(57)【要約】細胞または動物におけるＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量または活性を低減するため、そしてある特定の例では、細胞または動物におけるＬＲＲＫ２タンパク質の量を低減するための化合物、方法、及び薬学的組成物が提供される。そのような化合物、方法、及び薬学的組成物は、神経変性疾患の少なくとも１つの症状または特徴を改善するのに有用である。そのような症状及び特徴は、運動失調、神経障害、及び凝集体形成を含む。そのような神経変性疾患は、パーキンソン病を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜５０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＬＲＲＫ２核酸の等長部分と少なくとも９０％相補的であり、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖及び修飾されたヌクレオシド間結合から選択される少なくとも１つの修飾を含む、前記オリゴマー化合物。
【請求項２】
１２〜５０個の結合されたヌクレオシドからなり、配列番号３０〜３８４７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、オリゴマー化合物。
【請求項３】
１２〜５０個の結合されたヌクレオシドからなり、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の隣接する核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記部分が、
配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８の等長部分、
配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５の等長部分、
配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６の等長部分、
配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６の等長部分、
配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び／または８７，８３８〜８７，８６９の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３の等長部分、
配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６の等長部分、または
配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６の等長部分に相補的である、前記オリゴマー化合物。
【請求項４】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列全体にわたって測定された場合に、配列番号１または配列番号２の核酸塩基配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である核酸塩基配列を有する、請求項１〜３のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項５】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項１〜４のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項６】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項５に記載のオリゴマー化合物。
【請求項７】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、二環式糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項６に記載のオリゴマー化合物。
【請求項８】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、２’−４’架橋を有する二環式糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含み、前記２’−４’架橋が、−Ｏ−ＣＨ２−及び−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−から選択される、請求項７に記載のオリゴマー化合物。
【請求項９】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、非二環式の修飾された糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項５〜８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項１０】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、２’−ＭＯＥ修飾された糖または２’−ＯＭｅ修飾された糖を含む非二環式の修飾された糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項１１】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、糖サロゲートを含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項５〜１０のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項１２】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、モルホリノ及びＰＮＡから選択される糖サロゲートを含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、請求項１１に記載のオリゴマー化合物。
【請求項１３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
１〜５個の結合された５’領域ヌクレオシドからなる５’領域、
６〜１０個の結合された中心領域ヌクレオシドからなる中心領域、及び
１〜５個の結合された３’領域ヌクレオシドからなる３’領域を含む糖モチーフを有し、
前記５’領域ヌクレオシドの各々及び前記３’領域ヌクレオシドの各々が、修飾された糖部分を含み、前記中心領域ヌクレオシドの各々が、修飾されていない２’−デオキシリボシル糖部分を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項１４】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項１５】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合である、請求項１４に記載のオリゴマー化合物。
【請求項１６】
少なくとも１つのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１４または１５に記載のオリゴマー化合物。
【請求項１７】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項１４または１６に記載のオリゴマー化合物。
【請求項１８】
各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合のいずれかである、請求項１４、１６、または１７のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項１９】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾された核酸塩基を含む、請求項１〜１８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項２０】
前記修飾された核酸塩基が、５−メチルシトシンである、請求項１９に記載のオリゴマー化合物。
【請求項２１】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１２〜３０、１２〜２２、１２〜２０、１４〜２０、１５〜２５、１６〜２０、１８〜２２、または１８〜２０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１〜２０のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項２２】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１７または２０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１〜２１のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項２３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、請求項１〜２２のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項２４】
複合部分及び複合リンカーを含む複合群を含む、請求項１〜２２のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項２５】
前記複合群が、１〜３個のＧａｌＮＡｃリガンドを含むＧａｌＮＡｃクラスターを含む、請求項２４に記載のオリゴマー化合物。
【請求項２６】
前記複合リンカーが、単結合からなる、請求項２４または２５に記載のオリゴマー化合物。
【請求項２７】
前記複合リンカーが、切断可能である、請求項２５に記載のオリゴマー化合物。
【請求項２８】
前記複合リンカーが、１〜３個のリンカーヌクレオシドを含む、請求項２７に記載のオリゴマー化合物。
【請求項２９】
前記複合群が、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの５’末端で前記修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている、請求項２４〜２８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項３０】
前記複合群が、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの３’末端で前記修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている、請求項２４〜２８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項３１】
末端基を含む、請求項１〜３０のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項３２】
前記オリゴマー化合物が、一本鎖オリゴマー化合物である、請求項１〜３１のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項３３】
前記オリゴマー化合物が、リンカーヌクレオシドを含まない、請求項１〜２７または２９〜３１のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【請求項３４】
請求項１〜３１または３３のいずれかに記載のオリゴマー化合物を含むオリゴマー二本鎖。
【請求項３５】
請求項１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー化合物または請求項３４に記載のオリゴマー二本鎖を含むか、またはそれらからなるアンチセンス化合物。
【請求項３６】
請求項１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー化合物または請求項３４に記載のオリゴマー二本鎖、及び薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項３７】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化１】
2021530204.tif 000485
（配列番号２２２）
またはその塩。
【請求項３８】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化２】
2021530204.tif 000486
（配列番号８８８）
またはその塩。
【請求項３９】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化３】
2021530204.tif 000487
（配列番号１４３１）
またはその塩。
【請求項４０】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化４】
2021530204.tif 000488
（配列番号３５９０）
またはその塩。
【請求項４１】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化５】
2021530204.tif 000489
（配列番号３３８５）
またはその塩。
【請求項４２】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化６】
2021530204.tif 000490
（配列番号８５２）
またはその塩。
【請求項４３】
前記式のナトリウム塩である、請求項３７〜４２のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化７】
2021530204.tif 000491
（配列番号２２２）。
【請求項４５】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化８】
2021530204.tif 000492
（配列番号８８８）。
【請求項４６】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化９】
2021530204.tif 000493
（配列番号１４３１）。
【請求項４７】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化１０】
2021530204.tif 000494
（配列番号３５９０）。
【請求項４８】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化１１】
2021530204.tif 000495
（配列番号３３８５）。
【請求項４９】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【化１２】
2021530204.tif 000496
（配列番号８５２）。
【請求項５０】
請求項３７〜４９のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチドのキラル的に濃縮された集団であって、前記集団が、特定の立体化学的配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、前記キラル的に濃縮された集団。
【請求項５１】
前記集団が、（Ｓｐ）配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項５０に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５２】
前記集団が、（Ｒｐ）配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項５０または５１に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５３】
前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において特定の、独立して選択される立体化学的配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項５０に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５４】
前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において前記（Ｓｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項５３に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５５】
前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において前記（Ｒｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項５３に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５６】
前記集団が、５’から３’の方向で、Ｓｐ−Ｓｐ−Ｒｐ配置における少なくとも３個の隣接するホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項５０または請求項５３に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５７】
請求項３７〜４９のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチドの集団であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの前記ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全てが、ステレオランダムである、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの集団。
【請求項５８】
請求項３７〜４９のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチド及び薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物。
【請求項５９】
前記薬学的に許容される希釈剤が、人工脳脊髄液である、請求項５８に記載の薬学的組成物。
【請求項６０】
前記薬学的組成物が、前記修飾されたオリゴヌクレオチド及び人工脳脊髄液から本質的になる、請求項５９に記載の薬学的組成物。
【請求項６１】
請求項３６または５８〜６０のいずれかに記載の薬学的組成物を動物に投与することを含む方法。
【請求項６２】
ＬＲＲＫ２に関連する疾患を治療する方法であって、ＬＲＲＫ２に関連する疾患を有するかまたはそれを発症する危険性のある個体に、治療有効量の、請求項３６または５８〜６０のいずれかに記載の薬学的組成物を投与し、それによりＬＲＲＫ２に関連する前記疾患を治療することを含む、前記方法。
【請求項６３】
ＬＲＲＫ２に関連する前記疾患が、神経変性疾患である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記神経変性疾患の少なくとも１つの症状または特徴が、改善される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記症状または特徴が、運動失調、神経障害、及び凝集体形成のうちのいずれかである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ｇｅｓ  ｍＣｅｏ  Ｔｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅ（配列番号２２２）；
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【請求項６８】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ｔｅｓ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｅｏ  Ｇｅｏ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅ（配列番号８８８）；
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【請求項６９】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ａｅｓ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  Ｔｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ａｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅ（配列番号１４３１）；
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【請求項７０】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ａｅｓ  ｍＣｅｏ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ａｅ（配列番号３５９０）、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【請求項７１】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、Ａｅｓ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅ（配列番号３３８５）、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【請求項７２】
以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、ｍＣｅｓ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｏ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅ（配列番号８５２）、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【請求項７３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、ＲＮＡｉ化合物である、請求項３に記載のオリゴマー化合物。
【請求項７４】
前記ＲＮＡｉ化合物が、ｓｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡである、請求項７３に記載のオリゴマー化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、電子形式で配列表と共に出願されている。配列表は、サイズが１．１２ＭＢである、２０１９年６月１４日に作成されたＢＩＯＬ０３２４ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔのファイル名で提供される。配列表の電子形式での情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
細胞または動物におけるロイシンリッチ反復キナーゼ（ＬＲＲＫ２）ＲＮＡの量または活性を低減するため、そしてある特定の例では、細胞または動物におけるＬＲＲＫ２タンパク質の量を低減するための化合物、方法、及び薬学的組成物が提供される。そのような化合物、方法、及び薬学的組成物は、神経変性疾患の少なくとも１つの症状または特徴を改善するのに有用である。そのような症状及び特徴は、運動失調、神経障害、及び凝集体形成を含む。そのような神経変性疾患は、パーキンソン病を含む。
【背景技術】
【０００３】
ＬＲＲＫ２遺伝子は、アルマジロ反復（ＡＲＭ）領域、アンキリン反復（ＡＮＫ）領域、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ドメイン、キナーゼドメイン、ＲＡＳドメイン、ＧＴＰａｓｅドメイン、及びＷＤ４０ドメインを有するタンパク質をコードする。このタンパク質は、主に細胞質内に存在するが、ミトコンドリア外膜とも関連付けられる。ＬＲＲＫ２タンパク質の１つのセグメントは、ロイシンが富化されており、シグナル伝達及び細胞骨格の組立てに関与し得る。ＬＲＲＫ２タンパク質の他の部分も、タンパク質間相互作用に関与すると考えられている。さらなる研究は、ＬＲＲＫ２タンパク質が、リン酸化及びＧＴＰａｓｅ活性を含む、キナーゼ活性として知られる酵素機能を有することを示している。ＬＲＲＫ２は、脳、及び身体全体にわたる他の組織において活性である。
【０００４】
全ゲノム関連解析により、ＬＲＲＫ２とパーキンソン病との関連が判明した。実に、ＬＲＲＫ２は、パーキンソン病に対する知られている最大の遺伝的要因である。にもかかわらず、パーキンソン病は、遺伝子疾患とはみなされていない。パーキンソン病の症例の大部分は突発性である。パーキンソン病の症例のうち約１０パーセントは、遺伝的原因に結び付けられている。ＬＲＲＫ２遺伝子の変異が、この比較的小さい群におけるパーキンソン病の最も一般的な原因であり、全パーキンソン病症例の１〜２パーセントを占める。
【０００５】
現在、非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病を含むパーキンソン病などの神経変性疾患を治療するための許容される選択肢が不足している。したがって、そのような疾患の治療のための化合物、方法、及び薬学的組成物を提供することが本明細書の目標である。
【発明の概要】
【０００６】
ＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量または活性を低減するため、ある特定の実施形態では、細胞または動物におけるＬＲＲＫ２タンパク質の量を低減するための化合物、方法、及び薬学的組成物が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、動物は、神経変性疾患を有する。ある特定の実施形態では、動物は、パーキンソン病を有する。ある特定の実施形態では、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡの発現を低減するのに有用な化合物は、オリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡの発現を低減するのに有用な化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドである。
【０００７】
神経変性疾患の少なくとも１つの症状または特徴を改善するのに有用な方法もまた提供される。ある特定の実施形態では、神経変性疾患は、パーキンソン病である。ある特定の実施形態では、パーキンソン病は、ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病または非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病のいずれかである。ある特定の実施形態には、症状または特徴は、運動失調、神経障害、及び凝集体形成が含まれる。ある特定の実施形態では、これらの症状の改善は、改善された運動機能、低減された神経障害、及び凝集体の数の低減をもたらす。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
前述の概要及び以下の詳細な説明は共に、例示的かつ説明的であるに過ぎず、制限するものではないことを理解されたい。本明細書において、単数の使用は、特に明記されない限り、複数を含む。本明細書で使用される場合、「または（ｏｒ）」の使用は、特に明記されない限り、「及び／または」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、制限するものではない。また、「要素」または「構成要素」などの用語は、特に別段の定めのない限り、１つのユニットを含む要素及び構成要素、ならびに２つ以上のサブユニットを含む要素及び構成要素の両方を包含する。
【０００９】
本明細書で使用される項の見出しは、構造的目的のためのみであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。これらに限定されないが、特許、特許出願、論説、書物、及び論文を含む、この出願に列挙される全ての書類、または書類の一部は、本明細書で考察される書類の一部、ならびにそれらの全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。
【００１０】
定義
特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、有機合成化学、ならびに医薬的及び薬学的化学に関連して使用される用語法、ならびにそれらの手順及び技法は、当該技術分野で周知のものであり、一般的に使用される。許される場合、本開示全体において参照される全ての特許、出願、公開された出願、ならびに他の出版物及び他のデータは、それらの全体が本明細書において参照により組み込まれる。
【００１１】
別段の指示がない限り、以下の用語は、以下の意味を有する。
【００１２】
定義
本明細書で使用される場合、「２’−デオキシヌクレオシド」とは、天然型のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）中に見出されるような、２’−Ｈ（Ｈ）デオキシリボシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ある特定の実施形態では、２’−デオキシヌクレオシドは、修飾された核酸塩基を含み得るか、またはＲＮＡ核酸塩基（ウラシル）を含み得る。
【００１３】
本明細書で使用される場合、「２’−置換ヌクレオシド」とは、２’−置換糖部分を含むヌクレオシドを意味する。本明細書で使用される場合、糖部分に関する「２’−置換」とは、ＨまたはＯＨ以外の少なくとも１つの２’−置換基を含む糖部分を意味する。
【００１４】
本明細書で使用される場合、「５−メチルシトシン」とは、５位置に結合されたメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは、修飾された核酸塩基である。
【００１５】
本明細書で使用される場合、「投与すること」とは、薬学的剤を動物に提供することを意味する。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「動物」とは、ヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因し得る任意の検出可能な及び／または測定可能な変化を意味する。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性は、アンチセンス化合物の不在下で標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸またはそのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量または発現の減少である。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「アンチセンス化合物」とは、少なくとも１つのアンチセンス活性を達成することができるオリゴマー化合物を意味する。
【００１９】
本明細書で使用される場合、治療に関連する「改善する」とは、治療の不在下で同じ症状に対する少なくとも１つの症状における改善を意味する。ある特定の実施形態では、改善は、症状の重症度もしくは頻度の低減、または症状の発症の遅延、または症状の重症度もしくは頻度の進行の遅延である。ある特定の実施形態では、症状または特徴は、運動失調、神経障害、及び凝集体形成である。ある特定の実施形態では、これらの症状の改善は、改善された運動機能、低減された神経障害、及び凝集体の数の低減をもたらす。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「二環式ヌクレオシド」または「ＢＮＡ」とは、二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「二環式糖」または「二環式糖部分」とは、２つの環を含む修飾された糖部分を意味し、第２の環は、第１の環において原子のうち２つを接続する架橋を介して形成され、それにより二環式構造を形成する。ある特定の実施形態では、二環式糖部分の第１の環は、フラノシル部分である。ある特定の実施形態では、二環式糖部分は、フラノシル部分を含まない。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「切断可能な部分」とは、生理学的条件下、例えば、細胞、動物、またはヒト内で切断される原子の結合または群を意味する。
【００２３】
本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドに関連する「相補的」とは、オリゴヌクレオチドまたはその１つ以上の領域の核酸塩基及び別の核酸またはその１つ以上の領域の核酸塩基の少なくとも７０％は、オリゴヌクレオチド及び他方の核酸の核酸塩基配列が反対の方向に整列されている場合に、互いに水素結合することができることを意味する。相補的核酸塩基は、互いに水素結合を形成することができる核酸塩基を意味する。相補的核酸塩基対は、アデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）及びウラシル（Ｕ）、シトシン（Ｃ）及びグアニン（Ｇ）、５−メチルシトシン（ｍＣ）及びグアニン（Ｇ）を含む。相補的オリゴヌクレオチド及び／または核酸は、各ヌクレオシドで核酸塩基相補性を有する必要はない。むしろ、いくつかの不適合が耐容される。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドに関連する「完全に相補的」または「１００％相補的」とは、オリゴヌクレオチドが、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドで別のオリゴヌクレオチドまたは核酸と相補的であることを意味する。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「複合群」とは、オリゴヌクレオチドに直接的に結合される原子の群を意味する。複合群は、複合部分及び複合部分をオリゴヌクレオチドに結合する複合リンカーを含む。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「複合リンカー」とは、複合部分をオリゴヌクレオチドに接続する少なくとも１つの結合を含む原子の単結合または群を意味する。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「複合部分」とは、複合リンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合される原子の群を意味する。
【００２７】
