(57)【要約】  本開示は、マリノブファゲニン（ＭＢＧ）と高い親和性で特異的に結合するキメラ、ヒト化およびヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）ならびにそのフラグメントを提供する。抗ＭＢＧ  ｍＡｂおよびそのフラグメントは、任意に追加の治療用薬剤と組み合わせて、高血圧障害および線維化障害を含む、ＭＢＧ関連障害を処置するために使用することができる。さらに、抗ＭＢＧ  ｍＡｂおよびそのフラグメントは、生物学的サンプル中のＭＢＧを検出することおよびＭＢＧ関連障害を診断することを含む、診断目的で使用することができる。【選択図】図１ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３、配列番号４、配列番号５およびヒト重鎖可変フレームワーク、ならびに配列番号６、配列番号７、配列番号８およびヒト軽鎖可変フレームワークを含む抗マリノブファゲニン抗体であって、該抗マリノブファゲニン抗体が、Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ１、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ１、およびＨ３Ｌ２からなる群から選択される、上記抗体。
【請求項２】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、Ｈ１Ｌ１である、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項３】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、Ｈ２Ｌ１である、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項４】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、Ｈ３Ｌ１である、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項５】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、Ｈ１Ｌ２である、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項６】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、Ｈ２Ｌ２である、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項７】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、Ｈ３Ｌ２である、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項８】
ヒト化抗マリノブファゲニン抗体であって、該抗体が、配列番号１の重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域を含む抗体と、マリノブファゲニンとの結合に関する競合的阻害剤である、上記抗体。
【請求項９】
ヒト化抗マリノブファゲニン抗体であって、該抗体が、配列番号９、配列番号１０、および配列番号１１からなる群から選択される重鎖可変領域ならびに配列番号１２および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む抗体と、マリノブファゲニンとの結合に関して競合する、上記抗体。
【請求項１０】
前記抗体は、配列番号１１の重鎖可変領域および配列番号１３の軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１１】
前記抗体は、抗体フラグメントである、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１２】
前記抗体フラグメントは、単鎖抗体である、請求項１１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１３】
前記抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメントである、請求項１１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１４】
前記抗体フラグメントは、組み換えフラグメントである、請求項１１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１５】
前記抗体フラグメントは、延長部分を含む、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１６】
前記延長部分は、ポリエチレングリコールである、請求項１５に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、ＩｇＧである、請求項１、８、および９のいずれか１項に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１８】
前記抗体は、ＩｇＧ１である、請求項１７に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項１９】
前記抗体は、ＩｇＧ２である、請求項１７に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項２０】
前記抗体は、ＩｇＧ４である、請求項１７に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項２１】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、３Ｅ９抗体が結合するマリノブファゲニンのエピトープに結合する、請求項１に記載の抗マリノブファゲニン抗体。
【請求項２２】
妊娠高血圧腎症を処置する方法であって、妊娠高血圧腎症を有し、上昇したレベルのマリノブファゲニンを有する哺乳動物を準備するステップと、該哺乳動物に、前記マリノブファゲニンと結合する抗マリノブファゲニン抗体を投与するステップを含み、それによって前記妊娠高血圧腎症が処置される、上記方法。
【請求項２３】
前記哺乳動物は、マウス、ラット、またはヒトである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ヒト抗体は、２０１／２０２、２０３／２０４、２０５／２０７、２０６／２０８、２３６／２３７、２３８／２３９、２４０／２４１、Ｒ４ＣＥ−１Ｅ、Ｒ４ＣＥ−７Ｇ、Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ、１Ｂ−６Ｃ、１Ｂ−６Ｅ、２Ａ−５Ａ、および２Ａ−Ｆ８からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒト化抗体は、Ｈ１Ｌ１、Ｈ２Ｌ１、Ｈ３Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ２、およびＨ３Ｌ２からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
線維化を処置する方法であって、線維化を有し、上昇したレベルのマリノブファゲニンを有する哺乳動物を準備するステップと、該哺乳動物に、前記マリノブファゲニンと結合する抗マリノブファゲニン抗体を投与するステップとを含み、それによって前記線維化が処置される、上記方法。
【請求項２８】
前記哺乳動物は、マウス、ラット、またはヒトである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗マリノブファゲニン抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ヒト抗体は、２０１／２０２、２０３／２０４、２０５／２０７、２０６／２０８、２３６／２３７、２３８／２３９、２４０／２４１、Ｒ４ＣＥ−１Ｅ、Ｒ４ＣＥ−７Ｇ、Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ、１Ｂ−６Ｃ、１Ｂ−６Ｅ、２Ａ−５Ａ、および２Ａ−Ｆ８からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヒト化抗体は、Ｈ１Ｌ１、Ｈ２Ｌ１、Ｈ３Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ２、およびＨ３Ｌ２からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府資金による研究の記載
[0001]本発明は、政府機関ＮＩＨ／ＮＩＣＨＤ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃｈｉｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）によって付与された助成金第１Ｒ４３ＨＤ０７２７４５−０１号のもと、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
配列表、表またはコンピュータプログラムに対する言及
[0002]「ＰＲＩ００２＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」のファイル名、２０１８年６月７日の作成日、および５２キロバイトのサイズのＡＳＣＩＩ形式テキストファイルとして配列表の公式なコピーがＥＦＳ−Ｗｅｂを介して明細書と同時に提出されている。ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出された配列表は、明細書の一部であり、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
[0003]高血圧は、広い範囲の障害と関連する。高血圧障害の１つは、妊娠高血圧腎症（ＰＥ）である。ＰＥは、妊娠２０週以降の高血圧（拡張期≧９０ｍｍＨｇ）およびタンパク尿（２４時間中に≧３００ｍｇ）を特徴とする妊娠の重篤な合併症である。ＰＥは、ときどき、またはよく浮腫（例えば、肺水腫）、脳症、発作、腎不全、肝不全、子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）、および早産を伴い、後者の２つは、胎児および新生児の生存および健康を害する。ＰＥは、妊娠の約５〜１０％で起こり、世界中の母親および胎児の罹患率および死亡率の主な原因である。ＰＥに対する既知の有効な治療法は、新生児の早産だけである。
【０００４】
[0004]さらに、線維化は、多くの障害をもたらす。線維化障害の１つは、糖尿病性腎症（ＤＮ）であり、これもまた高血圧を特徴とする。ＤＮは、１型糖尿病患者の約１５〜２５％および２型糖尿病患者の約３０〜４０％を冒し、世界中の末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の最も一般的な原因である。臨床的ＤＮは、糸球体内毛細血管圧および糸球体濾過量（ＧＦＲ）の初期増加、糸球体肥大、メサンギウム基質拡大、糸球体基底膜の厚化、細動脈ヒアリン変性、結節性糸球体硬化、尿細管間質線維化および損傷、および（アルブミン尿を含む）タンパク尿を含む、一連の病理学的事象を伴う。例えば、糸球体毛細血管の瘢痕化（糸球体硬化）は、腎小体の濾過工程を障害し、タンパク質が血液から尿へ漏れて、結果としてタンパク尿を生じさせる。ＤＮ患者の不十分な血糖管理は、疾患進行をＥＳＲＤに至る可能性のある腎不全およびＧＦＲの低下に悪化させる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
[0005]本開示は、マリノブファゲニン（ＭＢＧ）と高い親和性で特異的に結合するそのフラグメントを含む、抗体を提供する。抗体は、モノクローナルであってもよく、ヒト、キメラまたはヒト化抗体であってもよい。そのフラグメントを含む、キメラ抗ＭＢＧ抗体は、非ヒト（例えば、マウス）相補性決定領域（ＣＤＲ）および非ヒトフレームワーク領域、ならびに任意に１つ以上のヒト定常ドメインを有してもよい。そのフラグメントを含む、ヒト化抗ＭＢＧ抗体は、非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域、ならびに任意にＣＤＲに隣接する非ヒトフレームワークアミノ酸残基および任意に１つ以上のヒト定常ドメインを有してもよい。ヒト抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントは、ヒトＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域、ならびに任意に１つ以上のヒト定常ドメインを有してもよい。
【０００６】
[0006]開示されているヒト抗体は、マリノブファゲニンと結合する抗体のナイーブヒトゲノムレパートリーであるライブラリーからの抗マリノブファゲニン抗体である。（抗体のナイーブヒトゲノムレパートリーである）ヒトファージミドライブラリーに対するパニングは、数十のＭＢＧ特異的なクローンを特定した。それに続く１００を超えるヒト抗体（Ｆａｂ）のキャラクタリゼーションは、ヒト抗体を、競合ＥＬＩＳＡスクリーニングにおいてＭＢＧと結合することを示した１４の特有の抗体に減少させた。このように、ライブラリーから得られたヒト抗体は、マリノブファゲニンと結合することができるナイーブヒトゲノムライブラリーにおいて見出される抗体である。
【０００７】
[0007]本明細書に記載されている抗ＭＢＧ抗体は、抗体に所望の特性を与える修飾を含んでもよい。例えば、修飾は、抗体の血清半減期を延長することができるか、または修飾は、血清半減期を短縮することができる。修飾はまた、抗体のエフェクター機能を高めることができ、例えば、抗体・ＭＢＧ複合体のクリアランスを高めることができる。修飾は、免疫原性を低下させるか、または抗ＭＢＧ抗体によって引き起こされるその他の望ましくない副作用もしくは有害事象を低減するであろう。
【０００８】
[0008]本明細書に記載されている抗ＭＢＧ抗体は、ＭＢＧの生物学的作用および影響を中和または阻害することができるため、ＭＢＧ関連障害を処置するために使用することができる。例えば、本明細書に記載されている抗ＭＢＧ抗体は、細胞上のＭＢＧによるレセプター結合を阻害するために使用することができる。本明細書に記載されている抗体は、マリノブファゲニンによって細胞において誘導されるＰＫＣ−δの核移行を阻害するために使用することができる。本明細書に記載されている抗体は、マリノブファゲニンによって引き起こされる内皮細胞による増殖の阻害を低減するために使用することができる。本明細書に記載されている抗体は、マリノブファゲニンによって引き起こされる内皮細胞による血管新生の阻害を低減するために使用することができる。ＭＢＧ関連障害としては、例えば、急性呼吸促迫症候群、および／または外傷性脳損傷を挙げることができる。その他のＭＢＧ関連障害としては、例えば、高血圧（例えば、本態性高血圧症）、高血圧関連障害（例えば、妊娠高血圧腎症）、および線維化関連障害（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎、糖尿病性腎症）が挙げられる。これらのＭＢＧ関連障害は、１つ以上の本明細書に記載されている抗体を、ＭＢＧ関連障害を患っている対象に投与することによって処置することができる。
【０００９】
[0009]本明細書に記載されている抗ＭＢＧ抗体は、診断目的で使用することができる。そのようなＭＢＧ診断は、ＭＢＧを検出する抗体を使用する。これらの診断は、インビトロまたはインビボにおいて実施することができる。そのような診断は、例えば、サンプル中のＭＢＧを定量するか、あるいはＭＢＧの位置および／またはその位置におけるＭＢＧの濃度を検出することができる。これらの診断は、対象がＭＢＧ関連障害を患っているかどうか、任意に、ＭＢＧ関連障害の重症度の程度を判断するために使用することができる。
【００１０】
[0010]本開示の実例となる実施形態を記載する以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することによって本開示の特徴および利点のさらに良好な理解が得られるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１ａ】[0011]図１は、直接ＥＬＩＳＡ結合実験におけるヒト化抗ＭＢＧの抗原結合を示す。図１ａは、６つのヒト化抗ＭＢＧ抗体を比較するが、図１ｂは、ヒト化抗ＭＢＧと親３Ｅ９抗体とを比較する。
【図１ｂ】同上。
【図２ａ】[0012]図２ａは、ＭＢＧ単独（２ｎＭ）またはＭＧＢ（２ｎＭ）プラス抗ＭＢＧ抗体とともにインキュベーションした初代心臓線維芽細胞の核中のプロテインキナーゼＣ−デルタ（ＰＫＣ−δ、７８ｋＤａ）の相対量を示すウエスタンブロットである。
【図２ｂ】[0013]図２ｂは、ＭＢＧ（１０ｎＭ）またはＭＢＧ（１０ｎＭ）プラス抗ＭＢＧ抗体とともにインキュベーションした初代心臓線維芽細胞の核中のプロテインキナーゼＣ−デルタ（ＰＫＣ−δ、７８ｋＤａ）の相対量を示すウエスタンブロットである。
【図３ａ】[0014]図３ａは、ＭＢＧ単独（２ｎＭ）またはＭＢＧ（２ｎＭ）プラスヒト抗ＭＢＧ抗体（２０μｇ／ｍＬ）とともにインキュベーションしたヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の増殖のレベルを示す。
【図３ｂ】[0015]図３ｂは、ＭＢＧ単独、またはＭＢＧ（２ｎＭ）プラスヒト化抗ＭＢＧ抗体（２．５〜１０μｇ／ｍＬ）とともにインキュベーションしたヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の増殖のレベルを示す。
【図４】[0016]図４は、Ｎａ＋Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ活性の尺度であるＰｉの測定としてＯＤ６３０読み取り値を示す。棒グラフは、Ｐｉレベルに対するＭＢＧの影響、および抗ＭＢＧ抗体によるこの影響の逆転を示す。
【図５】[0017]図５は、生物学的サンプル中のＭＢＧを測定するための競合ＥＬＩＳＡアッセイにおけるＭＢＧに関する標準曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
[0018]本開示のさまざまな実施形態が本明細書に記載されているが、そのような実施形態は例として示されているに過ぎないことは当業者には明らかであろう。本開示から逸脱することない、本明細書に記載される実施形態に対する数々の改変および変更、ならびにその変形物および代用物が当業者には明白であろう。本開示を実施する際に本明細書に記載されている実施形態に対するさまざまな代替物が利用されてもよいことが理解される。本開示のすべての実施形態は、任意にその実施形態と整合性のある本明細書に記載されている１つ以上の任意の他の実施形態と組み合わされてもよいことも理解されるべきである。
【００１３】
[0019]要素が一覧の形式（例えば、マーカッシュ群）で提示される場合、その要素の可能なそれぞれの部分群も開示され、任意の１つ以上の要素が一覧もしくは群から除去されてもよいことが理解される。
【００１４】
[0020]明らかに反対のことが示されない限り、２つ以上の行為またはステップを含む本明細書に記載されているか、または特許請求される任意の方法において、方法の行為またはステップの順序は、必ずしも方法の行為またはステップが列挙された順序に限定されないが、本開示は、順序がそのように限定される実施形態も包含することも理解される。
【００１５】
[0021]一般に、本明細書または特許請求の範囲の実施形態が１つ以上の特徴を含むものと言及される場合、本開示は、そのような特徴からなるか、またはそれから本質的になる実施形態も包含することがさらに理解される。
【００１６】
[0022]本開示の任意の実施形態、例えば、先行技術の範囲内で見出される任意の実施形態は、本明細書において特定の除外が列挙されているか否かにかかわらず、特許請求の範囲から明確に除外することができることも理解される。
【００１７】
[0023]本明細書における抗体もしくはそのフラグメントなどのペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に対する言及は、別に具体的に明記されない限りまたは文脈が明らかに別のことを示していない限り、薬学的に許容されるその塩を含むことがさらに理解される。そのような塩は、正の正味電荷、負の正味電荷を有するか、または正味電荷を有さない場合がある。
【００１８】
[0024]参照のため、および特定のセクションを見つけるのを助けるために本明細書には見出しが含まれる。見出しは、そうした見出しの下のセクションに記載されている実施形態の範囲および概念を限定することを意図しておらず、それらの実施形態および概念は、本開示全体をとおして他のセクションでも適用可能である場合もある。
【００１９】
[0025]本明細書中で引用されるすべての特許文献およびすべての非特許文献は、特許文献または非特許文献のそれぞれが具体的に、個別に参照によってその全体が本明細書に組み込まれることが示されたのと同程度にその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００２０】
Ｉ．定義
[0026]本明細書において使用されるすべての技術および科学用語は、本明細書におけるそれらの使用によって別に定義されない限り、または明らかに別のことが示されない限り、本出願が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００２１】
[0027]本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、不定冠詞「１つの、ある（ａおよびａｎ）」および定冠詞「その、前記（ｔｈｅ）」は、別に具体的に明記されない限り、または文脈が明らかに別のことを示していない限り、複数形の指示対象ならびに単数形の指示対象を含むことが可能である。
【００２２】
[0028]「約」または「およそ」という用語は、値が測定されるか、または求められる方法にある程度左右される、当業者によって求められる特定の値に対して許容される誤差を意味する。特定の実施形態において、「約」または「およそ」という用語は、１標準偏差内を意味する。いくつかの実施形態において、誤差の特定の限界（例えば、グラフまたはデータの表における所与の平均値に対する標準偏差）が挙げられていない場合、「約」または「およそ」という用語は、挙げられた値を包含するであろう範囲、さらに有効数字を考慮に入れて挙げられた値の端数を切り上げまたは切り捨てることによって含まれるであろう範囲も意味する。特定の実施形態において、「約」または「およそ」という用語は、特定の値±１０％、５％、４％、３％、２％または１％内を意味する。「約」または「およそ」という用語が、一連の２つ以上の数値または数値の一連の２つ以上の範囲の最初の数値に先行する場合はいつでも、「約」または「およそ」という用語は、その一連の数値またはその一連の数値の範囲の数値のそれぞれに適用される。
【００２３】
[0029]「抗体」という用語は、結合タンパク質と機能的に定義され、免疫グロブリンコード遺伝子のフレームワーク領域由来であると認められるアミノ酸配列を含むものと構造的に定義されるタンパク質を指す。抗体は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなってもよい。認められる免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それは、その結果として、それぞれ免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを定義する。
【００２４】
[0030]一般的なガンマ免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含むことが知られている。それぞれの四量体は、それぞれの組が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する、ポリペプチド鎖の２つの同一の組から構成される。それぞれの鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００から１１０以上のアミノ酸の可変領域を定義する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。
【００２５】
[0031]抗体は、無傷の免疫グロブリンとして、または多数の十分に特徴づけられたフラグメントとして存在する。このように、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域のジスルフィド結合より下で抗体を消化して、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’の二量体を作り出し、それ自体は、本来ジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１−ヒンジに結合した軽鎖である。Ｆ（ａｂ）’２は、穏やかな条件下で還元されて、ヒンジ領域中のジスルフィド結合を切断し、それによって、（Ｆａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換してもよい。Ｆａｂ’単量体は、本質的にヒンジ領域の部分を有するＦａｂである（その他の抗体フラグメントのさらに詳細な説明に関しては、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗ．  Ｅ．  Ｐａｕｌ編、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９９３年）を参照のこと）。さまざまな抗体フラグメントが無傷の抗体の消化に関して定義されているが、当業者は、フラグメントが、化学的に、または組み換えＤＮＡ法を利用することによってのいずれかで新規に合成されてもよいことを理解するであろう。したがって、抗体という用語は、本明細書中で使用される場合、抗体全体の改変によって作製されるか、または組み換えＤＮＡ技法を使用して合成されるかのいずれかの抗体フラグメントも含む。好ましい抗体としては、単鎖抗体（単一のポリペプチド鎖として存在する抗体）、例えば、可変重および可変軽領域が（直接またはペプチドリンカーにより）ともに結合して、連続的なポリペプチドを形成する単鎖Ｆｖ抗体（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）を含む、ＶＨ−ＶＬ二量体が挙げられる。単鎖Ｆｖ抗体は、直接結合したか、またはペプチドコードリンカーによって結合したかのいずれかのＶＨおよびＶＬコード配列を含む核酸から発現されてもよい共有結合したＶＨ−ＶＬヘテロ二量体である（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３ページ、１９８８年）。ＶＨおよびＶＬは、単一のポリペプチド鎖としてそれぞれに連結されるが、ＶＨおよびＶＬドメインは、非共有結合的に相互作用する。あるいは、抗体は、別のフラグメントであってもよい。組み換え技術の使用を含み、その他のフラグメントも形成されてもよい。例えば、（重または軽）鎖の一方がｇ３カプシドタンパク質に融合され、相補的な鎖がペリプラズムに可溶性分子として排出されている場合、Ｆａｂ分子は、ファージ上に提示されてもよい。２つの鎖は、同じまたは異なるレプリコンにコードされていてもよく、各Ｆａｂ分子中の２つの抗体鎖は、翻訳後に集合し、二量体がその鎖の一方のｇ３ｐとの結合によりファージ粒子に組み込まれる（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７３３，７４３号を参照）。ｓｃＦｖ抗体ならびに、本来は凝集するが、化学的に分離された抗体Ｖ領域のポリペプチド軽鎖および重鎖を、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造に折りたためる分子に変換する多数のその他の構造が当業者に知られている（例えば、すべての特許の全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号、および同第４��９５６，７７８号を参照）。特に好ましい抗体としては、ファージ上に提示されたか、またはベクターを使用した組み換え技術によって形成されたあらゆるものが挙げられ、その場合、鎖は、可溶性タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２として分泌される。抗体としては、ダイアボディおよびミニボディも挙げることができる。
【００２６】
[0032]抗体は、重鎖二量体、例えば、ラクダ科動物由来の抗体も含む。ラクダ科動物における重鎖二量体ＩｇＧのＶＨ領域は、軽鎖との疎水性相互作用を作る必要がないため、通常は軽鎖と接触する重鎖の領域が、ラクダ科動物では親水性アミノ酸残基に変化している。重鎖二量体ＩｇＧのＶＨドメインは、ＶＨＨドメインと呼ばれる。
【００２７】
[0033]ラクダ科動物では、抗体レパートリーの多様性は、ＶＨまたはＶＨＨ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、および３によって決定される。ラクダＶＨＨ領域のＣＤＲ３は、平均して１６アミノ酸の比較的長い長さを特徴とする（全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら、１９９４年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（９）：１１２９ページ）。これは、多くの他の種の抗体のＣＤＲ３領域と対照的である。例えば、マウスＶＨのＣＤＲ３は、９アミノ酸の平均を有する。
【００２８】
[0034]ラクダ科動物の可変領域のインビボ多様性を維持する、ラクダ科動物由来の抗体可変領域のライブラリーは、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、２００５年２月１７日に公開された米国特許出願公開第２００５００３７４２１号に開示されている方法によって作製することができる。
【００２９】
[0035]抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、抗体の作用の重要なメカニズムである。ＡＤＣＣは、いくつかの方法によって増強されてもよく、その多くは、改善されたＦｃレセプター結合を有する最終生成物抗体を含む。抗体Ｆｃ領域におけるアミノ酸置換が、ＮＫ細胞上のＦｃγＲＩＩＩａレセプターに対するＦｃ結合親和性を高めること（全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｎａｔｓｕｍｅら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、２００９年、３巻、７〜１６ページ）およびＡＤＣＣ活性を向上させることが示された。ＡＤＣＣを向上させるための別の方法は、抗体グリコシル化の糖組成を変えることである。これは、フコース残基のない抗体、つまり、「非フコシル化（ａ−ｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」または「脱フコシル化（ｄｅ−ｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」抗体を作製することよって行われる。１つの方法は、フコースが抗体に付加され得ないよう、抗体のグリコシル化部位を変更／修飾することを含む（特許第６１９４５５１号、２００１年２月２７日）。別の方法は、例えば、酵素分解または他の任意の手段によるフコースの除去によって抗体上の既存のフコースを除去することである。別の方法は、例えば、フコシルトランスフェラーゼ活性の抑制または欠失によって、フコースが抗体に運搬または付加できないような宿主発現系の遺伝子操作を含む（米国特許出願公開第２００７０１３４７５９号、２００７年６月１４日、および同第２００８０１６６７５６号、２００８年７月１０日、ともに、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【００３０】
[0036]本明細書中で使用される場合、「抗原」という用語は、適切な条件下において特異的な免疫応答を誘導することおよびその応答の生成物、例えば、特異抗体もしくは特に、感作されたＴリンパ球、または両方と反応することができる物質を指す。抗原は、可溶性物質、例えば、毒素および外来性タンパク質、または微粒子、例えば、細菌および組織細胞であってもよい。ただし、抗原決定基（エピトープ）とわかっているタンパク質またはポリサッカライド分子の部分のみが抗体またはリンパ球上の特異的なレセプターと結合する。さらに広く、「抗原」という用語は、物質が免疫原性であるかどうかにかかわらず、抗体が結合するあらゆる物質、またはそれに対して抗体が望まれるあらゆる物質を指すために使用されてもよい。そのような抗原に関して、抗体は、いかなる免疫応答とも無関係に、組み換え法によって特定されてもよい。
