(57)【要約】  本発明は、免疫刺激マクロライドとチェックポイント阻害剤との組み合わせを提供する。組み合わせは、相乗効果があり、ウイルス性疾患及び癌を治療する際に使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マクロライドが、式Ｉを有する前記マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ：
【化１】
2021523930.tif 000054
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖であり：
【化２】
2021523930.tif 000055
式中、Ｒ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリール部分から選択され、
式中、アルキル部分は、任意選択で分岐しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、ヘテロアルキル部分は、任意選択で分岐又は置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、シクロアルキル部分は、任意選択で置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
式中、アリール部分は、任意選択で置換されたＣ６芳香環から選択され、
式中、ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む任意選択で置換されたＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
式中、ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
式中、置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル、及びＯ−アシルから選択され、
式中、アシルは、Ｃ１−Ｃ４の任意選択で分岐したアシル基から選択され、
式中、Ｒ３は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒ４は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒａは、Ｈ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
式中、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、ならびにＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２、及びＯＲ１１から選択され、
式中、式（ＩＩ）のＲ４と一緒のＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と一緒のＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と一緒のＲ５、及び式（ＩＩ）のＲ９と一緒のＲ７は、独立して、各グループが接続されている炭素原子間に二重結合を残すために接合されてもよく、
式中、Ｒ２２と一緒のＲ２１、Ｒ６と一緒のＲ５、Ｒ８と一緒のＲ７、又はＲ１０と一緒のＲ９は、カルボニルで置き換えられてもよく、
式中、Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
式中、Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
式中、Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、又はＲ１０のうちの１つは、ＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２、
又はそれらの薬学的に許容される塩から選択される）。
【請求項２】
マクロライドが以下から選択される、請求項１に記載の組み合わせ：
【化３−１】
2021523930.tif 000056
【化３−２】
2021523930.tif 000057
【化３−３】
2021523930.tif 000058
【化３−４】
2021523930.tif 000059
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
マクロライドが以下である、請求項１〜２のいずれかに記載の組み合わせ：
【化４】
2021523930.tif 000060
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
免疫チェックポイント阻害剤が、細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られている）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９としても知られている）、ＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１及びＣＤ２７４としても知られている）、ＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ及びＣＤ−２７３としても知られている）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３、ＨＡＶｃｒ２としても知られている）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３、ＣＤ２２３としても知られている）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｓ１、Ｂ７Ｘ、ＶＣＴＮ１としても知られている）、２Ｂ４（ＣＤ２４４として知られている）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られている）、ならびにＣＭＴＭ６から選択された免疫チェックポイントを標的とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項５】
免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ−Ｌ２阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、Ａ２ａＲ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ４阻害剤、２Ｂ４阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、及びＣＭＴＭ６阻害剤から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項６】
免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ−１１０５、ＩＭＰ３２１、エノブリツズマブ、及びＭＧＤ００９から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項７】
免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブから選択される、請求項６に記載の組み合わせ。
【請求項８】
一方の組成物が、マクロライド及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み、他方の組成物が免疫チェックポイント阻害剤及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、２つの医薬組成物の形態の請求項１〜７のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項９】
２つの医薬組成物が、同じ又は異なる投与経路のために設計されている、請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
免疫刺激剤としての使用など、医学で使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に定義される組み合わせ。
【請求項１１】
癌の治療に使用するための、請求項１０に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
ウイルス性疾患の治療に使用するための、請求項１０に記載の組み合わせ。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれかに記載の組み合わせ及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１０〜１２のいずれかに記載の組み合わせ及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
癌の治療又は予防に使用するための医薬品キットであって、単一のパッケージで、
ｉ）マクロライドを含む第１の組成物、
ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤を含む第２の組成物、及び
ｉｉｉ）使用説明書
を含む、医薬品キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫チェックポイント阻害剤と、免疫系を刺激することができる、イムノライドと呼ばれるマクロライドとの組み合わせに関する。本発明は、それ自体の組み合わせ、ならびに医学、特に癌の免疫療法治療及びＨＩＶなどのウイルス性疾患の治療に使用するための組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌細胞は、多種多様な癌特異的抗原を引き起こす無数の遺伝子変異及び後成的変化を特徴とする。これらの抗原は、Ｔ細胞によって検出され、Ｔ細胞は、抗原を利用して前癌性及び／又は癌性細胞をそれらの正常な細胞から区別し、癌特異的免疫応答を引き出す。Ｔ細胞性免疫応答の振幅及び質は通常、免疫チェックポイントによってレギュレートされ、免疫チェックポイントは、応答の大きさをそれぞれ増加又は減少させるように作用する刺激分子及び阻害分子ならびに／又は分子経路として定義することができる。通常の生理学的条件下では、免疫チェックポイントは、自己免疫の予防及び病原性感染に起因する組織損傷からの保護に不可欠である。しかしながら、癌細胞は、免疫抵抗性を得るための方法として免疫チェックポイントタンパク質の調節不全を利用する場合がある。
【０００３】
Ｔ細胞性抗腫瘍免疫応答を誘発する１つのアプローチは、「チェックポイント遮断」と称され、癌細胞によって利用される免疫抑制チェックポイントの遮断又は阻害を指す。多くの免疫チェックポイントは、リガンド−受容体相互作用によって開始されるため、これらのチェックポイントは、抗体によって遮断されるか、又は問題のリガンド及び／もしくは受容体の組換え型によって調節され得る。
【０００４】
いくつかの免疫チェックポイントは、単独で又は組み合わせて、Ｔ細胞性抗腫瘍免疫応答の増強に関連している。これらとしては、細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られている）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９としても知られている）、ＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１及びＣＤ２７４としても知られている）、ＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ及びＣＤ−２７３としても知られている）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３、ＨＡＶｃｒ２としても知られている）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３、ＣＤ２２３としても知られている）、及びＢ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｓ１、Ｂ７Ｘ、ＶＣＴＮ１としても知られている）、２Ｂ４（ＣＤ２４４として知られている）、ならびにＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られている）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、関連する免疫チェックポイントの他の例は、科学文献及び特許文献に見出すことができ、本発明の範囲内でもある。
【０００５】
免疫チェックポイント阻害は、Ｔ細胞性抗腫瘍免疫を増強するのに有用であるが、本発明者らは、免疫チェックポイント阻害を１つ以上の補完的メカニズムと組み合わせて、Ｔ細胞活性化をさらに増強すると、さらに良好な抗腫瘍効果が提供されると想到する。この目的のために、本発明者らは、マクロライドが免疫刺激性抗癌及び免疫刺激性抗ウイルス効果を有することを認識し、これにより、本発明者らは、改善された治療計画を実現するために補完的メカニズムを利用する本発明に至った。
【０００６】
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、免疫応答の重要なメディエーターであり、癌患者におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の免疫能力を高める方法及び手段が当技術分野で非常に必要とされている。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】マクロライドエリスロマイシンＡ、化合物１、化合物Ａ、化合物Ｂ、及びＥＭ７０３の構造を示す図である。
【図２】Ｔ細胞及びＢ細胞でのＣＤ６９のアップレギュレーションを示す図である。ＰＢＭＣを化合物１、化合物Ａ、ならびに活性化対照ＬＰＳ及びＩＦＮ−γで２４時間処理した。初期活性化マーカーＣＤ６９の発現は、フローサイトメトリーを用いてＣＤ４＋Ｔ細胞集団（左）及びＣＤ１９＋Ｂ細胞集団（右）で測定した。値は、３つのサンプルの平均蛍光強度、ＭＦＩ、及びエラーバーの標準偏差を表す。
【図３】Ｔ細胞及びＢ細胞でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃのアップレギュレーションを示す図である。ＰＢＭＣを、化合物１又はＡならびに活性化対照ＬＰＳ及びＩＦＮ−γで２４時間処理した。ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現は、フローサイトメトリーを用いてＣＤ４＋Ｔ細胞集団（左）及びＣＤ１９＋Ｂ細胞集団（右）で測定した。値は、３つのサンプルの平均蛍光強度、ＭＦＩ、及びエラーバーの標準偏差を表す。
【図４】血中単球でのＣＤ８０及びＨＬＡ−ＤＲのアップレギュレーションを示す図である。ＰＢＭＣを化合物１又はＡならびに活性化対照ＬＰＳ及びＩＦＮ−γで２４時間処理した。ＣＤ８０及びＨＬＡ−ＤＲの発現は、フローサイトメトリーを用いて単球細胞集団で測定した。値は、３つのサンプルの平均蛍光強度、ＭＦＩ、及びエラーバーの標準偏差を表す。
【図５】血中単球でのＣＤ８０のアップレギュレーションを示す図である。ＰＢＭＣを化合物１又はＡ、及び活性化対照ＩＦＮ−γで２４時間処理した。ＣＤ８０の発現は、フローサイトメトリーを用いて単球細胞集団で測定した。値は、３つのサンプルの平均蛍光強度、ＭＦＩ、及びエラーバーの標準偏差を表す。
【図６】ＥＬＩＳＡで測定した、化合物１で４８時間又は１週間刺激した後のＰＢＭＣからのＩＬ−１０の産生を示す図である。
【図７】増殖色素Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びフローサイトメトリーを用いて測定した、化合物１による６日間の刺激後のＣＤ４  Ｔ細胞増殖を示す図である。未処理の細胞（ＵＮＴ）又は化合物Ａを対照として使用した。
【図８】フローサイトメトリーを用いて測定した、化合物１とのインキュベーション後のＣＭＶ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞上のＩＬ−７受容体α（ＣＤ１２７）のアップレギュレーションを示す図である。
【図９】化合物１又はＡの存在下又は非存在下でＣＭＶペプチドを用いて５日間成長させたＰＢＭＣ（ＣＭＶ＋ドナーから）からのインターフェロン−γ分泌（サイトメトリービーズアッセイで測定）を示す図である。
【図１０】示された化合物で４８時間刺激されたマクロファージからのインターフェロン−γ分泌（サイトメトリービーズアッセイで測定）を示す図である。
【図１１】指定された化合物で４８時間刺激されたＰＢＭＣ又はマクロファージからのケモカインＲＡＮＴＥＳ分泌（サイトメトリービーズアッセイで測定）を示す図である。
【図１２】示された化合物で４８時間刺激されたＰＢＭＣ又はマクロファージからのＩＬ１２ｐ７０分泌（サイトメトリービーズアッセイで測定）を示す図である。
【図１３】示された化合物で４８時間刺激されたＰＢＭＣ、マクロファージ、又はＣＤ４  Ｔ細胞からのＩＬ１ｂ分泌（サイトメトリービーズアッセイで測定）を示す図である。
【図１４】示された用量の化合物１を２４時間前に注射したＣ５７ｂｌ／６マウスの血中の％ＣＤ２５高細胞を示す図である。ＣＤ２５の発現をフローサイトメトリーで測定した。
【図１５】示された化合物を２４時間前に注射した３匹の個々のＣ５７ｂｌ／６マウスの脾臓における％ＭＨＣクラスＩ高ＣＤ１１ｂ＋細胞を示す図である。ＭＨＣクラスＩ及びＣＤ１１ｂの発現をフローサイトメトリーで測定した。
【図１６】抗ＰＤ−１遮断及びＩＳＲ３９７の相乗効果を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにＢ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を皮下接種した後、抗ＰＤ−１（黒丸）、抗ＰＤ−１＋ＩＳＲ３９７（黒四角）で処理するか、又は未処理のままにした（黒三角）。３、８、１１、１５、１８日目に測定された腫瘍体積を示す。
【図１７】抗ＰＤ−１遮断及びＩＳＲ３９７の相乗効果を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにＢ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を皮下接種した後、未処理のままにした（ピンク）、抗ＰＤ−１（紫）で処理、又は抗ＰＤ−１＋ＩＳＲ３９７（赤）で処理した。実験の終了時（１８日目）に測定された腫瘍体積を示す。
【図１８】抗ＰＤ−１遮断及びＩＳＲ３９７の相乗効果を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにＢ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を皮下接種した後、抗ＰＤ−１（黒丸）、抗ＰＤ−１＋ＩＳＲ３９７（黒四角）で処理するか、又は未処理のままにした（黒三角）。３、８、１１、１５、１８日目に測定された腫瘍体積を示す。
【図１９】ＩＳＲ３９７（化合物１）作用の提案されたメカニズムの描写を示す図である。
【０００８】
発明概論
