(57)【要約】本明細書では、糖鎖抗原切断のための酵素組成物、それに関連する方法、使用、装置およびシステムが提供される。特に、組成物は、２つの酵素、ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼを含み、組成物は、さらに、クラウディング剤を含んでもよい。さらに、本明細書に記載された組成物は、細胞生存性に適した温度およびｐＨレベルにおいて活性を有することが見出された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物であって、前記組成物は、
（ａ）精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と、
を含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記組成物は、
（ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５のうちの１つ以上から選択される精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７のうちの１つ以上から選択される精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と
の１つ以上から選択される、組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、前記組成物は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む、組成物。
【請求項４】
請求項１または２に記載の組成物であって、前記組成物は、
（ａ）配列番号２、配列番号４および配列番号５の精製フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質である、前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１０の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質である、前記精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と
の１つ以上から選択される酵素を含む、組成物。
【請求項５】
請求項１または２に記載の組成物であって、前記組成物は、
（ａ）配列番号１７または配列番号３２の精製クロストリジウム・テルチウムＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質である、前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）配列番号１９または配列番号３６の精製クロストリジウム・テルチウムガラクトサミニダーゼタンパク質である、前記精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と
の１つ以上から選択される、組成物。
【請求項６】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼが、１μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断することができる、請求項１〜５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項７】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼが、約６．５と約７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有する、請求項１〜６のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項８】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼが、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有する、請求項１〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項９】
（ａ）前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよび前記精製ガラクトサミニダーゼが固定化されるか、
（ｂ）前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが固定化されるか、または、
（ｃ）前記精製ガラクトサミニダーゼが固定化される、
請求項１〜８のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１０】
前記固定化酵素が表面に結合しており、前記表面が以下の１つ以上から選択される、請求項９に記載の組成物。
（ａ）ビーズまたはマイクロスフェア、
（ｂ）容器、
（ｃ）管、
（ｄ）カラム、または
（ｅ）マトリックス
【請求項１１】
前記組成物が、クラウディング剤をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１２】
前記クラウディング剤が、デキストラン、硫酸デキストラン、デキストリン、プルラン、ポリ（エチレングリコール）、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、及び不活性タンパク質のうちの１つ以上から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
配列番号２、配列番号４または配列番号５のフラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを含む精製酵素。
【請求項１４】
配列番号７、配列番号９または配列番号１０のフラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼを含む精製酵素。
【請求項１５】
配列番号１７または配列番号３２のクロストリジウム・テルチウムＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを含む精製酵素。
【請求項１６】
配列番号１９または配列番号３６のクロストリジウム・テルチウムガラクトサミニダーゼを含む精製酵素。
【請求項１７】
配列番号１、配列番号３、配列番号１６、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、および配列番号３０のうちの１つ以上から選択されるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼをコードする単離核酸配列。
【請求項１８】
配列番号６、配列番号８、配列番号１８、および配列番号２０のうちの１つ以上から選択されるガラクトサミニダーゼをコードする単離核酸配列。
【請求項１９】
請求項１７または１８に記載の核酸と異種核酸配列とを含むベクター。
【請求項２０】
前記異種核酸配列が、タンパク質タグおよび切断部位のうちの１つ以上から選択される、請求項１９に記載のベクター。
【請求項２１】
前記タンパク質タグが、アルブミン結合タンパク質（ＡＢＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、ＡＵ１エピトープ、ＡＵ５エピトープ、ＡｖｉＴａｇ、バクテリオファージＴ７エピトープ（Ｔ７−タグ）、バクテリオファージＶ５エピトープ（Ｖ５−タグ）、ビオチン−カルボキシ担体タンパク質（ＢＣＣＰ）、ブルータングウイルスタグ（Ｂ−タグ）、単一ドメインのラクダ抗体（Ｃ−タグ）、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰまたはカルモジュリン−タグ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、セルロース結合ドメイン（ＣＢＰ）、キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）、コリン結合ドメイン（ＣＢＤ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、ＤｏｇＴａｇ、Ｅ２エピトープ、Ｅ−タグ、ＦＬＡＧエピトープ（ＦＬＡＧ−タグ）、ガラクトース結合タンパク質（ＧＢＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ（ＥＥ−タグ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）、ＨａｌｏＴａｇ（商標）、交互ヒスチジンおよびグルタミンタグ（ＨＱタグ）、交互ヒスチジンおよびアスパラギンタグ（ＨＮタグ）、ヒスチジンアフィニティタグ（ＨＡＴ）、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、ＨＳＶエピトープ、イソペプタグ（Ｉｓｏｐｅｐ−タグ）、ケトステロイドイソメラーゼ（ＫＳＩ）、ＫＴ３エピトープ、ＬａｃＺ、ルシフェラーゼ、マルトース結合タンパク質（ＣＢＰ）、Ｍｙｃエピトープ（Ｍｙｃ−タグ）、ＮＥ−タグ、ＮｕｓＡ、ＰＤＺドメイン、ＰＤＺリガンド、ポリアルギニン（Ａｒｇ−タグ）、ポリアスパラギン酸（Ａｓｐ−タグ）、ポリシステイン（Ｃｙｓ−タグ）、ポリグルタミン酸（Ｇｌｕ−タグ）、ポリヒスチジン（Ｈｉｓ−タグ）、ポリフェニルアラニン（Ｐｈｅ−タグ）、プロフィニティｅＸａｃｔ、プロテインＣ、Ｒｈｏ１Ｄ４タグ、Ｓ１−タグ、Ｓ−タグ、ソフタグ１、ソフタグ３、スヌープタグＪｒ、スヌープタグ、スポットタグ、ＳｐｙＴａｇ（Ｓｐｙ−タグ）、ストレプトアビジン結合ペプチド（ＳＢＰ）、ブドウ球菌タンパク質Ａ（プロテインＡ）、ブドウ球菌タンパク質Ｇ（プロテインＧ）、ストレプタグ、ストレプトアビジン（ＳＢＰ−タグ）、ストレプタグＩＩ、Ｓｄｙ−タグ、低分子ユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）、タンデムアフィニティ精製（ＴＡＰ）、Ｔ７エピトープ、テトラシステインタグ（ＴＣタグ）、チオレドキシン（Ｔｒｘ）、ＴｒｐＥ、Ｔｙタグ、ユビキチン、ユニバーサル、Ｖ５タグ、ＶＳＶ−ＧまたはＶＳＶ−タグおよびＸｐｒｅｓｓタグのうちの１つ以上から選択される、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
請求項１７または１８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２３】
赤血球からＡ抗原を酵素的に切断する方法であって、
（ａ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質およびガラクトサミニダーゼタンパク質と  （１）Ａ型抗原を含む血液、または（２）Ａ型若しくはＡＢ型の赤血球とを混合する工程と、
（ｂ）酵素が血液または赤血球からＡ抗原を切断するのに十分な時間、酵素を（１）血液、または（２）Ａ型若しくはＡＢ型の赤血球と共に、インキュベートする工程とを含む方法。
【請求項２４】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質であり、前記ガラクトサミニダーゼが、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが配列番号４または配列番号５の精製フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質であり、前記ガラクトサミニダーゼが配列番号９または配列番号１０の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法が、クラウディング剤を添加することをさらに含む、請求項２３〜２６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２８】
前記クラウディング剤が、デキストラン、硫酸デキストラン、デキストリン、プルラン、ポリ（エチレングリコール）、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、超分岐グリセロール、不活性なタンパク質のうちの１つ以上から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
血液または赤血球を洗浄して、ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ、ガラクトサミニダーゼおよびクラウディング剤を除去することをさらに含む、請求項２３〜２８のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３０】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼが、１μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断することができる、請求項２３〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３１】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼが、約６．５と約７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有する、請求項２３〜３０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３２】
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼが、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有する、請求項２３〜３１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質、および
（ｂ）精製ガラクトサミニダーゼタンパク質、
を含む血液採取保存システム。
【請求項３４】
（ａ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号、３５のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質であり、
（ｂ）ガラクトサミニダーゼが、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質である、請求項３３に記載のシステム。
【請求項３５】
前記組成物が、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む、請求項３３に記載のシステム。
【請求項３６】
請求項３３、３４または３５に記載のシステムであって、前記システムは酵素が固定化される表面をさらに含み、前記表面が以下のうちの１つ以上から選択される、システム。
（ａ）ビーズまたはマイクロスフェア、
（ｂ）容器、
（ｃ）管、
（ｄ）カラム、または
（ｅ）マトリックス
【請求項３７】
血液採取保存装置であって、前記装置は、
（ａ）表面、
（ｂ）前記表面に固定化した精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質、および
（ｃ）前記表面に固定化した精製ガラクトサミニダーゼタンパク質、を含む装置。
【請求項３８】
（ａ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質であり、
（ｂ）ガラクトサミニダーゼが、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質である、請求項３７に記載の装置。
【請求項３９】
前記組成物が、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む、請求項３７に記載の装置。
【請求項４０】
前記酵素が固定化される前記表面が、以下の１つ以上から選択される、請求項３７に記載の装置。
（ａ）ビーズまたはマイクロスフェア、
（ｂ）容器、
（ｃ）管
（ｄ）カラム、または
（ｅ）マトリックス
【請求項４１】
前記容器がバッグである、請求項４０に記載の装置。
【請求項４２】
前記容器がバッグである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項４３】
前記容器がバッグである、請求項３６に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１８年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／７１９，２７２号「糖鎖抗原切断のための酵素組成物、それに関連する方法、使用、装置およびシステム」の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、酵素組成物の分野に関する。特に、本発明は、抗原を切断するための酵素組成物、ならびに当該組成物を用いて抗原を切断するための使用、方法、装置およびシステムの提供に関する。
【背景技術】
【０００３】
血液型Ａの人の血漿がＢ抗原に対する抗体を含み、逆もまた同様であり、それによって不適合な輸血により補体の活性化と赤血球（ＲＢＣ）溶解を生じ得る（Ｄａｎｉｅｌｓ  ２０１０）ため、血液型の正確な適合は、輸血医学における中心的な要件である。これらの細胞表面抗原は、Ａ型血液およびＢ型血液それぞれに対して、α‐１，３‐結合‐Ｎ‐アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）またはガラクトース（Ｇａｌ）で終端する糖鎖構造である。一方、Ｏ型赤血球はこれらの末端糖を含まず、全般的に輸血され得る（Ｇａｒｒａｔｔｙ  ２００８）。したがって、患者の血液型が不明または不明確な場合である緊急時に備えて、Ｏ型赤血球を血液バンクに十分に供給する必要がある。しかし、供給は限られていることが多い。
【０００４】
ＡまたはＢ  ＲＢＣをＯに変換する手段としてＡまたはＢ  ＲＢＣからＧａｌＮＡｃまたはＧａｌ構造を酵素により除去する概念がＧｏｌｄｓｔｅｉｎ（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  １９８２；ＵＳ４６０９６２７およびＣＡ２２７２９２５）によって最初に提案され、実証された。グリーンコーヒー豆由来のα‐ガラクトシダーゼを用いて、Ｂ型ＲＢＣをＯ型に変換し、続いて輸血を行い、成功した（Ｋｒｕｓｋａｌｌ  ２０００）。しかしながら、必要とされた酵素量から、このアプローチは非実用的なものであった。Ａ型の変換はより困難であるが、これは主にＡ型の血液型は内部結合が異なる多くのサブタイプが存在するためである（Ｃｌａｕｓｅｎ１９８９）。同様に、α‐ガラクトシダーゼはＢ型抗原の除去に用いられている（例えば、ＥＰ２２４３７９３参照）。Ａ型の変換を含む実用的な変換への大きな進歩は、四糖類基質を用いて、ＡおよびＢ変換活性の両方に関する細菌のライブラリのスクリーニングによってなされた。中性ｐＨ値で高い抗原切断活性を示すグリコシダーゼの二つの新しいファミリーが発見された（ＣＡＺｙ  ＧＨ１０９  α‐Ｎ‐アセチルガラクトサミニダーゼおよびＧＨ１１０  α‐ガラクトシダーゼ（Ｌｉｕ２００７））。両酵素はそれぞれの抗原を完全に除去して対応するＲＢＣを変換した。しかしながら、特にＡ型の変換には相当量の酵素が必要であり（６０ｍｇ酵素／血液単位）、さらなる発展を制限している。細胞から糖鎖抗原をより効率的に除去する酵素は有用であろう。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、部分的には、本明細書中に記載されるような、ガラクトサミニダーゼおよびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼの組合せが、以前に同定されたＡ抗原切断酵素よりも桁違いに効率的であるという驚くべき発見に基づく。例えば、ある条件下では、いくつかのＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ酵素は、１μ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。さらに、酵素の組み合わせによる切断効率は、赤血球の生存能力を維持するのに適したｐＨ（すなわち、約６．５と約７．５との間のｐＨ）において維持される。さらに、酵素は、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度で活性を有することが見出され、これはまた、血液の採取、洗浄および保存プロトコルに適している。さらに、酵素の効率は、クラウディング剤（例えばデキストラン）の添加によってさらに向上する。また、同じ２段階除去プロセスがドナー臓器に適用され得ることも理解されている。本願明細書に記載される酵素は、作用するのによりよいため、１０％ヘマトクリットを有する試料を中心に試験され、また約８０％のヘマトクリット値を含有する赤血球（ｒｂｃ）が詰められたバッグ（約２２０ｍｌ）に必要な量が算出された。
【０００６】
クラウディング剤を欠くある態様においては、赤血球からＡ抗原を除去するために、３μｇ／ｍｌの１０％ヘモクリット、１時間３７°Ｃ、＞５．３ｍｇの各酵素／ｒｂｃが詰められたバッグを用いてもよく、クラウディング剤を有する他の態様においては、赤血球からＡ抗原を切断するために、０．５μｇ／ｍｌの１０％ヘモクリット、１時間３７°Ｃ、＞０．９ｍｇの各酵素／ｒｂｃが詰められたバッグを用いてもよい。しかしながら、細胞がより長くインキュベートされる場合、より多くの酵素を使用して血液が処理され得る時間を短縮することができ、またはより少ない酵素を使用することができることが、当業者によって理解されるであろう。
【０００７】
ある実施形態によれば、組成物が提供され、当該組成物は、（ａ）精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質、および（ｂ）精製ガラクトサミニダーゼタンパク質を含む。
【０００８】
ある実施形態によれば、組成物が提供され、当該組成物は、（ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５のうちの１つ以上から選択される精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、（ｂ）配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６および配列番号３７のうちの１つ以上から選択される精製ガラクトサミニダーゼタンパク質とを含む。
【０００９】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む。
【００１０】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６及び３７のうちの１つに記載の配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む。
【００１１】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む。
【００１２】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６及び３７のうちの１つの配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む。
【００１３】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、（ａ）配列番号２、配列番号４および配列番号５の精製フラボニフラクター・プラウティ（Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ  ｐｌａｕｔｉｉ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質である、精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、（ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１０の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質である、精製ガラクトサミニダーゼタンパク質との１つ以上から選択される酵素を含む。
【００１４】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、（ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７および配列番号３２の精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、（ｂ）配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６および配列番号３７の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質である、精製ガラクトサミニダーゼタンパク質との１つ以上から選択される酵素を含む。
【００１５】
さらなる実施態様によれば、組成物が提供され、当該組成物は、（ａ）配列番号１７および配列番号３２の精製クロストリジウム・テルチウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｒｔｉｕｍ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質である精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、（ｂ）配列番号１９および配列番号３６の精製クロストリジウム・テルチウムガラクトサミニダーゼタンパク質である精製ガラクトサミニダーゼタンパク質との１つ以上から選択される酵素を含む。
【００１６】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ組成物は、１μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ組成物は、約６．５と約７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有し得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ組成物は、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有し得る。
【００１７】
前記組成物は、（ａ）前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよび前記精製ガラクトサミニダーゼが固定化されていてもよいか、（ｂ）精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが固定化されてもよいか、または（ｃ）精製ガラクトサミニダーゼが固定化されてもよい、ことを含んでもよい。
【００１８】
固定化酵素は、表面に結合されてもよく、当該表面は、以下の１つ以上から選択されてもよい：（ａ）ビーズまたはマイクロスフェア、（ｂ）容器、（ｃ）管、（ｄ）カラム、および（ｅ）マトリックス。組成物は、さらに、クラウディング剤を含めてもよい。クラウディング剤は、デキストラン、硫酸デキストラン、デキストリン、プルラン、ポリ（エチレングリコール）、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、および不活性タンパク質のうちの１つ以上から選択されてもよい。
【００１９】
さらなる実施態様によれば、配列番号２、配列番号４または配列番号５のフラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを含む精製酵素が提供される。
【００２０】
さらなる実施態様によれば、配列番号７、配列番号９または配列番号１０のフラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼを含む精製酵素が提供される。
【００２１】
さらなる実施態様によれば、配列番号１７または配列番号３２のクロストリジウム・テルチウムＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを含む精製酵素が提供される。
【００２２】
さらなる実施態様によれば、配列番号１９または配列番号３６のクロストリジウム・テルチウムガラクトサミニダーゼを含む精製酵素が提供される。
【００２３】
さらなる実施態様によれば、配列番号１、配列番号３、配列番号１６、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８および配列番号３０のうちの１つ以上から選択されるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼをコードする単離核酸配列が提供される。
【００２４】
さらなる実施態様によれば、配列番号６、配列番号８、配列番号１８および配列番号２０のうちの１つ以上から選択されるガラクトサミニダーゼをコードする単離核酸配列が提供される。
【００２５】
さらなる実施形態によれば、本明細書に記載の核酸を含むベクターが提供される。前記ベクターはまた、異種核酸配列であって、当該異種核酸配列が、タンパク質タグおよび切断部位のうちの１つ以上から選択される、異種核酸配列を含んでもよい。
【００２６】