【００３１】
[0037]本明細書中で使用される場合、抗体の「結合特異性」という用語は、抗体が結合する抗原の同一性、好ましくは、抗体が結合するエピトープの同一性を指す。
[0038]本明細書中で使用される場合、「キメラポリヌクレオチド」という用語は、ポリヌクレオチドが野生型の領域および変異した領域を含むことを意味する。ポリヌクレオチドが、あるポリヌクレオチドからの野生型領域および別の関連ポリヌクレオチドからの野生型領域を含むことを意味する場合もある。
【００３２】
[0039]本明細書中で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによって例示されている当該技術分野において認められた用語を指す。ＣＤＲはまた、超可変領域または超可変ループとして公知である（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７年）Ｊ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：  ９０１ページ；Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：  ８７７ページ；Ｅ．  Ａ．  Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．）（１９８７年）；ならびにＴｒａｍｏｎｔａｎｏら（１９９０年）Ｊ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：  １７５ページ、これらすべての文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲに隣接するＶドメインの領域を指す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域の位置は、当該技術分野において周知のさまざまな定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、およびＡｂＭを使用して決定することができる（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎら、上記；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、１９８７年、Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６、９０１〜９１７ページ；Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ．ら、１９８９年、Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２、８７７〜８８３ページ；Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ．ら、１９９２年、ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ＶＨ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７、７９９〜８１７ページ；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ  １９９７年、２７３（４）を参照）。抗原結合部位の定義も、以下に記載されている：Ｒｕｉｚら、ＩＭＧＴ、ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｄａｔａｂａｓｅ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２８、２１９〜２２１ページ（２０００年）；およびＬｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．  ＩＭＧＴ、ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｄａｔａｂａｓｅ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  Ｊａｎ  １；２９（１）：２０７〜９ページ（２００１年）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：  Ｃｏｎｔａｃｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２６２（５）、７３２〜７４５ページ（１９９６年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８６、９２６８〜９２７２ページ（１９８９年）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、２０３、１２１〜１５３ページ、（１９９１年）；Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏ��ｓ、１、１２６ページ（１９９２年）；およびＲｅｅｓら、Ｉｎ  Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  Ｍ．  Ｊ．  Ｅ．（編）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、１４１〜１７２ページ、１９９６年、これらすべての文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【００３３】
[0040]「少なくとも」または「より大きな」という用語が、一連の２つ以上の数値の最初の数値に先行する場合はいつでも、「少なくとも」または「より大きな」という用語は、その一連の数値の中の数値のそれぞれに適用される。
【００３４】
[0041]「異種起源の」という用語は、それが関連づけられるアミノ酸またはヌクレオチド配列と本来は関連が見られないアミノ酸またはヌクレオチド配列を指す。
[0042]「天然の」または「天然に存在する」という用語は、対象物に対して利用される場合、その対象物は自然界で見出すことができるという事実を指す。例えば、（ウイルスを含む）生物中に存在し、自然界の供給源から単離され得るポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列、および研究室でヒトによって意図的に改変されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列が天然に存在する。
【００３５】
[0043]「を超えない」または「未満」という用語が一連の２つ以上の数値の最初の数値に先行する場合はいつでも、「を超えない」または「未満」という用語は、その一連の数値の中の数値のそれぞれに適用される。
【００３６】
[0044]「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチド単位から構成される重合体を指す。ポリヌクレオチドとしては、デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）およびリボ核酸（「ＲＮＡ」）などの天然に存在する核酸、ならびに核酸類似体が挙げられる。核酸類似体としては、天然に存在しない塩基、天然に存在するリン酸ジエステル結合以外の結合で他のヌクレオチドと結合しているヌクレオチド、または／およびリン酸ジエステル結合以外の結合により結びつけられた塩基が挙げられる。ヌクレオチド類似体の非限定例としては、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロトリエステル、ホスホルアミダート、ボラノホスファート、メチルホスホナート、キラルメチルホスホナート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などが挙げられる。そのようなポリヌクレオチドは、例えば、自動化ＤＮＡ合成装置を使用して合成されてもよい。「核酸分子」という用語は、一般により大きなポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」という用語は、一般により短いポリヌクレオチドを指す。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、約５０を超えないヌクレオチドを含む。ヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）によって表される場合、これは、「Ｕ」が「Ｔ」に取って代わるＲＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）も含むことが理解される。
【００３７】
[0045]「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して連結される、天然または／および非天然アミノ酸残基、天然に存在する構造的なそのバリアント、または／および合成の天然に存在しないその類似体から構成される重合体を指す。合成ポリペプチドは、例えば、自動化ポリペプチド合成装置を使用して合成されてもよい。ポリペプチドはまた、ポリペプチドをコードする核酸配列を発現する細胞において組み換えで作製されてもよい。「タンパク質」という用語は、一般により大きなポリペプチドを指す。「ペプチド」という用語は、一般により短いポリペプチドを指す。特定の実施形態において、ペプチドは、約５０、４０または３０を超えないアミノ酸残基を含む。ポリペプチドは、抗体およびそのフラグメントを含む。ポリペプチド配列を描くために従来の表記が本明細書中で使用され、ポリペプチド配列の左側末端は、アミノ（Ｎ）末端であり、ポリペプチド配列の右側末端は、カルボキシル（Ｃ）末端である。
【００３８】
[0046]ポリペプチドは、１つ以上の修飾が意図的であるか否かにかかわらず、１つ以上の翻訳後修飾などのポリペプチドの合成または細胞産生の過程において行われてもよい１つ以上の修飾を含んでもよい。修飾としては、グリコシル化（例えば、Ｎ−結合型グリコシル化およびＯ−結合型グリコシル化）、脂質化、リン酸化、硫酸化、アセチル化（例えば、Ｎ末端のアセチル化）、アミド化（例えば、Ｃ末端のアミド化）、ヒドロキシル化、メチル化、分子内または分子間ジスルフィド結合形成、２つの側鎖間のラクタムの形成、ピログルタメートの形成、およびユビキチン化を挙げることができるが、これらに限定されない。別の例として、ポリペプチドは、天然の重合体（例えば、多糖）もしくは合成の重合体（例えば、ポリエチレングリコール［ＰＥＧ］）に結合されても、脂質化され（例えば、Ｃ８〜Ｃ２０アシル基でアシル化され）ても、または検出可能薬剤（例えば、放射性核種、蛍光色素もしくは酵素）で標識されてもよい。ペグ化は、プロテアーゼ抵抗性、安定性および半減期を増加させ、溶解度を高め、ポリペプチドの凝集を低減することができる。
【００３９】
[0047]「保存的置換」という用語は、機能的、構造的または化学的に類似した天然または非天然アミノ酸によるポリペプチド中のアミノ酸の置換を指す。特定の実施形態において、以下のグループは、それぞれ互いに対して保存的置換である天然アミノ酸を含む。
１）グリシン（Ｇｌｙ／Ｇ）、アラニン（Ａｌａ／Ａ）；
２）イソロイシン（Ｉｌｅ／Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ／Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ／Ｍ）、バリン（Ｖａｌ／Ｖ）；
３）フェニルアラニン（Ｐｈｅ／Ｆ）、チロシン（Ｔｙｒ／Ｙ）、トリプトファン（Ｔｒｐ／Ｗ）；
４）セリン（Ｓｅｒ／Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ／Ｔ）、システイン（Ｃｙｓ／Ｃ）；
５）アスパラギン（Ａｓｎ／Ｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ／Ｑ）；
６）アスパラギン酸（Ａｓｐ／Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ／Ｅ）；および
７）アルギニン（Ａｒｇ／Ｒ）、リジン（Ｌｙｓ／Ｋ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ／Ｈ）
【００４０】
[0048]さらなる実施形態において、以下のグループは、それぞれ互いに対して保存的置換である天然アミノ酸を含む。
１）非極性：Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ（プロリン／Ｐ）、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ；
２）疎水性：Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ；
３）脂肪族：Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
４）芳香族：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ；
５）非電荷の極性または親水性：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ（チロシンは、極性側鎖を有する疎水性アミノ酸と見なされる場合もある）；
６）脂肪族ヒドロキシルまたはスルフヒドリル含有：Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ；
７）アミド含有：Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
８）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
９）塩基性：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ；および
１０）小さい：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ
【００４１】
[0049]他の実施形態において、アミノ酸は、以下に示すとおりグループ化されてもよい。
１）疎水性：Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ；
２）芳香族：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ；
３）中性の親水性：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
４）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
５）塩基性：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ；および
６）主鎖配向に影響を与える残基：Ｐｒｏ、Ｇｌｙ
【００４２】
[0050]親ポリペプチドに対して１つ以上の修飾を有するポリペプチドは、必要に応じて親ポリペプチドの「類似体」、「誘導体」または「バリアント」と呼ばれる場合もある。
【００４３】
[0051]本開示は、正の正味電荷を有するもの、負の正味電荷を有するもの、および正味電荷を有さないものを含む、ポリペプチドの薬学的に許容される塩を包含する。
【００４４】
[0052]「薬学的に許容される」という用語は、過度の刺激症状、アレルギー反応、免疫原性および毒性がなく対象の組織および臓器と接触する使用に適しており、妥当な利益／リスク比の釣り合いのとれた、意図される使用に有効な物質（例えば、活性成分または賦形剤）を指す。医薬組成物の「薬学的に許容される」賦形剤または担体は、組成物の他の成分とも適合する。
【００４５】
[0053]「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という用語は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、４２℃の温度においてハイブリダイズし、０．２×ＳＳＣ、６０℃においてフィルターを洗浄することを指す。（１×ＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウムである。）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、洗浄、例えば、５０℃の０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウム；０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃における洗浄および５５℃の５０％ホルムアミドにおける洗浄、それに続く５５℃のＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗液における洗浄を伴う、４２℃のホルムアミド、例えば、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％  Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含むｐＨ６．５の５０ｍＭリン酸ナトリウムバッファーを含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミド；または４２℃の５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、および１０％デキストラン硫酸などの変性剤を用いたハイブリダイゼーションのための低イオン強度および高温も包含する。
【００４６】
[0054]「対象」という用語は、霊長類（例えば、ヒト、チンパンジーもしくはサル）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、モルモット、スナネズミもしくはハムスター）、ウサギ目動物（例えば、ウサギ）、イノシシ科動物（例えば、ブタ）、ウマ科動物（例えば、ウマ）、イヌ科動物（例えば、イヌ）またはネコ科動物（例えば、ネコ）などの哺乳動物を含むが、これらに限定されない動物を指す。
【００４７】
[0055]２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチドと関連した「実質的に一致する」または「実質的に同一の」という用語は、配列比較アルゴリズムを使用して、または視覚による検証によって判定される、最大一致に関して比較およびアライメントされる場合に、少なくとも約５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸または核酸残基同一性を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。「実質的に一致する」または「実質的に同一の」という用語は、少なくとも約７０％のアミノ酸または核酸残基同一性を意味することがある。「実質的に一致する」または「実質的に同一の」という用語は、少なくとも約８５％のアミノ酸または核酸残基同一性を意味することがある。実質的な一致または同一性は、少なくとも約２０、３０、４０、５０、１００、１５０または２００残基の長さである配列の領域にわたり存在することがある。配列は、比較生体高分子のいずれか、または両方の全長にわたって実質的に一致するか、または同一であることがある。
【００４８】
[0056]比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．、２：４８２ページ（１９８１年）の局所相同性アルゴリズム（ｌｏｃａｌ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）によって；ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、４８：４４３ページ（１９７０年）の相同性アライメントアルゴリズム（ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）によって；ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８５：２４４４ページ（１９８８年）の類似性検索法（ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ  ｍｅｔｈｏｄ）によって；これらのアルゴリズムのコンピュータによる実施（例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷｉｓｃｏｎｓｉｎのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または視覚による検証によって行われてもよい。
【００４９】
[0057]有用なアルゴリズムの一例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、累進ペアワイズアライメントを使用して関連配列の群から複数の配列アライメントを作成して、関係および配列同一性パーセントを示す。これは、アライメントを作成するために使用されたクラスター関係を示すツリーまたは系統樹も示す。ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｅｖｏｌ．、３５：３５１〜３６０ページ（１９８７年）の累進アライメント法の単純化したものを使用する。使用される方法は、ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ、ＣＡＢＩＯＳ、５：１５１〜１５３ページ（１９８９年）によって記載されている方法と類似している。このプログラムは、それぞれが約５，０００ヌクレオチドまたはアミノ酸の最大長さを有する、最大約３００配列をアライメントすることができる。複数のアライメント手順は、２つの最も類似した配列のペアワイズアライメントから開始して、２つのアライメントされる配列のクラスターを生成する。このクラスターは、その後、アライメントされる配列の次に最も関連する配列またはクラスターとアライメントされる。配列の２つのクラスターは、２つの個々の配列のペアワイズアライメントの単純な伸長によってアライメントされる。最終的なアライメントは、一連の累進ペアワイズアライメントによって達成される。このプログラムは、特定の配列および配列比較の領域に関するそのアミノ酸またはヌクレオチド座標を指定することによってならびにプログラムパラメーターを指定することによって実行される。例えば、参照配列は、以下のパラメーターを使用して配列同一性関連性パーセントを求めるために他の試験配列と比較されてもよい：デフォルトギャップ重み（ｄｅｆａｕｌｔ  ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）（３．００）、デフォルトギャップ長重み（ｄｅｆａｕｌｔ  ｇａｐ  ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ）（０．１０）、および重み付きエンドギャップ（ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｅｎｄ  ｇａｐ）。配列の複数のアライメントを形成するために有用な別のアルゴリズムは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗである（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２２：４６７３〜４６８０ページ［１９９４年］を参照）。
【００５０】
[0058]配列同一性パーセントおよび配列類似性を求めるのに適したアルゴリズムの別の例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３〜４１０ページ（１９９０年）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎにより公開されている。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードとアライメントされる場合に、一部の正値の閾値スコアＴと一致するか、またはそれを満たす、クエリー配列中に長さＷの短いワードを特定することによって高スコア配列ペア（ｈｉｇｈ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｐａｉｒ）（ＨＳＰ）を最初に特定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄ  ｗｏｒｄ  ｓｃｏｒｅ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ、１９９０年）。これらの最初の隣接ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるために検索を開始するための種としての役割を果たす。その後、ワードヒットは、累積アライメントスコアが増加可能な限り、各配列に沿って両方向に伸長される。ヌクレオチド配列に関しては、パラメーターＭ（一致残基のペアに対するリワードスコア（ｒｅｗａｒｄ  ｓｃｏｒｅ）；常に＞０）およびＮ（不一致残基に対するペナルティスコア；常に＜０）を使用して累積スコアが算出される。アミノ酸配列に関しては、累積スコアを算出するためにスコア行列が使用される。各方向におけるワードヒットの伸長は、以下の場合に停止される：累積アライメントスコアが最大達成値から量Ｘだけ減少する場合；１つ以上の負のスコアリング残基アライメントの蓄積のために、累積スコアがゼロ以下になる場合；またはいずれかの配列の末端に達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、およびＸは、アライメントの感度および速さを決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、例えば、１１のワードの長さ（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列に関して、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、例えば、３のワードの長さ（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列を使用する（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８９：１０９１５ページ［１９８９年］を参照）。
【００５１】
[0059]配列同一性パーセントを算出することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計分析も実行する（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０：５８７３〜５７８７ページ［１９９３年］）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって示される類似性の尺度の１つは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致が偶然に起こる確率の指標を示す最小合計確率［Ｐ（Ｎ）］である。特定の実施形態において、参照ポリヌクレオチドに対する試験ポリヌクレオチドの比較における最小合計確率が約０．１、０．０１または０．００１未満の場合、ポリヌクレオチドは、参照配列と類似していると考えられる。
【００５２】
[0060]いくつかの実施形態において、２つのポリペプチドが保存的なアミノ酸置換によってのみ異なる場合、ポリペプチドは、第２のポリペプチドと実質的に一致するか、または同一である。特定の実施形態において、２つのポリヌクレオチドが、本明細書に記載されているストリンジェントな条件下、または高度にストリンジェントな条件下において互いにハイブリダイズする場合、２つの核酸配列は、実質的に一致するか、または同一である。
【００５３】
[0061]「治療有効量」という用語は、対象に投与される場合に、処置される医学的状態を予防する、それが発症するリスクを低下させる、その発症を遅らせる、その進行を遅くする、またはその退行を引き起こす、あるいは医学的状態またはその状態の１つ以上の症状もしくは合併症をある程度まで緩和するのに十分な化合物の量を指す。「治療有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師または臨床医によって求められる細胞、組織、臓器、系、動物またはヒトの生物学的または医学的反応を引き出すのに十分な化合物の量も指す。
【００５４】
[0062]「処置する」、「処置すること」および「処置」という用語は、医学的状態またはその状態と関連する１つ以上の症状もしくは合併症を緩和する、改善する、または抑制すること、およびその状態の１つ以上の原因を緩和する、改善する、または根絶することを含む。医学的状態の「処置」の言及は、その状態の予防を含む。「予防する」、「予防すること」および「予防」という用語は、医学的状態またはその状態と関連する１つ以上の症状もしくは合併症を防ぐこと、それが発症するリスクを低下させることおよびその発症を遅らせることを含む。
【００５５】
ＩＩ．抗マリノブファゲニン抗体
[0063]本明細書に記載されている抗体は、マリノブファゲニン（ＭＢＧ）に対して特異性を有し、上記のすべての形態を含む。抗体は、特定の生物に使用するために操作されてもよい。生物は、ヒト、イヌ科動物、または商業的に有用な家畜、例えば、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ニワトリ、もしくはその他のトリなどであってもよい。抗体のそのような操作は、例えば、当該技術分野において既知の任意のレパートリー技術またはモノクローナル技術を使用した、ヒト化、ヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）、キメラ化、または単離ヒト（もしくは他の生物）抗体を含む。
【００５６】
[0064]本明細書中で開示されている抗体とともに親和性成熟が使用され、所望の親和性の抗ＭＢＧ抗体を得ることができる。動物（例えば、ヒト抗体レパートリーを持つトランスジェニック動物）から抗ＭＢＧ抗体が得られる場合、トランスジェニック動物中で作製される抗体は親和性成熟を経てもよい。あるいは、トランスジェニック動物、または他の技術（ディスプレイ技術など）からの抗体は、チェーンシャッフリングアプローチおよび／またはＶＨおよびＶＬをコードする核酸の変異に続く、親和性がより大きい抗体に関するスクリーニングおよび／または選択を使用して親和性成熟されてもよい。
【００５７】
[0065]非ヒト抗体の免疫原性を最小限に抑えながら、特異性および親和性を保持するための最も広く使用される方法は、非ヒトフレームワークに対する構造的相同性に関して一般に選択されたヒトフレームワークに、非ヒト抗体のＣＤＲをグラフトすることを含む（Ｊｏｎｅｓら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２〜５ページ；米国特許第５，２２５，５３９号、その両方の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。もともと、これらの方法は、親和性の劇的な低下をもたらした。しかしながら、その後、非ヒトＣＤＲ１および２の基本的な構造を維持するのに必要とされるフレームワーク中の重要な位置にある非ヒト残基を元に戻すことによって親和性の一部を取り戻すことができることが示された（Ｂａｊｏｒａｔｈら、１９９５年、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：２２０８１〜４ページ；Ｍａｒｔｉｎら、１９９１年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２０３：１２１〜５３ページ；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ、１９９７年、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７〜４８ページ、これらすべての文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＣＤＲ３の天然の立体構造を取り戻すことは、その構造がより可変であるため、さらにいっそう不確定な計画である。
【００５８】
[0066]従来のＣＤＲグラフトアプローチに対する改良は、さまざまなハイブリッド選択アプローチを使用し、ここでは、抗原結合に関する選択の連続的な繰り返しにおいて、非ヒト抗体の部分が相補的なヒト抗体配列のライブラリーと組み合わされ、この過程で非ヒト配列の大半が徐々にヒト配列で置換される。他の技法としては、鎖置換技術が挙げられ、この場合、非ヒトＣＤＲ３が保持され、フレームワークならびにＣＤＲ１および２を含む、Ｖ領域の残部のみが、実施される各段階において個別に置換された。
【００５９】