エリスロマイシン及びアジスロマイシンなどのマクロライドは、細菌感染症の治療に長年使用されてきた。エリスロマイシンは、放線菌サッカロポリスポラ・エリスラエア（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ  ｅｒｙｔｈｒａｅａ）の発酵によって産生されるポリケチド天然物マクロライドである。アジスロマイシンは、エリスロマイシンの半合成アザリド誘導体である。エリスロマイシンなどのマクロライドの抗菌活性を説明する多くの参考文献が存在する。この抗菌メカニズムは、細菌の５０Ｓ細菌リボソームのＰ部位に分子が結合することで実現され、これにより、ｔＲＮＡ結合を妨害する。
【０００９】
多くの参考文献は、半合成及び生合成工学によるエリスロマイシンの類似体の生成について説明している。特に、エリスロマイシン、デソサミン／クラジノース、及びミカロースのグリコシル基を半合成で除去する方法が説明されている。エリスロマイシンアグリコンに代替のグリコシル基を追加するための生体内変化についてのさらなる方法が説明されている（例えば、Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００，Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８及びＷＯ２００１／０７９５２０を参照）。しかしながら、この公開された作業の主な焦点は、抗菌性のエリスロマイシン類似体を生成することであった。
【００１０】
ＷＯ２００７／００４２６７は、第２の治療薬を含む組成物と組み合わせて、ｍＴＯＲ阻害剤及びアルブミンを含むナノ粒子を含む組成物を投与することによる、固形腫瘍の治療のための方法及び組成物を開示する。
【００１１】
ＷＯ２０１６／１００８８２は、免疫調節剤及び癌を治療する際に使用するための第２の治療薬を含む組み合わせを開示し、免疫調節剤は、免疫チェックポイント分子の阻害剤である。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、特に癌及び免疫系の刺激が有益である癌における治療を改善するためのマクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせに関する。
【００１３】
抗菌活性を欠くマクロライドによる免疫刺激活性は、これまで報告されていない。驚くべきことに、化合物１（図８）などの本発明の化合物が、免疫系のいくつかの細胞型に対して強力な免疫刺激効果を有することが今や見出された。１μＭの化合物１による末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激の２４〜４８時間後、活性化マーカーＣＤ６９をＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ細胞でアップレギュレートした（図１）。本発明者らはまた、Ｔ細胞及びＢ細胞での分子ＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−ＡＢＣ）のアップレギュレーションを観察し（図２）、これはウイルス抗原の抗原提示への効果を示している。化合物１によるＰＢＭＣ集団での単球の刺激は、共刺激分子ＣＤ８０及び抗原提示分子ＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ）のアップレギュレーションをもたらした（図３）。マクロファージに分化した単球も、化合物１による刺激に応答してＣＤ８０のアップレギュレーションを示した（図４）。さらに、化合物１で刺激されたＰＢＭＣは、免疫抑制性サイトカインＩＬ−１０の産生が増加したサイトカインプロファイルの変化を発現し、これは特定の条件下での免疫抑制効果を示している。化合物１の免疫学的効果をさらに分析すると、フローサイトメトリーで測定した、６日間の刺激後のＴ細胞のサイトカイン駆動増殖プロファイルの変化が明らかになった（図６）。加えて、ウイルス特異的Ｔ細胞増殖は、化合物１の影響を受けた。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）抗原及び化合物１の存在下で培養されたＣＭＶ感染ドナーからのＰＢＭＣは、ＩＬ−７受容体α（ＣＤ１２７）の発現が増加した活性化ＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型の変化を表示した（図７）。ＣＤ１２７は、Ｔ細胞の恒常性、分化、及び機能に不可欠であり、発現の低下は、ＨＩＶ及び他の慢性ウイルス性疾患の重症度と相関している（Ｃｒａｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。
【００１４】
要約すると、化合物１は、抗原提示、共刺激、ならびにＴ細胞の活性化及び増殖に影響を与えることにより、免疫応答を特異的に活性化及び修飾する驚くべき能力を有する。本明細書に表示した例の多くにおいて、以前にＳｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８（化合物２０として）で公開されたグリコシル化が変化した別の関連マクロライドエリスロマイシン類似体である化合物２（図８）は、アッセイでほとんど又はまったく活性を示さなかったため、陰性対照として含まれた。
【００１５】
免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用されるマクロライドは、免疫系の調節効果を最大化すると同時に、治療上望ましくない直接的な抗菌効果を最小化する。
【００１６】
したがって、本発明は、マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせに関する。この組み合わせは、癌の予防及び治療に有用である。マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、マクロライドの免疫刺激効果とチェックポイント阻害剤によって媒介される免疫系の破壊の放出とを組み合わせることによって、増強された抗腫瘍効果をもたらすと想到される。
【００１７】
そのような組み合わせに有用なマクロライドとしては、式（Ｉ）のマクロライド（本明細書の別の段落を参照）が挙げられるが、これに限定されない。対象となる具体的な免疫チェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ−Ｌ２阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ３阻害剤、及びＣＭＴＭ６阻害剤から選択される薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書の別の段落には、マクロライドと組み合わせて使用するのに適した免疫チェックポイント阻害剤の例が示されている。
【００１８】
マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との特に興味深い組み合わせとしては、マクロライドが本明細書に記載の化合物から選択される組み合わせが挙げられる。より特に興味深いのは、本明細書に記載の化合物から選択されたマクロライドと、化合物１（ＩＳＣ３９７）ならびにＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及びＣＴＬＡ−４の阻害剤から選択された免疫チェックポイント阻害剤を含む構造式、例えば、ＩＳＣ３９７＋ＰＤ−１、ＩＳＣ３９７＋ＰＤ−Ｌ１又はＩＳＣ３９７＋ＣＴＬＡ−４又はＩＳＣ３９７＋ＰＤ−１＋ＣＴＬＡ−４又はＩＳＣ３９７＋ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＬＡ−４との組み合わせである。
【００１９】
マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、マクロライド、免疫チェックポイント阻害剤、及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物の形態であり得るか、又は２つの医薬組成物の形態であり得、一方の組成物が、マクロライド及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み、他方の組成物が、免疫チェックポイント阻害剤及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。後者の場合、２つの組成物は、同じ又は異なる投与経路のために設計され得る。
【００２０】
あるいは、マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、マクロライド、免疫チェックポイント阻害剤、及び１つ以上の美容上許容される賦形剤を含む化粧品組成物の形態であり得る。
【００２１】
マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、さらに、単一のパッケージで、以下を含む医薬品キットの形態であり得る：
ｉ）マクロライドを含む第１の組成物、
ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤を含む第２の組成物、及び
ｉｉｉ）使用説明書。
【００２２】
本発明の組み合わせの一般用途
マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、医学及び／又は化粧品に有用である。マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、医学での使用に特に関心がある。潜在的な用途には、関連する任意の癌形態の治療又は予防の方法が含まれ、この方法は、それを必要とするヒト又は動物の対象に、治療有効量のマクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせを投与することを含む。
【００２３】
本発明はまた、癌を治療又は予防するための方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に、本明細書に記載の特許請求の範囲及び実施形態のいずれか１つによる治療有効量の組み合わせを投与することを含む、方法に関する。
【００２４】
上記組み合わせを含む医薬組成物及び医薬品キットを含む、マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭及び下咽頭癌、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽種、横紋筋肉腫、唾液腺癌、基底扁平上皮癌、メラノーマ、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及びウィルムス腫瘍を含むがこれらに限定されない、任意の形態の癌の予防及び治療に有用であると想到される。
【００２５】
本明細書に開示される本発明の組み合わせはまた、ＨＩＶ、アデノウイルス、アルファウイルス、アルボウイルス、ボルナ病、ブニヤウイルス、カリシウイルス、尖圭コンジローマ（Ｃｏｎｄｙｌｏｍａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ）、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス、伝染性膿瘡（Ｃｏｎｔａｇｅｏｕｓ  Ｅｃｔｈｙｍａ）、エプスタイン−バーウイルス、伝染性紅斑、ハンタウイルス、ウイルス性出血熱、ウイルス性肝炎、単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、感染性単核球症、インフルエンザ、ラッサ熱ウイルス、麻疹、流行性耳下腺炎、伝染性軟属腫、パラミクソウイルス、サシチョウバエ熱、ポリオーマウイルス、リフトバレー熱、風疹、遅延性疾患のウイルス、天然痘、亜急性硬化性全脳炎、腫瘍ウイルス感染、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、狂犬病ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｃｉｔｉａｌ  Ｖｉｒｕｓ）などのウイルス剤又はウイルス性疾患に感染した患者の治療などにおいて、免疫応答刺激が有用である疾患、障害、状態、及び症状を治療するために使用され得る。特に、ＨＩＶは、本文脈において興味深いものである。
【００２６】
本明細書に記載のマクロライドは、医学、医学研究、又はそのような用途のための組成物の製造に使用することができる。したがって、以下において「マクロライド」という用語が医療用途又は医薬組成物に関連して使用される場合、その用語はまた、式（Ｉ）の化合物を含むことを意図する。特に、式（Ｉ）のマクロライドの本明細書に記載の医学的用途としては、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＯＨであり、Ｒ１４がＨである場合、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであり、ＸがＣ＝Ｏである化合物が挙げられる。
【００２７】
式（Ｉ）のマクロライドは、直接的な抗菌効果を最小限に抑えるように設計されているが、免疫活性化特性に焦点を当てている。本発明の化合物を細菌の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｓ．サリバリウス（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、及びＢ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）、又はルテウス菌（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）の培養物に添加した場合、抗菌効果は認識されないか、最小限に抑えられる。宿主細胞に影響を与える単離された免疫刺激特性を有する化合物を有することの利点は、細菌耐性の発生が回避されることである。加えて、腸内細菌叢に影響を与えるマクロライドのよく知られた副作用が回避され、ディフィシル菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の異常増殖が下痢及び偽膜性大腸炎（ｐｓｅｕｄｏｍｅｂｒａｎｅｏｕｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ）を引き起こすリスクを伴う。多くのウイルス及び癌は、免疫認識を回避するためのメカニズムを発達させ、つまり、ＨＬＡ発現をダウンレギュレートして、Ｔ細胞による検出を回避する。介入の化合物のメカニズムは、感染細胞でのＨＬＡ分子の活性化及び発現の増加に依存している。ＨＬＡ分子は、感染細胞の排除を可能にするＴ細胞の認識シグナルを提示するために、細胞内感染性病原体に由来するペプチドをロードして提示する。
【００２８】
知られたマクロライドと比較した式（Ｉ）の化合物の有利な特性には、以下のうちの１つ以上が含まれ得る：
−直接的な抗菌活性の低下
−ＭＨＣクラスＩ刺激の改善
−免疫調節の改善
−抗原提示細胞の活性化の改善
−Ｔ細胞応答の改善
−抗腫瘍応答の改善
−抗ウイルス活性の改善
−ＭＨＣクラスＩＩ抗原提示の改善
【００２９】
本発明の組み合わせを含む医薬組成物
本発明はまた、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤又は担体と一緒に本発明の組み合わせを含む医薬組成物を提供する。
【００３０】
マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、マクロライド、免疫チェックポイント阻害剤、及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物の形態であり得るか、又は２つの医薬組成物の形態であり得、一方の組成物が、マクロライド及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み、他方の組成物が免疫チェックポイント阻害剤及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。後者の場合、２つの組成物は、同じ又は異なる投与経路のために設計され得る。
【００３１】
本発明の組み合わせ又はその製剤は、例えば任意の従来の経路によって投与され得るが、非限定的に、非経口的に、経口的に、局所的に、又は粘膜（頬側、舌下、経皮、膣、直腸、鼻、眼などを含む）を介して、医療装置（例えば、ステント）を介して、又は吸入によって投与され得る。治療は、単回投与又はある期間にわたる複数回投与からなり得る。
【００３２】
各化合物（すなわち、それぞれマクロライド及びチェックポイント阻害剤）又は化合物を含む組成物は、別々の投与経路によって、かつ異なる製剤タイプで投与され得る。また、投与頻度は、同じでなくてもよい。
【００３３】
マクロライド及びチェックポイント阻害剤の投与計画は、問題の化合物又は組成物の特性に応じて変動し得る。投与計画は、組み合わせの単回投与、又はそれぞれがマクロライド又はチェックポイント阻害剤のいずれかを含む２つの組成物からなり得る。投与計画はまた、１つ以上の期間にわたる複数回の投与であり得る。投与は、特定の用途、治療される疾患、ならびに治療される患者の体調及び特徴（性別、体重、及び年齢など）に応じて、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、頻度を減らす、又は頻度を増やしてもよい。治療は、例えば、滴下剤を介した、又はデポ剤もしくは徐放性製剤を介した静脈内投与などの継続的な投与によるものであってもよい。
【００３４】
本発明の組み合わせをそのまま投与することは可能であるが、それを医薬製剤として１つ以上の許容される担体と一緒に存在させることが好ましい。担体は、本発明の化合物と適合性であり、そのレシピエントに有害ではないという意味で「許容される」ものでなければならない。好適な担体の例は、以下により詳細に記載される。
【００３５】
医薬組成物は、単位剤形を含む好適な剤形で都合よく提示されてもよく、薬学の分野でよく知られた方法のいずれかによって調製されてもよい。そのような方法は、本発明の化合物を１つ以上の賦形剤と会合させるステップを含む。一般に、医薬組成物は、本発明の化合物を賦形剤（複数可）と均一かつ密接に会合させ、次いで、必要に応じて、得られた組成物を例えば、タブレットに成形することによって調製される。
【００３６】
本発明の組み合わせは、通常、経口又は非経口経路による通常の任意の投与経路により、活性成分を含む医薬製剤の形態で、任意選択で薬学的に許容される剤形の、無毒の有機又は無機の酸又は塩基の付加塩の形態で投与され得る。障害及び治療される患者、ならびに投与経路に応じて、組成物は、様々な用量及び／又は頻度で投与され得る。
【００３７】
医薬組成物は、製造及び貯蔵の条件下で安定でなければならない；したがって、必要に応じて細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されるべきである。液剤、分散剤、乳剤、及び懸濁剤などの液体製剤の場合、担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、植物油、ならびにそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。
