(57)【要約】  ムール貝脂質及びクリルオイルの組み合わせ又は組成物が開示され、この組み合わせ又は組成物は、炎症又は疼痛を処置するために使用される。約５０％以上のリン脂質含有量を有するクリルオイルの調製方法も開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせであって、個別投与又は連続投与のために適合されている組み合わせ。
【請求項２】
ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物の形態にある請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項３】
前記クリルオイルが少なくとも約４０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する請求項１又は請求項２に記載の組み合わせ。
【請求項４】
前記クリルオイルが少なくとも約６０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する請求項３に記載の組み合わせ。
【請求項５】
前記クリルオイルが約５％ｗ／ｗ以下の水分含有量を有する請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項６】
前記クリルオイルが約３％ｗ／ｗ以下の水分含有量を有する請求項５に記載の組み合わせ。
【請求項７】
前記クリルオイルが約１％ｗ／ｗ以下の水分含有量を有する請求項５に記載の組み合わせ。
【請求項８】
クリルオイルが約５％ｗ／ｗ以下の抽出溶媒含有量を有する請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項９】
前記クリルオイルが約３％ｗ／ｗ以下の抽出溶媒含有量を有する請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
前記クリルオイルが約１％ｗ／ｗ以下の抽出溶媒含有量を有する請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１１】
前記ムール貝脂質がムール貝粉末の形態にある請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記ムール貝脂質が、任意にビタミンＥを含有するムール貝脂質エキスの形態にある請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１３】
クリルオイルに対するムール貝脂質の重量比が１：９９〜９９：１の範囲にある請求項１から請求項１２のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１４】
クリルオイルに対するムール貝脂質の重量比が、約５：９５、又は約１０：９０、又は約１５：８５、又は約２０：８０、又は約２５：７５、又は約３０：７０、又は約３５：６５、又は約４０：６０、又は約４５：５５、又は約５０：５０、又は約５５：４５、又は約６０：４０、又は約６５：３５、又は約７０：３０、又は約７５：２５、又は約８０：２０、又は約８５：１５、又は約９０：１０、又は約９５：５である請求項１３に記載の組み合わせ。
【請求項１５】
経口単位剤形の形態の請求項１から請求項１４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１６】
前記経口単位剤形が軟質ジェルカプセルである請求項１５に記載の組み合わせ。
【請求項１７】
前記経口単位剤形が、約１０ｍｇ〜約１０ｇのムール貝脂質を含む請求項１５又は請求項１６に記載の組み合わせ。
【請求項１８】
前記経口単位剤形が、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１ｇ、１．１ｇ、１．２ｇ、１．３ｇ、１．４ｇ、１．５ｇ、１．６ｇ、１．７ｇ、１．８ｇ、１．９ｇ、２．０ｇ、２．１ｇ、２．２ｇ、２．３ｇ、２．４ｇ、２．５ｇ、２．６ｇ、２．７ｇ、２．８ｇ、２．９ｇ、３．０ｇ、３．２ｇ、３．５ｇ、３．７ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、又は約９．５ｇのムール貝脂質を含む請求項１７に記載の組み合わせ。
【請求項１９】
前記経口単位剤形が、約１０ｍｇ〜約１０ｇのクリルオイルを含む請求項１５から請求項１８のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項２０】
前記経口単位剤形が、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１ｇ、１．１ｇ、１．２ｇ、１．３ｇ、１．４ｇ、１．５ｇ、１．６ｇ、１．７ｇ、１．８ｇ、１．９ｇ、２．０ｇ、２．１ｇ、２．２ｇ、２．３ｇ、２．４ｇ、２．５ｇ、２．６ｇ、２．７ｇ、２．８ｇ、２．９ｇ、３．０ｇ、３．２ｇ、３．５ｇ、３．７ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、又は約９．５ｇのクリルオイルを含む請求項１９に記載の組み合わせ。
【請求項２１】
前記経口単位剤形が、約１０〜５００ｍｇの前記組み合わせを含む請求項１５から請求項２０のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項２２】
前記経口単位剤形が、約５０〜３００ｍｇの前記組み合わせを含む請求項２１に記載の組み合わせ。
【請求項２３】
１種以上の薬学的に許容できる担体及び／又は添加剤をさらに含む請求項１から請求項２２のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項２４】
ムール貝脂質及びクリルオイルからなる、又は実質的にムール貝脂質及びクリルオイルからなる請求項１から請求項２２のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項２５】
ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物。
【請求項２６】
前記クリルオイルが少なくとも約５０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ムール貝脂質が、任意にビタミンＥを含有するムール貝脂質エキスの形態にある請求項２５又は請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
クリルオイルに対するムール貝脂質の重量比が、約５：９５、又は約１０：９０、又は約１５：８５、又は約２０：８０、又は約２５：７５、又は約３０：７０、又は約３５：６５、又は約４０：６０、又は約４５：５５、又は約５０：５０、又は約５５：４５、又は約６０：４０、又は約６５：３５、又は約７０：３０、又は約７５：２５、又は約８０：２０、又は約８５：１５、又は約９０：１０、又は約９５：５である請求項２５から請求項２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
担体油をさらに含む請求項２５から請求項２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記担体油が、組成物全体の約１０％ｗ／ｗ〜約９０％ｗ／ｗを構成する請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
ムール貝脂質及びクリルオイルの総量に対する担体油の重量比が約３：１〜約１：３である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
単位剤形の形態の請求項２５から請求項３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
軟質ジェルカプセルに封入されている請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
約１０〜５００ｍｇの組み合わされたムール貝脂質及びクリルオイルを含む請求項３２又は請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
約５０〜３００ｍｇの組み合わされたムール貝脂質及びクリルオイルを含む請求項３４に記載の組み合わせ。
【請求項３６】
被験者における炎症の処置において使用するための請求項１から請求項２４のいずれか一項に記載の組み合わせ又は請求項２５から請求項３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
必要とする被験者における炎症の処置方法であって、前記被験者に請求項１から請求項２４のいずれか一項に記載の組み合わせ又は請求項２５から請求項３５のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程を備える方法。
【請求項３８】
炎症を処置するための医薬組合せの製造におけるムール貝脂質及びクリルオイルの使用。
【請求項３９】
前記医薬が個別投与又は同時投与のために適合されている請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記医薬がムール貝脂質及びクリルオイルの組成物の形態にある請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
ムール貝脂質及びクリルオイルを含む炎症を処置するための組合せ剤。
【請求項４２】
個別投与又は同時投与のために適合されている請求項４１に記載の剤。
【請求項４３】
被験者における疼痛の処置において使用するための請求項１から請求項２４のいずれか一項に記載の組み合わせ又は請求項２５から請求項３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
必要とする被験者における疼痛の処置方法であって、前記被験者に請求項１から請求項２４のいずれか一項に記載の組み合わせ又は請求項２５から請求項３５のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程を備える方法。
【請求項４５】
疼痛を処置するための医薬組合せの製造におけるムール貝脂質及びクリルオイルの使用。
【請求項４６】
前記医薬が個別投与又は同時投与のために適合されている請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記医薬がムール貝脂質及びクリルオイルの組成物の形態にある請求項４６に記載の使用。
【請求項４８】
ムール貝脂質及びクリルオイルを含む炎症を処置するための組合せ剤。
【請求項４９】
個別投与又は同時投与のために適合されている請求項４８に記載の剤。
【請求項５０】
約５０％以上のリン脂質含有量を有するクリルオイルの調製方法であって、
（ａ）オキアミバイオマス供給材料をＣＯ２及びエタノールの混合物と接触させ、クリルオイルを抽出する工程と、
（ｂ）前記クリルオイルをＣＯ２と接触させ、前記オイルが少なくとも５０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有するように少なくとも一定割合の非極性脂質成分を抽出する工程と
を備える方法。
【請求項５１】
前記オキアミバイオマス供給材料が、ＣＯ２中の約１５％ｗ／ｗ〜約３０％ｗ／ｗエタノールの混合物と接触させられる請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
工程（ａ）が約６０℃以下の温度で実施される請求項５０又は請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
工程（ａ）が約３００ｂａｒ以上の圧力で実施される請求項５０から請求項５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
工程（ｂ）が約６０°以下の温度で実施される請求項５０から請求項５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
工程（ａ）が約３００ｂａｒ以上の圧力で実施される請求項５０から請求項５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
工程（ｂ）で得られるオイルが約６０％ｗ／ｗ〜約９０％ｗ／ｗの範囲のリン脂質含有量を有する請求項５０から請求項５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
工程（ａ）で得られる抽出油からエタノールが除去される請求項５０から請求項５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記エタノールが真空下、約６０℃以下の温度で除去される請求項５７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、一般に海産脂質の組み合わせに関する。特に本開示は、モエギイガイ及びオキアミから得られる脂質の組み合わせ、この組み合わせを含む組成物及び調製物、並びに治療におけるその組み合わせ及び組成物の使用に関する。本開示はさらに、クリルオイルの製造方法並びに上記組み合わせ及び組成物におけるクリルオイルの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書において何らかの先行刊行物（若しくはそれに由来する情報）、又は公知である何らかの事項を参照することは、先行刊行物（若しくはそれに由来する情報）又は公知の事項が、本明細書が関連する技術分野における共通一般知識の一部を形成するということの承認でも自白でも何等かの形の示唆でもなく、またそのように解釈されるべきでもない。
【０００３】
炎症は、傷害及び感染に対する必要な生理的な適応応答であり、これがなければ、ヒト及び動物は生存することができないであろう。その機能は、傷害の初期原因を取り除き、有害な因子を除去し、組織構造及び機能の修復を開始することである。その初期急性期は、通常は、熱、疼痛、発赤及び腫脹を特徴とする。急性炎症の通常の結果は損傷の回復及び修復であるが、しかしながら、敗血症のような状態における不均衡な急性炎症反応及び長期の慢性炎症反応は、有害である可能性がある。
【０００４】