[0067]これらの技術は、ヒトに使用するための抗体を作製するために使用されるＣＤＲグラフト法と類似のアプローチを使用して、ＣＤＲを対象種のフレームワーク領域に入れる操作することによって、非ヒト対象に使用するのに適した抗体を作製するために使用することができる。
【００６０】
[0068]キメラ抗ＭＢＧ抗体は、開始抗ＭＢＧ抗体を使用し、開始抗ＭＢＧ抗体の可変領域を所望の可変ドメイン定常領域にグラフトして作製することができる。キメラ抗体は、例えば、マウスＶＬおよびＶＨ領域を、ヒト定常領域ＣＬ（軽鎖定常領域）および少なくともＣＨ１（重鎖定常領域１）と組み合わせることによって作製された。キメラ抗体に使用されたＶＨ領域は、以下のものであった。
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＤＳＩＴＳＧＹＷＮＷＩＲＫＦＰＧＮＫＬＥＹＭＧＹＩＳＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＡＲＹＧＹＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１）
【００６１】
[0069]キメラ抗体に使用されたＶＬ領域は、以下のものであった。
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＲＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
（配列番号２）
【００６２】
[0070]抗ＭＢＧヒト化抗体は、例えば、以下のＣＤＲを使用して作製された。
ＶＨ  ＣＤＲ１：ＤＳＩＴＳＧＹＷＮ（配列番号３）
ＶＨ  ＣＤＲ２：ＹＩＳＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４）
ＶＨ  ＣＤＲ３：ＡＲＹＧＹＧＦＤＹ（配列番号５）
ＶＬ  ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＲＮＴＹＬＥ（配列番号６）
ＶＬ  ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号７）
ＶＬ  ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ（配列番号８）
【００６３】
[0071]３つのＶＨ  ＣＤＲが、重鎖に関するヒト可変領域のフレームワーク配列に配置されて、以下のＶＨ鎖を作り出した。
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＤＳＩＴＳＧＹＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＲＹＧＹＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９）
【００６４】
[0072]このＶＨは、Ｈ１と指定された。配列番号９のフレームワーク領域に置換が組み込まれ、以下の２つのさらなるＶＨ鎖を作製した。
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＤＳＩＴＳＧＹＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＹＩＧＹＩＳＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＲＹＧＹＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＤＳＩＴＳＧＹＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＹＭＧＹＩＳＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＩＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＹＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＲＹＧＹＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）
【００６５】
[0073]配列番号１０は、Ｈ２と指定され、配列番号１１は、Ｈ３と指定された。
[0074]３つのＶＬ  ＣＤＲが、軽鎖のヒト可変領域に関するフレームワーク配列に配置されて、以下のＶＬ鎖を作り出した。
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＲＮＴＹＬＥＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
（配列番号１２）
【００６６】
[0075]配列番号１２は、Ｌ１と指定された。配列番号１２のフレームワーク領域に置換が組み込まれ、以下のさらなるＶＬ鎖を作製した。
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＲＮＴＹＬＥＷＹＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
（配列番号１３）
【００６７】
[0076]配列番号１３は、Ｌ２と指定された。ＶＬ鎖、配列番号１２が、ＨＬ鎖（配列番号：９、１０、および１１）のそれぞれと組み合わされて、３つの異なる抗体（Ｈ１Ｌ１、Ｈ２Ｌ１、およびＨ３Ｌ１）を作製した。ＶＬ鎖、配列番号１３が、これもＨＬ鎖（配列番号：９、１０、および１１）のそれぞれと組み合わされて、３つの異なる抗体（Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ２、およびＨ３Ｌ２）を作製した。
【００６８】
[0077]ヒト抗ＭＢＧ抗体は、ヒトディスプレイライブラリーから得た。１４の抗ＭＢＧ抗体が得られ、これら１４のヒト抗体重鎖および軽鎖の配列は、以下のとおりである。２３６／２３７と呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２３６／２３７  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＲＹＮＷＮＹＶＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号１４）
２３６／２３７  ＶＬ
ＱＡＶＬＴＱＰＳＳＶＳＡＡＰＲＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＡＳＮＩＧＲＮＧＶＳＷＹＨＱＶＰＧＫＡＰＲＬＬＬＳＨＤＧＬＶＴＳＧＶＰＤＲＬＳＶＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＨＳＤＤＥＧＤＹＹＣＡＶＷＤＤＳＬＮＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＳ
（配列番号１５）
【００６９】
[0078]２３６／２３７ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２３６／２３７  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
２３６／２３７  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２３６／２３７  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＡＲＹＮＷＮＹＶＬＦＤＹ（配列番号１８）
【００７０】
[0079]２３６／２３７ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２３６／２３７  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＡＳＮＩＧＲＮＧ（配列番号１９）
２３６／２３７  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＨＤＧ（配列番号２０）
２３６／２３７  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＡＶＷＤＤＳＬＮＡＶＶ（配列番号２１）
【００７１】
[0080]２０１／２０２と呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２０１／２０２  ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＧＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＮＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＳＩＡＡＲＴＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号２２）
２０１／２０２  ＶＬ
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
（配列番号２３）
【００７２】
[0081]２０１／２０２ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０１／２０２  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＧＧＹＹ（配列番号２４）
２０１／２０２  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＮＴ（配列番号２５）
２０１／２０２  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＡＳＩＡＡＲＴＦＤＹ（配列番号２６）
【００７３】
[0082]２０１／２０２ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０１／２０２  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２７）
２０１／２０２  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＤＮＮ（配列番号２８）
２０１／２０２  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＹＶ（配列番号２９）
【００７４】
[0083]２０３／２０４と呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有する。
２０３／２０４  ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＫＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＲＰＰＡＡＴＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号３０）
２０３／２０４  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＳＩＳＣＳＧＧＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＲＬＬＩＹＥＮＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＲＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
（配列番号３１）
【００７５】
[0084]２０３／２０４ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０３／２０４  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＹＹ（配列番号３２）
２０３／２０４  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２０３／２０４  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＲＰＰＡＡＴＦＤＹ（配列番号３３）
【００７６】
[0085]２０３／２０４ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０３／２０４  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２７）
２０３／２０４  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＥＮＮ（配列番号３４）
２０３／２０４  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＴＷＤＳＳＬＲＡＶＶ（配列番号３５）
【００７７】
[0086]２０６／２０８と呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２０６／２０８  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＮＬＲＧＡＦＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
（配列番号３６）
２０６／２０８  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
（配列番号３７）
【００７８】
[0087]２０６／２０８ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０６／２０８  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
２０６／２０８  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２０６／２０８  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＮＬＲＧＡＦＤＩ（配列番号３８）
【００７９】
[0088]２０６／２０８ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０６／２０８  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＡＧＹＤ（配列番号３９）
２０６／２０８  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＥＮＮ（配列番号３４）
２０６／２０８  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＶＶ（配列番号４０）
【００８０】
[0089]２３８／２３９と呼ばれるヒト抗体は、ＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２３８／２３９  ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＶＶＡＲＴＧＴＴＩＳＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号４１）
２３８／２３９  ＶＬ
ＱＡＶＬＴＱＰＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＤＴＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＲＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＩＬＬＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＶＩＷＨＳＳＡＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
（配列番号４２）
【００８１】
[0090]２３８／２３９ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２３８／２３９  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
２３８／２３９  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２３８／２３９  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＶＶＡＲＴＧＴＴＩＳＷＦＤＰ（配列番号４３）
【００８２】
[0091]２３８／２３９ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２３８／２３９  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＧＩＮＶＤＴＹＲ（配列番号４４）
２３８／２３９  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＹＫＳＤＳＤＫ（配列番号４５）
２３８／２３９  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＶＩＷＨＳＳＡＷＶ（配列番号４６）
【００８３】
[0092]２４０／２４１と呼ばれるヒト抗体は、ＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２４０／２４１  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＲＹＳＳＧＷＹＡＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号４７）
２４０／２４１  ＶＬ
ＬＰＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＮＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＡＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＶＡＷＤＧＳＬＳＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
（配列番号４８）
【００８４】
[0093]２４０／２４１ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２４０／２４１  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
２４０／２４１  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２４０／２４１  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＬＲＹＳＳＧＷＹＡＤＰ（配列番号４９）
【００８５】
[0094]２４０／２４１ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２４０／２４１  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＳＮＩ（配列番号５０）
２４０／２４１  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＮＮＮ（配列番号５１）
２４０／２４１  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＶＡＷＤＧＳＬＳＧＶＶ（配列番号５２）
【００８６】
[0095]２０５／２０７と呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２０５／２０７  ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＦＨＴＷＡＰＲＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
（配列番号５３）
２０５／２０７  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＥＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
（配列番号５４）
【００８７】
[0096]２０５／２０７ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０５／２０７  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
２０５／２０７  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２０５／２０７  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＦＨＴＷＡＰＲＡＦＤＩ（配列番号５５）
【００８８】
[0097]２０５／２０７ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２０５／２０７  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２７）
２０５／２０７  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＤＮＮ（配列番号２８）
２０５／２０７  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＬ（配列番号５６）
【００８９】
[0098]Ｒ４ＣＥ−１Ｅと呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＳＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＧＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＨＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＱＬＷＱＲＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号５７）
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ＶＬ
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＮＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＡＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
（配列番号５８）
【００９０】
[0099]Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ８  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＧＹＹ（配列番号５９）
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ８  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＨＳＧＳＴ（配列番号６０）
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ８  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＱＬＷＱＲＧＦＤＹ（配列番号６１）
【００９１】
[00100]Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ８  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹ（配列番号６２）
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ８  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＬＧＳ（配列番号６３）
Ｒ４ＣＥ−１Ｅ  ８  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＭＱＡＬＱＡＰＬＴ（配列番号６４）
【００９２】
[00101]２Ａ−Ｆ８と呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２Ａ−Ｆ８  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＶＴＷＳＤＹＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号６５）
２Ａ−Ｆ８  ＶＬ
ＥＩＶＭＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＳＲＲＶＡＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＲＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号６６）
【００９３】
[00102]２Ａ−Ｆ８  ＶＨに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２Ａ−Ｆ８  ９  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＦＳＧＹＹ（配列番号６７）
２Ａ−Ｆ８  ９  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＮＨＳＧＳＴ（配列番号６８）
２Ａ−Ｆ８  ９  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＶＴＷＳＤＹＲＤＹ（配列番号６９）
【００９４】
[00103]２Ａ−Ｆ８  ＶＬに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２Ａ−Ｆ８  ９  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＱＳＶＴＳＲＲ（配列番号７０）
２Ａ−Ｆ８  ９  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＧＡＳ（配列番号７１）
２Ａ−Ｆ８  ９  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＱＱＹＧＳＳＰＬＴ（配列番号７２）
【００９５】
[00104]Ｒ４ＣＥ−７Ｇと呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＧＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＴＹＳＹＧＰＧＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧ
（配列番号７３）
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＴＹＹＶＳＷＹＱＱＦＰＧＴＶＰＫＬＬＩＹＤＮＴＱＲＰＳＥＩＰＤＲＦＳＡＳＫＳＧＴＳＶＴＬＤＩＴＧＬＱＴＧＤＥＧＤＹＹＣＡＴＷＤＳＮＬＫＳＶＶＦＧＧＧＴＫＶＡＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
（配列番号７４）
【００９６】
[00105]Ｒ４ＣＥ−７Ｇに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  １０  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  １０  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＧＴ（配列番号７５）
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  １０  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＴＴＹＳＹＧＰＧＦＤＰ（配列番号７６）
【００９７】
[00106]Ｒ４ＣＥ−７Ｇに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  １０  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＴＹＹ（配列番号７７）
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  １０  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＤＮＴ（配列番号７８）
Ｒ４ＣＥ−７Ｇ  １０  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＡＴＷＤＳＮＬＫＳＶＶ（配列番号７９）
【００９８】
[00107]Ｒ４ＣＥ−１０Ｈと呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＧＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＨＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＭＹＹＹＧＳＧＳＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号８０）
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＫＮＦＶＳＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＦＬＩＹＥＮＳＫＲＰＳＧＩＰＤＲＩＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＡＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＳＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹ
（配列番号８１）
【００９９】
[00108]Ｒ４ＣＥ−１０Ｈに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  １１  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＧＧＹＹ（配列番号８２）
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  １１  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＨＳＧＳＴ（配列番号８３）
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  １１  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＭＹＹＹＧＳＧＳＰＹＷＹＦＤＬ（配列番号８４）
【０１００】
[00109]Ｒ４ＣＥ−１０Ｈに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  １１  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＫＮＦ（配列番号８５）
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  １１  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＥＮＳ（配列番号８６）
Ｒ４ＣＥ−１０Ｈ  １１  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＶＶ（配列番号４０）
【０１０１】
[00110]１Ｂ−６Ｃと呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
１Ｂ−６Ｃ  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＬＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＬＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＰＡＩＲＳＳＡＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号８７）
