(57)【要約】  本開示は、キメラ貪食受容体およびキメラ抗原受容体／またはＴ細胞受容体結合タンパク質により改変した免疫細胞または細胞サブセットの組合せを含む細胞免疫療法組成物、およびそのような細胞免疫療法組成物を使用する方法に関する。
2021519301.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第２のＣＥＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含むキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
細胞内シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項４】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＢ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
細胞内シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項５】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＢ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項６】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＢ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
細胞内シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項７】
（ａ）第１の標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
貪食シグナル伝達ドメインと、
細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインと
を含む第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＢ細胞を含む第１の組成物、および
（ｂ）第２の標的抗原に結合する組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物
を含む組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項８】
ＣＡＲの結合ドメインが、ｓｃＦｖを含む、請求項２、４または６のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項９】
ＣＡＲの細胞外ドメインが、スペーサードメインをさらに含む、請求項２、４、６または８のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１０】
ＣＡＲの膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５またはＺａｐ７０膜貫通ドメインを含む、請求項２、４、６、８または９のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１１】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２およびＣＤ６６ｄシグナル伝達ドメインから選択されるＩＴＡＭ含有活性化シグナル伝達ドメインを含む、請求項２、４、６および８〜１０のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１２】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２ＣおよびＢ７−Ｈ３シグナル伝達ドメインから選択される第１の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む、請求項２、４、６および８〜１１のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１３】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２ＣおよびＢ７−Ｈ３シグナル伝達ドメインから選択される第２の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む、請求項２、４、６および８〜１２のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１４】
ＣＡＲが、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、第３世代ＣＡＲまたはＴＣＲ−ＣＡＲである、請求項２、４、６および８〜１３のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１５】
ＣＡＲの第２の標的抗原が、腫瘍抗原、ウイルス抗原または寄生生物抗原である、請求項２、４、６および８〜１４のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１６】
ＣＡＲの第２の標的抗原が、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ−Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ−３、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ＭＵＣ−１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ−α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＡＧ−７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイス式Ａ抗原、ルイス式Ｙ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＲＡＧＥ−１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ−２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ−４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ−アセチル−ＧＤ２またはＧＤ２から選択される腫瘍抗原である、請求項１５に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１７】
組換えＴＣＲが、αβＴＣＲ、γδＴＣＲ、高親和性ＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、単鎖ＴＣＲまたは単一可変ドメインＴＣＲである、請求項３、５または７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１８】
組換えＴＣＲの第２の標的抗原が、ＷＴ−１、メソテリン、ＭＡＲＴ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＨＰＶ  Ｅ７、サバイビン、αフェトプロテインまたは腫瘍新生抗原である、請求項３、５、７または１７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項１９】
ＣＥＲの結合ドメインが、ｓｃＦｖ、受容体外部ドメインまたはリガンドを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２０】
ＣＥＲの細胞外ドメインが、スペーサードメインをさらに含む、請求項１〜７および１９のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２１】
ＣＥＲの膜貫通ドメインが、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ４、Ｔｉｍ３、ＦｃＲ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＭＥＲＴＫ、Ａｘｌ、Ｔｙｒｏ３、ＢＡＩ１、ＣＤ４、ＤＡＰ１２、ＭＲＣ１、ＦｃＲ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む、請求項１〜７、１９および２０のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２２】
ＣＥＲの貪食シグナル伝達ドメインが、ＭＥＲＴＫ、Ｔｙｒｏ３、ＩｔｇＢ５、ＭＲＣ１、ＥＬＭＯ、Ａｘｌ、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＣＤ７９ｂ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、Ｔｒａｆ６、Ｔｒａｆ２またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜７および１９〜２１のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２３】
ＣＥＲの貪食シグナル伝達ドメインが、一次貪食シグナル伝達ドメインおよび二次貪食シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜７および１９〜２２のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２４】
ＣＥＲの一次貪食シグナル伝達ドメインおよび二次貪食シグナル伝達ドメインが、異なる、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
ＣＥＲの一次貪食シグナル伝達ドメインおよび二次貪食シグナル伝達ドメインが各々独立して、ＭＥＲＴＫ、Ｔｙｒｏ３、ＩｔｇＢ５、ＭＲＣ１、ＥＬＭＯ、Ａｘｌ、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、ＣＤ７９ｂ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、Ｔｒａｆ６、Ｔｒａｆ２およびＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインから選択される、請求項２３または２４に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２６】
ＣＥＲの第１の標的抗原が、プロ貪食マーカー、腫瘍抗原、ウイルス抗原または寄生生物抗原である、請求項１〜７および１９〜２５のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２７】
第１の標的抗原および第２の標的抗原が、同じ標的抗原または異なる標的抗原である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２８】
プロ貪食マーカーが、ホスファチジルセリンである、請求項２６に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項２９】
ＣＥＲの結合ドメインが、ホスファチジルセリンに結合するＴｉｍ４結合ドメインを含む、請求項２８に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３０】
ＣＥＲの第１の標的抗原が、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ−Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ−３、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ＭＵＣ−１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ−α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＡＧ−７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイス式Ａ抗原、ルイス式Ｙ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＲＡＧＥ−１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ−２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ−４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ−アセチル−ＧＤ２またはＧＤ２である、請求項２６または２７に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３１】
ＣＥＲが、表１に列挙されるＣＥＲのいずれか１つである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３２】
ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞またはセントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３３】
ＣＤ８＋Ｔ細胞が、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞またはセントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項１〜３、６および７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３４】
Ｂ細胞が、ナイーブＢ細胞またはメモリーＢ細胞である、請求項４〜７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３５】
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞またはそれらの任意の組合せが、ヒト細胞である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３６】
組成物におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ８＋Ｔ細胞に対する比が、約１：１、１：２、１：４、１：８、１：１０または１：２０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３７】
組成物におけるＢ細胞のＴ細胞に対する比が、約１：１、１：２、１：４、１：８、１：１０または１：２０である、請求項４〜７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３８】
第１の組成物および第２の組成物が各々、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項３９】
第１の組成物および第２の組成物が、同じ製剤において、または別々の製剤において存在する、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物。
【請求項４０】
対象において疾患を治療する方法であって、有効量の請求項１〜３９のいずれか一項に記載の組合せ細胞免疫療法組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項４１】
疾患が、がん、細菌感染、ウイルス感染、寄生生物感染、自己免疫疾患または神経変性疾患である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
がんが、固形腫瘍、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞癌、腎がん、血液がん、前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん、結腸がん、直腸がん、胃がん、食道がん、膀胱がん、頭頸部がん、甲状腺がん、乳がん、三種陰性乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、尿路上皮がん、膵がん、神経膠芽腫、肝細胞がん、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、脳がん、ＣＮＳがんまたは悪性神経膠腫である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞が対象にとって自家または同種異系であるか、ＣＤ８＋Ｔ細胞が対象にとって自家または同種異系であるか、Ｂ細胞が対象にとって自家または同種異系であるか、またはこれらの任意の組合せである、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
組合せ細胞免疫療法組成物が、追加の治療剤と組み合わせて投与される、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
追加の治療剤が、抗体、放射線療法、化学療法剤、免疫チェックポイント分子阻害剤療法、小分子療法、細胞免疫療法、腫瘍溶解性ウイルス、電気パルス療法、ＵＶ光療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス、ペプチド、ホルモン、アプタマー、抗炎症剤、抗生物質、抗真菌剤または抗ウイルス剤である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
第１の組成物および第２の組成物が、対象に同時に、または連続して投与される、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
第１の組成物が、第２の組成物の約１〜７日後に投与される、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列リストについての申告
本出願に伴う配列リストを、用紙複写物の代わりにテキスト形式において提供し、これによって参照により本明細書に組み込む。配列リストを含有するテキストファイルの名称は、２００２６５＿４０７ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキストファイルは４７９ＫＢであり、２０１９年３月２６日に創出され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【背景技術】
【０００２】
がん抗原に対してターゲティングした遺伝子操作した受容体により改変した免疫細胞（例えばＴ細胞）の使用は、血液系腫瘍において臨床的成功を実証した（例えば白血病におけるＣＤ１９特異的キメラ抗原受容体療法）。少数の例を挙げると、ＣＥＡ、ＧＤ２、メソテリン、ＩＬ１３Ｒα、ＨＥＲ２、ＦＡＰおよびＬ１ＣＡＭをターゲティングする、操作した受容体を使用する、固形腫瘍の治療における養子細胞免疫療法についてのいくつかの臨床治験が進行中である。操作した受容体には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）および高親和性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ：Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）が含まれる。しかしながら、固形腫瘍の治療は、腫瘍部位への輸送、腫瘍微小環境への物理的障壁、ストレス性代謝状勢および免疫抑制機構（例えば免疫チェックポイント分子の発現、阻害性サイトカインの産生）を含む独特な問題を提示する。養子免疫療法治療における免疫細胞の持続性および活性を増強する努力は現在進行中である。
【図面の簡単な説明】
【０００３】
【図１】図１は、本開示の細胞免疫療法組成物の組合せによる細胞除去についての特徴的な機構を示す概略図である。キメラ貪食受容体（ＣＥＲ：Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｅｎｇｕｌｆｍｅｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）発現細胞（右）は、食作用機構を利用して、標的細胞を内部移行し、これを細胞区画内で死滅させ、一方で、ＣＡＲまたはＴＣＲ発現細胞（左）は、グランザイムおよびパーフォリン等の細胞溶解分子の放出、または「ポップ」細胞へのデスリガンド（例えばＦａｓリガンド）の誘導を通して標的細胞を細胞溶解する。細胞溶解性細胞および食作用性細胞を有する細胞免疫療法組成物の組合せを利用して、養子細胞療法（ＡＣＴ：ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ）を向上させることができる。
【図２】図２は、細胞溶解および貪食を通して標的細胞を除去する改変免疫細胞の組合せを利用する養子細胞免疫療法についての本開示の例示的な治療手法を示す概略図である。白血球除去（ｌｅｕｋａｐｈａｒｅｓｉｓ）後、グラフトを規定の細胞集団に分ける。ＣＤ４＋Ｔ細胞に、標的細胞を特に貪食するために食作用機構を利用するキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を形質導入する。ＣＤ８＋Ｔ細胞に、抗原特異的細胞溶解を促進するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を形質導入する。その後、細胞をエクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で拡大増殖させ、規定の比において患者に再導入し、患者において細胞は抗原発現腫瘍細胞をターゲティングする。食作用様式および細胞溶解様式の両方の細胞除去を利用する自家細胞注入は、組合せで作用する。
【図３】図３は、例示的なインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）共培養実験についての概略図である。ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化し、ヒトパピローマウイルス１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７タンパク質特異的ＴＣＲをコードするレンチウイルスカセットを形質導入し、一方で、同じグラフトからのＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化し、ＣＥＲをコードするレンチウイルスを形質導入した。両方の組の細胞を、エクスビボで拡大増殖させ、１：１の比において組み合わせ、ＨＰＶ１６  Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）と共培養した。
【図４】図４は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および対照またはｘ軸に示す通りに選択したＣＥＲのいずれかを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞数を示す棒グラフである。カスパーゼの強度を、活性化カスパーゼ３／７認識モチーフを、切断に際して蛍光を発する赤色試薬とカップリングさせるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光（ｆｌｕｒｏｅｓｃｅｎｃｅ）の強度を定量することによって測定した。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を、６時間後に共培養アッセイに添加し、ＢＺ−Ｘ７１０  Ｋｅｙｅｎｃｅ顕微鏡を使用して、かつハイブリッドキャプチャーソフトウェアを使用して蛍光を検出した。標的ＳＣＣ１５２細胞［緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ：ｇｒｅｅｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を形質導入した］を、同様に決定した。Ｙ軸は、カスパーゼ陽性標的％（カスパーゼ事象数／ＧＦＰ標的細胞数）＊１００を表す。
【図５】図５は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および対照またはｘ軸に示す通りに選択したＣＥＲのいずれかを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する共培養アッセイから定量した標的ＳＣＣ１５２細胞におけるカスパーゼの強度を示す棒グラフである。カスパーゼの強度を、活性化カスパーゼ３／７認識モチーフを、切断に際して蛍光を発する赤色試薬とカップリングさせるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光の強度を定量することによって測定した。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を、６時間後に共培養アッセイに添加し、ＢＺ−Ｘ７１０  Ｋｅｙｅｎｃｅ顕微鏡を使用して、かつハイブリッドキャプチャーソフトウェアを使用して蛍光を検出した。Ｙ軸は、任意単位（ａ．ｕ．：ａｒｂｉｔｒａｒｙ  ｕｎｉｔ）におけるカスパーゼ試薬の強度を表す。
【図６】図６は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および対照を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図７】図７は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図８】図８は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図９】図９は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１９を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１０】図１０は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２１を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１１】図１１は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２３を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１２】図１２は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１３】図１３は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１４】図１４は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０３Ｂを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１５】図１５は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０４を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１６】図１６は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１７】図１７は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１８】図１８は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）を、ＳＣＣ１５２細胞（緑色）と１：１の比において含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナル（代表的な赤色シグナルを白色矢印により示す）は、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図１９】図１９は、様々な標的細胞：エフェクター細胞比（０．５：１、１：１、１：２．５、１：５、１：１０、１：２０）における、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０４を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞の、ＳＣＣ１５２標的細胞と１：１の比における共培養の４時間後に行った乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ：ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）細胞傷害性アッセイを示す棒グラフである。
【図２０】図２０は、経時的なＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋頭頸部扁平上皮癌細胞の定量の棒グラフを示す。標的ＳＣＣ１５２細胞を、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞、または対照（ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋形質導入対照）と１：１：１の比において共培養した。画像化ソフトウェアを使用して標的細胞数を定量した。左から右へ０時間、２４時間および４８時間を示す。
【図２１】図２１は、ＳＣＣ１５２標的細胞と１：１：１の比においてインキュベートしたＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ５、ＣＥＲ１７またはＣＥＲ１９を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含む９６ウェル共培養実験からの微速度画像である。自動細胞カウントソフトウェアを使用して、ＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋標的細胞を定量した。ＳＣＣ１５２細胞は、対照（ＣＤ８＋Ｔ細胞ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲおよびＣＤ４＋Ｔ細胞対照）と比較して、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ５、ＣＥＲ１７またはＣＥＲ１９を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養において、経時的に数が減少していることが示される。
【図２２】図２２は、ＳＣＣ１５２標的細胞と１：１：１の比においてインキュベートしたＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３またはＣＥＲ２６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含む９６ウェル共培養実験からの微速度画像である。自動細胞カウントソフトウェアを使用して、ＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋標的細胞を定量した。ＳＣＣ１５２細胞は、対照（ＣＤ８  Ｔ細胞ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲおよびＣＤ４  Ｔ細胞対照）と比較して、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３またはＣＥＲ２６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養において、経時的に数が減少していることが示される。
【図２３】図２３は、ＳＣＣ１５２標的細胞と１：１：１の比においてインキュベートしたＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０３ｂ、ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１０５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含む９６ウェル共培養実験からの微速度画像である。自動細胞カウントソフトウェアを使用して、ＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋標的細胞を定量した。ＳＣＣ１５２細胞は、対照（ＣＤ８＋Ｔ細胞ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲおよびＣＤ４＋Ｔ細胞対照）と比較して、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０３ｂ、ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１０５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養において、経時的に数が減少していることが示される。
【図２４】図２４は、ＳＣＣ１５２標的細胞と１：１：１の比においてインキュベートしたＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０６、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ２７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含む９６ウェル共培養実験からの微速度画像である。自動細胞カウントソフトウェアを使用して、ＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋標的細胞を定量した。ＳＣＣ１５２細胞は、対照（ＣＤ８＋Ｔ細胞ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲおよびＣＤ４対照）と比較して、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１０６、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ２７を形質導入したＣＤ４  Ｔ細胞との共培養において、経時的に数が減少していることが示される。
【図２５】図２５は、９６ウェル共培養実験からの微速度画像である。ＳＣＣ１５２標的細胞をＣＤ４＋Ｔ細胞（対照）とインキュベートし、自動細胞カウントソフトウェアを使用して定量した。対照ＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養におけるＳＣＣ１５２細胞は、経時的に数が減少しない。
【図２６】図２６は、共培養実験における経時的なカスパーゼ３／７誘導を示す線グラフである。グラフは、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および対照または選択したＣＥＲのいずれかを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞数を示す。カスパーゼの強度を、活性化カスパーゼ３／７認識モチーフを、切断に際して蛍光を発する赤色試薬とカップリングさせるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光の強度を定量することによって測定した。共培養アッセイの２、６、８および１０時間において測定を行った。
【図２７】図２７は、ＳＣＣ１５２細胞の、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養に際して誘発されたエフェクターサイトカインプロファイルの向上を示す３Ｄ棒グラフである。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞を、選択したＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を１：１の比において伴って、ＳＣＣ１５２標的細胞に１：１のエフェクター：標的細胞比になるように共投与した。メソスケールマルチアレイサイトカインプレートを使用して各共培養実験からの細胞上清中のサイトカイン濃度を測定することによって、抗原特異的サイトカイン分泌を決定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲおよびＣＤ４＋Ｔ細胞／ＣＥＲの組合せは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲ単独または切断型ＥＧＦＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞と組み合わせたＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲに優る、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＬ−１３応答の向上をもたらした。アッセイにおいて以下のサイトカイン：ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｂ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１ｂおよびＩＬ−１０を測定した。棒は、前から後ろへ：非形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞；ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞；ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＥＧＦＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞；ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋およびＣＥＲ２１を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞；ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋およびＣＥＲ２５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞；ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋およびＣＥＲ２９を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞；ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋およびＣＥＲ３１を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞；ならびにＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋およびＣＥＲ１１２を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を示す。
【図２８】図２８は、ＳＣＣ１５２標的細胞のＣＤ４＋Ｔ細胞−ＣＥＲ媒介食作用の定量を表す棒グラフである。結果は、共培養アッセイの開始４時間後の、３Ｘ３  ４０ｘ画像から［（食作用標的事象数）／（エフェクターの総数）］＊１００として計算した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（ＣＥＲ５、ＣＥＲ１７、ＣＥＲ１９、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３、ＣＥＲ２６、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０３ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０５、ＣＥＲ１０６またはＣＥＲ１１６）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２頭頸部扁平上皮癌標的細胞と共に１：１：０．５の比において４時間共培養し、画像化した。
【図２９】図２９は、ＳＣＣ１５２標的細胞のＣＤ４＋Ｔ細胞−ＣＥＲ媒介食作用の定量を表す棒グラフである。結果は、共培養アッセイの開始４時間後の、３Ｘ３  ４０ｘ画像から（エフェクター細胞における標的事象の面積比中央値＊食作用％）として計算した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（ＣＥＲ５、ＣＥＲ１７、ＣＥＲ１９、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３、ＣＥＲ２６、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０３ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０５、ＣＥＲ１０６またはＣＥＲ１１６）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２頭頸部扁平上皮癌標的細胞と共に１：１：０．５の比において４時間共培養し、画像化した。
【図３０】図３０は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＤ４＋Ｔ細胞形質導入対照（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３１】図３１は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３２】図３２は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３３】図３３は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１９を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３４】図３４は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ２１を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３５】図３５は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ２３を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３６】図３６は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ２６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３７】図３７は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ２７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３８】図３８は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１０３ｂを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図３９】図３９は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１０４を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図４０】図４０は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１０５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図４１】図４１は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１０６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図４２】図４２は、４時間共培養アッセイにおける、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および切断型ＥＧＦＲタグ（非染色）、ＣＥＲ１１６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）およびＳＣＣ１５２標的細胞（赤色）の、４０Ｘの蛍光顕微鏡写真である（左パネル）。青色エフェクター細胞内の赤色標的事象について採点することによって、食作用事象を特定した。これらの事象を、ハイブリッドキャプチャーソフトウェア（Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０）によって定量して、食作用を受けた標的数、エフェクター細胞の総数およびエフェクター細胞における食作用を受けた標的細胞によって占有された面積（右パネル）を提供した。
【図４３】図４３は、ＴＲＡＦシグナル伝達ドメインを含有する様々なＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞とＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞との組合せが、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ単独の投与と比較して、カスパーゼ誘導によって測定される通り標的ＳＣＣ１５２細胞の細胞溶解を向上させることを示す棒グラフである。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したヒト初代ＣＤ８＋Ｔ細胞を、単独で、または本開示の選択したＣＥＲ（左から右へ：対照、ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１５、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞と１：１（ＣＤ４：ＣＤ８）の比において組み合わせて、ＳＣＣ１５２細胞と共培養した。活性化カスパーゼ３／７認識モチーフを、切断に際して蛍光を発する赤色試薬とカップリングさせるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光の強度を定量することによって、共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞数を測定した。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を、６時間後に共培養アッセイに添加し、ＢＺ−Ｘ７１０  Ｋｅｙｅｎｃｅ顕微鏡を使用して、かつハイブリッドキャプチャーソフトウェアを使用して蛍光を検出した。標的ＳＣＣ１５２細胞に、可視化のために緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を形質導入した。Ｙ軸は、（カスパーゼ事象数／ＧＦＰ標的ＳＣＣ１５２細胞数）＊１００を表す。
