(57)【要約】  本発明は、限定されないががん及び神経性障害を含む種々の障害の診断、治療及び予防のための組成物及び方法を指向する。特に、本発明は、ＰＣ４の阻害のための組成物及び方法を指向する。
2021529782.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図４に開示されている式の、３−（３，７，１２，１７−テトラメチル−１８−｛３−オキソ−３−［（３−フェニルプロピル）アミノ］プロピル）−８，１３−ジビニルポルフィリン−２−イル｝プロパン酸の化合物。
【請求項２】
Ｌ及び／又はＳアイソフォームを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｌ対Ｓアイソマー比又はＳ対Ｌアイソマー比が、およそ１：１、１：２以上；１：５以上、１：１０以上、１：２０以上、１：５０以上、又は１：１００以上である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項５】
アジュバントをさらに含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記アジュバントは、アルミニウムを含まない、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記アジュバントは、アルミニウムを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
水性又は凍結乾燥のものである、請求項４〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物を患者に投与することを含む、障害を治療又は予防するための方法。
【請求項１０】
前記化合物は、有効量で投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記有効量は、治療的に有効であるか又は予防的に有効である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記障害は、がん又は神経性障害である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんは、グリア細胞腫である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記神経性障害は、アルツハイマー病である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物は、静脈内投与されるか、筋肉内投与されるか、又は経口投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物を含む、ワクチン。
【請求項１７】
腫瘍形成を阻害するか、がん性細胞の増殖を阻害するか、転移性疾患を予防するか及び／又は神経変性を阻害する、請求項１６に記載のワクチン。
【請求項１８】
図３に開示されている、９−メチル及び／又は１３−メチルトランス−（±）−１８−エテニル−４，４ａ−ジヒドロ−３，４−ビス（メトキシカルボニル）４ａ，８，１４，１９−テトラメチル−２３Ｈ，２５Ｈ−ベンゾ［ｂ］ポルフィン−９，１３−ジプロパノエートのＬ及び／又はＳアイソフォームを含む化合物を患者に投与することを含む、神経性障害を治療又は予防するための方法。
【請求項１９】
前記化合物は、Ｌ及び／又はＳアイソフォームを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｌ対Ｓアイソマー比又はＳ対Ｌアイソマー比が、およそ１：１、１：２以上；１：５以上、１：１０以上、１：２０以上、１：５０以上、又は１：１００以上である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
前記神経性障害が、アルツハイマー病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物は、静脈内投与されるか、筋肉内投与されるか、又は経口投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物は、有効量で投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記有効量は、治療的に有効であるか又は予防的に有効である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
アジュバントをさらに含む、請求項１８〜２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記アジュバントは、アルミニウムを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記アジュバントは、アルミニウムを含まない、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
図４に開示されている式の、３−（３，７，１２，１７−テトラメチル−１８−｛３−オキソ−３−［（３−フェニルプロピル）アミノ］プロピル）−８，１３−ジビニルポルフィリン−２−イル｝プロパン酸の化合物を投与することをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願の参照＞
本出願は、２０１８年６月２８日出願の米国仮特許出願第６２／６９１，２６７号に対する優先権を主張し、当該出願は、その全体が参考として組み込まれる。
【０００２】
＜背景＞
１．発明の分野
本発明は、種々の形態のがんの診断、治療及び予防のための組成物及び方法を指向する。特に、本発明は、ＰＣ４発現、活性及び／又は機能の阻害剤又はレギュレーターを含む、組成物及び方法を指向する。
【背景技術】
【０００３】
＜２．背景の記載＞
低分子及び生物製剤を含む現行のがん療法は、細胞表面分子又は細胞質タンパク質のいずれかを標的とする。これらの標的の阻害は、細胞アポトーシスの開始をもたらし得る一方で、核ＤＮＡを無傷なままに留め、このことは、がん再発に事前に必要である。したがって、核たんぱく質、特にクロマチン構造及びＤＮＡ修復に関与するタンパク質を標的とする療法は、アポトーシスの反転を遮断し、再発率を反転しそして低減する可能性がある。
【０００４】
肺がんは、米国において、乳がん、前立腺がん及び結腸直腸がんを合わせたよりも多くの死亡件数に寄与する、がん関連死亡率の主要な原因である。２０１５年には、１５８，０４０人の米国人が亡くなっていると推定されている。肺がんには、２つのタイプがある。肺がんの約８５％〜９０％は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）であり、残るは小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）である。肺がんのこれらのタイプは、非常に異なった治療を受ける。
【０００５】
ＮＳＣＬＣは、より早い調節経路に対しての、明らかな満たされない医学的需要を伴う奇病と分類されている。奇病状態にもかかわらず、ＮＳＣＬＣを有する患者集団の大きさは、かなりのものである。ＮＳＣＬＣについての現行の治療としては、初期ステージについて外科手術及び放射線照射及びステージＩＶ転移性疾患（４０％）又はステージＩＩＩ限局性進行型疾患（３０〜４０％）についての化学療法が、挙げられる。近年のパイプラインは、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ及びチロシンキナーゼファミリーのメンバーを含む腫瘍血管新生経路に関与する標的タンパク質因子に注目している。
【０００６】