本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドの文脈における「隣接する」とは、ヌクレオシド、核酸塩基、糖部分、または互いにすぐに隣接するヌクレオシド間結合を指す。例えば、「隣接する核酸塩基」とは、配列において互いにすぐに隣接する核酸塩基を意味する。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「拘束エチル」または「ｃＥｔ」または「ｃＥｔ修飾された糖」とは、β−Ｄリボシル二環式糖部分を意味し、二環式糖の第２の環は、４’−炭素及びβ−Ｄリボシル糖部分の２’−炭素を接続する架橋を介して形成され、架橋は、式４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’を有し、架橋のメチル基は、Ｓ配置にある。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「ｃＥｔヌクレオシド」とは、ｃＥｔ修飾された糖を含むヌクレオシドを意味する。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「キラル的に濃縮された集団」とは、同一の分子式の複数の分子を意味し、特定のキラル中心で特定の立体化学的配置を含む集団内の分子の数または割合は、特定のキラル中心がステレオランダムであった場合に、集団内の同じ特定のキラル中心で同じ特定の立体化学的配置を含むと予期される分子の数または割合よりも大きい。各分子内に複数のキラル中心を有する分子のキラル的に濃縮された集団は、１つ以上のステレオランダムなキラル中心を含んでもよい。ある特定の実施形態では、分子は、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、分子は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物である。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「ギャップマー」とは、１つ以上のヌクレオシドを有する外部領域の間に位置するＲＮａｓｅ  Ｈ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを意味し、内部領域を含むヌクレオシドは、ヌクレオシドまたは外部領域を含むヌクレオシドとは化学的に異なる。内部領域は「ギャップ」と称されてもよく、外部領域は「ウイング」と称されてもよい。別段の指示がない限り、「ギャップマー」は糖モチーフを指す。別段の指示がない限り、ギャップマーのギャップのヌクレオシドの糖部分は、修飾されていない２’−デオキシリボシルである。したがって、「ＭＯＥギャップマー」は、ウイング及び２’−デオキシヌクレオシドのギャップの両方において２’−ＭＯＥヌクレオシドの糖モチーフを有するギャップマーを示す。別段の指示がない限り、ＭＯＥギャップマーは、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合及び／または修飾された核酸塩基を含み得、そのような修飾は、必ずしも糖修飾のギャップマーのパターンに従うわけではない。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「ホットスポット領域」は、標的核酸の量または活性のオリゴマー化合物媒介低減に適合する標的核酸の核酸塩基の範囲である。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「ハイブリダイゼーション」とは、相補的オリゴヌクレオチド及び／または核酸の対合またはアニーリングを意味する。特定のメカニズムに限定されないが、ハイブリダイゼーションの最も一般定なメカニズムは、相補的核酸塩基の間の、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合であり得る水素結合に関与する。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド間結合」という用語は、オリゴヌクレオチド内の隣接するヌクレオシド間の共有結合である。本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオシド間結合」とは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合以外の任意のヌクレオシド間結合を意味する。「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合の非架橋酸素原子のうちの１つが硫黄原子で置き換えられる修飾されたヌクレオシド間結合である。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「リンカーヌクレオシド」とは、オリゴヌクレオチドを複合部分に直接または間接的のいずれかで結合するヌクレオシドを意味する。リンカーヌクレオシドは、オリゴマー化合物の複合リンカー内に配置される。リンカーヌクレオシドは、たとえそれらがオリゴヌクレオチドと隣接していても、オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチド部分の一部と考えられていない。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「非二環式の修飾された糖部分」とは、糖の２つの原子間に架橋を形成せず第２の環を形成する、置換などの修飾を含む修飾された糖部分を意味する。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「不適合」または「非相補的」とは、第１及び第２のオリゴヌクレオチドが整列されている場合に、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸の対応する核酸塩基と相補的でない第１のオリゴヌクレオチドの核酸塩基を意味する。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「ＭＯＥ」とは、メトキシエチルを意味する。「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＭＯＥ修飾された糖」とは、リボシル糖部分の２’−ＯＨ基の代わりに２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を意味する。本明細書で使用される場合、「２’−ＭＯＥヌクレオシド」とは、２’−ＭＯＥ修飾された糖を含むヌクレオシドを意味する。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「モチーフ」は、オリゴヌクレオチドにおける修飾されていない及び／または修飾された糖部分、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合のパターンを意味する。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡ」とは、別段の指定がない限り、タンパク質をコードし、プレｍＲＮＡ及び成熟ｍＲＮＡを含むＲＮＡ転写産物を意味する。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「神経変性疾患」とは、運動機能の損失及び神経細胞の死を含む機能または構造の進行性損失を特徴とする条件を意味する。ある特定の実施形態では、神経変性疾患は、パーキンソン病である。ある特定の実施形態では、パーキンソン病は、ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病または非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病であってもよい。
【００４２】
「非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病」は、原因ＬＲＲＫ２遺伝子変異と関連しないパーキンソン病の診断である。原因ＬＲＲＫ２遺伝子変異には、Ｇ２０１９Ｓ、Ｒ１４４１Ｃ、Ｒ１４４１Ｇ、Ｉ２０２０Ｔ、及びＹ１６９９Ｃが含まれる。パーキンソン病の診断は、個体の病歴、兆候及び症状の所見、ならびに標準的な臨床検査または評定を評価することを含む、任意の方法によって達成し得る。Ｇ２０１９Ｓ、Ｒ１４４１Ｃ、Ｒ１４４１Ｇ、Ｉ２０２０Ｔ、及びＹ１６９９ＣなどのＬＲＲＫ２と関連する変異に対する遺伝子試験により、個体が非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病を有するかどうかが判明し得る。パーキンソン病であるが原因ＬＲＲＫ２変異を伴わないと診断された個体は、非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病を有する。「非ＬＲＲＫ２媒介性パーキンソン病を有する動物を特定する」とは、パーキンソン病と診断されているか、または原因ＬＲＲＫ２変異を伴わないパーキンソン病を発症すしやすい動物を特定することを意味する。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「核酸塩基」は、修飾されていない核酸塩基または修飾された核酸塩基を意味する。本明細書で使用される場合、「修飾されていない核酸塩基」は、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ）、またはグアニン（Ｇ）である。本明細書で使用される場合、修飾された核酸塩基は、少なくとも１つの修飾されていない核酸塩基と対合することができる修飾されていないＡ、Ｔ、Ｃ、Ｕ、またはＧ以外の原子の群である。「５−メチルシトシン」は、修飾された核酸塩基である。一般的な塩基は、５つの修飾されていない核酸塩基のうちのいずれか１つと対になることがきる修飾された核酸塩基である。本明細書で使用される場合、「核酸塩基配列」は、任意の糖またはヌクレオシド間結合修飾とは無関係の核酸またはオリゴヌクレオチドにおける隣接する核酸塩基の順番を意味する。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」は、核酸塩基及び糖部分を含む化合物を意味する。核酸塩基及び糖部分はそれぞれ独立して、修飾されていないか、または修飾されている。本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオシド」は、修飾された核酸塩基及び／または修飾された糖部分を含むヌクレオシドを意味する。修飾されたヌクレオシドは、核酸塩基を欠乏する脱塩基ヌクレオシドを含む。「結合されたヌクレオシド」は、連続する配列において接続されている（すなわち、追加のヌクレオシドが結合されているものの間に存在しない）ヌクレオシドである。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「オリゴマー化合物」とは、オリゴヌクレオチド、及び任意に、複合群または末端基などの１つ以上の追加の特徴を意味する。オリゴマー化合物は、第１のオリゴマー化合物と相補的な第２のオリゴマー化合物と対になっていてもよく、または対になっていなくてもよい。「一本鎖オリゴマー化合物」は、不対オリゴマー化合物である。用語「オリゴマー二本鎖」とは、相補的核酸塩基配列を有する２つのオリゴマー化合物によって形成される二本鎖を意味する。オリゴマー二本鎖の各オリゴマー化合物は、「二本鎖オリゴマー化合物」と称され得る。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」とは、ヌクレオシド間結合を介して接続される結合されたヌクレオシドの鎖を意味し、各ヌクレオシド及びヌクレオシド間結合は、修飾されているか、または修飾されていない。別段の指示がない限り、オリゴヌクレオチドは、８〜５０個の結合されたヌクレオシドからなる。本明細書で使用される場合、「修飾されたオリゴヌクレオチド」とは、オリゴヌクレオチドを意味し、少なくとも１つのヌクレオシドまたはヌクレオシド間結合は、修飾されている。本明細書で使用される場合、「修飾されていないオリゴヌクレオチド」とは、任意のヌクレオシド修飾またはヌクレオシド間修飾を含まないオリゴヌクレオチドを意味する。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体または希釈剤」とは、動物に投与することにおいて使用するのに好適な任意の物質を意味する。ある特定のそのような担体は、薬学的組成物が、例えば、対象による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ剤、スラリー、懸濁剤、及びトローチ剤として製剤化されることを可能にする。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される担体または希釈剤は、滅菌水、減菌食塩水、減菌緩衝溶液、または減菌人工脳脊髄液である。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」とは、化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩を意味する。薬学的に許容される塩は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、所望でないそれに対する毒物学的効果を与えない。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」とは、対象に投与するのに好適な物質の混合物を意味する。例えば、薬学的組成物は、オリゴマー化合物及び減菌水溶液を含み得る。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、ある特定の細胞株において自由取り込みアッセイで活性を示す。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」とは、動物またはその細胞内の異なる形態に変換される体外の形態である治療剤を意味する。典型的には、動物内のプロドラッグの変換は、酵素（例えば、内因性またはウイルス性酵素）または細胞もしくは組織中に存在する化学物質の作用によって及び／または生理的状態によって促進される。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「量または活性を低減または阻害する」は、治療されていないまたは対照試料における転写発現または活性に対する転写発現または活性の低減または遮断を指し、必ずしも転写発現または活性の全排除を示すわけではない。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ化合物」とは、少なくとも部分的に、ＲＩＳＣまたはＡｇｏ２を介して作用し、標的核酸及び／または標的核酸によってコードされるタンパク質を調節するアンチセンス化合物を意味する。ＲＮＡｉ化合物は、これらに限定されないが、二本鎖ｓｉＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、及びｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物を含むｍｉｃｒｏＲＮＡを含む。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ化合物は、標的核酸の量、活性、及び／またはスプライシングを調節する。ＲＮＡｉ化合物という用語は、ＲＮａｓｅ  Ｈを介して作用するアンチセンス化合物を除外する。
【００５３】
本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドに関連する「自己相補的」とは、それ自体に少なくとも部分的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを意味する。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」は、２つの逆平行であり実質的に相補的な核酸鎖を含む二本鎖構造を有するリボ核酸分子を指す。二本鎖構造を形成する２つの鎖は、１つのより大きいＲＮＡ分子の異なる部分であってもよく、または別々のＲＮＡ分子であってもよい。２つの鎖が、１つのより大きい分子の一部であり、そのため１つの鎖の３’末端と二本鎖構造を形成するそれぞれの他の鎖の５’末端との間で連続した核酸塩基によって接続する場合、接続しているＲＮＡ鎖は「ヘアピンループ」と称される。ＲＮＡ鎖は、ヌクレオチドの数が同じであっても異なっていてもよい。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「標準細胞アッセイ」とは、実施例４に記載されるアッセイ及びその合理的な変形を意味する。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「標準インビボアッセイ」とは、実施例１４に記載される実験、及びその合理的な変形を意味する。
【００５７】
本明細書で使用される場合、同一の分子式の分子の集団の文脈における「ステレオランダムキラル中心」とは、ランダム立体化学的配置を有するキラル中心を意味する。例えば、ステレオランダムキラル中心を含む分子の集団において、ステレオランダムキラル中心の（Ｓ）配置を有する分子の数は、ステレオランダムキラル中心の（Ｒ）配置を有する分子の数と同じであり得るが、必ずしも同じであるとは限らない。キラル中心の立体化学的配置は、立体化学的配置を制御するように設計されていない合成方法の結果である場合に、ランダムと考えられる。ある特定の実施形態では、ステレオランダムキラル中心は、ステレオランダムホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「糖部分」とは、修飾されていない糖部分または修飾された糖部分を意味する。本明細書で使用される場合、「修飾されていない糖部分」とは、ＲＮＡ（「修飾されていないＲＮＡ糖部分」）中に見出されるような２’−ＯＨ（Ｈ）リボシル部分、またはＤＮＡ（「修飾されていないＤＮＡ糖部分」）中に見出されるような２’−Ｈ（Ｈ）デオキシリボシル部分を意味する。修飾されていない糖部分は、１’、３’、及び４’位置の各々で１つの水素、３’位置で酸素、及び５’位置で２つの水素を有する。本明細書で使用される場合、「修飾された糖部分」または「修飾された糖」とは、修飾されたフラノシル糖部分または糖サロゲートを意味する。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「糖サロゲート」とは、核酸塩基を、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオシド間結合、複合群、または末端基などの別の基に結合し得るフラノシル部分以外を有する修飾された糖部分を意味する。糖サロゲートを含む修飾されたヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド内で１つ以上の位置に抱合され得、そのようなオリゴヌクレオチドは、相補的オリゴマー化合物または標的核酸にハイブリダイズすることができる。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「標的核酸」及び「標的ＲＮＡ」とは、アンチセンス化合物が影響するように設計されている核酸を意味する。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「標的領域」とは、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計されている標的核酸の部分を意味する。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「末端基」とは、オリゴヌクレオチドの末端に共有結合された化学基または原子の群を意味する。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、動物に治療効果を提供する薬学的剤の量を意味する。例えば、治療有効量は、疾患の症状を改善する。
【００６４】
ある特定の実施形態
本開示は、以下の非限定的な番号付きの実施形態を提供する。
実施形態１．１２〜５０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＬＲＲＫ２核酸の等長部分と少なくとも９０％相補的であり、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖、糖サロゲート、及び修飾されたヌクレオシド間結合から選択される少なくとも１つの修飾を含む、前記オリゴマー化合物。
【００６５】
実施形態２：１２〜５０個の結合されたヌクレオシドからなり、配列番号３０〜３８４７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、オリゴマー化合物。
【００６６】
実施形態３：１２〜５０個の結合されたヌクレオシドからなり、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の隣接する核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記部分が、
配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８の等長部分、
配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５の等長部分、
配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６の等長部分、
配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６の等長部分、
配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び／または８７，８３８〜８７，８６９の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０の等長部分、
配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２の等長部分、
配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３の等長部分、
配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６の等長部分、または
配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６の等長部分に相補的である、前記オリゴマー化合物。
【００６７】
実施形態４．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列全体にわたって測定された場合に、配列番号１または配列番号２の核酸塩基配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である核酸塩基配列を有する、実施形態１〜３のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００６８】
実施形態５．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態１〜４のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００６９】
実施形態６．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態５に記載のオリゴマー化合物。
【００７０】
実施形態７．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、二環式糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態６に記載のオリゴマー化合物。
【００７１】
実施形態８．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、２’−４’架橋を有する二環式糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含み、前記２’−４’架橋が、−Ｏ−ＣＨ２−及び−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−から選択される、実施形態７に記載のオリゴマー化合物。
【００７２】
実施形態９．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、非二環式の修飾された糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態５〜８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００７３】
実施形態１０．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、２’−ＭＯＥ修飾された糖または２’−ＯＭｅ修飾された糖を含む非二環式の修飾された糖部分を含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態９に記載のオリゴマー化合物。
【００７４】
実施形態１１．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、糖サロゲートを含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態５〜１０のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００７５】
実施形態１２．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、モルホリノ及びＰＮＡから選択される糖サロゲートを含む少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む、実施形態１１に記載のオリゴマー化合物。
【００７６】
実施形態１３．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
１〜５個の結合された５’領域ヌクレオシドからなる５’領域、
６〜１０個の結合された中心領域ヌクレオシドからなる中心領域、及び
１〜５個の結合された３’領域ヌクレオシドからなる３’領域を含む糖モチーフを有し、
前記５’領域ヌクレオシドの各々及び前記３’領域ヌクレオシドの各々が、修飾された糖部分を含み、前記中心領域ヌクレオシドの各々が、修飾されていない２’−デオキシリボシル糖部分を含む、実施形態１〜１２のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００７７】
実施形態１４．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む、実施形態１〜１３のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００７８】
実施形態１５．前記修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合である、実施形態１４に記載のオリゴマー化合物。
【００７９】
実施形態１６．少なくとも１つのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、実施形態１４または１５に記載のオリゴマー化合物。
【００８０】
実施形態１７．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、実施形態１４または１６に記載のオリゴマー化合物。
【００８１】
実施形態１８．各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合のいずれかである、実施形態１４、１６、または１７のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００８２】
実施形態１９．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾された核酸塩基を含む、実施形態１〜１８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００８３】
実施形態２０．前記修飾された核酸塩基が、５−メチルシトシンである、実施形態１９に記載のオリゴマー化合物。
【００８４】
実施形態２１．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１２〜３０、１２〜２２、１２〜２０、１４〜２０、１５〜２５、１６〜２０、１８〜２２、または１８〜２０個の結合されたヌクレオシドからなる、実施形態１〜２０のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００８５】
実施形態２２．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１７または２０個の結合されたヌクレオシドからなる、実施形態１〜２１のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００８６】
実施形態２３．前記修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、実施形態１〜２２のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００８７】
実施形態２４．複合部分及び複合リンカーを含む複合群を含む、実施形態１〜２２のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００８８】
実施形態２５．前記複合群が、１〜３個のＧａｌＮＡｃリガンドを含むＧａｌＮＡｃクラスターを含む、実施形態２４に記載のオリゴマー化合物。
【００８９】
実施形態２６．前記複合リンカーが、単結合からなる、実施形態２４または２５に記載のオリゴマー化合物。
【００９０】
実施形態２７．前記複合リンカーが、切断可能である、実施形態２５に記載のオリゴマー化合物。
【００９１】
実施形態２８．前記複合リンカーが、１〜３個のリンカーヌクレオシドを含む、実施形態２７に記載のオリゴマー化合物。
【００９２】
実施形態２９．前記複合群が、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの５’末端で前記修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている、実施形態２４〜２８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００９３】
実施形態３０．前記複合群が、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの３’末端で前記修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている、実施形態２４〜２８のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００９４】
実施形態３１．末端基を含む、実施形態１〜３０のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００９５】
実施形態３２．前記オリゴマー化合物が、一本鎖オリゴマー化合物である、実施形態１〜３１のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００９６】
実施形態３３．前記オリゴマー化合物が、リンカーヌクレオシドを含まない、実施形態１〜２７または２９〜３１のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
【００９７】
実施形態３４．実施形態１〜３１または３３のいずれかに記載のオリゴマー化合物を含むオリゴマー二本鎖。
【００９８】
実施形態３５．実施形態１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー化合物または実施形態３４に記載のオリゴマー二本鎖を含むか、またはそれらからなるアンチセンス化合物。
【００９９】
実施形態３６．実施形態１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー化合物または実施形態３４に記載のオリゴマー二本鎖、及び薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物。
【０１００】
実施形態３７．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１０１】
【化１】
2021530204.tif 000002
【０１０２】
またはその塩。
【０１０３】
実施形態３８．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１０４】
【化２】
2021530204.tif 000003
【０１０５】
またはその塩。
【０１０６】
実施形態３９．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１０７】
【化３】
2021530204.tif 000004
【０１０８】
またはその塩。
【０１０９】
実施形態４０．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１１０】
【化４】
2021530204.tif 000005
【０１１１】
またはその塩。
【０１１２】
実施形態４１．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１１３】
【化５】
2021530204.tif 000006
【０１１４】
またはその塩。
【０１１５】
実施形態４２．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１１６】
【化６】
2021530204.tif 000007
【０１１７】
またはその塩。
【０１１８】
実施形態４３．前記式のナトリウム塩である、実施形態３７〜４２のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチド。
【０１１９】
実施形態４４．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１２０】
【化７】
2021530204.tif 000008
【０１２１】
実施形態４５．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１２２】
【化８】
2021530204.tif 000009
【０１２３】
実施形態４６．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１２４】
【化９】
2021530204.tif 000010
【０１２５】
実施形態４７．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１２６】
【化１０】
2021530204.tif 000011
【０１２７】
実施形態４８．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１２８】
【化１１】
2021530204.tif 000012
【０１２９】
実施形態４９．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
【０１３０】
【化１２】
2021530204.tif 000013
【０１３１】
実施形態５０．実施形態３７〜４９のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチドのキラル的に濃縮された集団であって、前記集団が、特定の立体化学的配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、前記キラル的に濃縮された集団。
【０１３２】
実施形態５１．前記集団が、（Ｓｐ）配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、実施形態５０に記載のキラル的に濃縮された集団。
【０１３３】
実施形態５２．前記集団が、（Ｒｐ）配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、実施形態５０または５１に記載のキラル的に濃縮された集団。
【０１３４】
実施形態５３．前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において特定の、独立して選択される立体化学的配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、実施形態５０に記載のキラル的に濃縮された集団。
【０１３５】
実施形態５４．前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において前記（Ｓｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、実施形態５３に記載のキラル的に濃縮された集団。
【０１３６】
実施形態５５．前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において前記（Ｒｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、実施形態５３に記載のキラル的に濃縮された集団。
【０１３７】
実施形態５６．前記集団が、５’から３’の方向で、Ｓｐ−Ｓｐ−Ｒｐ配置における少なくとも３個の隣接するホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、実施形態５０または実施形態５３に記載のキラル的に濃縮された集団。
【０１３８】
実施形態５７．実施形態３７〜４９のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチドの集団であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの前記ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全てが、ステレオランダムである、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの集団。
【０１３９】
実施形態５８．実施形態３７〜４９のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチド及び薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物。
【０１４０】
実施形態５９．前記薬学的に許容される希釈剤が、人工脳脊髄液である、実施形態５８に記載の薬学的組成物。
【０１４１】
実施形態６０．前記薬学的組成物が、前記修飾されたオリゴヌクレオチド及び人工脳脊髄液から本質的になる、実施形態５９に記載の薬学的組成物。
【０１４２】
実施形態６１．実施形態３６または５８〜６０のいずれかに記載の薬学的組成物を動物に投与することを含む方法。
【０１４３】
実施形態６２．ＬＲＲＫ２に関連する疾患を治療する方法であって、ＬＲＲＫ２に関連する疾患を有するかまたはそれを発症する危険性のある個体に、治療有効量の、実施形態３６または５８〜６０のいずれかに記載の薬学的組成物を投与し、それによりＬＲＲＫ２に関連する前記疾患を治療することを含む、前記方法。
【０１４４】
実施形態６３．ＬＲＲＫ２に関連する前記疾患が、神経変性疾患である、実施形態６２に記載の方法。
【０１４５】
実施形態６４．前記神経変性疾患が、パーキンソン病である、実施形態６３に記載の方法。
【０１４６】
実施形態６５．前記神経変性疾患の少なくとも１つの症状または特徴が、改善される、実施形態６４に記載の方法。
【０１４７】
実施形態６６．前記症状または特徴が、運動失調、神経障害、及び凝集体形成のうちのいずれかである、実施形態６５に記載の方法。
【０１４８】
実施形態６７．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ｇｅｓ  ｍＣｅｏ  Ｔｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅ（配列番号２２２）；
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【０１４９】
実施形態６８．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ｔｅｓ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｅｏ  Ｇｅｏ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅ（配列番号８８８）；
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【０１５０】
実施形態６９．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ａｅｓ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  Ｔｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ａｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅ（配列番号１４３１）；
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【０１５１】
実施形態７０．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ａｅｓ  ｍＣｅｏ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ａｅ（配列番号３５９０）、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【０１５２】
実施形態７１．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、Ａｅｓ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅ（配列番号３３８５）、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【０１５３】
