(57)【要約】（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む少なくとも１つのリポソーム、および（ｂ）前記リポソーム内に封入されたトレプロスチニルを含む医薬組成物が、本明細書で提供される。トレプロスチニルのリン脂質に対する比は、０．０３５以上であり、トレプロスチニルの制御放出が提供される。呼吸器疾患を治療するための前記医薬組成物の使用も提供される。
2021523157.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外部媒体中に懸濁された１つまたは複数のリポソームを含む医薬組成物であって、
前記リポソームは、
（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む外部脂質二重層と、
（ｂ）トレプロスチニルおよび、内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供する塩を含む内部水性媒体と、
を含み、
トレプロスチニルの前記少なくとも１つの小胞形成リン脂質に対する重量比（すなわち、Ｔ／Ｐ比）は、約０．０３５以上であり、前記トレプロスチニルの約６０％未満が前記医薬組成物の投与後２時間以内に放出され、かつ、前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜約７２時間で放出される、医薬組成物。
【請求項２】
前記Ｔ／Ｐ比が約０．０４１以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記Ｔ／Ｐ比が約０．０５２以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記Ｔ／Ｐ比が約０．０５６以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記外部脂質二重層が、コレステロール、コレステロールヘキササクシネート、エルゴステロール、ラノステロール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるステロールをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ｐＨ勾配を提供するための前記塩が弱酸の塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記弱酸の塩がカルボン酸塩または重炭酸塩である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記カルボン酸塩が、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、イソ酪酸塩、吉草酸塩、イソ吉草酸塩、安息香酸塩およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記酢酸塩が、酢酸ナトリウム、酢酸カルシウムまたはそれらの組み合わせである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ｐＨ勾配を提供するための前記塩がアミノ酸である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記アミノ酸が極性アミノ酸である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記極性アミノ酸が中性極性アミノ酸である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記極性アミノ酸が塩基性極性アミノ酸である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜約４８時間で放出される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜２４時間で放出される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記内部水性媒体が実質的に沈殿を含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記小胞形成脂質が第１のリン脂質と第２のリン脂質との混合物、または第１のリン脂質と荷電脂質との混合物である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記第１のリン脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、前記第２のリン脂質が、ＰＥＧ修飾リン脂質、正に帯電した、または負に帯電したリン脂質であり、かつ前記荷電脂質が、正に帯電した、または負に帯電した脂質である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記第１のリン脂質がＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣまたはそれらの組み合わせから選択され、かつ、前記第２のリン脂質がＤＳＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＭＰＧ、ＰＥＧ−ＤＳＰＥまたはそれらの組み合わせから選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記第１のリン脂質がＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣまたはそれらの組み合わせから選択され、かつ、前記荷電脂質がステアリルアミン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、Ｎ４−コレステリル−スペルミン（ＧＬ６７）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、エチルホスホコリン（エチルＰＣ）またはそれらの組み合わせである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記医薬組成物が、界面活性剤およびイオノフォアを実質的に含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
外部媒体中に懸濁された１つまたは複数のリポソームを含む医薬組成物を投与する工程を含む、呼吸器疾患の治療方法であって、
前記リポソームは、
（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む外部脂質二重層と、
（ｂ）トレプロスチニルおよび、内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供する塩を含む内部水性媒体と、
を含み、
トレプロスチニルの前記少なくとも１つの小胞形成リン脂質に対する重量比（すなわち、Ｔ／Ｐ比）は、約０．０３５以上であり、前記トレプロスチニルの約６０％未満が、前記医薬組成物の投与後２時間以内に放出され、かつ、前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜約７２時間で放出される、方法。
【請求項２３】
前記医薬組成物が吸入により投与され、かつ前記トレプロスチニルの副作用が上気道で減少する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
吸入トレプロスチニルの副作用を上気道で低減する方法であって、それを必要とする対象に有効量の請求項１に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本特許出願は、その全体の開示が参照により本明細書に援用される、２０１８年５月７日に出願された、米国仮出願第６２／６６７，８８９号、および、２０１８年５月１４日に出願された、米国仮出願第６２／６７０，８７５号に基づく優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、リポソームにカプセル化されたトレプロスチニルの制御放出医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
リポソーム組成物は、血液循環時間の延長、薬物放出の制御、毒性の低減、および標的化された薬物送達などの薬剤薬物動態を改善するための大きな可能性を提供する。
【０００４】
制御され、または持続される薬物放出プロファイルは、治療効果を高めるのに好ましい。しかしながら、制御放出プロファイルが異なるリポソーム組成物は、特有の欠点または欠陥を有する。
【０００５】
例えば、前記リポソームの内部水性媒体における不溶性薬物沈殿物、結晶またはゲルの形成は、従来のリポソームからのカプセル化された薬物の迅速な放出またはバースト放出の問題を克服することが報告されており、それによって、前記バースト放出はしばしば副作用を引き起こす（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  （２０１２），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１６０：１１７−１３４および米国特許公開番号  ＵＳ  ２０１５／００９３４３４  Ａ１）。しかしながら、そのような不溶性の薬物沈殿物、結晶またはゲルは、適切な薬物放出または望ましい治療効果を提供せず、薬物がリポソームから完全には放出され得ず、非標的組織に薬物が蓄積され、有害な副作用を引き起こし得る。
