(57)【要約】  本発明は、２以上の非混和性液体と組み合わされた場合に界面へ位置することができる１以上の生物学的材料および／または動物脂質および／または植物脂質から調製された粒子を含む組成物に関する。エマルションが連続的な外相に分散した内相を有し、粒子が外相と内相の界面に位置する、粒子を含む組成物を含むエマルション、かかる組成物およびエマルションを調製する方法、かかる組成物およびエマルションの使用およびエマルションおよび組成物を含有する製品もまた記載されている。
2021530354.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２以上の非混和性液体と組み合わされた場合に界面へ、または界面に位置することができる、１以上の生物学的材料から調製された粒子を含む組成物。
【請求項２】
粒子が、青緑色藻類、ミカン科、アオイ科、アカネ科、ヒユ科、イネ科、ショウガ科、イチョウ科、ウコギ科、ツバキ科、キク科、モクセイ科、ワサビノキ科、パイナップル科、アブラナ科、バラ科、ムクロジ科、およびシソ科、およびそれらの混合物、および／または乳脂肪、パーム油、パーム核油、ココナッツ油、クフェア油、カカオバター、シアバター、トリパルミチン、パームステアリン、ワックス、分別油、水素化油、およびそれらの混合物からなる群から選択される動物脂質および／または植物脂質からなる群から選択される生物学的材料を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
生物学的材料が原料、抽出物、粉末、抽出物ケーキまたは精製の副産物の形態である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
動物脂質および／または植物脂質から調製された粒子が室温で固体である、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
粒子が、組成物の約０．１から約１００重量％、例えば約１から約８０重量％または約１０から約６０重量％の量で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
粒子が、約０．１μｍから約１００μｍ、例えば、約１μｍから約５０μｍの直径を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
粒子が抗酸化物質を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
抗酸化物質が、抗酸化物質が豊富な植物または微細藻類抽出物中にあるか、または由来する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
抗酸化物質が豊富な植物または微細藻類抽出物が、ローズマリー、セージ、または緑茶抽出物、原料または抽出ケーキ、ドナリエラサリナ抽出物またはオレオレジン、スピルリナ抽出物または抽出ケーキ、あるいはホウレンソウ抽出物、原料または抽出ケーキである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
抗酸化物質がローズマリーからの抽出物である、請求項７〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
抗酸化物質が、トコフェロール、トコトリエノール、プラストクロマノール、フェノール性ジテルペン、フラボノイド、フェノール酸およびエステル、スチルベン、カロテノイド、精油およびそれらの混合物、および／またはブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ｔｅｒｔ−ブチル−ヒドロキシキノン（ＴＢＨＱ）、没食子酸プロピル（ＰＧ）、パルミチン酸アスコルビルおよびそれらの混合物からなる群から選択される合成抗酸化物質からなる群から選択される、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
粒子が、約０．０１ｍｇ抗酸化物質／ｇ粒子から約１００ｍｇ抗酸化物質／ｇ粒子を含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物を含むエマルションであって、当該エマルションが連続外相に分散された内相を含み、粒子が外相と内相の界面に位置し、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能化合物を含む、前記エマルション。
【請求項１４】
酸化可能材料が、脂質、好ましくは脂肪アシル鎖に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する脂質を含む、請求項１３に記載のエマルション。
【請求項１５】
脂肪アシル鎖に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する脂質が、パルミトレイン酸、オレイン酸、ミリストレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ヒマワリ、大豆、カノーラ、菜種、亜麻仁、オリーブ、ピーナッツ、トウモロコシ、綿実、ヤシ、および魚の油からなる群から選択される、請求項１３または１４に記載のエマルション。
【請求項１６】
エマルションが水中油型エマルションである、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１７】
組成物が、エマルションの約０．０１重量％から約６０重量％の量で存在する、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１８】
エマルションが、約１％から約８０％ｗ／ｗの液体油、および約０．１％から約１０％の粒子を含む、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１９】
エマルションが、約０．００１μｇ抗酸化物質／ｇエマルションから約８０ｍｇ抗酸化物質／ｇエマルションを含む、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項２０】
エマルションの酸化を低減または防止するおよび／または酸化安定性を高めるための方法であって、以下：
（ｉ）連続外相に分散した内相を含むエマルションを形成し、請求項１〜１２のいずれか一項に記載された粒子を含む組成物をエマルションに添加すること；または
（ｉｉ）エマルションを形成するのに好適な条件下で２以上の非混和性液体と粒子を混合することによって、連続外相に分散した内相および請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物を含むエマルションを形成すること；
のいずれかを含み、
ここで、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含む、
前記方法。
【請求項２１】
エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品または食品の貯蔵寿命を延ばす方法であって、当該方法が、以下：
（ｉ）連続外相に分散した内相を含むエマルションを形成すること、および請求項１〜１２のいずれか一項に記載された粒子を含む組成物をエマルションに添加すること；または
（ｉｉ）エマルションを形成するのに好適な条件下で２以上の非混和性液体と粒子を混合することによって、連続外相に分散した内相および請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物を含むエマルションを形成すること；
のいずれかを含み、
ここで、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含む、
前記方法。
【請求項２２】
酸化を低減、遅延または防止することによって、連続外相に分散した内相を含むエマルションを安定化させるための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物の使用であって、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含む、前記使用。
【請求項２３】
連続外相に分散した内相を含むエマルションの酸化安定性を高めるための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物の使用であって、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含む、前記使用。
【請求項２４】
エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品または食品の貯蔵寿命を延ばすための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物の使用であって、エマルションが連続外相に分散した内相を含み、および前記内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含む、前記使用。
【請求項２５】
酸化可能材料が、脂質、好ましくは脂肪アシル鎖に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する脂質を含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２６】
脂肪アシル鎖に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する脂質が、パルミトレイン酸、オレイン酸、ミリストレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ヒマワリ、大豆、カノーラ、オリーブ、ピーナッツ、トウモロコシ、綿実、ヤシ、および魚の油からなる群から選択される、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２７】
内相が油を含み、および外相が水を含む、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２８】
組成物がエマルションの約０．０１重量％から約６０重量％の量でエマルション中に存在する、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２９】
エマルションが、約１％から約８０％ｗ／ｗの液体油、および約０．０１％から約６０％の粒子を含む、請求項２０〜２８のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３０】
エマルションが、約０．００１μｇ抗酸化物質／ｇエマルションから約８０ｍｇ抗酸化物質／ｇエマルションを含む、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３１】
粒子が、脂質ヒドロペルオキシドおよび共役ジエンヒドロペルオキシドを包含する一次酸化生成物および／またはアルデヒド、ケトン、アルコール、およびカルボン酸揮発性化合物を包含する二次酸化生成物および／またはｐ−アニシジン、エポキシド、ダイマーおよびポリマーなどの非揮発性二次酸化生成物などの酸化生成物の形成を低減、遅延および／または防止する、請求項２０〜３０のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３２】
エマルションが、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤であるか、またはエマルションが、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤の一部である、請求項２０〜３１のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物または請求項１３〜１９のいずれか一項に記載のエマルションを含む、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤。
【請求項３４】
栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤を提供するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物または請求項１３〜１９のいずれか一項に記載のエマルションの使用。
【請求項３５】
請求項１３〜１９のいずれか一項に記載のエマルションの調製方法であって、
当該方法が、以下：
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物を：
（ｃ）２以上の非混和性液体；または
（ｄ）連続外相に分散した内相を含む、事前に調製されたエマルション
のいずれかと混合すること
を含む、前記方法。
【請求項３６】
酸化を低減、遅延または防止することによって連続外相に分散した内相を含むエマルションを安定化するために使用するためのキットであって、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含み；前記キットが請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子および使用のための指示書を含む、前記キット。
【請求項３７】
連続外相に分散した内相を含むエマルションの酸化安定性を高めるために使用するためのキットであって、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含み；前記キットが請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子および使用のための指示書を含む、前記キット。 
【請求項３８】
エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品または食品の貯蔵寿命を延ばすために使用するためのキットであって、前記エマルションが連続外相に分散した内相を含み、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含み；前記キットが請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子および使用のための指示書を含む、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１以上の生物学的材料から調製された粒子を含む組成物に関し、粒子は、２以上の非混和性液体と組み合わされた場合に界面へ位置することができる。粒子を含む組成物を含むエマルション、ここでエマルションは連続外相に分散した内相を含み、粒子は外相と内相との界面に位置する、かかる組成物およびエマルションを調製する方法、かかる組成物およびエマルションの使用ならびに組成物およびエマルションを含有する製品もまた記載されている。
【背景技術】
【０００２】
水中油型エマルションなどのエマルションは、２つの非混和性液体が一緒に混合されて、連続外相に分散した内相を生成する場合に作られる系である。例えば、水中油型エマルション中の油と水。内相と外相との間のエリアは界面と称される。
