(57)【要約】本発明は、ポリオキサゾリン分子及び１以上の標識化合物を含む可視化剤に向けられている。該可視化剤は、硝子体を着色する為に使用されることが出来る眼の着色組成物であることが出来る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリオキサゾリン分子に分子的に結合された１以上の標識化合物を含む、ヒアルロナンを可視化する為の可視化剤であって、該ポリオキサゾリン分子が、下記の式
【化１】
2021522309.tif 000008
ここで、Ｒ１はアルキル基又はフェニル基であり、該アルキル基又はフェニル基は任意的に、ハロゲン、アミノ（−ＮＨ２）、ニトロ（−ＮＯ２）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ）、スルホネート（−ＳＯ３−）、ヒドロキシル（−ＯＨ）及びスルフヒドリル（−ＳＨ）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、及び、上記アルキル基又はフェニル基はまた任意的に、追加的に又は代替的に、１以上のアルキル基で置換されていてもよく、並びに、
Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロゲン、アミノ（−ＮＨ２）、ニトロ（−ＮＯ２）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、アルコキシ（−Ｏ−Ｒ）、スルホネート（−ＳＯ３−）、ヒドロキシル（−ＯＨ）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）及びスルフヒドリル（−ＳＨ）からなる群から選択される、
に従う繰り返し単位を有する、前記可視化剤。
【請求項２】
前記標識化合物がアゾ化合物であり、好ましくは下記の式
【化２】
2021522309.tif 000009
ここで、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じ芳香環又は異なる芳香環である、
に従うアゾ部分を有する、請求項１に記載の可視化剤。
【請求項３】
前記標識化合物が、下記の式（ＩＩＩ）に従うアゾ化合物
【化３】
2021522309.tif 000010
ここで、Ａｒ３及びＡｒ４は、同じ又は異なる（ヘテロ）アリール基であり、Ａｒ３及びＡｒ４はそれぞれ独立して、フェニル、ビフェニル、ナフチル、及びフェナジンから選択され、該フェニル、ビフェニル、ナフチル、及びフェナジンは任意的に、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル、スルホネート、スルフヒドリル及び−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５から選択される１以上の基で置換されていてもよく、−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５はアゾ基であり、Ａｒ５はフェニル及びナフチルから選択され、該フェニル及びナフチルは任意的に、メチル、エチル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、並びにスルホネート及びスルフヒドリルから選択される１つ以上の基で置換されていてもよい、
又は、下記の式（ＩＶ）に従うアゾ化合物
【化４】
2021522309.tif 000011
ここで、Ａｒ６及びＡｒ７は同じ又は異なる（ヘテロ）アリール基であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素原子、メチル、エチル、メトキシ、アミノ、ヒドロキシル、スルフヒドリル及びスルホネートから選択され、Ａｒ６及びＡｒ７はそれぞれ独立して、好ましくは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、及びフェナジンから選択され、該フェニル、ビフェニル、ナフチル、及びフェナジンは任意的に、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル、スルホネート、スルフヒドリル及び−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５から選択される１以上の基で置換されていてもよく、−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５基は、上で定義された通りである、
である、請求項２に記載の可視化剤。
【請求項４】
前記標識化合物が、バイタル染料、放射線造影剤、ＭＲＩ造影剤、蛍光化合物、同位体標識された化合物、及び化粧品着色剤から成る群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の可視化剤。
【請求項５】
前記標識化合物が、トリパンブルー（Trypan  Blue）、シカゴスカイブルー６Ｂ（Chicago  Sky  Blue  6B）、ヤヌスグリーンＢ（Janus  Green  B）、アルラレッド（Allura  Red）、ファストイエローＡＢ（Fast  Yellow  AB）、２−ナフトールオレンジ（2-naphtol  orange）、ジアミングリーン（diamine  green）、クマシーブルー（coomassie  blue）、ナフトールブルーブラック（naphtol  blue  black）、タートラジン（tartrazine）、スカーレットレッド（scarlet  red）、チアゾールイエローＧ（thiazole  yellow  G）、及びスーダンブラックＢ（sudan  black  B）から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の可視化剤。
【請求項６】
前記ポリオキサゾリンが、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）及びポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の可視化剤。
【請求項７】
前記ポリオキサゾリンが、２００〜５００，０００ｇ／モル、好ましくは５００〜１００，０００ｇ／モル、の分子量を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の可視化剤。
【請求項８】
前記剤が、ポリオキサゾリン１個当たり少なくとも５個の化合物を含み、各標識化合物が、ポリオキサゾリンに非共有的に結合されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の可視化剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤を含む可視化組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、硝子体を着色する為の眼科用組成物、歯茎を可視化する為の歯科用組成物、関節における組織を含むヒアルロナンを可視化する為の造影剤、又は化粧品組成物である、請求項９に記載の可視化組成物。
【請求項１１】
前記組成物が硝子体を着色する為の水性溶液であり、該組成物が、６．５〜８のｐＨ且つ０．５〜１０重量％の前記可視化剤の濃度を有する、請求項９又は１０に記載の可視化組成物。
【請求項１２】
前記組成物がさらにヒアルロナンを含む、請求項９又は１０に記載の可視化組成物。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤又は請求項９〜１１のいずれか１項に記載の可視化組成物を調製する方法であって、式（Ｉ）に従うポリオキサゾリン及び標識化合物を水中に溶解する工程を含む、前記方法。
【請求項１４】
眼科手術で使用する為の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤又は請求項９〜１１のいずれか１項に記載の可視化組成物であって、前記眼科手術が、硝子体を前記可視化剤又は前記組成物で着色することを含む、前記可視化剤又は前記可視化組成物。
【請求項１５】
眼科手術中に前房を安定化させる為の粘弾性組成物として眼科手術で使用する為の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤又は請求項９〜１１のいずれか１項に記載の可視化組成物。
【請求項１６】
歯肉（歯茎）を可視化剤又は組成物で着色することを含む歯科手術で使用する為の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤又は請求項９〜１１のいずれか１項に記載の可視化組成物。
【請求項１７】
組織をアゾ染料で着色すること、手術を行うこと、該アゾ染料をポリオキサゾリンと接触させること、そして、該アゾ染料と該ポリオキサゾリンとの間に形成された複合体を除去することを含む手術で使用する為の、請求項１に記載の式（Ｉ）に従う繰り返し単位を有するポリオキサゾリン。
【請求項１８】
診断において、請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤又は請求項９〜１１のいずれか１項に記載の可視化組成物を使用する方法。
