(57)【要約】【課題】ＣＤＲの生殖細胞系列化および開発クオリティの最適化は複雑で多因子的な課題である。【解決手段】  本明細書において、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体分子、ならびにその関連する核酸分子、ベクターおよび宿主細胞が提供される。さらに本明細書において、当該抗体分子の医療用途が提供される。【選択図】図１−１
2021519100.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＰＳＦＱＧ（配列番号６１）のＨＣＤＲ２およびＧＧＶＲＡＭＤＹ（配列番号６２）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号６３）のＬＣＤＲ３を含み、または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号５８）のＨＣＤＲ２およびＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＧＳＨＶＰＹ（配列番号６０）のＬＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含み、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含み、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含み、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含み、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含み、
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含み、
（ｅ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含み、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含み、
（ｆ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含み、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含み、
（ｇ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１３を含み、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１４を含み、または
（ｈ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１５を含み、かつ、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１６を含む、請求項１記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項３】
抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分であって、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｘ１−Ｆ−Ｔ−Ｘ２−Ｙ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５を含み、式中、Ｘ１はＳまたはＳの保存的置換であり、Ｘ２はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ３はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＭまたはＭの保存的置換であり、またＸ５はＨまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４２）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｔ−Ｘ７−Ｙ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｆ−Ｑ−Ｇを含み、式中、Ｘ１はＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ２はＧまたはＧの保存的置換であり、Ｘ３はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ５はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ８はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ９はＱまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ１０はＫまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４３）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｄ−Ｙを含み、式中、Ｘ１はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＹまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ４はＭまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４４）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｓ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｙ−Ｌ−Ｘ８を含み、式中、Ｘ１はＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ２はＶまたはＶの保存的置換であり、Ｘ３はＹまたはＹの保存的置換であり、Ｘ４はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ８はＧまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４５）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｋ−Ｘ１−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘ２−Ｓを含み、式中、Ｘ１はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ２はＦまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４６）、
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｑ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｐ−Ｙ−Ｘ６を含み、式中、Ｘ１はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＴまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号４７）、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分であって、当該抗体または抗原結合部分は、ＣＤ４７への結合を、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分と交差競合し、ならびに
（ａ）完全生殖細胞系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含有し、および／または
（ｂ）ＬＣＤＲ１中に「ＮＧ」の脱アミド化部位を含有せず、および／または
（ｃ）ＬＣＤＲ１中に「ＮＴ」の脱アミド化部位を含有せず、および／または
（ｄ）ＨＣＤＲ１および／またはＨＣＤＲ２中に高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティをもつヒト生殖細胞系列ペプチド配列を含有し、および／または
（ｅ）ＬＣＤＲ１中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または
（ｆ）ＨＣＤＲ１中またはＶＨドメインのＨＣＤＲ１／フレームワーク２領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有しない、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項６】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域の両方は、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項７】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域の両方は、前記ＣＤＲが挿入されたヒト可変領域フレームワークスキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項８】
前記ＶＨ領域は、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入された、ＩＧＨＶ５−５１またはＩＧＨＶ１−３のヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１または３に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項９】
前記ＶＬ領域は、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１、３および８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０】
前記抗体は、免疫グロブリン定常領域を含有する、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１１】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹである、請求項１０記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１２】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である、請求項１１記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１３】
前記免疫グロブリン定常領域は、免疫学的に不活性である、請求項１０記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１４】
前記免疫グロブリン定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、または野生型ヒトＩｇＧ２定常領域である、請求項１０記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１５】
前記免疫グロブリン定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する、請求項１０記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１６】
前記抗体または抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、またはｂｉｓ−ｓｃＦｖである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１７】
前記抗体は、モノクローナルである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１８】
前記抗体は、四量体抗体、四価抗体、または多特異性抗体である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１９】
前記抗体は、第一の抗原および第二の抗原に特異的に結合する二特異性抗体であり、前記第一の抗原はＣＤ４７であり、前記第二の抗原はＣＤ４７ではない、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２０】
前記抗体または抗原結合部分は、（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合する、または（ｂ）ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２１】
重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）であって、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｘ１−Ｙ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４を含有し、式中、Ｘ１はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ２はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＭまたはＭの保存的置換であり、またＸ４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号１０４）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、Ｍ−Ｇ−Ｘ１−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｔ−Ｘ５−Ｙ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｆ−Ｑ−Ｇを含み、式中、Ｘ１はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ３はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＱまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ８はＫまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号１０５）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｄ−Ｙを含み、式中、Ｘ１はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＹまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ４はＭまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４４）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｓ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｙ−Ｌ−Ｘ８を含み、式中、Ｘ１はＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ２はＶまたはＶの保存的置換であり、Ｘ３はＹまたはＹの保存的置換であり、Ｘ４はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ８はＧまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４５）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、Ｋ−Ｘ１−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘ２−Ｓを含み、式中、Ｘ１はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ２はＦまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４６）、
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、Ｘ１−Ｑ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｐ−Ｙ−Ｘ６を含み、式中、Ｘ１はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＴまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４７）、ならびに
前記ＶＨ領域は、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＨＶ５−５１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）。
【請求項２２】
（ａ）ＶＨアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号９４）のＨＣＤＲ２、およびＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９）のＨＣＤＲ３を含み、
（ｂ）ＶＨアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２、およびＭＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号９７）のＬＣＤＲ３を含む、請求項２１記載のｓｃＦｖ。
【請求項２３】
免疫グロブリン定常領域または免疫グロブリン定常領域の部分をさらに含む、請求項２１または２２に記載のｓｃＦｖ。
【請求項２４】
前記免疫グロブリン定常領域は、配列番号１７から２３のいずれか１つを含有する、請求項２３記載のｓｃＦｖ。
【請求項２５】
治療剤に結合された請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖを含有する免疫結合体。
【請求項２６】
前記治療剤が、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解性酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはアポトーシス促進剤である、請求項２５に記載の免疫結合体。
【請求項２７】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖ、または請求項２５もしくは２６に記載の免疫結合体、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物。
【請求項２８】
核酸分子であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分または請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、
（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または
（ｃ）ＶＨ領域およびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列、をコードする核酸分子。
【請求項２９】
請求項２８に記載の核酸分子を含有する発現ベクター。
【請求項３０】
請求項２８に記載の核酸分子、または請求項２９に記載の発現ベクターを含有する組換え宿主細胞。
【請求項３１】
抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を作製する方法であって、
核酸分子が発現される条件下で、請求項２９に記載の発現ベクターを含有する組換え宿主細胞を培養し、それにより抗体または抗原結合部分を作製すること、および
当該宿主細胞または培養物から、前記抗体または抗原結合部分を単離することと、を含む、方法。
【請求項３２】
対象において、免疫反応を強化する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分の、請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの、請求項２５もしくは２６に記載の免疫結合体の、または請求項２７に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
対象において、癌、自己免疫性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、または線維症を治療する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分の、請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの、請求項２５もしくは２６に記載の免疫結合体の、または請求項２７に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３４】
前記癌が、消化管間質癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌である、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
前記自己免疫性疾患または前記炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス（ｌｕｐｕｓ）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎である、請求項３３記載の方法。
【請求項３６】
前記心血管疾患が、冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症である、請求項３３記載の方法。
【請求項３７】
前記線維症が、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎または喘息である、請求項３３記載の方法。
【請求項３８】
癌、自己免疫性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、または線維症の治療における使用のための請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖ、請求項２５もしくは２６に記載の免疫結合体、または請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記癌が、消化管間質癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌である、請求項３８に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項４０】
前記自己免疫性疾患または前記炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス（ｌｕｐｕｓ）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎である、請求項３８に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項４１】
前記心血管疾患が、冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症である、請求項３８に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項４２】
前記線維症が、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎または喘息である、請求項３８に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項４３】
医薬品としての使用のための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２１から２４のいずれか一項に記載のｓｃＦｖ、請求項２５もしくは２６に記載の免疫結合体、または請求項２７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年８月２２日に出願された英国特許出願第１８１３６９３．７号明細書、および２０１８年３月２７日に出願された英国特許出願第１８０４８６０．３号明細書の利益を主張するものであり、それら開示内容は、その全体で参照により本明細書に援用される。
【０００２】
電子的に提出されるテキストファイルに関する説明
本明細書とともに電子的に提出される以下のテキストファイルの内容は、その全体で参照により本明細書に援用される：コンピューター読み取り可能な形式の配列表のコピー（ファイルの名称：ＵＬＴＷ＿００１＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、データ記録日：２０１９年３月２６日、ファイルサイズは１４５，９２３バイト）。
【０００３】
本発明は、ＣＤ４７（分化クラスター４７であり、インテグリン関連タンパク質［ＩＡＰ］としても知られる）に特異的に結合する抗体分子およびその医療用途に関する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ４７（インテグリン関連タンパク質［ＩＡＰ］としても知られる）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通タンパク質であり、また膜インテグリン、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ−１）およびシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）をはじめとするいくつかの公知のパートナーと結合する。ＣＤ４７は、細胞のアポトーシス、増殖、接着、および遊走をはじめとする細胞内プロセスの範囲と関連し、重要なことには、それが、免疫反応および血管新生反応で重要な役割を果たす。ＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナル伝達は、マクロファージおよび他の骨髄性細胞による食作用の活性化を阻害する重要な分子相互作用である。このことが、腫瘍細胞の生存を促進するため、骨髄細胞系列特異的免疫チェックポイントとしての役割を果たす。
【０００５】
前臨床エビデンスは、血液および固形の悪性腫瘍の両方についての多数の実験モデルにおいて、ＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナル伝達を遮断することにより、マクロファージの貪食作用を高めて、異種移植片の増殖を阻害することが可能であることを示唆している。マクロファージ活性はまた、組織線維化等である炎症関連の組織修復および動脈硬化プラークの形成の生物学において認識される因子であるため、ＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナル伝達の軸はまた、非癌性疾患における考慮すべき治療可能性のものでもある。ゆえに、抗ＣＤ４７  ｍＡｂは、癌および他の環境において免疫治療剤として作用し、現在確立されている治療法の有効性を増幅させる可能性を有している。