【図４４】図４４は、ＴＲＡＦシグナル伝達ドメインを含有する様々なＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞とＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞との組合せが、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ単独の投与と比較して、カスパーゼ誘導によって測定される通り標的ＳＣＣ１５２細胞の細胞溶解を向上させることを示す棒グラフである。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したヒト初代ＣＤ８＋Ｔ細胞を、単独で、または本開示の様々なＣＥＲ（左から右へ：対照、ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１５、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞と１：１（ＣＤ４：ＣＤ８）の比において組み合わせて、ＳＣＣ１５２細胞と共培養した。活性化カスパーゼ３／７認識モチーフを、切断に際して蛍光を発する赤色試薬とカップリングさせるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光の強度を定量することによって、共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞数を測定した。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を、６時間後に共培養アッセイに添加し、ＢＺ−Ｘ７１０  Ｋｅｙｅｎｃｅ顕微鏡を使用して、かつハイブリッドキャプチャーソフトウェアを使用して蛍光を検出した。Ｙ軸は、任意単位（ａ．ｕ．）におけるカスパーゼ試薬の強度を表す。
【図４５】図４５は、１：１（ＣＤ８：ＣＤ４）の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞形質導入対照（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図４６】図４６は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ２９を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図４７】図４７は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ３０を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図４８】図４８は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１０を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図４９】図４９は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１２を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図５０】図５０は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１３を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図５１】図５１は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１４を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図５２】図５２は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１５を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図５３】図５３は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１６を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図５４】図５４は、１：１の比におけるＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＥＲ１１７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞（青色）、ならびに頭頸部扁平上皮癌ＳＣＣ１５２細胞（緑色）を含有する共培養アッセイの蛍光顕微鏡写真である。赤色シグナルは、６時間後に共培養アッセイに添加されたカスパーゼ試薬からの蛍光シグナルである。
【図５５】図５５は、ＳＣＣ１５２標的細胞のＣＤ４＋Ｔ細胞−ＣＥＲ媒介食作用の定量を表す棒グラフである。食作用パーセントを［（食作用標的事象数）／（エフェクター細胞の総数）］＊１００として計算した。これらの数を、共培養アッセイの開始４時間後にＫｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０蛍光顕微鏡によって４０ｘ解像度により捕えた３Ｘ３画像から計算した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２標的細胞と共に１：１：０．５（ＣＤ８：ＣＤ４：標的細胞）の比において４時間共培養し、画像化した。
【図５６】図５６は、ＳＣＣ１５２標的細胞のＣＤ４＋Ｔ細胞−ＣＥＲ媒介食作用の定量を表す棒グラフである。補正済み食作用指数を、（エフェクター細胞における標的事象の面積比中央値＊食作用％）として計算した。これらの数を、共培養アッセイの開始４時間後にＫｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７１０蛍光顕微鏡によって４０ｘ解像度により捕えた３Ｘ３画像から計算した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２標的細胞と共に１：１：０．５（ＣＤ８：ＣＤ４：標的細胞）の比において４時間共培養し、画像化した。
【図５７】図５７は、共培養アッセイ中の経時的なＳＣＣ１５２  ＨＰＶ１６＋標的細胞の喪失の定量を示す棒グラフである。ＳＣＣ１５２細胞に、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を形質導入し、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞対照と共に１：１：１（ＣＤ８：ＣＤ４：標的細胞）の比において共培養した。蛍光顕微鏡および画像化ソフトウェアを使用して、共培養中の様々な時点（０時間、１２時間、２４時間および３６時間）において標的細胞数を定量した。いくつかのＣＥＲ（ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６およびＣＥＲ１１７）は、３６時間において標的ＳＣＣ１５２細胞のほぼ完全なクリアランスを示した。
【図５８】図５８は、図５７において説明する共培養アッセイの蛍光顕微鏡画像であり、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（左から右の列へ：対照、ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０またはＣＥＲ１１２）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養が進行するにつれた（上から下の行へ：０時間、１２時間、２４時間および３６時間）、ＳＣＣ１５２細胞（桃色）のクリアランスを示す。
【図５９】図５９は、図５７において説明する共培養アッセイの蛍光顕微鏡画像であり、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲ（左から右の列へ：対照、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養が進行するにつれた（上から下の行へ：０時間、１２時間、２４時間および３６時間）、ＳＣＣ１５２細胞（桃色）のクリアランスを示す。
【図６０】図６０Ａ〜６０Ｂは、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２細胞の食作用の分析を示す。図６０Ａは、ＣＥＲの種類によるＣＤ４＋Ｔ細胞食作用の規模幅曲線を示す。図６０Ｂは、ＣＤ４＋ＣＥＲ１２６形質導入Ｔ細胞によって貪食されるＳＣＣ１５２標的細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。上部の画像は、下部左の画像内の細胞の拡大であり、ＣＥＲ１２６形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞によって貪食されるＳＣＣ１５２細胞を示す。下部左の画像は、ＣＥ１２６Ｒ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞によって貪食されるＳＣＣ１５２細胞（ｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにより染色した）を示し；下部右の画像は、ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ  ｖｉｏｌｅｔにより照明されたＣＥＲ１２６形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞を示す同じ顕微鏡写真である。白色矢印は、Ｅ７特異的ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞を示し、これはｐＨｒｏｄｏ  Ｒｅｄ陰性である（図６０Ｂの下部左パネル）。食作用のソフトウェア描出（図６０Ｂの下部右パネル）。
【図６１】図６１は、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＥ７特異的ＴＣＲ  ＣＤ８＋Ｔ細胞共培養実験からのサイトカイン分泌を示す。ＣＥＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞の、Ｅ７特異的ＴＣＲ発現ＣＤ８＋Ｔ細胞への添加は、ＩＦＮγ分泌レベルを向上させた。
【図６２】図６２は、例示的な抗原提示アッセイの概略図を示す。食作用アッセイ工程において、ＣＥＲを発現するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞系を、ＨＰＶ  Ｅ７特異的ＴＣＲを発現するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞、ならびにＳＣＣ１５２（ＨＰＶ＋）細胞と共に一晩共培養した。翌日、続いてＣＥＲ＋Ｔ細胞をＦＡＣＳソーティングした。ＦＡＣＳプロットは、ＣＴ  ｖｉｏｌｅｔ＋  ＣＥＲを示す。ＦＡＣＳ精製後、ＨＰＶ腫瘍性タンパク質の抗原提示を査定した。ＣＥＲ発現細胞を、Ｅ６およびＥ７特異的ＴＣＲ／ＮＦＡＴレポーター細胞系と共に１：２の比において共培養し、ＮＦＡＴ活性化を、プレートリーダーを使用して経時的に測定した。
【図６３】図６３は、図６２の概略図において示される通り、ＨＰＶ＋腫瘍細胞およびＣＤ４＋／ＣＤ８＋  Ｅ７  ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞と共培養したＣＤ４＋およびＣＤ８＋  ＣＥＲ１２３形質導入Ｔ細胞との共培養後の、ＮＦＡＴレポーター遺伝子を含むＥ６／Ｅ７  ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞におけるＮＦＡＴ活性化の線グラフを示す。ＣＥＲ発現ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞系は、ＨＰＶ＋腫瘍細胞に対して食作用を示した後、ＮＦＡＴ活性化によって測定される通り、Ｅ７  ＨＰＶ腫瘍性タンパク質を、Ｅ７  ＴＣＲ／ＮＦＡＴレポーター発現Ｔ細胞に交差提示することができる。
【図６４】図６４Ａ〜６４Ｂは、ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞の抗原遭遇に際してのマスサイトメトリーデータのｖｉＳＮＥマップを示す。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞を、Ｅ７特異的ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、その後、マスサイトメトリー（ＣｙＴｏｆ）によって調べた。インタクトなＣＥＲ−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１およびｔＳＮＥ２軸を示すプロットにおいて示される。ｖｉＳＮＥ分析のために９つの細胞内マーカーを使用した。各点は、単一の細胞を表す。図６４Ａ：測定したマーカー（ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ１ｂ、パーフォリン、ＴＮＦ、ＩＬ−１７、グランザイムＢ、ＩＬ−４、ＩＬ−２およびＩＦＮγ）のうちのいくつかによってプロットに色を付けると、ｖｉＳＮＥ「島」にわたり表現型が示される。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。図６４Ｂ：全ての３２個のマーカーからのクラスター化アルゴリズムを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞集団を生成し、ｖｉＳＮＥマップ上にオーバーレイした。矢印は、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６およびＣＥＲ１１７を含有する試料における細胞内マーカーＩＦＮγを発現する島の富化を示す。
【図６５】図６５Ａ〜６５Ｂは、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞の抗原遭遇に際してのマスサイトメトリーデータのｖｉＳＮＥマップを示す。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞を、Ｅ７特異的ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、その後、マスサイトメトリー（ＣｙＴｏｆ）によって調べた。インタクトなＣＥＲ−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１およびｔＳＮＥ２軸を示すプロットにおいて示される。ｖｉＳＮＥ分析のために１８個の細胞表面マーカーを使用した。各点は、単一の細胞を表す。図６５Ａ：全ての１８個のマーカーからのクラスター化アルゴリズムを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞集団を生成し、ｖｉＳＮＥマップ上にオーバーレイした。矢印は、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６を含有する試料におけるＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現する島の富化を示す。図６５Ｂ：色プロットは、ｖｉＳＮＥ「島」にわたる表現型を示す。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。強調した領域は、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現する細胞を示す。
【図６６】図６６Ａ〜６６Ｂは、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞の抗原遭遇に際してのマスサイトメトリーデータのｖｉＳＮＥマップを示す。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞を、Ｅ７特異的ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、その後、マスサイトメトリー（ＣｙＴｏｆ）によって調べた。インタクトなＣＥＲ−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１およびｔＳＮＥ２軸を示すプロットにおいて示される。ｖｉＳＮＥ分析のために１８個の細胞表面マーカーを使用した。各点は、単一の細胞を表す。図６６Ａ：全ての１８個のマーカーからのクラスター化アルゴリズムを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞集団を生成し、ｖｉＳＮＥマップ上にオーバーレイした。矢印は、対照と比較したＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６試料の中のＣＣＲ７＋集団内のナイーブＴ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現する島の喪失を示す。図６６Ｂ：色プロットは、ｖｉＳＮＥ「島」にわたる表現型を示す。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。強調した領域は、ナイーブＴ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現する細胞を示す。ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗原遭遇後の記憶形成と関連付けられた。
【図６７】図６７Ａ〜６７Ｂは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞サブタイプの中で、ＣＥＲ改変ＣＤ４＋Ｔ細胞が貪食活性の大多数を宿していることを示す。図６７Ａは、ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞をｐＨ  ｒｏｄｏ標識ＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ腺癌細胞と共に一晩共培養し、ｐＨｒｏｄｏ陽性についてＦＡＣｓによって査定した食作用アッセイからのＦＡＣＳプロファイルを示す（囲みは食作用％を示し、ＣＤ８＋Ｔ細胞について９．８１％およびＣＤ４＋Ｔ細胞について４２．０％である）。図６７Ｂは、ＣＥＲ改変ＣＤ４＋Ｔ細胞対ＣＥＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞間の食作用の頻度の棒グラフである。
【図６８】図６８は、ｈＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞と共培養したＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ腺癌細胞の生存率を示す。ＥＧＦＲ小分子阻害剤（１ｎＭオシメルチニブ）の存在下または非存在下で５：１のエフェクター対標的細胞比においてアッセイを行った。ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ３＋Ｔ細胞の共培養を、精製ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞の共培養と比較した。３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物［ＭＴＴ：３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ］アッセイを使用して細胞生存率を定量した。
【図６９】図６９は、ＨＣＣ８２７細胞および１ｎＭオシメルチニブとの共培養の４８時間後の、ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ３＋Ｔ細胞またはｈＣＥＲ１０４改変精製ＣＤ４＋Ｔ細胞の位相差顕微鏡画像を示す。ＨＣＣ８２７の特異的標的細胞死滅は、オシメルチニブの存在下においてｈＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞にて観察された。
【図７０】図７０は、ＮＳＧマウスにおけるＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋頭頸部扁平上皮癌の腫瘍増殖を示す。ＨＰＶ  Ｅ７特異的ＴＣＲにより操作した１ｘ１０６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＥＲ１０４により操作した３ｘ１０６個のＣＤ４＋Ｔ細胞を伴って、または伴わずに注入した。データは、腫瘍キャリパー測定の平均値を表す（１群当たりｎ＝５匹のマウス）。
【図７１】図７１は、ＨＣＣ８２７異種移植片研究を示す。同時のターゲティング阻害剤療法を伴う精製ｈＣＥＲ１２２改変ＣＤ４＋Ｔ細胞またはｈＣＥＲ１２２改変ＣＤ＋Ｔ細胞の養子移植に際してのＮＳＧマウスにおけるＨＣＣ８２７／ルシフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅ）＋細胞の増殖を、生物発光画像法によって測定した。データは、平均値を表す（ｎ＝５匹のマウス／処置群）。
【図７２】図７２は、１６日目のＨＣＣ８２７異種移植片研究からの免疫蛍光染色を示す。腫瘍染色は、ＰＤ１＋ＣＤ４＋Ｔ細胞（機能的活性）の腫瘍間質への浸潤を示す。腫瘍標本を抗ＥＧＦＲ（腫瘍抗原）、抗ＣＤ４、抗ＰＤ１およびＤＡＰＩ対比染色により染色した（左画像）。
【図７３】図７３Ａ〜７３Ｂは、ファゴリソソームＶ型ＡＴＰアーゼの阻害剤であるバフィロマイシンによるＣＥＲ誘導食作用の消失を示す。ＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞および模擬形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（対照）を、ＴＡＭＲＡ−ＳＥ蛍光色素により標識し、かつオシメルチニブにより処理したＨＣＣ８２７細胞と共培養した。食作用をＦＡＣｓにより定量した。図７３Ａは、ＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞がＴＡＭＲＡ−ＳＥ標識オシメルチニブ処理ＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ細胞に対して食作用を示し、バフィロマイシン（２０ｎＭ）がＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞によるオシメルチニブ処理ＴＡＭＲＡ−ＳＥ標識ＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ細胞の取り込みを遮断したことを示す棒グラフである。図７３Ｂは、非処理ＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ細胞、またはオシメルチニブまたはオシメルチニブおよびバフィロマイシンにより処理したＨＣＣ８２７細胞と共培養したＣＥＲ１０４改変（左列）または模擬形質導入Ｔ細胞（対照、右列）のインビトロ食作用アッセイからのＦＡＣＳプロットを示す。
【図７４】図７４Ａ〜７４Ｂは、ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞のＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞への添加は、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で腫瘍死滅を向上させたことを示す。ＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２移植ＮＳＧマウスを、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞（模擬形質導入）、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞およびｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞により処置したか、または処置しなかった。連続生物発光画像法によって腫瘍容量を測定し、図７４Ａにおいて示した。図７４Ｂは、処置群について得られた生物発光シグナル強度の平均値のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００４】
本開示は、様々な組換え細胞免疫療法分子により改変した免疫細胞または細胞サブセットの組合せを含む細胞免疫療法組成物の組合せを提供する。本開示の実施形態は、ＣＥＲを含む免疫細胞を含む第１の組成物と、細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質を含む免疫細胞を含む第２の組成物とを含む。例示的な細胞免疫療法組成物の組合せは：第１のキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物および第２のＣＥＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＢ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＢ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＮＫ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むＮＫ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むγδＴ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むγδＴ細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含む粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ：ｍｕｃｏｓａｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｉｎｖａｒｉａｎｔ  Ｔ）細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含む粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含む単球を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含む単球を含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；ＣＥＲを含むマクロファージを含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第２の組成物；またはＣＥＲを含むマクロファージを含む第１の組成物およびＣＡＲまたは組換えＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物を含む。本開示において提供される細胞免疫療法組成物の組合せは、対象への投与のために同じ医薬組成物において、または別々の医薬組成物において存在し得る。本開示において提供されるそのような細胞免疫療法組成物は、非重複多様式の標的細胞死滅機能および高エフェクター機能を与え、提供する。
【０００５】
加えて、そのような細胞免疫療法組成物のその必要のある対象へのデリバリー方法が提供される。
【０００６】
本開示をより詳細に示す前に、本明細書において使用されるある特定の用語の定義を提供することは本開示の理解に役立ちうる。
【０００７】
本説明において、任意の濃度範囲、割合範囲、比の範囲または整数範囲は、別に示されない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値、および適切な場合、その分数（例として整数の１０分の１および１００分の１）を含むと理解されるべきである。また、任意の物理的特色、例としてポリマーサブユニット、サイズまたは厚さに関する本明細書において列挙される任意の数値範囲は、別に示されない限り、列挙される範囲内の任意の整数を含むと理解されるべきである。本明細書において使用されるとき、「約」という用語は、別に示されない限り、示される範囲、値または構造の±２０％を意味する。「ａ」および「ａｎ」という用語は、本明細書において使用されるとき、列挙される成分のうちの「１つまたは複数」を指すことが理解されるべきである。選択肢（例えば「または（ｏｒ）」）の使用は、選択肢のいずれか１つ、両方またはその任意の組合せを意味すると理解されるべきである。本明細書において使用されるとき、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「〜を有する（ｈａｖｅ）」および「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、同義的に使用され、その用語およびその変形は、非限定的であると解釈されることが意図される。
【０００８】
抗体技術の分野における当業者によって理解される用語は各々、本明細書において明確に異なって定義されない限り、当該技術分野において得られる意味を与えられる。「抗体」という用語は、最も広範な意味において使用され、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を含むインタクトな抗体、および標的分子を結合する能力を有するか、または保持するインタクトな抗体の抗原結合性部分（または抗原結合性ドメイン）を指し得る。抗体は、免疫グロブリンの天然、組換え産生、遺伝子操作または改変形態、例えばイントラボディ、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、ナノボディ、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰ、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンデムジ−ｓｃＦｖ、タンデムトリ−ｓｃＦｖ、ＡＤＡＰＴＩＲ）であり得る。モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、非ヒト、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分、好ましくはヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であり得る。免疫グロブリン構造および機能は、例えばHarlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988)において概略されている。インタクトな抗体の「抗原結合性部分」または「抗原結合性ドメイン」は、「抗体断片」を包含することを意味し、これは、インタクトな抗体の一部を示し、インタクトな抗体の抗原性決定可変領域または相補性決定領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ディアボディ、線形抗体、ｓｃＦｖ抗体、ＶＨならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。「Ｆａｂ（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」は、抗原に結合する抗体の一部であり、可変性領域と鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に連結された重鎖のＣＨ１とを含む。抗体は、ＩｇＧおよびそのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡならびにＩｇＤを含む任意のクラスまたはサブクラスの抗体であり得る。
【０００９】
抗体に関する「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は一般的に、同様の構造を有し、各ドメインは４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ：ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｒｅｇｉｏｎ）および３つの相補性決定領域（ＣＤＲ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）を含む（例えばKindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照のこと）。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を与えるために十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離され、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングしてもよい。例えばPortolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照されたい。
【００１０】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義である「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および／または結合親和性を与える、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すことが当該技術分野において公知である。一般的に、各重鎖可変領域における３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域における３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が存在する。
【００１１】
本明細書において使用されるとき、「結合ドメイン」、「結合領域」および「結合部分」という用語は、標的分子（例えば腫瘍抗原）と特異的かつ非共有結合的に結合、会合、合体、認識または合同する能力を有する分子、例としてペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質を指す。結合ドメインは、目的の生体分子または他の標的についての任意の天然、合成、半合成または組換え産生結合パートナーを含む。一部の実施形態においては、結合ドメインは、抗原結合性ドメイン、例として抗体またはその機能的結合ドメインもしくは抗原結合性部分である。例示的な結合ドメインには、単鎖抗体可変領域（例えばドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ）、受容体外部ドメイン（例えばＴＮＦ−α）、リガンド（例えばサイトカイン、ケモカイン）または生体分子に結合する特異的能力について選択される合成ポリペプチドが含まれる。
【００１２】
「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ：Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）とは、一般的に主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ：ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ）分子に結合した抗原を認識することの原因である、Ｔ細胞（Ｔリンパ球とも呼ばれる）の表面上に見られる分子を指す。ＴＣＲは一般的に、ほとんどのＴ細胞において高度に可変性のαおよびβ鎖（それぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても公知）のジスルフィド結合ヘテロ二量体からなる。Ｔ細胞の小サブセットにおいては、ＴＣＲは、γおよびδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても公知）のヘテロ二量体からなる。ＴＣＲの各鎖は、免疫グロブリンスーパーファミリーの一員であり、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域およびＣ末端の短い細胞質尾部を有する（Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997を参照のこと）。本開示のＴＣＲは、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ヤギ、ウマまたは他の哺乳動物を含む様々な動物種からのＴＣＲであり得る。ＴＣＲは、細胞結合性（すなわち、膜貫通領域またはドメインを有する）であっても、可溶性形態であってもよい。ＴＣＲには、例えばｓｃＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、ＴＣＲ融合コンストラクト［ＴＲｕＣ（商標）；米国特許出願公開第２０１７／０１６６６２２号を参照のこと］を含むＴＣＲの組換え産生、遺伝子操作、融合または改変形態が含まれる。
【００１３】
ＴＣＲ  α鎖（Ｖα）およびβ鎖（Ｖβ）、またはγδＴＣＲのＶγおよびＶδの「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、ＴＣＲの抗原への結合に関与する。ネイティブＴＣＲのＶαおよびＶβは一般的に、同様の構造を有し、各可変ドメインは４つの保存されたＦＲおよび３つのＣＤＲを含む。Ｖαドメインは、２つの別々のＤＮＡセグメントである、可変遺伝子セグメント（Ｖ遺伝子）および接合遺伝子セグメント（Ｊ遺伝子）によってコードされ；Ｖβドメインは、３つの別々のＤＮＡセグメントである、可変遺伝子セグメント（Ｖ遺伝子）、多様性遺伝子セグメント（Ｄ遺伝子）および接合遺伝子セグメント（Ｊ遺伝子）によってコードされる。単一のＶαまたはＶβドメインは、抗原結合特異性を与えるために十分であり得る。「主要組織適合抗原複合体分子（ＭＨＣ分子）」とは、ペプチド抗原を細胞表面へデリバリーする糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜貫通α鎖（３つのαドメインを有する）および非共有結合的に会合したβ２ミクログロブリンからなるヘテロ二量体である。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、２つの膜貫通糖タンパク質、αおよびβからなり、その両方は膜を貫通している。各鎖は、２つのドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞質ゾルに起源を有するペプチドを細胞表面へデリバリーし、細胞表面においてペプチド：ＭＨＣ複合体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、小胞系に起源を有するペプチドを細胞表面へデリバリーし、細胞表面においてそれらは、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣ分子は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物を含む様々な動物種からのＭＨＣ分子であり得る。
【００１４】
「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）とは、２つまたはそれよりも多い別個のドメインを含むキメラタンパク質を指し、細胞表面上に発現した場合、受容体として機能し得る。ＣＡＲは一般的に、標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、適宜の細胞外スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメイン［例えば免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ：ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）含有Ｔ細胞活性化モチーフ、および適宜、細胞内共刺激性ドメイン］からなる。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有Ｔ細胞活性化ドメイン（例えばＣＤ３ζ）および細胞内共刺激性ドメイン（例えばＣＤ２８）を有する。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、単一のポリペプチド鎖として合成されるか、または単鎖ポリペプチドとして核酸分子によってコードされる。
【００１５】
特定の標的に特異的に結合する本開示の結合ドメインを特定するため、および結合ドメイン親和性を決定するための様々なアッセイ、例としてウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、分析用超遠心法、分光学、表面プラズモン共鳴［ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）］分析およびＭＨＣ四量体分析が公知である（また、例えばScatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949；Wilson, Science 295:2103, 2002；Wolff et al., Cancer Res. 53:2560, 1993；Altman et al., Science 274:94-96, 1996；および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号またはその均等物を参照のこと）。本明細書において使用されるとき、「特異的に結合する」とは、結合ドメインまたはその融合タンパク質の、標的分子への、１０５Ｍ−１に等しいか、またはそれよりも大きい親和性またはＫａ（すなわち、１／Ｍの単位による特定の結合相互作用の平衡会合定数）による会合または合体であって、一方で、試料中の他の任意の分子または成分とは顕著に会合または合体しないことを指す。
【００１６】
「抗原」および「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘導することができる分子を指す。誘導される免疫応答は、抗体産生、特異的免疫学的コンピテント細胞の活性化またはこの両方を含み得る。タンパク質、糖タンパク質および糖脂質を含む高分子は、抗原として働き得る。抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。本明細書において企図されるとき、抗原は、（ｉ）遺伝子の全長ヌクレオチド配列によって単独で、または（ｉｉ）「遺伝子」によって、コードされる必要は全くない。抗原は生成されても、合成されてもよく、または抗原は生体試料に由来してもよい。そのような生体試料は、組織試料、腫瘍試料、細胞または生体体液を含み得るが、これらに限定されない。
【００１７】
「エピトープ」または「抗原性エピトープ」という用語には、同族免疫結合分子、例として抗体もしくはその断片（例えばｓｃＦｖ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＣＡＲ、キメラ貪食受容体または他の結合分子、ドメインもしくはタンパク質が特異的に結合する任意の分子、構造、アミノ酸配列または抗原内のタンパク質決定基が含まれる。エピトープ決定基は一般的に、分子の化学的活性表面群、例としてアミノ酸または糖側鎖を含有し、特異的三次元構造特徴および特異的電荷特徴を有し得る。エピトープは、線形エピトープまたはコンフォメーションエピトープであり得る。
【００１８】
本明細書において使用されるとき、「エフェクタードメイン」は、適切なシグナルを受容した場合エフェクタードメインを発現する細胞内の生物応答または生理応答を直接的または間接的に促進し得る融合タンパク質またはキメラ受容体の細胞内部分である。ある特定の実施形態においては、エフェクタードメインは、結合した場合シグナルを受容するタンパク質またはタンパク質複合体の部分である。他の実施形態においては、エフェクタードメインは、エフェクタードメインからのシグナルを誘発する標的分子に直接的に結合するタンパク質またはタンパク質複合体の部分である。例えば、ＣＥＲの標的分子への結合に応答して、エフェクタードメインは、シグナルを宿主細胞の内部へ伝達し、エフェクター機能、例えば貪食、ファゴリソソーム成熟または抗炎症性サイトカインおよび／または免疫抑制性サイトカインの分泌を誘発し得る。エフェクタードメインは、それが１つまたは複数のシグナル伝達ドメインまたはモチーフを含有する場合、細胞応答を直接的に促進し得る。他の実施形態においては、エフェクタードメインは、細胞応答を直接的に促進する１つまたは複数の他のタンパク質と会合することによって細胞応答を間接的に促進する。
【００１９】
「貪食シグナル伝達ドメイン」とは、宿主細胞が発現するＣＥＲの細胞外ドメインによってターゲティングされる標的分子（例えばホスファチジルセリン）の結合に際して、宿主細胞において１つまたは複数のシグナル伝達経路を活性化し、特定の実施形態においては、宿主細胞の細胞骨格再配置、および標的細胞または標的抗原と会合する粒子の内部移行を含む貪食をもたらす細胞内エフェクタードメインを指す。ある特定の実施形態においては、貪食シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数のシグナル伝達経路を活性化し、標的細胞または粒子の食作用をもたらす。さらなる実施形態においては、貪食シグナル伝達ドメインは、一次貪食シグナル伝達ドメインおよび二次貪食シグナル伝達ドメインを含む。
【００２０】
「接合部アミノ酸」または「接合部アミノ酸残基」とは、ポリペプチドの２つの隣接モチーフ、領域またはドメイン間の１つまたは複数の（例えば約２〜２０個の）アミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、キメラタンパク質のコンストラクト設計から生じ得る（例えば融合タンパク質をコードする核酸分子の構築中の制限酵素部位の使用から生じるアミノ酸残基）。
【００２１】
「疾患」は、対象が恒常性を維持することができない、かつ疾患が改善しない場合その後、対象の健康が悪化し続ける、対象の健康状態である。対照的に、対象における「障害」または「望ましくない状態」は、対象が恒常性を維持することができるが、対象の健康状態が、それが障害または望ましくない状態の非存在下にある場合よりも好ましくない、健康状態である。処置されないままの場合、障害または望ましくない状態は、対象の健康状態のさらなる減少を必ずしももたらさない。