１Ｂ−６Ｃ  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＦＧＳＲＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＱＬＬＩＦＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＧＩＴＧＶＱＴＧＤＥＡＥＹＹＣＧＡＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
（配列番号８８）
【０１０２】
[00111]１Ｂ−６Ｃに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
１Ｂ−６Ｃ−１２  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
１Ｂ−６Ｃ−１２  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
１Ｂ−６Ｃ−１２  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＰＡＩＲＳＳＡＩＦＤＹ（配列番号８９）
【０１０３】
[00112]１Ｂ−６Ｃに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
１Ｂ−６Ｃ−１２  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＲＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号９０）
１Ｂ−６Ｃ−１２  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＤＮＮ（配列番号２８）
１Ｂ−６Ｃ−１２  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＡＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号９１）
【０１０４】
[00113]１Ｂ−６Ｅと呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＳＳＧＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＨＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＡＰＹＳＳＳＰＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号９２）
１Ｂ−６Ｅ  ＶＬ
ＬＰＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＲＮＴＧＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＶＶＦＧＧＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＡＥＣＳ
（配列番号９３）
【０１０５】
[00114]１Ｂ−６Ｅに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＹＳＩＳＳＧＹＹ（配列番号９４）
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＨＳＧＳＴ（配列番号９５）
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＶＡＰＹＳＳＳＰＳＦＤＹ（配列番号９６）
【０１０６】
[00115]１Ｂ−６Ｅに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＲＮＴ（配列番号９７）
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＳＮＮ（配列番号９８）
１Ｂ−６Ｅ−１３  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＶＶ（配列番号９９）
【０１０７】
[00116]２Ａ−５Ａと呼ばれるヒト抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ配列を有した。
２Ａ−５Ａ  ＶＨ
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＦＳＲＧＧＰＦＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号１００）
２Ａ−５Ａ  ＶＬ
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＹＳＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＹＶＦＧＳＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
（配列番号１０１）
【０１０８】
[00117]２Ａ−５Ａに関するＶＨ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２Ａ−５Ａ−１４  ＶＨ  ＣＤＲ１  ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）
２Ａ−５Ａ−１４  ＶＨ  ＣＤＲ２  ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）
２Ａ−５Ａ−１４  ＶＨ  ＣＤＲ３  ＡＲＦＳＲＧＧＰＦＬ（配列番号１０２）
【０１０９】
[00118]２Ａ−５Ａに関するＶＬ  ＣＤＲ配列は、以下である。
２Ａ−５Ａ−１４  ＶＬ  ＣＤＲ１  ＳＳＮＩＧＳＹＳ（配列番号１０３）
２Ａ−５Ａ−１４  ＶＬ  ＣＤＲ２  ＤＮＮ（配列番号２８）
２Ａ−５Ａ−１４  ＶＬ  ＣＤＲ３  ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＹＶ（配列番号２９）
【０１１０】
[00119]ヒトＶＨ領域の８つは、ＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹ（配列番号１６）の同じＣＤＲ１を有する。ヒトＶＨ領域の８つは、ＩＹＹＳＧＳＴ（配列番号１７）の同じＣＤＲ２を有する。ヒトＶＬ領域の４つは、ＤＮＮ（配列番号２８）の同じＣＤＲ２を有する。ヒトＶＬ領域の３つは、ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２７）の同じＣＤＲ１を有する。ヒト抗体の上記ＣＤＲ配列は、他の種の抗体のフレームワーク領域にグラフトされてもよい。上記ヒトＣＤＲ配列はまた、新しい抗ＭＢＧ抗体を作製するためにコンビナトリアル様式で混合され、組み合わされてもよい。ヒト抗ＭＢＧ抗体はまた、例えば、倹約変異誘発（ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（例えば、ＢａｌｉｎｔおよびＬａｒｒｉｃｋ、１９９３年）を使用して親和性成熟させられて、ＭＢＧに対してより高い結合親和性を有する抗ＭＢＧ抗体を得てもよい。
【０１１１】
[00120]本明細書中で開示されているいずれの抗ＭＢＧ抗体も、例えば、（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびその他の分解フラグメント、ならびに例えば、ｓｃＦｖ、ディアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ビス−ｓｃＦｖ、ミニボディ、Ｆａｂ２、もしくはＦａｂ３などの組み換えフラグメントを含む）抗体フラグメントまたはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭなどの完全長抗体を含む、さまざまな形式にすることができる。ＩｇＧ完全長抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４であってもよい。完全長ＩｇＡは、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２であってもよい。
【０１１２】
[00121]本開示は、正の正味電荷を有するもの、負の正味電荷を有するもの、および正味電荷を有さないものを含む抗ＭＢＧ抗体の薬学的に許容される塩、ならびに以下に限定されないが、化合物として、医薬組成物中に、その治療的および診断的使用に、ならびにその作製におけるそのフラグメントを含む抗ＭＢＧ抗体の塩を含む抗ＭＢＧ抗体の薬学的に許容される塩を包含する。
【０１１３】
ＩＩＩ．抗ＭＢＧ抗体修飾
[00122]抗ＭＢＧ抗体は、抗体フラグメントの半減期（Ｔ１／２）または／および作用の持続時間を延長する部分を含んでもよい。その部分は、抗体の循環Ｔ１／２、血液Ｔ１／２、血漿Ｔ１／２、血清Ｔ１／２、消失相Ｔ１／２、生物学的Ｔ１／２、排出Ｔ１／２もしくは機能的Ｔ１／２、またはそれらの任意の組み合わせを延長することができる。
【０１１４】
[00123]特定の実施形態において、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、単一の部分を含む。他の実施形態において、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、２つ以上の実質的に類似もしくは同一の部分または同じタイプの２つ以上の部分を含む。さらに別の実施形態において、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、異なるタイプの２つ以上の部分、または部分の２つ以上の異なるタイプを含む。
【０１１５】
[00124]その部分は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）または胎児性Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）と結合するその一部（例えば、ドメインＩＩＩ）であってもよい。ＨＳＡは、部分的に、約６７ｋＤａの分子量（ＭＷ）および極めてアニオン性の表面のために、約１９日の名目上の血清半減期を有する。
【０１１６】
[00125]タンパク質のＨＳＡとの共有結合または非共有結合は、さらなる利点を与える。例えば、ＨＳＡは、タンパク質を保護することができ、それによって、タンパク質を、タンパク質分解切断を受けにくく、免疫原性を低くする。
【０１１７】
[00126]主なＦｃＲｎ結合部位は、ＨＳＡのドメインＩＩＩにある。ドメインＩＩＩは、６０９ａａの完全長ＨＳＡの位置３８８〜５８５に及ぶ。ドメインＩもＦｃＲｎとのＨＳＡ結合に寄与し、これは、なぜ単一ドメインとしてのドメインＩＩＩが、ＦｃＲｎに対して完全長ＨＳＡよりもおよそ１０倍低い親和性を有するのかを部分的に説明し得る。
【０１１８】
[00127]ＨＳＡまたはそのＦｃＲｎ結合部分は、任意に有益な特性または効果を付与する１つ以上の変異を有することができる。いくつかの実施形態において、ＨＳＡまたはそのＦｃＲｎ結合部分は、ｐＨ依存的なＦｃＲｎとのＨＳＡ結合を向上させるか、または／およびＨＳＡ半減期を延長する、Ｋ５７３Ｐまたは／およびＥ５０５Ｇ／Ｖ５４７Ａなどの１つ以上の変異を有する。
【０１１９】
[00128]ＨＳＡまたはそのＦｃＲｎ結合部分は、抗ＭＢＧ抗体フラグメント上の任意の適した位置または部位に結合させられてもよい。いくつかの実施形態において、ＨＳＡまたはそのＦｃＲｎ結合部分は、抗ＭＢＧ抗体フラグメントの重鎖または／および軽鎖のＮ末端または／およびＣ末端に、任意にリンカーを介して、組み換えで融合されるか、化学的に結合させられてもよい。
【０１２０】
[00129]さらに別の実施形態において、延長部分は、アルブミン（ＨＳＡ）と非共有結合する部分を含むか、またはそれである。抗ＭＢＧ抗体フラグメントのアルブミン結合部分との結合は、抗体フラグメントが抗体フラグメントのＨＳＡとの結合と同じ恩恵を享受することを可能にする。さらに、ＨＳＡとの非共有結合は、ＨＳＡ・抗体フラグメント複合体からの抗体フラグメントのゆっくりとした持続放出を可能にする。さらに、アルブミン結合部分は、アルブミンとの結合に基づく抗体フラグメントのアフィニティー精製を可能にする。
【０１２１】
[00130]さらに別の実施形態において、延長部分は、構造化されていないポリペプチドを含むか、またはそれである。構造化されていないポリペプチドのタンパク質との結合は、そのＭＷ、流体力学半径／体積および全体的なサイズを増加させ、それに伴って腎クリアランスを低下させることによって半減期を延長する。構造化されていないポリペプチドは、一般に体温で水溶液中においてランダム鎖立体構造をとる主鎖および水分子とのもの以外の分子内相互作用または分子間相互作用にかかわる傾向が低い側鎖を有し、これは、一般に生理的条件下において非電荷の側鎖を有する小さい親水性アミノ酸が有利である。疎水性アミノ酸は、細胞膜および細胞構成要素との非特異的疎水性相互作用を含む、分子内相互作用または分子間相互作用にかかわる場合もある。非電荷の親水性アミノ酸のうち、トレオニンは、β−シートを形成することもあり、システインは、ジスルフィド結合を形成することもあり、チロシンは、やや大きく、そのフェニル環は、疎水性相互作用にかかわる場合があり、アスパラギンおよびグルタミンは、凝集体を形成することもある。
【０１２２】
[00131]構造化されていないポリペプチドは、抗ＭＢＧ抗体フラグメント上の任意の適した位置または部位に結合させられてもよい。いくつかの実施形態において、構造化されていないポリペプチドは、抗ＭＢＧ抗体フラグメントの重鎖または／および軽鎖のＮ末端または／およびＣ末端に、任意にリンカーを介して、組み換えで融合されるか、または化学的に結合させられる。同様に、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、構造化されていないポリペプチド上の任意の適した位置または部位に結合させられてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、構造化されていないポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に、任意にリンカーを介して、組み換えで融合されるか、または化学的に結合させられる。
【０１２３】
[00132]別の実施形態において、延長部分は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のβ−サブユニット由来のカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むか、またはそれである。延長化ＣＴＰ（延長部分としてタンパク質に結合させられるＣＴＰ）は、ｈＣＧ−β  ＣＴＰの野生型配列を有してもよく、あるいはｈＣＧ−β  ＣＴＰに対して１つ以上の置換、付加もしくは欠失、あるいはそれら任意の組み合わせまたはすべてを有してもよい。ＣＴＰは、抗ＭＢＧ抗体フラグメント上の任意の適した位置または部位に結合させられてもよい。いくつかの実施形態において、ＣＴＰは、抗ＭＢＧ抗体フラグメントの重鎖または／および軽鎖のＮ末端または／およびＣ末端に、任意にリンカーを介して、組み換えで融合されるか、または化学的に結合させられる。同様に、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、ＣＴＰ上の任意の適した位置または部位に結合させられてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、ＣＴＰのＮ末端またはＣ末端に、任意にリンカーを介して、組み換えで融合されるか、または化学的に結合させられる。
【０１２４】
[00133]いくつかの実施形態において、ポリペプチド延長部分は、抗ＭＢＧ抗体フラグメントの重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端に、任意にリンカーを介して、組み換えで融合される。ポリペプチド延長部分の抗体フラグメントとの組み換え融合物は、製造を容易にし、さらなる結合および精製段階を回避し、生成物の不均質性を最小限にする。特定の実施形態において、ポリペプチド延長部分は、抗ＭＢＧ抗体フラグメントにリンカーを介して組み換えで融合される。リンカー／スペーサーは、立体障害を低減し、抗体フラグメントおよび延長部分の独立した働きを容易にする。リンカーの使用はまた、融合タンパク質の発現を増大させる場合もある。いくつかの実施形態において、リンカーは、約４〜３０のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態において、リンカーは、約６もしくは８アミノ酸残基から約２０アミノ酸残基、または約６もしくは８アミノ酸残基から約１５アミノ酸残基を含む。
【０１２５】
[00134]他の実施形態において、延長部分は、合成重合体の１、２、３、４、５個以上の部分を含むか、またはそれである。合成重合体は、生分解性であっても、または非生分解性であってもよい。延長部分として有用な生分解性重合体としては、ポリ（２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン）（ＰＭＰＣ）およびポリ［オリゴ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリラート］（ＰＯＥＧＭＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。延長部分として有用な非生分解性重合体としては、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリグリセロール、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）、ポリオキサゾリンおよびポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
[00135]いくつかの実施形態において、合成重合体は、ＰＥＧを含むか、またはそれである。１つ以上のＰＥＧ部分のタンパク質との結合は、そのＭＷ、流体力学半径／体積および全体的なサイズを増加させ、それに伴って腎クリアランスを低下させることによってその半減期を延長する。ペグ化は、溶解度を高め、凝集および免疫原性を低減し、タンパク質の食作用を回避することができる。ＰＥＧは、柔軟で非電荷および非生分解性であり、比較的低い免疫原性を有し、米国食品医薬品局によってＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）として承認されている。１つ以上のＰＥＧ部分は、独立して直鎖または分岐であってもよい。さらに、１つ以上のＰＥＧ部分は、独立してヒドロキシル基、メトキシ基（ｍＰＥＧ）または別のキャッピングされた基で終わってもよい。
【０１２７】
[00136]いくつかの実施形態において、１つ以上の合成重合体部分の個々の質量（例えば、平均分子量）、または総質量は、約１０〜５０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０もしくは４０〜５０ｋＤａ、または約１０、２０、３０、４０もしくは５０ｋＤａである。１つ以上の合成重合体部分の個々の質量（例えば、平均ＭＷ）、または総質量はまた、約５０〜１００、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０もしくは９０〜１００ｋＤａ、または約６０、７０、８０、９０もしくは１００ｋＤａなどの約５０ｋＤａ超であってもよい。さらに、個々の合成重合体部分の質量（例えば、平均ＭＷ）は、約１〜５もしくは５〜１０ｋＤａ、または約５ｋＤａなどの約１０ｋＤａ未満であってもよい。特定の実施形態において、１つ以上の合成重合体（例えば、ＰＥＧ）部分の個々の質量（例えば、平均ＭＷ）、または総質量は、約２０または４０ｋＤａである。修飾タンパク質の半減期は、合成重合体の長さに基づいて調整することができ、長い重合体は長い半減期を一般に付与する。
【０１２８】
[00137]１つ以上の合成重合体部分は、抗ＭＢＧ抗体フラグメント上の任意の適した位置または部位に連結されてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の合成重合体部分は、抗ＭＢＧ抗体フラグメントの重鎖または／および軽鎖のＮ末端、Ｃ末端または／および１つ以上の側鎖［例えば、接触可能なリジン側鎖アミノ基またはシステインチオール基］に、任意にリンカーを介して、化学的に結合させられる。
【０１２９】
[00138]いくつかの実施形態において、１つ以上の延長部分を含む抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、ＦｖまたはＦａｂである。特定の実施形態において、抗ＭＢＧ抗体フラグメントは、Ｆａｂ  ２Ａ−Ｆ８である。
【０１３０】
[00139]非限定例として、非ヒト（例えば、マウス）、ヒト化またはヒトＭＢＧ結合ＶＨまたはＶＬドメインは、ポリペプチド延長部分に組み換えで融合されてもよい。そのような抗ＭＢＧ  ＶＨまたはＶＬ・延長部分融合タンパク質は、単独で使用されてもよく、あるいは（例えば、ジスルフィド結合またはリンカーを介して）同じ延長部分、異なる延長部分または非延長化ポリペプチドに任意に融合されてもよい対応するＶＬまたはＶＨドメインに連結されてもよい（例えば、ＶＬ・延長部分に連結されたＶＨ・延長部分）。
【０１３１】
ＩＶ．医薬組成物
[00140]本開示のさらなる実施形態は、本明細書に記載されているキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント、あるいはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物、および１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む医薬組成物に関する。本組成物は、任意に追加の治療用薬剤を含んでもよい。一般に、医薬組成物は、治療有効量の抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体および任意に治療有効量の追加の治療用薬剤を含み、治療的使用のために対象への投与用に製剤化される。抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントはまた、イメージングのためなど診断的使用のために対象に投与されてもよい。
【０１３２】
[00141]医薬組成物は、一般に、例えば、連邦食品医薬品化粧品法§５０１（ａ）（２）（Ｂ）および規制調和国際会議Ｑ７ガイドラインによって推奨または要求される現在の適正製造基準（ＧＭＰ）に従って調製される。
【０１３３】
[00142]医薬組成物／製剤は、滅菌形態で調製することができる。例えば、注射または注入による非経口投与用の医薬組成物／製剤は、一般に滅菌される。滅菌医薬組成物／製剤は、米国薬局方７９７、１０７２および１２１１章ならびに連邦規則集２１章２１１条において開示されているか、またはそれによって要求されているものなどの当業者に既知の医薬品グレードの滅菌基準に従って調合または製造される。
【０１３４】
[00143]薬学的に許容される賦形剤および担体としては、薬学的に許容される物質、材料およびビヒクルが挙げられる。賦形剤のタイプの非限定例としては、液体および固体増量剤、希釈剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、界面活性剤、分散剤、崩壊剤、乳化剤、湿潤剤、懸濁化剤、増粘剤、溶媒、等張化剤、緩衝剤、ｐＨ調節剤、吸収遅延剤、安定剤、酸化防止剤、保存料、抗菌剤、抗細菌剤、抗真菌剤、キレート剤、アジュバント、甘味剤、香味料、着色剤、カプセル化材料ならびにコーティング材料が挙げられる。医薬製剤にそのような賦形剤を使用することは、当該技術分野において知られている。例えば、従来のビヒクルおよび担体としては、油（例えば、オリーブ油およびゴマ油などの植物油）、水性溶媒｛例えば、食塩水、緩衝食塩水（例えば、リン酸緩衝食塩水［ＰＢＳ］）および等張溶液（例えば、リンゲル液）｝、ならびに有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］およびアルコール［例えば、エタノール、グリセロールおよびプロピレングリコール］）が挙げられるが、これらに限定されない。任意の従来の賦形剤または担体が抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントと不適合でない限り、本開示は、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを含む製剤への従来の賦形剤および担体の使用を包含する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）（２００５年）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第５版、Ｒｏｗｅら編、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（２００５年）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ、第３版、ＡｓｈおよびＡｓｈ編、Ｇｏｗｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（２００７年）；ならびにＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ、Ｇｉｂｓｏｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ）（２００４年）を参照。
【０１３５】
[00144]適切な製剤は、選択される投与経路などのさまざまな要因により決まる場合がある。抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物の可能性のある投与の経路としては、経口、非経口（皮内、皮下、筋肉内、血管内、静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、髄腔内および局所を含む）、腔内、および局所（表皮／皮膚上、経皮、粘膜、経粘膜、鼻腔内［例えば、鼻腔スプレーまたは点鼻薬による］、眼内［例えば、点眼薬による］、肺［例えば、経口または経鼻吸入による］、頬側、舌下、直腸［例えば、座剤による］、および経膣［例えば、座剤による］を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。局所用製剤は、局所的または全身的な治療効果をもたらすよう設計することができる。特定の実施形態において、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、（例えば、急速投与として）注射によってまたはある期間にわたる注入によって非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内もしくは腹腔内）投与される。
【０１３６】
[00145]非経口製剤を調製するために使用することができる賦形剤および担体としては、溶媒（例えば、水性溶媒、例えば、水、食塩水、生理的食塩水、緩衝食塩水［例えば、リン酸緩衝食塩水］、平衡塩類溶液［例えば、リンゲルＢＳＳ］およびデキストロース水溶液）、等張化／等浸透圧化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ／ｉｓｏ−ｏｓｍｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）（例えば、塩［例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌおよびＣａＣｌ２］および糖［例えば、スクロース］）、緩衝剤およびｐＨ調節剤（例えば、リン酸二水素ナトリウム［一塩基性リン酸ナトリウム］／リン酸水素二ナトリウム［二塩基性リン酸ナトリウム］、クエン酸／クエン酸ナトリウムおよびＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ）、ならびに乳化剤（例えば、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート［例えば、ポリソルベート２０および８０］およびポロクサマー［例えば、ポロクサマー１８８］）が挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質製剤および送達系については、例えば、Ａ．  Ｊ．  Ｂａｎｇａ、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第３版、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ）（２０１５年）中で述べられている。
【０１３７】
[00146]賦形剤は、任意に、タンパク質の安定性を高めるか、タンパク質の溶解性を高めるか、タンパク質凝集を阻害するか、または溶液粘度を低下させる１つ以上の物質、またはそれらの任意の組み合わせもしくはすべてを含んでもよい。そのような物質の例としては、親水性アミノ酸（例えば、アルギニンおよびヒスチジン）、ポリオール（例えば、ミオイノシトール、マンニトールおよびソルビトール）、サッカライド｛例えば、グルコース（Ｄ−グルコース［デキストロース］を含む）、ラクトース、スクロースおよびトレハロース｝、オスモライト（例えば、トレハロース、タウリン、アミノ酸［例えば、グリシン、サルコシン、アラニン、プロリン、セリン、β−アラニンおよびγ−アミノ酪酸］、およびベタイン［例えば、トリメチルグリシンおよびトリメチルアミンＮ−オキシド］）、ならびに非イオン性界面活性剤｛例えば、アルキルポリグリコシド、ＰｒｏＴｅｋ（登録商標）アルキルサッカライド（例えば、長鎖脂肪酸または対応する長鎖アルコールと連結した単糖［例えば、グルコース］または二糖［例えば、マルトースもしくはスクロース］）、およびポリプロピレングリコール／ポリエチレングリコールブロック共重合体（例えば、ポロクサマー［例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−６８］、およびＧｅｎａｐｏｌ（登録商標）ＰＦ−１０およびそのバリアント）｝が挙げられるが、これらに限定されない。そのような物質は、タンパク質の溶解性を高めるため、製剤中のタンパク質濃度を高めるために使用されてもよい。製剤中のより高いタンパク質濃度は、急速投与の体積が制限される皮下投与に特に有利である（例えば、≦約１．５ｍＬ）。さらに、そのような物質は、凍結乾燥タンパク質の調製、保存および再構成の間にタンパク質を安定させるために使用されてもよい。
【０１３８】
[00147]非経口（例えば、静脈内、皮下または筋肉内）投与に関して、１つ以上の賦形剤を含む水性溶媒中の抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの滅菌溶液または懸濁液が予め調製されてもよく、例えば、プレフィルドシリンジとして提供されてもよい。あるいは、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、凍結乾燥（フリーズドライ）に先立って、任意に１つ以上の賦形剤を含んでもよい水性溶媒中に溶解または懸濁させられてもよい。適した容器（例えば、バイアル）において保管された凍結乾燥抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、非経口投与の直前に、例えば、任意に１つ以上の賦形剤を含んでもよい滅菌水を用いて再構成されてもよい。抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントが注入（例えば、静脈内）投与される場合、再構成された抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの溶液または懸濁液は、例えば、無菌食塩水（例えば、約０．９％ＮａＣｌ）が入った注入バッグに添加されて、そこで希釈されてもよい。
【０１３９】
[00148]より小さいタンパク質の経粘膜浸透を向上させる賦形剤としては、サイクロデキストリン、アルキルサッカライド（例えば、アルキルグリコシドおよびアルキルマルトシド［例えば、テトラデシルマルトシド］）、および胆汁酸（例えば、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、グリコデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびデヒドロコール酸）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４０】