【０００６】
潜在的な副作用を低減するためにバースト放出プロファイルを伴わないが、治療効果を維持するために持続放出プロファイルを伴うリポソーム組成物の必要性が未だ存在する。本発明は、これらおよび他の必要性に対処する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、外部媒体中に懸濁された１つまたは複数のリポソームを含む医薬組成物を提供し、前記リポソームは、（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む外部脂質二重層と、（ｂ）トレプロスチニルおよび、内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供する塩を含む内部水性媒体とを含み、ここで、トレプロスチニルの前記少なくとも１つの小胞形成リン脂質に対する重量比（すなわち、Ｔ／Ｐ比）は、約０．０３５以上であり、トレプロスチニルの約６０％未満が医薬組成物の投与後２時間以内に放出され、かつ、トレプロスチニルの８０％超が医薬組成物の投与後２時間超から約７２時間後に放出される。
【０００８】
本発明はまた、本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、呼吸器疾患の治療方法を開示する。
【０００９】
上気道における吸入トレプロスチニルの副作用を低減するための、それを必要とする対象に本明細書に記載の有効量の医薬組成物を投与する工程を含む方法も提供される。
【００１０】
本特許で使用される「発明」、「その発明」、「この発明」および「本発明」という用語は、本特許の全ての主題および以下の特許請求の範囲を広く指すことを意図している。これらの用語を含む記述は、本書に記載されている主題を制限しないこと、または以下の特許請求の範囲の意味または範囲を制限しないことを理解されるべきである。本特許の対象となる発明の実施形態は、本概要ではなく、以下の特許請求の範囲によって定義される。本概要は、本発明の様々な態様の高レベルの概要であり、以下の詳細な説明のセクションでさらに記載されるいくつかの概念を導入する。本概要は、請求される主題の、重要な、または本質的な特徴を特定することを意図しておらず、請求される主題の範囲を決定するために、単独で使用されることも意図されていない。本主題は、明細書全体、一部またはすべての図面、および各特許請求の範囲の適切な部分を参照することによって理解されるべきである。
【００１１】
本発明は、以下の添付の図面および詳細な説明とともに解釈すると、より明らかになるであろう。
【００１２】
本発明の例示的な実施形態は、以下の図を参照して以下に詳細に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１Ａ】図１Ａおよび図１Ｂは、様々なＴ／Ｐ比の遊離トレプロスチニル溶液およびトレプロスチニル−リポソーム溶液を投与されたラットの平均血漿トレプロスチニル濃度の対数および線形平均血漿トレプロスチニル濃度を示す折れ線グラフである。
【図１Ｂ】図１Ａおよび図１Ｂは、様々なＴ／Ｐ比の遊離トレプロスチニル溶液およびトレプロスチニル−リポソーム溶液を投与されたラットの平均血漿トレプロスチニル濃度の対数および線形平均血漿トレプロスチニル濃度を示す折れ線グラフである。
【図２】図２は、時間ゼロから特定の時間（ＡＵＣｔ）までの血漿濃度−時間曲線下の面積と、時間ゼロから無限大までの血漿濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣｉｎｆ）との比を示す折れ線グラフである。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｃは、トレプロスチニル−リポソーム組成物（図３Ａおよび図３Ｃ）およびメチルプレドニゾロン（ＭＰＳ）−リポソーム組成物（図３Ｂ）の内部水性媒体における沈殿の存在または非存在を示す電子顕微鏡画像である。
【図３Ｂ】図３Ａ〜図３Ｃは、トレプロスチニル−リポソーム組成物（図３Ａおよび図３Ｃ）およびメチルプレドニゾロン（ＭＰＳ）−リポソーム組成物（図３Ｂ）の内部水性媒体における沈殿の存在または非存在を示す電子顕微鏡画像である。
【図３Ｃ】図３Ａ〜図３Ｃは、トレプロスチニル−リポソーム組成物（図３Ａおよび図３Ｃ）およびメチルプレドニゾロン（ＭＰＳ）−リポソーム組成物（図３Ｂ）の内部水性媒体における沈殿の存在または非存在を示す電子顕微鏡画像である。
【詳細な説明】
【００１４】
本明細書で使用される場合、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法的対象の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例として、「ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ」は、１つの要素または複数の要素を意味する。全ての数字は「約」という用語に修飾される。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、指定される値の±１０％の範囲を指す。
【００１５】
「含む」または「含んでいる」という用語は、一般に、１つまたは複数の特徴、原料、または成分の存在を許容することを意味する、含む／含んでいる、という意味で使用される。
【００１６】
「対象」という用語は、呼吸器疾患を有する脊椎動物、または呼吸器疾患の治療を必要としているとみなされる脊椎動物を指し得る。対象としては、霊長類などの、哺乳動物などの温血動物、およびより好ましくはヒトが挙げられる。人間以外の霊長類も対象である。対象という用語としては、猫、犬などの飼育動物、家畜（例えば、牛、馬、豚、羊、山羊など）、および実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、スナネズミ、モルモットなど）が挙げられる。従って、獣医用の使用および医療用製剤が本明細書で企図される。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「カプセル化」、「装填」および「捕捉」という用語は、交換可能に使用され得て、リポソームの内部水性媒体中の生物活性剤（例えば、トレプロスチニル）の組み込みまたは会合を指す。
【００１８】
本開示は、外部媒体中に懸濁された１つまたは複数のリポソームを含む医薬組成物を提供し、前記リポソームは：（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む外部脂質二重層；および（ｂ）トレプロスチニルと、内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供するための塩（以下「ｐＨ勾配塩」）を含む内部水性媒体とを含み、ここで、トレプロスチニルの前記少なくとも１つの小胞形成リン脂質との重量比（すなわち、Ｔ／Ｐ比）は、約０．０３５以上であり、トレプロスチニルの約６０％未満が医薬組成物の投与後２時間以内に放出され、かつ、トレプロスチニルの８０％超が医薬組成物の投与後２時間超から約７２時間後に放出される。
【００１９】
例示的な実施形態では、前記リポソームは外部媒体中に懸濁されており、前記外部媒体のｐＨはトレプロスチニルのｐＫａを上回っている。他の例示的な実施形態では、前記内部水性媒体のｐＨは、前記外部媒体のｐＨより、少なくとも０．１単位または少なくとも１単位高い。さらに他の実施形態では、トレプロスチニルのカプセル化効率は、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％を超えている。
【００２０】
一実施形態では、前記トレプロスチニル対リン脂質比は、約０．０３５以上、約０．０３６以上、約０．０３７以上、約０．０３８以上、約０．０３９以上、約０．０４以上、約０．０４１以上、約０．０４２以上、約０．０４３以上、約０．０４４以上、約０．０４５以上、約０．０４６以上、約０．０４７以上、約０．０４８以上、約０．０４９以上、約０．０５以上、約０．０５１以上、約０．０５２以上、約０．０５３以上、約０．０５４以上、約０．０５５以上、約０．０５６以上、約０．０５７以上、約０．０５８以上、約０．０５９以上または約０．０６以上である。
【００２１】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、口腔、鼻咽頭、および声帯の上の喉頭などの、上気道におけるトレプロスチニルのバースト放出を減少させる（トレプロスチニルの約６０％未満が投与後２時間以内に放出される）。結果として、咳、喉の炎症、咽頭の痛み、鼻血、喀血、喘鳴などの、上気道における前記トレプロスチニルの副作用は、トレプロスチニル対リン脂質比が約０．０３５よりも低い医薬組成物のそれと比較して減少している。さらに他の例示的な実施形態では、前記医薬組成物は、トレプロスチニルの放出を、医薬組成物の投与後２時間超から少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１６時間、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間または少なくとも７２時間延長し（すなわち、トレプロスチニルの８０％超が投与後２時間超から約７２時間後に放出される）、投与頻度を減らす。それを必要とする対象に、本明細書に開示される有効量の医薬組成物を投与する工程を含む、呼吸器疾患を治療するための方法もまた、開示され、ここで、医薬組成物のトレプロスチニル対リン脂質比は、約０．０３５以上であり、トレプロスチニルの副作用は、トレプロスチニル対リン脂質比が約０．０３５未満の医薬組成物の副作用と比較して減少している。呼吸器疾患の非限定的な例としては、肺高血圧症および間質性肺疾患が挙げられる。
