(57)【要約】  本明細書に記載されるのは、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤との組み合わせを使用して癌を治療する方法である。【選択図】図１８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の：
ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；
ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤
を、前記癌を有する個人に投与することを含む方法。
【請求項２】
有効量の前記ＬＩＦ結合ポリペプチドを、前記癌を有する個人に投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
有効量の前記白金系抗悪性腫瘍剤を、前記癌を有する個人に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＬＩＦ結合ポリペプチドが、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＬＩＦ結合ポリペプチドが、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ヒト化されている、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、脱免疫原性化されている請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び
ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＶＨ配列が、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；前記ＶＬ配列が、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＶＨ配列が、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；前記ＶＬ配列が、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％の同一アミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び
ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、請求項５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、請求項５に記載の方法。
【請求項１９】
前記白金系抗悪性腫瘍剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記白金系抗悪性腫瘍剤が、シスプラチンである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記癌が、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌が、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記癌が、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチドの阻害剤での治療に対して抵抗性である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記癌が、治療量の白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、別々に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、異なるスケジュールで投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、単一の組成物中で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
癌を有する個人を治療する方法であって、
ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｉｉ．配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｖｉ．配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体と；
ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤と
の有効量の組み合わせを、前記癌を有する個人に投与することを含む方法。
【請求項２９】
有効量の前記ＬＩＦ結合ポリペプチドを、前記癌を有する個人に投与することをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
有効量の前記白金系抗悪性腫瘍剤を、前記癌を有する個人に投与することをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる、２０１８年６月１８日に出願された欧州特許出願第１８３８２４３２．５号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
白血病抑制因子（ＬＩＦ）は、細胞分化の阻害を含めた様々な生物学的活性に関与する、インターロイキン６（ＩＬ−６）型サイトカインである。ヒトＬＩＦは、ｇｐ１３０とヘテロ二量体化する細胞表面ＬＩＦ受容体（ＬＩＦＲ又はＣＤ１１８）への結合を介して生物学的効果を発揮する、２０２個のアミノ酸のポリペプチドである。ヒトＬＩＦは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及びヤヌス活性化キナーゼ（ＪＡＫ／ＳＴＡＴ）経路などの成長推進（ｐｒｏ−ｇｒｏｗｔｈ）シグナル伝達経路の活性化をもたらす。高い発現レベル及び高い血清レベルのＬＩＦは、多くの種類の癌についての予後不良と関係することが実証されている。
【０００３】
プラチン類（ｐｌａｔｉｎｓ）としても公知である白金系抗悪性腫瘍剤は、いくつかの癌の治療における有用性を示している、白金の配位錯体である。機構的には、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＤＮＡを架橋させる又はＤＮＡ間に挿入されることによって、細胞死を引き起こす。白金系抗悪性腫瘍剤は、細胞におけるＤＮＡ修復及び合成を阻害する。最終的には、これらの細胞過程が損なわれて、アポトーシスの開始につながる。一般的な白金系抗悪性腫瘍剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン（ｐｈｅｎａｔｈｒｉｐｌａｔｉｎ）、ピコプラチン、サトラプラチン、ロバプラチン、又はヘプタプラチンが含まれ得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書に記載されるのは、個人における癌、腫瘍、又は他の新生物を治療又は予防するための方法である。問題の方法及び組成物は、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤との組み合わせを含む。これらの方法は、ＬＩＦ活性を打ち消す又は阻止する抗ＬＩＦ抗体と、白金系抗悪性腫瘍剤を利用することができる。特に、これらの組み合わせは、抗ＬＩＦ抗体又は白金系抗悪性腫瘍剤のいずれか単独と比較した場合に、驚くべき相乗作用を呈する。
【０００５】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個人における癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせた白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドの使用である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、別々の製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、同じ製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤が個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与されるのと同時に個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅ）されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。ある種の実施形態では、癌は、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、単剤療法として投与される治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド又は白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である。
【０００６】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、個人における癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体の使用であり、ここでは、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。
【０００７】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の：（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤を、癌を有する個人に投与することを含む方法である。ある種の実施形態では、この方法は、癌を有する個人に、有効量のＬＩＦ結合ポリペプチドを投与することを含む。ある種の実施形態では、この方法は、癌を有する個人に、有効量の白金系抗悪性腫瘍剤を投与することを含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。ある種の実施形態では、癌は、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチドの阻害剤での治療に対して抵抗性である。ある種の実施形態では、癌は、治療量の白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である。ある種の実施形態では、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、別々に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、同時に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、単一の組成物中で投与される。
【０００８】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドを、癌を有する個人であって、治療量の白金系抗悪性腫瘍剤を投与されている個人に投与することを含む方法である。ある種の実施形態では、この方法は、癌の増殖又は転移を阻害する。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。ある種の実施形態では、癌は、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、治療量の白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である。
【０００９】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の白金系抗悪性腫瘍剤を、癌を有する個人であって、治療量の白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドを投与されている個人に投与することを含む方法である。ある種の実施形態では、この方法は、癌の増殖又は転移を阻害する。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。ある種の実施形態では、癌は、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチドの阻害剤での治療に対して抵抗性である。
【００１０】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の：（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体と；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤とを、癌を有する個人に投与することを含む方法である。
【００１１】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤とを含むキットである。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。ある種の実施形態では、キットは、薬学的に許容し得る補形薬、担体、又は希釈剤をさらに含む。
【００１２】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤を含む組成物である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。ある種の実施形態では、組成物は、薬学的に許容し得る補形薬、担体、又は希釈剤をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】異なる抗ＬＩＦヒト化抗体のＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示すウエスタンブロットを表す。
【図２Ａ−２Ｂ】ヒト化された親５Ｄ８抗体のＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示すウエスタンブロットを表す。
【図３Ａ】ｈ５Ｄ８抗体を使用するＵ−２５１細胞におけるＬＩＦ阻害についてのＩＣ５０を示す。
【図３Ｂ】内在性ＬＩＦ刺激条件下でのｐＳＴＡＴ３のｒ５Ｄ８及びｈ５Ｄ８阻害の代表的なＩＣ５０用量反応曲線を示す。示したのは、代表的な曲線である（ｎ＝１  ｈ５Ｄ８、ｎ＝２  ｒ５Ｄ８）。
【図４】この開示に記載した異なるモノクローナル抗体のＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示すウエスタンブロットを表す。
【図５】ヒト患者からの多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）、卵巣癌、結腸直腸癌、及び膵腫瘍における、ＬＩＦ発現の免疫組織化学染色及び定量化を表す。バーは、平均値＋／−平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図６Ａ】ヒト化５Ｄ８抗体を使用して、非小細胞肺癌のマウスモデルにおいて行われた実験を示すグラフである。
【図６Ｂ】ｒ５Ｄ８抗体を使用して、非小細胞肺癌のマウスモデルにおいて行われた実験を示すグラフである。
【図７Ａ】ＧＢＭの同所移植（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウスモデルにおけるＵ２５１細胞の阻害に対するｒ５Ｄ８の効果を示す。第２６日での定量化が示される。
【図７Ｂ】ルシフェラーゼ発現ヒトＵ２５１  ＧＢＭ細胞を接種し、且つその後１００、２００、又は３００μｇのｈ５Ｄ８又は賦形剤で週２回治療されたマウスからのデータを示す。腫瘍サイズは、第７日に、生物発光（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）によって決定した。このグラフは、平均値±ＳＥＭを示す水平なバーと共に、個々の腫瘍測定値を示す。統計的有意性は、対応のないノンパラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定を使用して算出した。
【図８Ａ】同系移植（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ）マウスモデルにおける卵巣癌細胞の増殖の阻害に対するｒ５Ｄ８の効果を示す。
【図８Ｂ】第２５日での腫瘍の個々の測定値を示す。
【図８Ｃ】ｈ５Ｄ８が、週２回２００μｇ／マウスで投与された場合に腫瘍増殖の有意な低下を示す（ｐ＜０．０５）ことを図示する。記号は、平均値±ＳＥＭであり、統計的有意性は、（対応のないノンパラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定を用いて）賦形剤と比較した。
【図９Ａ】同系移植マウスモデルにおける結腸直腸癌細胞の増殖の阻害に対するｒ５Ｄ８の効果を示す。
【図９Ｂ】第１７日での腫瘍の個々の測定値を示す。
【図１０Ａ】ＣＣＬ２２＋細胞の代表的な画像及び定量化を用いて、ＧＢＭの同所移植マウスモデルにおける腫瘍部位へのマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｂ】ヒト器官型組織片培養モデルにおけるマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｃ】ＣＣＬ２２＋細胞の代表的な画像及び定量化を用いて、卵巣癌の同系移植マウスモデルにおける腫瘍部位へのマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｄ】ＣＣＬ２２＋細胞の代表的な画像及び定量化を用いて、結腸直腸癌の同系移植マウスモデルにおける腫瘍部位へのマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｅ】第２５日（終点）にｈ５Ｄ８（１５ｍｇ／ｋｇ、２ＱＷ）で治療された腫瘍から採取された腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の炎症性表現型を示す。治療された腫瘍におけるＴＡＭは、Ｍ１炎症促進性表現型に極性化された。統計的有意性は、対応のないｔ検定によって決定した。
【図１０Ｆ】ＬＩＦノックダウン細胞の条件培地を用いて培養した単球の遺伝子発現データを示す。
【図１１Ａ】ｒ５Ｄ８での治療後の卵巣癌の同系移植マウスモデルにおける非骨髄性エフェクター細胞の増加を示す。
【図１１Ｂ】ｒ５Ｄ８での治療後の結腸直腸癌の同系移植マウスモデルにおける非骨髄性エフェクター細胞の増加を示す。
【図１１Ｃ】ｒ５Ｄ８での治療後のＮＳＣＬＣ癌のマウスモデルにおけるＣＤ４＋ＴＲＥＧ細胞のパーセンテージの低下を示す。
【図１２】抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８枯渇抗体の存在又は非存在下で腹腔内に投与されるＰＢＳ（対照）又はｒ５Ｄ８で週２回治療された、ＣＴ２６腫瘍を有するマウスからのデータを示す。このグラフは、平均腫瘍体積＋ＳＥＭとして表される第１３日での個々の腫瘍測定値を示す。群間の統計的有意差は、対応のないノンパラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定によって決定した。Ｒ５Ｄ８は、ＣＴ２６腫瘍の増殖を阻害した（＊ｐ＜０．０５）。ｒ５Ｄ８による腫瘍増殖阻害は、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８枯渇抗体の存在下で有意に低下した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図１３Ａ】ＬＩＦとの複合体におけるｈ５Ｄ８  Ｆａｂの共結晶構造の全体像を図示する。ｇｐ１３０相互作用部位の位置を、ＬＩＦの表面上に示す（濃く色付けされている）。
【図１３Ｂ】塩橋を形成する残基と１００Å２を超える埋没した表面積を有するｈ５Ｄ８残基を示す、ＬＩＦとｈ５Ｄ８との間の詳細な相互作用を図示する。
【図１４Ａ】５つのｈ５Ｄ８  Ｆａｂ結晶構造の重ね合わせを図示し、また、異なる化学的条件で結晶化されているにもかかわらず高度の類似性を示す。
【図１４Ｂ】不対のＣｙｓ１００によって媒介されるファンデルワールス相互作用の広範なネットワークを図示する。この残基は、秩序立っており、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ３の立体構造を形作るのに加わり、所望されないジスルフィドスクランブリングには関与しない。残基間の距離は、破線として示され、標識が付けられている。
【図１５Ａ】ＥＬＩＳＡによる、ｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異体のヒトＬＩＦへの結合を図示する。
【図１５Ｂ】ＥＬＩＳＡによる、ｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異体のマウスＬＩＦへの結合を図示する。
【図１６Ａ】Ｏｃｔｅｔによって、ｈ５Ｄ８が、ＬＩＦとＬＩＦＲとの間の結合を阻止しないことを示す。ｈ５Ｄ８のＬＩＦへの結合の後、ＬＩＦＲへの連続した結合が続く。
【図１６Ｂ−１６Ｃ】固定化されたＬＩＦＲ又はｇｐ１３０に対するＬＩＦ／ｍＡｂ複合体結合のＥＬＩＳＡ分析を図示する。固定化されたＬＩＦＲ（図１６Ｂ）又はｇｐ１３０（図１６Ｃ）コーティングプレートと結合するｍＡｂ／ＬＩＦ複合体の抗体部分を検出する、種特異的なペルオキシダーゼ結合抗ＩｇＧ抗体（（−）及びｈ５Ｄ８については抗ヒト、ｒ５ｄ８及びＢ０９については抗ラット）のシグナル。
【図１７Ａ−１７Ｂ】７２個の異なるヒト組織におけるＬＩＦ（図１７Ａ）又はＬＩＦＲ（図１８Ｂ）のｍＲＮＡ発現を図示する。
【図１８】ｈ５Ｄ８及びシスプラチンで治療した、ＣＴ２６腫瘍を皮下に移植したマウスからのデータを示す。この図は、賦形剤、対照ＩｇＧ１、ｈ５Ｄ８単独、シスプラチン単独、及びｈ５Ｄ８＋シスプラチン組み合わせ群についての、平均した腫瘍体積による腫瘍増殖の時間的経過を示す。
【図１９Ａ−１９Ｂ】ｈ５Ｄ８及びドキソルビシン（図１９Ａ）で、又はｈ５Ｄ８及びパクリタキセル（図１９Ｂ）で治療した、ＣＴ２６腫瘍を皮下に移植したマウスからの腫瘍体積データを経時的に示す。
【図２０】ｈ５Ｄ８及びシスプラチンで治療した、ＣＴ２６腫瘍を皮内に移植したマウスからのデータを示す。この図は、賦形剤、対照ＩｇＧ１、ｈ５Ｄ８単独、シスプラチン単独、及びｈ５Ｄ８＋シスプラチン組み合わせ群についての、平均した腫瘍体積による腫瘍増殖の時間的経過を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語は、本発明が属する分野の技術者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈によって他に明確に指示しない限り、複数の指示内容が含まれる。本明細書での「又は」へのあらゆる言及は、他に規定されない限り、「及び／又は」を包含することが意図される。
【００１５】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個人における癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせた白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドの使用である。
【００１６】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、個人における癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせた白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であり、ここでは、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。
【００１７】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の：（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤とを、癌を有する個人に投与することを含む方法である。
【００１８】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドを、癌を有する個人であって、治療量の白金系抗悪性腫瘍剤を投与されている個人に投与することを含む方法である。
【００１９】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の白金系抗悪性腫瘍剤を、癌を有する個人であって、治療量の白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドを投与されている個人に投与することを含む方法である。
【００２０】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、癌を有する個人を治療する方法であって、有効量の：（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体と；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤とを、癌を有する個人に投与することを含む方法である。
【００２１】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤とを含むキットである。
【００２２】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤とを含む組成物である。
【００２３】
本明細書で使用する場合、用語「個人」、「対象」、及び「患者」は、互換的に使用され、腫瘍、癌、又は他の新生物と診断された又は腫瘍、癌、又は他の新生物を患っている疑いがあるヒトが含まれる。
【００２４】
用語「癌」及び「腫瘍」は、無秩序な細胞増殖を特徴とする、哺乳類における生理学的状態に関する。癌は、一群の細胞が、制御されない増殖又は望まれない増殖を呈する類の疾患である。癌細胞は、他の位置に拡散する可能性もあり、これが、転移の形成をもたらす可能性がある。体内の癌細胞の拡散は、例えば、リンパ又は血液を介して起こる可能性がある。制御されない増殖、侵入、及び転移形成は、癌の悪性特性とも呼ばれる。これらの悪性特性は、癌を、一般的には浸潤も転移もしない良性腫瘍と区別する。
【００２５】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、哺乳類に投与された場合に生物学的効果をもたらす治療薬の量を指す。生物学的効果には、限定はされないが、受容体・リガンド相互作用（例えば、ＬＩＦ−ＬＩＦＲ）の阻害又は遮断、シグナル伝達経路（例えば、ＳＴＡＴ３リン酸化）の阻害、腫瘍増殖の低下、腫瘍転移の減少、又は腫瘍を有する動物の生存の延長が含まれる。「治療量」は、治療効果を発揮するように算出された薬物の濃度である。治療量は、個体集団において治療反応を誘発することが可能な投薬量の範囲を包含する。哺乳類は、ヒト個人であり得る。ヒト個人は、腫瘍を患っている可能性もあるし、腫瘍を患っている疑いがある可能性もある。
