(57)【要約】  例えばＰＤ−１阻害剤およびＰＤ−Ｌ１阻害剤などの免疫チェックポイント調節剤と併用される、癌治療のためのＴＲＰＶ６阻害剤の使用、ならびに関連組成物およびキットが提供される。
2021505659.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
その必要のある対象において癌を治療する方法であって、前記対象に、
（ａ）  ＴＲＰＶ６阻害剤、および
（ｂ）  免疫チェックポイント調節剤、を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤が、ペプチドもしくはポリペプチド、または低分子である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、ＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号２）またはＥＧＫＬＳＳＮＤＴＥＧＧＬＣＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号３）に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤は、表Ｔ１の配列に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなるペプチドであり、前記ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、麻痺活性を伴わずに癌細胞のカルシウム取り込みを阻害する、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、それら数値の間のすべての範囲を含む、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０アミノ酸の長さであるか、未満であるか、または以下である、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤が、化学療法剤と複合体化される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記免疫チェックポイント調節剤は、ペプチドもしくはポリペプチド、任意で抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫チェックポイント調節剤が、
（ｉ）  阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト、または
（ｉｉ）  刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記阻害性免疫チェックポイント分子は、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  ２（ＰＤ−Ｌ２）、Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４（ＣＴＬＡ−４）、Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＴＤＯ）、Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）、Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）、およびＴ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ）のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうちの１つまたは複数から選択され、前記癌は任意で、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニストであり、任意で、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＰＤＲ００１およびピディリズマブのうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、前記癌は任意で、ホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、前記癌は任意で、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頚部癌および尿路上皮癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記アンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストであり、任意で、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブおよびトレメリムマブのうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌は、メラノーマ、前立腺癌、肺癌および膀胱癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アンタゴニストは、ＩＤＯアンタゴニストであり、任意で、ＩＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうちの１つまたは複数から選択され、前記癌は任意で、転移性乳癌、および任意で多形膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫、または悪性脳腫瘍である脳腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記アンタゴニストは、ＴＤＯアンタゴニストであり、任意で、ＴＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記アンタゴニストは、ＴＩＭ−３アンタゴニストであり、任意で、ＴＩＭ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記アンタゴニストは、ＬＡＧ−３アンタゴニストであり、任意で、ＬＡＧ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡアンタゴニストであり、任意で、ＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記アンタゴニストは、ＴＩＧＩＴアンタゴニストであり、任意で、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびＨｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８または９に記載の方法。
【請求項２５】
前記アゴニストは、ＯＸ４０アゴニストであり、任意で、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０ＬおよびＧＳＫ３１７４９９８のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記アゴニストは、ＣＤ４０アゴニストであり、任意で、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３およびｒｈＣＤ４０Ｌのうちの１つまたは複数から選択され、前記癌は任意で、メラノーマ、膵癌、中皮腫、および例えば非ホジキンリンパ腫などの任意のリンパ腫といった血液癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記アゴニストは、ＧＩＴＲアゴニストであり、任意で、ＧＩＴＲに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１およびＭＥＤＩ１８７３のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記アゴニストは、ＣＤ１３７アゴニストであり、任意で、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブおよび４−１ＢＢリガンドのうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記アゴニストは、ＣＤ２７アゴニストであり、任意で、ＣＤ２７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブおよびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記アゴニストは、ＣＤ２８アゴニストであり、任意で、ＣＤ２８に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記アゴニストは、ＨＶＥＭアゴニストであり、任意で、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンドのうちの１つまたは複数から選択される、請求項８〜９、または２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
（ａ）および（ｂ）が、別個に投与される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）および（ｂ）が、同じ組成物の一部として一緒に投与される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌が、ＴＲＰＶ６を過剰発現する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記癌は、前立腺癌、乳癌、甲状腺癌、結腸癌または結腸直腸癌、卵巣癌、メラノーマ（例えば転移性メラノーマ）、膵臓癌、骨癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例えばリンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝癌（肝細胞癌）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、神経膠腫、多形膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、未分化神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、腎癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳腫瘍、頭頚部癌、子宮頸癌、精巣癌および胃癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
（ａ）  ＴＲＰＶ６阻害剤、および
（ｂ）  免疫チェックポイント調節剤、を含む治療用組成物。
【請求項３７】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤が、ペプチドもしくはポリペプチド、または低分子である、請求項３６に記載の治療用組成物。
【請求項３８】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、ＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号２）またはＥＧＫＬＳＳＮＤＴＥＧＧＬＣＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号３）に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなる、請求項３７に記載の治療用組成物。
【請求項３９】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤は、表Ｔ１の配列に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなるペプチドであり、前記ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、麻痺活性を伴わずに癌細胞のカルシウム取り込みを阻害する、請求項３７または３８に記載の治療用組成物。
【請求項４０】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、それら数値の間のすべての範囲を含む、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０アミノ酸の長さであるか、未満であるか、または以下である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項４１】
前記ＴＲＰＶ６阻害剤が、治療剤、任意で化学療法剤と複合体化される、請求項３６〜４０のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項４２】
前記免疫チェックポイント調節剤は、ペプチドもしくはポリペプチド、任意で抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である、請求項３６〜４１のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項４３】
前記免疫チェックポイント調節剤が、
（ｉ）  阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト、または
（ｉｉ）  刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、を含む、請求項３６〜４２のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項４４】
前記免疫チェックポイント調節剤は、前記免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、請求項４３に記載の治療用組成物。
【請求項４５】
前記阻害性免疫チェックポイント分子は、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  ２（ＰＤ−Ｌ２）、Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４（ＣＴＬＡ−４）、Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＴＤＯ）、Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）、Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）、およびＴ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ）のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３または４４に記載の治療用組成物。
【請求項４６】
前記アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうちの１つまたは複数から選択され、前記癌は任意で、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項４７】
前記アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニストであり、任意で、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＰＤＲ００１およびピディリズマブのうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項４８】
前記ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、前記癌は任意で、ホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４７に記載の治療用組成物。
【請求項４９】
前記ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、前記癌は任意で、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頚部癌および尿路上皮癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４７に記載の治療用組成物。
【請求項５０】
前記アンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストであり、任意で、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブおよびトレメリムマブのうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５１】
前記癌は、メラノーマ、前立腺癌、肺癌および膀胱癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項５０に記載の治療用組成物。
【請求項５２】
前記アンタゴニストは、ＩＤＯアンタゴニストであり、任意で、ＩＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうちの１つまたは複数から選択され、前記癌は任意で、転移性乳癌、および任意で多形膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫、または悪性脳腫瘍である脳腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５３】
前記アンタゴニストは、ＴＤＯアンタゴニストであり、任意で、ＴＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５４】
前記アンタゴニストは、ＴＩＭ−３アンタゴニストであり、任意で、ＴＩＭ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５５】
前記アンタゴニストは、ＬＡＧ−３アンタゴニストであり、任意で、ＬＡＧ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５６】
前記アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡアンタゴニストであり、任意で、ＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５７】
前記アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５８】
前記アンタゴニストは、ＴＩＧＩＴアンタゴニストであり、任意で、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５９】
前記刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびＨｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３または４４に記載の治療用組成物。
【請求項６０】
前記アゴニストは、ＯＸ４０アゴニストであり、任意で、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０ＬおよびＧＳＫ３１７４９９８のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６１】
前記アゴニストは、ＣＤ４０アゴニストであり、任意で、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３およびｒｈＣＤ４０Ｌのうちの１つまたは複数から選択され、前記癌は任意で、メラノーマ、膵癌、中皮腫、および例えば非ホジキンリンパ腫などの任意のリンパ腫といった血液癌のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６２】
前記アゴニストは、ＧＩＴＲアゴニストであり、任意で、ＧＩＴＲに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１およびＭＥＤＩ１８７３のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６３】
前記アゴニストは、ＣＤ１３７アゴニストであり、任意で、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブおよび４−１ＢＢリガンドのうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６４】
前記アゴニストは、ＣＤ２７アゴニストであり、任意で、ＣＤ２７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブおよびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６５】
前記アゴニストは、ＣＤ２８アゴニストであり、任意で、ＣＤ２８に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６６】
前記アゴニストは、ＨＶＥＭアゴニストであり、任意で、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンドのうちの１つまたは複数から選択される、請求項４３〜４４、または５９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６７】
その必要のある対象の癌の治療における、任意で請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法による使用のための、請求項３６〜６６のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項６８】
（ａ）  ＴＲＰＶ６阻害剤、および
（ｂ）  免疫チェックポイント調節剤、を含む患者ケアキット。
【請求項６９】
（ａ）および（ｂ）が、別個の組成物中にある、請求項６８に記載の患者ケアキット。
【請求項７０】
（ａ）および（ｂ）が、同じ組成物中にある、請求項６８に記載の患者ケアキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）のもと、２０１７年１２月１日に出願された米国特許出願６２／５９３，７４３、および２０１８年４月１１日に出願された米国出願６２／６５６，２７６の優先権を主張するものであり、それら各出願が、参照によりその全体で援用される。
【０００２】
配列表に関する声明
本出願に関する配列表は紙媒体の代わりにテキストフォーマットで提出され、本明細書に参照により援用される。配列表を含有するテキストファイルの名称は、ＳＯＲＩ＿００２＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。当該テキストファイルは約２ＫＢであり、２０１８年１１月２９日に作製され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出された。
【背景技術】
【０００３】
本開示の実施形態は、例えばＰＤ−１阻害剤およびＰＤ−Ｌ１阻害剤などの免疫チェックポイント調節剤と併用される、癌治療のためのＴＲＰＶ６阻害剤の使用、ならびに関連組成物およびキットに関する。
【発明の概要】
【０００４】
本開示の実施形態は、該当箇所においてはその必要のある対象における癌の治療方法に関するものであり、当該方法は、対象に、（ａ）ＴＲＰＶ６阻害剤、および（ｂ）免疫チェックポイント調節剤を投与する工程を含む。
【０００５】
一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、ペプチドもしくはポリペプチド、または低分子である。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、表Ｔ１の配列に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなるペプチドであり、当該ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、麻痺活性を伴わずに癌細胞のカルシウム取り込みを阻害する。特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、ＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号２）またはＥＧＫＬＳＳＮＤＴＥＧＧＬＣＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号３）に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなる。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、それら数値の間のすべての範囲を含む、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０アミノ酸の長さであるか、未満であるか、または以下である。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、化学療法剤と複合体化される。
【０００６】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ペプチドもしくはポリペプチド、任意で抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、（ｉ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト、または（ｉｉ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、を含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。
【０００７】
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  ２（ＰＤ−Ｌ２）、Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４（ＣＴＬＡ−４）、Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＴＤＯ）、Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）、Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）、およびＴ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ）のうちの１つまたは複数から選択される。
【０００８】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ４７３６）のうちの１つまたは複数から選択され、癌は任意で、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【０００９】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニストであり、任意で、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＰＤＲ００１およびピディリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、癌は任意で、ホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、癌は任意で、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頚部癌および尿路上皮癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１０】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストであり、任意で、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）およびトレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、癌は、メラノーマ、前立腺癌、肺癌および膀胱癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１１】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＩＤＯアンタゴニストであり、ＩＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ）（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（β−Ｃａｒｂｏｌｉｎｅ）（ノルハルマン（ｎｏｒｈａｒｍａｎｅ）；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタット（ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ）のうちの１つまたは複数から任意で選択され、癌は任意で、転移性乳癌、および任意で多形膠芽腫（Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、神経膠腫、神経膠肉腫、または悪性脳腫瘍である脳腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１２】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＴＤＯアンタゴニストであり、任意で、ＴＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１３】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＴＩＭ−３アンタゴニストであり、任意で、ＴＩＭ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１４】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＬＡＧ−３アンタゴニストであり、任意で、ＬＡＧ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１５】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡアンタゴニストであり、任意で、ＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１６】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１７】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＴＩＧＩＴアンタゴニストであり、任意で、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１８】