[00149]より小さいタンパク質の経上皮または経皮浸透を向上させる賦形剤としては、化学的浸透促進剤（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）（ＣＰＥ、脂肪酸［例えば、オレイン酸］を含む）、細胞透過性ペプチド｛ＣＰＰ、アルギニンに富むＣＰＰを含む［例えば、ポリアルギニン、例えば、Ｒ６〜Ｒ１１（例えば、Ｒ６およびＲ９）およびＴＡＴ関連ＣＰＰ、例えば、ＴＡＴ（４９−５７）］および両親媒性ＣＰＰ［例えば、Ｐｅｐ−１およびペネトラチン］｝、および皮膚透過性ペプチド（ＳＰＰ、例えば、皮膚透過性および細胞侵入性［ＳＰＡＣＥ］ペプチド）が挙げられるが、これらに限定されない。より小さいタンパク質の経皮浸透は、物理的増強技術、例えば、イオン導入、キャビテーションまたは非キャビテーション超音波、エレクトロポレーション、熱焼灼、高周波、マイクロダーマブレージョン、マイクロニードルまたはジェット注射の使用によってさらに増強することができる。ＵＳ２００７／０２６９３７９は、ＣＰＥの広範囲な一覧を提供する。Ｆ．  Ｍｉｌｌｅｔｔｉ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｔｏｄａｙ、１７：８５０〜８６０ページ（２０１２年）は、ＣＰＰの概説である。Ｒ．  Ｒｕａｎら、Ｔｈｅｒ．  Ｄｅｌｉｖ．、７：８９〜１００ページ（２０１６年）は、巨大分子の経皮送達のためのＣＰＰおよびＳＰＰについて述べており、Ｍ．  ＰｒａｕｓｎｉｔｚおよびＲ．  Ｌａｎｇｅｒ、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２６：１２６１〜１２６８ページ（２００８年）は、さまざまな経皮薬物送達法について述べている。
【０１４１】
[00150]いくつかの実施形態において、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、持続放出組成物から送達される。本明細書中で使用される場合、「持続放出組成物」という用語は、持続放出、長時間放出、長期放出、徐放性および制御放出組成物、系およびデバイスを包含する。タンパク質送達系については、例えば、Ｂａｎｇａ（上記）において述べられている。持続放出組成物は、長期間にわたり治療有効量の抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを送達することができる。いくつかの実施形態において、持続放出組成物は、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを少なくとも約３日間、１週間、２週間、３週間、１か月間（４週間）、６週間、２か月間、３か月間またはそれ以上の期間にわたって送達する。持続放出組成物は、例えば、非経口（例えば、静脈内、皮下または筋肉内）投与されてもよい。
【０１４２】
[00151]タンパク質の持続放出組成物は、例えば、粒子系、脂質もしくは油性組成物、またはインプラントの形態であってもよい。粒子系としては、ナノ粒子、ナノスフェア、ナノカプセル、マイクロ粒子、マイクロスフェアおよびマイクロカプセルが挙げられるが、これらに限定されない。ナノ粒子系は、一般に約１μｍよりも小さい直径または同等の寸法を有する。特定の実施形態において、ナノ粒子、ナノスフェアまたはナノカプセルは、約５００、４００もしくは３００ｎｍを超えない、または約２００、１５０もしくは１００ｎｍを超えない直径または同等の寸法を有する。いくつかの実施形態において、マイクロ粒子、マイクロスフェアまたはマイクロカプセルは、約１〜２００、１００〜２００もしくは５０〜１５０μｍ、または約１〜１００、１〜５０もしくは５０〜１００μｍの直径または同等の寸法を有する。ナノまたはマイクロカプセルは、一般に中心コアに治療用薬剤を含むが、治療用薬剤は、一般にナノまたはマイクロ粒子またはスフェア全体に分散させられる。特定の実施形態において、ナノ粒子系は、静脈内投与されるが、マイクロ粒子系は、皮下または筋肉内投与される。
【０１４３】
[00152]いくつかの実施形態において、持続放出粒子系またはインプラントは、生分解性重合体または／およびハイドロゲル製である。特定の実施形態において、生分解性重合体は、乳酸または／およびグリコール酸［例えば、Ｌ−乳酸系共重合体、例えば、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）もしくはポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−２−ヒドロキシオクタン酸）］を含む。ハイドロゲルが構成され得る重合体の非限定例としては、ポリビニルアルコール、アクリラート重合体（例えば、ポリアクリル酸ナトリウム）、ならびに比較的多くの親水基（例えば、ヒドロキシルまたは／およびカルボキシラート基）を有するその他のホモ重合体および共重合体が挙げられる。粒子系またはインプラントの生分解性重合体は、処置の期間が終了することが予想される頃に重合体が実質的に完全に分解するよう、かつ重合体の分解副生成物が重合体のように生体適合性であるよう選択されてもよい。
【０１４４】
[00153]あるいは、タンパク質の持続放出組成物は、非生分解性重合体から構成されてもよい。非生分解性重合体の例としては、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー４０７）が挙げられるが、これに限定されない。タンパク質の持続放出組成物は、その他の天然または合成物質または材料、例えば、ヒドロキシアパタイトから構成されてもよい。
【０１４５】
[00154]タンパク質の持続放出脂質もしくは油性組成物は、例えば、リポソーム、ミセル（例えば、生分解性の天然または／および合成重合体から構成されるもの、例えば、ラクトソーム）、および油中のエマルジョンの形態であってもよい。
【０１４６】
[00155]持続放出組成物は、例えば、皮下または筋肉内に注射されるか、または埋め込まれてもよいデポーとして製剤化または設計されてもよい。デポーは、例えば、高分子粒子系、高分子インプラント、または脂質もしくは油性組成物の形態であってもよい。デポー製剤は、そのような混合物が粒子系またはインプラントを形成するか否かにかかわらず、生体適合性溶媒系中のタンパク質と、例えば、生分解性重合体［例えば、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）］または半生分解性重合体（例えば、乳酸とＰＥＧのブロック共重合体）の混合物を含んでもよい。
【０１４７】
[00156]医薬組成物は、単回投与として単位剤形で提示されてもよく、この場合、すべての活性および不活性成分は、適した系中で組み合わされ、構成成分は、投与される組成物を形成するために混合される必要はない。単位剤形は、一般に有効量の治療用薬剤を含む。単位剤形の代表的な例は、治療用薬剤の非経口（例えば、静脈内、皮下または筋肉内）注射用のプレフィルドシリンジ、針および針カバーを含む単回使用ペンである。
【０１４８】
[00157]あるいは、医薬組成物は、キットとして提示されてもよく、この場合、治療用薬剤、賦形剤および担体（例えば、溶媒）は、２つ以上の個別の容器（例えば、アンプル、バイアル、チューブ、ボトルまたはシリンジ）で提供され、投与される組成物を形成するために組み合わされる必要がある。キットは、組成物（例えば、静脈または皮下注射される溶液）の保管、調製および投与に関する説明書を含んでもよい。
【０１４９】
[00158]キットは、単位剤形ですべての活性および不活性成分、または２つ以上の個別の容器中の活性成分および不活性成分を含むことができ、医学的状態を処置するための医薬組成物の投与または使用に関する説明書を含んでもよい。
【０１５０】
[00159]いくつかの実施形態において、キットは、抗ＭＢＧ抗体もしくはそのフラグメントまたはそれを含む医薬組成物、およびＭＢＧ関連障害を処置するための抗ＭＢＧ抗体もしくはそのフラグメントまたはそれを含む医薬組成物の投与または使用に関する説明書を含む。
【０１５１】
Ｖ．抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントの治療的使用
[00160]上記の抗ＭＢＧ抗体は、ＭＢＧ関連疾患または症候群を患っている対象に投与されてもよい。対象がヒトである場合、抗ＭＢＧ抗体は、キメラマウス・ヒト抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であってもよい。そのようなキメラ、ヒト化およびヒト抗体は、上に記載されている。ＭＢＧ関連疾患および症候群としては、例えば、急性呼吸促迫症候群、外傷性脳損傷、高血圧（例えば、本態性高血圧症）、高血圧関連障害（例えば、妊娠高血圧腎症）、および線維化関連障害（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎、糖尿病性腎症）が挙げられる。ＭＢＧ関連疾患は、敗血症、外傷、ならびに重症の合併肺炎および熱傷のバックグラウンドを持つ重病患者も含む。
【０１５２】
[00161]上昇したレベルのマリノブファゲニン（ＭＢＧ）は、急性呼吸促迫症候群に苦しむ対象と関連づけられる。急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）は、年間１００，０００人あたり６４例の有病率および４０〜５２％の死亡率を有する命にかかわる障害である。急性呼吸促迫症候群のＭＢＧ関連の影響は、抗ＭＢＧ抗体を対象に投与することによって対処することができる。抗ＭＢＧ抗体は、対象からＭＢＧを除去し、その結果、ＭＢＧの上昇したレベルを低下させる。ＭＢＧレベルの低下は、高ＭＢＧからの有害な影響を低減するはずである。
【０１５３】
[00162]上昇したレベルのマリノブファゲニン（ＭＢＧ）は、外傷性脳損傷（例えば、脳振盪）を患っている対象と関連づけられる。ＭＢＧは、炎症を惹起するだけでなく、炎症反応も維持する。外傷性脳損傷は、血液脳関門の透過性の増加と関連づけられ、ＭＢＧがＢＢＢを通過し、中枢神経系に入ることができる。全身的またはＣＮＳへ直接的のいずれかの抗ＭＢＧ抗体の投与は、中枢神経系からＭＢＧを取り除くことによってＣＮＳにおけるＭＢＧを低下させる（およびより多くのＣＮＳ  ＭＢＧが血液に入るのを可能にすることによってＣＮＳ  ＭＢＧを低下させる）ことができるか、または抗体が関係するクリアランスによってＣＮＳにおけるＭＢＧを低下させることができる。ＭＢＧレベルの低下は、対象におけるＣＮＳ炎症を低減し、ＣＮＳにおけるその他のＭＢＧ関連の影響を低減することができる。
【０１５４】
[00163]原発性または突発性高血圧としても知られている本態性高血圧症は、高血圧患者の約９０〜９５％を冒す。本態性高血圧症は、主に血管収縮または容積増加に起因する（Ｌａｒａｇｈ、１９８２年）。容積増加は、ナトリウムの増加および水保持による血液中の流体の増加である。過剰な容積増加は、例えば、高ＮａＣｌ食摂取またはうっ血性心不全（ＣＨＦ）、腎不全もしくは肝不全などの障害がある患者においてナトリウム処理を損なうことが原因となる場合がある。マリノブファゲニン（ＭＢＧ）は、ジギタリスと同様の効果を有する強心ステロイド（ＣＴＳ）である。ＭＢＧは、血圧の重要な制御因子であり、高血圧および高血圧関連障害発病にかかわる。ＭＢＧは、強力な血管収縮薬である（Ｂａｇｒｏｖ、ＥＪＰ、１９９５年）。さらに、本態性高血圧症、原発性アルドステロン症、妊娠高血圧腎症（ＰＥ）、ＣＨＦおよび慢性腎不全などの容積増加関連状態においてを含む、容積増加は、ＭＢＧ合成および分泌を引き起こす（Ｂａｇｒｏｖ、２００９年）。ＭＢＧは、例えば、血管収縮および血管線維化の誘導による、妊娠高血圧腎症における原因要素である。正常な妊娠ラットへのＭＢＧの投与は、食塩水を飲み、アルドステロン前駆体酢酸デスオキシコルチコステロン（ＤＯＣＡ）を注射された妊娠ラット、ＰＥの容積増加ラットモデルにおいて観察されるものと同様の血圧の上昇を引き起こす（Ｖｕ、２００５年）。ＰＥ患者における血漿ＭＢＧレベルは、正常血圧の妊娠女性においてよりも５倍高く、血漿ＭＢＧレベルは、ＰＥ重症度と相関関係にある（Ｌｏｐａｔｉｎ、１９９９年およびＡｇｕｎａｎｎｅ、２０１１年）。さらに、血漿ＭＢＧレベルは、本態性高血圧症またはＣＨＦの患者において７倍上昇し、慢性腎不全の患者において７０倍を超えて上昇する（Ｐｕｓｃｈｅｔｔ、ＡＪＫＤ、２０１０年）。
【０１５５】
[00164]高い血漿ＭＢＧレベルは、妊娠高血圧腎症（Ｇｒａｖｅｓ、１９８７年）、うっ血性心不全（Ｓｃｈｗｉｎｇｅｒ、１９９９年）、心筋虚血／梗塞（Ｂａｇｒｏｖ、１９９１年）、糖尿病（１および２型を含む）（Ｂａｇｒｏｖ、２００５年）、および閉塞性睡眠時無呼吸（Ｂａｇｒｏｖ、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、１９９５年およびＰａｃｉ、２０００年）を含む、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ（ＮＫＡ）ポンプ活性の低下を特徴とするさまざまな障害と関連づけられる。
【０１５６】
[00165]ＭＢＧは、正常な胎盤発達に重要な栄養膜（ＣＴＢ）細胞の増殖、移動および浸潤を阻害する（ＬａＭａｒｃａ、２００６年およびＵｄｄｉｎ、Ｐｌａｃｅｎｔａ、２００８年）。すべての出産のうちの約７％において、ＰＥは、ＣＴＢ細胞が浸潤すべき子宮およびその血管系、特に、らせん動脈へのＣＴＢ細胞の浸潤の不全を特徴とする。これは、胎盤を通る胎児への血流の減少をもたらし、これが、子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）の原因となることがある。さらに、ＮＫＡとのＭＢＧの結合は、絨毛外ＣＴＢ細胞株においてｐ３８が関係するアポトーシスおよびストレスシグナル伝達を引き起こす（Ｅｈｒｉｇ、２０１５年）。さらに、ＭＢＧは、絨毛外ＣＴＢ細胞株において、ＭＡＰＫ  ｐ３８およびｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２−末端キナーゼ（Ｊｎｋ）が関係するアポトーシス、ならびにｐ３８が関係するＩＬ−６の産生および分泌（細胞増殖、細胞分化、アポトーシスおよび炎症に関係する）を誘導する（Ｕｄｄｉｎ、ＪＢＣ、２００８年）。
【０１５７】
[00166]さらに、ＭＢＧは、内皮細胞のアポトーシスを誘導し、内皮細胞間のタイトジャンクションを妨害することによって内皮機能不全を引き起こし、これが、ＰＥの血管透過性／漏出特性を高める（Ｕｄｄｉｎ、ＡＪＮ  ａｎｄ  ＡＪＰＲＩＣＰ、２００９年）。内皮機能不全ならびに血管炎症もまた、高血圧における末梢抵抗および血管損傷の増加の一因となる（Ｖｅｒｓａｒｉ、２００９年およびＭａｒｃｈｅｓｉ、２００８年）。
【０１５８】
[00167]ＮＫＡとのＭＢＧの結合は、ＥＧＦＲが関係する細胞シグナル伝達を刺激し、酸化ストレスおよび線維化をもたらす（Ｂａｇｒｏｖ、２００８年）。ＭＢＧは、尿毒性心筋症における心臓線維化を含む、腎臓および心血管組織において線維化を引き起こす（Ｋｅｎｎｅｄｙ、２００６年ならびにＥｌｋａｒｅｈ、２００７年および２００９年）。線維化は、一般に損傷または炎症に応じた修復または反応過程における臓器または組織での過剰な線維性結合組織の形成である。線維化は、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンを含む、結合組織にある刺激された線維芽細胞を伴う。エラスチンとともにコラーゲンは、結合組織における主要な線維性硬タンパク質である。転写因子Ｆｌｉ−１は、プロコラーゲンＩおよびＩＩＩの転写の負の制御因子（サプレッサー）であり、ＴＧＦ−β誘導コラーゲン合成を阻害する（Ｋｕｂｏ、２００３年およびＣｚｕｗａｒａ−Ｌａｄｙｋｏｗｓｋａ、２００１年）。低濃度のＭＢＧの線維芽細胞上のＮＫＡとの結合は、上記のとおりＰＬＣおよびその後、ＰＫＣ−δの活性化をもたらす。ＰＫＣ−δの活性化は、それの核への移行を誘導し、そこで、ＰＫＣ−δがＦｌｉ−１をリン酸化し、それによって、Ｆｌｉ−１がタンパク質分解を受けやすくする。リン酸化Ｆｌｉ−１のタンパク質分解は、プロコラーゲンＩおよびＩＩＩの発現ならびにコラーゲン合成、したがって、線維化の増加をもたらす（Ｅｌｋａｒｅｈ、２００９年）。Ｉ型コラーゲンは、人体の最も豊富なコラーゲンであり、コラーゲン繊維を形成し、瘢痕組織に存在する。ＩＩＩ型コラーゲンは、肺、皮膚および血管系などの伸展性の結合組織に存在し、Ｉ型コラーゲンと関連していることも多い。Ｆｌｉ−１は、限局性および全身性強皮症を含む、さまざまな線維性疾患の発病に関与し、この場合、Ｆｌｉ−１欠乏が、線維化皮膚および血管病変においてコラーゲンの産生を促進する（Ｋｕｂｏ、２００３年、およびＡｓａｎｏ、ＡＪＰ  ａｎｄ  ＪＤＳ、２０１０年）。
【０１５９】
[00168]ＭＢＧは、ＰＥにおいて血管線維化を引き起こし（Ｎｉｋｉｔｉｎａ、２０１１年）、動脈壁硬化は、妊娠高血圧腎症および慢性高血圧妊娠を特徴づける（Ｔｉｈｔｏｎｅｎ、２００６年およびＫａｉｈｕｒａ、２００９年）。ＰＥ患者の臍動脈は、Ｆｌｉ−１発現の低下、プロコラーゲンＩおよびＩＩＩの発現の増加、およびエンドセリン−１誘発血管収縮後のニトロプルシドナトリウムの血管弛緩効果に対する応答の低下を示し、正常な臍動脈外植片の１および１０ｎＭ  ＭＢＧによる２４時間のエクスビボ処理は、ＰＥの同じ特徴を模倣する（Ｎｉｋｉｔｉｎａ、２０１１年）。
【０１６０】
[00169]ＭＢＧは、腎上皮細胞における上皮間葉転換（ＥＭＴ）を誘導することによって部分的に、腎皮質における糸球体周囲および尿細管周囲の線維化ならびに腎臓の皮髄境界部における線維化瘢痕の形成を誘発する（Ｆｅｄｏｒｏｖａ、２００９年）。ナノモル以下の濃度のＭＢＧは、正常な腎臓および心臓線維芽細胞によるコラーゲン合成を強く刺激する（Ｅｌｋａｒｅｈ、２００９年および２００７年）。ＮＫＡは、Ｓｒｃキナーゼと結合し、ＭＢＧなどのＣＴＳの腎臓および心血管細胞上のＮＫＡとの結合に応じてシグナル伝達複合体として働く（Ｔｉａｎ、２００６年）。Ｓｒｃの活性化が、線維芽細胞によるコラーゲン合成の誘導に必要とされる（Ｅｌｋａｒｅｈ、２００７年）。
【０１６１】
[00170]線維化は、冒された臓器（例えば、心臓もしくは腎臓）または組織（例えば、血管系もしくは腎尿細管系）の構造および機能を損なう。ＤＮに関して、ＭＢＧは、腎線維芽細胞および腎上皮細胞（腎尿細管系のそれらを含む）上のＮＫＡと結合し、ＭＢＧは低濃度でＮＫＡ／Ｓｒｃが開始するシグナルカスケードを誘導し、これが、ＮＫＡポンプ活性を阻害することなく、コラーゲン産生および線維化につながる。ＭＢＧは、腎線維芽細胞および腎上皮細胞（腎尿細管系のそれらを含む）を含む、腎臓における主なアイソフォームであるＮＫＡのα１アイソフォームと選択的に結合する（Ｂａｇｒｏｖ、２００９年）。ＮＫＡ／Ｓｒｃシグナル伝達複合体のＭＢＧ活性化は、腎線維芽細胞によるコラーゲン産生および上記のとおりＦｌｉ−１のＰＫＣ−δリン酸化によるプロコラーゲンＩおよびＩＩＩの発現のサプレッサーである転写因子Ｆｌｉ−１のタンパク質分解の促進による線維化につながる。さらに、ＭＢＧは、近位尿細管を含む、腎尿細管系の上皮細胞において、ＥＭＴを誘導することによって線維化変化を引き起こす（Ｆｅｄｏｒｏｖａ、２００９年）。
【０１６２】
[00171]線維化は、多種多様な障害と関連づけられる。線維化が起こる障害の例としては、妊娠高血圧腎症、心筋症（例えば、糖尿病性心筋症および尿毒性心筋症）、心臓線維化、心筋線維化、膠原病性脈管疾患（例えば、動脈壁硬化および血管線維化）、アテローム動脈硬化症、慢性心不全、糖尿病性腎症、糸球体硬化、腎線維化、尿細管間質線維化、慢性腎疾患（例えば、慢性腎不全）、肝臓線維化、硬変、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝炎）、アルコール性肝疾患（例えば、アルコール性脂肪肝炎）、慢性肝疾患、肝不全（例えば、硬変および慢性肝不全）、肺線維化、腎性全身性線維症（皮膚ならびに心臓、肝臓および肺などの内臓器官を冒すこともある）、および強皮症（限局性強皮症および全身性強皮症／全身性硬化症［皮膚、血管、筋肉、ならびに心臓、腎臓、肺、および胃腸管などの内臓器官を冒すこともある］を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６３】
[00172]高血圧はまた、広い範囲の障害（例えば、臨床的特徴もしくは合併症である）を特徴づけるか、またはその重大なリスク因子である（例えば、それを引き起こすか、もしくはその一因となる）。高血圧が関連する障害の非限定例としては、妊娠高血圧腎症、子癇、浮腫（例えば、全身性浮腫、末梢性浮腫、肺水腫および脳浮腫）、心血管疾患｛例えば、高血圧性心疾患、線維化障害（例えば、心筋症［例えば、糖尿病性心筋症および尿毒性心筋症］、心筋線維化および膠原病性脈管疾患［例えば、動脈壁硬化］）、動脈硬化症（例えば、アテローム動脈硬化症および細動脈硬化症）、心不全（例えば、うっ血性心不全、左心不全および右心不全）、冠動脈疾患（例えば、心筋虚血／梗塞）、大動脈解離、末梢血管疾患（例えば、末梢動脈疾患）、および卒中｝、腎障害（例えば、高血圧性腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、腎虚血、ネフローゼ症候群、腎不全［例えば、急性腎臓傷害および慢性腎疾患］、血尿、タンパク尿および尿毒症）、肝不全（例えば、硬変）、大脳障害（例えば、高血圧性脳症、脳出血、頭蓋内出血、頭蓋内圧亢進、脳卒中［例えば、虚血性脳卒中および出血性卒中］、および脳梗塞）、眼障害（例えば、網膜症［例えば、高血圧性網膜症］、眼の血管の損傷、うっ血乳頭、網膜出血および視力喪失）、（例えば、細動脈の）フィブリノイド壊死、メタボリックシンドローム、糖尿病（例えば、２型）、および睡眠時無呼吸（例えば、閉塞性睡眠時無呼吸）が挙げられる。
【０１６４】
[00173]本明細書に記載されているキメラ、ヒト化およびヒト抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントは、任意のＭＢＧ関連障害を処置するために使用することができる。特定の実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８である。いくつかの実施形態において、障害は、血液、尿または脳脊髄液（ＣＳＦ）中などのＭＢＧの上昇したレベルと関連づけられる。ＭＢＧ関連障害の非限定例としては、高血圧（例えば、本態性［原発性または突発性］高血圧、二次性高血圧［例えば、腎血管性高血圧、門脈圧亢進または肺高血圧］、容積増加関連高血圧、抵抗性高血圧および高血圧性緊急症［悪性高血圧症］）、妊娠の高血圧障害（例えば、慢性高血圧、妊娠高血圧腎症、子癇および妊娠高血圧症）、浮腫（例えば、全身性浮腫および末梢性浮腫）、心血管障害｛例えば、高血圧性心疾患、線維化障害（例えば、心筋症［例えば、糖尿病性心筋症および尿毒性心筋症］、心臓線維化、心筋線維化［例えば、心内膜心筋線維症］および膠原病性脈管疾患［例えば、動脈壁硬化および血管線維化］）、動脈硬化症（例えば、アテローム動脈硬化症および細動脈硬化症）、心不全（例えば、急性心不全、慢性心不全、うっ血性心不全、左心不全／左室機能不全、および右心不全）、冠動脈疾患（例えば、アンギナおよび心筋虚血／梗塞）、大動脈解離、末梢血管疾患（例えば、末梢動脈疾患）、および脳卒中｝、腎臓／腎障害｛例えば、高血圧性腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、糸球体硬化、腎線維化、尿細管間質線維化、腎虚血、ネフローゼ症候群、腎不全（例えば、急性腎臓傷害、急性増悪した腎不全、および慢性腎疾患［例えば、慢性腎不全および末期腎疾患］）、血尿、タンパク尿および尿毒症｝、肝障害｛例えば、肝臓線維化、硬変、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝炎）、アルコール性肝疾患（例えば、アルコール性脂肪肝炎）、慢性肝疾患、および肝不全（例えば、硬変および慢性肝不全）｝、肺障害（例えば、肺水腫および肺線維化［例えば、特発性肺線維症］）、大脳障害（例えば、高血圧性脳症、脳出血、頭蓋内出血、脳浮腫、頭蓋内圧亢進、脳腫脹、脳卒中［例えば、虚血性脳卒中および出血性卒中］、および脳梗塞）、眼障害（例えば、網膜症［例えば、高血圧性網膜症］、眼の血管の損傷、うっ血乳頭［視神経乳頭浮腫］、網膜出血、および視力障害および喪失）、皮膚障害（例えば、腎性全身性線維症［心臓、肝臓および肺などの内臓器官も冒すこともある］および強皮症［限局性強皮症および全身性強皮症／全身性硬化症を含む［血管、筋肉ならびに心臓、腎臓、肺、および胃腸管などの内臓器官も冒すこともある）、（例えば、細動脈の）フィブリノイド壊死、メタボリックシンドローム、真性糖尿病（１および２型を含む）、ならびに睡眠時無呼吸（例えば、閉塞性睡眠時無呼吸）が挙げられる。
【０１６５】
[00174]いくつかの実施形態において、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、高血圧障害を処置するために使用される。特定の実施形態において、高血圧は、高い動脈圧を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、高血圧障害は、高血圧（例えば、本態性高血圧症、容積増加関連高血圧もしくは抵抗性高血圧）、妊娠の高血圧障害（例えば、慢性高血圧もしくは妊娠高血圧腎症）、またはその他の高血圧関連障害｛例えば、心血管障害（例えば、高血圧性心疾患、心不全［例えば、うっ血性心不全］または冠動脈疾患［例えば、心筋虚血／梗塞］）または腎臓障害（例えば、高血圧性腎症、糖尿病性腎症もしくは腎不全［例えば、慢性腎疾患］）｝である。特定の実施形態において、高血圧障害は、本態性高血圧症、妊娠高血圧腎症、うっ血性心不全または慢性腎疾患である。
【０１６６】
[00175]さらに別の実施形態において、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、線維化障害を処置するために使用される。いくつかの実施形態において、線維化障害は、妊娠高血圧腎症、心筋症（例えば、糖尿病性心筋症もしくは尿毒性心筋症）、心臓線維化、心筋線維化、膠原病性脈管疾患（例えば、動脈壁硬化もしくは血管線維化）、アテローム動脈硬化症、慢性心不全、糖尿病性腎症、腎線維化、慢性腎疾患（例えば、慢性腎不全）、肝臓線維化、硬変、非アルコール性脂肪肝炎、慢性肝疾患、肝不全（例えば、慢性肝不全）、または強皮症（例えば、限局性強皮症もしくは全身性強皮症／全身性硬化症）である。特定の実施形態において、線維化障害は、尿毒性心筋症、心筋線維化、糖尿病性腎症、腎線維化または硬変である。
【０１６７】
[00176]キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、任意の適した経路により対象に投与されてもよい。抗体またはそのフラグメントの可能性のある投与経路としては、経口、非経口（皮内、皮下、筋肉内、血管内、静脈内、動脈内および腹腔を含む）、ならびに腔内が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、注射または注入（例えば、浸透圧ポンプによる）によって、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内または腹腔内）投与される。抗体またはそのフラグメントは、部分的に障害の種類によりその他の経路によって投与されてもよい。例えば、抗体またはそのフラグメントは、例えば、肺障害を処置するために、例えば、定量吸入器、ドライパウダー吸入器またはネブライザーを使用した経口吸入をすることによって投与されてもよい。別の例として、抗体またはそのフラグメントは、例えば、大脳障害を処置するために、髄内、髄腔内、頭蓋内、脳内または脳室内注射によって投与されてもよい。さらなる例として、抗体またはそのフラグメントは、例えば、眼障害を処置するために、硝子体内、結膜下、網膜下もしくはテノン嚢下注射（ｓｕｂ−Ｔｅｎｏｎ’ｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）またはインプラントによって投与されてもよい。あるいは、抗体またはそのフラグメントは、眼障害を処置するために点眼薬によって局所投与されてもよく、この場合、抗体またはそのフラグメントの後眼部または／および前眼部への浸透は、アルギニンが豊富なＣＰＰ［例えば、ポリアルギニン、例えば、Ｒ６〜Ｒ１１（例えば、Ｒ６もしくはＲ９）またはＴＡＴ関連ＣＰＰ、例えば、ＴＡＴ（４９−５７）］または両親媒性ＣＰＰ（例えば、Ｐｅｐ−１もしくはペネトラチン）などの細胞透過ペプチド（ＣＰＰ）の同時投与によって向上させることができる。さらなる例として、抗体またはそのフラグメントは、例えば、皮膚障害を処置するために経皮投与されてもよく、この場合、抗体またはそのフラグメントの皮膚への浸透および皮膚を通る浸透は、化学的浸透促進剤（ＣＰＥ）（例えば、オレイン酸などの脂肪酸）、ＣＰＰ（例えば、アルギニンが豊富なＣＰＰ、例えば、ポリアルギニンもしくはＴＡＴ関連ＣＰＰ）または皮膚透過性ペプチド（ＳＰＰ）（例えば、皮膚透過性および細胞侵入性［ＳＰＡＣＥ］ペプチド）、あるいはそれらの任意の組み合わせもしくはすべての同時投与によって、または／およびイオン導入、キャビテーションまたは非キャビテーション超音波、エレクトロポレーション、熱焼灼、高周波、マイクロダーマブレージョン、マイクロニードルもしくはジェット注射などの物理的増強技術の使用によって増強することができる。
【０１６８】
[00177]ＭＢＧ関連障害を処置するためのキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの投与の治療有効量および頻度、ならびにそれによる処置の長さは、障害の性質および重症度、抗体またはそのフラグメントの効力、投与様式、対象の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事、ならびに処置に対する対象の応答を含む、さまざまな要因によって左右される場合もあり、治療医師によって決定されてもよい。いくつかの実施形態において、ＭＢＧ関連障害の処置のための抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）の治療有効量は、約１、５もしくは１０ｍｇから約２００ｍｇ、約１、５もしくは１０ｍｇから約１５０ｍｇ、約１、５もしくは１０ｍｇから約１００ｍｇ、または約１、５もしくは１０ｍｇから約５０ｍｇ、あるいは治療医師によって適切だと考えられるとおりであり、単回用量または分割用量で投与されてもよい。さらに別の実施形態において、抗体またはそのフラグメントの治療有効量は、約１〜５ｍｇ、５〜１０ｍｇ、１０〜２０ｍｇ、２０〜３０ｍｇ、３０〜４０ｍｇ、４０〜５０ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、１００〜１５０ｍｇまたは１５０〜２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントの治療有効量は、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０または２００ｍｇである。特定の実施形態において、抗体またはそのフラグメントの治療有効量は、約１〜５ｍｇ、５〜１０ｍｇまたは１０〜５０ｍｇである。別の実施形態において、ＭＢＧ関連障害の処置のための抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）の治療有効量は、約０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ、１〜２ｍｇ／ｋｇもしくは２〜３ｍｇ／ｋｇ体重、または治療医師によって適切だと考えられるとおりである。特定の実施形態において、抗体またはそのフラグメントの治療有効量は、約０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１〜０．５ｍｇ／ｋｇまたは０．５〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。
【０１６９】
[00178]キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、ＭＢＧ関連障害を処置するのに適した任意の頻度で投与されてもよい。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、１日に１回、２日に１回、３日に１回、週に２回、週に１回、２週に１回、３週に１回、月に１回、６週に１回、２か月に１回もしくは３か月に１回、または治療医師によって適切だと考えられるとおり投与される。特定の実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、週に１回または２週に１回投与される。
【０１７０】
[00179]同様に、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、ＭＢＧ関連障害を処置するために、任意の適した時間の長さ、または任意の適した合計数の用量で投与されてもよい。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、少なくとも約１週間、２週間、１か月（４週間）、６週間、２か月間、３か月間、６か月間、１年間、２年間、３年間以上の期間にわたり、または治療医師によって適切だと考えられるとおり投与される。いくつかの実施形態において、ＭＢＧ関連障害は、慢性状態である。慢性状態は、例えば、少なくとも約６週間または２か月間存在することがある。特定の実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、少なくとも約６週間、２か月間、３か月間または６か月間の期間にわたり投与される。別の実施形態において、１、２、３、４、５または６用量の抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）が処置計画の全体の間に投与される。特定の実施形態において、１、２または３用量の抗体またはそのフラグメントが、処置計画の全体の間に投与される。