正のヒト転写補因子４（ＰＣ４、ｐ１４、ｐ１５、Ｓｕｂ１ホモログなどとしても知られる）は、Ｎ末端にセリンリッチな領域を有する、１２７アミノ酸残基の一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質である。この補因子は、多くの配列特異的及び細胞特異的なレギュレーター類と直接相互作用することによって、多くの遺伝子の転写活性を媒介することができる、一般的な正の補因子としてクローニングされそして同定されている［Ｇｅ  ａｎｄ  Ｒｏｅｄｅｒ，（１９９４），Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＰＣ４，ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｇｅｎｅｓ．Ｃｅｌｌ  ７８，  ５１３−５２３；Ｋｒｅｔｚｓｃｈｍａｒ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｖｉｒａｌ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  レギュレーターｓ．Ｃｅｌｌ  ７８，５２５−５３４］。ＰＣ４によって媒介されるレギュレーターは、多くの核ホルモンレセプター、腫瘍抑制因子、腫瘍性タンパク質、並びに腫瘍形成及び他のヒト疾患の病理学に必須である他の重要な因子を含む。
【０００７】
ＰＣ４は、腫瘍性タンパク質として機能し、そして細胞分化、発生及び腫瘍の病理学において重要な役割を果たす（米国特許第８，０７６，０６１号）。ＰＣ４の発現は、転写レベルでＰＣ４タンパク質自体と相互作用する、腫瘍抑制タンパク質ｐ５３によって制御される。さらに、ＰＣ４は、細胞周期、アポトーシス、ＤＮＡ修復及び他の細胞応答に関与する、多くの遺伝子の転写を調節するｐ５３の独自のアクティベーターとして機能する［Ｋｉｓｈｏｒｅ  Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ｐ５３  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｔｓ  ｏｗｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ−ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４：  ａ  ｎｅｗ  ｐ５３  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｇｅｎｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．４０６，４３７；  Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｇｅｎｅｒａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｐ５３  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２４，２０５２−２０６２］。ＰＣ４活性は、少なくともリン酸化及びアセチル化を含む転写後修飾によって、さらに制御される。ＰＣ４のリン酸化は、標的のアクティベーターと相互作用するその活性を阻害し、そしてそのコアクティベーター機能を下方制御する。質量分析によって、ＰＣ４のインビボ過剰リン酸化は、主にカゼインキナーゼＩＩによって媒介され、そしてＮ末端セリンリッチ領域に制限されることが示唆される［Ｇｅ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１，１２６９１−１２６９５］。ＰＣ４のアセチル化は、ｐ３００によって媒介され、そしてリン酸化によって阻害される［Ｋｕｍｏｒ，Ｐ．Ｂ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）ｐ３００−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４  ｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，１６８０４−１６８０９］。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】米国特許第８，０７６，０６１号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｇｅ  ａｎｄ  Ｒｏｅｄｅｒ，（１９９４），Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＰＣ４，ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｇｅｎｅｓ．Ｃｅｌｌ  ７８，  ５１３−５２３
【非特許文献２】Ｋｒｅｔｚｓｃｈｍａｒ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｖｉｒａｌ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  レギュレーターｓ．Ｃｅｌｌ  ７８，５２５−５３４
【非特許文献３】Ｋｉｓｈｏｒｅ  Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ｐ５３  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｔｓ  ｏｗｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ−ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４：  ａ  ｎｅｗ  ｐ５３  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｇｅｎｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．４０６，４３７
【非特許文献４】Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｇｅｎｅｒａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｐ５３  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２４，２０５２−２０６２
【非特許文献５】Ｇｅ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１，１２６９１−１２６９５
【非特許文献６】Ｋｕｍｏｒ，Ｐ．Ｂ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）ｐ３００−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＰＣ４  ｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，１６８０４−１６８０９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
がん及び腫瘍形成に関連する遺伝子及びタンパク質を調節する低分子を同定し、悪性腫瘍の分子診断を改良する必要性が存在する。さらに、増大した腫瘍特異性、並びに正常細胞及び組織に対する低減された毒性を有する、がんを治療及び予防する改善された方法に対する必要性が、存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
＜要旨＞
本発明は、がん、特に、腫瘍及び他の障害の発達を阻害及び／又は予防するように機能する薬剤、並びに、特に、ＰＣ４の発現、活性及び／又は機能の阻害剤又はレギュレーターを含む組成物及び方法に、関する。
【００１２】