一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびＨｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）のうちの１つまたは複数から選択される。
【００１９】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＯＸ４０アゴニストであり、任意で、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０ＬおよびＧＳＫ３１７４９９８のうちの１つまたは複数から選択される。
【００２０】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ４０アゴニストであり、任意で、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ（ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３およびｒｈＣＤ４０Ｌのうちの１つまたは複数から選択され、癌は任意で、メラノーマ、膵癌、中皮腫、および例えば非ホジキンリンパ腫などの任意のリンパ腫といった血液癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００２１】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＧＩＴＲアゴニストであり、任意で、ＧＩＴＲに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１およびＭＥＤＩ１８７３のうちの１つまたは複数から選択される。
【００２２】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ１３７アゴニストであり、任意で、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）および４−１ＢＢリガンドのうちの１つまたは複数から選択される。
【００２３】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ２７アゴニストであり、任意で、ＣＤ２７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうちの１つまたは複数から選択される。
【００２４】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ２８アゴニストであり、任意で、ＣＤ２８に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうちの１つまたは複数から選択される。
【００２５】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＨＶＥＭアゴニストであり、任意で、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンドのうちの１つまたは複数から選択される。
【００２６】
一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別個に投与される。一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、同じ組成物の一部として一緒に投与される。
【００２７】
一部の実施形態では、癌は、ＴＲＰＶ６を過剰発現する。一部の実施形態では、癌は、前立腺癌、乳癌、甲状腺癌、結腸癌または結腸直腸癌、卵巣癌、メラノーマ（例えば転移性メラノーマ）、膵臓癌、骨癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例えばリンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝癌（肝細胞癌）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、神経膠腫、多形膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、未分化神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、腎癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳腫瘍、頭頚部癌、子宮頸癌、精巣癌および胃癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００２８】
さらに（ａ）ＴＲＰＶ６阻害剤、および（ｂ）免疫チェックポイント調節剤を含む、治療用組成物も含まれる。
【００２９】
一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、ペプチドもしくはポリペプチド、または低分子である。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、表Ｔ１の配列に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなるペプチドであり、当該ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、麻痺活性を伴わずに癌細胞のカルシウム取り込みを阻害する。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、ＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号２）またはＥＧＫＬＳＳＮＤＴＥＧＧＬＣＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号３）に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなる。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、それら数値の間のすべての範囲を含む、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０アミノ酸の長さであるか、未満であるか、または以下である。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、治療剤、任意で化学療法剤と複合体化される。
【００３０】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ペプチドもしくはポリペプチド、任意で抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である。
【００３１】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、（ｉ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト、または（ｉｉ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、を含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。
【００３２】
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  ２（ＰＤ−Ｌ２）、Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４（ＣＴＬＡ−４）、Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＴＤＯ）、Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）、Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）、およびＴ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ）のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３３】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ４７３６）のうちの１つまたは複数から選択され、癌は任意で、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニストであり、任意で、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＰＤＲ００１およびピディリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３４】
一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、癌は任意で、ホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、癌は任意で、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頚部癌および尿路上皮癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３５】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストであり、任意で、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、癌は、メラノーマ、前立腺癌、肺癌および膀胱癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３６】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＩＤＯアンタゴニストであり、ＩＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ）（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（β−Ｃａｒｂｏｌｉｎｅ）（ノルハルマン（ｎｏｒｈａｒｍａｎｅ）；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタット（ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ）のうちの１つまたは複数から任意で選択され、癌は任意で、転移性乳癌、および任意で多形膠芽腫（Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、神経膠腫、神経膠肉腫、または悪性脳腫瘍である脳腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３７】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＴＤＯアンタゴニストであり、任意で、ＴＤＯに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３８】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＴＩＭ−３アンタゴニストであり、任意で、ＴＩＭ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３９】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＬＡＧ−３アンタゴニストであり、任意で、ＬＡＧ−３に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４０】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡアンタゴニストであり、任意で、ＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４１】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであり、任意で、それらに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４２】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＴＩＧＩＴアンタゴニストであり、任意で、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４３】
一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびＨｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４４】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＯＸ４０アゴニストであり、任意で、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０ＬおよびＧＳＫ３１７４９９８のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４５】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ４０アゴニストであり、任意で、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ（ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３およびｒｈＣＤ４０Ｌのうちの１つまたは複数から選択され、癌は任意で、メラノーマ、膵癌、中皮腫、および例えば非ホジキンリンパ腫などの任意のリンパ腫といった血液癌のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４６】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＧＩＴＲアゴニストであり、任意で、ＧＩＴＲに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１およびＭＥＤＩ１８７３のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４７】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ１３７アゴニストであり、任意で、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）および４−１ＢＢリガンドのうちの１つまたは複数から選択される。
【００４８】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ２７アゴニストであり、任意で、ＣＤ２７に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうちの１つまたは複数から選択される。
【００４９】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＣＤ２８アゴニストであり、任意で、ＣＤ２８に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうちの１つまたは複数から選択される。
【００５０】
一部の実施形態では、アゴニストは、ＨＶＥＭアゴニストであり、任意で、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンドのうちの１つまたは複数から選択される。
【００５１】
さらに、その必要のある対象の癌の治療における使用のための、本明細書に記載の治療用組成物も含まれる。
【００５２】
特定の実施形態には、（ａ）ＴＲＰＶ６阻害剤、および（ｂ）免疫チェックポイント調節剤、を含む、患者ケアキットが含まれる。一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別個の組成物中にある。一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、同じ組成物中にある。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、野生型前立腺癌細胞と比較した、ＴＲＰＶ６ノックアウト（ＫＯ）における相対的遺伝子定量における変化を示し、標的遺伝子の発現における２倍の減少と同等である（１  ＣＴ）。矢印は、腫瘍微小環境と免疫回避に影響を与える遺伝子を示す。各遺伝子に関連したＣＴ値は、ｘ軸のカッコ内にある。
【図２】図２は、典型的なＰＤ−１阻害アッセイと比較した、実施例２のプロトコールのフローチャートを示す。
【図３】図３は、ＴＲＰＶ６ノックアウト（ＫＯ）、およびＴＲＰＶ６ノックダウン（ＫＤ）の去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）ＰＣ３細胞において上方制御された遺伝子と下方制御された遺伝子のいくつかを要約したものである。ＫＯ／ＫＤ細胞の４分の３において発現が７分の５以下に低下（＞＝１．４−ｆｏｌｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）（または１．４倍以上増加した遺伝子が示されている。遺伝子名の横の数値は、野生型と比較した、発現の倍数増加（実線のボックス）または倍数低下（破線のボックス）である。＊は、４回のＫＤ／ＫＯ実験のうちの１回で、発現の増加がない、または発現の増加がわずかであることを示す。「生存」には、アポトーシスまたはアポトーシス促進に抵抗性の遺伝子が含まれる。
【図４】図４は、ＣＲＰＣ  ＰＣ−３細胞における、ＴＲＰＶ２−６遺伝子の発現に対するＴＲＰＶ６のＫＯおよびＫＤの影響を示す。ＴＲＰＶ６  ＫＯ／ＫＤ  ＣＲＰＣ細胞は、ＴＲＰＶチャンネルの発現を上方制御しなかった。
【図５】図５は、ＴＲＰＶ６の発現と比較した、細胞内カルシウムレベルの調節に関与する遺伝子の発現に対するＴＲＰＶ６のＫＯおよびＫＤの影響を示す。ＴＲＰＶ６  ＫＯ／ＫＤ  ＣＲＰＣ細胞は、癌に関与する他のカルシウムチャンネル発現の上方制御を示さなかった。
【図６】図６は、１．５倍以上に上方制御および下方制御された１８７個の遺伝子アレイパネルからの細胞増殖、転移および血管新生に関与する遺伝子のレベルを示す。
【図７】図７は、１．５倍以上に上方制御および下方制御された１８７個の遺伝子アレイパネルからのアポトーシスに関与する遺伝子のレベルを示す。
【図８】図８は、１．５倍以上に上方制御および下方制御された１８７個の遺伝子アレイパネルからの免疫回避および炎症に関与する遺伝子のレベルを示す。
【図９】図９は、ＳＯＲ−Ｃ１３（５００μＭ）で処置されたＴ−４７Ｄ細胞における、ＮＦＡＴ活性化に対するＳＯＲ−Ｃ１３の効果を示す。ＳＯＲ−Ｃ１３処置細胞とＰＢＳ処置細胞（処置無し）の間で、ＮＦＡＴ活性化に有意差（＊：ｐ＜０．０５）が観察された。
【図１０】図１０は、ＢｘＰＣ−３細胞溶解物における、ＳＯＲ−Ｃ１３（５００μＭ）による２４時間および７２時間でのカルシニューリン活性阻害を示す（＊：ｐ＜０．０５）。
【図１１】図１１は、毎日、ＳＯＲ−Ｃ１３（１００、５００μＭ）で９６時間処置されたＢｘＰＣ−３細胞における、総ＭＭＰ−９（ＮＴ対照％）を示す（＊：ｐ＜０．０５）。
【図１２】図１２は、ＳＯＲ−Ｃ１３（５００μＭ）で処置されたＢｘＰＣ−３細胞におけるＢｃｌ−２発現を示す。有意な減少（＊：ｐ＜０．０５）が９６時間で観察された。
【図１３】図１３は、ＳＯＲ−Ｃ１３で処置されたＴ−４７Ｄ細胞における、１８７個の遺伝子パネルからの上方制御および下方制御された遺伝子（＞１．５倍の発現変化）を示す。これら遺伝子は、検証された４種の他の癌細胞株（ＢｘＰＣ−３、ＰＣ−３、ＳＫＯＶ−３およびＳＵ．８６．８６）のうちの少なくとも１つにおいても上方制御または下方制御されている。影響を受けることが示されているカルシニューリン／ＮＦＡＴ経路に関与する遺伝子：ＮＦＡＴＣ１、ＭＭＰ−２、ＧＳＫ３ＡおよびＲＣＡＮ１。興味深いことに、Ｂｃｌ−２およびＭＭＰ−９は、ＢｘＰＣ−３（データ示さず）において下方制御されており（およそ０．６ＣＴ）、タンパク質発現データと一致していた。
【図１４】図１４は、最も低いレベルのＴＲＰＶ６  ｍＲＮＡは、処置の３日後に観察されており、ＴＲＰＶ６発現が８５％低下していた。
【図１５】図１５は、第二のベクターであるＴＲＰＶ６−２  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９は、ＴＲＰＶ６の４４１ｂｐ（エクソン３）のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９切断部位で１つのＧの欠失を生じさせ、フレームシフト変異をもたらしたことを示す。
【図１６】図１６は、少なくとも２回のＴＲＰＶ６処置で、２３個の遺伝子が下方制御されたことを示す。
【図１７】図１７は、少なくとも２回のＴＲＰＶ６処置で、３３個の遺伝子が上方制御されたことを示す。
【図１８】図１８は、２種のＰＣ−３  ＴＲＰＶ６ノックアウト細胞株（ＴＲＰＶ６−１ＡおよびＴＲＰＶ６−２Ｂ）からのＴａｑＭａｎ  Ａｒｒａｙデータをプールし（ｎ＝６）、ＰＣ−３  対照（ｎ＝３）と比較したときに差次的に発現された５７個の遺伝子（＞０．６  ＬｏｇＦＣおよび補正ｐ＜０．０５）を示すボルケーノプロットを示す。
【図１９】図１９〜２１は、図１８に示される、プールされたＴＲＰＶ６ノックアウト（ｎ＝６）と、ＰＣ−３対照（ｎ＝３）を比較した分析からの５７個の差次的に発現された遺伝子を示す。３つのグラフは、腫瘍形成の機能的メカニズムにより、差次的発現遺伝子をグループ化したものである。３つの遺伝子は、差次的に発現されたが、この３グラフのうちの１つにグループ化されなかった；下方制御（ＴＲＰＶ６）、上方制御（ＴＲＰＣ１およびＯＲＡＩ３）。図１９は、細胞増殖、転移および血管新生に関連した遺伝子のデータを示す。
【図２０】図２０は、アポトーシスに関連した遺伝子のデータを示す。
【図２１】図２１は、免疫回避および／または免疫刺激に関連した遺伝子のデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似した、または類似した均等の、または均等の任意の方法、材料、組成物、試薬、細胞を、本開示対象の実施または検証に使用することができるが、好ましい方法および材料が記載されている。本明細書に引用される、限定されないが、特許および特許出願を含むすべての公表文献および参照文献は、個々の公表文献または参照文献のそれぞれが具体的および個々に、本明細書に参照により援用されると完全に記載されて示されたのと同様に、本明細書に参照により援用される。本出願が優先権を主張する特許出願もすべて、公表文献および参照文献について上述された様式で、その全体で本明細書に参照により援用される。
【００５５】
組み換えＤＮＡ法、オリゴヌクレオチド合成法、および組織培養法ならびに形質転換法（例えばエレクトロポレーション法、リポフェクション法）に関し、標準的な技術が使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従って、または当該技術分野で普遍的に実施されるように、または本明細書に記載されるように実施されうる。これら、および関連の技術および手順は、当該技術分野で公知の従来的な方法に従って、および本明細書全体を通して引用および検討される様々な概要的および各論的な参照文献中に記載されているように、一般的に実施されることができる。具体的な規定が提示されない限り、本明細書に記載される分子生物学、分析化学、合成有機化学、ならびに医学および薬化学と関連して利用される用語体系、ならびに実験手順および技術は、当分野に公知であり、普遍的に使用されるものである。組み換え技術、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、調剤、製剤および送達、ならびに患者の治療に対し、標準的な技術が使用され得る。
【００５６】
本開示の目的に対し、以下の用語を、以下に規定する。
【００５７】
「ａ」および「ａｎ」といった冠詞は、本明細書において、当該冠詞の文法上の対象の１つまたは複数（すなわち少なくとも１つ）を指すために使用される。例示として、「ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ」とは、１つの要素または複数の要素を意味する。
【００５８】
「約」とは、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さに対し、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％までも変化する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さを意味する。
【００５９】
「抗原」という用語は、例えば抗体などの選択的結合体に結合されることができ、さらに動物において、その抗原のエピトープに結合することができる抗体の産生に使用されることができる分子、または分子の一部を指す。抗原は、１つまたは複数のエピトープを有し得る。本明細書において使用される場合、「抗原」という用語は、適切な条件下で、当該物質に対する免疫反応を誘導することができ、免疫反応産物と反応することができる物質を含む。例えば抗原は、抗体（液性免疫反応）、または感作Ｔリンパ球（Ｔヘルパー細胞、または細胞介在性免疫反応）、またはそれら両方により認識されることができる。抗原は、例えば毒素および外来性タンパク質などの可溶性物質、または例えば細菌および組織細胞などの粒子であってもよい。しかし、抗原決定基（エピトープ）として知られるタンパク質または多糖分子の部分のみが、抗体、またはリンパ球上の特定の受容体と結合する。より広範には、「抗原」という用語は、抗体が結合する任意の物質、または当該物質が免疫原性であるかに関わらず、抗体が望まれる任意の物質を含む。そうした抗原に対し、抗体は、いずれの免疫反応とも関係なく、組み換え法により特定されることができる。
【００６０】
「アンタゴニスト」とは、別の剤または分子の生理学的作用と干渉する、または別手段により低下させる生物学的構造または化学的な剤を指す。一部の例では、アンタゴニストは、他の剤または分子に特異的に結合する。完全アンタゴニストと部分アンタゴニストが含まれる。
【００６１】
「アゴニスト」とは、別の剤または分子の生理学的作用を増加させる、または強化する生物学的構造または化学的な剤を指す。一部の例では、アゴニストは、他の剤または分子に特異的に結合する。完全アゴニストと部分アゴニストが含まれる。
【００６２】
「アネルギー」という用語は、抗原による再刺激に対するＴ細胞反応またはＢ細胞反応の機能的不活化を指す。
【００６３】
