(57)【要約】  本発明は、有効成分として凝固第FXIa因子に対するヒト抗体、特に長期にわたって液体製剤として安定している、国際公開第2013167669号パンフレットに記載される抗体を含む、皮下投与に特に適した新規な高濃度液体医薬製剤に言及する。本発明はまた、再構成時間が短縮された、指定される液体製剤の凍結乾燥物、ならびに血栓性または血栓塞栓性障害の治療および予防におけるこれらの製剤の使用にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、10〜20mMのヒスチジン、25〜75mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニンを含む安定な液体医薬製剤であって、前記製剤のpHが4．7〜5．3である、液体医薬製剤。
【請求項２】
保存剤、担体、界面活性剤および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む、請求項1に記載の液体医薬製剤。
【請求項３】
前記ヒスチジン濃度が20mMである、請求項1または2に記載の液体医薬製剤。
【請求項４】
前記グリシン濃度が50mMである、請求項1から3のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
【請求項５】
前記アルギニン濃度が50mMである、請求項1から4のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
【請求項６】
1〜10％（w／v）の安定剤を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
【請求項７】
3〜7％（w／v）のトレハロース二水和物を含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
【請求項８】
0．005％〜0．2％（w／v）の濃度の界面活性剤を含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
【請求項９】
前記界面活性剤が、ポリソルベート80、ポリソルベート20およびポロキサマー188からなる群から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
【請求項１０】
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、20mMのヒスチジン、50mMのグリシンおよび50mMのアルギニン、5％（w／v）のトレハロース二水和物および0．1％（w／v）のポリソルベート80を含む安定な液体医薬製剤であって、前記製剤のpHが5である、液体医薬製剤。
【請求項１１】
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、20mMのヒスチジン、50mMのグリシンおよび50mMのアルギニン、5％（w／v）のトレハロース二水和物および0．05％（w／v）のポリソルベート20またはポロキサマー188を含む安定な液体医薬製剤であって、前記製剤のpHが5である、液体医薬製剤。
【請求項１２】
約150mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、20mMのヒスチジン、50mMのグリシンおよび50mMのアルギニン、5％（w／v）のトレハロース二水和物および0．1％（w／v）のポリソルベート80を含む安定な液体医薬製剤であって、前記製剤のpHが5である、液体医薬製剤。
【請求項１３】
約150mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、20mMのヒスチジン、50mMのグリシンおよび50mMのアルギニン、5％（w／v）のトレハロース二水和物および0．05％（w／v）のポリソルベート20またはポロキサマー188を含む安定な液体医薬製剤であって、前記製剤のpHが5である、液体医薬製剤。
【請求項１４】
請求項1から13のいずれか一項に記載の液体医薬製剤を凍結乾燥することによって得ることができる凍結乾燥物。
【請求項１５】
a）ペレットを形成するために、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴を凍結するステップと、
b）前記ペレットを凍結乾燥するステップと
を含む方法により得られる凍結乾燥物において、
ステップa）で、前記液滴が、温度制御可能な内壁面（110）および前記溶液の凍結温度よりも低い内部温度を有する冷却塔（100）の中に、抗FXIa抗体を含む前記溶液の液滴形成を用いて形成されること、
ならびに
ステップb）で、真空チャンバ（200）の内部に収容されている回転容器（210）内で前記ペレットが凍結乾燥されること
を特徴とする、請求項14に記載の凍結乾燥物。
【請求項１６】
請求項1から15のいずれか一項に記載の液体医薬製剤または凍結乾燥物を含む剤形。
【請求項１７】
前記剤形が、シリンジ、バイアル、ペン型装置、または自動注入装置である、請求項16に記載の剤形。
【請求項１８】
血栓性または血栓塞栓性障害の治療または予防に使用するための、請求項1から15のいずれか一項に記載の液体または凍結乾燥医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分として凝固第FXIa因子に対するヒト抗体、特に長期にわたって液体製剤として安定している、国際公開第2013167669号パンフレットに記載される抗体を含む、皮下投与に特に適した新規な高濃度液体医薬製剤に言及する。本発明はまた、再構成時間が短縮された、指定される液体製剤の凍結乾燥物、ならびに血栓性または血栓塞栓性障害の治療および予防におけるこれらの製剤の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
血液凝固は、血管壁の欠陥を迅速かつ確実に「封鎖する」ことができるようにするのに役立つ生物の保護機序である。よって、失血を回避するかまたは最小限に抑えることができる。血管の損傷後の止血は、主として血漿タンパク質の複雑な反応の酵素的カスケードが引き起こされる凝固系によって影響を受ける。多数の血液凝固因子がこの過程に関与しており、これらの因子の各々が、活性化して、それぞれ次の不活性前駆体をその活性型に変換する。カスケードの最後に、可溶性フィブリノーゲンの不溶性フィブリンへの変換が起こり、その結果、凝血塊が形成される。血液凝固では、伝統的に、最終的な連結反応経路で終わる内因性系と外因性系が区別される。
【０００３】
凝固第XIa因子は凝固の開始から増幅および伝播への移行の中心的要素である：正のフィードバックループでは、トロンビンが第V因子および第VIII因子に加えて、第XI因子も第XIa因子に活性化し、これによると第IX因子が第IXa因子に変換され、このようにして生成された第IXa因子／第VIIIa因子複合体を介して、第X因子が活性化され、そのため今度はトロンビン形成が高度に刺激されて、強力な血栓成長および血栓の安定化をもたらす。抗FXIa抗体は、抗凝固剤、すなわち血液凝固を阻害または防止するための物質として先行技術で知られている（国際公開第2013167669号パンフレット参照）。
【０００４】
例えば、ヒトモノクローナル抗体などの治療用タンパク質は、一般に、液体医薬製剤として注射によって投与される。多くの治療上有効なヒトモノクローナル抗体は低い安定性または凝集傾向などの好ましくない特性を有するので、適切な医薬製剤によってこれらの好ましくない特性を調節することが必要である。凝集体または変性抗体は、例えば低い治療有効性を有し得る。凝集体または変性抗体はまた、望ましくない免疫学的反応を引き起こす可能性がある。タンパク質の安定な医薬製剤は化学的不安定性を防ぐのにも適しているべきである。タンパク質の化学的不安定性は、分解または断片化をもたらし、したがって有効性の低下、または有毒な副作用さえももたらし得る。したがって、あらゆる種類の低分子量断片の形成または生成を回避するかまたは少なくとも最小限に抑えるべきである。これらはすべて調製物の安全性に影響を与え得る因子であるので、考慮に入れなければならない。さらに、低い粘度は必要な力を低く保ち、よって注入性を高めるので、シリンジまたはポンプを使用する場合には、低い粘度が基本である。低粘度は、例えば調製物の正確な充填を可能にするため、製造中でも必須である。しかしながら、ヒトモノクローナル抗体の治療的使用は、しばしば高抗体濃度の使用を必要とし、それはしばしば高粘度の問題を引き起こす。その概説論文において、DaughertyおよびMrsny（Adv Drug Deliv Rev．2006；58（5〜6）：686〜706）は、モノクローナル抗体の液体医薬製剤において起こり得るこれらの問題を論じている。
【０００５】
皮下（s．c．）注射の場合、製剤に関する特別な要件をさらに考慮する必要がある。静脈内適用と比較して、シリンジによる単回注射の場合、1〜2ミリリットルを超える送達量の製剤は十分に許容されていないため、注入量は制限される。これにより、同じ用量を送達するために、より高い抗体濃度が必要となる。これは、抗体が約100mg／ml以上の濃度に達する必要があることを意味する。高濃度タンパク質製剤は、タンパク質治療薬の製造可能性および投与に多くの課題を提起する可能性がある。さらに、患者の受諾およびコンプライアンスを確保するために、小さな針による簡便な適用が求められる。高濃度の抗体製剤の場合、抗体濃度が上昇するにつれて両方の属性が競合し、粘度が上昇し、投与を妨げる。
【０００６】
皮下適用と比較して多くの注入量を可能にする静脈内（i．v．）適用に適した抗FXIa抗体のための低濃度液体製剤は、特許出願PCT／EP2018／050951号明細書に記載されている。この低濃度製剤は、10〜40mg／mlの抗FXIa抗体と、5〜10mMのヒスチジンおよび130〜200mMのグリシンを含むヒスチジン／グリシン緩衝系を含み、製剤のpHは5．7〜6．3である。皮下適用で2ml以下の限られた適用量を考慮すると、特許出願PCT／EP2018／050951号明細書に記載される低濃度製剤は、意図される治療関連用量の投与に適していない。抗FXIa抗体濃度が約100mg／ml以上に増加することは不可避であり、明白である。しかし、特許出願PCT／EP2018／050951号明細書に記載されるヒスチジン／グリシン緩衝系で抗FXIa抗体の濃度を増加させると、溶液の粘度が指数関数的に増加して許容されない値となった。
【０００７】
多様な方法が、高濃度剤形に関連する課題を克服するために提案されてきた。例えば、高濃度の抗体製剤に関連する安定性の問題に取り組むために、抗体はしばしば凍結乾燥された後、投与直前に再構成される。再構成は、投与プロセスに追加の、時には時間を消費する工程を加え、製剤に汚染物質を導入することがあり得るため、一般に最適ではない。さらに、再構成した抗体でさえ、凝集と高粘度に悩まされる可能性がある。そのため、長期間にわたって安定している液体製剤が有利であることになる。
【０００８】
粘度を下げるためにさまざまな賦形剤を使用する、タンパク質および抗体のためのいくつかの液体高濃度製剤が当技術分野で公知である。例えば、国際公開第2009043049号パンフレットは、濃度が少なくとも70mg／mlのタンパク質である液体医薬タンパク質製剤の粘度を低下させるためのクレアチン、クレアチニン、カルニチンおよびそれらの混合物からなる群から選択される賦形剤の使用を記載している。一方、国際公開第2016065181号パンフレットには、高濃度製剤の粘度を低下させるためのさまざまなn−アセチルアミノ酸の使用が記載されている。
【０００９】
アルギニンは、粘度を低下させる賦形剤として公知である。しかし、現在まで、十分な粘度低下を提供するために大量のアルギニン、または大量のアルギニンとヒスチジンが必要であった高濃度のタンパク質製剤しか公知ではない。米国特許出願公開第20150239970号明細書は、抗IL−6抗体の液体高濃度製剤のための大量のアルギニン（150mM超）の使用を記載している。一方、米国特許第8703126号では、アルギニンまたはヒスチジンに由来する約150〜200mMの塩または緩衝液の使用が記載されている。
【００１０】
低い割合の凝集体および分解生成物を含み、凍結乾燥させる必要なく長期間にわたって液体として安定しており、粘度が最小である抗FXIa抗体の高濃度液体製剤が必要とされている。さらに、皮下適用の製剤のpHは、4．7〜7．4の範囲でなければならず、浸透圧は240〜400mOsm／kgの範囲を超えてはならない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第2013167669号パンフレット
【特許文献２】特許出願PCT／EP2018／050951号明細書
【特許文献３】国際公開第2009043049号パンフレット
【特許文献４】国際公開第2016065181号パンフレット
【特許文献５】米国特許出願公開第20150239970号明細書
【特許文献６】米国特許第8703126号明細書
【特許文献７】欧州特許出願第17170483．6号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】DaughertyおよびMrsny著、Adv Drug Deliv Rev．2006；58（5〜6）：686〜706
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、上述の必要性に取り組み、約100mg／ml以上の抗FXIa抗体、ならびに、長期間にわたって液体として安定している少量の凝集体および分解生成物を含む高濃度液体医薬製剤を提供する。また、これらの製剤は粘度が低いため、例えば当技術分野で公知のシリンジ、ペン型装置、自動注入装置または任意の他の装置を用いる皮下注射でさえも患者に簡単に投与することができる。高濃度液体抗FXIa製剤は、好ましくは従来の凍結乾燥方法よりも著しく短い再構成時間をもたらす欧州特許出願第17170483．6号明細書に記載されているような噴霧凍結に基づく方法によって凍結乾燥されていてもよい。
【００１４】
本発明は、皮下適用に特に適し、約100mg／ml以上の抗FXIa抗体と、アルギニンが少量で十分に粘度を低下させ、長期間にわたって液体として安定しているヒスチジン、グリシンおよびアルギニンを含む4．7〜5．3の低pHの三重緩衝系とを含む、低粘度の高濃度医薬製剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】再構成時間が短縮された凍結乾燥ペレットをもたらす凍結乾燥方法（方法3）のための装置を概略的に示す図である。
【図２】抗体溶液の従来の凍結乾燥（方法1）中に経時的に測定された温度および圧力のプロファイルをグラフで示す図である。
