(57)【要約】  担体が、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固形物体を含み、固形物体が少なくとも１つのカチオン部分を含む、非水性ＤＮＡ複合分子反応において使用するための固体担体。【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体が複数のポリエチレングリコール単位から形成される固形物体を含み、前記固形物体が少なくとも１つのカチオン部分を含む、非水性ＤＮＡ共役分子反応に使用するための固体担体。
【請求項２】
前記カチオン部分が四級アンモニウム基又はグアニジウム基を含む、請求項１に記載の固体担体。
【請求項３】
前記カチオン部分が、下記に定義される式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの化合物、
（Ｉ）式Ｉ：
【化１】
2021523901.tif 000036
（式中、
物体は、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固体担体であり；
Ｒは、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖；鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルケニレン鎖；或いは鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素三重重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルキニレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）の化合物；或いは
（ＩＩ）式ＩＩ：
【化２】
2021523901.tif 000037
｛式中、
物体及びＲは、それぞれ前記で定義された通りであり；
Ｒ１０は、ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；５〜１０員複素環又はＲ１１であり；
ｎは２〜１２の整数であり；
Ｒ１２は、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；且つ
Ｒ６及びＲ１１は、それぞれ独立して、
式ＩＩａ：
【化３】
2021523901.tif 000038
（式中、ｍは０〜８の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記で定義された通りである）を有する基；
或いは
式ＩＩｂ：
【化４】
2021523901.tif 000039
（式中、ｍは前記で定義された通りである）を有する基；
或いは
式−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＲ７
［式中、ｑは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ７は、式ＩＩｃ：
【化５】
2021523901.tif 000040
（式中ｐは１〜１２の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記で定義された通りである）を有する基である］を有する基
である｝の化合物；或いは
（ＩＩＩ）式ＩＩＩ：
【化６】
2021523901.tif 000041
［式中、
物体、Ｒ及びＹは、それぞれ前記で定義された通りであり；
ｒは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ８は、式ＩＩＩａ
【化７】
2021523901.tif 000042
（式中、Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｓは１〜６の整数であり；
Ｒ７は前記で定義された通りであり；且つ
Ｒ９はＨ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである）を有する基であるか、
或いは
Ｒ８は、式ＩＩＩｂ
【化８】
2021523901.tif 000043
（式中、
Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｔは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ９は前記で定義された通りである）を有する基である］の化合物
である、請求項１又は２に記載の固体担体。
【請求項４】
前記カチオン部分が、下記に定義される式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの化合物、
（Ｉ）式Ｉ：
【化９】
2021523901.tif 000044
（式中、
物体は、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固体担体であり；
Ｒは、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；
Ｘは、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖；鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルケニレン鎖；或いは鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素三重重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルキニレン鎖であり；
ＹはＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）による化合物；或いは
（ＩＩ）式ＩＩ：
【化１０】
2021523901.tif 000045
｛式中、
物体及びＲは、それぞれ前記で定義された通りであり；
Ｒ１０は、ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；５〜１０員複素環又はＲ１１であり；
ｎは２〜１２の整数であり；
Ｒ１２は、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；且つ
Ｒ６及びＲ１１は、それぞれ独立して、
式ＩＩａ：
【化１１】
2021523901.tif 000046
（式中、ｍは０〜８の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記で定義された通りである）を有する基；
或いは
式ＩＩｂ：
【化１２】
2021523901.tif 000047
（式中、ｍは前記で定義された通りである）を有する基；
或いは
式−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＲ７
［式中、ｑは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ７は、式ＩＩｃ：
【化１３】
2021523901.tif 000048
（式中ｐは１〜１２の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記で定義された通りである）を有する基である］を有する基
である｝の化合物；或いは
（ＩＩＩ）式ＩＩＩ：
【化１４】
2021523901.tif 000049
［式中、
物体、Ｒ及びＹは、それぞれ前記で定義された通りであり；
ｒは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ８は、式ＩＩＩａ
【化１５】
2021523901.tif 000050
（式中、Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｓは１〜６の整数であり；
Ｒ７は前記で定義された通りであり；且つ
Ｒ９はＨ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである）を有する基であるか、
或いは
Ｒ８は、式ＩＩＩｂ
【化１６】
2021523901.tif 000051
（式中、
Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｔは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ９は前記で定義された通りである）を有する基である］
の化合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項５】
前記カチオン部分が、下記に定義される式Ｉの化合物、
（Ｉ）式Ｉ：
【化１７】
2021523901.tif 000052
（式中、
物体は、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固体担体であり；
Ｒは、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖；鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルケニレン鎖；或いは鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素三重重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルキニレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）
の化合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項６】
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される、
請求項５に記載の固体担体。
【請求項７】
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、フェニル若しくはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキルから独立して選択される、
請求項５又は６に記載の固体担体。
【請求項８】
Ｘ１が、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つ未置換であるＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖である、請求項３又は５〜７のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項９】
Ｘが、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つ未置換であるＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖である、請求項４に記載の固体担体。
【請求項１０】
Ｘ１が、鎖が線形であるか、又は分岐しているＣ１〜Ｃ１０アルキレン鎖である、請求項８に記載の固体担体。
【請求項１１】
Ｘが、鎖が線形であるか、又は分岐しているＣ１〜Ｃ１０アルキレン鎖である、請求項９に記載の固体担体。
【請求項１２】
前記カチオン部分が式ＩＩの化合物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１３】
前記カチオン部分が式ＩＩＩの化合物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１４】
ＲがＨである、請求項３〜１３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１５】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がそれぞれ独立してＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項３〜１４のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１６】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が同一である、請求項１５に記載の固体担体。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がそれぞれメチルである、請求項１６に記載の固体担体。
【請求項１８】
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立して水素及びＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される、請求項３〜７、１４〜１７のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１９】
Ｒ９が水素である、請求項３〜４、１３〜１７のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項２０】
Ｒ１０がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項３〜４、１２、１４〜１７のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項２１】
Ｒ１０がメチルである、請求項２０に記載の固体担体。
【請求項２２】
前記固形物体が架橋されたポリエチレングリコールポリマーから形成される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項２３】
前記固形物体が、式（ＩＶ）のＮｏｖａＰＥＧ樹脂、式（Ｖ）のＰＥＧＡ樹脂又は式（ＶＩ）のＴｅｎｔａＧｅｌ樹脂から形成される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項２４】
前記固形物体が式（ＩＶ）のＮｏｖａＰＥＧ樹脂から形成される、請求項２２又は２３に記載の固体担体。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項に定義される固体担体上へＤＮＡ標識化合物を吸着するステップと、非水性溶媒系中で、担持された前記ＤＮＡ標識化合物を試薬と反応させるステップとを含む、１つ又はそれ以上の非水性溶媒を使用するＤＮＡ複合化合物を反応させる方法。
【請求項２６】
前記固体担体から生成物を放出するステップをさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＤＮＡ複合化合物を担持するための請求項１〜２４のいずれか一項に記載の固体担体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非水性化学反応、例えばＤＮＡコード化ライブラリ（ＤＮＡ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）（ＤＥＬ）を合成するためにＤＮＡ上で、又はＤＮＡの存在下で実行される化学反応での使用のために適切である固体担体、並びに本発明の固体担体上にＤＮＡを吸着するステップと、非水性溶媒系でＤＮＡ標識化合物を試薬と反応させるステップとを含む、これらの固体担体の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡコード化ライブラリ（ＤＮＡ  Ｅｎｃｏｄｅｄ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）（ＤＥＬ）は、それぞれが構造識別子として機能するユニークなＤＮＡ配列に複合化された何十万から何十億もの合成小分子の集合である。合成小分子−ＤＮＡ複合体のこれらの巨大な集合は、親和性選択プロセスによって混合物中でスクリーニングされ、それによって製薬的に関心のある生体分子標的に対するリガンドの発見のための魅力的な手段となる。ＤＥＬの合成のために導入される反応は、典型的に、核酸タグ又はラベルの可溶性及び安定性と適合性のある穏やかな水性条件下での共有化学結合の形成を含む。核酸の可溶化では高い割合の水が典型的に必要とされ、これは、ＤＥＬ合成のために使用される反応における試薬若しくは反応中間体のプロトン化又は試薬加水分解のような副反応を誘発する不可避な結果を有する。これによってＤＥＬ合成のための新規化学的転換の実行は高度に制限され、且つこれらは水の存在下で機能する可能性を有するものに典型的に制限される。これらの反応の多くは、臨床的候補を実現するために有意な最適化を要求し得る制限された薬様特性を有する分子を導く可能性がある、窒素誘導体化化学作用（例えばアミド化、還元アミノ化、スルホニル化、ウレタン化）又はパラジウム媒介クロスカップリング（最も顕著にはＳｕｚｕｋｉクロスカップリング）である。
【０００３】