【０１７１】
[00180]キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）はまた、ＭＢＧ関連障害を処置するために不規則な様式で投与されてもよい。例えば、抗体またはそのフラグメントは、１週間、２週間、３週間、１か月間、２か月間または３か月間の期間に１、２、３、４、５回以上、不規則な様式で投与されてもよい。さらに、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、ＭＢＧ関連障害の処置のために臨機応変に（必要に応じて）使用されてもよい。例えば、抗体またはそのフラグメントは、規則的または不規則な様式にかかわらず、高血圧の処置のために、血圧が特定のレベルに低下するまで１、２、３、４、５回以上投与されてもよい。血圧が特定のレベルに低下したら、抗体またはそのフラグメントの投薬は、任意に中止されてもよい。血圧が特定のレベルに到達するか、またはそれを超えた場合、規則的または不規則な様式にかかわらず、抗体またはそのフラグメントの投与が再開されてもよい。抗体またはそのフラグメントの適切な投与量、投薬の頻度およびそれによる処置の長さは、治療医師によって決定されてもよい。
【０１７２】
[00181]キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの治療レベルをより迅速に確立するために、少なくとも１つの負荷量の抗体またはそのフラグメントが、維持量に先立って投与されてもよい。いくつかの実施形態において、治療医師によって適切だと考えられるとおり、抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）の負荷量、続いて（ｉ）１つ以上のさらなる負荷量およびその後、１つ以上の治療有効維持量が投与されるか、または（ｉｉ）さらなる負荷量なしに１つ以上の治療有効維持量が投与される。薬物の負荷量は、一般にそれに続く維持量よりも多く（例えば、約１．５、２、３、４または５倍多い）、より迅速に薬物の治療レベルを確立するよう設計される。１つ以上の治療有効維持量は、本明細書に記載されているいずれの治療有効量であってもよい。特定の実施形態において、負荷量は、維持量よりも約２または３倍多い。いくつかの実施形態において、負荷量の抗体またはそのフラグメントが１日目に投与され、その後、例えば、週に１回または２週に１回、処置の期間の間、維持量の抗体またはそのフラグメントが投与される。特定の実施形態において、抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、１日目に約２〜１０ｍｇ、１０〜２０ｍｇもしくは２０〜１００ｍｇ、または約３〜１５ｍｇ、１５〜３０ｍｇもしくは３０〜１５０ｍｇの負荷量で、続いて処置の期間（例えば、少なくとも約２、３または６か月間）の間、週に１回または２週に１回、約１〜５ｍｇ、５〜１０ｍｇまたは１０〜５０ｍｇの維持量で投与され、この場合、負荷量は、維持量よりも約２または３倍多く、抗体またはそのフラグメントは、非経口（例えば、静脈内、皮下または筋肉内）投与される。
【０１７３】
[00182]いくつかの実施形態において、維持量に先立って２つの負荷量の抗体またはそのフラグメントが投与される。いくつかの実施形態において、第１の負荷量の抗体またはそのフラグメントが１日目に投与され、例えば、約１または２週間後に第２の負荷量が投与され、その後、処置の期間の間、例えば、週に１回または２週に１回、維持量が投与される。特定の実施形態において、第１の負荷量は、維持量よりも約３または４倍多く、第２の負荷量は、維持量よりも約２倍多い。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、１日目に約３〜１５ｍｇ、１５〜３０ｍｇもしくは３０〜１５０ｍｇ、または約４〜２０ｍｇ、２０〜４０ｍｇもしくは４０〜２００ｍｇの第１の負荷量で、約１または２週間後に約２〜１０ｍｇ、１０〜２０ｍｇまたは２０〜１００ｍｇの第２の負荷量で、続いて処置の期間（例えば、少なくとも約２、３または６か月間）の間、週に１回または２週に１回、約１〜５ｍｇ、５〜１０ｍｇまたは１０〜５０ｍｇの維持量で投与され、この場合、第１の負荷量は、維持量よりも約３または４倍多く、第２の負荷量は、維持量よりも約２倍多く、抗体またはそのフラグメントは、非経口（例えば、静脈内、皮下または筋肉内）投与される。
【０１７４】
[00183]いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の治療用薬剤は、下に記載されるとおり、ＭＢＧ関連障害を処置するために、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と組み合わせて使用される。
【０１７５】
[00184]本開示は、ＭＢＧ関連障害を処置する方法であって、処置を必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載されているキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを、任意に追加の治療用薬剤と組み合わせて投与するステップを含む、方法を提供する。本開示は、本明細書に記載されているキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント、あるいは医薬として使用するための、任意に追加の治療用薬剤と組み合わせた、本明細書に記載されているキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを含む組成物をさらに提供する。さらに、本開示は、任意に追加の治療用薬剤と組み合わせた、医薬の調製における本明細書に記載されているキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの使用を提供する。いくつかの実施形態において、医薬は、ＭＢＧ関連障害の処置のために使用される。
【０１７６】
ＶＩ．追加の治療用薬剤との併用療法
[00185]１つ以上の追加の治療用薬剤が、ＭＢＧ関連障害を処置するために、任意にキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と組み合わせて使用されてもよい。任意の追加の治療用薬剤は、対象に、抗体またはそのフラグメントの投与と同時に（例えば、抗体もしくはそのフラグメントと同じ組成物としてまたは別々の組成物として）あるいは抗体またはそのフラグメントの投与（前もしくは後）と連続的に投与されてもよい。
【０１７７】
[00186]いくつかの実施形態において、任意の追加の治療用薬剤は、ＭＢＧ阻害剤、硫酸マグネシウム、降圧剤、抗脂質異常症薬（ａｎｔｉｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ａｇｅｎｔ）、抗血小板薬、抗凝固剤、抗炎症剤、酸化防止剤、抗線維化薬（ａｎｔｉｆｉｂｒｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、およびそれらの組み合わせから選択される。
【０１７８】
[00187]ＭＢＧ阻害剤の例としては、レジブホゲニン（ＲＢＧ）、スピロノラクトン、カンレノン、ならびにその類似体、誘導体および塩が挙げられるが、これらに限定されない。スピロノラクトンは、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰアーゼＣＴＳ−結合部位の競合的アンタゴニストである。カンレノンは、スピロノラクトンの主要な代謝産物である。
【０１７９】
[00188]硫酸マグネシウムは、降圧効果を有することがあり、抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントの活性を増強することができる。マグネシウムも用量依存的な様式で高血圧を低下させる。
【０１８０】
[00189]いくつかの実施形態において、１つ以上の降圧剤は、高血圧または高血圧関連障害を処置するためにキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と組み合わせて使用される。降圧剤としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ＭＢＧ阻害剤、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系（ＲＡＡＳ）のアンタゴニスト、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬、α２−アドレナリンレセプターアゴニスト、α１−アドレナリンレセプターアンタゴニスト（アルファ遮断薬）、β−アドレナリンレセプター（β１または／およびβ２）アンタゴニスト（ベータ遮断薬）、混合型アルファ／ベータ遮断薬、血管拡張剤、エンドセリンレセプターアンタゴニスト、プロテインキナーゼＣ阻害剤（ＰＫＣは、ＶＳＭＣに対して血管収縮効果を発揮する）、糖化最終産物（ＡＧＥ、これは、一酸化窒素を妨げることによって血管拡張を阻害する）の蓄積または効果の阻害剤、無機物、ならびにその類似体、誘導体および塩。
【０１８１】
[00190]さらに別の実施形態において、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）は、心血管または脳血管障害を処置するために、抗脂質異常症薬、抗血小板薬もしくは抗凝固剤、またはそれらの任意の組み合わせもしくはすべてと併せて使用される。特定の実施形態において、抗脂質異常症薬は、スタチン（例えば、アトルバスタチンもしくはその塩）または／およびフィブラート（例えば、フェノフィブラート）を含むか、あるいはそれであり、抗血小板薬は、ＣＯＸ−１阻害剤（例えば、アスピリン）または／およびＰ２Ｙ１２阻害剤（例えば、クロピドグレル）を含むか、あるいはそれであり、抗凝固剤は、直接第Ｘａ因子阻害剤（例えば、アピキサバンもしくはリバーロキサバン）または／および直接トロンビン阻害剤（例えば、ダビガトラン）を含むか、あるいはそれである。さらに、抗脂質異常症薬（例えば、アトルバスタチンなどのスタチンまたはその塩）は、肥満関連障害（例えば、メタボリックシンドロームまたは２型糖尿病）を処置するために、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と組み合わせて使用されてもよい。スタチンはまた、抗炎症性特性（例えば、炎症促進性ＩＬ−６およびＩＬ−８の分泌を阻害する）および抗酸化作用特性（例えば、酸化ストレス誘発性細胞損傷を低減する）も持つ。
【０１８２】
[00191]抗脂質異常症薬としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ペルオキシソーム増殖剤活性化レセプター・アルファ（ＰＰＡＲ−α）アゴニスト、ＰＰＡＲ−δアゴニスト、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、肝臓Ｘレセプター（ＬＸＲ）アゴニスト、レチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）アゴニスト、アシルＣｏＡコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ、ステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ［ＳＯＡＴ］とも呼ばれる、ＡＣＡＴ１［ＳＯＡＴ１］およびＡＣＡＴ２［ＳＯＡＴ２］を含む）の阻害剤、ステアロイル−ＣｏＡデサチュラーゼ−１（ＳＣＤ−１、ステアロイル−ＣｏＡデルタ−９デサチュラーゼとも呼ばれる）活性または発現の阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＴＰ）活性または発現の阻害剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）レセプターアゴニスト、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ−４）阻害剤、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）活性または発現の阻害剤、アポリポタンパク質模倣ペプチド、オメガ−３脂肪酸、ならびにその類似体、誘導体および塩。
【０１８３】
[00192]抗血小板薬としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：シクロオキシゲナーゼ（例えば、ＣＯＸ−１）阻害剤、トロンボキサン（例えば、Ａ２）シンターゼ阻害剤、トロンボキサン（例えば、Ａ２）レセプターアンタゴニスト、二リン酸アデノシン（ＡＤＰ）レセプター／Ｐ２Ｙ１２阻害剤、アデノシン再取り込み阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤、ホスホジエステラーゼ（例えば、ＰＤＥ３または／およびＰＤＥ５）阻害剤、プロテアーゼ活性化レセプター１（ＰＡＲ１）アンタゴニスト、プロスタサイクリンおよびその類似体、ならびにその類似体、誘導体および塩。
【０１８４】
[00193]抗凝固剤としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ビタミンＫアンタゴニスト、間接第Ｘａ因子阻害剤、直接第Ｘａ因子阻害剤、直接トロンビン（第ＩＩａ因子）阻害剤（ＤＴＩ）、ならびにその類似体、誘導体および塩。
【０１８５】
[00194]炎症は、広い範囲の障害の病態生理の一因となる。炎症性障害としては、自己免疫疾患（例えば、１型糖尿病、多発性硬化症および全身性硬化症）、高血圧、妊娠高血圧腎症、浮腫、心血管障害（例えば、アテローム動脈硬化症、心筋虚血／梗塞、虚血再灌流障害［ＩＲＩ］および末梢動脈疾患）、大脳障害（例えば、脳卒中およびＩＲＩ）、腎障害（例えば、糸球体腎炎）、肝障害（例えば、硬変、非アルコール性およびアルコール性脂肪肝炎、および慢性肝疾患）、眼障害（例えば、加齢黄斑変性［ＡＭＤ］）、メタボリックシンドローム、糖尿病（１および２型）、および睡眠時無呼吸（例えば、閉塞性睡眠時無呼吸）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、炎症は、線維化の重要な刺激物質である。
【０１８６】
[00195]いくつかの実施形態において、１つ以上の抗炎症剤は、炎症性障害を処置するために、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と組み合わせて使用される。特定の実施形態において、１つ以上の抗炎症剤は、炎症性サイトカインもしくはそのレセプターまたはその産生（例えば、ＴＮＦ−αまたは／およびＩＬ−６もしくはＩＬ−６Ｒ）の阻害剤を含むか、またはそれである。
【０１８７】
[00196]抗炎症剤としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：非ステロイド系抗炎症性薬（ＮＳＡＩＤ）、免疫調節物質、免疫抑制剤、抗炎症性サイトカインおよびそれらの産生を増加させる化合物、炎症性サイトカインまたはそのレセプターの阻害剤、炎症性サイトカインまたはそのレセプターの産生の阻害剤、炎症促進性転写因子もしくはそれらの活性化または発現の阻害剤、炎症促進性プロスタグランジン（例えば、プロスタグランジンＥ２［ＰＧＥ２］）もしくはそのレセプター（例えば、ＥＰ３）またはその産生の阻害剤、ロイコトリエンもしくはそのレセプターまたはその産生の阻害剤、ホスホリパーゼＡ２（例えば、分泌および細胞質ＰＬＡ２）の阻害剤、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）活性またはレベルの抑制因子、肥満細胞安定化薬、ホスホジエステラーゼ阻害剤、特異的炎症収束性メディエーター（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ  ｐｒｏ−ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  ｍｅｄｉａｔｏｒ）（ＳＰＭ）、その他の種類の抗炎症剤、ならびにその類似体、誘導体、フラグメントおよび塩。
【０１８８】
[00197]非ステロイド系抗炎症性薬（ＮＳＡＩＤ）としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：酢酸誘導体、アントラニル酸誘導体（フェナマート）、エノール酸誘導体（オキシカム）、プロピオン酸誘導体、サリチラート、ＣＯＸ−２−選択的阻害剤、その他の種類のＮＳＡＩＤ、例えば、モノテルペノイド（例えば、ユーカリプトールおよびフェノール［例えば、カルバクロール］）、アニリノピリジンカルボン酸（例えば、クロニキシン）、スルホンアニリド（例えば、ニメスリド）、およびリポキシゲナーゼ（例えば、５−ＬＯＸ）とシクロオキシゲナーゼ（例えば、ＣＯＸ−２）（例えば、ケブラギン酸、リコフェロン、２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−４−（Ｎ−メチルインドール−３−イル）チオフェン、およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール系化合物［例えば、ＤＴＰＢＨＺ、ＤＴＰＩＮＨ、ＤＴＰＮＨＺおよびＤＴＰＳＡＬ］）の二重阻害剤；ならびにその類似体、誘導体および塩。
【０１８９】
[00198]副腎皮質ステロイド薬のグルココルチコイドクラスは、抗炎症特性および免疫抑制特性を有する。グルココルチコイドとしては、ヒドロコルチゾン型、ハロゲン化ステロイド、カーボネート、ならびにその類似体、誘導体および塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
[00199]例えば、反応性酸素種（ＲＯＳ、例えば、スーパーオキシドラジカル、一重項酸素、ヒドロキシルラジカル、ペルオキシルラジカル、過酸化水素および有機ヒドロペルオキシド［例えば、脂質ヒドロペルオキシド］）、反応性窒素種（ＲＮＳ、例えば、一酸化窒素ラジカル、ペルオキシナイトライト、窒素ジオキシドおよび三酸化二窒素）およびラジカル（例えば、炭酸ラジカル）を含む酸化ストレスも、多種多様な障害の病態生理に重要な役割を果たす。例えば、酸化ストレスまたは／および酸化ダメージ／損傷によって特徴づけられる酸化障害としては、妊娠高血圧腎症、心血管障害（例えば、アテローム動脈硬化症、心不全、心筋虚血／梗塞およびＩＲＩ）、大脳障害（例えば、脳卒中およびＩＲＩ）、神経変性疾患（例えば、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症およびアルツハイマー病、ハンチントン病およびパーキンソン病）、腎障害（例えば、糖尿病性腎症）、肝障害（例えば、硬変）、眼障害（例えば、ＡＭＤ）、メタボリックシンドローム、糖尿病（１および２型）、および睡眠時無呼吸（例えば、閉塞性睡眠時無呼吸）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、酸化体（例えば、ＲＯＳおよびＲＮＳ）および酸化分子（例えば、酸化脂質）は、極めて炎症性である場合がある。
【０１９１】
[00200]いくつかの実施形態において、１つ以上の酸化防止剤は、酸化障害を処置するために、キメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と併せて使用される。特定の実施形態において、１つ以上の酸化防止剤は、ビタミンまたはその類似体（例えば、ビタミンＥまたはその類似体、例えば、α−トコフェロールもしくはトロロクス）または／およびＲＯＳ、ＲＮＳもしくはラジカル捕捉剤（例えば、メラトニンまたは／およびグルタチオン）を含むか、またはそれである。
【０１９２】
[00201]酸化防止剤としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ビタミンおよびその類似体、カロテノイド、硫黄含有酸化防止剤、ＲＯＳ、ＲＮＳおよびラジカルの捕捉剤、ＲＯＳを生成する酵素の阻害剤、抗酸化酵素の活性または産生を模倣するか、または高める物質、抗酸化酵素の発現をアップレギュレートする転写因子の活性化物質、ミトコンドリア標的酸化防止剤、その他の種類の酸化防止剤、ならびにその類似体、誘導体および塩。
【０１９３】
[00202]別の実施形態において、１つ以上の抗線維化薬は、線維化関連障害を処置するためにキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の抗線維化薬は、抗炎症剤または／および酸化防止剤（例えば、ビタミンＥまたはその類似体［例えば、α−トコフェロールもしくはトロロクス］、硫黄含有酸化防止剤またはＲＯＳ、ＲＮＳもしくはラジカル捕捉剤［例えば、メラトニン］、あるいはそれらの任意の組み合わせ）を含むか、またはそれである。特定の実施形態において、１つ以上の抗線維化薬は、（本明細書に記載されているそのさまざまな抗線維化および抗炎症特性のうち、線維芽細胞増殖も低減する）ピルフェニドンまたは／および（線維芽細胞増殖、移行および形質転換に関与するＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦＲのシグナル伝達をブロックする）ニンテダニブを含むか、またはそれである。
【０１９４】
[00203]さらに別の実施形態において、１つ以上の抗線維化薬は、高血糖、糖尿病またはインスリン抵抗性が線維化の発生の一因となる線維化障害の処置のための血糖降下活性または／およびインスリン抵抗性改善活性を有する１つ以上の薬剤を含むか、またはそれである。そのような障害の例としては、腎線維化によって特徴づけられる糖尿病性腎症、ならびに肝臓線維化によって特徴づけられる非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）および硬変が挙げられるが、これらに限定されない。血糖降下薬または／およびインスリン抵抗性改善薬の使用は、例えば、腎臓の炎症および線維化または肝臓の炎症および線維化を縮小するか、または予防することができる。特定の実施形態において、１つ以上の抗線維化薬は、ＰＰＡＲ−γアゴニスト（例えば、チアゾリジンジオン［上記］、例えば、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾン）を含むか、またはそれである。ＰＰＡＲγ−活性化チアゾリジンジオンは、血糖降下特性およびインスリン抵抗性改善特性の両方を有する。
【０１９５】
[00204]抗線維化薬としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ＭＢＧ阻害剤、コラーゲン蓄積の阻害剤、線維化促進増殖因子（ｐｒｏ−ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）（例えば、ＴＧＦ−β［ＴＧＦ−β１を含む］、ＣＴＧＦおよび血小板由来増殖因子［ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−ＣおよびＰＤＧＦ−Ｄを含む］）またはそれらの産生、活性化もしくはシグナル伝達の阻害剤、レセプター型チロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤、抗ＥＧＦＲ抗体、上で挙げたものを含む抗炎症剤、上で挙げたものを含む酸化防止剤、上で挙げたものを含むレニン・アンジオテンシン・アルドステロン系（ＲＡＡ）のアンタゴニスト、（ＡＧＥ、とりわけ動脈壁硬化を増加させ、メサンギウム基質拡大を刺激する）終末糖化産物の蓄積または効果の阻害剤、ＲＧＤ模倣物および類似体（線維芽細胞および免疫細胞のＥＣＭ糖タンパク質の付着を阻害する）（例えば、ＮＳ−１１、ＳＦ−６，５およびＧＲＧＤＳ）、ガレクチン−３阻害剤（例えば、ＧＭ−ＣＴ−０１およびＧＲ−ＭＤ−０２）、トリコスタチンＡ（ＴＧＦβ１誘導ＥＭＴを阻害する）、およびＰＰＡＲ−γアゴニスト（例えば、チアゾリジンジオン［上記］）を含むが、これらに限定されないその他の種類の抗線維化薬；ならびにその類似体、誘導体、フラグメントおよび塩。
【０１９６】
[00205]任意の追加の治療用薬剤は、独立して任意の適した様式で投与されてもよい。可能性のある投与様式としては、経口、非経口（皮内、皮下、筋肉内、血管内、静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、髄腔内および局所を含む）、腔内、および局所（皮膚／皮膚上、経皮、粘膜、経粘膜、鼻腔内［例えば、鼻腔スプレーまたは点鼻薬による］、眼内［例えば、点眼薬による］、肺［例えば、経口または経鼻吸入による］、頬側、舌下、直腸［例えば、座剤による］および経膣［例えば、座剤による］を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、任意の追加の治療用薬剤は、独立して経口または非経口（例えば、静脈内、皮下もしくは筋肉内）投与される。
【０１９７】
[00206]任意の追加の治療用薬剤は、独立して、以下に限定されないが、毎日（１日１、２回以上）、２または３日毎、週に２回、週に１回、２週毎、３週毎、月に１回、２か月毎もしくは３か月毎、または不規則な様式で、もしくは必要に応じてを含む任意の適した頻度で投与されてもよい。投薬頻度は、例えば、選択される投与様式に左右される場合がある。任意の追加の治療用薬剤による処置の長さは、治療医師によって決定されてもよく、独立して、例えば、少なくとも約１日、２日間、３日間、４日間、１週間、２週間、３週間、４週間（１か月間）、６週間、２か月間、３か月間、６か月間、１年間、２年間、３年間またはそれ以上が可能である。
【０１９８】
ＶＩＩ．抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントの診断的使用
[00207]本明細書中で開示されているキメラ、ヒト化およびヒト抗ＭＢＧ抗体ならびにそのフラグメントは、高ＭＢＧレベルと関連づけられるもの（例えば、高血圧障害）を含む、ＭＢＧ関連障害の診断および予後評価にも有用である。さらに、そのような抗体およびそのフラグメントは、処置の決定を容易にするために使用することができる。
【０１９９】
[00208]抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントは、対象から得た元のサンプルまたは処理されたサンプル中のＭＢＧの存在を検出するために利用されてもよい。生物学的サンプルは、例えば、血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、細胞または組織を含む場合がある。サンプルは、直接分析されても、分析前に抽出されても、または適した溶媒の添加によって体積が拡大されてもよい。
【０２００】
[00209]いくつかの実施形態において、生物学的サンプルは、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントと接触させられ、そのサンプルは、抗体またはそのフラグメントのＭＢＧとの結合を検出するためにスクリーニングされる。そのような結合の検出は、サンプル中のＭＢＧの存在を示す。特定の実施形態において、抗ＭＢＧ抗体もしくはそのフラグメントは、抗体またはそのフラグメントのＭＢＧとの結合がシグナルを誘起するよう検出可能薬剤（例えば、蛍光色素）により標識される。他の実施形態において、生物学的サンプル中のＭＢＧは、標識化抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの導入に先立って表面に固定され（直接アッセイ）、ＭＢＧと結合した標識化抗体またはそのフラグメントの量と対応するシグナルの量はサンプル中のＭＢＧの量と相関関係にある。さらに別の実施形態において、生物学的サンプル中のＭＢＧは、表面に固定された非標識化第１抗体によって捕捉され、その後、捕捉されたＭＢＧと結合し、捕捉されたＭＢＧの量に比例してシグナルを生じる標識化第２抗体によって検出され（サンドイッチアッセイ）、この場合、非標識化第１抗体と標識化第２抗体とは、ＭＢＧの異なるエピトープと結合し、非標識化第１抗体または／および標識化第２抗体は、独立して、本明細書中で開示されている抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントであってもよい。
【０２０１】
[00210]別の実施形態において、生物学的サンプル中のＭＢＧは、競合アッセイにおいて検出される。いくつかの実施形態において、（任意にバッファー中に懸濁させた）サンプルは、標識化抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントと混合される。得られた混合物は、その後、ＭＢＧコーティング基体と接触させられる。基体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル）のＭＢＧコーティングを容易にするために、ＭＢＧは、例えば、基体に吸着する担体タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン［ＢＳＡ］、キーホールリンペットヘモシアニン［ＫＬＨ］またはオボアルブミン）と結合させられてもよい。サンプル中のＭＢＧの量が多い程、抗体／ＭＢＧ複合体が多く形成され、基体上のＭＢＧと結合するのに利用可能な結合していない（自由な）抗体が少なくなり（「競合」）、したがって生じるシグナルが低くなる。
【０２０２】
[00211]上記の直接、サンドイッチおよび競合アッセイにおいて、抗ＭＢＧ一次抗体またはそのフラグメントは、検出可能薬剤により標識されてもよい。あるいは、直接、サンドイッチおよび競合アッセイにおいて、抗ＭＢＧ一次抗体もしくはそのフラグメントは、標識されなくてもよく、一次抗体のＭＢＧとの結合後に標識化二次抗体（例えば、一次抗体のＦｃ領域と結合するもの）が結合してもよい。二次抗体が酵素と結合している場合、酵素の基質の添加は、シグナル（例えば、発色性、蛍光または電気化学的シグナル）を生じる酵素／基質反応をもたらす。サンプル中のＭＢＧの存在および量を判定するために、固体支持体（例えば、プレートウェルまたはビーズ）の吸光度、蛍光または電気化学的シグナル（例えば、電流）が測定される。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の基質の非限定例としては、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）および３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）が挙げられ、アルカリホスファターゼの基質としては、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスファート（ＢＣＩＰ）が挙げられ、β−グルクロニダーゼの基質としては、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）が挙げられる。そのようなアッセイは、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）と呼ばれる。
【０２０３】
[00212]検出可能薬剤としては、クロモホア｛例えば、色素、染料、顔料および色原体（例えば、３−アミノ−９−エチルカルバゾール［ＡＥＣ］、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスファート［ＢＣＩＰ］、３，３’−ジアミノベンジジン［ＤＡＢ］および３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン［ＴＭＢ］）｝、フルオロフォア／蛍光色素（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナートおよびローダミンなどの蛍光色素）、化学発光化合物（例えば、ルシフェリンおよびルミノール）、放射性同位元素（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓおよび１２５Ｉ）、放射性元素（例えば、テクネチウム）、高電子密度化合物、磁性物質および粒子（例えば、常磁性および超常磁性のもの）、磁気共鳴断層撮影（ＭＲＩ）造影剤（例えば、ガドリニウムを含有するもの）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ［ＨＲＰ］、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、β−グルクロニダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼ）、ハプテンならびに毒素が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０４】