【００２６】
本明細書で使用する場合、他に指示されない限り、用語「抗体」には、抗体の抗原結合断片、すなわち、全長抗体によって結合される抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体断片、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域を保持する断片が含まれる。抗体断片の例としては、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；二重特異性抗体；線状抗体；重鎖抗体、単鎖抗体分子、例えば単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディ、及び二重特異性抗体などの別の特異性を有する抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。ある種の実施形態では、抗体は、その抗体に対する個人の免疫応答を低下させるようにヒト化されている。例えば、抗体は、キメラ、例えばヒト定常領域を有する非ヒト可変領域、又はＣＤＲグラフトされたもの、例えばヒト定常領域及び可変領域のフレームワーク配列を有する非ヒトＣＤＲ領域であり得る。ある種の実施形態では、抗体は、ヒト化後に脱免疫原性化される。脱免疫原性化は、抗体の定常領域内の１つ以上のＴ細胞エピトープを除去する又は変異させることを含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、モノクローナルである。本明細書で使用する場合、「組換え抗体」は、２つの異なる種又は２つの異なる供給源由来のアミノ酸配列を含む抗体であり、合成の分子、例えば、非ヒトＣＤＲ及びヒトフレームワーク又は定常領域を含む抗体が含まれる。ある種の実施形態では、本発明の組換え抗体は、組換えＤＮＡ分子から産生される、又は合成される。
【００２７】
参照ポリペプチド又は抗体配列に関する配列同一性のパーセント（％）は、配列同一性の最大のパーセントを得るために、必要であれば配列を整列させてギャップを導入した後の、且つ配列同一性の一部としてのいかなる保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド又は抗体配列内のアミノ酸残基と同一である、候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージである。アミノ酸配列同一性のパーセントを決定する目的のアラインメントは、公知である様々な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、実現することができる。比較される配列の全長にわたる最大アラインメントを実現するために必要とされるアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することが可能である。しかし、本明細書の目的では、アミノ酸配列同一性の値（％）は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用してもたらされる。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に、ユーザ文書と共に保管されており、ここでは、これは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から公的に利用可能であるし、ソースコードからコンパイルすることもできる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ｄｉｇｉｔａｌ  ＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更しない。
【００２８】
ＡＬＩＧＮ−２が、アミノ酸配列比較のために用いられる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂと対照する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性（％）（これは、代わりに、所与のアミノ酸配列Ｂに対して、アミノ酸配列Ｂと、又はアミノ酸配列Ｂと対照して、あるアミノ酸配列同一性（％）を有する又は含む所与のアミノ酸配列Ａと表現することもできる）は、次の通りに算出される：１００×分数Ｘ／Ｙ（ここでは、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、ＡとＢのプログラムのアラインメントについて同一のマッチとして記録されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性（％）は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性（％）と等しくないこととなるということを理解されたい。他に具体的に規定されない限り、本明細書で使用されるすべてのアミノ酸配列同一性の値（％）は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載した通りに得られる。
【００２９】
用語「エピトープ」には、抗体などの抗原結合タンパク質によって結合されることが可能であるあらゆる決定基が含まれる。エピトープは、その抗原を標的にする抗原結合タンパク質によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗原結合タンパク質と直接的に接触する特異的なアミノ酸が含まれる。エピトープは、タンパク質上に存在することが最も多いが、糖類又は脂質などの他の種類の分子上に存在する場合もあり得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、又はスルホニル基などの分子の、化学的に活性な表面集団（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）を含むことができ、特異的な三次元構造特性及び／又は特異的な電荷特性を有することができる。一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質及び／又は高分子の複合混合物における標的抗原上のエピトープを優先的に認識することとなる。
【００３０】
用語「抗悪性腫瘍剤」は、癌、腫瘍、又は新生物の発生を予防する、阻害する、又は停止するように作用する能力がある薬剤を指す。抗悪性腫瘍剤は、化学療法剤としても公知であり得る。抗悪性腫瘍剤は、癌細胞を標的にして破壊することができる。抗悪性腫瘍剤には、限定はされないが、抗代謝産物、生物学的応答調節物質、ブレオマイシン、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡ架橋剤、酵素、ホルモン、モノクローナル抗体、白金錯体、プロテアソーム阻害剤、タキサン、ビンカ、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ヌクレオシド類似体、葉酸代謝拮抗剤、アントラサイクリン、ポドフィロトキシン、アルキル化剤、ｍＴＯＲ阻害剤、レチノイド、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、及び免疫調節剤が含まれ得る。
【００３１】
本明細書に記載される抗体の構造的特質
相補性決定領域（「ＣＤＲ」）は、主として抗体の抗原結合特異性の原因である、免疫グロブリン（抗体）可変領域の一部である。ＣＤＲ領域は、抗体が同じ標的又はエピトープに特異的に結合する場合でも、抗体ごとに高度に変動する。重鎖可変領域は、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、及びＶＨ−ＣＤＲ３と省略される３つのＣＤＲ領域を含み；軽鎖可変領域は、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、及びＶＬ−ＣＤＲ３と省略される３つのＣＤＲ領域を含む。これらのＣＤＲ領域は、可変領域内に連続して並んでおり、ＣＤＲ１が最もＮ末端側であり、ＣＤＲ３が最もＣ末端側である。ＣＤＲは、構造に寄与し且つＣＤＲ領域よりもかなり低い変動性を呈するフレームワーク領域の間に挿入されている。重鎖可変領域は、ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４と省略される４つのフレームワーク領域を含み；軽鎖可変領域は、ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、及びＶＬ−ＦＲ４と省略される４つのフレームワーク領域を含む。２本の重鎖と軽鎖を含む完全なフルサイズの二価抗体は、３つの特有の重鎖ＣＤＲと３つの特有の軽鎖ＣＤＲを含む１２個のＣＤＲ；４つの特有の重鎖ＦＲ領域と４つの特有の軽鎖ＦＲ領域を含む１６個のＦＲ領域を含むこととなる。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、３つの重鎖ＣＤＲを最小限含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、３つの軽鎖ＣＤＲを最小限含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲを最小限含む。所与のＣＤＲ又はＦＲの厳密なアミノ酸配列の境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，アメリカ国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ），Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６），“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，”（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナンバリングスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，”ＩＭＧＴ  ｕｎｉｑｕｅ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ａｎｄ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｖ−ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎｓ，”Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３  Ｊａｎ；２７（１）：５５−７７（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）；及びＨｏｎｅｇｇｅｒ  Ａ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  Ａ，“Ｙｅｔ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｔｏｏｌ，”Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，２００１  Ｊｕｎ  ８；３０９（３）：６５７−７０，（「Ａｈｏ」ナンバリングスキーム）によって記載されているものを含めた、いくつかの周知のスキームのいずれかを使用して容易に決定することができる。ＣＤＲは、異なるナンバリングシステムを使用して、本明細書ではＫａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングシステム、又は３つの任意の組み合わせを用いて提供される可変の配列から、本明細書で特定される。所与のＣＤＲ又はＦＲの境界は、特定のために使用されるスキームに応じて変わり得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは、構造アラインメントに基づいているのに対して、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは、構造情報に基づいている。ＫａｂａｔスキームとＣｈｏｔｈｉａスキームのどちらについてのナンバリングも、いくつかの抗体に現れる、挿入（挿入文字、例えば「３０ａ」によって対応される）及び欠失と共に、最も一般的な抗体領域配列長に基づいている。２つのスキームは、ある種の挿入及び欠失（「インデル」）を、異なる位置に配置し、その結果、異なるナンバリングがもたらされる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複合体結晶構造の解析に基づいており、多くの点でＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームと似ている。
【００３２】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体が抗原に結合することに関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい）。たった１つのＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を与えるのに十分であり得る。さらに、特定の抗原と結合する抗体を、抗原と結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを使用して単離して、それぞれ相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる（例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい）。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、キメラである。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ラット起源の可変領域を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ラット起源のＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マウス起源の可変領域を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マウス起源のＣＤＲを含む。
【００３３】
例えば抗体親和性を向上させるために、ＣＤＲに変更（例えば置換）を施すことができる。こうした変更は、体細胞成熟中に高い変異率を有するＣＤＲコードコドンに施すことができ（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、得られたバリアントを、結合親和性について試験することができる。親和性成熟（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、ＣＤＲのランダム化、又はオリゴヌクレオチド指定変異誘発を使用する）を使用して、抗体親和性を向上させることができる（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（２００１）を参照されたい）。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、具体的に特定することができる（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）を参照されたい）。具体的には、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、しばしば標的にされる。或いは、又はさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体と抗原の間の接触点が特定される。こうした接触残基及び隣接残基は、置換のための候補として標的にする又は排除することができる。バリアントをスクリーニングして、そのバリアントが所望される特性を含有するかどうかを決定することができる。
【００３４】
ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、可変領域に加えて定常領域を含む。重鎖定常領域（ＣＨ）は、完全な重鎖ポリペプチドのＣ末端、可変領域に対してＣ末端側に位置する、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４と省略される４つのドメインを含む。軽鎖定常領域（ＣＬ）は、ＣＨよりもかなり小さく、完全な軽鎖ポリペプチドのＣ末端、可変領域に対してＣ末端側に位置する。定常領域は、高度に保存され、わずかに異なる機能及び特性と関連する異なるアイソタイプを含む。ある種の実施形態で定常領域は、標的抗原への抗体結合にとって不必要である。ある種の実施形態では、抗体の定常領域、重鎖と軽鎖は両方とも、抗体結合にとって不必要である。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、１つ以上の軽鎖定常領域、重鎖定常領域、又はこれらの両方を欠いている。最も多いモノクローナル抗体は、ＩｇＧアイソタイプのものであり；これは、さらに、４つのサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分類される。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、あらゆるＩｇＧサブクラスを含む。ある種の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ１を含む。ある種の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ２を含む。ある種の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ３を含む。ある種の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ４を含む。
【００３５】
抗体は、補体及びＦｃ受容体への結合を担うフラグメント結晶化可能領域（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）（Ｆｃ領域）を含む。Ｆｃ領域は、抗体分子のＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含む。抗体のＦｃ領域は、補体及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の活性化を担う。Ｆｃ領域はまた、抗体の血清半減期に寄与する。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、補体介在性の細胞溶解を促進する１つ以上のアミノ酸置換を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、ＡＤＣＣを促進する１つ以上のアミノ酸置換を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、補体介在性の細胞溶解を減少させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、抗体のＦｃ受容体への結合を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。ある種の実施形態では、Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、又はこれらのあらゆる組み合わせを含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、抗体の血清半減期を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。ある種の実施形態では、抗体の血清半減期を増大させる１つ以上のアミノ酸置換は、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する抗体の親和性を増大させる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、この開示の抗体は、いくつかのエフェクター機能を有するが、すべてのエフェクター機能を有するわけではないバリアントであり、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）は不必要又は有害である用途にとって望ましい候補となる。インビトロ及び／又はインビボ細胞毒性試験を行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／喪失を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（したがってＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）がＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。対象となる分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号明細書及び第５，８２１，３３７号明細書に記載されている。或いは、非放射性アッセイ方法（例えば、ＡＣＴＩ（商標）及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性試験）を用いることができる。こうしたアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、単球、マクロファージ、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。
【００３７】
抗体は、増大された半減期、及び新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への増大された結合を有することができる（例えば、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号明細書を参照されたい）。こうした抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を向上させる１つ以上の置換を有するＦｃ領域をその中に含むことができ、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４（ＥＵナンバリングシステムによる）のうちの１つ以上に置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号明細書を参照されたい）。他の例のＦｃ領域バリアントも企図される（例えば、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号明細書及び第５，６２４，８２１号明細書；並びに国際公開第９４／２９３５１号パンフレットを参照されたい）。
【００３８】
診療現場において有用な抗体は、ヒト個人における免疫原性を低下させるために、しばしば「ヒト化」されている。ヒト化抗体は、モノクローナル抗体療法の安全性及び有効性を向上させる。ある一般的なヒト化の方法は、いずれかの好適な動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター）においてモノクローナル抗体を産生し、定常領域をヒト定常領域と置き換えることであり、このようにして遺伝子操作で作られた抗体は、「キメラ」と称される。別の一般的な方法は、非ヒトＶ−ＦＲをヒトＶ−ＦＲと置き換える「ＣＤＲグラフティング」である。ＣＤＲグラフティング方法では、ＣＤＲ領域を除くすべての残基が、ヒト起源のものである。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、キメラである。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＣＤＲグラフトされている。
【００３９】
ヒト化は一般に、抗体の全体的親和性を低下させる、又は抗体の全体的親和性にほとんど影響がない。本明細書に記載されるのは、ヒト化後に、その標的に対するより大きい親和性を予想外に有する抗体である。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を１０％増大させる。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を２５％増大させる。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を３５％増大させる。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を５０％増大させる。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を６０％増大させる。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を７５％増大させる。ある種の実施形態では、ヒト化は、抗体に対する親和性を１００％増大させる。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、適切に測定される。ある種の実施形態では、親和性は、グリコシル化されたヒトＬＩＦを使用して測定される。ある種の実施形態では、グリコシル化されたヒトＬＩＦは、ＳＰＲチップの表面に固定される。ある種の実施形態では、抗体は、約３００ナノモル濃度、２００ナノモル濃度、１５０ナノモル濃度、１２５ナノモル濃度、１００ナノモル濃度、９０ナノモル濃度、８０ナノモル濃度、７０ナノモル濃度、６０ナノモル濃度、５０ナノモル濃度、４０ナノモル濃度未満、又はそれ以下のＫＤで結合する。
【００４０】
本明細書に記載される組成物及び方法は、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤との組み合わせを含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域由来の少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、抗体は、本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体である。
【００４１】