重要なことに、今では慢性炎症は、変形性関節症、関節リウマチ、心血管疾患、脳血管疾患、呼吸器疾患、自己免疫疾患及び筋肉減少症等のすべての組織及び臓器に影響を及ぼす広い範囲の疾患の病態に関連づけられており、実際に慢性炎症は、老化のプロセス自体に関連づけられている。
【０００５】
炎症過程に対する応答として、一定範囲の薬物の開発があり、最も有効なものは、過剰な炎症を抑制することができるグルココルチコイドステロイド薬物である。しかしながら、ステロイド薬物療法は、著しい副作用が原因でその幅広い臨床使用には限界があり、一般に短期の使用のみに制限されている。非ステロイド性消炎薬（ＮＳＡＩＤＳ）と呼ばれるイブプロフェン等の第２クラスの炎症薬が開発された。表１を参照。アスピリンが消炎活性を有し、アスピリンがこの第２クラスの消炎薬の一部であることは認識されていた。これらの薬物は、ステロイド薬物よりも安全であり、より多くの慢性炎症状態、例えば変形性関節症に対して使用することができた。
【０００６】
【表１】
2021507872.tif 000002
【０００７】
プロスタグランジンは、炎症反応において鍵となる役割を果たし、その存在は、炎症組織において顕著に増大し、温度を高め、血管を拡張することにより疼痛及び熱感に寄与し、血管を拡張することは、プロスタグランジンが放出される場所で発赤及び腫脹を引き起こす。ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の両方の競合的部位阻害剤であり、これによりプロスタグランジンの合成を低下させる。プロスタグランジンの産生を低下させることにより、ＮＳＡＩＤは、熱感の不快感を緩和し炎症及び関連する疼痛を低減するのを助ける。ＮＳＡＩＤＳは、通常、疼痛及び炎症を特徴とする急性及び慢性の状態、例えば変形性関節症、関節リウマチ、頭痛及び片頭痛及び熱感の処置のために使用される。しかしながら、ＮＳＡＩＤＳも安全を取り巻く考慮するべき問題を示し、胃腸毒性、腎毒性及び心臓血管毒性を呈する可能性がある。例えば、アスピリンは、使用から数日以内に胃出血を引き起こす可能性があり、２０１５年７月に、ＦＤＡは、アスピリンを除く一般のＮＳＡＩＤ鎮痛剤の心臓への危険性についての過去の警告を繰り返した。これらには、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ）及びナプロキセン（Ａｌｅｖｅ）及び処方箋が必要なＮＳＡＩＤが含まれる。
【０００８】
従って、さらなる代替の消炎療法についてのニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ムール貝脂質及びクリルオイルの特定の組み合わせは、有利なことに、炎症過程に関係づけられる１種以上の炎症促進性メディエーターの産生又は放出に対して相加的又は相乗的な阻害効果をもたらす可能性があるということが今回見出された。それゆえ、いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、炎症を特徴とするか又は炎症性要素を有する障害に対する新しい治療的処置をもたらす可能性がある。いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、疼痛、例えば炎症に随伴する疼痛に対する新しい治療的処置をもたらす可能性がある。
【００１０】
このように、１つの態様では、ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせが提供される。このムール貝脂質とクリルオイルとの組み合わせは、被験者への個別投与又は同時投与のために適合されていてもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせはムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物である。
【００１１】
別の態様では、ムール貝脂質及びクリルオイルからなる、又は実質的にムール貝脂質及びクリルオイルからなる組み合わせが提供される。当該ムール貝脂質とクリルオイルとの組み合わせは、被験者への個別投与又は同時投与のために適合されていてもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、ムール貝脂質及びクリルオイルからなる、又は実質的にムール貝脂質及びクリルオイルからなる組成物である。
【００１２】
別の態様では、治療において使用するためのムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせが提供される。いくつかの実施形態では、被験者における炎症の処置において使用するためのムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせが提供される。被験者における疼痛の処置において使用するためのムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせも提供される。当該ムール貝脂質とクリルオイルとの組み合わせは、被験者への個別投与又は同時投与のために適合されていてもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせはムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物である。
【００１３】
別の態様では、本開示は、必要とする被験者における炎症の処置方法であって、その被験者に、ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせを投与する工程を備える方法を提供する。本開示は、必要とする被験者における疼痛の処置方法であって、その被験者に、ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組み合わせを投与する工程を備える方法も提供する。ムール貝脂質とクリルオイルとのこの組み合わせは、被験者への個別投与又は同時投与のために適合されていてもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせはムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物である。
【００１４】
別の態様では、本開示は、炎症を処置するための医薬組合せの製造におけるムール貝脂質及びクリルオイルの使用を提供する。本開示は、疼痛を処置するための医薬組合せの製造におけるムール貝脂質及びクリルオイルの使用も提供する。この医薬は、個別投与又は同時投与のために適合されていてもよい。いくつかの実施形態では、この組み合わせはムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物である。
【００１５】
別の態様では、本開示は、炎症を処置するための組合せ剤であって、ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組合せ剤を提供する。本開示は、疼痛を処置するための組合せ剤であって、ムール貝脂質とクリルオイルとを含む組合せ剤も提供する。このムール貝脂質及びクリルオイルは、被験者への個別投与又は同時投与のために適合されていてもよい。いくつかの実施形態では、当該組合せ剤はムール貝脂質とクリルオイルとを含む組成物である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、上記ムール貝脂質は乾燥ムール貝粉末の形態にある。他の実施形態では、上記ムール貝脂質は、ムール貝から得られた脂質エキス（「ムール貝脂質エキス」）の形態にある。なおさらなる実施形態では、上記ムール貝脂質は、乾燥ムール貝粉末及びムール貝脂質エキスの組み合わせ又は組成物の形態にあってもよい。
【００１７】
いくつかの実施形態では、上記クリルオイルは、約４０〜９９％ｗ／ｗ（重量／重量）の範囲のリン脂質含有量、さらなる実施形態では約５０〜９９％ｗ／ｗの範囲、例えば約６０〜８０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、被験者における１種以上の障害を処置することにおいて有用であってもよく、この障害は炎症性要素を有し、この処置においては１種以上の炎症促進性分子の阻害が治療上有益である。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、１種以上の慢性障害を処置するために好適であってもよい。
【００１９】
いくつかの実施形態では、例えば慢性炎症の処置において使用するために、当該組み合わせは、一般に利用できるＮＳＡＩＤＳに随伴する１以上の副作用の範囲、重症度又は継続期間を解消、回避又は別の態様で緩和してもよい。
【００２０】
別の態様では、約５０％以上、例えば約６０％以上のリン脂質含有量を有するクリルオイルの調製方法であって、
（ａ）オキアミバイオマス供給材料をＣＯ２及びエタノールの混合物と接触させ、クリルオイルを抽出する工程と、
（ｂ）上記クリルオイルをＣＯ２と接触させ、上記オイルが少なくとも５０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有するように少なくとも一定割合（一部）の非極性脂質成分を抽出する工程と
を備える方法が提供される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、この方法から得られるクリルオイルは、約６０％ｗ／ｗ以上、例えば少なくとも約６５％ｗ／ｗ、又は７０％ｗ／ｗ、又は７５％ｗ／ｗ、又は８０％ｗ／ｗ、又は８５％ｗ／ｗ、又は９０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する。
【００２２】
本開示は、クリルオイルのリン脂質含有量の濃縮方法にも関する。
【００２３】
従って、さらなる態様では、５０％ｗ／ｗ未満のリン脂質含有量を有するクリルオイルのリン脂質含有量を約５０％ｗ／ｗ以上まで高める方法であって、５０％ｗ／ｗ未満のリン脂質含有量を有するクリルオイルをＣＯ２と接触させて、非極性脂質成分を選択的に除去する工程を備える方法が提供される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、濃縮前のクリルオイルは、約５０％ｗ／ｗ未満、例えば約４０％未満、又は約３０％ｗ／ｗ未満又は２０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する。いくつかの実施形態では、そのように得られた濃縮後のオイルは、少なくとも約５５％ｗ／ｗ、又は少なくとも約６０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約６５％ｗ／ｗ又は少なくとも約７０％ｗ／ｗ又は少なくとも約７５％ｗ／ｗ又は少なくとも約８０％ｗ／ｗ又は少なくとも約８５％ｗ／ｗ又は少なくとも約９０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有する。
【００２５】
さらなる実施形態は、本開示の方法により得られる約５０％ｗ／ｗ以上（例えば６０％ｗ／ｗ以上）のリン脂質含有量を有するクリルオイルを提供する。
【００２６】
なおさらなる実施形態は、本明細書に記載される組み合わせ及び組成物において使用するための約５０％ｗ／ｗ以上又は６０％ｗ／ｗ以上のリン脂質含有量を有するクリルオイルを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１Ａは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、オリーブ油並びにＮ−（３−（アミノメチル）ベンジル）アセトアミジン（１４００Ｗ）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯ阻害効果をグラフで示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、オリーブ油並びにＮ−（３−（アミノメチル）ベンジル）アセトアミジン（１４００Ｗ）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯ放出（％）をグラフで示す。
【図２Ａ】図２Ａは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、オリーブ油並びにデキサメタゾンに対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα阻害効果をグラフで示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独並びにオリーブ油に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα放出（％）をグラフで示す。
【図３Ａ】図３Ａは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、オリーブ油並びにデキサメタゾンに対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＩＬ−６阻害効果をグラフで示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、並びにオリーブ油に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＩＬ−６放出（％）をグラフで示す。
【図４Ａ】図４Ａは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、オリーブ油並びにジクロフェナクに対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２阻害効果をグラフで示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、種々の濃度の、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの各々単独、並びにオリーブ油に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２放出（％）をグラフで示す。