本明細書において使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸、ならびにアミノ酸のアナログおよび模倣体のすべてを意味することが意図される。天然アミノ酸には、タンパク質生合成中に利用される２０種の（Ｌ）−アミノ酸、ならびに例えば４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、およびオルニチンなどの他のアミノ酸が含まれる。非天然アミノ酸には、例えば（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどが含まれ、それらは当分野の当業者に公知である。アミノ酸アナログとしては、天然アミノ酸および非天然アミノ酸の改変型が挙げられる。そうした改変としては、例えばアミノ酸上の化学基および部分の置換または置き換え、またはアミノ酸の誘導体化が挙げられる。アミノ酸模倣体としては、例えば基準アミノ酸の電荷、および電荷間隔の特徴といった機能的に類似した特性を呈する有機構造物が挙げられる。例えばアルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構造物は、類似した分子空間中に位置する正電荷部分を有し、天然Ａｒｇアミノ酸の側鎖のｅ−アミノ基と同じ可動度を有する。模倣体は拘束構造も含まれ、それによりアミノ酸またはアミノ酸官能基の最適な間隔および電荷相互作用が維持される。当業者であれば、どの構造が、機能的に均等なアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣体を構成するかを知っており、または決定することができる。
【００６４】
本明細書において使用される場合、疾患を発症する、または有害反応を発生させる「リスクがある」対象は、本明細書に記載の治療方法を行う前に、検出可能な疾患、または疾患症状を有していても、いなくてもよく、そして検出可能な疾患、または疾患症状を呈していても、いなくてもよい。「リスクがある」とは、対象が、本明細書に記載される、および当分野に公知の疾患の発症と相関する測定可能なパラメータであるリスク因子を１つまたは複数、有することを示す。これらリスク因子を１つまたは複数有する対象は、これらリスク因子を１つまたは複数有さない対象よりも、疾患または有害反応を発生させる確率が高い。
【００６５】
「生体適合性」とは、細胞または対象の生物機能に対して一般的に有害ではない、ならびにアレルギー状態および疾患状態を含む、任意の受容できない毒性の程度を生じさせない物質または化合物を指す。
【００６６】
「結合する」という用語は、例えば共有結合的相互作用、静電相互作用、疎水性相互作用ならびにイオンおよび／または水素結合相互作用などによる、例えば塩架橋および水架橋などの相互作用を含む、２分子間の直接的な会合を指す。
【００６７】
「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物のコードに寄与する、任意の核酸配列を意味する。対照的に、「非コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物のコードに直接的には寄与しない、任意の核酸配列を指す。
【００６８】
本開示全体を通じて、別段であることが必須でない限り、「含む」および「含むこと」という文言は、記載される工程もしくは要素、または工程もしくは要素の群の含有を示唆するが、任意の他の工程もしくは要素、または工程もしくは要素の群の除外は示唆しないことを理解されたい。
【００６９】
「〜からなる」とは、「〜からなる」という文言に続くものを含むが、それらに限定されることを意味する。ゆえに、「〜からなる」という文言は、列記される要素が必要または義務であり、他の要素は存在し得ないことを示す。「本質的に〜からなる」とは、当該文言の後に列記される任意の要素、および列記される要素に対し、本開示中に特定される活性もしくは作用に干渉しない、または寄与しない他の要素に限定される任意の要素を含むことを意味する。ゆえに、「本質的に〜からなる」という文言は、列記される要素が必須または義務であるが、他の要素も任意であり、列記される要素の活性または作用に実質的に影響を与えるか、与えないかに応じて、存在し、または存在し得ないことを示す。
【００７０】
「エンドトキシンフリー」または「実質的にエンドトキシンフリー」という用語は概して、最大でも微量の（例えば対象に対し、臨床的に有害な生理学的効果を有さない量）のエンドトキシンを含有し、好ましくは検出できない量のエンドトキシンを含有する組成物、溶媒、および／または容器に関する。エンドトキシンは、特定の微生物、例えば細菌、典型的にはグラム陰性細菌に関連する毒素であるが、例えばリステリア菌などのグラム陽性細菌でもエンドトキシンが存在する場合がある。最も蔓延しているエンドトキシンは、リポ多糖（ＬＰＳ）またはリポオリゴ糖（ＬＯＳ）であり、それらは様々なグラム陰性細菌の外膜に存在し、これら細菌が疾患を引き起こす能力の中心となる病原性を表す。ヒトにおいて、少量のエンドトキシンは、有害な生理学的効果の中でも特に、発熱、血圧の低下、ならびに炎症および凝固の活性化を引き起こす場合がある。
【００７１】
たとえ少量であってもヒトにおいて有害な作用をもたらす場合があるため、医薬品の製造においては多くの場合、薬品および／または薬の容器から、大部分の、またはすべてのエンドトキシンの痕跡を除去することが望ましい。大部分のエンドトキシンを破壊するためには、典型的には３００℃を超える温度が必要であるため、脱ピロゲンオーブンをこの目的に対して使用してもよい。例えばシリンジまたはバイアルなどの主要なパッケージ材料に基づき、２５０℃のガラス温度と３０分間の維持時間の組み合わせが多くの場合で、３ｌｏｇのエンドトキシンレベルの低下の実現には充分である。エンドトキシンの他の除去方法も予期され、例えば本明細書に記載され、当分野に公知のクロマトグラフィー法および濾過法が挙げられる。
【００７２】
エンドトキシンは、当分野に公知の日常的な技術を使用して検出することができる。例えば、カブトガニの血液を利用したＬｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  ａｓｓａｙは、エンドトキシンの存在検出に対して非常に感度の高いアッセイである。この試験では、凝固反応を増幅させる強力な酵素カスケードによって、非常に低レベルのＬＰＳでもリムルス溶解物の検出可能な凝固を生じさせることができる。エンドトキシンは、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）でも定量することができる。実質的にエンドトキシンフリーであるために、エンドトキシンのレベルは、活性化合物の約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍｇ未満であってもよい。典型的には、１ｎｇのリポ多糖（ＬＰＳ）は、約１〜１０ＥＵに相当する。
【００７３】
「エピトープ」という用語は、イムノグロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基を含む。エピトープには、抗体に結合される抗原領域が含まれる。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、例えばアミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面集団を含み、特定の実施形態では、エピトープは、特定の三次元構造特性および／または特定の電荷特性を有してもよい。エピトープは、本明細書に記載される抗原、参照配列、または標的分子の一次構造に関連して、連続的または非連続的であり得る。特定の実施形態では、エピトープは、本明細書に記載される参照配列、または標的分子の約、少なくとも約、または約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個以下の連続的なアミノ酸（すなわち直線状エピトープ）、または非連続的なアミノ酸（すなわち立体構造的エピトープ）を含み、からなり、または本質的にからなる。
【００７４】
「エピトープ」は、結合タンパク質の可変領域結合ポケットと相互作用する、結合相互作用を形成することができる抗原または他の高分子の部分を含む。そうした結合相互作用は、ＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸残基との分子間接触として表されることができる。抗原結合は、ＣＤＲ３またはＣＤＲ３対を含むことができる。エピトープは、直線状ペプチド配列（すなわち連続的）であってもよく、または非連続的なアミノ酸配列から構成されてもよい（すなわち「立体構造的」または「非連続的」）。結合タンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸配列を認識することができる。したがって、エピトープは、複数の別個のアミノ酸配列を規定することができる。結合タンパク質により認識されるエピトープは、当分野の当業者に公知のペプチドマッピング法および配列解析法により決定されることができる。「潜在性（ｃｒｙｐｔｉｃ）エピトープ」または「潜在性結合部位」は、非改変ポリペプチド内では暴露されていない、または実質的に認識されずにいるが、変性した、またはタンパク質分解されたポリペプチドの、結合タンパク質により認識されることができるタンパク質配列のエピトープまたは結合部位である。非改変ポリペプチド構造中で、暴露されていない、または部分的にだけ暴露されているアミノ酸配列は、潜在性エピトープである可能性がある。エピトープが暴露されていない、または部分的にしか暴露されていない場合、ポリペプチドの内部に埋もれている可能性がある。潜在性エピトープの候補は、例えば非改変ポリペプチドの三次元構造を検証することにより特定されることができる。
【００７５】
「半数効果濃度」または「ＥＣ５０」という用語は、いくつかの特定の暴露時間後に、基準と最大の間の中間の反応を誘導する、本明細書に記載の剤の濃度を指す。ゆえに段階的な用量反応曲線のＥＣ５０は、その最大効果の５０％が観察される化合物濃度を表す。ＥＣ５０は、インビボで最大効果の５０％を得るために必要な血漿濃度も表す。同様に、「ＥＣ９０」とは、その最大効果の９０％が観察される剤または組成物の濃度を指す。「ＥＣ９０」は、「ＥＣ５０」とヒルスロープから計算することができるか、または当分野に普遍的な知識を使用して直接データから決定することができる。一部の実施形態では、剤のＥＣ５０は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または５００ｎＭ未満である。一部の実施形態では、剤は、約１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
【００７６】
剤の「半減期」とは、生物の血清または組織内に投与されたときの活性と比較して、または任意の他の規定の時点と比較して、その剤が、薬理学的活性、生理学的活性、または他の活性の半分を失うまでにかかる時間を指す場合がある。「半減期」とは、生物の血清または組織内に投与されたときの量もしくは濃度と比較して、または任意の他の規定の時点と比較して、その剤の量または濃度が、生物の血清または組織内に投与された開始量の半分にまで低下するのにかかる時間を指す場合もある。半減期は、血清、および／または任意の１つもしくは複数の選択組織中で測定されることができる。
【００７７】
「調節すること」および「変化させること」という用語は、典型的には、対照と比較して、統計的に有意な、もしくは生理学的に意義のある量または程度で、「増加させること」、「強化すること」、または「刺激すること」、ならびに「減少させること」または「低下させること」を含む。「増加した」、「刺激された」または「強化された」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、組成物無し（例えば剤が非存在）または対照組成物により産生される量の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００倍またはそれ以上（例えば５００倍、１０００倍）（その間のすべての整数および範囲を含む、例えば１．５、１．６、１．７、１．８など）である増加を含む場合がある。「減少した」、または「低下した」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、組成物無し（例えば剤が非存在）または対照組成物により産生される量における、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％  、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少（その間のすべての整数および範囲を含む）を含む場合がある。比較および「統計的に有意な」量の例は、本明細書に記載される。
【００７８】
「ポリペプチド」、「タンパク質」および「ペプチド」という用語は、相互交換可能に使用され、任意の特定の長さに限定されない、アミノ酸のポリマーを意味する。「酵素」という用語は、ポリペプチドまたはタンパク質の触媒を含む。当該用語は、例えばミリストイル化、硫酸化、グリコシル化、リン酸化、およびシグナル配列の付加または欠失などの改変を含む。「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、１つまたは複数のアミノ酸の鎖を意味し、この場合において各鎖は、ペプチド結合により共有結合されたアミノ酸を含み、当該ポリペプチドまたはタンパク質は、非共有結合された、および／またはペプチド結合により共有結合された複数の鎖を含み得る。天然タンパク質の配列を有する場合、すなわち、天然および特定の非組み換え細胞により産生されるタンパク質、または遺伝子操作された、もしくは組み換え細胞により産生されたタンパク質は、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子を含み得、または天然配列の１つまたは複数のアミノ酸から欠失、付加、および／または置換を有する分子を含み得る。特定の実施形態では、ポリペプチドは、１つまたは複数の組み換えＤＮＡ分子を含む組み換え細胞により産生された「組み換え」ポリペプチドであり、典型的には、その場合以外に当該細胞には存在しない異種ポリヌクレオチド配列、またはポリヌクレオチド配列の組み合わせから作製される。
【００７９】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡ、ｃＲＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＤＮＡを含む。当該用語は典型的には、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチド、またはいずれかタイプのヌクレオチドの改変型の、少なくとも１０塩基の長さのヌクレオチドの多量体型を指す。当該用語は、一本鎖型および二本鎖型のＤＮＡを含む。「単離ＤＮＡ」および「単離ポリヌクレオチド」および「単離核酸」という用語は、特定の種の総ゲノムＤＮＡから単離された分子を指す。ゆえにポリペプチドをコードする単離ＤＮＡセグメントとは、１つまたは複数のコード配列を含有するが、当該ＤＮＡセグメントが取得された種の総ゲノムＤＮＡから実質的に単離されて離された、または精製されて遊離したＤＮＡセグメントを指す。さらに、ポリペプチドをコードしない非コードポリヌクレオチド（例えばプライマー、プローブ、オリゴヌクレオチド）も含まれる。さらに、例えば発現ベクター、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、ファージミド、ファージ、ウイルスなどを含む組み換えベクターも含まれ、それらは例えば組み換え法によりポリペプチド剤を産生するために使用され得る。
【００８０】
追加のコード配列または非コード配列は、必須ではないが、本明細書に記載のポリヌクレオチド内に存在してもよく、ポリヌクレオチドは、必須ではないが、他の分子および／またはサポート物質に連結されてもよい。ゆえにコード配列自身の長さに関わらず、ポリヌクレオチド、または発現可能なポリヌクレオチドは、例えば発現制御配列などの他の配列と組み合わされてもよい。
【００８１】
「発現制御配列」には、例えばプロモーター、リーダー、エンハンサー、イントロン、ＲＮＡの認識モチーフ、またはＤＮＡ結合タンパク質、ポリアデニル化シグナル、ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、選択シグナル、細胞内局在シグナルなどの核酸、または対応するアミノ酸の制御性配列が含まれ、それらは宿主細胞中のコード配列の転写もしくは翻訳、または細胞内もしくは細胞の位置に影響を与える能力を有する。発現制御配列の例は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載される。
【００８２】
「プロモーター」は、細胞中でＲＮＡポリメラーゼが結合し、下流（３’方向の）コード配列の転写を開始させることができるＤＮＡ制御領域である。本明細書において使用される場合、プロモーター配列は、その３’末端で転写開始部位に結合され、上流（５’方向）に伸長し、バックグラウンドを超えて検出可能なレベルの転写を開始するのに必要な塩基または要素の最小数を含む。転写開始部位（ヌクレアーゼＳ１を用いたマッピングにより簡便に規定される）は、プロモーター配列内、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合に寄与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）内に存在し得る。真核細胞のプロモーターは多くの場合、「ＴＡＴＡ」ボックスと「ＣＡＴ」ボックスを含有するが、常にではない。原核細胞のプロモーターは、−１０および−３５コンセンサス配列に加えて、Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ配列を含有する。
【００８３】
様々な別個の源に由来する、構造プロモーター、誘導性プロモーター、および抑制性プロモーターを含む、多くのプロモーターが、当分野に公知である。代表的な源としては、例えばウイルス、哺乳動物、昆虫、植物、酵母および細菌細胞が挙げられる。これら源に由来する適切なプロモーターが容易に利用可能であり、または例えばＡＴＣＣなどのデポジトリ、ならびに他の市販または個人の源などのオンラインで公的に利用可能な配列に基づき、合成で作製することができる。プロモーターは、単方向性（すなわち１つの方向で転写を開始する）または二方向性（すなわち３’または５’の方向のいずれかで転写を開始する）であり得る。プロモーターの非限定的な例としては例えば、Ｔ７細菌発現システム、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）細菌発現システム、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターとしては、Ｔｅｔシステム（米国特許第５，４６４，７５８号および第５，８１４，６１８号）、Ｅｃｄｙｓｏｎｅ誘導性システム（Ｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６）９３（８）：３３４６−３３５１）；Ｔ−ＲＥｘＴＭシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カリフォルニア州カールスバッド）、ＬａｃＳｗｉｔｃｈ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社、カリフォルニア州サンディエゴ）、およびＣｒｅ−ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼシステム（Ｉｎｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（１９９９）２７（２２）：４３２４−４３２７；Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（２０００）２８（２３）：ｅ９９；米国特許第７，１１２，７１５号；およびＫｒａｍｅｒ  ＆  Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５）３０８：１２３−１４４）、または所望の細胞での発現に適した当分野に公知の任意のプロモーターが挙げられる。
【００８４】
本明細書において言及される「単離された」ポリペプチドまたはタンパク質という用語は、対象タンパク質が、（１）通常、自然界でともに存在する少なくともいくつかの他のタンパク質が無い、（２）例えば同種などの同じ源に由来する他のタンパク質が本質的に無い、（３）異なる種に由来する細胞により発現される、（４）自然界では関連していたポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または他の物質の少なくとも約５０％から分離されている、（５）「単離されたタンパク質」が自然界では関連していたタンパク質の部分と（共有結合的または非共有結合的な相互作用で）関連していない、（６）自然界では関連していないポリペプチドと操作可能に（共有結合的または非共有結合的な相互作用で）関連している、または（７）自然界では存在しない、ことを意味する。そうした単離タンパク質は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、または他のＲＮＡによりコードされることができ、または合成起源のものであってもよく、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。特定の実施形態では、単離タンパク質は、その用途（治療、診断、予防、研究またはその他）と干渉するであろう、その本来の環境中で存在するタンパク質、ポリペプチドまたは他の混入物が実質的に無い。
【００８５】
特定の実施形態では、組成物中の任意の所与の剤の「純度」が規定されてもよい。例えば、特定の組成物は、例えばタンパク質ベースまたは重量−重量ベースで、その間のすべての小数および範囲を含み、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の純度であるポリペプチド剤などの剤を含んでもよく、例えば決して限定ではないが、化合物を分離、特定および定量するために生化学分野および分析化学分野において頻繁に使用されるカラムクロマトグラフィーの公知の形態である高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定される。
【００８６】
「参照配列」という用語は概して、別の配列と比較される、核酸コード配列またはアミノ酸配列を指す。名称により記載されるもの、ならびに表および配列表に記載されるものを含む、本明細書に記載されるすべてのポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、参照配列としてふくまれる。
【００８７】
特定の実施形態は、本明細書に記載されるポリペプチドの生物学的に活性な「バリアント」および「断片」、ならびにそれをコードするポリヌクレオチドを含む。「バリアント」は、参照ポリペプチドまたは参照ポリヌクレオチドと比較して、１つまたは複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する（例えば表および配列表を参照のこと）。バリアントのポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、本明細書に記載される参照配列に対し、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性、または配列類似性、または配列相同性を有するアミノ酸またはヌクレオチドの配列を含み、当該参照配列の活性を実質的に保持している。さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０個かそれ以上のアミノ酸またはヌクレオチドの付加、欠失、挿入または置換からなる、またはそれらにより参照配列とは異なる配列も含まれ、当該配列は実質的に参照配列の活性を保持している。特定の実施形態では、付加または欠失は、Ｃ末端および／もしくはＮ末端の付加ならびに／または欠失を含む。
【００８８】
「配列同一性」、または例えば「〜に対して５０％同一の配列」を含む、という用語は、本明細書において使用される場合、比較ウィンドウ上で配列が、ヌクレオチド毎で同一である、またはアミノ酸ごとで同一である程度を指す。ゆえに「配列同一性の百分率」は、比較ウィンドウ上の２つの最適アライメント配列を比較する工程、同一核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一アミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が、両方の配列中に存在する位置の数を決定して、合致位置数を算出する工程、合致位置数を、比較ウィンドウ中の総位置数（すなわちウィンドウサイズ）で割る工程、および結果に１００を掛けて、配列同一性の百分率を算出する工程、により計算されてもよい。比較ウィンドウの整列のための配列の最適アライメントは、アルゴリズム（米国ウィスコンシン州マジソン、サイエンスドライブ５７５、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ＧｒｏｕｐのＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）をコンピューター実装することで実施されてもよく、または選択される様々な方法のいずれかにより行われる検査と最適アライメント（すなわち比較ウィンドウ上で最も高い相同性百分率を生じさせるアライメント）により実施されてもよい。参照も、例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９，１９９７により開示されるように、ＢＬＡＳＴファミリープログラムに対して作製されてもよい。
【００８９】
「可溶度」という用語は、本明細書に提供される剤が、液性溶媒中に溶解され、均一な溶液を形成する性質を指す。可溶度は通常、溶媒の単位体積当たりの溶質の質量（溶媒１ｋｇあたりの溶質ｇ、ｄＬ（１００ｍＬ）あたりのｇ、ｍｇ／ｍｌなど）、モル濃度、モル濃度、モル分率、または他の類似した濃度に関する記載のいずれかにより、濃度として表される。溶媒体積当たりで溶解され得る、溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨおよび溶媒の性質をはじめとする特定の条件下での当該溶媒における当該溶質の可溶度である。特定の実施形態では、可溶度は、生理学的なｐＨ、または例えばｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、ｐＨ７．４、ｐＨ７．６、ｐＨ７．８、またはｐＨ８．０（例えば約ｐＨ５〜８）などの他のｐＨで測定される。特定の実施形態では、可溶度は、水、または例えばＰＢＳまたはＮａＣｌ（ＮａＰを含む、または含まない）などの生理学的緩衝液中で測定される。個別の実施形態では、可溶度は、比較的低いｐＨ（例えばｐＨ６．０）、および比較的高い塩濃度（例えば５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＮａＰ）で測定される。特定の実施形態では、可溶度は、例えば血液または血清などの生物学的液体（溶媒）中で測定される。特定の実施形態では、温度は、およそ室温（例えば約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）またはおよそ体温（３７℃）であってもよい。特定の実施形態では、剤は、室温または３７℃で少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｍｌの可溶度を有する。
【００９０】
「対象」または「その必要のある対象」または「患者」または「その必要のある患者」には、例えばヒト対象などの哺乳動物対象が含まれる。
【００９１】
「実質的に」または「本質的に」とは、全体的に、または完全に、いくつかの所与の量の例えば９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上に近いことを意味する。
【００９２】
「統計的に有意」とは、その結果が偶然に発生する可能性は低いことを意味する。統計的有意性は、当分野に公知の任意の方法により決定されることができる。普遍的に使用される有意性の測定尺度としては、ｐ値が挙げられる。ｐ値は、観察された事象が、ヌル仮説が真であった場合に発生する頻度または確率である。得られたｐ値が、有意性レベルよりも小さい場合、ヌル仮説は棄却される。シンプルなケースでは、有意性レベルは、０．０５以下のｐ値で規定される。
【００９３】
「治療反応」とは、１つまたは複数の治療剤の投与に基づく、症状の改善（持続性に関わらず）を指す。
【００９４】
本明細書において使用される場合、「治療有効量」、「治療投与量」、「予防有効量」、または「診断有効量」という用語は、投与の後に所望の生物反応を惹起させるために必要とされる量である。
【００９５】
本明細書において使用される場合、対象（例えばヒトなどの哺乳動物）または細胞の「治療」は、当該個体または細胞の本来の経過を変える試みにおいて使用される任意のタイプの介入である。治療としては限定されないが、医薬組成物の投与が挙げられ、予防的に実施されてもよく、または病理学的事象の始まりの後に実施されてもよく、または病原因子との接触の後に実施されてもよい。さらに「予防的」治療も含まれる。予防的治療は、治療される疾患もしくは状態の進行速度の低下、疾患もしくは状態の発生の遅延、またはその発病の重大度の低下を目的としてもよい。「治療」または「予防」は必ずしも疾患もしくは状態、またはその関連症状の完全な排除、治癒または予防を示すものではない。