反応に使用される有機溶媒の割合を増加させるために、固体担体上へＤＮＡ複合分子を固定することは知られている。そのような場合、典型的な担体は、ＤＥＡＥセファロースなどの多糖類担体である。しかしながら、そのような多糖類固体担体は親水性であり、したがって、完全に乾燥させることは実質的に不可能である。そのうえ、そのような固体担体が、有機合成において典型的に使用される全ての有機溶媒と適合性があるわけではない。
【０００４】
現在、水を完全に排除した有機溶媒中でのＤＮＡ複合小分子における反応を実行する方法は、固体担体へのＤＮＡ分子の共有結合に限定される（ＭａｃＣｏｎｎｅｌｌ  Ａ．Ｂ．，Ｐｒｉｃｅ  Ａ．Ｋ．＆Ｐａｅｇｅｌ  Ｂ．Ｍ．Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ  ｆｏｒ  ＤＮＡ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｌｉｂｒａｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．ＡＣＳ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１７（３），１８１−１９２；Ｋｌｉｋａ  Ｓｋｏｐｉｃ  Ｍ．，Ｓａｌａｍｏｎ  Ｈ．，Ｂｕｇａｉｎ  Ｏ．，Ｊｕｎｇ  Ｋ．，Ｇｏｈｌａ  Ａ．，Ｄｏｅｔｓｃｈ  Ｌ．Ｊ．，Ｄｏｓ  Ｓａｎｔｏｓ  Ｄ．，Ｂｈａｔ  Ａ．，Ｗａｇｎｅｒ  Ｂ．，Ｂｒｕｎｓｃｈｗｅｉｇｅｒ  Ａ．Ａｃｉｄ−  ａｎｄ  Ａｕ（Ｉ）−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｈｅｘａｔｈｙｍｉｄｉｎｅ−ＤＮＡ−ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ  ｃｈｉｍｅｒａｓ，ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｅｎｔｒｙ  ｔｏ  ＤＮＡ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  ｉｎｓｐｉｒｅｄ  ｂｙ  ｄｒｕｇ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１７（８），３３５６−３３６１）。これらの例において、固体担体へのＤＮＡの共有結合は、親和性選択実験において固定化された標的に対するライブラリのスクリーニングを防ぐか、又はライブラリ化合物の構造をコード化するためのＤＮＡタグの延長を阻害する。水性環境における大規模な多様なライブラリ合成に対してそのような転換を適応させることは、有意且つコストのかかる課題が依然としてある。重要なことに、この戦略では、ＤＮＡ適合性反応媒体での水の存在と適合し得ない、現代有機化学における進歩を直ちに利用することができない。
【発明の概要】
【０００５】
したがって、現在、ＤＮＡコード化ライブラリ合成の目的のため、無水有機溶媒中でＤＮＡ結合分子において反応を実行するための一般的な実用的な方法はない。
【０００６】
この課題は、水の不在下での化学作用を本質的に可能にするＰＥＧベースの不溶性カチオン担体における可逆的なイオン相互作用によるＤＮＡ結合骨格の非共有結合性吸着によって解決された。担体からの放出はＤＥＬ技術の小型化を可能にする。
【０００７】
本発明の第１の態様によると、非水性ＤＮＡ複合分子反応において使用するための固体担体が提供されるが、上記担体は複数のポリエチレングリコール単位から形成される固形物体を含み、上記固形物体は少なくとも１つのカチオン部分を含む。
【０００８】
本発明の第２の態様において、１つ又はそれ以上の非水性溶媒を使用してＤＮＡ複合化合物を反応させる方法が提供されるが、上記方法は、本発明の固体担体上へＤＮＡ標識化合物を吸着するステップと、非水性溶媒系中で、担持されたＤＮＡ標識化合物を試薬と反応させるステップとを含む。
【０００９】
本発明の第３の態様において、ＤＮＡ複合化合物を担持するための本発明による固体担体の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】式（ＶＩ）を有するペグ化固体ポリマーＴｅｎｔａＧｅｌ（ＲＴＭ）ＸＶ−ＮＨ２樹脂。
【図２】本発明の両親媒性ポリマー担体、並びにここではＣｙ５染料に複合化されたＤＮＡオリゴヌクレオチドの転移及び固定化における使用の化学構造及び略図。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
それらが水性及び有機条件の両方において使用可能であるため、ポリエチレングリコールベース固体樹脂（ＰＥＧベース樹脂）は所望の反応における使用のために適切であることが分かっていた。固体担体は、ＰＥＧベース樹脂の両親媒性の特性、及びカチオン部分により提供される核酸結合能力を含む。カチオン部分は、可逆的な静電的相互作用に核酸を提供する。したがって、ＤＮＡ吸着のために本発明による固体担体を水中で懸濁させ、次いで有機溶媒で洗浄して、疑似有機条件下で固定化されたＤＮＡコード化分子を残すことができる。したがって、本発明による固体担体は、水性及び有機溶媒系の両方において不溶性であり且つさらには不活発であり、ＤＮＡ複合分子を含む非水性化学的転換において使用されてよい。
【００１２】
都合のよいことに、モレキュラーシーブの添加などの既知の乾燥方法の使用によって、担体系から水を実質的に除去することが可能である。
【００１３】
乾燥固定化されたＤＮＡコード化分子は、以前は不可能であった非水性反応を受けることができる。
【００１４】
本発明の実施形態において、カチオン部分としては、四級アンモニウム基又はグアニジウム基が含まれる。
【００１５】
例えば、カチオン部分は、下記に定義される式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩによる化合物、
（Ｉ）式Ｉ：
【化１】
2021523901.tif 000002
（式中、
物体は、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固体担体であり；
Ｒは、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖；鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルケニレン鎖；或いは鎖が線形であるか、又は分岐しており、１つ又はそれ以上の炭素−炭素三重重結合を含有し、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ２〜Ｃ２０アルキニレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）による化合物；或いは
（ＩＩ）式ＩＩ：
【化２】
2021523901.tif 000003
｛式中、
物体は、上記で定義された通りであり；
Ｒは、上記で定義された通りであり；
Ｒ１０は、ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；５〜１０員複素環又はＲ１１であり；
ｎは２〜１２の整数であり；
Ｒ１２は、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；且つ
Ｒ６及びＲ１１は、それぞれ独立して、
（ａ）式ＩＩａ：
【化３】
2021523901.tif 000004
（式中、ｍは０〜８の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は上記で定義された通りである）を有する基；
或いは
（ｂ）式ＩＩｂ：
【化４】
2021523901.tif 000005
（式中、ｍは上記で定義された通りである）を有する基；
或いは
（ｃ）式−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＲ７
［式中、ｑは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ７は、式ＩＩｃ：
【化５】
2021523901.tif 000006
（式中ｐは１〜１２の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は上記で定義された通りである）を有する基である］を有する基
から選択される｝による化合物；或いは
（ＩＩＩ）式ＩＩＩ：
【化６】
2021523901.tif 000007
［式中、
物体は上記で定義された通りであり；
Ｒは上記で定義された通りであり；
Ｙは上記で定義された通りであり；
ｒは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ８は、式ＩＩＩａ
【化７】
2021523901.tif 000008
（式中、Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｓは１〜６の整数であり；
Ｒ７は上記で定義された通りであり；且つ
Ｒ９はＨ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである）を有する基であるか、
或いは
Ｒ８は、式ＩＩＩｂ
【化８】
2021523901.tif 000009
（式中、
Ｙ’は上記で定義された通りであり；
ｔは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ９は上記で定義された通りである）を有する基である］による化合物
であり得る。
【００１６】
本発明の実施形態において、Ｒ及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、適切にはＲ及びＲ１２は、それぞれ独立して水素である。
【００１７】
本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は同一である。適切には、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＣ１〜Ｃ６アルキルである。本発明のさらに他の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである。
【００１８】
本発明のさらなる実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素及びＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【００１９】
本発明のさらなる実施形態において、Ｒ９は水素である。
【００２０】
さらなる実施形態において、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択的にＣ１〜Ｃ３アルキル、さらに任意選択的にメチレン基である。
【００２１】
さらなる実施形態において、Ｘ１は、線形且つ未置換であるＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖である。
【００２２】
さらなる実施形態において、Ｘ１は、線形且つ未置換であるＣ１〜Ｃ１０アルキレン鎖である。
【００２３】
本発明のさらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数である）の化合物である。
【００２４】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）の化合物である。
【００２５】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しているＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）の化合物である。
【００２６】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しているＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ、水素；フェニル若しくはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルから独立して選択される）の化合物である。
【００２７】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくはＲ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである）の化合物である。
【００２８】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しているＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくはＲ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである）の化合物である。
【００２９】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；及び−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−から選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン又はＣ１〜Ｃ６アルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；及びナフチルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はナフチルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；及びＣ３〜Ｃ８シクロアルキレンから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキレンは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくはＲ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである）の化合物である。
【００３０】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；及び−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−から選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン又はＣ１〜Ｃ６アルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６アルコキシによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；及びナフチルから選択され、
上記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はナフチルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６アルコキシによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ２は、フェニル；及びＣ３〜Ｃ８シクロアルキレンから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキレンは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６アルコキシによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
上記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６アルコキシによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくはＲ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである）の化合物である。
【００３１】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−フェニル−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ２）２−５−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＣＨ（ＣＨ２−ナフチル）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＣＨ２−Ｏ−フェニル−ＣＨ（Ｒｚ）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−から選択され；
