(57)【要約】  本願は、Ｎ−［２−（メチルチオ）エチル］−２−［（３，３，３−トリフルオロプロピル）チオ］アデノシンを原料として、２つのステップの反応によりカングレロール四ナトリウムを含む反応溶液が得られた後、Ｃ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより一回分離精製して、純粋のカングレロール四ナトリウムを得る、カングレロール四ナトリウムの調製方法に関する。本願は、合成ルートが短く、反応条件が穏やかであり、反応が十分にでき、操作が簡単であり、産物の収率も純度も高く、環境に優しく、大規模な調製に適している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カングレロール四ナトリウムの調製方法であって、
【化１】
2021505601.tif 000014
有機溶媒の中で、化合物Ｃを、オキシ塩化リンと反応させ、化合物Ｂを含む反応液が得られるステップ（１）、
前記ステップ（１）で得られた前記化合物Ｂを含む反応液を、酸結合剤の存在下で、クロドロン酸またはその単塩と反応させた後、重炭酸ナトリウムと反応させて、カングレロール四ナトリウムを含む反応液が得られるステップ（２）、及び、
前記ステップ（２）で得られた前記カングレロール四ナトリウムを含む反応液から、カングレロール四ナトリウムを得るステップ（３）を含み、
ここで、前記ステップ（３）の中、好ましくは、前記ステップ（２）で得られた前記カングレロール四ナトリウムを含む反応液を、カラムクロマトグラフィーにより分離精製し、溶離剤で溶離して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を回収し、凍結乾燥して、カングレロール四ナトリウムが得られ；
より好ましくは、前記カラムクロマトグラフィーは、Ｃ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーであり；
最も好ましくは、前記ステップ（２）で得られた前記カングレロール四ナトリウムを含む反応溶液を、カラムクロマトグラフィーにより一回だけで分離精製し、溶離剤で溶離して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウム塩の溶離液が得られ、凍結乾燥することにより、カングレロール四ナトリウム塩を得る、調製方法。
【請求項２】
前記ステップ（１）において、前記有機溶媒は、アセトニトリル、リン酸トリエチル又はリン酸トリメチルからなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせであることを特徴とする、請求項１に記載の調製方法。
【請求項３】
前記ステップ（１）において、前記化合物Ｃと前記オキシ塩化リンとのモル比が１：１〜１：３であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の調製方法。
【請求項４】
前記ステップ（１）において、前記化合物Ｃを、塩基存在下でオキシ塩化リンと反応させ；好ましくは、前記塩基は１，８−ビス−ジメチルアミノナフタレン、トリエチルアミン、トリ−ｎ−プロピルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンからなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせであり；より好ましくは、前記化合物Ｃと前記塩基とのモル比は１：０．１〜１：２であることを特徴とする、請求項１〜３の何れかに記載の調製方法。
【請求項５】
前記ステップ（１）における反応温度が−３０〜２０℃であり、反応時間が１〜２４時間であり；好ましくは、前記ステップ（１）における反応温度が−１０〜１０℃であり、反応時間が３〜１０時間であることを特徴とする、請求項１〜４の何れかに記載の調製方法。
【請求項６】
前記ステップ（２）において、前記酸結合剤はトリエチルアミン、トリ−ｎ−プロピルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン又はＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンからなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせであり、好ましくは、前記化合物Ｃと前記酸結合剤とのモル比は１：２〜１：８であることを特徴とする、請求項１〜５の何れかに記載の調製方法。
【請求項７】
前記ステップ（２）において、前記化合物Ｃと前記クロドロン酸又はその単塩とのモル比は１：１．１〜１：３．５であり；好ましくは、前記化合物Ｃと前記クロドロン酸又はその単塩とのモル比は１：１．４〜１：２であることを特徴とする、請求項１〜６の何れかに記載の調製方法。
【請求項８】
前記クロドロン酸単塩は、クロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩、クロドロン酸一ナトリウム塩、クロドロン酸一カリウム塩からなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせであることを特徴とする、請求項１〜７の何れかに記載の調製方法。
【請求項９】
前記ステップ（２）において、前記化合物Ｃと前記重炭酸ナトリウムとのモル比は１：１０〜１：３０であり；好ましくは、前記化合物Ｃと前記重炭酸ナトリウムとのモル比は１：１５〜１：２０であることを特徴とする、請求項１〜８の何れかに記載の調製方法。
【請求項１０】
前記ステップ（２）において、前記ステップ（１）で得られた前記化合物Ｂを含む反応液を、前記クロドロン酸又はその単塩と反応させる際の反応温度が−１０〜３０℃であり、反応時間が１〜５時間であることを特徴とする、請求項１〜９の何れかに記載の調製方法。
【請求項１１】
前記ステップ（２）において、重炭酸ナトリウムと反応させる際の反応温度が１０〜４０℃であり、反応時間が１０〜４０時間であることを特徴とする、請求項１〜１０の何れかに記載の調製方法。
