(57)【要約】  本発明は、眼疾患の予防および処置における細菌株由来の多糖類の使用に関する。特に本発明は、眼の乾燥および炎症に関連する眼病態におけるＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８コベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株から得られやすい多糖類の眼科的使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼疾患または眼病態の処置における使用のための多糖類を含む組成物であって、
前記多糖類が、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンのモノマーからなる群からの各モノマーのうちの少なくとも１つを含み、
前記多糖類の総重量に対して、前記多糖類におけるヒドロキシル基の約１０重量％〜約２０重量％が、硫酸化されており、
前記多糖類が、約１，０００，０００〜約１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する、
組成物。
【請求項２】
前記多糖類の総重量に対して、前記多糖類におけるヒドロキシル基の約１０重量％が、硫酸化されており、
前記多糖類が、約１，０００，０００〜約５，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する、
請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記多糖類が、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンから選択されるモノマーから本質的になる、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記多糖類が、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約５重量％〜約５０重量％のラムノース、約５重量％〜約５０重量％のグルコース、約５重量％〜約４０重量％のガラクトース、約１０重量％〜約５０重量％のガラクツロン酸、約２重量％〜約２０重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記多糖類が、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約１２重量％〜約３７重量％のラムノース、約１４重量％〜約４０重量％のグルコース、約７重量％〜約３０重量％のガラクトース、約１５重量％〜約４３重量％のガラクツロン酸、約７重量％〜約１５重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
前記多糖類が、ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８コベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株培養物からの前記多糖類の抽出により得られやすい、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記組成物が、前記多糖類を、前記組成物の総重量の０．００１重量％〜２重量％、好ましくは０．０１重量％〜１重量％、より好ましくは０．２重量％〜０．５重量％の範囲の量で含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記組成物が、点眼薬、人工涙液、ゲル、または軟膏の形態である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記眼疾患または眼病態が、眼の炎症性の病態および／または病変である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記眼疾患または眼病態が、ドライアイ病態（乾性角結膜炎）である、請求項１０に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物を含む医薬。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１２に記載の医薬を含む、複数回投与用容器。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１２に記載の医薬を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼疾患の予防および処置における細菌株由来の多糖類の使用に関する。特に本発明は、眼の乾燥および炎症に関連する眼病態における、Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ２５−２８  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ−Ｆ７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５）に２０１５年１２月２３日に参照番号ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８の下提出されたコベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株から得られやすい多糖類（本明細書中ではＰ２６８）の眼科的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