【図３】方法2（国際公開第2006／008006号パンフレットに記載）による、抗体溶液の凍結および乾燥中に経時的に測定された温度および圧力のプロファイルをグラフで示す図である。
【図４】本明細書に記載される凍結乾燥方法（方法3）による抗体溶液の処理中に経時的に測定された冷却塔内の温度プロファイルをグラフで示す図である。
【図５】本明細書に記載される凍結乾燥方法（方法3）による抗体溶液の凍結および乾燥中に経時的に測定された温度および圧力のプロファイルをグラフで示す図である。
【図６】本明細書に記載される凍結乾燥方法（方法3）に従って製造されたペレットの走査型電子顕微鏡（Scanning Electron Microscopy：SEM）写真を示す図である。
【図７】従来の凍結乾燥（方法1）に従って製造された凍結乾燥物の走査型電子顕微鏡（SEM）写真を示す図である。
【図８】国際公開第2006／008006号パンフレットに開示された凍結乾燥プロセス（方法2）に従って製造された凍結乾燥物の走査型電子顕微鏡（SEM）写真を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
一実施形態では、液体医薬製剤は、5〜30mMのヒスチジン、20〜100mMのグリシンおよび150mM未満のアルギニンを含む。好ましい実施形態では、液体医薬製剤は、10〜20mMのヒスチジン、25〜75mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニンを含む。特に好ましい実施形態では、液体医薬製剤は、20mMのヒスチジン、50mMのグリシンおよび50mMのアルギニンを含む。さらに、液体医薬製剤のpHは4．7〜6．0である。好ましい実施形態では、液体医薬製剤のpHは4．7〜5．3である。特に好ましい実施形態では、液体医薬製剤のpHは5である。本発明による液体医薬製剤は、抗FXIa抗体を約100mg／ml以上の濃度で含む。好ましい実施形態では、抗FXIa抗体は、約100〜300mg／mlの濃度で存在する。特に好ましい実施形態では、抗FXIa抗体の濃度は135〜165mg／ml、最も好ましくは約150mg／mlである。さらに特に好ましい実施形態では、抗FXIa抗体の濃度は約100mg／mlである。すべての実施形態において、抗FXIa抗体は、特に好ましくは076D−M007−H04−CDRL3−N110Dである。
【００１７】
液体医薬製剤は安定剤も含むことがある。安定剤は例えば糖である。「糖」とは、水溶性であり、単糖、二糖およびポリオールに分けられる一群の有機化合物を指す。好ましい糖は非還元二糖であり、特に好ましくはトレハロースである。一実施形態では、安定剤は、1〜10％重量／容量（w／v）の程度、好ましくは3〜7％（w／v）の程度、特に好ましくは5％（w／v）の程度で存在する。好ましい実施形態では、トレハロース二水和物は、1〜10％重量／容量（w／v）の程度、好ましくは3〜7％（w／v）の程度、特に好ましくは5％（w／v）の程度で存在する。
【００１８】
液体医薬製剤は界面活性剤も含むことがある。「界面活性剤」という用語は、親水性領域および疎水性領域を有する任意の洗剤を指し、非イオン性、カチオン性、アニオン性および双性イオン性洗剤を含む。好ましい洗剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート80またはTWEEN 80としても公知）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ポリソルベート20またはTWEEN 20としても公知）、ポロキサマー188（ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのコポリマー）およびN−ラウリルサルコシンからなる群から選択され得る。開示される組成物の場合、非イオン性界面活性剤が好ましい。本発明の組成物には、ポリソルベート80、ポリソルベート20またはポロキサマー188の使用が特に好ましい。界面活性剤は、0．005％〜0．5％（w／v）の濃度で使用されてよく、0．01％〜0．2％（w／v）の濃度範囲が好ましい。0．05％〜0．1％（w／v）の界面活性剤の濃度を使用することが特に好ましい。特に好ましいのは、ポリソルベート80を0．1％（w／v）の濃度で使用することである。さらに特に好ましいのは、ポリソルベート20またはポロキサマー188を0．05％（w／v）の濃度で使用することである。
【００１９】
保存剤または他の添加剤、充填剤、安定剤または担体を、場合により本発明による液体医薬製剤に任意に添加してもよい。適切な保存剤は、例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、および芳香族アルコール、例えばフェノール、パラベンまたはm−クレゾールである。さらなる薬学的に許容される添加剤、安定剤または担体は、例えば、Remington’s Science And Practice of Pharmacy（第22版、Loyd V．Allen，Jr編、Philadelphia、PA：Pharmaceutical Press 2012）に記載されている。
【００２０】
したがって、本発明は約100mg／ml以上の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dとヒスチジン／グリシン／アルギニン緩衝系を含む高濃度液体医薬製剤を提供し、製剤は、5〜30mMのヒスチジン、20〜100mMのグリシンおよび150mM未満のアルギニン、好ましくは10〜20mMのヒスチジン、25〜75mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニンを含み、そのpHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。これにより、液体製剤として安定している、抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの高濃度製剤が、低粘度で、十分に安定化され、少ない凝集でもたらされるが、製剤の随意の凍結乾燥も可能である。
【００２１】
本発明による一実施形態は、約100mg／mlの抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dおよびヒスチジン／グリシン／アルギニン緩衝系を含む液体医薬製剤であり、製剤は、5〜30mMのヒスチジン、20〜100mMのグリシンおよび150mM未満のアルギニンを含み、好ましくは10〜20mMのヒスチジン、25〜75mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニンを含み、pHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。
【００２２】
本発明による一実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体M007−H04−CDRL3−N110D、
5〜30mMのヒスチジン、好ましくは10〜20mMのヒスチジン、
20〜100mMのグリシン、好ましくは25〜75mMのグリシンおよび
150mM未満のアルギニン、好ましくは50〜75mMのアルギニン、
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。製剤は、場合により、界面活性剤、保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００２３】
本発明による一実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
5〜30mMのヒスチジン、好ましくは10〜20mMのヒスチジン、
20〜100mMのグリシン、好ましくは25〜75mMのグリシンおよび
150mM未満のアルギニン、好ましくは50〜75mMのアルギニン、
1〜10％（w／v）の安定剤、好ましくは3〜7％（w／v）のトレハロース二水和物、
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。製剤は、場合により、界面活性剤、保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００２４】
一実施形態では、液体医薬製剤は、界面活性剤として0．005％〜0．5％（w／v）、好ましくは0．01％〜0．2％（w／v）の濃度でポリソルベート80、ポリソルベート20またはポロキサマー188を含む。
【００２５】
好ましい実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
10〜20mMのヒスチジン、25〜100mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニン、
3〜7％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．01％〜0．2％（w／v）の濃度のポリソルベート80、ポリソルベート20またはポロキサマー188
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００２６】
好ましい実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
10〜20mMのヒスチジン、25〜100mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニン、
3〜7％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．01％〜0．2％（w／v）の濃度のポリソルベート80、
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００２７】
さらに好ましい実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
10〜20mMのヒスチジン、25〜100mMのグリシンおよび50〜75mMのアルギニン、
3〜7％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．01％〜0．2％（w／v）の濃度のポリソルベート20またはポロキサマー188、
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは4．7〜5．3、好ましくはpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００２８】
特に好ましい実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
20mMのヒスチジン、50mMのグリシン、および50mMのアルギニン、
5％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．1％（w／v）の濃度のポリソルベート80
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００２９】
さらに特に好ましい実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
20mMのヒスチジン、50mMのグリシン、および50mMのアルギニン、
5％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．05％（w／v）の濃度のポリソルベート20
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００３０】
さらに特に好ましい実施形態は、
約100mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
20mMのヒスチジン、50mMのグリシン、および50mMのアルギニン、
5％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．05％（w／v）の濃度のポロキサマー188
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００３１】
さらに特に好ましい実施形態は、
約150mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
20mMのヒスチジン、50mMのグリシン、および50mMのアルギニン、
5％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．1％（w／v）の濃度のポリソルベート80
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００３２】
さらに特に好ましい実施形態は、
約150mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
20mMのヒスチジン、50mMのグリシン、および50mMのアルギニン、
5％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．05％（w／v）の濃度のポリソルベート20
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００３３】
さらに特に好ましい実施形態は、
約150mg／ml以上の濃度の抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110D、
20mMのヒスチジン、50mMのグリシン、および50mMのアルギニン、
5％（w／v）のトレハロース二水和物、および
0．05％（w／v）の濃度のポロキサマー188、
を含む液体医薬製剤であり、
製剤のpHは5である。製剤は、場合により保存剤、担体および安定剤からなる群から選択されるさらなる成分を含む。
【００３４】
本発明に従って使用される抗FXIa抗体は、血漿因子XIの活性化形態、FXIaに結合する能力がある。好ましくは、抗FXIa抗体はFXIaに特異的に結合する。好ましくは、抗FXIa抗体は、血小板凝集および関連する血栓症を阻害する能力がある。好ましくは、抗体に媒介される血小板凝集の阻害は、血小板依存性一次止血を損なわない。本発明の文脈において、「止血を損なうことなく」という用語は、凝固第XIa因子の阻害が、望ましくない測定可能な出血事象を引き起こさないことを意味する。
【００３５】