【０００６】
現在承認されている抗体治療剤の大部分は、免疫化されたげっ歯類に由来する。そうした抗体の多くが、マウスＣＤＲのヒトｖ−遺伝子フレームワーク配列への「移植」を介した、「ヒト化」として知られるプロセスを経ている（Ｎｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ９：７６７−７７４を参照のこと）。このプロセスは多くの場合、不正確であり、得られた抗体の標的結合アフィニティの低下が生じる。元の抗体の結合アフィニティに戻すために、通常、移植されたｖ−ドメインの可変ドメインフレームワーク中の重要な位置にマウス残基が導入される（「復帰突然変異（ｂａｃｋ−ｍｕｔａｔｉｏｎ）」としても知られる）。
【０００７】
ＣＤＲ移植および復帰突然変異によりヒト化された抗体は臨床において、完全マウスｖ−ドメインによるものと比較して低い免疫反応率を誘導することが示されているが、この基礎的な移植法を使用してヒト化された抗体は、物理的に不安定である可能性があり、移植ＣＤＲループ内に免疫原性モチーフがいまだ保存されていることから、いまだ重大な臨床開発リスクを負っている。例えば抗ＣＤ４７等である抗体は、それらの作用機序の一部として免疫エフェクター機能を潜在的にもつものであって、ＣＤ４７＋標的細胞の食作用を促進し得るために免疫原性のリスクが特に高く、これは標的細胞に加えて抗体の抗原プロセシングを生じる。患者におけるこれら抗薬剤抗体反応は、臨床使用における薬剤の半減期、有効性および安全性も低下させ得る。タンパク質の免疫原性に関する動物実験は、ヒトでの免疫反応の予測とはならないことが多く、治療用途の抗体操作は、予測されるヒトＴ細胞エピトープ含量、非ヒト生殖細胞系列アミノ酸含量、および精製タンパク質が凝集してしまう可能性を最小化することに焦点が置かれている。
【０００８】
ゆえに理想的なヒト化アゴニスト性抗ＣＤ４７抗体は、ｖ−ドメイン中に、詳細に特徴解析されたヒト生殖細胞系列配列のフレームワークとＣＤＲの両方に存在する残基と同一の残基を可能な限り多く有している抗体である。Ｔｏｗｎｓｅｎｄら（２０１５；ＰＮＡＳ  １１２：１５３５４−１５３５９）は、抗体の作製方法を記載しており、当該方法においてラット抗体、ウサギ抗体およびマウス抗体に由来するＣＤＲは、好ましいヒトフレームワーク内に移植され、次いで「拡張バイナリー置換（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｂｉｎａｒｙ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）」と呼ばれるヒト生殖細胞系列化（ｈｕｍａｎ  ｇｅｒｍ−ｌｉｎｉｎｇ）方法が行われる。この方法は、元の抗体のパラトープにおいては基礎的な柔軟性を示したが、正確性の高い抗体−抗原の共結晶構造データが無い場合には、任意の所与の抗体のＣＤＲループ中のどの個々の残基がどの組み合わせでヒト生殖細胞系列に転換され得るかを確実に予測することは不可能なままである。さらにＴｏｗｎｓｅｎｄらの研究では、ヒト生殖細胞系列中に存在する残基を超えた、開発リスクモチーフの除去が有益となる可能性がある位置に突然変異誘導を加えることには対処していない。これは技術の限界であり、この限界によってプロセスが本質的に非効率的となり、高リスクの開発困難性である抗体のままである。さらに現時点では、個々のｖ−ドメインのタンパク質配列で離れた位置にある改変のいずれが、リスクモチーフを排除しながら、抗原結合のアフィニティと特異性の維持を促進し得るのかは、たとえパートナーｖ−ドメイン上であったとしても正確に予測することはできない。
【０００９】
このようにＣＤＲの生殖細胞系列化および開発クオリティの最適化は複雑で多因子的な課題であるため、本例においては以下をはじめとする複合的な分子の機能特性が維持されるまたは改善されることが好ましい：標的結合特異性、ヒトおよび実験動物種（例えばカニクイザルとして知られるｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ、すなわちＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の両方に由来するＣＤ４７に対するアフィニティ、ｖ−ドメインの生物物理的安定性、ならびに／またはＩｇＧ発現収率。抗体操作実験から、重要なＣＤＲ中のたった１つの残基位置での突然変異であっても、これら望ましい分子特性のすべてに対し劇的な影響を与え得ることが示されている。
【００１０】
国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号は、「５Ｆ９Ｇ４」と名づけられたアンタゴニスト性マウス抗ＣＤ４７  ＩｇＧ分子、ならびに５Ｆ９Ｇ４（ｈ５Ｆ９Ｇ４）のヒト化型の調製を記載している。その５Ｆ９Ｇ４のヒト化型は、古典的なヒト化技術、すなわちＫａｂａｔ規定のマウスＣＤＲをヒトの重鎖および軽鎖のフレームワーク配列に移植することにより作製されており、ヒトフレームワーク残基の一部は、対応する位置の５Ｆ９Ｇ４マウス残基に復帰突然変異されている可能性がある。上述の理由によって、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号に記載される５Ｆ９Ｇ４のヒト化型は理想的ではない。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、多くの抗ＣＤ４７抗体、およびその医療用途を提供する。
【００１２】
本発明の１つの態様によると、ヒトＣＤ４７に、および任意でカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、ＩＧＨＶ５−５１ベースのまたはＩＧＨＶ１−３ベースのフレームワークを含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、ＩＧＫＶ２−２８ベースのフレームワークを含む。
【００１３】
ＩＧＨＶ５−５１のバックグラウンドでは、抗ＣＤ４７抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ−Ｓ−Ｆ−Ｔ−ＮまたはＮ（例えばＳ等）−Ｙ−Ｎの保存的置換またはＮ（例えばＳ等）−Ｍの保存的置換またはＭ  （例えばＩ等）−Ｈの保存的置換または任意のアミノ酸（例えばＧ等）（配列番号２８）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：ＭまたはＭ（例えばＩ）−Ｇ−Ｔの保存的置換または任意のアミノ酸（例えばＩ等）−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＤ等）−Ｄまたは任意のアミノ酸（例えばＳ等）−Ｄ−Ｔ−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えばＲ等）−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＳ、Ｈ等）−Ｑまたは任意のアミノ酸（例えばＰ等）−Ｋまたは任意のアミノ酸（例えば等）−Ｆ−Ｑ／Ｋ−Ｇ／Ｄ（配列番号２９）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＱ等）−Ｇ−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｒ−Ａまたは任意のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｍまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｄ−Ｙ（配列番号３０）と、を伴う重鎖可変領域を含んでもよい。
【００１４】
ＩＧＨＶ１−３のバックグラウンドでは、抗ＣＤ４７抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＤ等）−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＡ等）−Ｍ−Ｈ（配列番号３１）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：Ｍ−Ｇ−Ｔ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｎ−Ｄ−Ｄまたは任意のアミノ酸（例えばＮ等）−Ｔ−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えばＫ等）−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＳ等）−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号３２）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＱ等）−Ｇ−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｒ−Ａまたは任意のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｍまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｄ−Ｙ（配列番号３０）と、を伴う重鎖可変領域を含んでもよい。
【００１５】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＭＨ（配列番号３３、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号３４、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＧＧＹＲＡＭＤＹ（配列番号３５、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００１６】
抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−ＩまたはＩ（例えばＬ等）−Ｖの保存的置換またはＶ（例えばＬ等）−Ｙ  の保存的置換またはＹ（例えばＨ等）−Ｓ−Ｎの保存的置換または任意のアミノ酸（例えばＧ、Ｓ、Ｋ等）−Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｙ等）−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＱ、Ｙ等）−Ｔまたは任意のアミノ酸（例えばＮ等）−Ｙ−Ｌ−Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＤ等）（配列番号３６）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ｋ−Ｖまたは任意のアミノ酸（例えばＧ等）−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｆまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｓ等）−Ｓ（配列番号３７）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｆまたは任意のアミノ酸（例えばＬ、Ｍ等）−Ｑ−Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＡ等）−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えばＴ、Ｌ、Ｍ等）−Ｈまたは任意のアミノ酸（例えばＱ、Ｒ等）−Ｖまたは任意のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ等）−Ｐ−Ｙ−Ｔまたは任意のアミノ酸（例えばＩ等）（配列番号３８）と、を伴う軽鎖可変領域をさらに含んでもよい。
【００１７】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＲＳＳＱＳＩＶＹＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号３９、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４０、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＦＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号４１）を除外してもよい。
【００１８】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｘ１−Ｆ−Ｔ−Ｘ２−Ｙ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５を含み、式中、Ｘ１はＳまたはＳの保存的置換であり、Ｘ２はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ３はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＭまたはＭの保存的置換であり、またＸ５はＨまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４２）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｔ−Ｘ７−Ｙ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｆ−Ｑ−Ｇを含み、式中、Ｘ１はＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ２はＧまたはＧの保存的置換であり、Ｘ３はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ５はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ８はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ９はＱまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ１０はＫまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４３）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｄ−Ｙを含み、式中、Ｘ１はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＹまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ４はＭまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４４）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｓ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｙ−Ｌ−Ｘ８を含み、式中、Ｘ１はＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ２はＶまたはＶの保存的置換であり、Ｘ３はＹまたはＹの保存的置換であり、Ｘ４はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ８はＧまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４５）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｋ−Ｘ１−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘ２−Ｓを含み、式中、Ｘ１はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ２はＦまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４６）、
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｑ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｐ−Ｙ−Ｘ６を含み、式中、Ｘ１はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＴまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号４７）。
【００１９】
一部の態様において、本発明は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＰＳＦＱＧ（配列番号６１）のＨＣＤＲ２およびＧＧＶＲＡＭＤＹ（配列番号６２）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号６３）のＬＣＤＲ３を含み、または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号５８）のＨＣＤＲ２およびＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＧＳＨＶＰＹ（配列番号６０）のＬＣＤＲ３を含む。
【００２０】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、
（ａ）配列番号４８、または配列番号５７のＨＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号４９、または配列番号６１のＨＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号５０、または配列番号６２のＨＣＤＲ３とを含有し、および
当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、
（ａ’）配列番号５１、配列番号５５、または配列番号５６のＬＣＤＲ１と、
（ｂ’）配列番号５２のＬＣＤＲ２と、
（ｃ’）配列番号５３、配列番号５４、または配列番号６３のＬＣＤＲ３とを含有する。
【００２１】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１３を含有し、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１４を含有し、または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１５を含有し、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１６を含有する。
【００２２】
さらに本発明により、治療剤に結合された、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。
【００２３】
別の態様において、本発明は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。
【００２４】
さらに、本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。
【００２５】
また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。
【００２６】
さらなる態様において、抗ＣＤ４７抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養することと、当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離することと、を含む。
【００２７】
本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【００２８】
さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００２９】
さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００３０】
さらに、医薬品としての使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。
【００３１】
別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤との併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、または使用のためのベクター、または治療方法を提供する。
【００３２】
さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。
【００３３】
本発明はさらに、対象において自己免疫性疾患もしくは炎症性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００３４】
自己免疫性疾患または炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス（ｌｕｐｕｓ）、グレーブス病、および橋本甲状腺炎、ならびに強直性脊椎炎からなる群からすべての態様において選択されてもよい。
【００３５】
また、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【００３６】
さらに、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【００３７】
本発明はさらに、対象において心血管疾患もしくは線維症を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００３８】
また、心血管疾患または線維症の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【００３９】
さらに、自己免疫性疾患、炎症性疾患、または線維症の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【００４０】
本発明の任意の態様における心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症であってもよい。
【００４１】
本発明の任意の態様における線維症は、例えば、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎または喘息、であってもよい。
【００４２】
本発明はさらに、ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗ＣＤ４７  ＣＤＲをヒトｖ−ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗ＣＤ４７抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗ＣＤ４７抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのファージライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣＤ４７への結合、および任意でカニクイザルＣＤ４７への結合についても当該ファージライブラリーをスクリーニングする工程、
（４）スクリーニングする工程（３）から、ヒトＣＤ４７に特異的に結合する、および任意でカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合するクローンを選択する工程、ならびに
（５）ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を、工程（４）から選択されたクローンから作製する工程、を含む。
【００４３】
当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化し、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化し、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善するさらなる工程を含んでもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１−１】図１Ａ〜図１Ｆ。ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質へのｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ１およびｈＳＩＲＰα−Ｆｃ結合に対する、ライブラリー由来抗ＣＤ４７  ｓｃＦｖのＨＴＲＦ系競合スクリーニング。各ラウンドで、ビオチン化ヒトおよび／またはカニクイザルＣＤ４７−Ｆｃタンパク質における別個のファージ選択ブランチから、クローンが選択された。２つのブランチにおける複数の選択ラウンドの後に、ライブラリー由来クローン（黒色円）は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ４７−Ｆｃの両方に対する結合ならびにｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ１およびｈＳＩＲＰα−Ｆｃのエピトープ遮断（シグナルの低下を介して測定）についてスクリーニングした。ラウンド２の結果（図１Ａ、図１Ｂ）。ラウンド３の結果（図１Ｃ、図１Ｄ）。ラウンド４の結果（図１Ｅ、図１Ｆ）。陰性対照（非ＣＤ４７結合）および陽性対照ｈ５Ｆ９Ｇ４  ｓｃＦｖを、灰色のバツ印の円と灰色の縁をもつ黒色円でそれぞれ表した。さらに、ＩＧＨＶ５−５１／ＩＧＫＶ２−２８移植ｓｃＦｖもまた、各図に含めた（灰色の六角形）。
【図１−２】同上。
【図１−３】同上。
【図２】図２Ａ〜図２Ｂ。生殖細胞系列に対する変異に関する、ＣＤＲ残基の寛容の分析。ＥＬＩＳＡ陽性の２６９個の固有ｓｃＦｖクローン群のＣＤＲにおけるマウスアミノ酸保持頻度の図を、それぞれＶＨ（配列番号６４〜６６）ドメイン（図１Ａ）およびＶＬ（配列番号６７〜６９）（図２Ｂ）ドメインについて示す。ＨＣＤＲ３以外では、ヒト／マウス残基の突然変異誘導の標的とされた残基のみプロットされている。Ｘ軸上のカッコ内に記載されるＣＤＲ残基は、移植に使用されたヒト生殖細胞系列（ＩＧＫＶ２−２８およびＩＧＨＶ５−５１）中に存在する残基と同一である。カッコ内には無いがその値が０に設定されているＨＣＤＲ２中の残基は、移植プロセスの間にヒト生殖細胞系列へと変異された。両方の図において、７５％での灰色の破線は、ヒト生殖細胞系列によるマウス残基の置換の寛容性に対するカットオフを表している。
【図３】図３Ａ〜図３Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質へのライブラリー由来リードＩｇＧの結合に関する、直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。キメラ抗ＣＤ４７（ｍ５Ｆ９Ｇ４）、およびヒトＩｇＧ１ヌル形式のライブラリー由来クローンが、ヒト（図３Ａ）およびカニクイザル（図３Ｂ）のＣＤ４７−Ｆｃタンパク質に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定（単位μｇ／ｍｌ）された。ｍ５Ｆ９Ｇ４およびライブラリー由来クローンは、ＣＤ４７の両方のオルソログに対して結合活性を示した。
