(57)【要約】本開示は、少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤を含む医薬的組合せを提供する。また、治療有効量の少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤を投与することを含む、がんを治療する方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）治療有効量の少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター、並びに（ｉｉ）ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、プラジエノライド誘導体から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７、Ｈ３Ｂ−８８００及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１又は請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｈ３Ｂ−８８００及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、立体異性的に純粋である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約８０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９５重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９７重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＨＡ１４−１、ＢＨ３Ｉ−１、アンチマイシンＡ、ケレリトリン、ゴシポール（ＮＳＣ１９０４８）、アポゴシポール（ＮＳＣ７３６６３０）、ＴＷ−３７、４−（３−メトキシ−フェニルスルホニル）−７−ニトロ−ベンゾフラン−３−オキシド（ＭＮＢ）、ＴＭ１２−０６、オバトクラクス（ＧＸ１５−０７０）、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＡＢＴ７３７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの阻害剤が、Ａ−１３３１８５２及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、経口投与のために製剤化されている、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの阻害剤が、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの阻害剤が、経口投与のために製剤化されている、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
（ｉ）少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター、並びに（ｉｉ）ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤を含む、がんの治療における使用のための組合せであって、前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に投与される、使用のための組合せ。
【請求項２２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、プラジエノライド誘導体から選択される、請求項２１に記載の使用のための組合せ。
【請求項２３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７、Ｈ３Ｂ−８８００及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１又は請求項２２に記載の使用のための組合せ。
【請求項２４】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項２５】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｈ３Ｂ−８８００及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項２６】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、立体異性的に純粋である、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約８０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項２８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項２９】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９５重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３０】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９７重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＨＡ１４−１、ＢＨ３Ｉ−１、アンチマイシンＡ、ケレリトリン、ゴシポール（ＮＳＣ１９０４８）、アポゴシポール（ＮＳＣ７３６６３０）、ＴＷ−３７、４−（３−メトキシ−フェニルスルホニル）−７−ニトロ−ベンゾフラン−３−オキシド（ＭＮＢ）、ＴＭ１２−０６、オバトクラクス（ＧＸ１５−０７０）、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３２】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜３１のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３３】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３４】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３５】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＡＢＴ７３７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３６】
前記少なくとも１つの阻害剤が、Ａ−１３３１８５２及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項２１〜３６のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、経口投与のために製剤化されている、請求項２１〜３７のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項３９】
前記少なくとも１つの阻害剤が、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項２１〜３８のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４０】
前記少なくとも１つの阻害剤が、経口投与のために製剤化されている、請求項２１〜３９のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４１】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と同時に投与される、請求項２１〜４０のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と連続的に投与される、請求項２１〜４０のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と別々に投与される、請求項２１〜４０のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４４】
前記がんが、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管癌及び肺がんから選択される、請求項２１〜４３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４５】
前記がんが、肺がんである、請求項４４に記載の使用のための組合せ。
【請求項４６】
前記肺がんが、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌から選択される、請求項４５に記載の使用のための組合せ。
【請求項４７】
前記がんが、血液がんから選択される、請求項２１〜４３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項４８】
前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群及び多発性骨髄腫から選択される、請求項４７に記載の使用のための組合せ。
【請求項４９】
前記がんが、固形腫瘍から選択される、請求項２１〜４３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項５０】
前記固形腫瘍が、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、肺がん、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫及び黒色腫から選択される、請求項４９に記載の使用のための組合せ。
【請求項５１】
前記がんが、ＭＣＬ１依存性がんから選択される、請求項２１〜４３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項５２】
前記ＭＣＬ１依存性がんが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、肺がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫及び黒色腫から選択される、請求項５１に記載の使用のための組合せ。
【請求項５３】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質の１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項２１〜４３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項５４】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１（Ｕ２ＡＦ１）、セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ジンクフィンガー（ＣＣＣＨ型）ＲＮＡ結合モチーフ及びセリン／アルギニンリッチ２（ＺＲＳＲ２）、プレｍＲＮＡプロセシングスプライシング因子８（ＰＲＰＦ８）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２（Ｕ２ＡＦ２）、スプライシング因子１（ＳＦ１）、スプライシング因子３ａサブユニット１（ＳＦ３Ａ１）、ＰＲＰ４０プレｍＲＮＡプロセシング因子４０ホモログＢ（ＰＲＰＦ４０Ｂ）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０（ＲＢＭ１０）、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１（ＰＣＢＰ１）、クルックドネックプレｍＲＮＡスプライシング因子１（ＣＲＮＫＬ１）、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９（ＤＨＸ９）、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼ様２（ＰＰＩＬ２）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２（ＲＢＭ２２）、核内低分子リボヌクレオタンパク質Ｓｍ  Ｄ３（ＳＮＲＰＤ３）、推定ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（ＤＤＸ５）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５（ＤＨＸ１５）及びポリアデニル酸結合タンパク質１（ＰＡＢＰＣ１）から選択される、請求項５３に記載の使用のための組合せ。
【請求項５５】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）である、請求項５４に記載の使用のための組合せ。
【請求項５６】