【図５Ａ】図５Ａは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ９０〜ＬＹ５０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯ放出（％）をグラフで示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ５０〜ＬＹ１０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯ放出（％）をグラフで示す。
【図６Ａ】図６Ａは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ７５〜ＬＹ６０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯ放出（％）をグラフで示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ６０〜ＬＹ４５）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯ放出（％）をグラフで示す。
【図７】図７は、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ９０〜ＬＹ１０）による、相乗的なＮＯ阻害についてのアイソボログラムをグラフで示す。
【図８Ａ】図８Ａは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ９０〜ＬＹ６０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα放出（％）をグラフで示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ６０〜ＬＹ３０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα放出（％）をグラフで示す。
【図８Ｃ】図８Ｃは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ４０〜ＬＹ１０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα放出（％）をグラフで示す。
【図９Ａ】図９Ａは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ７０〜ＬＹ５５）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα放出（％）をグラフで示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ５０〜ＬＹ３５）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα放出（％）をグラフで示す。
【図１０】図１０は、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ９０〜ＬＹ１０）による相乗的なＴＮＦα阻害についてのアイソボログラムをグラフで示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ９０〜ＬＹ５０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＩＬ−６放出（％）をグラフで示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ５０〜ＬＹ１０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＩＬ−６放出（％）をグラフで示す。
【図１２Ａ】図１２Ａは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ７０〜ＬＹ５０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＩＬ−６放出（％）をグラフで示す。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ５０〜ＬＹ３０）に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦγ）で刺激されたＲＡＷ２６４．７細胞におけるＩＬ−６放出（％）をグラフで示す。
【図１３】図１３は、種々の濃度のムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせ（ＬＹ９０〜ＬＹ１０）による相乗的なＩＬ−６阻害についてのアイソボログラムをグラフで示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本明細書及びそれに続く請求項の全体にわたって、文脈と矛盾しないかぎり、語句「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（…を含む、…を備える）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」等の派生語は、記載された整数若しくは工程又は整数の群の包含を含意するがいずれの他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群の排除も含意しないと理解される。
【００２９】
本明細書及びそれに続く請求項の全体にわたって、文脈と矛盾しないかぎり、句「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（実質的に…からなる）」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ」等の派生語は、記載された要素（１又は複数）が本発明の必須のすなわち必要な要素であるということを示すと理解される。この句は、本発明の特徴に実質的な影響を及ぼさない他の記載されていない要素の存在を許容するが、規定される本発明の基本的かつ新規な特徴に影響を及ぼすと考えられる追加の不特定の要素は排除する。
【００３０】
単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈と明らかに矛盾する場合を除いて、複数の態様を包含する。
【００３１】
用語「発明」は、本明細書に記載されるすべての開示、態様、実施形態及び実施例を含む。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「約」は、記載された量、値又はパラメータの１０％、５％、又は２〜１％の程度は変動してもよく、少なくとも当該技術分野で受け入れられる許容度を含む量、値又はパラメータを指す。記載された整数の値に関して使用される場合、「約」は記載された値のどちらの側の１つの整数の変動を含んでもよく、例えば「５０％」は４９％及び５１％を含んでよい。記載された値の範囲の前に置かれる場合、「約」はその範囲の上限及び下限の両方に適用されることが意図されている。
【００３３】
特段の記載がない限り、以降で説明される特徴は、独立に、いずれの態様又は実施形態に適用してもよい。
【００３４】
本明細書で使用する場合、「ムール貝脂質」は、ニュージーランドグリーンリップド（Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  ｇｒｅｅｎ−ｌｉｐｐｅｄ：ＮＺＧＬ）（又はｇｒｅｅｎｓｈｅｌｌ）マッセル（モエギイガイ）から抽出又は入手される脂質成分を指す。このムール貝脂質は、多価不飽和長鎖脂肪酸（ＰＵＦＡ）、例えばＡＬＡ、ＥＴＡ、ＥＰＡ及びＤＨＡ、ステロール、ステロールエステル、トリグリセリド、非極性脂質カロテノイドのうちの１種以上並びに（ＮＺＧＬ）マッセル（ムール貝）肉の他の成分を含んでもよい。このムール貝脂質は、乾燥ムール貝粉末、又はムール貝肉から抽出された脂質画分（「ムール貝脂質エキス」）の形態にあってもよい。「ムール貝脂質」がムール貝粉末及びムール貝脂質エキスの混合物を包含することも想定されており、例えばムール貝脂質がムール貝粉末の添加により補われてもよいし、ムール貝粉末がムール貝脂質の添加により補われてもよい。いくつかの実施形態では、ムール貝脂質は単離された脂質画分である。
【００３５】
上記ムール貝脂質粉末は、新鮮な（生の）、冷凍の又は加熱処理したＮＺＧＬマッセル（ムール貝）肉からいずれかの好適な乾燥手段（例えば凍結乾燥、気流乾燥又は真空乾燥）及び粉砕手段によって調製されてもよい。脂肪酸（ＡＬＡ、ＥＴＡ、ＥＰＡ及びＤＨＡを含む）に加えて、ムール貝肉を乾燥することにより得られるムール貝粉末は、ミネラル、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、及びグリコサミノグリカン（例えばコンドロイチン−４−硫酸及びコンドロイチン−６−硫酸）を含む他の潜在的に有益な成分も含有することになる。ムール貝粉末の調製方法は当該技術分野で公知である。
【００３６】
上記ムール貝脂質エキスは、いずれかの好適な方法、例えば溶媒抽出（例えばアセトン又はエタノール。例えば国際公開第２００５０７３３５４Ａ１号パンフレットを参照。その内容を参照により援用する）、酵素処理（例えば国際公開第２００６１２８２４４号パンフレットを参照。その内容を参照により援用する）又は超臨界流体抽出により、新鮮な（生の）、冷凍の、加熱処理した又は乾燥した（例えば凍結乾燥した、気流乾燥した又は真空ドラム乾燥した）ＮＺＧＬマッセル（ムール貝）肉（例えば粉末、噴霧乾燥（スプレードライ）された又は粉砕された形態）から得られてもよい。いくつかの実施形態では、このムール貝脂質エキスは、有利には、乾燥された（例えば凍結乾燥された）ムール貝肉（任意に、酸化を防止するために安定化される）から超臨界ＣＯ２を用いた抽出によって得られる。ムール貝脂質エキスを得るための例示的な方法は、国際公開第９７／０９９９２Ａ１号パンフレットに記載されており、この文献の内容を参照により援用する。他の方法は当該技術分野で公知であろう。
【００３７】
好ましい実施形態では、プロセスは、脂肪酸等の有益な成分が実質的には破壊されず顕著に保持されるような条件下、例えば低温加工で実施される。
【００３８】
国際公開第９７／０９９９２Ａ１号パンフレットに記載される方法に従って得られる１つの例示的なムール貝脂質エキスは、ＰＣＳＯ−５２４（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｌｉｎｋ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、香港）としても知られる。ＰＣＳＯ−５２４（登録商標）は、添加されたビタミンＥ（０．１５％ｗ／ｗ、抗酸化防腐剤として添加されている）を含有し、遊離脂肪酸、トリグリセリド、ステロールエステル、非極性脂質及びカロテノイドの組み合わせを含み（Ｓｉｎｃｌａｉｒ，Ａ．Ｊ．ら、２０００）、そして長鎖オメガ−３多価不飽和脂肪酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、並びに他の長鎖脂肪酸、例えば５，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、５，９，１２，１６−ノナデカテトラエン酸、７，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸及び５，９，１２，１５，１８−ヘンエイコサペンタエン酸の供給源である。ＰＣＳＯ−２５４（登録商標）（封入された経口剤形の中でオリーブ油と共に処方されている）は、Ｌｙｐｒｉｎｏｌ（登録商標）及びＯｍｅｇａ  ＸＬ（登録商標）（ヒトによる消費用）、及びＡｎｔｉｎｏｌ（登録商標）（イヌ及びネコ用）の名称で上市されている。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせで使用されるムール貝脂質エキスは、ビタミンＥ、（例えば約０．２％ｗ／ｗ、又は０．１５％ｗ／ｗ、又は０．１％ｗ／ｗ、又は０．０５％ｗ／ｗ又は約０．０３％ｗ／ｗ又は約０．０１％ｗ／ｗの量で加えられる）と共に処方される。いくつかの実施形態では、ムール貝脂質は、ＰＣＳＯ−２５４（登録商標）、すなわち０．１５％ｗ／ｗのビタミンＥを含有するムール貝脂質エキスの形態で使用される。いくつかの実施形態では、任意にビタミンＥを含有するムール貝脂質は、さらにオリーブ油等の担体油と共に処方される。いくつかの実施形態ではムール貝脂質はムール貝脂質エキスでありビタミンＥを含有するが、ビタミンＥの添加は任意であり、従って、いくつかの実施形態では、ムール貝脂質エキスはそれだけで（ニートで）使用される、すなわちビタミンＥ等の他の付加的な原料のいずれも含有しない。
【００４０】
ムール貝脂質は、種々の形態で、工業的な供給業者から購入されてもよい。
【００４１】
クリルオイル（オキアミ油）は、ナンキョクオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｓｕｐｅｒｂａ、Ａｎｔａｒｃｔｉｃ  ｋｒｉｌｌ）、ツノナシオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａ、Ｐａｃｉｆｉｃ  ｋｒｉｌｌ）、Ｍａｇａｎｙｃｉｔｉｐｈａｎｅｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃａ（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｋｒｉｌｌ）、コオリオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｏｐｈｉａｓ、ｉｃｅ  ｋｒｉｌｌ）、Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｆｒｉｇｉｄａ、Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓ、Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｔｒｉａｃａｎｔｈａ及びＥｕｐｈａｕｓｉａ  ｖａｌｌｅｎｔｉｎｉを含めたいずれの好適なオキアミ種から調製されてよい。いくつかの好ましい実施形態では、クリルオイルはナンキョクオキアミから得られる。
【００４２】