実施形態７２．以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、ｍＣｅｓ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｏ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅ（配列番号８５２）、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
【０１５４】
実施形態７３．前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、ＲＮＡｉ化合物である、実施形態３に記載のオリゴマー化合物。
【０１５５】
実施形態７４．前記ＲＮＡｉ化合物が、ｓｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡである、実施形態７３に記載のオリゴマー化合物。
【０１５６】
Ｉ．ある特定のオリゴヌクレオチド
ある特定の実施形態では、結合されたヌクレオシドからなるオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物が本明細書に提供される。オリゴヌクレオチドは、修飾されていないオリゴヌクレオチド（ＲＮＡまたはＤＮＡ）であり得るか、または修飾されたオリゴヌクレオチドであり得る。修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾されていないＲＮＡまたはＤＮＡに対して少なくとも１つの修飾を含む。すなわち、修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド（修飾された糖部分及び／または修飾された核酸塩基を含む）及び／または少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む。
【０１５７】
Ａ．ある特定の修飾されたヌクレオシド
修飾されたヌクレオシドは、修飾された糖部分または修飾された核酸塩基または修飾された糖部分及び修飾された核酸塩基の両方を含む。
【０１５８】
１．ある特定の糖部分
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、非二環式の修飾された糖部分である。ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、二環式または三環式糖部分である。ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、糖サロゲートである。そのような糖サロゲートは、修飾された糖部分の他の種類のものに対応する１つ以上の置換を含み得る。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、そのいずれもフラノシル環の２つの原子を架橋して二環式構造を形成しない１つ以上の置換基を有するフラノシル環を含む非二環式の修飾された糖部分である。そのような非架橋置換基は、これらに限定されないが、２’、４’、及び／または５’位置を含むフラノシルの任意の位置にあり得る。ある特定の実施形態では、非二環式の修飾された糖部分の１つ以上の非架橋置換基は、分岐である。非二環式の修飾された糖部分に好適な２’−置換基群の例には、これらに限定されないが、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３（「ＯＭｅ」または「Ｏ−メチル」）、及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３（「ＭＯＥ」）が挙げられる。ある特定の実施形態では、２’−置換基は、ハロ、アリル、アミノ、アジド、ＳＨ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０置換アルコキシ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０置換アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ（Ｒｍ）−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ（Ｒｍ）−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ（Ｒｍ）−アルキニル、Ｏ−アルキレニル−Ｏ−アルキル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリール、Ｏ−アラルキル、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）の中から選択され、各Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈ、アミノ保護基、または置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルであり、２’−置換基は、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，５３１，５８４、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８５９，２２１、及びＣｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，００５，０８７に記載されている。これらの２’−置換基のある特定の実施形態は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ（ＮＯ２）、チオール、チオアルコキシ、チオアルキル、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルの中から独立して選択される１つ以上の置換基でさらに置換され得る。非二環式の修飾された糖部分に好適な４’−置換基の例には、これらに限定されないが、アルコキシ（例えば、メトキシ）、アルキル、及びＭａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２０１５／１０６１２８に記載されるものが挙げられる。非二環式の修飾された糖部分に好適な５’−置換基群の例には、これらに限定されないが、５−メチル（ＲまたはＳ）、５’−ビニル、及び５’−メトキシが挙げられる。ある特定の実施形態では、非二環式の修飾された糖部分は、２つ以上の非架橋糖置換基、例えば、２’−Ｆ−５’−メチル糖部分、ならびにＭｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２００８／１０１１５７及びＲａｊｅｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１３／０２０３８３６に記載される修飾された糖部分及び修飾されたヌクレオシドを含む。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、２’−置換非二環式の修飾されたヌクレオシドは、Ｆ、ＮＨ２、Ｎ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）３ＮＨ２、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＮ−置換アセトアミド（ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ））から選択される非架橋２’−置換基を含む糖部分を含み、各Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈ、アミノ保護基、または置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、２’−置換ヌクレオシド非二環式の修飾されたヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２、Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３（「ＮＭＡ」）から選択される非架橋２’−置換基を含む糖部分を含む。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、２’−置換非二環式の修飾されたヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＨ３、及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３．から選択される非架橋２’−置換基を含む糖部分を含む。
【０１６３】
ある特定の修飾された糖部分は、フラノシル環の２つの原子を架橋して第２の環を形成する置換基を含み、二環式糖部分をもたらす。ある特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、４’及び２’フラノース環原子の間に架橋を含む。そのような４’〜２’架橋糖置換基の例には、これらに限定されないが、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’（「ＬＮＡ」）、４’−ＣＨ２−Ｓ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（「ＥＮＡ」）、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（「拘束エチル」または「ｃＥｔ」と称される）、４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’、４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（「拘束ＭＯＥ」または「ｃＭＯＥ」）及びその類似体（例えば、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，３９９，８４５、Ｂｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，５６９，６８６、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，７４１，４５７、及びＳｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０２２，１９３を参照）、４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’及びその類似体（例えば、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２７８，２８３を参照）、４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’及びその類似体（例えば、Ｐｒａｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２７８，４２５を参照）、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（例えば、Ａｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，６９６，３４５及びＡｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，１２４，７４５を参照）、４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（例えば、Ｚｈｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４を参照）、４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’及びその類似体（例えば、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２７８，４２６を参照）、４’−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’、４’−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、ならびに４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’が挙げられ、各Ｒ、Ｒａ、及びＲｂは独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１−Ｃ１２アルキルである（例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，４２７，６７２を参照）。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、そのような４’〜２’架橋は独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１〜４個の結合された基を含み、
式中、
ｘは、０、１、または２であり、
ｎは、１、２、３、または４であり、
各Ｒａ及びＲｂは独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、
各Ｊ１及びＪ２は独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
【０１６５】
追加の二環式糖部分は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３、Ａｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９，８３６２−８３７９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａ．，Ｕ．Ｓ．７，０５３，２０７、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，２６８，４９０、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｕ．Ｓ．６，７７０，７４８、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．ＲＥ４４，７７９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，７９４，４９９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，６７０，４６１、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，０３４，１３３、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０８０，６４４、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０３４，９０９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，１５３，３６５、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，５７２，５８２、及びＲａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，５２５，１９１、Ｔｏｒｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２００４／１０６３５６、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ１９９９／０１４２２６、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２００７／１３４１８１、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，５４７，６８４、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，６６６，８５４、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０８８，７４６、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，７５０，１３１、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０３０，４６７、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２６８，９８０、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，５４６，５５６、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，５３０，６４０、Ｍｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．９，０１２，４２１、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，５０１，８０５、ならびに米国特許公開Ａｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，第ＵＳ２００８／００３９６１８号及びＭｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，同第ＵＳ２０１５／０１９１７２７号を参照されたい。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、二環式糖部分及びそのような二環式糖部分を抱合するヌクレオシドは、異性体配置によってさらに定義される。例えば、ＬＮＡヌクレオシド（本明細書に記載される）は、α−Ｌ配置またはβ−Ｄ配置にあり得る。
【０１６７】
【化１３】
2021530204.tif 000014
【０１６８】
α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）またはα−Ｌ−ＬＮＡ二環式ヌクレオシドは、アンチセンス活性を示したオリゴヌクレオチドに抱合されている（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。本明細書において、二環式ヌクレオシドの一般的な説明は、両方の異性体配置を含む。特定の二環式ヌクレオシド（例えば、ＬＮＡまたはｃＥｔ）の位置が本明細書に例示される実施形態で特定される場合、別段の定めがない限り、それらはβ−Ｄ配置にある。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、１つ以上の非架橋糖置換基及び１つ以上の架橋糖置換基（例えば、５’−置換及び４’−２’架橋糖）を含む。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、糖サロゲートである。ある特定のそのような実施形態では、糖部分の酸素原子は、例えば、硫黄、炭素、または窒素原子で置き換えられる。ある特定のそのような実施形態では、そのような修飾された糖部分はまた、本明細書に記載されるように、架橋及び／または非架橋置換基を含む。例えば、ある特定の糖サロゲートは、４’−硫黄原子ならびに２’−位置（例えば、Ｂｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，８７５，７３３及びＢｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，９３９，６７７を参照）及び／または５’位置での置換を含む。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、５個の原子以外を有する環を含む。例えば、ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、６員テトラヒドロピラン（「ＴＨＰ」）を含む。そのようなテトラヒドロピランは、さらに修飾されているか、または置換されていてもよい。そのような修飾されたテトラヒドロピランを含むヌクレオシドは、これらに限定されないが、ヘキシトール核酸（「ＨＮＡ」）、アニトール核酸（「ＡＮＡ」）、マンニトール核酸（「ＭＮＡ」）（例えば、Ｌｅｕｍａｎｎ，ＣＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，１０，８４１−８５４を参照）、フルオロＨＮＡ：
【０１７２】
【化１４】
2021530204.tif 000015
【０１７３】
（「Ｆ−ＨＮＡ」、例えば、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０８８，９０４、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，４４０，８０３、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，７９６，４３７、及びＳｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．９，００５，９０６を参照；Ｆ−ＨＮＡはまた、Ｆ−ＴＨＰまたは３’−フルオロテトラヒドロピランとも称され得る）、及び以下の式を有する追加の修飾されたＴＨＰ化合物を含むヌクレオシドを含み、
【０１７４】
【化１５】
2021530204.tif 000016
【０１７５】
式中、独立して、該修飾ＴＨＰヌクレオシドの各々について、
Ｂｘは、核酸塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は各々独立して、修飾されたＴＨＰヌクレオシドをオリゴヌクレオチドの残りに結合するヌクレオシド間結合基であるか、またはＴ３及びＴ４の一方は、修飾されたＴＨＰヌクレオシドをオリゴヌクレオチドの残りに結合するヌクレオシド間結合基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合された複合群、または５’もしくは３’−末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１及びＲ２の各々は独立して、水素、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、及びＣＮの中から選択され、Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２、及びＪ３は独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、修飾されたＴＨＰヌクレオシドが提供され、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７はそれぞれ、Ｈである。ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７のうちの少なくとも１つは、Ｈ以外である。ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７のうちの少なくとも１つは、メチルである。ある特定の実施形態では、修飾されたＴＨＰヌクレオシドが提供され、Ｒ１及びＲ２のうちの一方は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｆであり、Ｒ２は、Ｈであり、ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシであり、Ｒ２は、Ｈであり、ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシエトキシであり、Ｒ２は、Ｈである。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、５個を超える原子及び２個以上のヘテロ原子を有する環を含む。例えば、モルホリノ糖部分を含むヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドにおけるそれらの使用が報告されている（例えば、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２、４１，４５０３−４５１０及びＳｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６９８，６８５、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１６６，３１５、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｕ．Ｓ．５，１８５，４４４、ならびにＳｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，０３４，５０６を参照）。本明細書で使用される場合、用語「モルホリノ」は、以下の構造を有する糖サロゲートを意味する：
【０１７８】
【化１６】
2021530204.tif 000017
【０１７９】
ある特定の実施形態では、モルホリノは、例えば、上記のモルホリノ構造から様々な置換基を付加または改変することによって修飾され得る。そのような糖サロゲートは、本明細書で「修飾されたモルホリノ」と称される。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、非環式部分を含む。そのような非環式糖サロゲートを含むヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドの例には、これらに限定されないが、ペプチド核酸（「ＰＮＡ」）、非環式ブチル核酸（例えば、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，１１，５８５３−５８６５を参照）、ならびにＭａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２０１１／１３３８７６に記載されるヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【０１８１】
多くの他の二環式及び三環式糖ならびに糖サロゲート環系は、修飾されたヌクレオシドで使用され得る当該技術分野で既知である。
【０１８２】
２．ある特定の修飾された核酸塩基
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾されていない核酸塩基を含む１つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含む１つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオシドと称される、核酸塩基を含まない１つ以上のヌクレオシドを含む。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、アルキルまたはアルキニル置換ピリミジン、アルキル置換プリン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、及びＯ−６置換プリンから選択される。ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、２−アミノプロピルアデニン、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−Ｎ−メチルグアニン、６−Ｎ−メチルアデニン、２−プロピルアデニン、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−リボシルウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル、８−アザ及び他の８−置換プリン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル、５−ハロウラシル、及び５−ハロシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、６−Ｎ−ベンゾイルアデニン、２−Ｎ−イソブチリルグアニン、４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、４−Ｎ−ベンゾイルウラシル、５−メチル４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、５−メチル４−Ｎ−ベンゾイルウラシル、一般的な塩基、疎水性塩基、無差別塩基、サイズ拡張された塩基、ならびにフッ素化塩基から選択される。さらなる修飾された核酸塩基としては、三環式ピリミジン、例えば、１，３−ジアザフェノキサジン−２−オン、１，３−ジアザフェノチアジン−２−オン、及び９−（２−アミノエトキシ）−１，３−ジアザフェノキサジン−２−オン（Ｇクランプ）が挙げられる。修飾された核酸塩基はまた、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環、例えば、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、及び２−ピリドンで置き換えられるものを含み得る。さらなる核酸塩基は、Ｍｅｒｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．３，６８７，８０８に開示されるもの、Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９０，８５８−８５９、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３、Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３，２７３−２８８に開示されるもの、及びＣｈａｐｔｅｒｓ  ６  ａｎｄ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｒｏｏｋｅ  Ｓ．Ｔ．，Ｅｄ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，２００８，１６３−１６６  ａｎｄ  ４４２−４４３に開示されるものを含む。
【０１８４】
確実な上記の修飾された核酸塩基、ならびに他の修飾された核酸塩基の調製を教示する出版物は、限定することなく、Ｍａｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２００３／０１５８４０３、Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２００３／０１７５９０６、Ｄｉｎｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．４，８４５，２０５、Ｓｐｉｅｌｖｏｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１３０，３０２、Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１３４，０６６、Ｂｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１７５，２７３、Ｕｒｄｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，３６７，０６６、Ｂｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４３２，２７２、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４３４，２５７、Ｇｍｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４５７，１８７、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４５９，２５５、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４８４，９０８、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５０２，１７７、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５２５，７１１、Ｈａｒａｌａｍｂｉｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５５２，５４０、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５８７，４６９、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５９４，１２１、Ｓｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５９６，０９１、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６１４，６１７、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６４５，９８５、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６８１，９４１、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８１１，５３４、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，７５０，６９２、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，９４８，９０３、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５８７，４７０、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４５７，１９１、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，７６３，５８８、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８３０，６５３、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８０８，０２７、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，６，１６６，１９９、及びＭａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，００５，０９６を含む。
【０１８５】
３．ある特定の修飾されたヌクレオシド間結合
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、任意のヌクレオシド間結合を使用して一緒に結合されてもよい。ヌクレオシド間結合基の２つの主な分類は、リン原子の存在または不在下によって定義される。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合は、これらに限定されないが、ホスホジエステル結合（「Ｐ＝Ｏ」）（修飾されていないまたは天然型結合とも称される）を含むホスフェート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート、及びホスホロチオエート（「Ｐ＝Ｓ」）、及びホスホロジチオエート（「ＨＳ−Ｐ＝Ｓ」）を含む。代表的な非リン含有ヌクレオシド間結合基には、これらに限定されないが、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−）、チオジエステル、チオノカルバメート（−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）、シロキサン（−Ｏ−ＳｉＨ２−Ｏ−）、及びＮ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−）が含まれる。修飾されたヌクレオシド間結合は、天然型ホスフェート結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を改変、典型的には増加するために使用され得る。ある特定の実施形態では、キラル原子を有するヌクレオシド間結合は、ラセミ混合物、または別個のエナンチオマーとして調製され得る。リン含有及び非リン含有ヌクレオシド間結合の調製方法は、当業者に周知である。
【０１８６】
キラル中心を有する代表的なヌクレオシド間結合は、これらに限定されないが、アルキルホスホネート及びホスホロチオエートを含む。キラル中心を有するヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドは、特定の立体化学的配置において、ステレオランダムヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドとして、またはホスホロチオエート結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドの集団として調製され得る。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含み、全てのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ステレオランダムである。そのような修飾されたオリゴヌクレオチドは、各ホスホロチオエート結合の立体化学的配置のランダム選択をもたらす合成方法を使用して生成され得る。それにもかかわらず、当業者によって十分に理解されるように、各個々のオリゴヌクレオチド分子の各個々のホスホロチオエートは、定義される立体配置を有する。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、特定の、独立して選択される立体化学的配置において１つ以上の特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも６５％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも７０％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも８０％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも９０％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも９９％の分子に存在する。修飾されたオリゴヌクレオチドのそのようなキラル的に濃縮された集団は、当該技術分野で既知の合成方法、例えば、Ｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＣＳ  １２５，８３０７（２００３）、Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．４２，１３４５６（２０１４）、及びＷＯ２０１７／０１５５５５に記載される方法を使用して生成され得る。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、（Ｓｐ）配置において少なくとも１つの示されるホスホロチオエートを有する修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、（Ｒｐ）配置において少なくとも１つのホスホロチオエートを有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている。ある特定の実施形態では、（Ｒｐ）及び／または（Ｓｐ）ホスホロチオエートを含む修飾されたオリゴヌクレオチドは、それぞれ以下の式のうちの１つ以上を含み、「Ｂ」は、核酸塩基を示す。
