(57)【要約】本開示はトロンビンを含む止血組成物を調製する方法に関し、本方法は乾燥したトロンビンを、生体親和性ポリマーを含むペースト等のペーストの中で直接もどすステップを含む。トロンビンを含む止血組成物は、乾燥したトロンビン組成物及びペーストから単一ステップの操作で調製され、創傷の処置に用いられ得る。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
止血組成物を調製する方法であって、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて前記第１の容器と前記第２の容器を連結するステップ、及び、
ｄ）前記第１及び第２の容器の内容物を混合するステップ、
を含む、方法。
【請求項２】
前記混合するステップが、前記第１及び第２の容器の内容物を数回往復して移送することによって実施され、それによりトロンビンの実質的に均一な分布が得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記移送の回数が２０回未満、例えば１５回未満、例えば、１０回未満、例えば８回未満、例えば、約６回である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記止血組成物の全体にわたる前記トロンビンの均一な分布が、２０％未満、例えば１０％未満、例えば、５％未満のトロンビン含量の変動によって特徴付けられる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記止血組成物が、止血及び／又は創傷治癒における使用に適したペーストである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記止血組成物が流動性組成物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記乾燥したトロンビン組成物が噴霧乾燥又は凍結乾燥によって調製されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記乾燥したトロンビン組成物が凍結乾燥によって調製されている、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記乾燥したトロンビン組成物が２％未満の水、例えば、１％未満の水を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生体親和性ポリマーが水性媒体に実質的に不溶な粉末粒子からなる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記生体親和性ポリマーが架橋されている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記生体親和性ポリマーが生物吸収性である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記生体親和性ポリマーがゼラチンを含むか、又はゼラチンからなる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ゼラチンが微粉化ゼラチンスポンジ又はヒドロゲルから得られる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ステップｂ）におけるペーストが水、食塩液、塩化カルシウム溶液、及び緩衝水性媒体からなる群から選択される水性媒体を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ステップｂ）における前記ペーストが生体親和性ポリマーを約７％〜２０％、例えば、約８％〜１８％、例えば約１０％〜１６％、例えば、約１１％〜１５％、好ましくは約１２％〜１４％の含量で含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記止血組成物が１つ又は複数の親水性化合物を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記１つ又は複数の親水性化合物が１つ又は複数のポリオールである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記１つ又は複数のポリオールが糖アルコール類、糖類、及び／又はそれらの誘導体から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記１つ又は複数のポリオールが糖アルコールである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記糖アルコールがグリコール、グリセロール、エリスリトール、スレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ダルシトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、ポリグリシトール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記糖アルコールがマンニトールである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記１つ又は複数の親水性化合物がポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記止血組成物が、止血、創傷の治癒、骨の治癒、組織の治癒、及び／又は腱の治癒を刺激することができる１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記止血組成物が、アルブミン、好ましくはヒト血清アルブミン等の１つ又は複数の押出し促進剤をさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の親水性化合物、請求項２４に記載の生物活性剤、及び／又は、請求項２５に記載の押出し促進剤が、
ステップａ）における前記乾燥したトロンビン組成物の成分である、
ステップｂ）における前記ペーストの成分である、及び／又は、
ステップｄ）の後の別のステップにおいて前記止血組成物中に組み込まれる、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の親水性化合物、請求項２４に記載の生物活性剤、及び／又は、請求項２５に記載の押出し促進剤が、ステップａ）における前記乾燥したトロンビン組成物の成分である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の親水性化合物、請求項２４に記載の生物活性剤、及び／又は請求項２５に記載の押出し促進剤が、ステップｂ）における前記ペーストの成分である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１及び第２の容器が、前記乾燥したトロンビン組成物のもどし、及び、前記トロンビンを含む止血組成物の分配に適した医用送達デバイスである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１及び第２の容器がシリンジである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１の容器がガラスシリンジであるか、又は前記第１の容器が前記乾燥したトロンビン組成物を含むガラスインサートを含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記第２の容器がプラスチックシリンジである、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ステップａ）における前記乾燥したトロンビン組成物、ステップｂ）における前記ペースト、及び／又は、前記止血組成物を滅菌するさらなるステップを含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法によって得られた、又は得られ得る、止血組成物。
【請求項３５】
創傷の処置における使用のための、請求項３４に記載の止血組成物。
【請求項３６】
ａ）乾燥したトロンビン組成物を含む第１のシリンジ、
ｂ）生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２のシリンジ、及び、
ｃ）任意選択で外部包装、
を含むキットであって、前記２つのシリンジが相互連結可能である、キット。
【請求項３７】
乾燥したトロンビン組成物をもどす方法であって、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて前記第１の容器と前記第２の容器を連結するステップ、及び、
ｄ）前記第１及び第２の容器の内容物を混合するステップ、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本開示はトロンビンを含む止血ペースト組成物を調製する単純化された方法に関し、本方法は乾燥したトロンビンを、生体親和性ポリマーを含むペースト等のペーストの中で直接もどすステップを含む。トロンビンを含む止血組成物は、乾燥したトロンビン組成物及びペーストから単一ステップの操作で調製され、創傷の処置に用いられ得る。
【０００２】
［背景技術］
コラーゲン及びゼラチン等のタンパク質系の止血材料は手術手順における使用のための固体スポンジ及び緩い又は詰め込まれていない粉末の形態で市販されている。この緩い又は詰め込まれていない粉末を食塩液又はトロンビン溶液等の流体と混合することによって、混合条件及び材料の相対的な割合に応じて、特に不均一な表面又は到達しにくい区域からの拡散した出血の場合における使用のための止血組成物として有用なペースト又はスラリーを形成することができる。
【０００３】
従来の止血ペーストは通常、組成物の均一性をもたらすため、使用現場において、機械的撹拌及び生体親和性ポリマー、例えばゼラチンと液体、例えばトロンビン溶液の混合によって調製される。ペーストを形成するための混合は通常、混練又は２つのシリンジの間の移送等の広範囲な混合を必要とする。
【０００４】
止血ペーストはペーストの最適の止血効果をもたらすためにトロンビン成分を含むことが望まれることが多い。安定性の理由により、トロンビン成分は通常、生体親和性ポリマー成分とは別の乾燥した組成物として提供される。乾燥したトロンビンは次いで生体親和性ポリマーと混合される前にもどされて懸濁液又は溶液を形成する。このトロンビン成分のもどしのステップは通常、生体親和性ポリマーと混合する直前に行なわれる。トロンビンのもどしには時間を要し、多ステップのシリンジ取り扱いを含み、困難である。外科医は止血材が準備されるのを待つ間、その手順を中断しなければならないので、これらの要因は出血が起こっている手術室の環境では望ましくない。
【０００５】
Ｓｕｒｇｉｆｌｏ（登録商標）Ｈａｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｍａｔｒｉｘ（Ｅｔｈｉｃｏｎ社）はトロンビンを含む止血ゼラチンペーストを生成するためのキットであり、これは乾燥したトロンビン組成物を最初にもどし、次いでゼラチンマトリックス−トロンビンの溶液混合物を全部で少なくとも６回通過するよう、連結された２つのシリンジの間を往復して移送することによって調製される。Ｆｌｏｓｅａｌ（登録商標）Ｈａｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｍａｔｒｉｘ（Ｂａｘｔｅｒ社）は同様に止血ゼラチンペーストを生成するためのキットであり、乾燥したトロンビン組成物を最初にもどし、続いてゼラチンマトリックス−トロンビンの溶液混合物を全部で少なくとも２０回通過するよう、連結された２つのシリンジの間を往復して移送することを必要とする。実質的に均一なペースト組成物がいったん達成されれば、シリンジからペーストを押し出すことによって、止血ペーストを出血部に塗布して止血を促進することができる。