【請求項１９】
ヒアルロナンを可視化する為に、請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤を使用する方法。
【請求項２０】
ヒアルロナンを可視化する方法であって、ヒアルロナンを含む組織、好ましくは眼及び／又は硝子体、歯肉又は硝子軟骨、に、請求項１〜８のいずれか１項に記載の可視化剤を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロナン組織（特に、眼の硝子体）を可視化する為の分子複合体、ヒアルロナン組織を可視化する為の組成物、該複合体及び該組成物を調製する為の方法、並びに外科手術、診断、治療及び化粧品における該複合体及び該組成物の使用に向けられている。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸とも称されるヒアルロナンは、二糖の繰り返し単位からなる多糖である。ヒアルロナンの該二糖単位は、グリコシド結合を介して結合されたＤ−グルクロン酸及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンから構成される。ヒアルロナンは、ムコ多糖の群に属する。ヒアルロナンは、水性環境で、負に荷電した基の存在に起因して非常に極性が高い。
【０００３】
ヒアルロナンは、ヒト及び動物の身体の特定の組織に存在する。眼の後眼部に位置する硝子体は、多量のヒアルロナンを含む。ヒアルロナンはまた、関節軟骨（及び、特にヒアリン軟骨）の重要な成分であり、軟骨細胞の外面に存在する。ヒアルロナンはまた、口内の特定の組織に存在する。ほとんどの歯周組織がヒアルロナンを含み、特に歯肉（歯茎）は多量のヒアルロナンからなる。さらに、ヒアルロナンは、皮膚、毛包及び結合組織に有意な量で存在する。
【０００４】
可視化剤、例えば色素及び造影剤、は、或る組織を他の組織と識別する為に、該或る組織を可視化して使用される。当技術分野において、可視化剤をヒアルロナン組織に選択的に施与する必要性がある。例えば、周囲の組織を着色しないまま歯肉を色素で着色することができれば、歯科外科手術が容易になりうる。同様に、或る疾病を診断及び／又はモニタリングする為に、可視化剤、例えば造影剤、をヒアリン軟骨に選択的に施与することが有用である。さらに、種々の外科的手技の間に又は後にヒアリン「注射剤」が可視化されて、それらの存在を突き止める（ヒアリン注射剤が治療的ツールとして使用される場合）又はそれらの非存在を確認する（手術が行われた組織からヒアリン注射剤が再度除去されなければならない場合）ことが出来る場合に、それは様々な外科的処置を助けうる。
【０００５】
特に、眼の外科手術において、ヒアルロナン組織を可視化することが出来るようにする為の強い必要性がある。特定の眼の構造体に色素を施与して、外科医が、様々な眼の組織を可視化し且つ識別することを支援することは、眼の外科手術において一般的な実務である。例えば、水晶体前嚢（前眼部に位置する）を色素で着色して、嚢切開の実施を容易にすることは一般的な実務である。この手技は、例えば、国際公開第９９／５８１６０号パンフレットに記載されている。国際公開第９９／５８１６０号パンフレットに記載の方法は、組織を通して拡散することなく該組織を着色することが出来る生体着色色素を使用する。その上、網膜の膜（後眼部に位置する）を着色し、硝子体網膜外科手術を容易にすることは既知である。そのような膜の例は、内境界膜及び網膜上膜である。容易になりうる硝子体網膜外科手術の例は、網膜剥離外科手術、黄斑ひだ除去及び黄斑円孔外科手術である。この種の着色は、国際公開第９９／５８１５９号パンフレットに記載されている。
【０００６】
国際公開第９９／５８１５９号パンフレット及び国際公開第９９／５８１６０号パンフレットの手技の欠点は、それらの中に記載されている着色方法及び色素組成物が、硝子体を着色することが出来ないことである。
【０００７】
該硝子体は、清澄な透明の半固体ゲルからなる組織であり、それは水晶体と眼の後眼部にある網膜との間に位置する。該硝子体は、眼の後眼部で空間保持体として働く。該硝子体は主に、ヒアルロナンと、非常に少量のみの線維状構造体、例えばコラーゲン及びビトロシン、グルコース並びに微量の要素から構成される。その屈折率が、水晶体、並びに外科手術の際の水性溶液及び平衡塩類溶液のものとほぼ同等であるため、該硝子体又はその要素を可視化し、周囲の液体要素と区別することは、高倍率の外科用顕微鏡を通しても実質的に不可能である。人生の最初の数十年の間、該硝子体は網膜に付着しており、このことは、これらの解剖学的構造体の判別をさらに妨げうる。
【０００８】
従って、該硝子体を可視化することが出来る色素組成物の必要性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、外科手術中の硝子体又はその一部の不十分な可視性に関連付けられた上述の問題を克服することを試みる。
【００１０】
本発明の目的は、ヒアルロナンを含む組織を可視化することが出来る化合物又は組成物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらなる目的は、眼の外科手術中の別個の眼の組織の可視化を向上させることが出来る化合物又は組成物を提供することである。特に、本発明の目的は、硝子体を可視化し、並びに、外科医が、外科手術中に、周囲の二次的に形成された線維組織の眼の構造体と硝子体とを識別出来るようにし、且つ硝子質要素の選択的な除去を容易にするのに十分なコントラストをもたらすことを可能とすることである。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、硝子体を着色することが出来る化合物又は組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
これらの目的のうちの１つは、ポリオキサゾリン分子及び１以上の標識化合物を含む可視化剤を提供することによって達成された。従って、第１の観点において、本発明は、ポリオキサゾリン分子に分子的に結合された１以上の標識化合物を含む可視化剤であって、該ポリオキサゾリン分子が、下記の式
【００１４】
【化１】
2021522309.tif 000002
ここで、Ｒ１はアルキル基又はフェニル基であり、該アルキル基又はフェニル基は任意的に、ハロゲン、アミノ（−ＮＨ２）、ニトロ（−ＮＯ２）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ）、スルホネート（−ＳＯ３−）、ヒドロキシル（−ＯＨ）及びスルフヒドリル（−ＳＨ）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、及び、上記フェニル基はまた任意的に、追加的に又は代替的に、１以上のアルキル基で置換されていてもよく、並びに、
Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素原子、アルキル、フェニル、ハロゲン、アミノ（−ＮＨ２）、ニトロ（−ＮＯ２）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、アルコキシ（−Ｏ−Ｒ）、スルホネート（−ＳＯ３−）、ヒドロキシル（−ＯＨ）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）及びスルフヒドリル（−ＳＨ）からなる群から選択される、
に従う繰り返し単位を有する、上記可視化剤に向けられている。
【００１５】
本発明者等は、本発明に従う可視化剤が、周囲の眼の組織又は構造体に影響を及ぼすことなしに又は着色することなしに、硝子体を着色することが出来ることを見出した。これは、硝子体と周囲の眼の組織、例えば網膜、との間のコントラストを向上することを可能にする。本発明者等の知る限り、該可視化剤が、硝子体を有効に着色することが出来る、最初の既知の薬剤である。
【００１６】
しかしながら、本発明は、硝子体を着色することに限定されない。本発明者等は、可視化剤に存在するポリオキサゾリン分子が、硝子体におけるヒアルロナンの存在によってこの組織を着色することが出来ることを見出した。従って、本発明の複合体は、一般に、ヒアルロナンを可視化することがまた出来ることが期待される。従って、本発明は、眼の外科手術だけでなく、組織の可視化が有用である他の領域においても可視化の機会を開く。該可視化剤は、ヒアルロナンを含む組織、並びに合成ヒアルロナンを可視化する為に使用されることが出来る。例えば、該可視化剤は、外科手術又は診断において組織を可視化する為に使用されることが出来る。該可視化剤はまた、診断組成物（例えば、着色組成物又は造影媒体）、医薬組成物（例えば、注射剤）及び化粧組成物（例えば、皮膚への注射剤）において使用されることが出来る。該可視化剤は例えば、歯科外科手術における着色化合物として、又は放射線撮影、Ｘ線、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）若しくは磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）における造影媒体として、使用されうる。その上、ポリオキサゾリンとヒアルロナンとの間に形成される複合体は、結合されていないヒアルロナンを含む医薬組成物であって、体内への注射に好適な該医薬組成物に組み込まれることが出来る。