本明細書に記載される、ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせて利用又は投与される抗体は、ｈ５Ｄ８抗体である。ｈ５ｄ８抗体は、ＬＩＦと特異的に結合し、配列番号１〜３のいずれか１つに示したＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４又は５のいずれか１つに示したＶＨ−ＣＤＲ２、及び配列番号６〜８のいずれか１つに示したＶＨ−ＣＤＲ３を含む。本明細書に記載される、ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、ＬＩＦと特異的に結合し、配列番号９又は１０のいずれか１つに示したＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１又は１２に示したＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３に示したＶＬ−ＣＤＲ３を含む。本明細書に記載される、ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、ＬＩＦと特異的に結合し、配列番号１〜３のいずれか１つに示したＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４又は５のいずれか１つに示したＶＨ−ＣＤＲ２、及び配列番号６〜８のいずれか１つに示したＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号９又は１０のいずれか１つに示したＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１又は１２に示したＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３に示したＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ｈ５Ｄ８のＶＨ及びＶＬ領域は、配列番号４２及び４６によって示される。
【００４２】
ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８又は１９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、又は約９５％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ以上のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８又は１９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ以上のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００４３】
本明細書に記載されるｒ５Ｄ８抗体は、ヒトＬＩＦをコードするＤＮＡで免疫化されたラットから産生された。ｒ５Ｄ８をクローン化及び配列決定した。これは、次のアミノ酸配列：配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に相当するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に相当するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号６（ＴＣＷＥＷＤＬＤＦ）に相当するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に相当するＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に相当するＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に相当するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＣＤＲ（ＫａｂａｔとＩＭＧＴ  ＣＤＲナンバリング方法の組み合わせを使用する）を含む。この抗体は、ＣＤＲグラフティングによってヒト化されており、ヒト化型はｈ５Ｄ８と称される。
【００４４】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に示したものと少なくとも８０％、９０％、又は９５％同一のＶＨ−ＣＤＲ２、及び配列番号６（ＴＣＷＥＷＤＬＤＦ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＨ−ＣＤＲ３を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に示したものと少なくとも８０％同一のＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＬ−ＣＤＲ３を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に示したＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に示したＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号６（ＴＣＷＥＷＤＬＤＦ）に示したＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に示したＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に示したＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に示したＶＬ−ＣＤＲ３を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。この開示のＣＤＲのアミノ酸配列中の、ある程度の保存的アミノ酸置換が想定される。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なるＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なり、且つ結合親和性に１０％、２０％、又は３０％を超える影響を与えないＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８又は１９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ以上のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列のうちのすべてを含む。ある種の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８又は１９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ以上のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００４５】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＨ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に示したものと少なくとも８０％、９０％、又は９５％同一のＶＨ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８（ＴＳＷＥＷＤＬＤＦ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に示したものと少なくとも８０％同一のＶＬ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に示したものと少なくとも８０％又は９０％同一のＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に示したＶＨ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に示したＶＨ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号８（ＴＳＷＥＷＤＬＤＦ）に示したＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に示したＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に示したＶＬ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に示したＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。この開示のＣＤＲのアミノ酸配列中の、ある程度の保存的アミノ酸置換が想定される。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なるＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なり、且つ結合親和性に１０％、２０％、又は３０％を超える影響を与えないＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８又は１９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ以上のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列のうちのすべてを含む。ある種の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８又は１９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、１つ以上のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ以上のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に示したアミノ酸配列と同一のＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に示したアミノ酸配列と同一のＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。ある種の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００４６】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４１、４２、及び４４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４１、４２、及び４４のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００４７】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００４８】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６６に示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００４９】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５７〜６０のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５７〜６０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００５０】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５８に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５８に示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６７に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６７に示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００５１】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号３に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；配列番号４に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；配列番号７に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；配列番号９に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び配列番号１１に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する組換え抗体である。
【００５２】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号２に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；配列番号５に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；配列番号６に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び配列番号１２に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する組換え抗体である。この開示のＣＤＲのアミノ酸配列中の、ある程度の保存的アミノ酸置換が想定される。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号２、５、６、１０、１２、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なるＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号２、５、６、１０、１２、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なり、且つ結合親和性に１０％、２０％、又は３０％を超える影響を与えないＣＤＲを含む。
【００５３】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号３に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；配列番号４に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；配列番号７に示したアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；配列番号９に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び配列番号１１に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する組換え抗体である。この開示のＣＤＲのアミノ酸配列中の、ある程度の保存的アミノ酸置換が想定される。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号３、４、７、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なるＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、抗体は、配列番号３、４、７、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、又は４個のアミノ酸が異なり、且つ結合親和性に１０％、２０％、又は３０％を超える影響を与えないＣＤＲを含む。
【００５４】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４９〜５２のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５３〜５６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４９〜５２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５３〜５６のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００５５】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５０に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５０に示したアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５４のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖を含むＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００５６】
治療的に有用なＬＩＦ抗体によって結合されるエピトープ
本明細書に記載されるのは、結合された場合にＬＩＦの生物学的活性（例えば、ＳＴＡＴ３リン酸化）を阻害する、且つインビボで腫瘍増殖を阻害する、ヒトＬＩＦの固有のエピトープである。本明細書に記載されるエピトープは、ヒトＬＩＦタンパク質の２つの別のトポロジカルドメイン（αヘリックスＡ及びＣ）中に存在する、（ヒトＬＩＦの残基１３から残基３２まで、及び残基１２０から１３８までの）アミノ酸の２つの不連続な伸長からなる。この結合は、弱い（ファンデルワールス引力）、中程度の（水素結合）、及び強い（塩橋）相互作用の組み合わせである。ある種の実施形態では、接触残基は、抗ＬＩＦ抗体上の残基と共に水素結合を形成するＬＩＦ上の残基である。ある種の実施形態では、接触残基は、抗ＬＩＦ抗体上の残基と共に塩橋を形成するＬＩＦ上の残基である。ある種の実施形態では、接触残基は、抗ＬＩＦ抗体上の残基と共にファンデルワールス引力をもたらし、且つ抗ＬＩＦ抗体上の残基の少なくとも５、４、又は３オングストローム以内である、ＬＩＦ上の残基である。
【００５７】
ある種の実施形態では、本明細書に記載される、ＬＩＦ結合抗体とシスプラチンを含む方法及び組成物には、次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合する、単離された抗体が含まれる。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合する、単離された抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合する、単離された抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、ＬＩＦのヘリックスＡ及びＣと相互作用する。ある種の実施形態では、抗体は、ｇｐ１３０と共にＬＩＦ相互作用を阻止する。
【００５８】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合する、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合する、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。
【００５９】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合する、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合する、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。
【００６０】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５個のアミノ酸が異なり、且つ次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５個のアミノ酸が異なり、且つ次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。
【００６１】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５個のアミノ酸が異なり、且つ次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５個のアミノ酸が異なり、且つ次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合するＣＤＲを含む抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。
【００６２】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列；及び配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合し、且つ次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列；及び配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合し、且つ次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合する抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。
【００６３】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列；及び配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合し、且つ次の配列番号６８の残基：Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのいずれか１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個と結合する抗体である。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列；及び配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一のヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＬＩＦと特異的に結合し、且つ次の配列番号６８の残基Ａ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８のうちのすべてと結合する抗体である。ある種の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。ある種の実施形態では、抗体は、強い相互作用で抗体と関与する残基とのみ結合する。
【００６４】
ある種の実施形態では、本明細書に開示した抗体は、細胞におけるＬＩＦシグナル伝達を阻害する。ある種の実施形態では、Ｕ−２５１細胞における血清飢餓条件下での抗体の生物学的阻害についてのＩＣ５０は、約１００、７５、５０、４０、３０、２０、１０、５、又は１ナノモル濃度以下である。ある種の実施形態では、Ｕ−２５１細胞における血清飢餓条件下での抗体の生物学的阻害についてのＩＣ５０は、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、又は１００ナノモル濃度以下である。
【００６５】
ある種の実施形態では、本明細書に開示した抗体は、ＬＩＦを発現する腫瘍及び癌を治療するのに有用である。ある種の実施形態では、この開示の抗体で治療される個人は、ＬＩＦ陽性腫瘍／癌を有する場合の治療について選択されている。ある種の実施形態では、腫瘍は、ＬＩＦ陽性である、又は上昇したレベルのＬＩＦを生じる。ある種の実施形態では、ＬＩＦ陽性は、基準値、又は一連の病理学的基準と比較して決定される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ陽性腫瘍は、その腫瘍が由来する非形質転換細胞よりも２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍大きい、又はそれよりも大きいＬＩＦを発現する。ある種の実施形態では、腫瘍は、ＬＩＦの異所性発現を受けている。ＬＩＦ陽性腫瘍は、例えば抗ＬＩＦ抗体を用いる免疫組織化学を使用して組織学的に；一般的に使用される分子生物学方法、例えばリアルタイムＰＣＲ若しくはＲＮＡ−ｓｅｑによるｍＲＮＡ定量化；又は、例えば、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、若しくは同種タンパク質定量化アッセイ（例えば、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標））によるタンパク質定量化などによって決定することができる。ある種の実施形態では、この抗体は、癌と診断された患者を治療するために使用することができる。ある種の実施形態では、癌は、１つ以上の癌幹細胞を含む、又は１つ以上の癌幹細胞である。
【００６６】
ある種の実施形態では、本明細書に開示した抗体は、ＬＩＦ受容体（ＣＤ１１８）を発現する癌における腫瘍を治療するのに有用である。ＬＩＦ受容体陽性の腫瘍は、病理組織学又はフローサイトメトリーによって決定することができ、ある種の実施形態では、アイソタイプ対照よりも２×、３×、３×、４×、５×、１０×又はそれよりも多いＬＩＦ受容体抗体と結合する細胞を含む。ある種の実施形態では、腫瘍は、ＬＩＦ受容体の異所性発現を受けている。ある種の実施形態では、癌は、癌幹細胞である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ陽性の腫瘍又は癌は、抗ＬＩＦ及び抗ＬＩＦ抗体を使用する免疫組織化学によって決定することができる。ある種の実施形態では、ＬＩＦ陽性の腫瘍は、腫瘍の最高１０％、２０％、３０％、４０％、又は最高５０％におけるＬＩＦレベルを用いるＩＨＣ分析によって決定される。
【００６７】
本明細書に記載される抗体は、多数の結果に影響を及ぼす。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、腫瘍におけるＭ２マクロファージの存在を、腫瘍モデルにおける、対照抗体（例えば、アイソタイプ対照）と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上減少させることができる。Ｍ２マクロファージは、ＩＨＣ切片におけるＣＣＬ２２及びＣＤ２０６に対する染色によって、又は、腫瘍浸潤性の免疫又は骨髄細胞のフローサイトメトリーによって特定することができる。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ｇｐ１３０腫瘍に対するＬＩＦの結合を、対照抗体（例えば、アイソタイプ対照）と比較した場合に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上減少させることができる。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＬＩＦシグナル伝達を、ＬＩＦ応答性細胞株において、対照抗体（例えば、アイソタイプ対照）と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上低下させることができる。ＬＩＦシグナル伝達は、例えば、リン酸化ＳＴＡＴ３（ＬＩＦシグナル伝達の下流標的）に対するウエスタンブロットによって測定することができる。本明細書の抗体はまた、他のＩＬ−６ファミリーメンバーのサイトカインと比較して、ＬＩＦに対して高度に特異的である。ある種の実施形態では、抗体は、他のいずれかのＩＬ−６ファミリーメンバーのサイトカインの親和性よりも約１０×、約５０×、又は約１００×大きい親和性で、ヒトＬＩＦと結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦ抗体は、哺乳類系において産生される他のＩＬ−６ファミリーメンバーのサイトカインに結合しない。ある種の実施形態では、抗体は、哺乳類系において産生されているオンコスタチンＭに結合しない。