【０００６】
例えば既に国際公開第２０１１／１５１４００号、第２０１１／１５１３８４号、第２０１１／１５１３８６号、及び第２０１３／１８５７７６号に記載されているように、生体親和性ポリマーと乾燥状態のトロンビンとを同じシリンジの中で提供する試みもなされてきた。これらの教示は参照により全体として組み込まれる。しかし、止血製品の製造において通常採用される滅菌方法、即ちイオン化照射及び／又はエチレンオキシドに対するトロンビンの感受性、水に対するトロンビンの感受性、並びにトロンビンとゼラチン等の通常採用されるポリマーとの物理化学的特性の相違のため、製造、滅菌の間、及び製品の貯蔵期間を通して十分なトロンビンの活性を保持し、及び／又は最終のもどされた止血ペースト製品の中のトロンビンの満足すべき分布を保証する、そのような「オールインワン」製品を製造することが困難であることが分かってきた。
【０００７】
上述のように、止血ペーストの中にトロンビンを組み込むことは、製造若しくは安定性の理由から、又は生体親和性ポリマーとの混合の前の乾燥したトロンビン組成物のもどしに時間を要することから、困難である。したがって、当技術において止血ペーストの中にトロンビンを迅速かつ容易に組み込むための新規な方法の開発へのニーズがある。
【０００８】
［概要］
本開示は、止血ペーストの中へのトロンビンの組込みに関する上記の課題に対処し、乾燥したトロンビン組成物を、生体親和性ポリマーを含むペーストの中で直接もどし、トロンビンを含む止血ペーストを単一ステップの操作で産生する方法を提供する。止血組成物を調製するためのそのような単純で速い方法は、潜在的な出血を速くかつ効率的に制御しなければならない手術室において極めて価値がある。
【０００９】
したがって１つの態様では、本開示は止血組成物を調製する方法に関し、本方法は、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて第１の容器と第２の容器を連結するステップ、及び
ｄ）容器の内容物を混合するステップ
を含む。
【００１０】
第２の態様では、本開示は乾燥したトロンビン組成物をもどす方法に関し、本方法は、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて第１の容器と第２の容器を連結するステップ、及び
ｄ）容器の内容物を混合するステップ
を含む。
【００１１】
容器の内容物を混合するステップは、容器の内容物を数回、例えば、２０回未満、例えば１５回未満、例えば、１０回未満、好ましくは約６回、往復して移送することによって実施し得る。
【００１２】
本発明者らは驚くべきことに、乾燥したトロンビン組成物を、生体親和性ポリマーを含むペーストの中で直接もどすそのような方法によって、止血組成物中のトロンビンの実質的に均一な分布が得られることを見出した。したがって、本開示は、生体親和性ポリマーと混合する前にトロンビン成分を別にもどすことを必要としない速く単純な方法でトロンビンを含む止血組成物を調製する方法を提供する。
【００１３】
本開示はさらに、本明細書に記載した方法によって得られる止血組成物並びにその使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】乾燥したトロンビン組成物を、生体親和性ポリマーを含むペーストの中で直接もどして止血組成物を産生するための例示的な装置及び方法を示す図である。乾燥したトロンビン組成物は第１のシリンジの中に含まれており、本明細書ではゼラチンペーストによって例示する生体親和性ポリマーを含むペーストは第２のシリンジの中に含まれている。２つのシリンジは本実施形態ではスタティックミキサーによって互いに連結されており、シリンジの内容物を６回往復して移送することによって止血組成物が産生される。
【図２】本開示の方法を用いてもどされた止血組成物を含むシリンジの開始部分、中間部分、及び最後の部分におけるトロンビン活性の分布を示す図である。平均トロンビン活性は全トロンビン活性の百分率として与えられる。データは、ペーストによる乾燥トロンビンのもどしによってトロンビンの均一な分布を有する止血ペースト組成物が得られることを示している。エラーバーは平均値からの１標準偏差を用いて構築される。
【図３】対照（２ｍＬのトロンビン溶液と混合したＳｕｒｇｉｆｌｏ）と比較した本発明のペースト（６ＴＭペースト）の止血効率（止血時間（ＴＴＨ））を示す図である（平均±ＳＥＭ、ｎ＝７）。本発明に従って調製した６ＴＭペーストは、対照ペーストより速くかつより一貫して止血を誘起することが見出された。
【００１５】
［定義］
「生物活性剤」は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで実証され得る、しばしば有益であるいくつかの薬理学的効果をもたらす任意の薬剤、薬物、化合物、物質の組成物又は混合物である。したがって、薬剤はそれがヒト又は動物の体内の細胞組織との相互作用又はこれへの影響を有するならば、生物活性と考えられる。本明細書で用いる場合、この用語には、個体に局所的又は全身的な影響を生じる任意の生理学的又は薬理学的に活性な物質がさらに含まれる。生物活性剤は酵素等のタンパク質であってもよい。生物活性剤のさらなる例には、それだけに限らないが、オリゴ糖、多糖、任意選択でグリコシル化されたぺプチド、任意選択でグリコシル化されたポリペプチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、脂肪酸、脂肪酸エステル、及び二次代謝物が含まれるか、又はそれらからなる薬剤を含む。これは、ヒト又はその他の任意の動物等の個体の処置と併せて、予防的又は治療的に用いられ得る。本明細書で用いる用語「生物活性剤」は、真核細胞又は原核細胞等の細胞を包含しない。
【００１６】
「生体親和性」は、いずれの実質的な望ましくない局所的又は全身的な影響をも宿主に誘発せずにその意図された機能を実行する材料の能力を意味する。
【００１７】
「生物吸収性」又は「再吸収性」は、本発明の文脈において、前記粉末が作られる材料が体内で血流中に輸送できる大きさの小分子に分解できることを記述するために用いられる用語である。前記分解及び吸収によって、前記粉末材料は塗布された部位から徐々に除去されることになる。例えば、ゼラチンはタンパク質分解性組織酵素によって吸収性小分子に分解することができ、それによりゼラチンは組織に塗布した場合、典型的には約４〜６週で、また出血している表面及び粘膜に塗布した場合、典型的には３〜５日で吸収される。
【００１８】
「ゲル」は、「柔軟で弱い」から「硬くて強い」までの範囲の特性を有し得る固体でジェリー状の材料である。ゲルは実質的に希薄な架橋されたシステムとして定義され、定常状態では非流動性を示す。荷重下ではゲルはほとんど液体であるが、液体中の三次元架橋ネットワークによって固体のように挙動する。ゲルにその構造（硬さ）を与え、粘性（タック性）に寄与するものは流体中の架橋である。このように、ゲルは固体中の液体の分子の分散であり、その中で固体は連続相、液体は非連続相である。ゲルはペースト又はスラリーではない。例えば、非架橋ゼラチンは可溶性で、水のような水性媒体と接触すればゲルを形成する。
【００１９】
「止血」は、出血を軽減し又は停止させるプロセスである。止血は血液が体外又は血管外に存在する場合に起こり、出血及び血液の損失を停止する身体の本能的な応答である。止血の間には、３つのステップが迅速なシーケンスで起こる。血管の攣縮が第１の応答であり、血管が収縮して血液の損失を少なくする。第２のステップでは血小板血栓が形成され、血小板が互いに接着して一時的なシールを形成し、血管壁の破損を覆う。第３のかつ最終のステップは凝血又は血栓と呼ばれる。凝血は「分子糊」として作用するフィブリン糸で血小板血栓を補強する。したがって、止血化合物は止血を刺激することができる。
【００２０】
「国際単位（ＩＵ）」。薬学では、国際単位は生物学的な活性又は効果に基づく物質の量についての測定の単位である。これはＩＵ、ＵＩ、又はＩＥと略称される。これはビタミン、ホルモン、いくつかの医薬、ワクチン、血液製剤、及び同様に生物学的に活性な物質を定量するために用いられる。
【００２１】
本開示による「ペースト」は、歯磨きのように展延性のあるパテ状の稠度を有する。ペーストは微粉化された固体／粉末形態の固体と液体との粘稠な流体混合物である。ペーストは十分に大きな負荷又は応力が印加されるまでは固体として挙動し、その時点で流体のように流れる物質である。即ち、ペーストは流動可能である。流動可能な物質は塗布(application)に際して不規則な表面に効率よく適合する。ペーストは典型的にはバックグラウンドの流体の中の粒状材料の懸濁からなる。個別の粒は浜辺の砂のように相互に詰まり合い、不規則なガラス状若しくは不定形な構造を形成し、ペーストにその固体状性格を与える。ペーストにその最も独特の特性のいくつかを与えるものはこの「相互の詰まり合い」であり、これによってペーストは脆弱な物質の特性を示す。ペーストはゲル／ジェリーではない。「スラリー」は粉末化された／微粉化された固体と水のような液体との流体混合物である。スラリーはある意味では粘稠な流体のように挙動し、重力下で流れ、あまり粘稠でなければポンプで流すことができる。スラリーは機能的には薄い水のようなペーストとみなされ得るが、スラリーは一般的にはペーストより多くの水を含む。架橋ゼラチン粒子のような実質的に水不溶性の粉末状粒子は、水性媒体との混合に際してペーストを形成することになる。
【００２２】
「百分率」。他に指示がなければ、百分率は重量百分率、％ｗ／ｗ又はｗｔ％である。比は重量対重量（ｗ／ｗ）として指示される。
【００２３】
「トロンビン含量の変動」。本明細書で用いられるトロンビン含量の変動は、止血組成物の２つの部分の間の平均トロンビン活性における百分率の差として定義される。平均トロンビン活性は止血組成物全体の全トロンビン活性の百分率としてのある部分のトロンビン活性として与えられる。
【００２４】
［詳細な説明］
本開示はトロンビンを含む止血ペースト組成物を調製する単純化された方法に関する。本方法は乾燥したトロンビン組成物を、生体親和性ポリマーを含むペースト等のペーストの中で直接もどす(reconstitute)ステップを含む。
【００２５】
したがって本発明は止血組成物を調製する方法に関し、本方法は、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて第１の容器と第２の容器を連結するステップ、及び
ｄ）容器の内容物を混合するステップ
を含む。
【００２６】
混合の後、第１又は第２の容器は（移送の回数によって）止血組成物を組織に送達するための送達デバイスとして用いることができる。
【００２７】
したがって、トロンビンを含む止血組成物を、乾燥したトロンビン組成物の溶液中における時間がかかり失敗しやすいもどし操作を必要とせずに、乾燥したトロンビン組成物及びペーストから単一ステップの操作で調製することができる。
【００２８】
止血組成物を調製するためのそのような単純で速い方法は、潜在的な出血を速くかつ効率的に制御しなければならない手術室において極めて価値がある。
【００２９】
本開示で提供する方法及びそのような方法によって得られる止血組成物の利点は数多くあり、下記が含まれる。