タンパク質タグは、アルブミン結合タンパク質（ＡＢＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、ＡＵ１エピトープ、ＡＵ５エピトープ、ＡｖｉＴａｇ、バクテリオファージＴ７エピトープ（Ｔ７−タグ）、バクテリオファージＶ５エピトープ（Ｖ５−タグ）、ビオチン−カルボキシ担体タンパク質（ＢＣＣＰ）、ブルータングウイルスタグ（Ｂ−タグ）、単一ドメインのラクダ抗体（Ｃ−タグ）、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰまたはカルモジュリン−タグ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、セルロース結合ドメイン（ＣＢＰ）、キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）、コリン結合ドメイン（ＣＢＤ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、ＤｏｇＴａｇ、Ｅ２エピトープ、Ｅ−タグ、ＦＬＡＧエピトープ（ＦＬＡＧ−タグ）、ガラクトース結合タンパク質（ＧＢＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ（ＥＥ−タグ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）、ＨａｌｏＴａｇ（商標）、交互ヒスチジンおよびグルタミンタグ（ＨＱタグ）、交互ヒスチジンおよびアスパラギンタグ（ＨＮタグ）、ヒスチジンアフィニティタグ（ＨＡＴ）、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、ＨＳＶエピトープ、イソペプタグ（Ｉｓｏｐｅｐ−タグ）、ケトステロイドイソメラーゼ（ＫＳＩ）、ＫＴ３エピトープ、ＬａｃＺ、ルシフェラーゼ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｍｙｃエピトープ（Ｍｙｃ−タグ）、ＮＥ−タグ、ＮｕｓＡ、ＰＤＺドメイン、ＰＤＺリガンド、ポリアルギニン（Ａｒｇ−タグ）、ポリアスパラギン酸（Ａｓｐ−タグ）、ポリシステイン（Ｃｙｓ−タグ）、ポリグルタミン酸（Ｇｌｕ−タグ）、ポリヒスチジン（Ｈｉｓ−タグ）、ポリフェニルアラニン（Ｐｈｅ−タグ）、プロフィニティｅＸａｃｔ、プロテインＣ、Ｒｈｏ１Ｄ４タグ、Ｓ１−タグ、Ｓ−タグ、ソフタグ１、ソフタグ３、スヌープタグＪｒ、スヌープタグ、スポットタグ、ＳｐｙＴａｇ（Ｓｐｙ−タグ）、ストレプトアビジン結合ペプチド（ＳＢＰ）、ブドウ球菌タンパク質Ａ（プロテインＡ）、ブドウ球菌タンパク質Ｇ（プロテインＧ）、ストレプタグ、ストレプトアビジン（ＳＢＰ−タグ）、ストレプタグＩＩ、Ｓｄｙ−タグ、低分子ユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）、タンデムアフィニティ精製（ＴＡＰ）、Ｔ７エピトープ、テトラシステインタグ（ＴＣタグ）、チオレドキシン（Ｔｒｘ）、ＴｒｐＥ、Ｔｙタグ、ユビキチン、ユニバーサル、Ｖ５タグ、ＶＳＶ−ＧまたはＶＳＶ−タグおよびＸｐｒｅｓｓタグのうちの１つ以上から選択されてもよい。
【００２７】
さらなる実施態様によれば、血液、赤血球またはドナー臓器からＡ抗原を酵素的に除去する方法であって、（ａ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質およびガラクトサミニダーゼタンパク質と、（１）Ａ型抗原を含む血液、（２）Ａ型若しくはＡＢ型の赤血球、または（３）Ａ型抗原を提示するドナー臓器とを混合する工程と、（ｂ）酵素が血液、赤血球またはドナー臓器からＡ抗原を切断するのに十分な期間、酵素を、（１）血液、（２）Ａ型若しくはＡＢ型の赤血球、または（３）ドナー臓器と共に、インキュベートする工程とを含む方法が提供される。
【００２８】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４および配列番号３５のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質であり、ガラクトサミニダーゼは、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７のうちの１つ以上から選択される精製タンパク質であってもよい。
【００２９】
前記組成物は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２〜３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含んでもよい。
【００３０】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼは、配列番号４または配列番号５の精製フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質であってもよく、ガラクトサミニダーゼは、配列番号９または配列番号１０の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質であってもよい。
【００３１】
前記方法は、さらに、クラウディング剤を添加することを含めてもよい。クラウディング剤は、デキストラン、硫酸デキストラン、デキストリン、プルラン、ポリ（エチレングリコール）、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、超分岐グリセロール、および不活性タンパク質のうちの１つ以上から選択されてもよい。
【００３２】
前記方法は、血液、赤血球またはドナー臓器を洗浄し、ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ、ガラクトサミニダーゼおよびクラウディング剤を除去することをさらに含んでもよい。
【００３３】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、約６．５と約７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有してもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有してもよい。
【００３４】
さらなる実施態様によれば、（ａ）精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質および（ｂ）精製ガラクトサミニダーゼタンパク質を含む、血液採取保存システムが提供される。
【００３５】
前記システムは、酵素が固定化される表面をさらに含んでもよく、当該表面は、以下の１つ以上から選択される：（ａ）ビーズまたはマイクロスフェア、（ｂ）容器、（ｃ）管、（ｄ）カラム、または（ｅ）マトリックス。
【００３６】
さらなる実施形態によれば、血液採取保存装置が提供され、当該装置は、（ａ）表面、（ｂ）表面に固定化された精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質、および（ｃ）表面に固定化された精製ガラクトサミニダーゼタンパク質を含む。
【００３７】
酵素が固定化される装置表面は、以下の１つ以上から選択され得る：（ａ）ビーズまたはマイクロスフェア、（ｂ）容器、（ｃ）管、（ｄ）カラム、（ｅ）マトリックス。容器はバッグであってもよい。
【００３８】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１００μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、９０μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を８０μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、７０μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、６０μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を５０μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を４０μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を３０μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を２０μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１５μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１４μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１３μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１２μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１１μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１０μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を９μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、８μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を７μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、６μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を５μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を４μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を３μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を２μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を１μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．９μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．８μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．７μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．６μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃ���アセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．５μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．４μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．３μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．２μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．１μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．０９μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．０８μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．０７μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、０．０６μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．０５μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．０４μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．０３μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．０２μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、Ａ抗原を０．０１μｇ／ｍｌ以下で切断でき得る。
【００３９】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、約６．５と約７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有してもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、約６．０と約８．０との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有してもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、約６．８と約７．８との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有してもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、約６．９と約７．９との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有してもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、約６．４と約７．８との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有してもよい。
【００４０】
ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有していてもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、３°Ｃと３８°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有していてもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、４°Ｃと４０°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有していてもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、４°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有していてもよい。ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼは、５°Ｃと３７°Ｃとの間の温度でＡ抗原切断活性を有していてもよい。
【００４１】
精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよび精製ガラクトサミニダーゼは固定化されてもよい。精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼは固定化されてもよい。精製ガラクトサミニダーゼは固定化されてもよい。固定化酵素は、表面に付着してもよい。表面は、ビーズまたはマイクロスフェア、容器、管、カラム、またはマトリックスのうちの１つ以上から選択されてもよい。表面は、容器、管、カラム、またはマトリックスのうちの１つ以上から選択してもよい。容器はバッグであってもよい。
【００４２】
別の実施形態によれば、配列番号２、配列番号４または配列番号５のフラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを含む精製酵素が提供される。
【００４３】
別の実施形態によれば、配列番号７、配列番号９または配列番号１０のフラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼを含む精製酵素が提供される。
【００４４】
別の実施形態によれば、精製クロストリジウム・テルチウムＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよび配列番号１４のガラクトサミニダーゼ融合タンパク質を含む精製酵素が提供される。
【００４５】
別の実施形態によれば、本願明細書に記載される核酸と異種核酸配列とを含むベクターが提供される。
【００４６】
別の実施形態によれば、この方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで実施してもよい。本明細書で使用されるｅｘ  ｖｉｖｏは、この方法が生物の外部で実施されることを意味する。例えば、ｅｘ  ｖｉｖｏは、ｅｘ  ｖｉｖｏ肺灌流（ＥＶＬＰ）および提供された血液の処置を包含する。本明細書中で使用される場合、ｅｘ  ｖｉｖｏとは、組織または細胞（例えば赤血球やドナー臓器）がｉｎ  ｖｉｖｏであったときにその組織または細胞が置かれていた状態から最小のまたはいくらかの変化を伴う外部環境における、生物からの組織または細胞の中または上で行われる実験または測定または処置を指す。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、Ａ型、Ｈ型およびＢ型について、α−１，３−結合−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）またはガラクトース（Ｇａｌ）で終端する細胞表面抗原糖鎖構造の概略図を示し、ここで三角形は、α−アセチル−ガラクトサミニダーゼＥｍＧＨ１０９およびα−ガラクトシダーゼＢｆＧａｌ１１０の切断点を示す。
【図２】図２は、Ａ抗原切断のデアセチラーゼ経路を、対応する質量分析（ＭＳ）とともに示しており、これにより、フラボニフラクター・プラウティ（Ｆｐ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼは、Ａ抗原の末端α−Ｎ−アセチル−ガラクトサミンからアセチル基を切断し（−４２ｍ／ｚ）、次いで、ガラクトサミニド中間体は、フラボニフラクター・プラウティ（Ｆｐ）ガラクトサミニダーゼにより切断される（−１６１ｍ／ｚ）。
【図３】図３は、異なる濃度のＥｍＧＨ１０９またはフラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ）＋フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ  （Ｆｐガラクトサミニダーゼ）で処理、または３７°Ｃで１時間処理したＡ＋ＲＢＣのＦＡＣＳ分析を示しており、可視化のために抗Ｈ抗体（二次ＦＩＴＣ標識を追加）およびＡＰＣ標識抗Ａ抗体が使用され、Ｈ抗原の出現領域は左上のボックスにある。列Ａ〜Ｄは、５μｇ／ｍｌ（Ａ）、１０μｇ／ｍｌ（Ｂ）、５０μｇ／ｍｌ（Ｃ）、５０μｇ／ｍｌ＋デキストラン４０ｋ（Ｄ）でＥｍＧＨ１０９およびＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋ＦｐＧａｌＮａｓｅを比較する。
【図４】図４は、ＥｍＧＨ１０９とＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋ＦｐＧａｌＮａｓｅを、種々の酵素濃度において、種々の温度（すなわち、４°Ｃ、室温（ＲＴ）および３７°Ｃ）において、デキストランの存在下（■）および非存在下（◆）で比較したものである。
【図５】図５は、Ａ＋Ｂ＋およびＯ＋赤血球切断産物のＨＰＡＥ−ＰＡＤ分析、およびＡ＋赤血球における全長フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ）＋フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ（ＦｐＧａｌＮａｓｅ）酵素と切断されたＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋ＦｐＧａｌＮａｓｅ酵素との比較を示す。
【図６】図６は、（Ａ）ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよび（Ｂ）Ｆｐガラクトサミニダーゼの各々についてのｐＨプロファイルを示す。
【図７】図７は、（Ａ）Ａ＋ＲＢＣコントロール、（Ｂ）フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ）＋フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ  （ＦｐＧａｌＮａｓｅ）（１０ｕｇ／ｍＬ）、（Ｃ）ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋クロストリジウム・テルチウム（Ｃｔ）Ｃｔ５７５７＿ＧａｌＮａｓｅ（１０ｕｇ／ｍＬ）、および（Ｄ）ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋ロビンソニエラ・ペオリエンシス（Ｒｏｂｉｎｓｏｎｉｅｌｌａ  ｐｅｏｒｉｅｎｓｉｓ）（Ｒｐ）ガラクトサミニダーゼ（Ｒｐ１０２１）ＧａｌＮａｓｅ（１０ｕｇ／ｍＬ）について、ＦＡＣＳを介して分析したＡ赤血球上のＡ抗原のＨ抗原への変換を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
以下の詳細な説明は、添付の図と併せて読むとよりよく理解されるであろう。本発明を説明するために、図面は本発明の実施形態を示す。しかしながら、本発明は、示される正確な構成、実施例、および手段に限定されない。
【００４９】
本明細書において直接定義されない用語は、本発明の技術分野において理解されるように、それらに一般的に関連する意味を有するものと理解されるものとする。
【００５０】
本明細書で使用される「固定化酵素」は、不活性の不溶性物質であってもよい表面に付着した酵素である。酵素の固定化は、ｐＨ、温度などの条件の変化に対する抵抗性を増大させ、使用後および酵素再使用のためのそれらの除去を補助することができる。
【００５１】
酵素の固定化は、種々の方法（例えば、アフィニティタグ結合、ガラス上の表面吸着、樹脂、アルギン酸塩ビーズまたはマトリックス、ビーズ、繊維またはマイクロスフェアの捕捉、表面または他の酵素への架橋結合および表面への共有結合）によって達成されてもよい。
【００５２】
本明細書中で使用する場合、「アフィニティタグ結合」とは、酵素の表面への固定化（例えば、非共有結合性または共有結合性のタンパク質タグを用いる多孔質材料）を指す。アフィニティタグ結合は、タンパク質精製に使用されており、より最近では、ＥｚｉＧ（商標）  （スウェーデンのＥＮＧＩＮＺＹＭＥ  ＡＢ（商標）（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ  １９９２／０１０１１３）、およびＰＣＴ／ＳＥ  ２０１５／０５０１０８）によって生物触媒用途に使用されている。活性酵素を表面に付着させるための代替システムが当該技術分野で公知である（例えば、ＵＳ４０８８５３８、ＵＳ４１４１８５７、ＵＳ４２０６２５９、ＵＳ４２１８３６３、ＵＳ４２２９５３６、ＵＳ４２３９８５４、ＵＳ４６１９８９７、ＵＳ  ４７４８１２１、ＵＳ４７４９６５３、ＵＳ４８９７３５２、ＵＳ４９５４４４４、ＵＳ４９７８６１９、ＵＳ５１５４８０８、ＵＳ５９１４３６７、ＵＳ５９６２２７９、ＵＳ６０３０９３３、ＵＳ６２９１５８２、ＵＳ６２５４６４５、ＵＳ１０，０１６，４９０、およびＵＳ１０，０４１，０５５を参照）。
【００５３】
タンパク質タグは、組換えタンパク質上に遺伝的にグラフトされたペプチド配列であり、化学剤または酵素的手段によって除去可能であることが多く、種々の目的のためにタンパク質に結合される。表Ａに記載されているタンパク質タグは、実施例であることを意図しており、決して限定することを意図していない。ある種類のタンパク質タグはアフィニティタグであり、アフィニティ技術を用いて粗生物学的供給源から（例えば、発現系生物から）精製することができるように、または表面への  「タグ付けされた」  タンパク質の固定化を容易にするために、タンパク質またはペプチド配列に付加される。アフィニティタグの例としては、キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、ストレプ−タグ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、および金属マトリックスに結合するポリヒスチジン（Ｈｉｓ−タグ）が挙げられる。別のタイプのタンパク質タグはエピトープタグ（例えば、Ｖ５−タグ、Ｍｙｃ−タグ、ＨＡ−タグ、スポット−タグ、ＮＥ−タグ）であり、これは高親和性抗体の産生を容易にするために選択される短いペプチド配列であり、免疫反応性を改善するためのウイルス遺伝子配列に由来することが多い。エピトープタグは、タンパク質の精製および表面への固定にも使用されるが、ウェスタンブロッティング、免疫蛍光および免疫沈降実験に特に有用である。さらに別の種類のタンパク質タグは、クロマトグラフィタグ（例えば、ＦＬＡＧタグのようなポリアニオン性アミノ酸）であり、これは、タンパク質のクロマトグラフィ特性を変更して、分離および精製または固定化を補助するために使用され得る。さらに別のタンパク質タグは、可溶化タグ（例えば、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン（ＴＲＸ）およびポリ（ＮＡＮＰ））および蛍光タグ（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ））である。タンパク質タグは、特定の酵素的修飾、化学的修飾、またはタンパク質を他の成分に結合することを可能にする。しかしながら、タンパク質配列に付加されるタグの種類または数によっては、タンパク質本来の機能、この場合は、酵素機能は、タグによって損なわれ得る。従って、酵素の活性が損なわれないことを確実にするためにタンパク質タグを選択する必要があり、あるいは、使用前にタンパク質タグをタンパク質から切断してもよい。
【００５４】
表Ａ：代表的なタンパク質タグ
2021533783.tif 000002
2021533783.tif 000003
2021533783.tif 000004
2021533783.tif 000005
2021533783.tif 000006
【００５５】
タンパク質タグの使用は、本出願において、配列番号５、１０、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９および３１に示されるようなポリヒスチジンプロテインタグ（Ｈｉｓ−タグ）の使用を介して例示されているが、当業者であれば、使用される精製方法および／または酵素が結合される表面に応じて、任意の数の他のタンパク質タグを使用して酵素を精製し、および／または本明細書に記載されるように酵素を表面に結合することができることを容易に理解するであろう。そのようなタンパク質タグは、表Ａに列挙されたタンパク質タグのいずれか１つ以上から選択され得るが、他のそのようなタンパク質タグは、当該技術分野において公知である。
【００５６】
さらに、一つ以上の切断部位（例えば、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９および３１で使用されるトロンビン切断部位）は、酵素からタンパク質タグを分離するために、またはそうでなければ酵素を切断するために使用され得る。切断部位は、Ｎ末端メチオニン、シグナルペプチドの除去、および／または不活性もしくは非機能性タンパク質の活性タンパク質への変換（すなわち、チモーゲンまたはプロ酵素）に使用され得る。あるいは、切断部位を用いて、同じ読み枠で発現された２つ以上の酵素を分離してもよい。タンパク質またはペプチドを切断することができ、配列特異的切断部位を有するであろう酵素の例は、以下の１つ以上から選択され得る：Ａｒｇ−Ｃプロテイナーゼ、Ａｓｐ−Ｎエンドペプチダーゼ、Ａｓｐ−Ｎエンドペプチダーゼ＋Ｎ末端Ｇｌｕ  ＢＮＰＳ−スカトール、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、キモトリプシン高特異性（Ｐの前ではなく、［ＦＹＷ］のＣ末端）、キモトリプシン低特異性（Ｐの前ではなく、［ＦＹＷＭＬ］のＣ末端）、クロストリパイン（クロストリジオペプチダーゼＢ）、ＣＮＢｒ、エンテロキナーゼ、Ｘａ因子、ギ酸、グルタミルエンドペプチダーゼ、グランザイムＢ、ヒドロキシルアミン、ヨード安息香酸、ＬｖｓＣ、ＬｖｓＮ、ＮＴＣＢ（２−ニトロ−５−チオシアン安息香酸）、好中球エラスターゼ、ペプシン（ｐＨ１．３）、ペプシン（ｐＨ＞２）、プロリンエンドペプチダーゼ、プロテイナーゼＫ、ブドウ球菌ペプチダーゼＩ、タバコエッチウイルスプロテアーゼ、サーモリシン、トロンビン、トリプシン。
【００５７】
