(57)【要約】  式ＩＩ：2021533135.tif 000079の化合物は、トル様受容体７(ＴＬＲ７)のアゴニストとして有用である。前記化合物は、がんの治療において、特に、抗がん免疫療法剤またはワクチンアジュバンドと組み合わせて使用できる。
2021533135.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(ＩＩ)
【化１】
2021533135.tif 000067
[式中、
各Ｘ１は、独立して、ＮまたはＣＲ２であり；
Ｘ２は、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨ、ＳまたはＮ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)であり；
Ｒ１は、Ｈ、ＣＨ３(ＣＨ２)１−３、ＣＨ３(ＣＨ２)０−１Ｏ(ＣＨ２)２−３、ＣＨ３(ＣＨ２)０−３Ｃ(＝Ｏ)、ＣＨ３(ＣＨ２)０−１Ｏ(ＣＨ２)２−３Ｃ(＝Ｏ)、
【化２】
2021533135.tif 000068
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｏ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃｌ、ＦまたはＣＮであり；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、ＮＨ(Ｃ１−Ｃ５アルキル)、Ｎ(Ｃ１−Ｃ５アルキル)２、ＮＨ(ＣＨ２)０−１(Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル)、ＮＨ(Ｃ４−Ｃ８ビシクロアルキル)、ＮＨ(Ｃ６−Ｃ１０スピロシクロアルキル)、Ｎ(Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル)２、ＮＨ(ＣＨ２)１−３(アリール)、Ｎ((ＣＨ２)１−３(アリール))２、構造：
【化３】
2021533135.tif 000069
を有する環状アミン基、６員環の芳香族基またはヘテロ芳香族基または５員環のヘテロ芳香族基であって；
ここで、アルキル、シクロアルキル、ビシクロアルキル、スピロシクロアルキル、環状アミン、６員環の芳香族基またはヘテロ芳香族基あるいは５員環のヘテロ芳香族基は、所望により、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｏ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｃ(＝Ｏ)(Ｍｅ)、ＳＯ２(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｃ(＝Ｏ)(Ｅｔ)、ＮＨ２、ＮＨ(Ｍｅ)、Ｎ(Ｍｅ)２、ＮＨ(Ｅｔ)、Ｎ(Ｅｔ)２およびＮ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、(ＣＨ２)１−２ＯＨ、(ＣＨ２)１−２ＯＭｅから選択される１以上の置換基で置換されていてもよく；および
シクロアルキル、ビシクロアルキル、スピロシクロアルキルまたは環状アミン基は、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、ＮＨ、Ｃ(＝Ｏ)、Ｎ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、ＮＣ(＝Ｏ)(Ｃ１−Ｃ３アルキル)またはＮ(Ｂｏｃ)により置換されたＣＨ２基を有していてもよい；
ｍは、０または１であり；および
ｎは、１、２または３である]
の構造を有する、化合物。
【請求項２】
Ｒ１が、
【化４】
2021533135.tif 000070
である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
基：
【化５】
2021533135.tif 000071
において、各Ｘ１がＣＲ２であるか、または２以下のＸ１がＮである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
基：
【化６】
2021533135.tif 000072
が、
【化７】
2021533135.tif 000073
である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が、Ｃｌ、Ｈ、
【化８】
2021533135.tif 000074
【化９】
2021533135.tif 000075
からなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
式(ＩＩ')：
【化１０】
2021533135.tif 000076
の構造を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
式ＩＩａ：
【化１１】
2021533135.tif 000077
の構造を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
式ＩＩｂ：
【化１２】
2021533135.tif 000078
の構造を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
２ｋＤａ〜４０ｋＤａの大きさであるポリ(エチレングリコール)基に共有結合されている、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
抗がん免疫療法剤および請求項１記載の化合物の治療上有効な組合せを、がんに罹患している患者に投与することを特徴とする、がんを治療するための方法。
【請求項１１】
抗がん免疫療法剤が、アンタゴニスト性の抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
がんが、肺がん(非小細胞肺がんを含む)、膵臓がん、腎臓がん、頭頸部がん、リンパ腫(ホジキンリンパ腫を含む)、皮膚がん(メラノーマおよびメルケル皮膚がんを含む)、尿路上皮がん(膀胱がんを含む)、胃がん、肝細胞がんまたは大腸がんである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
がんが、イピリムマブ、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(関連出願の相互参照)
本願は、３５ Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１９(ｅ)のもとに米国仮出願第６２/７１４,２３８号(２０１８年８月３日出願)の優先権を主張し、その内容は引用により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
本開示は、トル様受容体７(「ＴＬＲ７」)アゴニストおよびそのコンジュゲート、ならびに前記アゴニストおよびそれらのコンジュゲートの製造および使用のための方法に関する。
【０００３】
トル様受容体(「ＴＬＲ」)は、病原体の特定の分類に保存された低分子モチーフである病原体関連分子パターン(「ＰＡＭＰ」)を認識する受容体である。ＴＬＲは、細胞表面上または細胞内部に存在することができる。ＴＬＲがその同族ＰＡＭＰと結合して活性化されると、関連する病原体が宿主体内に存在すること(即ち、感染)をシグナル伝達し、宿主免疫系を刺激して感染に対抗する。ヒトには、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３などと命名された１０種類のＴＬＲが存在する。
【０００４】
アゴニストによるＴＬＲの活性化(最も研究されているのはＴＬＲ７−の活性化)は、免疫反応全体を刺激することで、実際の病原体感染以外の様々な症状を治療する際に、ワクチンや免疫療法剤の作用に対して良好な効果を提供する。そのため、ＴＬＲ７アゴニストを、ワクチンのアジュバントとして、あるいはがん免疫療法のエンハンサーとして使用することに大きな期待が寄せられている。例えば、Vasilakos and Tomai 2013，Sato-Kaneko et al. 2017，Smits et al. 2008およびOta et al. 2019を参照されたい。
【０００５】
エンドソームの膜上に存在する細胞内受容体であるＴＬＲ７は、一本鎖ＲＮＡウイルスに関連するＰＡＭＰを認識する。その活性化により、ＩＦＮαおよびＩＦＮβなどのＩ型インターフェロンの分泌が誘導される(Lund et al.，2004)。ＴＬＲ７は、一本鎖ＲＮＡリガンドに対する結合部位(Berghoefer et al.，2007)とグアノシンなどの低分子に対する結合部位(Zhang et al.，2016)の２つの結合部位を有する。
【０００６】
ＴＬＲ７は、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]キノリン骨格をベースとするイミキモド、レシキモドおよびガルジキモドなどのグアノシン様合成アゴニストに結合して、活性化され得る。低分子ＴＬＲ７アゴニストのレビューとしては、Cortez and Va 2018を参照されたい。
【化１】
2021533135.tif 000003
【０００７】
ベサトリモドに例示されるようなプテリジノン分子骨格に基づいて合成された合成ＴＬＲ７アゴニストも、知られている(Desai et al. 2015)。
【化２】
2021533135.tif 000004
【０００８】
プリン様分子骨格をベースとしたその他の合成ＴＬＲ７アゴニストが、開示されており、多くの場合、一般式(Ａ)：
【化３】
2021533135.tif 000005
(式中、Ｒ、Ｒ'およびＲ''は、構造変数であり、Ｒ''は、通常、非置換または置換の芳香族または芳香族ヘテロ環を含んでいる)
に関する。
【０００９】
プリン様骨格を有する生物活性分子、ならびに線維症、炎症性障害、がんまたは病原性感染症などの症状を治療する際のそれらの使用に関する文献については、以下のものが挙げられる：Akinbobuyi et al. 2015 and 2016; Barberis et al. 2012; Carson et al. 2014; Ding et al. 2016，2017a，and 2017b; Graupe et al. 2015; Hashimoto et al. 2009; He et al. 2019a and 2019b; Holldack et al. 2012; Isobe et al. 2009a and 2012; Poudel et al. 2019a and 2019b; Pryde 2010;およびYoung et al. 2019。
【００１０】
基Ｒ''は、ピリジルであり得る：Bonfanti et al. 2015a and 2015b; Halcomb et al. 2015; Hirota et al. 2000; Isobe et al. 2002，2004，2006，2009a，2009b，2011，and 2012; Kasibhatla et al. 2007; Koga-Yamakawa et al. 2013; Musmuca et al. 2009; Nakamura 2012; Ogita et al. 2007;およびYu et al. 2013。
【００１１】
式(Ａ)の６,５縮合環系(ピリミジン６員環がイミダゾール５員環に縮合したもの)が修飾された関連分子に関する文献がある。(ａ) Dellaria et al. 2007，Jones et al. 2010 and 2012,およびPilatte et al. 2017には、ピリミジン環がピリジン環に置換されている化合物が開示されている。(ｂ) Chen et al. 2011，Coe et al. 2017およびZhang et al. 2018には、イミダゾール環がピラゾール環に置換された化合物が開示されている。(ｃ) Cortez et al. 2017 and 2018; Li et al. 2018;およびMcGowan et al. 2016a，2016b，and 2017には、イミダゾール環がピロール環で置換された化合物が開示されている。
【００１２】
Bonfantiら(2015b and 2016)およびPurandareら(2019)は、プリン基部分の２つの環に跨って、一つのマクロ環を形成するＴＬＲ７モジュレーターを開示している。
【００１３】
ＴＬＲ７アゴニストは、パートナー分子とコンジュゲートすることができ、このパートナー分子とは、例えば、リン脂質、ポリ(エチレングリコール)(「ＰＥＧ」)、抗体、または別のＴＬＲ(一般的には、ＴＬＲ２)であることが可能である。文献の例には、以下のものが挙げられる：Carson et al. 2013，2015，and 2016，Chan et al. 2009 and 2011，Cortez et al. 2017，Gadd et al. 2015，Lioux et al. 2016，Maj et al. 2015，Vernejoul et al. 2014およびZurawski et al. 2012。頻度が高いコンジュゲート部位は、式(Ａ)のＲ''基である。
【００１４】
Jensenら(2015)は、ＴＬＲ７アゴニストを送達するためのカチオン性脂質ビヒクルの使用を開示している。
【００１５】
レシキモドを含むいくつかのＴＬＲ７アゴニストは、デュアルＴＬＲ７/ＴＬＲ８アゴニストである。例えば、Beesuら(2017)、Embrechtsら(2018)、Liouxら(2016)およびVernejoulら(2014)を参照されたい。
【００１６】
本明細書の引用文献に対する筆頭著者または発明者および発行年による完全な引用は、本明細書の最後に記載している。
【発明の概要】
【００１７】
(本発明の簡単な説明)
本明細書は、ＴＬＲ７アゴニストとしての活性を示す２Ｈ−ピラゾロ[４,３−ｄ］ピリミジン芳香族系を有する化合物に関する。
【化４】
2021533135.tif 000006
【００１８】
一態様において、式ＩＩ：
【化５】
2021533135.tif 000007
[式中、
各Ｘ１は、独立して、ＮまたはＣＲ２であり；
Ｘ２は、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨ、ＳまたはＮ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)であり；
Ｒ１は、Ｈ、ＣＨ３(ＣＨ２)１−３、ＣＨ３(ＣＨ２)０−１Ｏ(ＣＨ２)２−３、ＣＨ３(ＣＨ２)０−３Ｃ(＝Ｏ)、ＣＨ３(ＣＨ２)０−１Ｏ(ＣＨ２)２−３Ｃ(＝Ｏ)、
【化６】
2021533135.tif 000008
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｏ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃｌ、ＦまたはＣＮであり；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、ＮＨ(Ｃ１−Ｃ５アルキル)、Ｎ(Ｃ１−Ｃ５アルキル)２、ＮＨ(ＣＨ２)０−１(Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル)、ＮＨ(Ｃ４−Ｃ８ビシクロアルキル)、ＮＨ(Ｃ６−Ｃ１０スピロシクロアルキル)、Ｎ(Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル)２、ＮＨ(ＣＨ２)１−３(アリール)、Ｎ((ＣＨ２)１−３(アリール))２、構造：
【化７】
2021533135.tif 000009
を有する環状アミン基、６員環の芳香族基またはヘテロ芳香族基、あるいは５員環のヘテロ芳香族基であり；
ここで、アルキル、シクロアルキル、ビシクロアルキル、スピロシクロアルキル、環状アミン、６員環の芳香族基またはヘテロ芳香族基、あるいは５員環のヘテロ芳香族基は、所望により、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｏ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｃ(＝Ｏ)(Ｍｅ)、ＳＯ２(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、Ｃ(＝Ｏ)(Ｅｔ)、ＮＨ２、ＮＨ(Ｍｅ)、Ｎ(Ｍｅ)２、ＮＨ(Ｅｔ)、Ｎ(Ｅｔ)２およびＮ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、(ＣＨ２)１−２ＯＨ、(ＣＨ２)１−２ＯＭｅから選択される１以上の置換基で置換されていてもよく；および
シクロアルキル、ビシクロアルキル、スピロシクロアルキルまたは環状アミン基は、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、ＮＨ、Ｃ(＝Ｏ)、Ｎ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、ＮＣ(＝Ｏ)(Ｃ１−Ｃ３アルキル)またはＮ(Ｂｏｃ)により置換されたＣＨ２基を有していてもよい；
ｍは０または１であり;および
ｎは１、２または３である]
の構造を有する化合物が提供される。
【００１９】
本明細書に開示されている化合物は、ＴＬＲ７アゴニストとしての活性を有しており、いくつかの化合物は、目的とする作用に関する標的組織または器官への標的化送達のために、抗体とコンジュゲートさせることができる。また、これらの化合物を、ＰＥＧ化することにより、その医薬特性を調節することができる。
【００２０】
本明細書に開示されている化合物、そのコンジュゲートまたはそのＰＥＧ化誘導体は、免疫系の活性化により治療可能な症状を有する対象に、治療上有効な量の化合物、そのコンジュゲートまたはそのＰＥＧ化誘導体を、特に、ワクチンまたはがん免疫療法剤と組み合わせて投与することによって治療することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、本願化合物を製造するための反応スキームを示す。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、本願化合物を製造するための反応スキームを示す。
【図３】図３は、本願化合物を製造するための反応スキームを示す。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、本願化合物を製造するための反応スキームを示す。
【図５】図５は、本願化合物にリンカーを結合させて、コンジュゲーションを好適化するためのスキームを示す。
【図６】図６は、本願化合物にリンカーを結合させて、コンジュゲーションを好適化するためのスキームを示す。
【発明の詳細な説明】
【００２２】
(定義)
「抗体」は、抗体全体およびあらゆる抗原結合フラグメント(即ち、「抗原結合部分」)またはその単鎖変異体を意味する。抗体全体または完全長抗体は、ジスルフィド結合により相互に連結された少なくとも２つの重鎖(Ｈ)および２つの軽鎖(Ｌ)を含むタンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域(ＶＨ)ならびに３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む重鎖定常領域を含んでいる。各軽鎖は、軽鎖可変領域(ＶＬまたはＶｋ)および１つのシングルドメインＣＬを含む軽鎖定常領域を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、高度に保存されたフレームワーク領域(ＦＲ)と共に点在する超可変領域、いわゆる相補性決定領域(ＣＤＲ)内で更に細分され得る。各々ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含み、アミノ末端からカルボキシ末端へと次の順番で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４。可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。定常領域は、宿主の組織または因子[例えば、エフェクター細胞などの免疫系の様々な細胞および古典的補体系の第一成分(Ｃｌｑ)]への抗体の結合を媒介し得る。抗体が、５ｘ１０−８Ｍ以下のＫＤ、より好ましくは１ｘ１０−８Ｍ以下のＫＤ、より好ましくは６ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤ、より好ましくは３ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤ、更により好ましくは２ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤにて抗原Ｘに結合するならば、該抗体は、抗原Ｘに「特異的に結合する」といえる。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体または好ましくはヒト抗体であり得る。重鎖定常領域を、グリコシル化の型またはその程度に影響を及ぼすように遺伝子設計して、抗体の半減期を延長させること、エフェクター細胞または補体系との相互作用を増強または低下させること、または別の性質を調節することができる。遺伝子設計は、１以上のアミノ酸の置換、付加または削除によるか、あるドメインを別のイムノグロブリン型由来のドメインに置き換えるか、または前記組合せにより達成され得る。