【請求項１２】
前記ステップ（３）において、前記Ｃ１８シリカゲルフィラーの粒径は、２０〜１５０ミクロンの範囲であり；好ましくは、Ｃ１８シリカゲルフィラーの粒径は４０〜１００ミクロンの範囲であることを特徴とする、請求項１〜１１の何れかに記載の調製方法。
【請求項１３】
前記ステップ（３）において、前記溶離剤は、メタノールの体積濃度が０．１％−１０％のメタノール水溶液、アセトニトリルの体積濃度が０．１％−１０％のアセトニトリル水溶液又は水から選ばれ、好ましくは、前記溶離剤は水であることを特徴とする、請求項１〜１２の何れかに記載の調製方法。
【請求項１４】
前記Ｃ１８シリカゲルフィラーと前記化合物Ｃとの質量比は３５：１〜１３０：１であり；好ましくは、前記Ｃ１８シリカゲルフィラーと前記化合物Ｃとの質量比は６０：１〜９０：１であることを特徴とする、請求項１〜１３の何れかに記載の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１７年１２月１２日に中国知的財産権局に出願された、「カングレロール四ナトリウムの調製方法」と題された、第２０１７１１３１８１７４．２号の中国特許出願の優先権を主張するが、その全内容は引用により、本願に組み込まれる。
【０００２】
本願は医薬品化学合成技術分野に属する。具体的には、カングレロール四ナトリウムの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
カングレロール四ナトリウム（ｃａｎｇｒｅｌｏｒ  ｔｅｔｒａｓｏｄｉｕｍ）は、Ｐ２Ｙ１２受容体阻害剤であり、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社によって製造され、Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ社が研究開発の許可を獲得した。経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）の患者の血栓性心血管疾患の件を減らす為に、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、２０１５年６月２２日に、商品名Ｋｅｎｇｒｅａｌであるカングレロール四ナトリウムの点滴静注剤の販売を承認した。カングレロールは、クロピドグレルやプラスグレルなどの抗血小板薬と異なり、非チエノピリジン系アデノシン三リン酸類似体であり、Ｐ２Ｙ１２血小板受容体に直接作用して、血小板凝集を迅速に阻害することができ、そして、即効性があり、可逆的であり、代謝が早く、出血のリスクが少ないという利点がある。
【０００４】
カングレロール四ナトリウムは、化学名がＮ−［２−（メチルチオ）エチル］−２−［（３，３，３−トリフルオロプロピル）チオ］−５’−アデニル酸の、ジクロロメチレンジホスフェートを含む一無水物の、四ナトリウム塩であり、その構造式は、
【化１】
2021505601.tif 000002
である。
【０００５】
文献Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９、１２、２１３−２２０は、カングレロール四ナトリウムの調製方法が報告されており、合成経路は、
【化２】
2021505601.tif 000003
である。
【０００６】
具体的に、当該合成経路は、化合物１がオキシ塩化リンと反応してなる反応処理液を、カラムクロマトグラフィーのカラムＤｏｗｅｘ  ５０ＷＸ８（Ｈ＋型）を通過して、アンモニア水で溶離し、溶離液を凍結乾燥して化合物２を得るステップ；化合物２が水を含むので、ピリジンと共沸することで水を除去し、そしてＤＭＦ中でＣＤＩと反応して化合物３を得るステップ；次に、化合物３とクロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩とを反応させて粗生成物を得るステップ；粗生成物を、デキストランゲルＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘにより精製し、重炭酸トリエチルアンモニウムまたは重炭酸アンモニウム溶液で溶離し、溶離液を凍結乾燥して濃縮したところ、検出を行い、主に生成物を含む溶離液を集めて凍結乾燥し、カングレロールアンモニウム塩を得るステップ；カングレロールアンモニウム塩は、塩を転換し、分離、洗浄、凍結乾燥により、カングレロール四ナトリウムを得るステップ；を含む。その調製方法については、長いルートと複雑なプロセスを持ち、複数の精製と凍結乾燥が必要であり、デキストランゲルによる精製効果が良好ではなく、化合物１からカングレロールアンモニウム塩までの収率はわずか４％であり、そして、大量の有機溶剤の使用が環境問題を起こす。
【０００７】
特許文献ＣＮ１６１３８６４Ａは、未反応の原料および生成物を効果的に分離できない問題を解決するために、ヌクレオチド三リン酸三ナトリウム塩（すなわち、カングレロール三ナトリウム塩）の精製および調製方法が開示されており、反応式は、
【化３】
2021505601.tif 000004
である。
【０００８】
主なステップは、ヌクレオチド一リン酸アンモニウム塩を原料とし、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，１２，２１３−２２０の合成法を参照して、カングレロールを含む反応処理液を得て、陰イオン交換樹脂を使用して粗分離を行い、重炭酸アンモニウム水溶液で溶離し、溶離液を凍結乾燥して、少量の純粋のヌクレオチド三リン酸アンモニウム塩（即ち、カングレロールアンモニウム塩）および大量の不純物を得るステップ；不純物には、１４−１８％の、未反応の原料であるヌクレオチド一リン酸アンモニウム塩を含み、大きな孔径強酸性陽イオン交換樹脂により不純物を分離・精製し、流出物と重炭酸アンモニウムとを反応させて、ヌクレオチド三リン酸アンモニウム塩を含む溶離液を得た後、その溶離液を凍結乾燥し、樹脂に残った原料を回収するステップ；純粋のヌクレオチド三リン酸アンモニウム塩を合わせ、重炭酸ナトリウム水溶液で置換し、ヌクレオチド三リン酸三ナトリウム塩（すなわち、カングレロール三ナトリウム塩）を得て凍結乾燥を行うステップ；を含む。この調製方法は、カングレロールアンモニウム塩の収率が５０％〜５８％に向上させたが、例えば、反応が不完全である為、反応溶液に未反応の原料が大量含まれること；中間体として潮解しやすいカングレロールアンモニウム塩を形成する必要があること；プロセスは複雑であり、精製および凍結乾燥の回数が増やし、時間を無駄にし、廃棄物の問題も厳しく、大規模な調製には有利ではないこと等の大量の問題がある。