【００３８】
例えば、本発明の組み合わせは、香味剤もしくは着色剤を含有し得る錠剤、カプセル剤、フィルム剤、胚珠剤、エリキシル剤、液剤、乳剤、又は懸濁剤の形態で経口、口腔内、又は舌下投与され得る。
【００３９】
経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、カプセル剤、カシェ剤、又は錠剤などの個別の単位として提供されてもよく、それぞれが、所定量の活性成分を、例えば、錠剤もしくはカプセル剤の形態で、複数の単位として：粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；又は水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして含有する。活性成分はまた、巨丸剤、舐剤、又はペースト剤として提供されてもよい。
【００４０】
経口投与に好適な本発明の組み合わせの溶液又は懸濁液は、水、アルコール、ポリオールなどを含む１つ以上の溶媒、及びｐＨ調整剤、安定剤、界面活性剤、可溶化剤、分散剤、保存剤、香料などのような１つ以上の賦形剤も含有し得る。具体例としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、分散剤、例えば、ポリソルベート８０、界面活性剤、及び可溶化剤、例えば、ポリエチレングリコール、Ｐｈｏｓａｌ  ５０  ＰＧ（ホスファチジルコリン、大豆脂肪酸、エタノール、モノ／ジグリセリド、プロピレングリコール、及びアスコルビルパルミタートからなる）を含む。本発明による製剤はまた、エマルジョンの形態であってもよく、本発明の組み合わせは、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンなどのエマルジョン中に存在してもよい。油は、天然油もしくは合成油、又は任意の油様物質、例えば、大豆油もしくはベニバナ油又はそれらの組み合わせなどであり得る。
【００４１】
錠剤は、微結晶セルロース、ラクトース（例えばラクトース一水和物又はラクトース無水物）、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム及びグリシン、ブチル化ヒドロキシトルエン（Ｅ３２１）、クロスポビドン、ヒプロメロースなどの賦形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、ポテト、又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及び特定の複雑なシリカートなどの崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、マクロゴール８０００、スクロース、ゼラチン、及びアラビアゴムなどの造粒結合剤を含有し得る。さらに、マグネシウムステアラート、ステアリン酸、グリセリルベヘナート、及びタルクなどの滑沢剤が含まれてもよい。
【００４２】
錠剤は、任意選択で１つ以上の副成分と共に圧縮又は成型することにより作製され得る。圧縮錠剤は、任意選択で結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、又は分散剤と混合された粉末もしくは顆粒などの自由流動形態の活性成分を好適な機械で圧縮することによって調製され得る。成型錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を好適な機械で成型することによって作製され得る。錠剤は、任意選択で被覆又は刻み目を入れてもよく、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な割合で使用して、その中の活性成分を徐放又は制御放出するように処方して所望の放出プロファイルを提供し得る。
【００４３】
同様の種類の固体組成物もゼラチンカプセルの充填剤として用いられ得る。これに関して好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁液及び／又はエリキシル剤の場合、本発明の組み合わせは、様々な甘味剤もしくは香味剤、色素、又は染料と、乳化剤及び／又は懸濁剤と、ならびに水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン、ならびにそれらの組み合わせなどの希釈剤と組み合わせ得る。
【００４４】
口内への局所投与に好適な本発明の医薬組成物としては、活性成分を風味付きで、通常スクロース及びアラビアゴム又はトラガカントを含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴムなどの不活性基剤中に活性成分を含むトローチ；ならびに活性成分を好適な液体担体中に含む洗口剤が挙げられる。
【００４５】
局所投与に適した本発明の医薬組成物は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、粉末剤、溶液、ペースト剤、ゲル剤、含浸包帯剤、スプレー剤、エアゾール剤又はオイル剤、経皮装置、散粉剤などとして処方され得る。これらの組成物は、活性剤を含有する従来の方法で調製され得る。したがって、それらはまた、保存剤、薬物浸透を助けるための溶媒、クリーム又は軟膏中の皮膚軟化剤、及びローションのためのエタノール又はオレイルアルコールなどの適合する従来の担体及び添加剤を含んでもよい。そのような担体は、組成物の最大約１％〜最大約９８％として存在してもよい。より通常には、それらは、組成物の最大約８０％を形成する。ほんの一例として、クリーム又は軟膏は、所望の粘稠度を有するクリーム又は軟膏を製造するのに十分な量で、約５〜１０重量％の化合物を含有する十分な量の親水性材料及び水を混合することによって調製される。
【００４６】
経皮投与に適した本発明の医薬組成物は、レシピエントの表皮と長期間密接に接触したままでいることを意図した個別のパッチとして提示され得る。例えば、活性成分は、イオン導入法によってパッチから送達され得る。
【００４７】
外部組織、例えば口及び皮膚への適用のためには、組成物は、局所用軟膏又はクリームとして適用されるのが好ましい。軟膏剤において処方される場合、活性成分は、パラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤と共に用いられ得る。
【００４８】
あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤を用いてクリーム剤において処方され得る。
【００４９】
非経口投与の場合、液体単位剤形は、活性成分及び滅菌ビヒクル、例えば、これらに限定されないが、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、及び植物油を用いて調製され、水が好ましい。使用されるビヒクル及び濃度に応じて、活性成分は、コロイド状、懸濁状、又はビヒクル中に溶解させることができる。溶液を調製する際には、活性成分を注射用水に溶解し、好適なバイアル又はアンプルに充填して密封する前に濾過滅菌することができる。
【００５０】
有利には、局所麻酔薬、保存剤、及び緩衝剤などの薬剤をビヒクルに溶解することができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後に凍結し、水を真空下で除去することができる。次いで、乾燥凍結乾燥粉末をバイアル中に密封し、使用の前に液体を再構成するために付随の注射用水バイアルを供給し得る。
【００５１】
注射用途に好適な本発明の医薬組成物は、無菌水溶液又は分散液を含む。さらに、組成物は、そのような滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末の形態であり得る。全ての場合において、最終注射形態は、無菌でなければならず、容易な注射可能性のために効果的に流動性でなければならない。
【００５２】
非経口懸濁液は、活性成分が溶解される代わりにビヒクルに懸濁され、滅菌が濾過によって達成できないことを除いて、溶液と実質的に同じ様式で調製される。無菌ビヒクルに懸濁する前に、活性成分をエチレンオキシドに曝露することによって滅菌することができる。有利には、活性成分の均一な分布を容易にするために界面活性剤又は湿潤剤が組成物中に含まれる。
【００５３】
特に上述した成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類を考慮して当技術分野で従来の他の薬剤、例えば経口投与に好適な香味剤を含み得ることを理解されたい。当業者は、好適な製剤を選択する方法及びそれを調製する方法を知っている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８Ｅｄ又はそれ以降を参照）。当業者はまた、好適な投与経路及び投与量を選択する方法を知っている。
【００５４】
当業者であれば、本発明の組み合わせの個々の投与量の最適な量及び間隔は、治療される状態の性質及び程度、投与形態、投与経路及び投与部位、ならびに治療されている特定の対象の年齢及び状態によって決定されることを認識し、医師が最終的に使用されるべき適切な投与量を決定することを認識する。この投与量は、必要に応じて何度も繰り返され得る。副作用が発生した場合、通常の臨床診療に従って、投与量及び／又は投与頻度を変更又は低減することができる。
【００５５】
文脈上別段の要求がない限り、本明細書で言及される全ての％値は、％ｗ／ｗである。
【００５６】
本発明の組み合わせで使用するためのマクロライド
本発明の組み合わせで使用するための免疫刺激マクロライドは、式（Ｉ）のマクロライド又はその薬学的に許容される塩水和物、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、又はジアステレオマーであり：
【化１】
2021523930.tif 000002
式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖であり：
【化２】
2021523930.tif 000003
式中、Ｒ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリール部分から選択され、
式中、アルキル部分は、任意選択で分岐しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、ヘテロアルキル部分は、任意選択で分岐又は置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、シクロアルキル部分は、任意選択で置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
式中、アリール部分は、任意選択で置換されたＣ６芳香環から選択され、
式中、ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む任意選択で置換されたＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
式中、ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
式中、置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル、及びＯ−アシルから選択され、
式中、アシルは、Ｃ１−Ｃ４の任意選択で分岐したアシル基から選択され、
式中、Ｒ３は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒ４は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒａは、Ｈ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
式中、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、ならびにＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２、及びＯＲ１１から選択され、
式中、式（ＩＩ）のＲ４と一緒のＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と一緒のＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と一緒のＲ５、及び式（ＩＩ）のＲ９と一緒のＲ７は、独立して、各グループが接続されている炭素原子間に二重結合を残すために接合されてもよく、これにより、
式中、Ｒ２３とＲ４とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化３】
2021523930.tif 000004
式中、Ｒ４とＲ５とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化４】
2021523930.tif 000005
式中、Ｒ５とＲ７とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化５】
2021523930.tif 000006
式中、Ｒ７とＲ９とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化６】
2021523930.tif 000007
式中、式（ＩＩＩ）のＲ５と一緒のＲ４、式（ＩＩＩ）のＲ７と一緒のＲ４、及び式（ＩＩＩ）のＲ９と一緒のＲ７は、独立して、結合を表すために接合して、各グループが接続されている炭素原子間に二重結合を残してもよく、これにより、
式中、Ｒ４とＲ５とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化７】
2021523930.tif 000008
式中、Ｒ４とＲ７とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化８】
2021523930.tif 000009
式中、Ｒ７とＲ９とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化９】
2021523930.tif 000010
式中、Ｒ２２と一緒のＲ２１、Ｒ６と一緒のＲ５、Ｒ８と一緒のＲ７、又はＲ１０と一緒のＲ９は、カルボニルで置き換えられてもよく、
式中、Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
式中、Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
式中、Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、又はＲ１０のうちの１つは、ＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択される。
【００５７】
いくつかの態様では、マクロライドは、式（ｉ）によるが、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨである場合、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであることを条件とし、Ｘは、Ｃ＝Ｏでなくてもよいが、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨである場合、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであることを条件とし、Ｘは、Ｃ＝Ｏでなくてもよいが、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨである場合、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨであることを条件として、Ｘは、Ｃ＝Ｏでなくてもよい。
【００５８】
式（Ｉ）の免疫刺激性マクロライド又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、又はジアステレオマーは、以下を有し得、
【化１０】
2021523930.tif 000011
式中、ＸはＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、及びＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）の糖であり：
【化１１】
2021523930.tif 000012
式中、Ｒ１は、アルキル又はシクロアルキル部分から選択され、
式中、アルキル部分は、任意選択で分岐し、独立して、任意選択でヒドロキシル化されたＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、シクロアルキル部分は、Ｃ１−Ｃ６の任意選択で置換された環状アルキル基から選択され、
式中、置換基は、アルキル及びＯＨから選択され、
式中、Ｒ３は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒ４は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒａは、Ｈ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
式中、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、ならびにＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２、及びＯＲ１１から選択され、
式中、式（ＩＩ）のＲ４と一緒のＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と一緒のＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と一緒のＲ５、及び式（ＩＩ）のＲ９と一緒のＲ７は、独立して、各グループが接続されている炭素原子間に二重結合を残すために接合されてもよく、これにより、
式中、Ｒ２３とＲ４とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化１２】
2021523930.tif 000013
式中、Ｒ４とＲ５とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化１３】
2021523930.tif 000014
式中、Ｒ５とＲ７とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化１４】
2021523930.tif 000015
式中、Ｒ７とＲ９とが接合して二重結合を形成する場合、そのとき式（ＩＩ）は、以下によって表すことができ：
【化１５】
2021523930.tif 000016
式中、Ｒ２２と一緒のＲ２１、Ｒ６と一緒のＲ５、Ｒ８と一緒のＲ７、又はＲ１０と一緒のＲ９は、カルボニルで置き換えられてもよく、
式中、Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
式中、Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
