(57)【要約】本発明は、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)免疫療法を受けているヒト患者において、CARを発現する免疫細胞の受容を促進するために、CD2+細胞を減少させる方法を提供する。抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、自己又は同種異系のCARを発現する免疫細胞を受けているヒト患者に、前記CARを発現する免疫細胞をヒト患者が受け入れるように、コンディショニング・レジメンとして投与する。本発明の組成物及び方法は、自己免疫疾患及びがんを含む種々の病態を治療するために、CAR療法と併用して使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象において、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞の受容を促進する方法、ここで、前記方法は、以下を含む、
(a) 抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象に投与すること、ここで、前記抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；及び、
(b) CARを発現する免疫細胞の治療有効量を前記ヒト対象に投与すること、ここで、前記CARは、腫瘍抗原又は自己免疫疾患に関連する抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。
【請求項２】
請求項１に記載の方法、ここで、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、アレムツズマブを投与されない。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法、ここで、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、リンパ球除去化学療法剤を投与されない。
【請求項４】
請求項３に記載の方法、ここで、前記リンパ球除去化学療法剤は、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、及び／又はペントスタチンである。
【請求項５】
請求項１から４の何れか一項に記載の方法、ここで、ステップ(b)の前に抗-CD2 ADCを前記ヒト対象に投与することを更に含む。
【請求項６】
請求項１から５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記方法は、ステップ(b)の約12時間から約21日前に、抗-CD2 ADCを前記ヒト対象に投与することを含む。
【請求項７】
請求項１から６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記免疫細胞は、同種異系細胞又は自己細胞である。
【請求項８】
請求項７に記載の方法、ここで、前記同種異系細胞は、同種異系T細胞又は同種異系NK細胞である。
【請求項９】
請求項１から８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARを発現する同種異系細胞の治療有効量は、約1×104から約1.0×108細胞／kgである。
【請求項１０】
腫瘍を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする対象に以下を投与することを含む方法、
(i) 抗-CD2 ADC、ここで、前記抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、及び
(ii) 約1×106から約1×108個の治療有効量の操作したCAR T細胞／kgを患者に投与すること。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法、ここで、前記操作したCAR T細胞の治療有効量は、約1×106 又は約2×106 細胞／kgである。
【請求項１２】
請求項１から１１の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗-CD2 ADCを、単回用量又は複数回用量として患者に投与する。
【請求項１３】
請求項１から１２の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO) 1、2、及び3に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖可変領域を含む、並びに、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO)4、5、及び6に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、キメラ化又はヒト化されている。
【請求項１５】
請求項１から１４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、IgG1アイソタイプ又はIgG4アイソタイプである。
【請求項１６】
請求項１から１５に記載の方法、ここで、前記細胞毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシンである。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマニチンである。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法、ここで、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群から選択される。
【請求項２０】
請求項１７に記載の方法、ここで、アマトキシンにコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、式Ab-Z-L-Amによって表される、ここで、Abは抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、及びAmは式(III)によって表されるアマトキシンである、
【化１】
2021530545.tif 000058
ここで、R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Xは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Zである；
RDは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、又は任意選択的に置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である、ここで、Amは正確に1つのRc置換基を含む。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法、ここで、前記リンカーは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリールである；又はジペプチドを含む；又は-(CH2)mO)n(CH2)m-である、ここでm及びnは、それぞれ個別に1、2、3、4、5、6、7、8、9、及び10から選択されたものである。
【請求項２２】
請求項１６に記載の方法、ここで、前記抗有糸分裂薬剤は、メイタンシン又はアウリスタチンである。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法、ここで、前記アウリスタチンは、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。
【請求項２４】
請求項１４に記載の方法、ここで、前記抗有糸分裂薬剤は、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)又はカリケアマイシンである。
【請求項２５】
請求項１から２４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCのリンカーは、N-ベータ-マレイミドプロピオニル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。
【請求項２６】
請求項１から２４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCは、以下の構造の何れか1つによって表される：
【化２】
2021530545.tif 000059
【請求項２７】
請求項１から２４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCは以下によって表される：
【化３】
2021530545.tif 000060
又は
【化４】
2021530545.tif 000061
。
【請求項２８】
請求項１から２７の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCは、3日以下の血清半減期を有する。
【請求項２９】
請求項１から２８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARの細胞外ドメインは、scFv抗体又は単鎖T細胞レセプター(scTCR)を含む。
【請求項３０】
請求項１から２８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記細胞外ドメインは、非-免疫グロブリン・スキャフォールド・タンパク質(scaffold protein)を含む。
【請求項３１】
請求項１から３０の何れか一項に記載の方法、ここで、前記腫瘍抗原は、CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、メソテリン、CD38、PD1、EGFR(例えば、EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D、又はCD123からなる群より選択される。
【請求項３２】
請求項１から３０の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARの細胞内ドメインは、CD28細胞内シグナリング・ドメイン、CD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメイン、OX40細胞内シグナリング・ドメイン、及び／又はCD137(4-1BB)細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【請求項３３】
請求項１から３１の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARの細胞内ドメインがCD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【請求項３４】
請求項１から３３の何れか一項に記載の方法、ここで、前記がんを有するヒト対象は、白血病、成人進行がん、膵臓がん、切除不能な膵臓がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、卵巣がん、トリプル-ネガティブ乳がん、造血系／リンパ系がん、大腸がん肝臓転移、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、B細胞リンパ腫、再発性又は難治性B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、再発性又は難治性びまん性大細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫、再発性縦隔、難治性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、大細胞型B細胞リンパ腫、ホジキン・リンパ腫、非-ホジキン・リンパ腫、再発又は難治性非-ホジキンリンパ腫、難治性進行性非-ホジキンリンパ腫、B細胞性非-ホジキン・リンパ腫、難治性非-ホジキンリンパ腫、結腸直腸がん腫(colorectal carcinoma)、胃がん(gastric carcinoma)、膵がん(pancreatic carcinoma)、トリプルネガティブ浸潤性乳がん(triple-negative invasive breast carcinoma)、腎細胞がん(renal cell carcinoma)、肺扁平上皮がん(lung squamous cell carcinoma)、肝細胞がん(hepatocellularcarcinoma)、尿路上皮がん(urothelial carcinoma)、白血病、B細胞性白血病、B細胞性急性リンパ球性白血病（B-cell acute lymphocytic leukemia）、B細胞性急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、成人急性リンパ芽球性白血病、B細胞性前リンパ球性白血病（B-cell prolymphocytic leukemia）、小児急性リンパ芽球性白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia)、難治性小児急性リンパ芽球性白血病(refractory childhood acute lymphoblastic leukemia)、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、再発性プラズマ細胞性骨髄腫(recurrent plasma cell myeloma)、難治性プラズマ細胞性骨髄腫(refractory plasma cell myeloma)、多発性骨髄腫、再発性又は難治性多発性骨髄腫、骨の多発性骨髄腫、脳の悪性神経膠腫(malignant glioma of brain)、骨髄異形成症候群、EGFR陽性結腸直腸がん、多形性膠芽腫(glioblastoma multiforme)、新生物、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm)、肝臓転移、固形腫瘍、進行性固形腫瘍(advanced solid tumor)、メソテリン陽性腫瘍(mesothelin positive tumor)、血液悪性腫瘍、及びその他の進行した悪性腫瘍、からなる群から選択されるがんを有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、2018年7月23日に出願された米国仮特許出願第62/702301号及び2018年11月29日に出願された米国仮特許出願第62/773108号に対する35 U.S.C§119(e)の利益に基づく優先権の利益を主張する。前記出願の内容は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０００２】
［配列一覧］
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出した配列リストを含み、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。2019年7月19日に作成された前記ASCIIのコピーは、M103034_2050WO_SL.txtという名前で、サイズが30,815 バイトになる。
【０００３】
［技術分野］
本発明は、広く、抗-CD2抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を使用することによって、ヒト対象においてキメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞の受容を促進するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
キメラ抗原レセプター(Chimeric antigen receptor)(CAR)療法は、身体自身の免疫システムを利用して、がんなどある特定の疾患に関連する特異的抗原を発現する細胞を破壊する免疫学的治療法である。例えば、がんにおいて、CAR療法は、がんを攻撃する患者の免疫システムの力を得る、及び強化する。過去数年間をかけて、この免疫療法は、有望かつ革命的な治療法として登場した。CAR療法は、T細胞などの免疫細胞に基づいており、この免疫細胞は、細胞外抗原結合ドメイン（scFvなど）と、前記細胞に表面レセプターからシグナル伝達をする細胞質活性シグナリング及び「共刺激」ドメインとが結合した、一般的に膜貫通融合タンパク質であるCARを発現する。従って、T-細胞のような免疫細胞がCARを発現すると、前記免疫細胞はCARの抗原結合ドメインがターゲットとする抗原(例えば、腫瘍関連抗原)を発現する細胞を認識し、それを殺すことができる(Geyer and Brentjens (2016) Cytotherapy 18(11): 1393-1409)。
【０００５】
CAR療法は信じられないほど強力な技術であるが、重篤なリスク及び有害な副作用を伴う(Kay and Turtle (2017) Drugs 77(3):237-245; Hill et al. (2018) Blood 131:121-130)。リンパ球除去化学療法は、CAR療法を受ける患者がCAR発現細胞を拒絶することを最小限に抑えるために、CAR療法と併用するコンディショニング治療として一般的に用いられている(Wei et al. (2017) Exp Hematol Oncol. 6: 10)。6: 10)。例えば、リンパ球除去剤フルダラビンとシクロホスファミドを併用すると、レシピエント(recipient)患者においてCAR-T細胞が維持される時間が改善された(Turtle et al. (2016) J Clinic Invest 126(6):2123; US 20170368101も参照)。コンディショニング療法は、CAR-T細胞の有効性を改善したが、リンパ球除去化学療法はしばしば重篤な負の副作用を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、CARを発現する免疫細胞の受容を促進するために、CAR療法と共に使用され得るコンディショニング・レジメンを提供する。本明細書中に記載する方法は、自己CARを発現する免疫細胞又は同種異系CARを発現する免疫細胞の何れかの受容を促進するために使用され得る。これまで、このような細胞の受容は、リンパ球除去化学療法を用いて実現されてきた。レシピエント(recipient)患者におけるCARを発現する細胞の受容を促進する改善した方法を、本明細書に記載する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第1の態様において、本発明は、(a) 前記方法は抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象に投与することにより（ここで、抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む）、；及び(b) CARを発現する免疫細胞の治療有効量を前記ヒト対象に投与することにより（ここで、前記CARは、腫瘍抗原又は自己免疫疾患に関連する抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む）、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象において、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞の受容を促進することを特徴とする。ある実施形態では、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、アレムツズマブを投与されない。別の実施形態では、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、リンパ球除去化学療法剤を投与されない。更に別の実施形態では、前記リンパ球除去化学療法剤はフルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン及び／又はペントスタチンである。
【０００８】
ある実施形態では、前記方法は、ステップ(b)の前に、抗-CD2 ADCを、前記ヒト対象に投与することを、含む。
【０００９】
ある実施形態では、方法は、ステップ(b)の約12時間~約21日前に、抗-CD2 ADCを前記ヒト対象に投与することを、含む。
【００１０】
ある実施形態では、前記免疫細胞は、同種異系細胞又は自己細胞である。更に別の実施形態では、前記同種異系細胞は、同種異系T細胞又は同種異系NK細胞である。
【００１１】
ある特定の実施形態では、前記CARを発現する同種異系細胞の治療有効量は、約1×104~約1.0×108細胞／kgである。
【００１２】
別の態様では、本発明は、(i) 抗-CD2 ADCを、それを必要とする患者に投与することにより（ここで、抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD5抗体又はその抗原結合フラグメントを含む）、及び（ii）約1×106~約1×108個の治療有効量の操作したCAR T細胞／kgを患者に投与することにより、腫瘍を有する患者を治療する方法を特徴とする。ある実施形態では、操作したCAR T細胞の治療有効量は、約1×106 又は約2×106 細胞／kgである。更に別の実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、単回用量として、又は複数回用量として、前記患者に投与する。
【００１３】
ある特定の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO): 1、2、及び3に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖可変領域を含む、並びに、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO): 4、5、及び6に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、キメラ化又はヒト化されている。
【００１４】
ある特定の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、IgG1アイソタイプ又はIgG4アイソタイプである。
【００１５】
ある特定の実施形態では、前記細胞毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。他の実施形態では、前記細胞毒素は、メイタンシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、又はアウリスタチンである。ある実施形態では、前記アウリスタチンは、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。ある実施形態では、前記細胞毒素は、メイタンシンである。ある実施形態では、前記細胞毒素は、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)である。例えば、いくつかの実施形態では、前記PBDは、テシリン又はタリリンから選択することがある。いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、カリケアマイシンであってもよい。例えば、いくつかの実施形態では、前記カリケアマイシンはオゾガミシンであってもよい。
【００１６】
他の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシンである。別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤である。別の実施形態では、前記アマニチンは、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリンからなる群から選択される。
【００１７】
ある実施形態では、前記抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は、式Ab-Z-L-Amによって表される、ここで、AbはCD2に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、Amはアマトキシンである。ある特定の実施形態では、リンカー-アマトキシン・コンジュゲートAm-L-Zは、式(III)で表される、
【化１】
2021530545.tif 000002
ここで、R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合する酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、又は任意選択的に置換されたヘテロアリールである；
Lは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、若しくは任意選択的に置換されたヘテロアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-を含む、ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 及び 10から選択される；並びに、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【００１８】
ある特定の実施形態では、前記リンカー-アマトキシン・コンジュゲートAm-L-Zは、式(III)で表される
【化２】
2021530545.tif 000003
ここで、R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合する酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、又は任意選択的に置換されたヘテロアリールである；
Lはリンカーである；並びに、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【００１９】
式(III)のある実施形態では、Lは、ペプチドを含むリンカーである。
【００２０】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、一種以上のジペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C6シクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、溶解度を高める基、-(C=O)-、-(CH2CH2O)p-基（ここで、pは1-6からの整数である）、((CH2)mO)n(CH2)m-（ここで、n及びmは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；又はそれらの組み合わせ、を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、((CH2)mO)n(CH2)m-基及びヘテロアリール基を含む、ここで、前記ヘテロアリール基は、トリアゾールである。いくつかの実施形態では、((CH2)mO)n(CH2)m-基及びトリアゾールは、一緒になって以下を含む
【化３】
2021530545.tif 000004
ここで、nは1~10である、及び波線は、更なるリンカー成分、化学的な部分構造Z、又はアマトキシンへの結合の位置を示す。
【００２２】
いくつかの実施形態では、Amは、丁度1個のRC置換基を含む。
【００２３】
ある実施形態では、前記ADCのリンカーは、N-ベータ-マレイミドプロピオニル-Val-Ala-パラアミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び前記化学的な部分構造Zは、L-Zとして一緒になって、以下である、
【化４】
2021530545.tif 000005
ここで、Sは、CD2に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である(例えば、システイン残基の-SH基に由来する)。
【００２４】
いくつかの実施形態では、L-Zは、
【化５】
2021530545.tif 000006
である。
【００２５】
ある実施形態では、前記ADCは、以下の構造の何れか一つによって表される：
【化６】
2021530545.tif 000007
。
【００２６】
ある実施形態では、前記ADCは、以下の構造の何れか一つによって表される：
【化７】
2021530545.tif 000008
又は
【化８】
2021530545.tif 000009
。
【００２７】
ある特定の実施形態では、前記ADCは、3日以下の血清半減期を有する。
【００２８】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞外ドメインは、scFv抗体、又は単鎖T細胞レセプター(scTCR)を含む。
【００２９】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞外ドメインは、非-免疫グロブリン・スキャフォールド・タンパク質(scaffold protein)を含む。
【００３０】
ある特定の実施形態では、前記腫瘍抗原は、CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、メソテリン、CD38、PD1、EGFR(例えば、EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D、又はCD123からなる群から選択される抗原である。
【００３１】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD28細胞内シグナリング・ドメイン、CD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメイン、OX40細胞内シグナリング・ドメイン、及び／又はCD137(4-1BB)細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【００３２】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【００３３】
ある特定の実施形態では、がんを有するヒト対象は、白血病、成人進行がん、膵臓がん、切除不能な膵臓がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、卵巣がん、トリプル-ネガティブ乳がん、造血系／リンパ系がん、大腸がん肝臓転移、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、B細胞リンパ腫、再発性又は難治性B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、再発性又は難治性びまん性大細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫、再発性縦隔、難治性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、大細胞型B細胞リンパ腫、ホジキン・リンパ腫、非-ホジキン・リンパ腫、再発又は難治性非-ホジキンリンパ腫、難治性進行性非-ホジキンリンパ腫、B細胞性非-ホジキン・リンパ腫、難治性非-ホジキンリンパ腫、結腸直腸がん腫(colorectal carcinoma)、胃がん(gastric carcinoma)、膵がん(pancreatic carcinoma)、トリプルネガティブ浸潤性乳がん(triple-negative invasive breast carcinoma)、腎細胞がん(renal cell carcinoma)、肺扁平上皮がん(lung squamous cell carcinoma)、肝細胞がん(hepatocellularcarcinoma)、尿路上皮がん(urothelial carcinoma)、白血病、B細胞性白血病、B細胞性急性リンパ球性白血病（B-cell acute lymphocytic leukemia）、B細胞性急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、成人急性リンパ芽球性白血病、B細胞性前リンパ球性白血病（B-cell prolymphocytic leukemia）、小児急性リンパ芽球性白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia)、難治性小児急性リンパ芽球性白血病(refractory childhood acute lymphoblastic leukemia)、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、再発性プラズマ細胞性骨髄腫(recurrent plasma cell myeloma)、難治性プラズマ細胞性骨髄腫(refractory plasma cell myeloma)、多発性骨髄腫、再発性又は難治性多発性骨髄腫、骨の多発性骨髄腫、脳の悪性神経膠腫(malignant glioma of brain)、骨髄異形成症候群、EGFR陽性結腸直腸がん、多形性膠芽腫(glioblastoma multiforme)、新生物、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm)、肝臓転移、固形腫瘍、進行性固形腫瘍(advanced solid tumor)、メソテリン陽性腫瘍(mesothelin positive tumor)、血液悪性腫瘍、及びその他の進行した悪性腫瘍、からなる群から選択されるがんを有する。
【００３４】
上記の態様の何れかのある特定の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下の表４に記載するように、CDRの組合せ(即ち、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及びCDR-L3領域)を含む。ある特定の実施形態では、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメントは、以下の表４に記載するような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の組合せを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、示した抗-CD2抗体又はネガティブ・コントロール(即ち、mIgG1)の各々をMOLT-4細胞(即ち、ヒトTリンパ芽球細胞株)と共にインキュベートし、続いて蛍光色素がコンジュゲートした抗-IgG抗体とインキュベートした、in vitro細胞株結合アッセイの結果をグラフで示す。シグナルをフロー・サイトメトリーにより検出し、抗-CD2抗体濃度(x軸)を横軸とした、蛍光強度の幾何平均(y軸)として示す。
【図２】図２は、示した抗-CD2抗体(RPA-2.10 又は「CD2 RPA-2.10」)又はネガティブ・コントロール(即ち、mIgG1)を初代ヒトT-細胞と共にインキュベートし、続いて蛍光色素がコンジュゲートした抗-IgG抗体とインキュベートした、in vitro初代細胞結合アッセイの結果をグラフで示す。シグナルをフロー・サイトメトリーにより検出し、抗-CD2抗体の濃度(x軸) を横軸とした、蛍光強度の幾何平均(y軸)として示す。
【図３】図３Ａ及び３Ｂは、薬物対抗体比(drug-to-antibody ratio)の平均が6で (図３Ａ)、鎖間コンジュゲートしたアマニチン、又は薬物対抗体比(drug-to-antibody ratio)が2で(図３Ｂ)、部位特異的にコンジュゲートしたアマニチン、を有する抗-CD2-アマニチンADC(即ち、RPA-2.10-AM又は「CD2 RPA-2.10-AM」)を含むin vitro T細胞傷害アッセイの結果をグラフで示す。図３Ａでは、抗-CD2 ADC T-細胞傷害解析を、非-コンジュゲートの抗-CD2抗体(即ち、「CD2 RPA-2.10 NAKED」)と比較して示す。図３Ｂでは、抗-CD2 ADC T-細胞傷害解析を、前記抗体の半減期を減少させるH435A変異(即ち、「CD2 RPA-2.10 D265C.H435A AM」)を有する抗-CD2抗体と比較して示す。本結果は、フロー・サイトメトリーを用いて評価した、ADC(CD2 RPA-2.10 AM、CD2 RPA-2.10 D265C.H435A AM)又は非-コンジュゲートの抗体(CD2 RPA-2.10 NAKED)の濃度(x軸)を横軸とした、生存可能なT-細胞の数(y軸)として示す。
【図４】図４は、薬剤対抗体比が6の鎖間コンジュゲートしたアマニチンを有する抗-CD2-アマニチンADC(即ち、RPA-2.10-AM又は「CD2 RPA-2.10-AM」)を含むin vitroナチュラル・キラー(NK)細胞傷害アッセイの結果をグラフで示す。本結果は、CellTiter Gloアッセイを用いて評価した場合、ADC(CD2 RPA-2.10-AM)又はコントロール抗体(即ち、hIgG1、hIgG1-アマニチン(「hIgG1-AM」)、又はCD45-アマニチン(「CD45 AM」))濃度を横軸とした(x軸)、生存NK-細胞のレベル(y軸)を示す。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは、鎖間薬剤対抗体比率が6である抗CD2-アマニチンADC(即ち、RPA-2.10-AM又は「CD2 RPA-2.10-AM」)の0.3 mg/kg、1 mg/kg、又は3 mg/kgの単回投与7日後のヒト化NSGマウスの末梢血(図５Ａ)及び骨髄(図５Ｂ)におけるT-細胞(CD3+細胞; y軸)の絶対的レベルを示す、in vivo T-細胞減少アッセイの結果を図示する。比較のために、図５Ａ及び５Ｂはまた、25 mg/kgの非-コンジュゲートの抗CD2抗体(すなわち、「CD2 Ab1」)又は示したコントロール(即ち、25 mg/kgの抗-CD52抗体(クローンYTH34.5);3 mg/kgのhIgG1-アマニチンADC(「hIgG1-AM」)、25 mg/kgのhIgG1、又はPBS)によってヒト化NSGマウスを処置後の、T?細胞減少のレベルも示す。
【図６】図６Ａ~６Ｃは、部位特異的に約2の薬剤対抗体比を有する抗CD2-アマニチンADC(すなわち、RPA-2.10-AM又「CD2 RPA-2.10-AM」)の1 mg/kg又は3 mg/kgの単回投与7日後のヒト化NSGマウスの末梢血(図６Ａ)、骨髄(図６Ｂ)、及び胸腺(図６Ｃ)におけるT-細胞(CD3+細胞; y軸)の絶対的レベルを示す、in vivo T-細胞減少アッセイの結果を図示する。比較のために、図６Ａ-６Ｃはまた、3 mg/kgの非-コンジュゲートの抗-CD2抗体(即ち、「CD2 RPA-2.10」)又は示したコントロール(即ち、3 mg/kgのhIgG1-アマニチン-ADC(「hIgG1-AM」)又はPBS)によってヒト化NSGマウスを処置後の、T-細胞減少のレベルも示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
［詳細な説明］
本発明は、CAR療法を受けている患者に抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与することにより、CAR療法を受けているヒト対象において、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞(自己又は同種異系)の受容を促進する方法を提供する。本明細書中に開示する方法を、CARを発現する免疫細胞の拒絶を減少させるためのコンディショニング療法として一般的に使用するリンパ球除去化学療法に依存することなく(又は代わりにその使用を減らして)、自己又は同種異系免疫細胞(例えば、T 細胞)の受容を改善するために使用することがある。
【００３７】
１．定義
本明細書中で使用される場合、用語「約」は、記載される値より5%高い値又は低い値をいう。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「同種異系」は、移植の文脈において使用する場合、ドナー(donor)から同じ種のレシピエント(recipient)に移植する細胞(又は組織若しくは臓器)を定義するために使用する、ここで、前記ドナー(donor)及び前記レシピエント(recipient)は同じ対象ではない。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、用語「自己」は、ドナー(donor)及びレシピエント(recipient)が同じ対象である細胞又はグラフトを指す。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「異種」は、ドナー(donor)及びレシピエント(recipient)の種が異なっている細胞を指す。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「免疫細胞」は、限定されるものではないが、造血起源であり、及び免疫反応において役割を果たす細胞を含むことが意図される。免疫細胞としては、限定されるものではないが、T細胞及びナチュラル・キラー(NK)細胞が挙げられる。ナチュラル・キラー細胞は、当技術分野で周知である。ある実施形態では、ナチュラル・キラー細胞として、NK-92細胞などの細胞株が挙げられる。NK細胞株の更なる例としては、NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS細胞、及びNKL細胞が挙げられる。免疫細胞は、同種異系又は自己であることがある。
【００４２】
「操作した細胞」は、遺伝子、DNA若しくはRNA配列、又はタンパク質若しくはポリぺポリペプチドの付加又は改変によって、改変した、形質転換した、又は操作した任意の生物の任意の細胞を意味する。本開示の単離した細胞、宿主細胞、及び遺伝子操作した細胞としては、CARをコードするDNA又はRNA配列を含み、細胞表層にCARを発現するNK細胞及びT細胞などの、単離された免疫細胞が挙げられる。単離した宿主細胞及び操作した細胞を、例えば、NK細胞活性又はTリンパ球活性を増強する、がんを治療する、及び自己免疫疾患を治療するために使用することがある。ある実施形態では、前記操作した細胞として、免疫細胞、例えば、T-細胞又はナチュラル・キラー(NK細胞)、が挙げられる。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合する、又は特定の抗原と免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子をいう。抗体としては、限定されるものではないが、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、マルチスペシフィック抗体(multispecific antibody)(例えば、バイスペシフィック抗体(bispecific antibody))、及び抗体フラグメントが挙げられる。
【００４４】
一般的に、抗体は、抗原結合領域を含む重鎖及び軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域(本明細書では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域から構成される。前記重鎖定常領域は、3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域から構成される。前記軽鎖定常領域は、1つのドメイン（CL）から構成される。前記VH及びVL領域は、超可変性の領域（相補性決定領域(CDR)と呼ばれる）に更に細分化することができ、より保存された領域（骨格領域(FR)と呼ばれる）が点在する。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、以下の順序で配列する：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。前記抗体の定常領域は、前記免疫グロブリンが宿主の組織又は因子（例えば、免疫システムの種々の細胞(例、エフェクター細胞)及び古典的補体システムの第一成分(C1q)等）に結合することを、仲立ちすることがある。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、用語「抗原結合フラグメント」は、ターゲット抗原に特異的に結合する作用能を保持する抗体の1つ以上の部分をいう。抗体の抗原結合機能を、全長抗体のフラグメントによって果たすことができる。前記抗体フラグメントは、例えば、Fab、F(ab')2、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であることがある。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：(i)Fabフラグメント、VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる一価フラグメント；(ii)F(ab')2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した、2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；(iii) VH及びCH1ドメインからなるFdフラグメント；(iv)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント；(v) VH及びVLドメインを含むdAb；(vi) VHドメインからなるdAbフラグメント(例えば、Ward et al., Nature 341:544-546、1989を参照のこと)；(vii) VH又はVLドメインからなるdAb；(viii)単離した相補性決定領域(CDR)；並びに(ix)合成リンカーによって任意選択的に連結することがある2つ以上(例えば、2つ、3つ、4つ、5つ、又は6つ)の単離したCDRの組み合わせ。更に、Fvフラグメントの2つのドメイン（VL及びVH）は、別々の遺伝子によってコードされているが、それらを、組換え方法を使用することで、リンカーによって連結して、単一タンパク質鎖（VL及びVH領域が対になって一価分子を形成する）とすることができる(単鎖Fv(scFv)として公知である；例えば、Bird et al.,Science 242:423-426, 1988 及びHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988を参照のこと)。これらの抗体フラグメントを、当業者に公知の従来の技術を使用して入手することができ、及び前記フラグメントを、インタクトな抗体と同じ様式で、有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合フラグメントを、組換えDNA技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的な又は化学的な切断によって、又は、ある場合には、当該技術分野で公知の化学的ペプチド合成手順によって、産生することができる。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、「インタクト」又は「全長」抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された2つの重(H)鎖ポリペプチド及び2つの軽(L)鎖ポリペプチドを有する抗体を指す。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、「抗-CD2抗体」又は「CD2に結合する抗体」又は「抗-CD2 ADC」又は「CD2に結合するADC」という用語は、CD2がT細胞などの細胞の細胞表面上に見出される場合、ヒトCD2に特異的に結合する抗体又はADCを指す。抗-CD2抗体(又は抗-CD2 ADC)が結合するヒトCD2のアミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 7として、以下に記載する。
【００４８】
用語「特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、抗体(又はADC)が、タンパク質一般というよりも、特異的なタンパク質構造(エピトープ)を認識し、結合する能力を指す。抗体がエピトープ「A」に特異的である場合、標識した「A」及び前記抗体を含む反応において、エピトープA(又は遊離の、非標識のA)を含む分子が存在すると、前記抗体に結合する標識したAの量が減少する。例えば、抗体は（標識されている場合）、対応する非標識抗体によってそのターゲットから競合して離れることができる場合、ターゲットに「特異的に結合する」。ある実施形態では、抗体は、ターゲット（例えば、CD2）に特異的に結合する（前記抗体が、少なくとも約10-4 M、10-5M、10-6 M、10-7 M、10-8 M、10-9 M、10-10 M、10-11 M、10-12 M、又はそれ未満(未満とは、10-12未満の数値を意味する、例えば10-13)の、前記ターゲットに対するKDを有する場合）。ある実施形態では、「CD2に対する特異的な結合」又は「CD2に特異的に結合する」という用語は、本明細書中で使用される場合、又はCD2に結合し、そして表面プラズモン共鳴によって決定されるように、1.0×10-7 M以下の酸解離定数(KD)を有する、抗体を指す。ある実施形態では、KDを、標準的なバイオレイヤー干渉法(Bio-Layer Interferometry)(BLI)に従って測定する。しかし、前記抗体は、配列が関連する2つ以上の抗原に特異的に結合することができることを理解されたい。例えば、ある実施形態では、抗体は、CD2のヒト及び非-ヒト(例えば、マウス又は非-ヒト霊長類)オルソログの両方に特異的に結合することがある。
【００４９】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、任意の真核生物、原核生物、又はファージクローンを含む単一のクローンから、当技術分野で利用可能な、又は公知の任意の手段によって、得られる。本開示と供に有用なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、及びファージ・ディスプレイ技術、又はそれらの組合せを使用することを含む、当技術分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。
【００５０】
本明細書で使用される用語「キメラ」抗体は、ラット又はマウス抗体などの非-ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列、及び典型的にはヒト免疫グロブリン・テンプレートから選択されるヒト免疫グロブリン定常領域、を有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; U.S. Pat. Nos. 5,807,715; 4,816,567; 及び 4,816,397を参照のこと。
【００５１】
非-ヒト(例えば、マウス)抗体の「ヒト化」形態は、非-ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限に含むキメラ免疫グロブリンである。概して、ヒト化抗体は少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、CDR領域の全て又は実質的に全ては非-ヒト免疫グロブリンのものに対応し、FR領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。前記ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン・コンセンサス配列の少なくとも一部を含むことがある。抗体ヒト化の方法は、当該分野で公知である。例えば、Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7; U.S. Pat. Nos. 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; and 6,180,370 to Queen et al.; EP239400; PCT publication WO 91/09967; U.S. Pat. No. 5,225,539; EP592106; EP519596; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814; Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973; 及び U.S. Pat. No. 5,565,332を参照。 
【００５２】
本明細書中で使用される場合、用語「キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)」又は「CAR」は、抗原に特異的に結合し得る少なくとも1つの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも1つの細胞内シグナリング・ドメインを含む組換えポリぺプチドをいう。一般に、CARは、免疫エフェクター細胞の細胞傷害性を、所定の抗原を提示する細胞に向けるように遺伝子操作をしたレセプターである。CARは、所望の抗原(例えば、腫瘍抗原)に対する抗体ベースの特異性を、T細胞受容体-活性化細胞内ドメインと組み合わせて、特異的な細胞性免疫活性を示すキメラ・タンパク質を生成する分子である。特定の実施形態では、CARは、細胞外ドメイン(結合ドメイン又は抗原特異的結合ドメインとも呼ばれる)、膜貫通ドメイン、及び細胞内(細胞質)シグナリング・ドメインを含む。前記CARの抗原結合ドメインが、ターゲット細胞の表面上のターゲット抗原と結合すると、前記CARはクラスター化し、活性化刺激をCAR含有細胞に送る。CARの主要な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を転換する作用能であり、それにより、モノクローナル抗体、可溶性リガンド又は細胞特異的コ-レセプターの細胞特異的ターゲティングの作用能を利用しながら、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシス又は主要組織適合性(MHC)非依存的に、ターゲット抗原を発現する細胞の細胞死を媒介することができる分子の産生をトリガーする。いくつかの実施形態では、CARは、腫瘍抗原に特異的に結合する細胞外結合ドメイン；膜貫通ドメイン；及び1つ以上の細胞内シグナリング・ドメインを含む。様々な実施形態では、CARは、ヒトCD2に特異的に結合する細胞外結合ドメイン；膜貫通ドメイン；及び1つ以上の細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、用語「CAR療法」は、CARを発現するように操作した免疫細胞を、所与の疾患(例えば、がん又は自己免疫疾患)を治療するために、ヒト対象へ投与することを言う。CAR療法は、操作した免疫細胞を使って、前記患者を特異的に治療することをいい、そしてCAR細胞療法と併せて一般的に使用される療法(例えば、リンパ球除去化学療法)を含むことは意図されない。特に、用語「細胞」が全体を通して使用される場合、細胞の集団もまた、特に明記されない限り、この用語に含まれる。例えば、CAR療法は、捜査した細胞の集団を投与することを必要とする。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、用語「併用」又は「併用療法」は、単一のヒト患者において、2つ(又はそれ以上)の治療を使用することをいう。これらの用語は、合剤組成物を指すことを意図していない。例えば、本明細書に記載することは、抗-CD2 ADCを投与すること及びCAR療法、を含む併用療法である。
【００５５】
用語「コンディショニング」は、CAR療法を必要とする患者を、好適な条件のために、準備をすることを指す。本明細書中で使用されるコンディショニングとしては、限定されるものではないが、内因性リンパ球の数を減少させること、サイトカイン・シンク（cytokine sink）を除去すること、1種以上のホメオスタシス・サイトカイン又は向-炎症性因子の血清中レベルを増加させること、コンディショニング後に投与するT細胞のエフェクター機能を増強すること、抗原提示細胞の活性化及び／又は利用可能性を増強すること、又はT細胞療法前のそれらの任意の組合せ、が挙げられる。
【００５６】
用語「減少させる（deplete）」は、CD2発現細胞に対する抗-CD2抗体又はADCの効果に関する文脈において、CD2発現細胞を、数で減少させる又は排除することを指す。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、用語「有効量」又は「治療有効量」は、所望の結果を達成するために、又は自己免疫疾患若しくはがんに対する効果を有するために、十分な量をいう。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、本明細書中に記載するような特定の疾患又は症状のための治療を受ける、ヒトのような生物をいう。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「治療する」又は「治療」は、疾患の任意の結果に対して任意の向上(例えば、生存期間の延長、より少ない罹患率、及び／又は代替の治療モダリティの副産物である副作用の減少)をもたらすことを言う；当該分野で容易に認識されるように、疾患の完全な根絶は好ましいが、治療行為の必要条件ではない。有益な又は所望の臨床成績としては、限定されるものではないが、CARを発現する免疫細胞(同種異系又は自己−いずれもCAR療法を受けている患者において免疫反応を引き起こし得る)の受容を促進することが挙げられる。本発明の方法が障害を予防することに向けられる限り、用語「予防する」は、前記疾患の状態が完全に阻止されることを必要としないことが理解される。寧ろ、本明細書中で使用される場合、用語の予防することとは、障害に対して感受性がある集団を同定する当業者の能力をいい、その結果、疾患が発症する前に、本発明の化合物を投与することがある。前記用語は、疾患の状態を完全に回避することを意味するものではない。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、DNAベクター、プラスミド、RNAベクター、ウイルス、又は他の好適なレプリコン等の、核酸ベクターを含む。本明細書中に記載する発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、並びに、例えば、タンパク質を発現させる及び／又は哺乳動物細胞のゲノムの中にこれらのポリヌクレオチド配列を組み込ませるために使用する更なる配列エレメントを含むことがある。CARを発現させるのに用いることができる特定のベクターとしては、遺伝子転写を指示する調節配列（例えば、プロモータ領域及びエンハンサー領域等）を含むプラスミドが挙げられる。抗体又はCARを発現させるための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳効率を高めるか、又は遺伝子転写から生じるmRNAの安定性又は核外への移行を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列要素は、例えば、発現ベクター上にある遺伝子を効率的に転写するようにするために、5'及び3'非翻訳領域及びポリアデニル化シグナル部位を含むことがある。本明細書中に記載する発現ベクターはまた、このようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含むこともある。好適なマーカーの例としては、アンピシリン、クロラムフェニコール、  カナマイシン、及びノウルセオスリシン(nourseothricin)等の抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が挙げられる。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体薬物コンジュゲート」又は「ADC」は、細胞毒素に連結した抗体を指す。ADCは、ある分子(例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント)の反応性官能基と、別の分子(例えば、本明細書中に記載する細胞毒素)の適切な反応性官能基との化学結合によって形成される。コンジュゲートは互いに結合した2つの分子間(例えば、抗体と細胞毒素との間)にリンカーを含むことがある。特に、用語「コンジュゲート」(化合物をいう場合)はまた、本明細書中で、「薬物コンジュゲート」、「抗体薬物コンジュゲート」又は「ADC」とも、互換的に称される。コンジュゲートの形成に用いることができるリンカーの例としては、ペプチド含有リンカー（例えば、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸、例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー）が挙げられる。リンカーを、本明細書中に記載する、及び当該技術分野で公知である、種々のストラテジーを使用して調製することがある。その中の反応性成分に依存して、リンカーを、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって、切断することがある(例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照のこと)。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、用語「カップリング反応」は、互いに反応するのに適した2つ以上の置換基が反応して、それぞれの置換基に結合した分子フラグメントが(例えば、共有結合的に)結合した化学的な部分構造を形成する化学反応を指す。カップリング反応には、細胞毒素（例えば、当該技術分野で公知の又は本明細書中に記載する細胞毒素）であるフラグメントに結合した反応性置換基が、抗体、又はその抗原結合フラグメント（例えば、当該技術分野で公知の若しくは本明細書中に記載される、CD2に結合する、抗体、その抗原結合フラグメント、又は特異的な抗-CD2抗体）であるフラグメントに結合した好適な反応性置換基と反応する反応が含まれる。好適な反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、特に、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対)等が挙げられる。カップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、特に、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本明細書に記載されている他の反応様式が挙げられる。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「微小管結合剤」という語は、細胞における有糸分裂及び間期細胞機能に必須である微小管ネットワークを破壊することによって作用する化合物をいう。微小管結合剤の例としては、限定されるものではないが、メイタシン、メイタンシノイド、及びそれらの誘導体(本明細書に記載するか、又は当該技術分野で公知のものなど)、ビンブラスチン、ビンブラスチン硫酸、ビンクリスチン、ビンクリスチン硫酸、ビンデシン、及びビノレルビン等のビンカ・アルカロイド、ドセタキセル及びパクリタキセル等のタキサン、ディスコデルモリド、コルヒチン(cochicine)及びエポチロン等のマクロライド、並びにそれらの誘導体(エポチロンB又はそれらの誘導体など)が挙げられる。
【００６４】
本明細書中で使用される場合、用語「アマトキシン」は、Amanita phalloides mushroomsによって産生されるペプチドのアマトキシン・ファミリーのメンバー、又はその誘導体（例えば、RNAポリメラーゼII活性を阻害し得るそのバリアント若しくは誘導体）のことをいう。アマトキシンを、種々のキノコ種(例えば、Amanita phalloides、Galerina marginata、Lepiota brunneo-incarnata)から単離することがある、又は半合成的若しくは合成的に調製することがある。このファミリーのメンバー（α-アマニチン）は、Wieland, Int. J. Pept. Protein Res.1983, 22(3):257-276に記載されている。アマトキシンの誘導体を、天然に存在する化合物を化学的に改変すること(「半合成」)によって得ることがある、又は完全に合成の供給源から得ることがある。種々のアマトキシン誘導体の合成経路は、例えば、米国特許第9,676,702 及びPerrin et al., J. Am. Chem. Soc. 2018, 140, p. 6513-6517に記載されている(これらの各々は、アマトキシンを調製する及び誘導体化するための合成方法に関して、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)。
【００６５】
本明細書に記載する組成物及び方法と併用して有用なアマトキシンとしては、式(II)の化合物（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリン）が挙げられる。本明細書中に記載するように、アマトキシンを、例えば、リンカー部分(L)を介して、抗体、又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせることがある（これにより、ADCを形成する)。例示的なアマトキシン-リンカー・コンジュゲートの構造は、式(III)、(IIIA)、及び(IIIB)によって表される。アマトキシンをコンジュゲートする例示的な方法及びそのようなプロセスに有用なリンカーを以下に記載する。前記組成物及び方法による、抗体、又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲートに有用な、例示的なリンカー含有アマトキシンもまた、本明細書に記載する。
【００６６】
本明細書で使用される用語「アシル」は、-C(=O)Rを指す、ここで、本明細書で定義されるように、RはH(「アルデヒド」)、C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、C2-C12アルキニル、C3-C7カルボシクリル、C6-C20アリール、5-10員ヘテロアリール、又は5-10員ヘテロシクリルである。非限定的な例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリロイルが挙げられる。
【００６７】
本明細書で使用される用語「C1-C12アルキル」は、1〜12個の炭素原子を有する直鎖又は分岐の飽和炭化水素を指す。代表的なC1-C12アルキル基としては、限定されるものではないが、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、及び-n-ヘキシルが挙げられる；一方、分岐C1-C12アルキルとしては、限定されるものではないが、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、及び2-メチルブチルが挙げられる。C1-C12のアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６８】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp2二重結合、を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：エチレン又はビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられる。アルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６９】
本明細書で使用される「アルキニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp三重結合を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、アセチレン及びプロパルギルが挙げられる。アルキニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７０】
本明細書で使用される「アリール」は、C6-C20炭素環芳香族基を指す。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。アリール基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７１】
本明細書で使用される「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。代表的なアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが挙げられる。前記アリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分（例えば、アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる）は1〜6個の炭素原子であり、アリール部分は5〜14個の炭素原子である。アルカリル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７２】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式又は二環式であることがある。シクロアルキル基としては、単環として3〜7個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環が挙げられる。単環式シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。シクロアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７３】