【図４】図４Ａ〜図４Ｂ。ライブラリー由来リードに関する、ＥＬＩＳＡ系ＣＤ４７−Ｆｃ−ＳＩＲＰα競合アッセイ。プレート結合ヒトＳＩＲＰαに対するヒト（図４Ａ）およびカニクイザル（図４Ｂ）のＣＤ４７−Ｆｃタンパク質のＥＬＩＳＡ結合シグナルについて、ＩｇＧ１ヌル形式での力価測定された競合相手ＩｇＧ、Ｄ−Ａ６  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、それに加えてアイソタイプＩｇＧ１、ＩＧＨＶ５−５１移植、ＩｇＧ１ヌル形式でのｈ５Ｆ９Ｇ４およびｍ５Ｆ９Ｇ４の存在下で検証した。
【図５】図５Ａ〜図５Ｂ。ライブラリー由来リードに関する、ＨＴＲＦ系の液相、高感度、ＣＤ４７エピトープ競合アッセイ。ヒトまたはカニクイザルのＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧのＨＴＲＦ結合シグナルを、ライブラリー由来リードを含む力価測定された競合相手ＩｇＧ、それに加えてアイソタイプＩｇＧ１および非標識ｈ５Ｆ９Ｇ４およびｍ５Ｆ９Ｇ４の存在下で検証した。全てのライブラリー由来リードが、ヒトＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４結合の濃度依存性阻害を示し、これは共有エピトープを維持するが、結合アフィニティは低下していることを示唆した（図５Ａ）。Ｄ−Ａ６タンパク質（ＩｇＧおよびｓｃＦｖ−Ｆｃ）の両方が、ヒトＣＤ４７（図５Ｂ）に対するｈ５Ｆ９Ｇ４結合を完全に阻害する能力を示し、同一のｖ−ドメインのｓｃＦｖ−Ｆｃ融合形態は、ＩｇＧよりも高い有効性を有していた。
【図６−１】図６Ａ〜図６Ｈ。ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質へのデザインリードＩｇＧの結合に関する、直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。キメラ抗ＣＤ４７（ｍ５Ｆ９Ｇ４）、およびヒトＩｇＧ１ヌル形式のデザインクローンが、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定（単位μｇ／ｍｌ）された。ｍ５Ｆ９Ｇ４およびライブラリー由来クローンは、ＣＤ４７の両方のオルソログに対して結合活性を示した：ＶＨ１．１−ＶＨ１．３ファミリー対ヒト（図６Ａ）およびカニクイザル（図６Ｂ）；ＶＨ１．４−ＶＨ１．６ファミリー対ヒト（図６Ｃ）およびカニクイザル（図６Ｄ）；ＶＨ１．７、ＶＨ１．９およびＶＨ１．１０ファミリー対ヒト（図６Ｅ）およびカニクイザル（図６Ｆ）およびＶＨ１．８ファミリー対ヒト（図６Ｇ）およびカニクイザル（図６Ｈ）。
【図６−２】同上。
【図６−３】同上。
【図６−４】同上。
【図７】図７Ａ〜図７Ｂ。ＶＨ１．８ファミリーデザインリードに関する、ＥＬＩＳＡ系ＣＤ４７−Ｆｃ−ＳＩＲＰα競合アッセイ。プレート結合ヒトＳＩＲＰαに対するヒト（図７Ａ）およびカニクイザル（図７Ｂ）のＣＤ４７−Ｆｃタンパク質のＥＬＩＳＡ結合シグナルについて、ＩｇＧ１ヌル形式での力価測定された競合相手ＩｇＧ、それに加えて陽性対照としてのＩｇＧ１ヌル形式でのｍ５Ｆ９Ｇ４およびｈ５Ｆ９Ｇ４の存在下で検証した。
【図８】図８。さらなるデザインリードに関する、ＥＬＩＳＡ系ＣＤ４７−Ｆｃ−ＳＩＲＰα競合アッセイ。プレート結合ヒトＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７−ＦｃのＥＬＩＳＡ結合シグナルについて、ＩｇＧ１ヌル形式での力価測定された競合相手ＩｇＧ、それに加えてアイソタイプＩｇＧ１およびＩｇＧ１ヌル形式でのｍ５Ｆ９Ｇ４の存在下で検証した。
【図９】図９Ａ〜図９Ｄ。デザインリードに関する、ＨＴＲＦ系の液相、高感度、ＣＤ４７エピトープ競合アッセイ。ヒトまたはカニクイザルのＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧのＨＴＲＦ結合シグナルを、ライブラリー由来リードを含む力価測定された競合ＩｇＧ、それに加えて陽性対照としての非標識ｈ５Ｆ９Ｇ４およびｍ５Ｆ９Ｇ４の存在下で検証した。全てのＶＨ１．８ファミリーデザインリードが、ヒト（図９Ａ）およびカニクイザル（図９Ｂ）のＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４結合の強い濃度依存性阻害を示した。他の選択されたデザインリードもまた、有効性が低下した状態で、ヒト（図９Ｃ）およびカニクイザル（図９Ｄ）のＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４結合の濃度依存性阻害を示した。
【図１０−１】図１０。デザインリードに関する、ＨＬ６０、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７＋  ＣＨＯ−Ｋ１細胞へのフローサイトメトリー結合。抗ＣＤ４７コントロールｍ５Ｆ９Ｇ４およびｈ５Ｆ９Ｇ４、デザインリードならびにアイソタイプコントロール（全てＩｇＧ１ヌル）について、野生型（ＷＴ、すなわちトランスフェクトしていない）ＣＨＯ−Ｋ１細胞、ヒトＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１細胞、カニクイザルＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１細胞およびヒトＡＭＬ細胞株ＨＬ６０に対する特異的結合を検証した。ＩｇＧは、２４〜１００，０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で検証された。すべてのＣＤ４７特異的抗体で、ヒトおよびカニクイザルの細胞株、それに加えてＨＬ６０細胞に対し、濃度依存性の結合が観察された。一方でアイソタイプコントロールでは観察されなかった。野生型ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し、バックグラウンドを超える結合シグナルは観察されなかった。
【図１０−２】同上。
【図１０−３】同上。
【図１０−４】同上。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜図１１Ｃ。開発リスクＥＬＩＳＡ。このアッセイにより、デザインリードである、ＩｇＧ１形式のｈ５Ｆ９Ｇ４抗体およびｍ５Ｆ９Ｇ４抗体が、負の電荷を有する生体分子のインスリン（図１１Ａ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）（図１１Ｂ）、および一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）（図１１Ｃ）に対し、陰性対照のＩｇＧ１ウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）アナログと同等のまたはそれよりも低い結合（ＶＨ１．１２／ＶＬ８は例外である）を呈することが示された。ボコシズマブ（Ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）およびブリアキヌマブ（Ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）のアナログに観察されるような、これら分子に対する強力な非特異的（ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ）結合は、治療用抗体の貧弱な薬物動態に関する高リスク指標であることがわかっている。
【図１１Ｂ】同上。
【図１１Ｃ】同上。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜図１２Ｃ。ｉＴｏｐｅ（商標）を用いたｈ５Ｆ９Ｇ４のＶＨおよびＶＬ配列の概要解析。完全ｖ−ドメイン配列にわたるペプチドを、１アミノ酸の増分における９ｍｅｒペプチドとして試験した。各列は、ＭＨＣクラスＩＩ結合（コア９ｍｅｒ）に関してスコア化されている９ｍｅｒペプチドのｐ１アンカー残基の位置を示す。各ボックスは、アラインされた９ｍｅｒとＭＨＣクラスＩＩとの間の＞０．６である結合スコアを示す。無差別に（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）結合するペプチドは、１７以上のアレルを結合するものとして規定した。抗原性ペプチドを含有する可能性がある領域を、「無差別性が高い」（ＨＡＦ）および「無差別性が中程度」（ＬＡＦ）のカラムに示し、濃い灰色の縦線はＨＡＦ  ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドを示し、また薄い灰色の縦線はＬＡＦ  ＭＨＣクラスＩＩ結合ぺプチドを示す。「ＴＣＥＤ」カラムでは、Ｔ細胞エピトープデータベースからのほぼ相同なペプチドを示す領域を、灰色の縦線として示す。ＬＣＤＲ１（配列番号７０）（図１２Ａ）、ＨＣＤＲ１（配列番号７１）（図１２Ｂ）およびＨＣＤＲ３（配列番号７２）（図１２Ｃ）に存在するキーＨＡＦおよびＴＣＥＤ＋エピトープに関して、例示的な解析を示す。
【図１２Ｂ】同上。
【図１２Ｃ】同上。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｂ。ｉＴｏｐｅ（商標）を用いた重要なリードのＶＬ配列の概要解析。完全ｖ−ドメイン配列にわたるペプチドを、完全ｖ−ドメイン全体にわたる１アミノ酸の増分における９ｍｅｒペプチドとして試験した（ここではＶＬ１．１を例として示す）。図１３Ａ〜図１３Ｂにデータを示す。ＬＣＤＲ２（配列番号７３）（図１３Ａ）およびＬＣＤＲ３（配列番号７４）（図１３Ｂ）に存在するキーＨＡＦおよびＴＣＥＤ＋エピトープに関して、例示的な解析を示す。
【図１３Ｂ】同上。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜図１４Ｃ。ヒトのマクロファージおよびジャーカット細胞を用いた食作用有効性アッセイ。ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式でのクローンｈ５Ｆ９Ｇ４、ＶＨ１．８／ＶＬ１．１、ＶＨ１．８／ＶＬ１．６およびＶＨ１．８／ＶＬ１．６−ＤＩについて、これらの相対的有効性を、ＣＤ４７＋標的細胞として３人の独立のドナー由来のヒト単核球由来マクロファージと、ヒトのジャーカット癌細胞とを用いた、食作用のフローサイトメトリーアッセイで検証した。食作用は、ドナー１（図１４Ａ）、ドナー２（図１４Ｂ）およびドナー３（図１４Ｃ）についてのＣＤ１１ｂ＋集団からのＣＦＳＥ＋細胞の百分率として測定した。
【図１４Ｂ】同上。
【図１４Ｃ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明の第一の態様によると、ヒトＣＤ４７に、および任意にカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
ＩＧＨＶ５−５１バックグラウンドでは、以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ−Ｓ−Ｆ−Ｔ−ＮまたはＮ（例えばＳ等）−Ｙ−Ｎの保存的置換またはＮ（例えばＳ等）−Ｍの保存的置換またはＭ  （例えばＩ等）−Ｈの保存的置換または任意のアミノ酸（例えばＧ等）（配列番号２８）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：ＭまたはＭ（例えばＩ）−Ｇ−Ｔの保存的置換または任意のアミノ酸（例えばＩ等）−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＤ等）−Ｄまたは任意のアミノ酸（例えばＳ等）−Ｄ−Ｔ−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えばＲ等）−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＳ、Ｈ等）−Ｑまたは任意のアミノ酸（例えばＰ等）−Ｋまたは任意のアミノ酸（例えば等）−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号２９）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＱ等）−Ｇ−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｒ−Ａまたは任意のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｍまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｄ−Ｙ（配列番号３０）と、を伴う重鎖可変領域を含んでもよい。
【００４６】
一部の態様では、本明細書に提供される抗ＣＤ４７抗体または抗原結合部分は、配列番号２４または配列番号２５を含有する、または配列番号２４または配列番号２５からなる、ＣＤ４７タンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗ＣＤ４７抗体または抗原結合部分は、配列番号２４または配列番号２５に対して、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤ４７タンパク質に特異的に結合する。
【００４７】
ＩＧＨＶ１−３バックグラウンドでは、以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＤ等）−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＡ等）−Ｍ−Ｈ（配列番号３１）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：Ｍ−Ｇ−Ｔ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｎ−Ｄ−Ｄまたは任意のアミノ酸（例えばＮ等）−Ｔ−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えばＫ等）−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＳ等）−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号３２）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＱ等）−Ｇ−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｒ−Ａまたは任意のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｍまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ等）−Ｄ−Ｙ（配列番号３０）と、を伴う重鎖可変領域を含んでもよい。
【００４８】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＭＨ（配列番号３３、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号３４、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＧＧＹＲＡＭＤＹ（配列番号３５、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００４９】
抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−ＩまたはＩ（例えばＬ等）−Ｖの保存的置換またはＶ（例えばＬ等）−Ｙ  の保存的置換またはＹ（例えばＨ等）−Ｓ−Ｎの保存的置換または任意のアミノ酸（例えばＧ、Ｓ、Ｋ等）−Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｙ等）−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えばＱ、Ｙ等）−Ｔまたは任意のアミノ酸（例えばＮ等）−Ｙ−Ｌ−Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＤ等）（配列番号３６）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ｋ−Ｖまたは任意のアミノ酸（例えばＧ等）−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｆまたは任意のアミノ酸（例えばＡ、Ｓ等）−Ｓ（配列番号３７）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｆまたは任意のアミノ酸（例えばＬ、Ｍ等）−Ｑ−Ｇまたは任意のアミノ酸（例えばＡ等）−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えばＴ、Ｌ、Ｍ等）−Ｈまたは任意のアミノ酸（例えばＱ、Ｒ等）−Ｖまたは任意のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ等）−Ｐ−Ｙ−Ｔまたは任意のアミノ酸（例えばＩ等）（配列番号３８）と、を伴う軽鎖可変領域をさらに含んでもよい。
【００５０】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＲＳＳＱＳＩＶＹＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号３９、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４０、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１Ａ１号に開示される５Ｆ９Ｇ４マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＦＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号４１）を除外してもよい。
【００５１】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｘ１−Ｆ−Ｔ−Ｘ２−Ｙ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５を含み、式中、Ｘ１はＳまたはＳの保存的置換であり、Ｘ２はＮまたはＮの保存的置換（例えばＳ）であり、Ｘ３はＮまたは任意の他のアミノ酸（例えばＳ、Ａ）であり、Ｘ４はＭまたはＭの保存的置換（例えばＩ）であり、またＸ５はＨまたは任意の他のアミノ酸（例えばＧ）であり（配列番号４２）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｔ−Ｘ７−Ｙ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｆ−Ｑ−Ｇを含み、式中、Ｘ１はＭまたはＭの保存的置換（例えばＩ）であり、Ｘ２はＧまたはＧの保存的置換であり、Ｘ３はＴまたは任意の他のアミノ酸（例えばＩ）であり、Ｘ４はＮまたは任意の他のアミノ酸（例えばＤ）であり、Ｘ５はＤまたは任意の他のアミノ酸（例えばＳ）であり、Ｘ６はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＳまたは任意の他のアミノ酸（例えばＲ）であり、Ｘ８はＮまたは任意の他のアミノ酸（例えばＳ）であり、Ｘ９はＱまたは任意の他のアミノ酸（例えばＰ）であり、またＸ１０はＫまたは任意の他のアミノ酸（例えばＳ）であり（配列番号７５）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｄ−Ｙを含有し、式中、Ｘ１はＧまたは任意の他のアミノ酸（例えばＱ）であり、Ｘ２はＹまたは任意の他のアミノ酸（例えばＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷ）であり、Ｘ３はＡまたは任意の他のアミノ酸（例えばＩ、Ｔ、ＶまたはＷ）であり、またＸ４はＭまたは任意の他のアミノ酸（例えばＡ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷ）であり（配列番号４４）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｓ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｙ−Ｌ−Ｘ８を含み、式中、Ｘ１はＩまたはＩの保存的置換（例えばＬ）であり、Ｘ２はＶまたはＶの保存的置換（例えばＬ）であり、Ｘ３はＹまたはＹの保存的置換（例えばＨ）であり、Ｘ４はＮまたは任意の他のアミノ酸（例えばＧ、ＳまたはＫ）であり、Ｘ５はＧまたは任意の他のアミノ酸（例えばＡまたはＹ）であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸（例えばＱまたはＹ）であり、Ｘ７はＴまたは任意の他のアミノ酸（例えばＮ）であり、またＸ８はＧまたは任意の他のアミノ酸（例えばＤ）であり（配列番号４５）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｋ−Ｘ１−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘ２−Ｓを含み、式中、Ｘ１はＶまたは任意の他のアミノ酸（例えばＧ）であり、またＸ２はＦまたは任意の他のアミノ酸（例えばＡまたはＳ）であり（配列番号４６）、
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｑ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｐ−Ｙ−Ｘ６を含み、式中、Ｘ１はＦまたは任意の他のアミノ酸（例えばＬまたはＭ）であり、Ｘ２はＧまたは任意の他のアミノ酸（例えばＡ）であり、Ｘ３はＳまたは任意の他のアミノ酸（例えばＴ、ＬまたはＭ）であり、Ｘ４はＨまたは任意の他のアミノ酸（例えばＱまたはＲ）であり、Ｘ５はＶまたは任意の他のアミノ酸（例えばＩまたはＴ）であり、Ｘ６はＴまたは任意の他のアミノ酸（例えばＩ）である（配列番号４７）。
【００５２】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＦＲ４を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域と、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＦＲ４を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含有し、この場合において、ＨＣＤＲ１は配列番号４２であり、ＨＣＤＲ２は配列番号７５であり、ＨＣＤＲ３は配列番号４４であり、ＬＣＤＲ１は配列番号４５であり、ＬＣＤＲ２は配列番号４６であり、そしてＬＣＤＲ３は配列番号４７であり、当該重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号１４１（表２を参照のこと）内の重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列であり、また当該軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号１４４（表２を参照のこと）内の軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列である。
【００５３】
本明細書に詳述されるように、本発明者らは、国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号、米国特許出願公開第２０１３０１４２７８６Ａ１号に開示されるマウス抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９Ｇ４から誘導されたＣＤＲ配列を使用し、多数の最適化抗ＣＤ４７抗体分子を作製することに初めて成功した。本発明の実施形態において、これら抗体分子は、（適切な動物実験種でのインビボ試験が容易になるように）ヒトＣＤ４７ならびにカニクイザルＣＤ４７の両方に特異的に結合するよう選択された。本明細書に記載される最適化された抗体分子のさらなる改良によって、可変ドメインの安定性の改善、より高い発現収率、および／または免疫原性の低下が提供された。
【００５４】
本発明の好ましい最適化抗ＣＤ４７抗体分子は、対応するマウスＣＤＲまたはその他（例えばフレームワーク）のアミノ酸の位置で、必ずしも最大数のヒト生殖細胞系列の置換を有するとは限らない。以下の実施例の項に詳述されるように、本発明者らは、「最大限にヒト化された」抗体分子は、抗ＣＤ４７結合特性および／または他の望ましい性質に関して、必ずしも「最大限に最適化」されているとは限らないことを見出した。
【００５５】
本発明は、本明細書に記載される抗体分子またはその抗原結合部分のアミノ酸配列に対する改変を包含する。例えば本発明は、その性質に大きな影響を与えない、機能的に同等の可変領域およびＣＤＲを含有する抗体分子およびその対応する抗原結合部分、ならびに活性および／もしくはアフィニティが強化された、または低下したバリアントを包含する。例えばアミノ酸配列は、ＣＤ４７に対し所望の結合アフィニティを有する抗体が得られるように変異されてもよい。１残基から数百以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合を含み、ならびに単一アミノ酸残基または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む挿入が予期される。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体分子、またはエピトープタグに融合された抗体分子が挙げられる。抗体分子のその他の挿入バリアントとしては、酵素またはポリペプチドの、抗体Ｎ末端または抗体Ｃ末端への融合が挙げられ、それにより血液循環中の抗体の半減期が延長される。
【００５６】
本発明の抗体分子または抗原結合部分は、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾を有するポリペプチド、例えば異なる糖類でのグリコシル化、アセチル化およびリン酸化を有するポリペプチドを含んでもよい。例えば１つまたは複数のアミノ酸残基を付加、除去または置換させ、グリコシル化部位を形成または除去させることにより、本発明の抗体分子または抗原結合部分を変異させて、当該翻訳後修飾を変化させてもよい。
【００５７】
本発明の抗体分子または抗原結合部分は、例えば抗体中の潜在的なタンパク質分解部位を除去するアミノ酸置換により改変されてもよい。
【００５８】
抗体分子またはその抗原結合部分において、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｙ−Ｔ／Ｓ−Ｆ−Ｔ−Ｎ／Ｓ／Ｄ−Ｙ−Ｎ／Ｓ／Ａ−Ｍ／Ｉ−Ｈ／Ｇ（配列番号７６）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ／Ｉ／Ｖ−Ｇ／Ａ／Ｓ−Ｔ／Ｉ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｎ／Ｄ−Ｄ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｔ−Ｓ／Ｋ／Ｒ−Ｙ−Ｎ／Ｓ／Ｈ−Ｑ／Ｐ／Ｈ−Ｋ／Ｓ−Ｆ−Ｋ／Ｑ−Ｄ／Ｇ（配列番号７７）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ／Ｑ−Ｇ−Ｙ／Ａ／Ｃ／Ｄ／Ｅ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｎ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ−Ｒ−Ａ／Ｉ／Ｔ／Ｖ／Ｗ−Ｍ／Ａ／Ｅ／Ｋ／Ｌ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ−Ｄ−Ｙ（配列番号７８）。