がんの治療のための薬剤の製造における、（ｉ）少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター、並びに（ｉｉ）ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤を含む組合せの使用であって、前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に投与される、使用。
【請求項５７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、プラジエノライド誘導体から選択される、請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７、Ｈ３Ｂ−８８００及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６又は請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６０】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｈ３Ｂ−８８００及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６１】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、立体異性的に純粋である、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約８０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６４】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９５重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６５】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９７重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６６】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＨＡ１４−１、ＢＨ３Ｉ−１、アンチマイシンＡ、ケレリトリン、ゴシポール（ＮＳＣ１９０４８）、アポゴシポール（ＮＳＣ７３６６３０）、ＴＷ−３７、４−（３−メトキシ−フェニルスルホニル）−７−ニトロ−ベンゾフラン−３−オキシド（ＭＮＢ）、ＴＭ１２−０６、オバトクラクス（ＧＸ１５−０７０）、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜６５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６７】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜６６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６８】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜６７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６９】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜６７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７０】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＡＢＴ７３７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜６７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７１】
前記少なくとも１つの阻害剤が、Ａ−１３３１８５２及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項５６〜６７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項５６〜７１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、経口投与のために製剤化されている、請求項５６〜７２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７４】
前記少なくとも１つの阻害剤が、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項５６〜７３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７５】
前記少なくとも１つの阻害剤が、経口投与のために製剤化されている、請求項５６〜７４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７６】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と同時に投与される、請求項５６〜７５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と連続的に投与される、請求項５６〜７５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と別々に投与される、請求項５６〜７５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７９】
前記がんが、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管癌及び肺がんから選択される、請求項５６〜７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８０】
前記がんが、肺がんである、請求項７９に記載の使用。
【請求項８１】
前記肺がんが、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌から選択される、請求項８０に記載の使用。
【請求項８２】
前記がんが、血液がんから選択される、請求項５６〜７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８３】
前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群及び多発性骨髄腫から選択される、請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
前記がんが、固形腫瘍から選択される、請求項５６〜７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８５】
前記固形腫瘍が、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、肺がん、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫及び黒色腫から選択される、請求項８４に記載の使用。
【請求項８６】
前記がんが、ＭＣＬ１依存性がんから選択される、請求項５６〜７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８７】
前記ＭＣＬ１依存性がんが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、肺がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫及び黒色腫から選択される、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質の１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項５６〜７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８９】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１（Ｕ２ＡＦ１）、セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ジンクフィンガー（ＣＣＣＨ型）ＲＮＡ結合モチーフ及びセリン／アルギニンリッチ２（ＺＲＳＲ２）、プレｍＲＮＡプロセシングスプライシング因子８（ＰＲＰＦ８）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２（Ｕ２ＡＦ２）、スプライシング因子１（ＳＦ１）、スプライシング因子３ａサブユニット１（ＳＦ３Ａ１）、ＰＲＰ４０プレｍＲＮＡプロセシング因子４０ホモログＢ（ＰＲＰＦ４０Ｂ）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０（ＲＢＭ１０）、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１（ＰＣＢＰ１）、クルックドネックプレｍＲＮＡスプライシング因子１（ＣＲＮＫＬ１）、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９（ＤＨＸ９）、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼ様２（ＰＰＩＬ２）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２（ＲＢＭ２２）、核内低分子リボヌクレオタンパク質Ｓｍ  Ｄ３（ＳＮＲＰＤ３）、推定ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（ＤＤＸ５）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５（ＤＨＸ１５）及びポリアデニル酸結合タンパク質１（ＰＡＢＰＣ１）から選択される、請求項８８に記載の使用。
【請求項９０】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）である、請求項８９に記載の使用。
【請求項９１】
がんを治療する方法であって、（ｉ）治療有効量の少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター、並びに（ｉｉ）ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、前記少なくとも１つの阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に投与される、方法。
【請求項９２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、プラジエノライド誘導体から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７、Ｈ３Ｂ−８８００及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項４５又は請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｅ７１０７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、Ｈ３Ｂ−８８００及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、立体異性的に純粋である、請求項９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約８０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９０重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９５重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターが、約９７重量％を超える１つの立体異性体を含む、請求項９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＨＡ１４−１、ＢＨ３Ｉ−１、アンチマイシンＡ、ケレリトリン、ゴシポール（ＮＳＣ１９０４８）、アポゴシポール（ＮＳＣ７３６６３０）、ＴＷ−３７、４−（３−メトキシ−フェニルスルホニル）−７−ニトロ−ベンゾフラン−３−オキシド（ＭＮＢ）、ＴＭ１２−０６、オバトクラクス（ＧＸ１５−０７０）、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）又はその薬学的に許容できる塩である、請求項９１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記少なくとも１つの阻害剤が、ＡＢＴ７３７及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