本明細書において、「凝固第XIa因子」、「第XIa因子」、または「FXIa」は、チモーゲン第XI因子を発現する任意の哺乳動物種由来の任意のFXIaを指す。例えば、FXIaは、ヒト、非ヒト霊長類（ヒヒなど）、マウス、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ウサギ、ならびに血流の調節、凝固、および／または血栓症に関与する凝固第XI因子を発現する任意のその他の種であり得る。
【００３６】
本明細書において、結合特異性は絶対的なものではなく、相対的な特性であるため、かかる抗体がかかる抗原と1個または複数の参照抗原とを区別することができる場合に、抗体は抗原（ここでは、FXIa）に「特異的に結合する」、「特異的である」かまたは抗原（ここでは、FXIa）を「特異的に認識する」。その最も一般的な形態において（そして定義された参照が言及されていない場合に）、「特異的結合」は、例えば、以下の方法の1つに従って決定される、目的の抗原と無関係の抗原とを区別する抗体の能力を指す。かかる方法は、限定されるものではないが、ウエスタンブロット、ELISA試験、RIA試験、ECL試験、IRMA試験およびペプチドスキャンを含む。例えば、標準的なELISAアッセイを行うことができる。スコアリングは、標準的な発色（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼによる二次抗体および過酸化水素によるテトラメチルベンジジン）によって行ってよい。特定のウェルでの反応は、例えば450nmでの光学密度によって記録される。典型的なバックグラウンド（＝負の反応）は0．1ODとなり得；典型的な正の反応は1ODとなり得る。これは、正／負の差が10倍を超える可能性があることを意味する。一般に、結合特異性の決定は、単一の参照抗原ではなく、約3〜5個の無関係な抗原、例えば粉乳、BSA、トランスフェリンなどのセットを使用することによって行われる。しかし、「特異的結合」は、抗体が標的抗原と、基準点として使用される1個または複数の密接に関連した抗原、例えば相同体を区別する能力を指す場合もある。例として、抗体は、参照抗原と比較して標的抗原に対して少なくとも1．5倍、2倍、5倍、10倍、100倍、103倍、104倍、105倍、106倍またはそれ以上の相対親和性を有する場合がある。さらに、「特異的結合」は、その標的抗原の異なる部分、例えば、FXIaの異なるドメインまたは領域を区別する抗体の能力に関連する場合がある。
【００３７】
「親和性」または「結合親和性」であるKDは、多くの場合、平衡会合定数（ka）および平衡解離定数（kd）を測定し、kdとkaの比を計算することにより決定される（KD＝kd／ka）。「免疫特異的」または「特異的結合」という用語は、好ましくは、抗体が、106M以下の親和性KD（一価の親和性）で凝固第XIa因子に結合することを意味する。「高親和性」という用語は、抗体が、107M以下の親和性KD（一価の親和性）で凝固第XIa因子に結合するKDを意味する。このような親和性は、従来の技術を使用して、例えば平衡透析によって；製造業者が概説した一般的な手順を使用して、BIAcore 2000計測器を使用することによって；放射性標識された標的抗原を使用するラジオイムノアッセイによって；または熟練した職人に公知の別の方法によって、容易に決定することができる。親和性データは、例えば、［Kaufman RJ，Sharp PA．（1982）Amplification and expression of sequences cotransfected with a  modular dihydrofolate reductase complementary dna gene．J Mol Biol．159：601〜621］に記載される方法によって分析されてよい。
【００３８】
本明細書において、「抗体」という用語には、自然から単離されたかまたは組換え手段によって作製された免疫グロブリン分子（例えば、IgG、IgE1 IgM、IgD、IgAおよびIgYをはじめとするあらゆる種類、および／または、IgGI、lgG2、lgG3、lgG4、IgAIおよびIgA2をはじめとするあらゆるクラス）が含まれ、従来から公知のすべての抗体およびその機能的断片が含まれる。「抗体」という用語は、抗体CDRインサートを天然の抗体に見出されるのと同じ活性な結合立体構造に配向させることができる他のタンパク質足場にも拡張され、その結果、これらのキメラタンパク質で観察された標的抗原の結合は、CDRが由来する天然抗体の結合活性と比較して維持される。
【００３９】
抗体／免疫グロブリンの「機能的断片」または「抗原結合抗体断片」は、抗原結合領域を保持する抗体／免疫グロブリンの断片（例えば、IgGの可変領域）として本明細書に定義される。抗体の「抗原結合領域」は、一般に、抗体の1個または複数の超可変領域、すなわち、CDR−1、−2、および／または−3領域に見出される。しかし、可変「フレームワーク」領域は、CDRの足場を提供するなど、抗原結合においても重要な役割を果たすことができる。好ましくは、「抗原結合領域」は、少なくとも、可変軽（VL）鎖のアミノ酸残基4〜103および可変重（VH）鎖の5〜109、より好ましくはVLのアミノ酸残基3〜107およびVHの4〜111を含み、特に好ましいのは、完全なVL鎖およびVH鎖である（VLのアミノ酸位置1〜109およびVHの1〜113；国際公開第97／08320号パンフレットによるナンバリング）。本発明の使用のための好ましい免疫グロブリンのクラスはIgGである。
【００４０】
本発明の「機能的断片」には、Fab、Fab1、F（ab’）2、およびFv断片；ダイアボディー；線状抗体；一本鎖抗体分子（scFv）；ならびに、抗体断片から形成される多重特異性抗体、ジスルフィド結合Fvs（sdFv）、および、無傷の免疫グロブリンから調製されるかまたは組換え手段によって調製される、VLまたはVHドメインを含む断片が含まれる。
【００４１】
抗原結合抗体断片は、1個または複数の可変領域を、単独でまたは以下のヒンジ領域、CHI、CH2、CH3およびCLドメインの全体または一部と組み合わせて含んでよい。1個または複数の可変領域と、ヒンジ領域、CHI、CH2、CH3およびCLドメインとの任意の組合せを含む抗原結合抗体断片も本発明に含まれる。
【００４２】
抗体および／または抗原結合抗体断片は、単一特異性（例えば、モノクローナル）、二重特異性、三重特異性、またはそれ以上の多重特異性であり得る。モノクローナル抗体が使用されることが好ましい。
【００４３】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指す。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る、起こり得る自然発生突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して作製されている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して作製されたさまざまな抗体を一般に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して作製されている。特異性に加えて、モノクローナル抗体は、異なる特異性および特徴をもつ他の免疫グロブリンによって汚染されていない、均一な培養によって合成されているという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。
【００４４】
抗体または抗原結合抗体断片は、例えば、ヒト、ヒト化、マウス（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリであってよい。ヒトまたはヒト化抗FXIa抗体が使用されることが好ましい。
【００４５】
本明細書において、「ヒト」抗体には、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が含まれ、ヒト免疫グロブリンライブラリー、ヒトB細胞、または1つもしくは複数のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離された抗体、ならびに合成ヒト抗体が含まれる。
【００４６】
「ヒト化抗体」または機能的ヒト化抗体断片は、本明細書において、（i）その抗体がヒト生殖系列配列に基づく非ヒト供給源（例えば、異種免疫系を有するトランスジェニックマウス）に由来するもの、または（ii）可変ドメインが非ヒト起源に由来し、定常ドメインがヒト起源に由来するキメラまたは（iii）可変ドメインのCDRが非ヒト起源に由来し、可変ドメインの1つまたは複数のフレームワークがヒト起源であり、定常ドメイン（存在する場合）がヒト起源である、CDRグラフト化されたものと定義される。
【００４７】
本発明に従って使用される、適した抗体は、例えば、国際公開第2013／167669号パンフレットに開示されている。一実施形態では、抗FXIa抗体は、国際公開第2013／167669号パンフレットに記載されるように、i）可変軽鎖ドメインのアミノ酸配列として配列番号19および可変重鎖ドメインのアミノ酸配列として配列番号20；またはii）可変軽鎖ドメインのアミノ酸配列として配列番号29および可変重鎖ドメインのアミノ酸配列として配列番号30；またはiii）可変軽鎖ドメインのアミノ酸配列として配列番号27および可変重鎖ドメインのアミノ酸配列として配列番号20、を含む。好ましい実施形態では、抗FXIa抗体は、国際公開第2013／167669号パンフレットに開示される抗体076D−M007−H04、076D−M007−H04−CDRL3−N110D、および076D−M028−H17から選択される。特に好ましい実施形態では、抗FXIa抗体は076D−M007−H04−CDRL3−N110Dであり、本明細書では可変重鎖ドメインのアミノ酸配列の配列番号1および可変軽鎖ドメインのアミノ酸配列の配列番号2で表される。
【００４８】
本明細書において使用される「医薬製剤」または「製剤」という用語は、その中に含まれる有効成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、製剤が投与される対象に対して容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない調製物を指す。
【００４９】
本明細書において、「粘度」は、流れに対する流体の抵抗であり、センチポイズ（cP）またはミリパスカル秒（mPa＊s）の単位で測定され得る。ここで、所定の剪断速度で1cP＝1mPa＊sである。粘度は、粘度計、例えば、mVroc、RheoSenseのような小型のサンプル粘度計を使用することによって測定されてよい。粘度は、当技術分野で公知の任意のその他の方法を使用して、任意のその他の単位で測定されてよく（例えば絶対粘度、動粘度（kinematic viscosity）または動粘度（dynamic viscosity））、重要なのは、本発明によって記載される賦形剤の使用によってもたらされる粘度の低下率であることを理解されたい。粘度を決定するために使用される方法にかかわらず、賦形剤製剤と対照製剤の粘度の低下率は、所定の剪断速度でほぼ同じままとなる。
【００５０】
本明細書において、「粘度を低下させる」ために有効な量の賦形剤を含む製剤（またはかかる賦形剤の「粘度低下」量もしくは濃度）とは、投与のための最終形態（溶液の場合、または粉末の場合には意図する量の希釈剤での再構成時）の製剤の粘度が、水、緩衝液、塩などの他の既知の粘度低下剤などの適切な対照製剤の粘度、および例えば本明細書に例示されるそれらの対照製剤の粘度よりも少なくとも5％低いことを意味する。
【００５１】
同様に、「粘度の低下した」製剤は、対照製剤と比較して粘度の低下を示す製剤である。
【００５２】
本明細書において使用される「緩衝液」という用語は、酸性または塩基性物質の添加後にpHがわずかに変化する緩衝溶液を指す。緩衝溶液は、弱酸とその対応する塩基の混合物、または弱塩基とその対応する酸の混合物をそれぞれ含む。例示的な製薬上許容される緩衝液としては、酢酸塩（例えば、酢酸ナトリウム）、コハク酸塩（例えばコハク酸ナトリウムなど）、リン酸塩、グルタミン酸、グルタミン酸塩、グルコン酸塩、ヒスチジン、グリシン、クエン酸塩または他の有機酸緩衝液が挙げられる。場合により、前述の酸および塩基の1つまたは複数の混合物を緩衝溶液で使用することができる。前述の酸および塩基の各々の例示的な緩衝液濃度は、例えば、緩衝液、および製剤の所望の張性（例えば等張性、高張性または低張性）に応じて、約1mM〜約200mM、約10mM〜約100mM、または約20mM〜50mMであり得る。
【００５３】
本明細書で使用される「緩衝系」という用語は、1つまたは複数の前述の酸および塩基の混合物を指す。本発明の好ましい緩衝系は、1つまたは複数のアミノ酸を含む。最も好ましくは、緩衝系は、ヒスチジン、グリシンおよびアルギニンの混合物を含み、その中で150mM未満の少量のアルギニンが粘度を十分に低下させる。好ましくは、アルギニンは、50〜75mMの濃度で、最も好ましくは50mMの濃度で含められる。
【００５４】
本発明の文脈において、「％（w／v）」は、組成物内の成分の質量濃度をパーセントで定義し、wは用いる成分の質量（g、mgなどで測定）を意味し、vは組成物の最終体積（L、mlなどで測定）を意味する。
【００５５】
「患者」という用語は、予防的または治療的処置を受けるヒトまたは動物の個体を指す。
【００５６】
本明細書における「治療」という用語は、疾患、その症状または疾患の素因を治癒する、改善する、これに影響を及ぼす、停止するまたは緩和することを目的とした、疾患を患っている、疾患の症状を示しているまたは疾患の素因がある患者への／に対する治療物質の使用もしくは投与、または患者の単離組織への／に対するもしくは細胞株への／に対する治療物質の使用もしくは投与を指す。
【００５７】
「有効量」は、本明細書において、所望の効果が少なくとも部分的に達成され得る有効成分量を記載する。したがって、「治療上有効量」は、疾患を少なくとも部分的に治癒するのに十分であるか、または疾患によって引き起こされる患者の有害効果を少なくとも部分的に排除するのに十分である有効成分量として定義される。この目的のために実際に必要とされる量は、疾患の重症度および患者の一般的な免疫状態に依存する。
【００５８】
本発明での使用に適した医薬組成物には、有効成分が、意図する目的、すなわち特定の疾患の治療を達成する有効量で含まれている組成物が含まれる。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【００５９】
抗体などの治療用タンパク質の製剤中の濃度は、医薬製剤の最終用途に依存し、当業者によって容易に決定され得る。
【００６０】