【００５９】
例えば、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｙ−Ｔ／Ｓ−Ｆ−Ｔ−Ｎ／Ｄ−Ｙ−Ｎ／Ａ−Ｍ／Ｉ−Ｈ（配列番号７９）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ−Ｇ−Ｔ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｎ／Ｄ−Ｄ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｔ−Ｓ／Ｋ／Ｒ−Ｙ−Ｎ／Ｓ−Ｑ／Ｐ／Ｈ−Ｋ／Ｓ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号８０）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｇ−Ｙ／Ｅ／Ｆ／Ｉ／Ｋ／／Ｎ／Ｖ−Ｒ−Ａ−Ｍ／Ｅ／Ｑ−Ｄ−Ｙ（配列番号８１）。
【００６０】
抗体分子またはその抗原結合部分において、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｖ／Ｌ−Ｙ／Ｈ−Ｓ−Ｎ／Ｇ／Ｓ／Ｋ−Ｇ／Ａ／Ｙ−Ｎ／Ｙ−Ｔ／Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｇ／Ｄ（配列番号８２）；ＬＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｋ−Ｇ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｆ／Ａ−Ｓ（配列番号８３）；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｆ／Ｍ−Ｑ−Ｇ／Ａ−Ｓ−Ｈ／Ｑ−Ｖ−Ｐ−Ｙ−Ｔ／Ｉ（配列番号８４）。
【００６１】
例えば、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｌ−Ｈ−Ｓ−Ｎ／Ｋ−Ｇ／Ａ／Ｙ−Ｎ／Ｑ／Ｙ−Ｔ／Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｇ（配列番号８５）；ＬＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｋ−Ｖ／Ｇ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｆ／Ａ／Ｓ−Ｓ（配列番号８６）；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｆ／Ｌ／Ｍ−Ｑ−Ｇ／Ａ−Ｓ／Ｔ／Ｌ／Ｍ−Ｈ／Ｑ／Ｒ−Ｖ／Ｉ／Ｔ−Ｐ−Ｙ−Ｔ／Ｉ（配列番号８７）。
【００６２】
本発明の特定の実施形態において、抗体分子または抗原結合部分は、以下を含有してもよい：
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．８／ＶＬ１．１］；または、
（ｂ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．８／ＶＬ１．２］；または、
（ｃ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．８／ＶＬ１．３］；または、
（ｄ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．８／ＶＬ１．４］；または、
（ｅ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．８／ＶＬ１．５］；または、
（ｆ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．８／ＶＬ１．６］；または、
（ｇ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．１／ＶＬ１．１］；または、
（ｈ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．１／ＶＬ１．２］；または、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．１／ＶＬ１．３］；または、
（ｊ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．１／ＶＬ１．６］；または、
（ｋ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＮＭＨ（配列番号８８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．５／ＶＬ１．１］；または、
（ｌ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号８９；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．７／ＶＬ１．１］；または、
（ｍ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号８９；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．７／ＶＬ１．２］；または、
（ｎ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号８９；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．７／ＶＬ１．３］；または、
（ｏ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号８９；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．７／ＶＬ１．５］；または、
（ｐ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号８９；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．７／ＶＬ１．６］；または、
（ｑ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．６／ＶＬ１．１］；または、
（ｒ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．６／ＶＬ１．２］；または、
（ｓ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９０；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．９／ＶＬ１．１］；または、
（ｔ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号９１；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４；ＬＣＤＲ３）、［クローンＶＨ１．９／ＶＬ１．２］；または、
（ｕ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＰＳＦＱＧ（配列番号６１；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＶＲＡＭＤＹ（配列番号６２；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＭＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号６３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＤ６］；または、
（ｖ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号９２；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＫＲＡＭＤＹ（配列番号９３；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＭＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号６３；ＬＣＤＲ３）、［クローンＦ−Ｅ５］；または、
（ｗ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号９４；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＱＤＹ（配列番号９５；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＭＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号９６；ＬＣＤＲ３）、［クローンＥ−Ｃ５］；または、
（ｘ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号９４；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＭＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号９７；ＬＣＤＲ３）、［クローンＥ−Ｄ６］；または、
（ｙ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号９８；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＩＲＡＭＤＹ（配列番号９９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＦＱＧＳＨＶＰＹＩ（配列番号１００；ＬＣＤＲ３）、［クローンＢ−Ａ６］；または、
（ｚ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＲＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号１０１；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＭＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号９７；ＬＣＤＲ３）、［クローンＤ−Ｃ１２］；または、
（ｚｉ）アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７；ＨＣＤＲ１）、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号５８；ＨＣＤＲ２）、ＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９；ＨＣＤＲ３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１；ＬＣＤＲ１）、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２；ＬＣＤＲ２）、ＭＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号９７；ＬＣＤＲ３）、［クローンＥ−Ａ１］。
【００６３】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＰＳＦＱＧ（配列番号６１）のＨＣＤＲ２およびＧＧＶＲＡＭＤＹ（配列番号６２）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号６３）のＬＣＤＲ３を含み、または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号５８）のＨＣＤＲ２およびＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＧＳＨＶＰＹ（配列番号６０）のＬＣＤＲ３を含む。
【００６４】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域は、表７のＶＨ領域アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有し、当該ＶＬ領域は、表７のＶＬ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する。
【００６５】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含み、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含み、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１３を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１４を含み、または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１５を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１６を含む。
【００６６】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号３に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号５に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号６に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号７に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号８に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号９に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１０に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１１に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１２に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１４に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；または
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１５に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１６に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である。
【００６７】
一部の態様において、抗ＣＤ４７抗体のＣＤＲアミノ酸配列は、列挙される配列中のＣＤＲアミノ酸配列に対して１００％の同一性であるが、ＦＲアミノ酸配列は、列挙される配列中のＦＲアミノ酸配列に対し、１００％未満の同一性である。
【００６８】
一部の態様において、本明細書に規定される抗体または抗原結合部分は、単離されてもよい。
【００６９】
本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、ＣＤ４７への結合を、本明細書に開示されるＣＤＲセットを含有する抗体またはその抗原結合部分と交差競合できる。一部の実施形態において、本発明は、単離された抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を提供するものであって、当該抗体または抗原結合部分は、本明細書に開示するＣＤＲのセットを含む抗体または抗原結合部分と、ＣＤ４７との結合に関して交差競合し、また（ａ）完全なヒト生殖細胞系列フレームワークのアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）ＬＣＤＲ１内に「ＮＧ」高リスク脱アミド化部位を含有せず、（ｃ）ＬＣＤＲ１内に「ＮＴ」脱アミド化部位を含有せず、および／または（ｄ）ＨＣＤＲ１および／またはＨＣＤＲ２内に高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティをもつヒト生殖細胞系列ペプチド配列を含有し、および／または（ｅ）ＬＣＤＲ１内にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または（ｆ）ＨＣＤＲ１内またはＶＨドメインのＨＣＤＲ１／フレームワーク２領域内にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有しない。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ２内の高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティをもつヒト生殖細胞系列ペプチド配列は、ＦＱＧＱＶＴＩＳＡ（配列番号１０２）またはＦＱＧＲＶＴＩＴＡ（配列番号１０３）である。
【００７０】
「交差競合する」、「交差競合」、「交差遮断する」、「交差遮断される」、および「交差遮断すること」という用語は本明細書において相互交換可能に使用され、抗体またはその部分がもつ、標的ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に対する直接結合または本発明の抗ＣＤ４７抗体のアロステリック調節を介した間接的結合を干渉する能力を意味する。抗体またはその部分が、別物質による標的結合に干渉することができる度合、つまり本発明により交差遮断する、または交差競合すると言えるかどうかは、競合結合アッセイを使用して決定され得る。結合競合アッセイの一例は、ＨＴＲＦ法（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）である。１つの特に適した定量的交差競合アッセイは、ＦＡＣＳ系またはＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ系の方法を使用して、標識（例えばＨｉｓタグ化、ビオチン化、または放射性標識）された抗体またはその部分と、他の抗体またはその部分との間の、標的への結合に関する競合を測定する。概して、交差競合抗体またはその部分は、例えば、アッセイの間に、および第二の抗体またはその部分の存在下で、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの記録される変位が、所与の量で存在する潜在的に交差遮断する抗体またはその断片による、（例えばＦＡＣＳ系競合アッセイにおける）理論上の最大変位（例えばコールド（例えば非標識）抗体または交差遮断されるために必要なその断片による変位）の１００％以下となるように、交差競合アッセイにおいて標的に結合することとなるものである。交差競合抗体またはその部分は、１０％〜１００％、または５０％〜１００％の記録される変位を有することが好ましい。
【００７１】
本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、１つまたは複数の置換、欠失および／または挿入を含んでもよく、それらにより例えばグリコシル化部位（Ｎ結合型またはＯ結合型）、脱アミノ化部位、リン酸化部位または異性化／断片化部位などの翻訳後修飾（ＰＴＭ：ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）部位が除去される。
【００７２】
３５０を超えるタイプのＰＴＭが公知である。重要なＰＴＭの型としては、リン酸化、グリコシル化（Ｎ結合型およびＯ結合型）、ＳＵＭＯ化、パルミトイル化、アセチル化、硫酸化、ミリストイル化、プレニル化、および（Ｋ残基およびＲ残基の）メチル化が挙げられる。特定のＰＴＭの原因となる推定アミノ酸部位を特定するための統計的手法は、当分野に周知である（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：１３１８−１３２１を参照のこと）。例えば置換、欠失および／または挿入によりそうした部位を除去し、次いで任意で（ａ）結合活性、および／または（ｂ）ＰＴＭの消失を検証（実験的に、および／または理論的に）することが予期される。
【００７３】
例えば、５Ｆ９Ｇ４マウスＬＣＤＲ１（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＹＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号３９））は、１０および１１位の残基（ＮＧ）で推定「高リスク」脱アミド化モチーフを有すると特定されている。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置にあるこの部位を、残基１０の置換（例えば、Ｇ、ＳまたはＫへの）により除去することが予期される（例えば表３の複数のクローンと同様に）。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置にあるこの部位を、残基１１の置換（例えば、ＡまたはＹへの）により除去することも予期される（例えばＶＬ１．４  ｖドメイン配列を含有するクローン、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。
【００７４】
さらなる例では、５Ｆ９Ｇ４マウスＬＣＤＲ１（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＹＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号３９））は、１２および１３位の残基（ＮＴ）で推定「高リスク」脱アミド化モチーフを有すると特定されている。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置にあるこのリスク部位を、残基１２の置換（例えば、Ｑ、Ｙへの）により除去することが予期される（例えばＶＬ１．４  ｖドメイン配列を含有するクローン、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。
【００７５】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ヒト、ヒト化またはキメラであってもよい。
【００７６】
抗体分子またはその抗原結合部分は、１つまたは複数のヒト可変ドメインフレームワークスキャホールドを含有してもよく、その中にはＣＤＲが挿入されている。例えば、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域およびＶＬ領域の両方が、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有してもよい。
【００７７】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ５−５１ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中には対応するＨＣＤＲ配列が挿入されている。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ５−５１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中には対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されている。
【００７８】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−３ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中には対応するＨＣＤＲ配列が挿入されている。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−３ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中には対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されている。
【００７９】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入されている。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域を含有してもよく、その中には対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されている。
【００８０】
抗体分子またはその抗原結合部分は、中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入されているＩＧＨＶ５−５１ヒト生殖細胞系列スキャホールドと、中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入されているＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドとを含有してもよい。抗体分子またはその抗原結合部分は、中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されているＩＧＨＶ５−５１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域と、中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されているＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域とを含有してもよい。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表４のクローンのいずれか１つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列であってもよい。一部の実施形態では、６つすべてのＣＤＲ配列が、表４の同じクローン由来である。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列は、表４の第一のクローン由来であり、またＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列は、表４の第二のクローン由来である。
【００８１】
