(57)【要約】  本出願は、例えば、細胞におけるガスデルミン細孔形成の阻害、細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）の阻害、細胞からのサイトカイン分泌の阻害、細胞における炎症性カスパーゼの阻害、および／または細胞におけるガスデルミンタンパク質のシステインとの共有結合的な反応に有用な化学化合物を提供する。これらの化合物はまた、インフラマソーム活性化が病因に関与する疾患または病態の治療もしくは予防において有用である。このような疾患または病態の一例は、敗血症である。【選択図】図１
2021530464.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応する、方法であって、
前記方法が、前記細胞を有効量の式（Ｉ）の化合物、
【化１】
2021530464.tif 000021
またはその薬学的に許容される塩と接触させることを含み、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ１およびＲ２が、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ２から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ３およびＲ４が、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ３から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｃｙ１が、独立して、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各ＲＣｙ１、ＲＣｙ２、およびＲＣｙ３が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ２およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ２Ｒｄ２から選択され、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒｃ１、Ｒｃ２、Ｒｄ１、およびＲｄ２が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＳＲａ３、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
Ｒｂ１およびＲｂ２が、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、およびＣｙ１から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＳＲａ３、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ３、Ｒｃ３、およびＲｄ３が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、それぞれ、オキソ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＳＲａ４、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択される１、２、３、４または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ３が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンから選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、それぞれ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＳＲａ４、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択される１、２、３、４または５個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ４、Ｒｃ４、およびＲｄ４が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンおよびＲｇから選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、それぞれ、Ｒｇから独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ４が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンおよびＲｇから選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、Ｒｇから独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｇが、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキレン、ＨＯ−Ｃ１〜３アルキレン、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ６〜１０アリールオキシ、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレン、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノ、チオ、Ｃ１〜６アルキルチオ、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜６アルキルスルホニル、カルバミル、Ｃ１〜６アルキルカルバミル、ジ（Ｃ１〜６アルキル）カルバミル、カルボキシ、Ｃ１〜６アルキルカルボニル、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１〜６アルキルスルホニルアミノ、アミノスルホニル、Ｃ１〜６アルキルアミノスルホニル、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノスルホニル、アミノスルホニルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノスルホニルアミノ、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノスルホニルアミノ、アミノカルボニルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニルアミノ、およびジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノカルボニルアミノから選択される、方法。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、それぞれ独立して、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ２から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ３およびＲ４が、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記４〜１２員ヘテロシクロアルキルが、以下の基、
【化２】
2021530464.tif 000022
のうちのいずれか１つから選択される、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
各Ｃｙ１が、独立して、Ｃ６〜１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールから選択され、これらのそれぞれが、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＲＣｙ１、ＲＣｙ２、およびＲＣｙ３が、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、およびＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒｃ１、Ｒｃ２、Ｒｄ１、およびＲｄ２が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から選択され、前記Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒｂ１およびＲｂ２が、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキルおよびＣｙ１から選択され、前記Ｃ１〜６アルキルが、ハロ、Ｃｙ１、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒａ３、Ｒｃ３、およびＲｄ３が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
各Ｒｂ３が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒａ４、Ｒｃ４、およびＲｄ４が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
各Ｒｂ４が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
各Ｒｇが、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキレン、およびＨＯ−Ｃ１〜３アルキレンから選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ１およびＲ２が、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ２から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ３およびＲ４が、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｃｙ１が、独立して、Ｃ６〜１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールから選択され、これらのそれぞれが、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２または３個の置換基で任意に置換されており、
各ＲＣｙ１、ＲＣｙ２、およびＲＣｙ３が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、およびＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２から選択され、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒｃ１、Ｒｃ２、Ｒｄ１、およびＲｄ２が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から選択され、前記Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
Ｒｂ１およびＲｂ２が、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキルおよびＣｙ１から選択され、前記Ｃ１〜６アルキルが、ハロ、Ｃｙ１、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ３、Ｒｃ３、およびＲｄ３が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ３が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ４、Ｒｃ４、およびＲｄ４が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ４が、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｇが、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキレン、およびＨＯ−Ｃ１〜３アルキレンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、それぞれ独立して、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記式（Ｉ）の化合物は、表Ａに列挙される化合物、
【表１】
2021530464.tif 000023
2021530464.tif 000024
2021530464.tif 000025
のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応する、方法であって、
前記方法が、前記細胞を、有効量の以下の化合物、
【表２】
2021530464.tif 000026
2021530464.tif 000027
2021530464.tif 000028
のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩と接触させることを含む、方法。
【請求項２０】
前記化合物が、
【表３】
2021530464.tif 000029
2021530464.tif 000030
またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ガスデルミンタンパク質が、ガスデルミンＤ（ＧＳＤＭＤ）である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記炎症性カスパーゼが、カスパーゼ−１またはカスパーゼ−１１である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物が、アポトーシスカスパーゼを阻害しない、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記炎症性サイトカインが、ＩＬ−１βである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ガスデルミンタンパク質のシステインが、Ｃｙｓ１９１である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
インフラマソーム活性化および／またはガスデルミン炎症性細胞死が病因に関与する疾患または病態を治療もしくは予防する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に、治療有効量の、
・請求項１〜１８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、あるいは
・請求項１９もしくは２０に記載の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を、投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記疾患または病態が、炎症性疾患、心血管疾患、代謝性疾患、および神経変性疾患から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記炎症性疾患が、敗血症、痛風、関節炎、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、および炎症性腸疾患から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に、少なくとも１つの追加の治療薬、またはその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与される、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記追加の治療薬が、抗炎症剤である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗炎症剤が、抗ＩＬ１抗体、抗ＴＮＦ抗体、ＮＳＡＩＤ、およびステロイド抗炎症剤から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記追加の治療薬が、抗生物質である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
化合物を同定する方法であって、前記化合物が、
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応し、
前記方法が、
ｇ）キレート配位子と錯体を形成することができる金属カチオンを含むリポソーム、前記キレート配位子、試験化合物、およびガスデルミンタンパク質、またはその断片を含む試料を提供することと、
ｈ）前記試料中の前記ガスデルミンタンパク質を、プロテアーゼ酵素と接触させることと、
ｉ）前記試験化合物が前記リポソームからの前記金属カチオンの漏出を阻害するかどうかを判定することであって、前記リポソームからの前記金属カチオンの前記漏出の前記阻害が、前記試験化合物が、
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応することの指標である、判定することと、を含む、方法。
【請求項３４】
前記金属カチオンが、Ｔｂ３＋である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記キレート配位子が、ジピコリン酸（ＤＰＡ）である、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記金属カチオンと前記キレート配位子との前記錯体の蛍光が、前記カチオンおよび前記配位子が互いに結合していないときの前記金属カチオン、または前記キレート配位子のいずれかの蛍光よりも大きい、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
ガスデルミンタンパク質が、ガスデルミンＤ（ＧＳＤＭＤ）である、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記プロテアーゼが、炎症性カスパーゼである、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記炎症性カスパーゼが、カスパーゼ−１またはカスパーゼ−１１である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ガスデルミンタンパク質が、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ切断部位（ＧＳＤＭ−３Ｃ）を含む、請求項３３〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記プロテアーゼが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記炎症性サイトカインが、ＩＬ−１βである、請求項３３〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記試験化合物が、前記リポソームからの前記金属カチオンの漏出を阻害するかどうかを判定することが、前記試料の前記蛍光が、前記試験化合物を含有しない対照試料の蛍光よりも低いと判断することを含む、請求項３３〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
・請求項１〜１８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、あるいは
・請求項１９もしくは２０に記載の化合物のいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩と、
薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１８年６月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／６９０，７８８号に対する優先権を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、化学化合物に関し、特に、炎症を阻害し、炎症に関連する病態の治療において有用である化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
インフラマソームは、炎症性カスパーゼ（１／４／５／１１）を活性化するために侵襲性病原体および滅菌危険シグナルに応答して組み立てられ、炎症性死（ピロトーシス）ならびに炎症誘発性サイトカインの処置および放出を誘発する多タンパク質シグナル伝達骨格である。インフラマソーム活性化は、炎症性腸疾患、痛風、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、アルツハイマー病、および敗血症（しばしば全身感染に対する致命的な応答）を含む多くのヒト疾患に寄与する。
【発明の概要】
【０００４】
第１の一般的な態様では、本開示は、
・細胞におけるガスデルミン(gasdermin)細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応する、方法を提供し、
本方法は、細胞を有効量の本明細書に記載される化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩と接触させることを含む。
【０００５】
第２の一般的な態様では、本開示は、インフラマソーム活性化および／またはガスデルミン炎症性細胞死が病因に関与する疾患または病態を治療もしくは予防する方法を提供し、本方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載される化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【０００６】
第３の一般的な態様では、本開示は、
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応する、化合物を同定する方法を提供し、
本方法は、
ａ）キレート配位子と錯体を形成することができる金属カチオンを含むリポソーム、キレート配位子、試験化合物、およびガスデルミンタンパク質、またはその断片を含む試料を提供することと、
ｂ）試料中のガスデルミンタンパク質を、プロテアーゼ酵素と接触させることと、
ｃ）試験化合物がリポソームからの金属カチオンの漏出を阻害するかどうかを判定することであって、リポソームからの金属カチオンの漏出の阻害が、試験化合物が、
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応することの指標である、判定することと、を含む。
【０００７】
第４の一般的な態様では、本開示は、本明細書に記載される化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。
【０００８】
第１、第２、第３、および第４の一般的な態様の特定の実施が本明細書に記載される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の疾患または病態のうちのいずれか１つを治療もしくは予防するための、本明細書に記載の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の疾患または病態のうちのいずれか１つを治療もしくは予防するための薬剤として使用するための、本明細書に記載の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩の、本明細書に記載の疾患または病態のうちのいずれか１つの治療もしくは予防のための薬剤の製造における使用を提供する。
【００１２】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本出願が属する当業者に一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本出願で使用される方法および材料が本明細書に記載されており、当該技術分野で既知の他の好適な方法および材料も使用され得る。材料、方法、および実施例は、例示的であり、限定することを意図するものではない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、および他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先される。
【００１３】
本出願の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および図面ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】テルビウム（Ｔｂ３＋）／ジピコリン酸（ＤＰＡ）蛍光リポソーム漏出アッセイの図形表示を含む。
【図２】リポソーム漏出アッセイにおけるジスルフィラムの用量反応曲線を示す折れ線グラフを含む。
【図３】Ａｌｅｘａ  ４８８標識Ｈｉｓ−ＭＢＰ−ＧＳＤＭＤ（８０ｎＭ）とＣ−２２、Ｃ−２３またはＣ−２４との結合のＭＳＴ測定を示す折れ線グラフを含む。
【図４】ニゲリシンまたは培地の存在下で化合物Ｃ−２２、Ｃ−２３、およびＣ−２４で処置した後の細胞生存率を示す棒グラフを含む。
【図５】各試験化合物による前処置後（ＰＢＳまたはＬＰＳによる電気穿孔前）の細胞生存率を示す棒グラフを含む。
【図６】カノニカルインフラマソーム活性化の化合物Ｃ−２３による阻害のＩＣ５０を示す折れ線グラフを含む。
【図７】非カノニカルインフラマソーム活性化の化合物Ｃ−２３による阻害のＩＣ５０を示す折れ線グラフを含む。
【図８】ＥＬＩＳＡ（ＬＰＳ、またはＬＰＳおよびニゲリシンで処置した細胞）によって評価されるように、化合物Ｃ−２３によって処置した培養上清中のＩＬ−１βのレベルを示す棒グラフを含む。
【図９】ＥＬＩＳＡ（ＰＢＳ、またはＬＰＳトランスフェクションで処置した細胞）によって評価されるように、化合物Ｃ−２３によって処置した培養上清中のＩＬ−１βのレベルを示す棒グラフを含む。
【図１０】ＰＢＳまたはポリ（ｄＡ：ｄＴ）でトランスフェクションする前にＣ−２３で前処置した後の細胞生存率を示す棒グラフを含む。
【図１１】化合物Ｃ−５、Ｃ−７、Ｃ−８、Ｃ−２２、Ｃ−２３、Ｃ−２４、およびＣ−２５の化学構造を含む。
【図１２】Ｃｕ（ＩＩ）の存在下または非存在下でのジスルフィラム（Ｃ−２３）またはその代謝産物ＤＴＣによるリポソーム漏出の阻害の用量反応曲線を含む。
【図１３】ＬＰＳ初期活性化（ｐｒｉｍｅｄ）ＴＨＰ−１を、Ｃｕ（ＩＩ）の存在下または非存在下でＣ−２３またはＤＴＣで１時間前処置した後、ニゲリシンまたは培地を２時間添加したことを示す折れ線グラフを含む。
【図１４】１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでチャレンジし、Ｃ−２３で処置した後のマウス生存率％を示す折れ線グラフを含む。
【図１５】Ｃ−２３で前処置し、１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでチャレンジしたマウスにおいてＥＬＩＳＡによって測定した血清ＩＬ−１βを示す棒グラフを含む。
【図１６】２５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでチャレンジし、Ｃ−２３で処置した後のマウス生存率％を示す折れ線グラフを含む。
【図１７】５０ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでチャレンジし、Ｃ−２３で処置した後のマウス生存率％を示す折れ線グラフを含む。
【図１８】腹腔内ＬＰＳチャレンジ（２５ｍｇ／ｋｇ）の０および１２時間後に、マウスを腹腔内注射によってＣ−２３（５０ｍｇ／ｋｇ）、Ｃ−２３（５０ｍｇ／ｋｇ）＋グルコン酸銅（０．１５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（対照）で処置した後のマウス生存率％を示す折れ線グラフを含む。
【図１９】ＤＴＣとＣｕ２＋との間の化学反応を示す化学スキームを含む。
【図２０】Ｃｙｓ１９１含有ヒトＧＳＤＭＤペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトルを含む。
【図２１】Ｃ−２３のジエチルジチオカルバメート部分によるＣｙｓ１９１上の共有結合修飾を有するＣ−２３とインキュベートした後のＧＳＤＭＤペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトルを含有する。
【図２２】ＧＳＤＭＡ３の対応する構造に基づく、その自己阻害型における完全長ヒトＧＳＤＭＤのモデル、およびＧＳＤＭＤＮ末端断片（ＧＳＤＭＤ−ＮＴ）の細孔形態のモデルを示す画像を含む。
【図２３】野生型、Ｃ３８ＡまたはＣ１９１Ａ  ＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）＋カスパーゼ−１１（０．１５μＭ）によって誘導されたリポソーム漏出のＣ−２３の阻害の用量反応曲線を含む。
【図２４】Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ、５００μＭ）または培地で１時間プレインキュベーションした後のＬＰＳ＋ニゲリシン処置ＴＨＰ−１細胞のピロトーシスのＣ−２３阻害を示す棒グラフを含む。
【図２５】ヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃ（０．３μＭ）＋３Ｃプロテアーゼ（０．１５μＭ）によって誘導されたリポソーム漏出における化合物Ｃ−２３の用量反応曲線を含む。
【図２６】ヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃ（０．３μＭ）＋３Ｃプロテアーゼ（０．１５μＭ）によって誘導されたリポソーム漏出における化合物Ｃ−２３の用量反応曲線を含む。
【図２７】カルバミドメチルによってシステイン１９１上で修飾されたペプチドＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫのＭＳ／ＭＳスペクトルを含む。
【図２８】Ｃ−２３によってシステイン１９１上で修飾されたペプチドＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫのＭＳ／ＭＳスペクトルを含む。
【図２９】Ｃｙｓ残基を示す、ＧＳＤＭＡ３、ｈＧＳＤＭＡ、ｍＧＳＤＭＤ、およびｈＧＳＤＭＤの配列アライメントを含む。
【図３０】リポソーム（５０μＭ）中のカスパーゼ−１１（０．１５μＭ）を添加する前に、指示された濃度のＣ−２３（０〜５０μＭ）と共に異なる期間（２〜９０分）プレインキュベートしたＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）のＴｂ３＋／ＤＰＡ蛍光を示す折れ線グラフを含む。
【図３１】指示された濃度の化合物Ｃ−２３の存在下でのカスパーゼ−１活性の時間経過を示す折れ線グラフを含む。
【図３２】指示された濃度の化合物Ｃ−２３の存在下でのカスパーゼ−１１活性の時間経過を示す折れ線グラフを含む。
【図３３】カスパーゼ−１活性アッセイにおける化合物Ｃ−２３の用量反応曲線を含む。
【図３４】カスパーゼ−１１活性アッセイにおける化合物Ｃ−２３の用量反応曲線を含む。
【図３５】指示された濃度の化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）の存在下でのカスパーゼ−１活性の時間経過を示す折れ線グラフを含む。
【図３６】指示された濃度の化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）の存在下でのカスパーゼ−１１活性の時間経過を示す折れ線グラフを含む。
【図３７】カスパーゼ−１活性アッセイにおける化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）の用量反応曲線を含む。
【図３８】カスパーゼ−１１活性アッセイにおける化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）の用量反応曲線を含む。
【図３９】表２に提示される試験化合物の化学構造を含む。
【図４０】表２および図３９に提示される化合物についての細胞生存率アッセイの結果を示す棒グラフを含む。
【図４１】ニゲリシンの有り無しでの表２および図３９の化合物についての細胞生存率アッセイの結果を示す棒グラフを含む。
【図４２】ニゲリシンを添加した後の化合物Ｃ−２３Ａ１、Ｃ−２３Ａ２、Ｃ−２３Ａ９、およびＣ−２３Ａ１０の細胞生存率アッセイの結果を示す棒グラフを含む。
【図４３】化合物Ｃ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、およびＣ−２３＋Ｂａｙ１１−７０８２についての細胞生存率アッセイの結果を示す棒グラフを含む。
【図４４】ＬＰＳトランスフェクション後の化合物Ｃ−２３およびＢａｙ１１−７０８２についての細胞生存率アッセイの結果を示す棒グラフを含む。
【図４５】Ｃ−２３およびＢａｙ１１−７０８２を用いて前処置したＴＨＰ−１細胞の免疫ブロットの画像を含む。
【図４６】Ｃ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、またはｚ−ＶＡＤｆｍｋで前処置した、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞の画像を含む。
【図４７】Ｃ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、またはｚ−ＶＡＤｆｍｋで処置した後のＡＰＳ凝集体を有する細胞の％を示す棒グラフを含む。
【図４８】Ｃ−２３単独で、またはＣｕ（ＩＩ）と共に前処置した、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞の画像を含む。
【図４９】Ｃ−２３単独で、またはＣｕ（ＩＩ）と共に処置した後のＡＰＳ凝集体を有する細胞の％を示す棒グラフを含む。
【図５０】Ｃ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、またはｚ−ＶＡＤｆｍｋで前処置し、指示された抗体で可視化した細胞の溶解物を示す免疫ブロットの画像を含む。
【図５１】Ｃ−２３単独で、またはＣｕ（ＩＩ）と共に前処置し、指示された抗体で可視化した細胞の溶解物を示す免疫ブロットの画像を含む。