【００２３】
抗体の「抗原結合フラグメント」および「抗原結合部分」(または、単純に「抗体部分」または「抗体フラグメント」)とは、抗原に特異的に結合する能力を保持する１以上の抗体フラグメントを意味する。抗体の抗原−結合機能は、完全長抗体のフラグメント、例えば(ｉ)Ｆａｂフラグメント、即ちＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント；(ｉｉ)Ｆ(ａｂ')２フラグメント、即ちヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；(ｉｉｉ)主にヒンジ領域の部分を有するＦａｂであるＦａｂ'フラグメント(例えば、Abbas et al.，Cellular and Molecular Immunology，6th Ed.，Saunders Elsevier 2007を参照されたい)；(ｉｖ)ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄフラグメント；(ｖ)抗体の１つのアームのＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖフラグメント；(ｖｉ)ＶＨドメインから成るｄＡｂフラグメント(Ward et al.,(1989) Nature 341:544-546)；(ｖｉｉ)単離された相補性決定領域領域(ＣＤＲ)；および(ｖｉｉｉ)ナノボディ、すなわち１つの可変ドメインおよび２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域、により発揮されることが示されている。好ましい抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ')２、Ｆａｂ'、ＦｖおよびＦｄフラグメントである。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別の遺伝子にコードされているが、それらを、組み換え手法を用いて合成リンカーにより連結させて、ＶＬおよびＶＨ領域が対になり一価の分子を形成する１つのタンパク質鎖(１本鎖ＦｖまたはｓｃＦｖとして知られる)として作製できる；例えば、Bird et al.(1988) Science 242:423-426；およびHuston et al.(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照されたい。このような１本鎖抗体もまた、用語、抗体の「抗原結合部分」に含まれる。
【００２４】
別段の記載が無ければ−例えば、配列表における直線の行上のナンバリングに関して−抗体の重鎖または軽鎖の可変領域(ＶＨまたはＶＬ)におけるアミノ酸の位置に関するナンバリングは、Ｋａｂａｔシステム(Kabat et al.，"Sequences of Proteins of immunological interest，5th ed.，Pub. No. 91-3242，U.S. Dept. Health & HumanServices，NIH，Bethesda，Md.，1991，以後「Ｋａｂａｔ」という)に従い、抗体の重鎖または軽鎖の定常領域(ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＬ)におけるアミノ酸の位置に関するナンバリングは、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスに従う(Lazar et al.，US 2008/0248028 A1を参照されたい；この開示内容は、出典明示により本明細書に含まれる(例えば、この使用法など)。さらに、ImMunoGeneTics Information System(IMGT)は、そのウェブサイトにおいて"IMGT Scientific Chart：Correspondence between C Numberings"の表題として、重鎖定常領域についてＥＵナンバリングシステムおよびＫａｂａｔナンバリングの対応を示している。
【００２５】
「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する(例えば、抗原Ｘを特異的に結合する単離された抗体とは、抗原Ｘ以外の抗原を特異的に結合する抗体を実質的に含まない)。しかし、抗原Ｘを特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原(例えば、別の種由来の抗原Ｘ分子)との交差反応性を有していてもよい。特定の実施態様において、単離された抗体は、ヒト抗原Ｘに特異的に結合し、別の(非ヒト)抗原Ｘの抗原とは交差反応しない。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含んでいなくても良い。
【００２６】
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、特定のエピトープについて１つの結合特異性および親和性を提示する単分子組成物である抗体分子の調製物を意味する。
【００２７】
「ヒト抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域(および定常領域、もし存在する場合)の双方が、ヒト生殖細胞系のイムノグロブリン配列から得られる可変領域を有する抗体を意味する。ヒト抗体は、後の修飾、例えば天然または合成の修飾を含み得る。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列イムノグロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基(例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的突然変異が導入される突然変異またはインビボでの体細胞突然変異)を包含し得る。しかし、「ヒト抗体」は、別の哺乳類の種、例えばマウスから得られたＣＤＲ配列がヒトのフレームワーク配列に組み込まれた抗体を含まない。
【００２８】
「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方が、ヒト生殖細胞系のイムノグロブリン配列から得られる可変領域を有する１つの結合特異性を提示する抗体を意味する。一実施態様において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合されたヒトの重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子組み換え非ヒト動物、例えば、遺伝子組み換えマウスから得られたＢ細胞を包含するハイブリドーマにより提供される。
【００２９】
「脂肪族」とは、特定数の炭素原子(例えば、「Ｃ３脂肪族」、「Ｃ１−５脂肪族」、「Ｃ１−Ｃ５脂肪族」または「Ｃ１〜Ｃ５脂肪族」のように、この後者３つのフレーズは、１〜５個の炭素原子を有する脂肪族基と同義である)を有するか、または炭素原子の数が明確に特定されていない場合には、１〜４個の炭素原子(不飽和脂肪族基の例では２〜４個の炭素)を有する直鎖または分枝鎖の飽和または不飽和の非芳香族炭化水素基を意味する。同様に、Ｃ２−４アルケン、Ｃ４−Ｃ７脂環式化合物のような別の形式で炭素数を用いられることも理解される。同様に、「(ＣＨ２)１−３」などの用語は、下付き文字としての略記が１、２または３であって、前記単語が、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２およびＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を示すことは理解される。
【００３０】
「アルキル」とは、飽和脂肪族基を意味しており、炭素原子数を表すために同様の慣習が適用できる。例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−ブチル、１−ブチル、２−ブチルなどを包含するが、これに限定するものではない。「アルキレン」は、アルキル基の二価のカウンターパート、例えばＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２およびＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を意味する。
【００３１】
「アルケニル」とは、少なくとも一つの炭素−炭素の二重結合を有する脂肪族基を意味しており、炭素原子数を表すために同様の慣習が適用できる。例えば、Ｃ２−Ｃ４アルケニル基は、エテニル(ビニル)、２−プロペニル(アリルまたはプロパ−２−エニル)、ｃｉｓ−１−プロペニル、ｔｒａｎｓ−１−プロペニル、Ｅ−(またはＺ−)２−ブテニル、３−ブテニル、１,３−ブタジエニル(ブタ−１,３−ジエニル)などを包含するが、これに限定されるものではない。
【００３２】
「アルキニル」とは、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する脂肪族基を意味しており、炭素原子数を表すために同様の慣習が適用できる。例えば、Ｃ２−Ｃ４アルキニル基は、エチニル(アセチレニル)、プロパルギル(プロパ−２−イニル)、１−プロピニル、ブタ−２−イニルなどを包含する。
【００３３】
「脂環式」とは、１〜３個の環を有する飽和または不飽和の非芳香族炭化水素基を意味しており、各環は３〜８個(好ましくは、３〜６個)の炭素原子を有するものである。「シクロアルキル」は、各環が飽和である脂環式基を意味する。「シクロアルケニル」は、少なくとも一つの環が、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有する脂環式基を意味する。「シクロアルキニル」は、少なくとも一つの環が、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する脂環式基を意味する。例としては、脂環式基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチルおよびアダマンチルを包含するが、これに限定するものではない。好ましい脂環式基は、シクロアルキル基、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。「シクロアルキレン」は、シクロアルキル基の二価のカウンターパートを意味する。同様に、「ビシクロアルキレン」および「スピロシクロアルキレン」(または「スピロアルキレン」)は、ビシクロアルキル基およびスピロシクロアルキル／スピロアルキル基の２価のカウンターパートを示す。
【００３４】
「ヘテロ脂環式」は、少なくとも一つのその環において３個まで(好ましくは、１〜２個)の炭素が、Ｎ、ＯまたはＳから独立して選択されるヘテロ原子により置換されている(このＮおよびＳは所望により酸化されていてもよく、かつＮが所望により四級化されてもよい)脂環式基を意味する。好ましい脂環式基は、５〜６員である１つの環から成る。同様に、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルケニル」および「ヘテロシクロアルキニル」とは、少なくとも一つのその環が上記のように修飾されているシクロアルキル、シクロアルケニルまたはシクロアルキニル基の各々を意味する。ヘテロ脂環式基の例は、アジリジニル、アゼチジニル、１,３−ジオキサニル、オキセタニル、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニルスルホン、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、１,３−ジオキソラニル、テトラヒドロ−１,１−ジオキソチエニル、１,４−ジオキサニル、チエタニルなどを包含する。「ヘテロシクロアルキレン」は、ヘテロシクロアルキル基の二価のカウンターパートを意味する。
【００３５】
「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「アルキルチオ」および「アリールチオ」は、−Ｏ(アルキル)、−Ｏ(アリール)、−Ｓ(アルキル)および−Ｓ(アリール)を各々意味する。この例は、各々メトキシ、フェノキシ、メチルチオおよびフェニルチオである。
【００３６】
「ハロゲン」または「ハロ」は、より狭義の意味が示されない限り、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００３７】
「アリール」は、単環、二環または三環系(好ましくは、単環式)を有する炭化水素基を意味し、ここで各環は、３〜７個の炭素原子を有しており、少なくとも一つの環が芳香族である。該環系の環は、互いに縮合され得るか(ナフチルのように)、または互いに結合され得るか(ビフェニルのように)、非芳香族環(インダニルまたはシクロヘキシルフェニルのように)と縮合または結合され得る。更なる例としては、アリール基は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントラセニルおよびアセナフチルを包含するが、これに限定するものではない。「アリーレン」は、アリール基の二価のカンウターパートを意味し、例えば１,２−フェニレン、１,３−フェニレンまたは１,４−フェニレンである。
【００３８】
「ヘテロアリール」は、各環が３〜７個の炭素原子を有しており、かつ少なくとも一つの環が、Ｎ、ＯまたはＳから独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する芳香族環(ここで、ＮおよびＳは、所望により酸化されていてもよく、Ｎは所望により四級化されてもよい)である単環、二環または三環系(好ましくは、５員〜７員の単環)を有する基を意味する。少なくとも一つのヘテロ原子を含有する芳香族環は、別の環と縮合され得るか(ベンゾフラニルまたはテトラヒドロイソキノリルのように)、または別の環と直接結合され得る(フェニルピリジルまたは２−シクロペンチルピリジルなど)。更なる例としては、ヘテロアリール基は、ピロリル、フラニル、チオフェニル(チエニル)、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、Ｎ−オキソピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、シンノリニル、キノザリニル、ナフチリジニル、ベンゾフラニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フェノチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、ジベンゾチオフェニル、アクリジニルなどを包含する。「ヘテロアリーレン」は、ヘテロアリール基の二価のカウンターパートを意味する。
【００３９】
ある部分が置換されていてもよいことを、例えば「置換されていない、または置換されたＣ１−Ｃ５アルキル」または「所望により置換されていてもよいヘテロアリール」にあるような、「置換されていない、または置換された」または「所望により置換されていてもよい」のフレーズを用いて示す場合、そのような部分は、１以上の、好ましくは１〜５、より好ましくは１または２の、独立して選択される置換基を有し得る。置換基および置換パターンにより、置換基が結合する部分を考慮して当業者により選択され、化学的に安定で、かつ当該分野の技術および本明細書に記載した方法により合成できる化合物が提供される。「置換されていない、または置換された」または「所望により置換されていてもよい」として基が規定されている場合、ある好ましい実施態様において、かかる基は置換されていない。
【００４０】
「アリールアルキル(ヘテロ脂環式)アルキル」、「アリールアルケニル」、「アリールアルキニル」、「ビアリールアルキル」などは、場合により、アリール、ヘテロ脂環式、ビアリール基などで置換されていてもよいアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を意味し、この基は、場合により、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基でオープンな(満たされていない)原子価であってもよく、例えば、ベンジル、フェネチル、Ｎ−イミダゾイルエチル、Ｎ−モルホリノエチルなどでもよい。逆に、「アルキルアリール」、「アルケニルシクロアルキル」などは、アルキル、アルケニルなどの基で置換されていてもよいアリール、シクロアルキルなどの基を意味し、例えばメチルフェニル(トリル)またはアリルシクロヘキシルであってもよい。「ヒドロキシアルキル」、「ハロアルキル」、「アルキルアリール」、「シアノアリール」などは、アルキル、アリールなどの基を意味し、場合により、１以上の同定された置換基(場合により、ヒドロキシル、ハロなどで)で置換されていてもよい。
【００４１】
例えば、許容され得る置換基は、アルキル(特に、メチルまたはエチル)、アルケニル(特に、アリル)、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、脂環式基、ヘテロ脂環式基、ハロ(特に、フルオロ)、ハロアルキル(特に、トリフルオロメチル)、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル(特に、ヒドロキシエチル)、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｏ(ハロアルキル)(特に、−ＯＣＦ３)、−Ｏ(シクロアルキル)、−Ｏ(ヘテロシクロアルキル)、−Ｏ(アリール)、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ(アルキル)、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＯＨ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ２、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＯＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ(アルキル)、−Ｎ(アルキル)２、−ＮＨ(アリール)、−ＮＨ(ヒドロキシアルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｈ、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＮＨＣ(＝ＮＨ)ＮＨ２、−ＯＳＯ２(アルキル)、−ＳＨ、−Ｓ(アルキル)、−Ｓ(アリール)、−Ｓ(シクロアルキル)、−Ｓ(＝Ｏ)アルキル、−ＳＯ２(アルキル)、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ(アルキル)、−ＳＯ２Ｎ(アルキル)２などを包含するが、これに限定するものではない。
【００４２】