記少なくとも１つの阻害剤が、Ａ−１３３１８５２及びその薬学的に許容できる塩から選択される、請求項９１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記スプライソソームモジュレーターが、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項９１〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記スプライソソームモジュレーターが、経口投与のために製剤化されている、請求項９１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記少なくとも１つの阻害剤が、静脈内、経口、皮下又は筋肉内の投与のために製剤化されている、請求項９１〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記少なくとも１つの阻害剤が、経口投与のために製剤化されている、請求項９１〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター及び前記少なくとも１つの阻害剤が、連続的に投与される、請求項９１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター及び前記少なくとも１つの阻害剤が、別々に投与される、請求項９１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記少なくとも１つのスプライソソームモジュレーター及び前記少なくとも１つの阻害剤が、同時に投与される、請求項９１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記がんが、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管癌及び肺がんから選択される、請求項９１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記がんが、肺がんである、請求項９１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記がんが、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌から選択される、請求項９１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記がんが、血液がんである、請求項９１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記血液がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項９１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記固形腫瘍が、結腸又は結腸直腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、黒色腫、胃がん、胆管癌、前立腺がん、子宮頸がん、神経膠腫及び肺がんから選択される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記黒色腫が、ブドウ膜黒色腫である、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記がんが、ＭＣＬ１依存性がんである、請求項９１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＭＣＬ１依存性がんが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、肺がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫及び黒色腫から選択される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質の１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項９１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１（Ｕ２ＡＦ１）、セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ジンクフィンガー（ＣＣＣＨ型）ＲＮＡ結合モチーフ及びセリン／アルギニンリッチ２（ＺＲＳＲ２）、プレｍＲＮＡプロセシングスプライシング因子８（ＰＲＰＦ８）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２（Ｕ２ＡＦ２）、スプライシング因子１（ＳＦ１）、スプライシング因子３ａサブユニット１（ＳＦ３Ａ１）、ＰＲＰ４０プレｍＲＮＡプロセシング因子４０ホモログＢ（ＰＲＰＦ４０Ｂ）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０（ＲＢＭ１０）、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１（ＰＣＢＰ１）、クルックドネックプレｍＲＮＡスプライシング因子１（ＣＲＮＫＬ１）、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９（ＤＨＸ９）、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼ様２（ＰＰＩＬ２）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２（ＲＢＭ２２）、核内低分子リボヌクレオタンパク質Ｓｍ  Ｄ３（ＳＮＲＰＤ３）、推定ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（ＤＤＸ５）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５（ＤＨＸ１５）及びポリアデニル酸結合タンパク質１（ＰＡＢＰＣ１）から選択される、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）である、請求項１２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１つのスプライソソームモジュレーターと、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬＸＬ阻害剤及びＢＣＬＸＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤とを含む組合せ、並びに使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0001]本出願は、２０１７年１０月３１日に出願された米国特許仮出願第６２／５７９，６６６号及び２０１７年１１月１日に出願された米国特許仮出願第６２／５８０，３６４号の優先権を主張し、該米国特許仮出願のそれぞれは、その全体において、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
[0002]ＢＣＬ２ファミリー遺伝子は、アポトーシスの制御に特に重要な役割を果たす、ＢＨドメイン含有抗アポトーシス性／生存促進性タンパク質をコードする。少なくとも５つのＢＣＬ２タンパク質である、ＢＣＬ２、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ２、ＢＣＬ２Ａ１及びＭＣＬ１があり、これらは様々ながんの種類における腫瘍細胞の生存に関与している（例えば、Ｄｅｌｂｒｉｄｇｅ  ＡＲＤら、２０１６年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １６、９９〜１０９；Ｃｚａｂｏｔａｒ  ＰＥら、２０１４年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．１５、４９〜６３参照）。ＢＣＬ２ファミリータンパク質を阻害するために、例えば、ＡＢＴ１９９（ベネトクラクス）、ＡＢＴ２６３（ナビトクラクス）、Ａ−１３３１８５２及びＡＢＴ７３７を含む、いくつかの化合物が開発されている。ＢＣＬ２阻害剤は、細胞毒性剤として有望とされているが、これらの化合物は、ＭＣＬ１の抗アポトーシス性作用を阻害することができない。特に、ＭＣＬ１は多くのがんの種類で局所的に増幅される（Ｚａｃｋ  ＴＩら、２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ４５、１１３４〜１１４０）。ＢＣＬ２Ｌ１（ＢＣＬｘＬ）の高発現は、ＭＣＬ１抑制に耐性を付与し、且つＭＣＬ１増幅／過剰発現は、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤に耐性を付与する主要なメカニズムであることが報告されている（例えば、Ｗｅｉ  Ｇら、２０１２年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（４）：５４７〜５６２、Ｌｉｎ  Ｘら、２００７年、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６（２７）：３９７２〜３９７９、Ｔｅｈ  ＴＣら、２０１７年、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１７．２４３参照）。ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤への耐性を克服するための効果的な療法が必要とされている。
【０００４】
[0003]併用療法が、がんの単剤治療の不完全な応答及び治療耐性を克服するのに役立つ証拠が相次いで示されている（Ｓｅｌｌｅｒｓ  ＷＲ、２０１１年、Ｃｅｌｌ  １４７（１）：２６〜３１）。例えば、ＭＡＰＫ経路阻害剤であるベムラフェニブ（ＲＡＦ阻害剤）とコビメチニブ（ＭＥＫ阻害剤）との組合せは、Ｂ−ＲＡＦ変異を有する黒色腫患者の治療に対してＦＤＡによって承認されている（Ｆｌａｈｅｒｔｙ  ＫＴら、２０１２年、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６７：１６９４〜１７０３）。しかし、効果的な併用療法の開発は、特に証拠に基づく薬物の組合せには、臨床的な組み合わせ活性を予測する効率的な前臨床的アプローチが欠如しているために一部困難をきたしている。メカニズムに基づく薬物の組み合わせ戦略は、基礎研究からの標的及び経路関連の生物学的所見に頼ることによって、前臨床及び臨床の場で適用されている。作用メカニズムの複雑さを考えると、細胞毒性剤に効果的な組合せを同定するためには、多くの障害が存在している。
【発明の概要】
【０００５】
[0004]本開示は、ある特定のスプライソソームモジュレーター（例えば、プラジエノライド化合物）と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せが、抗がん効果の改善（例えば、相乗的）を示すという観察結果に基づく。スプライソソーム及びその突然変異を標的化するプラジエノライド化合物は、特に有用である。したがって、本明細書で提供されるのは、治療有効量の少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター（例えば、Ｅ７１０７及び／又はＨ３Ｂ−８８００）、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤を投与することを含む、がんを治療するための併用療法である。
【０００６】
[0005]治療有効量の少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター（例えば、Ｅ７１０７及び／又はＨ３Ｂ−８８００）と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤との組合せを使用する、がんを治療するための方法、併用療法、医薬組成物及びキットもまた提供される。
【０００７】
[0006]本開示の他の特徴は、以下の詳細な説明、図面及び特許請求の範囲から明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＭＣＬ１過剰発現及びＭＣＬ１依存性の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株の同定を示す図である。図１は、ＭＣＬ１Ｌ（全長ＭＣＬ１）及びＧＡＰＤＨ（ローディング対照）のウエスタンブロット分析を示す図である。ライセート希釈を半定量標準として使用した。
【図２】ＭＣＬ１過剰発現及びＭＣＬ１依存性の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株の同定を示す図である。図２は、ｓｈＲＮＡによるＭＣＬ１のノックダウン時の細胞株の増殖阻害を示す図である。ＣＮＴＲＬ：対照のｓｈＲＮＡ；Ｄｏｘ：ドキシサイクリン。