【００２２】
本発明はまた、それを必要とする対象に本明細書に開示される有効量の医薬組成物を投与することを含む、上気道における吸入トレプロスチニルの副作用を低減するための方法に関し、ここで、医薬組成物のトレプロスチニル対リン脂質比は、約０．０３５以上である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、吸入およびバースト放出によって投与され、トレプロスチニル対リン脂質比が約０．０３５未満の医薬組成物と比較して、トレプロスチニルの副作用が低減される。
【００２４】
Ａ．リポソーム成分
本明細書で使用される「リポソーム」という用語は、内部水性媒体を封入する１つまたは複数の脂質二重層から構成される微視的な小胞または粒子を指す。リポソームを形成するためには、少なくとも１つの「小胞形成脂質」の存在が必要であり、これは、脂質二重層を形成するか、または脂質二重層に組み込まれ得る両親媒性脂質である。任意の適切な小胞形成脂質を使用して、前記リポソームを構成する脂質二重層を形成し得る。小胞形成脂質としては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）またはホスファチジルセリン（ＰＳ）などのリン脂質、および正に帯電した脂質または負に帯電した脂質などの荷電脂質、が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
リポソームの脂質二重層としては、コレステロール、ヘキサコハク酸コレステロール、エルゴステロール、ラノステロール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つの小胞形成脂質およびステロールが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な実施形態では、前記ステロールはコレステロールである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、前記小胞形成脂質は、第１のリン脂質と第２のリン脂質の混合物である。特定の実施形態では、第１のリン脂質はホスファチジルコリン（ＰＣ）であり、これは、水素化卵ホスファチジルコリン（ＨＥＰＣ）、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアリルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、オレオイルパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジペトロセリノイルホスファチジルコリン、パルミトイルエライドイルホスファチジルコリン、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジウンデカノイルホスファチジルコリン、ジデカノイルホスファチジルコリン、ジノナノイルホスファチジルコリン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。他の実施形態では、前記第２のリン脂質は、ポリエチレングリコール修飾リン脂質であり、１，２−ジステアロリー−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）、負に帯電したリン脂質、例えばジステアリルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）またはジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）または（ＤＯＰＧ）などの、約５００から約１０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールを含む。例示的な実施形態では、第１のリン脂質：コレステロール：第２のリン脂質のモル百分率は、５０−７０：２０−４５：０．１−１０、５０−７０：２０−４５：０．５−８または５５−６５：２５−４０：１−６である。 
【００２７】
他の実施形態では、前記小胞形成脂質は、第１のリン脂質と荷電脂質との混合物である。例示的な実施形態では、小胞形成脂質は、第１のリン脂質、第２のリン脂質、および荷電脂質の混合物である。荷電脂質としては、ステアリルアミン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、Ｎ４−コレステロール−スペルミン（ＧＬ６７）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、エチルホスホコリン（エチルＰＣ）またはそれらの組み合わせが挙げられる。他の例示的な実施形態では、前記第１のリン脂質：コレステロール：荷電脂質のモル百分率は５０−７０：２０−４５：０．１−１０、５０−７０：２０−４５：０．５−８または５５−６５：２５−４０：１−６である。
【００２８】
一実施形態では、脂質二重層中のＨＳＰＣ、コレステロール、およびＤＳＰＧのモル％は５０−７０：２０−４５：０．１−１０、５０−７０：２０−４５：０．１−５または５５−６５：２５−４０：０．５−８である。他の実施形態では、脂質二重層中のＨＳＰＣ、コレステロール、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のモル％は５０−７０：２０−４５：０．１−１０、５０−７０：２０−４５：０．１−５または５５−６５：２５−４０：０．５−８である。他の実施形態では、脂質二重層中のＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のモル％は５０−７０：２０−４５：０．５−８、５０−７０：２０−４５：０．１−５または５５−６５：２５−４０：１−６である。
【００２９】
一実施形態では、前記リポソームの脂質二重層としてはまた、少なくとも１つの小胞形成脂質および界面活性剤が挙げられ、これは、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤または両性イオン性界面活性剤であり得る。非イオン性界面活性剤は、その頭部に形式的に帯電した基を有していない。カチオン性界面活性剤は、その頭部に正味の正電荷を帯びている。双性イオン界面活性剤は電気的に中性であるが、異なる原子上に形式的な正電荷と負電荷を帯びている。
【００３０】
非イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、非イオン性水溶性モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド；ポリエチレングリコールの非イオン性水溶性一脂肪酸および二脂肪酸エステル；非イオン性水溶性ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ２０（ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエート）、ＳＰＡＮ（登録商標）  ８０）；非イオン性水溶性トリブロックコポリマー（例えば、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）  ４０６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）  Ｆ−１２７）などのポリ（エチレンオキシド）／ポリ-（プロピレンオキシド）／ポリ（エチレンオキシド）トリブロックコポリマー、またはその誘導体が挙げられる。
【００３１】
カチオン性界面活性剤の非限定的な例としては、ジメチルジアルキルアンモニウムブロミドまたはドデシルトリメチルアンモニウムブロミドが挙げられる。
【００３２】
双性イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルパルミチラムモニオ）−プロパンスルホネートが挙げられる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、前記リポソームは、リポソーム膜を通過するＨ＋またはＯＨ−の輸送を促進し得る化合物である界面活性剤またはイオノフォアを実質的に含まない。
【００３４】
リポソームを調製するための小胞形成脂質を溶解するための溶媒、例えば、メタノール、エタノール、エーテル、およびそれらの組み合わせが使用され得る。任意に、前記溶媒は、後に超臨界流体によって除去され得て、有機溶媒除去工程を実行するための時間を短縮するために、好ましくは最小量で使用される。
【００３５】
本発明によれば、前記リポソームは、前記リポソームの内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供するための塩（以下、「ｐＨ勾配塩」）を含む媒体中で調製される。小胞形成脂質がｐＨ勾配塩を含む培地と接触すると、リポソーム懸濁液が形成される。
【００３６】
