(57)【要約】  生物学的薬剤を真皮または表在筋へその薬剤の局所適用により送達する方法が提供される。上記方法は、１つの実施形態において、皮膚領域を処置またはコンディショニングして、その皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定し、その処置された皮膚領域に生物学的薬剤を含む製剤を適用することを含む。【選択図】図３Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的薬剤を送達する方法であって：
皮膚領域を処置して、その皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定するステップ；および
その処置された皮膚領域に製剤を適用し、この製剤がその生物学的薬剤および薬学的に許容される担体を含んでいるステップ、を含み、
それによって、前記処置がその生物学的薬剤の局所的または経皮的な送達を達成する、前記方法。
【請求項２】
前記処置が、化学的または機械的処置を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記処置が、ヒアルロン酸を含む製剤であり、このヒアルロン酸の一部が結晶形態である、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記処置が、真皮ローラーである、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記真皮ローラーが、角質層に接触する平坦な刃状の縁部を有する複数の微小突起を有する、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記真皮ローラーが、角質層に接触する先端部で終端するテーパ状シャフトを有する複数の微小突起を有する、請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記皮膚領域が、前記真皮ローラーの単一パスで処置される、請求項４〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
前記皮膚領域が、前記真皮ローラーの複数のパスで処置される、請求項４〜６のいずれか１項記載の方法、
【請求項９】
前記処置が、テープストリッピングである、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項１０】
前記テープストリッピングが、テープストリップを少なくとも２回、貼り付けて剥がすことを含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記テープストリッピングが、テープストリップを２〜２０回の間、貼り付けて剥がすことを含む、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
前記テープストリッピングが、テープストリップを３〜１２回の間、貼り付けて剥がすことを含む、請求項９記載の方法。
【請求項１３】
前記処置および適用が、同時に行われる、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
前記生物学的薬剤が、クロストリジウム誘導体である、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記クロストリジウム誘導体が、ボツリヌス毒素である、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記生物学的薬剤が、約40,000ダルトンよりも大きい分子量を有する、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
局在領域における状態を生物学的薬剤で治療する方法であって：
皮膚領域を処置して、その皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定するステップ、および
その処置された皮膚領域に製剤を適用し、この製剤がその生物学的薬剤および薬学的に許容される担体を含んでいるステップ、を含み、
それによって、前記処置がその生物学的薬剤の局所的または経皮的な送達を達成する、前記方法。
【請求項１８】
前記状態が、小じわまたはしわである、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記小じわまたはしわが、外眼角しわ、眉間しわ、額のしわ、広頸筋のしわ、鼻唇溝、口周囲唇のしわ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記状態が、皮膚の弛緩である、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
前記状態が、油性の皮膚、皮脂、拡大された細孔サイズ、または色素沈着過剰である、請求項１７記載の方法。
【請求項２２】
前記処置が、化学的または機械的処置を含む、請求項１７〜２１のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
前記処置が、ヒアルロン酸を含む製剤であり、このヒアルロン酸の一部が結晶形態である、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記処置が、真皮ローラーである、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
前記真皮ローラーが、角質層に接触する平坦な刃状の縁部を有する複数の微小突起を有する、請求項２５記載の方法。
【請求項２６】
前記真皮ローラーが、角質層に接触する先端部で終端するテーパ状シャフトを有する複数の微小突起を有する、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記皮膚領域が、その真皮ローラーの単一パスで処置される、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の方法。
【請求項２８】
前記皮膚領域が、その真皮ローラーの複数のパスで処置される、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の方法。
【請求項２９】
前記処置が、テープストリッピングである、請求項２２記載の方法。
【請求項３０】
前記テープストリッピングが、テープストリップを少なくとも２回、貼り付けて剥がすことを含む、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記テープストリッピングが、テープストリップを２〜２０回の間、貼り付けて剥がすことを含む、請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
前記テープストリッピングが、テープストリップを３〜１２回の間、貼り付けて剥がすことを含む、請求項２９記載の方法。
【請求項３３】
前記処置および適用が、同時に行われる、請求項１７〜３２のいずれか１項記載の方法。
【請求項３４】
前記生物学的薬剤が、クロストリジウム誘導体である、請求項１７〜３３のいずれか１項記載の方法。
【請求項３５】
前記クロストリジウム誘導体が、ボツリヌス毒素である、請求項１４記載の方法。
【請求項３６】
前記生物学的薬剤が、約40,000ダルトンよりも大きい分子量を有する、請求項１７〜３３のいずれか１項記載の方法。
【請求項３７】
肌の質を改善する方法であって：
皮膚領域をコンディショニングして、その皮膚領域内の角質層を崩壊させて、コンディショニングされた皮膚領域を画定するステップ；および
そのコンディショニングされた皮膚領域に製剤を適用し、この製剤がクロストリジウム誘導体および薬学的に許容される担体を含んでいるステップ、を含み、
それによって、前記コンディショニングおよび適用がそのクロストリジウム誘導体の皮膚送達および/または表在筋送達を達成する、前記方法。
【請求項３８】
前記クロストリジウム誘導体が、ボツリヌス毒素である、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
前記クロストリジウム誘導体が、約500,000ダルトンよりも大きい分子量を有する、請求項３７〜３８記載の方法。
【請求項４０】
前記コンディショニングが、化学的または機械的処置を含む、請求項３７〜３９のいずれか１項記載の方法。
【請求項４１】
前記処置が、ヒアルロン酸を含む製剤であり、このヒアルロン酸の一部が結晶形態である、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
前記処置が、真皮ローラーである、請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
前記真皮ローラーが、角質層に接触する平坦な刃状の縁部を有する複数の微小突起を有する、請求項４２記載の方法
【請求項４４】
前記真皮ローラーが、角質層に接触する先端部で終端するテーパ状シャフトを有する複数の微小突起を有する、請求項４２記載の方法。
【請求項４５】
前記皮膚領域が、その真皮ローラーの単一パスでコンディショニングされる、請求項４２〜４４のいずれか１項記載の方法。
【請求項４６】
前記皮膚領域が、その真皮ローラーの複数のパスでコンディショニングされる、請求項４２〜４４のいずれか１項記載の方法。
【請求項４７】
前記処置が、テープストリッピングである、請求項４０記載の方法。
【請求項４８】
前記テープストリッピングが、テープストリップを少なくとも２回、貼り付けて剥がすことを含む、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記テープストリッピングが、テープストリップを２〜２０回の間、貼り付けて剥がすことを含む、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
前記テープストリッピングが、テープストリップを３〜１２回の間、貼り付けて剥がすことを含む、請求項４７記載の方法。
【請求項５１】
前記コンディショニングおよび適用が、同時に行われる、請求項３７〜５０のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2018年５月11日に出願された米国特許仮出願第60/670,711号の利益を主張し、その全体の内容は参照により本明細書に援用されている。
【０００２】
技術分野