【００２２】
「核酸分子」および「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ、またはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡを含むＤＮＡの形態であり得る。核酸分子は、天然ヌクレオチド（例としてデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチド）、天然ヌクレオチドのアナログ（例えば天然ヌクレオチドのα−エナンチオマー形態）またはその両方の組合せからなり得る。修飾ヌクレオチドは、糖部分、またはピリミジンもしくはプリン塩基部分における修飾またはこれらの部分の置換を有し得る。核酸モノマーは、ホスホジエステル結合またはそのような結合のアナログによって連結され得る。ホスホジエステル結合のアナログには、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホラニリデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌｉｄａｔｅ）、ホスホラミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）等が含まれる。核酸分子は、二本鎖であっても、一本鎖であってもよく、一本鎖の場合、コード鎖であっても、非コード（アンチセンス鎖）であってもよい。コード分子は、当該技術分野において公知のコード配列と同一のコード配列を有してもよく、または遺伝子コードの重複または縮重の結果として、またはスプライシングによって、同じポリペプチドをコードし得る異なるコード配列を有してもよい。
【００２３】
「コードする」とは、特定のポリヌクレオチド配列、例としてＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列の、生物学的プロセスにおいて規定のヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または規定のアミノ酸配列のいずれかを有する他のポリマーおよび高分子の合成のための鋳型として働く固有の特性、およびそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、ポリヌクレオチドは、細胞または他の生体系においてそのポリヌクレオチドに対応するｍＲＮＡの転写および翻訳がタンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。コード鎖および非コード鎖の両方は、タンパク質またはポリヌクレオチドの他の生成物をコードすると言及され得る。別に指定しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いの縮重型であり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。
【００２４】
本明細書において使用されるとき、「内因性」または「ネイティブ」という用語は、遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性の天然変異型を含む、宿主または宿主細胞に通常存在する遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性を指す。
【００２５】
本明細書において使用されるとき、「同種の」または「ホモログ」とは、宿主細胞からの、例えば同じ宿主細胞からの、異なる宿主細胞からの、異なる生物からの、異なる系統からの、異なる種からの、第２の遺伝子または活性に祖先によって関連する分子または活性を指す。例えば、異種の分子、または分子をコードする異種の遺伝子は、それぞれ、ネイティブ宿主細胞分子または分子をコードする遺伝子と同種である場合があり、変更された構造、配列、発現レベルまたはその任意の組合せを有してもよい。
【００２６】
本明細書において使用されるとき、「異種の」核酸分子、コンストラクトまたは配列とは、宿主細胞にとってネイティブではないが、宿主細胞からの核酸分子または核酸分子の部分にとって同種であり得る核酸分子または核酸分子の部分を指す。異種の核酸分子、コンストラクトまたは配列の供給源は、異なる属または種からの供給源であり得る。一部の実施形態においては、異種の核酸分子は、天然ではない。ある特定の実施形態においては、異種の核酸分子は、例えばコンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーションその他によって、宿主細胞または宿主ゲノムに添加され（すなわち、内因性またはネイティブではなく）、添加された分子は、宿主細胞ゲノムに統合されても、染色体外遺伝子材料として（例えばプラスミドまたは自己複製ベクターの他の形態として）存在してもよく、多数のコピーにおいて存在してもよい。加えて、「異種の」とは、宿主細胞が同種のタンパク質または活性をコードするとしても、宿主細胞に導入された非内因性核酸分子によってコードされる非ネイティブ酵素、タンパク質または他の活性を指す。
【００２７】
本明細書において使用されるとき、「操作した」、「組換え」、「改変」または「非天然」という用語は、異種の核酸分子の導入によって改変された生物、微生物、細胞、核酸分子またはベクターを指すか、またはヒトの介入によって遺伝子操作された、すなわち、異種の核酸分子の導入によって改変された細胞または微生物を指すか、または内因性核酸分子または遺伝子の発現が制御されるか、調節解除されるか、または構成的であるように変更され、そのような変更または改変が遺伝子操作によって導入され得る細胞または微生物を指す。ヒトが生成した遺伝子変更は、例えば、１つまたは複数のタンパク質、キメラ受容体または酵素をコードする核酸分子（プロモーター等の発現制御エレメントを含み得る）を導入する改変；または他の核酸分子の付加、欠失、置換；または細胞の遺伝子材料の他の機能的破壊もしくは細胞の遺伝子材料への付加を含み得る。例示的な改変は、コード領域またはその機能的断片における改変、参照分子または親分子とは異種の、または同種のポリペプチドを含む。追加の例示的な改変には、例えば、改変が遺伝子またはオペロンの発現を変更する、非コード調節領域における改変が含まれる。
【００２８】
本明細書において使用されるとき、「導入遺伝子」という用語は、発現が宿主細胞において所望され、遺伝子操作技術によって細胞に移行された、目的のタンパク質（例えばＣＥＲ、ＣＡＲ、ＴＣＲ）をコードする遺伝子またはポリヌクレオチドを指す。導入遺伝子は、治療目的のタンパク質、およびレポーター、タグ、マーカー、自殺タンパク質等であるタンパク質をコードし得る。導入遺伝子は、天然供給源からの導入遺伝子、天然遺伝子の改変であってもよく、組換えまたは合成分子であってもよい。ある特定の実施形態においては、導入遺伝子は、ベクターの成分である。
【００２９】
「過剰発現した」抗原または抗原の「過剰発現」という用語は、細胞における異常に高レベルの抗原を指す。過剰発現した抗原または抗原の過剰発現は多くの場合、血液系腫瘍、および対象の特定の組織または器官内の固形腫瘍を形成する細胞における疾患状態等の、疾患状態と関連付けられる。腫瘍抗原の過剰発現によって特徴付けられる固形腫瘍または血液系腫瘍は、当該技術分野において公知の標準のアッセイによって決定することができる。
【００３０】
本明細書において使用されるとき、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基からなる化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列またはペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数について限定はない。ポリペプチドには、ペプチド結合によって互いに接合された２つまたはそれよりも多いアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質が含まれる。本明細書において使用されるとき、この用語は、当該技術分野において例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも通常呼ばれる短鎖、および一般的に当該技術分野においてタンパク質と呼ばれ、多くの種類がある長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」には、中でも、例えば生物活性断片、実質的同種ポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異型、改変ポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質が含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチドまたはそれらの組合せが含まれる。
【００３１】
本明細書において使用されるとき、「成熟ポリペプチド」または「成熟タンパク質」という用語は、分泌されるか、または細胞膜に、またはある特定の細胞小器官（例えば小胞体、ゴルジ体またはエンドソーム）内に局在化し、かつＮ末端シグナルペプチドを含まないタンパク質またはポリペプチドを指す。
【００３２】
「シグナルペプチド」は、「シグナル配列」、「リーダー配列」、「リーダーペプチド」、「局在化シグナル」または「局在化配列」とも呼ばれ、分泌経路に運命付けられた新規合成タンパク質のＮ末端に存在する短いペプチド（長さが通常１５〜３０個のアミノ酸）である。シグナルペプチドは典型的に、Ｎ末端における短い範囲の親水性正電荷アミノ酸、５〜１５個の残基の中心疎水性ドメインおよびシグナルペプチダーゼのための切断部位を有するＣ末端領域を含む。真核生物においては、シグナルペプチドは、新規合成タンパク質の小胞体への移行を誘発し、小胞体においてそれはシグナルペプチダーゼによって切断され、成熟タンパク質を創出し、その後成熟タンパク質はその適切な目的地へ進行する。
【００３３】
２つまたはそれよりも多い核酸またはアミノ酸配列間の「同一性パーセント」は、２つまたはそれよりも多い配列の整列を最適化するために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、それらの配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数ｘ１００）。２つまたはそれよりも多い配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラム等の数学的アルゴリズムをそれらのデフォルトパラメータを用いて使用して達成することができる（例えばAltschul et al., J. Mol. Biol. 215:403, 1990；また、www.ncbi.nlm.nih.gov/BLASTのＢＬＡＳＴＮを参照のこと）。
【００３４】
「保存的置換」は、当該技術分野において、１つのアミノ酸の、同様の特性を有する別のアミノ酸への置換として認識されている。例示的な保存的置換は、当該技術分野において周知である（例えば１９９７年３月１３日公開のＷＯ９７／０９４３３、１０ページ；Lehninger, Biochemistry, Second Edition; Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp.71-77；Lewin, Genes IV, Oxford University Press, NY and Cell Press, Cambridge, MA (1990), p. 8を参照のこと）。
【００３５】
「キメラ」という用語は、内因性ではなく、かつ天然に見られない本質的に共に接合または連結された、共に接合または連結された配列の組合せを含む任意の核酸分子またはタンパク質を指す。例えば、キメラ核酸分子は、多数の異なる遺伝子からの様々なドメインをコードする核酸を含み得る。別の例においては、キメラ核酸分子は、異なる供給源に由来する調節配列およびコード配列、または同じ供給源に由来するが、天然に見られる様式とは異なる様式において配置されている調節配列およびコード配列を含み得る。
【００３６】
「プロモーター」という用語は、本明細書において使用されるとき、細胞の合成機構によって認識されるか、または合成機構に導入される、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要とされるＤＮＡ配列として定義される。
【００３７】
本明細書において使用されるとき、「プロモーター／調節配列」という用語は、プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を意味する。一部の場合、この配列は、コアプロモーター配列であってもよく、他の場合、また、この配列は、エンハンサー配列、および遺伝子産物の発現に必要とされる他の調節エレメントを含んでもよい。プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的様式において遺伝子産物を発現するプロモーター／調節配列であってもよい。
【００３８】
「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか、または特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、細胞のほとんどまたは全ての生理学的条件下において遺伝子産物が細胞内で産生されることをもたらすヌクレオチド配列である。
【００３９】
「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか、または特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、実質的にプロモーターに対応するインデューサーが細胞内に存在する場合のみ、遺伝子産物が細胞内で産生されることをもたらすヌクレオチド配列である。
【００４０】
「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか、または遺伝子によって特定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織タイプの細胞である場合のみ、遺伝子産物が細胞内で産生されることをもたらすヌクレオチド配列である。
【００４１】
「転写制御下」または「作動可能に連結された」という句は、本明細書において使用されるとき、プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始およびポリヌクレオチドの発現を制御するためにポリヌクレオチドに関して正しい場所および方向において存在することを意味する。
【００４２】
「ベクター」は、別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、例えばプラスミド、コスミド、ウイルスまたはファージであり得る。また、この用語は、核酸の細胞への移行を促進する非プラスミドおよび非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。「発現ベクター」は、ベクターが適切な環境に存在する場合、ベクターが有する１つまたは複数の遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を方向付けることができるベクターである。
【００４３】
ある特定の実施形態においては、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例には、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ガンマレトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。「レトロウイルス」は、ＲＮＡゲノムを有するウイルスである。「ガンマレトロウイルス」とは、レトロウイルス科ファミリーの属を指す。ガンマレトロウイルスの例には、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルスおよび鳥類細網内皮症ウイルスが含まれる。「レンチウイルス」とは、分裂細胞および非分裂細胞に感染することができるレトロウイルスの属を指す。レンチウイルスの例には、ＨＩＶ（ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ）（ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含むヒト免疫不全ウイルス）、ウマ伝染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ：ｆｅｌｉｎｅ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ：ｂｏｖｉｎｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ：ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
他の実施形態においては、ベクターは、非ウイルスベクターである。非ウイルスベクターの例には、脂質ベースのＤＮＡベクター、修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、閉鎖末端直鎖状二本鎖（ＣＥＬｉＤ：ｃｌｏｓｅｄ−ｅｎｄｅｄ  ｌｉｎｅａｒ  ｄｕｐｌｅｘ）ＤＮＡおよびトランスポゾン媒介遺伝子移行（ＰｉｇｇｙＢａｃ、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ）が含まれる。非ウイルスデリバリー系が使用される場合、デリバリー媒体は、リポソームであり得る。脂質製剤は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで核酸を宿主細胞に導入するために使用され得る。核酸は、リポソームの内部に封入されていてもよく、リポソームの脂質二重層内に散在していてもよく、リポソームおよび核酸の両方と会合する連結分子を介してリポソームに結合していてもよく、ミセルに含有されるか、もしくはミセルと複合体形成していてもよく、別の方法で脂質と会合していてもよい。
【００４５】
「粒子」とは、直径が少なくとも１０ｎｍ〜最大で５０μｍの細胞の断片または小物体を指す。粒子は、生細胞または生物、環境に由来してもよく、合成であってもよい。粒子は、ウイルス粒子、プリオン粒子、タンパク質粒子、合成粒子、小鉱物粒子または細胞片であり得る。
【００４６】
本明細書において使用されるとき、「貪食」という用語は、直径が１０ｎｍを超える内因性または外因性細胞または粒子が、本開示の食細胞または宿主細胞によって内部移行される、受容体媒介プロセスを指す。貪食は典型的に、多ステップ：（１）貪食受容体の、標的細胞または粒子上のプロ貪食マーカーまたは抗原性マーカーへの直接的または間接的（架橋分子を介する）結合を介する標的細胞または粒子の繋留；および（２）標的細胞全体もしくは粒子全体またはそれらの部分の内部移行または貪食からなる。ある特定の実施形態においては、内部移行は、食細胞または宿主細胞の細胞骨格再配置を介して起こり、内部移行された標的を含有する膜結合区画であるファゴソームを形成し得る。貪食は、ファゴソームがますます酸性になり、リソソームと融合する（ファゴリソソームを形成する）ファゴソームの成熟をさらに含む場合があり、これに際して、貪食された標的は分解される（例えば「食作用」）。あるいは、ファゴソーム−リソソーム融合は、貪食において観察されない場合がある。また別の実施形態においては、ファゴソームは、その内容物を、完全な分解前に細胞外環境へ吐き戻すか、または排出し得る。一部の実施形態においては、貪食とは、食作用を指す。一部の実施形態においては、貪食は、本開示の宿主細胞の食細胞による標的細胞または粒子の繋留を含むが、内部移行は含まない。一部の実施形態においては、貪食は、本開示の宿主細胞の食細胞による標的細胞または粒子の繋留、および標的細胞または粒子の部分の内部移行を含む。
【００４７】
本明細書において使用されるとき、「食作用」という用語は、標的細胞または粒子の繋留、標的細胞または粒子の貪食および内部移行された標的細胞または粒子の分解が起こる、細胞または大粒子（０．５μｍ以上）の貪食プロセスを指す。ある特定の実施形態においては、食作用は、内部移行された標的細胞または粒子を包含するファゴソームの形成、および中の内容物が分解されるファゴリソソームを形成するリソソームとのファゴソーム融合を含む。ある特定の実施形態においては、本開示の宿主細胞上に発現するＣＥＲの、標的細胞または粒子によって発現される標的抗原への結合後、食作用シナプスが形成され；食作用シナプスにおいてアクチンリッチ食作用カップが生成し；細胞骨格再配置を通して食作用アームが標的細胞または粒子の周囲に伸長し；最終的に、モータータンパク質によって生成した力を通して標的細胞または粒子が食細胞または宿主細胞に引き込まれる。本明細書において使用されるとき、「食作用」には、非炎症様式におけるアポトーシス細胞または壊死細胞の食作用を特に指す「エフェロサイトーシス」のプロセスが含まれる。
【００４８】
「免疫系細胞」または「免疫細胞」という用語は、骨髄の造血幹細胞に由来する免疫系の任意の細胞を意味する。造血幹細胞は、２つの主要な系統：骨髄系前駆細胞（骨髄細胞、例として単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球および顆粒球を生じる）およびリンパ球前駆細胞［リンパ球細胞、例としてＴ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生じる］を生じる。例示的な免疫系細胞には、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４−ＣＤ８−二種陰性Ｔ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞および樹状細胞が含まれる。マクロファージおよび樹状細胞は、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ（ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ）」とも呼ばれる場合があり、これらは、ペプチドと複合体形成したＡＰＣの表面上の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）受容体が、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲと相互作用するとき、Ｔ細胞を活性化し得る特殊化細胞である。
【００４９】
「Ｔ細胞」という用語は、Ｔ細胞系統の細胞を指す。「Ｔ細胞系統の細胞」とは、細胞を他のリンパ球および赤血球系統または骨髄系統の細胞から区別する、Ｔ細胞またはその前駆体もしくは前駆細胞の少なくとも１つの表現型特徴を示す細胞を指す。そのような表現型特徴は、Ｔ細胞に特異的な１つまたは複数のタンパク質（例えばＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋）の発現、またはＴ細胞に特異的な生理学的、形態学的、機能的または免疫学的特色を含み得る。例えば、Ｔ細胞系統の細胞は、Ｔ細胞系統にコミットされた前駆細胞もしくは前駆体細胞；ＣＤ２５＋未成熟かつ不活性化Ｔ細胞；ＣＤ４またはＣＤ８系統コミットメントを受けた細胞；ＣＤ４＋ＣＤ８＋二種陽性である胸腺前駆細胞；単一陽性ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋；ＴＣＲαβもしくはＴＣＲγδ；または成熟かつ機能的もしくは活性化Ｔ細胞であり得る。「Ｔ細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５  ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ−）、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＣＲ７−、ＣＤ６２Ｌ−、ＣＤ２７−）、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、Ｔｒｅｇ、ナチュラルキラーＴ細胞および組織レジデントＴ細胞を包含する。
【００５０】
「Ｂ細胞」という用語は、Ｂ細胞系統の細胞を指す。「Ｂ細胞系統の細胞」とは、細胞を他のリンパ球および赤血球系統または骨髄系統の細胞から区別する、Ｂ細胞またはその前駆体もしくは前駆細胞の少なくとも１つの表現型特徴を示す細胞を指す。そのような表現型特徴は、Ｂ細胞に特異的な１つまたは複数のタンパク質（例えばＣＤ１９＋、ＣＤ７２＋、ＣＤ２４＋、ＣＤ２０＋）の発現、またはＢ細胞に特異的な生理学的、形態学的、機能的または免疫学的特色を含み得る。例えば、Ｂ細胞系統の細胞は、Ｂ細胞系統にコミットされた前駆細胞もしくは前駆体細胞（例えばプレプロＢ細胞、プロＢ細胞およびプレＢ細胞）；未成熟かつ不活性化Ｂ細胞；または成熟かつ機能的もしくは活性化Ｂ細胞であり得る。したがって、「Ｂ細胞」は、ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞性細胞、形質芽細胞およびメモリーＢ細胞（例えばＣＤ２７＋、ＩｇＤ−）を包含する。
【００５１】
表面上に免疫受容体（例えばＴＣＲ）を発現する免疫細胞（例えばＮＫ細胞またはＴ細胞）についての「細胞傷害活性」という用語は、「細胞溶解活性」とも呼ばれ、細胞が、抗原特異的シグナル伝達に際して（例えばＴＣＲを介して）、標的細胞がアポトーシスを受けるように誘導することを意味する。一部の実施形態においては、細胞傷害性細胞は、顆粒からの細胞毒、例としてパーフォリン、グランザイムおよびグラニュライシンの放出を介して標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。パーフォリンは、標的細胞膜に挿入し、水および塩が標的細胞に迅速に入ることを可能にする孔を形成する。グランザイムは、標的細胞においてアポトーシスを誘導するセリンプロテアーゼである。また、グラニュライシンは、標的細胞膜において孔を形成することができ、炎症促進性分子である。一部の実施形態においては、細胞傷害性細胞は、抗原特異的シグナル伝達後にＴ細胞上でアップレギュレートされるＦａｓリガンドと、標的細胞上に発現されるＦａｓ分子との相互作用を介して、標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。Ｆａｓは、いくつかの異なる細胞の表面上のアポトーシスシグナル伝達受容体分子である。標的細胞に対する細胞傷害活性は、標的細胞の表面上にプロ貪食マーカー、例えばホスファチジルセリンを曝露し得る。
【００５２】
「疾患」は、対象が恒常性を維持することができない、かつ疾患が改善しない場合その後、対象の健康が悪化し続ける、対象の健康状態である。対照的に、対象における「障害」または「望ましくない状態」は、対象が恒常性を維持することができるが、対象の健康状態が、それが障害または望ましくない状態の非存在下にある場合よりも好ましくない、健康状態である。処置されないままの場合、障害または望ましくない状態は、対象の健康状態のさらなる減少を必ずしももたらさない。
【００５３】
「がん」という用語は、本明細書において使用されるとき、異常な細胞の迅速かつ制御されていない増殖によって特徴付けられる疾患として定義される。異常な細胞は、固形腫瘍を形成するか、または血液系腫瘍を構成し得る。がん細胞は、局所的に、または血流およびリンパ系を通して身体の他の部分に広がり得る。様々ながんの例には、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵がん、結腸直腸がん、腎がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、肺がん等が含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
「対象」、「患者」および「個体」という用語は、本明細書において互換的に使用され、免疫応答が誘発され得る生存生物（例えば哺乳動物）を含むと意図される。対象の例には、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそのトランスジェニック種が含まれる。
【００５５】
「養子細胞免疫療法」または「養子免疫療法」または「細胞免疫療法」とは、天然の、または遺伝子操作した、疾患抗原特異的免疫細胞（例えばＴ細胞）の投与を指す。養子細胞免疫療法は、自家（免疫細胞が受容者からの細胞である）、同種異系（免疫細胞が同じ種のドナーからの細胞である）または同系（免疫細胞が受容者と遺伝的に同一のドナーからの細胞である）であり得る。
【００５６】
「自家」とは、グラフトが後に再導入される同じ対象に由来するグラフト（例えば器官、組織、細胞）を指す。
【００５７】
「同種異系」とは、同じ種の異なる対象に由来するグラフトを指す。
【００５８】
本開示のキメラタンパク質またはキメラタンパク質を発現する細胞（例えばキメラ貪食受容体またはキメラ貪食受容体を発現する細胞）の「治療有効量」または「有効量」とは、治療される疾患、障害または望ましくない状態の１つまたは複数の症状の改善をもたらすために十分なタンパク質または細胞の量を指す。単独で投与される、個々の活性成分、または単一の活性成分を発現する細胞について言及する場合、治療有効用量とは、その成分またはその成分を発現する細胞の単独の効果を指す。組合せについて言及する場合、治療有効用量とは、連続投与されるか、同時投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、活性成分または組み合わせた付属の活性成分の、活性成分を発現する細胞と組み合わせた量を指す。
【００５９】
「治療する」または「治療」または「改善する」とは、対象の疾患、障害または望ましくない状態の医療管理を指す。一般的に、本開示のキメラタンパク質を発現する宿主細胞を含む適切な用量または治療レジメンは、治療利益または予防利益を誘発するために十分な量において投与される。治療利益または予防／防止利益には、臨床アウトカムの改善；疾患、障害または望ましくない状態と関連付けられる症状の減少または軽減；症状の発生の減少；クオリティ・オブ・ライフの改善；より長い無疾患状態；疾患、障害または望ましくない状態の程度の縮減；疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；生存延長；またはそれらの任意の組合せが含まれる。
【００６０】
「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍容量における減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加またはがん性状態と関連付けられる様々な生理学的症状の改善によって証明され得る生物学的効果を指す。また、「抗腫瘍効果」は、血液系腫瘍または腫瘍形成の予防によって証明され得る。
【００６１】
追加の定義は、本開示全体を通して提供される。
【００６２】
導入遺伝子
本開示の細胞免疫療法組成物の組合せは、細胞免疫療法分子、例えばキメラ貪食受容体（ＣＥＲ）、キメラ抗原受容体およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）結合タンパク質をコードする導入遺伝子を含むように改変された免疫細胞からなる。本開示の細胞免疫療法組成物の組合せは、特定の細胞免疫療法分子により改変した、宿主において標的細胞除去のための特徴的な機構、すなわち、細胞溶解および食作用を示す、免疫細胞タイプまたはサブタイプの特定の組合せからなる（図１を参照のこと）。
【００６３】
Ｉ．キメラ貪食受容体
本開示の組成物は、部分的には、キメラ貪食受容体（ＣＥＲ）をコードする導入遺伝子を含む免疫細胞を含む。キメラ貪食受容体は一般的に、（ａ）標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、（ｂ）貪食シグナル伝達ドメイン、および（ｃ）細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態においては、本明細書において説明するキメラ貪食受容体の細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する細胞外スペーサードメインを含んでもよい。
【００６４】
本明細書において説明するキメラ貪食受容体は、前記キメラ貪食受容体を発現するように改変された宿主細胞に、標的抗原に特異的な貪食表現型を与えることができる。ある特定の実施形態においては、本明細書において説明するＣＥＲの発現は、天然には貪食表現型を示さない宿主細胞に、貪食表現型を与える。ある特定の実施形態においては、貪食活性は、食作用活性である。本開示のＣＥＲは、貪食特異性を、標的抗原を発現する標的細胞に再方向付けするために使用され得る。
【００６５】
細胞外ドメイン
本明細書において説明する通り、ＣＥＲは、標的抗原に特異的な細胞外ドメインを含む。ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、標的抗原（例えばホスファチジルセリン）に特異的に結合する結合ドメインを含む。結合ドメインによる標的分子の結合は、標的分子（例えば受容体またはリガンド）と別の分子との間の相互作用を遮断し、かつ例えば、標的分子のある特定の機能（例えばシグナル伝達）を妨害、低減または除去し得る。一部の実施形態においては、標的分子の結合は、除去のために、ある特定の生物学的経路を誘導するか、または標的分子または標的分子を発現する細胞を特定し得る。
【００６６】
本開示のＣＥＲにおける使用のために好適な結合ドメインは、目的の標的分子、例えばホスファチジルセリンに特異的に結合する任意のポリペプチドまたはペプチドであり得る。結合ドメインの供給源には、様々な種からの受容体の細胞外ドメイン、細胞表面受容体または分子のリガンド、および抗体または抗原結合部分、例として抗体可変領域が含まれる。例えば、結合ドメインは、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖベースのｇｒａｂａｂｏｄｙ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメインラクダ抗体（ＶＨＨ）またはドメイン抗体を含み得る。結合ドメインは、ヒト、霊長類、げっ歯類、鳥類またはヒツジに由来し得る。結合ドメインの追加の供給源には、他の種、例としてラクダ（ラクダ、ヒトコブラクダまたはラマから；Ghahroudi et al., FEBS Lett. 414:521, 1997；Vincke et al., J. Biol. Chem. 284:3273, 2009；Hamers-Casterman et al., Nature 363:446, 1993およびNguyen et al., J. Mol. Biol. 275:413, 1998）、コモリザメ（Roux et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 95:11804, 1998）、スポッティドラットフィッシュ（Nguyen et al., Immunogen. 54:39, 2002）またはヤツメウナギ（Herrin et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 105:2040, 2008およびAlder et al. Nat. Immunol. 9:319, 2008）からの抗体の可変領域が含まれる。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを使用する抗原結合領域を形成し得る、すなわち、これらの機能的抗体は、重鎖のみのホモ二量体（「重鎖抗体」と呼ばれる）である（Jespers et al., Nat. Biotechnol. 22:1161, 2004；Cortez-Retamozo et al., Cancer Res. 64:2853, 2004；Baral et al., Nature Med. 12:580, 2006；およびBarthelemy et al., J. Biol. Chem. 283:3639, 2008）。ある特定の実施形態においては、結合ドメインは、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化結合ドメインである。
【００６７】
ある特定の実施形態においては、ＣＥＲ結合ドメインは、標的疾患抗原に特異的な抗体またはその抗原結合性断片、例として、ＶＨおよびＶＬ領域を含む単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む。ある特定の実施形態においては、抗体または抗原結合性断片は、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体または抗原結合性断片である。さらなる実施形態においては、ＶＨおよびＶＬ領域は、ヒトまたはヒト化ＶＨおよびＶＬ領域である。
【００６８】
本開示のＣＥＲの細胞外ドメインが結合する標的分子は、目的の細胞（「標的細胞」）において見られるか、または目的の細胞と関連付けられ得る。例示的な標的細胞には、がん細胞；自己免疫疾患もしくは障害、神経変性疾患と、または炎症性疾患もしくは障害と関連付けられる細胞；感染性微生物（例えば細菌、ウイルスまたは真菌）；および感染した細胞（例えばウイルス感染細胞）が含まれる。感染性生物、例として哺乳動物寄生生物の細胞もまた、標的細胞として企図される。
【００６９】
ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、プロ貪食マーカーに結合する。本明細書において使用されるとき、プロ貪食マーカーは、アポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシス細胞または感染細胞がその表面上に示し、それぞれ、その細胞を非アポトーシス細胞、非壊死細胞、非ピロトーシス細胞、腫張（ｏｎｃｏｔｉｃ）細胞または非感染細胞から区別する部分（例えばタンパク質、脂質または多糖）である。プロ貪食マーカーは、アポトーシス細胞または壊死細胞上に表面曝露される細胞内部分、アポトーシス細胞または壊死細胞上の糖鎖付加の変更または表面電荷の変更を有する部分、またはアポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシス細胞または腫張細胞に結合した血清部分であり得る。アポトーシス細胞についてのプロ貪食マーカーの例には、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）、ＩＣＡＭ−３、酸化型低密度リポタンパク質、カルレティキュリン、アネキシンＩ、補体Ｃ１ｑおよびトロンボスポンジンが含まれる。また、壊死細胞、腫張細胞およびピロトーシス細胞は、細胞表面上にＰｔｄＳｅｒプロ貪食マーカーを曝露する。貪食受容体は、直接的に、またはプロ貪食マーカーに結合する中間体として可溶性架橋分子を使用して間接的に標的細胞（例えば損傷細胞、感染細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシス細胞または腫張細胞）上のプロ貪食マーカーを検出（または結合）し得る。ある特定のそのような実施形態においては、細胞外ドメインによってターゲティングされるプロ貪食マーカーは、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）、ＩＣＡＭ−３、酸化型低密度リポタンパク質、カルレティキュリン、アネキシンＩ、補体Ｃ１ｑまたはトロンボスポンジンである。本開示のＣＥＲにおける使用のための結合ドメインの実施形態には、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ４、Ｔｉｍ３からのＰｔｄＳｅｒ結合ドメイン、スタビリン（ｓｔａｂｉｌｉｎ）−２、終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ：ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ）、脳特異的血管新生阻害剤１（ＢＡＩ１：ｂｒａｉｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １）、乳脂肪球−ＥＧＦ第８因子タンパク質（ＭＦＧ−Ｅ８：Ｍｉｌｋ  Ｆａｔ  Ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  Ｆａｃｔｏｒ  ８  Ｐｒｏｔｅｉｎ）（例えばＰｔｄＳｅｒへの高親和性結合を媒介するＦＡ５８Ｃ２ドメイン）、増殖停止特異的６（ＧＡＳ６：Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｒｅｓｔ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ６）、タンパク質Ｓ、タンパク質Ｃ、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、ベータ２−糖タンパク質Ｉ、α５β３インテグリンおよび他のインテグリン、ＣＲ３補体受容体、ＣＲ４補体受容体、ＣＤ１４、ＣＤ９３、アネキシンＶ、ホスファチジルセリン受容体（ＰＳｒ）、プロトロンビンまたはスカベンジャー受容体、例としてスカベンジャー受容体Ｂ（ＳＲＢ：ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂ）［例えばＳＲＢ１（ＣＤ３６）］、スカベンジャー受容体Ｃ（ＳＲＣ：ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｃ）（例えばＬＯＸ−１、ＳＲＣＬ）、スカベンジャー受容体Ｄ（ＳＲＤ：ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｄ）（例えばＣＤ６８、マクロシアリ��）およびＰＳＯＸが含まれる。例示的なヒトＴｉｍ４結合ドメインは、配列番号９０または配列番号９０のアミノ酸２５〜３１４について少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、配列番号９０、配列番号８５、配列番号９０のアミノ酸２５〜３１４または配列番号８５のアミノ酸２３〜２７９のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
【００７０】
ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生生物抗原、神経変性疾患抗原または自己免疫疾患抗原に結合する。例示的な腫瘍抗原には、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ−Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ−３、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ＭＵＣ−１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ−α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＡＧ−７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイス式Ａ抗原、ルイス式Ｙ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＲＡＧＥ−１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ−２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ−４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ−アセチル−ＧＤ２およびＧＤ２が含まれる。
【００７１】
ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原または寄生生物抗原に結合する。
【００７２】
ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、細胞外非シグナル伝達スペーサーまたはリンカードメインを含んでもよい。含まれる場合、そのようなスペーサーまたはリンカードメインは、結合ドメインを宿主細胞表面から離れるように位置させて、適切な細胞−細胞接触、結合および活性化をさらに可能にし得る。細胞外スペーサードメインは一般的に、ＣＥＲの細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインサイズおよび親和性に基づいて、標的分子結合を最適化するために変動し得る（例えばGuest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005；ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照のこと）。ある特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域、または変更された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。変更されたＩｇＧ４ヒンジ領域は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号において説明されており、当該ヒンジ領域は、その全体を参照により本明細書に組み込む。特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１）のアミノ酸配列を有する改変ＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。
【００７３】