【０００３】
水中油型エマルションなどのエマルションは、熱力学的に不安定な系であり、相分離を回避するために内相を物理的に安定化しなければならない。
界面活性剤分子（以下、「従来の乳化剤」と称する）は、それらの界面への高い親和性のため、均質化工程中に界面に吸着することにより、エマルションを安定化させることができる。界面活性剤の吸着は、内相と外相の間の界面張力を低下させ、それによって系の総自由エネルギーが減少する。
本明細書に使用されるとき、エマルションを指すときの用語「安定化」は、エマルション中に存在する２つの非混和性液体の分離を防止することを意味する。
【０００４】
乳化剤は、典型的には２つのグループに分けられる:
（ｉ）親水性基（正または負に帯電した部分、糖または糖由来部分、またはポリオキシエチレン鎖など）と疎水性基（アルキル鎖など）の両方を含有する小さな界面活性剤（＜２０００ｇ／ｍｏｌ）、および
（ｉｉ）アミノ酸から作られるヘテロポリマーであるタンパク質。
【０００５】
「ピッカリング粒子」は、エマルションを安定化するためにも使用することができる。粒子は界面に固定され、脂肪滴を合体から保護する機械的（立体）障壁を提供すると考えられている。
【０００６】
エマルションが脂質相を含み、例えば水中油型エマルションにおいて、および脂質相が酸化を受けやすい場合、すなわち不飽和脂質（少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含有する脂質）を含有する場合、脂質酸化が起こることがあり、製品の栄養と官能的品質の両方が低下する（Laguerre, Bily, Roller, Birtic. Mass transport phenomena in lipid oxidation and antioxidation. Annu. Rev. Food Sci. Technol. 2017, 8, 391-411）。
【０００７】
本明細書における明らかに以前に公開された文書のリストまたは議論は、その文書が最新技術または一般的な知識の一部であることの承認として必ずしも解釈されるべきではない。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、１以上の生物学的材料から調製された粒子を含む組成物であって、粒子が、２以上の非混和性液体と組み合わされた場合に界面へ位置することができるか、または界面に位置する、前記組成物を提供する。
【０００９】
用語「界面に位置する」は、粒子の有意な割合（例として、粒子の少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％または９９重量％など）が、２つの非混和性液体間の界面に位置している。この特性を有する粒子は、本明細書に開示されるものを包含する。かかる粒子は、典型的には、２以上の非混和性液体に実質的に不溶性である（例として、粒子の２５％未満が２以上の非混和性液体のいずれかに溶解する、１０％未満または５％未満または１％未満など）。
【００１０】
粒子は、１以上の両親媒性化合物、例として、本明細書の他の場所で記載されている種類のものを含んでいてもよい。
【００１１】
粒子を含むこの組成物を、以下、本発明の組成物と称する。
本発明の組成物は、２以上の非混和性液体と均質化された場合に、界面へ位置することができるか、または界面に位置する、１以上の生物学的材料から調製された粒子からなるか、または本質的にからなることができる。
組成物は、乾燥していてもよく、すなわち粉末の形態であってもよく、または液体、例として、液体中の固体懸濁液または液体中の固体のコロイド分散体の形態であってもよい。
【００１２】
組成物は、組成物の約０．１から約１００重量％、例えば、約１から約８０重量％または約１０から約６０重量％の量の１以上の生物学的材料から調製された粒子を含み得る。
例えば、組成物が乾燥形態である場合には、粒子は、組成物の約１から約１００重量％、例えば、約５重量％から約９５重量％または約１０重量％から約９０重量％の量で存在し得る。
組成物が液体の形態である場合には、粒子は、液体中に懸濁され（懸濁液）または分散され（コロイド分散体）得る。組成物が液体の形態である組成物において、粒子は、組成物の約０．１から約６０重量％、例えば、約１重量％から約４０重量％の量で存在し得る。
【００１３】
粒子は、２以上の非混和性液体で均質化された場合に界面へ位置することができる粉末または粒子の形態の、脂質（例えば、粒子が本明細書で定義されるプロセスを介して得られ得る高融点脂質）などの生物学的材料、または生物学的材料の５０重量％未満の脂質、例えば、２５％重量未満の脂質または１０重量％未満の脂質を含む生物学的材料であり得る。
脂質は、２以上の非混和性液体と均質化された場合に、２以上の非混和性液体の少なくとも１つにおける溶解性のためにそれ自体では粒子を形成することができない、天然材料（例として、植物抽出物）または化合物（例として、天然源から抽出された化合物）を含むかまたはカプセル化することができる。例えば、脂質は、天然材料または化合物の５０％超が２以上の非混和性液体に可溶性である天然材料または化合物をカプセル化することができる、例えば、材料または化合物の７５重量％超または９０重量％超。
【００１４】
典型的には、天然材料または化合物は所望の特性を有しているであろう。例えば、天然材料または化合物は抗酸化活性を含むことができる。
本明細書に使用されるとき、用語「高融点」は、脂質または脂質混合物の有意な一部、例えば、混合物の２５重量％以上、または混合物の５０重量％以上が、室温で固体であることを意味する。
本明細書に使用されるとき、用語「室温」は、人間の居住に好適な温度を意味し、典型的には、約１５℃から約３５℃、または約２０℃から約２５℃である。
【００１５】
生物学的材料から調製された粒子において、生物学的材料は、それが自然界に見られる形態とは異なるように改変され得る。例えば、生物学的材料は、生物学的材料に残存する化合物を濃縮するために、生物学的材料に存在する水および／または他の化合物を除去するように改変され得る。改変は、典型的には、改変されていない材料には存在しない活性、または改変されていない材料と比較したときに増強されている活性を有する生物学的材料をもたらし得る。例えば、生物学的材料は、特定の溶媒を使用して抽出することができ、その結果、特定の化合物のみが可溶化され、生物学的材料から抽出される。
【００１６】
生物学的材料は、光合成生物から得ることができる。例えば、生物学的材料は、植物から得られてもよく、または藍藻などの藻類から得られてもよい。光合成生物から得られる生物学的材料は、植物または藻類抽出物、生の植物または藻類材料（乾燥または未乾燥）、粉末、抽出物の副産物または抽出ケーキの形態であり得る。
【００１７】
本明細書に使用されるとき、用語「植物抽出物」は、水、有機溶媒およびそれらの混合物などの溶媒を使用して、植物から、例えば、根、地上部、葉、花、茎、樹皮、果実、枝または種子またはそれらの組織から抽出された任意の植物材料を包含する。
例えば、生物学的材料から調製された粒子は、ショウガ科（例として、ターメリック）、シソ科（例として、ローズマリー）、アブラナ科（例として、大根）、シアノバクテリア（例として、スピルリナ）、ツバキ属（例として、緑茶）、パイナップル科（例として、パイナップル）およびヒユ科（例として、ホウレンソウ）を包含する１以上の光合成生物から得られ得る（例として、それらの抽出物である）。
【００１８】
本明細書に使用されるとき、用語「原料」は、化学的に改変されることなく直接得られた材料、または存在する水の約１０から約１００％、例えば、原料の約２０から約９０重量％または約３０から約８０重量％を除去するための乾燥工程のみに供された材料を意味する。原料は、物理的に改変され得る、例えば、原料は粉砕または微粉化され得る。
生物学的材料はまた、動物（魚を包含する）脂質および／または植物脂質から得ることができる。
【００１９】
本明細書に使用されるとき、用語「動物脂質」は、動物源に由来する任意の脂質および混合物を包含する。例えば、バター、乳脂肪および蜜蝋。
本明細書に使用されるとき、用語「植物脂質」は、植物源に由来する脂質または混合物を包含する。例えば、植物脂質は、パーム油、パーム核油、ココナッツ油、クフェア油、カカオバター、ペンタデスマバター（Pentadesma Butter）、シアバターおよび植物ワックスからなる群から選択されるものを包含し得る。
【００２０】
本発明に記載のコロイド粒子を調製するために使用される植物ワックスは、（ｉ）炭化水素（アルカン）、（ｉｉ）エステル結合を介して長鎖アルコールに結合した長鎖脂肪酸、（ｉｉｉ）超長鎖アルコール、または（ｉｖ）超長鎖脂肪酸であり得る。例えば、本発明に記載のコロイド粒子を調製するために使用される植物ワックスは、ホホバワックス、カルナウバワックス、カンデリラワックス、マイクロクリスタリンワックス（microcrystalline wax）、ライスワックス、大豆ワックス、サトウキビワックス、セラックワックス、グレインソルガムワックス、ベイベリーワックスおよびユーカリリーフワックスからなる群から選択することができる。
【００２１】
植物油の分別または水素化によって得られる高融点の脂肪もまた、本発明に記載のコロイド粒子を調製するために使用することができる。それらは、パーム油、ココナッツ油、パーム核油、トウモロコシ油、大豆油、ひまわり油、菜種油、およびそれらの混合物の水素化の生成物を包含し得る。それらはまた、パーム油（パームステアリン）、またはパーム核油（パーム核ステアリン）などの分別油、およびそれらの混合物を包含し得る。さらに、トリパルミチンなどの精製脂肪もまた使用することができる。
【００２２】
粒子は、乳脂肪などの動物性脂肪または植物油に天然に見られるものなどの、高融点を有する動物および／または植物脂質から調製することができる。植物油の分別または水素化によって得られる高融点の脂肪もまた、本発明に記載のコロイド粒子を調製するために使用することができる。
典型的には、生物学的材料から調製された粒子は、固体粉末／粒子の形態であり得る。
生物学的材料から調製された粒子は、コロイド粒子および／またはピッカリング粒子であり得る。
【００２３】
本明細書に使用されるとき、用語「ピッカリング粒子」は、エマルションの外相または内相に可溶性ではなく、主に（すなわち、粒子の少なくとも５０％、例えば、粒子の少なくとも７５％または粒子の少なくとも９０％）外相と内相との間の界面に位置する任意の固体または半固体粒子を意味し、ここで、内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含み、および粒子は本明細書で定義されるとおりの生物学的材料から調製される。
生物学的材料から形成された粒子は、生物学的供給源に応じて化合物の混合物を含み得る。
【００２４】
例えば、粒子を調製するために使用される生物学的材料が植物または藻類材料に由来する場合、粒子は、リグニン、セルロース、ヘミセルロース、アルカロイド、グリコシド、有機酸、樹脂（樹脂酸、樹脂アルコールおよび炭化水素樹脂を包含する）、揮発性油、糖類（でんぷん、イヌリン、ゴムおよびフレグマティック（phlegmatic）などを包含する）、アミノ酸、タンパク質および酵素、フェノール化合物、タンニン、植物色素（クロロフィル、カロテノイド、フラボノイド、ビートレッドベースおよびキノンなどを包含する）、油およびワックス、無機成分（微量元素）およびそれらの混合物からなる群から選択される植物または藻類由来の化学的な構成物質を含有し得る。
【００２５】
組成物中に存在する粒子は、ミクロンまたはサブミクロンサイズであり得る。例えば、粒子は、主に（例えば、組成物中の粒子の７０％超、８０％超または９０％超）、ＤＬＳ（動的光散乱）などの液滴サイズ分布測定およびＴＥＭ（透過電子顕微鏡）または光学顕微鏡などの画像顕微鏡を使用して測定した約０．１μｍから約１００μｍ、例えば、約０．２μｍから約５０μｍまたは約０．５μｍから約３０μｍの直径を有し得る。組成物は、小さい直径よりも下のおよび大きい直径よりも上の粒子を少量（例えば、組成物中の粒子の３０％未満、２０％未満、１０％未満）含み得ることも理解されるべきである。
【００２６】
典型的には、組成物中に存在する粒子はナノスケールではなく、ここでナノスケールは、約１ｎｍから約９９ｎｍの直径を有する粒子を意味することを意図している。例えば、粒子の５０％以下は、約１ｎｍから約９９ｎｍの直径を有する、例えば、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１０％以下または１％以下。
エマルション中に存在する各粒子は、各個別の粒子内に液体脂質相を含有し得る。例えば、各粒子（例えば、動物脂質および／または植物脂質、典型的には高融点脂質から得られる粒子）は、トリカプリリン、室温で液体の植物油（例えば、ヒマワリ、カノーラ、大豆油）、および／または中鎖トリグリセリドを含む画分を含有／カプセル化することができる。液体脂質相は、少なくとも１つの抗酸化物質を含有し得る。
【００２７】
組成物において、粒子は、青緑色藻類（スピルリナ）、ミカン科（オレンジ、ライムまたはレモンなどの柑橘類を包含する）、アオイ科（ココアおよびウスベニタチアオイを包含する）、アカネ科（コーヒーを包含する）、ヒユ科（ビートルートおよびホウレンソウを包含する）、イネ科（竹およびオート麦を包含する）、ショウガ科（クルクマを包含する）、イチョウ科（イチョウを包含する）、ウコギ科（朝鮮人参を包含する）、ツバキ科（抹茶を含む）、キク科（オオアザミを包含する）、モクセイ科（オリーブの木を包含する）、ワサビノキ科（ワサビノキを包含する）、パイナップル科（パイナップルを包含する）、アブラナ科（赤大根を包含する）、バラ科（ローズヒップを包含する）、ムクロジ科（ガラナを包含する）、およびシソ科（ローズマリー、セージ、タイム、バジルおよびオレガノを包含する）、およびそれらの混合物および／または上記で定義したバター、乳脂肪、蜜蝋、パーム油、パーム核油、ココナッツ油、キュフェア油、カカオバター、ペンタデスマバター、シアバターおよび植物ワックスからなる群から選択される動物脂質および／または植物脂質からなる群から選択される生物学的材料から調製し得る。
【００２８】
植物油の分別または水素化によって得られる高融点の脂肪もまた、本発明に記載の粒子を調製するために使用することができる。それらは、パーム油、ココナッツ油、パーム核油、トウモロコシ油、大豆油、ひまわり油、菜種油、およびそれらの混合物の水素化の生成物を包含し得る。それらはまた、パーム油（パームステアリン）、またはパーム核油（パーム核ステアリン）などの分別油、およびそれらの混合物を包含し得る。さらに、トリパルミチンなどの精製脂肪も使用することができる。
【００２９】
組成物において、粒子は抗酸化物質を含み得る。
本明細書に使用されるとき、用語「抗酸化物質」は、製剤（エマルションなど）に存在する場合、酸化可能基質の酸化を防止または遅延させることができる、生物学的材料から得られる任意の分子、または分子の群、または抽出物を意味する。