本開示は、局所的に適用された製剤から真皮および/または表在筋へ生物学的薬剤を送達する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
ヒトの皮膚は、有益な薬剤を送達するための容易にアクセス可能な表面である。平均成人体の皮膚は、約２m2の表面を覆い、身体を循環する血液の約1/3を受け取る。皮膚は、最上層、形態学的に異なる領域を有する表皮；基底層、棘層、顆粒層および最上部の角質層を含む。有益な薬剤を皮膚に局所送達するためにおよび有益な薬剤を系へ経皮送達するために、この薬剤は角質層のバリア特性を克服しなければならない。角質層は、その上に配置された薬剤に対して選択的に透過性であり、分子量が400ダルトン未満の比較的親油性の化合物のみを通過させることを可能にする。角質層のバリア特性を克服する方法には、イオントフォレーシス、皮膚のエレクトロポレーション、マイクロニードリングなどの物理的または機械的方法、および浸透促進剤、例えばジメチルスルホキシド(DMSO)、オレイルアルコール、プロピレングリコール(PG)、メチルピロリドン、およびドデシラジルシクロヘプタン2-オン(AZONE(登録商標))などが含まれる。このような化学的方法は、特に分子が親油性または両親媒性である場合には、分子量が約500ダルトン未満である特定の化合物の浸透性を高めることができる。タンパク質および他の生物学的薬剤のような親水性化合物は、既知の化学浸透技術が利用された場合であっても、有効な送達のための皮膚バリアを克服しない。皮膚を横切る生物学的薬剤の送達を達成する方法が望まれる。
【発明の概要】
【０００４】
概要
１つの態様において、生物学的薬剤を送達する方法が提供される。本方法は、皮膚領域を処置して、この皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定するステップ、およびこの処置された皮膚領域に製剤を適用し、この製剤がその生物学的薬剤および薬学的に許容される担体を含んでいるステップを含み、ここで、上記処置および適用のステップは、その生物学的薬剤の局所または経皮送達を達成する。
１つの実施形態において、上記処置は、化学的処置もしくは機械的処置または化学的処置と機械的処置の組合わせを含む。
１つの実施形態において、上記処置は、ヒアルロン酸を含む製剤を含み、このヒアルロン酸の一部は、結晶形態またはマイクロスピキュール形態である。
別の実施形態において、上記処置は真皮ローラーである。１つの実施形態において、この真皮ローラーは、角質層に接触する平坦で刃状の縁部を有する複数の微小突起を有する。別の実施形態において、この真皮ローラーは、角質層に接触する先端部で終端するテーパ状シャフトを有する複数の微小突起を有する。
１つの実施形態において、上記皮膚領域は、この真皮ローラーの単一パスで処置される。別の実施形態において、その皮膚領域は、この真皮ローラーの１回を超えるパスで処置される。
【０００５】
さらに別の実施形態において、上記処置はテープストリッピングである。１つの実施形態において、このテープストリッピングは、テープストリップを少なくとも２回、貼り付けて剥がすことを含む。別の実施形態において、このテープストリッピングは、テープストリップを２〜20回の間または３〜12回の間、貼り付けて剥がすことを含む。
１つの実施形態において、上記処置および適用は同時に行われる。
いくつかの実施形態において、上記生物学的薬剤はクロストリジウム誘導体である。１つの実施形態において、このクロストリジウム誘導体はボツリヌス毒素である。他の実施形態において、その生物学的薬剤は約100,000ダルトンよりも大きい分子量を有する。代替の実施形態において、その生物学的薬剤は、約40,000ダルトンよりも大きい分子量を有する。
別の態様において、生物学的薬剤で局在領域における状態を治療する方法は、皮膚領域を処置して、その皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定するステップ、およびその処置された皮膚領域に製剤を適用し、その製剤が生物学的薬剤および薬学的に許容される担体を含んでいるステップを含む。この処置および/または適用は、その生物学的薬剤の局所または経皮送達を達成する。
【０００６】
１つの実施形態において、上記状態は小じわ(fine lines)またはしわ(wrinkle)である。１つの実施形態において、この小じわまたはしわは、外眼角しわ、眉間しわ、額のしわ、広頸筋のしわ、鼻唇溝、口周囲唇のしわ、およびこれらの組合せからなる群から選択される。
他の実施形態において、上記状態は皮膚の弛緩である。さらに他の実施形態において、この状態は、油性の皮膚、皮脂、または拡大された細孔サイズである。さらに他の実施形態において、この状態は、過剰なまたは減少した色素である。一実施形態において、この状態は、色素沈着過剰である
別の態様において、肌の質を改善する方法が提供される。本方法は、上記皮膚領域を治療して、その皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定するステップ、およびその処置された皮膚領域に製剤を適用し、その製剤がクロストリジウム誘導体および薬学的に許容される担体を含んでいるステップを含む。この処置および/または適用は、その改善された肌の質のためのクロストリジウム誘導体の皮膚送達を達成する。
１つの実施形態において、上記処置は、ジメチルスルホキシド(DMSO)、オレイルアルコール、プロピレングリコール(PG)、メチルピロリドン、およびドデシルアジルシクロヘプタン2-オン(AZONE(登録商標))などのこれらに限定されない、化学溶媒で処理することを除外する。
下記の図面は、本方法の実施形態の態様および特徴を示すために提示される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】IgGの局所適用前のヒアルロン酸製剤で処置されたヒト死体の皮膚の共焦点レーザー走査顕微鏡からの画像であり、そのIgGの浸透深さを可視化するために蛍光標識され、０μm、８μm、16μm、24μm、32μm、40μm、48μm、56μm、64μmの組織深さで撮影された画像である。
【図１Ｂ】IgGの局所適用前の皮膚処置なしでヒト死体の皮膚の共焦点レーザー走査顕微鏡からの画像であり、そのIgGの浸透深さを可視化するために蛍光標識され、０μm、８μm、16μm、24μm、32μm、40μm、48μm、56μm、64μmの組織深さで撮影された画像である。
【図１Ｃ】ヒアルロン酸製剤で処置され、IgGを有しないヒト死体の皮膚の共焦点レーザー走査顕微鏡からの画像であり、０μm、８μm、16μm、24μm、32μm、40μm、48μm、56μm、64μmの組織深さで撮影された画像である。
【図２Ａ】IgGの局所適用前にマイクロニードル真皮ローラーで処置されたヒト死体の皮膚の共焦点レーザー走査顕微鏡からの画像であり、そのIgGの浸透深さを可視化するために蛍光標識され、IgG適用の１時間後、および０μmから280μmまでの10μmの組織深さで撮影された画像である。
【図２Ｂ】IgGの局所適用前の処置をしないヒト死体の皮膚の共焦点レーザー走査顕微鏡からの画像であり、そのIgGの浸透深さを可視化するために蛍光標識され、IgG適用の１時間後に０μmから280μmまでの10μmの組織深さで撮影された画像である。
【図３Ａ】BoNT/A(10U/kg)(n=６匹のラット/投与方法)の筋内(IM)もしくは皮内(ID)注射の３〜４日後に観察された最大平均ラット指外転スコア(DAS)を示す棒グラフである。
【図３Ｂ】針長0.25mm、0.5mmまたは1.0mmを有する真皮ローラーで上記皮膚を処置した後の最大平均ラットDASスコアを示す棒グラフであり、このローラーは、治療される皮膚の領域にわたって１回(1X)または２回(2X)通過させ、続いてBoNT/A組成物を局所適用した。
【図３Ｃ】ラット前脛骨筋の神経筋接合におけるSNAP25197陽性染色のパーセントを、針長0.25mm、0.5mm、1.0mmを有する真皮ローラーで皮膚を処置した後のDAS分析と比較して示す棒グラフである。
【図４】0.5mmの針長を有する真皮ローラーで上記皮膚を処置した後の最大平均ラットDASスコアを示す棒グラフであり、このローラーは、処置されている皮膚の領域にわたって２回通過させ、続いて示された濃度でBoNT/Aを含む２種類の異なる製剤を局所適用した。
【図５】MTXおよびDRSとして識別された２種類の異なる真皮ローラーで皮膚を処置した後の最大平均ラットDASスコアを示す棒グラフであり、このローラーは、BoNT/Aの局所製剤を適用する前に、皮膚処置領域にわたって２回(2X)、３回(3X)、４回(4X)または５回(5X)通過させた。
【図６】150kDaのBoNT/Aまたは900kDaのBoNT/Aを含む局所製剤を適用する前に、上記皮膚を真皮ローラで処置した後の平均ピークラットDASスコアを示す棒グラフである。
【図７】ラットTA筋のいくつかの運動神経終末および軸索における光SNAP25197陽性染色を、テープストリッピングおよびその上にある皮膚表面へのBoNT/A局所適用後に示す免疫組織化学(IHC)染色である。テープストリッピングを受けなかった筋肉では、SNAP25197染色は観察されなかった。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
詳細な説明
定義
下記の定義が本明細書に適用される：
本明細書で使用される「約」または「ほぼ」は、当業者により決定された特定の値に対する許容される誤差範囲内であることを意味し、その値がどのように測定または決定されたか(すなわち、測定系の限界)に一部依存する。例えば、「約」は、当該技術における行為に対して、１以内または１を超える標準偏差を意味する場合がある。特定の値が本出願および特許請求の範囲に記載される場合、特に明記しない限り、「約」という用語は、特定の値に対する許容される誤差範囲内であることを意味する。
「投与」または「投与する」とは、対象にボツリヌス毒素を与える(すなわち投与する)ステップ、あるいは医薬組成物を受容する対象を意味する。
「軽減」は、状態または状態に関連する症状の発生の低下を意味する。したがって、軽減には、ある程度の低下、大幅な減少、ほぼ完全な低下、および完全な低下が含まれる。軽減効果は、患者へのクロストリジウム誘導体の投与後１〜７日の間にまたはその後時々臨床的に現れないことがある。
【０００９】
