四角：BMX-Notch4*マウス、円：対照。
【図１０】EFAO後の足灌流の有意な改善が、Notch4*発現マウスにおいて観察された。Notch4*発現を、タモキシフェン投与によって、左後肢におけるEFAO誘発の直後におよびEAFOの1日後に誘導した(矢印)。足灌流を、EFAO前および後に、手術左側足および未手術右側足において測定した。図10は、経時的な処置および未処置足における左および右灌流値の比率を描写する。四角：BMX-Notch4*、円：対照。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明の範囲は、血管中のNotchシグナリングを活性化する薬剤の投与による血管状態の処置を包含する。一態様において、本発明の範囲は、血管状態の処置における使用のための、血管中のNotchシグナリングを活性化する薬剤を包含する。関連する態様において、本発明の範囲は、血管中のNotchシグナリングを活性化する薬剤の薬学的有効量の投与によって、その処置の必要がある対象において血管状態を処置する方法を包含する。関連する態様において、本発明の範囲は、血管閉塞または狭窄状態の処置のための医薬の製造において、血管中のNotchシグナリングを活性化する薬剤を使用する方法を包含する。本発明の様々な要素を次に記載する。
【００１６】
処置
本発明の様々な態様は、下記に定義されるような、血管状態の処置に向けられる。「処置」は、本明細書において使用される場合、任意の予防的または治療的処置を包含する。第一の局面において、「処置」は、例えば：血管状態の基礎にあるプロセスを阻害すること；血管状態の症状を改善すること；血管状態の進行を遅らせること；血管状態の重症度を低下させること；および血管状態を治癒することを含む、1つまたは複数の血管状態に関して治療効果を誘導することを包含する。
【００１７】
いくつかの実施において、「処置」は、本明細書において使用される場合、予防的処置、例えば、以下のうちの1つまたは複数を達成する処置を包含する：血管状態の発症を予防する；血管状態の進行を遅延させる、遅らせるまたは止める；血管循環または健康を改善する；血管状態のリスクを低下させる；虚血状態の進行を遅らせるまたは止める；および、血管中のNotchシグナリングを増加または回復させる。
【００１８】
いくつかの実施において、「処置」は、本明細書において使用される場合、1つまたは複数の生理的アウトカム、物理的アウトカム、機能的アウトカム、治療的アウトカム、またはパフォーマンスアウトカムを達成することを意味する。例えば、処置は、1つまたは複数の血管中のNotchシグナリングを増加させること；1つまたは複数の血管を通る血流または循環を改善すること；動脈新生を促進すること；1つまたは複数の血管を拡張すること；1つまたは複数の血管のコンダクタンスを増強すること；1つまたは複数の血管の抵抗を低下させること；および1つまたは複数の血管の血管緊張を改善することを包含し得る。
【００１９】
本発明の処置は、局所効果、例えば、虚血部位でのもしくは器官における血流の改善を達成し得、または全身効果、例えば、概して身体の全体にわたる循環の改善を達成し得る。
【００２０】
血管状態
本発明の様々な実施は、血管状態を処置することに向けられる。「血管状態」は、本明細書において使用される場合、1つまたは複数の血管中において血流が減少する、妨げられる、または遮断される、急性状態および慢性状態の両方を含む、任意の疾患、状態、または病状を含み得る。血管状態は、血流の減少、妨害、または遮断を構成する状態を含み得る。血管状態は、減少した、妨げられた、または遮断された血流を生じさせるか、またはこれらに起因する状態をさらに含み得る。
【００２１】
一局面において、血管状態は虚血である。一実施において、虚血は、冠動脈疾患としても公知であり、また、虚血性心疾患としても公知の、心虚血である。心虚血は、安定狭心症、不安定狭心症、急性冠動脈症候群、狭心症、心筋梗塞、およびアテローム性動脈硬化症に起因する虚血を包含する。
【００２２】
一局面において、血管状態は脳の虚血である。一実施において、脳虚血は急性虚血性脳卒中である。一態様において、脳虚血は、一過性脳虚血発作、または軽度脳卒中である。一態様において、脳虚血は、または微小梗塞である。一態様において、脳虚血は血管性認知症である。一態様において、血管状態は脳血管疾患である。一態様において、血管状態は、例えば、認知症、アルツハイマー病、または他の認知低下を含む、脳内の循環の減少を包含する状態である。
【００２３】
一態様において、血管状態は肢の虚血である。一態様において、肢の虚血は重症肢虚血である。
【００２４】
一態様において、血管状態は腸の虚血である。
【００２５】
一態様において、血管状態は頸動脈疾患である。
【００２６】
一態様において、血管状態は末梢動脈疾患である。一態様において、末梢動脈疾患は重症肢虚血である。一態様において、末梢動脈疾患は跛行である。
【００２７】
一態様において、血管状態は、アテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としてのものを含む、血流低下を包含する腎機能障害または腎疾患である。
【００２８】
一態様において、血管状態は、アテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としてのものを含む、血流低下を伴う眼の状態である。
【００２９】
一態様において、血管状態は、血流遮断に起因する脾梗塞を含む、脾臓中の血流低下を含む。
【００３０】
一態様において、血管状態は、腸間膜動脈閉塞または腸梗塞である。
【００３１】
一態様において、血管状態はモヤモヤ病である。
【００３２】
一態様において、血管状態は、CADASILと時には呼ばれる、皮質下梗塞および白質脳症を伴う常染色体優性脳動脈症である。
【００３３】
一態様において、血管状態は、例えば、肝臓、心臓、腎臓、および身体の他の系において現れるその遺伝型または自然発生型を含む、アラジール症候群またはアラジール-ワトソン症候群である。ALGSはJAG1またはNOTCH2のいずれかにおける機能喪失突然変異によって引き起こされる。
【００３４】
一態様において、血管状態は、小血管疾患、小血管梗塞、または白質疾患である。
【００３５】
一態様において、血管状態は、腎臓、肝臓、肺、心臓、細胞移植片などの、移植組織を受けた後に、血流を確立または改善する必要性である。
【００３６】
一態様において、血管状態は、再生組織の領域中における血流を確立または改善する必要性である。
【００３７】
本発明の方法は、動脈中の血管閉塞または狭窄の処置に特に適している。一態様において、血管状態は小動脈または細動脈中の循環の減少を包含する状態であり、ここで、それはまた、循環不良を引き起こし、臓器機能を損ない得る。他の態様において、血管状態は、静脈、毛細血管、または移植された血管中に現れる。
【００３８】
一態様において、血管状態は、身体の任意の部分における動脈閉塞性疾患である。一態様において、血管状態は低灌流である。一態様において、血管状態はアテローム性動脈硬化症である。一態様において、血管状態は血栓症である。一態様において、血管状態は血餅の形成または持続である。一態様において、血管状態は塞栓症である。一態様において、血管状態は肺塞栓症である。一態様において、血管状態は血管の疣贅による（vegetative）または他の遮断である。
【００３９】
対象