抗体分子またはその抗原結合部分は、中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入されているＩＧＨＶ１−３ヒト生殖細胞系列スキャホールドと、中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入されているＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドとを含有してもよい。抗体分子またはその抗原結合部分は、中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されているＩＧＨＶ１−３ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域と、中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されているＩＧＫＶ２−２８ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域とを含有してもよい。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表４のクローンのいずれか１つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列であってもよい。一部の実施形態では、６つすべてのＣＤＲ配列が、表４の同じクローン由来である。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列は、表４の第一のクローン由来であり、またＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列は、表４の第二のクローン由来である。
【００８２】
一部の態様では、抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。追加的な実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１ヌル、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫学的に不活性な定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域か、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域か、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域または野生型ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する、免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体は、表８のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。表８のＦｃ領域配列は、ＣＨ１ドメインから始まる。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体は、ヒトＩｇＧ４、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ１−３ＭまたはヒトＩｇＧ１−４ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。例えば、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）のＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ４のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｓ２２８Ｐ。例えば、ヒトＩｇＧ１−３ＭのＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ。一方で、ヒトＩｇＧ１−４ＭのＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓ。一部の態様では、免疫グロブリン分子の定常領域中のアミノ酸残基の位置は、ＥＵの命名法（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７−９４）に従って番号付けされる。一部の態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＲＤＥＬＴ（配列番号２６）モチーフ、またはＲＥＥＭ（配列番号２７）モチーフ（表８の下線部分）を含有してもよい。ＲＥＥＭ（配列番号２７）アロタイプは、ＲＤＥＬＴ（配列番号２６）アロタイプよりも少ないヒト集団に存在する。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体は、表４のクローンのいずれか１つの６つのＣＤＲアミノ酸配列、または表８のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体は、表８のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する免疫グロブリン重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である免疫グロブリン軽鎖定常領域を含有してもよい。
【００８３】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み； 
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み； 
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＨＶＰＹＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み； 
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＹＮＹＬＧ（配列番号５６）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み； 
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＡＮＴＹＬＧ（配列番号５５）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み； 
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＮＹＡＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＫＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２およびＧＧＦＲＡＭＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＦＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号５４）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み； 
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＰＳＦＱＧ（配列番号６１）のＨＣＤＲ２およびＧＧＶＲＡＭＤＹ（配列番号６２）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＡＳＱＶＰＹＴ（配列番号６３）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含み；または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号５８）のＨＣＤＲ２およびＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＧＳＨＶＰＹ（配列番号６０）のＬＣＤＲ３を含み、また重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含む。 
【００８４】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、または配列番号１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、または配列番号２からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、または配列番号３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、または配列番号４からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、または配列番号５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、または配列番号６からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、または配列番号７からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、または配列番号８からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、または配列番号９からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、または配列番号１０からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、または配列番号１１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、または配列番号１２からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１３を含有し、または配列番号１３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１４を含有し、または配列番号１４からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１５を含有し、または配列番号１５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１６を含有し、または配列番号１６からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。
【００８５】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、または配列番号１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、または配列番号２からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する； 
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、または配列番号３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、または配列番号４からなり、および重鎖定常領域は、配列番１７〜２３  のいずれか１つを含有する；      
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、または配列番号５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、または配列番号６からなり、重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する； 
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、または配列番号７からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、または配列番号８からなり、重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する； 
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、または配列番号９からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、または配列番号１０からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する； 
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、または配列番号１１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、または配列番号１２からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する； 
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１３を含有し、または配列番号１３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１４を含有し、または配列番号１４からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する；または
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１５を含有し、または配列番号１５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１６を含有し、または配列番号１６７からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１７〜２３のいずれか１つを含有する。 
【００８６】
一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体は、免疫エフェクターが無効であってもよい。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分は、免疫エフェクター機能を誘導せず、任意で免疫エフェクター機能を抑制する。一部の態様では、抗ＣＤ４７は、ヒトＦｃγＲＩ受容体、ＦｃγＲＩＩａ受容体、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、およびＦｃγＲＩＩＩｂ受容体への測定可能な結合を欠いてもよいが、ヒトＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合は維持し、任意で、ヒトＦｃＲｎ受容体への結合も維持する。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂは、活性化受容体の例示である。ＦｃγＲＩＩｂは、阻害性受容体の例示である。ＦｃＲｎは、リサイクル受容体の例示である。一部の態様では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分のヒトＦｃ受容体への結合アフィニティは、ビアコア（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））解析により測定されてもよい。一部の態様では、ＨＴＲＦ法（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を使用して、ヒトＦｃ受容体への抗ＣＤ４７抗体の結合を試験することができる。ＨＴＲＦ法の１つの例において、ヒトＩｇＧ１（野生型）が標識され、一揃いのＦｃガンマ受容体も同様にされ、次いで組換えＦｃ断片を含む抗体が、力価測定競合に使用される。一部の態様では、ＣＤ４７陽性細胞と、ヒト白血球および抗ＣＤ４７抗体とが混合されてもよく、そしてＣＤＣ、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰによる細胞殺傷が測定されてもよい。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ（表８を参照）のＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する抗ＣＤ４７抗体は、エフェクターが無効である。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ（表８を参照）のＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する抗ＣＤ４７抗体は、エフェクターが無効でない。
【００８７】
抗体分子またはその抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）断片、四量体抗体、四価抗体、多特異性抗体（例えば二価抗体）、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、モノクローナル抗体、または融合タンパク質であってもよい。１つの実施形態では、抗体は、第一の抗原と第二の抗原とに特異的に結合する二特異性抗体であってもよく、この場合において第一の抗原はＣＤ４７であり、第二の抗原はＣＤ４７ではない。抗体分子、ならびにその構築方法および使用方法は、例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ＆Ｈｕｄｓｏｎ（２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（９）：１１２６−１１３６）に記載されている。
【００８８】
一部の態様においては、本発明は、ＩｇＧ形式におけるよりも一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）形式でより強力に、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を中和する、重鎖可変（ＶＨ）領域配列および軽鎖可変（ＶＬ）領域配列を提供する。一部の実施形態では、こうした分子のＶＨ領域は、ＩＧＨＶ５−５１フレームワーク内にある。一部の実施形態では、本発明は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を包含するものであって、（ａ）ＨＣＤＲ１はＧ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｘ１−Ｙ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４を含有し、式中、Ｘ１はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ２はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＭまたはＭの保存的置換であり、またＸ４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号１０４）、（ｂ）ＨＣＤＲ２はＭ−Ｇ−Ｘ１−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｔ−Ｘ５−Ｙ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｆ−Ｑ−Ｇを含有し、式中、Ｘ１はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＮまたはＮの保存的置換であり、Ｘ３はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＱまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ８はＫまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号１０５）、（ｃ）ＨＣＤＲ３はＸ１−Ｇ−Ｘ２−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｄ−Ｙを含有し、式中、Ｘ１はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＹまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ４はＭまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４４）、（ｄ）ＬＣＤＲ１はＲ−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｓ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｙ−Ｌ−Ｘ８を含有し、式中、Ｘ１はＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ２はＶまたはＶの保存的置換であり、Ｘ３はＹまたはＹの保存的置換であり、Ｘ４はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＧ任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ７はＴまたは任意の他のアミノ酸でありまたＸ８はＧまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４５）、（ｅ）ＬＣＤＲ２はＫ−Ｘ１−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘ２−Ｓを含有し、式中、Ｘ１はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ２はＦまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４６）、および（ｆ）ＬＣＤＲ３はＸ１−Ｑ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｐ−Ｙ−Ｘ６を含有し、式中、Ｘ１はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＧまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ５はＶまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ６はＴまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号４７）、そしてＶＨ領域は、中にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されているＩＧＨＶ５−５１ヒト生殖細胞系列スキャホールドアミノ酸配列を含有する。一実施形態では、本発明のｓｃＦＶは、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＳＦＴＮＹＮＩＨ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＴＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＰＫＦＱＧ（配列番号９４）のＨＣＤＲ２およびＧＧＹＲＡＥＤＹ（配列番号５９）のＨＣＤＲ３を含むことと���（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＧ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＫＧＳＮＲＦＳ（配列番号５２）のＬＣＤＲ２およびＭＱＧＳＨＶＰＹＴ（配列番号９７）のＬＣＤＲ３を含むこととを含んでもよい。一部の態様では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨを含有する。一部の態様では、ｓｃＦｖは、ＶＨ配列とＶＬ配列との間にリンカーを含有する。一部の態様では、ｓｃＦｖは、免疫グロブリン定常領域または免疫グロブリン定常領域の部分をさらに含有する。一部の態様では、本発明は、本明細書に開示される１または複数のｓｃＦｖを含有する多重特異性（例えば、二特異性）のＣＤ４７結合分子を提供する。一部の場合では、免疫グロブリン定常領域は、配列番号１７〜２３のうちのいずれか１つを含有する。
【００８９】
本発明の別の態様では、治療剤に結合された、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。
【００９０】
適切な治療剤の例示としては、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、ならびに細胞増殖抑制酵素および細胞溶解性酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ）が挙げられる。さらなる治療剤としては、例えば免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤をコードする遺伝子などの治療用核酸が挙げられる。これらの薬剤の記述子は、相互排他的ではなく、ゆえに治療剤は、上述の用語の１つまたは複数を使用して記載されてもよい。
【００９１】
免疫結合体における使用に適した治療剤の例としては、タキサン、メイタンシン、ＣＣ−１０６５、およびデュオカルマイシン、カリケアミシンおよび他のエンジイン、ならびにオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）が挙げられる。他の例としては、抗葉酸剤、ビンアルカロイド、およびアントラサイクリンが挙げられる。植物毒素、他の生物活性タンパク質、酵素（すなわちＡＤＥＰＴ）、放射性同位体、光増感剤が、免疫結合体において使用されてもよい。さらに結合体は、細胞毒性剤として二次的な担体、例えばリポソームまたはポリマーなどを使用して作製され得る。適切な細胞毒素としては、細胞の機能を阻害または妨害し、および／または細胞の破壊をもたらす薬剤が挙げられる。代表的な細胞毒素としては、抗生物質、チューブリン重合の阻害剤、ＤＮＡに結合し、破壊するアルキル化剤、そしてタンパク質合成を破壊する、または例えばタンパク質キナーゼ、ホスファターゼ、トポイソメラーゼ、酵素およびサイクリンなどの必須の細胞タンパク質の機能を破壊する薬剤が挙げられる。
【００９２】
代表的な細胞毒素としては、以下に限定されないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ノガラマイシン、メノガリル、ピタルビシン（ｐｉｔａｒｕｂｉｃｉｎ）、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルジン（ｄｏｘｉｆｌｕｈｄｉｎｅ）、ペントスタチン、ブロクスジン（ｂｒｏｘｕｈｄｉｎｅ）、カペシタビン、クラドビン（ｃｌａｄｈｂｉｎｅ）、デシタビン、フロクスジン（ｆｌｏｘｕｈｄｉｎｅ）、フルダラビン、グーゲロチン、ピューロマイシン、テガフール、チアゾフン（ｔｉａｚｏｆｕｈｎ）、アダマイシン（ａｄｈａｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、メクロレタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキサート、フルロウラシル（ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、エトポシド、タキソール、タキソールアナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチン類、マイトマイシン、チオテパ、タキサン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、タモキシフェン、イダルビシン、ドラスタチン／オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、ヘミアステリン（ｈｅｍｉａｓｔｅｒｌｉｎ）、エスペラミシン、ならびにマイタンシノイドが挙げられる。