置換される基が脂肪族基である場合、好ましい置換基は、アリール、ヘテロアリール、脂環式基、ヘテロ脂環式基、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｏ(ハロアルキル)、−Ｏ(シクロアルキル)、−Ｏ(ヘテロシクロアルキル)、−Ｏ(アリール)、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ(アルキル)、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ(アルキル)、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＯＨ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ２、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＯＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ(アルキル)、−Ｎ(アルキル)２、−ＮＨ(アリール)、−ＮＨ(ヒドロキシアルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｈ、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＮＨＣ(＝ＮＨ)ＮＨ２、−ＯＳＯ２(アルキル)、−ＳＨ、−Ｓ(アルキル)、−Ｓ(アリール)、−Ｓ(＝Ｏ)アルキル、−Ｓ(シクロアルキル)、−ＳＯ２(アルキル)、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ(アルキル)および−ＳＯ２Ｎ(アルキル)２を包含する。より好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ(アリール)、＝Ｏ、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ(アルキル)、−Ｎ(アルキル)２、−ＮＨ(アリール)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｈ、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２および−ＮＨＣ(＝ＮＨ)ＮＨ２である。特に好ましいものは、フェニル、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、Ｏ(Ｃ２−Ｃ４アルキレン)ＯＨおよびＯ(Ｃ２−Ｃ４アルキレン)ハロである。
【００４３】
置換される基が、脂環式基、ヘテロ脂環式基、アリール基またはヘテロアリール基である場合、好ましい置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｏ(ハロアルキル)、−Ｏ(アリール)、−Ｏ(シクロアルキル)、−Ｏ(ヘテロシクロアルキル)、アルキルチオ、アリールチオ、−Ｃ(＝Ｏ)(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＯＨ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ２、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＯＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ(アルキル)、−Ｎ(アルキル)２、−ＮＨ(アリール)、−ＮＨ(ヒドロキシアルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｈ、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＮＨＣ(＝ＮＨ)ＮＨ２、−ＯＳＯ２(アルキル)、−ＳＨ、−Ｓ(アルキル)、−Ｓ(アリール)、−Ｓ(シクロアルキル)、−Ｓ(＝Ｏ)アルキル、−ＳＯ２(アルキル)、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ(アルキル)および−ＳＯ２Ｎ(アルキル)２である。より好ましい置換基は、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＯＨ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ２、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−Ｃ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＯＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｏ(ヒドロキシアルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２、−ＮＨ２、−ＮＨ(アルキル)、−Ｎ(アルキル)２、−ＮＨ(アリール)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｈ、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ２、−ＮＨＣ(＝Ｏ)ＮＨ(アルキル)、−ＮＨＣ(＝Ｏ)Ｎ(アルキル)２および−ＮＨＣ(＝ＮＨ)ＮＨ２である。特に好ましいものは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シアノ、ニトロ、ハロおよびＣ１−Ｃ４アルコキシである。
【００４４】
範囲が「Ｃ１−Ｃ５アルキル」または「５〜１０％」のように記載されている場合、この範囲は、最初の例ではＣ１およびＣ５の通り、また二番目の例では５％および１０％の通りに、その範囲のエンドポイントを包含する。
【００４５】
特定の立体異性体が、具体的に示されない限り(例えば、構造式において相応するキラル中心で太字または点線で書いた結合により、構造式においてＥまたはＺ配置を有するような二重結合の記載により、または立体化学を指定する命名法または記号を用いて)、全ての立体異性体は、純粋な化合物ならびにその混合物として、本発明の範囲内に包含される。別段の記載が無ければ、ラセミ体、個々のエナンチオマー(光学純粋または部分分割)、ジアステレオマー、幾何異性体ならびにその組合せおよび混合物の全てが、本発明に包含される。
【００４６】
当業者は、化合物が、互変異性体(例えば、ケトおよびエノール形態)、共鳴構造および双性イオン形体を有し得ること、またこれらが本明細書で使用される構造式に示されるものと等価であること、該構造式が、かかる互変異性体、共鳴構造体または双性イオン形体を包含することは理解されよう。
【００４７】
「医薬的に許容し得るエステル」は、インビボ(例えば、ヒトの体内で)で加水分解して、親化合物またはその塩を提供するか、またはそれ自体親化合物と同等の活性を有するエステルを意味する。適切なエステルは、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニルまたはＣ２−Ｃ５アルキニルエステル、特にメチル、エチルまたはｎ−プロピルを包含する。
【００４８】
「医薬的に許容される塩」は、医薬組成物として適切な化合物の塩を意味する。化合物が１以上の塩基性基を有する場合、該塩は、酸付加塩、例えば硫酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、パモ酸塩(エンボン酸塩)、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、塩酸塩、乳酸塩、硫酸メチル、フマル酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、メシル酸塩、ラクトビオン酸塩、スベリン酸塩、トシル酸塩などであってもよい。化合物が１以上の酸性基である場合、該塩は、塩、例えばカルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、アンモニウム塩、亜鉛塩、ピペラジン塩、トロメタミン塩、リチウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、4-フェニルシクロヘキシルアミン塩、ベンザチン塩、ナトリウム塩、テトラメチルアンモニウム塩などであり得る。多形結晶体および溶媒和物は、本発明の範囲内に包含される。
【００４９】
「対象」とは、霊長類(例えば、ヒト)、サル、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどの動物を指す。「対象」および「患者」という用語は、本明細書においては、例えば、ヒトなどの哺乳類の対象を指し、互換的に使用される。
【００５０】
疾患または障害を治療するという意味で、「治療する」、「治療すること」および「治療」という用語は、障害、疾患もしくは症状、または障害、疾患もしくは症状に関連する１つ以上の症状を緩和または無効にすること；または、疾患、障害または症状、またはその１つ以上の症状の進行、転移もしくは悪化を遅らせることを含むことを意味する。がんの治療」とは、以下の１つ以上の効果を示す：(１)腫瘍の成長をある程度抑制すること、例えば、(ｉ)成長速度の低下、(ｉｉ)完全な成長停止；(２)腫瘍細胞数の低下；(３)腫瘍サイズの維持；(４)腫瘍サイズの退縮；(５)末梢臓器への腫瘍細胞の浸潤を抑制すること、例えば、末梢臓器への腫瘍細胞の浸潤の(ｉ)低下、(ｉｉ)速度低下または(ｉｉi)完全な防止；(６)転移を抑制すること、例えば、転移の(ｉ)低下、(ｉｉ)速度低下または(ｉｉi)完全な防止；(７)抗腫瘍免疫反応を増強すること、これは(ｉ)腫瘍サイズの維持、(ｉｉ)腫瘍サイズの縮小、(ｉｉｉ)腫瘍成長の速度低下、(ｉｖ)浸潤の低下、浸潤の速度低下または浸潤の防止に至らしめること、ならびに/または(８)障害に関連する１つ以上の症状の重症度または症状の数についてのある程度の緩和。
【００５１】
本明細書の式において、結合に対して直角となる波線
【化８】
2021533135.tif 000010
または結合手の末端にあるアスタリスク(＊)は、共有結合部位を表している。例えば、式：
【化９】
2021533135.tif 000011
において、Ｒが、
【化１０】
2021533135.tif 000012
であるか、またはＲが、
【化１１】
2021533135.tif 000013
であるという記載は、
【化１２】
2021533135.tif 000014
を意味する。
【００５２】
本明細書の式において、芳香族環の２つの炭素原子の間を横切る結合手は、この結合手に結合された基が、環に当然存在している水素が除かれることにより利用できるようになる芳香族環のいずれの位置に存在していてもよいことを意味する。例示すると、式：
【化１３】
2021533135.tif 000015
は、
【化１４】
2021533135.tif 000016
を表す。
【００５３】
別の例においては、
【化１５】
2021533135.tif 000017
は、
【化１６】
2021533135.tif 000018
を示し、
【化１７】
2021533135.tif 000019
は、
【化１８】
2021533135.tif 000020
を示す。
【００５４】
当業者であれば、特定の構造が１つの互変異性体で描写さることがあるが、例えばケトに対してエノールのように、２つの形態が等価であることは理解されるであろう。
【００５５】
化合物
一実施態様において、下記基：
【化１９】
2021533135.tif 000021
において、各Ｘ１は、ＣＲ２であるか、または２以下のＸ１がＮであり、好ましくは、
【化２０】
2021533135.tif 000022
である。
【００５６】
好ましくは、基Ｒ１は、
【化２１】
2021533135.tif 000023
である。
【００５７】
Ｒ３の例には、Ｃｌ、ＯＨ、
【化２２】
2021533135.tif 000024
【化２３】
2021533135.tif 000025
が挙げられる。
【００５８】
基Ｒ３が、構造：
【化２４】
2021533135.tif 000026
(例えば、１以上のＯ、Ｓ、ＳＯ２、ＮＨ、Ｃ(＝Ｏ)、Ｎ(Ｃ１−Ｃ３アルキル)、ＮＣ(＝Ｏ)(Ｃ１−Ｃ３アルキル)またはＮ(Ｂｏｃ)により所望により置換されていてもよい１以上のメチレン(ＣＨ２)基を有するか、あるいはそれに縮合した別の環を有する場合を含む)を有する場合の例は、上記した通りに、
【化２５】
2021533135.tif 000027
である。
【００５９】
別の実施形態において、Ｒ３は、
【化２６】
2021533135.tif 000028
からなる群から選択される。
【００６０】
式ＩＩの一実施態様において、ｍは０である場合、それはＩＩ'：
【化２７】
2021533135.tif 000029
として簡略化される。
【００６１】
式ＩＩにおいて、好ましくは、
【化２８】
2021533135.tif 000030
【００６２】
式ＩＩの化合物の一実施態様は、式ＩＩａで表され、式中のＲ１およびＲ３は、本明細書の式ＩＩに関して定義されている通りである。このような化合物の例を、表Ａに示す。表Ａには、本明細書に記載されている通りの、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ(登録商標)ＴＬＲ７レポーターアッセイを用いたＴＬＲ７アゴニズム活性についての生物学的活性データが含まれる。比較のために、レシキモドとガーディキモドの活性も示す。
【００６３】
【表１】
2021533135.tif 000031
【表２】
2021533135.tif 000032
【表３】
2021533135.tif 000033
【表４】
2021533135.tif 000034
【表５】
2021533135.tif 000035
【００６４】
式ＩＩの化合物(式中、ｍが１である)の実施態様は、式ＩＩｂ(式中、Ｒ１、Ｒ３およびＸ１は、上記式ＩＩに定義される通りである)により示される。
【化２９】
2021533135.tif 000036
【００６５】
好ましくは、式ＩＩｂにおいて、
【化３０】
2021533135.tif 000037
【００６６】
式ＩＩｂの化合物の例は、表Ｂ：
【表６】
2021533135.tif 000038
に示される。
【００６７】
本明細書は、化合物ＩＩＩ−０２(ＥＣ５０ ５,０００ｎＭ)をさらに開示するものである。
【化３１】
2021533135.tif 000039
【００６８】
コンジュゲート
概要
本明細書に開示されたＴＬＲ７アゴニストは、局所投与またはターゲティング送達によるか、あるいはターゲティング基を含むコンジュゲートにより目的の作用部位に送達され得る。好ましくは、ターゲティング基とは、抗体またはその抗原結合部分であり、その抗原は目的とする作用付近に存在しており、例えば、目的とする作用部位が腫瘍(がん)であるならば腫瘍関連抗原である。好ましくは、腫瘍関連抗原は、正常細胞と比べると、がん細胞により特異的または過剰に発現される。腫瘍関連抗原は、がん細胞の表面に存在し得るか、またはそのがん細胞周辺にがん細胞により分泌され得る。
【００６９】
一態様において、式(ＩＶ)：
【数１】
2021533135.tif 000040
により示される本発明の化合物およびリガンドを含むコンジュゲートが提供され、式中のＺは、ターゲティング基であり、Ｄは、本発明のアゴニストであり、−(ＸＤ)ａＣ(ＸＺ)ｂ−は、ＺおよびＤを連結するという理由から、それらをまとめて「リンカー基」または「リンカー」という。リンカー内にて、Ｃは、Ｄの目的とする生物学的作用部位または部位付近で開裂されるように設計された開裂可能な基であり；ＸＤおよびＸＺは、ＤとＣおよびＣとＺを、夫々空間的に分離するスペーサー基(または「スペーサー」)であり；下付き文字ａ、ｂおよびｃは、独立して、０または１(即ち、ＸＤ、ＸＺおよびＣの存在は任意である)である。下付き文字ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０(好ましくは、１、２、３または４)である。Ｄ、ＸＤ、Ｃ、ＸＺおよびＺは、より詳細に後述される。
【００７０】
抗原または受容体が存在している標的組織または細胞に結合することにより、Ｚは、その場所にコンジュゲートを導く。標的組織または細胞で基Ｃが開裂することで、Ｄを放出して、その効果を局所的に発揮させる。この方法において、Ｄの正確な送達が、目的の作用部位で達成されて、必要な投薬量を低下することができる。またＤは、通常、コンジュゲートされた状態では生物学的に不活性(または、かなり活性が低い)であるので、これによりオフターゲット作用を低減できる。
【００７１】
下付き文字ｍに示されるように、各Ｚは、結合に利用できる部位Ｚの数および用いる実験条件によって、１以上のＤとコンジュゲートできる。個々のＺは、Ｄの整数までコンジュゲートされるが、コンジュゲートの調製物は、統計学的平均値を反映させてＤ：Ｚの非整数比として判定されることは当業者には理解されよう。この比は、置換比(「ＳＲ」)または薬剤−抗体比(「ＤＡＲ」)として示される。
【００７２】
ターゲティング基Ｚ
好ましくは、ターゲティング基Ｚは抗体である。便宜上かつ簡潔化のために、限定するものではないが、Ｚおよびそのコンジュゲートについての本明細書における詳細な説明は、それらが抗体であるという文脈で書かれているが、所望により変更して、別のタイプのＺをコンジュゲートし得ることも当業者には理解されよう。例えば、ターゲティング基として葉酸を含むコンジュゲートは、その表面上に葉酸受容体を有する細胞を標的とし得る(Leamon et al.，Cancer Res. 2008，68(23)，9839)。同じ理由から、本明細書における詳細な説明は、主に、ＺとＤ(ｍ＝１)が１：１の比として記載されている。
【００７３】
本発明のコンジュゲートに使用され得る抗体は、以下の抗原を認識するものを包含する：メソテリン、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４(Ｏ８Ｅとしても知られる)、タンパク質チロシンキナーゼ７(ＰＴＫ７)、グリピカン−３、ＲＧ１、フコシル−ＧＭ１、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ４４。抗体は、動物(例えば、マウス)の抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または好ましくはヒト抗体であってもよい。抗体は、好ましくは、モノクローナル、特にモノクローナルヒト抗体である。前記抗原の幾つかに対するヒトモノクローナル抗体の製造は、Korman et al.，US 8,609,816 B2(2013；B7H4、08Eとしても知られる；特に、抗体2A7、1G11および2F9)；Rao-Naik et al.，8,097,703 B2(2012；CD19；特に、抗体5G7、13F1、46E8、21D4、21D4a、47G4、27F3および3C10)；King et al.，US 8,481,683 B2(2013；CD22；特に、抗体12C5、19A3、16F7および23C6)；Keler et al.，US 7,387,776 B2(2008；CD30；特に、抗体5F11、2H9および17G1)；Terrett et al.，US 8,124,738 B2(2012；CD70；特に、抗体2H5、10B4、8B5、18E7および69A7)；Korman et al.，US 6,984,720 B1(2006；CTLA-4；特に、抗体10D1、4B6および1E2)；Korman et al.，US 8,008,449 B2(2011；PD-1；特に、抗体17D8、2D3、4H1、5C4、4A11、7D3および5F4)；Huang et al.，US 2009/0297438 A1(2009；PSMA、特に、抗体1C3、2A10、2F5、2C6)；Cardarelli et al.，US 7,875,278 B2(2011；PSMA；特に、抗体4A3、7F12、8C12、8A11、16F9、2A10、2C6、2F5および1C3)；Terrett et al.，US 8,222,375 B2(2012；PTK7；特に、抗体3G8、4D5、12C6、12C6aおよび7C8)；Harkins et al.，US 7,335,748 B2(2008；RG1；特に、抗体A、B、CおよびD)；Terrett et al.，US 8,268,970 B2(2012；メソテリン；特に、抗体3C10、6A4および7B1)；Xu et al.，US 2010/0092484 A1(2010；CD44；特に、抗体14G9.B8.B4、2D1.A3.D12および1A9.A6.B9)；Deshpande et al.，US 8,258,266 B2(2012；IP10；特に、抗体1D4、1E1、2G1、3C4、6A5、6A8、7C10、8F6、10A12、10A12Sおよび13C4)；Kuhne et al.，US 8,450,464 B2(2013；CXCR4；特に、抗体F7、F9、D1およびE2)；およびKorman et al.，US 7,943,743 B2(2011；PD-L1；特に、抗体3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7および13G4)；に開示され、これらの開示内容は、出典明示により本明細書に組み込まれる。好ましくは、前記抗体は、抗メソテリン抗体である。
【００７４】