【００３０】
止血組成物を調製するために費やされる時間がより短い。例えば、出血をより速く停止できる。
【００３１】
取り扱いステップがより少ないので、調製中の止血組成物の無菌性を損なう危険が低減される。
【００３２】
ペーストの調製が単純化されるので、調製中に失敗する危険が低減される。
【００３３】
短時間で信頼性及び一貫性があるもどしができる。
【００３４】
標準的な止血組成物の調製における時間がかかり失敗しやすいトロンビンの希釈ステップが避けられる。
【００３５】
ここに記載した製品の調製が単純で速く、使用しないかも知れない止血用流動物を手術の前に事前調製する理由がないので、手術室の費用を最小化できる。
【００３６】
最終混合組成物の稠度を改変するためにペーストに水性媒体を添加する適応性が増大する。
【００３７】
上記の要因の全てが、患者の安全性の増大につながる。
【００３８】
乾燥したトロンビン組成物
本開示は乾燥したトロンビン組成物をペーストの中で直接もどす方法に関する。
【００３９】
トロンビンは、ヒトではＦ２遺伝子によってコードされる「トリプシン様」セリンプロテアーゼタンパク質である。凝血カスケードにおいてプロトロンビン（凝血第ＩＩ因子）がタンパク質分解的に開裂してトロンビンを形成し、これが最終的に血液損失の抑制をもたらす。次にトロンビンは可溶性フィブリノーゲンを不溶性のフィブリンのストランドに変換し、また他の多くの凝血関連反応を触媒するセリンプロテアーゼとして作用する。血液凝固経路において、トロンビンは第ＸＩ因子をＸＩａに、第ＶＩＩＩ因子をＶＩＩＩａに、第Ｖ因子をＶａに、及びフィブリノーゲンをフィブリンに変換するように作用する。
【００４０】
一実施形態では、トロンビンはヒトトロンビンである。
【００４１】
一実施形態では、トロンビンは組み換えヒトトロンビンである。
【００４２】
他の実施形態では、トロンビンの起源はヒト以外の哺乳動物であり、例えばウシトロンビンである。
【００４３】
一実施形態では、トロンビンはプロトロンビンの形態である。
【００４４】
乾燥したトロンビン組成物は当業者には既知の任意の方法で調製してよく、通常、無菌状態で提供される。したがって、一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は無菌である。
【００４５】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は噴霧乾燥又は凍結乾燥によって調製されている。
【００４６】
好ましい実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は凍結乾燥によって調製されている。
【００４７】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は２％未満の水、例えば、１％未満の水を含む。
【００４８】
止血組成物中のトロンビンの量は、効果的な止血を保証するために十分であるべきである。一実施形態では、止血組成物中のトロンビンの最終濃度は約５０ＩＵ／ｍＬ〜約１０００ＩＵ／ｍＬ、例えば１００ＩＵ／ｍＬ〜約５００ＩＵ／ｍＬ、例えば、約１５０ＩＵ／ｍＬ〜約４５０ＩＵ／ｍＬ、例えば約２００ＩＵ／ｍＬ〜約４００ＩＵ／ｍＬ、例えば、約２００ＩＵ／ｍＬ〜約３００ＩＵ／ｍＬの範囲である。
【００４９】
乾燥したトロンビン組成物は、任意選択で１つ又は複数の親水性薬剤、例えば１つ若しくは複数のポリオール及び／又は１つ若しくは複数のポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）等を含んでよい。
【００５０】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む。そのような１つ又は複数の生物活性剤は、止血、創傷の治癒、骨の治癒、組織の治癒、及び／又は腱の治癒を刺激することができ得る。
【００５１】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は任意選択で１つ又は複数の押出し促進剤、例えばアルブミン等を含む。止血ペーストの押出し性を改善するための押出し促進剤の使用は、例えば全体として本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０８６０２８号に記載されている。
【００５２】
生体親和性ポリマーを含むペースト
本開示の乾燥したトロンビン組成物は、生体親和性ポリマーを含むペースト等のペーストの中で直接もどされる。
【００５３】
本開示の生体親和性ポリマーは生物由来又は非生物由来のポリマーであってよい。好適な生物由来のポリマーには、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、ヘモグロビン、カゼイン、フィブリノーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、エラスチン、ケラチン、及びラミニン等のタンパク質、又はそれらの誘導体若しくは組合せが含まれる。ゼラチン又はコラーゲンの使用が特に好ましく、ゼラチンがより好ましい。その他の好適な生物由来のポリマーにはグリコサミノグリカン類、デンプン誘導体、キシラン、セルロース誘導体、ヘミセルロース誘導体、アガロース、アルギネート、及びキトサン等の多糖類、又はそれらの誘導体若しくは組合せが含まれる。好適な非生物由来のポリマーは、２つの機構、即ち（１）ポリマー骨格の破壊、又は（２）水への溶解性をもたらす側鎖の分解、のいずれかによって分解されるように選択されることになる。例示的な非生物由来のポリマーには、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、ポリアクリルアミド類、ポリビニル樹脂、ポリラクチド−グリコリド類、ポリカプロラクトン類、及びポリオキシエチレン類等の合成物、又はそれらの誘導体若しくは組合せが含まれる。異なる種類のポリマーの組合せも可能である。
【００５４】
一実施形態では、生体親和性ポリマーは生物吸収性である。好適な生物吸収性材料の例には、ゼラチン、コラーゲン、キチン、キトサン、アルギネート、セルロース、酸化セルロース、ポリグリコール酸、ポリ酢酸、及びそれらの組合せが含まれる。これらの種々の形態、例えば線状若しくは架橋した形態、塩、エステル等も本開示に意図されることが理解されよう。本発明の好ましい実施形態では、生物吸収性材料はゼラチンである。ゼラチンは高度に生物吸収性であるので好ましい。さらに、ゼラチンは高度に生体親和性であり、血流中に進入した場合、又はヒト組織と長期に接触した場合に、ヒトのような動物に対して非毒性であることを意味している。
【００５５】
ゼラチンは典型的にはブタ供給源由来であるが、ウシ又は魚類の供給源等の他の動物供給源由来でもよい。ゼラチンは合成によって作られてもよく、即ち組み換え手段によって作られてもよい。
【００５６】
好ましい実施形態では、生体親和性ポリマーは架橋されている。架橋により通常、ポリマーは水性媒体に実質的に不溶になる。一実施形態では、生体親和性ポリマーは水性媒体に実質的に不溶な粉末粒子からなる。化学的及び物理的な架橋法の両方を含む当業者には既知の任意の好適な架橋法が用いられ得る。
【００５７】
本開示の一実施形態では、ポリマーは乾熱等の物理的手段によって架橋されている。乾熱処理は通常、１００℃〜２５０℃、例えば、約１１０℃〜約２００℃の温度で実施される。特に温度は１１０〜１６０℃の範囲、例えば１１０〜１４０℃の範囲、又は１２０〜１８０℃の範囲、又は１３０〜１７０℃の範囲、又は１３０〜１６０℃の範囲、又は１２０〜１５０℃の範囲であってよい。架橋のための時間は当業者によって最適化され、通常約１０分〜約１２時間、例えば、約１時間〜約１０時間、例えば約２時間〜約１０時間、例えば、約４時間〜約８時間、例えば約５時間〜約７時間、例えば、約６時間である。
【００５８】
別の実施形態では、ポリマーは化学的手段、即ち化学的架橋剤への曝露によって架橋されている。好適な化学的架橋剤の例には、それだけに限らないが、アルデヒド、特にグルタルアルデヒド及びホルムアルデヒド、アシルアジド、カルボジイミド、ヘキサメチレンジイソシアネート、ポリエーテルオキシド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、タンニン酸、アルドース糖類、例えばＤ−フルクトース、ジェニピン、及び色素介在光酸化が含まれる。具体的な化合物には、それだけに限らないが、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びジチオビス（プロパン酸ジヒドラジド）（ＤＴＰ）が含まれる。
【００５９】
一実施形態では、本開示によるペーストの調製のために用いられる生体親和性ポリマー粒子は、例えばゼラチン又はコラーゲンの架橋スポンジ、特にゼラチンの架橋スポンジ（市販のＳｐｏｎｇｏｓｔａｎ（登録商標）スポンジ及びＳｕｒｇｉｆｏａｍ（登録商標）スポンジ等）から得られる。架橋スポンジを、例えばロータリーベッド、押出し、顆粒化、及び強力なミキサー中での処理、又はミリング（例えばハンマーミル若しくは遠心ミルの使用による）等の当技術で既知の方法によって微粉化して、粉末状態の架橋生体親和性ポリマーが得られる。次いで粉末状態の架橋生体親和性ポリマーをある量の水性媒体と混合して、所望の稠度を有するペーストが得られる。
【００６０】
Ｅｔｈｉｃｏｎ社から入手可能なＳｐｏｎｇｏｓｔａｎ（登録商標）／Ｓｕｒｇｉｆｏａｍ（登録商標）は、ゼラチン系架橋吸収性止血スポンジである。これは１ｇ当たり３５ｇを超える血液を吸収し、ヒト体内で４〜６週以内に完全に吸収される。
【００６１】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、乾熱処理によって架橋された微粉化多孔質ゼラチンスポンジから得られる架橋ゼラチン粒子を含む。
【００６２】
微粉化多孔質ゼラチンスポンジは、不連続な気相を含む発泡体を創成するためにある量の可溶性ゼラチンを水性媒体と混合し、前記発泡体を乾燥し、乾燥した発泡体を乾熱に曝露して架橋することによって調製できる。得られる架橋スポンジは当技術で既知の方法によって微粉化することができる。ゼラチン発泡体は通常、重量で約１％〜７０％、通常重量で３％〜２０％のゼラチン濃度を有する。乾燥は通常約２０℃〜約４０℃で約５〜２０時間実施する。乾燥した発泡体は通常、約１１０℃〜約２００℃の温度に約１５分〜約８時間、例えば約１５０℃〜約１７０℃に約５〜７時間、曝露することによって架橋される。
【００６３】
一実施形態では、本開示によるペーストの調製のために用いられる生体親和性ポリマー粒子は、例えばゼラチン又はコラーゲンの架橋ゲル、特に架橋ゼラチンゲルから得られる。架橋ゲルを上記のようにして微粉化してもよい。次いで粉末状態の架橋生体親和性ポリマーをある量の水性媒体と混合して、所望の稠度を有するペーストが得られる。
【００６４】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、乾熱処理によって架橋された微粉化ゼラチンゲルから得られる架橋ゼラチン粒子を含む。