[00213]本明細書に記載されている抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントは、さまざまな免疫測定アッセイ（ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ）に利用することができる。そのようなアッセイとしては、発色、蛍光、化学発光、光散乱、放射標識、電気化学、酵素、沈殿、凝集、凝固、ウエスタンブロット、グリッドブロット、組織ブロット、ドットブロット、ディップスティック、およびバイオセンサーアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｃ．  ＰｒｉｃｅおよびＤ．  Ｎｅｗｍａｎ（編）、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９７年）；およびＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第２版、Ｄ．  Ｗｉｌｄ（編）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（２００１年）を参照。さらに、抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントは、ＭＲＩによってなどイメージングに利用することができる。
【０２０５】
[00214]生物学的サンプル中のＭＢＧの量の検出および測定は、ＭＢＧ関連障害の診断、予後および処置を容易にする場合がある。いくつかの実施形態において、障害は、上昇したＭＢＧのレベルと関連づけられ、障害のない他の対象からの対応するサンプル中のＭＢＧのレベルと比較した、対象からのサンプル中の上昇したＭＢＧのレベルは、対象における障害の診断を示す。障害の診断のための基準ＭＢＧレベルは、例えば、統計学的または疫学的に有意な数の障害のない対象からの対応するサンプル中のＭＢＧレベルと、統計学的または疫学的に有意な数の障害のある対象からの対応するサンプル中のＭＢＧレベルとの比較に基づいて求められてもよい。同様に、処置および予後予測のための対象からのサンプル中のＭＢＧのレベルは、障害の現在の重症度を判定するため、および障害の予想される過程または転帰（例えば、進行または退縮）を予測するために、例えば、ＭＢＧ関連障害の重症度と相関したＭＢＧレベルのスケールと比較されてもよい。
【０２０６】
[00215]さらに、生物学的サンプル中のＭＢＧの量の検出および測定は、処置の決定を容易にすることができる。いくつかの実施形態において、対象に投与される抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントの量または／および抗体またはそのフラグメントの対象への投与の頻度は、維持または調節される（増加もしくは減少させられる）か、あるいは抗体またはそのフラグメントの対象への投与は、対象からのサンプル中のＭＢＧの有無、量またはレベルに基づいて中止される。
【０２０７】
[00216]いくつかの実施形態において、キットは、任意に検出可能薬剤で標識されてもよい、抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントと、任意に診断用途（例えば、イムノアッセイにおいて）のために抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを使用するための説明書とを含む。
【０２０８】
[00217]高血圧および高血圧関連障害では血液ＭＢＧレベルが高い。例えば、血漿ＭＢＧレベルは、妊娠高血圧腎症（ＰＥ）患者において、正常血圧の妊娠女性よりも５倍高く、血漿ＭＢＧレベルは、ＰＥ重症度と相関関係にある（Ｌｏｐａｔｉｎ、１９９９年およびＡｇｕｎａｎｎｅ、２０１１年）。さらに、血漿ＭＢＧレベルは、本態性高血圧症またはうっ血性心不全（ＣＨＦ）の患者において７倍、慢性腎不全の患者において７０倍を超えて増加する（Ｐｕｓｃｈｅｔｔ、ＡＪＫＤ、２０１０年）。ＣＨＦの重症度は、血漿ＭＢＧレベルと相関関係にある（Ｆｒｉｄｍａｎ、２００２年）。さらに、心筋虚血／梗塞の患者における血漿ＭＢＧレベルは高く（Ｂａｇｒｏｖ、１９９８年）、閉塞性睡眠時無呼吸（ＯＳＡ）の患者における血漿ＭＢＧレベルは高く、ＯＳＡの重症度と相関関係にある（Ｚｖａｒｔａｕ、２００６年）。
【０２０９】
[00218]テロシノブファギン（ＴＣＢ）およびレジブホゲニン（ＲＢＧ）などのその他のブファジエノライド（ｂｕｆａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ）を含む、その他の強心ステロイドもまた、障害の診断に役立つこともある。例えば、慢性腎不全の患者における血漿ＴＣＢレベルは高い（Ｋｏｍｉｙａｍａ、２００５年）。ＲＢＧは、ＭＢＧの効果をブロックするか、またはＭＢＧと反対の効果を有する（Ｐｕｓｃｈｅｔｔ、２０１２年およびＵｄｄｉｎ、ＨＰ、２０１２年）。
【０２１０】
[00219]ＭＢＧによって引き起こされた血管新生の不均衡状態は、ＰＥの一因となる（Ｕｄｄｉｎ、ＴＲ、２０１２年）。血管新生の均衡状態は、抗血管新生因子（例えば、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１［ｓＦｌｔ１またはｓＶＥＧＦＲ１］および可溶性エンドグリン［ｓＥｎｇ］）および血管新生促進因子（例えば、血管内皮増殖因子［ＶＥＧＦ］および胎盤増殖因子［ＰｌＧＦ］）を伴う。ＰＥ患者では、臨床症状に先立ってｓＦｌｔ１およびｓＥｎｇレベルが増加し、これもＰＥ重症度と相関関係にあるが、ＰｌＧＦレベルは、著しく低下する（Ｖｅｒｌｏｈｒｅｎ、２０１２年およびＨａｇｍａｎｎ、２０１２年）。例えば、過剰な胎盤由来のｓＦｌｔ１は、ＰＥにおける内皮機能不全、高血圧およびタンパク尿の一因となり（Ｍａｙｎａｒｄ、２００３年）、上昇したレベルの胎盤由来のｓＥｎｇ、可溶性のＴＧＦ−βコレセプターは、ＰＥにおける血管透過性、高血圧およびＩＵＧＲを引き起こす（Ｖｅｎｋａｔｅｓｈａ、２００６年）。０．１ｎＭから１ｎＭの間の濃度のＭＢＧは、ｓＦｌｔ１およびｓＥｎｇの発現を増加させ、絨毛外ＣＴＢの細胞株におけるＶＥＧＦおよびＰｌＧＦの発現を低下させる（Ｅｈｒｉｇ、２０１４年）。ｓＦＬｔ１：ＰｌＧＦの比は、ＰＥの特徴である異常な胎盤発達および血管新生の不均衡状態を判定するのに特に有用であり（Ｈｅｒｔｉｇ、２０１０年およびｖｏｎ  Ｄａｄｅｌｓｚｅｎ、２０１４年）、妊娠中の血圧は、ｓＦｌｔ１：ＰｌＧＦの比と正の相関関係にある。
【０２１１】
ＶＩＩＩ．抗ＭＢＧ抗体およびそのフラグメントの作製
[00220]本開示は、本明細書に記載されているキメラ、ヒト化およびヒト抗ＭＢＧ抗体ならびにそのフラグメントをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＨドメインまたは／およびＶＬドメインをコードする核酸配列を含む。さらに別の実施形態において、ポリヌクレオチドは、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントの重鎖または／および軽鎖をコードする核酸配列を含む。
【０２１２】
[00221]本開示は、本明細書に記載されているキメラ、ヒト化およびヒト抗ＭＢＧ抗体ならびにそのフラグメントをコードする核酸配列を含む（発現またはクローニングベクターと呼ばれる場合もある）ベクターをさらに提供する。適したベクターとしては、プラスミド、コスミド、細菌人工染色体、酵母人工染色体、ラムダファージ（例えば、溶原性遺伝子（ｌｙｓｏｇｅｎｙ  ｇｅｎｅ）が欠失したもの）、およびウイルスが挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態において、ベクターは、プラスミドである。
【０２１３】
[00222]さまざまなベクター系が利用されてもよい。ベクターの1つのクラスは、アデノウイルス、バキュロウイルス、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、ＳＶ４０ウイルス、ワクチニアウイルス、およびレトロウイルス（例えば、ＭＭＴＶ、ＭＯＭＬＶおよびラウス肉腫ウイルス）などの動物ウイルス由来のＤＮＡ要素を利用する。ベクターの別のクラスは、東部ウマ脳炎ウイルス、フラビウイルスおよびセムリキ森林ウイルスなどのＲＮＡウイルス由来のＲＮＡ要素を利用する。
【０２１４】
[00223]ベクターは、例えば、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＨドメインまたは／およびＶＬドメイン、あるいは重鎖または／および軽鎖をコードする核酸配列に加えてｍＲＮＡの最適な発現のためのさまざまなその他の要素を含むことができる。例えば、ベクターは、転写プロモーター、プロモータープラスオペレーター、エンハンサー、イントロンまたは／およびエクソンを伴うか、または伴わないオープンリーディングフレーム、終結シグナル、スプライシングシグナル、分泌シグナル配列または選択マーカー（例えば、抗生剤または細胞傷害性薬剤に対する抵抗性を付与する遺伝子）、あるいはそれらの任意の組み合わせまたはすべてを含むことができる。
【０２１５】
[00224]本開示はまた、本明細書に記載されているキメラ、ヒト化およびヒト抗ＭＢＧ抗体ならびにそのフラグメントをコードするベクターを含むか、または発現させる宿主細胞も提供する。適した宿主細胞としては、真核細胞、哺乳動物細胞（例えば、ＢＨＫ、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫＩＩおよびＶｅｒｏ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）、酵母細胞および細菌細胞（例えば、Ｅ  ｃｏｌｉ細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物の細胞（例えば、ＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞）である。
【０２１６】
[00225]いくつかの実施形態において、宿主細胞は、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＨドメインもしくはＶＬドメイン、または重鎖もしくは軽鎖をコードするベクターを含むか、または発現する。さらに別の実施形態において、宿主細胞は、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＨドメインおよびＶＬドメイン、または重鎖および軽鎖をコードする単一のベクターを含むか、または発現する。他の実施形態において、同じ宿主細胞または別個の宿主細胞は、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＨドメインまたは重鎖をコードするベクターと、前記ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＬドメインまたは軽鎖をコードする別個のベクターとを含むか、または発現する。
【０２１７】
[00226]ベクターは、当該技術分野において既知の任意の方法によって宿主細胞にトランスフェクトされても、または導入されてもよい。トランスフェクション剤および方法としては、リン酸カルシウム、カチオン性重合体（例えば、ＤＥＡＥ−デキストランおよびポリエチレンイミン）、デンドリマー、ｆｕｇｅｎｅ、カチオン性リポソーム、エレクトロポレーション、ソノポレーション、細胞圧縮（ｃｅｌｌ  ｓｑｕｅｅｚｉｎｇ）、遺伝子銃、ウイルストランスフェクションおよびレトロウイルス形質導入が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１８】
[00227]トランスフェクション宿主細胞を培養するため、および組み換えで作製された抗ＭＢＧ抗体またはそのフラグメントを回収するための方法および条件は当該技術分野において知られており、例えば、利用される特定の発現ベクターまたは／および宿主細胞に応じて、変化しても、または最適化されてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＭＢＧ  ｍＡｂあるいはそのフラグメントのＶＨドメインまたは／およびＶＬドメイン、あるいは重鎖または／および軽鎖は組み換えで作製される。特定の実施形態において、抗ＭＢＧ  ＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４の全体の重鎖および軽鎖、または任意に延長部分と融合された抗ＭＢＧ  Ｆａｂフラグメントの重鎖および軽鎖は、組み換えで作製される。
【０２１９】
ＩＸ．引用文献
[00228]以下の非特許文献が、本明細書中で引用される。
Ａｇｕｎａｎｎｅ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｅｒｉｎａｔｏｌ．，  ２８：５０９−５１４  （２０１１）；
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Ｂａｇｒｏｖ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  ３１：１０９７−１１０３  （１９９８）；
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Ｅｌｋａｒｅｈ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  ４９：２１５−２２４  （２００７）；
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Ｆｒｉｄｍａｎ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，  ２０：１１８９−１１９４  （２００２）；
Ｇａｇｌｉａｒｄｉｎｉ，  Ｅ．  ａｎｄ  Ｂｅｎｉｇｎｉ，  Ａ．，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．，  １７：８９−９６  （２００６）；
Ｇｉｌｌｉｓ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｇｕｌ．  Ｉｎｔｅｇｒ．  Ｃｏｍｐ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ３０９：Ｒ６２−７０  （２０１５）；
Ｇｒａｖｅｓ，  Ｓ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  １０：Ｉ８４−８６  （１９８７）；  
Ｈａｇｍａｎｎ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．，  ５８：８３７−８４５  （２０１２）；
Ｈｅｒｔｉｇ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｌｉｅｒｅ，  Ｐ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ，  ４１１：１５９１−１５９５  （２０１０）；
Ｈｏｒｖａｔ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，  ２９：１−９  （２０１０）；
Ｉａｎｏｓｉ−Ｉｒｉｍｉｅ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，  ２７：６０５−６１７  （２００５）；
Ｋａｉｈｕｒａ．  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ２９７：Ｈ７５９−Ｈ７６４  （２００９）；
Ｋａｒｉｈａｌｏｏ，  Ａ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｄｉａｂ．  Ｒｅｐ．，  １２：４１４−４２２  （２０１２）；
Ｋａｔｏ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，  ５６：１０３７−１０４８  （１９９９）；
Ｋｅｎｎｅｄｙ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  ４７：４８８−４９５  （２００６）；
Ｋｉｔａｄａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  Ｒｅｎｏｖａｓｃ．  Ｄｉｓ．，  ９：２７９−２９０  （２０１６）；
Ｋｏｍｉｙａｍａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ３８：３６−４５  （２００５）；
Ｋｕｂｏ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  １６３：５７１−５８１  （２００３）；
ＬａＭａｒｃａ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｌａｃｅｎｔａ，  ２７：９８４−９８８  （２００６）；
Ｌａｎ，  Ｈ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ３９：７３１−７３８  （２０１２）；
Ｌａｒａｇｈ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｅｄ．  Ｐｒｏｃ．，  ４１：２４１５−２４２３  （１９８２）；
Ｌｅｏｎａｒｄ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｍｅｄ．，  Ｖｏｌ．  ６２  Ｎｏ．  ４  （２０１４），  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ；
Ｌｉｍ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｔｅｓｃｈ，  Ｇ．，  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．，  ２０１２：１４６１５４  （２０１２）；
Ｌｏｐａｔｉｎ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  １７：１１７９−１１８７  （１９９９）；
Ｍａｒｃｈｅｓｉ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．，  ２９：３６７−３７４  （２００８）；
Ｍａｓｏｎ，  Ｒ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎ．  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３：９５−１０４  （２００９）；
Ｍａｙｎａｒｄ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｋａｒｕｍａｎｃｈｉ，  Ｓ．，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，  ３１：３３ｅ４６  （２００１）；
Ｍａｙｎａｒｄ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １１１：６４９−６５８  （２００３）；
Ｎｉｋｉｔｉｎａ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  ２９：７６９−７７６  （２０１１）；
Ｐａｃｉ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  Ｒｅｓ．，  ２３（Ｓｕｐｐｌ．）：Ｓ８７−Ｓ９１  （２０００）；
Ｐｕｓｃｈｅｔｔ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．，  ５６：３５９−３７０  （２０１０）；
Ｐｕｓｃｈｅｔｔ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ，  １８０２：１２４６−１２５３  （２０１０）；
Ｐｕｓｃｈｅｔｔ，  Ｊ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｅｒｉｎａｔｏｌ．，  ２９：７７７−７８５  （２０１２）；
Ｑｉ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  ４０：９−１３  （２００８）；
Ｓｃｈｗｉｎｇｅｒ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  ９９：２１０５−２１１２  （１９９９）；
Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，  ５６：１８２５−１８３３  （２００７）；
Ｔｉａｎ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ，  １７：３１７−３２６  （２００６）；
Ｔｉｈｔｏｎｅｎ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｂｓｔｅｔ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．  Ｂｉｏｌ．，  １２８：１８０−１８６  （２００６）；
Ｕｄｄｉｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２８３：１７９４６−１７９５３  （２００８）；
Ｕｄｄｉｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｌａｃｅｎｔａ，  ２９：２６６−２７３  （２００８）；
Ｕｄｄｉｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，  ３０：２６−３３  （２００９）；
Ｕｄｄｉｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｇｕｌ．  Ｉｎｔｅｇｒ．  Ｃｏｍｐ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ２９６：１７２６ｅ３４  （２００９）；
Ｕｄｄｉｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，  ３１：７０−７８  （２０１２）；
Ｕｄｄｉｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｒｅｓ．，  １６０：９９−１１３  （２０１２）；
Ｖｅｎｋａｔｅｓｈａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．，  １２：６４２−６４９  （２００６）；
Ｖｅｒｌｏｈｒｅｎ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｏｂｓｔｅｔ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．，  ２０６：５８．ｅ１−８  （２０１２）；
Ｖｅｒｓａｒｉ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  １５７：５２７−５３６  （２００９）；
ｖｏｎ  Ｄａｄｅｌｓｚｅｎ，  Ｐ．  ａｎｄ  Ｍａｇｅｅ，  Ｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  Ｒｅｐ．，  １６：４５４  （２０１４）；
Ｖｕ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，  ２５：５２０−５２８  （２００５）；
Ｗｕ，  Ｙ．  ａｎｄ  Ｚｈｏｕ，  Ｂ．，  Ｃｅｌｌ  Ａｄｈ．  Ｍｉｇｒ．，  ４：１９９−２０３  （２０１０）；
Ｙｕａｎ，  Ｚ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ，  １６：４０３４−４０４５  （２００５）；
Ｚｈａｎｇ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｎａｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ３０２：Ｆ４３３−４３８  （２０１２）；  ａｎｄ
Ｚｖａｒｔａｕ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  （Ｎｏｉｓｙ−ｌｅ−ｇｒａｎｄ），  ５２：２４−２７  （２００６）．
【０２２０】
[00229]本明細書において引用されるすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許それぞれが具体的に個別に参照により組み込まれることが示されたかのように参照によって本明細書に組み込まれ、刊行物が引用される方法および／または材料に関連して方法および／または材料を開示および記載するために参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２２１】
[00230]以下の実施例は、本開示を説明することのみが意図される。他のアッセイ、研究、プロセス、プロトコル、手順、手法、試薬および条件が必要に応じて代わりに使用されてもよい。
【実施例】
【０２２２】
実施例１．キメラ抗ＭＢＧ抗体の作製
[00231]キメラ抗体を、高い特異性および高い親和性でＭＢＧと結合するマウス抗体から作製した。マウス抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメイン（配列番号１および２）を、それぞれヒトＩｇＧ２  ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインまたはヒトカッパＣＬドメインと融合させた。
【０２２３】
実施例２．ヒト化抗ＭＢＧ抗体の作製
[00232]ＭＢＧと結合するマウス抗体もヒト化した。３Ｅ９の重鎖のＣＤＲ（ＩｇＧ１）および軽鎖（カッパ）（配列番号３〜８）を、アクセプターヒトフレームワーク配列にグラフトした。
【０２２４】
[00233]マウスフレームワーク配列をヒトフレームワーク配列のデータベースを用いてアライメントして、それぞれの鎖に関して最も近いヒトホモログ（一般に約６５〜７０％の配列同一性）を見つけることによってヒトフレームワーク配列を選択した。重鎖に関してはヒトＶＨ４−３１およびＶＨ４−５９がマウスフレームワーク配列と最も一致し、軽鎖に関してはヒトＶＫ２−２９およびＶＫ２−３０がマウスフレームワーク配列と最も一致した。ヒト抗体レパートリーにおいて高い使用頻度を有し、その他のヒトフレームワーク配列と比較して重要なフレームワーク位置において高度な保存を示しているため、それぞれＶＨおよびＶＬドメインに関してＶＨ４−５９およびＶＫ２−３０をアクセプターヒトフレームワーク配列として選択した。
【０２２５】
[00234]標的抗体のＦｖ領域の３つの３Ｄモデルを、１Ｔ４Ｋ、１ＯＲＳおよび１ＤＱＤのＶＨドメインと、１ＴＥＴのＶＬドメインとの３つの組み合わせを使用して構築した。モデルにおいて、鋳型は、ＣＤＲ長さおよび基本的な構造が３Ｅ９配列から予測されるものと一致した。マウス配列とヒト配列の間で異なり、抗原結合に影響を与える場合もあるフレームワーク領域のアミノ酸位置を特定した。３つのヒト化重鎖可変配列（Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）ならびに２つのヒト化軽鎖可変配列（Ｌ１およびＬ２）を設計した。ヒト化重鎖および軽鎖可変配列は、ヒト生殖系列と約８７〜９４％の類似性を有した。各重鎖がヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４  ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み、各軽鎖がヒトカッパＣＬドメインを含む、３つのヒト化重鎖と２つのヒト化軽鎖の６つすべての組み合わせから得たヒト化抗体、Ｈ１Ｌ１、Ｈ２Ｌ１、Ｈ３Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ２およびＨ３Ｌ２を作製した。
【０２２６】
実施例３．ファージ由来のヒト抗ＭＢＧ抗体の作製
[00235]１．２×１０１０の独立クローンを有するヒトファージミドライブラリーを、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と結合させたＭＢＧに対してパニングした。パニングがＭＢＧ結合クローンの３回目の濃縮まで進んだ際に、ファージを、第１に「非特異的な」強心ステロイド（ＣＴＳ、一般に１〜１０μＭ遊離分子のウアバイン）を使用して抗原を競合的に溶出し、続いて、単一の濃度（１〜５μＭ）のＭＢＧを用いた第２の競合的溶出を行った。４回目の濃縮に関して、第２の溶出は、遊離ＭＢＧの一連の段階的濃度（０．１、０．５、１．０および５．０μＭ）であり、最終的な５μＭ溶出からのクローンをスクリーニングのために回収した。最終的な競合的溶出後に抗原に残ったファージも、１００μＭのトリエチルアミンを使用して回収し、バインダーに関するスクリーニングもし、これが、例えば、ＭＢＧに対して非常に高い親和性および特異性を有する２３６／２３７抗体につながった。
【０２２７】
[00236]６つの異なるパニングによる濃縮画分であるおよそ６６０の個々のクローンを、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）においてＭＢＧとの結合に関して試験し、これが、数十のＭＢＧ特異的なクローンを特定した。約１１０の推定上のＭＢＧ結合抗体（ファージ上に発現されたＦａｂフラグメント）を、ＢｓｔＮ１フィンガープリンティング、ＤＮＡ配列決定または／およびＭＢＧ競合ＥＬＩＳＡによってさらに特徴づけて、ＥＬＩＳＡにおいてＭＢＧと結合し、競合した１４の特有の抗体を得た。１４のヒト抗体の相対的なＣＴＳ特異性は、下記実施例８に示す。１４の特有の抗ＭＢＧ  Ｆａｂフラグメントのうちの７つ（２０１／２０２、２０３／２０４、２０５／２０７、２０６／２０８、２３６／２３７、２３８／２３９および２４０／２４１）を、各ファージクローン内に含まれる重鎖可変ドメインおよび完全な軽鎖を、ＨＥＫ２９３細胞における発現のための哺乳動物発現ベクターにサブクローニングすることによって完全なヒトＩｇＧ１に変換した。ファージ由来のヒト抗ＭＢＧ  Ｆａｂフラグメントおよび完全なＩｇＧ１抗体の一部は、カッパＣＬドメインを有したが、その他は、ラムダＣＬドメインを有した。
【０２２８】
実施例４．キメラ抗ＭＢＧ抗体の組み換え作製
[00237]キメラ３Ｅ９  ＩｇＧ  ｍＡｂを作製するために、マウス抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を、ＲＡＣＥ−ＰＣＲ  ｃＤＮＡアプローチを使用してクローン化し、それぞれ、ヒト化ｍＡｂに使用した発現プラスミドと同様の個別の発現プラスミドにおいてヒトＩｇＧ２  ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインまたはヒトカッパＣＬドメインをコードするＤＮＡ配列と融合させた（実施例６を参照）。キメラｍＡｂを、実施例６にヒト化ｍＡｂに関して記載されるのと同様の手順を使用して組み換えで作製した。
【０２２９】
実施例５．ヒト化抗ＭＢＧ抗体の組み換え作製
[00238]ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４  ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインと融合したヒト化重鎖Ｈ１、Ｈ２またはＨ３をコードするプラスミド（実施例２を参照）ならびにヒトカッパＣＬドメインと融合したヒト化軽鎖Ｌ１またはＬ２をコードするプラスミド（実施例２を参照）を調製した。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を無血清培地において培養し、Ｈ１、Ｈ２またはＨ３をコードするプラスミドおよびＬ１またはＬ２をコードするプラスミド（Ｈ１Ｌ１、Ｈ２Ｌ１、Ｈ３Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ２およびＨ３Ｌ２を作製するための６つの異なる組み合わせ）によりコトランスフェクトした。トランスフェクション後４日目に、細胞培養上清を回収した。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって抗体を精製した。
【０２３０】