皮下投与用の治療用タンパク質は、高濃度で投与されることが多い。特に考えられる、抗体をはじめとする高濃度の治療用タンパク質は（ペグ化などの化学修飾の重量を考慮に入れずに）、少なくとも約70、80、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、175、180、185、190、195、200、250、300、350、400、450、または500mg／ml、および／または約250、300、350、400、450または500mg／ml未満である。製剤中の、抗体などの治療用タンパク質の例示的な高濃度は、約100mg／ml〜約500mg／mlの範囲であり得る。好ましくは、本発明による治療用タンパク質の濃度は、約100〜300mg／mlの範囲内、より好ましいのは135〜165mg／mlの範囲内、最も好ましいのは約150mg／mlである。さらに最も好ましい濃度は約100mg／mlである。この文脈において、「約」所定の値の濃度、例えば、所定の濃度範囲の上限または下限は、この所定の値から±10％まで逸れるすべての濃度を包含すると理解されるべきである。
【００６１】
「高分子量凝集体」（同義語：「HMW」）という用語は、少なくとも2つのタンパク質モノマーで構成される凝集体を記載する。
【００６２】
本発明はさらに、本発明による医薬製剤の1つと、好ましくはまた使用説明書とを含む製品を提供する。一実施形態では、製品が、本発明による液体製剤を含む容器を含む。使用可能な容器は、例えば、ボトル、バイアル、チューブ、カートリッジ、一室もしくは多室シリンジ、または当技術分野で公知の任意のその他の容器である。容器は、例えばガラスまたはプラスチックで構成され得る。例示的な投与装置には、針の有無にかかわらずシリンジ、輸液ポンプ、ジェット式注射器、ペン型装置、経皮注射器、または他の無針注射器が含まれる。シリンジ、ペン型装置、自動注入装置または当技術分野で公知の任意のその他の装置は、例えば金属で構成される注射針を含み得る。本発明はさらに、前述の医薬製剤を含むキットを提供する。
【００６３】
一実施形態では、容器はシリンジである。さらなる実施形態では、シリンジは予め充填されている。さらなる実施形態では、シリンジは注射装置に含まれている。さらなる実施形態では、注射装置は自動注入装置である。もう一つの実施形態では、容器はカートリッジである。さらなる実施形態では、カートリッジは、ペン型装置または当技術分野で公知の任意のその他の装置に含まれている。もう一つの実施形態では、容器はバイアルである。
【００６４】
本発明による組成物は、先行技術で利用可能な抗FXIa抗体用の製剤と比較して、高い抗体濃度で増加した安定性を示す。好ましい製剤は液体製剤として安定しているが、凍結乾燥させることもできる。したがって、本発明による液体医薬製剤は、従来の凍結乾燥方法（方法1）によるか、または例えば国際公開第2006／008006号に記載されるような噴霧凍結に基づく方法（方法2）によるか、または本明細書に記載される方法3によって得られる再構成された凍結乾燥物であってもよい。好ましくは、凍結乾燥物は、再構成時間が短縮された凍結乾燥ペレットを提供する、本明細書に記載されるような噴霧凍結に基づく方法3によって得られる。
【００６５】
従来のプロセスでは、凍結乾燥は、通常、（真空）乾燥チャンバ内に1つまたは複数のトレイまたは棚を含む標準的な凍結乾燥チャンバで実施される。バイアルに製品を充填して凍結乾燥させ、それをこれらのトレイに配置することができる。これらの乾燥機は一般に、温度制御された壁を持たず、乾燥機チャンバに設置されたバイアルに不均一な熱伝達を提供する。特に、チャンバの壁とプレート／棚の積み重ねとの間の隙間の放射伝熱およびガス伝導に起因して、プレートの中央に配置されたバイアルよりも、端部に配置されたバイアルのほうがエネルギーをより集中的に交換する。エネルギー分布のこの不均一性は、端部のバイアルと中央のバイアルとの間の凍結および乾燥速度の変化につながり、それぞれのバイアルの活性内容物の活性の変化および製品の収率の低下をもたらすことがあり得る。最終製品の均一性を確保するために、実験室規模と生産規模の両方で広範な開発および検証作業を実施する必要がある。
【００６６】
国際公開第2006／008006号パンフレットは、ペレット化されたバイオ医薬品の凍結乾燥、貯蔵、アッセイおよびバイアルなどの最終容器への充填をはじめとする、無菌製造のためのプロセスに関係している。記載されるプロセスは噴霧凍結と凍結乾燥を組み合わせ、以下のステップ：a）ペレットを形成するために、生成物の液滴を凍結し、それにより、生成物の溶液を周波数支援ノズル（frequency assisted nozzles）に通すことによって液滴が形成され、それらを低温蔵ガスの向流に通すことによって液滴からペレットが形成されるステップ；b）ペレットを凍結乾燥するステップ；c）凍結乾燥ペレットを貯蔵および均質化するステップ；d）凍結乾燥ペレットを貯蔵および均質化している間にそれらをアッセイするステップ；およびe）凍結乾燥ペレットを容器に装入するステップ、を含む。
【００６７】
本発明による液体医薬製剤は非経口投与に適している。非経口投与には、とりわけ、静脈内注射もしくは注入、動脈内注射もしくは（動脈内への）注入、筋肉内注射、髄腔内注射、皮下注射、腹腔内注射もしくは注入、骨内投与または組織内への注射が含まれる。本発明による組成物は、皮下投与に特に適している。非経口投与に適した投与形態は、液体形態の溶液、懸濁液、乳濁液、または凍結乾燥物もしくは無菌粉末としての形態の注射または注入のための調製物であり、これらは投与前に再構成される。必要に応じて、本発明による液体医薬製剤は、生物学的活性を維持する一方で、投与前に凍結乾燥させて再構成することもできる。しかし、従来の方法による、本発明による抗体製剤の凍結乾燥では、最大で2時間以上の再構成時間で凍結乾燥物がもたらされる。このような長い再構成時間は、患者にとっても医療従事者にとっても面倒で実行不可能である。したがって、従来の凍結乾燥によって得られる凍結乾燥物を構成するFXIa抗体と比較して大幅に短縮された再構成時間を示す抗FXIa抗体を含む凍結乾燥ペレットの製造のための噴霧凍結に基づく方法が開発された。本明細書に記載されるこの噴霧凍結に基づく方法（方法3）は、約150mg／mlの抗体濃度に再構成された場合に再構成時間が約10分の、ペレットを構成する凍結乾燥抗FXIa抗体をもたらす。本明細書に記載され、本出願の実施例7に適用される、抗FXIa抗体を含む凍結乾燥ペレットの再構成時間を短縮するための噴霧凍結乾燥方法（方法3）は、以下の
a）ペレットを形成するために、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴を凍結するステップ；
b）ペレットを凍結乾燥するステップ；
を含み、
この際、ステップa）において、温度制御可能な内壁面と溶液の凍結温度よりも低い内部温度を有する冷却塔の中に、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴形成を用いて液滴が形成され、ステップb）において、真空チャンバの内部に収容されている回転容器内でペレットが凍結乾燥される。
【００６８】
方法3の凍結ペレットの作成は、既知技術に従って行うことができる。しかし、重要なことに、抗体を含む液滴を液体窒素に滴下してその中でペレットを形成することは避けるべきである。
【００６９】
方法3のその後の凍結乾燥ステップを考慮すると、凍結ペレットは、好ましくは狭い粒度分布を有することが好ましい。その後、凍結ペレットは無菌および低温条件下で凍結乾燥機に搬送されることができる。次に、ペレットは、容器の回転によって乾燥チャンバの内部の保有表面（carrying surface）の至る所に分散する。昇華乾燥は、原則として、ペレットに適したあらゆる種類の凍結乾燥機で可能である。昇華蒸気の流れ、制御された壁温度、および、乾燥チャンバとコンデンサーとの間の適した断面積のためのスペースを設けている凍結乾燥機が好ましい。
【００７０】
方法3のステップa）で使用される液滴は、周波数支援ノズルを通過することによる溶液の液滴形成を用いて形成することができる。好ましくは、発振周波数は、200Hz以上5000Hz以下、より詳細には、400Hz以上4000Hz以下、または1000Hz以上2000Hz以下である。
【００７１】
周波数支援されているノズルとは独立に、ノズル開口部の直径は、100μm〜500μmの範囲内、好ましくは200μm〜400μmの範囲内、非常に好ましくは300μm〜400μmの範囲内であり得る。ノズル直径は、約200μm〜約1000μmの範囲内、好ましくは約400μm〜約900μmの範囲内、非常に好ましくは約600μm〜800μmの範囲内の液滴サイズをもたらす。
【００７２】
この文脈において、「約」所定の値のサイズ、例えば、所定のサイズ範囲の上限または下限は、この所定の値から±30％まで逸れるすべての液滴サイズを包含すると理解されるべきである。例えば、得られる液滴サイズの約400μmは、280μmから520μmの間で変化する液滴サイズを包含する。同様に、約100μm〜約500μmのサイズ範囲は、70mm〜650μmの液滴サイズを包含すると理解される。
【００７３】
液滴は、中央値の周りに特定の液滴サイズ分布を示す。これは、上記で参照した値とほぼ同じである必要がある。
【００７４】
上記の方法のステップa）で得られるペレットのペレットサイズ中央値は、約200μm以上から約1500μm以下である。好ましいのは、約500μm以上から約900μm以下のペレットサイズ中央値である。
【００７５】
図1は、上記のように、抗FXIa抗体を含む凍結乾燥ペレットの再構成時間を短縮するための噴霧凍結乾燥に基づく方法を実施するための装置を概略的に示す。この装置は、主要な構成要素として、冷却塔100および真空乾燥チャンバ200を含む。冷却塔は、内壁110および外壁120を含み、それによって内壁110と外壁120との間に空間130を規定する。この空間130は、配管の形で冷却手段140を収容する。冷却液は、図の矢印によって示されるように、冷却手段140に出入りすることができる。冷却手段140を通って流れる冷却液は、内壁110の冷却をもたらし、したがって、冷却塔100の内部の冷却をもたらす。凍結ペレット（クライオペレット）の製造では、液体は、ノズル150を介して冷却塔に噴霧される。液滴は、参照番号160によって表される。液滴は、最終的にその下向きの経路で固化（凍結）し、それは参照番号170によって表される。凍結ペレット170はシュート180を下って移動し、そこではバルブ190が真空乾燥チャンバ200への進入を可能にする。ここには示されていないが、ペレット170が閉じたバルブ190の前に集まる間、ペレット170を凍結状態に保つようにシュート180が温度制御されることも可能であり、さらに好ましい。真空乾燥チャンバ200の内部には、回転可能なドラム210が配置されていて、乾燥させる凍結ペレットを収容する。ペレットへの効率的なエネルギー伝達を実現するために、水平軸の周囲に回転が起こる。熱は、ドラムによって、またはカプセル化された赤外線ヒーターを介して導入され得る。最終結果として、参照番号220によって象徴される凍結乾燥ペレットが得られる。
【００７６】
上記の方法で使用される冷却塔の内面の温度は、−120℃以下、好ましくは−180℃以上−120℃以下である。好ましくは温度は−160℃以上−140℃以下である。
【００７７】
上記の−160℃以上−140℃以下の温度は、特に2m〜4m、より詳細には約3mの距離を落下している間に凍結する、約600μm以上約800μm以下範囲の液滴サイズに最適化されている。
【００７８】
冷却塔の内面は、内面と熱的に接触している1つまたは複数のパイプに冷却剤を通過させることによって冷却される。冷却液は、所望の温度の液体窒素または窒素蒸気であり得る。
【００７９】
図1に示される装置を使用する場合には、本明細書に記載される抗FXIa抗体を含む凍結乾燥ペレットの再構成時間を短縮するための噴霧凍結乾燥に基づく方法（方法3）は、以下の
a）ペレットを形成するために、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴を凍結するステップ；
b）ペレットを凍結乾燥するステップ；
を含み、
この際、ステップa）において、温度制御可能な内壁面（110）と溶液の凍結温度よりも低い内部温度を有する冷却塔（100）の中に、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴形成を用いて液滴が形成され、さらに、ステップb）において、真空チャンバ（200）の内部に収容されている回転容器（210）内でペレットが凍結乾燥される。
【００８０】
さらに、方法3は、ステップb）の後にステップc）およびd）：
c）凍結乾燥ペレットを貯蔵および均質化するステップ
d）凍結乾燥したペレットを容器に装入するステップ
をさらに含むことができる。
【００８１】
貯蔵および均質化するステップc）は、凍結乾燥に使用される真空チャンバ内の回転容器内で行うこともできる。ステップd）では、ユーザーの規定した量の凍結乾燥ペレットが最終容器に充填される。貯蔵容器は、分離した充填ラインに移され、無菌ドッキングステーションに入れられる。容器の内容物は、アイソレーターの内部で充填機の貯蔵所に移される。加工された抗FXIa抗体への損傷がないか、または最小限の損傷しか生じない方法3は、狭い指定された範囲内の所望の抗体量の正確な充填を可能にする。この方法はさらに、最終使用用容器への柔軟で個別化された充填を可能にする。
【００８２】
本発明の文脈において、「従来の凍結乾燥」および「慣習的に凍結乾燥した」という用語は、（真空）乾燥チャンバ内に1つまたは複数のトレイまたは棚を含む標準的な凍結乾燥チャンバで実行され、噴霧凍結のプロセスステップを含まない、バイアル内での標準的な凍結乾燥プロセスを指す。一般に、凍結乾燥される製品はバイアルに充填され、それは次に（真空）乾燥チャンバに入れられる。
【００８３】
本発明の文脈において、「従来の凍結乾燥によって得られる凍結乾燥物と比較して凍結乾燥ペレットの再構成時間を短縮する」という用語は、従来の凍結乾燥によって得られた凍結乾燥物と比較して、再構成媒体、例えば滅菌水を添加したときに本発明による方法によって得られる凍結乾燥ペレットの完全またはほぼ完全な溶解に要する時間の短縮として理解される。再構成時間は、詳細には、少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％または少なくとも95％短縮される。本発明の文脈において、「凍結乾燥ペレットの完全またはほぼ完全な再構成／溶解」という用語は、再構成媒体中の凍結乾燥ペレットの固形分の少なくとも98％、より詳細には、凍結乾燥ペレットの固形分の少なくとも98．5％、最も詳細には、凍結乾燥ペレットの固形分の少なくとも99％、少なくとも99．5％、少なくとも99．75％または少なくとも99．9％の溶解を指す。