本明細書において説明するＣＥＲにおいて使用され得るヒンジ領域の他の例には、野生型またはその変異型であり得る１型膜タンパク質、例としてＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域からのヒンジ領域が含まれる。さらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそれらの組合せから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全てまたは一部を含む（例えばＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照されたく、当該スペーサーは、その全体を参照により本明細書に組み込む）。またさらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃレクチンの柄領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃレクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡおよびＮＫＧ２Ｄが含まれる。またさらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ：ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）膜近傍ドメインに由来し得る。ＴＬＲ膜近傍ドメインは、ＴＬＲのロイシンリッチ反復配列（ＬＲＲ：ｌｅｕｃｉｎｅ  ｒｉｃｈ  ｒｅｐｅａｔ）と膜貫通ドメインとの間にある酸性アミノ酸を含む。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ膜近傍ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９膜近傍ドメインである。例示的なＴＬＲ膜近傍ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４膜近傍ドメインである。
【００７４】
細胞外ドメインは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそれらのトランスジェニック種を含む任意の哺乳動物種に由来し得る。ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化細胞外ドメインである。
【００７５】
貪食シグナル伝達ドメイン
ＣＥＲの貪食シグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、ＣＥＲの細胞外ドメインの標的分子への結合に応答して、機能的シグナルを細胞に伝達することができる。貪食シグナル伝達ドメインは、十分なシグナル伝達活性を保持する貪食シグナル伝達分子の任意の部分であり得る。一部の実施形態においては、貪食シグナル伝達分子の全長または全長細胞内成分が使用される。一部の実施形態においては、貪食シグナル伝達分子または貪食シグナル伝達分子の細胞内成分の切断部分が使用され、但し、その切断部分は十分なシグナル伝達活性を保持する。さらなる実施形態においては、貪食シグナル伝達ドメインは、貪食シグナル伝達分子の全部分または切断部分の変異型であり、但し、その変異型は十分なシグナル伝達活性を保持する（すなわち、機能的変異型である）。
【００７６】
ＣＥＲにおいて使用され得る例示的な貪食シグナル伝達ドメインには、ＭＲＣ１シグナル伝達ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、Ｔｙｒｏ３シグナル伝達ドメイン、Ａｘｌシグナル伝達ドメイン、ＥＬＭＯシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｓｙｋシグナル伝達ドメイン、ＭｙＤ８８シグナル伝達ドメイン、ＰＩ３Ｋシグナル伝達ドメイン、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（例えばＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１またはＦｃαＲ１シグナル伝達ドメイン）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ−Ｒ：Ｂ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２［ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ：ＴＹＲＯ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）とも呼ばれる］シグナル伝達ドメイン、ＩＴＡＭモチーフ１を伴うＮＦＡＴ活性化タンパク質（ＮＦＡＭ１：ＮＦＡＴ  Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｗｉｔｈ  ＩＴＡＭ  Ｍｏｔｉｆ  １）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン（例えばＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン）、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインが含まれる。
【００７７】
ある特定の実施形態においては、貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＭＲＣ１シグナル伝達ドメイン、配列番号４のアミノ酸配列を含むＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、配列番号６のアミノ酸配列を含むＴｙｒｏ３シグナル伝達ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むＡｘｌシグナル伝達ドメイン、配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＬＭＯシグナル伝達ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＳｙｋシグナル伝達ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＭｙＤ８８シグナル伝達ドメイン、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＦｃεＲＩγシグナル伝達ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＢＡＦＦ−Ｒシグナル伝達ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ２シグナル伝達ドメイン、または配列番号３３のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインについて少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有する配列を含む。
【００７８】
一部の実施形態においては、貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＭＲＣ１シグナル伝達ドメイン、配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、配列番号６のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｙｒｏ３シグナル伝達ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＡｘｌシグナル伝達ドメインまたは配列番号８のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＥＬＭＯシグナル伝達ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＳｙｋシグナル伝達ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＭｙＤ８８シグナル伝達ドメイン、配列番号１３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃεＲＩγシグナル伝達ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号１５のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号１６のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、配列番号１７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号１８のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＢＡＦＦ−Ｒシグナル伝達ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＤＡＰ−１２シグナル伝達ドメイン、配列番号２０のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、配列番号２２のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、配列番号２３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、配列番号２５のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、配列番号２６のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、配列番号２８のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、配列番号２９のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、配列番号３０のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、配列番号３１のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、配列番号３２のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｒａｆ２シグナル伝達ドメイン、または配列番号３３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインである。
【００７９】
切断型貪食シグナル伝達ドメインは、そのＮ末端、そのＣ末端において、Ｎ末端およびＣ末端の両方において切断され得る。ある特定の実施形態においては、ＭＲＣ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＭＥＲＴＫ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｔｙｒｏ３貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ａｘｌ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＥＬＭＯ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｔｒａｆ６貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｓｙｋ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＭｙＤ８８貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃεＲＩγ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ２Ａ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ２Ｃ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ３Ａ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１７のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＢＡＦＦ−Ｒ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＤＡＰ−１２貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＮＦＡＭ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＣＤ７９ｂ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ２貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ３貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ４貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ５貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ６貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ７貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ８貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ９貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｔｒａｆ２貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；またはＴｒａｆ３貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３３のアミノ酸配列に対応するそのＮ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されている。
【００８０】
ある特定の実施形態においては、ＭＲＣ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＭＥＲＴＫ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｔｙｒｏ３貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ａｘｌ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＥＬＭＯ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｔｒａｆ６貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｓｙｋ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＭｙＤ８８貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃεＲＩγ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ２Ａ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ２Ｃ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＦｃγＲ３Ａ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１７のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＢＡＦＦ−Ｒ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＤＡＰ−１２貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＮＦＡＭ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＣＤ７９ｂ貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ１貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ２貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ３貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ４貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ５貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ６貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ７貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ８貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；ＴＬＲ９貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；Ｔｒａｆ２貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されており；またはＴｒａｆ３貪食シグナル伝達ドメインは、配列番号３３のアミノ酸配列に対応するそのＣ末端において１、２、３、４、５つまたはそれよりも多いアミノ酸切断されている。
【００８１】
ある特定の実施形態においては、切断型ＭｙＤ８８貪食シグナル伝達ドメインは、デスドメインを含むが、Ｔｏｌｌ／インターロイキン１受容体（ＴＩＲ：Ｔｏｌｌ／ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ホモロジードメインを欠く。そのような切断型ＭｙＤ８８貪食シグナル伝達ドメインの例は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、切断型ＭｙＤ８８貪食シグナル伝達ドメインは、ＴＩＲドメインを含む。ＴＩＲドメインを含む切断型ＭｙＤ８８貪食シグナル伝達ドメインの例は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。例示的な切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。例示的な切断型ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。例示的な切断型ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
【００８２】
ある特定の実施形態においては、ＣＥＲは、本明細書において提供される貪食シグナル伝達ドメインのいずれかから選択される第１の貪食シグナル伝達ドメイン（または一次貪食シグナル伝達ドメイン）および第２の貪食シグナル伝達ドメイン（または二次貪食シグナル伝達ドメイン）を含む。例示的な第１の貪食シグナル伝達ドメインは、ＭＲＣ１シグナル伝達ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、Ｔｙｒｏ３シグナル伝達ドメイン、Ａｘｌシグナル伝達ドメイン、ＥＬＭＯシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｓｙｋシグナル伝達ドメイン、ＭｙＤ８８シグナル伝達ドメイン、ＰＩ３Ｋシグナル伝達ドメイン、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（例えばＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１またはＦｃαＲ１シグナル伝達ドメイン）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ−Ｒ）シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２［ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ）とも呼ばれる］シグナル伝達ドメイン、ＩＴＡＭモチーフ１を伴うＮＦＡＴ活性化タンパク質（ＮＦＡＭ１）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン（例えばＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン）、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインおよびＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインから選択され；例示的な第２の貪食シグナル伝達ドメインは、ＭＲＣ１シグナル伝達ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、Ｔｙｒｏ３シグナル伝達ドメイン、Ａｘｌシグナル伝達ドメイン、ＥＬＭＯシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｓｙｋシグナル伝達ドメイン、ＭｙＤ８８シグナル伝達ドメイン、ＰＩ３Ｋシグナル伝達ドメイン、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（例えばＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１またはＦｃαＲ１シグナル伝達ドメイン）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ−Ｒ）シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２［ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ）とも呼ばれる］シグナル伝達ドメイン、ＩＴＡＭモチーフ１を伴うＮＦＡＴ活性化タンパク質（ＮＦＡＭ１）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン（例えばＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン）、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインおよびＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインから選択される。
【００８３】
第１の貪食シグナル伝達ドメインおよび第２の貪食シグナル伝達ドメインの位置は、ＣＥＲにおいて互換的であることが理解される。したがって、一例においては、第１の貪食シグナル伝達ドメインは、ＣＥＲにおいて第２の貪食シグナル伝達ドメインに対してＮ末端に位置し得る。別の例においては、第１の貪食シグナル伝達ドメインは、ＣＥＲにおいて第２の貪食シグナル伝達ドメインに対してＣ末端に位置し得る。一部の実施形態においては、ＣＥＲは、同じ分子からの第１の貪食シグナル伝達ドメインおよび第２の貪食シグナル伝達ドメインを含む。他の実施形態においては、第１の貪食シグナル伝達ドメインおよび第２の貪食シグナル伝達ドメインは、異なる分子からのドメインである。
【００８４】
貪食シグナル伝達ドメインは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそれらのトランスジェニック種を含む哺乳動物種に由来し得る。
【００８５】
膜貫通ドメイン
本開示のＣＥＲは、細胞外ドメインと貪食シグナル伝達ドメインとを接続し、かつこれらの間に位置する膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横断し、かつ宿主細胞膜においてＣＥＲを固定する疎水性アルファヘリックスである。膜貫通ドメインは、結合ドメインに、または存在する場合細胞外スペーサードメインに直接的に融合され得る。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、膜内在性タンパク質［例えば受容体、表面抗原分類（ＣＤ：ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子その他］に由来する。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインまたは貪食シグナル伝達ドメインと同じ分子から選択され得る（例えばＴＬＲ４貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ４膜貫通ドメインを含むＣＥＲ、またはＴｉｍ４結合ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むＣＥＲ）。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは各々、異なる分子から選択される。他の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび貪食シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。また他の実施形態においては、膜貫通ドメイン、細胞外ドメインおよび貪食シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。
【００８６】
ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ４、Ｔｉｍ３、ＦｃＲ（例えばＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１またはＦｃαＲ１）、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＭＥＲＴＫ、Ａｘｌ、Ｔｙｒｏ３、ＣＤ４、ＤＡＰ１２、ＭＲＣ１、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む。
【００８７】
ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＴｉｍ１膜貫通ドメイン、配列番号３８または３９のアミノ酸配列を含むＴｉｍ４膜貫通ドメイン、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＴｉｍ３膜貫通ドメイン、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ１膜貫通ドメイン、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ａ膜貫通ドメイン、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ｂ２膜貫通ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ｃ膜貫通ドメイン、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ３Ａ膜貫通ドメイン、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦｃεＲ１膜貫通ドメイン、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦｃαＲ１膜貫通ドメイン、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＭＥＲＴＫ膜貫通ドメイン、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＡｘｌ膜貫通ドメイン、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＴｙｒｏ３膜貫通ドメイン、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤ４膜貫通ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２膜貫通ドメイン、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＭＲＣ１膜貫通ドメイン、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１膜貫通ドメイン、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２膜貫通ドメイン、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３膜貫通ドメイン、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４膜貫通ドメイン、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５膜貫通ドメイン、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６膜貫通ドメイン、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７膜貫通ドメイン、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８膜貫通ドメイン、または配列番号６４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９膜貫通ドメインについて少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有する配列を含む。
【００８８】
ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｉｍ１膜貫通ドメイン、配列番号３８または３９のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｉｍ４膜貫通ドメイン、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｉｍ３膜貫通ドメイン、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ１膜貫通ドメイン、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ２Ａ膜貫通ドメイン、配列番号４３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ２Ｂ２膜貫通ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ２Ｃ膜貫通ドメイン、配列番号４５のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃγＲ３Ａ膜貫通ドメイン、配列番号４６のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃεＲ１膜貫通ドメイン、配列番号４７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＦｃαＲ１膜貫通ドメイン、配列番号４８のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号５０のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＭＥＲＴＫ膜貫通ドメイン、配列番号５１のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＡｘｌ膜貫通ドメイン、配列番号５２のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴｙｒｏ３膜貫通ドメイン、配列番号５３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤ４膜貫通ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＤＡＰ１２膜貫通ドメイン、配列番号５５のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＭＲＣ１膜貫通ドメイン、配列番号５６のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ１膜貫通ドメイン、配列番号５７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２膜貫通ドメイン、配列番号５８のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ３膜貫通ドメイン、配列番号５９のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ４膜貫通ドメイン、配列番号６０のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ５膜貫通ドメイン、配列番号６１のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ６膜貫通ドメイン、配列番号６２のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ７膜貫通ドメイン、配列番号６３のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ８膜貫通ドメイン、または配列番号６４のアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ９膜貫通ドメインである。
【００８９】
膜貫通ドメインは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそれらのトランスジェニック種を含む任意の哺乳動物種に由来し得る。
【００９０】
本明細書において説明するＣＥＲの１つのドメインの別のドメインへの直接的融合は、介在性接合部アミノ酸の存在を排除しないと理解される。接合部アミノ酸は、天然または非天然（例えばキメラタンパク質のコンストラクト設計から生じる）であり得る。
【００９１】
ある特定の実施形態においては、キメラ貪食受容体は、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するポリヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態においては、キメラ貪食受容体は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化貪食受容体である。
【００９２】
本開示の細胞免疫療法組成物の組合せにおける使用のためのＣＥＲの実施形態は、実施例、表１、配列リストにおいて提供され、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５３５５３号、同ＰＣＴ／ＵＳ／２０１８／５２２９７号、米国仮出願第６２／５６３，６１５号および同第６２／６４９，５２９号において開示されており、当該出願は、それらの全体を参照により組み込む。
【００９３】
表１：例示的なキメラ貪食受容体
【表１】
2021519301.tif 000003
【表２】
2021519301.tif 000004
【００９４】
本開示のＣＥＲの追加の実施形態は、プロ貪食マーカーまたは標的抗原に結合する細胞外ドメインと；適宜の細胞外スペーサードメインと；膜貫通ドメインと；ＴＬＲシグナル伝達ドメインから選択される一次貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメイン、ＴＲＡＦ３シグナル伝達ドメインまたはＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインから選択される二次貪食シグナル伝達ドメインを含む貪食シグナル伝達ドメインとを含む。ＣＥＲのさらなる実施形態は、プロ貪食マーカーまたは標的抗原に結合する細胞外ドメインと；適宜の細胞外スペーサードメインと；膜貫通ドメインと；ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインまたはＴＬＲ８シグナル伝達ドメインから選択される一次貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメイン、ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインまたはＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインから選択される二次貪食シグナル伝達ドメインを含む貪食シグナル伝達ドメインとを含む。ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態においては、細胞外ドメインは、Ｔｉｍ４結合ドメインを含む。例示的なＴｉｍ４結合ドメインは、配列番号９０のアミノ酸配列または配列番号９０のアミノ酸２５〜３１４を含む。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む。例示的なＴｉｍ４膜貫通ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。使用され得る例示的なＴＬＲ２およびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインは、それぞれ、配列番号２４および配列番号３０を含むアミノ酸配列を含む。例示的なＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。例示的なＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。例示的なＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインは、配列番号９または３５のアミノ酸配列を含む。
【００９５】
ＩＩ．キメラ抗原受容体
ある特定の実施形態においては、本開示の組成物は、一部には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする導入遺伝子を含む免疫細胞を含む。キメラ抗原受容体は、一般的に：標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン；細胞内シグナル伝達ドメイン；および細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインを含む組換え受容体である。キメラ抗原受容体は一般的に、それらが発現される宿主細胞に抗原特異的細胞傷害活性を与える。
【００９６】
本開示のＣＡＲにおける使用のために好適な結合ドメインには、任意の抗原結合性ポリペプチドが含まれる。結合ドメインは、例えば全長重鎖、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓＦｖ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ｄＡｂ、ＶＨＨ、ＣＤＲおよびｓｃＦｖを含む抗体またはその抗原結合性断片を含み得る。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲ結合ドメインは、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化ＣＡＲ結合ドメインである。
【００９７】
ある特定の実施形態においては、本開示において提供されるＣＡＲの細胞外ドメインは、細胞外非シグナル伝達スペーサーまたはリンカードメインを含んでもよい。含まれる場合、そのようなスペーサーまたはリンカードメインは、結合ドメインを、宿主細胞表面から離れるように位置させて、適切な細胞−細胞接触、結合および活性化をさらに可能にし得る。細胞外スペーサードメインは一般的に、ＣＡＲの細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインサイズおよび親和性に基づいて、標的分子結合を最適化するために変動し得る（例えばGuest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005；ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照のこと）。ある特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域または変更された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。変更されたＩｇＧ４ヒンジ領域は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号において説明されており、当該ヒンジ領域は、その全体を参照により本明細書に組み込む。特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１）のアミノ酸配列を有する改変ＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。
【００９８】
本明細書において説明するＣＡＲにおいて使用され得るヒンジ領域の他の例には、野生型またはその変異型であり得る１型膜タンパク質、例としてＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域からのヒンジ領域が含まれる。さらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそれらの組合せから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全てまたは一部を含む（例えばＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照されたく、当該スペーサーは、その全体を参照により本明細書に組み込む）。またさらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃレクチンの柄領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃレクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡおよびＮＫＧ２Ｄが含まれる。
【００９９】
本開示のＣＡＲは、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続し、かつこれらの間に位置する膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横断し、かつ宿主細胞膜においてＣＡＲを固定する疎水性アルファヘリックスである。膜貫通ドメインは、結合ドメインに、または存在する場合細胞外スペーサードメインに直接的に融合され得る。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、膜内在性タンパク質［例えば受容体、表面抗原分類（ＣＤ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子その他］に由来する。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインと同じ分子から選択され得る（例えばＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８膜貫通ドメインを含むＣＡＲ）。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは各々、異なる分子から選択される。他の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。また他の実施形態においては、膜貫通ドメイン、細胞外ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。
【０１００】
本開示のＣＡＲにおける使用のための例示的な膜貫通ドメインには、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５およびＺａｐ７０が含まれる。例示的なＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。
【０１０１】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、ＣＡＲの細胞外ドメインの標的分子への結合に応答して、機能的シグナルを細胞に伝達することができる。細胞内シグナル伝達ドメインは、十分なシグナル伝達活性を保持する細胞内シグナル伝達分子の任意の部分であり得る。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達分子の全長または全長細胞内成分が使用される。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達分子または細胞内シグナル伝達分子の細胞内成分の切断部分が使用され、但し、その切断部分は十分なシグナル伝達活性を保持する。さらなる実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達分子の全部分または切断部分の変異型であり、但し、その変異型は十分なシグナル伝達活性を保持する（すなわち、機能的変異型である）。
【０１０２】
ある特定の実施形態においては、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）含有シグナル伝達ドメインを含む。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは一般的に、少なくとも１つの（１、２、３、４つまたはそれよりも多い）ＩＴＡＭを含有し、これは、ＹＸＸＬ／Ｉ−Ｘ６−８−ＹＸＸＬ／Ｉの保存されたモチーフを指す。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは、抗原結合またはリガンド係合後、Ｔ細胞活性化シグナル伝達を開始し得る。ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインには、例えばＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２およびＣＤ６６ｄの細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１５８または１５９のアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