本発明の方法は、対象の処置に適用される。対象は、血管状態の処置の必要がある対象、例えば、血管状態に苦しむかまたは血管状態のリスクがある対象である。対象は、任意の動物、例えば、ヒト対象、非ヒト霊長動物、マウス、ラット、他の齧歯動物、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウマ、または任意の他の動物種であり得る。一態様において、対象はヒト患者である。一態様において、対象は獣医学対象である。一態様において、対象は試験動物である。
【００４０】
一態様において、対象は血管状態のリスクがある対象である。一態様において、血管状態のリスクがある対象は、高齢の対象である。例えば、ヒト対象の場合、高齢の対象は、少なくとも40歳、少なくとも45歳、少なくとも50歳、少なくとも55歳、少なくとも60歳、少なくとも65歳、少なくとも70歳、80歳、またはそれ以上であり得る。他の態様において、血管状態のリスクがある対象は、喫煙者または元喫煙者である。他の態様において、血管状態のリスクがある対象は、血管疾患の病歴または家族歴を有する対象である。他の態様において、血管状態のリスクがある対象は、例えば、25を超える、または30を超えるBMIを有する、過体重または肥満の対象である。一態様において、リスクがある対象は、糖尿病を有する対象である。一態様において、リスクがある対象は、高血圧を有する対象である。
【００４１】
Notchシグナリング活性化
本発明の範囲は、Notchシグナリングのアクチベーターである薬剤の使用を包含する。Notch受容体は1回膜貫通受容体タンパク質である。哺乳動物Notch受容体はNotch1、Notch2、Notch3、およびNotch4を包含し、Notch1およびNotch4は動脈内皮細胞において発現される。
【００４２】
Notch経路は、神経、血管、心臓、免疫、内分泌発生、および他のプロセスにおける一連の細胞運命決定が制御される、細胞間シグナリングを媒介する。Notchシグナリングにおいて、細胞の表面上のNotch受容体は、隣接細胞の表面上に存在する膜貫通リガンドと相互作用する。リガンド結合は、次いで、Notch受容体の一連のタンパク質分解切断をもたらし、膜からNotch細胞内ドメイン(ICD)を放出する。ICDは核へとトランスロケートし、ここで、それは、核タンパク質との、哺乳動物においてはCSLタンパク質CBF-1/RBPJとの複合体の一部になり、様々な標的遺伝子の転写を制御する。RBPJを通して、Notchは古典的シグナリングを活性化する。Notchはまた、他の下流エフェクターを通して非古典的シグナリングを活性化する。
【００４３】
本明細書において使用される場合、「Notchシグナリングの活性化」と本明細書において呼ばれる、「Notchの活性化」または「Notch活性化」は、当技術分野において公知であるような、任意のNotchシグナリング活性または効果（古典的または非古典的）の誘導、増加、または上方制御を包含する。本明細書において言及されるNotchシグナリングの活性化は、既存の内因性Notch活性の増強、正常な内因性Notch活性の回復、ならびに動脈血管中のNotch活性の増強および付加を含む。Notchシグナリングは、例えば：ICDを放出するためのNotchの切断、核へのICDのトランスロケーション、TNF-α ADAM金属プロテアーゼ変換酵素(TACE)活性を増加させること；Mibによる切断型Notch細胞外ドメインのユビキチン化を増加させること、Notch細胞内ドメインのγ-セクレターゼ媒介放出を増加させること、CBF1/Su(H)/Lag-1転写因子複合体形成もしくは活性を増強すること；ならびに／または内因性Notch活性と一致するNotch下流遺伝子の制御(ICDによって、またはICDの1つもしくは複数の効果をバイパスおよび模倣する薬剤によって)を包含し得る。下流遺伝子は、Deltex-1、Deltex-2、Deltex-3、Deltexのサプレッサー(SuDx)、Numbおよびそのアイソフォーム、Numb関連キナーゼ(NAK)、Notchless、Dishevelled (Dsh)、emb5、Fringe遺伝子(例えば、Radical、LunaticおよびManic)、PON、LNX、Disabled、Numblike、Nur77、NFkB2、Mirror、Warthog、Engrailed-1およびEngrailed-2、Lip-1およびその相同体、Deltexによって制御されるRas/MAPKカスケードに関与するポリペプチド、エフェリン(epherin)-B2、Myc、p21、ならびにHESファミリーメンバー、エフリン-B2、Eph-B4、コネキシン40、FBW7、ならびに他のNotch標的遺伝子を含む。Notchシグナリング活性化は、下流標的遺伝子の遺伝子発現変化（上方制御または下方制御）を最終的にもたらす。
【００４４】
Notch活性化は、例えば、標的細胞におけるNotch活性の増加；標的細胞におけるNotch遺伝子もしくはタンパク質、notchリガンド遺伝子もしくはタンパク質、notchの正の制御因子の遺伝子もしくはタンパク質、Notchシグナリングメディエーター遺伝子もしくはタンパク質、Notchシグナリングモジュレーター遺伝子もしくはタンパク質、またはNotch下流標的の発現の増加；Notchシグナリングの上方制御；Notch活性化下流種またはエフェクターの発現または活性の増加；Notchシグナリングの負の制御因子の阻害、または、作用機序にかかわらず、標的細胞における有益な方法でのNotchシグナリングの任意の他の増加をさらに包含する。
【００４５】
Notch活性化は、本明細書において使用される場合、古典的または非古典的シグナリングを介して、Notch 1、Notch 2、Notch 3、およびNotch 4によって媒介される経路を含む、Notchシグナリング経路の任意の活性化を包含する。主要な態様において、Notch 1およびNotch 4は動脈内皮細胞において主に発現されるアイソフォームであるため、Notch活性化は、Notch 1および／またはNotch 4活性化を指す。
【００４６】
Notch活性化は、本明細書において使用される場合、身体の任意の細胞型におけるNotchシグナリング活性化を包含する。主要な実施において、Notchシグナリング活性化は、血管の内皮細胞または平滑筋細胞中を含む、血管細胞中におけるNotchシグナリング経路の活性化を指す。主要な実施において、Notchシグナリング活性化は、動脈細胞、例えば、動脈内皮細胞中における、Notchシグナリング経路の活性化を指す。いかなる特定の理論にも拘束されないが、血管内皮細胞中のNotchの活性化が、本明細書に記載される治療効果を主に担うことが考えられる。しかし、Notch活性化の治療効果は、他の細胞型、例えば、平滑筋細胞もしくは血液細胞中、または身体の他の領域中におけるNotch活性化に起因し得、本発明の範囲は動脈内皮細胞中のNotch活性化の治療効果に限定されないことが理解されるだろう。
【００４７】
Notch活性化剤
本発明の範囲は、Notch活性化剤の投与を包含する。Notch活性化剤は、身体の細胞、例えば、血管内皮細胞、例えば、動脈内皮細胞中のNotchシグナリングを増加させる任意の物質組成物を含む。Notch活性化剤は、例えば、抗体、小分子、ペプチドおよびタンパク質、ならびに核酸を含む、Notch活性化活性を有する任意の薬剤を含み得る。
【００４８】
一実施において、Notch活性化剤は小分子である。例示的な小分子Notchアゴニストとしては、N-メチルヘメアンチジンクロリド（N-methylhemeanthidine chloride）、バルプロ酸、レスベラトロール、トリアセチルレスベラトロール、フェネチルイソチオシアネート、およびYhhu-3792、および前述のもののNotch活性化化学アナログおよびバリアントが挙げられる。