【００９３】
適切な免疫調節剤としては、腫瘍に対するホルモンの作用を遮断する抗ホルモン剤、およびサイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御する、またはＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤が挙げられる。
【００９４】
さらに、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子も提供される。核酸分子は、本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分の、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または（ｃ）ＶＨ領域とＶＬ領域の両方のアミノ酸配列をコードしてもよい。一部の態様では、本明細書に規定される核酸分子が単離されてもよい。
【００９５】
さらに、本明細書に規定される本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。ベクターは、発現ベクターであってもよい。
【００９６】
また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。宿主細胞は、組換え宿主細胞であってもよい。
【００９７】
さらなる態様において、抗ＣＤ４７抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養することと、当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離することと、を含む。
【００９８】
本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【００９９】
さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。
【０１００】
さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。
【０１０１】
例えば、癌は、胃腸間質性癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌であり得る。
【０１０２】
本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。
【０１０３】
別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤と組み合わせた併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、または使用のためのベクター、または治療方法を提供する。
【０１０４】
さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。
【０１０５】
本発明はさらに、対象において自己免疫性疾患もしくは炎症性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。
【０１０６】
例えば、自己免疫性疾患または炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎であり得る。
【０１０７】
また、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【０１０８】
さらに、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【０１０９】
本発明はさらに、対象において心血管疾患もしくは線維症を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。
【０１１０】
また、心血管疾患または線維症の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【０１１１】
さらに、心血管疾患または線維症の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【０１１２】
本発明の任意の態様における心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症であってもよい。
【０１１３】
本発明の任意の態様における線維症は、例えば、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、または気管支炎であってもよい。
【０１１４】
一実施形態において、本発明は、治療における使用のための本明細書に開示されるアミノ酸配列を含有する抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を提供する。
【０１１５】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤を含有してもよい。薬学的に許容可能な賦形剤は、二次的な反応を引き起こさない医薬組成物に入れられる化合物または化合物の組み合わせであってもよく、例えば、抗ＣＤ４７抗体分子の投与の促進、その持続期間の延長、および／もしくは体内におけるその有効性の増加、または溶液中の可溶度の上昇を可能にする。これら薬学的に許容可能なビヒクルは周知であり、抗ＣＤ４７抗体分子の投与形態の効果に応じて当業者により適合される。
【０１１６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、凍結乾燥されて提供され、投与前に再構成されてもよい。例えば凍結乾燥された抗体分子は、滅菌水で再構成され、個体への投与前に生理食塩水と混合される。
【０１１７】
抗ＣＤ４７抗体分子は通常、医薬組成物の形態で投与され、当該医薬組成物は、抗体分子に加えて少なくとも１つの構成要素を含有してもよい。したがって医薬組成物は、抗ＣＤ４７抗体分子に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、または当業者に周知の他の物質を含有してもよい。そうした物質は、非毒性でなければならず、そして抗ＣＤ４７抗体分子の効能に干渉してはならない。担体または他の物質の正確な性質は、投与経路に依存することとなり、これは、以下に検討されるように、ボーラス、点滴、注射または任意の他の適切な経路であってもよい。
【０１１８】
例えば注射などによる皮下投与または静脈内投与などの非経口投与に関しては、抗ＣＤ４７抗体分子を含有する医薬組成物は、発熱物質を含まず、そして適切なｐＨ、等張性および安定性の非経口に受容可能な水溶液の形態であってもよい。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射溶液、リンゲル注射溶液、乳酸リンゲル注射溶液などの等張ビヒクルを使用して適切な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、および／または他の添加剤を必要に応じて採用してもよく、例えばリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンなどの抗酸化剤；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３’−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド；例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；例えばポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンなどの単糖、二糖および他の炭水化物；例えばＥＤＴＡなどのキレート剤；例えばショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；例えばナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；および／または例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１１９】
抗ＣＤ４７抗体分子を含有する医薬組成物は、治療される状態に応じて、単独で投与されてもよく、または他の治療と併用されて、同時に、または連続のいずれかで投与されてもよい。
【０１２０】
本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ヒトまたは動物の身体の治療方法に使用されてもよく、治療には、予防的または防止的な治療が含まれる（例えば、個体において症状が発生する前に、当該個体において当該症状が発生するリスクを低下させる、その発生を遅延させる、または発生後の重症度を低下させるための治療）。治療方法は、抗ＣＤ４７抗体分子を、その必要のある個体に投与することを含んでもよい。
【０１２１】
投与は通常、「治療有効量」でされ、これは、患者に対し有益性を示すために充分な量である。そうした有益性は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善であってもよい。投与される実際の量、投与速度、および投与の経時変化は、治療されるものの、特に治療される哺乳動物の、性質および重症度、個々の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医療従事者がわかっている他の因子に依存することとなる。例えば用量の決定などの治療の指示は、一般開業医および他の医師の責の範囲内にあり、治療される疾患の症状の重症度、および／または治療される疾患の進行に依存し得る。抗体分子の適切な投与量は、当分野に周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：６５９−６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ  Ｋ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ４：９１５−９２２）。具体的な用量は、本明細書において、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００３）において示され、投与される薬剤のタイプに応じた用量が、使用され得る。抗体分子の治療有効量または適切な投与量は、そのインビトロ活性と、動物モデルにおけるインビボ活性とを比較することにより決定され得る。マウスおよび他の被験動物における有効用量を、ヒトに外挿する方法は公知である。正確な投与量は、抗体が予防用または治療用であるか、治療される領域の大きさおよび位置、抗体の正確な性質（例えば全抗体、断片）および抗体に付加された任意の検出可能な標識または他の分子の性質をはじめとする多くの因子に依存することとなる。
【０１２２】
典型的な抗体投与量は、全身投与に対しては１００μｇ〜１ｇ、また局所投与に対しては１μｇ〜１ｍｇの範囲である。初回に高い負荷投与量で、その後は１回または複数回の低投与量が投与されてもよい。典型的には、抗体は、例えばＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプなどの全抗体である。これは成人患者の単回治療用の投与量であり、小児および幼児に対しては相対的に調整され得、そして分子量に比例して他の抗体形式にも調整され得る。治療は、医師の裁量で毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で繰り返され得る。個々の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態および薬力学的性質、投与経路、ならびに治療される症状の性質に依存し得る。
【０１２３】
治療は定期的であってもよく、投与の間の期間は、約２週間またはそれ以上であってもよく、例えば約３週間以上、約４週間以上、約１カ月に１回以上、約５週間以上、または約６週間以上であってもよい。例えば、治療は、２週〜４週ごと、または４週〜８週ごとであってもよい。治療は、外科手術の前、および／もしくは後に行われてもよく、ならびに／または外科的治療もしくは浸潤的手順の解剖学的位置に直接投与または適用されてもよい。適切な製剤および投与経路は、上記に記載される。
【０１２４】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、皮下注射として投与されてもよい。皮下注射は、例えば長期間または短期間の予防用／治療用の自己注射器を使用して投与されてもよい。
【０１２５】
一部の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子の治療効果は、血清抗体半減期の数倍の間、持続し得、投与量に依存する。例えば抗ＣＤ４７抗体分子の単回投与の治療効果は、個体において、１カ月以上、２カ月以上、３カ月以上、４カ月以上、５カ月以上、または６カ月以上、持続し得る。
【０１２６】
本発明はさらに、ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、および任意でカニクイザルのＣＤ４７にも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗ＣＤ４７  ＣＤＲをヒトｖ−ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗ＣＤ４７抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗ＣＤ４７抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのファージライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣＤ４７への結合について、および任意でカニクイザルのＣＤ４７への結合についても当該ファージライブラリーを選択する工程、
（４）選択する工程（３）から、ヒトＣＤ４７に特異的に結合する、および任意でカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合するクローンをスクリーニングする工程、ならびに
（５）ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣＤ４７にも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を、工程（４）から選択されたクローンから作製する工程、を含む。
【０１２７】
当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化し、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化し、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善するさらなる工程を含んでもよい。
【０１２８】
上述の方法に適用可能な改善は、以下の実施例１に記載されるとおりである。
【０１２９】
本明細書で用いる場合、“ＣＤ４７”の語は、ＣＤ４７の生物学的活性の少なくとも一部を保持する、ＩＡＰ（インテグリン関連タンパク質（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ））を指す。本明細書において使用される場合、ＣＤ４７は、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含むすべての哺乳動物種の天然配列ＣＤ４７を含む。「ＣＤ４７」の語は、ヒトＣＤ４７のバリアント、アイソフォームおよび種のホモログを含むために使用される。本発明の抗体は、ヒト以外の種に由来するＣＤ４７、特にカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）由来のＣＤ４７と交差反応し得る。ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７アミノ酸配列の例を、表９に提供する。ある実施形態では、抗体は、完全にヒトＣＤ４７に特異的であってもよく、非ヒトとの交差反応性を呈さなくてもよい。
【０１３０】
明細書において使用される場合、本発明の抗体の文脈において使用される場合の「アンタゴニスト」、または「抗ＣＤ４７アンタゴニスト抗体」（「抗ＣＤ４７抗体」と相互交換可能に称される）とは、ＣＤ４７に結合することができる、ならびにＣＤ４７の生物学的活性を阻害することができる、および／またはＣＤ４７シグナル伝達により介在される下流経路を阻害することができる抗体を指す。抗ＣＤ４７アンタゴニスト抗体には、例えばＣＤ４７に対する受容体結合および／または細胞反応の惹起など、ＣＤ４７シグナル伝達により介在される下流経路を含めた、（有意に）ＣＤ４７の生物学的活性（を含めた）を遮断する、拮抗する、抑制する、または低下させることができる抗体を包含する。本発明の目的に対し、「抗ＣＤ４７アンタゴニスト抗体」という用語は、ＣＤ４７それ自体、およびＣＤ４７の生物学的活性（限定されないが、骨髄細胞系列の細胞による食作用の活性化を促進するする能力を含む）、または活性もしくは生物学的活性の結果が、任意の意義のある程度に実質的に無効化される、減少される、または中和されるすべての用語、タイトル、ならびに機能的状態および機能的特性を包含することが明示的に理解されるであろう。
【０１３１】
他の受容体よりも高いアフィニティ、高いアビディティ、より容易に、および／またはより長い期間、ＣＤ４７と結合する場合、当該抗体は、ＣＤ４７に「特異的に結合する」、「特異的に相互作用する」、「優先的に結合する」、「結合する」または「相互作用する」。
【０１３２】
「抗体分子」は、例えば炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、「抗体分子」という用語は、インタクトなポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のみならず、任意の抗原結合断片（例えば「抗原結合部分」）またはその一本鎖、抗体を含む融合タンパク質、ならびに例えば限定されないが、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えばサメ抗体およびラクダ科抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびｂｉｓ−ｓｃＦｖを含む抗原認識部位を含有する免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造体も包含する。
【０１３３】
「抗体分子」は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を包含するが、抗体はいずれか特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、様々なクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンにはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５種類の主要なクラスがある。これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられる場合があり、例えば、ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ｌｇＡ１およびｌｇＡ２がある。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域はそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。このサブユニットの構造、および様々なクラスの免疫グロブリンの三次元構造は周知である。
【０１３４】
抗体分子の「抗原結合部分」という用語は、本明細書において使用される場合、ＣＤ４７に特異的に結合する能力を保持する、インタクトな抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体分子の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片により実現され得る。抗体分子の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例示としては、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ’）２；ＶＨドメインとＣＨ１ドメインとからなるＦｄ断片；抗体の１つのアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【０１３５】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に及ぶと規定される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスの番号である。免疫グロブリンのＦｃ領域は通常、ＣＨ２とＣＨ３の２つの定常ドメインを含有する。当分野に知られているように、Ｆｃ領域は、二量体型または単量体型で存在し得る。
【０１３６】
抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域の、いずれか単独または組み合わせを指す。当分野に知られているように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られている３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）に繋がる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲに隣接するＦＲを選択するとき、例えば抗体のヒト化または最適化を行うとき、同じ基準クラスのＣＤＲ配列を含有する抗体由来のＦＲが好ましい。
【０１３７】
本出願において使用されるＣＤＲの定義は、当分野で創出された多くの異質的な、しばしば矛盾するスキームにおいて使用されるドメインを組み合わせており、免疫グロブリンレパートリー分析と、遊離状態および抗原との共結晶状態の抗体の構造分析との組み合わせに基づいている（Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，ａｂＹｓｉｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．［ＰＭＩＤ：２７５６１７０７；Ｅｐｕｂ  ２２  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１６］によるレビューを参照のこと）。本明細書において使用されるＣＤＲの定義（「統合（Ｕｎｉｆｉｅｄ）」定義）は、そうしたすべての過去の洞察の教示を組み込んでおり、潜在的に標的−結合の相補性を介在する完全な残基の状況を抽出するために必要なすべての適切なループ位置を含む。
【０１３８】
表１は、本明細書に規定される５Ｆ９Ｇ４マウス抗ＣＤ４７抗体のＣＤＲのアミノ酸配列（「統合」スキーム）を、同じＣＤＲを規定する周知の代替的な系と比較して示している。
【０１３９】
本明細書において使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸を、機能活性を大きく有害には変化させない別のアミノ酸で置換することを指す。「保存的置換」の好ましい例は、１つのアミノ酸を、以下のＢＬＯＳＵＭ  ６２置換マトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ  ８９：１０９１５−１０９１９を参照のこと）において０以上の値（≧０）を有する別のアミノ酸で置換することである。
【０１４０】
【化１】
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【０１４１】
「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）という用語は、例えば任意の真核細胞クローン、原核細胞クローンもしくはファージクローンなどの１つのコピーまたはクローンから誘導された抗体またはその抗原結合部分を指し、それが作製された方法ではない。本発明のモノクローナル抗体は、均質、または実質的に均質な集団で存在することが好ましい。
【０１４２】
「ヒト化」抗体分子とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限に含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の抗原結合性の抗体下位配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体分子またはその抗原結合部分の形態を指す。ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、アフィニティおよび能力を有する例えばマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であってもよい。
【０１４３】
「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」とは、ヒト抗体遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから誘導された、またはヒト細胞から誘導された抗体分子またはその抗原結合部分を指す。
【０１４４】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列は別の種に由来する抗体分子またはその抗原結合部分を指すことが意図され、例えば、可変領域配列はマウス抗体に由来し、定常領域配列はヒト抗体に由来する抗体分子などである。
【０１４５】
「抗体−薬剤結合体」および「免疫結合体」とは、ＣＤ４７に結合する、抗体誘導体を含めた抗体分子またはその抗原結合部分であって、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、および／または治療剤と結合された抗体分子またはその抗原結合部分を指す。
【０１４６】
本発明の抗体分子、またはその抗原結合部分は、例えば組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはそうした技術もしくは当分野に既に公知である他の技術との組み合わせなどの当分野に周知の技術を使用して作製され得る。
【０１４７】
「単離された分子」（分子が、例えばポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体である場合）という用語は、その起源または誘導の源によって、（１）自然状態では付随する天然の関連構成要素と関連していない分子、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種由来の細胞により発現された分子、または（４）自然に発生しない分子である。したがって、化学的に合成された分子、または天然での起源である細胞とは異なる細胞系で発現された分子は、その天然の関連構成要素から「単離される」。さらに分子は、当分野に周知の精製技術を使用した単離によって、天然の関連構成要素を実質的に含まない状態にされ得る。分子純度または均質性は、当分野に周知の多くの手段により解析され得る。例えばポリペプチドサンプルの純度は、当分野に周知の技術を使用してポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用し、ゲルを染色してポリペプチドを可視化して解析されてもよい。ある目的に対し、ＨＰＬＣ、または精製分野で周知の他の手段を使用することにより、さらに高い分解能が提供される場合がある。