「動物性タンパク質を含まない」とは、血液由来の、血液貯蔵されたおよび他の動物由来の産物または化合物が存在しないことを意味する。「動物」は、哺乳動物(ヒトなど)、鳥類、爬虫類、魚類、昆虫類、クモ類または他の動物種を意味する。「動物」は、細菌などの微生物を除外する。したがって、動物性タンパク質を含まない医薬組成物はボツリヌス神経毒を含み得る。例えば、「動物性タンパク質を含まない」医薬組成物は、血清由来アルブミン、ゼラチン、および免疫グロブリンなどの他の動物由来タンパク質を実質的に含まないか、もしくは本質的に含まないか、または完全に含まないかのいずれかである医薬組成物を意味する。動物性タンパク質を含まない医薬組成物の例は、(活性成分として)ボツリヌス毒素および安定剤または賦形剤としての適切な多糖類を含むかまたはそれからなる医薬組成物である。
「生物学的薬剤」は、生物学的に活性であり、分子量が5,000ダルトン以上であるか、または本明細書で特定される値の範囲内の分子量を有する分子を意図する。
【００１０】
「ボツリヌス毒素」は、クロストリジウム・ボツリヌム(Clostridium botulinum)によって産生される神経毒、ならびに非クロストリジウム種によって組換え的に製造されたボツリヌス毒素(またはその軽鎖もしくは重鎖)を意味する。本明細書で使用される「ボツリヌス毒素」という用語は、ボツリヌス毒素血清型A(BoNT/A)、ボツリヌス毒素血清型B(BoNT/B)、ボツリヌス毒素血清型C(BoNT/C)、ボツリヌス毒素血清型D(BoNT/D)、ボツリヌス毒素血清型E(BoNT/E)、ボツリヌス毒素血清型F(BoNT/F)、ボツリヌス毒素血清型G(BoNT/G)、ボツリヌス毒素血清型H(BoNT/H)、ボツリヌス毒素血清型X(BoNT/X)、ならびにモザイク型ボツリヌス毒素および/またはそのサブタイプおよび変異体を包含する。本明細書で使用される「ボツリヌス毒素」はまた、「修飾ボツリヌス毒素」ボツリヌス毒素を包含する。本明細書で使用されるさらなる「ボツリヌス毒素」はまた、ボツリヌス毒素複合体(例えば、300、600および900kDa複合体)、ならびに複合タンパク質が結合していないボツリヌス毒素(150kDa)の神経毒性成分も包含する。
「クロストリジウム誘導体」は、クロストリジウム毒素の任意の部分を含有する分子を指す。本明細書で使用されるように、「クロストリジウム誘導体」という用語は、天然または組換え神経毒素、組換え修飾毒素、その断片、標的小胞性エキソサイトーシス調節因子(TEM)、またはそれらの組合せを包含する。
【００１１】
「クロストリジウム毒素」は、クロストリジウム毒素が細胞内に入り、クロストリジウム毒素の低または高親和性クロストリジウム毒素受容体への結合、毒素/受容体複合体の内部移行、クロストリジウム毒素軽鎖の細胞質内への移行、およびクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾を起こすことによって、全般的な細胞機構を遂行することができるクロストリジウム毒素株により産生される任意の毒素を指す。クロストリジウム毒素の非限定的な例としては、BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、破傷風毒素(TeNT)、バラティ(Baratii)毒素(BaNT)、およびブチリカム(Butyricum)毒素(BuNT)などのボツリヌス毒素が挙げられる。神経毒素ではないBoNT/C2サイトトキシンおよびBoNT/C3サイトトキシンは、「クロストリジウム毒素」という用語から除外される。本明細書に開示されるクロストリジウム毒素としては、限定するものではないが、例えば、クロストリジウム毒素イソ型およびクロストリジウム毒素サブタイプなどの天然に存在するクロストリジウム毒素変異体、、非天然のクロストリジウム毒素変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素変異体、非保存的クロストリジウム毒素変異体、クロストリジウム毒素キメラ変異体およびそれらの活性クロストリジウム毒素断片、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。本明細書に開示されるクロストリジウム毒素には、クロストリジウム毒素複合体も含まれる。本明細書で使用される「クロストリジウム毒素複合体」という用語は、クロストリジウム毒素および非毒素関連タンパク質(NAP)を含む複合体、例えば、ボツリヌス毒素複合体、破傷風毒素複合体、バラティ毒素複合体、およびブチリカム毒素複合体を指す。クロストリジウム毒素複合体の非限定的な例としては、例えば、クロストリジウム・ボツリナム(Clostridium botulinum)により産生されるもの、例えば、900kDa BoNT/A複合体、600kDa BoNT/A複合体、300kDa BoNT/A複合体、500kDa BoNT/B複合体、500kDa BoNT/C1複合体、500kDa BoNT/D複合体、300kDa BoNT/D複合体、および300kDa BoNT/F複合体が挙げられる。
【００１２】
生物学的有効成分に適用される「有効量」は、対象において所望の変化を引き起こすのに一般的に充分である成分の量を意味する。例えば、所望の効果が結石の形成の減少である場合、有効量の成分は、膀胱過剰活性および関連する症状の少なくとも実質的な減少を引き起こし、かつ有意な毒性をもたらすことのない量である。
「無傷の皮膚」という用語は、その自然のバリア機能を保持し、角質層のバリア機能を害する可能性があるように化学的手段または物理的処置により変更されていない皮膚を指す。逆に、「非無傷の」皮膚とは、角質層のバリア機能を害するように処置された皮膚を指す。
「局所投与」は、医薬品の生物学的効果が望まれる場所である動物体表面もしくは体内またはその近傍への医薬品の投与を意味し、例えば、筋内もしくは皮内もしくは皮下注射、または経皮投与などによる。局所投与は、静脈内投与または経口投与などの全身性経路を除く。皮膚投与は、医薬品が患者の皮膚に適用される局所投与の一種である。
【００１３】
「修飾ボツリヌス毒素」は、天然ボツリヌス毒素と比較して、少なくとも１つのアミノ酸が欠失し、修飾され、または置換されたボツリヌス毒素を意味する。さらに、この修飾ボツリヌス毒素は、組換えにより産生された神経毒素、または組換えにより作製された神経毒素の誘導体もしくは断片であり得る。修飾ボツリヌス毒素は、天然ボツリヌス毒素の少なくとも１つの生物活性、例えば、ボツリヌス毒素受容体に結合する能力、またはニューロンからの神経伝達物質放出または非神経細胞からの小胞放出を阻害する能力を保持する。修飾ボツリヌス毒素の一例は、１つのボツリヌス毒素血清型(血清型Aなど)由来の軽鎖、および異なるボツリヌス毒素血清型(血清型Bなど)由来の重鎖を有するボツリヌス毒素である。修飾ボツリヌス毒素の別の例は、P物質のような神経伝達物質に結合されたボツリヌス毒素である。
「分子量」という用語は、分子を構成する全ての原子の原子量の和をいい、ダルトン(Da)で数値的に表現できる。
【００１４】
「変異」は、天然に存在するタンパク質または核酸配列の構造修飾を意味する。例えば、核酸変異の場合、変異は、DNA配列中の１つ以上のヌクレオチドの欠失、付加または置換であり得る。タンパク質配列変異の場合、変異は、タンパク質配列中の１つ以上のアミノ酸の欠失、付加または置換であり得る。例えば、タンパク質配列を含む特定のアミノ酸を、他のアミノ酸、例えば、アミノ酸アラニン、アスパラギン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンまたは任意の他の天然もしくは非天然のアミノ酸もしくは化学修飾アミノ酸を含む群から選択されるアミノ酸に置換できる。タンパク質配列の変異は、DNA配列に対する変異の結果であり、DNAが転写され、得られたmRNAが翻訳されたときに、突然変異タンパク質配列を生じる。タンパク質配列への変異はまた、所望の変異を含有するペプチド配列を所望のタンパク質配列に融合させることによって作り出すことができる。
「受動的経皮送達」という用語は、皮膚表面上に活性剤を置き、それによって、皮膚表面上のより高い薬物濃度と皮膚内のより低い薬物濃度との間の濃度勾配の関数として皮膚に浸透することによりその活性薬剤を送達することを指す。
「末梢投与」は、局所投与とは対照的に、症候性位置から離れた位置への投与を意味する。
「医薬組成物」は、例えば、ボツリヌス毒素などのクロストリジウム毒素活性成分などの活性医薬成分と、例えば、安定剤または賦形剤などの少なくとも１つの追加成分とを含む組成物を意味する。したがって、医薬組成物は、ヒト患者などの対象への診断的または治療的投与に適した製剤である。この医薬組成物は、例えば、凍結乾燥もしくは真空乾燥の状態、凍結乾燥もしくは真空乾燥された医薬組成物の再構成後に形成された溶液、または再構成を必要としない溶液もしくは固体であり得る。
【００１５】
「薬理学的に許容される賦形剤」は、「薬理学的賦形剤」または「賦形剤」と同義であり、哺乳動物に投与されたときに実質的に長期的または永続的な有害な効果を有さず、かつ例えば、安定化剤、増量剤、低温保護剤、凍結防止剤、添加剤、ビヒクル、担体、希釈剤、または補助剤などの化合物を包含する、任意の賦形剤を指す。賦形剤は、一般に活性成分と混合され、または活性成分を希釈または封入することが可能であり、固体、半固体または液体剤であり得る。クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物は、活性成分を薬学的に許容される組成物に加工するのを容易にする１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことができることも企図される。任意の薬理学的に許容される賦形剤がクロストリジウム毒素活性成分と不適合でない限り、薬学的に許容される組成物におけるその使用が企図される。薬理学的に許容される賦形剤の非限定的な例は、例えば、医薬剤形および薬物送達システム(Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed. 1999)、レミントンの薬学の科学と実務(Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed. 2000)、グッドマン・ギルマン薬理書：薬物治療の基礎と臨床(Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001)、および薬学的賦形剤ハンドブック(Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4th edition 2003)に見出すことができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に援用されている。