【００４９】
一実施において、Notch活性化剤はペプチドまたはタンパク質である。第一の実施において、ペプチドまたはタンパク質は、Notchリガンド、即ち、インビボで細胞表面上に発現され、かつ、Notch細胞外ドメインへ結合するとNotchと相互作用してNotchシグナリングを活性化する、種である。Notchリガンドは、任意の哺乳動物Notchリガンド、例えば、デルタ様リガンド1 (DLL1)、デルタ様リガンド2 (DLL2)  デルタ様3(DLL3)  デルタ様リガンド4 (DLL4)を含む、デルタ様リガンドを含む。Notchリガンドは、哺乳動物Jaggedリガンド、Jagged-1およびJagged-2をさらに含む。Notchリガンドは、非哺乳動物Notchリガンドまたはそのバリアント、例えば、デルタタンパク質、Serrateファミリーのタンパク質(Serrate-1およびSerrate-2を含む)ならびにLAG-2をさらに含み得る。
【００５０】
Notchリガンドは、公知のNotchリガンドのバリアント、例えば、Notch活性化活性を保持または増強しながら、Notchリガンドに対して少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも99%の配列同一性を有するタンパク質を含み得る。Notchリガンドバリアントはまた、野生型タンパク質の切断を含み得る。例えば、一態様において、Notch活性化リガンドバリアントは、高度に保存されたJagged1デルタ/Serrate/Lag-2 (DSL)ドメインを含む。別の態様において、Notch活性化リガンドバリアントは、例えばKannan et al. (2013) Notch activation inhibits AML growth and survival: a potential therapeutic approach. J Exp Med 210:321-337に記載されるような、Notch活性化活性を有することが示された、ヒトJagged 1のアミノ酸残基188〜204を含む。野生型DLLリガンドは8個の上皮増殖因子様(EGF様)配列リピートを含み、一方、野生型Jaggedリガンドは12個のEGF様リピートを含む。本発明のNotchリガンドバリアントは、野生型配列と比較して変更された数のEGF様配列リピートを有するDLLまたはJaggedのバリアントを含み得る。さらに、Notchリガンドバリアントは、例えば、Tveriakhina et al., The ectodomains determine ligand function in vivo and selectivity of DLL1 and DLL4 toward NOTCH1 and NOTCH2 in vitro eLife 2018;7:e40045に記載されるような、2つ以上のリガンドタイプ由来のサブユニットから構成されているハイブリッドタンパク質を含み得る。例えば、一態様において、Notchリガンドバリアントは、DLL1、DLL2、DLL3、DLL4、Jagged 1、またはJagged 2の、N末端MNNLおよびDSLドメインおよび隣接EGFリピート1〜3を含む。別の態様において、Notchリガンドバリアントは、Liu et al., Identification of Domains for Efficient Notch Signaling Activity in Immobilized Notch Ligand Proteins, J Cell Biochem 2017 Apr;118(4):785-796に記載されるような、257位におけるアルギニンからプロリンへの置換を含むDLL4突然変異体を含む。
【００５１】
一実施において、Notchのペプチドまたはタンパク質アクチベーターは、Notch活性化活性を有する、アミノ酸配列、ペプチド、およびタンパク質を含む操作バリアントおよびデノボ合成分子を含む、Notchリガンド模倣体である。例えば、操作バリアントは、例えば、増加した活性を有するように変更された、Notchリガンドのリガンド結合ドメインおよびその他の活性ドメインを含み得る。
【００５２】
一実施において、Notchのペプチドまたはタンパク質アクチベーターは、Notch ICD、例えば、Notch 1、Notch 2、Notch 3、またはNotch 4 ICDである。ICDは、膜貫通輸送を促進する脂質担体またはペプチド種のような、膜中へのまたは膜を横断しての輸送ための担体へと融合またはコンジュゲートされ得る。例えば、ICDは、転写のトランスアクチベーター(TAT)ペプチド、ペネトラチン、コレステロール依存性細胞溶解素、または他の細胞透過性ペプチドへと融合され得る。
【００５３】
一実施において、Notch活性化ペプチドまたはタンパク質は、抗体、またはその抗原結合性フラグメントを含み、ここで、抗体は、Notchへ結合し、ICD切断および／またはNotch活性化を開始する。例えば、一態様において、Notch活性化剤は、Li et al., Modulation of Notch Signaling by Antibodies Specific for the Extracellular Negative Regulatory Region of NOTCH3, J Bio Chem 283: 8046-8054, 2008に記載されるような抗体A13を含む。
【００５４】
一実施において、Notch活性化剤は脂質を含む。JaggedおよびDLLリガンドは、脂質結合モチーフを含有し、ここで、ある脂質の結合はNotch活性化を制御する。一態様において、Notch活性化活性を有する脂質は、NotchへまたはNotchリガンドへ結合する脂質である。例えば、一態様において、Notch活性化脂質はスフィンゴシン-1-リン酸(S1P)を含む。同様に、S1P受容体3タンパク質が使用され得る。
【００５５】
一態様において、Notch活性化剤は、核酸、例えば、標的細胞へ送達され、そのような細胞によって発現される、遺伝的構築物である。一態様において、Notch活性化剤は、Notch活性化タンパク質をコードする核酸構築物またはNotchシグナリングの下流エフェクターをコードする核酸構築物である。一態様において、構築物は、Notch受容体(例えば、Notch 1、Notch 2、Notch3、またはNotch 4)をコードする。一態様において、Notch受容体はNotch4*であり、これは、本明細書において使用される場合、Notch Flk1/int-3対立遺伝子が、機能獲得型Notch4変異突然変異体（当技術分野において公知の通り、発現後に細胞内ドメインが構成的に切断されるNotch 4タンパク質を産生する）であることを意味する。一態様において、構築物は、例えば、細胞外ドメインを欠いている、Notch細胞内ドメイン、例えば、Notch 1またはNotch 4細胞内ドメインをコードする。一態様において、構築物は、Notchリガンド、例えば、DLL1、DLL2、DLL3、DLL4、Jagged 1、Jagged 2、またはNotchリガンドのバリアントをコードする。
【００５６】