【００８４】
方法3の動作原理には、いくつかの明確な利点がある。第1に、抗FXIa抗体を含む溶液の噴霧液滴は、国際公開第2006／008006号パンフレットに記載されるような向流の様式で極低温ガスに接触しない。冷却塔の内部空間に極低温ガスを導入する必要がないため、極低温ガスの取り扱いおよび滅菌のすべてのステップを省略することができる。この方法のすべてのステップは、無菌条件下で、個々のステップ間の無菌性を損なうことなく実行することができる。
【００８５】
第2に、この方法（方法3）は、抗FXIa抗体に重要な損傷をもたらさないため、最終製品での結合親和性の喪失を回避することが実験によって見出された。実際に、この方法（方法3）によって得られた凍結乾燥ペレットを構成する抗FXIa抗体は、従来の凍結乾燥（方法1）または国際公開第2006／008006号パンフレットによる凍結乾燥プロセス（方法2）によって得られる凍結乾燥物を構成する抗FXIa抗体と比較して、間接ELISAで評価して、FXIa抗原に対して結合親和性の増加を示した。抗FXIa抗体への損傷を回避することにより、狭い指定された範囲内の所望の量の活性な抗FXIa抗体を正確に充填することが可能になる。さらに、この方法は、従来の凍結乾燥と比較して、多様な容量および適用システムで凍結乾燥ペレットのより柔軟な充填を可能にする。
【００８６】
第3に、真空チャンバの内部の回転容器において凍結乾燥ステップを行うことにより、個々のペレットの空間位置が経時的に均等に分散される。これにより均一な乾燥条件が保証される。したがって、棚の上の凍結乾燥バイアルの場合のように、抗体活性、例えば結合親和性の空間的変動がなくなる。
【００８７】
最後に、この方法（方法3）に従って製造されたペレットを構成する抗FXIa抗体は、特に、従来の凍結乾燥（方法1）によって得られる凍結乾燥物を構成する抗FXIa抗体と比較して、また、国際公開第2006／008006号パンフレットに開示されるプロセス（方法2）によって得られたペレットとも比較して、かなり短縮された再構成時間を示すことが見出された。
【００８８】
しかし、長期間にわたって安定していない他の多くの液体抗体製剤とは対照的に、本発明による液体高濃度抗体製剤は、驚くべきことに、長期試験において高い安定性を示すため、凍結乾燥とそのすべての欠点および制限が通常不要になる。
【００８９】
本明細書において、生物活性タンパク質の「安定している」製剤は、対照製剤サンプルと比較して、2〜8℃で少なくとも6カ月間貯蔵するか、または−60℃未満で少なくとも12カ月貯蔵すると、少なくとも20％の、凝集の減少および／または生物活性の喪失の低下を示す製剤である。あるいは、それは、熱ストレス、例えば、複数の凍結／解凍サイクルまたは攪拌ストレス、例えば（300rpmで3時間）などの条件下で、凝集の減少および／または生物活性の損失の減少を示す。
【００９０】
本発明による液体医薬製剤は、有用な薬理学的特性を有し、ヒトおよび動物の疾患を予防および治療するために使用することができる。疾患およびその治療に使用することができる本発明による液体医薬製剤は、特に血栓性または血栓塞栓性疾患の群を含む。したがって、本発明による液体医薬製剤は、凝血塊の形成から生じ得る疾患または合併症の治療および／または予防に適している。
【００９１】
本発明の文脈において、「血栓性または血栓塞栓性疾患」には、動脈血管系と静脈血管系の両方で起こり、本発明による液体医薬製剤で治療することができる疾患、特に心臓の冠動脈の疾患、例えば急性冠症候群（ACS）、ST部分上昇を伴う心筋梗塞（STEMI）およびST部分上昇を伴わない心筋梗塞（非STEMI）、安定狭心症、不安定狭心症、血管形成術、ステント留置または大動脈冠動脈バイパスなどの冠動脈インターベンション後の再閉塞および再狭窄が含まれるが、特に深肢静脈および腎静脈における末梢動脈閉塞性疾患、肺塞栓症、静脈血栓塞栓症、静脈血栓症、一過性虚血発作ならびにまた血栓性脳卒中および血栓塞栓性脳卒中をもたらすさらなる血管における血栓性または血栓塞栓性疾患も含まれる。
【００９２】
凝固系の刺激は種々の原因または関連する障害によって起こり得る。外科的介入、不動、寝たきり、感染症、炎症またはがんもしくはがん治療の状況では、とりわけ、凝固系が高度に活性化されるおそれがあり、血栓性合併症、特に静脈血栓症があり得る。したがって、本発明による液体医薬製剤は、がんを患っている患者における外科的介入の状況における血栓症の予防に適している。したがって、本発明による液体医薬製剤はまた、例えば記載される刺激状況において、活性化凝固系を有する患者における血栓症の予防にも適している。
【００９３】
したがって、本発明による液体医薬製剤は、急性、断続的または持続性の心不整脈、例えば心房細動を有する患者、および心臓除細動を受けている患者、および心臓弁障害または人工心臓弁を有する患者における、心原性血栓塞栓症、例えば脳虚血、卒中および全身性血栓塞栓症および虚血の予防および治療にも適している。
【００９４】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、とりわけ敗血症に関連して起こり得るが、外科的介入、新生物障害、火傷または他の傷害にも起因し、微小血栓症を通して重度の臓器障害を引き起こし得る播種性血管内凝固（DIC）の治療および予防にも適している。
【００９５】
血栓塞栓性合併症はさらに、微小血管障害性溶血性貧血で、ならびに体外循環、例えば血液透析、ECMO（「体外式膜型人工肺」）、LVAD（「左室補助人工心臓」）および同様の方法、動静脈瘻、血管および心臓弁プロテーゼの状況で異物表面と接触する血液によって起こり得る。
【００９６】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、血管性認知症またはアルツハイマー病などの認知症障害につながり得る、脳血管内のマイクロクロット（microclot）形成またはフィブリン沈着を伴う疾患の治療および／または予防に適している。ここで、凝血塊は、閉塞を介して、およびさらなる疾患関連因子を結合することによって、障害に寄与し得る。
【００９７】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、腫瘍患者、特に大きな外科的介入または化学もしくは放射線療法を受けている患者のために、腫瘍増殖および転移形成を抑制する、ならびに血栓塞栓性合併症、例えば静脈血栓塞栓症を予防および／または治療するために使用することができる。
【００９８】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、関節リウマチ（RA）のような炎症性疾患、またはアルツハイマー病（AD）のような神経疾患の治療または予防のために使用することができる。さらに、これらの抗体は、癌および転移、血栓性微小血管症（TMA）、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、ならびに他の微小血管疾患の治療に有用であり得る。
【００９９】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、透析患者の治療および／または予防、特に血液透析におけるシャント血栓症のCimino瘻予防に使用することができる。血液透析は、天然の動静脈瘻、合成ループグラフト、大口径の中心静脈カテーテル、または人工表面からなる他のデバイスを用いて行うことができる。本発明の抗体の投与は、透析中とその直後の両方で、瘻内の血餅の形成（および肺動脈での塞栓血餅の増殖）を防止するであろう。
【０１００】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、心肺バイパス手術（例えば、ECMO：体外式膜型人工肺）後に心臓内および肺内血栓症を患っている患者の治療および／または予防にも有用である。
【０１０１】
望ましくない出血イベントのリスクを増加させない抗凝固は、この集団における静脈血栓塞栓症（VTE）および心房細動（例えば、血液透析患者の末期腎疾患）の発生率が高い透析患者において、非常に必要とされている。本発明による液体医薬製剤はまた、これらの種類の患者の治療および／または予防にも有用である。
【０１０２】
本発明による液体医薬製剤は、特発性血小板減少性紫斑病（IPT）に罹患した患者の治療および／または予防にも有用である。これらの患者は、一般集団と比較して血栓症のリスクが高くなっている。凝固因子FXIの濃度は、対照と比較してITP患者で有意に高く、aPTTはITP患者で有意に長くなっている。
【０１０３】
さらに、本発明による液体医薬製剤は肺高血圧症の予防および／または治療にも適している。
【０１０４】
本発明の文脈において、「肺高血圧症」という用語は、肺動脈高血圧症、左心障害に関連する肺高血圧症、肺障害および／または低酸素症に関連する肺高血圧症ならびに慢性血栓塞栓症による肺高血圧症（CTEPH）を含む。
【０１０５】
「肺動脈高血圧症」には、膠原腫、先天性全身肺シャント、門脈圧亢進症、HIV感染症、一定の薬物および医薬品の摂取、他の障害（甲状腺障害、グリコーゲン貯蔵障害、ゴーシェ病、遺伝性末梢血管拡張症、異常ヘモグロビン症、骨髄増殖性疾患、脾摘出術）、重大な静脈／毛細血管の寄与を有する障害、例えば肺−静脈閉塞性障害および肺−毛細血管性血管腫、および新生児の持続性肺高血圧症に関連する、特発性肺動脈高血圧症（IPAH、以前は原発性肺高血圧症とも呼ばれた）、家族性肺動脈高血圧症（FPAH）、および関連する肺動脈高血圧症（APAH）が含まれる。
【０１０６】
左心障害に関連する肺高血圧症には、罹患した左心房または心室および僧帽弁または大動脈弁の欠陥が含まれる。
【０１０７】
肺障害および／または低酸素症に関連する肺高血圧症には、慢性閉塞性肺障害、間質性肺障害、睡眠時無呼吸症候群、肺胞低換気、慢性高所症および固有の欠陥が含まれる。
【０１０８】
慢性血栓塞栓症による肺高血圧症（CTEPH）は、近位肺動脈の血栓塞栓性閉塞、遠位肺動脈の血栓塞栓性閉塞および非血栓性肺塞栓症（腫瘍、寄生虫、異物）を含む。
【０１０９】
本発明はさらに、サルコイドーシス、組織球症Xおよびリンパ管腫症に関連する肺高血圧症を治療および／または予防するための医薬品を製造するための本発明による液体医薬製剤の使用を提供する。
【０１１０】
さらに、本発明による液体医薬製剤は、感染症および／または全身性炎症反応症候群（SIRS）、敗血症性臓器障害、敗血症性臓器および多臓器不全、急性呼吸窮迫症候群（ARDS）、急性肺損傷（ALI）、敗血症性ショックおよび／または敗血症性臓器不全の状況での播種性血管内凝固の治療および／または予防にも適している。
【０１１１】
感染の過程において、種々の臓器における微小血栓症および続発性出血性合併症を伴う凝固系の一般化された活性化（播種性血管内凝固または消費性凝固障害、以下「DIC」と呼ぶ）があり得る。さらに、血管の透過性の増加ならびに血管外腔への体液およびタンパク質の拡散を伴う内皮損傷があり得る。感染が進行するにつれて、臓器不全（例えば、腎不全、肝不全、呼吸器不全、中枢神経障害および心血管不全）または多臓器不全が起こり得る。
【０１１２】
DICの場合には、損傷した内皮細胞の表面、異物の表面または架橋した血管外組織において凝固系が大量に活性化される。結果として、低酸素症およびその後の臓器障害を伴う種々の臓器の小血管における凝固がある。二次的効果は、凝固因子（例えば、第X因子、プロトロンビンおよびフィブリノーゲン）および血小板の消費であり、これは血液の凝固性を低下させ、大量の出血をもたらし得る。
【０１１３】
本発明による液体医薬製剤はまた、遺伝子突然変異が酵素の活性増加、またはチモーゲンレベルの増加をもたらす患者における、血管透過性が増加した血栓性もしくは血栓塞栓性障害および／または炎症性障害および／または血管透過性が増加した傷害の一次予防にも適しており、これらは酵素活性またはチモーゲンの関連試験／測定によって確立されている。
【０１１４】
本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防するための本発明による液体医薬製剤の使用を提供する。
【０１１５】
本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防するための医薬品を製造するための本発明による液体医薬製剤の使用を提供する。
【０１１６】
本発明はさらに、治療上有効量の本発明の化合物を使用して、障害、特に上記障害を治療および／または予防する方法を提供する。
【０１１７】
本発明はさらに、治療上有効量の本発明の化合物を使用して、障害、特に上記障害を治療および／または予防する方法に使用するための本発明による液体医薬製剤を提供する。
【０１１８】
ヒトにおけるこれらの十分に記載された疾患はまた、他の哺乳動物においても同等の病因で生じ得るので、そこでも同様に本発明の液体医薬製剤で治療され得る。
【０１１９】
本発明の文脈において、「治療」または「治療する」という用語は、慣用的な意味で使用され、疾患または健康異常に対抗する、これを低減する、減弱するまたは緩和する目的で患者に接する、患者を世話する、および患者を介護する、ならびにこの疾患によって損なわれる生活状態を改善することを意味する。
【０１２０】
そのため、本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防するための本発明による液体医薬製剤の使用を提供する。
【０１２１】
本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防するための医薬品を製造するための本発明による液体医薬製剤の使用を提供する。
【０１２２】
本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防する方法における本発明による液体医薬製剤の使用を提供する。
【０１２３】
本発明はさらに、有効量の本発明による液体医薬製剤の1種を使用して、疾患、特に上記疾患を治療および／または予防する方法を提供する。
【０１２４】
好ましい実施形態では、治療および／または予防が、本発明による液体医薬製剤の非経口投与である。皮下投与が特に好ましい。
【０１２５】
本発明による医薬製剤は、単独で、または必要に応じて、1種または複数の他の薬理学的に活性な物質と組み合わせて使用することができ、ただし、この組合せは望ましくない副作用および許容できない副作用をもたらさない。そのため、本発明はさらに、特に上記疾患を治療および／または予防するための、本発明による組成物の少なくとも1種と、1種または複数のさらなる有効成分とを含む医薬品を提供する。
【０１２６】
本発明による液体は、単一治療として投与することができるが、繰り返し連続的に投与することもでき、または診断後に長期間投与することもできる。