当業者は、Ａ抗原を効率的に切断することができる、本明細書に記載される活性ガラクトサミニダーゼ酵素および活性ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ酵素の組み合わせが重要であることを理解し、当業者はまた、１つ以上の切断部位および／または１つ以上のタンパク質タグの付加が任意であり、そのような改変が特定の発現系、精製系および可能な表面付着戦略に基づいて選択され得ることを理解するであろう。さらに、ガラクトサミニダーゼ配列およびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ配列に対する他の修飾も、Ａ抗原の切断活性が有意に損なわれない限り可能である。さらに、Ａ抗原切断活性が有意に損なわれない限り、ガラクトサミニダーゼおよびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼの修飾が可能である。ガラクトサミニダーゼおよびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ配列に対する修飾は、欠失、挿入および／または置換であり得る。置換は、保存的置換または中立的置換であり得る。例えば、ガラクトサミニダーゼ配列およびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ配列は、成熟酵素と９０％以上の配列同一性を共有し得る。例えば、ガラクトサミニダーゼ配列およびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ配列は、成熟酵素と８５％以上の配列同一性を共有し得る。例えば、ガラクトサミニダーゼ配列およびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ配列は、成熟酵素と７５％以上の配列同一性を共有し得る。あるいは、ガラクトサミニダーゼおよびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ配列は、アミノ酸の５、１０、１３、１５、２０、または２５％までの改変を有し得る。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「ガラス、アルギン酸ビーズまたはマトリックスへの吸着」とは、不活性物質の外側への酵素の付着を指す。一般的に、このタイプの固定化は化学反応によっては生じず、固定化された酵素の活性部位はそれが吸着された表面によってブロックされ得、これは吸着される酵素の活性を低下させ得る。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「捕捉」とは、不溶性ビーズまたはマイクロスフェア内での酵素の捕捉を指す。しかしながら、捕捉は、基質の到達および生成物の流出を妨げることがある。一例としては、アルギン酸ナトリウム溶液および酵素溶液の混合物を塩化カルシウムと反応させることによって製造することができるアルギン酸カルシウムビーズとしての使用が挙げられる。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、「架橋」とは、ほぼ酵素のみからなるマトリックスを作製するための、酵素の相互への共有結合を指す。架橋酵素反応を設計する場合、理想的には、酵素の活性は酵素の活性部位の閉塞ではなく固定化によってのみ影響されるように結合部位は酵素の活性部位をカバーしない。それにもかかわらず、ポリ（エチレングリコール）のようなスペーサ分子は、基質による立体障害を低減するために使用され得る。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、「共有結合」とは、共有結合を介した不溶性支持体または表面（例えばシリカゲル）への酵素の結合を指す。酵素と支持体または表面との間の共有結合の強度のために、酵素が支持体または表面から剥離する可能性は非常に低い。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「クラウディング剤（ｃｒｏｗｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）」とは、酵素の活性を改善するために酵素を細胞表面上に集結させることによって高分子の凝集を促進する任意のポリマーまたはタンパク質を指す。クラウディング剤は、例えば、デキストラン、デキストラン硫酸、デキストリン、プルラン、ポリ（エチレングリコール）、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、超分岐グリセロールおよび不活性タンパク質であり得る（Ｋｕｚｎｅｔｓｏｖａ，Ｉ．Ｍ ｅｔ  ａｌ.  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ.（２０１４）「Ｗｈａｔ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｏｗｄｉｎｇ  Ｃａｎ  Ｄｏ  ｔｏ  ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ」１５（１２）：２３０９０−２３１４０）。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「デキストラン」とは、１，０００ダルトン以上の分子量を有し、α−結合ｄ−グルコピラノシル反復単位の直鎖骨格を有する多糖類を指す。デキストランは、五つの炭素原子と一つの酸素原子を含むピラノース環構造に基づいて３つの構造クラス（つまり、クラス１〜３）に分けられる。クラス１のデキストランはα（１→２）、α（１→３）及びα（１→４）結合を持つｄ−グルコース分枝の小さな側鎖で修飾されたα  （１→６）−結合ｄ−グルコピラノシル骨格を含む。クラス１のデキストランは、その分子量、空間配置、分岐のタイプと程度、および分枝鎖の長さが微生物産生株と培養条件に依存して３〜５変化する。イソマルトースおよびイソマルトトリオースは、クラス１のデキストラン骨格構造を有するオリゴ糖である。クラス２のデキストラン（オルタナンス（ａｌｔｅｒｎａｎｓ））はα（１→３）及びα（１→６）結合ｄ‐グルコピラノシル単位とα（１→３）結合分枝の交互骨格構造を含む。クラス３のデキストラン（ムタンス（ｍｕｔａｎｓ））はα（１→６）結合分枝を有する連続α（１→３）結合ｄ‐グルコピラノシル単位の骨格構造を有する。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「プルランス（ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）」は、真菌アウレオバシジウム  プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）によってデンプンから主に産生される構造多糖であり、α（１→６）結合マルトトリオース（Ｄ−グルコピラノシル−α（１→４）−Ｄ−グルコピラノシル−α（１→４）−Ｄ−グルコース）単位の繰り返しからなり、時折マルトテトラオース単位を含む。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「デキストリン」とは、単一のα（１→６）結合で始まり、α（１→４）結合Ｄ−グルコピラノシル単位で直線的に続く、デキストランより短い鎖長を有するＤ−グルコピラノシル単位を指す。
【００６６】
本明細書中で使用される場合、「硫酸デキストラン」は、硫酸化を介してデキストランに由来する。
【００６７】
本明細書中で使用される場合、「Ｆｉｃｏｌｌ（商標）」は、中性で、高度に分岐し、高質量の親水性多糖であり、水溶液中で容易に溶解する。
【００６８】
様々な代替実施形態および実施例が本明細書に記載される。これらの実施形態および実施例は例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【００６９】
（材料および方法）
本試験で使用した化学物質および市販の酵素は、特に断りのない限りＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（商標）から購入した。単糖メチルウンベリフェリルグリコシドはＨｏｎｇｍｉｎｇ  Ｃｈｅｎ博士からの寛大な贈り物であり、Ａ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵはＤａｖｉｄ  Ｋｗａｎ博士（Ｋｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）からの寛大な贈り物であった。
【００７０】
ヒト糞便メタゲノムライブラリ
【００７１】
ヒトメタゲノミクスフォスミドライブラリの生成のために、血液型ＡＢ＋を有する健康なアジア人男性ボランティアからヒト新鮮糞便試料を採取した。ＭｏＥプロトコル（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ｅｔ  ａｌ．２０１７）に記述された手順に従って、直接ＤＮＡ抽出とフォスミドライブラリ作成を行った。
【００７２】
フォスミドライブラリスクリーニング
【００７３】
５１×３８４ウェルのＡＢ＋血液フォスミドライブラリプレートを室温で解凍し、５０μｌのスクリーニング用ＬＢ培地（１２．５μｇ／ｍＬクロラムフェニコール、２５μｇ／ｍＬカナマイシン、１００μｇ／ｍＬアラビノース、０．２％（ｖ／ｖ）マルトース、１０ｍＭ  ＭｇＳＯ４）を含有する３８４ウェルプレート中に複製した。プレートを、過剰な蒸発を防ぐために、水のリザーバを含む密閉容器中で３７°Ｃで１８時間インキュベートした。４５μｌの反応混合物（１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４、２％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００，１００μＭ  ＧａｌＮＡｃ−α−ＭＵ、１００μＭ  Ｇａｌ−α−ＭＵ）を、ＱＦｉｌｌ（商標）装置［Ｇｅｎｅｔｉｘ（商標）］を用いて、成長したスクリーニングプレート上に添加した。次いで、プレートを密封容器中で３７°Ｃで２４時間インキュベートし、各プレートの蛍光（例：３６５ｎｍ  Ｅｍ：４３５ｎｍ、ｓｗｅｅｐモード、ｇａｉｎ８０）を、ＳｙｎｅｒｇｙＨ１プレートリーダ［ＢｉｏＴｅｋ（商標）］を介して１、２、４、８および２４時間で測定した。全てのウェルについて、Ｚスコアを計算し、これは式：Ｚスコア＝（蛍光中央値）／標準偏差によって与えられる。
【００７４】
ある閾値を超えるすべてのポジティブヒットを、新しい３８４ウェルプレートに再配列し、「単純基質ヒット」プレートと命名し、−７０°Ｃで保存した。二つのスクリーニングプレートを「単純基質ヒット」プレートから複製し、ＧａｌＮＡｃ−α−ＭＵまたはＧａｌ−α−ＭＵ活性のいずれかについて再スクリーニングして、以前に検出された活性を確認し、デコンボリュートした。
【００７５】
ヒットのどれがＡ抗原またはＢ抗原構造を切断し得るかを決定するために、結合酵素アッセイを用いて、５０μＭのＡ抗原サブタイプ１ｔｅｔｒａ−ＭＵまたは５０μＭのＢ抗原サブタイプ１ｔｅｔｒａ−ＭＵに対するそれらの活性を測定した。この結合アッセイのバージョンは、Ｋｗａｎ（Ｋｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）によって以前に記載された。結合酵素としてＢｇａＡ（Ｓｉｎｇｈ  ２０１４）の代わりにＢｇａＣ（Ｊｅｏｎｇ  ２００９）を用いて、サブタイプ１Ａ抗原の切断も検出できるようにアッセイを改良した。α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼやα−ガラクトシダーゼは末端の糖を切断し、Ｈ抗原サブタイプＩｔｒｉ−ＭＵを遊離させる。その後、α−フコシダーゼ（ＡｆｃＡ（Ｋａｔａｙａｒｎａ  ２００４））、β−ガラクトシダーゼ（ＢｇａＣ（Ｊｅｏｎｇ  ２００９））、β−ヘキソサミニダーゼ（ＳｐＨｅｘ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ２００２））は、４−メチルウンベリフェリルアルコールが遊離するまで、残存する糖をエキソ型で切断する。これは、蛍光の増加として検出できる。これを達成するために、各酵素５０μｇ／ｍＬを反応混合物に添加した。ある閾値を超えるすべてのポジティブヒットを３回再スクリーニングし、挿入物を欠くベクターを含む宿主細胞株をネガティブコントロールとして使用した。全ての確認されたヒットは、−７０°ＣでＬＢ培地（１２．５μｇ／ｍＬクロラムフェニコール、２５μｇ／ｍＬカナマイシン、１５％（ｖ／ｖ）グリセロール、０．２％（ｖ／ｖ）マルトース、１０ｍＭ  ＭｇＳＯ４）中に別々に保存した。
【００７６】
フォスミドヒットシークエンシング
【００７７】
配列決定のためのフォスミドＤＮＡを単離するために、ポジティブヒットフォスミドグリセロールストックを用いて、５ｍＬのＴＢ培地（１２．５μｇ／ｍＬクロラムフェニコール、２５μｇ／ｍＬカナマイシン、１００μｇ／ｍＬアラビノース、０．２％（ｖ／ｖ）マルトース、１０ｍＭ  ＭｇＳＯ４）に接種し、３７°Ｃ、２２０ｒｐｍで一晩インキュベートした。フォスミド単離は、ＧｅｎｅＪｅｔ（商標）プラスミドミニプレップキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ（商標））を用いて行った。Ｐｌａｓｍｉｄ−Ｓａｆｅ（商標）ＡＴＰ−依存性ＤＮアーゼ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（商標））を用いて、単離したプラスミドをコンタミネーション線状大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＮＡから精製し、続いてＧｅｎｅＪｅｔ（商標）ＰＣＲ精製キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ（商標））を用いて別の精製を行った。濃度は、Ｑｕａｎｔ−ｉＴ（商標）ｄｓＤＮＡＨＳアッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））を用いて、Ｑｂｉｔ（商標）蛍光光度計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（商標））上で計算した。予想されるＤＮＡサイズを１％アガロースゲルで確認した。完全なフォスミドシークエンシングのために、各フォスミド２ｎｇをＵＢＣシークエンシングセンタ（バンクーバー、ＢＣ、カナダ）に送った。各フォスミドは、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑ（商標）システムを用いて個別にバーコード化し、配列決定した。
【００７８】
Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑ（商標）の未加工のシークエンスデータはすべてトリミングされ、ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ｈａｌｌａｍｌａｂ／ＦａｂＦｏｓにおいてＧｉｔＨｕｂ（商標）で入手できるＰｙｔｈｏｎスクリプトを使ってアセンブルされた。簡単に述べれば、Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃを用いて、リード（ｒｅａｄｓ）からアダプタ（ａｄａｐｔｅｒｓ）および低品質の配列を除去した（Ｂｏｌｇｅｒ  ２０１４）。これらのリードを、ＢＷＡ（Ｌｉ  ２０１３）を用いてベクターおよび宿主配列についてスクリーニングし、次いでＳａｍｔｏｏｌｓ（商標）およびｂａｍ２ｆａｓｔｑスクリプトを用いて濾過して汚染物質を除去した。これらの高品質で精製されたリードは、１０の増分によって増加する、７１と２４１との間の範囲のｋ−ｍｅｒ値を有するＭＥＧＡＨＩＴによってアセンブルされた（Ｌｉ  ２０１５）。これらのライブラリは、２万倍を超えるカバー率（ｃｏｖｅｒａｇｅ）を有することが多く、適切な配列アセンブリを妨害する配列決定エラーの蓄積を防ぐため、最小ｋ−ｍｅｒ多重度は、フォスミドの推定カバー率の１％によって計算された。複数のコンティグを生成するＰｙｔｈｏｎスクリプトアセンブリの外部で、ｍｉｎｉｍｕｓ２を使ってスキャフォールドを行った（Ｔｒｅａｎｇｅｎ  ２０１１）。パラメータ化されたコマンドは、ＧｉｔＨｕｂ（商標）ページのドキュメントとＰｙｔｈｏｎスクリプト自体の両方に見出し得る。
【００７９】
フォスミドＯＲＦ予測とヒット検証
【００８０】
フォスミドＯＲＦをＰｒｏｄｉｇａｌ（商標）（Ｈｙａｔｔ  ２０１０）のメタゲノム版を用いて同定し、ＭｅｔａＰａｔｈｗａｙｓ（商標）ｖ２．５ソフトウェアパッケージの一部としてＢＬＡＳＴＰ（商標）を用いたＣＡＺｙ（商標）データベースと比較した（Ｋｏｎｗａｒ  ２０１５）。ＭｅｔａＰａｔｈｗａｙｓ（商標）パラメータは、長さ（ｌｅｎｇｔｈ）＞６０，ＢＬＡＳＴスコア＞２０，ｂｌａｓｔスコア比＞０．４，ＥＶａｌｕｅ＜１×１０−６である。
【００８１】
ＧＨまたはＣＢＭファミリー（既知または疑われるα−ガラクトシダーゼおよび／またはα−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ活性とともに）のメンバーに対する注釈を有するすべての予測ＯＲＦを、Ｇｏｌｄｅｎ  Ｇａｔｅ（商標）クローニング戦略（Ｅｎｇｌｅｒ  ２００８）を用いてｐＥＴ１６ｂプラスミドにクローニングし、プライマー配列を表Ｂに設定した。タンパク質をＢＬ２１（ＤＥ３）で発現させ、１０ｍＬのＺＹ５０５２自動誘導培地（Ｓｔｕｄｉｅｒ  ２００５）中で３７°Ｃ、２２０ｒｐｍで２０時間培養した。細胞を遠心分離（４０００×ｇ、４°Ｃ、１０分）によって回収し、１ｍＬの溶解緩衝液（１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４、２％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ（商標）１００、１ｘプロテアーゼインヒビターＥＤＴＡフリー（Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ）［Ｐｉｅｒｃｅ（商標）］）に再懸濁した。連結アッセイ（Ｋｗａｎ ２０１５）を、候補からの粗細胞溶解物５０μｌを用いて行い、アッセイ緩衝液５０μｌ（１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４、５０μｇ／ｍＬ  ＳｐＨｅｘ、５０μｇ／ｍＬ  ＡｆｃＡ、５０μｇ／ｍＬ  ＢｇａＣ、１００μＭ  Ａ抗原サブタイプ１ｔｅｔｒａ−ＭＵ又は１００μＭ  Ｂ抗原サブタイプ１ｔｅｔｒａ−ＭＵ）と混合し、３７°Ｃでインキュベートした。すべての反応を、黒色の９６ウェルプレート中で３通りに行った。蛍光（３６５／４３５ｎｍ）をＳｙｎｅｒｇｙ（商標）Ｈ１プレートリーダ［ＢｉｏＴｅｋ（商標）］を用いて４時間連続的にモニタした。ＡまたはＢ抗原に対する切断活性を示す粗抽出物からのアッセイを、今回は結合酵素なしで繰り返し、反応生成物をＨＦ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  Ｃ１８カラムを介して単離し、ＬＣ−ＭＳおよび／またはＴＬＣで分析した。ＴＬＣは、ＴＬＣシリカゲル６０  Ｆ２５４  ＴＬＣプレート［ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．（商標）、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ、ＵＳＡ］を用いて実施した。
【００８２】
表Ｂ：プライマー配列
2021533783.tif 000007
【００８３】
ＨＰＡＥ−ＰＡＤアッセイ
【００８４】
ガラクトサミンの酵素的放出の分析をＨＰＡＥ−ＰＡＤ（Ｄｉｏｎｅｘ（商標））ＨＰＬＣシステムで行った。以下の基質について、種々のタンパク質の切断活性を試験した：７．５μｇ／μＬのブタ胃タイプＩＩ由来ムチンを１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４  ｐＨ７．４に溶解したもの、５ｍＭ  Ａ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵを１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４  ｐＨ７．４中に存在させたもの、および、Ａ＋、Ｂ＋およびＯ−型ドナーからのＲＢＣ（ヘマトクリット５０％）を１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４中に存在させたもの。１０μｇ／ｍＬの酵素を含む試料を、３７°Ｃで二時間インキュベートし、その後、さらなる分析のために−８０°Ｃで保存した。少量の反応物（１０μｌ）をＨ２Ｏ（１００μｌ）中に希釈し、ＨＰＡＥ−ＰＡＤ装置で分析した。ガードカラムを有するＣａｒｂｏＰＡＣＰＡ２００（商標）（１５０ｍｍ）カラムで分離を行い、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）電極上の使い捨て金及び四電位波形を用いて検出を行った。分離条件は次の通りであった：１００ｍＭ水酸化ナトリウムおよび７０から３００ｍＭまでの酢酸ナトリウム勾配を分離の最初の１０分間にわたって与えた。溶離液を最終勾配条件で１分間保持し、次の１分間にわたって初期条件に戻した。流速は１．０ｍｌ／分で、インジェクションは２７分毎に行った。遊離糖ＧａｌＮＡｃ、ＧａｌおよびＧａｌＮ（１０μＭ）の基準をＨＰＡＥ‐ＰＡＤに適用し、参照のためピーク溶出時間を決定した。
【００８５】
動態アッセイ
【００８６】
脱離基として４−メチルウンベリフェロンを用いた全ての動態アッセイを蛍光の測定により行った。内部フィルタ効果（Ｐａｌｍｉｅｒ  ２００７）に基づく測定誤差を避けるために、標準曲線を用いて蛍光色素の線形範囲を検証した。
【００８７】
Ｆｐガラクトサミニダーゼ
【００８８】
Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−ＭｅｎｔｅｎパラメータをＧａｌＮ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵおよびＡ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵについて１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４，ｐＨ７．４，  ３７°Ｃで測定した。１００μｌ中で３．４ｎＭのＦｐガラクトサミニダーゼ（５．３１ｎＭ  ＦｐＧａｌＮａｓｅ＿ｔｒｕｎｃＡ）および０．１ｍｇ／ｍＬのＳｐＨｅｘ，ＡｆｃＡ，０．２ｍｇ／ｍＬのＢｇａＣおよび種々の濃度の基質（５μＭ〜２ｍＭ）と反応させた。複製物としてコントロール（Ｆｐガラクトサミニダーゼなし）を伴う一連の四つの反応を行った。加水分解によるＭＵ放出から生じる蛍光シグナル（３６５／４３５ｎｍ）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ［ＢｉｏＴｅｋ（商標）］によってモニタし、同一の反応条件下で測定したＭＵ標準濃度曲線を用いて濃度に変換した。初期速度（μＭ／ｓ）を測定し、Ｇｒａｆｉｔ７．０（商標）でプロットして動態パラメータを決定した。
【００８９】
ｋｃａｔ／ＫＭパラメータを、ＧａｌＮ抗原サブタイプ１／２／４ｔｅｔｒａ−ＭＵおよびＢ抗原サブタイプ１ｔｅｔｒａ−ＭＵについて、ｐＨ７．４および３７°Ｃで測定した。反応（全容量１００μＬ）を、黒色の９６プレートウェル中で行い、結合アッセイとして、８．６３ｎＭ  Ｆｐガラクトサミニダーゼ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＳｐＨｅｘ、ＢｇａＣ（サブタイプ２に対してＢｇａＡ）、ＡｆｃＡ、様々な濃度の基質（２５μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、７．５μＭ、５μＭ）を伴う１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４）において実施した。複製物としてコントロール（Ｆｐガラクトサミニダーゼなし）を伴う一連の四つの反応を行った。加水分解によるＭＵ放出から生じる蛍光シグナル（３６５／４３５ｎｍ）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ［ＢｉｏＴｅｋ（商標）］によってモニタし、同一の反応条件下で測定したＭＵ標準濃度曲線を用いて濃度に変換した。初期速度（μＭ／ｓ）を決定し、Ｇｒａｆｉｔ７．０（商標）でプロットして、ｋｃａｔ／ＫＭ（ｓ−１＊ｍＭ−１）パラメータを決定した。
【００９０】
８６３．２ｎＭのＦｐガラクトサミニダーゼ（１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４において）または体積１００μｌにおいて様々な基質濃度（１０μＭ〜５ｍＭ）を有する３６９．９ｎＭのＦｐＧＨ４（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１００μＭ  ＮＡＤ＋、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２において）を伴う透明な９６プレート中のＧａｌＮ−α−ｐＮＰについて、３７°ＣでＭｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎパラメータを測定した。反応は、二つのコントロール（無酵素）を伴う一連の３つの反応として行った。加水分解によるｐＮＰ放出から生じる吸収（４０５ｎｍで）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ［ＢｉｏＴｅｋ（商標）］によってモニタし、同一の反応条件下で測定したｐ−ニトロフェノール標準濃度曲線を用いて濃度に変換した。初期速度（μＭ／ｓ）を測定し、Ｇｒａｆｉｔ７．０（商標）でプロットして動態パラメータを決定した。
【００９１】
ＦｐＧａｌＮａｃデアセチラーゼ
【００９２】
１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４、３７°ＣにおけるＡ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵについて、前述の結合アッセイ（Ｋｗａｎ  ２０１５）を用いて、Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎパラメータを測定した。サブタイプ１（後に４）の切断を検出できるように、β−ガラクトシダーゼとして、ＢｇａＡ（Ｓｉｎｇｈ  ２０１４）の代わりにＢｇａＣ（Ｊｅｏｎｇ  ２００９）を用いた。また、Ａ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵはガラクトースをさらに含むため、Ｇａｌ−β−１，３−β−ＧｌｃＮＡｃ−β−１，３−Ｇａｌ−β−ＭＵおよびＧａｌ−β−ＭＵの両方を切断する必要性を補うために、ＢｇａＣの濃度を０．２ｍｇ／ｍＬに上昇させた。さらに、ガラクトサミン含有中間体の切断を可能にするために、Ｆｐガラクトサミニダーゼを含めた。１００μｌでの反応セットアップは、３ｎＭのＦｐGalNAcデアセチラーゼ（４．５２ｎＭ  ＦｐＧａｌＮａｃＤｅＡｃ＿Ｄ１ｅｘｔ、３．５５ｎＭ  ＦｐＧａｌＮａｃＤｅＡｃ＿Ｄ１＋２）および０．０１ｍｇ／ｍＬのＦｐガラクトサミニダーゼ、０．１ｍｇ／ｍＬのＳｐＨｅｘ、ＡｆｃＡ、０．２ｍｇ／ｍＬのＢｇａＣおよび種々の濃度の基質（５μＭ〜２．５ｍＭ）であった。複製物としてコントロール（ＦｐＧａｌＮａｃデアセチラーゼなし）を伴う一連の四つの反応を行った。加水分解によるＭＵ放出から生じる蛍光シグナル（３６５／４３５ｎｍ）をＳｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ（商標））でモニタし、同一の反応条件下で測定したＭＵ標準濃度曲線を用いて濃度に変換した。初期速度（μＭ／ｓ）を決定し、Ｇｒａｆｉｔ７．０でプロットして、動態パラメータを決定した。
【００９３】
ｋｃａｔ／ＫＭパラメータを、Ａ抗原サブタイプ１／２／４ｔｅｔｒａ−ＭＵについて、ｐＨ７．４、３７°Ｃで決定した。反応（全容量１００μＬ）を、黒色の９６プレートウェル中で行い、結合アッセイとして、１２ｎＭ  ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ  ０．１ｍｇ／ｍＬ  ＳｐＨｅｘ、ＢｇａＣ（サブタイプＩＩに対してＢｇａＡ）、ＡｆｃＡとの、様々な濃度の基質（２５μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、７．５μＭ、５μＭ）を伴う１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ  ７．４）において実施した。複製物としてコントロール（ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼなし）を伴う一連の四つの反応を行った。加水分解によるＭＵ放出から生じる蛍光シグナル（３６５／４３５ｎｍ）をＳｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ（商標））でモニタし、同一の反応条件下で測定したＭＵ標準濃度曲線を用いて濃度に変換した。初期速度（μＭ／ｓ）を決定し、そしてＧｒａｆｉｔ（商標）７．０でプロットして、ｋｃａｔ／ＫＭ（ｓ−１＊ｍＭ−１）パラメータを決定した。
【００９４】
ＧＨ１０９サブタイプ動態
【００９５】
Ａ抗原サブタイプ１／２／４ｔｅｔｒａ−ＭＵについて、ｐＨ７．４および３７°Ｃでｋｃａｔ／ＫＭパラメータを測定した。反応（全容量１００μＬ）を黒色９６プレートウェルで実施し、結合アッセイとして、８６．０２ｎＭ  ＢｖＧＨ１０９＿１／１００．４９ｎＭ  ＥｍＧＨ１０９／８０．５２ｎＭ  ＢｖＧＨ１０９＿２／８７．４ｎＭ  ＢｓＧＨ１０９および５μＭ  ＮＡＤ＋、各ＳｐＨｅｘ、ＢｇａＣ  （サブタイプ２に対してＢｇａＡ）、ＡｆｃＡについて０．１ｍｇ／ｍＬ、種々の濃度の基質（２５μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、７．５μＭ、５μＭ）を伴う１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４で実施した。複製物としてコントロール（α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼなし）を伴う一連の四つの反応を行った。加水分解によるＭＵ放出から生じる蛍光シグナル（３６５／４３５ｎｍ）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ［ＢｉｏＴｅｋ（商標）］によってモニタし、同一の反応条件下で測定したＭＵ標準濃度曲線を用いて濃度に変換した。初期速度（μＭ／ｓ）を決定し、ｋｃａｔ／ＫＭ（ｓ−１＊ｍＭ−１）パラメータを決定するためにＧｒａｆｉｔ７．０（商標）でプロットした。
【００９６】
結晶解析
【００９７】
結晶化の前に、ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＿Ｄ１ｅｘｔをトロンビン（Ｎｏｖａｇｅｎ（商標））で１ｍｇ／ｍＬの濃度で一晩、製造業者の提案プロトコルを用いて消化した。次いで、タンパク質をＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦカラムによって精製し、流出分を回収し、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０＋７５ｍＭ  ＮａＣｌに緩衝液交換し、１２ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
【００９８】
結晶化
【００９９】
ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＿Ｄ１ｅｘｔ（１２ｍｇ／ｍＬ）を、０．２Ｍ  ＣａＣｌ２、０．１Ｍ  ＭＥＳ  ｐＨ６、１８％ＰＥＧ４０００、および２０ｍＭ  ＭｎＣｌ２からなるリザーバ溶液を用いた懸滴拡散蒸着法を用いて、１：１のタンパク質：リザーバ比で結晶化した。フェージングのために結晶を誘導体化するために迅速な臭化物浸漬を使用し、１Ｍ  ＮａＢｒ、２５％グリセロール、１８％ＰＥＧ４０００、２０ｍＭ  ＣａＣｌ２、および０．１Ｍ  Ｍｅｓ  ｐＨの溶液に３０秒間結晶を移し、液体窒素中で瞬間凍結することによって調製した。血液型Ｂ抗原三糖類（Ｂ＿ｔｒｉ）との結晶複合体を、タンパク質（１２ｍｇ／ｍＬ）を１０ｍＭ  Ｂ＿ｔｒｉと２時間プレインキュベーションすることによって調製し、その後、上記と同じ条件下で滴を設定したが、ＭｎＣｌ２は省いた。結晶を、２５％グリセロールを補充したリザーバ溶液で凍結保護した。