組成物において、抗酸化物質は、生物学的材料に内在性であり得るか、または生物学的材料に添加され得る、すなわち、粒子を作るために使用される生物学的材料に存在するか、または粒子に添加されていてもよい。例えば、生物学的材料から得られた粒子は、抗酸化活性をもつ化合物をもともと含有し得る。
例えば、粒子を調製するために使用される生物学的材料が動物脂質および／または植物脂質から得られる場合、抗酸化物質（例えば、ローズマリーからの抽出物の形態で）を粒子に添加してもよい。
【００３０】
組成物において、粒子中に存在し得るおよび／または粒子に添加され得る抗酸化物質は、抗酸化物質が豊富な植物または微細藻類抽出物などの天然材料を包含する（例えば、カルノシン酸を含有するローズマリーまたはセージ抽出物、カテキンを含有する緑茶抽出物、カロテノイドを含有するドナリエラサリナオレオレジン（Dunaliella salina oleoresins）、ホウレンソウ原料またはシュウ酸キレート剤を含有する抽出物）。かかる植物または微細藻類抽出物に存在する化合物は、これらに限定されないが、トコフェロール（すなわちα−トコフェロール）、トコトリエノール、プラストクロマノール、フェノール性ジテルペン（カルノシン酸など）、フラボノイド（茶カテキンなど）、フェノール酸およびエステル、スチルベン、カロテノイド、精油（酸素化テルペンを包含する）およびそれらの混合物からなる群から選択されるものを包含する。
【００３１】
粒子に添加し得る抗酸化物質は、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキシキノン（ＴＢＨＱ）、没食子酸プロピル（ＰＧ）、パルミチン酸アスコルビル、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）およびそれらの混合物からなる群から選択される合成抗酸化物質を包含する。
【００３２】
組成物は、ローズマリー抽出物の形態の抗酸化物質などの抗酸化物質に富む植物または微細藻類抽出物を含む、植物脂質および／または動物脂質から調製された粒子を含むかまたはそれらからなることができる。
例えば、植物脂質および／または動物脂質から調製された粒子は、粉末の形態のローズマリー抽出物を含んでもよく、ここで抽出物は植物脂質および／または動物脂質から調製された粒子の約１重量％から約７０重量％のカルノシン酸を含む、または組成物の約１重量％から約３０重量％のカルノシン酸を含む液体の形態のローズマリー抽出物を含んでもよい。
ローズマリー抽出物が液体の形態である場合、ローズマリー抽出物は、液体に可溶化され得るおよび／または懸濁され得る。好適な液体は、これに限定されないが、ひまわり油などの植物油を包含する。
【００３３】
組成物において、粒子は、約０．０１ｍｇ抗酸化物質／ｇ粒子から約１００ｍｇ抗酸化物質／ｇ粒子、例えば、約０．１ｍｇ抗酸化物質／ｇ粒子から約５０ｍｇ抗酸化物質／ｇ粒子を含み得る。
粒子はまた、トリパルミチンおよび／またはパームステアリンおよび／またはトリカプリリンから調製されてもよく、および任意にα−トコフェロール、カルノシン酸または緑茶フラボノイドなどの抗酸化物質を含み得る。
例えば、組成物はトリパルミチンから調製された粒子を含むかまたはそれからなることができ、任意にさらにα−トコフェロールを含むことができ、あるいは組成物はパームステアリンから調製された粒子を含むかまたはそれからなることができ、任意にさらにα−トコフェロールを含むことができる。
【００３４】
いくつかの組成物において、粒子は、任意に、キチン、タンパク質ケージ、例えば、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ多酵素複合体のバチルスステアロサーモフィルス（Bacillus stearothermophilus）Ｅ２タンパク質またはＥ２ＬＣ２タンパク質、あるいはゲル化可能な親水性多糖類、例えば、寒天、アガロース、アルギン酸塩およびカラギーナン、を含まなくてもよく、またはそれらからならなくてもよい。
【００３５】
本発明の組成物に使用される粒子は以下：
（ｉ）生物学的材料を提供すること；および
（ｉｉ）生物学的材料を粒子に変換すること、
によって調製することができる。
生物学的材料を粒子に変換することは、材料（すなわち、生の植物材料）から水を除去すること、例えば、生物学的材料を乾燥させること、および次いで生物学的材料を先に定義した粒子直径を有する粉末／粒子に微粉化（例えば、粉砕）すること、を含み得る。生物学的材料はまた水中で粉砕することもできる。
【００３６】
代替的に、生物学的物質を、溶媒、例えば、水または水／アルコールまたはアルコールまたはエステルまたはエーテルまたは芳香族または脂肪族のアルカンで抽出することができ、および溶媒を除去して固体生成物を生成し、これを任意に先に定義した粒子径を有する粉末／粒子に微粉化（例えば、粉砕）することができる。
さらに代替的に、植物および／または動物および／または微生物学的材料を処理して、高融点脂質を抽出することができ、これを次いで粒子に形成することができる。
【００３７】
例えば、粒子を植物および／または動物からの高融点脂質から調製する場合、粒子を以下：
ａ）水相を加熱すること（例えば、水相を約室温から１５０℃までの温度、例えば、約４０℃から約１００℃まで加熱すること）；
ｂ）植物および／または動物からの高融点の脂質を融解すること；
ｃ）（ａ）および（ｂ）の生成物を高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること；
ｄ）工程（ｃ）で得られた粗いエマルションを均質化して、サブミクロンのエマルションを得ること；および
ｅ）工程（ｄ）の生成物を冷却して脂質相を結晶化させること（例えば、工程（ｄ）の生成物を約室温から約０℃の温度に冷却すること）
によって調製することができる。
【００３８】
任意に、上記の方法は、工程（ｂ）で溶融脂質に抗酸化物質を組み込むこと、および／または工程（ｅ）で得られた調製物を乾燥させて粒子の固体製剤を提供することを包含し得る。
工程（ａ）において、水相を、水浴、熱交換器、または加熱ジャケットを備えたタンクなどの当技術分野で知られているそのような技術によって加熱することができる。
工程（ｂ）において、脂質を、水浴、熱交換器、または加熱ジャケットを備えたタンクなどの当技術分野で知られているそのような技術によって溶融することができる。
【００３９】
工程（ｃ）において、（ａ）および（ｂ）の生成物を、ローターステーターホモジナイザー、超音波、またはコロイドミルなどの当技術分野で知られているそのような技術によって攪拌することができる。
工程（ｄ）において、粗いエマルションを、高圧均質化または超音波を使用してサブミクロンサイズの溶融脂肪粒子を得るなど、当技術分野で知られているそのような技術によって均質化することができる。
工程（ｅ）において、工程（ｄ）の生成物を、水浴、熱交換器、または加熱ジャケットを備えたタンクなどの当技術分野で知られているそのような技術によって冷却することができる。
【００４０】
本発明はまた、先に定義された組成物を含むエマルション（水中油型エマルションまたは油中水型エマルションなど）を提供し、エマルションは、連続外相に分散された内相を含み、ここで粒子は外相と内相の界面に位置し、および内相または外相の少なくとも１つは酸化可能化合物を含む。
以下、このエマルションを本発明のエマルションと称す。
【００４１】
本明細書で使用されるとき、用語「エマルション」は、少なくとも１０分間、好ましくは少なくとも１時間、例えば少なくとも２４時間または少なくとも１週間、外相内に分散された内相を含む液体生成物である。本明細書で使用されるとき、「エマルション」は、シングルおよびダブルエマルションを包含し、および気体内相を含む液体エマルションを包含する。
【００４２】
本明細書で使用されるとき、用語「酸化可能材料」は、材料が、周囲環境に存在する酸素と反応して一次および／または二次酸化生成物を形成する官能基を含有することを意味する。酸化可能材料は、フレーバー形成化合物、発色化合物またはそれらの混合物であり得る。
エマルションにおいて、酸化可能材料は、脂質、例えば、脂肪アシル鎖に二重結合または三重結合などの少なくとも１つの炭素−炭素不飽和を有する脂質、を含み得る。
例えば、脂肪アシル鎖に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する脂質は、パルミトレイン酸、オレイン酸、ミリストレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ヒマワリ（ストリッピングヒマワリ油（stripped sunflower oil）など）、大豆、カノーラ、菜種、亜麻仁、オリーブ、ピーナッツ、トウモロコシ、綿実、ヤシ、および魚の油からなる群から選択され得る。
【００４３】
エマルションは、油を含む内相および水を含む外相（以下、水中油型エマルションと称す）を含んでもよく、または水を含む内相および油を含む外相（油中水型エマルションと称す）を含んでもよい。
エマルションは、エマルションの約０．０１重量％から約６０重量％、例えば、約１重量％から約４０重量％の量の本発明の組成物を含み得る。
エマルションは、約１％から約８０％ｗ／ｗの液体油、および約０．０１％から約６０％の粒子を含み得る。
【００４４】
エマルションは、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学（oenological）または化粧品製剤であってもよく、または栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤の一部を形成してもよい。
例えば、エマルションは、マヨネーズ、オランデーズ、ベアルネーズまたはサラダドレッシングなどの水中油ベースのソースであり得る。
【００４５】
本発明のエマルションにおいて、界面に位置する粒子は内相を完全に取り囲むか、または内相を部分的にのみ取り囲むことができる。典型的には、粒子は内相を完全に取り囲む。
エマルションにおいて、内相の直径は、典型的には粒子の直径より小さくなく、および好ましくは使用される粒子よりも大きい。例えば、内相の直径は、０．５μｍから約１０００μｍ、例えば約１μｍから約５００μｍまたは約１０μｍから約１００μｍ、であり得る。
【００４６】
本発明者らは、驚くべきことにおよび予想外に、本発明の組成物が、エマルション中に存在する脂質の酸化に対する保護を提供できることを見出した。
本発明者らはまた、エマルションの界面に位置するかまたは位置することができる粒子中の抗酸化物質の存在が、粒子が抗酸化物質を含まない同じ粒子安定化エマルションよりも、エマルションに抗酸化物質が存在する場合でさえも、例えば、エマルションの内（油）相に抗酸化物質が存在する場合でさえも、エマルションに存在する脂質の酸化に対してより良好な保護を提供できることを見出した。
【００４７】
食品、医薬品、栄養補助食品などの特定の用途では、粒子は食用および/または非毒性であり得る。
必要に応じて、乳化剤をエマルションに少量添加することができる。典型的には、添加される乳化剤の量は、エマルションの５重量％未満、例えば、エマルションの２重量％未満または１重量％未満であり得る。
【００４８】
本発明は、以下：
（ｉ）連続外相に分散した内相を含むエマルションを形成し、次いで、先に定義した組成物をエマルションに添加すること；または
（ｉｉ）エマルションを形成するのに好適な条件下で２以上の非混和性液体と粒子を混合することによって、連続外相に分散した内相および先に定義した組成物を含むエマルションを形成すること；
のいずれかを含み、ここで、内相または外相の少なくとも１つは、酸化可能材料を含む、エマルションの酸化を低減または防止するための方法、を提供する。
【００４９】
例えば、本発明は、先に定義した組成物を以下：
（ａ）２以上の非混和性液体；または
（ｂ）連続外相に分散した内相を含む、事前に調製されたエマルション
のいずれかと混合することによってエマルションを形成することを含む、エマルションの酸化を低減または防止するための方法を提供する。
【００５０】
本発明はまた、以下：
（ｉ）連続外相に分散した内相を含むエマルションを形成し、次いで、先に定義した組成物をエマルションに添加すること；または
（ｉｉ）エマルションを形成するのに好適な条件下で２以上の非混和性液体と粒子を混合することによって、連続外相に分散した内相および先に定義した組成物を含むエマルションを形成すること；
のいずれかを含み、ここで、内相または外相の少なくとも１つが酸化可能材料を含む、エマルションの酸化安定性を高める方法を提供する。
【００５１】
例えば、本発明は、先に定義した組成物を以下：
（ａ）２以上の非混和性液体；または
（ｂ）連続外相に分散した内相を含む、事前に調製されたエマルション
のいずれかと混合することによってエマルションを形成することを含む、エマルションの酸化安定性を高める方法を提供する。
【００５２】
本発明はまた、エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品、または食品の貯蔵寿命を延ばす方法を提供し、当該方法は、以下：
（ｉ）連続外相に分散した内相を含むエマルションを形成し、次いで、先に定義した組成物をエマルションに添加すること；または
（ｉｉ）エマルションを形成するのに好適な条件下で２以上の非混和性液体と粒子を混合することによって、連続外相に分散した内相および先に定義した組成物を含むエマルションを形成すること；
のいずれかを含み、ここで、内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含む。
【００５３】
例えば、本発明は、先に定義した組成物を以下：
（ａ）２以上の非混和性液体；または
（ｂ）連続外相に分散した内相を含む、事前に調製されたエマルション
のいずれかと混合することによってエマルションを形成することを含む、エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品または食品の貯蔵寿命を延ばす方法を提供する。
【００５４】
上記の方法において、内相は油を含んでもよく、および外相は水を含んでもよく、または内相は水を含んでもよく、および内相は油を含んでもよい。
上記の方法において、以下：
（ｉ）組成物を少なくとも２つの非混和性液体に添加すること、
（ｉｉ）高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること
によって、組成物を少なくとも２つの非混和性液体に添加することができる。
上記の方法において、以下：
（ｉ）組成物を事前に調製されたエマルションに添加すること、
（ｉｉ）高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること
によって、組成物を事前に調製されたエマルションに添加することができる。
【００５５】
例えば、内相が油であり、外相が水である場合、先に記載した脂質ベースの粒子を含む組成物を、以下：
（ｉ）エマルションの内相および外相を脂質ベースの粒子を含む組成物と混合すること、
（ｉｉ）高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること
によって、エマルションに添加することができる。