Ｒｚは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及びＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される１つ又は２つの置換基によって任意選択的に置換されたフェニルであり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくはＲ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである）の化合物である。
【００３２】
さらなる実施形態において、カチオン部分は、式（Ｉ）
（式中、
Ｒは水素であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐している未置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−フェニル−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ２）２−５−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＣＨ（ＣＨ２−ナフチル）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＣＨ２−Ｏ−フェニル−ＣＨ（Ｒｚ）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−から選択され；
Ｒｚは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及びＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される１つ又は２つの置換基によって任意選択的に置換されたフェニルであり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、好ましくはＲ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれメチルである）の化合物である。
【００３３】
本発明のさらなる実施形態において、上記実施形態のいずれかに定義された固体担体上へＤＮＡ標識化合物を吸着するステップと、非水性溶媒系において、担持されたＤＮＡ標識化合物を試薬と反応させるステップとを含む、１つ又はそれ以上の非水性溶媒を使用してＤＮＡ複合化合物を反応させる方法が提供される。本方法のさらなる実施形態において、本方法は、固体担体から生成物を放出するステップをさらに含む。
【００３４】
本発明のさらなる実施形態において、ＤＮＡ複合化合物を担持するための上記実施形態のいずれかに定義された固体担体の使用が提供される。さらなる実施形態において、ＤＮＡ複合化合物を吸着するための上記実施形態のいずれかに定義された固体担体の使用が提供される。
【００３５】
定義
本明細書で使用される場合、「Ｃ１〜Ｃ２０アルキレン」という用語は、炭素及び水素原子のみからなり、不飽和を含有せず、１〜２０個の炭素原子を有する線形であるか、又は分枝された炭化水素鎖二価ラジカルを指す。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」という用語は、炭素及び水素原子のみからなり、不飽和を含有せず、１〜８個の炭素原子を有する線形であるか、又は分枝された炭化水素鎖ラジカルであって、単結合によって分子の残基に結合するラジカルを指す。「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」という用語は、それに対応して解釈される。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「Ｃ２〜Ｃ２０アルケニレン」という用語は、炭素及び水素原子のみからなり、少なくとも１つの二重結合を含有し、２〜２０個の炭素原子を有する線形であるか、又は分枝された炭化水素鎖二価ラジカルを指す。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「Ｃ２〜Ｃ２０アルキニレン」という用語は、炭素及び水素原子のみからなり、少なくとも１つの三重結合を含有し、２〜２０個の炭素原子を有する線形であるか、又は分枝された炭化水素鎖二価ラジカルを指す。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン」という用語は、３〜８個の炭素原子の飽和、単環式性、二価ラジカル炭化水素基を指す。特定の実施形態において、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン基は、同一炭素原子を介して、又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキレン基の異なる炭素原子を介して結合され得る。Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレンの例としては、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、シクロヘプチレン及びシクロオクチレンが含まれる。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ」という用語は、Ｒａが一般に上記で定義されるＣ１〜Ｃ８アルキルラジカルである式−ＯＲａのラジカルを指す。Ｃ１〜Ｃ６アルコキシという用語は、それに対応して解釈される。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「ハロ」という用語はフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを指す。好ましくは、ハロはフルオロ又はクロロである。より好ましくは、ハロはフルオロである。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル」という用語は、１つ又はそれ以上の上記で定義されたハロラジカルによって置換された、上記で定義されたＣ１〜Ｃ６アルキル基を指す。Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルの例としては、限定されないが、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、１，１−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、２−フルオロプロピル、３，３−ジフルオロプロピル及び１−フルオロメチル−２−フルオロエチルが含まれる。好ましくは、ハロラジカルはフルオロである。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」という用語は、３〜８個の炭素原子の飽和単環式炭化水素基を指す。一実施形態において、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルから選択される。「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」という用語は、それに対応して解釈される。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル」という用語は、Ｒａ１がカルボニル基であり、且つＣ１〜Ｃ８アルキルが上記で定義された通りである式−Ｒａ１−Ｃ１〜Ｃ８アルキルのラジカルを指す。
【００４５】
「ハロゲン」又は「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを指す。好ましくは、ハロはフルオロ、クロロ又はブロモである。より好ましくは、ハロはフルオロ又はクロロである。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「５〜１０員複素環」という用語は、安定非芳香族単環式又は二環式環ラジカルを指す。一実施形態において、５〜１０の員複素環は、窒素、酸素及び硫黄から個々に選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む。複素環ラジカルは、炭素原子又はヘテロ原子を介して結合されてよい。複素環の例としては、限定されないが、ピロリニル、ピロリジル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチエニル、ピペリジル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル又はペルヒドロアゼピニルが含まれる。「３〜７員複素環」という用語は、それに対応して解釈される。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「５又は６員ヘテロアリール」という用語は、５又は６員芳香族単環式環ラジカルを指す。一実施形態において、５又は６員ヘテロアリールは、個々に窒素、酸素及び硫黄から選択される１、２、３又は４個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリールラジカルは、炭素原子又はヘテロ原子を介して結合されてよい。ヘテロアリールの例としては、限定されないが、フリル、ピロリル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チオゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジル又はピリジルが含まれる。
【００４８】
一実施形態において、「カルバモイル」は式−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２の基である。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「任意選択的に置換される」という用語には、未置換又は置換されたものが含まれる。
【００５０】
Ｒｘ又はＲｘ２がフェニル、ナフチル又はアントラシルである実施形態において、そのようなフェニル、ナフチル又はアントラシル基は二価ラジカル基であることが理解されるであろう。
【００５１】
ポリエチレングリコールベースの固体樹脂は、架橋ポリエチレングリコールポリマー又はペグ化ポリマーマトリックスであってよい。
【００５２】
架橋ＰＥＧベース固体樹脂の例としては、式（ＩＶ）：
【化９】
2021523901.tif 000010
を有する商業的に入手可能なＮｏｖａＰＥＧ／Ｃｈｅｍｍａｔｒｉｘ樹脂であって、上記カチオン部分を組み込むために反応させることができる遊離アミン基又は官能化アミンを有する状態で入手可能であるもの；及び
式（Ｖ）：
【化１０】
2021523901.tif 000011
を有する商業的に入手可能なＰＥＧＡ樹脂（ＣＡＳ  ３７２１０９−５９−６）が含まれる。
【００５３】
ペグ化固体ポリマー樹脂の例は、式（ＶＩ）を有するＴｅｎｔａＧｅｌ（ＲＴＭ）ＸＶ−ＮＨ２樹脂である（図１）。
【００５４】
固体樹脂物体は両親媒性であり、したがって、良好に溶媒和し、極性溶媒（水、ＤＭＳＯ、アルコールなど）及び非極性有機溶媒（ＤＣＭ、ＴＨＦ、アセトニトリルなど）の使用に適合性を有する。
【００５５】
したがって、本明細書に定義される固体担体は、複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位から形成され、且つ少なくとも１つのカチオン部分をさらに含む物体を含む固体材料である。本発明の固体担体は、水及び有機媒体中で不溶性であり、且つ担体が利用される反応化学に対して不活性である。
【００５６】
カチオン部分は、ＤＮＡを吸着することができる正に帯電したイオンを有するいずれかの基である。カチオンの典型的な例としては、オニウムカチオン、例えば四級アンモニウム、超塩基共役カチオン、例えばグアニジウム、アミジニウムが含まれる。当業者は、カチオン部分が特定の超塩基共役カチオン、例えばグアニジウム、アミジニウムなどの潜伏性カチオンを含むことを認識するであろう。グアニジウムカチオンは、水の存在下でＤＮＡ吸着複合体構造の最初のステップの間に形成され得、それによって、ＤＮＡを吸着することができる少なくとも１つのカチオン部分が提供される。
【００５７】
ＤＮＡ複合分子の吸着及び放出
上記したように、本発明のＰＥＧベースの固体樹脂は、水中で効率的に溶媒和する。これによって、水中に懸濁された固体担体を用いて、ＤＮＡ複合分子をインキュベーションすることができる。ＤＮＡ複合分子及びＰＥＧベースの固体樹脂担体の混合物を約１５分間、水中で一緒に撹拌し、そしてＰＥＧベースの固体樹脂担体上のＤＮＡ複合分子の吸着は、上澄みのＵＰＬＣ−ＴＯＦ分析、又は懸濁液をデカンテーションした後の上澄みの吸収度測定によって確認される。
【００５８】
ＤＮＡ複合分子がＰＥＧベースの固体樹脂担体上に固定された後、それらを乾燥して、そして最初に水混和性溶媒（例えばＴＨＦ、ＤＭＳＯ、アセトニトリル、ＤＭＦ、アルコールなど）で樹脂を洗浄し、続いてその後の反応で使用される有機溶媒（例えばＤＣＭ、ジクロロエタン、トルエンなど）で樹脂を洗浄することによって、非水性有機溶媒中に懸濁させることができる。典型的に、水混和性溶媒を用いて少なくとも３つの別々の洗浄ステップが実行され、続いて有機溶媒を用いて少なくとも３つの別々の洗浄ステップが実行される。
【００５９】
次いで、ＤＮＡ複合分子を変換するために、所望の有機溶媒中で固定化ＤＮＡ複合分子を使用して、所望の化学反応を実行することができる。
【００６０】
最後に、塩の濃縮溶液（１．５〜３Ｍ  ＮａＣｌ／水中０．００５％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００）による樹脂の２回以上の処理などの既知の方法によって、ＤＮＡ複合分子を樹脂から放出し、それによって、固体担体は新規変換されたＤＮＡ複合物から、例えば濾過によって分離され得る。
【００６１】
したがって、当業者は、本発明の固体担体が非水性ＤＮＡ複合分子反応での使用に適切となるためには、固体担体が水及び有機媒体中で不溶性でなければならないことを理解するであろう。
【実施例】
【００６２】
実施例の調製
以下の実施例は、本明細書に開示される方法を使用して調製され、単離され、且つ特徴づけられた。
【００６３】
略語
本明細書で使用される略語は、以下の通りに定義される：「１×」は１回、「２×」は２回、「３×」は３回、「℃」は摂氏度、「ａｑ」は水性、「Ｃｏｌ」はカラム、「ｅｑ」は等量、「ｇ」はグラム、「ｍｇ」はミリグラム、「ｎｍ」はナノメートル、「Ｌ」はリットル、「ｍＬ」又は「ｍｌ」はミリリットル、「ｕｌ」、「ｕＬ」、「μｌ」又は「μＬ」はマイクロリットル、「ｎＬ」又は「ｎｌ」はナノリットル、「Ｎ」はノルマル、「ｕＭ」又は「μＭ」はミクロモル、「ｎＭ」はナノモル、「ｍｏｌ」はモル、「ｍｍｏｌ」はミリモル、「ｍｉｎ」は分、「ｈ」又は「ｈｒｓ」は時間、「ＲＴ」は室温、「ＯＮ」は一晩、「ａｔｍ」は大気、「ｐｓｉ」は重量ポンド毎平方インチ、「ｃｏｎｃ．」は濃縮物、「ａｑ」は水性、「ｓａｔ」又は「ｓａｔ’ｄ」は飽和、「ＭＷ」は分子量、「ｍｗ」又は「μｗａｖｅ」はマイクロ波、「ｍｐ」は融点、「Ｗｔ」は重量、「ＭＳ」又は「Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃ」は質量分析法、「ＥＳＩ」はエレクトロスプレーイオン化質量分析、「ＨＲ」は高解像度、「ＨＲＭＳ」は高解像度質量分析法、「ＬＣＭＳ」は液体クロマトグラフィー質量分析法、「ＨＰＬＣ」は高圧液体クロマトグラフィー、「ＲＰ  ＨＰＬＣ」は逆相ＨＰＬＣ、「ＴＬＣ」又は「ｔｌｃ」は薄層クロマトグラフィー、「ＮＭＲ」は核磁気共鳴分光学、「ｎＯｅ」は核オーバーハウザー効果分光学、「１Ｈ」はプロトン、「δ」はデルタ、「ｓ」はシングレット、「ｄ」はダブレット、「ｔ」はトリプレット、「ｑ」はカルテット、「ｍ」はマルチプレット、「ｂｒ」は広域、「Ｈｚ」はヘルツ、「ｅｅ」は鏡像体過剰率であり、「α」、「β」、「Ｒ」、「ｒ」、「Ｓ」、「ｓ」、「Ｅ」及び「Ｚ」は、当業者に周知の立体化学的呼称である。
【００６４】
本明細書で使用される以下の略語は、対応する意味を有する：
ＡＣＮ  アセトニトリル
ＡｃＯＨ  酢酸
Ａｃ２Ｏ  無水酢酸
Ｂｎ  ベンジル
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ２Ｏ  ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート
Ｂｕ  ブチル
Ｃｓ２ＣＯ３  無水炭酸セシウム
ＤＣＥ  １，２−ジクロロエタン
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＩＣ  Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ  エチレンジアミン四酢酸
Ｅｑｕｉｖ．  等量
Ｅｔ  エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
ＨＡＴＵ  ２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ  塩酸
ＨＣＯＯＨ  ギ酸