【０００９】
特許文献ＵＳ９２９５６８７Ｂ１は、カングレロールの不純物が報告されており、その構造式は下記の通り。
不純物Ａ：
【化４】
2021505601.tif 000005
不純物Ｂ：
【化５】
2021505601.tif 000006
不純物Ｃ：
【化６】
2021505601.tif 000007
不純物Ｄ：
【化７】
2021505601.tif 000008
不純物Ｅ：
【化８】
2021505601.tif 000009
【００１０】
原薬のＩＣＨガイドラインでは、原薬の中で未知の単一の不純物が０．１％未満であることを要求する。本願の発明者らは、従来の文献の調製方法に従って得られたカングレロールナトリウムは、不純物の含有量がいずれも比較的高く、例えば、不純物Ａの含有量は２％を超えており、原薬の品質要件を満たすことができないことを見出した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
既存の技術の不備に対して、本願の目的は、新規なカングレロール四ナトリウムの調製方法を提供することであり、合成ルートとプロセスを好適化することで操作を簡略化させ、生成物の収率と純度を向上させ、大規模な調製の要求に満足させる。
【００１２】
本願の目的によれば、本願の技術案は、
【化９】
2021505601.tif 000010
有機溶媒の中で、化合物Ｃをオキシ塩化リンと反応させ、化合物Ｂを含む反応液が得られるステップ（１）、
酸結合剤（ｄｅａｃｉｄ  ｒｅａｇｅｎｔ）の存在下で、ステップ（１）で得られた化合物Ｂを含む反応液を、クロドロン酸またはその単塩と反応した後、重炭酸ナトリウムと反応してカングレロール四ナトリウムを含む反応液を得るステップ（２）、及び、
ステップ（２）で得られたカングレロール四ナトリウムを含む反応液から、カングレロール四ナトリウムを得るステップ（３）を含み、
ステップ（３）の中、好ましくは、ステップ（２）で得られたカングレロール四ナトリウムを含む反応液を、カラムクロマトグラフィーにより分離精製し、溶離剤で溶離して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を回収し、凍結乾燥してカングレロール四ナトリウムが得られ、より好ましくは、前記カラムクロマトグラフィーはＣ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーであり、最も好ましくは、ステップ（２）で得られたカングレロール四ナトリウムを含有する反応溶液を、カラムクロマトグラフィーにより一回だけで分離および精製し、溶離剤で溶離して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウム塩の溶離液が得られ、凍結乾燥することにより、カングレロール四ナトリウム塩を得る、カングレロール四ナトリウムの調製方法である。
【００１３】
本願において、出発原料としての化合物Ｃの化学名はＮ−［２−（メチルチオ）エチル］−２−［（３，３，３−トリフルオロプロピル）チオ］アデノシンであり、ＣＡＳ番号は１６３７０６−５８−９である。化合物Ｃは、市販品を使用してもよく、例えば、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９、１２、２１３−２２０などの文献に記載された調製方法に従って得ることもできる。
【００１４】
好ましくは、ステップ（１）における前記有機溶媒は、アセトニトリル、リン酸トリエチル及びリン酸トリメチルからなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせである。
【００１５】
好ましくは、ステップ（１）における化合物Ｃとオキシ塩化リンとのモル比は、１：１〜１：３である。
【００１６】
ステップ（１）において、化合物Ｃとオキシ塩化リンとの反応は、塩基の非存在下で行っても良く、塩基の存在下で行っても良いが、塩基の存在下で行うことが好適である。好ましくは、前記塩基は、１，８−ビス−ジメチルアミノナフタレン、トリエチルアミン、トリ−ｎ−プロピルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンから選ばれ；より好ましくは、化合物Ｃと塩基とのモル比は１：０．１〜１：２である。
【００１７】
好ましくは、ステップ（１）において、反応温度が−３０〜２０℃であり、反応時間が１〜２４時間である。より好ましくは、ステップ（１）において、反応温度が−１０〜１０℃であり、反応時間が３〜１０時間である。
【００１８】
本願によれば、ステップ（１）が完成した後で、得られた化合物Ｂを含む反応液は処理せず、そのまま次のステップに移送できることで、プロセスが大幅に簡素化される。
【００１９】
本願の実施形態の一つによれば、ステップ（２）における酸結合剤の定義は、当業者にとって自明なことである。好ましくは、ステップ（２）における酸結合剤は、トリエチルアミン、トリ−ｎ−プロピルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンからなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせであり；より好ましくは、化合物Ｃと酸結合剤とのモル比は１：２〜１：８である。
【００２０】