【００６５】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、ゼラチンヒドロゲルから得られる架橋ゼラチン粒子を含むか、又はそれからなる。ゼラチンヒドロゲルは、ある量のゼラチンを水性緩衝液に溶解して、典型的には重量で１％〜７０％、通常重量で３％〜１０％の固体含量を有する非架橋ヒドロゲルを形成することによって調製することができる。ゼラチンは、例えばグルタルアルデヒド（例えば０．０１％〜０．０５％ｗ／ｗ、水性緩衝液中、０℃〜１５℃で一夜）、過ヨウ素酸ナトリウム（例えば０．０５Ｍ、０℃〜１５℃で４８時間保持）、若しくは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（例えば０．５％〜１．５％ｗ／ｗ、室温で一夜）に曝露すること、又は約０．３〜３メガラッドのγ線若しくは電子線への照射に曝露することによって、架橋され得る。得られる架橋ヒドロゲルを断片化し、乾燥してゼラチン粉末が得られる。或いは、ゼラチン粒子をアルコール中、好ましくはメチルアルコール若しくはエチルアルコール中に固体含量１重量％〜７０重量％、通常３重量％〜１０重量％で懸濁して、架橋剤、典型的にはグルタルアルデヒド（例えば０．０１％〜０．１％ｗ／ｗ、室温で一夜）に曝露することによって架橋し得る。グルタルアルデヒドで架橋する場合には、架橋はシッフ塩基を介して形成され、これは引き続いて例えば水素化ホウ素ナトリウムによる処理で還元することによって安定化され得る。架橋の後、得られる顆粒を水で洗浄し、任意選択でアルコールによってリンスし、乾燥してゼラチン粉末を得ることができる。一実施形態では、架橋ゼラチン粒子は本質的に米国特許第６０６６３２５号に記載されたようにして調製される。
【００６６】
一実施形態では、ペーストは生体親和性ポリマーを約７％〜２０％、例えば、約８％〜１８％、例えば約１０％〜１６％、例えば、約１１％〜１５％、例えば約１２％〜１４％の含量で含む。
【００６７】
一実施形態では、ペーストは生体親和性ポリマーを約７％〜２０％、例えば、約７％〜１８％、例えば約７％〜１６％、例えば、約７％〜１４％、例えば約７％〜１３％、例えば、約７％〜１２％、例えば約７％〜１１％、例えば、約７％〜１０％、例えば約７％〜９％の含量で含む。
【００６８】
一実施形態では、ペーストは生体親和性ポリマーを約７％〜２０％、例えば、約１０％〜２０％、例えば約１１％〜２０％、例えば、約１２％〜２０％、例えば約１３％〜２０％、例えば、約１４％〜２０％、例えば約１５％〜２０％、例えば、約１７％〜２０％、例えば約１９％〜２０％の含量で含む。
【００６９】
一実施形態では、ペーストは生体親和性ポリマーを約１０％〜２０％、例えば、約１０％〜１８％、例えば約１０％〜１６％、例えば、約１０％〜１５％の含量で含む。
【００７０】
生体親和性ポリマーを含むペーストは、１つ又は複数の親水性薬剤、例えば１つ若しくは複数のポリオール及び／又は１つ若しくは複数のポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）等をさらに含んでよい。
【００７１】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む。そのような１つ又は複数の生物活性剤は、止血、創傷の治癒、骨の治癒、組織の治癒、及び／又は腱の治癒を刺激することができ得る。
【００７２】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、１つ又は複数の押出し促進剤、例えばアルブミン等を含む。
【００７３】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、１つ又は複数の抗微生物剤、例えば１つ又は複数の抗菌剤を含む。
【００７４】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、塩化ベンザルコニウムを含む。
【００７５】
本明細書に記載した生体親和性ポリマーを含むペーストは、当技術で既知の手法に従って調製し得る。したがって、生体親和性ポリマーを含むペーストは、生体親和性ポリマーの粉末を水性媒体と混合して前記ペーストを産生することによって調製し得る。
【００７６】
生体親和性ポリマーを含むペーストは通常、無菌状態で提供される。したがって、一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは無菌である。
【００７７】
生体親和性ポリマーを含むペーストは水性媒体、例えば水、食塩液、塩化カルシウム溶液、又は緩衝水性媒体をさらに含む。
【００７８】
水性媒体
本開示では生体親和性ポリマーを含むペーストを調製するために水性媒体が用いられ得る。
【００７９】
本開示の水性媒体は、ペーストの調製に適した当業者には既知の任意の水性媒体、例えば水、食塩液、又は緩衝水性媒体であってよい。水はＷＦＩ（注射用水）であってよい。水性媒体は、もどされたペースト生成物が止血及び／又は創傷治癒の目的のため等のヒト若しくは動物対象への使用を意図した場合に、本質的に等浸透圧であるように選択することが重要である。水性媒体は、好ましくは無菌である。
【００８０】
本開示の水性媒体は、一実施形態では食塩溶液である。
【００８１】
一実施形態では、水性媒体は塩化カルシウム溶液である。
【００８２】
他の実施形態では、水性媒体は水である。
【００８３】
水性媒体は止血ペーストにおける使用に適した緩衝水性媒体であってもよい。当業者には既知の任意の好適な緩衝剤、例えばクエン酸ナトリウム；クエン酸、クエン酸ナトリウム；酢酸、酢酸ナトリウム；Ｋ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４；Ｎａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４；ＣＨＥＳ；Ｂｏｒａｘ、水酸化ナトリウム；ＴＡＰＳ；Ｂｉｃｉｎｅ；Ｔｒｉｓ；Ｔｒｉｃｉｎｅ；ＴＡＰＳＯ；ＨＥＰＥＳ；ＴＥＳ；ＭＯＰＳ；ＰＩＰＥＳ；Ｃａｃｏｄｙｌａｔｅ；ＳＳＣ；ＭＥＳ、又はその他からなる群から選択される１つ又は複数の緩衝剤が用いられ得る。緩衝水性媒体のｐＨはヒトへの用途を意図した止血ペーストを創成するために好適であるべきであり、当業者によって決定することができる。
【００８４】
したがって、一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、水、食塩液、塩化カルシウム溶液、及び緩衝水性媒体からなる群から選択される水性媒体を含む。
【００８５】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、約６０％〜約９５％の水、例えば約７０％〜約９０％の水、例えば、約７５％〜約９０％の水、例えば約８０％〜約９０％の水を含む。
【００８６】
水性媒体は、１つ又は複数の親水性薬剤、例えば１つ若しくは複数のポリオール又は１つ若しくは複数のポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含んでよい。
【００８７】
一実施形態では、水性媒体は１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む。そのような１つ又は複数の生物活性剤は、止血、創傷の治癒、骨の治癒、組織の治癒、及び／又は腱の治癒を刺激することができ得る。
【００８８】
一実施形態では、水性媒体は１つ又は複数の押出し促進剤、例えばアルブミン等を含む。
【００８９】
親水性化合物
一実施形態では、止血組成物は１つ又は複数の親水性化合物を含む。親水性化合物は通常、極性又は電荷を有する機能性基を含み、それにより水溶性になっている。本開示の止血組成物に１つ又は複数の親水性化合物が含まれていることがトロンビンの安定性に有利な効果を有していると考えられ、それにより、乾燥したトロンビン組成物のもどし効率が改善され得る。親水性化合物はまた、止血組成物の稠度を改善し得る。
【００９０】
一実施形態では、親水性化合物は親水性ポリマーである。親水性ポリマーは天然でも合成でもよく、線状でも分枝状でもよく、任意の好適な長さを有し得る。
【００９１】
一実施形態では、親水性ポリマーはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（スチレンスルホネート）（ＰＳＳ）、ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）、ポリ（アリルアミン塩酸）、及びポリ（ビニル酸）からなる群から選択される。一実施形態では、親水性化合物はＰＥＧである。
【００９２】
一実施形態では、親水性化合物はセチルピリジニウムクロリド、ドクセートナトリウム、グリシン、ヒプロメロース、フタレート、レシチン、リン脂質、ポロキサマー、ポリオキシエチレンアルキルエーテル類、ポリオキシエチレンカスター油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンステアレート類、ポリビニルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル類（ソルビタン脂肪酸エステル類）、及びトリカプリリンからなる群から選択される。
【００９３】
好ましい実施形態では、親水性化合物はポリオールである。したがって、本発明の一実施形態によれば、１つ又は複数のポリオールが止血組成物中に含まれてよい。ポリオールは乾燥したトロンビン組成物のもどし速度を速め、トロンビンの活性を安定化し、止血組成物の最適の稠度を保証する役割を果たし得る。
【００９４】
本明細書で定義するポリオールは複数のヒドロキシル官能基を有する化合物である。ポリオールには糖類（単糖類、二糖類、及び多糖類）、糖アルコール類、及びそれらの誘導体が含まれる。特に好ましいものは糖アルコール類である。
【００９５】
単糖類には、それだけに限らないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース、及びリボースが含まれる。
【００９６】
二糖類には、それだけに限らないが、スクロース（サッカロース）、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、及びセロビオースが含まれる。
【００９７】
多糖類には、それだけに限らないが、デンプン、グリコーゲン、セルロース、及びキチンが含まれる。
【００９８】
糖アルコールはポリアルコールとしても知られているが、炭水化物の水素化形であり、そのカルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は一級又は二級のヒドロキシル基（以後、アルコール）に還元されている。糖アルコール類は一般式Ｈ（ＨＣＨＯ）ｎ＋１Ｈを有する一方、糖類はＨ（ＨＣＨＯ）ｎＨＣＯを有している。本開示の方法において用いられ得るいくつかの一般的な糖アルコール類には、それだけに限らないが、グリコール（２炭素）、グリセロール（３炭素）、エリスリトール（４炭素）、スレイトール（４炭素）、アラビトール（５炭素）、キシリトール（５炭素）、リビトール（５炭素）、マンニトール（６炭素）、ソルビトール（６炭素）、ダルシトール（６炭素）、フシトール（６炭素）、イジトール（６炭素）、イノシトール（６炭素、環状糖アルコール）、ボレミトール（７炭素）、イソマルト（１２炭素）、マルチトール（１２炭素）、ラクチトール（１２炭素）、ポリグリシトールが含まれる。
【００９９】
一実施形態では、止血組成物は単一の親水性化合物、例えば単一のポリオールを含む。
【０１００】
本発明の一実施形態では、止血組成物は２つ以上の親水性化合物、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上の異なる親水性化合物を含む。
【０１０１】
好ましい実施形態では、親水性化合物はポリオールである。
【０１０２】
本発明の一実施形態では、止血組成物は２つのポリオール、例えばマンニトール及びグリセロール、又はトレハロース及びグリコールを含む。
【０１０３】