【図３】Ｅ７１０７が、ＮＣＩＨ１５６８細胞においてＭＣＬ１のスプライシングモジュレーションを誘導することを示す図である。図３は、ＭＣＬ遺伝子スプライシングの概略図である。
【図４】Ｅ７１０７が、ＮＣＩＨ１５６８細胞においてＭＣＬ１のスプライシングモジュレーションを誘導することを示す図である。図４は、ＭＣＬ１のｍＲＮＡである、ＭＣＬ１Ｌ：エクソン１、２及び３を含有する長い形態、ＭＣＬ１Ｓ：エクソン１及び３を含有する短い形態、ＭＣＬ１のプレｍＲＮＡ：イントロン１保持のｍＲＮＡの定量的ＲＴ−ＰＣＲ検出を示す図である。
【図５】Ｅ７１０７が、ＮＣＩＨ１５６８細胞においてＭＣＬ１のスプライシングモジュレーションを誘導することを示す図である。図５は、Ｅ７１０７で６時間の処理後のＭＣＬ１Ｌ（全長）、トランケート型ＭＣＬ１、切断型ＰＡＲＰ、及びチューブリン（ローディング対照）のウエスタンブロット分析を示す図である。
【図６】Ｅ７１０７誘導性細胞毒性がＭＣＬ１及びＢＣＬｘＬ依存性であることを示す図である。図６は、ＮＣＩＨ１５６８細胞におけるＭＣＬ１Ｌの誘導性ｃＤＮＡ発現を示す図である。ウエスタンブロット分析では、ＭＣＬ１Ｌ及びＧＡＰＤＨ（ローディング対照）の発現を示した。ＣＮＴＲＬ：対照ベクター。
【図７】Ｅ７１０７誘導性細胞毒性がＭＣＬ１及びＢＣＬｘＬ依存性であることを示す図である。図７は、空ベクター（対照）及びＭＣＬ１ＬのｃＤＮＡ過剰発現を伴うＮＣＩＨ１５６８細胞株の増殖阻害を示す図である。
【図８】Ｅ７１０７誘導性細胞毒性がＭＣＬ１及びＢＣＬｘＬ依存性であることを示す図である。図８は、Ａ５４９細胞における（ＢＣＬ２Ｌ１によりコードされる）ＢＣＬｘＬの誘導性ｓｈＲＮＡ媒介ノックダウンを示す図である。ウエスタンブロット分析では、ＢＣＬｘＬ及びＧＡＰＤＨ（ローディング対照）の発現を示した。
【図９】Ｅ７１０７誘導性細胞毒性がＭＣＬ１及びＢＣＬｘＬ依存性であることを示す図である。図９は、ＢＣＬｘＬのＤｏｘ誘導性ノックダウン時のＡ５４９細胞株の増殖阻害を示す図である。Ｄｏｘ：ドキシサイクリン。
【図１０Ａ】４つのＮＳＣＬＣ細胞株におけるＥ７１０７及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。この試験は、ベクター対照又はＢＣＬｘＬのｓｈＲＮＡで実施された。
【図１０Ｂ】４つのＮＳＣＬＣ細胞株におけるＥ７１０７及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。この試験は、ベクター対照又はＢＣＬｘＬのｓｈＲＮＡで実施された。
【図１０Ｃ】４つのＮＳＣＬＣ細胞株におけるＥ７１０７及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。この試験は、ベクター対照又はＢＣＬｘＬのｓｈＲＮＡで実施された。
【図１０Ｄ】４つのＮＳＣＬＣ細胞株におけるＥ７１０７及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。この試験は、ベクター対照又はＢＣＬｘＬのｓｈＲＮＡで実施された。
【図１１】Ａ５４９細胞株におけるＥ７１０７及びＡＢＴ１９９による処理の相乗効果を示す図である。この試験は、ベクター対照又はＢＣＬｘＬのｓｈＲＮＡで実施された。
【図１２Ａ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＵ２６６Ｂ１及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。
【図１２Ｂ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＵ２６６Ｂ１及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。
【図１２Ｃ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＵ２６６Ｂ１及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。
【図１２Ｄ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＵ２６６Ｂ１及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ２６３による処理の相乗効果を示す図である。
【図１３Ａ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＪＪＮ３及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ１９９による処理の相乗効果を示す図である。
【図１３Ｂ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＪＪＮ３及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ１９９による処理の相乗効果を示す図である。
【図１３Ｃ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＪＪＮ３及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ１９９による処理の相乗効果を示す図である。
【図１３Ｄ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＪＪＮ３及びＲＰＭＩ８２２６におけるＨ３Ｂ−８８００及びＡＢＴ１９９による処理の相乗効果を示す図である。
【図１４Ａ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＲＰＭＩ８２２６及びＭＭ１ＳにおけるＨ３Ｂ−８８００及びＡ−１３３１８５２による処理の相乗効果を示す図である。
【図１４Ｂ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＲＰＭＩ８２２６及びＭＭ１ＳにおけるＨ３Ｂ−８８００及びＡ−１３３１８５２による処理の相乗効果を示す図である。
【図１４Ｃ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＲＰＭＩ８２２６及びＭＭ１ＳにおけるＨ３Ｂ−８８００及びＡ−１３３１８５２による処理の相乗効果を示す図である。
【図１４Ｄ】２つの多発性骨髄腫細胞株であるＲＰＭＩ８２２６及びＭＭ１ＳにおけるＨ３Ｂ−８８００及びＡ−１３３１８５２による処理の相乗効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
[0015]特に明記されていない限り、本明細書で使用される場合、以下の定義が適用される。
【００１０】
[0016]「異性体」とは、同じ数及び種類の原子を有し、したがって同じ分子量を有するが、原子の配置又は構成に関して異なる化合物を指す。「立体異性体」とは、同じ原子の接続性を有するが、空間でのそれらの原子の配置が異なる化合物を指す。「ジアステレオ異性体」又は「ジアステレオマー」とは、鏡像異性体ではない立体異性体を指す。「鏡像異性体」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体を指す。「幾何異性体」とは、二重結合又は環若しくは中心原子に対して基の位置が異なるシス−トランス異性体を指す。
【００１１】
[0017]本明細書にて教示される鏡像異性体は、例えば、特定の１つ又は複数の非対称中心において、単一の鏡像異性体の９０％、９２％、９５％、９８％又は９９％以上、又は１００％に等しい、単一の鏡像異性体を本質的に含む「鏡像異性的に純粋な」異性体を含むことができる。「非対称中心」又は「キラル中心」とは、４つの異なる置換基を含む四面体炭素原子を指す。
【００１２】
[0018]本明細書で使用される場合、「立体異性的に純粋な」とは、化合物の１つの立体異性体を含み、且つその化合物の他の立体異性体を本質的に含まない化合物又はその組成物を意味する。例えば、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、該化合物の対する鏡像異性体を本質的に含まないことになる。２つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、該化合物の、ジアステレオマーを本質的に含まず、且つ対する鏡像異性体を本質的に含まないことになる。一般的な立体異性的に純粋な化合物は、化合物の約８０重量％を超える１つの立体異性体及び化合物の約２０重量％未満の他の立体異性体を含み、さらに好ましくは、化合物の約９０重量％を超える１つの立体異性体及び化合物の約１０重量％未満の他の立体異性体を含み、なおさらに好ましくは、化合物の約９５重量％を超える１つの立体異性体及び化合物の約５重量％未満の他の立体異性体を含み、最も好ましくは、化合物の約９７重量％を超える１つの立体異性体及び化合物の約３重量％未満の他の立体異性体を含む。例えば、米国特許第７，１８９，７１５号を参照。
【００１３】
[0019]異性体を示す用語としての「Ｒ」及び「Ｓ」とは、非対称置換炭素原子における立体化学構造の記述子である。「Ｒ」又は「Ｓ」のような非対称置換炭素原子の指定は、当業者に周知であり、且つ国際純正応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）命名法の有機化学、Ｅ項、立体化学に記載されているとおり、カーン−インゴルド−プレローグ順位則の適用によって行われる。
【００１４】
[0020]がんの「治療」、がんを「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本明細書に記載される場合、がんを後退させること（例えば、細胞の分化遮断を克服すること）、がんを緩和すること（例えば、貧血、血球数低下などによる疲労などの１つ又は複数の症状を緩和すること）、及び／又はがんの進行を遅らせること（例えば、ＡＭＬへの転換などの状態の進行を遅らせること）を指す。
【００１５】
[0021]本明細書で使用される場合、「対象」とは、動物対象、好ましくは哺乳類の対象、特にヒトを意味する。
【００１６】
[0022]本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」とは、製剤化される化合物の薬理学的活性を破壊しない非毒性の担体、アジュバント又はビヒクルを指す。本発明の組成物で使用することができる薬学的に許容できる担体、アジュバント又はビヒクルは、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース由来物質、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及びウール脂肪などが含まれる。
【００１７】
[0023]「薬学的に許容できる塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、且つ望まない毒性作用を与えない塩である。そのような塩の例は、（ａ）例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などの無機酸で形成される酸付加塩、及び例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などの有機酸で形成される塩、並びに（ｂ）塩素、臭素及びヨウ素などの元素アニオンから形成される塩である。例えば、Ｈａｙｎｅｓら、「Ｃｏｍｍｅｎｔａｒｙ：Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ａｎｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、９４巻、１０号（２００５年）、及びＢｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、６６巻、１号（１９７７年）を参照。これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
[0024]特に明記されていない限り、本明細書で示される化合物は、本明細書で示される化合物の混合物、並びに鏡像異性体、ジアステレオマー及び／又は幾何異性体（又は立体配座）の構造形態のいずれか、例えば、各非対称中心のＲ及びＳの構成、（Ｚ）及び（Ｅ）の二重結合異性体、並びに（Ｚ）及び（Ｅ）の配座異性体を含む。特に明記しない限り、本明細書に示される、互変異性形態と共存する化合物は、本発明の範囲内である。さらに、特に明記しない限り、本明細書に示される構造は、１つ又は複数の同位体濃縮原子の存在においてのみが異なる化合物を含むことも意味する。例えば、重水素若しくは三重水素による水素の置き換え、又は１３Ｃ若しくは１４Ｃ濃縮炭素による炭素の置き換えを除いて、本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツール又はプローブとして有用であることがある。
【００１９】