多糖類は、細胞の中にあり得るかまたは微生物によりそれらの環境の中へと分泌され得る高分子量ポリマーである。分泌される多糖類は、微生物細胞がコロニーとして互いにかつ表面上に接着するバイオフィルムの形成に寄与する物理化学的な性質を有する。
【０００３】
多糖類の産業上の使用は、当該分野でよく知られている。分泌される多糖類の最も一般的な例は、ゲランガムである。この多糖類は、好熱性細菌シュードモナス・エロディア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｅｌｏｄｅａ）により分泌される。ゲランガムは、寒天多糖類の代わりとして微生物培養培地に使用されているが、その粘性を提供する（ｖｉｓｃｏｓｉｆｙｉｎｇ）性質は、同様に食品業界にも使用されている。さらに、眼用組成物での粘性を提供する賦形剤としてのゲランガムの使用は、中国特許公開公報第１０４０５５７２９号に開示されている。
【０００４】
微生物株により分泌される多糖類とヒアルロン酸との間の構造上の類似性は、当該分野で記載されている。
【０００５】
驚くべきことに、本出願人は、本発明で使用される多糖類が、眼疾患、たとえばドライアイに関連する症状および／または眼の表面の損傷の兆候の予防および／または処置に使用できることを見出した。これら眼の徴候は、多くの場合、表在性角膜炎、シェーグレン症候群、または原発性ドライアイ症候群などの疾患に関連する。また本発明の組成物は、乾燥感、焼灼感、および眼の疲労感、ならびに煙、乾熱、空調、風、冷気、長時間のコンピュータスクリーンの使用、またはレンズとの接触などの軽微な環境上の要因により誘導される病理学的に重要ではない他の軽微な病状の事例において眼の潤滑のために使用され得る。
【発明の概要】
【０００６】
よって本発明は、眼疾患または眼病態の処置に使用するための多糖類を含む組成物に関する。この多糖類は、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンのモノマーからなる群からの各モノマーのうちの少なくとも１つを含む。多糖類の総重量に対して、多糖類におけるヒドロキシル基の約１０重量％〜約２０重量％が、硫酸化されている。さらに多糖類は、約１，０００，０００〜約１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する。
【０００７】
一実施形態では、多糖類の総重量に対して、多糖類におけるヒドロキシル基の約１０重量％が、硫酸化されている。さらに多糖類は、約１，０００，０００〜約５，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する。
【０００８】
第２の実施形態では、多糖類は、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンから選択されるモノマーから本質的になる。
【０００９】
好ましい実施形態では、多糖類は、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約５重量％〜約５０重量％のラムノース、約５重量％〜約５０重量％のグルコース、約５重量％〜約４０重量％のガラクトース、約１０重量％〜約５０重量％のガラクツロン酸、約２重量％〜約２０重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す。
【００１０】
さらにより好ましい実施形態では、多糖類は、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約１２重量％〜約３７重量％のラムノース、約１４重量％〜約４０重量％のグルコース、約７重量％〜約３０重量％のガラクトース、約１５重量％〜約４３重量％のガラクツロン酸、約７重量％〜約１５重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す。
【００１１】
一実施形態では、多糖類は、Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ２５−２８  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ−Ｆ７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５）に２０１５年１２月２３日に参照番号ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８の下提出されたコベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株からの抽出により得られやすい。
【００１２】
本発明の使用のための組成物は、上述の多糖類を、本組成物の総重量の０．００１重量％〜２重量％、好ましくは０．０１〜１重量％、より好ましくは０．２重量％〜０．５重量％の範囲の濃度で含む。
【００１３】
一実施形態では、本発明に係る使用のための組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【００１４】
本発明のいずれかの実施形態に係る使用のための組成物は、点眼薬、人工涙液、ゲル、または軟膏の形態にあり得る。
【００１５】
本発明に係る組成物は、眼の炎症性の病態および／または病変に関連する眼疾患または眼病態の処置に使用するためのものである。特に、眼疾患または眼病態は、ドライアイ病態（乾性角結膜炎）である。
【００１６】
第２の態様では、本発明は、本発明の組成物を含む医薬に関する。
【００１７】