本願によれば、ステップ（２）において、化合物Ｃとクロドロン酸又はその単塩とのモル比は１：１．１〜１：３．５であり；好ましくは、化合物Ｃとクロドロン酸又はその単塩とのモル比は１：１．４〜１：２である。クロドロン酸単塩は、クロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩、クロドロン酸一ナトリウム塩、クロドロン酸一カリウム塩などからなる群より選ばれる一種又はそれらの任意の組み合わせである。最も好ましくは、クロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩である。
【００２１】
本願によれば、ステップ（２）において、クロドロン酸又はその単塩は、固体状で分割で添加してもよく、ステップ（１）における前記有機溶媒を使用して溶液にして分割で添加しても良い。
【００２２】
本願によれば、ステップ（２）において、化合物Ｃと重炭酸ナトリウムとのモル比は１：１０〜１：３０であり；好ましくは、化合物Ｃと重炭酸ナトリウムとのモル比は１：１５〜１：２０である。ステップ（２）において、重炭酸ナトリウムは、固体状で分割で添加しても良く、重炭酸ナトリウム水溶液にして添加しても良い。重炭酸ナトリウム水溶液の質量濃度は、通常、１．０％〜飽和溶液濃度であり、５％〜９％であることが好ましい。
【００２３】
本願の実施形態の一つによれば、ステップ（２）において、ステップ（１）で得られた化合物Ｂを含む反応液を、クロドロン酸又はその単塩と反応させる際の反応温度が−１０〜３０℃であり、反応時間が１〜５時間である。ステップ（２）において、重炭酸ナトリウムと反応させる際の反応温度が１０〜４０℃であり、反応時間が１０〜４０時間である。
【００２４】
本願が提供された調製方法によれば、ステップ（２）が終了した後、カングレロール四ナトリウムを含む反応液を得る。発明者らは、ＨＰＬＣにより、この反応液が主に８０−８５ｍｏｌ％のカングレロール四ナトリウムを含有し、不純物Ａであるジナトリウム塩（構造式は下記通り）の含有量が僅か約２−５ｍｏｌ％であることを見出した。
【化１０】
2021505601.tif 000011
不純物Ａであるジナトリウム塩
【００２５】
ステップ（３）において、前記「Ｃ１８シリカゲル」とは、オクタデシル基結合シリカゲル（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌｙｌ  ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ，略称はＯＤＳである）を意味し、Ｃ１８シリカゲルは、シリカゲルをマトリックスとしてオクタデシル官能基を結合するので、炭素含有量と疎水性が高い。カラムクロマトグラフィーのフィラーとしてＣ１８シリカゲルを使用する逆相分離モードでは、非極性または疎水性化合物が強く保持される一方、極性化合物が弱く保持されるので、より早く通過して、成分の分離および精製を実現できる。
【００２６】
Ｃ１８シリカゲルフィラーは市販品であり、例えば、ＤＡＩＳＯＧＥＬ  ＯＤＳ、ＹＭＣ  ＯＤＳ、ＧＨ  ＧＥＬ  ＯＤＳ、ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ１８、Ｆｕｊｉ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ  Ｃ１８、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ  ＯＤＳ、ＳＫＲ−１０、ＳＥＰＡＸ  Ｃ１８等が挙げられ、提供可能なフィラー粒径は１．８ミクロンから３００ミクロンまで、又はそれ以上である。
【００２７】
本願によれば、ステップ（３）において、大規模調製のコストと効率を考慮すると、Ｃ１８シリカゲルフィラーの粒径は、２０〜１５０ミクロンの範囲から選ばれるのが好ましい。より好ましくは、Ｃ１８シリカゲルフィラーの粒径は、４０〜１００ミクロンの範囲から選ばれる。
【００２８】
本願によれば、ステップ（３）において、安全と環境保護の観点から、溶離剤はメタノールの体積濃度が０．１％−１０％のメタノール水溶液、アセトニトリルの体積濃度が０．１％−１０％のアセトニトリル水溶液、及び水から選ばれる。好ましくは、溶離剤が水である。本願における「水」とは、医薬用水を意味し、「医薬品製造管理規則」の条件を満たしている。溶離態様は、グラジエント溶離でも良く、アイソクラティック溶離でも良い。
【００２９】
本願によれば、ステップ（３）において、Ｃ１８シリカゲルフィラーと化合物Ｃとの質量比は３５：１〜１３０：１である。好ましくは、Ｃ１８シリカゲルフィラーと化合物Ｃとの質量比は６０：１〜９０：１である。
【００３０】
選択しうるステップとして、ステップ（３）において、カングレロール四ナトリウム塩を含む反応溶液を、Ｃ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーを通過させる前に、濾過などの本分野での通常の方法により機械的な不純物を除去することが可能である。
【００３１】
選択しうるステップとして、ステップ（３）において、カングレロール四ナトリウムを含む反応溶液を、Ｃ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーを通過させる前に、抽出により一部の不純物を除去することが可能であり、抽出に用いる溶剤の選択は当業者にとって一般的な操作であるので、ここで余計な記載をしない。
【００３２】
発明者らの更なる研究により、ステップ（３）におけるカラムクロマトグラフィーは、Ｃ１８シリカゲルと類似な物理的および化学的特性を持つ他のフィラーを採用しても、良好な分離および精製結果も達成できることを見出した。
【００３３】
本願によれば、以下のステップを含むカングレロール四ナトリウムの調製方法を提供することができる。
【化１１】
2021505601.tif 000012