[0025]がんの治療用のスプライシングモジュレーターとして、様々なプラジエノライド化合物が開発されており、以下の特許出願で開示されたものを含む。国際公開第２００２／０６０８９０号、国際公開第２００４／０１１４５９号、国際公開第２００４／０１１６６１号、国際公開第２００４／０５０８９０号、国際公開第２００５／０５２１５２号、国際公開第２００６／００９２７６号、国際公開第２００８／１２６９１８号及び国際公開第２０１５／１７５５９４号。これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、プラジエノライド化合物である（８Ｅ，１２Ｅ，１４Ｅ）−７−（（４−シクロヘプチルピペラジン−１−イル）カルボニル）オキシ−３，６，１６，２１−テトラヒドロキシ−６，１０，１２，１６，２０−ペンタメチル−１８，１９−エポキシトリコサ−８，１２，１４−トリエン−１１−オリドは、Ｅ７１０７としても知られ、天然産物プラジエノライドＤの半合成誘導体であり、その第Ｉ相試験の結果が報告されている：
【化１】
2021505526.tif 000002
【００２０】
[0026]別の例として、プラジエノライドピリジン化合物である（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデク−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（別名「（２Ｓ，３Ｓ，４Ｅ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（２Ｅ，４Ｅ，６Ｒ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデク−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート」）は、Ｈ３Ｂ−８８００としても知られ、ある特定の血液がんの治療の希少疾病用医薬品の指定を受けており、次の構造を有する：
【化２】
2021505526.tif 000003
【００２１】
[0027]いくつかの実施形態では、併用療法に使用する少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーターは、化学式１（「Ｅ７１０７」）：
【化３】
2021505526.tif 000004
及びその薬学的に許容できる塩から選択される。
【００２２】
[0028]いくつかの実施形態では、併用療法に使用する少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーターは、化学式２（「Ｈ３Ｂ−８８００」）：
【化４】
2021505526.tif 000005
及びその薬学的に許容できる塩から選択される。
【００２３】
[0029]本明細書で使用される場合、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤は、これらに限定されないが、ＨＡ１４−１、ＢＨ３Ｉ−１、アンチマイシンＡ、ケレリトリン、ゴシポール（ＮＳＣ１９０４８）、アポゴシポール（ＮＳＣ７３６６３０）、ＴＷ−３７、４−（３−メトキシ−フェニルスルホニル）−７−ニトロ−ベンゾフラン−３−オキシド（ＭＮＢ）、ＴＭ１２−０６、オバトクラクス（ＧＸ１５−０７０）、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２及びＡＢＴ７３７を含む。
【００２４】
[0030]いくつかの実施形態では、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤は、ベネトクラクス（ＡＢＴ１９９）、ナビトクラクス（ＡＢＴ２６３）、Ａ−１３３１８５２、ＡＢＴ７３７及びそれらの薬学的に許容できる塩から選択される。
【００２５】
[0031]本明細書に開示されている方法は、血液学的悪性腫瘍及び固形腫瘍を含む、様々な種類のがんを治療するために使用することができる。
【００２６】
[0032]血液学的悪性腫瘍は、血液のがん（例えば、白血病）、若しくはリンパ節のがん（例えば、リンパ腫）、又は他の関連するがんを含むことができる。白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）などを含むことができる。リンパ腫は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含むことができる。他の血液学的悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）及び多発性骨髄腫（ＭＭ）を含むことができる。
【００２７】
[0033]固形腫瘍は、例えば、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、肺がん（非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む）、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫、黒色腫など、腺癌などのがんを含むことができる。
【００２８】
[0034]本明細書に開示されている方法は、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質、例えば、ＳＦ３Ｂ１を標的化する薬剤に応答することができるがんを治療するために使用されることも可能である。このようながんの例には、これらに限定されないが、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管癌、又は肺がん（非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む）を含む。例示的なスプライソソーム遺伝子又はタンパク質は、これらに限定されないが、スプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１（Ｕ２ＡＦ１）、セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ジンクフィンガー（ＣＣＣＨ型）ＲＮＡ結合モチーフ及びセリン／アルギニンリッチ２（ＺＲＳＲ２）、プレｍＲＮＡプロセシングスプライシング因子８（ＰＲＰＦ８）、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２（Ｕ２ＡＦ２）、スプライシング因子１（ＳＦ１）、スプライシング因子３ａサブユニット１（ＳＦ３Ａ１）、ＰＲＰ４０プレｍＲＮＡプロセシング因子４０ホモログＢ（ＰＲＰＦ４０Ｂ）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０（ＲＢＭ１０）、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１（ＰＣＢＰ１）、クルックドネックプレｍＲＮＡスプライシング因子１（ＣＲＮＫＬ１）、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９（ＤＨＸ９）、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼ様２（ＰＰＩＬ２）、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２（ＲＢＭ２２）、核内低分子リボヌクレオタンパク質Ｓｍ  Ｄ３（ＳＮＲＰＤ３）、推定ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（ＤＤＸ５）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５（ＤＨＸ１５）、及びポリアデニル酸結合タンパク質１（ＰＡＢＰＣ１）を含む。
【００２９】
[0035]本明細書に開示されている方法は、ＭＣＬ１依存性がんを治療するために使用されることも可能である。ＭＣＬ１依存性がんの例としては、これらに限定されないが、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、及び固形腫瘍を含むことができる。ＭＣＬ１依存性白血病は、これらに限定されないが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、及び急性単球性白血病を含むことができる。ＭＣＬ１依存性リンパ腫は、これらに限定されないが、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含むことができる。ＭＣＬ１依存性固形腫瘍は、これらに限定されないが、肺がん（例えば、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌）、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、胃がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管癌、神経膠腫及び黒色腫を含むことができる。
【００３０】
[0036]ＭＣＬ１の高発現を伴うがんは、直接的な標的阻害又は遺伝子レベルの摂動、例えば、転写阻害若しくはスプライシング阻害のいずれかによるＭＣＬ１阻害に感受性であることが示されている（Ｇａｏ  Ｙ、Ｋｏｉｄｅ  Ｋ、２０１３年、ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ、８（５）：８９５〜９００；Ｗｅｉ  Ｇら、２０１２年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（４）：５４７〜５６２）。また、ＢＣＬ−ｘＬの高発現が、ＭＣＬ１抑制に対する耐性を付与すること、そしてＭＣＬ１増幅／過剰発現が、ＢＣＬ２／ｘＬ阻害剤に対する耐性を付与する主要なメカニズムであることも示されている（例えば、Ｗｅｉ  Ｇら、２０１２年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（４）：５４７〜５６２；Ｌｉｎ  Ｘら、２００７年、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６（２７）：３９７２〜３９７９；Ｔｅｈ  ＴＣら、２０１７年、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１７．２４３を参照）。本明細書に記載されるとおり、いずれかの特定の理論に縛られることは望まないが、プラジエノライド誘導体のＥ７１０７及びＨ３Ｂ−８８００は、ＭＣＬ１遺伝子の強力なスプライシングモジュレーションを誘導することができ、機能的完全長タンパク質の発現の低下へ導くことができる。ＭＣＬ１タンパク質の減少は、がん細胞株で強い細胞死を引き起こすことができる。少なくとも１つのプラジエノライド誘導体（例えば、Ｅ７１０７及び／又はＨ３Ｂ−８８００）と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤との組合せは、がん細胞の相乗的な成長阻害を誘導することができる。したがって、少なくとも１つの小分子スプライシングモジュレーターと、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤との組合せは、抗アポトーシス遺伝子に依存するがんなどのがんを治療するために使用することができる。
【００３１】
[0037]また、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤を含む医薬組成物も本明細書に開示されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体をさらに含む。少なくとも１つの薬学的に許容できる担体は、意図される投与経路に従って選択することができる。
【００３２】
[0038]本明細書に開示されている医薬組成物は、非経口、経口、吸入スプレー、局所、直腸、経鼻、頬側、経膣又は埋め込み式リザーバーなどの投与のために製剤化することができる。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内の注射技術又は点滴技術を含む。特定の実施形態では、併用療法の化合物は、静脈内、経口、皮下、又は筋肉内の投与を介し、投与される。本開示の組成物の無菌の注射可能な形態は、水性又は油性の懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤、及び懸濁剤を使用して当業者に周知の技術に従い製剤化することができる。無菌の注射可能な調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオールの溶液のように、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤又は溶媒の無菌の注射可能な溶液又は懸濁液であってもよい。使用されることが可能な許容できるビヒクル及び溶媒には、水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油は、溶媒又は懸濁媒体として従来使用されている。
【００３３】