抗体であることに加えて、Ｚはまた、抗体フラグメント(例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')２、ＦｄまたはＦｖ)または抗体擬体、例えばアフィボディ、ドメイン抗体(ｄＡｂ)、ナノボディ、ユニボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、バーサボディ(ｖｅｒｓａｂｏｄｙ)、デュオカリン、リポカリンまたはアビメールでもあり得る。
【００７５】
Ｚ上の異なる幾つかの反応基のいずれか１つは、例えばリジン残基内のε−アミノ基、ペンダント炭水化物基、アスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖上のカルボン酸基、システイン−システインジスルフィド基およびシステインチオール基などのコンジュゲーション部位であり得る。コンジュゲーションに適切な抗体の反応基についてのレビューは、例えば、Garnett，Adv. Drug Delivery Rev. 2001，53，171-216およびDubowchik and Walker，Pharmacology & Therapeutics 1999，83，67-123を参照されたい；これらの開示内容は、出典明示により本明細書に組み込まれる。
【００７６】
殆どの抗体は、複数のリジン残基を有しており、リジンのε−アミノ基により、アミド、ウレア、チオウレアまたはカルバメート結合を介してコンジュゲートされ得る。
【００７７】
システイン側鎖中のチオール(−ＳＨ)基を用いて、いくつかの方法によりコンジュゲートを形成できる。前記チオール基は、この基とリンカー上のチオール基の間にジスルフィド結合を形成するために使用できる。別の方法とは、リンカー上のマレイミド基へのマイケル付加反応である。
【００７８】
通常、抗体は、システイン残基を有しているが、それらの全てのシステインが鎖間または鎖内のジスルフィド結合に関与しており、遊離のチオール基は存在しない。遊離のチオール基を生成させるために、元々のジスルフィド基を還元することができる。例えば、Packard et al.，Biochemistry 1986，25，3548；King et al.，Cancer Res. 1994，54，6176；and Doronina et al.，Nature，Biotechnol. 2003，21，778を参照されたい。あるいは、抗体を突然変異させることによるか、システインを別のアミノ酸に代えて置き換えることによるか、またはシステインをポリペプチド鎖中に導入することにより、遊離の−ＳＨ基を有するシステインを導入することができる。例えば、Eigenbrot et al.，US 7,521,541 B2(2009)；Chilkoti et al.，Bioconjugate Chem. 1994，5，504；Urnovitz et al.，US 4,698,420(1987)；Stimmel et al.，J. Biol. Chem. 2000，275，30445；Bam et al.，US 7,311,902 B2(2007)；Kuan et al.，J. Biol. Chem. 1994，269，7610；Poon et al.，J. Biol. Chem. 1995，270，8571；Junutula et al.，Nature Biotechnology 2008，26，925 and Rajpal et al.，US Provisional Application No. 62/270245，filed Dec. 21，2015を参照されたい。また別の手法としては、システインは、重鎖または軽鎖のＣ末端に加えられる。例えば、Liu et al.，US 8,865,875 B2(2014)；Cumber et al.，J. Immunol. 1992，149，120；King et al，Cancer Res. 1994，54，6176；Li et al.，Bioconjugate Chem. 2002，13，985；Yang et al.，Protein Engineering 2003，16，761；and Olafson et al.，Protein Engineering Design & Selection 2004，17，21を参照されたい。このパラグラフに引用された文献の開示内容は、出典明示によりその内容が本明細書に組み込まれる。
【００７９】
リンカーおよびそれらの成分
上記の通り、リンカーは、３つまでの要素：開裂可能な基Ｃおよび任意のスペーサーＸＺおよびＸＤを含む。
【００８０】
基Ｃは、生理学的条件下において開裂可能である。好ましくは、基Ｃは、コンジュゲートが血中で循環している間は比較的安定であるが、コンジュゲートが目的とするその作用部位に到達した時点で容易に開裂される。
【００８１】
好ましい基Ｃは、血清中のプロテアーゼによる開裂とは異なり、標的細胞内部のプロテアーゼにより選択的に開裂されるペプチドである。通常、該ペプチドは、１〜２０個のアミノ酸、好ましくは１〜６個のアミノ酸、より好ましくは２〜３個のアミノ酸を含む。アミノ酸は、天然および／または非天然のα−アミノ酸であってもよい。天然アミノ酸は、遺伝子コードによりコードされたアミノ酸、加えてそれらから誘導されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、シトルリンおよびＯ−ホスホセリンである。本明細書において、用語「アミノ酸」とは、アミノ酸アナログおよびアミノ酸擬体も包含する。アナログとは、Ｒ基が天然アミノ酸の中に存在する基ではないこと以外、天然アミノ酸の一般構造Ｈ２Ｎ(Ｒ)ＣＨＣＯ２Ｈと同じ構造を有する化合物である。アナログの例示は、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニン−スルホキシドおよびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。アミノ酸擬体は、α−アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、α−アミノ酸と類似した様式で機能する化合物である。アミノ酸は、遺伝子的にコードされたアミノ酸の「Ｌ」立体配置として、同様にエナンチオマーの「Ｄ」立体配置としても存在し得る。
【００８２】
好ましくは、Ｃは、プロテアーゼに対して開裂認識配列であるアミノ酸配列を含有する。多くの開裂認識配列は、当業者には知られている。例えば、Matayoshi et al. Science 247：954(1990)；Dunn et al. Meth. Enzymol. 241：254(1994)；Seidah et al. Meth. Enzymol. 244：175(1994)；Thornberry，Meth. Enzymol. 244：615(1994)；Weber et al. Meth. Enzymol. 244：595(1994)；Smith et al. Meth. Enzymol. 244：412(1994)；and Bouvier et al. Meth. Enzymol. 248：614(1995)を参照されたい；これらの内容は、出典明示により、本明細書にその内容が組み込まれる。
【００８３】
基Ｃは、がん近傍において細胞外マトリックスに存在するプロテアーゼ、例えば、死亡がん細胞周辺で放出されたプロテアーゼまたはがん細胞により分泌された腫瘍関連プロテアーゼにより開裂されるように選択され得る。細胞外の腫瘍関連プロテアーゼの例は、プラスミン、マトリックスメタロプロテアーゼ(ＭＭＰ)、チメット(ｔｈｉｍｅｔ)オリゴペプチダーゼ(ＴＯＰ)およびＣＤ１０である。例えば、Trouet et al.，US 7,402,556 B2(2008)；Dubois et al.，US 7,425,541 B2(2008);およびBebbington et al.，US 6,897,034 B2(2005)を参照されたい。カテプシンＤは、通常、細胞内部に存在するリソソーマル酵素であるが、腫瘍環境内に存在することもあり、これはおそらく死亡がん細胞により放出されるのであろう。
【００８４】
酵素により為されるように設計されたコンジュゲートのために、Ｃは、好ましくは、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、ＬおよびＳなどのプロテアーゼ、特にカテプシンＢによる開裂のために選択されたアミノ酸配列を含む。カテプシンＢの開裂可能なペプチドの例は、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−ＧｌｎおよびＡｓｐ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ(ここで、アミノ酸配列は、前後関係が別段明確に記載されていない限り、Ｈ２Ｎ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ２Ｈのように、Ｎ−から−Ｃ方向に記載されている)。Dubowchik et al., Biorg. Med.Chem. Lett. 1998, 8, 3341；Dubowchik et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 3347;およびDubowchik et al.，Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855を参照されたい；これらの開示内容は、出典明示により本明細書の一部に組み込まれる。
【００８５】
ペプチジルリンカーを開裂するために利用し得る別の酵素はレグマインであり、これはＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎで優先的に開裂するリソソーマルシステインプロテアーゼである。
【００８６】
一実施態様において、基Ｃは、２つのアミノ酸配列、−ＡＡ２−ＡＡ１−(式中、ＡＡ１は、リジン、アルギニンまたはシトルリンであり、ＡＡ２は、フェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシンである)を含むペプチドである。別の実施態様において、Ｃは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、ＳｅｒおよびＧｌｕからなる群から選択される１〜３つのアミノ酸の配列から構成される。より好ましくは、Ｃは、前記基から選択される２〜３つのアミノ酸ペプチドである。
【００８７】
１つのアミノ酸からなる開裂可能な基Ｃの製造および設計は、Ｃｈｅｎら(US 8,664,407 B2(2014))に開示されており、これらの開示内容は、出典明示により本明細書に組み込まれる。
【００８８】
基Ｃは、ＺまたはＤに直接結合され得る；即ち、スペーサーＸＺまたはＸＤは、場合により非存在であり得る。
【００８９】
存在する場合、スペーサーＸＺは、ＣおよびＺの間の空間的分離を提供して、前者が後者による抗原結合と立体的に干渉するか、または後者が前者の開裂を立体的に干渉することを防ぐ。さらに、スペーサーＸＺを用いて、コンジュゲートに高い溶解性または低い凝集性という特性を与えることができる。スペーサーＸＺは、あらゆる数の組合せでアセンブルされ得る１以上のモジュラーセグメントを含み得る。スペーサーＸＺとして適切なセグメントの例は、以下：
【化３２】
2021533135.tif 000041
(ここで、下付き文字ｇは、０または１であり、下付き文字ｈは、１〜２４であり、好ましくは２〜４である)
およびその組合せである。これらのセグメントを、下記に示したように合わせることもできる：
【化３３】
2021533135.tif 000042
【００９０】
スペーサーＸＤは、もし存在するならば、ＣおよびＤの間の空間的分離を提供して、後者が、前者の開裂と立体的または電気的に干渉することを防ぐ。スペーサーＸＤは、追加の分子量および化学的官能基をコンジュゲートに導入することにも役立ち得る。一般的には、追加の質量および官能基は、コンジュゲートの血清半減期およびその他の特性に影響を及ぼす。このように、スペーサー基の適正な選択により、コンジュゲートの血清半減期を調節することができる。スペーサーＸＤもまた、スペーサーＸＺについて上記したものと同様に、モジュラーセグメントからアセンブルされ得る。
【００９１】
スペーサーＸＺおよび／またはＸＤは、存在している場合、各々ＺとＣの間またはＤとＣの間に、好ましくは４〜２５個の原子、より好ましくは４〜２０個の原子の直線状の間隔を提供する。
【００９２】
リンカーは、抗体および薬剤の共有結合に加えて、別の機能を果たし得る。例えば、リンカーは、ポリ(エチレングリコール)(「ＰＥＧ」)基を含有し得る。コンジュゲーション工程には、通常、水性媒体中での薬剤−リンカーおよび抗体のカップリング工程が含まれるので、ＰＥＧ基の多くは、薬剤−リンカーの水溶性を増強する。また、ＰＥＧ基は、溶解度を増強し得るか、または得られるＡＤＣの凝集を減少し得る。ＰＥＧ基が存在する場合、ＰＥＧ基は、スペーサーＸＺまたはＸＤ、あるいは両方のいずれかに組み込まれ得る。ＰＥＧ基中のリピート単位数は、２〜２０、好ましくは４〜１０であり得る。
【００９３】
スペーサーＸＺまたはＸＤ、あるいは両方のいずれかは、自己崩壊基を含み得る。自己崩壊基とは、(１)Ｃ、およびＺまたはＤのいずれかに結合される基、かつ(２)基Ｃからの開裂により、場合によってはＺまたはＤからの開裂により、自己崩壊基自体の結合を開裂させる反応経路が開始されるような構造を有する基である。言い換えると、ＺまたはＤとは遠い部位での反応(基Ｃからの開裂)は、ＸＺ−ＺまたはＸＤ−Ｄの結合を同じ様に開裂させる。自己崩壊基の存在は、スペーサーＸＤの場合には望ましい。この理由は、コンジュゲートの開裂後に、スペーサーＸＤまたはその部分がＤとの結合を維持していた場合、Ｄの生物学的活性が損なわれる可能性があるためである。自己崩壊基の使用は、特に、開裂可能な基Ｃがポリペプチドである場合に必要であり、この場合、ペプチド開裂と立体的または電気的な干渉からＤを保護するために、自己崩壊基は、通常、ポリペプチドに隣接して配置される。
【００９４】
Ｄのヒドロキシル基またはアミノ基に結合された自己崩壊基(ｉ)−(ｖ)の例を、以下に示す：
【化３４】
2021533135.tif 000043
。
【００９５】
自己崩壊基は、点線ａおよびｂ(または点線ｂおよびｃ)の間にある構造であり、隣接する構造的特徴は文脈に示される。自己崩壊基(ｉ)および(ｖ)は、Ｄ−ＮＨ２(即ち、コンジュゲーションはアミノ基を介する)と結合され、一方で自己崩壊基(ｉｉ)、(ｉｉｉ)および(ｉｖ)は、Ｄ−ＯＨ(即ち、コンジュゲーションは、ヒドロキシル基またはカルボキシル基による)と結合される。酵素[構造(ｉ)−(ｖ)の例においてはペプチダーゼ、および構造(ｖｉ)の例においてはβ−グルクロニダーゼ]による点線ｂでの結合の開裂により、点線ａで結合の開裂をもたらす自己崩壊の反応経路が開始され、その結果、この場合はＤ−ＯＨまたはＤ−ＮＨ２が放出される。例として、構造(ｉ)〜(ｉｖ)についての自己崩壊メカニズムを、以下に示す：
【化３５】
2021533135.tif 000044
。
【００９６】
言い換えれば、自己崩壊基の一部分にて、最初の化学結合の開裂がおこり、自己崩壊基の異なる部分で、第二の化学結合(自己崩壊基と薬剤とを連結する結合)の開裂へと至る工程経路が順に開始されて、薬剤が放出される。
【００９７】
幾つかの例において、自己崩壊基は、構造(ｖｉｉ)に示されるように、縦一列に用いられ得る。そのような場合、点線ｃでの開裂により、点線ｂとｃとの間の１,６−排除反応により、基の自己崩壊が始まり、その後に環化排除反応により点線ａとｂとの間に基の自己崩壊がおこる。自己崩壊基に関する更なる開示については、Carl et al.，J. Med. Chem. 1981，24，479；Carl et al.，WO 81/01145(1981)；Dubowchik et al.，Pharmacology & Therapeutics 1999，83，67；Firestone et al.，US 6,214,345 B1(2001)；Toki et al.，J. Org. Chem. 2002，67，1866；Doronina et al.，Nature Biotechnology 2003，21，778(erratum，p. 941)；Boyd et al.，US 7,691,962 B2；Boyd et al.，US 2008/0279868 A1；Sufi et al.，WO 2008/083312 A2；Feng，US 7,375,078 B2；Jeffrey et al.，US 8,039,273；およびSenter et al.，US 2003/0096743 A1を参照されたい；これらの開示内容は、出典明示により本明細書に組み込まれる。
【００９８】
別の実施態様において、ＺおよびＤは、開裂出来ないリンカーにより結合される(即ち、Ｃは存在しない)。Ｄの代謝により、最終的には、リンカーをＤの生物学的活性と干渉しない低分子の付加基にまで分解される。
【００９９】
コンジュゲーション技術
本明細書において開示されたＴＬＲ７アゴニストのコンジュゲートは、好ましくは、Ｄおよびリンカー(ＸＤ)ａ(Ｃ)ｃ(ＸＺ)ｂ(式中、ＸＤ、Ｃ、ＸＺ、ａ、ｂおよびｃは、式(ＩＩ)に定義された通りである)を含む化合物を最初に製造して、
式(Ｖ)：
【数２】
2021533135.tif 000045
(式中、Ｒ３１は、Ｚ上の相補的官能基と反応するために適切な官能基である)
により示される薬剤−リンカー化合物を形成して、コンジュゲートを形成することにより製造される。適切な基Ｒ３１の例は、アミノ、アジド、チオール、シクロオクチン、
【化３６】
2021533135.tif 000046
(式中、Ｒ３２は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、メシレートまたはトシレートであり、Ｒ３３は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、ＯＨ、−Ｏ−Ｎ−スクシンイミジル、−Ｏ−(４−ニトロフェニル)、−Ｏ−ペンタフルオロフェニルまたは−Ｏ−テトラフルオロフェニルである)
が包含される。適切な基：Ｄ−(ＸＤ)ａＣ(ＸＺ)ｂ−Ｒ３１を製造するために広く使用できる化学的手法は、Ng et al.，US 7,087,600 B2(2006)；Ng et al.，US 6,989,452 B2(2006)；Ng et al.，US 7,129,261 B2(2006)；Ng et al.，WO 02/096910 A1；Boyd et al.，US 7,691,962 B2；Chen et al.，US 7,517,903 B2(2009)；Gangwar et al.，US 7,714,016 B2(2010)；Boyd et al.，US 2008/0279868 A1；Gangwar et al.，US 7,847,105 B2(2010)；Gangwar et al.，US 7,968,586 B2(2011)；Sufi et al.，US 8,461,117 B2(2013)；およびChen et al.，US 8,664,407 B2(2014)に開示されており、これらの開示内容は、出典明示によりその内容は本明細書に組み込まれる。
【０１００】
好ましい反応性官能基−Ｒ３１は、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＨ、マレイミド、シクロオクチン、アジド(−Ｎ３)、ヒドロキシルアミノ(−ＯＮＨ２)またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドである。特に好ましい官能基−Ｒ３１は、
【化３７】
2021533135.tif 000047
である。
【０１０１】
−ＯＨ基は、抗体上のカルボキシ基(例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖上の)とエステル化され得る。
【０１０２】
−ＣＯ２Ｈ基は、−ＯＨ基とエステル化され得るか、または抗体上のアミノ基(例えば、リジン側鎖上で)とアミド化され得る。
【０１０３】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基は、機能的に活性化されたカルボキシル基であり、アミノ基(例えば、リジンからの)との反応により好都合にアミド化され得る。
【０１０４】
マレイミド基は、マイケル付加反応において、抗体上の−ＳＨ基(例えば、システインによるか、またはスルフィドリル官能基を導入するような抗体の化学修飾による)とコンジュゲートされ得る。
【０１０５】