【０１８７】
【化１７】
2021530204.tif 000018
【０１８８】
特に指示がない限り、本明細書に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドのキラルヌクレオシド間結合は、ステレオランダムであり得るか、または特定の立体化学的配置にあり得る。
【０１８９】
中性ヌクレオシド間結合には、限定することなく、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ＭＭＩ（３’−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−５’）、アミド−３（３’−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−５’）、アミド−４（３’−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−５’）、ホルムアセタール（３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−５’）、メトキシプロピル、及びチオホルムアセタール（３’−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−５’）が含まれる。さらなる中性ヌクレオシド間結合には、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボキシレートエステル、カルボキサミド、スルフィド、スルホネートエステル、及びアミドを含む非イオン結合が含まれる（例えば、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．  Ｃｏｏｋ，Ｅｄｓ．，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３  ａｎｄ  ４，４０−６５を参照）。さらなる中性ヌクレオシド間結合には、混合されたＮ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２成分を含む非イオン結合が含まれる。
【０１９０】
Ｂ．ある特定のモチーフ
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された糖部分を含む１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含む１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。そのような実施形態では、修飾された、修飾されていない、及び異なって修飾された糖部分、核酸塩基、及び／または修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、パターンまたはモチーフを定義する。ある特定の実施形態では、糖部分、核酸塩基、及びヌクレオシド間結合のパターンはそれぞれ、互いに無関係である。したがって、修飾されたオリゴヌクレオチドは、その糖モチーフ、核酸塩基モチーフ、及び／またはヌクレオシド間結合モチーフによって説明され得る（本明細書で使用される場合、核酸塩基モチーフは、核酸塩基の配列とは無関係である核酸塩基に対する修飾を説明する）。
【０１９１】
１．ある特定の糖モチーフ
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたは糖モチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される１つ以上の種類の修飾された糖及び／または修飾されていない糖部分を含む。ある特定の例では、そのような糖モチーフは、これらに限定されないが、本明細書に記載される糖修飾うちのいずれかを含む。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２つの外部領域または「ウイング」及び中心もしくは内部領域または「ギャップ」によって定義されるギャップマーモチーフを有する領域を含むか、またはそれからなる。ギャップマーモチーフの３つの領域（５’−ウイング、ギャップ、及び３’−ウイング）は、ヌクレオシドの連続する配列を形成し、ウイングの各々のヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部は、ギャップのヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部とは異なる。具体的には、ギャップに最も隣接する各ウイングのヌクレオシドの少なくとも糖部分（５’−ウイングの３’−末端側ヌクレオシド（３’−ｍｏｓｔ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）及び３’−ウイングの５’−末端側ヌクレオシド（５’−ｍｏｓｔ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ））は、隣接するギャップヌクレオシドの糖部分とは異なり、したがって、ウイングとギャップとの間の境界を画定する（すなわち、ウイング／ギャップジャンクション）。ある特定の実施形態では、ギャップ内の糖部分は、互いに同じである。ある特定の実施形態では、ギャップは、ギャップの１つ以上の他のヌクレオシドの糖部分とは異なる糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、２つのウイングの糖モチーフは、互いに同じである（対称ギャップマー）。ある特定の実施形態では、５’−ウイングの糖モチーフは、３’−ウイングの糖モチーフとは異なる（非対称ギャップマー）。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、ギャップマーのウイングは、１〜５個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーの各ウイングの各ヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップマーの各ウイングの少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップマーの各ウイングの少なくとも２つのヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップマーの各ウイングの少なくとも３つのヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップマーの各ウイングの少なくとも４つのヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップは、７〜１２個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップの各ヌクレオシドは、修飾されていない２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップの少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、ギャップマーは、デオキシギャップマーである。ある特定の実施形態では、各ウイング／ギャップジャンクションのギャップ側のヌクレオシドは、修飾されていない２’−デオキシヌクレオシドであり、各ウイング／ギャップジャンクションのウイング側のヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップの各ヌクレオシドは、修飾されていない２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、ギャップマーの各ウイングの各ヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、完全に修飾された糖モチーフを有する領域を含むか、またはそれからなる。そのような実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの完全に修飾された領域の各ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチド全体の各ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、完全に修飾された糖モチーフを有する領域を含むか、またはそれからなり、完全に修飾された領域内の各ヌクレオシドは、本明細書で均一に修飾された糖モチーフと称される同じ修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、完全に修飾されたオリゴヌクレオチドは、均一に修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、均一に修飾されたものの各ヌクレオシドは、同じ２’−修飾を含む。
【０１９７】
本明細書において、ギャップマーの３つの領域の長さ（ヌクレオシドの数）は、表記法［５’−ウイングにおけるヌクレオシドの番号］−［ギャップにおけるヌクレオシドの番号］−［３’−ウイングにおけるヌクレオシドの番号］を使用して提供され得る。したがって、５−１０−５ギャップマーは、各ウイングにおける５個の結合されたヌクレオシド及びギャップにおける１０個の結合されたヌクレオシドからなる。そのような用語法の後に特定の修飾が続く場合、その修飾は、各ウイングの各糖部分における修飾であり、ギャップヌクレオシドは、修飾されていないデオキシヌクレオシド糖を含む。したがって、５−１０−５ＭＯＥギャップマーは、５’−ウイングにおける５個の結合されたＭＯＥ修飾されたヌクレオシド、ギャップにおける１０個のデオキシヌクレオシド、及び３’−ウイングにおける５個の結合されたＭＯＥヌクレオシドからなる。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、３−１０−３ＢＮＡギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、３−１０−３ｃＥｔギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、３−１０−３ＬＮＡギャップマーである。
【０１９９】
２．ある特定の核酸塩基モチーフ
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたはモチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される修飾された及び／または修飾されていない核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、各核酸塩基は、修飾されている。ある特定の実施形態では、核酸塩基のうちのいずれも修飾されていない。ある特定の実施形態では、各プリンまたは各ピリミジンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各アデニンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各グアニンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各チミンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各ウラシルは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各シトシンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドにおけるシトシン核酸塩基のいくつかまたは全ては、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、シトシン核酸塩基の全ては、５−メチルシトシンであり、修飾されたオリゴヌクレオチドの他の核酸塩基の全ては、修飾されていない核酸塩基である。
【０２００】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基のブロックを含む。ある特定のそのような実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’−末端にある。ある特定の実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’−末端の３ヌクレオシド以内にある。ある特定の実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの５’−末端にある。ある特定の実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの５’−末端の３ヌクレオシド以内にある。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、ギャップマーモチーフを有するオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含むヌクレオシドを含む。ある特定のそのような実施形態では、修飾された核酸塩基を含む１つのヌクレオシドは、ギャップマーモチーフを有するオリゴヌクレオチドの中心ギャップにある。ある特定のそのような実施形態では、当該ヌクレオシドの糖部分は、２’−デオキシリボシル部分である。ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、２−チオピリミジン及び５−プロピンピリミジンから選択される。
【０２０２】
３．ある特定のヌクレオシド間結合モチーフ
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたはモチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される修飾された及び／または修飾されていないヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、各ヌクレオシド間結合基は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（Ｐ＝Ｏ）である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合基は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（Ｐ＝Ｓ）である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は独立して、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合及びホスホジエステルヌクレオシド間結合から選択される。ある特定の実施形態では、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は独立して、ステレオランダムホスホロチオエート、（Ｓｐ）ホスホロチオエート、及び（Ｒｐ）ホスホロチオエートから選択される。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの糖モチーフは、ギャップマーであり、ギャップ内のヌクレオシド間結合は全て、修飾されている。ある特定のそのような実施形態では、ウイングにおけるヌクレオシド間結合のうちのいくつかまたは全ては、修飾されていないホスホジエステルヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、末端ヌクレオシド間結合は、修飾されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの糖モチーフは、ギャップマーであり、ヌクレオシド間結合モチーフは、少なくとも１つのウイングにおいて少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間結合を含み、少なくとも１つのホスホジエステル結合は、末端ヌクレオシド間結合ではなく、残りのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある特定のそのような実施形態では、ホスホロチオエート結合の全ては、ステレオランダムである。ある特定の実施形態では、ウイングにおける全てのホスホロチオエート結合は、（Ｓｐ）ホスホロチオエートであり、ギャップは、少なくとも１つのＳｐ、Ｓｐ、Ｒｐモチーフを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、そのようなヌクレオシド間結合モチーフを含む修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。
【０２０３】
Ｃ．ある特定の長さ
オリゴヌクレオチドの長さを、活性を排除することなく増加または減少させることが可能である。例えば、Ｗｏｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３０５−７３０９，１９９２）において、１３〜２５核酸塩基長の一連のオリゴヌクレオチドが、卵母細胞注射モデルにおいて標的ＲＮＡの切断を誘発するそれらの能力について試験された。オリゴヌクレオチドの末端付近に８または１１個の不適合塩基を有する２５核酸塩基長のオリゴヌクレオチドは、不適合を含まないオリゴヌクレオチドよりも少ない程度ではあるが、標的ＲＮＡの特異的切断を指示することができた。同様に、標的特異的切断は、１または３つの不適合を有するものを含む１３個の核酸塩基オリゴヌクレオチドを使用して達成された。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド（修飾されたオリゴヌクレオチドを含む）は、様々な長さの範囲のいずれかを有し得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、Ｘが、範囲内でヌクレオシドの最も少ない数を表し、Ｙが、範囲内でヌクレオシドの最も大きい数を表す、Ｘ〜Ｙの結合されたヌクレオシドからなる。ある特定のそのような実施形態では、Ｘ及びＹは各々独立して、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０から選択されるが、Ｘ≦Ｙであることを条件とする。例えば、ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２〜１３、１２〜１４、１２〜１５、１２〜１６、１２〜１７、１２〜１８、１２〜１９、１２〜２０、１２〜２１、１２〜２２、１２〜２３、１２〜２４、１２〜２５、１２〜２６、１２〜２７、１２〜２８、１２〜２９、１２〜３０、１３〜１４、１３〜１５、１３〜１６、１３〜１７、１３〜１８、１３〜１９、１３〜２０、１３〜２１、１３〜２２、１３〜２３、１３〜２４、１３〜２５、１３〜２６、１３〜２７、１３〜２８、１３〜２９、１３〜３０、１４〜１５、１４〜１６、１４〜１７、１４〜１８、１４〜１９、１４〜２０、１４〜２１、１４〜２２、１４〜２３、１４〜２４、１４〜２５、１４〜２６、１４〜２７、１４〜２８、１４〜２９、１４〜３０、１５〜１６、１５〜１７、１５〜１８、１５〜１９、１５〜２０、１５〜２１、１５〜２２、１５〜２３、１５〜２４、１５〜２５、１５〜２６、１５〜２７、１５〜２８、１５〜２９、１５〜３０、１６〜１７、１６〜１８、１６〜１９、１６〜２０、１６〜２１、１６〜２２、１６〜２３、１６〜２４、１６〜２５、１６〜２６、１６〜２７、１６〜２８、１６〜２９、１６〜３０、１７〜１８、１７〜１９、１７〜２０、１７〜２１、１７〜２２、１７〜２３、１７〜２４、１７〜２５、１７〜２６、１７〜２７、１７〜２８、１７〜２９、１７〜３０、１８〜１９、１８〜２０、１８〜２１、１８〜２２、１８〜２３、１８〜２４、１８〜２５、１８〜２６、１８〜２７、１８〜２８、１８〜２９、１８〜３０、１９〜２０、１９〜２１、１９〜２２、１９〜２３、１９〜２４、１９〜２５、１９〜２６、１９〜２９、１９〜２８、１９〜２９、１９〜３０、２０〜２１、２０〜２２、２０〜２３、２０〜２４、２０〜２５、２０〜２６、２０〜２７、２０〜２８、２０〜２９、２０〜３０、２１〜２２、２１〜２３、２１〜２４、２１〜２５、２１〜２６、２１〜２７、２１〜２８、２１〜２９、２１〜３０、２２〜２３、２２〜２４、２２〜２５、２２〜２６、２２〜２７、２２〜２８、２２〜２９、２２〜３０、２３〜２４、２３〜２５、２３〜２６、２３〜２７、２３〜２８、２３〜２９、２３〜３０、２４〜２５、２４〜２６、２４〜２７、２４〜２８、２４〜２９、２４〜３０、２５〜２６、２５〜２７、２５〜２８、２５〜２９、２５〜３０、２６〜２７、２６〜２８、２６〜２９、２６〜３０、２７〜２８、２７〜２９、２７〜３０、２８〜２９、２８〜３０、または２９〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる。
【０２０５】
Ｄ．ある特定の修飾されたオリゴヌクレオチド
ある特定の実施形態では、上記の修飾（糖、核酸塩基、ヌクレオシド間結合）は、修飾されたオリゴヌクレオチドに抱合される。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、それらの修飾、モチーフ、及び全体の長さによって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、そのようなパラメータはそれぞれ、互いに無関係である。したがって、特に指示がない限り、ギャップマー糖モチーフを有するオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾されていても修飾されていなくてもよく、糖修飾のギャップマー修飾パターンに従っていても従っていなくてもよい。例えば、糖ギャップマーのウイング領域内のヌクレオシド間結合は、互いに同じであっても異なっていてもよく、糖モチーフのギャップ領域のヌクレオシド間結合と同じであっても異なっていてもよい。同様に、そのような糖ギャップマーオリゴヌクレオチドは、糖修飾のギャップマーパターンとは無関係の１つ以上の修飾された核酸塩基を含み得る。別段の指示がない限り、全ての修飾は、核酸塩基配列とは無関係である。
【０２０６】
Ｅ．修飾されたオリゴヌクレオチドのある特定の集団
集団の修飾されたオリゴヌクレオチドの全てが同じ分子式を有する修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、ステレオランダム集団またはキラル的に濃縮された集団であり得る。修飾されたオリゴヌクレオチドの全てのキラル中心の全ては、ステレオランダム集団においてステレオランダムである。キラル的に濃縮された集団において、少なくとも１つの特定のキラル中心は、集団の修飾されたオリゴヌクレオチドにおいてステレオランダムではない。ある特定の実施形態では、キラル的に濃縮された集団の修飾されたオリゴヌクレオチドは、β−Ｄリボシル糖部分が濃縮されており、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全ては、ステレオランダムである。ある特定の実施形態では、キラル的に濃縮された集団の修飾されたオリゴヌクレオチドは、β−Ｄリボシル糖部分、及び特定の立体化学的配置にある少なくとも１つの、特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合の両方が濃縮されている。
【０２０７】
Ｆ．核酸塩基配列
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド（修飾されていないまたは修飾されたオリゴヌクレオチド）は、それらの核酸塩基配列によってさらに説明される。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの同定された参照核酸と相補的な核酸塩基配列を有する。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域は、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの同定された参照核酸と相補的な核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域または全体の長さの核酸塩基配列は、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの核酸と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０２０８】
ＩＩ．ある特定のオリゴマー化合物
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド（修飾されたまたは修飾されていない）、ならびに任意に１つ以上の複合群及び／または末端基からなるオリゴマー化合物が本明細書に提供される。複合群は、１つ以上の複合部分、及び複合部分をオリゴヌクレオチドに結合する複合リンカーからなる。複合群は、オリゴヌクレオチドのいずれかまたは両方の末端に、及び／または任意の内部位置で結合され得る。ある特定の実施形態では、複合群は、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの２’−位置に結合され得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのいずれかまたは両方の末端に結合される複合群は、末端基である。ある特定のそのような実施形態では、複合群または末端基は、オリゴヌクレオチドの３’及び／または５’−末端で結合される。ある特定のそのような実施形態では、複合群（または末端基）は、オリゴヌクレオチドの３’−末端で結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、オリゴヌクレオチドの３’−末端に近接して結合される。ある特定の実施形態では、複合群（または末端基）は、オリゴヌクレオチドの５’−末端で結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、オリゴヌクレオチドの５’−末端に近接して結合される。
【０２０９】
末端基の例には、これらに限定されないが、複合群、キャッピング基、ホスフェート部分、保護基、修飾されたまたは修飾されていないヌクレオシド、及び独立して修飾されたまたは修飾されていない２つ以上のヌクレオシドが挙げられる。
【０２１０】
Ａ．ある特定の複合群
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の複合群に共有結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、これらに限定されないが、薬力学、薬物動態学、安定性、結合、吸収、組織分布、細胞分布、細胞取り込み、電荷、及びクリアランスを含む、結合されたオリゴヌクレオチドの１つ以上の特性を修飾する。ある特定の実施形態では、複合群は、結合されたオリゴヌクレオチド、例えば、オリゴヌクレオチドの検出を可能にするフルオロフォアまたはレポーター基に新しい特性を与える。ある特定の複合群及び複合部分は、以前に説明されており、例えば、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３−６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４，１０５３−１０６０）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６−３０９、Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９３，３，２７６５−２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３−５３８）、脂肪族鎖、例えば、ド−デカン−ジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０，１１１１−１１１８、Ｋａｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７−３３０、Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９−５４）、リン脂質、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールもしくはトリエチル−アンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１−３６５４、Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７−３７８３）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９−９７３）、またはアダマンタン酢酸パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９−２３７）、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３−９３７）、トコフェロール基（Ｎｉｓｈｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２０１５，４，ｅ２２０、及びＮｉｓｈｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２００８，１６，７３４−７４０）、またはＧａｌＮＡｃクラスター（例えば、ＷＯ２０１４／１７９６２０）である。
【０２１１】
１．複合部分
複合部分には、限定することなく、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、ビタミン部分、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸塩、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、フルオロフォア、及び色素が含まれる。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、複合部分は、活性薬原薬、例えば、アスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）−（＋）−プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、２，３，５−トリヨード安息香酸、フィンゴリモド、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾチアジアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメタシン、バルビツレート、セファロスポリン、サルファ薬、抗糖尿病薬、抗菌薬、または抗生物質を含む。
【０２１３】
２．複合リンカー
複合部分は、複合リンカーによってオリゴヌクレオチドに結合される。ある特定のオリゴマー化合物では、複合リンカーは、単一の化学結合である（すなわち、複合部分は、単結合によってオリゴヌクレオチドに直接的に結合される）。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、ヒドロカルビル鎖などの鎖構造、またはエチレングリコール、ヌクレオシド、もしくはアミノ酸単位などの繰り返し単位のオリゴマーを含む。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、複合リンカーは、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、及びヒドロキシルアミノから選択される１つ以上の基を含む。ある特定のそのような実施形態では、複合リンカーは、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、アルキル及びアミド基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、少なくとも１つのリン部分を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、少なくとも１つのホスフェート基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、少なくとも１つの中性結合基を含む。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、上に記載される複合リンカーを含む複合リンカーは、二官能性結合部分、例えば、複合群を本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドなどの親化合物に結合するのに有用であることが当該技術分野で既知のものである。一般に、二官能性結合部分は、少なくとも２つの官能性基を含む。官能性基のうちの一方は、親化合物の特定の部位に結合するように選択され、他方は、複合群に結合するように選択される。二官能性結合部分で使用される官能性基の例には、これらに限定されないが、求核基と反応させるための求電子剤及び求電子基と反応させるための求核剤が含まれる。ある特定の実施形態では、二官能性結合部分は、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、アルキル、アルケニル、及びアルキニルから選択される１つ以上の基を含む。
【０２１６】
複合リンカーの例には、これらに限定されないが、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及び６−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）が含まれる。他の複合リンカーには、これらに限定されないが、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、または置換もしくは非置換Ｃ２−Ｃ１０アルキニルが含まれ、好ましい置換基の非限定的一覧には、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルが含まれる。
【０２１７】
ある特定の実施形態では、複合リンカーは、１〜１０個のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、２〜５個のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、正確に３個のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、ＴＣＡモチーフを含む。ある特定の実施形態では、そのようなリンカーヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、そのようなリンカーヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、リンカーヌクレオシドは、修飾されていない。ある特定の実施形態では、リンカーヌクレオシドは、プリン、置換されているプリン、ピリミジン、または置換されているピリミジンから選択される任意に保護された複素環式塩基を含む。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ウラシル、チミン、シトシン、４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、５−メチルシトシン、４−Ｎ−ベンゾイル−５−メチルシトシン、アデニン、６−Ｎ−ベンゾイルアデニン、グアニン、及び２−Ｎ−イソブチリルグアニンから選択されるヌクレオシドである。リンカーヌクレオシドが、標的組織に到達した後にオリゴマー化合物から切断されることが典型的には望ましい。したがって、リンカーヌクレオシドは、典型的には、互いに及び切断可能な結合によってオリゴマー化合物の残りに結合される。ある特定の実施形態では、そのような切断可能な結合は、ホスホジエステル結合である。
【０２１８】
本明細書において、リンカーヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの一部であるとは考えられていない。したがって、オリゴマー化合物が、特定の数または範囲の結合されたヌクレオシド及び／または参照核酸との特定のパーセントの相補性からなるオリゴヌクレオチドを含み、オリゴマー化合物もまた、リンカーヌクレオシドを含む複合リンカーを含む複合群を含む実施形態では、それらのリンカーヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの長さに計算されず、参照核酸に対するオリゴヌクレオチドの相補性パーセントを決定することにおいて使用されない。例えば、オリゴマー化合物は、（１）８〜３０個のヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドと、（２）修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドと連続している１〜１０個のリンカーヌクレオシドを含む複合群とを含んでもよい。そのようなオリゴマー化合物における隣接する結合されたヌクレオシドの合計数は、３０個を超える。代替的には、オリゴマー化合物は、８〜３０個のヌクレオシドからなりかつ複合群は存在しない修飾されたオリゴヌクレオチドを含み得る。そのようなオリゴマー化合物における隣接する結合されたヌクレオシドの合計数は、３０個以下である。特に指示がない限り、複合リンカーは、１０個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、５個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、３個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、２個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、１個以下のリンカーヌクレオシドを含む。