ＨＦＩＰ  １，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール
ＨＯＡｔ  １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ｉ−Ｐｒ  イソプロピル
ｉＰｒＯＨ  イソプロピルアルコール
Ｉｒ［ｄＦ（ＣＦ３）ｐｐｙ］２（ｄｔｂｂｐｙ）ＰＦ６  ［４，４’−ビス（１，１−ジメチルエチル）−２，２’−ビピリジン−Ｎ１，Ｎ１’］ビス［３，５−ジフルオロ−２−［５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル−Ｎ］フェニル−Ｃ］イリジウム（ＩＩＩ）ヘキサフルオロホスフェート
ＫＣＮ  シアン化カリウム
Ｋ２ＣＯ３  炭酸カリウム
Ｍｅ  メチル
ＭｅＣＮ  アセトニトリル
ＭｅＯＨ  メタノール
ＭＳ  モレキュラーシーブ又は質量分析
ＮＥｔ３  トリエチルアミン
ＮＨ３  アンモニア
ＮｉＣｌ２（ｄｍｅ）  ニッケル（ＩＩ）クロリドエチレングリコールジメチルエーテル錯体
ＮＭＰ  Ｎメチル−２−ピロリドン
Ｐｈ  フェニル
ＲＴ  室温（℃）
Ｒｔ  保持時間
ｔ−Ｂｕ又はＢｕｔ  ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＥＡ  トリエチルアミン
ＴＩＳ  トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【００６５】
本発明によるＰＥＧベースの固体担体の合成
ベース樹脂は、典型的に、官能化可能なアミン基を含む商業的に入手可能なＰＥＧベースの固体樹脂である。次いで、官能化可能なアミン基は、上記で定義された１つ又はそれ以上のカチオン基を誘導するために標準アミドカップリング手順（例えばＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡ）によって誘導体化される。
【００６６】
アミドカップリング後に残る未反応アミンの検出のためのカイザーテスト（Ｋａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔ）のための一般的なプロトコル：
溶液１：１００ｍＬのエタノール中５ｇのニンヒドリン
溶液２：２０ｍＬのエタノール中８０ｇのフェノール
溶液３：９８ｍＬのピリジン中２ｍＬの０．００１ＭのＫＣＮ水
数個のビーズをエッペンドロフ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）管に入れ、そして２５（５０）μＬの各溶液を添加する。管をサーモミキサー中に配置し、そして発達させるために１００℃で５分間、反応させた。青色の樹脂及び溶液（薄い青から濃い青まで強度が変動する）は、反応が完了していない（正）ことを示す。無色から淡黄色の樹脂及び溶液は、反応が完了している（負）ことを示す。
【００６７】
実施例１
カチオン酸性１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミドの合成
【化１１】
2021523901.tif 000012
１１−ブロモウンデカン酸（Ｆｌｕｋａ  ＣＡＳ  ２８３４−０５−１）（８ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）をトリメチルアミン（ＥｔＯＨ中３５％）（６０ｍｌ、２２４ｍｍｏｌ）中に溶解し、そして反応容器をセプタムで密封し、溶液を室温で４８時間撹拌した。この段階で白色沈殿物が形成する。白色沈殿物を冷ＥｔＯＨで濾過し、洗浄した。回収した白色固体をＥｔＯＨから再結晶し、濾過し、減圧下で乾燥させ、純粋な１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミドが白色粉末として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ３．３０−３．２４（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｓ，９Ｈ），２．１９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．７１−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２７（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１２Ｈ）．
ＵＰＬＣ−ＭＳ：０．５１分；２４４．３（Ｍ）＋．（２＿ＭＩＮ＿ＲＥＡＣＴＩＯＮ＿ＭＯＮＩＴＯＲＩＮＧ＿ＩＰＡ）：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ，２．１×５０ｍｍ  ８０℃、溶出液Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％  ＨＣＯＯＨ＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ：ｉＰｒＯＨ＋０．０５％  ＨＣＯＯＨ、勾配：５〜９８％  Ｂ  １．７分、流速：０．６ｍＬ／分。Ｒｔ  ０．５１分  観察されたＭｗ２４４．３（Ｍ）＋。
【００６８】
実施例２
商業的に入手可能なＮｏｖａＰＥＧ樹脂Ｒｉｎｋアミドを得た。樹脂ＮｏｖａＰＥＧ樹脂Ｒｉｎｋアミド（２５０ｍｇ）（０．２５０ｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中で３時間、膨潤させた。ＤＭＦ（体積：５ｍＬ）／ＤＭＳＯ（体積：３ｍＬ）中でカチオン酸：
【化１２】
2021523901.tif 000013
（０．４６０ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．０６３ｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（０．０７２ｍＬ、０．４６０ｍｍｏｌ）を混合することによって樹脂を変換した。得られた溶液を樹脂に添加し、そして２時間反応させた。溶媒としてＤＭＳＯのみを使用して、このプロセスを繰り返した。遊離アミンの検出に対するカイザーテストは陰性だった。
【００６９】
得られた誘導体化された樹脂：
【化１３】
2021523901.tif 000014
をＤＭＳＯで４回、そして水で４回洗浄した。
【００７０】
実施例３
所望のカチオン酸によるアミンの誘導体化がより困難である実施形態においては、以下の手順が使用されてもよい：
【００７１】
５０ｍＬカートリッジ中、商業的に入手可能な樹脂をＤＭＳＯ（体積：６ｍｌ）ですすいだ。
【００７２】
ＤＭＳＯ（体積：６ｍｌ）中のカチオン酸（０．８００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（０．３０４ｇ、０．８００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．１４０ｍｌ、０．８００ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を樹脂に添加し、４０℃で一晩振とうした。
【００７３】
次いで、樹脂を濾過し、ＤＭＳＯですすぎ、そして再び、２０時間、４０℃において試薬の新しい溶液で処理した。次いで、樹脂を濾過し、ＤＭＳＯですすいだ。次いで、それをＤＭＦ（体積：８ｍｌ）中でカチオン酸（０．８００ｍｍｏｌ）、Ｏｘｙｍａ（０．１１４ｇ、０．８００ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．１２５ｍｌ、０．８００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．１４０ｍｌ、０．８００ｍｍｏｌ）のさらなる溶液で２．５時間、６０℃で処理した。
【００７４】
得られた誘導体化された樹脂をＤＭＦで４回、次いで水で４回洗浄した。
【００７５】
再び、カイザーテストを実行し、樹脂上の結合を決定した。
【００７６】
実施例４
当業者は、上記で定義されたカチオン部分のいくつかが、オリゴ−リジン又はオリゴ−アルギニンなどのオリゴペプチドから形成され得ることを認識する。そのような場合、オリゴペプチドは、自動ペプチド合成機を使用して固体ポリマーマトリックスにグラフト化され得る。
【００７７】
次式：
樹脂−ＮＨ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨＡｃを有する誘導体化された樹脂は、以下の手順を使用してＮｏｖａＰＥＧ  Ａｍｉｎｏ樹脂、Ａｍｉｎｏ  ＰＥＧＡ樹脂及びＴｅｎｔａｇｅｌ  ＸＶ  ＮＨ２樹脂のそれぞれから調製された。
【００７８】
アミノ酸（ＡＡ）、活性剤（Ａｃｔ）及び塩基のための主溶媒としてＤＭＦを使用した。
【００７９】
カップリング：
ＬｉｂｅｒｔｙＢｌｕｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒに、１／５／５／５の樹脂／ＡＡ／Ａｃｔ／塩基の比率でアミノ酸（０．２Ｍ）、活性剤（ＤＩＣ−０．５Ｍ）、塩基（Ｏｘｙｍ（１Ｍ）＋ＤＩＰＥＡ（０．１Ｍ））を添加した（総体積４ｍｌ）。合成機は、９０℃の温度で、メーカーの指示に従って作動させた。
【００８０】
脱保護：
ＮＭＰ／ＥｔＯＨ（９／１）中１０％ピペリジンを使用して、化合物を脱保護した。
【００８１】
キャッピング：
ＤＭＦ（５ｍｌ）中Ａｃ２Ｏ（５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５ｍｍｏｌ）のキャッピング溶液を使用した。樹脂をキャッピング溶液で処理し、２５℃において１時間振とうした。次いで、樹脂をＤＣＭで濾過及び洗浄した。
【００８２】
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）の脱保護：
樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９０：５：５）の５ｍｌ溶液で処理し、２５℃において１時間振とうした。次いで、樹脂を、ＤＣＭ、ＴＨＦ及び水で濾過及び洗浄した。
【００８３】
実施例５
種々のリンカーによる種々のカチオン樹脂の合成
商業的に入手可能なＮｏｖａＰＥＧアミノ樹脂（Ｍｅｒｃｋ製品番号８．５５１２６）を０．５７ｍｍｏｌ／ｇ装填することによって合成を実行可能である（Ｆ．Ｇａｒｃｉａ−Ｍａｒｔｉｎら，（２００６）Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，８，２１３）。
【００８４】
実施例５．１
アミノ−ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３
【化１４】
2021523901.tif 000015
ＤＣＭ（体積：１０．００ｍＬ）を使用して、（フィルターを備えた）２５ｍＬシリンジ中でＮｏｖａＰＥＧアミノ樹脂（２５０ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）を懸濁させた。シリンジを室温で３時間振とうし、濾過し、ＤＭＳＯで３回洗浄した。１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミド（１８５ｍｇ、０．５７０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．０９９ｍＬ、０．５７０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２２３ｍｇ、０．５７０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）中で予混合し、室温で２分間振とうし、そして樹脂に添加した。得られた懸濁液を室温で１６時間振とうした。仕上げ：樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。
【００８５】
カイザーテストを実行したところ、陰性であった。次いで、樹脂をＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）で２回洗浄し、そしてこの溶液１０ｍＬ中で一晩膨潤させた。次いで、懸濁液を濾過し、同一溶液で２回洗浄し、乾固するまで濾過した。２×２．５ｍＬのＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）を用いて、樹脂をシリンジから１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ管へ移した。
【００８６】
種々のリンカー−Ｚ−Ｘ１−による種々のカチオン樹脂の合成
実施例５．２
ＰＥＧ−Ｂｎ−Ｎ＋（Ｍｅ）３
【化１５】
2021523901.tif 000016
ＮｏｖａＰＥＧアミノ樹脂（２５０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＣＭ中で１時間膨潤させ、次いで、５ｍＬのＤＭＳＯで２回洗浄した。別のフラスコ中で、Ｆｍｏｃ−（４−アミノメチル）−安息香酸（１７５ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（５９．５ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１８０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）中で混合することによって、酸を活性化させた。得られた溶液を樹脂に添加し、振とうしながら室温で１２時間反応させた。カップリング反応を繰り返した。未反応のアミンの検出のためのカイザーテストは陰性であった。いずれの残留する一級アミンも除去するために、無水酢酸／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン／ＤＭＦ（体積比１／２／７）の溶液で１５分間処理することによって樹脂をキャッピングした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。
【００８７】
Ｆｍｏｃ−基の脱保護：樹脂に、ＤＭＦ中２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン１０ｍＬを添加した。混合物を室温で５分間振とうした。次いで、樹脂を濾過した。ＤＭＦ中２０％ピペリジンの第２の部を添加し、そして混合物を室温で５分間振とうした。数部分のＤＭＳＯで樹脂を濾過及び洗浄した。化合物１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミド（１４６ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．０７８ｍＬ、０．４５０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１７６ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）中で予混合し、室温で２分間振とうし、そして脱保護された樹脂に添加した。得られた懸濁液を室温で１６時間振とうした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。カイザーテストは陰性であった。次いで樹脂をＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）で２回洗浄し、この溶液１０ｍＬ中で一晩膨潤させた。次いで、懸濁液を６０℃において１時間振とうし、乾固するまで濾過した。２×２．５ｍＬのＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）を用いて、樹脂をシリンジから１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ管へ移した。
【００８８】
実施例５．３
ＰＥＧ−シクロヘキサン−Ｎ＋（Ｍｅ）３
【化１６】
2021523901.tif 000017
ＮｏｖａＰＥＧアミノ樹脂（２５０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＣＭ中で１時間膨潤させ、次いで５ｍＬのＤＭＳＯで２回洗浄した。ＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）中のＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．０８２ｍＬ、０．４６０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１８０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）による処理によって、酸Ｂｏｃ−１−アミノメチル−シクロヘキサン酢酸（１２５ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）を活性化した。得られた溶液を樹脂に添加し、振とうしながら室温で１２時間反応させた。カップリング反応を繰り返した。いずれの残留する一級アミンも除去するために、無水酢酸／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン／ＤＭＦ（体積比１／２／７）の溶液で１５分間処理することによって樹脂をキャッピングした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。カイザーテストは陰性であった（樹脂淡黄色及び溶液淡黄色）。