ステップ（１）：有機溶媒の中で、化合物Ｃをオキシ塩化リンと反応させ、化合物Ｂを含む反応液が得られ、ここで、反応温度が−３０〜２０℃であり、反応時間が１〜２４時間であり、前記有機溶媒がアセトニトリル、リン酸トリエチルまたはリン酸トリメチルから選ばれ、前記化合物Ｃとオキシ塩化リンとのモル比が１：１〜１：３である；
ステップ（２）：酸結合剤の存在下で、ステップ（１）で得られた化合物Ｂを含む反応液を、クロドロン酸またはその単塩と反応させ、反応温度が−１０〜３０℃であり、反応時間が１〜５時間であり、そして重炭酸ナトリウムと反応させ、反応温度が１０〜４０℃であり、反応時間が１０〜４０時間であることにより、カングレロール四ナトリウムを含む反応液が得られ、
ここで、前記酸結合剤は、トリエチルアミン、トリ−ｎ−プロピルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンから選ばれ、化合物Ｃと酸結合剤とのモル比は１：２〜１：８であり、前記クロドロン酸単塩は、クロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩、クロドロン酸一ナトリウム塩、クロドロン酸一カリウム塩から選ばれ、化合物Ｃとクロドロン酸又はその単塩とのモル比は１：１．１〜１：３．５であり、化合物Ｃと重炭酸ナトリウムとのモル比は１：１０〜１：３０である；及び、
ステップ（３）：ステップ（２）で得られたカングレロール四ナトリウムを含む反応液を、Ｃ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離、精製し、溶離剤で溶離して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を回収し、凍結乾燥して純粋のカングレロール四ナトリウムが得られ、
ここで、前記Ｃ１８シリカゲルフィラーの粒径範囲が２０〜１５０ミクロンであり、Ｃ１８シリカゲルフィラーと化合物Ｃとの質量比が３５：１〜１３０：１であり、前記溶離剤はメタノールの体積濃度が０．１％−１０％のメタノール水溶液、アセトニトリルの体積濃度が０．１％−１０％のアセトニトリル水溶液、または水から選ばれる。
【００３４】
本願によれば、
前記ステップ（１）における好ましい反応温度が−１０〜１０℃であり、好ましい反応時間が３〜１０時間である；
前記ステップ（２）において、化合物Ｃとクロドロン酸又はその単塩とのモル比は、１：１．４〜１：２が好ましく、化合物Ｃと重炭酸ナトリウムとのモル比は１：１５〜１：２０が好ましい；
前記ステップ（３）において、Ｃ１８シリカゲルフィラーの粒径は４０〜１００ミクロンが好ましく、Ｃ１８シリカゲルフィラーと化合物Ｃとの質量比は６０：１〜９０：１が好ましく、溶離剤は水が好ましい。
【００３５】
従来技術と比べ、本願は、合成ルートが短く、Ｎ−［２−（メチルチオ）エチル］−２−［（３，３，３−トリフルオロプロピル）チオ］アデノシン（化合物Ｃ）を出発原料として、２つのステップによるワンポット反応により、カングレロール四ナトリウムを含む反応溶液を得ることができ、反応は十分で、カングレロールアンモニウム塩中間体を形成してから塩を転換する必要が無く、反応条件は穏やかで、操作は簡単である；後処理は、Ｃ１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより一回だけで分離および精製し、溶離液は水又は水を主成分とする低濃度有機溶媒水溶液を採用し、廃棄物が少なく、コストが低く、産物のＨＰＬＣ純度は９９．５％以上であり、原料の品質要件を満たし、収率は７０％以上であり、大規模な調製に適している；という利点がある。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本願は、さらに以下の実施例を参照することにより説明され、その実施例は、本願の調製方法を詳細に記載した。当業者にとって自明なことは、本願の範囲を離脱しない限り、調製条件について様々な変更が行われる。
【００３７】
実施例に用いられる試薬は、特に説明されない限り、市販品である。
【００３８】
実施例は、特に説明されない限り、常温（１０℃〜３０℃））下で行う。
【００３９】
用いられる器械は、
凍結乾燥機（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｌｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ，）、
ＡＶ−４００核磁気共鳴装置（ドイツのＢｒｕｋｅｒ社）、
ＬＣ−２０ＡＴ高速液体クロマトグラフ（島津製作所社）がある。
【００４０】
ＨＰＬＣ測定条件：
ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−２  カラムＣ１８，サイズ５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ
移動相Ａ：０．０５Ｍでのリン酸アミン溶液（酢酸とトリエチルアミンでｐＨ＝７．２に調整）
移動相Ｂ：アセトニトリル
ＨＰＬＣグラジエント：
【表１】
2021505601.tif 000013
流速：１ｍｌ／分  
時間：４５分          
紫外線吸収波長：２４２ｎｍ
【００４１】
実施例１
５００ｍＬの四つ口フラスコに、化合物Ｃ４．７ｇ（１０ｍｍｏｌ）、リン酸トリエチル９０ｍＬおよび１，８−ビスジメチルアミノナフタレン２．１ｇ（１０ｍｍｏｌ）を加え、−１０℃に冷却し、オキシ塩化リン３．１ｇ（２０ｍｍｏｌ）を滴下した後、保温しながら２０時間反応させ、化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００４２】
トリ−ｎ−ブチルアミン１０．２ｇ（５５ｍｍｏｌ）、クロドロン酸３．７ｇ（１５ｍｍｏｌ）及びリン酸トリエチル５０ｍＬを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、常温で２時間撹拌した後、質量濃度が８％である重炭酸ナトリウム水溶液３１５ｇを加え、常温で１２時間撹拌した。
【００４３】