海産脂質は、遊離酸形態及びトリグリセリド形態の脂肪酸、特にＥＰＡ及びＤＨＡ等のオメガ−３脂肪酸を含有する。同様に、クリルオイルもオメガ−３脂肪酸が豊富であるが、しかしながら、クリルオイルは非常に多くの量のリン脂質を含有し、リン脂質では、上記脂肪酸はグリセロール部分を介してリン酸頭部に結合している。トリグリセリド形態よりも効率的に細胞膜の中へ取り込まれ、これにより、より容易に生物が利用可能になるのは脂肪酸のこのリン脂質結合形態である。クリルオイル中で見出される典型的なリン脂質として、ホスファチジルコリン、アルキルアシルホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルコリン、リゾアルキルアシルホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、アルキルアシルホスファチジルエタノールアミン、カルジオリピン＋Ｎ−アシルホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、及びリゾアルキルアシルホスファチジルエタノールアミンを挙げてもよい。クリルオイルは、かなりの量のアスタキサンチンも含有し、このアスタキサンチンは、抗酸化物質であり、クリルオイルの赤い色の理由でもある。
【００４３】
いくつかの実施形態では、クリルオイルは、少なくとも約１％ｗ／ｗ、５％ｗ／ｗ、１０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約２０％ｗ／ｗのリン脂質を含有する。さらなる実施形態では、このオイルは、少なくとも約２５％ｗ／ｗ又は少なくとも約３０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約３５％ｗ／ｗ、又は少なくとも約４０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約４５％ｗ／ｗ、又は少なくとも約５０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約５５％ｗ／ｗ、又は少なくとも約６０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約６５％ｗ／ｗ又は少なくとも約７０％ｗ／ｗ、又は少なくとも約７５％ｗ／ｗ、又は少なくとも約８０％ｗ／ｗ又は少なくとも約８５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９７％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９８％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９９％ｗ／ｗのリン脂質を含有する。いくつかの実施形態では、クリルオイルは、約４０〜９９％ｗ／ｗ（すなわち、約４０％ｗ／ｗ以上約９９％ｗ／ｗ以下）の範囲のリン脂質含有量を有する。いくつかのさらなる実施形態では、クリルオイルは、約６０〜９９％ｗ／ｗの範囲、例えば約６５〜９０％ｗ／ｗの範囲のリン脂質含有量を有する。本明細書中で言及する場合、「濃縮（された）」クリルオイルは、少なくとも約６０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有するクリルオイルを指す。リン脂質含有量は、当該技術分野のいずれの好適な手段で、例えば３１Ｐ  ＮＭＲ分析で決定されてもよい。
【００４４】
リン脂質が濃縮されたクリルオイルを含めたクリルオイルの調製方法は、当該技術分野で公知である。典型的には、新鮮な、冷凍した、及び／又は加熱処理したオキアミ（例えばナンキョクオキアミ又はツノナシオキアミ）バイオマスが、溶媒（例えばエタノール等のアルコール；アセトン等のケトン；又はジメトキシエタン）及び／又は超臨界流体（例えばＣＯ２）を使用して抽出されてもよい。いくつかの限定を意図しない例示的なクリルオイルの調製方法は、米国特許第９，０２８，８７７号明細書、米国特許第９，３７５，４５３号明細書、米国特許第６，８００，２９９号明細書、米国特許第８，８２８，４４７号明細書、米国特許第９，１５０，８１５号明細書、米国特許第８，３８３，８４５号明細書、国際公開第２００７／１２３４２４号パンフレット、国際公開第２０１１／０５０４７４号パンフレット、国際公開第２０１５／１０４４０１号パンフレット及び国際公開第２０１５／１２１３７８号パンフレットに記載されており、これらの内容は、参照により本明細書に援用したものとする。さらなる方法も本明細書に記載される。クリルオイルは工業的な供給業者から購入されてもよい。
【００４５】
いくつかの有利な実施形態では、クリルオイルは、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の水分含有量を有する。いくつかの実施形態では、クリルオイルは、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の残留抽出溶媒含有量を有する。さらなる実施形態では、クリルオイルは、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の水分含有量、及び約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の残留抽出溶媒含有量を有する。水及び溶媒は、いずれの好適な手段により、例えば非常に短時間の加熱又は穏やかな加熱（例えば３０分、又は１時間、又は２時間又は３時間、約６０℃若しくはこれ未満、又は約５０℃若しくはこれ未満、又は約４０℃若しくはこれ未満の温度、かつ好ましくは構成成分の完全性が実質的には損なわれないように）、窒素気流又は凍結乾燥（フリーズドライ）により除去されてもよい。
【００４６】
１種以上の炎症メディエーター、例えば亜酸化窒素（ＮＯ）、インターロイキン（例えばＩＬ−６）等のサイトカイン、プロスタグランジン（例えばＰＧ−Ｅ２）、及びＴＮＦα、に対する当該組み合わせの阻害活性は、被験者における、このような分子のうちの１種以上の阻害が治療上有益である１種以上の障害又は症候を処置することにおいて有用である可能性がある。特に、本開示の組み合わせは、過度の急性炎症、若しくは慢性炎症、及び／又はそれらに随伴する症候、例えば疼痛、熱感、発赤及び腫脹のうちの１種以上を処置することにおいて有用である可能性がある。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、病態が炎症性要素を含む障害における炎症、及び／又はこのような障害に随伴する疼痛を処置することにおいて有用である可能性がある。炎症性の態様を含む障害のいくつかの限定を意図しない例としては、アテローム性動脈硬化症、アレルギー、喘息、自己免疫疾患（例えばセリアック病、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎）、線維筋痛症、痛風、片頭痛、変形性関節症、潰瘍性大腸炎、癌、アルツハイマー病を含めた認知障害、２型糖尿病、遅発性筋肉痛（ＤＯＭＳ）、クローン病及び強直性脊椎炎が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、関節痛を処置すること、又は変形性関節症若しくは関節リウマチに関連する関節可動性を改善することにおいて有用である可能性がある。いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、ＰＧＥ２の阻害が有益である可能性がある障害、例えば関節リウマチ、片頭痛並びに疼痛（侵害受容性疼痛（体性痛若しくは内臓痛）、及び／又は神経因性疼痛であってもよい）を処置することにおいて有用である可能性がある。
【００４７】
本明細書に記載される組み合わせは、個別投与又は同時投与のために適合されていてもよいということは分かるであろう。同時投与のために適合されている場合、当該組み合わせは、ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの両方を含む一体の組成物若しくは混合物として、又は各組み合わせ成分の個別剤形として提供及び／又は投与されてもよい。ムール貝脂質エキス及びクリルオイルが各々別々に提供及び／又は投与される場合、それらは同時に、続けて、又はそれぞれ異なる時間に投与されてもよい。
【００４８】
さらなる実施形態では、ムール貝脂質及びクリルオイルは、任意に、一緒に又は個別に、１種以上の薬学的に許容できる担体及び／又は添加剤と組み合わせて処方されてもよい。好適な担体のいくつかの例は、オリーブ油、ヒマシ油、アマニ油、ブドウ種子油、魚油（例えばマグロ油）、キャノーラ油（菜種油）、植物油、ヒマワリ油、チア油、大豆油、ゴマ油、藻油、及びこれらの混合物等の食用油である。１種以上の任意の添加剤、例えば抗酸化物質、ビタミン（脂溶性ビタミン（Ａ、Ｄ、Ｅ及びＫ）、又は水溶性ビタミン（Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｃ）等）、食餌ミネラル、アミノ酸、矯味矯臭剤、乳化剤、薬学的に許容できるアルコール（例えばエタノール、グリセロール、プロピレングリコール、及びポリエチレングリコール）又は他の粘度調整剤、界面活性剤（例えばポリソルベート）、懸濁剤、ラクトース（乳糖）、デキストロース、スクロース（ショ糖）、マンニトール、ソルビトール、グルコース、滑沢剤、結合剤、デンプン、吸収促進薬及び防腐剤等も含まれてよい。担体又は添加剤は１以上の機能を果たしてもよい。ムール貝脂質及び／又はクリルオイルは、任意に、ムール貝及びクリルオイルの１種以上のさらなる精製又は部分的に精製された成分、例えばアスタキサンチン及びそのエステル、遊離酸、酸エステル、トリグリセリド又はリン脂質のいずれの形態であってもよい脂肪酸（例えばＥＰＡ、ＤＨＡ）、ステロール、ステロールエステル、アミノ酸、ペプチド及びタンパク質、並びにグリコサミノグリカン（例えばコンドロイチン硫酸）をさらに補充され又はそれらと組み合わされてもよい。全体を磨り潰した形態等の他の消炎性食物又はそのエキス、例えばウコン（クルクミン）、ショウガ、ニンニク、チョウジ等も，任意に組み込まれてよい。
【００４９】
当該処方された組み合わせは、当該技術分野で公知の方法に従って調製されてよい。このような方法は、上記ムール貝脂質エキス及び／又はクリルオイルを任意に１種以上の添加剤成分と共に上記担体と完全に合わせる（混合する）工程を備える。いずれの担体又は添加剤も薬学的に許容できるものであることは理解されるであろう。
【００５０】
従って、いくつかの実施形態では、ムール貝脂質及びクリルオイルは、別個に又は一緒に、オリーブ油等の担体油とともに処方される。いくつかの実施形態では、この担体油は、当該組み合わせ又は組成物の約１０％ｗ／ｗ〜約９０％ｗ／ｗ、例えば約２０％ｗ／ｗ〜約８０％ｗ／ｗを構成する。さらなる実施形態では、担体油は、当該組み合わせ又は組成物の約２５％ｗ／ｗ、又は約３０％ｗ／ｗ、又は約３５％ｗ／ｗ、又は約４０％ｗ／ｗ、又は約４５％ｗ／ｗ、又は約５０％ｗ／ｗ、又は約５５％ｗ／ｗ、又は約６０％ｗ／ｗ、又は約６５％ｗ／ｗ、又は約７０％ｗ／ｗ、又は約７５％ｗ／ｗを構成する。いくつかの実施形態では、ムール貝脂質及びクリルオイルの組み合わせた量に対する担体油の重量比は、約３：１、又は約２．５：１、又は約２：１、又は約１．５：１、又は約１：１、又は約１：１．５、又は約１：２、又は約１：２．５又は約１：３である。
【００５１】
経口、非経口、局所、経皮又は皮下等のいずれの投与形態も本発明で想定されるが、有利には、いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、経口剤形で提供及び／又は投与されてもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、バルク形態で、例えば液体、シロップ、ペースト、半固体ワックス、分散液、懸濁液、エマルション（例えば油中水又は水中油）、微粉砕した粉末又はマイクロカプセル化粉末として提示することができ、このバルク形態から個々の投薬量を測定することができる。測定及び／又は投与は、さじ又はスクープ、シリンジ、点滴器、又は計量カップ等いずれの手段によってもよい。測定された投薬量は、そのまま、又は食物若しくは飲料に混ぜ込まれ、食物若しくは飲料に注がれ、若しくは食物若しくは飲料に振りかけられて被験者に投与されてもよい。
【００５２】
他の実施形態では、当該組み合わせは、有利には単位経口剤形、すなわち固定剤形（固定用量形態）として提示される。好適な単位経口剤形のいくつかの例としては、個別包装のアンプル剤、チューブ、充填済みシリンジ（フィルドシリンジ）、サシェ（小袋）、噛むもの及びカプセル剤（硬質ジェルカプセル及び軟質ジェルカプセルを含む）が挙げられる。
【００５３】
好適な単位経口剤形の一例は硬殻又は軟殻の形態のカプセル剤である。この殻（シェル）は、ゼラチン、プルラン、ヒプロメロース、ＰＶＡ共重合体、カラギーナン、若しくはデンプン若しくはセルロース等の他の糖類成分のうちの１種以上、又はこれらの混合物を含んでもよく、着色剤、乳白剤、可塑剤（例えばソルビトール、キシロース、マルチトール及びグリセリン）などをさらに含んでもよい。ムール貝脂質及びクリルオイル等の海産油及び海産脂質の封入方法は、当該技術分野で公知である。例えば国際公開第２０１５／１２１３７８号パンフレットを参照。この文献の内容は、参照により本明細書に援用したものとする。クリルオイルが別個に封入されるいくつかの実施形態では、クリルオイルは、粘度調整剤等の任意のさらなる剤の不存在下で封入されてもよく、つまり、カプセル剤充填物は、実質的にクリルオイルからなる。
【００５４】
いくつかの有利な実施形態では、本開示のムール貝脂質とクリルオイルとの組み合わせは、軟質ジェルカプセル形態、例えばムール貝脂質及びクリルオイルの両方を含む軟質ジェルカプセルとして、又はムール貝脂質及びクリルオイルが任意に好適な担体及び／若しくは添加剤と共に別個に封入されている個別の軟質ジェルカプセルとして提示される。好適な軟質ジェルカプセルは、ゼラチン（あるいは、プルラン及びヒプロメロース等の糖類源）から、任意にソルビトール及びグリセリン（グリセロール）等の１種以上の可塑剤、及び着色剤及び乳白剤等の添加剤と共に調製されてもよい。１つの例では、軟質ジェルカプセルの殻は、ゼラチン、並びにソルビトール及びグリセリンの一方又は両方を含んでもよい。
【００５５】