ＣＡＲ細胞内シグナル伝達ドメインは、主要な、または古典的な（例えばＩＴＡＭ駆動）活性化シグナルと共に活性化された場合、Ｔ細胞応答、例としてＴ細胞活性化、サイトカイン産生、増殖、分化、生存、エフェクター機能またはそれらの組合せを促進する、または向上させる共刺激性シグナル伝達ドメインを含んでもよい。ＣＡＲにおける使用のための共刺激性シグナル伝達ドメインには、例えばＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０またはそれらの任意の組合せが含まれる。特定の実施形態においては、共刺激性シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）シグナル伝達ドメインを含む。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインは、配列番号１６１または１６２のアミノ酸配列を含む。例示的な４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインは、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
ある特定の実施形態においては、キメラ抗原受容体は、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するポリヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態においては、キメラ抗原受容体は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化抗原受容体である。
【０１０５】
ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲまたは第３世代ＣＡＲである。第１世代ＣＡＲは一般的に、ＣＤ３ζ、ＦｃγＲＩの細胞内シグナル伝達ドメインまたは他のＩＴＡＭ含有活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有して、Ｔ細胞活性化シグナルを提供する。第２世代ＣＡＲは、共刺激性シグナル伝達ドメイン（例えば内因性Ｔ細胞共刺激性受容体、例としてＣＤ２８、４−１ＢＢまたはＩＣＯＳからの共刺激性シグナル伝達ドメイン）をさらに含む。第３世代ＣＡＲは、ＩＴＡＭ含有活性化ドメイン、第１の共刺激性シグナル伝達ドメインおよび第２の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。
【０１０６】
ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、Ｔ細胞受容体ベースのキメラ抗原受容体（ＴＣＲ−ＣＡＲ）である。ＴＣＲ−ＣＡＲは、可溶性ＴＣＲを一般的に含むヘテロ二量体融合タンパク質であり（ＶαドメインおよびＣαドメインを含むポリペプチド鎖、およびＶβドメインおよびＣβドメインを含むポリペプチド鎖）、ＶβＣβポリペプチド鎖は、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達成分（例えばＩＴＡＭ含有活性化ドメインおよび適宜、共刺激性シグナル伝達ドメイン）に連結されている（例えばWalseng et al., 2017 Scientific Reports 7:10713を参照のこと）。
【０１０７】
本開示のＣＡＲは、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生生物抗原、腫瘍抗原、神経変性疾患抗原または自己免疫疾患抗原を含む様々な抗原をターゲティングし得る。ＣＡＲがターゲティングし得る例示的な腫瘍抗原には、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ−Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ−３、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ＭＵＣ−１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ−α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＡＧ−７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイス式Ａ抗原、ルイス式Ｙ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＲＡＧＥ−１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ−２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ−４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ−アセチル−ＧＤ２およびＧＤ２が含まれる。
【０１０８】
ＩＩＩ．Ｔ細胞受容体結合タンパク質
ある特定の実施形態においては、本開示の組成物は、一部には、組換えＴＣＲ結合タンパク質をコードする導入遺伝子を含む免疫細胞を含む。組換えＴＣＲ結合タンパク質には、α鎖ポリペプチドとβ鎖ポリペプチドとのヘテロ二量体（αβ  ＴＣＲ）またはγ鎖ポリペプチドとδ鎖ポリペプチドとのヘテロ二量体（γδ  ＴＣＲ）からなる「伝統的な」ＴＣＲ；例えば単鎖ＴＣＲ、単一ドメインＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ融合ＴＣＲタンパク質およびＴＣＲ融合コンストラクト［ＴＲｕＣ（商標）］を含む、その結合性断片および融合タンパク質が含まれる。ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲは、高親和性ＴＣＲである。
【０１０９】
ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲ結合タンパク質は、フレキシブルリンカーによってＶβに接合されたＶαを含む単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ：ｓｉｎｇｌｅ  ｃｈａｉｎ  ＴＣＲ）である。一部の実施形態においては、ｓｃＴＣＲは、Ｖα−リンカー−Ｖβポリペプチドを含む。他の実施形態においては、ｓｃＴＣＲは、Ｖβ−リンカー−Ｖαポリペプチドを含む。
【０１１０】
ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲ結合タンパク質は、単一ドメインＴＣＲ（例えばＶβ）である。
【０１１１】
ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲ結合タンパク質は、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）融合タンパク質である。ｓｃＴＣＲ融合タンパク質は、ｓｃＴＣＲを含む結合ドメイン（ＴＣＲ  Ｖβドメインに連結したＴＣＲ  Ｖαドメイン）と、適宜の細胞外スペーサーと、膜貫通ドメインと、ＣＤ３ζ  ＩＴＡＭ含有活性化ドメインおよび適宜の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含む（Aggen et al., 2012, Gene Ther. 19:365-374；Stone et al., Cancer Immunol. Immunother. 2014, 63:1163-76を参照のこと）。
【０１１２】
ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲ結合タンパク質は、ＴＣＲ融合コンストラクト［ＴＲｕＣ（商標）コンストラクト］である（米国特許公開公報第２０１７／０１６６６２２号を参照のこと）。ＴＲｕＣ（商標）コンストラクトは、ＴＣＲ複合体の少なくとも１つの成分（ＣＤ３γ、ＣＤ３εまたはＣＤ３δ）に融合した抗原特異的結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含み、ＴＣＲ複合体成分融合タンパク質を形成する。ヒトＴＣＲ複合体は、ＣＤ３εポリペプチド、ＣＤ３γポリペプチド、ＣＤ３δポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＴＣＲ  α鎖ポリペプチドおよびＴＣＲ  β鎖ポリペプチドを含有する。ＴＣＲ複合体成分融合タンパク質は、ＴＣＲ複合体の他の成分と会合して機能的完全ＴＣＲ融合複合体を形成することができる。ＴＣＲとは異なって、ＴＲｕＣ（商標）コンストラクトは、ＭＨＣ独立様式において標的抗原に結合することができる。
【０１１３】
ある特定の実施形態においては、ＴＣＲ結合タンパク質は、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するポリヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態においては、ＴＣＲ結合タンパク質は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化ＴＣＲ結合タンパク質である。
【０１１４】
本開示のＴＣＲ結合タンパク質は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生生物抗原、神経変性疾患抗原および自己免疫疾患抗原を含む様々な抗原に結合し得る。組換えＴＣＲ結合タンパク質がターゲティングし得る例示的な腫瘍抗原には、ＷＴ−１、メソテリン、ＭＡＲＴ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＨＰＶ  Ｅ７、サバイビン、α−フェトプロテインおよび腫瘍特異的新生抗原が含まれる。本開示の細胞免疫療法組成物の組合せにおいて使用され得る例示的なＨＰＶ１６  Ｅ７タンパク質特異的ＴＣＲは、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１５／１８４２２８号（その全体を参照により組み込む）において示されている。ある特定の実施形態においては、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。配列番号８４のアミノ酸配列は、ＴＣＲβ鎖配列とＴＣＲα鎖配列との間にＰ２Ａ自己切断ペプチドを含有し、これは、宿主細胞において切断されて、２つのポリペプチド鎖を形成し得る。したがって、ある特定の実施形態においては、配列番号８４によって表されるＴＣＲは、二量体化してαβＴＣＲを形成することができる別々のＴＣＲβおよびＴＣＲαポリペプチド鎖を含む。ある特定の実施形態においては、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲは、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶβを含む。ある特定の実施形態においては、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲは、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＶαを含む。さらなる実施形態においては、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲは、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶβおよび配列番号８８のアミノ酸配列を含むＶαを含む。
【０１１５】
ある特定の実施形態においては、ＴＣＲ  Ｃαドメイン、Ｃβドメインまたはこれらの両方は、非改変ＴＣＲには存在しない、２つの定常ドメインシステイン残基間の鎖間ジスルフィド結合を創出するシステイン置換を含む。そのような改変ＴＣＲは、より安定なヘテロ二量体を形成し得る。特定の実施形態においては、Ｃαドメインは、野生型タンパク質配列の４８位におけるＴｈｒ→Ｃｙｓ置換を含み、Ｃβドメインは、野生型タンパク質配列の５６位におけるＳｅｒ→Ｃｙｓ置換を含む（ＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１５／１８４２２８号を参照のこと）。例示的なシステイン改変ＴＣＲ  Ｃβ定常領域は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
【０１１６】
ある特定の実施形態においては、ＴＣＲは、膜貫通ドメインの疎水性を増大させるための、αおよびβ鎖のうちの１つまたは両方の定常領域の膜貫通ドメインにおける１、２または３つのアミノ酸の、疎水性アミノ酸による置換を含む。ある特定の実施形態においては、ＴＣＲα鎖のＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４およびＧｌｙ１１５から選択される残基のうちの１、２または３つは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、ＭｅｔまたはＴｒｐにより置換される。例示的なシステイン改変「ＬＶＬ」置換ＴＣＲ  Ｃα領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
ある特定の実施形態においては、組合せ細胞免疫療法組成物におけるＣＥＲおよびＣＡＲ、またはＣＥＲおよびＴＣＲ結合タンパク質は、同じ抗原をターゲティングする。他の実施形態においては、組合せ細胞免疫療法組成物におけるＣＥＲおよびＣＡＲ、またはＣＥＲおよびＴＣＲ結合タンパク質は、異なる抗原をターゲティングする。
【０１１８】
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞
ある特定の態様においては、本開示は、本明細書において説明する細胞免疫療法分子（例えばＣＥＲ、ＣＡＲおよびＴＣＲ結合タンパク質）のうちの任意の１つまたは複数をコードする核酸分子を提供する。核酸とは、一本鎖または二本鎖ＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡを指す場合があり、アンチセンスＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびＲＮＡを含む互いに相補する核酸の正の鎖および負の鎖を含み得る。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡの天然形態または合成形態であり得る。所望の受容体をコードする核酸配列は、例えばSambrook et al. (1989 and 2001 editions; Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY)およびAusubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, 2003)において説明される通り、標準技術を使用する当該技術分野において公知の組換え法を使用して、例として所望の配列またはその一部を発現する細胞からのライブラリーをスクリーニングすることによって、所望の配列またはその一部を含むことが公知のベクターからの配列を派生させることによって、または所望の配列またはその一部を含有する細胞または組織から直接的に配列またはその一部を単離することによって、取得または産生することができる。あるいは、目的の配列は、クローニングするのではなく、合成産生することができる。
【０１１９】
本明細書において提供される細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、任意の動物、例としてヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタまたはそれらの組合せに由来し得る。ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドが挿入される宿主細胞と同じ動物種からのポリヌクレオチドである。
【０１２０】
ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、前駆体タンパク質の分泌経路へのターゲティングのための５’末端におけるシグナルペプチド（リーダーペプチドまたはシグナル配列とも呼ばれる）をコードする配列を含む。シグナルペプチドは、細胞プロセシングおよび受容体の宿主細胞膜への局在化中に細胞外ドメインのＮ末端から切断されてもよい。シグナルペプチド配列が切断または除去されたポリペプチドは、成熟ポリペプチドとも呼ばれ得る。本開示の受容体において使用され得るシグナルペプチドの例には、例えばＧＭ−ＣＳＦ（配列番号６７のアミノ酸配列）またはＴｉｍ４（配列番号６８のアミノ酸配列）を含む、内因性分泌タンパク質由来のシグナルペプチドが含まれる。本明細書において使用されるとき、本明細書において提供される細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列についての言及は、シグナル配列を含んでもよく、除外してもよい。シグナルペプチド配列を含む本明細書において開示される配列について、シグナルペプチド配列は、コードされるタンパク質を細胞外膜へ輸送することができる別のシグナルペプチドで置き換えてもよいことが当業者によって理解される。
【０１２１】
ある特定の実施形態においては、本開示のポリヌクレオチドをコードする細胞免疫療法分子は、ポリヌクレオチドを含む標的宿主細胞における効率的な発現のためにコドン最適化される（例えばScholten et al., Clin. Immunol. 119:135-145 (2006)を参照のこと）。本明細書において使用されるとき、「コドン最適化した」ポリヌクレオチドは、目的の宿主細胞におけるｔＲＮＡの存在量に対応するサイレント変異により改変したコドンを有する異種のポリヌクレオチドを含む。
【０１２２】
本開示の細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、発現制御配列に作動可能に連結され得る。発現制御配列は、適切な転写開始、終止、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、例としてスプライシングおよびポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を向上させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を向上させる配列；およびことによると、タンパク質分泌を向上させる配列を含み得る。
【０１２３】
ある特定の実施形態においては、本開示の細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、空間的制御および時間的制御を最適化するように構築され得る。例えば、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、空間的制御および時間的制御を最適化するプロモーターエレメントを含み得る。一部の実施形態においては、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドの器官、細胞種（例えば免疫細胞）または病理学的微小環境、例として腫瘍または感染組織への特異的誘導を可能にする組織特異的プロモーターまたはエンハンサーを含む。「エンハンサー」は、協同的に、または独立して機能して転写を活性化し得る追加のプロモーターエレメントである。ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、構成的プロモーターを含む。本開示のポリヌクレオチドを発現することにおける使用のための例示的な構成的プロモーターは、ＥＦ−１αプロモーターである。ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、誘導性プロモーターを含む。ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、組織特異的プロモーターを含む。
【０１２４】
本開示の細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドは、目的の宿主細胞（例えば免疫細胞）への導入のために、適切なベクター、例えばウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクターおよび非ウイルスベクター、例として脂質ベースのＤＮＡベクター、修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、ＣＥＬｉＤおよびトランスポゾン媒介遺伝子移行（ＰｉｇｇｙＢａｃ、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ）に挿入され得る。本開示の細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドは、任意の好適なベクター、例として発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターまたはシークエンシングベクターにクローニングされ得る。ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチド、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドおよび貪食シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、共に接合されてＣＥＲをコードする単一のポリヌクレオチドになり、その後、ベクターに挿入される。他の実施形態においては、細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチド、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドおよび貪食シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、発現されるアミノ酸配列が機能的ＣＥＲを産生するように、ベクターに別々に挿入され得る。同様に、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの成分は、ベクターへの挿入前にアセンブルしてもよく、ベクターに別々に挿入し、アセンブルしてもよい。ＣＥＲをコードするベクターは、「ＣＥＲベクター」と本明細書において呼ばれる。ＣＡＲをコードするベクターは、「ＣＡＲベクター」と本明細書において呼ばれる。ＴＣＲ結合タンパク質をコードするベクターは、「ＴＣＲ結合タンパク質ベクター」と本明細書において呼ばれる。集合的に、これらのベクターは、「細胞免疫療法分子ベクター」と本明細書において呼ばれる。
【０１２５】
ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子ポリヌクレオチドの長期統合および娘細胞への伝播を可能にするベクターが利用される。例には、ウイルスベクター、例として、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ポックスウイルスまたはレトロウイルス、例としてレンチウイルスベクターが含まれる。レンチウイルスに由来するベクターは、長期遺伝子移行を達成するために使用され、非増殖細胞、例として肝細胞に形質導入する能力、および低免疫原性を含む、ベクターに優る付加利益を有し得る。
【０１２６】
ある特定の実施形態においては、エピソーム性を保持する非統合ベクターは、本開示の細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドのために使用される。非統合ウイルスベクターの例には、アデノウイルスベクター、および非統合性になるように変異させた統合ウイルスベクター、例として非統合レンチウイルスベクターおよび非統合フォーミーウイルスベクターが含まれる。
【０１２７】
コアウイルスをコードするベクターは、「ウイルスベクター」と本明細書において呼ばれる。ヒト遺伝子療法適用のために特定されたウイルスベクターを含む、本開示の組成物との使用のために好適な多数の使用可能なウイルスベクターがある（Pfeifer and Verma, Ann. Rev. Genomics Hum. Genet. 2:177, 2001を参照のこと）。好適なウイルスベクターには、ＲＮＡウイルスに基づくベクター、例としてレトロウイルス由来ベクター、例えばモロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ：Ｍｏｌｏｎｅｙ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ）由来ベクターが含まれ、より複雑なレトロウイルス由来ベクター、例えばレンチウイルス由来ベクターが含まれる。ＨＩＶ−１由来ベクターは、このカテゴリーに属する。他の例には、ＨＩＶ−２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶおよびマエディビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが含まれる。レトロウイルス性およびレンチウイルス性ウイルスベクターを使用する方法、および哺乳動物宿主細胞にキメラ受容体導入遺伝子を含有するウイルス粒子を形質導入するための細胞をパッケージングする方法は、当該技術分野において公知であり、例えば米国特許第８，１１９，７７２号；Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011；Zhao et al., J. Immunol. 174:4415, 2005；Engels et al., Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003；Frecha et al., Mol. Ther. 18:1748, 2010；Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97, 2009において以前に説明されている。また、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターのコンストラクトおよび発現系は、市販されている。
【０１２８】
ある特定の実施形態においては、ウイルスベクターは、細胞免疫療法分子をコードする非内因性ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するために使用される。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターであり得る。また、ウイルスベクターは、形質導入についてのマーカーをコードする核酸配列を含み得る。ウイルスベクターのための形質導入マーカーは、当該技術分野において公知であり、薬物抵抗性を与え得る選択マーカー、または検出可能なマーカー、例として蛍光マーカー、もしくはフローサイトメトリー等の方法によって検出され得る細胞表面タンパク質を含む。特定の実施形態においては、ウイルスベクターは、蛍光タンパク質（例えば緑色、黄色）を含む形質導入についての遺伝子マーカー、ヒトＣＤ２の細胞外ドメインまたは切断型ヒトＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔまたはｔＥＧＦＲ；Wang et al., Blood 118:1255, 2011を参照のこと）をさらに含む。例示的なｔＥＧＦＲ配列は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
また、ポリヌクレオチドデリバリーのために、例えばアデノウイルスベースのベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ：ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓ）ベースのベクター；アンプリコンベクター、複製欠損ＨＳＶおよび弱毒化ＨＳＶを含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ：ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ）由来のベクターを含むＤＮＡウイルスベクターを含む他のウイルスベクターを使用することができる（Krisky et al., Gene Ther. 5: 1517, 1998）。
【０１３０】
また、遺伝子療法のために最近開発された他のウイルスベクターは、本開示の組成物および方法と共に使用することができる。そのようなベクターには、バキュロウイルスおよびα−ウイルス由来のベクター（Jolly, D J. 1999.  Emerging Viral Vectors.  pp 209-40, Friedmann T. ed.  The Development of Human Gene Therapy.  New York: Cold Spring Harbor Lab）またはプラスミドベクター（例としてｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙまたは他のトランスポゾンベクター）が含まれる。
【０１３１】
時間的な制御が所望される場合、細胞免疫療法分子ベクターは、形質導入された細胞の誘導性枯渇を可能にするエレメントを含み得る。例えば、そのようなベクターは、誘導性自殺遺伝子を含み得る。自殺遺伝子は、アポトーシス遺伝子または剤（例えば薬物）への感受性を与える遺伝子であり得る。例示的な自殺遺伝子には、化学誘導性カスパーゼ９（ｉＣＡＳＰ９）（米国特許公開公報第２０１３／００７１４１４号）、化学誘導性Ｆａｓ、またはガンシクロビルへの感受性を与える単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ）が含まれる。さらなる実施形態においては、細胞免疫療法分子ベクターは、関連抗体の注入に際して、形質導入された細胞の枯渇を可能にする公知の細胞表面抗原を発現するように設計され得る。形質導入された細胞の枯渇のために使用され得る細胞表面抗原およびそれらの関連抗体の例には、ＣＤ２０およびリツキシマブ、ＲＱＲ８（ＣＤ３４選択および抗ＣＤ２０枯渇を可能にする混合ＣＤ３４およびＣＤ２０エピトープ）およびリツキシマブ、ならびにＥＧＦＲおよびセツキシマブが含まれる。
【０１３２】
また、誘導性ベクター系、例として、ドキシサイクリンにより導入遺伝子発現を活性化するテトラサイクリン（Ｔｅｔ）−Ｏｎベクター系（Heinz et al., Hum. Gene Ther. 2011, 22:166-76）は、細胞免疫療法分子の誘導性発現のために使用され得る。また、小分子応答転写因子は、発現を調節するために使用され得る。また、細胞免疫療法分子の誘導性発現は、細胞免疫療法分子構造に導入したフックおよびストレプトアビジン結合タンパク質を通して小胞体膜に固定したストレプトアビジンに基づく選択フック（ＲＵＳＨ）系を使用する保持を介して達成することができ、ここでは、ビオチンの系への添加は、小胞体からの細胞免疫療法分子の放出をもたらす（Agaugue et al., 2015, Mol. Ther. 23(Suppl. 1):S88）。
【０１３３】
ある特定の実施形態においては、また、ＣＥＲ改変宿主細胞は、１つまたは複数の小ＧＴＰアーゼを共発現するように改変され得る。Ｒｈｏ  ＧＴＰアーゼ、小（約２１ｋＤａ）シグナル伝達Ｇタンパク質のファミリーおよびまた、Ｒａｓスーパーファミリーのサブファミリーは、様々な細胞種におけるアクチン細胞骨格組織化を調節し、食作用中の偽足伸長およびファゴソーム閉鎖を促進する（例えばCastellano et al., 2000, J. Cell Sci. 113:2955-2961を参照のこと）。貪食は、繋ぎ止められた細胞または粒子の下のＦ−アクチン動員、および細胞または粒子内部移行をもたらす膜伸長を可能にするＦ−アクチン再配置を必要とする。Ｒｈｏ  ＧＴＰアーゼには、ＲｈｏＡ、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、ＲｈｏＧおよびＣＤＣ４２が含まれる。他の小ＧＴＰアーゼ、例としてＲａｐ１は、補体媒介食作用の調節に関与する。小ＧＴＰアーゼとＣＥＲとの共発現は、宿主細胞による標的細胞または粒子内部移行および／またはファゴソーム形成を促進する、または向上させ得る。一部の実施形態においては、ＧＴＰアーゼをコードする組換え核酸分子は、ＣＥＲ含有ベクターとは別々のベクターにコードされる。他の実施形態においては、ＧＴＰアーゼをコードする組換え核酸分子は、ＣＥＲと同じベクターにコードされる。ＧＴＰアーゼおよびＣＥＲは、同じベクターの異なるプロモーターの調節下で（例えば異なるマルチクローニング部位において）発現され得る。あるいは、ＣＥＲおよびＧＴＰアーゼは、マルチシストロン性ベクターにおいて１つのプロモーターの調節下で発現され得る。
【０１３４】
ＣＥＲと共に共発現され得るＧＴＰアーゼの例には、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｂ５（Ｒａｂ５ａとも呼ばれる）、Ｒａｂ７、Ｒａｐ１、ＲｈｏＡ、ＲｈｏＧ、ＣＤＣ４２またはそれらの任意の組合せが含まれる。特定の実施形態においては、ＧＴＰアーゼは、配列番号７１のＲａｃ１アミノ酸配列、配列番号７２のＲａｂ５アミノ酸配列、配列番号７３のＲａｂ７アミノ酸配列、配列番号７４のＲａｐ１アミノ酸配列、配列番号７５のＲｈｏＡアミノ酸配列、配列番号７６のＣＤＣ４２アミノ酸配列またはそれらの任意の組合せと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一である配列を含むか、またはその配列である。ある特定の実施形態においては、ＧＴＰアーゼの発現は、ＣＥＲがその標的抗原に結合するために十分な時間後、ＧＴＰアーゼの発現が作動されるように、宿主細胞において誘導または調節される。さらなる実施形態においては、ＧＴＰアーゼの発現は、標的抗原を発現する細胞のＣＥＲ媒介貪食に十分な時間後、作動解除され得る。
【０１３５】
ある特定の実施形態においては、本開示のポリヌクレオチドまたはベクターは、単一のｍＲＮＡからの多数のタンパク質の共発現を可能にするために、その中にコードされる多数の遺伝子間に配置された配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ：ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅ）、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドを含み得る。例えば、ＩＲＥＳ、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドは、ＴＣＲα鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとＴＣＲβ鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとの間に配置され得る。別の例においては、ＩＲＥＳ、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドは、ＣＥＲをコードするポリヌクレオチドと形質導入マーカー（例えば切断型ＥＧＦＲ）をコードするポリヌクレオチドとの間に配置され得る。ある特定の実施形態においては、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス−１（Ｐ２Ａ）、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）またはそれらの変異型である。例示的なＴ２Ａペプチドは、配列番号７７、７８、７９および１６８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例示的なＰ２Ａペプチドは、配列番号８０または８１のアミノ酸配列を含む。例示的なＥ２Ａペプチド配列は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。例示的なＦ２Ａペプチド配列は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
【０１３６】
ある特定の実施形態においては、対象から得られた免疫細胞等の細胞は、本明細書において説明する細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドを導入することによって、非天然または組換え細胞（例えば非天然または組換え免疫細胞）に遺伝子改変される場合があり、それによって、細胞は、細胞表面局在化細胞免疫療法分子（例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質）を発現する。ある特定の実施形態においては、宿主細胞は、免疫細胞、例として骨髄系前駆細胞またはリンパ球前駆細胞である。細胞免疫療法分子または細胞免疫療法分子を含むベクターを含むように改変され得る例示的な免疫細胞には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、リンパ球前駆体細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆体細胞、成熟骨髄細胞、単球またはマクロファージが含まれる。
【０１３７】
ある特定の実施形態においては、Ｂ細胞は、本開示のＣＥＲを発現するように遺伝子改変される。Ｂ細胞は、炎症部位への輸送、抗原を内部移行および提示することができること、Ｔ細胞を共刺激することができること、高増殖性および自己再生性（生涯持続する）を含む宿主細胞として有益であり得るある特定の特性を有する。ある特定の実施形態においては、ＣＥＲ改変Ｂ細胞は、貪食された標的細胞または貪食された標的粒子をより小さいペプチドに消化し、それらを、ＭＨＣ分子を介してＴ細胞に提示することができる。ＣＥＲ改変Ｂ細胞による抗原提示は、免疫応答の非ターゲティング抗原への抗原拡張に寄与し得る。Ｂ細胞は、Ｂ細胞系統にコミットされた前駆細胞もしくは前駆体細胞（例えばプレプロＢ細胞、プロＢ細胞およびプレＢ細胞）；未成熟かつ不活性化Ｂ細胞；または成熟かつ機能的もしくは活性化Ｂ細胞を含む。ある特定の実施形態においては、Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞性細胞、形質芽細胞、メモリーＢ細胞またはそれらの任意の組合せであり得る。メモリーＢ細胞は、ナイーブＢ細胞においては非存在であるＣＤ２７の発現によってナイーブＢ細胞から区別され得る。ある特定の実施形態においては、Ｂ細胞は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物由来の初代細胞または細胞系であり得る。Ｂ細胞系は、当該技術分野において周知である。哺乳動物から得られる場合、Ｂ細胞は、血液、骨髄、脾臓、リンパ節または他の組織もしくは体液を含む多くの供給源から得ることができる。Ｂ細胞組成物は、富化または精製され得る。
【０１３８】
ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、本開示の細胞免疫療法分子（例えばＣＥＲ、ＣＡＲおよびＴＣＲ結合タンパク質）を発現するように遺伝子改変される。例示的なＴ細胞には、ＣＤ４＋ヘルパー、ＣＤ８＋エフェクター（細胞傷害性）、ナイーブ（ＣＤ４５  ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ−）、セントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋）、エフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＣＲ７−、ＣＤ６２Ｌ−、ＣＤ２７−）、Ｔメモリー幹、制御性、粘膜関連インバリアント（ＭＡＩＴ）、γδ（ｇｄ）、組織レジデントＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞またはそれらの任意の組合せが含まれる。ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物由来の初代細胞または細胞系であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺または他の組織もしくは体液を含む多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞組成物は、富化または精製され得る。Ｔ細胞系は、当該技術分野において周知であり、それらのうちの一部は、Sandberg et al., Leukemia 21:230, 2000において説明されている。ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはそれらの両方の内因性発現を欠く。そのようなＴ細胞は、ＴＣＲαおよびβ鎖の内因性発現を天然に欠いていてもよく、発現を遮断するように（例えば、ＴＣＲαおよびβ鎖を発現しないトランスジェニックマウスからのＴ細胞、またはＴＣＲαおよびβ鎖の発現を阻害するように操作された細胞）、またはＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖またはそれらの両方の遺伝子をノックアウトするように改変されていてもよい。
【０１３９】
ある特定の実施形態においては、本開示の細胞免疫療法分子を発現する宿主細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞系統の細胞ではないが、細胞表面抗ＣＤ３を発現するように改変された前駆細胞、幹細胞または細胞である、細胞である。
【０１４０】
ある特定の実施形態においては、宿主細胞ゲノムを本開示の細胞免疫療法分子を含むように改変するために、遺伝子編集法が使用される。遺伝子編集またはゲノム編集は、遺伝子操作エンドヌクレアーゼを使用してＤＮＡが挿入されるか、置き換えられるか、または宿主細胞のゲノムから除去される遺伝子操作法である。ヌクレアーゼは、ゲノムにおけるターゲティングされた遺伝子座において特異的二本鎖切断を創出する。その後、宿主細胞の内因性ＤＮＡ修復経路は、例えば非相同末端結合（ＮＨＥＪ：ｎｏｎ−ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｅｎｄｉｎｇ  ｊｏｉｎｉｎｇ）および相同組換えによって、誘導された切断（複数可）を修復する。遺伝子編集に有用な例示的なエンドヌクレアーゼには、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ：ｚｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒ  ｎｕｃｌｅａｓｅ）、転写アクチベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ：ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ）ヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ：クラスター化規則的配置短回文反復配列）／Ｃａｓヌクレアーゼ系（例えばＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９）、メガヌクレアーゼまたはそれらの組合せが含まれる。遺伝子編集エンドヌクレアーゼを使用して、Ｂ細胞およびＴ細胞を含む免疫細胞において遺伝子または遺伝子発現を破壊する方法は、当該技術分野において公知であり、例えばＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１５／０６６２６２号；ＷＯ２０１３／０７４９１６号；ＷＯ２０１４／０５９１７３号；Cheong et al., Nat. Comm. 2016 7:10934；Chu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016 113:12514-12519において説明されており、そのうちの各々からの方法は、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【０１４１】
ある特定の実施形態においては、宿主細胞の内因性遺伝子の発現は、阻害、ノックダウンまたはノックアウトされる。Ｂ細胞において阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る内因性遺伝子の例には、ＩＧＨ、ＩＧκ、ＩＧλまたはそれらの任意の組合せが含まれる。Ｔ細胞において阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る内因性遺伝子の例には、ＴＣＲ遺伝子（ＴＲＡまたはＴＲＢ）、ＨＬＡ遺伝子（ＨＬＡクラスＩ遺伝子またはＨＬＡクラスＩＩ遺伝子）、免疫チェックポイント分子（ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ−１またはＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒ）またはそれらの任意の組合せが含まれる。内因性遺伝子の発現は、遺伝子レベル、転写レベル、翻訳レベルまたはそれらの組合せにおいて阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る。内因性遺伝子を阻害、ノックダウンまたはノックアウトする方法は、例えばＲＮＡ干渉剤（例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等）もしくは操作されたエンドヌクレアーゼ［例えばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ］またはそれらの任意の組合せによって達成され得る。ある特定の実施形態においては、内因性Ｂ細胞遺伝子（例えばＩＧＨ、ＩＧκまたはＩＧλ）は、操作されたエンドヌクレアーゼを介する等の、本開示のＣＥＲをコードするポリヌクレオチドの内因性Ｂ細胞遺伝子の遺伝子座への挿入によってノックアウトされる。ある特定の実施形態においては、内因性Ｔ細胞遺伝子（例えばＴＣＲ遺伝子、ＨＬＡ遺伝子または免疫チェックポイント分子遺伝子）は、操作されたエンドヌクレアーゼを介する等の、本開示のＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの内因性Ｔ細胞遺伝子の遺伝子座への挿入によってノックアウトされる。
【０１４２】