第３の態様では、本発明は、本発明の使用のための組成物を含む複数回投与用容器に関する。
【００１８】
第４の態様では、本発明は、本発明の使用のための組成物を含むキットに関する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
本発明では、以下の用語は、以下の意味を有する。
【００２０】
「約」は、おおよそ、大体、周辺、または相当（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ，  ｒｏｕｇｈｌｙ，  ａｒｏｕｎｄ，  ｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ）を意味するように本明細書中使用される。用語「約」は、ある数字の前にある場合、上記数字の＋または−１０％の値を意味する。用語「約」は、数学的な範囲と組み合わせて使用される場合、限界を記載される数値の１０％超および１０％未満まで延ばすことにより当該範囲を修正する。
【００２１】
「多糖類」は、共有結合した少なくとも２つの単糖類分子（糖のモノマー）を含む１つ以上の分子を含むポリマーの化合物または調製物を表す。多糖類は、細胞の細胞内成分であり得るか、または細胞の細胞外環境へと分泌され得る。一実施形態では、多糖類は、直鎖状の配列の糖モノマーを含み得る。別の実施形態では、糖のモノマーは、分岐して結合され得る。「多糖類」は、類似するかまたは同一の反復単位を有するが、集合の中で異なる分子量を有する分子の調製物であり得る。一実施形態では、単糖類のヒドロキシル部分は、共有結合（グリコシド結合）に関与しているかまたは遊離している。別の実施形態では、単糖類のヒドロキシル部分は、共有結合（グリコシド結合）に関与しているか、硫酸化されているか、または遊離している（すなわち硫酸化されていない）。硫酸化されているヒドロキシル部分の数は、多糖類の総重量と比較した重量パーセントとして表される。
【００２２】
「薬学的に許容される賦形剤」は、本発明の１つ以上の化合物と共に、患者に投与され得、その薬理学的活性を破壊せず、治療量の本化合物を送達するために十分な用量で投与される場合に非毒性である、担体またはアジュバントを表す。
【００２３】
詳細な説明
本発明は、眼疾患または眼病態の処置に使用するための多糖類を含む組成物に関する。
【００２４】
本発明の組成物に使用される多糖類は、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンのモノマーからなる群からの各モノマーのうちの少なくとも１つを含む。多糖類のモノマー構造は、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、または質量分析（ＭＳ）などの当該分野でよく知られている規定の方法を用いて決定され得る。
【００２５】
多糖類の総重量と比較して、上記多糖類における約１０重量％〜約２０重量％のヒドロキシル基が、硫酸化されている。硫酸化したヒドロキシル基の比率は、アンペロメトリーと組み合わせた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、比色分析、硫黄元素分析、または赤外線（ＩＲ）分析などの、当該分野でよく知られている規定の方法を用いて決定され得る。
【００２６】
本発明で使用される多糖類は、約１，０００，０００〜約１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する。多糖類の分子量は、光散乱（ＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）などの、当該分野でよく知られている規定の方法を用いて決定され得る。
【００２７】
第１の実施形態では、多糖類は、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＡ−アセチル−グルコサミンのモノマーからなる群からの各モノマーの少なくとも１つを含む。多糖類のヒドロキシル基の総数と比較したヒドロキシル基の数において、多糖類におけるヒドロキシル基の約１０％〜約２０％が、硫酸化されている。多糖類は、約１，０００，０００〜約１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する。
【００２８】
第２の実施形態では、多糖類は、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンのモノマーからなる群からの各モノマーの少なくとも１つを含む。多糖類の総重量と比較して、多糖類における約１０重量％のヒドロキシル基が硫酸化されている。多糖類は、約１，０００，０００〜約５，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する。
【００２９】
第３の実施形態では、上述の多糖類は、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンから選択されるモノマーから本質的になる。
【００３０】
第４の実施形態では、上述の多糖類は、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約５重量％〜約５０重量％のラムノース、約５重量％〜約５０重量％のグルコース、約５重量％〜約４０重量％のガラクトース、約１０重量％〜約５０重量％のガラクツロン酸、約２重量％〜約２０重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す。
【００３１】