【０１２７】
実施例1：抗体濃度の粘度および粒子形成への影響
PCT／EP2018／050951号は、静脈内投与に特に適したpH6．0の10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、5％のトレハロース二水和物、0．05％のポリソルベート80中に25mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含む抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの低濃度製剤を記載している。
【０１２８】
皮下適用の場合、この特定の製剤で濃縮されたときに、粘度値の増加および粒子形成をもたらす組成物の最大濃度を決定することが重要である。必要な用量の臨床シナリオは、約150mg／mlの濃度目標を提案した。したがって、組成物と抗体を分離する30kDaの濾過膜を含有する遠心管（Merck Milipore、Amicon Ultra−15）と組み合わせた遠心機（Sigma、Typ 3K30）を2000Gで使用して076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの濃度を増加させた。
【０１２９】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの低濃度製剤についてPCT／EP2018／050951に記載されるように、ヒスチジン／グリシン緩衝系での濃度を増加させて076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを製剤化した。
（1）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、5％のトレハロース二水和物、0．05％のポリソルベート80、pH6．0
【０１３０】
この実施例の組成物ならびに以下の実施例の組成物を、280nmの波長を吸収するUV／VIS分光計（NanoDrop 2000、ThermoFisher Scientific）を使用して抗体濃度に関して分析した。起こり得る光散乱のために、試験は320nmでも補正された。
【０１３１】
溶液の粘度は、小型のサンプル粘度計（mVroc、RheoSense）を使用して測定した。250μLの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dサンプルを、20℃のフローチャネルを通って50μl／分〜100μl／分の流量で注入した。
【０１３２】
粒子形成は、フローサイトメトリー（MFI、ProteinSimple、2μm〜100μm）および2μm〜100μmの粒度範囲にわたる光遮蔽法（Pamas SVSS、Pamas）を使用してモニターした。
【０１３３】
【表１】
2021529800.tif 000002
【０１３４】
表1は、組成物1中の076D−M007−H04−CDRL3−N110D濃度を増加させて測定した粘度および粒子装入量をまとめたものである。粒子形成を増加させ、約30mPa＊sでの粘度の許容限界を超えずに、提案された範囲である約150mg／mlまで076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの濃度を増加させることはできなかった。したがって、PCT／EP2018／050951号に記載されるヒスチジン／グリシン緩衝系を含むFXIa抗体の低濃度製剤（製剤1）は、皮下投与に必要な076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの高濃度製剤に適していないことが分かった。
【０１３５】
実施例2：さまざまな賦形剤の影響
粘度を下げて抗体濃度を上げるために、さまざまな賦形剤の影響を試験した。この実施例は、属性の粘度および第2ビリアル係数への、さまざまな賦形剤の影響を示す。
【０１３６】
第2ビリアル係数（B22値）を、1mg／ml〜10mg／mlの範囲の組成物の抗体濃度に依存して、658nmの波長で静的光散乱（SLS）を測定することによって求めた（NanoStar、Wyatt Technologies）。静的光散乱により、分子間相互作用をモニターすることができる。分子量が濃度の増加と共に不釣り合いに増加する場合、抗体は凝集する傾向がある。製剤中の主な状態は「引力性」と呼ばれる。対照的に、分子量が不釣り合いに減少する場合、「反発」状態がその系で優勢である。凝集する傾向は限られている。
【０１３７】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dは、それぞれ50mM、75mMおよび150mMの濃度のさまざまな賦形剤と共に、10mMのL−ヒスチジンおよび130mMグリシンを含むpH6．0のヒスチジン−グリシン緩衝系（組成物2）に約120．0mg／mlで製剤化された。以下の組成物を試験した：
（2）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、pH6．0
（3）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、50mMの塩化ナトリウム、pH6．0
（4）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMの塩化ナトリウム、pH6．0
（5）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、150mMの塩化ナトリウム、pH6．0
（6）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、50mMの塩化カルシウム二水和物、pH6．0
（7）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMの塩化カルシウム二水和物、pH6．0
（8）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、150mMの塩化カルシウム二水和物、pH6．0
（9）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、50mMのL−リジン塩酸塩、pH6．0
（10）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMのL−リジン塩酸塩、pH6．0
（11）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、150mMのL−リジン塩酸塩、pH6．0
（12）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、50mMのL−アルギニン塩酸塩、pH6．0
（13）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMのL−アルギニン塩酸塩、pH6．0
（14）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、150mMのL−アルギニン塩酸塩、pH6．0
【０１３８】
【表２】
2021529800.tif 000003
【０１３９】
表2は、組成物2〜14の動的粘度および第2ビリアル係数をまとめたものである。粘度値は、39．8mPa＊s（さらなる添加剤を含まないヒスチジン−グリシン緩衝系を含む組成物2の場合）から、試験したすべての賦形剤で最大5倍低下した。一般に、粘度低下効果は、賦形剤の量の増加と共に増加した。塩化ナトリウム、リジン、塩化カルシウムおよびアルギニンは、それぞれ、150mM〜12．7mPa＊s、10．7mPa＊s、7．6mPa＊sおよび7．31mPa＊sの濃度で溶液の粘度を低下させた。しかし、最低粘度は、75mMのアルギニンを用いて達成され、得られる粘度は7．2mPa＊sであった。
【０１４０】
アルギニンは、この系の粘度を低下させるのに最も効果的な賦形剤であるために選択された。アルギニンを粘度低下剤として使用してさらなる実験を行った。しかし、粘度の低下と抗体の安定性のバランスをとるためにさらなる調査がなお必要であった。
【０１４１】
さらに、組成物（14）の動粘度値（表2）は、タンパク質間相互作用の有意な変化を示した。したがって、組成物（2）および組成物（14）がストレス条件下で例示的に試験された。
【０１４２】
アルギニンは最も効果的な粘度低下剤であり、第2ビリアル係数にもプラスの効果を示したため、出発組成物2（賦形剤なし）と比較して、異なるストレス条件下で粒子生成を誘発することにより、組成物14（150mMアルギニンを含む）を試験した。タンパク質の凝集と、目に見える粒子までのオリゴマー（HMW）の形成をもたらす可能性のある3つの異なるストレス条件を、組成物2および14に誘導した。試験したストレス条件は、シェーカー（Type HS 260C、IKA）を使用する攪拌ストレス（300rpmで3時間）、−20℃から20℃までの各6時間の3回の凍結／解凍サイクル、および2〜8℃で1週間の貯蔵であった。
【０１４３】
【表３】
2021529800.tif 000004
【０１４４】
表3に示されるように、アルギニン（組成物14）の添加は、粘度を低下させる賦形剤を含まない組成物2と比較して、3つすべてのストレス条件下で076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの粒子形成挙動に全体的にプラスの効果をもたらした。
【０１４５】
実施例3：pHの影響
異なる賦形剤に加えて、pHの変化は抗体の粘度および安定性に影響を及ぼす可能性がある。pH4．7〜7．4のpH範囲は、皮下投与に適していると見なされる。
【０１４６】
第2ビリアル係数および粒子形成を前述のように評価した。組成物の熱安定性は、抗体含有組成物中の内因性および外因性トリプトファン源の蛍光を測定することによって求めた。組成物を、示差走査蛍光測定（DSF）法（Prometheus、NanoTemper）を使用して15℃から95℃までの温度プロファイルで加熱し、330nmおよび350nmの波長で蛍光データを収集した。DSFで測定された融解温度（Tm）の上昇は、立体構造の安定性が向上したことを強く示す。
【０１４７】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを、3つの異なるpH値で10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシンおよび75mMのL−アルギニン塩酸塩中約120mg／mlで製剤化した。以下の組成物を試験した：
（15）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMのL−アルギニン塩酸塩、pH6．0
（16）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMのL−アルギニン塩酸塩、pH5．5
（17）10mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン、75mMのL−アルギニン塩酸塩、pH5．0
【０１４８】
【表４】
2021529800.tif 000005
【０１４９】
表4は、組成物15〜17の第2ビリアル係数、粒子形成ならびに熱安定性をまとめたものである。pHをpH6．0からpH5．5およびpH5．0にそれぞれ下げると、第2ビリアル係数がそれぞれ7．43E−06ml＊mol／g2から1．14E−04ml＊mol／g2に増加し、サンプルの加工に起因して誘発された粒子形成が2μm超の粒子約294個から31個に減少した。しかし、Tm値は66．38℃から59．36℃に低下した。
【０１５０】
第2ビリアル係数へのプラスの効果のために、約5．0のpH低下がさらなる実験のために好ましいと決定された。しかし、立体構造の安定性が低下したという取引が注目され、実施例5でさらに取り上げられた。
【０１５１】
実施例4：界面活性剤濃度の影響
この実施例は、2μmから100  μmの粒子範囲でMicro Flow Imaging（MFI 5200、Protein Simple）を使用して、肉眼で見ることのできない粒子形成の観点から、界面活性剤濃度の増加が組成物の安定性に及ぼす影響を示す。実施例2に記載されるように、組成物を異なるストレス条件にさらした。選択された界面活性剤はポリソルベート80であった。
【０１５２】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを、ポリソルベート80の濃度を増加させながら、pH5．0の20mMのL−ヒスチジン中約150mg／mlで製剤化した。以下の組成物を試験した：
（18）20mMのL−ヒスチジン、pH5．0、0．00％のポリソルベート80
（19）20mMのL−ヒスチジン、pH5．0、0．01％のポリソルベート80
（20）20mMのL−ヒスチジン、pH5．0、0．05％のポリソルベート80
（21）20mMのL−ヒスチジン、pH5．0、0．10％のポリソルベート80
（22）20mMのL−ヒスチジン、pH5．0、0．15％のポリソルベート80
（23）20mMのL−ヒスチジン、pH5．0、0．20％のポリソルベート80
【０１５３】
【表５】
2021529800.tif 000006
【０１５４】
表5は、組成物に攪拌ストレスを誘発している間の076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの粒子形成をまとめたものである。
【０１５５】
【表６】
2021529800.tif 000007
【０１５６】
表6は、組成物に凍結／解凍ストレスを誘発している間の076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの粒子形成をまとめたものである。
【０１５７】
界面活性剤の保護効果は、組成物（20）中の約0．05％のポリソルベート80から組成物23中の0．20％のポリソルベート80の濃度でプラトーに達した。貯蔵寿命の間の保護効果を確保し、安全で堅牢な回廊を作製するために、0．1％のポリソルベート80が特に好ましかった。さらに、表6に示されるように、凍結／解凍ストレスを誘発している間の0．1％のポリソルベート80（組成物21）の保護効果は、組成物20中の5μm超の粒子897個と比較して5μm超の粒子が637個となった。これは、ポリソルベート80の濃度が少なくとも0．1％であることを示している。
【０１５８】
表5および表6に示されるように、高濃度のポリソルベート80ほど、保護効果に有意な改善は見られなかった。
【０１５９】
実施例5：さまざまな賦形剤の組合せ