また、本開示は、細胞免疫療法分子改変宿主細胞の集団を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子改変宿主細胞の集団は、Ｂ細胞集団、Ｔ細胞集団、ナチュラルキラー細胞集団、リンパ球前駆体細胞集団、抗原提示細胞集団、樹状細胞集団、ランゲルハンス細胞集団、骨髄前駆体細胞集団、成熟骨髄細胞集団またはそれらの任意の組合せであり得る。さらに、特定の細胞種の細胞免疫療法分子改変宿主細胞の集団は、１つまたは複数のサブタイプからなり得る。例えば、Ｂ細胞集団は、ＣＥＲ改変ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞性細胞、形質芽細胞、メモリーＢ細胞またはそれらの任意の組合せからなり得る。別の例においては、Ｔ細胞集団は、ＣＡＲ改変ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクター（細胞傷害性）Ｔ細胞、ナイーブ（ＣＤ４５  ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ−）Ｔ細胞、セントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋）Ｔ細胞、エフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＣＲ７−、ＣＤ６２Ｌ−、ＣＤ２７−）Ｔ細胞、Ｔメモリー幹細胞、制御性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ）、γδ（ｇｄ）、組織レジデントＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞またはそれらの任意の組合せからなり得る。
【０１４３】
ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法分子改変宿主細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞を調製する場合、宿主細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞の増殖を促進する１つまたは複数の増殖因子サイトカインが、細胞培養物に添加され得る。サイトカインは、ヒトまたは非ヒトサイトカインであり得る。Ｔ細胞増殖を促進するために使用され得る例示的な増殖因子サイトカインには、ＩＬ−２、ＩＬ−１５その他が含まれる。Ｂ細胞増殖を促進するために使用され得る例示的な増殖因子サイトカインには、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＢＡＦＦその他が含まれる。
【０１４４】
宿主細胞の細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドによる遺伝子改変の前に、宿主細胞（例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞等）の供給源は、対象から得られ（例えば全血、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織）、これらから宿主細胞が、当該技術分野において公知の方法を使用して単離される。特定の宿主細胞サブセットは、抗体への親和性結合、フローサイトメトリーおよび／または免疫磁気選択等の公知の技術に従って収集され、公知の技術によって富化または枯渇され得る。富化および／または枯渇工程ならびに細胞免疫療法分子をコードするポリヌクレオチドの導入後、公知の技術または当業者に明らかであるその変形に従って、所望の改変宿主細胞のインビトロ拡大増殖を行ってもよい。
【０１４５】
宿主細胞における細胞免疫療法分子の発現は、Ｔ細胞結合、活性化または誘導の決定を含む、およびまた、抗原特異的であるＴ細胞応答の決定を含む、宿主細胞（例えばＴ細胞）活性をアッセイするための多数の当該技術分野において許容される方法のいずれかに従って機能的に特徴付けてもよい。例は、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞サイトカイン放出、抗原特異的Ｔ細胞刺激、ＣＴＬ活性（例えば、事前にロードした標的細胞からの５１Ｃｒまたはユーロピウム放出、標的細胞におけるカスパーゼ活性の誘導、標的細胞による乳酸デヒドロゲナーゼの細胞外放出を検出することによって）、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化およびＴ細胞機能の他の測定値の決定を含む。これらおよび同様のアッセイを行うための手技は、例えばLefkovits (Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998)において見出すことができる。また、Current Protocols in Immunology; Weir, Handbook of Experimental Immunology, Blackwell Scientific, Boston, MA (1986)；Mishell and Shigii (eds.) Selected Methods in Cellular Immunology, Freeman Publishing, San Francisco, CA (1979)；Green and Reed, Science 281:1309 (1998)およびそれらの中で引用される参考文献を参照されたい。サイトカインレベルは、例えばＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、フローサイトメトリーおよびそれらの任意の組合せ（例えば細胞内サイトカイン染色およびフローサイトメトリー）を含む当該技術分野において公知の方法に従って決定され得る。免疫応答の抗原特異的誘発または刺激から生ずる免疫細胞増殖およびクローン拡大増殖は、末梢血細胞またはリンパ節からの細胞の試料中の循環リンパ球等のリンパ球を単離し、細胞を抗原により刺激し、トリチウム化チミジンの組込みまたはＭＴＴアッセイ等の非放射性アッセイ等による等、サイトカイン産生、細胞増殖および／または細胞生存率を測定することによって決定され得る。
【０１４６】
ある特定の実施形態においては、ＣＥＲ改変宿主細胞は、標的細胞について約２０〜約１，５００の食作用指数を有する。「食作用指数」は、培地中の標的細胞または粒子とＣＥＲ改変宿主細胞との懸濁液のインキュベーションの設定期間中の、ＣＥＲ改変宿主細胞当たりの摂取された標的細胞または粒子の数をカウントすることによって決定される、形質導入された宿主細胞の食作用活性の測定値である。食作用指数は、［貪食された標的細胞の総数／カウントされたＣＥＲ改変細胞の総数（例えば食作用頻度）］ｘ［ＣＥＲ＋宿主細胞当たりの標的細胞または粒子染色の平均面積ｘ１００（例えばハイブリッドキャプチャー）］または［貪食された粒子の総数／カウントされたＣＥＲ改変宿主細胞の総数］ｘ［貪食された粒子を含有するＣＥＲ改変宿主細胞数／カウントされたＣＥＲ＋細胞の総数］ｘ１００を掛けることによって計算され得る。ある特定の実施形態においては、ＣＥＲ改変細胞は、約３０〜約１，５００；約４０〜約１，５００；約５０〜約１，５００；約７５〜約１，５００；約１００〜約１，５００；約２００〜約１，５００；約３００〜約１，５００；約４００〜約１，５００；約５００〜約１，５００；約２０〜約１，４００；約３０〜約１，４００；約４０〜約１，４００；約５０〜約１，４００；約１００〜約１，４００；約２００〜約１，４００；約３００〜約１，４００；約４００〜約１，４００；約５００〜約１，４００；約２０〜約１，３００；約３０〜約１，３００；約４０〜約１，３００；約５０〜約１，３００；約１００〜約１，３００；約２００〜約１，３００；約３００〜約１，３００；約４００〜約１，３００；約５００〜約１，３００；約２０〜約１，２００；約３０〜約１，２００；約４０〜約１，２００；約５０〜約１，２００；約１００〜約１，２００；約２００〜約１，２００；約３００〜約１，２００；約４００〜約１，２００；約５００〜約１，２００；約２０〜約１，１００；約３０〜約１，１００；約４０〜約１，１００；約５０〜約１，１００；約１００〜約１，１００；約２００〜約１，１００；約３００〜約１，１００；約４００〜約１，１００；または約５００〜約１，１００；約２０〜約１，０００；約３０〜約１，０００；約４０〜約１，０００；約５０〜約１，０００；約１００〜約１，０００；約２００〜約１，０００；約３００〜約１，０００；約４００〜約１，０００；または約５００〜約１，０００；約２０〜約７５０；約３０〜約７５０；約４０〜約７５０；約５０〜約７５０；約１００〜約７５０；約２００〜約７５０；約３００〜約７５０；約４００〜約７５０；または約５００〜約７５０；約２０〜約５００；約３０〜約５００；約４０〜約５００；約５０〜約５００；約１００〜約５００；約２００〜約５００；または約３００〜約５００の食作用指数を有する。さらなる実施形態においては、インキュベーション時間は、約２時間〜約４時間、例えば約２時間、約３時間または約４時間である。またさらなる実施形態においては、ＣＥＲ改変細胞は、切断型ＥＧＦＲ対照を形質導入した細胞よりも統計的に有意に高い食作用指数を示す。食作用指数は、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡による定量を含む、当該技術分野において公知の、かつ実施例およびＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５３５５３号（その全体を参照により本明細書に組み込む）においてさらに説明される方法を使用して計算され得る。
【０１４７】
宿主細胞は、動物、例としてヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタまたはそれらの組合せからの宿主細胞であり得る。好ましい実施形態においては、動物は、ヒトである。宿主細胞は、健康な対象または抗原の発現と関連付けられる疾患を有する対象から得てもよい。
【０１４８】
細胞免疫療法組成物
本開示は、細胞免疫療法組成物の組合せを提供する。細胞免疫療法組成物の組合せは、ＣＥＲを含む免疫細胞を含む第１の組成物（「組成物１番」とも呼ばれる）と、細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲを含む免疫細胞を含む第２の組成物（「組成物２番」とも呼ばれる）とを含む。第１の組成物の免疫細胞に存在するＣＥＲは、本明細書において説明するＣＥＲ結合タンパク質のうちの任意の１つまたは複数から選択され得る。第２の組成物の免疫細胞（ｃａｌｌ）に存在するＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲは、本明細書において説明するＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質のうちの任意の１つまたは複数から選択され得る。特定の実施形態においては、第１の組成物中のＣＥＲを含む免疫細胞は、本明細書において説明するＣＥＲ改変宿主細胞であり、第２の組成物の細胞免疫療法分子を含む免疫細胞は、本明細書において説明するＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲにより改変した宿主細胞である。宿主免疫細胞と細胞免疫療法分子との組合せの例示的な実施形態を、表２および表３において示す。
【０１４９】
ある特定の実施形態においては、第１の組成物のＣＥＲおよび第２の組成物の細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質は、同じ疾患または障害、例えばがんと関連付けられる標的抗原に結合する。第１の組成物のＣＥＲおよび第２の組成物の細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質は、同じ標的抗原に結合してもよく、異なる標的抗原に結合してもよい。ある特定の実施形態においては、第１の組成物のＣＥＲは、プロ貪食マーカー（例えばホスファチジルセリン）に結合し、第２の組成物の細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質は、疾患（例えばがん）と関連付けられる標的抗原に結合する。他の実施形態は、第１の組成物のＣＥＲが第１の腫瘍抗原に結合し、第２の組成物の細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質が第１の腫瘍抗原に結合することを提供する。また他の実施形態は、第１の組成物のＣＥＲが第１の腫瘍抗原に結合し、第２の組成物の細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質が第２の腫瘍抗原に結合することを提供する。
【０１５０】
表２において示す組成物の一実施形態においては、第１の組成物の特定の免疫細胞は、プロ貪食マーカーをターゲティングするＣＥＲを含み、一方で、第２の組成物の特定の免疫細胞のＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲは、腫瘍抗原をターゲティングする。表２において示す組成物の別の実施形態においては、第１の組成物の特定の免疫細胞は、プロ貪食マーカーをターゲティングするＣＥＲを含み、一方で、第２の組成物の特定の免疫細胞のＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲは、細菌抗原、ウイルス抗原または寄生生物抗原をターゲティングする。表２において示す組成物の別の実施形態においては、第１の組成物の特定の免疫細胞は、プロ貪食マーカーをターゲティングするＣＥＲを含み、一方で、第２の組成物の特定の免疫細胞のＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲは、自己免疫疾患抗原をターゲティングする。表２において示す組成物のまた別の実施形態においては、第１の組成物の特定の免疫細胞は、腫瘍抗原をターゲティングするＣＥＲを含み、第２の組成物の特定の免疫細胞のＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲは、腫瘍抗原をターゲティングする。
【０１５１】
表２：例示的な細胞免疫療法組成物の組合せ
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【０１５２】
表３：特異的細胞免疫療法組成物の組合せ
【表６】
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【０１５３】
ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法組成物における免疫細胞の種類についての言及は、本明細書において提供される任意の１つまたは複数の特定の細胞サブタイプを含み得る。一例においては、ＣＤ４＋Ｔ細胞を含む細胞免疫療法組成物は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞またはそれらの任意の組合せを含む。別の例においては、ＣＤ８＋Ｔ細胞を含む細胞免疫療法組成物は、ナイーブＣＤ８  Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞またはそれらの任意の組合せを含む。また別の例においては、Ｂ細胞を含む細胞免疫療法組成物は、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞またはこれらの両方を含む。
【０１５４】
ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法組成物の組合せは、細胞免疫療法分子、例えば、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質を含む免疫細胞を含む第３の組成物をさらに含む。
【０１５５】
本開示において提供される細胞免疫療法組成物の組合せは、第１の組成物および第２の組成物の両方を含む単一の医薬組成物として調合してもよい。あるいは、本開示において提供される細胞免疫療法組成物の組合せは、別々の医薬組成物において調合してもよく、第１の組成物が第１の医薬組成物に調合され、第２の組成物が第１の医薬組成物とは別個の第２の医薬組成物に調合される。本開示において提供される細胞免疫療法組成物の組合せの実施形態は、非重複多様式の標的細胞死滅機能および高エフェクター機能を提供する。高エフェクター機能の例には、標的細胞に対する細胞傷害活性；高活性化（例えば高サイトカイン産生、例としてＩＦＮγ）；細胞増殖の向上；細胞拡大増殖の向上；持続性の向上；メモリー形成の向上；抗原提示活性；抗原特異的食作用シグナル伝達の誘導もしくは抗原特異的食作用シグナル伝達の向上；貪食された標的細胞の分解；またはそれらの任意の組合せが含まれる。ある特定の実施形態においては、そのような細胞免疫療法組成物は、エフェクター機能に相乗効果を与える。
【０１５６】
本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せにおいて利用される第１の組成物と第２の組成物との相対量（同じ製剤に含まれるか、別々の製剤に含まれるかにかかわらず）は、対象に投与されるべき規定の細胞比を達成するように調節され得る。本明細書において使用されるとき、「細胞比」という用語は、第１の組成物に含まれる免疫細胞数の、第２の組成物に含まれる免疫細胞数に対する比を指す。例えば、本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せが、ＣＥＲを含む１００個の免疫細胞を有する第１の組成物とＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲを含む１００個の免疫細胞を有する第２の組成物とを含む場合、第１の組成物の、第２の組成物に対する比は、１：１であり得る。別の例においては、本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せが、ＣＥＲを含む５０個の免疫細胞を有する第１の組成物とＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲを含む１００個の免疫細胞を有する第２の組成物とを含む場合、第１の組成物の、第２の組成物に対する比は、１：２であり得る。また別の例においては、本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せが、ＣＥＲを含む１００個の免疫細胞を有する第１の組成物とＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲを含む５０個の免疫細胞を有する第２の組成物とを含む場合、第１の組成物の、第２の組成物に対する比は、２：１であり得る。ある特定の実施形態においては、本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せは、約０．１：１、約０．２５：１、約０．５：１、約０．７５：１、約１：１、約１．２５：１、約１．５：１、約１．７５：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１５：１、約２０：１、約２５：１、約３０：１、約３５：１、約４０：１、約４５：１、約５０：１、約１：１．１、約１：１．２５、約１：１．５、約１：１．７５、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１５、約１：２０、１：２５、約１：３０、約１：３５、約１：４０、約１：４５および約１：５０から選択される比における第１の組成物および第２の組成物を含む。別の実施形態においては、本説明に記載の細胞免疫療法組成物は、約１：１〜約１：２、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：７．５、約１：１〜約１：１０、約１：１〜約１：１５、約１：１〜約１：２０、約１：１〜約１：３０、約１：１〜約１：４０、および約１：１〜約１：５０の範囲の比から選択される比における第１の組成物および第２の組成物を含む。別の実施形態においては、本説明に記載の細胞免疫療法組成物は、約５０：１〜約１：１、約４０：１〜約１：１、約３０：１〜約１：１、約２０：１〜約１：１、約１５：１〜約１：１、約１０：１〜約１：１、約７．５：１〜約１：１、約５：１〜約１：１、および約２：１〜約１：１の範囲の比から選択される比における第１の組成物および第２の組成物を含む。各そのような実施形態においては、細胞免疫療法組成物は、本明細書において説明する組合せのいずれかに従う第１の組成物（すなわち、組成物１番）および第２の組成物（すなわち、組成物２番）を含む得る。
【０１５７】
本開示において提供される細胞免疫療法組成物において使用される特定の細胞免疫療法分子と規定の免疫細胞集団との組合せの実施形態は、非重複多様式の標的細胞死滅機能および高エフェクター機能を提供する。例として、細胞免疫療法組成物の組合せは、ＣＥＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞を含む第１の組成物と、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物とを含み得る。発現されたＣＡＲまたはＴＣＲによる抗原結合に際して、ＣＡＲまたはＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性顆粒の内容物（例えばグランザイム、グラニュライシン、パーフォリン）を放出することによって標的細胞においてアポトーシス（細胞溶解）を誘導することができる。また、ＣＥＲ改変ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗原結合に際して標的細胞においてアポトーシスを誘導することができ、また、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を支持するＴｈ１サイトカイン（例えばＩＦＮ−γ、ＩＬ−２）を分泌する。さらに、ＣＥＲ改変ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＥＲが結合した標的細胞を貪食することができる。別の例においては、細胞免疫療法組成物の組合せは、ＣＥＲを含むＢ細胞を含む第１の組成物と、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む第２の組成物とを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）。発現されたＣＡＲまたはＴＣＲによる抗原結合に際して、ＣＡＲ／またはＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性顆粒の内容物（例えばグランザイム、グラニュライシン、パーフォリン）を放出することによって標的細胞においてアポトーシス（細胞溶解）を誘導することができる。ＣＥＲ改変Ｂ細胞は、ＣＥＲが結合した標的細胞を貪食することができる。さらに、Ｂ細胞は、内部移行した抗原をＴ細胞に提示し、Ｔ細胞を共刺激し得る。したがって、本明細書において提供される細胞免疫療法組成物の組合せは、宿主免疫細胞によって発現される特定の細胞免疫療法分子によって与えられる独特の特異性および機能性を有する。
【０１５８】
ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法組成物の組合せの細胞傷害活性は、単独で含有される第１の細胞免疫療法組成物または第２の細胞免疫療法組成物と比較して、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％またはそれよりも多く増大する。さらなる実施形態においては、相乗的細胞傷害応答が示される。一部の実施形態においては、宿主細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。宿主細胞、特にＴ細胞およびＮＫ細胞等の免疫細胞の細胞傷害活性を測定する方法には、標的細胞死およびエフェクター細胞活性を測定する、クロミウム（５１Ｃｒ）放出アッセイ、β−ｇａｌまたはホタルルシフェラーゼ放出アッセイ、フローサイトメトリー法が含まれる（例えばExpert Rev. Vaccines, 2010, 9:601-616を参照のこと）。ある特定の実施形態においては、宿主細胞の細胞傷害活性は、宿主細胞への曝露後の標的細胞アポトーシス、例えばカスパーゼ３／７活性、乳酸デヒドロゲナーゼ放出を検出することによって測定され得る。
【０１５９】
使用方法
一態様においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載の細胞免疫療法組成物の組合せは、疾患、障害または望ましくない状態を患う対象を治療する方法において使用され得る。これらの方法の実施形態は、本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せを含む治療有効量の医薬組成物（複数可）を対象に投与することを含む。
【０１６０】
本開示において提供される細胞免疫療法組成物の組合せにより治療され得る疾患は、がん、自己免疫疾患、神経変性疾患および感染性疾患（ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、原生動物感染）を含む。養子免疫療法および遺伝子療法は、様々な種類のがん（Morgan et al., Science 314:126, 2006；Schmitt et al., Hum. Gene Ther. 20:1240, 2009；June, J. Clin. Invest. 117:1466, 2007）および感染性疾患（Kitchen et al., PLoS One 4:38208, 2009；Rossi et al., Nat. Biotechnol. 25:1444, 2007；Zhang et al., PLoS Pathog. 6:e1001018, 2010；Luo et al., J. Mol. Med. 89:903, 2011）のための有望な治療である。
【０１６１】
固形腫瘍および白血病を含む多種多様ながんは、本明細書において提供される細胞免疫療法組成物の組合せを使用する治療に適している。本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せを使用して治療され得る例示的ながんには、乳房、前立腺および結腸の腺癌；全ての形態の気管支原性肺癌；骨髄性白血病；黒色腫；肝細胞腫；神経芽細胞腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫；鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患；ならびに癌腫（例えば、ウォーカー癌腫、基底細胞癌、基底扁平細胞癌、ブラウン・ピアース癌、腺管癌、エールリッヒ癌、クレブス２癌、メルケル細胞癌、粘液性癌、非小細胞肺癌、燕麦細胞癌、乳頭癌、硬性癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、扁平上皮癌および移行上皮癌）が含まれる。本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用して治療され得る追加のがんの種類は、組織球性障害；悪性組織球症；白血病；ホジキン病；免疫増殖性小（ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ）；非ホジキンリンパ腫；形質細胞腫；多発性骨髄腫；形質細胞腫；細網内皮症；黒色腫；軟骨芽細胞腫；軟骨腫；軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；未分化胚細胞腫；過誤腫；間葉腫；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント質腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫；絨毛性腫瘍を含む。さらに、また、以下の種類のがん：腺腫；胆管腫；真珠腫；円柱腫（ｃｙｃｌｉｎｄｒｏｍａ）；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；男性胚腫；肝細胞腫；汗腺腫；膵島腫瘍；ライディッヒ細胞腫；乳頭腫；セルトリ細胞腫；莢膜細胞腫；平滑筋腫（ｌｅｉｍｙｏｍａ）；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫（ｍｙｏｍｍａ）；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節腫；神経膠腫；髄芽腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経腫；傍神経節腫；非クローム親和性傍神経節腫は、本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用する治療に適することが企図される。また、治療され得るがんの種類は、被角血管腫；好酸球増加症を伴う血管リンパ様過形成；硬化性血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管外皮腫；血管肉腫；リンパ管腫；リンパ管筋腫；リンパ管肉腫；松果体腫；癌肉腫；軟骨肉腫；葉状嚢胞肉腫；線維肉腫；血管肉腫；平滑筋肉腫；白血肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；筋肉腫；粘液肉腫；卵巣癌；横紋筋肉腫；肉腫；新生物；神経線維腫症（ｎｅｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ）；および子宮頸部異形成を含む。
【０１６２】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せを使用する治療に適する高増殖性障害の例には、Ｂ細胞リンパ腫［例として様々な形態のホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ：ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）または中枢神経系リンパ腫］を含むＢ細胞がん、白血病［例として急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ：ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ：ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病のＢ細胞芽細胞化］および骨髄腫（例として多発性骨髄腫）が含まれる。本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せを使用して治療され得る追加のＢ細胞がんには、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ：ｍｕｃｏｓａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ）の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性化の可能性をもつＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症および移植後リンパ増殖性障害が含まれる。
【０１６３】
感染性疾患は、感染病原体と関連付けられる感染性疾患を含み、様々な細菌［例えば病原性大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）、ネズミチフス菌（Ｓ．  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、緑膿菌（Ｐ．  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、炭疽菌（Ｂ．  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ボツリヌス菌（Ｃ．  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ディフィシル菌（Ｃ．  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、ウェルシュ菌（Ｃ．  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、ピロリ菌（Ｈ．  ｐｙｌｏｒｉ）、コレラ菌（Ｖ．  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、リステリア属種（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐｐ．）、リケッチア属種（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐｐ．）、クラミジア属種（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．）等］、マイコバクテリアおよび寄生生物（公知の任意の原生動物寄生性メンバーを含む）のいずれかを含む。感染性ウイルスには、真核細胞ウイルス、例としてアデノウイルス、ブニヤウイルス、ヘルペスウイルス、パポーバウイルス、パピローマウイルス（例えばＨＰＶ）、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、ラブドウイルス（例えば狂犬病）、オルトミクソウイルス（例えばインフルエンザ）、ポックスウイルス（例えばワクシニア）、レオウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス（例えばＨＩＶ）、フラビウイルス（例えばＨＣＶ、ＨＢＶ）その他が含まれる。ある特定の実施形態においては、本開示に記載の細胞免疫療法組成物の組合せは、対象において持続的感染を確立することができる微生物による感染を治療するために使用される。
【０１６４】
対象を治療する方法は、有効量の本開示の細胞免疫療法組成物の組合せを投与することを含む。細胞免疫療法組成物の組合せは、対象にとって異種、同系、同種異系または自家であり得る。さらに、細胞免疫療法組成物の組合せ内の個々の細胞免疫療法組成物の各々は独立して、対象にとって異種、同系、同種異系または自家であり得る。
【０１６５】
細胞免疫療法組成物を含む医薬組成物は、医療分野の熟練者によって決定される通り、治療（または予防）されるべき疾患または状態に適切な様式において投与され得る。組成物の適切な用量、好適な持続期間および投与頻度は、患者の状態、サイズ、体重、体表面積、年齢、性別、疾患の種類および重症度、投与される特定の治療、活性成分の特定の形態、投与時間および方法ならびに同時に投与される他の薬物等の因子によって決定される。本開示は、細胞免疫療法組成物および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好適な賦形剤には、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールその他およびそれらの組合せが含まれる。他の好適な点滴媒体は、生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ  Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）、Ｐｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）、水中の５％デキストロースまたは乳酸リンゲル液を含む任意の等張媒体製剤であり得る。ある特定の実施形態においては、組合せ内の細胞免疫療法組成物は、同じ医薬組成物中に共に調合される。他の実施形態においては、組合せ内の各細胞免疫療法組成物は、別々の医薬組成物に調合される。
【０１６６】
医薬組成物中の治療有効量の細胞は、少なくとも１つの細胞（例えば１つのＣＥＲ改変Ｔ細胞）であるか、またはより典型的には１０２個の細胞よりも多く、例えば最高で１０６個、最高で１０７個、最高で１０８個の細胞、最高で１０９個の細胞、最高で１０１０個の細胞もしくは最高で１０１１個の細胞またはそれよりも多い。ある特定の実施形態においては、細胞は、約１０６個〜約１０１０個の細胞／ｍ２の範囲内、好ましくは約１０７個〜約１０９個の細胞／ｍ２の範囲内で投与される。特定の実施形態においては、ＣＥＲ改変細胞は、少なくとも約１ｘ１０６個の細胞、２ｘ１０６個の細胞、３ｘ１０６個の細胞、４ｘ１０６個の細胞、５ｘ１０６個の細胞、６ｘ１０６個の細胞、７ｘ１０６個の細胞、８ｘ１０６個の細胞、９ｘ１０６個の細胞、１ｘ１０７個の細胞、２ｘ１０７個の細胞、３ｘ１０７個の細胞、４ｘ１０７個の細胞、５ｘ１０７個の細胞、６ｘ１０７個の細胞、７ｘ１０７個の細胞、８ｘ１０７個の細胞、９ｘ１０７個の細胞、１ｘ１０８個の細胞、２ｘ１０８個の細胞、３ｘ１０８個の細胞、４ｘ１０８個の細胞、５ｘ１０８個の細胞、６ｘ１０８個の細胞、７ｘ１０８個の細胞、８ｘ１０８個の細胞、９ｘ１０８個の細胞、１ｘ１０９個の細胞、２ｘ１０９個の細胞、３ｘ１０９個の細胞、４ｘ１０９個の細胞、５ｘ１０９個の細胞、６ｘ１０９個の細胞、７ｘ１０９個の細胞、８ｘ１０９個の細胞、９ｘ１０９個の細胞、１ｘ１０１０個の細胞、２ｘ１０１０個の細胞、３ｘ１０１０個の細胞、４ｘ１０１０個の細胞、５ｘ１０１０個の細胞、６ｘ１０１０個の細胞、７ｘ１０１０個の細胞、８ｘ１０１０個の細胞、９ｘ１０１０個の細胞、１ｘ１０１１個の細胞、２ｘ１０１１個の細胞、３ｘ１０１１個の細胞、４ｘ１０１１個の細胞、５ｘ１０１１個の細胞、６ｘ１０１１個の細胞、７ｘ１０１１個の細胞、８ｘ１０１１個の細胞または９ｘ１０１１個の細胞の量において投与される。細胞数は、組成物に含まれる細胞種はもちろん、組成物が意図される最終使用に依存する。例えば、ＣＥＲを含有するように改変された細胞を含む組成物は、約５％〜約９５％またはそれよりも多くのそのような細胞を含有する細胞集団を含む。ある特定の実施形態においては、ＣＥＲ改変細胞を含む組成物は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれよりも多くのそのような細胞を含む細胞集団を含む。本明細書において提供される使用のために、細胞は一般的に、１リットルもしくはそれ未満、５００ｍｌもしくはそれ未満、２５０ｍｌもしくはそれ未満、または１００ｍｌもしくはそれ未満の容量において存在する。それゆえ、所望の細胞の密度は典型的に、１０４個の細胞／ｍｌよりも高く、一般的には１０７個の細胞／ｍｌよりも高く、一般的に１０８個の細胞／ｍｌまたはそれよりも高い。細胞は、１回の点滴として、またはある時間範囲にわたる多数回の点滴において投与され得る。細胞免疫療法分子改変細胞の反復点滴は、日、週、月またはさらには疾患または疾患活性の再発が存在する場合には年単位で分離され得る。臨床関連免疫細胞数は、累積的に１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０または１０１１個の細胞に等しいか、またはこれを超える多数回点滴に配分され得る。本明細書において説明する組換え発現ベクターを含む宿主細胞の投与のために好ましい用量は、約１０７個の細胞／ｍ２、約５ｘ１０７個の細胞／ｍ２、約１０８個の細胞／ｍ２、約５ｘ１０８個の細胞／ｍ２、約１０９個の細胞／ｍ２、約５ｘ１０９個の細胞／ｍ２、約１０１０個の細胞／ｍ２、約５ｘ１０１０個の細胞／ｍ２または約１０１１個の細胞／ｍ２である。
【０１６７】
ある特定の実施形態においては、ＣＥＲを含む免疫細胞を含む第１の組成物、細胞免疫療法分子、例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質を含む免疫細胞を含む第２の組成物、またはこれらの両方は、別の方法で単独療法として投与された場合に治療量未満であると考えられ得る用量において投与される。そのような実施形態においては、第１の組成物、第２の組成物またはこれらの両方がより低い用量において投与され得るように、第１の組成物と第２の組成物との組合せは、相加的または相乗的効果を提供し得る。
【０１６８】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物は、静脈内に、腹腔内に、鼻内に、腫瘍内に、骨髄中に、リンパ節中に、および／または脳脊髄液中に投与され得る。
【０１６９】
組合せ治療における細胞免疫療法組成物が別々の医薬組成物中に調合される場合、治療方法は、本明細書において説明するＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質を発現する免疫細胞を含む第２の組成物の前（例えば第２の組成物の１日〜７日、１日〜１０日、１日〜１４日、１日〜３０日前またはそれよりも前）の、第２の組成物と同時（同日）の、または第２の組成物の後（例えば第２の組成物の１日〜７日、１日〜１０日、１日〜１４日、１日〜３０日後またはそれよりも後）の本明細書において説明するＣＥＲを発現する免疫細胞を含む第１の組成物の投与を含む。ある特定の実施形態においては、ＣＥＲを発現する免疫細胞を含む第１の組成物は、ＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現する免疫細胞（ａｎ  ｉｍｍｕｎｅ）を含む第２の組成物の投与後に投与される。さらなる実施形態においては、第１の組成物は、第２の組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後に投与される。またさらなる実施形態においては、第１の組成物は、第２の組成物の投与後４週間以内、３週間以内、２週間以内または１週間以内に投与される。第２の組成物が多数の用量を含む場合、第１の組成物は、第２の組成物の初回用量後に、第２の組成物の最終用量後に、または第２の組成物の多数の用量間において投与してもよい。
【０１７０】
細胞免疫療法組成物の組合せは、１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて対象に投与され得る。本説明に記載の細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせて投与され得る治療剤の例には、放射線療法、抗体療法、免疫チェックポイント分子阻害剤療法、ＵＶ光療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法または医薬療法、例として化学療法剤、治療用ペプチド、ホルモン療法、アプタマー、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、小分子療法が含まれる。
【０１７１】
放射線療法には、体外照射療法（例えば従来型体外照射療法、定位放射線、３次元原体照射療法、強度変調放射線療法、強度変調振子照射療法、粒子線療法、陽子線療法およびオーガー療法）、近接照射療法、体系的放射性同位体療法、手術中の放射線療法またはそれらの任意の組合せが含まれる。ある特定の実施形態においては、典型的な用量よりも低用量の放射線療法が、ＣＥＲ療法と組み合わせて使用される。低用量放射線療法は、溶解に満たない膜損傷を細胞に引き起こすために十分であるが、必ずしも細胞溶解性ではない場合がある。溶解に満たない膜損傷は、ＣＥＲ療法によって標的化され得るプロ貪食マーカー（例えばホスファチジルセリン）を曝露するために十分である。
【０１７２】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的な抗体には、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｍａｂ）、ペルツズマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、ベバシズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレファセプト、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｚｉｍａｂ）、ベリムマブ、ベズロトクスマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、オララツマブ、パリビズマブ、パニツムマブおよびトシリズマブが含まれる。
【０１７３】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のためであり得る例示的な免疫チェックポイント分子の阻害剤には、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ−１、ＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒまたはそれらの任意の組合せをターゲティングするチェックポイント阻害剤が含まれる。ある特定の実施形態においては、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、ペプチド、ＲＮＡｉ剤または小分子であり得る。ＣＴＬＡ−４に特異的な抗体は、イピリムマブまたはトレメリムマブであり得る。ＰＤ−１に特異的な抗体は、ピディリズマブ、ニボルマブまたはペンブロリズマブであり得る。ＰＤ−Ｌ１に特異的な抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブまたはアベルマブであり得る。
【０１７４】
化学療法剤には、有糸分裂または細胞分裂を阻害する非特異的細胞傷害剤、および腫瘍増殖、進行および転移に関与する特定の分子（例えば癌遺伝子）をターゲティングすることによってがん細胞の増殖および広がりを遮断する分子ターゲティング療法が含まれる。本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的な非特異的化学療法剤は、アルキル化剤、プラチナベースの剤、細胞傷害剤、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗薬（例として葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよび糖修飾アナログ）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例として挿入剤）およびＤＮＡ修復阻害剤を含み得る。
【０１７５】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的な分子ターゲティング阻害剤には、例えばホルモン、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現阻害剤（例えば翻訳阻害剤）、アポトーシスインデューサー、血管新生阻害剤（例えばＶＥＧＦ経路阻害剤）、ＧＴＰアーゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤およびチロシンキナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦ／ＥＧＦＲ経路阻害剤）を含むがん細胞増殖および生存に関与する分子をターゲティングする阻害剤が含まれる。追加の例示的な分子ターゲティング阻害剤には、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、アデノシン経路阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＡＢＳ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、Ｈ−ＲＡＳ阻害剤、Ｋ−ＲＡＳ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤、ＡＬＫ／ＲＯＳ１阻害剤およびＢＴＫ阻害剤が含まれる。ある特定の実施形態においては、分子ターゲティング療法の使用は、分子標的に特異的な分子ターゲティング療法を、分子標的（例えばドライバー癌遺伝子）を有する腫瘍を有すると特定された対象に投与することを含む。ある特定の実施形態においては、分子標的は、活性化変異を有する。ある特定の実施形態においては、分子ターゲティング阻害剤と組み合わせたＣＥＲ改変細胞の使用は、抗腫瘍応答の大きさ、抗腫瘍応答の持続力またはこれらの両方を増大する。ある特定の実施形態においては、典型的な用量よりも低いか、または治療用量未満の分子ターゲティング療法が、ＣＥＲ改変細胞と組み合わせて使用される。