Notch活性化遺伝的構築物は、例えば、遺伝子療法技術によって送達される遺伝子構築物を含む、任意のタイプの発現ベクターを含み得る：ウイルスベクター(例えば、アデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルス、レンチウイルス)、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート関連ヌクレアーゼシステム(CRISPR/Cas)タイプ構築物、CRISPRa、ナノ粒子媒介遺伝子送達(例えば、デンドリマー、脂質、キトサン遺伝子送達粒子など)、または当技術分野において公知の任意の他の遺伝子療法構築物。遺伝的構築物は、高レベルのNotchアクチベーター発現のための構成的プロモーター、またはNotchシグナリング経路中の遺伝子の調節された発現のための誘導性プロモーターをさらに含み得る。プロモーターは、組織特異的プロモーター、例えば、動脈特異的プロモーター、ヒトにおいては、fms様チロシンキナーゼ-1 (FLT-1)、細胞間接着分子-2 (ICAM-2)、およびフォン・ヴィレブランド因子(vWF)プロモーター、DLL4、Notch1、Notch4、コネキシン40、コネキシン43、コネキシン37などのプロモーターであり得、マウス対象においては、BMXなどのプロモーターが使用され得る。
【００５７】
一態様において、Notch活性化剤は、Notchの負の制御因子の阻害剤、例えば、ユビキチンリガーゼRNF8、NUMB、SEL-10、およびFBW7の阻害剤である。阻害剤は、Notch活性化の負の制御因子を下方制御または阻害する、小分子、ペプチド、アミノ酸、または他の物質組成物であり得、ここで、負の制御因子の阻害はNotchシグナリングの誘導または増加を引き起こす。
【００５８】
一態様において、Notch活性化剤は、Notch活性化に影響を与えるRNA、例えば、Notchシグナリングを増加させることができるマイクロRNA、RNAi構築物、ショートヘアピンRNAまたは他のRNA配列である。例えば、RNAは、Notchシグナリングの負の制御因子の発現または活性を阻害するマイクロRNAまたは他のRNAを含み得る。RNA構築物は、Notch活性化タンパク質の発現についての一過性発現ベクターを含み得る。
【００５９】
標的細胞、例えば、動脈の内皮細胞への核酸構築物送達は、当技術分野において公知の任意の手段によって達成され得る。例えば、送達は、ウイルス遺伝子ベクター、エレクトロポレーション、遺伝子銃送達システム、マイクロインジェクション、超音波、流体力学的送達、リポソーム送達、ポリマーまたはタンパク質ベースのカチオン性薬剤(例えば、ポリエチレンイミン、ポリリジン)、イントラジェクトシステム、およびDNA送達デンドリマーによって達成され得る。遺伝子送達は、全身(例えば、静脈内)、または、例えば、局所注入、カテーテル(例えば、薬物溶出バルーンカテーテル)による送達、もしくは薬物溶出インプラント(例えば、ステント)による、局所であり得る。リポソーム送達システムも使用される。例えば、血管組織において発現されるトランスジーンを送達する方法による。血管への標的指向送達のための方法は、当技術分野において公知の方法、例えば、Meiningerによる、「Endothelium-targeting nanoparticle for reversing endothelial dysfunction」という表題の、米国特許出願公開第20050053590号；Yu et al.による、「Carrier system for specific artery wall gene delivery」という表題の、PCT国際特許出願公開第2002042426号；および、Coleman et al.による、「Gene delivery formulations and methods for treatment of ischemic conditions」という表題の、米国特許出願公開第20090209630号に記載される方法から適合させることができる。
【００６０】
一態様において、Notchアクチベーターは、ハーブまたは植物ベースの組成物である。例えば、タマスダレ(ゼフィランサス・カンジダ（Zephyranthes candida）)抽出物は、例えば、Ye et al., Small molecule activation of NOTCH signaling inhibits acute myeloid leukemia Scientific Reports volume 6, Article number: 26510に記載されるように、Notch活性化分子であるN-メチルヘメアンチジンクロリドを有する。
【００６１】
Notch活性化剤の構築物、製剤、および投与
本発明のNotch活性化剤は、有効性の増強のために構成されかつ製剤化され得、デバイスまたは他の薬剤と組み合わされ得る。
【００６２】
本発明のNotch活性化剤は、当技術分野において公知のような、薬学的に許容される賦形剤、担体、希釈剤、放出製剤および他の薬物送達ビヒクルと組み合わせて投与され得る。
【００６３】
本発明のNotch活性化剤は、Notch活性化種を標的血管細胞へと標的指向させる物質組成物である、標的指向部分を含み得る。いくつかの実施において、本発明の方法は、動脈および細動脈を含む、任意の動脈血管において適用される。一態様において、本発明の方法は、動脈内皮細胞を含む、動脈細胞中において、選択的にまたは優先的にNotchシグナリングを増加させることができる薬剤の投与を含む。動脈細胞中において選択的にまたは優先的にNotchシグナリングを増加させることは、動脈細胞を標的とし、非動脈血管および他の非標的組織中においは不十分であるかもしくは存在しない、または、そうでなければ非動脈血管中よりも動脈細胞中において規模もしくは持続がより大きい、増強されたNotchシグナリングを包含し得る。
【００６４】
標的血管細胞は、内皮細胞、平滑筋細胞、および血液細胞を含む、静脈などの他の血管タイプにおける他の血管細胞をさらに含み得る。例えば、ストレスまたは炎症中に提示されるリガンドへと結合する標的指向部分が、Notch活性化剤を罹患または損傷内皮細胞へと標的指向させるために使用され得る。例示的な標的指向部分としては、例えば、白血球接着分子、LDL、および誘導リン脂質が挙げられる。血管、例えば、動脈血管中に存在する他のリガンドが、関連する細胞型へとNotch活性化剤を標的指向させるために使用され得る。
【００６５】
いくつかの態様において、Notch活性化剤は、賦形剤無しで、緩衝液、食塩水、または水中において実質的に単独で送達される。有利なことに、実施例セクションに記載されるように、静脈内に送達されるNotch活性化剤は、特異的標的指向部分無しで、主に動脈内皮中においてNotchを活性化するようである。
【００６６】
いくつかの態様において、Notch活性化剤はリポソームによって送達される。リポソーム送達システムは、核酸、ペプチド、および他の薬剤の送達に適している。薬剤の動脈送達は、例えば、Hwang et al., Improving Cerebral Blood Flow Through Liposomal Delivery of Angiogenic Peptides: Potential of 18F-FDG PET Imaging in Ischemic Stroke Treatment J Nucl Med. 2015;56:1106-1111に記載されている。
【００６７】
いくつかの態様において、部位特異的送達のために、超音波媒介マイクロバブル送達を含む、当技術分野において公知のような、マイクロバブル送達方法が利用され得る。
【００６８】