【０１００】
データ収集、フェージング（ｐｈａｓｉｎｇ）、構造決定
【０１０１】
データセットはＣａｎａｄｉａｎ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ（商標）で収集した。データはＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ  ２０１０）を用いて統合し、Ａｉｍｌｅｓｓ（商標）（Ｅｖａｎｓ  ２０１３）でスケール化した。フェージングおよび自動化構造ソリューションは、ＣＲＡＮＫ２（商標）（Ｓｋｕｂａｋ  ２０１３）をＣＣＰ４Ｉ２（商標）プログラムスイート（Ｐｏｔｔｅｒｔｏｎ  ２０１８）で使用して実施した。Ｃｏｏｔ（商標）（Ｅｍｓｌｅｙ  ２００４）とＲｅｆｍａｃ（商標）（Ｖａｇｉｎ  ２００４）の交互サイクルを用いて構造をチェックし、精密化した。Ｂ＿ｔｒｉ構造複合体を差分Ｆｏｕｒｉｅｒによって解き、配位子を水及び金属イオンと同様にＣｏｏｔ（商標）中に手動で構築した。差密度マップにより、アポ構造にＭｎ２＋、配位構造にＣａ２＋の存在が確認された。モデルはＣｏｏｔ（商標）およびＭｏｌｐｒｏｂｉｔｙ（商標）（Ｃｈｅｎ  ２０１０）によって検証された。アポおよびＢ＿ｔｒｉ複合体の原子座標および構造因子は、以下のアクセッション番号（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ）とともにタンパク質データバンク（ＰＤＢ）に寄託されている：
フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質配列番号：ＷＰ＿００９２６０９２６．１、およびフラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質配列番号：ＷＰ＿０４４９４２９５２．１。
【０１０２】
活性部位変異誘発
【０１０３】
構造情報（表示しない）および配列アラインメント（表示しない）に基づいて、ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＿Ｄ１ｍｉｎおよびＦｐＧａｌＮａｓｅ＿ｔｒｕｎｃＡを、ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ（商標）プロトコル（Ｚｈａｎｇ  ２００４）を用いて、表Ｂに記載されているプライマーを利用して変異させた。変異体は、上記のようにＮｉＮＴＡおよびＨＩＣカラムを介して精製された。全ての変異体の構造的完全性はＣＤ分光法によって確認された。それによると、すべての試験酵素は野生型と構造的に類似していた。活性が比較的低い変異体については、完全な動態決定に用いたのと同じ条件下で反応を行った。しかし、ｋｃａｔ／ＫＭ値の測定には前述のように基質消費法を用いた（Ｖｏｃａｄｌｏ  ２００２）。簡単に説明すると、［基質］＜ＫＭ（Ｋｍの〜１／５−１／１０に相当）である低濃度の基質において、ｋｃａｔ／ＫＭ値は、反応時間経過を一次曲線に非線形に当てはめ、酵素濃度で割ることによって近似することができる。
【０１０４】
ＧＨ３６系統発生マッピング
【０１０５】
ＧＨ３６の参照配列をＳＡＣＣＨＡＲＩＳ（商標）ｃａｚｙ＿ｅｘｔｒａｃｔ．ｐｌスクリプト（Ｊｏｎｅｓ  ２０１８）を用いてＣＡＺｙ（商標）データベースからダウンロードした。系統発生ベースのタンパク質プロファイリングソフトウェア、ＴｒｅｅＳＡＰＰ（商標）（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ｈａｌｌａｍｌａｂ／ＴｒｅｅＳＡＰＰ、において入手可能）を用いて、参照ツリーを構築し、これらのツリーに配列をマッピングした。簡単に述べれば、ｄｂＣＡＮからのＨＭＭｓを用いて、ＣＡＺｙ（商標）（Ｙｉｎ  ２０１２）からダウンロードした全ての全長配列からタンパク質ファミリードメインを抽出した。次いで、これらの配列をＵＣＬＵＳＴ（商標）を用いて７０％の配列類似性でクラスター化し、冗長な配列空間を除去し、ツリーのサイズを減少させた（Ｅｄｇａｒ  ２０１０）。ＲＡｘＭＬ（商標）バージョン８．２．０を使用して参照ツリーを構築し、「−−ａｕｔｏＭＲＥ」によって１０００回の複製が実行される前にブートストラップを終了する時期を決定し、ＰＲＯＴＧＡＭＭＡＡＵＴＯ（商標）によって最適なタンパク質モデルを選択した（Ｓｔａｍａｔａｋｉｓ２００６およびＳｔａｍａｔａｋｉｓ２００８）。
【０１０６】
次に、ＴｒｅｅＳＡＰＰ（商標）を用いて、クエリー配列をこれらの参照ツリーにマッピングした。簡単に述べれば、タンパク質配列をｈｍｍｓｅａｒｃｈ（商標）を用いてＨＭＭｓに整列させ、整列させた領域を抽出した（Ｅｄｄｙ  １９９８）。ｈｍｍａｌｉｇｎ（商標）を使用して、新しいクエリー配列を参照マルチプルアラインメントに含め、ＴｒｉｍＡｌ（商標）は保存されていない位置をアラインメントファイルから削除した（Ｃａｐｅｌｌａ−Ｇｕｔｉeｒｒｅｚ  ２００９）。ＲＡｘＭＬ（商標）を用いて、挿入により参照ツリー中のクエリー配列を分類した。各クエリー配列の配置はフィルタリングされ、単一に連結された。ｉＴＯＬ（商標）（Ｍａｔｓｅｎ２０１２およびＬｅｔｕｎｉｃ  ２０１６）で表示する前のＪｐｌａｃｅ（商標）ファイル。
【０１０７】
ＲＢＣアッセイ
【０１０８】
ブリティッシュ・コロンビア大学の臨床倫理委員会によって承認されたプロトコルを用いて、健康な同意ドナーからの全血をクエン酸Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒに採取した。チューブを１０００×ｇで４分間、室温において回転させ、ＲＢＣを分離し、１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４で３回洗浄した。デキストラン４０ｋの存在下でのアッセイのために、洗浄されたＲＢＣ（２００μＬ、１０％ヘマトクリット）をチューブに入れ、上清を部分的に除去し、デキストラン４０ｋの存在下および非存在下で１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４で置き換えた（最終濃度３００ｍｇ／ｍＬ）。さらに、いくつかのアッセイを１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４＋２５％血漿または１００％血漿中で実施した。ＲＢＣを注意深く混合し、３０秒間オービタルシェーカ上に置いた。次に、希釈した酵素溶液を加え、２００μＬの最終容量にした。チューブを非常に穏やかにボルテックスし、設定温度で所定の時間、オービタルシェーカ上に置いた。
【０１０９】
ＭＴＳカード
【０１１０】
反応後、ＲＢＣを過剰の１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４で３回洗浄し、Ｍｉｃｒｏ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（ＭＴＳ）カード［ＭＴＳ（商標）、フロリダ、アメリカ）］を使用して分析した。希釈剤中に懸濁されたＲＢＣ（１２μｌ、５％ヘマトクリット）［ＭＴＳ、フロリダ、アメリカ］を、血液とミニゲルの内容物との間に空間を残して、ミニゲルのカラムに注意深く添加した。ＭＴＳカードを、推奨されるように改変された試料ホルダーを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ａｌｌｅｇｒａ  Ｘ−２２Ｒ（商標）遠心機を用いて、室温で１５６ｘｇで６分間遠心した。ＲＢＣ表面からの抗原除去の程度は、製造業者の指示に従って、回転後のミニゲル中のＲＢＣの位置から評価した。表面抗原濃度の高いＲＢＣはゲルカラムに存在するモノクローナル抗体との相互作用で凝集し、浸透できなかった（ＭＴＳ（商標）スコア４）。表面抗原のないＲＢＣは凝集せず、ミニゲルの底に移動した（ＭＴＳスコア０）。表面抗原の部分的除去を受けたＲＢＣは、これらの間の位置に移動し、製造業者の指示に従って０（存在しない）と４（存在する）との間のスコアが割り当てられた。
【０１１１】
Ｈ抗原の凝集アッセイ
【０１１２】
酵素処理後のＡ抗原のＨ抗原への変換を分析するために、洗浄したＡ−ＥＣＯ−ＲＢＣｓを２μｇ／ｍＬの抗Ｈ抗体（抗血液型Ｈａｂ抗原抗体［９７−Ｉ］：ｃａｔ  ｎｏ．ａｂ２４２１３（Ａｂｃａｍ（商標）））と等量混合し、３０分の時間枠内での凝集の出現をモニタした。抗Ｈ抗体で凝集したＲＢＣは、０（１８００秒以内に凝集しない）と５（１２０秒以内に凝集する）の間のスコアを割り当てた。
【０１１３】
ＦＡＣＳ
【０１１４】
酵素処理したＲＢＣを１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４で２回洗浄し、１％ヘマトクリットＥＣＯ−ＲＢＣｓを１／１００ＡＰＣ−抗Ａ抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）６４７マウス抗ヒト血液型Ａ：ｃａｔ  ｎｏ．５６５３８４（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（商標）））および／または抗Ｈ抗体（抗血液型Ｈａｂ抗原抗体［９７−Ｉ］：ｃａｔ  ｎｏ．ａｂ２４２１３（Ａｂｃａｍ（商標）））で、室温において３０分間処理し、次いで１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４で２回洗浄した。抗Ｈ抗体の検出には、二次ＦＩＴＣ標識抗体（ヤギＦ（ａｂ′）２抗マウスＩｇＭ  ｍｕ鎖（ＦＩＴＣ）：ｃａｔ  ｎｏ．ａｂ５９２６（Ａｂｃａｍ（商標）））を１／５００濃度で使用した。データは、フローサイトメータ（ＣｙｔｏＦＬＥＸ（商標）（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ（商標）））を用いて１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４（ヘマトクリット１％）に再構成した後に評価した。
【０１１５】
酵素吸着と抗原性
【０１１６】
処理後のＲＢＣから酵素を容易に除去できるかどうかを試験するために、吸着可能性を評価した。パシフィックブルーで標識したＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ及びＦｐＧａｌＮａｓｅ（Ｆ／Ｐ＝１）をＲＢＣとともに３７°Ｃで１時間インキュベートし、数回の洗浄後、フローサイトメータ（ＣｙｔｏＦＬＥＸ（商標）（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ（商標）））で残留蛍光を測定した。
【０１１７】
ＲＢＣを各酵素５０μｇ／ｍＬとインキュベートし、酵素処理したＲＢＣを同種または自家血清と混合し、凝集の可能性を観察することによって、抗原性を試験した。加えて、潜在的な抗−ＩｇＧ，−Ｃ３ｄ曝露を評価するために、処理したＲＢＣを抗−ＩｇＧ，−Ｃ３ｄＭＴＳ（商標）カード［ＭＴＳ（商標）、フロリダ、アメリカ）］で試験した。インキュベーション時間は３７°Ｃにおいて３０分であった。
【０１１８】
抗原サブタイプの合成
【０１１９】
ＡおよびＢ抗原サブタイプ１／２／４ｔｅｔｒａ−ＭＵの合成は、Ｋｗａｎ（Ｋｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）に記載された修正プロトコルを用いて行った。
【０１２０】
二段階Ｈ抗原サブタイプ１／２／４ｔｒｉ−ＭＵ合成
【０１２１】
２０ｍｇのＧａｌＮＡｃ−α−ＭＵ／ＧｌｃＮＡｃ−α−ＭＵのスケールにおいて、１０ｍＬの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ，２００ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ７．４，１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、５０Ｕアルカリホスホリラーゼ、１．５当量ＵＤＰ−Ｇａｌ，１．２当量ＧＤＰ−Ｆｕｃ（ＬａｃＮＡｃ−ＭＵ生成物でスケールされる）中で３つの合成の全てを行った。所望の生成物に応じて、１００μｇ／ｍＬの濃度で種々のグリコシルトランスフェラーゼを添加した。つまり、サブタイプＩに対して、ＣｇｔＢＳ４２およびＴｅ２ＦＴ、サブタイプＩＩに対して、ＨＰ０８２６およびＷｂｇＬ、サブタイプＩＶに対してＬｇｔＤおよびＴｅ２ＦＴである。反応を３７°Ｃで実施し、進行をＴＬＣ（移動相ＥｔＡｃ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏの比が、６：２：１）によって制御し、４−メチルウンベリフェロンを１０％Ｈ２ＳＯ４を介して化合物から加水分解し、ＵＶ（３６０ｎｍ）によって検出した。さらなる生成物の増加が観察されなくなった後、反応をＨＦ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  Ｃ１８カラムに適用し、数カラム容量の５％メタノールで洗浄し、生成物を２５％メタノールで溶出した。次いで、溶媒を減圧下で除去した。
【０１２２】
Ａ抗原サブタイプ１／２／４ｔｅｔｒａ−ＭＵ合成
【０１２３】
最終合成工程は、１０ｍｇ  Ｈ抗原サブタイプ１／２／４ｔｒｉ−ＭＵのスケールで、５ｍＬ  ５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、２５Ｕアルカリホスホリラーゼ、１．５当量ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃおよび１００μｇ／ｍＬ  ＢｇｔＡ中、３７°Ｃで行われた。さらなる生成物の増加が観察されなかった後、ＴＬＣを介して、反応をＨＦ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  Ｃ１８カラムに適用し、数カラム容量の５％メタノールで洗浄し、生成物を２５％メタノールで溶出した。次いで、溶媒を減圧下で除去した。最終生成物を１．５×４６ｃｍＨＷ−４０Ｆサイズ排出カラムでさらに精製し、次いで凍結乾燥した。
【０１２４】
Ｂ抗原サブタイプ１／２／４ｔｅｔｒａ−ＭＵ合成
【０１２５】
最終合成工程は、１０ｍｇＨ抗原サブタイプ１／２／４ｔｒｉ−ＭＵのスケールで、５ｍＬ  ５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、２５Ｕアルカリホスホリラーゼ、１．５当量ＵＤＰ−Ｇａｌおよび１００μｇ／ｍＬ  ＢｏＧＴ６ａ中、３７°Ｃで実施した。さらなる生成物の増加が観察されなかった後、ＴＬＣを介して進行を追跡し、反応をＨＦ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  Ｃ１８カラムに適用し、数カラム容量の５％メタノールで洗浄し、生成物を２５％メタノールで溶出した。次いで、溶媒を減圧下で除去した。最終生成物を１．５×４６ｃｍＨＷ−４０Ｆサイズ排除カラムでさらに精製し、次いで凍結乾燥した。
【０１２６】
ＧａｌＮ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵ合成
【０１２７】
１０ｍｇのＡ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵを１μｇ／ｍＬのＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼと５ｍＬの１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４中で３７°Ｃで３０分間インキュベートした後、１ｍＭのＥＤＴＡを加えて反応を停止させ、基質の完全な変換をＴＬＣで確認し、反応物をＨＦ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  Ｃ１８カラムに適用し、数カラム容量の２％メタノールで洗浄し、生成物を１０％メタノールで溶出させた。次いで、溶媒を減圧下で除去した。
【０１２８】
タンパク質精製
【０１２９】
すべてのタンパク質およびその切断は、Ｇｏｌｄｅｎ  Ｇａｔｅ（商標）クローニング（Ｅｎｇｌｅｒ  ２００８）またはＰＩＰＥクローニング（Ｋｌｏｃｋ  ２００８）を介してｐＥＴ１６ｂまたはｐＥＴ２８ａにクローニングされた。プライマー配列は表Ｂに記載する。
【０１３０】
拡張された特性評価のためのタンパク質の産生は、ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞中で行い、２０時間、３７°Ｃ、２２０ｒｐｍで、２００ｍＬのＺＹ５０５２自動誘導培地（Ｓｔｕｄｉｅｒ  ２００５）中で培養され、１００μｌの一晩置いたＬＢ培養物に接種した。細胞を遠心分離（４０００ｘｇ、４０°Ｃ、１０分）によって回収し、１０ｍＬの溶解緩衝液（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％（ｖ／ｖ）グリセロール、４０ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．４、２ｍＭ  ＤＴＴ、１ｘプロテアーゼインヒビターＥＤＴＡフリー（Ｐｉｅｒｃｅ（商標））、２Ｕベンゾナーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ（商標））、０．３ｍｇ／ｍＬリゾチーム、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）に再懸濁し、次いで氷上で音波処理（３分間のパルス時間；５秒パルス、１０秒休止、３５％振幅）した。遠心分離（１４０００×ｇ、４°Ｃ、３０分）による細胞残渣の除去後、上清を回収し、蠕動ポンプを用いてニッケルアフィニティクロマトグラフィカラム（５ｍＬ  ＨｉｓＴｒａｐＨＰ（商標）カラム（ＧＥ（商標）））に負荷した。溶出はＡＥＫＴＡｐｕｒｉｆｉｅｒ（商標）システム（ＧＥ（商標））上で行い、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを介して５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、４００ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．４、２ｍＭ  ＤＴＴの１０〜７５％勾配でモニタし、タンパク質を含有する画分を同定し、次いでプールした。５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、２ｍＭ  ＤＴＴへの緩衝液交換および濃縮をＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ（商標）ＭＷＣＯ  １０ｋＤａ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標））中で行った。
【０１３１】
ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ、Ｆｐガラクトサミニダーゼおよびその切断は精製の第二ラウンドを行う必要があり、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ ＭＷＣＯ  １０ｋＤａ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標））を用いて、疎水性相互作用クロマトグラフィカラム（フェニルセファロース高性能カラム１０ｍＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（商標）））にタンパク質を負荷する前に緩衝液を交換した。カラムの負荷、洗浄および溶出（勾配０〜１００％）は、以下の緩衝液条件を利用して、ＡＥＫＴＡｐｕｒｉｆｉｅｒ（ＧＥ（商標））を通して処理された：ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ、結合１ｘＰＢＳ、８００ｍＭ  ＮＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４および溶出１ｘＰＢＳ、ｐＨ７．４およびＦｐガラクトサミニダーゼ、結合２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、溶出２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ  ｐＨ７．４。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、タンパク質を含有する画分を同定し、次いでプールした。５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４への緩衝液交換および濃縮をＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ（商標） ＭＷＣＯ  １０ｋＤａ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標））中で行った。
【０１３２】
タンパク質の特性解析
【０１３３】
最適ｐＨ値
【０１３４】
Ａ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵおよびＧａｌＮ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵに対するＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびＦｐガラクトサミニダーゼの活性の一般的なｐＨ範囲を、それぞれ異なるｐＨ値に対するＴＬＣプレート上の生成物の出現によって決定した。反応は１００μｌスケール、３７°Ｃ、５０μＭ基質および１μｇ／ｍＬ酵素を適切な緩衝系中で行った。ｐＨ４〜６の緩衝液は、５０ｍＭクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６〜８の場合は５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液およびｐＨ８〜１０の場合は５０ｍＭグリシン／水酸化ナトリウム緩衝液に基づいた。
【０１３５】
最適ｐＨ値を決定するために、５μｇ／ｍＬのＦｐガラクトサミニダーゼを１００μｌの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中でｐＨ範囲（５．８〜８．０）および２００μＭのＧａｌＮ−α−ｐＮＰとともにインキュベートし、ｐＮＰ放出から生じる（４０５ｎｍにおける）吸収をＳｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ（商標））により３７°Ｃで１時間モニタした。
【０１３６】
５μｇ／ｍＬのＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよび５０μＭのＡ抗原サブタイプＩｐｅｎｔａ−ＭＵを、１０分間、３７°Ｃ、２５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中で、種々のｐＨ範囲（５．８〜１０．０）でプレインキュベートした。反応を、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．５、１００μＭ  ＥＤＴＡ、５μｇ／ｍＬ  Ｆｐガラクトサミニダーゼ、５０μｇ／ｍＬ  ＳｐＨｅｘ、５０μｇ／ｍＬ  ＡｆｃＡおよび５０μｇ／ｍＬ  ＢｇａＣ、最終容量１００μｌでクエンチした。加水分解によるＭＵ放出から生じる蛍光シグナル（３６５／４３５ｎｍ）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ（商標））によって３０分間、３７°Ｃでモニタした。
【０１３７】
タンパク質の安定性
【０１３８】
ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ及びＦｐＧａｌＮａｓｅを１ｘＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４、４°Ｃで保存した。２週間後及び１２週間後に、Ａ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵに対する最適ｐＨについて記載したように、ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼとＦｐＧａｌＮａｓｅに対するＧａｌＮ−α−ｐＮＰとの結合酵素反応で酵素活性を試験した。
【０１３９】
ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ阻害
【０１４０】
ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを、結合アッセイとして、９６ウェルプレートフォーマットにおいて、異なる可能性のある阻害剤に対して試験した。１００μＬスケールで、３７°Ｃにおいて、５０μＭのＡ抗原サブタイプ１ｐｅｎｔａ−ＭＵおよび５μｇ／ｍＬのＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼを用いて、１００ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４  ｐＨ７．４において、１０μｇ／ｍＬのＦｐガラクトサミニダーゼ、５０μｇ／ｍＬのＳｐＨｅｘ、５０μｇ／ｍＬのＡｆｃＡ、５０μｇ／ｍＬのＢｇａＣと反応を行った。阻害剤として、ＥＤＴＡ（１、１０、１００μＭ）、Ｍａｒｉｍａｓｔａｔ（１、１０、１００、１０００μＭ）、ＤＭＳＯ（２％、４％）、プロテアーゼインヒビターカクテルＥＤＴＡフリー（Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ  ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ）（Ｐｉｅｒｃｅ（商標））（１ｘ、２ｘ、および４ｘ）を試験した。蛍光（３６５／４３５ｎｍ）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１（商標）プレートリーダ（ＢｉｏＴｅｋ（商標））を用いて１時間連続的にモニタした。強い効果を示す添加剤を結合酵素なしで再試験し、生成物形成をＴＬＣで分析した。
【０１４１】
限定分解
【０１４２】
Ｆｐガラクトサミニダーゼのより小さく安定なサブドメインがあるかどうかを調べるために、限定的なタンパク質分解を行った。Ｆｐガラクトサミニダーゼをサーモリシン（タンパク質：プロテアーゼ質量比１０：１）で種々の温度（２０°Ｃ、３７°Ｃ、４２°Ｃ、５０°Ｃ、および６５°Ｃ）で１．５時間処理した。次いで、試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で泳動し、安定な断片を（最初の１１８ｋＤａから）約７０ｋＤａで泳動して同定し、ほぼ完全な分解が５０°Ｃのインキュベーション温度で達成された。この断片はペプチド同定のためにＵＢＣプロテオミクスコア施設に送られ、アミノ酸６９０〜７００間の切断部位を有する全長タンパク質のＣ末端切断型であると決定された。
【０１４３】
グリカンアレイスクリーニング
【０１４４】
グリカンアレイスクリーニングのために、５００μｇのＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＿Ｄ  ２ｅｘｔを、Ｆｌｕｏｒｏｔａｇ（商標）ＦＩＴＣ結合キット（Ｓｉｇｍａ（商標））を用いてフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）でＦ／Ｐ比１で標識した。スクリーニングは、５および５０μｇ／ｍＬのタンパク質濃度に対して６回の反復で６００個のグリカンから構成されたＣＦＧのＰｒｏｔｅｉｎ−Ｇｌｙｃａｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｃｏｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ（商標）バージョン５．３の印刷されたアレイで実施された。結合モチーフの分析は、エモリー大学  （ｈｔｔｐｓ：／／ｇｌｙｃｏｐａｔｔｅｒｎ．ｅｍｏｒｙ．ｅｄｕ／）のウェブツールを用いて行った。
【０１４５】
（実施例）
実施例１：メタゲノムライブラリの構築およびスクリーニング
【０１４６】
ＡＢ＋血液型の男性ドナーが提供した糞便試料から抽出したＤＮＡの大きな（３５〜６５  ｋｂ）フラグメントを含むメタゲノムライブラリを構築した。このようなライブラリは、細菌当たり複数の遺伝子を含み、これらの遺伝子の少なくともいくつかの発現の確率を高め、複数の遺伝子の小さな「経路」の発現を可能にする。本発明者らのライブラリは、約１９，５００クローンを５１×３８４ウェルプレートに含み、約８０万遺伝子である可能性があり、従って、高価なＡ抗原基質を用いたそのようなライブラリの初期スクリーニングは実用的ではなかった。むしろ、単純で高感度の蛍光発生基質であるガラクトースとＮ−アセチル−ガラクトサミンのメチルウンベリフェリルα−グリコシド（Ｇａｌ−α−ＭＵおよびＧａｌＮＡｃ−α−ＭＵ）を用いてスクリーニングした。この二つの基質を混合した最初のスクリーニングでは、２２６ヒットのサブセットが得られた。これらを各々の個々の基質に対して再スクリーニングし、４４をＧａｌＮＡｃａｓｅで、１６６をガラクトシダーゼ活性で同定した。第二ラウンドのスクリーニングは、図１に示されるＡ抗原およびＢ抗原四糖グリコシド基質を用いて、基質が存在しないコントロール群と共に、結合酵素アッセイ（Ｋｗａｎ  ２０１５）を用いて、これらのヒットについて実施した：最初のＧａｌまたはＧａｌＮＡｃが切断された場合にのみ、結合酵素が作用し、ＭＵを放出することができる。これらのヒットのうち１１個は、Ａ抗原切断活性を含み、そのうちの一つは、Ｂ抗原も切断したが、一方で基質の非存在下で、６個は蛍光を生成し、したがって、無関係な蛍光産物を生成する経路をコードする。
【０１４７】
実施例２：ヒットのシークエンスおよび初期分析
【０１４８】