本発明の１つの実施形態は、ＡＧ−１０３１、ＡＧ−１５０３、ＡＧ−１６０１及び／又はこれらの組み合わせを含む組成物を指向する。好ましくは、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、ＡＧ−１０３１、ＡＧ−１５０３及び／又はＡＧ−１６０１を含む医薬組成物の有効量を患者に投与することを含む、障害を治療又は予防する方法を指向する。好ましくは、障害は、がん及び／又は神経性障害であり、好ましくは、がんは、非小細胞肺癌腫、脳腫瘍又はグリア細胞腫である。また、好ましくは、神経性障害は、アルツハイマー病である。好ましくは、医薬組成物の有効量は、治療的に有効又は予防的に有効であり、そして組成物は、静脈内投与されるか、筋肉内投与されるか又は経口投与される。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、ＡＧ−１０３１、ＡＧ−１５０３及び／又はＡＧ−１６０１を含む、障害の予防のためのワクチンを指向する。好ましくは、本発明のワクチンは、腫瘍形成、がん性細胞の増殖を阻害し、転移性疾患の、予防、及び／又は神経変性を予防する。これらの化合物は、キラル分子であり、Ｌ及びＳアイソマー形態を有するエナンチオマーとして存在する。本発明の化合物は、Ｌ及びＳアイソフォームの両方を含んでもよく、あるいは、Ｌアイソフォームのみ又はＳアイソフォームのみとして単離されていてもよい。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、本発明のワクチンを、それを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍形成、がん性細胞の増殖、転移性疾患、及び／又は神経変性を阻害又は予防する方法を指向する。好ましくは、投与は、経口投与、静脈内投与又は筋肉内投与である。また、好ましくは、ワクチンは、例えば、アルミニウムを含む化合物などのアジュバントをさらに含んでもよい。あるいは、アジュバントは、アルミニウム非含有であってもよい。
【００１６】
本発明の他の実施形態及び利点は、部分的には、詳細な記載に示され、そして部分的には、詳細な記載から明らかであってもよく、又は本発明の実施から理解されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】薬物の詳細及び効能の表。
【図２】ＡＧ−１５０３の化学構造（ただ１つのアイソフォームのみを示す（Ｃａｓ＃：５５２２−６３−４コプロポルフィリンＩＩＩテトラメチルエステル；ＭＷ：７１０．８３）。
【図３】ＡＧ−１０３１の化学構造（９−メチル（Ｉ）及び１３−メチル（ＩＩ）トランス−（±）−１８−エテニル−４，４ａ−ジヒドロ−３，４−ビス（メトキシカルボニル）４ａ，８，１４，１９−テトラメチル−２３Ｈ，２５Ｈ−ベンゾ［ｂ］ポルフィン−９，１３−ジプロパノエート）を、Ｌ及びＳアイソフォームの両方で示す（Ｃａｓ＃：１２９４９７−７８−５ベルテポルフィン／ビスダイン；ＭＷ：７１８．７９４）。
【図４】ＡＧ−１６０１の化学構造、Ｌアイソフォーム（Ｉ及びＩＩＩ；３−（２，８，１３，１８−テトラメチル−３−（３−オキソ−３−（（３−フェニルプロピル）アミノ）プロピル）−１２，１７−ジビニルポルフィリン−７−イル）プロパン酸）；並びにＳアイソフォーム（ＩＩ及びＩＶ；３−（３，７，１２，１７−テトラメチル−１８−｛３−オキソ−３−［（３−フェニルプロピル）アミノ］プロピル）−８，１３−ジビニルポルフィリン−２−イル｝プロパン酸（ＷＪＵＳ０１−２４１−１ａ；合成；ＭＷ：６７９．８６）の両方で示す。
【図５】ＰＣ４−ＤＮＡ結合におけるＡＰＩ物質の干渉。
【図６Ａ】ラット神経膠芽腫細胞株Ｃ６のＡＧ−１０３１及びＡＧ−１５０３阻害を示すチャート。
【図６Ｂ】ヒト非小細胞肺がん細胞株Ｈ８４１のＡＧ−１０３１及びＡＧ−１５０３阻害を示すチャート。
【図７】ＮＳＣＬＣ腫瘍の増殖のＡＧ−１０３１阻害を示すヒストグラム。
【図８】ＮＳＣＬＣ腫瘍の増殖のＡＧ−１０３１阻害を示すチャート。
【図９】ＮＳＣＬＣに対するワクチンとしてのＡＧ−１０３１の使用における進行ステップ。
【図１０】ＮＳＣＬＣ形成の予防を示すＡＧ−１０３１の投与後の増殖結果。
【図１１Ａ】化合物８９７〜９０２の１つによるワクチン接種後のＡ５４９異種移植マウスにおける腫瘍増殖に対するＡＧ−１０３１効果の評価。
【図１１Ｂ】化合物９０３〜９０８の１つによるワクチン接種後のＡ５４９異種移植マウスにおける腫瘍増殖に対するＡＧ−１０３１効果の評価。
【図１２】Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍増殖に対するＡＧ−１０３１のワクチン効果の評価（ワクチン群：上；対象群：下）。
【図１３】Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍増殖に対するＡＧ−１０３効果の評価。
【図１４Ａ】中心位置の距離によって測定したＡＧ−１５０３によるグリア細胞腫を有するラットの不安及び活動のオープンフィールド研究。
【図１４Ｂ】位置の全体距離によって測定したＡＧ−１５０３によるグリア細胞腫を有するラットの不安及び活動のオープンフィールド研究。
【図１５】新たな物体認識を改善するＡＧ−１０３１及びＡＧ−１５０３の効力。
【図１６Ａ】ベースラインの百分率によって測定した、研究の電気生理学試験及び記憶能力。
【図１６Ｂ】実測百分率によって測定した、研究の電気生理学試験及び記憶能力。
【図１７Ａ】腫瘍組織におけるアポトーシス関連タンパク質のウェスタンブロット。
【図１７Ｂ】カバ組織におけるアポトーシス関連タンパク質のウェスタンブロット。
【図１８Ａ】ＮＳＣＬＣ−Ａ５４９細胞上における、同定された新規化合物ＡＧ−１６０１のスクリーニング。
【図１８Ｂ】ＮＳＣＬＣ−１４２９９細胞上における、同定された新規化合物ＡＧ−１６０１のスクリーニング。
【図１９Ａ】ＮＳＣＬＣ−Ｈ８４１細胞上における、同定された新規化合物ＡＧ−１６０１のスクリーニング。
【図１９Ｂ】グリア細胞腫Ｃ６細胞上における、同定された新規化合物ＡＧ−１６０１のスクリーニング。
【図２０Ａ】オープンフィールドかつ新規物体認識（ＮＯＲ）試験における、Ａβ４２によって誘発された、ＡＧ１６０１改善された認知障害。実験の時間チャート。Ｂ．オープンフィールド試験において中心領域に侵入した数；Ｃ．短期記憶の認識指数、並びにＤ．長期記憶試験の認識指数。
【図２０Ｂ】オープンフィールドかつ新規物体認識（ＮＯＲ）試験における、Ａβ４２によって誘発された、ＡＧ１６０１改善された認知障害。中心領域に侵入した数。
【図２０Ｃ】オープンフィールドかつ新規物体認識（ＮＯＲ）試験における、Ａβ４２によって誘発された、ＡＧ１６０１改善された認知障害。短期記憶の認識指数。
【図２０Ｄ】オープンフィールドかつ新規物体認識（ＮＯＲ）試験における、Ａβ４２によって誘発された、ＡＧ１６０１改善された認知障害。長期記憶試験の認識指数。
【図２１Ａ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２によって誘発された抑制された海馬のＬＴＰ及びＤＥＰを反転した。ＴＢＳによって誘発されたＬＴＰ及びＬＦＳによって誘発されたＤＥＰ。
【図２１Ｂ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２によって誘発された抑制された海馬のＬＴＰ及びＤＥＰを反転した。ＬＴＰの平均ｆＥＰＳＰ勾配。
【図２１Ｃ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２によって誘発された抑制された海馬のＬＴＰ及びＤＥＰを反転した。ＤＥＰの平均ｆＥＰＳＰ勾配。
【図２２Ａ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発型ＡＤモデルにおける還元型シナプスタンパク質の発現を増大した。海馬組織のホモジネートを、ウェスタンブロットにより分析し、示した個々の抗体によって検出した。
【図２２Ｂ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発型ＡＤモデルにおける還元型シナプスタンパク質の発現を増大した。ＰＳＤ９５及びＳＹＰタンパク質の定量分析。＊Ｐ＜０．０５対偽ｅ群、＃Ｐ＜０．０５及び＃＃Ｐ＜０．０１対Ａβ４２群；ｎ＝３／群。
【図２３Ａ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発型ＡＤモデルにおける還元型ＳＩＲＴ１タンパク質の発現を増大した。海馬組織由来のホモジネートのウェスタンブロット分析。
【図２３Ｂ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発型ＡＤモデルにおける還元型ＳＩＲＴ１タンパク質の発現を増大した。ウェスタンブロット結果の定量分析。