【００１７】
いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、該可視化剤に存在するポリオキサゾリンは、非共有結合的結合を介してヒアルロナンに結合することが出来ると考えられる。該結合は、ポリオキサゾリンとヒアルロナンとの間のファンデルワールス力によって、特に水素結合及び疎水性相互作用によって、もたらされることが予想される。従って、該ポリオキサゾリンは、標識化合物の担体として機能することが出来る。これは、該可視化剤がヒアルロナン組織を可視化することを提供にする。該可視化剤とヒアルロナン組織との間に形成される結合は可逆的である。本発明者等の知る限り、ポリオキサゾリンとヒアルロナンとの間のそのような相互作用が当技術分野で記載されるのはこれが初めてである。
【００１８】
本明細書で使用される場合、語「可視化剤」は、ヒアルロナン組織を可視化する為に適している薬剤を云う。特に、該薬剤は、該組織と接触させられる場合に、ヒアルロナン組織を可視化することが出来る。該可視化剤によって達成される可視化の種類は、該薬剤に存在する標識化合物の種類に依存する。該可視化剤は、分子複合体（１以上の標識化合物が該ポリオキサゾリンに非共有結合的に結合されている）、又は化合物（１以上の標識化合物が該ポリオキサゾリンに共有結合的に結合されている）でありうる。
【００１９】
本明細書で使用される場合、語「ヒアルロナン組織」は、ヒアルロナンを含む組織を云う。該語は、ヒアルロナンをその成分の１つとして含む組織、並びにヒアルロナンで覆われた組織も包含する。該組織は、固体、ゲル（例えば、硝子体（vitreous））、又は流体（例えば、体液）でありうる。該組織は結合組織であることが出来る。ヒアルロナン組織の例は、硝子体、歯肉（歯茎）及びヒアリン軟骨（例えば、関節軟骨）である。該組織は、動物組織、特に哺乳動物組織、好ましくはヒト組織、でありうる。ヒアルロナンはまた、文献においてヒアルロン酸と称される。２つの名称は同じ化合物を云い、且つ互換可能に使用されうる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、好適な標識化合物の分子構造を示す。図示される化学構造は、シカゴスカイブルー６Ｂ（Chicago  Sky  Blue  6B）である。
【図２】図２は、好適な標識化合物の分子構造を示す。図示される化学構造は、２−ナフトールオレンジ（2-naphtol  orange）である。
【図３】図３は、好適な標識化合物の分子構造を示す。図示される化学構造は、アルラレッドＡＣ（Allura  Red  AC）である。
【図４】図４は、好適な標識化合物の分子構造を示す。図示される化学構造は、ジアミングリーンＢ（Diamine  Green  B）である。
【図５】図５は、好適な標識化合物の分子構造を示す。図示される化学構造は、ファストイエローＡＢ（Fast  Yellow  AB）である。
【図６】図６は、好適な標識化合物の分子構造を示す。図示される化学構造は、ヤヌスグリーンＢ（Janus  Green  B）である。
【図７】図７は、シカゴスカイブルー及びポリオキサゾリンを用いて実行された吸光度試験の結果を示す。
【図８】図８は、シカゴスカイブルー及びポリオキサゾリンを用いて実行された吸光度試験の結果を示す。
【図９】図９は、様々なアゾ化合物を使用した、硝子体の着色実験の結果を示す。
【図１０】図１０は、様々な長さのポリオキサゾリンを使用した、硝子体の着色実験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
該可視化剤は、１以上の標識化合物と、式（Ｉ）に従う繰り返し単位を有するポリオキサゾリンとを含む。該標識化合物は、ヒアルロナン組織を可視化する為のものである。該標識化合物は、該ポリオキサゾリンに分子的に結合される。１以上の該標識化合物は、ポリオキサゾリンに非共有結合的に結合されうる。例えば、１以上の該標識化合物及び該ポリオキサゾリンは、例えばファンデルワールス力によって、特に水素結合及び疎水性相互作用によって、分子複合体を形成しうる。代替的には、１以上の該標識化合物は、該ポリオキサゾリンに共有結合的に結合されることがまた可能である。これらの場合の両方について、該可視化剤のポリオキサゾリン部分は、ヒアルロナン組織に結合することが出来るであろうことが予想される。
【００２２】
本発明の可視化剤は典型的に、ポリオキサゾリン１個当たり複数の標識化合物を含む。該可視化剤における各標識化合物は、該ポリオキサゾリンに共有結合的に又は非共有結合的に結合されうる。該可視化剤は、複数の標識化合物を含みうる。この場合、該可視化剤は、ポリオキサゾリンモノマー１個当たり０．０１〜１個、好ましくは０．１〜０．７５個、より好ましくは０．２５〜０．５個、の標識化合物を含みうる。該ポリオキサゾリンにおけるポリオキサゾリンモノマーの数は、パラメーターｎによって表されうる。該可視化剤は、ポリオキサゾリン１個当たり少なくとも２個、好ましくは少なくとも５個、より好ましくは少なくとも１０個、の標識化合物を含みうる。例えば、約５，０００の分子量（すなわち、ｎは約５０）を有するポリオキサゾリンの場合、典型的に、約２０個のアゾ色素分子がポリオキサゾリン分子１個当たりに結合される。該可視化剤は、単一又は複数のポリオキサゾリン分子を含みうる。
【００２３】
該可視化剤は、１以上の該標識化合物及び該ポリオキサゾリン以外の成分を必要としない。従って、その最も簡潔な形態の該可視化剤は、１以上の該標識化合物及び該ポリオキサゾリンからなる。
【００２４】
式（Ｉ）に従うと、Ｒ１はアルキル基又はフェニル基であってもよく、ここで、該アルキル基又はフェニル基は任意的に、フルオロ、クロロ、ブロモ、アミノ（−ＮＨ２）、ニトロ（−ＮＯ２）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、メトキシ（−Ｏ−ＣＨ３）、エトキシ（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３）、スルホネート（−ＳＯ３−）、ヒドロキシル（−ＯＨ）及びスルフヒドリル（−ＳＨ）からなる群から選択される１以上の置換基で置換される。追加的に又は代替的に、上記フェニル基はまた任意的に、１以上のメチル基又はエチル基で置換されていてもよい。
【００２５】
好ましくは、Ｒ１は、上述の通り任意的に置換されていてもよいアルキルである。Ｒ１は１〜８個の炭素原子を有してもよく、好ましくは１〜５個の炭素原子、を有する。より好ましくは、該アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル及びイソプロピルから選択される。最も好ましくは、Ｒ１はメチル又はエチルである。そのような小さいアルキル基を有するポリオキサゾリンは、水への良好な溶解性を有する。
【００２６】
式（Ｉ）に従うと、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素原子、アルキル、フェニル、ハロゲン、アミノ（−ＮＨ２）、ニトロ（−ＮＯ２）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、アルコキシ（−Ｏ−Ｒ）、スルホネート（−ＳＯ３−）、ヒドロキシル（−ＯＨ）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）及びスルフヒドリル（−ＳＨ）からなる群から選択される。好ましくは、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも１つは水素原子である。Ｒ２又はＲ３がアルキル基である場合、該アルキル基は、Ｒ１（前段落の定義を参照されたい）と同じように定義される。Ｒ２及び／又はＲ３が式−ＯＲのアルコキシ基である場合、この式のＲ基がまた、Ｒ１と同じように定義される。Ｒ２及び／又はＲ３がハロゲンである場合、該ハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、好ましくはＣｌ、でありうる。イミノの場合、Ｒ２及びＲ３は一緒になって該イミノ基を表す。
【００２７】
好ましくは、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素原子、メチル及びエチルからなる群から選択される。好ましくは、Ｒ２及びＲ３のうちの少なくとも１つは水素原子である。さらにより好ましくは、Ｒ２及びＲ３はいずれも水素原子である。
【００２８】
ポリオキサゾリンは好ましくは、ポリ（２−アルキル）（２−オキサゾリン）である。この場合、式（Ｉ）のＲ２及びＲ３はいずれも水素原子である。優れた可視化の結果は、実施例にまた例示されている通り、この種のポリオキサゾリンを使用して達成された。好ましくは、ポリオキサゾリンは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−ｎ−プロピル−２−オキサゾリン）及びポリ（２−イソプロピル−２−オキサゾリン）からなる群から選択される。最も好ましくは、ポリオキサゾリンは、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）である。