【００１６】
本明細書で使用される「TEM」は、「標的化エキソサイトーシス調節因子」または「再標的化エンドペプチダーゼ」または「標的化分泌抑制剤(TSI)」と同義である。一般に、TEMは、クロストリジウム毒素軽鎖由来の酵素ドメイン、クロストリジウム毒素重鎖由来の移行ドメイン、および標的化ドメインを含む。TEMの標的化ドメインは、天然に存在するクロストリジウム毒素により利用される天然クロストリジウム毒素受容体以外の受容体に分子を標的化する、改変された細胞標的化能力を与える。この再標的化能力は、クロストリジウム毒素の天然に存在する結合ドメインを非クロストリジウム毒素受容体に対する結合活性を有する標的化ドメインで置き換えることによって達成される。TEMは、非クロストリジウム毒素受容体に結合するが、TEM/受容体複合体の細胞質への内部移行、小胞膜での孔および二鎖分子の形成、酵素ドメインの細胞質への移行、ならびに標的細胞のSNARE複合体の成分に対するタンパク質分解効果の発揮を含む、中毒プロセスの全ての他のステップを行う。
本明細書で使用される「局所適用」または「局所的に適用する」は、角質層層が無傷であっても崩壊されていてもよい、表皮組織、特に外側の皮膚において、直接的に配置または広げることを意味する
本明細書で使用される「局所送達」または「局所投与」などは、皮膚への限局性送達のために、局所的に適用された活性剤の皮膚への通過を意味する。
本明細書で使用される「経皮」は、表在筋への限局性送達のためにまたは活性剤の全身送達のために皮膚の中および/または皮膚への通過を意味する。
【００１７】
「治療する」または「治療」は、一時的にもしくは持続的に、少なくとも１つの症状(例えば、股関節部および鼠径部の痛み)を軽減する(または排除する)ことを意味する。
「治療有効量」は、所望の治療効果を達成するのに充分な量を指す。
「変異型」は、野生型ボツリヌス毒素に対して少なくとも１つのアミノ酸の置換、修飾、付加または欠失によって修飾された野生型ボツリヌス毒素血清型A、B、C、D、E、F、G、H、X、モザイク型ボツリヌス毒素および/またはそれらのサブタイプ、ハイブリッド、キメラなどのクロストリジウム神経毒素を意味し、これは、標的細胞によって認識され、その標的細胞によって、内部移行され、その標的細胞中のSNARE(SNAP(可溶性NSF接着タンパク質)受容体)タンパク質を触媒的に切断する。
変異型神経毒成分の一例は、置換され、修飾され、欠失および/または付加された１つ以上のアミノ酸を有するボツリヌス毒素の変異型軽鎖を含むことができる。この変異型軽鎖は、エキソサイトーシス、例えば、神経伝達物質小胞の放出を防止するための同じまたはより良好な能力を有することができる。さらに、変異型の生物学的効果は、親化学物質と比較して減少させることができる。例えば、アミノ酸配列が除去されたボツリヌス毒素A型の変異軽鎖は、親(または天然)ボツリヌス毒素A型の軽鎖よりも短い生物学的持続性を有することができる。
【００１８】
治療方法
１つの態様において、生物学的薬剤の局所または経皮送達のための方法が提供される。本方法は、皮膚領域を処置して、この皮膚領域内の角質層を崩壊させて、処置された皮膚領域を画定するステップ、およびこの処置された皮膚領域に製剤を適用し、この製剤が生物学的薬剤および薬学的に許容される担体を含んでいるステップを含む。この処置および/または適用は、その生物学的薬剤の局所または経皮送達を達成する。いくつかの実施形態において、この処置および/または適用は、例えば、その処置された皮膚領域の表在筋または処置された皮膚領域の真皮への生物学的薬剤の送達を達成する。他の態様において、肌の質を改善するため、または損傷したまたは老化した皮膚を治療するための、局在領域における状態を治療するための方法が提供される。いくつかの実施形態において、その生物学的薬剤はクロストリジウム誘導体である。
実施例１に記載されているように、皮膚領域を処置し、生物学的薬剤を適用することにより皮膚状態を治療する方法を実証するために、試験を行った。ヒト死体の皮膚を、ヒアルロン微結晶を含有する研磨スクラブで処置して角質層を崩壊させた。ヒアルロン酸スクラブで処置した後、この処置された皮膚領域に、その生物学的薬剤IgGを含む製剤を適用した。このIgGは150kDaタンパク質である。それは、皮膚へのその浸透深さが可視化され得るように蛍光標識された。比較対照のために、皮膚サンプルは、IgG製剤の適用前にヒアルロンスクラブで処置されず、他の皮膚サンプルは、ヒアルロンスクラブのみで処置された(すなわち、IgG製剤は適用されなかった)。蛍光が検出されず、画像が撮影されないまでは、共焦点レーザー走査顕微鏡で増加する組織深さで皮膚サンプルを走査した。結果を図１Ａ〜図１Ｃに示す。
【００１９】
図１Ａを参照すると、IgGの局所適用前にヒアルロン酸スクラブで処置された皮膚の共焦点レーザー走査顕微鏡からの画像は、各画像に示されるように様々な組織深さで示されている。共焦点画像は、蛍光標識IgGの浸透深さが約32μmであったことを示す。この画像はまた、皮膚の形態がヒアルロン酸スクラブで変化したことを示す。これは、図１Ｂの画像を検査することにより明らかであり、ヒアルロンスクラブで処置されなかった皮膚対照サンプルに対応する。角質層を崩壊させるために皮膚を処置することなく皮膚へのその生物学的薬剤の適用は、約8μmのIgG浸透深さを達成した。ヒアルロン酸スクラブ処置を受けていない対照サンプル(図１Ｂ)の画像は、蛍光強度がはるかに低く、ほぼ不可視であることも示す。ヒアルロン酸スクラブで処置され、IgGで治療されていない他の対照サンプルについては、画像は図１Ｃに示されている。ヒアルロン酸スクラブのみで処置された対照皮膚サンプルにおいて、非常にわずかなバックグラウンド蛍光が検出された。これらの結果は、皮膚上の角質層を崩壊させるために、ヒアルロン酸微結晶を含有するような研磨スクラブの使用は、表皮/皮膚バリアへの150kDa IgGのような生物学的薬剤の送達を改善することができ、皮膚構造を破壊することによって、皮膚における大きな分子浸透を増強できることを示している。１つの実施形態において、この皮膚を処置して画定された領域内の角質層を崩壊させ、処置された皮膚領域に生物学的薬剤を有する製剤を適用することにより、角質層を崩壊させるために処置されなかった皮膚に適用された同じ製剤からの生物学的薬剤の浸透深さよりも少なくとも約２、2.5、３、3.5または４倍大きい、画定された領域への生物学的薬剤の浸透深さの増加が達成される。
【００２０】
別の試験では、真皮ローラーを使用して、皮膚領域を処置して、角質層を崩壊させた。実施例２に記載されているように、ヒト死体の皮膚サンプルを針の長さが0.5mmの真皮ローラーでマイクロポレーション処理した。その真皮ローラーで処置した後、その処置された皮膚領域に蛍光標識IgGを有する製剤を適用した。１時間後に、この皮膚を共焦点レーザー走査顕微鏡で分析し、蛍光が可視化されるまで、10μm厚さの皮膚層を通して走査した。対照として、皮膚サンプルは、そのIgG製剤を適用する前に真皮ローラーで処理されなかった。
図２Ａは、蛍光標識IgGの局所適用前に、マイクロニードル真皮ローラーで処置された皮膚の画像を示す。これらの画像は、生成されたマイクロチャネルの深さを示し、220μmは蛍光標識IgGの検出のための限界である。図２Ｂは、IgGの局所適用前に真皮ローラーで処置されなかった皮膚の画像を示す。蛍光標識IgGは、約70μm深さを超えて可視化され得ない。これらの結果は、この生物学的薬剤が真皮ローラーを用いた物理的処置の後に、物理的処置を行わないよりもヒトの皮膚に３倍深く浸透したことを示した。蛍光マーカーは、真皮ローラー処置(図２Ａ)後の約220μm深さまで真皮ローラー処置なしの対照皮膚のための約70μmの深さ(図２Ｂ)に対して可視であった。220μm深さへの送達は、皮膚の真皮層への送達に等しい。これらの結果は、分子量が5,000ダルトン、10,000ダルトン、50,000ダルトン、75,000ダルトン、または100,000ダルトンよりも大きい生物学的薬剤の皮膚における浸透が、生物学的薬剤の適用前または適用時に皮膚構造を破壊することにより増強され得ることを示す。１つの実施形態において、浸透促進は、角質層を崩壊させるように処置されていない同様の皮膚領域に適用された同じ製剤から同じ生物学的薬剤について得られたものよりも少なくとも約２、2.5、３、3.5、４、4.5または５倍大きい。
【００２１】
実施例３は、皮膚を処置して角質層を崩壊させて、生物学的薬剤の送達を可能にする別の試験を記載する。この試験において、この生物学的薬剤は、ボツリヌス神経毒素A型(BoNT/A)であった。無毛ラットの前脛骨(TA)筋の上にある皮膚を、針長が0.25mm、0.50mm、または1.0mmの真皮ローラーによりマイクロポレーション処理した。ニードル装置が処置の皮膚領域にわたって転がされたパス数または回数は、１回または２回(すなわち、１パスまたは２パス、図では１X、２Xなどとして示されている)であった。この真皮ローラーでの処置後、150kDaの生物学的薬剤、BoNT/Aを含む製剤をこの処置された皮膚領域に適用した。
上記BoNT/Aの皮膚浸透度を測定するために、ラット指外転スコア(DAS)を使用した。このDASは、局所筋肉弱化におけるBoNT/Aの有効性を決定するために使用される生理的アッセイである(Broide, R.S. et al., Toxicon, 71:18-24 (2013))。簡潔に言えば、筋内(IM)または皮内(ID)注射の後、この毒素は、特徴的な後肢スタートル応答を生じる動物の能力の用量依存的減少を誘発し、この応答の程度は、５点スケールでスコアされる。さらに、筋内の運動神経における機能性BoNT/Aの存在は、高選択性抗体を使用したBoNT/A切断SNAP25基質(SNAP25197)の免疫組織化学的(IHC)染色によって検証できる(Rheaume, C. et al., Toxins (Basel), 7(7), 2354-2370 (2015); Cai, B.B. et al., Neuroscience, 352:155-169 (2017))。
この試験では、局所適用後、１〜４日目および７日目にDAS読み取り値を取り、各群についての最大平均DASスコアを観察し、記録した。スコアリングスケールは、実施例３に記載されている。TA筋の上にある皮膚へのBoNT/A(10U/kg、900kDa)の皮内注射は、ポジティブコントロールとして使用された。皮内注射は、図３Ａに見られるように、同じ毒素用量における筋内注射と以前に比較されており、有効性は、わずかだけ減少していることが見出された(それぞれ、〜ED70対〜ED90)。