本発明の一実施形態では、止血組成物は１つ又は複数の糖アルコール、例えばグリコール、グリセロール、エリスリトール、スレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ダルシトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、ポリグリシトールからなる群から選択される１つ又は複数の糖アルコールを含む。
【０１０４】
一実施形態では、止血組成物は１つ又は複数の糖アルコール及び１つ又は複数の糖、例えば１つの糖アルコール及び１つの糖を含む。
【０１０５】
一実施形態では、止血組成物は１つの糖アルコール及び任意選択で１つ又は複数のさらなる親水性化合物、例えば糖アルコール類又は糖類であってよい１つ又は複数のポリオールを含む。
【０１０６】
一実施形態では、止血組成物は唯一のポリオールとして糖を含まない。
【０１０７】
本発明の一実施形態では、止血組成物はマンニトールを含む。
【０１０８】
本発明の一実施形態では、止血組成物はソルビトールを含む。
【０１０９】
本発明の一実施形態では、止血組成物はグリセロールを含む。
【０１１０】
本発明の一実施形態では、止血組成物はトレハロースを含む。
【０１１１】
本発明の一実施形態では、止血組成物はグリコール、例えばプロピレングリコールを含む。
【０１１２】
本発明の一実施形態では、止血組成物はキシリトールを含む。
【０１１３】
本発明の一実施形態では、止血組成物はマルチトールを含む。
【０１１４】
本発明の一実施形態では、止血組成物はソルビトールを含む。
【０１１５】
一実施形態では、止血組成物は約１％〜約２０％の１つ又は複数の親水性化合物、例えば約１％〜約１５％の１つ又は複数の親水性化合物、例えば、約１％〜約１０％の１つ又は複数の親水性化合物、例えば約１％〜約７％の１つ又は複数の親水性化合物、例えば、約１％〜約５％の１つ又は複数の親水性化合物、例えば、約２％〜約５％の１つ又は複数の親水性化合物、例えば約３％〜約５％の１つ又は複数の親水性化合物を含む。
【０１１６】
一実施形態では、本開示の親水性化合物はポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）ではない。
【０１１７】
親水性化合物は、乾燥したトロンビン組成物の成分、生体親和性ポリマーを含むペーストの成分であってよく、及び／又は乾燥したトロンビン組成物をもどした後の別のステップにおいて止血組成物中に組み込んでもよい。
【０１１８】
一実施形態では、１つ又は複数の親水性化合物は、乾燥したトロンビン組成物の成分である。
【０１１９】
一実施形態では、１つ又は複数の親水性化合物は、生体親和性ポリマーを含むペーストの成分である。
【０１２０】
一実施形態では、１つ又は複数の親水性化合物は、乾燥したトロンビン組成物をもどした後の別のステップにおいて止血組成物中に組み込まれる。
【０１２１】
好ましくは、（１つ又は複数の）親水性化合物は、止血組成物を生成するためのさらなる混合ステップを避けるために、トロンビン成分又はペースト成分に含まれる。
【０１２２】
さらなる生物活性剤
本発明の一実施形態では、止血組成物は、止血、創傷の治癒、骨の治癒、組織の治癒、及び／又は腱の治癒を刺激することができる１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む。１つ又は複数の生物活性剤は、乾燥したトロンビン組成物、生体親和性ポリマーを含むペーストの成分であってよく、及び／又は乾燥したトロンビン組成物をもどした後の別のステップにおいて止血組成物中に組み込んでもよい。好ましくは、そのような生物活性剤は、さらなる混合ステップを避けるために、乾燥したトロンビン組成物の中又は生体親和性ポリマーを含むペーストの中に含まれる。生物活性剤が保存及びもどしの間にその生物活性を保持すること、即ち、その薬剤が最終の止血組成物中でその生物学的機能を保持していることが重要である。多くの生物活性剤、特に水が存在すると分解するか又はその二次構造を失うおそれがある酵素及びその他のタンパク質は、溶液中で不安定である。
【０１２３】
１つ又は複数のさらなる生物活性剤は、例えばフィブリノーゲン、第ＸＩＩＩ因子と組み合わせたフィブリノーゲン、又はトラネキサム酸と組み合わせたフィブリノーゲン及び第ＸＩＩＩ因子であってよい。
【０１２４】
一実施形態では、止血組成物は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、及びトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）からなる群から選択される１つ又は複数の増殖因子等の、骨及び／又は腱及び／又は組織の治癒を刺激する１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む。
【０１２５】
一実施形態では、止血組成物は１つ又は複数の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含む。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）はＴＧＦ−βスーパーファミリーのサブグループである。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）はサイトカインとして及びメタボロゲンとしても知られている増殖因子の群である。もともとは骨及び軟骨の形成を誘起する能力によって発見されたが、ＢＭＰは今では身体全体の組織構築を統合する重要な形態形成シグナルの群を構成していると考えられている。
【０１２６】
一実施形態では、止血組成物は１つ又は複数のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を含む。ＭＭＰは亜鉛依存性エンドペプチダーゼである。ＭＭＰは傷害の後の治癒プロセスの間の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分解及びリモデリングにおいて極めて重要な役割を有している。ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１３、及びＭＭＰ−１４を含むある種のＭＭＰはコラーゲナーゼ活性を有する。これは多くの他の酵素と異なり、コラーゲンＩフィブリルを分解する能力を有していることを意味している。
【０１２７】
これらの増殖因子は全て、治癒プロセスの間で異なった役割を有している。ＩＧＦ−１は炎症の最初の段階の間にコラーゲン及びプロテオグリカンの生成を増大し、ＰＤＧＦも傷害後の早期の段階の間に存在してその他の増殖因子の合成並びにＤＮＡの合成及び細胞の増殖を促進する。ＴＧＦ−βの３つのアイソフォーム（ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、及びＴＧＦ−β３）は創傷の治癒及び瘢痕の形成に役割を果たしていることが知られている。ＶＥＧＦは血管新生を促進し、内皮細胞の増殖及び遊走を誘起することがよく知られている。
【０１２８】
一実施形態では、本開示の止血組成物は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）のフレーク又は粒子を含む。ＥＣＭは動物組織の細胞外の部分であり、通常、動物細胞を構造的に支持するとともに、他の種々の重要な機能を果たしている。ＥＣＭは機能的な組織再生を促進するので、治癒において極めて有益な効果を有していることが示されている。
【０１２９】
本発明の止血組成物と併せて用いられ得るさらなる種々の生物活性剤の範囲は広い。一般に、本発明の止血組成物を介して投与され得る生物活性剤には、限定なく、抗生剤及び抗ウイルス剤等の抗感染薬；鎮痛薬及び組合せ鎮痛薬；抗寄生虫薬；抗関節炎薬；抗痙攣薬；抗うつ薬；抗ヒスタミン薬；抗炎症薬；抗片頭痛製剤；抗新生物薬；抗パーキンソン病薬、抗精神病薬；解熱剤；鎮痙剤；抗コリン作用薬；交感神経用作用薬；キサンチン誘導体；カルシウムチャネルブロッカー並びにピンドロール及び抗不整脈薬等のベータブロッカーを含む心臓血管系製剤；抗高血圧薬；利尿剤；一般的な冠動脈、末梢、及び脳を含む血管拡張剤；中枢神経系刺激剤；エストラジオール、及びコルチコステロイドを含むその他のステロイド等のホルモン類；免疫抑制剤；筋弛緩剤；副交感神経遮断薬；精神刺激薬；天然誘導の若しくは遺伝子操作されたタンパク質、多糖類、糖タンパク質、又はリポタンパク質；オリゴヌクレオチド、抗体、抗原、コリン作用薬、化学療法剤、放射活性剤、骨誘導剤、嚢胞抑制剤、ヘパリン中和剤、凝結促進剤及び止血剤、例えば、プロトロンビン、トロンビン、フィブリノーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、ヘパリナーゼ、第Ｘ／Ｘａ因子、第ＶＩＩ／ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ／ＶＩＩＩａ因子、第ＩＸ／ＩＸａ因子、第ＸＩ／ＸＩａ因子、第ＸＩＩ／ＸＩＩａ因子、第ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩａ因子、組織因子、バトロキソビン、アンクロッド、エカリン、フォンウィレブランド因子、血小板表面糖タンパク質、バソプレシン、バソプレシンアナログ、エピネフリン、セレクチン、凝血促進性蛇毒、プラスミノーゲン活性化阻害剤、血小板活性化剤、並びに止血活性を有する合成ぺプチドが含まれる。
【０１３０】
一実施形態では、１つ又は複数のさらなる生物活性剤は、乾燥したトロンビン組成物の成分である。
【０１３１】
一実施形態では、１つ又は複数のさらなる生物活性剤は、生体親和性ポリマーを含むペーストの成分である。
【０１３２】
一実施形態では、１つ又は複数のさらなる生物活性剤は、乾燥したトロンビン組成物をもどした後の別のステップにおいて止血組成物中に組み込まれる。
【０１３３】
さらなる化合物
本発明の止血組成物は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）及び／又は２−メチル−２，４−ペンタンジオール（ＭＰＤ）のうちの１つ又は複数をさらに含んでよい。
【０１３４】
一実施形態では、本開示の止血組成物は、１つ又は複数の抗菌剤等の、１つ又は複数の抗微生物剤を含む。
【０１３５】
一実施形態では、本開示の止血組成物は塩化ベンザルコニウムを含む。
【０１３６】
一実施形態では、本開示の止血組成物は抗微生物剤を含まない。
【０１３７】
一実施形態では、止血組成物は押出し促進剤、即ちシリンジからのペーストの押出しを促進することができる化合物をさらに含む。
【０１３８】
適切な量のアルブミン等のある種の押出し促進剤を提供することによって、ゼラチンペースト組成物を例えばシリンジから押し出すために必要な力の量を低減することができるので、より高い濃度のゼラチンを用いることができることが既に示されている。高い濃度のゼラチンを用いることにより、そのような製品の止血特性を改善することができる。押出し促進剤は適切な量で提供することが必要である。その量は押出し効果が得られるように、即ち比較的大量の生体親和性ポリマー、例えば架橋ゼラチンであっても流れやすいペーストを可能にして、外科医が例えばアプリケーターチップを含むシリンジを用いて止血組成物を正確に塗布できるために十分多いことが好ましいが、一方、その量は止血組成物の起こり得る望ましくない機能特性を防止するために十分少ない必要がある。
【０１３９】
押出し促進剤は好ましくはアルブミン、特にヒト血清アルブミンである。
【０１４０】