【００２９】
該ポリマーは、分子量によって又はパラメーターｎによって表される通り、特定の長さのものでありうる。パラメーターｎは、該ポリマーにおけるオキサゾリン部分の数を表す。従って、該ポリオキサゾリンは、下記の式（Ｉｂ）：
【００３０】
【化２】
2021522309.tif 000003
によって表されることが出来る。
【００３１】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は上で定義された通りであり、ｎは典型的には、少なくとも５の整数である。該ポリマーの長さは、主に、ヒアルロナンとの相互作用によって決定される。長すぎるポリオキサゾリンは、ヒアルロナンにもはや適切に結合し得ない可能性がある。さらに、非常に小さいポリオキサゾリン分子は、比較的少数の標識化合物にしか結合することが出来ないという欠点を有する。従って、パラメーターｎは典型的には、１０〜５，０００、好ましくは２０〜１，０００、例えば２０〜５００、の範囲である。
【００３２】
該ポリオキサゾリンは好ましくは、２００〜５００，０００ｇ／モル、好ましくは５００〜１００，０００ｇ／モル、例えば１，０００〜５０，０００ｇ／モル、の分子量（Ｍｗ）を有する。
【００３３】
該標識化合物は、可視化される機能を有する可視化剤を提供する。ポリオキサゾリンそれ自体は、独特の色、Ｘ線又は赤外線によって検出可能ではない。該標識化合物は、色素、放射線造影剤、ＭＲＩ造影剤、蛍光化合物、同位体標識された化合物及び化粧品着色剤からなる群から選択されうる。色素は、組織を目視検査によって直接可視化する為に使用されることが出来る。この種の可視化は、本明細書において着色（staining）とも云われる。該放射線造影剤は、組織（及びそれに結合された薬剤）をＸ線に付した場合に、該組織を可視化する為に使用されることが出来る。該蛍光化合物は、組織（及びそれに結合された薬剤）を紫外光に付した場合に、該組織を可視化する為に使用されることが出来る。ＭＲＩ造影剤は、組織（及びそれに結合された薬剤）を磁気共鳴に付した場合に、該組織を可視化する為に使用されることが出来る。同位体標識された化合物は、組織（及びそれに結合された薬剤）を赤外光若しくは核磁気共鳴に付した場合に、又はポジトロンの放出を観察することによって、該組織を可視化する為に使用されることが出来る。
【００３４】
好ましくは、該標識化合物は、アゾ化合物である。好ましくは、該アゾ化合物は、下記の式
【００３５】
【化３】
2021522309.tif 000004
ここで、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じ芳香環又は異なる芳香環である、
に従う部分を有する。該芳香環は、単環式環（例えば、ベンゼン）、複素環式環（例えば、ナフタレン）又は多環式環（例えば、フェナジン）であることが出来る。単環式環の場合、該環は好ましくは、５又は６員芳香環である。複素環式環の場合、該環は好ましくは、２つの縮合した６員環、又は６員環と縮合した５員環からなる。該芳香環は、単素環式環又は複素環式環でありうる。複素環式環の場合、該環員のうちの１以上は好ましくは、窒素原子（Ｎ）、酸素原子（Ｏ）及び硫黄原子（Ｓ）から選択される元素である。該芳香環は、水素原子以外の１以上の基で置換されていてもよく、該１以上の基はそれぞれ独立して、好ましくは、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される。そのような芳香環は、置換された芳香環と云われる。
【００３６】
Ａｒ１は好ましくは、置換されたフェニル部分、置換されたナフチル部分、置換されたピラゾール部分、置換されたベンゾチアゾール又は置換されたフェナジン部分である。同様に、Ａｒ２は好ましくは、置換されたフェニル部分、置換されたナフチル部分、置換されたピラゾール部分、置換されたベンゾチアゾール又は置換されたフェナジン部分である。Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、好ましくは、フェニル部分、ナフチル部分、ピラゾール部分、ベンゾチアゾール部分及びフェナジン部分から選択され、該部分は任意的に、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換されていてもよい。本発明者等は、そのようなアゾ化合物が、ポリオキサゾリンと非常に安定した複合体を形成することが出来たことを見出した。この結合は、非共有結合的結合であり、ここで該アゾ官能基が該ポリオキサゾリンのアミド基と相互作用しうること、が予想される。さらに、該アリール基は、該ポリオキサゾリンの疎水性鎖及び基と相互作用しうる。
【００３７】
好ましくは、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、フェニル部分及びナフチル部分から選択され、ここで、上記フェニル部分及びナフチル部分は任意的に、メチル、エチル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換されていてもよい。より好ましくは、Ａｒ１及びＡｒ２のうちの少なくとも１つは、任意的にメチル、エチル、メトキシ、アミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換されていてもよいフェニル部分である。
【００３８】
式（ＩＩ）に従う部分を有する化合物の例は、シカゴスカイブルー６Ｂ、２−ナフトールオレンジ、アルラレッドＡＣ、ジアミングリーンＢ、ファストイエローＡＢ、ヤヌスグリーンＢ、ナフトールブルーブラック（Naphtol  Blue  Black）、タートラジン（Tartrazine）、スカーレットレッド（Scarlet  Red）、チアゾールイエローＧ（Thiazole  Yellow  G）及びスーダンブラックＢ（Sudan  Black  B）である。これらの化合物のうちの幾つかの構造が、図１〜図６に見付けられる。
【００３９】
該標識化合物は好ましくは、下記の式
【００４０】
【化４】
2021522309.tif 000005
ここで、Ａｒ３及びＡｒ４は、同じ又は異なる（ヘテロ）アリール基である、
を有するアゾ化合物である。語「（ヘテロ）アリール基」は、アリール基及びヘテロアリール基からなる群を云う。（ヘテロ）アリールは、単環式基（例えば、ベンゼン）、複素環式基（例えば、ナフタレン）又は多環式基（例えば、フェナジン）であることが出来る。単環式（ヘテロ）アリール基の場合、該基は好ましくは、５又は６員アリール基である。複素環式（ヘテロ）アリール基の場合、該基は好ましくは、２つの縮合した６員環、又は６員環と縮合した５員環からなる。ヘテロアリール基の場合、該基の環員のうちの１以上は好ましくは、窒素原子（Ｎ）、酸素原子（Ｏ）及び硫黄原子（Ｓ）から選択される元素である。（ヘテロ）アリール基は、水素原子以外の１以上の基で置換されていてもよく、１以上の基はそれぞれ独立して、好ましくは、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル、スルホネート、スルフヒドリル及び−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５から選択される。−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５基はアゾ基であり、ここで、Ａｒ５は、（ヘテロ）アリール基でありであり、好ましくはフェニル及びナフチルから選択される（ヘテロ）アリール基であり、ここで、該（ヘテロ）アリール基は任意的に、メチル、エチル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホネート及びスルフヒドリルから選択される１以上の基で置換されていてもよい。
【００４１】
Ａｒ３及びＡｒ４はそれぞれ独立して、好ましくは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、ピラゾール、ベンゾチアゾール及びフェナジンから選択され、該フェニル、ビフェニル、ナフチル、ピラゾール、ベンゾチアゾール及びフェナジンは任意的に、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル、スルホネート、スルフヒドリル及び−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５から選択される１以上の基で置換されていてもよい。
【００４２】
式（ＩＩＩ）の化合物の例は、シカゴスカイブルー６Ｂ、２−ナフトールオレンジ、アルラレッドＡＣ、ジアミングリーンＢ、ファストイエローＡＢ及びヤヌスグリーンＢである。これらの色素はまた、眼用着色組成物に使用する為の候補である可能性が高く、なぜならば、それらが、非常に少ない量で明瞭な可視着色を提供するためである。また、それらは、２０年超にわたる臨床使用により、有利な毒性プロファイルを有することが示されてきている。最も好ましくは、該標識化合物は、シカゴスカイブルー６Ｂである。
【００４３】