抗体がコンジュゲーションに利用できるシステイン−ＳＨを有さない場合、リジン残基の側鎖内のε−アミノ基を、２−イミノチオランまたはＮ−スクシンイミジル−３−(２−ピリジルジチオ)プロピオネート(「ＳＰＤＰ」)と反応させて、遊離チオール(−ＳＨ)基を導入して、いわばシステイン代用物を作出することができる。チオール基を、マレイミドまたは他の求核試薬アクセプター基と反応させて、コンジュゲーションを行うことができる。２−イミノチオランを用いた場合のこのメカニズムを下記に示した。
【化３８】
2021533135.tif 000048
【０１０６】
通常、抗体あたりに２〜３つのチオールのチオール化レベルが達成される。代表的な方法については、Cong et al.，US 8,980,824 B2(2015)を参照されたい；出典明示により、その内容は本明細書に組み込まれる。
【０１０７】
逆の配置では、抗体Ｚを、Ｎ−スクシンイミジル ４−(マレイミドメチル)−シクロヘキサンカルボキシレート(「ＳＭＣＣ」)またはそのスルホン化バリアントであるスルホ−ＳＭＣＣ(これらの両方は、Sigma-Aldrichから購入できる)で修飾して、それらにマレイミド基を導入することができる。その後、コンジュゲーションを、リンカー上の−ＳＨ基を有する薬剤-リンカー化合物を用いて行い得る。
【０１０８】
別のコンジュゲーション方法は、銅不含の「クリック・ケミストリー」を用いるものであり、アジド基が直線状シクロオクチンと付加環化して、１,２,３−トリアゾール環を形成する。例えば、Agard et al.，J. Amer. Chem. Soc. 2004，126，15046；Best，Biochemistry 2009，48，6571を参照されたい；この開示内容は、出典明示により本明細書に組み込まれる。アジドは、抗体上に存在していても、あるいは逆に、薬剤−リンカー基上のシクロオクチンに存在していてもよい。好ましいシクロオクチン基は、ジベンゾシクロオクチン(ＤＩＢＯ)である。ＤＩＢＯ基を有する様々な試薬は、Invitrogen/Molecular Probes，Eugene，Oregonから購入できる。この反応について、ＤＩＢＯ基が、抗体(Ａｂ)：
【化３９】
2021533135.tif 000049
に結合されている例として、クリック・ケミストリー・コンジュゲーションを上記に示す。
【０１０９】
また別のコンジュゲーション技術には、薬剤基中の反応性官能基とのコンジュゲーションのための官能基を提供する非天然アミノ酸を抗体に導入することが挙げられる。例えば、非天然アミノ酸であるｐ−アセチルフェニルアラニンは、Tian et al.,WO 2008/030612 A2(2008)に教示の通り、抗体または他のポリペプチドに導入され得る。ｐ−アセチルフェニルアラニン内のケトン基は、リンカー−薬剤基上のヒドロキシルアミノ基とオキシムを形成することによるコンジュゲーション基として存在し得る。あるいは、非天然アミノ酸であるｐ−アジドフェニルアラニンを抗体に組み込んで、上記に説明したようにクリック・ケミストリーによるコンジュゲーションのためにアジド官能基を提供できる。非天然アミノ酸もまた、Goerke et al.，US 2010/0093024 A1(2010) and Goerke et al.，Biotechnol. Bioeng. 2009，102(2)，400-416に教示されている通り、細胞不含法を用いて抗体または他のポリペプチド中に組み込まれ得る。前記開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。即ち、一実施態様において、コンジュゲートを作成するために使用される抗体は、非天然アミノ酸により置き換えられた１以上のアミノ酸を有しており、これは、好ましくは、ｐ−アセチルフェニルアラニンまたはｐ−アジドフェニルアラニン、より好ましくは、ｐ−アセチルフェニルアラニンである。
【０１１０】
また別のコンジュゲーション技術は、酵素トランスグルタミナーゼ(好ましくは、Streptomyces mobaraensis由来のバクテリアトランスグルタミナーゼまたはＢＴＧ)を使用する技術である(Jeger et al.，Angew. Chem. Int. Ed. 2010，49，9995)。ＢＴＧは、グルタミンの側鎖のカルボキサミド(アミンアクセプター)およびアルキレンアミノ基(アミンドナー)(例えば、リジンまたは５−アミノ−ｎ−ペンチル基のε−アミノ基であり得る)との間にアミド結合を形成する。典型的なコンジュゲーション反応において、グルタミン残基は、抗体上に存在しており、一方でアルキレンアミノ基は、下記に示したようなリンカー−薬剤基上に存在する：
【化４０】
2021533135.tif 000050
【０１１１】
ポリペプチド鎖上のグルタミン残基の位置は、ＢＴＧ媒介性のアミド基転移に対するその感受性に大きな影響を及ぼす。抗体上のグルタミン残基は、通常ＢＴＧ基質ではない。しかし、抗体が脱グリコシル化されれば[該グリコシル化部位は、重鎖のアスパラギン２９７(Ｎ２９７；ＥＵインデックスによるナンバリング、Kabat et al.，"Sequences of proteins of immunological interest." 5th ed.，Pub. No. 91-3242，U.S. Dept. Health & Human Services，NIH，Bethesda，Md.，1991；以後「Ｋａｂａｔ」に記載した通り)である]、グルタミン２９５(Ｑ２９５)付近がＢＴＧ感受性となる。抗体は、ＰＮＧａｓｅ Ｆ(ペプチド-Ｎ-グリコシダーゼＦ)を用いる処理により、酵素的に脱グリコシル化され得る。あるいは、定常領域にＮ２９７Ａ突然変異を導入することにより、Ｎ２９７グリコシル化部位を排除して、グリコシドを含まずに抗体を合成できる。さらに、Ｎ２９７Ｑ置換は、グリコシル化を排除するのみならず、アミンアクセプターでもある第二のグルタミン残基を(位置２９７で)誘導できることも判っている。そのため、一実施態様において、抗体は脱グリコシル化される。別の実施態様において、抗体はＮ２９７Ｑ置換を有する。合成後の修飾またはＮ２９７Ａ突然変異の導入による脱グリコシル化によって、２つのＢＴＧ反応性グルタミン残基／抗体(重鎖あたりに１ヶ所、２９５位置で)が生成されるが、一方でＮ２９７Ｑ置換を有する抗体は、４つのＢＴＧ−反応性グルタミン残基(重鎖あたりに２ヶ所、位置２９５および２９７で)を有することは当業者には理解されるであろう。
【０１１２】
抗体は、グルタミン含有ペプチドまたは「タグ(ｔａｇ)」(例えば、Pons et al.，US 2013/0230543 A1(2013)およびRao-Naik et al.，WO 2016/144608 A1教示されている通り)を抗体に導入することにより、ＢＴＧ媒介性のコンジュゲーションに感受性となり得る。
【０１１３】
補完的手法において、ＢＴＧの基質特異性は、Rao-Naik et al.，WO 2017/059158 A1(2017)に教示された通り、そのアミノ酸配列を改変することにより、非修飾抗体中のグルタミン２９５と反応できるように変わり得る。
【０１１４】
一方で、最も広く利用可能なバクテリアのトランスグルタミナーゼは、S. mobaraensis由来のものであるが、多少異なる基質特異性を有するその他のバクテリア由来のトランスグルタミナーゼも、例えばStreptoverticillium ladakanum由来のトランスグルタミナーゼなども検討され得る(Hu et al.，US 2009/0318349 A1(2009)，US 2010/0099610 A1(2010)およびUS 2010/0087371 A1(2010))。
【０１１５】
第一級または第二級アルキルアミンを有する本発明のＴＬＲ７アゴニストは、特に、コンジュゲートに使用するために適切であり、第二級アミンはリンカーに結合するための官能基を提供する。かかるＴＬＲ７アゴニスト-リンカー化合物の例は、化合物４１であって、これは、化合物ＩＩａ−０１から製造することができ、また酵素的に開裂可能なリンカーを含有している。図５は、化合物４１を製造することができるスキームを示す。
【０１１６】
【化４１】
2021533135.tif 000051
【０１１７】
非酵素的に開裂可能なリンカーを含有するＴＬＲ７アゴニスト−リンカー化合物の例は、化合物４３であり、これもまた、化合物ＩＩａ−０１から製造することができる。図６は、化合物４３を合成するための経路を示す。
【化４２】
2021533135.tif 000052
【０１１８】
化合物４１および４３はどちらも、第一級アルキルアミノ基を含有しており、これによりトランスグルタミナーゼを用いてコンジュゲーションすることが可能である。適切なコンジュゲーション方法は、下記の実施例に記述される。
【０１１９】
コンジュゲーションは、Levary et al.，PLoS One 2011，6(4)，e18342；Proft，Biotechnol. Lett. 2010，32，1-10；Ploegh et al.，WO 2010/087994 A2(2010);およびMao et al.，WO 2005/051976 A2(2005)に教示される通り、酵素ソルターゼＡを用いても実施され得る。ソルターゼＡの認識モチーフ(通常ＬＰＸＴＧであって、Ｘは任意の天然アミノ酸である)は、リガンドＺに存在していてもよく、また求核性アクセプターモチーフ(通常、ＧＧＧ)は、式(ＩＩＩ)中の基Ｒ３１であってもよい；あるいは、その逆であってもよい。
【０１２０】
ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート
前記技術を用いて、ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート、例えば下記に示されるコンジュゲートが、製造され得る：
【化４３】
2021533135.tif 000053
【化４４】
2021533135.tif 000054
(式中、ｍは、１、２、３または４であり、Ａｂは抗体である)。
【０１２１】
ペグ化
ポリ(エチレングリコール)(ＰＥＧ)鎖および薬剤(「ＰＥＧ化」)の結合により、後者の薬物動態特性を改善することができる。薬剤の循環半減期は、時には一桁以上も増長されると同時に、目的とする治療効果を達成するのに必要な投薬量を低下することができる。また、ＰＥＧ化により、薬剤の代謝分解を減らし、その免疫原性を低下させることもできる。概要として、Kolate et al.，J. Controlled Release 2014，192，167を参照されたい。
【０１２２】
当初ＰＥＧ化は生物製剤に適用された。２０１６年の時点では、１０以上のＰＥＧ化生物製剤が承認されていた(Turecek et al.，J. Pharmaceutical Sci. 2016，105，460.)。最近では、生物製剤に対するこのコンセプトの適用が成功したことが刺激となって、低分子薬のペグ化が注目されている。前記の利点に加えて、ＰＥＧ化低分子薬は、溶解度を増加させて、毒性効果を低下させ得る(Li et al. Prog. Plymer Sci. 2013，38，421)。
【０１２３】
本明細書に開示された化合物は、ＰＥＧ化され得る。化合物が、脂肪族第一級または第二級アミンあるいは脂肪族ヒドロキシル、例えば、矢印で示される位置で下記化合物の場合、化合物は、従来技術を利用して、カルボキシ含有ＰＥＧ分子(例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ＨＡＴＵ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなど)と、エステル、アミド、カーボネートまたはカルバメート基を介してＰＥＧ化され得る。医薬分子をＰＥＧ化するための様々な別の方法は、Alconcel et al.，Polymer Chem. 2011，2，1442に開示されており、この開示内容は、出典明示によりその内容を本明細書の一部に組み込まれる。
【化４５】
2021533135.tif 000055
【０１２４】
必要であれば、本明細書に開示されたＴＬＲ７アゴニストを、自己崩壊基を含む酵素的に開裂可能なリンカーを介してＰＥＧ化して、所望の様式にて非ＰＥＧ化アゴニストを放出させることができる。さらに、ＰＥＧ含有分子が、タンパク質に結合するための適切な官能基、例えばアミンを持っている場合は、ＰＥＧ化は、抗体などのタンパク質とのコンジュゲーションと組み合わせることができる。このタンパク質は、更なる治療的機能を提供できるか、または、このタンパク質が抗体であれば、ターゲティング機能を提供できる。これらの概念は、以下の反応手順に示され、ＴＬＲ７−ＮＨ−Ｒは、一般的に、ＴＬＲ７アゴニスト：
【化４６】
2021533135.tif 000056
を示す。
【０１２５】
上記した反応手順において、バリン−シトルリン(Ｖａｌ−Ｃｉｔ)ジペプチドは、自己崩壊スペーサーとして機能するｐ−アミノベンジルオキシカルボニル(ＰＡＢＣ)基を有する酵素カテプシンＢにより開裂され得る。コンジュゲーションのための官能基はアミン基であり、Ｆｍｏｃ基により一時的に保護される。コンジュゲーションは、アシルアクセプターとして作用するグルタミン(Ｇｌｎ)側鎖を有する酵素トランスグルタミナーゼにより実施される。下付き文字ｘは、ＰＥＧのリピート単位数を示しているが、以下に説明するようにＰＥＧ化の目的に依って大きく変わり得る。ある目的のためには、ｘは比較的小さい数、例えば２、４、８、１２または２４であり得る。別の目的のためには、ｘは大きい数、例えば約４５〜約９１０である。
【０１２６】
この手順が例示であって、当業者には周知のその他の要因−ペプチド、自己崩壊基、コンジュゲーション方法、ＰＥＧの長さなど−を用い得ることは、当業者には理解されよう。上記の手順は、ＰＥＧ化およびコンジュゲーションを組み合わせているが、ＰＥＧ化はコンジュゲーションを必要としない(または、必要としてもよい)ことは当業者には理解されよう。
【０１２７】
化合物に脂肪族ヒドロキシル基または脂肪族の第一級または第二級アミンが無い場合、化合物を、ピリミジン環上の芳香族アミンで更にＰＥＧ化することができる。この部位でＰＥＧ化するための方法は、Zarraga,US 2017/0166384 A1(2007)に開示されており、この開示内容は、出典明示により本明細書の一部に組み込まれる。
【０１２８】
ある実施態様において、一つの分子内に連結された複数のＰＥＧ化されたアゴニストを有することが望まれ得る。例えば、４つのＰＥＧ化アームを、ペンタエリトリトール(Ｃ(ＣＨ２ＯＨ)４)で構築することができ、ＴＬＲ７アゴニストは、各ＰＥＧ化アームに結合され得る(Gao et al.，US 2013/0028857 A1(2013)を参照されたい；この開示内容は、出典明示により、出典明示により本明細書の一部に組み込まれる。
【０１２９】
薬物動態を改変するために、一般的には、ＰＥＧ基は、約２ｋＤａ(約４５の−(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)−リピート単位に相当する)〜約４０ｋＤａ(約９１０の−(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)−リピート単位に対応する)の間、より好ましくは約５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの間の式量を有するものが好ましい。即ち、上記式中の下付き文字ｘの範囲は、約４５〜約９１０である。ＰＥＧ組成物は１００％同質ではなく、むしろ分子量の分布を提示することは理解されよう。即ち、参照として、例えば「２０ｋＤａ ＰＥＧ」とは、２０ｋＤａの平均分子量を有するＰＥＧを意味する。
【０１３０】
ＰＥＧ化は、アゴニストの溶解度を改善するためにも使用され得る。そのような例には、短いＰＥＧ鎖(例えば、２、４、８、１２または２４のリピート単位を含むもの)が、使用され得る。
【０１３１】
(医薬組成物および投与)
別の態様において、本明細書で開示されている化合物またはそのコンジュゲートを、医薬的に許容される担体または賦形剤と一緒に製剤される医薬組成物が提供する。また、生物学的製剤や低分子製剤などの１以上の別の医薬活性成分を、所望により含んでもよい。本発明の医薬組成物は、別の治療薬、特に抗がん剤との併用療法にて投与することができる。
【０１３２】
医薬組成物は、1または複数の賦形剤を含んでいてもよい。使用し得る賦形剤としては、担体、界面活性剤、増粘剤または乳化剤、固体結合剤、分散助剤、懸濁補助剤、可溶化剤、着色剤、香料、コーティング剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味料、防腐剤、等張剤およびこれらの組み合わせが挙げられる。適切な賦形剤の選択および使用については、Gennaro，ed.，Remington：The Science and Practice of Pharmacy，20th Ed.(Lippincott Williams & Wilkins 2003)に教示されている。
【０１３３】
好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮への投与(例えば、注射または点滴による)に適切である。投与経路に応じて、活性化合物を、酸の作用や不活性化を起こす可能性のあるその他の自然条件から保護するために、活性化合物をある材料によりコーティングしてもよい。用語「非経口投与」とは、経腸投与および局所投与以外の投与様式を意味し、通常は注射によるものを指し、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、被膜内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内の注射および点滴が挙げられるが、これに限定するものではない。あるいは、医薬組成物は、局所的投与経路、表皮的投与経路または粘膜的投与経路などの非経口投与経路、例えば、鼻腔内、口腔内、膣内、直腸内、舌下または局所的な投与経路を介して投与することができる。
【０１３４】
医薬組成物は、無菌水溶液または分散液の形で存在し得る。また、高い薬剤濃度を達成するために適切なマイクロエマルジョン、リポソームまたはその他の規則的な構造物に製剤することもできる。前記組成物は、投与前に水中に溶解するために、凍結乾燥物の形態で提供することもできる。
【０１３５】
単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、治療対象および特定の投与方法によって異なり、一般的には、治療効果を提供する組成物の量である。一般的には、１００％のうち、この量は、約０.０１％〜約９９％の有効成分、好ましくは約０.１％〜約７０％、最も好ましくは約１％〜約３０％の有効成分を、医薬的に許容される担体と組み合わせた量である。
【０１３６】
投与レジメンは、治療効果が得られるように調整される。例えば、１回のボーラス投与を行ってもよく、数回の分割用量を経時的に投与してもよく、あるいは用量を、状況の危急性に応じた適応に合わせて、増減させて投与してもよい。非経口的な組成物は、投与を容易にし、かつ投与量を均一にするために、投薬単位形態にて製剤することが特に有利である。「投与量の単位形態」とは、治療対象に対する単回投与量として適切な物理的に分離された単位であり、各単位には、必要な医薬用担体と関連して、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物が含まれている。
【０１３７】
投与量は、宿主の体重に対して、約０.０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０.０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投与量は、０.３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、あるいは０.１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲内とすることができる。治療レジメンの例としては、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回または３〜６ヶ月に１回の投与である。好ましい投与レジメンとしては、以下の投与スケジュール：(ｉ)４週間ごとに６回投与した後、３ヶ月ごとに投与するスケジュール、(ｉｉ)３週間ごとに投与するスケジュール、(ｉｉｉ)３ｍｇ／ｋｇ体重を１回投与した後、３週間ごとに１ｍｇ／ｋｇ体重を投与するスケジュールの内の１つを用いて、１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内投与する方法が挙げられる。いくつかの方法では、投与量を、血漿中の抗体濃度が、約１〜１０００μｇ／ｍＬになるように調整し、いくつかの方法においては約２５〜３００μｇ／ｍＬになるように調整する。