マイクロカプセル化は、小さい液滴又は粒子がコーティング壁によって取り囲まれているか又はマトリクスに包埋されて粉末が形成される方法であり、このコーティング又はマトリクスは酸化等の化学反応に向かう傾向を回避又は低減する機能的バリアを形成する。加えて、このコーティング又はマトリクスは、潜在的な矯味矯臭の役割を提供してもよい。このように、いくつかの実施形態では、ムール貝脂質及び／又はクリルオイルは、別個に又は一緒にマイクロカプセル化されて、粉末が形成されてもよい。一般に使用されるマイクロカプセル化方法としては、乳化、噴霧乾燥、凍結乾燥、同軸エレクトロスプレー、押出、コアセルベーション（液滴形成）、超臨界流体技術、及びインサイチュ（その場）重合が挙げられる。コーティング材料としては、天然ポリマー及び合成ポリマー、炭水化物（例えばデンプン、グルコース）、タンパク質（例えばカゼイン、ゼラチン）及びこれらの混合物が挙げられる（例えば、Ｂａｋｒｙ，Ａ．Ｍ．ら、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｓａｆｅｔｙ，１５，１４３，２０１６及びその中で引用される参考文献、国際公開第２０１４／１７０４６４号パンフレット及び国際公開第２０１４／１６９３１５号パンフレットを参照。これらの内容は、参照により本明細書に援用される）。ムール貝脂質及び／又はクリルオイルは、上記のとおりの１種以上の担体又は添加剤と共にマイクロカプセル化されてもよい。マイクロカプセル化されたムール貝脂質及び／又はクリルオイル粉末は、例えば硬殻カプセル単位剤形にさらに封入されてもよい。粉末のマイクロカプセル化された脂質又はオイルは、任意に１種以上の担体又は添加剤と組み合わされてもよい。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、例えば振りかけ、撹拌、混合、又はこのムール貝脂質エキス及びクリルオイルの組み合わせを食物若しくは飲料に塗工若しくは組み込む他の手段によって食物又は飲料とともに摂取されてもよい。このように、当該組み合わせは、飲料又は食材への組み込みのための形式で提供されてもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、食材及び飲料の調製において処方され、機能性食品を提供してもよい。
【００５７】
いくつかの実施形態では、ムール貝脂質及びクリルオイルは、別個に又は一緒に、オリーブ油等の担体油と共に、任意に抗酸化物質（例えばビタミンＥ）と共に処方される。
【００５８】
本開示の組み合わせにより処置される対象の被験者としては、哺乳類の被験者、例えばヒト、霊長類、ネコ科の動物、イヌ科の動物、ウシ亜科の動物、ウマ科の動物、ブタ、ウサギ科の動物、ヒツジ属の動物、及びヤギ亜科の動物が挙げられ、家畜（例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ及びヤギ）、コンパニオンアニマル（例えばイヌ、ネコ、ウサギ、モルモット）、及び捕獲された野生動物を含む。ウサギ、マウス、ラット、モルモット及びハムスター等の実験室動物は簡便な試験システムを提供する可能性があるため、このような実験室動物も想定される。
【００５９】
上記の剤形のいずれも、適宜、ヒト用途又は獣医学用途に適用されてもよい。
【００６０】
処置有効量は、所望の投薬計画に従って投与されたときに、所望の治療効果を少なくとも部分的に達成するために２成分で有効である当該組み合わせの量を含むことが意図されており、この所望の治療効果には、下記のもののうちの１種以上が含まれる：炎症及び／若しくは炎症の１種以上の症候（例えば熱感、疼痛、腫脹、発赤）の継続期間、重症度及び／若しくは頻度を緩和、解消若しくは低下させること、処置されている特定の障害若しくは状態の発症を予防若しくは遅延すること、その障害若しくは状態の進行を阻害すること、又はその障害若しくは状態の発症又は進行を（部分的に又は全体的に）停止若しくは逆転させること。
【００６１】
好適な投薬量及び投薬計画は、担当の医師又は獣医によって決められてよく、処置されている特定の状態／症候、その状態の重症度、並びに被験者の全般的な年齢、身体の状態及び体重によって変わってもよい。上記ムール貝脂質及び／又はクリルオイルの好適な一日投薬量は、独立に、約１０ｍｇ〜約１０ｇの範囲、例えば約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１ｇ、１．１ｇ、１．２ｇ、１．３ｇ、１．４ｇ、１．５ｇ、１．６ｇ、１．７ｇ、１．８ｇ、１．９ｇ、２．０ｇ、２．１ｇ、２．２ｇ、２．３ｇ、２．４ｇ、２．５ｇ、２．６ｇ、２．７ｇ、２．８ｇ、２．９ｇ、３．０ｇ、３．２ｇ、３．５ｇ、３．７ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、又は約９．５ｇであってもよい。いくつかのさらなる実施形態では、当該組み合わせの一日投薬量は、約２０ｍｇ〜約１５ｇの範囲、例えば約２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１ｇ、１．１ｇ、１．２ｇ、１．３ｇ、１．４ｇ、１．５ｇ、１．６ｇ、１．７ｇ、１．８ｇ、１．９ｇ、２．０ｇ、２．１ｇ、２．２ｇ、２．３ｇ、２．４ｇ、２．５ｇ、２．６ｇ、２．７ｇ、２．８ｇ、２．９ｇ、３．０ｇ、３．２ｇ、３．５ｇ、３．７ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇ、１０．５ｇ、１１．０ｇ、１１．５ｇ、１２．０ｇ、１２．５ｇ、１３．０ｇ、１３．５ｇ、１４．０ｇ、又は１４．５ｇであってもよい。
【００６２】
いくつかの実施形態では、個々の単位投薬量（例えば軟質ジェルカプセル）は、任意に担体油（例えばオリーブ油）と共に処方され、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７５ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３９０ｍｇ、４００、ｍｇ、４１０ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４４０ｍｇ、４５０ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４９０ｍｇ、又は約５００ｍｇの当該組み合わせを含有してよい。そのいくつかのさらなる実施形態では、当該組み合わせはビタミンＥをさらに含む。そのいくつかのさらなる実施形態では、当該組み合わせは、ムール貝脂質及びクリルオイル全体の全量の約１０％〜約９０％ｗ／ｗの範囲の量のムール貝脂質（例えばＰＣＳＯ−５２４として）を含み、かつ、ムール貝脂質及びクリルオイル全体の約９０％〜約１０％ｗ／ｗの範囲の量のクリルオイルを含み、つまり約１０：９０〜９０：１０のクリルオイルに対するムール貝脂質の重量比、例えば約１５：８５、又は約２０：８０、又は約２５：７５、又は約３０：７０、又は約３５：６５、又は約４０：６０、又は約４５：５５、又は約５０：５０、又は約５５：４５、又は約６０：４０、又は約６５：３５、又は約７０：３０、又は約７５：２５、又は約８０：２０、又は約８５：１５のクリルオイルに対するムール貝脂質の重量比の量で含む。
【００６３】
投薬量は、簡便に１日１回投与されてもよいし、一日投薬量が一日複数回（例えば２回、３回又は４回）に分けて投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、一週間に１回、２回、３回又は４回以上、例えば一日おきに投与されてもよい。いくつかの実施形態では、処置は、例えば少なくとも６〜１２ヶ月又は少なくとも２〜３年にわたって連続的又は長期のものであってもよく、又は進行中であってもよい。
【００６４】
例えば上記一日投薬量のいずれかにおける本開示の組み合わせは、ムール貝脂質及びクリルオイル全体の全量の約１％〜約９９％ｗ／ｗの範囲の量のムール貝脂質を含んでもよく、かつムール貝脂質及びクリルオイル全体の約９９％〜約１％の範囲の量のクリルオイルを含んでもよく、つまり約１：９９〜９９：１のクリルオイルに対するムール貝脂質の重量比であってもよい。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、ムール貝脂質及びクリルオイル全体の全量の約５％〜約９５％ｗ／ｗの範囲の量のムール貝脂質を含み、かつムール貝脂質及びクリルオイル全体の約９５％〜約５％の範囲の量のクリルオイルを含み、つまり約５：９５〜９５：５のクリルオイルに対するムール貝脂質の重量比である。いくつかの実施形態では、当該組み合わせは、ムール貝脂質及びクリルオイル全体の全量の約１０％〜約９０％ｗ／ｗの範囲の量のムール貝脂質を含み、かつムール貝脂質及びクリルオイル全体の約９０％〜約１０％ｗ／ｗの範囲の量のクリルオイルを含み、つまり、約１０：９０〜９０：１０のクリルオイルに対するムール貝脂質の重量比である。なおさらなる実施形態では、当該組み合わせは、約１５：８５、又は約２０：８０、又は約２５：７５、又は約３０：７０、又は約３５：６５、又は約４０：６０、又は約４５：５５、又は約５０：５０、又は約５５：４５、又は約６０：４０、又は約６５：３５、又は約７０：３０、又は約７５：２５、又は約８０：２０、又は約８５：１５のクリルオイルに対するムール貝脂質の重量比を含む。
【００６５】
本開示の組み合わせはいずれか１種以上の障害に対する単独の消炎療法として投与されてもよいが、本開示の組み合わせは、１種以上のＮＳＡＩＤＳ、例えばセレコキシブ、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、テロロラク（ｔｅｌｏｒｏｌａｃ）、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク及びトルメチンの投与レジメンと併用して投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせは、例えば追加的なＮＳＡＩＤＳ治療の必要性を解消又は実質的に解消することにより、又は有益な治療効果を達成するために必要とされるＮＳＡＩＤＳの投薬量及び／又は投薬頻度を低下させることにより、ＮＳＡＩＤＳに随伴する潜在的な副作用を解消又は低減する可能性がある。
【００６６】
上で論じたように、１以上の実施形態では、本明細書に開示される組み合わせで使用されるクリルオイルは、有利には少なくとも約５０％ｗ／ｗ以上、好ましくは少なくとも約６０％ｗ／ｗ以上のリン脂質含有量を有してもよい。高リン脂質（例えば約５０％ｗ／ｗ又は６０％ｗ／ｗ超）のクリルオイルをオキアミ粉から抽出するための多くの先行技術の方法は、ＣＯ２及びＣＯ２／エタノールの組み合わせを使用する。しかしながら、クリルオイルのリン脂質含有量が高くなるほどクリルオイルはより高粘度になり、約６０％以上の含有量を有するクリルオイルは通常は常温で粘性が高いペーストを呈することがよく認識されている。これは、特に工業的又は商業的規模のオイル製造では製造上の課題を提示する。というのも、粘性が高い材料からの抽出プロセスで使用される溶媒を揮発させるためにより高い温度が必要とされ、オイルへの熱関連の損傷がより起こりやすくなるからである。加えて、そのあとに、そのオイルを抽出槽から梱包槽へ移動させるために高い圧力が必要とされる。
【００６７】
１つの例示的な先行技術の方法は、国際公開第２００７１２３４２４号パンフレットに記載されている。この文献は、供給材料が最初に純粋なＣＯ２で抽出され、中性の脂質（すなわち非極性トリグリセリド）のみを抽出して、この非極性トリグリセリドの除去のおかげで、リン脂質が濃縮された材料を残す２工程プロセスを記載する。このリン脂質が濃縮された材料は、次にＣＯ２＋≧１０％エタノール共溶媒で抽出されて、極性のリン脂質、及び残っている非極性トリグリセリドが一緒にオキアミ原料バイオマスから抽出される。この方法は、商業規模ではプラント能力を十分に使用しない。というのも、そのプロセスの両方の段階の間、高圧抽出装置の中のかなりの容積が供給バイオマス中の抽出できないタンパク質、炭水化物及び灰分で満たされているからである。上記方法は、基本的には、（より効率的な連続操作と比べて）効率的でないバッチ操作でもあり、このことはプロセスコストに悪影響を及ぼす可能性がある。効果的には、出来上がったオイル中に最終の極性リン脂質含有量を届けるための濃縮は、工業規模で不均質な固体原料に対して直接第１工程で成し遂げられる。その固体原料の極性脂質及び非極性脂質の含有量、並びに各々がその後どれほど十分に抽出されるかの正確な事前の知識が、正確な最終のオイル濃縮のために必要とされる。実際には、商業規模での不確実性がコストがかかる過剰な濃縮につながる可能性があり、この過剰な濃縮は、そのあと必要に応じて、仕様に戻すための最終調合を要する。このことは、またこのプロセスの経済性に悪影響を及ぼす。
【００６８】
米国特許第９，７３５，４５３号明細書、米国特許第９，０７８，９０５号明細書、米国特許第９，０２８，８７７号明細書、米国特許第９，３２０，７６５号明細書及び米国特許第９，０７２，７５２号明細書は、中性の（非極性トリグリセリド）脂質を抽出するためのＣＯ２又はＣＯ２及びおよそ５％エタノール、並びにその後の、バルクの不均質な固体物質からクリルオイルを多くの量のリン脂質、アスタキサンチンエステル及び／又はオメガ−３脂肪酸とともに抽出するためのＣＯ２／約２０％エタノールを用いたオキアミの抽出を記載する。これらの方法は、上記の不都合を有することは共通である。
【００６９】
今回、本開示は、特に工業的又は商業的規模で先行技術の方法に従って高含有量の又は濃縮されたリン脂質含有クリルオイルを調製するとき（例えば、少なくとも約５０ｋｇ、１００ｋｇ、２００ｋｇ、３００ｋｇ又は５００ｋｇ以上のオーダーでオイルのバッチを製造するとき）の上で論じた不都合のうちの１以上をいくつかの実施形態では軽減、最小化又は解消しうる方法を記載する。このように、本開示は、少なくとも約５０％ｗ／ｗ以上、好ましくは少なくとも約６０％ｗ／ｗ以上のレベルまでのリン脂質含有量を有するクリルオイルの調製方法、及び低リン脂質含有量（約５０％ｗ／ｗ未満）のオイルの少なくとも約５０％ｗ／ｗ以上のレベル、好ましくは少なくとも約６０％ｗ／ｗ以上のレベルまでの濃縮方法も提供する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも約５０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有するクリルオイルを調製するための２工程プロセスであって、第１工程は約５０％ｗ／ｗ未満のリン脂質含有量を有する第１クリルオイルをオキアミバイオマスから抽出し、次いで少なくとも一定割合（一部）の非極性脂質成分（例えばトリグリセリド）をこの第１クリルオイルから除去して、第１クリルオイルと比べてリン脂質が濃縮されている（すなわちより高いリン脂質含有量を有する）第２クリルオイルを得ることを伴う２工程プロセスを提供する。