【００６８】
ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチド及び抗体は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は脳内などの、抗体含有医薬組成物の投与に適したあらゆる経路によって投与することができる。ある種の実施形態では、抗体は、静脈内に投与される。ある種の実施形態では、抗体は、好適な投薬スケジュールで（例えば、毎週、週２回、毎月、月２回など）投与される。ある種の実施形態では、抗体は、３週に１回投与される。抗体は、あらゆる治療有効量で投与することができる。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。ＬＩＦ結合ポリペプチド又は抗体は、少なくとも約６０分という時間をかけてｉ．ｖ．投与することができる；しかし、この時間は、それぞれ個々の投与に関する条件に基づいて、いくらか変動する可能性がある。
【００６９】
白金系抗悪性腫瘍剤
プラチン類としても公知である白金系抗悪性腫瘍剤は、癌を治療するために使用される、白金の配位錯体である。本明細書に記載されるＬＩＦ結合ポリペプチド及び抗体を、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせて、腫瘍、癌、又は他の新生物を治療するための方法に採用することができる。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるＬＩＦ結合ポリペプチド及び抗体を、癌、腫瘍、又は他の新生物を治療するのに有用な医薬組成物中の白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせることができる。本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体を、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせて、腫瘍、癌、又は他の新生物を治療するための方法に採用することができる。ある種の実施形態では、本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体を、癌、腫瘍、又は他の新生物を治療するのに有用な医薬組成物中の白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせることができる。
【００７０】
本明細書の組成物及び方法に利用される白金系抗悪性腫瘍剤は、ＤＮＡの架橋又はＤＮＡとの結合をもたらすことができる。架橋は、癌細胞におけるＤＮＡ修復又はＤＮＡ合成を阻害することができる。架橋は、細胞過程を妨げる及びアポトーシスをもたらすことができる。いくつかの実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）、シス−ジアンミンジクロリド白金（ＩＩ）（ＣＤＤＰ）、シス−ジアンミン白金（ＩＩ）二塩化物、［ＳＰ−４−２］−ジアミンジクロロ白金）；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）、シス−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金）；オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標）、［ＳＰ−４−２］−（１Ｒ−トランス）］−（１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ’）［エタンジオエータ（ｅｔｈａｎｅｄｉｏａｔａ）（２−）−Ｏ，Ｏ’］白金）；ネダプラチン（Ａｑｕｐｌａ（登録商標）、シス−ジアンミン（グリコラト−Ｏ，Ｏ’）白金、［ＳＰ−４−３］−ジアンミン（ヒドロキシアセタト（ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔａｔｏ）（２−）−Ｏ１，Ｏ２）白金）；四硝酸トリプラチン（ＢＢＲ３４６４、四硝酸ヘキサアンミンジクロロ−ビス［μ−（１，６−ヘキサンジアミン−κＮ：κＮ’）］トリ−白金（４＋））；硝酸フェナトリプラチン（［ＳＰ−４−３］−ジアンミンクロロ（フェナントリジン）−白金（１＋）、ピコプラチン（［ＳＰ−４−３］−アンミンジクロロ（２−メチルピリジン）白金）、サトラプラチン（ＪＭ２１６、［ＯＣ−６−４３］−ビス（アセタト（ａｃｅｔａｔｏ）−Ｏ）アンミンジクロロ（シクロヘキサンアミン）白金）；ロバプラチン（［ＳＰ−４−３−（Ｓ），（トランス）］−（１，２−シクロブタンジメタンアミン−Ｎ，Ｎ’）［２−ヒドロキシプロパノアト（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｏａｔｏ）（２−）−Ｏ１，Ｏ２］−白金）；ヘプタプラチン（エプタプラチン（Ｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、［ＳＰ−４−２−［４Ｒ−（２α，４α，５β）］］−［２−（１−メチルエチル）−１，３−ジオキソラン−４，５−ジメタンアミン−Ｎ，Ｎ’］［プロパンジオアト（ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏａｔｏ）（２−）−Ｏ，Ｏ’］−白金，）；その薬学的に許容し得る塩、又はその組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチンである。
【００７１】
ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、脳内、又は経口などの、小分子含有医薬組成物の投与に適したあらゆる経路によって投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、静脈内に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、好適な投薬スケジュールで、例えば、毎日、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、毎週、週２回、毎月、月２回、２週に１回、３週に１回、又は４週に１回投与される。白金系抗悪性腫瘍剤は、あらゆる治療有効量で投与することができる。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約１０００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２である。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１５０ｍｇ／ｍ２、又は約５０ｍｇ／ｍ２〜約２００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約５０ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２、又は１０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約５０ｍｇ／ｍ２、約１ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２、又は約１ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１００ｍｇ／ｍ２〜約２００ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２、又は約３００ｍｇ／ｍ２〜約６００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、７ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２、９ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１１０ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２、１４０ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、１７０ｍｇ／ｍ２、１８０ｍｇ／ｍ２、１９０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、５００ｍｇ／ｍ２、６００ｍｇ／ｍ２、７００ｍｇ／ｍ２、８００ｍｇ／ｍ２、９００ｍｇ／ｍ２、又は１０００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。
【００７２】
ある種の実施形態では、シスプラチンは、あらゆる治療有効量で投与することができる。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約５０ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。ある種の実施形態では、シスプラチンの治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、７ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２、９ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、又は１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。
【００７３】
ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤の個人への投与は、約１０ミリグラム〜約１５００ミリグラムの、一定の投薬量レベルであり得る。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤の個人への投与は、約５０ミリグラム〜約１０００ミリグラム、約５０ミリグラム〜約８００ミリグラム、約５０ミリグラム〜約６００ミリグラム、約５０ミリグラム〜約５００ミリグラム、約１００ミリグラム〜約５００ミリグラムの、一定の投薬量レベルであり得る。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤の個人への投与は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、又は１５００ミリグラムの、一定の投薬量レベルであり得る。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤の個人への投与は、単剤療法に適したレベルであり得る。
【００７４】
ある種の実施形態では、シスプラチンの個人への投与は、約１０ミリグラム〜約５００ミリグラムの、一定の投薬量レベルであり得る。ある種の実施形態では、シスプラチンの個人への投与は、約５０ミリグラム〜約５００ミリグラム、約５０ミリグラム〜約４００ミリグラム、約１００ミリグラム〜約４００ミリグラム、約１００ミリグラム〜約３００ミリグラム、又は約１００ミリグラム〜約２００ミリグラムの、一定の投薬量レベルであり得る。ある種の実施形態では、シスプラチンの個人への投与は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ミリグラムの、一定の投薬量レベルであり得る。ある種の実施形態では、シスプラチンの個人への投与は、単剤療法に適したレベルであり得る。
【００７５】
Ｈ５Ｄ８投薬量
ある種の実施形態では、抗体は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は脳内などの、抗体含有医薬組成物の投与に適したあらゆる経路によって投与することができる。ある種の実施形態では、抗体は、静脈内に投与される。ある種の実施形態では、抗体は、好適な投薬スケジュールで（例えば、毎週、週２回、毎月、月２回など）投与される。ある種の実施形態では、抗体は、３週に１回投与される。抗体は、あらゆる治療有効量で投与することができる。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。ｈ５Ｄ８抗体は、ｈ５Ｄ８抗体が投与される個人の重量又は質量とは無関係に、一定の用量で投与することができる。ｈ５Ｄ８抗体は、個人が少なくとも約３７．５キログラムの質量を有するという条件で、ｈ５Ｄ８抗体が投与される個人の重量又は質量とは無関係に、一定の用量で投与することができる。約１ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約５０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約７５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、約７５０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、約１１２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、又は約１５００ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約７５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約７５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１１２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１５００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２０００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。
【００７６】
ｈ５Ｄ８の他の投薬量も企図される。約１、１０、２５、５０、１００、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、１０２５、１０５０、１０７５、１１００、１１５０、１１７５、１２００、１２２５、１２５０、１２７５、１３００、１３２５、１３５０、１３７５、１４００、１４２５、１４５０、１４７５、１５２５、１５５０、１５７５、１６００、１６２５、１６５０、１６７５、１７００、１７２５、１７５０、１７７５、１８００、１８２５、１８５０、１８７５、１９００、１９２５、１９５０、１９７５、２０２５、２０５０、２０７５、又は２１００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。これらの用量のいずれかを、週１回、２週に１回、３週に１回、又は４週に１回投与することができる。
【００７７】
約１ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約５０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約７５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約７５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約７５０ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約１１２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約７５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約７５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１１２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１５００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２０００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。
【００７８】
約１ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約５０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約７５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約７５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約７５０ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約１１２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約７５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約７５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１１２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１５００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２０００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。
【００７９】
約１ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約５０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約７５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約７５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約７５０ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約１１２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約７５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約７５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１１２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１５００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２０００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。
【００８０】
約１ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約５０ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約７５ミリグラムから約２０００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約７５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約７５０ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、約１１２５ミリグラムから約１５００ミリグラムまでの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約７５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約７５０ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１１２５ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１５００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２０００ミリグラムの、一定の用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。
【００８１】
ｈ５Ｄ８抗体は、ｈ５Ｄ８抗体が投与される個人の重量又は質量に基づく用量で投与することができる。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、又は約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約１５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。約２５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。
【００８２】
約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇまでの、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、又は約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまでの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週に１回、２週に１回、３週に１回、又は４週に１回投与することができる。
【００８３】
他の体重により調節された用量のｈ５Ｄ８も企図される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を投与することができる。これらの用量のいずれかを、週１回、２週に１回、３週に１回、又は４週に１回、投与することができる。
【００８４】
約０．０１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約０．０５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約０．１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約０．５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約１５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。約２５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、週１回投与することができる。
【００８５】
約０．０１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約０．０５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約０．１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約０．５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約１５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。約２５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、２週に１回投与することができる。
【００８６】
約０．０１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約０．０５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約０．１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約０．５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約１５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。約２５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、３週に１回投与することができる。
【００８７】
約０．０１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約０．０５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約０．１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約０．５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約３ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約１５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２０ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。約２５ｍｇ／ｋｇの、体重により調節された用量のｈ５Ｄ８を、４週に１回投与することができる。
【００８８】
本明細書で詳述した用量のいずれかを、少なくとも約６０分という時間をかけてｉ．ｖ．投与することができる；しかし、この時間は、それぞれ個々の投与に関する条件に基づいて、いくらか変動する可能性がある。
【００８９】
組み合わせ療法の投薬スケジュール
ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤を含む組み合わせ治療は、様々な方式で施すことができる。ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、同一のスケジュールで同時に、又は異なるスケジュールで異なる時点で投与することができる。同時に投与される場合、投与は、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤の両方を含む別々の製剤又は単一の製剤によるものであり得る。投与様式は、混合することができ、例えば、ＬＩＦ結合ポリペプチドを静脈内に投与することができ、同時に、白金系抗悪性腫瘍剤を、経口的に又は非経口注射によって投与することができる。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、静脈内に、非経口的に、皮下に、腫瘍内に、又は経口的に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、静脈内に、非経口的に、皮下に、腫瘍内に、又は経口的に投与される。