【０１３８】
本発明の化合物の「治療上有効な量」とは、好ましくは、病状の重症度の軽減、病状が無い期間の頻度と期間の増加または疾患の苦痛による機能不全または障害の予防をもたらす。例えば、腫瘍を有する対象を治療するための、「治療上有効な量」は、治療を受けていない対象と比較して、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらに好ましくは少なくとも約６０％、さらに好ましくは少なくとも約８０％、腫瘍の成長を阻害する。治療上有効な量の治療用の化合物は、腫瘍の大きさを低下させるか、または対象(通常ヒトであるが、他の哺乳類でもよい)の症状を改善することができる。２以上の治療剤を併用して(組み合わせて)投与する場合、「治療上有効な量」とは、個々の治療剤ではなく、全体として、その併用に関する有効性をいう。
【０１３９】
医薬組成物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達システムなどの放出制御製剤または徐放性製剤であり得る。生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができ、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステルおよびポリ乳酸などが挙げられる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照されたい。
【０１４０】
治療用組成物は、(１) 無針皮下注射装置、(２) マイクロ注入ポンプ、(３) 経皮装置、(４) 輸液装置、および(５) 浸透圧装置などの医療装置を介して投与することができる。
【０１４１】
ある実施態様において、医薬組成物は、生体内での適切な分布を確保するように製剤され得る。例えば、本発明の治療用化合物が、血液脳関門を通過することを確実にするために、リポソームに製剤化することが可能であり、このリポソームは、特定の細胞または器官への選択的輸送を強化するために、標的化部位をさらに含むこともできる。
【０１４２】
(産業上利用性)
本明細書に開示されたＴＬＲ７アゴニスト化合物は、ＴＬＲ７の活性化によって改善され得る疾患または症状を治療するために使用され得る。
【０１４３】
一実施態様において、ＴＬＲ７アゴニストは、抗がん免疫療法剤(免疫腫瘍剤としても知られている)と組み合わせて使用される。抗がん免疫療法剤は、体の免疫系を刺激して、特にＴ細胞を活性化することにより、がん細胞を攻撃して破壊するよう機能する。免疫系には多数のチェックポイント(制御)分子が存在し、正当な標的細胞を攻撃すること、ならびに健康な正常細胞を攻撃しないようにすることのバランスを保っている。チェックポイント分子の中には、刺激因子(アップレギュレーター)となるものがあり、これが作用するとＴ細胞の活性化が促進され、免疫反応が増強する。一方で、阻害剤(ダウンレギュレーターまたはブレーキ)となるものも存在し、これが作用するとＴ細胞の活性化が阻害され、免疫反応が抑制される。刺激性チェックポイント分子にアゴニストの免疫療法薬が結合すると、チェックポイント分子が活性化され、がん細胞に対する免疫応答が増強される。逆に、阻害性チェックポイント分子にアゴニストの免疫療法剤を結合させると、チェックポイント分子による免疫系のダウンレギュレーションを防ぎ、がん細胞に対して有効な反応を維持することができる。刺激性チェックポイント分子の例としては、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８Ｈなどが挙げられる。阻害性チェックポイント分子の例としては、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１、ＣＤ９６、ＴＩＭ−４が挙げられる。
【０１４４】
抗がん免疫療法剤の作用機序が何であれ、ＴＬＲ７の活性化などによる免疫系の全般的なアップレギュレーションによって、その効果を増強することができる。従って、一実施態様においては、本明細書は、抗がん免疫療法剤と本明細書に開示されるＴＬＲ７アゴニストとの治療上有効な組み合わせを、前記がんに罹患している患者に投与することを特徴とする、がんを治療する方法を提供する。投与のタイミングは、同時に、連続的に、または別々に行うことができる。投与様式は、全身または局所である。ＴＬＲ７アゴニストは、コンジュゲートを介して、標的化の手法で送達され得る。
【０１４５】
上記のような併用療法によって治療できるがんには、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、カポジ肉腫、リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、テラトイド／ラブドイド腫瘍、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄増殖性新生物、大腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭がん、胆管がん、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、眼がん、卵管がん、胆嚢がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍、ヘアリーセル白血病、頭頸部がん、心臓がん、肝臓がん、下咽頭がん、膵臓がん、腎臓がん、喉頭がん、慢性骨髄性白血病、口唇/口腔がん、肺がん、メラノーマ、メルケル細胞がん、中皮腫、口腔がん、口唇がん、骨肉腫、卵巣がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、軟部組織肉腫、精巣がん、咽喉がん、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、膣がん、外陰がんなどが挙げられる。
【０１４６】
本明細書で開示されている併用療法に使用できる抗がん免疫療法剤には、以下のものが挙げられる：ＡＭＧ５５７、ＡＭＰ−２２４、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ９３６５５９、セミプリマブ、ＣＰ−８７０８９３、ダセツズマブ、ダルバルマブ、エノブリツズマブ、ガリキシマブ、ＩＭＰ３２１、イピリムマブ、ルカツムマブ、ＭＥＤＩ−５７０、ＭＥＤＩ−６３８３、ＭＥＤＩ−６４６９、ミューロモナブ−ＣＤ３、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、スパルタリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ウトミルマブ、バルリルマブ、ボンレラロリズマブ。以下の表Ｃには、各々別名(ブランド名、旧名称、リサーチコードまたは同義語)および各々が標的とするチェックポイント分子を示す。
【０１４７】
【表７】
2021533135.tif 000057
【０１４８】
ＴＬＲ７アゴニストとの併用療法の一実施態様において、抗がん免疫療法剤は、アンタゴニスト性の抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。がんは、肺がん(非小細胞肺がんを含む)、膵臓がん、腎臓がん、頭頸部がん、リンパ腫(ホジキンリンパ腫を含む)、皮膚がん(メラノーマおよびメルケル皮膚がんを含む)、尿路上皮がん(膀胱がんを含む)、胃がん、肝細胞がんまたは大腸がんであり得る。
【０１４９】
ＴＬＲ７アゴニストとの併用療法の別の実施態様においては、抗がん免疫療法剤は、アンタゴニスト性の抗ＣＴＬＡ−４抗体、好ましくはイピリムマブである。
【０１５０】
ＴＬＲ７アゴニストとの併用療法の別の実施態様においては、抗がん免疫療法剤は、アンタゴニスト性の抗ＰＤ−１抗体であり、好ましくはニボルマブまたはペムブロリズマブである。
【０１５１】
本明細書に開示したＴＬＲ７アゴニストは、ワクチンアジュバントとしても有用である。
【０１５２】
(生物学的活性)
ＴＬＲ７アゴニストとして本明細書に開示された化合物の生物学的活性は、以下の方法によりアッセイされ得る。
【０１５３】
ヒトＴＬＲ７アゴニスト活性アッセイ
本方法は、本明細書に開示された化合物のヒトＴＬＲ７(ｈＴＬＲ７)アゴニスト活性をアッセイするための方法を記載するものである。
【０１５４】
ヒトＴＬＲ７分泌型胚性アルカリホスファターゼ(ＳＥＡＰ)レポーター導入遺伝子を有する遺伝子組換え型ヒト胎児腎由来ブルー細胞(ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ(登録商標)ＴＬＲ細胞；Invitrogen)を、１０％ウシ胎児血清(Sigma)を加えた非選択培地(ＤＭＥＭ高グルコース(Invitrogen)に懸濁した。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ(登録商標)ＴＬＲ７細胞を、３８４ウェル組織培養プレートの各ウェルに加えて(１５,０００細胞／ウェル)、３７℃、５％ＣＯ２で１６〜１８時間インキュベートした。化合物(１００ｎｌ)を、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ(登録商標)ＴＬＲ細胞を入れたウェルに分注し、処理済細胞を、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。１８時間処理後、各ウェルに新たに調製したＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ(登録商標)試薬(Invivogen)を、１０μｌづつ加えて、３０分間インキュベートし(３７℃で５％ＣＯ２)、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを用いてＳＥＡＰレベルを測定した(ＯＤ＝６２０ｎｍ)。半分の最大有効濃度値(ＥＣ５０；アッセイのベースラインと最大値の間の半分の反応を誘発する化合物濃度)を算出した。報告した活性は、複数回の測定の平均値であり得る。
【０１５５】
ヒト全血中のＩ型インターフェロン遺伝子(ＭＸ−１)およびＣＤ６９の誘導
Ｉ型インターフェロン(ＩＦＮ)ＭＸ−１遺伝子およびＢ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９の誘導は、ＴＬＲ７経路の活性化によりおこる下流の事象である。以下の記載は、ＴＬＲ７アゴニストへの反応におけるそれらの誘導を測定するヒト全血アッセイである。
【０１５６】
ヘパリン処理したヒト全血を、ヒト対象から採血し、１ｍＭの試験用ＴＬＲ７アゴニスト化合物で処理した。血液をＲＰＭＩ１６４０培地で希釈して、Ｅｃｈｏを用いて、１ウェルあたり１０ｎＬに分注して、最終濃度を１ｕＭとした(１０ｕＬの血液に１０ｎＬ)。シェーカーで３０秒間攪拌した後、プレートに蓋をして、３７℃のチャンバー内に１７時間静置した。固定／溶解用緩衝液を調製して(Ｈ２O中で５ｘ−＞１ｘ，３７℃に温める；Ｃａｔ＃ ＢＤ ５５８０４９)、後で使用するためのＰｅｒｍ緩衝液を(氷上で)保持した。
【０１５７】
表面マーカー染色(ＣＤ６９)のために、０.０４５ｕｌの表面Ａｂｓ：ｈＣＤ１４−ＦＩＴＣ(ThermoFisher Cat # MHCD1401)＋０.６ｕｌのｈＣＤ１９−ｅｆ４５０(ThermoFisher Cat # 48-0198-42)＋１.５ｕｌのｈＣＤ６９−ＰＥ(cat#  BD555531)＋０.８５５ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液を調製した。３ｕｌ／ウェルを添加して、１０００ｒｐｍで１分間回転させた後、シェーカーで３０秒間攪拌し、３０分間氷上に静置した。３０分後に予め温めておいた１ｘ 固定/溶解用緩衝液(７０ｕＬ)を用いて、刺激を停止して、Ｆｅｌｉｅｘ ｍａｔｅを使用して、再懸濁し(１５回、各プレート毎にチップを交換)、３７℃で１０分間インキュベートした。
【０１５８】
遠心を行い(２０００ｒｐｍ，５分)、ＨＣＳプレートウォッシャーで吸引し、シェーカーで３０秒間混合した後、ｄＰＢＳ(７０ｕＬ)を用いて洗い、２ｘ(２０００ｒｐｍ、５分)ペレット化して、ＦＡＣＳバッファー(５０ｕｌ)で洗い、１ｘ(２０００ｒｐｍ、５分)ペレット化した。シェーカーで３０秒間攪拌した。細胞内マーカー染色(ＭＸ−１)の場合には、ＢＤ Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩを５０ｕｌ加えて、シェーカーで３０秒間攪拌した。氷上で３０分間インキュベートした(暗所にて)。５０ｕＬのＦＡＣＳ緩衝液で２Ｘ洗い(ｐｅｒｍ後に、２３００ｒｐｍ×５分間の回転)、その後シェーカーで３０秒間攪拌した。ＭＸ１抗体((4812)-Ａｌｅｘａ６４７：Novus Biologicals #NBP2-43704AF647) (２０ｕｌ)＋ＦＡＣＳ緩衝液(２０ｕｌ)＋０.８ｕｌ ｈＩｇＧ＋０.０４ｕｌ ＭＸ−１を含有するＦＡＣＳバッファー(２０ｕｌ)に再懸濁した。１０００ｒｐｍで１分間回転させて、シェーカー上で３０秒間混合した後、サンプルを、暗所にてＲＴで４５分間インキュベートした後、２ｘＦＡＣＳ緩衝液で洗った(ｐｅｒｍ後、＠２３００ｒｐｍｘ５分間)。２０ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液(ウェルあたり３５ｕＬの全量)に再懸濁し、ホイルで覆い、４℃で保管して、翌日に実測した。プレートの読み取りは、ｉＱｕｅＰｌｕｓで行った。結果を、ツールセットに読み込ませて、カーブマスターでＩＣ５０曲線を作成した。ｙ軸の１００％は、レシキモドの１ｕＭに設定されている。
【０１５９】
マウス血液中のＴＮＦ−αおよびＩ型ＩＦＮ応答遺伝子の誘導
ＴＮＦ−αおよびＩ型ＩＦＮ応答遺伝子の誘導は、ＴＬＲ７経路の活性化によりおこる下流の事象である。以下の記載は、ＴＬＲ７アゴニストに反応したマウス全血中のそれらの誘導を測定するアッセイである。
【０１６０】
ヘパリン処理したマウス全血を、５：４の割合でＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐを含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて希釈した(全血５０ｕＬと培地４０ｕＬ)。希釈した血液９０ｕｌを、Ｆａｌｃｏｎ平底９６ウェル組織培養プレートに分注し、このプレートを、４℃で１時間インキュベートした。試験化合物／１００％ＤＭＳＯストックを、濃度応答アッセイと同じ培地で２０倍に希釈して、次いで１０ｕＬの希釈した試験化合物をウェルに加えて、ＤＭＳＯ終濃度を０.５％とした。コントロールウェルに、５％ＤＭＳＯを含有する１０ｕＬの培地を入れた。次いで、このプレートを、５％ＣＯ2のインキュベーター内において３７℃で１７時間インキュベートした。インキュベーション後、１００ｕＬの培養培地を各ウェルに加えた。プレートを遠心分離に供し、１３０ｕＬの上清を取り出して、ＥＬＩＳＡ(Invitrogen，Catalog Number 88-7324，Thermo-Fisher Scientific)によるＴＮＦα産生アッセイに使用した。ＤＴＴを含有するｍＲＮＡ捕捉溶解緩衝液(１ｘ)(７０ｕＬ)(the Invitrogen mRNA Catcher Plus kit(Cat#K1570-02)を、残りの７０ｕＬサンプル／ウェルに加えて、ピペッティングにより５回上下させて混合した。次いで、プレートを、室温で５〜１０分間振盪して、その後２ｕＬのプロテインキナーゼＫ(２０ｍｇ/ｍＬ)を各ウェルに加えた。次いで、プレートを、１５〜２０分間室温で振盪した。次いで、プレートを、次の処理を行うまで−８０℃で保管した。
【０１６１】
凍結サンプルを解凍し、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のｍＲＮＡ Ｃａｔｃｈｅｒ Ｐｌｕｓキット(Cat# K1570-02)を用いて、メーカーの指示書に従ってｍＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ抽出から得たｍＲＮＡの半分量を用いて、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ ＶＩＬＯ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ(Cat# 11756500)を用いた２０μＬの逆転写酵素反応において、ｃＤＮＡを合成した。ＴａｑＭａｎ(登録商標)リアルタイムＰＣＲは、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社(Applied Biosystems)のＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲシステムを用いて行った。全てのリアルタイムＰＣＲ反応は、マウスＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＭＸ１およびＰＰＩＡ遺伝子発現用に市販されている事前設計されたＴａｑＭａｎアッセイおよびＴａｑＭａｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘを用いて二回行った。ＰＰＩＡを、ハウスキーピング遺伝子として利用した。製造元の指示書に従った。全ての生データ(Ｃｔ)を、ハウスキーピング遺伝子の平均値(Ｃｔ)を用いて正規化した後、比較Ｃｔ(ΔΔＣｔ)法を用いて遺伝子の相対発現量(ＲＱ)を定量化し、実験の解析を行った。
【０１６２】
合成
本発明の実施は、以下の実施例を参照して更に理解され得るが、これらは説明を目的として提供されるものであって、制限するものではない。
【０１６３】
実施例以後の表は、本明細書に使用した頭字語および略語とその意味を記載したものである。
【実施例】
【０１６４】
実施例１−図１についての化合物の合成
本実施例および図１は、化合物ＩＩａ−０１の合成に関する。
【０１６５】
化合物３．メタノール(５０ｍＬ)中のメチル ４−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキシレート２(４ｇ，２８.３ｍｍｏｌ)およびメチル(Ｚ)−４−(２,３−ビス(メトキシカルボニル)グアニジノ)−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキシレート１を、酢酸(８.１１ｍＬ，１４２ｍｍｏｌ)で処理すると、沈殿が生じた。この反応混合物を終夜攪拌した。ナトリウムメトキシド(６４.８ｍＬ，２８３ｍｍｏｌ)を加えて、終夜攪拌を続けた。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。酢酸をゆっくりと加えて、ｐＨを５に調整すると、沈殿物が形成し、これを水、次いでアセトニトリルで洗い、乾燥させて、５.２ｇの化合物３をオフホワイトの固体として得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ７Ｈ７Ｎ５Ｏ３についての計算値＝２１０.１６(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値２１０.０(Ｍ＋Ｈ＋)．
【０１６６】
化合物４．ＤＭＳＯ(１０ｍＬ)中の化合物３(２ｇ，９.５６ｍｍｏｌ)、ブタン−１−アミン(１.８ｍＬ，９ｍｍｏｌ)およびＤＢＵ(１.６ｍＬ，１０ｍｍｏｌ)を、ＢＯＰ(５ｇ，１１ｍｍｏｌ)でゆっくりと処理した。反応混合物を、６０℃で２時間加熱した時点で、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。この反応物を、８０ｇのＣ−１８カラムを用いて０〜１００％アセトニトリル／水(０.１％ギ酸)で溶出する逆相ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ(登録商標)装置で直接精製して、化合物４を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１１Ｈ１６Ｎ６Ｏ２についての計算値＝２６５.２８(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値２６５.２(Ｍ＋Ｈ＋). 1H NMR(400 MHz，dmso-d6) δ 8.02(s，1H)，3.97(s，3H)，1.74− 1.66(m，2H)，1.49− 1.38(m，2H)，1.25(s，1H)，0.95(t，J＝7.4 Hz，3H).