【００８９】
Ｂｏｃ−基の脱保護：樹脂を１０ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／ジクロロメタン（ＤＣＭ）中で懸濁させ、室温で３分間振とうし、そして濾過した。５０％ＴＦＡ／ＤＣＭの第２の部を添加し、室温で５分間振とうした。１０ｍＬのＤＣＭ（１ｍＬ／樹脂１ｇ）で樹脂を３回洗浄した。樹脂を１０ｍＬの５％（ｖ／ｖ）ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）／ＤＣＭ）で３回洗浄し、ＴＦＡを除去した。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。化合物１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミド（１４６ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．０７８ｍＬ、０．４５０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１７６ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）中で予混合し、室温で２分間振とうし、そして脱保護された樹脂に添加した。得られた懸濁液を室温で１６時間振とうした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。カイザーテストは陰性であった。次いで樹脂をＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）で２回洗浄し、この溶液１０ｍＬ中で一晩膨潤させた。次いで、懸濁液を６０℃において１時間振とうし、乾固するまで濾過した。２×２．５ｍＬのＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）を用いて、樹脂をシリンジから１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ管へ移した。
【００９０】
実施例５．４
ＰＥＧ−ナフト−Ｎ＋（Ｍｅ）３
【化１７】
2021523901.tif 000018
ＮｏｖａＰＥＧアミノ樹脂（２５０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＣＭ中で１時間膨潤させ、次いで５ｍＬのＤＭＳＯで２回洗浄した。Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−（２−ナフチル）−Ｌ−アラニン（２１２ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．０８２ｍＬ、０．４６０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１８０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）で混合することによって酸を活性化させた。得られた溶液を樹脂に添加し、振とうしながら室温で１２時間反応させた。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。カップリング反応を繰り返した。いずれの残留する一級アミンも除去するために、無水酢酸／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン／ＤＭＦ（体積比１／２／７）の溶液で１５分間処理することによって樹脂をキャッピングした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。カイザーテストは陰性であった（樹脂淡黄色及び溶液淡黄色）。Ｆｍｏｃ−基の脱保護：樹脂にＤＭＦ中２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン１０ｍＬを添加した。混合物を室温で５分間振とうした。樹脂を濾過した。ＤＭＦ中２０％ピペリジンの第２の部を添加し、そして混合物を室温で５分間振とうした。化合物１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミド（１４６ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．０７８ｍＬ、０．４５０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１７６ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：５ｍＬ）中で予混合し、室温で２分間振とうし、そして脱保護された樹脂に添加した。得られた懸濁液を室温で１６時間振とうした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄した。カイザーテストは陰性であった。次いで樹脂をＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）で２回洗浄し、この溶液１０ｍＬ中で一晩膨潤させた。次いで、懸濁液を６０℃において１時間振とうし、乾固するまで濾過した。次いで、２×２．５ｍＬのＨ２Ｏ／グリセロール（１／１）を用いて、樹脂をシリンジから１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ管へ移した。
【００９１】
実施例６
商業的に入手可能なＮｏｖａＰＥＧ樹脂Ｒｉｎｋアミド（Ｍｅｒｃｋ製品番号８．５５０４７）を０．４６ｍｍｏｌ／ｇ装填することによる、種々のカチオン基を有する種々のカチオン樹脂の合成。
【００９２】
実施例６．１
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３
【化１８】
2021523901.tif 000019
樹脂ＮｏｖａＰＥＧ樹脂Ｒｉｎｋアミド（２５０ｍｇ）（４ｇ、１．８４０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で３時間膨潤させた。ＤＭＳＯ（体積：４０ｍＬ）中で１０−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルデカン−１−アミニウムブロミド（２．３８７ｇ、７．３６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．８０ｇ、７．３６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（１．２８５ｍＬ、７．３６ｍｍｏｌ）を混合することによって酸を活性化した。得られた溶液を樹脂に添加し、１２時間反応させた。未反応のアミンの検出のためのカイザーテストは陰性であった。樹脂をＤＭＳＯで４回、そして水で４回洗浄し、次いで、水／グリセロール１／１中に懸濁させた。
【００９３】
実施例６．２
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｅｔ）３
【化１９】
2021523901.tif 000020
樹脂ＮｏｖａＰＥＧ  Ｒｉｎｋ樹脂（５００ｍｇ）（０．５ｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で３０分間膨潤させた。トリエチルアミン（０．５１３ｍＬ、３．６８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルカルボジイミド（０．２８７ｍＬ、１．８４０ｍｍｏｌ）で処理することによって、酸１１−ブロモデカン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＣＡＳ  ２８３４−０５−１）（０．９７６ｇ、３．６８ｍｍｏｌ）を活性化させた。得られた溶液を樹脂に添加し、室温で１２時間反応させた。未反応のアミンの検出のためのカイザーテストは陰性であった。樹脂をエタノールで３回洗浄し、２５ｍｌの体積比１／１のＮＥｔ３／ＥｔＯＨ中に懸濁させた。この懸濁液を１２時間還流させた。樹脂を洗浄し、そしてキャッピングを実行して、いずれの残留する一級アミンも除去した（１０分  ＤＭＦ／ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）／Ａｃ２Ｏ  ７／２／１）。四級化の成功は、ＴＦＡ／水９５／５中での樹脂のいくつかのビーズにおける分裂、並びに期待される四級アンモニウムカルボキサミド１１−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチル−１１−オキソウンデカン−１−アミニウムブロミド及び対応するブロモカルボキサミド１１−ブロモウンデカンアミドの不在のＵＰＬＣ−ＭＳによる観察によって決定された。
【００９４】
ＵＰＬＣ−ＭＳ：０．６１分（ＥＬＳＤ検出、分子上に発色団なし）；２８５．４（Ｍ＋）．（２＿ＭＩＮ＿ＲＥＡＣＴＩＯＮ＿ＭＯＮＩＴＯＲＩＮＧ＿ＩＰＡ）：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ、８０℃、溶出液Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ：ｉＰｒＯＨ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ、勾配：１．７分間で５〜９８％のＢ、流速：０．６ｍＬ／分。１１−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチル−１１−オキソウンデカン−１−アミニウムブロミドの構造と適合性を有するものとして解釈される。樹脂をＤＭＳＯで４回、ＭｅＯＨ、ＤＭＦ及び水で４回洗浄した。さらなる精製は必要とされず、そして水／グリセロール１／１中での懸濁の体積を１０ｍｌに調節した後にそのままこの樹脂を使用した。
【００９５】
実施例６．３
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｂｕ）３
【化２０】
2021523901.tif 000021
樹脂ＮｏｖａＰＥＧ  Ｒｉｎｋ樹脂（５００ｍｇ）（０．５ｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で３０分間膨潤させた。トリブチルアミン（０．０４３ｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（０．２８７ｍＬ、１．８４０ｍｍｏｌ）で処理することによって、酸１１−ブロモデカン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＣＡＳ  ２８３４−０５−１）（０．９７６ｇ、３．６８ｍｍｏｌ）を活性化させた。得られた溶液を樹脂に添加し、室温で１２時間反応させた。未反応のアミンの検出のためのカイザーテストは陰性であった。樹脂をエタノールで３回洗浄し、２５ｍｌのニートのトリブチルアミン中に懸濁させた。この懸濁液を１５０℃で１２時間撹拌させた。樹脂を洗浄し、そしてキャッピングを実行した（１０分  ＤＭＦ／ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）／Ａｃ２Ｏ  ７／２／１）。四級化の成功は、樹脂のいくつかのビーズにおける分裂、並びに期待される四級アンモニウムカルボキサミド１１−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリブチル−１１−オキソウンデカン−１−アミニウムブロミド及び対応するブロモカルボキサミド１１−ブロモウンデカンアミドの不在のＵＰＬＣ−ＭＳによる観察によって決定された。
【００９６】
ＵＰＬＣ−ＭＳ：０．８１分（ＥＬＳＤ検出、分子上に発色団なし）；３６９．４（Ｍ＋）．（２＿ＭＩＮ＿ＲＥＡＣＴＩＯＮ＿ＭＯＮＩＴＯＲＩＮＧ＿ＩＰＡ）：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ、８０℃、溶出液Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ：ｉＰｒＯＨ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ、勾配：１．７分間で５〜９８％  Ｂ、流速：０．６ｍＬ／分。１１−アミノ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリブチル−１１−オキソウンデカン−１−アミニウムブロミドの構造と適合性を有するものとして解釈される。樹脂をＤＭＳＯで４回、ＭｅＯＨ、ＤＭＦ及び水で４回洗浄した。さらなる精製は必要とされず、次いで、水／グリセロール１／１（体積比）中での懸濁の体積を１０ｍｌに調節した後にそのままこの樹脂を使用した。
【００９７】
実施例６．４
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）２Ｂｎ
【化２１】
2021523901.tif 000022
樹脂ＮｏｖａＰＥＧ  Ｒｉｎｋ樹脂（５００ｍｇ）（０．５ｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で３０分間膨潤させた。１１−ブロモデカン酸Ａｌｄｒｉｃｈ  ＣＡＳ  ２８３４−０５−１（０．９７６ｇ、３．６８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−フェニルメタンアミン（０．５５４ｍＬ、３．６８ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（０．２８７ｍＬ、１．８４０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（体積：８ｍＬ）中で混合することによって酸を活性化させた。得られた溶液を樹脂に添加し、室温で１２時間反応させた。プロセスをもう１回繰り返した。未反応のアミンの検出のためのカイザーテストは陰性であった。樹脂をエタノールで３回洗浄し、２５ｍｌの体積比１／１のエタノール／Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−フェニルメタンアミン中に懸濁させた。この懸濁液を１２時間還流させた。樹脂をエタノールで３回洗浄し、そしてキャッピングを実行した（１０分  ＤＭＦ／ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）／Ａｃ２Ｏ  ７／２／１）。四級化の成功は、樹脂のいくつかのビーズにおける分裂、並びに期待される四級アンモニウムカルボキサミド１１−アミノ−Ｎ−ベンジル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１１−オキソウンデカン−１−アミニウムブロミド及び対応するブロモカルボキサミド１１−ブロモウンデカンアミドの不在のＵＰＬＣ−ＭＳによる観察によって決定された。
【００９８】
ＵＰＬＣ−ＭＳ：０．６７分（ＥＬＳＤ検出）；３１９．４（Ｍ＋）（２＿ＭＩＮ＿ＲＥＡＣＴＩＯＮ＿ＭＯＮＩＴＯＲＩＮＧ＿ＩＰＡ）：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ、８０℃、溶出液Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ：ｉＰｒＯＨ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ、勾配：１．７分間で５〜９８％Ｂ、流速：０．６ｍＬ／分。１１−アミノ−Ｎ−ベンジル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１１−オキソウンデカン−１−アミニウムブロミドの構造と適合性を有するものとして解釈される。樹脂をＤＭＳＯで４回、ＭｅＯＨ、ＤＭＦ及び水で４回洗浄した。
【００９９】
次いで、水の不在下におけるオリゴヌクレオチド上での共役結合反応を実行するために、文献に記載の既存の固体担体と比較して、本発明の新規固体担体を使用することの利益を実証するために、これらの種々の樹脂を使用した（下記参照）。
【０１００】
固体担体として本発明の樹脂を使用する反応
以下の非水性条件下においてＤＮＡ複合化合物上で反応を実行するために、本発明の樹脂を使用した：
【０１０１】
実施例７
ＳＮＡＰ反応：
【化２２】
2021523901.tif 000023