[00239]ヒト化抗ＭＢＧ  ｍＡｂの重鎖（例えば、Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）および軽鎖（例えば、Ｌ１またはＬ２）をコードする個々のプラスミドによりコトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（例えば、Ｈ１Ｌ１、Ｈ２Ｌ１、Ｈ３Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ２、Ｈ３Ｌ２）を、２週間、無血清培地において増殖させ、１０μｇ／ｍｌのピューロマイシンおよび５００μｇ／ｍｌのＧ４１８を用いて選択した。安定したプールの単一の細胞を、ＦＡＣＳによって９６ウェルプレートに選別した。２〜３週間後、コロニーが成長した。培養培地中の抗体レベルをＥｌｉｓａによってスクリーニングした。抗体高発現クローンを、２４ウェルプレート、６ウェルプレート、および３０ｍｌ振盪培養に拡大した。抗体産生レベルは、バッチ培養において特徴づける。上位クローンの抗体産生レベルは、＞３００ｍｇ／Ｌであった。
【０２３１】
実施例６．ヒト抗ＭＢＧ抗体の組み換え作製
[00240]ヒト抗ＭＢＧ  ｍＡｂ（例えば、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）の重鎖および軽鎖をコードする個別のプラスミドでコトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、無血清培地において２００ｍＬの培養物として４日間増殖させた。培養上清を、回収し、フィルター滅菌した。その抗体を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。
【０２３２】
[00241]ＣＨＯ細胞を、ヒト抗ＭＢＧ  ｍＡｂ（例えば、２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）の重鎖および軽鎖をコードする個別のプラスミドでコトランスフェクトし、２週間、無血清培地において増殖させ、１０μｇ／ｍｌのピューロマイシンおよび５００μｇ／ｍｌのＧ４１８を用いて選択した。安定したプールの単一の細胞を、ＦＡＣＳによって９６ウェルプレートに選別した。そのコロニーを、２〜３週間増殖させる。培養培地中の抗体レベルをＥｌｉｓａによってスクリーニングした。抗体高発現クローンを、２４ウェルプレート、６ウェルプレート、および３０ｍｌ振盪培養に拡大した。抗体産生レベルは、バッチ培養において特徴づける。上位クローンの抗体産生レベルは、＞３００ｍｇ／Ｌである。
【０２３３】
実施例７．ヒト化抗ＭＢＧの抗原結合
ヒト化抗ＭＧＢの抗原結合は、直接Ｅｌｉｓａアッセイにおいてアッセイした。２μｇ／ｍｌのＭＢＧ結合ＢＳＡを、Ｅｌｉｓａプレートにコーティングした。１％  ＢＳＡでブロッキング後、ヒト化抗ＭＢＧの２倍希釈系列をプレートに添加した。洗浄後、結合抗体を、抗ヒトＦｃ  ＨＲＰ複合体を添加することによって検出し、ＴＭＢ基質を添加することによって定量した。４５０ｎｍにおけるＯＤ吸収を、マイクロプレートリーダーにおいて測定した。６つのヒト化抗体のうち、Ｈ３Ｌ２が、親３Ｅ９抗体（図１ｂ）と同様の最高の結合親和性（図１ａ）を示した
【０２３４】
実施例８．抗ＭＢＧ抗体の親和力および相対的なＣＴＳ特異性
[00242]抗ＭＢＧ抗体のＭＢＧに対する親和力を、ＥＬＩＳＡにおいて推定した。マイクロタイタープレートのウェルを、２μｇ／ｍｌのＭＢＧ・ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはＭＢＧ・キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）のいずれかでコーティングした。そのウェルを、その後、１％  ＢＳＡでブロッキングした。異なる濃度（一般に約０．０００１ｎＭから約２５ｎＭ）の試験ＩｇＧ抗体をウェルに添加した。固定されたＭＢＧと結合した試験ＩｇＧを、抗ヒトＦｃ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で検出した。ウェルの洗浄後、適したＨＲＰ試薬（例えば、ＴＭＢ  ｕｌｔｒａ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を、ウェルに添加した。４５０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）を、マイクロプレートリーダーによって測定した。結合曲線の中間点の試験抗体の濃度が、ＭＢＧに対する親和力の推定値である。
【０２３５】
【表１】
2021529215.tif 000003
【０２３６】
[00243]各種強心ステロイド（ＣＴＳ）と比較したＭＢＧに対する抗ＭＢＧ抗体の特異性（相対的親和性）を競合ＥＬＩＳＡにおいて求めた。各抗ＭＢＧ抗体を、遊離ＭＢＧ、競合物としてレジブホゲニン（ＲＢＧ）、シノブファギン（ＣＩＮＯ）、ウアバイン（ＯＵＢ）またはジゴキシン（ＤＩＧ）の存在下において固定されたＭＢＧとの結合に関して試験した。一定量の抗ＭＢＧ抗体（一般に１〜５μｇ／ｍＬ）および異なる濃度の各ＣＴＳ（１０−１２Ｍから１０−５Ｍ）を、ＭＢＧ・ＢＳＡ・コーティングウェルに添加する前にプレインキュベーションした。ウェルの洗浄後、抗ヒトＦｃ、ＨＲＰ結合二次抗体（１：５０００希釈）を、ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベーションした。ウェルの洗浄後、適したＨＲＰ試薬（例えば、ＴＭＢ  ｕｌｔｒａ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を、ウェルに添加した。４５０ｎｍにおけるＯＤを、マイクロプレートリーダーによって測定した。１０μＭのＭＢＧを１００％競合すると仮定し、１ｐＭのＭＢＧを０％競合すると仮定した。そのデータを、競合反応における遊離ＣＴＳ濃度と比較した抗体・抗原結合の滴定としてプロットして、遊離ＣＴＳ濃度（μＭ）を求め、固定されたＭＢＧに対する抗体の最大結合の５０％を得た。ＣＴＳに対する抗体の相対的な特異性を、ＭＢＧ＝１００％に正規化した。
【０２３７】
【表２】
2021529215.tif 000004
【０２３８】
[00244]３つの抗体、２３６／２３７、２Ａ−Ｆ８、およびＨ３Ｌ２は、ＣＴＳ競合分子のいずれとも反応しなかった。２つの抗体、２０１／２０２およびＲ４ＣＥ−１Ｅは、ＣＴＳ競合物ＲＢＧおよびＣＩＮＯと反応した。２つの抗体、２０３／２０４および２０６／２０８は、ＣＴＳ競合物ＲＢＧと反応した。１つの抗体、２Ａ−５Ａは、ＣＴＳ競合物ＲＢＧ、ＣＩＮＯおよびＤＩＧと反応した。２つの抗体、２３８／２３９および１Ｂ−６Ｅは、ＣＴＳ競合物ＯＵＢと反応した（しかし、その他のＣＴＳ競合物に対しては試験しなかった）。
【０２３９】
実施例９．ＭＢＧに誘導されるＰＫＣ−δ核移行の抗ＭＢＧ  Ａｂによる阻害
[00245]ＭＢＧは、腎線維化、心臓線維化および血管線維化を含む、線維化を誘導する（Ｆｅｄｅｒｏｖａ、２００９年、Ｅｌｋａｒｅｈ、２００７年およびＮｉｋｉｔｉｎａ、２０１１年）。ＮＫＡとのＭＢＧの結合は、ＰＫＣ−δのサイトゾルから核への移行を誘導し、ここで、ＰＫＣ−δが転写因子Ｆｌｉ−１をリン酸化し、それによって、Ｆｌｉ−１をタンパク質分解されやすくする。Ｆｌｉ−１のタンパク質分解は、プロコラーゲンＩおよびＩＩＩの発現の抑制を解放する（Ｅｌｋａｒｅｈ、２００９年）。コラーゲン合成の増加は、線維化を促進する。
【０２４０】
[00246]培養される初代ラット心臓線維芽細胞への添加に先立って、ＭＢＧを抗ＭＢＧ抗体とインキュベーションした。３０分後に核を単離し、ＰＫＣ−δの量に関して分析した。マウス抗ＭＢＧ  ｍＡｂ  ３Ｅ９が陽性対照の役割を果たし、非ＭＢＧ結合ヒトＩｇＧ  ｍＡｂが陰性対照およびアイソタイプ対照の役割を果たした。
【０２４１】
[00247]図２は、ＭＢＧ単独またはＭＢＧプラス抗体とともにインキュベーションした初代心臓線維芽細胞の核中のＰＫＣ−δ（７８ｋＤａ）の相対量を示すウエスタンブロットである。２ｎＭのＭＢＧは、「対照」（ビヒクルのみで処理、ブロットのレーン１）と比較して、核中のＰＫＣ−δの量の増加を誘導し、これは、抗ＭＢＧ  ｍＡｂ、３Ｅ９、Ｈ３Ｌ１、２０１／２０２、２０６／２０８および２３６／２３７による処理によって低減され、Ｈ２Ｌ１、Ｈ２Ｌ２、２３８／２３９および２４０／２４１によってそれより弱い程度に低減された（図２ａ）。図２ｂのウエスタンブロットは、ヒト化３Ｅ９  ｍＡｂ、Ｈ３Ｌ２および６つすべてのファージ由来のヒトｍＡｂ（スラッシュを伴う２つの数）が、１０ｎＭのＭＢＧでの核へのＰＫＣ−δ移行を減少させたことを示している。
【０２４２】
実施例１０．ＨＵＶＥＣ細胞増殖のＭＢＧ阻害の抗ＭＢＧ  Ａｂによる逆転
[00248]内皮機能不全は、血管透過性／漏出の増加を含む、妊娠高血圧腎症の病理学的特徴の原因となる（Ｐｕｓｃｈｅｔｔ、ＢＢＡ  ２０１０年）。ＭＢＧは、内皮細胞増殖を阻害することによって内皮機能不全を部分的に促進する（Ｕｄｄｉｎ、Ｐｌａｃｅｎｔａ、２００８年）。
【０２４３】
[00249]培養されるヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）への添加に先立って、ＭＢＧ（２ｎＭ）を抗体（図３ａの２０μｇ／ｍＬ、ヒト抗ＭＢＧ  ｍＡｂ、または図３ｂの異なる濃度（２．５〜１０μｇ／ｍＬ）、ヒト化抗ＭＢＧ  ｍＡｂ）とともにインキュベーションした。４８時間後、ＤＮＡ合成を、３Ｈ−チミジンの取り込みによって評価した。
【０２４４】
[00250]内皮細胞増殖培地中のＨＵＶＥＣ細胞を、９６ウェルプレートに播いた。次の日、細胞を各種抗体（２．５〜２０μｇ／ｍＬ）で前処理し、その後、２ｎＭのＭＢＧとともに４８時間インキュベーションした。［３Ｈ］−チミジンを、各ウェルに添加した。細胞を回収し、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ  Ｔａｉｌｕｘ液体シンチレーションカウンターを使用して３Ｈに関してアッセイすることによって、［３Ｈ］−チミジン標識ＤＮＡをアッセイした。マウス抗ＭＢＧ  ｍＡｂは、陽性対照の役割を果たし、非ＭＢＧ結合ヒトＩｇＧ  ｍＡｂは、陰性対照およびアイソタイプ対照の役割を果たした。平均を、スチューデントｔ検定を使用して有意性に関して検定した。
【０２４５】
[00251]ＨＵＶＥＣ細胞増殖のＭＢＧ阻害は、ファージ由来のヒトｍＡｂのうち２０１／２０２、２３６／２３７および２３８／２３９によって（図３ａ）、さらにヒト化３Ｅ９  ｍＡｂのうちＨ２Ｌ２およびＨ３Ｌ２（図３ｂ）によって有意に低減された。
【０２４６】
実施例１１．ＣＴＢ細胞におけるＭＢＧに誘導される抗増殖および抗血管新生シグナル伝達の抗ＭＢＧ抗体による逆転
[00252]ＭＢＧは、栄養膜細胞（ＣＴＢ）細胞の増殖、移動および浸潤を阻害する（Ｕｄｄｉｎ、ＪＢＣ  ａｎｄ  Ｐｌａｃｅｎｔａ、２００８年）。さらに、ＭＢＧによって引き起こされる血管新生の不均衡状態は、妊娠高血圧腎症における内皮機能不全を促進する（Ｐｕｓｃｈｅｔｔ、ＢＢＡ、２０１０年およびＵｄｄｉｎ、ＴＲ、２０１２年）。ＰＥ患者では、臨床症状に先立ってｓＦｌｔ１およびｓＥｎｇレベルが増加し、これもＰＥ重症度と相関関係にあるが、ＰｌＧＦレベルは、著しく低下する（Ｖｅｒｌｏｈｒｅｎ、２０１２年およびＨａｇｍａｎｎ、２０１２年）。ＭＢＧは、ＣＴＢ細胞において抗血管新生シグナル伝達を誘導する（Ｅｈｒｉｇ、２０１４年）。
【０２４７】
[00253]ＣＴＢ細胞を、培地において血清不足にした後、２回洗浄し、複製物を、その後、（細胞増殖を刺激するために）ＤＭＳＯ（ビヒクル）または０．１、１、１０もしくは１００ｎＭのＭＢＧを含む培地で４８時間処理した。一部の細胞を、ＭＢＧの添加に先立って３０％モル過剰な抗体２０６／２０８、Ｈ１Ｌ２または３Ｅ９で前処理した。培養培地を、血管新生促進因子および抗血管新生因子の分析のために回収した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｕｄｄｉｎ、ＪＢＣ、２００８年およびＰｌａｃｅｎｔａ、２００８年）を使用して細胞生存性を判定した。
【０２４８】
[00254]さらなる一連の実験において、ヒトＣＴＢ細胞を、ＤＭＳＯ（ビヒクル）または０．１、１、１０もしくは１００ｎＭのＭＢＧで４８時間処理した。一部の細胞は、３０％モル過剰な抗体２０１／２０２、２０６／２０８、２３６／２３７、Ｈ１Ｌ２または３Ｅ９で前処理したが、その他の細胞は、抗体およびＭＢＧで共処理した。マウス抗ＭＢＧ  ｍＡｂは、陽性対照の役割を果たし、非ＭＢＧ結合ヒトＩｇＧ  ｍＡｂは、陰性対照およびアイソタイプ対照の役割を果たした。培養培地を、血管新生促進因子および抗血管新生因子の分泌の分析のために回収した。培養培地中の可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｓＦｌｔ１またはｓＶＥＧＦＲ１）、可溶性エンドグリン（ｓＥｎｇ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、および胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）のレベルを、ＥＬＩＳＡキット（Ｂｏｓｔｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して測定した。細胞溶解物を、ウエスタンブロットによって増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）の発現およびｐ３８  ＭＡＰＫのリン酸化に関して分析した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して細胞生存性を判定した。分散分析およびダンカンの事後検定を使用して統計分析を行った。ｐ値≦０．０５を統計学的に有意と見なした。
【０２４９】
[00255]ビヒクル（ＤＭＳＯ）による処理と比較して、≧１ｎＭのＭＢＧによるＣＴＢ細胞の処理は、ＰＣＮＡ発現を有意にダウンレギュレートし、ｐ３８  ＭＡＰＫのリン酸化を増加させ、有意に抗血管新生因子ｓＦｌｔ１およびｓＥｎｇの分泌を増加させ、有意に血管新生促進因子ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦの分泌を低下させた（それぞれに関しｐ＜０．０５）。４つの試験抗ＭＢＧ  ｍＡｂのそれぞれおよびマウス抗体によるＣＴＢ細胞の前処理および共処理は、ＰＣＮＡ発現を有意にアップレギュレートし、ｐ３８  ＭＡＰＫのリン酸化を減少させ、ｓＦｌｔ１およびｓＥｎｇの分泌を有意に低下させ、ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦの分泌を有意に増加させた（それぞれに関しｐ＜０．０５）。４つすべての試験抗ＭＢＧ  ｍＡｂは、培養されるＣＴＢ細胞中のＭＢＧにより誘導される抗増殖および抗血管新生シグナル伝達を、マウス抗ＭＢＧ  ｍＡｂ  ３Ｅ９と同様の程度に減弱させた。
【０２５０】
実施例１２．妊娠高血圧腎症（ＰＥ）のＤＯＣＡ／食塩水ラットモデル
[00256]ヒトは、妊娠中に細胞外液（ＥＣＦ）体積が約４０〜５０％増し、容積増加がＭＢＧ分泌を促進し、最終的にＰＥの発症を促進する（Ｍａｙｎａｒｄ、２００１年）。妊娠ラットのＰＥの容積増加モデルにおいて（Ｖｕ、２００５年およびＰｕｓｃｈｅｔｔ、ＢＢＡ、２０１０年）、アルドステロン前駆体、酢酸デスオキシコルチコステロン（ＤＯＣＡ）の注射とともに正常な飲用水を食塩水と置き換えることが、容積増加、高い尿ＭＢＧレベルを引き起こし、以下のヒトＰＥの表現型の特徴の多くを有する症候群を引き起こす：高血圧、タンパク尿、ＩＵＧＲ、産仔数の減少、および一腹総体重の減少（Ｖｕ、２００５年、Ｉａｎｏｓｉ−Ｉｒｉｍｉｅ、２００５年、およびＨｏｒｖａｔ、２０１０年）。
【０２５１】
[00257]雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜２５０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を１週間順応させ、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２７５〜３００ｇ）と交配させた。膣柱の存在によってまたは膣スミアの検査によって妊娠を確認した。それぞれのラットを別々に収容した。
【０２５２】
[00258]以下のラットの５つの群を調査した（各群ｎ＝１０）：群１（ＮＰ）：正常な妊娠ラット；群２（ＰＤＳ）：初めにデポー形態で１２．５ｍｇのＤＯＣＡをｉ．ｐ．注射され、続いて週に１回、６．５ｍｇのＤＯＣＡのｉ．ｐ．注射を受け、飲用水が０．９％食塩水で置き換えられた妊娠ラット；群３（ＮＰＭ）：実験の４日目に妊娠が確立されたら毎日、ＭＢＧ（１日あたり７．６５μｇ／ｋｇ体重）の注射が与えられた正常な妊娠ラット；群４（ＰＤＳ−３Ｅ９）：群２に対するのと同様にＤＯＣＡおよび食塩水が施され、さらに妊娠の１６、１７、および１８日目にマウス抗ＭＢＧ抗体３Ｅ９（１日あたり２．２ｍｇ／ｋｇ体重）も与えられたラット；ならびに群５（ＰＤＳ−Ｈ３Ｌ２）：群２に対するのと同様にＤＯＣＡおよび食塩水が施され、さらに妊娠の１６、１７、および１８日目にヒト化抗ＭＢＧ抗体Ｈ３Ｌ２（１日あたり２．２ｍｇ／ｋｇ体重）も与えられたラット。
【０２５３】
[00259]収縮期血圧（ＢＰ）は、１７〜１９日目にテールカフによって測定した。ＢＰを安定させた後、少なくとも３回読み取り、これらの値の平均を算出した。報告したＢＰ値は、毎日の測定の平均である。妊娠の１８〜２０日目に、尿中のタンパク質量の測定の落ちたいかなる餌粒子による汚染も避けるために餌の不在下において２４時間尿を採取した。この部分の調査の間は、それぞれのラットを別々に代謝ケージに収容した。２４時間のタンパク質排出を、測定し、クレアチニンに対して正規化した。１８〜２０日目の最後の測定後に、ラットを屠殺し、血液サンプルを採取した。胎仔の数をカウントし、調べた。平均仔数および仔の任意の発達上または組織学的異常を評価した。分散分析およびチューキーの事後検定を使用して統計分析を行った。ｐ値≦０．０５を統計学的に有意と見なした。
【０２５４】
【表３】
2021529215.tif 000005
【０２５５】
[00260]ＤＯＣＡおよび食塩水処置は、血圧、タンパク尿、妊娠ラットにおける産仔数の全般的な減少、および胎仔の奇形を増加させた。ＭＢＧ単独の投与も、同様の影響があった。抗ＭＢＧおよびヒト化抗ＭＢＧ抗体は、この血圧、タンパク尿、および胎仔の奇形の増加を予防した。
【０２５６】
実施例１３．Ｄａｈｌ塩感受性妊娠高血圧腎症ラットモデル
[00261]Ｄａｈｌ塩感受性（Ｄａｈｌ−Ｓ）ラットは、妊娠中に、高血圧、タンパク尿の重度の増悪、糸球体肥大（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｍｅｇａｌｙ）などの腎臓の変化、胎仔死亡の増加、および新生仔のサイズの減少を含む、ヒトＰＥに典型的な多くの表現型を示す（Ｇｉｌｌｉｓ、２０１５年）。妊娠Ｄａｈｌ−Ｓラットも、ＭＢＧレベルが上昇する。
【０２５７】
[00262]雌のＤａｈｌ−Ｓラット（ＳＳ／ｊｒ、２００〜２５０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を１週間順応させ、雄のＤａｈｌ−Ｓラット（２７５〜３００ｇ）と交配させる。膣柱の存在によってまたは膣スミアの検査によって妊娠を確認する。それぞれのラットを別々に収容する。
【０２５８】
[00263]ラットの６つの群を調査する（各群ｎ＝１０）：群１：非妊娠雌Ｄａｈｌ−Ｓラット；群２：妊娠Ｄａｈｌ−Ｓラット；群３：妊娠の１０日から２０日に週に２回、アイソタイプおよび陰性対照として非ＭＢＧ結合ヒトｍＡｂ（ＩｇＧ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）に与えられる妊娠Ｄａｈｌ−Ｓラット；群４：妊娠の１０日から２０日に週に２回、抗ＭＢＧ抗体（例えば、Ｈ３Ｌ２、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）をｉ．ｐ．で与えられる妊娠Ｄａｈｌ−Ｓラット；群５：群４と同様だが、妊娠の１０日から２０日に週に２回、２ｍｇ／ｋｇの抗ＭＢＧ抗体をｉ．ｐ．で与えられる；ならびに群６：群４と同様だが、妊娠の１０日から２０日に週に２回、０．５ｍｇ／ｋｇの抗ＭＢＧ抗体をｉ．ｐ．で与えられる。
【０２５９】
[00264]収縮期血圧を測定し、算出し、妊娠の１８〜２０日目に２４時間の期間、尿中のタンパク質の量を測定し、その他の測定および評価を、ＤＯＣＡ／食塩水ラットに関して上で記載されているのと同様に行う。分散分析およびチューキーの事後検定を使用して統計分析を行い、ｐ値≦０．０５は統計的有意性を示す。
【０２６０】
[00265]収縮期血圧（ＢＰ）を、０日目（ベースライン、Ｔ０）、８〜１０日目（Ｔ１）、および１８〜２０日目（Ｔ２）に測定する。それぞれの日に、ＢＰを安定させた後、少なくとも３回読み取り、これらの値の平均を算出する。Ｔ０、Ｔ１およびＴ２に関して報告するＢＰ値は、毎日の測定値の平均である。
【０２６１】
[00266]妊娠の１８〜２０日目に、尿中のタンパク質量の測定の落ちたいかなる餌粒子による汚染も避けるために餌の不在下において２４時間尿を採取する。この部分の調査の間は、それぞれのラットを別々に代謝ケージに収容する。競合ＥＬＩＳＡにおいて尿中のＭＢＧ、ＲＢＧおよびＴＣＢのレベルを測定し、２４時間のタンパク質排出を測定する。１８〜２０日目にラットを屠殺し、血液サンプルを採取する。仔をカウントし、調べる。平均仔数および仔の任意の発達上または組織学的異常を評価する。
【０２６２】
[00267]分散分析およびチューキーの事後検定を使用して統計分析を行う。ｐ値≦０．０５を統計学的に有意と見なす。
【０２６３】
実施例１４．進行した糖尿病性腎症のＳＴＺ−ＣＤ１マウスモデル
[00268]ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）（２００ｍｇ／ｋｇ）のＣＤ１マウスへの単回ｉ．ｐ．注射は、インスリン産生膵臓β細胞へのＳＴＺの毒性の結果として１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）を引き起こす。ＳＴＺ−ＣＤ１  Ｔ１Ｄマウスは、ＳＴＺ注射後６か月以内に尿細管間質線維化および腎機能の低下と関連づけられる慢性腎疾患を発症する（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ、２００７年）。ＳＴＺ−ＣＤ１マウスは、重度の尿細管間質線維化、中等度のメサンギウム基質拡大、および中等度のアルブミン尿を示す（Ｋｉｔａｄａ、２０１６年）。
【０２６４】
[00269]８週齢の時点でＣＤ１マウス（７週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）に、ビヒクルまたはＳＴＺ（１０ｍＭクエン酸ナトリウム中、ｐＨ４．５、２００ｍｇ／ｋｇ）をｉ．ｐ．注射して、Ｔ１Ｄを引き起こす。ＳＴＺ注射の３日後に、尿ディップスティック試験によってＴ１Ｄを確認する。それぞれのマウスを別々に代謝ケージに収容する。マウスを６つの群（各群ｎ＝１２）に無作為に分け、ＳＴＺ注射の１か月後に開始して、２か月間、以下のとおり週に２回のｉ．ｐ．処置をする：群１：ＣＤ１マウス＋ビヒクルのみ；群２：ＳＴＺ−ＣＤ１  Ｔ１Ｄマウス＋通常のヒトＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）、陰性対照およびアイソタイプ対照として；群３：ＳＴＺ−ＣＤ１  Ｔ１Ｄマウス＋マウス抗ＭＢＧ  ｍＡｂ  ３Ｅ９、陽性対照として；群４：ＳＴＺ−ＣＤ１  Ｔ１Ｄマウス＋試験抗ＭＢＧ抗体（例えば、Ｈ３Ｌ２、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）（１ｍｇ／ｋｇ）；群５：ＳＴＺ−ＣＤ１  Ｔ１Ｄマウス＋試験抗ＭＢＧ抗体；ならびに群６：ＳＴＺ−ＣＤ１  Ｔ１Ｄマウス＋試験抗ＭＢＧ抗体。マウスをＳＴＺ注射の３か月後に屠殺する。
【０２６５】
[00270]臨床的パラメーターの評価に関して、尾部プレチスモグラフィーによって収縮期血圧を週に１回監視する。処置の最後の週の間、２４時間の尿サンプルを採取する。尿中アルブミンは、ＥＬＩＳＡ（Ｅｘｏｃｅｌｌ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）によって測定する。血清または尿中クレアチニンは、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定する。クレアチニンは、純粋なクレアチニン（１０〜５０ｎｇ）の標準曲線との比較によって定量する。
【０２６６】
[00271]病理組織学的分析に関して、灌流された腎臓を取り除き、ホルマリン中で一晩固定し、切片を過ヨウ素酸シッフで染色する。糸球体拡大および硬化の程度を評価するためにスライドを分析する。１つの切片上の各糸球体を０から４で段階評価し、この場合、０は、病変がないことを表し、１、２、３および４は、それぞれ、糸球体係蹄領域の＜２５、２５〜５０、５０〜７５または＞７５％を含む、メサンギウム基質拡大または硬化を表す。尿細管間質線維化は、Ｚｈａｎｇら（２０１２年）によって記載されているピクロシリウス染色を使用して評価する。
【０２６７】
[00272]免疫組織学に関して、腎臓にある線維化促進メディエーター（例えば、ＴＧＦ−βおよびＣＴＧＦ）および炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＭＣＰ−１）を、間接免疫蛍光法によって染色したクライオスタット切片上で検出し、Ｋａｔｏら（１９９９年）によって記載されているとおり半定量する。
【０２６８】
[00273]スチューデントｔ検定を使用して統計分析を行う。ｐ値≦０．０５を統計学的に有意と見なす。
実施例１５．進行した糖尿病性腎症のＺＤＦラットモデル
[00274]Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ、Ｌｅｐｒｆａ／Ｃｒｌ）ラットは、ＤＮの自然発症モデルである。ＺＦ系から得られたＺＤＦラットは、糖尿病を伴う肥満を示し、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）を研究するために広く使用されている。ＺＤＦラットは、３〜８週齢で進行性のインスリン抵抗性およびグルコース不耐性を発症し、８〜１０週で明白に糖尿病になる。ＺＤＦラットは、８週では糸球体硬化、尿細管細胞損傷または尿細管間質線維化を示さないが、ＺＤＦラットの糸球体は、８週で対照のやせ型ラットのものと比較してわずかに肥大しているようである。ＺＤＦラットは、８週齢過ぎに糸球体病変のさらなる増加、および２２週で中等度から重度のメサンギウム基質拡大を示す。さらに、２２〜３９週にＺＤＦラットの腎臓において、尿細管細胞損傷、中等度から重度の尿細管間質線維化、炎症および低酸素が観察される。ＺＤＦラットは、中等度から重度のメサンギウム基質拡大、中等度から重度の尿細管間質線維化、および中等度から重度のアルブミン尿を発症する（Ｋｉｔａｄａ、２０１６年）。
【０２６９】
[00275]雄のＺＤＦラット（１０週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）および雄のやせた型（ＺＬ）対照ラット（１０週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を別々に代謝ケージに収容する。１５週に開始して、ラットを、絶食条件下における血糖レベルの上昇について観察する。糖尿病は、血糖レベル＞２５０ｍｇ／ｄＬと定義される。アルブミン尿は、ＥＬＩＳＡ（Ｅｘｏｃｅｌｌ）によって測定する。著しいアルブミン尿を伴う高血糖ラットだけが、各処置群に配置され、処置される。ＺＤＦラットの顕著な腎臓の病状は、２２週齢までに顕在化することが予想される（Ｃｈａｎｄｅｒ、２００４年）。
【０２７０】
[00276]ラットを、無作為に６つの群に分け（各群ｎ＝５）、糖尿病の発症後、以下のとおり週に２回、ｉ．ｐ．処置をする：群１：ＺＬラット＋ビヒクルのみ；群２：ＺＤＦ糖尿病ラット＋通常のヒトＩｇＧ、陰性対照およびアイソタイプ対照として；群３：ＺＤＦ糖尿病マウス＋マウス抗ＭＢＧ  ｍＡｂ  ３Ｅ９（１０ｍｇ／ｋｇ）、陽性対照として；群４：ＺＤＦ糖尿病マウス＋試験抗ＭＢＧ抗体（例えば、Ｈ３Ｌ２、２３６／２３７または２Ａ−Ｆ８）（１ｍｇ／ｋｇ）；群５：ＺＤＦ糖尿病マウス＋試験抗ＭＢＧ抗体；および群６：ＺＤＦ糖尿病マウス＋試験抗ＭＢＧ抗体。病的状態の徴候を示すとき、または３９週齢のときにラットを屠殺する。
【０２７１】
[00277]臨床的パラメーター、病理組織学的分析、免疫組織学および統計分析の評価は、ＤＮのＳＴＺ−ＣＤ１マウスモデルに関して上で記載したのと同様に行われる。
【０２７２】
実施例１６．抗ＭＢＧ抗体は、Ｎａ＋Ｋ＋−ＡＴＰアーゼのＭＢＧ阻害を予防する
[00278]Ｎａ＋Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ（ＮＫＡ）は、ラット心臓から精製した。ＮＫＡを、筋鞘／粒子（ＳＬＰ）画分として採取し、凍結した。
【０２７３】
[00279]Ｎａ＋Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ活性を、下記のとおり測定した：ＳＬＰのアリコートを、反応バッファー（２００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、３０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、６０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＥＧＴＡ、１００μｇ／ｍＬ  ＰＭＳＦ、２μｇ／ｍＬペプスタチンＡ、および２μｇ／ｍＬアプロチニン）と混合した。ＭＢＧを用いてか、または用いずに、さらに抗ＭＢＧ抗体（１〜１００μｇ／ｍＬ）を用いてか、または用いずに反応を行った。ウアバインを、ＮＫＡ阻害に対する陽性対照として使用した。チューブを予め温め、ＡＴＰを添加した。反応を停止させ、氷上に置いた。
【０２７４】
[00280]マラカイトグリーンリン酸アッセイを使用してリン酸をアッセイした。リン酸標準物質またはサンプルを、９６ウェルプレートの各ウェルに添加し、続いて、試薬Ａを添加した。混合およびインキュベーションしながら試薬Ｂを添加した。その後、マイクロプレート分光光度計において６３０ｎｍにおけるＯＤを読み取った。ウアバインまたはＭＢＧは、ＮＫＡ活性を有意に阻害することができた。抗ＭＧＢマウス抗体３Ｅ９およびヒト化抗体Ｈ３Ｌ２は、ＮＫＡに対するＭＢＧの阻害効果を低下させることがわかった（図４）。
【０２７５】
実施例１７：生物学的サンプル中のＭＢＧの測定
[00281]尿中のＭＢＧレベルを、Ａｂｉ−Ｇｈａｎｅｍら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ．  ３２：３１〜４６ページ（２０１１年）から変更された競合ＥＬＩＳＡによって測定した。ウェルを抗ＭＢＧ抗体でコーティングした。その後、ＭＢＧ（既知または未知）およびＭＢＧ・ＢＳＡを含むサンプルをウェルに添加した。ＨＲＰ・抗ＢＳＡ抗体を各ウェルに添加し、その後、ＴＭＢ（Ｋ＆Ｐ  Ｌａｂｓ）と反応させた。反応を停止させ、ウェルを４５０ｎｍにおいて読み取った。既知の量のＭＢＧを含むサンプルを使用して標準曲線を作製した（図５）。尿サンプルを、アッセイし、標準曲線と比較した。尿サンプル中のＭＢＧの濃度を標準曲線の直線範囲から算出した。尿サンプル中に見られたＭＢＧの量は、文献で報告されている値と同様であった。例えば、ヒト尿サンプル＃３は、２回分析し、０．１４０および０．１４９のＯＤ値を得た。標準曲線から、これらの値は、２２４．６＋／−２３．７ｐｇ／ｍＬ  ＭＢＧに相当する。この実施例は、尿サンプルを利用してＭＢＧを測定したが、このアッセイには任意の生体液／サンプルを使用できるであろう。
【０２７６】
[00282]特定の実施形態が示され、記載されているが、それに対してさまざまな改変が行われてもよく、本明細書において意図されることが理解される。本開示が本明細書において提供される特定の例によって限定されないことも理解される。本明細書において本開示の実施形態および例の説明および実例が、限定する意味に解釈されることを意図しない。本開示のすべての態様は、さまざまな条件および変数によって左右される場合もある本明細書中に記載されている特定の描写、構成または相対的割合に限定されないこともさらに理解される。本開示の実施形態および例の形態および細部におけるさまざまな改変物および変形物は、当業者には明白であろう。したがって、本開示が任意のおよびすべてのそのような改変物、変形物および等価物も含むことが意図される。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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