【０１７６】
本明細書において企図される組合せ療法における使用のために考えられる化学療法剤の例には、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブ、コビメチニブ、アナストロゾール［アリミデックス（登録商標）］、ビカルタミド［カソデックス（登録商標）］、硫酸ブレオマイシン［ブレノキサン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）（登録商標）］、ブスルファン［ミレラン（登録商標）］、ブスルファン注射［ブスルフェクス（登録商標）］、カペシタビン［ゼローダ（登録商標）］、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン［パラプラチン（登録商標）］、カルムスチン［ＢｉＣＮＵ（登録商標）］、クロラムブシル［ロイケラン（登録商標）］、シスプラチン［プラチノール（登録商標）］、クラドリビン［ロイスタチン（登録商標）］、シクロホスファミド［シトキサン（登録商標）またはネオサル（Ｎｅｏｓａｒ）（登録商標）］、シタラビン、シトシンアラビノシド［シトサル（Ｃｙｔｏｓａｒ）−Ｕ（登録商標）］、シタラビンリポソーム注射［デポサイト（登録商標）］、ダカルバジン［ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）］、ダクチノマイシン［アクチノマイシンＤ、コスメゲン（Ｃｏｓｍｅｇａｎ）］、ダウノルビシン塩酸塩［セルビジン（登録商標）］、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射［ダウノゾーム（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ）（登録商標）］、デキサメタゾン、ドセタキセル［タキソテール（登録商標）］、ドキソルビシン塩酸塩［アドリアマイシン（登録商標）、ルベックス（Ｒｕｂｅｘ）（登録商標）］、エトポシド［ベプシド（登録商標）］、リン酸フルダラビン［フルダラ（登録商標）］、５−フルオロウラシル［アドルシル（Ａｄｒｕｃｉｌ）（登録商標）、エフデックス（Ｅｆｕｄｅｘ）（登録商標）］、フルタミド［ユーレキシン（Ｅｕｌｅｘｉｎ）（登録商標）］、テザシチビン（ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素［ハイドレア（登録商標）］、イダルビシン［イダマイシン（登録商標）］、イホスファミド［ＩＦＥＸ（登録商標）］、イリノテカン［カンプト（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）（登録商標）］、Ｌ−アスパラギナーゼ［ＥＬＳＰＡＲ（登録商標）］、ロイコボリンカルシウム、メルファラン［アルケラン（登録商標）］、６−メルカプトプリン［ピュリネソール（登録商標）］、メトトレキセート［フォレックス（Ｆｏｌｅｘ）（登録商標）］、ミトキサントロン［ノバントロン（登録商標）］、マイロターグ、パクリタキセル［タキソール（登録商標）］、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０カルムスチンインプラント［ギリアデル（登録商標）］、ｆｄａｂｒａクエン酸タモキシフェン［ノルバデックス（登録商標）］、テニポシド［ブモン（Ｖｕｍｏｎ）（登録商標）］、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン［チラゾン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ）登録商標）］、トポテカン塩酸塩注射［ハイカムチン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ）（登録商標）］、ビンブラスチン［ベルバン（登録商標）］、ビンクリスチン［オンコビン（登録商標）］、イブルチニブ、ベネトクラクス、クリゾチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、セリチニブおよびビノレルビン［ナベルビン（登録商標）］が含まれる。
【０１７７】
本明細書において企図される組合せ療法における使用のための例示的なアルキル化剤には、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼン：ウラシルマスタード［アミノウラシルマスタード（登録商標）、クロレタミナシル（Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ）（登録商標）、デメチルドパン（Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ）（登録商標）、デスメチルドパン（Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ）（登録商標）、ヘマンタミン（Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ）（登録商標）、ノルドパン（Ｎｏｒｄｏｐａｎ）（登録商標）、ウラシルナイトロジェンマスタード（登録商標）、ウラシロスト（Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ）（登録商標）、ウラシルモスタザ（Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ）（登録商標）、ウラムスチン（Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ）（登録商標）、ウラムスチン（Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ）（登録商標）］、クロルメチン［マスタージェン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）（登録商標）］、シクロホスファミド［シトキサン（登録商標）、ネオサル（登録商標）、クラフェン（Ｃｌａｆｅｎ）（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、プロサイトクス（Ｐｒｏｃｙｔｏｘ）（登録商標）、レビミューン（Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ）（商標）］、イホスファミド［ミトキサナ（Ｍｉｔｏｘａｎａ）（登録商標）］、メルファラン［アルケラン（登録商標）］、クロラムブシル［ロイケラン（登録商標）］、ピポブロマン［アメデール（登録商標）、バーサイト（Ｖｅｒｃｙｔｅ）（登録商標）］、トリエチレンメラミン［ヘメル（登録商標）、ヘキサレン（Ｈｅｘａｌｅｎ）（登録商標）、ヘキサスタット（Ｈｅｘａｓｔａｔ）（登録商標）］、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド［テモダール（登録商標）］、チオテパ［チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標）］、ブスルファン［ブシルベックス（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ）（登録商標）、ミレラン（登録商標）］、カルムスチン［ＢｉＣＮＵ（登録商標）］、ロムスチン［ＣｅｅＮＵ（登録商標）］、ストレプトゾシン［ザノサー（Ｚａｎｏｓａｒ）（登録商標）］およびダカルバジン［ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）］が含まれる。本明細書において企図される組合せ療法における使用のための追加の例示的なアルキル化剤には、オキサリプラチン［エロキサチン（登録商標）］；テモゾロミド［テモダール（Ｔｅｍｏｄａｒ）（登録商標）およびテモダール（Ｔｅｍｏｄａｌ）（登録商標）］；ダクチノマイシン［アクチノマイシン−Ｄとしても公知、コスメゲン（登録商標）］；メルファラン［Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシンおよびフェニルアラニンマスタードとしても公知、アルケラン（登録商標）］；アルトレタミン［ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ：ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅ）としても公知、ヘキサレン（登録商標）］；カルムスチン［ＢｉＣＮＵ（登録商標）］；ベンダムスチン［トレアンダ（登録商標）］；ブスルファン［ブスルフェクス（登録商標）およびミレラン（登録商標）］；カルボプラチン［パラプラチン（登録商標）］；ロムスチン［ＣＣＮＵとしても公知、ＣｅｅＮＵ（登録商標）］；シスプラチン［ＣＤＤＰとしても公知、プラチノール（登録商標）およびプラチノール（登録商標）−ＡＱ］；クロラムブシル［ロイケラン（登録商標）］；シクロホスファミド［シトキサン（登録商標）およびネオサル（登録商標）］；ダカルバジン［ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても公知、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）］；アルトレタミン［ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、ヘキサレン（登録商標）］；イホスファミド［イフェクス（Ｉｆｅｘ）（登録商標）］；プレドニムスチン（Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ）；プロカルバジン［マチュレーン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（登録商標）］；メクロレタミン［ナイトロジェンマスタード、ムスチンおよびメクロレタミン塩酸塩としても公知、マスタージェン（登録商標）］；ストレプトゾシン［ザノサー（登録商標）］；チオテパ［チオホスホアミド（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｅ）、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても公知、チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標）］；シクロホスファミド［エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ネオサル（登録商標）、プロシトクス（登録商標）、レビミューン（登録商標）］；およびベンダムスチンＨＣｌ［トレアンダ（登録商標）］が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７８】
本明細書において企図される組合せ療法における使用のための例示的なプラチナベースの剤には、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、フェナントリプラチン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｐｌａｔｉｎ）およびトリプラチン四硝酸塩（ｔｒｉｐｌａｔｉｎ  ｔｅｔｒａｎｉｔｒａｔｅ）が含まれる。
【０１７９】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的な血管新生阻害剤は、Ａ６（Ａｎｇｓｔｒｏｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＢＴ−５１０（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＡＢＴ−６２７（アトラセンタン）（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ／Ｘｉｎｌａｙ）、ＡＢＴ−８６９（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、アクチミド（Ａｃｔｉｍｉｄ）（ＣＣ４０４７、ポマリドマイド）（Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＡｄＧＶＰＥＤＦ．１１Ｄ（ＧｅｎＶｅｃ）、ＡＤＨ−１［エキセリン（Ｅｘｈｅｒｉｎ）］（Ａｄｈｅｒｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＡＥＥ７８８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＧ−０１３７３６（アキシチニブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＡＧ３３４０（プリノマスタット）（Ａｇｏｕｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＧＸ１０５３（ＡｎｇｉｏＧｅｎｅｘ）、ＡＧＸ５１（ＡｎｇｉｏＧｅｎｅｘ）、ＡＬＮ−ＶＳＰ（ＡＬＮ−ＶＳＰ  Ｏ２）（Ａｌｎｙｌａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＭＧ３８６（Ａｍｇｅｎ）、ＡＭＧ７０６（Ａｍｇｅｎ）、アパチニブ（Ａｐａｔｉｎｉｂ）（ＹＮ９６８Ｄ１）（Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｈｅｎｇｒｕｉ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、ＡＰ２３５７３（リダフォロリムス／ＭＫ８６６９）（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＱ４Ｎ（Ｎｏｖａｖｅａ）、ＡＲＱ１９７（ＡｒＱｕｌｅ）、ＡＳＡ４０４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ａｎｔｉｓｏｍａ）、アチプリモド（Ｃａｌｌｉｓｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＴＮ−１６１（Ａｔｔｅｎｕｏｎ）、ＡＶ−４１２（Ａｖｅｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＶ−９５１（Ａｖｅｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アバスチン（ベバシズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＺＤ２１７１［セディラニブ／レセンチン（Ｒｅｃｅｎｔｉｎ）］（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＡＹ  ５７−９３５２［テラチニブ（Ｔｅｌａｔｉｎｉｂ）］（Ｂａｙｅｒ）、ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＩＢＦ１１２０（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＩＢＷ２９９２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＭＳ−２７５２９１（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ−５８２６６４（ブリバニブ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ−６９０５１４（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、カルシトリオール、ＣＣＩ−７７９（トーリセル）（Ｗｙｅｔｈ）、ＣＤＰ−７９１（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、セフラトニン（Ｃｅｆｌａｔｏｎｉｎ）（ホモハリントニン／ＨＨＴ）（ＣｈｅｍＧｅｎｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、セレブレックス（セレコキシブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＥＰ−７０５５（Ｃｅｐｈａｌｏｎ／Ｓａｎｏｆｉ）、ＣＨＩＲ−２６５（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＮＧＲ−ＴＮＦ、ＣＯＬ−３［メタスタット（Ｍｅｔａｓｔａｔ）］（Ｃｏｌｌａｇｅｎｅｘ  Ｐｈａｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、コンブレタスタチン（Ｏｘｉｇｅｎｅ）、ＣＰ−７５１，８７１（フィギツムマブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＰ−５４７，６３２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＳ−７０１７（第一三共）、ＣＴ−３２２［アンジオセプト（Ａｎｇｉｏｃｅｐｔ）］（Ａｄｎｅｘｕｓ）、クルクミン、ダルテパリン（フラグミン）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ジスルフィラム（Ａｎｔａｂｕｓｅ）、Ｅ７８２０（エーザイ株式会社）、Ｅ７０８０（エーザイ株式会社）、ＥＭＤ  １２１９７４（シレンジタイド）（ＥＭＤ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＥＮＭＤ−１１９８（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、ＥＮＭＤ−２０７６（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、エンドスター（Ｅｎｄｏｓｔａｒ）（Ｓｉｍｃｅｒｅ）、アービタックス（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＥＺＮ−２２０８（Ｅｎｚｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＥＺＮ−２９６８（Ｅｎｚｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＧＣ１００８（Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ゲニステイン、ＧＳＫ１３６３０８９［フォレチニブ（Ｆｏｒｅｔｉｎｉｂ）］（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＷ７８６０３４（パゾパニブ）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＴ−１１１（Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｇｅｎｉｃｓ  Ｌｔｄ．）、ＩＭＣ−１１２１Ｂ（ラムシルマブ）（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ−３Ｇ３（ＩｍＣｌｏｎｅ  ＬＬＣ）、ＩＮＣＢ００７８３９（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＩＮＧＮ  ２４１（Ｉｎｔｒｏｇｅｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、イレッサ（ＺＤ１８３９／ゲフィチニブ）、ＬＢＨ５８９［ファリダク（Ｆａｒｉｄａｋ）／パノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔｓｔ）］（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ルセンティス（ラニビズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＬＹ３１７６１５（エンザスタウリン）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、マクジェン（ペガプタニブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＭＥＤＩ５２２［アベグリン（Ａｂｅｇｒｉｎ）］（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＭＬＮ５１８（タンデュチニブ）（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ネオバスタット（Ｎｅｏｖａｓｔａｔ）（ＡＥ９４１／ベネフィン）（Ａｅｔｅｒｎａ  Ｚｅｎｔａｒｉｓ）、ネクサバール（Ｂａｙｅｒ／Ｏｎｙｘ）、ＮＭ−３（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ノスカピン（Ｃｏｕｇａｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＮＰＩ−２３５８（Ｎｅｒｅｕｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＯＳＩ−９３０（ＯＳＩ）、パロミド（Ｐａｌｏｍｉｄ）５２９（Ｐａｌｏｍａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、パンゼム（Ｐａｎｚｅｍ）カプセル（２ＭＥ２）（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、パンゼムＮＣＤ（２ＭＥ２）（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、ＰＦ−０２３４１０６６（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＦ−０４５５４８７８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＩ−８８（Ｐｒｏｇｅｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ／Ｍｅｄｉｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＰＫＣ４１２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ポリフェノンＥ（緑茶抽出物）（Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏ  Ｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、ＰＰＩ−２４５８（Ｐｒａｅｃｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＰＴＣ２９９（ＰＴＣ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＴＫ７８７（バタラニブ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＸＤ１０１（ベリノスタット）（ＣｕｒａＧｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６）（Ｂａｙｅｒ）、レブリミド（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、レタアネ（Ｒｅｔａａｎｅ）（Ａｌｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＳＮ３８（リポソーム製剤）（Ｎｅｏｐｈａｒｍ）、ＳＮＳ−０３２（ＢＭＳ−３８７０３２）（Ｓｕｎｅｓｉｓ）、ＳＯＭ２３０（パシレオチド）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、スクアラミン（Ｇｅｎａｅｒａ）、スラミン、スーテント（Ｐｆｉｚｅｒ）、タルセバ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＴＢ−４０３（Ｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃｓ）、テムポスタチン（Ｔｅｍｐｏｓｔａｔｉｎ）（Ｃｏｌｌａｒｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、テトラチオモリブデート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＴＧ１００８０１（ＴａｒｇｅＧｅｎ）、サリドマイド（Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、チンザパリンナトリウム、ＴＫＩ２５８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＴＲＣ０９３（Ｔｒａｃｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ（アフリバーセプト）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ−Ｅｙｅ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ベグリン（Ｖｅｇｌｉｎ）（ＶａｓＧｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ボルテゾミブ（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ＸＬ１８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ６４７（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ７８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ８２０（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ９９９（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ボリノスタット（Ｍｅｒｃｋ）およびＺＳＴＫ４７４を含み得るが、これらに限定されない。
【０１８０】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的な血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ：Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）受容体阻害剤は、ベバシズマブ［アバスチン（登録商標）］、アキシチニブ［インライタ（登録商標）］；ブリバニブアラニネート［ＢＭＳ−５８２６６４、（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−イル）２−アミノプロパノエート］；ソラフェニブ［ネクサバール（登録商標）］；パゾパニブ［ヴォトリエント（登録商標）］；リンゴ酸スニチニブ［スーテント（登録商標）］；セディラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ  ２８８３８３−２０−１）；バラガテフ（Ｖａｒｇａｔｅｆ）（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ  ９２８３２６−８３−４）；フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）；テラチニブ（ＢＡＹ５７−９３５２、ＣＡＳ  ３３２０１２−４０−５）；アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ  ８１１８０３−０５−１）；イマチニブ［グリベック（登録商標）］；ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ  ９４３３１９−７０−８）；チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ  ４７５１０８−１８−０）；レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６、ＣＡＳ  ７５５０３７−０３−７）；バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ  ２１２１４１−５１−０）；ブリバニブ（ＢＭＳ−５４０２１５、ＣＡＳ  ６４９７３５−４６−６）；バンデタニブ［カプレルサ（登録商標）またはＡＺＤ６４７４］；モテサニブ二リン酸塩［ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ  ８５７８７６−３０−３、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０２／０６６４７０号において説明されているＮ−（２，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−６−イル）−２−［（４−ピリジニルメチル）アミノ］−３−ピリジンカルボキサミド］；ドビチニブ二乳酸（Ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ  ｄｉｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ  ８５２４３３−８４−２）；リンファニブ（Ｌｉｎｆａｎｉｂ）（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ  ７９６９６７−１６−３）；カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ  ８４９２１７−６８−１）；レスタウルチニブ（ＣＡＳ  １１１３５８−８８−４）；Ｎ−［５−［［［５−（１，１−ジメチルエチル）−２−オキサゾリル］メチル］チオ］−２−チアゾリル］−４−ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ  ３４５６２７−８０−７）；（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−１−（（４−（（３−メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）メチル）ピペリジン−３−オール（ＢＭＳ６９０５１４）；Ｎ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［［（３ａα，５β，６ａα）−オクタヒドロ−２−メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メトキシ］−４−キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ  ７８１６１３−２３−８）；４−メチル−３−［［１−メチル−６−（３−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］アミノ］−Ｎ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−ベンザミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ  ９４０３１０−８５−０）；およびアフリバーセプト［アイリーア（登録商標）］を含み得るが、これらに限定されない。
【０１８１】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的なＥＧＦ経路阻害剤は、チルホスチン４６、ＥＫＢ−５６９、エルロチニブ［タルセバ（登録商標）］、ゲフィチニブ［イレッサ（登録商標）］、アービタックス、ニモツズマブ、ラパチニブ［タイケルブ（登録商標）］、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）、１８８Ｒｅ−標識ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）およびＷＯ９７／０２２６６、ＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、米国特許第５，７４７，４９８号、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３およびＷＯ９６／３３９８０において一般的かつ特異的に開示されている化合物を含み得るが、これらに限定されない。例示的なＥＧＦＲ抗体には、セツキシマブ［アービタックス（登録商標）］；パニツムマブ［ベクチビックス（登録商標）］；マツズマブ（ＥＭＤ−７２０００）；トラスツズマブ［ハーセプチン（登録商標）］；ニモツズマブ（ｈＲ３）；ザルツムマブ；ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈ−Ｒ３；ＭＤＸ０４４７（ＣＡＳ  ３３９１５１−９６−１）；およびｃｈ８０６（ｍＡｂ−８０６、ＣＡＳ  ９４６４１４−０９−１）が含まれるが、これらに限定されない。例示的な上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ：Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）阻害剤には、オシメルチニブ［タグリッソ（登録商標）］、エルロチニブ塩酸塩［タルセバ（登録商標）］；ブリガチニブ；オシメルチニブ（ｏｓｉｍｅｒｉｔｉｎｉｂ）；イコチニブ；ゲフィチニブ［イレッサ（登録商標）］；Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３’’Ｓ’’）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド、トボック（Ｔｏｖｏｋ）（登録商標）；バンデタニブ［カプレルサ（登録商標）］；ラパチニブ［タイケルブ（登録商標）］；（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−１−（（４−（（３−メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）メチル）ピペリジン−３−オール（ＢＭＳ６９０５１４）；カネルチニブ二塩酸塩（ＣＩ−１０３３）；６−［４−［（４−エチル−１−ピペラジニル）メチル］フェニル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（ＡＥＥ７８８、ＣＡＳ  ４９７８３９−６２−０）；ムブリチニブ（ＴＡＫ１６５）；ペリチニブ（Ｐｅｌｉｔｉｎｉｂ）（ＥＫＢ５６９）；アファチニブ（ＢＩＢＷ２９９２）；ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）；Ｎ−［４−［［１−［（３−フルオロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ］−５−メチルピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イル］−カルバミン酸、（３Ｓ）−３−モルホリニルメチルエステル（ＢＭＳ５９９６２６）；Ｎ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［［（３ａα，５β，６ａα）−オクタヒドロ−２−メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メトキシ］−４−キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ  ７８１６１３−２３−８）；および４−［４−［［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール（ＰＫＩ１６６、ＣＡＳ  １８７７２４−６１−４）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８２】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン［ラパミューン（登録商標）］ならびにそのアナログおよび誘導体；ＳＤＺ−ＲＡＤ；テムシロリムス［トーリセル（登録商標）；ＣＣＩ−７７９としても公知］；リダフォロリムス［デフォロリムス（ｄｅｆｅｒｏｌｉｍｕｓ）として以前に公知、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０３／０６４３８３号において説明されている］；エベロリムス［アフィニトール（登録商標）またはＲＡＤ００１］；ラパマイシン［ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標）］；シマピモド（Ｓｉｍａｐｉｍｏｄ）（ＣＡＳ  １６４３０１−５１−３）；（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ  １０１３１０１−３６−４）；およびＮ２−［１，４−ジオキソ−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−，分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ  ９３６４８７−６７−１）を含み得るが、これらに限定されない。
【０１８３】
ある特定の実施形態においては、本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせて使用されるチロシンキナーゼ阻害剤は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ：ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｋｉｎａｓｅ）阻害剤である。例示的なＡＬＫ阻害剤には、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ダランテルセプト（ｄａｌａｎｔｅｒｃｅｐｔ）、エントレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）およびロルラチニブが含まれる。
【０１８４】
本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せと組み合わせた使用のための例示的なホスホイノシチド３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ：Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ３−ｋｉｎａｓｅ）阻害剤は、４−［２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−［［４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル］メチル］チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル］モルホリン（ＧＤＣ  ０９４１としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０９／０３６０８２号およびＷＯ０９／０５５７３０号において説明されている）；２−メチル−２−［４−［３−メチル−２−オキソ−８−（キノリン−３−イル）−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］フェニル］プロピオニトリル（ＢＥＺ  ２３５またはＮＶＰ−ＢＥＺ  ２３５としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０６／１２２８０６号において説明されている）；４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン（ＢＫＭ１２０またはＮＶＰ−ＢＫＭ１２０としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２００７／０８４７８６号において説明されている）；トザセルチブ（Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）（ＶＸ６８０またはＭＫ−０４５７、ＣＡＳ  ６３９０８９−５４−６）；（５Ｚ）−５−［［４−（４−ピリジニル）−６−キノリニル］メチレン］−２，４−チアゾリジンジオン（ＧＳＫ１０５９６１５、ＣＡＳ  ９５８８５２−０１−２）；（１Ｅ，４Ｓ，４ａＲ，５Ｒ，６ａＳ，９ａＲ）−５−（アセチルオキシ）−１−［（ジ−２−プロペニルアミノ）メチレン］−４，４ａ，５，６，６ａ，８，９，９ａ−オクタヒドロ−１１−ヒドロキシ−４−（メトキシメチル）−４ａ，６ａ−ジメチル−シクロペンタ［５，６］ナフト［１，２−ｃ］ピラン−２，７，１０（１Ｈ）−トリオン（ＰＸ８６６、ＣＡＳ  ５０２６３２−６６−８）；および８−フェニル−２−（モルホリン−４−イル）−クロメン−４−オン（ＬＹ２９４００２、ＣＡＳ  １５４４４７−３６−６）を含み得るが、これらに限定されない。例示的なタンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｂ）またはＡＫＴ阻害剤には、８−［４−（１−アミノシクロブチル）フェニル］−９−フェニル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｆ］［１，６］ナフチリジン−３（２Ｈ）−オン（ＭＫ−２２０６、ＣＡＳ  １０３２３４９−９３−１）；ペリホシン（ＫＲＸ０４０１）；４−ドデシル−Ｎ−１，３，４−チアジアゾール−２−イル−ベンゼンスルホンアミド（ＰＨＴ−４２７、ＣＡＳ  １１９１９５１−５７−１）；４−［２−（４−アミノ−１，２，５−オキサジアゾール−３−イル）−１−エチル−７−［（３Ｓ）−３−ピペリジニルメトキシ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−４−イル］−２−メチル−３−ブチン−２−オール（ＧＳＫ６９０６９３、ＣＡＳ  ９３７１７４−７６−０）；８−（１−ヒドロキシエチル）−２−メトキシ−３−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−６−オン（パロミド５２９、Ｐ５２９またはＳＧ−００５２９）；トリシルビン（Ｔｒｉｃｉｒｂｉｎｅ）（６−アミノ−４−メチル−８−（β−Ｄ−リボフラノシ��）−４Ｈ，８Ｈ−ピロロ［４，３，２−デ］ピリミド［４，５−ｃ］ピリダジン）；（αＳ）−α−［［［５−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジニル］オキシ］メチル］−ベンゼンエタンアミン（Ａ６７４５６３、ＣＡＳ  ５５２３２５−７３−２）；４−［（４−クロロフェニル）メチル］−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−４−ピペリジンアミン（ＣＣＴ１２８９３０、ＣＡＳ  ８８５４９９−６１−６）；４−（４−クロロフェニル）−４−［４−（１Ｈピラゾール−４−イル）フェニル］−ピペリジン（ＡＴ７８６７、ＣＡＳ  ８５７５３１−００−１）；およびアルケキシン（Ａｒｃｈｅｘｉｎ）（ＲＸ−０２０１、ＣＡＳ  ６６３２３２−２７−７）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８５】
細胞免疫療法組成物の組合せが１つまたは複数の追加の療法と組み合わせて投与されるある特定の実施形態においては、１つまたは複数の追加の療法は、別の方法で単独療法として投与された場合に治療量未満であると考えられ得る用量において投与され得る。そのような実施形態においては、１つまたは複数の追加の療法がより低い用量において投与され得るように、細胞免疫療法組成物の組合せは、相加的または相乗的効果を提供し得る。組合せ療法は、追加の療法の前（例えば追加の療法の１日〜３０日前またはそれよりも前）の、追加の療法と同時（同日）の、または追加の療法の後（例えば追加の療法の１日〜３０日後またはそれよりも後）の本明細書において説明する細胞免疫療法組成物の組合せの投与を含む。ある特定の実施形態においては、細胞免疫療法組成物の組合せは、１つまたは複数の追加の療法の投与後に投与される。さらなる実施形態においては、細胞免疫療法分子改変細胞は、１つまたは複数の追加の療法の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後に投与される。またさらなる実施形態においては、細胞免疫療法組成物の組合せは、１つまたは複数の追加の療法の投与後４週間以内、３週間以内、２週間以内または１週間以内に投与される。１つまたは複数の追加の療法が多数の用量を含む場合、細胞免疫療法組成物の組合せは、１つまたは複数の追加の療法の初回用量後に、１つまたは複数の追加の療法の最終用量後に、または１つまたは複数の追加の療法の多数の用量間において投与され得る。
【０１８６】
ある特定の実施形態においては、本開示の方法は、枯渇工程を含む。細胞免疫療法分子改変細胞を対象から除去するための枯渇工程は、対象への毒性を軽減するために、治療利益に十分な時間後に行い得る。そのような実施形態においては、細胞免疫療法分子（例えばＣＥＲ、ＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質）を含むベクターは、誘導性自殺遺伝子、例としてｉＣＡＳＰ９、誘導性ＦａｓまたはＨＳＶ−ＴＫを含み得る。同様に、ベクターは、関連付けられるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、例えばＣＤ２０についてのリツキシマブまたはＥＧＦＲについてのセツキシマブの点滴を通して、形質導入された細胞の枯渇を促進する公知の細胞表面抗原、例としてＣＤ２０または切断型ＥＧＦＲ（配列番号７０）の発現のために設計され得る。また、成熟リンパ球の表面上に存在するＣＤ５２をターゲティングするアレムツズマブは、形質導入されたＢ細胞、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞を枯渇するために使用され得る。
【０１８７】