【図２３Ｃ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発型ＡＤモデルにおける還元型ｐ−ＣＲＥＢタンパク質の発現を増大した。海馬組織由来のホモジネートのウェスタンブロット分析。
【図２３Ｄ】ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発型ＡＤモデルにおける還元型ｐ−ＣＲＥＢタンパク質の発現を増大した。ウェスタンブロット結果の定量分析。
【図２４Ａ】ラット細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（実測値）。
【図２４Ｂ】ラット細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（チャート値）。
【図２５Ａ】ヒトグリア細胞腫細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（実測値）。
【図２５Ｂ】ヒトグリア細胞腫細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（チャート値）。
【図２６Ａ】Ｃ６及びＵ２５１グリア細胞腫細胞における異なるバッチのＡＧ−１６０１の効力（実測値）。
【図２６Ｂ】Ｃ６及びＵ２５１グリア細胞腫細胞における異なるバッチのＡＧ−１６０１の効力（チャート値）。
【図２７Ａ】Ｃ６及びＵ８７グリア細胞腫細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（実測値）。
【図２７Ｂ】Ｃ６及びＵ８７グリア細胞腫細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（チャート値）。
【図２８Ａ】Ｕ２５１細胞における、ＡＧ−１６０１、ＴＭＺ、及びカルムスチンの効力（実測値）。
【図２８Ｂ】Ｕ２５１細胞における、ＡＧ−１６０１、ＴＭＺ、及びカルムスチンの効力（チャート値）。
【図２９Ａ】Ｕ８７細胞における、ＡＧ−１６０１、ＴＭＺ、及びカルムスチンの効力（実測値）。
【図２９Ｂ】Ｕ８７細胞における、ＡＧ−１６０１、ＴＭＺ、及びカルムスチンの効力（チャート値）。
【図３０】Ｔ９８Ｇ細胞における、ＴＭＺ抵抗の効果のＡＧ−１６０１克服。
【図３１Ａ】ＡＧ−１６０１は、Ｕ２５１細胞におけるＴＭＺの効果を増強した（実測値）。
【図３１Ｂ】ＡＧ−１６０１は、Ｕ２５１細胞におけるＴＭＺの効果を増強した（チャート値）。
【図３２Ａ】ＡＧ−１６０１は、Ｕ８７細胞におけるＴＭＺの効果を増強した（実測値）。
【図３２Ｂ】ＡＧ−１６０１は、Ｕ８７細胞におけるＴＭＺの効果を増強した（チャート値）。
【図３３Ａ】ＳＦ２９５異種移植マウスモデルにおけるＡＧ−１６０１の効力（ｎ＝６における処理）。
【図３３Ｂ】ＳＦ２９５異種移植マウスモデルにおけるＡＧ−１６０１の効力（ｎ＝６における対照）。
【図３３Ｃ】ＳＦ２９５異種移植マウスモデルにおけるＡＧ−１６０１の効力（ｎ＝６における処理）。
【図３３Ｄ】ＳＦ２９５異種移植マウスモデルにおけるＡＧ−１６０１の効力（ｎ＝６における対照）。
【図３４Ａ】ＡＧ−１６０１処理の間のＵ８７／ＳＦ２９５異種移植腫瘍マウスの体重ｄｕｒｉｎｇ（処理）。
【図３４Ｂ】ＡＧ−１６０１処理の間のＵ８７／ＳＦ２９５異種移植腫瘍マウスの体重（対照）。
【図３５】安楽死後ＳＦ２９５異種移植マウスから単離した腫瘍（ＡＧ−１６０１臨床試験前）。
【図３６】偽、偽＋ＡＧ−１６０１処理、Ｃ６グリア細胞腫、及びグリア細胞腫＋ＡＧ−１６０１処理の体重。
【図３７】Ｃ６グリア細胞腫及びグリア細胞腫＋ＡＧ−１６０１の腫瘍サイズの画像。
【図３８Ａ】Ｃ６グリア細胞腫及びグリア細胞腫＋ＡＧ−１６０１の腫瘍体積。
【図３８Ｂ】Ｃ６グリア細胞腫及びグリア細胞腫＋ＡＧ−１６０１の腫瘍重量。
【図３９】偽、偽＋ＡＧ−１６０１処理、Ｃ６グリア細胞腫、及びグリア細胞腫＋ＡＧ−１６０１処理の生存率。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
＜発明の説明＞
ＰＣ４は、広範な遺伝子特異的及び／又は組織特異的なレギュレーターを介して転写活性化を媒介する、一般的な転写補因子である。ＰＣ４の活性形態は、がん細胞株及び原発性腫瘍の大部分において上方制御されることが見いだされ、そしてＰＣ４発現レベルは、悪性腫瘍の程度に相関することが見いだされている（米国特許第８，０７６，０６１号を参照されたい）。この調節分子は、アポトーシス、細胞周期進行、発生、リン酸化、増殖、クロマチン構築、ＤＮＡ複製及び修復、並びにがん、神経変性及び他の障害に関連する他の経路に関与する。近年の研究は、ＰＣ４が、ヒトにおいて性質決定された４８の共通のがんマーカーの１つであることを実証している。
【００１９】
驚くべきことに、多くの分子が、インビボ及びインビトロの両方においてＰＣ４活性を阻害することが、見出されている（図１を参照されたい）。１つの驚くべき発見は、現在光力学治療に用いられており、以前より非腫瘍学兆候についてＦＤＡに認可されている分子ＡＧ−１０３１が、その二本鎖ＤＮＡ結合能力を遮断することにより、インビトロでＰＣ４活性を特異的に阻害し、そしてインビボで非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞増殖を阻害したことであった。ＮＳＣＬＣ細胞株Ａ５４９に由来するマウス異種移植モデルにおける腫瘍増殖を腫瘍形成後に阻害することに加え、ＡＧ−１０３１の事前注入もまた、異種移植モデルにおける腫瘍形成を効果的に防いだ。さらに、ＡＧ−１０３１は、記憶欠失及び他の活性欠失の回復と組み合わせて、神経膠芽腫細胞株Ｃ６に由来する異種移植モデルにおけるグリア細胞腫増殖を、有意に阻害した。
【００２０】
別の驚くべき発見は、ＡＧ−１０３１の類似体である分子ＡＧ−１５０３は、グリア細胞腫細胞株Ｃ６の増殖に対する特異的阻害活性を有するが、ＮＳＣＬＣ細胞株の増殖に対して有意な阻害活性を有さないことであった。Ｃ６細胞株の異種移植モデルの研究は、ＡＧ−１５０３は、記憶欠失及び他の活性の欠失の回復に対し、より良好な活性を有することを示した。
【００２１】
別の驚くべき発見は、新規に合成したＡＧ−１０３１の類似体である分子ＡＧ−１６０１である。研究は、いくつかのＮＳＣＬＣ細胞株の増殖の阻害に加えて、この分子は、ＡＧ−１５０３と比較して、グリア細胞腫細胞の増殖に対しより良好な阻害活性さえも有することを示した。本発明の組成物及び方法は、新規な標的及び新規な免疫刺激メカニズムによって、がん、腫瘍及び他の医学的障害を治療及び／又は予防するための、これまで不可能であった個別化の医学的アプローチを提供する。
【００２２】
＜ＡＧ−１５０３＞
ＡＧ−１５０３（図２）は、ＡＧ−１０３１の類似体であり、強力なＰＣ４阻害剤として同定され、ＮＳＣＬＣ、神経膠芽腫及びアルツハイマー病に対して、将来性ある治療法として性質決定されている。ＡＧ−１５０３は、単独治療として単独で使用されるか又はＡＧ−１０３１、ＡＧ−１６０１又は他の薬物と組み合わせて使用された場合、ＮＳＣＬＣ、グリア細胞腫治療及び他のがんのために使用され得る。ＡＧ−１５０３は、ＮＳＣＬＣ及びグリア細胞腫のための個別化医薬であってもよく、及び／又はＮＳＣＬＣ及び／又はグリア細胞腫の再発を防ぐための補助剤又はワクチンであってもよい。ＡＧ−１５０３は、例えば、水素、ヒドロキシル基、直鎖状若しくは分枝鎖状のカルボキシ基、酸素基、メチル基、若しくはエチル基の付加による置換によるか、又は類似分子に化学結合することによる１つ以上の改変により、機能活性を低減することなく、改変することができる。さらに、ＡＧ−１５０３は、キラルであり、Ｌ及びＳのアイソマー形態を有するエナンチオマーとして存在する。本発明の化合物は、Ｌ及びＳアイソフォームの両方を含んでも、又はＬアイソフォームのみ若しくはＳアイソフォームのみとして単離されていてもよい。種々の化学形態のすべてを、本明細書中でＡＧ−１５０３と呼ぶ。
【００２３】
＜ＡＧ−１０３１＞