本明細書で使用される「シクロアルケニル」は不飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式でも二環式でもよい。シクロアルケニル基としては、単環として3〜6個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環が挙げられる。単環式シクロアルケニル基の例としては、1-シクロペント-1-エニル、1-シクロペント-2-エニル、1-シクロペント-3-エニル、1-シクロヘキサ-1-エニル、1-シクロヘキサ-2-エニル、及び1-シクロヘキサ-3-エニルが挙げられる。シクロアルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７４】
本明細書で使用される「ヘテロアラルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがヘテロアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等が挙げられる。前記ヘテロアリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分(アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる)は1〜6個の炭素原子である、並びにヘテロアリール部分は5〜14個の炭素原子である並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子である。前記ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。
【００７５】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ芳香族又は非芳香族環システムを指し、ここで1つ以上の環原子は、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、及び硫黄である。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル・ラジカルは、2〜20個の炭素原子及びN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルは、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７６】
ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキル基は、Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), 特に1, 3, 4, 6, 7, 及び 9章; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 特に Volumes 13, 14, 16, 19, 及び 28; 並びに J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566、に記載されている。
【００７７】
ヘテロアリール基の例としては、例えば、限定されるものではないが、ピリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイサチノイルが挙げられる。
【００７８】
ヘテロシクロアルキルの例としては、例えば、限定されるものではないが、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、及びモルホリニルが挙げられる。
【００７９】
限定ではなく例として、炭素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、ピリジンの2、3、4、5、若しくは6位、ピリダジンの3、4、5、若しくは6位、ピリミジンの2、4、5、若しくは6位、ピラジンの2、3、5、若しくは6位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの2、3、4、若しくは5位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの2、4、若しくは5位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの3、4、若しくは5位、アジリジンの2、若しくは3位、アゼチジンの2、3若しくは4位、キノリンの2、3、4、5、6、7、若しくは8位、又はイソキノリンの1、3、4、5、6、7、若しくは8位、で結合する。更に典型的には、炭素結合ヘテロシクリルとしては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、又は5-チアゾリルが挙げられる。
【００８０】
限定ではなく例として、窒素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの1位で、イソインドール又はイソインドリンの2位、モルホリンの4位、及びカルバゾール又はベータ・カルボリンの9位、に結合している。更に典型的には、窒素結合ヘテロ環としては、1-アジリジル、1-アゼテジル(1-azetedyl)、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、及び1-ピペリジニルが挙げられる。
【００８１】
本明細書で使用される、並びに上記のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルなどの何れかに適用される、「置換された」とは1個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基で置換されていることを意味する。
【００８２】
典型的な置換基には、限定されるものではないが、-X, -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+(R)3, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -NO, -NO2, -N3, -NC(=O)H, -NC(=O)R,  -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH2,  -C(=O)N(R)2, -SO3-, -SO3H, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NH2, -S(=O)2N(R)2, -S(=O)R, -OP(=O)(OH)2, -OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)2, -PO3, -PO3H2, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO2H, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, -C(=S)NH2, -C(=S)N(R)2, -C(=NH)NH2, 及び -C(=NR)N(R)2、が含まれる；ここで、各Xは、F、Cl、Br、及びIから、それぞれの場合について独立に選択される；及び、各Rは、C1-C12アルキル、C6-C20アリール、C3-C14ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール、保護基及びプロドラック部分から、それぞれの場合について独立に選択される。基が「任意選択的に置換される」と記載されている場合はどんな場合でも、その基は、それぞれの場合について独立に、1個以上の上記の置換基で置換されることがある。
【００８３】
あるラジカルの命名規則には、状況に応じて、モノ-ラジカル又はジ-ラジカルの何れかが含まれうることを理解しておく必要がある。例えば、置換基が分子の残りの部分への2つの結合の位置を必要とする場合、前記置換基はジ-ラジカルであると理解される。例えば、2点の結合の位置を必要とするアルキルとして識別される置換基には、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、等のジ-ラジカルが含まれる。他のラジカル命名規則は、前記ラジカルが「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」等のようなジ-ラジカルであることを明確に示す。
【００８４】
置換基がジ-ラジカルとして示される(即ち、分子の残りの部分への2つの結合の位置を有する)場合はどこでも、前記置換基は、別段の指示がない限り、任意の方向性配置で結合することができることを理解されたい。
【００８５】
「異性 (Isomerism)」とは、同一の分子式を有するが、その原子の結合の配列、又はその原子の空間配置が異なる化合物を意味する。その原子の空間配置が異なる異性体を「立体異性体」と呼ぶ。互いに鏡像関係にない立体異性体を「ジアステレオマー」と呼ぶ、及び互いに重ね合わせることができない、鏡像関係にある立体異性体を「エナンチオマー」と呼び、時には「光学異性体」と呼ぶ。
【００８６】
4つの非-同一置換基に結合した炭素原子を「キラル中心」と呼ぶ。「キラル異性体」とは、少なくとも1つのキラル中心を有する化合物を意味する。1つ以上のキラル中心を有する化合物は、個々のジアステレオマーとして、又は「ジアステレオマー混合物(diastereomeric mixture)」と呼ばれるジアステレオマーの混合物として存在することがある。1つのキラル中心が存在する場合、立体異性体は、そのキラル中心の絶対配置(R又はS)によって特徴付けることができる。絶対配置とは、前記キラル中心に結合した置換基の空間配置をいう。検討するキラル中心に結合した置換基を、Cahn、Ingold及びPrelogの配列規則に従ってランク付けする。(Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116)。キラリティーが反対である個々のエナンチオマー形態を等量で含む混合物を、「ラセミ混合物」と呼ぶ。
【００８７】
本明細書及び特許請求の範囲に開示される化合物は、1つ以上の不斉中心を含むことがある、及び、各化合物の異なるジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在することがある。この説明書及び特許請求の範囲にある化合物の記載は、別段の記載がない限り、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー及びそれらの混合物を含むことを意味する。更に、この明細書及び特許請求の範囲にある任意の化合物の記載は、別段の記載がない限り、個々のエナンチオマー、並びに前記エナンチオマーの任意の混合物、ラセミ体又は他のものを含むことを意味する。化合物の構造を特定のエナンチオマーとして描いた場合、本出願の発明は、その特定のエナンチオマーに限定されないことを理解されたい。従って、本開示の各々の構造式のエナンチオマー、光学異性体、及びジアステレオマーが、本明細書中で企図される。本明細書において、前記化合物の構造式は、便宜上、いくつかの場合において、特定の異性体を表すが、本開示は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等のような全ての異性体を含み、全ての異性体が同じレベルの活性を有するわけではないことが理解される。これらの化合物類は、異なる互変異性体形態で存在し得る。本開示による化合物は、別段の記載がない限り、全ての互変異性体の形態を含むことを意味する。化合物の構造を特定の互変異性体として描いた場合、本出願の発明は、その特定の互変異性体に限定されないことが理解されるべきである。
【００８８】
本明細書中に記載する任意の式の化合物は、適用可能であれば、化合物自体、並びにそれらの塩、及びそれらの溶媒和物を含む。例えば、塩は、アニオンと本開示の化合物上の正に荷電した基(例えば、アミノ)との間で形成されることがある。好適なアニオンとしては、塩化物、ブロミド、ヨウ化物、硫酸塩、重硫酸塩、スルファメート、硝酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、グルタミン酸塩、グルクロン酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、サリチル酸塩、乳酸塩、ナフタレンスルホン酸塩及び酢酸塩（例、トリフルオロ酢酸塩）が挙げられる。用語「薬学的に許容可能なアニオン」は、薬学的に許容可能な塩を形成するための好適なアニオンをいう。同様に、塩は、カチオンと本開示の化合物上の負に荷電した基(例えば、カルボキシレート)との間で形成されることがある。好適なカチオンとしては、ナトリウム・イオン、カリウム・イオン、マグネシウム・イオン、カルシウム・イオン、及びテトラメチルアンモニウム・イオンなどのアンモニウム・カチオンが挙げられる。いくつかの好適な置換アンモニウム・イオンの例としては、以下から誘導したものが挙げられる：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、リジン及びアルギニンなどのアミノ酸。本開示の化合物はまた、第四級窒素原子を含有する塩を含む。
【００８９】
好適な無機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下の無機酸から誘導されるものが挙げられる：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン(phosphoric)及びリン(phosphorous)。好適な有機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下の有機酸から誘導されるものが挙げられる：2-アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファルスルホン酸、桂皮皮、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレン・カルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルフォン酸、及び吉草酸。好適なポリマー有機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下のポリマー酸から誘導されるものが挙げられる：タンニン酸、カルボキシメチル・セルロース。
【００９０】
更に、本開示の化合物（例えば、前記化合物の塩）は、含水若しくは非含水(無水)形態で、又は他の溶媒分子との溶媒和物として存在することがある。水和物の非限定的な例としては、一水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非限定的な例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。「溶媒和物」は、化学量論的な量又は非化学量論的な量の何れかの溶媒を含有する、溶媒が付加された形態を意味する。いくつかの化合物は、結晶性の固相中に、固定したモル比率の溶媒分子を補足する傾向を有し、それによって溶媒和物を形成する。前記溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である；及び前記溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物とは、1分子の物質と1分子以上の水の組合せによって形成され、その中では、水がH2Oとしての分子状態を保持する。水和物とは、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などを指す。
【００９１】
更に、本明細書中に開示する式が表す化合物又はその塩について、結晶多型が存在することがある。任意の結晶形態、結晶形態の混合物、又はそれらの無水物若しくは水和物が、本開示の範囲に含まれることに留意されたい。
【００９２】
以下の節では、CAR療法において、CARを発現する免疫細胞の受容を促進するために、ヒトに抗-CD2 ADCを投与することに基づく方法に関して記載する。
【００９３】
II．抗-CD2抗体及びCARの治療に関する方法
キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)療法の課題は、遺伝子操作したCAR発現細胞（例えば、CAR-T細胞）を、ヒト・レシピエント(recipient)が受容することができるようになる手段を決定することである。このような操作した免疫細胞の受容は、治療の有効性に影響を及ぼし、また、患者に有害な副作用をもたらす可能性がある。
【００９４】
リンパ球除去化学療法は、レシピエント(recipient)の免疫システムを抑制し、受容を改善する、従来からある方法であるが、一般的に有害な副作用がある。CAR療法を受けているヒト患者において、(CARを)発現する免疫細胞の受容を促進する方法を本明細書に記載する。本明細書中に記載する方法は、CAR療法を受けているヒト患者において、CD2+細胞(例えば、CD2+ T細胞)を特異的にターゲットとする、及びCD2+細胞を除去する。本明細書中に開示する方法は、リンパ球除去化学療法よりもターゲット化されたものであり、及び自己又は同種異系細胞の何れかを使用することができる手段を提供する。
【００９５】
CAR発現免疫細胞の受容及び有効性を促進するために、CAR療法を受けている患者内のCD2特異的な免疫細胞の集団を減少させるための抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与する方法を、本明細書に記載する。免疫系のCD2を特異的に発現する細胞を、このように選択的に減少させることにより、自己免疫疾患又はがんを治療するために、CAR発現免疫細胞が拒絶されるリスクを減少させながら、全生存期間及び無再発生存期間が改善される。
【００９６】
CARを発現する免疫細胞が拒絶されるリスクは、CAR細胞療法を処方した後も依然として高くなっている。本明細書中に開示する方法及び組成物は、ヒト患者におけるCAR細胞の拒絶を阻害又は予防するために使用することがある。抗-CD2 ADCを使用して、CAR細胞療法を受ける予定がある患者において、活性化したT細胞を選択的にターゲット化することがある。本明細書中に記載するように、抗-CD2 ADCを使用して、すでにCAR細胞療法を受けたことがあるヒト患者において、CD2陽性細胞をターゲット化する、及び減少させることによって、CAR細胞が拒絶されるリスクを減少させることもある。
【００９７】
本明細書中に記載する組成物及び方法を使用して、CAR細胞療法の拒絶に関連するCD2+細胞(例えば、T細胞)を減少させることがある。本発明の方法は、ヒト対象(例えば、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象)において、CARを発現する免疫細胞の受容を促進する。ある実施形態では、前記方法は、CAR療法を受ける予定がある又は受けたことがあるヒト対象に、抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与すること、及び前記ヒト対象に、CARを発現する免疫細胞の治療有効量を投与すること、を含む。
【００９８】
前記抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する前、それと同時に、又はそれの後に、投与することがある。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、CAR細胞療法を処方する前(例えば、約3日前、約2日前、約12時間前)に、投与する。抗-CD2 ADCの単回用量を、そのような単回用量がCARを発現する免疫細胞の減少のリスクを予防する又は減少させるのに充分である場合、CAR細胞療法を処方する前、後、又は同時に、前記ヒト患者に投与することがある。
【００９９】
ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約3日前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約2日前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約1日前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約20時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約18時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約15時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約12時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約6時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約4時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約2時間前に、投与する。
【０１００】
ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、CAR細胞療法を処方すると同時に、投与する。
【０１０１】
ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約2時間後に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約4時間後に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約6時間後に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約12時間後に、投与する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、1つ以上のCAR細胞療法を処方する約21日前まで（例えば、1つ以上のCAR細胞療法を処方する約21日前、例えば、約21日前、約20日前、約19日前、約18日前、約17日前、約16日前、約15日前、約14日前、約13日前、約12日前、約11日前、約10日前、約9日前、約8日前、約7日前、約6日前、約5日前、約4日前、約3日前、約2日前、約1日前、約24時間前、約12時間前、約6時間前、約3時間前、約2時間前、又は約1時間前）に投与することがある。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR細胞療法を処方する約12時間後（例えば、1つ以上のCAR細胞療法を処方する約12時間後、約11時間後、約10時間後、約9時間後、約8時間後、約7時間後、約6時間後、約5時間後、約4時間後、約3時間後、約2時間後、約1時間後）に投与することがある。いくつかの実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR細胞療法を処方する約10日後（例えば、1つ以上のCAR細胞療法を処方する約10日後、約9日後、約8日後、約7日後、約6日後、約5日後、約4日後、約3日後、約2日後、約1日後）に投与することがある。
【０１０４】
ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR発現免疫細胞を、それを必要とするヒト患者に投与する前に、投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して、前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約12時間~約21日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約18時間~約20日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約20時間~約18日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約1日前~約15日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約1日前~約10日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約2日前~約8日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約3日前~約6日前に、前記ヒト対象に投与する。
【０１０５】
ヒト患者由来の生物学的サンプル中のT細胞の全体的なレベルを、抗-CD2 ADCを投与した後に評価することがある、ここで、抗-CD2 ADCの投与後の、投与前のレベルと比較したヒト患者におけるT細胞の全体的な数の低下は、前記CAR細胞療法が拒絶されることを予防するための、前記抗-CD2 ADCの有効性を示す。ある実施形態では、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル中の、内因性のT細胞のレベルは、前記抗-CD2 ADCを投与する直前の、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル(例えば、同じタイプである、血液)のT細胞のレベルと比較して、少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約15%、少なくとも約20%減少している。ある実施形態では、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル中の、内因性のT細胞のレベルは、前記抗-CD2 ADCを投与する直前の、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル(例えば、同じタイプである、血液)のT細胞のレベルと比較して、約5%~25%、約5%~20%、約5%~15%、又は約5%~10%減少している。ある実施形態では、内因性のT細胞のレベルを、抗-CD2 ADCを投与する1日前以下に、測定する。
【０１０６】
T細胞のレベルを、限定されるものではないが、蛍光活性化細胞選別(FACs)解析又は血液分析器等を含む、当技術分野で公知の標準的な方法に従って決定することができる。
【０１０７】
上述したように、本明細書中に記載する方法の利点の1つは、CAR療法を受けている又は受けることを計画しているヒト患者に処方するコンディショニング・レジメンにおいて、リンパ球除去化学療法剤を減少させることができる、又は含まないようにすることができることである。リンパ球除去化学療法剤、例えば、限定されるわけではないが、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、及び／又はペントスタチンを、CAR療法を受けているヒトにおいて、CARを発現する細胞の受容を促進するための抗-拒絶剤として、一般的には使用する。ある特定の実施形態では、ヒト患者に、例えば、CARを発現する免疫細胞(例えば、T細胞)と併用して、抗-CD2 ADCを投与する。その結果、CARを発現する免疫細胞を投与する前、それと同時に、又はそれの後に、前記ヒト患者は、リンパ球除去化学療法剤（例えば、フルダラビン及び／又はシクロホスファミド）を受けない。
【０１０８】
ヒト対象の内因性の免疫細胞を減少させるための、及びCARを発現する免疫細胞が拒絶されるリスクを減少させるための剤として、抗-CD2 ADCを使用することにより、他の免疫減少剤の使用を回避する又は減少させることもある。例えば、アレムツズマブは、CAR療法を受けているヒトにおいて、CARを発現する細胞の受容を促進するために、CAR療法と併用する抗-拒絶剤として一般的に使用される。ある特定の実施形態では、ヒト患者に、CARを発現する免疫細胞(例えば、T細胞)を投与する前に、それと併用して、抗-CD2 ADCを投与する。その結果、前記ヒト患者は、例えば、CARを発現する免疫細胞(例えば、T細胞)を投与する前、それと同時に、又はそれの後に、アレムツズマブを受けない。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、抗-CD2 ADCを、CARを発現する免疫細胞へのトレランスを促進するために、別の治療と併用して使用する。例えば、抗-CD2 ADCを、前記ヒト患者がCAR療法を受ける前に、前記ヒト患者に投与することがある。抗-CD2 ADCを、抗-CD2 ADCの前、それと同時に、又はそれの後に、投与することがある、ここで、抗-CD2 ADC及び抗-CD2 ADCの両方を、CAR療法の前に、前記ヒト患者に投与する。
【０１１０】
本明細書中に開示する方法を、CARを発現する自己及び同種異系細胞の両方に対して使用することがある。重要なことに、本明細書に記載する抗-CD2 ADCコンディショニング方法は、同種異系細胞へのトレランスを提供することができる手段を提供することによって、CAR療法に使用することができる免疫細胞の種類を拡大するのに役立つ。ある実施形態では、前記CARを発現する免疫細胞は、同種異系細胞又は自己細胞である。CARを発現するように操作することがある免疫細胞のタイプの例としては、限定されるものではないが、同種異系T細胞、自己T細胞、自己NK細胞、又は同種異系NK細胞が挙げられる。
【０１１１】
ある実施形態では、前記抗-CD2抗体-薬物コンジュゲートを使用して、CAR細胞療法を処方した後に前記抗-CD2抗体-薬物コンジュゲートを投与することによって、CD2を発現するドナー(donor)細胞（例えば、CD2を発現する活性化したT細胞）を減少させる。ある実施形態では、前記CAR細胞療法は同種異系細胞を含む。
【０１１２】
本明細書中に開示する方法は、これらの障害のうちの1種を有するヒト対象におけるがん又は自己免疫疾患を治療するのに特に有用である。
【０１１３】
ある実施形態では、本明細書中に開示する方法を使用してがんを治療する。より具体的には、抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用してがんを有するヒト対象に投与する。本明細書に開示する方法を用いて治療することができるがんの種類の例としては、限定されるものではないが、成人進行がん、膵臓がん、切除不能な膵臓がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、卵巣がん、トリプル-ネガティブ乳がん、造血系／リンパ系がん、大腸がん肝臓転移、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、B細胞リンパ腫、再発性又は難治性B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、再発性又は難治性びまん性大細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫、再発性縦隔、難治性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、大細胞型B細胞リンパ腫、ホジキン・リンパ腫、非-ホジキン・リンパ腫、再発又は難治性非-ホジキンリンパ腫、難治性進行性非-ホジキンリンパ腫、B細胞性非-ホジキン・リンパ腫、難治性非-ホジキンリンパ腫、結腸直腸がん腫(colorectal carcinoma)、胃がん(gastric carcinoma)、膵がん(pancreatic carcinoma)、トリプルネガティブ浸潤性乳がん(triple-negative invasive breast carcinoma)、腎細胞がん(renal cell carcinoma)、肺扁平上皮がん(lung squamous cell carcinoma)、肝細胞がん(hepatocellularcarcinoma)、尿路上皮がん(urothelial carcinoma)、白血病、B細胞性白血病、B細胞性急性リンパ球性白血病（B-cell acute lymphocytic leukemia）、B細胞性急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、成人急性リンパ芽球性白血病、B細胞性前リンパ球性白血病（B-cell prolymphocytic leukemia）、小児急性リンパ芽球性白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia)、難治性小児急性リンパ芽球性白血病(refractory childhood acute lymphoblastic leukemia)、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、再発性プラズマ細胞性骨髄腫(recurrent plasma cell myeloma)、難治性プラズマ細胞性骨髄腫(refractory plasma cell myeloma)、多発性骨髄腫、再発性又は難治性多発性骨髄腫、骨の多発性骨髄腫、脳の悪性神経膠腫(malignant glioma of brain)、骨髄異形成症候群、EGFR陽性結腸直腸がん、多形性膠芽腫(glioblastoma multiforme)、新生物、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm)、肝臓転移、固形腫瘍、進行性固形腫瘍(advanced solid tumor)、メソテリン陽性腫瘍(mesothelin positive tumor)、血液悪性腫瘍、及びその他の進行した悪性腫瘍、が挙げられる。
【０１１４】
ある実施形態では、本明細書中に開示する方法を使用して、自己免疫疾患を治療する。より具体的には、抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して、自己免疫疾患を有するヒト対象に投与する。本明細書中に開示する併用方法を使用して治療することがある自己免疫疾患の例としては、限定されるものではないが、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、I型糖尿病、ループス、及び乾癬が挙げられる。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、抗-CD2 ADCを、CAR-T細胞療法と併用してヒト患者に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR-T療法を処方する前に、ヒト患者に投与する。本明細書中に記載する抗-CD2 ADC療法と併用することがあるCAR-T細胞の例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：CD19 CAR-T (e.g., CART-19-01,02,03 (Fujian Medical University); daopeicart (Hebei Senlang Biotechnology Inc.); IM19CART/001,YMCART201702 (Beijing Immunochina Medical Science & Technology Co.); CART-CD19-02,03 (Wuhan Sian Medical Technology Co.); Universal CD19-CART/SHBYCL001,002 (Shanghai Bioray Laboratory Inc.); UnicarTherapy201701 (Shanghai Unicar-Therapy Biomedicine Technology Co.); Genechem/NCT02672501 (Shanghai GeneChem Co.); SenL_19 (Hebei Senlang Biotechnology Inc.); PCAR-019 (PersonGen BioTherapeutics (Suzhou); ICAR19 (Immune Cell, Inc.); WM-CART-02 (Sinobioway Cell Therapy Co.); HenanCH080,109,152 (Henan Cancer Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Co.); IM19-CD28 and IM19-41BB CAR-T cells (Beijing Immunochina Medical Science & Technology Company); CTL019/IT1601-CART19 (Beijing Sanwater Biological Technology Co.); CTL019/CCTL019C2201 (Novartis Pharmaceuticals); CD19:4-1BB:CD28:CD3 / FirstShenzhen01 (Shenzhen Second People’s Hospital / The Beijing Pregene Science and Technology Company); MB-CART19.1 (Shanghai Children’s Medical Center / Miltenyi Biotec GmbH); PZ01 CAR-T cells (Pinze Lifetechnology Co.); YMCART201701 (Beijing Immunochina Medical Science & Technology Co.); 2016YJZ12 (Peking University / Marino Biotechnology Co.); EGFRt/19-28z/4-1BBL CAR T cells (Memorial Sloan Kettering Cancer Center / Juno Therapeutics, Inc.); Doing-002 (Beijing Doing Biomedical Co.); PCAR-019 (PersonGen BioTherapeutics (Suzhou) Co.); C-CAR011 (Peking Union Medical College Hospital / Cellular Biomedicine Group Ltd.); iPD1 CD19 eCAR T cells (Peking University / Marino Biotechnology Co.); 2013-1018/NCT02529813 (M.D. Anderson Cancer Center / Ziopharm / Intrexon Corp.); HenanCH CAR 2-1 (Henan Cancer Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Co.); JCAR015 (Juno Therapeutics, Inc.); JCAR017/017001,004,006 (Juno Therapeutics, Inc.); JCAR017 (Celgene); TBI-1501 (Takara Bio Inc.); JMU-CD19CAR (Jichi Medical University); KTE-C19 (Kite, A Gilead Company); TriCAR-T-CD19 (Timmune Biotech Inc.); PF-05175157 (Fred Hutchinson Cancer Research Center)); CD22/CD30/CD7/BCMA/CD123 (e.g., 2016040/NCT03121625 (Hebei Senlang Biotechnology Inc.)); CD22 (e.g., Ruijin-CAR-01 (Ruijin Hospital / Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.); AUTO-PA1,DB1 (Autolus Limited)), CD20 (e.g., Doing-006 (Beijing Doing Biomedical Co.)); 又はCD20/CD22/CD30 (e.g., SZ5601 (The First Affiliated Hospital of Soochow University Shanghai / Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.))。
【０１１６】
キメラ抗原レセプター(Chimeric Antigen receptor)(CAR)
本発明は、抗-CD2免疫抑制ADCと併用してCAR療法を使用することを含む。本発明は、抗-CD2 ADCが、内因性CD2+免疫細胞（例えば、内因性のT細胞など）を除去することによるCAR発現細胞の受容を促進することによって、CAR療法のためのコンディショニング剤として役割を果たすことがある、という知見に少なくとも部分的に基づいているので、本発明は一般に、特定のCAR構築物（例えば、特定の抗原結合部位又は細胞内シグナリング・ドメイン）に限定されない。特定のCAR（例えば、CD19特異的なCAR）を本明細書中で想定し、及び本明細書中に開示する方法に含まれるが、限定することを意味しない。
【０１１７】
CAR構築物は当該分野で公知である、並びに一般的に、(a)抗原結合ドメインを含む細胞外領域、(b)膜貫通ドメイン及び(c)細胞内シグナリング・ドメインを含む。例示的なCARの構成は、当技術分野で知られている、及び本明細書で説明する方法では、任意の好適な構成を使用することがある。例えば、前記CARは、例えばGuedan et al.  Molecular Therapy-Methods & Clinical Development. 12: 145-156 (2019) 又はSadelain et al. Cancer discovery 3.4: 388-398 (2013)らに記載されているように（その全内容は、本明細書に参照により取り込まれる）、第1世代の、第2世代の、又は第3世代のCARであることがある。簡単に述べると、「第1世代」のCARは、(a)細胞外抗原結合ドメイン、(b)膜貫通ドメイン、(c)1つ以上の細胞内シグナリング・ドメイン、及び任意選択的に(d)抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに接続するヒンジ領域を含むことがある。「第2世代」のCARは、要素(a)、(b)、(c)、及び任意選択的に(d)を含むことがある、並びに更に、共刺激ドメイン（例えば、CD28又は4-1BBの共刺激ドメイン）を含むことがある。「第3世代」のCARは、要素(a)、(b)、(c)、及び任意選択的に(d)を含むことがある、並びに更に、複数の共刺激ドメイン（例えば、CD28及び4-1BBの共刺激ドメイン、又はCD28及びOX40の共刺激ドメイン）を含むことがある。上記の各要素について、以下で詳細に説明する。いくつかの実施形態では、以下の例示的な非限定的な配置によって記載するCAR分子は、左側から右側に向かって、前記CARのN末端側からC末端側であることを理解されたい。本開示が記載するCARは、本明細書に記載する要素の任意の他の組合せを含むことがある、又は更に含むことがある。
【０１１８】
本明細書中に開示する方法において使用するCARは、細胞外抗原結合ドメインを含むことがある。前記細胞外抗原結合ドメインは、抗原に結合する任意の分子であることがあり、限定されるものではないが、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその任意の機能的フラグメント等を含む。ある特定の実施形態では、前記抗原結合ドメインはscFvである。他の実施形態では、前記細胞外抗原結合ドメインは非-免疫グロブリン・スキャフォールド・タンパク質(scaffold protein)である。他の実施形態では、前記CARの細胞外結合ドメインは、単鎖T細胞レセプター(scTCR)を含む。米国特許第5,359,046, 5,686,281 5,686,281及び6,103,521に記載されているように、前記細胞外ドメインを、リガンド結合及び／又はシグナル伝達に関連する多種多様な細胞外ドメイン又は分泌タンパク質の何れかから得ることもある。
【０１１９】
前記細胞外結合ドメインの分子ターゲット(抗原)を選択することは、ターゲット細胞の表面を規定するリガンドの種類及び個数に依存する。例えば、前記抗原結合ドメインを選択して、特定の病態に関連するターゲット細胞に対する細胞表面マーカーとして振る舞うリガンドを認識するようにすることがある。従って、ある態様において、所望の抗原に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメインを、操作してCARの中に入れることによって、CARを介した免疫細胞(例えば、T-細胞)の反応を、目的の抗原に向けさせることがある。例えば、前記抗原結合ドメインを選択して、がん又は自己免疫疾患などの特定の疾患の状態に関連するターゲット細胞上の細胞表面マーカーとして振る舞うリガンドを認識するようにすることがある。従って、CARにおける抗原結合ドメインに対するリガンドとして振る舞うことがある細胞表面マーカーの例としては、がん細胞及び他の形態の疾患細胞(例えば、自己免疫疾患細胞及び病原体感染細胞)に関連するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞上の抗原に特異的に結合する所望の抗原結合ドメインを操作することによって、CARを操作して、目的の腫瘍抗原をターゲット化するようにする。本発明の文脈において、「腫瘍抗原」は、がんなどの特定の過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。ある実施形態では、前記抗原は腫瘍抗原である、これらの例としては、限定されるものではないが、CD19, CD22, CD30, CD7, BCMA, CD137, CD22, CD20, AFP, GPC3, MUC1, メソテリン(mesothelin), CD38, PD1, EGFR  (e.g., EGFRvIII), MG7, BCMA, TACI, CEA, PSCA, CEA, HER2, MUC1, CD33, ROR2, NKR-2, PSCA, CD28, TAA, NKG2D, 又はCD123、が挙げられる。ある実施形態では、CARは、CD19, CD22, CD30, CD7, BCMA, CD137, CD22, CD20, AFP, GPC3, MUC1, メソテリン(mesothelin), CD38, PD1, EGFR  (e.g., EGFRvIII), MG7, BCMA, TACI, CEA, PSCA, CEA, HER2, MUC1, CD33, ROR2, NKR-2, PSCA, CD28, TAA, NKG2D, 又はCD123、に結合するscFvを含む。
【０１２０】
別の態様では、前記CARの細胞外結合領域は、以下である抗原に結合する、AFP (e.g., ETCH17AFPCAR01 (Aeon Therapeutics (Shanghai) Co. / Eureka Therapeutics Inc.)), GPC3 (e.g., GeneChem GPC-3 CART (Shanghai GeneChem Co.); 302 GPC3-CART (Shanghai GeneChem Co.); 肝臓がんのCAR-T (Shanghai GeneChem Co.); CAR-GPC3 T 細胞 (Carsgen Therapeutics)), MUC1 (e.g., PG-021-001,002 (PersonGen BioTherapeutics (Suzhou) Co.)), メソテリン(mesothelin) (e.g., H2017-01-P01 (Ningbo Cancer Hospital); TAI-meso-CART (Shanghai GeneChem Co.); K16-4/NCT02930993 (China Meitan General Hospital / Marino Biotechnology Co.)), CD38 (e.g., 抗-CD38 A2 CAR-T / SOR-CART-MM-001 (Sorrento Therapeutics, Inc.)), herinCAR-PD1 (e.g., herinCAR-PD1/NBWYKY2016-06-001,002,003 (Ningbo Cancer Hospital); SIMC-20160101,02,03 (Shanghai International Medical Center)), BCMA (e.g., P-BCMA-101 自己T 幹細胞メモリ(Tscm) CAR-T 細胞/ P-BCMA-101-001 (Poseida Therapeutics, Inc.); HenanCH284 (Henan Cancer Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Company); LCAR-B38M CAR-T 細胞(Nanjing Legend Biotech Co.); 9762/NCT03338972 (Fred Hutchinson Cancer Research Center / Juno Therapeutics, Inc.); Descartes-08 (Cartesian Therapeutics); KITE-585 (Kite, A Gilead Company); bb21217 (bluebird bio); bb21217 (Celgene); JCARH125 (Juno Therapeutics, Inc.)), CD30 (e.g., ICAR30 T cells (Immune Cell, Inc.)), EGFR (e.g., EGFR:4-1BB:CD28:CD3改変T細胞/ First Shenzhen02 (Shenzhen Sceond People’s Hospital / The Beijing Pregene Science and Technology Company); EGFR-IL12-CART (Shenzhen Second People’s Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Co.); SBNK-2016-015-01 (Beijing Sanbo Brain Hospital / Marino Biotechnology Co.)), MG7 (e.g., MG7-CART (Xijing Hospital / Shanghai GeneChem Co.)), BCMA/TACI (e.g., AUTO2-MM1 (Autolus Limited)), CEA (e.g., 383-74/NCT02416466 (Roger Williams Medical Center / Sirtex Medical)), メソテリン(mesothelin)/PSCA/CEA/HER2/MUC1/EGFRvIII (e.g., NCT03267173 (First Affiliated Hospital of Harbin Medical University / Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.)), CD20 (e.g., EY201605-19 (Beijing Biohealthcare Biotechnology Co.)), CD33 (e.g., 2016-0341/NCT03126864 (M.D. Anderson Cancer Center / Intrexon Corp. / Ziopharm)), EGFR/BCMA (e.g., EGFRt/BCMA-41BBz CAR T細胞 (Memorial Sloan Kettering Cancer Center / Juno Therapeutics, Inc.)), ROR2 (e.g., 自己CCT301-38 又はCCT301-59 T 細胞(Shanghai Sinobioway Sunterra Biotech)), NKR-2 (e.g., CYAD-N2T-002,003,004 (Celyad)), PSCA (e.g., BP-012 (Bellicum Pharmaceuticals)), CD28 (e.g., 自己CSR T 細胞(Beijing Sanbo Brain Hospital / Marino Biotechnology Co.)), TAA (e.g., AMG 119 (Amgen)), NKG2D (e.g., CM-CS1 (Celyad)), 又は CD123 (e.g., UCART123 (Cellectis S.A.))。前述の文は、前記抗原(例えば、AMG 119(Amgen))に結合するCARの例を、更に提供する。これらのCAR構築物を、抗-CD2 ADCを用いた、本明細書中に開示するコンディショニング方法において使用することがある。
【０１２１】
CAR構築物は、前記細胞外抗原結合ドメインを細胞内シグナリング・ドメインに連結する(文字通り、又は、ほぼ近接して、例えば、スペーサーを使って)膜貫通ドメインを更に含むことがある。いくつかの実施形態では、CARの細胞外抗原結合ドメイン(例えば、scFv、Fab又は他の抗原結合部分)は、ヒンジ又は他のリンカーを使用して膜貫通ドメインに連結していることがある。スペーサ、リンカー、又はヒンジを、前記細胞外抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に導入して、前記抗原結合ドメインが様々な方向に配向することを可能にする柔軟性を提供し、それによって抗原の認識及び結合を容易にすることがある。前記膜貫通ドメインの細胞質側を、CD28又はCD3ゼータ(CD3-ζ)の細胞内シグナリング・ドメインのような細胞内シグナリング・ドメインに付けることがある、及び、更に、以下で論じるように1つ以上の共刺激ドメインを含むことがある。
【０１２２】
従って、ある特定の実施形態では、前記CARは、前記細胞外抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に位置するヒンジ領域を更に含むことがある。例えば、前記ヒンジ領域は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM、CD28、又はCD8アルファのヒンジ領域に由来することがある。ある特定の実施形態では、前記ヒンジ領域は、IgG4のヒンジ領域に由来する。別の実施形態では、前記ヒンジ領域は、CD8のヒンジ・ドメインである(SwissProt/GenBank Acc.NoP01732参照)。
【０１２３】
ある実施形態では、CARは、細胞外抗原結合ドメイン、及びCD8ヒンジを介して連結した膜貫通ドメインを含む：  AKPTTTPAPR PPTPAPTIAS QPLSLRPEAC RPAAGGAVHT RGLDFA (配列番号(SEQ ID NO): 8)。
【０１２４】
ある実施形態では、CARは、細胞外抗原結合ドメイン、及びハイブリッドCD8-CD28ヒンジを介して連結した膜貫通ドメインを含む：  AKPTTTPAPR PPTPAPTIAS QPLSLRPEAC RPAAGGAVHT RGLDFAPRKI EVMYPPPYLD NEKSNGTIIH VKGKHLCPSP LFPGPSKP (配列番号(SEQ ID NO): 9)。
【０１２５】
前記膜貫通ドメインは、細胞外抗原結合ドメインに寄与するタンパク質、エフェクター機能シグナリング・ドメインに寄与するタンパク質、増殖シグナリング部分に寄与するタンパク質、又は全く異なったタンパク質、の配列に由来していることがある。いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは、前記CARの他のドメインのうちの1つと自然に関連している。例えば、前記膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、同じタンパク質の膜貫通領域及び細胞質領域に由来することがある。ある実施形態では、前記CARの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、CD28配列の連続している部分を含む。任意の膜貫通ドメインを、そのドメインが抗原結合ドメインを含むCARを細胞膜に固定することができるならば、本明細書に記載のCAR構築物に使用することができる。
【０１２６】
前記膜貫通ドメインは、天然の又は合成した供給源の何れかに由来することがある。前記供給源が天然である場合、前記ドメインは、任意の膜結合又は膜貫通タンパク質に由来することがある。本明細書中で提供する方法において使用することがある例示的な膜貫通ドメインは、T-細胞レセプターのアルファ鎖、ベータ鎖、若しくはゼータ鎖、CD28、CD3イプシロン、CD45、CD4、CD2、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、LFA-1 T-細胞共-レセプター、CD2 T-細胞共-レセプター／接着分子、CD8アルファ、及びそれらのフラグメント、に由来することがある（例えば、少なくとも上記の膜貫通ドメインを含む）。タンパク質の膜貫通ドメインは、当該分野で公知の任意の方法(例えば、疎水性解析、構造解析など)を使用して、又は公的なデータベース(例えば、UniProtデータベース)を使用することによって、同定することができる。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは合成したものであることがある。例示的な実施形態では、前記膜貫通ドメインは、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を主に含むことがある。ある実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、合成膜貫通ドメインのそれぞれの端部に配置させることがある。任意選択的に、短いオリゴの又はポリペプチドのリンカー（好ましくは2~10アミノ酸長）によって、前記膜貫通ドメインとCARの細胞内シグナリング・ドメインとの間の連結が形成されることがある。グリシン-セリン・ダブレットは、特に好適なリンカーを提供する。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本発明のCAR中の膜貫通ドメインは、CD8の膜貫通ドメインである。この目的のためのCD8の配列は、PCT公開番号WO2014/055771A1に教示されている。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、前記CAR中の膜貫通ドメインは、CD8の膜貫通ドメイン又はその機能的部分である。例えば、CARは、LDPKLCYLLD GILFIYGVIL TALFLRVK (配列番号(SEQ ID NO): 10)のアミノ酸配列を有するCD3の膜貫通ドメイン、又はその機能的部分（例えば、LCYLLDGILF IYGVILTALF L (配列番号(SEQ ID NO): 11)）、を含むことがある。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本発明のCAR中の膜貫通ドメインは、CD28の膜貫通ドメインである。CD28の例示的な配列、並びに例示的な膜貫通ドメイン配列を以下に提供する。いくつかの実施形態では、前記CD28の膜貫通ドメインは、以下の例示的な膜貫通ドメイン配列、又はそのフラグメント若しくはそのバリアント（その配列を含むCARを細胞膜に固定することができるものである）を含む。従って、いくつかの実施形態では、前記CARの膜貫通ドメインは、以下のアミノ酸配列を含むCD28の膜貫通ドメインである：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(配列番号(SEQ ID NO): 12)。ある実施形態では、前記CARの膜貫通ドメインは、以下のアミノ酸配列を含むCD28の膜貫通ドメインである：IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWV (配列番号(SEQ ID NO): 13)、又はその機能的フラグメント、例えば配列番号(SEQ ID NO): 12。
【０１３１】
細胞外抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメインに加えて、CARは、細胞内(又は細胞質)シグナリング・ドメインを更に含む。
【０１３２】
内因性のTCRを介して生成されるシグナルだけでは、T細胞を完全に活性化するには不十分であり、二次的又は共-刺激シグナルも必要とされることがある、ということが知られている。このように、T細胞の活性化は二つの異なる種類の細胞内シグナリング配列によって媒介されることがある。即ち、前記TCRを介して抗原依存性の一次活性化を開始させるもの(一次細胞内シグナリング配列)と、抗原-独立的に作用して二次シグナル又は共-刺激シグナルを提供するもの(二次細胞内シグナリング配列)である。
【０１３３】
用語「細胞内シグナリング・ドメイン(intracellular signaling domain)」又は「細胞内シグナリング・ドメイン(cytoplasmic signaling domain)」は、本明細書中で使用される場合、分子の細胞内部位をいう。前記細胞内シグナリング・ドメインは、CARを含む免疫細胞（例えば、CAR-T細胞又はCAR発現NK細胞）の免疫エフェクタ機能を促進するシグナル、を生成することができる。例えばCART細胞又はCAR発現NK細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含むヘルパー活性が挙げられる。実施形態では、前記細胞内シグナル・ドメインがエフェクタ機能シグナルを伝達し、その細胞に対して、特化した機能を実行するように指示する。細胞内シグナリング・ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、その鎖全体を使用することは必須ではない。切断を受けた細胞内シグナリング・ドメインの部分を使用する範囲について、そのような切断を受けた部分は、それが前記エフェクタ機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用することができる。従って、細胞内シグナリング・ドメインという用語は、前記エフェクター機能シグナルを伝達するのに充分な細胞内シグナリング・ドメインの任意の切断を受けた部分を含むことを意味する。
【０１３４】
ある実施形態では、前記CARの細胞内シグナリング・ドメインは、配列番号(SEQ ID NO): 14に記載するようなCD3ゼータのシグナリング領域、又はそのシグナリング部分を含む：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (配列番号(SEQ ID NO): 14)。 
【０１３５】
細胞内シグナリング・ドメインは、限定されるものではないが、CD3ゼータ、FcRガンマ、FcRベータ、CD3ガンマ、CD3デルタ、CD3イプシロン、CDS、CD22、CD79a、CD79b、CD278(「ICOS」)、Fc.イプシロン.RI、CD66d、DAP10、DAP12から誘導されるものを、更に含むことがある。
【０１３６】
CARは、サイトカイン産生を増強する共刺激タンパク質又はタンパク質（例えば、CD28及び4-1BB等）の細胞内シグナリング・ドメインに由来するポリペプチド鎖である「細胞内共刺激ドメイン」を、更に含むことがある。例示的な共-刺激シグナリング領域としては、4-1BB、CD21、CD28、CD27、CD127、ICOS、IL-15Rα、及びOX40、が挙げられる。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、CARの細胞質共刺激ドメインは、4-1BBシグナリング・ドメインを単独で、又はCARの文脈において有益な任意の他の所望の細胞内ドメインと組み合わせて含む。4-1BBは、GenBank Acc 番号AAA62478.2 として提供されるアミノ酸配列、又は非-ヒト種(例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など)由来の同等の残基、を有するTNFRスーパーファミリーのメンバーである；及び「4-1BB共刺激ドメイン」は、GenBank Acc 番号AAA62478.2 のアミノ酸残基214~255、又は非-ヒト種(例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人種など)由来の同等の残基、として定義される。
【０１３８】
ある実施形態では、前記CARの細胞内共刺激シグナリング・ドメインは、4-1BB(CD137)の共-刺激シグナリング領域、又はそのシグナリング部分である：
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (配列番号(SEQ ID NO): 15)。
【０１３９】
ある実施形態では、前記CARの共刺激シグナリング・ドメインは、CD28の共-刺激シグナリング領域配列である。例えば、共刺激シグナリング・ドメインは、以下のCD28共-刺激シグナリング部位、又はそのシグナリング部位を含むことがある：
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (配列番号(SEQ ID NO): 16)。
【０１４０】
例示的な実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD3-ゼータのシグナリング・ドメインを、本発明のCARの文脈において有用である任意の他の所望の細胞内ドメインと組合せて、含有することがある。ある特定の実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD3ゼータのドメイン及び共刺激シグナリング領域（例えば、限定されるものではないが、4-1BB、CD28、及びCD27の共刺激シグナリング領域）を含むことがある。
【０１４１】
本発明のCARの細胞内シグナリング部分内の細胞内シグナリング配列は、ランダム又は特定の順序で互いに連結していても良い。任意選択的に、短いオリゴの又はポリペプチドのリンカー又はスペーサ（好ましくは5~20アミノ酸長）を細胞内ドメインの間に挿入することがある。GGGGS(配列番号(SEQ ID NO): 17)又は(GGGGS)×3(配列番号(SEQ ID NO): 18)は、特に好適なリンカーを提供する。
【０１４２】
ある実施形態では、本明細書で使用するCARは、抗-CD19モノクローナル抗体の単鎖可変ドメインを含有する細胞外ドメイン、CD8αのヒンジ及び膜貫通ドメインを含有する膜貫通ドメイン、並びにCD3ζのシグナリング・ドメイン及び4-1BBのシグナリング・ドメインを含有する細胞内ドメイン、を含む。例示的なCARは、Nicholson I C, et al., Mol Immunol 34:1157-1165 (1997)に記載されている抗-CD19モノクローナル抗体を含む細胞外ドメインに加えて、CD8αの21アミノ酸シグナル・ペプチド(GenBankアクセッション番号.NM_001768の26-88位の63ヌクレオチドから翻訳される)、を含む。CD8αヒンジ及び膜貫通ドメインは、GenBankアクセッション番号NM_001768の815~1021位の207ヌクレオチドから翻訳される69アミノ酸からなる。好ましい実施形態のCD3ζシグナリング・ドメインは、GenBankアクセッション番号NM_000734の1022~1360位の339ヌクレオチドから翻訳される112アミノ酸を含む。。
【０１４３】
前記CARの細胞外ドメイン(抗原結合ドメインを含む)と膜貫通ドメインとの間、又は前記CARの細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間に、スペーサ又はヒンジ・ドメインが組み込まれていることがある。本明細書で使用する場合、「スペーサ・ドメイン」は一般に、前記膜貫通ドメインをポリペプチド鎖中の細胞外ドメイン及び／又は細胞内ドメインに連結するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドを意味する。本明細書中で使用する場合、ヒンジ・ドメインは一般に、前記CAR、若しくはそのドメインに柔軟性を提供するように、及び／又はCAR、又はそのドメインの立体障害を防止するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドを意味する。いくつかの実施形態では、スペーサ又はヒンジ・ドメインは、300個までのアミノ酸、好ましくは10~100個のアミノ酸、最も好ましくは5~20個のアミノ酸を含むことがある。本開示の態様はこの点に限定されないので、1つ以上のスペーサ・ドメインがCARの他の領域に含まれてもよいことも理解されるべきである。
【０１４４】