懸濁液中のリポソームはサイズ縮小を受ける。リポソームのサイズは、通常、その直径を指す。リポソームサイズの縮小は、押し出し、超音波処理、均質化技術または粉砕技術などの、当技術分野の当業者によく知られており実行され得る、多くの方法によって達成され得る。押し出しとしては、定義された細孔サイズを有するフィルターに、圧力下でリポソームを１回または複数回通過させることが挙げられる。前記フィルターは、通常、ポリカーボネート製であるが、リポソームと相互作用せず、十分な圧力下で押し出すのに十分な強度のある耐久性のある、任意の材料でも作製され得る。前記リポソームのサイズは、超音波処理によって縮小され得て、ここで超音波処理は、音波エネルギーを使用してリポソームを破壊または剪断し、自発的に小さなリポソームに再形成する。例えば、超音波処理は、リポソーム懸濁液を含むガラス管を、浴型ソニケーターで生成された音波震源地に浸漬することによって実行され得て、または、リポソーム懸濁液と直接接触しているチタンプローブの振動によって、音波エネルギーを生成するプローブタイプの超音波処理装置が使用され得る。本発明において、前記リポソームは、通常、約５０ｎｍ〜５００ｎｍ、例えば、約５００ｎｍ以下、約４００ｎｍ以下、約３００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、または約１００ｎｍ以下の直径を有する。
【００３７】
サイジング後、外部媒体中のｐＨ勾配塩の濃度を調整して、内部水性媒体と外部媒体の間にｐＨ勾配を提供し、これは、いくつかの方法で、例えば、ダイアフィルトレーション、透析、限外ろ過、またはタンジェンシャルフローろ過などの方法により、クエン酸緩衝液（Ｈ３Ｃ６Ｈ５Ｏ）やリン酸緩衝液（Ｈ３ＰＯ４）などのｐＨ勾配塩を欠く適切な緩衝液と、前記外部媒体を交換することにより実行され得る。
【００３８】
前記ｐＨ勾配塩は、リポソームの外部媒体と内部水性媒体との間に、より低い外側およびより高い内側のｐＨ勾配を提供する。一実施形態では、前記内部水性媒体のｐＨは、前記外部媒体のｐＨよりも少なくとも０．１単位高い。他の実施形態では、前記内部水性媒体のｐＨは、前記外部媒体のｐＨよりも少なくとも１単位高い。さらに他の実施形態では、前記内部水性媒体のｐＨは約７、８、９または１０であり、前記外部媒体のｐＨは７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、約３〜７、約３．５〜６．５、または約４〜６である。さらに他の例示的な実施形態では、前記外部媒体のｐＨは、トレプロスチニルのｐＫａを超える。
【００３９】
前記調製されたリポソームは、トレプロスチニルを装填して対象に投与する前に、相当の期間保存され得る。例えば、リポソームは、トレプロスチニルを装填する前に、相当の期間、冷蔵条件で保存され得る。あるいは、リポソームは、投与前に、脱水され、保存され、その後、再水和され、トレプロスチニルを装填され得る。リポソームは、トレプロスチニルを装填した後に脱水もされ得る。脱水は、実行可能な、当技術分野で知られている多くの方法によって実施され得る。いくつかの実施形態では、リポソームは、標準的な凍結乾燥装置、すなわち低圧条件下での脱水を使用して脱水される。また、リポソームは、例えば液体窒素を使用して、凍結され得る。糖質は、脱水中のリポソームの安定性および完全性を確実にするために、脱水の前に、リポソーム環境、例えば、リポソームを含む緩衝液に添加され得る。糖類の例としては、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
上記のように約０．０３５以上のＴ／Ｐ比を有するリポソーム懸濁液は、トレプロスチニルをすぐに内包し得る。通常、トレプロスチニルは前記リポソームの外部媒体に添加され、得られた懸濁液をインキュベートし、トレプロスチニルをリポソームの内部水性媒体に、望ましい装填濃度まで拡散させ、カプセル化効率（組成物中のトレプロスチニルの総量に対するトレプロスチニルの内部の量／カプセル化された量の割合）が達成される。
【００４１】
Ｂ．両親媒性トレプロスチニル
本明細書で使用される場合、「両親媒性トレプロスチニル」および「トレプロスチニル」という用語は、交換可能に使用され、両方が、リポソームに内包されることを目的とした生物学的に活性なトレプロスチニルを指し、かつ、不溶性の結晶、沈殿物、またはゲルを形成することなくほとんど溶解し、アルカリ性溶液中で安定である、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）およびヒドロキシル基（−ＯＨ）からなる群から選択される少なくとも１つの官能基をも含む。トレプロスチニルはまた、カルボン酸官能基に加えて１つまたは複数の官能基を含み得るが、そのような官能基の存在は、トレプロスチニルの酸性度をその非官能化相当物の酸性度から有意に変化させてはならない。
【００４２】
本開示によれば、前記両親媒性トレプロスチニルは、そのプロトン化形態またはその任意の塩形態で生物学的に活性であり得る。両親媒性トレプロスチニルの塩は、水溶性の形態である任意の薬学的に許容される対イオンを伴い得る。
【００４３】
一実施形態では、前記両親媒性トレプロスチニルはトレプロスチニルである。
【００４４】
Ｃ．トレプロスチニルとリン脂質の比率と制御放出プロファイルとの関連
本開示によれば、ｐＨ勾配塩を使用して、リポソーム内区画とリポソーム外区画との間にｐＨ勾配を提供し、前記内部水性媒体へのトレプロスチニルの装填を可能にし、リポソーム膜内に取り込まれないか、あるいは脂質二重層の外面に結合されないようにする。
【００４５】
ｐＨ勾配塩の非限定的な例としては、弱酸性塩（カルボン酸塩または重炭酸塩など）またはアミノ酸（極性アミノ酸など）が挙げられる。
【００４６】
本明細書で使用される「重炭酸塩」は、重炭酸陰イオンおよび陽イオン成分などの薬学的に許容される塩化合物を指す。一実施形態では、塩化合物のカチオン性成分は金属である。金属の非限定的な例としては、カリウム（Ｋ）、ナトリウム（Ｎａ）、カルシウム（Ｃａ）、マグネシウム（Ｍｇ）、セシウム（Ｃｓ）、およびリチウム（Ｌｉ）などのＩＡ族またはＩＩＡ族の金属、または鉄（Ｆｅ）やニッケル（Ｎｉ）などのＩＡ族またはＩＩＡ族の金属以外の金属が挙げられる。重炭酸塩の例としては、重炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カルシウム、重炭酸マグネシウム、重炭酸セシウム、重炭酸リチウム、重炭酸ニッケル、重炭酸第一鉄またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
本明細書で使用される「カルボン酸塩」としては、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、イソ酪酸塩、吉草酸塩、イソ吉草酸塩、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な一実施形態では、酢酸塩は、酢酸ナトリウム、酢酸カルシウム、またはそれらの組み合わせである。
【００４８】
【表１】
2021523157.tif 000003
【００４９】
表１は、２０個のアミノ酸の分類を示している。２０個のアミノ酸はＪｕａｎｇ  ＲＨ（２００７）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙに従って分類されている。一実施形態では、前記ｐＨ勾配塩は、中性極性アミノ酸（チロシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン）、塩基性極性アミノ酸（アルギニン、リジン、ヒスチジン）、酸性極性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）またはそれらの組み合わせ、などの、極性アミノ酸である。
【００５０】
特定の実施形態では、前記ｐＨ勾配塩はリン酸塩ではない。例示的な実施形態では、前記ｐＨ勾配塩は重炭酸塩である。他の例示的な実施形態では、ｐＨ勾配塩は酢酸塩である。
【００５１】
対イオンは、安定したｐＨ勾配を維持するためにｐＨ勾配塩を伴うように選択され、対イオンとｐＨ勾配塩との間の相互作用が一緒になって、ｐＨ勾配塩の最適な効果、すなわち、リポソームの内部水性媒体中の高濃度のトレプロスチニルをカプセル化すること、および／またはリポソームからのトレプロスチニルの放出速度を高めること、を達成する。ｐＨ勾配が達成された後、リポソーム内の過剰な対イオンが豊富な水酸化物を提供し、これらの対イオンのみが膜不透過性であることが理解されよう。中性型のトレプロスチニルは、リポソーム装填中のインキュベーション条件下で脂質二重層に浸透し、対イオンに応答して脱プロトン化し得る。脱プロトン化されたトレプロスチニルは、リポソーム二重層を容易に透過しない。特定の実施形態において、前記対イオンは、アルカリ金属のイオンであり得る。
【００５２】
特定の実施形態では、内部水性媒体は、沈殿物、結晶、またはゲルを実質的に含まない。前記内部水性媒体は、少なくとも５０００倍、８０００倍、１００００倍、１２０００倍、１５０００倍、または２００００倍の倍率の電子顕微鏡でそのような沈殿物、結晶またはゲルが視認されない場合、沈殿物、結晶またはゲルを実質的に含まないとみなされる。
【００５３】