本発明の止血組成物では、アルブミン等の押出し促進剤は約０．１％〜約１０％、例えば、約０．２％〜約８％、例えば約０．３％〜約７％、好ましくは約０．５％〜約５％、例えば、約１％〜約４％の量で存在する。
【０１４１】
一実施形態では、本発明の止血組成物は、例えば、０．１％未満、例えば０．０１％未満、例えば、０．００１％未満、例えば０．０００１％未満の微量のアルブミンを含む。
【０１４２】
１つ又は複数のさらなる化合物は、乾燥したトロンビン組成物の成分、生体親和性ポリマーを含むペーストの成分であってよく、及び／又は乾燥したトロンビン組成物をもどした後の別のステップにおいて止血組成物中に組み込んでもよい。
【０１４３】
一実施形態では、１つ又は複数のさらなる化合物は、乾燥したトロンビン組成物の成分である。
【０１４４】
一実施形態では、１つ又は複数のさらなる化合物は、生体親和性ポリマーを含むペーストの成分である。
【０１４５】
一実施形態では、１つ又は複数のさらなる化合物は、乾燥したトロンビン組成物をもどした後の別のステップにおいて止血組成物中に組み込まれる。
【０１４６】
止血組成物の作成／乾燥したトロンビン組成物のもどし
本開示は、乾燥したトロンビン組成物をペーストの中で直接もどして創傷の処置における特に止血目的のための使用に適した止血組成物を産生する方法に関する。
【０１４７】
したがって、一実施形態では、止血組成物を調製する方法が提供され、本方法は、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて第１の容器と第２の容器を連結するステップ、及び
ｄ）容器の内容物を混合するステップ
を含む。
【０１４８】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物をもどす方法が提供され、本方法は、
ａ）第１の容器中に乾燥したトロンビン組成物を用意するステップ、
ｂ）第２の容器中に生体親和性ポリマーを含むペーストを用意するステップ、
ｃ）好適な連結手段を用いて第１の容器と第２の容器を連結するステップ、及び
ｄ）容器の内容物を混合するステップ
を含む。
【０１４９】
容器は通常シリンジ、より好ましくは相互連結可能なシリンジである。
【０１５０】
一実施形態では、好適な連結手段はスタティックミキサーを含む。前記スタティックミキサーは混合中に空気をペーストの中に混合する能力を提供し得る。スタティックミキサーの寸法は止血組成物の稠度及び空気を止血組成物中に混合する能力に影響し得る。
【０１５１】
一実施形態では、好適な連結手段はルアーロック又はルアースリップコネクター等の標準的な型のコネクター部分を含む。ルアーロック又はルアースリップコネクションの寸法によって、止血組成物の稠度及び止血組成物の中に空気を混合する能力に影響し得る。
【０１５２】
混合は容器の内容物を数回往復して移送することによって実施される。
【０１５３】
一実施形態では、移送の回数は２０回未満、例えば１５回未満、例えば、１２回未満、例えば１０回未満、例えば、６回未満である。
【０１５４】
一実施形態では、移送の回数は１０回未満、例えば９回未満、例えば、８回未満、例えば７回未満、例えば、６回未満、例えば５回未満である。
【０１５５】
一実施形態では、移送の回数は８回未満である。
【０１５６】
好ましい実施形態では、移送の回数は約６回又はそれ未満である。
【０１５７】
６回の移送による混合は下記のように実施することができる。混合は、生体親和性ポリマーを含むペーストを、乾燥したトロンビン組成物を保持した第１の容器に移送することによって開始される。したがって、１回目の移送は生体親和性ポリマーを含むペーストの第２の容器から第１の容器への移送によって特徴付けられる。２回目の移送はトロンビン及び１回目の移送に起因するペースト混合物の第１の容器から最初に生体親和性ポリマーを含むペーストを保持していた第２の容器への移送によって特徴付けられる。３回目の移送はトロンビン及び２回目の移送に起因するペースト混合物の第２の容器から第１の容器への移送によって特徴付けられる。４回目の移送はトロンビン及び３回目の移送に起因するペースト混合物の第１の容器から第２の容器への移送によって特徴付けられる。５回目の移送はトロンビン及び４回目の移送に起因するペースト混合物の第２の容器から第１の容器への移送によって特徴付けられる。６回目かつ最終の移送は、トロンビン及び５回目の移送に起因するペースト混合物の第１の容器から第２の容器への移送によって特徴付けられる。
【０１５８】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物をペーストの中でもどすために、第１の容器と第２の容器との間の７回以上の移送が用いられる。
【０１５９】
一実施形態では、最終の移送はトロンビン及びペースト混合物の第１の容器から第２の容器への移送によって特徴付けられる。次いで得られる止血組成物が前記第２の容器から処置する部位、例えば出血している創傷の上に直接塗布され得る。一部の実施形態では、アプリケーターチップをシリンジに取り付けて、既に述べたように使用してもよい。
【０１６０】
乾燥したトロンビン組成物と生体親和性ポリマーを含むペーストとを混合することによって、止血組成物中のトロンビンの実質的に均一な分布がもたらされる。
【０１６１】
止血組成物
本開示の止血組成物は、乾燥したトロンビン組成物を、生体親和性ポリマーを含むペーストの中で直接もどすことによって調製される。ペーストのもどしは本明細書に記載した方法によって実施し得る。止血組成物は、止血組成物中のトロンビンの実質的に均一な分布を有する。
【０１６２】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビンの均一な分布は、２０％未満、例えば１０％未満、例えば、５％未満、例えば４％未満、例えば、３％未満、例えば２％未満、例えば、１％未満のトロンビン含量の変動によって特徴付けられる。トロンビン含量の変動は、容器中の止血ペーストの異なった部分、例えばシリンジの開始時の部分、シリンジの中間部分、又はシリンジの最後の部分の間のトロンビンの活性又は濃度の差異として測定し得る。
【０１６３】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビン含量の変動は１０％未満である。
【０１６４】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビン含量の変動は５％未満である。
【０１６５】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビン含量の変動は４％未満である。
【０１６６】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビン含量の変動は３％未満である。
【０１６７】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビン含量の変動は２％未満である。
【０１６８】
一実施形態では、止血組成物の全体にわたるトロンビン含量の変動は１％未満である。
【０１６９】
本明細書に記載した方法によって得られる止血組成物は、好ましくは流動性組成物である。本明細書に記載した方法によって得られる止血組成物は、止血及び／又は創傷治癒における使用に好適である。
【０１７０】
止血組成物は、１つ又は複数の親水性薬剤、例えば１つ若しくは複数のポリオール又は１つ若しくは複数のポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）等を含んでよい。
【０１７１】
一実施形態では、止血組成物はトロンビンの他に１つ又は複数のさらなる生物活性剤を含む。そのような１つ又は複数の生物活性剤は、止血、創傷の治癒、骨の治癒、組織の治癒、及び／又は腱の治癒を刺激することができ得る。
【０１７２】
一実施形態では、止血組成物は１つ又は複数の押出し促進剤、例えばアルブミン等を含む。
【０１７３】
止血組成物は本明細書に記載した乾燥したトロンビン組成物をもどす任意の方法によって得ることができる。
【０１７４】
一実施形態では、止血組成物は約１００ｇ×秒〜約１０，０００ｇ×秒、例えば、約５００ｇ×秒〜約５０００ｇ×秒、例えば約１０００ｇ×秒〜約３０００ｇ×秒、例えば、約１５００ｇ×秒〜約２０００ｇ×秒の範囲内の稠度を有する。
【０１７５】
一実施形態では、止血組成物は約５０００ｇ×秒未満、例えば約４０００ｇ×秒未満、例えば、約３０００ｇ×秒未満、例えば約２０００ｇ×秒未満の稠度を有する。
【０１７６】
容器
止血組成物を調製するために、当業者には既知の任意の好適な容器、例えばバイアル、ジャー、チューブ、トレイ、カートリッジ、又はシリンジが用いられ得る。
【０１７７】
乾燥したトロンビン組成物が第１の容器中に用意され、生体親和性ポリマーを含むペーストが第２の容器中に用意される。
【０１７８】
第１及び第２の容器は任意の好適な材料、例えばプラスチック、ガラス、セラミック、プラスチック、又はステンレススチール等の金属から作成できる。好適なプラスチック材料の例には、それだけに限らないが、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、及びポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）が含まれる。
【０１７９】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物は、シリンジ、バイアル、ジャー、チューブ、トレイ、又はカートリッジから選択し得る第１の容器中に用意される。
【０１８０】
好ましい実施形態では、乾燥したトロンビン組成物を保持する前記第１の容器は、それを必要とする患者に流動性止血組成物を分配するために適した医用送達デバイス、例えばシリンジである。
【０１８１】
第１の容器は通常、容器の内容物に影響しない化学的表面滅菌に適した材料から作られる。例えば、前記第１の容器は、エチレンオキシドを透過しない材料から作られ、例えばエチレンオキシドを透過しない金属、ガラス、又はプラスチックから作られ得る。
【０１８２】
乾燥したトロンビン組成物は好ましくはガラス容器内に用意され、したがってエチレンオキシドガスを用いて前記容器を滅菌することが可能である。一実施形態では、前記第１の容器はガラスシリンジである。一実施形態では、前記第１の容器は乾燥したトロンビンを保持するガラスインサートを有するシリンジである。
【０１８３】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストが、シリンジ、バイアル、ジャー、チューブ、トレイ、又はカートリッジから選択され得る第２の容器中に用意される。生体親和性ポリマーを含むペーストは当技術で既知の方法、例えば生体親和性ポリマー粉末を水性媒体と混合して前記ペーストを産生することによって調製し得る。生体親和性ポリマーを含むペーストは、好適にはバルクで調製され、前記第２の容器に移送され／分割され得る。
【０１８４】
好ましい実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストを保持する容器は、それを必要とする患者に流動性止血組成物を分配するために適した医用送達デバイス、例えばシリンジである。一実施形態では、第２の容器は使い捨てプラスチックシリンジである。
【０１８５】