[0039]この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を使用することができる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、オリーブ油又はヒマシ油、特にポリオキシエチル化型、などの天然の薬学的に許容できる油と同様に、注射可能な調製物に有用である。これらの油性の溶液又は懸濁液はまた、エマルジョン及び懸濁液を含む薬学的に許容できる剤形の製剤において一般的に使用されるカルボキシメチルセルロース又は類似の分散剤などの長鎖アルコールの希釈剤又は分散剤を含有することができる。薬学的に許容できる固体、液体又は他の剤形の製造において一般的に使用される、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）、スパン（Ｓｐａｎ）及び他の乳化剤又は生物学的利用能増強剤などの他の一般的に使用される界面活性剤も、製剤化の目的で使用することができる。
【００３４】
[0040]経口投与には、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター並びに／又はＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤を、カプセル、錠剤、水性の懸濁液又は溶液を含むがこれらに限定されない、許容できる経口的剤形で提供することができる。経口使用の錠剤の場合、担体は、例えば、ラクトース及びコーンスターチから選択することができる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤もまた添加することができる。カプセル形態での経口投与には、有用な希釈剤は、ラクトース及び乾燥コーンスターチを含む。水性懸濁液が経口使用に必要な場合、活性成分が、乳化剤及び／又は懸濁剤と合わせられる。所望に応じて、ある特定の甘味料、着香料又は着色料も添加することができる。
【００３５】
[0041]いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、各活性剤の単一の剤形で又は別々若しくは連続の投与によって対象に投与される。
【００３６】
[0042]いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、錠剤、ピル、カプセル又は溶液に製剤化される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びに／又はＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、非経口投与の溶液に製剤化される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、１つのカプセル内に格納される分離領域又は異なるカプレットに製剤化される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、１つの錠剤中の分離層に製剤化される。
【００３７】
[0043]いくつかの実施形態では、医薬組成物が、治療有効量の少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤、並びに少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む。
【００３８】
[0044]いくつかの実施形態では、医薬組成物が、治療有効量のＥ７１０７、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤、並びに少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む。
【００３９】
[0045]いくつかの実施形態では、医薬組成物が、治療有効量のＨ３Ｂ−８８００、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤、並びに少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む。
【００４０】
[0046]いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤を、別々の組成物として、任意選択で異なる形態、例えば、別々の錠剤又は溶液として投与することができる。さらに、非限定的な例として、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤の両方を、経口錠剤として、別々に投与することができる。
【００４１】
[0047]いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤は、別々の組成物：
ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤、並びに少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物；及び
治療有効量の少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、及び少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物
として投与される。
【００４２】
[0048]いくつかの実施形態では、キットが本明細書で提供され、キットは、治療有効量の少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーターを含む第１の医薬組成物、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される治療有効量の少なくとも１つの阻害剤を含む第２の医薬組成物、並びにがんの治療におけるキットの使用説明書を含む。
【００４３】
[0049]いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、同時に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、連続的に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、間欠的に投与される。少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーターと、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤との投与の間の時間の長さは、所望の治療効果を達成するように調整することができる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、わずか数分間隔で投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤が、数時間（例えば、約２、４、６、１０、１２、２４又は３６時間）間隔で投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤のうちの一方の複数回の投薬を、残りの治療剤の投与の間に行うことが有益であることがある。例えば、一方の治療剤を１時に投与し、次いでもう一方の治療剤を投与した後１１時に再度投与することができる。いくつかの実施形態では、併用療法の全体的な治療効果が、併用療法の併用効果又は相乗効果に部分的に起因することができるように、プラジエノライドスプライソソームモジュレーター、及びＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤それぞれの治療効果が、持続期間の少なくとも一部の間、重なることが必要である。
【００４４】
[0050]本明細書で開示されている、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤は、治療有効（treatment effective）又は治療有効（therapeutically effective）量で、対象に投与することができる。少なくとも１つの薬学的に許容できる担体と合わせて単一の剤形を生成することができる、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤のそれぞれの量は、治療される対象及び意図される投与経路に応じて可変となる。
【００４５】
[0051]いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤のそれぞれが、０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の投薬量で、対象に投与されるように、医薬組成物が製剤化される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤のそれぞれが、１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲の投薬量で、対象に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤のそれぞれが、０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの範囲の投薬量で、対象に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーター、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤及びＢＣＬｘＬ阻害剤から選択される少なくとも１つの阻害剤のそれぞれが、１ｍｇ〜５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、又は５ｍｇ〜４０ｍｇの範囲の投薬量で提供される。
【００４６】
[0052]いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームモジュレーターが、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの投薬量範囲で投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームが、１ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームが、５ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのプラジエノライドスプライソソームが、８ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。
【００４７】
[0053]いくつかの実施形態では、Ｅ７１０７が、５ｍｇ／ｋｇの投薬量で５日間連続して静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、Ｈ３Ｂ−８８００が、８ｍｇ／ｋｇの投薬量で５日間連続して経口投与された後、９日間休止する。
【００４８】
[0054]当業者は、任意の特定の患者のための特定の投薬量及び治療レジメンが、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬物の組合せ、治療する医師の判断、及び治療されている特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存することを理解するであろう。併用療法の各活性剤の量は、組成物中の特定の化合物／塩にも依存することになる。
【００４９】
[0055]以下の実施例は、本明細書に記載される実施形態及びその使用がより十分に理解されるように記載される。これらの実施例は説明の目的のみのためであり、いかなる方法においても制限するように解釈されるものではないことを理解する必要がある。
【実施例】
【００５０】
Ａ．材料及び方法
１．細胞株及び細胞培養プロトコル
[0056]非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株のＡ５４９、ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ１５６８、ＮＣＩ−Ｈ１６５０、ＮＣＩ−Ｈ１９７５及びＮＣＩ−Ｈ２１１０を、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手し、製造元の指示のとおりに培養した。レンチウイルス形質導入により生成される誘導性ｓｈＲＮＡ株及び誘導性ｃＤＮＡ株を、標準の血清ではなくＴｅｔシステム仕様ＦＢＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を利用して製造元の指示に従って培養した。ＬｅｎｔｉＸ−２９３Ｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、感染用のｓｈＲＮＡ及びｃＤＮＡ過剰発現ウイルスの生成に使用し、製造元の指示に従って培養した。マイコプラズマ汚染についてこれらの細胞株を試験し、細胞同一性の確認を認証した。ピューロマイシン（０．２５〜１．２５μｇ／ｍｌ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ｓｈＲＮＡ発現細胞の選択に使用した。Ｇ４１８（０．５〜２ｍｇ／ｍＬ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、誘導性ｃＤＮＡ発現細胞の選択に使用した。ドキシサイクリンハイクレート（Ｓｉｇｍａ）（Ｄｏｘ）を、ｓｈＲＮＡ及びｃＤＮＡの誘導に使用した。