CARは、本明細書中に提供される配列を有する領域(例えば、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメイン、シグナリング・ドメイン、安全性ドメイン、及び／若しくはリンカー、又はそれらの任意の組合せ)を含むことがあること、又はそれらのバリアント、若しくはそれらの何れかのフラグメント(例えば、CAR活性に必要とされる機能を保持するバリアント及び／又はフラグメント)が本明細書中に記載するCARタンパク質に含まれ得ること、は理解されるべきである。いくつかの実施形態では、バリアントは、示した配列に対して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のアミノ酸が変化している。いくつかの実施形態では、バリアントは、示した配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、90%~95%、少なくとも95%又は少なくとも99%同一である配列を有する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、本明細書中に提供される配列よりも、1~5、5~10、10~20、20~30、30~40、又は40~50アミノ酸分、短い。いくつかの実施形態では、フラグメントは、提供する配列のN末端、C-末端、又は両方の末端領域でより短い。いくつかの実施形態では、フラグメントは、本明細書中で提供する配列中のアミノ酸の数の80%~85%、85%~90%、90%~95%、又は95%~99%を含む。
【０１４５】
他の実施形態では、本発明は、本明細書中に開示するアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、上記の例示的な非限定的な配置は、前記CARの左側から右側、N末端側からC末端側である。前記CARは、本明細書中に記載するように、要素の任意の他の組合せを含んでもよく、又は更に含んでもよい。
【０１４７】
CAR構築物がその様々な部分で同定されると、CARを発現する免疫細胞が産生され、それによって、前記免疫細胞が前記CARを発現する。本方法は、本明細書中に記載する核酸分子(例えば、RNA分子(例えば、mRNA))、又はCAR(例えば、本明細書中に記載するCAR)をコードする核酸分子を含むベクターを、前記免疫細胞を導入すること(例えば、形質導入すること)を包含する。また、本発明は、細胞集団(例えば、外因性RNAを一時的に発現する、RNAで操作した細胞)を作製する方法を提供する。本方法は、本明細書中に記載するようなRNA(例えば、in vitroで転写したRNA又は合成RNA；本明細書中に記載するようなCARポリペプチドをコードするmRNA配列)を細胞に導入することを包含する。実施態様では、前記RNAは、CARポリペプチドを一過性に発現する。ある実施形態では、前記細胞は本明細書に記載の細胞（例えば、免疫エフェクタ細胞(例えば、T細胞若しくはNK細胞、又は細胞集団)である。
【０１４８】
他の例示的なキメラ抗原レセプター構築物は、米国特許第 9,328,156号；米国特許第 9,783,591号；米国特許第9,714,278号；米国特許第 9,765,156号；米国特許第 10,117,896号；米国特許第9,573,988号；米国特許第 10,308,717号；米国特許第 10,221,245号；米国特許第10,040,865号；米国特許公開公報第 2018/0256712A1号；米国特許公開公報第 2018/0271907A1号；米国特許公開公報第2016/0046724A1号；米国特許公開公報第 2018/0044424A1号；米国特許公開公報第 2018/0258149A1号；米国特許公開公報第2019/0151363A1号；及び 米国特許公開公報第2018/0273601A1号、に開示されている；前記の特許及び特許公開公報のそれぞれの内容は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１４９】
III．抗-CD5抗体薬物コンジュゲート(ADC)
本明細書中に記載するように、抗-CD5 ADCを、CAR療法と併用して、ヒト患者におけるがん又は自己免疫疾患を治療する。より具体的には、抗-CD5 ADCを使用して、CAR療法も受けているヒト対象において、CD5+細胞(例えば、CD5+ T細胞)を減少させることができる。抗-CD5 ADCは、内因性T細胞をターゲットとし、これらの細胞を傷害することにより、前記患者の免疫系が、前記対象に投与したCARを発現する免疫細胞(自己又は同種異系)を攻撃しないようにする。このように、抗-CD5 ADCを、CAR療法と併用して、コンディショニング・レジメンとして使用し、レシピエント(recipient)患者において、操作したCARを発現する免疫細胞の受容を促進させる。コンディショニング・レジメンとして抗-CD5 ADCを使用することの1つの利点は、一般的な全身リンパ球除去化学療法剤を前記対象に投与する、CAR療法のコンディショニングの従来の方法よりも、CD5を発現する内因性T細胞を減少させることが特異的にターゲット化されることである。
【０１５０】
抗-CD5抗体
CD5と結合することができるADCを治療薬剤として使用し、CARを発現する免疫細胞が拒絶されるリスクを防止又は減少させることによって、CARを発現する免疫細胞のヒト患者における受容を促進させることがある。
【０１５１】
本明細書中に記載する抗-CD5 ADCは、細胞毒素に連結した抗-CD5抗体又はその抗原結合部分を含む。
【０１５２】
ヒトCD5は、リンパ球抗原T1、T1、Leu-1、及びLEU1とも呼ばれる。CD5は、ヒトT細胞上に発現する。ヒトCD5の2つのアイソフォームが同定されてきている。アイソフォーム1は、495アミノ酸を含み、Gladkikh et al (2017) Cancer Med.6(12):2984 and Jones et al. (1986) Nature 323 (6086): 346)に記載されている。CD5(アイソフォーム1)のアミノ酸配列を以下に示す(NCBI参照配列: NP_055022.2)：
【化９】
2021530545.tif 000010
【０１５３】
ヒトCD5の第2のアイソフォームは438アミノ酸であり、以下、NCBI参照配列: NP_00133385.1として同定される。アイソフォーム1とは異なり、CD5アイソフォーム2は細胞内タンパク質である。アイソフォーム2は、アイソフォーム1と比較して、異なる5' UTRを含み、5'コーディング領域(coding region)のイン-フレーム部分を欠く。得られたアイソフォーム2は、アイソフォーム1と比較して、N末端が短い。CD5アイソフォーム2は、アイソフォーム1と比較して、リーダー・ペプチドを欠き、Bリンパ球のサブセットに見られる細胞内アイソフォームを示す。本明細書に記載のADCは、ヒトCD5の細胞外バージョンを表すヒトCD5アイソフォーム1に特異的である。
【０１５４】
ある実施形態では、本明細書中に記載する方法及び組成物において使用することがある抗-CD5抗体は、抗体5D7v(Ab5D7v)である。Ab5D7vの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を以下の配列番号(SEQ ID NO): 1に示す。
【化１０】
2021530545.tif 000011
【０１５５】
Ab5D7vのVH CDRアミノ酸配列を上記に下線で示し、以下の通りである: FSLSTSGMG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO): 3); WWDDD(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO): 4);及びRRATGTGFDY(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO): 5)。
【０１５６】
Ab5D7vの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 2)として以下に提供する。
【化１１】
2021530545.tif 000012
【０１５７】
Ab5D7vのVL CDRアミノ酸配列を上記に下線で示し、以下の通りである: QDVGTA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO): 6); WTSTRHT(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO): 7)；及びYNSYNT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO): 8)。
【０１５８】
ある実施形態では、抗-CD5 ADCは、配列番号(SEQ ID NO): 3に記載のアミノ酸配列を含むCDR1ドメイン、配列番号(SEQ ID NO): 4に記載のアミノ酸配列を含むCDR2ドメイン、及び配列番号(SEQ ID NO): 5に記載のアミノ酸配列を含むCDR3ドメインを含む重鎖、並びに配列番号(SEQ ID NO):6に記載のアミノ酸配列を含むCDR1ドメイン、配列番号(SEQ ID NO): 7に記載のアミノ酸配列を含むCDR2ドメイン、及び配列番号(SEQ ID NO): 8に記載のアミノ酸配列を含むCDR3ドメインを含む軽鎖、を含む抗-CD5抗体を含む、ここで、前記抗体は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートしている。
【０１５９】
ある実施形態では、抗-CD5 ADCは、配列番号(SEQ ID NO): 1に記載のアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖、及び配列番号(SEQ ID NO): 2に記載のアミノ酸配列を含む可変領域を含む軽鎖、を含む抗-CD5抗体を含む、ここで、前記抗体は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートしている。
【０１６０】
別の実施形態では、本明細書中に記載するADCにおいて使用する抗-CD5抗体は、5D7抗体である(例えば、US 20080254027を参照のこと、その開示は、本明細書に参照により取り込まれる)。別の実施形態では、本明細書中に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗-CD5抗体は、5D7抗体のバリアントである(例えば、US 20080254027、その開示は、本明細書に参照により取り込まれる)。
【０１６１】
更に、ある特定の実施形態では、前記抗-CD5 ADCは、3日以下のヒト対象における血清半減期を有する。
【０１６２】
本明細書中に記載するADCにおいて使用することがある更なる抗-CD5抗体を、ハイブリドーマ産生などの当技術分野で公知の技術を使用して同定することがある。ハイブリドーマを、マウスのシステムを用いて調製することがある。免疫化及びその後に融合するために脾細胞を単離するためのプロトコルは、当該分野で公知である。ハイブリドーマを産生するための融合パートナー及び手順もまた公知である。あるいは、HuMAb-Mouse登録商標又はXenoMouseTMを使用して、抗-CD5抗体を生成することもある。更なる抗-CD5抗体を作製する際に、そのCD5抗原を単離及び／又は精製する。CD5抗原は、CD5の細胞外ドメイン由来のCD5のフラグメントであることがある。動物の免疫化を、当技術分野で公知の任意の方法によって行うことができる。例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990、を参照のこと。マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ及びウマなどの動物を免疫するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、Harlow and Lane、同上及び、米国特許第5,994,619号、を参照。前記CD5抗原を、免疫反応を刺激するために、アジュバントと共に投与することがある。当技術分野で公知のアジュバントとしては、完全又は不完全フロイント・アジュバント、RIBI(ムラミル・ジペプチド)又はISCOM(免疫刺激複合体)が挙げられる。CD5抗原で動物を免疫した後、免疫した動物から単離した細胞から抗体産生不死化細胞株を調製する。免疫化後、前記動物を屠殺し、そしてリンパ節及び／又は脾臓B細胞を、当該分野で公知の方法(例えば、がん遺伝子導入、がん原性ウイルス形質導入、発がん性又は変異原性化合物への暴露、不死化細胞(例えば、骨髄腫細胞)との融合、及び腫瘍サプレッサー遺伝子の不活性化)によって不死化する。例えば、Harlow and Lane、同上を参照。ハイブリドーマを、所望の特性（例えば、強固な増殖、高い抗体産生、及び所望の抗体特性が挙げられる）について、選択する、クローニングする及び更にスクリーニングすることがある。
【０１６３】
本明細書中に記載する抗-CD5 ADCにおいて使用するための抗-CD5抗体はまた、CD5に結合可能な分子についての抗体又は抗体フラグメントのライブラリを、ハイスループット・スクリーニングすることを使用して、同定することがある。このような方法としては、当技術分野で公知のin vitroディスプレイ技術、例えば、とりわけ、ファージ・ディスプレイ、バクテリア・ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソーム・ディスプレイ、mRNAディスプレイ、及びcDNAディスプレイなど、が挙げられる。生物学的に関連する分子に結合する抗体、抗原結合フラグメント、又はリガンドを単離するためにファージ・ディスプレイを使用することは、例えば、Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1:149-183, 1995; Katz, Annual Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:27-45, 1997; 及び Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1-20, 1998、でレビューされてきている、これらの各々の開示は、in vitroディスプレイ技術に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2:251-268, 1995 及び Kay et al., Mol. Divers. 1:139-140, 1996に記載されるように、ランダム化したコンビナトリアル・ペプチド・ライブラリを構築して、細胞表面抗原に結合するポリペプチドを選択することも行われてきている、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。タンパク質類(例えば、多量体タンパク質類)を、機能的分子として、ファージ・ディスプレイすることが、うまくできてきている(例えば、EP 0349578; EP 4527839;及びEP 0589877、並びにChiswell and McCafferty, Trends Biotechnol. 10:80-84 1992を参照、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイ技術の使用に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。更に、機能的抗体フラグメント(例えば、Fab及びscFvフラグメント)を、in vitroディスプレイ・フォーマットで、発現させることも行われてきている(例えば、McCafferty et al., Nature 348:552- 554, 1990; Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982, 1991; 及びClackson et al., Nature 352:624-628, 1991、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイ・プラットフォームに関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１６４】
in vitroディスプレイ技術に加えて、US2013/0288373に記載された手順を使用しながら、計算モデリング技術を使用して、例えば、抗-CD5抗体又は抗体フラグメントをin silicoで設計する、及び同定することがある（その開示は、抗-CD5抗体を同定するための分子モデリング方法に関するものとして、本明細書に組み込まれる）。例えば、計算モデリング技術を用いて、当業者のある者は、CD5の細胞外エピトープなどのCD5上の特異的エピトープに結合することができる分子を求めて、抗体又は抗体フラグメントのライブラリをin silicoでスクリーニングすることがある。
【０１６５】
ある実施形態では、本明細書中に記載するADCにおいて使用する抗-CD5抗体は、細胞の中に取り込まれることがある。抗-CD5抗体(又はそのフラグメント)を同定する際に、更なる技術を使用して、細胞(例えば、T細胞)の表面上のCD5に結合し、更に、例えば、レセプター媒介エンドサイトーシスによって、前記細胞が中に取り込むことができる抗体又は抗原結合フラグメントを同定することがある。例えば、上記のin vitroディスプレイ技術を、造血幹細胞の表面上のCD5に結合し、続いて中に取り込まれる抗体又はその抗原結合フラグメントを求めてスクリーニングするように、適合させることがある。ファージ・ディスプレイは、このスクリーニング・パラダイムと組み合わせて使用することがあるような技術の1つの代表である。CD5に結合し、続いてCD5+細胞の中に取り込まれる抗-CD5抗体又はそのフラグメントを同定するために、当業者のある者は、Williams et al., Leukemia 19:1432-1438, 2005に記載されるファージ・ディスプレイ技術を使用することがある（その開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１６６】
抗-CD5抗体又はそのフラグメントを中に取り込む許容量を、例えば、当該分野で公知の放射性核種内部取込アッセイを使用して、評価することがある。例えば、本明細書中に記載する、又は当技術分野で公知のin vitroディスプレイ技術を用いて同定した抗-CD5抗体又はそのフラグメントを、放射性同位元素（例えば、18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I,125I, 129I, 131I, 211At, 67Ga, 111In, 99Tc, 169Yb, 186Re, 64Cu, 67Cu, 177Lu, 77As, 72As, 86Y,90Y, 89Zr, 212Bi, 213Bi, 又は 225Ac）を取り込ませることにより、機能的にすることがある。例えば、放射性ハロゲン（例えば、18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I,125I, 129I, 131I, 211At等）を、求電子性ハロゲン試薬(例えば、ヨード化ビーズ、Thermo Fisher Scientific, Inc., Cambridge, MA)を含むビーズ（例えば、ポリスチレン・ビーズ）を使用して、抗体、そのフラグメント、又はリガンドの中に組み込ませることがある。放射性標識した抗体又はそのフラグメントを、造血幹細胞と共に、中に取り込まれるのに充分な時間、インキュベートすることがある。中に取り込まれた抗体、又はそのフラグメントを、得られた造血幹細胞から放出される放射線(例えば、γ線)を検出し、回収した洗浄バッファーから放出される放射線(例えば、γ線)と比べて、同定することがある。前記の内部取込アッセイを使用して、ADCを特徴付けることもある。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、前記抗-CD5抗体(又はそのフラグメント)は、定義された血清半減期を有する。例えば、抗-CD5抗体(又はそのフラグメント)は、ヒト患者において、約1~24時間の血清半減期を有することがある。このような抗-CD5抗体を含むADCはまた、例えば、ヒト患者において約1~24時間の血清半減期を有することがある。血清レベルを計測することによる薬物動態解析を、当技術分野で公知のアッセイによって行うことがある。
【０１６８】
抗-CD5抗体を組換えにより産生するためには、抗体をコードする核酸(例えば、上記のよう)を、単離し、及び宿主細胞において更にクローニングする及び／又は発現させるために、1種以上のベクターに挿入する。このような核酸分子を、従来の手順を使用して(例えば、前記抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチド・プローブを使用することによって)容易に単離することができ、及びシークエンシングをすることができる。
【０１６９】
抗体をコードするベクターをクローニングする又は発現させるのに好適な宿主細胞としては、本明細書に記載の原核生物の、又は真核生物の細胞が挙げられる。例えば、抗体類を、特にグリコシル化及びFcエフェクタ機能を必要としない場合に、バクテリアの中で産生することがある。バクテリアの中で抗体フラグメント及びポリペプチドを発現させることについては、例えば、米国特許第5,648,237号, 5,789,199号,及び5,840,523を参照のこと。（大腸菌の中で抗体フラグメントを発現させることを記載する、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 245-254、も参照のこと）。発現させた後、前記抗体をバクテリア細胞のペースト(paste)から可溶性画分として単離し、更に精製することがある。
【０１７０】
脊椎動物細胞を宿主としても使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合化した哺乳動物細胞株は有益であることがある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株(COS-7)；ヒト胚腎臓株(293又は293細胞、例えば、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載されている)；乳児ハムスター腎臓細胞(BHK)；マウス・セルトリ細胞(TM4細胞、例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されている)；サル腎臓細胞(CV1)；アフリカミドリザル腎臓細胞(VERO-76)；ヒト子宮頸部がん(carcinoma)細胞(HELA)；イヌ腎臓細胞(MDCK)；バッファロー・ラット肝臓細胞(BRL 3A)；ヒト肺細胞(W138)；ヒト肝臓細胞(Hep G2)；マウス乳房腫瘍(MMT 060562)；TRI細胞、例えば、Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されている；MRC 5細胞；及びFS4細胞、である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞(例えば、DHFR-CHO細胞等を含む(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))；及び骨髄腫細胞株(例えば、Y0、NS0及びSp2/0)、が挙げられる。抗体産生に適した、ある特定の哺乳動物宿主細胞株のレビューについては、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。ある実施形態では、前記宿主細胞は真核生物、例えば、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞又はリンパ系細胞(例えば、Y0、NS0、Sp20細胞)である。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載する組成物及び方法と併せて使用することがある抗-CD5抗体としては、以下の表１Ａ及び１Ｂに記載するCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及びCDR-L3領域の組合せを含むものが挙げられる。
【０１７２】
[表１]
【０１７３】
[表２]
【０１７４】
細胞毒素
種々の細胞毒素を、本明細書中に記載する併用療法における使用のために、リンカーを介して抗-CD5抗体にコンジュゲートすることがある。特に、抗-CD5 ADCは、細胞毒性部分(又は細胞毒素)にコンジュゲートした(即ち、リンカーによって共有結合した)抗体(又はその抗原結合フラグメント)を含む。本明細書中で使用する場合、用語「細胞毒素」、「細胞毒性部分」及び「薬剤」を、互換的に使用する。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、コンジュゲートとして結合している場合、細胞毒性は減少している、又は細胞毒性を示さない、しかし、前記リンカーからの切断後、細胞毒性を再び示すようになる。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、前記リンカーから切断されること無しに、細胞毒性を保持する。いくつかの実施形態では、前記細胞毒性分子は、本明細書中に記載するような、細胞の中に取り込まれる抗体又はそのフラグメントにコンジュゲートする、その結果、前記抗体又はそのフラグメントが細胞の中に取り込まれた後に、前記細胞毒素がその細胞内ターゲットにアクセスし、及び、例えば、T細胞死を媒介することがある。
【０１７５】
従って、本発明のADCは、一般式Iであることがある、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメント(Ab)は、リンカー(L)にコンジュゲート(共有結合)し、化学的な部分構造(Z)を通じて、細胞毒性部分(「薬剤」、D)にコンジュゲートする。
Ab-(Z-L-D)n      (I)
【０１７６】
従って、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、整数nによって示されるような多数の薬物部分にコンジュゲートすることがある、ここで、整数nは抗体当たりの細胞毒素の平均個数を表す、ここで、整数nは例えば約1~約20の範囲であることがある。任意の数（例えば、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、又は約8）の細胞毒素が前記抗体にコンジュゲートすることがある。いくつかの実施形態では、nは1~4である。いくつかの実施形態では、nは1~3である。いくつかの実施形態では、nは約2である。いくつかの実施形態では、nは約1である。コンジュゲーション反応によるADCの調製物中の抗体当たりの薬物部分の平均個数を、マス・スペクトロスコピー、ELISAアッセイ、及びHPLCのような従来の手段によって明らかにすることができる。nに関するADCの定量的な分布も決定することができる。場合によっては、逆相HPLC又は電気泳動のような手段によって、nが特定の数値である均質なADCを、他の薬物搭載量を有するADCから、分離する、精製する、及び特性評価することができる。
【０１７７】
いくつかの抗-CD5 ADCについて、nは、抗体上の結合部位の数によって制限されることがある。例えば、結合がシステインのチオールである場合、抗体は1個又は数個のシステインのチオール基しかもたない、又はリンカーが結合するのに十分な反応性をもつチオール基を1個又は数個しかもたない。一般に、抗体は、薬物部分に結合することができる遊離及び反応性システイン基を多くは含まない；主に、抗体中のシステインのチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体を、ジチオトレイトール(DTT)又はトリカルボニルエチルホスフィン(TCEP)などの還元剤で還元して、部分的又は全還元条件下で、反応性システインのチオール基を生成させることができる。ある特定の実施形態では、より高く薬物を搭載させると(例えば、n>5)、ある特定の抗体-薬物コンジュゲートでは凝集性、不溶性、毒性が引き起こされる、又は細胞透過性が失われることが引き起されることがある。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、コンジュゲーション反応の間に、理論上の最大よりも少ない薬物部分が、抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、以下に論じるように、薬剤-リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含むことがある。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応することができる。ある特定の実施形態では、抗体を、変性条件下に供し、リジン又はシステインのような反応性求核基を表に出す。
【０１７９】
ADCの搭載(薬剤／抗体比)を、種々の方法で（例えば、(i)抗体に対する、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること、(ii)コンジュゲーション反応の時間又は温度を制限すること、(iii)システインのチオール修飾のために、部分的又は制限的な還元条件下にすること、(iv)リンカー-薬物結合の数及び／又は位置をコントロールするために、システイン残基の数及び位置を改変するように、抗体のアミノ酸配列を組換え技術によって操作すること）、コントロールすることがある。
【０１８０】
本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用するのに適した細胞毒素としては、当該技術分野において公知の、とりわけ、DNA-インターカレーティング剤(例えば、アントラサイクリン)、紡錘体装置を破壊することができる薬剤(例えば、ビンカ・アルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、及びその誘導体)、RNAポリメラーゼ阻害剤(例えば、α-アマニチン等のアマトキシン、及びその誘導体)、並びにタンパク質生合成を破壊することができる薬剤(例えば、サポリン及びリシンA鎖等のrRNA N-グリコシダーゼ活性を示す薬剤)が挙げられる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤(例えば、メイタンシン又はメイタンシノイド)、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deブーガニン、ジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、又はそのバリアント、又は本明細書に記載する若しくは当該技術分野で公知の他の細胞毒性化合物である。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、前記抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、RNAポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。
【０１８３】
本発明の方法において有用な抗-CD5 ADCにおいて使用することがある細胞毒素に関する更なる詳細を、以下に記載する。
【０１８４】
アマトキシン
いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。種々の天然に存在するアマトキシンの構造は、式II及び一緒に提示する表２によって表される、及び、例えば、Zanotti et al., Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 450-459に開示される。
【化１２】
2021530545.tif 000013
【０１８５】
表２：アマトキシンの構造の表。
【表３】
2021530545.tif 000014
【０１８６】
ある実施形態では、前記細胞毒素はアマニチン又はその誘導体である。ある実施形態では、前記細胞毒素はα-アマニチン又はその誘導体である。
【０１８７】
アマトキシン又はその誘導体上の多くの位置は、連結部分Lと共有結合する位置としての役割を果たすことができる、及びそれ故に、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる。いくつかの実施形態では、式IのADC中の細胞毒素は、式(II)で表されるアマトキシン又はその誘導体である。
【０１８８】
ある実施形態では、前記ADCは式Ab-Z-L-Amで表される、ここで、AbはCD5に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、Amはアマトキシンである。この実施形態では、前記リンカー-アマトキシン・コンジュゲートAm-L-Zは、式(III)で表される：
【化１３】
2021530545.tif 000015
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、及び任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-である（ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；Z'は反応性部分である、及びZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０１８９】
式(III)は、アマトキシン及びリンカーを含む、並びに、いくつかの実施形態では、リンカー、化学的な部分構造、及び抗体を含む。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシンである、及びリンカー-アマトキシン・コンジュゲート又は抗体-リンカー-アマトキシン・コンジュゲートは式(IIIA)で表される：
【化１４】
2021530545.tif 000016
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、及び任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-である（ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；Z'は反応性部分である、及びZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、前記アマトキシンは、1個のRC置換基を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化１５】
2021530545.tif 000017
ここで、Yは-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE)-, 又は-(CRERE’)-である；並びに
RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである；ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、又はヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。式(IIIA)は、アマトキシン及びリンカーを含む、並びに、いくつかの実施形態では、リンカー、化学的な部分構造、及び抗体を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化１６】
2021530545.tif 000018
ここで、
R3はH又はRCである。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化１７】
2021530545.tif 000019
ここで、
R3はH又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1はH、OH、又はORAである；
R2はH、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化１８】
2021530545.tif 000020
ここで、
R3、R4、R6、及びR7はそれぞれHである；
R5がORCである；
R8がOH又はNH2である；
R9がH又はOHである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される：
【化１９】
2021530545.tif 000021
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、及び任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-である（ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；Z'は反応性部分である、及びZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２００】
式(IIIA)は、アマトキシン及びリンカーを含む、並びに、いくつかの実施形態では、リンカー、化学的な部分構造、及び抗体を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化２０】
2021530545.tif 000022
ここで、Yは-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE)-, 又は-(CRERE’)-である；並びに
RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである；ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントは、アマトキシン-リンカーコンジュゲート又はその誘導体にコンジュゲートし、式IIIBで表される、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化２１】
2021530545.tif 000023
ここで、R3はH又はRCである。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化２２】
2021530545.tif 000024
ここで、
R3はH又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1はH、OH、又はORAである；
R2はH、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化２３】
2021530545.tif 000025
ここで、
R3、R4、R6、及びR7はそれぞれHである；
R5がORCである；
R8がOH又はNH2である；
R9がH又はOHである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２０８】
アウリスタチン
本明細書に記載する抗-CD5抗体及びその抗原結合フラグメントは、アウリスタチンである細胞毒素にコンジュゲートしていることがある(米国特許第5,635,483号;第5,780,588号)。アウリスタチンは、微小管動態、GTP加水分解、核分裂及び細胞分裂を妨げる抗有糸分裂剤であり(Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584)、並びに抗がん活性(米国特許第5,663,149号)及び抗真菌活性(Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). (米国特許第5,635,483; 5,780,588号)を有する。アウリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のN(アミノ)末端又はC(カルボキシル)末端を介して、抗体に結合することがある(WO02/088172)。
【０２０９】
例示的なアウリスタチンの実施形態は、N末端結合モノメチル・アウリスタチン薬物部分DE及びDFを含み(それぞれ、MMAE及びMMAF)、これらは、Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, 2004年3月28日に開示されている（この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２１０】
例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAEである：
【化２４】
2021530545.tif 000026
ここで、その波線は、抗体-薬物又は薬物-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２１１】
別の例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAFである：
【化２５】
2021530545.tif 000027
ここで、その波線は、US 2005/0238649で開示されているように、抗体-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す：
【０２１２】
アウリスタチンは以下の方法に従って調製することができる：米国特許第5,635,483号；米国特許第5,780,588；Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G. R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 15:859-863; 及び Doronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7):778-784。
【０２１３】
メイタンシノイド
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、微小管結合剤である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤は、メイタンシン、メイタンシノイド又はメイタンシノイド類似体である。メイタンシノイドは微小管と結合し、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは最初に、東アフリカ低木Maytenus serrataから単離された(米国特許第3,896,111号)。続いて、特定の微生物もまた、メイタンシノイド(例えば、メイタンシノール及びC-3メイタンシノール・エステル)を産生することが発見された(米国特許第4,151,042号)。合成メイタンシノール、並びにその誘導体及びその類似体は例えば、米国特許4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; 及び 4,371,533 号において開示されている。メイタンシノイドの薬物部分は、抗体薬物コンジュゲートにおいて魅力的な薬物部分である。なぜならば、メイタンシノイドの薬物部分は：(i)発酵又は、発酵産物の化学修飾、誘導体化によって調製することに、比較的アクセス可能である、(ii)非-ジスルフィド・リンカーを介した抗体へのコンジュゲートに適した官能基による誘導体化がやり易い、(iii)血漿中で安定である、及び(iv)種々の腫瘍細胞株に対して効果的である、からである。
【０２１４】
好適なメイタンシノイドの例としては、メイタンシノール、合成メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体及び誘導体、のエステルが挙げられる。メイタンシノイド、メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体、及び誘導体のように、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に対して非常に毒性である、任意の細胞毒素が本明細書に含まれる。
【０２１５】
好適なメイタンシノール・エステルの例としては、修飾された芳香環を有するもの、及び他の位置に修飾を有するものが含まれる。そのような好適なメイタンシノイドは、米国特許第4,137,230; 4,151,042; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814;  4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,362,663; 4,364,866; 4,424,219 ;4,450,254; 4,322,348; 4,362,663; 4,371,533; 5,208,020; 5,416,064; 5,475,092; 5,585,499; 5,846,545; 6,333,410; 7,276,497; 及び7,473,796号に開示されており、これらの各々は、メイタンシノイド及びその誘導体に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は、細胞毒性薬物として、チオール含有メイタンシノイド(DM1)（正式にはN2'-デアセチル-N2'-(3-メルカプト-1-オキソプロピル)-メイタンシンと呼ばれる）を利用する。DM1は、以下の構造式IVで表される：
【化２６】
2021530545.tif 000028
。
【０２１７】
別の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、チオール含有メイタンシノイドN2'-デアセチル-N2'(4-メチル-4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(例えば、DM4)を細胞毒性薬物として利用する。DM4は、以下の構造式Vで表される：
【化２７】
2021530545.tif 000029
。
【０２１８】
立体障害チオール結合を含む側鎖を含む別のメイタンシノイドは、N2'-デアセチル-N-2'(4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(DM3と呼ばれる)であり、以下の構造式VIで表される：
【化２８】
2021530545.tif 000030
。
【０２１９】
米国特許第5,208,020 及び 7,276,497が教示する各メイタンシノイドを、本発明のコンジュゲートにおいて使用することもある。この点に関して、5,208,020及び7,276,697の開示全体は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２０】
メイタンシノイド上の多くの位置は、連結部分と共有結合する位置としての役割を果たすことができる、及び、それ故に前記抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる（本明細書に記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z'）。例えば、ヒドロキシル基を有するC-3位、ヒドロキシメチルで修飾されたC-14位、ヒドロキシで修飾されたC-15位、及びヒドロキシ基を有するC-20位は、全て有用であると予想される。いくつかの実施形態では、前記C-3位は、連結部分と共有結合する位置としての役割を果たし、いくつかの特定の実施形態では、メイタンシノールのC-3位が、連結部分と共有結合する位置としての役割を果たす。抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを作製するために、当該技術分野で知られている多くの連結基が存在し、例えば、それらは、米国特許第5,208,020、6,441,163、及び欧州特許第0425235 B1; Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); 並びに U.S. 2005/0169933 A1に開示されているもの等を含む（これらの開示は、本明細書に明確に参照により取り込まれる）。更なる結合基は、本明細書に記載され、例示される。
【０２２１】
本発明はまた、メイタンシノイド及びコンジュゲートの種々の異性体及び混合物を含む。本発明の特定の化合物及びコンジュゲートは、種々の立体異性体、鏡像異性体、及びジアステレオマーの形態で存在することがある。このような抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを生成することは、米国特許5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,716,821、及び7,368,565に記載されている(これらの各々は、その全体が本明細書に取り込まれる)。
【０２２２】
アントラサイクリン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、アントラサイクリン分子である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。アントラサイクリンは、細胞傷害活性を示す抗生物質化合物である。研究によれば、アントラサイクリンは、以下を含む多数の異なるメカニズムによって、細胞を死滅させることがあることが示されてきている： 1)前記薬物分子が細胞のDNAにインターカレーションすることによって、DNA依存性の核酸合成を阻害すること；2) 薬物によるフリーラジカルの産生、フリーラジカルは、次いで細胞性高分子と反応して細胞に損傷を引き起こす、又は3)薬物分子と細胞膜との相互作用[例えば、C. Peterson et al.," Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia" in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy; N.R. Bachur, "Free Radical Damage" id. at pp.97-102を参照のこと]。細胞毒性の可能性があるため、白血病、乳がん、肺がん、卵巣腺がん及び肉腫のような多数のがんの治療にアントラサイクリンが用いられている[例えば、P.H- Wiernik, in Anthracycline: Current Status And New Developments p 11を参照]。一般的に使用されるアントラサイクリンには、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びダウノマイシンが含まれる。
【０２２３】
アントラサイクリンの代表的な例としては、限定されるものではないが、ダウノルビシン(Cerubidine; Bedford Laboratories)、ドキソルビシン(アドリアマイシン；Bedford Laboratories；塩酸ドキソルビシン、ヒドロキシ-ダウノルビシン、及びルベックス(Rubex)とも呼ばれる)、エピルビシン(Ellence;ファイザー)、及びイダルビシン(イダマイシン;ファイザー社)が挙げられる。アントラサイクリン類似体であるドキソルビシン(ADRIAMYCINO)は、インターカレーションによってDNAと相互作用し、及び転写のためにDNAをほどく酵素トポイソメラーゼIIが進むことを阻害する、と考えられている。ドキソルビシンは、トポイソメラーゼII複合体を、複製のためにDNA鎖を切断した後に安定化させ、DNA二重らせんが再び閉じることを防ぎ、それによって複製のプロセスを止める。ドキソルビシン及びダウノルビシン(DAUNOMYCIN)は、プロトタイプの細胞毒性天然物アントラサイクリン化学療法剤である（Sessa et al., (2007) Cardiovasc. Toxicol. 7:75-79）。
【０２２４】
本明細書で使用するのに適したアントラサイクリンの非限定的な一例は、ネモルビシンの非常に強力な主要代謝産物であるPNU-159682(「PNU」)である。PNUは、親であるネモルビシンに対して3000倍を超える細胞毒性を示す(Quintieri et al., Clinical Cancer Research 2005, 11, 1608-1617)。PNUは、以下の構造式によって表される：
【化２９】
2021530545.tif 000031
。
【０２２５】
PNUのようなアントラサイクリン上の多数の位置は、前記連結部分への共有結合する位置としての役割を果たす、そして、それ故に、本明細書中に記載するような抗-CD137抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる。例えば、リンカーを、ヒドロキシメチル・ケトン側鎖への改変を介して導入することがある。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、下記構造式で表されるPNU誘導体である：
【化３０】
2021530545.tif 000032
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、下記構造式で表されるPNU誘導体である：
【化３１】
2021530545.tif 000033
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２２８】
ピロロベンゾジアゼピン(PBDs)
他の実施形態では、本明細書に記載する抗-CD5抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)である細胞毒素、又はPBDを含む細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。PBDはある特定の放線菌によって産生され、配列選択的なDNAアルキル化化合物であることが示されてきている。PBD細胞毒素としては、限定されるものではないが、アントラマイシン、二量体PBD、及び、例えば、Hartley, J.A. (2011). “The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents.”  Expert Opin. Inv. Drug, 20(6), 733-744; 及び Antonow, D.; Thurston, D.E. (2011) “Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines (PBDs).” Chem. Rev. 111: 2815-2864の中で開示されているものが挙げられる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式で表されるピロロベンゾジアゼピン二量体であることがある：
【化３２】
2021530545.tif 000034
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。このPBDに基づくADCは、例えば、Sutherland et al., Blood 2013 122:1455-1463（これは、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に開示されている。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式で表されるPBD二量体であることがある：
【化３３】
2021530545.tif 000035
ここで、nは3又は5である、ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式で表されるPBD二量体であることがある：
【化３４】
2021530545.tif 000036
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、前記細胞毒素はPBD二量体であることがある、これは、リンカー及び反応性部分構造Z'と一緒になった場合、それぞれ本明細書中に記載するように、以下の構造によって表されることがある：
【化３５】
2021530545.tif 000037
。
【０２３３】
この特定の細胞毒素-リンカー・コンジュゲートはテシリン(SG3249)として知られており、例えば、Howard et al., ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7(11), 983-987、に記載されている、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、前記細胞毒素はPBD二量体であることがある、これは、リンカー及び反応性部分構造Z'と一緒になった場合、それぞれ本明細書中に記載するように、以下の構造によって表されることがある：
【化３６】
2021530545.tif 000038
。
【０２３５】
この特定の細胞毒素-リンカー・コンジュゲートはタリリンとして知られており、例えば、Mantaj et al., Angewandte Chemie International Edition English 2017,56, 462-488、に記載されている、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３６】
カリケアマイシン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、エネジイン抗腫瘍抗生物質(例えば、カリケアマイシン、オゾガマイシン)である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。カリケアマイシン・ファミリーの抗生物質は、ピコモル未満の濃度で、二本鎖DNAを切断することができる。カリケアマイシン・ファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,767,285; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 及び 5,877,296号を参照のこと（全てAmerican Cyanamid Companyに関する）。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998), 及びAmerican Cyanamidに関する上記の米国特許、に開示されているものが挙げられる。
【０２３７】
本発明における使用に適したカリケアマイシンの例としては、例えば、米国特許第4,671,958号。米国特許第4,970,198号。米国特許第5,053,394号、米国特許第5,037,651号；及び米国特許第5,079,233号、に開示されている、これらは、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０２３８】
例示的なカリケアマイシンは、γ1と命名されている、これらを、本明細書では単にガンマとして呼び、以下の構造式を有する：
【化３７】
2021530545.tif 000039
。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、前記カリケアマイシンは、ガンマ-カリケアマイシン誘導体又はN-アセチル・ガンマ-カリケアマイシン誘導体である。使用することがあるカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998)、及び上記の米国特許に開示されるものが挙げられる。カリケアマイシンは、適当なチオールと反応してジスルフィドを形成することができるメチルトリスルフィド部分を含み、メチルトリスルフィド部分は、同時に、カリケアマイシン誘導体を本明細書に記載の抗-CD5抗体又はその抗原結合フラグメントに、リンカーを介して結合させるのに有用な官能基を導入する。
【０２４０】
ある実施形態では、本明細書中に開示するADCの細胞毒素は、以下の式で表されるカリケアマイシン・ジスルフィド誘導体である：
【化３８】
2021530545.tif 000040
ここで、波線は、前記リンカーの結合の位置を示す。
【０２４１】
追加の細胞毒素
他の実施形態では、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントを、本明細書において上記で開示される細胞毒素以外の、又はそれに加えた細胞毒素に、コンジュゲートすることがある。本明細書に記載する組成物及び方法と共に使用するのに適した追加の細胞毒素としては、限定されるものではないが、5-エチニルウラシル、アビラテロン(abiraterone)、アシルフルベン(acylfulvene)、アデシペノール(adecypenol)、アドゼレシン(adozelesin)、アルデスロイキン(aldesleukin)、アルトレタミン(altretamine)、アンバムスチン(ambamustine)、アミドックス(amidox)、アミフォスチン(amifostine)、アミノレブリン酸(aminolevulinic acid)、アムルビシン(amrubicin)、アムサクリン(amsacrine)、アナグレリド(anagrelide)、アナストロゾール(anastrozole)、アンドログラフォリド(andrographolide)、血管新生阻害剤、アンタレリクス(antarelix)、抗背側形成タンパク質-1（anti-dorsalizing  morphogenetic protein-1）、抗アンドロゲン、前立腺がん、抗エストロゲン、抗新生物薬(antineoplaston)、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、アフィジコリン・グリシネート(aphidicolin glycinate)、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス・レギュレーター、アプリン酸(apurinic acid)、アスラクリン(asulacrine)、アタメスタン(atamestane)、アトリムスチン(atrimustine)、アキシナスタチン1(axinastatin 1)、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザセトロン(azasetron)、アザトキシン(azatoxin)、アザチロシン(azatyrosine)、バッカチンＩＩＩ(baccatin III.)誘導体、バラノール(balanol)、バチマスタット(batimastat)、BCR/ABL拮抗薬、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン(benzoylstaurosporine)、βラクタム誘導体、βアレチン(beta-alethine)、βクラマイシン(betaclamycin)B、ベツリン酸、bFGF阻害剤、ビカルタミド(bicalutamide)、ビサントレン(bisantrene)、ビスアジリジニルスペルミン(bisaziridinylspermine)、ビスナフィド(bisnafide)、ビストラテン(bistratene)A、ビゼレシン(bizelesin)、ブレフラート(breflate)、ブレオマイシンA2、ブレオマイシンB2、ブロピリミン(bropirimine)、ブドチタン(budotitane)、ブチオニン・スルホキシイミン(buthionine sulfoximine)、カルシポトリオール(calcipotriol)、カルホスチン(calphostin)C、カンプトテシン(camptothecin)誘導体（例えば、10-ヒドロキシ-カンプトテシン）、カペシタビン(capecitabine)、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン(carzelesin)、カゼイン・キナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン(castanospermine)、セクロピン(cecropin)B、セトロレリクス(cetrorelix)、クロリン(chlorins)、クロロキノキサリン・スルホンアミド(chloroquinoxaline sulfonamide)、シカプロスト(cicaprost)、シス-ポルフィリン、クラドリビン(cladribine)、クロミフェン(clomifene)及びその類似体、クロトリマゾール(clotrimazole)、コリスマイシン(collismycin)A、コリスマイシンB、コンブレタスタチン(combretastatin)A4、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン(conagenin)、クラムベシジン(crambescidin)816、クリスナトール(crisnatol)、クリプトフィシン(cryptophycin)8、クリプトフィシンA誘導体、キュラシン(curacin)A、シクロペンタアントラキノン(cyclopentanthraquinones)、シクロプラタム(cycloplatam)、シペマイシン(cypemycin)、シタラビン・オクホスファート(cytarabine ocfosfate)、細胞溶解因子、シトスタチン(cytostatin)、ダクリキシマブ(dacliximab)、デシタビン(decitabine)、デヒドロジデムニン(dehydrodidemnin)B、2'デオキシコホルマイシン(DCF)、デスロレリン(deslorelin)、デキシホスファミド(dexifosfamide)、デクスラゾキサン(dexrazoxane)、デクスベラパミル(dexverapamil)、ジアジクオン(diaziquone)、ジデムニン(didemnin)B、ジドクス(didox)、ジエチルノルスペルミン(diethylnorspermine)、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン(dioxamycin)、ジフェニル・スピロムスチン(diphenyl spiromustine)、ディスコデルモライド(discodermolide)、ドコサノール(docosanol)、ドラセトロン(dolasetron)、ドキシフルリジン(doxifluridine)、ドロロキシフェン(droloxifene)、ドロナビノール(dronabinol)、デュオカルマイシン(duocarmycin)SA、エブセレン(ebselen)、エコムスチン(ecomustine)、エデルフォシン(edelfosine)、エドレコロマブ(edrecolomab)、エフロルニチン(eflornithine)、エレメン(elemene)、エミテフール(emitefur)、エポチロン（epothilones）、エピチロン（epithilones）、エプリステリド(epristeride)、エストラムスチン(estramustine)及びその類似体、エトポシド（etoposide）、エトポシド4’-リン酸（etoposide 4’-phosphate）（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン(exemestane)、ファドロゾール(fadrozole)、ファザラビン(fazarabine)、フェンレチニド(fenretinide)、フィルグラスチム(filgrastim)、フィナステリド(finasteride)、フラボピリドール(flavopiridol)、フレゼラスチン(flezelastine)、フルアステロン(fluasterone)、フルダラビン(fludarabine)、塩酸フルロダウノルニシン(fluorodaunorunicin hydrochloride)、フォルフェニメクス(forfenimex)、フォルメスタン(formestane)、フォストリエシン(fostriecin)、フォテムスチン(fotemustine)、ガドリニウム・テキサフィリン(gadolinium texaphyrin)、硝酸ガリウム、ガロシタビン(galocitabine)、ガニレリクス(ganirelix)、ゲラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン(gemcitabine)、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム(hepsulfam)、ホモハリングトニン（homoharringtonine(HHT)）、ハイペリシン(hypericin)、イバンドロン酸（Ibandronic acid）、イドキシフェン(idoxifene)、イドラマントン(idramantone)、イルモフォシン(ilmofosine)、イロマスタット(ilomastat)、イミダゾアクリドン、イミキモド(imiquimod)、免疫刺激ペプチド、イオベングアン(iobenguane)、ヨードドキソルビシン(iododoxorubicin)、イポメアノール(ipomeanol)、イリノテカン、イロプラクト(iroplact)、イルソグラジン(irsogladine)、イソベンガゾール(isobengazole)、ジャスプラキノリド(jasplakinolide)、カハラリド(kahalalide)F、三酢酸ラメラリン-N(lamellarin-N triacetate)、ランレオチド(lanreotide)、レイナマイシン(leinamycin)、レノグラスチム(lenograstim)、硫酸レンチナン(lentinan sulfate)、レプトルスタチン(leptolstatin)、レトロゾール(letrozole)、親油性白金化合物、リソクリナミド(lissoclinamide)7、ロバプラチン(lobaplatin)、ロメトレキソール(lometrexol)、ロニダミン(lonidamine)、ロソキサントロン(losoxantrone)、ロキソリビン(loxoribine)、ルルトテカン(lurtotecan)、ルテチウム・テキサフィリン(lutetium texaphyrin)、リソフィリン(lysofylline)、マソプロコール(masoprocol)、マスピン(maspin)、マトリックス・メタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル(menogaril)、メルバロン(merbarone)、メテレリン(meterelin)、メチオニナーゼ、メトクロプラミド(metoclopramide)、MIF阻害剤、ミフェプリストン(mifepristone)、ミルテホシン(miltefosine)、ミリモスチム(mirimostim)、ミトラシン(mithracin)、ミトグアゾン(mitoguazone)、ミトラクトール(mitolactol)、マイトマイシン及び��の類似体、ミトナフィド(mitonafide)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、モファロテン(mofarotene)、モルグラモスチム(molgramostim)、マイカペルオキシドB、ミリアポロン(myriaporone)、N-アセチルジナリン(acetyldinaline)、N-置換ベンズアミド、ナファレリン(nafarelin)、ナグレスチップ(nagrestip)、ナパビン(napavin)、ナフテルピン(naphterpin)、ナルトグラスチム(nartograstim)、ネダプラチン(nedaplatin)、ネモルビシン(nemorubicin)、ネリドロン酸、ニルタミド(nilutamide)、ニサマイシン(nisamycin)、ニトルリン(nitrullyn)、オクトレオチド(octreotide)、オキセノン(okicenone)、オナプリストン(onapristone)、オンダンセトロン(ondansetron)、オラシン(oracin)、オルマプラチン(ormaplatin)、オキサリプラチン(oxaliplatin)、オキサウノマイシン(oxaunomycin)、パクリタキセル(paclitaxel)及びその類似体、パラウアミン(palauamine)、パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin)、パミドロン酸、パナキシトリオール(panaxytriol)、パノミフェン(panomifene)、パラバクチン(parabactin)、パゼリプチン(pazelliptine)、ぺグアスパルガーゼ(pegaspargase)、ペルデシン(peldesine)、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、ペントスタチン(pentostatin)、ペントロゾール(pentrozole)、パーフルブロン(perflubron)、パーホスファミド(perfosfamide)、フェナジノマイシン(phenazinomycin)、ピシバニル(picibanil)、ピラルビシン(pirarubicin)、ピリトレキシム(piritrexim)、ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）、ポルフィロマイシン(porfiromycin)、プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド(raltitrexed)、リゾキシン(rhizoxin)、ログレチミド(rogletimide)、ロヒツキン(rohitukine)、ルビギノン(rubiginone)B1、ルボキシル(ruboxyl)、サフィンゴル(safingol)、サイントピン(saintopin)、サルコフィトール(sarcophytol)A、サルグラモスチム(sargramostim)、ソブゾキサン(sobuzoxane)、ソネルミン(sonermin)、スパルホジン酸(sparfosic acid)、スピカマイシン(spicamycin)D、スピロムスチン(spiromustine)、スチピアミド(stipiamide)、スルフィノシン(sulfinosine)、タリムスチン(tallimustine)、テガフール(tegafur)、テモゾロミド(temozolomide)、テニポシド(teniposide)、タリブラスチン(thaliblastine)、チオコラリン(thiocoraline)、チラパザミン(tirapazamine)、トポテカン、トプセンチン(topsentin)、トリシリビン(triciribine)、トリメトレキサート(trimetrexate)、ベラミン(veramine)、ビノレルビン(vinorelbine)、ビンキサルチン(vinxaltine)、ボロゾール(vorozole)、ゼニプラチン(zeniplatin)、並びにジラスコルブ(zilascorb)、が挙げられる。