【０１６７】
化合物６．ＤＭＦ(２ｍＬ)中のメチル ４−(ブロモメチル)−２−メトキシベンゾエート５(１ｇ，３.８６ｍｍｏｌ)およびシクロブタンアミン５ａ(０.６５９ｍＬ，７.７２ｍｍｏｌ)の混合物を、７０℃で３０分かけて加熱すると、アミン生成物の形成がＬＣＭＳにより確認された。過剰量の塩基を蒸発させて、ヒューニッヒ塩基(１.３４８ｍＬ，７.７２ｍｍｏｌ)を加え、次いでＢｏｃ無水物(０.８９６ｍＬ，３.８６ｍｍｏｌ)を加えた。ＬＣＭＳにより、反応の完了が認められた。溶媒を蒸発させて、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ(登録商標)装置で精製し、０.８２ｇの目的生成物６を、無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１９Ｈ２７ＮＯ５についての計算値＝３５０.４２(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値３５０.１(Ｍ＋Ｈ＋)．
【０１６８】
化合物７．０℃で、ＴＨＦ(５ｍＬ)中の化合物６(０.８２ｇ，２.３４７ｍｍｏｌ)の溶液を、ＬｉＡｌＨ４(ＴＨＦ中で２Ｍ，１.１７３ｍＬ，２.３４７ｍｍｏｌ)を用いてゆっくりと処理し、３０分間撹拌すると、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。この反応を、ゆっくりとメタノールを添加してクエンチし、ロッシェル塩溶液で２時間撹拌した。有機層を分離し、粗生成物７を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンによるシリカゲルカラムを用いるＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ(登録商標)装置で精製した。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１８Ｈ２７ＮＯ４についての計算値＝３２２.４１(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値３２２.１(Ｍ＋Ｈ＋)．
【０１６９】
化合物８および９．ＴＨＦ(３ｍＬ)中の化合物４(１００ｍｇ，０.３７８ｍｍｏｌ)、化合物７(１８２ｍｇ，０.５６８ｍｍｏｌ)、トリフェニルホスフィン(２４８ｍｇ，０.９４６ｍｍｏｌ)の混合物を、ＤＩＡＤ(０.１１０ｍＬ，０.５６８ｍｍｏｌ)を用いて５分間かけてゆっくりと処理し、Ｎ２下において、ＲＴで３０分間撹拌すると、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。溶媒を蒸発させて、粗生成物を８０ｇのＣ−１８カラムを用いる０〜１００％のアセトニトリル／水(１ｍＭ ＴＥＡＡ)で溶出する逆相ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ(登録商標)装置で精製して、化合物８および９の混合物を、白色固体として得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２９Ｈ４１Ｎ７Ｏ５についての計算値＝５６６.６９(Ｍ−Ｈ＋)，実測値５６６.３(Ｍ−Ｈ＋)．
【０１７０】
カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ ５−ＣｅｌｌｕＣｏａｔ，２１ｘ２５０ｍｍ，５ミクロン，移動相：１５％ＭｅＯＨ−ＤＥＡ／８５％ＣＯ２，フロー条件：４５ｍＬ／ｍｉｎ，１５０バール，４０℃，検出波長：２３０ｎｍ，インジェクション詳細：ＭｅＯＨ中で〜２５ｍｇ／ｍＬ(０.５ｍＬ)を用いるキラル超臨界流体クロマトグラフィーにより、異性体を分離して、１７ｍｇの化合物８および２５ｍｇの化合物９を得た。
【０１７１】
化合物８についての分析データ：1H NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ 9.61(s，2H)，7.86(s，2H)，6.94(s，2H)，6.83(s，2H)，6.63(d，J＝7.9 Hz，2H)，6.51(d，J＝7.5 Hz，2H)，5.69(s，4H)，4.39(s，4H)，3.79(s，6H)，3.63(s，6H)，3.48(d，J＝6.2 Hz，4H)，3.33(s，20H)，3.18(d，J＝5.3 Hz，1H)，2.05− 1.95(m，8H)，1.53(t，J＝7.5 Hz，7H)，1.35(s，11H)，1.23(q，J＝7.2 Hz，6H)，0.86(t，J＝7.4 Hz，6H).
化合物９についての分析データ：1H NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ 9.37(s，1H)，8.08(s，1H)，6.90(s，1H)，6.84(s，1H)，6.71(d，J＝7.7 Hz，1H)，5.48(s，2H)，4.42(s，3H)，3.78(d，J＝18.0 Hz，4H)，3.69(s，1H)，3.61(s，3H)，3.51− 3.42(m，3H)，2.06− 1.97(m，6H)，1.61− 1.47(m，6H)，1.36(s，8H)，1.34− 1.26(m，6H)，0.99(t，J＝7.1 Hz，3H)，0.94− 0.85(m，4H).
【０１７２】
化合物８ａ．化合物８(１３ｍｇ，０.０２３ｍｍｏｌ)の溶液を、ＴＨＦ(０.５ｍＬ)に溶解して、ＴＦＡ(０.０１８ｍＬ，０.２２９ｍｍｏｌ)で処理した。３０分後、ＬＣＭＳによりＢｏｃの脱保護が確認された。ＴＦＡを蒸発させて、混合物を水酸化ナトリウム(９.１６ｍｇ，０.２２９ｍｍｏｌ)で処理し、６０℃で２時間加熱した時点で、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。塩基を、６Ｍ 塩酸を徐々に添加して中和し、ＥｔＯＡｃ／水により後処理した。この粗製物質を、以下の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した；カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８，２００ｍｍ×１９ｍｍ，５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５アセトニトリル：水(１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する)；移動相Ｂ：９５：５アセトニトリル：水(１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する)；グラジエント：７％Ｂで０分保持、２０分かけて７〜４７％Ｂ、その後１００％Ｂで４分保持；流速２０ｍＬ／ｍｉｎ.
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２２Ｈ３１Ｎ７Ｏについての計算値＝４１０.５(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４１０.２(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(500 MHz，DMSO-d6) δ 7.54(s，3H)，7.02(s，3H)，6.76(d，J＝7.6 Hz，3H)，6.47− 6.38(m，5H)，5.60(d，J＝11.5 Hz，10H)，3.58(s，2H)，3.47(s，1H)，3.42(s，2H)，3.38(s，2H)，3.18− 3.11(m，2H)，2.02(s，4H)，1.90(s，5H)，1.70(t，J＝9.5 Hz，5H)，1.60(d，J＝9.8 Hz，3H)，1.49(dt，J＝24.2，8.3 Hz，9H)，1.36(d，J＝19.4 Hz，4H)，1.20(dt，J＝15.0，7.2 Hz，6H)，0.84(t，J＝7.4 Hz，9H).
【０１７３】
化合物ＩＩａ−０１．化合物ＩＩａ-０１を、化合物８ａに使用した方法と同様の手法で製造した。ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２２Ｈ３１Ｎ７Ｏについての計算値＝４１０.５(Ｍ−Ｈ＋)，実測値４１０.２(Ｍ−Ｈ＋). 1H NMR(500 MHz，DMSO-d6) δ 7.64(s，1H)，7.02(s，1H)，6.90(d，J＝7.7 Hz，1H)，6.85(d，J＝7.6 Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.37(s，2H)，3.56(s，1H)，3.18− 3.11(m，1H)，2.55(s，3H)，2.04(d，J＝9.0 Hz，2H)，1.88(s，6H)，1.71(t，J＝9.7 Hz，2H)，1.56(dq，J＝19.1，10.6，10.2 Hz，4H)，1.31(q，J＝7.7 Hz，2H)，0.88(t，J＝7.4 Hz，3H).
【０１７４】
実施例２−図２Ａ−２Ｂについての化合物の合成
この実施例および図２Ａ-２Ｂは、化合物ＩＩａ-１４およびＩＩａ−１９および同様に製造したその他の化合物の合成に関する。
化合物１２および１３：メチル ４−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキシレート１０(３.２７ｇ，１９.１１ｍｍｏｌ)／ＤＭＦ(２０ｍＬ)の溶液を、Ｋ２ＣＯ３(２.９０ｇ，２１.０２ｍｍｏｌ)およびメチル４−(ブロモメチル)−３−メトキシベンゾエート１１(５ｇ，１９.３０ｍｍｏｌ)で処理した。反応を０℃で開始し、１時間進行させると、〜１：５の混合物で反応が完了したことがＬＣＭＳにより示された。塩基をろ過して、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で２回洗った。溶媒を蒸発させ、粗生成物を、そのまま次の工程に用いた。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１５Ｈ１５Ｎ３Ｏ７についての計算値＝３５０.２(Ｍ−Ｈ＋)，実測値３５０.０(Ｍ−Ｈ＋)．
【０１７５】
特徴分析を目的として、少量の生成物の混合物を、０〜５０％ＥｔＯＡｃ/ヘキサンによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離した。
【０１７６】
化合物１２についての分析データ：1H NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ 8.40(s，1H)，7.57(dd，J＝7.8，1.5 Hz，1H)，7.50(d，J＝1.6 Hz，1H)，7.27(d，J＝7.9 Hz，1H)，5.53(s，2H)，3.96(s，3H)，3.84(d，J＝16.2 Hz，6H).
化合物１３についての分析データ：1H NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ 9.05(s，1H)，7.62− 7.51(m，2H)，7.28(d，J＝7.9 Hz，1H)，5.47(s，2H)，3.87(s，8H)，3.31(s，1H).
【０１７７】
化合物１４および１５．化合物１２および１３(２ｇ，５.７３ｍｍｏｌ)、亜鉛およびギ酸アンモニウムの溶液を、室温で２時間攪拌した後、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。濾過および濃縮により、化合物１４および１５の粗製混合物を得た。ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１５Ｈ１７Ｎ３Ｏ５についての計算値＝３２０.３(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値３２０.２(Ｍ＋Ｈ＋).
【０１７８】
化合物１６および１７．ＭｅＯＨ(２０ｍＬ)中の化合物１４および１５(１.８３０ｇ，５.７３ｍｍｏｌ)と化合物１の混合物を、酢酸(１.６４０ｍＬ，２８.７ｍｍｏｌ)で処理し、終夜撹拌した。この溶液を、ナトリウムメトキシド(１３.１１ｍＬ，５７.３ｍｍｏｌ)で処理し、終夜撹拌した。ＬＣＭＳにより、生成物への変換が示された。ｐＨを５に調整し、得られた沈殿物を水で洗った。残留物を乾燥させて、化合物１６および１７の混合物を得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１７Ｈ１７Ｎ５Ｏ６についての計算値＝３８８.３(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値３８８.１(Ｍ＋Ｈ＋)．
【０１７９】
化合物１８および１９．ＤＭＳＯ(１０ｍＬ)中の化合物１６および１７(１ｇ，２.５８ｍｍｏｌ)の混合物を、ブタン−１−アミン(０.５１０ｍＬ，５.１６ｍｍｏｌ)、ＤＢＵ(０.４２８ｍＬ，２.８４ｍｍｏｌ)、次いでＢＯＰ(１.３７０ｇ，３.１０ｍｍｏｌ)でゆっくりと処理した。反応混合物を７０℃で２時間加熱した時点で、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そのまま次の工程に用いた。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２１Ｈ２６Ｎ６Ｏ５についての計算値＝４４３.４(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４４３.２(Ｍ＋Ｈ＋). 1H NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ 9.41(s，1H)，8.20(s，1H)，8.08(s，1H)，7.57− 7.42(m，3H)，6.93(d，J＝8.1 Hz，1H)，5.80(s，1H)，5.60(s，2H)，4.04(q，J＝7.1 Hz，1H)，3.95− 3.82(m，10H)，3.62(d，J＝6.1 Hz，4H)，3.45(q，J＝7.0 Hz，3H)，2.68(d，J＝9.9 Hz，1H)，2.57− 2.50(m，6H)，2.00(s，1H)，1.59(p，J＝7.3 Hz，3H)，1.54− 1.48(m，1H)，1.39− 1.26(m，3H)，1.18(t，J＝7.1 Hz，2H)，0.86(dt，J＝29.5，7.3 Hz，5H).
【０１８０】
化合物１８ａおよびＩＩａ−１４．０℃の化合物１８および１９(１.１４２ｇ，２.５８ｍｍｏｌ)／ＴＨＦ(２.５８ｍＬ，５.１６ｍｍｏｌ)の溶液を、ＬｉＡｌＨ４(ＴＨＦ、２.５８ｍＬ，５.１６ｍｍｏｌ)で処理し、１時間撹拌した後、ＬＣＭＳにより反応の完了が示された。反応を、ＭｅＯＨでクエンチし、ロッシェル塩溶液で終夜撹拌した。生成物をＥｔＯＡｃで抽出し、粗製化合物の還元された中間体の混合物として次の工程に用いた。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２０Ｈ２６Ｎ６Ｏ４についての計算値＝４１５.４(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４１５.２(Ｍ＋Ｈ＋).