【００２２】
図３Ｂ〜図３Ｃを参照すると、真皮ローラーでのマイクロポレーション処理は、スコアがDAS０〜４(アッセイにおいて、最大の応答)の範囲のラットにおいて一時的な筋麻痺をもたらす(図３Ｂ)。0.25mmの長さを有する針は、局所的に適用されたボツリヌス神経毒素によって、低DASスコア(平均＜１)をもたらした。0.5mmおよび1.0mmの針長は、0.25mmの針長よりも実質的に良好なDASスコア(３〜４)を示し、この針長がバリア破壊の効率およびBoNT/A送達の結果的な効率に影響を与えることを示している。針長にかかわらず、真皮ローラーによる２パスは、単一パスと比較して、送達を増加させた。
ラットDASアッセイは、一般に、前脛骨筋のような後肢腓腹の１つへのBoNT/Aの筋内注射、続いてDASスコアリングを含む。角質層を崩壊させるためのバリア破壊(例えば、真皮ローラー)によるラットのTA筋の上にある皮膚組織の処置は、皮膚表面から下にある筋肉への機能性BoNT/Aの送達を容易にすることができる。筋内注射と同様に、BoNT/Aのこの局所適用はまた、用量依存性の測定可能なDAS応答をもたらす。
単回真皮ローラーコンディショニング(処置)後のSNAP25197陽性神経筋接合(NMJ)の定量的分析およびBoNT/A局所処置は、図３Ｃに見られるように、針長に依存するDASスコアと正の相関を示した。実施例３に記載されるように、前脛骨筋の断面を、１)シナプス後ニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)に結合する、蛍光標識α-ブンガノトキシン(α-Bgt)を用いた全NMJの存在および２)組換えモノクローナル抗体を用いた、シナプス前運動神経終末(MNT)および運動神経(MN)軸索におけるSNAP25197の存在について二重標識した(Rheaume, C. et al., Toxins (Basel), 7(7), 2354-2370 (2015))。前脛骨筋にわたる全体のα-Bgt-標識NMJの代表的なサンプリングのうちのSNAP25197陽性NMJの百分率を計算し、記録し、その結果を図３Ｃに示す。図３Ｂ〜図３Ｃのデータは、より長いニードルによるバリア破壊の増加および/または皮膚をわたる多くのパスが、皮膚におけるBoNT/Aの局所的な送達を容易にすることを示している。
【００２３】
したがって、１つの実施形態において、真皮および/または表在筋への生物学的薬剤の送達のための方法が提供される。本方法は、皮膚を処置して角質層を崩壊させるステップおよびこの処置された皮膚にその生物学的薬剤を有する製剤を局所的に適用するステップを含む。１つの実施形態において、その生物学的薬剤は、真皮および/または表在筋のみに送達され、受動的輸送によってのみ送達される。受動的な輸送または拡散は、外面の薬物と皮膚の内面との間の濃度勾配に依存する。拡散速度は勾配に比例し、分子のサイズ、疎水性、親水性および他の物理化学的性質ならびに吸収面の領域により調節される。１つの実施形態において、この生物学的薬剤は、いかなる活性輸送も伴わずに真皮および/または表在筋に送達される。活性輸送または送達は、例えば、その生物学的薬剤のイオン化、または皮膚の中へおよび皮膚を通って薬剤を推進するための他の手段に依存する。活性輸送送達システムには、イオントフォレーシス、ソノフォレシスおよび熱マイクロポレーションなどの方法が含まれる。
別の試験は、実施例４に記載されており、ここでは、生物学的薬剤の用量および真皮ローラーによるバリア破壊後の真皮または表在筋への送達効率について製剤を評価した。無毛ラットにおける皮膚処置領域は、皮膚領域にわたって２回ローラーを通過させることにより、0.50mmのマイクロニードルを有する真皮ローラーでコンディショニングされた。各製剤に対して２種類の異なる用量でのBoNT/Aを含む２つの製剤を、その処置された皮膚領域に適用した。局所適用に続いて、１日目〜4日目および７日目にDAS読み取り値を取り、各群についての最大平均DASスコアを決定した。図４は、異なる製剤についての最大平均ラットDASスコアを示す。平均ピークDASスコアは、異なる製剤が用量、針長、およびローラーの通過数が一定に保たれるときに異なる効率でBoNT/Aを送達できることを示している。この製剤にかかわらず、局所用量を増加させることにより、TA筋へのBoNT/Aのより効率的な送達が促進される。
【００２４】
別の試験は、実施例５に記載されており、ここでは、生物学的薬剤の送達に対する２種類の異なる真皮ローラーの効果を評価した。各真皮ローラーは、0.5mmの針を有した、一方のローラーは、より高い針密度を有する−540本の針(「DRS」ローラー)対200本の針(「MTS」ローラー)。また、針の形状は、より平坦で刃のような外観を有する針を有する１つのローラーと、円筒状のテーパー状の針を有する他のローラーで異なっていた。ローラーを皮膚領域にわたって２回通過させることにより、またはMTXローラーの場合、３回、４回および５回通過させることにより、無毛ラットの皮膚処置領域を真皮ローラーの１つでコンディショニングした。BoNT/Aを含む製剤は、この処置された皮膚領域に適用された。局所適用に続いて、DASの読み取り値が取られ、各群についての最大平均DASスコアが求められた。図５は、異なるローラー処置のための最大平均ラットDASスコアを示す。データは、異なる物理的デザインを有する真皮ローラーが、150,000ダルトン(150kDa)よりも大きい分子量を有するタンパク質生物学的薬剤の送達のために使用され得ることを示している。
【００２５】
図６は、本明細書に記載の方法を使用して、分子量が150,000ダルトンおよび900,000ダルトンの生物学的薬剤を表在筋に送達することを実証する別の試験の結果を示す。ラットの皮膚領域を真皮ローラー(実施例６)を用いてコンディショニングし、コンディショニング後、生物学的薬剤を有する局所製剤を適用した。筋肉への生物学的薬剤−ボツリヌス毒素−の機能的送達を評価するためにDASアッセイが使用された。図６のデータは、皮膚バリア破壊を局所適用と組合せることにより、900kDaのBoNT/A複合体を150kDaのBoNT/A分子と同じくらい効率的に送達できることを示している。これは、精製された150kDaのBoNT/Aと比較して、BoNT/A複合体の実質的に増加したサイズと考えれば驚くべき結果であった。
無毛ラットを使用する別の試験では、皮膚をテープストリッピングで処置し、真皮または下にある表在筋への生物学的薬剤の送達を評価した。実施例７に記載されているように、皮膚をテープ剥離して角質層を崩壊させ、下にある筋肉への機能性BoNT/Aの送達を容易にした。テープストリッピングで前処置した後またはテープストリッピングなしで、BoNT/AをTA筋の上の皮膚の領域に滴下した。局所適用後、処置された皮膚および下にある筋肉を収集し、免疫組織化学によるSNAP25197陽性染色のために処理し、これらの組織画像を図７に示す。テープストリッピングおよびBoNT/A局所適用後、すべての表在筋は、運動神経終末および軸索における光SNAP25197陽性染色を示した。SNAP25197標識NMJのパーセントは、NMJの全サンプリングから〜20%で推定された。上にある皮膚表面へのテープストリッピングを受けなかったいずれの筋肉においても、免疫組織化学的シグナルは観察されなかった。これらの結果は、軽度のテープストリッピングが、真皮および表在筋層へのBoNT/Aの送達を容易にするのに充分であることを示している。
【００２６】
図１〜図７のデータは、皮膚を処置またはコンディショニングして角質層を崩壊させ、生物学的薬剤を有する製剤を適用することによって、真皮および/または表在筋への生物学的薬剤の送達が達成されることを示している。ヒトの皮膚のモデルとして、ヒト死体の皮膚と、無毛ラットについての皮膚とを使用してデータを生成した。無毛ラットの皮膚は、典型的なラット皮膚よりも大きな皮膚厚を有する。無毛ラットにおいて、皮幹筋までの下肢皮膚表面は約1.2mmである。ヒトの場合、ヒトの顔の皮膚表面から皮膚脂肪までの距離は約２〜３mmである。正のDAS応答の本試験における観察は、バリア破壊が、〜l.2mm(この領域ではラットの皮膚の厚さ)よりも大きい距離において、無毛ラットの足の皮膚を通ってTA筋までの毒素送達を容易にすることを示している。したがって、バリア破壊は、皮膚表面から２〜３mmであるヒト顔面筋への毒素送達を容易にすることができる。ボツリヌス神経毒素は、組織中で拡散し、広がる。拡散および広がりの程度は、用量および体積を含むいくつかの要因に基づく。本明細書のデータに基づいて、BoNT/Aのような生物学的薬剤は、下の表皮から下にある筋肉まで0.5cmを拡散させることができる。
上述したように、図１〜７のデータに基づいて、真皮または表在筋に生物学的薬剤を送達する方法は、皮膚領域をコンディショニングまたは処置し、その処置またはコンディショニングされた皮膚領域に生物学的薬剤を有する製剤を局所的に適用することによって企図される。１つの態様において、本方法は、小じわおよび/またはしわなどの皮膚状態を治療するために企図される。小じわおよび/またはしわは、外眼角しわ(カラスの足跡)、眉間しわ(眉間の縦じわ)、額のしわ、広頸筋のしわ(首のしわ)、鼻唇溝(「笑いじわ」または「ほうれい線」)または口周囲唇のしわ(口と唇の周り)であり得る。実施例８は、ヒト対象が老化に起因する小じわを改善するように治療された例を提供する。
【００２７】
他の態様において、本明細書に記載の方法は、肌の質を改善するために企図される。ヒトの肌の状態または質は、例えば、湿度、紫外線、化粧品、老化、疾患、ストレス、タバコの喫煙、摂食習慣を含む様々な要因によって、連続的に影響され、その各々は様々な皮膚の変化をもたらす可能性がある。老化に特徴的な皮膚に変化が現れ、その多くは皮膚の構造の変化により反映される。皮膚の老化のいくつかの臨床徴候は、小じわおよび深いしわの出現を含み、それぞれが経時的に増加できる。皮膚の経時的な老化と皮膚の日光への暴露による皮膚の光老化の両方によって、しわが生じる可能性がある。本明細書において、企図されるような肌の質を改善するための方法には、自然老化に関連する皮膚の変化、または上述した種々の因子を逆転させること、進行を遅らせること、または予防することが含まれる。例えば、肌の質を改善することには、太陽の損傷または光老化に関連する皮膚の変化−すなわち、日光または他の形態の化学線(例えば、紫外線および日焼けブースのような)への暴露に関連する皮膚の変化の逆転、進行を遅らせること、または予防することが含まれる。別の例として、肌の質を改善することには、放射線、空気汚染、風、寒冷、湿気、熱、化学物質、煙、タバコの喫煙、およびそれらの組合せを含むが、これらに限定されない外因性要因に起因する皮膚の変化を逆転させること、進行を遅らせること、または予防することも含まれ得る。肌の質を改善することにはまた、例えば、ある種の皮膚状態(例えば、座瘡)、感染症(すなわち、リーシュマニア症)、または傷害(例えば、擦過傷、穿刺、裂傷、または外科的創傷)から生じる可能性がある瘢痕を逆転させること、予防することまたは減少させることが含まれ得る。肌の質を改善することには、上記の皮膚の変化の１つ以上を低下させること、減少させること、および/または最小化することが含まれる。肌の質を改善することにより、より若い外観を有する皮膚をもたらすことができる。肌の質を改善することにより、より滑らかで、水和された(すなわち、乾燥されていない)、色素またはより少ないうろこ状の外観さえも有する皮膚をもたらすことができる。