【００９０】
組み合わせ治療が、同一のスケジュールで個人に施される場合、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、週に１回、２週に１回、又は４週に１回投与することができる。ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、別々に又は単一製剤として投与することができる。
【００９１】
組み合わせ治療が、異なるスケジュールで個人に施される場合、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、交互に施すことができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドの投与の前に、１回以上、個人に投与することができる。ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤の投与から１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤の投与から１週、２週、３週、又は４週以内に投与することができる。ｈ５Ｄ８抗体は、白金系抗悪性腫瘍剤の投与から１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。ｈ５Ｄ８抗体は、白金系抗悪性腫瘍剤の投与から１週、２週、３週、又は４週以内に投与することができる。
【００９２】
ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤の投与の前に、１回以上、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドの投与から１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドの投与から１週、２週、３週、又は４週以内に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ｈ５Ｄ８抗体の投与から１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ｈ５Ｄ８抗体の投与から１週、２週、３週、又は４週以内に投与することができる。
【００９３】
ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、２週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、３週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、４週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、週に１回、個人に投与することができ、且つＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、２週に１回、個人に投与することができ、且つＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、３週に１回、個人に投与することができ、且つＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、４週に１回、個人に投与することができ、且つＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、白金系抗悪性腫瘍剤の投与の前に、１回以上、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、２週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、３週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、４週に１回、個人に投与することができ、且つ白金系抗悪性腫瘍剤は、毎週、２週ごとに、３週ごとに、又は４週ごとに、個人に投与することができる。
【００９４】
本開示による組み合わせ治療は、活性化成分（例えば、ＬＩＦ結合ポリペプチド及び白金系抗悪性腫瘍剤）の片方又は両方が、単剤療法として単独では有効でないが、組み合わせ治療の一部として投与された場合には有効である組み合わせを含むことができる。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、単剤療法については有効でないが、ＬＩＦ結合ポリペプチドと組み合わせると有効なレベルで投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、単剤療法については有効でないが、ｈ５Ｄ８抗体と組み合わせると有効なレベルで投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、単剤療法については有効でないが、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせると有効なレベルで投与される。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、単剤療法については有効でないが、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせると有効なレベルで投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤の両方が、単剤療法については有効でないレベルで投与されるが、組み合わせでは有効である。ある種の実施形態では、ｈ５Ｄ８と白金系抗悪性腫瘍剤の両方が、単剤療法については有効でないレベルで投与されるが、組み合わせでは有効である。
【００９５】
治療適応症
ある種の実施形態では、本明細書に開示するのは、癌又は腫瘍の治療に有用な方法及び組成物である。ある種の実施形態では、癌は、乳房、心臓、肺、小腸、結腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、及び肝臓腫瘍を含む。ある種の実施形態では、本発明の抗体で治療することができる腫瘍は、腺腫、腺癌、血管肉腫、星細胞腫、上皮癌、胚細胞腫、膠芽腫、神経膠腫、血管内皮腫、血管肉腫、血腫、肝芽腫、白血病、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫及び／又は奇形腫を含む。ある種の実施形態では、腫瘍／癌は、末端黒子型黒色腫、日光角化症、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、星細胞系腫瘍、バルトリン腺癌、基底細胞癌、気管支腺癌、毛細血管カルチノイド（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｉｄ）、癌腫、癌肉腫、胆管癌、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺癌、上衣肉腫（ｅｐｅｎｄｙｍａｌ  ｓａｒｃｏｍａ）、スウィング肉腫（Ｓｗｉｎｇ’ｓ  ｓａｒｃｏｍａ）、限局性結節性過形成、ガストロノーマ（ｇａｓｔｒｏｎｏｍａ）、生殖系列腫瘍、膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽細胞腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝腺腫症、肝細胞癌、インスリナイト（ｉｎｓｕｌｉｎｉｔｅ）、上皮内腫瘍、上皮内扁平上皮癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、浸潤性扁平上皮癌、大細胞癌、脂肪肉腫、肺癌、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘腫、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘表皮癌、骨髄性白血病、神経芽腫、神経上皮腺癌、結節性型黒色腫、骨肉腫、卵巣癌、漿液性乳頭状腺癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、前立腺癌、肺芽腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、有棘細胞癌、小細胞癌、軟部組織癌（ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ソマトスタチン産生腫瘍（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ）、扁平上皮癌、有棘細胞癌、未分化癌、ブドウ膜黒色腫、疣状癌、膣／外陰癌、ＶＩＰ産生腫瘍、及びウィルムス腫瘍の群から選択される。ある種の実施形態では、本発明の１つ以上の抗体で治療されるべき腫瘍／癌は、脳癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、急性骨髄性白血病、プレＢ細胞急性リンパ性白血病、膀胱癌、星細胞腫、好ましくはグレードＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶ星細胞腫、膠芽腫、多形神経膠芽腫、小細胞癌、及び非小細胞癌、好ましくは非小細胞肺癌、肺腺癌、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺癌、アンドロゲン依存性転移性前立腺癌、前立腺腺癌、及び乳癌（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）、好ましくは乳管癌、及び／又は乳癌（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む。ある種の実施形態では、この開示の抗体で治療される癌は、膠芽腫を含む。ある種の実施形態では、この開示の１つ以上の抗体で治療される癌は、膵癌を含む。ある種の実施形態では、この開示の１つ以上の抗体で治療される癌は、卵巣癌を含む。ある種の実施形態では、この開示の１つ以上の抗体で治療される癌は、肺癌を含む。ある種の実施形態では、この開示の１つ以上の抗体で治療される癌は、前立腺癌を含む。ある種の実施形態では、この開示の１つ以上の抗体で治療される癌は、結腸癌を含む。ある種の実施形態では、治療される癌は、膠芽腫、膵癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、他の治療に対して抵抗性である。ある種の実施形態では、治療される癌は、再発性である。ある種の実施形態では、癌は、再発した／抵抗性の膠芽腫、膵癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、又は肺癌である。ある種の実施形態では、癌は、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む。ある種の実施形態では、癌は、進行した固形腫瘍を含む。ある種の実施形態では、個人は、単剤療法としてのＬＩＦ結合抗体での以前の治療に対して抵抗性である。ある種の実施形態では、個人は、単剤療法としての白金系抗悪性腫瘍剤での以前の治療に対して抵抗性である。
【００９６】
薬学的に許容し得る補形薬、担体、及び希釈剤
ある種の実施形態では、本開示の白金系抗悪性腫瘍剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、医薬組成物の構成成分である。ある種の実施形態では、本開示の白金系抗悪性腫瘍剤とＬＩＦ結合ポリペプチドは、同じ医薬組成物の構成成分である。ある種の実施形態では、医薬組成物は、生理学的に適切な塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）を含む。ある種の実施形態では、医薬組成物は、約０．６％〜１．２％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、医薬組成物は、約０．７％〜１．１％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、医薬組成物は、約０．８％〜１．０％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、医薬組成物は、緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸水素、及びヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、ポリソルベート及びポロクサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、ヒスチジン、グリシン、又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン；並びにキレート剤、例えば、ＥＧＴＡ又はＥＧＴＡのうちの１種以上をさらに含む。
【００９７】
ある種の実施形態では、本開示の白金系抗悪性腫瘍剤、ＬＩＦ結合ポリペプチド、又は白金系抗悪性腫瘍剤とＬＩＦ結合ポリペプチドの両方は、無菌の溶液に懸濁して投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤とＬＩＦ結合ポリペプチドは、同一の溶液から投与される。ある種の実施形態では、この溶液は、生理学的に適切な塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）を含む。ある種の実施形態では、この溶液は、約０．６％〜１．２％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、この溶液は、約０．７％〜１．１％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、この溶液は、約０．８％〜１．０％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、抗体の高度に濃縮されたストック溶液を、約０．９％のＮａＣｌに希釈することができる。ある種の実施形態では、溶液は、約０．９％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、溶液は、緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸水素、及びヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、ポリソルベート及びポロクサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、ヒスチジン、グリシン、又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン；並びにキレート剤、例えば、ＥＧＴＡ又はＥＧＴＡのうちの１種以上をさらに含む。ある種の実施形態では、本開示の白金系抗悪性腫瘍剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、凍結乾燥して輸送／保管され、投与前に再構成される。ある種の実施形態では、凍結乾燥される抗体製剤は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０などの充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含む。ある種の実施形態では、この開示の抗ＬＩＦ抗体は、使用される治療場所で希釈されることとなる濃縮されたストック溶液として輸送及び保管することができる。ある種の実施形態では、このストック溶液は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート、及び約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＩＦ抗体を含む。ある種の実施形態では、この溶液のｐＨは、約６．０である。ある種の実施形態では、個人に投与される形態は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート８０、及び約２０ｍｇ／ｍＬのｈ５Ｄ８抗体を含む水溶液である。ある種の実施形態では、この溶液のｐＨは、約６．０である。
【００９８】
ある種の実施形態では、本開示の白金系抗悪性腫瘍剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、無菌の溶液に懸濁して投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤とＬＩＦ結合ポリペプチドは、同一の溶液から投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤とＬＩＦ結合ポリペプチドは、別の溶液から投与される。ある種の実施形態では、この溶液は、生理学的に適切な塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）を含む。ある種の実施形態では、この溶液は、約０．６％〜１．２％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、この溶液は、約０．７％〜１．１％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、この溶液は、約０．８％〜１．０％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、抗体の高度に濃縮されたストック溶液を、約０．９％のＮａＣｌに希釈することができる。ある種の実施形態では、溶液は、約０．９％のＮａＣｌを含む。ある種の実施形態では、溶液は、緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸水素、及びヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、ポリソルベート及びポロクサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、ヒスチジン、グリシン、又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン；並びにキレート剤、例えば、ＥＧＴＡ又はＥＧＴＡのうちの１種以上をさらに含む。ある種の実施形態では、本開示の白金系抗悪性腫瘍剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、凍結乾燥して輸送／保管され、投与前に再構成される。ある種の実施形態では、凍結乾燥される抗体製剤は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０などの充填剤を含む。ある種の実施形態では、この開示の抗ＬＩＦ抗体は、使用される治療場所で希釈されることとなる濃縮されたストック溶液として輸送及び保管することができる。ある種の実施形態では、このストック溶液は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート、及び約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＩＦ抗体を含む。ある種の実施形態では、この溶液のｐＨは、約６．０である。ある種の実施形態では、個人に投与される形態は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート８０、及び約２０ｍｇ／ｍＬのｈ５Ｄ８抗体を含む水溶液である。ある種の実施形態では、この溶液のｐＨは、約６．０である。
【００９９】
本明細書に記載されるのはまた、本明細書に記載される組み合わせ療法を実行するためのキットである。ある種の実施形態では、キットは、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤を含む。ある種の実施形態では、キットは、ｈ５Ｄ８と白金系抗悪性腫瘍剤を含む。構成成分の一方又は両方は、凍結乾燥された又は液体の形態で、ガラス又は他の好適な材料のバイアルに含有され得る。
【０１００】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、個人における非小肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせたＬＩＦ結合ポリペプチドの使用である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、別々の製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、同じ製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤が個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与されるのと同時に個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、癌は、単剤療法として投与される治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド又は白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である。
【０１０１】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、個人における結腸直腸癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせたＬＩＦ結合ポリペプチドの使用である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、別々の製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、同じ製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤が個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与されるのと同時に個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、癌は、単剤療法として投与される治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド又は白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である。
【０１０２】
ある種の実施形態では、本明細書に記載されるのは、個人における多形神経膠芽腫を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせたＬＩＦ結合ポリペプチドの使用である。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、別々の製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤は、同じ製剤中で個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、白金系抗悪性腫瘍剤が個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与される前に個人に投与される。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与されるのと同時に個人に投与される。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、脱免疫原性化されている。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。ある種の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、ＬＩＦに特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、白金系抗悪性腫瘍剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む。ある種の実施形態では、癌は、単剤療法として投与される治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド又は白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、「を治療すること」又は「治療」は、１つ以上の有益な効果を生じることが意図される病的状態への介入を指す。癌／腫瘍のためには、治療には、安定な疾患、部分応答、完全寛解、無増悪生存期間の延長、全生存期間の延長、腫瘍縮小、腫瘍増殖の遅延、腫瘍増殖の停止、又は転移の予防若しくは低下をもたらす又は確かにもたらすことを目的とする方法が含まれる。ある種の場合では、本明細書に記載される治療方法は、成功裏の治療後の維持として、又は特定の腫瘍若しくは癌の再発若しくは転移を予防するために使用することができる。すべての個人が、治療用抗体の所与の投与に対して、同程度に反応する又は全く反応しないこととなるわけではないが、たとえ反応が検出されないとしても、これらの個人は治療されているとみなされることが理解されよう。
【０１０４】
例示的実施形態