トレプロスチニル対リン脂質比の特定の範囲を有する本発明の医薬組成物は、カプセル化されたトレプロスチニルのバースト放出を低減し、したがって、トレプロスチニルの副作用を低減する。さらに、望ましい治療効果のために十分な量のトレプロスチニルが医薬組成物から放出され、その放出プロファイルは、トレプロスチニル対リン脂質比が本開示の特定の範囲外にある医薬組成物のそれと比較して拡張されている。この特許請求されたトレプロスチニル対リン脂質比は、本明細書に記載の放出プロファイルのための界面活性剤またはイオノフォア（カルシウムイオノフォアなど）を使用せずに、トレプロスチニルの副作用を低減しながら、リポソーム組成物からの捕捉されたトレプロスチニルの放出を予想外に拡大する。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「バースト放出」という用語は、医薬組成物の投与後２時間以内の医薬組成物からの＞６０％のトレプロスチニルの、迅速なおよび／またはやや制御されない放出を指す。特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物のトレプロスチニルのバースト放出は減少し、したがって、カプセル化されたトレプロスチニルの約６２％未満、約６１％未満、約６０％未満、約５９％未満、約５８％未満、約５７％未満、約５６％未満、約５５％未満、約５４％未満、約５３％未満、約５２％未満、約５１％未満、約５０％未満、約４９％未満、約４８％未満、約４７％未満、約４６％未満、約４５％未満、約４４％未満、約４３％未満、約４２％未満、約４１％未満、約４０％未満、約３９％未満または約３８％未満は、薬物投与後約２時間以内に放出される。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「持続放出」という用語は、「制御放出」、「遅延放出」、「改変放出」、「延長放出」、「プログラム放出」、「時間放出」、「速度制御」または「徐放」と交換可能に使用され得て、かつ、医薬組成物の投与後２時間超から約７２時間の期間中の８０％を超えるトレプロスチニルの放出を指す。
【００５６】
一実施形態では、医薬組成物の徐放プロファイルは、インビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイおよび／または捕捉されたトレプロスチニルのインビボ薬物動態研究に基づく。
【００５７】
特定の実施形態では、インビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイおよび／またはインビボ薬物動態研究に基づいて、前記医薬組成物は、放出プロファイルを有し、ここで捕捉されたトレプロスチニルの約６０重量％未満、約５５重量％未満、約５０重量％未満、約４５重量％未満、約４０重量％未満または約３５重量％未満は、薬物投与時から２時間以内に放出される。
【００５８】
特定の実施形態では、インビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイおよび／またはインビボ薬物動態研究に基づいて、前記医薬組成物は、放出プロファイルを有し、ここで、捕捉されたトレプロスチニルの約９０重量％超、約８５重量％超、約８０重量％超、約７５重量％超、約７０重量％超、約６５重量％超、約６０重量％超、または約５５重量％超が、薬剤投与時から２時間超、４時間、８時間、１２時間、２４時間、４８時間、または７２時間までにリポソームから放出される。
【００５９】
Ｄ．管理
本発明の医薬組成物は、血流と直接接触していない対象の空洞に投与され得る。投与経路の例としては、吸入、気管内注射、皮下注射、関節内注射、筋肉内注射、硝子体内注射および髄腔内注射が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
特定の実施形態では、前記医薬組成物は、気管内注射を介して投与され得る。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、皮下注射を介して投与され得る。
【００６１】
本発明の医薬組成物はまた、対象の血流に直接投与され得る。
【００６２】
この開示によれば、前記医薬組成物は、１日１回〜３回、２日に１回、または３日に１回投与され得る。
【００６３】
本開示は、以下の実施例においてさらに説明される。しかしながら、以下の例は、例示のみを目的としており、実際に本開示を限定するものとして解釈されるべきではないことを理解されたい。
【実施例】
【００６４】
一般的な実験手順：
１．トレプロスチニルリポソーム組成物の調製
リポソームコロイド懸濁液は、エタノール注入技術を使用して調製された。具体的には、第１のリン脂質（すなわち、ＨＳＰＣ）、コレステロール、および第２のリン脂質（すなわち、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）をモル比３：２：０．０７５で含むすべての脂質成分を、約６０℃で２．８６ｍＬのエタノール溶液に溶解させた。次に、得られた脂質溶液を１７．１４ｍＬの重炭酸ナトリウム溶液（４００ｍＭ；ｐＨ８．５）に注入し、リポソームの水和のために６０℃で撹拌した。混合物を特定の細孔サイズ（それぞれ０．２μｍおよび／または０．１μｍ）のポリカーボネート膜を通して６〜１０回押し出し、約１００ｎｍ〜２００ｎｍの平均粒子サイズおよび＜０．２の多分散性指数（ＰｄＩ）を有するリポソームの懸濁液を得た。続いて、リポソームの懸濁液を、５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）に対してタンジェンシャルフロー濾過システムで透析し、リポソームの内部水性媒体と外部媒体との間に膜貫通ｐＨ勾配（すなわち、より高い内側およびより低い外側のｐＨ勾配）を形成した。膜貫通ｐＨ勾配を有するリポソームの懸濁液は、薬物装填プロセスの前に４℃で保存された。
【００６５】
トレプロスチニル（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ＵＳＡから購入）を５０ｍＭのクエン酸ナトリウム水溶液に溶解させ、次にリポソームの懸濁液に所定のトレプロスチニル対リン脂質の比率で添加し、４０℃で３０分間インキュベートした。得られた混合物をクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）で調整して、ｐＨ５．５およびリン脂質濃度８．５９ｍｇ／ｍＬを有するトレプロスチニルリポソーム組成物を得た。
【００６６】
一般的な分析方法：
１．トレプロスチニルリポソーム組成の定量的特性化
ａ．カプセル化された遊離トレプロスチニルの濃度：
トレプロスチニルリポソーム組成物をＰＤＭｉｎｉＴｒａｐＴＭ  Ｇ−２５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に注ぎ、トレプロスチニルを装填したリポソーム（すなわち、リポソーム内にカプセル化されたトレプロスチニル）を遊離トレプロスチニル（すなわち、リポソーム外）から分離した。
【００６７】
トレプロスチニル−リポソーム組成物は、メタノール（９０％メタノールおよび１０％リポソーム懸濁液）を使用して損傷を受け、上記の試験サンプル溶液（２０μＬ）をフォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＰＬＣシステムに注入することにより、カプセル化されたトレプロスチニルの濃度および遊離トレプロスチニル（リポソーム外）の濃度をそれぞれ定量的に分析した。移動相はアセトニトリルとリン酸緩衝液（ｐＨ２．５）（５０：５０、ｖ／ｖ）の混合物であり、移動相の流速は１．０  ｍＬ／ｍｉｎである。分離は、４．６ｍｍ  ｘ  １５ｃｍ、５μｍの寸法のＣ１８カラムを使用して、４５℃で行い、２２０ｎｍで吸光度のピークを検出した。
【００６８】
内部水性媒体中のカプセル化トレプロスチニル（Ｌ）および外部媒体中の遊離トレプロスチニル（Ｆ）などの、トレプロスチニルリポソーム組成物中のトレプロスチニルの総量の濃度は、［ＴＲＥ］で表される。
【００６９】
ｂ．カプセル化効率（ＥＥ）およびトレプロスチニル対リン脂質（Ｔ／Ｐ）比：
カプセル化効率（ＥＥ）は、トレプロスチニル［ＴＲＥ］の総量（すなわち、カプセル化されたトレプロスチニル（Ｌ）と遊離の（カプセル化されていない）外部媒体中のトレプロスチニル（F）の合計）に対するリポソームの内部水性媒体中のカプセル化されたトレプロスチニル（Ｌ）の割合として計算された。つまり、前記ＥＥは次の式を使用して計算された。
【００７０】
【数１】
2021523157.tif 000004
【００７１】
トレプロスチニルリポソーム組成物のＴ／Ｐ比は、以下の式を使用して計算された：
【００７２】
【数２】
2021523157.tif 000005
【００７３】
ｃ．平均粒子サイズと多分散性指数（ＰｄＩ）：
リポソームの平均粒子サイズは、動的光散乱によって評価された。リポソームのサイズ分布を示す値である多分散性指数（ＰｄＩ）は、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤｅｌｓａＴＭ  Ｎａｎｏ  Ｃ粒子アナライザーを使用して、平均粒子サイズと同じ評価手法を使用して決定された。
【００７４】
実施例１．トレプロスチニル対リン脂質（Ｔ ／ Ｐ）比が異なる重炭酸塩を使用したトレプロスチニルリポソーム組成物のインビトロ放出（ＩＶＲ）プロファイルおよびインビボ薬物動態（ＰＫ）プロファイル
実験手順：
Ａ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出（ＩＶＲ）アッセイ