次いで、エマルションを、任意に後続する以下の工程：
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られた粗いエマルションを均質化すること
（ｉｖ）（ｉｉｉ）の生成物を冷却して、粒子の脂質相を結晶化させること
に供することができる。
【００５６】
工程（ｉ）において、内相および外相を、混合タンクなどの当技術分野で知られているそのような技術によって混合することができる。
上記の方法において、典型的には、本発明の組成物を、均質化する前に、少なくとも２の非混和性液体または事前に調製されたエマルションに添加することができる。例えば、工程（ｉ）から（ｉｉｉ）は列挙された順序で行なう。
工程（ｉｉ）において、（ｉ）の生成物を、高圧均質化、超音波処理、攪拌方法（ローターステーターホモジナイザー、コロイドミル）などの当技術分野で知られているそのような技術によって混合することができる。
【００５７】
本発明はまた、酸化を低減、遅延または防止することによって、連続外相に分散した内相を含むエマルションを安定化するための、先に定義した組成物の使用を提供し、ここで内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含む。
本発明はまた、連続外相に分散した内相を含むエマルションの酸化安定性を高めるための、先に定義した組成物の使用を提供し、ここで内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含む。
本発明はまた、エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品、または食品の貯蔵寿命を延ばすための、先に定義した組成物の使用を提供し、ここでエマルションは連続外相に分散した内相を含み、内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含む。
これらの方法および使用は、以下、本発明の方法および使用と称す。典型的には、上記の使用および方法において、組成物は、２以上の非混和性液体間の界面へ位置することができるか、または位置する。
【００５８】
酸化可能材料は、脂質、例えば少なくとも１つの炭素−炭素不飽和を有する脂質、例えば脂肪アシル鎖の二重または三重結合、を含み得る。
例えば、脂肪アシル鎖に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する脂質は、パルミトレイン酸、オレイン酸、ミリストレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ヒマワリ、大豆、カノーラ、菜種、亜麻仁、オリーブ、ピーナッツ、トウモロコシ、綿実、ヤシ、および魚の油からなる群から選択される。
【００５９】
エマルションは、油を含む内相および水を含む外相を含み得る、以下、水中油型エマルションと称す。
エマルションは、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤であるか、一部を形成してもよい。
例えば、エマルションは、水中油型エマルションを含むか、または水中油型エマルションである、食べ物であり得る、例えばマヨネーズ、オランデーズ、ベアルネーズまたはサラダドレッシング。
【００６０】
エマルション中の粒子の存在は、脂質ヒドロペルオキシドおよび共役ジエンヒドロペルオキシドを包含する一次酸化生成物および／またはアルデヒド、ケトン、アルコール、およびカルボン酸揮発性化合物を包含する二次酸化生成物およびｐ−アニシジン、エポキシド、ダイマーおよびポリマーなどの非揮発性二次酸化生成物などの酸化生成物の形成を低減、遅延および／または防止する。
【００６１】
粒子を含む組成物は、エマルションの約０．０１重量％から約６０重量％、例えば、約１重量％から約４０重量％の量でエマルション中に存在し得る。
本発明は、本発明の組成物および／または本発明のエマルションを含む、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤を提供する。
【００６２】
本発明はまた、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤における本発明の組成物および／またはエマルションの使用を提供する。
【００６３】
栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤は、必要に応じて、任意にさらに、薬学的／獣医学的成分、例えば賦形剤または担体または（機能性）食品許容成分およびそれらの混合物を含み得る。
【００６４】
栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬または獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤は、本発明のエマルションからなるか、または本質的にからなることができる。
【００６５】
誤解を避けるために、本明細書において用語「含む（comprising）」または「含む（comprises）」を使用する場合、記載される抽出物または組成物は、列挙された成分（単数または複数）を含有しなければならないが、任意に追加の成分を含み得ることを意味する。用語「本質的にからなる（consisting essentially of）」または「本質的にからなる（consists essentially of）」を使用する場合、記載されている抽出物または組成物は、列挙された成分（単数または複数）を含有しなければならず、少しの（たとえば、５重量％まで、あるいは１重量％または０．１重量％まで）他の成分を含有することがあることを意味するが、ただし、追加の成分は抽出物または組成物の本質的な特性に影響を与えない。用語「からなる（consisting oｆ）」または「からなる（consists of）」を使用する場合、記載されている抽出物または組成物は、列挙されている成分（単数または複数）のみを含有している必要があることを意味する。
また、「含む（comprise）」または「含む（comprises）」または「含む（comprising）」という用語は、出願全体を通して「からなる（consist）」または「からなる（consisting）」または「からなる（consisting）」に置き換えられてもよいことが意図されている。
【００６６】
本明細書に使用されるとき、薬学的または獣医学的に許容される賦形剤への言及は、当業者に知られているような薬学的または獣医学的に許容されるアジュバント、希釈剤および／または担体を指し得る。
食品に許容される成分は、当技術分野で知られているもの（本明細書では薬学的に許容される賦形剤とも称されるものを包含する）を包含し、天然または非天然であることができ、すなわち、それらの構造は自然界で発生することも、しないこともある。特定の例では、それらは天然化合物に由来することができ、使用前に改変することができる（例えば、マルトデキストリン）。
【００６７】
「薬学的または獣医学的に許容される」とは、組成物の追加成分が一般に安全で、非毒性であり、および生物学的にも他においても望ましくないものではないことを意味する。例えば、追加成分は一般に無菌でパイロジェンフリーである。かかる成分は、本発明のエマルションと適合性があり、そのレシピエントに有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。よって、「薬学的に許容される賦形剤」は、単に賦形剤として作用することを意図する、すなわちそれ自体が生物学的活性を有することを意図しない、製剤の一部を形成するのに使用される任意の化合物を包含する。
【００６８】
当業者は、本発明の組成物および／または本発明のエマルションを含む組成物が（例えば、医薬または獣医学組成物などの組成物の形態で）、経口、直腸、経鼻、肺、頬側、舌下、経皮、嚢内、腹腔内、または非経口（皮下、筋肉内、髄腔内、静脈内および皮内を包含する）ルートなどの任意の好適なルートによって、患者または対象（例えば、ヒトまたは動物の患者または対象）に投与することができることを理解するであろう。
【００６９】
本発明の組成物および／または本発明のエマルションを含む組成物（例えば、医薬または獣医学または食品組成物）は、経口投与され得てもよい。かかる場合において、本発明による医薬または獣医学組成物は、経口ルートによる投与のために特別に処方され得る。
経口投与用の液体剤形は、溶液、エマルション、水性または油性懸濁液、シロップおよびエリキシル剤を包含する。
【００７０】
本明細書に記載の組成物（例えば、医薬または獣医学または食品組成物）、例えば経口投与を目的とするものなどは、組成物の成分を一緒に混合することなどの当業者に知られている方法に従って調製することができる。
【００７１】
組成物（例えば、医薬または獣医学または食品組成物）は、１以上の追加の成分、例えば食品成分または医薬成分および賦形剤、例えば、甘味料、フレーバー剤、着色剤および保存剤を含有し得る。本発明の組成物は、非毒性の薬学的に許容される賦形剤（または成分）と混合された活性成分を含有し得る。これらの賦形剤（または成分）は、例えば、以下のものであり得る：炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；造粒および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、マルトデキストリンまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア；あるいは潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、およびそれらの混合物。
【００７２】
液体組成物（例えば、医薬または獣医学または食品組成物）は、カプセル内に含まれていてもよく、これは、コーティングされていなくても、または上に定義されるとおりにコーティングされていてもよい。
好適な医薬または獣医学担体は、不活性な固体希釈剤または充填剤、無菌水溶液および様々な有機溶媒を包含する。液体担体の例は、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンおよび水である。
その上、担体または希釈剤は、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートなどの当技術分野で知られている任意の持続放出材料を、単独で、またはワックスと混合して包含し得る。
【００７３】
好適な医薬担体は、不活性な無菌水溶液および様々な有機溶媒を包含する。液体担体の例は、シロップ、植物油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンおよび水である。その上、担体または希釈剤は、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートなどの当技術分野で知られている任意の持続放出材料を、単独で、またはワックスと混合して包含し得る。
本明細書で使用される用語「担体」はまた、天然物またはそれが由来する天然物とは異なるように変換または改変された天然物に由来する生成物、例えばマルトデキストリン、を指すことがある。
【００７４】
医薬および／または獣医学製品について、治療される障害および対象、ならびに投与ルートに応じて、本発明のエマルションを含むまたはからなる組成物は、様々な用量（すなわち、それを必要とする患者に投与される治療有効用量）で投与することができる。これに関して、当業者は、本発明の文脈において哺乳動物、特にヒトに投与される用量は、合理的な時間枠にわたって哺乳動物の治療反応に影響を与えるのに十分であるべきであることを理解するであろう。当業者は、正確な用量および組成の選択ならびに最も適切な送達レジメンは、とりわけ、製剤の薬理学的特性、処置される状態の性質および重症度、ならびにレシピエントの身体的状態および精神的鋭敏さ、ならびに処置を受ける患者の年齢、状態、体重、性別および反応、ならびに疾患の病期／重症度によっても影響を受けることを認識するであろう。
【００７５】
治療有効量の本発明の組成物および／または本発明のエマルションを含む医薬または獣医学組成物。本明細書に使用されるとき、用語「有効量」は、「治療有効量」、「有効用量」、または「治療有効用量」と同義であり、本発明で使用される場合、本発明のエマルションの最小用量を指し、所望の治療効果を達成し、炎症に関連する症状を軽減するのに十分な用量を包含する。本明細書に記載の疾患または状態を処置する際の有効性は、１以上の臨床症状、および／または状態に関連する生理学的指標に基づいて個人の改善を観察することによって決定することができる。本明細書に記載の疾患または状態の改善はまた、同時治療の必要性の減少によって示さすこともできる。
【００７６】
加えて、本発明のエマルションの反復投与が使用される場合、本発明のエマルションの有効量は、これらに限定されないが、投与の頻度、本発明の抽出物の半減期またはそれらの任意の組み合わせを包含する要因にさらに依存するであろう。
栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬品（医薬組成物または製剤）、獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤に存在する本発明の組成物および／または本発明のエマルションの量は用途に応じて異なるであろう。
【００７７】
典型的には、栄養補助食品組成物、ヒトまたは動物用の食事製品または食品（機能性食品組成物など、すなわち、食べ物、飲料、飼料またはペット食品あるいは食べ物、飲料、飼料またはペット食品サプリメントなど）、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬品（医薬組成物または製剤）、獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤に存在する本発明の組成物および／または本発明のエマルションの量は、栄養補助食品組成物、食事製品または食品、除草剤、栄養補助サプリメント、フレグランスまたはフレーバー剤、医薬組成物または製剤、獣医学組成物、ワイン学または化粧品製剤の約０．００１から約５０重量％、例えば、約０．０１重量％から約３０重量％または約１重量％から約２０重量％である、例えば製剤の約０．０１から約２０重量％、または約０．１から１０重量％または約１から約５重量％。
【００７８】
本発明のエマルションは広範囲の食品における使用に好適である。かかる食品は、これらに限定されないが、生肉製品、調理肉製品、生家禽製品、調理済み家禽製品、生シーフード製品、調理済みシーフード製品、そのまま食べられる食品、パスタソースおよびケチャップなどの調理ソース、テーブルソース、低温殺菌されたおよび低温殺菌されていないスープ、サラダドレッシングおよびその他の水中油型エマルション、例えばマヨネーズ、油中水型エマルション、乳製品、ベーカリー製品、菓子製品、果物製品、および脂肪ベースまたは水分を含有する具を有する食べ物を包含する。好ましくは、食料品は水中油型エマルションを含むか、または水中油型エマルションである。例えば、食料品はテーブルソース、例えば卵および油ベースソース、例としてはマヨネーズ、オランデーズまたはベアルネーズであり得る。