いくつかの態様において、Notch活性化剤は、当技術分野において公知のような、ナノ粒子負荷フィルム、例えば、標的血管の周りに巻き付けられるフィルムによって、送達される。
【００６９】
いくつかの態様において、Notch活性化剤は薬物-抗体コンジュゲート技術によって送達され、ここで、Notch活性化剤は、ファージディスプレイによって開発された結合性フラグメントのような、抗体またはその抗原結合性フラグメントへコンジュゲートされ、ここで、抗体または抗原結合性フラグメントは、動脈においてまたは他の標的細胞型において存在するリガンドへと選択的に結合する。例えば、標的指向部分は、CD34、接着分子1、および他の動脈リガンド、例えば、架橋フィブリンのような損傷血管中に見られるリガンドへ向けられ得る。
【００７０】
一態様において、Notch活性化剤は、当技術分野において公知のような、磁気指向薬物送達方法における使用のための、磁化可能なマイクロ粒子またはナノ粒子(例えば、酸化鉄、フェロフェリックオキシド)へ化学的にコンジュゲートされたNotch活性化組成物を含む。
【００７１】
いくつかの実施において、標的指向部分およびNotch活性化組成物は、両方とも、タンパク質またはペプチドである。そのような実施において、Notch活性化剤は、標的指向部分およびNotch活性化タンパク質またはペプチドを含む融合タンパク質を含む。
【００７２】
一実施において、本発明のNotch活性化剤は、デバイス上へコーティングされるか、デバイスへコンジュゲートされるか、またはそうでなければデバイス上に存在する。デバイスは、当技術分野において公知のような、経カテーテル送達によって標的部位へ送達され得る。
【００７３】
一実施において、デバイスは、当技術分野において公知のような、薬剤の徐放溶出のためのポリマー材料と混合されたNotch活性化剤の製剤でコーティングされ得る。例示的な薬物溶出ポリマーは、当技術分野において公知の材料、例えば、ポリウレタン、ポリクローン、ポリメチルメタクリレート、ポリビニルアルコール、およびポリエチレンを含み得る。代替の態様において、Notch活性化剤は、デバイスの表面へ直接コンジュゲートされる。
【００７４】
例えば、一態様において、デバイスはインプラントを含み得る。一態様において、インプラントはステントを含み得る。ステントは、金属ステントまたはポリマーステント、例えば、生分解性または再吸収性ポリマーステントであり得る。
【００７５】
一態様において、デバイスは、当技術分野において公知のような、薬物コーティングバルーンを含み得る。薬物コーティングバルーンは、カテーテルから展開されるポリマーバルーンを含み、例えば放射線イメージングの助けによって、いったん配置されると、バルーンは膨らまされ、その結果、それは血管壁に接触し、血管壁は典型的に、ポリソルベート、ソルビトール、イオプロミド、ブチリル-トリ-ヘキシルシトレート(BTHC)、アロイリチン酸、およびシェロール酸のような担体または賦形剤中の、バルーンの外側の上にコーティングされた薬剤に曝される。バルーンは、動脈壁への効率的な移行をもたらすための時間の間、置かれた状態にされ得る。
【００７６】
いくつかの実施において、Notch活性化剤は、ミクロスフェア、ナノスフェア、ナノ粒子、小胞、合成エキソソーム、および他の薬物送達粒子のような、薬物送達粒子組成物中または上に製剤化される。
【００７７】
一実施において、Notch活性化剤は、赤血球、血小板、または赤血球もしくは血小板の合成模倣体へコンジュゲートされる。赤血球修飾方法は、例えば、Shi et al., Engineered red blood cells as carriers for systemic delivery of a wide array of functional probes, PNAS 2014 28:10131-10136に記載されるように、当技術分野において公知である。同様に、機能を持たせた血小板は、例えば、Lu et. al., Platelet for Drug Delivery 2014, Curr Op Biotech 58:81-91によって概説されるように、使用され得る。
【００７８】
Notch活性化剤は、任意の他の治療用組成物、例えば：血栓溶解薬、例えば、組織プラスミノゲン活性化因子；神経保護薬；抗高血圧薬；抗痙攣薬；アドレナリン受容体拮抗薬；および虚血または他の血管状態の処置において投与される他の薬剤と組み合わせて同時投与され得る。
【００７９】
Notch活性化剤の投与
本発明の処置において、Notch活性化剤は、選択された血管状態の処置のために身体中の1つまたは複数の部位へ薬学的有効量で送達される。薬学的有効量は、測定可能な治療効果または測定可能なNotchシグナリング活性を誘導するのに十分な任意の量である。
【００８０】
投与の方法およびタイミングは、様々な要因：問題の血管状態、血管状態の進行および状態、対象の状態；選択されたNotch活性化剤の物理的および薬理学的特性；ならびに送達方法、に基づいて選択される。
【００８１】
例えば、Notch活性化剤の局所または全身送達が行われ得る。一実施において、例えば循環系への、全身投与が達成される。全身投与は、例えば、血管状態のリスクがある対象において動脈弾力性を促進するための、予防的処置、例えば、高齢の対象における虚血または別の血管状態の予防的処置の場合に、望ましい場合がある。全身送達はまた、Notch活性化剤が最小限のまたは許容されるオフターゲット効果を有する場合に、行われ得る。他の状況において、例えば、急性損傷、閉塞、または他の局所状態の処置において、局所送達が好ましく、例えば、ここで、カテーテルまたは他のデバイスによる狭窄領域へのアクセスが問題である。
【００８２】
薬剤の投与は、例えば、血管状態のリスク低下を生じさせるまたは維持するための予防的処置の場合、または慢性状態の処置において、長期間であり得る。投与は、例えば、虚血のような急性血管状態の処置において、短期間であり得る。
【００８３】
主要な実施において、標的細胞が血管細胞であると仮定すると、Notch活性化剤の投与は、静脈内経路によるだろう。代替の態様において、投与は、経口、局所、腹腔内注射による、またはそうでなければ、選択されたNotch活性化剤と適合性であるようなものであり得る。
【００８４】
第一の実施において、Notch活性化剤は、静脈内注射によって全身的に適用される。そのような場合、薬剤は循環系の標的内皮細胞へ容易に曝露される。この投与経路は、有利なことに、身体内の深部の、または、そうでなければ外科的介入で容易にアクセス可能でない、血管への送達を可能にする。
【００８５】
代替の実施において、Notch活性化剤は、例えば、罹患血管への注射によって、局所送達される。例えば、Notch活性化剤は、罹患領域の直ぐ上流および／もしくは下流の血管の部分へ、または血管の罹患領域、例えば、閉塞部分または梗塞内に、送達され得る。
【００８６】
一態様において、Notch活性化剤は、血管中へ導入されるカテーテルまたは同様のデバイスによって罹患血管へ局所送達される。Notch活性化剤は、カテーテルから流されるかもしくは分配され得、または、カテーテル表面上に、もしくはカテーテルによって罹患部位へ送達される薬物溶出構造体（例えばバルーン）中に、存在し得る。
【００８７】
別の態様において、Notch活性化剤は、外科用インプラントと組み合わせて投与される。例えば、一態様において、Notch活性化剤はステントまたは他のインプラント上にて投与され、ここで、インプラントは、薬物溶出送達ビヒクルまたは製剤中のNotch活性化剤でコーティングされている。
【００８８】