【００７１】
これまでに論じた先行技術の方法とは対照的に、当該方法のいくつかの実施形態は、オキアミバイオマス供給材料からのオイルの非選択的な抽出で開始する。固体の供給粉末からの極性脂質（例えばリン脂質）及び非極性脂質（例えばトリグリセリド）の両方の抽出は、ＣＯ２及びエタノールの混合物（例えば共沸エタノール、すなわち約９５％エタノールを含む水−エタノール混合物）を使用して成し遂げられてもよい。
【００７２】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＯ２中の少なくとも約１５％ｗ／ｗ又は少なくとも約２０％ｗ／ｗ、例えば約１７〜２２％ｗ／ｗの範囲のエタノールの質量比が使用されてもよい。さらなる実施形態では、ＣＯ２中の少なくとも約２５％ｗ／ｗエタノールの質量比が使用されてもよく、例えばＣＯ２中の少なくとも約２６％ｗ／ｗエタノール、又は少なくとも約２７％ｗ／ｗエタノール、又は少なくとも約２８％ｗ／ｗエタノール、又は少なくとも約２９％ｗ／ｗエタノール、又は少なくとも約３０％ｗ／ｗエタノールが使用される。
【００７３】
この段落で論じられる他の実施形態のいずれか１つを含めて、いくつかの実施形態では、抽出温度は、生成物分解のリスクを有利に低下又は最小化するために、約６０℃以下、例えば約５５℃以下、又は約５０℃以下、又は約４５℃以下、又は４０℃以下、又は３５℃以下、又は３０℃以下である。抽出圧力は、選択された温度及びエタノールに対するＣＯ２の比に対して超臨界状態、亜臨界状態及び／又は臨界近傍状態を確保するように設定されてもよい。いくつかの実施形態では、この圧力は、約２００〜３５０ｂａｒ（２０〜３５ＭＰａ）、例えば約２５０〜３００ｂａｒ（２５〜３０ＭＰａ）の範囲にあるが、より高い圧力、例えば４００ｂａｒ（４０ＭＰａ）以上が技術的には効果的であり、使用されてもよい。いくつかの実施形態では、上記圧力の値又は範囲は、非極性脂質の抽出が当該方法にとって律速にならないことを確保するのに十分な溶媒密度を生み出す。いくつかの実施形態では、抽出圧力条件は、超臨界状態、亜臨界状態又は臨界近傍状態の間を動くように、抽出プロセス全体にわたって調整されてもよい。いくつかの実施形態では、亜臨界状態及び／又は臨界近傍状態が使用され、そのための条件はＣＯ２−エタノール二元混合比（又は水も含有する共沸エタノールの場合は三元混合比）に応じて変わることになる。抽出時間は当業者によって決定されてよく、とりわけ、抽出条件及び所望の経済的な最適化に依存してもよい。いくつかの実施形態では、抽出時間は、通常は約１〜１５時間の範囲、例えば約２〜１０時間、例えば約２〜５時間又は約３〜６時間、又は約４〜５時間の範囲にある。抽出時間は、今度は、とりわけバイオマス供給材料の量及び粒径に依存する可能性がある。より大きい粒子は、動かないバイオマス及び均一な溶媒接触を依然として保持しながら、より高い溶媒流量が使用されることを許容することになる。しかしながら、より大きい粒子は、溶媒が粒子の中心に到達するために拡散が増強される必要も提示し、より多くの溶媒が必要とされる。このように、いくつかの実施形態では、供給材料の粒径は約１〜５ｍｍ、例えば約２〜３ｍｍである。
【００７４】
いくつかのさらなる実施形態では、抽出圧力は約３００ｂａｒ（３０ＭＰａ）であり、抽出温度は約６０℃である。
【００７５】
上記オイルの分離は、より低い温度（例えば約２５〜３５℃）及び圧力（例えば約２５〜６０ｂａｒ（２．５〜６ＭＰａ））で行うことができる。
【００７６】
得られた抽出油は、極性脂質（例えばリン脂質）及び非極性脂質（例えばトリグリセリド）の両方を含有し、約５０％ｗ／ｗ未満、又は約４５％ｗ／ｗ未満、又は約４０％ｗ／ｗ未満、又は約３５％ｗ／ｗ未満、又は約３０％ｗ／ｗ未満、又は約２５％ｗ／ｗ未満、又は約２０％ｗ／ｗ未満、又は約１０％ｗ／ｗ未満のリン脂質含有量を有してもよい。
【００７７】
いくつかの有利な実施形態では、次に、オイルの中に存在する水及びエタノールを、いずれかの好適な方法、例えば真空（減圧）下でのエバポレーション（任意に穏やかな加熱、例えば約６５℃以下を用いる）、窒素気流又は凍結乾燥を使用して除去することができる。いくつかの実施形態では、このオイルは、任意に穏やかな加熱を用いる真空下でのエバポレーションに供される。このあとに、低粘度の極性脂質及び非極性脂質の混合物（高い割合の非極性脂質は低粘度を与える）から水及びエタノール共溶媒を除去するためにより高温（例えば約７０℃、約７５℃又は約８０℃）の短い滞留時間（例えば１〜３秒）が続いてもよい。いくつかの好ましい実施形態では、抽出油の成分の分解を回避又は最小にするために、温度は、有利には真空下での穏やかな加熱全体にわたって約６０℃を超えない。さらなる実施形態では、温度は、真空下での穏やかな加熱全体にわたって、有利には約５５℃、又は約５０℃又は約４５℃、又は約４０℃、又は約３５℃、又は約３０℃、又は約２５℃を超えない。
【００７８】
いくつかの実施形態では、エバポレーション後の残留する揮発性の含有物（水及びエタノール）は約３％ｗ／ｗ以下である。というのも、このことが、残留するエタノール及び水があとの濃縮工程で脂質の分離に悪影響を及ぼす可能性を最小にする可能性があるからである。さらなる実施形態では、残留する揮発性の含有物は、約２．５％ｗ／ｗ以下、又は約２．０％ｗ／ｗ以下、又はａ約１．５％ｗ／ｗ以下、又は約１．０％ｗ／ｗ以下、又は約０．５％ｗ／ｗ未満、又は約０．３％ｗ／ｗ未満、又は約０．１％ｗ／ｗ未満である。
【００７９】
この段階で、エバポレーション後、非極性脂質成分の存在のため、オイルはまだ流体であり、例えばリン脂質及び／又はオメガ−３脂肪酸の含有量について簡単に分析することができる。これは重要である。というのも、所望の濃縮度、従って以下の工程で成し遂げられる最終のオイルのリン脂質含有量を算出するために、正確な分析が必要とされるからである。特に、最終の高リン脂質含有量が所望される場合、過剰濃縮（すなわち、非極性脂質のさらなる除去）は、たとえ小さな差であっても、過大な粘度に起因する処理の問題につながる可能性がある。エバポレーション後のオイルは、任意に、中間生成物槽へ移した後に、均一性を確保するために十分に混合することができる。任意に、このオイルは、分析のための流体で均一な材料を維持するのを助けるために、穏やかに加熱されてもよい（例えば約６０℃以下又は５５℃、又は約５０℃又は約４５℃、又は約４０℃、又は約３５℃、又は約３０℃、又は約２５℃の温度）。第１工程ＣＯ２／ＥｔＯＨ抽出により得られる未濃縮オイルの、これまでに論じられた先行技術の方法で使用される第１工程のバルク固体バイオマスと比べてより低い粘性は、いくつかの実施形態では、有利にもより正確な組成分析を可能にする可能性がある。というのも、バルク（全体）の均一性がより容易に成し遂げられうるからである。いくつかの実施形態では、このことは、有利にも、後の非極性脂質の選択的抽出においてリン脂質の過剰濃縮を回避、最小化又は別の態様で低減する可能性がある。リン脂質の過剰濃縮は、それが回避、最小化又は低減されないと、望ましくないほどに粘性が高い又は移動できない固体生成物を生じる可能性がある。
【００８０】
当該方法の第２工程は、第１工程で得られたオイルからの非極性（トリグリセリド）脂質の好ましい又は選択的な抽出を伴う。第１抽出工程により得られる未濃縮オイルが中間体槽に移された場合、その未濃縮オイルは上記抽出設備に戻される。このオイルは、非極性（トリグリセリド）脂質を選択的に抽出するために、ＣＯ２抽出に、いくつかの好ましい実施形態では、超臨界状態の、例えば約３００ｂａｒ（３０ＭＰａ）以上及び約６０℃でのＣＯ２抽出にさらに供される。いくつかの実施形態では、この抽出は、より低い圧力で開始することができ、次いで圧力は、漸増的に所望のレベル（例えば約３００ｂａｒ（３０ＭＰａ））まで上昇させることができる。非極性（トリグリセリド）脂質は、着実に抽出することができ、これにより、要求される組成目標、例えば少なくとも約５０％ｗ／ｗのリン脂質含有量、又は少なくとも約５５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約６０％ｗ／ｗ、リン脂質又は少なくとも約６５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約７０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約７５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約８０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約８５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９７％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９８％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９９％ｗ／ｗのリン脂質が成し遂げられるまで、残りの抽残物を濃縮することができる。
【００８１】
いくつかの実施形態では、要求される量の非極性脂質が抽出されて、所望のレベルのリン脂質濃縮が達成されると、その抽出容器を部分的に除圧することで、残留圧力が、今回濃縮され（そしてより粘性が高い）抽残物の排出を必要に応じて支援することが可能になる。濃縮された高粘度のオイルの排出は、まだ部分的に加圧されている抽出装置からの排出により、より大きな程度起こりやすくなる可能性がある。このようにして、極度に粘性が高い材料を以降のブレンド及び処方のために移すことができる。
【００８２】
１以上の実施形態では、当該方法は、半連続処理を可能にし、他の抽出容器が稼動し続けている間、個々の抽出容器が一度に１つだけだが連続ローテーションで交代される。このようにして、複数の抽出装置のバッチを変更するために停止することが回避されてもよい。
【００８３】
他の実施形態では、本明細書に記載される第２工程は、少なくとも約５０％ｗ／ｗのリン脂質含有量を有するクリルオイルを得るために、約５０％ｗ／ｗ未満のリン脂質含有量を有する任意のクリルオイルのリン脂質含有量を高めるために使用することができる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、出発のクリルオイルは、約４５％ｗ／ｗ以下、又は約４０％ｗ／ｗ以下、又は約３５％ｗ／ｗ以下、又は約３０％ｗ／ｗ以下、又は約２５％ｗ／ｗ以下、又は約２０％ｗ／ｗ以下、又は約１０％ｗ／ｗ以下のリン脂質含有量を有する。いくつかの実施形態では、最終の濃縮後のオイルは、少なくとも約５５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約６０％ｗ／ｗのリン脂質又は少なくとも約６５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約７０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約７５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約８０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約８５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９０％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９５％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９７％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９８％ｗ／ｗのリン脂質、又は少なくとも約９９％ｗ／ｗのリン脂質のリン脂質含有量を有してもよい。
【００８５】
いくつかの実施形態では、濃縮クリルオイルは、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の最終水分含有量を有する。いくつかの実施形態では、このクリルオイルは、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の残留抽出溶媒含有量を有する。さらなる実施形態では、このクリルオイルは、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の水分含有量を有し、約５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下の残留抽出溶媒含有量を有する。なおさらなる実施形態では、濃縮後のクリルは、５％ｗ／ｗ以下、又は約４％ｗ／ｗ以下、又は３％ｗ／ｗ以下、又は２％ｗ／ｗ以下又は１．５％ｗ／ｗ以下、又は１％ｗ／ｗ以下、又は０．５％ｗ／ｗ以下、又は０．３％ｗ／ｗ以下、又は０．１％ｗ／ｗ以下の残留溶媒（水及びエタノール）含有量を有する。
【００８６】
さらなる他の実施形態では、最終の濃縮クリルオイルは、少なくとも約６０％ｗ／ｗリン脂質のリン脂質含有量、及び約３％ｗ／ｗ以下の残留溶媒含有量を有する。
【００８７】
本明細書に記載されるクリルオイルに関する他の実施形態も、本開示の方法により製造されるクリルオイルに、適宜、適用されてよい。
【００８８】
以下の実施例は、本開示のいくつかの実施形態を説明する目的で提供され、本明細書中にこれまで記載された一般性を限定することは意図されていない。
【実施例】
【００８９】
実施例１  −  ６２％ｗ／ｗリン脂質のクリルオイルの調製
１．オキアミ粉末からのクリルオイルの抽出
オキアミ粉末を、ＣＯ２／エタノール（エタノール：オキアミ粉末の供給比は約３．０〜３．５：１ｗ／ｗ）を用い、約１７〜２２％ｗ／ｗの範囲のエタノール質量分率、６０℃の温度及び３００ｂａｒ（３０ＭＰａ）の圧力で抽出した。このエタノール／ＣＯ２段階抽出は継続時間が１０〜１５時間であった。抽出油／ＣＯ２／ＥｔＯＨ混合物を４５ｂａｒ（４．５ＭＰａ）の圧力及び２５℃で分離した。