【０２４２】
リンカー
本明細書で使用する用語「リンカー」は、抗-CD5抗体又はそのフラグメント(Ab)を薬物部分(D)に共有結合させて式Iの抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を形成する、原子の共有結合又は鎖を含む、二価の化学的な部分構造を意味する。好適なリンカーは2つの反応性末端を有し、一方は抗体にコンジュゲートさせるためであり、他方は細胞毒素にコンジュゲートさせるためである。前記リンカーの抗体とコンジュゲートする反応性末端(反応性部分構造、Z')は、典型的には、前記抗体上のシステイン・チオール又はリジン・アミン基を介して、前記抗体にコンジュゲートさせることができる部位であり、従って、典型的には二重結合のようなチオールとの反応性がある基(例えば、マレイミドなど)、又はクロロ、ブロモ、ヨード等の脱離基、若しくはR-スルファニル基、又はカルボキシル基のようなアミンとの反応性がある基である；一方、前記リンカーの細胞毒素とコンジュゲートする反応性末端は、典型的には、細胞毒素にコンジュゲートすることができる部位である。リンカー-細胞毒素コンジュゲーションの非限定的な例としては、例えば、細胞毒素上の塩基性アミン基又はカルボキシル基とのアミド結合の形成（それぞれ、前記リンカーのカルボキシル又は塩基性アミン基を介する）、又はエーテル等の形成（前記細胞毒素のOH基をアルキル化することを介する、例えば、前記リンカーの脱離基を介する）、が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞毒素-リンカー・コンジュゲーションは、前記細胞毒素のアミン又はカルボキシル基とのアミド結合の形成を介する、そして、その場合、前記リンカーの反応性置換基はそれぞれカルボキシル又は塩基性アミン基である。前記用語「リンカー」を、コンジュゲートした形態のリンカーを説明する際に使用する場合、反応性末端の一方又は両方は、前記リンカー及び／又は前記細胞毒素間の、並びに前記リンカー及び／又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント間の、結合が形成されているので、存在しない(例えば、反応性部分構造Z'、化学的な部分構造Zに変換されている)か、又は反応途中にある(例えば、カルボン酸のカルボニルだけになっている等)。このようなコンジュゲートさせる反応を、本明細書中以下に更に記載する。
【０２４３】
様々なリンカーを使用して、記載した抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子にコンジュゲートさせることができる。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、細胞内の条件下で切断可能であり、その結果、前記リンカーの切断によって、細胞内環境において、抗体から薬物ユニットが放出される。更に他の実施形態では、そのリンカー・ユニットは切断可能ではなく、薬剤は、例えば、抗体の分解によって放出される。本発明のADCに有用なリンカーは、好ましくは細胞外で安定であり、ADC分子が凝集することを防止し、ADCが水溶性の媒体中で及び単量体状で溶け易いように維持する。細胞内に輸送される又は送達される前には、前記ADCは、好ましくは安定であり、及びインタクトなままであり、即ち、前記抗体は、前記薬物部分に連結したままである。前記リンカーはターゲット細胞の外部では安定であり、細胞内部ではある有効な速度で切断されることがある。効果的なリンカーは：(i)前記抗体の特異的な結合特性を維持する；(ii)前記コンジュゲート又は薬物部分が細胞内に送達されることを可能にする；(iii)前記コンジュゲートがそのターゲット部位に送達又は輸送されるまで、安定かつインタクトなままであり、即ち切断されない；並びに(iv)前記細胞毒性部分の、細胞毒性、細胞傷害効果又は細胞増殖抑制効果を維持する。前記ADCの安定性を、質量分析、HPLC、及び分離／解析技術のLC/MS等の標準的な分析技術によって測定することができる。前記抗体及び前記薬物部分の共有結合は、前記リンカーが2つの反応性官能基を有することを要求する（即ち反応性の意味での二価である）。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基等の2つ以上の機能的又は生物学的に活性な部分を結合させるのに有用な二価のリンカー試薬が知られており、それらのコンジュゲートを得る方法については記載されている(Hermanson、GT(1996)Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York、p.234-242)。
【０２４４】
好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって切断され得るものが挙げられる(例えば、Lericheら、Bioorg.Med.Chem、20:571-582、2012を参照のこと、これらの開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる)。好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル又はジペプチドなどの化学的な部分構造を挙げることができる。
【０２４５】
酸性条件下で加水分解可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス-アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタール等が挙げられる(例えば、米国特許第 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929号；Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661、これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)。このようなリンカーは、血中の条件のような中性pHの条件下では比較的安定であるが、リソソームのおよそのpHであるpH 5.5又は5.0未満では不安定である。
【０２４６】
還元条件下で切断可能なリンカーとしては、例えば、ジスルフィドが挙げられる。例えば、SATA(N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテート)、SPDP(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート)、SPDB(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)ブチレート)及びSMPT(N-スクシンイミジル-オキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)トルエン)、SPDB及びSMPT、を使用して形成することができるジスルフィド・リンカーが挙げられる、様々なジスルフィド・リンカーが当該技術分野で知られている(例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987)を参照のこと)。米国特許第4,880,935も参照のこと。これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２４７】
酵素的な加水分解に感受性があるリンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素(リソソーム・プロテアーゼ又はエンドソーム・プロテアーゼが挙げられるが
、これらに限定されない)によって切断されるペプチド含有リンカーであることがある。治療薬剤が細胞内タンパク質分解によって放出されることを利用することの1つの利点は、前記治療薬剤は、コンジュゲートしている場合、一般に減弱していて、及び前記コンジュゲートの血清安定性は一般的に高い、ということである。いくつかの実施形態では、前記ペプチジル・リンカーは、少なくとも2アミノ酸長又は少なくとも3アミノ酸長である。例示的なアミノ酸リンカーとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが挙げられる。好適なペプチドの例としては、バリン、アラニン、シトルリン(Cit)、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、及びグリシン等のアミノ酸を含有するペプチドが挙げられる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基としては、天然に存在するもの、並びにマイナーなアミノ酸及び非天然に存在するアミノ酸類似体(例えば、シトルリン)が挙げられる。例示的なジペプチドとしては、バリン-シトルリン(vc又はval-cit)及びアラニン-フェニルアラニン(af又はala-phe)が挙げられる。例示的なトリペプチドとしては、グリシン-バリン-シトルリン(gly-val-cit)及びグリシン-グリシン-グリシン(gly-gly-gly)が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Cit、Ala-Val、又はPhe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg、又はTrp-Citのようなジペプチドが挙げられる。Val-Cit又はPhe-Lys等のジペプチドを含むリンカーは、例えば、米国特許第6,214,345号に開示されている（この開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Ala及びVal-Citから選択されるジペプチドが挙げられる。
【０２４８】
本明細書に記載する抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子に結合させるのに適したリンカーとしては、1,6-脱離過程によって、細胞毒素を放出することができるリンカーが挙げられる。この脱離過程を可能にする化学的な部分構造としては、p-アミノベンジル(PAB)基、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、及びJain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015（この開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載される他の試薬等が挙げられる。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、前述のPAB又はPABC(パラ-アミノベンジルオキシカルボニル)等の「自壊」基が挙げられ、これらは、例えば、Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24:479-480; Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; WO98/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; WO2004/032828に開示されている。このプロセスが可能な他のこのような化学的な部分構造(「自壊リンカー」)としては、メチレン・カルバメート及びヘテロアリール基、例えばアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどが挙げられる。このような複素環の自壊基を含むリンカーは、例えば、米国特許出願公開20160303254 及び 20150079114、並びに米国特許第7,754,681; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237; US 2005/0256030; de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830; 及び US 7223837に開示されている。いくつかの実施形態では、ジペプチドを、自壊リンカーと組合せて使用する。
【０２５０】
本明細書での使用に適したリンカーは、C1-C6アルキレン、C1-C6ヘテロアルキレン、C2-C6アルケニレン、C2-C6ヘテロアルケニレン、C2-C6アルキニレン、C2-C6ヘテロアルキニレン、C3-C6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、及びそれらの組合せから選択される1つ以上の基を更に含むことがあり、これらの各々は任意選択的に置換されていることがある。このような基の非限定的な実施例としては、(CH2)p、(CH2CH2O)p、及び-(C=O)(CH2)p-ユニットが挙げられ、ここで、pは1〜6の整数であり、各々の場合に対して独立に選択される。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、C3-C6シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、スルホニルシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、C3-C6シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、スルホニルシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって、任意選択的に割り込まれていることがある。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、C3-C6シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、スルホニルシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって、任意選択的に割り込まれていることがある、並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。好適なリンカーは、溶解性を高める特性を有する基を含むことがある。例えば、(CH2CH2O)pユニット(ポリエチレングリコール、PEG)を含むリンカーは、溶解性を高めることができる（例えば、アミノ、スルホン酸、ホスホン酸又はリン酸残基で置換して、アルキル鎖の溶解性を高めることができる）。このような部分構造を含むリンカーは、例えば、米国特許番号8,236,319 及び9,504,756に開示されている（これらの各々の開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。更なる溶解性を高める基としては、例えば、以下の構造を有するアシル及びカルバモイル・スルファミド基が挙げられる：
【化３９】
2021530545.tif 000041
ここで、aは0又は1である；並びに
R10は、水素、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C1-C24(ヘテロ)アリール基、C1-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC1-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C2-C24（ヘテロ）アリール基、C3-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC3-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、からなる基から選択され、これらの各々は、O、S、及びNR11R12から選択される1種以上のヘテロ原子によって、任意選択的に置換している、及び／又は任意選択的に割り込まれていることがある、ここで、R11及びR12は、水素及びC1-C4アルキル基からなる群から独立して選択される；又はR10は細胞毒素である、ここで、前記細胞毒素は、スペーサー部分を介して、Nに任意選択的に結合する。そのような基を含むリンカーは、例えば、米国特許9,636,421号及び米国特許出願公開第2017/0298145号(これら開示は、細胞毒素及び抗体又はそれらの抗原結合フラグメントへの共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)に記載されている。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、ジペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、複素環自壊基、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C6シクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、溶解増強基、アシル、-(C=O)-、又は-(CH2CH2O)p-基のうちの1つ以上を含むことがある、ここで、pは1〜6の整数である。当業者の中のある者は、列挙された基の1つ以上が、二価(ジラジカル)種(例えば、C1-C6アルキレン等)の形態で存在し得ることを認識する。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、p-アミノベンジル基(PAB)を含む。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、細胞毒性薬物とリンカー中のプロテアーゼ切断部位との間に配置される。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルオキシカルボニル・ユニットの一部である。ある実施形態では、p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルアミド・ユニットの一部である。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Ala、Phe-Cit、Val-Ala、Val-Cit、及びVal-Argからなる群より選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、又はAla-PABのうちの1種以上を含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又はAla-PAB を含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、-(CH2)p-, -(CH2CH2O)p-, PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又はAla-PAB、のうちの1つ以上の組合せを含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、-(C=O)(CH2)p-ユニットを含み、ここで、pは1〜6の整数である。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、前記リンカーは、-(CH)2n-ユニットを含む、ここで、nは2-6からの整数である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、nが6である-((CH2)nを含む。いくつかの実施形態において、L-Zは、
【化４０】
2021530545.tif 000042
である、ここで、Sは、CD5に結合する、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である(例えば、システイン残基の-SH基に由来する)。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、((CH2)mO)n(CH2)m-基を含み、ここで、n及びmはそれぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される；並びにヘテロアリール基、ここで、前記ヘテロアリール基は、トリアゾールである。いくつかの実施形態では、((CH2)mO)n(CH2)m-基及びトリアゾールは、一緒になって以下を含む
【化４１】
2021530545.tif 000043
ここで、nは1~10であり、及び波線は、追加のリンカー構成成分、化学的な部分構造Z、又はアマトキシンへの結合の位置を示す。本明細書中に記載する方法及び組成物において使用することがある他のリンカーは、米国特許出願公開第2019/0144504号に記載されており、これは、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２６２】
ある具体的な実施形態では、前記リンカーは、PAB-Ala-Val-プロピオニルを含み、以下の構造によって表される
【化４２】
2021530545.tif 000044
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。
【０２６３】
別の具体的な実施形態では、前記リンカーは、PAB-Cit-Val-プロピオニルを含み、以下の構造によって表される
【化４３】
2021530545.tif 000045
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。このようなPAB-ジペプチド-プロピオニル・リンカーとしては、例えば、特許出願公開WO2017/149077に開示されている（これは、その全体が、本明細書に参照により取り込まれる）。更に、WO2017/149077に開示された細胞毒素は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２６４】
本明細書に開示する化学基、部分及び特徴の何れか1つ以上を、多様な方法で組み合わせて、本明細書に開示するような抗体と細胞毒素とをコンジュゲートさせることに対して有用なリンカーを形成し得ることは、当業者の中のある者によって認識されるだろう。本明細書中に記載する組成物及び方法と併せることにおいて有用な更なるリンカーは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、その開示内容は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、リンカーの前駆物質である中間体を、好適な条件下で薬物部分と反応させる。ある特定の実施形態では、反応性基を、前記薬物及び／又は前記中間体若しくはリンカー上で使用する。前記薬物と前記中間体との間の反応の生成物、又は誘導体化した薬物を、その後、好適な条件下で、抗体又は抗原結合フラグメントと反応させる。あるいは、前記リンカー又は中間体を、最初に前記抗体又は誘導体化した抗体と反応させ、次いで前記薬物又は誘導体化した薬物と反応させてもよい。このようなコンジュゲーション反応を、ここで、より完全に記載する。
【０２６６】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントに、前記リンカー又は薬物-リンカー・コンジュゲートを共有結合させるために、多くの様々な反応を利用することができる。抗体分子上の好適な結合の位置としては、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の種々の部分が挙げられる。例えば、化合物上のカルボキシ(又はアミノ)基を抗体部分上のアミノ(又はカルボキシ)基に連結するために、非特異的な共有結合を、カルボジイミド反応を用いて行うことがある。更に、化合物上のアミノ基を抗体部分上のアミノ基に結合させるために、ジアルデヒド又はイミドエステルなどの二官能基性の薬剤を使用することもある。薬物を結合剤に結合させることには、シッフ塩基反応を利用することも可能である。この方法は、グリコール又は水酸基を含有する薬物を過ヨウ素酸塩酸化させることを含み、このようにしてアルデヒドを形成させ、次いでこれを結合剤と反応させる。結合は、前記結合剤のアミノ基を有するシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートを、薬物を結合剤に共有結合させるためのカップリング剤として使用することもある。他の技術は当業者に知られており、本発明の範囲内である。
【０２６７】
本明細書に記載する場合、抗体又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに有用なリンカーとしては、限定されるものではないが、以下の表３に示すような、カップリング反応によって形成される化学的な部分構造Zを含むリンカーが挙げられる。曲線は、それぞれ、抗体又は抗原結合フラグメント、及び細胞毒性分子に結合する位置を示す。
【０２６８】
表３．抗体-薬物コンジュゲートを生成する際のカップリング反応によって形成される、例示的な化学的な部分構造Z
[表４]
【０２６９】
当業者の中のある者は、前記リンカー及び前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基に結合した反応性置換基Z'が、化学的な部分構造Zを生成する共有結合カップリング反応に関与するものであることを認識し、前記反応性の部分構造Z'を認識する。従って、本明細書に記載の方法と併せることにおいて有用な抗体-薬物コンジュゲートは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートと反応することによって形成されることがあり、本明細書に記載するように、前記リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは反応性置換基Z'等を含み、抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基との反応に適していて、化学的な部分構造Zを形成する。
【０２７０】
表３に示されるように、前記リンカー及び抗体、又はその抗原結合フラグメント上の好適な反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対、又はジエン／α,β-不飽和カルボニル対)等が挙げられる。化学的な部分構造Zを形成するための反応性置換基間のカップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン又はヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、とりわけ、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本明細書に記載されている他の反応様式が挙げられる。好ましくは、前記リンカーは、前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の求核性官能基との反応のための求電子性官能基を含む。
【０２７１】
本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、(i)N末端アミン基、(ii)側鎖アミン基(例えば、リジン)、(iii)側鎖チオール基(例えば、システイン)、及び(iv)糖水酸基又はアミノ基(ここで、前記抗体はグリコシル化されている)、のような求核基が挙げられる。本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、セリン、スレオニン、及びチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸及びグルタミン酸残基のカルボキシル部分；並びにシステイン残基のチオール部分、並びに、非天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール(例えば、フルオロアリール)、ハロヘテロアリール(例えば、フルオロヘテロアリール)、ハロアルキル、及びハロヘテロアルキル部分が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基としては、アミン又はチオール部分が挙げられる。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド（即ち、システイン架橋）を有する。抗体は、DTT(ジチオトレイトール)等の還元剤で処理することによって、リンカー試薬とコンジュゲートさせるために、反応性にすることができる。従って、各システイン架橋は、理論的には、2つの反応性チオール求核基を形成する。リジンと2-イミノチオラン(トラウト試薬)との反応によって、更なる求核基を抗体中に導入して、アミンをチオールに転化させることができる。1個、2個、3個、4個、又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって(例えば、1個以上の元々は無かったシステイン・アミノ酸残基を含む変異抗体を調製することによって)、反応性チオール基を、抗体(又はそのフラグメント)に導入することがある。米国特許第7,521,541号は、反応性システイン・アミノ酸を導入することによる工学的に操作した抗体を教示している。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、前記リンカーに結合した反応性の部分構造Z'は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基である。抗体上の有用な求電子基としてはアルデヒド及びケトンのカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、前記抗体と共有結合を形成することがある。有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジン・カルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、Zは、抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性求核置換基(例えば、アミン及びチオール部分)と反応性求電子置換基Z'との間の反応の生成物である。例えば、Z'は、特に、マイケル・アクセプター(例えば、マレイミド)、活性化エステル、電子欠損カルボニル化合物、及びアルデヒドであることがある。反応性置換基Z'及び得られる化学的な部分構造Zのいくつかの代表的的及び非限定的な例を、表４に示す。
【０２７４】
表４．補完的な反応性置換基と化学的な部分構造
【表５】
2021530545.tif 000046
【０２７５】
例えば、薬物-抗体及び薬物-リガンド・コンジュゲートの合成に好適なリンカーとしては、限定されるものではないが、マレイミド又はハロアルキル基などの反応性置換基Z'が挙げられる。これらは、試薬（例えば、特に、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボキシレート(SMCC)、N-スクシンイミジル・ヨードアセテート(SIA)、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジル・エステル(MBS)、スルホ-MBS、及びスクシンイミジル・ヨードアセテート、等であり、例えば、Liu et al., 18:690-697, 1979に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる））によって、前記リンカーに結合することがある。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、リンカーLに結合した反応性置換基Z'は、マレイミド、アジド、又はアルキンである。マレイミド含有リンカーの例は、非切断性マレイミドカプロイル-ベースのリンカーであり、これは、アウリスタチンなどの微小管破壊剤をコンジュゲートするのに特に有用である。このようなリンカーはDoronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、反応性置換基Z'は-(C=O)-又は-NH(C=O)-であり、その結果、前記リンカーは、それぞれ、-(C=O)-又は-NH(C=O)基と抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ基との反応から生じるアミド又は尿素の部分構造によって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントに結合することがある。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、N-マレイミジル基、ハロゲン化N-アルキルアミド基、スルホニルオキシN-アルキルアミド基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、内部に炭素-炭素の三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ[6.1.0]ノン-4-イン-9-イル基（bicyclo[6.1.0]non-4-yn-9-yl group）、内部に炭素-炭素の二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリル・オキシド基、ニトロン基、ニトリル・イミン基、ジアゾ基、ケトン基、(O-アルキル)ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化N-マレイミジル基、1,1-ビス(スルホニルメチル)メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、又はアレンアミド基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていることがある。いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、又は任意に置換された(ヘテロ)シクロアルキニル基を含む。
【０２７９】
前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性残基との反応に適した反応性置換基Z'を含むアマトキシン-リンカー・コンジュゲートの非限定的な例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる、7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボニル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-((4-(マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(R)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(S)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(マレイミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)アゼチジン-1イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(2-(アミノオキシ)アセトア��ド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(1-(アミノオキシ)-2-オクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3-アザヘプタデカン-17-オイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(20-(アミノオキシ)-4,19-ジオクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,18-ジアザイコシル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-S-メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(5-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ペンチル)-アマトキシン；6'O-(2-((6-(マレイミド)ヘキシル)オキシ)-2-オキソエチル)-アマトキシン；6'O-((6-(マレイミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-ブロモアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(アジド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(へクス-5-イノイルアミノ)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(11,12-ジデヒドロ-5,6-ジヒドロ-ジベンズ[b,f]アゾシン-5-イル)-6-オクソヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(へクス-5-イノイルアミノ)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-(アミノオキシ)アセチルアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-((6-アミノオキシ)ヘキシル)-アマトキシン；及び 6'O-(6-(2-イオドアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、前記化学的な部分構造Zを、表３又は表４から選択する。いくつかの実施形態では、前記化学的な部分構造Zは：
【化４４】
2021530545.tif 000047
ここで、Sは、抗-CD-5抗体のような抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー-反応性部分構造である-L-Z'にコンジュゲートしている：
【化４５】
2021530545.tif 000048
ここで、波線は、前記細胞毒素(例えば、アマトキシン)上の置換基への結合の位置を示す。このリンカー-反応性置換基であるL-Z'を、代わりに、N-ベータ-マレイミドプロピオニル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)と呼ぶことがある。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー-反応性部分である-L-Z'にコンジュゲートしている：
【化４６】
2021530545.tif 000049
ここで、波線は、前記細胞毒素(例えば、アマトキシン)上の置換基への結合の位置を示す。このリンカー-反応性置換基であるL-Z'を、代わりに、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Cit-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Cit-PAB) と呼ぶことがある。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び化学的な部分構造Zは、L-Zとして一緒になって、
【化４７】
2021530545.tif 000050
である、ここで、Sは、抗-CD-5抗体のような、抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である。前記リンカーの末端にある波線は、前記アマトキシンへの結合の位置を示す。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び化学的な部分構造Zは、前記尾抗体にコンジュゲートした後、L-Z-Abとして一緒になって、以下の構造を有する:
【化４８】
2021530545.tif 000051
。
【０２８５】
前記のリンカー部分構造及びアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、とりわけ、本明細書に記載する組成物及び方法と関連して有益であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号及び特許出願公開第WO2017/149077号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２８６】
前記のリンカー部分構造及びアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、とりわけ、本明細書に記載する組成物及び方法と関連して有益であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号及び特許出願公開第WO2017/149077号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２８７】
ある実施形態では、本明細書中に記載するCD5抗体又は抗原結合フラグメントは、それぞれ本明細書中に記載するように、式Ab-Z-L-Am(式中、Abは前記CD5抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、及びAmはアマトキシンである)によって表されるコンジュゲートを形成するように、アマトキシンに結合していることがある。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化４９】
2021530545.tif 000052
である。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化５０】
2021530545.tif 000053
である。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化５１】
2021530545.tif 000054
である。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化５２】
2021530545.tif 000055
である。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abはである:
【化５３】
2021530545.tif 000056
である。
【０２９３】
抗体-薬物コンジュゲートの調製
本明細書に開示する式IのADCにおいて、抗-CD5抗体、又はその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示するリンカーL及び化学的な部分構造Zを介して、1個以上の細胞毒性薬物部分(D)(例えば、1抗体あたり約1〜約20個の薬物部分)にコンジュゲートしている。本発明のADCは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、及び試薬を使用するいくつかの経路によって調製され得る：(1)抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、本明細書中上記のようなAb-Z-Lを形成させる、続いて、薬物部分Dと反応させる；又は、(2)薬物部分の反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、D-L-Z'を形成させる、続いて、本明細書中上記のような抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基と反応させる。ADCを調製するための更なる方法は、本明細書中に記載される。
【０２９４】
別の態様において、前記抗-CD5抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を導入するために化学的に修飾され得る1つ以上のリジン残基を有する。次いで、前記ADCを、本明細書中上記に記載するように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成する。リジンを修飾するために使用することができる試薬としては、限定されるものではないが、N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテート(SATA)及び2-イミノチオラン塩酸塩(Traut’s試薬)が挙げられる。
【０２９５】
別の態様において、前記抗-CD5抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾され得る1つ以上の糖鎖部分(carbohydrate groups)を有することがある。次いで、前記ADCを、本明細書中上記に記載されるように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成する。
【０２９６】
更に別の態様において、前記抗-CD5抗体は、酸化されてアルデヒド(-CHO)基を提供し得る1つ以上の糖鎖部分(carbohydrate groups)を有することがある(例えば、Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548-55を参照のこと)。次いで、前記ADCを、本明細書中上記に記載されるように、対応するアルデヒドを介してコンジュゲートすることによって形成する。細胞毒素を結合させる又は会合させるためのタンパク質を改変する他のプロトコールは、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)に記載されている（本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２９７】
抗体、免疫グロブリン又はそのフラグメント等の細胞にターゲットするタンパク質に、リンカー-薬物部分をコンジュゲートさせるための方法は、例えば、米国特許第5,208,020号; 米国特許第6,441,163号; WO2005037992; WO2005081711; 及びWO2006/034488に記載されている（これらの全ては、その全体が本明細書に明確に参照により取り込まれる）。
【０２９８】
投与経路及び用量
或いは、前記抗体及び細胞毒性薬物を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術又はペプチド合成によって、作製することがある。DNAの長さは、互いに隣接するか、又は前記コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカー・ペプチドをコードする領域によって分離された、前記コンジュゲートの2つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことがある。
【０２９９】
本明細書中に記載するADCを、種々の投薬形態で患者(例えば、自己免疫疾患又はがんに罹患しているヒト患者)に投与することがある。例えば、本明細書中に記載するADCを、自己免疫疾患又はがんに罹患している患者に、水溶液（例えば、1種以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液等）の形態で投与することがある。本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用するために好適な薬学的に許容される賦形剤には、粘度調整剤が含まれる。前記水溶液を、当該技術分野で公知の技術を使用して滅菌することがある。
【０３００】
本明細書中に記載するような抗-CD5 ADCを含む医薬製剤は、このようなADCを、1種以上の任意選択的な薬学的に許容可能な担体と混合することによって(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition、Osol、AEd.(1980))、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容可能な担体は、一般に、使用する用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒性であり、これには、限定されるものではないが、以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジル・アルコール；メチル若しくはプロピル・パラベン等のアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；及びm-クレゾール等）；低分子量(約10残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの他の糖類；EDTAなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Zn-タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレン・グリコール（PEG）などの非イオン性界面活性剤。
【０３０１】
投与するADCの量は、CAR細胞療法を拒絶する細胞(例えば、活性化T細胞)を減少させるのに充分であるべきである。治療的に有効な用量を決定することは当業者の能力の範囲内であるが、例えば、免疫疾患又はがんを治療するために、ADCを全身投与するのに利用する本明細書に記載の方法の実施形態では、有効なヒト用量は、0.1~150 mg/kgの範囲(例えば、5 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg等)にあるであろう。その投与経路は、推奨用量に影響を及ぼす可能性がある。採用する投与様式に依存しつつ、有効なレベルを維持するために、例えば、CAR-T細胞拒絶のリスクを減少させるために、全身投与を繰り返すことが意図される。
【０３０２】
本明細書に記載する抗-CD5 ADCを、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、又は非経口などの様々な経路によって投与することがある。任意の所与の症例において投与するのに最も好適な経路は、具体的なADC、患者、医薬製剤方法、投与方法(例えば、投与時間及び投与経路)、患者の年齢、身体の重量、性別、治療する疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄速度に依存する。
【０３０３】
本明細書中に記載する抗-CD5 ADCの有効用量は、例えば、単回(例えば、ボーラス)投与、複数回投与、又は持続投与あたりで、体重に関して約0.001〜約100 mg/kgの範囲にすることで、前記抗-CD5 ADCは最適な血中濃度(例えば、0.0001〜5000 μg/mLの血中濃度)になることがある。前記抗-CD5 ADCの1回用量を、前記抗-CD5 ADCを投与した後の時間にCAR療法を同時に受けている、又は受ける予定のヒト患者に、1日、1週間、又は1ヶ月あたり1回以上(例えば、2〜10回)、投与することがある。抗-CD5 ADCを、ヒト患者に1回又は複数回用量として投与することがある。ある実施形態では、前記抗-CD5 ADCを、宿主反応性T細胞の量を減少させる（例えば、CAR療法前の10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、又はそれ以上）のに充分な量で、投与することがある。
【実施例】
【０３０４】
本明細書中に記載する組成物及び方法を、どのように使用する、作製する、及び評価することがあるかに関する記載を、当業者に提供するために、以下の実施例を提示する、そして、純粋に本発明の例示であることが意図され、そして本発明者らがそれらの発明とみなす範囲を限定することを意図していない。
【０３０５】
実施例１：抗-CD5抗体のin vitro結合解析
抗-CD5抗体 5D7 hIgG1の結合特性を測定するために、抗体結合試験を、25℃セルシウスで、0.1% w/vのウシ血清アルブミンを添加した1× PBS中、バイオレイヤー干渉法(Bio-Layer Interferometry (BLI))を用いたPall ForteBio Octet Red96により、行った。精製ヒト抗-CD5抗体(5D7)を、抗-ヒトFcバイオセンサ(AHC; Pall ForteBio 18-5063)上に固定化し、50nMの精製したヒトCD5エクトドメインと共にインキュベートした。抗-CD5抗体 5D7 の結合特性を表４に示す。実施例１〜５で使用する抗-CD5抗体5D7は、マウス抗体5D7のヒト化型である(US 2008/0254027を参照)。本明細書中で使用する抗体5D7の配列を、配列番号(SEQ ID Nos): 53及び54(重鎖可変領域アミノ酸配列及び軽鎖可変領域アミノ酸配列)並びに配列番号(SEQ ID Nos):47~52(重鎖CDR及び軽鎖CDR)に記載する。
【０３０６】
【表６】
2021530545.tif 000057
【０３０７】
実施例２：抗-CD5抗体のin vitro細胞株結合解析
MOLT-4細胞(即ち、不死化ヒトTリンパ芽球細胞株)を20,000細胞／ウェルでプレーティングし、示したマウス抗-CD5抗体(即ち、L17F12、UCHT2、205919、及びCRIS-1)を滴下し、4℃で2時間染色した。二次抗-マウスAF488染色を、一定量で、4℃で30分間添加した。洗浄後、プレートをフローサイトメーターで測定し、示した抗体(及びネガティブ・コントロール、即ちmIgG1)の結合を、AF488チャンネルにおける蛍光強度の幾何平均値に基づいて決定した。これらのアッセイによる結果を図１に示す。
【０３０８】
図１に示すように、前記マウス抗-CD5抗体 L17F12(Thermo Fisher)、UCHT2(BioLegend)、205919(Novus Biologicals)、及びCRIS-1(Novus Biologicals)は、ヒトTリンパ芽球細胞(即ち、MOLT-4細胞)に結合し、EC50 = 207 pM(L17)、354 pM(UCH)、1350 pM(205)、及び43 pM(CRIS)であった。
【０３０９】
実施例３：抗-CD5抗体のin vitro初代細胞結合解析
初代ヒトT-細胞を8×104細胞／ウェルでプレーティングし、ヒト抗-CD5抗体 5D7 を滴下し、37℃で2時間染色した。二次抗-マウスAF488染色を、一定量で、4℃で30分間添加した。洗浄後、プレートをフローサイトメーターで測定し、抗-CD5 5D7抗体(及びネガティブ・コントロール、即ちhIgG1)の結合を、AF488チャンネルにおける蛍光強度の幾何平均値に基づいて決定した。これらのアッセイによる結果を図２に示す。
【０３１０】
図２に示すように、前記抗-CD5抗体5D7は、EC50 = 3.0 pMで、初代ヒトT-細胞に結合した。
【０３１１】
実施例４：in vitro T-細胞傷害試験を用いた、抗-CD5-アマトキシン抗体薬物コンジュゲート(ADC)の in vitro 解析
抗-CD5抗体 5D7を、切断可能なリンカーを使ってアマトキシン(アマニチン)にコンジュゲートさせて、抗-CD5 5D7ADCを形成させた。約6(鎖間DAR6)の薬剤対抗体比(DAR)を有する抗-CD5 5D7-ADC、並びに約2のDARを有する抗-CD5 5D7-ADC(D265C変異を介する部位特異的なコンジュゲーションを使用して調製)を試験した。更に、抗-CD5 5D7-ADCの速い半減期のバリアントを、そのFc領域内にH435A変異を導入することによって作製した。
【０３１２】
各抗-CD5 5D7-ADCを、in vitroヒトT-細胞傷害アッセイを用いて評価した。
【０３１３】
凍結保存されたネガティブに選択された初代ヒトT細胞を解凍し、抗-CD3抗体及びIL-2で刺激した。アッセイの最初に、384ウェル・プレートのウェル当たり2×104 個のT細胞を播種し、示したADC又は非-コンジュゲートの抗-CD5抗体を、0.003nM~30 nMの間の種々の濃度でウェルに添加した後、37℃及び5% CO2のインキュベーターの中に置いた。5日間の培養をした後、細胞をフロー・サイトメトリーによって解析した。細胞を生存率マーカ7-AADで染色し、体積フロー・サイトメーター（volumetric flow cytometer）で測定した。
【０３１４】
生存しているT-細胞の数(図３Ａ及び３Ｂ)を、FSC対SSC及び7-AADによって測定した。非-コンジュゲートの抗-CD5 5D7抗体を、比較対照として使用した(図３Ａ)。
【０３１５】
図３Ａに示すように、約6のDARを有する抗-CD5 5D7-ADCは、ヒトT細胞を強力かつ特異的に傷害した(IC50=3.7 pm)。一方、非-コンジュゲート(「そのまま(naked)」)抗-CD5 5D7抗体の存在下にあるT細胞は、生存可能なままであった。図３Ｂに示すように、約2の部位特異的な(D265C)DARを有するADCは、DAR 6のADCと同様の強力なレベルのT-細胞傷害性(IC50=5.0 pm)を保持した。抗-CD5 5D7-ADC(H435A)の速い半減期のバリアントは、同様レベルのT-細胞傷害性を示した(IC50=4.9 pm；図３Ｂ)。
【０３１６】
実施例５：hNSGマウス・モデルを用いたT-細胞減少の解析
in vivo T-細胞減少アッセイを、ヒト化NSGマウス(Jackson Laboratories)を用いて行った。抗-CD5抗体 5D7を、切断可能なリンカーを使ってアマトキシン(アマニチン)にコンジュゲートさせて、抗-CD5 5D7-ADCを形成させた。抗-CD5 5D7-ADCを、上記のように、約6のDAR又は約2のDARの何れかとして調製した。各抗-CD5 5D7 ADC(DAR6又はDAR2)を、ヒト化マウスに単回の静脈内注射(DAR6 ADCについては0.3 mg/kg、1 mg/kg、又は3 mg/kg、又はDAR2 ADCについては1 mg/kg又は3 mg/kg)として投与した。7日目に、末梢血細胞、骨髄、又は胸腺サンプルを採取し、フロー・サイトメトリーによりCD3+ T-細胞の絶対数を測定した(DAR2 ADCについては図４Ａ−４Ｂ、DAR6 ADCについては５Ａ−５Ｃを参照のこと)。
【０３１７】
図４Ａ−４Ｂに示すように、0.3mg/kg、1mg/kg、又は3mg/kgのDAR6の抗-CD5 5D7-ADCで処理したヒト化NSGマウスでは、末梢血又は骨髄において、T-細胞が強力に減少した、一方、1mg/kg又は3mg/kgのDAR6の抗-CD5 5D7-ADCで処置した後で、胸腺のT-細胞は減少した。このin vivo試験で使用したネガティブ・コントロールは、CD5に特異的でないヒトIgG1(そのままの(naked)抗体(huIgG1)として)を含み、アマトキシン(huIgG1-AM)にコンジュゲートさせた。図４Ａ〜４Ｂに記載するように、前記huIgG1そのまま(naked)及びコンジュゲートさせたコントロールは、末梢血(図４Ａ)及び骨髄(図４Ｂ)におけるT細胞の減少に、影響を与えず、これらのコントロールはPBSコントロールに相当した。抗-CD5抗体(抗体YTH34.5)をコントロールとして使用しても、25 mg/kgの用量で末梢の及び骨髄のT細胞を減少させることができた。
【０３１８】
図５Ａ−５Ｃに示すように、1 mg/kg又は3 mg/kgで、部位特異的なDAR2の抗-CD5 5D7-ADCを処置したヒト化NSGマウスは、末梢血、骨髄、及び胸腺T-細胞において、T-細胞が強力に減少した。図５Ａ〜５Ｃのそれぞれにおいて、そのままの抗体5D7もコントロールとして使用した。図５Ａに記載するように、抗体5D7により (非-特異的なヒトIgG1コントロール又はPBSと比較して)末梢T細胞を減少させることができたが、骨髄T細胞又は胸腺T細胞のいずれも減少させることはできなかった。一方、図５Ｂ及び５Ｃに記載するように、5D7-AM ADCは、骨髄及び胸腺のT細胞の両方を減少させるのに有効であった。
【０３１９】
実施例６：マウス・モデルにおける同種異系CAR-T細胞の投与
以下の研究を行って、様々な条件下で同種異系レシピエント(recipient)中に存在するCAR-T細胞のレベルを評価する。
【０３２０】
この研究では、マウスの同種異系CAR-Tモデルを用いる。
【０３２１】
第1の処置群のマウスを、0日目に1×107~1×109 細胞／kgを静脈内注入することによって、同種異系T細胞の初回用量で処置する。3日目に、前記マウスに抗-CD5-α-アマニチンADCを3 mg/kgの用量で投与する。10日目に、前記ADCが前記マウスの血中から実質的にクリアランスされた後、マウスに同種異系のCAR-T細胞を投与する。前記CAR-T細胞は、0日目に投与した同種異系T細胞と同じドナー(donor)に由来する。
【０３２２】
第2の処置群のマウスを、第1の処置群と同じプロトコルを用いて処置する、但し、抗-CD5 ADCの代わりに、3日目に非コンジュゲートの抗-CD5抗体を投与する。
【０３２３】
第3の処置群のマウスを、第1の処置群と同じプロトコルを用いて処置する、但し、抗-CD5 ADCの代わりに、3日目にα-アマニチンにコンジュゲートしたアイソタイプ・コントロールの抗体を投与する。
【０３２４】
第4の処置群のマウスを、第1の処置群と同じプロトコルを用いて処置する、但し、同種異系T細胞の代わりに、0日目に初回用量の自己T細胞を投与する。
【０３２５】
第5の処置群のマウスは、前処置なしに、10日目に同種異系CAR-T細胞を投与する。
【０３２６】
第6の処置群のマウスは、前処置なしに、10日目に自己CAR-T細胞を投与する。
【０３２７】
14日目、17日目、及び30日目に、各処置群から得られたマウスの脾及び末梢血中に存在するCAR-T細胞の個数を測定する。9日目に、各処置群から得られたマウスの脾及び末梢血中のCD5+活性化T細胞の個数を測定する。本試験期間を通じて、拒絶反応の症状(symptom)についてマウスをモニターする。
【０３２８】
実施例７：同種異系細胞療法の拒絶反応を予防するための、抗-CD5抗体薬物コンジュゲートのヒト患者への投与
同種異系CAR細胞療法などの同種異系細胞療法を受けるヒト患者を選択する。同種異系細胞の拒絶を阻害又は予防するために、抗-CD5抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、本明細書中に開示する方法に従って投与する。医師は、以下の治療ステップを行う。
【０３２９】
まず最初に、同種異系細胞に対するプライミング免疫反応を誘発するのに充分な量で、初回用量の同種異系細胞を、前記患者に静脈内投与する。プライミング段階では、同種異系細胞を前記患者に投与して、内因性の活性化CD5+ T細胞が生じる免疫反応を誘発させる。
【０３３０】
続いて、前記患者に、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD5抗体を含む抗-CD5 ADCを投与する。前記抗-CD5 ADCは、内因性のCD5+活性化T細胞を減少させるのに有効な量で投与する。前記抗-CD5 ADCを投与した後に、CD5+活性化T細胞のレベルを評価し、減少を確認する。
【０３３１】
次に、治療有効量のCARを発現する同種異系細胞を投与する。前記同種異系細胞は、プライミング・ステップの間に、前記患者に投与した細胞と同じドナー(donor)に由来する。プライミング及び抗-CD5 ADCの投与を行わずに同種異系細胞療法を受けている患者と比較して、レシピエント(recipient)患者における同種異系細胞の受容が促進され、拒絶反応のリスクが低下する。
【０３３２】
表５：．配列のまとめ
[表７]
【０３３３】
他の実施形態
本明細書において言及する全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各独立した刊行物又は特許出願を具体的かつ個別に示して参照により組み込まれるように、同じ程度まで、本明細書に参照により取り込まれる。
【０３３４】
本発明をその特定の実施形態に関連させて説明してきたが、本発明は更なる改変が可能であり、本出願は、広く、本発明の原理に従い、本発明が関係する技術内の既知の又は慣例的な実施の範囲内に入り、本明細書で前述され、特許請求の範囲に従う本質的な特徴に適用され得るような、本発明からの逸脱を含む、本発明の任意の変形、使用、又は適応を包含することが意図されることを理解されたい。
【図１】
2021530545.tif 000062
【図２】
2021530545.tif 000063
【図３Ａ】
2021530545.tif 000064
【図３Ｂ】
2021530545.tif 000065
【図４】
2021530545.tif 000066
【図５Ａ】
2021530545.tif 000067
【図５Ｂ】
2021530545.tif 000068
【図６Ａ】
2021530545.tif 000069
【図６Ｂ】
2021530545.tif 000070
【図６Ｃ】
2021530545.tif 000071
【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年9月3日(2021.9.3)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、2018年7月23日に出願された米国仮特許出願第62/702301号及び2018年11月29日に出願された米国仮特許出願第62/773108号に対する35 U.S.C§119(e)の利益に基づく優先権の利益を主張する。前記出願の内容は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０００２】
［配列一覧］
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出した配列リストを含み、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。2019年7月19日に作成された前記ASCIIのコピーは、M103034_2050WO_SL.txtという名前で、サイズが30,815 バイトになる。