【０１４８】
「エピトープ」という用語は、抗体分子の抗原結合領域のうちの１つまたは複数で抗体分子に認識され、結合されることができる分子の部分、またはその抗原結合部分を指す。エピトープは、一次、二次または三次のタンパク質構造の規定領域からなる場合があり、抗体またはその抗原結合部分の抗原結合領域に認識される標的の二次構造単位または二次構造ドメインの組み合わせを含む。同じくエピトープは、例えばアミノ酸または糖側鎖などの規定の化学的に活性な分子の表面群からなる場合があり、特定の三次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する場合がある。本明細書において使用される場合、「抗原性エピトープ」という用語は、当分野に周知の任意の方法、例えば従来的な免疫アッセイ法、抗体競合結合アッセイ、またはｘ線結晶法もしくは関連する構造決定法（例えばＮＭＲ）により決定されたときに、抗体分子が特異的に結合することができるポリペプチドの部分として規定される。
【０１４９】
「結合アフィニティ」または「ＫＤ」という用語は、特定の抗原−抗体の相互作用の解離速度を指す。ＫＤは、「ｏｆｆ−ｒａｔｅ  （ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離速度の、「ｏｎ−ｒａｔｅ  （ｋｏｎ）」、すなわち会合速度に対する比率である。ゆえにＫＤは、ｋｏｆｆ  ／  ｋｏｎに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。従って、ＫＤが小さくなると、結合アフィニティは強くなる。ゆえにＫＤが１μＭであれば、ＫＤが１ｎＭの場合と比較して結合アフィニティが弱いことを示す。抗体のＫＤ値は、当分野に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤの決定方法の１つは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用するものであり、典型的には、例えばビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））システムなどのバイオセンサーシステムを使用する。
【０１５０】
「有効性」という用語は、生物活性の測定値であり、本明細書に記載のＣＤ４７活性アッセイにおいて測定される活性の５０％を阻害する、抗原ＣＤ４７に対する抗体または抗体薬剤結合体のＩＣ５０すなわち有効濃度として表す場合もある。
【０１５１】
本明細書において使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という文言は、所望の治療結果を実現するために必要な（用量での、および期間に対する、および投与手段に対する）量を指す。有効量は、活性剤の、対象に治療上有益な影響を与えるために必要な少なくとも最小量であるが、対象に毒性のある量よりは少ない量である。
【０１５２】
本発明の抗体分子の生物活性に関して本明細書において使用される場合、「阻害する」または「中和する」という用語は、限定されないが、ＣＤ４７に対する抗体分子の生物活性、または抗体分子とＣＤ４７の結合相互作用を含む、阻害されるものの例えば進行または重症度を実質的に拮抗する、妨げる、予防する、抑える、減速させる、破壊する、除去する、停止させる、低下させる、または反転させる抗体の能力を意味する。
【０１５３】
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクターに対するレシピエントであってもよく、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫物を含み、当該子孫物は、自然の、偶発的な、または意図的な変異により、元の親細胞と完全に同一（形態において、またはゲノムＤＮＡの相補体において）であるとは限らない場合がある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【０１５４】
本明細書において使用される場合、「ベクター」とは、宿主細胞において、関心の１つまたは複数の遺伝子または配列を送達することができる、そして好ましくは発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては限定されないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン縮合剤と会合したＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、および例えば産生細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。
【０１５５】
本明細書において使用される場合、別段が示唆されない限り、「治療すること」という用語は、そうした用語が適用される障害もしくは症状、またはそうした障害もしくは症状の１つまたは複数症状を反転させる、改善させる、その進行を阻害する、その進行を遅延させる、発症を遅延させる、または予防することを意味する。本明細書において使用される場合、別段の示唆が無い限り、「治療」という用語は、上述に規定される治療の行為を指す。「治療すること」という用語は、対象のアジュバント療法およびネオアジュバント療法も含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及を含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及もさらに含む。
【０１５６】
本明細書において、実施形態は、「含む、含有する」という文言で記載されているか、さもなければ「〜からなる」および／または「本質的に〜からなる」として記載される類似した実施形態も提供されることを理解されたい。
【０１５７】
本発明の態様または実施形態が、マーカッシュ群または他の択一的な群で記載されている場合、本発明は、概して列挙される群全体のみならず、当該群の各メンバーを個々に、および当該主要群のうちの可能性のあるすべての亜群、そして当該群メンバーの１つまたは複数を欠いた主要群も包含する。本発明はさらに、請求される本発明の群メンバーのいずれかの１つまたは複数の明白な除外を予期するものである。
【０１５８】
別段の規定がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合、本明細書が定義を含めて主導をとるものとする。本明細書および特許請求の範囲の全体を通じて、「含む、含有する」という文言、または例えば「含む、含有する」または「含むこと、含有すること」といった変化形は、記述される整数値の含有、または整数値の群の含有を示唆するが、任意の他の整数値または整数値の群の除外は示唆しないと理解される。文脈により別段であることを要しない限り、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形は単数を含むものとする。「例えば」という用語の後に続くあらゆる例示は、包括的または限定であることは意味しない。
【０１５９】
本発明の実施は、別段の示唆が無い限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来的な技術を採用し、それら技術は当分野の技術範囲内にある。
【０１６０】
本発明の特定の非限定的な実施形態を、添付の図面を参照しながら記載することとする。
【実施例】
【０１６１】
実施例１．最適化抗ＣＤ４７治療用抗体の作製
イントロダクション
本実施例において、本発明者らは、アンタゴニスト性の最適化抗ＣＤ４７抗体パネルの作製に成功した。これら抗ＣＤ４７抗体は良好に発現され、生物物理的に安定であり、溶解度が高く、そして好ましいヒト生殖細胞系列に対し最大のアミノ酸配列同一性を有している。
【０１６２】
材料及び方法
ＩｇＧのクローニング、一過性発現、精製
抗体ｖ−ドメインをコードするＤＮＡ配列を、制限酵素−ライゲーションクローニングを介して、別個のプラスミドベクター中の別個のＩｇＧ重鎖およびＩｇＧ軽鎖の発現カセット内にクローニングした。抗体は、以下の２つのヒトＩｇＧ１形式で発現された：ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）およびＩｇＧ１ヌル−Ｆｃγ受容体誘導型のエフェクター機能が最小化されている、下位ヒンジ変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａを有するＩｇＧ１。製造元のプロトコールに従い、エンドトキシンを含まないＩｇＧ発現プラスミド調製物を用いた一過性トランスフェクションの後、ＨＥＫ−２９３ｅｘｐｉまたはＣＨＯ細胞において、ＩｇＧを発現した。以下の単工程プロトコールを使用してＩｇＧを精製した：馴化培地を、ＰＢＳ  ｐＨ７．４で前もって平衡化された１ｍＬのＰｒｏＡセファロースカラム上にロードした（適切に）。カラムを、５カラム体積のＰＢＳ  ｐＨ７．４で洗浄し、その後、タンパク質を１００ｍＭのグリシン、ｐＨ２．７で溶出させ、３０ｋＤａカットオフ透析膜を使用して、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中で透析を行った。
【０１６３】
ＩｇＧ力価測定結合ＥＬＩＳＡｓ
グライナー社のＢｉｏ−Ｏｎｅ  Ｈｉｇｈ  ｂｉｎｄ  ＥＬＩＳＡプレートをコーティングするために、標的タンパク質を炭酸塩緩衝液中で１μｇ／ｍｌに希釈し、１ウェル当たり１００μｌで、４℃で一晩、添加した。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ  ｐＨ７．４で３回洗浄し、１％  ＢＳＡのＰＢＳ溶液（３８０μｌ／ウェル）で１時間、室温でブロッキングし、その後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で３回洗浄した。次いでＣＤ４７抗体（１００μｌ／ウェル；ＰＢＳＴ中で希釈）を添加し、次いで１時間、室温でインキュベートした。次いでプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ヤギ抗ヒトカッパ鎖−ＨＲＰ（１００μｌ／ウェル）を室温で１時間添加した。次いでプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄した後、１ウェル当たり１００μｌのＴＭＢを添加した。１００μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４／ウェルを加えることで反応を停止させ、４５０ｎｍでプレートリーダー上でＯＤを読み取った。
【０１６４】
抗ＣＤ４７抗体は、ＥＬＩＳＡで多重反応性を試験した。精製された組換えの、標的抗原および非標的抗原を、炭酸塩緩衝液中、１ウェル当たり１００ｎｇで９６ウェルＮｕｎｃ  ｍａｘｉｓｏｒｐプレートに４℃で一晩、コーティングした。次いでプレートをＰＢＳで３回洗浄し、１％ＢＳＡのＰＢＳ溶液でブロッキングを行い、次いでＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。次いで一次抗体の希釈系列を加え、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、その後、ヤギ抗ヒトカッパ鎖−ＨＲＰ  １：４，０００の二次抗体を加えた。次いでウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄して、１ウェル当たり１００μｌのＴＭＢペルオキシダーゼ基質を加えて、１００μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４を加えることで反応を停止させて、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。過去に記載（Ｍｏｕｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ  ４６７：５９１−５９５を参照のこと）されるように、負電荷を帯びた生物分子表面上でのＥＬＩＳＡを介したＩｇＧ結合解析が行われた。
【０１６５】
ＣＤ４７ライブラリーの作製および選択
ＣＤ４７  ｓｃＦｖレパートリーは、大量オリゴヌクレオチド合成およびＰＣＲにより組み立てられた。次いで増幅されたｓｃＦｖレパートリーを制限酵素−ライゲーションを介してファージミドベクター内にクローニングし、大腸菌ＴＧ−１細胞内に形質転換した。ファージレパートリーは、原則として過去に詳述されるようにレスキューされた（Ｆｉｎｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ６８１：３８３−４０１）。
ファージ選択は、ストレプトアビジン磁気マイクロビーズをＣＤ４７−Ｆｃタンパク質（ヒトまたはカニクイザルのいずれか）でコーティングし、ビーズをＰＢＳで３回洗浄して、５％スキムミルクタンパク質（ＭＰＢＳ）を加えたＰＢＳ  ｐＨ７．４中に再懸濁させることにより実施された。これらビーズは、選択のラウンド１では２００ｎＭの標的タンパク質でコーティングされており、その後の連続ラウンドでは１００、５０および１０ｎＭでコーティングした。
【０１６６】
ＨＴＲＦ結合競合アッセイ
移植クローンおよびライブラリー由来クローンによる、ヒトおよび／またはカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃへのｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ結合に対するエピトープ競合を検証するために、競合ＨＴＲＦアッセイを確立した。精製されたｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ１を、標識キット（ＣｉｓＢｉｏ社）を製造元の説明書に従い使用して、テルビウムで標識した。最終反応混合物は、上述の通り調製された、ビオチン化ヒトまたはカニクイザルのＣＤ４７-Ｆｃ、ＳＡ−ＸＬ６６５（ＣｉｓＢｉｏ社）、テルビウム標識された親ｈ５Ｆ９Ｇ４、および関心の競合ｓｃＦｖまたはＩｇＧを含有した。トータルの反応体積は、１×アッセイ緩衝液［５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ  ７．５、４００ｍＭのフッ化カリウム、および０．１％のＢＳＡ（ｗ／ｖ）］中、２０μｌであった。３８４ウェルの低体積黒色プレート（Ｎｕｎｃ社）に連続して試薬を加えた。室温で１時間、反応を進ませ、その後にプレートをプレートリーダー上で３４０ｎｍの励起、および６１５ｎｍ（ｈ５Ｆ９Ｇ４−テルビウムからのインプットドナー蛍光を測定）と６６５ｎｍ（ＳＡＸＬ６６５からのアウトプットアクセプター蛍光を測定）との２つの発光測定値を用いて読み取った。測定値は、６６５ｎｍ／６１５ｎｍの比率として表した。
【０１６７】
ＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合競合アッセイ
ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの結合相互作用を遮断する最適化リードの能力を検証するために、競合ＥＬＩＳＡアッセイを確立した。グライナー社のＢｉｏ−Ｏｎｅ  Ｈｉｇｈ  ｂｉｎｄ  ＥＬＩＳＡプレートをコーティングするために、炭酸塩コーティング緩衝液中１０μｇ／ｍｌのヒトＳＩＲＰα−Ｆｃを、ウェル当たり１００μｌで、４℃で一晩、添加した。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ  ｐＨ７．４で３回洗浄し、１％  ＢＳＡのＰＢＳ溶液（３８０μｌ／ウェル）で１時間、室温でブロッキングし、その後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で３回洗浄した。次いで、ビオチン化したヒト、マウスまたはカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃを、競合ｓｃＦｖまたはＩｇＧを添加して状態でまたは添加しない状態で、ＰＢＳ中０．２μｇ／ｍｌで、１ウェル当たり１００μｌで、室温で６０分間添加した。次いでプレートを、ＰＢＳＴで３回洗浄し、ストレプトアビジンＨＲＰを、室温で１時間添加した（１００μｌ／ウェル）。次いでプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄した後、１ウェル当たり１００μｌのＴＭＢを添加した。１００μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４／ウェルを加えることで反応を停止させ、４５０ｎｍでプレートリーダー上でＯＤを読み取った。
【０１６８】
抗体ｖ−ドメインＴ細胞エピトープ含量：インシリコ分析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ社（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．））は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、抗体ｖ−ドメイン中の潜在的な免疫原性を評価するために使用した。ｉＴｏｐｅ（商標）を使用して、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対して無差別な高アフィニティ結合を有するペプチドに関し、重要なリードのＶＬ配列およびＶＨ配列を解析した。無差別な高アフィニティのＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床免疫原性に関する高いリスク指標であるＴ細胞エピトープの存在と相関すると考えられている。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、ペプチドのアミノ酸側鎖と、３４種のヒトＭＨＣクラスＩＩアレルの開放末端結合溝（ｇｒｏｏｖｅ）内の特定の結合ポケット（特にポケット位置；ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７およびｐ９）との間の有益な相互作用を予測する。これらアレルは、広く存在する最も普遍的なＨＬＡ−ＤＲアレルであり、任意の特定の民族集団で最も多く存在するものによって起こる重み付けはない。当該アレルのうちの２０種が、「開いた」ｐ１構造を含有している。そして１４種が「閉じた」構造を含有しており、８３位のグリシンがバリンで置換されている。重要な結合残基の位置は、被験タンパク質配列にわたり８アミノ酸が重複している９ｍｅｒペプチドのインシリコ生成により取得される。このプロセスによって、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する、または結合しないペプチド同士を高い正確性で識別することに成功した。
【０１６９】
さらに、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ細胞エピトープデータベース（Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（商標）））を使用して配列を解析し、過去にインビトロでの他のタンパク質配列のヒトＴ細胞エピトープマッピング解析により特定されたＴ細胞エピトープとの合致を検索した。ＴＣＥＤ（商標）を使用して、非関連タンパク質に由来するペプチドの大きな（１０，０００個を超えるペプチド）データベースに対する任意の被験配列と、抗体配列とを検索する。
【０１７０】
ヒトマクロファージを用いた食作用有効性アッセイ。
末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、密度勾配遠心分離により全血液より単離した。次いでＣＤ１４陽性ＰＢＭＣを、ＣＤ１４マイクロビーズを用いた磁気細胞単離を介して単離した。並行して、ジャーカット細胞を、グリーンＣＦＳＥ（カルボキシフルオレスセインジアセテート、サクシニミジルエステル）細胞追跡用色素を用いて標識した。合計で６．２５×１０５個の標識したジャーカット細胞を、５％のＣＯ２を含有する湿気のある環境で、ＵＨ２抗体の存在下、９６ウェルプレート中、３７℃で１時間、予めインキュベートした。インキュベート後、２．５×１０５個のＣＤ１４陽性細胞を各ウェルに添加して、同じ培養条件下で、さらに１時間インキュベートした。
【０１７１】
細胞は、激しくピペッティングすることで回収し、生死判別色素（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｄｙｅ）で染色し、氷冷した４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定した。固定後、細胞を、Ｆｃ受容体結合阻害モノクローナル抗体で１０分間ブロッキングし、次いでＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（ＡＦ６４７）を結合させた抗ヒトＣＤ１１ｂ抗体と共に、室温で３０分間インキュベートし、４％パラホルムアルデヒド中で５分間、さらなる時間固定した。
【０１７２】
細胞を、ＣＦＳＥおよびＡＦ６４７の蛍光強度データに加えて、前方散乱および側方散乱特性を記録するＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで解析した。データは、少なくとも１×１０４個のＡＦ６４７陽性事象が記録されるまで取得した。データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（バージョン１０．４．２）を用いて取得後に解析した。簡潔には、細胞片（ｃｅｌｌ  ｄｅｂｒｉｓ）を、散乱特性でゲートアウトした（ＳＳＣ−Ａｒｅａ  ｂｙ  ＦＳＣ−Ａｒｅａ（ＳＳＣ面積×ＦＳＣ面積））。単一細胞もまた、ＳＳＣ−Ａｒｅａ  ｂｙ  ＳＳＣ−Ｈｅｉｇｈｔ（ＳＳＣ面積×ＳＳＣ高さ）でゲートし、次いでＦＳＣ−Ａｒｅａ  ｂｙ  ＦＳＣ−Ｈｅｉｇｈｔ（ＦＳＣ面積×ＦＳＣ高さ）でゲートした。残った単一細胞集団から、ビヒクル処置試験でのＣＤ１１ｂ陽性細胞の集団に基づいて設定されたＱｕａｄｒａｎｔ  Ｇａｔｅを用いて、ＣＦＳＥおよびＣＤ１１ｂの二重陽性細胞をゲートした。ＣＤ１１ｂ陽性集団からのＣＦＳＥ陽性細胞の百分率を、算出してプロットした。
【０１７３】
結果および考察
好ましいヒト生殖細胞系列ｖ−遺伝子へのＣＤＲ移植
アンタゴニストマウス抗ＣＤ４７  ＩｇＧ  ５Ｆ９Ｇ４のＣＤＲ（５Ｆ９Ｇ４；国際公開第２０１１１４３６２４Ａ２号および表２を参照のこと）を、ＣＤＲ移植法を使用して、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンｖ−ドメインフレームワーク配列スキャホールドに最初に導入した。最適な薬剤様性能を有する最終リード治療用ＩｇＧ化合物に向けて、遺伝子操作の努力を傾けるために、親抗体のＣＤＲを、「好ましい」生殖細胞系列スキャホールドのＩＧＨＶ５−５１およびＩＧＫＶ２−２８に移植することを選択した。それらスキャホールドは、ファージディスプレイにおいてｓｃＦｖ形式で非常に良好に示されて発現され、良好な溶解性、高い物理的安定性を有することが知られており、発現されたヒト抗体レパートリーにおいて高頻度に使用されている。ＩＧＨＶ５−５１もまた、ＶＨの移植に関して好ましい生殖細胞系列フレームワークであるが、これはｍ５Ｆ９Ｇ４  ＨＣＤＲ２との高度な配列および構造モチーフ相同性を示したからである（図２）。
【０１７４】
これらスキャホールドおよび移植されたＣＤＲの定義は、表２に概要を掲載した。キメラ抗ＣＤ４７抗体ｍ５Ｆ９Ｇ４、およびヒト化ｈ５Ｆ９Ｇ４の重鎖配列と軽鎖配列も表２に示す。このＣＤＲ移植のプロセスは周知であるが、ヒトｖ−ドメイン配列の所与のセットが非ヒトＣＤＲ移植にとって適切なアクセプターフレームワークとして機能するかどうかを予測するのは未だ困難である。不適切なフレームワークの使用は、標的結合機能の減少、タンパク質安定性の問題、さらには最終ＩｇＧの発現の低下につながり得る。そこでＣＤＲ突然変異誘導の鋳型としてＩＧＫＶ２−２８／ＩＧＨＶ５−５１移植が採用され、改善クローンの選択が行われた。
【０１７５】
ライブラリー作製およびスクリーニング
ＣＤＲが移植されたＩＧＫＶ２−２８／ＩＧＨＶ５−５１のｖ−ドメイン配列を、ＶＬ−ＶＨ  ｓｃＦｖ形式に組み込み、突然変異誘導ライブラリーカセットを、オリゴヌクレオチド合成およびアセンブリにより作製した。最終ｓｃＦｖライブラリーをファージディスプレイベクター内にライゲートし、エレクトロポレーション法を介して大腸菌内に形質転換して、６．０×１０８個の独立したクローンを生成した。ライブラリーの構造品質は、９６個のクローンを配列解析することにより検証された。この配列解析データにより、マウスまたはヒトいずれかの生殖細胞系列の各相違位置の残基をコードする位置を、効率的におよそ５０％の頻度でサンプリングされたことが示された。ライブラリーは、ヘルパーファージＭ１３を使用してレスキューされ、選択はビオチン化されたヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質に対し、複数の別個のブランチにおいて実施された。
【０１７６】
選択後スクリーニング（図１Ａ〜Ｆに示すとおり）およびＤＮＡシーケンシングにより、ｈ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ１とのエピトープ結合競合を保持し、ｈＣＤ４７のｈＳＩＲＰαに対する結合を遮断し、また有意に増加したＣＤＲ内のヒト含量を含有した、２６９個の固有のヒトおよびマウスＣＤ４７結合ｓｃＦｖクローンの存在が明らかになり、一方で、フレームワーク配列は、完全に生殖細胞系列のままであった。これら２６９個のクローンの中で、生殖細胞系列化変異が、すべてのＣＤＲ中で観察された（表３）。リードクローンは、ヒトＣＤ４７−Ｆｃおよびｈ５Ｆ９Ｇ４の両方への結合に関する、ＨＴＲＦシグナルに対するＣＤＲ生殖細胞系列化のレベルに基づき格付けされた（図１）。次いでこの格付けの上位１１個のクローンのｖ−ドメインをＩｇＧ発現ベクターにサブクローニングし、以下のさらなる検証を行った（表４）。しかしながら、予期せずに、ＣＤ４７−ＳＩＲＰαおよびＣＤ４７−ｈ５Ｆ９Ｇ４両方の中和の全ての解析において、ライブラリー由来クローンも、ＩＧＫＶ２−２８／ＩＧＨＶ５−５１移植ｓｃＦｖも、ＩＧＫＶ２−２８／ＩＧＨＶ１−３−移植ｈ５Ｆ９Ｇ４  ｓｃＦｖと同じ有効性に達したものはなかった（図１Ａ〜Ｆ）。
【０１７７】