【図５２】Ｃ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、およびｚ−ＶＡＤｆｍｋのカスパーゼ−１の活性を示す棒グラフを含む。
【図５３】Ｃ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、またはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで前処置し、マウス抗ＧＳＤＭＤモノクローナル抗体で染色したＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞の画像を含む。
【図５４】ＧＳＤＭＤ膜染色およびピロトーシス気泡を有する細胞の割合の定量化を示す棒グラフを含む。
【図５５】野生型、Ｃ３８ＡまたはＣ１９１ＡヒトＧＳＤＭＤによるリポソーム漏出のＢａｙ１１−７０８２阻害の反応曲線を含む。
【図５６】Ａｌｅｘａ  ４８８標識Ｈｉｓ−ＭＢＰ−ＧＳＤＭＤとＢａｙ１１−７０８２との直接結合の熱泳動測定を示す折れ線グラフを含む。
【図５７】カスパーゼ−１活性に対するＢａｙ１１−７０８２の効果の用量反応曲線を含む。
【図５８】カスパーゼ−１１活性に対するＢａｙ１１−７０８２の効果の用量反応曲線を含む。
【図５９】カルバミドメチルによってＣｙｓ１９１上で修飾されたＧＳＤＭＤペプチドのＭＳスペクトルを含む。
【図６０】Ｃｙｓ１９１で修飾された、Ｂａｙ１１−７０８２とのＧＳＤＭＤインキュベーション後のＧＳＤＭＤペプチドのＭＳスペクトルを含む。
【図６１】ヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃによって誘導されたリポソーム漏出に対するＢａｙ１１−７０８２の効果の用量反応曲線を含む。
【図６２】マウスＧＳＤＭＤ−３Ｃによって誘導されたリポソーム漏出に対するＢａｙ１１−７０８２の効果の用量反応曲線を含む。
【図６３】ピロトーシスの阻害に対するＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）とのＢａｙ１１−７０８２のプレインキュベーションの効果を示す棒グラフを含む。
【図６４】指示されたプラスミドでトランスフェクトし、ゲルを指示された抗体でプローブしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の免疫ブロットの画像を含む。
【図６５】指示されたプラスミドでトランスフェクトし、ゲルを指示された抗体でプローブしたＨＣＴ１１６、２９３Ｔ、およびＴＨＰ−１細胞の免疫ブロットの画像を含む。
【図６６】抗ＧＳＤＭＤモノクローナル抗体で免疫染色し、ＤＡＰＩで共染色した２９３ＴおよびＴＨＰ−１細胞の画像を含む。
【図６７】ガスデルミンＤ細孔の形成およびその後の炎症媒介物の放出につながる生化学的プロセスを示すスキームを含む。
【図６８】ＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼとのインキュベーションの有り無しでのＰＳ含有ナノディスクのネガティブ染色ＥＭ画像を含む。左から３番目の画像では、ＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼ混合物にＣ−２３を添加した後、Ｃ−２３をナノディスクに添加し、４番目の画像では、細孔が形成されたときに混合物をナノディスクと共にインキュベートした後にＣ−２３を添加した。スケールバー、１００ｎｍ。矢印は空のナノディスクおよび細孔を指している。
【図６９】２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα（Ｔ）、１００ｎＭのＳＭＡＣ模倣薬（Ｓ）、および２０μＭのｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋ（Ｚ）を添加する前に、ジスルフィラム（Ｃ−２３）または２μＭのネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）または１０μＭのネクロスタチン−１（Ｎｅｃ）で１時間前処置し（１０μＭおよび５０μＭ）または前処置せず、２４時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイにより細胞生存率を分析した、ＨＴ−２９細胞についての実験結果を示す棒グラフを含む。グラフは、平均値±ｓ．ｄを示し、データは、３つの独立した実験を代表するものである。＊＊Ｐ＜０．０１である。
【図７０】阻害剤無しまたは３０μＭのＣ−２３もしくはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋの存在下でＳＹＴＯＸ  Ｇｒｅｅｎ取り込みによって測定されたピロトーシスの結果を示す折れ線グラフを含む。
【図７１】ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において、完全長（ＦＬ）ヒトＧＳＤＭＤおよびＧＳＤＭＤ  Ｃ１９１Ｓがカスパーゼ−１１と共発現したときの実験の結果を示す棒グラフを含む。細胞死を、トランスフェクションの２０時間後にＣｙｔｏＴｏｘ９６細胞傷害性アッセイによって判定した。
【図７２】ＦＬヒトＷＴまたはＣ１９１Ｓ  ＧＳＤＭＤがＨＥＫ２９３Ｔ細胞中のカスパーゼ−１１と共発現したときの実験の結果を示す棒グラフを含む。トランスフェクションの８時間後、指示された量のジスルフィラムを添加し、１２時間後のＬＤＨ放出によって細胞死を判定した。棒グラフは、実施した３つの独立した実験のうちの１つの代表的な実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１であり、ｎ．ｓ．は、有意ではないことを示す。
【図７３】予め切断されたヒトＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）によって誘導されたリポソーム漏出におけるジスルフィラムの用量反応曲線を示す折れ線グラフを含む。
【図７４】予め切断されたマウスＧＳＤＭＡ３−３Ｃ（０．３μＭ）によって誘導されたリポソーム漏出におけるジスルフィラムの用量反応曲線を示す折れ線グラフを含む。
【図７５】３０μＭのジスルフィラムまたはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置したか、または前処置せず、ニゲリシンまたは培地で刺激したＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を示す画像を含む。
【図７６】ＡＳＣスペックについてのＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞の分析結果を示す棒グラフを含む。
【図７７】ＮＬＲＰ３についてのＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞の分析結果を示す画像を含む。
【図７８】カスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロ−ＩＬ−１β切断、ならびに全細胞溶解物（ＷＣＬ）または培養上清の免疫ブロットによるＩＬ−１放出についてのＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞の分析結果を示す画像を含む。
【図７９】ＧＳＤＭＤの形質膜への再分配を示す画像および棒グラフを含む。細胞をニゲリシンを添加した後３０分固定し、社内で（ｉｎ  ｈｏｕｓｅ）生成された以前に報告されていないモノクローナル抗体を使用してＧＳＤＭＤを染色した。代表的な共焦点顕微鏡画像ならびにＧＳＤＭＤ膜染色およびピロトーシス気泡を有する細胞の割合の定量化が示されている。矢印は、ピロトーシス気泡のＧＳＤＭＤ染色を指している。グラフは、平均値±ｓ．ｄを示し、データは、３つの独立した実験を代表するものである。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１である。
【図８０】ＧＳＤＭＤに主な効果を有する、インフラマソーム経路工程のモデルおよびジスルフィラムによるそれらの阻害を示す画像を含む。
【図８１】マウスを、１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでの腹腔内チャレンジの２４時間前および４時間前に腹腔内注射によってジスルフィラム（５０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（対照）で前処置し、生存を追跡した実験の結果を示すプロットを含む。ＴＮＦａを、ＬＰＳチャレンジの１２時間後にＥＬＩＳＡ（ｎ＝５／群）によって測定した。平均値±ｓ．ｄ．が示されている。
【図８２】マウスを、１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでの腹腔内チャレンジの２４時間前および４時間前に腹腔内注射によってジスルフィラム（５０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（対照）で前処置し、生存を追跡した実験の結果を示すプロットを含む。血清ＩＬ−６を、ＬＰＳチャレンジの１２時間後にＥＬＩＳＡ（ｎ＝５／群）によって測定した。平均値±ｓ．ｄ．が示されている。
【図８３】マウスを、腹腔内ＬＰＳチャレンジ（２５ｍｇ／ｋｇ）の４時間前および腹腔内ＬＰＳチャレンジ（２５ｍｇ／ｋｇ）の後に毎日、腹腔内注射によってジスルフィラム（５０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（対照）で前処置し、生存を追跡した実験の結果を示す折れ線グラフを含む。
【図８４】４つの指示されたマウス群由来の腹膜マクロファージを免疫ブロットによってＮＬＲＰ３、ＧＳＤＭＤおよびＨＭＧＢ１について分析した実験の結果を示す画像を含む。
【図８５】リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフを含む。ＧＳＤＭＤ（２．５μＭ）およびカスパーゼ−１１（２．５μＭ）を２０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣｌ）中の様々な濃度で、リポソーム溶液中で１時間インキュベートした。スクリーンのリポソーム脂質の濃度を５０μＭに設定した。
【図８６】リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフを含む。異なる濃度のＧＳＤＭＤおよびカスパーゼ−１１（１：１比）を、リポソーム（５０μＭ）溶液中で１時間インキュベートした。スクリーンで使用したＧＳＤＭＤの濃度を０．３μＭに設定した。
【図８７】リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフを含む。異なる濃度のカスパーゼ−１１およびＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）を、リポソーム（５０μＭ）溶液中で１時間インキュベートした。スクリーンで使用したカスパーゼ−１１の濃度を０．１５μＭに設定した。５４５ｎｍにおける蛍光強度を、２７６ｎｍでの励起後に測定した。
【図８８】マウスｉＢＭＤＭを、ＰＢＳまたはｐｏｌｙ（ｄＡ：ｄＴ）でトランスフェクションする前に、５〜４０μＭの範囲のジスルフィラム（Ｃ−２３）で１時間前処置し、または前処置せず、４時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイで細胞生存率を分析した実験の結果を示す棒グラフを含む。＊＊Ｐ＜０．０１である。
【図８９】Ｃｙｓ残基を示す、ＧＳＤＭＡ３、ｈＧＳＤＭＡ、ｍＧＳＤＭＤ、およびｈＧＳＤＭＤの配列アライメントを示す画像を含む。
【図９０】ＦＬマウスＧＳＤＭＤまたはＷＴ、Ｃ１９２ＳまたはＣ３９Ａ  ＧＳＤＭＤ−ＮＴがＨＥＫ２９３Ｔ細胞において一過性に発現された実験の結果を示す棒グラフを含む。細胞死を、トランスフェクションの２０時間後にＣｙｔｏＴｏｘ９６細胞傷害性アッセイによって判定した。ｃは、実施した３つの独立した実験のうちの１つの代表的な実験の平均値±ｓ．ｄ．を示している。＊＊Ｐ＜０．０５である。
【図９１】化合物ネクロスルホンアミドについて０．３μＭのＧＳＤＭＤ＋０．１５μＭのカスパーゼ−１１によって誘導されたＧＳＤＭＤ媒介性リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフ（用量反応曲線）を含む。
【図９２】化合物フマル酸ジメチルについて０．３μＭのＧＳＤＭＤ＋０．１５μＭのカスパーゼ−１１によって誘導されたＧＳＤＭＤ媒介性リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフ（用量反応曲線）を含む。
【図９３】化合物アファチニブについて０．３μＭのＧＳＤＭＤ＋０．１５μＭのカスパーゼ−１１によって誘導されたＧＳＤＭＤ媒介性リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフ（用量反応曲線）を含む。
【図９４】化合物イブルチニブについて０．３μＭのＧＳＤＭＤ＋０．１５μＭのカスパーゼ−１１によって誘導されたＧＳＤＭＤ媒介性リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフ（用量反応曲線）を含む。
【図９５】化合物ＬＤＣ７５５９について０．３μＭのＧＳＤＭＤ＋０．１５μＭのカスパーゼ−１１によって誘導されたＧＳＤＭＤ媒介性リポソーム漏出アッセイの結果を示す折れ線グラフ（用量反応曲線）を含む。
【図９６】３０μＭのジスルフィラムまたはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置し、または前処置せず、ニゲリシンまたは培地で刺激したＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、０．５時間後に細胞透過性蛍光カスパーゼ活性プローブＦＡＭ−ＹＶＡＤ−ＦＭＫによってカスパーゼ−１活性について分析した実験の結果を示す棒グラフを含む。
【図９７】培地除去後に、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、蛍光読み取りの前に、さらに０．５時間、ＦＬＩＣＡアッセイ緩衝液中のプローブＦＡＭ−ＹＶＡＤ−ＦＭＫと共にインキュベートした実験の結果を示す棒グラフを含む。ｉＢＭＤＭを、ジスルフィラム、Ｂａｙ１１−７０８２、ネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）、またはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置した後、ニゲリシンで０．５時間処置したか、または処置しなかった。指示された抗体で全細胞溶解物および培養上清を免疫ブロットした。
【図９８】培地除去後に、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、蛍光読み取りの前に、さらに０．５時間、ＦＬＩＣＡアッセイ緩衝液中のプローブＦＡＭ−ＹＶＡＤ−ＦＭＫと共にインキュベートした実験の結果を示す棒グラフを含む。ｉＢＭＤＭを、ジスルフィラム、Ｂａｙ１１−７０８２、ネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）、またはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置した後、ニゲリシンで１時間処置したか、または処置しなかった。指示された抗体で全細胞溶解物および培養上清を免疫ブロットした。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下でさらに詳細に論じられるように、細孔形成タンパク質ガスデルミン（ガスデルミンＤなど）は、インフラマソーム活性化の下流の最終的なピロトーシス実行型である。本出願の化合物は、ガスデルミン細孔形成およびその後のＩＬ−１βなどの炎症性媒介物の分泌を強力に阻害する。したがって、本出願の化合物は、例えば、敗血症などの炎症によって媒介される疾患および病態の治療に有用である。本開示の化合物を含有する薬学的組成物、ならびにこれらの化合物を使用および作製する様々な方法を以下に記載する。
【００１６】
治療用化合物
１つの一般的な態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、
【化１】
2021530464.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ２から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ３から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｃｙ１は、独立して、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各ＲＣｙ１、ＲＣｙ２、およびＲＣｙ３は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ２およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ２Ｒｄ２から選択され、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒｃ１、Ｒｃ２、Ｒｄ１、およびＲｄ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＳＲａ３、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
Ｒｂ１およびＲｂ２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＳＲａ３、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ３、Ｒｃ３、およびＲｄ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、それぞれオキソ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＳＲａ４、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択される１、２、３、４または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ３は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンから選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、それぞれ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＳＲａ４、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４、およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択される１、２、３、４または５個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ４、Ｒｃ４、およびＲｄ４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンおよびＲｇから選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、それぞれ、Ｒｇから独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ４は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンおよびＲｇから選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、および（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレンが、Ｒｇから独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｇは、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキレン、ＨＯ−Ｃ１〜３アルキレン、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ６〜１０アリールオキシ、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ３〜１０シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキレン、（５〜１０員ヘテロアリール）−Ｃ１〜４アルキレン、（４〜１２員ヘテロシクロアルキル）−Ｃ１〜４アルキレン、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノ、チオ、Ｃ１〜６アルキルチオ、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜６アルキルスルホニル、カルバミル、Ｃ１〜６アルキルカルバミル、ジ（Ｃ１〜６アルキル）カルバミル、カルボキシ、Ｃ１〜６アルキルカルボニル、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１〜６アルキルスルホニルアミノ、アミノスルホニル、Ｃ１〜６アルキルアミノスルホニル、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノスルホニル、アミノスルホニルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノスルホニルアミノ、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノスルホニルアミノ、アミノカルボニルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニルアミノ、およびジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノカルボニルアミノから選択される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００１８】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、およびＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００１９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。これらの実施形態のいくつかの態様では、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、およびｔ−ブチルから選択され、これらの各々は、Ｃｙ１で任意に置換されている。これらの実施形態の他の態様において、Ｒ１は、Ｃｙ１で置換されたメチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はＣｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００２１】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、およびＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００２２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。これらの実施形態のいくつかの態様では、Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、およびｔ−ブチルから選択され、これらの各々は、Ｃｙ１で任意に置換されている。これらの実施形態の他の態様では、Ｒ２は、Ｃｙ１で置換されたメチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２はＣｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００２４】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、およびＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００２５】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。これらの実施形態のいくつかの態様では、Ｒ３は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、およびｔ−ブチルから選択され、これらの各々は、Ｃｙ１で任意に置換されている。これらの実施形態の他の態様では、Ｒ３は、Ｃｙ１で置換されたメチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３はＣｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００２７】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、およびＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００２８】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。これらの実施形態のいくつかの態様では、Ｒ４は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、およびｔ−ブチルから選択され、これらの各々は、Ｃｙ１で任意に置換されている。これらの実施形態の他の態様では、Ｒ４は、Ｃｙ１で置換されたメチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ４はＣｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、Ｃｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルであり、Ｒ２は、Ｃｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃｙ１であり、Ｒ２は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。
【００３０】
いくつかの実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ、Ｃｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４は、Ｃｙ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃｙ１であり、Ｒ４は、Ｃｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルである。
【００３１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ２から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。前述の実施形態のいくつかの態様では、４〜１２員ヘテロシクロアルキルは、以下の基のうちのいずれか１つから選択される。
【化２】
2021530464.tif 000004
【００３２】
いくつかの実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。前述の実施形態のいくつかの態様では、４〜１２員ヘテロシクロアルキルは、以下の基のうちのいずれか１つから選択される。
【化３】
2021530464.tif 000005
【００３３】
いくつかの実施形態では、Ｃｙ１は、Ｃ６〜１０アリールであり、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。これらの実施形態のいくつかの態様では、Ｃ６〜１０アリールは、フェニルまたはナフチルである。
【００３４】
いくつかの実施形態では、各Ｃｙ１は、独立して、Ｃ６〜１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールから選択され、これらのそれぞれが、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２または３個の置換基で任意に置換されている。
【００３５】
いくつかの実施形態では、Ｃｙ１は、Ｃ３〜１０シクロアルキルであり、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。これらの実施形態のいくつかの態様では、Ｃ３〜１０シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルから選択される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、Ｃｙ１は、５〜１０員ヘテロアリールであり、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。これらの実施形態のいくつかの態様では、５〜１０員ヘテロアリールは、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１，２，３−トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−トリアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニルおよびピリダジニルから選択される。これらの実施形態の他の態様では、５〜１０員ヘテロアリールは、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、およびピリジン−４−イルから選択される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、Ｃｙ１は、４〜１２員ヘテロシクロアルキルであり、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。これらの実施形態のいくつかの態様では、４〜１２員ヘテロシクロアルキルは、テトラヒドロプラニル、オキセタニル、アゼチジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、アゼパニル、およびベンズアザペニルから選択される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、各ＲＣｙ１は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、およびＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２から選択される。いくつかの実施形態では、各ＲＣｙ１はＣ１〜６アルキルである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、各ＲＣｙ２は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、およびＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２から選択される。いくつかの実施形態では、各ＲＣｙ２はＣ１〜６アルキルである。
【００４０】
いくつかの実施形態では、各ＲＣｙ３は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、およびＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２から選択される。いくつかの実施形態では、各ＲＣｙ３はＣ１〜６アルキルである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒｃ１、Ｒｃ２、Ｒｄ１、およびＲｄ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００４２】
いくつかの実施形態、Ｒｂ１およびＲｂ２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキルおよびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、ハロ、Ｃｙ１、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００４３】
いくつかの実施形態では、Ｒａ３、Ｒｃ３、およびＲｄ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００４４】
いくつかの実施形態では、各Ｒｂ３は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００４５】
いくつかの実施形態では、Ｒａ４、Ｒｃ４、およびＲｄ４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００４６】
いくつかの実施形態では、各Ｒｂ４は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されている。
【００４７】
いくつかの実施形態では、各Ｒｇは、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキレン、およびＨＯ−Ｃ１〜３アルキレンから選択される。
【００４８】