例示的実施形態は、１．個人における癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせた白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドの使用。２．ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、別々の製剤中で個人に投与される、実施形態１の使用。３．ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、同じ製剤中で個人に投与される、実施形態１の使用。４．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、白金系抗悪性腫瘍剤が個人に投与される前に個人に投与される、実施形態１又は２の使用。５．白金系抗悪性腫瘍剤が、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与される前に個人に投与される、実施形態１又は２の使用。６．白金系抗悪性腫瘍剤が、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個人に投与されるのと同時に個人に投与される、実施形態１から３のいずれか１つの使用。７．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む、実施形態１〜６のいずれか１つの使用。８．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む、実施形態７の使用。９．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、実施形態８の使用。１０．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ヒト化されている、実施形態８の使用。１１．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、脱免疫原性化されている、実施形態８の使用。１２．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む、実施形態８の使用。１３．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態８の使用。１４．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである、実施形態８の使用。１５．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及びｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、実施形態８〜１４のいずれか１つの使用。１６．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、実施形態８〜１５のいずれか１つの使用。１７．ＶＨ配列が、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列が、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、実施形態１６の使用。１８．ＶＨ配列が、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である、実施形態１７の使用。１９．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及びｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む、実施形態８〜１８のいずれか１つの使用。２０．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態８〜１９のいずれか１つの使用。２１．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態８〜１９のいずれか１つの使用。２２．白金系抗悪性腫瘍剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態１０〜２１のいずれか１つの使用。２３．白金系抗悪性腫瘍剤が、シスプラチンである、実施形態２２の使用。２４．癌が、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む、実施形態１〜２３のいずれか１つの使用。２５．癌が、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む、実施形態２４の使用。２６．癌が、単剤療法として投与される治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド又は白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である、実施形態１〜２５のいずれか１つの使用。２７．癌を有する個人を治療する方法であって、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；（ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤との有効量の組み合わせを、癌を有する個人に投与することを含む方法。２８．癌を有する個人に有効量のＬＩＦ結合ポリペプチドを投与することを含む、実施形態２７の方法。２９．癌を有する個人に、有効量の白金系抗悪性腫瘍剤を投与することを含む、実施形態２７の方法。３０．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む、実施形態２７〜２９のいずれか１つの方法。３１．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、ＬＩＦに特異的に結合する抗体を含む、実施形態２７〜２９のいずれか１つの方法。３２．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、実施形態３１の方法。３３．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ヒト化されている、実施形態３１の方法。３４．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、脱免疫原性化されている、実施形態３１の方法。３５．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖を含む、実施形態３１の方法。３６．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態３１の方法。３７．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである、実施形態３１の方法。３８．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及びｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、実施形態３１〜３７のいずれか１つの方法。３９．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及びｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、実施形態３１〜３７のいずれか１つの方法。４０．ＶＨ配列が、配列番号４２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列が、配列番号４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、実施形態３９の方法。４１．ＶＨ配列が、配列番号４２に示したアミノ酸配列と同一であり；ＶＬ配列が、配列番号４６に示したアミノ酸配列と同一である、実施形態４０の方法。４２．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％の同一アミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖配列；及びｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖配列を含む、実施形態３１〜３７のいずれか１つの方法。４３．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態３１〜４２のいずれか１つの方法。４４．ＬＩＦに特異的に結合する抗体が、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態３１〜４２のいずれか１つの方法。４５．白金系抗悪性腫瘍剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナトリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態２７〜４４のいずれか１つの方法。４６．白金系抗悪性腫瘍剤が、シスプラチンである、実施形態４５の方法。４７．癌が、進行した固形腫瘍、膠芽腫、胃癌、皮膚癌、前立腺癌、膵癌、乳癌、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、食道癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、リンパ腫、又は軟部組織癌を含む、実施形態２７〜４６のいずれか１つの方法。４８．癌が、非小細胞肺癌、卵巣上皮癌、又は膵臓腺癌を含む、実施形態４７の方法。４９．癌が、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチドの阻害剤での治療に対して抵抗性である、実施形態２７〜４８のいずれか１つの方法。５０．癌が、治療量の白金系抗悪性腫瘍剤での治療に対して抵抗性である、実施形態２７〜４８のいずれか１つの方法。５１．白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、別々に投与される、実施形態２７〜５０のいずれか１つの方法。５２．ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、同時に投与される、実施形態２７〜５０のいずれか１つの方法。５３．ＬＩＦ結合ポリペプチドと白金系抗悪性腫瘍剤が、単一の組成物中で投与される、実施形態２７〜５０のいずれか１つの方法。５４．個人における癌を治療するための、白金系抗悪性腫瘍剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体の使用。ここでは、ＬＩＦ結合抗体は、ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及びｆ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽
鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。５５．癌を有する個人を治療する方法であって、ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；ｉｉ．配列番号４又は５のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及びｖｉ．配列番号１３に示したアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体と；ｂ）白金系抗悪性腫瘍剤との有効量の組み合わせを、癌を有する個人に投与することを含む方法。５６．癌を有する個人に、有効量のＬＩＦ結合ポリペプチドを投与することを含む、実施形態５５の方法。５７．癌を有する個人に、有効量の白金系抗悪性腫瘍剤を投与することを含む、実施形態５５の方法。
【実施例】
【０１０５】
次の実例は、本明細書に記載される組成物及び方法の実施形態を代表するものであり、決して制限的であることが意図されない。
【０１０６】
実施例１−ＬＩＦに特異的なラット抗体の産生
ヒトＬＩＦのアミノ酸２３〜２０２をコードするｃＤＮＡを、発現プラスミド（Ａｌｄｅｖｒｏｎ  ＧｍｂＨ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にクローニングした。実験用ラット（Ｗｉｓｔａｒ）の群に、微粒子撃ち込み（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）（「遺伝子銃（ｇｅｎｅ  ｇｕｎ）」）のための手持ち型装置を使用するＤＮＡコーティングされた金粒子の皮内適用によって、免疫化した。一過性トランスフェクトしたＨＥＫ細胞上の細胞表面発現を、ＬＩＦタンパク質のＮ末端に付加されたタグを認識する抗タグ抗体を用いて確認した。一連の免疫化後に、血清試料を収集し、前述の発現プラスミドを用いて一過性トランスフェクトしたＨＥＫ細胞に対してフローサイトメトリーで試験した。抗体産生細胞を単離し、標準の手順に従って、マウス骨髄腫細胞（Ａｇ８）と融合させた。上に記載した通りにフローサイトメトリー分析においてスクリーニングを行うことによって、ＬＩＦに特異的な抗体を産生するハイブリドーマを特定した。ＲＮＡ保護剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃによるＲＮＡｌａｔｅｒ，ｃａｔ．＃ＡＭ７０２０）を使用して、陽性のハイブリドーマ細胞の細胞ペレットを調製し、抗体の可変ドメインの配列決定のためにさらに処理した。
【０１０７】
実施例２−ＬＩＦに特異的なマウス抗体の産生
ヒトＬＩＦのアミノ酸２３〜２０２をコードするｃＤＮＡを、発現プラスミド（Ａｌｄｅｖｒｏｎ  ＧｍｂＨ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にクローニングした。実験用マウス（ＮＭＲＩ）の群に、微粒子撃ち込み（「遺伝子銃」）のための手持ち型装置を使用するＤＮＡコーティングされた金粒子の皮内適用によって、免疫化した。一過性トランスフェクトしたＨＥＫ細胞上の細胞表面発現を、ＬＩＦタンパク質のＮ末端に付加されたタグを認識する抗タグ抗体を用いて確認した。一連の免疫化後に、血清試料を収集し、前述の発現プラスミドを用いて一過性トランスフェクトしたＨＥＫ細胞に対してフローサイトメトリーで試験した。抗体産生細胞を単離し、標準の手順に従って、マウス骨髄腫細胞（Ａｇ８）と融合させた。上に記載した通りにフローサイトメトリー分析においてスクリーニングを行うことによって、ＬＩＦに特異的な抗体を産生するハイブリドーマを特定した。ＲＮＡ保護剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃによるＲＮＡｌａｔｅｒ，ｃａｔ．＃ＡＭ７０２０）を使用して、陽性のハイブリドーマ細胞の細胞ペレットを調製し、抗体の可変ドメインの配列決定のためにさらに処理した。
【０１０８】
実施例３−ＬＩＦに特異的なラット抗体のヒト化
それに続くヒト化のために、ラット免疫化（５Ｄ８）からの１つのクローンを選択した。ヒト化は、標準のＣＤＲグラフティング方法を使用して行った。重鎖及び軽鎖領域を、標準の分子クローニング技術を使用して、５Ｄ８ハイブリドーマからクローニングし、サンガー法によって配列決定した。次いで、ヒト重鎖及び軽鎖可変配列に対して、ＢＬＡＳＴ検索を行い、それぞれからの４つの配列を、ヒト化のためのアクセプターフレームワークとして選択した。これらのアクセプターフレームワークを脱免疫原性化して、Ｔ細胞応答エピトープを除去した。５Ｄ８の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を、４つの異なる重鎖アクセプターフレームワーク（Ｈ１からＨ４）、及び４つの異なる軽鎖フレームワーク（Ｌ１からＬ４）にクローニングした。次いで、１６個の異なる抗体をすべて、ＣＨＯ−Ｓ細胞（Ｓｅｌｅｘｉｓ）における発現；ＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害；及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による結合親和性について試験した。これらの実験を、以下にまとめて示す。
【０１０９】
【表１】
2021533084.tif 000003
【０１１０】
トランスフェクトした細胞の発現性能を、エルレンマイヤーフラスコ（３×１０５細胞／ｍＬ播種、２００ｍＬ培養体積）中で、流加培養で、１０日の細胞培養後に、比較した。この時点で、細胞を回収し、分泌された抗体をプロテインＡカラムを使用して精製し、次いで定量化した。Ｈ３重鎖（配列番号４３）を使用するものを除いて、すべてのヒト化抗体が発現した。
【０１１１】
チロシン７０５でのＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を、ウエスタンブロットによって決定した。Ｕ２５１神経膠腫細胞を、１００，０００細胞／ウェルの密度で６ウェルプレートにプレーティングした。細胞を、あらゆる処理の前に、完全培地で２４時間培養し、その後、細胞を、８時間、血清飢餓状態にした。その後、細胞を、１０μｇ／ｍｌの濃度の指示された抗体で、一晩処理した。処理後、ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含有する放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中でタンパク質を得、定量化し（ＢＣＡ−タンパク質定量法、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ウエスタンブロットに使用した。ウエスタンブロットについては、メンブレンを、５％脱脂粉乳−ＴＢＳＴ中で１時間ブロッキングし、一次抗体と共に一晩（ｐ−ＳＴＡＴ３、ｃａｔａｌｏｇ＃９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ若しくはＳＴＡＴ３、ｃａｔａｌｏｇ＃９１３２、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）又は３０分（β−アクチン−ペルオキシダーゼ、ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ３８５４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）インキュベートした。次いで、メンブレンをＴＢＳＴで洗浄し、二次抗体と共にインキュベートし、再び洗浄した。タンパク質を、化学発光（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、ｃａｔａｌｏｇ＃３４０７６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出した。これらの結果を、図１に示す。ｐＳＴＡＴ３バンドの色が濃いほど、存在する阻害が小さい。阻害は、５Ｄ８（非ヒト化ラット）、Ａ（Ｈ０Ｌ０）、Ｃ（Ｈ１Ｌ２）、Ｄ（Ｈ１Ｌ３）、及びＧ（Ｈ２Ｌ２）と標識が付けられたレーンでは高かった；阻害は、Ｈ（Ｈ２Ｌ３）、Ｏ（Ｈ４Ｌ２）、及びＰ（Ｈ４Ｌ３）では中程度であった；阻害は、Ｂ（Ｈ１Ｌ１）、Ｅ（Ｈ１Ｌ４）、Ｆ（Ｈ２Ｌ１）、Ｉ（Ｈ２Ｌ４）、Ｎ（Ｈ４Ｌ１）、及びＱ（Ｈ４Ｌ４）では存在しなかった。
【０１１２】
次いで、ＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を呈する抗体を、ＳＰＲによって分析して、結合親和性を決定した。簡単に言うと、アミンカップリングｈＬＩＦに対するＡ（Ｈ０Ｌ０）、Ｃ（Ｈ１Ｌ２）、Ｄ（Ｈ１Ｌ３）、及びＧ（Ｈ２Ｌ２）、Ｈ（Ｈ２Ｌ３）及びＯ（Ｈ４Ｌ２）ヒト化抗体の結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２００２装置を使用して観察した。速度定数及び親和性を、６つのリガンド濃度でのすべてのセンサーチップ表面上でもたらされたすべてのセンサーグラムの数学的センサーグラムフィッティング（ラングミュア相互作用モデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ］）によって決定した。各濃度の最も適合する曲線（最小カイ二乗）を、速度定数及び親和性の算出のために使用した。表１を参照されたい。
【０１１３】
実験手順は、検体として二価抗体を使用したので、ヒト化抗体の標的結合機構へのより詳細な洞察を得るために、最も適合するセンサーグラムをまた、二価検体フィッティングモデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ；ＡＢ＋Ｂ＝ＡＢ２］に基づいて分析した。二価フィッティングモデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ；ＡＢ＋Ｂ＝ＡＢ２］を使用するセンサーグラム動態解析によって、ｍＡｂ試料の相対的親和性順位が確認された。
【０１１４】
その高い結合親和性、及び回分培養からの高い収率により、より掘り下げた分析のために、Ｈ２及びＬ２を含むヒト化５Ｄ８を選択した。
【０１１５】
実施例４−クローン５Ｄ８のヒト化はＬＩＦに対する結合を向上させる
さらなる分析のために、Ｈ２Ｌ２クローン（ｈ５Ｄ８）を選択し、ＳＰＲによって、結合を、親ラット５Ｄ８（ｒ５Ｄ８）及びマウスクローン１Ｂ２と比較した。１Ｂ２抗体は、以前にＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ａｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭ  ＡＣＣ３０５４）に寄託された、以前に開示されたマウス抗ＬＩＦ抗体であり、比較目的で含められた。それぞれ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びＨＥＫ−２９３細胞から精製された組換え型ヒトＬＩＦを、リガンドとして使用した。ヒト又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）起源からのＬＩＦを、アミンカップリング化学を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ光学センサーチップの表面に共有結合させ、速度定数から結合親和性を算出した。
【０１１６】
材料及び方法
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来のヒトＬＩＦは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（参照記号ＬＩＦ  １０１０）から入手し；ＨＥＫ−２９３細胞由来のヒトＬＩＦは、ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（参照記号ＬＩＦ−Ｈ５２１ｂ）から入手した。ＬＩＦを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ａｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（ＢＲ−１０００−５０；ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ）を使用して、センサーチップにカップリングさせた。試料は、ＣＭ５光学センサーチップ（ＢＲ−１０００−１２；ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（商標）２００２装置に流した。機械の稼働中、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液を使用した（ＢＲ−１００１−８８；ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ）。結合センサーグラムの動態解析を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．１ソフトウェアを使用して実施した。速度定数及び親和性を、漸増する検体濃度でのすべてのセンサーチップ表面上でもたらされたすべてのセンサーグラムの数学的センサーグラムフィッティング（ラングミュア相互作用モデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ］）によって決定した。決定されたラングミュア抗体−標的親和性に対する二価の寄与（例えば、結合活性の寄与）についての見積もりをもたらすために、センサーグラムをまた、主成分分析を含めて、二価検体センサーグラムフィッティングモデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ；ＡＢ＋Ｂ＝ＡＢ２］に基づいて分析した。各濃度の最も適合する曲線（最小カイ二乗）を、速度定数及び親和性の算出のために使用した。これらの親和性実験の概要を、表２（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において作られたヒトＬＩＦ）及び表３（ＨＥＫ２９３細胞において作られたヒトＬＩＦ）に示す。
【０１１７】
【表２】
2021533084.tif 000004
【０１１８】
【表３】
2021533084.tif 000005
【０１１９】
この一連の実験から、ラングミュア１：１センサーグラムフィッティングモデルは、ヒト化５Ｄ８（ｈ５Ｄ８）抗体が、マウス１Ｂ２及びｒ５Ｄ８よりも約１０〜２５倍高い親和性で、ヒトＬＩＦに結合したことを示す。
【０１２０】
次に、ｈ５Ｄ８抗体を、ＳＰＲによって、複数の種のＬＩＦに対して試験した。ｈ５Ｄ８  ＳＰＲ結合速度解析を、異なる種及び発現系由来の組換え型ＬＩＦ検体：ヒトＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＨＥＫ２９３細胞）；マウスＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＣＨＯ細胞）；ラットＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））；カニクイザルＬＩＦ（酵母、ＨＥＫ２９３細胞）について実施した。
【０１２１】
材料及び方法
ｈ５Ｄ８抗体を、非共有結合性の、Ｆｃ特異的な捕捉によって、センサーチップ表面に固定した。ＬＩＦ検体に対する抗ＬＩＦ抗体の立体的に均一且つフレキシブルな提示を可能にする、組換え型の、Ｉｇ（Ｆｃ）特異的な黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）プロテインＡ／Ｇを、捕捉剤として使用した。ＬＩＦ検体の供給源は、次の通りである：ヒトＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）より；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ参照記号ＬＩＦ  １０５０）；ヒトＬＩＦ（ＨＥＫ細胞よりＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＬＩＦ−Ｈ５２１）；マウスＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃａｔ．Ｎｏ  ＮＦ−ＬＩＦ２０１０）；マウスＬＩＦ（ＣＨＯ細胞より；Ｒｅｐｒｏｋｉｎｅ  Ｃａｔａｌｏｇ＃  ＲＣＰ０９０５６）；サルＬＩＦ（酵母  Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃａｔａｌｏｇ＃  ＲＰ１０７４Ｙ）；ＨＥＫ−２９３細胞において産生されるサルＬＩＦ。全ｈ５Ｄ８が、いくつかの種由来のＬＩＦに対する結合を呈した。この親和性実験の概要を、表４に示す。
【０１２２】
【表４】
2021533084.tif 000006
【０１２３】
実施例５−ヒト化クローン５Ｄ８は、ＳＴＡＴ３のＬＩＦ誘発リン酸化をインビトロで阻害する
ｈ５Ｄ８の生物学的活性を決定するために、ＬＩＦ活性化の細胞培養モデルにおいて、ヒト化及び親型を試験した。図２Ａは、神経膠腫細胞株をヒトＬＩＦと共にインキュベートした場合に、ヒト化クローンが、ＳＴＡＴ３リン酸化（Ｔｙｒ  ７０５）の阻害の増大を呈したことを示す。図２Ｂは、異なる希釈のｈ５Ｄ８抗体を用いて再び行った、図２Ａと同じ手順を用いた実験を示す。
【０１２４】
方法
Ｕ２５１神経膠腫細胞を、１５０，０００細胞／ウェルの密度で６ウェルプレートにプレーティングした。細胞を、あらゆる処理の前に、完全培地で２４時間培養した。その後、細胞を、１０μｇ／ｍｌの濃度のｒ５Ｄ８抗ＬＩＦ抗体又はｈ５Ｄ８抗ＬＩＦ抗体で、一晩処理した、又はしなかった（対照細胞）。
【０１２５】