ＡＧ−１０３１（図３を参照されたい）は、非腫瘍学兆候のためにＦＤＡ認可された、光力学（ＰＤ）薬物である。ハイスループットスクリーニングプラットフォームを用いることにより、ＡＧ−１０３１を、強力なＰＣ４阻害剤として同定し、そして非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に対する治療効力について性質決定した。特に、ＡＧ−１０３１は、単独で、ＮＳＣＬＣ治療についての単独治療として使用されてもよく、又は、ＮＳＣＬＣ及び他のがんについての第一選択治療において、ＡＧ−１５０３、ＡＧ−１６０１若しくは他の薬物と組み合わせて使用されてもよい。ＡＧ−１０３１は、ＮＳＣＬＣのための個別化医薬であっても、及び／又はＮＳＣＬＣの再発を防ぐための補助剤又はワクチンであってもよい。ＡＧ−１３０１は、例えば、水素、ヒドロキシル基、直鎖状若しくは分枝鎖状のカルボキシ基、酸素基、メチル基、若しくはエチル基の付加による置換によるか、又は類似分子に化学結合することによる１つ以上の改変により、機能活性を低減することなく改変することができる。さらに、ＡＧ−１０３１は、キラルであり、Ｌ及びＳのアイソマー形態を有するエナンチオマーとして存在する。本発明の化合物は、Ｌ及びＳアイソフォームの両方を含んでも、又はＬアイソフォームのみ若しくはＳアイソフォームのみとして単離されていてもよい。種々の化学形態のすべてを、本明細書中でＡＧ−１０３１と呼ぶ。
【００２４】
＜ＡＧ−１６０１＞
ＡＧ−１６０１（図４）は、新規に合成したＡＧ−１０３１の別の類似体である。ＡＧ−１６０１は、強力なＰＣ４阻害剤として同定され、ＮＳＣＬＣ、神経膠芽腫及びアルツハイマー病のための治療として有用であるＡＧ−１６０１の化学構造は、Ｌアイソフォーム（Ｉ及びＩＩＩ；３−（２，８，１３，１８−テトラメチル−３−（３−オキソ−３−（（３−フェニルプロピル）アミノ）プロピル）−１２，１７−ジビニルポルフィリン−７−イル）プロパン酸）；及びＳアイソフォーム（ＩＩ及びＩＶ；３−（３，７，１２，１７−テトラメチル−１８−｛３−オキソ−３−［（３−フェニルプロピル）アミノ］プロピル）−８，１３−ジビニルポルフィリン−２−イル｝プロパン酸（ＷＪＵＳ０１−２４１−１ａ；合成；ＭＷ：６７９．８６）の両方で存在する。ＮＳＣＬＣ及び／又はグリア細胞腫治療のための単独治療としてのＡＧ−１６０１は、単独で、又はＡＧ−１０３１、ＡＧ−１５０３若しくは他の薬物と組み合わせて使用される。ＡＧ−１６０１は、ＮＳＣＬＣ及び／又はグリア細胞腫のための個別化医薬として、ＰＣ４陽性の患者の診断とともに使用されてもよい。ＡＧ−１６０１は、ＮＳＣＬＣ及び又はグリア細胞腫のための個別化医薬であっても、及び／又はＮＳＣＬＣ及び／又はグリア細胞腫の再発を防ぐための補助剤又はワクチンであってもよい。ＡＧ１６０１は、ＴＭＺ及びカルムスチンよりも、インビトロでグリア細胞腫細胞に対しより高い効力を有することを示し、ＳＦ２９５異種移植腫瘍マウスモデルに対する効力を示す；そしてＣ６異種移植腫瘍ラットモデルに対する効力を示す。ＡＧ−１６０１は、例えば、水素、ヒドロキシル基、直鎖状若しくは分枝鎖状のカルボキシ基、酸素基、メチル基、若しくはエチル基の付加による置換によるか、又は類似分子に化学結合することによる１つ以上の改変により、機能活性を低減することなく改変することができる。さらに、ＡＧ−１６０１は、キラルであり、Ｌ及びＳのアイソマー形態を有するエナンチオマーとして存在する。本発明の化合物は、Ｌ及びＳアイソフォームの両方を含んでも、又はＬアイソフォームのみ若しくはＳアイソフォームのみとして単離されていてもよい。種々の化学形態のすべてを、本明細書中でＡＧ１６０１と呼ぶ。
【００２５】
ＡＧ１６０１及び３，３’−（３，７，１２，１７−テトラメチル−８，１３−ジビニルポルフィリン−２、１８−ジイル）ビス（Ｎ−（３−フェニルプロピル）プロパンアミド）（本明細書中で化合物Ｂ１と呼ぶ）は、１’−カルボニルジイミダゾールを活性化のために用いて、開始物質Ｐｈ−ＩＸ（３，３’−（３，７，１２，１７−テトラメチル−８，１３−ジビニルポルフィリン−２，１８−ジイル）ジプロピオン酸を、３−フェニルプロピルアミンと結合させることにより調製する。ＡＧ１６０１及び化合物Ｂ１は、クロロホルム／メタノール系を用いたクロマトグラフィー法によって精製されて、固体ＡＧ１６０１及び化合物Ｂ１を高い化学的純度（９５〜９７％以上）で得ることができる。
【００２６】
調製方法は、以下の主要な工程を含み得る：
ａ）  ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン中の１，１’−カルボニルジイミダゾールにより、開始物質のカルボン酸を周囲温度で１〜３時間活性化させることにより、カルボニルイミダゾール中間体Ｍを形成する。
ｂ）  アリールアルキルアミンを上記中間体Ｍ溶液へ滴下し、そして２４〜２８時間撹拌し続ける。
ｃ）  上記溶液に水を加え、生成物を沈殿させて、溶媒を濾別する。
ｄ）  粗生成物を、クロロホルム／メタノール（又はエタノール）溶出液を用いてシリカゲルカラム上で分離し、ＡＧ１６０１（薄層クロマトグラフィー上でゆっくりと移動する）及び化合物Ｂ１（薄層クロマトグラフィー上でより速く移動する）を得る。
【００２７】
任意の長さのアミンのアミドを、この方法を用いて合成することができる。本方法は、生物学的スクリーニングのための生物学的類似体の迅速な生成のために特に好適である。中間体Ｍが形成されると、異なる長さ及び形状の置換基のアミンの反応のために、多くの画分に分配され得る。
【００２８】
本発明の方法は、周囲条件下で維持される一般に入手可能な溶媒で起こる反応を可能にする。モノアミド及びジアミド比は、アミン量によって制御され得、それによって生成混合物がシリカゲルカラム上で分離される。
【００２９】
本方法は、モノアミド及びジアミドの混合物を生じ、これは、有効に分離され得る。クロマトグラフィー精製の後、純粋な（９５％以上の）モノアミド及びジアミドを、インビトロ及び細胞スクリーニングのために使用することができる。
【００３０】
記載の方法は、量を展開するための構造的多様性及びスケーラビリティを有する、化合物の迅速な生成を可能にする。例えば、アミドの化合物ライブラリーは、以下の手順で調製されてもよい。
【００３１】
Ｐｈ−ＩＸ（３，３’−（３，７，１２，１７−テトラメチル−８，１３−ジビニルポルフィリン−２，１８−ジイル）ジプロピオン酸が、最初に活性化される。次いで、これが４等分量に分けられ、４つの異なるアミンと反応する。
【００３２】
工程１：ＣＤＩ（１，１’−カルボニルジイミダゾール、５２ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）を、３ｍＬ脱水ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中のＰｈ−ＩＸ（６０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）溶液に加えた。
工程２：１時間室温で撹拌した後、完了の指標として赤い色がわずかに退色していった。この赤い液体を、４本の試験管にシリンジを介して等分した。
工程３：以下の３．１〜３．４で示す通り、０．３２１ｍｍｏｌのアミンを加え、２４時間にわたって撹拌した。水を加え、粗生成物を沈殿させた。
工程４：粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィープレートにロードし、混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝１００：５）で溶出して、モノアミドアイソマーからジアミンを分離した。
【００３３】
３．１：３−フェニルプロピルアミン（４５μＬ、０．３２１ｍｍｏｌ）を工程３において使用した場合、クロマトグラフィー分離の後にＡＧ１６０１及び化合物Ｂ１を得、９５％を超えて（ＴＬＣプレートを、ＵＶ光２５３ｎｍ下で視認することによって）いた。収量：２８％（Ａ、ｒｆ＝０．４、モノアミド、５ｍｇ）；３３％（Ｂ、ｒｆ＝０．８、ジアミド、７ｍｇ）。
【００３４】
３．２  プロピルアミン（２６μＬ、０．３２１ｍｍｏｌ）を工程３において使用した場合、クロマトグラフィー分離後に化合物Ｃを得、９５％を超える純度であった（ＴＬＣプレートを、ＵＶ光２５３ｎｍ下で視認することによって）。収量：１７％（Ｃ、ｒｆ＝０．５、ジアミド、３ｍｇ）