１１個のプラスミドをＩｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑ（商標）上で配列決定し、ＣＡＺｙ（商標）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／）（Ｌｏｍｂａｒｄ  ２０１４）に存在するＯＲＦｓをＭｅｔａｐａｔｈｗａｙｓ（商標）ソフトウェア（Ｋｏｎｗａｒ  ２０１５）を用いて同定した。現在利用可能なヒトマイクロバイオーム配列決定のかなりの深さのために、すべてのフォスミドが由来する生物を同定することができた。Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の二種のゲノムの重複断片に由来する１１種のうちの８種から、それらの配列は５つのクラスターに分類できた。クラスターＢのすべてのフォスミドに共通な唯一の遺伝子はＧＨ１０９酵素（Ｂ．ｖｕｌｇａｔｕｓ）である。クラスターＡはＧＨ１０９  （Ｂ．ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ）も含んでいるが、ＧＨ１０９は他のバクテロイデス由来のフォスミド（Ｂ．ｖｕｌｇａｔｕｓ）に見られる唯一のＣＡＺｙ遺伝子である。偏性嫌気性菌フラボニフラクター・プラウティ（Ｌｉ  ２０１５）由来のフォスミドＮ０８はＣＡＺｙ内に見られる三つのＯＲＦ，すなわち見かけの糖鎖結合モジュールＣＢＭ３２と二つの潜在的グリコシドヒドロラーゼＧＨ３６とＧＨ４を含む。最後にコリンゼラ（Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ）ｓｐ．、おそらくＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ  ｔａｎａｋａｅｉ由来のフォスミドＫ０５はＣＡＺｙ関連ＯＲＦを含まない。ここでは、フォスミドＫ０５のサブライブラリの生成により、Ａ切断活性を有するＯＲＦの同定が可能となり、後にＧＨ３６（表示しない）として同定された。
【０１４９】
実施例３：ＧＨ１０９酵素の分析
【０１５０】
ＧＨ１０９ファミリーは、そのメンバーのうちのいくつかのＡ抗原切断活性に基づいて見出された。これらの酵素は、通常とは異なるＮＡＤ＋依存性機構を用いるものであるが、この機構は、当該機構を示したＧＨ４  Ａｄｄ  Ｙｉｐ  Ｒｅｆ（２００４）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６，８３５４−８３５５における酵素で最初に発見された（Ｖａｒｒｏｔ  ２００５およびＬｉｕ  ２００７）。ここで同定した３つのＧＨ１０９遺伝子をシグナルペプチドの除去後にＨｉｓタグを付してクローニングし、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）において発現させた。これら三つのタンパク質、ＢｓＧＨ１０９、ＢｖＧＨ１０９＿１およびＢｖＧＨ１０９＿２（表示しない）を、標準としてのＥｌｉｚａｂｅｔｈｋｉｎｇｉａ  ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ由来の標準的なＧＨ１０９（ＥｍＧＨ１０９）（Ｌｉｕ  ２００７）と共に精製し、それぞれについて動態パラメータを決定した。３つの新規酵素は、試験した３つのＡサブタイプ基質のそれぞれと同様の触媒効率を示し、主にＥｍＧＨ１０９標準の動態パラメータを反映した。対照的に、承認されたＭＴＳカードを用いてＡ＋ＲＢＣでそれらのＡ抗原切断活性が試験されたとき、残念ながらＥｍＧＨ１０９のみが有意な活性を示した。試験は、クラウディング剤としてのデキストラン４０Ｋの存在下で行ったが、当該クラウディング剤は細胞表面に酵素を集結させることにより活性を増加させることが示されている（Ｃｈａｐａｎｉａｎ  ２０１４）。それが存在しない場合、１５０ｕｇ／ｍＬのＥｍＧＨ１０９であっても効果を示さなかったが、３００ｍｇ／ｍＬのデキストラン４０Ｋの存在下では、１５μｇ／ｍＬの酵素で十分であった（図３および４参照）。以前の研究においては、低イオン強度もまた細胞上のＥｍＧＨ１０９の活性を高めることを示している（Ｌｉｕ  ２００７）。したがって、ＥｍＧＨ１０９は血液全体においては効果的ではない。
【０１５１】
実施例４：Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ  ｓｐ．由来のフォスミドＫ０５由来のＧＨ３６の分析
【０１５２】
フォスミドＫ０５中に同定されたＧＨ３６タンパク質（Ｋ０５ＧＨ３６という名前）はＧａｌＮＡｃ−α−ＭＵとＡ抗原四糖に対して活性を示した。これは、主にα−ガラクトシダーゼとα−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼを含み、共有結合β−グリコシル酵素中間体を含む二重置換機構により加水分解を行う（ｃｏｍｆｏｒｔ  ２００７）ＧＨ３６ファミリーの一員であることと一致する。系統発生解析により、その配列はＧＨ３６サブファミリーのクラスター４内に配置された（Ｆｒｅｄｓｌｕｎｄ  ２０１１）。興味深いことに、このクラスターは、Ａ抗原構造を切断することも知られているＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ由来の特徴づけられたＧＨ３６も近接して含んでいる（Ｃａｌｃｕｔｔ  ２００２）。しかし、赤血球からＡ抗原を除去するＫ０５ＧＨ３６の能力を試験したところ、その活性は期待外れであり、クラウディング剤と併用した場合でも３しかスコア付けされなかった。
【０１５３】
実施例５：フラボニフラクター・プラウティ由来のフォスミドＮ０８の分析
【０１５４】
これらの新規酵素は利点を提供しないので、Ｆ．プラウティ由来のＮ０８フォスミドに注目したが、それは、特にその遺伝子産物がＡ抗原とＢ抗原の両方を切断するためである。三つのＣＡＺ関連遺伝子を複製し、それらのシグナルペプチド配列を除去し、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）で発現させ、得られた酵素を１４０ｍｇ／Ｌまでの収率で精製した。驚くべきことに、ＡおよびＢ四糖類基質に対して個々の精製タンパク質を試験したとき、観察された唯一の切断はＮ０８ＧＨ３６によるＢ抗原の切断のみであり、それらのいずれによるＡ抗原の切断もなかった。このため、これらの酵素の対の組み合わせを試験し、Ｎ０８ＣＢＭ３２とＮ０８ＧＨ３６の混合物がＡ抗原四糖類を迅速に切断することを発見したことに驚いた。個々の酵素との反応混合物のＴＬＣ分析により、Ｎ０８ＣＢＭ３２が、より極性を有するが、依然としてＵＶ活性を有する生成物へのＡ抗原の変換を触媒することが明らかにされ、一方で、その後のＮ０８ＧＨ３６の添加により、Ｈ抗原三糖類と共にガラクトサミンと共移動する糖生成物が放出された。反応混合物のＭＳ分析により、Ｎ０８ＣＢＭ３２がＡ抗原デアセチラーゼであることが示され、従って４２ｍ／ｚおよび、より極性を有する生成物の減少であり、一方で、Ｎ０８ＧＨ３６はガラクトサミニダーゼであり、このファミリーにおける新しい活性を有することが示された（図２）。これは反応の高速陰イオン交換クロマトグラフィ（ＨＰＡＥ−ＰＡＤ）分析（図５）によってさらに確認され、両酵素によるＡ抗原の処理はガラクトサミンを放出するが、個々の酵素によっては放出しないことを示した。同様の結果は胃粘素基質でも得られたが、この酵素はおそらくこの基質に対して進化したと思われる。したがって、この２つの酵素は、以後、ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ）およびＦｐガラクトサミニダーゼ（ＦｐＧａｌＮａｓｅ）と呼ばれる。
【０１５５】
Ａ抗原分解のこの経路は、これまで特徴づけられていなかったが、興味深いことに、５０年以上前にいわゆる「後天性」Ｂ現象の説明として示唆されていた。この現象では、クロストリジウム・テルチウムに感染したＡ型患者は、テムズ川に沈められたヒト組織の法医学的サンプルと同様に（Ｒｅｆ  Ｊｕｄｄ  ａｎｄ  Ａｎｎｅｓｌｅｙ  ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ０８８７−７９６３（９６）８００８７−３，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９６）１０，１１１−１１７）、血液型がＢ型に明らかに変化した（Ｇｅｒｂａｌ  １９７５）。これはおそらく、タイピングに用いた抗Ｂ抗体が末端のＧａｌとＧａｌＮを区別できなかったためであろう。
【０１５６】
フォスミドの３番目の酵素であるＧＨ４を調べたところ、それはＧａｌ−α−ｐＮＰ、ＧａｌＮ−α−ｐＮＰおよびＧｌｃＮ−α−ｐＮＰを加水分解するが、Ａ抗原に基づく基質を切断しないことがわかった。したがって、それはＡ抗原の変換に直接関与していないようである。しかしながら、これらのグリコサミニダーゼはＧＨ４ファミリー内において新しい活性を示す。
【０１５７】
実施例６：ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼの特性評価
【０１５８】
Ｐｈｙｒｅ２（商標）（Ｋｅｌｌｅｙ ２０１５）によるこの遺伝子のより詳細な生物情報学的分析により、Ｎ末端においてこれまで機能が未知であった約３０８アミノ酸ドメインおよびＣ末端近くの約１４５アミノ酸ＣＢＭ３２、そしてその間にリンカー領域を有することが示された。未加工のデアセチラーゼドメインを含む全ての構築物が実際に触媒活性を示したことから（表２）、切断分析により、この基本構造が確認された。従って、このタンパク質は、新しい糖鎖エステラーゼファミリー、ＣＥｘｘの創始メンバーとして分類される。
【０１５９】
アセトアミド糖デアセチラーゼはすべて二価金属イオンを必要とする金属酵素であることが証明されている（Ｂｌａｉｒ  ２００５）。このことと一致して、１００μＭのＥＤＴＡで処理すると、酵素活性はほとんど消失したが、Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋、Ｎｉ２＋またはＺｎ２＋の添加では増加した。（非金属）アミダーゼの他の阻害剤は効果がなかった。本酵素の最適ｐＨは８付近（図６）で、基質特異性は狭く、異なるＡサブタイプとそれより短いバージョンに限定されていた。しかし、これらのサブタイプの中では、それはあまり区別できず、これらのサブタイプのすべての間で、比活性に約２倍の差があるにすぎない（表２）。このようなｐＨ依存性および特異性プロファイルは、Ａのすべてのサブタイプが脱アセチル化されているが、それ以外のものはないため、ＲＢＣ変換に理想的である。
【０１６０】
タンパク質のＣＢＭ部分の特異性は、Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｌｙｃｏｍｉｃｓ（ＣＦＧ）のグリカンアレイを用いて検討した。好ましい標的は、ＣＢＭ３２ファミリーの創設メンバー、つまりクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のＮ−アセチルグルコサミニダーゼ（Ｆｉｃｋｏ−Ｂｌｅａｎ  ２００６）についても見られるように、反復Ｎ−アセチルラクトサミン（ＬａｃＮＡｃ）構造を有するグリカンであった。しかし、ＣＢＭとは異なり、我々の組成物は血液抗原構造に高親和性結合を示さない。反復ＬａｃＮＡｃ構造は、いくつかのＯ−グリカンおよび糖脂質と同様に、複合体およびハイブリッドＮ‐グリカンの一般的成分として細胞表面の共通成分である（Ｃｏｈｅｎ  ２００９）。われわれの場合、これらはおそらくデアセチラーゼドメインが結合するためのアンカーポイントとして働いている。これにより、その触媒ドメインは、それ自身の基質と競合することなく、Ａ抗原に近接するようになる。このモデルを支持するように、ドメインを除去すると、可溶性基質の切断速度に影響することなくＲＢＣの活性が低下した（表２）。
【０１６１】
実施例７：ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼの結晶解析
【０１６２】
この新規酵素活性に対する構造的洞察を提供するために、切断されたタンパク質を結晶化試験に供し、ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＿Ｄ１ｅｘｔが最良の分解能に回折する結晶を生成することを見出した。この構造の溶液により、Ｄ１００とＨ２５２により配位結合した二価金属イオンを含む活性部位を有する５回のβプロペラ構造を採用する触媒ドメインが明らかになった。反応生成物の類似体としてのＢ抗原三糖類と酵素の共結晶化により、その結合様式が明らかになった。活性部位ポケットの基部で、Ａ抗原とＢ抗原の区別基である非還元末端ガラクトシル部分は、Ｈ９７、Ｅ６４および２つの金属配位水と水素結合相互作用をする。残りの配位子は表面露出し、フコシル基とＳ６１及びＤ１２１側鎖間の極性相互作用が同定される。還元末端ガラクトシル部分のＣ１−ＯＨ基は溶媒にさらされているので、基質への伸長（すなわちＧｌｃＮＡｃにおいて）は酵素によって容易に調節される。Ａ−三糖類のＮ−アセチル基をこの構造上にモデル化することにより、基質の脱アセチル化に関与する可能性のある近傍アミノ酸の合理的な変異を作ることができた。残基Ｅ６４は両変異体が不活性であることから活性に重要であることが判明し、おそらく求核性水分子の活性化において直接的役割を示すことが示唆される（表１）。二価金属Ｄ１００、Ｙ３１５およびＨ２５２を配位する残基も重要であることが判明し、約５０００倍の速度低下をもたらすいずれの変異も、二価金属イオンの結合におけるそれらの見かけの役割と一致している。他のアセトアミド糖デアセチラーゼから類推して、ＦｐＧａｌＮＡｃデアセチラーゼがカルボニルを分極し、カルボニルへの求核攻撃のための水分子を活性化して四面体中間体を形成する機構により加水分解を行うことを我々は提案する。この中間体の分解はＨｉｓ１００による糖窒素原子へのプロトン供与によって促進される。
【０１６３】
表１｜Ａ抗原Ｔｙｐｅ２ｔｅｔｒａ−ＭＵの切断に対するＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＿Ｄ１ｍｉｎのその変異体の比活性
2021533783.tif 000008
【０１６４】
実施例８：ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃおよびＦｐＧａｌＮａｓｅの特性評価
【０１６５】
配列の系統発生的解析において、ＦｐＧａｌＮａｓｅはＧＨ３６ファミリーの新しいサブグループ（５）に配置された（Ｆｒｅｄｓｌｕｎｄ  ２０１１）。３９０のアミノ酸触媒ドメインは、この大きな（１０７９のアミノ酸）タンパク質の中心に位置し、Ｃ末端に潜在的な糖鎖結合ドメインを有する。このＣ末端ドメインの除去は、可溶性基質による酵素の動態パラメータに影響を及ぼさなかったが（表２）、脱アセチル化Ａ＋ＲＢＣの切断効率を低下させた。この酵素はガラクトサミン含有糖に特異的であり、試験されたどのような状況でもＧａｌＮＡｃ残基を切断しない。しかしながら、それは単純なアリールグリコシドＧａｌＮ−α−ｐＮＰから高次のものにわたる脱Ｎ−アセチル化ガラクトサミニドの切断に対してかなり広い特異性を有する。実際、（表２）試験した三つのＡサブタイプのｋｃａｔ／ＫＭ値は、すべて互いに類似しており、またデアセチラーゼの値と類似していた。Ｂ抗原の切断に対するｋｃａｔ／ＫＭの値は、対応するＧａｌＮ抗原に対する値よりも２０００倍以上低かったが、それにもかかわらず、元のスクリーン上でポジティブヒットを生じさせるには十分であった。脱アセチル化αガラクトース構成基質に対するこの特異性は、その最適ｐＨが約６．５〜７．０であることと相まって、デアセチラーゼとともに血液型変換に用いるのに適している（図６）。
【０１６６】
表２｜異なる抗原基質に対するＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃおよびＦｐＧａｌＮａｓｅ構築物の動態パラメータ
2021533783.tif 000009
【０１６７】
実施例９：ＲＢＣからのＡ抗原の切断
【０１６８】
Ａ＋、Ｂ＋及びＯ＋型ＲＢＣをＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ及びＦｐＧａｌＮａｓｅそれぞれと及び混合物としてインキュベートし、放出された糖をＨＰＡＥ−ＰＡＤイオンクロマトグラムで分析した。個々に使用した酵素はいずれも糖生成物を放出しなかった。しかし、両者の混合物を用いると、ガラクトサミンはタイプＡ＋ＲＢＣからは明らかに放出されたが、Ｂ＋またはＯ＋からは放出されず、Ａ抗原に対してのみ高い特異性を示した。他の状況ではＧａｌＮＡｃがＲＢＣ表面から放出されないことを示すため、これは非常に重要である。ＦｐＧａｌＮａｓｅの切断型も有効であったが、活性はやや低かった。
【０１６９】
次に、業界標準のＭＴＳ（商標）カードを使用して、ＲＢＣから抗原を除去する試験を行った。これらの抗体結合カラムにＲＢＣを負荷し、遠心機で遠心する。抗原を含まないＲＢＣはカラムの底部に移動して０としてスコア化されるが、対応する抗原を含む未処理のＲＢＣは上部に付着して４としてスコア化され、その中間スコアで抗原除去の程度がランク付けされる。ＦｐＧａｌＮａｓｅ単独処理では、（表３）の濃度で、ＡまたはＢ抗原性を除去しなかったが、これは、ＧａｌＮＡｃ基質に対する不活性およびＧａｌに対する低活性と一致する。ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃとのインキュベーションは、アセトアミドのアミンへの変換による抗原性を除去し、使用される抗Ａ抗体の結合を弱める。完全な抗原脱アセチル化に必要な最小量の酵素を、  ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ単独およびＦｐＧａｌＮａｓｅとの併用で、クラウディング剤としてデキストラン３００ｍｇ／ｍｌの有無の両方で評価した。３μｇ／ｍｌまでのＦｐＧａｌＮａｓｅの量はデキストランなしで十分であったが、３００ｍｇ／ｍｌのデキストランを含有することで、必要な負荷は０．５μｇ／ｍｌまで減少した（表３）。従来の最良の酵素ＥｍＧＨ１０９は、低塩緩衝液を使用しない限り、デキストランの非存在下では効果がなかったが、デキストランの存在下では最小有効濃度は１５μｇ／ｍｌであり、これは３０倍高い負荷であった。ＣＢＭを欠くＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃのバージョンは、はるかに効果が低かった。
【０１７０】
表３｜Ａ＋、Ｂ＋およびＡＢ＋ＲＢＣをＥｍＧＨ１０９、ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃおよびＦｐＧａｌＮａｓｅで処理した場合のＭＴＳカードの結果
2021533783.tif 000010
【０１７１】
ＭＴＳ（商標）カードテストはＡ抗原の完全な変換を評価しないため、またＧａｌＮ抗原を検出するための抗体が利用できなかったため、処理したＲＢＣ上で新たに形成されたＨ抗原の検出に焦点を当てた。ＦｐＧａｌＮａｓｅはわずか５μｇ／ｍｌの濃度で機能的であり、図３に見られるＦＡＣＳ分析によって確認されるように、Ａ抗原の損失と同時にＨ抗原レベルの増加をもたらした。抗Ｈ抗体の存在下での凝集時間を測定することにより、数名のＡ＋ＲＢＣドナーに対する両酵素の機能性、また全血反応条件において、他の血液変換酵素では達成できなかった能力を実証した。このように、この酵素対は、従来の最良の酵素に必要とされるよりもはるかに低い酵素負荷量で、Ａ＋ＲＢＣをＯ型「全般的ドナー」ＲＢＣに変換する。しかしながら、これらのＲＢＣを患者に輸血する前に、遠心分離後に細胞の洗浄によることが最もあり得るが、変換に使用される微量の酵素を有害な免疫反応を回避するために全て除去することが推奨される。これが達成され得ることを確認するために、ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ及びＦｐＧａｌＮａｓｅの蛍光標識試料でＡ＋ＲＢＣを処理し、次いで、ＦＡＣＳ分析を用いて、実際に単純な洗浄が有効であることを確認した（図３）。
【０１７２】
産生されたＡ−ＥＣＯ  ＲＢＣのさらなる特性評価は、輸血医学において使用するためのそれらの完全な実行可能性を評価するために有用であるかもしれないが、献血を収集する間を可能性として、血漿に直接酵素を含める可能性は、プロセスを離れて、血液採取保存の既存の自動化ルーチンへの容易かつコスト効率的な実装を可能にするかもしれない。特に、表４に示すように、酵素の安定性を試験した。
表４：ガラクトサミニダーゼおよびＧａｌＮＡｃデアセチラーゼの保存安定性
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【０１７３】
実施例１０：クロストリジウム・テルチウム由来のＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ融合体  
【０１７４】
類似酵素の探索において、ＣＢＭ（ＧＨ３６ドメイン−ＣＢＭ−脱アセチル化ドメイン）  で連結したガラクトサミニダーゼとＧａｌＮＡｃデアセチラーゼの新規なクロストリジウム・テルチウム自然融合体を同定した。最初の試験では、この酵素が赤血球のＡ抗原を切断することが示されたが（最初に脱アセチル化、次にガラクトサミン切断という同じ機構）、それほど効率的ではなかった（つまり、ＥｍＧＨ１０９と同様）。クロストリジウム・テルチウム脱アセチル化ドメインは、Ｆ．プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼほど効率的ではないが、Ｆ．プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼで補助すると、クロストリジウム・テルチウムガラクトサミニダーゼドメインは、赤血球上でＦ．プラウティガラクトサミニダーゼと同様の活性を示す。
【０１７５】
実施例１１：代替ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ酵素
【０１７６】
データは、クロストリジウム・テルチウム、ガラクトサミニダーゼ（Ｃｔ５７５７＿ＧａｌＮＡｓｅ）およびＲｐ１０２１が、ＧａｌＮ抗原のＨ抗原への変換（第２の反応段階）に対して同等の酵素活性を有することを示す。
【０１７７】
また、代替ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびガラクトサミニダーゼ酵素のデータも収集し、代替酵素をフラボニフラクター・プラウティのＧａｌＮＡｃデアセチラーゼおよびフラボニフラクター・プラウティのガラクトサミニダーゼと比較した。表５に示されるように、処理されたＡ  ＲＢＣ上の抗Ａ抗体についてのＭＴＳスコアは、ガラクトサミニダーゼとＧａｌＮＡｃデアセチラーゼとのクロストリジウム・テルチウム自然融合体について示され、これは、Ａ抗原を効果的に切断するためにデキストランの存在を必要とし、また、フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ（ＦｐＧａｌＮａｓｅ）と組み合わせると、良好な活性（Ｃｔ５７５７＿ＤｅＡｃａｓｅ）を示す。また、表６において、データは、ロビンソニエラ・ペオリエンシス（Ｒｐ）Ｒｐ３６７２およびＲｐ３６７１が、ＲＢＣ上のＡ抗原を脱アセチル化することができるが、ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃａｓｅよりも効率が低く、活性がクラウディング剤（すなわち、デキストラン４０ｋ）の存在下でのみ達成されたことを示す。
【０１７８】
表５：処理されたＡ  ＲＢＣ上の抗Ａ抗体のＭＴＳスコア
2021533783.tif 000012
【０１７９】
表６：ロビンソニエラ・ペオリエンシス（Ｒｐ）３６７１および３６７２のＭＴＳスコア
2021533783.tif 000013
【０１８０】
図７は、（Ａ）Ａ＋ＲＢＣコントロール、（Ｂ）フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ）＋フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ（ＦｐＧａｌＮａｓｅ）（１０μｇ／ｍＬ）、（Ｃ）ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋クロストリジウム・テルチウム（Ｃｔ）Ｃｔ５７５７＿ＧａｌＮａｓｅ（１０μｇ／ｍＬ）、および（Ｄ）ＦｐＧａｌＮＡｃＤｅＡｃ＋ロビンソニエラ・ペオリエンシス（Ｒｐ）ガラクトサミニダーゼ（Ｒｐ１０２１）ＧａｌＮａｓｅ（１０μｇ／ｍＬ）について、ＦＡＣＳ選別によって分析されたＡ抗原のＡ  ＲＢＣｓ上のＨ抗原への変換を示す。データは、クロストリジウム・テルチウム（Ｃｔ）Ｃｔ５７５７＿ＧａｌＮａｓｅおよびロビンソニエラ・ペオリエンシス（Ｒｐ）ガラクトサミニダーゼ（Ｒｐ１０２１）ＧａｌＮａｓｅは、ＧａｌＮ抗原のＨ抗原への変換に対して（第２の反応段階）フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼと同程度の酵素活性を示す。
【０１８１】
本明細書では、本発明の様々な実施形態が開示されているが、本発明の範囲内で、当業者の一般的な知識に従って、多くの適応および修正を行うことができ、そのような修正は、実質的に同じ方法で同じ結果を達成するために、本発明の任意の態様に対する既知の等価物の置換を含む。数値範囲は、当該範囲を規定する数値を包括する。本明細書では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）が、これに限定されない」という語句と実質的に等価な、非限定的用語として使用し、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」  という語は対応する意味を有する。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈において明確に断らない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「物（ａ  ｔｈｉｎｇ）」への言及は、複数のそのようなものを含む。本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の実施形態の先行技術であることを認めるものではない。本発明は、実施例および図面を参照して、実質的に前述したように、すべての実施形態および変形形態を含む。
【０１８２】
（配列）
フラボニフラクター・プラウティＤＮＡ配列を天然に存在するＤＮＡ配列（ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ２３１１／２３１９ｎｔ／  ガラクトサミニダーゼ３２２８／３２３７ｎｔ）から改変した。特に、タンパク質精製に使用される配列の長さに差があり、それによってシグナルペプチドが除去され、Ｎ末端Ｈｉｓタグがベクター骨格を介して付加された。
【０１８３】
インフォーマル配列リスト
【０１８４】
配列番号２
【０１８５】
説明：フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（タンパク質配列）
ＭＲＮＲＲＫＡＶＳＬＬＴＧＬＬＶＴＡＱＬＦＰＴＡＡＬＡＡＤＳＳＥＳＡＬＮＫＡＰＧＹＱＤＦＰＡＹＹＳＤＳＡＨＡＤＤＱＶＴＨＰＤＶＶＶＬＥＥＰＷＮＧＹＲＹＷＡＶＹＴＰＮＶＭＲＩＳＩＹＥＮＰＳＩＶＡＳＳＤＧＶＨＷＶＥＰＥＧＬＳＮＰＩＥＰＱＰＰＳＴＲＹＨＮＣＤＡＤＭＶＹＮＡＥＹＤＡＭＭＡＹＷＮＷＡＤＤＱＧＧＧＶＧＡＥＶＲＬＲＩＳＹＤＧＶＨＷＧＶＰＶＴＹＤＥＭＴＲＶＷＳＫＰＴＳＤＡＥＲＱＶＡＤＧＥＤＤＦＩＴＡＩＡＳＰＤＲＹＤＭＬＳＰＴＩＶＹＤＤＦＲＤＶＦＩＬＷＡＮＮＴＧＤＶＧＹＱＮＧＱＡＮＦＶＥＭＲＹＳＤＤＧＩＴＷＧＥＰＶＲＶＮＧＦＬＧＬＤＥＮＧＱＱＬＡＰＷＨＱＤＶＱＹＶＰＤＬＫＥＦＶＣＩＳＱＣＦＡＧＲＮＰＤＧＳＶＬＨＬＴＴＳＫＤＧＶＮＷＥＱＶＧＴＫＰＬＬＳＰＧＰＤＧＳＷＤＤＦＱＩＹＲＳＳＦＹＹＥＰＧＳＳＡＧＤＧＴＭＲＶＷＹＳＡＬＱＫＤＴＮＮＫＭＶＡＤＳＳＧＮＬＴＩＱＡＫＳＥＤＤＲＩＷＲＩＧＹＡＥＮＳＦＶＥＭＭＲＶＬＬＤＤＰＧＹＴＴＰＡＬＶＳＧＮＳＬＭＬＳＡＥＴＴＳＬＰＴＧＤＶＭＫＬＥＴＳＦＡＰＶＤＴＳＤＱＶＶＫＹＴＳＳＤＰＤＶＡＴＶＤＥＦＧＴＩＴＧＶＳＶＧＳＡＲＩＭＡＥＴＲＥＧＬＳＤＤＬＥＩＡＶＶＥＮＰＹＴＬＩＰＱＳＮＭＴＡＴＡＴＳＶＹＧＧＴＴＥＧＰＡＳＮＶＬＤＧＮＶＲＴＩＷＨＴＮＹＡＰＫＤＥＬＰＱＳＩＴＶＳＦＤＱＰＹＴＶＧＲＦＶＹＴＰＲＱＮＧＴＮＧＩＩＳＥＹＥＬＹＡＩＨＱＤＧＳＫＤＬＶＡＳＧＳＤＷＡＬＤＡＫＤＫＴＶＳＦＡＰＶＥＡＶＧＬＥＬＫＡＩＡＧＡＧＧＦＧＴＡＡＥＬＮＶＹＡＹＧＰＩＥＰＡＰＶＹＶＰＶＤＤＲＤＡＳＬＶＦＴＧＡＷＮＳＤＳＮＧＳＦＹＥＧＴＡＲＹＴＮＥＩＧＡＳＶＥＦＴＦＶＧＴＡＩＲＷＹＧＱＮＤＶＮＦＧＡＡＥＶＹＶＤＧＶＬＡＧＥＶＮＶＹＧＰＡＡＡＱＱＬＬＦＥＡＤＧＬＡＹＧＫＨＴＩＲＩＶＣＶＳＰＶＶＤＦＤＹＦＳＹＶＧＥ
【０１８６】
配列番号４
【０１８７】
説明：フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ（除去シグナルペプチドタンパク質配列）
ＡＤＳＳＥＳＡＬＮＫＡＰＧＹＱＤＦＰＡＹＹＳＤＳＡＨＡＤＤＱＶＴＨＰＤＶＶＶＬＥＥＰＷＮＧＹＲＹＷＡＶＹＴＰＮＶＭＲＩＳＩＹＥＮＰＳＩＶＡＳＳＤＧＶＨＷＶＥＰＥＧＬＳＮＰＩＥＰＱＰＰＳＴＲＹＨＮＣＤＡＤＭＶＹＮＡＥＹＤＡＭＭＡＹＷＮＷＡＤＤＱＧＧＧＶＧＡＥＶＲＬＲＩＳＹＤＧＶＨＷＧＶＰＶＴＹＤＥＭＴＲＶＷＳＫＰＴＳＤＡＥＲＱＶＡＤＧＥＤＤＦＩＴＡＩＡＳＰＤＲＹＤＭＬＳＰＴＩＶＹＤＤＦＲＤＶＦＩＬＷＡＮＮＴＧＤＶＧＹＱＮＧＱＡＮＦＶＥＭＲＹＳＤＤＧＩＴＷＧＥＰＶＲＶＮＧＦＬＧＬＤＥＮＧＱＱＬＡＰＷＨＱＤＶＱＹＶＰＤＬＫＥＦＶＣＩＳＱＣＦＡＧＲＮＰＤＧＳＶＬＨＬＴＴＳＫＤＧＶＮＷＥＱＶＧＴＫＰＬＬＳＰＧＰＤＧＳＷＤＤＦＱＩＹＲＳＳＦＹＹＥＰＧＳＳＡＧＤＧＴＭＲＶＷＹＳＡＬＱＫＤＴＮＮＫＭＶＡＤＳＳＧＮＬＴＩＱＡＫＳＥＤＤＲＩＷＲＩＧＹＡＥＮＳＦＶＥＭＭＲＶＬＬＤＤＰＧＹＴＴＰＡＬＶＳＧＮＳＬＭＬＳＡＥＴＴＳＬＰＴＧＤＶＭＫＬＥＴＳＦＡＰＶＤＴＳＤＱＶＶＫＹＴＳＳＤＰＤＶＡＴＶＤＥＦＧＴＩＴＧＶＳＶＧＳＡＲＩＭＡＥＴＲＥＧＬＳＤＤＬＥＩＡＶＶＥＮＰＹＴＬＩＰＱＳＮＭＴＡＴＡＴＳＶＹＧＧＴＴＥＧＰＡＳＮＶＬＤＧＮＶＲＴＩＷＨＴＮＹＡＰＫＤＥＬＰＱＳＩＴＶＳＦＤＱＰＹＴＶＧＲＦＶＹＴＰＲＱＮＧＴＮＧＩＩＳＥＹＥＬＹＡＩＨＱＤＧＳＫＤＬＶＡＳＧＳＤＷＡＬＤＡＫＤＫＴＶＳＦＡＰＶＥＡＶＧＬＥＬＫＡＩＡＧＡＧＧＦＧＴＡＡＥＬＮＶＹＡＹＧＰＩＥＰＡＰＶＹＶＰＶＤＤＲＤＡＳＬＶＦＴＧＡＷＮＳＤＳＮＧＳＦＹＥＧＴＡＲＹＴＮＥＩＧＡＳＶＥＦＴＦＶＧＴＡＩＲＷＹＧＱＮＤＶＮＦＧＡＡＥＶＹＶＤＧＶＬＡＧＥＶＮＶＹＧＰＡＡＡＱＱＬＬＦＥＡＤＧＬＡＹＧＫＨＴＩＲＩＶＣＶＳＰＶＶＤＦＤＹＦＳＹＶＧＥ
【０１８８】
配列番号５
【０１８９】
説明：Ｈｉｓタグを有するフラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ  （ｐＥＴ１６ａ−タンパク質配列）
ＭＧＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨＳＳＧＡＤＳＳＥＳＡＬＮＫＡＰＧＹＱＤＦＰＡＹＹＳＤＳＡＨＡＤＤＱＶＴＨＰＤＶＶＶＬＥＥＰＷＮＧＹＲＹＷＡＶＹＴＰＮＶＭＲＩＳＩＹＥＮＰＳＩＶＡＳＳＤＧＶＨＷＶＥＰＥＧＬＳＮＰＩＥＰＱＰＰＳＴＲＹＨＮＣＤＡＤＭＶＹＮＡＥＹＤＡＭＭＡＹＷＮＷＡＤＤＱＧＧＧＶＧＡＥＶＲＬＲＩＳＹＤＧＶＨＷＧＶＰＶＴＹＤＥＭＴＲＶＷＳＫＰＴＳＤＡＥＲＱＶＡＤＧＥＤＤＦＩＴＡＩＡＳＰＤＲＹＤＭＬＳＰＴＩＶＹＤＤＦＲＤＶＦＩＬＷＡＮＮＴＧＤＶＧＹＱＮＧＱＡＮＦＶＥＭＲＹＳＤＤＧＩＴＷＧＥＰＶＲＶＮＧＦＬＧＬＤＥＮＧＱＱＬＡＰＷＨＱＤＶＱＹＶＰＤＬＫＥＦＶＣＩＳＱＣＦＡＧＲＮＰＤＧＳＶＬＨＬＴＴＳＫＤＧＶＮＷＥＱＶＧＴＫＰＬＬＳＰＧＰＤＧＳＷＤＤＦＱＩＹＲＳＳＦＹＹＥＰＧＳＳＡＧＤＧＴＭＲＶＷＹＳＡＬＱＫＤＴＮＮＫＭＶＡＤＳＳＧＮＬＴＩＱＡＫＳＥＤＤＲＩＷＲＩＧＹＡＥＮＳＦＶＥＭＭＲＶＬＬＤＤＰＧＹＴＴＰＡＬＶＳＧＮＳＬＭＬＳＡＥＴＴＳＬＰＴＧＤＶＭＫＬＥＴＳＦＡＰＶＤＴＳＤＱＶＶＫＹＴＳＳＤＰＤＶＡＴＶＤＥＦＧＴＩＴＧＶＳＶＧＳＡＲＩＭＡＥＴＲＥＧＬＳＤＤＬＥＩＡＶＶＥＮＰＹＴＬＩＰＱＳＮＭＴＡＴＡＴＳＶＹＧＧＴＴＥＧＰＡＳＮＶＬＤＧＮＶＲＴＩＷＨＴＮＹＡＰＫＤＥＬＰＱＳＩＴＶＳＦＤＱＰＹＴＶＧＲＦＶＹＴＰＲＱＮＧＴＮＧＩＩＳＥＹＥＬＹＡＩＨＱＤＧＳＫＤＬＶＡＳＧＳＤＷＡＬＤＡＫＤＫＴＶＳＦＡＰＶＥＡＶＧＬＥＬＫＡＩＡＧＡＧＧＦＧＴＡＡＥＬＮＶＹＡＹＧＰＩＥＰＡＰＶＹＶＰＶＤＤＲＤＡＳＬＶＦＴＧＡＷＮＳＤＳＮＧＳＦＹＥＧＴＡＲＹＴＮＥＩＧＡＳＶＥＦＴＦＶＧＴＡＩＲＷＹＧＱＮＤＶＮＦＧＡＡＥＶＹＶＤＧＶＬＡＧＥＶＮＶＹＧＰＡＡＡＱＱＬＬＦＥＡＤＧＬＡＹＧＫＨＴＩＲＩＶＣＶＳＰＶＶＤＦＤＹＦＳＹＶＧＥ
【０１９０】
配列番号７
【０１９１】
説明：フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ
ＭＲＧＫＫＦＩＳＬＴＬＳＴＭＬＣＬＱＬＬＰＴＡＳＦＡＡＡＰＡＴＤＴＧＮＡＧＬＩＡＥＧＤＹＡＩＡＧＮＧＶＲＶＴＹＤＡＤＧＱＴＩＴＬＹＲＴＥＧＳＧＬＩＱＭＳＫＰＳＰＬＧＧＰＶＩＧＧＱＥＶＱＤＦＳＨＩＳＣＤＶＥＱＳＴＳＧＶＭＧＳＧＱＲＭＴＩＴＳＱＳＭＳＴＧＬＩＲＴＹＶＬＥＴＳＤＩＥＥＧＶＶＹＴＡＴＳＹＥＡＧＡＳＤＶＥＶＳＷＦＩＧＳＶＹＥＬＹＧＡＥＤＲＩＷＳＹＮＧＧＧＥＧＰＭＨＹＹＤＴＬＱＫＩＤＬＴＤＳＧＫＦＳＲＥＮＫＱＤＤＴＡＡＳＩＰＶＳＤＩＹＩＡＤＧＧＩＴＶＧＤＡＳＡＴＲＲＥＶＨＴＰＶＱＥＴＳＤＳＡＱＶＳＩＧＷＰＧＫＶＩＡＡＧＳＶＩＥＩＧＥＳＦＡＶＶＨＰＧＤＹＹＮＧＬＲＧＹＫＮＡＭＤＨＬＧＶＩＭＰＡＰＧＤＩＰＤＳＳＹＤＬＲＷＥＳＷＧＷＧＦＮＷＴＩＤＬＩＩＧＫＬＤＥＬＱＡＡＧＶＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＮＡＧＤＷＡＬＮＰＥＫＦＰＮＧＡＳＤＡＬＲＬＴＤＡＩＨＥＨＧＭＴＡＬＬＷＷＲＰＣＤＧＧＩＤＳＩＬＹＱＱＨＰＥＹＦＶＭＤＡＤＧＲＰＡＲＬＰＴＰＧＧＧＴＮＰＳＬＧＹＡＬＣＰＭＡＤＧＡＩＡＳＱＶＤＦＶＮＲＡＭＮＤＷＧＦＤＧＦＫＧＤＹＶＷＳＭＰＥＣＹＮＰＡＨＮＨＡＳＰＥＥＳＴＥＫＱＳＥＩＹＲＶＳＹＥＡＭＶＡＮＤＰＮＶＦＮＬＬＣＮＣＧＴＰＱＤＹＹＳＬＰＹＭＴＱＩＡＴＡＤＰＴＳＶＤＱＴＲＲＲＶＫＡＹＫＡＬＭＧＤＹＦＰＶＴＡＤＨＮＮＩＷＹＰＳＡＶＧＴＧＳＶＬＩＥＫＲＤＬＳＧＴＡＫＥＥＹＥＫＷＬＧＩＡＤＴＶＱＬＱＫＧＲＦＩＧＤＬＹＳＹＧＦＤＰＹＥＴＹＶＶＥＫＤＧＶＭＹＹＡＦＹＫＤＧＳＫＹＳＰＴＧＹＰＤＩＥＬＫＧＬＤＰＮＫＭＹＲＩＶＤＹＶＮＤＲＶＶＡＴＮＬＭＧＤＮＡＶＦＮＴＲＦＳＤＹＬＬＶＫＡＶＥＩＳＥＰＤＰＥＰＶＤＰＤＹＧＦＴＳＶＤＤＲＤＥＡＬＩＹＴＧＴＷＨＤＤＮＮＡＳＦＳＥＧＴＡＲＹＴＮＳＴＤＡＳＶＶＦＳＦＴＧＴＳＩＲＷＹＧＱＲＤＴＮＦＧＴＡＥＶＹＬＤＤＥＬＫＴＴＶＤＡＮＧＡＡＥＡＧＶＣＬＦＥＡＬＤＬＰＡＡＥＨＴＩＫＩＶＣＫＳＧＶＩＤＩＤＲＦＡＹＥＡＡＴＬＥＰＩＹＥＫＶＤＡＬＳＤＲＩＴＹＶＧＮＷＥＥＹＨＮＳＥＦＹＭＧＮＡＭＲＴＤＥＡＧＡＹＡＥＬＴＦＲＧＴＡＶＲＬＹＡＥＭＳＦＮＦＧＴＡＤＶＹＬＤＧＥＬＶＥＮＩＩＬＹＧＱＥＡＴＧＱＬＭＦＥＲＴＧＬＥＥＧＥＨＴＩＲＬＶＱＮＡＷＮＩＮＬＤＹＩＳＹＬＰＥＱＤＱＰＴＰＰＥＴＴＶＴＶＤＡＭＤＡＱＬＶＹＴＧＶＷＮＤＤＹＨＤＶＦＱＥＧＴＡＲＹＡＳＳＡＧＡＳＶＥＦＥＦＴＧＳＥＩＲＷＹＧＱＮＤＳＮＦＧＶＡＳＶＹＩＤＮＥＦＶＱＱＶＮＶＮＧＡＡＡＶＧＫＬＬＦＱＫＡＤＬＰＡＧＳＨＴＩＲＩＶＣＤＴＰＶＩＤＬＤＹＬＴＹＴＴＮＡ
【０１９２】
配列番号９
【０１９３】
説明：フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ（除去シグナルペプチドタンパク質配列）
ＡＡＰＡＴＤＴＧＮＡＧＬＩＡＥＧＤＹＡＩＡＧＮＧＶＲＶＴＹＤＡＤＧＱＴＩＴＬＹＲＴＥＧＳＧＬＩＱＭＳＫＰＳＰＬＧＧＰＶＩＧＧＱＥＶＱＤＦＳＨＩＳＣＤＶＥＱＳＴＳＧＶＭＧＳＧＱＲＭＴＩＴＳＱＳＭＳＴＧＬＩＲＴＹＶＬＥＴＳＤＩＥＥＧＶＶＹＴＡＴＳＹＥＡＧＡＳＤＶＥＶＳＷＦＩＧＳＶＹＥＬＹＧＡＥＤＲＩＷＳＹＮＧＧＧＥＧＰＭＨＹＹＤＴＬＱＫＩＤＬＴＤＳＧＫＦＳＲＥＮＫＱＤＤＴＡＡＳＩＰＶＳＤＩＹＩＡＤＧＧＩＴＶＧＤＡＳＡＴＲＲＥＶＨＴＰＶＱＥＴＳＤＳＡＱＶＳＩＧＷＰＧＫＶＩＡＡＧＳＶＩＥＩＧＥＳＦＡＶＶＨＰＧＤＹＹＮＧＬＲＧＹＫＮＡＭＤＨＬＧＶＩＭＰＡＰＧＤＩＰＤＳＳＹＤＬＲＷＥＳＷＧＷＧＦＮＷＴＩＤＬＩＩＧＫＬＤＥＬＱＡＡＧＶＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＮＡＧＤＷＡＬＮＰＥＫＦＰＮＧＡＳＤＡＬＲＬＴＤＡＩＨＥＨＧＭＴＡＬＬＷＷＲＰＣＤＧＧＩＤＳＩＬＹＱＱＨＰＥＹＦＶＭＤＡＤＧＲＰＡＲＬＰＴＰＧＧＧＴＮＰＳＬＧＹＡＬＣＰＭＡＤＧＡＩＡＳＱＶＤＦＶＮＲＡＭＮＤＷＧＦＤＧＦＫＧＤＹＶＷＳＭＰＥＣＹＮＰＡＨＮＨＡＳＰＥＥＳＴＥＫＱＳＥＩＹＲＶＳＹＥＡＭＶＡＮＤＰＮＶＦＮＬＬＣＮＣＧＴＰＱＤＹＹＳＬＰＹＭＴＱＩＡＴＡＤＰＴＳＶＤＱＴＲＲＲＶＫＡＹＫＡＬＭＧＤＹＦＰＶＴＡＤＨＮＮＩＷＹＰＳＡＶＧＴＧＳＶＬＩＥＫＲＤＬＳＧＴＡＫＥＥＹＥＫＷＬＧＩＡＤＴＶＱＬＱＫＧＲＦＩＧＤＬＹＳＹＧＦＤＰＹＥＴＹＶＶＥＫＤＧＶＭＹＹＡＦＹＫＤＧＳＫＹＳＰＴＧＹＰＤＩＥＬＫＧＬＤＰＮＫＭＹＲＩＶＤＹＶＮＤＲＶＶＡＴＮＬＭＧＤＮＡＶＦＮＴＲＦＳＤＹＬＬＶＫＡＶＥＩＳＥＰＤＰＥＰＶＤＰＤＹＧＦＴＳＶＤＤＲＤＥＡＬＩＹＴＧＴＷＨＤＤＮＮＡＳＦＳＥＧＴＡＲＹＴＮＳＴＤＡＳＶＶＦＳＦＴＧＴＳＩＲＷＹＧＱＲＤＴＮＦＧＴＡＥＶＹＬＤＤＥＬＫＴＴＶＤＡＮＧＡＡＥＡＧＶＣＬＦＥＡＬＤＬＰＡＡＥＨＴＩＫＩＶＣＫＳＧＶＩＤＩＤＲＦＡＹＥＡＡＴＬＥＰＩＹＥＫＶＤＡＬＳＤＲＩＴＹＶＧＮＷＥＥＹＨＮＳＥＦＹＭＧＮＡＭＲＴＤＥＡＧＡＹＡＥＬＴＦＲＧＴＡＶＲＬＹＡＥＭＳＦＮＦＧＴＡＤＶＹＬＤＧＥＬＶＥＮＩＩＬＹＧＱＥＡＴＧＱＬＭＦＥＲＴＧＬＥＥＧＥＨＴＩＲＬＶＱＮＡＷＮＩＮＬＤＹＩＳＹＬＰＥＱＤＱＰＴＰＰＥＴＴＶＴＶＤＡＭＤＡＱＬＶＹＴＧＶＷＮＤＤＹＨＤＶＦＱＥＧＴＡＲＹＡＳＳＡＧＡＳＶＥＦＥＦＴＧＳＥＩＲＷＹＧＱＮＤＳＮＦＧＶＡＳＶＹＩＤＮＥＦＶＱＱＶＮＶＮＧＡＡＡＶＧＫＬＬＦＱＫＡＤＬＰＡＧＳＨＴＩＲＩＶＣＤＴＰＶＩＤＬＤＹＬＴＹＴＴＮＡ
【０１９４】
配列番号１０
【０１９５】
説明：Ｈｉｓタグを有するフラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼ（ｐＥＴ１６ａ−タンパク質配列）
ＭＧＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨＳＳＧＡＡＰＡＴＤＴＧＮＡＧＬＩＡＥＧＤＹＡＩＡＧＮＧＶＲＶＴＹＤＡＤＧＱＴＩＴＬＹＲＴＥＧＳＧＬＩＱＭＳＫＰＳＰＬＧＧＰＶＩＧＧＱＥＶＱＤＦＳＨＩＳＣＤＶＥＱＳＴＳＧＶＭＧＳＧＱＲＭＴＩＴＳＱＳＭＳＴＧＬＩＲＴＹＶＬＥＴＳＤＩＥＥＧＶＶＹＴＡＴＳＹＥＡＧＡＳＤＶＥＶＳＷＦＩＧＳＶＹＥＬＹＧＡＥＤＲＩＷＳＹＮＧＧＧＥＧＰＭＨＹＹＤＴＬＱＫＩＤＬＴＤＳＧＫＦＳＲＥＮＫＱＤＤＴＡＡＳＩＰＶＳＤＩＹＩＡＤＧＧＩＴＶＧＤＡＳＡＴＲＲＥＶＨＴＰＶＱＥＴＳＤＳＡＱＶＳＩＧＷＰＧＫＶＩＡＡＧＳＶＩＥＩＧＥＳＦＡＶＶＨＰＧＤＹＹＮＧＬＲＧＹＫＮＡＭＤＨＬＧＶＩＭＰＡＰＧＤＩＰＤＳＳＹＤＬＲＷＥＳＷＧＷＧＦＮＷＴＩＤＬＩＩＧＫＬＤＥＬＱＡＡＧＶＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＮＡＧＤＷＡＬＮＰＥＫＦＰＮＧＡＳＤＡＬＲＬＴＤＡＩＨＥＨＧＭＴＡＬＬＷＷＲＰＣＤＧＧＩＤＳＩＬＹＱＱＨＰＥＹＦＶＭＤＡＤＧＲＰＡＲＬＰＴＰＧＧＧＴＮＰＳＬＧＹＡＬＣＰＭＡＤＧＡＩＡＳＱＶＤＦＶＮＲＡＭＮＤＷＧＦＤＧＦＫＧＤＹＶＷＳＭＰＥＣＹＮＰＡＨＮＨＡＳＰＥＥＳＴＥＫＱＳＥＩＹＲＶＳＹＥＡＭＶＡＮＤＰＮＶＦＮＬＬＣＮＣＧＴＰＱＤＹＹＳＬＰＹＭＴＱＩＡＴＡＤＰＴＳＶＤＱＴＲＲＲＶＫＡＹＫＡＬＭＧＤＹＦＰＶＴＡＤＨＮＮＩＷＹＰＳＡＶＧＴＧＳＶＬＩＥＫＲＤＬＳＧＴＡＫＥＥＹＥＫＷＬＧＩＡＤＴＶＱＬＱＫＧＲＦＩＧＤＬＹＳＹＧＦＤＰＹＥＴＹＶＶＥＫＤＧＶＭＹＹＡＦＹＫＤＧＳＫＹＳＰＴＧＹＰＤＩＥＬＫＧＬＤＰＮＫＭＹＲＩＶＤＹＶＮＤＲＶＶＡＴＮＬＭＧＤＮＡＶＦＮＴＲＦＳＤＹＬＬＶＫＡＶＥＩＳＥＰＤＰＥＰＶＤＰＤＹＧＦＴＳＶＤＤＲＤＥＡＬＩＹＴＧＴＷＨＤＤＮＮＡＳＦＳＥＧＴＡＲＹＴＮＳＴＤＡＳＶＶＦＳＦＴＧＴＳＩＲＷＹＧＱＲＤＴＮＦＧＴＡＥＶＹＬＤＤＥＬＫＴＴＶＤＡＮＧＡＡＥＡＧＶＣＬＦＥＡＬＤＬＰＡＡＥＨＴＩＫＩＶＣＫＳＧＶＩＤＩＤＲＦＡＹＥＡＡＴＬＥＰＩＹＥＫＶＤＡＬＳＤＲＩＴＹＶＧＮＷＥＥＹＨＮＳＥＦＹＭＧＮＡＭＲＴＤＥＡＧＡＹＡＥＬＴＦＲＧＴＡＶＲＬＹＡＥＭＳＦＮＦＧＴＡＤＶＹＬＤＧＥＬＶＥＮＩＩＬＹＧＱＥＡＴＧＱＬＭＦＥＲＴＧＬＥＥＧＥＨＴＩＲＬＶＱＮＡＷＮＩＮＬＤＹＩＳＹＬＰＥＱＤＱＰＴＰＰＥＴＴＶＴＶＤＡＭＤＡＱＬＶＹＴＧＶＷＮＤＤＹＨＤＶＦＱＥＧＴＡＲＹＡＳＳＡＧＡＳＶＥＦＥＦＴＧＳＥＩＲＷＹＧＱＮＤＳＮＦＧＶＡＳＶＹＩＤＮＥＦＶＱＱＶＮＶＮＧＡＡＡＶＧＫＬＬＦＱＫＡＤＬＰＡＧＳＨＴＩＲＩＶＣＤＴＰＶＩＤＬＤＹＬＴＹＴＴＮＡ
【０１９６】
配列番号１２
【０１９７】
説明：クロストリジウム・テルチウム単離タンパク質配列０９９３４５７５７．１−Ｃｔ５７５７（ＣＢＭ（元のタンパク質配列）で連結したガラクトサミニダーゼとＧａｌＮＡｃデアセチラーゼとの融合物）
ＭＫＫＲＩＬＡＴＦＩＴＡＭＣＧＬＧＦＦＳＮＷＴＳＳＮＡＹＮＬＩＤＮＩＳＶＥＫＬＤＴＤＩＳＱＡＮＥＮＶＦＬＮＧＮＧＩＡＬＥＶＤＮＲＧＡＴＣＩＹＬＶＤＥＮＧＶＫＴＫＡＴＴＳＬＤＴＡＤＦＳＧＹＰＩＩＧＧＱＫＩＲＤＦＶＩＩＳＫＮＬＥＥＮＩＮＳＩＬＧＶＧＮＲＬＴＩＩＳＫＳＳＳＴＮＬＩＲＫＩＶＦＥＴＳＮＳＮＰＧＡＩＹＳＴＶＳＹＫＡＥＳＮＤＬＬＶＤＳＦＨＥＮＥＹＴＭＳＬＧＱＧＰＦＬＡＹＱＧＣＡＤＱＱＧＡＮＴＩＶＮＶＴＮＧＹＮＨＮＳＧＱＮＮＹＳＶＧＶＰＦＳＹＶＹＮＳＶＧＧＩＧＩＧＤＡＳＴＳＲＲＥＦＫＬＰＩＩＧＫＤＮＴＶＳＬＧＭＥＷＮＧＱＴＬＫＫＧＡＥＴＡＩＧＴＳＶＩＴＴＴＮＧＤＹＹＳＧＬＫＳＹＡＥＶＭＫＤＫＧＩＳＡＰＡＳＩＰＤＩＡＹＤＳＲＷＥＳＷＧＦＥＦＤＦＴＩＥＫＩＶＮＫＬＤＥＬＫＡＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＹＡＧＤＷＫＬＳＰＱＫＦＰＮＧＮＡＤＭＫＹＬＴＤＥＩＨＫＲＧＭＴＡＩＬＷＷＲＰＶＤＧＧＩＮＳＫＬＶＳＥＨＰＥＷＦＩＫＮＳＱＧＮＭＶＲＬＰＧＰＧＧＧＮＧＧＴＡＧＹＡＬＣＰＮＳＥＧＳＩＱＨＨＫＤＦＶＴＶＡＬＥＥＷＧＦＤＧＦＫＥＤＹＶＷＧＩＰＫＣＹＤＳＳＨＫＨＳＳＬＳＤＴＬＥＮＱＹＫＦＹＥＡＩＹＥＱＳＩＡＩＮＰＤＴＦＩＥＬＣＮＣＧＴＰＱＤＦＹＳＴＰＹＶＮＨＡＰＴＡＤＰＩＳＲＶＱＴＲＴＲＶＫＡＦＫＡＩＦＧＤＤＦＰＶＴＴＤＨＮＳＶＷＬＰＳＡＬＧＴＧＳＶＭＩＴＫＨＴＴＬＳＳＳＤＲＥＱＹＮＫＹＦＧＬＡＲＤＬＥＬＡＫＧＥＦＩＧＮＬＹＫＹＧＩＤＰＬＥＳＹＶＩＲＫＧＥＤＩＹＹＳＦＹＫＤＮＳＳＹＳＧＮＩＥＩＫＧＬＤＳＮＡＴＹＲＩＥＤＹＶＮＮＲＶＩＡＲＧＶＫＧＰＴＡＴＩＮＴＳＦＴＤＮＬＬＶＲＡＩＰＤＤＴＰＡＥＶＴＴＦＤＶＧＮＮＴＩＬＳＳＴＤＳＧＮＳＫＹＬＮＡＶＳＴＴＬＥＫＴＡＴＩＤＳＬＳＩＹＩＧＮＮＳＥＮＧＫＬＱＩＡＩＹＤＤＮＮＧＫＰＧＴＫＫＡＹＶＥＥＦＶＰＴＫＮＳＷＮＴＫＫＶＶＮＳＶＴＬＰＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫＰＬＱＮＡＥＴＹＬＮＩＰＴＹＤＧＬＮＱＳＴＨＰＤＶＫＹＦＫＮＧＷＮＧＹＫＹＷＭＩＭＴＰＮＲＴＧＳＳＶＡＥＮＰＳＩＬＡＳＤＤＧＩＮＷＥＶＰＡＧＶＴＮＰＩＡＰＭＰＱＶＧＨＮＣＤＶＤＭＩＹＮＥＡＴＤＥＬＷＶＹＷＶＥＳＤＤＩＴＫＧＷＶＫＬＩＫＳＫＤＧＶＮＷＳＳＱＱＶＶＶＤＤＮＲＡＫＹＳＴＬＳＰＳＩＩＦＫＤＮＫＹＹＭＷＳＶＮＴＧＮＳＧＷＮＮＱＳＮＫＶＥＬＲＥＳＳＤＧＶＮＷＳＮＰＴＶＶＮＴＬＡＱＤＧＳＱＩＷＨＶＮＶＥＹＩＰＳＫＮＥＹＷＡＩＹＰＡＹＫＮＧＴＧＳＤＫＴＥＬＹＹＡＫＳＳＤＧＶＮＷＴＴＹＫＮＰＩＬＳＫＧＴＳＧＫＷＤＤＭＥＩＹＲＳＣＦＶＹＤＥＤＴＮＭＩＫＶＷＹＧＡＶＳＱＮＰＱＩＷＫＩＧＦＴＥＮＤＹＤＫＦＩＥＧＬＴＱ
【０１９８】
配列番号１４
【０１９９】
説明：シグナルペプチドを除いたクロストリジウム・テルチウム５７５７（Ｃｔ５７５７）単離タンパク質配列（識別番号０９９３４５７５７．１−Ｃｔ５７５７）
ＹＮＬＩＤＮＩＳＶＥＫＬＤＴＤＩＳＱＡＮＥＮＶＦＬＮＧＮＧＩＡＬＥＶＤＮＲＧＡＴＣＩＹＬＶＤＥＮＧＶＫＴＫＡＴＴＳＬＤＴＡＤＦＳＧＹＰＩＩＧＧＱＫＩＲＤＦＶＩＩＳＫＮＬＥＥＮＩＮＳＩＬＧＶＧＮＲＬＴＩＩＳＫＳＳＳＴＮＬＩＲＫＩＶＦＥＴＳＮＳＮＰＧＡＩＹＳＴＶＳＹＫＡＥＳＮＤＬＬＶＤＳＦＨＥＮＥＹＴＭＳＬＧＱＧＰＦＬＡＹＱＧＣＡＤＱＱＧＡＮＴＩＶＮＶＴＮＧＹＮＨＮＳＧＱＮＮＹＳＶＧＶＰＦＳＹＶＹＮＳＶＧＧＩＧＩＧＤＡＳＴＳＲＲＥＦＫＬＰＩＩＧＫＤＮＴＶＳＬＧＭＥＷＮＧＱＴＬＫＫＧＡＥＴＡＩＧＴＳＶＩＴＴＴＮＧＤＹＹＳＧＬＫＳＹＡＥＶＭＫＤＫＧＩＳＡＰＡＳＩＰＤＩＡＹＤＳＲＷＥＳＷＧＦＥＦＤＦＴＩＥＫＩＶＮＫＬＤＥＬＫＡＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＹＡＧＤＷＫＬＳＰＱＫＦＰＮＧＮＡＤＭＫＹＬＴＤＥＩＨＫＲＧＭＴＡＩＬＷＷＲＰＶＤＧＧＩＮＳＫＬＶＳＥＨＰＥＷＦＩＫＮＳＱＧＮＭＶＲＬＰＧＰＧＧＧＮＧＧＴＡＧＹＡＬＣＰＮＳＥＧＳＩＱＨＨＫＤＦＶＴＶＡＬＥＥＷＧＦＤＧＦＫＥＤＹＶＷＧＩＰＫＣＹＤＳＳＨＫＨＳＳＬＳＤＴＬＥＮＱＹＫＦＹＥＡＩＹＥＱＳＩＡＩＮＰＤＴＦＩＥＬＣＮＣＧＴＰＱＤＦＹＳＴＰＹＶＮＨＡＰＴＡＤＰＩＳＲＶＱＴＲＴＲＶＫＡＦＫＡＩＦＧＤＤＦＰＶＴＴＤＨＮＳＶＷＬＰＳＡＬＧＴＧＳＶＭＩＴＫＨＴＴＬＳＳＳＤＲＥＱＹＮＫＹＦＧＬＡＲＤＬＥＬＡＫＧＥＦＩＧＮＬＹＫＹＧＩＤＰＬＥＳＹＶＩＲＫＧＥＤＩＹＹＳＦＹＫＤＮＳＳＹＳＧＮＩＥＩＫＧＬＤＳＮＡＴＹＲＩＥＤＹＶＮＮＲＶＩＡＲＧＶＫＧＰＴＡＴＩＮＴＳＦＴＤＮＬＬＶＲＡＩＰＤＤＴＰＡＥＶＴＴＦＤＶＧＮＮＴＩＬＳＳＴＤＳＧＮＳＫＹＬＮＡＶＳＴＴＬＥＫＴＡＴＩＤＳＬＳＩＹＩＧＮＮＳＥＮＧＫＬＱＩＡＩＹＤＤＮＮＧＫＰＧＴＫＫＡＹＶＥＥＦＶＰＴＫＮＳＷＮＴＫＫＶＶＮＳＶＴＬＰＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫＰＬＱＮＡＥＴＹＬＮＩＰＴＹＤＧＬＮＱＳＴＨＰＤＶＫＹＦＫＮＧＷＮＧＹＫＹＷＭＩＭＴＰＮＲＴＧＳＳＶＡＥＮＰＳＩＬＡＳＤＤＧＩＮＷＥＶＰＡＧＶＴＮＰＩＡＰＭＰＱＶＧＨＮＣＤＶＤＭＩＹＮＥＡＴＤＥＬＷＶＹＷＶＥＳＤＤＩＴＫＧＷＶＫＬＩＫＳＫＤＧＶＮＷＳＳＱＱＶＶＶＤＤＮＲＡＫＹＳＴＬＳＰＳＩＩＦＫＤＮＫＹＹＭＷＳＶＮＴＧＮＳＧＷＮＮＱＳＮＫＶＥＬＲＥＳＳＤＧＶＮＷＳＮＰＴＶＶＮＴＬＡＱＤＧＳＱＩＷＨＶＮＶＥＹＩＰＳＫＮＥＹＷＡＩＹＰＡＹＫＮＧＴＧＳＤＫＴＥＬＹＹＡＫＳＳＤＧＶＮＷＴＴＹＫＮＰＩＬＳＫＧＴＳＧＫＷＤＤＭＥＩＹＲＳＣＦＶＹＤＥＤＴＮＭＩＫＶＷＹＧＡＶＳＱＮＰＱＩＷＫＩＧＦＴＥＮＤＹＤＫＦＩＥＧＬＴＱ
【０２００】
配列番号１５
【０２０１】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するクロストリジウム・テルチウム５７５７（Ｃｔ５７５７）融合タンパク質配列発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおける）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＹＮＬＩＤＮＩＳＶＥＫＬＤＴＤＩＳＱＡＮＥＮＶＦＬＮＧＮＧＩＡＬＥＶＤＮＲＧＡＴＣＩＹＬＶＤＥＮＧＶＫＴＫＡＴＴＳＬＤＴＡＤＦＳＧＹＰＩＩＧＧＱＫＩＲＤＦＶＩＩＳＫＮＬＥＥＮＩＮＳＩＬＧＶＧＮＲＬＴＩＩＳＫＳＳＳＴＮＬＩＲＫＩＶＦＥＴＳＮＳＮＰＧＡＩＹＳＴＶＳＹＫＡＥＳＮＤＬＬＶＤＳＦＨＥＮＥＹＴＭＳＬＧＱＧＰＦＬＡＹＱＧＣＡＤＱＱＧＡＮＴＩＶＮＶＴＮＧＹＮＨＮＳＧＱＮＮＹＳＶＧＶＰＦＳＹＶＹＮＳＶＧＧＩＧＩＧＤＡＳＴＳＲＲＥＦＫＬＰＩＩＧＫＤＮＴＶＳＬＧＭＥＷＮＧＱＴＬＫＫＧＡＥＴＡＩＧＴＳＶＩＴＴＴＮＧＤＹＹＳＧＬＫＳＹＡＥＶＭＫＤＫＧＩＳＡＰＡＳＩＰＤＩＡＹＤＳＲＷＥＳＷＧＦＥＦＤＦＴＩＥＫＩＶＮＫＬＤＥＬＫＡＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＹＡＧＤＷＫＬＳＰＱＫＦＰＮＧＮＡＤＭＫＹＬＴＤＥＩＨＫＲＧＭＴＡＩＬＷＷＲＰＶＤＧＧＩＮＳＫＬＶＳＥＨＰＥＷＦＩＫＮＳＱＧＮＭＶＲＬＰＧＰＧＧＧＮＧＧＴＡＧＹＡＬＣＰＮＳＥＧＳＩＱＨＨＫＤＦＶＴＶＡＬＥＥＷＧＦＤＧＦＫＥＤＹＶＷＧＩＰＫＣＹＤＳＳＨＫＨＳＳＬＳＤＴＬＥＮＱＹＫＦＹＥＡＩＹＥＱＳＩＡＩＮＰＤＴＦＩＥＬＣＮＣＧＴＰＱＤＦＹＳＴＰＹＶＮＨＡＰＴＡＤＰＩＳＲＶＱＴＲＴＲＶＫＡＦＫＡＩＦＧＤＤＦＰＶＴＴＤＨＮＳＶＷＬＰＳＡＬＧＴＧＳＶＭＩＴＫＨＴＴＬＳＳＳＤＲＥＱＹＮＫＹＦＧＬＡＲＤＬＥＬＡＫＧＥＦＩＧＮＬＹＫＹＧＩＤＰＬＥＳＹＶＩＲＫＧＥＤＩＹＹＳＦＹＫＤＮＳＳＹＳＧＮＩＥＩＫＧＬＤＳＮＡＴＹＲＩＥＤＹＶＮＮＲＶＩＡＲＧＶＫＧＰＴＡＴＩＮＴＳＦＴＤＮＬＬＶＲＡＩＰＤＤＴＰＡＥＶＴＴＦＤＶＧＮＮＴＩＬＳＳＴＤＳＧＮＳＫＹＬＮＡＶＳＴＴＬＥＫＴＡＴＩＤＳＬＳＩＹＩＧＮＮＳＥＮＧＫＬＱＩＡＩＹＤＤＮＮＧＫＰＧＴＫＫＡＹＶＥＥＦＶＰＴＫＮＳＷＮＴＫＫＶＶＮＳＶＴＬＰＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫＰＬＱＮＡＥＴＹＬＮＩＰＴＹＤＧＬＮＱＳＴＨＰＤＶＫＹＦＫＮＧＷＮＧＹＫＹＷＭＩＭＴＰＮＲＴＧＳＳＶＡＥＮＰＳＩＬＡＳＤＤＧＩＮＷＥＶＰＡＧＶＴＮＰＩＡＰＭＰＱＶＧＨＮＣＤＶＤＭＩＹＮＥＡＴＤＥＬＷＶＹＷＶＥＳＤＤＩＴＫＧＷＶＫＬＩＫＳＫＤＧＶＮＷＳＳＱＱＶＶＶＤＤＮＲＡＫＹＳＴＬＳＰＳＩＩＦＫＤＮＫＹＹＭＷＳＶＮＴＧＮＳＧＷＮＮＱＳＮＫＶＥＬＲＥＳＳＤＧＶＮＷＳＮＰＴＶＶＮＴＬＡＱＤＧＳＱＩＷＨＶＮＶＥＹＩＰＳＫＮＥＹＷＡＩＹＰＡＹＫＮＧＴＧＳＤＫＴＥＬＹＹＡＫＳＳＤＧＶＮＷＴＴＹＫＮＰＩＬＳＫＧＴＳＧＫＷＤＤＭＥＩＹＲＳＣＦＶＹＤＥＤＴＮＭＩＫＶＷＹＧＡＶＳＱＮＰＱＩＷＫＩＧＦＴＥＮＤＹＤＫＦＩＥＧＬＴＱ
【０２０２】
配列番号１７
【０２０３】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するクロストリジウム・テルチウム５７５７（Ｃｔ５７５７）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質配列発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおける）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫＰＬＱＮＡＥＴＹＬＮＩＰＴＹＤＧＬＮＱＳＴＨＰＤＶＫＹＦＫＮＧＷＮＧＹＫＹＷＭＩＭＴＰＮＲＴＧＳＳＶＡＥＮＰＳＩＬＡＳＤＤＧＩＮＷＥＶＰＡＧＶＴＮＰＩＡＰＭＰＱＶＧＨＮＣＤＶＤＭＩＹＮＥＡＴＤＥＬＷＶＹＷＶＥＳＤＤＩＴＫＧＷＶＫＬＩＫＳＫＤＧＶＮＷＳＳＱＱＶＶＶＤＤＮＲＡＫＹＳＴＬＳＰＳＩＩＦＫＤＮＫＹＹＭＷＳＶＮＴＧＮＳＧＷＮＮＱＳＮＫＶＥＬＲＥＳＳＤＧＶＮＷＳＮＰＴＶＶＮＴＬＡＱＤＧＳＱＩＷＨＶＮＶＥＹＩＰＳＫＮＥＹＷＡＩＹＰＡＹＫＮＧＴＧＳＤＫＴＥＬＹＹＡＫＳＳＤＧＶＮＷＴＴＹＫＮＰＩＬＳＫＧＴＳＧＫＷＤＤＭＥＩＹＲＳＣＦＶＹＤＥＤＴＮＭＩＫＶＷＹＧＡＶＳＱＮＰＱＩＷＫＩＧＦＴＥＮＤＹＤＫＦＩＥＧＬＴＱ
【０２０４】
配列番号１９
【０２０５】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するクロストリジウム・テルチウム５７５７（Ｃｔ５７５７）タンパク質配列ガラクトサミニダーゼ発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＹＮＬＩＤＮＩＳＶＥＫＬＤＴＤＩＳＱＡＮＥＮＶＦＬＮＧＮＧＩＡＬＥＶＤＮＲＧＡＴＣＩＹＬＶＤＥＮＧＶＫＴＫＡＴＴＳＬＤＴＡＤＦＳＧＹＰＩＩＧＧＱＫＩＲＤＦＶＩＩＳＫＮＬＥＥＮＩＮＳＩＬＧＶＧＮＲＬＴＩＩＳＫＳＳＳＴＮＬＩＲＫＩＶＦＥＴＳＮＳＮＰＧＡＩＹＳＴＶＳＹＫＡＥＳＮＤＬＬＶＤＳＦＨＥＮＥＹＴＭＳＬＧＱＧＰＦＬＡＹＱＧＣＡＤＱＱＧＡＮＴＩＶＮＶＴＮＧＹＮＨＮＳＧＱＮＮＹＳＶＧＶＰＦＳＹＶＹＮＳＶＧＧＩＧＩＧＤＡＳＴＳＲＲＥＦＫＬＰＩＩＧＫＤＮＴＶＳＬＧＭＥＷＮＧＱＴＬＫＫＧＡＥＴＡＩＧＴＳＶＩＴＴＴＮＧＤＹＹＳＧＬＫＳＹＡＥＶＭＫＤＫＧＩＳＡＰＡＳＩＰＤＩＡＹＤＳＲＷＥＳＷＧＦＥＦＤＦＴＩＥＫＩＶＮＫＬＤＥＬＫＡＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＹＡＧＤＷＫＬＳＰＱＫＦＰＮＧＮＡＤＭＫＹＬＴＤＥＩＨＫＲＧＭＴＡＩＬＷＷＲＰＶＤＧＧＩＮＳＫＬＶＳＥＨＰＥＷＦＩＫＮＳＱＧＮＭＶＲＬＰＧＰＧＧＧＮＧＧＴＡＧＹＡＬＣＰＮＳＥＧＳＩＱＨＨＫＤＦＶＴＶＡＬＥＥＷＧＦＤＧＦＫＥＤＹＶＷＧＩＰＫＣＹＤＳＳＨＫＨＳＳＬＳＤＴＬＥＮＱＹＫＦＹＥＡＩＹＥＱＳＩＡＩＮＰＤＴＦＩＥＬＣＮＣＧＴＰＱＤＦＹＳＴＰＹＶＮＨＡＰＴＡＤＰＩＳＲＶＱＴＲＴＲＶＫＡＦＫＡＩＦＧＤＤＦＰＶＴＴＤＨＮＳＶＷＬＰＳＡＬＧＴＧＳＶＭＩＴＫＨＴＴＬＳＳＳＤＲＥＱＹＮＫＹＦＧＬＡＲＤＬＥＬＡＫＧＥＦＩＧＮＬＹＫＹＧＩＤＰＬＥＳＹＶＩＲＫＧＥＤＩＹＹＳＦＹＫＤＮＳＳＹＳＧＮＩＥＩＫＧＬＤＳＮＡＴＹＲＩＥＤＹＶＮＮＲＶＩＡＲＧＶＫＧＰＴＡＴＩＮＴＳＦＴＤＮＬＬＶＲＡＩＰＤＤＴＰＡＥＶＴＴＦＤＶＧＮＮＴＩＬＳＳＴＤＳＧＮＳＫＹＬＮＡＶＳＴＴＬＥＫＴＡＴＩＤＳＬＳＩＹＩＧＮＮＳＥＮＧＫＬＱＩＡＩＹＤＤＮＮＧＫＰＧＴＫＫＡＹＶＥＥＦＶＰＴＫＮＳＷＮＴＫＫＶＶＮＳＶＴＬＰＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫ
【０２０６】
配列番号２１
【０２０７】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ１０２１ガラクトサミニダーゼタンパク質発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＧＮＧＬＥＶＫＡＳＰＲＥＶＡＱＩＴＧＮＧＶＳＶＴＦＦＱＥＤＧＴＶＱＬＳＣＩＥＤＤＧＮＴＡＦＭＴＲＮＳＥＶＳＹＰＶＶＧＧＥＥＶＴＤＦＳＤＦＱＣＥＶＱＥＮＶＴＧＡＡＧＡＧＳＲＭＴＩＴＳＩＳＳＧＲＧＩＱＲＳＶＶＩＥＴＶＤＥＶＫＧＬＬＨＩＳＳＳＹＲＡＥＥＥＶＤＡＤＥＦＩＤＳＲＦＳＬＤＮＰＳＤＴＶＷＳＹＮＧＧＧＥＧＡＱＳＲＹＤＴＬＱＫＩＤＬＳＤＧＥＳＦＹＲＥＮＬＱＮＱＴＡＡＧＩＰＶＡＤＩＹＧＫＤＧＧＩＴＶＧＤＡＳＶＴＲＲＱＬＳＴＰＶＮＥＲＮＧＴＡＹＶＳＶＫＨＰＧＡＶＩＴＱＲＥＴＥＩＳＱＳＦＶＮＶＨＲＧＤＹＹＳＧＬＲＧＹＡＤＧＭＫＱＩＧＦＴＴＬＳＲＥＱＩＰＥＳＳＹＤＬＲＷＥＳＷＧＷＥＦＤＷＴＶＥＬＩＩＮＫＬＤＥＬＫＥＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＮＡＡＧＥＷＧＬＮＮＷＫＬＰＮＧＡＬＤＭＲＨＬＴＤＡＩＨＥＲＧＭＴＡＶＬＷＷＲＰＣＤＧＧＲＥＤＳＡＬＦＫＥＨＰＥＹＦＩＫＮＱＤＧＳＦＧＫＬＡＧＰＧＱＷＮＳＦＬＧＳＣＧＹＡＬＣＰＬＳＥＧＡＶＱＳＱＶＤＦＩＮＲＡＭＮＥＷＧＦＤＧＦＫＳＤＹＶＷＳＬＰＫＣＹＳＱＤＨＨＨＥＹＰＥＥＳＴＥＱＱＡＶＦＹＲＡＶＹＥＡＭＴＤＮＤＰＮＡＦＨＬＬＣＮＣＧＴＰＱＤＹＹＳＬＰＹＶＴＱＶＰＴＡＤＰＴＳＶＤＱＴＲＲＲＶＫＡＹＫＡＬＣＧＤＹＦＰＶＴＴＤＨＮＥＶＷＹＰＳＴＩＧＴＧＡＩＬＩＥＫＲＤＬＳＧＷＥＥＥＥＹＡＫＷＬＫＩＡＱＥＮＱＬＨＫＧＴＦＩＧＤＬＹＳＹＧＹＤＰＹＥＴＹＴＶＹＫＤＧＩＭＹＹＡＦＹＫＤＧＮＲＹＲＰＳＧＮＰＤＩＥＬＫＧＬＥＤＧＫＬＹＲＩＶＤＹＶＮＮＱＶＶＡＴＮＶＴＳＳＮＡＶＦＳＹＰＦＳＤＹＬＬＶＫＡＶＥＩＳＥＰＤＴＤＧＰＧＰＶＰＤＰＥＧＡＶＴＶＥＥＮＤＰＥＬＶＹＴＧＤＷＶＲＥＥＮＤＧＹＨＧＧＧＡＲＹＴＫＥＡＥＡＳＶＥＬＡＦＹＧＴＧＡＡＷＹＧＱＨＤＶＮＦＧＳＡＲＩＹＩＤＧＴＹＶＫＴＶＳＣＭＧＥＰＧＩＮＩＫＬＦＥＩＳＧＬＤＬＡＳＨＲＩＫＩＥＣＥＴＰＶＩＤＩＤＲＬＴＹＩＫＧＥＥＶＰＡＫＶＭＴＡＤＬＲＡＬＴＶＩＡＮＱＹＤＭＮＳＦＡＤＧＮＹＫＤＱＬＧＶＳＬＶＲＡＮＱＬＬＡＡＤＤＶＴＱＧＡＶＮＥＥＱＫＹＬＬＮＡＭＬＫＩＲＫＫＶＤＫＳＷＩＧＬＰＧＰＩＰＱＤＩＱＴＥＮＩＳＲＤＮＬＡＫＶＩＳＹＴＧＱＬＤＲＤＥＩＩＰＡＩＫＥＱＬＮＤＳＹＤＫＡＶＳＩＡＥＲＱＤＡＳＱＰＥＩＤＲＡＷＡＥＬＭＮＡＶＱＹＳＳＹＩＲＧＳＫＥＥＬＬＳＬＬＤＥＹＧＫＶＤＴＴＶＹＫＤＡＡＬＦＩＥＳＬＥＡＡＫＫＶＹＱＤＥＮＡＭＤＧＥＩＳＤＣＩＫＱＬＲＤＡＫＤＱＬＱＬＫＤＰＶＤＰＰＫＰＤＰＤＰＤＰＫＰＤＰＴＰＤＰＧＰＤＰＫＰＤＰＴＰＤＰＴＰＤＰＫＰＮＰＴＰＴＰＤＰＴＰＥＰＡＬＫＫＰＥＱＶＳＧＬＫＳＫＡＥＴＤＹＬＴＶＳＷＫＫＬＮＮＡＥＳＹＫＶＹＩＹＫＳＧＫＷＲＬＡＧＫＴＴＫＴＳＩＫＩＫＫＬＶＳＧＴＫＹＴＶＫＶＡＡＶＮＫＡＧＱＧＫＹＳＳＱＶＹＴＡＡＫＰＫＫＶＫＬＫＳＶＳＲＹＲＴＳＫＶＫＬＮＹＧＫＶＫＡＧＧＹＥＩＷＭＫＮＧＫＧＳＹＫＫＡＡＴＳＴＫＴＴＡＩＫＳＧＬＫＫＧＫＴＹＹＦＫＶＲＡＹＶＫＮＫＮＱＶＩＹＧＳＦＳＮＩＫＫＹＫＭＶＬ
【０２０８】
配列番号２３
【０２０９】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するＲｕｔｈｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔａｔｉｆｏｒｍａｎｓ  Ｒ１８７５５ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質配列発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＥＥＴＤＬＬＶＮＧＧＦＥＴＧＤＳＴＧＷＮＷＦＮＮＡＶＶＤＳＡＡＰＨＳＧＮＹＣＡＫＶＡＫＮＳＳＹＥＱＶＶＴＶＳＰＤＴＫＹＶＬＴＧＷＡＫＳＥＧＳＳＶＭＴＬＧＶＫＮＹＧＧＱＥＴＦＳＡＴＬＳＡＤＹＱＱＬＡＶＴＦＴＴＧＰＮＡＱＴＡＴＩＹＧＹＲＱＮＳＧＳＧＡＧＹＦＤＤＶＥＬＴＡＶＱＤＦＡＰＹＱＰＬＡＮＡＩＡＰＱＡＩＰＴＹＤＧＡＮＱＰＴＨＰＳＶＶＫＦＥＱＰＷＮＧＹＬＹＷＭＡＭＴＰＹＰＦＮＤＧＳＹＥＮＰＳＩＶＡＳＮＤＧＥＮＷＩＶＰＥＧＶＳＮＰＬＡＧＴＰＳＰＧＨＮＣＤＶＤＬＶＹＶＰＡＳＤＥＬＲＭＹＹＶＥＡＤＤＩＩＳＳＲＶＫＭＩＳＳＲＤＧＶＨＷＳＥＰＱＶＶＭＱＤＬＶＲＫＹＳＩＬＳＰＳＩＥＩＬＰＤＧＴＹＭＭＷＹＶＤＴＧＮＡＧＷＮＳＱＮＮＱＶＫＹＲＴＳＡＤＧＩＫＷＳＧＡＶＴＣＴＤＦＶＱＰＧＹＱＩＷＨＩＤＶＨＹＤＴＳＳＧＡＹＹＡＶＹＰＡＹＰＮＧＴＤＣＤＨＣＮＬＦＦＡＶＮＲＴＧＫＱＷＥＴＦＳＲＰＩＬＫＰＳＴＥＧＧＷＤＤＦＣＩＹＲＳＳＭＬＩＤＤＧＭＬＫＶＷＹＧＡＫＫＱＥＤＳＳＷＨＴＧＬＴＭＲＤＦＳＥＦＭＫＩＬＥＲ
【０２１０】
配列番号２５
【０２１１】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ  ３６７１ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＳＰＬＳＡＡＡＥＳＧＴＧＴＲＬＶＫＧＱＴＧＹＬＴＥＥＱＡＩＲＮＱＥＱＴＴＥＥＲＥＱＫＬＴＧＥＥＴＡＥＶＬＭＥＧＴＫＤＳＧＩＶＱＴＥＥＶＱＴＫＥＭＱＴＥＤＡＱＴＥＥＶＱＴＥＥＭＱＴＥＤＡＱＴＫＥＶＱＴＥＥＭＱＴＥＤＡＱＴＥＥＶＱＴＫＥＥＰＡＥＥＴＨＭＫＥＩＱＴＱＧＴＫＫＡＳＤＲＮＧＫＡＲＶＴＥＩＬＥＤＡＱＤＰＡＮＲＩＶＹＬＳＤＬＱＷＫＳＥＮＨＴＶＤＳＥＬＰＴＲＫＤＫＳＦＧＧＧＫＩＴＬＫＶＤＧＴＶＴＥＦＤＫＧＩＧＴＱＴＤＳＴＩＶＹＤＬＥＧＫＧＹＴＫＦＥＴＹＶＧＶＤＹＳＱＫＥＮＩＰＧＥＶＣＤＶＫＦＲＶＫＩＤＤＫＩＶＳＥＴＧＶＬＤＰＬＳＮＡＶＫＩＳＶＮＩＰＤＴＡＫＴＬＴＬＹＡＤＫＶＴＥＴＷＳＤＨＡＮＷＡＤＡＫＦＹＱＡＬＰＥＰＥＮＶＡＦＫＫＴＶＶＴＲＫＴＳＤＮＳＥＡＰＶＮＰＤＳＡＶＮＳＳＫＡＶＤＧＶＩＤＳＳＳＹＦＤＦＧＤＱＡＮＳＧＡＶＲＥＳＬＹＭＥＶＤＬＫＧＳＹＬＬＳＤＩＱＬＷＲＹＷＫＤＧＲＴＹＡＡＴＡＩＶＶＡＥＤＥＮＦＥＮＡＡＶＩＹＮＳＤＴＴＧＥＩＨＨＬＧＡＧＳＤＭＬＹＡＥＴＥＳＧＫＴＦＰＶＰＥＮＴＫＡＲＹＩＲＶＹＴＹＧＶＮＧＴＳＧＶＴＮＨＩＶＥＬＫＶＮＡＹＶＦＧＤＥＩＬＰＥＫＰＤＤＳＫＩＦＰＮＡＶＮＰＬＫＬＱＧＰＧＴＮＤＱＶＴＨＰＤＶＴＶＦＤＥＰＷＮＧＹＫＹＷＭＡＹＴＰＮＫＰＧＳＳＹＦＥＮＰＣＩＡＡＳＮＤＧＶＮＷＥＦＰＡＱＮＰＶＱＰＲＹＤＳＥＩＥＮＱＮＥＨＮＣＤＴＤＩＶＹＤＰＶＮＤＲＬＩＭＹＷＥＷＡＱＤＥＡＶＮＧＫＴＨＲＳＥＩＲＹＲＶＳＹＤＧＩＮＷＧＶＥＤＫＴＧＶＬＭＴＧＰＴＤＨＧＣＡＩＡＴＥＧＥＲＹＳＤＬＳＰＴＶＶＹＤＫＴＥＫＩＹＫＭＷＡＮＤＡＧＤＶＧＹＥＮＫＱＮＮＫＶＷＹＲＴＳＱＤＧＩＳＮＷＳＤＫＴＹＶＥＮＦＬＧＶＮＥＤＧＬＱＭＹＰＷＨＱＤＩＱＷＶＥＥＦＱＥＹＷＡＬＱＱＡＦＰＡＧＳＧＰＤＮＳＳＬＲＦＳＫＳＫＤＧＬＨＷＥＰＶＳＥＫＡＬＩＴＶＧＡＰＧＴＷＤＡＧＱＩＹＲＳＴＦＷＹＥＰＧＧＡＫＧＮＧＴＦＨＩＷＹＡＡＬＡＥＧＱＳＨＷＤＩＧＹＴＳＡＮＹＡＤＡＭＹＫＬＴＧＳＲＰＥＶＥＫＲＩＥＶＮＮＥＮＰＬＬＩＭＰＬＹＧＫＳＹＳＥＳＧＳＴＬＤＷＧＤＤＬＶＳＲＷＫＱＶＰＥＤＬＫＥＮＡＶＩＥＩＨＬＧＧＫＩＧＬＮＥＳＤＳＨＴＡＫＡＦＹＥＱＱＬＡＩＡＱＥＮＮＩＰＶＭＭＶＶＡＴＡＧＱＱＮＹＷＴＧＴＡＮＬＤＡＥＷＩＤＲＭＦＫＱＨＳＶＬＫＧＩＭＳＴＥＮＹＷＴＤＹＮＫＶＡＴＭＧＡＤＹＬＲＶＡＡＥＮＧＧＹＦＶＷＳＥＨＱＥＧＶＩＥＮＶＩＡＮＥＫＦＮＥＡＬＫＬＹＧＮＮＦＩＦＴＷＫＮＴＰＡＧＴＮＳＮＡＧＴＡＳＹＭＱＧＬＷＬＴＧＩＣＡＱＷＧＧＬＡＤＴＷＫＷＹＥＫＧＦＧＫＬＦＤＧＱＹＳＹＮＰＧＧＥＥＡＲＰＶＡＴＥＰＥＡＬＬＧＩＥＭＭＳＩＹＴＮＧＧＣＶＹＮＦＥＨＰＡＹＶＹＧＳＹＮＱＮＳＰＣＦＥＮＶＩＡＥＦＭＲＹＡＩＫＮＰＡＰＧＫＥＥＶＬＡＤＴＫＡＶＦＹＧＫＬＳＳＬＫＳＡＧＮＬＬＱＫＧＬＮＷＥＤＡＴＬＰＴＱＴＴＧＲＹＧＬＩＰＡＶＰＥＡＶＤＥＫＴＶＫＡＶＦＧＤＩＥＩＬＮＱＳＳＡＱＬＡＮＫＤＡＫＫＡＹＦＥＥＫＹＰＥＱＹＴＧＴＡＦＧＱＬＬＮＤＴＷＹＬＹＮＳＮＶＮＶＤＧＶＱＮＡＫＬＰＬＥＧＮＫＳＶＤＩＴＭＴＰＨＴＹＶＩＬＤＤＱＤＧＥＬＱＩＫＬＮＮＹＲＶＤＫＤＳＩＷＥＧＹＧＴＴＶＴＤＲＷＤＴＤＨＮＴＫＬＱＤＷＩＲＤＥＹＩＰＮＰＤＤＤＴＦＲＤＴＴＦＥＬＶＧＬＥＳＥＰＥＶＮＶＴＮＧＬＫＤＱＹＱＥＰＶＶＥＹＤＡＡＡＧＴＡＭＩＴＶＳＧＮＧＷＶＤＬＴＩＤＴＮＴＡＥＶＰＱＶＤＫＡＫＬＮＳＫＩＡＥＡＫＧＩＲＱＧＮＹＴＤＥＳＹＫＡＬＱＥＥＩＧＫＳＱＡＶＳＮＫＴＤＡＴＱＥＥＶＮＡＱＬＳＲＬＥＳＡＩＡＲＬＫＥＫＰＡＶＶＳＫＴＡＬＮＡＫＩＡＥＡＫＧＩＲＱＧＮＹＴＤＥＳＹＫＡＬＱＮＡＩＶＫＡＱＥＬＳＮＫＴＤＡＴＱＱＱＶＮＤＬＶＳＡＬＴＮＡＩＫＮＬＫＩＤＡＤＫＬＡＡＥＳＡＫＫＶＡＡＶＫＶＡＶＫＡＶＳＹＫＳＫＥＩＫＬＳＷＫＴＶＡＤＡＤＧＹＶＩＲＶＫＴＧＫＫＷＳＴＥＫＴＩＫＮＮＲＩＩＴＹＴＹＫＫＧＴＰＧＫＫＹＶＦＥＶＫＡＦＫＫＶＮＧＫＴＴＹＳＫＹＫＴＡＴＫＫＶＶＰＱＴＶＴＡＫＡＫＡＳＫＮＮＶＶＶＫＷＮＫＶＳＧＡＳＧＹＶＶＭＫＫＫＧＫＴＷＶＫＡＡＱＶＮＡＫＫＬＹＦＴＤＫＫＶＫＫＧＫＶＹＳＹＫＶＫＡＹＫＶＹＫＧＫＫＶＹＧＳＹＳＫＳＶＮＶＫＴＫＳ