好ましい実施態様において、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、フェニル及びナフチルから選択され、ここで、上記フェニル及びナフチルは任意的に、メチル、エチル、メトキシ、アミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換されていてもよい。より好ましくは、Ａｒ３及びＡｒ４のうちの少なくとも１つはフェニルであり、該フェニルは任意的に、メチル、エチル、メトキシ、アミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換される。そのような化合物の例は、２−ナフトールオレンジ、アルラレッドＡＣ及びファストイエローＡＢである。
【００４４】
さらにより好ましくは、該標識化合物は、下記の式
【００４５】
【化５】
2021522309.tif 000006
ここで、Ａｒ６及びＡｒ７は同じ又は異なる（ヘテロ）アリール基であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素原子、メチル、エチル、メトキシ、アミノ、ヒドロキシル、スルフヒドリル及びスルホネートから選択される、
を有するアゾ化合物である。Ａｒ６及びＡｒ７は、上述のＡｒ３及びＡｒ４と同じ定義を有する。
【００４６】
Ａｒ６及びＡｒ７はそれぞれ独立して、好ましくは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、ベンゾチアゾール及びフェナジンから選択され、ここで、該フェニル、ビフェニル、ナフチル、ベンゾチアゾール及びフェナジンは任意的に、メチル、エチル、フェニル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ヒドロキシル、スルホネート、スルフヒドリル及び−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５から選択される１以上の基で置換されていてもよい。−Ｎ＝Ｎ−Ａｒ５基は、上で定義された通りである。式（ＩＶ）の化合物の例は、シカゴスカイブルー６Ｂ及びジアミングリーンＢである。
【００４７】
式（ＩＶ）の化合物の好ましい実施態様において、Ａｒ６及びＡｒ７はそれぞれ独立して、フェニル及びナフチルから選択され、ここで、該フェニル及びナフチルは任意的に、メチル、エチル、メトキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換されていてもよい。より好ましくは、Ａｒ６及びＡｒ７のうちの少なくとも１つはナフチルであり、該ナフチルは任意的に、メチル、エチル、メトキシ、アミノ、ヒドロキシル及びスルホネートから選択される１以上の基で置換される。そのような化合物の例は、２−ナフトールオレンジ、アルラレッドＡＣ及びファストイエローＡＢである。そのような化合物の例は、シカゴスカイブルー６Ｂである。
【００４８】
上記の化合物は中性形態であることが出来、又はその塩、例えばナトリウム塩、として用意されることが出来る。
【００４９】
該可視化剤が色素又はアゾ色素である場合、該可視化剤は好ましくは、生体着色色素（vital  dye）である。本明細書で使用される場合、語「生体着色色素」は、生理学的及び毒物学的に許容される（例えば、細胞代謝に臨床的に有意に干渉しない）濃度で、十分な着色又は着色能を有する色素を云う。従って、そのような色素は、生細胞及び生組織の（イン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ））環境で使用されることが出来る。言い換えれば、可視化されるのに有用な着色の為に十分な着色を提供する為に必要である色素の最小量は、有害毒性効果を生じない、又はほとんど生じない程度に低くなければならない。
【００５０】
本発明はさらに、可視化剤とヒアルロナンとの複合体に向けられている。上述されている通り、該可視化剤はヒアルロナンに結合する。これら２つの複合体は、診断、治療、外科手術及び化粧品に使用されうる。特に、そのような複合体は、以下に記載されている「注射剤」の形態で使用されうる。
【００５１】
第２の観点において、本発明は、式（Ｉ）に従うポリオキサゾリン及び１以上の標識化合物を含む可視化組成物に向けられている。該ポリオキサゾリン及び該標識化合物は、上述の通りである。
【００５２】
該組成物中に存在する標識化合物のモル量とポリオキサゾリンのモル量との比は好ましくは、１００／１〜１／１、より好ましくは５０／１〜２／１、さらにより好ましくは３０／１〜１０／１、である。複数の標識化合物が１つのポリオキサゾリン分子に結合することが出来る故に、上記モル量は低すぎてはならない。該ポリオキサゾリンの長さに依存して、より高い又はより低い量の標識化合物が使用されうる。
【００５３】
該可視化組成物は好ましくは、液体組成物、より好ましくは水性組成物、さらにより好ましくは水性溶液、である。本発明者等は、該標識化合物及び該ポリオキサゾリンが、水に溶解される場合に、本発明に従う可視化剤を自発的に形成しうることを見出した。これは、例えば、該標識化合物がアゾ化合物である場合に当てはまる。アゾ化合物は、水中で該ポリオキサゾリンに自発的に結合する。
【００５４】
該ポリオキサゾリンは、０．１〜１５重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、さらにより好ましくは１．０〜５．０重量％、の量で液体組成物に存在しうる。該組成物の粘度を考慮すると、高い濃度は望ましくない場合がありうる。該ポリオキサゾリンの高い濃度は、高い粘度に起因して、取扱い及び施与が難しい場合がありうる。
【００５５】
該標識化合物は、０．００１〜５重量％、好ましくは０．００１〜１．０重量％、さらにより好ましくは０．０１〜０．５重量％、さらにより好ましくは０．０２〜０．２、の量で液体組成物に存在しうる。
【００５６】
本発明に従う可視化剤は、０．１〜２０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、さらにより好ましくは１．０〜５．０重量％、の量で液体組成物に存在しうる。
【００５７】
該液体組成物の粘度は好ましくは、少なくとも２．０ｍＰａ．ｓ、より好ましくは少なくとも５ｍＰａ．ｓ、さらにより好ましくは１０ｍＰａ．ｓ、である。さらに、着色組成物の粘度は好ましくは５０ｍＰａ．ｓ未満、より好ましくは２０ｍＰａ．ｓ未満、である。粘度値は、２９８Ｋの温度でレオメーターを使用して決定されることが出来る。必要に応じて、該粘度は、粘度を高める化合物、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、を含むことによって増大されることが出来る。該粘弾性組成物の場合、粘度は典型的により高いであろう。
【００５８】
該可視化組成物のポリオキサゾリンは好ましくは架橋されない、又は少なくとも有意な程度まで架橋されない。架橋は、ヒアルロナンへの結合に干渉しうる。
【００５９】
該可視化組成物はまた、固体形態で提供されうる。そのような組成物に、液体、例えば水性溶液、を後で添加して、新鮮な液体組成物を調製することが出来る。
【００６０】
本発明に従う組成物において、該アゾ化合物は、中性形態で、又は化合物の塩若しくは水和物、例えばナトリウム塩、として用意されうる。
【００６１】
該可視化組成物は、硝子体（vitreous）を可視化する為の眼科用組成物でありうる。この場合、該標識化合物は色素化合物である。
【００６２】
該可視化組成物は、歯肉を可視化する為の歯科用組成物でありうる。この場合、該標識化合物は色素化合物又は造影剤でありうる。
【００６３】
該可視化組成物は、ヒアルロナンを含む組織を可視化する為の造影媒体でありうる。この場合、該標識化合物は、同位体標識化合物（例えば、１１１Ｉｎを含む）又はＭＲＩ造影剤（例えば、Ｇｄを含む）でありうる。
【００６４】
該可視化組成物は、合成ヒアルロナン組織を着色する為の化粧品着色剤でありうる。この場合、該標識化合物は、皮膚を着色する為に適した顔料でありうる。
【００６５】
好ましい実施態様において、本発明に従う可視化組成物は、ヒアルロナンをさらに含む。そのような組成物は、該組成物が典型的には注射によって対象に投与されるので、本明細書において「注射剤」と云われうる。ヒアルロナンを含む可視化組成物は、対象がヒアルロナンを投与される用途に使用されることが出来る。ヒアルロナンを含むそのような注射剤は当技術分野で既知であり、当業者はそれらを調製する方法を理解する。本発明に従う可視化剤をそのような組成物に含むことにより、患者へのヒアルロナンの投与がモニタリングされることが出来る。上述されている通り可視化剤に存在するポリオキサゾリンはヒアルロナンに結合する。従って、ヒアルロナンを含む可視化組成物は、可視化剤とヒアルロナンとの複合体を含む。該組成物中に存在するヒアルロナンの量は、該可視化剤の量よりも相当に多くてもよい。従って、該組成物は、そのような場合、該可視化剤に結合されたヒアルロナンと、該可視化剤に結合されていないヒアルロナンとの両方を含みうる。該注射剤は例えば、外科的用途に使用されうる。そのような注射剤の例は、例えば、前房を安定化させる為の眼の外科手術（例えば、白内障外科手術、緑内障外科手術、角膜移植、硝子体網膜外科手術）に使用されうる粘弾性組成物である。該注射剤はまた、治療的又は診断的用途に使用されうる。例えば、本発明の注射剤は、ヒアルロナンを関節内のヒアリン軟骨に投与する為に使用されうる。該注射剤はまた、化粧品用途に使用されうる。例えば、ヒアルロナンを含む可視化組成物は、皮膚を着色する為の標識化合物として色素を含みうる。そのような組成物は、皮膚に注射されることが出来る。