【００３５】
３．３：イソプロピルアミン（２８μＬ、０．３２１ｍｍｏｌ）を工程３で使用した場合、クロマトグラフィー分離後に化合物Ｄ及びＥを得、９５％を超える純度であった（ＴＬＣプレートを、ＵＶ光２５３ｎｍ下で視認することによって）。収量：３５％（Ｄ、ｒｆ＝０．５、ジアミド、５．７ｍｇ）、２９％（Ｅ、ｒｆ＝０．８、モノアミド、５ｍｇ）。
【００３６】
３．４．：Ｎ、Ｎ−ジメチルプロピルアミン（４０μＬ、０．３２１ｍｍｏｌ）を工程３で使用した場合、クロマトグラフィー分離後に化合物Ｆを得、９０％を超える純度であった（ＴＬＣプレートを、ＵＶ光２５３ｎｍ下で視認することによって）．収量：２６％（Ｆ、ｒｆ＝０．１５、ジアミド、５ｍｇ）。
【００３７】
メチルエステルの合成が、以下の手順によって行われた。
【００３８】
ＤＣＣ（Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１０４ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン、１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びメタノール（２００mＬ、４．９５ｍｍｏｌ、Ｐｈ−ＩＸの酸の１３．８等量）を、２ｍＬ脱水ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）／２ｍＬ  ＣＨ２ＣＨ２（ジクロロメタン）中のＰｈ−ＩＸ（１００ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）溶液に加えた。この混合物を、３日間室温で撹拌した。生成混合物を、分液漏斗にあけ、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）／１５％  ＮａＣｌ溶液（２０ｍＬ）で抽出した。有機溶媒を蒸発させた。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（２０ｇシリカゲル、溶出液：６０ｍＬ  ＣＨＣｌ３及び１．５ｍＬメタノール）によって分離した。重なった部分を、分取ＴＬＣによって再度分離した。収量：化合物Ｇ、３９％、ｒｆ＝０．２５、４０ｍｇ；化合物Ｈ、５７％、ｒｆ＝０．６、６０ｍｇ。
【００３９】
化合物Ｇ、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１０．２５（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、１０．２０（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、１０．１５（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、１０．１１（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、８．３１（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ１＝１２Ｈｚ、Ｊ２＝１６Ｈｚ、ビニル）、６．４０（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．２２（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１２Ｈｚ）、４．４５（ｍ、２セット、４Ｈ、ＣＨ２）、３．６５−３．７５（ｓ、５ｘＣＨ３）、３．３０（ｍ、２セット、４Ｈ）。
【００４０】
化合物Ｈ、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１０．３０（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、１０．２８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、１０．１９（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、１０．１１（ｓ、１Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、８．２３（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ１＝１２Ｈｚ、Ｊ２＝１６Ｈｚ、ビニル）、６．４１（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．２５（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１２Ｈｚ）、４．４２（ｍ、２セット、４Ｈ、ＣＨ２）、３．６５−３．７５（ｓ、６ｘＣＨ３）、３．３０（ｍ、２セット、４Ｈ）。
【００４１】
大規模でのＡＧ１６０１及び化合物Ｂ１の合成を、以下に概説する手順を用いて達成することができる。
【００４２】
ＣＤＩ（１，１’−カルボニルジイミダゾール、１１７．７６ｍｇ、０．７１２ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬ脱水ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）／１０ｍＬ  ＣＨ２Ｃｌ２（ジクロロメタン）中のＰｈ−ＩＸ（２００ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）溶液に加えた。室温で０．７５時間撹拌した後、完了の指標として赤色がわずかに退色したら、ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中３−フェニルプロピルアミン（６３ｍＬ、０．４４５ｍｍｏｌ、１．２５ｅｑ）を、３０分間かけてゆっくりと加えた。４４時間後、ＴＬＣは、モノアミドを主要なスポットと示した。水を加え、ＣＤＩを分解した。この手順を、３３０ｍｇ（０．５８７ｍｍｏｌ）Ｐｈ−ＩＸを用いて、もう一度繰り返した。
【００４３】
上記２つの反応からの組合わせた粗生成物の混合物を、蒸発に供した。ジクロロメタンの除去後、残った液体に、１５０ｍＬの水（ブライン：水＝１：２）を加え、固体を砕いた。カラムクロマトグラフィー（６２ｇシリカゲル）後、ＡＧ１６０１（モノアミド）（３８８ｍｇ、６１％）及び化合物Ｂ１（ジアミド）（６４ｍｇ、８．５％）が得られた。ＡＧ１６０１及び化合物Ｂ１（７０ｍｇ、約９％）の両方を含む画分も得られた。
【００４４】
ＡＧ１６０１、１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１０．３０−１０．４０（ｍｓ、４Ｈ、ｒｉｎｇ）、８．６０（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ１＝１２Ｈｚ、Ｊ２＝１６Ｈｚ、ビニル）、７．３０（ｍ、１Ｈ、ＮＨＣＯ）、６．７０−６．９０（ｍ、５Ｈ、Ｐｈ）、６．５０（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．２５（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１２Ｈｚ）、４．４３（ｍ、２セット、４Ｈ、ＣＨ２）、３．８０−３．７８（ｓ、２ｘＣＨ３）、３．６５−３．７０（ｓ、２ｘＣＨ３）、３．３０（ｍ、２セット、４Ｈ）、３．０１（ｍ、４Ｈ、ＮＣＨ２及びＣＨ２Ｐｈ）、１．８０（ｍ、２Ｈ、Ｃ−ＣＨ２−Ｃ）；ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化ポジティブモード：［Ｍ＋１］＋＝６８０．４；高解像度ＭＳは、Ｍ＋１＝６８０．３６０１、式：Ｃ４３Ｈ４６Ｎ５Ｏ３を確認する。
【００４５】