【０２１２】
配列番号２７
【０２１３】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ  ３６７２ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＡＥＴＡＴＥＥＮＡＡＬＥＫＴＶＴＬＨＫＳＤＧＴＥＬＰＥＤＹＲＮＰＱＲＰＡＴＭＡＶＤＧＩＩＤＤＴＧＥＹＮＹＣＤＦＧＫＤＧＤＫＡＡＬＹＭＱＶＤＬＧＧＬＹＤＬＳＲＶＮＭＷＲＹＷＫＤＳＲＴＹＤＡＴＶＩＴＴＳＥＳＧＤＦＴＤＥＡＶＩＹＮＳＤＲＳＮＶＨＧＦＧＡＧＧＤＥＲＹＡＥＴＡＳＧＨＥＦＰＶＰＤＧＴＫＡＱＡＶＲＶＹＶＦＧＳＱＮＧＴＴＮＨＩＮＥＬＱＶＷＧＴＰＨＴＥＮＰＤＶＮＳＹＱＶＴＩＰＱＧＮＧＹＱＶＩＰＹＥＮＤＰＴＴＶＥＥＧＧＳＦＲＦＱＶＬＩＤＳＤＮＧＹＳＡＴＳＡＶＫＡＮＧＶＳＬＥＡＶＤＳＶＹＴＩＥＮＩＴＥＤＱＶＩＴＩＥＧＶＨＫＡＱＹＥＶＫＦＰＥＮＰＱＧＹＳＶＥＩＱＮＥＧＳＴＴＶＤＹＮＧＳＶＳＦＫＬＩＩＤＥＡＹＮＥＳＶＰＶＶＫＡＮＧＧＡＡＬＧＫＤＥＬＧＶＹＴＩＡＮＩＱＤＤＩＴＶＴＶＥＧＩＱＥＮＴＶＶＫＴＫＴＭＹＬＳＤＭＤＷＫＳＡＡＮＡＶＧＡＴＧＥＫＤＴＰＴＫＤＬＮＨＬＱＱＱＭＫＬＬＶＮＧＡＥＫＳＦＤＫＧＩＧＶＱＴＤＳＳＩＶＹＤＬＥＤＫＧＹＴＳＦＨＴＬＡＧＶＤＹＳＡＭＥＹＶＤＧＥＧＣＤＩＱＦＫＶＹＬＤＤＶＶＶＦＤＳＧＶＶＤＡＳＤＥＡＱＥＶＮＶＡＩＴＳＥＮＫＥＬＫＬＥＡＫＭＶＫＥＰＹＮＤＷＧＮＷＡＤＡＳＦＥＭＡＹＰＥＰＳＮＶＡＬＮＫＴＶＴＶＫＫＴＡＤＮＳＤＳＥＶＮＳＳＲＰＧＳＭＡＶＤＧＩＩＧＰＴＳＤＳＮＹＣＤＦＧＱＤＧＤＮＴＳＲＹＬＱＶＤＬＧＤＶＹＥＬＴＱＩＮＭＦＲＹＷＡＤＧＲＶＹＮＧＴＶＩＡＶＳＥＮＡＤＦＳＮＰＴＦＩＹＮＳＤＫＡＤＫＨＧＬＧＡＧＳＤＤＴＹＧＥＴＱＳＧＫＬＦＥＶＰＡＧＴＭＧＱＹＶＲＶＹＭＡＧＳＮＫＧＴＴＮＨＩＡＥＬＱＶＭＧＹＮＦＮＴＥＰＫＰＹＥＡＮＡＦＥＮＡＥＶＹＬＤＭＰＴＨＦＱＤＬＤＳＮＫＮＤＤＧＳＬＫＨＩＧＧＱＶＴＨＰＤＩＱＶＦＤＱＰＷＮＧＹＫＹＷＭＩＹＴＰＮＴＭＩＴＳＱＹＥＮＰＹＩＶＡＳＥＤＧＱＴＷＶＥＰＥＧＩＳＮＰＩＥＰＥＰＰＳＴＲＦＨＮＣＤＡＤＬＬＹＤＳＶＮＤＲＬＬＡＹＷＮＷＡＤＤＧＧＧＩＤＤＥＬＫＤＱＮＣＱＩＲＬＲＩＳＹＤＧＩＮＷＧＶＰＹＤＫＤＧＮＩＡＴＴＡＤＴＶＶＲＭＥＴＧＤＫＤＦＩＰＡＩＳＥＫＤＲＹＧＭＬＳＰＴＦＴＹＤＤＦＲＧＩＹＴＭＷＡＱＮＳＧＤＡＧＹＮＱＳＧＫＦＩＥＭＲＷＳＥＤＧＩＮＷＳＥＰＱＫＶＮＮＦＬＧＫＤＥＮＧＲＱＬＷＰＷＨＱＤＩＱＹＩＰＥＬＱＥＹＷＧＬＳＱＣＦＳＴＳＮＰＤＧＳＶＬＹＬＴＫＳＲＤＧＶＮＷＥＱＡＧＴＱＰＶＬＲＡＧＫＳＧＴＷＤＤＦＱＩＹＲＳＴＦＹＹＤＮＱＳＤＳＰＴＧＧＫＦＲＩＷＹＳＡＬＱＡＮＴＳＧＫＴＶＬＡＰＤＧＴＶＳＬＱＶＧＳＱＤＴＲＩＷＲＩＧＹＴＥＮＤＹＭＥＶＭＫＡＬＴＱＮＫＮＹＥＥＰＥＬＶＤＡＶＳＬＮＬＳＭＤＫＴＳＩＳＶＧＥＥＡＴＶＳＴＡＦＶＰＥＮＡＴＤＲＩＶＫＹＴＳＱＤＰＥＩＡＶＩＤＰＴＧＩＶＴＧＶＫＤＧＴＴＴＩＶＡＥＴＫＳＧＡＫＧＥＬＳＶＴＶＧＥＬＱＲＧＥＩＲＦＥＶＳＮＤＨＰＭＹＬＥＮＹＹＷＳＤＤＡＰＫＫＤＧＬＤＡＮＫＮＹＹＧＤＥＲＶＤＳＰＶＭＬＹＮＴＶＰＥＥＬＫＤＮＴＶＩＬＬＩＡＥＲＳＬＮＳＴＤＡＶＲＤＷＩＫＫＮＶＥＬＣＮＥＮＫＩＰＣＡＶＱＩＡＮＧＥＴＮＶＮＴＴＩＰＬＳＦＷＮＥＬＡＴＮＮＥＹＬＶＧＦＮＡＡＥＭＹＮＲＦＡＧＤＮＲＳＹＶＭＤＭＩＲＬＧＶＳＨＧＶＣＭＭＷＴＤＴＮＩＦＧＴＮＧＶＬＹＤＷＬＴＱＤＥＫＬＳＧＬＭＲＥＹＫＥＹＩＳＬＭＴＫＥＳＹＧＳＥＡＡＮＴＤＡＬＦＫＧＬＷＭＴＤＹＣＥＮＷＧＩＡＳＤＷＷＨＷＱＬＤＳＮＧＡＬＦＤＡＧＳＧＧＤＡＷＫＱＣＬＴＷＰＥＮＭＹＴＱＤＶＶＲＡＶＳＱＧＡＴＣＦＫＳＥＡＱＷＹＳＮＡＴＫＧＭＲＴＰＴＹＱＹＳＭＩＰＦＬＥＫＬＶＳＫＥＶＫＩＰＴＫＥＥＭＬＥＲＴＫＡＩＶＶＧＡＥＮＷＮＮＦＮＹＮＴＴＹＳＮＬＹＰＳＴＧＱＹＧＩＶＰＹＶＰＳＮＣＰＥＥＥＬＡＧＹＤＬＶＶＲＥＮＬＧＫＡＧＬＫＳＡＬＤＴＶＹＰＶＱＫＳＥＧＴＡＹＣＥＴＦＧＤＴＷＹＷＭＮＳＳＥＤＫＮＶＳＱＹＴＥＦＴＴＡＩＮＧＡＥＳＶＫＩＡＧＥＰＨＶＦＧＩＩＫＥＮＰＧＳＬＮＶＹＬＳＮＹＲＬＤＫＴＥＬＷＤＧＴＩＰＧＧＬＳＤＱＧＣＹＮＹＶＷＱＭＣＥＲＭＫＮＧＴＧＬＤＴＱＬＲＤＴＶＩＴＶＫＮＡＶＥＰＫＶＮＦＶＴＥＳＰＡＤＲＳＦＡＥＤＮＹＶＲＰＹＫＹＴＶＡＱＫＥＧＴＴＤＥＷＶＩＴＶＳＨＮＧＩＶＥＦＮＩＶＴＧＤＥＫＶＰＡＴＳＶＥＬＳＴＤＫＶＤＶＩＲＮＲＴＡＶＶＫＡＴＶＬＰＱＮＡＧＮＫＱＬＴＷＴＩＡＤＰＥＩＡＳＶＤＮＫＧＴＶＴＧＬＫＥＧＫＴＶＬＲＡＡＩＳＧＳＶＹＫＥＣＥＶＮＶＩＤＲＫＶＴＥＶＮＬＮＫＴＥＬＳＬＳＡＧＤＳＡＫＬＥＡＳＩＡＰＥＤＰＳＤＳＳＩＴＷＴＳＴＮＥＮＶＡＴＶＡＳＮＧＴＶＴＡＨＫＡＧＶＡＱＩＩＡＱＳＡＹＱＡＫＧＩＡＴＶＴＶＮＹＡＡＳＶＫＬＤＲＴＧＭＴＡＴＡＮＳＥＱＳＫＳＧＧＥＧＰＡＳＮＶＬＤＧＫＱＤＴＭＷＨＴＳＷＴＤＫＰＥＬＨＰＨＷＩＫＩＤＬＮＧＴＫＴＩＮＫＦＡＹＴＰＲＴＧＡＳＮＧＴＩＹＮＹＶＬＩＩＴＤＬＥＧＮＥＫＱＶＡＫＧＶＷＡＡＮＡＤＶＫＹＡＥＦＤＡＶＥＡＴＡＩＫＬＱＶＤＧＮＤＤＫＡＳＫＧＧＹＧＳＡＡＥＩＮＩＦＥＶＡＱＫＰＳＡＮＥＬＡＥＮＩＫＶＩＡＰＶＫＡＥＤＴＫＶＳＩＰＶＩＴＧＦＤＩＶＩＳＮＳＳＮＰＤＶＩＧＩＤＧＳＩＴＲＰＥＮＤＴＶＶＴＬＴＬＫＶＫＥＴＤＡＫＳＶＫＡＡＧＴＥＡＴＴＮＶＤＶＬＶＴＧＴＫＴＳＤＶＥＡＥＳＶＴＬＤＱＴＳＡＤＬＴＶＧＧＥＬＬＬＮＡＶＶＫＰＤＩＡＴＮＫＡＶＴＷＳＳＤＫＰＧＴＡＴＶＥＮＧＲＶＫＡＬＡＡＧＥＡＲＩＴＡＡＴＡＮＧＫＴＡＤＣＶＩＮＶＫＥＫＥＥＰＥＶＩＬＰＡＥＶＲＬＮＩＰＳＡＥＦＴＶＧＤＱＩＱＬＴＡＳＶＬＰＡＮＡＡＤＫＴＩＴＷＫＳＤＫＰＥＶＡＴＶＡＮＧＷＶＫＧＩＡＡＧＴＡＫＩＴＡＴＳＶＮＧＫＴＡＶＣＶＩＴＶＫＡＱＰＱＮＬＰＴＧＶＳＬＮＫＫＴＡＳＶＫＬＮＫＴＬＴＬＳＡＶＶＱＰＳＮＡＤＮＫＴＶＫＷＴＳＤＮＴＹＶＡＴＶＥＮＧＶＶＫＡＶＮＡＧＴＡＲＩＴＡＡＴＶＮＧＨＫＡＴＣＴＩＴＶＰＧＴＫＩＳＫＡＫＶＳＬＡＳＳＫＴＨＴＧＫＡＬＫＰＳＶＫＶＴＹＧＫＮＴＬＫＫＮＴＤＹＴＶＳＹＫＮＮＩＮＰＧＴＡＳＶＴＩＴＧＫＧＫＹＹＧＴＩＮＫＴＦＡＩＫＡＡＥＧＫＴＹＴＶＧＫＧＫＹＫＶＴＤＡＳＡＫＮＫＴＶＴＦＭＡＰＶＫＫＴＹＳＳＦＳＶＰＳＫＶＫＩＧＮＤＴＹＫＶＴＡＶＡＫＮＡＦＫＫＮＴＫＬＴＫＬＴＩＧＳＮＶＫＴＩＧＳＹＡＦＹＧＡＳＱＬＫＴＬＴＬＫＴＴＧＬＮＳＶＧＫＮＡＦＫＫＴＮＡＫＬＴＶＫＶＰＫＳＫＬＡＤＹＫＫＬＬＫＧＫＧＬＳＧＫＡＫＩＱＫ
【０２１４】
配列番号２９
【０２１５】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ  ３６７１ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質Ｒｐ３６７１＿発現構築物（ｐＥＴ２８  ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＳＰＬＳＡＡＡＥＳＧＴＧＴＲＬＶＫＧＱＴＧＹＬＴＥＥＱＡＩＲＮＱＥＱＴＴＥＥＲＥＱＫＬＴＧＥＥＴＡＥＶＬＭＥＧＴＫＤＳＧＩＶＱＴＥＥＶＱＴＫＥＭＱＴＥＤＡＱＴＥＥＶＱＴＥＥＭＱＴＥＤＡＱＴＫＥＶＱＴＥＥＭＱＴＥＤＡＱＴＥＥＶＱＴＫＥＥＰＡＥＥＴＨＭＫＥＩＱＴＱＧＴＫＫＡＳＤＲＮＧＫＡＲＶＴＥＩＬＥＤＡＱＤＰＡＮＲＩＶＹＬＳＤＬＱＷＫＳＥＮＨＴＶＤＳＥＬＰＴＲＫＤＫＳＦＧＧＧＫＩＴＬＫＶＤＧＴＶＴＥＦＤＫＧＩＧＴＱＴＤＳＴＩＶＹＤＬＥＧＫＧＹＴＫＦＥＴＹＶＧＶＤＹＳＱＫＥＮＩＰＧＥＶＣＤＶＫＦＲＶＫＩＤＤＫＩＶＳＥＴＧＶＬＤＰＬＳＮＡＶＫＩＳＶＮＩＰＤＴＡＫＴＬＴＬＹＡＤＫＶＴＥＴＷＳＤＨＡＮＷＡＤＡＫＦＹＱＡＬＰＥＰＥＮＶＡＦＫＫＴＶＶＴＲＫＴＳＤＮＳＥＡＰＶＮＰＤＳＡＶＮＳＳＫＡＶＤＧＶＩＤＳＳＳＹＦＤＦＧＤＱＡＮＳＧＡＶＲＥＳＬＹＭＥＶＤＬＫＧＳＹＬＬＳＤＩＱＬＷＲＹＷＫＤＧＲＴＹＡＡＴＡＩＶＶＡＥＤＥＮＦＥＮＡＡＶＩＹＮＳＤＴＴＧＥＩＨＨＬＧＡＧＳＤＭＬＹＡＥＴＥＳＧＫＴＦＰＶＰＥＮＴＫＡＲＹＩＲＶＹＴＹＧＶＮＧＴＳＧＶＴＮＨＩＶＥＬＫＶＮＡＹＶＦＧＤＥＩＬＰＥＫＰＤＤＳＫＩＦＰＮＡＶＮＰＬＫＬＱＧＰＧＴＮＤＱＶＴＨＰＤＶＴＶＦＤＥＰＷＮＧＹＫＹＷＭＡＹＴＰＮＫＰＧＳＳＹＦＥＮＰＣＩＡＡＳＮＤＧＶＮＷＥＦＰＡＱＮＰＶＱＰＲＹＤＳＥＩＥＮＱＮＥＨＮＣＤＴＤＩＶＹＤＰＶＮＤＲＬＩＭＹＷＥＷＡＱＤＥＡＶＮＧＫＴＨＲＳＥＩＲＹＲＶＳＹＤＧＩＮＷＧＶＥＤＫＴＧＶＬＭＴＧＰＴＤＨＧＣＡＩＡＴＥＧＥＲＹＳＤＬＳＰＴＶＶＹＤＫＴＥＫＩＹＫＭＷＡＮＤＡＧＤＶＧＹＥＮＫＱＮＮＫＶＷＹＲＴＳＱＤＧＩＳＮＷＳＤＫＴＹＶＥＮＦＬＧＶＮＥＤＧＬＱＭＹＰＷＨＱＤＩＱＷＶＥＥＦＱＥＹＷＡＬＱＱＡＦＰＡＧＳＧＰＤＮＳＳＬＲＦＳＫＳＫＤＧＬＨＷＥＰＶＳＥＫＡＬＩＴＶＧＡＰＧＴＷＤＡＧＱＩＹＲＳＴＦＷＹＥＰＧＧＡＫＧＮＧＴＦＨＩＷＹＡＡＬＡＥＧＱＳＨＷＤＩＧＹＴＳＡＮＹＡＤＡＭＹＫＬＴＧＳＲ
【０２１６】
配列番号３１
【０２１７】
説明：Ｈｉｓタグおよびトロンビン切断部位を有するロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ  ３６７２＿ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ＿タンパク質発現構築物（ｐＥＴ２８ａベクターにおいて）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＡＥＴＡＴＥＥＮＡＡＬＥＫＴＶＴＬＨＫＳＤＧＴＥＬＰＥＤＹＲＮＰＱＲＰＡＴＭＡＶＤＧＩＩＤＤＴＧＥＹＮＹＣＤＦＧＫＤＧＤＫＡＡＬＹＭＱＶＤＬＧＧＬＹＤＬＳＲＶＮＭＷＲＹＷＫＤＳＲＴＹＤＡＴＶＩＴＴＳＥＳＧＤＦＴＤＥＡＶＩＹＮＳＤＲＳＮＶＨＧＦＧＡＧＧＤＥＲＹＡＥＴＡＳＧＨＥＦＰＶＰＤＧＴＫＡＱＡＶＲＶＹＶＦＧＳＱＮＧＴＴＮＨＩＮＥＬＱＶＷＧＴＰＨＴＥＮＰＤＶＮＳＹＱＶＴＩＰＱＧＮＧＹＱＶＩＰＹＥＮＤＰＴＴＶＥＥＧＧＳＦＲＦＱＶＬＩＤＳＤＮＧＹＳＡＴＳＡＶＫＡＮＧＶＳＬＥＡＶＤＳＶＹＴＩＥＮＩＴＥＤＱＶＩＴＩＥＧＶＨＫＡＱＹＥＶＫＦＰＥＮＰＱＧＹＳＶＥＩＱＮＥＧＳＴＴＶＤＹＮＧＳＶＳＦＫＬＩＩＤＥＡＹＮＥＳＶＰＶＶＫＡＮＧＧＡＡＬＧＫＤＥＬＧＶＹＴＩＡＮＩＱＤＤＩＴＶＴＶＥＧＩＱＥＮＴＶＶＫＴＫＴＭＹＬＳＤＭＤＷＫＳＡＡＮＡＶＧＡＴＧＥＫＤＴＰＴＫＤＬＮＨＬＱＱＱＭＫＬＬＶＮＧＡＥＫＳＦＤＫＧＩＧＶＱＴＤＳＳＩＶＹＤＬＥＤＫＧＹＴＳＦＨＴＬＡＧＶＤＹＳＡＭＥＹＶＤＧＥＧＣＤＩＱＦＫＶＹＬＤＤＶＶＶＦＤＳＧＶＶＤＡＳＤＥＡＱＥＶＮＶＡＩＴＳＥＮＫＥＬＫＬＥＡＫＭＶＫＥＰＹＮＤＷＧＮＷＡＤＡＳＦＥＭＡＹＰＥＰＳＮＶＡＬＮＫＴＶＴＶＫＫＴＡＤＮＳＤＳＥＶＮＳＳＲＰＧＳＭＡＶＤＧＩＩＧＰＴＳＤＳＮＹＣＤＦＧＱＤＧＤＮＴＳＲＹＬＱＶＤＬＧＤＶＹＥＬＴＱＩＮＭＦＲＹＷＡＤＧＲＶＹＮＧＴＶＩＡＶＳＥＮＡＤＦＳＮＰＴＦＩＹＮＳＤＫＡＤＫＨＧＬＧＡＧＳＤＤＴＹＧＥＴＱＳＧＫＬＦＥＶＰＡＧＴＭＧＱＹＶＲＶＹＭＡＧＳＮＫＧＴＴＮＨＩＡＥＬＱＶＭＧＹＮＦＮＴＥＰＫＰＹＥＡＮＡＦＥＮＡＥＶＹＬＤＭＰＴＨＦＱＤＬＤＳＮＫＮＤＤＧＳＬＫＨＩＧＧＱＶＴＨＰＤＩＱＶＦＤＱＰＷＮＧＹＫＹＷＭＩＹＴＰＮＴＭＩＴＳＱＹＥＮＰＹＩＶＡＳＥＤＧＱＴＷＶＥＰＥＧＩＳＮＰＩＥＰＥＰＰＳＴＲＦＨＮＣＤＡＤＬＬＹＤＳＶＮＤＲＬＬＡＹＷＮＷＡＤＤＧＧＧＩＤＤＥＬＫＤＱＮＣＱＩＲＬＲＩＳＹＤＧＩＮＷＧＶＰＹＤＫＤＧＮＩＡＴＴＡＤＴＶＶＲＭＥＴＧＤＫＤＦＩＰＡＩＳＥＫＤＲＹＧＭＬＳＰＴＦＴＹＤＤＦＲＧＩＹＴＭＷＡＱＮＳＧＤＡＧＹＮＱＳＧＫＦＩＥＭＲＷＳＥＤＧＩＮＷＳＥＰＱＫＶＮＮＦＬＧＫＤＥＮＧＲＱＬＷＰＷＨＱＤＩＱＹＩＰＥＬＱＥＹＷＧＬＳＱＣＦＳＴＳＮＰＤＧＳＶＬＹＬＴＫＳＲＤＧＶＮＷＥＱＡＧＴＱＰＶＬＲＡＧＫＳＧＴＷＤＤＦＱＩＹＲＳＴＦＹＹＤＮＱＳＤＳＰＴＧＧＫＦＲＩＷＹＳＡＬＱＡＮＴＳＧＫＴＶＬＡＰＤＧＴＶＳＬＱＶＧＳＱＤＴＲＩＷＲＩＧＹＴＥＮＤＹＭＥＶＭＫＡＬＴＱＮＫＮＹＥＥ
【０２１８】
配列番号３２
【０２１９】
説明：クロストリジウム・テルチウム５７５７（Ｃｔ５７５７）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質配列
ＨＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫＰＬＱＮＡＥＴＹＬＮＩＰＴＹＤＧＬＮＱＳＴＨＰＤＶＫＹＦＫＮＧＷＮＧＹＫＹＷＭＩＭＴＰＮＲＴＧＳＳＶＡＥＮＰＳＩＬＡＳＤＤＧＩＮＷＥＶＰＡＧＶＴＮＰＩＡＰＭＰＱＶＧＨＮＣＤＶＤＭＩＹＮＥＡＴＤＥＬＷＶＹＷＶＥＳＤＤＩＴＫＧＷＶＫＬＩＫＳＫＤＧＶＮＷＳＳＱＱＶＶＶＤＤＮＲＡＫＹＳＴＬＳＰＳＩＩＦＫＤＮＫＹＹＭＷＳＶＮＴＧＮＳＧＷＮＮＱＳＮＫＶＥＬＲＥＳＳＤＧＶＮＷＳＮＰＴＶＶＮＴＬＡＱＤＧＳＱＩＷＨＶＮＶＥＹＩＰＳＫＮＥＹＷＡＩＹＰＡＹＫＮＧＴＧＳＤＫＴＥＬＹＹＡＫＳＳＤＧＶＮＷＴＴＹＫＮＰＩＬＳＫＧＴＳＧＫＷＤＤＭＥＩＹＲＳＣＦＶＹＤＥＤＴＮＭＩＫＶＷＹＧＡＶＳＱＮＰＱＩＷＫＩＧＦＴＥＮＤＹＤＫＦＩＥＧＬＴＱ
【０２２０】
配列番号３３
【０２２１】
説明：Ｒｕｔｈｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔａｔｉｆｏｒｍａｎｓ  Ｒ１８７５５ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質配列
ＨＥＥＴＤＬＬＶＮＧＧＦＥＴＧＤＳＴＧＷＮＷＦＮＮＡＶＶＤＳＡＡＰＨＳＧＮＹＣＡＫＶＡＫＮＳＳＹＥＱＶＶＴＶＳＰＤＴＫＹＶＬＴＧＷＡＫＳＥＧＳＳＶＭＴＬＧＶＫＮＹＧＧＱＥＴＦＳＡＴＬＳＡＤＹＱＱＬＡＶＴＦＴＴＧＰＮＡＱＴＡＴＩＹＧＹＲＱＮＳＧＳＧＡＧＹＦＤＤＶＥＬＴＡＶＱＤＦＡＰＹＱＰＬＡＮＡＩＡＰＱＡＩＰＴＹＤＧＡＮＱＰＴＨＰＳＶＶＫＦＥＱＰＷＮＧＹＬＹＷＭＡＭＴＰＹＰＦＮＤＧＳＹＥＮＰＳＩＶＡＳＮＤＧＥＮＷＩＶＰＥＧＶＳＮＰＬＡＧＴＰＳＰＧＨＮＣＤＶＤＬＶＹＶＰＡＳＤＥＬＲＭＹＹＶＥＡＤＤＩＩＳＳＲＶＫＭＩＳＳＲＤＧＶＨＷＳＥＰＱＶＶＭＱＤＬＶＲＫＹＳＩＬＳＰＳＩＥＩＬＰＤＧＴＹＭＭＷＹＶＤＴＧＮＡＧＷＮＳＱＮＮＱＶＫＹＲＴＳＡＤＧＩＫＷＳＧＡＶＴＣＴＤＦＶＱＰＧＹＱＩＷＨＩＤＶＨＹＤＴＳＳＧＡＹＹＡＶＹＰＡＹＰＮＧＴＤＣＤＨＣＮＬＦＦＡＶＮＲＴＧＫＱＷＥＴＦＳＲＰＩＬＫＰＳＴＥＧＧＷＤＤＦＣＩＹＲＳＳＭＬＩＤＤＧＭＬＫＶＷＹＧＡＫＫＱＥＤＳＳＷＨＴＧＬＴＭＲＤＦＳＥＦＭＫＩＬＥＲ
【０２２２】
配列番号３４
【０２２３】
説明：ロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ３６７１ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質
ＨＳＰＬＳＡＡＡＥＳＧＴＧＴＲＬＶＫＧＱＴＧＹＬＴＥＥＱＡＩＲＮＱＥＱＴＴＥＥＲＥＱＫＬＴＧＥＥＴＡＥＶＬＭＥＧＴＫＤＳＧＩＶＱＴＥＥＶＱＴＫＥＭＱＴＥＤＡＱＴＥＥＶＱＴＥＥＭＱＴＥＤＡＱＴＫＥＶＱＴＥＥＭＱＴＥＤＡＱＴＥＥＶＱＴＫＥＥＰＡＥＥＴＨＭＫＥＩＱＴＱＧＴＫＫＡＳＤＲＮＧＫＡＲＶＴＥＩＬＥＤＡＱＤＰＡＮＲＩＶＹＬＳＤＬＱＷＫＳＥＮＨＴＶＤＳＥＬＰＴＲＫＤＫＳＦＧＧＧＫＩＴＬＫＶＤＧＴＶＴＥＦＤＫＧＩＧＴＱＴＤＳＴＩＶＹＤＬＥＧＫＧＹＴＫＦＥＴＹＶＧＶＤＹＳＱＫＥＮＩＰＧＥＶＣＤＶＫＦＲＶＫＩＤＤＫＩＶＳＥＴＧＶＬＤＰＬＳＮＡＶＫＩＳＶＮＩＰＤＴＡＫＴＬＴＬＹＡＤＫＶＴＥＴＷＳＤＨＡＮＷＡＤＡＫＦＹＱＡＬＰＥＰＥＮＶＡＦＫＫＴＶＶＴＲＫＴＳＤＮＳＥＡＰＶＮＰＤＳＡＶＮＳＳＫＡＶＤＧＶＩＤＳＳＳＹＦＤＦＧＤＱＡＮＳＧＡＶＲＥＳＬＹＭＥＶＤＬＫＧＳＹＬＬＳＤＩＱＬＷＲＹＷＫＤＧＲＴＹＡＡＴＡＩＶＶＡＥＤＥＮＦＥＮＡＡＶＩＹＮＳＤＴＴＧＥＩＨＨＬＧＡＧＳＤＭＬＹＡＥＴＥＳＧＫＴＦＰＶＰＥＮＴＫＡＲＹＩＲＶＹＴＹＧＶＮＧＴＳＧＶＴＮＨＩＶＥＬＫＶＮＡＹＶＦＧＤＥＩＬＰＥＫＰＤＤＳＫＩＦＰＮＡＶＮＰＬＫＬＱＧＰＧＴＮＤＱＶＴＨＰＤＶＴＶＦＤＥＰＷＮＧＹＫＹＷＭＡＹＴＰＮＫＰＧＳＳＹＦＥＮＰＣＩＡＡＳＮＤＧＶＮＷＥＦＰＡＱＮＰＶＱＰＲＹＤＳＥＩＥＮＱＮＥＨＮＣＤＴＤＩＶＹＤＰＶＮＤＲＬＩＭＹＷＥＷＡＱＤＥＡＶＮＧＫＴＨＲＳＥＩＲＹＲＶＳＹＤＧＩＮＷＧＶＥＤＫＴＧＶＬＭＴＧＰＴＤＨＧＣＡＩＡＴＥＧＥＲＹＳＤＬＳＰＴＶＶＹＤＫＴＥＫＩＹＫＭＷＡＮＤＡＧＤＶＧＹＥＮＫＱＮＮＫＶＷＹＲＴＳＱＤＧＩＳＮＷＳＤＫＴＹＶＥＮＦＬＧＶＮＥＤＧＬＱＭＹＰＷＨＱＤＩＱＷＶＥＥＦＱＥＹＷＡＬＱＱＡＦＰＡＧＳＧＰＤＮＳＳＬＲＦＳＫＳＫＤＧＬＨＷＥＰＶＳＥＫＡＬＩＴＶＧＡＰＧＴＷＤＡＧＱＩＹＲＳＴＦＷＹＥＰＧＧＡＫＧＮＧＴＦＨＩＷＹＡＡＬＡＥＧＱＳＨＷＤＩＧＹＴＳＡＮＹＡＤＡＭＹＫＬＴＧＳＲ
【０２２４】
配列番号３５
【０２２５】
説明：ロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ３６７２＿ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ＿タンパク質
ＨＡＥＴＡＴＥＥＮＡＡＬＥＫＴＶＴＬＨＫＳＤＧＴＥＬＰＥＤＹＲＮＰＱＲＰＡＴＭＡＶＤＧＩＩＤＤＴＧＥＹＮＹＣＤＦＧＫＤＧＤＫＡＡＬＹＭＱＶＤＬＧＧＬＹＤＬＳＲＶＮＭＷＲＹＷＫＤＳＲＴＹＤＡＴＶＩＴＴＳＥＳＧＤＦＴＤＥＡＶＩＹＮＳＤＲＳＮＶＨＧＦＧＡＧＧＤＥＲＹＡＥＴＡＳＧＨＥＦＰＶＰＤＧＴＫＡＱＡＶＲＶＹＶＦＧＳＱＮＧＴＴＮＨＩＮＥＬＱＶＷＧＴＰＨＴＥＮＰＤＶＮＳＹＱＶＴＩＰＱＧＮＧＹＱＶＩＰＹＥＮＤＰＴＴＶＥＥＧＧＳＦＲＦＱＶＬＩＤＳＤＮＧＹＳＡＴＳＡＶＫＡＮＧＶＳＬＥＡＶＤＳＶＹＴＩＥＮＩＴＥＤＱＶＩＴＩＥＧＶＨＫＡＱＹＥＶＫＦＰＥＮＰＱＧＹＳＶＥＩＱＮＥＧＳＴＴＶＤＹＮＧＳＶＳＦＫＬＩＩＤＥＡＹＮＥＳＶＰＶＶＫＡＮＧＧＡＡＬＧＫＤＥＬＧＶＹＴＩＡＮＩＱＤＤＩＴＶＴＶＥＧＩＱＥＮＴＶＶＫＴＫＴＭＹＬＳＤＭＤＷＫＳＡＡＮＡＶＧＡＴＧＥＫＤＴＰＴＫＤＬＮＨＬＱＱＱＭＫＬＬＶＮＧＡＥＫＳＦＤＫＧＩＧＶＱＴＤＳＳＩＶＹＤＬＥＤＫＧＹＴＳＦＨＴＬＡＧＶＤＹＳＡＭＥＹＶＤＧＥＧＣＤＩＱＦＫＶＹＬＤＤＶＶＶＦＤＳＧＶＶＤＡＳＤＥＡＱＥＶＮＶＡＩＴＳＥＮＫＥＬＫＬＥＡＫＭＶＫＥＰＹＮＤＷＧＮＷＡＤＡＳＦＥＭＡＹＰＥＰＳＮＶＡＬＮＫＴＶＴＶＫＫＴＡＤＮＳＤＳＥＶＮＳＳＲＰＧＳＭＡＶＤＧＩＩＧＰＴＳＤＳＮＹＣＤＦＧＱＤＧＤＮＴＳＲＹＬＱＶＤＬＧＤＶＹＥＬＴＱＩＮＭＦＲＹＷＡＤＧＲＶＹＮＧＴＶＩＡＶＳＥＮＡＤＦＳＮＰＴＦＩＹＮＳＤＫＡＤＫＨＧＬＧＡＧＳＤＤＴＹＧＥＴＱＳＧＫＬＦＥＶＰＡＧＴＭＧＱＹＶＲＶＹＭＡＧＳＮＫＧＴＴＮＨＩＡＥＬＱＶＭＧＹＮＦＮＴＥＰＫＰＹＥＡＮＡＦＥＮＡＥＶＹＬＤＭＰＴＨＦＱＤＬＤＳＮＫＮＤＤＧＳＬＫＨＩＧＧＱＶＴＨＰＤＩＱＶＦＤＱＰＷＮＧＹＫＹＷＭＩＹＴＰＮＴＭＩＴＳＱＹＥＮＰＹＩＶＡＳＥＤＧＱＴＷＶＥＰＥＧＩＳＮＰＩＥＰＥＰＰＳＴＲＦＨＮＣＤＡＤＬＬＹＤＳＶＮＤＲＬＬＡＹＷＮＷＡＤＤＧＧＧＩＤＤＥＬＫＤＱＮＣＱＩＲＬＲＩＳＹＤＧＩＮＷＧＶＰＹＤＫＤＧＮＩＡＴＴＡＤＴＶＶＲＭＥＴＧＤＫＤＦＩＰＡＩＳＥＫＤＲＹＧＭＬＳＰＴＦＴＹＤＤＦＲＧＩＹＴＭＷＡＱＮＳＧＤＡＧＹＮＱＳＧＫＦＩＥＭＲＷＳＥＤＧＩＮＷＳＥＰＱＫＶＮＮＦＬＧＫＤＥＮＧＲＱＬＷＰＷＨＱＤＩＱＹＩＰＥＬＱＥＹＷＧＬＳＱＣＦＳＴＳＮＰＤＧＳＶＬＹＬＴＫＳＲＤＧＶＮＷＥＱＡＧＴＱＰＶＬＲＡＧＫＳＧＴＷＤＤＦＱＩＹＲＳＴＦＹＹＤＮＱＳＤＳＰＴＧＧＫＦＲＩＷＹＳＡＬＱＡＮＴＳＧＫＴＶＬＡＰＤＧＴＶＳＬＱＶＧＳＱＤＴＲＩＷＲＩＧＹＴＥＮＤＹＭＥＶＭＫＡＬＴＱＮＫＮＹＥＥ
【０２２６】
配列番号３６
【０２２７】
説明：クロストリジウム・テルチウム５７５７（Ｃｔ５７５７）ガラクトサミニダーゼタンパク質配列
ＨＹＮＬＩＤＮＩＳＶＥＫＬＤＴＤＩＳＱＡＮＥＮＶＦＬＮＧＮＧＩＡＬＥＶＤＮＲＧＡＴＣＩＹＬＶＤＥＮＧＶＫＴＫＡＴＴＳＬＤＴＡＤＦＳＧＹＰＩＩＧＧＱＫＩＲＤＦＶＩＩＳＫＮＬＥＥＮＩＮＳＩＬＧＶＧＮＲＬＴＩＩＳＫＳＳＳＴＮＬＩＲＫＩＶＦＥＴＳＮＳＮＰＧＡＩＹＳＴＶＳＹＫＡＥＳＮＤＬＬＶＤＳＦＨＥＮＥＹＴＭＳＬＧＱＧＰＦＬＡＹＱＧＣＡＤＱＱＧＡＮＴＩＶＮＶＴＮＧＹＮＨＮＳＧＱＮＮＹＳＶＧＶＰＦＳＹＶＹＮＳＶＧＧＩＧＩＧＤＡＳＴＳＲＲＥＦＫＬＰＩＩＧＫＤＮＴＶＳＬＧＭＥＷＮＧＱＴＬＫＫＧＡＥＴＡＩＧＴＳＶＩＴＴＴＮＧＤＹＹＳＧＬＫＳＹＡＥＶＭＫＤＫＧＩＳＡＰＡＳＩＰＤＩＡＹＤＳＲＷＥＳＷＧＦＥＦＤＦＴＩＥＫＩＶＮＫＬＤＥＬＫＡＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＴＹＡＧＤＷＫＬＳＰＱＫＦＰＮＧＮＡＤＭＫＹＬＴＤＥＩＨＫＲＧＭＴＡＩＬＷＷＲＰＶＤＧＧＩＮＳＫＬＶＳＥＨＰＥＷＦＩＫＮＳＱＧＮＭＶＲＬＰＧＰＧＧＧＮＧＧＴＡＧＹＡＬＣＰＮＳＥＧＳＩＱＨＨＫＤＦＶＴＶＡＬＥＥＷＧＦＤＧＦＫＥＤＹＶＷＧＩＰＫＣＹＤＳＳＨＫＨＳＳＬＳＤＴＬＥＮＱＹＫＦＹＥＡＩＹＥＱＳＩＡＩＮＰＤＴＦＩＥＬＣＮＣＧＴＰＱＤＦＹＳＴＰＹＶＮＨＡＰＴＡＤＰＩＳＲＶＱＴＲＴＲＶＫＡＦＫＡＩＦＧＤＤＦＰＶＴＴＤＨＮＳＶＷＬＰＳＡＬＧＴＧＳＶＭＩＴＫＨＴＴＬＳＳＳＤＲＥＱＹＮＫＹＦＧＬＡＲＤＬＥＬＡＫＧＥＦＩＧＮＬＹＫＹＧＩＤＰＬＥＳＹＶＩＲＫＧＥＤＩＹＹＳＦＹＫＤＮＳＳＹＳＧＮＩＥＩＫＧＬＤＳＮＡＴＹＲＩＥＤＹＶＮＮＲＶＩＡＲＧＶＫＧＰＴＡＴＩＮＴＳＦＴＤＮＬＬＶＲＡＩＰＤＤＴＰＡＥＶＴＴＦＤＶＧＮＮＴＩＬＳＳＴＤＳＧＮＳＫＹＬＮＡＶＳＴＴＬＥＫＴＡＴＩＤＳＬＳＩＹＩＧＮＮＳＥＮＧＫＬＱＩＡＩＹＤＤＮＮＧＫＰＧＴＫＫＡＹＶＥＥＦＶＰＴＫＮＳＷＮＴＫＫＶＶＮＳＶＴＬＰＳＧＱＹＷＬＶＦＱＰＤＮＤＶＬＱＴＫＴＮＰＳＳＭＫＱＳＡＮＮＮＰＹＮＹＮＩＬＰＮＳＦＰＩＧＴＧＹＮＡＹＫＧＤＶＳＦＹＡＴＦＫＥＡＳＳＱＡＩＰＱＮＳＷＡＬＫＹＶＤＳＥＥＴＴＧＥＮＧＲＡＴＮＡＦＤＧＮＮＮＴＩＷＨＴＫＹＳＧＧＮＡＡＰＭＰＨＥＩＱＩＤＬＲＧＶＹＮＩＮＱＩＮＹＬＰＲＱＤＧＧＴＮＧＴＩＫＤＹＥＶＹＬＳＬＤＧＶＮＷＧＱＰＩＳＫＧＴＦＥＳＮＳＴＥＫＩＶＫＦＮＥＴＫＳＲＹＶＫＬＫＡＬＳＥＩＮＮＫＱＦＴＴＶＡＤＬＫＶＦＧＷＥＩＳＫＩＥＫ
【０２２８】
配列番号３７
【０２２９】
説明：ロビンソニエラ・ペオリエンシスＲｐ１０２１ガラクトサミニダーゼタンパク質配列
ＨＧＮＧＬＥＶＫＡＳＰＲＥＶＡＱＩＴＧＮＧＶＳＶＴＦＦＱＥＤＧＴＶＱＬＳＣＩＥＤＤＧＮＴＡＦＭＴＲＮＳＥＶＳＹＰＶＶＧＧＥＥＶＴＤＦＳＤＦＱＣＥＶＱＥＮＶＴＧＡＡＧＡＧＳＲＭＴＩＴＳＩＳＳＧＲＧＩＱＲＳＶＶＩＥＴＶＤＥＶＫＧＬＬＨＩＳＳＳＹＲＡＥＥＥＶＤＡＤＥＦＩＤＳＲＦＳＬＤＮＰＳＤＴＶＷＳＹＮＧＧＧＥＧＡＱＳＲＹＤＴＬＱＫＩＤＬＳＤＧＥＳＦＹＲＥＮＬＱＮＱＴＡＡＧＩＰＶＡＤＩＹＧＫＤＧＧＩＴＶＧＤＡＳＶＴＲＲＱＬＳＴＰＶＮＥＲＮＧＴＡＹＶＳＶＫＨＰＧＡＶＩＴＱＲＥＴＥＩＳＱＳＦＶＮＶＨＲＧＤＹＹＳＧＬＲＧＹＡＤＧＭＫＱＩＧＦＴＴＬＳＲＥＱＩＰＥＳＳＹＤＬＲＷＥＳＷＧＷＥＦＤＷＴＶＥＬＩＩＮＫＬＤＥＬＫＥＭＧＩＫＱＩＴＬＤＤＧＷＹＮＡＡＧＥＷＧＬＮＮＷＫＬＰＮＧＡＬＤＭＲＨＬＴＤＡＩＨＥＲＧＭＴＡＶＬＷＷＲＰＣＤＧＧＲＥＤＳＡＬＦＫＥＨＰＥＹＦＩＫＮＱＤＧＳＦＧＫＬＡＧＰＧＱＷＮＳＦＬＧＳＣＧＹＡＬＣＰＬＳＥＧＡＶＱＳＱＶＤＦＩＮＲＡＭＮＥＷＧＦＤＧＦＫＳＤＹＶＷＳＬＰＫＣＹＳＱＤＨＨＨＥＹＰＥＥＳＴＥＱＱＡＶＦＹＲＡＶＹＥＡＭＴＤＮＤＰＮＡＦＨＬＬＣＮＣＧＴＰＱＤＹＹＳＬＰＹＶＴＱＶＰＴＡＤＰＴＳＶＤＱＴＲＲＲＶＫＡＹＫＡＬＣＧＤＹＦＰＶＴＴＤＨＮＥＶＷＹＰＳＴＩＧＴＧＡＩＬＩＥＫＲＤＬＳＧＷＥＥＥＥＹＡＫＷＬＫＩＡＱＥＮＱＬＨＫＧＴＦＩＧＤＬＹＳＹＧＹＤＰＹＥＴＹＴＶＹＫＤＧＩＭＹＹＡＦＹＫＤＧＮＲＹＲＰＳＧＮＰＤＩＥＬＫＧＬＥＤＧＫＬＹＲＩＶＤＹＶＮＮＱＶＶＡＴＮＶＴＳＳＮＡＶＦＳＹＰＦＳＤＹＬＬＶＫＡＶＥＩＳＥＰＤＴＤＧＰＧＰＶＰＤＰＥＧＡＶＴＶＥＥＮＤＰＥＬＶＹＴＧＤＷＶＲＥＥＮＤＧＹＨＧＧＧＡＲＹＴＫＥＡＥＡＳＶＥＬＡＦＹＧＴＧＡＡＷＹＧＱＨＤＶＮＦＧＳＡＲＩＹＩＤＧＴＹＶＫＴＶＳＣＭＧＥＰＧＩＮＩＫＬＦＥＩＳＧＬＤＬＡＳＨＲＩＫＩＥＣＥＴＰＶＩＤＩＤＲＬＴＹＩＫＧＥＥＶＰＡＫＶＭＴＡＤＬＲＡＬＴＶＩＡＮＱＹＤＭＮＳＦＡＤＧＮＹＫＤＱＬＧＶＳＬＶＲＡＮＱＬＬＡＡＤＤＶＴＱＧＡＶＮＥＥＱＫＹＬＬＮＡＭＬＫＩＲＫＫＶＤＫＳＷＩＧＬＰＧＰＩＰＱＤＩＱＴＥＮＩＳＲＤＮＬＡＫＶＩＳＹＴＧＱＬＤＲＤＥＩＩＰＡＩＫＥＱＬＮＤＳＹＤＫＡＶＳＩＡＥＲＱＤＡＳＱＰＥＩＤＲＡＷＡＥＬＭＮＡＶＱＹＳＳＹＩＲＧＳＫＥＥＬＬＳＬＬＤＥＹＧＫＶＤＴＴＶＹＫＤＡＡＬＦＩＥＳＬＥＡＡＫＫＶＹＱＤＥＮＡＭＤＧＥＩＳＤＣＩＫＱＬＲＤＡＫＤＱＬＱＬＫＤＰＶＤＰＰＫＰＤＰＤＰＤＰＫＰＤＰＴＰＤＰＧＰＤＰＫＰＤＰＴＰＤＰＴＰＤＰＫＰＮＰＴＰＴＰＤＰＴＰＥＰＡＬＫＫＰＥＱＶＳＧＬＫＳＫＡＥＴＤＹＬＴＶＳＷＫＫＬＮＮＡＥＳＹＫＶＹＩＹＫＳＧＫＷＲＬＡＧＫＴＴＫＴＳＩＫＩＫＫＬＶＳＧＴＫＹＴＶＫＶＡＡＶＮＫＡＧＱＧＫＹＳＳＱＶＹＴＡＡＫＰＫＫＶＫＬＫＳＶＳＲＹＲＴＳＫＶＫＬＮＹＧＫＶＫＡＧＧＹＥＩＷＭＫＮＧＫＧＳＹＫＫＡＡＴＳＴＫＴＴＡＩＫＳＧＬＫＫＧＫＴＹＹＦＫＶＲＡＹＶＫＮＫＮＱＶＩＹＧＳＦＳＮＩＫＫＹＫＭＶＬ
【０２３０】
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Ｇａｒｒａｔｔｙ，  Ｇ．  Ｖｏｘ  Ｓａｎｇ．（２００８）  “Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｅｄ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｏ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ／ｓｔｅａｌｔｈ  ｄｏｎｏｒ  ｒｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｓｕｉｔａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．”  ９４（２）：８７−９５．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｎｏｖ  ２２．
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ＵＳ４６０９６２７；ａｎｄ  ＣＡ２２７２９２５
Ｋｒｕｓｋａｌｌ  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  （２０００）  “Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｔｏ  ｂｌｏｏｄ  ｇｒｏｕｐ  Ａ  ａｎｄ  Ｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｏｆ  ｇｒｏｕｐ  Ｂ  ＲＢＣｓ  ｔｈａｔ  ｈａｖｅ  ｂｅｅｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ  ｃｏｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｏ  ｇｒｏｕｐ  Ｏ．”  ４０（１１）：１２９０−８．
Ｃｌａｕｓｅｎ，  Ｈ  ａｎｄ  Ｈａｋｏｍｏｒｉ，  Ｓ．  Ｖｏｘ  Ｓａｎｇ．  （１９８９）  “ＡＢＨ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｈｉｓｔｏ−ｂｌｏｏｄ  ｇｒｏｕｐ  ａｎｔｉｇｅｎｓ；  ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｉｓｏｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．”  ５６（１）：１−２０．
ＥＰ２２４３７９３
Ｌｉｕ，  Ｑ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（２００８）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ＧＨ１１０  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ａｌｐｈａ  １，３−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅｓ：  ｎｏｖｅｌ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｆｏｒ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｐｈａ  ３Ｇａｌ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ．”  ２８３（１３）：８５４５−５４．  ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ７０９０２０２００．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊａｎ  ２８．
ＰＣＴ／ＵＳ１９９２／０１０１１３；  ａｎｄ  ＰＣＴ／ＳＥ２０１５／０５０１０８
ＵＳ４０８８５３８；  ＵＳ４１４１８５７；  ＵＳ４２０６２５９；  ＵＳ４２１８３６３；  ＵＳ４２２９５３６；  ＵＳ４２３９８５４；  ＵＳ４６１９８９７；  ＵＳ４７４８１２１；  ＵＳ４７４９６５３；  ＵＳ４８９７３５２；  ＵＳ４９５４４４４；  ＵＳ４９７８６１９；  ＵＳ５１５４８０８；  ＵＳ５９１４３６７；  ＵＳ５９６２２７９；  ＵＳ６０３０９３３；  ＵＳ６２９１５８２；  ＵＳ６２５４６４５；  ＵＳ１０，０１６，４９０；  ａｎｄ  ＵＳ１０，０４１，０５５
Ｊｅｏｎｇ，  Ｊ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．（２００９）  “Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＢｇａＣ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｂｅｔａ−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｇａｌｂｅｔａ１−３ＧｌｃＮＡｃ  ｍｏｉｅｔｙ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．”  １９１（９）：３０１１−２３．  ｄｏｉ：１０．１１２８／ＪＢ．０１６０１−０８．  Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｍａｒ  ６．