いくつかの実施形態では、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、およびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、およびＣ２〜６アルキニルが、それぞれ、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ１、ＳＲａ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＯＲａ１、ＮＲｃ１Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ１Ｒｄ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１、ＮＲｃ１Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ１およびＳ（Ｏ）２ＮＲｃ１Ｒｄ１から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ２から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合するＮ原子と共に、４〜１２員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは、ＲＣｙ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｃｙ１は、独立して、Ｃ６〜１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールから選択され、これらのそれぞれが、ＲＣｙ１から独立して選択される１、２または３個の置換基で任意に置換されており、
各ＲＣｙ１、ＲＣｙ２、およびＲＣｙ３は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ２、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ２Ｒｄ２、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２、ＮＲｃ２Ｒｄ２、ＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）Ｒｂ２、およびＮＲｃ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ２から選択され、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒｃ１、Ｒｃ２、Ｒｄ１、およびＲｄ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃｙ１、Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ３Ｒｄ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３、Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃ３Ｒｄ３から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、Ｃｙ１、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
Ｒｂ１およびＲｂ２は、それぞれ独立して、Ｃ１〜６アルキルおよびＣｙ１から選択され、該Ｃ１〜６アルキルが、ハロ、Ｃｙ１、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ３、ＮＲｃ３Ｒｄ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）Ｒｂ３、ＮＲｃ３Ｃ（Ｏ）ＯＲａ３、およびＮＲｃ３Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ３から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ３、Ｒｃ３、およびＲｄ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ３は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６シアノアルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲａ４、ＮＲｃ４Ｒｄ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）Ｒｂ４、ＮＲｃ４Ｃ（Ｏ）ＯＲａ４、およびＮＲｃ４Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ４から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
Ｒａ４、Ｒｃ４、およびＲｄ４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｂ４は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４シアノアルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜１０シクロアルキル、５〜１０員ヘテロアリール、および４〜１２員ヘテロシクロアルキルから選択され、これらのそれぞれが、Ｒｇから独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意に置換されており、
各Ｒｇは、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキレン、およびＨＯ−Ｃ１〜３アルキレンから選択される。
【００４９】
前述の実施形態のいくつかの態様では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｃｙ１およびＣｙ１で任意に置換されたＣ１〜６アルキルから選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下の表Ａに列挙される化合物、
【表１】
2021530464.tif 000006
2021530464.tif 000007
のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、表Ａに列挙される化合物のうちのいずれか１つではない。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本出願は、以下の化合物、
【表２】
2021530464.tif 000008
2021530464.tif 000009
2021530464.tif 000010
のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本出願の化合物は、Ｃ−５、Ｃ−７、Ｃ−８、Ｃ−２２、Ｃ−２４、Ｃ−２５、Ｂａｙ１１−７０８２、ＡＳＮ−０８９６６８９９、ＬＤＣ７５５９、イブルチニブ、アファチニブ、フマル酸ジメチル、またはネクロスルホンアミドではない。
【００５４】
いくつかの実施形態では、本出願は、以下の化合物、
【表３】
2021530464.tif 000011
2021530464.tif 000012
のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、本出願の化合物は、Ｃ−５、Ｃ−７、Ｃ−８、Ｃ−２２、Ｃ−２４、Ｃ−２５、Ｂａｙ１１−７０８２、またはＡＳＮ−０８９６６８９９ではない。
【００５６】
薬学的に許容される塩
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物の塩は、アミノ官能基などの化合物の酸と塩基性基との間に形成されるか、またはカルボキシル官能基などの化合物の塩基と酸性基との間に形成される。別の実施形態によれば、本化合物は、薬学的に許容される酸付加塩である。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本開示の化合物の薬学的に許容される塩を形成するために一般に用いられる酸としては、無機酸、例えば、二硫化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、およびリン酸、ならびに有機酸、例えば、パラ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、ビタルタル酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、ギ酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、乳酸、シュウ酸、パラブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クチン酸、クエン酸、安息香酸、および酢酸、ならびに関連する無機および有機酸が挙げられる。したがって、このような薬学的に許容される塩としては、グルコン酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリレート、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリル酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩酸塩、コハク酸塩、スベレート、セバカン酸塩、フマル酸塩、マレ酸塩、ブチン−１，４−ジオン酸、ヘキシン−Ｌ，６−ジオン酸、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩および他の塩が挙げられる。一実施形態では、薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸および臭化水素酸などの鉱酸で形成されるもの、特にマレイン酸などの有機酸で形成されるものが挙げられる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本開示の化合物の薬学的に許容される塩を形成するために一般的に使用される塩基には、ナトリウム、カリウム、およびリチウムを含むアルカリ金属の水酸化物；カルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムや亜鉛などの他の金属の水酸化物；アンモニア、非置換またはヒドロキシル置換モノ−、ジ−、またはトリ−アルキルアミンなどの有機アミン、ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどのモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ＯＨ−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルアミン）；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；モルホリン；チオモルホリン；ピペリジン；ピロリジン；およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸が挙げられる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、実質的に単離されている。
【００６０】
作製方法
本明細書に開示される化合物（その塩を含む）は、既知の有機合成技術を使用して調製することができ、多くの可能な合成経路のいずれかに従って合成することができる。当業者は、適切な合成プロトコルを選択および実装する方法を知っており、本明細書に提供される化合物の合成に潜在的に使用されるために広範な合成有機反応のレパートリーが利用可能であることを理解する。
【００６１】
出発物質、中間体、および生成物の好適な合成方法は、以下のような引用元を含む文献を参照することによって特定され得る。Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｓ．１−１０７（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９６３−２０１２）；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌｓ．１−４９（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６４−２０１２）；Ｃａｒｒｅｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｓ．１−４８（２００１−２０１０）ａｎｄ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  Ｕｐｄａｔｅｓ  ＫＵ２０１０／１−４；２０１１／１−４；２０１２／１−２  （Ｔｈｉｅｍｅ，２００１−２０１２）；Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ，ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．）；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ＩＩ  （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００４）；Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．），Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８４）；Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ，（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６ｔｈ  Ｅｄ．（Ｗｉｌｅｙ，２００７）；Ｔｒｏｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．），Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）。
【００６２】
本明細書に提供される化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者によって容易に選択され得る好適な溶媒中で実行することができる。好適な溶媒は、反応が行われる温度、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度までの範囲であり得る温度で、出発物質（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応を、１つの溶媒または２つ以上の溶媒の混合物中で実行することができる。特定の反応工程に応じて、特定の反応工程に好適な溶媒は、当業者によって選択され得る。
【００６３】
本明細書で提供される化合物の調製は、種々の化学基の保護および脱保護を伴い得る。保護および脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定することができる。保護基の化学は、例えば、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２００６）に見出すことができる。
【００６４】
使用方法
図６７を参照すると、炎症性カスケードは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）または損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）、別名アラーミンが、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）およびＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）、ならびに細胞質センサなどの細胞表面およびエンドソームパターン認識受容体（ＰＲＲ）によって感知されるときに開始する。ＰＡＭＰおよびＤＡＭＰの例としては、ＬＰＳ、細菌毒素、細菌タンパク質および核酸、粒子（尿酸およびコレステロール結晶ならびにアミロイドβ原線維など）、ヒアルロナン、ならびに細胞外ＡＴＰが挙げられる。応答して、細胞機構は、プロカスパーゼカノニカルまたは非カノニカルインフラマソームを活性化し、活性炎症性カスパーゼの放出をもたらす。炎症性カスパーゼの例としては、カスパーゼ−１、カスパーゼ−１１、ならびにカスパーゼ−４およびカスパーゼ−５が挙げられる。インフラマソーム中のカスパーゼの活性化は、細胞質タンパク質ガスデルミンのカスパーゼ切断をもたらし、ガスデルミンＮ末端断片（ガスデルミン−ＮＴ）を産生する。場合によっては、カスパーゼ切断可能なガスデルミンタンパク質は、ガスデルミンファミリーの以下のメンバーから選択される：ＧＳＤＭＡ、ＧＳＭＤＢ、ＧＳＤＭＣ、ＧＳＤＭＤ、ＤＦＮＡ５、およびＤＦＮＢ５９。次いで、ガスデルミン−ＮＴは、細胞質側から細胞膜に結合して、細胞膜を透過処置させる細孔を形成し、サイトカイン分泌およびピロトーシスを引き起こす。ＤＦＮＡ５は、古典的なアポトーシス中にカスパーゼ−３によって活性化される。他のガスデルミンを活性化するプロテアーゼは、現在知られていないが、カスパーゼではなく、インフラマソームとは独立して活性化され得る。典型的には、ガスデルミンは、ホスファチジルイノシトールリン酸塩（ＰＩＰ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびホスファチジン酸（ＰＡ）、ならびに細菌およびミトコンドリア脂質カルジオリピンなどの哺乳動物膜の内部リーフレットに制限される酸性脂質に結合する。典型的には、ガスデルミン遺伝子は、様々な組織の上皮および免疫細胞内で発現され、炎症性カスパーゼによって切断されると、全てが細孔を形成することができる。一例では、カノニカルインフラマソーム活性化は、プロＩＬ−１β、プロＩＬ−１８およびガスデルミンＤを切断するカスパーゼ−１を活性化し、これが、処置された炎症性サイトカインＩＬ−１βを放出するのに必要な細孔を形成する。
【００６５】
本開示の化合物は、ガスデルミン細孔形成を効率的にブロックし、したがって、個々の下流媒介物のいずれかをブロックする。したがって、これらの化合物は、臨床的に試験されたもの（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＴＮＦα抗体）などの個々の上流または下流の炎症経路を阻害する抗炎症剤よりも炎症の阻害において効率的である。化合物はまた、播種性血管内凝固（活性化タンパク質Ｃ注入で阻害される）など、患者を死亡させる複数の制御困難な調節異常事象を媒介することにおいてもより効率的である。本出願の化合物によるガスデルミン（例えば、ガスデルミンＤ）の阻害は、サイトカインストームを予防する。これは、サイトカインストームの合併症を低減させようとする従来の抗炎症治療よりも効果的である。同様に、本出願の化合物はまた、ＬＰＳまたはその細胞外受容体（ＴＬＲ４、ＣＤ１４）を中和する薬剤よりも効率的である。グラム細菌は多くのＰＡＭＰ（毒素、べん毛、桿菌タンパク質）を産生するが、全てが知られているわけではないため、ＬＰＳ阻害が不完全な場合、ＬＰＳを中和しても、特にＬＰＳ過敏症のヒトではグラム敗血症を予防できない可能性がある。ＴＬＲ４は、免疫抗原提示細胞だけでなく、粘膜上皮において、ヒトで構成的に発現される非カノニカルインフラマソームよりもＬＰＳの重要性が低いセンサであり得る。ＬＰＳは、非常に重要な誘因（ｔｒｉｇｇｅｒ）であり、それを阻害すること、またはその第１の検出が成功しない場合、次いで、他のＰＡＭＰまたはＤＡＭＰセンサのうちの１つを阻害することは、例えば、誘発（ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ）ＰＡＭＰが治療が必要な時点で一般に知られていないヒトにおける多面発現的に誘発された（ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）敗血症においても有効であろう。さらに、本出願の化合物は、炎症性カスパーゼの個々の阻害剤よりも効率的である。これは、アポトーシスカスパーゼおよび他のシステインプロテアーゼに対するこれらの阻害剤の潜在的な交差反応性が、望ましくない毒性（例えば、肝線維症）をもたらす可能性があるためである。カスパーゼ−８の不必要な阻害も、ネクロトーシスを引き起こす可能性がある。いくつかの実施形態では、ガスデルミン細孔形成の阻害は、本出願の化合物がガスデルミンタンパク質中のシステインと反応する結果として生じる。いくつかの実施形態では、システインはＣｙｓ１９１である。いくつかの実施形態では、本化合物はまた、センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと反応する。いくつかの実施形態では、本化合物のタンパク質システイン残基との多様な反応性は、いかなる望ましくない毒性ももたらさず、化合物の有効性に悪影響を及ぼさない。
【００６６】
場合によっては、本出願の化合物は、炎症性障害の治療または予防、もしくはこれらの障害に関連する症状の改善において有用である。このような障害は、典型的には、自分自身の細胞または組織を攻撃する免疫系をもたらし、敗血症（例えば、急性敗血症）、脱毛症、難聴症候群、痛風、関節炎、リウマチ性関節炎、硬化症、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎（ＡＳ）、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、血管炎、家族性地中海熱、新生児期発症多臓器炎症性疾患、ベーチェット病、皮膚症、１型糖尿病、自己免疫疾患、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、アジソン病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、悪性貧血、セリアック病、慢性炎症、リウマチ、脳脊髄炎、感染症後小脳炎、視神経脊髄炎（例えば、デビック病）、脳炎、代謝性脳炎、喘息、歯周炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、副鼻腔炎、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、および消化性潰瘍が挙げられる。場合によっては、炎症性疾患には、緑内障、ドライアイ、および網膜虚血再灌流などの眼疾患が挙げられる。場合によっては、炎症性疾患には、慢性肺疾患および傷害、ならびにＮＡＳＨおよび他の炎症性肝疾患が挙げられる。場合によっては、炎症性疾患は、遺伝的自己炎症性病態である。
【００６７】
炎症性障害に関連する症状としては、典型的には、慢性疼痛、赤み、関節および他の組織の腫脹、硬直、発熱、臓器内の血液タンパク質の蓄積、脱毛、疲労、および正常な組織への損傷が挙げられる。本出願の化合物は、これらの症状の改善において有用である。
【００６８】
場合によっては、本出願の化合物は、敗血症の治療、またはこの病態に関連する症状の改善において有用である。敗血症に関連する症状の例としては、血管漏出、循環器崩壊、凝固活性化、および多臓器不全が挙げられる。適切な治療を行わなければ、敗血症は症例の約３分の１で致命的である。これは、世界の新生児および小さな子供の主要な死因であり、米国では成人の入院患者の２人または３人に１人の死亡に寄与している。敗血症の現在の治療は、抗生物質および支持療法に限定され、感染に対する免疫応答を静止させるように設計された１００以上の臨床試験は、単一の新しい有効な療法を生み出すことに失敗している。有利なことに、本出願の化合物は、播種性および制御不良の感染に対する先天性免疫応答を低減し、敗血症の治療に成功する。
【００６９】
場合によっては、本出願の化合物は、例えば、敗血症を発症するリスクが高い患者において敗血症を予防するために使用されてもよい。このような患者の好適な例としては、骨髄移植を受けている好中球減少症患者が挙げられる。
【００７０】
場合によっては、本開示の化合物は、心血管疾患の治療または予防において有用である。このような疾患の例としては、脳卒中、心不全、高血圧性心臓病、リウマチ性心臓病、心筋症、心不整脈、先天性心疾患、心臓弁膜症、心臓炎、大動脈瘤、末梢動脈疾患、血栓塞栓性疾患、冠動脈疾患、心筋梗塞、および静脈性血栓症が挙げられる。
【００７１】
場合によっては、本開示の化合物は、代謝障害の治療または予防において有用である。このような障害の例としては、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、シスチン症、シスチン尿症、ファブリー病、ガラクトース血症、ゴーシェ病（Ｉ型）、ハートナップ病、ホモシスチン尿症、ハンター症候群、ハーラー症候群、レッシュ・ナイハン症候群、メープルシロップ尿症、マロトー・ラミー症候群、モルキオ症候群、ニーマン・ピック病（Ａ型）、フェニルケトン尿症、ポンペ病、ポルフィリン症、シャイエ症候群、テイ・サックス病、チロシン血症（肝腎）、およびフォン・ギエルケ病が挙げられる。
【００７２】
場合によっては、本出願の化合物は、神経変性疾患の治療または予防において有用である。このような疾患の例としては、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、認知症、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、運動ニューロン疾患、および統合失調症が挙げられる。
【００７３】
特に、感染または細胞死が疾患に関与する場合、任意の疾患に炎症性成分が存在する可能性がある。したがって、本出願の化合物は、このような疾患の治療または予防において有用である。このような疾患の好適な例としては、グラム陽性細菌によって引き起こされる感染症、多菌感染症、寄生虫によって引き起こされる感染症（例えば、マラリア、トキソプラズマ症、トリパノソーマ症、リーシュマニア）、移植拒絶症、眼の炎症（例えば、網膜炎、ブドウ膜炎）、および癌が挙げられる。
【００７４】
併用療法
場合によっては、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用方法は、少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて、対象に化合物を投与することを含む。この方法では、化合物および追加の治療薬は、対象に同時に（例えば、同じ剤形もしくは別個の剤形で）、または連続して（例えば、追加の治療薬は、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩の前もしくは後に）投与してもよい。
【００７５】
場合によっては、追加の治療薬は、抗炎症剤を含む。好適な例としては、セレコキシブ、ロフェコキシブ、イブプロフェン、ナプロキセン、アスピリン、ジクロフェナク、スリンダク、オキサプロジン、ピロキシカム、インドメタシン、メロキシカム、フェノプロフェン、ジフルニサル、ＢＡＹ１１〜７０８２、またはその薬学的に許容される塩などの非ステロイド性抗炎症薬が挙げられる。ステロイド（例えば、コルチコステロイド）抗炎症剤の好適な例としては、コルチゾール、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、アルドステロン、デオキシコルチコステロン、トリアムシノロン、バルドキソロン、バルドキソロンメチル、トリアムシノロン、コルチゾン、プレドニゾン、およびメチルプレドニゾロン、またはその薬学的に許容される塩が挙げられる。抗炎症剤の他の好適な例としては、抗炎症抗体（例えば、抗ＩＬ−１、抗ＴＮＦ）、およびインテグリンなどのタンパク質が挙げられる。
【００７６】
場合によっては、追加の治療薬は、抗生物質である。このような抗生物質は、キノロン、β−ラクタム、セファロスポリン、ペニシリン、カルバペネム、リポペチド、アミノグリコシド、グリコペプチド、マクロライド、アンサマイシン、スルホンアミド、モノバクタム、オキサゾリジノン、リポペプチド、マクロライド、およびカチオン性抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）から選択され得る。
【００７７】
カチオン性抗菌ペプチドの好適な例としては、ディフェンシンペプチド（例えば、βディフェンシン１もしくはα−ディフェンシン１などのディフェンシン１）、またはセクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトトキシン、メリチン、マガイニン、デルマセプチン、ボンビニン、ブレビニン（例えば、ブレビニン−１）、エスクレンチン、ブフォリンＩＩ（例えば、両生類由来）、ＣＡＰ１８（例えば、ウサギ由来）、ＬＬ３７（例えば、ヒト由来）、アバエシン、アピダエシン（例えば、ミツバチ由来）、プロフェニン（例えば、ブタ由来）、インドリシン（例えば、ウシ由来）、ブレビニン、プロテグリン（例えば、ブタ由来）、タキプレシン（例えば、カブトガニ由来）、およびドロソマイシン（例えば、ミバエ由来）が挙げられる。
【００７８】
キノリン抗生物質の好適な例としては、レボフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、ペルフロキサシン、ロメフロキサシン、フレロキサシン、スパルフロキサシン、グレパフロキサシン、トロバフロキサシン、クリナフロキサシン、ゲミフロキサシン、エノキサシン、シタフロキサシン、ナジフロキサシン、トスルフロキサシン、シンノキサシン、ロソキサシン、ミロキサシン、モキシフロキサシン、ガチフロキサシン、シンノキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、ロマフロキサシン、ロメフロキサシン、ミロキサシン、ナリジクス酸、ナジフロキサシン、オキソリン酸、ペフロキサシン、ピリミジン酸、ピペミド酸、ロソキサシン、ルフロキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、トロバフロキサシン、およびベシフロキサシンが挙げられる。
【００７９】
セファロスポリン抗生物質の好適な例としては、セファゾリン、セフロキシム、セフタジジム、セファレキシン、セファロリジン、セファマンドール、セフスロジン、セホニシド、セフォペラジン、セフォプロジル、およびセフトリアキソンが挙げられる。
【００８０】
ペニシリン抗生物質の好適な例としては、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、プロカインペニシリン、ならびにベンザシンペニシリン、アンピシリン、およびアモキシシリン、ベンジルペニシリン、フェノキシメチルペニシリン、オキサシリン、メチシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、テモシリン、アズロシリン、カルベニシリン、リカシリン、メズロシリン、ピペラシリン、アパルシリン、ヘタシリン、バカンピシリン、スルベニシリン、メシシラム（ｍｅｃｉｃｉｌａｍ）、ペブメシリナム、シクラシリン、タラピシリン、アスポキシシリン、クロキサシリン、ナフシリン、ならびにピバンピシリンが挙げられる。
【００８１】
カルバペネム抗生物質の好適な例としては、チエナマイシン、トモペネム、レナペネム、テビペネム、ラズペネム、イミペネム、メロペネム、エルタペネム、ドリペネム、パニペネム（ベタミプロン）、およびビアペネムが挙げられる。
【００８２】
リポペプチド抗生物質の好適な例としては、ポリミキシンＢ、コリスチン（ポリミキシンＥ）、およびダプトマイシンが挙げられる。
【００８３】
アミノグリコシド抗生物質の好適な例としては、ゲンタマイシン、アミカシン、トブラマイシン、デベカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、およびストレプトマイシンが挙げられる。
【００８４】
グリコペプチド抗生物質の好適な例としては、バンコマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、ラモプラニン、ダプトマイシン、デカプラニン、およびブレオマイシンが挙げられる。
【００８５】
マクロライド抗生物質の好適な例としては、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、フィダキソマイシン、テリスロマイシン、カルボマイシンＡ、ジョサマイシン、キタサマイシン、ミデカマイシン／ミドカマイシン酢酸塩、オレアンドマイシン、ソリスロマイシン、スピラマイシン、トロレアンドマイシン、タイロシン／タイロシン、ロキシスロマイシン、ジリスロマイシン、トロレアンドマイシン、スペクチノマイシン、メチマイシン、ネオメチマイシン、エリスロノリド、メガロマイシン、ピクロマイシン、ナルボマイシン、オレアンドマイシン、トリアセチル−オレアンドマイシン、ラウカマイシン、クジマイシンＡ、アルボサイクリンおよびシネロマイシンＢが挙げられる。
【００８６】
アンサマイシン抗生物質の好適な例としては、ストレプトバリシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファマイシン、リファンピン、リファブチン、リファペンチン、およびリファミキシンが挙げられる。
【００８７】
スルホンアミド抗生物質の好適な例としては、スルファニルアミド、スルファセタルニド、スルファピリジン、スルファチアゾール、スルファジアジン、スルファメラジン、スルファジミジン、スルファソミジン、スルファサラジン、マフェニド、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファジメトキシン、スルファシマジン、スルファドキシン、スルファメトピラジン、スルファグアニジン、スクシニルスルファチアゾールおよびフタリルスルファチアゾールが挙げられる。
【００８８】
薬学的組成物
本出願はまた、有効量の本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。薬学的組成物はまた、本明細書に記載される追加の治療薬のうちのいずれか１つを含み得る。ある特定の実施形態では、本出願はまた、本明細書に記載される追加の治療薬のいずれか１つを含む薬学的組成物および剤形を提供する。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合性であるという意味で「許容される」ものであり、薬学的に許容される担体の場合、薬剤で使用される量でそのレシピエントに有害ではない。
【００８９】
本出願の薬学的組成物で使用され得る薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルにとしては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、およびウール脂肪が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９０】