【０２１９】
ある特定の実施形態では、複合群を、オリゴヌクレオチドから切断させることが望ましい。例えば、ある特定の状況では、特定の複合部分を含むオリゴマー化合物は、特定の細胞型によってよく取り込まれるが、一旦オリゴマー化合物が取り込まれると、複合群が切断されて非複合体化または親オリゴヌクレオチドを放出することが望ましい。したがって、ある特定の複合リンカーは、１つ以上の切断可能な部分を含み得る。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、切断可能な結合である。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、少なくとも１つの切断可能な結合を含む原子の群である。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、１、２、３、４、または５個以上の切断可能な結合を有する原子の群を含む。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、リソソームなど細胞または細胞内コンパートメントの内側で選択的に切断される。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ヌクレアーゼなどの内因性酵素によって選択的に切断される。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、切断可能な結合は、アミド、エステル、エーテル、ホスホジエステルの一方または両方のエステル、ホスフェートエステル、カルバメート、またはジスルフィドの中から選択される。ある特定の実施形態では、切断可能な結合は、ホスホジエステルの一方または両方のエステルである。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ホスフェートまたはホスホジエステルを含む。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド及び複合部分または複合群の間のホスフェート結合である。
【０２２１】
ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、１つ以上のリンカーヌクレオシドを含むか、またはそれからなる。ある特定のそのような実施形態では、１つ以上のリンカーヌクレオシドは、互いに及び／または切断可能な結合によってオリゴマー化合物の残りに結合される。ある特定の実施形態では、そのような切断可能な結合は、修飾されていないホスホジエステル結合である。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ホスフェートヌクレオシド間結合によってオリゴヌクレオチドの３’または５’−末端ヌクレオシドのいずれかに結合され、ホスフェートまたはホスホロチオエート結合によって複合リンカーまたは複合部分の残りに共有結合される２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定のそのような実施形態では、切断可能な部分は、２’−デオキシアデノシンである。
【０２２２】
Ｂ．ある特定の末端基
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ以上の末端基を含む。ある特定のそのような実施形態では、オリゴマー化合物は、安定化された５’−ホスフェートを含む。安定化された５’−ホスフェートには、これらに限定されないが、５’−ビニルホスホネートを含むがこれらに限定されない５’−ホスファネート（５’−ｐｈｏｓｐｈａｎａｔｅ）が含まれる。ある特定の実施形態では、末端基は、１つ以上の脱塩基ヌクレオシド及び／または逆ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、末端基は、１つ以上の２’−結合ヌクレオシドを含む。ある特定のそのような実施形態では、２’−結合ヌクレオシドは、脱塩基ヌクレオシドである。
【０２２３】
ＩＩＩ．オリゴマー二本鎖
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるオリゴマー化合物は、標的核酸の配列と相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、第２のオリゴマー化合物と対合して、オリゴマー二本鎖を形成する。そのようなオリゴマー二本鎖は、標的核酸と相補的な領域を有する第１の第１のオリゴマー化合物、及び第１のオリゴマー化合物と相補的な領域を有する第２のオリゴマー化合物を含む。ある特定の実施形態では、オリゴマー二本鎖の第１のオリゴマー化合物は、（１）修飾されたまたは修飾されていないオリゴヌクレオチド及び任意に複合群と、（２）第２の修飾されたまたは修飾されていないオリゴヌクレオチド及び任意に複合群とを含むか、またはそれらからなる。オリゴマー二本鎖のオリゴマー化合物のいずれかまたは両方は、複合群を含み得る。オリゴマー二本鎖の各オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドは、非相補的突出ヌクレオシドを含み得る。
【０２２４】
ＩＶ．アンチセンス活性
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物及びオリゴマー二本鎖は、標的核酸にハイブリダイズすることができ、少なくとも１つのアンチセンス活性をもたらし、そのようなオリゴマー化合物及びオリゴマー二本鎖は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、それらが標準細胞アッセイにおいて標的核酸の量または活性を２５％以上低減または阻害する場合に、アンチセンス活性を有する。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、選択的に１つ以上の標的核酸に影響を与える。そのようなアンチセンス化合物は、１つ以上の標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列を含み、１つ以上の所望のアンチセンス活性をもたらし、重要な所望でないアンチセンス活性をもたらすような方法で１つ以上の非標的核酸にハイブリダイズしないか、または１つ以上の非標的核酸にハイブリダイズしない。
【０２２５】
ある特定のアンチセンス活性では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸を切断するタンパク質の動員をもたらす。例えば、ある特定のアンチセンス化合物は、標的核酸のＲＮａｓｅ  Ｈ媒介切断をもたらす。ＲＮａｓｅ  Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。そのようなＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＤＮＡは、修飾されていないＤＮＡである必要はない。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ  Ｈ活性を誘発するのに十分に「ＤＮＡ様」であるアンチセンス化合物が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップにおける１つ以上の非ＤＮＡ様ヌクレオシドは、耐容される。
【０２２６】
ある特定のアンチセンス活性では、アンチセンス化合物またはアンチセンス化合物の部分は、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に取り込まれ、最終的に標的核酸の切断をもたらす。例えば、ある特定のアンチセンス化合物は、Ａｒｇｏｎａｕｔｅによって標的核酸の切断をもたらす。ＲＩＳＣに取り込まれたアンチセンス化合物は、ＲＮＡｉ化合物である。ＲＮＡｉ化合物は、二本鎖（ｓｉＲＮＡ）または一本鎖（ｓｓＲＮＡ）であり得る。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸を切断するタンパク質の動員をもたらさない。ある特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸のスプライシングの改変をもたらす。ある特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸とタンパク質または他の核酸との間の結合相互作用の阻害をもたらす。ある特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸の翻訳の改変をもたらす。
【０２２８】
アンチセンス活性は、直接または間接的に観察され得る。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性の観察または検出は、標的核酸またはそのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量の変化、核酸もしくはタンパク質のスプライスバリアントの比の変化、及び／または細胞もしくは動物の表現型変化の観察または検出を含む。
【０２２９】
Ｖ．ある特定の標的核酸
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、標的核酸は、内因性ＲＮＡ分子である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、タンパク質をコードする。ある特定のそのような実施形態では、標的核酸は、イントロン、エキソン、及び非翻訳領域を含む成熟ｍＲＮＡ及びプレｍＲＮＡから選択される。ある特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、成熟ｍＲＮＡである。ある特定の実施形態では、標的核酸は、プレｍＲＮＡである。ある特定のそのような実施形態では、標的領域は、全体的にイントロン内にある。ある特定の実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションにわたる。ある特定の実施形態では、標的領域は、イントロン内で少なくとも５０％である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、レトロ遺伝子のＲＮＡ転写産物である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、非コードＲＮＡである。ある特定のそのような実施形態では、標的非コードＲＮＡは、長い非コードＲＮＡ、短い非コードＲＮＡ、イントロンＲＮＡ分子から選択される。
【０２３０】
Ａ．標的核酸との相補性／不適合
不適合塩基を、活性を排除することなく導入することが可能である。例えば、Ｇａｕｔｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ  ２００１）は、ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡとの１００％相補性を有し、ｂｃｌ−ｘＬ  ｍＲＮＡとの３つの不適合を有し、インビトロ及びインビボでｂｃｌ−２及びｂｃｌ−ｘＬの両方の発現を低減するオリゴヌクレオチドの能力を示した。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで強力な抗腫瘍活性を示した。Ｍａｈｅｒ及びＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，１９８８）は、一連のタンデム１４核酸塩基オリゴヌクレオチドを試験し、２８及び４２核酸塩基オリゴヌクレオチドは、ウサギ網赤血球アッセイにおいてヒトＤＨＦＲの翻訳を停止するそれらの能力として、それぞれタンデムオリゴヌクレオチドのうちの２または３個の配列を含んだ。３個の１４核酸塩基オリゴヌクレオチドの各々は単独で、２８または４２核酸塩基オリゴヌクレオチドよりも適度なレベルではあるが、翻訳を阻害することができた。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さ全体にわたって標的核酸と相補的である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸と９９％、９５％、９０％、８５％、または８０％相補的である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さ全体にわたって標的核酸と少なくとも８０％相補的であり、標的核酸と１００％または完全に相補的な領域を含む。ある特定の実施形態では、完全な相補性の領域は、６〜２０、１０〜１８、または１８〜２０核酸塩基長である。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸に対して１つ以上の不適合核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、標的に対するアンチセンス活性は、そのような不適合によって低減されるが、非標的に対する活性は、より大きな量によって低減される。したがって、ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの選択性が改善される。ある特定の実施形態では、不適合は、ギャップマーモチーフを有するオリゴヌクレオチド内に特異的に配置される。ある特定の実施形態では、不適合は、ギャップ領域の５’−末端からの位置１、２、３、４、５、６、７、または８にある。ある特定の実施形態では、不適合は、ギャップ領域の３’−末端からの位置９、８、７、６、５、４、３、２、１にある。ある特定の実施形態では、不適合は、ウイング領域の５’−末端からの位置１、２、３、または４にある。ある特定の実施形態では、不適合は、ウイング領域の３’−末端からの位置４、３、２、または１にある。
【０２３３】
Ｂ．ＬＲＲＫ２
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、標的核酸は、ＬＲＲＫ２である。ある特定の実施形態では、ＬＲＲＫ２核酸は、配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿１９８５７８．３）及び配列番号２（ヌクレオチド２７５９０００〜２９０９０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２９４１９．１１）に示される配列を有する。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、細胞を配列番号１または配列番号２と相補的なオリゴマー化合物と接触させることは、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量を低減し、ある特定の実施形態では、ＬＲＲＫ２タンパク質の量を低減する。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドからなる。ある特定の実施形態では、細胞を配列番号１または配列番号２と相補的なオリゴマー化合物と接触させることは、神経変性疾患の１つ以上の症状または特徴を改善する。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドからなる。ある特定の実施形態では、症状または特徴は、運動失調、神経障害、及び凝集体形成である。ある特定の実施形態では、細胞を配列番号１または配列番号２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドと接触させることは、改善された運動機能、低減された神経障害、及び凝集体の数の低減をもたらす。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドからなる。
【０２３５】
Ｃ．ある特定の組織中のある特定の標的核酸
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、標的核酸は、薬理学的に関連する組織中に発現される。ある特定の実施形態では、薬理学的関連する組織は、中枢神経系（ＣＮＳ）を含む細胞及び組織である。そのような組織には、皮質、黒質、線条体、中脳、及び脳幹などの脳組織、ならびに脊髄が含まれる。
【０２３６】
ＶＩ．ある特定の薬学的組成物
ある特定の実施形態では、１つ以上のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、１つ以上のオリゴマー化合物はそれぞれ、修飾されたオリゴヌクレオチドからなる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される希釈剤または担体を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、減菌食塩水溶液及び１つ以上のオリゴマー化合物を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、減菌食塩水は、薬学的等級の生理食塩水である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上のオリゴマー化合物及び減菌水を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、減菌水は、薬学的等級の水である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上のオリゴマー化合物及びリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、減菌ＰＢＳは、薬学的等級のＰＢＳを含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上のオリゴマー化合物及び人工脳脊髄液を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、人工脳脊髄液は、薬学的等級である。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、修飾されたオリゴヌクレオチド及び人工脳脊髄液を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、修飾されたオリゴヌクレオチド及び人工脳脊髄液からなる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、修飾されたオリゴヌクレオチド及び人工脳脊髄液から本質的になる。ある特定の実施形態では、人工脳脊髄液は、薬学的等級である。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上のオリゴマー化合物及び１つ以上の賦形剤を含む。ある特定の実施形態では、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンから選択される。
【０２３９】
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、薬学的組成物または配合物の調製のために薬学的に許容される活性及び／または不活性物質と混合されてもよい。薬学的組成物の製剤化のための組成物及び方法は、これらに限定されないが、投与の経路、疾患の程度、または投与される用量を含む、いくつかの基準に依存する。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物を含む薬学的組成物は、オリゴマー化合物の任意の薬学的に許容される塩、オリゴマー化合物のエステル、またはそのようなエステルの塩を包含する。ある特定の実施形態では、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物を含む薬学的組成物は、ヒトを含む動物への投与の際に、生物学的に活性な代謝産物またはその残基を提供する（直接または間接的に）ことができる。したがって、例えば、本開示はまた、オリゴマー化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、及び他の生物学的同等性にも注目する。好適な薬学的に許容される塩には、これらに限定されないが、ナトリウム及びカリウム塩が含まれる。ある特定の実施形態では、プロドラッグは、オリゴヌクレオチドに結合された１つ以上の複合群を含み、複合群は、体内で内因性ヌクレアーゼによって切断される。
【０２４１】
脂質部分は、様々な方法で核酸療法において使用されている。ある特定のそのような方法では、オリゴマー化合物などの核酸は、予め形成されたリポソームまたはカチオン性脂質及び中性脂質の混合物で作成されたリポプレックスに導入される。ある特定の方法では、モノ−またはポリ−カチオン性脂質とのＤＮＡ錯体は、中性脂質の存在なしで形成される。ある特定の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞または組織に対する薬学的剤の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態では、脂質部分は、脂肪組織に対する薬学的剤の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態では、脂質部分は、筋組織に対する薬学的剤の分布を増加させるように選択される。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、送達系を含む。送達系の例には、これらに限定されないが、リポソーム及びエマルジョンが含まれる。ある特定の送達系は、疎水性化合物を含むものを含むある特定の薬学的組成物を調製するのに有用である。ある特定の実施形態では、ジメチルスルホキシドなどのある特定の有機溶媒が使用される。
【０２４３】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、特定の組織または細胞型に本発明の１つ以上の薬学的剤を送達するように設計された１つ以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、共溶媒系を含む。ある特定のそのような共溶媒系は、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、及び水性相を含む。ある特定の実施形態では、そのような共溶媒系は、疎水性化合物に使用される。そのような共溶媒系の非限定的な例は、ＶＰＤ共溶媒系であり、それは、３％ｗ／ｖベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０（商標）、及び６５％ｗ／ｖポリエチレングリコール３００を含む無水エタノールの溶液である。そのような共溶媒系の割合は、それらの溶解性及び毒性特性を著しく改変することなく、かなり変化し得る。さらに、共溶媒構成成分の同一性は、変化してもよく、例えば、他の界面活性剤は、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（商標）の代わりに使用されてもよく、ポリエチレングリコールの画分サイズは変化してもよく、他の生体適合性ポリマーは、ポリエチレングリコール、例えば、ポリビニルピロリドンを置き換えてもよく、他の糖または多糖類は、デキストロースを置換してもよい。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、経口投与のために調製される。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、頬側投与のために調製される。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、髄腔内（ＩＴ）、脳室内（ＩＣＶ）など）による投与のために調製される。ある特定のそのような実施形態では、薬学的組成物は、担体を含み、水などの水溶液中、またはハンクス溶液、リンガー溶液、もしくは生理食塩水緩衝剤などの生理学的に適合する緩衝剤で製剤化される。ある特定の実施形態では、他の成分が含まれる（例えば、溶解性を補助するかまたは防腐剤として役立つ成分）。ある特定の実施形態では、注射可能な懸濁剤は、適切な液体担体、懸濁剤などを使用して調製される。注射のためのある特定の薬学的組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回投与容器内にある。注射のためのある特定の薬学的組成物は、油性または水性ビヒクルにおいて懸濁剤、溶液、またはエマルジョンであり、懸濁剤、安定化剤、及び／または分散剤などの処方剤を含み得る。注射のための薬学的組成物での使用に好適なある特定の溶媒は、これらに限定されないが、ゴマ油などの親油性溶媒及び脂肪油、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、ならびにリポソームを含む。
【０２４６】
ある特定の条件下で、本明細書に開示されるある特定の化合物は、酸として作用する。そのような化合物は、プロトン化（遊離酸）形態、イオン化（アニオン）形態、またはイオン化及びカチオン（塩）と関連する形態で、描かれるかまたは説明され得るが、そのような化合物の水溶液は、そのような形態の中でも均衡状態で存在する。例えば、水溶液中のオリゴヌクレオチドのホスフェート結合は、遊離酸、アニオン、及び塩形態の中でも均衡状態で存在する。別段の指示がない限り、本明細書に開示される化合物は、全てのそのような形態を含むことが意図される。さらに、ある特定のオリゴヌクレオチドは、いくつかのそのような結合を有し、その各々は均衡状態にある。したがって、溶液中のオリゴヌクレオチドは、全て均衡状態で複数の位置でアンサンブルの形態で存在する。「オリゴヌクレオチド」という用語は、全てのそのような形態を含むことが意図される。描かれた構造は、必ず単一の形態を示す。それにもかかわらず、特に指示がない限り、そのような図は、同様に対応する形態を含むことが意図される。本明細書では、「またはその塩」という用語が後に続く化合物の遊離酸を示す構造は、完全または部分的にプロトン化／脱プロトン化／カチオンと関連し得る全てのそのような形態を明らかに含む。ある特定の例では、１つ以上の特定のカチオンが特定される。
【０２４７】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴマー化合物は、ナトリウムを含む水溶液中にある。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、カリウムを含む水溶性中にある。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、人工ＣＳＦ中である。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、ＰＢＳ中にある。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、水中にある。ある特定のそのような実施形態では、溶液のｐＨは、ＮａＯＨ及び／またはＨＣｌで調節され、所望のｐＨを達成する。
【０２４８】
ＶＩＩ．ある特定の組成物
１．化合物番号７８０２４１
化合物番号７８０２４１は、ＧＣＴＣＡＴＡＴＣＴＡＡＡＧＡＣＣＧＣＡ（配列番号２２２として本明細書に組み込まれる）の配列（５’〜３’）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々（５’〜３’）は、２’−ＭＯＥ修飾を含み、ヌクレオシド６〜１５の各々は、２’−デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２〜３、３〜４、４〜５、１６〜１７、及び１７〜１８の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド１〜２、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１８〜１９、及び１９〜２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２４９】
化合物番号７８０２４１は、以下の化学表記法によって特徴付けられてもよく、Ｇｅｓ  ｍＣｅｏ  Ｔｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅ、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
【０２５０】
化合物番号７８０２４１は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２５１】
【化１８】
2021530204.tif 000019
【０２５２】
化合物番号７８０２４１は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２５３】
【化１９】
2021530204.tif 000020
【０２５４】
２．化合物番号８０２７１４
化合物番号８０２７１４は、ＴＣＡＣＣＡＣＡＡＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＴ（配列番号８８８として本明細書に組み込まれる）の配列（５’〜３’）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々（５’〜３’）は、２’−ＭＯＥ修飾を含み、ヌクレオシド６〜１５の各々は、２’−デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２〜３、３〜４、４〜５、１６〜１７、及び１７〜１８の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド１〜２、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１８〜１９、及び１９〜２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２５５】
化合物番号８０２７１４は、以下の化学表記法によって特徴付けられてもよく、Ｔｅｓ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｅｏ  Ｇｅｏ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅ、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
【０２５６】
化合物番号８０２７１４は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２５７】
【化２０】
2021530204.tif 000021
【０２５８】
化合物番号８０２７１４は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２５９】
【化２１】
2021530204.tif 000022
【０２６０】
３．化合物番号８０３２６８
化合物番号８０３２６８は、ＡＣＣＣＴＴＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＣＡＴＴ（配列番号１４３１として本明細書に組み込まれる）の配列（５’〜３’）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々（５’〜３’）は、２’−ＭＯＥ修飾を含み、ヌクレオシド６〜１５の各々は、２’−デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２〜３、３〜４、４〜５、１６〜１７、及び１７〜１８の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド１〜２、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１８〜１９、及び１９〜２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２６１】
化合物番号８０３２６８は、以下の化学表記法によって特徴付けられてもよく、Ａｅｓ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  ｍＣｅｏ  Ｔｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ａｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅ、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
【０２６２】
化合物番号８０３２６８は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２６３】
【化２２】
2021530204.tif 000023
【０２６４】
化合物番号８０３２６８は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２６５】
【化２３】
2021530204.tif 000024
【０２６６】
４．化合物番号８７６０３１
化合物番号８７６０３１は、ＡＣＧＣＡＣＴＴＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＡ（配列番号３５９０として本明細書に組み込まれる）の配列（５’〜３’）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々（５’〜３’）は、２’−ＭＯＥ修飾を含み、ヌクレオシド６〜１５の各々は、２’−デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２〜３、３〜４、４〜５、１６〜１７、及び１７〜１８の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド１〜２、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１８〜１９、及び１９〜２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２６７】
化合物番号８７６０３１は、以下の化学表記法によって特徴付けられてもよく、Ａｅｓ  ｍＣｅｏ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ａｅ、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
【０２６８】
化合物番号８７６０３１は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２６９】
【化２４】
2021530204.tif 000025
【０２７０】
化合物番号８７６０３１は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２７１】
【化２５】
2021530204.tif 000026
【０２７２】
５．化合物番号８７６６０４
化合物番号８７６６０４は、ＡＧＣＡＡＴＣＡＴＴＧＧＴＡＧＣＡＴＡＣ（配列番号３３８５として本明細書に組み込まれる）の配列（５’〜３’）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々（５’〜３’）は、２’−ＭＯＥ修飾を含み、ヌクレオシド６〜１５の各々は、２’−デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２〜３、３〜４、４〜５、１６〜１７、及び１７〜１８の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド１〜２、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１８〜１９、及び１９〜２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２７３】
化合物番号８７６６０４は、以下の化学表記法によって特徴付けられてもよく、Ａｅｓ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｅｏ  Ａｅｏ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅ、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
【０２７４】
化合物番号８７６６０４は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２７５】
【化２６】
2021530204.tif 000027
【０２７６】
化合物番号８７６６０４は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２７７】
【化２７】
2021530204.tif 000028
【０２７８】
６．化合物番号９３４５５６
化合物番号９３４５５６は、ＣＧＣＡＣＴＴＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＡＴ（配列番号８５２として本明細書に組み込まれる）の配列（５’〜３’）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々（５’〜３’）は、２’−ＭＯＥ修飾を含み、ヌクレオシド６〜１５の各々は、２’−デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２〜３及び１７〜１８の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド１〜２、３〜４、４〜５、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１６〜１７、１８〜１９、及び１９〜２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２７９】
化合物番号９３４５５６は、以下の化学表記法によって特徴付けられてもよく、ｍＣｅｓ  Ｇｅｏ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｏ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅ、式中、
Ａ＝アデニン核酸塩基、
ｍＣ＝５−メチルシトシン核酸塩基、
Ｇ＝グアニン核酸塩基、
Ｔ＝チミン核酸塩基、
ｅ＝２’−ＭＯＥ修飾された糖、
ｄ＝２’−デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
【０２８０】
化合物番号９３４５５６は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２８１】
【化２８】
2021530204.tif 000029
【０２８２】
化合物番号９３４５５６は、以下の化学構造によって表されてもよい。
【０２８３】
【化２９】
2021530204.tif 000030