【００５１】
[0057]ＮＫＭ１細胞及びＫＯ５２細胞を、国立研究開発法人医薬基盤健康栄養研究所ＪＣＲＢ細胞バンクから入手する。ＨＮＴ３４細胞、ＭＯＮＯＭＡＣ６細胞及びＭＵＴＺ３細胞を、ドイツ細胞バンク（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ）から入手する。ＨＮＴ３４細胞及びＮＫＭ１細胞を、１０％ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ（ＡＴＣＣ）で維持する。ＫＯ５２細胞を、１０％ウシ胎児血清を有するＡｌｐｈａ−ＭＥＭ（ＡＴＣＣ）で維持する。ＭＯＮＯＭＡＣ６細胞を、２０％ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ（ＡＴＣＣ）で維持する。ＭＵＴＺ３細胞を、２０％ウシ胎児血清及び２０％５６３７条件培地を有するＡｌｐｈａ−ＭＥＭ（ＡＴＣＣ）で維持する。これらの細胞株を、加湿インキュベーターにおいて、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。
【００５２】
２．ＭＣＬ１及びＢＣＬｘＬのウエスタンブロット分析プロトコル
[0058]細胞株を、プロテアーゼ阻害剤カクテル（ミニコンプリート、ＥＤＴＡフリー、Ｒｏｃｈｅ）及びホスファターゼ阻害剤のＰｈｏｓＳＴＯＰ（Ｒｏｃｈｅ）を加えたＲＩＰＡ緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ  ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ）に溶解した。ライセートを、４倍ＬＤＳ試料用緩衝液（Ｎｕｐａｇｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び１０倍還元試薬（Ｎｕｐａｇｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を有するＲＩＰＡ緩衝液に希釈し、５分間煮沸した。１ウェルあたり、２５マイクログラムのタンパク質を、４〜１２％ビス−トリスＳＤＳ  Ｐａｇｅゲル（Ｎｏｖｅｘ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に充填した。ゲルを、ｉＢｌｏｔシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してニトロセルロース膜に転写した。膜を、ブロッキング緩衝液（１倍トリス緩衝生理食塩水＋０．１％ツイーン−２０（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）＋５％脱脂粉乳（Ｂｉｏ−Ｒａｄ））で１時間ブロックし、次いで裁断した。それぞれの裁断片を、ブロッキング緩衝液中で、以下の各タンパク質に対する抗体で別々にプローブした。１：５００希釈のＭＣＬ１（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ５４５３）（Ｄ３５Ａ５）ウサギモノクローナル抗体、１：５００希釈のＢＣＬ−ｘＬ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ２７６４）（５４Ｈ６）ウサギモノクローナル抗体、１：５００希釈の切断型Ｐａｒｐ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ５６２５）（Ｄ６４Ｐ１０）ウサギモノクローナル抗体、及び１００ｎｇ／ｍＬのＧＡＰＤＨ（Ｓｉｇｍａ  Ｇ８７９５）マウスモノクローナル抗体。ブロットを一次抗体希釈液で一晩４℃にて振とうしながらインキュベートした。次に、ウエスタンブロットをＯｄｙｓｓｅｙ  Ｌｉｃｏｒ又はＨＲＰ二次抗体のどちらかでブロットした。次いで、ブロットを、洗浄緩衝液（１倍トリス緩衝生理食塩水＋０．１％ツイーン−２０）を使用して４回洗浄した。Ｌｉｃｏｒを用いてイメージングしたブロットは、Ｌｉｃｏｒ  ＩＲ標識二次抗体である、ＩＲダイ（ＩＲＤｙｅ）（登録商標）８００ＣＷヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｏｄｙｓｓｅｙ  ９２５−３２２１１）及びＩＲダイ（登録商標）６８０ＬＴヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｏｄｙｓｓｅｙ  ９２５−６８０２０）をブロッキング緩衝液に１：１０，０００希釈したものを用いて、室温で１時間振とうしてプローブした。次いで、ブロットを、洗浄緩衝液で３回洗浄した。ＩＲ色素検出を、製造元の指示に従ってＬｉｃｏｒイメージングシステム（Ｏｄｙｓｓｅｙ）を使用して実施した。ＨＲＰを使用してイメージングしたブロットを、抗マウスＩｇＧ、ＨＲＰ結合抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ７０７６）及び抗ウサギＩｇＧ、ＨＲＰ結合抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ７０７４）をブロッキング緩衝液に１：５０００希釈したものを用いて、室温で１時間振とうしてプローブした。次いで、ブロットを、洗浄緩衝液で３回洗浄した。ＨＲＰ検出を、製造元の指示に従って、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｆｅｍｔｏ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して実施し、イメージクウォント（ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ）（商標）ＬＡＳ４０００生体分子撮像装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてイメージングした。
【００５３】
３．ＭＣＬ１の定量的リアルタイムＰＣＲプロトコル
[0059]ＲＮＡライセートを、化合物で処理される細胞から９６ウェルプレートに単離し、製造元の指示に従ってＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−ＣＴ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して逆転写した。定量ＰＣＲを、１８Ｓ  ｒＲＮＡ  ＶＩＣ−ＰＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｓｓａｙ  ＩＤ  Ｈｓ９９９９９９０１＿ｓ１）で二重化されるＭＣＬ１転写プローブ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＦＡＭ−ＺＥＮ／ＩＢＦＱ）を用いてＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して実施し、そしてΔΔＣｔ法を使用して定量した。
【００５４】
ＭＣＬ１Ｌのプローブセット
プライマー    ＡＴＡＴＧＣＣＡＡＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣ
プライマー    ＡＡＧＧＡＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＧＧ
プローブ      ＡＧＡＡＣＴＣＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＣ
ＭＣＬ１Ｓのプローブセット
プライマー    ＡＡＡＧＣＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＧＴ
プライマー    ＣＣＡＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＣＣＴＣＴＡＣＡＴ
プローブ      ＴＣＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＣＴＴＧＧＡＡＧＧＣＣ
ＭＣＬ１のプレｍＲＮＡイントロン１−エクソン２のプローブセット
プライマー    ＧＡＣＡＡＡＧＧＡＧＧＣＣＧＴＧＡＧＧＡ
プライマー    ＧＴＴＴＧＴＴＡＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＧＡＡＡ
プローブ      ＴＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＴＣＧＧＡＡＡＣＴＧＧＡ
【００５５】
４．誘導性のｓｈＲＮＡ及びｃＤＮＡプロトコル
[0060]ＢＣＬ−ｘＬのｓｈＲＮＡ１（ＧＣＴＣＡＣＴＣＴＴＣＡＧＴＣＧＧＡＡＡＴ）（Ｗｅｉ  Ｇら、２０１２年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（４）：５４７〜５６２）を、Ｔｅｔ誘導性レンチウイルスのｐＬＫＯ−ｉＫＤ−Ｈ１  ｐｕｒｏベクターのＡｇｅＩ及びＥｃｏＲＩにクローニングした（Ｗｉｅｄｅｒｓｃｈａｉｎ  Ｄら、２００９年、Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ８（３）：４９８〜５０４）。ＭＣＬ１のｓｈＲＮＡ４８（ＧＣＡＴＣＧＡＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＡＡＡ）（Ｗｅｉ  Ｇら、２０１２年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（４）：５４７〜５６）を、Ｔｅｔ誘導性レンチウイルスのｐＬＫＯ−ｉＫＤ−Ｕ６  ｐｕｒｏベクターのＡｇｅＩ及びＥｃｏＲＩにクローニングした。ＭＣＬ１−ＬのｐＥＮＴＲ−Ｄ−ＴＯＰＯを、ｐＩＮＤＵＣＥＲ２０にゲートウェイクローニングした（ＬＲクロナーゼ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（Ｍｅｅｒｂｒｅｙ  ＫＬら、２０１１年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１０８（９）：３６６５〜３６７０）。レンチウイルスを、ＬｅｎｔｉＸ−２９３Ｔ細胞で調製した。１０ｃｍ  Ｂｉｏｃｏａｔ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  ＩＩディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中の２．５Ｍの細胞を、ＴｒａｎｓＩＴ試薬（Ｍｉｒｕｓ）を使用して、２．４μｇのｐΔ８．９１（パッケージング）及び０．６μｇのＶＳＶＧ（エンベロープ）に加えて、２．４μｇの標的ｐＬＫＯ−ｓｈＲＮＡ又はｐＩＮＤＵＣＥＲ２０プラスミドでトランスフェクトした。ｐＩＮＤＵＣＥＲ２０＋ＭＣＬ１−Ｌ、ｐＩＮＤＵＣＥＲ２０ベクター、ｐＬＫＯ−ｉＫＤ−Ｕ６  ｐｕｒｏ＋ＭＣＬ１  ｓｈＲＮＡ４８及びｐＬＫＯ−ｉＫＤ−Ｕ６  ｐｕｒｏベクターのウイルスを使用して、Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ１５６８、ＮＣＩ−Ｈ１６５０、ＮＣＩ−Ｈ１９７５及びＮＣＩ−Ｈ２１１０を感染させた。ｐＬＫＯ−ｉＫＤ−Ｈ１  ｐｕｒｏ＋ＢＣＬ−ｘＬ  ｓｈＲＮＡ１及びｐＬＫＯ−ｉＫＤ−Ｈ１  ｐｕｒｏのウイルスを使用して、Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ１５６８、及びＮＣＩ−Ｈ２１１０を感染させた。ポリブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、スピン感染あり又はなしに細胞を感染させた。感染の１〜３日後に、ジェネティシン（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）（ｐＩＮＤＵＣＥＲ２０）又はピューロマイシン（ｐＬＫＯ  ｓｈＲＮＡ）で細胞を培養した。選択した細胞を、Ｄｏｘ（３００ｎｇ／ｍｌ）の存在下又は非存在下で培養した。細胞を、誘導後３〜５日にタンパク質及びＲＮＡについて回収した。ＭＣＬ１のリアルタイムＰＣＲの項と同様に、ＲＮＡを単離した。上記のＭＣＬ１及びＢＣＬ−ｘＬウエスタンブロット手順の項と同様に、タンパク質抽出物を調製した。
【００５６】
５．細胞生存及びＭＣＬ１救済プロトコル
[0061]誘導性ｓｈＲＮＡ実験には、３００ｎｇ／ｍＬ  Ｄｏｘあり又はなしで７２時間、９６ウェルにて細胞を培養し、次いで、製造元の指示に従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて溶解し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎを使用して分析した。Ｄｏｘで処理されたウェルを、細胞株のそれぞれの処理なしに正規化した。
【００５７】