カプセル化されたトレプロスチニルの放出に対するトレプロスチニル対リン脂質比の影響を研究するために、表２に示される特定のトレプロスチニル対リン脂質比を有するＨＳＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００で処方されたトレプロスチニルリポソーム組成物は、前のセクションに記載された、一般的な実験手順の「１．トレプロスチニルリポソーム組成物の調製」と題された、手順に従い調製された。リポソームの平均粒子サイズは１００〜２００ｎｍであり、ＰｄＩは０．２０未満であった。
【００７５】
カプセル化されたトレプロスチニルおよび遊離トレプロスチニルの濃度などの、トレプロスチニルリポソーム組成物の定量的特性評価、カプセル化効率、トレプロスチニル対リン脂質比、平均粒子サイズ、およびＰｄＩは、前のセクションに記載され、一般分析法の「１．トレプロスチニルリポソーム組成の定量的特性化」と題された、手順に従い実行された。
【００７６】
さまざまなＩＶＲアッセイを使用して、ＩＶＲプロファイルを評価し得る。実際のＩＶＲアッセイは、請求されたリポソーム組成物中のトレプロスチニルによって、当業者に知られているか、または明らかになるであろう。前記トレプロスチニルのＩＶＲプロファイルは、Ｍ．Ｒ．Ｃ．  Ｍａｒｑｕｅｓら  （２０１１），  Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  １８：１５−２８に従い、ＩＶＲアッセイによって評価された。簡潔に言うと、０．５ｍＬの放出媒体をＭ．Ｒ．Ｃ．  Ｍａｒｑｕｅｓ  ら  （２０１１）に従って調製し、２０ｋＤａのセルロースエステル膜透析チューブ（カタログ番号８８４０５、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に添加し、次に、セルロースエステル膜透析チューブを、１４ｍＬの放出媒体を含む１５ｍＬスクリューキャップコニカルチューブに入れた。放出媒体の非限定的な例としては、シミュレートされた肺液（ＳＬＦ）が挙げられる。
【００７７】
適切な量のトレプロスチニルリポソーム組成物をコニカルチューブに加えて、５μｇ／ｍＬのトレプロスチニルの最終濃度を得た後、３７℃および１００ｒｐｍで透析した。所定の時点（すなわち、透析後０、２、４、８、１２、２４、４８および７２時間）において、前のセクションで説明した手順に従ってＨＰＬＣを使用して、リポソームから透析チューブに放出されたトレプロスチニルの濃度を測定するために、透析チューブ内の混合物の約０．５ｍＬを取り出した。
【００７８】
ＳＬＦから放出されるカプセル化されたトレプロスチニルの割合は、式１を使用して計算され、
【００７９】
【数３】
2021523157.tif 000006
【００８０】
ここで、
・ＣＲｅｌｅａｓｅ  ａｔ  ｔ（μｇ／ｍＬ）：特定の時間（ｔ、秒）でリポソーム組成物から放出されたトレプロスチニルの濃度
・ＣＥｎｃａｐ  ａｔ  ｔ０（μｇ／ｍＬ）：リポソーム組成のカプセル化されたトレプロスチニルの初期（ｔ０）濃度
・ＣＮｏｎ−ｅｎｃａｐ  ａｔ  ｔ０（μｇ／ｍＬ）：リポソーム組成のカプセル化されていないトレプロスチニルの初期（ｔ０）濃度
・ＣＮｏｎ−ｅｎｃａｐ  ａｔ  ｔ（μｇ／ｍＬ）：特定の時間（ｔ、秒）でのリポソーム組成のカプセル化されていないトレプロスチニルの濃度
・（ＣＮｏｎ−ｅｎｃａｐ  ａｔ  ｔ）ｄｉｆｆｕｓｅ  ａｔ  ｔ：特定の時間（ｔ、秒）に透析膜を通って拡散するリポソーム組成物のカプセル化されていないトレプロスチニルの測定された濃度
・（ＣＮｏｎ−ｅｎｃａｐ  ａｔ  ｔ０）ｄｉｆｆｕｓｅ  ａｔ  ｔ：特定の時間（ｔ、秒）に透析膜を通って拡散するリポソーム組成物のカプセル化されていないトレプロスチニルの推定初期（ｔ０）濃度
・（ＣＥｎｃａｐ  ａｔ  ｔ０）ｄｉｆｆｕｓｅ  ａｔ  ｔ：特定の時間（ｔ、秒）に透析膜を通って拡散するカプセル化されたトレプロスチニルの推定初期（ｔ０）濃度。
【００８１】
ここで、以下のように、（ＣＮｏｎ−ｅｎｃａｐ  ａｔ  ｔ０）ｄｉｆｆｕｓｅ  ａｔ  ｔは、式１−（１）および１−（２）を使用して計算され、かつ（ＣＥｎｃａｐ  ａｔ  ｔ０）ｄｉｆｆｕｓｅ  ａｔ  ｔは、式１−（３）および１−（４）を使用して計算された：
【００８２】
【数４】
2021523157.tif 000007
【００８３】
ここで、
Ｃｒｅｌｅａｓｅ  ｍｅｄｉｕｍ（μｇ／ｍＬ）：放出媒体中のトレプロスチニルの初期濃度
ＥＥ（％）：リポソームへのトレプロスチニルのカプセル化効率。
【００８４】
透析膜を通って拡散するトレプロスチニルの拡散係数（Ｄ）は、主に放出媒体に溶解している遊離型のトレプロスチニルによって評価された。トレプロスチニルの拡散がフィックの法則（式１）に従うと仮定すると、透析膜を横切る拡散トレプロスチニルの濃度は、特定の期間内に指数関数的に増加し、式２を使用して計算され得る。
【００８５】
【数５】
2021523157.tif 000008
【００８６】
ここで、
Ｃｔ（μｇ／ｍＬ）：特定の時間（ｔ、秒）に透析膜を通過して拡散するトレプロスチニルの濃度
Ｃｍａｘ（μｇ／ｍＬ）：平衡状態で透析膜全体に拡散するトレプロスチニルの濃度
Ｃ０（μｇ／ｍＬ）：透析膜中のトレプロスチニルの初期（ｔ０）濃度（５μｇ／ｍＬ）。
【００８７】
結果
異なるＴ／Ｐ比のトレプロスチニルリポソーム組成物の物理化学的特性とＩＶＲプロファイルを表２に示す。
【００８８】
【表２】
2021523157.tif 000009
【００８９】
表２は、重炭酸ナトリウム塩で９０％を超えるＥＥが達成されたことを示している。０．０３５より高いＴ／Ｐ比を有する表２のトレプロスチニルリポソーム組成物（すなわち、ＬＢ００４００、ＬＢ００５００、ＬＢ０１０００、ＬＢ０１５００およびＬＢ０２０００）は、以下の特性の制御されたインビトロ放出を示す：Ｔ／Ｐ比が０．０３５未満の組成物（すなわちＬＢ００３００）と比較する場合、トレプロスチニルの６０％未満が投与時から２時間以内に放出され、かつ、トレプロスチニルの８０％超が投与時（すなわち８時間、１２時間または２４時間）から、２時間超２４時間以内に放出される。
【００９０】
Ｂ．トレプロスチニルリポソーム組成物のｉｎｖｉｖｏ薬物動態（ＰＫ）研究
実験手順：
このｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＫ研究では、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）をイソフルランで麻酔し、上顎切歯に引っ掛けたリボンを用いて、４５°から５０°の平面で背側の位置にあるアーチ型のプラットフォームに背中をしっかりと配置した。マイクロスプレーエアロゾルチップ（Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ、ＰｅｎｎＣｅｎｔｕｒｙ、フィラデルフィア、米国）を各ラットの気管分岐部に挿入し、マイクロスプレーエアロゾル装置に取り付けられた高圧注射器を使用して、試験サンプル（すなわち、表２の組成物または遊離トレプロスチニル溶液）を各ラットに所定の用量で気管内投与した。遊離トレプロスチニル溶液は、６ｍｇのトレプロスチニルを５０ｍＭのクエン酸ナトリウム水溶液に溶解し、０．９％生理食塩水で１０ｍＬにすることによって調製した。
【００９１】
所定の時点（すなわち、投与後０、０．２５、０．５、０．７５、１、２、３、４、５、６、８、１０および１２時間）で、各ラットの血液サンプルを含ヘパリンチューブに収集し、湿った氷上で貯蔵される。次に、血液サンプルを約２５００×ｇで１５分間、採取後１時間以内に４±２℃で遠心分離し、血漿を血球から分離した。各ラットから得られた血漿サンプル約０．１ｍＬを新しい貯蔵管に加え、−７０±２℃に維持された温度で冷凍庫に貯蔵した。
【００９２】
トレプロスチニル濃度を定量化するために、各ラットの血漿サンプル５０μＬを９６ウェルプレートのウェルに移し、続いて硝酸アセトン１５０μＬを各ウェルに添加した。得られた混合物を１分間ボルテックスして、血漿タンパク質のトレプロスチニルへの結合を破壊し、続いて３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。得られた上清（１５０μＬ）を等量のＨ２Ｏと混合し、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）で分析して、ラットの血漿サンプル中のトレプロスチニル濃度を測定した。
【００９３】
様々な試験サンプルを所与の用量で投与したラットの血漿サンプル中の平均トレプロスチニル濃度の対数対最大１２時間の投与時間を、それぞれ図１Ａおよび図１Ｂに示すようにプロットした。
【００９４】
ある期間にわたるトレプロスチニルの総曝露量を決定するため、および各試験サンプルで使用されるトレプロスチニルの異なる投与量を正規化するために、時間ゼロから特定の時間（ＡＵＣｔ）までの血漿濃度−時間曲線下の面積と、時間ゼロから無限大までの血漿濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣｉｎｆ）との比を図２に示す。
【００９５】
結果：
図１Ａおよび図１Ｂに示されるように、血漿トレプロスチニル濃度は、遊離トレプロスチニル投与の最初の５分以内にピークに達した。トレプロスチニルリポソーム組成物（すなわち、ＬＢ００３００、ＬＢ０１０００、ＬＢ０１５００、およびＬＢ０２０００）の投与後に有意なピークは認められなかった。図２に示すように、トレプロスチニルの６０％以上（ＡＵＣｔ／ＡＵＣｉｎｆ）が２時間以内に遊離トレプロスチニルで放出され、ＬＢ００３００（Ｔ／Ｐ＜０．０３５）の投与はバースト放出を示している。