適切な投薬量および処置レジメンは、患者、疾患、薬剤、および送達要因に基づいて、変化し、当業者によって選択され得る。1ナノモル濃度〜100マイクロモル濃度の例示的な投薬量、例えば、体重1キログラム当たり1日当たり1〜1000マイクログラムの薬剤、例えば、体重1キログラム当たり1日当たり約50〜100マイクログラムの薬剤の投薬量が投与され得る。投薬量は、1日当たり複数回、毎日、一日おきにもしくは毎週、または、例えば薬物溶出ポンプもしくはデバイスの場合、連続的に、投与され得る。投薬量は、数日、数週間、数ヵ月、またはそれ以上の期間の間投与され得る。
【実施例】
【００８９】
実施例1．誘導性動脈Notchシグナリングを有するマウス
虚血のマウスモデルにおけるNotchシグナリングの効果を研究するために、それぞれ、Notch1 ICDおよびNotch4*で示される、Notch1およびNotch4の構成的に活性な形態を使用した。Notch1 ICDは、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインを有さない切断型Notch1受容体細胞内ドメイン(ICD)を含み、切断型Notch細胞内ドメインを機能的に複製し、発現すると構成的に活性である。Notch4*突然変異体は、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを有し細胞外ドメインを有さない切断型Notch4受容体を含み、これはNotch4 ICDへと構成的に切断される。従って、Notch4*は発現すると、機能的に構成的に活性である。Notch1 ICDまたはNotch4*は、従って、細胞において発現した場合にNotchシグナリングを増加させる。
【００９０】
これらの2つの突然変異Notch遺伝子の発現をテトラサイクリン(Tet)応答エレメント(TRE)下に置いた。これは、テトラサイクリン(tet)-オフ遺伝子発現系である、TRE-Notch1 ICDおよびTRE-Notch4*において、tetトランスアクチベーター(tTA)によって活性化される。tTAはROSA:LNL:tTA対立遺伝子中のCre活性化後に発現される。従って、Notch1 ICDおよびNotch4*の発現は、Bmx(PAC)-CreERT2トランスジーンの調節下にある。Bmx(PAC)-CreERT2は主に動脈内皮細胞中において活性であり、レポーター研究はまた、脳の静脈および毛細血管中におけるいくらかのまだら状の検出可能な発現、ならびに肢静脈中におけるいくらかのまだら状の検出可能な発現を示し、肢毛細血管中において実質的な発現は検出されなかった。この構築物を、タモキシフェン誘導系およびテトラサイクリン(tet)オフ遺伝子発現系と合わせた。タモキシフェン投与はBmx(PAC)-CreERT2を活性化し、tTA発現をもたらす。tTAはテトラサイクリンの非存在下で活性である(従って遺伝子発現はオンである)。この系において、動物がテトラサイクリンまたはその誘導体で未処置のままである場合、トランスジーン発現の誘導はタモキシフェン投与によってのみ調節される。遺伝子誘導のために、タモキシフェンを、連続2日間にわたって、成体マウスへ与えた。タモキシフェン注射は、IP注射により、2日間にわたって、1日1回である。dMCAOまたはEFAOの14および13日前での注射をいくつかの処置において投与した。他の処置において、Notchシグナリングの誘導は、閉塞事象(dMCAOまたはEFAO)時に開始し、これについては、dMCAOまたはEFAO後0日目(閉塞の日)および1日目に投与した。
【００９１】
Bmx(PAC)-CreERT2; ROSA:LNL:tTA; TRE-Notch1 ICDを有するマウスは、本明細書においてBMX-Notch1 ICDマウスと本明細書において呼ばれ、Bmx(PAC)-CreERT2; ROSA:LNL:tTA; TRE-Notch4*を有するマウスは、BMX-Notch4*マウスと本明細書において呼ばれる。対照マウスは、Notchを有さず、Bmx(PAC)-CreERT2および／またはROSA:LNL:tTA構築物を有するマウスである。
【００９２】
Notch4*発現マウスにおいて、肢におけるNotch4*染色研究は血管内皮細胞とのNotch4*の共局在を示すが、他の細胞型におけるNotch4*の発現を排除することができない。
【００９３】
Rosa26-mT/mGレポーターによって産生された膜標的指向緑色蛍光タンパク質の検査は、主に動脈中に存在するBmx(PAC)-CreERT2活性を明らかにし、動脈の内皮細胞(EC)中において強く、静脈の細胞中において弱くかつ散在的であり、後肢の毛細血管中には存在しなかった。複数の組織の分析は、Bmx(PAC)-CreERT2活性が全ての場合において主に動脈の細胞中に存在したことを明らかにした。加えて、Bmx(PAC)-CreERT2活性はまた、耳の静脈およびリンパEC、腸間膜のリンパEC、ならびに精巣挙筋の静脈EC中に、より少ない程度に、存在した。組織のいずれも、毛細血管床中における有意なBmx(PAC)-CreERT2発現を示さなかった。
【００９４】
実施例2．Notch1細胞内ドメイン(ICD)発現を通しての動脈Notchシグナリング活性化は、虚血性脳卒中のマウスモデルにおける回復を促進する
Notch1 ICD発現を、当技術分野において公知のようなdMCAO手順によって誘発される実験的脳卒中の14および13日前に、タモキシフェンの投与によってBMX-Notch1 ICDマウスにおいて誘導した。対照およびBMX-Notch1マウスをdMCAO手順に供した。神経学的機能をdMCAO前および後に試験した。Notch1の動脈中活性化はdMCAO後の神経学的回復を改善した。改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験などによって、神経学的機能を評価した(図1A)。BMX-Notch1 ICDマウスは、対照マウスと比較して、dMCAO手術後のより良い神経学的回復を実証した。H&E染色は、対照マウスと比較して、BMX-Notch1 ICDマウスにおいてより少ない梗塞病変を示した。梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch1 ICDマウスにおいて有意により少ない(p<0.01)梗塞体積を示した(図1B)。
【００９５】
さらに、[全ての軟膜をすみからすみまで除去する]動脈の血管キャスティングは、対照マウスと比較してBMX-Notch1 ICDマウスの脳内において側副枝のより顕著な再構築(前大脳動脈-中大脳動脈吻合)を示した。dMCAOの同側における側副枝の再構築はBMX-Notch1 ICDおよび対照マウスの両方において観察されたが、血管数、直径および蛇行における再構築の程度は、BMX-Notch1 ICDマウスにおいてより顕著であった。拡大画像は、BMX-Notch1 ICD発現マウスにおける軟膜側副枝が、対照マウスのそれと比較して、より顕著かつ蛇行性であることを明らかに示した。
【００９６】
同様の結果が、Notch4シグナリングの動脈中活性化において観察された。Notch4*発現は、dMCAOモデルマウスにおいて、神経学的回復を促進し、梗塞体積を減少させた。Notch4の動脈中活性化はdMCAO後の神経学的回復を改善した。改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験などによって、神経学的機能を評価した(図2A)。H&E染色は、対照マウスと比較して、BMX-Notch4*マウスにおいてより少ない梗塞病変を示した。梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch4*マウスにおいて有意により少ない(p<0.01)梗塞体積を示した(図2B)。