好ましい実施形態では、上述の多糖類は、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約１２重量％〜約３７重量％のラムノース、約１４重量％〜約４０重量％のグルコース、約７重量％〜約３０重量％のガラクトース、約１５重量％〜約４３重量％のガラクツロン酸、約７重量％〜約１５重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す。
【００３２】
別の実施形態では、多糖類は、各糖のモル比が、以下：
ラムノース：２、３、または４；
グルコース：２、３、または４；
ガラクトース：１、２、または３；
ガラクツロン酸：２、３、または４；
Ｎ−アセチル−グルコサミン：１
の通りである、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンから選択されるモノマーから本質的になる。
【００３３】
特定の実施形態では、多糖類は、コベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）属の細菌培養物の培養物から抽出されるＰ２６８である。一実施形態では、多糖類は、”Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ”［Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ］（ＣＮＣＭ），Ｐａｓｔｅｕｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（２８  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ，  ７５７２４  Ｐａｒｉｓ，  Ｆｒａｎｃｅ）に２０１５年１２月２３日にブダペスト条約にしたがいＰＯＬＹＭＡＲＩＳ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＧＹ（Ａｅｒｏｐｏｌｅ  Ｃｅｎｔｒｅ，  ２９６００  Ｍｏｒｌａｉｘ，  Ｆｒａｎｃｅ）がコードＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８の下寄託したコベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）属の細菌培養物（「ＥＮＧＩＥ  ２−６８  ＰＢ」とも呼ばれる）の培養物から抽出されるＰ２６８である。
【００３４】
一実施形態では、多糖類は、コベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株培養物からの多糖類の抽出により得られやすい。
【００３５】
一実施形態では、多糖類は、Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ２５−２８  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ−Ｆ７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５）に２０１５年１２月２３日に参照番号ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８の下提出されたコベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株からの抽出により得られやすい。
【００３６】
Ｐ２６８は、約１，０００，０００〜約１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する。Ｐ２６８多糖類の総重量と比較して、ヒドロキシル基の約１０重量％〜約２０重量％が硫酸化されている。さらにＰ２６８は、パーセンテージの合計が１００％を超えないとの条件で、約５重量％〜約５０重量％のラムノース、約５重量％〜約５０重量％のグルコース、約５重量％〜約４０重量％のガラクトース、約１０重量％〜約５０重量％のガラクツロン酸、約２重量％〜約２０重量％のＮ−アセチル−グルコサミンの組成物を表す。Ｐ２６８は、各糖のモル比が、以下：
ラムノース：２、３、または４；
グルコース：２、３、または４；
ガラクトース：１、２、または３；
ガラクツロン酸：２、３、または４；
Ｎ−アセチル−グルコサミン：１
の通りである、ラムノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、およびＮ−アセチル−グルコサミンから選択されるモノマーから本質的になる。
【００３７】
本発明の多糖類を産生するコベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）菌株（「ＥＮＧＩＥ  ２−６８  ＰＢ」とも呼ばれる）は、参照番号ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８の下、”Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ”［Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ］（ＣＮＣＭ），  Ｐａｓｔｅｕｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（２８  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ，  ７５７２４  Ｐａｒｉｓ，  Ｆｒａｎｃｅ）に、２０１５年１２月２３日にブダペスト条約に従いＰＯＬＹＭＡＲＩＳ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＧＹ（Ａｅｒｏｐｏｌｅ  Ｃｅｎｔｒｅ，  ２９６００  Ｍｏｒｌａｉｘ，  Ｆｒａｎｃｅ）により寄託された。