【０００３】
［技術分野］
本発明は、広く、抗-CD2抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を使用することによって、ヒト対象においてキメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞の受容を促進するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
キメラ抗原レセプター(Chimeric antigen receptor)(CAR)療法は、身体自身の免疫システムを利用して、がんなどある特定の疾患に関連する特異的抗原を発現する細胞を破壊する免疫学的治療法である。例えば、がんにおいて、CAR療法は、がんを攻撃する患者の免疫システムの力を得る、及び強化する。過去数年間をかけて、この免疫療法は、有望かつ革命的な治療法として登場した。CAR療法は、T細胞などの免疫細胞に基づいており、この免疫細胞は、細胞外抗原結合ドメイン（scFvなど）と、前記細胞に表面レセプターからシグナル伝達をする細胞質活性シグナリング及び「共-刺激」ドメインとが結合した、一般的に膜貫通融合タンパク質であるCARを発現する。従って、T-細胞のような免疫細胞がCARを発現すると、前記免疫細胞はCARの抗原結合ドメインがターゲットとする抗原(例えば、腫瘍関連抗原)を発現する細胞を認識し、それを傷害することができる(Geyer and Brentjens (2016) Cytotherapy 18(11): 1393-1409)。
【０００５】
CAR療法は信じられないほど強力な技術であるが、重篤なリスク及び有害な副作用を伴う(Kay and Turtle (2017) Drugs 77(3):237-245; Hill et al. (2018) Blood 131:121-130)。リンパ球除去化学療法は、CAR療法を受ける患者がCAR発現細胞を拒絶することを最小限に抑えるために、CAR療法と併用するコンディショニング治療として一般的に用いられている(Wei et al. (2017) Exp Hematol Oncol. 6: 10)。6: 10)。例えば、リンパ球除去剤フルダラビンとシクロホスファミドを併用すると、レシピエント(recipient)患者においてCAR-T細胞が維持される時間が改善された(Turtle et al. (2016) J Clinic Invest 126(6):2123; US 20170368101も参照)。コンディショニング療法は、CAR-T細胞の有効性を改善したが、リンパ球除去化学療法はしばしば重篤な負の副作用を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、CARを発現する免疫細胞の受容を促進するために、CAR療法と共に使用され得るコンディショニング・レジメンを提供する。本明細書中に記載する方法は、自己CARを発現する免疫細胞又は同種異系CARを発現する免疫細胞の何れかの受容を促進するために使用され得る。これまで、このような細胞の受容は、リンパ球除去化学療法を用いて実現されてきた。レシピエント(recipient)患者におけるCARを発現する細胞の受容を促進する改善した方法を、本明細書に記載する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第1の態様において、本発明は、(a) 前記方法は抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象に投与することにより（ここで、抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む）；及び(b) CARを発現する免疫細胞の治療有効量を前記ヒト対象に投与することにより（ここで、前記CARは、腫瘍抗原又は自己免疫疾患に関連する抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む）、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象において、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞の受容を促進することを特徴とする。ある実施形態では、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、アレムツズマブを投与されない。別の実施形態では、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、リンパ球除去化学療法剤を投与されない。更に別の実施形態では、前記リンパ球除去化学療法剤はフルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン及び／又はペントスタチンである。
【０００８】
ある実施形態では、前記方法は、ステップ(b)の前に、抗-CD2 ADCを、前記ヒト対象に投与することを、含む。
【０００９】
ある実施形態では、方法は、ステップ(b)の約12時間〜約21日前に、抗-CD2 ADCを前記ヒト対象に投与することを、含む。
【００１０】
ある実施形態では、前記免疫細胞は、同種異系細胞又は自己細胞である。更に別の実施形態では、前記同種異系細胞は、同種異系T細胞又は同種異系NK細胞である。
【００１１】
ある特定の実施形態では、前記CARを発現する同種異系細胞の治療有効量は、約1×104〜約1.0×108細胞／kgである。
【００１２】
別の態様では、本発明は、(i) 抗-CD2 ADC（ここで、抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む）を、投与することにより、及び（ii）約1×106〜約1×108個の治療有効量の操作したCAR T細胞／kgを患者に投与することにより、腫瘍を有する患者を治療する方法を特徴とする。ある実施形態では、操作したCAR T細胞の治療有効量は、約1×106 又は約2×106 細胞／kgである。更に別の実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、単回用量として、又は複数回用量として、前記患者に投与する。
【００１３】
ある特定の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO): 1、2、及び3に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖可変領域を含む、並びに、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO): 4、5、及び6に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、キメラ化又はヒト化されている。
【００１４】
ある特定の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、IgG1アイソタイプ又はIgG4アイソタイプである。
【００１５】
ある特定の実施形態では、前記細胞毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。他の実施形態では、前記細胞毒素は、メイタンシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、又はアウリスタチンである。ある実施形態では、前記アウリスタチンは、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。ある実施形態では、前記細胞毒素は、メイタンシンである。ある実施形態では、前記細胞毒素は、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)である。例えば、いくつかの実施形態では、前記PBDを、テシリン又はタリリンから選択することがある。いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、カリケアマイシンであってもよい。例えば、いくつかの実施形態では、前記カリケアマイシンはオゾガマイシンであってもよい。
【００１６】
他の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシンである。別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマニチンである。別の実施形態では、前記アマニチンは、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリンからなる群から選択される。
【００１７】
ある実施形態では、前記抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は、式Ab-Z-L-Amによって表される、ここで、AbはCD2に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、及びAmはアマトキシンである。ある特定の実施形態では、リンカー-アマトキシン・コンジュゲートAm-L-Zは、式(III)で表される、
【化１】
2021530545.tif 000072
ここで、R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合する酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、又は任意選択的に置換されたヘテロアリールである；
Lは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、若しくは任意選択的に置換されたヘテロアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-を含む、ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 及び 10から選択される；並びに、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【００１８】
ある特定の実施形態では、前記リンカー-アマトキシン・コンジュゲートAm-L-Zは、式(III)で表される
【化２】
2021530545.tif 000073
ここで、R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合する酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、又は任意選択的に置換されたヘテロアリールである；
Lはリンカーである；並びに、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【００１９】
式(III)のある実施形態では、Lは、ペプチドを含むリンカーである。
【００２０】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、一種以上のジペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C6シクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、溶解度を高める基、-(C=O)-、-(CH2CH2O)p-基（ここで、pは1-6からの整数である）、((CH2)mO)n(CH2)m-（ここで、n及び各mは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；又はそれらの組み合わせ、を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、((CH2)mO)n(CH2)m-基及びヘテロアリール基を含む、ここで、前記ヘテロアリール基は、トリアゾールである。いくつかの実施形態では、((CH2)mO)n(CH2)m-基及びトリアゾールは、一緒になって以下を含む
【化３】
2021530545.tif 000074
ここで、nは1〜10である、及び波線は、更なるリンカー成分、化学的な部分構造Z、又はアマトキシンへの結合の位置を示す。
【００２２】
いくつかの実施形態では、Amは、丁度1個のRC置換基を含む。
【００２３】
ある実施形態では、前記ADCのリンカーは、N-ベータ-マレイミドプロピオニル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び前記化学的な部分構造Zは、L-Zとして一緒になって、以下である、
【化４】
2021530545.tif 000075
ここで、Sは、CD2に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である(例えば、システイン残基の-SH基に由来する)。
【００２４】
いくつかの実施形態では、L-Zは、
【化５】
2021530545.tif 000076
である。
【００２５】
ある実施形態では、前記ADCは、以下の構造の何れか一つによって表される：
【化６】
2021530545.tif 000077
。
【００２６】
ある実施形態では、前記ADCは、以下の構造の何れか一つによって表される：
【化７】
2021530545.tif 000078
又は
【化８】
2021530545.tif 000079
。
【００２７】
ある特定の実施形態では、前記ADCは、3日以下の血清半減期を有する。
【００２８】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞外ドメインは、scFv抗体、又は単鎖T細胞レセプター(scTCR)を含む。
【００２９】
ある特定の実施形態では、前記細胞外ドメインは、非-免疫グロブリン・スキャフォールド・タンパク質(scaffold protein)を含む。
【００３０】
ある特定の実施形態では、前記腫瘍抗原は、CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、メソテリン、CD38、PD1、EGFR(例えば、EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D、又はCD123からなる群から選択される抗原である。
【００３１】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD28細胞内シグナリング・ドメイン、CD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメイン、OX40細胞内シグナリング・ドメイン、及び／又はCD137(4-1BB)細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【００３２】
ある特定の実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【００３３】
ある特定の実施形態では、がんを有するヒト対象は、白血病、成人進行がん、膵臓がん、切除不能な膵臓がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、卵巣がん、トリプル-ネガティブ乳がん、造血系／リンパ系がん、大腸がん肝臓転移、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、B細胞リンパ腫、再発性又は難治性B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、再発性又は難治性びまん性大細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫、再発性縦隔、難治性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、大細胞型B細胞リンパ腫、ホジキン・リンパ腫、非-ホジキン・リンパ腫、再発又は難治性非-ホジキン・リンパ腫、難治性進行性非-ホジキン・リンパ腫、B細胞性非-ホジキン・リンパ腫、難治性非-ホジキン・リンパ腫、結腸直腸がん腫(colorectal carcinoma)、胃がん(gastric carcinoma)、膵がん(pancreatic carcinoma)、トリプルネガティブ浸潤性乳がん(triple-negative invasive breast carcinoma)、腎細胞がん(renal cell carcinoma)、肺扁平上皮がん(lung squamous cell carcinoma)、肝細胞がん(hepatocellularcarcinoma)、尿路上皮がん(urothelial carcinoma)、白血病、B細胞性白血病、B細胞性急性リンパ球性白血病（B-cell acute lymphocytic leukemia）、B細胞性急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、成人急性リンパ芽球性白血病、B細胞性前リンパ球性白血病（B-cell prolymphocytic leukemia）、小児急性リンパ芽球性白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia)、難治性小児急性リンパ芽球性白血病(refractory childhood acute lymphoblastic leukemia)、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、再発性プラズマ細胞性骨髄腫(recurrent plasma cell myeloma)、難治性プラズマ細胞性骨髄腫(refractory plasma cell myeloma)、多発性骨髄腫、再発性又は難治性多発性骨髄腫、骨の多発性骨髄腫、脳の悪性神経膠腫(malignant glioma of brain)、骨髄異形成症候群、EGFR陽性結腸直腸がん、多形性膠芽腫(glioblastoma multiforme)、新生物、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm)、肝臓転移、固形腫瘍、進行性固形腫瘍(advanced solid tumor)、メソテリン陽性腫瘍(mesothelin positive tumor)、血液悪性腫瘍、及びその他の進行した悪性腫瘍、からなる群から選択されるがんを有する。
【００３４】
上記の態様の何れかのある特定の実施形態では、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下の表４に記載するように、CDRの組合せ(即ち、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及びCDR-L3領域)を含む。ある特定の実施形態では、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメントは、以下の表４に記載するような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の組合せを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、示した抗-CD2抗体又はネガティブ・コントロール(即ち、mIgG1)の各々をMOLT-4細胞(即ち、ヒトTリンパ芽球細胞株)と共にインキュベートし、続いて蛍光色素がコンジュゲートした抗-IgG抗体とインキュベートした、in vitro細胞株結合アッセイの結果をグラフで示す。シグナルをフロー・サイトメトリーにより検出し、抗-CD2抗体濃度(x軸)を横軸とした、蛍光強度の幾何平均(y軸)として示す。
【図２】図２は、示した抗-CD2抗体(RPA-2.10 又は「CD2 RPA-2.10」)又はネガティブ・コントロール(即ち、mIgG1)を初代ヒトT-細胞と共にインキュベートし、続いて蛍光色素がコンジュゲートした抗-IgG抗体とインキュベートした、in vitro初代細胞結合アッセイの結果をグラフで示す。シグナルをフロー・サイトメトリーにより検出し、抗-CD2抗体の濃度(x軸) を横軸とした、蛍光強度の幾何平均(y軸)として示す。
【図３】図３Ａ及び３Ｂは、薬物対抗体比(drug-to-antibody ratio)の平均が6で鎖間コンジュゲートしたアマニチン(図３Ａ)、又は薬物対抗体比(drug-to-antibody ratio)が2で部位特異的にコンジュゲートしたアマニチン(図３Ｂ)、を有する抗-CD2-アマニチンADC(即ち、RPA-2.10-AM又は「CD2 RPA-2.10-AM」)を含むin vitro T細胞傷害アッセイの結果をグラフで示す。図３Ａでは、抗-CD2 ADC T-細胞傷害解析を、非-コンジュゲートの抗-CD2抗体(即ち、「CD2 RPA-2.10 NAKED」)と比較して示す。図３Ｂでは、抗-CD2 ADC T-細胞傷害解析を、前記抗体の半減期を減少させるH435A変異(即ち、「CD2 RPA-2.10 D265C.H435A AM」)を有する抗-CD2抗体と比較して示す。本結果は、フロー・サイトメトリーを用いて評価した、ADC(CD2 RPA-2.10 AM、CD2 RPA-2.10 D265C.H435A AM)又は非-コンジュゲートの抗体(CD2 RPA-2.10 NAKED)の濃度を横軸とした(x軸)、生存T-細胞の数(y軸)を示す。
【図４】図４は、薬物対抗体比が6で鎖間コンジュゲートしたアマニチンを有する抗-CD2-アマニチンADC(即ち、RPA-2.10-AM又は「CD2 RPA-2.10-AM」)を含むin vitroナチュラル・キラー(NK)細胞傷害アッセイの結果をグラフで示す。本結果は、CellTiter Gloアッセイを用いて評価した場合、ADC(CD2 RPA-2.10-AM)又はコントロール抗体(即ち、hIgG1、hIgG1-アマニチン(「hIgG1-AM」)、又はCD45-アマニチン(「CD45 AM」))濃度を横軸とした(x軸)、生存NK-細胞のレベル(y軸)を示す。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは、鎖間薬物対抗体比が6である抗-CD2-アマニチンADC(即ち、RPA-2.10-AM又は「CD2 RPA-2.10-AM」)の0.3 mg/kg、1 mg/kg、又は3 mg/kgの単回投与7日後のヒト化NSGマウスの末梢血(図５Ａ)及び骨髄(図５Ｂ)におけるT-細胞(CD3+細胞; y軸)の絶対的レベルを示す、in vivo T-細胞減少アッセイの結果を図示する。比較のために、図５Ａ及び５Ｂはまた、25 mg/kgの非-コンジュゲートの抗-CD2抗体(すなわち、「CD2 Ab1」)又は示したコントロール(即ち、25 mg/kgの抗-CD52抗体(クローンYTH34.5);3 mg/kgのhIgG1-アマニチンADC(「hIgG1-AM」)、25 mg/kgのhIgG1、又はPBS)によってヒト化NSGマウスを処置した後の、T-細胞減少のレベルも示す。
【図６】図６Ａ〜６Ｃは、約2の部位特異的な薬物対抗体比を有する抗-CD2-アマニチンADC(すなわち、RPA-2.10-AM又「CD2 RPA-2.10-AM」)の1 mg/kg又は3 mg/kgの単回投与7日後のヒト化NSGマウスの末梢血(図６Ａ)、骨髄(図６Ｂ)、及び胸腺(図６Ｃ)におけるT-細胞(CD3+細胞; y軸)の絶対的レベルを示す、in vivo T-細胞減少アッセイの結果を図示する。比較のために、図６Ａ-６Ｃはまた、3 mg/kgの非-コンジュゲートの抗-CD2抗体(即ち、「CD2 RPA-2.10」)又は示したコントロール(即ち、3 mg/kgのhIgG1-アマニチン-ADC(「hIgG1-AM」)又はPBS)によってヒト化NSGマウスを処置した後の、T-細胞減少のレベルも示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
［詳細な説明］
本発明は、CAR療法を受けている患者に抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与することにより、CAR療法を受けているヒト対象において、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞(自己又は同種異系)の受容を促進する方法を提供する。本明細書中に開示する方法を、CARを発現する免疫細胞の拒絶を減少させるためのコンディショニング療法として一般的に使用するリンパ球除去化学療法に依存することなく(又はその使用を減らして代用的に)、自己又は同種異系免疫細胞(例えば、T 細胞)の受容を改善するために使用することがある。
【００３７】
Ｉ．定義
本明細書中で使用される場合、用語「約」は、記載される値より5%高い値又は低い値をいう。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「同種異系」は、移植の文脈において使用する場合、ドナー(donor)から同じ種のレシピエント(recipient)に移植する細胞(又は組織若しくは臓器)を定義するために使用する、ここで、前記ドナー(donor)及び前記レシピエント(recipient)は同じ対象ではない。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、用語「自己」は、ドナー(donor)及びレシピエント(recipient)が同じ対象である細胞又は移植片を指す。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「異種」は、ドナー(donor)及びレシピエント(recipient)の種が異なっている細胞を指す。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「免疫細胞」は、限定されるものではないが、造血起源であり、及び免疫反応において役割を果たす細胞を含むことが意図される。免疫細胞としては、限定されるものではないが、T細胞及びナチュラル・キラー(NK)細胞が挙げられる。ナチュラル・キラー細胞は、当技術分野で周知である。ある実施形態では、ナチュラル・キラー細胞として、NK-92細胞などの細胞株が挙げられる。NK細胞株の更なる例としては、NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS細胞、及びNKL細胞が挙げられる。免疫細胞は、同種異系又は自己であることがある。
【００４２】
「操作した細胞」は、遺伝子、DNA若しくはRNA配列、又はタンパク質若しくはポリペプチドの付加又は改変によって、改変した、形質転換した、又は処理した任意の生命体の任意の細胞を意味する。本開示の単離した細胞、宿主細胞、及び遺伝子操作した細胞としては、CARをコードするDNA又はRNA配列を含み、細胞表層に前記CARを発現するNK細胞及びT細胞などの、単離した免疫細胞が挙げられる。単離した宿主細胞及び操作した細胞を、例えば、NK細胞活性又はTリンパ球活性を増強する、がんを治療する、及び自己免疫疾患を治療するために使用することがある。ある実施形態では、前記操作した細胞としては、免疫細胞、例えば、T-細胞又はナチュラル・キラー(NK細胞)、が挙げられる。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合する、又は特定の抗原と免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子をいう。抗体としては、限定されるものではないが、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、マルチスペシフィック抗体(multispecific antibody)(例えば、バイスペシフィック抗体(bispecific antibody))、及び抗体フラグメントが挙げられる。
【００４４】
一般的に、抗体は、抗原結合領域を含む重鎖及び軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域(本明細書では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域から構成される。前記重鎖定常領域は、3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域から構成される。前記軽鎖定常領域は、1つのドメイン（CL）から構成される。前記VH及びVL領域は、超可変性の領域（相補性決定領域(CDR)と呼ばれる）に更に細分化することができ、より保存された領域（骨格領域(FR)と呼ばれる）が点在する。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、以下の順序で配列する：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。前記抗体の定常領域は、前記免疫グロブリンが宿主の組織又は因子（例えば、免疫システムの種々の細胞(例、エフェクター細胞)及び古典的補体システムの第一成分(C1q)等）に結合することを、仲立ちすることがある。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、用語「抗原結合フラグメント」は、ターゲット抗原に特異的に結合する作用能を保持する抗体の1つ以上の部分をいう。抗体の抗原結合機能を、全長抗体のフラグメントによって果たすことができる。前記抗体フラグメントは、例えば、Fab、F(ab')2、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であることがある。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：(i)Fabフラグメント、VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる一価フラグメント；(ii)F(ab')2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した、2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；(iii) VH及びCH1ドメインからなるFdフラグメント；(iv)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント；(v) VH及びVLドメインを含むdAb；(vi) VHドメインからなるdAbフラグメント(例えば、Ward et al., Nature 341:544-546、1989を参照のこと)；(vii) VH又はVLドメインからなるdAb；(viii)単離した相補性決定領域(CDR)；並びに(ix)合成リンカーによって任意選択的に連結することがある2つ以上(例えば、2つ、3つ、4つ、5つ、又は6つ)の単離したCDRの組み合わせ。更に、Fvフラグメントの2つのドメイン（VL及びVH）は、別々の遺伝子によってコードされているが、それらを、組換え方法を使用することで、リンカーによって連結して、その結果、単一タンパク質鎖（VL及びVH領域が対になって一価分子を形成する）とすることができる(単鎖Fv(scFv)として公知である；例えば、Bird et al.,Science 242:423-426, 1988 及びHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988を参照のこと)。これらの抗体フラグメントを、当業者に公知の従来の技術を使用して入手することができ、及び前記フラグメントを、インタクトな抗体と同じ様式で、有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合フラグメントを、組換えDNA技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的な又は化学的な切断によって、又は、ある場合には、当該技術分野で公知の化学的ペプチド合成手順によって、産生することができる。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、「インタクト」又は「全長」抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された2つの重(H)鎖ポリペプチド及び2つの軽(L)鎖ポリペプチドを有する抗体を指す。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、「抗-CD2抗体」又は「CD2に結合する抗体」又は「抗-CD2 ADC」又は「CD2に結合するADC」という用語は、CD2がT細胞などの細胞の細胞表面上に見出される場合、ヒトCD2に特異的に結合する抗体又はADCを指す。抗-CD2抗体(又は抗-CD2 ADC)が結合するヒトCD2のアミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 7として、以下に記載する。
【００４８】
用語「特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、抗体(又はADC)が、タンパク質一般というよりも、特異的なタンパク質構造(エピトープ)を認識し、結合する能力を指す。抗体がエピトープ「A」に特異的である場合、標識した「A」及び前記抗体を含む反応において、エピトープA(又は遊離の、非標識のA)を含む分子が存在すると、前記抗体に結合する標識したAの量が減少する。例えば、抗体は（標識されている場合）、対応する非標識抗体によってそのターゲットから競合して離れることができる場合、ターゲットに「特異的に結合する」。ある実施形態では、抗体は、ターゲット（例えば、CD2）に、前記抗体が、少なくとも約10-4M、10-5 M、10-6 M、10-7 M、10-8 M、10-9 M、10-10 M、10-11 M、10-12 M、又はそれ未満(未満とは、10-12未満の数値を意味する、例えば10-13)の、前記ターゲットに対するKDを有する場合、特異的に結合する。ある実施形態では、「CD2に対する特異的な結合」又は「CD2に特異的に結合する」という用語は、本明細書中で使用される場合、又はCD2に結合し、そして表面プラズモン共鳴によって測定すると、1.0×10-7 M以下の解離定数(KD)を有する、抗体を指す。ある実施形態では、KDを、標準的なバイオレイヤー干渉法(Bio-Layer Interferometry)(BLI)に従って測定する。しかし、前記抗体は、配列が関連する2つ以上の抗原に特異的に結合することができることを理解されたい。例えば、ある実施形態では、抗体は、CD2のヒト及び非-ヒト(例えば、マウス又は非-ヒト霊長類)オルソログの両方に特異的に結合することがある。
【００４９】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、任意の真核生物、原核生物、又はファージ・クローンを含む単一のクローンから、当技術分野で利用可能な、又は公知の任意の手段によって、得られる。本開示と供に有用なモノクローナル抗体を、ハイブリドーマ、組換え、及びファージ・ディスプレイ技術、又はそれらの組合せを使用することを含む、当技術分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。
【００５０】
本明細書で使用される用語「キメラ」抗体は、ラット又はマウス抗体などの非-ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列、及び典型的にはヒト免疫グロブリン・テンプレートから選択されるヒト免疫グロブリン定常領域、を有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; U.S. Pat. Nos. 5,807,715; 4,816,567; 及び 4,816,397を参照のこと。
【００５１】
非-ヒト(例えば、マウス)抗体の「ヒト化」形態は、非-ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限に含むキメラ免疫グロブリンである。概して、ヒト化抗体は少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、CDR領域の全て又は実質的に全ては非-ヒト免疫グロブリンのものに対応し、FR領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。前記ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン・コンセンサス配列の少なくとも一部を含むことがある。抗体をヒト化する方法は、当該分野で公知である。例えば、Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7; U.S. Pat. Nos. 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 及び 6,180,370 to Queen et al.; EP239400; PCT公開 WO 91/09967; U.S. Pat. No. 5,225,539; EP592106; EP519596; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814; Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973; 及び U.S. Pat. No. 5,565,332を参照。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、用語「キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)」又は「CAR」は、抗原に特異的に結合し得る少なくとも1つの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも1つの細胞内シグナリング・ドメインを含む組換えポリぺプチドをいう。一般に、CARは、免疫エフェクター細胞の細胞傷害性を、所定の抗原を提示する細胞に向けるように遺伝子操作をしたレセプターである。CARは、所望の抗原(例えば、腫瘍抗原)に対する抗体ベースの特異性を、T細胞受容体-活性化細胞内ドメインと組み合わせて、特異的な細胞性免疫活性を示すキメラ・タンパク質を生成する分子である。特定の実施形態では、CARは、細胞外ドメイン(結合ドメイン又は抗原特異的結合ドメインとも呼ばれる)、膜貫通ドメイン、及び細胞内(intracellular)（細胞内(細胞質側(cytoplasmic))）シグナリング・ドメインを含む。前記CARの抗原結合ドメインが、ターゲット細胞の表面上のターゲット抗原と結合すると、前記CARはクラスター化し、活性化刺激をCAR含有細胞に送る。CARの主要な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を転換する作用能であり、それにより、モノクローナル抗体、可溶性リガンド又は細胞特異的コ-レセプターの細胞特異的ターゲティングの作用能を利用しながら、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシス又は主要組織適合性(MHC)非依存的に、ターゲット抗原を発現する細胞の細胞死を媒介することができる分子の産生をトリガーする。いくつかの実施形態では、CARは、腫瘍抗原に特異的に結合する細胞外結合ドメイン；膜貫通ドメイン；及び1つ以上の細胞内シグナリング・ドメインを含む。様々な実施形態では、CARは、ヒトCD2に特異的に結合する細胞外結合ドメイン；膜貫通ドメイン；及び1つ以上の細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、用語「CAR療法」は、CARを発現するように操作した免疫細胞を、所与の疾患(例えば、がん又は自己免疫疾患)を治療するために、ヒト対象へ投与することを言う。CAR療法は、操作した免疫細胞を使って、前記患者を特異的に治療することをいい、そしてCAR細胞療法と併せて一般的に使用される療法(例えば、リンパ球除去化学療法)を含むことは意図されない。特に、用語「細胞」が全体を通して使用される場合、細胞の集団もまた、特に明記されない限り、この用語に含まれる。例えば、CAR療法は、操作した細胞の集団を投与することを必要とする。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、用語「併用」又は「併用療法」は、単一のヒト患者において、2種(又はそれ以上)の治療を使用することをいう。これらの用語は、合剤組成物を指すことを意図していない。例えば、本明細書に記載することは、抗-CD2 ADCを投与すること及びCAR療法、を含む併用療法である。
【００５５】
用語「コンディショニング」は、CAR療法を必要とする患者を、好適な条件のために、準備をすることを指す。本明細書中で使用されるコンディショニングとしては、限定されるものではないが、内因性リンパ球の数を減少させること、サイトカイン・シンク（cytokine sink）を除去すること、1種以上のホメオスタシス・サイトカイン又は向-炎症性因子の血清中レベルを増加させること、コンディショニング後に投与するT細胞のエフェクター機能を増強すること、抗原提示細胞の活性化及び／又は利用可能性を増強すること、又はT細胞療法前のそれらの任意の組合せ、が挙げられる。
【００５６】
用語「減少させる（deplete）」は、CD2発現細胞に対する抗-CD2抗体又はADCの効果に関する文脈において、CD2発現細胞を、数で減少させる又は排除することを指す。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、用語「有効量」又は「治療有効量」は、所望の結果を達成するために、又は自己免疫疾患若しくはがんに対する効果を有するために、十分な量をいう。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、本明細書中に記載するような特定の疾患又は症状のための治療を受ける、ヒトのような生命体をいう。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「治療する」又は「治療」は、疾患の任意の結果に対して任意の向上(例えば、生存期間の延長、より少ない罹患率、及び／又は代替の治療モダリティの副産物である副作用の減少)をもたらすことを言う；当該分野で容易に認識されるように、疾患の完全な根絶は好ましいが、治療行為の必要条件ではない。有益な又は所望の臨床成績としては、限定されるものではないが、CARを発現する免疫細胞(同種異系又は自己−いずれもCAR療法を受けている患者において免疫反応を引き起こし得る)の受容を促進することが挙げられる。本発明の方法が障害を予防することに向けられる限り、用語「予防する」は、前記病態が完全に阻止されることを必要としないことが理解される。寧ろ、本明細書中で使用される場合、用語の予防することとは、障害に対して感受性がある集団を同定する当業者の能力をいい、その結果、疾患が発症する前に、本発明の化合物を投与することがある。前記用語は、病態を完全に回避することを意味するものではない。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、DNAベクター、プラスミド、RNAベクター、ウイルス、又は他の好適なレプリコン等の、核酸ベクターを含む。本明細書中に記載する発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、並びに、例えば、タンパク質を発現させる及び／又は哺乳動物細胞のゲノムの中にこれらのポリヌクレオチド配列を組み込ませるために使用する更なる配列エレメントを含むことがある。CARを発現させるのに用いることができる特定のベクターとしては、遺伝子転写を指示する調節配列（例えば、プロモーター領域及びエンハンサー領域等）を含むプラスミドが挙げられる。抗体又はCARを発現させるための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳効率を高めるか、又は遺伝子転写から生じるmRNAの安定性又は核外への移行を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列要素は、例えば、発現ベクター上にある遺伝子を効率的に転写するようにするために、5'及び3'非翻訳領域及びポリアデニル化シグナル部位を含むことがある。本明細書中に記載する発現ベクターはまた、このようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含むこともある。好適なマーカーの例としては、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、及びノウルセオスリシン(nourseothricin)等の抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が挙げられる。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体薬物コンジュゲート」又は「ADC」は、細胞毒素に連結した抗体を指す。ADCは、ある分子(例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント)の反応性官能基と、別の分子(例えば、本明細書中に記載する細胞毒素)の適切な反応性官能基との化学結合によって形成される。コンジュゲートは互いに結合した2つの分子間(例えば、抗体と細胞毒素との間)にリンカーを含むことがある。特に、用語「コンジュゲート」(化合物をいう場合)はまた、本明細書中で、「薬物コンジュゲート」、「抗体薬物コンジュゲート」又は「ADC」とも、互換的に称される。コンジュゲートの形成に用いることができるリンカーの例としては、ペプチド含有リンカー（例えば、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸、例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー）が挙げられる。リンカーを、本明細書中に記載する、及び当該技術分野で公知である、種々のストラテジーを使用して調製することがある。その中の反応性成分に依存して、リンカーは、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって、切断されることがある(例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照のこと)。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、用語「カップリング反応」は、互いに反応するのに適した2つ以上の置換基が反応して、それぞれの置換基に結合した分子フラグメントを(例えば、共有結合的に)結合させる化学的な部分構造を形成する化学反応を指す。カップリング反応には、細胞毒素（例えば、当該技術分野で公知の又は本明細書中に記載する細胞毒素）であるフラグメントに結合した反応性置換基が、抗体、又はその抗原結合フラグメント（例えば、当該技術分野で公知の若しくは本明細書中に記載される、CD2に結合する、抗体、その抗原結合フラグメント、又は特異的な抗-CD2抗体）であるフラグメントに結合した好適な反応性置換基と反応する反応が含まれる。好適な反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、特に、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対)等が挙げられる。カップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、特に、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本明細書に記載されている他の反応様式が挙げられる。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「微小管結合剤」という語は、細胞における有糸分裂及び間期細胞機能に必須である微小管ネットワークを破壊することによって作用する化合物をいう。微小管結合剤の例としては、限定されるものではないが、メイタシン(maytasine)、メイタンシノイド、及びそれらの誘導体(本明細書に記載するか、又は当該技術分野で公知のものなど)、ビンブラスチン、ビンブラスチン硫酸、ビンクリスチン、ビンクリスチン硫酸、ビンデシン、及びビノレルビン等のビンカ・アルカロイド、ドセタキセル及びパクリタキセル等のタキサン、ディスコデルモリド、コルヒチン(cochicine)及びエポチロン等のマクロライド、並びにそれらの誘導体(エポチロンB又はそれらの誘導体など)が挙げられる。
【００６４】
本明細書中で使用される場合、用語「アマトキシン」は、Amanita phalloides mushroomsによって産生されるペプチドのアマトキシン・ファミリーのメンバー、又はその誘導体（例えば、RNAポリメラーゼII活性を阻害し得るそのバリアント若しくは誘導体）のことをいう。アマトキシンを、種々のキノコ種(例えば、Amanita phalloides、Galerina marginata、Lepiota brunneo-incarnata)から単離することがある、又は半合成的若しくは合成的に調製することがある。このファミリーのメンバー（α-アマニチン）は、Wieland, Int. J. Pept. Protein Res.1983, 22(3):257-276に記載されている。アマトキシンの誘導体を、天然に存在する化合物を化学的に改変すること(「半合成」)によって得ることがある、又は完全に合成の供給源から得ることがある。種々のアマトキシン誘導体の合成経路は、例えば、米国特許第 9,676,702 及び Perrin et al., J. Am. Chem. Soc. 2018, 140, p. 6513-6517に記載されている(これらの各々は、アマトキシンを調製する及び誘導体化するための合成方法に関して、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)。
【００６５】
本明細書に記載する組成物及び方法と併用して有用なアマトキシンとしては、式(II)のに記載するアマトキシン（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリン）が挙げられる。本明細書中に記載するように、アマトキシンを、例えば、リンカー部分(L)を介して、抗体、又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせることがある（これにより、ADCを形成する)。例示的なアマトキシン-リンカー・コンジュゲートの構造は、式(III)、(IIIA)、及び(IIIB)によって表される。アマトキシンをコンジュゲートする例示的な方法及びそのようなプロセスに有用なリンカーを以下に記載する。前記組成物及び方法による、抗体、又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲートに有用な、例示的なリンカー含有アマトキシンもまた、本明細書に記載する。
【００６６】
本明細書で使用される用語「アシル」は、-C(=O)Rを指す、ここで、本明細書で定義されるように、Rは水素(「アルデヒド」)、C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、C2-C12アルキニル、C3-C7カルボシクリル、C6-C20アリール、5-10員ヘテロアリール、又は5-10員ヘテロシクリルである。非-限定的な例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリロイルが挙げられる。
【００６７】
本明細書で使用される用語「C1-C12アルキル」は、1〜12個の炭素原子を有する直鎖又は分岐の飽和炭化水素を指す。典型的なC1-C12アルキル基としては、限定されるものではないが、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、及び-n-ヘキシルが挙げられる；一方、分岐C1-C12アルキルとしては、限定されるものではないが、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、及び2-メチルブチルが挙げられる。C1-C12のアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６８】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp2二重結合、を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：エチレン又はビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられる。アルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６９】
本明細書で使用される「アルキニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp三重結合を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、アセチレン及びプロパルギルが挙げられる。アルキニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７０】
本明細書で使用される「アリール」は、C6-C20炭素環芳香族基を指す。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。アリール基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７１】
本明細書で使用される「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが挙げられる。前記アリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分（例えば、アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる）は1〜6個の炭素原子であり、アリール部分は5〜14個の炭素原子である。アルカリル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７２】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式又は二環式であることがある。シクロアルキル基としては、単環として3〜7個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環が挙げられる。単環式シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。シクロアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７３】
本明細書で使用される「シクロアルケニル」は不飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式でも二環式でもよい。シクロアルケニル基としては、単環として3〜6個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環が挙げられる。単環式シクロアルケニル基の例としては、1-シクロペント-1-エニル、1-シクロペント-2-エニル、1-シクロペント-3-エニル、1-シクロヘキサ-1-エニル、1-シクロヘキサ-2-エニル、及び1-シクロヘキサ-3-エニルが挙げられる。シクロアルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７４】
本明細書で使用される「ヘテロアラルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがヘテロアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等が挙げられる。前記ヘテロアリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分(アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる)は1〜6個の炭素原子である、並びにヘテロアリール部分は5〜14個の炭素原子である並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子である。前記ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。
【００７５】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ芳香族又は非芳香族環システムを指し、ここで1つ以上の環原子は、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、及び硫黄である。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル・ラジカルは、2〜20個の炭素原子及びN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルは、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００７６】
ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキル基は、Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), 特に1, 3, 4, 6, 7, 及び 9章; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 特に Volumes 13, 14, 16, 19, 及び 28; 並びに J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566、に記載されている。
【００７７】
ヘテロアリール基の例としては、例えば、限定されるものではないが、ピリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイサチノイルが挙げられる。
【００７８】
ヘテロシクロアルキルの例としては、例えば、限定されるものではないが、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、及びモルホリニルが挙げられる。
【００７９】
限定ではなく例として、炭素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、ピリジンの2、3、4、5、若しくは6位、ピリダジンの3、4、5、若しくは6位、ピリミジンの2、4、5、若しくは6位、ピラジンの2、3、5、若しくは6位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの2、3、4、若しくは5位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの2、4、若しくは5位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの3、4、若しくは5位、アジリジンの2、若しくは3位、アゼチジンの2、3若しくは4位、キノリンの2、3、4、5、6、7、若しくは8位、又はイソキノリンの1、3、4、5、6、7、若しくは8位、で結合する。更に典型的には、炭素結合ヘテロシクリルとしては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、又は5-チアゾリルが挙げられる。
【００８０】
限定ではなく例として、窒素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの1位で、イソインドール又はイソインドリンの2位、モルホリンの4位、及びカルバゾール又はベータ・カルボリンの9位、で結合する。更に典型的には、窒素結合ヘテロ環としては、1-アジリジル、1-アゼテジル(1-azetedyl)、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、及び1-ピペリジニルが挙げられる。
【００８１】
本明細書で使用される、並びに上記のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルなどの何れかに適用される、「置換された」とは1個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基で置換されていることを意味する。
【００８２】
典型的な置換基には、限定されるものではないが、-X, -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+(R)3, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -NO, -NO2, -N3, -NC(=O)H, -NC(=O)R,  -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH2,  -C(=O)N(R)2, -SO3-, -SO3H, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NH2, -S(=O)2N(R)2, -S(=O)R, -OP(=O)(OH)2, -OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)2, -PO3, -PO3H2, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO2H, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, -C(=S)NH2, -C(=S)N(R)2, -C(=NH)NH2, 及び -C(=NR)N(R)2、が含まれる；ここで、各Xは、F、Cl、Br、及びIから、それぞれの場合について独立に選択される；及び、各Rは、C1-C12アルキル、C6-C20アリール、C3-C14ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール、保護基及びプロドラック部分から、それぞれの場合について独立に選択される。基が「任意選択的に置換される」と記載されている場合はどんな場合でも、その基は、それぞれの場合について独立に、1個以上の上記の置換基で置換されることがある。
【００８３】
あるラジカルの命名規則には、状況に応じて、モノ-ラジカル又はジ-ラジカルの何れかが含まれうることを理解しておく必要がある。例えば、置換基が分子の残りの部分への2つの結合の位置を必要とする場合、前記置換基はジ-ラジカルであると理解される。例えば、2点の結合の位置を必要とするアルキルとして識別される置換基には、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、等のジ-ラジカルが含まれる。他のラジカル命名規則は、前記ラジカルが「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」等のようなジ-ラジカルであることを明確に示す。
【００８４】
置換基がジ-ラジカルとして示される(即ち、分子の残りの部分への2つの結合の位置を有する)場合はどこでも、前記置換基は、別段の指示がない限り、任意の方向性配置で結合することができることを理解されたい。
【００８５】
「異性 (Isomerism)」とは、同一の分子式を有するが、その原子の結合の配列、又はその原子の空間配置が異なる化合物を意味する。その原子の空間配置が異なる異性体を「立体異性体」と呼ぶ。互いに鏡像関係にない立体異性体を「ジアステレオマー」と呼ぶ、及び互いに重ね合わせることができない、鏡像関係にある立体異性体を「エナンチオマー」と呼び、時には「光学異性体」と呼ぶ。
【００８６】
4つの非-同一置換基に結合した炭素原子を「キラル中心」と呼ぶ。「キラル異性体」とは、少なくとも1つのキラル中心を有する化合物を意味する。1つ以上のキラル中心を有する化合物は、個々のジアステレオマーとして、又は「ジアステレオマー混合物(diastereomeric mixture)」と呼ばれるジアステレオマーの混合物として存在することがある。1つのキラル中心が存在する場合、立体異性体は、そのキラル中心の絶対配置(R又はS)によって特徴付けることができる。絶対配置とは、前記キラル中心に結合した置換基の空間配置をいう。検討するキラル中心に結合した置換基を、Cahn、Ingold及びPrelogの配列規則に従ってランク付けする。(Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116)。キラリティーが反対である個々のエナンチオマー形態を等量で含む混合物を、「ラセミ混合物」と呼ぶ。
【００８７】
本明細書及び特許請求の範囲に開示される化合物は、1つ以上の不斉中心を含むことがある、及び、各化合物の異なるジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在することがある。この明細書及び特許請求の範囲にある任意の化合物の記載は、別段の記載がない限り、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー及びそれらの混合物を含むことを意味する。更に、この明細書及び特許請求の範囲にある任意の化合物の記載は、別段の記載がない限り、個々のエナンチオマー、並びに前記エナンチオマーの任意の混合物、ラセミ体又は他のものを含むことを意味する。化合物の構造を特定のエナンチオマーとして描いた場合、本出願の発明は、その特定のエナンチオマーに限定されないことを理解されたい。従って、本開示の各々の構造式のエナンチオマー、光学異性体、及びジアステレオマーが、本明細書中で企図される。本明細書において、前記化合物の構造式は、便宜上、いくつかの場合において、特定の異性体を表すが、本開示は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等のような全ての異性体を含み、全ての異性体が同じレベルの活性を有するわけではないことが理解される。これらの化合物類は、異なる互変異性体形態で存在し得る。本開示による化合物は、別段の記載がない限り、全ての互変異性体の形態を含むことを意味する。化合物の構造を特定の互変異性体として描いた場合、本出願の発明は、その特定の互変異性体に限定されないことが理解されるべきである。
【００８８】
本明細書中に記載する任意の式の化合物は、適用可能であれば、化合物自体、並びにそれらの塩、及びそれらの溶媒和物を含む。例えば、塩は、アニオンと本開示の化合物上の正に荷電した基(例えば、アミノ)との間で形成されることがある。好適なアニオンとしては、塩化物、臭化物（ブロミド）、ヨウ化物、硫酸塩、重硫酸塩、スルファミン酸塩（スルファメート）、硝酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、グルタミン酸塩、グルクロン酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、サリチル酸塩、乳酸塩、ナフタレンスルホン酸塩及び酢酸塩（例、トリフルオロ酢酸塩）が挙げられる。用語「薬学的に許容可能なアニオン」は、薬学的に許容可能な塩を形成するための好適なアニオンをいう。同様に、塩は、カチオンと本開示の化合物上の負に荷電した基(例えば、カルボキシレート)との間で形成されることがある。好適なカチオンとしては、ナトリウム・イオン、カリウム・イオン、マグネシウム・イオン、カルシウム・イオン、及びテトラメチルアンモニウム・イオンなどのアンモニウム・カチオンが挙げられる。いくつかの好適な置換アンモニウム・イオンの例としては、以下から誘導したものが挙げられる：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、リジン及びアルギニンなどのアミノ酸。本開示の化合物はまた、第四級窒素原子を含有する塩を含む。
【００８９】
好適な無機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下の無機酸から誘導されるものが挙げられる：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン(phosphoric)及びリン(phosphorous)。好適な有機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下の有機酸から誘導されるものが挙げられる：2-アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファルスルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレン・カルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルフォン酸、及び吉草酸。好適なポリマー有機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下のポリマー酸から誘導されるものが挙げられる：タンニン酸、カルボキシメチル・セルロース。
【００９０】