濾過を行い、その濾液を、ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径１００ミクロン）４２０ｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、体積濃度５％のメタノール水溶液でアイソクラティック溶離を行って、流速が２．０リットル／時間であり、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて、凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６．１ｇを得た。
【００４４】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７１％、ＨＰＬＣ純度が９９．９１％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０３％であり、不純物Ｃの含有量が０．０２％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。ＮＭＲデータ：１Ｈ−ＮＭＲ  δ（Ｄ２Ｏ）：８．２３（１Ｈ，ｓ），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．６５（１Ｈ，ｍ），４．４９（１Ｈ，ｍ），
４．２８（１Ｈ，ｍ），４．１７（２Ｈ，ｍ），３．６７（１Ｈ，ｓ），３．２１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．７２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．５８（２Ｈ，ｍ），２．０１（３Ｈ，ｓ）。
【００４５】
実施例２
５００ｍＬの四つ口フラスコに、化合物Ｃ４．７ｇ（１０ｍｍｏｌ）、リン酸トリエチル６０ｍＬ、アセトニトリル５０ｍＬおよびジイソプロピルエチルアミン２．６ｇ（２０ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却し、オキシ塩化リン２．３ｇ（１５ｍｍｏｌ）を滴下した後、保温しながら５時間反応させ、化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００４６】
トリ−ｎ−ブチルアミン１３．０ｇ（７０ｍｍｏｌ）、クロドロン酸７．４ｇ（３０ｍｍｏｌ）及びリン酸トリエチル５０ｍＬを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、０℃で４時間撹拌した後、質量濃度が１０％である重炭酸ナトリウム水溶液１２６ｇを加え、３０℃で２８時間撹拌した。
【００４７】
濾過を行い、その濾液をｔ−ブチルメチルエーテル２００ｍＬで抽出し、得られた水相を、ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径５０ミクロン）２８０ｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、体積濃度５％のアセトニトリル水溶液でアイソクラティック溶離を行って、その流速が２．０リットル／時間であり、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６．２ｇを得た。
【００４８】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７２％であり、ＨＰＬＣ純度が９９．９４％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０２％であり、不純物Ｃの含有量が０．０２％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。
【００４９】
実施例３
５００ｍＬの四つ口フラスコに、化合物Ｃ４．７ｇ（１０ｍｍｏｌ）、リン酸トリエチル９０ｍＬおよびジイソプロピルエチルアミン１．３ｇ（１０ｍｍｏｌ）を加え、１０℃に冷却し、オキシ塩化リン３．１ｇ（２０ｍｍｏｌ）を滴下した後、１時間保温して化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００５０】
トリ−ｎ−プロピルアミン４．３ｇ（３０ｍｍｏｌ）、クロドロン酸４．９ｇ（２０ｍｍｏｌ，２ｅｑ）及びリン酸トリエチル２０ｍＬを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、常温で２時間撹拌した後、質量濃度が５％である重炭酸ナトリウム水溶液５００ｇを加え、４０℃で２０時間撹拌した。
【００５１】
濾過を行い、その濾液を、ＤＡＩＳＯＧＥＬ  ＯＤＳ−ＢＰ  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径５０ミクロン）１６５ｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、精製水で溶離を行って、その流速が２．０リットル／時間であり、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６．６ｇを得た。
【００５２】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７６％であり、ＨＰＬＣ純度が９９．７９％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０５％であり、不純物Ｃの含有量が０．０４％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。
【００５３】
実施例４
５００ｍＬの四つ口フラスコに、化合物Ｃ４．７ｇ（１０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル９０ｍＬおよび１，８−ビスジメチルアミノナフタレン０．５４ｇ（２．５ｍｍｏｌ）を加え、−１０℃に冷却し、オキシ塩化リン４．６ｇ（３０ｍｍｏｌ）を滴下した後、１０時間保温して化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００５４】