【００３８】
多糖類は、当該分野で知られている可能性のあるいずれかの手段により、菌株培養物から抽出される。一実施形態では、多糖類は、菌株培養培地の遠心分離により抽出される。別の実施形態では、多糖類は、菌株培養培地の遠心分離、次にマイクロフィルター法を行うことにより抽出される。
【００３９】
一実施形態では、本発明の組成物は、上述の多糖類を、上記組成物の総重量の０．００１重量％〜２重量％の範囲の量で含む。
【００４０】
一実施形態では、本発明の組成物は、上述の多糖類を、上記組成物の総重量の０．０１重量％〜１重量％の範囲の量で含む。
【００４１】
１つの好ましい実施形態では、本発明の組成物は、上述の多糖類を、上記組成物の総重量の０．２重量％〜０．５重量％の範囲の量で含む。
【００４２】
また本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、上述の組成物に関する。上記薬学的に許容される賦形剤は、抗酸化剤、浸透物質、粘度調節剤、ｐＨ調節剤またはバッファー、保存剤、可溶化剤、キレート剤の群から選択される。添加剤の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして当業者により計算され得る。
【００４３】
一実施形態では、本発明に係る組成物は、ビタミンＥ、亜硫酸水素ナトリウム、メタスルファイトナトリウム、チオ硫酸ナトリウム無水物、クエン酸一水和物、パルミチン酸アスコルビルおよびアスコルビン酸、ブチルヒドロキシルトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、プロピルガレート、補酵素Ｑ１０（２，３−ジメトキシ−５−メチル−６−デカプレニルベンゾキノン（ｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ））、ω−３脂肪酸の群から選択される抗酸化剤を含む。これら抗酸化剤は、単一または組み合わせて使用され得る。抗酸化剤の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして当業者により計算され得る。
【００４４】
一実施形態では、本発明の組成物は、グリセロール、プロピレングリコール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトールなどの群から選択される少なくとも１つの浸透物質を含む。特定の実施形態では、トレハロースが、同様に浸透圧保護剤および安定化剤としても使用され得る。同様に、浸透物質の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして決定される。
【００４５】
一実施形態では、本組成物は、粘度調節剤を含まない。別の実施形態では、本組成物は、カルボマー、ポリカルボフィル、セルロース誘導体（たとえばヒドロキシプロピルセルロース（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｃｅｌｌｕｌｅ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース…）、ポビドン、コポビドン、天然ガム（たとえばゲランガム、グアーガム、キサンタンガム、寒天、キシログルカン…）、ポロクサマーなどの群から選択される少なくとも１つの粘度調節剤を含む。これら粘度調節剤は、単一または組み合わせて使用され得、その量は、（欧州または米国の）薬局方の必要条件および生物学的な基準を満たしている。
【００４６】
一実施形態では、本発明の組成物は、非常に低いせん断速度（０．１ｓ−１未満）で１Ｐａ．ｓを超える粘度を呈する。一実施形態では、本発明の組成物は、０のせん断速度で１Ｐａ．ｓを超える粘度を呈する。
【００４７】
本組成物の粘度は、大気圧（１ａｔｍ）、２５〜３５℃で、当業者により知られているレオメータの器具（たとえば回転型レオメータＫｉｎｅｘｕｓ，  Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を使用して測定される。
【００４８】
一実施形態では、本発明の組成物は、緩衝されない。別の実施形態では、本発明の組成物は、塩酸、クエン酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ホウ酸、ホウ砂、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸三ナトリウムなどから選択される少なくとも１つのｐＨ調節剤またはバッファーを含む。ｐＨ調節剤の量は、３．５〜７．５；好ましくは約６．４〜約７．３で構成される最終的なｐＨの値の関数である。同様に、ｐＨ調節剤の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして使用される。
【００４９】
一実施形態では、本発明の組成物は、保存性作用物質フリーである（または「保存剤フリー」である）。別の実施形態では、本発明の組成物は、それ自体または組み合わせた、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）、ベンジルアルコール、水銀塩、チオメルサール、クロルヘキシジン、ホウ酸、および／またはそれらの塩などから選択される少なくとも１つの保存性作用物質を含む。同様に、保存性作用物質の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして使用される。