【０２８４】
ＶＩＩＩ．ある特定のホットスポット領域
１．配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０２８５】
配列番号８５２、１９９７、２０７３、２１４８、３５１３、及び３５９０の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８と相補的である。
【０２８６】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基１８，６３３〜１８，６５８と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５４％の低減を達成する。
【０２８７】
２．配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０２８８】
配列番号２９１、８６９、８７０、８７１、８７２、８７３、８７４、８７５、８７６、８７７、８７８、８７９、及び８８０の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５と相補的である。
【０２８９】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基２１，７２１〜２１，７５５と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５２％の低減を達成する。
【０２９０】
３．配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０２９１】
配列番号２９３、８８６、８８７、８８８、８８９、８９０、８９１、８９２、８９３、及び３７４５の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６と相補的である。
【０２９２】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基２７，９６３〜２８，０１６と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも３９％の低減を達成する。
【０２９３】
４．配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０２９４】
配列番号９２０、９２１、２３７８、２４５４、２５３０、２６０６、２６８３、２７５９、２８３５、３０６１、３１３７、３２１２、及び３２８８の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６と相補的である。
【０２９５】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基３５，４１５〜３５，４４６と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも４２％の低減を達成する。
【０２９６】
５．配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０２９７】
配列番号１３１、２１７、１１０６、１１０７、及び１１０８の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４と相補的である。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基７７，２２１〜７７，２６４と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５１％の低減を達成する。
【０２９９】
６．配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び８７，８３８〜８７，８６９
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び８７，８３８〜８７，８６９は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び８７，８３８〜８７，８６９と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び８７，８３８〜８７，８６９と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３００】
配列番号６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、１７８５、１７８６、１７８７、１７８８、１７８９、１７９０、１７９１、及び１７９２の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び８７，８３８〜８７，８６９と相補的である。
【０３０１】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８１，５８１〜８１，６１２及び８７，８３８〜８７，８６９と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも３８％の低減を達成する。
【０３０２】
７．配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３０３】
配列番号６７４、１７９９、１８００、１８０１、１８０２、及び１８０３の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１と相補的である。
【０３０４】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８１，６２７〜８１，６５１と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも６６％の低減を達成する。
【０３０５】
８．配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３０６】
配列番号２２２、１１３０、１１３１、１１３２、及び１１３３の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１と相補的である。
【０３０７】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８２，０５８〜８２，０８１と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５３％の低減を達成する。
【０３０８】
９．配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３０９】
配列番号２２５、１１４５、２００５、２８４０、３３６９、３４４６、３５２１、３５９８、及び３６７４の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０と相補的である。
【０３１０】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８２，１８０〜８２，２２０と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも６４％の低減を達成する。
【０３１１】
１０．配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３１２】
配列番号４３９、１８０７、１８０８、１８０９、１８１０、１８１１、及び１８１２の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５と相補的である。
【０３１３】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基８２，５００〜８２，５２５と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも４９％の低減を達成する。
【０３１４】
１１．配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３１５】
配列番号６９２、１８２６、１８２７、１８２８、１８２９、１８３０、１８３１、１８３２、１８３３、１８３４、及び１８３５の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７と相補的である。
【０３１６】
化合物番号７８０６４２、８０３６６４、８０３６６５、８０３６６６、８０３６６７、８０３６６８、８０３６６９、８０３６７０、８０３６７１、８０３６７２、及び８０３６７３の修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７と相補的である。
【０３１７】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９１，０３８〜９１，０６７と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも４２％の低減を達成する。
【０３１８】
１２．配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３１９】
配列番号１２１３、２６１３、２６９０、３１４３、３２１９、及び３２９５の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３と相補的である。
【０３２０】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９２，１４８〜９２，１７３と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５９％の低減を達成する。
【０３２１】
１３．配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３２２】
配列番号１２３１、１２３２、２４６２、２５３８、２６１４、２６９１、２７６７、３０６９、３１４４、３２２０、３２９６の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０と相補的である。
【０３２３】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９８，１８６〜９８，２２０と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５５％の低減を達成する。
【０３２４】
１４．配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３２５】
配列番号１５０、１２３３、２００８、３３７２、３４４９、及び３５２４の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２と相補的である。
【０３２６】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９８，２１８〜９８，２４２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも３８％の低減を達成する。
【０３２７】
１５．配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３２８】
配列番号１２４３、２３１１、２３８７、２９２０、２９９５、及び３７５５の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３と相補的である。
【０３２９】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基９９，１９９〜９９，２２３と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５２％の低減を達成する。
【０３３０】
１６．配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３３１】
配列番号７５０、１９２７、１９２８、１９２９、１９３０、１９３１、１９３２、１９３３、１９３４、１９３５、２８２２、２８９８、３３５１、及び３７３３の核酸塩基配列は、配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６と相補的である。
【０３３２】
ある特定の実施形態では、配列番号２の核酸塩基１１９，９０３〜１１９，９３６と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５１％の低減を達成する。
【０３３３】
１７．配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６
ある特定の実施形態では、配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル（「ｏ」）及びホスホロチオエート（「ｓ」）ヌクレオシド間結合は、５’から３’：ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓの順に配列される。
【０３３４】
配列番号３９、２３１、２３２、２３３、１１６１、及び１１６２の核酸塩基配列は、配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６と相補的である。
【０３３５】
ある特定の実施形態では、配列番号１の核酸塩基４，０６２〜４，０８６と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの単一用量アッセイにおいてインビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡの少なくとも５６％の低減を達成する。
【０３３６】
参照による非限定的開示及び組み込み
本明細書に列挙される文献及び特許公開の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【０３３７】
本明細書に記載されるある特定の化合物、組成物、及び方法は、ある特定の実施形態に従って、特異性と共に説明されている一方で、以下の実施例は、本明細書に記載される化合物を説明するためだけに役立ち、それを限定することは意図されていない。本出願に列挙される参考文献の各々、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号などは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３３８】
この出願に添付している配列表は、必要に応じて「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして各配列、実際には、化学修飾の任意の組み合わせで修飾され得る配列を同定する。当業者は、修飾されたオリゴヌクレオチドを説明するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」としての指定は、ある特定の例では、恣意的であることを容易に理解するであろう。例えば、２’−ＯＨ糖部分及びチミン塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾された糖（ＤＮＡの１つの２’−Ｈの代わりの２’−ＯＨ）を有するＤＮＡとして、または修飾された塩基（ＲＮＡのウラシルの代わりのチミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡとして記載され得る。したがって、本明細書に提供される核酸配列は、これらに限定されないが、配列表にあるものを含め、これらに限定されないが修飾された核酸塩基を有するそのような核酸を含む、天然もしくは修飾されたＲＮＡ及び／またはＤＮＡの任意の組み合わせを含む核酸を包含することが意図される。さらなる例として、限定することなく、核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するオリゴマー化合物は、修飾されているかまたは修飾されていないかにかかわらず、これらに限定されないが、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものならびにいくつかのＤＮＡ塩基及び「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＲＮＡ塩基を有するものなどのＲＮＡ塩基を含むそのような化合物と、「ＡＴｍＣＧＡＵＣＧ」などの他の修飾された核酸塩基を有するオリゴマー化合物とを含む、そのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴマー化合物を包含し、ｍＣは、５−位置でメチル基を含むシトシン塩基を示す。
【０３３９】
本明細書に記載されるある特定の化合物（例えば、修飾されたオリゴヌクレオチド）は、１つ以上の不斉中心を有し、したがってエナンチオマー、ジアステレオマー、及び（Ｒ）または（Ｓ）として、糖アノマーなどのαもしくはβとして、またはアミノ酸などの（Ｄ）もしくは（Ｌ）として、絶対立体化学に関して定義され得る他の立体異性体配置を生じさせる。ある特定の立体異性体配置を有するとして描出または記載される本明細書に提供される化合物は、示される化合物のみを含む。定義されていない立体化学により描出または記載される本明細書に提供される化合物は、別段の指定がない限り、全てのそのような可能性のある異性体（それらのステレオランダムかつ光学的に純粋な形態を含む）を含む。同様に、本明細書の化合物の全ての互変異性型も、別段の指示がない限り含まれる。別段の指示がない限り、本明細書に開示される化合物は、対応する塩形態を含むことが意図される。
【０３４０】
本明細書に記載される化合物は、１つ以上の原子が、示される要素の非放射性アイソトープまたは放射性アイソトープで置き換えられる変形を含む。例えば、水素原子を含む本明細書の化合物は、１Ｈ水素原子の各々に対して全ての可能な重水素置換を包含する。本明細書の化合物によって包含される同位体置換は、１Ｈの代わりに２Ｈまたは３Ｈ、１２Ｃの代わりに１３Ｃまたは１４Ｃ、１４Ｎの代わりに１５Ｎ、１６Ｏの代わりに１７Ｏまたは１８Ｏ、及び３２Ｓの代わりに３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、または３６Ｓを含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、非放射性同位体置換は、治療または研究ツールとしての使用に有益なオリゴマー化合物に新しい特性を与え得る。ある特定の実施形態では、放射性同位体置換は、化合物を、画像化などの研究または診断目的に好適にし得る。
【実施例】
【０３４１】
以下の実施例は、本開示のある特定の実施形態を示し、限定するものではない。さらに、特定の実施形態が提供される場合、発明者らは、それらの特定の実施形態の一般的応用を企図した。例えば、特定のモチーフを有するオリゴヌクレオチドの開示は、同じまたは類似のモチーフを有する追加のオリゴヌクレオチドに対する合理的な支持を提供する。さらに、例えば、特定の高親和性修飾が特定の位置で現れる場合、同じ位置での他の高親和性修飾は、特に指示がない限り、好適であると考えられる。
【０３４２】
実施例１：インビトロ、単回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現へのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
ヒトＬＲＲＫ２核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡへのそれらの効果について試験した。
【０３４３】
１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で培養したＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、未処理の対照に対して５，０００ｎＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドでまたは修飾されたオリゴヌクレオチドなしで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間後、ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１３３＿ＭＧＢ（配列番号１１として本明細書で指定される順方向配列ＴＴＣＣＡＣＡＣＴＴＧＣＧＧＴＣＴＴＴＡＧＡ、配列番号１２として本明細書で指定される逆方向配列ＧＣＧＧＧＡＣＣＴＧＧＴＡＧＧＴＡＣＴＧ、配列番号１３として本明細書で指定されるプローブ配列ＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＧＡＴ）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。アスタリスク（＊）で印付けられた対照値のパーセントを伴う修飾されたオリゴヌクレオチドは、プライマープローブセットのアンプリコン領域を標的とする。追加のアッセイを使用して、アンプリコン領域を標的とするオリゴヌクレオチドの効力及び有効性を測定してもよい。
【０３４４】
表１の修飾されたオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ギャップマーは、２０核酸塩基長であり、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む５’末端及び３’末端の両方のウイングセグメントに隣接している。ギャップマーの糖モチーフは、（５’から３’）ｅｅｅｅｅｄｄｄｄｄｄｄｄｄｄｅｅｅｅｅであり、「ｄ」は、２’−デオキシリボース糖を表し、「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾された糖を表す。各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である５’−末端側ヌクレオシドを示す。「終結部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である３’−末端側ヌクレオシドを示す。
【０３４５】
以下の表１に列挙される各修飾されたオリゴヌクレオチドは、示されるように、ヒトＬＲＲＫ２核酸配列の配列番号１または配列番号２と相補的である。「Ｎ／Ａ」は、修飾されたオリゴヌクレオチドが、１００％の相補性でその特定の核酸配列と相補的でないことを示す。以下に示されるように、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの配列と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量を低減した。
【０３４６】
【表１−１】
2021530204.tif 000031
【０３４７】
【表１−２】
2021530204.tif 000032
【０３４８】
【表１−３】
2021530204.tif 000033
【０３４９】
【表１−４】
2021530204.tif 000034
【０３５０】
【表１−５】
2021530204.tif 000035
【０３５１】
【表１−６】
2021530204.tif 000036
【０３５２】
【表１−７】
2021530204.tif 000037
【０３５３】
【表１−８】
2021530204.tif 000038
【０３５４】
【表１−９】
2021530204.tif 000039
【０３５５】
【表１−１０】
2021530204.tif 000040
【０３５６】
【表１−１１】
2021530204.tif 000041
【０３５７】
【表１−１２】
2021530204.tif 000042
【０３５８】
実施例２：インビトロ、単回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
ヒトＬＲＲＫ２核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡへのそれらの効果について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
【０３５９】
１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で培養したＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、未処理の対照に対して５，０００ｎＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドでまたは修飾されたオリゴヌクレオチドなしで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間後、ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１３２（配列番号１４として本明細書で指定される順方向配列ＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＴＡＡＧＡＣＡＡＧＡ、配列番号１５として本明細書で指定される逆方向配列ＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡＡＡＧＡＴＡＴＣＡＡ、配列番号１６として本明細書で指定されるプローブ配列ＣＴＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＡ）、ＲＴＳ３１３３＿ＭＧＢ（配列番号１１として本明細書で指定される順方向配列ＴＴＣＣＡＣＡＣＴＴＧＣＧＧＴＣＴＴＴＡＧＡ、配列番号１２として本明細書で指定される逆方向配列ＧＣＧＧＧＡＣＣＴＧＧＴＡＧＧＴＡＣＴＧ、配列番号１３として本明細書で指定されるプローブ配列ＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＴＧＡＴ）、及びＲＴＳ３１４６＿ＭＧＢ（配列番号１７として本明細書で指定される順方向配列ＧＡＧＣＴＴＣＣＴＣＡＣＧＣＡＧＴＴＣＡＣ、配列番号１８として本明細書で指定される逆方向配列ＴＧＣＴＧＧＧＴＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＧＡ、配列番号１９として本明細書で指定されるプローブ配列ＴＴＣＴＡＡＡＴＧＡＡＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣ）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。アスタリスク（＊）で印付けられた対照値のパーセントを伴う修飾されたオリゴヌクレオチドは、プライマープローブセットのアンプリコン領域を標的とする。
【０３６０】
表２の修飾されたオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ギャップマーは、２０核酸塩基長であり、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む５’末端及び３’末端の両方のウイングセグメントに隣接している。ギャップマーの糖モチーフは、（５’から３’）ｅｅｅｅｅｄｄｄｄｄｄｄｄｄｄｅｅｅｅｅであり、「ｄ」は、２’−デオキシリボース糖を表し、「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾された糖を表す。各ギャップマー全体の全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。各ギャップマーのヌクレオシド間結合は、混合ホスホジエステル及びホスホロチオエート結合である。ギャップマーのヌクレオシド間結合モチーフは、（５’から３’）ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓであり、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。「開始部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である５’−末端側ヌクレオシドを示す。「終結部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である３’−末端側ヌクレオシドを示す。
【０３６１】
以下の表２に列挙される各修飾されたオリゴヌクレオチドは、示されるように、ヒトＬＲＲＫ２核酸配列の配列番号１または配列番号２と相補的である。「Ｎ／Ａ」は、修飾されたオリゴヌクレオチドが、１００％の相補性でその特定の核酸配列と相補的でないことを示す。以下に示されるように、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの配列と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量を低減した。
【０３６２】
【表２−１】
2021530204.tif 000043
【０３６３】
【表２−２】
2021530204.tif 000044
【０３６４】
【表２−３】
2021530204.tif 000045
【０３６５】
【表２−４】
2021530204.tif 000046
【０３６６】
【表２−５】
2021530204.tif 000047
【０３６７】
【表２−６】
2021530204.tif 000048
【０３６８】
【表２−７】
2021530204.tif 000049
【０３６９】
実施例３：インビトロ、単回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
ヒトＬＲＲＫ２核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡへのそれらの効果について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
【０３７０】
１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で培養したＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、未処理の対照に対して３，０００ｎＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドでまたは修飾されたオリゴヌクレオチドなしで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間後、ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、実施例２に記載されるように、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１３２を使用して定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。アスタリスク（＊）で印付けられた対照値のパーセントを伴う修飾されたオリゴヌクレオチドは、プライマープローブセットのアンプリコン領域を標的とする。追加のアッセイを使用して、アンプリコン領域を標的とするオリゴヌクレオチドの効力及び有効性を測定してもよい。
【０３７１】
表３〜９の修飾されたオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ギャップマーは、２０核酸塩基長であり、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む５’末端及び３’末端の両方のウイングセグメントに隣接している。ギャップマーの糖モチーフは、（５’から３’）ｅｅｅｅｅｄｄｄｄｄｄｄｄｄｄｅｅｅｅｅであり、「ｄ」は、２’−デオキシリボース糖を表し、「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾された糖を表す。各ギャップマー全体の全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。各ギャップマーのヌクレオシド間結合は、混合ホスホジエステル及びホスホロチオエート結合である。ギャップマーのヌクレオシド間結合モチーフは、（５’から３’）ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓであり、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。「開始部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である５’−末端側ヌクレオシドを示す。「終結部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である３’−末端側ヌクレオシドを示す。
【０３７２】
以下の表３〜９に列挙される各修飾されたオリゴヌクレオチドは、示されるように、ヒトＬＲＲＫ２核酸配列の配列番号１または配列番号２と相補的である。「Ｎ／Ａ」は、修飾されたオリゴヌクレオチドが、１００％の相補性でその特定の核酸配列と相補的でないことを示す。以下に示されるように、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの配列と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量を低減した。
【０３７３】
【表３−１】
2021530204.tif 000050
【０３７４】
【表３−２】
2021530204.tif 000051
【０３７５】
【表３−３】
2021530204.tif 000052
【０３７６】
【表３−４】
2021530204.tif 000053
【０３７７】
【表３−５】
2021530204.tif 000054
【０３７８】
【表３−６】
2021530204.tif 000055
【０３７９】
【表４−１】
2021530204.tif 000056
【０３８０】
【表４−２】
2021530204.tif 000057
【０３８１】
【表４−３】
2021530204.tif 000058
【０３８２】
【表４−４】
2021530204.tif 000059
【０３８３】
【表４−５】
2021530204.tif 000060
【０３８４】
【表４−６】
2021530204.tif 000061
【０３８５】
【表４−７】
2021530204.tif 000062
【０３８６】
【表５−１】
2021530204.tif 000063
【０３８７】
【表５−２】
2021530204.tif 000064
【０３８８】
【表５−３】
2021530204.tif 000065
【０３８９】
【表５−４】
2021530204.tif 000066
【０３９０】
【表５−５】
2021530204.tif 000067
【０３９１】
【表５−６】
2021530204.tif 000068
【０３９２】
【表６−１】
2021530204.tif 000069
【０３９３】
【表６−２】
2021530204.tif 000070
【０３９４】
【表６−３】
2021530204.tif 000071
【０３９５】
【表６−４】
2021530204.tif 000072
【０３９６】
【表６−５】
2021530204.tif 000073
【０３９７】
【表６−６】
2021530204.tif 000074
【０３９８】
【表６−７】
2021530204.tif 000075
【０３９９】
【表６−８】
2021530204.tif 000076
【０４００】
【表６−９】
2021530204.tif 000077
【０４０１】
【表６−１０】
2021530204.tif 000078
【０４０２】
【表６−１１】
2021530204.tif 000079
【０４０３】
【表６−１２】
2021530204.tif 000080
【０４０４】
【表７−１】
2021530204.tif 000081
【０４０５】
【表７−２】
2021530204.tif 000082
【０４０６】
【表７−３】
2021530204.tif 000083
【０４０７】
【表７−４】
2021530204.tif 000084
【０４０８】
【表７−５】
2021530204.tif 000085
【０４０９】
【表７−６】
2021530204.tif 000086
【０４１０】
【表７−７】
2021530204.tif 000087
【０４１１】
【表８−１】
2021530204.tif 000088
【０４１２】
【表８−２】
2021530204.tif 000089
【０４１３】
【表８−３】
2021530204.tif 000090
【０４１４】
【表８−４】
2021530204.tif 000091
【０４１５】
【表８−５】
2021530204.tif 000092
【０４１６】
【表８−６】
2021530204.tif 000093
【０４１７】
【表８−７】
2021530204.tif 000094
【０４１８】
【表８−８】
2021530204.tif 000095
【０４１９】
【表９−１】
2021530204.tif 000096
【０４２０】
【表９−２】
2021530204.tif 000097
【０４２１】
【表９−３】
2021530204.tif 000098
【０４２２】
【表９−４】
2021530204.tif 000099
【０４２３】
【表９−５】
2021530204.tif 000100
【０４２４】
【表９−６】
2021530204.tif 000101
【０４２５】
【表９−７】
2021530204.tif 000102
【０４２６】
実施例４：インビトロ、単回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
ヒトＬＲＲＫ２核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでＬＲＲＫ２  ＲＮＡへのそれらの効果について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
【０４２７】
１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で培養したＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、未処理の対照に対して４，０００ｎＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドでまたは修飾されたオリゴヌクレオチドなしで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間後、ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、実施例２に記載されるように、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１３２を使用して定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。アスタリスク（＊）で印付けられた対照値のパーセントを伴う修飾されたオリゴヌクレオチドは、プライマープローブセットのアンプリコン領域を標的とする。追加のアッセイを使用して、アンプリコン領域を標的とするオリゴヌクレオチドの効力及び有効性を測定してもよい。