トリエチルアミン５．１ｇ（５０ｍｍｏｌ）、クロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩６．５ｇ（１５ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル５０ｍＬを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、常温で５時間撹拌した後、質量濃度が１０％である重炭酸ナトリウム水溶液８４ｇを加え、常温で２０時間撹拌した。
【００５５】
濾過を行い、その濾液を、ＹＭＣ  ＯＤＳ−ＡＱ  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径２０ミクロン）２００ｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、脱イオン水で溶離を行って、その流速が２．０リットル／時間であり、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６．１ｇを得た。
【００５６】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７１％であり、ＨＰＬＣ純度が９９．９１％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０３％であり、不純物Ｃの含有量が０．０２％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。
【００５７】
実施例５
５００ｍＬの四つ口フラスコに、化合物Ｃ４．７ｇ（１０ｍｍｏｌ）、リン酸トリエチル９０ｍＬおよび１，８−ビスジメチルアミノナフタレン２．１ｇ（１０ｍｍｏｌ）を加え、−１０℃に冷却し、オキシ塩化リン３．１ｇ（２０ｍｍｏｌ）を滴下した後、保温しながら５時間反応させ、化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００５８】
トリ−ｎ−ブチルアミン１０．２ｇ（５５ｍｍｏｌ）、クロドロン酸３．７ｇ（１５ｍｍｏｌ）及びリン酸トリエチル５０ｍＬを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、常温で２時間撹拌した。その後、質量濃度が８％である重炭酸ナトリウム水溶液２００ｇを加え、常温で２０時間撹拌した。
【００５９】
濾過を行い、その濾液を、ＦＵＪＩ  ＣＨＲＯＭＡＴＯＲＥＸＣ１８  ＳＭＢ１００−２０／４５  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径２０−４５ミクロン）３５０ｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、体積濃度１％のメタノール水溶液２Ｌで溶離を行った後、脱イオン水で溶離を行って、その流速が２．０リットル／時間であり、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６．５ｇを得た。
【００６０】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７５％であり、ＨＰＬＣ純度が９９．９６％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０２％であり、不純物Ｃの含有量が０．０２％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。
【００６１】
実施例６
２０Ｌの反応釜に、化合物Ｃ４７０ｇ（１ｍｏｌ）、リン酸トリエチル４．７Ｌおよび１，８−ビスジメチルアミノナフタレン２１４ｇ（１ｍｏｌ）を加え、−１０℃に冷却し、オキシ塩化リン２３０ｇ（１．５ｍｏｌ）を滴下した後、保温しながら３時間反応させ、化合物Ｃの含有量が５％未満であることをＨＰＬＣ中央制御で示したところ、化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００６２】
トリ−ｎ−ブチルアミン７４０ｇ（４ｍｏｌ）、クロドロン酸４９０ｇ（２ｍｏｌ）及びリン酸トリエチル５Ｌを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、２５〜３０℃で２時間撹拌した。
【００６３】
別の反応釜に、質量濃度が８％である重炭酸ナトリウム水溶液２１ｋｇを用意した後、撹拌しながら上記反応液を重炭酸ナトリウム水溶液に滴下し、３０〜４０℃で３０時間撹拌した。
【００６４】
濾過を行い、その濾液を、ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径７５ミクロン）３０ｋｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、脱イオン水で溶離を行って、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６３５ｇを得た。
【００６５】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７３．５％であり、ＨＰＬＣ純度が９９．８８％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０３％であり、不純物Ｃの含有量が０．０４％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。ＮＭＲデータ：１Ｈ−ＮＭＲ  δ（Ｄ２Ｏ）：８．２３（１Ｈ，ｓ），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．６５（１Ｈ，ｍ），４．４９（１Ｈ，ｍ），