【００９７】
動脈の血管キャスティングは、対照マウスのそれと比較して、BMX-Notch4*マウスにおいて側副枝のより顕著な再構築を示した。拡大画像は、BMX-Notch4*マウスにおける側副枝が、対照マウスのそれと比較して、より顕著かつ蛇行性であることを明らかに示した。
【００９８】
これらの結果は、急性虚血性脳卒中の前および後での、Notchシグナリングの誘導は、血流のより大きな回復および梗塞体積の減少を伴って、損傷マウスの回復を劇的に改善することを実証する。このデータは治療効果だけでなく予防的効果も示唆する。
【００９９】
実施例3．虚血後Notchシグナリング活性化は、神経学的回復、梗塞体積減少、および側副動脈成長増加を促進する
以前の結果は、脳内の虚血傷害後の改善されたアウトカムが、傷害前および後の、Notchシグナリングの活性化によって達成され得ることを実証する。この効果が傷害後処置状況において適用され得ることを実証するために、実験を行い、ここで、Notch活性化を虚血性傷害後に誘導した。これらの試験において、対照および突然変異NotchマウスをdMCAOに供し、続いてタモキシフェン投与によってNotch ICD発現を誘導した。脳卒中発症後のNotchシグナリング活性化を確立するために、タモキシフェン(2mg/身体, ip)を、dMCAO手術直後に連続2日間注射した。
【０１００】
虚血傷害後のNotch1の動脈中活性化は神経学的回復を改善した。dMCAO虚血傷害の前および後に、改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験などによって、神経学的機能を評価した(図3A)。BMX-Notch1 ICDマウスは、対照マウスのそれと比較して、有意により良い神経学的回復を示した。Notch1シグナリング活性化は脳卒中後に徐々に達成されたため、2つの群間の差異は脳卒中の7日後から有意になった。H&E染色は、Notch1シグナリングの上方制御が脳卒中後に誘導されたBMX-Notch1 ICDマウスにおいて、対照マウスのそれと比較して、より少ない梗塞病変を示した。H&E染色によって決定された梗塞体積の定量化は、対照マウスと比較して、BMX-Notch1 ICDマウスにおいて有意により少ない梗塞体積を示した(図3B)。
【０１０１】
動脈の血管キャスティングのイメージングは、Notch1 ICDが実験的脳卒中後に発現された場合、BMX-Notch1 ICDマウスにおいて、対照マウスのそれと比較して、側副枝のより顕著な再構築を示した。画像は、BMX-Notch1 ICDマウスにおける側副枝が、対照マウスのそれと比較して、より顕著かつ蛇行性であることを明らかに示した。
【０１０２】
同様に、虚血性傷害後に開始された虚血後Notch4シグナリング活性化は、神経学的回復、梗塞体積減少、および側副動脈成長改善を促進した。MCAO前および後に、改変bedersonグレーディング、持ち上げボディースイング試験、ラダー試験、および粘着試験などによって、神経学的機能を評価した(図4A)。Notch4の動脈中活性化をタモキシフェン注射によって虚血傷害後に誘導した。有意に改善された神経学的回復がBMX-Notch4*マウスにおいて観察された。Notch4シグナリング活性化は脳卒中後に徐々に達成されたため、2つの群間の差異は脳卒中の7日後から有意になった。HE染色は、notch4シグナリングの上方制御が脳卒中後に達成されたBMX-Notch4*マウスにおいて、対照マウスのそれと比較して、より少ない梗塞病変を示した。H&E染色によって決定された梗塞体積の定量化は、BMX-Notch4*マウスにおいて有意により少ない梗塞体積を示した(図4B)。
【０１０３】
実施例4．虚血後回復に対する、一過性Notchシグナリング誘導の永続的効果
脳内の虚血傷害後の上方制御されたNotchシグナリングの効果をさらに調べるために、図5Aに要約されるように実験を行った。dMCAOより14日前に、Notchシグナリングをタモキシフェン投与によってBMX-Notch1マウスにおいて誘導した。dMCAOから14日後に、Tet-オフ発現構築物の手段、およびドキシサイクリンの投与によってNotch1 ICD発現をオフにした。
【０１０４】
Notch1 ICDの動脈発現は、Notch1 ICDをオフにしたにもかかわらず、側副枝の成長を促進し、脳血流を保った。
【０１０５】
側副動脈直径、速度、およびフラックス(図5B)は、対照マウスと比較して、BMX-Notch1 ICDマウスにおいて全て改善された。血管サイズおよび機能の有意な改善は、Notch1 ICDがオフにされた後も持続し、これは、傷害後の期間におけるNotch活性化からの持続的な治療効果を実証している。
【０１０６】
同様に、動脈の血管キャスティングは、対照マウスのそれと比較して、BMX-Notch4*マウスにおいて側副枝のより顕著な再構築を示し、dMCAOから14日後にNotch4*発現をオフにしたにもかかわらず維持された。拡大画像は、対照マウスのそれと比較して、BMX-Notch4*マウスにおけるより顕著かつ蛇行性の側副枝が、Notch4*発現がオフにされた後、長く維持されたことを明らかに示した。
【０１０７】
実施例5．Notchリガンドの投与によるNotchシグナリング活性化の治療効果
前述の実験は、遺伝的アプローチによって虚血性脳傷害におけるNotchシグナリングの治療効果を実証した。虚血性脳傷害後の上方制御されたNotchシグナリングの治療効果をさらに実証するために、図6Aに要約されるように、組換えマウスDLL4を、dMCAOの前日から開始して8日間にわたって、最初の3用量については体重1グラム当たり1マイクログラムおよびその後は1日当たり0.8マイクログラムの投薬量での静脈内注射によって、野生型マウス(C57BL/6J株)へ毎日投与した。側副動脈サイズおよび機能を、傷害後7日および14日目に評価した。rDLL4で処置されたマウスにおいて、側副動脈直径、速度、およびフラックス(図6B)が7日目で有意に改善され、この時点でrDLL4投与を中止した。処置マウスにおける有意な改善は14日目において持続していた。神経学的機能は、15および17日目でラダー試験によって評価されたように、処置マウスにおいてより高かった(図6C)。
【０１０８】
これらの結果は、Notchシグナリングアクチベーターの外因性適用が、虚血傷害の処置において実質的かつ永続的な治療効果を有し得ることを実証する。
【０１０９】
実施例6．Notchシグナリングの上方制御は急性肢虚血モデルにおける回復を改善する