【００９６】
前記ＬＢ０１０００、ＬＢ０１５００、およびＬＢ０２０００トレスプロスチニル-リポソーム組成物はすべて０．０３５を超えるＴ／Ｐ比を持ち、持続放出プロファイル（＞８０％ＡＵＣｔ／ＡＵＣｉｎｆは、投与後２時間超から約７２時間後に発生した）を、バースト放出なしで（すなわち、投与後２時間以内においてＡＵＣｔ／ＡＵＣｉｎｆ＜６０％）示した。
【００９７】
この研究は、Ｔ／Ｐ比が０．０３５以上のトレプロスチニル−リポソーム組成物が以下の特徴を有することを示している：
（ａ）トレプロスチニルのバースト放出がなく、副作用の軽減；
（ｂ）安定した治療域を達成するための、変動がほとんどなく一定のままであるトレプロスチニルの血漿レベル；および
（ｃ）長期間における持続放出。
【００９８】
実施例２．異なる小胞形成リン脂質を有するトレプロスチニルリポソーム組成物のＩＶＲプロファイル
実験手順：
トレプロスチニルの放出プロファイルに対するリポソームリン脂質の効果を調査するために、インビトロ研究を実施した。この研究におけるトレプロスチニルリポソーム組成物は、「１．トレプロスチニルリポソーム組成物の調製」と題された、前のセクションに記載された手順に従って調製され、「１．トレプロスチニルリポソーム組成物の定量的特性化」と題された、前のセクションに記載された手順に従って分析された。トレプロスチニルリポソーム組成物のＩＶＲプロファイルは、実験手順の「Ａ．インビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイ」と題された、実施例１に記載されている手順に従って決定された。
【００９９】
結果：
さまざまなトレプロスチニルリポソーム組成物の物理化学的特性とＩＶＲプロファイルを表３に示す。
【０１００】
【表３】
2021523157.tif 000010
【０１０１】
表３に示すように、ＤＳＰＧリン脂質（すなわち、ＬＢ１１０００およびＬＢ１１５００）またはＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００リン脂質（すなわち、ＬＢ０１０００およびＬＢ０１５００）を含むトレプロスチニルリポソーム組成物は、同様のＩＶＲプロファイル（トレプロスチニルの６０％未満が投与時から２時間以内に放出され、トレプロスチニルの８０％超が投与時から２時間超から７２時間以内（すなわち１２時間または２４時間）に放出される）を示す。
【０１０２】
実施例３．異なる塩溶液を含むトレプロスチニルリポソーム組成物のＩＶＲプロファイル
実験手順：
トレプロスチニルリポソーム組成物のＩＶＲプロファイルに対する異なる塩の影響を研究するために、インビトロ研究を実施した。この研究のリポソーム組成物を調製し、ＩＶＲプロファイルを実施例１に概説した手順に従って分析した。
【０１０３】
この例では、３つの弱酸性塩溶液を使用してトレプロスチニルを装填した：
重炭酸ナトリウム溶液（４００ｍＭ；ｐＨ８．５）、酢酸ナトリウム溶液（４００ｍＭ；ｐＨ８．５）およびリン酸ナトリウム溶液（４００ｍＭ；ｐＨ８．５）。
【０１０４】
結果：
さまざまな塩を使用したトレプロスチニルリポソーム組成物の物理化学的特性とＩＶＲプロファイルを表４に示す。
【０１０５】
【表４】
2021523157.tif 000011
【０１０６】
表４は、バースト放出がないこと（トレプロスチニルの６０％未満が投与時から２時間以内に放出される）および拡張ＩＶＲプロファイル（トレプロスチニルの８０％超が投与時から２時間超から７２時間以内（すなわち１２時間）に放出される）は、重炭酸塩と酢酸塩で達成されたが、リン酸塩では達成されなかったことを示している。特定の理論に縛られることなく、重炭酸イオンと酢酸イオンは脂質二重層を透過して、トレプロスチニルを装填するための内部水性媒体とリポソームの外部との間で適切な膜貫通ｐＨ勾配を達成できるが、リン酸イオンは十分な膜貫通ｐＨ勾配を生成できず（リン酸塩は脂質二重層全体に不浸透性であるため）、したがって、Ｔ／Ｐ比は０．０３５未満であり、トレプロスチニルの装填が制限されたと考えられる。上記の結果は、重炭酸塩および酢酸塩（リン酸塩ではない）によって生成されたリポソームの膜貫通ｐＨ勾配が、０．０３５以上のＴ／Ｐ比を達成し、バースト放出を低減し、ＩＶＲプロファイルを制御または拡張するために重要であることを示唆している。
【０１０７】
実施例４．吸入トレプロスチニルリポソーム組成物の安全性評価
実験手順：
この研究では、８匹のオスのＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）を、対照グループ（ｎ＝２）、比較グループ（ｎ＝３）、実験グループ（ｎ＝３）の３つのグループに分けた。実験群ラットおよび比較群ラットを拘束管に入れ、それぞれ実施例２からの噴霧トレプロスチニルリポソーム組成物ＬＢ１１５００および遊離トレプロスチニル溶液を、２０ポートの鼻のみのＢｕｘｃｏ吸入暴露システム（ＤＳＩ、米国）を介して、６μｇ／ｋｇ／日の投与量で１０日間与えた。メッシュ振動ネブライザーによって生成された気流によって運ばれるエアロゾルが、ラットが入れられているシステムタワーに１０Ｌ／分の速度で提供された。対照グループのラットは薬物への曝露を受けなかった。
【０１０８】
研究中、吸入された噴霧トレプロスチニルリポソーム組成物または遊離トレプロスチニル溶液による上気道刺激の発生を記録するために、単一の観察者によって各ラットに対してケージ側の臨床観察が行われた。上気道の炎症の症状としては、緊張、くしゃみ、紅斑性ピンネ、振戦、腰の曲がった姿勢、立毛、頻呼吸、呼吸困難、過呼吸、鼻血などが挙げられる。
【０１０９】
結果：
表５は、ラットの各グループで記録された上気道刺激の発生率を示している。
【０１１０】
【表５】
2021523157.tif 000012
【０１１１】
この研究は、本発明のトレプロスチニルリポソーム組成物の例示的な実施形態が、遊離トレプロスチニル溶液のそれよりも上気道刺激の誘発が少ないことを実証している。
【０１１２】
実施例５．異なる薬物および異なる弱酸性塩を含むトレプロスチニルリポソーム組成物のＩＶＲプロファイルおよび沈殿状態
３：２：０．０７５のモル比でＨＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥを含むリポソーム組成物を、実施例１に概説された手順に従って調製した。リポソームの平均粒子サイズは１００〜１４０ｎｍで、ＰｄＩは０．２０未満であった。トレプロスチニル（ＴＲＥ）、ＭＲＥ−２６９、またはイロプロストを、酢酸カルシウム（Ｃａ（ＡＣ）２）、酢酸ナトリウム（ＮａＡＣ）、または重炭酸ナトリウム（ＮａＢｉｃ）を使用してリポソーム組成物に装填した。メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム（ＭＰＳ）リポソーム組成物をＢａｒｅｎｈｏｌｚら  （２０１２），  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  １６０：１１７−１３４内の手順に従って調製した。
【０１１３】
リポソーム組成物のＩＶＲプロファイルは、実施例１に記載された手順を使用して評価された。リポソームの内部水性媒体中の沈殿物の存在は、ＣＣＤ  Ｇａｔａｎ  ８３２（４ｋ×２ｋ）カメラを備えた２００ｋｅＶで動作するＪＥＯＬ  ＪＥＭ−２１００電子顕微鏡を使用して低温透過型電子顕微鏡（Ｃｒｙｏ−ＴＥＭ）によって評価された。ガラス質氷グリッドは、グリッドを−１７０℃未満の温度に維持するクライオステージを使用して電子顕微鏡に移された。前記Ｃｒｙｏ−ＴＥＭ画像は、低線量モデルで取得され、２００００ｘ（０．３０ｎｍ／ピクセル）の倍率を提供した。
【０１１４】
結果：
表６は、物理化学的特性、ＩＶＲプロファイル、およびさまざまなリポソーム組成物の沈殿の有無を示している。
【０１１５】
【表６】
2021523157.tif 000013
【０１１６】
表６は、薬物装填に使用される弱酸性塩の種類に関係なく、トレプロスチニル−、ＭＲＥ−２６９−、イロプロスト−、およびＭＰＳ−リポソーム組成のＥＥが８０％を超えることを示している。しかしながら、トレプロスチニル−リポソーム組成物のみがバースト放出の減少（投与後２時間以内にトレプロスチニルの６０％未満が放出される）およびＩＶＲプロファイルの延長（トレプロスチニルの８０％超が投与後２時間超７２時間以内（すなわち１２時間）放出される）を示す。図３Ｂは、ＭＰＳ−リポソーム組成物の内部水性媒体中の沈殿物の存在を示し、一方で、トレプロスチニル−リポソーム組成物の内部水性媒体は、実質的に沈殿がない（図３Ａおよび図３Ｃ）。特定の理論に縛られることなく、ＭＰＳ−リポソーム組成物からの薬物放出は、内部水性媒体中のＭＰＳとカルシウムとの間の沈殿がより長期間存在するために延長または拡張されると考えられている。したがって、治療効果を達成するために、ＭＰＳを沈殿物から完全に放出し得なかった。
【０１１７】
実施例６．異なるＴ／Ｐ比のトレプロスチニルリポソーム組成物のＩＶＲプロファイル