処理後、ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含有する放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中でタンパク質を得、定量化し（ＢＣＡ−タンパク質定量法、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ウエスタンブロットに使用した。ウエスタンブロットについては、メンブレンを、５％脱脂粉乳−ＴＢＳＴ中で１時間ブロッキングし、一次抗体と共に一晩（ｐ−ＳＴＡＴ３、ｃａｔａｌｏｇ＃９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ若しくはＳＴＡＴ３、ｃａｔａｌｏｇ＃９１３２、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）又は３０分（β−アクチン−ペルオキシダーゼ、ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ３８５４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）インキュベートした。次いで、メンブレンをＴＢＳＴで洗浄し、必要であれば二次抗体と共にインキュベートし、再び洗浄した。タンパク質を、化学発光（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、ｃａｔａｌｏｇ＃３４０７６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出した。
【０１２６】
実施例６−Ｕ−２５１細胞における内在レベルのＬＩＦに対するｈ５Ｄ８抗体処理のＩＣ５０値
Ｕ−２５１細胞において、血清飢餓条件下で、ｈ５Ｄ８についての生物学的阻害に対する４９０ピコモル濃度（図３Ａ）と低いＩＣ５０も決定された。代表的な結果図３Ａ及び３Ｂ及び表５を参照されたい。
【０１２７】
【表５】
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【０１２８】
方法
Ｕ−２５１細胞を、（条件あたり）６ｃｍプレートあたり６００，０００細胞で蒔いた。細胞を、対応する濃度（段階希釈（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ））のｈ５Ｄ８で、血清飢餓（０．１％  ＦＢＳ）下で３７℃で一晩処理した。ｐＳＴＡＴ３についての陽性対照として、組換え型ＬＩＦ（Ｒ＆Ｄ  ＃７７３４−ＬＦ／ＣＦ）を使用して、１．７９ｎＭで、３７℃で１０分間、細胞を刺激した。ｐＳＴＡＴ３の陰性対照として、ＪＡＫ  Ｉ阻害剤（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  ＃４２００９９）を、１μＭで、３７℃で３０分間使用した。次いで、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｐｏｔ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｔｏｔａｌ  ＳＴＡＴ３（Ｃａｔ＃  Ｋ１５０ＳＮＤ−２）及びＰｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）（Ｃａｔ＃  Ｋ１５０ＳＶＤ−２）キットのプロトコルに従って、細胞を、ライセートのために氷上に回収して、ＭＳＤ  Ｍｅｓｏ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｓ６００によって、検出可能なタンパク質レベルを測定した。
【０１２９】
実施例７−ヒトＬＩＦに特異的に結合する追加の抗体
ヒトＬＩＦと特異的に結合する他のラット抗体クローン（１０Ｇ７及び６Ｂ５）を特定し、その結合特性の概要を、下の表６に示す（クローン１Ｂ２は比較としての役割を果たす）。
【０１３０】
方法
検体として、組換え型ＬＩＦ標的タンパク質［ヒトＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃａｔ．Ｎｏ．ＬＩＦ  １０１０及びヒトＬＩＦ（ＨＥＫ２９３細胞）；ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔ．Ｎｏ．ＬＩＦ−Ｈ５２１ｂ］を適用して、ＣＭ５光学センサーチップの表面上に固定された抗ＬＩＦ  ｍＡｂｓ  １Ｂ２、１０Ｇ７、及び６Ｂ５について、リアルタイム結合動態解析を実施した。
【０１３１】
速度定数及び親和性は、グローバルフィッティング（センサーグラムセットの同時フィッティング）並びに単一曲線フィッティングアルゴリズムを適用して、ラングミュア１：１結合モデルを使用する数学的センサーグラムフィッティングによって得た。グローバルフィットの妥当性を、ｋｏｂｓ解析によって評価した。
【０１３２】
【表６】
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【０１３３】
実施例８−ＳＴＡＴ３のＬＩＦ誘発リン酸化をインビトロで阻害する追加の抗ＬＩＦ抗体
追加のクローンを、細胞培養において、ＳＴＡＴ３のＬＩＦ誘発リン酸化を阻害するその能力について試験した。図４に示す通り、クローン１０Ｇ７及び以前に詳述したｒ５Ｄ８は、１Ｂ２クローンと比較して、ＬＩＦ誘発ＳＴＡＴ３リン酸化の高い阻害を呈した。抗ＬＩＦポリクローナル抗血清（ｐｏｓ．）は、陽性対照として含まれていた。６Ｂ５は、阻害を呈さなかったが、これは、この実験で使用された非グリコシル化ＬＩＦに対する６Ｂ５結合が存在しない可能性によって説明することができる。
【０１３４】
方法
患者由来の神経膠腫細胞を、１５０，０００細胞／ウェルの密度で、６ウェルプレートにプレーティングした。細胞を、あらゆる処理の前に、Ｂ２７（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン／ストレプトマイシン、及び増殖因子（２０ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦ及び２０ｎｇ／ｍｌ  ＦＧＦ−２［ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ］）を添加したＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から構成されるＧＢＭ培地中で、２４時間培養した。次の日、細胞を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において産生された組換え型ＬＩＦ、又は組換え型ＬＩＦプラス指示された抗体の混合物で、１５分間処理した、又はしなかった（抗体については１０μｇ／ｍｌの最終濃度、及び２０ｎｇ／ｍｌの組換え型ＬＩＦ）。処理後、ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含有する放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中でタンパク質を得、定量化し（ＢＣＡ−タンパク質定量法、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ウエスタンブロットに使用した。ウエスタンブロットについては、メンブレンを、５％脱脂粉乳−ＴＢＳＴ中で１時間ブロッキングし、一次抗体と共に一晩（ｐ−ＳＴＡＴ３、ｃａｔａｌｏｇ＃９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）又は３０分（β−アクチン−ペルオキシダーゼ、ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ３８５４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）インキュベートした。次いで、メンブレンをＴＢＳＴで洗浄し、必要であれば二次抗体と共にインキュベートし、再び洗浄した。タンパク質を、化学発光（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、ｃａｔａｌｏｇ＃３４０７６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出した。
【０１３５】
実施例９−ＬＩＦは複数の腫瘍型にわたって高度に過剰発現される
複数のヒト腫瘍型に対して免疫組織化学を行って、ＬＩＦ発現の程度を決定した。図５に示す通り、ＬＩＦは、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、及び膵癌において高度に発現される。
【０１３６】
実施例１０−ヒト化クローンｈ５Ｄ８は非小細胞肺癌のマウスモデルにおいて腫瘍増殖を阻害する
ヒト化５Ｄ８クローンがＬＩＦ陽性癌をインビボで阻害する能力を決定するために、この抗体を、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のマウスモデルにおいて試験した。図６Ａは、この抗体で治療されたマウスにおける、賦形剤の陰性対照と比較した腫瘍増殖の減少を示す。図６Ｂは、ｒ５Ｄ８型を使用してもたらされたデータを示す。
【０１３７】
方法
高いＬＩＦレベルを有するマウス非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＫＬＮ２０５を、インビボでの生物発光モニタリングのために、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現するレンチウイルスに安定に感染させた。マウスモデルを発病させるために、５×１０５個のＫＬＮ２０５非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞を、８週齢の免疫適格性の同系移植ＤＢＡ／２マウスの左肺に、肋間穿刺によって同所性移植した。マウスを、対照賦形剤で又は１５ｍｇ／ｋｇ若しくは３０ｍｇ／ｋｇのｈ５Ｄ８抗体で（週２回、腹腔内に）治療し、腫瘍増殖を生物発光によってモニタリングした。生物発光画像化のために、マウスは、１〜２％吸入イソフルラン麻酔下で０．２ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  Ｄ−ルシフェリンの腹腔内注射を受けた。生物発光シグナルは、高感度冷却ＣＣＤカメラから構成されるＩＶＩＳシステム２０００シリーズ（Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用してモニタリングした。Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェア（Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を使用して、画像化データをグリッド処理し、囲まれた各領域内の全生物発光シグナルを統合した。データは、対象領域（ＲＯＩ）内の全光子束放射（光子／秒）を使用して解析した。結果は、ｈ５Ｄ８抗体での治療が、腫瘍退縮を促進することを実証する。データは、平均値±ＳＥＭとして示される。
【０１３８】
実施例１１−ｈ５Ｄ８は多形神経膠芽腫のマウスモデルにおいて腫瘍増殖を阻害する
ルシフェラーゼ発現ヒト細胞株Ｕ２５１を使用する、同所移植ＧＢＭ腫瘍モデルでは、腹腔内（ＩＰ）注射によって３００μｇ  ｒ５Ｄ８及びｈ５Ｄ８を週２回投与したマウスにおいて、ｒ５Ｄ８は、腫瘍体積を有意に低下させた。この研究の結果を、図７Ａに示す（治療後第２６日に定量化）。この実験をまた、２００μｇ又は３００μｇで治療されるヒト化ｈ５Ｄ８マウスを使用して行い、治療の７日後の腫瘍の統計的に有意な低下が示された。図７Ｂは、ルシフェラーゼ発現ヒトＵ２５１  ＧＢＭ細胞を接種し、且つその後１００、２００、又は３００μｇのｈ５Ｄ８又は賦形剤で週２回治療されたマウスからのデータを示す。腫瘍サイズは、第７日に、生物発光（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）によって決定した。グラフは、平均値±ＳＥＭを示す水平なバーと共に、個々の腫瘍測定値を示す。統計的有意性は、対応のないノンパラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定を使用して算出した。
【０１３９】
方法
ルシフェラーゼを安定に発現するＵ２５１細胞を収集し、ＰＢＳ中で洗浄し、４００ｇで５分間遠心分離し、ＰＢＳに再懸濁し、自動セルカウンター（Ｃｏｕｎｔｅｓｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて計数した。最適な生存能を維持するために、細胞を氷上に維持した。マウスを、ケタミン（Ｋｅｔｏｌａｒ５０（登録商標））／キシラシン（Ｘｙｌａｃｉｎｅ）（Ｒｏｍｐｕｎ（登録商標））（それぞれ７５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与で麻酔した。各マウスを、注意深く定位装置に入れ、固定した。脱毛クリームを用いて頭部から毛を除去し、メスで頭部皮膚を切断して、頭蓋骨を露出させた。ラムダに対して横方向１．８ｍｍ且つ前方向１ｍｍの座標に、穿孔器を用いて小さい切開部を注意深く作成した。右線条体に、２．５ｍｍの深さでＨａｍｉｌｔｏｎ  ３０Ｇシリンジを使用して、５μＬの細胞を接種した。Ｈｙｓｔｏａｃｒｙｌ組織接着剤（Ｂｒａｕｎ）を用いて頭部切開部を閉じ、マウスに皮下鎮痛薬メロキシカム（Ｍｅｔａｃａｍ（登録商標））（１ｍｇ／ｋｇ）を注射した。各マウスに移植された最終細胞数は、３×１０５個であった。
【０１４０】
マウスを、腹腔内に投与されるｈ５Ｄ８で週２回治療した。治療は、腫瘍細胞接種の直後、第０日に開始した。マウスは、ｈ５Ｄ８又は賦形剤対照の合計２回の投与を受けた。
【０１４１】
体重及び腫瘍体積：体重は、２回／週、測定し、腫瘍増殖は、第７日に生物発光（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）によって定量化した。生物発光活性をインビボで定量化するために、マウスを、イソフルオラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）を使用して麻酔し、ルシフェリン基質（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）（１６７μｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。
【０１４２】
生物発光（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）によって求められた腫瘍サイズを、第７日に評価した。個々の腫瘍測定値、及び各治療群についての平均値±ＳＥＭを算出した。統計的有意性は、対応のないノンパラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定によって決定した。
【０１４３】
実施例１２−ｈ５Ｄ８は卵巣癌のマウスモデルにおいて腫瘍増殖を阻害する
ｒ５Ｄ８の有効性を、２つの他の同系移植腫瘍モデルにおいて評価した。卵巣同所移植腫瘍モデルＩＤ８では、３００μｇ  ｒ５Ｄ８（週２回）のＩＰ投与は、腹部体積によって測定された場合に、腫瘍増殖を有意に阻害した（図８Ａ及び８Ｂ）。図８Ｃにおける結果は、ｈ５Ｄ８はまた、２００μｇ以上の用量でも腫瘍体積を低下させたことを示す。
【０１４４】
方法
ＩＤ８細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、４０Ｕ／ｍＬペニシリン及び４０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（ＰｅｎＳｔｒｅｐ）（Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び０．２５μｇ／ｍＬプラスモシン（Ｐｌａｓｍｏｃｉｎ）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を添加した、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。
【０１４５】
ＩＤ８細胞を収集し、ＰＢＳ中で洗浄し、４００ｇで５分間遠心分離し、ＰＢＳに再懸濁した。最適な生存能を維持するために、細胞を氷上に維持し、２００μＬの細胞懸濁液を、２７Ｇ針を用いて腹腔内に注射した。マウスに移植された最終細胞数は、５×１０６個であった。
【０１４６】
マウスは、指示された通りの異なる用量でｉｐ投与されるｈ５Ｄ８で週２回治療した。体重は、２回／週、測定し、腫瘍増悪は、ノギス（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して腹囲を測定することによってモニタリングした。
【０１４７】
実施例１３−ｒ５Ｄ８は結腸直腸癌のマウスモデルにおいて腫瘍増殖を阻害する
皮下結腸ＣＴ２６腫瘍を有するマウスでは、ｒ５Ｄ８（週２回３００μｇをＩＰ投与される）は、腫瘍増殖を有意に阻害した（図９Ａ及び９Ｂ）。
【０１４８】
方法
ＣＴ２６細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４０Ｕ／ｍＬペニシリン及び４０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（ＰｅｎＳｔｒｅｐ）、及び０．２５μｇ／ｍＬプラスモシン（Ｐｌａｓｍｏｃｉｎ）を添加した、ロズウェルパーク記念研究所培地（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｍｅｄｉｕｍ）（ＲＰＭＩ［Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］）中で培養した。
【０１４９】
ＣＴ２６細胞（８×１０５）を、トリプシン処理し、ＰＢＳですすぎ、４００ｇで５分間遠心分離し、１００μＬ  ＰＢＳに再懸濁した。細胞は、細胞死を回避するために氷上に維持した。ＣＴ２６細胞を、２７Ｇ針を使用する皮下注射を介して、マウスに投与した。
【０１５０】
３００μｇ  ｒ５Ｄ８、又は賦形剤対照を、ＣＴ２６細胞移植後、第３日から、週２回、腹腔内注射（ＩＰ）を介してマウスに投与した。
【０１５１】
体重及び腫瘍体積は、１週間に３回測定した。腫瘍体積は、ノギス（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定した。
【０１５２】
実施例１４−ｒ５Ｄ８は腫瘍モデルにおいて炎症性浸潤を減少させる  
Ｕ２５１  ＧＢＭ同所移植モデルでは、ＣＣＬ２２、すなわちＭ２極性化マクロファージのマーカーの発現は、図１０Ａに示した通り、ｒ５Ｄ８で治療された腫瘍において有意に低下した。この所見はまた、ｈ５Ｄ８を使用する、生理学的に関連する器官型組織片培養モデルにおいても確認され、ここでは、３つの患者試料は、図１０Ｂに示した通り、治療後に、ＣＣＬ２２及びＣＤ２０６（ＭＲＣ１）発現（同様にＭ２マクロファージのマーカー）の有意な低下を示した（ＭＲＣ１とＣＣＬ２２の両方について、左上（対照）を右下（治療）と比較されたい）。さらに、ｒ５Ｄ８はまた、免疫適格性マウスにおける同系移植ＩＤ８（図１０Ｃ）及びＣＴ２６（図１０Ｄ）腫瘍において、ＣＣＬ２２＋Ｍ２マクロファージを減少させた。Ｈ５Ｄ８治療はまた、同系移植ＣＴ２６腫瘍モデルにおいて、マクロファージを免疫刺激性の表現型にプログラムした（図１０Ｅ）。ｈ５Ｄ８治療は、ＣＤ２０６陰性／ＭＨＣＩＩ陽性割合の増大によって示される通り、Ｍ１表現型を有するマクロファージを増加させ、ＣＤ２０６陽性／ＭＨＣＩＩ陰性割合の低下によって示される通り、Ｍ２表現型を有するマクロファージを減少させた。図１０Ｆは、ＬＩＦノックダウンを有するＵ２５１細胞の条件培地中で培養した単球からの遺伝子発現データを示す。ＭＲＣ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１、及びＣＴＳＫ（三角形で表した）はすべて、発現の有意な減少を示した。
【０１５３】
実施例１５−ｒ５Ｄ８は非骨髄性エフェクター細胞を増加させる
さらなる免疫機構を調べるために、腫瘍微小環境内でのＴ細胞及び他の非骨髄性免疫エフェクター細胞に対するｒ５Ｄ８の効果を評価した。卵巣同所移植ＩＤ８同系移植モデルでは、ｒ５Ｄ８治療は、図１１Ａに示した通り、腫瘍内ＮＫ細胞の増加及び全部の及び活性化されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増加をもたらした。同様に、結腸同系移植ＣＴ２６腫瘍モデルでは、ｒ５Ｄ８は、図１１Ｂに示した通り、腫瘍内ＮＫ細胞を増加させ、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、また、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ−ｒｅｇ細胞を減少させる傾向があった。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ−ｒｅｇ細胞の減少の傾向はまた、図１１Ｃに示した通り、ｒ５Ｄ８治療後の同系移植同所移植ＫＬＮ２０５腫瘍モデルにおいても観察された。有効性を媒介するためのＴ細胞の必要性と一致して、ＣＴ２６モデルにおけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇は、図１２に示した通り、ｒ５Ｄ８の抗腫瘍有効性を阻害した。
【０１５４】
Ｔ細胞枯渇のための方法
ＣＴ２６細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ［Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］）、４０Ｕ／ｍＬペニシリン及び４０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（ＰｅｎＳｔｒｅｐ［Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］）、及び０．２５μｇ／ｍＬプラスモシン（Ｐｌａｓｍｏｃｉｎ）を添加した、ＲＰＭＩ培養培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。ＣＴ２６細胞（５×１０５）を、収集し、ＰＢＳですすぎ、４００ｇで５分間遠心分離し、１００μＬ  ＰＢＳに再懸濁した。細胞は、細胞死を回避するために氷上に維持した。ＣＴ２６細胞を、２７Ｇシリンジを使用する皮下注射を介して、マウスの両側腹部に投与した。マウスは、研究デザインにおいて指示された通り、腹腔内投与されるｒ５Ｄ８で週２回治療した。賦形剤対照（ＰＢＳ）、ラットｒ５Ｄ８、及び／又は抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８を、研究デザインにおいて記述した通り、週２回、腹腔内注射（ＩＰ）を介してマウスに投与した。すべての抗体治療は、同時に施された。
【０１５５】
実施例１６−ヒトＬＩＦとの複合体におけるｈ５Ｄ８の結晶構造
ｈ５Ｄ８の結晶構造を、ｈ５Ｄ８が結合するＬＩＦ上のエピトープを決定する、また、結合に関与するｈ５Ｄ８の残基を決定するために、３．１オングストロームの分解能に対して解析した。共結晶構造から、ＬＩＦのＮ末端ループが、ｈ５Ｄ８の軽鎖可変領域と重鎖可変領域との間の中心に位置することが明らかになった（図１３Ａ）。さらに、ｈ５Ｄ８は、ＬＩＦのヘリックスＡ及びＣ上の残基と相互作用し、それによって、不連続且つ立体構造的エピトープを形成する。結合は、いくつかの塩橋、Ｈ結合、及びファンデルワールス相互作用によって推進される（表７、図１３Ｂ）。ＬＩＦのｈ５Ｄ８エピトープは、ｇｐ１３０との相互作用の領域に及ぶ。Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ，Ｍ．Ｊ．，Ｂａｎｋｏｖｉｃｈ，Ａ．Ｊ．，Ｋｏｒｔｅｍｍｅ，Ｔ．，Ｂａｋｅｒ，Ｄ．＆Ｇａｒｃｉａ，Ｋ．Ｃ．  Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｓｈａｒｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｐ１３０．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  １２，５７７−５８９（２００３）を参照されたい。これらの結果を、下の表７にまとめて示し、また、図１３に表す。
【０１５６】
【表７】
2021533084.tif 000009
【０１５７】
方法
ＬＩＦは、ＨＥＫ  ２９３Ｓ（Ｇｎｔ  Ｉ−／−）細胞において一過性発現させ、Ｎｉ−ＮＴＡ親和性クロマトグラフィー、それに続いてゲル濾過クロマトグラフィー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中）を使用して精製した。組換え型ｈ５Ｄ８  Ｆａｂは、ＨＥＫ  ２９３Ｆ細胞において一過性発現させ、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔアフィニティクロマトグラフィー、それに続いて陽イオン交換クロマトグラフィーを使用して精製した。精製されたｈ５Ｄ８  ＦａｂとＬＩＦを、１：２．５のモル比で混合し、室温で３０分間インキュベートし、その後ＥｎｄｏＨを使用して脱グリコシル化を行った。続いて、ゲル濾過クロマトグラフィーを使用して、複合体を精製した。この複合体を、２０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、低密度マトリックススクリーン（ｔｅｓｐａｒｓｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｓｃｒｅｅｎ）を使用する結晶化試行のために準備した。１９％（ｖ／ｖ）イソプロパノール、１９％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ４０００、５％（ｖ／ｖ）グリセロール、０．０９５Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ５．６）を含有する条件で、４℃で結晶を形成させた。この結晶を、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＣＬＳ）の０８ＩＤ−１ビームラインで、３．１Åの分解能まで回折させた。データを収集し、Ｋａｂｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｘｄｓ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６，１２５−１３２（２０１０）の通りにＸＤＳを使用して処理及びスケーリングした。構造は、ＭｃＣｏｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅｒ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４０，６５８−６７４（２００７）の通りに、Ｐｈａｓｅｒを使用して、分子置換によって決定した。構造が許容されるＲｗｏｒｋ及びＲｆｒｅｅに収束するまで、Ｃｏｏｔ及びｐｈｅｎｉｘ．ｒｅｆｉｎｅを使用して、数回繰り返されるモデル構築及び精密化を実施した。Ｅｍｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｏｏｔ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６，４８６−５０１（２０１０）；及びＡｄａｍｓ，ｅｔ  ａｌ．ＰＨＥＮＩＸ：ａ  ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｐｙｔｈｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６，２１３−２２１（２０１０）をそれぞれ参照のこと。図は、ＰｙＭＯＬ（Ｔｈｅ  ＰｙＭＯＬ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０  Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）で作成した。