一実施形態では、第１及び第２の容器は相互連結可能である。コネクター部分はルアーロック又はルアースリップコネクター等の標準的な型のコネクター部分であってよい。コネクター部分は適合するコネクターとの連結を確実にするためのネジ部分を備えてよい。前記ルアーロック又はルアースリップコネクションの寸法によって、乾燥したトロンビン組成物と生体親和性ポリマーを含むペーストとの混合の間に止血組成物の中に空気を混合する能力を変化させることができ得る。さらに、ルアーロック又はルアースリップコネクションの寸法によって、止血組成物の稠度に影響を与えることができ得る。
【０１８６】
一実施形態では、コネクター部分はスタティックミキサーを含む。前記スタティックミキサーの寸法によって、乾燥したトロンビン組成物と生体親和性ポリマーを含むペーストとの混合の間に止血組成物の中に空気を混合する能力を変化させることができ得る。さらに、スタティックミキサーの寸法によって、止血組成物の稠度に影響を与えることができ得る。
【０１８７】
外部包装
一実施形態では、例えば本明細書で開示したシリンジ等のシリンジ、又はその他の封入ユニットの中に含まれる乾燥したトロンビン組成物及び／又は生体親和性ポリマーを含むペーストは外部包装の中にさらに含まれ、それにより製品は使用まで無菌に保たれる。これにより使用者は外部包装を取り除き、止血組成物の成分を無菌野に移すことができる。
【０１８８】
外部包装は通常、可撓性で半剛性又は剛性の材料から作られ、典型的にはプラスチック、アルミニウムホイル及び／又はプラスチックラミネート等の材料からなり、プラスチックはＰＥＴ、ＰＥＴＧ、ＰＥ、ＬＬＤＰＥ、ＣＰＰ、ＰＡ、ＰＥＴＰ、ＭＥＴＰＥＴ、Ｔｙｖｅｋからなる群から選択してよく、任意選択でポリウレタン等の接着剤で接合され、又は共押し出しされる。
【０１８９】
一実施形態では、外部包装はアルミニウムホイルの外部包装である。
【０１９０】
外部包装は、好ましくは湿気に対する完全なバリアを形成する。
【０１９１】
外部包装は、好ましくは照射等による滅菌処理に耐えることができる。
【０１９２】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物を含む第１のシリンジ及び生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２のシリンジは、個別の外部包装に含まれる。
【０１９３】
滅菌
本開示の乾燥したトロンビン組成物、生体親和性ポリマーを含むペースト、及び／又は止血組成物は、好ましくは無菌である。当技術で既知の任意の好適な滅菌手法を利用することができる。滅菌は、伝染性の物質（例えば真菌、細菌、ウイルス、プリオン、及び胞子の形態等）を効果的に殺滅し又は排除する任意のプロセスを意味する。滅菌は例えば熱、化学物質、及び／又は照射の適用によって達成することができる。
【０１９４】
滅菌はオートクレーブ（高温の水蒸気を用いる）及び乾熱を含む熱滅菌によって達成され得る。
【０１９５】
滅菌は成分に無菌性を提供する照射、例えばイオン化照射によって達成され得る。そのような照射にはｅビーム（β線照射）、Ｘ線、γ線及びβ線、ＵＶ光並びに原子内粒子が含まれ得る。照射のレベル及び時間を含む滅菌条件が、無菌組成物を提供する。滅菌条件は当技術で現在用いられているものと同様であり、当業者によって決定することができる。
【０１９６】
滅菌は例えばエチレンオキシドガス、オゾン、塩素漂白剤、グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、オルトフタルアルデヒド、過酸化水素及び／又は過酢酸を用いることによる化学滅菌によって実施され得る。
【０１９７】
乾燥したトロンビン組成物は通常、無菌の方法によって調製され、それにより前記第１の容器中で無菌の乾燥したトロンビン組成物が用意される。
【０１９８】
一実施形態では、乾燥したトロンビン組成物を含む第１の容器の表面は、エチレンオキシドガス等による化学滅菌によって滅菌される。
【０１９９】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストは、γ線照射等の照射によって滅菌される。
【０２００】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２の容器の滅菌は、β線又はγ線の照射を用いて滅菌され、それにより無菌のペースト及び無菌の容器が用意される。
【０２０１】
一実施形態では、生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２の容器の滅菌は最終滅菌として、即ち生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２の容器が外部包装の中に含まれたときに行なわれる。
【０２０２】
医学用途
本開示は、本開示の方法によって得られる止血組成物の、止血及び／又は創傷の治癒を促進するための使用にさらに関する。
【０２０３】
本開示の止血組成物は、例えば出血の制御が望まれる数々の手術手順の中で用いられ得る。止血組成物は不規則な表面に適合するペーストの形態であって出血を速く止めることができ、したがって止血スポンジが効率的でない粗い又は不均一な表面において迅速な止血を提供するために有用である。
【０２０４】
一般に、止血ペーストは手術場において必要なときに医療従事者、即ち医師又は看護師によって、通常は液体（任意選択でトロンビンを含む）をある量の生体親和性ポリマーを含むシリンジ等の容器に添加することによって直接調製される。生体親和性ポリマーは液体で前もって湿潤化してもよく、又は本質的に乾燥していてもよい（自由流動粉末）。したがってペーストは極めて緊張した条件下で調製されることが多く、したがってペーストを調製するプロセスが単純で速く、出血をできるだけ速く阻止すること、及びペーストを調製する間に失敗がなく、看護師が止血材を調製する代わりに外科医の要求に集中できることを確実にすることが重要である。ペーストの稠度が止血ペーストとしての使用に好適であること、並びに製品の稠度が調製ロット間及び経時的に変化しないことも重要である。
【０２０５】
現在利用可能な流動性ペースト製品（Ｆｌｏｓｅａｌ（登録商標）及びＳｕｒｇｉｆｌｏ（登録商標））は、トロンビン組成物を液体中でもどした後に、実質的に均一なペーストを得るために生体親和性ポリマーとその液体とを２つの連結されたシリンジの間を数回通過させることによってもどされたトロンビン溶液と生体親和性ポリマーとを機械的に混合する必要がある。トロンビンのもどしは時間がかかり失敗しやすく、これらは手術室での設定における２つの望ましくない要素である。これらの製品は手術時に必要な場合には手術前に手術室において事前準備されることが多く、未使用の製品が廃棄されて不必要に高い手術室のコストを引き起こすことが多い。
【０２０６】
本開示の止血組成物を調製する方法は、乾燥したトロンビン組成物をペースト中で直接もどすことを可能にすることにより、手順中の取り扱いステップの数を低減するので、現在利用可能な方法よりも優れている。本開示の止血組成物は、生体親和性ポリマーを含むある量のペーストを乾燥したトロンビン組成物を含む容器に加え、相互に連結された２つのシリンジの間で内容物を数回移送する等、内容物を混合することによって単純に調製することができ、それにより、実質的に均一に分布したトロンビンを含む即時使用可能な止血ペーストが形成される。
【０２０７】
乾燥したトロンビン組成物を液体中で事前にもどす必要がないという事実は、ペーストを調製するために費やされる時間がより短いことをも意味し、それにより、止血組成物をより速く患者に塗布できるという事実及び調製法が単純なので止血組成物を調製する間に失敗する可能性が少なくなるという事実の両方から、患者の安全性が増大する。また、本開示の止血組成物を調製する方法は、調製が単純で速く、現行の製品を手術前に事前調製する必要がないので、手術室のコストを低減することができる。
【０２０８】
本発明の方法のもう１つの注目すべき利点は、現行の止血用流動性キットと比較してより少ない部品からなるキットを調製することができることである。手術室において流動性ペースト組成物を調製するために必要な全てのものは、シリンジ等の第１の容器に含まれる本明細書に記載した乾燥したトロンビン組成物、及び生体親和性ポリマーを含むペーストを含む医用送達デバイス等の第２の容器である。２つを連結して混合すれば、効果的な止血のためのトロンビンを含む全ての必要な薬剤を含む即時使用可能な流動性ペーストが形成される。したがって、本開示の方法に従って調製した製品では、追加のシリンジ、バイアルアダプター、針、及び混合ボウルは必要ない。これは製造コストが低減できることを意味し、また手術の間に手術室のスタッフが追跡すべき部品の数がより少ないので患者の安全性を良好に保証できる。止血材の調製に針を必要としないことも、手術室のスタッフの安全性を保証する。
【０２０９】
一実施形態では、本開示は、本開示の方法によって調製された止血組成物を出血部位に塗布することによる、それを必要とする個体において出血を停止させ／止血を促進する方法に関する。
【０２１０】
本開示の止血組成物は、一般手術、心臓胸部手術、血管手術、形成外科手術、小児外科手術、結腸直腸手術、移植手術、腫瘍外科手術、外傷手術、内分泌外科手術、乳房手術、皮膚手術、耳鼻咽喉手術、婦人科手術、口腔及び顎顔面手術、歯科手術、整形外科手術、神経手術、眼科手術、足の手術、泌尿器科手術を含む任意の種類の手術に用いられ得る。
【０２１１】
一実施形態では、本開示は、本開示の方法によって調製された止血組成物を創傷に塗布することによる、それを必要とする個体において創傷の治癒を促進する方法に関する。
【０２１２】
「創傷」は、様々な原因（例えば長期の臥床による床擦れ及び外傷によって誘起された創傷）によって始まり、種々の特徴を有する皮膚及び／又はその下（皮下）の組織の傷害を広く意味する。創傷は創傷の深さに応じて４つのグレード：ｉ）グレードＩ：上皮に限局した創傷；ｉｉ）グレードＩＩ：真皮内に進展した創傷；ｉｉｉ）グレードＩＩＩ：皮下組織内に進展した創傷；及びｉｖ）グレードＩＶ（又は全厚創傷）：骨が露出した創傷（例えば大転子又は仙骨等の骨圧点）の１つに分類され得る。本開示は、本開示の止血組成物を用いる任意の種類の上述の創傷の処置に関する。
【０２１３】
創傷の処置は、原理的には創傷の治癒又は創傷の治癒の促進をもたらす。治癒の促進は、例えば創傷治癒促進物質の投与の結果であり得る。或いは、創傷の治癒は、細菌又はウイルスによる感染を防止すること、又はさもなければ創傷の処置のプロセスを長期化したかも知れない感染のリスクを低減することによって促進され得る。
【０２１４】
一実施形態では、本開示は、本開示の方法によって調製された止血組成物を傷害された骨／腱に塗布することによる、それを必要とする個体において骨及び／又は腱の治癒を促進する方法に関する。
【０２１５】
「個体」は、本明細書では、それだけに限らないが、マウス及びハムスター等のげっ歯目の哺乳動物、及びウサギ等のウサギ目の哺乳動物を含む任意の哺乳動物であってよい。哺乳動物はネコ科（ネコ）及びイヌ科（イヌ）を含む食肉目からのものであることが好ましい。哺乳動物はウシ亜科（ウシ）及びブタ科（ブタ）を含む偶蹄目、又はウマ科（ウマ）を含むウマ目からのものであることがさらに好ましい。哺乳動物は霊長目、セボイド目、又はシモイド目（サル）、又は真猿亜目（ヒト及び類人猿）のものであることが最も好ましい。特に好ましい哺乳動物はヒトである。
【０２１６】
一実施形態では、本開示は創傷の処置における使用のため、例えば出血を停止するため、又は創傷の治癒を促進するための、本明細書で開示した止血組成物に関する。
【０２１７】
止血用キット
本開示はさらに、本開示の乾燥したトロンビン組成物及び乾燥したトロンビン組成物の量に適合した生体親和性ポリマーを含むペーストを含み、混合に際して止血における使用に適したトロンビン含量を有する止血組成物が形成される止血用キットに関する。