【００９０】
この方法により得られた数バッチのオイルをブレンドして、極性成分及び非極性極性成分の両方を含有し、約４２％のリン脂質含有量を有するクリルオイルを得た（下記表１−１参照）。
【００９１】
【表１．１】
2021507872.tif 000003
【００９２】
２．工程１から得たクリルオイルからのトリグリセリドの選択的抽出
５．９ｋｇの供給クリルオイル（上記表１−１に示す組成を有する）を１つの１０．７Ｌ抽出容器（直径１５５ｍｍ）に直接投入した。この供給材料を、ＣＯ２を用いて６０℃の温度及び３００ｂａｒ（３０ＭＰａ）の圧力で抽出した。
【００９３】
ほぼトリグリセリドを含有するエキスを回収し、このエキスは、抽出容器に投入した供給クリルオイルよりも顕著に粘性が低かった。
【００９４】
抽出した物質の全質量が抽出できる物質の理論量の９７％に到達すると、抽出容器の除圧プロセスを開始した。上記設備を、一定のランプ速度で１５分間にわたって３００ｂａｒ（３０ＭＰａ）から１００ｂａｒ（１０ＭＰａ）まで除圧し、ＣＯ２循環は続けたが抽出流量の５０％であった。この間、抽出装置への出口で測定した温度は、６０℃の稼動温度から５０℃へ低下した。次にこの抽出装置を、ポンプを稼動させずに、さらに１５分間にわたって１００ｂａｒ（１０ＭＰａ）から７５ｂａｒ（７．５ＭＰａ）へとさらに除圧した。その後、この分離容器の内容物を空にした。
【００９５】
抽出容器がまだ処理温度及び７５ｂａｒ（７５ＭＰａ）の圧力にある間に、この容器からその濃縮クリルオイル内容物を抽出装置の容器の基部から抽残物表面レベより十分下まで出し、これにより高圧ＣＯ２のロスを回避し、抽残オイルを排出した。濃縮後のオイルの回収には約１時間かかり、その間、抽出容器中の残りのＣＯ２が膨張してかつて抽残オイルによって占められていた空間を占めるにつれて、容器の圧力は７５ｂａｒ（７．５ＭＰａ）から５４ｂａｒ（５．４ＭＰａ）まで低下した。
【００９６】
濃縮後のオイルの排出が終了すると、いくらかの濃縮クリルオイルが抽出容器の中に、容器の分配器及び底に残っていることが観察され、これは濃縮後のオイルの全質量の２％未満にあたると見積もられた。商業スケールでは、そのような残っているオイルがあればそれは、その抽出装置用の以降のクリルオイルバッチへと回収される。
【００９７】
アスタキサンチン及びリン脂質の分析に先だって、この濃縮後のオイルを、オーブン中、５５℃で１時間加熱した。これにより、試料には、分析用の均質な試料を得るために、撹拌するために十分に流動性があるようになった。
【００９８】
表１−２は、供給油、抽出油及び濃縮油について質量、並びにリン脂質（ＰＬ）及びアスタキサンチン（Ａｓｔａ）の含有量をまとめる。ごく少量のリン脂質（＜１ｇ／１００ｇエキス）及びアスタキサンチン（＜２ｍｇ／１００ｇエキス）が同時に抽出された。全体では、濃縮プロセスから得たエキスの質量は、６２％リン脂質までの濃縮用に必要とされた理論エキスの９８％であった。
【００９９】
【表１．２】
2021507872.tif 000004
【０１００】
表１−３及び表１−４は、濃縮後のオイルの組成含有量をまとめる。
【０１０１】
【表１．３】
2021507872.tif 000005
【０１０２】
【表１．４】
2021507872.tif 000006
2021507872.tif 000007
【０１０３】
実施例２
【０１０４】
ムール貝脂質エキスを国際公開第９７／０９９９２号パンフレットに従って調製し、ＰＣＳＯ−５２４（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｌｉｎｋ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、香港）の形態で使用した。クリルオイルを実施例１の方法により調製し、このクリルオイルは上記表１−３及び表１−４に示した組成含有量を有していた。
【０１０５】
試料調製
新鮮な試料を毎日調製した。この試料をサンプリング前に反転させて混合した。この試料を１．５ｍＬ遠心管の中に秤量し、エタノールで１００ｍｇ／ｍＬにしてストック（原液）を調製した。上記オイルを正しい比で秤量し次いでエタノールで濃度調整することによりこのストック混合物を調製した。この原液の段階希釈をエタノール中で行った。次にこの段階希釈物を細胞培地中で希釈し（１対１００）、その後、最終１対１０希釈物で細胞（三重）に加えた。これにより、すべての投薬及び対照について０．１％のエタノール濃度となった。クリルオイルはおよそ６２％ｗ／ｗのリン脂質を含有していた。ムール貝脂質エキスをＰＣＳＯ−５２４（登録商標）の形態で使用した。
【０１０６】
結果を提示する際に使用する略語を下記表２−１に示す。
【０１０７】
【表２．１】
2021507872.tif 000008
【０１０８】
アッセイ
標準的な細胞培地中で培養し異なる試験化合物／エキス及び陽性対照の存在下又は不存在下でＬＰＳ及びＩＦＮγと共にインキュベーションした、リポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦＮγ）で刺激したマウスマクロファージ、ＲＡＷ２６４．７細胞の中で消炎活性を決定した。ＮＯ、ＰＧＥ２及びＬＴＢ４、サイトカイン、ＴＮＦα及びＩＬ−６を含めた炎症メディエーターの産生を、市販のキットを使用して、確立された方法によって測定した。各試料を、少なくとも３つの濃度で（３つの複製物を使用し、最大濃度は１００μｇ／ｍｌであった）（ｎ＝９）、関連する内部対照とともに試験した（表２−２）。各試料の細胞毒性もＭＴＴアッセイにより決定した。試験したいずれの濃度に対しても細胞毒性を検出しなかった。
【０１０９】
各アッセイに対するアッセイパラメータを表２−２にまとめる。手短に言えば、消炎アッセイを実施するために、上記培養したＲＡＷ２６４．７細胞をカウントし、９６穴プレートにプレーティングし（０．８×１０５細胞／ウェル）、示したプレーティング時間にわたりインキュベーションした。次にこの培地を吸引し、新しい培地に置換し、続いて試験化合物を加えた。この化合物を刺激薬の添加に先だって１時間インキュベーションした。次にこのプレートを４〜１８時間インキュベーションし、上清を注目するメディエーターについて分析し、残っている細胞の生存率をＭＴＴによって求めた。
【０１１０】
陽性対照は、類似のアッセイにおけるその幅広い使用に基づいて選択し、Ｎ−（３−（アミノメチル）ベンジル）アセトアミジン（１４００Ｗ）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の時間依存的な強い結合阻害剤（Ｇａｒｖｅｙ，Ｅ．Ｐ．ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９９７，２１：２７２（８）：４９５９−６３、及び一般に使用されるサイトカイン阻害剤であるデキサメタゾンを含んでいた。ジクロフェナクは、一般的な非ステロイド系消炎剤であり、ＰＧＥ２を産生するシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の公知の阻害剤である。
【０１１１】
【表２．２】
2021507872.tif 000009
【０１１２】
結果
１．一酸化窒素アッセイ
ＮＯは、ラジカル代謝産物であり、シグナル伝達分子として及び炎症における毒剤として数多くの生理学的機能を有することが示されている（Ｃｏｌｅｍａｎ、２００１）。ＮＯは、３種の一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）、もともとマウスマクロファージにおいて記載された構成型、神経型ＮＯＳ及び血管内皮型ＮＯＳ、及び誘導型、ｉＮＯＳ（Ｎａｔｈａｎ  ＆  Ｘｉｅ，１９９４；Ｓｔｕｅｈｒ  ＆  Ｍａｒｌｅｔｔａ，１９８５）、によるＬ−アルギニンの酸化に由来する。誘導型は、ひとたび発現すると頻繁に活性化され、それゆえＬＰＳ及びＩＦＮ−γのような炎症性分子によって刺激されるＮＦ−κＢによって転写レベルで制御される。ｉＮＯＳによるＮＯの産生は、ＮＯがはるかに高い（ｎＭ）持続レベルで産生されるまでに数時間の遅延時間を経験する（Ｎａｔｈａｎ  ＆  Ｘｉｅ，１９９４）。ＮＯＳの誘導型は、炎症に関係づけられる可能性が最も高く、産生されるＮＯのレベルがより高いため、インビトロでより簡単に評価される。
【０１１３】
ＮＯは、珍しいシグナル伝達分子である。ＮＯに対する特異的な細胞表面受容体が存在しないため、ＮＯは無差別に細胞に侵入するが、その効果は細胞型及びＮＯ濃度に依存し、従って広い範囲の生理的反応を生み出す。ＮＯは、血管透過性の向上、血管拡張、及び組織の損傷を引き起こし病原体を取り除くラジカルの発生を引き起こす（Ｇｕｚｉｋ，Ｋｏｒｂｕｔ，  ＆  Ａｄａｍｅｋ−Ｇｕｚｉｋ，２００３）。これらの生理的変化は、血流の増加を伴う炎症に関連し、より多くの免疫細胞が冒された組織に侵入し、これによりその病原体を破壊することを可能にする。
【０１１４】
上記ＮＯ阻害アッセイについての結果を図１Ａ及び図１Ｂ並びに表２−３に示す。
【０１１５】
【表２．３】
2021507872.tif 000010
【０１１６】
２．腫瘍壊死因子−α
ＴＮＦαは、主に急性期炎症反応に関与する細胞シグナル伝達タンパク質（サイトカイン）である。マクロファージがＴＮＦαの主要な供給源であるが、ＴＮＦαは、ＣＤ４＋リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、マスト細胞、好酸球、及び神経細胞等の多くの他の細胞型によって放出されうる。ＴＮＦαはＭＡＰＫ及びＮＦ−κＢの活性化によって産生される。ＴＮＦαは、それ自身の産生及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）等の他の炎症性サイトカインの産生を増加させるように作用する。ＴＮＦαは、熱感、アポトーシス細胞死、悪液質、炎症を誘導し、腫瘍形成及びウイルス複製を阻害する。ＴＮＦαは、敗血症、外傷性障害、虚血、喘息、熱傷、過敏性腸症候群、アルツハイマー病、癌、大うつ病、関節炎及び多発性硬化症を含む多くの病状に関係づけられている（Ｃａｉｒｎｓ，Ｐａｎａｃｅｋ，Ｈａｒｋｅｎ，  ＆  Ｂａｎｅｒｊｅｅ、２０００；Ｄｏｗｌａｔｉら、２０１０；Ｓｗａｒｄｆａｇｅｒら、２０１０）。
【０１１７】
上記ＴＮＦα阻害アッセイについての結果を図２Ａ及び図２Ｂ並びに表２−４に示す。
【０１１８】
【表２．４】
2021507872.tif 000011
【０１１９】
３．インターロイキン−６
ＴＮＦαのように、ＩＬ−６は炎症促進性サイトカインと考えられている。ＩＬ−６は、Ｔ細胞及びマクロファージにより分泌され、免疫応答を刺激する。ＩＬ−６は、骨髄中での好中球の産生の増加を担う。ＩＬ−６はＢ細胞の成長を支え、Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞への分化に対して拮抗性がある。ＩＬ−６は、血液脳関門を通過し、視床下部でＰＧＥ２の合成を開始し、これにより体温の設定温度（セットポイント）を変えることができる（Ｂａｎｋｓ，Ｋａｓｔｉｎ，  ＆  Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ、１９９４）。
【０１２０】
ＩＬ−６阻害アッセイについての結果を図３Ａ及び図３Ｂ並びに表２−５に示す。
【０１２１】
【表２．５】
2021507872.tif 000012
【０１２２】
４．プロスタグランジンＥ２
プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、酵素シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の作用によりアラキドン酸（ＡＡ）から産生される脂質メディエーターの１つであり、発熱、疼痛感覚及び炎症を誘導することに関与する。アスピリン及び非ステロイド性消炎薬（ＮＳＡＩＤＳ）はプロスタノイド（ＰＧＥ２を含む）の生合成を阻害し、解熱、鎮痛及び消炎の効果をもたらす（Ｋａｗａｈａｒａ，Ｋ．ら、２０１５、及びＫａｗａｂａｔａ，Ａ．，２０１１）。
【０１２３】
結果を図４Ａ及び図４Ｂ並びに表２−６に示す。
【０１２４】
【表２．６】
2021507872.tif 000013
【０１２５】
結果のまとめ
ムール貝脂質エキス及びクリルオイルは、ＮＯ、ＴＮＦα及びＩＬ−６を個々に阻害するが、ＰＧＥ２を阻害しないことが、試験した濃度のこのアッセイ系で明らかになった。
【０１２６】
ムール貝脂質エキス及びクリルオイルの当該組み合わせは、ＮＯ、ＴＮＦα及びＩＬ−６を阻害することにおいて、ムール貝脂質エキス又はクリルオイルのいずれか単独よりも有効であった。ＰＧＥ２アッセイでは、ムール貝脂質エキスもクリルオイルも単独では阻害活性を示さなかったが、組み合わせると阻害を示した。
【０１２７】
実施例３  −  相乗効果
ムール貝脂質エキスを国際公開第９７／０９９９２号パンフレットに従って調製し、ＰＣＳＯ−５２４（登録商標）の形態で使用した。クリルオイルを実施例１の方法により調製し、このクリルオイルは上記表１−３及び表１−４に示した組成含有量を有していた。
【０１２８】
試料、調製及び組み合わせ
ＰＣＳＯ−５２４（登録商標）のストック試料及び高リン脂質クリルオイルを、実験のサンプリング前に反転により混合した。この試料を１５ｍＬ遠心管の中に秤量し、エタノールで１００ｍｇ／ｍＬにしてストックを調製した。この混合物を、希釈オイルを正しい比で混合することにより調製した。段階希釈をエタノール中で行った。次にこの段階希釈物を細胞培地中で希釈し（１対１００）、その後、最終１対１０希釈物で細胞（三重に）に加えた。これにより、すべての投薬及び対照について０．１％のエタノール濃度となった。これらの用量を毎日新鮮に調製した。表３−１は、各試料に対して使用した略語を示す。
【０１２９】
【表３．１】
2021507872.tif 000014
【０１３０】
アッセイ
標準的な細胞培地（ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清５％）中で培養し異なる試験化合物／エキス及び対照の存在下又は不存在下でインキュベーションしたリポ多糖（ＬＰＳ）及びインターフェロンγ（ＩＦＮγ）で刺激したマウスマクロファージ、ＲＡＷ２６４．７細胞の中で消炎活性を決定した。ＮＯ、サイトカイン、ＴＮＦα及びＩＬ−６を含めた炎症メディエーターの産生を、市販のＥＬＩＳＡキット（表３−２に列挙した供給業者）を使用して、確立された方法によって測定した。各試料を、少なくとも６つの濃度で（３つの複製物を使用し、最大濃度は１００μｇ／ｍＬであった）（ｎ＝９）、関連する内部対照（表３−２に示す）とともに試験した。試験した各試料の細胞毒性を、ＭＴＴアッセイにより決定した。試験したいずれの濃度に対しても細胞毒性は検出されなかった。