化合物Ｂ１、１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：このスペクトルの解像度は低く、ここでは推定値のみを示す：１０．１０−１０−３０（ｓ、４Ｈ、Ｃ−Ｈ、ｒｉｎｇ）、８．３０（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ１＝１２Ｈｚ、Ｊ２＝１６Ｈｚ、ビニル）、６．７０−６．９０（ｍ、１０Ｈ、Ｐｈ）、６．７０（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．５０（ｄｄ、２セット、２Ｈ、Ｊ＝１２Ｈｚ）、４．４３（ｍ、２セット、４Ｈ、ＣＨ２）、３．８０−３．７８（ｓ、２ｘＣＨ３）、３．６５−３．７０（ｓ、２ｘＣＨ３）、３．１０（ｍ、２セット、４Ｈ）、３．０１（ｍ、８Ｈ、ＮＣＨ２ａｎｄＣＨ２Ｐｈ）、１．５０−８０（ｍ、４Ｈ、Ｃ−ＣＨ２−Ｃ）。
【００４６】
ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化ポジティブモード：［Ｍ＋１］＋＝７９７．５；高解像度ＭＳ確認：Ｍ＋１＝７９７．５４５３、式：Ｃ５２Ｈ５７Ｎ６Ｏ２。
【００４７】
本発明の１つの実施形態は、ＰＣ４発現及び／又は活性を阻害又は調節する低分子を含む組成物を指向する。腫瘍性タンパク質として、ＰＣ４は、多くの種類のヒトがん及び腫瘍に関する腫瘍形成において重要な役割を果たし、ＰＣ４発現の調節は、がん細胞及び転移性疾患を含む細胞の増殖の抑制及び／又は阻害をもたらす。好ましくは、本発明の組成物は、細胞性ＰＣ４レベルを低減するか及び／又はＰＣ４機能を阻害することにより、がんを直接的に又は間接的に治療又は予防するために処方される。本発明の好ましい組成物は、ＰＣ４発現及び／又は活性を阻害又は調節する化合物の類似体及び誘導体を含む。好ましいＰＣ４阻害剤としては、例えば、ＡＧ−１０３１（ベルテポルフィン／ビスダイン）、ＡＧ−１５０３（コプロポルフィリンＩＩＩテトラメチルエステル）、ＡＧ−１６０１及びこれらの組み合わせが挙げられる。本発明の組成物は、限定されないが、がん、悪性腫瘍、腫瘍、神経性障害及びアルツハイマー病を含む、種々の障害を治療又は予防する。本発明の組成物は、短期間又は長期間の投与について安全であるか又は有効であり、望ましくない副作用を最小限にしか有さないか又は全く有さないので、特定の魅力を供する。これらの低分子は、好ましくは、（化学療法剤とは異なり）変異原性がなく、そして細胞毒性もないが、１種以上の疾患及び障害の治療及び／又は予防のための高い効力を有する。同定された特定の低分子は、他の医学的兆候のために既にＦＤＡ認可されており、既知の安全性プロファイルを有し、一方、他の低分子は、そうでなければ、新規な、これまで未知であったものである。本発明の低分子を含む類似体及び誘導体は、保存的置換、付加又は欠失を有する。保存的置換、付加又は欠失としては、例えば、メチル基若しくはアルデヒド基、又は非官能性マーカー若しくは標識化合物の付加又は欠失が挙げられる。
【００４８】
本発明の別の実施形態は、本発明の低分子を含む医薬組成物を指向する。医薬組成物は、本発明の低分子を、薬学的に許容される担体及び塩と組み合わせて含み、水性であっても凍結乾燥状態であってもよい。薬学的に許容される担体としては、例えば、水及び他の水性溶液、油、脂肪酸、糖類、炭水化物及び塩が挙げられ、例えば、患者への直接投与又は時間放出投与のための、散剤、カプセル剤又は丸剤のような、液体、ゲル又は固体であってもよい。
【００４９】
本発明の別の実施形態は、本発明の組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、疾患及び障害の治療のための方法を指向する。本発明の組成物によって治療される疾患及び障害としては、肺がん、膀胱がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、小腸がん、卵巣がん、及び他の悪性腫瘍、並びにアルツハイマー病及び合併症などが挙げられるが、これらに限定されない。患者としては、ヒト（例えば、成人、青少年、児童、幼児）、類人猿及び飼育動物などの哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。投与は、非経口であっても、非経口でなくてもよいが、好ましくは経口、筋肉内又は静脈内投与である。治療は、短時間（例えば、パルスであっても又は連続的であっても）であってもよく、短期間又は長期間であってもよく、患者の終生を通じて連続的であってもよい。
【００５０】
本発明の組成物は、単独で、又は１種以上の他の治療と組み合わせて、有効量で対象に投与され得、がんを効果的に治療する。有効量の本発明の組成物は、疾患を有する細胞の数を低減するか又はゼロにするために有効な量、及び／又は疾患の再発を予防する量である。好ましくは、有効量は、患者に対し有害ではない量、又は何らかの有害な副作用が最小であるか若しくはさもなければ組成物の患者への有益な効果が有害な副作用より勝る量である。投与される有効な投薬量は、典型的には、患者の年齢若しくは体重、及び／又は疾患の重症度に依存して変動する。
【００５１】
本発明の別の実施形態は、患者に投与された際に、疾患又は障害の発病を防ぐ、本発明の医薬組成物を指向する。このような医薬組成物は、例えば、限定されないが、腫瘍及び転移性疾患、神経性疾患並びにこれらの組み合わせを含むがんなどの、疾患又は障害を予防する予防薬物、免疫刺激物質、及び／又はワクチンとして作用する。本発明の組成物の投与は、予防的に有効な単回のボーラス投与であっても、多数回の予防的に有効な投薬であってもよく、アジュバントを含んでもよい。アジュバントは、アルミニウムを含んでもよく、又は代替的に、アジュバントは、アルミニウム非含有であってもよい。投与は、非経口であっても非経口でなくてもよいが、好ましくは、経口投与、筋肉内投与又は静脈内投与である。
【００５２】
さらなる局面において、本発明は、１種以上の組成物を含むキットを提供し、組成物それぞれが、治療有効量の本開示の化合物の１種以上の化合物、薬学的に許容されるその塩、その溶媒、又はそのプロドラッグ、これらの任意の組み合わせ、及び脳のがんを治療する１種以上の組成物を使用するための指示書を含む。
【００５３】
本開示の化合物は、およそ１：１、１：２以上；１：５以上、１：１０以上、１：２０以上、１：５０以上、又は１：１００以上のＬ対Ｓアイソマー比、又はＳ対Ｌアイソマー比で組成物中に存在してもよく、及び／又は投与されてもよい。
【００５４】
治療的に有効とは、本明細書中の症状又は疾患（例えば、脳のがん）を治療するために対象に投与された際に、このような治療を及ぼすのに十分である、本開示の化合物の量を含む。治療有効量は、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療される哺乳動物の年齢、体重、健康状態及び応答性に依存して変動する。
【００５５】
本開示の化合物は、例えば、好ましくは哺乳動物の対象に投与されてもよい。．好ましい哺乳動物としては、モルモット、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ハムスター及びヒトを含む霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
薬学的に許容されるとは、物質又は組成物が、処方物を構成する他の成分及び／又はここで治療される哺乳動物と、化学的に及び／又は毒物学的に適合性であることを示す。
【００５７】
薬学的に許容される塩としては、例えば、特定の化合物に対応する遊離酸又は塩基の生物学的な有効性を維持した塩、並びに生物学的又はその他の意味でも望ましくないものではない塩が挙げられる。薬学的に許容される塩の例としては、本開示の化合物を鉱酸若しくは有機酸又は無機塩基と反応させることによって調製される塩が挙げられる。このような塩としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩素、臭素、ヨウ素、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、及びマンデル酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の１つの化合物は、１つ以上の酸部分又は塩基部分を含み得るので、本開示の化合物は、１つの化合物内に一塩、二塩又は三塩を含み得る。