【００９６】
「野生型」という用語は、集団中で最も頻繁に観察され、ゆえに任意で遺伝子の「通常」または「野生型」が意図される遺伝子または遺伝子産物（例えばポリペプチド）を指す。
【００９７】
本明細書中の各実施形態は、別段であることが明示的に記載されない限り、すべての他の実施形態にも適用されるものとする。
【００９８】
ＴＲＰＶ６阻害剤
特定の実施形態は、１つまたは複数の「ＴＲＰＶ６阻害剤」を採用する。ＴＲＰＶ６は、Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ（ＴＲＰ）ｃｈａｎｎｅｌｓ，ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ｖａｎｉｌｌｏｉｄ（ＴＲＰＶ），ｍｅｍｂｅｒ  ６であり、Ｃａ２＋イオンに対して選択的である。特に前立腺癌、結腸癌、乳癌、甲状腺癌および卵巣癌をはじめとする様々な癌組織中でも高度に発現されている。その発現は癌の進行と同時発生することから、癌細胞の増殖を誘導していると提唱されている。ゆえに特定の実施形態は、ＴＲＰＶ６に特異的に結合する剤を含む、例えば細胞（例えば癌細胞）のカルシウム取り込みを低下させる、または阻害することによりＴＲＰＶ６を阻害する、またはアンタゴナイズする剤を含む。代表的な剤としては、ＴＲＰＶ６阻害剤低分子（例えば、参照により援用されるＬａｎｄｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２０１１  Ｆｅｂ；２８（２）：３２２−３０を参照のこと）およびＴＲＰＶ６阻害剤ペプチド（例えば参照により援用される米国特許第８，２１１，８５７号、第８，６１８，０５８号、第９，３０３，０７７号を参照のこと）が挙げられる。
【００９９】
特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、ペプチドである。特定のＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドの例としては、ソリシジン（ｓｏｒｉｃｉｄｉｎ）オリゴペプチド（配列番号１）ならびにそのバリアントおよび断片が挙げられ、それらは細胞（例えば癌細胞）のカルシウム取り込みを低下または阻害する。特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、ソリシジンに関連した麻痺活性を伴わずにカルシウム取り込みを阻害する。ソリシジンおよび代表的なその断片のアミノ酸配列を、以下の表Ｔ１に提示する。
【０１００】
【表Ｔ１】
2021505659.tif 000003
【０１０１】
ゆえに特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、表Ｔ１のアミノ酸、または麻痺活性を伴わずにカルシウム取り込みを阻害するそのバリアントおよび／断片を含む、からなる、または本質的にからなるペプチドである。例としては、表Ｔ１の配列に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸を含み、からなり、または本質的にからなり、麻痺活性を伴わずに細胞（例えば癌細胞）のカルシウム取り込みを阻害するバリアント／断片が挙げられる。さらに、表Ｔ１の配列の約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０個であるか、未満であるか、または以下である連続的なアミノ酸を含み、からなり、または本質的にからなるペプチドを含む、それら数値の間のすべての範囲を含む、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸の長さであるか、未満であるか、または以下であるＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドも含まれる。
【０１０２】
特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、ＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号２）またはＥＧＫＬＳＳＮＤＴＥＧＧＬＣＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ（配列番号３）に対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、からなる、または本質的にからなる。
【０１０３】
上述のように、ＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドを含むペプチド剤は、アミノ酸の置換、欠失、切断、付加、および挿入を含む様々な方法で改変されてもよい。そうした操作のための方法は、当分野において一般的に公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の突然変異により作製され得る。突然変異誘導およびヌクレオチド配列改変のための方法は、当分野に公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８−４９２）、Ｋｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７−３８２）、米国特許第  ４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、（“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ”，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびそれらにおいて引用される参照文献を参照のこと。対象タンパク質の生物活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出され得る。
【０１０４】
生物学的に活性な切断ペプチドおよび／またはバリアントペプチドは、参照アミノ酸残基と比較し、その配列に沿った様々な位置で保存的アミノ酸置換を含んでもよい。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられる置換である。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野に規定されており、一般的に以下のように下位分類されることができる。
【０１０５】
酸性：この残基は生理学的なｐＨでＨイオンを失うために負電荷を有している。この残基は水溶液に引き付けられ、そのため当該ペプチドが生理学的ｐＨで水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造中の表面の位置を求める。酸性側鎖を有するアミノ酸としては、グルタミン酸およびアスパラギン酸が挙げられる。
【０１０６】
塩基性：この残基は生理学的なｐＨで、またはその１または２ｐＨ単位内（例えばヒスチジン）で、Ｈイオンと会合するために正電荷を有している。この残基は水溶液に引き付けられ、そのため当該ペプチドが生理学的ｐＨで水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造中の表面の位置を求める。塩基性側鎖を有するアミノ酸としては、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが挙げられる。
【０１０７】
荷電：この残基は生理学的ｐＨで荷電しており、そのため、酸性または塩基性の側鎖を有するアミノ酸が挙げられる（すなわちグルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リシンおよびヒスチジン）。
【０１０８】
疎水性：この残基は生理学的なｐＨで荷電していない。この残基は水溶液にはじかれるため、当該ペプチドが水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造中の内部の位置を求める。疎水性側鎖を有するアミノ酸としては、チロシン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、およびトリプトファンが挙げられる。
【０１０９】
中性／極性：この残基は生理学的なｐＨで荷電していない。しかしこの残基は水溶液にそれほどはじかれないため、当該ペプチドが水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造中の内部の位置をおそらく求めるであろう。中性／極性の側鎖を有するアミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、システイン、ヒスチジン、セリンおよびスレオニンが挙げられる。
【０１１０】
本開示はさらに、特定のアミノ酸を「小さい」として特徴付けるものである。その理由は、その側鎖が充分には大きくなく、たとえ極性基が欠落していたとしても、疎水性を与えることができないためである。プロリンの例外を除き、「小さな」アミノ酸は、少なくとも１個の極性基が側鎖上にあるときには４個以下の炭素、極性基が側鎖上にないときには３個以下の炭素を有するアミノ酸である。小さな側鎖を有するアミノ酸としては、グリシン、セリン、アラニンおよびスレオニンが挙げられる。遺伝子にコードされる二級アミノ酸のプロリンは、ペプチド鎖の二次構造に与える効果が知られており、特殊なケースとされる。プロリンの構造は、その側鎖がα−アミノ基の窒素ならびにα−炭素に結合しているという点で、他のすべての天然アミノ酸とは異なっている。いくつかのアミノ酸の類似性マトリクスが当分野に知られている（例えば、タンパク質の進化的変化のモデルである、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８に開示されるＰＡＭ１２０マトリクスおよびＰＡＭ２５０マトリクスを参照のこと）。しかし、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ，（ｅｄ．），Ａｔｌａｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．５，ｐｐ．３４５−３５８，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣにある距離関連性を決定するためのマトリクス、およびＧｏｎｎｅｔら（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１４４３０−１４４５，１９９２）は、プロリンを、グリシン、セリン、アラニンおよびスレオニンと同じグループに含めている。したがってプロリンは、「小さい」アミノ酸として分類される。
【０１１１】
極性または非極性として分類するために必要な引力または斥力の程度は恣意的なものであり、それゆえ、本発明により特異的に予期されるアミノ酸は、いずれかとして分類されている。特異的に命名されなかった大部分のアミノ酸は、公知の性質に基づき分類され得る。
【０１１２】
アミノ酸残基は、環状または非環状、および芳香族または非芳香族として、残基の側鎖置換基に関する自己説明的な分類として、小さいまたは大きいとしてさらに下位分類されることができる。残基は、追加の極性置換基が存在するのであればカルボキシル炭素を含み総数で４個以下の炭素原子を含有する場合、存在しないのであれば３個以下の炭素原子を含有する場合に小さいとみなされる。もちろん小さな残基は常に非芳香族である。その構造的性質に応じて、アミノ酸残基は、２つ以上の分類に分けられ得る。天然タンパク質のアミノ酸については、本スキームによる下位分類を表Ａに示す。
【０１１３】
【表Ａ】
2021505659.tif 000004
【０１１４】
保存的アミノ酸置換も側鎖に基づくグループ化を含む。例えば脂肪族側鎖を有するアミノ酸グループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンである。脂肪属−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸グループは、セリンおよびスレオニンである。アミド含有側鎖を有するアミノ酸グループは、アスパラギンおよびグルタミンである。芳香族側鎖を有するアミノ酸グループは、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンである。塩基性側鎖を有するアミノ酸グループは、リシン、アルギニンおよびヒスチジンである。そして硫黄含有側鎖を有するアミノ酸グループは、システインおよびメチオニンである。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリンの置換、アスパラギン酸とグルタミン酸の置換、セリンとスレオニンの置換、またはあるアミノ酸と構造的に関連したアミノ酸の類似した置換は得られるバリアントポリペプチドの性質に大きな影響は与えず、これを除外することは妥当である。アミノ酸変化が、機能的に切断された、および／またはバリアントなポリペプチドを生じさせるか否かは、本明細書に記載されるように、その非基準的な活性を分析することで容易に決定することができる。保存的置換は、例示的置換の見出しで、表Ｂに示す。本発明範囲内にあるアミノ酸置換は、概して、（ａ）置換基領域中のペプチド主鎖の構造、（ｂ）標的部位の分子の電荷または疎水性、（ｃ）側鎖の体積、または（ｄ）生物学的機能、の維持に対する効果において、大きな違いが無い置換基を選択することにより実現される。置換基が導入された後、バリアントは生物活性に対してスクリーニングされる。
【０１１５】
【表Ｂ】
2021505659.tif 000005
【０１１６】
あるいは保存的置換を行うための類似アミノ酸は、その側鎖の同一性に基づき３つのカテゴリーにグループ化されることができる。Ｚｕｂａｙ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｍ．Ｃ．Ｂｒｏｗｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９３）に記載されるように、第一のグループは、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リシン、ヒスチジンを含み、それらはすべて荷電側鎖を有している。第二のグループは、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、グルタミン、アスパラギンを含む。第三のグループは、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニンを含む。置換、欠失および／または付加を導入した後、バリアント／断片を、ＴＲＰＶ６によるカルシウム取り込みを低下させる、または別手段で阻害する能力を含む生物活性に対してスクリーニングする。
【０１１７】
特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤、例えばＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドは、第二の治療剤、例えば化学療法剤と複合体化され、または別手段で付加される。ゆえに特定の実施形態は、本明細書に記載されるように、直接、またはその間に任意のリンカーもしくはスペーサーを介して化学療法剤と複合体化されているＴＲＰＶ６阻害剤ペプチドを含むペプチド薬剤複合体（ＰＤＣ：ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）を含む。
【０１１８】
本明細書に記載のＴＲＰＶ６ペプチドは、例えば固相合成法（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６４，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ａｓｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４）または均一溶液中の合成（Ｈｏｕｂｅｎｗｅｙｌ，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｄ．Ｅ．Ｗａｎｓｃｈ，Ｖｏｌ．１５  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ，Ｔｈｉｅｍｅ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）などのタンパク質化学分野で公知の技術を使用した組み換え合成法または化学合成法により容易に調製され得る。
【０１１９】
当業者であれば、本明細書に記載の様々なＴＲＰＶ６阻害剤が、本明細書に記載の様々な免疫チェックポイント調節剤の任意の１つまたは複数と組み合わされ得ること、ならびに本明細書に記載の方法および組成物の任意の１つまたは複数に従い使用され得ることを認識するであろう。
【０１２０】
免疫チェックポイント調節剤
特定の実施形態は、１つまたは複数の免疫チェックポイント調節剤を採用する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、対象の免疫反応を調節して、例えば癌関連または癌特異的な免疫反応を増加させ、または維持し、それにより癌細胞の免疫細胞阻害または減少の増加を生じさせる。免疫チェックポイント調節剤の例としては、例えば抗体およびその抗原結合断片などのポリペプチド、リガンド、小さなペプチド、低分子、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１２１】
免疫チェックポイント調節剤の特定の例としては、１つまたは複数の阻害性免疫チェックポイント分子の「アンタゴニスト」、および１つまたは複数の刺激性免疫チェックポイント分子の「アゴニスト」が挙げられる。一般的に、免疫チェックポイント分子は、シグナルを上向かせる（共刺激性分子）、またはシグナル下向ける、免疫システムの構成要素である。癌細胞は免疫チェックポイント分子の本来の機能を乱し得るため、その標的化は癌治療の可能性を有している（Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８：５６−６１，２０１５；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２７：４５０−４６１，２０１５；Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ．１２：２５２−２６４，２０１２）。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤（例えばアンタゴニスト、アゴニスト）は、本明細書に記載の１つまたは複数の免疫チェックポイント分子に「結合する」、または「特異的に結合する」。
【０１２２】
特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ポリペプチドまたはペプチドである。「ペプチド」と「ポリペプチド」という用語は本明細書に置いて相互交換可能に使用されるが、特定の実施形態では、「ペプチド」という用語は短いポリペプチド、例えばそれらの間のすべての整数および範囲を含む（例えば５〜１０、８〜１２、１０〜１５）、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸からなるポリペプチドを指す場合があり得る。ポリペプチドおよびペプチドは、本明細書に記載されるように、天然アミノ酸および／または非天然アミノ酸から構成され得る。抗体もポリペプチドとして含まれる。
【０１２３】
ポリペプチドの結合性質は、当分野に公知の方法を使用して定量され得る（Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３，１９９０を参照のこと）。一部の実施形態では、ポリペプチドは標的分子、例えば免疫チェックポイント分子またはそのエピトープに、約≦１０−７から約１０−８Ｍであるか、またはその範囲にある平衡解離定数で特異的に結合する。一部の実施形態では、平衡解離定数は、約≦１０−９Ｍから約１０−１０であるか、またはその範囲である。ある例示的実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載の（特異的に結合する）標的に対し、約、もしくは少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭであるか、または未満のアフィニティ（Ｋｄ）を有する。
【０１２４】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節ポリペプチド剤は、抗体または「その抗原結合断片」である。抗体または抗原結合断片は、原則的にいずれのタイプのものであってもよい。当分野の当業者に知られているように、抗体は、例えば免疫チェックポイント分子などの標的に、少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して特異的に結合することができるイムノグロブリン分子であり、エピトープ認識部位は免疫グロブリン分子の可変領域中に位置している。
【０１２５】
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、完全なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のみならず、それらの断片（例えばｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その合成バリアント、天然バリアント、必要とされる特異性の抗原結合断片を有する抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性の抗原結合部位または断片（エピトープ認識部位）を含むイムノグロブリン分子の任意の他の改変構造物も包含される。抗体（およびその抗原結合断片）の特定の性質および特徴は、本明細書においてさらに詳細に記載される。
【０１２６】
本明細書において使用される場合、「抗原結合断片」という用語は、対象抗原に結合するイムノグロブリンの重鎖および／または軽鎖のＣＤＲを少なくとも１つ含有するポリペプチド断片を指す。これに関し、本明細書に記載の抗体の抗原結合断片は、標的分子に結合する抗体に由来するＶＨ配列およびＶＬ配列のＣＤＲを１、２、３、４、５または６個すべて含有してもよい。
【０１２７】
例えばポリペプチドまたは抗体といった分子は、別の細胞または物質よりも特定の細胞または物質と、より頻繁に、より急速に、長時間および／もしくは高いアフィニティで反応する、または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を呈すると言われる。他の物質との結合よりも高いアフィニティ、アビディティで、より急速に、および／または長い期間、例えば統計的に有意な量で結合する場合、抗体は、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば特定のエピトープに特異的に、または優先的に結合する抗体は、他のエピトープに結合するよりも高いアフィニティ、アビディティで、より急速に、および／または長い期間、当該特定のエピトープに結合する抗体である。この定義を読むことで、例えば第一の標的に特異的に、または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第二の標的に特異的に、または優先的に結合しても、または結合しなくてもよいことが理解されるであろう。したがって「特異的結合」または「優先的結合」は必ずしも排他的結合を必須とはしない（が、排他的結合も含み得る）。必ずではないが一般的に、結合に対する参照とは、優先的結合を意味する。
【０１２８】
イムノグロブリン結合とは概して、イムノグロブリン分子と当該イムノグロブリンが特異的な抗原の間に、例えば例示として、限定ではないが、静電性、イオン性、親水性、および／もしくは疎水性の引力または斥力、立体力、水素結合、ファンデルワールス力、および他の相互作用の結果として発生するタイプの非共有結合的相互作用を指す。免疫学的結合の相互作用の強度またはアフィニティは、相互作用の解離定数（Ｋｄ）を単位として表されることができ、この場合においてＫｄが小さくなると、アフィニティは高くなる。選択されたポリペプチドの免疫学的結合の性質は、当分野に公知の方法を使用して定量することができる。そうした方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体の形成と解離の速度を計測する工程を伴い、この場合においてそうした速度は、複合パートナーの濃度、相互作用のアフィニティ、および両方向で速度に等しく影響を与える幾何学的パラメーターに依存する。ゆえに「会合速度定数（ｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」（Ｋｏｎ）と「解離速度定数（ｏｆｆ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」（Ｋｏｆｆ）の両方ともが、濃度と、実際の会合と解離の速度を算出することにより決定され得る。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率によって、アフィニティに関連しないすべてのパラメーターを相殺することができ、それゆえ、この比率は解離定数Ｋｄと等しいものとなる。
【０１２９】
抗体は、当分野の当業者に公知の様々な技術のいずれかにより調製されてもよい。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。対象ポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，１９７６の技術、およびその改善技術を使用して調製されてもよい。また、例えばヒト抗体を発現するマウスなどのトランスジェニック動物を利用する方法も含まれる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６，１９９６；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１，１９９４；およびＬｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：６５−９３，１９９５を参照のこと。特定の例としては、ＲＥＧＥＮＥＲＥＸ（登録商標）によるＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットフォームが挙げられる（例えば米国特許第６，５９６，５４１号を参照のこと）。
【０１３０】
抗体は、ファージディスプレイライブラリまたは酵母ディスプレイライブラリを使用して作製または特定されてもよい（例えば米国特許第７，２４４，５９２号およびＣｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．１：７５５−７６８，２００６を参照のこと）。利用可能なライブラリの非限定的な例としては、例えばＨｕｍａｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ（ＨｕＣＡＬ）などのクローン化ライブラリまたは合成ライブラリが挙げられる。このライブラリでは、７個の重鎖可変領域遺伝子と、７個の軽鎖可変領域遺伝子により、ヒト抗体レパートリーの構造多様性が提示されている。これら遺伝子の組み合わせにより、マスターライブラリにおいて４９個のフレームワークが生じる。これらフレームワークに高度に可変性の遺伝子カセット（ＣＤＲ＝相補性決定領域）を重ね合わせることにより、膨大なヒト抗体レパートリーが再産生され得る。さらに、軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲ−３をコードするヒトドナーを源とする断片、重鎖ＣＤＲ−１中の多様性をコードする合成ＤＮＡ、および重鎖ＣＤＲ−２中の多様性をコードする合成ＤＮＡを用いて設計されたヒトライブラリも含まれる。当業者には、使用に適した他のライブラリが明白であろう。
【０１３１】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合断片は重鎖および軽鎖のＣＤＲセットを含み、各セットは重鎖および軽鎖のフレームワーク領域（ＦＲ）セットの間に置かれ、ＦＲセットはＣＤＲのサポートを提供し、互いに対するＣＤＲの空間的関連性を規定する。本明細書において使用される場合、「ＣＤＲセット」という用語は、重鎖および軽鎖のＶ領域の３つの超可変領域を指す。重鎖または軽鎖のＮ末端から進み、これらの領域はそれぞれ「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」および「ＣＤＲ３」と示される。ゆえに抗原結合部位は、重鎖および軽鎖のＶ領域のそれぞれに由来するＣＤＲセットを含む、６個のＣＤＲを含有する。単一のＣＤＲ（例えばＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を含有するポリペプチドは本明細書において「分子認識単位」と呼称される。多くの抗原−抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基は、広範な結合抗原との接触を形成し、最も広範な抗原接触は、重鎖ＣＤＲ３との接触であった。ゆえにこの分子認識単位が主に抗原結合部位の特異性に寄与している。