組成物または剤形は、好適な薬学的に許容される賦形剤から構成される残部を伴い、本明細書に記載の化合物および治療薬のうちのいずれか１つを０．００５％〜１００％の範囲で含有し得る。企図される組成物は、０．００１％〜１００％の本明細書に提供される化合物および治療薬のうちのいずれか１つを含有してもよく、一実施形態では０．１〜９５％、別の実施形態では７５〜８５％、さらなる実施形態では２０〜８０％の本明細書に提供される化合物および治療薬のうちのいずれか１つを含有してもよく、残部は、本明細書に記載される薬学的に許容される任意の賦形剤、またはこれらの賦形剤の任意の組み合わせから構成され得る。
【００９１】
投与経路および剤形
本出願の薬学的組成物は、任意の許容される投与経路に好適なものを含む。許容される投与経路としては、口腔内、皮膚内、子宮頸内、副鼻腔内、気管内、経腸、硬膜外、間質内、腹部内、動脈内、気管支内、口内、脳内、大槽内、冠動脈内、皮内、乳管内、十二指腸内、硬膜内、上皮内、食道内、胃内、歯肉内、回腸内、リンパ内、脊髄内、髄膜内、筋肉内、鼻孔内、卵巣内、腹腔内、前立腺内、肺内、鼻腔内、髄腔内、滑液嚢内、精巣内、くも膜下腔内、尿細管内、腫瘍内、子宮内、血管内、静脈内、鼻内、経鼻胃、経口、非経口、経皮、硬膜外、直腸、呼吸器（吸入）、皮下、舌下、粘膜下、局所、経皮、経粘膜、経気管、尿管、尿道、および膣内が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９２】
本明細書に記載の組成物および製剤は、好都合に、単位剤形、例えば、錠剤、徐放性カプセル、およびリポソームで提供され得、薬剤学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ  （２０ｔｈ  ｅｄ．２０００）を参照されたい。このような調製方法は、投与される分子を１つ以上の副成分を構成する担体などの成分と会合させる工程を含む。一般に、組成物は、活性成分を液体担体、リポソームまたは微粉固体担体、またはその両方と均一かつ密接に会合させ、その後、必要に応じて生成物を形成することによって調製される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物および治療薬のうちのいずれか１つは、経口投与される。経口投与に適した本出願の組成物は、それぞれ所定量（例えば、有効量）の活性成分をそれぞれ含有するカプセル、サシェ剤、顆粒または錠剤、粉末または顆粒、水性液体または非水性液体中の溶液または懸濁液、水中油液エマルジョン、油中水液体エマルジョン、リポソーム中に充填される、またはボーラスとしてなどの別個の単位として提供され得る。軟質ゼラチンカプセルは、化合物の吸収速度を有利に増加させ得る、このような懸濁液を含有するのに有用であり得る。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ならびにケイ酸およびデンプンが挙げられる。他の許容される賦形剤には、ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸などの充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶液遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤、ｈ）カオリンやベントナイト粘土などの吸収剤、ならびにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびこれらの混合物などの潤滑剤が挙げられる。カプセル形態での経口投与の場合、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁液が経口投与される場合、活性成分は乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。所望される場合、特定の甘味剤および／または風味剤および／または着色剤が添加されてもよい。経口投与に好適な組成物としては、風味ベースの、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカントで成分を含むローゼンジ剤、ならびにゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性ベースで活性成分を含むパスティール剤が挙げられる。
【００９４】
非経口投与に好適な組成物としては、製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、および溶質を含有し得る水性および非水性滅菌注射溶液または注入溶液、ならびに懸濁剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量または多用量容器、例えば、密封されたアンプルおよびバイアルに提供され得、使用直前に、滅菌液体担体、例えば、注射用水、生理食塩水（例えば、０．９％の生理食塩水）または５％のデキストロース溶液の添加のみを必要とする凍結乾燥（凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保管され得る。即時注射用の溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製してもよい。注射液は、例えば、滅菌注射用水性懸濁液または油性懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、当該技術分野において既知の技法に従って製剤化され得る。滅菌注射用調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。使用され得る許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、マンニトール、水、リンガー溶液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油は、従来、溶媒または懸濁媒体として用いられる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激固定油が用いられてもよい。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンのように、注射剤の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含有してもよい。
【００９５】
本出願の薬学的組成物は、直腸投与のための座薬の形態で投与され得る。これらの組成物は、本出願の化合物を、室温では固体であるが直腸温度では液体であるため、直腸内で溶解して活性成分を放出する好適な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。そのような材料には、ココアバター、蜜蝋、およびポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
本出願の薬学的組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。このような組成物は、医薬製剤の技術分野において周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の好適な防腐剤、バイオアベイラビリティを増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または当該技術分野において既知の他の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製され得る。例えば、米国特許第６，８０３，０３１号を参照されたい。鼻腔内投与のための追加の製剤および方法は、Ｉｌｉｕｍ，Ｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，５６：３−１７，２００４  ａｎｄ  Ｉｌｉｕｍ，Ｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  １１：１−１８，２０００に見出される。
【００９７】
本開示の局所組成物は、エアロゾルスプレー、クリーム、エマルジョン、固体、液体、分散液、泡、油、ゲル、ヒドロゲル、ローション、ムース、軟膏、粉末、パッチ、ポマード、溶液、ポンプスプレー、スティック、タオル、石鹸の形態で、または局所投与および／または化粧品ならびにスキンケア製剤の技術分野で一般的に使用される他の形態で調製および使用することができる。局所組成物は、エマルジョン形態であり得る。本出願の薬学的組成物の局所投与は、所望の治療が局所適用によって容易にアクセス可能な領域または器官を伴う場合に特に有用である。いくつかの実施形態では、局所組成物は、本明細書に開示される化合物および治療薬のうちのいずれか１つと、吸収剤、抗刺激剤、抗ニキギ剤、防腐剤、酸化防止剤、着色剤／顔料、エモリエント（保湿剤）、乳化剤、フィルム形成／保持剤、香料、葉状の剥離剤、処方薬、防腐剤、スクラブ剤、シリコーン、皮膚同質／修復剤、スリップ剤、日焼け止め活性物質、界面活性剤／洗剤入り清浄剤、浸透促進剤、および増粘剤が挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の追加の成分、担体、賦形剤、または希釈剤の組み合わせと、含む。
【００９８】
本出願の化合物および治療薬は、プロテーゼ、人工弁、血管移植片、ステント、またはカテーテルなどの移植可能な医療用デバイスをコーティングするための組成物に組み込んでもよい。好適なコーティングおよびコーティングされた移植可能なデバイスの一般的な調製は当該技術分野において既知であり、米国特許第６，０９９，５６２号、同第５，８８６，０２６号、および同第５，３０４，１２１号に例示されている。コーティングは、典型的には、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニル、およびこれらの混合物などの生体適合性ポリマー材料である。コーティングは、任意に、フルオロシリコーン、多糖類、ポリエチレングリコール、リン脂質、またはこれらの組み合わせの好適なトップコートによってさらに覆われて、組成物中に制御放出特性を付与してもよい。侵襲性デバイス用のコーティングは、それらの用語が本明細書で使用されるため、薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルの定義に含まれるべきである。
【００９９】
別の実施形態によれば、本出願は、前記化合物または治療薬が前記デバイスから放出され、治療的に活性であるように、化合物もしくは治療薬、または本出願の化合物もしくは治療薬を含む組成物を含有または含有する移植可能な薬物放出デバイスを提供する。
【０１００】
薬用量およびレジメン
本出願の薬学的組成物において、本明細書に記載の化合物は、有効量（例えば、治療有効量）で存在する。
【０１０１】
有効量は、治療される疾患、疾患の重症度、投与経路、対象の性別、年齢、および全般的な健康病態、賦形剤の使用、他の薬剤の使用などの他の治療処置との併用の可能性、ならびに治療する医師の判断に応じて変化し得る。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本出願の化合物は、ヒト血液および組織において容易かつ安全に達成される濃度で使用される。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物の有効量は、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ）の範囲であり得る。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、ｏｒ約１５０ｍｇ／ｋｇである。
【０１０５】
前述の薬用量は、１日単位で（例えば、単回用量として、または２回以上の分割用量として、例えば、１日１回、１日２回、１日３回）または非１日単位で（例えば、隔日、２日毎、３日毎、１週間に１回、１週間に２回、２週間毎、１ヶ月に１回）投与することができる。
【０１０６】
キット
本開示はまた、例えば、治療有効量の本開示の化合物を含む薬学的組成物を含有する１つ以上の容器を含む、本明細書で言及される障害、疾患、および病態の治療に有用な薬学的キットも提供する。このようなキットは、必要に応じて、様々な従来の薬学的キット構成要素、例えば、１つ以上の薬学的に許容される担体を有する容器、追加の容器などのうちの１つ以上をさらに含むことができる。添付文書またはラベルのいずれかとして、投与される成分の量、投与のための指針、および／または成分を混合するための指針を示す説明書も、キットに含めることができる。このキットは、本明細書に記載の量および剤形のうちのいずれか１つにおいて、本明細書に記載の追加の治療薬のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩を任意に含んでもよい。
【０１０７】
スクリーニングアッセイ
場合によっては、本出願は、例えば、ガスデルミン細孔形成、インフラマソーム媒介性細胞死（ピロトーシス）、細胞サイトカイン分泌、および／または炎症性カスパーゼの阻害剤を同定するためのスクリーニングアッセイを提供する。図１を参照すると、そのようなアッセイにおいて、試料は、金属カチオンがリポソームの内部に閉じ込められるように形成されるリポソームを含んでもよい。試料はまた、プロテアーゼ切断部位、試験化合物、およびリポソーム内に閉じ込められた金属カチオンと錯体を形成することができる配位子を含有する完全長ガスデルミンタンパク質を含み得る。化合物が細孔形成を阻害すると判定するために、プロテアーゼ酵素を試料に添加する。プロテアーゼ酵素は、完全長ガスデルミンタンパク質からＮ末端ガスデルミン断片を切断する。試験化合物の非存在下、または試験化合物がアッセイにおいて不活性である場合、これらのＮＴ断片はその後、リポソームの脂質に結合し、リポソーム内に細孔を形成し、それを通して金属カチオンがリポソームから外部緩衝液中に漏出する。外部緩衝液において、金属カチオンはキレート配位子と結合して錯体を形成する。この錯体は、カチオンと配位子が互いに結合していない場合、金属カチオンまたはキレート配位子よりも高い蛍光を有する。試料の増加した蛍光は、適切な器具を使用して検出することができ、これによりリポソームからの金属カチオンの漏出を示す。例えば、ガスデルミンと化学的に反応する活性試験化合物の存在下で、試験化合物によって化学修飾されるＮＴガスデルミン断片は、リポソーム中に細孔を形成しない。したがって、金属カチオンは、リポソーム中に封入されたままであり、外部緩衝液中のキレート配位子と結合しない。そのため、試料中にはリポソーム漏出はなく、蛍光増加は検出されない。活性化合物は、試験化合物を含有する試料の蛍光と、いかなる試験化合物も含有しない対照試料の蛍光とを比較することによって、アッセイにおいて同定することができる。化合物がアッセイにおいて活性であると見なされる場合、試料の蛍光は、対照の蛍光よりも低い。いくつかの実施形態では、化合物が活性であると見なされる場合、試料の蛍光は、対照の蛍光よりも少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、または約６０％低い。
【０１０８】
場合によっては、金属カチオンは、Ｃｅ３＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｇ２＋、およびＴｂ３＋から選択される。いくつかの実施形態では、金属カチオンはＴｂ３＋である。場合によっては、キレート配位子は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジピコリン酸（ＤＰＡ）、エチレンジアミン、ポルフィリン、およびジメルカプトールから選択される。いくつかの実施形態では、キレート配位子はジピコリン酸（ＤＰＡ）である。
【０１０９】
場合によっては、試料中のガスデルミンタンパク質は、ＧＳＤＭＡ、ＧＳＭＤＢ、ＧＳＤＭＣ、ＧＳＤＭＤ、ＤＦＮＡ５、およびＤＦＮＢ５９から選択される。場合によっては、ガスデルミンタンパク質は、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ切断部位（ＧＳＤＭ−３Ｃ）を含有する。例えば、試料中のガスデルミンタンパク質は、３Ｃプロテアーゼ切断部位（ＧＳＤＭＤ−３Ｃ）を有するガスデルミンＤタンパク質である。
【０１１０】
場合によっては、プロテアーゼ酵素は、炎症性カスパーゼおよびライノウイルス３Ｃプロテアーゼから選択される。炎症性カスパーゼは、カスパーゼ１またはカスパーゼ１１であり得る。いくつかの実施形態では、ガスデルミンタンパク質はＧＳＤＭ−３Ｃであり、プロテアーゼ酵素は３Ｃプロテアーゼである。他の実施形態では、ガスデルミンタンパク質はＧＳＤＭＤ−３Ｃであり、プロテアーゼ酵素は３Ｃプロテアーゼである。
【０１１１】
さらに別の一般的な態様において、本出願は、
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応する、化合物を同定する方法を提供し、
本方法は、
ｄ）キレート配位子と錯体を形成することができる金属カチオンを含むリポソーム、キレート配位子、および試験化合物を含む試料を提供することと、
ｅ）試験化合物をＮ末端ガスデルミンタンパク質断片と接触させることと、
ｆ）試験化合物がリポソームからの金属カチオンの漏出を阻害するかどうかを判定することであって、リポソームからの金属カチオンの漏出の阻害が、試験化合物が、
・細胞におけるガスデルミン細孔形成を阻害する、および／または
・細胞のインフラマソーム媒介性死（ピロトーシス）を阻害する、および／または
・細胞からのサイトカイン分泌を阻害する、および／または
・細胞内の炎症性カスパーゼを阻害する、および／または
・細胞内のガスデルミンタンパク質のシステインと共有結合的に反応する、および／または
・センサ、アダプタ、および転写因子、またはその調節因子から選択される炎症性シグナル伝達分子のシステインと共有結合的に反応することの指標である、判定することと、を含む。
【０１１２】
定義
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、「およそ」（例えば、示された値の約１０％をプラスまたはマイナスすること）を意味する。
【０１１３】
本明細書の種々の箇所において、本発明の化合物の置換基は、基または範囲で開示される。本発明は、このような基および範囲のメンバーのそれぞれおよび全ての個々の部分的組み合わせを含むことが具体的に意図される。例えば、「Ｃ１〜６アルキル」という用語は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、およびＣ６アルキルを個別に開示することを特に意図する。
【０１１４】
本明細書の様々な箇所において、様々なアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキル環が記載される。特に明記しない限り、これらの環は、価によって許容されるように、任意の環員において分子の残りに結合することができる。例えば、「ピリジン環」または「ピリジニル」という用語は、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、またはピリジン−４−イル環を指すことができる。
【０１１５】
明確にするために、別個の実施形態との関連で記載される本発明の特定の特徴もまた、単一の実施形態では組み合わせて提供され得ることがさらに理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態と関連して記載される本発明の様々な特徴もまた、別個に、または任意の好適な部分的組み合わせで提供することができる。
【０１１６】
用語「芳香族」は、芳香族性質を有する（すなわち、ｎが整数である（４ｎ＋２）非局在化π（パイ）電子を有する）１つ以上の多価不飽和環を有する炭素環または複素環を指す。
【０１１７】
ｎが整数である「ｎ員」という用語は、典型的には、環形成原子の数がｎである部分における環形成原子の数を説明する。例えば、ピペリジニルは６員ヘテロシクロアルキル環の一例であり、ピラゾリルは５員ヘテロアリール環の一例であり、ピリジルは６員ヘテロアリール環の一例であり、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンは１０員シクロアルキル基の一例である。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、語句「任意に置換された」は、非置換または置換されていることを意味する。置換基は、独立して選択され、置換は、任意の化学的にアクセス可能な位置にあり得る。本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、水素原子が除去され、置換基によって置き換えられていることを意味する。単一の二価置換基、例えば、オキソは、２つの水素原子を置き換えることができる。所与の原子における置換は、価によって制限されることを理解されたい。
【０１１９】
定義全体を通して、「Ｃｎ〜ｍ」という用語は、端点を含む範囲を示し、ｎおよびｍは整数であり、炭素の数を示す。例としては、Ｃ１〜４、Ｃ１〜６などが挙げられる。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「Ｃｎ〜ｍアルキル」という用語は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する直鎖または分枝鎖であり得る飽和炭化水素基を指す。アルキル部分の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルなどの化学基、２−メチル−１−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、ｎ−ヘキシル、１，２，２−トリメチルプロピルなどのより高級な同族体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素原子、１〜４個の炭素原子、１〜３個の炭素原子、または１〜２個の炭素原子を含有する。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「Ｃｎ〜ｍハロアルキル」という用語は、同一であっても異なってもよい１個のハロゲン原子から２ｓ＋１個のハロゲン原子を有するアルキル基を指し、「ｓ」はアルキル基中の炭素原子の数であり、アルキル基はｎ〜ｍ個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ハロアルキル基はフッ素化のみである。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１２２】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルケニル」は、１つ以上の炭素−炭素二重結合を有し、ｎ〜ｍ個の炭素を有するアルキル基を指す。例示的なアルケニル基としては、エテニル、ｎ−プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、ｓｅｃ−ブテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルケニル部分は、２〜６個、２〜４個、または２〜３個の炭素原子を有する。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキニル」は、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有し、ｎ〜ｍ個の炭素を有するアルキル基を指す。例示的なアルキニル基としては、エチニル、プロピン−１−イル、プロピン−２−イルなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキニル部分は、２〜６個、２〜４個、または２〜３個の炭素原子を有する。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「Ｃｎ〜ｍアルキレン」という用語は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する二価アルキル結合器を指す。アルキレン基の例としては、エタン−１，１−ジイル、エタン−１，２−ジイル、プロパン−１，１−ジイル、プロパン−１，３−ジイル、プロパン−１，２−ジイル、ブタン−１，４−ジイル、ブタン−１，３−ジイル、ブタン−１，２−ジイル、２−メチル−プロパン−１，３−ジイルなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキレン部分は、２〜６個、２〜４個、２〜３個、１〜６個、１〜４個、または１〜２個の炭素原子を有する。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「Ｃｎ〜ｍアルコキシ」という用語は、式−Ｏ−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。例示的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシ）、ブトキシ（例えば、ｎ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシ）などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍハロアルコキシ」は、ｎ〜ｍ個の炭素原子を有する式−Ｏ−ハロアルキルの基を指す。例示的なハロアルコキシ基はＯＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ハロアルコキシ基はフッ素化のみである。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、「アミノ」という用語は、式−ＮＨ２の基を指す。
【０１２８】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「Ｃｎ〜ｍアルキルアミノ」という用語は、式−ＮＨ（アルキル）（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。アルキルアミノ基の例としては、Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−エチルアミノ、Ｎ−プロピルアミノ（例えば、Ｎ−（ｎ−プロピル）アミノおよびＮ−イソプロピルアミノ）、Ｎ−ブチルアミノ（例えば、Ｎ−（ｎ−ブチル）アミノおよびＮ−（ｔｅｒｔ−ブチル）アミノ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
本明細書で使用される場合、「ジ（Ｃｎ〜ｍ−アルキル）アミノ」という用語は、式−Ｎ（アルキル）２（式中、２個のアルキル基は、それぞれ独立して、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、各アルキル基は、独立して、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルコキシカルボニル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。アルコキシカルボニル基の例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル（例えば、ｎ−プロポキシカルボニルおよびイソプロポキシカルボニル）、ブトキシカルボニル（例えば、ｎ−ブトキシカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３１】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルカルボニル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。アルキルカルボニル基の例としては、メチルカルボニル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル（例えば、ｎ−プロピルカルボニルおよびイソプロピルカルボニル）、ブチルカルボニル（例えば、ｎ−ブチルカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブチルカルボニル）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３２】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルカルボニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１３３】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルスルホニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＳ（Ｏ）２−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１３４】
本明細書で使用される場合、「アミノスルホニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２の基を指す。
【０１３５】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルアミノスルホニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ（アルキル）（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「ジ（Ｃｎ〜ｍアルキル）アミノスルホニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（アルキル）２（式中、各アルキル基は、独立して、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、各アルキル基は、独立して、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、「アミノスルホニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＳ（Ｏ）２ＮＨ２の基を指す。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルアミノスルホニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＳ（Ｏ）２ＮＨ（アルキル）（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１３９】
本明細書で使用される場合、「ジ（Ｃｎ〜ｍアルキル）アミノスルホニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｎ（アルキル）２（式中、各アルキル基は、独立して、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、各アルキル基は、独立して、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４０】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「アミノカルボニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２の基を指す。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルアミノカルボニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ（アルキル）（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４２】
本明細書で使用される場合、「ジ（Ｃｎ〜ｍアルキル）アミノカルボニルアミノ」という用語は、式−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（アルキル）２（式中、各アルキル基は、独立して、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、各アルキル基は、独立して、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４３】
本明細書で使用される場合、「カルバミル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２の基を指す。
【０１４４】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルカルバミル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ（アルキル）（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、「ジ（Ｃｎ〜ｍ−アルキル）カルバミル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）Ｎ（アルキル）２（式中、２個のアルキル基は、それぞれ独立して、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、各アルキル基は、独立して、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４６】
本明細書で使用される場合、「チオ」という用語は、式−ＳＨの基を指す。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルチオ」という用語は、式−Ｓ−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４８】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルスルフィニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１４９】
本明細書で使用される場合、「Ｃｎ〜ｍアルキルスルホニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）２−アルキル（式中、アルキル基は、ｎ〜ｍ個の炭素を有する）の基を指す。いくつかの実施形態では、このアルキル基は、１〜６個、１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「カルボニル」という用語は、Ｃ（Ｏ）としても記述され得る−Ｃ（＝Ｏ）−基を指す。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「カルボキシ」という用語は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ基を指す。