【００５０】
一実施形態では、本発明の組成物は、エタノール、ポリエチレングリコール、グリセロール、プロピレングリコール、Ｎ−メチルピロリドン、グリコフロール、ジメチルイソソルビドから選択される少なくとも１つの可溶化剤を含む。同様に、可溶化剤の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして使用される。
【００５１】
一実施形態では、本発明の組成物は、エデト酸およびその塩、エチレングリコール四酢酸およびその塩、クエン酸、メタリン酸、ピロリン酸、ポリリン酸、リンゴ酸、酒石酸、フィチン酸、およびそれらの塩から選択される；より好ましくはエデト酸、クエン酸、メタリン酸、ポリリン酸、およびそれらの塩からなる群から選択される少なくとも１種；特に好ましくはエデト酸の塩の、少なくとも１つのキレート剤を含む。同様に、キレート剤の量は、薬局方の基準および生物学的な基準に照らして使用される。
【００５２】
一実施形態では、本発明の組成物は、当該分野で知られているいずれかの方法により滅菌され得る。
【００５３】
滅菌方法の非限定的な例として、たとえばオートクレーブなどによる加熱、フィルタリングまたはろ過、放射線照射、およびガス滅菌法がある。
【００５４】
一実施形態では、本発明の組成物は、液剤またはエマルジョンである。好ましい実施形態では、本組成物は液剤である。
【００５５】
本発明に係る組成物を含む液剤のｐＨは、約４．２〜約７．４、好ましくは約６．４〜約７．３の範囲にある。
【００５６】
本発明に係る組成物を含む液剤の浸透圧は、約１００〜約２５０ｍＰａ．ｓ、好ましくは約１７０〜約２２０ｍＰａ．ｓの範囲にある。
【００５７】
本発明に係る組成物を含む液剤の２５℃での粘度は、約１〜約７０ｍＰａ．ｓ、好ましくは約２〜約６０ｍＰａ．ｓ．の範囲にある。
【００５８】
一実施形態では、本発明の組成物は、液体、流体、ゲル、散剤、軟膏、クリーム、パッチ、フィルム製剤、または眼科投与に適したいずれかの送達製剤であり得る。
【００５９】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、点眼薬、人工涙液、ゲル、または軟膏の形態であり得る。
【００６０】
一態様では、本発明は、上述の本発明の組成物を含む医薬に関する。
【００６１】
別の態様では、本発明は、本発明の多糖類、組成物、または医薬を含む装置に関する。第１の実施形態では、この装置は、本発明の多糖類、組成物、または医薬を含む容器である。この容器は、中身の微生物混入を最小限にしかつ／または阻害する方法で開口され得る。これら容器のノズルは、対象の眼の滴下に適切であり得る。この容器は、単回投与用の容器または複数回投与用の容器であり得る。
【００６２】
第２の実施形態では、本装置は、適用および／または注射のための当該分野で知られているいずれかの装置であり得る。このような実施形態では、本装置は、あらかじめ充填されたシリンジ装置であり得る。
【００６３】
一実施形態では、本発明の組成物は、単位用量にパッケージングされ；別の実施形態では、本組成物は、適切な複数回投与用容器にパッケージングされている。
【００６４】
別の態様では、本発明は、上述の本発明の組成物または医薬を含むキットに関する。本キットは、本発明の組成物または医薬の単位用量の形態または複数回投与用容器を含み得る。本キットは、組成物を適用する装置（たとえば点眼用のディスペンサーまたはシリンジ）および／または本組成物の適用後に眼領域に残る過剰な組成物を吸収するための滅菌ガーゼをさらに含み得る。
【００６５】
本発明の意味において、眼疾患または眼病態は、ドライアイ病態、たとえば、ドライアイ症候群または慢性ドライアイ疾患、たとえば乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｓ  ｓｉｃｃａ）（ＫＣＳ）、萎縮性角結膜炎（ＡＫＣ）および春季カタル（ＶＫＣ）、緑内障、眼炎症病態、たとえば角膜炎、角膜上皮びらん、前部ブドウ膜炎を含むブドウ膜炎、眼内炎症、アレルギー、およびドライアイ症候群眼感染症、眼感染症、眼アレルギー、角膜または結膜の病変、がん腫、糖尿病黄斑浮腫、加齢黄斑変性、角膜の感覚消失または瞳孔の散瞳である。
【００６６】
一実施形態では、眼病態は、眼瞼炎、緑内障、マイボーム腺機能不全（ＭＧＤ）などのマイボーム腺障害、およびドライアイ症候群または慢性ドライアイ疾患などのドライアイ病態、糖尿病性角膜症、または神経障害性角膜症であり得る。
【００６７】
一実施形態では、病態は、ニキビダニ（ｄｅｍｏｄｅｘ  ｆｏｌｌｉｃｕｌｏｒｕｍ）感染症に関連し得る。一実施形態では、病態は、緑内障である。一実施形態では、病態は、前部ブドウ膜炎である。
【００６８】
一実施形態では、眼疾患または眼病態は、眼性増殖性疾患、すなわち眼の組織および眼周辺に形成される増殖性疾患、たとえばメラノーマ（眼で色素メラニンを作製する細胞における）、細胞腫（眼の構造を覆う組織における）、リンパ腫（免疫系細胞における）、および網膜芽細胞腫（網膜における）などではない。一実施形態では、眼疾患または眼病態は、眼のがんではない。
【００６９】
別の態様では、本発明の組成物は、眼疾患または眼病態の処置のための薬物または医薬の製造に使用するためのものである。
【００７０】
また本発明は、それを必要とする対象の眼疾患または眼病態の処置のための方法であって、上述の本発明に係る多糖類、組成物、または医薬を対象の眼へ眼科的な投与を行うステップを含む、方法に関する。
【００７１】