【０１３２】
本明細書において使用される場合、「ＦＲセット」という用語は、４つの隣接アミノ酸配列を指し、これらが重鎖および軽鎖のＶ領域のＣＤＲセットのＣＤＲを形作る。いくつかのＦＲ残基は結合抗原と接触する場合がある。しかしＦＲ、特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基は主に、Ｖ領域を抗原結合部位内に収めることに寄与している。ＦＲ内では、特定のアミノ残基と特定の構造性質が非常に高度に保存されている。この点に関し、すべてのＶ領域配列は、約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含有している。Ｖ領域が結合部位内に収まる場合、ＣＤＲは突出したループモチーフとして提示され、これが抗原結合表面を形成する。一般的に、ＦＲの保存構造領域が存在し、当該領域が、詳細なＣＤＲアミノ酸配列に関わらず、特定の「標準的な」構造内に収まるＣＤＲループの形状に影響を与えると認識されている。さらに特定のＦＲ残基は、抗体の重鎖と軽鎖の相互作用を安定化させる非共有結合的なドメイン間接触に関与していることが知られている。
【０１３３】
イムノグロブリンの可変ドメインの構造と配置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７、およびその最新版を参照することにより決定されてもよい。
【０１３４】
また、均一な抗体集団を指す「モノクローナル抗体」も含まれ、この場合においてモノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与するアミノ酸（天然および非天然）から構成される。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一エピトープに対して指向する。「モノクローナル抗体」という用語は、完全なポリクローナル抗体および全長モノクローナル抗体のみならず、それらの断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その合成バリアント、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、および必要とされる特異性の抗原結合断片（エピトープ認識部位）とエピトープに結合する能力を含むイムノグロブリン分子の任意の他の改変構造物も包含される。抗体の源、または作製される様式（例えばハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、トランスジェニック動物など）に関して限定されることは意図されない。この用語は、全イムノグロブリン、ならびに「抗体」の定義の下で上述される断片などを含む。
【０１３５】
タンパク質分解酵素のパパインはＩｇＧ分子を選択的に切断して、いくつかの断片を生じさせる。その断片（Ｆ（ａｂ）断片）のうちの２つはそれぞれ、損なわれていない抗原結合部位を含む共有結合性のヘテロ二量体を含む。酵素のペプシンはＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含むいくつかの断片を生じさせることができる。本発明の特定の実施形態による使用のためのＦｖ断片は、ＩｇＭ、稀にＩｇＧまたはＩｇＡイムノグロブリン分子の選択的タンパク質分解的切断により作製されることができる。しかし当分野に公知の組み換え技術を使用してＦｖ断片を誘導される方が普遍的である。Ｆｖ断片は、抗原結合部位を含む非共有結合性のＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含み、それらは天然抗体分子の抗原認識と結合の能力の大部分を保持している。Ｉｎｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．６９：２６５９−２６６２，１９７２；Ｈｏｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２７０６−２７１０，１９７６；およびＥｈｒｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９：４０９１−４０９６，１９８０を参照のこと。
【０１３６】
特定の実施形態では、一本鎖ＦｖまたはｓｃＦＶ抗体が予期される。例えばカッパボディ（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７，１９９７）；ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０５−９，１９９４）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：６４４４−８，１９９３）；またはＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９，１９９１；およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２，１９９２）が、所望の特異性を有する抗体の選択に関し、本出願の教示に従い標準的な分子生物学的技術を使用して調製されてもよい。
【０１３７】
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）ポリペプチドは、共有結合したＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体であり、ペプチドコードリンカーにより連結されたＶＨコード遺伝子およびＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合から発現される。Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５（１６）：５８７９−５８８３，１９８８）。抗体Ｖ領域に由来する、自然に凝集し、しかし化学的に分離される軽鎖ポリペプチドと重鎖ポリペプチドを、抗原結合部位の構造と実質的に類似した３次元構造へとフォールディングされるｓｃＦＶ分子へと転換するために、化学構造を識別する方法が多数報告されている。例えば米国特許第  ５，０９１，５１３号および第５，１３２，４０５号、Ｈｕｓｔｏｎら；ならびに米国特許第  ４，９４６，７７８号、Ｌａｄｎｅｒら、を参照のこと。
【０１３８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、「ダイアボディ」の形態である。ダイアボディはポリペプチドの多量体であり、各ポリペプチドは、イムノグロブリン軽鎖の結合領域を含む第一のドメインと、イムノグロブリン重鎖の結合領域を含む第二のドメインを含む。この２つのドメインは（例えばペプチドリンカーにより）連結されるが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない。抗原結合部位は多量体内の１つのポリペプチドの第一のドメインと、多量体内の別のポリペプチドの第二のドメインの会合により形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。抗体のｄＡｂ断片は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）。ダイアボディ、および他の多価または多特異的な断片は、例えば遺伝子融合により構築され得る（ＷＯ９４／１３８０４；ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．９０：６４４４−６４４８，１９９３を参照のこと）。
【０１３９】
ＣＨ３ドメインに結合されたｓｃＦＶを含有するミニボディも含まれる（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６を参照のこと）。Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３４１：５４４−５４６，１９８９；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５：５８７９−５８８３，１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５；ＷＯ９４／１３８０４；およびＲｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５，１９９６も参照のこと。
【０１４０】
二特異性抗体が使用される場合、これらは様々な方法で作製され得る従来型の二特異性抗体であってもよく（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６−４４９，１９９３）、例えば化学的に調製されてもよく、またはハイブリッドハイブリドーマから調製されてもよく、または上述の二特異性抗体断片のいずれかであってもよい。ダイアボディとｓｃＦＶは、可変ドメインのみを使用して、Ｆｃ領域無しで構築されてもよく、それにより抗イディオタイプな反応の影響を低下させる可能性がある。
【０１４１】
二特異性全抗体とは対照的に、二特異性ダイアボディは容易に構築され、大腸菌中で発現させることができるために、特に有用である場合もある。適切な結合特異性のダイアボディ（および多くの他のポリペプチド、例えば抗体断片）は、ライブラリからファージディスプレイにより容易に選択されることができる（ＷＯ９４／１３８０４）。ダイアボディの１つのアームが例えば抗原Ｘに対する特異性を有して一定に維持される場合、他方のアームを変化させてライブラリを作製して、適切な特異性の抗体を選択することもできる。二特異性全抗体は、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ操作法により作製されてもよい（Ｒｉｄｇｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９：６１６−６２１，１９９６）。
【０１４２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供されてもよい。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ社、オランダ、ユトレヒト；例えばＵＳ２００９０２２６４２１も参照のこと）。この抗体技術により安定的で小さな抗体型が生成され、現行の小さな抗体型よりも治療濃度域が広いことが予測される。ＩｇＧ４抗体は不活性とみなされており、そのため免疫系とは相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体は、抗体のヒンジ領域を除去して、対応する元のＩｇＧ４とは明確に異なる安定性を有する半−分子断片を取得することにより改変され得る（ＧｅｎＭａｂ社、ユトレヒト）。ＩｇＧ４分子を半分にするとＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）上には同族抗原（例えば疾患標的）に結合することができる１つの領域のみが残されているため、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は標的細胞の１つの部位のみに一価で結合する。特定の癌細胞表面抗原に対し、この一価結合では、同じ抗原特異性を有する二価抗原を使用するときに見られるような癌細胞の増殖を刺激することはなく、ゆえにＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）技術は、従来型の抗体を用いた治療に対し難治性の可能性がある一部のタイプの癌に対する治療選択肢を与え得る。小さなサイズのＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、大きな固形腫瘍全体に分子がより広く分布することが可能となり、潜在的に有効性が上昇することから、いくつかの癌型の治療に際し大きな利益を与え得る。
【０１４３】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ナノボディの形態をとってもよい。ミニボディは単一遺伝子にコードされ、ほとんどすべての原核細胞宿主と真核細胞宿主、例えば大腸菌（米国特許第６，７６５，０８７号）、カビ（例えばアスペルギルス属またはトリコデルマ属）および酵母（例えばサッカロミセス属、クリベロマイセス属、ハンゼヌラ属、またはピキア属）（米国特許第６，８３８，２５４号を参照のこと）において効率的に産生される。産生プロセスは拡張可能であり、複数キログラム単位のナノボディが産生されている。ナノボディは、長期保存可能な、すぐに使える溶液として製剤化され得る。ナノクローン法（ＷＯ０６／０７９３７２を参照のこと）は、Ｂ細胞の自動化ハイスループット選別を基にした、所望標的に対するナノボディ作製の特許方法である。
【０１４４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化される。これらの実施形態は、一般的には組み換え技術を使用して調製されるキメラ分子を指し、キメラ分子は非ヒト種のイムノグロブリンに由来する抗原結合部位と、ヒトイムノグロブリンの構造および／または配列を基にした残りのイムノグロブリン構造の分子を有する。抗原結合部位は、定常ドメインに融合された完全可変ドメイン、または可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域上に移植されたＣＤＲのみのいずれかを含んでもよい。エピトープ結合部位は、野生型であっても、１つまたは複数のアミノ酸置換により改変されてもよい。ヒト個体における免疫原としての定常領域は除去されているが、外来性可変領域に対する免疫反応の可能性は残されている（ＬｏＢｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４，１９８９；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８６：１００２９−１００３３，１９８８；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３−３２７，１９８８）。抗体ヒト化の例示的な方法として、米国特許第７，４６２，６９７号に記載される方法が挙げられる。
【０１４５】
別の方法は、ヒト由来定常領域の提供のみならず、可変領域の改変にも同様に焦点を当てており、それによってヒト型に可能な限り似せて再形成される。重鎖と軽鎖、両方の可変領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＣＤＲは対象のエピトープに反応して変化して結合能力を決定し、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接されていることが知られている。ＦＲは所与の種中で比較的保存され、ＣＤＲの足場を提供すると推定されている。特定のエピトープに関して非ヒト抗体が作製された場合、非ヒト抗体由来のＣＤＲを、改変されるヒト抗体中に存在するＦＲ上に移植することにより、可変領域を「再形成」、または「ヒト化」してもよい。様々な抗体に対する本方法のアプリケーションは、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：８５１−８５６，１９９３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−３７８３，１９９１；Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４，１９９１；Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：４１８１−４１８５，１９９１；Ｔｅｍｐｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１，１９９１；Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：２８６９−２８７３，１９９１；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：４２８５−４２８９，１９９２；およびＣｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４，１９９２に報告されている。一部の実施形態では、ヒト抗体はすべてのＣＤＲ配列を保存している（例えばマウス抗体由来の６つすべてのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体に対し改変された１つまたは複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６）を有し、それらは元の抗体の１つまたは複数のＣＤＲから「誘導された」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。
【０１４６】
特定の実施形態では、抗体はキメラ抗体であってもよい。これに関し、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に操作可能に連結された、または別手段で融合された抗体の抗原結合断片から構成される。特定の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ヒト起源のＦｃドメインである。他の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、親抗体とは異なるＩｇクラスのＦｃドメインであってもよく、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２サブクラスを含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４サブクラスを含む）、およびＩｇＭが挙げられる。さらなる実施形態において、異種Ｆｃドメインは、異なるＩｇクラスの１つまたは複数に由来するＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインから構成されてもよい。ヒト化抗体に関して上述されるように、キメラ抗体の抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体のＣＤＲを１つのみ、または複数含んでもよく（例えば本明細書に記載される抗体の１、２、３、４、５または６個のＣＤＲ）、または可変ドメイン全体（ＶＬ、ＶＨまたはその両方）を含んでもよい。
【０１４７】
一部の実施形態では、剤は、例えば免疫チェックポイント分子の本来のリガンドなどの「リガンド」であってもよく、または含む。「リガンド」とは一般的に、標的分子（例えば生体分子）との複合体を形成して、生物学的な目的を果たす物質または分子を指し、一般的に標的分子上の部位または標的タンパク質に結合することでシグナルを生成する「タンパク質リガンド」が含まれる。ゆえに特定の剤は、自然界において免疫チェックポイント分子に結合してシグナルを生成するタンパク質リガンドである。また、例えばイムノグロブリンから誘導されたＦｃ領域などの薬物動態改変因子に融合されたタンパク質リガンドなどの「改変リガンド」も含まれる。
【０１４８】
一部の実施形態では、剤は、「低分子」であり、低分子とは、合成または生物起源（生体分子）である有機化合物を指すが、通常、ポリマーではない。有機化合物とは、化合物の巨大なクラスを指し、その分子は炭素を含有し、典型的には、炭水化物、炭素の単純酸化物、またはシアン化物のみを含有するものは除外される。「生体分子」とは一般的に、生きた生物体から生成される有機分子を指し、例えばペプチド、多糖および核酸などの巨大な高分子（バイオポリマー）、同様に例えば一次二次代謝物、脂質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミンおよびホルモンなどの低分子が含まれる。「ポリマー」とは一般的に、反復構造単位から構成される巨大分子または高分子を指し、それらは通常、共有結合的化学結合により接続される。
【０１４９】
特定の実施形態では、低分子は、約１０００〜２０００ダルトンであるか、または未満、典型的には約３００〜７００ダルトンの分子量を有し、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００または２０００ダルトンであるか、または未満が挙げられる。
【０１５０】
特定の低分子は、本明細書において例えば抗体などのポリペプチドに関し記載される「特異的結合」の特徴を有し得る。例えば一部の実施形態では、低分子は標的、例えば免疫チェックポイント分子に、約、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０もしくは５０ｎＭであるか、または未満の結合アフィニティ（Ｋｄ）で特異的に結合する。
【０１５１】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、１つまたは複数の阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストまたは阻害剤である。阻害性免疫チェックポイント分子の例としては、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  ２（ＰＤ−Ｌ２）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）、Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４（ＣＴＬＡ−４）、Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＴＤＯ）、Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）、Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、およびＴ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ）が挙げられる。
【０１５２】
特定の実施形態では、剤は、ＰＤ−１（受容体）のアンタゴニストまたは阻害剤であり、その標的化により、腫瘍環境中の免疫機能が回復することが示されている（例えばＰｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：３９−４６，２０１５を参照のこと）。ＰＤ−１はイムノグロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面受容体であり、Ｔ細胞およびプロＢ細胞上に発現される。ＰＤ−１は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の２つのリガンドと相互作用する。ＰＤ−１は、例えばＴ細胞活性化を低下させる、または妨害することにより阻害性免疫チェックポイント分子として機能し、これにより自己免疫性を低下させ、自己寛容を促進する。ＰＤ−１の阻害性効果は、少なくとも部分的には、リンパ節中の抗原特異的Ｔ細胞のアポトーシスを促進しながら制御性Ｔ細胞（抑制性Ｔ細胞）のアポトーシスも低下させるという二重のメカニズムを介して達成される。ＰＤ−１のアンタゴニストまたは阻害剤のいくつかの例としては、ＰＤ−１に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数、例えば下流シグナル伝達やＰＤ−Ｌ１との相互作用を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。ＰＤ−１のアンタゴニストまたは阻害剤の具体的な例としては、抗体のニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＰＤＲ００１、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４およびピディリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる（例えば米国特許第８，００８，４４９号、第８，９９３，７３１号、第９，０７３，９９４号、第９，０８４，７７６号、第９，１０２，７２７号、第９，１０２，７２８号、第９，１８１，３４２号、第９，２１７，０３４号、第９，３８７，２４７号、第９，４９２，５３９号、第９，４９２，５４０号、および米国特許出願２０１２／００３９９０６、２０１５／０２０３５７９を参照のこと）。
【０１５３】
一部の実施形態では、剤は、ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストまたは阻害剤である。上述のように、ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１受容体の本来のリガンドの１つである。ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数、例えばＰＤ−１受容体への結合を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストの具体的な例としては、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる（例えば米国特許第９，１０２，７２５号、第９，３９３，３０１号、第９，４０２，８９９号、第９，４３９，９６２号）を参照のこと）。
【０１５４】
一部の実施形態では、剤は、ＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストまたは阻害剤である。上述のように、ＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ−１受容体の本来のリガンドの１つである。ＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＰＤ−Ｌ２に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数、例えばＰＤ−１受容体への結合を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０１５５】
一部の実施形態では、剤は、ＣＴＬＡ−４のアンタゴニストまたは阻害剤である。ＣＴＬＡ４またはＣＴＬＡ−４（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４）は、ＣＤ１５２（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １５２）としても知られており、例えば抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合した際に、Ｔ細胞に阻害性シグナルを伝達することにより、阻害性免疫チェックポイント分子として機能するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ−４のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。具体的な例としては、抗体のイピリムマブおよびトレメリムマブ、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。イピリムマブの活性の少なくとも一部は、ＣＴＬＡ−４を発現する抑制性Ｔｒｅｇの抗体‐依存性細胞‐介在性細胞障害（ＡＤＣＣ）殺傷により介在されると考えられている。
【０１５６】
一部の実施形態では、剤は、ＩＤＯのアンタゴニストもしくは阻害剤、またはＴＤＯのアンタゴニストもしくは阻害剤である。ＩＤＯおよびＴＤＯは免疫阻害性の性質を有するトリプトファン代謝酵素である。例えばＩＤＯは、Ｔ細胞とＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来抑制性細胞を生じさせ、活性化すること、ならびに腫瘍の血管新生を促進することが知られている。ＩＤＯおよびＴＤＯのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＩＤＯまたはＴＤＯに特異的に結合し、１つまたは複数の免疫抑制性活性を低下または阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる（例えば、Ｐｌａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６７３，２０１４を参照のこと）。ＩＤＯのアンタゴニストまたは阻害剤の具体的な例としては、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットが挙げられる（例えばＳｈｅｒｉｄａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．３３：３２１−３２２，２０１５を参照のこと）。ＴＤＯのアンタゴニストまたは阻害剤の具体的な例としては、６８０Ｃ９１およびＬＭ１０が挙げられる（例えばＰｉｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０９：２４９７−２５０２，２０１２を参照のこと）。