急性肢虚血における動脈Notchシグナリングの治療可能性を研究するために、BMX-Notch4*マウスおよび対照マウスを、左後肢の実験的大腿動脈閉塞(EFAO)に供した。BMX-Notch4*マウスにおけるNotch4*発現を、FFAOより14日前にタモキシフェン投与によって誘導した。EFAO後、足の血流および後肢の動脈直径を、手術および未手術肢において測定した。図7Aは、Notch4*発現マウスの虚血足における改善された血流を描写する。図7Bは、BMX-Notch4*マウスにおける後肢の動脈直径の改善された回復を描写し、一方、オフターゲット効果は未手術肢において見られなかった。図7Cは、手術肢および未手術肢間のEFAO後の側副動脈直径の変化の比率を描写する。図8は、EFAO後7日目でのBMX-Notch4*マウスにおける有意に減少した筋壊死を描写する。関連する実験において、BMX-Notch4*マウスおよび対照マウスを1つの肢におけるEFAOに供することによって、Notch4活性化の持続的効果を急性肢虚血モデルにおいて調べた。BMX Notch4*マウスに、Notch4*発現を誘導するためにEFAO手順より13および14日前にタモキシフェンを注射した。EFAOから14日後に、Notch4*発現をドキシサイクリン(飼料中)の投与によってオフにした。Notch4*発現はドキシサイクリン投与後数日の期間にわたって恐らく減少した。外科的傷害の前および後に、当技術分野において公知のような、レーザードップラー灌流イメージング、またはLDPIによって、足灌流を手術および未手術肢において測定した。未手術肢に対する手術肢における足灌流の比率は、足血流回復の尺度を提供する。対照マウスと比較して、足血流は、BMX-Notch4*マウスの虚血肢においてより大きく、7日目までに有意に改善し、測定の56日の時間経過の残りの期間の間そのままであった(図9)。手術から14日後にNotch 4*発現をオフにしたにもかかわらず、血流の有意な改善が、Notch4*がオフにされた後も十分に、測定期間を通して持続した。
【０１１０】
別の実験において、BMX-Notch4*マウスおよび対照マウスを1つの肢におけるEFAOに供することによって、Notch活性化の治療効果を急性肢虚血モデルにおいて調べた。EFAO手順の直後に、BMX-Notch4*マウスにおいてNotch4*発現を誘導するためにタモキシフェン投与を行った。外科的傷害の前および後に、当技術分野において公知のような、レーザードップラー灌流イメージング、またはLDPIによって、足灌流を手術および未手術肢において測定した。未手術肢に対する手術肢における足灌流の比率は、足血流回復の尺度を提供する。図10に描写されるように、EFAO後の足灌流の有意な改善が、21日目までに、Notch4*発現マウスにおいて観察された。これらの改善は測定期間である63日を通して持続した。
【０１１１】
これらの結果は、虚血傷害後の脳におけるNotchシグナリング活性化の予防効果および治療効果が、他の虚血部位にも適用可能であることを実証し、結果は、効果が、予防的に、治療的に機能し得、さらに、Notch4活性化が停止された後も十分に永続的、持続的であることを確認する。
【０１１２】
例示的な態様
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、血管疾患は虚血状態であり、ここで、虚血状態は、心虚血、脳虚血、肢虚血、または頸動脈疾患であり得る。
【０１１３】
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、血管疾患は脳の虚血状態であり、ここで、虚血状態は、急性虚血性脳卒中、一過性脳虚血発作、微小梗塞、血管性認知症、または脳血管疾患であり得る。
【０１１４】
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、血管疾患は、末梢動脈疾患；血流低下を包含する腎機能障害または腎疾患；眼の血管状態；脾臓中の血流低下；腸間膜動脈閉塞；腸梗塞；小血管疾患；およびアテローム性動脈硬化症または糖尿病の結果としての血管中の血流減少からなる群より選択される。
【０１１５】
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、Notch活性化剤はNotchリガンドである。一態様において、Notchリガンドは、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される。
【０１１６】
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、Notch活性化剤はNotch細胞内ドメインである。一態様において、Notch細胞内ドメインは、Notch 1細胞内ドメイン、Notch 2細胞内ドメイン、Notch 3細胞内ドメイン、およびNotch 4細胞内ドメイン、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される。
【０１１７】
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、Notch活性化剤は、N-メチルヘメアンチジンクロリド、バルプロ酸、レスベラトロール、トリアセチルレスベラトロール、フェネチルイソチオシアネート、およびYhhu-3792からなる群より選択される。
【０１１８】
一態様において、本発明の範囲は、血管疾患の処置における使用のためのNotch活性化剤を包含し、ここで、血管疾患は虚血状態であり、ここで、虚血状態は、心虚血、脳虚血、肢虚血、または頸動脈疾患からなる群より選択され、ここで、脳の虚血状態は、急性虚血性脳卒中、一過性脳虚血発作、微小梗塞、血管性認知症、または脳血管疾患からなる群より選択され；ここで、Notch活性化剤はNotchリガンドであり；ここで、Notchリガンドは、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される。
【０１１９】
一態様において、本発明の範囲は、薬物送達デバイスを包含し、薬物送達デバイスは、1つもしくは複数のNotch活性化剤で官能化されているか、または生理的条件へ曝露されると1つもしくは複数のNotch活性化剤を溶出する組成物でコーティングされており；ここで、Notch活性化剤は、Notchリガンド、Notch細胞内ドメイン、Notchの小分子アクチベーター、および抗体からなる群より選択され、ここで、Notchリガンドは、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択され；ここで、デバイスは薬物溶出バルーンまたはステントであり得る。
【０１２０】
一態様において、本発明の範囲は、1つまたは複数のNotch活性化剤で機能を持たせた赤血球を包含する。一態様において、Notch活性化剤はNotchリガンドである。一態様において、Notchリガンドは、デルタ様リガンド1、デルタ様リガンド2、デルタ様3、デルタ様リガンド4、Jagged-1、Jagged-2、および前述のもののNotch活性化バリアントからなる群より選択される。
【０１２１】
本明細書中に引用される全ての特許、特許出願、および刊行物は、各々の独立した特許出願または刊行物が参照により組み入れられるために具体的にかつ個々に示されているかのように同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。開示される態様は、説明目的のために提示され、限定目的のためではない。本発明はその記載された態様を参照して記載されたが、全体として本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の構造体および要素に対して改変が行われ得ることが、当業者によって認識されるだろう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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2021533095.tif 000024
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