一実施形態では、この投与は局所的である。一実施形態では、この投与は、眼内投与、たとえば眼内注射である。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、内部対照化合物（１０μＭのＪａｋ阻害剤（Ｊａｋ阻害剤Ｉ；ＣＡＳ  ｎ°４５７０８１−０３−７））；０．５（ｗ／ｗ）％のＰ２６８溶液の０．０４％、０．２％、１％、および５％の希釈物と４８時間インキュベーションした後のインターロイキン８（ＩＬ−８）の分泌のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの阻害の結果を表すグラフを示す。この結果は、０．３（ｗ／ｗ）％のヒアルロン酸を含む組成物（Ｖｉｓｍｅｄ  ｇｅｌ（登録商標））の０．０４％、０．２％、１％、および５％の希釈物、ならびに０．５（ｗ／ｗ）％のＰＨＥ８００（Ｖｉｂｒｉｏ  ｄｉａｂｏｌｉｃｕｓ  ＣＮＣＭ−Ｉ−１６２９培養物から抽出、Ｈｙａｌｕｒｉｆｔ（登録商標））の０．０４％、０．２％、１％、および５％の希釈物、ならびに０．５（ｗ／ｗ）％のＰ１５（Ｐｏｌｙｍａｒｉｓ（登録商標））の細菌性多糖類溶液の０．０４％、０．２％、１％、および５％の希釈物と４８時間インキュベーションした後に得られたものと比較された。
【図２】図２は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのカラゲナン誘導性結膜炎アッセイの結果を表すグラフを示す。浮腫の病変の重量（ｍｇ）は、ビヒクル、および０．３％のＰ２６８溶液で処置した後に測定した。この結果は、ヒアレイン（登録商標）（０．３％）、ムコスタ（登録商標）（２％）、プロラノン（Ｐｒｏｐｒａｎｏｎ）（登録商標）（０．１％）、およびフルメトロン（登録商標）（０．１％）での処置の後に得られたものと比較された。
【図３】図３は、涙腺切除によるｉｎ  ｖｉｖｏでのラットのドライアイ（「ＤＥＤ」）疾患のアッセイの結果を表すグラフを示す。点状表層角膜炎スコア（「ＳＰＫスコア」）が、以下の群：健常な対照の群、ビヒクルの処置のみで処置された涙腺が切除された対照の群、０．０３（ｗ／ｗ）％、０．１（ｗ／ｗ）％、および０．３（ｗ／ｗ）％のＰ２６８溶液のみで処置され涙腺が切除された群の蛍光染色により、測定された。この結果は、ジクアス（登録商標）（３％）の溶液で処置し涙腺を切除した群の結果と比較された。
【実施例】
【００７３】
本発明を、さらに以下の実施例により説明する。
【００７４】
実施例１：ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８培養物由来の多糖類Ｐ２６８抽出物
本発明で使用される多糖類Ｐ２６８は、ＣＮＣＭ  Ｉ−５０３８コベティア・マリナ（Ｃｏｂｅｔｉａ  ｍａｒｉｎａ）細菌株培養物の凍結乾燥した上清から入手した。
【００７５】
細菌細胞の培養を、２５℃で、グルコース（３０ｇ／Ｌ）を補充したｍａｒｉｎｅ  ｂｒｏｔｈ  ２２１６培地（ＢＤ  Ｄｉｆｃｏ）を含む５Ｌの発酵槽で行った。培養培地に、指数増殖期の細菌懸濁物を１０（ｖ／ｖ）％で播種した。ｐＨを、１ＭのＮａＯＨを自動的に添加することにより、７．５に調節および維持した。この培地を、３５０ｒｐｍの撹拌速度で、１５Ｌ／分にて酸素付加した。７２時間の発酵の後、細菌細胞を、遠心分離（１６，０００ｇ、３０分）により培養培地から除去した。次に、排出された多糖類Ｐ２６８を含む上清を、超遠心（１００ｋＤａ）により精製した。Ｐ２６８サンプルを、凍結乾燥し、光および水が入らないように室温で保存した。
【００７６】
実施例２：多糖類Ｐ２６８の構造解析
本発明で使用され、上記の実施例１で記載のように製造された多糖類Ｐ２６８を、当該分野で知られている構造決定方法により解析した。
【００７７】
ＧＣ解析
多糖類Ｐ２６８のモノマーの構造を、
【表１】
2021519281.tif 000002
として決定した。
【００７８】
ＨＰＬＣ−アンペロメトリー解析
多糖類Ｐ２６８の硫酸化したヒドロキシル基の割合を、１０〜２０（ｗ／ｗ）％の硫酸化されているヒドロキシル基と決定した。
【００７９】
ＳＥＣ−ＬＳ解析
多糖類Ｐ２６８の分子量を、１  ０００  ０００ｇ／ｍｏｌ超と決定した。
【００８０】
実施例３：Ｐ２６８溶液の調製
ビーカーで水およびＰ２６８を共に秤量して、高濃度のＰ２６８溶液を調製した。２５℃で一晩保存した後、完全に溶液が均一となるまで溶液を撹拌した。３種のＰ２６８溶液を入手した。
【表２】
2021519281.tif 000003
【００８１】
得られた溶液の物理化学的な性質を、０．１８（ｗ／ｗ）％のヒアルロン酸（ＨＡ）を含有する組成物（Ｖｉｓｍｅｄ  ｍｕｌｔｉ（登録商標））と比較し、これは表３に提示しされている。
【表３】
2021519281.tif 000004
【００８２】
実施例４：Ｐ２６８および他の多糖類によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのインターロイキン８（ＩＬ−８）の阻害
ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）を、９６ウェルプレートに播種し、２４時間培養培地で培養した。次に、この培地を、試験化合物もしくは参照物質（１０μＭのＪａｋ阻害剤（Ｊａｋ阻害剤Ｉ；ＣＡＳ  ｎ°４５７０８１−０３−７））を含む培養培地または含まない培養培地（対照）または溶媒対照（５％のＰＢＳ）と交換し、細胞を、２４時間プレインキュベートした。プレインキュベートの後、細胞を再度、試験化合物、参照物質、または溶媒対照で処理し、サイトカインの混合物（それぞれ３ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７＋ＯＳＭ＋ＴＮＦα）で刺激したかまたは刺激を行わなかった（刺激しなかった対照）。これら細胞を、４８時間インキュベートした。全ての実験条件は、ｎ＝６の刺激した対照および刺激しなかった対照を除き、ｎ＝３で行った。