【０４２８】
表１０〜５０の修飾されたオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ギャップマーは、２０核酸塩基長であり、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、５個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む５’末端及び３’末端の両方のウイングセグメントに隣接している。ギャップマーの糖モチーフは、（５’から３’）ｅｅｅｅｅｄｄｄｄｄｄｄｄｄｄｅｅｅｅｅであり、「ｄ」は、２’−デオキシリボース糖を表し、「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾された糖を表す。各ギャップマー全体の全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。各ギャップマーのヌクレオシド間結合は、混合ホスホジエステル及びホスホロチオエート結合である。ギャップマーのヌクレオシド間結合モチーフは、（５’から３’）ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓであり、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表す。「開始部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である５’−末端側ヌクレオシドを示す。「終結部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である３’−末端側ヌクレオシドを示す。
【０４２９】
表１０〜５０に列挙される各修飾されたオリゴヌクレオチドは、示されるように、ヒトＬＲＲＫ２核酸配列の配列番号１または配列番号２と相補的である。「Ｎ／Ａ」は、修飾されたオリゴヌクレオチドが、１００％の相補性でその特定の核酸配列と相補的でないことを示す。以下に示されるように、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの配列と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの量を低減した。
【０４３０】
【表１０−１】
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【０４３１】
【表１０−２】
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【０４３２】
【表１０−３】
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【０４３３】
【表１０−４】
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【０４３４】
【表１０−５】
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【０４３５】
【表１０−６】
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【０４３６】
【表１１−１】
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【０４３７】
【表１１−２】
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【０４３８】
【表１１−３】
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【０４３９】
【表１１−４】
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【０４４０】
【表１１−５】
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【０４４１】
【表１１−６】
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【０４４２】
【表１１−７】
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【０４４３】
【表１２−１】
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【０４４４】
【表１２−２】
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【０４４５】
【表１２−３】
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【０４４６】
【表１２−４】
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【０４４７】
【表１２−５】
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【０４４８】
【表１２−６】
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【０４４９】
【表１３−１】
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【０４５０】
【表１３−２】
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【０４５１】
【表１３−３】
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【０４５２】
【表１３−４】
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【０４５３】
【表１３−５】
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【０４５４】
【表１３−６】
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【０４５５】
【表１４−１】
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【０４５６】
【表１４−２】
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【０４５７】
【表１４−３】
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【０４５８】
【表１４−４】
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【表１４−５】
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【０４６０】
【表１４−６】
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【０４６１】
【表１４−７】
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【０４６２】
【表１５−１】
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【０４６３】
【表１５−２】
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【０４６４】
【表１５−３】
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【０４６５】
【表１５−４】
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【０４６６】
【表１５−５】
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【０４６７】
【表１５−６】
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【０４６８】
【表１６−１】
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【０４６９】
【表１６−２】
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【０４７０】
【表１６−３】
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【０４７１】
【表１６−４】
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【表１６−５】
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【０４７３】
【表１６−６】
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【０４７４】
【表１７−１】
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【０４７５】
【表１７−２】
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【０４７６】
【表１７−３】
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【０４７７】
【表１７−４】
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【表１７−５】
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【表１７−６】
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【０４８０】
【表１８−１】
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【０４８１】
【表１８−２】
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【０４８２】
【表１８−３】
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【０４８３】
【表１８−４】
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【０４８４】
【表１８−５】
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【０４８５】
【表１８−６】
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【０４８６】
【表１９−１】
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【０４８７】
【表１９−２】
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【０４８８】
【表１９−３】
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【０４８９】
【表１９−４】
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【０４９０】
【表１９−５】
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【０４９１】
【表１９−６】
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【０４９２】
【表２０−１】
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【０４９３】
【表２０−２】
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【０４９４】
【表２０−３】
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【０４９５】
【表２０−４】
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【０４９６】
【表２０−５】
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【０４９７】
【表２０−６】
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【０４９８】
【表２１−１】
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【０４９９】
【表２１−２】
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【０５００】
【表２１−３】
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【表２１−４】
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【表２１−６】
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【０５０４】
【表２１−７】
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【０５０５】
【表２２−１】
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【０５０６】
【表２２−２】
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【０５０７】
【表２２−３】
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【表２２−４】
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【０５０９】
【表２２−５】
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【０５１０】
【表２２−６】
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【０５１１】
【表２２−７】
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【０５１２】
【表２３−１】
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【０５１３】
【表２３−２】
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【０５１４】
【表２３−３】
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【０５１５】
【表２３−４】
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【０５１６】
【表２３−５】
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【０５１７】
【表２３−６】
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【０５１８】
【表２３−７】
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【０５１９】
【表２３−８】
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【０５２０】
【表２３−９】
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【０５２１】
【表２４−１】
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【０５２２】
【表２４−２】
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【表２４−３】
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【表２４−４】
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【０５２５】
【表２４−５】
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【表２４−６】
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【０５２７】
【表２４−７】
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【０５２８】
【表２５−１】
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【０５２９】
【表２５−２】
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【０５３０】
【表２５−３】
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【０５３１】
【表２５−４】
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【０５３２】
【表２５−５】
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【０５３３】
【表２５−６】
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【０５３４】
【表２６−１】
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【０５３５】
【表２６−２】
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【０５３６】
【表２６−３】
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【０５３７】
【表２６−４】
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【０５３８】
【表２６−５】
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【０５３９】
【表２６−６】
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【０５４０】
【表２７−１】
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【０５４１】
【表２７−２】
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【表２７−３】
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【０５４３】
【表２７−４】
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【０５４４】
【表２７−５】
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【０５４５】
【表２７−６】
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【０５４６】
【表２８−１】
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【０５４７】
【表２８−２】
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【０５４８】
【表２８−３】
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【０５４９】
【表２８−４】
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【０５５０】
【表２８−５】
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【０５５１】
【表２８−６】
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【０５５２】
【表２８−７】
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【０５５３】
【表２９−１】
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【０５５４】
【表２９−２】
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【０５５５】
【表２９−３】
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【０５５６】
【表２９−４】
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【０５５７】
【表２９−５】
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【０５５８】
【表２９−６】
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【０５５９】
【表２９−７】
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【０５６０】
【表３０−１】
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【表３０−２】
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【表３０−３】
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【表３０−４】
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【０５６４】
【表３０−５】
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【表３０−６】
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【０５６６】
【表３０−７】
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【表３１−１】
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【０５６８】
【表３１−２】
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【０５６９】
【表３１−３】
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【０５７０】
【表３１−４】
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【０５７１】
【表３１−５】
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【０５７２】
【表３１−６】
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【０５７３】
【表３２−１】
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【０５７４】
【表３２−２】
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【０５７５】
【表３２−３】
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【０５７６】
【表３２−４】
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【０５７７】
【表３２−５】
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【０５７８】
【表３２−６】
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【０５７９】
【表３３−１】
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【０５８０】
【表３３−２】
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【表３３−３】
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【表３３−４】
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【表３３−５】
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【０５８４】
【表３３−６】
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【表３４−１】
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【０５８６】
【表３４−２】
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【表３４−３】
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【表３４−４】
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【表３４−６】
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【表３５−１】
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【０５９２】
【表３５−２】
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【０５９３】
【表３５−３】
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【表３５−４】
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【表３５−６】
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【０５９７】
【表３６−１】
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【表３６−２】
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【０５９９】
【表３６−３】
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【表３６−４】
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【表３６−５】
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【表３６−６】
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【表３７−１】
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【０６０４】
【表３７−２】
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【表３７−３】
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【表３７−４】
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【表３７−５】
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【表３７−６】
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【０６０９】
【表３８−１】
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【０６１０】
【表３８−２】
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【０６１１】
【表３８−３】
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【０６１２】
【表３８−４】
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【０６１３】
【表３８−５】
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【０６１４】
【表３８−６】
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【０６１５】
【表３９−１】
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【０６１６】
【表３９−２】
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【０６１７】
【表３９−３】
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【０６１８】
【表３９−４】
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【０６１９】
【表３９−５】
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【０６２０】
【表３９−６】
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【表３９−７】
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【表４０−１】
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【表４０−３】
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【表４０−４】
2021530204.tif 000298
【０６２６】
【表４０−５】
2021530204.tif 000299
【０６２７】
【表４０−６】
2021530204.tif 000300
【０６２８】
【表４１−１】
2021530204.tif 000301
【０６２９】
【表４１−２】
2021530204.tif 000302
【０６３０】
【表４１−３】
2021530204.tif 000303
【０６３１】
【表４１−４】
2021530204.tif 000304
【０６３２】
【表４１−５】
2021530204.tif 000305
【０６３３】
【表４１−６】
2021530204.tif 000306
【０６３４】
【表４２−１】
2021530204.tif 000307
【０６３５】
【表４２−２】
2021530204.tif 000308
【０６３６】
【表４２−３】
2021530204.tif 000309
【０６３７】
【表４２−４】
2021530204.tif 000310
【０６３８】
【表４２−５】
2021530204.tif 000311
【０６３９】
【表４２−６】
2021530204.tif 000312
【０６４０】
【表４３−１】
2021530204.tif 000313
【０６４１】
【表４３−２】
2021530204.tif 000314
【０６４２】
【表４３−３】
2021530204.tif 000315
【０６４３】
【表４３−４】
2021530204.tif 000316
【０６４４】
【表４３−５】
2021530204.tif 000317
【０６４５】
【表４３−６】
2021530204.tif 000318
【０６４６】
【表４４−１】
2021530204.tif 000319
【０６４７】
【表４４−２】
2021530204.tif 000320
【０６４８】
【表４４−３】
2021530204.tif 000321
【０６４９】
【表４４−４】
2021530204.tif 000322
【０６５０】
【表４４−５】
2021530204.tif 000323
【０６５１】
【表４４−６】
2021530204.tif 000324
【０６５２】
【表４５−１】
2021530204.tif 000325
【０６５３】
【表４５−２】
2021530204.tif 000326
【０６５４】
【表４５−３】
2021530204.tif 000327
【０６５５】
【表４５−４】
2021530204.tif 000328
【０６５６】
【表４５−５】
2021530204.tif 000329
【０６５７】
【表４５−６】
2021530204.tif 000330
【０６５８】
【表４６−１】
2021530204.tif 000331
【０６５９】
【表４６−２】
2021530204.tif 000332
【０６６０】
【表４６−３】
2021530204.tif 000333
【０６６１】
【表４６−４】
2021530204.tif 000334
【０６６２】
【表４６−５】
2021530204.tif 000335
【０６６３】
【表４６−６】
2021530204.tif 000336
【０６６４】
【表４７−１】
2021530204.tif 000337
【０６６５】
【表４７−２】
2021530204.tif 000338
【０６６６】
【表４７−３】
2021530204.tif 000339
【０６６７】
【表４７−４】
2021530204.tif 000340
【０６６８】
【表４７−５】
2021530204.tif 000341
【０６６９】
【表４７−６】
2021530204.tif 000342
【０６７０】
【表４８−１】
2021530204.tif 000343
【０６７１】
【表４８−２】
2021530204.tif 000344
【０６７２】
【表４８−３】
2021530204.tif 000345
【０６７３】
【表４８−４】
2021530204.tif 000346
【０６７４】
【表４８−５】
2021530204.tif 000347
【０６７５】
【表４８−６】
2021530204.tif 000348
【０６７６】
【表４９−１】
2021530204.tif 000349
【０６７７】
【表４９−２】
2021530204.tif 000350
【０６７８】
【表４９−３】
2021530204.tif 000351
【０６７９】
【表４９−４】
2021530204.tif 000352
【０６８０】
【表４９−５】
2021530204.tif 000353
【０６８１】
【表４９−６】
2021530204.tif 000354
【０６８２】
【表４９−７】
2021530204.tif 000355
【０６８３】
【表５０−１】
2021530204.tif 000356
【０６８４】
【表５０−２】
2021530204.tif 000357
【０６８５】
【表５０−３】
2021530204.tif 000358
【０６８６】
【表５０−４】
2021530204.tif 000359
【０６８７】
【表５０−５】
2021530204.tif 000360
【０６８８】
【表５０−６】
2021530204.tif 000361
【０６８９】
【表５０−７】
2021530204.tif 000362
【０６９０】
実施例５：インビトロ、複数回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現へのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
上記実施例１から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、１．１２５μＭ、２．２５０μＭ、４．５００μＭ、９．０００μＭ、及び１８．０００μＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットＲＴＳ３１３３＿ＭＧＢ（本明細書の実施例１に記載される）を使用してＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０６９１】
【表５１】
2021530204.tif 000363
【０６９２】
実施例６：インビトロ、複数回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
上記実施例２及び３から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、０．３３３μＭ、１．０００μＭ、３．０００μＭ、及び９．０００μＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットＲＴＳ３１３２（上文の実施例２に記載される）を使用してＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０６９３】
【表５２−１】
2021530204.tif 000364
【０６９４】
【表５２−２】
2021530204.tif 000365
【０６９５】
【表５３−１】
2021530204.tif 000366
【０６９６】
【表５３−２】
2021530204.tif 000367
【０６９７】
実施例７：インビトロ、複数回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
上記実施例４から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、０．２９６、０．８８８、２．６６６、及び８．０００μＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットＲＴＳ３１３２（本明細書の実施例２に記載される）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０６９８】