この実施例は、前の実施例を組み合わせたアプローチを示す。その目的は、前述の効果を最適化して、アルギニンの濃度範囲に関するより詳細な情報を提供する一方で、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの粘度を下げ、安定性を向上させることであった。組成物の浸透圧を生理学的レベル（240〜400mOsm／kg）に下げるには、賦形剤の全体的な濃度を下げる必要があった。
【０１６０】
次のスクリーニングの目的は、アルギニンの含有量を50mMに減らし、より低濃度で有益な効果を明らかにする一方で、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの高濃度製剤の粘度低下だけでなく粒子形成防止特性を最適化することであった。
【０１６１】
また、グリシンおよびメチオニンと組み合わせたアルギニンの相乗効果を調査した。したがって、さまざまな賦形剤を含む緩衝系およびさまざまなpH値のそれらの組合せを設定し、第2ビリアル係数、熱安定性、および粘度に関して評価した。
【０１６２】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを、約150mg／mlで以下のさまざまな組成で製剤化した。
（24）20mMのL−ヒスチジン
（25）20mMのL−ヒスチジン、50mMのL−アルギニン塩酸塩
（26）20mMのL−ヒスチジン、30mMのL−アルギニン塩酸塩
（27）20mMのL−ヒスチジン、50mMのL−アルギニン塩酸塩、10mMのL−メチオニン
（28）20mMのL−ヒスチジン、130mMのグリシン
（29）20mMのL−ヒスチジン、50mMのL−アルギニン塩酸塩、130mMのグリシン
（30）20mMのリン酸緩衝液
（31）20mMの酢酸緩衝液
すべての組成物は、5．0〜6．0のpH範囲内で0．2刻みで試験された。
【０１６３】
【表７】
2021529800.tif 000008
【０１６４】
表7は、組成物のpHに依存して約150mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含むさまざまな組成物の第2ビリアル係数をまとめたものである。実施例3で既に説明されたように、全体的なpHの低下は、第2ビリアル係数の増加をもたらした。B22値（分子間相互作用を表す）は、−2．70E−04mol＊ml／g2〜2．94E−05mol＊ml／g2であった。組成物25、28、29および31は、pH5．2以下でゼロを上回る第2ビリアル係数を有した（表7参照）。このことは、高いB22値はコロイド安定性の指標であるため好ましかった。対照的に、組成物26は30mMのアルギニンを含んでいたが有意な改善を示さなかった。この観察された効果は、わずか30mMのアルギニンの濃度は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの実現可能な高濃度製剤には不十分であるという結論に至った。
【０１６５】
【表８】
2021529800.tif 000009
【０１６６】
表8は、組成物のpHに依存して約150mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含むさまざまな組成物の熱安定性をまとめたものである。Tm値は59．7℃〜78．5℃の間であった。全体的にpHが低下すると、Tm値が低下した。アミノ酸、ヒスチジン、グリシン、アルギニンおよび／またはメチオニンをさまざまな組合せおよび濃度で使用して安定化された組成物（24〜28）は、リン酸緩衝液または酢酸緩衝液を含む組成物よりも低いTm値を有していた。
【０１６７】
驚くことに、アミノ酸を含有する組成物の中で、組成物28は、グリシンを含まない組成物と比較して、＋4℃〜＋5℃の有意に高いTm値を示し、グリシンが抗体に対して安定化効果を有するという結論に至った。
【０１６８】
第2ビリアル係数へのアルギニンのプラスの効果、ならびに076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの熱安定性へのグリシンの正の効果から、好ましい組成物にはヒスチジンに加えて両方のアミノ酸が含まれるべきであるという結論に至った。
【０１６９】
組成物32（20mMのヒスチジン、50mMのアルギニン、50mMのグリシン、5％のトレハロース二水和物、0．10％のポリソルベート80、pH5．0）中のヒスチジンに加えて、賦形剤、グリシンおよびアルギニンの組合せにより、相乗作用が確認された。組成物32の第2ビリアル係数は3．385E−05ml＊mol／g2であり、組成物25、28、および29の範囲内であった（表7に示される通り）。組成物32のTmは、ヒスチジンに加えてグリシンのみを含む組成物28に匹敵する63．3℃であった。これらのデータは、ヒスチジンに加えて、グリシンとアルギニンの組合せが、タンパク質間相互作用（第2ビリアル係数）を低下させ、同時に熱安定性（Tm）を増加させることを示している。
【０１７０】
【表９】
2021529800.tif 000010
【０１７１】
表9は、pH5．0およびpH6．0で約150mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含むさまざまな組成物の動粘度を示す。組成物25、および29の第2ビリアル係数は同等の範囲内であったが、組成物29の動粘度は、pH5．0で25．6mPa＊sの許容粘度をもたらした唯一の製剤である。
【０１７２】
凍結点浸透圧計および3点校正（50、300、2000mOsm／kg−Osmomat 030、GonoTech、ベルリン）を使用して浸透圧を測定した。組成物29は、ポリソルベート80などの界面活性剤またはトレハロース二水和物などの安定剤をさらに含まずに、約324mOsm／kgの浸透圧をもたらした。5％のトレハロース二水和物を添加すると、145mOsm／kgが加わり、組成物の浸透圧値が増加することは公知であった。したがって、5％のトレハロース二水和物と組み合わせた結果として得られた組成物29の理論浸透圧は、469mOsm／kgで高張であると予想され、240〜400mOsm／kgの許容範囲外であった。
【０１７３】
そのため、組成物29のグリシンの量を130mMから50mMに減らした（組成物32とする）。この減少により、241mOsm／kgの浸透圧が得られた。安定剤として5％のトレハロース二水和物と組み合わせると、386mOsm／kgの許容浸透圧が算術的にもたらされることになる。
【０１７４】
この算術値は、371mOsm／kgの浸透圧を示す組成物32の浸透圧の測定によって確認された。
【０１７５】
実施例6：従来の凍結乾燥による凍結乾燥
この実施例は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dおよびヒスチジン−グリシン−アルギニン緩衝系を含む液体高濃度組成物の従来の凍結乾燥への適合性を示す。トレハロースを安定剤として添加した。
【０１７６】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを、約150mg／ml以下で、
（32）20mMのL−ヒスチジン、50mMのL−アルギニン塩酸塩、50mMのグリシン、5％のトレハロース二水和物、0．10％のポリソルベート80、pH5．0
で製剤化した。
【０１７７】
適した凍結乾燥プロセスを開発するためには、一次乾燥を実行することができる温度を決定する崩壊温度を決定することが不可欠であった。崩壊温度は、凍結乾燥顕微鏡（lyo−microscope）（Lyostat 2、Biopharma）を使用して、組成物を−50℃に凍結させた後、真空（0．1mbar）にし、サンプルを1℃／分の勾配で20．0℃に加熱することによって測定した。組成物を加熱しながら、試験した系の崩壊が観察されるまで写真を撮影し、分析した。
【０１７８】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの崩壊温度は、−14．3℃であることが分かった。これは、以下の凍結乾燥サイクルを選択するために必要なパラメータである。
【０１７９】
抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含む液体組成物32を、従来の凍結乾燥方法（方法1）に従って加工した。150mg／mlの抗FXIa抗体を含有する溶液を10R I型ガラスバイアルに充填し、従来のバイアル凍結乾燥機で凍結乾燥した。合計20本のバイアルに1バイアルあたり2．25mlの溶液を充填し、半分栓をしてVirtis Genesis凍結乾燥機に装入した。溶液を−45℃に凍結させ、＋10℃で一次乾燥を行い、それに続いて二次乾燥段階を40℃で行った。完全な凍結乾燥プロセスには、約38時間を要した。凍結乾燥機の中でバイアルに栓をし、取り出した直後に密封した。
【０１８０】
組成物32の従来の凍結乾燥方法（方法1）による凍結乾燥サイクルの詳細を表12にまとめる。
【０１８１】
【表１０】
2021529800.tif 000011
【０１８２】
このように実施した従来の凍結乾燥プロセス中に経時的に測定した圧力と温度のプロファイルを図2にグラフで示す。
【０１８３】
上記の従来の凍結乾燥方法は、その後再構成することができる黄色がかったケーキまたは粉末をもたらした。
【０１８４】
凍結乾燥物の再構成には、2mlの注射用滅菌水を再構成媒体として各バイアルに注入した。次に、バイアルを約10〜20秒間穏やかに攪拌した。従来の凍結乾燥によって得られたこの凍結乾燥物の再構成は、137分の再構成時間をもたらした。
【０１８５】
再構成の後、目に見える粒子のない、透明で黄色がかった溶液が得られた。凝集も凝集の気配も検出されなかった。
【０１８６】
実施例7：さまざまな噴霧凍結乾燥方法による凍結乾燥
実施例6（方法1）に記載される従来の凍結乾燥方法によって得られた凍結乾燥物の再構成時間は2時間を超え、許容できないほど長いため、2つの異なる他の凍結乾燥方法を適用し、上記のような従来の凍結乾燥と比較した。
【０１８７】
最初に、抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含む液体組成物32を、国際公開第2006／008006号パンフレットに記載された方法（方法2）に従って加工した。150mg／mlの抗FXIa抗体を含む溶液138mlを、400  μmのノズルを通して噴霧し、470Hzの周波数で約19．5g／分の速度および220mbarの圧力オーバーレイを用いて霧化した。液滴は、ノズルの約25cm下に配置され、プロセス全体を通して攪拌された、液体窒素を満たした分離した容器内で凍結させた。噴霧の完了後、液体窒素を予冷したふるいに通して注ぐことによって凍結ペレットを取り出し、Virtis Advantage Pro凍結乾燥機の予冷した棚の上のプラスチックホイルで裏打ちされたスチールラックに置き、凍結乾燥した。一次乾燥は、0℃の棚温度で33時間にわたって行われ、続いて、二次乾燥が30℃で5時間行われた。乾燥が完了した後、乾燥ペレットを即座にガラス瓶に移し、ガラス瓶をしっかりと閉じた。その後、乾燥窒素雰囲気下で520mgのペレットを秤量して10R I型ガラスバイアルに入れた。国際公開第2006／008006号パンフレットに記載される方法に従って抗体溶液の凍結および乾燥中に経時的に測定された圧力および温度のプロファイルを図3にグラフで示す。
【０１８８】
次に、抗FXIa抗体076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含む液体組成物32を、
a）ペレットを形成するために、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴を凍結するステップ；
b）ペレットを凍結乾燥するステップ；
を含み、
ステップa）において、温度制御可能な内壁面と溶液の凍結温度よりも低い内部温度を有する冷却塔の中に、抗FXIa抗体を含む溶液の液滴形成を用いて液滴が形成され、ステップb）において、真空チャンバの内部に収容されている回転容器内でペレットが凍結乾燥される、
凍結乾燥ペレットの再構成時間を短縮するための噴霧凍結乾燥に基づく方法（本明細書に記載される方法3）に従って加工した。
【０１８９】
したがって、150mg／mlの抗FXIa抗体を含む250mlの溶液を、壁を冷却された冷却塔に噴霧することによって凍結乾燥させた。噴霧ノズルは直径400μmの開口部を1つ有していた。これは、約800μmの液滴サイズに対応する。振動周波数は1445Hz、たわみ圧力は0．4barであり、ポンプは14rpmで作動した。乾燥が完了した後、乾燥ペレットを即座にガラス瓶に移し、ガラス瓶をしっかりと閉じた。その後、乾燥窒素雰囲気下で520mgのペレットを秤量して10R I型ガラスバイアルに入れた。経時的に測定された冷却塔内の温度プロファイルを図4にグラフで示す。抗体溶液の凍結および乾燥中に経時的に測定された温度および圧力のプロファイルを図5にグラフで示す。本明細書に記載される方法3は、狭いサイズおよび重量分布ならびに高い表面積を示す均一なペレットをもたらした。この方法によって得たペレットの残留湿度は、0．268％であった。
【０１９０】
従来の凍結乾燥（方法1）によって得られた凍結乾燥物は、0．15％の残留湿度を含んでいた。
【０１９１】
3つの異なる凍結乾燥プロセスによって得られたペレットのサイズ排除クロマトグラフィー分析を表13に示す。
【０１９２】
【表１１】
2021529800.tif 000012
【０１９３】
全体として、同等の分析データは、3つの凍結乾燥方法のサイズ排除クロマトグラフィーによって得られた。
【０１９４】
サンプルに存在するタンパク質性成分全体に対するインタクトな抗体の量を決定するために、IgGの純度をキャピラリーSDS−ゲル電気泳動（CGE）によって分析した。試験サンプルおよび参照サンプルを、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）の存在下、裸のフューズドシリカキャピラリーを使用してCGEによって分離した。試験は非還元条件下で行われた。分離したサンプルを220nmの吸光度でモニターした。アッセイの目的は、主なピークのピーク面積を積分し、還元後の副生成物を分析することであった。
【０１９５】
キャピラリーゲル電気泳動（CGE）およびELISA分析の結果を表14に示す。
【０１９６】
【表１２】
2021529800.tif 000013
【０１９７】
3つの異なる凍結乾燥方法によって得られたペレットの再構成時間を以下の通り比較した。2mlの注射用滅菌水を再構成媒体として各バイアルに注入した。写真を撮った後、バイアルを約10〜20秒間穏やかに攪拌した。経時的なペレットの再構成を視覚的に観察し、写真によって文書に記録した。
【０１９８】