【０１８１】
１,４−ジオキサン(１０ｍＬ)中の還元された中間体(１０６９ｍｇ，２.５８ｍｍｏｌ)の混合物を、水酸化ナトリウム水溶液(２.５８ｍＬ，２５.８ｍｍｏｌ)で処理し、８０℃で５時間加熱した後、ＬＣＭＳにより生成物の形成が確認された。この塩基を６Ｍ 塩酸で中和し、溶媒を蒸発させた。残留物を、５ｍＬのＤＭＦに移し取り、シリンジにより濾過した。溶媒を蒸発させて、化合物１８ａおよびＩＩａ−１４の３：１の混合物を得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１８Ｈ２４Ｎ６Ｏ２についての計算値＝３５７.４(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値３５７.２(Ｍ＋Ｈ＋)．
【０１８２】
化合物１８ｂおよびＩＩａ−１９．ＴＨＦ(１ｍＬ)中の化合物Ｉａ−３８およびＩＩａ−１４(４２０ｍｇ，１.１７８ｍｍｏｌ)の溶液を、塩化チオニル(０.１７２ｍＬ，２.３５７ｍｍｏｌ)で処理し、３０分間撹拌した後、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。溶媒を蒸発させ、粗生成物をそのまま次の工程に用いた。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＮ６Ｏについての計算値＝３７５.８(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値３７５.２(Ｍ＋Ｈ＋)．
【０１８３】
ＤＭＦ(１ｍＬ)中の前記粗生成物混合物(２０ｍｇ，０.０５３ｍｍｏｌ)およびテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン２２(５.４０ｍｇ，０.０５３ｍｍｏｌ)の混合物を、７０℃で１時間加熱した後、反応の完了がＬＣＭＳにより示された。反応混合物を、シリンジ濾過し、粗生成物を、以下の条件の分取ＬＣ／ＭＳで精製および分離した：カラム；ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８，２００ｍｍｘ１９ｍｍ，５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５アセトニトリル：水(０.１％トリフルオロ酢酸を含有する)；移動相Ｂ：９５：５アセトニトリル：水(０.１％トリフルオロ酢酸を含有する)；グラジエント：６％Ｂで２分保持、２５分かけて６〜２７％Ｂ、その後１００％Ｂで２分保持；流量：２０ｍＬ／ｍｉｎ；カラム温度：２５℃：画分の回収は、ＭＳシグナルにより開始された。目的とする生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により、乾燥させた。
【０１８４】
ＩＩａ−１９についての分析データ：ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２３Ｈ３３Ｎ７Ｏ２についての計算値＝４４０.５(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４４０.１(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(500 MHz，DMSO-d6) δ 9.39(s，1H)，7.98(s，1H)，7.94(s，0H)，7.86(s，1H)，7.24(s，1H)，7.14− 7.03(m，2H)，5.51(s，2H)，4.16(s，2H)，3.96− 3.90(m，2H)，3.84(s，3H)，3.29(d，J＝11.6 Hz，2H)，2.89(s，1H)，2.73(s，1H)，2.55(s，1H)，2.00(d，J＝12.6 Hz，2H)，1.58(p，J＝7.5 Hz，4H)，1.31(q，J＝7.5 Hz，2H)，0.89(t，J＝7.4 Hz，3H).
【０１８５】
追加の化合物を、化合物ＩＩａ−１９と同様に製造したが、最終工程においてテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン２２の代わりに、表Ｄに示したアミンを使用した。
【表８】
2021533135.tif 000058
【表９】
2021533135.tif 000059
【０１８６】
実施例３−図３についての化合物の合成
化合物ＩＩａ−３５を、図３の合成スキームに従って製造した。予測値(Ｍ＋Ｈ)４０１.４；実測値４０１.１.
【０１８７】
実施例４−図４Ａ−４Ｂについての化合物の合成
本実施例および図４Ａ−４Ｂは、化合物ＩＩｂ−０１、ＩＩｂ−０４および同様に製造した他の化合物の合成に関する。
【０１８８】
化合物３０．ジオキサン(５ｍＬ)中の化合物４(４００ｍｇ，１.５１３ｍｍｏｌ)の懸濁液を、水酸化ナトリウム(水中で１０Ｎ，１.５１３ｍＬ，１５.１３ｍｍｏｌ)で処理し、６０℃で４５分間撹拌した。反応混合物を濃縮した。粗生成物を水に溶解し、１５０ｇのＣ−１８カラムを用いたＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ(登録商標)ユニットの逆相クロマトグラフィーにより、１０ｍＭ ＴＥＡＡ／アセトニトリル：水中で１０ｍＭを０〜７０％のグラジエントで溶出して精製した。目的とする画分を凍結乾燥させて、化合物３０(１５０ｍｇ，０.７２７ｍｍｏｌ，４８.１％収率)を得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ９Ｈ１５Ｎ６についての計算値＝２０７.１(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値２０７.２(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ 7.56(br s，1H)，5.53(br s，2H)，3.43(br d，J=6.2 Hz，2H)，1.57(t，J=7.2 Hz，2H)，1.44 - 1.29(m，2H)，0.95 - 0.76(m，3H).
【０１８９】
化合物３３．ＤＭＦ(２６.３ｍｌ)中の６-フルオロニオコチンアルデヒド３１(１.８０９ｇ，１４.４６ｍｍｏｌ)、メチル ４−ヒドロキシベンゾエート３２(２ｇ，１３.１５ｍｍｏｌ)およびＫ２ＣＯ３(１.９９８ｇ，１４.４６ｍｍｏｌ)の懸濁液を、１１０℃で４時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。冷却した後に、この反応を、水でクエンチした。得られる固体を、濾取して、水で洗い、真空乾燥させて、化合物３３(３.３０ｇ，１２.８４ｍｍｏｌ，９５.１％収率)を得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１４Ｈ１１ＮＯ４についての計算値＝２５８.１(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値２５８.０(Ｍ＋Ｈ＋). 1H NMR(400 MHz，クロロホルム-d) δ 10.01(s，1H)，8.63(d，J=2.4 Hz，1H)，8.23(dd，J=8.6，2.4 Hz，1H)，8.17 - 7.97(m，2H)，7.27 - 7.22(m，2H)，7.10(d，J=8.6 Hz，1H)，3.93(s，3H).
【０１９０】
化合物３４．ＭｅＯＨ(１００ｍｌ)中の化合物３３(３.７６ｇ，１４.６２ｍｍｏｌ)の溶液を、０℃でＮａＢＨ４(０.５５３ｇ，１４.６２ｍｍｏｌ)を用いて数回に分けて処理した後、冷却しながら１０分間撹拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。半飽和のＮＨ４Ｃｌを、ゆっくりと加えて反応をクエンチした。撹拌を、ＲＴで３０分間続けた。反応混合物を、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過して、濃縮した。粗製固体を水中で混合して、濾取し、真空乾燥させて、化合物３４(３.３７ｇ，１３.００ｍｍｏｌ，８９％収率)を得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１４Ｈ１３ＮＯ４についての計算値＝２６０.１(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値２６０.０(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(400 MHz，クロロホルム-d) δ 8.21(d，J=2.2 Hz，1H)，8.12 - 8.04(m，2H)，7.81(dd，J=8.4，2.4 Hz，1H)，7.21 - 7.13(m，2H)，6.99(d，J=8.4 Hz，1H)，4.71(s，2H)，3.91(s，3H).
【０１９１】
化合物３５．化合物３４(７.９ｇ，３０.５ｍｍｏｌ)／ＤＣＭ(７５ｍＬ)を、０℃でＭｓＣｌ(２.６１ｍＬ，３３.５ｍｍｏｌ)により処理した。ＲＴで１６時間撹拌した後、反応を行った。この反応を水でクエンチした。ＤＣＭ(３×２０ｍＬ)で抽出した後、合わせた有機抽出液を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、濃縮した。粗製生成物をＩＳＣＯシリカカラム(８０ｇ)で精製し、酢酸エチル：ヘキサンの０〜７０％のグラジエントで溶出した。目的とする画分を濃縮して、化合物３５(７.４７ｇ，２６.９ｍｍｏｌ，８８％収率)を得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ１４Ｈ１３ＣｌＮＯ３についての計算値＝２７８.１(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値２７８.０(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(400 MHz，クロロホルム-d) δ 8.19(d，J=2.2 Hz，1H)，8.13 - 8.02(m，2H)，7.79(dd，J=8.5，2.5 Hz，1H)，7.22 - 7.14(m，2H)，6.99(d，J=8.6 Hz，1H)，4.57(s，2H)，3.92(s，3H).
【０１９２】
化合物３６および３７．ＤＭＦ(１ｍＬ)中の化合物３０(７０ｍｇ，０.３３９ｍｍｏｌ)を、炭酸セシウム(３３２ｍｇ，１.０１８ｍｍｏｌ)で処理し、続いて化合物３５(９４ｍｇ，０.３３９ｍｍｏｌ)を処理した。ＲＴで５時間撹拌した後、反応が完了した。水でクエンチし、酢酸エチル(３ｘ１０ｍＬ)で抽出した後、合わせた有機抽出液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、濃縮した。粗生成物を、ＩＳＣＯシリカカラム(２４ｇ)で精製し、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭの０〜６０％のグラジエントで溶出した。目的とする画分を濃縮し、化合物３６および３７の混合物(１２０ｍｇ，０.０８０ｍｍｏｌ，収率７９％)を１：４の比率で得た。
ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２３Ｈ２６Ｎ７Ｏ３についての計算値＝４４８.２(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４４８.３(Ｍ＋Ｈ＋).
【０１９３】
化合物３６ａおよびＩＩｂ−０１．ＴＨＦ(２ｍＬ)中の化合物３６および３７(６０ｍｇ，０.１１４ｍｍｏｌ)の混合物を、Ｎ２下において、０℃でＬｉＡｌＨ４(ＴＨＦ中で１.０Ｍ，０.２２ｍＬ，０.２２ｍｍｏｌ)を用いてゆっくりと処理した。反応混合物を、０℃で１時間撹拌すると、その時点で反応の完了がＬＣＭＳにより示された。Ｎａ２ＳＯ４−１０・Ｈ２Ｏをゆっくりと加えて、その後ＭｅＯＨを加え、ＲＴで３時間撹拌することで反応をクエンチした。固体を濾去した。濾液を濃縮した。残留物をＤＭＦに溶解し、生成物を以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した：カラム；ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８，２００ｍｍｘ１９ｍｍ，５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５アセトニトリル：水(０.１％トリフルオロ酢酸を含有する)；移動相Ｂ：９５：５アセトニトリル：水(０.１％トリフルオロ酢酸を含有する)；グラジエント：１０％Ｂで０分保持、２０分かけて１０〜４５％Ｂ、その後１００％Ｂで４分間保持；流速：２０ｍＬ／分。画分の回収は、ＭＳおよびＵＶシグナルにより開始した。目的とする生成物を含む画分を合わせて、遠心分離で乾燥させた。
化合物ＩＩｂ−０１についての分析データ：ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２２Ｈ２６Ｎ７Ｏ２についての計算値＝４２０.２(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４２０.２(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(500 MHz，DMSO-d6) δ 9.45 - 9.29(m，1H)，8.21 - 8.15(m，1H)，8.13(s，1H)，7.86 - 7.78(m，1H)，7.78 - 7.68(m，1H)，7.35(br d，J=8.2 Hz，2H)，7.08 - 7.03(m，2H)，7.03 - 6.99(m，1H)，5.52(s，2H)，4.50(br d，J=4.9 Hz，2H)，2.98 - 2.82(m，2H)，1.65 - 1.51(m，2H)，1.40 - 1.27(m，2H)，0.90(br t，J=7.2 Hz，3H).
【０１９４】
化合物ＩＩｂ−０４．ＴＨＦ(１ｍＬ)中の化合物３６ａおよび化合物ＩＩｂ−０４(４０ｍｇ，０.０９５ｍｍｏｌ)の混合物を、塩化チオニル(０.１４ｍＬ，１.９ｍｍｏｌ)で処理した。ＲＴで３時間撹拌した後、ＬＣＭＳにより反応の完了が確認された。溶媒を蒸発させ、過剰量の塩化チオニルを、ＤＣＭと共沸させて除去した。粗製塩化物を、さらなる精製を行うことなく次の工程に直接用いた。ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２２Ｈ２５Ｎ７Ｏについての計算値＝４３８.２(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４３８.１(Ｍ＋Ｈ＋).
【０１９５】
前項塩化物(４０ｍｇ，０.０９１ｍｍｏｌ)の混合物を、ＤＭＦ(１.０ｍＬ)に溶解し、２−アミノエタン−１−オール(５５.０μｌ，０.９１ｍｍｏｌ)で処理した後、ＲＴで１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応の完了が示された。混合物を、以下の条件の分取ＬＣ／ＭＳで精製した：カラム；ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８，２００ｍｍｘ１９ｍｍ，５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５アセトニトリル：水(１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する)；移動相Ｂ：９５：５アセトニトリル：水(１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する)；グラジエント：８％Ｂで０分保持、２５分かけて８〜４８％Ｂ、その後１００％Ｂで４分間保持；流速：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の回収は、ＭＳシグナルにより開始した。目的とする生成物を含む画分を合わせて、遠心分離で乾燥させた。
化合物ＩＩｂ−０４についての分析データ：ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２４Ｈ３１Ｎ８Ｏ２についての計算値＝４６３.２(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４６３.３(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(500 MHz，DMSO-d6) δ 8.18(br s，2H)，7.91(br s，1H)，7.84(br d，J=8.7 Hz，1H)，7.55(br d，J=8.1 Hz，2H)，7.18(br d，J=8.3 Hz，2H)，7.09(br d，J=8.7 Hz，1H)，5.55(s，2H)，4.18(s，2H)，3.73 - 3.63(m，2H)，3.12 - 2.74(m，4H)，1.69 - 1.50(m，2H)，1.38 - 1.25(m，2H)，0.91(br t，J=7.3 Hz，3H).
【０１９６】
図４Ａ−４Ｂのスキームにおいて、６−フルオロニコチンアルデヒドの３１を４−フルオロ−２−メトキシベンズアルデヒドに置き換えて、概ね上記手順に従って、所定のアミンを用いて、表Ｅの化合物を同じ方法で製造した。
【表１０】
2021533135.tif 000060
【０１９７】
実施例５−化合物ＩＩＩ−０１およびＩＩＩ−０２の合成
本実施例は、化合物ＩＩＩ−０１およびＩＩＩ−０２の製造に関するものである。これらの化合物を、化合物３６および３７を、ＭｅＭｇＣｌグリニャール試薬と反応させて製造した。
【化４７】
2021533135.tif 000061
【０１９８】
ＴＨＦ(１ｍＬ)中の化合物３６および３７(６０ｍｇ，０.１３４ｍｍｏｌ)の混合物に、０℃でＭｅＭｇＣｌ(０.１７１ｍＬ，０.５１３ｍｍｏｌ)を加えた。１時間後、ＬＣＭＳにより反応が完了したことが示された。混合物を以下の条件の分取ＬＣ／ＭＳで精製した：カラム；ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８，２００ｍｍｘ１９ｍｍ，５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水(０.１％ＴＦＡを含有する)；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水(０.１％ＴＦＡを含有する)；グラジエント：１０％Ｂで０分間保持、２０分かけて１０〜４５％Ｂ、その後１００％Ｂで４分保持；流速：流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の回収は、ＭＳシグナルにより開始した。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。
ＩＩＩ−０２についての分析データ．ＬＣＭＳ ＥＳＩ：Ｃ２４Ｈ３０Ｎ７Ｏ２についての計算値＝４４８.２(Ｍ＋Ｈ＋)，実測値４４８.２(Ｍ＋Ｈ＋)．1H NMR(500 MHz，DMSO-d6) δ 8.22(d，J=1.8 Hz，1H)，8.06 - 7.97(m，2H)，7.87(br dd，J=8.5，2.4 Hz，2H)，7.23(d，J=8.8 Hz，2H)，7.15(d，J=8.5 Hz，1H)，5.99 - 5.97(m，1H)，5.56(s，2H)，3.58 - 3.54(m，2H)，1.64 - 1.49(m，2H)，1.37 - 1.25(m，2H)，1.17(s，6H)，0.90(t，J=7.4 Hz，3H)，0.71 - 0.70(m，1H)
【０１９９】
前記発明の詳細な説明には、本発明の特定の部分または態様と、主にまたは排他的に関係する箇所が含まれている。これは、明確化かつ利便性のためであり、具体的な機能は、それが開示されている箇所以外にも関連している可能性があり、本明細書の開示内容は、異なる箇所にある情報の全ての適切な組み合わせを含んでいることを理解されたい。同様に、本明細書の様々な図や説明は、本発明の特定の実施態様に関するものであるが、特定の特徴が、特定の図または実施態様の内容に開示されている場合、そのような特徴は、適切な範囲で、別の図または実施態様の内容において、別の特徴と組み合わせて、または本発明全体に使用することもできることを理解されよう。
【０２００】
さらに、本発明を、特定の好ましい実施態様により具体的に説明してきたが、本発明は、そのような好ましい実施態様に限定されるものではない。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲により規定されるものである。
【０２０１】
頭字語および略語
以下の表は、本明細書中で使用されている頭字語および略語とその意味の一覧である。
【表１１】
2021533135.tif 000062
【０２０２】
本明細書の冒頭で、筆頭著者(または発明者)および日付により略式に引用されている以下の文献の完全な引用を示す。これらの各文献は、あらゆる目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。
2021533135.tif 000063
2021533135.tif 000064
2021533135.tif 000065
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【図１】
2021533135.tif 000080
【図２Ａ】
2021533135.tif 000081
【図２Ｂ】
2021533135.tif 000082
【図３】
2021533135.tif 000083
【図４Ａ】
2021533135.tif 000084
【図４Ｂ】
2021533135.tif 000085
【図５】
2021533135.tif 000086
【図６】
2021533135.tif 000087
【国際調査報告】
2021533135.tif 000088
2021533135.tif 000089