式中、Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、又はＲ１０のうちの１つは、ＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択される。
【００５９】
一態様では、上記のマクロライドは、式（Ｉ）によるが、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨである場合、ＲａがＨ、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであることを条件として、Ｘは、Ｃ＝Ｏでなくてもよいが、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨである場合、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであることを条件として、Ｘは、Ｃ＝Ｏでなくてもよいが、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨである場合、ＲａがＨ、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨであることを条件として、Ｘは、Ｃ＝Ｏでなくてもよい。
【００６０】
マクロライドは、３−ヒドロキシル位置でグリコシル化する生体内変化株の培養物への式ＩＶとのアグリコンの添加を伴う、式（Ｉ）の化合物を産生するための方法によって提供され得る。
【化１６】
2021523930.tif 000017
【００６１】
マクロライドの興味深い選択は、Ｒ２が、Ｌ−ダウノサミン、Ｌ−アコサミン、Ｌ−リストサミン、Ｄ−リストサミン、４−オキソ−Ｌ−バンコサミン、Ｌ−バンコサミン、Ｄ−フォロサミン、Ｌ−アクチノサミン、３−エピ−Ｌ−バンコサミン、Ｌ−ビセニサミン、Ｌ−マイコサミン、Ｄ−マイコサミン、Ｄ−３−Ｎ−メチル−４−Ｏ−メチル−Ｌ−リストサミン、Ｄ−デソサミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−ピロロサミン、Ｌ−メゴサミン、Ｌ−ノガラミン、Ｌ−ロドサミン、Ｄ−アンゴロサミン、Ｌ−ケダロサミン、２’−Ｎ−メチル−Ｄ−フコサミン、３−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−エレモサミン、Ｄ−ラビドサミン、３−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｄ−マイコサミン／Ｄ−ミカミノース、３−Ｎ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、４−Ｏ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、３−Ｎ−アセチル−４−Ｏ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｌ−デソサミン、Ｄ−アモサミン、Ｄ−ビオサミン、Ｌ−アビジノサミン、Ｄ−グロサミン、Ｄ−アロサミン、及びＬ−シビロサミンから選択される化合物である。
【００６２】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ２がＤ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−ジデスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＮ−エチルＤ−アンゴロサミン、及びＮ−ジデスメチルＮ−ジエチルＤ−アンゴロサミンから選択される化合物である。
【００６３】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ２がＮ−デスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−ジデスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＮ−エチルＤ−アンゴロサミン、及びＮ−ジデスメチルＮ−ジエチルＤ−アンゴロサミンから選択される化合物である。
【００６４】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ２が式（ＩＩ）による糖である化合物である。
【００６５】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ２が式２による糖である化合物であり、式中、ＲａはＨであり、Ｒ４はＭｅであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＯＨであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ８はＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９はＨであり、Ｒ１０はＨである。
【００６６】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ１１がＨ、Ｍｅ、及びＥｔから選択され、Ｒ１２がＨ、Ｍｅ、及びＥｔから選択される化合物である。
【００６７】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ１１がＥｔであり、Ｒ１２がＥｔである化合物である。
【００６８】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ１１がＭｅであり、Ｒ１２がＥｔである化合物である。
【００６９】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、ＸがＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−及びＣＨ（ＯＨ）−から選択される化合物である。
【００７０】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ１がＭｅ、Ｅｔ、及びシクロアルキルから選択される化合物である。
【００７１】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ１がＭｅ及びＥｔから選択される化合物である。
【００７２】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｘが−ＮＲ３ＣＨ２−又はＣＨ２ＮＲ３−から選択される化合物である。
【００７３】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、又はＲ８のうちの１つがＮＲ１１Ｒ１２である化合物である。
【００７４】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、ならびにＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０が、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、及びＯＲ１１から選択される化合物である。
【００７５】
マクロライドのさらに別の興味深い選択は、Ｒ１３及びＲ１４が、ＯＨである化合物である。
【００７６】
特に興味深いのは、式（Ｉ）のマクロライドであり、式中、Ｒ１はＥｔであり、Ｒ２は式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３はＯＨであり、Ｒ１４はＨであり、ＲａはＨであり、Ｒ４はＭｅであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＯＨであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ８はＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９はＨであり、Ｒ１０はＨであり、ＸはＣ＝Ｏである。
【００７７】
具体的なマクロライドとしては、以下が挙げられる：
【化１７−１】
2021523930.tif 000018
【化１７−２】
2021523930.tif 000019
【化１７−３】
2021523930.tif 000020
【化１７−４】
2021523930.tif 000021
【００７８】
本明細書における例から分かるように、いくつかのマクロライドは、本明細書で定義されるような実質的な抗菌活性を持たない。
【００７９】
式（Ｉ）のマクロライドのための一般的な調製方法
当業者は、式（Ｉ）のマクロライドが、知られた方法を使用して、様々なやり方で調製され得ることを認識するであろう。下記の経路は、式（Ｉ）の化合物の調製に用いることができるいくつかの方法の単なる例示である。
【００８０】
生体内変化にアグリコンが必要な場合、これらには多数の方法でアクセスできる。アジスロマイシン及びエリスロマイシンは、容易に入手でき、好適な出発点と見なされる。ミカロース／クラジノース及び／又はデソサミンは、グリコシド切断などの化学的方法によって除去される。簡単に言えば、一方法では、酸で処理することによって糖を除去し得る。アミノ糖の除去を容易にするために、最初にジメチルアミンを酸化して、次いで熱分解によって除去されるＮ−オキシドを形成する必要がある。次いで、得られた５−Ｏ／３−Ｏ糖を、酸性分解によって除去することができる。好適な方法は、ＬｅＭａｈｉｅｕ  ｅｔ  ａｌ．１９７４及びＤｊｏｋｉｃ  ｅｔ  ａｌ．１９８８によって教示されている。最後に、化合物は、アミノ糖を添加する細菌株を使用して生体内変化する。
【００８１】
好適なアグリコンへの別の経路は、好適なブロックされた変異体からの発酵及び単離によるものである。例えば、エリスロノリドＢ（３ａ）は、例えば、米国特許第３，１２７，３１５号（例えば、ＮＲＲＬ２３６１、ＮＲＲＬ２３６０、ＮＲＲＬ２３５９、及びＮＲＲＬ２３３８）、Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００（例えば、Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭ  ΔＢＶ  ΔＣＩＩＩ）に記載されている菌株及びプロセスなどのグリコシル化でブロックされたＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）の菌株の発酵によって生成することができる。簡単に言えば、発酵は、当技術分野で知られた方法によって行われる。典型的には、種培養が調製され、生産容器に移される。生産段階は、４日〜１０日であり、生物は、好適な撹拌及び通気を伴って２４℃〜３０℃で成長する。次いで、抽出及び精製によって、アグリコンを単離することができる。
【００８２】
本発明のアグリコン又は化合物がアミノ糖又は他の任意の第三級アミンを有し、発酵によって調製される場合、細菌ブロスを抽出し、化合物を精製する必要がある。典型的には、バクテリアブロスは、ｐＨ８〜１０、理想的には９．５に調整される。次いで、ブロスを好適な有機溶媒で抽出することができる。この溶媒は、水混和性ではなく、理想的には酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、又は同様の特性を有する溶媒である。ブロス及び溶媒は、理想的には、一定期間、例えば３０分又は１時間、撹拌することにより混合される。次いで、相を分離し、有機抽出物を除去する。ブロスは、このようにして複数回、理想的には２〜３回抽出することができる。次いで、合わせた有機抽出物を真空中で還元することができる。次いで、残留物を弱酸性の水性溶媒に溶解又は懸濁する。典型的には、これは、塩化アンモニウム水溶液である。次いで、これを酢酸エチルなどの非水混和性有機溶媒で数回、理想的には２〜３回抽出する。得られた水層を収集し、ｐＨをｐＨ８〜１０、理想的には９．０に調整する。次いで、得られた水層を酢酸エチルなどの非水混和性有機溶媒で数回、理想的には２〜３回抽出する。有機抽出物を合わせ、真空中で還元して、さらなる精製を必要とする標的化合物で増強された粗抽出物を得る。
【００８３】
化合物精製は、クロマトグラフィー又は（再）結晶化によって行うことができ、必要な方法は、当業者によく知られている。順相シリカでクロマトグラフィーが必要であり、本発明のアグリコン又は化合物がアミノ糖又は他の第三級アミンを有する場合、そのとき移動相に塩基性修飾剤を添加することが有益である。例えば、順相シリカでのクロマトグラフィーは、添加した０〜５％の水酸化アンモニウム水溶液で溶出するためにヘキサン、酢酸エチル、メタノール系を使用することができる。理想的には、２％の水酸化アンモニウム水溶液を添加する。生体内変化に続いて、本発明の未使用のアグリコン及び化合物の両方を、好適な溶媒系を使用して同じ粗抽出物から別々に精製することができる。さらに精製が必要な場合、これは、任意選択で分取ＨＰＬＣによって実施することができる。
【００８４】
第一級又は第二級アミンをアルキル化するための還元的アミノ化は、当業者によく知られている。アミンを溶媒中でアルデヒド又はケトンと混合し、還元剤を添加する。次いで、水素化ホウ素ナトリウムは、アミン及びカルボニルの反応から生じるイミン又はヘミアミナールを還元することができ、例えば、アルキル化アミンが生じる。水素化ホウ素ナトリウムはまた、存在する他のカルボニル基、例えば、ケトンも還元し得る。ケトンも存在する場合、シアノ水素化ホウ素ナトリウムなどのプロトン化イミンにより特異的な還元剤を使用することが好ましいが、最適な条件を見つけるために、異なる還元剤、溶媒、温度、及び反応時間を試験する必要があるかもしれないことは、当業者には明らかであろう。
【００８５】
本発明の組み合わせで使用するためのチェックポイント阻害剤
現在知られているチェックポイント阻害剤は、未だ同定されていないチェックポイント阻害剤と同様に、本発明に関連して興味深い。したがって、興味深いのは、イピリムマブ及びトレメリムマブなどのＣＴＬＡ４阻害剤から選択された薬剤、又はペンブロリズマブ（ＭＫ３４７５）、ニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ＡＭＰ−２２４などのＰＤ−１阻害剤から選択された薬剤、又はアテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ−１１０５、抗ＰＤ−１（Ｍｅｒｃｋ，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｒｏｃｈｅ、もしくはＡｓｔｒａからのクローンＲＭＰ  １−１４）などのＰＤ−Ｌ１阻害剤から選択された薬剤、又はＰＤ−Ｌ２阻害剤から選択された薬剤、又はＩＭＰ３２１などのＬＡＧ３阻害剤から選択された薬剤、又はエノブリツズマブ及びＭＧＤ００９などのＢ７−Ｈ３阻害剤から選択された薬剤、又はＣＭＴＭ６から選択された薬剤である。
【００８６】
特に興味深いのは、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブから選択される免疫チェックポイント阻害剤である。
【００８７】
さらに特に興味深いのは、ＰＤ−１の阻害剤から選択された免疫チェックポイント阻害剤である。
【００８８】
しかしながら、免疫チェックポイント阻害剤の他の例は、科学文献及び特許文献に見出すことができ、本発明の範囲内にもある。
【００８９】
定義
冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、本明細書では、冠詞の文法的対象の１つ又は２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「類似体」は、１つの類似体又は複数の類似体を意味する。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「直接抗菌効果」という用語は、細菌のｒＲＮＡ複合体への結合をと通して発生するエリスロマイシン及び類似体の抗菌活性を指す。この効果は、いかなる宿主の免疫系成分の存在も必要としないため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイ及びディスク阻害アッセイなどの標準的な抗菌アッセイで明らかである。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「実質的な抗菌活性を持たない」という用語は、本発明の化合物が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｓ．サリバリウス（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、及びＢ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）におけるその抗菌活性について本明細書の例１３に従って試験された場合、＞６４μｇ／ｍｌのＭＩＣ値を有することを意味するように意図される。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「免疫刺激剤」という用語は、免疫系を活性化する化合物を意味することを意図している。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントを標的とする」という文は、それがチェックポイントシグナル伝達を遮断することを意味するように意図される。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、例えば、直鎖アルキルの場合は−ＣｎＨ２ｎ＋１などの水素原子で完全に飽和された、ｓｐ３混成炭素原子のみから構成される任意の直鎖又は分枝鎖を指し、式中、ｎは、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、イソペンチル、ヘキシル、又はイソヘキシルなどの１〜６の範囲になり得る。本明細書で使用されるアルキルは、さらに置換され得る。
【００９５】
本文脈における「ヘテロアルキル」という用語は、単独で又は組み合わせて使用される基−Ｘ−Ｃ−１−６アルキルを示し、Ｃ１−６アルキルは、上記で定義された通りであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ−アルキルである。線状ヘテロアルキル基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、及びヘキソキシである。分岐ヘテロアルキルの例は、イソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソペントキシ、及びイソヘキソキシである。環状ヘテロアルキルの例は、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、及びシクロヘキシルオキシである。本明細書で使用されるヘテロアルキルは、さらに置換され得る。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、−ＣｎＨ２ｎ−１の一般式を有する環状／環構造の炭素鎖を指し、式中、ｎは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシルなどのような３〜６である。本明細書で使用されるシクロアルキルは、環状構造においてさらに置換され得るか、又はヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ−アルキル）を含有し得る。