【０１５７】
一部の実施形態では、剤は、ＴＩＭ−３のアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）は、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ−細胞上で発現され、Ｔｈ１サイトカインおよびＴｈ１７サイトカインを制御する。ＴＩＭ−３は、そのリガンドであるガレクチン−９との相互作用で細胞死を誘発することにより、Ｔｈ１／Ｔｃ１機能の負の制御因子としても作用する。ＴＩＭ−３は、抑制性の腫瘍微小環境に寄与し、その過剰発現は様々な癌において予後不良と関連している（例えばＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ．５４：１７０６−１３，２０１５を参照のこと）。ＴＩＭ−３のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＴＩＭ−３に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させ、または阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０１５８】
一部の実施形態では、剤は、ＬＡＧ−３のアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）は、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞および形質細胞様樹状細胞上で発現される。ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１に似た様式でＴ細胞の増殖、活性化およびホメオスタシスを負に制御し（例えばＷｏｒｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｖｉｇｎａｌｉ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．３３：９７０−９，２００３；およびＷｏｒｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．１７２：５４５０−５，２００４を参照のこと）、Ｔｒｅｇの抑制性機能において重要な役割を果たすことが報告されている（例えば、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２１：５０３−１３，２００４を参照のこと）。ＬＡＧ３はさらにＣＤ８＋Ｔ−細胞を寛容原性の状態に維持し、ＰＤ−１と結合してＣＤ８  Ｔ細胞の枯渇状態を維持する。ＬＡＧ−３のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＬＡＧ−３に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。具体的な例としては抗体のＢＭＳ−９８６０１６、およびその抗原結合断片が挙げられる。
【０１５９】
一部の実施形態では、剤は、ＶＩＳＴＡのアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）は、造血細胞上で主に発現され、Ｔ細胞活性化を抑制し、Ｆｏｘｐ３発現を誘導し、そして抗腫瘍Ｔ細胞反応が抑制されている腫瘍微小環境内で高度に発現される阻害性免疫チェックポイント制御因子である（例えば、Ｌｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７４：１９２４−３２，２０１４を参照のこと）。ＶＩＳＴＡのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＶＩＳＴＡに特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０１６０】
一部の実施形態では、剤は、ＢＴＬＡのアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｂ−  ａｎｄ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２）の発現はＴ細胞の活性化中に誘導され、細胞表面受容体の腫瘍壊死因子ファミリー受容体（ＴＮＦ−Ｒ）およびＢ７ファミリーとの相互作用を介してＴ細胞を阻害する。ＢＴＬＡは、ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）としても知られているｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳＦ１４）に対するリガンドである。ＢＴＬＡ−ＨＶＥＭ複合体は、例えばヒトＣＤ８＋癌特異的Ｔ−細胞の機能を阻害することによりＴ細胞の免疫反応を負に制御する（例えば、Ｄｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２０：１５７−６７，２００９を参照のこと）。ＢＴＬＡのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＢＴＬＡ−４に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０１６１】
一部の実施形態では、剤は、ＨＶＥＭのアンタゴニストまたは阻害剤であり、例えばＨＶＥＭに特異的に結合し、ＢＴＬＡまたはＣＤ１６０とのその相互作用に干渉するアンタゴニストまたは阻害剤である。ＨＶＥＭのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＨＶＥＭに特異的に結合し、任意でＨＶＥＭ／ＢＴＬＡおよび／またはＨＶＥＭ／ＣＤ１６０の相互作用を低下させ、それによりＨＶＥＭの免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０１６２】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ１６０のアンタゴニストまたは阻害剤であり、例えばＣＤ１６０に特異的に結合し、ＨＶＥＭとのその相互作用に干渉するアンタゴニストまたは阻害剤である。ＣＤ１６０のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＣＤ１６０に特異的に結合し、任意でＣＤ１６０／ＨＶＥＭの相互作用を低下させ、それによりその免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させ、または阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０１６３】
一部の実施形態では、剤は、ＴＩＧＩＴのアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎ（ＴＩＧＩＴ）は、様々なリンパ系細胞の表面上に存在し、例えばＴｒｅｇを介して抗腫瘍免疫を抑制する共阻害性受容体である（Ｋｕｒｔｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３−４０６２，２０１５を参照のこと）。ＴＩＧＩＴのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＴＩＧＩＴに特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる（例えば、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２６：９２３−３７，２０１４を参照のこと）。
【０１６４】
特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、１つまたは複数の刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。刺激性免疫チェックポイント分子の例としては、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびＨｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）が挙げられる。
【０１６５】
一部の実施形態では、剤は、ＯＸ４０アゴニストである。ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、エフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞の拡張を促進し、Ｔ制御性細胞の分化と活性を抑制する（例えば、Ｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２２９：１７３−９１，２００９を参照のこと）。そのリガンドは、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）である。ＯＸ４０のシグナル伝達はＴ細胞の活性化と生存の両方に影響を与えるため、リンパ節中の抗腫瘍免疫反応の開始と、腫瘍微小環境中の抗腫瘍免疫反応の維持に重要な役割を果たす。ＯＸ４０のアゴニストの一般的な例としては、ＯＸ４０に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＯＸ８６、ＯＸ−４０Ｌ、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＥＤＩ０５６２（ヒト化ＯＸ４０アゴニスト）、ＭＥＤＩ６４６９（マウスＯＸ４アゴニスト）、およびＭＥＤＩ６３８３（ＯＸ４０アゴニスト）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０１６６】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ４０アゴニストである。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）および一部の悪性腫瘍で発現される。そのリガンドは、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）である。ＡＰＣ上でのライゲーションにより共刺激性分子の上方制御が生じ、抗腫瘍免疫反応においてＴ細胞の支援の必要性を回避する可能性がある。ＣＤ４０アゴニスト療法は、ＡＰＣの成熟、および腫瘍からリンパ節へのＡＰＣの移動に重要な役割を果たし、抗原提示とＴ細胞活性化の上昇をもたらす。抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、動物モデルにおいて、少なくとも部分的には細胞障害性Ｔ細胞により介在される効果である充分な反応性と長期的な抗癌免疫をもたらす（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１：１３２１−１３２８，２０１５；およびＶｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ  ａｎｄ  Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９：１０３５−４３，２０１３を参照のこと）。ＣＤ４０のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ４０に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３、ＣＤ４０Ｌ、ｒｈＣＤ４０Ｌ、およびそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０１６７】
一部の実施形態では、剤は、ＧＩＴＲアゴニストである。Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）は、Ｔ細胞の拡張を増加させ、Ｔｒｅｇの抑制性の活性を阻害し、そしてＴ−エフェクター細胞の生存期間を延長させる。ＧＩＴＲのアゴニストは、Ｔｒｅｇ系統の安定性の減少を通じて、抗腫瘍反応を促進することが示されている（例えば、Ｓｃｈａｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．１：３２０−３１，２０１３を参照のこと）。これら多様なメカニズムは、ＧＩＴＲがリンパ節での免疫反応の開始と、腫瘍組織での免疫反応の維持に重要な役割を果たしていることを示している。そのリガンドは、ＧＩＴＲＬである。ＧＩＴＲのアゴニストの一般的な例としては、ＧＩＴＲに特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＧＩＴＲＬ、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、ＭＥＤＩ１８７３、およびそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０１６８】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ１３７アゴニストである。ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーの１種であり、ＣＤ１３７の交差結合によりＴ細胞の増殖、ＩＬ−２分泌、生存および細胞溶解活性が強化される。ＣＤ１３７介在シグナル伝達も、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞を活性化誘導性細胞死から保護する。ＣＤ１３７のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ１３７に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＣＤ１３７（または４−１ＢＢ）リガンド（例えばＳｈａｏ  ａｎｄ  Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．８９：２１−９，２０１１を参照のこと）およびその抗原結合断片を含む、抗体のウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）が挙げられる。
【０１６９】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ２７アゴニストである。ＣＤ２７の刺激により、ナイーブＴ細胞の抗原特異的拡張が増加し、Ｔ細胞メモリーと、Ｔ細胞免疫の長期維持に寄与する。そのリガンドは、ＣＤ７０である。アゴニスト抗体を用いてヒトＣＤ２７を標的化することで、Ｔ細胞活性化と抗腫瘍免疫が刺激される（例えば、Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１４；３：ｅ２７２５５．ｄｏｉ：１０．４１６１／ｏｎｃｉ．２７２５５；およびＨｅ  ｅｔ  ａｌ  ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４１７４−８３，２０１３を参照のこと）。ＣＤ２７のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ２７に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としてはＣＤ７０、ならびにその抗原結合断片を含む抗体のバルリルマブおよびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）が挙げられる。
【０１７０】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ２８アゴニストである。ＣＤ２８は構造的にＣＤ４＋Ｔ細胞と一部のＣＤ８＋Ｔ細胞に発現される。そのリガンドとしてはＣＤ８０とＣＤ８６が挙げられ、その刺激によりＴ細胞拡張が増加する。ＣＤ２８のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ２８に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としてはＣＤ８０、ＣＤ８６、抗体のＴＡＢ０８、およびその抗原結合断片が挙げられる。
【０１７１】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ２２６アゴニストである。ＣＤ２２６は、ＴＩＧＩＴとリガンドを共有する刺激性受容体である。ＴＩＧＩＴとは反対に、ＣＤ２２６との会合によってＴ細胞活性化が強化される（例えば、Ｋｕｒｔｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３−４０６２，２０１５；Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９８４：５５７−５６７，２００３；およびＴａｈａｒａ−Ｈａｎａｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５３３−５３８，２００４を参照のこと）。ＣＤ２２６のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ２２６に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンド（例えばＣＤ１１２、ＣＤ１５５）が挙げられる。
【０１７２】
一部の実施形態では、剤は、ＨＶＥＭアゴニストである。Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）は、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳＦ１４）としても知られており、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのヒト細胞表面受容体である。ＨＶＥＭは、Ｔ細胞、ＡＰＣ、および他の免疫細胞を含む様々な細胞上に見出される。他の受容体とは異なり、ＨＶＥＭは高レベルで休息状態のＴ細胞上に発現され、活性化すると下方制御される。ＨＶＥＭシグナル伝達は、Ｔ細胞活性化の早期フェーズと、リンパ節での腫瘍特異的リンパ球集団の拡張中に重要な役割を果たすことが示されている。ＨＶＥＭのアゴニストの一般的な例としては、ＨＶＥＭに特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。
【０１７３】
当業者であれば、本明細書に記載の様々な免疫チェックポイント調節剤が、本明細書に記載の様々なＴＲＰＶ６阻害剤の任意の１つまたは複数と組み合わされ得ること、ならびに本明細書に記載の方法および組成物の任意の１つまたは複数に従い使用され得ることを認識するであろう。
【０１７４】
使用方法および治療用組成物
本明細書において記述されるように、本開示の実施形態は、ＴＲＰＶ６阻害剤が癌治療に関連し、例えば免疫チェックポイント調節剤などの他の癌免疫療法の抗がん効果を増強し得る潜在的な免疫−腫瘍の作用メカニズムを有することを見出したことに関する。ゆえに特定の実施形態は、その必要のある対象の癌を治療する、症状を改善する、および／または進行を阻害する方法を含む、併用療法を含むものであり、当該方法は、当該対象に少なくともＴＲＰＶ６阻害剤と、少なくとも１つの免疫チェックポイント調節剤を投与する工程を含む。ＴＲＰＶ６阻害剤および免疫チェックポイント調節剤の例は、本明細書の別段に記載される。
【０１７５】
一部の例では、ＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤は、例えば別個の治療用組成物中で、同時または別のときに別個に投与される。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤は、同じ治療用組成物の一部として同時に投与される。
【０１７６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、各剤の単独と比較して、抗腫瘍活性および／もしくは免疫刺激性活性が増加（例えば相乗的に増加）または増強されている。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、免疫チェックポイント調節剤単独と比較して、当該免疫チェックポイント調節剤の抗腫瘍活性および／もしくは免疫刺激性活性を増加（例えば相乗的に増加）、増強、補完、または強化する。一部の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、免疫チェックポイント調節剤単独と比較して、当該免疫チェックポイント調節剤の抗腫瘍活性および／もしくは免疫刺激性活性を、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれ以上に増加（例えば相乗的に増加）、増強、補完、または強化する。
【０１７７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、生存能力のある腫瘍の量、例えば腫瘍質量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％またはそれ以上の減少などの統計的に有意な減少により示される、またはスキャン体積の変化（例えば統計的に有意な減少）により示される、腫瘍退縮を生じさせるのに充分である。特定の実施形態では、ＴＲＰＶ６阻害剤は、免疫チェックポイント調節剤が、生存能力のある腫瘍の量を減少させる能力を増強する、または強化する。
【０１７８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、症状の安定をもたらすのに充分である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、熟練した医療従事者に公知の特定の疾患徴候の症状において臨床的に意義のある低下をもたらすのに充分である。
【０１７９】
一部の実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、各剤の単独と比較して、対象のメジアン生存期間を例えば４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１５週間、２０週間、２５週間、３０週間、４０週間、またはそれ以上延長させる。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、対象のメジアン生存期間を１年、２年、３年またはそれ以上延長させる。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、無憎悪生存期間を２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間またはそれ以上延長させる。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法または治療用組成物は、無憎悪生存期間を１年、２年、３年またはそれ以上延長させる。一部の実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、各剤単独と比較して、メジアン生存期間および／または無憎悪生存期間を延長させる。
【０１８０】
本明細書に記載の方法および治療用組成物は、任意の様々な癌の治療において使用され得る。一部の実施形態では、対象または患者は、膵臓癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例えばリンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝癌（肝細胞癌またはＨＣＣ）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、メラノーマ（例えば転移性メラノーマ）、乳癌（例えばエストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）、エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）、Ｈｅｒ２陽性（Ｈｅｒ２＋）、Ｈｅｒ２陰性（Ｈｅｒ２−）、またはそれらの組み合わせ、例えばＥＲ＋／Ｈｅｒ２＋、ＥＲ＋／Ｈｅｒ２−、ＥＲ−／Ｈｅｒ２＋、もしくはＥＲ−／Ｈｅｒ２−；またはエストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびＨＥＲ２−陰性の「トリプルネガティブ」の乳癌）、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫（例えば星状細胞腫、乏突起神経膠腫、上位細胞腫、または脈絡叢乳頭腫）、多形膠芽腫（例えば巨細胞膠芽腫または神経膠肉腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、未分化神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、腎癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳腫瘍、頭頚部癌、子宮頸癌、精巣癌、胃癌、ウイルス誘導型腫瘍、例えばパピローマウイルス誘導型癌腫（例えば子宮頸癌腫、子宮頸癌）、腺癌、ヘルペスウイルス誘導型腫瘍（例えばバーキットリンパ腫、ＥＢＶ−誘導型Ｂ細胞リンパ腫）、Ｂ型肝炎誘導型腫瘍（肝細胞癌腫）、ＨＴＬＶ−１−誘導型リンパ腫およびＨＴＬＶ−２誘導型リンパ腫、聴神経腫、肺癌（例えば肺癌腫、気管支癌腫）、小細胞肺癌腫、咽頭癌、肛門癌、膠芽腫、直腸癌、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽腫、基底細胞腫、脳転移、髄芽腫、膣癌、膵臓癌、精巣癌、ホジキン症候群、髄膜腫、シュネーベルガー症、下垂体腫瘍、菌状息肉腫、カルチノイド、神経線維腫症、棘細胞癌、バーキットリンパ腫、喉頭癌、腎癌、胸腺腫、子宮体部癌（ｃｏｒｐｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、骨癌、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、ＣＵＰ症候群、頭／頸腫瘍、乏突起神経膠腫、外陰部癌、腸管癌、結腸癌、食道癌（例えば食道癌腫）、いぼ併発型小腸腫瘍、頭蓋咽頭腫瘍、卵巣癌、生殖器腫瘍、卵巣癌（例えば卵巣癌腫）、膵臓癌（例えば膵臓癌腫）、子宮内膜癌、肝臓転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、白血病、形質細胞腫、および眼瞼腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される癌を有する。
【０１８１】
特定の実施形態では、癌は、例えば対応する組織型の非癌性細胞と比較して、ＴＲＰＶ６を過剰発現する。
【０１８２】
一部の実施形態では、例えば免疫チェックポイント調節剤がＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストまたは阻害剤である場合、対象は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害療法に適しているとされるバイオマーカー（例えば癌細胞または癌特異的ＣＴＬなどの細胞におけるＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１のレベル上昇）を１つまたは複数有している。例えば一部の実施形態では、対象は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセット内のｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １が高い／ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４が高い（例えばＰＤ−１ｈｉＣＴＬＡ−４ｈｉ）細胞の分画が増加している（例えば、Ｄａｕｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２６：３４４７−３４５２，２０１６を参照のこと）。別の例では、一部の実施形態では、対象は、循環腫瘍反応性（例えばＰＤ−１＋ＣＤ１１ａｈｉＣＤ８＋）Ｔ細胞中のＢｉｍ（Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ２−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ（Ｂｃｌ２−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ）ｍｅｄｉａｔｏｒ）のレベルが上昇しており、および任意で転移性メラノーマを有する（例えば、Ｄｒｏｎｃａ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ．Ｍａｙ  ５；１（６）：ｅ８６０１４，２０１６を参照のこと）。
【０１８３】