【０２１８】
したがって、一実施形態では、本開示は、
ａ）乾燥したトロンビン組成物を含む第１のシリンジ、
ｂ）生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２のシリンジ、及び
ｃ）任意選択で外部包装
を含む止血用キットであって、
２つのシリンジが相互連結可能である、止血用キットに関する。
【０２１９】
一実施形態では、止血用キットは、
ａ）外部包装中の乾燥したトロンビン組成物を含む第１のシリンジ、
ｂ）外部包装中の生体親和性ポリマーを含むペーストを含む第２のシリンジ、及び
ｃ）任意選択でａ）及びｂ）の成分を含む外部包装
を含み、２つのシリンジは相互連結可能である。
【０２２０】
一実施形態では、キットは１つ又は複数のアプリケーターチップをさらに含む。
【０２２１】
キットは任意選択でキットの使用のための指示書を含んでよい。
【０２２２】
止血用キットの部品は本明細書の他の箇所に記載した通りでよい。
【０２２３】
［実施例］
［実施例１：ペースト中のトロンビンの分布］
材料：
１０ｍＬガラスシリンジ中、２０００ＩＵの乾燥したトロンビン（第１のシリンジ）
１０ｍＬシリンジ中、５ｍＬのゼラチンペースト（第２のシリンジ）
【０２２４】
方法：
ルアーロックを介して２つのシリンジを相互連結し、ゼラチンペーストの内容物を、乾燥したトロンビン組成物を含むシリンジに移送する（第１の移送）。次いで得られるトロンビンとゼラチンペーストの混合物を第１と第２のシリンジの間を５回往復させて移送し、第２のシリンジの中に含まれた止血組成物を得る（図１）。移送の全回数は６回である。得られる止血組成物はトロンビンを含む流動性ペースト製剤であり、本明細書では「６ｔｏｍｉｘ」又は「６ＴＭ」ペーストと特定する。混合の結果として全体で約３ｍＬの空気がペーストの中に入り、ペーストの最終体積は約８ｍＬになる。
【０２２５】
結果：
最終の止血組成物は体積約８ｍＬのペーストである。
【０２２６】
止血組成物のトロンビン含量は止血組成物の異なる部分の平均トロンビン活性として測定される。以下の部分への分割が適用される。開始部分（即ちシリンジから押し出された最初の３分の１の止血組成物）、中間部分（シリンジから押し出された中間の３分の１の止血組成物）、及び最後の部分（シリンジから押し出された最後の３分の１の止血組成物）。
【０２２７】
止血組成物全体のトロンビン活性を１００％とし、個別の部分の平均トロンビン活性を全活性の百分率として計算する。止血組成物中のトロンビンの分布が完全に均一であれば、３つの部分のそれぞれの平均トロンビン活性は３３．３３３％になる。
【０２２８】
【表１】
2021523097.tif 000002
【０２２９】
トロンビン含量の変動
トロンビン含量の変動は、２つの部分の間の平均トロンビン活性の百分率での差異として計算する。
【０２３０】
本明細書では、トロンビン含量の最大変動は
（３６／（３１＋３６））−０．５０＊１００＝３．７％
として計算される。
【０２３１】
結論として、この結果は、２つのシリンジの間で２つの成分を６回移送することによって、乾燥したトロンビン組成物をゼラチンペーストの中で直接もどすことができ、止血組成物中で実質的に均一なトロンビンの分布を有する止血組成物が産生されることを実証している。
【０２３２】
［実施例２：ペーストの止血効果］
目的
本研究の目的は、実施例１の６ＴＭペーストの止血効率を試験することであった。ペーストの止血効率を市販のＳｕｒｇｉｆｌｏ（登録商標）ペーストの止血効率と比較した。Ｓｕｒｇｉｆｌｏ（登録商標）は出血している表面に塗布することによる止血用途に承認された無菌の吸収性ブタゼラチンペースト製剤であり、確立された市販の製品である。
【０２３３】
止血効率は以下に記載するようにブタ脾臓生検モデルで試験した。
【０２３４】
実験モデル
ブタ脾臓生検パンチモデルを用い、最初１０秒の圧迫時間、続いて１２０秒の評価時間、その後１０秒の圧迫時間で８ｍｍの穿刺（深さ３ｍｍ）を脾臓に適用した。
【０２３５】
ブタ脾臓生検パンチモデルは止血ペーストの止血効率をｉｎ  ｖｉｖｏで評価するための確立されたモデルである（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、２０１５、Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＸＸＶＩＩ）。本研究のブタ脾臓生検パンチモデルはＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、２０１５で用いられたものと同様である。本研究はＴｈｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  Ｉｎｓｐｅｃｔｏｒａｔｅ  ｏｆ  Ｄｅｎｍａｒｋ  （Ｄｙｒｅｆｏｒｓｏｅｇｓｔｉｌｓｙｎｅｔ）の許可のもとに行なった。
【０２３６】
実験動物
ブタは大量の血液（７０ｍＬ／ｋｇ）及び大血管の脾臓を有し、単一の動物で多くの止血の比較が可能であるので、このモデルのために選択される動物である。本研究の雌ブタは体重約４０ｋｇ（±５ｋｇ）、月齢約３か月であった。体重をブタの組み入れ基準とした。体重の下限は試験すべき臓器が適切な大きさであることを保証することとし、上限はブタの大きさが標準化されていることを保証する指針であった。
【０２３７】
手術の際に、試験したブタには臨床的疾病の兆候は見られなかった。
【０２３８】
麻酔及び流体治療
ブタは手術前、少なくとも６時間絶食させた。以下の混合物、即ち６．２５ｍＬのＮａｒｃｏｘｙｌ（キシラジン２０ｍｇ／ｍＬ）、１．２５ｍＬのＫｅｔａｍｉｎｏｌ（ケタミン１００ｍｇ／ｍＬ）、２ｍＬのＴｕｒｂｏｇｅｓｉｃ（ブトルファノール１０ｍｇ／ｍＬ）、及び２ｍＬのＭｅｔａｄｏｎ（メタドン１０ｍｇ／ｍＬ）をＺｏｌｅｔｉｌ  ５０Ｖｅｔバイアルに添加したもの（１２５ｍｇのチレタミン及び１２５ｍｇのゾラゼパムを含む）を筋肉内注射（１ｍＬ／１０ｋｇ）することによって麻酔を誘導した。
【０２３９】
ブタに挿管し、レスピレーターを用いて０．５Ｌの酸素／２．５Ｌの空気／分の混合物で換気した。フェンタニル（５０μｇ／ｍＬ、１ｍＬ／１０ｋｇ／時間）及びプロポフォール（１０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍＬ／ｋｇ／時間）の静脈内投与によって麻酔を維持した。動物はラクテートリンゲル液（１２５ｍＬ／時間）で正常補水状態に保った。上記の医薬の使用が止血に影響しないことは既に評価済みである。
【０２４０】
本研究に用いたブタは、心停止をもたらすバルビツル酸塩の過剰投与によって手術後に安楽死させた。
【０２４１】
試験手順
試料の調製
実施例１に記載したように、即ち食塩液中でトロンビンを事前にもどすことなく、湿潤したゼラチンペーストを乾燥したトロンビンの調製物と混合することによって、本発明の６ＴＭペーストを調製した。
【０２４２】
Ｓｕｒｇｉｆｌｏペースト（対照）は、２０１４年６月１１日付けのＳｕｒｇｉｆｌｏ使用指示書に従ってトロンビン溶液と混合した。
【０２４３】
いったんトロンビンと混合すれば、対照製品（Ｓｕｒｇｉｆｌｏ）と本発明の６ＴＭペーストの化学組成及び含水率は同一であった。
【０２４４】
保存条件を模倣するため、ペーストは４０℃で３か月保存してからトロンビンと混合し続いて試験した。唯一の相違は、対照ペーストが含む液体（食塩液）が保存中の本発明の６ＴＭペーストより２ｍＬ少ないことであった。対照ペーストにはトロンビンを含む２ｍＬの食塩液を試験の直前に加え、本発明の６ＴＭペーストは試験の直前に実施例１に記載したように乾燥したトロンビンと混合した。
【０２４５】
手術手順
正中腹部切開を作成して脾臓を露出した。脾臓に８ｍｍのパンチ（深さ３ｍｍ）を作成した。出血強度は本明細書で下記するように０〜５のスケールで評価した。出血強度３及び４のみを許容可能とみなした。パンチは今や対照試料又は試験試料のいずれかに準備できた。試験試料ごとに新たなパンチを作成した。
【０２４６】
それぞれの試料の種類を７回試験した（ｎ＝７）。試料はランダム化された順序で試験した。
【０２４７】
それぞれのブタについて、試験期間の開始時及び完了時に湿潤したガーゼのみを用いる１２分の陰性対照を実施した。陰性対照は、研究期間を通して動物の出血する能力の指標として用いた。
【０２４８】
一次試験パラメーターは止血までの時間（ＴＴＨ）を測定することであった。ＴＴＨは、さらなる出血が起こらないこと、即ち非再出血を保証する最終の止血評価期間を全時間から差し引いた時間として定義される。
【０２４９】
出血強度の評価並びに試験試料及び陰性対照の適用について、以下に詳細に述べる。
【０２５０】
出血強度
それぞれのパンチの出血強度は、外科医によって０〜５のスケールで評価された（下表を参照）。
【０２５１】
出血強度はそれぞれのパンチについてｔ＝０で記録した。出血強度３〜４の創傷について実施した試験のみを、さらなる解析に用いた。
【０２５２】
【表２】
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【０２５３】
陰性対照
湿潤したガーゼをパンチの上に直接載せた。指圧を３０秒間印加し、続いて１２０秒を止血評価時間とした。止血を評価した（血液が試験物品の下から３０秒間漏出しないことと定義）。１２０秒以内に止血が達成されない場合には、さらに３０秒間の指圧を印加し、１２０秒の止血再評価を実施した。出血が停止して止血が達成されるまで、又は試験時間が１２分に達するまで、タンポンの適用及び観察時間を実施した。陰性対照では止血は１２分の試験時間以内で達成されず、したがって研究を通してブタが出血する能力が示された。
【０２５４】
試験試料の塗布
アプリケーターチップを用いて、ほぼ１〜２ｍＬのペーストを直接パンチに塗布した。塗布の間、チップをパンチの中に進入させ、組織との接触を確実にした。塗布の後、０．９％の食塩液で湿潤したガーゼをパンチの上に載せた。指圧（タンポン）を１０秒間印加した。加圧を停止し、ガーゼを取り除きし、続いて止血を評価した。試験物品の下からの血液の漏出が１２０秒間見られない場合には、止血が達成されたと結論し、実験を終了する。血液が試験物品の下から１２０秒の時間枠内で漏出した場合には、漏出に要する時間を記録し、再び指圧を１０秒間印加し、その後、止血を検査した。止血が達成されるか、１２分のいずれか早い方まで、この手順を継続した。
【０２５５】
止血時間の評価のための計算例
指圧１０秒、止血の検査：３９秒後に血液漏出、指圧さらに１０秒、止血の検査１２０秒間：漏出なし−結論：止血は１０＋３９＋１０秒＝５９秒後に達成された。即ち、最後の観察時間はＴＴＨの計算に含めない。
【０２５６】
結果
本研究の結果を下表に示し、さらに図３に示す。
【０２５７】
【表３】
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【０２５８】
結果は、６ＴＭペーストの平均ＴＴＨが対照ペーストと比較してほとんど２分の１に低減することを示している。
【０２５９】
対照ペーストのメディアンＴＴＨは３７秒であり、一方６ＴＭペーストのメディアンＴＴＨは１０秒であった。
【０２６０】
データは本発明に従って調製した６ＴＭペーストが驚くべきことに対照ペーストよりも速くかつより一貫して止血をもたらすことを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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