４．２８（１Ｈ，ｍ），４．１７（２Ｈ，ｍ），３．６７（１Ｈ，ｓ），３．２１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．７２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．５８（２Ｈ，ｍ），２．０１（３Ｈ，ｓ）。
【００６６】
実施例７
５００ｍＬの四つ口フラスコに、化合物Ｃ４．７ｇ（１０ｍｍｏｌ）およびリン酸トリエチル９０ｍＬを加え、−１０℃に冷却し、オキシ塩化リン３．１ｇ（２０ｍｍｏｌ）を滴下した後、保温しながら２０時間反応させ、化合物Ｂを含む反応液を得た。
【００６７】
トリ−ｎ−ブチルアミン１０．２ｇ（５５ｍｍｏｌ）、クロドロン酸３．７ｇ（１５ｍｍｏｌ）及びリン酸トリエチル５０ｍＬを混合し、上記の化合物Ｂを含む反応液に投入して、常温で２時間撹拌した後、丁寧に質量濃度が８％である重炭酸ナトリウム水溶液３１５ｇを加え、常温で１２時間撹拌した。
【００６８】
濾過を行い、その濾液を、ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ１８シリカゲルフィラー（粒径１００ミクロン）４２０ｇを充填したクロマトグラフィーカラムにより分離精製し、体積濃度５％のメタノール水溶液でアイソクラティック溶離を行って、その流速が２．０リットル／時間であり、溶離液を段階的に収集し、ＨＰＬＣで検出して、ＨＰＬＣ純度≧９９．５％のカングレロール四ナトリウムの溶離液を合わせて凍結乾燥した後、白色粉末状固体であるカングレロール四ナトリウム６．３ｇを得た。
【００６９】
カングレロール四ナトリウムのモル収率が７３％であり、ＨＰＬＣ純度が９９．９１％であり、不純物Ａである二ナトリウム塩の含有量が０．０３％であり、不純物Ｃの含有量が０．０２％であり、不純物Ｂ、Ｄ、Ｅは検出されていない。
【００７０】
対比実施例１（ＣＮ１６１３８６４Ａによるカングレロール三ナトリウム塩の調製）
トリ−ｎ−ブチルアミン１．８５ｇをピリジン１５０ｍＬに溶解し、ヌクレオチド一リン酸アンモニウム塩５．８３ｇを添加し、撹拌溶解した後、４０℃で真空蒸留を行い、共沸で水を除去した後、ＤＭＦ１２０ｍＬ、ＣＤＩ８．１ｇを添加し、撹拌しながら１６時間反応させて、メタノール２．４６ｇを加え、１時間撹拌し、クロドロン酸１３．９２ｇ、トリ−ｎ−ブチルアミン１０．５６ｇ及びＤＭＦ溶液３５０ｍＬを滴下し、室温で２６時間撹拌した後、濾過で不溶性不純物を除去し、得られた濾液における溶剤を６０℃で真空除去を行って、２００ｍＬの精製水を加えて溶解させ、陰イオン交換樹脂ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ａ−１００により分離および精製し、脱イオン水５Ｌ、０．１Ｍ重炭酸アンモニウム水溶液２．５Ｌ、０．２Ｍ重炭酸アンモニウム水溶液２．５Ｌ、０．３Ｍの重炭酸アンモニウム水溶液で順次に溶離し、ＨＰＬＣ検出を行い、カングレロールを含む溶離液７．２Ｌを回収し、凍結乾燥したところ、カングレロール三アンモニウム塩５．１ｇを得ることになって、そのモル収率が５６．７％、ＨＰＬＣ純度が９１．３％、ヌクレオチド一リン酸アンモニウム塩（不純物Ａであるアンモニウム塩）が７．１％である。
【００７１】
不純物Ｃが０．６％である。
【００７２】
対比実施例２（文献Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，１２，２１３−２２０によるカングレロール四ナトリウムの調製）
化合物Ｃ５．１７ｇ（１１ｍｍｏｌ）をリン酸トリエチル１２０ｍＬに溶解し、０℃に冷却、オキシ塩化リン６．６ｇ（４３ｍｍｏｌ）を滴下した後、保温しながら５時間反応させ、重炭酸ナトリウム１４．５ｇを含む氷水１Ｌに入れ、得られた混合物を４５分間撹拌した後、エーテル２００ｍＬ×２で抽出を行い、水相をクロマトグラフィーカラムＤｏｗｅｘ  ５０ＷＸ８（Ｈ＋型）に通過し、アンモニア水で溶離し、溶離液を凍結乾燥して、ヌクレオチド一リン酸アンモニウム塩化合物を得た。
【００７３】
前のステップで得られたアンモニウム塩を反応ボトルに加えて、トリ−ｎ−ブチルアミン１．５７ｇを添加し、そして、ピリジン５０ｍＬを加えて減圧下で蒸発乾固する操作を３回繰り返し、ピリジンの使用量が毎回５０ｍＬであり、残留物にＤＭＦ１００ｍＬ、ＣＤＩ６．６ｇを加え、撹拌しながら４時間反応させ、メタノール２ｇを加えてさらに３０分間撹拌し、クロドロン酸トリ−ｎ−ブチルアミン塩２１ｇを含むＤＭＦ１００ｍｌを投入、１８時間反応させ、ろ過し、減圧下で溶媒を蒸発させ、脱イオン水１００ｍＬで残留物を溶解し、ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ−Ａ２５で分離精製、０−０．６Ｍの重炭酸アンモニウム水溶液でグラジエント溶離を行い、溶離液を多段階に収集、ＨＰＬＣでモニタリングしてカングレロールを含む溶離液を合わせて、凍結乾燥して、得られたアンモニウム塩をメタノール２０ｍＬで溶解し、１Ｍのヨウ化ナトリウムのアセトン溶液３００ｍＬを滴下し、室温で３時間撹拌し、窒素下で濾過、アセトンで洗浄し、フィルターケーキを精製水１００ｍＬで溶解した後、凍結乾燥したところ、カングレロール四ナトリウム９１０ｍｇを得た。その結果は、モル収率が９％、ＨＰＬＣ純度が９６．５％、不純物Ａである二ナトリウム塩が２．２％である。
【００７４】
上記の文献の方法に従って標的化合物を調製した結果は、文献の結果と一致し、本願が提供されるプロセスと比べ、収率が大幅に低下し、そして後処理および精製操作も煩雑であり、工業的な大規模生産には適せず、精製した後に得られた製品はＡＰＩ（原薬）の品質要件を満たすことができない。
【００７５】
上に述べたものは、単に本願の好ましい実施形態であり、本願は限定されず、本願の趣旨および原理の範囲内で行われた補正、置換または改良等は、何れも本願の保護範囲に含まれるものとする。
【国際調査報告】
2021505601.tif 000015
2021505601.tif 000016
2021505601.tif 000017
2021505601.tif 000018