【００９７】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、炭素環式芳香環系を含むことを意図している。アリールはまた、以下に列挙される炭素環系の部分的に水素化された誘導体を含むことを意図している。
【００９８】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、フリル、チエニル、ピロリルなどの窒素、酸素、及び硫黄の中から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する複素環式不飽和環系を含み、以下に列挙される複素環式系の部分水素化誘導体を含むことも意図している。
【００９９】
本明細書で使用される「アリール」及び「ヘテロアリール」という用語は、任意選択で非置換又は一置換、二置換、もしくは三置換され得るアリール、又は任意選択で非置換又は一置換、二置換、もしくは三置換され得るヘテロアリールを指す。「アリール」及び「ヘテロアリール」の例としては、フェニル、ビフェニル、インデニル、ナフチル（１−ナフチル、２−ナフチル）、Ｎ−ヒドロキシテトラゾリル、Ｎ−ヒドロキシトリアゾリル、Ｎ−ヒドロキシイミダゾリル、アントラセニル（１−アントラセニル、２−アントラセニル、３−アントラセニル）、フェナントレニル、フルオレニル、ペンタレニル、アズレニル、ビフェニレニル、チオフェニル（１−チエニル、２−チエニル）、フリル（１−フリル、２−フリル）、フラニル、チオフェニル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、ピラニル、ピリダジニル、ピラジニル、１，２，３−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、テトラゾリル、チアジアジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル（チアナフテニル）、インドリル、オキサジアゾリル、イソキサゾリル、キナゾリニル、フルオレニル、キサンテニル、イソインダニル、ベンズヒドリル、アクリジニル、ベンズイソキサゾリル、プリニル、キナゾリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、フテリジニル、アゼピニル、ジアゼピニル、ピロリル（２−ピロリル）、ピラゾリル（３−ピラゾリル）、５−チオフェン−２−イル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、イミダゾリル（１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル）、トリアゾリル（１，２，３−トリアゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−２−イル、１，２，３−トリアゾール−４−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル）、オキサゾリル（２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、チアゾリル（２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、ピリジル（２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリミジニル（２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル）、ピラジニル、ピリダジニル（３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル）、イソキノリル（１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノイル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、キノリル（２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、ベンゾ［ｂ］フラニル（２−ベンゾ［ｂ］フラニル、３−ベンゾ［ｂ］フラニル、４−ベンゾ［ｂ］フラニル、５−ベンゾ［ｂ］フラニル、６−ベンゾ［ｂ］フラニル、７−ベンゾ［ｂ］フラニル）、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル（２−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、３−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、４−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、６−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、７−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル））、ベンゾ［ｂ］チオフェニル（２−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、３−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、４−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、５−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、６−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、７−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル（２−（２，３−ジヒドロ）−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、３−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、４−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、６−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、７−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル））、インドリル（１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、インダゾリル（１−インダゾリル、２−インダゾリル、３−インダゾリル、４−インダゾリル、５−インダゾリル、６−インダゾリル、７−インダゾリル）、ベンズイミダゾリル、（１−ベンズイミダゾリル、２−ベンズイミダゾリル、４−ベンズイミダゾリル、５−ベンズイミダゾリル、６−ベンズイミダゾリル、７−ベンズイミダゾリル、８−ベンズイミダゾリル）、ベンゾオキサゾリル（１−ベンゾオキサゾリル、２−ベンゾオキサゾリル）、ベンゾチアゾリル（１−ベンゾチアゾリル、２−ベンゾチアゾリル、４−ベンゾチアゾリル、５−ベンゾチアゾリル、６−ベンゾチアゾリル、７−ベンゾチアゾリル）、カルバゾリル（１−カルバゾリル、２−カルバゾリル、３−カルバゾリル、４−カルバゾリル）が挙げられるが、これらに限定されない。部分的に水素化された誘導体の非限定的な例は、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、１，４−ジヒドロナフチル、ピロリニル、ピラゾリニル、インドリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゼピニルなどである。
【０１００】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機又は有機の酸又は塩基から形成される従来の塩、ならびに四級アンモニウム酸付加塩を含む。好適な酸塩のより具体的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ギ酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、パルモック（ｐａｌｍｏｉｃ）酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化水素酸、リンゴ酸、ステアリン酸（ｓｔｅｒｏｉｃ）、タンニン酸などが挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容されないが、本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に有用であり得る。好適な塩基性塩のより具体的な例としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、及びプロカインの塩が挙げられる。
【０１０１】
本発明は、以下の非限定的な実施形態によってさらに説明される：
１．マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ。
２．マクロライドが実質的な抗菌活性を持たない、実施形態１に記載の組み合わせ。
３．例１３に記載の抗菌活性試験に従って試験した場合、マクロライドが＞６４μｇ／ｍｌのＭＩＣ値を有する、実施形態２に記載の組み合わせ。
４．マクロライドが式Ｉを有する実施形態１〜３のいずれかによるマクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ：
【化１８】
2021523930.tif 000022
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖であり：
【化１９】
2021523930.tif 000023
式中、Ｒ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリール
部分から選択され、
式中、アルキル部分は、任意選択で分岐しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、ヘテロアルキル部分は、任意選択で分岐又は置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、シクロアルキル部分は、任意選択で置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
式中、アリール部分は、任意選択で置換されたＣ６芳香環から選択され、
式中、ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む任意選択で置換されたＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
式中、ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
式中、置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル、及びＯ−アシルから選択され、
式中、アシルは、Ｃ１−Ｃ４の任意選択で分岐したアシル基から選択され、
式中、Ｒ３は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒ４は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒａは、Ｈ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
式中、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、ならびにＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２、及びＯＲ１１から選択され、
式中、式（ＩＩ）のＲ４と一緒のＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と一緒のＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と一緒のＲ５、及び式（ＩＩ）のＲ９と一緒のＲ７は、独立して、各グループが接続されている炭素原子間に二重結合を残すために接合されてもよく、
式中、Ｒ２２と一緒のＲ２１、Ｒ６と一緒のＲ５、Ｒ８と一緒のＲ７、又はＲ１０と一緒のＲ９は、カルボニルで置き換えられてもよく、
式中、Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
式中、Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
式中、Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、又はＲ１０のうちの１つは、ＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２、
又はそれらの薬学的に許容される塩から選択される）。
５．マクロライドが以下から選択される、実施形態１〜４のいずれかに記載の組み合わせ：
【化２０−１】
2021523930.tif 000024
【化２０−２】
2021523930.tif 000025
【化２０−３】
2021523930.tif 000026
【化２０−４】
2021523930.tif 000027
又はそれらの薬学的に許容される塩。
６．マクロライドが、以下である、実施形態１〜５のいずれかに記載の組み合わせ：
【化２１】
2021523930.tif 000028
又はその薬学的に許容される塩。
７．免疫チェックポイント阻害剤が、細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られている）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９としても知られている）、ＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１及びＣＤ２７４としても知られている）、ＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ及びＣＤ−２７３としても知られている）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３、ＨＡＶｃｒ２としても知られている）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３、ＣＤ２２３としても知られている）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｓ１、Ｂ７Ｘ、ＶＣＴＮ１としても知られている）、２Ｂ４（ＣＤ２４４として知られている）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られている）、ならびにＣＭＴＭ６から選択される免疫チェックポイントを標的とする、実施形態１〜６のいずれかに記載の組み合わせ。
８．免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ−Ｌ２阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、Ａ２ａＲ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ４阻害剤、２Ｂ４阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、及びＣＭＴＭ６阻害剤から選択される、実施形態１〜７のいずれかに記載の組み合わせ。
９．マクロライドが、
【化２２】
2021523930.tif 000029
又はその薬学的に許容される塩であり、
免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ−１阻害剤である、実施形態８に記載の組み合わせ。
１０．免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ−１１０５、ＩＭＰ３２１、エノブリツズマブ、及びＭＧＤ００９から選択される、実施形態１〜９のいずれかに記載の組み合わせ。
１１．免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブから選択される、実施形態１０に記載の組み合わせ。
１２．一方の組成物が、マクロライド及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み、他方の組成物が免疫チェックポイント阻害剤及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、２つの医薬組成物の形態の実施形態１〜１１のいずれかに記載の組み合わせ。
１３．２つの医薬組成物が、同じ又は異なる投与経路のために設計されている、実施形態１２に記載の組み合わせ。
１４．医学で使用するための実施形態１〜１３のいずれか１つに定義されている組み合わせ。
１５．免疫刺激剤として使用するための実施形態１４に記載の組み合わせ。
１６．癌の治療に使用するための実施形態１４又は１５のいずれかに記載の組み合わせ。
１７．癌が、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭及び下咽頭癌、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽種、横紋筋肉腫、唾液腺癌、基底扁平上皮癌、メラノーマ、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍から選択される、実施形態１６に記載の組み合わせ。
１８．ウイルス性疾患の治療に使用するための、実施形態１４又は１５のいずれかに記載の組み合わせ。
１９．ウイルス性疾患が、ＨＩＶ、アデノウイルス、アルファウイルス、アルボウイルス、ボルナ病、ブニヤウイルス、カリシウイルス、尖圭コンジローマ（Ｃｏｎｄｙｌｏｍａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ）、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス、伝染性膿瘡（Ｃｏｎｔａｇｅｏｕｓ  Ｅｃｔｈｙｍａ）、エプスタイン−バーウイルス、伝染性紅斑、ハンタウイルス、ウイルス性出血熱、ウイルス性肝炎、単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、感染性単核球症、インフルエンザ、ラッサ熱ウイルス、麻疹、流行性耳下腺炎、伝染性軟属腫、パラミクソウイルス、サシチョウバエ熱、ポリオーマウイルス、リフトバレー熱、風疹、遅延性疾患のウイルス、天然痘、亜急性硬化性全脳炎、腫瘍ウイルス感染、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、狂犬病ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｃｉｔｉａｌ  Ｖｉｒｕｓ）から選択される、実施形態１８に記載の組み合わせ。