生殖細胞系列化変異は、ライブラリー選択から直接誘導されたリードクローンのすべてのＣＤＲにおいて観察されたが、配列解析を行うことで、ヒト化が最大となるようクローンをさらに設計することが可能となり、また最大限のＣＤ４７結合アフィニティとアンタゴニズム有効性とを保持する可能性がある。したがって、ヒトおよびマウスのタンパク質に対する結合シグナルを有する２６９個の配列−固有ヒットを使用して、この機能的に特徴解析された集団のＣＤＲにおけるマウスアミノ酸の保持頻度を解析した。位置的なアミノ酸保持頻度は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインでの百分率として表されている（図２Ａ、２Ｂ）。ＲＦ＜７５％を有するマウス残基は、一連のコンビナトリアルデザインにおいて、標的−結合パラトープに必須ではない可能性がある位置とみなされ、生殖細胞系列化に対し開かれている可能性がある。重要なことに、上記に概要を示したｓｃＦｖスクリーニングデータで観察されたように、ＩＧＨＶ５−５１移植ＶＨドメインの有効性は、ＩＧＨＶ１−３フレームワークのものよりも低そうであるとみなされた。このことが問題であるか否かを検証するために、図２ＡおよびＢに概要を示したパラトープサンプリング情報を用いて、最初のライブラリー由来の高度にヒト化したクローン（ＶＨドメイン内のＩＧＨＶ５−５１フレームワーク）と並べて比較するためにＩＧＫＶ２−２８およびＩＧＨＶ１−３のフレームワーク内にデザインクローンを構築した。
【０１７８】
多くの組み合わせのなかで、ＲＦ＞７５％でそれらマウス残基を主として含有する１０種のＶＨデザインは、ＶＨ１．１〜ＶＨ１．１０と示した。６種のＶＬデザインもまた生成したが（ＶＬ１．１〜ＶＬ１．６）、これらは、ｓｃＦｖ配列の高機能性集団において観察された最もヒト化されたＣＤＲと、ＬＣＤＲ１内のさらなるヒト化変異および脱アミド化モチーフ破壊変異を加えて組み合わせて生成された（表４）。これらＬＣＤＲ１ヒト化変異および安定化変異は、１１位、１２位および１３位（残基ＧＮＴ）で取得され、これらは可変位置であることが観察されたが（図２Ａ、表３）、これら潜在的な最適配列（例えば「ＡＮＴ」および特にデザイン鎖ＶＬ１．４に存在する「ＡＹＮ」モチーフと、表４に概要を示した他のもの）は、標的結合特異性とＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を遮断する能力とを保持しながら、忍容され得るということは明確に示されなかった。
【０１７９】
ＶＨクローンおよびＶＬクローンは、（上記に概要を示した１１個のライブラリー由来クローン、陽性対照のＩＧＨＶ５−５１移植、ｈ５Ｆ９Ｇ４およびｍ５Ｆ９Ｇ４ならびに陰性対照の非ＣＤ４７反応性ｖ−ドメインとともに）遺伝子合成により生成され、次いで発現ベクターにクローニングされ、ヒトＩｇＧ１ヌルとして作製された。機能的に最適化された配列を見出す機会を最大限にするために、ＶＨデザインクローンおよびＶＬデザインクローンをマトリクス化し、全てのあり得る組み合わせでＶＨ配列およびＶＬ配列を組み合わせた。上記で観察されたＩＧＨＶ５−５１ベースのｓｃＦｖの観察された有効性の低下が、ｓｃＦｖフォーマッティングに起因するか否か、フレームワーク選択に起因するものではないか否かを検証するために、リードクローンＤ６のｓｃＦｖを、ＩｇＧ１およびｓｃＦｖ−Ｆｃの融合形式の両方としてクローニングした。すべてのＩｇＧおよびＤ６  ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質が、ＨＥＫ−２９３細胞の一過性トランスフェクションから容易に発現され、精製された。
【０１８０】
ライブラリー由来リードＩｇＧの特異性および有効性の特徴解析
次いで上述の精製ＩｇＧを、直接力価測定ＥＬＩＳＡ形式において、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃへの結合に関して試験した。この解析により、全てのライブラリー由来クローンが、ヒトＣＤ４７に対する結合アフィニティを保持したが、ｍ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ１の結合を完全に反復するものはなかったことを示した（図３Ａ）。この結合の減少は、カニクイザルＣＤ４７でより顕著であり、クローンＦ−Ｇ３が、特に弱い反応性を示していた（図３Ｂ）。
【０１８１】
直接ＥＬＩＳＡ結合シグナルはアビディティに影響を受け、ある特定のエピトープの維持を明らかにしないため、すべてのＩｇＧをその後、ＣＤ４７に対する５Ｆ９Ｇ４結合について、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合遮断アッセイ（図４）および液相ＨＴＲＦ競合アッセイで検証した（図５）。ＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合遮断アッセイでは、全てのライブラリー由来ＩｇＧが、ヒトＣＤ４７（図４Ａ）への結合であってもカニクイザルＣＤ４７（図４Ｂ）への結合であっても、ｈ５Ｆ９Ｇ４、ｍ５Ｆ９Ｇ４およびＩＧＨＶ５−５１移植ＩｇＧと比較して、有効性の有意な減少を示した。重要なことには、ＩＧＨＶ５−５１移植ＩｇＧは、ＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７両方の結合を完全に遮断するが、ｈ５Ｆ９Ｇ４と比較して、明らかに有効性が減少していたことを示した。このことは、ＩＧＨＶ５−５１フレームワークに５Ｆ９Ｇ４  ＣＤＲを配置する移植プロセスが、ｈ５Ｆ９Ｇ４と比較して分子の有効性を特に減少させたが、これはＣＤＲ配列が両フレームワークに沿って維持されるためであることを示唆した。さらに予期せぬ知見では、Ｄ６  ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質が、両オルソログに対する、ＩＧＨＶ５−５１移植ＩｇＧの開始ＣＤ４７を遮断する性能を維持した一方で、Ｄ−Ａ６  ＩｇＧは維持しなかったので、いずれのオルソログも完全に遮断することができなかった（図４Ａ、４Ｂ）。
【０１８２】
一部のＩＧＨＶ５−５１フレームワーククローンによるＣＤ４７遮断性能の観察された損失が、「エピトープシフト」現象によりなされたものではないということを確実にするために、ＨＴＲＦアッセイを行った。このアッセイで、これらクローンの、ＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４の結合を競合する能力を検証した。これら解析では、ほとんど全てのクローン（Ｆ−Ｇ３を除く）が、ｈ５Ｆ９Ｇ４と交差競合できて、大部分のクローンでは、最高濃度において結合を完全に阻害することを実証していたことを示した（図５Ａ）。しかしながらここでまた、阻害性能は、ｈ５Ｆ９Ｇ４の自己競合と比較して減少していた。この知見により、共有エピトープの維持が示唆されたが、ＩＧＨＶ５−５１フレームワーククローンにおける結合アフィニティは低下した。重要なことには、ここでまたＤ６  ＩｇＧよりもＤ６  ｓｃＦｖ−Ｆｃの機能が改善したことが実証されて、Ｄ６  ｓｃＦｖ−ＦｃはＩＧＨＶ５−５１移植ＩｇＧに対して同等の有効性を示していた一方で、Ｄ−Ａ６  ＩｇＧは明らかに有効性が減少した（図５Ｂ）。
【０１８３】
Ｄ６  ＩｇＧに対するＤ６  ｓｃＦｖ−Ｆｃの融合性能に関する知見は、ｓｃＦｖのディスプレイおよびスクリーニングと一体となっている、ＣＤＲを再移植するプロセスが、ｓｃＦｖ形式で優先的に機能的であるクローンを予期せずに選択して、当該クローンはその後ＩｇＧ１内に再構成されたときに性能が減少することを強く示唆した。この観察は、ｓｃＦｖ断片として、二特性抗体生成において特に魅力的であるこうしたクローンが、多重特異性抗体のモジュラー構築ブロックとしてうまく使用することが可能であることを示す。しかしながら、全体として、これら知見はまた、Ｔｏｗｎｓｅｎｄらのオリジナルの方法が、改善されたバージョンのｈ５Ｆ９Ｇ４の生成を含んでいないことも示している。
【０１８４】
デザインＩｇＧの特異性および有効性の特徴解析
次いで上述の精製ＩｇＧを、直接力価測定ＥＬＩＳＡ形式において、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７−Ｆｃへの結合に関して試験した。この解析では、多数のクローンがヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７に対する結合アフィニティを保持したが、結合有効性の範囲は不均一性が高く、一部のクローンでは結合シグナルが有意に減少していたがＩｇＧのサブセットではｍ５Ｆ９Ｇ４  ＩｇＧ１の結合を完全に反復していたということが実証された（図６Ａ〜Ｈ）。ＶＬ１．１−１．６ドメインと組み合わせたＶＨ１．８  ＶＨドメインを含有するクローンのファミリーが、ｍ５９Ｇ４の完全な結合性能の最も一貫した反復を実証したので、それらを図６ＧおよびＨで別個に示している。
【０１８５】
直接ＥＬＩＳＡ結合シグナルはアビディティに影響を受け、ある特定のエピトープの維持を明らかにしないため、すべてのＩｇＧをその後、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合遮断アッセイで検証した（図７、図８）。ＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合遮断アッセイでは、全てのＶＨ１．８ファミリーＩｇＧが、高い有効性を示して、ヒトＣＤ４７（図７Ａ）への結合であってもカニクイザルＣＤ４７への結合であっても（図７Ｂ）、ｈ５Ｆ９Ｇ４およびｍ５Ｆ９Ｇ４と比較して、ＶＨ１．８／ＶＬ１．４以外の全てのクローンに関して機能的等価性（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｙ）を伴っていた。ＥＬＩＳＡで良好に作動したいくつかの他のデザインクローンがまた、ｈＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合を遮断する能力を示したが（図８）、それにもかかわらず、ＶＨ１．８ファミリークローンよりも低い有効性を伴っていた。
【０１８６】
高機能性デザイン抗体によるＣＤ４７遮断性能の観察された維持が、維持されたエピトープ特異性と一体的であることを確実にするために、ＣＤ４７に対する５Ｆ９Ｇ４結合の液相ＨＴＲＦ競合アッセイを実施した（図９）。このアッセイで、重要なデザインクローンの、ＣＤ４７に対するｈ５Ｆ９Ｇ４の結合を競合する能力を検証した。この解析では、全てのＶＨ１．８ファミリークローンが、ｈ５Ｆ９Ｇ４と交差競合することができ、複数のクローンは、ヒトＣＤ４７（図９Ａ）およびカニクイザルＣＤ４７（図９Ｂ）に対して同等の有効性（表５）を実証していたことが示された。しかしながらここでまた、ＶＨ１．８／ＶＬ１．４に対する阻害性能は、ｈ５Ｆ９Ｇ４の自己競合と比較して減少していた。この知見により、共有エピトープの維持が示唆されたが、ＶＬ１．４ドメイン含有クローンに関する結合アフィニティは低下した。さらなるＨＴＲＦ解析では、ｈＣＤ４７遮断を示した全ての非ＶＨ１．８ファミリークローンもまた（図８）、ｈ５Ｆ９Ｇ４と交差競合することができたが、全てのクローンで、ヒトＣＤ４７（図９Ｃ）およびカニクイザルＣＤ４７（図９Ｄ）に対して有効性が減少していた（表５）ことが示された。ＶＨ１．８バックグラウンドでのＣＤＲ残基をさらに取得する試みにおいて、ＶＬ１．５配列の３種つのさらなるデザインクローンの子孫（ＶＬ１．７、ＶＬ１．８およびＶＬ１．９）に加えて、２つのさらなるデザインクローン（ＶＨ１．１１およびＶＨ１．１２）を生成した。これらデザインクローンを、あるマトリックス内で共発現し、６つのさらなるＩｇＧを生成し、次いでＣＤ４７−ＳＩＲＰα遮断アッセイで検証した。この解析では、クローンの全てが、ＶＨ１．１２／ＶＬ１．８以外で、拮抗性ＣＤ４７において全ての有効性を喪失し、ＶＨ１．１２／ＶＬ１．８は１０μｇ／ｍｌで最小限の遮断（＜５０％）を維持したことが示された。これら知見では、ＬＣＤＲ２の６位におけるＦからＡへの変異が、またはＬＣＤＲ３の１位におけるＦからＭへの変異の両方が、ＣＤ４７拮抗の完全な排除をもたらしたことが示された。
【０１８７】
細胞膜でのリードＩｇＧ結合特異性のフローサイトメトリー解析
ＥＬＩＳＡによってＣＤ４７に対する結合を保持することが示された抗体を、フローサイトメトリーを介して、細胞表面での濃度依存性結合に関して分析した。ヒトまたはカニクイザルのＣＤ４７のいずれかの全長ｃＤＮＡを用いてＣＨＯ−Ｋ１細胞に安定的にトランスフェクトした。次いで抗ＣＤ４７  ＩｇＧおよびアイソタイプコントロールＩｇＧ１をすべて、１００〜０．０２４μｇ／ｍｌの濃度範囲にわたり、ヒト、カニクイザルまたは野生型対照（「ｗｔ」、すなわち非トランスフェクト）のＣＨＯ−Ｋ１（図１０）に対する結合に関してＩｇＧ１ヌル形式で試験した。アイソタイプコントロール以外のすべてのＩｇＧが、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７＋細胞に対して、そして、ヒトＡＭＬ細胞株ＨＬ６０に対しても、濃度依存性の結合を示した。各ケースにおいて、最大ＭＦＩは、非トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１に対する結合で観察されたバックグラウンドシグナルよりも５０倍超高かった。抗ＣＤ４７抗体は、非トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し、測定可能なバックグラウンド結合を示さず、アイソタイプコントロールＩｇＧ１と同等であった（図１０）。
【０１８８】
「開発可能性」ＥＬＩＳＡアッセイにおけるリードＩｇＧ解析
当分野において、いくつかの指標的生物基質に対する、治療用途目的のＩｇＧの結合は、生体利用効率の貧弱さ、およびインビボ半減期の短さによって、患者での性能が低くなるリスクが高いことの指標となることが知られている。３種のこうした生物基質は、インスリン、ｄｓＤＮＡおよびｓｓＤＮＡである（Ａｖｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｂｓ；１０：２；２４４−２５５；２０１８）。そこでこれら３種の基質を使用してＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、最適化されたリード抗体のＩｇＧ１ヌル型の結合を検証した。これらヒトＩｇＧ系抗体の結合シグナルを、多反応性および性能の低さが判明し、臨床試験の進行が停止してしまった「陽性対照」のヒトＩｇＧ抗体（ボコシズマブおよびブリアキヌマブのヒトＩｇＧ１アナログ）と比較した。陰性対照のヒトＩｇＧ１抗体については、ブリアキヌマブと同じ治療標的と反応するが、ｐＫが長く、治療用製品として承認を受けることに成功したＩｇＧ１ウステキヌマブアナログを使用した。図１１Ａ、ＢおよびＣに示されるＥＬＩＳＡ解析において、陽性対照抗体は、３種すべての基質に対し、予測通りの強い反応性を呈した。一方で、陰性対照のウステキヌマブは、低い反応性を示した。重要なことは、検証されたすべてのＩｇＧ１リードクローンが、３種すべての基質に対し、陰性対照以下の結合を示したことである。この知見は、最適化されたクローンＶＨ１．８／ＶＬ１．１、ＶＨ１．８／ＶＬ１．２、ＶＨ１．８／ＶＬ１．３、ＶＨ１．８／ＶＬ１．４、ＶＨ１．８／ＶＬ１．５、ＶＨ１．８／ＶＬ１．６、ＶＨ１．７／ＶＬ１．４、ＶＨ１．６／ＶＬ１．９およびＶＨ１．１２／ＶＬ１．８において高度に特異的な、標的誘導結合が維持されていることを強調していた。
【０１８９】
抗体ｖ−ドメインＴ細胞エピトープ解析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．社）は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、ｈ５Ｆ９Ｇ４およびリード抗体のｖ−ドメイン両方の免疫原性の評価に使用した。ｖ−ドメイン配列の解析は、重複する９ｍｅｒペプチド（各々が最後のペプチドと８残基重複する）を用いて実施され、３４種のＭＨＣクラスＩＩアロタイプの各々に対して試験した。各９ｍｅｒを、ＭＨＣクラスＩＩ分子との潜在的な「適合」および相互作用に基づいてスコア化した。ソフトウェアにより算出されるペプチドスコアは、０〜１の間である。高い平均結合スコアを出したペプチド（ｉＴｏｐｅ（商標）スコアリング機能において＞０．５５）が強調された。ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドの＞５０％（すなわち３４種のアレルのうちの１７種）が高い結合アフィニティ（スコア＞０．６）を有する場合、そうしたペプチドは、「高アフィニティ」ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドとして規定され、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有するリスクが高いとみなされる。低アフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、多くのアレル（＞５０％）に、＞０．５５の結合スコア（しかし大部分は＞０．６ではない）で結合する。配列のさらなる解析は、ＴＣＥＤ（商標）を使用して実施された。この配列を使用して、ＢＬＡＳＴサーチによりＴＣＥＤ（商標）をデータ検索し、過去にＡｂｚｅｎａ  Ｌｔｄ．社で実施されたインビトロＴ細胞エピトープマッピング研究でＴ細胞反応を刺激した非関連タンパク質／抗体由来のペプチド（Ｔ細胞エピトープ）間で任意の高い配列相同性を特定した。
【０１９０】
ペプチドを、以下の４つのクラスに分類した：高アフィニティ外来物（「ＨＡＦ」−高免疫原性リスク）、低アフィニティ外来物（「ＬＡＦ」−低免疫原性リスク）、ＴＣＥＤ＋（過去にＴＣＥＤ（商標）データベースにおいて特定されたエピトープ）、および生殖細胞系列エピトープ（「ＧＥ」−高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列）。生殖細胞系列エピトープの９ｍｅｒペプチドは、広範な生殖細胞系列ペプチドを用いた過去の研究により立証されたように、Ｔ細胞寛容によって免疫原性である可能性は低い（すなわち、これらペプチドは、宿主において「自己」として認識される）。重要なことは、そうした生殖細胞系列のｖ−ドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域中の類似配列によりさらに補助される）は、抗原提示細胞の細胞膜でのＭＨＣクラスＩＩ占有に関しても競合するため、Ｔ細胞刺激に必要とされる「活性化閾値」を達成するのに充分な外来性ペプチド提示のリスクを低下させることである。ゆえにＧＥ含量が高いことは、抗体治療剤の臨床開発において有益な性質である。このスケールのもう一方では、ＴＣＥＤ＋ペプチドが、臨床において免疫原性で非常に高リスクであり、これは当該ペプチドが、ＭＨＣ分子で提示されて、ヒトＴ細胞を活性化することが可能であるような、実験で証明されたペプチドエピトープの特性を有するからである。
【０１９１】
重要なリードｖ−ドメインは、ｈ５Ｆ９Ｇ４と比較してペプチドエピトープ含量において有意に有益な変化を示した。したがって、本明細書において採用したｖ−ドメインの操作プロセスは、抗ＣＤ４７有効性を維持する抗体の選択に成功し、一方で、ＴＣＥＤ＋であって、ｈ５Ｆ９Ｇ４の重鎖および軽鎖の両方のｖ−ドメインに存在するものである複数のＨＡＦエピトープおよびＬＡＦエピトープを除去した。重要なことは、これら外来性エピトープが、リードクローンのＣＤＲ中に存在する生殖細胞系列化変異によって特異的に除去されていたことである。例えば、ｈ５Ｆ９Ｇ４のＬＣＤＲ−１に存在するＴＣＥＤ＋ペプチド「ＩＶＹＳＮＧＮＴＹ」（配列番号１０６）（図１２Ａ）（そのため、ＣＤＲ移植でヒト化されたｈ５Ｆ９Ｇ４のいずれかの形式で）が、表４の全てのリードクローンで見られるように、１位および２位におけるＩからＬへの変異およびＶからＬへの変異よって、大部分のリードクローンにおいて除去された。この知見により、ＬＣＤＲ１のみにおける生殖細胞系列化変異および非生殖細胞系列化変異は、アスパラギン脱アミド化リスクモチーフだけでなく試験されたヒトＴ細胞エピトープも除去するのに十分であることが示された。
【０１９２】
同様に、ｈ５Ｆ９Ｇ４配列からのＨＣＤＲ１／フレームワーク２領域が、ＨＡＦおよびＴＣＥＤ＋ペプチド「ＹＮＭＨＷＶＲＱＡ」（配列番号１０７）をコードした（図１２Ｂ）。このエピトープは、表４で見られるいくつかのリード配列で無効にされており、例えば、配列「ＹＡＭＨＷＶＲＱＡ」（配列番号１０８）（例えば、ＶＨ１．１、ＶＨ１．６、ＶＨ１．８、ＶＨ１．９、ＶＨ１．１１、ＶＨ１．１２）または「ＹＮＩＨＷＶＲＱＡ」（配列番号１０９）（例えばＶＨ１．７）を含有する抗体等である。重要なことは、２位におけるＮからＡへの変異および３位におけるＭからＩへの変異が、ＴＣＥＤ＋エピトープを無効にするだけでなく、このエピトープを、ＧＥペプチドに変換することである。さらに、表４に記載の全てのリードのＨＣＤＲ２の最後の残基の生殖細胞系列化（表２で規定される最後のｃ−末端ＨＣＤＲ２位におけるＤからＧへの変異）はまた、ＩＧＨＶ５−５１（「ＦＱＧＱＶＴＩＳＡ」配列番号１０２）およびＩＧＨＶ１−３（「ＦＱＧＲＶＴＩＴＡ」配列番号１０３）の両方の生殖細胞系列に存在するＧＥペプチドを回復させた。
【０１９３】
ｈ５Ｆ９Ｇ４のＶＨドメインのＨＣＤＲ３／フレームワーク４配列において、さらなるＴＣＥＤ＋ペプチド「ＹＲＡＭＤＹＷＧＱ」（配列番号１１０）が特定された（図１２Ｃ）。このエピトープは、表４で見られるいくつかのリード配列で無効にされており、例えば、配列「ＹＲＡＥＤＹＷＧＱ」（配列番号１１１）（例えば、ＶＨ１．１、ＶＨ１．２、ＶＨ１．３、ＶＨ１．６、ＶＨ１．９）を含有する抗体等である。
【０１９４】
詳細には、図２Ａおよび２ＢのデータによってＣＤ４７結合クローンにおいて寛容性でないことが予測されていた非生殖細胞系列変異および生殖細胞系列変異は、いくつかの重要なリードにおいて、試験的に、新規の置換を含んでいた。例えば、ｈ５Ｆ９Ｇ４のＬＣＤＲ−１において、軽鎖配列ＶＬ１．３、ＶＬ  １．４、ＶＬ  １．５およびＶＬ  １．６に存在する開発リスクモチーフ除去変異（表４）は、寛容されるべきではない（図２Ｂ）。同様に、ＶＨ１．８配列に基づくクローンまたは他のクローンの（表４）ＨＣＤＲ１におけるＮからＡへの、単一の、脱免疫化の、非保存的である変異は、図２Ａのデータにおいて寛容ではないことが強く予測された）。これら知見は、有益な変異は、文脈上、ｖ−遺伝子フレームワーク依存的であり、この場合においては経験的にもまたはＴｏｗｎｓｅｎｄらの方法によっても完全に予測することができなかったことを示す。
【０１９５】
最後に、残る２つのＨＡＦペプチドが、ＶＬ配列ＶＬ１．１〜１．９内に存在する。フレームワーク２／ＬＣＤＲ２領域にわたる、はじめのＨＡＦペプチド「ＬＩＹＫＧＳＮＲＦ」（配列番号１１２）が、図１３Ａに示す解析において特定された。フレームワーク３／ＬＣＤＲ３領域にわたる、次のＨＡＦペプチド「ＶＧＶＹＹＣＦＱＡ」（配列番号１１３）が、図１３Ａに示す解析において特定された。両ＨＡＦペプチドは、１位の残基のアラニンへの変異（それぞれＬからＡと、ＶからＡ）により、完全に無効することができた。これら置換を取得するために、新規クローン「ＶＨ１．８／ＶＬ１．６−ＤＩ」を構築したが、これはＶＬドメインにおいて両方のアラニン置換を含有した。
【０１９６】
重要なリードの有効性およびアフィニティの解析
クローンｈ５Ｆ９Ｇ４、ＶＨ１．８／ＶＬ１．１、ＶＨ１．８／ＶＬ１．６およびＶＨ１．８／ＶＬ１．６−ＤＩを、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式で、容易に発現して精製した。全てのクローンに関して、Ｆａｂドメインもまた、結合アフィニティ解析のために、可溶性モノマーとして発現して精製された。次いでこれらＦａｂを、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７に対するアフィニティに関して、定常状態のアフィニティ解析を用いてビアコアで検証した。信頼性のある１：１モデリングのためには、全てのＦａｂの会合速度および解離速度が速過ぎたため、結合アフィニティ解析として定常状態を用いた。表６に示すように、４クローン全てが、非常に低いＣｈｉ２値で証明されるとおり、正確な良好に当てはめられるデータを示した。全てのクローンは、低ｎＭ範囲において、ｈ５Ｆ９Ｇ４の２倍の範囲内の結合アフィニティを有することが判明した。
【０１９７】
有効性を保持することについての最後の解析として、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式でのクローンｈ５Ｆ９Ｇ４、ＶＨ１．８／ＶＬ１．１、ＶＨ１．８／ＶＬ１．６およびＶＨ１．８／ＶＬ１．６−ＤＩについて、これらの相対的有効性を、ＣＤ４７＋標的細胞として３人の独立のドナー由来のヒト単核球由来マクロファージと、ヒトのジャーカット癌細胞とを用いた、食作用のフローサイトメトリーアッセイで検証した。ドナー１（図１４Ａ）、ドナー２（図１４Ｂ）およびドナー３（図１４Ｃ）からの細胞に対して解析された全てのクローンに関して、全てのクローンが、完全に重複する反応曲線で証明されるとおり、ｈ５Ｆ９Ｇ４の有効性を完全に保持したかまたは当該有効性より改善された。
【０１９８】
本発明は好ましい実施形態または例示的実施形態を参照して記載されているが、当業者であれば、本発明の主旨および範囲を逸脱することなくそれらに対する様々な改変および変動を行うことが可能であること、およびそうした改変は本明細書において予期されることが明白であると認識するであろう。本明細書に開示される、および添付の請求の範囲に記載される特定の実施形態に関し、限定は意図されておらず、何らの示唆もないものとする。
【０１９９】
本明細書に開示される、および添付の請求の範囲に記載される特定の実施形態に関し、限定は意図されておらず、何らの示唆もないものとする。限定されないが特許、特許出願、記事、書誌、および論文を含む本明細書に引用されるすべての書面、または書面の一部は、その全体ですべての目的に対し、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。組み込まれた書面、または書面の一部の１つまたは複数が、本出願の用語定義と矛盾する用語を定義する場合、本出願にある定義が優先される。しかしながら、本明細書に引用されるすべての参照文献、記事、公表文献、特許、公表特許、および特許出願に関する言及は、それらが正当な先行技術を構成する、または世界の任意の国における普遍的で一般的な知識の一部を形成するという承認、または任意の形態の示唆として見なされず、または見なされるべきではない。
【０２００】
【表１】
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【表２】
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【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表５】
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【表６】
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【表７−１】
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【表７−２】
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【表８】
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【表９】
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図６−４】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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