【００６６】
本発明の可視化組成物に存在するヒアルロナンは、任意の好適な分子量のものでありうる。ヒアルロナンの分子量は一般的に、５０，０００〜８，０００，０００ｇ／モルの範囲内であるが、供給源、単離方法及び決定方法に依存して、１３，０００，０００もの高い分子量が報告されている。
【００６７】
可視化組成物が眼の外科手術の為の粘弾性組成物である場合、可視化組成物の特性は、眼用着色組成物について以下に記載されるものと同様でありうる。ヒアルロナンは、粘弾性物質である。従って、当業者は、粘弾性可視化組成物を調製する方法を知っているであろう。ヒアルロナンのゼロせん断粘度は一般的に、５０，０００〜１０，０００，０００センチポアズで変動する。ゼロせん断粘度値は、２９８Ｋの温度でレオメーターを使用して決定されることが出来る。
【００６８】
特に好ましい実施態様において、該可視化組成物は、硝子体を着色するのに好適である。そのような組成物は、本明細書において眼用着色組成物と云われうる。
【００６９】
眼用着色組成物は好ましくは水性組成物、好ましくは水性溶液、である。該ポリオキサゾリン及び該標識化合物の量及び比は、特に詳細に言及されない限り、本発明の一般的組成物について上で定義された通りである。該液体組成物について上で言及された粘度はまた、眼用着色組成物に適用される。
【００７０】
眼用着色組成物の標識化合物は好ましくは、上で定義されたアゾ色素である。アゾ色素は好ましくは、生体着色色素である。特に、上で定義された式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）に従うアゾ色素が眼用着色組成物に好適である。これらの色素は、網膜を着色することなく硝子体周辺部を着色することにより、硝子体を可視化することが出来る。
【００７１】
該着色組成物は、塩をさらに含みうる。該眼用着色組成物は好ましくは、眼の流体と等張性である。この目的の為に、該眼用着色組成物は、そのモル浸透圧濃度を好適な値に調整する為の塩を含みうる。本発明の着色組成物は好ましくは、２５０〜４００ｍｏｓｍｏｌ／Ｌ、好ましくは３００〜３３０ｍｏｓｍｏｌ／Ｌ、例えば３１５ｍｏｓｍｏｌ／Ｌ、のモル浸透圧濃度を有する。当業者は、これを達成する為に必要とされる塩の量を計算することが出来るであろう。
【００７２】
該塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム又はこれらの組み合わせからなる群から選択されうる。塩を含む着色組成物を提供する為に、該着色組成物は塩類溶液を含みうる。好適な例は、平衡塩類溶液又はハルトマン乳酸リンゲル溶液である（Nuijts  RMMA,  Edelhauser  HF,  Holley  GP,  "Intraocular  irrigating  solutions:  a  comparison  of  Hartmann's  lactated  Ringer's  solution,  BSS  and  BSS  plus",  Clin.  Exp.  Ophtamol.,  vol.  233  (1995),  pp.  655-661をまた参照されたい）。
【００７３】
該液体着色組成物は、中性又はわずかに塩基性のｐＨ、すなわち、６．５〜８のｐＨ、を有することがさらに好ましい。好ましくは、該組成物は７．２〜７．７のｐＨを有する。安定したｐＨを維持する為に、該着色組成物は、眼科用用途に好適な緩衝液、好ましくは塩類緩衝液、を含みうる。好適な緩衝液の例は、リン酸緩衝ＮａＣｌである。
【００７４】
該眼用着色組成物の色素の濃度は、該着色組成物の総重量に基づいて、好ましくは０．００１〜２重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％、さらにより好ましくは０．０５〜０．５重量％、さらにより好ましくは０．１〜０．５重量％、である。この範囲内で、該濃度は、使用される色素の毒性及び着色特性に適合されうる。最適な着色効果が達成されると同時に、色素の毒性による眼又はその一部に対する考えられる損傷リスクが最小化されるような量が選択されることが好ましい。
【００７５】
該眼用着色組成物は、ポリオキサゾリンに結合されていない第２の色素化合物を含みうる。該第２の色素は好ましくは、アゾ色素以外の色素である。好ましくは、該第２の色素はポリオキサゾリンに結合することが出来ない。そのような第２の色素は、硝子体以外の眼の組織を着色する為に使用されることが出来る。該第２の色素は、ブリリアントブルーＧ、メチレンブルー、パテントブルーＶ、インドシアニングリーン、クリスタルバイオレット、サフラニン、フルオレセイン及びローズベンガルからなる群から選択されうる。
【００７６】
該眼用着色組成物の各成分は好ましくは、生理学的及び毒物学的に許容される着色組成物中の濃度を有する。言い換えれば、該着色組成物の各成分の最小量は、有害毒性効果が生じない、又はほとんど生じないように十分低くあるべきである。好ましくは、該着色組成物の各成分は、網膜及び隣接構造体に対して毒性ではない、又は少なくともほとんど毒性ではない。眼の外科手術の直後に眼に存在する着色組成物の各成分の含有量が、患者が、該着色組成物の使用による副作用を経験するリスクをほとんどもたらさないことがさらに好ましい。
【００７７】
該眼用着色組成物は、眼の組織又は眼の組織の一部、特に硝子体、の着色処置に使用されうる。該着色処置は、眼の外科手術の一部でありうる。上でも述べられている通り、外科医が１つの眼の組織を他の組織と容易に視覚的に識別するようにすることによって外科医の作業を容易にする為に、眼の外科手術において、眼の組織の少なくとも一部の着色が使用されうる。該着色組成物は典型的に、着色される眼の組織の表面に施与される。その後、該着色組成物は、例えば重力下で組織に染み込ませる又は浸透させることにより、この組織の上及び／又は組織を通して広げられうる。硝子体の着色の場合、該眼用着色組成物は、硝子体の外層及び／又は外面を特に着色する。これは、網膜を着色することなく達成されることが出来る。この施与はさらに、本発明の第５及び第６の観点に関して以下で考察される。
【００７８】
第３の観点において、本発明は、本発明に従う可視化剤を含む可視化組成物に向けられている。また、ポリオキサゾリン分子に分子的に結合された１以上の標識化合物を含む可視化剤、及び該ポリオキサゾリン分子に結合されたヒアルロナンを含む可視化組成物であって、該ポリオキサゾリン化合物が、本明細書で定義される下記の式
【００７９】
【化６】
2021522309.tif 000007
に従う繰り返し単位を有する、上記可視化組成物が提供される。１つの実施態様において、該可視化組成物はさらに、該可視化剤に結合されていないヒアルロナンを含む。該組成物はさらに、第２の観点の可視化組成物と組成が同様でありうる。
【００８０】
第４の観点において、本発明は、可視化剤を調製する為の方法に向けられている。該方法は、式（Ｉ）のポリオキサゾリン及び標識化合物を用意すること、並びに該ポリオキサゾリン及び該標識化合物を水中で混合して、水性混合物を形成することの工程を含む。該標識化合物は、中性形態で、又はその塩若しくは水和物として用意されうる。該標識化合物が式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）のうちのいずれか１つに従うアゾ化合物である場合、混合することによって本発明に従う可視化剤が形成する。非常に安定した分子複合体をもたらした式（ＩＩＩ）に従うアゾ化合物を使用して、特に良好な結果が得られた。
【００８１】
混合は、０〜１００℃、好ましくは１〜５０℃、さらにより好ましくは５〜３０℃、の温度、例えば室温、で実行されうる。
【００８２】
アゾ色素とポリオキサゾリンとの結合が確立するのに要する時間は、ストップトフロー速度論（stopped  flow  kinetics）を使用して決定された場合に、３ミリ秒（ｍｓ）未満であった。それにもかかわらず、混合は好ましくは、該アゾ化合物が溶解することが出来るのに十分に長時間実行されるべきである。
【００８３】
該ポリオキサゾリンは好ましくは、水性溶液の形態で用意される。該アゾ化合物がまた、水性溶液の形態で用意されうる。
【００８４】
１つのポリオキサゾリン分子に複数の標識化合物が結合することが出来る故に、過剰の標識化合物が使用されるべきである。好ましくは、該方法で使用される標識化合物のモル量は、ポリオキサゾリンのモル量の１〜１００倍、好ましくは２〜５０倍、さらにより好ましくは１０〜３０倍、でありうる。
【００８５】
結果として生じる水性混合物は好ましくは、該可視化組成物について上で定義された、ポリオキサゾリン及び標識化合物の濃度を有する。
【００８６】
結果として生じる水性混合物は、５〜９、好ましくは６．５〜８、より好ましくは７．２〜７．８、のｐＨを有しうる。このｐＨは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）に従うアゾ化合物が使用される場合に、安定した分子複合体の形成を可能とする。