3つの異なる凍結乾燥方法によって得られたペレットの再構成時間は以下の通りである。
凍結乾燥方法  再構成時間  Ab濃度
方法1        137分      150mg／ml
方法2        16分      150mg／ml
方法3        11分      150mg／ml
【０１９９】
本明細書に記載される方法3に従って得られるペレットを含む凍結乾燥抗FXIa抗体の再構成は、従来の凍結乾燥（方法1）によって得られる凍結乾燥物を含む同等の抗FXIa抗体の再構成よりも著しく速かったが、国際公開第2006／008006号パンフレット（方法2）に従って得られる凍結乾燥ペレットと比較しても速かった。
【０２００】
その後、3つの異なる凍結乾燥方法によって得られたペレットを、走査型電子顕微鏡（SEM）測定にかけた。したがって、サンプルの調製を窒素雰囲気下のグローブバッグ内で行い、各サンプルを個別に調製した。サンプルをホルダーに載せ、金でスパッタした。続いて、走査型電子顕微鏡測定を行った。SEM写真を図6〜図8に示す。
【０２０１】
本明細書に記載される方法3に従って製造されたペレットは、特に均質な形態を示しており、後のプロセスステップにおける取り扱い特性を改善し得ることが分かる。
【０２０２】
実施例8：凍結乾燥高濃度製剤の長期安定性
この実施例は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの凍結乾燥高濃度製剤の2〜8℃および25℃での長期安定性を説明する。
【０２０３】
2．25mlの組成物32を滅菌6Rガラスバイアルに充填した。この液体製剤を、実施例6に記載されるように従来の凍結乾燥方法（方法1）に従って凍結乾燥させた。そのため、150mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを含むように再構成される凍結乾燥組成物32は、1mgの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dあたり0．047mgのL−ヒスチジン、0．158mgのL−アルギニン塩酸塩、0．056mgのグリシン、0．75mgのトレハロース二水和物、および0．015mgのポリソルベート80を含んでいた。
【０２０４】
水で再構成させると、凍結乾燥組成物のpHは約5．0であった。
【０２０５】
凍結乾燥組成物を、2〜8℃および25℃で12カ月間貯蔵した。特定の時点（3、6、9、12、18および24カ月）で、サンプルを滅菌水で再構成した。
【０２０６】
再構成後（最終容量2．25ml／バイアル）、液体組成物を製薬用途での有用性について分析した。物理的安定性（濃度、凝集、粒子形成、動粘度、浸透圧など）を測定する上記の分析方法に加えて、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの化学的安定性ならびに活性を分析した。
【０２０７】
モノマー含有量は、モノマーを断片（低分子量、LMW）およびオリゴマー（高分子量、HMW）から、その空間サイズに基づいて分離するサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）を用いて測定された。画分の分離は、東ソーTSK gel super SW3000をAgilent HPLC1200と組み合わせて使用して達成した。サンプルを、pH6．8の160mM PBS／200mMアルギニン緩衝液に0．2ml／分の流量で溶出した。
【０２０８】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの電荷変異体は、キャピラリー等電点電気泳動（cIEF）を使用して決定された。この方法では、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dのサンプルはその電荷によって電場（SCIEX PA800 Enhanced、Beckman Coulter）で分離され、一方、変異体はUV−vis法を用いて検出された。電荷変異体の集光ステップは、正常の極性で25kVで15分間サンプルを保持することによって達成された。化学的動員は、サンプルを30kVで30分間保持して実施した。この手順の後、データ収集を停止した。
【０２０９】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの生化学的試験は、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）を使用して結合容量として報告された。次に、結合容量を、pH5、−60℃未満で20mM L−ヒスチジン／50mM L−アルギニン塩酸塩／50mMグリシンの緩衝液、5％トレハロース二水和物および0．1％ポリソルベート80を含む参照標準と比較した。参照標準と試験サンプルの吸収値を比較した。
【０２１０】
粒子形成は、2μm〜100μmの粒度範囲にわたる光遮蔽法（HIAC、Beckman Coulter）を使用してモニターされた。実験は、10個の個別のバイアルからプールされたサンプルの3連の試験として自動化された試験手順で実施された。各測定に対して5mlのサンプルを使用した。
【０２１１】
溶液の濁度の決定は、濁度計2100N IS（HachLange、デュッセルドルフ）を使用する濁度測定を用いて行われた。3mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを測定し、Ph．Eur．（RS I−IV）に準拠した光学参照標準と比較した。
【０２１２】
【表１３】
2021529800.tif 000014
【０２１３】
表15は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの凍結乾燥高濃度組成物32の2〜8℃での安定性研究の結果を示す。24カ月間にわたって、pHなどの安定性パラメータの有意な変化または粒子状物質は観察されなかった。
【０２１４】
【表１４】
2021529800.tif 000015
【０２１５】
表16は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの凍結乾燥高濃度組成物32の安定性研究のさらなる結果を示す。24カ月間にわたって、モノマー含有量、結合容量、電荷変異体またはタンパク質濃度などの安定性パラメータの有意な変化は観察されなかった。
【０２１６】
【表１５】
2021529800.tif 000016
【０２１７】
表17は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの凍結乾燥高濃度組成物32の25℃での安定性研究の結果を示す。12カ月間にわたって、pHなどの安定性パラメータの有意な変化または粒子状物質は観察されなかった。
【０２１８】
【表１６】
2021529800.tif 000017
【０２１９】
表18は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの凍結乾燥高濃度組成物32の安定性研究のさらなる結果を示す。2〜8℃での安定性データと比較して、モノマー含有量の98から94％への減少、ならびに電荷変異体（cIEF）の74％から68％へのシフトが観察された。しかし、タンパク質濃度および結合容量などの安定性パラメータは、この時点で有意な変化を示さなかった。
【０２２０】
全体として、凍結乾燥状態の組成物32は、2〜8℃での貯蔵で少なくとも12ヶ月間安定であることが確認された。
【０２２１】
実施例9：液体高濃度製剤の長期安定性
この実施例は、アミノ酸の代わりにリン酸塩を緩衝液（34）として含む組成物と比較した、組成物32中の2つの異なる抗体濃度［150mg／ml（32）および100mg／ml（34）］の076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの液体高濃度製剤の長期安定性を説明する。
【０２２２】
076D−M007−H04−CDRL3−N110Dを、約150mg／mlで以下の組成：
（32）20mMのL−ヒスチジン、50mMのL−アルギニン塩酸塩、50mMのグリシン、5％のトレハロース二水和物、0．01％のポリソルベート80、pH5．0
またはリン酸緩衝液中、
（33）50mMのリン酸塩、5％のトレハロース二水和物、0．1％のポリソルベート80、pH5．0
で製剤化した。
さらに、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dは、組成物32と同じ緩衝系：
（34）20mMのL−ヒスチジン、50mMのL−アルギニン塩酸塩、50mMのグリシン、5％のトレハロース二水和物、0．01％のポリソルベート80、pH5．0
で約100mg／mlの抗体濃度で試験された。
【０２２３】
液体組成物は、2〜8℃で6カ月間貯蔵された。指定された時点（2、4および6カ月）で、サンプルを上記のように分析した。
【０２２４】
さらに、キャピラリー電気泳動（CGE、red．−SCIEX PA 800 Enhanced、Beckman Coulter）を使用して、還元条件下でのIgGサンプル（重鎖および軽鎖）をそのIgG純度に関して分析し、さまざまな実施形態の断片化を比較した。
【０２２５】
表19に示されるように、結合容量、モノマー含有量ならびに濁度などのすべてのパラメータは、組成物32および34において2〜8℃で6カ月間安定していた。
【０２２６】
【表１７】
2021529800.tif 000018
【０２２７】
表19は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの液体高濃度製剤32〜34の安定性研究の結果を示す。ヒスチジン／グリシン／アルギニンを含む組成物である、組成物32（150mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110D）ならびに組成物34（100mg／mlの076D−M007−H04−CDRL3−N110D）は、pH、濁度、タンパク質濃度ならびに結合容量の点で安定していた。
【０２２８】
しかし、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dは、リン酸緩衝液中の同じ貯蔵条件（組成物33）では安定していなかった。組成物33を含むリン酸緩衝液は、溶液のpHを安定化することができず、濁度値は、ほぼ参照標準IV（30NTU）まで増加した。
【０２２９】
【表１８】
2021529800.tif 000019
【０２３０】
表20は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの液体高濃度製剤32〜34の配向安定性研究のさらなる結果を示す。組成物32（150mg／ml）ならびに組成物34（100mg／ml）は、粒子状物質、電荷変異体（cIEF）の形成、還元条件下（CGE）での断片化、ならびにモノマー含有量（SEC）の点で安定していた。
【０２３１】
しかし、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dは、リン酸緩衝液中の同じ貯蔵条件（組成物34）では安定していなかった。粒子形成は、ヒスチジン−グリシン−アルギニン緩衝液を含む組成物と比較して不釣り合いに増加した。等電点電気泳動（cIEF）の結果は、6カ月後に、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの電荷変異体が、ヒスチジン／グリシン／アルギニン緩衝液組成物と比較してリン酸緩衝液中で増加することを示した。さらに、CGEを使用して分析した還元断片は、リン酸緩衝液中の抗体の断片化を示す重鎖と軽鎖の合計の減少を示した。
【０２３２】
液体製剤の長期安定性データの分析により、本発明によるヒスチジン−グリシン−アルギニン緩衝系を含む組成物32が、驚くべきことに、液体状態の076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの高濃度製剤を少なくとも6ヶ月間安定させるという結論が導き出された。本発明による高濃度製剤抗FXIa抗体は長期間にわたって液体製剤として安定しているため、本発明による製剤の凍結乾燥は可能であるが、必要ではない。
【０２３３】
凍結乾燥が必要な場合には、それは、従来の凍結乾燥によって得られるか、または国際公開第2006／008006号パンフレットに開示される方法によって得られる凍結乾燥物と比較して大幅に短い再構成時間を提供する、本明細書に記載される噴霧凍結乾燥方法によって行われるべきである。
【０２３４】
表21および22は、076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの液体高濃度組成物32の安定性研究のさらなる結果を示す。9カ月間にわたって、モノマー含有量、結合容量、電荷変異体またはタンパク質濃度などの安定性パラメータの有意な変化は観察されなかった。
【０２３５】
【表１９】
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【０２３６】
【表２０】
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【０２３７】
実施例10：高濃度製剤の凍結バルクの長期安定性
この実施例は、液体組成物（32）中の076D−M007−H04−CDRL3−N110Dの液体高濃度製剤の−60℃未満で18カ月間にわたる長期安定性を説明する。
【０２３８】
液体組成物を、−60℃未満で12カ月間貯蔵した。指定された時点（1、2、3、6、9、12および18カ月）で、サンプルを上記のように分析した。
【０２３９】
表23に示すように、pH、電荷変異体、モノマー含有量、高分子含有量、活性およびタンパク質濃度などのすべての関連パラメータは、組成物32中で−60℃未満で18カ月間安定していた。全体として、凍結状態の組成物32は、−60℃未満での貯蔵で少なくとも18ヶ月間安定していることが確認された。
【０２４０】
【表２１】
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【符号の説明】
【０２４１】
100  冷却塔
110  内壁
120  外壁
130  空間
140  冷却手段
150  ノズル
160  液滴
170  凍結ペレット
180  シュート
190  バルブ
200  真空チャンバ、真空乾燥チャンバ
210  回転容器
220  凍結乾燥ペレット
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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