[0062]化合物の用量応答実験には、細胞を１ウェルあたり５０μｌに１，０００細胞で、９６又は３８４ウェルプレートに載せた。化合物は、９０％ＤＭＳＯの１１ポイントの段階希釈系列から、音響分注により培地中の細胞に添加した。最終的なＤＭＳＯ濃度は０．１％であった。プレートに蓋をして、３７℃及び５％ＣＯ２で細胞を増殖させた。ｔ＝０で、未処理の細胞を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて溶解し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーにて測定した。ｔ＝７２（化合物の添加後７２時間）で、化合物で処理された細胞をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて溶解し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎにて分析した。それぞれの処理試料の発光値を、各ＤＭＳＯ対照の平均値に正規化した。
【００５８】
[0063]ＭＣＬ１救済実験には、細胞株を、３００ｎｇ／ｍＬのｄｏｘで７２時間培養した後、継代培養し、３００ｎｇ／ｍＬのｄｏｘを有する９６又は３８４ウェルプレートに播種した。
【００５９】
６．組み合わせ試験
[0064]スプライシングモジュレーター（例えば、Ｅ７１０７又はＨ３Ｂ−８８００）、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤（例えば、ＡＢＴ２６３、ＡＢＴ１９９又はＡ−１３３１８５２）に化合物段階希釈を実施し、細胞を、細胞生存及びＭＣＬ１救済プロトコルで述べたとおりに処理した。ＢＣＬ−ｘＬノックダウンには、細胞を、細胞生存及びＭＣＬ１救済プロトコルに従って、３８４ウェルプレートに播種する前に３００ｎｇ／ｍＬのｄｏｘで処理した。最終ＤＭＳＯ濃度は０．２％であった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを、細胞生存及びＭＣＬ１救済プロトコルに従って実施した。Ｃｈａｌｉｃｅ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓソフトウェア（Ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ケンブリッジ、英国）を使用してデータを分析した。スプライシングモジュレーター（例えば、Ｅ７１０７又はＨ３Ｂ−８８００）、並びにＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤（例えば、ＡＢＴ２６３、ＡＢＴ１９９又はＡ−１３３１８５２）の化合物の相乗効果を見積もるために、Ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙのロエベ相加性モデルを使用し、ロエベ過剰を、用量応答マトリックスからロエベモデル（化合物の自己交差に基づく純粋な相加性）を差し引くことによって計算した。
【００６０】
７．動物試験
[0065]有効性試験の組み合わせ群に使用する許容用量を同定するために、マウスにスプライソソームモジュレーター（例えば、Ｅ７１０７又はＨ３Ｂ−８８００）を、１日１回、連続５日間（ＱＤｘ５）、十分な許容用量レベル（例えば、Ｅ７１０７の場合は１．２５、２．５及び５ｍｇ／ｋｇ）で静脈内に、又はＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤若しくはＢＣＬｘＬ阻害剤を、１日１回（ＱＤ）、許容用量（１００、５０及び２５ｍｇ／ｋｇ）で経口にて、単独又は組合せで投与する。投与後は、健康上の問題が発症するまで（例えば、麻痺又は体重の過剰な減少）、動物を監視する。各化合物の最大に許容される組み合わせ用量及びそれぞれの単一用量を、腫瘍を有する動物の有効性試験において使用する。
【００６１】
[0066]Ｅ７１０７と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せによる抗腫瘍活性を、Ａ５４９及びＮＣＩＨ１５６８の皮下モデルにおいてインビボで評価する。細胞（Ｈ１５６８  ５ｘ１０６細胞及びＡ５４９  １０ｘ１０６細胞）を、ヌードマウスの脇腹に皮下移植する。動物に、スプライソソームモジュレーター、及びＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤を以前の試験で同定された用量に基づき投与する。
【００６２】
Ｂ．結果
１．ＭＣＬ１過剰発現及びＭＣＬ１依存性のＮＳＣＬＣ細胞株の同定
[0067]プラジエノライドスプライソソームモジュレーターと、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せによる活性を評価するための細胞株モデルを同定するために、ＭＣＬ１増幅を伴う又は伴わない６つの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株を、以前の報告に基づいて選択した（Ｗｅｉ  Ｇら、２０１２年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（４）：５４７〜５６２）。これらの細胞株におけるＭＣＬ１タンパク質発現についてウエスタンブロット分析を行った。図１に示すとおり、ＭＣＬ１遺伝子増幅のＮＣＩＨ１５６８、ＮＣＩＨ２３及びＮＣＩＨ２１１０は、非増幅細胞株のＮＣＩＨ１６５０、ＮＣＩＨ１９７５及びＡ５４９と比較して、より高いＭＣＬ１タンパク質発現レベルを示す。次に、ＭＣＬ１を特異的にダウンレギュレートする誘導性ｓｈＲＮＡを使用して、ＭＣＬ１への依存性をこれらの細胞株で試験した。ＭＣＬ増幅細胞株で選択的ＭＣＬ依存性を示したが、非増幅細胞株では示さなかった（図２）。ＭＣＬ１過剰発現及びＭＣＬ１依存性のＮＳＣＬＣ細胞株モデルを、さらなる機能性試験で使用するために同定した。
【００６３】
２．Ｅ７１０７は、ＭＣＬ１のスプライシングモジュレーションを誘導する
[0068]プラジエノライド誘導体Ｅ７１０７によるＭＣＬ１遺伝子のスプライシングモジュレーションを試験した。ＭＣＬ１遺伝子は、３つのエクソン及び２つのイントロンを含有し、３つのエクソン及び２つのイントロンは、２つの主要な転写産物である、機能性全長タンパク質をコードするＭＣＬ１Ｌ及び推定上の機能喪失タンパク質をコードするＭＣＬ１Ｓに選択的にスプライシングされ得る（図３）。試験の一部として、Ｅ７１０７がスプライシング機構を混乱させた後のＭＣＬ１のイントロン保持を測定した。ＮＣＩＨ１５６８細胞をＥ７１０７で６時間、処理することで、ＭＣＬ１ＬのｍＲＮＡの強固な減少、ＭＣＬ１ＳのｍＲＮＡの一時的発現、及びイントロン保持を伴うＭＣＬ１のプレｍＲＮＡの継続的な誘導を誘発した（図４）。
【００６４】
[0069]ＭＣＬ１のタンパク質発現を、ＮＣＩＨ１５６８細胞においてさらに試験した。ｍＲＮＡのデータと一致して、Ｅ７１０７は、全長ＭＣＬ１タンパク質の用量依存的なダウンレギュレーションを引き起こしたが、トランケートされた短縮型タンパク質産物は、用量依存的な様式で増加した。ＭＣＬタンパク質レベルの変化は、アポトーシスの指標である切断型ＰＡＲＰタンパク質の誘導に関連しており、Ｅ７１０７によるＭＣＬ１のスプライシングモジュレーションが、ＮＣＩＨ１５６８細胞において細胞死を引き起こす可能性があることを示唆した（図５）。
【００６５】
３．Ｅ７１０７誘導性細胞死は、ＭＣＬ１及びＢＣＬｘＬに依存性である
[0070]ＭＣＬ１のＥ７１０７誘導性ダウンレギュレーションが細胞死の原因であることを確認するために、ＭＣＬ１ＬのｃＤＮＡを、ウエスタンブロット分析によって示されるとおり、ＮＣＩＨ１５６８細胞において過剰発現させた（図６）。ＭＣＬ１ＬのｃＤＮＡ過剰発現は、ＭＣＬ１依存性細胞株においてＥ７１０７によって誘導される細胞死を救済した（図７）。Ｅ７１０７処理ＭＣＬ１非依存性Ａ５４９細胞における（ＢＣＬ２Ｌ１でコードされる）ＢＣＬｘＬの役割についてさらに検討した。予測のとおり、Ｅ７１０７のみ細胞増殖阻害を誘導し、一方で、ＢＣＬｘＬの誘導性ノックダウン（図８）は、Ｅ７１０７処理時に明らかな細胞死をもたらした（図９）。要約すると、これらのデータは、ＭＣＬ１とＢＣＬｘＬとの両方の阻害により相乗活性をもたらし、ＭＣＬ１依存性と非依存性との両方のがん細胞で細胞毒性を導くことを裏付ける。
【００６６】
４．Ｅ７１０７と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せは相乗効果を示す
[0071]Ｅ７１０７はＭＣＬ１をモジュレーションすることができるが、他のＢＣＬ２タンパク質は、ＭＣＬ１阻害によって誘導される細胞毒性に対抗することができるため、Ｅ７１０７と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せは、すべての抗アポトーシスＢＣＬ２タンパク質の広範な標的化を介して、細胞死の増強をもたらすことができる。
【００６７】
[0072]ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ／ＢＣＬｗ汎阻害剤である、ＡＢＴ２６３（ナビトクラクス）を、８×８の用量マトリックスモードで、Ｅ７１０７との組合せにおいて試験した（図１０）。確かに、この２つの阻害剤の組合せは、ＭＣＬ１依存性のＮＣＩＨ２３（相乗効果スコア＝５０．８）、ＮＣＩＨ２１１０（相乗効果スコア＝５０．２）、ＮＣＩＨ１５６８（相乗効果スコア＝３５．２）及びＭＣＬ１非依存性Ａ５４９細胞（相乗効果スコア＝８５．４）を含む４つの異なる空ベクター発現細胞株モデルで、ロエベ相加性モデル（図１０、左パネル）を大幅に超える強い相乗効果を示した。さらに、ＢＣＬｘＬのｓｈＲＮＡ枯渇は、Ｅ７１０７とＡＢＴ２６３との間の相乗効果を大幅に減少させ（図１０、右パネル）、ｓｈＲＮＡの遺伝子操作及び薬理学的阻害剤（ＡＢＴ２６３）が、同じノードのＢＣＬｘＬに影響を与えて、相乗効果を達成することが確認された。特に、相乗効果スコアが、ＮＣＩＨ２３（７．４２）、ＮＣＩＨ２１１０（７．０３）、ＮＣＩＨ１５６８（１２．７）及びＡ５４９（２８．３）に、大幅に低下する。
【００６８】
[0073]ＡＢＴ１９９（ベネトクラクス）もまた、Ｅ７１０７との組合せにおいて試験した。ＡＢＴ１９９は、ＢＣＬｘＬに活性である、よりＢＣＬ２選択的な阻害剤である。ＭＣＬ１非依存性Ａ５４９細胞におけるＥ７１０７とＡＢＴ１９９との組合せは、相乗活性を示し（スコア＝３２．６）、一方で、ＢＣＬｘＬのノックダウンは相乗性を大幅に減少させた（スコア＝１６．４）（図１１）。
【００６９】
５．Ｈ３Ｂ−８８００と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せは相乗効果を示す
[0074]別のＳＦ３ｂ標的化スプライシングモジュレーターであるＨ３Ｂ−８８００もまた、すべての抗アポトーシス性ＢＣＬ２タンパク質を広範囲に標的化することで細胞死の増強をもたらすことができるＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤との相乗活性の可能性について評価した。
【００７０】
[0075]ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ／ＢＣＬｗ汎阻害剤である、ＡＢＴ２６３（ナビトクラクス）を、１２×１２の用量マトリックスモードで、Ｈ３Ｂ−８８００との組合せにおいて試験した。この２つの阻害剤の組合せは、Ｕ２６６Ｂ１（相乗効果スコア＝４１．３）及びＲＰＭＩ８２２６（相乗効果スコア＝４０．１）を含む２つの異なる多発性骨髄腫細胞株モデルにおいて、ロエベ相加性モデル（図１２）を大幅に超える強い相乗効果を示した。
【００７１】
[0076]ＡＢＴ１９９（ベネトクラクス）もまた、Ｈ３Ｂ−８８００との組合せにおいて試験した。ＡＢＴ１９９は、ＢＣＬｘＬに活性である、よりＢＣＬ２選択的な阻害剤である。Ｈ３Ｂ−８８００とＡＢＴ１９９との組合せもまた、ＪＪＮ３（相乗効果スコア＝２６．１）及びＲＰＭＩ８２２６（相乗効果スコア＝１９）の２つの試験された多発性骨髄腫細胞株モデルにおいて相乗活性を示した（図１３）。
【００７２】
[0077]さらに、Ａ−１３３１８５２もまた、Ｈ３Ｂ−８８００との組合せにおいて試験した。Ａ−１３３１８５２は、よりＢＣＬｘＬ選択的な阻害剤である。Ｈ３Ｂ−８８０とＡ−１３３１８５２との組合せは、ＲＰＭＩ８２２６（相乗効果スコア＝６８．３）及びＭＭ１Ｓ（相乗効果スコア＝５６．８）の２つの試験された多発性骨髄腫細胞株モデルにおいて実質的な相乗活性を示した（図１４）。
【００７３】
[0078]まとめると、これらのデータは、プラジエノライド由来のスプライシングモジュレーター（例えば、Ｅ７１０７又はＨ３Ｂ−８８００）と、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤（例えば、ＡＢＴ２６３、ＡＢＴ１９９又はＡ−１３３１８５２）との組合せが、様々ながん細胞において相乗的な細胞毒性を誘導することを示す。したがって、このデータは、プラジエノライドスプライシングモジュレーターと、ＢＣＬ２阻害剤、ＢＣＬ２／ＢＣＬｘＬ阻害剤又はＢＣＬｘＬ阻害剤との組合せを、がんの治療において使用することを支持する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【国際調査報告】
2021505526.tif 000032
2021505526.tif 000033