【００２８】
本明細書に記載の方法に関して、肌の質を改善するために、局所的な皮膚状態を処置するために、または生物学的薬剤を送達するために、治療として企図される皮膚は、顔の皮膚、頸部の皮膚、手、腕、脚、または胴体、および他の身体領域の皮膚を含むことができる。治療または改善される皮膚の状態としては、例えば、しわ(ヒトの顔のしわを含むが、これに限定されるものではない)、皮膚のしわの深まり、皮膚の菲薄化、皮膚の黄変、斑点形成、色素沈着、着色および/または非着色の老人性色素斑の出現、皮革様性、弾性の消失、反動能力(recoilability)の消失、コラーゲン線維の損失、弾性線維の異常な変化、真皮の小血管の劣化、くも状静脈の形成、およびそれらの組合せが挙げられる。
他の実施形態において、肌の質を改善する方法は、皮膚の弛緩、油性の皮膚、皮脂、または拡大された細孔サイズのうちの１つ以上を改善することを含む。さらに他の実施形態において、本方法は、皮膚の色素沈着過剰を治療することによって、肌の質を改善するためのものである。
【００２９】
実施例９〜11は、肌の質を改善するために本明細書で企図される方法を使用してヒト対象を治療する例を記載する。実施例９では、ヒト女性をヒアルロン酸マイクロスピキュールスクラブのマイクロダーマブレージョンおよび処置された皮膚領域にボツリヌス毒素の局所適用で治療して、しわを最小限に抑え、肌の弛緩を向上させることを含む、肌の質を改善させる。実施例10では、男性のヒトを真皮ローラーでかつBoNT/Aの液体製剤で治療して、油性、皮脂、細孔サイズを減少させることにより肌の質を改善させる。実施例11では、男性のヒトをマイクロスピクルスクラブのマイクロダーマブレージョンおよび処置された皮膚領域にボツリヌス毒素の局所適用で治療して、油性、皮脂、細孔サイズを減少させることにより肌の質を改善させる。
記載された実施例から理解されるように、本明細書の方法は、皮膚領域への化学的または機械的処置、または化学的および機械的処置の組合せを含む。１つの実施形態において、処置は、ヒアルロン酸を含む製剤を含み、このヒアルロン酸の一部は、結晶形態またはマイクロスピキュール形態である。別の実施形態において、処置は、真皮ローラーのようなマイクロニードリング装置である。１つの実施形態において、このマイクロニードリング装置は、角質層に接触する平坦な刃状の縁部を有する複数の微小突起を有する。別の実施形態において、マイクロニードリング装置は、角質層に接触する先端部で終端するテーパ状シャフトを有する複数の微小突起を有する。１つの実施形態において、皮膚領域は、このマイクロニードリング装置の単一パスで処置される。別の実施形態において、皮膚領域は、このマイクロニードリング装置の１を超えるパスで処置される。
【００３０】
さらに別の実施形態において、上記処置はテープストリッピングである。１つの実施形態において、このテープストリッピングは、テープストリップを少なくとも２回、貼り付けて剥がすことを含む。別の実施形態において、このテープストリッピングは、テープストリップを２〜20回の間または３〜12回の間、貼り付けて剥がすことを含む。
１つの実施形態において、上記化学的および/または機械的処置は連続してまたは同時に行われる。別の実施形態において、この化学的および/または機械的処置、ならびに上記生物学的薬剤を有する製剤の適用は、連続してまたは同時に行われる。
本明細書に記載の方法に企図される生物学的薬剤は、分子量が10kDa、25kDa、50kDa、75kDa、100kDa、125kDa、150kDa、175kDa、200kDa、250kDa、300kDa、350kDa、400kDa、500kDa、600kDa、700kDa、800kDa、900kDa、1,000kDa、1,500kDa、1,600kDa、2,000kDa、2,200kDa、2,500kDa、または3,000kDaよりも大きいことができる。本明細書に記載の方法に企図される生物学的薬剤は、分子量が10kDa、25kDa、50kDa、75kDa、100kDa、125kDa、150kDa、175kDa、200kDa、250kDa、300kDa、350kDa、400kDa、500kDaよりも大きく、約3,000kDa、2,500kDa、2,200kDa、2,000kDa、1,600kDa、1,500kDa、または1,000kDaよりも少ないことができる。
【００３１】
１つの実施形態において、上記生物学的薬剤は、例えば、BoNT/A、BoNT/Bなどのボツリヌス神経毒素(BoNT)のようなクロストリジウム誘導体である。これらの毒素は、神経伝達物質のような神経分泌物質の放出を遮断することによって、神経系に作用する。BoNTの作用は、細胞表面上の受容体分子へのその結合により開始され、次いで、毒素-受容体複合体はエンドサイトーシスを受ける。細胞内に入ると、BoNTは、SNAREタンパク質(可溶性N-エチルマレイミド感受性因子結合タンパク質受容体)として知られる細胞からの神経伝達物質のドッキングおよび放出の原因となるエキソサイトーシス特異的タンパク質を切断する。結果として生じる一過性の化学的除神経(chemodenervation)は、様々な治療用途につながる神経筋接合における運動神経伝達を遮断するために医学的に利用されてきた。
いくつかの実施形態において、上記クロストリジウム誘導体には、天然の組換えクロストリジウム毒素、組換え修飾毒素、その断片、TEM、またはそれらの組合せが含まれる。いくつかの実施形態において、このクロストリジウム誘導体はボツリヌス毒素である。いくつかの実施形態において、このボツリヌス毒素は、ボツリヌス毒素A型、B型、C1型、D型、E型、F型、G型、H型、X型、またはモザイク型ボツリヌス毒素および/またはサブタイプ、ハイブリッド、それらのキメラ、またはそれらの任意の組合せであり得る。このボツリヌス神経毒素は、E.コリ(E.coli)により産生されるボツリヌス毒素などの組換え的に作製されたボツリヌス神経毒素であってもよい。代替の実施形態において、このクロストリジウム誘導体はTEMである。
【００３２】
いくつかの実施形態において、上記ボツリヌス神経毒素は、天然の毒素と比較して、そのアミノ酸の少なくとも１つが欠失、修飾または置換されたボツリヌス神経毒素である、修飾神経毒素であり得、またはこの修飾ボツリヌス神経毒素は、組換え産生されたボツリヌス神経毒またはその誘導体または断片であり得る。特定の実施形態において、この修飾された毒素は、関心のある神経細胞または非神経細胞のための改変された細胞標的化能力を有する。この改変された能力は、ボツリヌス毒素の天然に存在する標的化ドメインを、非ボツリヌス毒素標的細胞中に存在する非ボツリヌス毒素受容体に対する選択的結合活性を示す標的化ドメインと置換することにより達成される。標的化ドメインに対するこのような修飾は、非ボツリヌス毒素標的細胞(再標的化)上に存在する非ボツリヌス毒素受容体(標的受容体)に選択的に結合できる修飾毒素を生じる。非ボツリヌス毒素標的細胞に対する標的化活性を有する修飾ボツリヌス毒素は、非ボツリヌス毒素標的細胞上に存在する受容体に結合し、細胞質中に移動し、標的細胞のSNARE複合体にそのタンパク質分解作用を及ぼすことができる。本質的に、酵素ドメインを含むボツリヌス毒素軽鎖は、適切な標的化ドメインを選択することによって、所望のいずれの細胞にも細胞内送達される。
本発明に従って使用するためのボツリヌス毒素などのクロストリジウム誘導体は、真空圧下または安定な液体として、凍結乾燥された真空乾燥形態で容器に保存できる。凍結乾燥の前に、ボツリヌス毒素を薬学的に許容される賦形剤、安定剤および/または担体、例えばアルブミンなどと組合せることができる。許容される賦形剤または安定剤としては、アルブミンまたはゼラチンなどのタンパク質賦形剤、またはポロキサマー、糖類、ポリエチレングリコールなどを含む非タンパク質賦形剤が挙げられる。アルブミンを含む実施形態において、このアルブミンは、例えば、ヒト血清アルブミンまたは組換えアルブミンなどであり得る。この凍結乾燥された物質は、例えば生理食塩水、水などの適切な液体で再構成して、患者に投与されるボツリヌス毒素を含む溶液または組成物を生成できる。
【００３３】
いくつかの実施形態において、上記クロストリジウム誘導体は、クロストリジウム誘導体をカプセル化するポリマーマトリックスを含む制御放出システムにおいて提供され、クロストリジウム誘導体の一部の量は、制御された方法で長期間にわたってポリマーマトリックスから放出される。制御放出神経毒素システムは、例えば、米国特許第6,585,993号、同第6,585,993号、同第6,306,423号および同第6,312,708号に開示されており、その各々は、その全体が参照により本明細書に援用されている。
代替の実施形態において、上記クロストリジウム誘導体は、局所投与に適した軟膏、ゲル、クリームまたはエマルジョンで提供される。
本方法に従って投与されるクロストリジウム誘導体、例えばボツリヌス毒素の治療有効量は、この毒素の効力および治療される疼痛の特定の特徴に応じて、その重症度ならびにサイズ、体重、年齢、および治療に対する応答性を含む他の種々の患者変数を含めて、変化し得る。この毒素の効力は、マウスのLD50値の倍数として表され、毒素の１単位(U)は、それぞれ体重約20グラムである18〜20匹の雌のSwiss-Websterマウスの群の50％が死亡する毒素の当量であると定義される。
【００３４】