【０１５２】
本明細書で使用される場合、「シアノ−Ｃ１〜３アルキル」という用語は、式−（Ｃ１〜３アルキレン）−ＣＮの基を指す。
【０１５３】
本明細書で使用される場合、「ＨＯ−Ｃ１〜３アルキル」という用語は、式−（Ｃ１〜３アルキレン）−ＯＨの基を指す。
【０１５４】
本明細書で使用される場合、「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを指す。いくつかの実施形態では、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒである。
【０１５５】
本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「アリール」という用語は、単環式または多環式（例えば、２、３、または４個の縮合環を有する）であり得る芳香族炭化水素基を指す。用語「Ｃｎ〜ｍアリール」は、ｎ〜ｍ個の環炭素原子を有するアリール基を指す。アリール基としては、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜１０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、フェニルまたはナフチルである。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」は、環化アルキルおよび／またはアルケニル基を含む非芳香族環式炭化水素を指す。シクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、２、３、または４個の縮合環を有する）基およびスピロ環を含むことができる。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、１または２個の独立して選択されるオキソまたはスルフィド基（例えば、Ｃ（Ｏ）またはＣ（Ｓ））によって任意に置換され得る。シクロアルキルの定義には、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサンなどのベンゾまたはチエニル誘導体と縮合した（すなわち、これらと共通の結合を有する）１つ以上の芳香環を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含有するシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を通して結合することができる。シクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の環形成炭素（Ｃ３〜１０）を有し得る。いくつかの実施形態では、シクロアルキルはＣ３〜１０単環式または二環式シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルはＣ３〜７単環式シクロアルキルである。例示的なシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル、アダマンチルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルである。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」は、硫黄、酸素、および窒素から選択される少なくとも１つのヘテロ原子環員を有する単環式または多環式芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、窒素、硫黄、および酸素から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール部分中の任意の環形成Ｎは、Ｎ−オキシドであり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、窒素、硫黄、および酸素から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する５〜１０員単環式または二環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、窒素、硫黄、および酸素から独立して選択される１または２個のヘテロ原子環員を有する５〜６員単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、５員または６員ヘテロアリール環である。５員ヘテロアリール環は、５つの環原子を有する環を備えたヘテロアリールであり、１つ以上の（例えば、１、２、または３個の）環原子は、Ｎ、Ｏ、およびＳから独立して選択される。例示的な５員環ヘテロアリールは、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１，２，３−トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−トリアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、および１，３，４−オキサジアゾリルである。６員ヘテロアリール環は、６個の環原子を有する環を備えたヘテロアリールであり、１つ以上の（例えば、１、２、または３個の）環原子は、Ｎ、Ｏ、およびＳから独立して選択される。例示的な６員環ヘテロアリールは、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニル、およびピリダジニルである。
【０１５８】
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される１つ以上の環形成ヘテロ原子を有する非芳香族単環式または多環式複素環を指す。ヘテロシクロアルキルに含まれるのは、単環式４員、５員、６員、７員、８員、９員または１０員ヘテロシクロアルキル基である。ヘテロシクロアルキル基はまた、スピロ環も含むことができる。例示的なヘテロシクロアルキル基としては、ピロリジン−２−オン、１，３−イソオキサゾリジン−２−オン、ピラニル、テトラヒドロピラン、オキセタニル、アゼチジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、アゼパニル、ベンズアゼペンなどが挙げられる。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子およびヘテロ原子は、１または２個の独立して選択されるオキソまたはスルフィド基（例えば、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、またはＳ（Ｏ）２など）によって任意に置換され得る。ヘテロシクロアルキル基は、環形成炭素原子または環形成ヘテロ原子を通して結合することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０〜３個の二重結合を含有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０〜２個の二重結合を含有する。ヘテロシクロアルキルの定義には、シクロアルキル環と縮合した（すなわち、シクロアルキル環と共通の結合を有する）１つ以上の芳香族環、例えば、ピペリジン、モルホリン、アゼピンなどのベンゾまたはチエニル誘導体を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含有するヘテロシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を通して結合することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１または２個のヘテロ原子を有し、１つ以上の酸化環員を有する単環式４〜６員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を有し、１つ以上の酸化環員を有する単環式または二環式４〜１０員ヘテロシクロアルキルである。
【０１５９】
ある特定の箇所において、定義または実施形態は、特定の環（例えば、アゼチジン環、ピリジン環など）を指す。別段の指示がない限り、これらの環は、原子の価を超えない限り、任意の環員に結合することができる。例えば、アゼチジン環は、環の任意の位置に結合されてもよく、一方、ピリジン−３−イル環は、３位に結合される。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、「オキソ」という用語は、二価の置換基としての酸素原子を指し、炭素に結合したとき（例えば、Ｃ＝Ｏ）、またはスルホキシドもしくはスルホン基を形成するヘテロ原子に結合したときにカルボニル基を形成する。
【０１６１】
「化合物」という用語は、本明細書で使用されるとき、描かれる構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、および同位体を含むことを意味する。本明細書において、１つの特定の互変異性形態としての名称または構造によって同定される化合物は、別途指定されない限り、他の互変異性形態を含むことが意図される。
【０１６２】
本明細書に記載の化合物は、非対称であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有する）。別段の指示がない限り、鏡像異性体およびジアステレオマーなどの全ての立体異性体が意図される。非対称に置換された炭素原子を含有する本発明の化合物は、光学活性形態またはラセミ形態で単離することができる。ラセミ混合物の分解能または立体選択的合成などにより、光学的に不活性な出発物質から光学的に活性な形態を調製する方法が当該技術分野において既知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合、Ｎ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体も、本明細書に記載の化合物中に存在することができ、全てのこのような安定異性体が本発明において企図される。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体が記載され、異性体の混合物として、または分離異性体形態として単離され得る。いくつかの実施形態では、この化合物は（Ｒ）−配置を有する。いくつかの実施形態では、この化合物は（Ｓ）−配置を有する。
【０１６３】
本明細書で提供される化合物は、互変異性形態も含む。互変異性形態は、単結合と隣接する二重結合とを、プロトンの同時移動と一緒に交換することから生じる。互変異性形態には、同じ実験式および総電荷を有する異性体プロトン化状態であるプロトン転移（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｃ）互変異性体が含まれる。プロトン転移互変異性体の例としては、ケトン−エノール対、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、エナミン−イミン対、ならびに環状形態が挙げられ、プロトンは複素環系の２つ以上の位置、例えば、１Ｈ−および３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈおよび４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−および２Ｈ−イソインドール、ならびに１Ｈ−および２Ｈ−ピラゾールを占めることができる。互変異性形態は、平衡にあるか、または適切な置換によって１つの形態に立体的にロックされ得る。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、「細胞」という用語は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボである細胞を指すことが意図される。いくつかの実施形態では、エクスビボ細胞は哺乳動物などの生物から切除される組織試料の一部であり得る。いくつかの実施形態では、インビトロ細胞は細胞培養物中の細胞であり得る。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は哺乳動物などの生物内に生存する細胞である。
【０１６５】
本明細書で使用される場合、「接触させること」という用語は、インビトロ系またはインビボ系における示される部分を一緒にすることを指す。例えば、本発明の化合物とガスデルミンを「接触させる」ことは、ガスデルミンを有するヒトなどの個体または患者に本発明の化合物を投与すること、ならびに例えば、本発明の化合物を、ガスデルミンを含有する細胞調製物または精製調製物を含有する試料中に導入することを含む。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、「個体」、「患者」、または「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、および最も好ましくはヒトを含む任意の動物を指す。
【０１６７】
本明細書で使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という語句は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められている組織、系、動物、個体またはヒトにおける生物学的または医学的応答を誘発する活性化合物または医薬品の量を指す。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「治療すること」または「治療」という用語は、１）疾患を阻害すること、例えば、疾患、病態または障害の病理学もしくは症状を経験または表示している個体における疾患、病態または障害を阻害すること（すなわち、病理学および／または症状のさらなる発達を阻止すること）、または２）疾患を改善すること、例えば、疾患、病態または障害の病理学もしくは症状を経験または表示している個体における疾患、病態または障害を改善すること（すなわち、病理学および／または症状を逆転させること）を指す。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、疾患、病態または障害の「予防すること」または「予防」という用語は、対象または対象の群（例えば、疾患、病態または障害に罹患しやすいか、または受けやすい対象もしくは対象の群）における疾患、病態または障害の発生のリスクを減少させることを指す。いくつかの実施形態では、疾患、病態または障害を予防することは、疾患、病態または障害および／またはその関連する症状を獲得する可能性を減少させることを指す。いくつかの実施形態では、疾患、病態または障害を予防することは、疾患、病態または障害の発生を完全にまたはほぼ完全に停止させることを指す。
【実施例】
【０１７０】
骨髄系およびバリア上皮細胞による病原体および危険性の細胞質センシングは、炎症性カスパーゼを活性化してサイトカイン成熟および炎症性細胞死（ピロトーシス）を誘発するインフラマソームと呼ばれる大きな複合体を組み立てる。炎症は、免疫細胞を動員して、保護免疫応答を編成するが、病理を引き起こし得る。炎症性カスパーゼ基質であるガスデルミンＤ（ＧＳＤＭＤ）による細孔形成は、最近、ピロトーシスおよび炎症性媒介物の放出に関与する機構として特定された。ＧＳＤＭＤを阻害することは、炎症を抑制するための魅力的な戦略である。以下に記載される実験結果は、慢性アルコール依存症を治療するために使用される薬物であるジスルフィラムが、ＧＳＤＭＤによる細孔形成の阻害剤であるが、ＧＳＤＭファミリーの他のメンバーではないことを説明している。ジスルフィラムは、マウスにおいて、細胞におけるインフラマソーム媒介性ピロトーシスおよびサイトカイン放出をブロックし、ＬＰＳ誘導性敗血症死を阻害する。ナノモル濃度では、ジスルフィラムは、ＧＳＤＭＤ中のヒトＣｙｓ１９１（マウスＣｙｓ１９２）を共有結合的に修飾して、細孔形成およびピロトーシスをブロックする。
【０１７１】
一般的な方法
マウス。８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６野生型マウスをジャクソン研究所から購入し、ハーバード・メディカル・スクールのＳＰＦ施設で管理した。全てのマウス実験は、ボストン小児病院およびハーバード大学医学大学院の動物実験委員会（Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｓｔｏｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ａｎｄ  Ｈａｒｖａｒｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ）によって承認されたプロトコルを使用して行った。
【０１７２】
マウスにおける薬物投与およびＬＰＳ誘導性敗血症。指示された時間に腹腔内注射により、ゴマ油またはビヒクル（対照）中に製剤化されたジスルフィラム（Ｃ−２３、ＤＳＦ、５０ｍｇ／ｋｇ）でマウスを処置した。図５ｈに示されるマウス群において、ＤＳＦの最初の注射の６時間前に、グルコン酸銅（０．１５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。敗血症を、指示された濃度でのＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ１１１：Ｂ４）の腹腔内注射によって、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８〜１０週齢）において誘導させた。いくつかの実験では、マウスを、ＬＰＳチャレンジの５時間前に腹腔内注射によってグルコン酸銅（０．１５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルで処置し、その後、ＬＰＳチャレンジの４時間前および直前にゴマ油またはビヒクルに腹腔内溶解させたＤＳＦ（５０ｍｇ／ｋｇ）を投与した（１５ｍｇ／ｋｇ腹腔内）。ＬＰＳチャレンジの６時間後、３％のＦＢＳを含有する氷冷ＰＢＳで腹腔をすすぐことによって、腹膜細胞を採取した。サイトカインを測定するために、ＬＰＳチャレンジの１２時間後に尾静脈出血によって血液試料を採取し、室温で凝固させた。２，０００×ｇで１０分間遠心分離した後に得られた血清を、ＥＬＩＳＡによって炎症性サイトカインについて分析した。
【０１７３】
試薬。β−メルカプトエタノール（２ＭＥ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、塩化テルビウム（ＩＩＩ）（ＴｂＣｌ３）、ジピコリン酸（ＤＰＡ）、およびグルコン酸銅は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。化合物Ｃ−２３およびその類似体：テトラエチルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３）、テトラメチルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ１）、テトラブチルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ３）、４−メチルピペラジン−１−カルボチオイン酸ジチオペルオキシ無水物（Ｃ−２３Ａ４）、テトラフェニルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ５）、Ｎ，Ｎ’−ジメチル−Ｎ，Ｎ’−（４，４’−ジメチルジフェニル）チウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ６）、ジ（４−モルホリニル）ジチオペルオキシ無水物（Ｃ−２３Ａ７）、Ｎ，Ｎ’−ジメチル−Ｎ，Ｎ’−ジ（４−ピリジニル）チウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ８）、ピロリジン−１−カルボチオイン酸ジチオペルロキシ無水物（Ｃ−２３Ａ１０）、およびジメチルジフェニルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ１１）を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。テトライソプロピルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ２）およびジシクロペンタメチレンチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ９）は、Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから得た。テトラベンジルチウラムジスルフィド（Ｃ−２３Ａ１２）は、ＡＫ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得た。ホルボール１２−ミリスステート１３−アセテート（ＰＭＡ）およびＤＭＳＯは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。ウルトラＬＰＳおよびニゲリシンは、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎから得た。汎カスパーゼ阻害剤のｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから得た。完全なプロテアーゼ阻害剤カクテルおよびＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤カクテルは、Ｒｏｃｈｅから得た。ネクロスルホンアミド、ネクロスタチン−１、フマル酸ジメチル、イブルチニブ、およびアファチニブは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。ＬＤＣ７５５９は、Ｉｎｔｏｎａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓによって合成した。
【０１７４】
生体分子：ＧＳＤＭＤに対するモノクローナル抗体を、６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに組換えヒトＧＳＤＭＤを免疫し、標準プロトコルに従って組換えヒトＧＳＤＭＤ−ＮＴで追加免疫することによって、社内で生成した。血清試料を採取して反応性抗体の力価を評価し、脾臓細胞をＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させた。ハイブリドーマを選択し、得られたクローン由来の上清を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット法、および免疫蛍光顕微鏡法によってスクリーニングした。チューブリン抗体は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。ホスホ−ＩκＢα抗体、ＩκＢα抗体、ホスホ−ＮＦ−κＢｐ６５抗体、切断ヒトカスパーゼ−１（Ａｓｐ２９７）抗体、およびＮＬＲＰ３抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから得た。ＡＳＣ抗体（ＡＬ１７７）およびマウスカスパーゼ−１ｐ２０抗体は、ＡｄｉｐｏＧｅｎから得た。ヒトおよびマウスＩＬ−１β抗体は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから得た。ＨＭＧＢ１およびマウスＧＳＤＭＤ抗体は、Ａｂｃａｍから得た。
【０１７５】
リポソーム漏出アッセイ：蛍光発生リポソーム漏出アッセイは、ＧＳＤＭＤおよびカスパーゼ−１１と共にインキュベートしたＴｂ３＋搭載リポソームからのＴｂ３＋の漏出を検出する（参照文献７および９を参照されたい）。図１を参照されたい。Ｔｂ３＋が緩衝液Ｃ中のジピコリン酸（ＤＰＡ）に結合したとき、リポソーム漏出を蛍光の増加によって検出した。ヒトＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）をＰＣ／ＰＥ／ＣＬリポソーム（５０μＭのリポソーム脂質）を含有するウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３８２０）に分配し、各ウェルにカスパーゼ−１１（０．１５μＭ）を添加する前に試験化合物と共に１時間インキュベートした。ウェルの蛍光強度を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用してカスパーゼ−１１を添加した１時間後２７６ｎｍの励起で５４５ｎｍで測定した。最終阻害パーセントを［（蛍光試験化合物−蛍光陰性対照）／（蛍光陽性対照−蛍光陰性対照）］×１００として計算し、ここでは、試験化合物を含まないＧＳＤＭＤを有するウェルを陽性対照として使用し、カスパーゼ−１１を含まないウェルを陰性対照として使用した。試験化合物のＩＣ５０を、０．００８〜５０μＭの用量範囲の濃度反応実験において決定した。
【０１７６】
タンパク質発現および精製：ＮｄｅＩおよびＸｈｏＩ制限部位を使用して、タバコエッチングウイルス（ＴＥＶ）切断可能なＮ末端Ｈｉｓ６−ＭＢＰタグを用いて、完全長ヒトＧＳＤＭＤ配列をｐＤＢ．Ｈｉｓ．ＭＢＰベクターにクローニングした。ヒトＧＳＤＭＤ−３ＣおよびマウスＧＳＤＭＡ３−３Ｃ変異体を、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって構築した。完全長ＧＳＤＭＤ、ＧＳＤＭＤ−３Ｃ、ＧＳＤＭＡ３、およびＧＳＤＭＡ３−３Ｃの発現のために、示されるプラスミドを保有するＥ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を、ＯＤ６００が０．８に達したときに０．５ｍＭのイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で誘導した後、５０μｇ  ｍｌ−１のカナマイシンを補充したＬＢ培地中で１８℃で一晩増殖させた。細胞を、ｐＨ８．０で２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、および５ｍＭの２ＭＥを含有する溶解緩衝液中で超音波処置した。溶解物を４℃にて４０，０００×ｇで１時間の遠心分離によって明らかになった。標的タンパク質を含有する上清をＮｉ−ＮＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、樹脂−上清混合物をカラムに注ぎ、樹脂を溶解緩衝液で洗浄した。１００ｍＭのイミダゾールを補充した溶解緩衝液を使用してタンパク質を溶出した。Ｈｉｓ６−ＭＢＰタグを、ＴＥＶプロテアーゼ消化によって１６℃で一晩除去した。切断されたタンパク質を、ＨｉＴｒａｐ  Ｑイオン交換およびＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ゲル濾過カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して精製した。
【０１７７】
カスパーゼ−１１配列を、ＥｃｏＲＩおよびＸｈｏＩ制限部位を使用して、ＴＥＶ切断可能なＮ末端Ｈｉｓ６−タグを有するｐＦａｓｔＢａｃ−ＨＴａベクターにクローニングした。バキュロウイルスをＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して調製し、タンパク質を製造業者の指示に従ってＳｆ９細胞中で発現させた。Ｈｉｓ−カスパーゼ−１１バキュロウイルス（１０ｍｌ）を使用して、１ＬのＳｆ９細胞に感染させた。細胞を感染の４８時間後に採取し、Ｈｉｓ６−ＭＢＰ−ＧＳＤＭＤと同じプロトコルに従ってＨｉｓ６−カスパーゼ−１１を精製した。Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂由来の溶出液を、後続のアッセイのために採取した。
【０１７８】
リポソーム調製：ＰＣ（１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、クロロホルム中２５ｍｇ／ｍＬ；８０μＬ）、ＰＥ（１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、クロロホルム中２５ｍｇ／ｍＬ；１２８μＬ）およびＣＬ（１’，３’−ビス［１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ］−ｓｎ−グリセロール（ナトリウム塩）、クロロホルム中２５ｍｇ／ｍＬ；６４μＬ）を混合し、溶媒をＮ２ガスの流れ下で蒸発させた。脂質混合物を、１ｍＬの緩衝液Ａ（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および１５ｍＭのＴｂＣｌ３）中に３分間懸濁させた。懸濁液を１００ｎｍのＷｈａｔｍａｎ（登録商標）Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ（商標）トラックエッチドメンブレンを通して３０回プッシュし、均質なリポソームを得た。濾過した懸濁液を、緩衝液Ｂ（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ）中のサイズ排除カラム（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６、１０／３００ＧＬ）によって精製し、ＴｂＣｌ３を外側リポソームから除去した。ボイド画分をプールして、ＰＣ／ＰＥ／ＣＬリポソーム（１．６ｍＭ）のストックを作製した。リポソームを、高スループットスクリーニングで使用するために、緩衝液Ｃ（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および５０μＭのＤＰＡ）で５０μＭに希釈する。
【０１７９】
蛍光タンパク質標識およびマイクロスケール熱泳動結合アッセイ：Ｈｉｓ６−ＭＢＰ−ＧＳＤＭＤを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓタンパク質標識キットを使用して、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８で標識した。ＧＳＤＭＤへの阻害剤の結合を、マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）を使用して評価した。リガンド（４９ｎＭ〜１５０μＭ）を、アッセイ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０）中で、精製したＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８標識タンパク質（８０ｎＭ）と共に３０分間インキュベートした。試料をＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ  Ｍｏｎｏｌｉｔｈ  ＮＴ．１１５ガラス毛細管に充填し、ＭＳＴを２０％のＬＥＤ出力および４０％のＭＳＴ出力を使用して実施した。質量作用方程式およびＮａｎｏＴｅｍｐｅｒソフトウェアを使用して、Ｋｄ値を計算した。
【０１８０】
カスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１阻害アッセイ：カスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１活性に関する蛍光発生アッセイは、カスパーゼ基質Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣからの７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）の放出に基づく。化合物（８ｎＭ〜５０μＭ）を、Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ（４０μＭ）を添加する前に、３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３８２０）中のアッセイ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ）中で３０分間、０．５Ｕのカスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１と共にインキュベートして反応を開始させた。３５０／４６０ｎｍの励起／発光波長を有するＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）中で反応を監視した。各反応の蛍光強度を２分間毎に２時間記録した。
【０１８１】
細胞生存率アッセイ。９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６１０）中でウェル当たり４０００個の細胞の密度で播種したＴＨＰ−１細胞を、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳでプライミングする前に、５０ｎＭのＰＭＡに３６時間曝露することによって分化させた。初期活性化ＴＨＰ−１細胞を各試験化合物で１時間前処置した後、対照として２０μＭのニゲリシンまたは培地を添加した。生存細胞の数を、１．５時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイによって決定した。最終細胞生存率パーセントを、式［（発光試験化合物−発光陰性対照）／（発光陽性対照−発光陰性対照）］×１００を使用して計算し、ここでは、ＬＰＳのみを有するウェルを陽性対照として使用し、ＬＰＳおよびニゲリシンで処置したウェルを陰性対照として使用した。細胞生存率アッセイにおける各試験化合物のＩＣ５０を、０．３９〜５０μＭの用量範囲の濃度反応実験によって決定した。
【０１８２】
質量分析および試料調製。ゲルバンドを１ｍｍサイズの切片に切断し、別々の１．５ｍＬポリプロピレンチューブに配置した。５０ｍＭの重炭酸アンモニウム緩衝液中の５０％アセトニトリル１００μＬを各チューブに添加し、次いで試料を室温で２０分間インキュベートした。必要に応じて、この工程を繰り返してゲルを脱染した。次いで、ゲルスライスを、室温で暗所にて４５分間、５５ｍＭのヨードアセトアミド（５０ｍＭの重炭酸アンモニウム中）と共にインキュベートした後、ゲルを５０ｍＭの重炭酸アンモニウム、水、およびアセトニトリルで順次洗浄した。次いで、試料をＳｐｅｅｄｖａｃ中で２０分間乾燥させた。トリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）（２５ｍＭの重炭酸アンモニウム中１０ｎｇ／μＬ、ｐＨ８．０）を各試料チューブに添加してゲルを覆い、次いで試料を３７℃で６時間または一晩インキュベートした。