【００８７】
上述の方法はまた、本発明に従う可視化組成物を調製する為に、特に、眼用着色組成物を調製する為に、好適に使用されることが出来る。
【００８８】
該方法は、混合の前、その間又はその後に、追加の成分を水中に加える工程をさらに含みうる。例えば、塩又は塩類緩衝液がこの様式で添加されうる。該方法はまた、水性混合物に第２の色素化合物を加える工程を含みうる。
【００８９】
代替的には、本発明に従う可視化剤は、標識化合物がポリオキサゾリンに共有結合的に付着される方法で調製されうる。該可視化剤はまた、標識化合物がオキサゾリンモノマーに共有結合的に付着され、引き続き、結果として生じる可視化モノマーが重合反応に使用されて、可視化剤を得る方法で調製されうる。
【００９０】
第５の観点において、本発明は、ヒアルロナンを可視化する為の、本発明に従う可視化剤又は可視化組成物の使用に向けられている。該ヒアルロナンは、合成ヒアルロナン又はヒアルロナン組織でありうる。該使用は、該可視化剤又は可視化組成物を、紫外線、ＭＲＩ、Ｘ線（レントゲン線）、ＮＭＲ、ＰＥＴ又は赤外線に供することを包含しうる。該使用は好ましくは、該可視化剤を眼及び／又は硝子体に投与することを含む。本発明に従う可視化剤を眼及び／又は硝子体に投与することを含む、ヒアルロナンを可視化する為の方法がまた提供される。例えば、本発明は、ヒアルロナン組織又はその一部を可視化する為の使用又は方法であって、本発明に従う可視化組成物又は本発明に従う可視化剤をヒアルロナン組織と接触させる工程を含む、上記方法を提供する。該使用又は該方法はさらに、例えば、接触された組織を紫外線、ＭＲＩ、Ｘ線（レントゲン線）、ＮＭＲ、ＰＥＴ又は赤外線に付すことによって、該可視化剤を活性化させることを含みうる。
【００９１】
該可視化剤は、本発明の可視化組成物をヒアルロナン組織の表面に施与することによってヒアルロナン組織と接触させられうる。該可視化剤はまた、ヒアルロナン組織の上又はその中に注射されうる。眼用着色組成物の場合、ヒアルロナン組織又はその一部（すなわち、硝子体）を可視化する為の方法は、本発明の着色組成物を硝子体の表面に施与する工程を含む。
【００９２】
第６の観点において、本発明は、診断、治療、外科手術及び化粧品における、本発明に従う可視化剤又は可視化組成物の使用に向けられている。該可視化剤又は該可視化組成物は、第５の観点について上述された通り、ヒアルロナンを可視化する為にこれらの用途において使用されうる。該可視化剤又は該可視化組成物のそのような使用の例が、以下でさらに詳細に記載されている。
【００９３】
該可視化剤又は可視化組成物の１つの特定の好ましい使用は、眼の外科手術においてであり、ここで、上記剤又は組成物は、硝子体又はその一部を着色する為に使用されることが出来る。この点に関して、本発明は特に、硝子体又はその一部を着色すること、及び着色された硝子体又はその周囲の組織に外科手術を実施することを含む、眼の外科手術の方法における使用の為の、本発明に従う眼用着色組成物に向けられている。該眼用着色組成物及びその中に存在する可視化剤の詳細は、上述の通りである。該眼用着色組成物は、外科手術中に硝子体を周囲の眼の組織と識別する為に、硝子体を着色する為に使用されうる。特に、硝子体の外面又は周辺部が着色される。該着色は典型的には、硝子体の周囲の眼の組織に影響を及ぼさないか又は着色しない。該着色は例えば、本発明の第５の観点について上述された通り、硝子体を可視化剤又は眼用着色組成物と接触させることによって達成されることが出来る。
【００９４】
眼の外科手術は典型的には、硝子体の少なくとも一部（ただし、好ましくは全部）又は硝子体の周囲の組織の少なくとも一部の除去を含む。硝子体の周囲の組織は例えば、網膜及び網膜の膜である。
【００９５】
硝子体切除の為の外科的介入は通常、硝子体の全ての残留物を完全に除去することを目的としている。これは典型的に、細胞を瘢痕形成（線維化）に関与させ易くすると考えられる足場を除去することを包含する。種々の技術及び器具が「硝子体索の除去」に使用されうるが、これらの手法の全てに共通する問題は、硝子体又はその一部が外科医によって明瞭に特定されることが出来ないことである。それ故に、硝子体除去は現在のところ、種々の周囲の解剖学的構造体の組織応答（刺激に応じて組織の動きがないこと）を判断することによって、解剖学的組織構造体を着色する生体着色色素を用いてネガティブ着色すること（着色の非存在下、硝子体残留物が存在しうる）によって実施されている。本発明は、硝子体を着色する方策を提供することによって、該問題を解決する。
【００９６】
眼用着色組成物が使用される外科手術は、硝子体網膜外科手術でありうる。そのような外科手術は一般的に、硝子体切除又は網膜の外科手術又はその両方を含む。硝子体切除において、硝子体の少なくとも一部が操作及び／又は除去される。網膜の外科手術において、網膜又は網膜の膜の少なくとも一部が操作及び／又は除去される。網膜の膜の例は、網膜上膜及び内境界膜である。
【００９７】
硝子体切除において、外科手術が実施される組織は硝子体である。該硝子体切除において、硝子体の少なくとも一部又は全てが操作及び／又は除去される。最も一般的な例は、経毛様体扁平部硝子体切除である。この種の硝子体切除は、周囲の眼の構造体の操作及び／又は除去（例えば、網膜の膜の除去）を伴って、又は伴わずに実行されることが出来る。硝子体切除の別の例は、前眼部硝子体切除である。前眼部硝子体切除は、眼の前眼部から硝子体のごく一部を除去することを含む。
【００９８】
従って、１つの好ましい実施態様において、眼の外科手術は嚢切開を含むか、又は嚢切開である。
【００９９】
該着色組成物は、硝子体とともに目から除去されうる。
【０１００】
硝子体網膜外科手術、特に硝子体切除、で処置されることが出来る状態は、網膜剥離、黄斑ひだ、糖尿病性網膜症、黄斑円孔、硝子体出血及び硝子体浮遊物を含む。
【０１０１】
着色する工程は、本発明の着色組成物を硝子体の外面に施与することによって実行されうる。これは、カニューレ又はシリンジ、好ましくは鈍端カニューレ、を使用することによって行われることが出来る。該カニューレ又はシリンジは、該着色組成物を施与する為に水晶体嚢外面に配置されることが出来る。
【０１０２】
該硝子体を着色する為に使用される着色溶液の量は、０．０１〜１．０ｍＬの範囲、好ましくは０．１〜０．３ｍＬの範囲、でありうる。同じ外科手術期間中、着色溶液の繰り返しの施与が使用されうる。
【０１０３】
眼の外科手術における可視化剤又は可視化組成物の別の好ましい使用は、粘弾性組成物としての用途である。眼の外科手術中に粘弾性組成物を前房に注射して、上記房を安定化させることが既知である。粘弾性組成物は、スペーサー保持体として働く、すなわち、該組成物は、外科手術中に前房に十分に広い空間を維持する為のものである。このように、眼の外科手術が容易にされることが出来る。例は、嚢切開の実施である。粘弾性組成物の前房での注射は、白内障外科手術中の水晶体嚢での円形開口の創出を容易にする。さらに、該粘弾性組成物は、水晶体嚢と周囲の組織との間のコントラストを向上させる為に、眼の前房に注射されることが出来る。そのような用途は、例えば欧州特許出願公開第１１３２０６５号明細書に記載されている。上述の手技はまた、本発明の眼用着色組成物を用いて実行されることが出来る。この場合、該組成物はヒアルロナンを含み、該粘弾性組成物の形態である。従って、本発明は、眼の前房に粘弾性眼用着色組成物を注射すること、及び注射された粘弾性眼用着色組成物の周囲の眼の構造体に外科手術を実施することを含む、眼の外科手術の方法における使用の為の粘弾性眼用着色組成物を提供する。この用途における可視化剤は好ましくは、粘弾性組成物のみを着色するが、眼の組織を着色しない。該外科手術は、白内障外科手術、緑内障外科手術、角膜移植又は硝子体網膜外科手術でありうる。特に、白内障外科手術は、粘弾性眼用着色組成物を使用することによって容易にされうる。この種の外科手術において、外科手術中に外科医によって、該水晶体嚢が操作される。外科手術の最後に、例えば塩溶液を用いてすすぐことによって、該粘弾性液体が除去されることが出来る。
【０１０４】
本発明に従う粘弾性眼用着色組成物は、ヒアルロナンを含む。ヒアルロナンは、該組成物に粘弾特性を与える。該粘弾性眼用着色組成物は、眼用着色組成物について上述されたものと同様の特性を有しうる。該粘弾性眼用着色組成物は、第２の色素を含みうる。そのような色素は、眼の組織を着色しうる。この用途における可視化剤は、粘弾性眼用着色組成物を着色する為のみのものであるため、このことは有利である。診断、治療、外科手術及び化粧品における本発明に従う可視化剤又は可視化組成物の使用のさらなる例が、以下に記載されている。
【０１０５】
該可視化剤又は該可視化組成物は、外科手術、例えば眼の外科手術（上述された通り）又は歯科外科手術、に使用する為のものでありうる。例えば、本発明は、歯肉（歯茎）を上記可視化剤又は組成物で着色することを含む歯科外科手術に使用する為の、本発明に従う可視化剤又は本発明に従う可視化組成物を提供する。例えば、外科医の視覚性を向上させる為の着色に色素が使用されうる。可視化はまた、Ｘ線によって検出可能な標識化合物を使用することによって達成されうる。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、語「外科手術を実施する」は、典型的には外科医によって実行される、組織を操作及び／又は除去する外科手術の工程を云いうる。該組織は、眼の組織若しくは眼の構造体（例えば、眼の膜又は硝子体）又は歯肉を云いうる。