上記ボツリヌス毒素の治療有効量は、市販のボツリヌス毒素製剤は等価な効力単位を有しないので、特定のボツリヌス毒素の効力に応じて変化できる。BOTOX(登録商標)(オナボツリヌスA(onabotulinumA))、Allergan, Inc.から入手可能なボツリヌス毒素A型の１単位がDYSPORT(登録商標)(アボボツリヌストキシンA(abobotulinumtoxinA))、また、Ipsen Pharmaceuticalsから入手可能なボツリヌス毒素A型の３〜５単位にほぼ等しい効力単位を有することが報告されている。MYOBLOC(登録商標)、Elanから入手可能なボツリヌス毒素B型は、BOTOX(登録商標)に対して非常に低い効力単位を有することが報告されている。いくつかの実施形態において、このボツリヌス神経毒は、XEOMIN(登録商標)(インコボツリヌストキシンA(incobotulinumtoxinA))などの複合タンパク質を含まない純粋な毒素であってもよい。インコボツリヌストキシンAの１単位は、オナボツリヌストキシンAの１単位とほぼ同等の効力を有することが報告されている。したがって、投与される毒素の量およびその投与の頻度は、治療に関与する医師の裁量であり、安全性の問題および特定の毒素製剤により生じる効果に相応する。
ヒト治療用途に使用される投与量は様々であってよい。典型的には、患者に投与されるクロストリジウム誘導体の投与量は、患者あたり治療あたり約0.01単位から約1,000単位まで、例えば約500単位まで、好ましくは約80単位から約460単位の範囲であってもよいが、適切な状況でより少ないまたはより大きい用量を投与してもよい。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本方法は、BOTOX(登録商標)などのボツリヌス毒素A型の約１〜500単位を含む組成物を標的部位に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、約１〜100単位のBOTOX(登録商標)を含む組成物を標的部位に投与することを含む。１つの特定の実施形態において、本方法は、約２〜50単位のBOTOX(登録商標)を含む組成物を標的部位に投与することを含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、対象の顔面上の標的部位に局所的に投与される。特定の実施形態において、投与量は、治療あたり約１単位から約100単位の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、治療あたりの投与量は、２単位、５単位、10単位、20単位、30単位、40単位、50単位、60単位、70単位、80単位、90単位、100単位、110単位、120単位、130単位、140単位、150単位、160単位、170単位、180単位、190単位、200単位のボツリヌス毒素A型、オナボツリヌストキシンAなどである。代替の実施形態において、本方法は、約３〜500単位のアボボツリヌスAを含む組成物を標的部位に投与することを含む。１つの特定の実施形態において、本方法は、約６〜250単位のアボボツリヌスAを含む組成物を標的部位に投与することを含む。いくつかの態様において、この組成物は、対象の顔面上の標的部位に局所的に投与される。特定の実施形態において、投与量は、治療あたり約３単位から約250Uの範囲であり得る。さらに代替の実施形態において、本方法は、約１〜100単位のインコボツリヌストキシンAを含む組成物を標的部位に投与することを含む。１つの特定の実施形態において、本方法は、約２〜50単位のインコボツリヌストキシンAを含む組成物を標的部位に投与することを含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、対象の顔面上の標的部位に局所的に投与される。特定の実施形態において、投与量は、治療あたり約１単位から約100単位のインコボツリヌストキシンAの範囲であり得る。いくつかの実施形態において、神経毒素がボツリヌス毒素B型である場合には、投与量はボツリヌス毒素A型の機能的に等価な用量よりも約50倍大きい。
【実施例】
【００３６】
以下の非限定的な実施例は、本方法の実施形態の範囲内で特定の好ましい方法で当業者に示すものであり、その範囲を限定することを意図するものではない。
【００３７】
実施例１
150kDaの生物学的製剤の皮膚浸透に対するヒアルロン酸スクラブ処置の効果
冷凍ヒト死体皮膚サンプルを室温(22〜25℃)で完全に解凍し、水で簡単にすすぎ、硬質ボード上の湿潤紙タオル上に平らに置き、２本のPBS湿潤綿棒を用いて洗浄し、綿棒で乾燥した。ヒアルロン酸スクラブ(MITI Systems、韓国)を皮膚に均一に塗布し(〜30mg/〜２×２cm2)、２滴の鉱油を加えてこのスクラブを湿潤させた。油とスクラブの混合物を有する皮膚を、中圧で手袋をはめた指を用いて30秒間マッサージし、次いで２本の湿潤綿棒を使用して拭き取った。
FITC-IgG(100μLの200μg/0.5ml溶液)を塗布して、処理された領域(〜４cm2)を覆い、中圧で30秒間手袋をはめた指を用いて肌をマッサージした。過剰のFITC-IgGを、２本の湿潤綿棒を使用して除去した。処理された皮膚の一片が切断され、処理されたサンプルとしてガラススライド上に置かれた。わずかな変更を有する２つの対照サンプルについて同じ手順を繰り返した。ヒアルロン酸スクラブ処置を受けていない対照サンプルについては、ヒアルロン酸スクラブなしの鉱油を使用して、FITC-IgG塗布前の皮膚サンプルをマッサージした。FITC-IgGを含まない対照サンプルについては、ヒアルロン酸スクラブを皮膚に塗布し、続いて100μLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を塗布した。蛍光が検出されず、画像が撮影されるまで、共焦点レーザー走査顕微鏡(CLSM)で組織深さを増加させることにより、サンプルを走査した。結果を図１Ａ〜図１Ｃに示す。
【００３８】
実施例２
150kDaの生物学的製剤の皮膚浸透に対する真皮ローラー処置の効果
ヒト死体の皮膚サンプルを室温(22〜25℃)で完全に解凍し、水で簡単にすすぎ、硬質ボード上の湿潤紙タオル上に平らに置いた。供給者により提供されたガイドラインに従った常圧を使用して、皮膚をマイクロニードリング装置Dermaroller(登録商標)MN(MT5マイクロニードル真皮ローラー、0.5mm)でマイクロポレーション処理した。このマイクロニードリング装置は、垂直に４回、水平に４回、次いで、各方向に対して４回、同じ領域にわたって同じ強度で斜めにやさしく転がした。マイクロポレーション処理された皮膚の一片を切断し、100μLのFITC-IgG溶液(200μg/0.5mL)を、それがマイクロポレーション処理された領域(少なくとも１cm2)を覆うように塗布した。湿潤紙タオルを備えた暗く密閉した加湿されたチャンバ内で、皮膚を60分間静置したままにし、インキュベーション期間の完了後に湿潤生理食塩水KimwipesTMを使用して過剰の染料を除去した。染色された微細孔は共焦点レーザー走査顕微鏡で観察され、より多くの蛍光が可視化されなくなるまで、10μm厚さの皮膚層を通して走査された。サンプルは、FITC-IgGを有する未処理の皮膚およびFITC-IgGを有するマイクロポレーション処理された皮膚を含んだ。結果を図２Ａ〜図２Ｂに示す。
【００３９】
実施例３
機能性ボツリヌス毒素の皮膚浸透に対する真皮ローラー処置の効果
無毛ラットの前脛骨(TA)筋の上にある皮膚をマイクロニードリング装置、針長が0.25mm、0.50mm、または1.0mmであるDRS(登録商標)ダーマローラーでマイクロポレーション処理した。ニードル装置が関心のある領域にわたって転がしたパス数または回数は、１回または２回(すなわち、図中に1X、2X等で示される１または２パス)であった。適切なマイクロニードリング装置で前処置した後、適切な希釈剤中の26ng/mlの150kDa BoNT/Aの50μLを、組織内への摩擦/マッサージと共に、関心のある皮膚領域に滴下した。局所適用後、DAS読み取り値を１〜４日目および７日目に取り、各群についての最大平均DASスコアを観察し、記録した。DASアッセイを実施し、先に記載したようにスコアを付けた(Broide, R.S. et al., Toxicon, 71:18-24 (2013))。簡潔に言えば、胴体の周りでラットを把持し、空気中に持ち上げ、平坦な表面への落下または戻りをシミュレートすることにより、DAS応答を誘導した。その後肢の指を広げることにより、衝撃のためのラット反射ブレースと、DAS応答とを、リクライニング位置に上向きの動物を用いて直ちにスコア付けした。次いで、様々な程度の指の外転を、５点スケール(０＝正常〜４＝指の外転の最大減少)でスコア付けした。ラットにおけるピークDAS応答は、一般に３日目〜４日目に観察される。TA筋を覆う皮膚内へのBoNT/A(10U/kg、900kDa)の皮内(ID)注射をポジティブコントロールとして使用した。ID注射は、同じ毒素用量でのIM注射と以前に比較されており、有効性は、わずかに減少したことがわかった(それぞれ〜ED70対〜ED90)(図３Ａ)。結果を図３Ｂに示す。
SNAP25197陽性神経筋接合(NMJ)(単回真皮ローラー処置後)の定量分析およびBoNT/A局所治療も行った。TA筋の14μm厚の断面を、１)シナプス後ニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)に結合する、蛍光標識されたα-ブンガロトキシン(α-Bgt)を用いた全NMJの存在、および２)組換えモノクローナル抗体を使用したシナプス前運動神経終末(MNT)および運動神経(MN)軸索におけるSNAP25197の存在に対して二重標識した(Rheaume, C. et al., Toxins (Basel), 7(7), 2354-2370, (2015))。TA筋全体にわたる全α-Bgt標識NMJの代表的なサンプリングからのSNAP25197陽性NMJの百分率は、計算され記録され、図３Ｃに示されている。ダーマローラー前処置を行わない局所適用は、観察可能なDASスコアまたはIHC染色(図示せず)を示さなかった。
【００４０】
実施例４
真皮ローラーによるマイクロポレーション処理後の皮膚における機能性ボツリヌス神経毒素の皮膚浸透に対する製剤の効果