実施例１において調製されたカチオン担体樹脂を最初に水中で膨潤させた。次いで、１５分間、フィルターを備えた２ｍｌシリンジ中でベンズアルデヒド−ＤＮＡ複合物（８７μＬ）の溶液と一緒に樹脂（２５０μＬ）をインキュベーションした。樹脂を水、ＴＨＦ及びＤＣＭで洗浄した（４回）。０．２ｍＬのＤＣＭを樹脂に添加し、それに続いて、いくらかのＭＳ  ４Ａ及びｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）（（トリブチルスタンニル）メチル）カルバメート（８．４２μＬ）を添加した。懸濁液を４０℃において３０分間振とうし、次いで、それをすすぎ、そしてこの処理を繰り返した。樹脂をＤＣＭですすぎ、ＤＣＭ（０．１６ｍＬ）を添加し、そしてＨＦＩＰ（体積：０．０４ｍＬ）中で銅（ＩＩ）トリフルオロメタンスルホネート（０．１８１ｍｇ）及び２，６−ルチジン（０．０５８μＬ）の懸濁液（室温で１時間予混合された）で処理した。懸濁液を４０℃で２時間振とうした。
【０１０２】
仕上げ
樹脂をＴＨＦで３回洗浄した。次いで、５００μｌのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  リン酸緩衝液ｐＨ８、０．００５％トリトン−Ｘ）による処理によって、樹脂からＤＮＡを放出させた。溶液を回収し、５００μｌのＥＤＴＡで希釈した。この希釈溶液７０ｕｌを以下のＰ６精製によって脱塩した：
１．固定したジェルを再懸濁し、いずれの気泡も除去するために、パックされたＰ−６  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｍｉｃｒｏ  Ｂｉｏ−Ｓｐｉｎ（商標）Ｐ−６  Ｇｅｌ  Ｃｏｌｕｍｎｓ，ＳＳＣ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＃７３２−６２０５，ＢｉｏＲａｄ）を数回激しく逆にする。
２．先端を折り、約２．０ｍｌの管にカラムを配置し、キャップを取り外す。
３．パックされた緩衝液を重力によって流し出し、緩衝液を廃棄する。
４．１０００Ｇ≒３．９ｒｐｍで２分間回転させることによって流し出す。
５．５００μＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水を添加し、１０００Ｇ≒３．９ｒｐｍで１分間回転させることによって流し出す。
６．ステップ５を繰り返す（３回）。
７．試料（５０〜７５μＬ）を適用する。
８．１０００Ｇ≒３．９ｒｐｍで４分間回転させることによって、新しいエッペンドロフ管中に精製試料を回収する。
生成物は７０％収率を有した。
【０１０３】
比較例８
ＤＥＡＥセファロース担体を使用して、実施例７に記載されたものと同一の反応を実行した。反応条件は、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）（（トリブチルスタンニル）メチル）カルバメートの添加の前にベンズアルデヒド−ＤＮＡ複合物をＤＥＡＥセファロース担体上に担持したことを除き、実施例７と同一であった。
【０１０４】
ＤＥＡＥセファロース担体を使用した生成物は、１０％未満の生成物収率が得られた。
【０１０５】
実施例９
カルボアニオンのルテニウム触媒添加
その潜在的範囲及び基礎単位有効性のため、この反応は特に興味が持たれており、且つ非水性条件下でカチオン樹脂を使用する概念を試験するためのさらなる実施例として選択された。この新規方法論は、純粋な有機溶媒中の穏やかな条件で作用するが、空気又は水の存在と適合性を有することは記載されていない。ＰＥＧベースのカチオン樹脂上で固定化されたケトン−ＤＮＡ複合物を使用して、我々はこの方法論を試験することができ、且つ以下の通りにほんの数回のみの最適化の後、ほぼ定量的転換を迅速に得た：
【化２３】
2021523901.tif 000024
（式中、
１はヒドラジン水和物であり、
２はジクロロ（ｐ−シメン）ルテニウム（ＩＩ）二量体であり、
３は１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（ＤＰＰＰ）であり、
４はリン酸カリウム又は炭酸カルシウムであり、
５は実施例７において使用される樹脂である）。
【０１０６】
溶液Ａの調製：
ベンズアルデヒド（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＣＡＳ  １００−５２−７）（４８８μＬ）をＴＨＦ（体積：２ｍＬ）中に溶解し、その後、ヒドラジン（２３３μＬ）を添加した。この溶液を室温で３０分間撹拌した。ジクロロ（ｐ−シメン）ルテニウム（ＩＩ）二量体（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＣＡＳ  ５２４６２−２９−０）（１８ｍｇ）及び１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＣＡＳ  ６７３７−４２−４）（２５ｍｇ）を溶解するためにそれを使用する前に、少量のＮａ２ＳＯ４（５８０ｍｇ）をこの溶液に添加した。
【０１０７】
担持されたケトン−ＤＮＡ複合物の調製：
シリンジ中、２００μｌの実施例２で調製されたカチオン樹脂の懸濁液（水中で膨潤された樹脂）（２００μＬ）を９７μｌのケトン−ＤＮＡ複合物の溶液（水溶液として）（０．０６４ｍｇ）と一緒に１５分間インキュベーションした。樹脂を水及びＴＨＦで洗浄した（４回）。
【０１０８】
ルテニウム触媒カルボアニオン添加：
次いで、５００μｌの溶液Ａをこの担持されたケトン−ＤＮＡ複合物に添加し、続いて、固体Ｋ３ＰＯ４（７９ｍｇ）を添加し、そして４５℃において１時間撹拌した。
【０１０９】
次いで、溶媒を流し出し、そして樹脂をＴＨＦで３回洗浄し、その後、実施例７で上記された仕上げ手順を使用して、ＤＮＡ基材を放出した。
【０１１０】
ＤＮＡ基材は７５％の収率で回収された。
【０１１１】
比較例１０
ＤＥＡＥセファロース担体を使用して、実施例９に記載のものと同一の反応を実行した。反応条件は、溶液Ａへの添加の前に、ケトン−ＤＮＡ複合物がＤＥＡＥセファロース担体上に担持されたことを除き、実施例９に記載されるものと同一であった。
【０１１２】
比較例１０の反応では、カルボアニオン添加生成物は得られなかった。
【０１１３】
実施例１１
還元アミノ化
ケトンの還元アミノ化は、以下の通り、溶媒としてジクロロメタンを使用して実行された：
【化２４】
2021523901.tif 000025
【０１１４】
溶液Ａの調製：
酢酸をジクロロエタン（２８５ｍＭ）中に溶解し、そしてこれにジクロロエタン（２８５ｍＭ）中アミンの溶液を添加した。
【０１１５】
担持されたケトン−ＤＮＡ複合物の調製：
シリンジ中、２００μｌの実施例２において調製されたカチオン樹脂（水中で膨潤した樹脂）の懸濁液（２００μＬ）を９７μｌのケトン−ＤＮＡ複合物の溶液（水溶液として）（０．０６４ｍｇ）と一緒に１５分間インキュベーションした。樹脂をＴＨＦ（４回）及びジクロロエタン（２回）で洗浄した。
【０１１６】
還元アミノ化反応：
次いで、担持されたケトン−ＤＮＡ複合物に５００μｌの溶液Ａを添加し、そして懸濁液を室温で１時間インキュベーションした。インキュベーション後、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（４２．４ｍｇ）を固体として添加し、そして反応混合物を室温で２時間撹拌した。
【０１１７】
次いで、溶媒を流し出し、そして樹脂をＤＣＥで３回及びＴＨＦで３回洗浄した。５％の４−メチルピペリジンを含有するＤＮＡ溶出溶液５００μｌによる処理によって生成物を担体から放出させ、次いで、実施例７に記載されるＰ６精製法によって脱塩させた。
【０１１８】
実施例１１．１において、アミンはアニリン（すなわち、Ｒ’＝Ｃ６Ｈ５−ＣＨ２−）であり、且つ生成物は８７％の収率で回収された。
【０１１９】
実施例１１．２において、アミンはベンジルアミン（すなわち、Ｒ’＝Ｃ６Ｈ５−）であり、且つ生成物は４４％の収率で回収された。
【０１２０】
実施例１２
アシル化
従来のアシル化反応は、以下の通りにカチオン担体上で実行された：
【化２５】
2021523901.tif 000026
【０１２１】
フィルターを備えた１ｍｌのカートリッジ中に２５０μｌの樹脂（水中で膨潤したもの）を配置し、そして室温で１５分間、ＤＮＡ部分の溶液と一緒に樹脂をインキュベーションすることによって、実施例２において調製されたカチオン担体上にＤＮＡ部分を担持させた。樹脂を、水で、次いでＤＭＦで（４回）洗浄した。
【０１２２】
次いで、樹脂を、ＤＭＦ（体積：０．２ｍＬ）中４−ホルミル安息香酸（０．４５０ｍｇ、３．００μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５２４μｌ、３．００μｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．４６７μｌ、３．００μｍｏｌ）及びＨＯＡｔ（０．４０８ｍｇ、３．００μｍｏｌ）の溶液によって室温で１５分間処理し、この処理をもう一度繰り返した。
【０１２３】
次いで、生成物を担体から放出させ、実施例７に記載される方法を使用して精製した。
【０１２４】
実施例１３
オリゴヌクレオチド複合物ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯの合成
オリゴ−アミン出発材料の分子構造
【化２６】
2021523901.tif 000027
この典型的なオリゴヌクレオチド（５’−ＴＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＴＴＧＣＴＴＡＧ−３’）の配列をランダム化した。
【０１２５】
固定化ＤＮＡに関するアシル化プロトコルは、Ｈａｒｂｕｒｙら（Ｈａｌｐｉｎ，Ｄ．Ｒ．；Ｌｅｅ，Ｊ．Ａ．；Ｗｒｅｎｎ，Ｓ．Ｊ．；Ｈａｒｂｕｒｙ，Ｐ．Ｂ．，ＤＮＡＤｉｓｐｌａｙＩＩＩ．Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｎ  Ｕｎｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ＤＮＡ．ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００４，２（７），ｅ１７５．）から採用された。
【０１２６】
ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯの合成のためのアシル化プロトコル
【化２７】
2021523901.tif 000028
出発材料ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯの分子構造
５０００μｌのＤＥＡＥセファロース（ＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）  Ａ−２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  １７−０１７０−０２）の懸濁液を、１０ｍｌのＤＮＡ結合溶液（水＋０．００５％トリトン−Ｘ１００中の１０ｍＭ酢酸）で洗浄した。
【０１２７】
次いで、溶液としての５０００ｕｌのオリゴ−アミンの溶液（０．５ｎモル／μｌ）（３．１４ｍｇ、０．５μｍｏｌ）を５ｍｌのＤＮＡ結合溶液と一緒に樹脂に添加した。この懸濁剤を２分撹拌し、続いて濾過し、水（１０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（１０ｍｌ）で洗浄した。次いで、いずれの残留する酢酸も中和し、そして除去するために、ＭｅＯＨ中５％の４−メチルピペリジン１０ｍｌで樹脂を２分間洗浄した。
【０１２８】
ＨＯＡｔ（ＣＡＳ  ３９９６８−３３−７）（ＭｅＯＨ中１００ｍＭ）（３０００μｌ、３００μｍｏｌ）、４−ヨード安息香酸（ＤＭＳ中１００ｍＭ）（３０００μｌ、３００μｍｏｌ）及びＤＩＣ（４６．７μｌ、３００μｍｏｌ）を混合することによって、活性化された酸の溶液を調製した。ＤＥＡＥセファロース樹脂の添加の３０秒前に、この溶液を撹拌した。樹脂を活性化された酸と一緒に１５分間撹拌し、そしてこのプロセスをもう一度繰り返した。次いで、いくつかのビーズを６５μｌのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、水＋０．００５％トリトン−Ｘ１００中５０ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液）中でインキュベーションし、そしてＨＰＬＣ−ＴＯＦ分析の前に、Ｐ６クロマトグラフィー（Ｍｉｃｒｏ  Ｂｉｏ−Ｓｐｉｎ（商標）Ｐ−６  Ｇｅｌ  Ｃｏｌｕｍｎｓ）によって精製されたＤＮＡを放出した。仕上げ及び精製：この段階で、反応は完了し、そして３０分間の２ｍｌのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭリン酸緩衝液  ｐＨ８、０．００５％トリトン−Ｘ）による処理、それに続いて、１５分間の２０００μｌの同一溶液による３回の処理によってＤＮＡは放出された。３Ｋ  ＭＷＣＯ  Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎデバイス（ＰＡＬＬ、Ｎａｎｏｓｅｐ  ３Ｋ−３０Ｋ  Ｏｍｅｇａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｄｅｖｉｃｅ、５ｍＬ、５０００Ｇ、４０℃、３０分）を使用して混合物を濃縮した。濃縮試料を水で４ｍｌまで希釈し、再び濃縮した（５０００Ｇ、４０℃、３０分）（２回）。最終溶液は逆相ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ  Ｘｂｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ５μｍ  ＯＢＤ（商標）１９×５０ｍｍ、溶媒Ａ：１００ｍＭ  ＨＦＩＰ  ８６ｍＭ  ＴＥＡ、溶媒Ｂ：ＭｅＯＨ／ＡＣＮ  １／１）によって精製した。留分を組み合わせて、３Ｋ  ＭＷＣＯ遠心デバイス（５０００Ｇ、４０℃、３０分）を使用して濃縮し、４ｍｌに調整し、２６０ｎｍにおけるＵＶ吸収度によって決定された４４５ｎモルの純粋な生成物ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯ（８９％）を含有する溶液を得た。
【０１２９】
ＵＰＬＣ／ＭＳ：Ａｇｉｌｅｎｔ  ６２００シリーズＴＯＦ／６５００シリーズＱ−ＴＯＦ、Ｃｏｌｕｍｎ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  ＯＳＴ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ、１．７ｕｍ、６０℃：流速０．６ｍＬ／分、勾配：２．７分間で１５〜３０％Ｂ；０．９５分間で３０〜８５％Ｂ；０．０５分間で８５〜１００％Ｂ；０．８分間で１００％、Ａ＝水＋１０ｍＭ  ＴＥＡ＋２００ｍＭ  ＨＦＩＰ及びＢ＝ＭｅＯＨ、Ｒｔ＝１．９０分、ｍ／ｚ＝６５１５．９７ａｍｕ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．００による解析後のＭ）（計算値６５１６．０５）、最終化合物ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯの構造と適合性を有するものとして解釈される。
【０１３０】
生成物（赤）の予測されたアイソトープ分布（ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １４．００）は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  ６．００ソフトウェアスイートからＩｓｏｔｏｐｅ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒアドオンを使用して、実験的なアイソトープ分布（青）と重ねられた。
【０１３１】
実施例１４
添加された水及びＤＥＡＥセファロースによるＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３の置き換えの影響
この実験は、ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３を商業的に入手可能なイオン交換樹脂ＤＥＡＥセファロース（ＣＡＳ番号５７４０７−０８−６）と比較すること、及び添加された水が、水の存在に影響されやすい有機転換に有害であることを実証することを目的としたものであった。
【０１３２】
固体担体ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３によって担持されるＤＮＡ複合物上での光化学脱炭酸性クロスカップリングの標準条件