特定の具体的な組み合わせとしては、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌および腎細胞癌の１つまたは複数から選択される癌の治療のための、ＴＲＰＶ６阻害剤と例えばアテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）などのＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストまたは阻害剤が挙げられる。
【０１８４】
いくつかの具体的な組み合わせとしては、ホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つまたは複数から選択される癌の治療のための、ＴＲＰＶ６阻害剤と、例えばニボルマブなどのＰＤ−１アンタゴニストが挙げられる。
【０１８５】
特定の具体的な組み合わせとしては、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頚部癌および尿路上皮癌のうちの１つまたは複数から選択される癌の治療のための、ＴＲＰＶ６阻害剤と、例えばペムブロリズマブなどのＰＤ−１アンタゴニストが挙げられる。
【０１８６】
特定の具体的な組み合わせとしては、メラノーマ、前立腺癌、肺癌および膀胱癌のうちの１つまたは複数から選択される癌の治療のための、ＴＲＰＶ６阻害剤と、例えばイピリムマブおよびトレメリムマブなどのＣＴＬＡ−４アンタゴニストが挙げられる。
【０１８７】
いくつかの具体的な組み合わせとしては、転移性乳癌、および任意で多形性膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫または悪性脳腫瘍である脳腫瘍のうちの１つまたは複数から選択される癌の治療のための、ＴＲＰＶ６阻害剤と、例えばインドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、またはエパカドスタットなどのＩＤＯアンタゴニストが挙げられる。
【０１８８】
癌を治療するための方法は、他の治療モダリティと組み合わされてもよい。例えば本明細書に開示される併用療法は、対症療法、放射線療法、外科手術、移植、ホルモン療法、光線力学的療法、抗生物質療法、またはそれらの任意の組み合わせをはじめとする他の治療介入の前、間、または後に、対象に投与されてもよい。対症療法としては、脳浮腫、頭痛、認知機能障害、および嘔吐を低下させるためのコルチコステロイドの投与、および発作を低下させるための抗けいれん剤の投与が挙げられる。放射線療法としては、全脳照射、分割放射線療法、および放射線外科手術、例えば定位的放射線外科手術が挙げられ、それらは従来的な外科手術とさらに組み合わされてもよい。
【０１８９】
本明細書に記載される疾患または状態の１つまたは複数を有する対象を特定する方法は当分野に公知である。
【０１９０】
ヒトの疾患の治療または試験に関するインビボ用途については上述のように、本明細書に記載の剤は一般的に、投与前に１つもしくは複数の治療用組成物または医薬組成物へと組み込まれる。
【０１９１】
ゆえに特定の実施形態は、本明細書に記載されるように少なくとも１つのＴＲＰＶ６阻害剤を含む治療用組成物に関する。いくつかの例において、治療用組成物または医薬組成物は、薬学的もしくは生理学的に受容可能な担体または賦形剤と組み合わされて、本明細書に記載される剤の１つまたは複数を含有する。特定の治療用組成物は、本明細書に記載されるように少なくとも１つの免疫チェックポイント調節剤をさらに含有する。
【０１９２】
特定の実施形態では、剤を含有する治療用組成物は、タンパク質ベースで、または重量−重量ベースで実質的に純粋である。例えば組成物は、タンパク質ベースで、または重量−重量ベースで、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の純度を有する。
【０１９３】
一部の実施形態では、本明細書に置いて記載されるように、および当分野において公知のように、本明細書において提供されるポリペプチド（例えばペプチド）剤は、凝集を形成せず、所望の可溶度を有し、および／またはヒトにおける使用に適した免疫原性プロファイルを有する。ゆえに一部の実施形態では、ポリペプチド剤（例えばペプチドまたは抗体）を含有する治療用組成物は、実質的に凝集が無い。例えば特定の組成物は、（タンパク質ベースで）約１０％未満の高分子量凝集タンパク質、または約５％未満の高分子量凝集タンパク質、または約４％未満の高分子量凝集タンパク質、または約３％未満の高分子量凝集タンパク質、または約２％未満の高分子量凝集タンパク質、または約１％未満の高分子量凝集タンパク質を含有する。一部の組成物は、その見掛けの分子量に関し、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の単分散性であるポリペプチド剤を含む。
【０１９４】
一部の実施形態では、ポリペプチド剤は、約、または少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６、０．７、０．８、０．９、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ／ｍｌに濃縮され、バイオ治療用途に製剤化される。
【０１９５】
治療用組成物または医薬組成物を調製するために、有効量もしくは所望量の１つまたは複数の剤が、特定の剤および／または投与様式に適するように当分野の当業者に公知の任意の薬学的担体または賦形剤と混合される。薬学的担体は、液状、半液状、または固形であってもよい。非経口適用、皮内適用、皮下適用もしくは局所適用に使用される溶液または懸濁液としては例えば、滅菌希釈液（例えば水）、生理食塩水（例えばリン酸緩衝生理食塩水；ＰＢＳ）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒；抗菌剤（例えばベンジルアルコールおよびメチルパラベン）；抗酸化剤（例えばアスコルビン酸および重亜硫酸ナトリウム）およびキレート剤（例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝剤（例えば酢酸塩、クエン酸塩およびリン酸塩）が挙げられる。静脈内投与される場合（例えばＩＶ点滴）、適切な担体としては、生理学的食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ならびに例えばグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびそれらの混合物などの増粘剤ならびに可溶化剤を含有する溶液が挙げられる。
【０１９６】
純粋な形態で、または適切な治療用組成物もしくは医薬組成物での本明細書に記載の剤の投与は、類似した有用性を果たすための剤の受容される投与様式のいずれかを介して実施され得る。治療用組成物または医薬組成物は、剤を含有する組成物と、適切な生理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を組み合わせることにより調製されることができ、ならびに例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、注射、吸入剤、ゲル、ミクロスフィア、およびエアロゾルなどの固形、半固形、液体または気体の形態で調製物内に製剤化されてもよい。さらに、他の薬学的に活性な成分（本明細書において別段に記載される他の低分子を含む）、ならびに／または例えば塩、緩衝剤および安定剤などの適切な賦形剤が、必須ではないが、組成物内にあってもよい。
【０１９７】
投与は様々な異なる経路で実施されてもよく、経口、非経口、鼻内、静脈内、皮内、筋肉内、皮下または局所が挙げられる。好ましい投与様式は、治療される、または予防される状態の性質に応じる。特定の実施形態は、ＩＶ点滴による投与を含む。
【０１９８】
担体としては例えば、薬学的もしくは生理学的に受容可能な担体、賦形剤または安定剤であってもよく、それらは採用される用量および濃度で、それらに暴露される細胞または哺乳動物に対し非毒性である。多くの場合、生理学的に受容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に受容可能な担体の例としては、例えばリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸をはじめとする抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；例えば血清アルブミン、ゼラチンもしくはイムノグロブリンなどのタンパク質；例えばポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンをはじめとする単糖、二糖および他の炭水化物；例えばＥＤＴＡなどのキレート剤；例えばマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；例えばナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／または例えばポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標））ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標））などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１９９】
一部の実施形態では、１つまたは複数の剤は、コロイド薬剤送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセルなど）において、またはマクロエマルションの状態で、液滴形成技術により、または界面重合により調製されたマイクロカプセル（例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンのマイクロカプセル、およびポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル）に封入されてもよい。そうした技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示されている。粒子またはリポソームはさらに、他の治療剤または診断剤を含んでもよい。
【０２００】
正確な用量および治療期間は、治療される疾患に応じ、そして公知の試験プロトコールを使用して経験的に決定されてもよく、または当分野で公知のモデルシステム中で組成物を試験し、それらから推定することにより決定されてもよい。比較臨床試験が実施されてもよい。用量も、緩和される状態の重大度で変化し得る。医薬組成物は一般的に、治療的に有用な効果を発揮しつつ、望ましくない副作用を最小化するように製剤化され、投与される。組成物は１度に投与されてもよく、または複数の小さな投与量に分割されて、間隔をあけて投与されてもよい。任意の特定の対象について、具体的な投与レジメンは、個々のニーズに従い経時的に調整されてもよい。
【０２０１】
ゆえに、これら、および関連する治療用組成物または医薬組成物の典型的な投与経路としては限定されないが、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、口腔内、直腸内、膣内および鼻内が挙げられる。本明細書において使用される場合、非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内の注射または点滴技術を含む。本開示の特定の実施形態に従う治療用組成物または医薬組成物は、その中に含有される活性成分が、対象または患者に当該組成物が投与された時点で生体利用可能となるよう製剤化される。対象または患者に投与される組成物は、１つまたは複数の用量単位の形態をとってもよく、例えば錠剤は単回用量単位であってもよく、本明細書に記載のエアロゾル形態の剤の容器は、複数の用量単位を保持してもよい。そうした剤型の実際の調製方法は公知であり、当分野の当業者には明白である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照のこと。投与される組成物は通常、対象の疾患または状態の治療のための本明細書に記載の剤の治療有効量を含有する。
【０２０２】
治療用組成物または医薬組成物は、固体または液体の形状であってもよい。１つの実施形態では、組成物が例えば錠剤または粉末形態であるために、担体は微粒子であってもよい。担体は液体であってもよく、その場合、組成物は例えば経口の油状液、注射液またはエアロゾルであり、エアロゾルは吸入投与に有用である。経口投与が意図される場合、医薬組成物は固体または液体のいずれかであることが好ましく、半固形、半液状、懸濁液およびゲルの形状は、本明細書において固体または液体のいずれかとみなされる形状の範囲内に含まれる。特定の実施形態は、滅菌注射溶液を含む。
【０２０３】
経口投与用の固形組成物として、医薬組成物は粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸薬、カプセル、チューイングガム、水などに製剤化されてもよい。そうした固形組成物は通常、１つまたは複数の不活性希釈剤または食用担体を含有する。さらに以下のうちの１つまたは複数が存在してもよい：例えばカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；例えばデンプン、ラクトースまたはデキストリンなどの賦形剤、例えばアルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチなどの崩壊剤；例えばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘなどの潤滑剤；例えばコロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；例えばスクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；例えばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香味料などの香味剤；および着色剤。医薬組成物が例えばゼラチンカプセルなどのカプセルの形状であるとき、上述のタイプの物質に加えて、例えばポリエチレングリコールまたは油などの液状担体を含有してもよい。
【０２０４】
治療用組成物または医薬組成物は、例えばエリキシル、シロップ、溶液、エマルションまたは懸濁液などの液状であってもよい。液体は、２つの例として、経口投与用、または注射による送達用であってもよい。経口投与が意図される場合、組成物は、本開示化合物に加えて甘味剤、保存剤、色素／着色剤および香味強化剤のうちの１つまたは複数を含有することが好ましい。注射による投与が意図される組成物では、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝剤、安定剤、および等張剤のうちの１つまたは複数が含有されてもよい。
【０２０５】
溶液、懸濁液または他の類似した形状であるかに関わらず、液状の治療用組成物または医薬組成物は、以下のアジュバントのうちの１つまたは複数を含んでもよい：例えば注射用水、生理食塩水、好ましくは生理学的食塩水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム溶液、溶媒または懸濁化媒体としての機能を果たし得る例えば合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドなどの固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の溶媒などの滅菌希釈液；例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；例えばアスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；例えばエチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；例えば酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、および例えば塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性の調整用の剤。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックで作製されたアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは複数回投与用バイアル中に封入されてもよい。生理学的食塩水が好ましいアジュバントである。注射用医薬組成物は滅菌されていることが好ましい。
【０２０６】
非経口投与または経口投与のいずれかが意図される液状の治療用組成物または医薬組成物は、適切な用量が得られる量の剤を含有しなければならない。典型的には、この量は、組成物中で少なくとも０．０１％の対象の剤である。経口投与が意図される場合、この量は組成物の重量の０．１〜約７０％であるように化してもよい。特定の経口用の治療用組成物または医薬組成物は、約４％〜約７５％の対象の剤を含有する。特定の実施形態では、本開示に従う治療用組成物または医薬組成物および調製物は、希釈前に非経口用量単位が０．０１〜１０重量％の対象の剤を含有するよう調製される。
【０２０７】
治療用組成物または医薬組成物は、局所投与が意図されてもよく、その場合、担体は、溶液、エマルション、軟膏またはゲルベースを適切に含有してもよい。例えばベースは、以下のうちの１つまたは複数を含有してもよい：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱物油、例えば水およびアルコールなどの希釈剤、ならびに乳化剤および安定剤。局所投与については、治療用組成物または医薬組成物中に増粘剤が存在してもよい。経皮投与が意図される場合、組成物は経皮パッチまたはイオントフォレーシス装置を含んでもよい。
【０２０８】
治療用組成物または医薬組成物は、例えば座薬の形態での直腸投与が意図されてもよく、座薬は直腸で溶解し、薬剤を放出する。直腸投与用の組成物は、適切な刺激性の無い賦形剤として油性ベースを含有してもよい。そうしたベースとしては限定されないが、ラノリン、ココアバター、およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０２０９】
治療用組成物または医薬組成物は、様々な物質を含んでもよく、それら物質が、固形または液状の用量単位の物理的形状を改変する。例えば組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する物質を含んでもよい。コーティングシェルを形成する物質は通常、不活性であり、例えば糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択されてもよい。あるいは活性成分は、ゼラチンカプセル中に封入されてもよい。固形または液状の治療用組成物または医薬組成物は、剤に結合し、それにより化合物送達を支援する構成要素を含んでもよい。この能力を発揮し得る適切な構成要素としては、モノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、１つもしくは複数のタンパク質、またはリポソームである。
【０２１０】
治療用組成物または医薬組成物は、エアロゾルとして投与され得る用量単位から本質的になるものであってもよい。エアロゾルという用語は、コロイド状の性質のものから、加圧パッケージからなるシステムにおよぶ様々なシステムを示すために使用される。液化ガスまたは圧縮ガスにより送達されてもよく、または活性成分を投薬する適切なポンプシステムにより送達されてもよい。エアロゾルは、活性成分を送達するために一層、二層、または三層のシステムで送達されてもよい。エアロゾルの送達は、必要な容器、活性化剤、バルブ、サブ容器などを含み、それらが一体になってキットを形成してもよい。当業者であれば、過度の実験を行うことなく好ましいエアロゾルを決定し得る。
【０２１１】
本明細書に記載の組成物は、身体からの急速な排泄から剤を保護するための担体、例えば徐放製剤またはコーティングを用いて調製されてもよい。そうした担体としては、徐放製剤、例えば限定されないが移植およびマイクロカプセル化送達システム、ならびに例えばビニル酢酸エチレン、ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、および当業者に公知のその他物質などの生分解性で生体適合性のあるポリマーが挙げられる。
【０２１２】
治療用組成物または医薬組成物は、調剤分野に公知の技法により調製されてもよい。例えば注射により投与されることが意図される治療用組成物または医薬組成物は、塩、緩衝剤および／または安定剤のうちの１つまたは複数と、滅菌された蒸留水を含有し、溶液を形成してもよい。均一な溶液または懸濁液の形成を促進するために界面活性剤が添加されてもよい。界面活性剤は、剤と非共有結合的に相互作用して、水性送達システム中の剤の溶解または均一な懸濁を促進する化合物である。
【０２１３】
一部の実施形態では、治療用組成物または医薬組成物は、治療有効量で投与される。治療有効量は、採用される具体的な化合物の活性；化合物の代謝安定性および作用期間の長さ；対象の年齢、体重、一般健康状態、性別および食事；投与様式および投与時間；排出速度；薬剤の組み合わせ；特定の疾患または状態の重大度；ならびに対象が受けている療法、を含む様々な因子に応じて変化する。一部の例では、１日の治療有効用量は、（７０ｋｇの哺乳動物に対し）約０．００１ｍｇ／ｋｇ（すなわち約０．０７ｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇ（すなわち約７．０ｇ）；好ましくは治療有効用量は、（７０ｋｇの哺乳動物に対し）約０．０１ｍｇ／ｋｇ（すなわち約約０．７ｍｇ）〜約５０ｍｇ／ｋｇ（すなわち約３．５ｇ）；より好ましくは治療有効用量は、（７０ｋｇの哺乳動物に対し）約１ｍｇ／ｋｇ（すなわち約約７０ｍｇ）〜約２５ｍｇ／ｋｇ（すなわち約１．７５ｇ）である。一部の実施形態では、治療有効用量は、毎週、隔週、または毎月ベースで投与される。具体的な実施形態では、治療有効用量は、例えば約１〜１０または１〜５ｍｇ／ｋｇ、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｍｇ／ｋｇで、毎週、隔週または毎月ベースで投与される。
【０２１４】
本明細書に記載の併用療法は、ＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤を（任意で１つまたは複数の追加の活性剤とともに）含有する単一の薬剤用量製剤の投与を含んでもよく、ならびにＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤を、それらを別個の薬剤用量製剤中に含有する組成物の投与を含んでもよい。例えばＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤は、単一経口用量組成物、例えば錠剤またはカプセルなどにおいて一緒に対象に投与されてもよく、または各剤は、別個の経口用量製剤において投与されてもよい。同様にＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤は、対象に、単一非経口用量組成物、例えば生理食塩水または他の生理学的に受容可能な溶液などにおいて一緒に投与されてもよく、または各剤は、別個の非経口用量製剤において投与されてもよい。別の例として、細胞系療法に関し、ＴＲＰＶ６阻害剤は、投与前に細胞と混合されてもよく、別個の組成物の一部として投与されてもよく、またはその両方であってもよい。別個の用量製剤が使用される場合、組成物は、本質的に同時に、すなわち並行して投与されてもよく、または別々に交互の時間に、すなわち連続して任意の順序で投与されてもよい。併用療法は、これらすべてのレジメンを含むと理解される。
【０２１５】
また、（ａ）ＴＲＰＶ６阻害剤、および（ｂ）免疫チェックポイント調節剤、を含む、患者ケアキットも含まれる。特定のキットでは、（ａ）および（ｂ）は、別個の治療用組成物中にある。一部のキットでは、（ａ）および（ｂ）は、同じ治療用組成物中にある。
【０２１６】
本明細書においてキットは、１つまたは複数の追加の治療剤、または治療される適応症に適した、もしくは望ましい他の構成要素、または所望の診断アプリケーション用の他の構成要素を含んでもよい。本明細書においてキットは、１つまたは複数のシリンジ、または意図される送達様式の促進に必要な、または望ましい他の構成要素も含み得る（例えば、ステント、移植可能なデポーなど）。
【０２１７】
一部の実施形態では、患者ケアキットは、組成物および情報資料のための別個の容器、仕切り、または区画を含有する。例えば組成物は、ボトル、バイアルまたはシリンジに含有され、情報資料は、容器と関連付けられて含有されてもよい。一部の実施形態では、キットの別個の要素は、１つの分割されていない容器内に含有される。例えば組成物は、ボトル、バイアルまたはシリンジに含有され、そこにラベルの形態で情報資料が添付される。一部の実施形態では、キットは、複数の個々の容器を含み（例えばパック）、それぞれがＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤の１つまたは複数の単位剤型（例えば本明細書に記載される剤型）を含有する。例えばキットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイル包み、またはブリスターパックを含み、それぞれが、ＴＲＰＶ６阻害剤と免疫チェックポイント調節剤の単回単位投与量を含有する。キットの容器は、気密状態、ウォータープルーフ（例えば湿気または蒸発の変化に対して不透性）、および／または遮光であってもよい。
【０２１８】
患者ケアキットは任意で、組成物の投与に適したデバイス、例えばシリンジ、吸入装置、ドロッパー（例えば点眼器）、棒（例えば綿棒または木の棒）、または任意のそうした送達デバイスを含む。一部の実施形態では、デバイスは、剤の定量を投薬する移植可能デバイスである。さらに本明細書に記載される構成要素を組み合わせることにより、キットを提供する方法も含まれる。
【０２１９】
本明細書に引用されるすべての公表文献、特許出願および登録特許が、個々の公表文献、特許出願または登録特許のそれぞれが具体的に、および個々に参照により援用されることが示されているように、参照により本明細書に援用される。
【０２２０】
前述の本発明は、明確性および理解を目的として、図および実施例により詳細に記載されているが、本発明の教示に照らし、特定の変化および改変が、添付の請求の範囲の主旨または範囲から逸脱することなく、実施され得ることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、解説のみを目的として提供されるものであり、限定ではない。当業者であれば、本質的に類似した結果を得るために変えられ得る、または改変され得る重要ではない様々なパラメーターが容易に認識されるであろう。
【実施例】
【０２２１】
実施例１
前立腺癌細胞ＴＲＰＶ６ノックアウトの分子プロファイリング
ＴＲＰＶ６カルシウムチャンネルは多くの上皮癌で過剰発現されており、その結果として上昇した細胞カルシウムイオンは癌細胞のアポトーシスに対する抵抗性を増加させ、そして転移と細胞増殖を増加させる。ＴＲＰＶ６を過剰発現することにより、癌細胞は免疫シナプスをはじめとする腫瘍微小環境にも影響を与えることができ、ＮＫ殺傷またはＴリンパ球殺傷に対する癌細胞の感受性を低下させる。
【０２２２】
ＴＲＰＶ６のノックアウト（ＫＯ）およびノックダウン（ＫＤ）のＰＣ−３前立腺癌細胞の分子／発現プロファイルを野生型の前立腺癌細胞対照と比較して評価する試験を実施した。ＴＲＰＶ６  ＫＯ実験について、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ：ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ）のＰＣ−３細胞クローンは、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９技術を使用して作製された。具体的には、ＰＣ−３細胞にＴＲＰＶ６−１またはＴＲＰＶ６−４のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９プラスミドをトランスフェクトし、ＴＲＰＶ６  ＫＯを、Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙを使用してトランスフェクトの２日後に評価した。次いでＴＲＰＶ６  ＫＯ細胞をクローニングし、分析した。ＴＲＰＶ６  ＫＤ実験については、ＣＲＰＣ  ＰＣ−３細胞に、ＴＲＰＶ６  ｓｉＲＮＡｓ（＃１１５６９３６および＃１１５６９３９）を５０ｎＭで３日間トランスフェクトした。
【０２２３】