更に、本開示の化合物（例えば、前記化合物の塩）は、含水若しくは非含水(無水)形態で、又は他の溶媒分子との溶媒和物として存在することがある。水和物の非-限定的な例としては、一水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非-限定的な例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。「溶媒和物」は、化学量論的な量又は非化学量論的な量の何れかの溶媒を含有する、溶媒が付加された形態を意味する。いくつかの化合物は、結晶性の固相中に、固定したモル比率の溶媒分子を補足する傾向を有し、それによって溶媒和物を形成する。前記溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である；及び前記溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、1分子の物質と1分子以上の水の組合せによって形成され、その中では、水がH2Oとしての分子状態を保持する。水和物とは、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などを指す。
【００９１】
更に、本明細書中に開示する式が表す化合物又はその塩について、結晶多型が存在することがある。任意の結晶形態、結晶形態の混合物、又はそれらの無水物若しくは水和物が、本開示の範囲に含まれることに留意されたい。
【００９２】
以下の節では、CAR療法において、CARを発現する免疫細胞の受容を促進するために、ヒト患者に抗-CD2 ADCを投与することに基づく方法に関して記載する。
【００９３】
II．抗-CD2抗体及びCARの治療に関する方法
キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)療法の課題は、操作したCAR発現細胞（例えば、CAR-T細胞）を、ヒト・レシピエント(recipient)が受容することができるようになる手段を決定することである。このような操作した免疫細胞の受容は、治療の有効性に影響を及ぼし、また、患者に有害な副作用をもたらす可能性がある。
【００９４】
リンパ球除去化学療法は、レシピエント(recipient)の免疫システムを抑制し、受容を改善する、従来からある方法であるが、一般的に有害な副作用がある。CAR療法を受けているヒト患者において、(CARを)発現する免疫細胞の受容を促進する方法を本明細書に記載する。本明細書中に記載する方法は、CAR療法を受けているヒト患者において、CD2+細胞(例えば、CD2+ T細胞)を特異的にターゲットとする、及びCD2+細胞を除去する。本明細書中に開示する方法は、リンパ球除去化学療法よりもターゲット化されたものであり、及び自己又は同種異系細胞の何れかを使用することができる手段を提供する。
【００９５】
CAR発現免疫細胞の受容及び有効性を促進するために、CAR療法を受けている患者内のCD2特異的な免疫細胞の集団を減少させるための抗-CD2抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を投与する方法を、本明細書に記載する。免疫系のCD2を特異的に発現する細胞を、このように選択的に減少させることにより、自己免疫疾患又はがんを治療するために、CAR発現免疫細胞が拒絶されるリスクを減少させながら、全生存期間及び無再発生存期間が改善される。
【００９６】
CARを発現する免疫細胞が拒絶されるリスクは、CAR細胞療法を処方した後も依然として高くなっている。本明細書中に開示する方法及び組成物は、ヒト患者におけるCAR細胞の拒絶を阻害又は予防するために使用することがある。抗-CD2 ADCを使用して、CAR細胞療法を受ける予定がある患者において、活性化したT細胞を選択的にターゲット化することがある。本明細書中に記載するように、抗-CD2 ADCを使用して、すでにCAR細胞療法を受けたことがあるヒト患者において、CD2陽性細胞をターゲット化する、及び減少させることによって、CAR細胞が拒絶されるリスクを減少させることもある。
【００９７】
本明細書中に記載する組成物及び方法を使用して、CAR細胞療法の拒絶に関連するCD2+細胞(例えば、T細胞)を減少させることがある。本発明の方法は、ヒト対象(例えば、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象)において、CARを発現する免疫細胞の受容を促進する。ある実施形態では、前記方法は、CAR療法を受ける予定がある又は受けたことがあるヒト対象に、抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与すること、及び前記ヒト対象に、CARを発現する免疫細胞の治療有効量を投与すること、を含む。
【００９８】
前記抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する前、それと同時に、又はそれの後に、投与することがある。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、CAR細胞療法を処方する前(例えば、約3日前、約2日前、約12時間前)に、投与する。抗-CD2 ADCの単回用量を、そのような単回用量がCARを発現する免疫細胞の減少のリスクを予防する又は減少させるのに充分である場合、CAR細胞療法を処方する前、後、又は同時に、前記ヒト患者に投与することがある。
【００９９】
ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約3日前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約2日前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約1日前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約20時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約18時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する15時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約12時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約6時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約4時間前に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方する約2時間前に、投与する。
【０１００】
ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、CAR細胞療法を処方すると同時に、投与する。
【０１０１】
ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約2時間後に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約4時間後に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約6時間後に、投与する。ある実施形態では、抗-CD2 ADCを、それを必要とするヒト患者に、1回以上のCAR細胞療法を処方した約12時間後に、投与する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、1回以上のCAR細胞療法を処方する約21日前まで（例えば、1回以上のCAR細胞療法を処方する約21日前、約20日前、約19日前、約18日前、約17日前、約16日前、約15日前、約14日前、約13日前、約12日前、約11日前、約10日前、約9日前、約8日前、約7日前、約6日前、約5日前、約4日前、約3日前、約2日前、約1日前、約24時間前、約12時間前、約6時間前、約3時間前、約2時間前、又は約1時間前）に投与することがある。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR細胞療法を処方する約12時間後（例えば、1回以上のCAR細胞療法を処方する約12時間後、約11時間後、約10時間後、約9時間後、約8時間後、約7時間後、約6時間後、約5時間後、約4時間後、約3時間後、約2時間後、約1時間後）に投与することがある。いくつかの実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR細胞療法を処方する約10日後（例えば、1回以上のCAR細胞療法を処方する約10日後、約9日後、約8日後、約7日後、約6日後、約5日後、約4日後、約3日後、約2日後、約1日後）に投与することがある。
【０１０４】
ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR発現免疫細胞を、それを必要とするヒト患者に投与する前に、投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して、前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約12時間〜約21日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約18時間〜約20日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約20時間〜約18日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約1日前〜約15日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約1日前〜約10日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約2日前〜約8日前に、前記ヒト対象に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して前記ヒト患者に投与する、ここで、前記抗-CD2 ADCを、前記CAR発現免疫細胞を投与する約3日前〜約6日前に、前記ヒト対象に投与する。
【０１０５】
ヒト患者由来の生物学的サンプル中のT細胞の全体的なレベルを、抗-CD2 ADCを投与した後に評価することがある、ここで、抗-CD2 ADCの投与後の、投与前のレベルと比較したヒト患者におけるT細胞の全体的な数の低下は、前記CAR細胞療法が拒絶されることを予防するための、前記抗-CD2 ADCの有効性を示す。ある実施形態では、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル中の、内因性のT細胞のレベルは、前記抗-CD2 ADCを投与する直前の、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル(例えば、同じタイプである、血液)中のT細胞のレベルと比較して、少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約15%、少なくとも約20%減少している。ある実施形態では、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル中の、内因性のT細胞のレベルは、前記抗-CD2 ADCを投与する直前の、前記ヒト患者由来の生物学的サンプル(例えば、同じタイプである、血液)中のT細胞のレベルと比較して、約5%〜25%、約5%〜20%、約5%〜15%、又は約5%〜10%減少している。ある実施形態では、内因性のT細胞のレベルを、抗-CD2 ADCを投与する1日前以下に、測定する。
【０１０６】
T細胞のレベルを、限定されるものではないが、蛍光活性化細胞選別(FACs)解析又は血液分析器等を含む、当技術分野で公知の標準的な方法に従って決定することができる。
【０１０７】
上述したように、本明細書中に記載する方法の利点の1つは、CAR療法を受けている又は受けることを計画しているヒト患者に処方するコンディショニング・レジメンにおいて、リンパ球除去化学療法剤を量的に減少させることができる、又は含まないようにすることができることである。リンパ球除去化学療法剤、例えば、限定されるわけではないが、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、及び／又はペントスタチンを、CAR療法を受けているヒトにおいて、CARを発現する細胞の受容を促進するための抗-拒絶剤として、一般的には使用する。ある特定の実施形態では、ヒト患者に、例えば、CARを発現する免疫細胞(例えば、T細胞)と併用して、抗-CD2 ADCを投与する。その結果、CARを発現する免疫細胞を投与する前、それと同時に、又はそれの後に、前記ヒト患者は、リンパ球除去化学療法剤（例えば、フルダラビン及び／又はシクロホスファミド）を受けない。
【０１０８】
ヒト対象の内因性の免疫細胞を減少させるための、及びCARを発現する免疫細胞が拒絶されるリスクを減少させるための剤として、抗-CD2 ADCを使用することにより、他の免疫減少剤の使用を回避する又は減少させることもある。例えば、アレムツズマブは、CAR療法を受けているヒトにおいて、CARを発現する細胞の受容を促進するために、CAR療法と併用する抗-拒絶剤として一般的に使用される。ある特定の実施形態では、ヒト患者に、CARを発現する免疫細胞(例えば、T細胞)を投与する前に、それと併用して、抗-CD2 ADCを投与する。その結果、前記ヒト患者は、例えば、CARを発現する免疫細胞(例えば、T細胞)を投与する前、それと同時に、又はそれの後に、アレムツズマブを受けない。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、抗-CD2 ADCを、CARを発現する免疫細胞へのトレランスを促進するために、別の治療と併用して使用する。例えば、抗-CD2 ADCを、前記ヒト患者がCAR療法を受ける前に、前記ヒト患者に投与することがある。抗-CD2 ADCを、抗-CD2 ADCの前、それと同時に、又はそれの後に、投与することがある、ここで、抗-CD2 ADC及び抗-CD2 ADCの両方を、CAR療法の前に、前記ヒト患者に投与する。
【０１１０】
本明細書中に開示する方法を、CARを発現する自己及び同種異系細胞の両方に対して使用することがある。重要なことに、本明細書に記載する抗-CD2 ADCコンディショニング方法は、同種異系細胞へのトレランスを提供することができる手段を提供することによって、CAR療法に使用することができる免疫細胞の種類を拡大するのに役立つ。ある実施形態では、前記CARを発現する免疫細胞は、同種異系細胞又は自己細胞である。CARを発現するように操作することがある免疫細胞のタイプの例としては、限定されるものではないが、同種異系T細胞、自己T細胞、自己NK細胞、又は同種異系NK細胞が挙げられる。
【０１１１】
ある実施形態では、前記抗-CD2抗体-薬物コンジュゲートを使用して、CAR細胞療法を処方した後に前記抗-CD2抗体-薬物コンジュゲートを投与することによって、CD2を発現するドナー(donor)細胞（例えば、CD2を発現する活性化したT細胞）を減少させる。ある実施形態では、前記CAR細胞療法は同種異系細胞を含む。
【０１１２】
本明細書中に開示する方法は、これらの障害（がん、自己免疫疾患）のうちの1種を有するヒト対象におけるがん又は自己免疫疾患を治療するのに特に有用である。
【０１１３】
ある実施形態では、本明細書中に開示する方法を使用してがんを治療する。より具体的には、抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用してがんを有するヒト対象に投与する。本明細書に開示する方法を用いて治療することができるがんの種類の例としては、限定されるものではないが、成人進行がん、膵臓がん、切除不能な膵臓がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、卵巣がん、トリプル-ネガティブ乳がん、造血系／リンパ系がん、大腸がん肝臓転移、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、B細胞リンパ腫、再発性又は難治性B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、再発性又は難治性びまん性大細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫、再発性縦隔、難治性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、大細胞型B細胞リンパ腫、ホジキン・リンパ腫、非-ホジキン・リンパ腫、再発又は難治性非-ホジキン・リンパ腫、難治性進行性非-ホジキン・リンパ腫、B細胞性非-ホジキン・リンパ腫、難治性非-ホジキン・リンパ腫、結腸直腸がん腫(colorectal carcinoma)、胃がん(gastric carcinoma)、膵がん(pancreatic carcinoma)、トリプルネガティブ浸潤性乳がん(triple-negative invasive breast carcinoma)、腎細胞がん(renal cell carcinoma)、肺扁平上皮がん(lung squamous cell carcinoma)、肝細胞がん(hepatocellularcarcinoma)、尿路上皮がん(urothelial carcinoma)、白血病、B細胞性白血病、B細胞性急性リンパ球性白血病（B-cell acute lymphocytic leukemia）、B細胞性急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、成人急性リンパ芽球性白血病、B細胞性前リンパ球性白血病（B-cell prolymphocytic leukemia）、小児急性リンパ芽球性白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia)、難治性小児急性リンパ芽球性白血病(refractory childhood acute lymphoblastic leukemia)、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、再発性プラズマ細胞性骨髄腫(recurrent plasma cell myeloma)、難治性プラズマ細胞性骨髄腫(refractory plasma cell myeloma)、多発性骨髄腫、再発性又は難治性多発性骨髄腫、骨の多発性骨髄腫、脳の悪性神経膠腫(malignant glioma of brain)、骨髄異形成症候群、EGFR陽性結腸直腸がん、多形性膠芽腫(glioblastoma multiforme)、新生物、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm)、肝臓転移、固形腫瘍、進行性固形腫瘍(advanced solid tumor)、メソテリン陽性腫瘍(mesothelin positive tumor)、血液悪性腫瘍、及びその他の進行した悪性腫瘍、が挙げられる。
【０１１４】
ある実施形態では、本明細書中に開示する方法を使用して、自己免疫疾患を治療する。より具体的には、抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して、自己免疫疾患を有するヒト対象に投与する。本明細書中に開示する併用方法を使用して治療することがある自己免疫疾患の例としては、限定されるものではないが、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、I型糖尿病、ループス、及び乾癬が挙げられる。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、抗-CD2 ADCを、CAR-T細胞療法と併用してヒト患者に投与する。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、CAR-T療法を処方する前に、ヒト患者に投与する。本明細書中に記載する抗-CD2 ADC療法と併用することがあるCAR-T細胞の例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：CD19 CAR-T (e.g., CART-19-01,02,03 (Fujian Medical University); daopeicart (Hebei Senlang Biotechnology Inc.); IM19CART/001,YMCART201702 (Beijing Immunochina Medical Science & Technology Co.); CART-CD19-02,03 (Wuhan Sian Medical Technology Co.); Universal CD19-CART/SHBYCL001,002 (Shanghai Bioray Laboratory Inc.); UnicarTherapy201701 (Shanghai Unicar-Therapy Biomedicine Technology Co.); Genechem/NCT02672501 (Shanghai GeneChem Co.); SenL_19 (Hebei Senlang Biotechnology Inc.); PCAR-019 (PersonGen BioTherapeutics (Suzhou); ICAR19 (Immune Cell, Inc.); WM-CART-02 (Sinobioway Cell Therapy Co.); HenanCH080,109,152 (Henan Cancer Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Co.); IM19-CD28 and IM19-41BB CAR-T 細胞 (Beijing Immunochina Medical Science & Technology Company); CTL019/IT1601-CART19 (Beijing Sanwater Biological Technology Co.); CTL019/CCTL019C2201 (Novartis Pharmaceuticals); CD19:4-1BB:CD28:CD3 / FirstShenzhen01 (Shenzhen Second People’s Hospital / The Beijing Pregene Science and Technology Company); MB-CART19.1 (Shanghai Children’s Medical Center / Miltenyi Biotec GmbH); PZ01 CAR-T 細胞 (Pinze Lifetechnology Co.); YMCART201701 (Beijing Immunochina Medical Science & Technology Co.); 2016YJZ12 (Peking University / Marino Biotechnology Co.); EGFRt/19-28z/4-1BBL CAR T 細胞 (Memorial Sloan Kettering Cancer Center / Juno Therapeutics, Inc.); Doing-002 (Beijing Doing Biomedical Co.); PCAR-019 (PersonGen BioTherapeutics (Suzhou) Co.); C-CAR011 (Peking Union Medical College Hospital / Cellular Biomedicine Group Ltd.); iPD1 CD19 eCAR T 細胞 (Peking University / Marino Biotechnology Co.); 2013-1018/NCT02529813 (M.D. Anderson Cancer Center / Ziopharm / Intrexon Corp.); HenanCH CAR 2-1 (Henan Cancer Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Co.); JCAR015 (Juno Therapeutics, Inc.); JCAR017/017001,004,006 (Juno Therapeutics, Inc.); JCAR017 (Celgene); TBI-1501 (Takara Bio Inc.); JMU-CD19CAR (Jichi Medical University); KTE-C19 (Kite, A Gilead Company); TriCAR-T-CD19 (Timmune Biotech Inc.); PF-05175157 (Fred Hutchinson Cancer Research Center)); CD22/CD30/CD7/BCMA/CD123 (e.g., 2016040/NCT03121625 (Hebei Senlang Biotechnology Inc.)); CD22 (e.g., Ruijin-CAR-01 (Ruijin Hospital / Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.); AUTO-PA1,DB1 (Autolus Limited)), CD20 (e.g., Doing-006 (Beijing Doing Biomedical Co.)); 又は CD20/CD22/CD30 (e.g., SZ5601 (The First Affiliated Hospital of Soochow University Shanghai / Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.))。
【０１１６】
キメラ抗原レセプター(Chimeric Antigen receptor)(CAR)
本発明は、抗-CD2免疫抑制ADCと併用してCAR療法を使用することを含む。本発明は、抗-CD2 ADCが、内因性CD2+免疫細胞（例えば、内因性のT細胞など）を除去することによるCAR発現細胞の受容を促進することによって、CAR療法のためのコンディショニング剤として役割を果たすことがある、という知見に少なくとも部分的に基づいているので、本発明は一般に、特定のCAR構築物（例えば、特定の抗原結合部位又は細胞内シグナリング・ドメイン）に限定されない。特定のCAR（例えば、CD19特異的なCAR）を本明細書中で想定し、及び本明細書中に開示する方法に含まれるが、限定することを意味しない。
【０１１７】
CAR構築物は当該分野で公知である、並びに一般的に、(a)抗原結合ドメインを含む細胞外領域、(b)膜貫通ドメイン及び(c)細胞内シグナリング・ドメインを含む。例示的なCARの構成は、当技術分野で知られている、及び本明細書で説明する方法では、任意の好適な構成を使用することがある。例えば、前記CARは、例えばGuedan et al.  Molecular Therapy-Methods & Clinical Development. 12: 145-156 (2019) 又は Sadelain et al. Cancer discovery 3.4: 388-398 (2013)らに記載されているように（その全内容は、本明細書に参照により取り込まれる）、第1世代の、第2世代の、又は第3世代のCARであることがある。簡単に述べると、「第1世代」のCARは、(a)細胞外抗原結合ドメイン、(b)膜貫通ドメイン、(c)1つ以上の細胞内シグナリング・ドメイン、及び任意選択的に(d)前記抗原結合ドメインを前記膜貫通ドメインに接続するヒンジ領域を含むことがある。「第2世代」のCARは、要素(a)、(b)、(c)、及び任意選択的に(d)を含むことがある、並びに更に、共刺激ドメイン（例えば、CD28又は4-1BBの共刺激ドメイン）を含むことがある。「第3世代」のCARは、要素(a)、(b)、(c)、及び任意選択的に(d)を含むことがある、並びに更に、複数の共刺激ドメイン（例えば、CD28及び4-1BBの共刺激ドメイン、又はCD28及びOX40の共刺激ドメイン）を含むことがある。上記の各要素について、以下で詳細に説明する。いくつかの実施形態では、以下の例示的な非-限定的な配置によって記載するCAR分子は、左側から右側に向かって、前記CARのN-末端側からC-末端側であることを理解されたい。本開示が記載するCARは、本明細書に記載する要素の任意の他の組合せを含むことがある、又は更に含むことがある。
【０１１８】
本明細書中に開示する方法において使用するCARは、細胞外抗原結合ドメインを含むことがある。前記細胞外抗原結合ドメインは、抗原に結合する任意の分子であることがあり、限定されるものではないが、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその任意の機能的フラグメント等を含む。ある特定の実施形態では、前記抗原結合ドメインはscFvである。他の実施形態では、前記細胞外抗原結合ドメインは非-免疫グロブリン・スキャフォールド・タンパク質(scaffold protein)である。他の実施形態では、前記CARの細胞外結合ドメインは、単鎖T細胞レセプター(scTCR)を含む。米国特許第5,359,046, 5,686,281及び6,103,521に記載されているように、前記細胞外ドメインを、リガンド結合及び／又はシグナル伝達に関連する多種多様な細胞外ドメイン又は分泌タンパク質の何れかから得ることもある。
【０１１９】
前記細胞外結合ドメインの分子ターゲット(抗原)を選択することは、ターゲット細胞の表面を規定するリガンドの種類及び個数に依存する。例えば、前記抗原結合ドメインを選択して、特定の病態に関連するターゲット細胞に対する細胞表面マーカーとして振る舞うリガンドを認識するようにすることがある。従って、ある態様において、所望の抗原に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメインを、操作してCARの中に入れることによって、CARを介した免疫細胞(例えば、T-細胞)の反応を、目的の抗原に向けさせることがある。例えば、前記抗原結合ドメインを選択して、がん又は自己免疫疾患などの特定の病態に関連するターゲット細胞上の細胞表面マーカーとして振る舞うリガンドを認識するようにすることがある。従って、CARにおける抗原結合ドメインに対するリガンドとして振る舞うことがある細胞表面マーカーの例としては、がん細胞及び他の形態の疾患細胞(例えば、自己免疫疾患細胞及び病原体感染細胞)に関連するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞上の抗原に特異的に結合する所望の抗原結合ドメインを操作することによって、CARを操作して、目的の腫瘍抗原をターゲット化するようにする。本発明の文脈において、「腫瘍抗原」は、がんなどの特定の過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。ある実施形態では、前記抗原は腫瘍抗原である、これらの例としては、限定されるものではないが、CD19, CD22, CD30, CD7, BCMA, CD137, CD22, CD20, AFP, GPC3, MUC1, メソテリン(mesothelin), CD38, PD1, EGFR  (e.g., EGFRvIII), MG7, BCMA, TACI, CEA, PSCA, CEA, HER2, MUC1, CD33, ROR2, NKR-2, PSCA, CD28, TAA, NKG2D, 又は CD123、が挙げられる。ある実施形態では、CARは、CD19, CD22, CD30, CD7, BCMA, CD137, CD22, CD20, AFP, GPC3, MUC1, メソテリン(mesothelin), CD38, PD1, EGFR  (e.g., EGFRvIII), MG7, BCMA, TACI, CEA, PSCA, CEA, HER2, MUC1, CD33, ROR2, NKR-2, PSCA, CD28, TAA, NKG2D, 又は CD123、に結合するscFvを含む。
【０１２０】
別の態様では、前記CARの細胞外結合領域は、以下である抗原に結合する、AFP (e.g., ETCH17AFPCAR01 (Aeon Therapeutics (Shanghai) Co. / Eureka Therapeutics Inc.)), GPC3 (e.g., GeneChem GPC-3 CART (Shanghai GeneChem Co.); 302 GPC3-CART (Shanghai GeneChem Co.); 肝臓がんのCAR-T (Shanghai GeneChem Co.); CAR-GPC3 T 細胞 (Carsgen Therapeutics)), MUC1 (e.g., PG-021-001,002 (PersonGen BioTherapeutics (Suzhou) Co.)), メソテリン(mesothelin) (e.g., H2017-01-P01 (Ningbo Cancer Hospital); TAI-meso-CART (Shanghai GeneChem Co.); K16-4/NCT02930993 (China Meitan General Hospital / Marino Biotechnology Co.)), CD38 (e.g., 抗-CD38 A2 CAR-T / SOR-CART-MM-001 (Sorrento Therapeutics, Inc.)), herinCAR-PD1 (e.g., herinCAR-PD1/NBWYKY2016-06-001,002,003 (Ningbo Cancer Hospital); SIMC-20160101,02,03 (Shanghai International Medical Center)), BCMA (e.g., P-BCMA-101 自己 T 幹細胞メモリ(Tscm) CAR-T 細胞 / P-BCMA-101-001 (Poseida Therapeutics, Inc.); HenanCH284 (Henan Cancer Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Company); LCAR-B38M CAR-T 細胞 (Nanjing Legend Biotech Co.); 9762/NCT03338972 (Fred Hutchinson Cancer Research Center / Juno Therapeutics, Inc.); Descartes-08 (Cartesian Therapeutics); KITE-585 (Kite, A Gilead Company); bb21217 (bluebird bio); bb21217 (Celgene); JCARH125 (Juno Therapeutics, Inc.)), CD30 (e.g., ICAR30 T 細胞 (Immune Cell, Inc.)), EGFR (e.g., EGFR:4-1BB:CD28:CD3改変T細胞 / First Shenzhen02 (Shenzhen Sceond People’s Hospital / The Beijing Pregene Science and Technology Company); EGFR-IL12-CART (Shenzhen Second People’s Hospital / The Pregene (ShenZhen) Biotechnology Co.); SBNK-2016-015-01 (Beijing Sanbo Brain Hospital / Marino Biotechnology Co.)), MG7 (e.g., MG7-CART (Xijing Hospital / Shanghai GeneChem Co.)), BCMA/TACI (e.g., AUTO2-MM1 (Autolus Limited)), CEA (e.g., 383-74/NCT02416466 (Roger Williams Medical Center / Sirtex Medical)), メソテリン(mesothelin)/PSCA/CEA/HER2/MUC1/EGFRvIII (e.g., NCT03267173 (First Affiliated Hospital of Harbin Medical University / Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.)), CD20 (e.g., EY201605-19 (Beijing Biohealthcare Biotechnology Co.)), CD33 (e.g., 2016-0341/NCT03126864 (M.D. Anderson Cancer Center / Intrexon Corp. / Ziopharm)), EGFR/BCMA (e.g., EGFRt/BCMA-41BBz CAR T細胞 (Memorial Sloan Kettering Cancer Center / Juno Therapeutics, Inc.)), ROR2 (e.g., 自己 CCT301-38 又は CCT301-59 T 細胞 (Shanghai Sinobioway Sunterra Biotech)), NKR-2 (e.g., CYAD-N2T-002,003,004 (Celyad)), PSCA (e.g., BP-012 (Bellicum Pharmaceuticals)), CD28 (e.g., 自己 CSR T 細胞(Beijing Sanbo Brain Hospital / Marino Biotechnology Co.)), TAA (e.g., AMG 119 (Amgen)), NKG2D (e.g., CM-CS1 (Celyad)), 又は CD123 (e.g., UCART123 (Cellectis S.A.))。前述の文は、前記抗原(例えば、AMG 119(Amgen))に結合するCARの例を、更に提供する。これらのCAR構築物を、抗-CD2 ADCを用いた、本明細書中に開示するコンディショニング方法において使用することがある。
【０１２１】
CAR構築物は、前記細胞外抗原結合ドメインを細胞内シグナリング・ドメインに連結する(文字通り、又は、ほぼ近接して、例えば、スペーサを使って)、膜貫通ドメインを更に含むことがある。いくつかの実施形態では、CARの細胞外抗原結合ドメイン(例えば、scFv、Fab又は他の抗原結合部分)は、ヒンジ又は他のリンカーを使用して膜貫通ドメインに連結していることがある。スペーサ、リンカー、又はヒンジを、前記細胞外抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に導入して、前記抗原結合ドメインが様々な方向に配向することを可能にする柔軟性を提供し、それによって抗原の認識及び結合を容易にすることがある。前記膜貫通ドメインの細胞質側を、CD28又はCD3ゼータ(CD3-ζ)の細胞内シグナリング・ドメインのような細胞内シグナリング・ドメインに付けることがある、及び、更に、以下で論じるように1つ以上の共刺激ドメインを含むことがある。
【０１２２】
従って、ある特定の実施形態では、前記CARは、前記細胞外抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に位置するヒンジ領域を更に含むことがある。例えば、前記ヒンジ領域は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM、CD28、又はCD8アルファのヒンジ領域に由来することがある。ある特定の実施形態では、前記ヒンジ領域は、IgG4のヒンジ領域に由来する。別の実施形態では、前記ヒンジ領域は、CD8のヒンジ・ドメインである(SwissProt/GenBank Acc.NoP01732参照)。
【０１２３】
ある実施形態では、CARは、細胞外抗原結合ドメイン、及びCD8ヒンジを介して連結した膜貫通ドメインを含む：  AKPTTTPAPR PPTPAPTIAS QPLSLRPEAC RPAAGGAVHT RGLDFA (配列番号(SEQ ID NO): 8)。
【０１２４】
ある実施形態では、CARは、細胞外抗原結合ドメイン、及びハイブリッドCD8-CD28ヒンジを介して連結した膜貫通ドメインを含む：  AKPTTTPAPR PPTPAPTIAS QPLSLRPEAC RPAAGGAVHT RGLDFAPRKI EVMYPPPYLD NEKSNGTIIH VKGKHLCPSP LFPGPSKP (配列番号(SEQ ID NO): 9)。
【０１２５】
前記膜貫通ドメインは、細胞外抗原結合ドメインに寄与するタンパク質、エフェクター機能シグナリング・ドメインに寄与するタンパク質、増殖シグナリング部分に寄与するタンパク質、又は全く異なったタンパク質、の配列に由来していることがある。いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは、前記CARの他のドメインのうちの1つと自然に関連している。例えば、前記膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、同じタンパク質の膜貫通領域及び細胞質領域に由来することがある。ある実施形態では、前記CARの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、CD28配列の連続している部分を含む。任意の膜貫通ドメインを、そのドメインが抗原結合ドメインを含むCARを細胞膜に固定することができるならば、本明細書に記載のCAR構築物に使用することができる。
【０１２６】
前記膜貫通ドメインは、天然の又は合成した供給源の何れかに由来することがある。前記供給源が天然である場合、前記ドメインは、任意の膜結合又は膜貫通タンパク質に由来することがある。本明細書中で提供する方法において使用することがある例示的な膜貫通ドメインは、T-細胞レセプターのアルファ鎖、ベータ鎖、若しくはゼータ鎖、CD28、CD3イプシロン、CD45、CD4、CD2、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、LFA-1 T-細胞共-レセプター、CD2 T-細胞共-レセプター／接着分子、CD8アルファ、及びそれらのフラグメント、に由来することがある（例えば、少なくとも上記の膜貫通ドメインを含む）。タンパク質の膜貫通ドメインは、当該分野で公知の任意の方法(例えば、疎水性解析、構造解析など)を使用して、又は公的なデータベース(例えば、UniProtデータベース)を使用することによって、同定することができる。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは合成したものであることがある。例示的な実施形態では、前記膜貫通ドメインは、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を主に含むことがある。ある実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、合成膜貫通ドメインのそれぞれの端部に配置させることがある。任意選択的に、短いオリゴの又はポリペプチドのリンカー（好ましくは2〜10アミノ酸長）によって、CARの前記膜貫通ドメインと前記細胞内シグナリング・ドメインとの間の連結を形成することがある。グリシン-セリン・ダブレットは、特に好適なリンカーを提供する。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本発明のCAR中の膜貫通ドメインは、CD8の膜貫通ドメインである。この目的のためのCD8の配列は、PCT公開番号WO2014/055771A1に教示されている。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、前記CAR中の膜貫通ドメインは、CD8の膜貫通ドメイン又はその機能的部分である。例えば、CARは、LDPKLCYLLD GILFIYGVIL TALFLRVK (配列番号(SEQ ID NO): 10)のアミノ酸配列を有するCD3の膜貫通ドメイン、又はその機能的部分（例えば、LCYLLDGILF IYGVILTALF L (配列番号(SEQ ID NO): 11)）、を含むことがある。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本発明のCAR中の膜貫通ドメインは、CD28の膜貫通ドメインである。CD28の例示的な配列、並びに例示的な膜貫通ドメイン配列を以下に提供する。いくつかの実施形態では、前記CD28の膜貫通ドメインは、以下の例示的な膜貫通ドメイン配列、又はそのフラグメント若しくはそのバリアント（これは、その配列を含むCARを細胞膜に固定することができるものである）を含む。従って、いくつかの実施形態では、前記CARの膜貫通ドメインは、以下のアミノ酸配列を含むCD28の膜貫通ドメインである：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(配列番号(SEQ ID NO): 12)。ある実施形態では、前記CARの膜貫通ドメインは、以下のアミノ酸配列を含むCD28の膜貫通ドメインである：IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWV (配列番号(SEQ ID NO): 13)、又はその機能的フラグメント、例えば配列番号(SEQ ID NO): 12。
【０１３１】
細胞外抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメインに加えて、CARは、細胞内(intracellular)（又は細胞内(細胞質側(cytoplasmic))）シグナリング・ドメインを更に含む。
【０１３２】
内因性のTCRを介して生成されるシグナルだけでは、T細胞を完全に活性化するには不十分であり、二次的又は共-刺激シグナルも必要とされることがある、ということが知られている。このように、T細胞の活性化は二つの異なる種類の細胞内シグナリング配列によって媒介されることがある：即ち、前記TCRを介して抗原依存性の一次活性化を開始させるもの(一次細胞内シグナリング配列)と、抗原-独立的に作用して二次シグナル又は共-刺激シグナルを提供するもの(二次細胞内シグナリング配列)である。
【０１３３】
用語「細胞内シグナリング・ドメイン(intracellular signaling domain)」又は「細胞内シグナリング・ドメイン(cytoplasmic signaling domain)」は、本明細書中で使用される場合、分子の細胞内部位をいう。前記細胞内シグナリング・ドメインは、CARを含む免疫細胞（例えば、CAR-T細胞又はCAR発現NK細胞）の免疫エフェクター機能を促進するシグナル、を生成することができる。例えばCART細胞又はCAR発現NK細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含むヘルパー活性が挙げられる。実施形態では、前記細胞内シグナル・ドメインがエフェクター機能シグナルを伝達し、その細胞に対して、特化した機能を実行するように指示する。細胞内シグナリング・ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、その鎖全体を使用することは必須ではない。切断を受けた細胞内シグナリング・ドメインの部分を使用する範囲について、そのような切断を受けた部分は、それが前記エフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用することができる。従って、細胞内シグナリング・ドメインという用語は、前記エフェクター機能シグナルを伝達するのに充分な細胞内シグナリング・ドメインの任意の切断を受けた部分を含むことを意味する。
【０１３４】
ある実施形態では、前記CARの細胞内シグナリング・ドメインは、配列番号(SEQ ID NO): 14に記載するようなCD3ゼータのシグナリング領域、又はそのシグナリング部分を含む：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (配列番号(SEQ ID NO): 14)。
【０１３５】
細胞内シグナリング・ドメインは、限定されるものではないが、CD3ゼータ、FcRガンマ、FcRベータ、CD3ガンマ、CD3デルタ、CD3イプシロン、CDS、CD22、CD79a、CD79b、CD278(「ICOS」)、Fc.イプシロン.RI、CD66d、DAP10、及びDAP12から誘導されるものを、更に含むことがある。
【０１３６】
CARは、サイトカイン産生を増強する共刺激タンパク質又はタンパク質類（例えば、CD28及び4-1BB等）の細胞内シグナリング・ドメインに由来するポリペプチド鎖である「細胞内共刺激ドメイン」を、更に含むことがある。例示的な共-刺激シグナリング領域としては、4-1BB、CD21、CD28、CD27、CD127、ICOS、IL-15Rα、及びOX40、が挙げられる。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、CARの細胞内共刺激ドメインは、4-1BBシグナリング・ドメインを単独で、又はCARの文脈において有益な任意の他の所望の細胞内ドメインと組み合わせて含む。4-1BBは、GenBank Acc 番号AAA62478.2 として提供されるアミノ酸配列、又は非-ヒト種(例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など)由来の同等の残基、を有するTNFRスーパーファミリーのメンバーである；及び「4-1BB共刺激ドメイン」は、GenBank Acc 番号AAA62478.2 のアミノ酸残基214〜255、又は非-ヒト種(例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人種など)由来の同等の残基、として定義される。
【０１３８】
ある実施形態では、前記CARの細胞内共刺激シグナリング・ドメインは、4-1BB(CD137)の共-刺激シグナリング領域、又はそのシグナリング部分である：
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (配列番号(SEQ ID NO): 15)。
【０１３９】
ある実施形態では、前記CARの共刺激シグナリング・ドメインは、CD28の共-刺激シグナリング領域配列である。例えば、前記共刺激シグナリング・ドメインは、以下のCD28共-刺激シグナリング部位、又はそのシグナリング部位を含むことがある：
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (配列番号(SEQ ID NO): 16)。
【０１４０】
例示的な実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD3-ゼータのシグナリング・ドメインを、本発明のCARの文脈において有用である任意の他の所望の細胞内ドメインと組合せて、含有することがある。ある特定の実施形態では、前記CARの細胞内ドメインは、CD3ゼータのドメイン及び共刺激シグナリング領域（例えば、限定されるものではないが、4-1BB、CD28、及びCD27の共刺激シグナリング領域）を含むことがある。
【０１４１】
本発明のCARの細胞内シグナリング部分内の細胞内シグナリング配列は、ランダム又は特定の順序で互いに連結していても良い。任意選択的に、短いオリゴの又はポリペプチドのリンカー又はスペーサ（好ましくは5〜20アミノ酸長）を細胞内ドメインの間に挿入することがある。GGGGS(配列番号(SEQ ID NO): 17)又は(GGGGS)×3(配列番号(SEQ ID NO): 18)は、特に好適なリンカーを提供する。
【０１４２】
ある実施形態では、本明細書で使用するCARは、抗-CD19モノクローナル抗体の単鎖可変ドメインを含有する細胞外ドメイン、CD8αのヒンジ及び膜貫通ドメインを含有する膜貫通ドメイン、並びにCD3ζのシグナリング・ドメイン及び4-1BBのシグナリング・ドメインを含有する細胞内ドメイン、を含む。例示的なCARは、Nicholson I C, et al., Mol Immunol 34:1157-1165 (1997)に記載されている抗-CD19モノクローナル抗体を含む細胞外ドメインに加えて、CD8αの21アミノ酸シグナル・ペプチド(GenBankアクセッション番号.NM_001768の26-88位の63ヌクレオチドから翻訳される)、を含む。CD8αヒンジ及び膜貫通ドメインは、GenBankアクセッション番号NM_001768の815〜1021位の207ヌクレオチドから翻訳される69アミノ酸からなる。好ましい実施形態のCD3ζシグナリング・ドメインは、GenBankアクセッション番号NM_000734の1022〜1360位の339ヌクレオチドから翻訳される112アミノ酸を含む。
【０１４３】
前記CARの細胞外ドメイン(抗原結合ドメインを含む)と膜貫通ドメインとの間、又は前記CARの細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間に、スペーサ又はヒンジ・ドメインが組み込まれていることがある。本明細書で使用する場合、用語「スペーサ・ドメイン」は一般に、前記膜貫通ドメインをポリペプチド鎖中の細胞外ドメイン及び／又は細胞内ドメインに連結するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドを意味する。本明細書中で使用する場合、ヒンジ・ドメインは一般に、前記CAR、若しくはそのドメインに柔軟性を提供するように、及び／又は前記CAR、又はそのドメインの立体障害を防止するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドを意味する。いくつかの実施形態では、スペーサ又はヒンジ・ドメインは、300個までのアミノ酸、好ましくは10〜100個のアミノ酸、最も好ましくは5〜20個のアミノ酸を含むことがある。本開示の態様はこの点に限定されないので、1つ以上のスペーサ・ドメインがCARの他の領域に含まれてもよいことも理解されるべきである。
【０１４４】
CARは、本明細書中に提供される配列を有する領域(例えば、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメイン、シグナリング・ドメイン、安全性ドメイン、及び／若しくはリンカー、又はそれらの任意の組合せ)を含むことがあること、又はそれらのバリアント、若しくはそれらの何れかのフラグメント(例えば、CAR活性に必要とされる機能を保持するバリアント及び／又はフラグメント)が本明細書中に記載するCARタンパク質に含まれ得ること、は理解されるべきである。いくつかの実施形態では、バリアントは、示した配列に対して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のアミノ酸が変化している。いくつかの実施形態では、バリアントは、示した配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、90%〜95%、少なくとも95%又は少なくとも99%同一である配列を有する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、本明細書中に提供される配列よりも、1〜5、5〜10、10〜20、20〜30、30〜40、又は40〜50アミノ酸分、短い。いくつかの実施形態では、フラグメントは、提供する配列のN-末端、C-末端、又は両方の末端領域でより短い。いくつかの実施形態では、フラグメントは、本明細書中で提供する配列中のアミノ酸の数の80%〜85%、85%〜90%、90%〜95%、又は95%〜99%を含む。
【０１４５】
他の実施形態では、本発明は、本明細書中に開示するアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、上記の例示的な非-限定的な配置は、前記CARの左側から右側、N-末端側からC-末端側である。前記CARは、本明細書中に記載するように、要素の任意の他の組合せを含んでもよく、又は更に含んでもよい。
【０１４７】
CAR構築物がその様々な部分で同定されると、CARを発現する免疫細胞が産生され、それによって、前記免疫細胞が前記CARを発現する。本方法は、本明細書中に記載する核酸分子(例えば、RNA分子(例えば、mRNA))、又はCAR(例えば、本明細書中に記載するCAR)をコードする核酸分子を含むベクターを、前記免疫細胞に導入すること(例えば、形質導入すること)を包含する。また、本発明は、細胞集団(例えば、外因性RNAを一時的に発現する、RNAで操作した細胞)を作製する方法を提供する。本方法は、本明細書中に記載するようなRNA(例えば、in vitroで転写したRNA又は合成RNA；本明細書中に記載するようなCARポリペプチドをコードするmRNA配列)を細胞に導入することを包含する。実施形態では、前記RNAは、CARポリペプチドを一過性に発現する。ある実施形態では、前記細胞は本明細書に記載の細胞（例えば、免疫エフェクター細胞(例えば、T細胞若しくはNK細胞、又は細胞集団)）である。
【０１４８】
他の例示的なキメラ抗原レセプター構築物は、米国特許第 9,328,156号；米国特許第 9,783,591号；米国特許第9,714,278号；米国特許第 9,765,156号；米国特許第 10,117,896号；米国特許第9,573,988号；米国特許第 10,308,717号；米国特許第 10,221,245号；米国特許第10,040,865号；米国特許公開公報第 2018/0256712A1号；米国特許公開公報第 2018/0271907A1号；米国特許公開公報第2016/0046724A1号；米国特許公開公報第 2018/0044424A1号；米国特許公開公報第 2018/0258149A1号；米国特許公開公報第2019/0151363A1号；及び 米国特許公開公報第2018/0273601A1号、に開示されている；前記の特許及び特許公開公報のそれぞれの内容は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１４９】
III．抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)
本明細書中に記載するように、抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して、ヒト患者におけるがん又は自己免疫疾患を治療する。より具体的には、抗-CD2 ADCを使用して、CAR療法も受けているヒト対象において、CD2+細胞(例えば、CD2+ T細胞)を減少させることができる。抗-CD2 ADCは、内因性T細胞をターゲットとし、これらの細胞を傷害することにより、前記患者の免疫系が、前記対象に投与したCARを発現する免疫細胞(自己又は同種異系)を攻撃しないようにする。このように、抗-CD2 ADCを、CAR療法と併用して、コンディショニング・レジメンとして使用し、レシピエント(recipient)患者において、操作したCARを発現する免疫細胞の受容を促進させる。コンディショニング・レジメンとして抗-CD2 ADCを使用することの1つの利点は、一般的な全身リンパ球除去化学療法剤を前記対象に投与する、CAR療法のためのコンディショニングに関する従来の方法よりも、CD2を発現する内因性T細胞を特異的にターゲット化して減少させることである。
【０１５０】
抗-CD2 ADC及びこれを用いたコンディショニング方法の実施例は、PCT公開 WO 2019/108860 に記載されていて、本明細書に参照により取り込まれる。
【０１５１】
抗-CD2抗体
CD2と結合することができるADCを治療薬剤として使用し、CARを発現する免疫細胞が拒絶されるリスクを防止又は減少させることによって、CARを発現する免疫細胞のヒト患者における受容を促進させることがある。
【０１５２】
本明細書中に記載する抗-CD2 ADCは、細胞毒素に連結した抗-CD2抗体又はその抗原結合部分を含む。
【０１５３】
ヒトCD2は、T細胞表面抗原T11/Leu-5, T11、CD2抗原(p50)、及びヒツジ赤血球細胞レセプター(Sheep Red Blood Cell Receptor (SRBC))とも呼ばれる。CD2は、T細胞上に発現する。ヒトCD2の2つのアイソフォームが同定されてきている。アイソフォーム1は、351アミノ酸を含み、Seed, B. et al. (1987) 84: 3365-69 (Sewell et al. (1986)83: 8718-22も参照) 及び以下 (NCBI 参照配列: NP_001758.2)に記載されている。
【化９】
2021530545.tif 000080
【０１５４】
CD2の第2のアイソフォームは377アミノ酸であり、本明細書中でNCBI参照配列: NP_001315538.1として特定される。
【０１５５】
ある実施形態では、本明細書中に記載される組成物及び方法と併せて使用することがある抗-CD2抗体は、以下のCDRの1つ以上、又は全てを有するものを含む：
a. アミノ酸配列EYYMY(配列番号(SEQ ID NO): 1)を有するCDR-H1；
b. アミノ酸配列RIDPEDGSIDYVEKFKK (配列番号(SEQ ID NO): 2)を有するCDR-H2；
c. アミノ酸配列GKFNYRFAY(配列番号(SEQ ID NO): 3)を有するCDR-H3；
d. アミノ酸配列RSSQSLLHSSGNTYLN(配列番号(SEQ ID NO): 4)を有するCDR-L1；
e. アミノ酸配列LVSKLES(配列番号(SEQ ID NO): 5)を有するCDR-L2；
f. アミノ酸配列MQFTHYPYT(配列番号(SEQ ID NO): 6)を有するCDR-L3。
前記のCDR配列を含む抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば米国特許第6,849,258号に記載されており、その開示は、抗-CD2抗体及びその抗原結合フラグメントに関連するので、本明細書に参照により取り込まれる。
【０１５６】
更に、ある特定の実施形態では、前記抗-CD2 ADCは、3日以下のヒト対象における血清半減期を有する。
【０１５７】
本明細書中に記載するADCにおいて使用することがある更なる抗-CD2抗体を、ハイブリドーマ産生などの当技術分野で公知の技術を使用して同定することがある。ハイブリドーマを、マウスのシステムを用いて調製することがある。免疫化及びその後に融合するために脾臓細胞を単離するためのプロトコルは、当該分野で公知である。ハイブリドーマを産生するための融合パートナー及び手順もまた公知である。あるいは、HuMAb-Mouse登録商標又はXenoMouseTMを使用して、抗-CD2抗体を生成することもある。更なる抗-CD2抗体を作製する際に、そのCD2抗原を単離及び／又は精製する。前記CD2抗原は、CD2の細胞外ドメイン由来のCD2のフラグメントであることがある。動物の免疫化を、当技術分野で公知の任意の方法によって行うことができる。例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990、を参照のこと。マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ及びウマなどの動物を免疫するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、Harlow and Lane、同上及び、米国特許第5,994,619号、を参照。前記CD2抗原を、免疫反応を刺激するために、アジュバントと共に投与することがある。当技術分野で公知のアジュバントとしては、完全又は不完全フロイント・アジュバント、RIBI(ムラミル・ジペプチド)又はISCOM(免疫刺激複合体)が挙げられる。CD2抗原で動物を免疫した後、免疫した動物から単離した細胞から抗体産生不死化細胞株を調製する。免疫化後、前記動物を屠殺し、そしてリンパ節及び／又は脾臓B細胞を、当該分野で公知の方法(例えば、がん遺伝子導入、がん原性ウイルス形質導入、発がん性又は変異原性化合物への暴露、不死化細胞(例えば、骨髄腫細胞)との融合、及び腫瘍サプレッサー遺伝子の不活性化)によって不死化する。例えば、Harlow and Lane、同上を参照。ハイブリドーマを、所望の特性（例えば、強固な増殖、高い抗体産生、及び所望の抗体特性が挙げられる）について、選択する、クローニングする及び更にスクリーニングすることがある。
【０１５８】
本明細書中に記載する抗-CD2 ADCにおいて使用するための抗-CD2抗体はまた、CD2に結合可能な分子についての抗体又は抗体フラグメントのライブラリを、ハイスループット・スクリーニングすることを使用して、同定することがある。このような方法としては、当技術分野で公知のin vitroディスプレイ技術、例えば、とりわけ、ファージ・ディスプレイ、バクテリア・ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソーム・ディスプレイ、mRNAディスプレイ、及びcDNAディスプレイなど、が挙げられる。生物学的に関連する分子に結合する抗体、抗原結合フラグメント、又はリガンドを単離するためにファージ・ディスプレイを使用することは、例えば、Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1:149-183, 1995; Katz, Annual Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:27-45, 1997; 及び Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1-20, 1998、でレビューされてきている、これらの各々の開示は、in vitroディスプレイ技術に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2:251-268, 1995 及び Kay et al., Mol. Divers. 1:139-140, 1996に記載されるように、ランダム化したコンビナトリアル・ペプチド・ライブラリを構築して、細胞表面抗原に結合するポリペプチドを選択することも行われてきている、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。タンパク質類(例えば、多量体タンパク質類)を、機能的分子として、ファージ・ディスプレイすることが、うまくできてきている(例えば、EP 0349578; EP 4527839;及びEP 0589877、並びにChiswell and McCafferty, Trends Biotechnol. 10:80-84 1992を参照、これらの各々の開示は、抗原結合分子を発見するためのin vitroディスプレイ技術の使用に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。更に、機能的抗体フラグメント(例えば、Fab及びscFvフラグメント)を、in vitroディスプレイ・フォーマットで、発現させることも行われてきている(例えば、McCafferty et al., Nature 348:552- 554, 1990; Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982, 1991; 及び Clackson et al., Nature 352:624-628, 1991、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイ・プラットフォームに関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１５９】
in vitroディスプレイ技術に加えて、例えば、US2013/0288373に記載された手順を使用しながら、計算モデリング技術を使用して、抗-CD2抗体又は抗体フラグメントをin silicoで設計する、及び同定することがある（その開示は、抗-CD2抗体を同定するための分子モデリング方法に関するものとして、本明細書に取り込まれる）。例えば、計算モデリング技術を用いて、当業者のある者は、CD2の細胞外エピトープなどのCD2上の特異的エピトープに結合することができる分子を求めて、抗体又は抗体フラグメントのライブラリをin silicoでスクリーニングすることがある。
【０１６０】
ある実施形態では、本明細書中に記載するADCにおいて使用する抗-CD2抗体は、細胞の中に取り込まれることがある。抗-CD2抗体(又はそのフラグメント)を同定する際に、更なる技術を使用して、細胞(例えば、T細胞)の表面上のCD2に結合し、更に、例えば、レセプター媒介エンドサイトーシスによって、前記細胞が中に取り込むことができる抗体又は抗原結合フラグメントを同定することがある。例えば、上記のin vitroディスプレイ技術を、造血幹細胞の表面上のCD2に結合し、続いて中に取り込まれる抗体又はその抗原結合フラグメントを求めてスクリーニングするように、適合させることがある。ファージ・ディスプレイは、このスクリーニング・パラダイムと組み合わせて使用することがあるような技術の1つの代表である。CD2に結合し、続いてCD2+細胞の中に取り込まれる抗-CD2抗体又はそのフラグメントを同定するために、当業者のある者は、Williams et al., Leukemia 19:1432-1438, 2005に記載されるファージ・ディスプレイ技術を使用することがある（その開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１６１】