２０．実施形態１〜１３のいずれかに記載の組み合わせ及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
２１．実施形態１４〜１９のいずれかに記載の組み合わせ及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
２２．癌の治療又は予防に使用するための医薬品キットであって、単一のパッケージで、
ｉ）マクロライドを含む第１の組成物、
ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤を含む第２の組成物、及び
ｉｉｉ）使用説明書
を含む、医薬品キット。
２３．マクロライドが以下から選択される、実施形態２２に記載の医薬品キット：
【化２３−１】
2021523930.tif 000030
【化２３−２】
2021523930.tif 000031
又はそれらの薬学的に許容される塩。
２４．マクロライドが以下である、実施形態２１に記載の医薬品キット：
【化２４】
2021523930.tif 000032
又はその薬学的に許容される塩。
２５．癌を治療又は予防するための方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の治療有効量の組み合わせを投与することを含む、方法。
【０１０２】
実験的
材料
特に明記しない限り、以下の例で使用される全ての試薬は、商業的供給源から得られる。アジスロマイシンＢのサプライヤーの例としては、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（テキサス州、米国）及びＴｏｒｏｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（トロント、カナダ）が挙げられる。
【０１０３】
抗体
抗ＣＤ８０  Ｖ４５０、抗ＣＤ６９  ＰＥ、抗ＨＬＡ−ＤＲ  ＡＰＣ−Ｒ７００、抗ＣＤ１２７−ＡＰＣ、及び抗ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ  ＦＩＴＣは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。Ｔ細胞増殖アッセイ用のセルトレースバイオレットは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ＥＬＩＳＡ抗体は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。
【０１０４】
培地
２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、１０％のウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１００μｇ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
【０１０５】
一般的な生物学的方法
免疫刺激に対する本発明の化合物の効果は、以下に記載される方法のうちの１つ以上を使用して試験され得る：
【０１０６】
一般的な化合物法
化合物分析−溶液中の溶解度及び安定性
【０１０７】
発酵ブロス及び化合物の分析
以下のようにして得られた発酵ブロスのアリコートを等量の酢酸エチルと共に３０分間激しく振とうし、次いで遠心分離によって分離するか、又はすでに単離された化合物をメタノール：水（９：１、０．１ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、次いで遠心分離により分離した。上清をＬＣ−ＭＳ及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析し、４０℃で加熱したＬｕｎａ  ＨＰＬＣカラム（２５０×４．６ｍｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（マックルズフィールド、英国））を使用して、塩基不活性化Ｌｕｎａ  Ｃ１８逆相シリカ（５ミクロンの粒径）でクロマトグラフィーを実現した。ＢｒｕｋｅｒＥｓｑｕｉｒｅイオントラップＭＳに接続されたクォータナリポンプ、オートサンプラ、カラムオーブン、及びダイオードアレイ検出器で構成されるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステム。
移動相Ａ＝水中０．１％のギ酸
移動相Ｂ＝アセトニトリル中０．１％のギ酸
【０１０８】
グラジエント：Ｔ＝０分、Ｂ＝５０％；Ｔ＝４．５分、Ｂ＝５０％；Ｔ＝７分、Ｂ＝１００％；Ｔ＝１０．５分、Ｂ＝１００％；Ｔ＝１０．７５分、Ｂ＝５０％；Ｔ＝１３分、Ｂ＝５０％。
【０１０９】
化合物をＬＣ−ＭＳ及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳで同定し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで内部標準に対して定量化した。
フローサイトメトリーによるマーカー発現の分析
【０１１０】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール−パック密度遠心分離を用いて健康なドナーから精製した。細胞を、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０％のウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充した完全ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で、３７℃、５％のＣＯ２で２４〜７２時間培養し、化合物１及び２の濃度を上げながら刺激した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、細胞表面マーカーに特異的なモノクローナル抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用してフローサイトメトリーで分析した。全てのサンプルを２回試験した。
【０１１１】
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）培養
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール−パック密度遠心分離を用いて健康なＣＭＶ陽性ドナーから精製した。ＰＢＭＣをＰＢＳ中の５μＭのセルトレースバイオレット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１５分間標識し、次いで完全な細胞培養培地で洗浄した。標識されたＰＢＭＣを、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０％のウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充したＡＩＭ−Ｖ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で、３７℃、５％のＣＯ２で６〜８日間、ＣＭＶ  ｐｐ６５タンパク質（１μｇペプチド／ｍｌ、ＪＰＴ）にまたがるペプチドライブラリーの存在下で培養した。細胞増殖を、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用したフローサイトメトリーで評価した。
【０１１２】
ＥＬＩＳＡ
上清ＩＬ−１０を完全ＲＰＭＩ培地、３７℃、５％のＣＯ２で２．５μＭの化合物１及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と４８時間及び７日間インキュベートした後、標準サンドイッチＥＬＩＳＡ（全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製の抗体）で測定した。
【０１１３】
ＴＬＲ２アッセイ
サンプル及び対照を、標準的なアッセイ条件を使用したＩｎｖｉｖｏｇｅｎでのセルレポーターアッセイを使用して、組換えＨＥＫ−２９３−ＴＬＲ細胞株で２回試験した。これらの細胞株は、ヒトＴＬＲ２タンパク質及び分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）であるレポーター遺伝子を機能的に過剰発現する。このレポーター遺伝子の産生は、ＮＦｋＢ誘導性プロモーターによって駆動される。ＴＬＲレポーター細胞株の活性化の結果は、光学密度値（ＯＤ）として示される。
【０１１４】
２０μｌの各試験品を使用して、２００μｌの最終反応体積でｈＴＬＲ２レポーター細胞株を刺激した。サンプルを２回試験し、少なくとも２つの濃度（２０μＭ及び１０μＭ）を試験した。
【０１１５】
細胞透過性の評価（双方向）
１０μＭの試験品をＣａｃｏ−２細胞単層の頂端（Ａ）表面に添加し（０．３％のＤＭＳＯ及び５μＭのＬＹを含むＨＢＳＳバッファー中、３７℃）、９０分間のインキュベーション後に化合物の基底外側（Ｂ）区画への浸透を測定した。これはまた、能動輸送を調査するために逆方向（基底外側から頂端）で実行した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、試験化合物及び標準対照化合物の両方のレベルを定量化するために使用される。流出比は、ＢからＡへの透過性をＡからＢへの透過性で割ることによって計算した。
薬物透過性：Ｐａｐｐ＝（ＶＡ／（面積×時間））×（［薬物］アクセプター／（（［薬物］初期、ドナー）×希釈係数）
【０１１６】
代謝安定性の評価（ミクロソーム安定性アッセイ）
ミクロソームの代謝率は、以下のように試験した：
ヒト肝ミクロソームをバッファーＣ（０．１Ｍのリン酸カリウムバッファー、１．０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で２．５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ミクロソーム安定性研究を、３０μＬの１．５μＭの化合物スパイク溶液をウェルに添加することによって実施した（１．５μＬの５００μＭスパイク溶液（１０μＬの１０ｍＭ  ＤＭＳＯストック溶液を１９０μＬのＡＣＮに入れて最終的に１μＭの最終試験濃度を生成）及び１８．７５μＬの２０ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソームを４７９．７５μＬのバッファーＣに入れる）。全てのサンプルを３７℃で約１５分間プレインキュベートした。これに続いて、穏やかに混合しながら１５μＬのＮＡＤＰＨ溶液（６ｍＭ）を添加することにより反応を開始した。アリコート（４０μＬ）を０、５、１５、３０、及び４５分で取り出し、内部標準（１３５μＬ）を含有するＡＣＮでクエンチした。タンパク質を遠心分離（４０００ｒｐｍ、１５分）で除去し、サンプルプレートの化合物濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析した。次いで、分析物の濃度を元々存在していた量と比較して、標準的な方法で半減期を計算した。
【０１１７】
例
例１−化合物１の調製（ＩＳＣ３９７）
【化２５】
2021523930.tif 000033
【０１１８】
アジスロマイシンアグリコン（Ａｚ−ＡＧ）の調製（１ａ）
アジスロマイシンアグリコン（１ａ）は、文献（Ｄｊｏｋｉｃ  ｅｔ  ａｌ．１９８８）に記載されている方法を使用して生成した。簡単に説明すると、アジスロマイシンは、３−Ｏ及び５−Ｏ糖の酸性除去によってアジスロマイシンアグリコンに変換される。５−Ｏアミノ糖は、最初に酸化及び熱分解されて切断を容易にする。
【０１１９】
エリスロマイシンアグリコン（エリスロノリド）をグリコシル化できる生体内変化株の生成：
【０１２０】
Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１（ｐＡＥＳ５２）の生成
ａｃｔＩＩ−ＯＲＦ４  ｐａｃｔＩ／ＩＩＩ発現系（Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９８）と共にａｎｇＡＩ、ａｎｇＡＩＩ、ａｎｇＣＶＩ、ａｎｇ−ｏｒｆ１４、ａｎｇＭＩＩＩ、ａｎｇＢ、ａｎｇＭＩ、及びａｎｇＭＩＩを含有する発現プラスミドであるｐＡＥＳ５２を以下のように生成した。
【０１２１】
アンゴラマイシン糖生合成遺伝子を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナッサス、バージニア州、米国）から得られたＳ．ユリサーマス（Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ）ＡＴＣＣ２３９５６株のコスミドライブラリーから増幅した。生合成遺伝子クラスター配列は、ＥＵ０３８２７２、ＥＵ２２０２８８、及びＥＵ２３２６９３として寄託した（Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８）。
【０１２２】
生合成遺伝子カセットは、以前に記載されたように（Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８、ＥＳＩ）ベクターｐＳＧ１４４で組み立てられ、糖生合成に必要な８が得られるまで連続遺伝子を追加し、プラスミドｐＡＥＳ５２を作成した。
【０１２３】
ｐＡＥＳ５２を１８Ａ１株（ＷＯ２００５０５４２６５）に形質転換した。
【０１２４】
ｐＡＥＳ５２のＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１への形質転換
ｐＡＥＳ５２は、標準的な方法（Ｋｉｅｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００、Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９７）を使用して、プロトプラストによってＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１に形質転換した。得られた菌株をＩＳＯＭ−４５２２と指定し、２０１７年１月２４日に受け入れ番号：ＮＣＩＭＢ４２７１８でＮＣＩＭＢに寄託した。
【０１２５】
Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２（ｐＡＥＳ５４）の生成
ａｃｔＩＩ−ＯＲＦ４  ｐａｃｔＩ／ＩＩＩ発現系（Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）と共にａｎｇＡＩ、ａｎｇＡＩＩ、ａｎｇＣＶＩ、ａｎｇ−ｏｒｆ１４、ａｎｇＭＩＩＩ、ａｎｇＢ、ａｎｇＭＩ、及びａｎｇＭＩＩを含有する発現プラスミドであるｐＡＥＳ５４を以下のように生成した
【０１２６】
アンゴラマイシン糖生合成遺伝子を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナッサス、バージニア州、米国）から得られたＳ．ユリサーマス（Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ）ＡＴＣＣ２３９５６株のコスミドライブラリーから増幅した。生合成遺伝子クラスター配列は、ＥＵ０３８２７２、ＥＵ２２０２８８、及びＥＵ２３２６９３として寄託した（Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８）
【０１２７】
生合成遺伝子カセットは、以前に記載されたように（Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８、ＥＳＩ）ベクターｐＳＧ１４４で組み立てられ、糖生合成に必要な８が得られるまで連続遺伝子を追加し、プラスミドｐＡＥＳ５２を作成した。
【０１２８】
プラスミドｐＡＥＳ５４を、ａｃｔＩＩ−ＯＲＦ４  ｐａｃｔＩ／ＩＩＩプロモーター系を含有する１１，５４１ｂｐ  ＳｐｅＩ−ＮｈｅＩフラグメントをライゲートすることによって作製し、８ａｎｇ遺伝子を、アプラマイシン耐性遺伝子、ｏｒｉＣ、ストレプトマイセスに移すためのｏｒｉＴ、及び統合的形質転換のためのａｔｔＰ部位を有するｐｈｉＢＴ１インテグラーゼを含有する、ｐＧＰ９からの５，０８７ｂｐ  ＸｂａＩ−ＳｐｅＩフラグメントを用いて、ｐＡＥＳ５２から切除した。（互換性のあるＮｈｅＩ及びＸｂａＩ部位をライゲーション中に除外した。）
【０１２９】
次いで、ｐＡＥＳ５４をＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２に形質転換した（Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００、ＷＯ２００５０５４２６５）。
【０１３０】
ｐＡＥＳ５４のＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２への形質転換
ｐＡＥＳ５４を、標準的な方法を使用して、接合によってＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２に移した。簡単に説明すると、大腸菌ＥＴ１２５６７  ｐＵＺ８００２を標準的な手順でｐＡＥＳ５４で形質転換し、アプラマイシン（５０μｇ／ｍＬ）、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）、及びクロラムフェニコール（３３μｇ／ｍＬ）選択を用いて２ＴＹに広げた。このプレートを３７℃で一晩インキュベートした。これからのコロニーを使用して、対数増殖期後期に達するまで３７℃でインキュベートした新鮮な液体２ＴＹ培養物を設定した。細胞を回収し、洗浄し、Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２の胞子と混合し、Ｒ６のプレートに広げ、２８℃でインキュベートした。２４時間後、これらのプレートに３ｍｇのアプラマイシン及び２．５ｍｇのナリジクス酸を含有する１ｍＬの滅菌水をかぶせ、２８℃でさらに５〜７日間インキュベートした。このプレート上の接合完了体を、アプラマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有するＲ６の新鮮なプレートに移した。
【０１３１】
代替生体内変化株
あるいは、ＢＩＯＴ−２９４５（Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８）は、これがエリスロノリドにアンゴロサミンも追加するため、生体内変化株として使用してもよい。
【０１３２】
化合物１を調製するためのアジスロマイシンアグリコンの生体内変化
ＳＶ２培地（４０ｍＬ）及び８μＬチオストレプトン（２５ｍｇ／ｍＬ）を含有する三角フラスコ（２５０ｍＬ）に、０．２ｍＬのＩＳＯＭ−４５２２株の胞子ストックを接種し、３０℃でインキュベートし、３００ｒｐｍで２．５ｃｍのスローで４８時間振とうした。
【表１】
2021523930.tif 000034
【０１３３】