【０１８３】
消化後、試料を０．１％のギ酸（ＦＡ）で酸性化し、３μｌのトリプシンペプチド溶液を注入した。ナノ−ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを、４０ウェル標準トレイを有するＤｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔ  ３０００ナノＨＰＬＣおよび自動サンプラーと結合したＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｆｕｓｉｏｎシステム上で実行した。試料をトラップカラム（３００μＭの１．ｄ．×５ｍｍ、Ｃ１８  ＰｅｐＭａｐ  １００）に注入し、次いでＣ１８逆相ナノＬＣカラム（Ａｃｃｌａｉｍ  ＰｅｐＭａｐ  １００  ７５μｍ×２５ｃｍ）に注入し、５０℃に加熱した。移動相Ａ（９９．９％の水、０．１％のＦＡ）およびＢ（９９．９％アセトニトリル、０．１％のＦＡ）を使用して、６０分のＬＣ勾配で流速を４００ｎＬ／分に設定した。溶出したペプチドを、荷電したエミッタ先端部（ＰｉｃｏＴｉｐ  Ｅｍｉｔｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ、１０＋／−１μｍ）を通して質量分析計にスプレーした。パラメータは、先端部電圧、＋２．２ｋＶ、前駆体イオンのＭＳ取得のためのフーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）モード（分解能１２０，０００）、高エネルギー衝突解離（ＨＣＤ）を介した後続のＭＳ／ＭＳのためのイオントラップ質量分析（ＩＴＭＳ）モード（３秒）であった。
【０１８４】
タンパク質同定および修飾分析にＰｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ  １．４を使用した。ＵｎｉＰｏｒｔヒトデータベースを用いて生データを解析した。他のパラメータとしては、以下が挙げられる：トリプシンとして酵素を選択すること、切断最大ミス数＝２、動的修飾は、システイン上のカルバミドメチル（対照）、ジエチルジチオカルバメート（Ｃ−２３由来）およびＢａｙ１１−７０８２であること、酸化メチオニン、脱アミノアスパラギンおよびグルタミン；１０ｐｐｍに設定された前駆体耐性、０．６Ｄａに設定されたＭＳ／ＭＳ断片耐性、ならびに＋２〜＋４荷電ペプチドが考慮されること。有意な一致について、ペプチド偽発見率（ＦＤＲ）を１％未満に設定した。
【０１８５】
細胞株および処置：ＴＨＰ−１細胞およびＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣから得られた）を、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンＧ、１００μｇ／ｍｌの硫酸ストレプトマイシン、６ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．６ｍＭのＬ−グルタミン、および５０μＭの２ＭＥを補充した１０％の熱不活性化ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ中で増殖させた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのｉＢＭＤＭ細胞を、Ｊ．Ｋａｇａｎ（ボストン小児病院）から親切に提供され、同じ補充成分を用いてＤＭＥＭ中で培養した。細胞は、マイコプラズマ汚染がないことを確認した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の一過性トランスフェクションを、製造業者の指示に従ってリポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。ｉＢＭＤＭ細胞をＡｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒキット（ＶＰＡ−１００９）を使用してヌクレオフェクションによってトランスフェクトした。一般に、ＴＨＰ−１細胞を、まず５０ｎＭのＰＭＡと３６時間インキュベートすることによって分化させ、次にＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）で４時間初期活性化後、ニゲリシン（２０μＭ）で処置した。ＩκＢαリン酸化および分解ならびにＩＬ−１β誘導を調べるために、ＰＭＡ分化ＴＨＰ−１細胞をそれぞれＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）で０．５時間、１時間、および４時間刺激した。非カノニカルインフラマソーム活性化のために、１００万個のｉＢＭＤＭ細胞を１μｇのウルトラＬＰＳで電気穿孔した。
【０１８６】
細胞傷害性および細胞生存率アッセイ：細胞死および細胞生存率を、製造業者の指示に従って、それぞれ、ＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して乳酸デヒドロゲナーゼ放出アッセイによって、およびＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＡＴＰレベルを測定することによって判定した。発光および吸光度をＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダー上で測定した。
【０１８７】
ナノディスクおよびネガティブ染色電子顕微鏡における細孔再構成：膜骨格タンパク質ＮＷ５０のコード配列をｐＥＴ−２８ａベクターにクローニングし、タンパク質をＥ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）中で発現させ、再折り畳み手順により精製し、前述のプロトコルに従ってソルターゼで共有結合的に環化した。ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびホスファチジルコリン（ＰＣ）（モル比３：７）を含有する脂質混合物を６０ｍＭのコール酸ナトリウムに可溶化し、氷上で環化ＮＷ５０と共に１時間インキュベートしてナノディスクを組み立てた。次いで、バイオビーズＳＭ−２（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）と共に４℃で一晩インキュベートすることによってコール酸ナトリウムを除去した。次いで、０．２２μｍのフィルターを使用してバイオビーズを除去し、組み立てられたナノディスクを、緩衝液Ｄ（ｐＨ８．０で５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ）で平衡化したＳｕｐｅｒｏｓｅ６  １０／３００ゲル濾過カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してさらに精製して、過剰な脂質を除去した。ナノディスク上にＧＳＤＭＤ細孔を形成するために、精製したヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃを、ナノディスクの存在下で３Ｃプロテアーゼと共に氷上で６時間インキュベートした。緩衝液Ｄで平衡化したＳｕｐｅｒｏｓｅ６カラム上で細孔をさらに精製した。Ｃ−２３の効果を評価するために、ヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼを氷上で３０分間Ｃ−２３と共に（モル比１：１）インキュベートした後、ナノディスクに添加する（前処置）か、または氷上で３０分間Ｃ−２３を既に組み立てられた細孔に添加する（後処置）かのいずれかを行った。ネガティブ染色電子顕微鏡の場合、５μｌの試料をグロー放電炭素被覆銅グリッド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に配置し、緩衝液Ａで２回洗浄し、１％のギ酸ウラニルで１分間染色し、空気乾燥させた。グリッドをＴｅｃｎａｉ  Ｇ２  Ｓｐｉｒｉｔ  ＢｉｏＴＷＩＮ電子顕微鏡上で撮像し、ＡＭＴ  ２ｋ  ＣＣＤカメラ（ハーバード大学医学大学院の電子顕微鏡施設）で記録した。
【０１８８】
免疫ブロット分析：完全プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）およびＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．１％のＳＤＳ、０．５％のデオキシコール酸塩）を使用して細胞抽出物を調製した。試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、次いで分解したタンパク質をＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に移した。免疫ブロットを指示された抗体でプローブし、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ化学発光ＥＣＬキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して可視化した。
【０１８９】
細胞におけるカスパーゼ−１活性アッセイ：カスパーゼ−１活性化を測定するために、ＴＨＰ−１細胞を９６ウェルプレートに播種し、ＰＭＡで分化させた。指示された処置の後、細胞を蛍光活性カスパーゼ−１基質ＦＡＭ−ＹＶＡＤ−ＦＭＫ（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共にインキュベートした。試料をＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダー上で読み取った。
【０１９０】
サイトカインの測定：培養上清またはマウス血清中のＩＬ−１βの濃度を、製造業者の指示に従ってＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。
【０１９１】
免疫染色および共焦点顕微鏡法：カバースリップ上で増殖させた細胞を、ＰＢＳ中の４％のパラホルムアルデヒドで１５分間固定し、ＰＢＳ中の０．１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００中で５分間透過させ、５％のＢＳＡを使用して１時間ブロックした。次いで、細胞を、指示された一次抗体で染色した後、蛍光コンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）でインキュベーションした。核をＤＡＰＩ（４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で対比染色した。Ａｑｕａ−Ｐｏｌｙ／Ｍｏｕｎｔ（Ｄａｋｏ）を使用してスライドを取り付けた。６３倍の水浸対物レンズを備えたレーザー走査共焦点顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｆｌｕｏｖｉｅｗ  ＦＶ１０００  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ）およびＯｌｙｍｐｕｓ  Ｆｌｕｏｖｉｅｗソフトウェア（Ｏｌｙｍｐｕｓ）を用いて画像を取り込んだ。全ての共焦点画像は、３つの独立した実験を代表するものである。
【０１９２】
統計：スチューデントのｔ検定を用いて、２つの独立した治療の統計分析を行った。マンテル・コックスログランク検定を使用して、マウスの生存曲線および統計を分析した。
【０１９３】
実施例１−試験化合物によるＧＳＤＭＤ細孔形成の阻害
Ｃ−２３は、アルコール依存症の治療に使用される薬物であるジスルフィラムとして知られている対称性分子である（参考文献１２を参照されたい）。
【化４】
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【０１９４】
試験化合物のＩＣ５０値およびＧＳＤＭＤ結合結果（マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）によって評価）を表１に示す。試験化合物の化学構造を図１１に示す。
【表４】
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【０１９５】
試験化合物を、マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）によってＧＳＤＭＤ結合について評価した。図３は、Ａｌｅｘａ  ４８８標識Ｈｉｓ−ＭＢＰ−ＧＳＤＭＤ  （８０ｎＭ）とＣ−２２、Ｃ−２３またはＣ−２４との結合のＭＳＴ測定を示す。
【０１９６】
試験化合物がピロトーシスを阻害するかどうかを評価するために、試験化合物を、ＬＰＳ電気穿孔によってニゲリシンまたは非カノニカルインフラマソームでカノニカルインフラマソームを活性化する前に、ＰＭＡ分化およびＬＰＳ初期活性化ヒトＴＨＰ−１細胞またはマウス不死化骨髄由来マクロファージ（ｉＢＭＤＭ）に添加した。次の段落で論議するように、Ｃ−２３は、カノニカルおよび非カノニカルインフラマソーム依存性ピロトーシスについて、それぞれ７．６７±０．２９μＭおよび１０．３３±０．５０μＭのＩＣ５０値でピロトーシスをブロックし、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）でトランスフェクトしたマウスｉＢＭＤＭにおけるＡＩＭ２インフラマソームによって誘発される細胞死を減じた（図１０を参照）。ジスルフィラムはまた、汎カスパーゼ阻害剤ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋに匹敵する効力で、ニゲリシンまたはＬＰＳトランスフェクション誘導性ＩＬ−１β分泌を阻害した。
【０１９７】
実験結果：リポソーム漏出アッセイにおける化合物ジスルフィラム（Ｃ−２３）の反応曲線を図２に示す。図４、６、および８において、ＰＭＡ分化ＬＰＳ初期活性化ヒトＴＨＰ−１を、指示された濃度の各化合物で１時間前処置してから、ニゲリシンまたは培地を添加した。生存細胞の数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイ（図４および６）によって決定し、培養上清中のＩＬ−１βを２時間後にＥＬＩＳＡによって評価した（図８）。図５、７、および９において、マウスｉＢＭＤＭを各試験化合物で１時間前処置した後、ＰＢＳまたはＬＰＳで電気穿孔した。生存細胞の数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイ（図５および７）によって決定し、培養上清中のＩＬ−１βを２．５時間後にＥＬＩＳＡによって評価した（図９）。図８および９において、４０μＭ濃度の試験化合物を添加した。図１０において、マウスｉＢＭＤＭを、ＰＢＳまたはｐｏｌｙ（ｄＡ：ｄＴ）でトランスフェクションする前に、３０μＭのＣ−２３で１時間前処置し、または前処置せず、４時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイで細胞生存率を分析した。グラフは、平均値±ｓ．ｄ．を示し、データは、３つの独立した実験を代表するものである。＊＊Ｐ＜０．０１である。
【０１９８】
Ｃ−２３が細孔形成を阻害することを確認するために、酸性脂質であるホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルコリンで構築された共有結合的に環化脂質ナノディスク上でヒトＧＳＤＭＤ−ＮＴ細孔を再構成した。完全長ＧＳＤＭＤを操作して、前述のようにカスパーゼ切断部位をライノウイルス３Ｃプロテアーゼ切断部位（ＧＳＤＭＤ−３Ｃ）に置き換えた。操作されたＧＳＤＭＤ−３Ｃの３Ｃプロテアーゼ切断は、活性ＮＴ断片を遊離する。ネガティブ染色電子顕微鏡（ＥＭ）によって可視であった組み立てられたナノディスクが再構成した細孔にＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼの添加。ナノディスクに添加する前にＣ−２３で前処置した場合、ＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼによる細孔形成は、完全にブロックされた。しかしながら、細孔形成後のＣ−２３添加は、既に組み立てられた細孔を破壊しなかった。したがって、ジスルフィラムは、細孔形成を阻害するが、既に形成された細孔は分解しない。
【０１９９】
Ｃ−２２、−２３、および−２４がピロトーシスを阻害するかどうかを評価するために、これらの化合物を、ニゲリシンでカノニカルＮＬＲＰ３インフラマソームを活性化する前に、ＰＭＡ分化およびＬＰＳ初期活性化ヒトＴＨＰ−１細胞に、またはＬＰＳ電気穿孔によって非カノニカルインフラマソームを活性化する前に、マウス不死化骨髄由来マクロファージ（ｉＢＭＤＭ）に添加した（図を参照されたい）。Ｃ−２３のみが、カノニカルヒトおよび非カノニカルマウスの炎症依存性ピロトーシスについて、それぞれ７．７±０．３μＭおよび１０．３±０．５μＭの同様のＩＣ５０値で、ピロトーシスをブロックした。また、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）でトランスフェクトしたマウスｉＢＭＤＭにおけるＡＩＭ２インフラマソームによって誘発される用量依存的様式で細胞死を減じ、インフラマソーム経路の共通の下流部分のその阻害を支援した。阻害は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  ＡＴＰ発光によって評価される細胞生存率、および膜不透過性染料ＳＹＴＯＸ  Ｇｒｅｅｎの取り込みによって評価される膜透過性によって示された。さらに、ジスルフィラムは、汎カスパーゼ阻害剤ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋに匹敵する効力で、ＴＨＰ−１におけるニゲリシン誘導性ＩＬ−１β分泌およびｉＢＭＤＭ細胞におけるＬＰＳトランスフェクション誘導性ＩＬ−１β分泌を阻害した。対照的に、ジスルフィラムは、ネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）またはネクロスタチン−１（Ｎｅｃ）のいずれかによってブロックされたＴＮＦα、ＳＭＡＣ模倣物、およびｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋによる処置によって、ＨＴ−２９細胞において誘導されるネクロトーシスには影響を及ぼさなかった。これらのデータは、ジスルフィラムがカノニカルおよび非カノニカルインフラマソームによって誘発されるピロトーシスをヒトおよびマウス細胞の両方において阻害することを示すが、ネクロトーシスを阻害しないことを示している。
【０２００】
実施例２−ジスルフィラムは、ＬＰＳ誘導性敗血症から保護する
疫学的研究は、アルコール依存症のためにジスルフィラムを服用する個人が癌で死亡する可能性が低いことを示したため、ジスルフィラムは抗癌剤として検討されている（参考文献２４を参照されたい）。細胞において、ジスルフィラムはジエチルジチオカルバメート（ＤＴＣ）に急速に代謝される（参考文献２５および２６を参照されたい）。
【化５】
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ＤＴＣのインビボでの抗癌活性は、おそらく、ＤＴＣチオールの増強された求電子性のために、銅との錯化によって大幅に増強される（例えば、参考文献２４を参照されたい）。リポソーム漏出アッセイでは、グルコン酸銅（Ｃｕ２＋）がジスルフィラムまたはＤＴＣの阻害をわずかに増加させるにすぎないことが見出された。これは、関与するＧＳＤＭＤのＣｙｓ残基の高い反応性に起因する可能性が高い（以下の実施例を参照されたい）。しかしながら、Ｃｕ２＋は、ジスルフィラムまたはＤＴＣのいずれかが、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞をピロトーシスから保護する能力を強く促進した（図１３）。Ｃｕ２＋を伴うと、ピロトーシスを阻害するためのＣ−２３のＩＣ５０は２４倍減少して、０．４１±０．０２μＭとなり、これはリポソーム漏出を防止するためのその効力と同様であった。ＤＴＣは、Ｃｕ２＋の存在下で細胞内でＣ−２３とほぼ同等の活性となった。
【０２０１】
Ｃ−２３が細胞内でのピロトーシスおよびＩＬ−１β放出を阻害したため、ＬＰＳ誘導性敗血症からＣ５７ＢＬ／６マウスを保護するその能力も試験した。ＬＰＳでチャレンジする前に、マウスをビヒクルまたはジスルフィラムで腹腔内処置した。低濃度のＬＰＳ（１５ｍｇ／ｋｇ）が９６時間後に８匹の対照マウスのうち３匹を死滅させたのに対し、ジスルフィラム処置マウスは全て生存した（Ｐ＜０．０５）（図１４）。全てのマウスが生存していた場合、ＬＰＳチャレンジの１２時間後に血清ＩＬ−１β濃度を強く低下させた（ジスルフィラム−前処置マウスにおいて２８１±１４９ｎｇ／ｍＬ、対照マウスにおいて９１０±１４０ｎｇ／ｍＬ（Ｐ＜０．０００１））（図１５）。中間濃度（２５ｍｇ／ｋｇ）でのＬＰＳチャレンジ後、全ての対照マウスは７２時間以内に死亡したが、ジスルフィラム処置マウスの８匹のうちの５匹は生存した（Ｐ＜０．０１）（図１６）。最も高いＬＰＳチャレンジ（５０ｍｇ／ｋｇ）において、全ての対照マウスは１日以内に死亡したが、ジスルフィラム処置によって死亡が著しく遅れ、８匹のマウスのうち１匹が生存した（Ｐ＜０．０００１）（図１７）。処置をＬＰＳチャレンジ後まで遅らせることができるかどうか、および銅を添加することで保護を向上させることができるかどうかを判定するために、マウスを２５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳで腹腔内チャレンジし、直ちにおよび２４時間後にグルコン酸銅を含んで、または含まずにＣ−２３を投与した。ＬＰＳ後処置は依然として生存率を改善した（銅なしではＰ＝０．０４１、銅ありではＰ＝０．０２４）。全ての対照マウスおよび銅なしで処置したマウスは死亡したが、銅錯化ジスルフィラムを与えられた８匹のマウスのうち２匹は生存した（図１８）。したがって、ＬＰＳの前または後に与えられるジスルフィラムは、敗血症性死からマウスを部分的に保護し、ＩＬ−１β分泌を減少させた。
【０２０２】
実験結果：図１２は、Ｃｕ（ＩＩ）の存在下または非存在下でのＣ−２３またはその代謝産物ＤＴＣによるリポソーム漏出の阻害の用量反応曲線を示す。図１３において、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１を、Ｃｕ（ＩＩ）の存在下または非存在下でＣ−２３またはＤＴＣで１時間前処置した後、ニゲリシンまたは培地を２時間添加した。細胞死を、ＣｙｔｏＴｏｘ９６アッセイによって判定した。図１４〜１７において、マウスを、腹腔内ＬＰＳチャレンジの２４時間および４時間前に腹腔内注射によりＣ−２３（５０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（対照）で前処置し（図１４および１５：１５ｍｇ／ｋｇ、図１６：２５ｍｇ／ｋｇ、図１７：５０ｍｇ／ｋｇ）、生存を追跡した。ログランク試験を用いて統計分析を行った（図１４、１６、１７では、では、マウス／群）。図１５において、血清ＩＬ−１βを、上記のようにＣ−２３で前処置し、１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳでチャレンジしたマウス（ｎ＝５／群）においてＥＬＩＳＡによって測定した。ＬＰＳチャレンジの１２時間後に血清を得た。平均値±ｓ．ｄ．が示されている。図１８において、腹腔内ＬＰＳチャレンジ（２５ｍｇ／ｋｇ）の０および１２時間後に、マウスを腹腔内注射によってＣ−２３（５０ｍｇ／ｋｇ）、Ｃ−２３（５０ｍｇ／ｋｇ）＋グルコン酸銅（０．１５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（対照）で処置した。ログランク試験を用いて統計分析を行った（８匹のマウス／群）。
【０２０３】
細胞において、Ｃｕ（ＩＩ）は、おそらくＣｕ（ＩＩ）が主要な細胞代謝産物ＤＴＣの活性を促進したため、ジスルフィラムまたはＤＴＣのいずれかがＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞をピロトーシスから保護する能力を強く促進した。Ｃｕ（ＩＩ）を伴うと、ピロトーシスを阻害するためのジスルフィラムのＩＣ５０は２４倍減少して、０．４１±０．０２μＭとなり、これはリポソーム漏出を防止するためのその効力と同様であった。ＤＴＣは、Ｃｕ（ＩＩ）の存在下で細胞内でジスルフィラムとほぼ同等の活性となった。リポソーム中のＧＳＤＭＤ細孔形成および細胞内のピロトーシスを阻害する際のジスルフィラム（その主要な細胞代謝産物が安定化されるとき）の類似の効力は、ジスルフィラムの作用機序の主要標的としてＧＳＤＭＤを支援する。
【０２０４】
実施例３−ジスルフィラムは、ＧＳＤＭＤ  Ｃｙｓ１９１を共有結合的に修飾する
ジスルフィラムは、共有結合修飾によって反応性Ｃｙｓ残基を不活性化することが示されている（参考文献２７を参照されたい）。ジスルフィラムによるＧＳＤＭＤ阻害の機構を精査するために、ナノ液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ナノ−ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を使用して、ジスルフィラム処置されたヒトＧＳＤＭＤを分析した。トリプシン断片は、対称性ジスルフィラム分子の半分がチオールに結合しているＣｙｓ１９１のジチオジエチルカルバモイル付加物を示した（図２０、２１、２７、および２８）。実際、Ｃｙｓ１９１は、マウスＧＳＤＭＤにおける対応するＣｙｓ１９２のＡｌａ変異によってオリゴマー化がブロックされたため、細胞におけるＧＳＤＭＤ細孔形成に必要である（参考文献８を参照されたい）。このＣｙｓ残基は、ＧＳＤＭＤで保存されているが、他のＧＳＤＭファミリーメンバーでは保存されておらず、マウスＧＳＤＭＡ３構造に基づいて生成された完全長自己阻害構造モデルおよびＮ末端細孔形成モデルの両方でアクセス可能である（参考文献７および１４）（図２２および２９）。ＧＳＤＭＡ３のＬｅｕ１８３に対応して、Ｃｙｓ１９１は、細孔を形成するβバレルの重要な要素であるβ７−β８ヘアピン内のβ８鎖の開始部において膜スパン領域の遠位先端に位置する（参考文献１４）。ＰＲＯＰＫＡを使用したＣｙｓ反応性の分析（参照２８）は、Ｃｙｓ１９１がＧＳＤＭＤ中の全てのＣｙｓ残基の中で最も反応性であることを示唆している。その高い反応性と一致して、時間経過分析は、ジスルフィラムがインキュベーションの２分以内にリポソーム漏出を阻害したことを示した（図３０）。ジスルフィラムがＣｙｓ１９１に作用することを確認するために、対照としてＣｙｓ１９１およびＣｙｓ３８のＡｌａ変異を発生させた。リポソーム漏出アッセイにおいて、ＷＴおよびＣ３８ＡについてのジスルフィラムＩＣ５０値は共に約０．３μＭであったが、Ｃ１９１ＡについてのＩＣ５０は約８倍であった（図２３）。ジスルフィラムはまた、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）とともにインキュベートし、ＮＡＣは、Ｃｙｓ反応性薬物を不活性化することができる反応性Ｃｙｓを含有し、ジスルフィラムがニゲリシン媒介性ピロトーシスからＴＨＰ−１細胞を保護するかどうかを評価した。予想通り、ＮＡＣはジスルフィラムの活性を排除した（図２４）。これらのデータをまとめると、ジスルフィラムがＣｙｓ１９１を選択的かつ共有結合的に修飾することによって、ＧＳＤＭＤ細孔形成を阻害することが示唆される。
【０２０５】
実験結果：図２０および２１は、カルバミドメチルによってＣｙｓ１９１上で修飾されたＣｙｓ１９１含有ヒトＧＳＤＭＤペプチドＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫ（ａａ１８４〜１０３；２０５７．００Ｄａ）のＭＳ／ＭＳスペクトル（５７．０２１４Ｄａの増加）［ＬＣ保持時間、２２．８５分；トリプレット荷電前駆体イオンｍ／ｚ７０５．６８２７（質量：２１１４．０４８１Ｄａ；デルタＭ  ２．２７ｐｐｍ）が観察された］（ａ）、またはＣ−２３のジエチルジチオカルバメート部分によってＣｙｓ１９１上で修飾されたＣ−２３（ジスルフィラム）とのＧＳＤＭＤインキュベーション後の対応するＧＳＤＭＤペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトル（１４７．０２５５Ｄａの増加）を示す。［ＬＣ保持時間．２８．９３分；トリプレット荷電前駆体イオンｍ／ｚ７３５．６８０２（質量：２２０４．０４０６Ｄａ；デルタＭ０．５３ｐｐｍ）が観察された。］（ｂ）を示す。図２２は、化合物Ｃ−２３によって主食されたＣｙｓ１９１の位置を示している、ＧＳＤＭＡ３の対応する構造に基づく、その自己阻害型における完全長ヒトＧＳＤＭＤのモデル、およびＧＳＤＭＤＮ末端断片（ＧＳＤＭＤ−ＮＴ）の細孔形態のモデル（参考文献７および１４）を示す。ＧＳＤＭＤ−ＮＴは試案で、ＧＳＤＭＤ−ＣＴは灰色で示す。図２３は、野生型、Ｃ３８ＡまたはＣ１９１Ａ  ＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）＋カスパーゼ−１１（０．１５μＭ）によって誘導されたリポソーム漏出のＣ−２３の阻害の用量反応曲線を示す。図２４は、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ、５００μＭ）または培地で１時間Ｃ−２３プレインキュベーションした後のＬＰＳ＋ニゲリシン処置ＴＨＰ−１細胞のピロトーシスのＣ−２３阻害を示す。５〜４０μＭの範囲のＣ−２３の２倍希釈物を使用した。グラフは、平均値±ｓ．ｄ．を示し、データは、３つの独立した実験を代表するものである。＊＊Ｐ＜０．０１である。図２５および２６は、ヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃ（０．３μＭ）＋３Ｃプロテアーゼ（０．１５μＭ）（図２５）またはマウスＧＳＤＭＡ３−３Ｃ（０．３μＭ）＋３Ｃプロテアーゼ（０．１５μＭ）（図２６）によって誘導されたリポソーム漏出における化合物Ｃ−２３の用量反応曲線を示す。
【０２０６】
図２７および２８は、ヒトＧＳＤＭＤ中のＣｙｓ１９１を含有するペプチドについてのＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。図２７は、カルバミドメチルによってシステイン上で修飾されたペプチドＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫのＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。タンパク質カバレッジは、７３％である。図２８は、Ｃ−２３によってシステイン上で修飾されたペプチドＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫのＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。タンパク質カバレッジは、７２％である。
【０２０７】
図２９および３０は、ジスルフィラムがＧＳＤＭＤのＣｙｓ１９１を共有結合的に修飾することを示す。図２９において、マウスＧＳＤＭＡ３、ヒトＧＳＤＭＡ（ｈＧＳＤＭＡ）、マウスＧＳＤＭＤ（ｍＧＳＤＭＤ）およびヒトＧＳＤＭＤ（ｈＧＳＤＭＤ）の配列アライメントは、Ｃｙｓ残基を示す。図３０において、ＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）を、リポソーム（５０μＭ）中のカスパーゼ−１１（０．１５μＭ）を添加する前に、指示された濃度のＣ−２３（０〜５０μＭ）と共に異なる時間（２〜９０分）プレインキュベートした。
【０２０８】
ジスルフィラムがＣｙｓ１９１に作用することを確認するために、ジスルフィラムＩＣ５０値を、ＷＴ、Ｃ３８Ａ対照、またはＣ１９１ＡヒトＧＳＤＭＤ＋カスパーゼ−１１で処置したリポソームにおける細孔形成について比較した。Ｃ１９１Ａ  ＧＳＤＭＤに作用するジスルフィラムのＩＣ５０は、ＷＴ  ＧＳＤＭＤの約８倍であったが、Ｃ３８Ａ上の活性はＷＴ  ＧＳＤＭＤと同様であり、ジスルフィラム活性に対するＣｙｓ１９１の重要性を確認した。Ｃｙｓ１９１変異体の残留阻害は、変異体ＧＳＤＭＤ内の他のＣｙｓ残基のジスルフィラム修飾に起因し得る。細孔形成におけるＣｙｓ１９１の重要性を確認するために、カスパーゼ−１１の有無にかかわらず、完全長ヒトＷＴまたはＣ１９１Ｓ変異体ＧＳＤＭＤを異所的に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞中のＬＤＨ放出によって細胞死を測定した。ＷＴまたはＣ１９１Ｓ  ＧＳＤＭＤ単独では細胞生存を損なうことはなかったが、ＷＴ  ＧＳＤＭＤおよびカスパーゼ−１１は共に実質的な細胞死を引き起こし、Ｃ１９１Ｓ  ＧＳＤＭＤおよびカスパーゼ−１１を減少させた。同様に、マウスＧＳＤＭＤ−ＮＴ（ｍＧＳＤＭＤ−ＮＴ）の異所性発現によって引き起こされる細胞死は、類似のＣ１９２Ｓ変異体を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞において有意に減少したが、Ｃ３９Ａ  ｍＧＳＤＭＤ−ＮＴを発現する細胞においては適度に減少したに過ぎなかった。これらの結果は、以前の結果と一致する、ヒトおよびマウスにおけるＧＳＤＭＤ−ＮＴ細孔形成におけるＣｙｓ１９１およびＣｙｓ１９２の役割をそれぞれ確認している。
【０２０９】
ジスルフィラムがＣｙｓ１９１に作用することをさらに確認するために、カスパーゼ−１１およびＷＴまたはＣ１９１Ｓ  ＧＳＤＭＤを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＬＤＨ放出のジスルフィラム阻害を評価した。予想通り、ＷＴ  ＧＳＤＭＤ誘導細胞死は、試験した最低濃度（１０μＭ）から始まる用量依存的様態でジスルフィラムによって強く阻害されたが、カスパーゼ−１１およびＣ１９１Ｓ  ＧＳＤＭＤの発現によって引き起こされる減少した細胞死は、ジスルフィラムを４倍多く添加したときにのみ阻害された。これらのデータをまとめると、ジスルフィラムがＣｙｓ１９１を共有結合的に修飾することによって、ＧＳＤＭＤ細孔形成を阻害することが示される。加えて、データは、ジスルフィラムがカスパーゼ−１１を強く阻害した場合、カスパーゼ−１１およびＣ１９１Ｓ  ＧＳＤＭＤを発現する細胞の死からより良い保護を提供したであろうため、ジスルフィラムがＧＳＤＭＤ−ＮＴ細孔形成に対するその効果を通じて、主に細胞死を阻害することを示唆している。