【０１５８】
実施例１７−ｈ５Ｄ８はＬＩＦに対する高い特異性を有する
ｈ５Ｄ８の他のＬＩＦファミリーメンバーに対する結合を試験して、結合特異性を決定した。Ｏｃｔｅｔ９６解析を使用すると、ヒトＬＩＦに対するｈ５Ｄ８結合は、ＬＩＦと最も高い相同性のＩＬ−６ファミリーメンバーオンコスタチンＭ（ＯＳＭ）に対する結合よりもおよそ１００倍強い（どちらのタンパク質も大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において産生される場合）。どちらのタンパク質も哺乳類系において産生される場合、ｈ５Ｄ８は、ＯＳＭに対する結合は呈しない。データを、表８にまとめて示す。
【０１５９】
【表８】
2021533084.tif 000010
【０１６０】
方法
Ｏｃｔｅｔ結合実験：試薬は、製造者によって提供されたマニュアルの通りに使用及び調製した。基本の速度解析実験（Ｂａｓｉｃ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）は、Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアｖｅｒ．９．０．０．２６を次の通りに使用して実施した：センサー／プログラムの設定：ｉ）平衡化（６０秒）；ｉｉ）負荷（１５秒）；ｉｉｉ）ベースライン（６０秒）；ｉｖ）結合（１８０秒）；及びｖ）解離（６００秒）。
【０１６１】
サイトカインに対するｈ５Ｄ８のＯｃｔｅｔ親和性：基本の速度解析実験（Ｂａｓｉｃ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）は、Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアｖｅｒ．９．０．０．２６を次の通りに使用して実施した：アミン反応性第２世代バイオセンサー（Ａｍｉｎｅ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ２ｎｄＧｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ）（ＡＲ２Ｇ）を水中で最低１５分間含水させた。バイオセンサーに対するｈ５Ｄ８のアミン結合を、アミンカップリング第２世代キット（Ａｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ）を使用して、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｎｏｔｅ  ２６（参考文献を参照されたい）に従って実施した。浸漬ステップは、３０℃、１０００ｒｐｍで、次の通りに実施した：ｉ）水中での６０秒の平衡化；ｉｉ）２０ｍＭ  ＥＣＤ、１０ｍＭスルホ−ＮＨＳ（水中）中での３００秒の活性化；ｉｉｉ）１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）中での１０μｇ／ｍｌ  ｈ５Ｄ８の６００秒の固定化；ｉｖ）１Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．５）中での３００秒の反応停止（Ｑｕｅｎｃｈ）；ｖ）水中での１２０秒のベースライン。次いで、３０℃、１０００ｒｐｍでの次の浸漬及び読み取りステップを伴う速度解析実験を実施した：ｖｉ）１Ｘ速度解析緩衝液中での６０秒のベースライン；ｖｉｉ）サイトカインの１Ｘ速度解析緩衝液中での適切な段階希釈物の１８０秒の結合；ｖｉｉｉ）１Ｘ速度解析緩衝液中での３００秒の解離；ｉｘ）それぞれ１０ｍＭグリシン（ｐＨ２．０）と１Ｘ速度解析緩衝液とを交代させる３回の再生／中和サイクル（３回のサイクルについてそれぞれ５秒）。再生後、バイオセンサーを、その後の結合分析のために再利用した。
【０１６２】
哺乳類細胞から産生されるヒト組換え型ＬＩＦは、ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＬＩＦ−Ｈ５２１ｂ）によるものであった；哺乳類細胞において産生されるヒト組換え型ＯＳＭは、Ｒ＆Ｄ（８４７５−ＯＭ／ＣＦ）によるものであった；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞において産生されるヒト組換え型ＯＳＭは、Ｒ＆Ｄ（２９５−ＯＭ−０５０／ＣＦ）によるものであった。
【０１６３】
実施例１８−ｈ５Ｄ８  ｆａｂの結晶構造
広範囲の化学的条件下でのｈ５Ｄ８  Ｆａｂの５つの結晶構造を決定した。これらの構造の高い分解能は、ＣＤＲ残基の立体構造が、わずかな自由度しか伴っておらず、異なる化学環境でも高度に類似であることを示す。この抗体の固有の特徴は、可変重鎖領域の第１００位における非カノニカルなシステインの存在である。構造分析により、システインが不対であり、溶媒に大いに近づきにくいことが示される。
【０１６４】
Ｈ５Ｄ８  Ｆａｂは、そのＩｇＧのパパイン消化、それに続く、標準のアフィニティ、イオン交換、及びクロマトグラフィー技術を使用する精製によって得た。結晶は、蒸気拡散法を使用して得、分解能が１．６５Å〜２．０Åの範囲である５つの結晶構造を決定することが可能になった。５つの異なるｐＨレベル：５．６、６．０、６．５、７．５、及び８．５にわたる範囲である結晶化条件にもかかわらず、すべての構造が、同じ結晶学的空間群内で、且つ類似の単位格子寸法を伴って（Ｐ２１２１２１、ａ  約５３．８Å、ｂ  約６６．５Å、ｃ  約１４３．３Å）解析された。したがって、これらの結晶構造は、人工産物を詰め込んだ結晶によって邪魔されない、また、広範囲の化学的条件にわたる、ｈ５Ｄ８  Ｆａｂの三次元配置の比較が可能である。
【０１６５】
すべての相補性決定領域（ＣＤＲ）残基について、電子密度を観察し、続いて、これをモデル化した。注目すべきことに、ＬＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２は、細長い立体構造をとり、これは、浅いＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ３領域と共に、パラトープの中心の結合溝を形成していた（図１４Ａ）。５つの構造は、すべての残基にわたって高度に類似であり、すべての原子の平均二乗偏差は、０．１９７Å〜０．３２７Åの範囲である（図１４Ａ）。これらの結果は、ＣＤＲ残基の立体構造が、５．６〜８．５の範囲であるｐＨレベル及び１５０ｍＭ〜１Ｍの範囲であるイオン強度を含めた様々な化学環境において維持されることを示した。ｈ５Ｄ８パラトープの静電表面の分析から、正及び負に帯電した領域が、親水特性に等しく寄与し、広く行きわたる疎水性パッチは存在しないことが明らかになった。ｈ５Ｄ８は、ＨＣＤＲ３の基部に（Ｃｙｓ１００）、非カノニカルなシステインというあまり見られない特徴を有する。５つすべての構造において、この遊離のシステインが配列され、ジスルフィドスクランブルをまったく形成しない。さらに、これは、Ｃｙｓ（システイン付加（ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｔｉｏｎ））又はグルタチオン（グルタチオン付加（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｌａｔｉｏｎ））の付加によって改変されず、重鎖のＬｅｕ４、Ｐｈｅ２７、Ｔｒｐ３３、Ｍｅｔ３４、Ｇｌｕ１０２、及びＬｅｕ１０５の主鎖及び側鎖原子と共にファンデルワールス相互作用（３．５〜４．３Å距離）を生じる（図１４Ｂ）。最後に、Ｃｙｓ１００は、ＣＤＲ１及びＨＣＤＲ３の立体構造を媒介するのに関与するように見える圧倒的に埋没した構造の残基である。したがって、本発明者らの５つの結晶構造におけるこの領域の均一な配置によって観察される場合に、他のシステインとの反応性を有する可能性が低い。
【０１６６】
方法
Ｈ５Ｄ８−１  ＩｇＧは、Ｃａｔａｌｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓから入手し、２５ｍＭヒスチジン、６％スクロース、０．０１％ポリソルベート８０中でｐＨ６．０で調製した。調製されたＩｇＧを、１０Ｋ  ＭＷＣＯ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、大規模にＰＢＳに緩衝液交換し、その後、３７℃で１時間、１：１００マイクログラムのパパイン（Ｓｉｇｍａ）（ＰＢＳ、１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭシステイン中）を用いて消化を行った。パパインで消化されたＩｇＧを、ＡＫＴＡ  Ｓｔａｒｔクロマトグラフィーシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、プロテインＡカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に流した。ｈ５Ｄ８  Ｆａｂを含有するプロテインＡ素通り画分を回収し、１０Ｋ  ＭＷＣＯ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、２０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ５．６）に緩衝液交換した。得られた試料を、ＡＫＴＡ  Ｐｕｒｅクロマトグラフィーシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、Ｍｏｎｏ  Ｓ陽イオン交換カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷した。１Ｍ塩化カリウムのグラジエントを用いる溶離は、顕著なｈ５Ｄ８  Ｆａｂピークをもたらし、これを回収し、濃縮し、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム中で、ｐＨ８．０で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅゲル濾過カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製して、大きさを均一にした。還元及び非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、高純度のｈ５Ｄ８  Ｆａｂが確認された。
【０１６７】
精製されたｈ５Ｄ８  Ｆａｂを、１０Ｋ  ＭＷＣＯ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して２５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。Ｏｒｙｘ  ４ディスペンサー（Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、２０℃で低密度マトリックス９６−コンディションズ（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）市販のスクリーンＪＣＳＧ  ＴＯＰ９６（Ｒｉｇａｋｕ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ）及びＭＣＳＧ−１（Ａｎａｔｒａｃｅ）を用いる蒸気拡散結晶化実験の準備をした。次の５つの結晶化条件：１）０．０８５Ｍクエン酸ナトリウム、２５．５％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ４０００、０．１７Ｍ酢酸アンモニウム、１５％（ｖ／ｖ）グリセロール（ｐＨ５．６）；２）０．１Ｍ  ＭＥＳ、２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ６０００、１Ｍ塩化リチウム（ｐＨ６．０）；３）０．１Ｍ  ＭＥＳ、２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ４０００、０．６Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）；４）０．０８５Ｍ  ＨＥＰＥＳナトリウム、１７％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ４０００、８．５％（ｖ／ｖ）２−プロパノール、１５％（ｖ／ｖ）グリセロール（ｐＨ７．５）；及び５）０．０８Ｍ  Ｔｒｉｓ、２４％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ４０００、０．１６Ｍ塩化マグネシウム、２０％（ｖ／ｖ）グリセロール（ｐＨ８．５）において、４日後に結晶を得、収集した。液体窒素中で瞬間凍結させる前、結晶を含有する母液を、必要に応じて５〜１５％（ｖ／ｖ）グリセロール又は１０％（ｖ／ｖ）エチレングリコールと共に添加した。結晶に、先端放射光施設（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ）でのＸ線シンクロトロン放射、ビームライン２３−ＩＤ−Ｄ（Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を施し、回折パターンを、Ｐｉｌａｔｕｓ３  ６Ｍ検出器で記録した。ＸＤＳを使用してデータを処理し、Ｐｈａｓｅｒを使用して分子置換によって構造を決定した。Ｃｏｏｔでのモデル構築と共に、ＰＨＥＮＩＸでの精密化を実施した。図は、ＰｙＭＯＬで作成した。すべてのソフトウェアは、ＳＢＧｒｉｄを通してアクセスした。
【０１６８】
実施例１９−ｈ５Ｄ８のシステイン１００での変異は結合を維持する
ｈ５Ｄ８の分析から、重鎖の可変領域における第１００位での遊離のシステイン残基（Ｃ１００）が明らかになった。ヒト及びマウスＬＩＦに対する結合及び親和性を特徴付けるために、Ｃ１００をそれぞれ天然に存在するアミノ酸と置換することによって、Ｈ５Ｄ８バリアントを作製した。ＥＬＩＳＡ及びＯｃｔｅｔアッセイを使用して、結合を特徴付けた。結果を表９にまとめて示す。ＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０曲線は、図１５に示す（図１５Ａ  ヒトＬＩＦ及び図１５Ｂ  マウスＬＩＦ）。
【０１６９】
【表９】
2021533084.tif 000011
【０１７０】
方法
ＥＬＩＳＡ：ヒト及びマウスＬＩＦに対するｈ５Ｄ８  Ｃ１００バリアントの結合を、ＥＬＩＳＡによって決定した。組換え型ヒト又はマウスＬＩＦタンパク質を、１μｇ／ｍＬで、４℃で一晩、Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ３８４ウェルプレート上にコーティングした。プレートを、室温で２時間、１×ブロッキング緩衝液でブロッキングした。各ｈ５Ｄ８  Ｃ１００バリアントの段階希釈物（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）を添加し、室温で１時間結合させた。プレートを、ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄した。ＨＲＰ結合抗ヒトＩｇＧを添加し、室温で３０分間結合させた。プレートを、ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄し、１×ＴＭＢ基質を使用して顕色させた。１Ｍ  ＨＣｌを用いて反応を停止させ、４５０ｎｍでの吸収を測定した。図の作成及び非線形回帰分析は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して実施した。
【０１７１】
Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６：ヒト及びマウスＬＩＦに対するｈ５Ｄ８  Ｃ１００バリアントの親和性を、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６システムを使用して、ＢＬＩによって決定した。ｈ５Ｄ８  Ｃ１００バリアントを、１×速度解析緩衝液中での３０秒のベースライン後に、７．５μｇ／ｍＬで、抗ヒトＦｃバイオセンサーに負荷した。ヒト又はマウスＬＩＦタンパク質の段階希釈物（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）を、９０秒間、負荷されたバイオセンサーに結合させ、３００秒間、１×速度解析緩衝液中で解離させた。ＫＤは、１：１グローバルフィットモデルを使用して、データ分析ソフトウェアによって算出した。
【０１７２】
実施例２０−ｈ５Ｄ８はＬＩＦのｇｐ１３０への結合をインビトロで阻止する
ｈ５Ｄ８が、ＬＩＦがＬＩＦＲと結合するのを妨げるかどうかを決定するために、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６  プラットフォームを使用する分子結合アッセイを実施した。Ｈ５Ｄ８を、抗ヒトＦｃ捕捉によってＡＨＣバイオセンサーに負荷した。次いで、バイオセンサーをＬＩＦに浸漬させ、予想通り、結合が観察された（図１６Ａ、３分割の中央）。続いて、バイオセンサーを、異なる濃度のＬＩＦＲに浸漬させた。用量依存性の結合が観察された（図１６Ａ、３分割の右側）。対照実験は、この結合がＬＩＦ特異的であり（図示していない）、ＬＩＦＲとｈ５Ｄ８との、又はバイオセンサーとの非特異的な相互作用に起因しないことを実証した。
【０１７３】
ｈ５Ｄ８とＬＩＦとの結合をさらに特徴付けるために、一連のＥＬＩＳＡ結合実験を行った。Ｈ５Ｄ８とＬＩＦをプレインキュベートし、次いで、組換え型ヒトＬＩＦＲ（ｈＬＩＦＲ）又はｇｐ１３０でコーティングしたプレートに導入した。ｈ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体とコーティング基質との間の結合の欠如は、ｈ５Ｄ８が、ＬＩＦの受容体への結合を何らかの方法で妨害したことを示すであろう。さらに、ＬＩＦと結合しない対照抗体（（−）で示されるアイソタイプ対照）、又は知られている結合部位でＬＩＦと結合する対照抗体（Ｂ０９は、ＬＩＦ結合について、ｇｐ１３０ともＬＩＦＲとも競合しない；ｒ５Ｄ８は、ｈ５Ｄ８のラット親型である）も使用した。ＥＬＩＳＡ結果は、ｈ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体が、ｈＬＩＦＲと結合することが可能である（ｒ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体もそうである）ことを実証し、これらの抗体がＬＩＦ／ＬＩＦＲ結合を妨げないことが示された（図１６Ａ）。対照的に、ｈ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体（及びｒ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体）は、組換え型ヒトｇｐ１３０と結合することが可能ではなかった（図１６Ｂ）。これは、ＬＩＦがｈ５Ｄ８に結合した場合に、ＬＩＦのｇｐ１３０結合部位が影響を受けたことを示す。
【０１７４】
実施例２１−ヒト組織におけるＬＩＦ及びＬＩＦＲ発現
ＬＩＦ及びＬＩＦＲの発現レベルを決定するために、多くの異なる種類のヒト組織に対して、定量的リアルタイムＰＣＲを実施した。図１７Ａ及び１７Ｂに示した平均発現レベルは、１００ｎｇの全ＲＮＡあたりのコピー数として示される。ほとんどの組織は、１００ｎｇの全ＲＮＡあたり少なくとも１００コピーを発現した。ＬＩＦ  ｍＲＮＡ発現は、ヒト脂肪組織（腸間膜−回腸［１］）、血液−血管組織（脈絡膜−神経叢［６］及び腸間膜［８］）、及び臍帯［６８］組織において最も高く、脳組織（皮質［２０］及び黒質［２８］）において最も低かった。ＬＩＦＲ  ｍＲＮＡ発現は、ヒト脂肪組織（腸間膜−回腸［１］）、血管組織（肺［９］）、脳組織［１１−２８］、及び甲状腺［６６］組織において最も高く、ＰＢＭＣ［３１］において最も低かった。カニクイザル組織におけるＬＩＦ及びＬＩＦＲ  ｍＲＮＡ発現レベルは、ヒト組織において観察されるものと同様であり、ここでは、ＬＩＦ発現は、脂肪組織において高く、また、ＬＩＦＲ発現は、脂肪組織において高く、ＰＢＭＣにおいて低かった（データは示していない）。
【０１７５】
図１７Ａ及び図１７Ｂについての組織番号付けは、以下である：１−脂肪（腸間膜−回腸）；２−副腎；３−膀胱；４−膀胱（三角部）；５−血液−血管（大脳：中大脳−動脈）；６−血管（脈絡膜−神経叢）；７−血管（冠動脈）；８−血管（腸間膜（結腸））；９−血管（肺）；１０−血管（腎臓）；１１−脳（扁桃体）；１２−脳（尾状核）；１３−脳（小脳）；１４  脳−（皮質：帯状皮質−前）；１５−脳（皮質：帯状皮質−後）；１６−脳（皮質：前頭皮質−外側部）；１７−脳（皮質：前頭皮質−内側部）；１８−脳（皮質：後頭）；１９−脳（皮質：頭頂葉）；２０−脳（皮質：側頭）；２１−脳（背側縫線核）；２２−脳（海馬）；２３−脳（視床下部：前部）；２４−脳（視床下部：後部）；２５−脳（青斑核）；２６−脳（延髄）；２７−脳（側坐核）；２８−脳（黒質）；２９−乳房；３０−盲腸；３１−末梢血単核球（ＰＢＭＣ）；３２−結腸；３３−後根神経節（ＤＲＧ）；３４−十二指腸；３５−ファロピウス管；３６−胆嚢；３７−心臓（左心房）；３８−心臓（左心室）；３９−回腸；４０−空腸；４１−腎臓（皮質）；４２−腎臓（髄質）；４３−腎臓（骨盤）；４４−肝臓（実質）；４５−肝臓（気管支：主）；４６−肝臓（気管支：３次）；４７−肺（実質）；４８−リンパ腺（扁桃）；４９−筋肉（骨格筋）；５０−食道；５１−卵巣；５２−膵臓；５３−松果体；５４−脳下垂体；５５−胎盤；５６−前立腺；５７−直腸；５８−皮膚（包皮）；６９−脊髄；６０−脾臓（実質）；６１−胃（前庭部）；６２−胃（体部）；６３−胃（底部）；６４−胃（幽門管）；６５−精巣；６６−甲状腺；６７−気管；６８−臍帯；６９−尿管；７０−子宮（頸部）；７１−子宮（筋層）；及び７２−精管。
【０１７６】
実施例２２−皮下腫瘍移植モデルにおける、シスプラチン、ドキソルビシン、又はパクリタキセルと組み合わせたｈ５Ｄ８
皮下移植されたＣＴ２６モデルにおいて、シスプラチン、ドキソルビシン、又はパクリタキセルと組み合わせたｈ５Ｄ６の有効性を評価した。ＣＴ２６細胞は、１０％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシン（どちらも１００μｇ／ｍｌ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。ＢＡＬＢ／ｃマウスに１０，０００細胞／マウスを皮下移植し、マウスを、ｈ５Ｄ８（１５ｍｇ／ｋｇ）（週２回）、及び／又はシスプラチン（１０ｍｇ／ｋｇ）（週１回）、パクリタキセル（１５ｍｇ／ｋｇ）（週２回）、ドキソルビシン（４ｍｇ／ｋｇ）（週１回）のうちの１つで治療した。治療コホートあたりのマウスは１２匹であった。腫瘍体積及びマウス重量は、ノギスを使用して週２回測定した。
【０１７７】
図１８に示した通り、シスプラチンとｈ５Ｄ８との組み合わせで治療されたマウスは、シスプラチン又はｈ５Ｄ８単独で治療されたマウスと比較した場合、ＣＴ２６腫瘍増殖の低下を呈した。図１９Ａに示した通り、ドキソルビシンとｈ５Ｄ８との組み合わせで治療されたマウスは、ドキソルビシン又はｈ５Ｄ８単独で治療されたマウスと比較した場合、ＣＴ２６腫瘍増殖の低下を示さなかった。図１９Ｂに示した通り、パクリタキセルとｈ５Ｄ８との組み合わせで治療されたマウスは、パクリタキセル又はｈ５Ｄ８単独で治療されたマウスと比較した場合、ＣＴ２６腫瘍増殖の低下を示さなかった。第２１日の終点で測定されたすべての治療群におけるすべての動物についての腫瘍体積を、表１０に示す。
【０１７８】
【表１０】
2021533084.tif 000012
【０１７９】
実施例２３−皮内腫瘍移植モデルにおけるｈ５Ｄ８とシスプラチンの組み合わせ
皮内移植されたＣＴ２６モデルにおいて、シスプラチン、ドキソルビシン、又はパクリタキセルと組み合わせたｈ５Ｄ６の有効性を評価した。ＣＴ２６細胞は、１０％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシン（どちらも１００μｇ／ｍｌ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。ＢＡＬＢ／ｃマウスに５０，０００細胞／マウスを皮内移植し、マウスを、ｈ５Ｄ８（１５ｍｇ／ｋｇ）（週２回）及び／又はシスプラチン（１０ｍｇ／ｋｇ）（週１回）で治療した。治療コホートあたりのマウスは１２匹であった。腫瘍体積及びマウス重量は、ノギスを使用して週２回測定した。
【０１８０】
図２０に示した通り、シスプラチンとｈ５Ｄ８との組み合わせで治療されたマウスは、シスプラチン又はｈ５Ｄ８単独で治療されたマウスと比較した場合、ＣＴ２６腫瘍増殖の低下を呈した。第２１日の終点で測定されたすべての治療群におけるすべての動物についての腫瘍体積を、表１１に示す。
【０１８１】
【表１１】
2021533084.tif 000013
【０１８２】
本発明の好ましい実施形態を、本明細書に提示及び記載してきたが、こうした実施形態が、ほんの一例として提供されるに過ぎないことが、当業者には明らかであろう。本発明から逸脱しない多数の変更、改変、及び置換が、当業者には直ちに思い浮かぶであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する種々の代替物を、本発明を実施する際に用いることができることが理解されよう。
【０１８３】
本明細書において言及したすべての刊行物、特許出願、発行された特許、及び又は文書は、それぞれ個々の刊行物、特許出願、発行された特許、及び他の文書が、あたかも具体的且つ個々にその全体を参照によって組み込まれることが示されるがごとく、参照により本明細書に組み込む。参照によって組み込まれる本文に含有される定義は、それらがこの開示における定義と矛盾する限りは除外される。
【０１８４】
配列
【表１２】
2021533084.tif 000014
【０１８５】
【表１３】
2021533084.tif 000015
【０１８６】
【表１４】
2021533084.tif 000016
【０１８７】
【表１５】
2021533084.tif 000017
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１０−５】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１１−３】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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