ＥｒｙＰＰ培地（７ｍＬ）を含有する滅菌バンジド（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｂｕｎｇｅｄ）ファルコンチューブ（５０ｍＬ）を調製し、抗生物質を含まないシードフラスコ（ファルコンチューブあたり０．５ｍＬ）から培養物を接種した。ファルコンを３０℃でインキュベートし、３００ｒｐｍで２．５ｃｍのスローで２４時間振とうした。
【表２】
2021523930.tif 000035
【０１３４】
２４時間後、アジスロマイシンアグリコン（ＤＭＳＯ中０．５ｍＭ、５０μＬ）を各ファルコンチューブに加え、インキュベーションを３００ｒｐｍで２．５ｃｍのスローでさらに６日間続けた。
【０１３５】
化合物１の単離
全ブロスをｐＨ９．５に調整し、１体積の酢酸エチルで２回抽出した。遠心分離（３，５００ｒｐｍ、２５分）後の吸引により有機層を収集した。有機層を合わせ、真空中で還元して、化合物１を含有する褐色のガムを明らかにした。この抽出物を酢酸エチル（２００ｍｌ）と塩化アンモニウム水溶液（２０ｍｌの５０％濃縮溶液）とに分配した。分離後、有機層をさらなる体積（２００ｍｌ）の塩化アンモニウム水溶液で抽出した。次いで、合わせた水層を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９．０に調整し、次いで１体積当量の酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、真空中で還元して褐色の固体にした。次いで、この抽出物をシリカカラムにアプライし、以下によって段階的に（５００ｍｌロットで）溶出した：
【表３】
2021523930.tif 000036
【０１３６】
化合物１は、主にＦ及びＧにあった。これらの溶媒を合わせ、真空中で還元して、化合物１を含有する褐色の固体を得た。次いで、この物質を分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８  Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸカラム、２０ｍＭの酢酸アンモニウム及びアセトニトリルを溶媒として用いたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）で精製した。標的化合物を含有する画分をプールし、乾燥させた後、Ｃ１８  ＳＰＥカートリッジで脱塩した。
【０１３７】
例２−化合物３の調製（知られた化合物−Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８の化合物１７に対応）
【化２６】
2021523930.tif 000037
エリスロノリドＢ（３ａ）は、米国特許第３，１２７，３１５号（例えば、ＮＲＲＬ２３６１、２３６０、２３５９、及び２３３８）、Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０００（例えば、Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭ  ΔＢＶ  ΔＣＩＩＩに記載される菌株及びプロセスなどのグリコシル化でブロックされたＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）の菌株の発酵によって生成することができる。
【０１３８】
次いで、エリスロノリドＢ（３ａ）を、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを添加できる生体内変化株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に供給し、標準的な方法で発酵ブロスから化合物３を単離した。
【０１３９】
例３−化合物４の調製
【化２７】
2021523930.tif 000038
アジスロマイシンＢアグリコン（４ａ）を、アジスロマイシンＡの場合と同じ方法で、アジスロマイシンＢから糖を加水分解することによって生成した。
【０１４０】
次いで、アジスロマイシンＢアグリコン（４ａ）を、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを添加できる生体内変化株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に供給し、標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１４１】
例４−化合物５の調製
【化２８】
2021523930.tif 000039
シクロブチルエリスロノリドＢ（５ａ）を、ＷＯ９８／０１５７１に記載されている方法を使用して生成した。簡単に説明すると、Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭ  ΔＢＶ  ΔＣＩＩＩ（Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００）は、ｐＩＧ１（Ｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００２、ＷＯ９８／０１５７１）で形質転換した。得られた菌株をシクロブテンカルボン酸を添加して発酵させると、シクロブチルエリスロノリドＢ（５ａ）が生成した。これは、標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１４２】
次いで、シクロブチルエリスロノリドＢ（５ａ）を、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを添加できる生体内変化株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）及び標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離した化合物５に供給した。
【０１４３】
例５−化合物６の調製
【化２９】
2021523930.tif 000040
メチル基は、それをＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加し、標準的な方法を使用して発酵ブロスから化合物６を単離することにより、化合物３のアミノ糖（例２を参照）から除去した。
【０１４４】
例６−化合物７の調製
【化３０】
2021523930.tif 000041
化合物３を溶媒中の水素化ホウ素ナトリウムで処理した。標準的な反応後処理に続いて、化合物７を標準的な方法によって精製した。
【０１４５】
例７−化合物８の調製
【化３１】
2021523930.tif 000042
１４−デスメチルエリスロノリドＢ（８ａ）を、ＷＯ２０００／００６１８に記載されている方法を使用して生成した。簡単に説明すると、Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭ  ΔＢＶ  ΔＣＩＩＩ（Ｇａｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０００）をｐＰＦＬ４３で形質転換した。得られた菌株を典型的な方法を使用して発酵させ、化合物８ａをクロマトグラフィーを使用して単離した。
【０１４６】
次いで、１４−デスメチルエリスロノリドＢ（８ａ）を、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを添加できる生体内変化株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に供給し、標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１４７】
例８−化合物９の調製
【化３２】
2021523930.tif 000043
１４−ヒドロキシアンゴロサミンエリスロノリドＢ（９）を、化合物３（例２を参照）をＳ．ロチェイ（Ｓ．ｒｏｃｈｅｉ）ＡＴＣＣ  ２１２５０の発酵に供給し、ヒドロキシル基を追加することによって生成した。次いで、標準的な方法を使用して、化合物９を発酵ブロスから単離した。
【０１４８】
例９−化合物１０の調製
【化３３】
2021523930.tif 000044
化合物６（６．０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、アセトアルデヒド（１．０μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で撹拌し、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を３０分間撹拌し、次いで濃重炭酸ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）を添加することによりクエンチした。水性抽出物を酢酸エチル（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、濃縮ブライン溶液で洗浄し、溶媒を真空で除去した。次いで、標的化合物１０を分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０１４９】
例１０−化合物１２の調製
【化３４】
2021523930.tif 000045
化合物３（例２を参照）は、それをＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加することによってアミノ糖から両方のメチル基を除去するように生体内変化し、化合物１１を標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１５０】
化合物１１をＴＨＦに溶解し、アセトアルデヒドを添加する。反応物を室温で撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物をさらに撹拌し、重炭酸ナトリウム水溶液を添加することにより反応をクエンチする。水性抽出物をＥｔＯＡｃ（３×体積当量）で抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、溶媒を真空で除去する。次いで、標的化合物１２は、標準的な方法を使用して精製される。
【０１５１】
例１１−化合物１４の調製
【化３５】
2021523930.tif 000046
化合物１（例１を参照）は、それをＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加することによってアミノ糖からメチル基を除去するように生体内変化され、化合物１３は、標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離される。
【０１５２】
化合物１３をＴＨＦに溶解し、アセトアルデヒドを添加する。反応物を室温で撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物をさらに撹拌し、重炭酸ナトリウム水溶液を添加することにより反応をクエンチする。水性抽出物をＥｔＯＡｃ（３×体積当量）で抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、溶媒を真空で除去する。次いで、標的化合物１４は、標準的な方法を使用して精製される。
【０１５３】
例１２−化合物１６の調製
【化３６】
2021523930.tif 000047
化合物１（例１を参照）は、それをＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加することによってアミノ糖から両方のメチル基を除去するように生体内変化され、化合物１５は、標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離される。
【０１５４】
化合物１５をＴＨＦに溶解し、アセトアルデヒドを添加する。反応物を室温で撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物をさらに撹拌し、重炭酸ナトリウム水溶液を添加することにより反応をクエンチする。水性抽出物をＥｔＯＡｃ（３×体積当量）で抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、溶媒を真空で除去する。次いで、標的化合物１６は、標準的な方法を使用して精製される。
【０１５５】
例１３−直接的な抗菌活性の評価
一般的な腸内細菌の４つの菌株（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、サリバリウス連鎖球菌亜種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ｓｕｂｓｐ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、カゼイ乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、及びビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ｓｕｂｓｐ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）ならびに一般的な哺乳類の皮膚分離株のミクロコッカスルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ）に対するマクロライド化合物の生物活性を、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイを使用して評価した。細菌株は、ＮＣＩＭＢから入手したルテウス菌（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）を除いてＤＳＭＺ（ブラウンシュワイク、ドイツ）から購入し、−８０℃で２０％のグリセロールに保存した。
【０１５６】
陽性対照（アジスロマイシン及びエリスロマイシン）、ならびに試験化合物１及び２のストック溶液（１００％のＤＭＳＯ）を、ブロスで２５６μｇ／ｍｌの作業ストック濃度に希釈した（最終アッセイ試験濃度範囲１２８μｇ／ｍｌ〜０．００３９１μｇ／ｍｌ）。他の全ての化合物のストック溶液をブロスで希釈して、１２８μｇ／ｍｌの作業ストック濃度にした（最終アッセイ試験濃度範囲６４μｇ／ｍｌ〜０．００１９５μｇ／ｍｌ）。
【０１５７】
細菌株は、３７℃で好気的に培養されたルテウス菌（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）を除いて、３７℃の嫌気性チャンバー中の適切なブロスで培養した。１８時間の培養物をブロスでＯＤ５９５が０．１になるように希釈し、次いでさらに１：１０に希釈した。９６ウェルプレートで、２回、２００μｌの試験化合物の作業ストックをウェル１に移し、ブロスで段階希釈（１：２）した。１００μｌの細菌懸濁液を各ウェルに分注し、完全に混合した。適切な無菌対照が含まれ、プレートを嫌気性チャンバー中で、又は好気的に（ルテウス菌（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ））３７℃で１８時間インキュベートした。ＭＩＣは、目に見える成長のない第１のウェルでの試験化合物の濃度であると決定した。
【表４】
2021523930.tif 000048
【０１５８】
表１に表したデータから分かるように、化合物１、３、４、５、６、７、８、及び９は、試験した細菌株のいずれに対しても抗菌活性を示さないが、エリスロマイシン及びアジスロマイシンは、いくつかの菌株に対して強力な活性を示す。
【０１５９】
例１４−免疫刺激活性の評価
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール−パック密度遠心分離を用いて健康なドナーから精製した。細胞は、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０％のウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充した完全ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で培養した。細胞は、組織培養プレート中の化合物１及び２の濃度を増加させながら、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間（研究１〜４）又は４８時間〜１週間（研究５）刺激した。細胞をプレートから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製のモノクローナル抗体及びＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーで細胞特異的表面マーカー及びＭＨＣクラスＩの発現について分析した。
【０１６０】
上清ＩＬ−１０を、完全ＲＰＭＩ培地、３７℃、５％のＣＯ２で２．５μＭの化合物１及び１００  Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と４８時間及び７日間インキュベートした後、標準サンドイッチＥＬＩＳＡ（全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製の抗体）で測定した。
研究１：１μＭの化合物１（図８）による末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激の２４時間後、活性化マーカーＣＤ６９をＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ細胞でアップレギュレートした（図１）。
研究２：本発明者らはまた、Ｔ細胞及びＢ細胞での分子ＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−ＡＢＣ）のアップレギュレーションを観察し（図２）、これはウイルス抗原の抗原提示への効果を示している。
研究３：化合物１によるＰＢＭＣの刺激は、単球上の共刺激分子ＣＤ８０及び抗原提示分子ＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ）のアップレギュレーションをもたらした（図３）。
研究４：マクロファージに分化した単球も、化合物１による刺激に応答してＣＤ８０をアップレギュレートした（図４）。
研究５：化合物１で４８時間及び７日間刺激されたＰＢＭＣは、サンドイッチＥＬＩＳＡで測定した、免疫抑制性サイトカインＩＬ−１０の産生の増加を伴う変化したサイトカインプロファイルを発現した。これは、特定の条件下での免疫抑制効果を示している（図５）。
研究６：ＰＢＭＣを化合物１で刺激し、ＩＬ−２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ  Ｄｙｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下でＲＰＭＩ培地で６日間培養した。増殖は、フローサイトメトリーで測定した。化合物１の免疫学的効果の分析により、Ｔ細胞のサイトカイン駆動増殖プロファイルの変化が明らかになった（図６）。