１８４個の遺伝子の分子プロファイリングにより、ＥＧＦ／ＶＧＥＦ、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−１６（ＣＡ−１２５）、ＭＭＰ２、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ８（Ｉｌ８）およびＩＬ−６のｍＲＮＡ発現レベルが、ＴＲＰＶ６  ＫＯにおいて対照と比較し有意に低下していることが明らかとなった（図１を参照のこと）。これらの遺伝子は炎症と直接、または間接的に関連しており、間質形成を含む腫瘍微小環境（ＴＭＥ：ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）に影響を及ぼす。さらにＭＵＣ−１がＴＲＰＶ６  ＫＯにおいて有意に下方制御されており、それにより腫瘍細胞にアクセスするリンパ球に対する物理的障壁の１つが低下し、免疫抑制が低下していた。ＮＫ細胞の抑制性因子であるＭＵＣ１６（ＣＡ−１２５）も大きく下方制御されていた。これら遺伝子の活性の下方制御は、細胞カルシウムの低下と、それに付随するカルシウム依存性のシグナル伝達経路の低下を介していると推測される。
【０２２４】
図３、図６、図７および図８のデータから、ＴＲＰＶ６のＫＯおよびＫＤは、ＰＣ−３腫瘍細胞の増殖／生存、血管新生、浸潤／転移、免疫回避（例えばＩＬ−６、ＦＡＳＬＧ、ＶＥＧＦ）および腫瘍微小環境（例えばＣＸＣＬ１２、ＥＧＦＲ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）の免疫構成（例えばＭ２マクロファージ）に関与する遺伝子の下方制御をもたらしたことが示される。図６は、１．５倍以上に上方制御および下方制御された１８７個の遺伝子アレイパネルからの細胞増殖、転移および血管新生に関与する遺伝子のレベルを示す。図７は、１．５倍以上に上方制御および下方制御された１８７個の遺伝子アレイパネルからのアポトーシスに関与する遺伝子のレベルを示す。図８は、１．５倍以上に上方制御および下方制御された１８７個の遺伝子アレイパネルからの免疫回避および炎症に関与する遺伝子のレベルを示す。このデータからも、この点に関するＮＦＡＴシグナル伝達の中心的な役割が明らかとなった。図４は、ＣＲＰＣ  ＰＣ−３細胞における、ＴＲＰＶ２−６遺伝子の発現に対するＴＲＰＶ６のＫＯおよびＫＤの影響を示す。ＴＲＰＶ６  ＫＯ／ＫＤ  ＣＲＰＣ細胞は、ＴＲＰＶチャンネルの発現を上方制御しなかった。図５は、細胞内カルシウムレベルの調節に関与する遺伝子の発現に対するＴＲＰＶ６  ＫＯおよびＫＤの影響を、ＴＲＰＶ６の発現と比較して示す。ＴＲＰＶ６  ＫＯ／ＫＤ  ＣＲＰＣ細胞は、癌に関与する他のカルシウムチャンネル発現の上方制御を示さなかった。
【０２２５】
結果から、癌におけるＴＲＰＶ６の中心的な役割が示され、例えば腫瘍間質の構成を含む腫瘍微小環境に影響を及ぼすことによる、ＴＲＰＶ６阻害剤の潜在的な免疫−癌の作用機序と、そのポジティブな抗癌効果が示される。実際に、例えばＳＯＲ−Ｃ１３（ＴＲＰＶ６介在性カルシウムインポートの１３−アミノ酸ペプチド阻害剤）などのＴＲＰＶ６阻害剤も、カルシウムインポートを特異的に減少させる。
【０２２６】
より具体的には、ＣＸＣＬ１２およびＩＬ−６を含む、ＰＤ−１の作用を増強させ得る複数の遺伝子がＴＲＰＶ６  ＫＯにおいて下方制御されている。ＴＲＰＶ６  ＫＯ前立腺癌細胞は、野生型と比較してＣＸＣＬ１２発現レベルがおよそ９分の１に低下していた（図１を参照のこと）。ＣＸＣＲ４受容体に結合するケモカインであるＣＸＣＬ１２は、腫瘍微小環境中の免疫抑制を増大させる（Ｇｉｌ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １５，２０１４，１９３：５３２７−５３３７）。前臨床試験において、ＣＸＣＲ４の阻害と抗ＰＤ−Ｌ１免疫療法は相乗的であり（Ｃｈｅｎ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６１：１５９１−６０２）、ＢＬ−８０４０（ＣＸＣＲ４アンタゴニストペプチド）のようないくつかのアンタゴニストが、ペムブロリズマブとの併用で、転移性膵臓腺癌の臨床試験において評価されている。
【０２２７】
ＴＲＰＶ６  ＫＯ前立腺癌細胞も、野生型と比較してＩＬ−６発現がおよそ３分の２以下に低下（１．５−ｆｏｌｄ  ｄｅｃｒｅａｓｅ）していた（図１および図６を参照のこと）。ＩＬ−６は多くの癌で過剰発現されるサイトカインであり、その発現は不良な生存率と関連している。膵臓癌において、ＩＬ−６は腫瘍増殖を促進し、腫瘍微小環境を改変する（Ａｎｃｒｉｌｅ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２００７；２１：１７１４−１７１９）。前立腺癌において、ＩＬ−６はアンドロゲン療法に対する抵抗性に関与している（Ｆｅｎｇ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２００９；８（３）：６６５−６７１）。膵臓癌の患者において、ＩＬ−６レベルの上昇は、癌ステージの進行および不良な生存率と相関している（Ｈｏｌｍｅｒ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｅｐａｔｈｏｂｉｌｉａｒｙ  Ｐａｎｃｒｅａｔ  Ｄｉｓ  Ｉｎｔ．２０１４  ；１３  ：３７１−３８０）。さらに前臨床試験において、抗ＩＬ−６抗体を使用したＩＬ−６の阻害と抗ＰＤ−Ｌ１免疫療法は相乗的である（Ｍａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；３（Ｓｕｐｐｌ  ２）：Ｐ３６６；およびＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１７  ；４８６：２３９−２４４）。
【０２２８】
ゆえに、例えばＳＯＲ−Ｃ１３（および関連ペプチド）などのＴＲＰＶ６阻害剤によるＴＲＰＶ６機能の阻害は、癌の治療においてカルシウム依存性シグナル伝達を通じて作動して、免疫チェックポイント調節剤の有効性に有意にポジティブ（例えば相乗的）な影響を与え得ると仮定される。
【０２２９】
実施例２
ＴＲＰＶ６癌チャンネル（ｏｎｃｏｃｈａｎｎｅｌ）ノックアウト／ノックダウンを用いた、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞の分子プロファイリング
ＰＣ−３  ＴＲＰＶ６のノックアウトおよびノックダウン。ＴＲＰＶ６  ｍＲＮＡの発現は、ＴＲＰＶ６  ｓｉＲＮＡ  １１５６９３９処置の１日後に７７％ノックダウンされ、ＴＲＰＶ６  ｍＲＮＡの抑制は４日間持続した。最も低レベルのＴＲＰＶ６  ｍＲＮＡは、処置の３日後に観察されており、ＴＲＰＶ６発現が８５％低下していた。
【０２３０】
配列解析により、ＴＲＰＶ６−１  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ベクターが、ＰＣ−３  ＴＲＰＶ６−１Ａ細胞コロニーにおいて、ＴＲＰＶ６の２９３ｂｐ（エクソン１）のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９切断部位で、１２２ｂｐの挿入を生じさせたこと、それによりフレームシフトが生じ、非機能性のＴＲＰＶ６タンパク質が産生されたことが確認された。この１２２ｂｐの挿入もジヌクレオチドＧＡリピート配列であり、ＤＮＡポリメラーゼの休止と解離をもたらし、ＴＲＰＶ６−１ＡでのｍＲＮＡ低下で認められたような遺伝子の下方制御を生じさせ得る。第二のベクターであるＴＲＰＶ６−２  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９は、ＴＲＰＶ６の４４１ｂｐ（エクソン３）のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９切断部位で１つのＧの欠失を生じさせ、フレームシフト変異をもたらした。ＴＲＰＶ６発現は、ｓｉＲＮＡ  ３６では有意には減少せず、ゆえに分析から除外された。
【０２３１】
ＲＴ−ｑＰＣＲ  ＴａｑＭａｎ  Ａｒｒａｙによる１８７個の遺伝子の分析。ベン図は、以下の各ＴＲＰＶ６処置で差次的に発現された遺伝子の数を表している；ＰＣ−３  ＴＲＰＶ６ノックアウトのＴＲＰＶ６−１Ａ（ｎ＝３）、ＰＣ−３  ＴＲＰＶ６ノックアウトのＴＲＰＶ６−２Ｂ（ｎ＝３）およびＴＲＰＶ６  ｓｉＲＮＡ  ３９ノックダウン（ｎ＝２）。ならびに、ＴＲＰＶ６処置の間でどの程度の差次的発現遺伝子が共有されているかを示している。ＴａｑＭａｎ  Ａｒｒａｙは、細胞増殖、転移、アポトーシス、血管新生、免疫−癌、および細胞内カルシウム制御に関与する１８７個の遺伝子からなる。ＰＣ−３対照（ｎ＝３）とは差次的に発現された遺伝子（補正ｐ＜０．１０）は、上方制御または下方制御されたとみなされた。
【０２３２】
ＴＲＰＶ６−１Ａでは２６個の遺伝子が下方制御され、ＴＲＰＶ６−２Ｂノックアウトでは２７個、ｓｉＲＮＡ  ３９ノックダウンでは９個であった。ノックアウト処置およびノックダウン処置の両方において、下方制御されたＴＲＰＶ６−１Ａ（７６）、ＴＲＰＶ６−２Ｂ（３７）およびｓｉＲＮＡ  ３９（１６）の遺伝子よりも上方制御された遺伝子のほうが有意に多かった。少なくとも２つのＴＲＰＶ６処置（図１６）において総数で２３個の遺伝子が下方制御され、少なくとも２つのＴＲＰＶ６処置（図１７）において総数で３３個の遺伝子が上方制御されていた。
【０２３３】
ＰＣ−３  ＴＲＰＶ６ノックアウト。ボルケーノプロット（図１８）は、２種のＰＣ−３  ＴＲＰＶ６ノックアウト細胞株（ＴＲＰＶ６−１ＡおよびＴＲＰＶ６−２Ｂ）からのＴａｑＭａｎ  Ａｒｒａｙデータをプールし（ｎ＝６）、ＰＣ−３  対照（ｎ＝３）と比較したときの５７個の差次的に発現された遺伝子（＞０．６  ＬｏｇＦＣおよび補正ｐ＜０．０５）を示す（図１９〜２１）。
【０２３４】
材料および方法
細胞培養およびｓｉＲＮＡによるＴＲＰＶ６のノックダウン。
ＰＣ−３細胞は、ＡＴＣＣから取得され、推奨の通りに培養した。細胞は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）ＲＮＡｉＭａｘを使用して、ＴＲＰＶ６  ｓｉＲＮＡ  １１５６９３６または１１５６９３９のいずれかをトランスフェクトされた。トランスフェクションの７２時間後、８０〜１００％コンフルエンスで細胞を回収した。
【０２３５】
ＴＲＰＶ６ノックアウト細胞株の作製
２つのＴＲＰＶ６ノックアウトＰＣ−３細胞株（ＰＣ−３  ＴＲＰＶ６−１ＡおよびＰＣ−３  ＴＲＰＶ６−２Ｂ）を、ＧｅｎｅＡｒｔ（商標）ＣＲＩＳＰＲ  Ｎｕｃｌｅａｓｅ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ＣＤ４  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔと２つの異なるＣＲＩＳＰＲ  ｃｒＲＮＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用して作製した。２つのＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼベクターにより、ＴＲＰＶ６−１とＴＲＰＶ６−２が作製された。ＰＣ−３細胞は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００を使用して、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９  ＴＲＰＶ６−１ベクターまたはＴＲＰＶ６−２ベクターのいずれかをトランスフェクトされた。トランスフェクションの２日後、細胞を回収して、ＣＤ４陽性ＰＣ−３細胞を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  ＣＤ４  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔを使用して単離した。単離されたＣＤ４陽性細胞をクローニングし、単一細胞コロニーを単離した。クローニングされたコロニーを、ＧｅｎｅＡｒｔ（商標）Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用してＴＲＰＶ６ダブルアレルノックアウトに関してスクリーニングした。純粋なＴＲＰＶ６遺伝子変異に対して陽性のコロニーに、確認用の配列解析を実施した。
【０２３６】
ＲＮＡ単離およびＲＴ−ｑＰＣＲ分析
ＰｕｒｅＬｉｎｋ  ＲＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔの溶解緩衝液を用いて６ウェルの培養プレート中で直接、細胞を溶解することにより収集し、次いでメーカー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）の説明書に従いＲＮＡ単離を実施した。ＲＮＡは、Ｑｕｂｉｔ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒを使用して定量された。逆転写を実施し、ｃＤＮＡライブラリーは、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＶ  ＶＩＬＯ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  ｗｉｔｈ  ｅｚＤＮａｓｅ  Ｅｎｚｙｍｅを使用して生成された。Ｃｕｓｔｏｍ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ａｒｒａｙ  Ｃａｒｄの各ポートに、５００ｎｇのｃＤＮＡおよび１Ｘ  ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘをロードした。ＲＴ−ｑＰＣＲは、Ｑｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ（商標）７Ｆｌｅｘを使用して実施され、分析は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒのクラウドソフトウェアにより、内部対照としてＧＵＳＢおよびＨＲＰＴ１を使用して実施され、ＰＣ−３対照細胞に対して較正された。
【０２３７】
要約
ＴＲＰＶ６を阻害／除去することで、転写因子（例えばＥＲＳＰ１）を含む調節不全状態の遺伝子のカスケードが生じる。
【０２３８】
ＴＲＰＶ６のノックアウトは、パネル中のかなりの割合（３０％）の遺伝子に調節不全を生じさせ、それらは予測された増殖、転移、アポトーシス、血管新生に関与する遺伝子のみならず、興味深いことに免疫回避／刺激に関与する遺伝子でもあった。
【０２３９】
ＴＲＰＶ６の作用機序は、ＣＲＩＳＰＲ  ＴＲＰＶ６ノックアウトと、ｓｉＲＮＡ  ＴＲＰＶ６ノックダウンの両方で、去勢抵抗性前立腺癌細胞において確認された（アポトーシス、増殖、転移および血管新生）。
【０２４０】
ＴＲＰＶ６のノックアウトおよびノックダウンのデータは、前立腺癌の腫瘍形成におけるＴＲＰＶ６の中心的な役割と、当該分野におけるＴＲＰＶ６阻害剤の好適性を示している。
【０２４１】
ＴＲＰＶ６阻害剤は、チェックポイント阻害剤との相乗効果があり（例えばＮＦＫＢの重複経路）、腫瘍微小環境の免疫構成を改変して、抗癌免疫反応の誘発を補助する可能性を秘めている。
【０２４２】
実施例３
ＮＦＡＴ−カルシニューリン経路に関与する遺伝子、および１８７個の遺伝子のアレイの発現／活性化に対するＳＯＲ−Ｃ１３癌細胞処置の影響。
ＴＲＰＶ６オンコチャンネル（ｏｎｃｏｃｈａｎｎｅｌ）阻害剤と、臨床での候補薬剤ＳＯＲ−Ｃ１３の作用機序における、ＮＦＡＴシグナル伝達の中心的役割を検証した。ＳＯＲ−Ｃ１３は、上皮由来の癌において過剰発現されているＴＲＰＶ６カルシウムチャンネルの阻害を介して、固有の抗癌活性メカニズムを提供する。ＴＲＰＶ６の腫瘍形成性の作用機序には、カルシニューリン／ＮＦＡＴシグナル伝達分子の経路が含まれる。この経路には、以下のタンパク質、ＮＦＡＴ、カルシニューリン、Ｂｃｌ−２、ＡＴＸ、ＭＭＰ２、ＭＭＰ−９、ＧＳＫ３およびＲＣＡＮ１が含まれる。
【０２４３】
図９は、Ｔ−４７Ｄ癌細胞における、ＮＦＡＴ活性化に対するＳＯＲ−Ｃ１３処置の効果を示す。ＳＯＲ−Ｃ１３処置細胞とＰＢＳ処置細胞（薬剤無し）の間で、ＮＦＡＴ活性化に有意差（＊：ｐ＜０．０５）が観察された。
【０２４４】
ＳＯＲ−Ｃ１３（配列番号２）の構造は以下のとおりである：
【化１】
2021505659.tif 000006
【０２４５】
図１０は、ＳＯＲ−Ｃ１３で処置されたＢｘＰＣ−３膵臓癌細胞の溶解物における、２４時間および７２時間でのＳＯＲ−Ｃ１３によるカルシニューリン活性阻害を示す（＊：ｐ＜０．０５）。
【０２４６】
図１１は、毎日１００μＭおよび５００μＭのＳＯＲ−Ｃ１３で９６時間処置されたＢｘＰＣ−３細胞における、ＭＭＰ−９発現の低下をＰＢＳ対照からの％で示す（＊：ｐ＜０．０５）。
【０２４７】
図１２は、ＳＯＲ−Ｃ１３で処置されたＢｘＰＣ−３細胞における、Ｂｃｌ−２発現に対するＳＯＲ−Ｃ１３処置の影響を示す。Ｂｃｌ−２発現において有意な減少（＊：ｐ＜０．０５）が９６時間で観察された。
【０２４８】
図１３は、ＳＯＲ−Ｃ１３で処置されたＴ−４７Ｄ乳癌細胞株における、１８７個の遺伝子パネルアレイからの上方制御された、および下方制御された遺伝子（＞１．５倍の発現変化）を示す。これら遺伝子は、検証された５種の他の癌細胞株（ＢｘＰＣ−３、ＰＣ３、ＳＫＯＶ３およびＳｕ  ８６．８６）のうちの少なくとも１つにおいても上方制御または下方制御されている。カルシニューリン／ＮＦＡＴ経路に関与するＮＦＡＴＣ１、ＭＭＰ２、ＧＳＫ３およびＲＣＡＮ１のｍＲＮＡ発現は、ＳＯＲ−Ｃ１３処置に影響を受けることが示されている。図１３も、複数の癌細胞において、アポトーシスに対する抵抗性、増殖、転移および血管新生に関与する遺伝子の発現、ならびに免疫サイトカインおよび転写因子の発現にＳＯＲ−Ｃ１３が影響を及ぼすことを示している。
【０２４９】
興味深いことに、Ｂｃｌ−２とＭＭＰ９はＢｘＰＣ−３においておよそ−０．６ＣＴに下方制御された（データ示さず）。
【０２５０】
材料および方法
ペプチド：ＳＯＲ−Ｃ１３、その改変型は、ＣａｎＰｅｐｔｉｄｅ（ＱＣ社）により合成された。
【０２５１】
細胞培養：乳癌（Ｔ−４７Ｄ）、前立腺癌（ＰＣ−３）および膵臓癌（ＢｘＰＣ−３、ＳＵ．８６．８６）の細胞株はＡＴＣＣから取得し、推奨されるように培養した。
細胞：細胞株は、そのＴＲＰＶ６  ｍＲＮＡ発現に基づき高／低いずれかとして分析に選択され、およびＳＯＲ−Ｃ１３の第Ｉ相臨床試験において反応した細胞型に対するものであった。
【０２５２】
インビトロＮＦＡＴ分析：
トランスフェクション：Ｔ−４７Ｄ細胞は、９６ウェルプレート中に１ｘ１０４細胞／ウェルで播種され、一晩培養された。細胞は、Ｌｉｐｔｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ３０００（０．３μＬ／ウェル）／Ｐ３０００  Ｒｅａｇｅｎｔ（１μＬ／ウェル）を使用して、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地中、３７℃／５％  ＣＯ２で２４時間、５００ｎｇのＮＦＡＴデュアルレポータープラスミド（Ｃｉｇｎａｌ  ＮＦＡＴ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ、Ｑｉａｇｅｎ社）をトランスフェクトされた。
【０２５３】
薬剤投与：トランスフェクション後、Ｔ−４７Ｄ細胞に毎日、ＮＴ（ｓ．ｆ．ＰＢＳ）または５００μＭのＳＯＲ−Ｃ１３（ｆ．ｓ．ＰＢＳ中で毎日新しく調製）を７２時間投与された。投与された後、７２時間の投与期間中、９６ウェルプレートは３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートされた。投与は７２時間の間、２４時間ごとに繰り返された。
【０２５４】
プレートアッセイ：発光は、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用してモニタリングされ、ＰＢＳと、ＳＯＲ−Ｃ１３処置Ｔ−４７Ｄ細胞の間での（ｐＫＣ経路と関連した）ＮＦＡＴ発光の発現における変化を測定した。ＦｉｒｅｆｌｙおよびＲｅｎｉｌｌａの発光は、分子デバイスのマイクロプレーターリーダーを使用して測定された。
【０２５５】
インビトロでのＣａｌｎｒおよびＢｃｌ−２の分析：
薬剤投与：細胞は、６ウェルプレート中に５ｘ１０５細胞／ウェルで播種された。２４時間のインキュベーション後、ＢｘＰＣ−３細胞に毎日、ＮＴ（ｓ．ｆ．ＰＢＳ）または５００μＭのＳＯＲ−Ｃ１３（ｆ．ｓ．ＰＢＳ中で毎日新しく調製）を７２時間投与された。投与された後、７２時間の投与期間中、細胞は３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートされた。投与は７２時間の間、２４時間ごとに繰り返された。２４時間ごとに、タンパク質溶解物（ＲＩＰＡ）が細胞から調製され、脱塩された（７ｋＤａ  ＭＷＣＯ、Ｚｅｂｒａ  ｓｐｉｎ  ｃｏｌｕｍｎｓ、Ｆｉｓｈｅｒ社）。Ｂｃｌ−２アッセイは、９６時間投与のパラメーターであった。
【０２５６】
プレートアッセイ（Ｃａｌｎｒ）：細胞カルシニューリン濃度は、Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ（ＰＰ２Ｂ）Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して６２０ｎｍでモニタリングされた。結果は、放出されたリン酸塩の量に対する標準曲線から補間された。
【０２５７】
プレートアッセイ（Ｂｃｌ−２）：ヒト総Ｂｃｌ−２濃度は、ＤｕｏＳｅｔ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｔｏｔａｌ  ＢｃＬ−２  ｓａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用して実施された。ＢｘＰＣ−３細胞に対するＢｃｌ−２濃度は、（４−ＰＬ）標準曲線Ｂｃｌ−２から補間された。
【０２５８】
インビトロＭＭＰ−９分析：
薬剤投与：：ＢｘＰＣ−３細胞は、９６ウェルプレート中に２ｘ１０４細胞／ウェルで播種され、一晩培養された。細胞に毎日、ＮＴ（ｓ．ｆ．ＰＢＳ）、１００μＭ、５００μＭのＳＯＲ−Ｃ１３（ｆ．ｓ．ＰＢＳ中で毎日新しく調製）を９６時間投与された。投与は９６時間の間、２４時間ごとに繰り返された。
【０２５９】
プレートアッセイ：ＭＭＰ−９濃度は、ＭＭＰ−９  Ｃｙｔｏｇｌｏｗ  ＥＬＩＳＡ（Ａｓｓａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用してモニタリングされた。細胞はプレートに固定され、ＥＬＩＳＡが実施された。ＭＭＰ−９発現は、非処置対照の％として算出された。
【０２６０】
ＲＴ−ｑＰＣＲ  ＴａｑＭａｎアレイ  ＮＦＡＴ／Ｃａ２＋遺伝子経路のプロファイリング：
ｍＲＮＡ発現：ＮＦＡＴ／Ｃａ２＋関連遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルは、ＳＯＲ−Ｃ１３（５００μＭ）で１２０時間処置された６種の癌細胞株中で、１８７個の遺伝子からなるｑＰＣＲ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ａｒｒａｙ  ｐａｎｅｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用して決定された。ＰｕｒｅＬｉｎｋ  ＲＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔの溶解緩衝液を用いて細胞を収集し、次いでメーカー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）の説明書に従いＲＮＡ単離を実施した。ＲＮＡは、Ｑｕｂｉｔ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒを使用して定量された。逆転写を実施し、ｃＤＮＡは、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＶ  ＶＩＬＯ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  ｗｉｔｈ  ｅｚＤＮａｓｅ  Ｅｎｚｙｍｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用して生成された。Ｃｕｓｔｏｍ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ａｒｒａｙ  Ｃａｒｄの各ポートに、５００ｎｇのｃＤＮＡおよび１Ｘ  ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘをロードした。ＲＴ−ｑＰＣＲは、Ｑｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ（商標）７Ｆｌｅｘを使用して実施され、分析は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒのクラウドソフトウェアにより、内部対照としてＧＵＳＢおよびＨＲＰＴ１を使用して実施された。
【０２６１】
要約
ＳＯＲ−Ｃ１３ペプチドはＴＲＰＶ６チャンネルを標的とし、阻害する。そしてインビトロ投与実験で、ＮＦＡＴシグナル伝達分子経路の標的（Ｃａｌｎｒ、Ｂｃｌ−２、ＡＴＸ、ＭＭＰ−９およびＮＦＡＴ）において処置に伴う減少が示された。
【０２６２】
ＮＦＡＴ／Ｃａ２＋シグナル伝達遺伝子の上方制御および下方制御は、ＮＦＡＴ／Ｃａ２＋シグナル伝達経路、それに付随する腫瘍形成に関連する他の下流分子の相互作用におけるＳＯＲ−Ｃ１３  ＭＯＡの関与を示すものである。
【０２６３】
複数の癌細胞において、アポトーシスに対する抵抗性、増殖、転移および血管新生に関与する遺伝子の発現、ならびに免疫サイトカインおよび転写因子の発現に対するＳＯＲ−Ｃ１３の影響によって、ＳＯＲ−Ｃ１３は魅力的な新規抗癌剤となる。
【０２６４】
ＳＯＲ−Ｃ１３は、ＴＲＰＶ６カルシウムチャンネルの阻害を介して、固有の抗癌活性メカニズムを提供する。良好な忍容性、および管理可能な安全性プロファイル、そして抗腫瘍活性が期待される（Ｆｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１７）ことから、抗癌剤としてＳＯＲ−Ｃ１３を用いた次の試験が計画されており、ＳＯＲ−Ｃ１３は、特定され、臨床開発にまで持ち込まれた最初の高度に特異的なＴＲＰＶ６阻害剤となる。
【０２６５】
実施例４
免疫チェックポイント調節剤との併用における、ＴＲＰＶ６阻害剤の効果
例えばＰＤ−１阻害剤などの免疫チェックポイント調節剤との併用で、ＴＲＰＶ６阻害剤の効果を評価する試験が実施される（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２００８  Ｊｕｎ；４９（６）：２５１８−２５２５；および図２を参照のこと）。簡潔に述べると、ＢｘＰＣ−３膵臓癌細胞が４８時間、ＩＮＦ−γで処置され、ＰＤ−Ｌ１の細胞表面発現が誘導される。活性化された時点で、ＢｘＰＣ−３細胞のセットに、０または１００μＭのＳＯＲ−Ｃ１３（ＫＥＦＬＨＰＳＫＶＤＬＰＲ；配列番号２）を４８時間、処置する。例えばペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））などの免疫チェックポイント調節性被験剤を様々な濃度で、活性化Ｊｕｒｋａｔ細胞（すなわち細胞障害性Ｔ細胞）とともに添加し、そしてＢｘＰＣ−３細胞とともに４８時間、共にインキュベートする。
【０２６６】
生存能力と、ＩＬ−２産生を、４８時間後に決定する。活性化Ｊｕｒｋａｔ細胞は、ＢｘＰＣ−３細胞の殺傷を介在するＩＬ−２を産生する。細胞死は、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｒｅ  Ｇｌｏｗ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用して定量される。ＢｘＰＣ−３細胞のＩＬ−２介在殺傷に対するＳＯＲ−Ｃ１３の効果は、ＳＯＲ−Ｃ１３の非存在下でのＢｘＰＣ−３細胞のＩＬ−２介在殺傷と比較される。
【０２６７】
結果は、ＳＯＲ−Ｃ１３の添加が、例えばペムブロリズマブなどの免疫チェックポイント調節剤の抗癌活性を高めることを示すであろう。
【図１】
2021505659.tif 000007
【図２】
2021505659.tif 000008
【図３】
2021505659.tif 000009
【図４】
2021505659.tif 000010
【図５】
2021505659.tif 000011
【図６】
2021505659.tif 000012
【図７】
2021505659.tif 000013
【図８】
2021505659.tif 000014
【図９】
2021505659.tif 000015
【図１０】
2021505659.tif 000016
【図１１】
2021505659.tif 000017
【図１２】
2021505659.tif 000018
【図１３】
2021505659.tif 000019
【図１４】
2021505659.tif 000020
【図１５】
2021505659.tif 000021
【図１６】
2021505659.tif 000022
【図１７】
2021505659.tif 000023
【図１８】
2021505659.tif 000024
【図１９】
2021505659.tif 000025
【図２０】
2021505659.tif 000026
【図２１】
2021505659.tif 000027
【配列表】
2021505659000001.app
【国際調査報告】
2021505659.tif 000028
2021505659.tif 000029