抗-CD2抗体又はそのフラグメントを中に取り込む許容量を、例えば、当該分野で公知の放射性核種内部取込アッセイを使用して、評価することがある。例えば、本明細書中に記載する、又は当技術分野で公知のin vitroディスプレイ技術を用いて同定した抗-CD2抗体又はそのフラグメントを、放射性同位元素（例えば、18F, 75Br, 77Br, 122I,123I, 124I, 125I, 129I, 131I, 211At, 67Ga, 111In, 99Tc, 169Yb, 186Re, 64Cu, 67Cu, 177Lu, 77As, 72As, 86Y, 90Y, 89Zr, 212Bi, 213Bi, 又は 225Ac）を取り込ませることにより、機能的にすることがある。例えば、放射性ハロゲン（例えば、18F, 75Br, 77Br, 122I,123I, 124I, 125I, 129I, 131I, 211At等）を、求電子性ハロゲン試薬(例えば、ヨード化ビーズ、Thermo Fisher Scientific, Inc., Cambridge, MA)を含むビーズ（例えば、ポリスチレン・ビーズ）を使用して、抗体、そのフラグメント、又はリガンドの中に組み込ませることがある。放射性標識した抗体又はそのフラグメントを、造血幹細胞と共に、中に取り込まれるのに充分な時間、インキュベートすることがある。中に取り込まれた抗体、又はそのフラグメントを、得られた造血幹細胞から放出される放射線(例えば、γ線)を検出し、回収した洗浄バッファーから放出される放射線(例えば、γ線)と比べて、同定することがある。前記の内部取込アッセイを使用して、ADCを特徴付けることもある。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、前記抗-CD2抗体(又はそのフラグメント)は、定義された血清半減期を有する。例えば、抗-CD2抗体(又はそのフラグメント)は、ヒト患者において、約1〜24時間の血清半減期を有することがある。このような抗-CD2抗体を含むADCもまた、例えば、ヒト患者において約1〜24時間の血清半減期を有することがある。血清レベルを計測することによる薬物動態解析を、当技術分野で公知のアッセイによって行うことがある。
【０１６３】
抗-CD2抗体を組換えにより産生するためには、抗体をコードする核酸(例えば、上記のよう)を、単離し、及び宿主細胞において更にクローニングする及び／又は発現させるために、1種以上のベクターに挿入する。このような核酸分子を、従来の手順を使用して(例えば、前記抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチド・プローブを使用することによって)容易に単離することができ、及びシークエンシングをすることができる。
【０１６４】
抗体をコードするベクターをクローニングする又は発現させるのに好適な宿主細胞としては、本明細書に記載の原核生物の、又は真核生物の細胞が挙げられる。例えば、抗体類を、特にグリコシル化及びFcエフェクター機能を必要としない場合に、バクテリアの中で産生することがある。バクテリアの中で抗体フラグメント及びポリペプチドを発現させることについては、例えば、米国特許第5,648,237号, 5,789,199号,及び5,840,523を参照のこと（大腸菌の中で抗体フラグメントを発現させることを記載する、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 245-254、も参照のこと）。発現させた後、前記抗体をバクテリア細胞のペースト(paste)から可溶性画分として単離し、更に精製することがある。
【０１６５】
脊椎動物細胞を宿主としても使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合化した哺乳動物細胞株は有益であることがある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株(COS-7)；ヒト胚腎臓株(293又は293細胞、例えば、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載されている)；乳児ハムスター腎臓細胞(BHK)；マウス・セルトリ細胞(TM4細胞、例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されている)；サル腎臓細胞(CV1)；アフリカミドリザル腎臓細胞(VERO-76)；ヒト子宮頸部がん(carcinoma)細胞(HELA)；イヌ腎臓細胞(MDCK)；バッファロー・ラット肝臓細胞(BRL 3A)；ヒト肺細胞(W138)；ヒト肝臓細胞(Hep G2)；マウス乳房腫瘍(MMT 060562)；TRI細胞、例えば、Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されている；MRC 5細胞；及びFS4細胞、である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞(例えば、DHFR-CHO細胞等を含む(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))；及び骨髄腫細胞株(例えば、Y0、NS0及びSp2/0)、が挙げられる。抗体産生に適した、ある特定の哺乳動物宿主細胞株のレビューについては、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。ある実施形態では、前記宿主細胞は真核生物、例えば、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞又はリンパ系細胞(例えば、Y0、NS0、Sp20細胞)である。
【０１６６】
細胞毒素
種々の細胞毒素を、本明細書中に記載する併用療法における使用のために、リンカーを介して抗-CD2抗体にコンジュゲートすることがある。特に、抗-CD2 ADCは、細胞毒性部分(又は細胞毒素)にコンジュゲートした(即ち、リンカーによって共有結合した)抗体(又はその抗原結合フラグメント)を含む。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、コンジュゲートとして結合している場合、細胞毒性は減少している、又は細胞毒性を示さない。しかし、前記リンカーからの切断後、細胞毒性を再び示すようになる。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、前記リンカーから切断されること無しに、細胞毒性を保持する。いくつかの実施形態では、前記細胞毒性分子は、本明細書中に記載するような、細胞の中に取り込まれる抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートする、その結果、前記抗体又はそのフラグメントが細胞の中に取り込まれた後に、前記細胞毒素がその細胞内ターゲットにアクセスし、例えば、T細胞死を媒介することがある。
【０１６７】
従って、本発明のADCは、一般式Iであることがある、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメント(Ab)は、リンカー(L)にコンジュゲート(共有結合)し、化学的な部分構造(Z)を通じて、細胞毒性部分(「薬物」、D)にコンジュゲートする。
Ab-(Z-L-D)n      (I)
【０１６８】
従って、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、整数nによって示されるような多数の薬物部分にコンジュゲートすることがある、ここで、整数nは抗体当たりの細胞毒素の平均個数を表す、ここで、整数nは例えば約1〜約20の範囲であることがある。任意の数（例えば、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、又は約8）の細胞毒素が前記抗体にコンジュゲートすることがある。いくつかの実施形態では、nは1〜4である。いくつかの実施形態では、nは1〜3である。いくつかの実施形態では、nは約2である。いくつかの実施形態では、nは約1である。コンジュゲーション反応によるADCの調製物中の抗体当たりの薬物部分の平均個数を、マス・スペクトロスコピー、ELISAアッセイ、及びHPLCのような従来の手段によって明らかにすることができる。nに関するADCの定量的な分布も決定することができる。場合によっては、逆相HPLC又は電気泳動のような手段によって、nが特定の数値である均質なADCを、他の薬物搭載量を有するADCから、分離する、精製する、及び特性評価することができる。
【０１６９】
いくつかの抗-CD2 ADCについて、nは、抗体上の結合部位の数によって制限されることがある。例えば、結合がシステインのチオールである場合、抗体は1個又は数個のシステインのチオール基しかもたない、又はリンカーが結合するのに十分な反応性をもつチオール基を1個又は数個しかもたない。一般に、抗体は、薬物部分に結合することができる遊離及び反応性システイン基を多くは含まない；主に、抗体中のシステインのチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体を、ジチオトレイトール(DTT)又はトリカルボニルエチルホスフィン(TCEP)などの還元剤で還元して、部分的又は全還元条件下で、反応性システインのチオール基を生成させることができる。ある特定の実施形態では、より高く薬物を搭載させると(例えば、n>5)、ある特定の抗体-薬物コンジュゲートでは凝集性、不溶性、毒性が引き起こされる、又は細胞透過性が失われることが引き起されることがある。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、コンジュゲーション反応の間に、理論上の最大よりも少ない薬物部分が、抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、以下に論じるように、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含むことがある。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応することができる。ある特定の実施形態では、抗体を、変性条件下に供し、リジン又はシステインのような反応性求核基を表に出す。
【０１７１】
ADCの搭載(薬物／抗体比)を、種々の方法で（例えば、(i)抗体に対する、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること、(ii)コンジュゲーション反応の時間又は温度を制限すること、(iii)システインのチオール修飾のために、部分的又は制限的な還元条件下にすること、(iv)リンカー-薬物結合の数及び／又は位置をコントロールするために、システイン残基の数及び位置を改変するように、抗体のアミノ酸配列を組換え技術によって操作すること）、コントロールすることがある。
【０１７２】
本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用するのに適した細胞毒素としては、当該技術分野において公知の、とりわけ、DNA-インターカレーティング剤(例えば、アントラサイクリン)、紡錘体装置を破壊することができる薬剤(例えば、ビンカ・アルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、及びその誘導体)、RNAポリメラーゼ阻害剤(例えば、α-アマニチン等のアマトキシン、及びその誘導体)、並びにタンパク質生合成を破壊することができる薬剤(例えば、サポリン及びリシンA鎖等のrRNA N-グリコシダーゼ活性を示す薬剤)が挙げられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤(例えば、メイタンシン又はメイタンシノイド)、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deブーガニン、ジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、又はそのバリアント、又は本明細書に記載する若しくは当該技術分野で公知の他の細胞毒性化合物である。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、前記抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、RNAポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。
【０１７５】
本発明の方法において有用な抗-CD2 ADCにおいて使用することがある細胞毒素に関する更なる詳細を、以下に記載する。
【０１７６】
アマトキシン
いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。種々の天然に存在するアマトキシンの構造は、式II及び一緒に提示する表１によって表される、及び、例えば、Zanotti et al., Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 450-459に開示される。
【化１０】
2021530545.tif 000081
【０１７７】
【表１】
2021530545.tif 000082
【０１７８】
ある実施形態では、前記細胞毒素はアマニチン又はその誘導体である。ある実施形態では、前記細胞毒素はα-アマニチン又はその誘導体である。
【０１７９】
アマトキシン又はその誘導体上の多くの位置は、連結部分Lと共有結合する位置としての役割を果たすことができる、及びそれ故に、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる。いくつかの実施形態では、式IのADC中の細胞毒素は、式(II)で表されるアマトキシン又はその誘導体である。ある実施形態では、前記ADCは式Ab-Z-L-Amで表される、ここで、AbはCD2に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、Amはアマトキシンである。この実施形態では、前記リンカー-アマトキシン・コンジュゲートAm-L-Zは、式(III)で表される：
【化１１】
2021530545.tif 000083
ここで：
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、及び任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、である；ジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-である（ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；Z'は反応性部分である、及びZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。いくつかの実施形態では、前記アマトキシンは、1個のRC置換基を含む。
【０１８０】
式(III)は、アマトキシン及びリンカーを含む、並びに、いくつかの実施形態では、リンカー、化学的な部分構造、及び抗体を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシンである、及びリンカー-アマトキシン・コンジュゲート又は抗体-リンカー-アマトキシン・コンジュゲートは式(IIIA)で表される：
【化１２】
2021530545.tif 000084
ここで：
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、及び任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-である（ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；Z'は反応性部分である、及びZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。いくつかの実施形態では、前記アマトキシンは、1個のRC置換基を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化１３】
2021530545.tif 000085
ここで、Yは、-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE)-, 又は-(CRERE’)-である；並びに
ここで、RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである；ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、又はヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０１８３】
式(IIIA)は、アマトキシン及びリンカーを含む、並びに、いくつかの実施形態では、リンカー、化学的な部分構造、及び抗体を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化１４】
2021530545.tif 000086
ここで、
R3は、H又はRCである。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化１５】
2021530545.tif 000087
ここで、
R3は、H又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9は、H又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1は、H、OH、又はORAである；
R2は、H、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化１６】
2021530545.tif 000088
ここで、
R3、R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、ORCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIAで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は式IIIAで表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される：
【化１７】
2021530545.tif 000089
ここで：
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、及び任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、である；又はジペプチドを含む；又は-((CH2)mO)n(CH2)m-である（ここで、m及びnは、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される）；Z'は反応性部分である、及びZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０１９１】
式(IIIB)は、アマトキシン及びリンカーを含む、並びに、いくつかの実施形態では、リンカー、化学的な部分構造、及び抗体を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化１８】
2021530545.tif 000090
ここで、Yは、-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE)-, 又は-(CRERE’)-である；並びに
ここで、RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである；ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントは、アマトキシン-リンカー・コンジュゲート又はその誘導体にコンジュゲートする、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化１９】
2021530545.tif 000091
ここで、R3は、H又はRCである。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化２０】
2021530545.tif 000092
ここで、
R3は、H又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9は、H又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1は、H、OH、又はORAである；
R2は、H、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化２１】
2021530545.tif 000093
ここで、
R3、R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、ORCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素はアマトキシン又はその誘導体である、及び前記アマトキシン-リンカー・コンジュゲートは式IIIBで表される、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０１９９】
アウリスタチン
本明細書に記載する抗-CD2抗体及びその抗原結合フラグメントは、アウリスタチンである細胞毒素にコンジュゲートしていることがある(米国特許第5,635,483号;第5,780,588号)。アウリスタチンは、微小管動態、GTP加水分解、核分裂及び細胞分裂を妨げる抗有糸分裂剤であり(Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584)、並びに抗がん活性(米国特許第5,663,149号)及び抗真菌活性(Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). (米国特許第5,635,483; 5,780,588号)を有する。アウリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のN(アミノ)末端又はC(カルボキシル)末端を介して、抗体に結合することがある(WO02/088172)。
【０２００】
例示的なアウリスタチンの実施形態は、N-末端結合モノメチル・アウリスタチン薬物部分DE及びDFを含み(それぞれ、MMAE及びMMAF)、これらは、Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, 2004年3月28日に開示されている（この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２０１】
例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAEである：
【化２２】
2021530545.tif 000094
ここで、その波線は、抗体-薬物又は薬物-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２０２】
別の例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAFである：
【化２３】
2021530545.tif 000095
ここで、その波線は、US 2005/0238649で開示されているように、抗体-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す：
【０２０３】
アウリスタチンは以下の方法に従って調製することができる：米国特許第5,635,483号；米国特許第5,780,588；Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G. R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 15:859-863; 及び Doronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7):778-784。
【０２０４】
メイタンシノイド
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、微小管結合剤である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤は、メイタンシン、メイタンシノイド又はメイタンシノイド類似体である。メイタンシノイドは微小管と結合し、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは最初に、東アフリカ低木Maytenus serrataから単離された(米国特許第3,896,111号)。続いて、特定の微生物もまた、メイタンシノイド(例えば、メイタンシノール及びC-3メイタンシノール・エステル)を産生することが発見された(米国特許第4,151,042号)。合成メイタンシノール、並びにその誘導体及びその類似体は例えば、米国特許4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; 及び 4,371,533 号において開示されている。メイタンシノイドの薬物部分は、抗体薬物コンジュゲートにおいて魅力的な薬物部分である。なぜならば、メイタンシノイドの薬物部分は：(i)発酵又は、発酵産物の化学修飾、誘導体化によって調製することに、比較的アクセス可能である、(ii)非-ジスルフィド・リンカーを介した抗体へのコンジュゲートに適した官能基による誘導体化がやり易い、(iii)血漿中で安定である、及び(iv)種々の腫瘍細胞株に対して効果的である、からである。
【０２０５】
好適なメイタンシノイドの例としては、メイタンシノール、合成メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体及び誘導体、のエステルが挙げられる。メイタンシノイド、メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体、及び誘導体のように、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に対して非常に毒性である、任意の細胞毒素が本明細書に含まれる。
【０２０６】
好適なメイタンシノール・エステルの例としては、修飾された芳香環を有するもの、及び他の位置に修飾を有するものが含まれる。そのような好適なメイタンシノイドは、米国特許第4,137,230; 4,151,042; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814;  4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,362,663; 4,364,866; 4,424,219 ;4,450,254; 4,322,348; 4,362,663; 4,371,533; 5,208,020; 5,416,064; 5,475,092; 5,585,499; 5,846,545; 6,333,410; 7,276,497; 及び7,473,796号に開示されており、これらの各々は、メイタンシノイド及びその誘導体に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は、細胞毒性薬物として、チオール含有メイタンシノイド(DM1)（正式にはN2'-デアセチル-N2'-(3-メルカプト-1-オキソプロピル)-メイタンシンと呼ばれる）を利用する。DM1は、以下の構造式IVで表される：
【化２４】
2021530545.tif 000096
。
【０２０８】
別の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、チオール含有メイタンシノイドN2'-デアセチル-N2'(4-メチル-4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(例えば、DM4)を細胞毒性薬物として利用する。DM4は、以下の構造式Vで表される：
【化２５】
2021530545.tif 000097
【０２０９】
立体障害チオール結合を含む側鎖を含む別のメイタンシノイドは、N2'-デアセチル-N-2'(4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(DM3と呼ばれる)であり、以下の構造式VIで表される：
【化２６】
2021530545.tif 000098
【０２１０】
米国特許第5,208,020 及び 7,276,497が教示する各メイタンシノイドを、本発明のコンジュゲートにおいて使用することもある。この点に関して、5,208,020及び7,276,697の開示全体は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２１１】
メイタンシノイド上の多くの位置は、連結部分と共有結合する位置としての役割を果たすことができる、及び、それ故に前記抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる（本明細書に記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z'）。例えば、ヒドロキシル基を有するC-3位、ヒドロキシメチルで修飾されたC-14位、ヒドロキシで修飾されたC-15位、及びヒドロキシ基を有するC-20位は、全て有用であると予想される。いくつかの実施形態では、前記C-3位は、リンカー部分と共有結合する位置としての役割を果たし、いくつかの特定の実施形態では、メイタンシノールのC-3位が、連結部分と共有結合する位置としての役割を果たす。抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを作製するために、当該技術分野で知られている多くの連結基が存在し、例えば、それらは、米国特許第5,208,020、6,441,163、及び欧州特許第0425235 B1; Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); 並びに U.S. 2005/0169933 A1に開示されているもの等を含む（これらの開示は、本明細書に明確に参照により取り込まれる）。更なる結合基は、本明細書に記載され、例示される。
【０２１２】
本発明はまた、メイタンシノイド及びコンジュゲートの種々の異性体及び混合物を含む。本発明の特定の化合物及びコンジュゲートは、種々の立体異性体、鏡像異性体、及びジアステレオマーの形態で存在することがある。このような抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを生成することは、米国特許5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,716,821、及び7,368,565に記載されている(これらの各々は、その全体が本明細書に取り込まれる)。
【０２１３】
アントラサイクリン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、アントラサイクリン分子である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。アントラサイクリンは、細胞傷害活性を示す抗生物質化合物である。研究によれば、アントラサイクリンは、以下を含む多数の異なるメカニズムによって、細胞を死滅させることがあることが示されてきている： 1)前記薬物分子が細胞のDNAにインターカレーションすることによって、DNA依存性の核酸合成を阻害すること；2) 薬物によるフリーラジカルの産生、フリーラジカルは、次いで細胞性高分子と反応して細胞に損傷を引き起こす、又は3)薬物分子と細胞膜との相互作用[例えば、C. Peterson et al.," Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia" in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy; N.R. Bachur, "Free Radical Damage" id. at pp.97-102を参照のこと]。細胞毒性の可能性があるため、白血病、乳がん、肺がん、卵巣腺がん及び肉腫のような多数のがんの治療にアントラサイクリンが用いられている[例えば、P.H- Wiernik, in Anthracycline: Current Status And New Developments p 11を参照]。一般的に使用されるアントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びダウノマイシンが挙げられる。
【０２１４】
アントラサイクリンの代表的な例としては、限定されるものではないが、ダウノルビシン(Cerubidine; Bedford Laboratories)、ドキソルビシン(アドリアマイシン；Bedford Laboratories；塩酸ドキソルビシン、ヒドロキシ-ダウノルビシン、及びルベックス(Rubex)とも呼ばれる)、エピルビシン(エレンス(Ellence);ファイザー)、及びイダルビシン(イダマイシン;ファイザー社)が挙げられる。
【０２１５】
アントラサイクリン類似体であるドキソルビシン(ADRIAMYCINO)は、インターカレーションによってDNAと相互作用し、及び転写のためにDNAをほどく酵素トポイソメラーゼIIが進むことを阻害する、と考えられている。ドキソルビシンは、トポイソメラーゼII複合体を、複製のためにDNA鎖を切断した後に安定化させ、DNA二重らせんが再び閉じることを防ぎ、それによって複製のプロセスを止める。ドキソルビシン及びダウノルビシン(DAUNOMYCIN)は、プロトタイプの細胞毒性天然物アントラサイクリン化学療法剤である（Sessa et al., (2007) Cardiovasc. Toxicol. 7:75-79）。
【０２１６】
本明細書で使用するのに適したアントラサイクリンの非-限定的な一例は、PNU-159682(「PNU」)である。PNUは、親であるネモルビシンに対して3000倍を超える細胞毒性を示す(Quintieri et al., Clinical Cancer Research 2005, 11, 1608-1617)。PNUは、以下の構造式によって表される：
【化２７】
2021530545.tif 000099
。
【０２１７】
PNUのようなアントラサイクリン上の多数の位置は、前記連結部分への共有結合する位置としての役割を果たす、そして、それ故に、本明細書中に記載するような抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる。例えば、リンカーを、ヒドロキシメチル・ケトン側鎖への改変を介して導入することがある。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、下記構造式で表されるPNU誘導体である：
【化２８】
2021530545.tif 000100
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２１９】
ピロロベンゾジアゼピン(PBDs)
他の実施形態では、本明細書に記載する抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)である細胞毒素、又はPBDを含む細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。PBDはある特定の放線菌によって産生され、配列選択的なDNAアルキル化化合物であることが示されてきている。PBD細胞毒素としては、限定されるものではないが、アントラマイシン、二量体PBD、及び、例えば、Hartley, J.A. (2011). “The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents.”  Expert Opin. Inv. Drug, 20(6), 733-744; 及び Antonow, D.; Thurston, D.E. (2011) “Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines (PBDs).” Chem. Rev. 111: 2815-2864の中で開示されているものが挙げられる。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式で表されるピロロベンゾジアゼピン二量体であることがある：
【化２９】
2021530545.tif 000101
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。このPBDに基づくADCは、例えば、Sutherland et al., Blood 2013 122:1455-1463（これは、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に開示されている。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式で表されるPBD二量体であることがある：
【化３０】
2021530545.tif 000102
ここで、nは3又は5である、ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式で表されるPBD二量体であることがある：
【化３１】
2021530545.tif 000103
ここで、波線は、本明細書中に記載するようなADCのリンカーに共有結合をする位置を示す。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、前記細胞毒素はPBD二量体であることがある、これは、リンカー及び反応性部分構造Z'と一緒になった場合、それぞれ本明細書中に記載するように、以下の構造によって表されることがある：
【化３２】
2021530545.tif 000104
。
【０２２４】
この特定の細胞毒素-リンカー・コンジュゲートはテシリン(SG3249)として知られており、例えば、Howard et al., ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7(11), 983-987、に記載されている、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、前記細胞毒素はPBD二量体であることがある、これは、リンカー及び反応性部分構造Z'と一緒になった場合、それぞれ本明細書中に記載するように、以下の構造によって表されることがある：
【化３３】
2021530545.tif 000105
。
【０２２６】
この特定の細胞毒素-リンカー・コンジュゲートはタリリンとして知られており、例えば、Mantaj et al., Angewandte Chemie International Edition English 2017,56, 462-488、に記載されている、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２７】
カリケアマイシン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、エネジイン抗腫瘍抗生物質(例えば、カリケアマイシン、オゾガマイシン)である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。
【０２２８】
カリケアマイシン・ファミリーの抗生物質は、ピコモル未満の濃度で、二本鎖DNAを切断することができる。カリケアマイシン・ファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,767,285; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 及び 5,877,296号を参照のこと（全てAmerican Cyanamid Companyに関する）。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998), 及びAmerican Cyanamidに関する上記の米国特許、に開示されているものが挙げられる。
【０２２９】
例示的なカリケアマイシンは、γ1と命名されている、これらを、本明細書では単にガンマとして呼び、以下の構造式を有する：
【化３４】
2021530545.tif 000106
【０２３０】
いくつかの実施形態では、前記カリケアマイシンは、ガンマ-カリケアマイシン誘導体又はN-アセチル・ガンマ-カリケアマイシン誘導体である。使用することがあるカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998)、及び上記の米国特許に開示されるものが挙げられる。カリケアマイシンは、適当なチオールと反応してジスルフィドを形成することができるメチルトリスルフィド部分を含み、メチルトリスルフィド部分は、同時に、カリケアマイシン誘導体を本明細書に記載の抗-CD137抗体又はその抗原結合フラグメントに、リンカーを介して結合させるのに有用な官能基を導入する。カリケアマイシン・ファミリーのコンジュゲートを調製することについては、米国特許5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,767,285; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 及び5,877,296(全てAmerican Cyanamid Company)を参照のこと。使用することがあるカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342(1993)、Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928(1998)、及びAmerican Cyanamidに対する上記の米国特許中に開示されるものが挙げられる。
【０２３１】
ある実施形態では、本明細書中に開示するADCの細胞毒素は、以下の式で表されるカリケアマイシン・ジスルフィド誘導体である：
【化３５】
2021530545.tif 000107
ここで、波線は、前記リンカーの結合の位置を示す。
【０２３２】
追加の細胞毒素
他の実施形態では、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントを、本明細書において上記で開示される細胞毒素以外の、又はそれに加えた細胞毒素に、コンジュゲートすることがある。本明細書に記載する組成物及び方法と共に使用するのに適した追加の細胞毒素としては、限定されるものではないが、5-エチニルウラシル、アビラテロン(abiraterone)、アシルフルベン(acylfulvene)、アデシペノール(adecypenol)、アドゼレシン(adozelesin)、アルデスロイキン(aldesleukin)、アルトレタミン(altretamine)、アンバムスチン(ambamustine)、アミドックス(amidox)、アミフォスチン(amifostine)、アミノレブリン酸(aminolevulinic acid)、アムルビシン(amrubicin)、アムサクリン(amsacrine)、アナグレリド(anagrelide)、アナストロゾール(anastrozole)、アンドログラフォリド(andrographolide)、血管新生阻害剤、アンタレリクス(antarelix)、抗背側形成タンパク質-1（anti-dorsalizing  morphogenetic protein-1）、抗アンドロゲン、前立腺がん、抗エストロゲン、抗新生物薬(antineoplaston)、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、アフィジコリン・グリシネート(aphidicolin glycinate)、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス・レギュレーター、アプリン酸(apurinic acid)、アスラクリン(asulacrine)、アタメスタン(atamestane)、アトリムスチン(atrimustine)、アキシナスタチン1(axinastatin 1)、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザセトロン(azasetron)、アザトキシン(azatoxin)、アザチロシン(azatyrosine)、バッカチンＩＩＩ(baccatin III.)誘導体、バラノール(balanol)、バチマスタット(batimastat)、BCR/ABL拮抗薬、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン(benzoylstaurosporine)、βラクタム誘導体、βアレチン(beta-alethine)、βクラマイシン(betaclamycin)B、ベツリン酸、bFGF阻害剤、ビカルタミド(bicalutamide)、ビサントレン(bisantrene)、ビスアジリジニルスペルミン(bisaziridinylspermine)、ビスナフィド(bisnafide)、ビストラテン(bistratene)A、ビゼレシン(bizelesin)、ブレフラート(breflate)、ブレオマイシンA2、ブレオマイシンB2、ブロピリミン(bropirimine)、ブドチタン(budotitane)、ブチオニン・スルホキシイミン(buthionine sulfoximine)、カルシポトリオール(calcipotriol)、カルホスチン(calphostin)C、カンプトテシン(camptothecin)誘導体（例えば、10-ヒドロキシ-カンプトテシン）、カペシタビン(capecitabine)、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン(carzelesin)、カゼイン・キナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン(castanospermine)、セクロピン(cecropin)B、セトロレリクス(cetrorelix)、クロリン(chlorins)、クロロキノキサリン・スルホンアミド(chloroquinoxaline sulfonamide)、シカプロスト(cicaprost)、シス-ポルフィリン、クラドリビン(cladribine)、クロミフェン(clomifene)及びその類似体、クロトリマゾール(clotrimazole)、コリスマイシン(collismycin)A、コリスマイシンB、コンブレタスタチン(combretastatin)A4、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン(conagenin)、クラムベシジン(crambescidin)816、クリスナトール(crisnatol)、クリプトフィシン(cryptophycin)8、クリプトフィシンA誘導体、キュラシン(curacin)A、シクロペンタアントラキノン(cyclopentanthraquinones)、シクロプラタム(cycloplatam)、シペマイシン(cypemycin)、シタラビン・オクホスファート(cytarabine ocfosfate)、細胞溶解因子、シトスタチン(cytostatin)、ダクリキシマブ(dacliximab)、デシタビン(decitabine)、デヒドロジデムニン(dehydrodidemnin)B、2'デオキシコホルマイシン(DCF)、デスロレリン(deslorelin)、デキシホスファミド(dexifosfamide)、デクスラゾキサン(dexrazoxane)、デクスベラパミル(dexverapamil)、ジアジクオン(diaziquone)、ジデムニン(didemnin)B、ジドクス(didox)、ジエチルノルスペルミン(diethylnorspermine)、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン(dioxamycin)、ジフェニル・スピロムスチン(diphenyl spiromustine)、ディスコデルモライド(discodermolide)、ドコサノール(docosanol)、ドラセトロン(dolasetron)、ドキシフルリジン(doxifluridine)、ドロロキシフェン(droloxifene)、ドロナビノール(dronabinol)、デュオカルマイシン(duocarmycin)SA、エブセレン(ebselen)、エコムスチン(ecomustine)、エデルフォシン(edelfosine)、エドレコロマブ(edrecolomab)、エフロルニチン(eflornithine)、エレメン(elemene)、エミテフール(emitefur)、エポチロン（epothilones）、エピチロン（epithilones）、エプリステリド(epristeride)、エストラムスチン(estramustine)及びその類似体、エトポシド（etoposide）、エトポシド4’-リン酸（etoposide 4’-phosphate）（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン(exemestane)、ファドロゾール(fadrozole)、ファザラビン(fazarabine)、フェンレチニド(fenretinide)、フィルグラスチム(filgrastim)、フィナステリド(finasteride)、フラボピリドール(flavopiridol)、フレゼラスチン(flezelastine)、フルアステロン(fluasterone)、フルダラビン(fludarabine)、塩酸フルロダウノルニシン(fluorodaunorunicin hydrochloride)、フォルフェニメクス(forfenimex)、フォルメスタン(formestane)、フォストリエシン(fostriecin)、フォテムスチン(fotemustine)、ガドリニウム・テキサフィリン(gadolinium texaphyrin)、硝酸ガリウム、ガロシタビン(galocitabine)、ガニレリクス(ganirelix)、ゲラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン(gemcitabine)、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム(hepsulfam)、ホモハリングトニン（homoharringtonine(HHT)）、ハイペリシン(hypericin)、イバンドロン酸（Ibandronic acid）、イドキシフェン(idoxifene)、イドラマントン(idramantone)、イルモフォシン(ilmofosine)、イロマスタット(ilomastat)、イミダゾアクリドン、イミキモド(imiquimod)、免疫刺激ペプチド、イオベングアン(iobenguane)、ヨードドキソルビシン(iododoxorubicin)、イポメアノール(ipomeanol)、イリノテカン、イロプラクト(iroplact)、イルソグラジン(irsogladine)、イソベンガゾール(isobengazole)、ジャスプラキノリド(jasplakinolide)、カハラリド(kahalalide)F、三酢酸ラメラリン-N(lamellarin-N triacetate)、ランレオチド(lanreotide)、レイナマイシン(leinamycin)、レノグラスチム(lenograstim)、硫酸レンチナン(lentinan sulfate)、レプトルスタチン(leptolstatin)、レトロゾール(letrozole)、親油性白金化合物、リソクリナミド(lissoclinamide)7、ロバプラチン(lobaplatin)、ロメトレキソール(lometrexol)、ロニダミン(lonidamine)、ロソキサントロン(losoxantrone)、ロキソリビン(loxoribine)、ルルトテカン(lurtotecan)、ルテチウム・テキサフィリン(lutetium texaphyrin)、リソフィリン(lysofylline)、マソプロコール(masoprocol)、マスピン(maspin)、マトリックス・メタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル(menogaril)、メルバロン(merbarone)、メテレリン(meterelin)、メチオニナーゼ、メトクロプラミド(metoclopramide)、MIF阻害剤、ミフェプリストン(mifepristone)、ミルテホシン(miltefosine)、ミリモスチム(mirimostim)、ミトラシン(mithracin)、ミトグアゾン(mitoguazone)、ミトラクトール(mitolactol)、マイトマイシン及び��の類似体、ミトナフィド(mitonafide)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、モファロテン(mofarotene)、モルグラモスチム(molgramostim)、マイカペルオキシドB、ミリアポロン(myriaporone)、N-アセチルジナリン(acetyldinaline)、N-置換ベンズアミド、ナファレリン(nafarelin)、ナグレスチップ(nagrestip)、ナパビン(napavin)、ナフテルピン(naphterpin)、ナルトグラスチム(nartograstim)、ネダプラチン(nedaplatin)、ネモルビシン(nemorubicin)、ネリドロン酸、ニルタミド(nilutamide)、ニサマイシン(nisamycin)、ニトルリン(nitrullyn)、オクトレオチド(octreotide)、オキセノン(okicenone)、オナプリストン(onapristone)、オンダンセトロン(ondansetron)、オラシン(oracin)、オルマプラチン(ormaplatin)、オキサリプラチン(oxaliplatin)、オキサウノマイシン(oxaunomycin)、パクリタキセル(paclitaxel)及びその類似体、パラウアミン(palauamine)、パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin)、パミドロン酸、パナキシトリオール(panaxytriol)、パノミフェン(panomifene)、パラバクチン(parabactin)、パゼリプチン(pazelliptine)、ぺグアスパルガーゼ(pegaspargase)、ペルデシン(peldesine)、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、ペントスタチン(pentostatin)、ペントロゾール(pentrozole)、パーフルブロン(perflubron)、パーホスファミド(perfosfamide)、フェナジノマイシン(phenazinomycin)、ピシバニル(picibanil)、ピラルビシン(pirarubicin)、ピリトレキシム(piritrexim)、ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）、ポルフィロマイシン(porfiromycin)、プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド(raltitrexed)、リゾキシン(rhizoxin)、ログレチミド(rogletimide)、ロヒツキン(rohitukine)、ルビギノン(rubiginone)B1、ルボキシル(ruboxyl)、サフィンゴル(safingol)、サイントピン(saintopin)、サルコフィトール(sarcophytol)A、サルグラモスチム(sargramostim)、ソブゾキサン(sobuzoxane)、ソネルミン(sonermin)、スパルホジン酸(sparfosic acid)、スピカマイシン(spicamycin)D、スピロムスチン(spiromustine)、スチピアミド(stipiamide)、スルフィノシン(sulfinosine)、タリムスチン(tallimustine)、テガフール(tegafur)、テモゾロミド(temozolomide)、テニポシド(teniposide)、タリブラスチン(thaliblastine)、チオコラリン(thiocoraline)、チラパザミン(tirapazamine)、トポテカン、トプセンチン(topsentin)、トリシリビン(triciribine)、トリメトレキサート(trimetrexate)、ベラミン(veramine)、ビノレルビン(vinorelbine)、ビンキサルチン(vinxaltine)、ボロゾール(vorozole)、ゼニプラチン(zeniplatin)、並びにジラスコルブ(zilascorb)、が挙げられる。
【０２３３】
リンカー
本明細書で使用する用語「リンカー」は、抗-CD2抗体又はそのフラグメント(Ab)を薬物部分(D)に共有結合させて式Iの抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を形成する、原子の共有結合又は鎖を含む、二価の化学的な部分構造を意味する。好適なリンカーは2つの反応性末端を有し、一方は抗体にコンジュゲートさせるためであり、他方は細胞毒素にコンジュゲートさせるためである。前記リンカーの抗体とコンジュゲートする反応性末端(反応性部分構造、Z')は、典型的には、前記抗体上のシステイン・チオール又はリジン・アミン基を介して、前記抗体にコンジュゲートさせることができる部位であり、従って、典型的には二重結合のようなチオールとの反応性がある基(例えば、マレイミドなど)、又はクロロ、ブロモ、ヨード等の脱離基、若しくはR-スルファニル基、又はカルボキシル基のようなアミンとの反応性がある基である；一方、前記リンカーの細胞毒素とコンジュゲートする反応性末端は、典型的には、細胞毒素にコンジュゲートすることができる部位である。リンカー-細胞毒素コンジュゲーションの非-限定的な例としては、例えば、細胞毒素上の塩基性アミン基又はカルボキシル基とのアミド結合の形成（それぞれ、前記リンカーのカルボキシル又は塩基性アミン基を介する）、又はエーテル等の形成（前記細胞毒素のOH基をアルキル化することを介する、例えば、前記リンカーの脱離基を介する）、が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞毒素-リンカー・コンジュゲーションは、前記細胞毒素のアミン又はカルボキシル基とのアミド結合の形成を介する、そして、その場合、前記リンカーの反応性置換基はそれぞれカルボキシル又は塩基性アミン基である。前記用語「リンカー」を、コンジュゲートした形態のリンカーを説明する際に使用する場合、反応性末端の一方又は両方は、前記リンカー及び／又は前記細胞毒素間の、並びに前記リンカー及び／又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント間の、結合が形成されているので、存在しない(例えば、反応性部分構造Z'、化学的な部分構造Zに変換されている)か、又は反応途中にある(例えば、カルボン酸のカルボニルだけになっている等)。このようなコンジュゲートさせる反応を、本明細書中以下に更に記載する。
【０２３４】
様々なリンカーを使用して、記載した抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子にコンジュゲートさせることができる。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、細胞内の条件下で切断可能であり、その結果、前記リンカーの切断によって、細胞内環境において、抗体から薬物ユニットが放出される。更に他の実施形態では、そのリンカー・ユニットは切断可能ではなく、薬物は、例えば、抗体の分解によって放出される。本発明のADCに有用なリンカーは、好ましくは細胞外で安定であり、ADC分子が凝集することを防止し、ADCが水溶性の媒体中で及び単量体状で溶け易いように維持する。細胞内に輸送される又は送達される前には、前記ADCは、好ましくは安定であり、及びインタクトなままであり、即ち、前記抗体は、前記薬物部分に連結したままである。前記リンカーはターゲット細胞の外部では安定であり、細胞内部ではある有効な速度で切断されることがある。効果的なリンカーは：(i)前記抗体の特異的な結合特性を維持する；(ii)前記コンジュゲート又は薬物部分が細胞内に送達されることを可能にする；(iii)前記コンジュゲートがそのターゲット部位に送達又は輸送されるまで、安定かつインタクトなままであり、即ち切断されない；並びに(iv)前記細胞毒性部分の、細胞毒性、細胞傷害効果又は細胞増殖抑制効果を維持する。前記ADCの安定性を、質量分析、HPLC、及び分離／解析技術のLC/MS等の標準的な分析技術によって測定することができる。前記抗体及び前記薬物部分の共有結合は、前記リンカーが2つの反応性官能基を有することを要求する（即ち反応性の意味での二価である）。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基等の2つ以上の機能的又は生物学的に活性な部分を結合させるのに有用な二価のリンカー試薬が知られており、それらのコンジュゲートを得る方法については記載されている(Hermanson, G.T. (1996)Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York、p.234-242)。
【０２３５】
好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって切断され得るものが挙げられる(例えば、Lericheら、Bioorg.Med.Chem、20:571-582、2012を参照のこと、これらの開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる)。好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル又はジペプチドなどの化学的な部分構造を挙げることができる。
【０２３６】
酸性条件下で加水分解可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス-アコニット・アミド、オルトエステル、アセタール、ケタール等が挙げられる(例えば、米国特許第 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929号；Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661、これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)。このようなリンカーは、血中のpH条件のような中性pHの条件下では比較的安定であるが、リソソームのおよそのpHであるpH 5.5又は5.0未満では不安定である。
【０２３７】
還元条件下で切断可能なリンカーとしては、例えば、ジスルフィドが挙げられる。例えば、SATA(N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテート)、SPDP(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート)、SPDB(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)ブチレート)及びSMPT(N-スクシンイミジル-オキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)トルエン)、SPDB及びSMPT、を使用して形成することができるジスルフィド・リンカーを含む、様々なジスルフィド・リンカーが当該技術分野で知られている(例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987)を参照のこと)。米国特許第4,880,935も参照のこと。これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３８】
酵素的な加水分解に感受性があるリンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素(リソソーム・プロテアーゼ又はエンドソーム・プロテアーゼが挙げられるが
、これらに限定されない)によって切断されるペプチド含有リンカーであることがある。治療薬剤が細胞内タンパク質分解によって放出されることを利用することの1つの利点は、前記治療薬剤は、コンジュゲートしている場合、一般に減弱していて、及び前記コンジュゲートの血清安定性は一般的に高い、ということである。いくつかの実施形態では、前記ペプチジル・リンカーは、少なくとも2アミノ酸長又は少なくとも3アミノ酸長である。例示的なアミノ酸リンカーとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが挙げられる。好適なペプチドの例としては、バリン、アラニン、シトルリン(Cit)、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、及びグリシン等のアミノ酸を含有するペプチドが挙げられる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基としては、天然に存在するもの、並びにマイナーなアミノ酸及び非天然に存在するアミノ酸類似体(例えば、シトルリン)が挙げられる。例示的なジペプチドとしては、バリン-シトルリン(vc又はval-cit)及びアラニン-フェニルアラニン(af又はala-phe)が挙げられる。例示的なトリペプチドとしては、グリシン-バリン-シトルリン(gly-val-cit)及びグリシン-グリシン-グリシン(gly-gly-gly)が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Cit、Ala-Val、又はPhe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg、又はTrp-Citのようなジペプチドが挙げられる。Val-Cit又はPhe-Lys等のジペプチドを含むリンカーは、例えば、米国特許第6,214,345号に開示されている（この開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Ala及びVal-Citから選択されるジペプチドが挙げられる。
【０２３９】
本明細書に記載する抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子に結合させるのに適したリンカーとしては、1,6-脱離過程によって、細胞毒素を放出することができるリンカーが挙げられる。この脱離過程を可能にする化学的な部分構造としては、p-アミノベンジル(PAB)基、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、及びJain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015（この開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載される他の試薬等が挙げられる。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、前述のPAB又はPABC(パラ-アミノベンジルオキシカルボニル)等の「自壊」基が挙げられ、これらは、例えば、Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24:479-480; Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; WO98/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; WO2004/032828に開示されている。このプロセスが可能な他のこのような化学的な部分構造(「自壊リンカー」)としては、メチレン・カルバメート及びヘテロアリール基、例えばアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどが挙げられる。このような複素環の自壊基を含むリンカーは、例えば、米国特許出願公開20160303254 及び 20150079114、並びに米国特許第7,754,681; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237; US 2005/0256030; de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830; 及び US 7223837に開示されている。いくつかの実施形態では、ジペプチドを、自壊リンカーと組合せて使用する。
【０２４１】