【００７９】
食品は、典型的には、食品を安定化する、例えば、食品の酸化を低減、遅延、阻害、または防止するのに十分な量で、本発明の組成物またはエマルションを含有する。典型的には、安定化組成物は、食料品の約０．１重量％から約２０重量％の量で食料品中に存在する。例えば、約０．５％から約１０％、または約１％から約５％または２．５％。
【００８０】
本発明の組成物またはエマルションが食品、例えば卵および油ベースのソース、例えば、マヨネーズ、オランデーズまたはベアルネーズに、組み込まれるまたは食品である場合、ならびに、エマルションの非存在下で発生したであろう酸化の量と比較して、所与の期間にわたる酸化の量を低減、阻害または防止することによって安定化効果を提供する場合、本発明のエマルションは、それが組み込まれている食品の色に悪影響を及ぼすべきではない。
【００８１】
本発明は、先に定義したエマルションの調製方法を提供し、当該方法は、
先に定義した組成物を以下：
（ａ）２以上の非混和性液体；または
（ｂ）連続外相に分散した内相を含む、事前に調製されたエマルション
のいずれかと混合することを含む。
以下、この方法を本発明の調製方法と称する。
内相は油を含み得る、および外相は水を含み得る、または内相は水を含み得る、および内相は油を含み得る。
【００８２】
調製方法において、組成物は、以下：
（ｉ）組成物を少なくとも２つの非混和性液体に添加すること、
（ｉｉ）高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること
によって少なくとも２つの非混和性液体に添加することができる。
調製方法において、組成物は、以下：
（ｉ）組成物を事前に調製されたエマルションに添加すること、
（ｉｉ）高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること
によって事前に調製されたエマルションに添加することができる。
【００８３】
例えば、内相が油であり、外相が水である場合、先に記載した脂質ベースの粒子を含む組成物を、以下：
（ｉ）エマルションの内相および外相を脂質ベースの粒子を含む組成物と混合すること、
（ｉｉ）高速で攪拌して粗いエマルションを形成すること
によって、エマルションに添加することができる。
次いで、エマルションを、任意に以下の工程：
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られた粗いエマルションを均質化すること
（ｉｖ）（ｉｉｉ）の生成物を冷却して、粒子の脂質相を結晶化させること
に供することができる。
【００８４】
工程（ｉ）において、内相および外相を、混合タンクなどの当技術分野で知られているそのような技術によって混合することができる。
調製方法において、典型的には、本発明の組成物を、均質化される前に、少なくとも２つの非混和性液体または事前に調製されたエマルションに添加することができる。例えば、工程（ｉ）から（ｉｉｉ）は列挙された順序で行なう。
工程（ｉｉ）において、（ｉ）の生成物を、高圧均質化、超音波処理、攪拌方法（ローターステーターホモジナイザー、コロイドミル）などの当技術分野で知られているそのような技術によって混合することができる。
【００８５】
工程（ｉｉｉ）において、粗いエマルションは、高圧を使用してサブミクロンサイズの溶融脂肪滴を得るなどの、当技術分野で知られているそのような技術によって均質化することができる。
工程（ｉｖ）において、工程（ｉｉｉ）の生成物は、水浴、熱交換器、サーモスタットタンク（加熱ジャケット）などの当技術分野で知られているそのような技術によって冷却することができる。
【００８６】
本発明はまた、酸化を低減、遅延または防止することによって連続外相に分散した内相を含むエマルションを安定化するためのキットを提供し、ここで、内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含み；キットは上で定義した粒子および使用のための指示書を含む。
【００８７】
本発明はまた、連続外相に分散した内相を含むエマルションの酸化安定性を高めるためのキットを提供し、ここで、内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料み；キットは上で定義した粒子および使用のための指示書を含む。
【００８８】
本発明はまた、エマルションを含む飲料、栄養補助食品、医薬品、または食品の貯蔵寿命を延ばすためのキットを提供し、ここで前記エマルションが連続外相に分散した内相を含み、内相または外相の少なくとも１つは酸化可能材料を含み；キットは上で定義した粒子および使用のための指示書を含む。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】トリパルミチンコロイド粒子（Ａ）またはトリパルミチンが油相に可溶化される従来の乳化剤（Ｂ）によって安定化された水中油型エマルションの概略図。
【図２】トリパルミチン脂肪を含有する従来のカゼインナトリウム安定化エマルション（丸）およびトリパルミチンコロイド粒子によって安定化されたピッカリングエマルション（四角）において測定された脂質酸化動態。両方のエマルションは２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートする。ＣＤ、共役ジエン（左）；ｐ−ＡＶ、ｐ−アニシジン（右）。
【図３】パームステアリンコロイド粒子によって安定化された水中油型エマルション（Ａ）、またはパームステアリンが油相に可溶化される従来の乳化剤によって安定化された水中油型エマルション（Ｂ）の概略図。
【００９０】
【図４】トリパルミチン脂肪を含有する従来のカゼインナトリウム安定化エマルション（丸）およびパームステアリンコロイド粒子によって安定化されたピッカリングエマルション（四角）において測定された脂質酸化動態。両方のエマルションは２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートする。ＣＤ、共役ジエン（左）；ｐ−ＡＶ、ｐ−アニシジン（右）。
【図５】１％（ｗ／ｗ）で水に懸濁したいくつかの代表的な天然粉末の粒子サイズ分布の特徴付け。抹茶原料（Ａ）、ホウレンソウ葉原料（Ｂ）、スピルリナ抽出ケーキ（Ｃ）、パイナップル繊維（Ｄ）、およびローズマリー葉抽出ケーキ（Ｅ）。非微粉化粉末：実線；微粉化粉末：点線。
【図６】抹茶原料（ＡおよびＢ）、パイナップル繊維（ＣおよびＤ）、ホウレンソウ原料（ＥおよびＦ）、ローズマリー葉抽出ケーキ（ＧおよびＨ）、スピルリナ抽出ケーキ（ＩおよびＪ）、クルクマ抽出物（ＫおよびＬ）、および赤大根抽出物（ＭおよびＮ）の非微粉化および微粉化（それぞれ）粉末の走査型電子顕微鏡写真。
【００９１】
【図７】非微粉化天然粉末または従来の乳化剤によって４℃で３か月間安定化された水中油型エマルションの粒子サイズ分布。試験した粉末は、ホウレンソウ（Ａ）、スピルリナ（Ｂ）、抹茶（Ｃ）、パイナップル繊維（Ｄ）である一方、従来の乳化剤は１％（ｗ／ｗ）のＴｗｅｅｎ６０（Ｅ）、５％（ｗ／ｗ）の卵黄（Ｆ）である。ｔ０：実線；ｔ３：点線。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製され、抗菌剤として０．１ｗｔ％のソルビン酸カリウムを含有していた。
【図８】４℃で１か月間、５％ｗｔの非微粉化天然粒子によって安定化され、１００ｍＭＮａＣｌが添加されたピッカリング水中油型エマルションの粒子サイズ分布。抹茶（Ａ）、ホウレンソウ葉（Ｂ）、スピルリナケーキ（Ｃ）。ｔ０：実線；ｔ１：点線。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製した。
【図９】４℃で１か月間、５％ｗｔの非微粉化天然粒子によって安定化され、１００ｍＭＮａＣｌが添加されたピッカリング水中油型エマルションの粒子サイズ分布。抹茶（Ａ）、ホウレンソウ葉（Ｂ）、スピルリナケーキ（Ｃ）、およびパイナップル繊維（Ｄ）。ｔ０：実線；ｔ１：点線。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ７．０で調製した。
【００９２】
【図１０】４℃で１か月間、５％ｗｔの非微粉化パイナップル繊維によって安定化され、１００ｍＭＮａＣｌが添加されたピッカリング水中油型エマルションの粒子サイズ分布。ｔ０：実線；ｔ１：点線。すべてのエマルションは、ＩＳＯ３６９６で定義されている「タイプ１」の緩衝されていない超純水（たとえば、ミリＱ水）で調製した。
【図１１】４℃で１か月間、５％ｗｔの非微粉化天然粒子によって酸性および中性で安定化されたピッカリング水中油型エマルションの粒子サイズ分布。抹茶ｐＨ４．５（Ａ）およびｐＨ７．０（Ｂ）、ならびにスピルリナケーキｐＨ４．５（Ｃ）およびｐＨ７．０（Ｄ）。ｔ０：実線；ｔ１：点線。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ７．０で調製した。ｐＨ４．５のエマルションは５０ｍＭ酢酸緩衝液で調製し、一方ｐＨ７．０のものは５０ｍＭリン酸緩衝液で調製した。
【図１２】従来のＴｗｅｅｎ６０安定化水中油型エマルションにおいて、および５％（ｗ／ｗ）の非微粉化スピルリナケーキ粉末によって安定化されたピッカリング水中油型エマルションにおいて測定された脂質酸化動態。すべてのエマルションを２５℃で４か月間インキュベートする。すべてのエマルションは、ストリッピングひまわり油および５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製する。それらは抗菌剤として０．１ｗｔ％のソルビン酸カリウムを含有する。
【００９３】
【図１３】従来の卵黄安定化水中油型エマルションにおいて、および５％（ｗ／ｗ）の非微粉化抹茶粉末または５％（ｗ／ｗ）の非微粉化ホウレンソウ葉粉末で安定化された２つのピッカリング水中油型エマルションにおいて測定された脂質酸化動態。すべてのエマルションを２５℃で４か月間インキュベートする。すべてのエマルションは、ストリッピングひまわり油および５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製する。それらは抗菌剤として０．１ｗｔ％のソルビン酸カリウムを含有する。
【図１４】１％（ｗ／ｗ）の非微粉化クルクマ抽出物（Ａ）および２．５％（ｗ／ｗ）の非微粉化ローズマリー葉抽出ケーキ（Ｂ）によって安定化されたピッカリング油中水型エマルション（逆エマルション）の代表的な顕微鏡写真。
【図１５】天然粒子に洗浄手順を適用した後に得られた上澄みの表面活性。
【００９４】
【図１６】４℃で１週間、５％ｗｔの洗浄された非微粉化天然粒子の上澄みによって安定化された水中油型エマルションの粒子サイズ分布。抹茶（Ａ）、ホウレンソウ葉（Ｂ）、スピルリナケーキ（Ｃ）、およびパイナップル繊維（Ｄ）。ｔ０：実線；ｔ１：点線。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製する。
【図１７】４℃で４週間（パイナップルを除く、１週間）、５％ｗｔの洗浄された非微粉化天然粒子によって安定化されたピッカリング水中油型エマルションの粒子サイズ分布。抹茶（Ａ）、ホウレンソウ葉（Ｂ）、スピルリナケーキ（Ｃ）、およびパイナップル繊維（Ｄ）。ｔ０：実線；ｔ４：点線。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製する。
【図１８】２種類のコロイド粒子安定化ストリッピングヒマワリ水中油型エマルション（ピッカリングエマルション）の概略図。エマルションの組成は同じであるが、α−トコフェロールがコロイド粒子（本発明のエマルション）（Ａ）にまたは液体ＰＵＦＡ油滴（対照エマルション）（Ｂ）に組み込まれている。２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートした両方の水中油型エマルションにおける、共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）濃度（Ｃ）、ｐ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）（Ｄ）、およびα−トコフェロール分解（Ｅ）。平均値±標準偏差は、独立した３回の結果である。記号：本発明のエマルション（Ａ）；四角い灰色の記号：対照エマルション（Ｂ）黒い円。両方のピッカリングエマルションは、トリパルミチンコロイド粒子によって安定化されている。
【００９５】
【図１９】トリパルミチンコロイド粒子（Ａ）に、または液滴（Ｂ）内に最初に添加された２５−ＮＢＤ−コレステロール（α−トコフェロールの蛍光類似体）を有する、本発明のピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルション（Ａ）および対照エマルション（Ｂ）の異なる時点で撮影された共焦点レーザー走査顕微鏡画像。ｔ０およびｔ７２ｈでのコロイドミル均質化で生成された本発明のピッカリングエマルションの偏光顕微鏡画像（それぞれ、ＣおよびＤ）。パネルＡおよびＢにおいて、スケールバーは１０μｍを表す。両方のピッカリングエマルションは、トリパルミチンコロイド粒子によって安定化されている。
【図２０】ｔ０およびｔ３３６でα−トコフェロールを含有するトリパルミチンコロイド粒子によって安定化された本発明のピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルションのＤＳＣ融解および結晶化サーモグラム（Ｃ）。
【図２１】２種のコロイド粒子安定化ストリッピングヒマワリ水中油型エマルション（ピッカリングエマルション）の概略図。エマルションの組成は同じであるが、カルノシン酸がトリパルミチンコロイド粒子（本発明のエマルション）（Ａ）にまたは液体ＰＵＦＡ油滴（対照エマルション）（Ｂ）に組み込まれている。２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートした両方の水中油型エマルションにおける、共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）濃度（Ｃ）およびｐ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）（Ｄ）。平均値±標準偏差は、独立した３回の結果である。記号：本発明のエマルション（Ａ）；四角い灰色の記号：対照エマルション（Ｂ）黒い円。
【００９６】
【図２２】水相にトリパルミチンコロイド粒子の懸濁液を含む、２種の従来のカゼインナトリウムで安定化されたストリッピングヒマワリ水中油型エマルションの概略図。エマルションおよび懸濁液の組成は同じであるが、抗酸化物質が懸濁したトリパルミチンコロイド粒子（Ａ）または油滴のコア（Ｂ）のいずれかにある。総抗酸化物質濃度は両方の系で類似している。２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートした、共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）含有量（Ｃ）、ｐ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）（Ｄ）、および懸濁コロイド粒子（黒丸）に、または液体油滴（灰色の四角）に、α−トコフェロールを有する２種類のエマルションのα−トコフェロール回収率（Ｅ）。平均値±標準偏差は、独立した３回の結果である（Ｃ、Ｄ、およびＥ）。