３：２：０．０７５のモル比（８．５９ｍｇ ／ ｍＬのリン脂質）でＨＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥを含むリポソーム組成物を、実施例１に概説された手順に従って調製した。リポソームの平均粒子サイズは１００〜１４０ｎｍまたは１８０〜２００ｎｍ（＊＊でマーク）であり、ＰｄＩは０．２０未満であった。トレプロスチニル（ＴＲＥ）は、酢酸カルシウム（Ｃａ（ＡＣ）２）、酢酸ナトリウム（ＮａＡＣ）、重炭酸ナトリウム（ＮａＢｉｃ）、またはリジンを使用してリポソーム組成物に装填された。
【０１１８】
トレプロスチニル-リポソーム組成物のＩＶＲプロファイルは、実施例１に記載の手順を使用して評価した。
【０１１９】
結果：
表７は、さまざまなＴ／Ｐ比のトレプロスチニルリポソーム組成物の物理化学的特性とＩＶＲプロファイルを示している。
【０１２０】
【表７】
2021523157.tif 000014
【０１２１】
表７はトレプロスチニル-リポソーム組成物（酢酸ナトリウム、酢酸カルシウム、重炭酸ナトリウム、またはリジンを使用してｐＨ勾配を達成する）は、Ｔ／Ｐ比が０．０３５以上の場合、バースト放出の減少（トレプロスチニルの６０％未満が投与時から２時間以内に放出される）とＩＶＲプロファイルの拡張（トレプロスチニルの８０％超が投与後２時間超７２時間以内（すなわち８、１２、２４時間）に放出される）を示すことを示唆している。
【０１２２】
上記の説明では、説明の目的で、実施形態の完全な理解を提供するために、多数の特定の詳細が示されている。しかしながら、当業者には、１つまたは複数の他の実施形態が、これらの特定の詳細のいくつかなしで実施され得ることが明らかであろう。本明細書全体を通して、「一つの実施形態」、「一実施形態」、序数などを示す実施形態への言及は、特定の特徴、構造、または特徴が、以下の本開示の実施に含まれ得ることを意味することも理解されたい。本記載において、本開示を合理化し、様々な発明的側面の理解を助ける目的で、様々な特徴が、単一の実施形態、図、またはその説明において一緒にグループ化されることがあること、および本開示の実施において、適切な場合、一実施形態からの１つまたは複数の特徴または特定の詳細は、他の実施形態からの１つまたは複数の特徴または特定の詳細と一緒に実施され得ること、をさらに理解されたい。
【図１Ａ】
2021523157.tif 000015
【図１Ｂ】
2021523157.tif 000016
【図２】
2021523157.tif 000017
【図３Ａ】
2021523157.tif 000018
【図３Ｂ】
2021523157.tif 000019
【図３Ｃ】
2021523157.tif 000020
【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年3月8日(2021.3.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外部媒体中に懸濁された１つまたは複数のリポソームを含む医薬組成物であって、
前記リポソームは、
（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む外部脂質二重層と、
（ｂ）トレプロスチニルおよび、内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供する塩を含む内部水性媒体と、
を含み、
トレプロスチニルの前記少なくとも１つの小胞形成リン脂質に対する重量比（すなわち、Ｔ／Ｐ比）は、約０．０３５以上であり、前記トレプロスチニルの約６０％未満が前記医薬組成物の投与後２時間以内に放出され、かつ、前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜約７２時間で放出される、医薬組成物。
【請求項２】
前記Ｔ／Ｐ比が約０．０４１以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記Ｔ／Ｐ比が約０．０５２以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記Ｔ／Ｐ比が約０．０５６以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記外部脂質二重層が、コレステロール、コレステロールヘキササクシネート、エルゴステロール、ラノステロール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるステロールをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ｐＨ勾配を提供するための前記塩が弱酸の塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記弱酸の塩がカルボン酸塩または重炭酸塩である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記カルボン酸塩が、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、イソ酪酸塩、吉草酸塩、イソ吉草酸塩、安息香酸塩およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記酢酸塩が、酢酸ナトリウム、酢酸カルシウムまたはそれらの組み合わせである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ｐＨ勾配を提供するための前記塩がアミノ酸である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記アミノ酸が極性アミノ酸である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記極性アミノ酸が中性極性アミノ酸である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記極性アミノ酸が塩基性極性アミノ酸である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜約４８時間で放出される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記トレプロスチニルの８０％超が、前記医薬組成物の投与後２時間超〜２４時間で放出される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記内部水性媒体が実質的に沈殿を含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記小胞形成脂質が第１のリン脂質と第２のリン脂質との混合物、または第１のリン脂質と荷電脂質との混合物である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記第１のリン脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、前記第２のリン脂質が、ＰＥＧ修飾リン脂質、正に帯電した、または負に帯電したリン脂質であり、かつ前記荷電脂質が、正に帯電した、または負に帯電した脂質である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記第一のリン脂質がＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣまたはそれらの組み合わせから選択され、かつ、前記第二のリン脂質がＤＳＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＭＰＧ、ＰＥＧ−ＤＳＰＥまたはそれらの組み合わせから選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記第一のリン脂質がＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣまたはそれらの組み合わせから選択され、かつ、前記荷電脂質がステアリルアミン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、Ｎ４−コレステリル−スペルミン（ＧＬ６７）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、エチルホスホコリン（エチルＰＣ）またはそれらの組み合わせである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記医薬組成物が、界面活性剤およびイオノフォアを実質的に含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
１つまたは複数のリポソームを含む組成物の、呼吸器疾患の治療のための医薬の製造における使用であって、
前記リポソームは、
（ａ）少なくとも１つの小胞形成リン脂質を含む外部脂質二重層と、
（ｂ）トレプロスチニルおよび、内部水性媒体間にｐＨ勾配を提供する塩を含む内部水性媒体と、
を含み、
トレプロスチニルの前記少なくとも１つの小胞形成リン脂質に対する重量比（すなわち、Ｔ／Ｐ比）は、約０．０３５以上であり、前記トレプロスチニルの約６０％未満が、前記組成物の投与後２時間以内に放出され、かつ、前記トレプロスチニルの８０％超が、前記組成物の投与後２時間超〜約７２時間で放出される、使用。
【請求項２３】
前記医薬が吸入により投与され、かつ前記トレプロスチニルの副作用が上気道で減少する、請求項２２に記載の使用。
【国際調査報告】
2021523157.tif 000021