BoNT/aの機能的経皮送達のための読み出しとしてラットDASモデルを使用して、150kDaのBoNT/Aを皮膚を通して送達するためにマイクロニードリング装置によって無毛ラットを前処置した。各ラットの皮膚処置領域は、マイクロニードリング装置、0.50mm針を有するDRS(登録商標)ダーマローラーで、このローラーをTA筋にわたって２回通過させることにより刺激した。２つの異なる製剤におけるBoNT/Aの指示された用量および各製剤に対する異なる用量は、処置された皮膚領域に塗布された。各試験剤は、TA筋の上の皮膚上に滴下することにより50μLの全容積で塗布された。局所適用後、DASの読み取り値を１〜４日目、および７日目に取り、各群についての最大平均DASスコアをプロットした。DASアッセイを実施し、記載されたようにスコアを付けた(Broide, R.S. et al., Toxicon, 71:18-24 (2013))。ピークDASスコアは、BoNT/Aの塗布の３〜４日後に観察され、状態あたりn＝５または６匹のラットが評価された。結果を図４に示す。
【００４１】
実施例５
送達の効率についての真皮ローラーの分析
皮膚全体にBoNT/Aを送達するための電位差を評価するために、２つの異なるマイクロニードリング装置を直接比較評価した。DRS50ダーマローラーシステム装置(0.5mmの針長、540針、中国)およびMTS MR5ローラー(0.5mm針長、200針；Clinical Resolution Laboratories, Inc.)を、皮膚の領域をDRS50 Dermaroller Systemローラーで２回またはMTS MR5ローラーで２〜５回転がすことにより比較した。DRS50ローラーの針数が２倍を超えると仮定すると、実験目的は、MR5ローラーとの匹敵する浸透を達成するために増加した数の回転またはパスが必要とされるか否かを決定することであった。また、針の形状が２つのローラータイプの間で異なることにも留意すべきである。DRS50ローラーは、より平坦で刃のような外観を有する針を有し、一方、MR5ローラーは、より典型的な円筒状のテーパー状の針形状を有する。結果を図５に示す。
【００４２】
実施例６
真皮ローラーによるマイクロポレーション処理後の皮膚における機能性ボツリヌス神経毒素複合体(900kDa)の効率的な送達
BoNT/Aの機能性経皮送達のための読み出しとしてラットDASモデルを使用して、150kdaのBoNT/A(n＝3)または900kDaのBoNT/A複合体(n＝6)を皮膚を通して送達するために、ダーマローラーで無毛ラットを前処置した。TA筋にわたってMTS MR5ローラー(0.5mm針長；Clinical Resolution Laboratories, Inc.)による５パスは、局所試験物品の適用前に行なった。150kDa BoNT/Aおよび900kDa BoNT/A複合体の両方を同様に製剤化し、皮膚を真皮ローラーでコンディショニングした後、用量をラットに塗布した。150kdaのBoNT/Aを有する製剤は、10ng/mLの濃度を有し、3.25ngのBoNT/Aを投与するために50μLで塗布した。900kDa BoNT/Aを有する製剤は、65ng/mlの濃度を有し、3.25ngのBoNT/Aを投与するために50μLで塗布した。しかしながら、質量ベースで塗布された用量差は、モル基準で有意であったが、用量は同様であった。モル単位で、900kDa複合体のわずかに多くが投与された。各試験剤は、TA筋の上の皮膚上に滴下し、各液滴に続いて摩擦しながら50μLの全容積で塗布された。局所適用後、DASの読み取り値を１〜４日目、７日目に取り、各群についての最大平均DASスコアをプロットした。DASアッセイを実施し、上記および他の場所に記載したようにスコアを付けた(Broide, R.S. et al., Toxicon, 71:18-24 (2013))。結果を図６に示す。
【００４３】
実施例７
機能性ボツリヌス神経毒素の皮膚浸透に対するテープストリッピングの効果
テープストリップによる無毛ラットの処置は、角質層を崩壊させて、皮膚表面から下にある筋肉への機能性BoNT/Aの送達を容易にするために行われた。ラットを数回テープストリッピングし、一方、対照群はテープストリッピングを受けなかった。テープストリッピングの有無で前処置した後、7000U/mL(合計350U)の150kDa BoNT/Aの50μLをTA筋の上の皮膚の領域に滴下した。10U/kgの150kDa BoNT/Aの皮内注射をポジティブコントロールとして使用した。局所適用後、処置されたTA筋を収集し、上記のように免疫組織化学によるSNAP25197陽性染色のために処理した。結果を図７に示す。
【００４４】
実施例８
小じわおよびたるみを改善するための真皮ローラーバリア破壊および局所的BONTの使用
フォトタイプIIの皮膚を有する45歳の女性は、小じわおよびたるみを含む、光老化した顔の皮膚の兆候を最小にすることを望んでいる。関連するダウンタイムのために、彼女は、部分的なレーザー治療を減少させて、彼女の肌の質を改善する。代わりに、彼女は、ボツリヌス神経毒素に基づく製品(例えば、BoNT/A)による局所治療を要求する。治療前に、局所麻酔クリーム(2.5％リドカインおよび2.5％プリロカイン)を治療の30分前の皮膚に塗布し、次いで無菌ワイプで完全に除去する。
次いで、顔面の約20cm2の面積(約5cm直径の円)を、0.5mmの真皮ローラーで１〜10回垂直に、１〜10回水平に、１〜10回対角線的に、および１〜10回反対の対角線的に転がすことにより治療のために刺激する。次いで、液体または液体の再構成されたBoNT/A製品(20cm2あたり200μL)を、各滴下後にマッサージしながら、直ちに刺激された領域に滴下する。提供者は、最終的な滴下の15分後に顔面を穏やかに洗浄する。
評価は、ベースラインおよび12週間の処置後に実施される。ベースラインと比較して、12週間の処置後では、彼女の顔面の皮膚は、医師のより高い全体的な評価および対象満足スコアを示し、粗さ、水和、皮膚弾性、および経皮水分損失(TEWL)の有意な改善を伴う。
【００４５】
実施例９
小じわおよびたるみを改善するための研磨スクラブおよび局所適用によるバリア破壊
フォトタイプIIの皮膚を有する45歳の女性は、小じわおよびたるみを含む、光老化した顔の皮膚の兆候を最小にすることを望んでいる。関連するダウンタイムのために、彼女は、部分的なレーザー治療を減少させて、彼女の肌の質を改善する。代わりに、彼女は、ボツリヌス神経毒素に基づく製品(例えば、BoNT/A)による局所治療を要求する。治療前に、皮膚を無菌ワイプで洗浄する。
この顔面の約20cm2の面積(約5cm直径の円)を、ヒアルロン酸マイクロスピキュール(HA微結晶)スクラブによるマイクロダーマブレーションにより刺激する。100mgのHAスクラブを治療すべき領域に適用し、手袋をはめた手で30秒間マッサージした。いずれの残りのスクラブも無菌水で湿潤した綿棒で除去される。次いで、液体BoNT/Aまたは再構成されたBoNT/A製品(20cm2あたり200μL)を、各滴下後にマッサージしながら、刺激された領域に直ちに局所的に滴下する。提供者は、最終的な滴下の15分後に顔面を穏やかに洗浄する。
評価は、ベースラインおよび12週間の処置後に実施される。ベースラインと比較して、12週間の処置後では、彼女の顔面の皮膚は、医師のより高い全体的な評価および対象満足スコアを示し、粗さ、水和、皮膚弾性、および経皮水分損失(TEWL)の有意な改善を伴う。
【００４６】
実施例１０
油性、皮脂および細孔サイズを減少させるためのマイクロダーマルローラーによるバリア破壊に続く局所的BONT/Aの使用
フォトタイプIIIの皮膚を有する35歳の男性は、油性の額(脂漏性)を有し、BoNT/Aで局所的な治療を受ける。
治療前に、局所麻酔クリーム(2.5％リドカインおよび2.5％プリロカイン)を処置の30分前の皮膚に塗布し、次いで無菌ワイプで完全に除去する。次いで、顔面の約20cm2の面積(約5cm直径の円)を、0.5mmの真皮ローラーで１〜10回垂直に、１〜10回水平に、１〜10回対角線的に、および１〜10回反対の対角線的に転がすことにより治療のために刺激する。次いで、液体または液体の再構成されたBoNT/A製品(20cm2あたり200μL)を、各滴下後にマッサージしながら、直ちに刺激された領域に滴下する。提供者は、最終的な滴下の15分後に顔面を穏やかに洗浄する。
評価は、ベースラインおよび12週間の処置後に実施され、皮脂量はセブメータを用いて測定される。ベースラインと比較して、12週間の処置後では、彼の額は、医師のより高い全体的な評価を示し、患者は、彼が結果について、油性、皮脂および細孔サイズの有意な減少により満足したことを報告した。皮脂の百分率(％)減少は、セブメータにより測定される。
【００４７】
実施例１１
油性、皮脂および細孔サイズを減少させるためのヒアルロン酸マイクロスピキュールスクラブによるバリア破壊に続く局所BoNT/Aの使用
フォトタイプIIIの皮膚を有する35歳の男性は、油性額(脂漏性)を有し、BoNT/aで局所的な治療を受ける。
治療前に、この皮膚を無菌ワイプで洗浄する。次いで、この顔面の約20cm2の面積(約5cm直径の円)を、ヒアルロン酸マイクロスピキュール(HA微結晶)スクラブによるマイクロダーマブレーションにより刺激する。100mgのこのスクラブを治療される領域に塗布し、手袋をはめた手で30秒間マッサージする。残りのいずれのスクラブも無菌水で湿潤した綿棒で除去される。次いで、液体BoNT/Aまたは再構成されたBoNT/A製品(20cm2あたり200μL)を、各滴下後にマッサージしながら、刺激された領域に直ちに局所的に滴下する。提供者は、最終的な滴下の15分後に顔面を穏やかに洗浄する。
評価は、ベースラインおよび12週間の処置後に実施され、皮脂量はセブメータを用いて測定される。ベースラインと比較して、12週間の処置後では、彼の額は、医師のより高い全体的な評価を示し、患者は、彼が結果について、油性、皮脂および細孔サイズの有意な減少により満足したことを報告した。皮脂の百分率(％)減少は、セブメータにより測定される。
当業者であれば、本開示の精神および範囲から逸脱することなく、多くの変更および修正を行うことができる。したがって、記載された実施形態は、実施例のためにのみ記載されており、これらの実施形態は、下記請求項の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、下記請求項は、文字通りに記載された要素の組合せだけでなく、実質的に同じ結果を得るために実質的に同じ方法で実質的に同じ機能を実行するためのすべての等価な要素を含むように読まれるべきである。したがって、請求項は、上で説明されたもの、概念的に等価なもの、および開示の概念を組み込むものを含むことが理解されるべきである。
【図１Ａ】
2021523176.tif 000003
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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