【表５４−１】
2021530204.tif 000368
【０６９９】
【表５４−２】
2021530204.tif 000369
【０７００】
【表５５−１】
2021530204.tif 000370
【０７０１】
【表５５−２】
2021530204.tif 000371
【０７０２】
【表５６−１】
2021530204.tif 000372
【０７０３】
【表５６−２】
2021530204.tif 000373
【０７０４】
【表５７−１】
2021530204.tif 000374
【０７０５】
【表５７−２】
2021530204.tif 000375
【０７０６】
実施例８：インビトロ、複数回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
上記実施例４から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、０．４４４、１．３３３、４．０００、及び１２．０００μＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットＲＴＳ３１３２（本明細書の実施例２に記載される）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０７０７】
【表５８−１】
2021530204.tif 000376
【０７０８】
【表５８−２】
2021530204.tif 000377
【０７０９】
【表５９−１】
2021530204.tif 000378
【０７１０】
【表５９−２】
2021530204.tif 000379
【０７１１】
【表６０−１】
2021530204.tif 000380
【０７１２】
【表６０−２】
2021530204.tif 000381
【０７１３】
【表６１−１】
2021530204.tif 000382
【０７１４】
【表６１−２】
2021530204.tif 000383
【０７１５】
【表６２−１】
2021530204.tif 000384
【０７１６】
【表６２−２】
2021530204.tif 000385
【０７１７】
【表６３−１】
2021530204.tif 000386
【０７１８】
【表６３−２】
2021530204.tif 000387
【０７１９】
【表６４−１】
2021530204.tif 000388
【０７２０】
【表６４−２】
2021530204.tif 000389
【０７２１】
【表６５−１】
2021530204.tif 000390
【０７２２】
【表６５−２】
2021530204.tif 000391
【０７２３】
【表６６−１】
2021530204.tif 000392
【０７２４】
【表６６−２】
2021530204.tif 000393
【０７２５】
【表６７−１】
2021530204.tif 000394
【０７２６】
【表６７−２】
2021530204.tif 000395
【０７２７】
【表６８−１】
2021530204.tif 000396
【０７２８】
【表６８−２】
2021530204.tif 000397
【０７２９】
【表６９−１】
2021530204.tif 000398
【０７３０】
【表６９−２】
2021530204.tif 000399
【０７３１】
【表７０−１】
2021530204.tif 000400
【０７３２】
【表７０−２】
2021530204.tif 000401
【０７３３】
実施例９：ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡと相補的な混合されたヌクレオシド間結合を有するギャップマーの設計
ヒトＬＲＲＫ２核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計した。表７１の修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ギャップマーは、２’−デオキシヌクレオシドを含む中心ギャップセグメントを有し、及びｃＥｔヌクレオシド及び／または２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む５’末端及び３’末端の両方のウイングセグメントに隣接している。各ギャップマー全体の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。ヌクレオシド間結合は、混合ホスホジエステルヌクレオシド間結合及びホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。配列及び化学表記法の列は、５’−メチルシトシン、糖化学、及びヌクレオシド間結合化学を含む配列を明記し、下付き文字「ｄ」は、２’−デオキシリボース糖を表し、下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾された糖を表し、下付き文字「ｋ」は、ｃＥｔ修飾された糖を表し、下付き文字「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、下付き文字「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、シトシン残基の前の「ｍ」の下付き文字は、５−メチルシトシンを示す。「開始部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である５’−末端側ヌクレオシドを示す。「終結部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である３’−末端側ヌクレオシドを示す。
【０７３４】
以下の表に列挙される各修飾されたオリゴヌクレオチドは、示されるように、ヒトＬＲＲＫ２核酸配列の配列番号１または配列番号２と相補的である。「Ｎ／Ａ」は、修飾されたオリゴヌクレオチドが、１００％の相補性でその特定の核酸と相補的でないことを示す。
【０７３５】
【表７１−１】
2021530204.tif 000402
【０７３６】
【表７１−２】
2021530204.tif 000403
【０７３７】
【表７１−３】
2021530204.tif 000404
【０７３８】
【表７１−４】
2021530204.tif 000405
【０７３９】
【表７１−５】
2021530204.tif 000406
【０７４０】
【表７１−６】
2021530204.tif 000407
【０７４１】
【表７１−７】
2021530204.tif 000408
【０７４２】
【表７１−８】
2021530204.tif 000409
【０７４３】
【表７１−９】
2021530204.tif 000410
【０７４４】
【表７１−１０】
2021530204.tif 000411
【０７４５】
【表７１−１１】
2021530204.tif 000412
【０７４６】
【表７１−１２】
2021530204.tif 000413
【０７４７】
【表７１−１３】
2021530204.tif 000414
【０７４８】
【表７１−１４】
2021530204.tif 000415
【０７４９】
【表７１−１５】
2021530204.tif 000416
【０７５０】
【表７１−１６】
2021530204.tif 000417
【０７５１】
実施例１０：自由摂取（ｆｒｅｅ  ｕｐｔａｋｅ）を介したインビトロでのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への混合されたヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーの効果
上の実施例から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、自由摂取によりＡ４３１細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、０．０３９、０．１５６、０．６２５、２．５００、及び１０．０００μＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドとともに、細胞を１ウェルあたり１０，０００個の細胞の密度で播種した。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットＲＴＳ３１３２（本明細書の実施例２に記載される）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０７５２】
【表７２−１】
2021530204.tif 000418
【０７５３】
【表７２−２】
2021530204.tif 000419
【０７５４】
実施例１１：インビトロ、複数回投与でのアカゲザルＬＲＲＫ２  ＲＮＡへの修飾されたオリゴヌクレオチドの効果
アカゲザルＬＲＲＫ２と相補的でもある、上の実施例から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、ＬＬＣ−ＭＫ２サル細胞において様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、０．０１１、０．０３４、０．１０３、０．３０９、０．９２６、２．７７８、８．３３３、及び２５．０００μＭ濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。対照オリゴヌクレオチド、６７６６３０、標的不明の混合されたホスホジエステル及びホスホロチオエート骨格を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマー、ならびに配列ＣＣＴＡＴＡＧＧＡＣＴＡＴＣＣＡＧＧＡＡ（配列番号３８４８）も試験した。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットｈＬＲＲＫ２  ＬＴＳ３５７００（配列番号２０として本明細書で指定される順方向配列ＣＣＡＧＧＴＡＣＡＡＴＧＣＡＡＡＧＣＴＴＡＡＴ、配列番号２１として本明細書で指定される逆方向配列ＴＣＡＧＴＣＣＡＡＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＴＴ、配列番号２２として本明細書で指定されるプローブ配列ＴＴＧＧＧＡＡＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＴＴＣＡＣＣＡ）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０７５５】
【表７３】
2021530204.tif 000420
【０７５６】
＊この修飾されたオリゴヌクレオチドは、アカゲザルＬＲＲＫ２核酸配列番号３と相補的であり、それに対して１つの不一致を含む。
＊＊これらの修飾されたオリゴヌクレオチドは、アカゲザルＬＲＲＫ２核酸配列番号３と相補的であり、それに対して２つの不一致を含む。
【０７５７】
実施例１２：インビトロ、複数回投与でのヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現への修飾されたオリゴヌクレオチドの効果
上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウェルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、０．０１１、０．０３４、０．１０３、０．３０９、０．９２６、２．７７８、８．３３３、及び２５．０００μＭの修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。対照オリゴヌクレオチド、６７６６３０、標的不明の混合されたホスホジエステル及びホスホロチオエート骨格を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーも試験した。約２４時間の治療期間後、全ＲＮＡを、細胞から単離し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＬＲＲＫ２プライマープローブセットＬＴＳ３５７００（本明細書の実施例１１に記載される）を使用して、ＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。ＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを使用して「ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変スロープ（４パラメータ）」式を使用して計算した。
【０７５８】
【表７４】
2021530204.tif 000421
【０７５９】
実施例１３：トランスジェニックマウス、２週間の評定におけるヒトＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの活性
２週間後の活性を評定するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ヒトＢＡＣ野生型ＬＲＲＫ２トランスジェニックマウスモデル（Ｂ６；ＳＪＬ−Ｔｇ（ＬＲＲＫ２）６６Ｍｊｆｆ／Ｊ；ストック番号０１３７２５、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）において試験した。ＢＡＣ  ＬＲＲＫ２−Ｗｔ導入遺伝子に対して半接合であるマウスは、生存能力及び繁殖能力がある。これらのマウスは、ＢＡＣ導入遺伝子のヒトＬＲＲＫ２プロモーター／エンハンサー領域の指示を受ける野生型ヒトロイシンリッチ反復キナーゼ２（ＬＲＲＫ２）遺伝子を発現する（Ｏｕｙａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。このモデルからのマウスは、脊髄及び脳を含む様々な組織中でヒトＬＲＲＫ２を発現する。
【０７６０】
治療
ＬＲＲＫ２トランスジェニックマウスは各々、以下の表に列挙される３００μｇの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回脳室内（ＩＣＶ）投与を受けた。各治療群は、４匹のマウスから構成された。４匹のマウスの群は、陰性対照としてＰＢＳを受けた。
【０７６１】
ＲＮＡ分析
２週間後、マウスを屠殺し、プライマープローブセットｈＬＲＲＫ２  ＬＴＳ３５７００を使用して、ＬＲＲＫ２のＲＮＡ発現の測定のリアルタイムＰＣＲ分析のために、ＲＮＡを皮質脳組織及び脊髄から抽出した（本明細書の上文の実施例１１に記載）。シクロフィリンＡを用いて正規化した、ＰＢＳ対照に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
【０７６２】
以下の表に示されるように、修飾されたオリゴヌクレオチドでの治療は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの低減をもたらした。
【０７６３】
【表７５−１】
2021530204.tif 000422
【０７６４】
【表７５−２】
2021530204.tif 000423
【０７６５】
【表７５−３】
2021530204.tif 000424
【０７６６】
【表７６−１】
2021530204.tif 000425
【０７６７】
【表７６−２】
2021530204.tif 000426
【０７６８】
【表７６−３】
2021530204.tif 000427
【０７６９】
【表７７−１】
2021530204.tif 000428
【０７７０】
【表７７−２】
2021530204.tif 000429
【０７７１】
【表７８−１】
2021530204.tif 000430
【０７７２】
【表７８−２】
2021530204.tif 000431
【０７７３】
【表７９−１】
2021530204.tif 000432
【０７７４】
【表７９−２】
2021530204.tif 000433
【０７７５】
【表７９−３】
2021530204.tif 000434
【０７７６】
【表８０−１】
2021530204.tif 000435
【０７７７】
【表８０−２】
2021530204.tif 000436
【０７７８】
【表８１−１】
2021530204.tif 000437
【０７７９】
【表８１−２】
2021530204.tif 000438
【０７８０】
【表８２−１】
2021530204.tif 000439
【０７８１】
【表８２−２】
2021530204.tif 000440
【０７８２】
【表８３−１】
2021530204.tif 000441
【０７８３】
【表８３−２】
2021530204.tif 000442
【０７８４】
【表８４−１】
2021530204.tif 000443
【０７８５】
【表８４−２】
2021530204.tif 000444
【０７８６】
【表８５−１】
2021530204.tif 000445
【０７８７】
【表８５−２】
2021530204.tif 000446
【０７８８】
【表８６−１】
2021530204.tif 000447
【０７８９】
【表８６−２】
2021530204.tif 000448
【０７９０】
【表８７−１】
2021530204.tif 000449
【０７９１】
【表８７−２】
2021530204.tif 000450
【０７９２】
実施例１４：トランスジェニックマウス、８週間の評定におけるヒトＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの活性
８週間後の活性を評定するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ヒトＢＡＣ野生型ＬＲＲＫ２トランスジェニックマウスモデル（本明細書の上文に記載）において試験した。ＢＡＣ  ＬＲＲＫ２−Ｗｔ導入遺伝子に対して半接合であるマウスは、生存能力及び繁殖能力がある。これらのマウスは、ＢＡＣ導入遺伝子のヒトＬＲＲＫ２プロモーター／エンハンサー領域の指示を受ける野生型ヒトロイシンリッチ反復キナーゼ２（ＬＲＲＫ２）遺伝子を発現する（Ｏｕｙａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。このモデルからのマウスは、脊髄及び脳を含む様々な組織中でヒトＬＲＲＫ２を発現する。
【０７９３】
治療
ＬＲＲＫ２トランスジェニックマウスは各々、以下の表に列挙される３００μｇの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回ＩＣＶ投与を受けた。各治療群は、４匹のマウスから構成された。４匹のマウスの群は、陰性対照としてＰＢＳを受けた。
【０７９４】
ＲＮＡ分析
８週間後、マウスを屠殺し、プライマープローブセットｈＬＲＲＫ２  ＬＴＳ３５７００を使用して、ＬＲＲＫ２のＲＮＡ発現の測定のリアルタイムＰＣＲ分析のために、ＲＮＡを皮質脳組織及び脊髄から抽出した（本明細書の上文の実施例１１に記載）。シクロフィリンＡを用いて正規化した、ＰＢＳ対照に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
【０７９５】
以下の表に示されるように、修飾されたオリゴヌクレオチドでの治療は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの低減をもたらした。
【０７９６】
【表８８】
2021530204.tif 000451
【０７９７】
【表８９】
2021530204.tif 000452
【０７９８】
実施例１５：トランスジェニックラットにおけるヒトＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの活性
活性を評定するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ヒトＢＡＣ  Ｇ２０１９Ｓ変異型ＬＲＲＫ２トランスジェニックラット（ＮＴａｃ：ＳＤ−Ｔｇ（ＬＲＲＫ＊Ｇ２０１９Ｓ）５７１Ｃｊｌｉ；Ｔａｃｏｎｉｃ）モデルにおいて試験した。このモデルは、ＮＴａｃ：ＳＤ接合体へのＧ２０１９Ｓ変異を有する全ヒトＬＲＲＫ２遺伝子の前核注射により創出した。このモデルからのラットは、脊髄及び脳を含む様々な組織中でヒトＬＲＲＫ２を発現する（Ｗｅｓｔ  ＡＢ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０１４，５２２（１１）：２４６５−２４８０）。
【０７９９】
治療
ＬＲＲＫ２トランスジェニックラットは各々、以下の表に列挙される１，０００μｇの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回ＩＣＶ投与を受けた。各治療群は、４〜５匹のラットから構成された。４匹のラットの群は、陰性対照としてＰＢＳを受けた。
【０８００】
ＲＮＡ分析
２週間後、ラットを屠殺し、プライマープローブセットｈＬＲＲＫ２  ＬＴＳ３５７００を使用して、ＬＲＲＫ２のＲＮＡ発現の測定のリアルタイムＰＣＲ分析のために、ＲＮＡを、脳幹、皮質脳組織、脊髄、肺、及び腎臓から抽出した（本明細書の上文の実施例１１に記載）。シクロフィリンＡを用いて正規化した、ＰＢＳ対照に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
【０８０１】
以下の表に示されるように、修飾されたオリゴヌクレオチドでの治療は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの低減をもたらした。
【０８０２】
【表９０】
2021530204.tif 000453
【０８０３】
実施例１６：トランスジェニックラットにおけるヒトＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの有効性
オリゴヌクレオチドの有効性を試験するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、本明細書で上述したヒトＢＡＣ  Ｇ２０１９Ｓ変異型ＬＲＲＫ２トランスジェニックラット（ＮＴａｃ：ＳＤ−Ｔｇ（ＬＲＲＫ＊Ｇ２０１９Ｓ）５７１Ｃｊｌｉ）モデルにおいて試験した。
【０８０４】
治療
ＬＲＲＫ２トランスジェニックラットは各々、以下の表に列挙される１０、３０、１００、３００、７００、１，０００、または３，０００μｇの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回脳室内（ＩＣＶ）投与を受けた。各治療群は、５匹のラットから構成された。５匹のラットの群は、各投薬群につき陰性対照としてＰＢＳを受けた。
【０８０５】
ＲＮＡ分析
２週間後、ラットを屠殺し、プライマープローブセットｈＬＲＲＫ２  ＬＴＳ３５７００を使用して、ＬＲＲＫ２のＲＮＡ発現の測定のリアルタイムＰＣＲ分析のために、ＲＮＡを、皮質から抽出した（本明細書の上文の実施例１１に記載）。シクロフィリンＡを用いて正規化した、ＰＢＳ対照に対するＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
【０８０６】
以下の表に示されるように、修飾されたオリゴヌクレオチドでの治療は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＬＲＲＫ２  ＲＮＡの低減をもたらした。用量応答データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェア（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して分析した。ＥＤ５０値は、ログ変換した用量または濃度及び個々の動物のＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルから、内蔵ＧｒａｐｈＰａｄ式「ｌｏｇ（ａｇｏｎｉｓｔ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ−−Ｆｉｎｄ  ＥＣａｎｙｔｈｉｎｇ」を、次の制約：ＥＤ５０について、ボトム値＞０、トップ値＝１００、Ｆ＝５０で使用して計算した。
【０８０７】
【表９１】
2021530204.tif 000454
【０８０８】
実施例１７：野生型マウス、３時間のＦＯＢ評定におけるＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの耐容性
上に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドを野生型雌Ｃ５７／Ｂｌ６マウスで試験して、オリゴヌクレオチドの耐容性を評定した。野生型雌Ｃ５７／Ｂｌ６マウスは各々、以下の表に列挙される７００μｇの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回ＩＣＶ投与を受けた。各治療群は、４匹のマウスから構成された。４匹のマウスの群は、各実験につき陰性対照としてＰＢＳを受けた（以下の別個の表に特定される）。注射後３時間で、マウスを７つの異なる基準に従って評価した。基準は、（１）マウスは、明晰であり、機敏であり、反応が良かった、（２）マウスは、刺激なしで起立または背を丸めていた、（３）マウスは、刺激なしで任意の動きを示した、（４）マウスは、持ち上げられた後に前方への動きを示した、（５）マウスは、持ち上げられた後に任意の動きを示した、（６）マウスは、尾部をつまむことに対して反応した、（７）正常な呼吸、である。７つの基準の各々について、マウスに、基準を満たした場合に０、満たさなかった場合に１のサブスコアを与えた（機能観察総合評価スコアまたはＦＯＢ）。全ての７つの基準を評価した後、スコアを各マウスについて合計し、各治療群内で平均化した。以下の表に結果を表す。
【０８０９】
【表９２−１】
2021530204.tif 000455
【０８１０】
【表９２−２】
2021530204.tif 000456
【０８１１】
【表９３】
2021530204.tif 000457
【０８１２】
【表９４】
2021530204.tif 000458
【０８１３】
【表９５】
2021530204.tif 000459
【０８１４】
【表９６】
2021530204.tif 000460
【０８１５】
【表９７】
2021530204.tif 000461
【０８１６】
【表９８−１】
2021530204.tif 000462
【０８１７】
【表９８−２】
2021530204.tif 000463
【０８１８】
実施例１８：ラット、３時間のＦＯＢ評定におけるヒトＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの耐容性
上に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドをＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットで試験して、オリゴヌクレオチドの耐容性を評価した。Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットは各々、以下の表に列挙される３ｍｇのオリゴヌクレオチドの単回髄腔内（ＩＴ）投与を受けた。各治療群は、３〜４匹のラットから構成された。４匹のラットの群は、各実験につき陰性対照としてＰＢＳを受けた（以下の別個の表に特定される）。注射後３時間で、各ラットについて体の７つの異なる部分の動きを評価した。７つの体の部分は、（１）ラットの尾部、（２）ラットの後方姿勢、（３）ラットの後肢、（４）ラットの後足、（５）ラットの前足、（６）ラットの前方姿勢、（７）ラットの頭部である。７つの異なる体の部分の各々について、各ラットに、体の部分が動いていた場合に０、または体の部分が動いていなかった場合に１のサブスコアを与えた。７つの基準の各々について、ラットに、基準を満たした場合に０、満たさなかった場合に１のサブスコアを与えた（機能観察総合評価スコアまたはＦＯＢ）。全ての７つの基準を評価した後、スコアを各ラットについて合計し、各治療群内で平均化した。以下の表に結果を表す。
【０８１９】
【表９９】
2021530204.tif 000464
【０８２０】
【表１００】
2021530204.tif 000465
【０８２１】
【表１０１】
2021530204.tif 000466
【０８２２】
【表１０２】
2021530204.tif 000467
【０８２３】
【表１０３】
2021530204.tif 000468
【０８２４】
【表１０４】
2021530204.tif 000469
【０８２５】
【表１０５】
2021530204.tif 000470
【０８２６】
【表１０６】
2021530204.tif 000471
【０８２７】
【表１０７】
2021530204.tif 000472
【０８２８】
【表１０８】
2021530204.tif 000473
【０８２９】
【表１０９】
2021530204.tif 000474
【０８３０】
【表１１０】
2021530204.tif 000475
【０８３１】
【表１１１】
2021530204.tif 000476
【０８３２】
【表１１２】
2021530204.tif 000477
【０８３３】
【表１１３】
2021530204.tif 000478
【０８３４】
【表１１４】
2021530204.tif 000479
【０８３５】
【表１１５】
2021530204.tif 000480
【０８３６】
実施例１９：ＰＦＦモデルにおける修飾されたオリゴヌクレオチドによるＬＲＲＫ２の予防的低減
野生型マウスは、以下の表に列挙される７００μｇのオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳビヒクルのみの単回ＩＣＶ注射を受けた。各治療群は、１１または１２匹のマウスから構成された。オリゴヌクレオチド治療の２週間後、α−シヌクレインの事前形成線維（ＰＦＦ）を線条体に注射し、記載されているように（Ｌｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１２，３３８，９４９−９５３を参照されたい）、いくつかの脳領域におけるα−シヌクレイ凝集体の形成及び運動障害を生じさせた。１つの対照群はＰＦＦの注射を受けなかった。オリゴヌクレオチド治療の５５日後、運動機能をワイヤーハング試験において試験した。各治療群のマウスがワイヤ上に留まった時間の長さの平均として、以下の表に結果を表す。
【０８３７】
ワイヤーハング試験の１日後、４匹のみを屠殺したオリゴヌクレオチドもＰＦＦ注射も受けなかった群を除き、各治療群の全マウスを屠殺した。動物に氷冷ＰＢＳを灌流させた。免疫化学のため、同側半球を固定し、処理した。対側中脳及び線条体を切除し、ＲＮＡ分析まで凍結させ、同時に対側皮質全体を切除し、タンパク質分析まで凍結させた。ＬＲＲＫ２  ＲＮＡ発現を、マウスプライマープローブセットＲＴＳ３０４３（配列番号２３として本明細書で指定される順方向配列ＧＧＣＧＡＧＴＴＡＴＣＣＧＣＡＣＣＡＴ、配列番号２４として本明細書で指定される逆方向配列ＣＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＡＴＧＡＣＡＴＴＣＴＴＡＡ、配列番号２５として本明細書で指定されるプローブ配列ＴＧＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＣＡＡ）を使用して定量的リアルタイムＰＣＲにより分析した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによって測定されるように、全ＲＮＡ含量に従ってＬＲＲＫ２  ＲＮＡレベルを調節した。オリゴヌクレオチド治療もＰＦＦ注射も受けなかった野生型対照群に対する平均阻害パーセントとして、以下の表に結果を示す。
【０８３８】
皮質におけるＬＲＲＫ２、α−シヌクレイン、及び高リン酸化α−シヌクレイン（ｐ−α−ｓｙｎ）タンパク質のレベルを、ウエスタンブロットにより分析した。対側皮質組織を、まずＲＩＰＡ緩衝液中で均質化し、１３，３００×ｇで遠心分離した。上清をＬＲＲＫ２タンパク質レベルについてウエスタンブロットに供し、ローディング対照としてβ−チューブリンを使用した。結果は、皮質におけるＬＲＲＫ２タンパク質レベルが、オリゴヌクレオチド治療を受けなかった動物よりもオリゴヌクレオチドで治療した動物において有意に低かったことを示した。ペレットをＲＩＰＡ緩衝液に再懸濁し、１００，０００×ｇで遠心分離し、得られた不溶性物質を２％ＳＤＳ緩衝液にさらに懸濁した後、追加で、１００，０００×ｇで回転させた。得られた上清を、α−シヌクレイン及びｐ−α−ｓｙｎについてウエスタンブロットにより分析した。結果は、Ｌｕｋらにおいて報告されているように、ＰＦＦ注射により、内因性マウスα−シヌクレインが不溶性凝集体に補充されたことを示した。凝集体はまた、高リン酸化された。ウエスタンブロットにおける不溶性マウスα−シヌクレイン及びｐ−α−ｓｙｎの低減からも明らかであるように、オリゴヌクレオチド治療により凝集体の形成が低減した。黒質におけるｐ−α−ｓｙｎ凝集体は、免疫組織化学により可視化した。各治療群からの同じサイズの試料について観察された凝集体の数の平均を以下の表に示す。結果の一方向ＡＮＯＶＡ試験により、ＰＢＳで治療した動物とオリゴヌクレオチドで治療した動物との間の差異が有意であったことが示された。
【０８３９】
【表１１６】
2021530204.tif 000481
【０８４０】
実施例２０：ＰＦＦモデルにおける修飾されたオリゴヌクレオチドによるＬＲＲＫ２の低減
ＰＦＦの注射後の野生型マウスにおけるオリゴヌクレオチド低減の効果を、６９００９３を使用して評価した。オリゴヌクレオチド治療をＰＦＦ注射の２週間前ではなくＰＦＦ注射の２週間後に行ったことを除き、実施例１９に記載のとおりにマウスを治療した。各治療群は、１０匹の動物から構成された。ＰＦＦ注射の５５日後、実施例１９に記載のとおり、マウスをワイヤーハング試験において評定した。ワイヤーハング試験の１日後、マウスを屠殺し、実施例１９に記載のとおり、中脳、線条体、及び黒質を収集し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡ及びｐ−α−ｓｙｎ凝集体を測定した。各治療群についての平均として、以下の表に結果を示す。「ｎｄ」の記入は、その治療群についてはデータが収集されなかったことを示す。結果により、修飾されたオリゴヌクレオチドが、ＰＦＦモデルの発症後に投与された場合であっても、運動機能を改善させ、病的凝集体の数を低減させたことが示される。
【０８４１】
【表１１７】
2021530204.tif 000482
【０８４２】
実施例２１：長期的研究でのＰＦＦモデルにおける修飾されたオリゴヌクレオチドによるＬＲＲＫ２の予防的低減
修飾されたオリゴヌクレオチドを長期的研究において試験して、修飾されたオリゴヌクレオチドによる長期的治療によりドーパミン作動性ニューロンが保護されるかどうかを決定した。黒質緻密部におけるα−ｓｙｎ凝集体の蓄積は、時間とともにドーパミン作動性ニューロンの生存を損なった（Ｌｕｋ  ２０１２、Ｔｒａｎ  ２０１４）。
【０８４３】
ＰＦＦの注射後の野生型マウスにおけるオリゴヌクレオチド低減の効果を、６９００９３または対照オリゴヌクレオチド６７６６３０、標的不明の混合されたホスホジエステル及びホスホロチオエート骨格を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーを使用して評価した。マウスが９０日目に第２のＩＣＶ用量の６９００９３を受け、第１のＩＣＶ治療後１８０日目に屠殺されたことを除き、実施例１９に記載のとおりに、マウスを治療した。各治療群は、１２匹の動物から構成された。屠殺時、実施例１９に記載のとおり、中脳、線条体、及び黒質を収集し、ＬＲＲＫ２  ＲＮＡ及びｐ−α−ｓｙｎ凝集体を測定し、ドーパミン作動性細胞を、抗チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）抗体を使用して免疫組織化学により定量化した。各治療群についての平均として、以下の表に結果を示す。結果は、ＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドで治療した群において、病的凝集体の数が、長期の治療経過にかけて低減したことを示す。加えて、ＴＨ陽性ニューロンの定量化は、６９００９３媒介性ＬＲＲＫ２抑制により、対照治療を行った細胞と比較して、同側黒質緻密部におけるＴＨ陽性細胞が救助されたことを示した。
【０８４４】
【表１１８】
2021530204.tif 000483
【０８４５】
実施例２２：ラット、長期的評定におけるヒトＬＲＲＫ２と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの耐容性
同じ条件で行った別個の試験において、上に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドをＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットで試験して、オリゴヌクレオチドの長期的耐容性を評価した。Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットは各々、３ｍｇのオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳの単回の髄腔内（ＩＴ）送達による投与を受けた。治療後１週目で開始して６週の間、訓練を受けた観察者が、有害事象について、各動物を毎週秤量し、評価した。有害事象は、ＰＢＳ治療を行った対照動物において典型的ではない神経機能障害、例えば、非限定的に、異常な肢の脱臼、歩行異常、振戦、呼吸異常、麻痺、及び痙直として定義した。有害事象の発症は、異常が最初に記録された投薬後の週として定義する。有害事象が成されなかった場合、発症なし（−）とする。有害事象の発症は、典型的には、ＰＢＳ治療動物に類似した体重増加／維持を欠くことと定義した成長障害と相関する。類似の耐容性評定が、Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０１３  Ｎｏｖ；４１（２１）：９６３４−９６５０  ａｎｄ  Ｓｏｕｔｈｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１４  Ｄｅｃ；２２（１２）：２０９３−２１０６に記載されている。以下の表に示すように、８７６０３１、７８０２４１、８０２７１４、８０３２６８、８７６６０４、及び９３４５５６は、長期的耐容性評定において耐容性が良好であった。
【０８４６】
【表１１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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