本開示の組成物および方法によって治療され得る対象には、動物、例としてヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモットまたはブタが含まれる。対象は、男性であっても、女性であってもよく、幼児、若年、青年、成人および老年の対象を含む任意の好適な年齢であり得る。
【実施例】
【０１８８】
実施例１
ＣＥＲ、ＴＣＲ、および改変Ｔ細胞の構築
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ４の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号９４のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ５」を創出した。
【０１８９】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ３の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１１２のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１７」を創出した。
【０１９０】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ５の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号９５のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１９」を創出した。
【０１９１】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号９６のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ２１」を創出した。
【０１９２】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ９の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１１６のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ２３」を創出した。
【０１９３】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ１の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１１８のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ２６」を創出した。
【０１９４】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ２の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号９８のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ２７」を創出した。
【０１９５】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号９９のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ２９」を創出した。
【０１９６】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＲＡＦ２の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１２０のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ３０」を創出した。
【０１９７】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂの切断型貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１３８のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１０３Ｂ」を創出した。
【０１９８】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１３９のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１０４」を創出した。
【０１９９】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインおよびＢＡＦＦ−Ｒの貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１４０のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１０５」を創出した。
【０２００】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＮＦＡＭ１の貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１４１のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１０６」を創出した。
【０２０１】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１４５のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１０」を創出した。
【０２０２】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１４８のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１２」を創出した。
【０２０３】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインおよびＢＡＦＦ−Ｒの貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１４９のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１３」を創出した。
【０２０４】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインおよびＭＥＲＴＫの貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１５０のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１４」を創出した。
【０２０５】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＭＥＲＴＫの貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１５１のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１５」を創出した。
【０２０６】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、Ｔｒａｆ６の貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１５２のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１６」を創出した。
【０２０７】
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインとＴｉｍ４膜貫通ドメインとを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６の貪食シグナル伝達ドメインに融合して、配列番号１５３のアミノ酸配列をコードするキメラ貪食受容体「ＣＥＲ１１７」を創出した。
【０２０８】
ＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲのＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドおよびＴＣＲαをコードするポリヌクレオチド（ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１５／１８４２２８号を参照のこと）を、それらの間にＰ２Ａ自己切断ペプチドをコードする配列を使用して融合した。ＴＣＲ  Ｖαドメインは、配列番号８８のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲ  Ｖβ領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。Ｃαドメインは、システイン置換、および１２、１４および１５位におけるＬＶＬ置換を含み、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。また、Ｃβは、システイン置換を含み、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。コードされるＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
【０２０９】
選択されたＣＥＲポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲポリヌクレオチドを各々、ｐＬｅｎｔｉレンチウイルスベクターに挿入した。ヒトドナーから静脈穿刺により末梢血を収集し、リンパ球分離媒体を使用する密度勾配遠心分離によってヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ）を単離した。市販されている単離キットを使用してＰＢＭＣからＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を富化し、完全細胞増殖培地において抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８により活性化した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを発現する５０μｌのウイルスベクターを、０．５ｍｌの完全細胞増殖培地中に希釈し、ＣＤ８＋Ｔ細胞に添加した。選択されたＣＥＲを発現する５０μｌのウイルスベクターを、０．５ｍｌの完全細胞増殖培地中に希釈し、ＣＤ４＋Ｔ細胞に添加した。その後、形質導入したＴ細胞を、３２℃の事前に温めた遠心分離機において２７０ｘｇ  ｒｐｍにて１時間遠心分離した。Ｔ細胞を３７℃において２４時間インキュベートした。Ｔ細胞を完全細胞増殖培地においてさらなる７２時間拡大増殖させ、ビーズを除去し、ｘ５日間拡大増殖させ、その後、機能アッセイに利用した。形質導入したＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、機能アッセイのために１：１の比において混合した。
【０２１０】
実施例２
ＣＤ８＋Ｔ細胞−ＴＣＲとＣＤ４＋Ｔ細胞−ＣＥＲとの組合せは、抗原特異的細胞溶解活性および食作用活性の向上を示す
標的ＳＣＣ１５２細胞のＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲおよびＣＥＲ二重媒介除去を、細胞傷害性アッセイおよび食作用アッセイを使用して検出した（図３を参照のこと）。ＳＣＣ１５２細胞は、下咽頭の扁平上皮癌からのＨＰＶ１６＋細胞である。活性化カスパーゼ３／７認識モチーフを、切断に際して蛍光を発する赤色試薬とカップリングさせるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬［ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）］を使用して、ＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞傷害活性を検出した。蛍光顕微鏡を使用して蛍光シグナルを測定した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞および選択したＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を、１：１の比において混合し、ＨＰＶ１６  Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）と１：１の比において共培養し、カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を共培養物に添加した。蛍光を測定することによって、細胞傷害活性を経時的に測定した。対照試料は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ単独を形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞であった。図４、５および２６のグラフ、および図６〜１８の蛍光顕微鏡写真において示される通り、ほとんどの試験したＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞の、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞への添加により、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８  Ｔ細胞による単独治療に優る細胞傷害活性の向上がもたらされた。
【０２１１】
乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）細胞傷害性アッセイを使用して測定した場合、ＣＥＲ１０４を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞およびＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞傷害活性の向上を観察した（図１９を参照のこと）。ＬＤＨは、形質膜が損傷した場合に細胞によって細胞培養培地に放出されるサイトゾル酵素である。したがって、培養培地中のＬＤＨの存在は、細胞死のマーカーである。ＬＤＨアッセイは、他の方法を使用して検出され得ない細胞膜への低レベルの損傷を検出することができる。ＬＤＨは、比色法または蛍光法を使用して検出され得る。
【０２１２】
また、ＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択されたＣＥＲを形質導入したＣＤ４  Ｔ細胞とのコインキュベーション中に、ＳＣＣ１５２細胞による緑色蛍光タンパク質発現を経時的に（０時間、２４時間、４８時間）定量することによって、標的ＳＣＣ１５２細胞の除去を検出した（図２０を参照のこと）。４８時間までに、ＣＤ４＋Ｔ細胞／ＣＥＲおよびＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲの組合せ共培養物の全ては、対照と比較してＳＣＣ１５２細胞の除去の向上を示した。共培養実験の微速度撮影画像は同様に、対照と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞／ＣＥＲおよびＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲの組合せ共培養物によるＳＣＣ１５２細胞の除去の向上を示した（図２１〜２５を参照のこと）。
【０２１３】
共培養実験のサイトカイン応答は、メソスケールマルチアレイサイトカインプレートを使用して細胞上清を試料採取することによって測定した。以下のサイトカイン：ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｂ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１ｂおよびＩＬ−１０を測定した。対照と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞／ＣＥＲおよびＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲの組合せとの共培養物において、活性プロファイルを示すサイトカイン産生（例えばＩＦＮγ、ＩＬ−２）の向上が誘発された（図２７を参照のこと）。
【０２１４】
ＫＥＹＥＮＣＥ  ＢＺ−Ｘ７１０蛍光顕微鏡、２０Ｘ対物レンズおよびハイブリッドキャプチャーソフトウェアを使用して、ＳＣＣ１５２細胞と共培養したＣＤ４＋Ｔ細胞／ＣＥＲおよびＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲの組合せの食作用活性を可視化および定量した。図２８〜４２は、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲとの共培養において使用した様々なＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞が、対照ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ単独との共培養に優る、ＳＣＣ１５２標的細胞の貪食の向上を示したことを示す。
【０２１５】
また、ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞と、ＴＲＡＦシグナル伝達ドメインを含有する選択されたＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞とを含む組成物を、細胞溶解活性および食作用活性について試験した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞および選択されたＣＥＲ（ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１５、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を１：１の比において混合し、ＨＰＶ１６  Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）と１：１の比において共培養し、６時間後にカスパーゼ３／７アポトーシス試薬を共培養物に添加した。蛍光を測定することによって細胞傷害活性を経時的に測定した。対照試料は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および対照を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞であった。図４３および４４の棒グラフ、および図４５〜５４の蛍光顕微鏡写真において示される通り、全ての試験したＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞の、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞への添加は、細胞傷害活性を向上させた。
【０２１６】
ＫＥＹＥＮＣＥ  ＢＺ−Ｘ７１０蛍光顕微鏡、２０Ｘ対物レンズおよびハイブリッドキャプチャーソフトウェアを使用して、ＳＣＣ１５２細胞と共培養したＣＤ４＋Ｔ細胞／ＣＥＲおよびＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲの組合せの食作用活性を可視化および定量した。ＣＤ４＋Ｔ細胞／対照およびＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを、対照として使用した。図５５および５６の棒グラフは、ＣＤ８  Ｔ細胞／ＨＰＶ  Ｅ７  ＴＣＲとの共培養において使用した全ての試験したＣＥＲ（ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞が、対照に優る、ＳＣＣ１５２標的細胞の貪食の向上をもたらしたことを示す。
【０２１７】
また、ＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞および選択されたＣＥＲ（ＣＥＲ２９、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７）を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞とのコインキュベーション中に、ＳＣＣ１５２細胞による緑色蛍光タンパク質発現を経時的に（０時間、１２時間、２４時間、３６時間）定量することによって、標的ＳＣＣ１５２細胞の除去を検出した（図５７を参照のこと）。３６時間までに、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物により処理した共培養物は、対照と比較してＳＣＣ１５２細胞のほぼ完全な除去を示した（図５７を参照のこと）。共培養実験の微速度撮影画像は同様に、対照と比較して、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１１３、ＣＥＲ１１４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞により処理した共培養物におけるＳＣＣ１５２細胞の除去の向上を示した（図５８および５９）。
【０２１８】
実施例３
ＣＥＲ改変ＣＤ４  Ｔ細胞の特徴付け
また、特定のＣＥＲが宿主細胞において広範な低規模食作用応答（例えば９０％の細胞における１０％の貪食）を与えるか、低頻度であるが強い食作用応答（例えば１０％の細胞における９０％の貪食）を与えるかを決定するために、様々なＣＥＲ改変ＣＤ４＋Ｔ細胞を、応答の幅について査定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞に、実施例１において説明する通りにＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲを形質導入した。ＣＤ４＋Ｔ細胞にＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。模擬形質導入（ベクター単独）ＣＤ４＋Ｔ細胞を対照として使用した。ＣＤ４＋／ＣＥＲ＋およびＣＤ８＋／Ｅ７  ＴＣＲ＋Ｔ細胞をＣＥＬＬＴＲＡＣＥ  ｖｉｏｌｅｔにより染色した。ＨＰＶ１６  Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）をｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにより染色した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞および選択されたＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を１：１の比において混合し、ＳＣＣ１５２細胞と１：１の比において８時間共培養した。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞による標的ＳＣＣ１５２細胞の食作用を、蛍光顕微鏡により分析した。図６０Ａは、ＣＥＲの種類による食作用についての規模幅曲線を示す。横軸は、貪食を有するＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞の領域％、または標的ＳＣＣ１５２細胞により奪われたＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞の領域％を表す。この測定は、試験したＣＥＲの種類にわたり滅多に４０％を超えなかった。縦軸は、食作用性であったＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を表す。ＣＥＲ１０４について、ＣＥＲ１０４形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞の約２０％が、１０％を超える貪食を有する。ＣＥＲ１１７形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞について、１０％未満が１０％を超える貪食を有する。図６０Ｂは、ＣＥＲ１２６形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞によって貪食されたＳＣＣ１５２標的細胞の蛍光顕微鏡写真像を示す。
【０２１９】
ＣＤ４＋Ｔ細胞に、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０２、ＣＥＲ１０３Ａ、ＣＥＲ１０３Ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０６、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。模擬形質導入（ベクター単独）ＣＤ４＋Ｔ細胞を対照として使用した。ＣＤ８＋Ｔ細胞に、ＨＰＶ１６  Ｅ７特異的ＴＣＲを形質導入した。ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞および選択されたＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を１：１の比において混合し、ＳＣＣ１５２細胞と１：１の比において１０時間共培養した。その後、上清を収集し、バルクサイトカイン分泌について分析した。図６１において示す通り、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞のＥ７  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞への添加は、ＩＦＮγ分泌のレベルを向上させた。
【０２２０】
実施例４
ＣＥＲ改変Ｔ細胞による抗原提示
細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＴＬ）による腫瘍細胞死滅を向上させるための１つの戦略は、ＭＨＣ  Ｉ分子において外因性抗原を「交差提示」する独特な能力を有する抗原提示細胞（ＡＰＣ）を利用することである。腫瘍特異的ＣＴＬ応答を広げることは、腫瘍に対する有効な免疫応答を誘導する可能性を有する。この実施例においては、キメラ貪食受容体（ＣＥＲ）発現細胞の抗原プロセシングおよび提示能力を特徴付けるために、ウイルスＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７腫瘍性タンパク質をモデル抗原として使用した。
【０２２１】
ヒトＰＢＭＣからＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＥＲ発現Ｔ細胞系を確立した。精製Ｔ細胞に、ＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズによる活性化後に、ＣＥＲ１２３（配列番号１６４）および切断型ＥＧＦＲ（形質導入マーカー）をコードするレンチウイルスを形質導入し、その後、ＩＬ−７、ＩＬ−１５およびＩＬ−２を含有する培地において５日間拡大増殖させた。ｔＥＧＦＲ＋Ｔ細胞の割合は、４０〜６０％に及んだ。
【０２２２】
Ｔ細胞応答を研究するために、ＮＦＡＴ誘導性ルシフェラーゼレポーターコンストラクトの安定な統合を有するＪｕｒｋａｔ細胞系を利用した。ヒトＥ６およびＥ７特異的操作ＴＣＲを、Ｊｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴレポーター細胞系に形質導入して、操作ＣＥＲとの共培養に際してのＮＦＡＴ活性化を特徴付けた。
【０２２３】
ＭＨＣ−Ｉ交差提示を評価するために、ＳＣＣ１５２  ＨＰＶ＋細胞を、Ｅ７特異的ＴＣＲを発現するＴ細胞の存在下において、ＣＥＲ１２３発現ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞または模擬形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞と一晩共培養した。一晩の共培養後、ＣＥＲ１２３発現Ｔ細胞または模擬形質導入Ｔ細胞を、ＦＡＣＳを使用して精製し、洗浄し、次にＥ６／Ｅ７特異的ヒトＴＣＲ／ＮＦＡＴレポーター細胞系と１：１の比において培養した。細胞培養上清においてルシフェラーゼ活性を測定することによって、ＮＦＡＴ活性化を、連続時点（０、６、１２、２４および７２時間）において評価した。このアッセイの概略図を図６２において示す。細胞を９６ウェル丸底プレートにおいてＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳ中にて培養した。ＣＥＲ１２３発現ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞系を、ＨＰＶ＋腫瘍に対して食作用を示した後に、Ｅ７１１〜１９特異的ＴＣＲおよびＮＦＡＴレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と一晩共培養した。Ｅ７１１〜１９特異的Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の誘導を、示される時点においてＮＦＡＴシグナル伝達の発光によって定量し、模擬（ベクター単独）形質導入Ｔ細胞と比較した（図６３）。ＣＥＲ１２３発現Ｔ細胞は、ＨＰＶ＋腫瘍細胞の食作用後にＨＰＶ  Ｅ７腫瘍性タンパク質の交差提示効率の向上を実証した。
【０２２４】
実施例５
ＣＥＲ改変ＣＤ４  Ｔ細胞のマーカー分析
ＣＤ４＋Ｔ細胞に、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。ＣＥＲ１０４（配列番号１３９）は、Ｔｉｍ４結合ドメインと、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインと、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む一次貪食シグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む二次貪食シグナル伝達ドメインを含む貪食シグナル伝達ドメインとを含む。ＣＥＲ１１６（配列番号１５２）は、Ｔｉｍ４結合ドメインと、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインと、ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む一次貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む二次貪食シグナル伝達ドメインを含む貪食シグナル伝達ドメインとを含む。ＣＥＲ１１７（配列番号１５３）は、Ｔｉｍ４結合ドメインと、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインと、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む一次貪食シグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む二次貪食シグナル伝達ドメインを含む貪食シグナル伝達ドメインとを含む。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞を、Ｅ７  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、マスサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）によって、ｖｉＳＮＥを高次シングルセルデータの可視化のために使用して調査した（図６４〜６６）。インタクトなＣＥＲを形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞を、ｔＳＮＥ１（横）およびｔＳＮＥ２（縦）軸を示すプロットにおいて示す。ｖｉＳＮＥ分析のために２７個の細胞内マーカーを使用した。各点は、単一の細胞を表す。測定したマーカー（ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ１ｂ、パーフォリン、ＴＮＦ、ＩＬ−１７、グランザイムＢ、ＩＬ−４、ＩＬ−２およびＩＦＮγ）のうちのいくつかによってプロットに色を付けると、ｖｉＳＮＥ「島」にわたり表現型が示される（図６４Ａ）。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。全ての２７個のマーカーからクラスター化アルゴリズムを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞集団を生成し、ｖｉＳＮＥマップ上にオーバーレイした。矢印は、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６およびＣＥＲ１１７を含有する試料における細胞内マーカーＩＦＮγを発現する島の富化を示す（図６４Ｂ）。全ての１８個のマーカーからクラスター化アルゴリズムを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞集団を生成し、ｖｉＳＮＥマップ上にオーバーレイした（図６５Ａ）。矢印は、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する試料におけるＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現する島の富化を示す。１８個の細胞内マーカー（ＣＤ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＰＤ１、ＣＤ１２７、パーフォリン、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ３８、ＣＤ２７、グランザイムＢ、ＣＤ５７、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１５４、ＣＤ５６、ＨＬＡ−ＤＲおよびＴＣＲγδ）による色プロットは、ｖｉＳＮＥ「島」にわたり表現型を示す（図６５Ｂ）。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。矢印により強調した領域は、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現する細胞を示す。１８個の細胞内マーカー（ＣＤ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＰＤ１、ＣＤ１２７、パーフォリン、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ３８、ＣＤ２７、グランザイムＢ、��Ｄ５７、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１５４、ＣＤ５６、ＨＬＡ−ＤＲおよびＴＣＲγδ）からクラスター化アルゴリズムを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞集団を生成し、ｖｉＳＮＥマップ上にオーバーレイした。矢印は、対照と比較した、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６試料のうちのＣＣＲ７＋集団内のナイーブＴ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現する島の喪失を示す（図６６Ａ）。１８個の細胞内マーカーによる色プロットは、ｖｉＳＮＥ「島」にわたり表現型を示す（図６６Ｂ）。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。矢印により強調した領域は、ナイーブＴ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現する細胞を示す。したがって、このデータは、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞が抗原遭遇後のメモリー形成と関連付けられることを示す。
【０２２５】
実施例６
ＣＤ４＋ＣＥＲ改変Ｔ細胞はインビボで貪食活性の大部分を有し、腫瘍死滅を向上させる
ＰＢＭＣからＣＤ４＋またはＣＤ３＋細胞を精製し、活性化し、ｈＣＥＲ１０４核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。ｈＣＥＲ１０４は、Ｔｉｍ４結合ドメインと、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインと、ＴＬＲ８貪食シグナル伝達ドメインと、Ｄａｐ１２貪食シグナル伝達ドメインとを含むヒトＣＥＲ１０４コンストラクトであり、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む。ＨＣＣ８２７細胞はＥＧＦＲ変異を有し、ＥＧＦＲ阻害剤オシメルチニブによる処理は、細胞表面上のホスファチジルセリンの曝露を誘導する。形質導入したＴ細胞を拡大増殖させた。ＣＥＲ改変Ｔ細胞を、ｐＨｒｏｄｏ−ｒｅｄ標識ＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ腺癌細胞と一晩共培養し、ｐＨｒｏｄｏ陽性シグナルについてＦＡＣｓによって査定して、ＨＣＣ８２７標的細胞の食作用を検出した（図６７Ａを参照のこと、ＦＡＣｓプロット内の囲みは食作用％を示す）。抗体染色を使用して、Ｔ細胞サブセットをそれらの食作用能力について分析した。ＣＤ４＋ＣＥＲ改変Ｔ細胞のインビトロ食作用の頻度は、ＣＤ８＋ＣＥＲ改変Ｔ細胞よりかなり高かった（図６７Ｂを参照のこと）。
【０２２６】
ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ３＋Ｔ細胞およびｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞を、１ｎＭオシメルチニブを伴って、または伴わずに４８時間処理したＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ腺癌細胞と共に、５：１のエフェクター対標的細胞比において共培養した。模擬形質導入Ｔ細胞を対照として使用した。共培養後のＨＣＣ８２７細胞の生存率をＭＴＴアッセイによって測定し、図６８に示した。ＨＣＣ８２７細胞は、ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ３＋Ｔ細胞よりも、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの混合物を表すｈＣＥＲ１０４  ＣＤ４＋Ｔ細胞と共培養した場合に、より低い細胞生存率を示した。４８時間共培養における位相差顕微鏡は、オシメルチニブの存在下におけるｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ３＋Ｔ細胞によるＨＣＣ８２７細胞の特異的細胞死滅を示す（図６９）。
【０２２７】
ＨＰＶ  Ｅ７特異的ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞（１ｘ１０６個）（実施例１において説明する）およびｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞（３ｘ１０６個）を含む細胞免疫療法組成物の組合せを、ＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２細胞をＮＳＧマウスに注射することによって生成した頭頸部扁平上皮癌マウスモデルに注入し、ＨＰＶ  Ｅ７特異的ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞単独で処置したＳＣＣ１５２異種移植マウスと比較した（ｎ＝５匹のマウス／処置群）。キャリパー測定により腫瘍容量を経時的に測定し、図７０に示した。ＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞の、Ｅ７特異的ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞への添加は、インビボで腫瘍死滅を向上させた。
【０２２８】
ＰＢＭＣからＣＤ３＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を精製し、活性化し、ｈＣＥＲ１２２核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。ｈＣＥＲ１２２は、Ｔｉｍ４結合ドメインと、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインと、ＴＬＲ２貪食シグナル伝達ドメインと、Ｄａｐ１２貪食シグナル伝達ドメインとを含むヒトＣＥＲ１２２コンストラクトであり、配列番号１７９のアミノ酸配列を含む。形質導入したＴ細胞を拡大増殖させた。ｈＣＥＲ１２２改変ＣＤ３＋Ｔ細胞（２．５ｘ１０６個または５ｘ１０６個）またはｈＣＥＲ１２２改変ＣＤ４＋Ｔ細胞（２．５ｘ１０６個または５ｘ１０６個）を、ＨＣＣ８２７腺癌細胞（２００万個／マウス）を移植したＮＳＧマウスに注入した。また、ＨＣＣ８２７異種移植マウスは、移植後に１ｍｇ／ｋｇのオシメルチニブを投与された。ｈＣＥＲ１２２改変ＣＤ３＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の両方は、オシメルチニブ処置単独と比較してインビボで（ｉｎ  ｖｏｖ）抗腫瘍応答の向上を示した（図７１）。ｈＣＥＲ１２２改変ＣＤ４＋Ｔ細胞は、異種移植モデルの腫瘍を除去した（図７１）。１６日目のＨＣＣ８２７異種移植モデルからの免疫蛍光染色した腫瘍細胞の顕微鏡像。腫瘍標本を、抗ＥＧＦＲ（腫瘍抗原）、抗ＣＤ４、抗ＰＤ１およびＤＡＰＩ対比染色により染色した。腫瘍染色は、ＰＤ１＋ＣＤ４＋Ｔ細胞（機能的に活性）の腫瘍間質への浸潤を示す（図７２、左画像）。図７２、右画像は、抗ＰＤ１染色したＴ細胞を示す。
【０２２９】
実施例７
ファゴリソソームＶ型ＡＴＰアーゼの阻害はＣＥＲ誘導食作用を消失させる
Ｔ細胞に、実施例６において説明するｈＣＥＲ１０４核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。ｈＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞を、オシメルチニブを伴って、または伴わずに、ＨＣＣ８２７腺癌細胞と共培養した。バフィロマイシンは、Ｖ型ＡＴＰアーゼの阻害剤であり、ファゴソーム酸性化（ａｃｉｆｉｃｉａｔｉｏｎ）を妨害する。ｈＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞は、ＴＡＭＲＡ−ＳＥ蛍光色素標識ＨＣＣ８２７細胞の食作用を示した（図７３Ａ）。バフィロマイシン（２０ｎＭ）の共培養物への添加は、ｈＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞による標識ＨＣＣ８２７細胞の取り込みを遮断した（図７３Ａ）。ｈＣＥＲ１０４改変Ｔ細胞または模擬形質導入対照Ｔ細胞におけるインビトロ食作用アッセイからのＦＡＣｓプロットを図７３Ｂに示す。
【０２３０】
実施例８
ｈＣＥＲ１０４改変ＣＤ４＋Ｔ細胞はインビボでＥ７特異的ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍死滅を向上させた
ＨＰＶ＋ＳＣＣ１５２／ルシフェラーゼ＋細胞を、ＮＳＧマウスに移植した。腫瘍が確立されると、マウスを、ＨＰＶ  Ｅ７特異的ＴＣＲ（配列番号８４）改変ＣＤ８＋Ｔ細胞および模擬形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞により処置するか、ＨＰＶ  Ｅ７特異的ＴＣＲ改変ＣＤ８＋Ｔ細胞およびｈＣＥＲ１０４（配列番号１７６）改変ＣＤ４＋Ｔ細胞により処置するか、または処置しなかった（処置群当たりｎ＝５）。ＨＰＶ  Ｅ７  ＣＤ８＋Ｔ細胞およびｈＣＥＲ１０４  ＣＤ４＋Ｔ細胞を、１：１の比において投与した。生物発光画像法によって腫瘍容量を経時的に測定した（図７４Ａ〜７４Ｂを参照のこと）。ＨＰＶ  Ｅ７  ＣＤ８＋Ｔ細胞は、異種移植モデルにおいて非処置対照と比較して抗腫瘍応答を示した。ｈＣＥＲ１０４  ＣＤ４＋Ｔ細胞のＨＰＶ  Ｅ７  ＣＤ８＋Ｔ細胞への添加は、インビボで腫瘍死滅を向上させた。
【０２３１】
上記に説明する様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。非限定的に２０１８年３月２８日出願の米国仮特許出願第６２／６４９，５４１号、２０１８年４月４日出願の米国仮特許出願第６２／６５２，８３８号、および２０１８年９月２１日出願の米国仮特許出願第６２／７３４，８６３号を含む、本明細書において参照および／または出願データシートに列挙される全ての米国特許、米国特許出願公開公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は、その全体を参照により本明細書に組み込む。実施形態の態様は、様々な特許、出願および刊行物の概念を用いて、またさらなる実施形態を提供するために必要な場合、改変され得る。
【０２３２】
これらおよび他の変化は、上記に詳述される説明に照らして実施形態についてなされ得る。一般的に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を、明細書および特許請求の範囲において開示されている特定の実施形態に限定すると解釈されるべきではないが、そのような特許請求の範囲が権利を与える均等物の全範囲に沿った全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０Ａ】
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【図６０Ｂ】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７Ａ】
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【図６７Ｂ】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３Ａ】
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【図７３Ｂ】
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【図７４Ａ】
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【図７４Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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