【０２１０】
実施例４−ジスルフィラム（Ｃ−２３）はカスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１を阻害する
ジスルフィラムは、タンパク質分解を担う触媒Ｃｙｓに結合することによってカスパーゼを阻害することが報告されている（参照文献２９を参照されたい）。したがって、ジスルフィラムはカスパーゼおよびＧＳＤＭＤの両方を阻害する可能性が高い。基質Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣからの７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）の放出を測定する蛍光発光カスパーゼ活性アッセイを使用して、ジスルフィラムが、それぞれ０．１５±０．０４μＭおよび０．７３±０．０７μＭのＩＣ５０でカスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１を実際に阻害したことが見出された（図３１〜３８）。Ｃｕ（ＩＩ）を添加しても、インビトロでジスルフィラムカスパーゼ阻害は強く変化しなかった。細孔形成におけるジスルフィラムによるカスパーゼ−１１阻害対ＧＳＤＭＤ阻害の相対的寄与を判定するために、ＧＳＤＭＤ中のカスパーゼ切断部位をライノウイルス３Ｃプロテアーゼ部位（ＧＳＤＭＤ−３Ｃ）に置き換え、リポソーム漏出アッセイにおいてカスパーゼ−１１の代わりに３Ｃプロテアーゼを使用した。得られたＩＣ５０は０．５２±０．０３μＭであり、カスパーゼ−１１誘発リポソーム漏出については０．３０±０．０１μＭ（図２および２５）と同等であった。対照的に、マウスＧＳＤＭＡ３が保存Ｃｙｓ１９１を欠くため、ジスルフィラムは、１２．１４±２．１０μＭのはるかに弱いＩＣ５０を有する３Ｃプロテアーゼ部位（ＧＳＤＭＡ３−３Ｃ）を含有する３Ｃ切断ＧＳＤＭＡ３によって誘発されるリポソーム漏出を阻害した（図２６）。したがって、リポソーム漏出アッセイにおけるジスルフィラムの抑制効果は、ＧＳＤＭＤの直接抑制によって媒介される。
【０２１１】
実験結果：図３１および３２は、指示された濃度の化合物Ｃ−２３の存在下でのカスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１活性の時間経過を示す。カスパーゼ（０．５Ｕ）を化合物Ｃ−２３と共にインキュベートした（Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ（４０μＭ）を添加する前に、指示された濃度で１時間）。図３３および３４は、カスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１活性アッセイにおける化合物Ｃ−２３の用量反応曲線を示す。図３５および３６は、指示された濃度の化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）の存在下でのカスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１活性の時間経過を示す。カスパーゼ（０．５Ｕ）を化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）と共にインキュベートした（Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ（４０μＭ）を添加する前に、指示された濃度で１時間）。図３７および３８は、カスパーゼ−１およびカスパーゼ−１１活性アッセイにおける化合物Ｃ−２３＋Ｃｕ（ＩＩ）の用量反応曲線を示す。４６０ｎｍにおける蛍光強度を、３５０ｎｍでの励起後に測定した。
【０２１２】
実施例５−試験化合物は、ＧＳＤＭＤ細孔形成を阻害する
リポソーム漏出アッセイにおける図３９に示す試験化合物のＩＣ５０値を、図４０〜４２に示す。データは、試験した化合物がＴＨＰ−１におけるニゲリシン誘導性ピロトーシスに対して保護したことを示す。漏出アッセイの結果を表２に示す。表２に列挙される化合物の化学構造を図３９に示す。
【表５】
2021530464.tif 000017
2021530464.tif 000018
【０２１３】
実験結果：図４０において、ＰＭＡ分化ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、指示された化合物（４０μＭ）で３時間処置し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイによって生存率を試験した。図４１において、ＰＭＡ分化ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、処置前に４０μＭのジスルフィラムまたは指示された試験化合物またはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置するか、あるいはニゲリシンで処置せず、細胞を、ニゲリシンの添加後２時間、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイによって細胞生存率について評価した。図４２において、ＰＭＡ分化ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、４０μＭのジスルフィラムもしくはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで、または指示された試験化合物の２倍連続希釈物（濃度範囲、０．３９〜５０μＭ）で１時間前処置した後、ニゲリシンを添加し、細胞を、ニゲリシンの添加後２時間、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイによって細胞生存率について評価した。グラフは、平均値±ｓ．ｄ．を示し、データは、３つの独立した実験を代表するものである。＊＊Ｐ＜０．０１である。試験した化合物のいずれも、ＴＨＰ−１細胞に大して毒性はなかった（図を参照されたい）。試験した化合物は、ＴＨＰ−１細胞におけるニゲリシン誘導性ピロトーシスに対しても有意に保護した。
【０２１４】
実施例６ａ−ジスルフィラムおよびＢａｙ１１−７０８２は、インフラマソーム活性化カスケードにおける複数の工程を阻害する
汎カスパーゼ阻害剤ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋ（ＣＡＳ登録番号１８７３８９−５２−２）：
【化６】
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はＴＨＰ−１細胞におけるカノニカルインフラマソーム経路を阻害することが見出された。
【０２１５】
また、Ｂａｙ１１−７０８２（ＣＡＳ登録番号１９５４２−６７−７）、
【化７】
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ＮＦ−κＢ活性化（参考文献１３）およびＮＬＲＰ３経路（参考文献３０）の以前から既知の阻害剤（図４３）が、ＴＨＰ−１細胞におけるカノニカルインフラマソーム経路も阻害することが見出された。以下で考察するように、Ｂａｙ１１−７０８２は、例えば、ＧＳＤＭＤ、カスパーゼ−１、およびカスパーゼ−１１を阻害する。
【０２１６】
ＭＳＴによれば、Ｂａｙ１１−７０８２はＧＳＤＭＤに結合した（図５５および５６ならびに図２を参照）。Ｂａｙ１１−７０８２は、カスパーゼ−１を阻害し、カスパーゼ−１１を比較的程度は低いが阻害した（図５５〜５８を参照されたい）。驚くべきことに、ジスルフィラムと同様に、Ｂａｙ１１−７０８２は、反応性Ｃｙｓ残基を不活性化することによって機能し（参照文献３１および３２を参照されたい）、ＧＳＤＭＤ中のＣｙｓ１９１は、Ｂａｙ１１−７０８２によって共有結合的に修飾された（図５９および６０を参照されたい）。リポソーム漏出アッセイにおいて、Ｃ１９１Ａ  ＧＳＤＭＤをＷＴ  ＧＳＤＭＤに置き換えることによって、Ｂａｙ１１−７０８２のリポソーム漏出の阻害を２倍減少させた（図５５）。Ｂａｙ１１−７０８２によるリポソーム漏出の阻害の多くは、カスパーゼ−１１阻害に起因し得、なぜなら、Ｂａｙ１１−７０８２は、ＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼによる漏出を、ＧＳＤＭＤ＋カスパーゼ−１１によるものよりも阻害することができず、同等の反応性システインを欠くマウスＧＳＤＭＡ３−３Ｃに対するその活性に加えて３Ｃプロテアーゼは、ＧＳＤＭＤ−３Ｃに対するその活性に類似していたからである（図６１および６２を参照されたい）。
【０２１７】
Ｂａｙ１１−７０８２は、ＴＨＰ−１細胞におけるカノニカルおよび非カノニカルインフラマソームの両方によって誘発されるピロトーシスを阻害したが、ＬＰＳでトランスフェクトされた細胞よりもニゲリシン処置においてより活性であった（図４３および４４）。Ｂａｙ１１−７０８２は、銅の非存在下でジスルフィラムよりもカノニカルインフラマソーム依存性ピロトーシスを阻害する上でより効果的であり、２つの薬物は一緒に付加的保護効果を有したが、試験された最高濃度では細胞毒性であった（図４３）。Ｂａｙ１１−７０８２は、非カノニカルインフラマソーム活性化によって誘導されるピロトーシスの阻害において、ジスルフィラムよりも活性が低かった（図４４）。
【０２１８】
ジスルフィラムおよびＢａｙ１１−７０８２の両方が反応性Ｃｙｓを非特異的に修飾するため、次に、ピロトーシスおよび炎症性カスパーゼ活性化につながる工程に対するそれらの効果を分析した。カノニカルインフラマソーム経路に関与する遺伝子のいくつかは、非刺激細胞において発現されず、それらの発現は、初期活性化（プライミング）と呼ばれるプロセスにおいて、病原体の細胞表面センサおよびＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）などの危険関連分子パターンに結合することによって誘導される必要がある。Ｂａｙ１１−７０８２は、プライミングにおける重要な転写因子であるＮＦ−κＢ活性化を阻害することが知られている。ジスルフィラムおよびＢａｙ１１−７０８２がプライミングに与える影響を最初に検討した（図４５）。ＮＦ−κＢ活性化は、ＩκＢαリン酸化および分解ならびにＲｅｌＡ（ｐ６５）リン酸化を検討することによって評価した。プロＩＬ−１βの誘導を、プロＩＬ−１βタンパク質についての免疫ブロットによって評価した。ジスルフィラムまたはＢａｙ１１−７０８２の非存在下では、ＬＰＳを添加した３０分後にｐ６５のリン酸化を最初に検出し、４時間持続し、ＬＰＳを添加した１時間後にリン酸化および低減されたＩκＢαを検出し、ＬＰＳを添加した４時間後に増加したプロＩＬ−１βを検出した。３０μＭの濃度で添加した両方の試験化合物は、ＮＦ−κＢの活性化を阻害したが、Ｂａｙ１１−７０８２はより強い効果を有し、両方ともプロ−ＩＬ−１βの誘導をブロックした。したがって、ジスルフィラムおよびＢａｙ１１−７０８２は、両方ともプライミングを阻害する。
【０２１９】
ニゲリシンは、カスパーゼ動員ドメイン（ＡＳＣ）を含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質と呼ばれるアダプタを使用して、ＮＬＲＰ３カノニカルインフラマソームの組み立てを活性化し、これを免疫蛍光顕微鏡でスペックとして可視化することができる。ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を阻害剤の非存在下でニゲリシンで処置したとき、ＡＳＣスペックを３０％の細胞で検出した（図３６）。予想通り、カスパーゼ活性化はインフラマソームアセンブリの下流で生じるため、スペック形成はｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋによって阻害されなかった。しかしながら、プライミング後であるがニゲリシンの１時間前に添加された両方の試験化合物は、ＡＳＣスペック形成を阻害したが完全ではなく、同じ濃度で使用した場合、Ｂａｙ１１−７０８２はジスルフィラムよりも強力であった。１μＭのジスルフィラムは、ニゲリシンまたはトランスフェクトされたＬＰＳによって誘発されるピロトーシスをブロックする際に完全に不活性であったが（図６および７）、グルコン酸銅と組み合わせた同じ濃度のジスルフィラムは、ピロトーシスを完全にブロックし、ＡＳＣパンクタも減少させた（図４８および４９）。
【０２２０】
ＮＬＲＰ３媒介性炎症におけるどの工程がＡＳＣスペック形成後に阻害されたかを評価するために、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞をビヒクルまたは３０μＭのｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋ、ジスルフィラム、またはＢａｙ１１−７０８２で１時間処置した後ニゲリシンを添加し、カスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロＩＬ−１βの切断および活性化を３０分後に全細胞溶解物の免疫ブロットによって分析した（図５０）。処置されたＩＬ−１βの分泌も、培養上清の免疫ブロットによって評価した。カスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロＩＬ−１βのそれらの活性形態への切断は、阻害剤の非存在下で明確に検出されたが、３つの阻害剤のいずれかによって処置された細胞において劇的に減少し、さらに、処理されたＩＬ−１βは、任意の阻害剤の非存在下で培養上清中でのみ検出された。ＰＢＳまたはグルコン酸銅中の１μＭのジスルフィラムのみで細胞を処置することによって同じ実験を繰り返した場合、銅と錯化されたジスルフィラムは、カスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロＩＬ−１β処理ならびにＩＬ−１β分泌を完全にブロックしたが、銅を含まないジスルフィラムは影響を及ぼさなかった（図５１）。免疫ブロットは定量的ではないため、ニゲリシンを添加した３０分後のカスパーゼ−１活性も、無傷細胞内の蛍光基質を使用して評価した。カスパーゼ−１活性はｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋによって完全に阻害されたが、ジスルフィラムおよびＢａｙ１１−７０８２のいずれかにより部分的にのみ減少し、Ｂａｙ１１−７０８２により再び強力に減少した（図５２）。次に、ＬＰＳ＋ニゲリシン誘導ＧＳＤＭＤ細孔形成に対するｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋ、ジスルフィラム、およびＢａｙ１１−７０８２の効果を、未切断ＧＳＤＭＤおよびその細孔形態の両方を認識するモノクローナル抗体を使用して免疫蛍光顕微鏡によって評価した（図５３、５４、および６４〜６６）。任意の阻害剤の非存在下で、ＧＳＤＭＤ抗体は、ＬＰＳ＋ニゲリシン処置細胞のサイトゾルおよび形質膜の両方を染色し、これが特徴的なピロトーシス気泡を形成した（参考文献１０を参照されたい）。３つ全ての阻害剤は、ＧＳＤＭＤ膜の染色およびピロトーシス気泡の出現を完全にブロックした。したがって、ジスルフィラムおよびＢａｙ１１−７０８２は、プライミング、インフラマソーム組み立て、炎症性カスパーゼ活性化、炎症促進性サイトカイン処理、およびＧＳＤＭＤ細孔形成を含む、カノニカルインフラマソーム誘導性ピロトーシスおよび炎症性サイトカイン放出をもたらす複数の工程を阻害する。
【０２２１】
実験結果：図４３において、ＰＭＡ分化ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を、ニゲリシンで処置する前に、２倍連続希釈物（０．３１２５〜４０μＭの範囲）のＣ−２３および／またはＢａｙ１１−７０８２で１時間前処置した。細胞死を、ＣｙｔｏＴｏｘ９６アッセイによって判定した。図４４において、マウスｉＢＭＤＭを、ＰＢＳまたはＬＰＳで電気穿孔する前に、Ｃ−２３またはＢａｙ１１−７０８２（０．３１２５〜４０μＭの範囲）の連続２倍希釈物で１時間前処置した。細胞死を、ＣｙｔｏＴｏｘ９６アッセイによって判定した。図４５において、ＴＨＰ−１細胞を３０μＭのＣ−２３またはＢａｙ１１−７０８２で１時間前処置した後、ＬＰＳを添加した。０．５時間後に採取した全細胞溶解物の免疫ブロットが示されている。図４６、４７、５０、および５２において、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１を、３０μＭのＣ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、またはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置した後、ニゲリシンまたは培地を添加した。ＡＳＣスペックの代表的な画像（矢印）およびＡＳＣスペックを有する細胞の平均値±ｓ．ｄ．パーセントを、２０分後に分析した（図４７）。ニゲリシンを添加した３０分後に、全細胞溶解物（ＷＣＬ）および培養上清（Ｓｕｐ）を採取し、指示された抗体で免疫ブロットした（図５０）。細胞透過性蛍光色素ＦＡＭ−ＹＶＡＤ−ＦＭＫを使用して、ニゲリシンを添加した３０分後にカスパーゼ−１活性をアッセイした（図５２）。図４８、４９および５１において、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１を、Ｃｕ（ＩＩ）の非存在下で１μＭのＣ−２３で１時間前処置した後、ニゲリシンまたは培地を添加した。ＡＳＣスペックの代表的な画像（矢印）およびＡＳＣスペックを有する細胞の平均値±ｓ．ｄ．パーセントを、２０分後に分析した（図４８および４９）。ニゲリシンを添加した３０分後に、全細胞溶解物（ＷＣＬ）および培養上清（Ｓｕｐ）を採取し、免疫ブロットにより分析した（図５１）。図５３および５４において、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１を、３０μＭのＣ−２３、Ｂａｙ１１−７０８２、またはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで１時間前処置した後、ニゲリシンまたは培地を添加し、３０分後にマウス抗ＧＳＤＭＤモノクローナル抗体で染色した（図５５〜６３を参照されたい）。図は、ＧＳＤＭＤ膜染色およびピロトーシス気泡を有する細胞の割合の代表的な共焦点顕微鏡画像および定量化を示す。矢印は、ピロトーシス気泡のＧＳＤＭＤ染色を指している。図５５は、野生型、Ｃ３８ＡまたはＣ１９１Ａ  ＧＳＤＭＤ（０．３μＭ）＋カスパーゼ−１１（０．１５μＭ）によるリポソーム漏出の阻害のＢａｙ１１−７０８２用量反応曲線を示す。図５６は、ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒによるＡｌｅｘａ  ４８８標識Ｈｉｓ−ＭＢＰ−ＧＳＤＭＤ（８０ｎＭ）とＢａｙ１１−７０８２との直接結合のＭＳＴ測定を示す。図５７および５８は、蛍光ペプチド基質に対するカスパーゼ−１（図５７）およびカスパーゼ−１１（図５８）活性に対するＢａｙ１１−７０８２の効果の用量反応曲線である。図５９および６０は、カルバミドメチルによってＣｙｓ１９１上で修飾されたＣｙｓ１９１含有ＧＳＤＭＤペプチドＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫ（ａａ１８４〜１０３；２０５７．００Ｄａ）のＭＳ／ＭＳスペクトル（５７．０２１４Ｄａの増加）［ＬＣ保持時間、２２．８５分；トリプレット荷電前駆体イオンｍ／ｚ７０５．６８２７（質量：２１１４．０４８１Ｄａ；デルタＭ  ２．２７ｐｐｍ）が観察された］（図５９）（ａ）、またはＣｙｓ１９１上で修飾されたＢａｙ１１−７０８２とのＧＳＤＭＤインキュベーション後の対応するＧＳＤＭＤペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトル（２０７．０３５４Ｄａの増加）［ＬＣ保持時間．１７．２０分；トリプレット荷電前駆体イオンｍ／ｚ７５６．０２２９（質量：２２６４．０６８８Ｄａ；デルタＭ１１．７ｐｐｍ）が観察された。］（図６０）。図６１および６２は、０．３μＭのヒトＧＳＤＭＤ−３Ｃ（図６１）またはマウスＧＳＤＭＡ３−３Ｃ（図６２）＋０．１５μＭの３Ｃプロテアーゼによって誘導されたリポソーム漏出に対する、Ｂａｙ１１−７０８２の効果の用量反応曲線を示す。図６３は、ＬＰＳ＋ニゲリシンで処置したＴＨＰ−１細胞のピロトーシスの阻害に対する、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ、５００μＭ）とのＢａｙ１１−７０８２の１時間のプレインキュベーションの効果を示す。５〜４０μＭのＢａｙ１１−７０８２の２倍希釈物を使用した。グラフは、平均値±ｓ．ｄを示し、データは、３つの独立した実験を代表するものである。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１である。
【０２２２】
ジスルフィラムと比較して、Ｂａｙ１１−７０８２は、より低い親和性でＧＳＤＭＤに結合し、リポソーム漏出を阻害する際の活性が２３倍低かった（ＩＣ５０  ６．８１±０．１０μＭ対０．３０±０．０１μＭ）。Ｂａｙ１１−７０８２もカスパーゼ−１を阻害したが、ジスルフィラムよりもカスパーゼ−１１に対する活性が約３倍低かった。ジスルフィラムと同様に、Ｂａｙ１１−７０８２は反応性Ｃｙｓ残基２９、３０を不活性化することによって機能する。ナノ−ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって、Ｂａｙ１１−７０８２は、ＧＳＤＭＤ中のＣｙｓ１９１を共有結合的に修飾することが見出された。しかしながら、アッセイにおいて、Ｃ１９１Ａ  ＧＳＤＭＤをＷＴ  ＧＳＤＭＤに置き換えることによって、Ｂａｙ１１−７０８２のリポソーム漏出の阻害をわずか２倍減少させた。したがって、Ｂａｙ１１−７０８２によるリポソーム漏出の阻害の多くは、カスパーゼ−１１阻害に起因し得、なぜなら、Ｂａｙ１１−７０８２は、ＧＳＤＭＤ−３Ｃ＋３Ｃプロテアーゼによる漏出を、ＧＳＤＭＤ＋カスパーゼ−１１によるものよりも実質的に阻害することができず、同等の反応性システインを欠くマウスＧＳＤＭＡ３−３Ｃに対するその活性に加えて３Ｃプロテアーゼは、ＧＳＤＭＤ−３Ｃに対するその活性に類似していたからである。したがって、ジスルフィラムとは異なり、Ｂａｙ１１−７０８２は、リポソーム漏出アッセイにおいては、ＧＳＤＭＤ阻害剤というよりもカスパーゼ阻害剤である。
【０２２３】
実施例６ｂ−インフラマソーム活性化カスケードの阻害剤
最近、Ｃｙｓ反応性壊死因子阻害剤ＮＳＡは、ＧＳＤＭＤ媒介性ピロトーシスも阻害することが示された。ＧＳＤＭＤおよびカスパーゼ−１１媒介性リポソーム漏出を阻害するジスルフィラムの効力を、ＮＳＡおよび他のＣｙｓ反応性化合物（フマル酸ジメチル（ＤＭＦ、乾癬および多発性硬化症のための薬物）、アファチニブ（上皮成長因子受容体チロシンキナーゼを阻害する薬物）、イブルチニブ（ブルトンのチロシンキナーゼを阻害する薬物）、およびＬＤＣ７５５９を含む）の抗力と比較した。ＮＳＡは、リポソーム漏出を適度に阻害したが、ジスルフィラムよりも約３０倍効力が弱かった（９．５０±０．４３μＭのＩＣ５０）。
【０２２４】
実施例７−マウスモノクローナル抗体は、免疫ブロット上および免疫蛍光顕微鏡によって、完全長ヒトＧＳＤＭＤおよびＧＳＤＭＤ−ＮＴ細孔形態を認識する。
ＧＳＤＭＤに対するモノクローナル抗体を、マウスに組換えヒトＧＳＤＭＤを免疫し、方法に従って組換えヒトＧＳＤＭＤ−ＮＴで追加免疫することによって生成した。図６４において、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を指示されたプラスミドでトランスフェクトし、細胞溶解物を、指示された抗体でプローブされた還元ゲルの免疫ブロットによって分析した。図６５において、ニゲリシンで処置したか、またはニゲリシンで処置しなかったＨＣＴ１１６、２９３ＴおよびＴＨＰ−１細胞の細胞溶解物を、指示された抗体で免疫ブロットした。２９３Ｔ細胞は、内因性ＧＳＤＭＤを発現しない。図６６において、２９３ＴおよびＴＨＰ−１細胞を、抗ＧＳＤＭＤモノクローナル抗体で免疫染色し、ＤＡＰＩで共染色した（青色）。ＧＳＤＭＤを発現しない２９３Ｔ細胞は、背景染色を示さない。
【０２２５】
実施例８−機械的研究
ジスルフィラムによるピロトーシス阻害の細胞機構を解明するために、インフラマソーム活性化経路全体に対するその効果を分析した。カノニカルインフラマソーム経路に関与する遺伝子のいくつかは、非刺激細胞において発現されず、それらの発現は、プライミング（初期活性化）と呼ばれるプロセスにおいて、病原体の細胞表面センサおよびＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）などの危険関連分子パターンに結合することによって誘導される必要がある。以前の実験では、ジスルフィラムをＬＰＳプライミングの４時間後、およびニゲリシンで刺激する１時間前に添加したため、インフラマソームプライミングにおけるジスルフィラムの効果は検討されなかった。プライミングを明示的に調べるために、ＴＨＰ−１細胞をジスルフィラムで１時間前処置した後、最大４時間ＬＰＳを添加した。プライミングにおける重要な転写因子であるＮＦ−κＢ活性化は、ＩκＢαリン酸化および分解ならびにＲｅｌＡ（ｐ６５）リン酸化を検討することによって評価した。ＮＬＲＰ３およびプロＩＬ−１β発現の誘導を、免疫ブロットによって評価した。Ｂａｙ１１−７０８２を、ＮＦ−κＢ活性化に対するその既知の阻害効果のために、陽性対照として使用した。ジスルフィラムまたはＢａｙ１１−７０８２の非存在下では、ＬＰＳを添加した３０分後にｐ６５のリン酸化を最初に検出し、４時間持続し、ＬＰＳを添加した１時間後にリン酸化および低減されたＩκＢαを検出し、ＬＰＳを添加した４時間後に増加したＮＬＲＰ３およびプロＩＬ−１βタンパク質を検出した。両方の薬物は、ＮＦ−κＢの活性化を阻害したが、Ｂａｙ１１−７０８２はより強い効果を有し、両方ともＮＬＲＰ３およびプロ−ＩＬ−１βの誘導をブロックした。
【０２２６】
ニゲリシンは、カスパーゼ動員ドメイン（ＡＳＣ）を含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質と呼ばれるアダプタを使用して、ＮＬＲＰ３カノニカルインフラマソームの組み立てを活性化し、これを免疫蛍光顕微鏡でスペックとして可視化することができる。ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞を阻害剤の非存在下でニゲリシンで処置したとき、ＡＳＣスペックを約３０％の細胞で検出した。予想通り、カスパーゼ活性化はインフラマソームアセンブリの下流で生じるため、スペック形成はｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋによって阻害されなかった。プライミング後であるが、ニゲリシンの１時間前に添加されたジスルフィラムは、ＡＳＣスペック形成を適度に阻害し、約２０％の細胞に至った。スペック形成の適度な減少は、ＬＰＳプライミングの４時間後に添加されたにもかかわらず、ジスルフィラムによるプライミングの微妙な阻害に起因する。実際、免疫ブロットは、培地中でインキュベートされた細胞と比較して、プライミング後に添加されたジスルフィラムによってＮＬＲＰ３レベルが低下したことを示した。
【０２２７】
カノニカルインフラマソームの組み立ては、プロＩＬ−１βおよびＧＳＤＭＤを切断するカスパーゼ−１を活性化し、後者は、処理されたＩＬ−１βを放出し、ピロトーシスを誘発するために必要とされる。ＮＬＲＰ３媒介性炎症におけるどの工程がＡＳＣスペック形成後に阻害されたかを評価するために、ＬＰＳ初期活性化ＴＨＰ−１細胞をビヒクル、３０μＭのｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋ、またはジスルフィラムで１時間処置してからニゲリシンを添加し、カスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロＩＬ−１βの切断および活性化を３０分後および１時間後に全細胞溶解物の免疫ブロットによって分析した。処置されたＩＬ−１βの分泌も、培養上清の免疫ブロットによって評価した。カスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロＩＬ−１βのそれらの活性形態への切断は、阻害剤の非存在下で明確に検出され、それらの処理は、ニゲリシンの３０分後にジスルフィラムまたはｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋによって処置された細胞において低減された。しかしながら、ジスルフィラムがカスパーゼに及ぼすより弱い効果と一致して、６０分までに、ジスルフィラム処置された試料中のカスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤ、およびプロＩＬ−１βの処理は、阻害剤の非存在下で検出されたものに追いついたが、ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで処置された試料は、依然としてこれらのタンパク質の切断をほとんど示さなかった。１時間の時点は、細胞死およびＩＬ−１β放出測定値がそれぞれ、ニゲリシンで１時間および２時間刺激した細胞を使用したときに関連する。これらのデータは、ジスルフィラムがカスパーゼ−１活性化を遅らせたが、阻害しなかったことを示唆している。しかしながら、処理されたＩＬ−１βは、いずれかの阻害剤の非存在下で培養上清中でのみ検出され、ジスルフィラムが、限定されたカスパーゼ−１阻害にもかかわらず、ＧＳＤＭＤ細孔形成をブロックすることによってサイトカイン放出を完全に阻害したことを示唆している。マウスｉＢＭＤＭにおいて、ＩＬ−１β放出に対するジスルフィラムの同様の優先的効果（ただし、処理ではない）が見出された一方で、ＮＳＡ、Ｂａｙ１１−７０８２およびｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋは、１時間時点で依然としてカスパーゼ−１、ＧＳＤＭＤおよびＩＬ−１βの処理を阻害した。
【０２２８】
次に、ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋおよびジスルフィラムがＬＰＳに加えてニゲリシン誘導性ＧＳＤＭＤ細孔形成に与える影響を、切断されていないＧＳＤＭＤおよびその細孔形態の両方を認識する前の実施例で生成されたモノクローナル抗体を使用した免疫蛍光顕微鏡法によって評価した。任意の阻害剤の非存在下で、ＧＳＤＭＤ抗体は、ＬＰＳ＋ニゲリシン処置細胞のサイトゾルおよび形質膜の両方を染色し、これが特徴的なピロトーシス気泡を形成した。両方の阻害剤は、ＧＳＤＭＤ膜の染色およびピロトーシス気泡の出現を完全にブロックした。したがって、ジスルフィラムはプライミングを阻害し、カスパーゼ−１の活性化を遅らせるが、その効果は、ＴＨＰ−１およびｉＢＭＤＭ細胞の両方におけるピロトーシスおよび炎症性サイトカイン放出の両方を抑制するＧＳＤＭＤ細孔形成のボトルネック段階で最高潮に達する。対照的に、対照阻害剤ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋは、カスパーゼ−１活性を排他的にブロックする。
【０２２９】
ジスルフィラムのインビボ効果を検討するために、ＬＰＳ誘導性敗血症をＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて検査した。体表面積を考慮した相対成長スケーリング後、アルコール依存症を治療するために臨床的に承認された１２５〜５００ｍｇ／日の用量範囲内であるヒトにおける２８４ｍｇ／日に等しい薬物用量（５０ｍｇ／ｋｇ）を使用してＬＰＳでチャレンジする前に、ビヒクルまたはジスルフィラムでマウスを腹腔内処置した３２。低濃度のＬＰＳ（１５ｍｇ／ｋｇ）が９６時間後に８匹の対照マウスのうち３匹を死滅させたのに対し、ジスルフィラム処置マウスは全て生存した（Ｐ＝０．０４５）。血清ＩＬ−１β、ＴＮＦαおよびＩＬ−６濃度は、全てのマウスが生存しているとき、ＬＰＳチャレンジの１２時間後に強く低下した（ｐ≦０．０００３）。中間濃度（２５ｍｇ／ｋｇ）でのＬＰＳチャレンジ後、全ての対照マウスは７２時間以内に死亡したが、ジスルフィラム処置マウスの８匹のうちの５匹は生存した（Ｐ＜０．００８）。最も高いＬＰＳチャレンジ（５０ｍｇ／ｋｇ）において、全ての対照マウスは１日以内に死亡したが、ジスルフィラム処置によって死亡が著しく遅れ、８匹のマウスのうち１匹が生存した（Ｐ＝０．００７）。マウスにおけるＬＰＳ誘導性敗血症は、非カノニカルインフラマソームにおけるカスパーゼ−１１によるＧＳＤＭＤ切断に依存する。以前の研究と一致して、Ｃａｓｐ１１−／−マウスおよびＧｓｄｍｄ−／−マウスは、ＬＰＳ誘導性敗血症による死亡に耐性を示したが、Ｃａｓｐ１−／−は示さなかった。予想通り、ジスルフィラムは、致死的ＬＰＳチャレンジからＣａｓｐ１−／−マウスを保護したが、各非薬物対照群における１匹を除く全てのマウスが生存したため、Ｃａｓｐ１１−／−マウスおよびＧｓｄｍｄ−／−マウスの生存に有意に影響しなかった。
【０２３０】
Ｃｕ（ＩＩ）との錯化がインビボで敗血症からの保護を向上させることができるかを判定するために、Ｃｕ（ＩＩ）を伴って、またはＣｕ（ＩＩ）を伴わずに投与されるジスルフィラムの有効性を、２５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳで腹腔内でチャレンジされたマウスの生存率と比較した。通常、敗血症は炎症性カスケードが開始された後にのみ診断される臨床状況をよりよく模倣するために、ジスルフィラム投与をＬＰＳ注射の直後および１２時間後まで延期した。ＬＰＳ後のジスルフィラム処置は、死亡を著しく遅らせた（Ｃｕ（ＩＩ）なしのｐ＝０．０４１；銅ありのｐ＝０．０２４）。全ての対照マウスおよびジスルフィラム単独で処置したマウスは死亡したが、Ｃｕ（ＩＩ）錯化ジスルフィラムを与えられた８匹のマウスのうち２匹は生存した。しかしながら、Ｃｕ（ＩＩ）を伴うか、または伴わないジスルフィラム処置の間の生存率の差は有意性に達しなかった（ｐ＝０．０６４）。したがって、ＬＰＳ部分的に保護された後にジスルフィラムを与えられたマウスで、Ｃｕ（ＩＩ）の投与を伴うマウスは、その活性を改善することができた。