【０１０７】
該可視化剤又は可視化組成物は、診断に使用されることが出来る。この場合、該標識化合物は、同位体標識化合物（例えば、１１１Ｉｎを含む）又はＰＥＴ若しくはＭＲＩ造影剤（例えば、Ｇｄを含む）でありうる。診断的用途の例は、歯肉に関連付けられた状態若しくは疾病（例えば、歯肉炎）又は関節におけるヒアリン軟骨に関連付けられた状態若しくは疾病の診断である。
【０１０８】
該可視化剤又は可視化組成物は、化粧品に使用されることが出来る。該標識化合物は、皮膚を着色するのに好適な顔料でありうる。該可視化剤又は可視化組成物は例えば、皮膚中に注射によって投与されることが出来る。
【０１０９】
該可視化剤又は可視化組成物は、治療において、例えば医薬において、使用されることが出来る。特に、可視化剤がヒアルロナンに結合された「注射剤」の使用が好ましい用途である。そのような組成物は、ヒアルロナンが投与される処置（ヒアルロナン欠損に関連付けられた状態又は疾病、例えばヒアリン軟骨に関連付けられた状態又は疾病）に使用されることが出来る。該可視化剤は、投与中又はその後に、該処置をモニタリングする可能性を提供する。
【０１１０】
本発明はさらに、対象にＸ線、赤外線、ＰＥＴ又はＭＲＩ測定を実行する方法であって、該対象が、本発明に従う可視化剤又は本発明に従う可視化組成物と結合された、ヒアルロナンを含む組織を有する、上記方法に向けられている。該組織は、軟骨、関節軟骨又はヒアリン軟骨であってもよく、該対象の関節に位置してもよい。該組織はまた、歯肉でありうる。
【０１１１】
本発明はさらに、アゾ色素を結合し、引き続き、着色された組織から該色素を除去する為の、上で定義されたポリオキサゾリンの使用に向けられている。従って、本発明は、アゾ色素で組織を着色すること、外科手術を実施すること、該アゾ色素を上記ポリオキサゾリンと接触させること、及び該アゾ色素と上記ポリオキサゾリンの間に形成される、得られる複合体を除去することを含む外科手術に使用する為の、上で定義された式（Ｉ）に従う繰り返し単位を有するポリオキサゾリンに向けられている。外科手術は、眼の組織が、典型的には１以上の色素を使用して着色される、眼の外科手術でありうる。眼の組織は例えば、網膜上膜、内境界膜又は水晶体嚢でありうる。ポリオキサゾリンは、組織に対するよりも強力にこれらの色素に結合し、それにより該組織から色素を有効に除去することが見出された。該除去は典型的には、外科手術中、眼の組織を操作及び／又は除去する工程の後に実行される。
【０１１２】
本発明はさらに、薬物送達複合体に向けられている。該薬物送達複合体は、標識化合物の代わりに有効成分がポリオキサゾリン分子に結合されていることを除いて、上述の可視化剤と同じ複合体である。該有効成分は、上述の式（ＩＩ）に従うアゾ部分を含みうる。
【０１１３】
本発明はさらに、１以上の標識化合物と、式（Ｉ）に従う繰り返し単位を有するポリオキサゾリン分子とを含むパーツのキットに向けられている。
【０１１４】
上記の用途に関して、身体は一般的に、腎臓を介して身体から可視化剤を除去することが出来る。
【０１１５】
本発明は、ヒアルロナン及びヒアルロナンを含む組織に関して上に記載されたが、該可視化剤は、ムコ多糖全般を可視化することも出来ることが予想される。ムコ多糖（グリコサミノグリカンとも称される）は、二糖の繰り返し単位からなる多糖である。繰り返し単位は典型的には、アミノ糖（Ｎ−アセチルグルコサミン又はＮ−アセチルガラクトサミン）、ウロン糖（グルクロン酸又はイズロン酸）又はガラクトースからなる。ムコ多糖の例は、ヒアルロナン（ヒアルロン酸とも称される）、ヘパリン硫酸、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸及びケラタン硫酸である。他のムコ多糖との構造における類似性を考慮すると、本発明に従う可視化剤は、ムコ多糖を含む組織を可視化する為に使用されることも出来ることが予想される。それ故に、ヒアルロナンの可視化に関して上述された様々な観点が、上述の他のムコ多糖の可視化にも適用されうる。
【０１１６】
特徴が、明瞭且つ正確な記載の目的の為に、本発明の同じ観点若しくは実施態様の一部又は別個の観点若しくは実施態様として本明細書に記載されうる。当業者であれば、本発明の範囲は、同じ実施態様の一部又は別個の実施態様として本明細書に記載されている特徴の全て又は幾つかの組み合わせを有する実施態様を包含しうることを理解するであろう。
【０１１７】
本発明は、下記の非限定的な実施例でより詳細に説明されるだろう。
【０１１８】
実施例
実施例１：ポリオキサゾリンのアゾ化合物との結合：
ポリオキサゾリンとシカゴスカイブルー（アゾ化合物）との結合を確立する為に、吸光度試験が行われた。
【０１１９】
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ：phosphate  buffered  saline）にシカゴスカイブルー（ＣＳＢ：Chicago  Sky  Blue）を溶解することにより、第１の試料が調製された。
【０１２０】
Ｍｗが５，０００ｇ／モルの、５％ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）（ＰＥｔＯｘ）を含むリン酸緩衝生理食塩水にＣＳＢを溶解することによって、第２の試料が調製された。
【０１２１】
結果が図７に示されている。該第１の試料（ＰＢＳ中のＣＳＢ）は、約６１０ｎｍの波長（λｍａｘ）で最大吸光度（Ａｍａｘ）を有し、一方、該第２の試料（ＰＢＳ＋ＰＥｔＯｘ中のＣＳＢ）は約６４０ｎｍでＡｍａｘを有した。Ａｍａｘのシフトは、ＣＳＢのＰＥｔＯｘとの結合に起因すると考えることが出来る。
【０１２２】
試料が１ＭのＮａＣｌを含むようにＮａＣｌが添加されたことを除き、第１及び第２の試料と同じ組成をそれぞれ有する第３及び第４の試料が調製された。該試料１及び試料３の形状及び（λｍａｘ）は同じであった。該試料２及び試料４の形状及び（λｍａｘ）がまた同じであった。この実験から、ＮａＣｌの存在は、ＰＥｔＯｘとＣＳＢとの結合にあまり影響を与えないことが結論付けられることが出来る。それ故に、該結合がイオン性である可能性は低い。
【０１２３】
ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）の代わりにポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）が使用されたことを除き、該第２の試料と同じ組成を有する第５の試料が調製された。結果が図８に示されている。これら２種のポリオキサゾリンを使用する場合に、同様の結合が確立されることが結論付けられることが出来る。
【０１２４】
実施例２：硝子体の着色
Ｍｗが５，０００ｇ／モルの、１〜１０％ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）を含むＰＢＳ（１００ｍｌ）にアゾ化合物（１００ｍｇ）を溶解することによって、眼用着色組成物が調製された。引き続き、これらの着色組成物が、外科的に除去されたヒトの眼の硝子体を着色する為に使用された。該組成物を硝子体の外面と接触させることによって、該組成物は施与された。
【０１２５】
下記のアゾ化合物が、試験において使用された：
アルラレッド（図９ａ）
２−ナフトールオレンジ（図９ｂ）
チアゾールイエロー（図９ｃ）
ヤヌスグリーン（図９ｄ）
シカゴスカイブルー（図９ｅ）。
【０１２６】
アゾ色素で硝子体を着色した結果の写真が撮影された。結果が図９に示されている。図で使用されるアゾ色素への参照が上に示されている。
【０１２７】
試験された全てのアゾ色素が、２−エチル−２−オキサゾリンを含む水性溶液に存在する場合に硝子体を着色することが出来たことが結論付けられた。
【０１２８】
実施例３：着色に対するポリオキサゾリンのＭｗ及びＮａＣｌの効果
ＣＳＢ及び様々なＭｗの２−エチル−２−オキサゾリン（ＰＥｔＯｘ）を含む眼用着色溶液が調製された。ＰＥｔＯｘの分子量は、５０，０００ｇ／モル（試料ａ）、２５，０００ｇ／モル（試料ｂ）及び５，０００ｇ／モル（試料ｄ）であった。さらに、試料ｄと同様であるが、１Ｍの濃度までＮａＣｌが添加された眼用着色溶液（試料ｃ）が調製された。
【０１２９】
図１０に示されている着色結果の写真が撮影された。図１０におけるペトリ皿は、試料ａ（左）、試料ｂ（中央左）、試料ｃ（中央右）及び試料ｄ（右）で着色された硝子体の結果物を含む。
【０１３０】
全ての眼用着色溶液が硝子体を可視化することが出来たことが結論付けられた。着色の強度は、Ｍｗ５０，０００（試料ａ）で最も高いことが判った。ＮａＣｌの存在は、溶液の着色能にあまり影響を与えないように思われた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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