【図２３】トリパルミチンコロイド粒子（Ａ）に、または液滴（Ｂ）内に最初に添加された２５−ＮＢＤ−コレステロール（α−トコフェロールの蛍光類似体）を有する、トリパルミチンコロイド粒子を添加した従来のストリッピングヒマワリ水中油型エマルションの異なる時点で撮影された共焦点レーザー走査顕微鏡画像。パネルＡおよびＢにおいて、スケールバーは１０μｍを表す。
【００９７】
【図２４】抗酸化物質を含まないトリパルミチンコロイド粒子の界面吸着集団、およびα−トコフェロールを含有する（Ａ）または含有しない（Ｂ）トリパルミチンコロイド粒子の水相懸濁集団を含むピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルションの概略図。エマルションおよび懸濁液の組成は同じであるが、抗酸化物質が懸濁したコロイド粒子（Ａ）または油滴のコア（Ｂ）のいずれかにある。２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートした、共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）含有量（Ｃ）、ｐ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）（Ｄ）、および懸濁コロイド粒子（黒丸）に、または液体油滴（灰色の四角）に、α−トコフェロールを有する２種類のエマルションのα−トコフェロール回収率（Ｅ）。平均値±標準偏差は、独立した３回の結果である（Ｃ、Ｄ、およびＥ）。
【００９８】
【図２５】抗酸化物質を含まないパルミチンコロイド粒子の界面吸着集団、および２５−ＮＢＤ−コレステロール（α−トコフェロールの蛍光類似体）を含有する（Ａ）または含有しない（Ｂ）トリパルミチンコロイド粒子の水相懸濁集団を含むピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルションの異なる時点で撮影された共焦点レーザー走査顕微鏡画像。この後者の場合、蛍光類似体は最初は油滴に位置している。パネルＡおよびＢにおいて、スケールバーは１０μｍを表す。
【００９９】
【図２６】トリパルミチンコロイド粒子に９０（黒丸）、４５（三角形）または２２．５（ダイヤモンド）ｐｐｍのα−トコフェロールを含有する本発明のピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルション、および油滴に９０ｐｐｍのα−トコフェロールを含有する対照のピッカリング水中油型エマルション（灰色正方形）のインキュベーション中の共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）濃度（Ａ）、ｐ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）（Ｂ）、およびα−トコフェロール分解（Ｃ）。
【０１００】
【図２７】α−トコフェロールを有するまたは有さないトリパルミチンコロイド粒子の特徴付け。粒子サイズ分布（Ａ）、ＤＳＣ融解および結晶化サーモグラム（Ｂ）、およびトコフェロールを含有するトリパルミチンコロイド粒子のＴＥＭ画像（Ｃ）。
【図２８】トリパルミチンコロイド粒子（本発明のエマルション）または油滴のコア（対照エマルション）のいずれかにおける、α-トコフェロールを有するピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルションの特徴付け。本発明のエマルションの液滴サイズ分布（Ａ）、ＤＳＣ融解および結晶化サーモグラム（Ｂ）およびＴＥＭ画像（Ｃ）。
【図２９】トリパルミチンコロイド粒子中（黒丸）または油滴のコア中（灰色の四角）のいずれかにおける、α-トコフェロールとともに中鎖トリグリセリドを含有するピッカリング水中油型エマルションのインキュベーション中のα-トコフェロールの安定性。
【図３０】水相中のトリパルミチンコロイド粒子（実線）およびトリパルミチンコロイド粒子分散液（破線）を含む従来のカゼインナトリウムで安定化されたストリッピングヒマワリ水中油型エマルションのＤＳＣ融解および結晶化サーモグラム。
【０１０１】
【図３１】２種のコロイド粒子安定化ストリッピングヒマワリ水中油型エマルション（ピッカリングエマルション）の概略図。エマルションの組成は同一であるが、α−トコフェロールは粒子（本発明のエマルション）（Ａ）または液体ＰＵＦＡ油滴（対照エマルション）（Ｂ）に組み込まれている。２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートした、両方の水中油型エマルションにおける、共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）濃度（Ｃ）、ｐ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）（Ｄ）、およびα−トコフェロール分解（Ｃ）。平均値±標準偏差は、独立した３回の結果である。記号：本発明のエマルション（Ａ）；灰色の四角：対照エマルション（Ｂ）黒い丸。両方のピッカリングエマルションは、２０％（ｗ／ｗ）の液体トリカプリリンを含有するトリパルミチン（８０％）コロイド粒子によって安定化されている。
【０１０２】
【図３２】コロイド粒子中（Ａ）に、または液滴内（Ｂ）に最初に添加された２５−ＮＢＤ−コレステロール（α−トコフェロールの蛍光類似体）を有する、本発明のピッカリングストリッピングヒマワリ水中油型エマルション（Ａ）および対照エマルション（Ｂ）の異なる時点で撮影された共焦点レーザー走査顕微鏡画像。ｔ０およびｔ７２ｈでのコロイドミル均質化で生成された本発明のピッカリングエマルションの偏光顕微鏡画像（それぞれ、ＣおよびＤ）。パネルＡおよびＢにおいて、スケールバーは１０μｍを表す。両方のピッカリングエマルションは、トリパルミチンコロイド粒子によって安定化されている。
【０１０３】
【図３３】２種のコロイド粒子安定化非ストリッピングヒマワリ水中油型エマルション（ピッカリングエマルション）の概略図。エマルションの組成は同一であるが、α−トコフェロールは粒子（本発明のエマルション）（Ａ）または液体ＰＵＦＡ油滴（対照エマルション）（Ｂ）に組み込まれている。２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡとともに２５℃でインキュベートした両方の水中油型エマルションにおける、共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）濃度（Ｃ）。平均値±標準偏差は、独立した３回の結果である。記号：本発明のエマルション（Ａ）；灰色の四角：対照エマルション（Ｂ）黒い丸。両方のピッカリングエマルションは、トリパルミチンコロイド粒子によって安定化されている。
【０１０４】
例
本発明は、以下の非限定的な例を参照することによってさらに説明されるであろう。
材料および方法
１）       材料
トリパルミチン（＃Ｔ８１２７、純度＞９９％）、リン酸二水素ナトリウム（＃Ｓ９６３８）、リン酸水素二ナトリウム（＃Ｓ９７６３）、塩化ナトリウム（＃Ｓ７６５３）、硫酸鉄（ＩＩ）七水和物（＃Ｆ８６３３）、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物（＃Ｅ６６３５）、パラ−アニシジン（＃Ａ８８２５５）、および酢酸（＃４５７２６）はSigma-Aldrichから購入した。Ｎ−ヘキサン（＃８０８０２３５０２）は、Actu-All Chemicals（オス、オランダ）から入手した。２−プロパノールはMerck（ダルムシュタット、ドイツ）から購入した。カゼインナトリウムはDMV Internationalから供給された（＃４１６１０、噴霧乾燥、タンパク質含有量９１．０％）。ひまわり油は地元のスーパーマーケットから入手し、アルミナ粉末（MPEcoChrome（商標）ALUMINA N、アクティビティ：Super I、Biomedicals）でストリッピングして、不純物およびトコフェロールを除去した。パームステアリン（パルミチン酸、８２％；オレイン酸、９％；ステアリン酸、５％）は、ＡＤＭ（サンローランブランジー、フランス）から供給された。すべての実験に超純水（１８．２ＭΩ）を使用し、ミリＱシステム（Millipore Corporation、ビレリカ、MA、米国）を使用して調製した。他のすべての化学物質または溶媒は分析グレードであった。 
【０１０５】
２）トリパルミチンの精製
トリパルミチンをエタノールを使用して３つの再結晶ステップによって精製した。手短に言えば、トリパルミチンを６０〜７０℃で１５分間撹拌しながらエタノールに溶解し、室温まで放冷して再結晶させた後、エタノールを除去し、さらに２回繰り返した。
【０１０６】
３）コロイド脂質粒子（ＣＬＰｓ）の調製
リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）中にカゼインナトリウムを含有する水相を水浴で加熱し、溶融脂肪相（トリパルミチン、パームステアリンまたはトリカプリリン）に添加した。
粒子がトコフェロールを含有する場合は、この段階でメタノール（２００ｍｇｍＬ−１）で調製した１００μＬのα−トコフェロールを添加した。最終的なα−トコフェロール濃度は４ｍｇｍｇ−１脂肪であった。
次いで、高速撹拌により粗いエマルションを調製した。
次いで、粗いエマルションを高圧および高温で均質化し、次いで放冷して、脂質相を結晶化させた。
【０１０７】
４）１以上の生物学的材料から調製された粒子の抗酸化効果を研究するためのＯ／Ｗエマルションの調製の一般手順
２種の水中油型エマルションを調製した：１つは１以上の生物学的材料としてコロイド脂質粒子（ＣＬＰ）（トリパルミチンまたはパームステアリン）によって安定化ピッカリングエマルション（図１Ａおよび３Ａ）；および同じＨＭＰ脂肪（トリパルミチンまたはパームステアリン）を油内部に含有する従来のカゼインナトリウムで安定化された水中油型エマルション（図１Ｂおよび３Ｂ）。両方のエマルションは同量のＨＭＰ脂肪を含んでいたが、それらの構造機構は異なっていた。
【０１０８】
ＨＭＰ脂肪を含有する従来のカゼインナトリウム安定化エマルションについて、ストリッピングひまわり油を、トリパルミチン、リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）およびリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）中のカゼインナトリウムと高温で混合した。
ＣＬＰ安定化ピッカリングエマルションの場合、ストリッピングひまわり油をリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）および粒子分散液と混合した。
Ｏ／Ｗエマルションは、高圧均質化またはコロイドミル均質化のいずれかによって処理した。
粗いエマルションは、高速攪拌によって調製した。次いで、得られたエマルションを高圧で均質化するか、コロイドミルで処理した。
【０１０９】
５）抗酸化物質で満たされた１以上の生物学的材料から調製された粒子の抗酸化効果を研究するためのＯ／Ｗエマルションの調製のための一般手順
２種の水中油型ピッカリングエマルションを調製した；１つは粒子にα−トコフェロールを有するもの、およびもう１つは液体のひまわり油滴にα−トコフェロールを有するもの（図１８、２１、３１および３３）。
【０１１０】
前者の場合において、界面活性不純物を事前にストリッピングしたひまわり油を、リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）および粒子分散液（粒子中にα−トコフェロールを有する）と混合した。
後者の場合において、成分は同じ比率で混合したが、粒子はα−トコフェロールを含有していない、一方ひまわり油には、均質化する前に、メタノール（２００ｍｇｍＬ−１）で調製した１００μＬα−トコフェロールを添加した。
混合物を高速撹拌により処理した。次いで、得られたエマルションを高圧で均質化し、低温で保存した。
【０１１１】
６）α−トコフェロールの抽出および分析
α−トコフェロールをＣＬＰの分散液またはエマルションから抽出した。まず、クロロホルム４ｍＬ、メタノール３ｍＬ、および飽和塩化ナトリウム溶液１ｍＬを、１５ｍＬポリプロピレン遠心分離管内の２ｍＬのＣＬＰ分散液またはエマルションに加え、ボルテックスした後、３０００×ｇで１０分間遠心分離した。次いで、遠心分離管の底に注意深く穴を開けることにより、透明なクロロホルム相を収集した。
【０１１２】
抽出物をUltiMate 3000液体クロマトグラフィーシステム（Thermo Scientific、サニーベール、ＣＡ、米国）で、Ｃ３０逆相カラム、３μｍ、１５０×４．６ｍｍ（ＹＭＣ、ディンスラーケン、ドイツ）を使用して分析した。抽出物は、８１％メタノール、１４％メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）および４％ミリＱ水から７４％メタノール、２２％メチルｔ−ブチルエーテルおよび４％ミリＱ水まで８分で、および２分で元の組成に戻る直線勾配で移動相を使用して、３０°Ｃで１ｍＬｍｉｎ−１で溶離した。α-トコフェロールは、２９２ｎｍのＵＶ−ＶＩＳ検出器（Dionex（商標）UltiMate（商標）3000可変波長検出器）で検出し、含有量は５μｇｍＬ−１から５０００μｇｍＬ−１の範囲で直線的な検量線を使用して計算した。ＣＬＰ中のα-トコフェロールの回収率（Ｒｅｃ％）は次のように計算した：
【数１】
2021530354.tif 000003
式中、Ｃｅｘは抽出されたα−トコフェロールの含有量であり、Ｃｉｎは最初に添加されたα−トコフェロールの含有量である。
【０１１３】
７）脂質酸化実験
ＦｅＳＯ４およびＥＤＴＡの等モル混合物からなる触媒は、ＦｅＳＯ４およびＥＤＴＡ（１２ｍＭ）を超純水に別々に溶解することによって調製した。等量の各溶液を混合し、暗所で１時間の適度な攪拌下で鉄−ＥＤＴＡ複合体を形成させた（Berton, Ropers, Viau, & Genot, 2011）。エマルションのアリコート（２ｇ）を１５−ｍＬポリプロピレン遠心分離管に分配した。触媒（１００μＬ）をエマルションに添加して、鉄とＥＤＴＡの両方の最終濃度２００μＭを得た。管を暗所で２ｒｐｍ、２５°Ｃで０〜７２時間回転させた。
【０１１４】
共役ジエンヒドロペルオキシド（ＣＤ−ＬＯＯＨ）の形成。