Ｓｉｎｇｈ，  Ａ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．（２０１４）  “Ｕｎｒａｖｅｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒａｌｌｙ  ｉｎｔｒｉｃａｔｅ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，  ＢｇａＡ．”  １０（９）：ｅ１００４３６４．  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００４３６４．  ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１４  Ｓｅｐ．
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Ｔｒｅａｎｇｅｎ，  Ｔ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  （２０１１）  “Ｎｅｘｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｗｉｔｈ  ＡＭＯＳ．”  Ｃｈａｐｔｅｒ  １１：Ｕｎｉｔ  １１．８．  ｄｏｉ：  １０．１００２／０４７１２５０９５３．ｂｉ１１０８ｓ３３．
Ｈｙａｔｔ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．（２０１０）  “Ｐｒｏｄｉｇａｌ：  ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ  ｇｅｎｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．”  １１：１１９．  ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７１−２１０５−１１−１１９．
Ｋｏｎｗａｒ，  Ｋ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．（２０１５）  “ＭｅｔａＰａｔｈｗａｙｓ  ｖ２．５：  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ，  ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  ｕｓａｂｉｌｉｔｙ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ．”  ３１（２０）：３３４５−７．  ｄｏｉ：１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｖ３６１．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｊｕｎ  １５．
Ｓｔｕｄｉｅｒ，  Ｆ．Ｗ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．（２００５）  “Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｕｔｏ−ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｓｈａｋｉｎｇ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ．”  ４１（１）：２０７−３４．
Ｐａｌｍｉｅｒ  Ｍ．Ｏ．  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｄｏｒｅｎ  Ｓ．Ｒ．  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  （２００７）  “Ｒａｐｉｄ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｆｒｏｍ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ：  ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｎｎｅｒ  ｆｉｌｔｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ．”  ３７１（１）：４３−５１．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊｕｌ  １８．
Ｋａｂｓｃｈ，  Ｗ．    Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．（２０１０）  “ＸＤＳ”  ６６（Ｐｔ  ２）：１２５−３２．  ｄｏｉ：  １０．１１０７／Ｓ０９０７４４４９０９０４７３３７．  Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ｊａｎ  ２２．  
Ｅｖａｎｓ，  Ｐ．Ｒ．  ａｎｄ  Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ，  Ｇ．Ｎ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．（２０１３）  “Ｈｏｗ  ｇｏｏｄ  ａｒｅ  ｍｙ  ｄａｔａ  ａｎｄ  ｗｈａｔ  ｉｓ  ｔｈｅ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ？”  ６９（Ｐｔ  ７）：１２０４−１４．  ｄｏｉ：  １０．１１０７／Ｓ０９０７４４４９１３００００６１．  Ｅｐｕｂ  ２０１３  Ｊｕｎ  １３．
Ｓｋｕｂａｋ，  Ｐ．  ａｎｄ  Ｐａｎｎｕ，  Ｎ．Ｓ．  Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．（２０１３）  “Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｗｅａｋ  Ｘ−ｒａｙ  ｄａｔａ．”  ４：２７７７．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ３７７７．
Ｐｏｔｔｅｒｔｏｎ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ．（２０１８）  “ＣＣＰ４ｉ２：  ｔｈｅ  ｎｅｗ  ｇｒａｐｈｉｃａｌ  ｕｓｅｒ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＣＣＰ４  ｐｒｏｇｒａｍ  ｓｕｉｔｅ．”  ７４（Ｐｔ  ２）：６８−８４．  ｄｏｉ：  １０．１１０７／Ｓ２０５９７９８３１７０１６０３５．  Ｅｐｕｂ  ２０１８  Ｆｅｂ  １．
Ｅｍｓｌｅｙ，  Ｐ．  ａｎｄ  Ｃｏｗｔａｎ，  Ｋ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．（２００４）  “Ｃｏｏｔ：  ｍｏｄｅｌ−ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｇｒａｐｈｉｃｓ．”  ６０（Ｐｔ  １２  Ｐｔ  １）：２１２６−３２．  Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｎｏｖ  ２６．
Ｖａｇｉｎ，  Ａ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．（２００４）  “ＲＥＦＭＡＣ５  ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ：  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｉｏｒ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  ａｎｄ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ｕｓｅ．”  ６０（Ｐｔ  １２  Ｐｔ  １）：２１８４−９５．  Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｎｏｖ  ２６．
Ｃｈｅｎ，  Ｖ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．（２０１０）  “ＭｏｌＰｒｏｂｉｔｙ：  ａｌｌ−ａｔｏｍ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ．”  ６６（Ｐｔ  １）：１２−２１．  ｄｏｉ：  １０．１１０７／Ｓ０９０７４４４９０９０４２０７３．  Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｄｅｃ  ２１．
Ｚｈａｎｇ  ２００４
Ｖｏｃａｄｌｏ，  Ｄ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．（２００２）  “Ａ  ｃａｓｅ  ｆｏｒ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｏｔｏｎａｔｉｏｎ：  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｕ１６０  ａｓ  ａｎ  ａｃｉｄ／ｂａｓｅ  ｃａｔａｌｙｓｔ  ｉｎ  Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍ  ｂｅｔａ−ｘｙｌｏｓｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｄｅｔａｉｌｅｄ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｎｔ．”  ４１（３１）：９７３６−４６．
Ｊｏｎｅｓ，  Ｄ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｆｕｅｌｓ．（２０１８）  “ＳＡＣＣＨＡＲＩＳ：  ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｐｉｐｅｌｉｎｅ  ｔｏ  ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｃｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆａｍｉｌｉｅｓ  ａｎｄ  ｄｅ  ｎｏｖｏ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｓｅｔｓ．”  １１：２７．  ｄｏｉ：  １０．１１８６／ｓ１３０６８−０１８−１０２７−ｘ．  ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１８．
Ｙｉｎ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２０１２）  “ｄｂＣＡＮ：  ａ  ｗｅｂ  ｒｅｓｏｕｒｃｅ  ｆｏｒ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ａｃｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ．”  ４０（Ｗｅｂ  Ｓｅｒｖｅｒ  ｉｓｓｕｅ）：Ｗ４４５−５１．  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｓ４７９．  Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｍａｙ  ２９．
Ｅｄｇａｒ，  Ｒ．Ｃ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．（２０１０）  “Ｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ  ｆａｓｔｅｒ  ｔｈａｎ  ＢＬＡＳＴ．”  ２６（１９）：２４６０−１．  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｑ４６１．  Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ａｕｇ  １２．
Ｓｔａｍａｔａｋｉｓ，  Ａ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  （２００６）  “ＲＡｘＭＬ−ＶＩ−ＨＰＣ：  ｍａｘｉｍｕｍ  ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ−ｂａｓｅｄ  ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｏｕｓａｎｄｓ  ｏｆ  ｔａｘａ  ａｎｄ  ｍｉｘｅｄ  ｍｏｄｅｌｓ．”  ２２：２６８８−２６９０．  ｄｏｉ：１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｌ４４６．
Ｓｔａｍａｔａｋｉｓ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｏｔｔ，  Ｍ．  Ｐｈｉｌｏｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄ  Ｂ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ．  （２００８）  “Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｍｕｌｔｉ−ｇｅｎｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉ−ｃｏｒｅ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｓ．”  ３６３（１５１２）：３９７７−８４．  ｄｏｉ：  １０．１０９８／ｒｓｔｂ．２００８．０１６３．
Ｅｄｄｙ，  Ｓ．Ｒ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  （１９９８）  “Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｈｉｄｄｅｎ  Ｍａｒｋｏｖ  ｍｏｄｅｌｓ．”  １４（９）：７５５−６３．  Ｒｅｖｉｅｗ．
Ｃａｐｅｌｌａ−Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  （２００９）  “ｔｒｉｍＡｌ：  ａ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｔｒｉｍｍｉｎｇ  ｉｎ  ｌａｒｇｅ−ｓｃａｌｅ  ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ．”  ２５（１５）：１９７２−３．  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｐ３４８．  Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｊｕｎ  ８．
Ｍａｔｓｅｎ，  Ｆ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．  （２０１２）  “Ａ  ｆｏｒｍａｔ  ｆｏｒ  ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ．”  ７（２）：ｅ３１００９．  ｄｏｉ：  １０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００３１００９．  Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｆｅｂ  ２２．
Ｌｅｔｕｎｉｃ，  Ｉ．  ａｎｄ  Ｂｏｒｋ，  Ｐ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  （２０１６）  “Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ  ｔｒｅｅ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  （ｉＴＯＬ）  ｖ３：  ａｎ  ｏｎｌｉｎｅ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ａｎｄ  ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｔｒｅｅｓ．”  ４４（Ｗ１）：Ｗ２４２−５．  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｗ２９０．  Ｅｐｕｂ  ２０１６  Ａｐｒ  １９．
Ｅｎｇｌｅｒ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．  （２００８）  “Ａ  ｏｎｅ  ｐｏｔ，  ｏｎｅ  ｓｔｅｐ，  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ．”  ３（１１）：ｅ３６４７．  ｄｏｉ：  １０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００３６４７．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｎｏｖ  ５．
Ｋｗａｎ，  Ｄ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．  （２０１５）  “Ｔｏｗａｒｄ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｂｌｏｏｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｇｕｉｄｅｄ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．”  １３７（１７）：５６９５−７０５．  ｄｏｉ：  １０．１０２１／ｊａ５１１６０８８．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ａｐｒ  ２４．    Ｔｈｅ  ｅｌｅｖｅｎ  ｆｏｓｍｉｄｓ  ｗｅｒｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ  ｏｎ  ａｎ  Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑＴＭ ａｎｄ  ＯＲＦｓ  ｔｈｅｒｅｉｎ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｐｒｅｓｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＣＡＺｙＴＭ  ｄａｔａｂａｓｅ  （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／）（Ｌｏｍｂａｒｄ  ２０１４
Ｋｏｎｗａｒ，  Ｋ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  （２０１５）  “ＭｅｔａＰａｔｈｗａｙｓ  ｖ２．５：  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ，  ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  ｕｓａｂｉｌｉｔｙ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ．”  ３１（２０）：３３４５−７．  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｖ３６１．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｊｕｎ  １５．
Ｌｉ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  （２０１５）  “ＭＥＧＡＨＩＴ：  ａｎ  ｕｌｔｒａ−ｆａｓｔ  ｓｉｎｇｌｅ−ｎｏｄｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｌａｒｇｅ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｖｉａ  ｓｕｃｃｉｎｃｔ  ｄｅ  Ｂｒｕｉｊｎ  ｇｒａｐｈ．”  ３１（１０）：１６７４−６．  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｖ０３３．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｊａｎ  ２０．
ｅｎｚｙｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ＧＨ４  Ａｄｄ  Ｙｉｐ，  Ｖ．Ｌ．  ａｎｄ  Ｗｉｔｈｅｒｓ，  Ｓ．Ｇ．  Ｊ．  Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  （２００６）  “Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｎｕｓｕａｌ  ｒｅｄｏｘ−ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｅｍｐｌｏｙｅｄ  ｂｙ  Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＢｇｌＴ：  ａ  ６−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  ｆａｍｉｌｙ  ４．”  １２６，  ８３５４−８３５５  
Ｃｈａｐａｎｉａｎ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．  （２０１４）  “Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  ｖｉａ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｒｏｗｄｉｎｇ．”  ５：４６８３．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ５６８３．
Ｖａｒｒｏｔ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  （２００５）  “ＮＡＤ＋  ａｎｄ  ｍｅｔａｌ−ｉｏｎ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ｆａｍｉｌｙ  ４  ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅｓ：  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｉｎｓｉｇｈｔ  ｉｎｔｏ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ｐｈｏｓｐｈｏ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ．”  ３４６（２）：４２３−３５．  Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｊａｎ  ７．
Ｌｉｕ，  Ｑ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  （２００７）  “Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ．”  ２５（４）：４５４−６４．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ａｐｒ  １．
Ｃｏｍｆｏｒｔ，  Ｄ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２００７）  “Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＧＨ３６  ａｌｐｈａ−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  （ＴｍＧａｌＡ）  ｃｏｎｆｉｒｍｓ  ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｃｏｍｍｏｎａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｃｌａｎ  ＧＨ−Ｄ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ．”  ４６（１１）：３３１９−３０．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｆｅｂ  ２７．
Ｃａｌｃｕｔｔ，  Ｍ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．  （２００２）  “Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｌｐｈａ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ．”  ２１４（１）：７７−８０．
Ｇｅｒｂａｌ，  Ａ．  Ｍａｓｌｅｔ，  Ｃ．  ａｎｄ  Ｓａｌｍｏｎ，  Ｃ．  Ｖｏｘ  Ｓａｎｇ．  （１９７５）  “Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  Ｂ  ａｎｔｉｇｅｎ．”  ２８（５）：３９８−４０３．
Ｊｕｄｄ，  Ｗ．Ｊ．  ａｎｄ  Ａｎｎｅｓｌｅｙ，  Ｔ．Ｍ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  （１９９６）  “Ｔｈｅ  ａｃｑｕｉｒｅｄ−Ｂ  ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ．”  １０，  １１１−１１７．
Ｋｅｌｌｅｙ，  Ｌ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．  （２０１５）  “Ｔｈｅ  Ｐｈｙｒｅ２  ｗｅｂ  ｐｏｒｔａｌ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ，  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ．”  １０（６）：８４５−５８．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２０１５．０５３．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｍａｙ  ７．
Ｆｉｃｋｏ−Ｂｌｅａｎ，  Ｅ．  ａｎｄ  Ｂｏｒａｓｔｏｎ，  ＡＢ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  （２００６）  “Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｄｕｌｅ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−ｂｅｔａ−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”  ２８１（４９）：３７７４８−５７．  Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ２１．
Ｃｏｈｅｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  （２００９）  “ＡＢＯ  ｂｌｏｏｄ  ｇｒｏｕｐ  ｇｌｙｃａｎｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ．”  １１４（１７）：３６６８−７６．  ｄｏｉ：  １０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００９−０６−２２７０４１．  Ｅｐｕｂ  ２００９  Ａｕｇ  ２４．
Ｆｒｅｄｓｌｕｎｄ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  （２０１１）  “Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  α−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＮＣＦＭ：  ｉｎｓｉｇｈｔ  ｉｎｔｏ  ｔｅｔｒａｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ．”  ４１２（３）：４６６−８０．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｊｍｂ．２０１１．０７．０５７．  Ｅｐｕｂ  ２０１１  Ｊｕｌ  ３０．
【図１】
2021533783.tif 000014
【図２】
2021533783.tif 000015
【図３】
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【図３（Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ）】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図７（Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ）】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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