本明細書での使用に適したリンカーは、C1-C6アルキレン、C1-C6ヘテロアルキレン、C2-C6アルケニレン、C2-C6ヘテロアルケニレン、C2-C6アルキニレン、C2-C6ヘテロアルキニレン、C3-C6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、及びそれらの組合せから選択される1つ以上の基を更に含むことがあり、これらの各々は任意選択的に置換されていることがある。このような基の非-限定的な実施例としては、(CH2)p、(CH2CH2O)p、及び-(C=O)(CH2)p-ユニットが挙げられ、ここで、pは1〜6の整数であり、各々の場合に対して独立に選択される。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、C3-C6シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、スルホニルシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、C3-C6シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、スルホニルシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって、任意選択的に割り込まれていることがある。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、C3-C6シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、スルホニルシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって、任意選択的に割り込まれていることがある、並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２４５】
好適なリンカーは、溶解性を高める特性を有する基を含むことがある。例えば、(CH2CH2O)pユニット(ポリエチレングリコール、PEG)を含むリンカーは、溶解性を高めることができる（例えば、アミノ、スルホン酸、ホスホン酸又はリン酸残基で置換して、アルキル鎖の溶解性を高めることができる）。このような部分構造を含むリンカーは、例えば、米国特許番号8,236,319 及び9,504,756に開示されている（これらの各々の開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。更なる溶解性を高める基としては、例えば、以下の構造を有するアシル及びカルバモイル・スルファミド基が挙げられる：
【化３６】
2021530545.tif 000108
ここで、aは0又は1である；並びに
R10は、水素、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C1-C24(ヘテロ)アリール基、C1-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC1-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C2-C24（ヘテロ）アリール基、C3-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC3-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、からなる基から選択され、これらの各々は、O、S、及びNR11R12から選択される1種以上のヘテロ原子によって、任意選択的に置換している、及び／又は任意選択的に割り込まれていることがある、ここで、R11及びR12は、水素及びC1-C4アルキル基からなる群から独立して選択される；又はR10は細胞毒素である、ここで、前記細胞毒素は、スペーサ部分を介して、Nに任意選択的に結合する。そのような基を含むリンカーは、例えば、米国特許9,636,421号及び米国特許出願公開第2017/0298145号(これら開示は、細胞毒素及び抗体又はそれらの抗原結合フラグメントへの共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)に記載されている。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、ジペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、複素環自壊基、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C6シクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、溶解性増強基、アシル、-(C=O)-、又は-(CH2CH2O)p-基のうちの1つ以上を含むことがある、ここで、pは1〜6の整数である。当業者の中のある者は、列挙された基の1つ以上が、二価(ジラジカル)種(例えば、C1-C6アルキレン等)の形態で存在し得ることを認識する。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、p-アミノベンジル基(PAB)を含む。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、細胞毒性薬物とリンカー中のプロテアーゼ切断部位との間に配置される。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルオキシカルボニル・ユニットの一部である。ある実施形態では、p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルアミド・ユニットの一部である。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Ala、Phe-Cit、Val-Ala、Val-Cit、及びVal-Argからなる群より選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、又はAla-PABのうちの1種以上を含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又はAla-PAB を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、-(CH2)p-, -(CH2CH2O)p-, PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又はAla-PAB、のうちの1つ以上の組合せを含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、-(C=O)(CH2)p-ユニットを含み、ここで、pは1〜6の整数である。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、前記リンカーは、-(CH)2n-ユニットを含む、ここで、nは2-6からの整数である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、nが6である-((CH2)nを含む。いくつかの実施形態において、L-Zは、
【化３７】
2021530545.tif 000109
である、ここで、Sは、CD2に結合する、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である(例えば、システイン残基の-SH基に由来する)。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、((CH2)mO)n(CH2)m-基を含み、ここで、n及びmはそれぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10から選択される；並びにヘテロアリール基、ここで、前記ヘテロアリール基は、トリアゾールである。いくつかの実施形態では、((CH2)mO)n(CH2)m-基及びトリアゾールは、一緒になって以下を含む
【化３８】
2021530545.tif 000110
ここで、nは1〜10であり、及び波線は、追加のリンカー構成成分、化学的な部分構造Z、又はアマトキシンへの結合の位置を示す。本明細書中に記載する方法及び組成物において使用することがある他のリンカーは、米国特許出願公開第2019/0144504号に記載されており、これは、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２５４】
ある具体的な実施形態では、前記リンカーは、PAB-Ala-Val-プロピオニルを含み、以下の構造によって表される
【化３９】
2021530545.tif 000111
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。
【０２５５】
別の具体的な実施形態では、前記リンカーは、PAB-Cit-Val-プロピオニルを含み、以下の構造によって表される
【化４０】
2021530545.tif 000112
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。このようなPAB-ジペプチド-プロピオニル・リンカーとしては、例えば、特許出願公開WO2017/149077に開示されている（これは、その全体が、本明細書に参照により取り込まれる）。更に、WO2017/149077に開示された細胞毒素は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２５６】
本明細書に開示する化学基、部分及び特徴の何れか1つ以上を、多様な方法で組み合わせて、本明細書に開示するような抗体と細胞毒素とをコンジュゲートさせることに対して有用なリンカーを形成し得ることは、当業者の中のある者によって認識されるだろう。本明細書中に記載する組成物及び方法と併せることにおいて有用な更なるリンカーは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、その開示内容は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２５７】
ある特定の実施形態では、リンカーの前駆物質である中間体を、好適な条件下で薬物部分と反応させる。ある特定の実施形態では、反応性基を、前記薬物及び／又は前記中間体若しくはリンカー上で使用する。前記薬物と前記中間体との間の反応の生成物、又は誘導体化した薬物を、その後、好適な条件下で、抗体又は抗原結合フラグメントと反応させる。あるいは、前記リンカー又は中間体を、最初に前記抗体又は誘導体化した抗体と反応させ、次いで前記薬物又は誘導体化した薬物と反応させてもよい。このようなコンジュゲーション反応を、ここで、より完全に記載する。
【０２５８】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントに、リンカー又は薬物-リンカー・コンジュゲートを共有結合させるために、多くの様々な反応を利用することができる。前記抗体分子上の好適な結合の位置としては、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の種々の部分が挙げられる。例えば、化合物上のカルボキシ(又はアミノ)基を抗体部分上のアミノ(又はカルボキシ)基に連結するために、非特異的な共有結合を、カルボジイミド反応を用いて行うことがある。更に、化合物上のアミノ基を抗体部分上のアミノ基に結合させるために、ジアルデヒド又はイミドエステルなどの二官能基性の薬剤を使用することもある。薬物を結合剤に結合させることには、シッフ塩基反応を利用することも可能である。この方法は、グリコール又は水酸基を含有する薬物を過ヨウ素酸塩酸化させることを含み、このようにしてアルデヒドを形成させ、次いでこれを結合剤と反応させる。結合は、前記結合剤のアミノ基を有するシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートを、薬物を結合剤に共有結合させるためのカップリング剤として使用することもある。他の技術は当業者に知られており、本発明の範囲内である。
【０２５９】
本明細書に記載する場合、抗体又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに有用なリンカーとしては、限定されるものではないが、以下の表２に示すような、カップリング反応によって形成される化学的な部分構造Zを含むリンカーが挙げられる。曲線は、それぞれ、抗体又は抗原結合フラグメント、及び細胞毒性分子に結合する位置を示す。
【０２６０】
【表２−１】
2021530545.tif 000113
【表２−２】
2021530545.tif 000114
【表２−３】
2021530545.tif 000115
【表２−４】
2021530545.tif 000116
【０２６１】
当業者の中のある者は、前記リンカー及び前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基に結合した反応性置換基Z'が、化学的な部分構造Zを生成する共有結合カップリング反応に関与するものであることを認識し、前記反応性の部分構造Z'を認識する。従って、本明細書に記載の方法と併せることにおいて有用な抗体-薬物コンジュゲートは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートと反応することによって形成されることがあり、本明細書に記載するように、前記リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは反応性置換基Z'等を含み、抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基との反応に適していて、化学的な部分構造Zを形成する。
【０２６２】
表２に示されるように、前記リンカー及び抗体、又はその抗原結合フラグメント上の好適な反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対、又はジエン／α,β-不飽和カルボニル対)等が挙げられる。化学的な部分構造Zを形成するための反応性置換基間のカップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン又はヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、とりわけ、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本明細書に記載されている他の反応様式が挙げられる。好ましくは、前記リンカーは、前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の求核性官能基との反応のための求電子性官能基を含む。
【０２６３】
本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、(i)N-末端アミン基、(ii)側鎖アミン基(例えば、リジン)、(iii)側鎖チオール基(例えば、システイン)、及び(iv)糖水酸基又はアミノ基(ここで、前記抗体はグリコシル化されている)、のような求核基が挙げられる。本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、セリン、スレオニン、及びチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸及びグルタミン酸残基のカルボキシル部分；並びにシステイン残基のチオール部分、並びに、非天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール(例えば、フルオロアリール)、ハロヘテロアリール(例えば、フルオロヘテロアリール)、ハロアルキル、及びハロヘテロアルキル部分が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基としては、アミン又はチオール部分が挙げられる。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド（即ち、システイン架橋）を有する。抗体は、DTT(ジチオトレイトール)等の還元剤で処理することによって、リンカー試薬とコンジュゲートさせるために、反応性にすることができる。従って、各システイン架橋は、理論的には、2つの反応性チオール求核基を形成する。リジンと2-イミノチオラン(トラウト試薬)との反応によって、更なる求核基を抗体中に導入して、アミンをチオールに転化させることができる。1個、2個、3個、4個、又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって(例えば、1個以上の元々は無かったシステイン・アミノ酸残基を含む変異抗体を調製することによって)、反応性チオール基を、抗体(又はそのフラグメント)に導入することがある。米国特許第7,521,541号は、反応性システイン・アミノ酸を導入することによる工学的に操作した抗体を教示している。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、前記リンカーに結合した反応性の部分構造Z'は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基である。抗体上の有用な求電子基としてはアルデヒド及びケトンのカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、前記抗体と共有結合を形成することがある。有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジン・カルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、Zは、抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性求核置換基(例えば、アミン及びチオール部分)と反応性求電子置換基Z'との間の反応の生成物である。例えば、Z'は、特に、マイケル・アクセプター(例えば、マレイミド)、活性化エステル、電子欠損カルボニル化合物、及びアルデヒドであることがある。反応性置換基Z'及び得られる化学的な部分構造Zのいくつかの代表的な及び非-限定的な例を、表３に示す。
【０２６６】
【表３】
2021530545.tif 000117
【０２６７】
例えば、薬物-抗体及び薬物-リガンド・コンジュゲートの合成に好適なリンカーとしては、限定されるものではないが、マレイミド又はハロアルキル基などの反応性置換基Z'が挙げられる。これらは、試薬（例えば、特に、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボキシレート(SMCC)、N-スクシンイミジル・ヨードアセテート(SIA)、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジル・エステル(MBS)、スルホ-MBS、及びスクシンイミジル・ヨードアセテート、等であり、例えば、Liu et al., 18:690-697, 1979に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる））によって、前記リンカーに結合することがある。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、リンカーLに結合した反応性置換基Z'は、マレイミド、アジド、又はアルキンである。マレイミド含有リンカーの例は、非切断性マレイミドカプロイル-ベースのリンカーであり、これは、アウリスタチンなどの微小管破壊剤をコンジュゲートするのに特に有用である。このようなリンカーはDoronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、反応性置換基Z'は-(C=O)-又は-NH(C=O)-であり、その結果、前記リンカーは、それぞれ、-(C=O)-又は-NH(C=O)-基と抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ基との反応から生じるアミド又は尿素の部分構造によって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントに結合することがある。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、N-マレイミジル基、ハロゲン化N-アルキルアミド基、スルホニルオキシN-アルキルアミド基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、内部に炭素-炭素の三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ[6.1.0]ノン-4-イン-9-イル基（bicyclo[6.1.0]non-4-yn-9-yl group）、内部に炭素-炭素の二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリル・オキシド基、ニトロン基、ニトリル・イミン基、ジアゾ基、ケトン基、(O-アルキル)ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化N-マレイミジル基、1,1-ビス(スルホニルメチル)メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、又はアレンアミド基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていることがある。いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、又は任意選択的に置換された(ヘテロ)シクロアルキニル基を含む。
【０２７１】
前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性残基との反応に適した反応性置換基Z'を含むアマトキシン-リンカー・コンジュゲートの非-限定的な例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる、7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボニル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-((4-(マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(R)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(S)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メ��ル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(マレイミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)アゼチジン-1イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(2-(アミノオキシ)アセトア���ド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(1-(アミノオキシ)-2-オクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3-アザヘプタデカン-17-オイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(20-(アミノオキシ)-4,19-ジオクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,18-ジアザイコシル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-S-メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(5-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ペンチル)-アマトキシン；6'O-(2-((6-(マレイミド)ヘキシル)オキシ)-2-オキソエチル)-アマトキシン；6'O-((6-(マレイミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-ブロモアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(アジド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(へクス-5-イノイルアミノ)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(11,12-ジデヒドロ-5,6-ジヒドロ-ジベンズ[b,f]アゾシン-5-イル)-6-オクソヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(へクス-5-イノイルアミノ)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-(アミノオキシ)アセチルアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-((6-アミノオキシ)ヘキシル)-アマトキシン；及び 6'O-(6-(2-イオドアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、前記化学的な部分構造Zを、表３又は表４から選択する。いくつかの実施形態では、前記化学的な部分構造Zは：
【化４１】
2021530545.tif 000118
ここで、Sは、抗-CD5抗体のような抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー-反応性部分構造である-L-Z'にコンジュゲートしている：
【化４２】
2021530545.tif 000119
ここで、波線は、前記細胞毒素(例えば、アマトキシン)上の置換基への結合の位置を示す。このリンカー-反応性置換基であるL-Z'を、代わりに、N-ベータ-マレイミドプロピオニル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)と呼ぶことがある。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー-反応性部分である-L-Z'にコンジュゲートしている：
【化４３】
2021530545.tif 000120
ここで、波線は、前記細胞毒素(例えば、アマトキシン)上の置換基への結合の位置を示す。このリンカー-反応性置換基であるL-Z'を、代わりに、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Cit-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Cit-PAB) と呼ぶことがある。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び化学的な部分構造Zは、L-Zとして一緒になって、
【化４４】
2021530545.tif 000121
である、ここで、Sは、抗-CD5抗体のような、抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である。前記リンカーの末端にある波線は、前記アマトキシンへの結合の位置を示す。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び化学的な部分構造Zは、前記抗体にコンジュゲートした後、L-Z-Abとして一緒になって、以下の構造を有する:
【化４５】
2021530545.tif 000122
。
【０２７７】
前記のリンカー部分構造及びアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、とりわけ、本明細書に記載する組成物及び方法と関連して有益であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号及び特許出願公開第WO2017/149077号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２７８】
前記のリンカー部分構造及びアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、とりわけ、本明細書に記載する組成物及び方法と関連して有益であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号及び特許出願公開第WO2017/149077号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２７９】
ある実施形態では、本明細書中に記載するCD2抗体又は抗原結合フラグメントは、それぞれ本明細書中に記載するように、式Ab-Z-L-Am(式中、Abは前記CD2抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、及びAmはアマトキシンである)によって表されるコンジュゲートを形成するように、アマトキシンに結合していることがある。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化４６】
2021530545.tif 000123
である。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化４７】
2021530545.tif 000124
である。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化４８】
2021530545.tif 000125
である。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化４９】
2021530545.tif 000126
である。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、Am-L-Z-Abは：
【化５０】
2021530545.tif 000127
である。
【０２８５】
抗体-薬物コンジュゲートの調製
本明細書に開示する式IのADCにおいて、抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示するリンカーL及び化学的な部分構造Zを介して、1個以上の細胞毒性薬物部分(D)(例えば、1抗体あたり約1〜約20個の薬物部分)にコンジュゲートしている。本発明のADCは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、及び試薬を使用するいくつかの経路によって調製され得る：(1)抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、本明細書中上記のようなAb-Z-Lを形成させる、続いて、薬物部分Dと反応させる；又は、(2)薬物部分の反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、D-L-Z'を形成させる、続いて、本明細書中上記のような抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基と反応させる。ADCを調製するための更なる方法は、本明細書中に記載される。
【０２８６】
別の態様において、前記抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を導入するために化学的に修飾され得る1つ以上のリジン残基を有する。次いで、前記ADCを、本明細書中上記に記載するように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成する。リジンを修飾するために使用することができる試薬としては、限定されるものではないが、N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテート(SATA)及び2-イミノチオラン塩酸塩(Traut’s試薬)が挙げられる。
【０２８７】
別の態様において、前記抗-CD2抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾され得る1つ以上の糖鎖部分(carbohydrate groups)を有することがある。次いで、前記ADCを、本明細書中上記に記載されるように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成する。
【０２８８】
更に別の態様において、前記抗-CD2抗体は、酸化されてアルデヒド(-CHO)基を提供し得る1つ以上の糖鎖部分(carbohydrate groups)を有することがある(例えば、Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548-55を参照のこと)。次いで、前記ADCを、本明細書中上記に記載されるように、対応するアルデヒドを介してコンジュゲートすることによって形成する。細胞毒素を結合させる又は会合させるためのタンパク質を改変する他のプロトコールは、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)に記載されている（本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２８９】
抗体、免疫グロブリン又はそのフラグメント等の細胞にターゲットするタンパク質に、リンカー-薬物部分をコンジュゲートさせるための方法は、例えば、米国特許第5,208,020号; 米国特許第6,441,163号; WO2005037992; WO2005081711; 及びWO2006/034488に記載されている（これらの全ては、その全体が本明細書に明確に参照により取り込まれる）。
【０２９０】
投与経路及び用量
或いは、前記抗体及び細胞毒性薬物を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術又はペプチド合成によって、作製することがある。DNAの長さは、互いに隣接した、又は前記コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカー・ペプチドをコードする領域によって分離された、前記コンジュゲートの2つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことがある。
【０２９１】
本明細書中に記載するADCを、種々の投薬形態で患者(例えば、自己免疫疾患又はがんに罹患しているヒト患者)に投与することがある。例えば、本明細書中に記載するADCを、自己免疫疾患又はがんに罹患している患者に、水溶液（例えば、1種以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液等）の形態で投与することがある。本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用するために好適な薬学的に許容される賦形剤には、粘度調整剤が含まれる。前記水溶液を、当該技術分野で公知の技術を使用して滅菌することがある。
【０２９２】
本明細書中に記載するような抗-CD2 ADCを含む医薬製剤は、このようなADCを、1種以上の任意選択的な薬学的に許容可能な担体と混合することによって(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition、Osol、AEd.(1980))、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容可能な担体は、一般に、使用する用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒性であり、これには、限定されるものではないが、以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジル・アルコール；メチル若しくはプロピル・パラベン等のアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；及びm-クレゾール等）；低分子量(約10残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの他の糖類；EDTAなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Zn-タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレン・グリコール（PEG）などの非イオン性界面活性剤。
【０２９３】
投与するADCの量は、CAR細胞療法を拒絶する細胞(例えば、活性化T細胞)を減少させるのに充分であるべきである。治療的に有効な用量を決定することは当業者の能力の範囲内であるが、例えば、免疫疾患又はがんを治療するために、ADCを全身投与するのに利用する本明細書に記載の方法の実施形態では、有効なヒト用量は、0.1〜150 mg/kgの範囲(例えば、5 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg等)にあるであろう。その投与経路は、推奨用量に影響を及ぼす可能性がある。採用する投与様式に依存しつつ、有効なレベルを維持するために、例えば、CAR-T細胞拒絶のリスクを減少させるために、全身投与を繰り返すことが意図される。
【０２９４】
本明細書に記載する抗-CD2 ADCを、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、又は非経口などの様々な経路によって投与することがある。任意の所与の症例において投与するのに最も好適な経路は、具体的なADC、患者、医薬製剤方法、投与方法(例えば、投与時間及び投与経路)、患者の年齢、身体の重量、性別、治療する疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄速度に依存する。
【０２９５】
本明細書中に記載する抗-CD2 ADCの有効用量は、例えば、単回(例えば、ボーラス)投与、複数回投与、又は持続投与あたりで、体重に関して約0.001〜約100 mg/kgの範囲にすることで、前記抗-CD2 ADCは最適な血中濃度(例えば、0.0001〜5000 μg/mLの血中濃度)になることがある。前記抗-CD2 ADCの1回用量を、前記抗-CD2 ADCを投与した後の時間にCAR療法を同時に受けている、又は受ける予定のヒト患者に、1日、1週間、又は1ヶ月あたり1回以上(例えば、2〜10回)、投与することがある。抗-CD2 ADCを、ヒト患者に1回又は複数回用量として投与することがある。ある実施形態では、前記抗-CD2 ADCを、宿主反応性T細胞の量を減少させる（例えば、CAR療法前の10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、又はそれ以上）のに充分な量で、投与することがある。
【実施例】
【０２９６】
本明細書中に記載する組成物及び方法を、どのように使用する、作製する、及び評価することがあるかに関する記載を、当業者に提供するために、以下の実施例を提示する、そして、純粋に本発明の例示であることが意図され、及び本発明者らがそれらの発明とみなす範囲を限定することを意図していない。
【０２９７】
以下の実施例１〜６のデータは国際特許出願WO 2019/108860号に記載されており、これは参照により本明細書に取り込まれる。
【０２９８】
実施例１：抗-CD2抗体のin vitro結合解析
抗-CD2抗体RPA-2.10 mIgG1及びAb1 hIgG1の結合特性を測定するために、抗体結合試験を、25℃セルシウスで、0.1% w/vのウシ血清アルブミンを添加した1× PBS中、バイオレイヤー干渉法(Bio-Layer Interferometry (BLI))を用いたPall ForteBio Octet Red96により、行った。示した精製ヒト(Ab1-hIgG1)又はマウス(RPA-2.10 mIgG1)抗体を、抗ヒトFcバイオセンサ(AHC; Pall ForteBio 18-5063)又は抗マウスFcバイオセンサ(AMQ; Pall ForteBio 18-5090)上に固定化し、50nMの精製ヒトCD2エクトドメイン(Sigma Aldrich及びカタログ番号5086)と共にインキュベートした。精製したヒトCD2エクトドメインに対する、各IgGについてのForteBioデータ解析ソフトウエア・バージョン10によって計算された1:1結合モデルを用いた局所完全フィッティングによって、見かけの一価親和性(KD)、見かけの結合速度(KON)、及び見かけの解離速度(KDIS)を測定し、表３に示す。
【０２９９】
抗-CD2抗体の更なる特性評価を、実施例２〜６で記載する。
【０３００】
【表４】
2021530545.tif 000128
【０３０１】
実施例２：抗-CD2抗体のin vitro細胞株結合解析
MOLT-4細胞(即ち、不死化ヒトTリンパ芽球細胞株)を20,000細胞／ウェルでプレーティングし、示したマウス抗-CD2抗体(即ち、RPA-2.10, TS1/8, BH1, UMCD2, 1E7E8.G4, 又は LT2)を滴下し、4℃で2時間染色した。二次抗-マウスAF488染色を、一定量で、4℃で30分間添加した。洗浄後、プレートをフロー・サイトメーターで測定し、示した抗体(及びネガティブ・コントロール、即ちmIgG1)の結合を、AF488チャンネルにおける蛍光強度の幾何平均値に基づいて決定した。これらのアッセイによる結果を図１に示す。
【０３０２】
図１に示すように、前記マウス抗-CD2抗体 RPA-2.10, TS1/8, BH1, UMCD2, 1E7E8.G4, 及び LT2は、ヒトTリンパ芽球細胞(即ち、MOLT-4細胞)に結合し、EC50 = 160 pM (RPA-2.10), 125 pM (TS 1/8), 639 pM (BH1), 151 pM (UMCD2), 134 pM (1E7E8), 及び 60 pM (LT2)であった。
【０３０３】
実施例３：抗-CD2抗体のin vitro初代細胞結合解析
初代ヒトT-細胞を8×104細胞／ウェルでプレーティングし、マウス抗-CD2抗体 RPA-2.10 を滴下し、37℃で2時間染色した。二次抗-マウス又は抗-ヒトAF488染色を、一次抗体に対して、一定量で、4℃で30分間添加した。洗浄後、プレートをフロー・サイトメーターで測定し、示した抗体(及びネガティブ・コントロール、即ちmIgG1又はhIgG1)の結合を、AF488チャンネルにおける蛍光強度の幾何平均値に基づいて決定した。これらのアッセイによる結果を図２に示す。
【０３０４】
図２に示すように、前記マウス抗-CD2抗体RPA-2.10は、EC50 = 1.84 pM（RPA-2.10）で、初代ヒトT-細胞に結合した。
【０３０５】
実施例４：in vitro T-細胞傷害アッセイを用いた、抗-CD2-アマニチン抗体薬物コンジュゲート(ADC)の in vitro 解析
抗-CD2抗体RPA-2.10を、切断可能なリンカーを使ってアマニチンにコンジュゲートさせて、抗-CD2 ADCを形成させた。ある抗-CD2-ADCを、マウス抗-CD2抗体RPA-2.10から、平均鎖間薬物対抗体比(DAR)が6であるように調製した。平均DARが2である第2の抗-CD2-ADCを、部位特異的なコンジュゲーションを使用して、アマニチンにコンジュゲートしたRPA-2.10のヒト・キメラ・バリアントを用いて調製した。更に、抗-CD2-ADCの速い半減期のバリアントを、H435A変異を導入することによって作製した。各抗-CD2-ADCを、in vitroヒトT-細胞傷害アッセイを用いて評価した。
【０３０６】
凍結保存されたネガティブに選択された初代ヒトT細胞を解凍し、抗-CD3抗体及びIL-2で刺激した。アッセイの開始時に、384ウェル・プレートのウェル当たり2×104 個のT細胞を播種し、示したADC又は非-コンジュゲートの抗-CD2抗体を、0.003nM〜30 nMの間の種々の濃度でウェルに添加した後、37℃及び5% CO2のインキュベーターの中に置いた。5日間の培養をした後、細胞をフロー・サイトメトリーによって解析した。細胞を生存率マーカー7-AADで染色し、体積フロー・サイトメーター（volumetric flow cytometer）で測定した。生存しているT-細胞の数(図３Ａ及び３Ｂ)を、FSC対SSC及び7-AAD染色によって測定した。非-コンジュゲートの抗-CD2抗体（RPA 2.10）を、比較対照として使用した(図３Ａ)。
【０３０７】
図３Ａに示すように、6の鎖間薬物対抗体比を有する抗-CD2-ADCは、T細胞を強力かつ特異的に傷害した(IC50=5.0 pm)。一方、非-コンジュゲート(「そのまま(naked)」)抗-CD2抗体の存在下では、T細胞は生存可能なままであった。図３Ｂに示すように、2の部位特異的な薬物対抗体比を有するヒト・キメラ抗-CD2-ADCは、DAR 6のADCと同様の強力なレベルのT-細胞傷害性(IC50=1.0 pm)を保持した。更に、速い半減期のバリアントである抗-CD2-ADC(H435A)は、WTの半減期である抗-CD2-ADCと、同様レベルのT-細胞傷害性を示した(IC50=6.3 pm；図３Ｂ)。
【０３０８】
実施例５：in vitro T-細胞傷害アッセイを用いた抗-CD2-アマニチン抗体薬物コンジュゲート(ADC)の in vitro 解析
前記抗-CD2抗体RPA 2.10を、切断可能なリンカーを用いてアマニチンにコンジュゲートさせて、平均鎖間薬物対抗体比(DAR)が6である鎖間抗-CD2-ADCを形成させた。前記抗-CD2-ADCを、in vitro ナチュラル・キラー(NK)‐細胞傷害アッセイを用いて評価した。
【０３０９】
初代ヒトCD56+ CD3- NK細胞を組換えIL-2とIL-15で4日間培養した。本アッセイの開始時に、健常なヒト・ドナー(donor)から新たに単離した30,000のNK細胞を、384ウェル・プレートのウェル当たりに播種し、示したADC又はコントロール(即ち、IgG1又はIgG1-アマニチンADC)を、0.003 nm〜30 nmの間の種々の濃度で前記ウェルに添加した後、37℃及び5% CO2にしたインキュベーター中に置いた。培養4日後、NK細胞の生存率をCellTiter-Gloアッセイにより解析した(図４)。
【０３１０】
図４に示すように、抗-CD2-ADCは、5.2 pMのIC50で、NK細胞の強力な傷害性を示した。抗-CD2-ADCによる傷害が完全ではないことは、CD2が約75%のNK細胞でしか発現していないことに合致する。
【０３１１】
実施例６：hNSGマウス・モデルを用いたT-細胞減少の解析
in vivo T-細胞減少アッセイを、ヒト化NSGマウス(Jackson Laboratories)を用いて行った。抗-CD2抗体RPA 2.10を、切断可能なリンカーを使ってアマニチンにコンジュゲートさせて、抗-CD2-ADCを形成させた。ある抗-CD2-ADCを、マウスRPA-2.10を使って、平均鎖間薬物対抗体比(DAR)が6であるように調製した。別の抗-CD2-ADCを、ヒト・キメラRPA-2.10を使って、平均部位特異的DARが2であるように調製した。各抗-CD2-ADC(DAR6及びDAR2)を、ヒト化マウス・モデルに単回の静脈内注射(DAR6 ADCについては0.3 mg/kg、1 mg/kg、又は3 mg/kg、及びDAR2 ADCについては1 mg/kg又は3 mg/kg)として投与した。7日目に、末梢血細胞、骨髄、又は胸腺サンプルを採取し、フロー・サイトメトリーによりCD3+ T-細胞の絶対数を測定した(DAR2 ADCについては図５Ａ及び５Ｂ、並びにDAR6 ADCについては６Ａ−６Ｃを参照のこと)。
【０３１２】
図５Ａ−５Ｂに示すように、0.3mg/kg、1mg/kg、又は3mg/kgの鎖間DAR6の抗-CD2-ADCで処置したヒト化NSGマウスでは、末梢血又は骨髄において、T-細胞が強力に減少した、一方、3 mg/kgのDAR6の抗-CD2-ADCで処置した後で、胸腺のT-細胞は減少した。比較のために、図５Ａ及び５Ｂはまた、25 mg/kgのAb1(コンジュゲートしていない抗-CD2抗体)又は示したコントロール(即ち、25 mg/kgの抗-CD52抗体(クローンYTH34.5);3 mg/kgのhIgG1-アマニタンADC(「hIgG1-AM」)、25 mg/kgのhIgG1、又はPBS)でヒト化NSGマウスを処置した後のT-細胞減少のレベルを示す。
【０３１３】
図６Ａ−６Ｃに示すように、1 mg/kg又は3 mg/kgで、部位特異的なDAR2の抗-CD2-ADCを処置したヒト化NSGマウスは、末梢血、又は骨髄において、T-細胞が強力に減少した。一方、3 mg/kgのDAR2の抗-CD2-ADCで処置した後で、胸腺のT-細胞は約59%減少した。比較のために、図６Ａ−６Ｃはまた、3 mg/kgのコンジュゲートしていない抗-CD2抗体又は示したコントロール(即ち、3 mg/kgのhIgG1-アマニタンADC(「hIgG1-AM」)又はPBS)でヒト化NSGマウスを処置した後のT-細胞減少のレベルを示す。
【０３１４】
実施例７：マウス・モデルにおける同種異系CAR-T細胞の投与
以下の研究を行って、様々な条件下で同種異系レシピエント(recipient)中に存在するCAR-T細胞のレベルを評価する。
【０３１５】
この研究では、マウスの同種異系CAR-Tモデルを用いる。
【０３１６】
第1の処置群のマウスを、0日目に1×107〜1×109 細胞／kgを静脈内注入することによって、同種異系T細胞の初回用量で処置する。3日目に、前記マウスに抗-CD2-α-アマニチンADCを3 mg/kgの用量で投与する。10日目に、前記ADCが前記マウスの血中から実質的にクリアランスされた後、マウスに同種異系のCAR-T細胞を投与する。前記CAR-T細胞は、0日目に投与した同種異系T細胞と同じドナー(donor)に由来する。
【０３１７】
第2の処置群のマウスを、第1の処置群と同じプロトコルを用いて処置する、但し、抗-CD2 ADCの代わりに、3日目に非コンジュゲートの抗-CD2抗体を投与する。
【０３１８】
第3の処置群のマウスを、第1の処置群と同じプロトコルを用いて処置する、但し、抗-CD2 ADCの代わりに、3日目にα-アマニチンにコンジュゲートしたアイソタイプ・コントロールの抗体を投与する。
【０３１９】
第4の処置群のマウスを、第1の処置群と同じプロトコルを用いて処置する、但し、同種異系T細胞の代わりに、0日目に初回用量の自己T細胞を投与する。
【０３２０】
第5の処置群のマウスは、前処置なしに、10日目に同種異系CAR-T細胞を投与する。
【０３２１】
第6の処置群のマウスは、前処置なしに、10日目に自己CAR-T細胞を投与する。
【０３２２】
14日目、17日目、及び30日目に、各処置群から得られたマウスの脾臓及び末梢血中に存在するCAR-T細胞の個数を測定する。9日目に、各処置群から得られたマウスの脾臓及び末梢血中のCD2+活性化T細胞の個数を測定する。本試験期間を通じて、拒絶反応の症状(symptom)及びCAR-T細胞の存在についてマウスをモニターする。
【０３２３】
実施例８：同種異系細胞療法の拒絶反応を予防するための、抗-CD2抗体薬物コンジュゲートのヒト患者への投与
同種異系CAR細胞療法などの同種異系細胞療法を受けるヒト患者を選択する。同種異系細胞の拒絶を阻害又は予防するために、抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、本明細書中に開示する方法に従って投与する。医師は、以下の治療ステップを行う。
【０３２４】
まず最初に、同種異系細胞に対するプライミング免疫反応を誘発するのに充分な量で、初回用量の同種異系細胞を、前記患者に静脈内投与する。プライミング段階では、同種異系細胞を前記患者に投与して、内因性の活性化CD2+ T細胞が生じる免疫反応を誘発させる。
【０３２５】
続いて、前記患者に、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD137抗体を含む抗-CD2 ADCを投与する。前記抗-CD2 ADCは、内因性のCD2+活性化T細胞を減少させるのに有効な量で投与する。前記抗-CD2 ADCを投与した後に、CD2+活性化T細胞のレベルを評価し、減少を確認する。
【０３２６】
次に、治療有効量のCARを発現する同種異系細胞を投与する。前記同種異系細胞は、プライミング・ステップの間に、前記患者に投与した細胞と同じドナー(donor)に由来する。プライミング及び抗-CD2 ADCの投与を行わずに同種異系細胞療法を受けている患者と比較して、レシピエント(recipient)患者における同種異系細胞の受容が促進され、拒絶反応のリスクが低下する。
【０３２７】
【表５−１】
2021530545.tif 000129
【表５−２】
2021530545.tif 000130
【表５−３】
2021530545.tif 000131
【０３２８】
他の実施形態
本明細書において言及する全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各独立した刊行物又は特許出願を具体的かつ個別に示して参照により取り込まれるように、同じ程度まで、本明細書に参照により取り込まれる。
【０３２９】
本発明をその特定の実施形態に関連させて説明してきたが、本発明は更なる改変が可能であり、本出願は、広く、本発明の原理に従い、本発明が関係する技術内の既知の又は慣例的な実施の範囲内に入り、本明細書で前述され、特許請求の範囲に従う本質的な特徴に適用され得るような、本発明からの逸脱を含む、本発明の任意の変形、使用、又は適応を包含することが意図されることを理解されたい。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象において、キメラ抗原レセプター(chimeric antigen receptor)(CAR)を発現する免疫細胞の受容を促進する方法、ここで、前記方法は、以下を含む、
(a) 抗-CD2抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、がん又は自己免疫疾患を有するヒト対象に投与すること、ここで、前記抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；及び、
(b) CARを発現する免疫細胞の治療有効量を前記ヒト対象に投与すること、ここで、前記CARは、腫瘍抗原又は自己免疫疾患に関連する抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。
【請求項２】
請求項１に記載の方法、ここで、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、アレムツズマブを投与されない。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法、ここで、前記ヒト対象は、ステップ(b)の前、それと同時に、又はそれの後に、リンパ球除去化学療法剤を投与されない。
【請求項４】
請求項３に記載の方法、ここで、前記リンパ球除去化学療法剤は、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、及び／又はペントスタチンである。
【請求項５】
請求項１から４の何れか一項に記載の方法、ここで、ステップ(b)の前に抗-CD2 ADCを前記ヒト対象に投与することを更に含む。
【請求項６】
請求項１から５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記方法は、ステップ(b)の約12時間から約21日前に、抗-CD2 ADCを前記ヒト対象に投与することを含む。
【請求項７】
請求項１から６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記免疫細胞は、同種異系細胞又は自己細胞である。
【請求項８】
請求項７に記載の方法、ここで、前記同種異系細胞は、同種異系T細胞又は同種異系NK細胞である。
【請求項９】
請求項１から８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARを発現する同種異系細胞の治療有効量は、約1×104から約1.0×108細胞／kgである。
【請求項１０】
腫瘍を有する患者を治療する方法であって、以下を含む方法、
(i) 抗-CD2 ADC、ここで、前記抗-CD2 ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、及び
(ii) 約1×106から約1×108個の治療有効量の操作したCAR T細胞／kgを患者に投与すること。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法、ここで、前記操作したCAR T細胞の治療有効量は、約1×106 又は約2×106 細胞／kgである。
【請求項１２】
請求項１から１１の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗-CD2 ADCを、単回用量又は複数回用量として患者に投与する。
【請求項１３】
請求項１から１２の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO) 1、2、及び3に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖可変領域を含む、並びに、それぞれ、配列番号(SEQ ID NO)4、5、及び6に記載のアミノ酸配列を有するCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、キメラ化又はヒト化されている。
【請求項１５】
請求項１から１４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、IgG1アイソタイプ又はIgG4アイソタイプである。
【請求項１６】
請求項１から１５に記載の方法、ここで、前記細胞毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシンである。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマニチンである。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法、ここで、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群から選択される。
【請求項２０】
請求項１７に記載の方法、ここで、アマトキシンにコンジュゲートした抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメントは、式Ab-Z-L-Amによって表される、ここで、Abは抗体又はその抗原結合フラグメントである、Lはリンカーである、Zは化学的な部分構造である、及びAmは式(III)によって表されるアマトキシンである、
【化１】
2021530545.tif 000132
ここで、R1は、H、OH、ORA、又はORCである；
R2は、H、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3は、H、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9は、H、OH、ORC、又はORDである；
Xは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Zである；
RDは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、又は任意選択的に置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗-CD2抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である、ここで、Amは正確に1つのRc置換基を含む。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法、ここで、前記リンカーは、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリールである；又はジペプチドを含む；又は-(CH2)mO)n(CH2)m-である、ここでm及びnは、それぞれ個別に1、2、3、4、5、6、7、8、9、及び10から選択されたものである。
【請求項２２】
請求項１６に記載の方法、ここで、前記抗有糸分裂薬剤は、メイタンシン又はアウリスタチンである。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法、ここで、前記アウリスタチンは、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。
【請求項２４】
請求項１４に記載の方法、ここで、前記抗有糸分裂薬剤は、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)又はカリケアマイシンである。
【請求項２５】
請求項１から２４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCのリンカーは、N-ベータ-マレイミドプロピオニル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。
【請求項２６】
請求項１から２４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCは、以下の構造の何れか1つによって表される：
【化２】
2021530545.tif 000133
【請求項２７】
請求項１から２４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCは以下によって表される：
【化３】
2021530545.tif 000134
又は
【化４】
2021530545.tif 000135
【請求項２８】
請求項１から２７の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCは、3日以下の血清半減期を有する。
【請求項２９】
請求項１から２８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARの細胞外ドメインは、scFv抗体又は単鎖T細胞レセプター(scTCR)を含む。
【請求項３０】
請求項１から２８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記細胞外ドメインは、非-免疫グロブリン・スキャフォールド・タンパク質(scaffold protein)を含む。
【請求項３１】
請求項１から３０の何れか一項に記載の方法、ここで、前記腫瘍抗原は、CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、メソテリン、CD38、PD1、EGFR(例えば、EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D、又はCD123からなる群より選択される。
【請求項３２】
請求項１から３１の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARの細胞内ドメインは、CD28細胞内シグナリング・ドメイン、CD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメイン、OX40細胞内シグナリング・ドメイン、及び／又はCD137(4-1BB)細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【請求項３３】
請求項１から３２の何れか一項に記載の方法、ここで、前記CARの細胞内ドメインがCD3ゼータ細胞内シグナリング・ドメインを含む。
【請求項３４】
請求項１から３３の何れか一項に記載の方法、ここで、前記がんを有するヒト対象は、白血病、成人進行がん、膵臓がん、切除不能な膵臓がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、卵巣がん、トリプル-ネガティブ乳がん、造血系／リンパ系がん、大腸がん肝臓転移、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、B細胞リンパ腫、再発性又は難治性B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、再発性又は難治性びまん性大細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫、再発性縦隔、難治性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、大細胞型B細胞リンパ腫、ホジキン・リンパ腫、非-ホジキン・リンパ腫、再発又は難治性非-ホジキン・リンパ腫、難治性進行性非-ホジキン・リンパ腫、B細胞性非-ホジキン・リンパ腫、難治性非-ホジキン・リンパ腫、結腸直腸がん腫(colorectal carcinoma)、胃がん(gastric carcinoma)、膵がん(pancreatic carcinoma)、トリプルネガティブ浸潤性乳がん(triple-negative invasive breast carcinoma)、腎細胞がん(renal cell carcinoma)、肺扁平上皮がん(lung squamous cell carcinoma)、肝細胞がん(hepatocellularcarcinoma)、尿路上皮がん(urothelial carcinoma)、白血病、B細胞性白血病、B細胞性急性リンパ球性白血病（B-cell acute lymphocytic leukemia）、B細胞性急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、成人急性リンパ芽球性白血病、B細胞性前リンパ球性白血病（B-cell prolymphocytic leukemia）、小児急性リンパ芽球性白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia)、難治性小児急性リンパ芽球性白血病(refractory childhood acute lymphoblastic leukemia)、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、再発性プラズマ細胞性骨髄腫(recurrent plasma cell myeloma)、難治性プラズマ細胞性骨髄腫(refractory plasma cell myeloma)、多発性骨髄腫、再発性又は難治性多発性骨髄腫、骨の多発性骨髄腫、脳の悪性神経膠腫(malignant glioma of brain)、骨髄異形成症候群、EGFR陽性結腸直腸がん、多形性膠芽腫(glioblastoma multiforme)、新生物、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm)、肝臓転移、固形腫瘍、進行性固形腫瘍(advanced solid tumor)、メソテリン陽性腫瘍(mesothelin positive tumor)、血液悪性腫瘍、及びその他の進行した悪性腫瘍、からなる群から選択されるがんを有する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2021530545.tif 000136
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２】
2021530545.tif 000137
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３Ａ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３Ａ】
2021530545.tif 000138
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３Ｂ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３Ｂ】
2021530545.tif 000139
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図４】
2021530545.tif 000140
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図５Ａ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図５Ａ】
2021530545.tif 000141
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図５Ｂ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図５Ｂ】
2021530545.tif 000142
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図６Ａ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図６Ａ】
2021530545.tif 000143
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図６Ｂ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図６Ｂ】
2021530545.tif 000144
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図６Ｃ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図６Ｃ】
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【国際調査報告】
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2021530545.tif 000147
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