【０１３１】
各アッセイに対するアッセイパラメータを表３−２にまとめる。手短に言えば、ＮＯ、ＴＮＦα及びＩＬ−６のアッセイのために、培養したＲＡＷ２６４．７細胞をカウントし、９６穴プレートにプレーティングし（０．８×１０５細胞／ウェル）、４８時間インキュベーションした。次にこの培地を吸引し、新しい培地に置換し、続いて試験化合物を加えた。この化合物を刺激薬の添加に先だって１時間インキュベーションした。次にこのプレートを１８時間インキュベーションし、上清を注目するメディエーターについて分析し、残っている細胞の生存率をＭＴＴによって求めた。
【０１３２】
陽性対照は、類似のアッセイにおけるその幅広い使用に基づいて選択し、Ｎ−（３−（アミノメチル）ベンジル）アセトアミジン（１４００Ｗ）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の時間依存的な強い結合阻害剤（Ｇａｒｖｅｙら、１９９７）、及び一般に使用されるサイトカイン阻害剤であるデキサメタゾンを含んでいた。
【０１３３】
【表３．２】
2021507872.tif 000015
【０１３４】
相乗作用の算出
相乗作用は併用効果（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）として表される。相乗作用併用効果（ＣＩ）及びアイソボログラムＩＣ５０加重値を、Ｃｏｍｐｓｙｎソフトウェアを使用して算出した。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍで生成した用量反応曲線をその曲線を代表する１０点に変換した。次にこれらの１０点をそれらのデータポイントにフィットするための曲線を生成するＣｏｍｐｓｙｎプログラムに入力した。この方法は、完全な用量反応曲線をその相乗作用プログラムで忠実に複製するために好ましかった。次にＣｏｍｐｓｙｎフィット曲線を相乗作用の算出のために使用した。試験した範囲にわたる相乗作用におけるパターンは、アイソボログラムを用いて観察することができ、アイソボログラムは、ＩＣ５０で活性に対する各成分の相対的な寄与をプロットする。ブレンドされた２つの薬物の間に引かれた直線がある（Ｂｉａｖａｔｔｉ、２００９）。その線の下の値は相乗作用を示し、線上の値は相加的と考えられ、線より上の値は拮抗的である。
【０１３５】
結果
１．一酸化窒素アッセイ
上記組み合わせが炎症性シグナル伝達分子ＮＯに対して相乗的な阻害を示すか否かを判定するために、それらをアッセイした。まず、上記組み合わせを１０％増分で試験した。観察した最も活性な組み合わせはＬＹ６０であった。さらに次に、ＬＹ６０の周辺で５％増分を試験した。
【０１３６】
試験した組み合わせＬＹ９０〜ＬＹ１０の用量反応曲線を図５Ａ、図５Ｂ、図６Ａ及び図６Ｂに示す。ＮＯ阻害に対するＩＣ５０値及び併用効果を表３−３及び表３−４に提示する。１未満の併用効果は相乗作用を示す。１０％増分についてのアイソボログラムを図７に示す。
【０１３７】
【表３．３】
2021507872.tif 000016
【０１３８】
【表３．４】
2021507872.tif 000017
【０１３９】
２．ＴＮＦαアッセイ
上記組み合わせが炎症性サイトカインＴＮＦαに対して相乗的な阻害を示すか否かを判定するために、それらをアッセイした。まず、上記組み合わせを１０％増分で試験した。観察した最も活性な組み合わせはＬＹ５０であった。さらに次に、ＬＹ５０の周辺で５％増分を試験した。
【０１４０】
試験した組み合わせＬＹ９０〜ＬＹ１０の用量反応曲線を図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図９Ａ及び図９Ｂに示す。ＴＮＦα阻害に対するＩＣ５０値及び併用効果を表３−５及び表３−６に提示する。１未満の併用効果は相乗作用を示す。１０％増分についてのアイソボログラムを図１０に示す。
【０１４１】
【表３．５】
2021507872.tif 000018
【０１４２】
【表３．６】
2021507872.tif 000019
【０１４３】
３．ＩＬ−６アッセイ
上記組み合わせが炎症性サイトカインＩＬ−６に対して相乗的な阻害を示すか否かを判定するために、それらをアッセイした。まず、上記組み合わせを１０％増分で試験した。観察した最も活性な組み合わせはＬＹ６０であった。さらに次に、ＬＹ６０の周辺で５％増分を試験した。
【０１４４】
試験した組み合わせＬＹ９０〜ＬＹ１０の用量反応曲線を図１１Ａ、図１１Ｂ、図１２Ａ及び図１２Ｂに示す。ＩＬ−６阻害に対するＩＣ５０値及び併用効果を表３−７及び表３−８に提示する。１未満の併用効果は相乗作用を示す。１０％増分についてのアイソボログラムを図１３に示す。
【０１４５】
【表３．７】
2021507872.tif 000020
【０１４６】
【表３．８】
2021507872.tif 000021
【０１４７】
結果のまとめ
組み合わせて使用したムール貝脂質エキス及びクリルオイルは、ＮＯ、ＴＮＦα及びＩＬ−６を阻害することにおいて、相乗作用についての数学的基準を満たすことがこのアッセイ系で明らかになった。
【０１４８】
実施例４  −  患者研究
様々な疼痛／炎症状態に罹患している患者に、ムール貝脂質エキス（ＰＣＳＯ−５４２の形態で）及びクリルオイル（６１％ＰＬ）のＰＣＳＯ−５４２：クリルオイルが７５：２５の比の組み合わせを、カプセル形態で投与した。そのカプセルの組成を表４−１に提示する。
【０１４９】
【表４．１】
2021507872.tif 000022
【０１５０】
投薬量は、通常、１回、２回又は３回の投薬での１日あたり２〜８カプセルの範囲であった。上記組み合わせを用いた処置を開始するのに先だって、患者は、典型的には、疼痛を抑えるためにパラセタモール又はイブプロフェンを含めた１種以上のＮＳＡＩＤＳを服用していた。結果を表４−２に示す。
【０１５１】
【表４．２】
2021507872.tif 000023
2021507872.tif 000024
2021507872.tif 000025
2021507872.tif 000026
【０１５２】
参考文献
Ｂｉａｖａｔｔｉ，Ｍ．Ｗ．（２００９）．  Ｓｙｎｅｒｇｙ：ａｎ  ｏｌｄ  ｗｉｓｄｏｍ，ａ  ｎｅｗ  ｐａｒａｄｉｇｍ  ｆｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，４５（３），３７１−３７８
Ｃａｉｒｎｓ，Ｃ．Ｂ．，Ｐａｎａｃｅｋ，Ｅ．Ａ．，Ｈａｒｋｅｎ，Ａ．Ｈ．，  ＆  Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ａ．（２０００）．  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  ｂｅｄｓｉｄｅ：Ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ：Ｆｒｏｍ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７（８），９３０−９４１
Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｊ．Ｗ．（２００１）．  Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，１（８），１３９７−１４０６
Ｄｏｗｌａｔｉ，Ｙ．，Ｈｅｒｒｍａｎｎ，Ｎ．，Ｓｗａｒｄｆａｇｅｒ，Ｗ．，Ｌｉｕ，Ｈ．，Ｓｈａｍ，Ｌ．，Ｒｅｉｍ，Ｅ．Ｋ．，  ＆  Ｌａｎｃｔｏｔ，Ｋ．Ｌ．（２０１０）．  Ａ  Ｍｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｍａｊｏｒ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，６７（５），４４６−４５７．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｐｓｙｃｈ．２００９．０９．０３３
Ｇａｒｖｅｙ，Ｅ．Ｐ．，Ｏｐｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｆｕｒｆｉｎｅ，Ｅ．Ｓ．，Ｋｉｆｆ，Ｒ．Ｊ．，Ｌａｓｚｌｏ，Ｆ．，Ｗｈｉｔｔｌｅ，Ｂ．Ｊ．Ｒ．，  ＆  Ｋｎｏｗｌｅｓ，Ｒ．Ｇ．（１９９７）．  １４００Ｗ  ｉｓ  ａ  ｓｌｏｗ，  ｔｉｇｈｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ，  ａｎｄ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｎｉｔｒｉｃ−ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７２（８），４９５９−４９６３
Ｇｕｚｉｋ，Ｔ．Ｊ．，Ｋｏｒｂｕｔ，Ｒ．，  ＆  Ａｄａｍｅｋ−Ｇｕｚｉｋ，Ｔ．（２００３）．  Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ａｎｄ  ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，５４（４），４６９−４８７
Ｋａｗａｂａｔａ，Ａ．，（２０１１）．  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２  ａｎｄ  Ｐａｉｎ  −  Ａｎ  Ｕｐｄａｔｅ．  Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ，３４（８），１１７０−１１７３
Ｋａｗａｈａｒａ，Ｋ．（２０１５）．  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１８５１（４），４１４−４２１
Ｎａｔｈａｎ，Ｃ．，  ＆  Ｘｉｅ，Ｑ．Ｗ．（１９９４）．  Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅｓ：  ｒｏｌｅｓ，ｔｏｌｌｓ，  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ．  Ｃｅｌｌ，７８（６），９１５−９１８
Ｓｉｎｃｌａｉｒ，Ａ．Ｊ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｋ．Ｊ．  ａｎｄ  Ｌｉ，Ｄ．（２０００）  Ｍａｒｉｎｅ  ｌｉｐｉｄｓ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ”ｎｅｗｓ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ａｎｄ  ｌｉｐｉｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｙｐｒｉｎｏｌ”．  Ａｌｌｅｒｇ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（Ｐａｒｉｓ）３２（７），２６１−２７１
Ｓｔｕｅｈｒ，Ｄ．Ｊ．，  ＆  Ｍａｒｌｅｔｔａ，Ｍ．Ａ．（１９８５）．  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｎｉｔｒａｔｅ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｍｏｕｓｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ｎｉｔｒｉｔｅ  ａｎｄ  ｎｉｔｒａｔｅ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２（２２），７７３８−７７４２
Ｓｗａｒｄｆａｇｅｒ，Ｗ．，Ｌａｎｃｔｏｔ，Ｋ．，Ｒｏｔｈｅｎｂｕｒｇ，Ｌ．，Ｗｏｎｇ，Ａ．，Ｃａｐｐｅｌｌ，Ｊ．，  ＆  Ｈｅｒｒｍａｎｎ，Ｎ．（２０１０）．  Ａ  Ｍｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，６８（１０），９３０−９４１
【図１Ａ】
2021507872.tif 000027
【図１Ｂ】
2021507872.tif 000028
【図２Ａ】
2021507872.tif 000029
【図２Ｂ】
2021507872.tif 000030
【図３Ａ】
2021507872.tif 000031
【図３Ｂ】
2021507872.tif 000032
【図４Ａ】
2021507872.tif 000033
【図４Ｂ】
2021507872.tif 000034
【図５Ａ】
2021507872.tif 000035
【図５Ｂ】
2021507872.tif 000036
【図６Ａ】
2021507872.tif 000037
【図６Ｂ】
2021507872.tif 000038
【図７】
2021507872.tif 000039
【図８Ａ】
2021507872.tif 000040
【図８Ｂ】
2021507872.tif 000041
【図８Ｃ】
2021507872.tif 000042
【図９Ａ】
2021507872.tif 000043
【図９Ｂ】
2021507872.tif 000044
【図１０】
2021507872.tif 000045
【図１１Ａ】
2021507872.tif 000046
【図１１Ｂ】
2021507872.tif 000047
【図１２Ａ】
2021507872.tif 000048
【図１２Ｂ】
2021507872.tif 000049
【図１３】
2021507872.tif 000050
【国際調査報告】
2021507872.tif 000051
2021507872.tif 000052
2021507872.tif 000053
2021507872.tif 000054
2021507872.tif 000055
2021507872.tif 000056
2021507872.tif 000057