【００８３】
インキュベートの後、培養の上清を、インターロイキン８（ＩＬ−８）の放出の定量化のため回収した。ＩＬ−８の定量化は、ＥＬＩＳＡキット（Ｄｕｏ  ｓｅｔ  ＩＬ−８，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を供給元の説明に従い使用して測定した。ＮＨＥＫのバイアビリティを、標準的なＭＴＴ還元アッセイを使用して細胞層上で評価した。
【００８４】
図１に示されるように、０．５（ｗ／ｗ）％のＰ２６８溶液の５％の希釈物（最終濃度０．０２５（ｗ／ｗ）％）で処置した細胞は、１０μＭのＪａｋ阻害剤と比較して３０％のＩＬ−８の分泌阻害を示した。Ｐ２６８は、用量依存的にＩＬ−８の分泌阻害を阻害した。
【００８５】
ヒアルロン酸溶液（Ｖｉｓｍｅｄ  ｇｅｌ（登録商標））は、高い試験濃度でのみＩＬ−８の分泌を阻害した。上記阻害は、Ｐ２６８での処置後に観察されるものよりも有意に劣っていた。
【００８６】
全ての細菌性多糖類が抗炎症性の性質を有しているわけではない。図１に示されるように、細菌性多糖類ＰＨＥ８００（Ｈｙａｌｕｒｉｆｔ（登録商標））は、ＩＬ−８の分泌阻害を示さず、細菌性多糖類Ｐ１５（Ｐｏｌｙｍａｒｉｓ（登録商標））は、同じ実験条件下でＰ２６８と比較して有意ではないＩＬ−８の分泌阻害を示した。ＰＨＥ８００およびＰ１５は、本発明に係る多糖類の範囲にはない。
【００８７】
実施例５：カラゲナン誘導性結膜炎のラットモデル
比較基準としてのムコスタ、ヒアレイン、およびプロラノン（プラノプロフェン）と併せた、Ｐ２６８の、カラゲナン誘導性結膜炎のラットモデルにおける結膜下浮腫の形成に及ぼす阻害性作用の評価
【表４】
2021519281.tif 000005
【００８８】
試験溶液（５μＬ／眼）を、カラゲナン投与をウィスターラットに行う１時間前に投与する。その後投与を、カラゲナン投与から０、１、２、および３時間後に行う。各試験溶液を、この実験過程の間に５回投与する。
【００８９】
カラゲナン投与から４時間後に、結膜下組織（浮腫性病変を有する）を回収し、重量を測定する。重量が低いほど効力が高い。
【００９０】
カラゲナン誘導性結膜炎モデルのアッセイの結果は、図２に示されている。
【００９１】
有意な抗炎症性作用が、浮腫性病変重量の低下として、Ｐ２６８（０．３％）群の滴下で観察された。
【００９２】
実施例６：眼窩外涙腺切除されたドライアイのラットモデル
比較基準としてジクアスと併せた、Ｐ２６８の、眼窩外涙腺を切除したドライアイ疾患（「ＤＥＤ」）のラットモデルにおける角膜上皮の損傷に及ぼす阻害性作用を評価する。
【表５】
2021519281.tif 000006
【００９３】
涙腺切除（およびドライアイの発症）から８週間後に、試験溶液（５μＬ／眼）を、２週間にわたり１日６回投与した。
【００９４】
角膜上皮の損傷を表す点状表層角膜炎（蛍光染色によるＳＰＫスコア）を、処置開始から２週間後に測定した。
【００９５】
眼窩外涙腺を切除したドライアイのモデルのラットのアッセイの結果は、図３に提示されている。
【００９６】
角膜上皮の損傷に及ぼす有意な阻害性作用が、Ｐ２６８（０．１％）、Ｐ２６８（０．３％）、およびジクアスの滴下から２週間後に観察された。
【００９７】
実施例７：多糖類Ｐ２６８眼用組成物
Ｐ２６８を含む眼用組成物を製造し、その物理化学的な性質を試験した。
【００９８】
Ｐ２６８の局所投与に適した眼用組成物は、生理的なｐＨ（約７）および２００ｍＯｓｍ／ｋｇの高浸透圧を有する水性の製剤であり得る。
【００９９】
ｐＨを、バッファー（Ｔｒｉｓバッファー（５ｍＭ））により調節した。高浸透圧を、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）および糖（マンニトールまたはトレハロース）から選択される少なくとも１つの浸透物質により調節した。
【０１００】
ｐＨおよびレオロジー（剪断応力の関数としての剪断粘度）を、以下の安定点で測定した：
２５℃、４０℃、６０℃、および８０℃でＴ１５日
２５℃、４０℃、および６０℃でＴ３０日
【０１０１】
浸透圧を、２５℃のＴ３０日で測定した。
【０１０２】
以下の組成物１〜４のそれぞれで、Ｐ２６８の３つの異なる濃度：０．１（ｗ／ｗ）％、０．３（ｗ／ｗ）％、および０．５（ｗ／ｗ）％を試験した。
【表６】
2021519281.tif 000007
【０１０３】
ｐＨは、一般に、温度、時間、およびＰ２６８の濃度の関数として減少し、これは８０℃でより顕著である。より均一なｐＨ安定性のプロファイルを、組成物１および２（マンニトールまたはＮａＣｌを含む）で入手した。
【０１０４】
より均一なレオロジープロファイルを、組成物１および２で入手し、ここで組成物２（ＮａＣｌを含む）、より具体的には０．３（ｗ／ｗ）％および０．５（ｗ／ｗ）％の濃度の組成物２で著しく優れていた。
【０１０５】
浸透圧の有意な変動は、組成物１〜４の間で観察されなかった。
【０１０６】
よって、Ｐ２６８は、眼用投与に必要な物理化学的な性質を有する眼用組成物に製剤化することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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