グリセロール：水１：１によって２０ｍＬに調整されたカチオン固体担体ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３（又はＤＥＡＥセファロース）（２００μＬ、０．００１００μｍｏｌ）を、フィルターを備えた１ｍｌシリンジ中で１ｍＬのＨ２Ｏで３回洗浄し、次いで、ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯ（水溶液として２２．８０μＬ、０．００１μｍｏｌ）及び２００μＬのＨ２Ｏと一緒に１５分間インキュベーションした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄し、ＤＭＳＯ（体積：５００μＬ）を使用して磁気撹拌器を含有する２ｍｌガラスびん中に移した。５００μｌの以下の溶液Ａをアルゴンの正圧下でこの懸濁液に添加した。びんを青色光光反応器（４７０ｎｍ）中に配置し、室温で６０分間照射を行った。（溶液Ａ：１−ＢＯＣ−ピペリジン−４−カルボン酸（２２．９３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）を水（２５０μｌ）中Ｃｓ２ＣＯ３（１６．２９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に溶解したものを添加した。溶液を３０秒間振とうし、ロータリーエバポレーター上で蒸発乾固させた。蒸発後、１−ＢＯＣ−ピペリジン−４−カルボン酸の固体セシウム塩（２２．９３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：２０００μＬ）に溶解し、そして２０ｍＬマイクロ波びん中で、ＤＭＳＯ（体積：３０００μＬ）中のＮｉＣｌ２（ｄｍｅ）（２．１９７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、４，４’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，２’−ビピリジン（２．６８ｍｇ、１０μｍｏｌ）及びＩｒ［ｄＦ（ＣＦ３）ｐｐｙ］２（ｄｔｂｂｐｙ）ＰＦ６（２．２４４ｍｇ、２μｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液Ａにアルゴン通気し、ガスを除去した。）仕上げ：フィルターを備えた１ｍＬシリンジに樹脂を再度移し、溶媒濾過し、ＤＭＳＯで５回洗浄した。樹脂を４００μＬのＨ２Ｏと一緒に一晩インキュベーションし、５ｍＬ  ３Ｋ  Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎデバイス中に濾過された。次いで、２００μＬのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  リン酸緩衝液  ｐＨ８、０．００５％トリトン−Ｘ、５％４−Ｍｅ−ピペリジン）を樹脂に添加し、５０℃において３０分間インキュベーションし、そして同一Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎデバイス中に濾過された。次いで水で５ｍＬまで希釈された試料を限外濾過によって精製し、そして回収して、蒸発乾固した。残渣を１５０μＬのＨ２Ｏ中に溶解し、そしてＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０１３３】
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  ＯＳＴ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ  １．７ｕｍ、６０℃：溶出液Ａ：水＋１０ｍＭ  ＴＥＡ＋２００ｍＭ  ＨＦＩＰ  Ｖｉａｌ：２：３５  勾配：２．７分間で８〜４０％；０．９５分間で４０〜８５％Ｂ；０．０５分間で８５〜１００％Ｂ；０．８分間で１００％  溶出液Ｂ：１００％メタノール  流速：０．６ｍＬ／分。Ｒｔ＝２．１５８、６５８８．２６ａｍｕ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．００による解析後のＭ）（計算値６５８８．５４８）、最終化合物ＤＮＡ−Ｂｏｃ−Ｐｉｐの構造と適合性を有するものとして解釈される。
【０１３４】
実施例１５
【化２８】
2021523901.tif 000029
オリゴヌクレオチド複合物ＤＮＡ−Ｂｒは、ＤＮＡ−４−ＩＯＤＯに関して使用された方法によって調製された。
【０１３５】
ＤＮＡ−Ｂｏｃ−ＰｉｐへのＤＮＡ−Ｂｒの転換に関する上記反応条件で種々の固体担体を試験し、下記の表１にまとめられた変換が導かれた：
【０１３６】
【表１】
2021523901.tif 000030
【０１３７】
実施例１６
種々のカチオンＰＥＧ樹脂の比較
この実験は、オリゴヌクレオチドの化学的転換を生じるために、種々のリンカー及びカチオン基を有する樹脂が使用可能であることを実証することを目的とする。
【化２９】
2021523901.tif 000031
器具：フィルター挿入物を備えた１ｍＬシリンジ、５ｍＬガラスびん、磁気撹拌器、光反応器（２Ｗ、４７０ｎｍ）。
【０１３８】
固体担体ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３によって担持されるＤＮＡ複合物上での光化学脱炭酸性クロスカップリングの標準条件
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３（グリセロール：水１：１によって２０ｍＬに調整されたＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３）（２００μＬ、０．００１００μｍｏｌ）を、フィルターを備えた１ｍｌシリンジ中で１ｍＬのＨ２Ｏで３回洗浄し、次いで、水溶液としてのＤＮＡ−４−ＩＯＤＯ（６．５２μｇ、０．００１μｍｏｌ）及び２００ｕＬのＨ２Ｏと一緒に１５分間インキュベーションした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄し、ＤＭＳＯ（体積：５００μＬ）を使用して磁気撹拌器を含有する２ｍｌガラスびん中に移した。５００μｌの以下の溶液Ａを空気下でこの懸濁液に添加した。びんを光反応器（４７０ｎｍ）中に配置し、６０分間照射を行った。
【０１３９】
溶液Ａ：テトラヒドロフラン−２−カルボン酸（９．５７μＬ、０．１００ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０μＬ）に溶解し、そして水（１５０μｌ）中Ｃｓ２ＣＯ３（１６．２９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液を３０秒間振とうし、ロータリーエバポレーター上で蒸発乾固させた。テトラヒドロフラン−２−カルボン酸のこのＣｓ塩（９．５７μＬ、０．１００ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：２０００μＬ）に溶解し、そして２０ｍＬマイクロ波びん中で、ＤＭＳＯ（体積：３０００μＬ）中のＮｉＣｌ２（ｄｍｅ）（２．１９７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、４，４’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，２’−ビピリジン（２．６８ｍｇ、１０μｍｏｌ）及びＩｒ［ｄＦ（ＣＦ３）ｐｐｙ］２（ｄｔｂｂｐｙ）ＰＦ６（２．２４４ｍｇ、２μｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液にアルゴン通気し、ガスを除去した。仕上げ：１ｍＬフィルターシリンジに樹脂を移し、溶媒濾過し、ＤＭＳＯで５回洗浄した。樹脂を１００μＬのＨ２Ｏと一緒に５０℃で１５分間インキュベーションし、濾過した。次いで、１００μＬのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  リン酸緩衝液  ｐＨ８、０．００５％トリトン−Ｘ、５％４−Ｍｅ−ピペリジン）を樹脂に添加し、５０℃において３０分間インキュベーションし、そして同一管中に濾過された。試料を限外濾過によって精製し、そしてＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０１４０】
ＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳ：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  ＯＳＴ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ  １．７ｕｍ、６０℃：溶出液Ａ：水＋１０ｍＭ  ＴＥＡ＋２００ｍＭ  ＨＦＩＰ  勾配：２．７分間で８〜４０％；０．９５分間で４０〜８５％Ｂ；０．０５分間で８５〜１００％Ｂ；０．８分間で１００％  溶出液Ｂ：１００％メタノール  流速：０．６ｍＬ／分。Ｒｔ：１．９３８、６４６０．１４ａｍｕ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．００による解析後のＭ）（計算値６４６０．３７３）、最終化合物ＤＮＡ−４−ＴＨＦの構造と適合性を有するものとして解釈される。
【０１４１】
試験された種々の固体担体によって上記標準条件下での変換が導かれ、下記の表２にまとめられる：
【０１４２】
【表２】
2021523901.tif 000032
【０１４３】
実施例１７
種々の基材における種々のカチオンＰＥＧ樹脂の比較
この実験は、オリゴヌクレオチドの化学的転換を生じるために、種々のリンカー及びカチオン基を有する樹脂が使用可能であることを実証することを目的とする。
【化３０】
2021523901.tif 000033
器具：フィルター挿入物を備えた１ｍＬシリンジ、５ｍＬガラスびん、磁気撹拌器、光反応器（２Ｗ、４７０ｎｍ）。
【０１４４】
固体担体ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３によって担持されるＤＮＡ複合物上での光化学脱炭酸性クロスカップリングの標準条件
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３（グリセロール：水１：１によって２０ｍＬに調整されたＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３）（２００μＬ、０．００１００μｍｏｌ）を、フィルターを備えた１ｍｌシリンジ中で１ｍＬのＨ２Ｏで３回洗浄し、次いで、水溶液としてのＤＮＡ−４−ＩＯＤＯ（６．５２μｇ、０．００１μｍｏｌ）及び２００ｕＬのＨ２Ｏと一緒に１５分間インキュベーションした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄し、ＤＭＳＯ（体積：５００μＬ）を使用して磁気撹拌器を含有する２ｍｌガラスびん中に移した。５００μｌの以下の溶液Ａを空気下でこの懸濁液に添加した。びんを光反応器（４７０ｎｍ）中に配置し、６０分間照射を行った。
【０１４５】
溶液Ａ：ＢＯＣ−ピペリジン−４−カルボン酸（２２．９３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０μＬ）に溶解し、そして水（１５０μｌ）中Ｃｓ２ＣＯ３（１６．２９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液を３０秒間振とうし、ロータリーエバポレーター上で蒸発乾固させた。ＢＯＣ−ピペリジン−４−カルボン酸のこのＣｓ塩（２２．９３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：２０００μＬ）に溶解し、そして２０ｍＬマイクロ波びん中で、ＤＭＳＯ（体積：３０００μＬ）中のＮｉＣｌ２（ｄｍｅ）（２．１９７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、４，４’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，２’−ビピリジン（２．６８ｍｇ、１０μｍｏｌ）及びＩｒ［ｄＦ（ＣＦ３）ｐｐｙ］２（ｄｔｂｂｐｙ）ＰＦ６（２．２４４ｍｇ、２μｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液にアルゴン通気し、ガスを除去した。仕上げ：１ｍＬフィルターシリンジに樹脂を再度移し、溶媒濾過し、ＤＭＳＯで５回洗浄した。樹脂を１００μＬのＨ２Ｏと一緒に５０℃で１５分間インキュベーションし、濾過した。次いで、１００μＬのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  リン酸緩衝液  ｐＨ８、０．００５％トリトン−Ｘ、５％４−Ｍｅ−ピペリジン）を樹脂に添加し、５０℃において３０分間インキュベーションし、そして同一管中に濾過された。試料を限外濾過によって精製し、そしてＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０１４６】
ＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳ：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  ＯＳＴ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ  １．７ｕｍ、６０℃：溶出液Ａ：水＋１０ｍＭ  ＴＥＡ＋２００ｍＭ  ＨＦＩＰ  勾配：２．７分間で８〜４０％；０．９５分間で４０〜８５％Ｂ；０．０５分間で８５〜１００％Ｂ；０．８分間で１００％  溶出液Ｂ：１００％メタノール  流速：０．６ｍＬ／分。Ｒｔ：１．９３８、６５７３．２１ａｍｕ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．００による解析後のＭ）（計算値６５７３．５３３）、最終化合物ＤＮＡ−Ｂｏｃ−Ｐｉｐの構造と適合性を有するものとして解釈される。
【０１４７】
種々の固体担体を試験し、下記の表３にまとめられるＤＮＡ−Ｂｏｃ−ＰｉｐへのＤＮＡ−４−ＩＯＤＯの変換が導かれた：
【０１４８】
【表３】
2021523901.tif 000034
【０１４９】
実施例１８
化学的転換の変換に対する樹脂対イオンの影響を研究するための実験
器材：１ｍＬ  ＰＡＬＬ  Ｆｉｌｔｅｒプレート（Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ＰＲＯＤＵＣＴ  ＩＤ  ８０１９用のＡｃｒｏＰｒｅｐ（商標）Ａｄｖａｎｃｅ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｐｌａｔｅｓ）、磁気撹拌器、レンズを備えた光反応器（Ａｂｏｎ、９６×８３３ｍＷ、４７０ｎｍ）。
【０１５０】
樹脂洗浄手順
樹脂上で対イオンを置き換えるために、導入される対イオンのナトリウム塩の水溶液でカチオン樹脂ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３を平衡させた。例えば、水中のＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３の懸濁液１００μＬを１ｍＬ  ＰＡＬＬ濾過プレートで濾過し、８００μＬの水で２回洗浄した。次いで、樹脂を、水中１．５Ｍのヨウ化ナトリウム（ＮａＩ）８００ｕＬと一緒に６０℃で３０分間インキュベーションした。懸濁液を濾過し、そして８００μＬの同溶液、続いて８００μＬの水で２回洗浄した。次いで、樹脂を、８００μＬの水と一緒にインキュベーションし、そして８００μＬの水で３回洗浄した。
【０１５１】
ヘキサフルオロリン酸ナトリウム（ＮａＰＦ６）の０．３Ｍ水溶液を使用して臭化物対イオンをＰＦ６−と置き換えるために、この手順を繰り返した。
【０１５２】
固体担体ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３によって担持されるＤＮＡ複合物上での光化学脱炭酸性クロスカップリングの標準条件
ＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３（グリセロール：水１：１によって２０ｍＬに調整されたＰＥＧ−Ｎ＋（Ｍｅ）３）（２００μＬ、０．００１００μｍｏｌ）を、フィルターを備えた１ｍｌシリンジ中で１ｍＬのＨ２Ｏで３回洗浄し、次いで、水溶液としてのＤＮＡ−４−ＩＯＤＯ（６．５２μｇ、０．００１μｍｏｌ）及び２００ｕＬのＨ２Ｏと一緒に１５分間インキュベーションした。樹脂をＤＭＳＯで４回洗浄し、ＤＭＳＯ（体積：５００μＬ）を使用して磁気撹拌器を含有する２ｍｌガラスびん中に移した。５００μｌの以下の溶液Ａを空気下でこの懸濁液に添加した。びんを光反応器（４７０ｎｍ）中に配置し、６０分間照射を行った。溶液Ａ：ＢＯＣ−ピペリジン−４−カルボン酸（２２．９３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０μＬ）に溶解し、そして水（１５０μｌ）中Ｃｓ２ＣＯ３（１６．２９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液を３０秒間振とうし、ロータリーエバポレーター上で蒸発乾固させた。ＢＯＣ−ピペリジン−４−カルボン酸のこのＣｓ塩（２２．９３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（体積：２０００μＬ）に溶解し、そして２０ｍＬマイクロ波びん中で、ＤＭＳＯ（体積：３０００μＬ）中のＮｉＣｌ２（ｄｍｅ）（２．１９７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、４，４’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，２’−ビピリジン（２．６８ｍｇ、１０μｍｏｌ）及びＩｒ［ｄＦ（ＣＦ３）ｐｐｙ］２（ｄｔｂｂｐｙ）ＰＦ６（２．２４４ｍｇ、２μｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液にアルゴン通気し、ガスを除去した。仕上げ：１ｍＬフィルターシリンジに樹脂を再度移し、溶媒濾過し、ＤＭＳＯで５回洗浄した。樹脂を１００μＬのＨ２Ｏと一緒に５０℃で１５分間インキュベーションし、濾過した。次いで、１００μＬのＤＮＡ溶出溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  リン酸緩衝液  ｐＨ８、０．００５％トリトン−Ｘ、５％４−Ｍｅ−ピペリジン）を樹脂に添加し、５０℃において３０分間インキュベーションし、そして同一管中に濾過された。試料を限外濾過によって精製し、そしてＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０１５３】
ＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳ：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  ＯＳＴ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ  １．７ｕｍ、６０℃：溶出液Ａ：水＋１０ｍＭ  ＴＥＡ＋２００ｍＭ  ＨＦＩＰ  勾配：２．７分間で８〜４０％；０．９５分間で４０〜８５％Ｂ；０．０５分間で８５〜１００％Ｂ；０．８分間で１００％  溶出液Ｂ：１００％メタノール  流速：０．６ｍＬ／分。Ｒｔ：１．９３８、６５７３．２２ａｍｕ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．００による解析後のＭ）（計算値６５７３．５３３）、最終化合物ＤＮＡ−Ｂｏｃ−Ｐｉｐの構造と適合性を有するものとして解釈される。
【０１５４】
上記された標準条件下で種々の固体担体を試験し、下記の表４にまとめられる変換が導かれた：
【０１５５】
【表４】
2021523901.tif 000035
【０１５６】
これらの結果は、本発明の両親媒性ＰＥＧ固体担体が、ＤＮＡコード化ライブラリの作成に対して重要な有機化学反応の転換を促進するため、したがって、このライブラリ作成技術によって調査可能な化学的空間の境界を増加させるために有用であることを実証する。本明細書に記載される結果は、形式的なカルボアニオン又は反応性ラジカルの生成を必要とするものなどのオリゴヌクレオチドの存在下で困難である変換を実行することが可能であることを実証する。これは、初期小分子がビーズの周辺で自由に反応できるようにするオリゴヌクレオチド鎖を保護するカチオン部分によって、比較的親油性の環境でのポリマーマトリックス上へのＤＮＡの吸着によって達成された。基本的に、そのような固体担持ＤＮＡ化学方法論は、次世代のＤＮＡコード化ライブラリの合成を可能にする。
【図１】
2021523901.tif 000053
【図２】
2021523901.tif 000054
【配列表】
2021523901000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月21日(2020.8.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ又はそれ以上の非水性溶媒を使用するＤＮＡ複合化合物を反応させる方法であって、前記方法が、以下のステップ：
ｉ）固体担体上へＤＮＡ標識化合物を吸着させるステップと；
ｉｉ）非水性溶媒系中で、担持された前記ＤＮＡ標識化合物を試薬と反応させるステップと
を含み、前記担体が、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固形物体を含み、前記固形物体が、少なくとも１つのカチオン部分を含み、前記カチオン部分が、四級アンモニウム基又はグアニジウム基を含む、方法。
【請求項２】
前記固体担体から生成物を放出するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非水性ＤＮＡ複合分子反応において使用するための固体担体であって、前記担体が複数のポリエチレングリコール単位から形成される固形物体を含み、前記固形物体が少なくとも１つのカチオン部分を含み、前記カチオン部分が四級アンモニウム基又はグアニジウム基を含み、且つ前記カチオン部分が下記に定義される式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの化合物、
（Ｉ）式Ｉ：
【化１】
2021523901.tif 000055
（式中、
物体は、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固体担体であり；
Ｒは、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ、ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択され、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）の化合物；或いは
（ＩＩ）式ＩＩ：
【化２】
2021523901.tif 000056
｛式中、
物体及びＲは、それぞれ前記で定義された通りであり；
Ｒ１０は、ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；５〜１０員複素環又はＲ１１であり；
ｎは２〜１２の整数であり；
Ｒ１２は、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；且つ
Ｒ６及びＲ１１は、それぞれ独立して、
式ＩＩａ：
【化３】
2021523901.tif 000057
（式中、ｍは０〜８の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記で定義された通りである）を有する基；
或いは
式ＩＩｂ：
【化４】
2021523901.tif 000058
（式中、ｍは前記で定義された通りである）を有する基；
或いは
式−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＲ７
［式中、ｑは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ７は、式ＩＩｃ：
【化５】
2021523901.tif 000059
（式中ｐは１〜１２の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記で定義された通りである）を有する基である］を有する基
である｝の化合物；或いは
（ＩＩＩ）式ＩＩＩ：
【化６】
2021523901.tif 000060
［式中、
物体、Ｒ及びＹは、それぞれ前記で定義された通りであり；
ｒは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ８は、式ＩＩＩａ
【化７】
2021523901.tif 000061
（式中、Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｓは１〜６の整数であり；
Ｒ７は前記で定義された通りであり；且つ
Ｒ９はＨ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである）を有する基であるか、
或いは
Ｒ８は、式ＩＩＩｂ
【化８】
2021523901.tif 000062
（式中、
Ｙ’はＣ（Ｏ）又はＣＨ２であり；
ｔは１〜６の整数であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ９は前記で定義された通りである）を有する基である］の化合物
である、固体担体。
【請求項４】
前記カチオン部分が、下記に定義される式Ｉの化合物、
（Ｉ）式Ｉ：
【化９】
2021523901.tif 000063
（式中、
物体は、複数のポリエチレングリコール単位から形成される固体担体であり；
Ｒは、水素；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環であり；
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択され、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、水素；ヒドロキシ；ヒドロキシ、フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜１０員複素環若しくは−ＯＣ１〜Ｃ８アルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル；又は５〜１０員複素環から独立して選択される）の化合物である、請求項３に記載の固体担体。
【請求項５】
ＸはＸ１又はＸ２であり、
Ｘ１は、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、カルバモイル、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ５、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜７員複素環、フェニル、５若しくは６員ヘテロアリール又はＣ１〜Ｃ４アルキル−フェニルから選択される１つ又はそれ以上の置換基によって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖であり；
Ｘ２は−Ｚ−Ｘ１−であり、
Ｚは、−（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（（ＣＨ２）ａ−Ｒｘ１）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；−（ＣＨ２）ａ−（Ｏ）０−１−Ｒｘ２−ＣＨ（Ｒｘ３）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−；及び−（ＣＨ２）ｂ−（Ｏ）０−１−（ＣＨ２）ｂ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され；
ａは０〜６の整数であり；
ｂは１〜６の整数であり；
Ｒｘは、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；−Ｃ（Ｈ）２−ｘ（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ｘ）−；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
Ｒｘ１は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ２は、フェニル；Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン；ナフチル；及びアントラシルから選択され、
前記フェニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、ナフチル又はアントラシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ＲＸ３は、水素；フェニル；及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され、
前記フェニル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル又はハロによって独立して、１、２、３又は４回、任意選択的に置換されており；
ｘは０〜２の整数であり；
ＹはＣ（Ｏ）であり；且つ
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ、フェニル若しくはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルによって任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル；又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキルから独立して選択される、
請求項３又は４に記載の固体担体。
【請求項６】
Ｘ１が、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つ未置換であるＣ１〜Ｃ２０アルキレン鎖である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項７】
Ｘが、鎖が線形であるか、又は分岐しており、且つ未置換であるＣ１〜Ｃ１０アルキレン鎖である、請求項６に記載の固体担体。
【請求項８】
前記カチオン部分が式ＩＩの化合物である、請求項３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項９】
前記カチオン部分が式ＩＩＩの化合物である、請求項３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１０】
ＲがＨである、請求項３〜９のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がそれぞれ独立してＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が同一である、請求項１１に記載の固体担体。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がそれぞれメチルである、請求項１２に記載の固体担体。
【請求項１４】
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立して水素及びＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される、請求項３、１０〜１３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１５】
Ｒ９が水素である、請求項３、９〜１３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１６】
Ｒ１０がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項３、８、１０〜１３のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１７】
Ｒ１０がメチルである、請求項１６に記載の固体担体。
【請求項１８】
前記固形物体が架橋されたポリエチレングリコールポリマーから形成される、請求項３〜１７のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項１９】
前記固形物体が、式（ＩＶ）のＮｏｖａＰＥＧ樹脂
【化１０】
2021523901.tif 000064
又は式（ＶＩ）のＴｅｎｔａＧｅｌ樹脂
【化１１】
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から形成される、請求項３〜１７のいずれか一項に記載の固体担体。
【請求項２０】
前記固形物体が式（ＩＶ）のＮｏｖａＰＥＧ樹脂から形成される、請求項１８又は１９に記載の固体担体。
【請求項２１】
請求項３〜２０のいずれか一項に定義される固体担体上へＤＮＡ標識化合物を吸着するステップと、非水性溶媒系中で、担持された前記ＤＮＡ標識化合物を試薬と反応させるステップとを含む、１つ又はそれ以上の非水性溶媒を使用するＤＮＡ複合化合物を反応させる方法。
【請求項２２】
前記固体担体から生成物を放出するステップをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＤＮＡ複合化合物を担持するための請求項３〜２０のいずれか一項に記載の固体担体の使用。
【国際調査報告】
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