一次脂質酸化生成物であるＣＤ−ＬＯＯＨの定量化は、Corongiu & Banni (1994)から採用した。要するに、インキュベートされたエマルションを、複数の工程で２−プロパノールに４０００倍に希釈した。最終溶液を２０２３８×ｇで１分間遠心分離し（Centrifuge 5424、エッペンドルフハンブルク、ドイツ）、上澄みの吸光度を紫外可視分光光度計（DU 720 Beckman Coulter、ブレア、ＣＡ、米国）を使用して２３３ｎｍで測定した。参照セルは、試料の最終希釈と同じ比率で２−プロパノールおよびリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）を含有していた。結果は、２３３ｎｍでＣＤのモル吸光係数として２７０００Ｍ−１ｃｍ−１を使用して、油１ｋｇあたりの等価ヒドロペルオキシドのｍｍｏｌ（ｍｍｏｌｅｑＨＰｋｇ−１油）で表した。
【０１１５】
総アルデヒドの形成。
総アルデヒドの尺度であるパラ−アニシジン値（ｐ−ＡＶ）を使用して、二次脂質酸化生成物の形成を評価した（AOCS、1998）。要するに、飽和塩化ナトリウム溶液１ｍＬおよびヘキサン／イソプロパノール（１／１、ｖ／ｖ）５ｍＬを、インキュベートしたエマルション（２．１ｍＬ）のアリコートごとに添加した。混合物をボルテックスした後、２０００×ｇで、４℃で８分間遠心分離した。上部のヘキサン層（＞２ｍＬ）を収集し、氷上に３分間置いた後、２０２３８×ｇで１分間遠心分離した。上澄みの吸光度は、ブランクとして純粋なヘキサンを使用して３５０ｎｍで測定した（Ａｂ）。遠心分離バイアルで、１ｍＬの上清を酢酸溶液中の２．５ｇ／Ｌパラ−アニシジン０．２ｍＬと混合した。正確に１０分後、酢酸溶液中の２．５ｇ／Ｌパラ−アニシジン０．２ｍＬと混合した純粋なヘキサン１ｍＬをブランクとして１０分間インキュベートして、３５０ｎｍで吸光度を測定した（Ａｓ）。パラアニシジン値（ｐＡＶ、任意単位）は次のように計算した。
【数２】
2021530354.tif 000004
式中、ｍは油の濃度（ｇ／ｍＬ）である。
【０１１６】
例１  材料および方法のセクションで詳述するとおりに調製されたトリパルミチンコロイド粒子を含む本発明のエマルションと比較した、トリパルミチンを含有する従来のカゼインナトリウム−安定化水中油型エマルションの酸化安定性
トリパルミチンコロイド粒子（ＰＴＰ）によって安定化されたピッカリングエマルションの酸化安定性は、ＨＭＰ脂肪を含有する従来のカゼインナトリウム−安定化エマルションと比較して、共役ジエン（一次酸化生成物）とｐ−アニシジン（二次酸化生成物）の両方によって同量で評価されている（図１）。両方のエマルションの脂質酸化は、２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡによって加速された。得られたデータは、トリパルミチンが油滴の内部に溶解している同じエマルション（従来型）と比較して、ＣＤ−ＬＯＯＨとｐ−ＡＶの両方がゆっくりと上昇するため、トリパルミチンコロイド粒子が対応するピッカリングエマルションに保護効果を発揮することを示した（図２）。
【０１１７】
例２  材料および方法のセクションで詳述するとおりに調製したパームステアリンコロイド粒子を含む本発明のエマルションと比較した、パームステアリンを含む従来のカゼインナトリウム安定化−水中油型エマルションの酸化安定性
トリパルミチンの代わりにパームステアリンを使用して、例１と同じ実験を繰り返した。パームステアリン（ＰＰＳ）によって形成されたコロイド粒子によって安定化されたピッカリングエマルションを、同量のＨＭＰ脂肪を含有する従来のカゼインナトリウム−安定化エマルションと比較して評価した（図３）。両方のエマルションの脂質酸化は、２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡによって加速された。以前にトリパルミチンで見られた効果は、パームステアリンで悪化した。この例のコロイド粒子は、対応するピッカリングエマルションに大きな抗酸化効果を発揮した。これは、一次（共役ジエン）および二次（ｐ−アニシジン）酸化生成物の両方で実証されている（図４）。
【０１１８】
例３  生物学的材料が光合成生物から得られる、懸濁液中の１以上の生物学的材料から調製された粒子の粒子サイズ分布の特徴付け。
１％（ｗ／ｗ）で水に懸濁したいくつかの代表的な天然粉末の粒子サイズ分布の特徴付けは、１．４５の屈折率粒子および０．０１の吸着指数を用いた静的光散乱（Malvern Mastersizer 3000、Malvern Instruments Ltd.、Malvern、Worcestershire、UK）を使用して行った（図５）。微粉化粉末と非微粉化粉末（抹茶原料、ホウレンソウ葉原料、スピルリナ抽出ケーキ、パイナップル繊維およびローズマリー葉抽出ケーキ）の両方を試験した。
興味深いことに、０．２μｍ未満の粒子サイズは測定されず、使用された粒子がナノスケールではなかったことを実証している。
【０１１９】
パイナップルおよびホウレンソウ葉粉末からの粒子は、抹茶およびスピルリナケーキよりも大きい粒子サイズを持っていることがわかった。非微粉化ホウレンソウ葉粒子は、２００μｍにメインピークを有するさまざまな直径の粒子を含有していた（すなわち、多分散分布）一方、同じ材料の微粉化粒子は、８μＭの平均的な粒子サイズを有する均一なサイズの粒子を含有していた（すなわち、単分散分布）。これらの結果は、微粉化が粒子サイズの減少だけでなく、サイズ分布にも大きな影響を与えることも示している。
【０１２０】
抹茶粉末およびホウレンソウ葉粒子は、微粉化の前は多分散であったが、処理後は単分散であった。スピルリナケーキは微粉化されるとより多分散になる一方、パイナップルは単分散分布を維持した。微粉化および非微粉化の両方の形態のローズマリーケーキ粉末は、サイズが多分散であり、大きな粒子および小さな粒子として現れた。それにもかかわらず、他の材料とは異なり、粒子サイズ分布は微粉化によって有意に影響を受けなかった。
【０１２１】
例４  生物学的材料が光合成生物から得られる、１以上の生物学的材料から調製された粒子の化学的特徴付け。
微粉化または非微粉化粒子の代表的なセットの化学的特徴付けをし、表１および２に示す。
【０１２２】
表１  いくつかの代表的な粒子の組成表。アスタリスクの付いたポリフェノール含有量の値はＨＰＬＣによって決定し、その他の値はFolin-Ciocalteu法からであった。
【表１】
2021530354.tif 000005
【０１２３】
表２  いくつかの代表的な粒子のフォローアップ組成表。
【表２】
2021530354.tif 000006
【０１２４】
例５  生物学的材料がそれらの乾燥形態の光合成生物から得られる、１以上の生物学的材料から調製された粒子の形態学的特徴付け。
微細構造から乾燥した粒子には、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用してアクセスした。非微粉化クルクマ粒子は多面体の形状であったが、微粉化試料は不規則な形状であった（図６）。非微粉化大根およびスピルリナケーキ粒子は、最初は球形であったが、処理後、微粉化試料は両方とも不規則であった。したがって、結果は、これらの粒子について、微細構造が超音波処理（すなわち、微粉化）によって破壊されたことを示した。
【０１２５】
抹茶粉末、パイナップル、ローズマリーケーキおよびホウレンソウ葉については、非微粉化粒子と微粉化粒子の両方が処理の前後で不規則な構造を示したため、粒子形状は微粉化による影響を受けなかったようである。さらに、抹茶粉末、ホウレンソウ葉、ローズマリーケーキの粒子は高い多孔性を示したが、パイナップルの粒子はそうではなかった。
【０１２６】
例６  生物学的材料が光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子によって安定化された本発明のピッカリング水中油型エマルションの物理的安定性の特徴付け。
この例では、本発明の天然粒子のエマルション形成および安定化能力を、対応する水中油型エマルションの粒子サイズ分布を通じて評価した。図７は、ホウレンソウ葉（Ａ）、スピルリナケーキ（Ｂ）、抹茶（Ｃ）およびパイナップル繊維（Ｄ）が、すべて微粉化されていない形態で、５％ｗ／ｗで添加されるとピッカリング水中油型エマルションを形成し、４℃で３か月にわたって安定させることができたことを示している。
【０１２７】
これらのエマルションを、乳化剤を含まない培地で形成および安定化し、および１％（ｗ／ｗ）のＴｗｅｅｎ６０で（図７Ｅ）または５％（ｗ／ｗ）の卵黄で（図７Ｆ）安定化された２つの従来の水中油型エマルションと比較した。すべてのエマルションは、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製され、抗菌剤として０．１ｗｔ％ソルビン酸カリウムを含有していた。
【０１２８】
例７  生物学的材料が光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子によって安定化された本発明のピッカリング水中油型エマルションのＮａＣｌを添加した場合の物理的安定性の特徴付け。
この例では、生物学的材料が光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子のエマルション形成および安定化能力を、対応する水中油型エマルションの粒子サイズ分布を通じてＮａＣｌの存在下で評価した。
【０１２９】
図８は、抹茶（Ａ）、ホウレンソウ葉（Ｂ）、およびスピルリナケーキ（Ｃ）が、すべて微粉化されていない形態で、５％ｗ／ｗで添加されると、実質的なレベルの塩の存在下で、５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４．５で調製したピッカリング水中油型エマルションを形成し、安定化（４℃で１か月）できたことを示している。
【０１３０】
図９は、非微粉化抹茶（Ａ）、ホウレンソウ葉（Ｂ）、スピルリナケーキ（Ｃ）、およびパイナップル繊維（Ｄ）について、まったく同じエマルションを酢酸緩衝液の代わりに５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．０で調製した場合の同様の結果を示している。
【０１３１】
最後に、図１０は、ＩＳＯ３６９６で定義されている「タイプ１」の緩衝されていない超純水（たとえば、ミリＱ水）でまったく同じエマルションを調製した場合の、非微粉化パイナップル繊維の同様の結果を示している。
【０１３２】
この一連のデータは、場合によっては水中油型エマルションの物理的安定性に悪影響を与えることが知られている塩の存在下で、本発明のピッカリング水中油型エマルションが、有意な時間にわたって形成されおよび安定化できることを明確に示している。
【０１３３】
例８  生物学的材料が中性および酸性ｐＨで光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子によって安定化された本発明のピッカリング水中油型エマルションの物理的安定性の特徴付け。
ここでは、生物学的材料が光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子のエマルション形成および安定化能力を、対応する水中油型エマルションの粒子サイズ分布を通じて異なるｐＨで評価した。図１１は、ｐＨ４．５（Ａ）およびｐＨ７．０（Ｂ）の抹茶粉末、ならびにｐＨ４．５（Ｃ）およびｐＨ７．０（Ｄ）のスピルリナケーキ粉末が、すべて非微粉化形態で、５％ｗ／ｗで添加されると、実質的なレベルの塩の存在下でピッカリング水中油型エマルションを形成し、安定化（４℃で１か月間）できたことを示している。ｐＨ４．５のエマルションは５０ｍＭ酢酸緩衝液で調製し、ｐＨ７．０のエマルションは５０ｍＭリン酸緩衝液で調製した。
【０１３４】
例９  ５％（ｗ／ｗ）の非微粉化スピルリナケーキ粉末によって安定化された本発明のピッカリング水中油型エマルションと比較した、従来のＴｗｅｅｎ６０−安定化水中油型エマルションの酸化安定性。
５％（ｗ／ｗ）の非微粉化スピルリナケーキ粉末によって安定化されたピッカリング水中油型エマルション（本発明のエマルション）と比較した従来のＴｗｅｅｎ６０−安定化水中油型エマルションの酸化安定性は、共役ジエン（共役Ｅ，Ｚ−Ｌｎ−ＯＯＨ、一次酸化生成物）、脂質ヒドロペルオキシド（ＬＯＯＨ、一次酸化生成物）およびアルデヒド（二次酸化生成物）のレベルを通じて評価した（図１２）。両方のエマルションの脂質酸化は自然であった（すなわち、系に自然に存在するもの以外の酸化触媒によって加速されなかった）。２５℃で４か月間のインキュベーション後、データは、Ｔｗｅｅｎ６０（業界で使用される標準乳化剤）で安定化された従来のエマルションと比較して、すべての酸化マーカーの上昇が遅いため、スピルリナケーキ粉末が対応するピッカリング水中油型エマルションに驚くべき保護効果を及ぼすことを示している。よって、スピルリナケーキの粒子は、天然の抗酸化コロイドまたは粒子として機能する。
【０１３５】
例１０  ５％（ｗ／ｗ）の非微粉化抹茶粉末または５％（ｗ／ｗ）の非微粉化ホウレンソウ葉によって安定化された本発明の２つのピッカリング水中油型エマルションと比較した従来の卵黄−安定化水中油型エマルションの酸化安定性。
５％（ｗ／ｗ）の非微粉化抹茶粉末または非微粉化ホウレンソウ葉によって安定化された２つのピッカリング水中油型エマルション（本発明のエマルション）と比較した従来の卵黄−安定化水中油型エマルションの酸化安定性は、共役ジエン（共役Ｅ，Ｚ−Ｌｎ−ＯＯＨ、一次酸化生成物）、脂質ヒドロペルオキシド（ＬＯＯＨ、一次酸化生成物）およびアルデヒド（二次酸化生成物）のレベルを通じて評価した（図１３）。両方のエマルションの脂質酸化は自然であった（すなわち、系に自然に存在するもの以外の酸化触媒によって加速されなかった）。２５℃で４か月間のインキュベーション後、データは、卵黄（業界で使用される標準乳化剤）で安定化された従来のエマルションと比較して、すべての酸化マーカーの上昇が遅いため、両天然粉末が対応するピッカリング水中油型エマルションに驚くべき保護効果を及ぼすことを示している。よって、抹茶粉末粒子またはホウレンソウ葉粒子は、天然の抗酸化コロイドまたは粒子として機能する。
【０１３６】
例１１  生物学的材料が光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子の油中水型エマルション（本発明のエマルション）を形成および安定化する能力の特徴付け。
予期せぬことに、１％（ｗ／ｗ）の非微粉化クルクマ抽出粒子（図１４Ａ）または２．５％（ｗ／ｗ）の非微粉化ローズマリー葉抽出ケーキ粒子（図１４Ｂ）を使用して、１０％の油中水型エマルション（逆エマルション）を形成することができた。
【０１３７】
例１２  生物学的材料が光合成生物から得られる１以上の生物学的材料から調製された粒子の、粒子が水で洗浄された後に油中水型エマルション（本発明のエマルション）を形成および安定化する能力の特徴付け。
天然粒子を水で洗浄すると、予想外に、得られた上澄みが、それらのほとんどについて、比較的控えめではあるが、有意な張力活性（すなわち、ストリッピングしたひまわり油と水との間の界面の張力を低下させる能力）を発揮することがわかった（図１５）。ゆえに、例６、７、および８で先に見られた安定化効果が、単に粉末に含有され、洗浄によって除去可能であるいくつかの界面活性分子の張力活性によるものか、より具体的にはピッカリング（機械的）安定化メカニズムによるものかを解明するために、洗浄された粒子によって安定化されたピッカリングエマルションのいくつかの物理的安定性テストを要約した。興味深いことに、洗浄された粒子はすべて、生じた水中油型エマルションを物理的に安定化させることができた（図１７）。また、洗浄手順で生じた上澄みを試験し、それらが水中油型エマルションを安定化できなかったことがわかり（図１６）、安定化効果が従来の乳化効果ではなく真のピッカリングメカニズムによって伝わることが明確に示された。