【０２３１】
ＬＰＳは、プライミングを必要としない非カノニカルインフラマソーム活性化を細胞内で引き起こすだけでなく、敗血症ショックを増幅するＮＬＲＰ３インフラマソーム活性化もプライミングする。ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ、カスパーゼ−１、またはＩＬ−１受容体の遺伝的欠損は、以前の研究でＬＰＳでチャレンジしたマウスにおいて実質的な生存利点を提供しなかったが、カスパーゼ−１１またはＧＳＤＭＤ欠損は、敗血症死からマウスを保護した。したがって、ＬＰＳ誘導性敗血症からの保護は、ＧＳＤＭＤ切断または細孔形成の阻害に依存する可能性が高いが、ＮＬＲＰ３インフラマソームプライミングに依存しないと推論される。この推論は、ジスルフィラムがＣａｓｐ１−／−およびＷＴマウスを同様に保護したという独自の発見によって裏付けられている。
【０２３２】
ジスルフィラムが主にカスパーゼ−１１によるＧＳＤＭＤ処理を阻害するか、または細孔形成を阻害するかどうかを判定するために、４つの群のマウスを、ＬＰＳまたはビヒクルによる腹腔内チャレンジの４時間前および直前にジスルフィラムまたはビヒクルで前処置した。腹膜マクロファージを６時間後に採取し、免疫ブロットによってＮＬＲＰ３、ＧＳＤＭＤ、およびＨＭＧＢ１について分析した。ＧＳＤＭＤは、ジスルフィラム処置を行ったか、または行わなかったＬＰＳチャレンジ群において同様に処理され、ＧＳＤＭＤ切断の阻害ではなく、ＧＳＤＭＤ細孔形成の阻害による死亡の抑制が示された。驚くべきことに、ＮＬＲＰ３レベルはまた、ジスルフィラム処置を行ったか、または行わなかったＬＰＳチャレンジ群において同様であり、ジスルフィラムが細胞内のＮＬＲＰ３プライミングを損なったとしても、マウス内のＮＬＲＰ３プライミングを阻害しなかったことを示唆している。これらの結果は、ＧＳＤＭＤ細孔形成を阻害してＬＰＳ誘導性ピロトーシスおよび炎症性媒介物の放出を阻害することが、我々のモデルにおけるジスルフィラムの主な標的であることを強く示唆している。
【０２３３】
マウスおよびヒト細胞におけるＧＳＤＭＤ細孔形成のジスルフィラム阻害は、インフラマソームプライミングおよびカスパーゼ活性のブロックにおけるその活性を補完し、カノニカル経路および非カノニカル経路の両方によって誘発されるピロトーシスおよび炎症性サイトカイン放出を抑制する。インフラマソーム経路における３つの工程の同時標的化は、ジスルフィラムが、特にその中間体を安定化させるためにＣｕ（ＩＩ）と共に投与される場合、特に炎症の強力な阻害剤であることを意味している。本明細書に提示する結果は、ピロトーシスおよび炎症性媒介物放出の両方における一般的な必須最終工程である細孔形成の阻害が、ジスルフィラムの抗炎症活性を支配することを示している。プライミングおよびカスパーゼの阻害におけるその比較的弱い活性は、ジスルフィラムがヒトに対して無毒であることを可能にした一方で、Ｂａｙ１１−７０８２およびカスパーゼ阻害剤などのより強力なＮＦ−κＢ阻害剤は共に毒性と関連付けられている。さらに、非カノニカルインフラマソームはプライミングを必要とせず、疾患状況において、関連する免疫および上皮細胞のプライミングは、炎症の徴候および症状が臨床的に認識されるまでに既に発生している可能性があり、ＧＳＤＭＤを阻害して、ピロトーシスおよび炎症性媒介物放出における最も下流の工程を停止することが特に有用であることを示唆している。最後に、ジスルフィラムの相対的な選択性は、高反応性ＤＭＦを含むいくつかの他の共有結合性のＣｙｓ反応性化合物のＧＳＤＭＤに対する活性の欠如によって支援される。
【０２３４】
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８  Ｌｉｕ，Ｘ．，Ｚｈａｎｇ，Ｚ．，Ｒｕａｎ，Ｊ．，Ｐａｎ，Ｙ．，Ｍａｇｕｐａｌｌｉ，Ｖ．Ｇ．，Ｗｕ，Ｈ．＆  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｇａｓｄｅｒｍｉｎ  Ｄ  ｃａｕｓｅｓ  ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｏｒｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ５３５，１５３−１５８（２０１６）．
９  Ｓｂｏｒｇｉ，Ｌ．，Ｒａｖｏｔｔｉ，Ｆ．，Ｄａｎｄｅｙ，Ｖ．Ｐ．，Ｄｉｃｋ，Ｍ．Ｓ．，Ｍａｚｕｒ，Ａ．，Ｒｅｃｋｅｌ，Ｓ．，Ｃｈａｍｉ，Ｍ．，Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．，Ｈｕｂｅｒ，Ｍ．，Ｂｏｃｋｍａｎｎ，Ａ．，Ｅｇｅｌｍａｎ，Ｅ．Ｈ．，Ｓｔａｈｌｂｅｒｇ，Ｈ．，Ｂｒｏｚ，Ｐ．，Ｍｅｉｅｒ，Ｂ．Ｈ．＆  Ｈｉｌｌｅｒ，Ｓ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ＡＳＣ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｂｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ａｎｄ  ｃｒｙｏ−ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １１２，１３２３７−１３２４２（２０１５）．
１０  Ｃｈｅｎ，Ｘ．，Ｈｅ，Ｗ．Ｔ．，Ｈｕ，Ｌ．，Ｌｉ，Ｊ．，Ｆａｎｇ，Ｙ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｘｕ，Ｘ．，Ｗａｎｇ，Ｚ．，Ｈｕａｎｇ，Ｋ．＆  Ｈａｎ，Ｊ．Ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｓ  ｄｒｉｖｅｎ  ｂｙ  ｎｏｎ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｇａｓｄｅｒｍｉｎ−Ｄ  ｐｏｒｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ｉｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ＭＬＫＬ  ｃｈａｎｎｅｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ  ２６，１００７−１０２０（２０１６）．
１１  Ｒｕｓｓｏ，Ｈ．Ｍ．，Ｒａｔｈｋｅｙ，Ｊ．，Ｂｏｙｄ−Ｔｒｅｓｓｌｅｒ，Ａ．，Ｋａｔｓｎｅｌｓｏｎ，Ｍ．Ａ．，Ａｂｂｏｔｔ，Ｄ．Ｗ．＆  Ｄｕｂｙａｋ，Ｇ．Ｒ．Ａｃｔｉｖｅ  Ｃａｓｐａｓｅ−１  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｐｌａｓｍａ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｏｒｅｓ  Ｔｈａｔ  Ｐｒｅｃｅｄｅ  Ｐｙｒｏｐｔｏｔｉｃ  Ｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｒｅ  Ｂｌｏｃｋｅｄ  ｂｙ  Ｌａｎｔｈａｎｉｄｅｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９７，１３５３−１３６７（２０１６）．
１２  Ｗｒｉｇｈｔ，Ｃ．＆  Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．Ｄ．Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  ８８，６４７−６５５（１９９０）．
１３  Ｐｉｅｒｃｅ，Ｊ．Ｗ．，Ｓｃｈｏｅｎｌｅｂｅｒ，Ｒ．，Ｊｅｓｍｏｋ，Ｇ．，Ｂｅｓｔ，Ｊ．，Ｍｏｏｒｅ，Ｓ．Ａ．，Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｔ．＆  Ｇｅｒｒｉｔｓｅｎ，Ｍ．Ｅ．Ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＩｋａｐｐａＢａｌｐｈａ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｈｏｗ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２，２１０９６−２１１０３（１９９７）．
１４  Ｒｕａｎ，Ｊ．，Ｘｉａ，Ｓ．，Ｌｉｕ，Ｘ．，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．＆  Ｗｕ，Ｈ．Ｃｒｙｏ−ＥＭ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇａｓｄｅｒｍｉｎ  Ａ３  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｏｒｅ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１８）．
１５  Ｂａｌｄｗｉｎ，Ａ．Ｇ．，Ｂｒｏｕｇｈ，Ｄ．＆  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｓ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ５９，１６９１−１７１０（２０１６）．
１６  Ｚｈｏｕ，Ｒ．，Ｙａｚｄｉ，Ａ．Ｓ．，Ｍｅｎｕ，Ｐ．＆  Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．Ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ  ｉｎ  ＮＬＲＰ３  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ４６９，２２１−２２５（２０１１）．
１７  Ｎａｋａｈｉｒａ，Ｋ．，Ｈａｓｐｅｌ，Ｊ．Ａ．，Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｖ．Ａ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｊ．，Ｄｏｌｉｎａｙ，Ｔ．，Ｌａｍ，Ｈ．Ｃ．，Ｅｎｇｌｅｒｔ，Ｊ．Ａ．，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ，Ｍ．，Ｃｅｒｎａｄａｓ，Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｐ．，Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｋ．Ａ．，Ｒｙｔｅｒ，Ｓ．Ｗ．＆  Ｃｈｏｉ，Ａ．Ｍ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ＮＡＬＰ３  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２，２２２−２３０（２０１１）．
１８  Ｍｏｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｎａｋａｈｉｒａ，Ｋ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｋ．Ｐ．，ＤｅＮｉｃｏｌａ，Ｇ．Ｍ．，Ｋｏｏ，Ｍ．Ｊ．，Ｐａｂｏｎ，Ｍ．Ａ．，Ｒｏｏｎｅｙ，Ｋ．Ｔ．，Ｙｏｏｎ，Ｊ．Ｈ．，Ｒｙｔｅｒ，Ｓ．Ｗ．，Ｓｔｏｕｔ−Ｄｅｌｇａｄｏ，Ｈ．＆  Ｃｈｏｉ，Ａ．Ｍ．ＮＯＸ４−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ＮＬＲＰ３  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２２，１００２−１０１２（２０１６）．
１９  Ｚａｎｏｎｉ，Ｉ．，Ｔａｎ，Ｙ．，Ｄｉ  Ｇｉｏｉａ，Ｍ．，Ｂｒｏｇｇｉ，Ａ．，Ｒｕａｎ，Ｊ．，Ｓｈｉ，Ｊ．，Ｄｏｎａｄｏ，Ｃ．Ａ．，Ｓｈａｏ，Ｆ．，Ｗｕ，Ｈ．，Ｓｐｒｉｎｇｓｔｅａｄ，Ｊ．Ｒ．＆  Ｋａｇａｎ，Ｊ．Ｃ．Ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｃａｓｐａｓｅ−１１  ｌｉｇａｎｄ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  ｌｉｖｉｎｇ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５２，１２３２−１２３６（２０１６）．
２０  Ｌｕｐｆｅｒ，Ｃ．Ｒ．，Ａｎａｎｄ，Ｐ．Ｋ．，Ｌｉｕ，Ｚ．，Ｓｔｏｋｅｓ，Ｋ．Ｌ．，Ｖｏｇｅｌ，Ｐ．，Ｌａｍｋａｎｆｉ，Ｍ．＆  Ｋａｎｎｅｇａｎｔｉ，Ｔ．Ｄ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｃａｓｐａｓｅ−１１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｎ−ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ＮＬＲＰ３  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｉｃ  ｐａｔｈｏｇｅｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  １０，ｅ１００４４１０（２０１４）．
２１  Ｃｈｕ，Ｌ．Ｈ．，Ｉｎｄｒａｍｏｈａｎ，Ｍ．，Ｒａｔｓｉｍａｎｄｒｅｓｙ，Ｒ．Ａ．，Ｇａｎｇｏｐａｄｈｙａｙ，Ａ．，Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅ．Ｐ．，Ｍｏｎａｃｋ，Ｄ．Ｍ．，Ｄｏｒｆｌｅｕｔｎｅｒ，Ａ．＆  Ｓｔｅｈｌｉｋ，Ｃ．Ｔｈｅ  ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｏｘＰＡＰＣ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｆｒｏｍ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｎ−ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｉｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ９，９９６（２０１８）．
２２  Ｚｈｏｎｇ，Ｚ．，Ｕｍｅｍｕｒａ，Ａ．，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｌｏｐｅｚ，Ｅ．，Ｌｉａｎｇ，Ｓ．，Ｓｈａｌａｐｏｕｒ，Ｓ．，Ｗｏｎｇ，Ｊ．，Ｈｅ，Ｆ．，Ｂｏａｓｓａ，Ｄ．，Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｇ．，Ａｌｉ，Ｓ．Ｒ．，ＭｃＧｅｏｕｇｈ，Ｍ．Ｄ．，Ｅｌｌｉｓｍａｎ，Ｍ．Ｈ．，Ｓｅｋｉ，Ｅ．，Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ，Ａ．Ｂ．，Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｈ．Ｍ．，Ｄｉａｚ−Ｍｅｃｏ，Ｍ．Ｔ．，Ｍｏｓｃａｔ，Ｊ．＆  Ｋａｒｉｎ，Ｍ．ＮＦ−ｋａｐｐａＢ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ  Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｖｉａ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄａｍａｇｅｄ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ｃｅｌｌ  １６４，８９６−９１０（２０１６）．
２３  Ｚｈａｎｇ，Ｊ．Ｈ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｔ．Ｄ．＆  Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇ，Ｋ．Ｒ．Ａ  Ｓｉｍｐｌｅ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｕｓｅ  ｉｎ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｓｓａｙｓ．Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ４，６７−７３（１９９９）．
２４  Ｓｋｒｏｔｔ，Ｚ．，Ｍｉｓｔｒｉｋ，Ｍ．，Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｋ．Ｋ．，Ｆｒｉｉｓ，Ｓ．，Ｍａｊｅｒａ，Ｄ．，Ｇｕｒｓｋｙ，Ｊ．，Ｏｚｄｉａｎ，Ｔ．，Ｂａｒｔｋｏｖａ，Ｊ．，Ｔｕｒｉ，Ｚ．，Ｍｏｕｄｒｙ，Ｐ．，Ｋｒａｕｓ，Ｍ．，Ｍｉｃｈａｌｏｖａ，Ｍ．，Ｖａｃｌａｖｋｏｖａ，Ｊ．，Ｄｚｕｂａｋ，Ｐ．，Ｖｒｏｂｅｌ，Ｉ．，Ｐｏｕｃｋｏｖａ，Ｐ．，Ｓｅｄｌａｃｅｋ，Ｊ．，Ｍｉｋｌｏｖｉｃｏｖａ，Ａ．，Ｋｕｔｔ，Ａ．，Ｌｉ，Ｊ．，Ｍａｔｔｏｖａ，Ｊ．，Ｄｒｉｅｓｓｅｎ，Ｃ．，Ｄｏｕ，Ｑ．Ｐ．，Ｏｌｓｅｎ，Ｊ．，Ｈａｊｄｕｃｈ，Ｍ．，Ｃｖｅｋ，Ｂ．，Ｄｅｓｈａｉｅｓ，Ｒ．Ｊ．＆  Ｂａｒｔｅｋ，Ｊ．Ａｌｃｏｈｏｌ−ａｂｕｓｅ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｖｉａ  ｐ９７  ｓｅｇｒｅｇａｓｅ  ａｄａｐｔｏｒ  ＮＰＬ４．Ｎａｔｕｒｅ  ５５２，１９４−１９９（２０１７）．
２５  Ｓｈｅｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｍａｙｓ，Ｄ．Ｃ．，Ｌｉｐｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．＆  Ｎａｙｌｏｒ，Ｓ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｄｄｕｃｔｓ  ｏｆ  ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ  ｗｉｔｈ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６１，５３７−５４５（２００１）．
２６  Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｅ．Ｎ．Ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．Ａｃｔａ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ  Ｓｃａｎｄ  Ｓｕｐｐｌ  ３６９，７−１３（１９９２）．
２７  Ｃａｓｔｉｌｌｏ−Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ，Ａ．，Ｒｕｆｉｎｏ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｙ．，Ｍｅｎｄｅｚ，Ｓ．Ｔ．，Ｔｏｒｒｅｓ−Ａｒｒｏｙｏ，Ａ．，Ｐｏｎｃｅ−Ｍａｃｏｔｅｌａ，Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｇｏｒｄｉｌｌｏ，Ｍ．Ｎ．，Ｒｅｙｅｓ−Ｖｉｖａｓ，Ｈ．＆  Ｏｒｉａ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｊ．Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ  ｔｒｉｏｓｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｇｉａｒｄｉａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐａｒａｓｉｔｏｌ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔ  ７，４２５−４３２（２０１７）．
２８  Ｓａｎｃｈｅｚ，Ｒ．，Ｒｉｄｄｌｅ，Ｍ．，Ｗｏｏ，Ｊ．＆  Ｍｏｍａｎｄ，Ｊ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｙ  ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｔｈｉｏｌｓ  ｕｓｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  １７，４７３−４８１（２００８）．
２９  Ｎｏｂｅｌ，Ｃ．Ｓ．，Ｋｉｍｌａｎｄ，Ｍ．，Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｄ．Ｗ．，Ｏｒｒｅｎｉｕｓ，Ｓ．＆  Ｓｌａｔｅｒ，Ａ．Ｆ．Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｓｐａｓｅ  ｆａｍｉｌｙ．Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  １０，１３１９−１３２４（１９９７）．
３０  Ｉｒｒｅｒａ，Ｎ．，Ｖａｃｃａｒｏ，Ｍ．，Ｂｉｔｔｏ，Ａ．，Ｐａｌｌｉｏ，Ｇ．，Ｐｉｚｚｉｎｏ，Ｇ．，Ｌｅｎｔｉｎｉ，Ｍ．，Ａｒｃｏｒａｃｉ，Ｖ．，Ｍｉｎｕｔｏｌｉ，Ｌ．，Ｓｃｕｒｕｃｈｉ，Ｍ．，Ｃｕｔｒｏｎｅｏ，Ｇ．，Ａｎａｓｔａｓｉ，Ｇ．Ｐ．，Ｅｔｔａｒｉ，Ｒ．，Ｓｑｕａｄｒｉｔｏ，Ｆ．＆  Ａｌｔａｖｉｌｌａ，Ｄ．ＢＡＹ  １１−７０８２  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ＮＦ−ｋａｐｐａＢ  ａｎｄ  ＮＬＲＰ３  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＩＭＱ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ）  １３１，４８７−４９８（２０１７）．
３１  Ｊｕｌｉａｎａ，Ｃ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ−Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｔ．，Ｗｕ，Ｊ．，Ｄａｔｔａ，Ｐ．，Ｓｏｌｏｒｚａｎｏ，Ｌ．，Ｙｕ，Ｊ．Ｗ．，Ｍｅｎｇ，Ｒ．，Ｑｕｏｎｇ，Ａ．Ａ．，Ｌａｔｚ，Ｅ．，Ｓｃｏｔｔ，Ｃ．Ｐ．＆  Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｅ．Ｓ．Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｐａｒｔｈｅｎｏｌｉｄｅ  ａｎｄ  Ｂａｙ  １１−７０８２  ａｒｅ  ｄｉｒｅｃｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８５，９７９２−９８０２（２０１０）．
３２  Ｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｎ．，Ｂｅｎｃｚｅ，Ｇ．，Ｃｏｈｅｎ，Ｐ．＆  Ｔｏｎｋｓ，Ｎ．Ｋ．Ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ＢＡＹ−１１−７０８２  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ．Ｔｈｅ  ＦＥＢＳ  ｊｏｕｒｎａｌ  ２８０，２８３０−２８４１（２０１３）．
３３  Ｋｕｌｋａｒｎｉ，Ｒ．Ａ．，Ｓｔａｎｆｏｒｄ，Ｓ．Ｍ．，Ｖｅｌｌｏｒｅ，Ｎ．Ａ．，Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ，Ｄ．，Ｂｌｉｓｓ，Ｍ．Ｒ．，Ｂａｒｏｎ，Ｒ．，Ｂｏｔｔｉｎｉ，Ｎ．＆  Ｂａｒｒｉｏｓ，Ａ．Ｍ．Ｔｈｉｕｒａｍ  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｓ  ａｓ  ｐｓｅｕｄｏ−ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ  ８，１５６１−１５６８（２０１３）．
Ｂｒｏｚ，Ｐ．＆  Ｄｉｘｉｔ，Ｖ．Ｍ．Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｓ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｓｓｅｍｂｌｙ，ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６，４０７−４２０（２０１６）．
３４．Ｓｈｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｆ  ＧＳＤＭＤ  ｂｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ｐｙｒｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｎａｔｕｒｅ  ５２６，６６０−６６５（２０１５）．
３５．Ｈａｇｎ，Ｆ．，Ｎａｓｒ，Ｍ．Ｌ．＆  Ｗａｇｎｅｒ，Ｇ．Ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｄｉｓｃｓ  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｉｚｅ  ｆｏｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｂｙ  ＮＭＲ．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  １３，７９−９８（２０１８）．
３６．Ｓｕｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｘｅｄ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ＲＩＰ３  ｋｉｎａｓｅ．Ｃｅｌｌ  １４８，２１３−２２７（２０１２）．
３７．Ｄｅｇｔｅｒｅｖ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＲＩＰ１  ｋｉｎａｓｅ  ａｓ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｓｔａｔｉｎｓ．Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ４，３１３−３２１（２００８）．
３８．Ｒａｔｈｋｅｙ，Ｊ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｙｒｏｐｔｏｔｉｃ  ｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇａｓｄｅｒｍｉｎ  Ｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  ｓｅｐｓｉｓ．Ｓｃｉ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３（２０１８）．
３９．Ｓｏｌｌｂｅｒｇｅｒ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｄｅｒｍｉｎ  Ｄ  ｐｌａｙｓ  ａ  ｖｉｔａｌ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｒａｐｓ．Ｓｃｉ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３（２０１８）．
４０．Ｎａｉｒ，Ａ．Ｂ．＆  Ｊａｃｏｂ，Ｓ．Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｄｏｓｅ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｎｉｍａｌｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ．Ｊ  Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍ  ７，２７−３１（２０１６）．
４１．Ｋａｙａｇａｋｉ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｏｎ−ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｃａｓｐａｓｅ−１１．Ｎａｔｕｒｅ  ４７９，１１７−１２１（２０１１）．
４２．Ｗｈｉｔｅ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｍｔＤＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＳＴＩＮＧ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ＩＦＮ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ  １５９，１５４９−１５６２（２０１４）．
４３．Ｒｏｎｇｖａｕｘ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ  ｂｙ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ．Ｃｅｌｌ  １５９，１５６３−１５７７（２０１４）．
４４．Ｒａｕｅｒｔ−Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＩＫＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｂａｙ  １１−７０８２  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＦｋａｐｐａＢ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８，ｅ５９２９２（２０１３）．
４５．Ｎａｓｒ，Ｍ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ｃｉｒｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ｎａｎｏｄｉｓｃｓ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｙｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｖｉｒａｌ  ｅｎｔｒｙ．Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４，４９−５２（２０１７）．
【０２３５】
他の実施形態
本出願は、その詳細な説明と併せて説明されているが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本出願の範囲を例示することを意図しており、限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、および修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
2021530464.tif 000031
【図２】
2021530464.tif 000032
【図３】
2021530464.tif 000033
【図４】
2021530464.tif 000034
【図５】
2021530464.tif 000035
【図６】
2021530464.tif 000036
【図７】
2021530464.tif 000037
【図８】
2021530464.tif 000038
【図９】
2021530464.tif 000039
【図１０】
2021530464.tif 000040
【図１１】
2021530464.tif 000041
【図１２】
2021530464.tif 000042
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2021530464.tif 000050
【図２１】
2021530464.tif 000051
【図２２】
2021530464.tif 000052
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
2021530464.tif 000060
【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
2021530464.tif 000069
【図４０】
2021530464.tif 000070
【図４１】
2021530464.tif 000071
【図４２】
2021530464.tif 000072
【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
2021530464.tif 000080
【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
2021530464.tif 000090
【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
2021530464.tif 000109
【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９】
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【図９０】
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【図９１】
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【図９２】
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【図９３】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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【図９８】
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【国際調査報告】
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