研究７：ウイルス特異的Ｔ細胞増殖も化合物１の影響を受けた。ＣＭＶ抗原及び化合物１の存在下で６日間培養されたサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染ドナーからのＰＢＭＣは、フローサイトメトリーで測定した、ＩＬ−７受容体α（ＣＤ１２７）の発現が増加した活性化ＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型の変化を表示した（図７）。ＣＤ１２７は、Ｔ細胞の恒常性、分化、及び機能に不可欠であり、発現の低下は、ＨＩＶ及び他の慢性ウイルス性疾患の重症度と相関している（Ｃｒａｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。
分かるように、化合物１は、抗原提示、共刺激、ならびにＴ細胞の活性化及び増殖に影響を与えることにより、免疫応答を特異的に活性化及び修飾する驚くべき能力を有する。これらの研究の多くには、以前にＳｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，２００８で（化合物２０として）公開された、グリコシル化が変化した別の関連マクロライドエリスロマイシン類似体である化合物２が含まれ、アッセイでほとんど又はまったく活性を示さなかった。
研究８：ＣＭＶ抗原の存在下で培養されたＣＭＶ感染ドナーからのＰＢＭＣを、未処理又は化合物１又は化合物２に３日間曝露した。化合物１への曝露は、高レベルのＩＦＮ−γの分泌を誘導したが、抗原培養のみ又は化合物Ａと一緒の抗原は、ＩＦＮ−γの分泌を誘導しなかった（図９）。
研究９：化合物１又は２に４８時間曝露された健康なドナーからのマクロファージ。化合物１に曝露されたマクロファージのみがＩＦＮ−γを分泌したが、未処理のマクロファージ及び化合物Ａに曝露されたマクロファージは、ＩＦＮ−γを分泌しなかった（図１０）。したがって、化合物１は、健康なドナーからのマクロファージでＩＦＮ−γ分泌を誘導することができる。
研究１０：化合物１又は２に２日間曝露されたＰＢＭＣ及びマクロファージ（図１１）。ＰＢＭＣにおけるＲＡＮＴＥＳの基礎発現は、化合物２の影響を受けなかったが、化合物１は、発現の２倍のアップレギュレーションを誘導した。ＲＡＮＴＥＳの発現は、マクロファージではごくわずかであり、化合物１は、高い発現を誘導した。
研究１１：化合物１及び２に２日間曝露されたＰＢＭＣ及びマクロファージ。ＰＢＭＣ及びマクロファージは、化合物１に応答してＩＬ−１２ｐ７０を分泌したが、化合物２は、未処理の細胞で分泌を誘導できなかった（図１２）。
研究１２：化合物１及び２に２日間曝露されたＰＢＭＣ、マクロファージ、及びＣＤ４＋Ｔ細胞。ＩＬ−１β分泌は、マクロファージでは化合物１によって増加し、ＰＢＭＣではわずかに増加したが、ＣＤ４＋Ｔ細胞ではＩＬ−１βは、誘導されなかった（図１３）。
研究１３：化合物１を０．１６５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇでＣ５７ｂｌ／６マウスに静脈内投与した。ＣＤ２５＋細胞の存在量は、５ｍｇ／ｋｇの最高用量を受容した動物で増加し（図１４）、同じグループの体重も増加した（図示せず）。
研究１４：化合物１又は２をＣ５７ｂｌ／６マウスに静脈内投与した。２４時間後、脾臓を摘出し、ＣＤ１１ｂ＋脾臓細胞でのＭＨＣクラスＩ発現を評価した化合物１は、ＭＨＣ  Ｉ発現の高い脾臓細胞の増加を誘導したが、化合物Ａを注射したマウスの脾臓細胞では効果は観察されなかった。
【０１６１】
例１５−代謝安定性の評価
本発明の化合物の代謝安定性は、標準的なヒトミクロソーム安定性アッセイで評価した（一般的な方法を参照）。半減期が長い化合物は、投与後の半減期が長くなると予想され、これは、投与頻度を減らすのに有用であり得る。半減期が短い化合物は、患者の系に入ると活性物質が急速に分解する「ソフトドラッグ」としての使用に有用であり得る。化合物の半減期を以下の表２に示すように評価した：
【表５】
2021523930.tif 000049
【０１６２】
分かるように、本発明の化合物の多くは、アジスロマイシン、エリスロマイシン、及びＥＭ７０３と比較して、代謝安定性を増加又は減少させた（例えば、ＥＰ１３５０５１０を参照）。
【０１６３】
例１６−ｃａｃｏ−２透過性の評価
本発明の化合物の透過性は、標準的なｃａｃｏ−２双方向透過性アッセイで評価した（一般的な方法を参照）。透過性が増加した化合物は、細胞透過性及び効果の可能性が良好であると予想され、透過性が改善された、かつ／又は流出が減少した化合物は、経口バイオアベイラビリティが増加すると予想される。化合物の透過性及び流出を以下の表３に示す。
【表６】
2021523930.tif 000050
【０１６４】
分かるように、本発明の化合物の多くは、アジスロマイシン及びＥＭ７０３と比較して、改善された細胞透過性及び／又は減少した流出を有する（例えば、ＥＰ１３５０５１０を参照のこと）。
【０１６５】
例１７−ＴＬＲ２刺激の評価
化合物は、ＴＬＲ２受容体の刺激について測定するＴＬＲ２レポーターアッセイ（一般的な方法を参照）を使用して試験した。刺激効果を、分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の放出による光学密度（ＯＤ）の増加として測定し、表４に示す。
【表７】
2021523930.tif 000051
【０１６６】
分かるように、化合物１は、５μＭまでの濃度でＴＬＲ２を刺激し、化合物１７は、１０μＭまでの濃度でＴＬＲ２を刺激したが、Ｓｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，２００８（化合物１７及び２０として）で以前に公開されたグリコシル化が変化した関連マクロライド系エリスロマイシン類似体であるエリスロマイシンＡ、アジスロマイシン、ならびに化合物２及び３は、２０μＭまでの濃度で刺激をほとんど又はまったく示さなかった。
【０１６７】
例１８−化合物１７の調製
【化３７】
2021523930.tif 000052
アグリコン１７ａを、９−デオキソ−８ａ−アザ−８ａ−メチル−８ａ−ホモエリスロマイシン（Ｗｉｌｋｅｎｉｎｇ  １９９３）から生成して、続いて糖を加水分解した。次いで、１７ａを、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを添加することができる生体内変化株（ＮＣＩＭＢ４２７１８など）及び標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離された化合物１７に供給した。
【０１６８】
例１９−化合物１８の調製
【化３８】
2021523930.tif 000053
６−デオキシエリスロノリドＢ（６−ＤＥＢ、１８ａ）を、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを添加できる生体内変化株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に供給し、標準的な方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１６９】
例２０−ＩＳＣ３９７とチェックポイント阻害剤との組み合わせの効果の研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは、ドイツのチャールズリバー研究所から購入した。マウスに、イソフルラン麻酔下で１ｘ１０６  Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を右後部側面に皮下注射した。
【０１７０】
治療群は（群あたり１０匹のマウス）であった：
１）１、３、６、９、及び１２日目の抗ＰＤ−１（Ｍｅｒｃｋ、Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｒｏｃｈｅ、又はＡｓｔｒａのクローンＲＭＰ  １−１４、２００マイクログラム／用量）。
２）１、３、６、９、及び１２日目の抗ＰＤ−１（Ｍｅｒｃｋ、Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｒｏｃｈｅ、又はＡｓｔｒａのクローンＲＭＰ  １−１４、２００マイクログラム／用量）＋毎日実験終了までＩＳＲ３９７（５００マイクログラム／用量）。
３）未処理。
【０１７１】
全ての化合物を静脈内注射した。腫瘍体積を毎日測定し、動物の健康状態を１日２回測定した。腫瘍が２ｍｌに達した場合、又は健康状態が悪い場合、動物を殺傷した。実験を１８日目に終了し、全てのマウスが頸椎脱臼により死亡した。
【０１７２】
結果を図１６〜１９に示す。
【０１７３】
参考文献
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【０１７４】
特許及び特許出願を含む、本出願で言及される全ての参照は、可能な限り最大限に参照することにより本明細書に組み込まれる。
【図１】
2021523930.tif 000061
【図２】
2021523930.tif 000062
【図３】
2021523930.tif 000063
【図４】
2021523930.tif 000064
【図５】
2021523930.tif 000065
【図６】
2021523930.tif 000066
【図７】
2021523930.tif 000067
【図８】
2021523930.tif 000068
【図９】
2021523930.tif 000069
【図１０】
2021523930.tif 000070
【図１１】
2021523930.tif 000071
【図１２】
2021523930.tif 000072
【図１３】
2021523930.tif 000073
【図１４】
2021523930.tif 000074
【図１５】
2021523930.tif 000075
【図１６】
2021523930.tif 000076
【図１７】
2021523930.tif 000077
【図１８】
2021523930.tif 000078
【図１９】
2021523930.tif 000079
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月21日(2020.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マクロライドが、式Ｉを有する前記マクロライドと免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ：
【化１】
2021523930.tif 000080
（式中、Ｘは、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、及びＣ＝ＮＯＨから選択され、Ｒ２は、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖であり：
【化２】
2021523930.tif 000081
式中、Ｒ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリール部分から選択され、
式中、アルキル部分は、任意選択で分岐しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、ヘテロアルキル部分は、任意選択で分岐又は置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
式中、シクロアルキル部分は、任意選択で置換され、任意選択で１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
式中、アリール部分は、任意選択で置換されたＣ６芳香環から選択され、
式中、ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む任意選択で置換されたＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
式中、ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
式中、置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル、及びＯ−アシルから選択され、
式中、アシルは、Ｃ１−Ｃ４の任意選択で分岐したアシル基から選択され、
式中、Ｒ３は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒ４は、Ｈ及びＭｅから選択され、
式中、Ｒａは、Ｈ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
式中、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、ならびにＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２、及びＯＲ１１から選択され、
式中、式（ＩＩ）のＲ４と一緒のＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と一緒のＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と一緒のＲ５、及び式（ＩＩ）のＲ９と一緒のＲ７は、独立して、各グループが接続されている炭素原子間に二重結合を残すために接合されてもよく、
式中、Ｒ２２と一緒のＲ２１、Ｒ６と一緒のＲ５、Ｒ８と一緒のＲ７、又はＲ１０と一緒のＲ９は、カルボニルで置き換えられてもよく、
式中、Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
式中、Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
式中、Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、又はＲ１０のうちの１つは、ＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２、
又はそれらの薬学的に許容される塩から選択される）。
【請求項２】
マクロライドが以下から選択される、請求項１に記載の組み合わせ：
【化３−１】
2021523930.tif 000082
【化２】
2021523930.tif 000083
及び
【化３】
2021523930.tif 000084
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
マクロライドが以下である、請求項１〜２のいずれかに記載の組み合わせ：
【化４】
2021523930.tif 000085
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
免疫チェックポイント阻害剤が、細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られている）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９としても知られている）、ＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１及びＣＤ２７４としても知られている）、ＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ及びＣＤ−２７３としても知られている）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３、ＨＡＶｃｒ２としても知られている）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３、ＣＤ２２３としても知られている）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｓ１、Ｂ７Ｘ、ＶＣＴＮ１としても知られている）、２Ｂ４（ＣＤ２４４として知られている）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られている）、ならびにＣＭＴＭ６から選択された免疫チェックポイントを標的とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項５】
免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ−Ｌ２阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、Ａ２ａＲ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ３阻害剤、Ｂ７−Ｈ４阻害剤、２Ｂ４阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、及びＣＭＴＭ６阻害剤から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項６】
免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ−１１０５、ＩＭＰ３２１、エノブリツズマブ、及びＭＧＤ００９から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項７】
免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブから選択される、請求項６に記載の組み合わせ。
【請求項８】
一方の組成物が、マクロライド及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み、他方の組成物が免疫チェックポイント阻害剤及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、２つの医薬組成物の形態の請求項１〜７のいずれかに記載の組み合わせ。
【請求項９】
２つの医薬組成物が、同じ又は異なる投与経路のために設計されている、請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
免疫刺激剤としての使用など、医学で使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に定義される組み合わせ。
【請求項１１】
癌の治療に使用するための、請求項１０に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
ウイルス性疾患の治療に使用するための、請求項１０に記載の組み合わせ。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれかに記載の組み合わせ及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１０〜１２のいずれかに記載の組み合わせ及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
癌の治療又は予防に使用するための医薬品キットであって、単一のパッケージで、
ｉ）請求項１〜３のいずれかに定義されるマクロライドを含む第１の組成物、
ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤を含む第２の組成物、及び
ｉｉｉ）使用説明書
を含む、医薬品キット。
【国際調査報告】
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