【０１３８】
例１３  抗酸化物質（α−トコフェロール）が（ｉ）パルミチンコロイド粒子（材料および方法のセクションで詳述されているとおりに調製された本発明のエマルション）中、または（ｉｉ）油滴の内部のいずれかにある、ヒマワリ水中油型エマルションの比較。
上で詳述されているとおりに調製された２つのピッカリングエマルション。１つはコロイド粒子に組み込まれたα−トコフェロール（図１８ａ）、およびもう１つは液体のひまわり油滴中のα−トコフェロール（図１８ｂ）。
【０１３９】
酸化を２５℃で２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡで加速した。次いで、エマルションを、共役ジエンなどの一次酸化生成物と、ｐ−アニシジンアルデヒドなどの二次酸化生成物の両方について試験した。図１８ｃおよび１８ｄに示すとおり、α−トコフェロールが油滴の内部に可溶化された同じエマルションと比較して、α−トコフェロールがコロイド粒子に組み込まれた場合、エマルションで発生する酸化は少なかった。
【０１４０】
次いで、各エマルション中のα−トコフェロールの安定性を、図１８ａおよびｂに記載されているようにコロイド粒子またはエマルション液滴のいずれかからα−トコフェロールを抽出することによって調査した。
α−トコフェロールのＨＰＬＣ分析は、コロイド粒子にα−トコフェロールを組み込むことで抗酸化物質に対する有意な保護を提供することを示した（図１８ｅ）。
特にα−トコフェロール、およびフェノール含有化合物は、一般にフリーラジカルなどの脂質酸化生成物によって媒介される酸化に非常に敏感であるため、この予想外の効果は、ここで研究した製剤に追加の利点をもたらす。
【０１４１】
コロイド粒子に製剤化された場合のα−トコフェロールの抗酸化活性の改善（図１８ｃおよびｄ）と、トコフェロール自体に対するそのような製剤の保護効果（図１８ｅ）をさらに特徴づけるために、異なる時間間隔（０、６、２４、および７２時間）で共焦点レーザー走査顕微鏡を使用して、コロイド粒子中に位置するα−トコフェロール（２５−ＮＢＤ−コレステロール）の蛍光類似体で標識されたエマルションを画像化した（図１９Ａ）。
【０１４２】
図１９Ａに見られるように、蛍光色素が界面に付着したコロイド粒子（すなわちピッカリング粒子）にある場合、０分ですべての脂肪滴の周りに強い緑色の蛍光が存在し、リング状のパターンを形成する。これは、α−トコフェロール蛍光類似体の有意な部分が、吸着されたコロイド粒子内の界面に位置していることを示している。時間の経過とともに、α−トコフェロールはコロイド粒子から液滴にゆっくりと放出されるだけである。これは、黒と緑の液滴比が０時間から７２時間に減少することを通じて分かり得る。
【０１４３】
対照的に、α−トコフェロールの蛍光類似体が液体油滴にある場合（図１９Ｂ）、すべての液滴は緑色であり、α−トコフェロールの蛍光類似体がすべての油滴内で即座に動的平衡に達することを実証している。
これは、コロイド粒子内に抗酸化物質（すなわちα−トコフェロール）を組み込むことにより、抗酸化物質（すなわちα−トコフェロール）が界面に位置し、コロイド粒子によって保護されながら改善された抗酸化効果を提供できること、および抗酸化物質（すなわちα−トコフェロール）がコロイド粒子からゆっくりと放出されるだけであり、よって抗酸化効果を維持することを示している。
【０１４４】
最後に、偏光顕微鏡法（図１９Ｃおよび１９Ｄ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析（図２０）は、油水界面に吸着されたコロイド粒子が、実験のタイムスケールにわたって物理的に無傷のままであることを示した。この結果は、α−トコフェロール蛍光類似体の拡散（ゆえに、類推により、α−トコフェロールの拡散）は、時間の経過に伴う液体油相中のコロイド粒子の可溶化によって引き起こされることを示唆しており、これはこれらのエマルションの高い長期的な物理的安定性と一致する。
【０１４５】
例１４  抗酸化物質（カルノシン酸）が（ｉ）パルミチンコロイド粒子（材料と方法のセクションで詳述されているように調製された本発明のエマルション）中、または（ｉｉ）油滴の内部のいずれかにあるヒマワリ水中油型エマルションの比較
α−トコフェロールの代わりにカルノシン酸を使用したことを除いて例１３とまったく同じ実験計画を再現した。図２１に示すデータは、このジテルペンフェノール系抗酸化物質でも同じ抗酸化効果が得られることを明確に示しており、本発明のコロイド粒子が多くの抗酸化分子に対する界面リザーバーとして機能し、抗酸化促進効果を提供できることを示している。
【０１４６】
例１５  抗酸化物質（α−トコフェロール）が（ｉ）界面に吸着されていないパルミチンコロイド粒子中、または（ｉｉ）油滴の内部内のいずれかにあるヒマワリ水中油型エマルションの比較。
コロイド粒子に配合されたα−トコフェロールの抗酸化活性の改善が、特異的にこれらの粒子の界面固定によるものかどうかを調査するために、コロイド粒子の水性懸濁液を含む２種の従来のカゼインナトリウム安定化ストリッピングしたヒマワリ水中油型エマルションを調製した。
エマルションおよび懸濁液の組成は同じであったが、抗酸化物質は懸濁したコロイド粒子（図２２ａ）または油滴のコア中（図２２ｂ）のいずれかに位置した。例３と比較した主な違いは、コロイド粒子が界面に吸着されず、代わりに水相中の粒子懸濁液として添加された（すなわち、吸着されていない）ことであった。
【０１４７】
酸化を２５℃で２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡで加速した。次いで、エマルションを、共役ジエンなどの一次酸化生成物と、ｐ−アニシジンアルデヒドなどの二次酸化生成物の両方について試験した。図２２ｃおよび２２ｄに示すとおり、両方のエマルションの酸化安定性は非常に類似しており、両方のエマルションは、油／水界面に付着したコロイド粒子内に抗酸化物質が含有される本発明のエマルションである例３のエマルションよりも高濃度の酸化生成物を含有していた。
【０１４８】
吸着されていないコロイド粒子またはエマルション液滴からのα−トコフェロールの抽出、それに続くＨＰＬＣは、粒子が液滴表面で吸収されなかった場合（図２２ｅ）、例１３（図１８ｅ）におけるコロイド粒子によって与えられた保護効果が劇的に減少したことを示した。
【０１４９】
再度、これは、本発明のエマルション（例１３および１４）が、例１５の２つの記載されたエマルションよりもはるかに優れた抗酸化化合物の保護を提供することを示している。よって、抗酸化物質ロード粒子（すなわち、真のピッカリング粒子）の界面への付着は、抗酸化物質活性に関して有益な効果を有するために必要とされる。
【０１５０】
最後に、異なる時間間隔（０、６、２４、および７２時間）でのレーザー走査顕微鏡を使用して、吸着されていないコロイド粒子（図２３Ａ）中または直接油滴（図２３Ｂ）中に位置するα−トコフェロール（２５−ＮＢＤ−コレステロール）の蛍光類似体で標識されたエマルションを画像化した。
【０１５１】
見てわかるとおり、蛍光色素が懸濁粒子にある場合、緑色の蛍光は０分で外部水相に均一に分布する。そのインキュベーション時間では、緑色の液滴は観察できない。これは、０時間では、コロイド粒子が油／水界面に吸着されていないことを示している。代わりに、それらは脂質酸化を打ち消すのに非常に非効率的である上述の水相に懸濁される。時間の経過とともに、緑色のバックグラウンドの減少は緑色の液滴の増加と平行しており、α−トコフェロールの蛍光類似体が水相から油滴の内部に徐々に拡散することを明確に示している。
７２時間で、黒対緑の液滴比は、色素が最初に油滴コアに位置している図２３Ｂに示されているものと同一ではないにしても、類似している（図２２Ａ）。
【０１５２】
例１６  抗酸化物質（α−トコフェロール）が（ｉ）界面に吸着されず、「ピッカリングバリア」によって油内部に拡散するのが控えられたパルミチンコロイド粒子中、または（ｉｉ）油滴の内部内のいずれかにあるピッカリングしたヒマワリ水中油型エマルションの比較。
例１３（本発明のエマルション）に見られるα−トコフェロール抗酸化活性に対する増強効果におけるコロイド粒子の各集団（界面吸着ｖｓ．界面非吸着）のそれぞれの寄与を解明するために、界面に付着したα−トコフェロールを含まないコロイド粒子によって安定化されたピッカリングエマルションを調製し、均質化後にα−トコフェロールロードコロイド粒子を添加した結果、α−トコフェロールロードコロイド粒子は界面に付着しなかった（図２４Ａ）。
【０１５３】
このエマルションを、α−トコフェロールが油滴のコアに位置することを除いて、同じピッカリング水中油型エマルションと比較した（図２４Ｂ）。
この比較により、本発明のエマルションのものと同様の界面構造を維持しながら、連続相における抗酸化物質ロードＣＬＰの役割の評価が可能になった（例１３）。
【０１５４】
脂質酸化は、コロイド状脂質粒中にα−トコフェロールだけを含有するピッカリングエマルションで有意に速く進行した（図２４Ｃおよび２４Ｄ）。よって、本発明のエマルション（例１３）の水相に懸濁された抗酸化物質ロード粒子は、抗酸化活性を改善する効果に寄与しないと結論付けることができる。確かに、ここでは、この正確な抗酸化物質ロード粒子亜集団は、油相で直接配合されたα−トコフェロールよりも脂質酸化を阻害する効果が低いことが明確に示されている。
【０１５５】
先の例のように、同様の構造原理を有するエマルションもまた、２５−ＮＢＤコレステロールを用いて調製した。インキュベーション中の水相に存在するコロイド粒子からエマルション液滴コアへの蛍光プローブの拡散は、タンパク質安定化エマルションと比較してはるかに遅く（図２５Ａ）、これは例１３に見られるように、コロイド粒子が本発明のエマルションに提供する有益な効果を裏付けている。
【０１５６】
例１７  （ｉ）トリパルミチンコロイド粒子（材料および方法のセクションで詳述されているとおりに調製された本発明のエマルション）中、または（ｉｉ）油滴の内部内のいずれかに位置する異なる濃度の抗酸化物質（α−トコフェロール）を有するピッカリングヒマワリ水中油型エマルションの比較
例１３に示した階層的エマルション設計が、抗酸化物質が油滴の内部に位置する対照エマルションと比較して、抗酸化物質の抗酸化効率をどの程度高めたかを調査するために、本発明のエマルションを９０ｐｐｍから４５、次いで２２．５ｐｐｍ（２〜４倍低い）に減少させたα−トコフェロール含有量で製造した。
【０１５７】
興味深いことに、本発明のエマルションに配合する場合、トコフェロールを劇的に減少させることができ（少なくとも２〜３倍）、それでも抗酸化物質が脂肪滴の内部に配合されている対照エマルション中の２〜３倍高濃度のα−トコフェロールで得られるものと同等またはそれ以上の脂質酸化に対する保護を提供できることがわかった（図２６）。
【０１５８】
例１８  抗酸化物質（α−トコフェロール）の有無でのトリパルミチンコロイド粒子の物理的および形態学的特徴付け。
この例では、粒子サイズ分布（Ａ）、示差走査熱量測定（Ａ）、およびＴＥＭ（Ａ）を使用して、α−トコフェロールを含有するまたはしない粒子を特徴付けした（図２７Ａ、ＢおよびＣ）。
【０１５９】
例１９  パルミチンコロイド粒子（本発明のエマルション）中または油滴のコア中のいずれかに抗酸化物質（α−トコフェロール）を有するピッカリングヒマワリ水中油型エマルションの物理的および形態学的特徴付け。
この例では、液滴サイズ分布（Ａ）、融解および結晶化の熱特性（Ｂ）、ならびにそれらの形態（Ｃ）を測定することにより、ピッカリング水中油型エマルションを特徴付けした（図２８Ａ、ＢおよびＣ）。
【０１６０】
例２０  酸化可能ではない油を使用して調製したエマルションと、例１３のヒマワリ水中油型エマルション中のα−トコフェロールロードコロイド粒子の活性の比較。
ピッカリングエマルションの液滴表面に吸着されたα−トコフェロールロードコロイド粒子が、特定の抗酸化作用を通じてエマルションの酸化を防止し、他のメカニズムではないかどうかを調べるために、エマルション中で使用された油がストリッピングひまわり油の代わりに中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）からなることを除いて、例３の実験設定を再現した。
【０１６１】
ひまわり油とは異なり、ＭＣＴは酸化不可能であり、図２９から、第一鉄（２５°Ｃで２００μＭＦｅＳＯ４／ＥＤＴＡ）の存在下でさえも、どちらのエマルションでもα−トコフェロールの有意な消費がなかったことがわかる。これは、α−トコフェロールがカチオン金属によって直接消費されるのではなく、脂質酸化生成物によって特異的に消費されることを示唆している。その結果として、α−トコフェロールロードコロイド粒子は、真の抗酸化作用を通じてピッカリングエマルションに対して保護効果を発揮する。
【０１６２】
例２１  水相に添加されたパルミチンコロイド粒子を含有する従来のカゼインナトリウム安定化ヒマワリ水中油型エマルション（実線）、およびコロイド脂質粒子分散液（破線）の熱量測定による特徴付け。
この例では、示差走査熱量測定を使用して、従来のカゼインナトリウムで安定化されたエマルションを特徴付けした（図３０）。
【０１６３】
例２２  抗酸化物質（α−トコフェロール）が（ｉ）２０％トリカプリリンを含有するパルミチン（８０％）コロイド粒子（材料および方法のセクションで詳述されているとおりに調製された本発明のエマルション）中または（ｉｉ）油滴の内部内のいずれかにある、ヒマワリ水中油型エマルションの比較。
例１３とまったく同じ実験計画がここに再現されているが、１００％トリパルミチンの代わりに２０％トリカプリリン／８０％トリパルミチンを含有するコロイド粒子を使用している（図３１ＡおよびＢ）。図３１Ｃ、Ｄ、およびＥに示したデータは、これらのコロイド粒子で同種の利点が得られることを明確に示しており、コロイド粒子組成の変化に対して抗酸化増強効果が頑強であることを示している。
【０１６４】
例２３  抗酸化物質（α−トコフェロール）が（ｉ）パルミチンコロイド粒子（材料および方法のセクションで詳述したとおりに調製された本発明のエマルション）中または（ｉｉ）油滴の内部内のいずれかにある、亜麻仁水中油型エマルションの比較
例１３とまったく同じ実験計画がここに再現されているが、ひまわり油の代わりに亜麻仁油を使用している（図３３ＡおよびＢ）。図３３Ｃに示したデータは、ひまわり油とは異なる油でも同種の利点が得られることを明確に示しており、油組成の変化に対して抗酸化増強効果が頑強であることを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【国際調査報告】
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