【００５８】
本開示のプロドラッグは、生理学的条件下で又は加溶媒分解によって、特定の化合物又はそのような化合物の塩に変換され得る化合物をいう。本開示の化合物及び／又は組成物は、種々の好適な経路で投与され得る。好適な経路としては、経口、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外を含む）、経皮、直腸内、経鼻、局所（経頬及び舌下を含む）、膣内、腹腔内、肺内及び鼻腔内が挙げられる。投与経路は、例えば、レシピエントの状態によって変動し得ることが、理解される。化合物が経口投与される場合、これは、薬学的に許容される担体又は賦形剤とともに、丸剤、カプセル剤、錠剤などとして処方されてもよい。化合物が非経口投与される場合、これは、以下に説明するように、薬学的に許容される非経口ビヒクルとともに、単位投薬注射可能形態で処方されてもよい。
【００５９】
本開示の化合物を、ヒトを含む哺乳動物の治療処置に使用するために、これを医薬組成物として標準的な製薬理論に従って処方してもよい。本発明の医薬組成物は、すなわち、量、濃度、計画、経過、ビヒクル及び投与経路の様式で、良好な医薬理論にしたがって処方され、分封され、そして投与される。この文脈で検討される因子としては、治療される障害、治療される哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の病因、薬剤の送達部位、投与方法、投与の計画、及び臨床医に公知の他の因子が挙げられる。投与される化合物の治療有効量は、このような考慮と化合物の特性、及び投与される化合物の量とによって決定され、逆もまたしかりである。本開示の化合物は、薬物の容易に制御可能な薬物の用量を提供するための医薬投与形態に処方されて、患者が定められたレジメンに従うことを可能にするように処方され得る。
【００６０】
本開示の化合物の医薬製剤は、種々の経路及び投与のタイプのために調製されてもよい。例えば、本発明の２以上の化合物は、凍結乾燥処方物、粉砕粉末、又は水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤又は安定化剤と任意選択的に混合されてもよい。処方は、周囲温度にて、適切なｐＨで、所望の純度で、生理学的に許容されるな担体すなわち、使用される投薬量及び濃度において、レシピエントにとって非毒性な担体と混合されることによって行われてもよい。処方物は、従来的な溶解手順及び混合手順を用いて、調製されてもよい。例えば、バルクの薬物材料（すなわち、本開示の化合物又は化合物の安定化形態）が、１種以上の賦形剤の存在下で、好適な溶媒に溶解されてもよい。
【００６１】
使用される担体、希釈剤又は賦形剤は、本開示の化合物が適用される手段及び目的に依存する。溶媒は、一般に、哺乳動物へ投与されるために当業者に安全であると認識されている溶媒（ＧＲＡＳ）に基づいて選択されてもよい。一般に、安全な溶媒は、水中に溶解可能であるか又は混和可能な水及び他の非毒性溶媒などの、非毒性の水性溶媒である。好適な溶媒としては、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ  ４００、ＰＥＧ３００）など及びこれらの混合物が挙げられる。許容される希釈剤、担体、賦形剤及び安定化剤は、使用される投薬量及び濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンなどの抗酸化剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギルネ（ａｒｇｉｒｕｎｅ）、又はリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリンなどの単糖類、二糖類及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン類；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコールなどの（ＰＥＧ）非毒性界面活性剤が挙げられる。処方物はまた、１種以上の安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、滑剤、処理補助剤、着色剤、甘味料、香料、着香剤及び他の公知の添加剤を含み、薬物（すなわち、本開示の化合物又はその医薬組成物）に優れた体裁を与え又は医薬製品（すなわち、医薬）の製造における補助を与えてもよい。活性な医薬成分はまた、例えば、コロイド薬物送達系中で（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）、又はマクロエマルジョン中で、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルといった、コアセルベーション技術又は界面重合によって調製されるマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｅｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。「リポソーム」は、哺乳動物への薬物の送達のために有用な、種々のタイプの脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤で構成される小胞である。リポソームの構成成分は、生物膜の脂質編成と同様に、一般に、二重層形成で編成される。
【００６２】
本開示の発明の化合物の、徐放性調製物が、調製されてもよい。徐放性放出の好適な例としては、本開示の化合物を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このようなマトリックスは、例えばフィルム又はマイクロカプセルに形成された物品の形態である。徐放性放出マトリックスとしては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非崩壊性酢酸エチレン−ビニル、崩壊性乳酸−グリコール酸コポリマーは挙げられる。
【００６３】
本開示の医薬組成物は、滅菌注射可能調製物、例えば、滅菌注射可能水性懸濁液又は油性懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、上述のような好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を用いて公知技術にしたがって処方されてもよい。滅菌注射可能調製物はまた、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤又は溶剤中、例えば、１，３−ブタンジオール中の滅菌注射可能溶液又は懸濁液であってもよく、又は凍結乾燥粉末として調製されてもよい。許容できるビヒクル及び溶剤の中でも、水、リンゲル液及び等張の塩化ナトリウム溶液が使用され得る。さらに、滅菌固定油は、溶剤又は懸濁媒体として従来使用され得る。この目的のために、合成のモノグリセリド又はジグリセリドを含む任意のブランドの固定油が使用され得る。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射可能調製物中で同様に使用され得る。
【００６４】
非経口投与のために好適な本開示の医薬組成物としては、水性及び非水性の滅菌注射溶液が挙げられ、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬及び処方物を意図するレシピエントの血液と等張にするための溶質；並びに懸濁化剤及び増粘剤を含む水性及び非水性の滅菌懸濁液を含み得る。
【００６５】
本発明の組成物はまた、経口用途（例えば、錠剤、ロゼンジ剤、硬質及び軟質カプセル、水性又は油性懸濁液、エマルジョン、分散可能散剤又は顆粒、シロップ又はエリキシル剤として）、局所用途（例えばクリーム剤、軟膏、ゲル剤、又は水性若しくは油性の溶液若しくは懸濁液として）、吸入による投与（例えば微粉末又は液体エアロゾルとして）、吹送法による投与（例えば微粉末として）のために、好適に処方されてもよい。
【００６６】
錠剤処方物のための好適な薬学的に許容される賦形剤としては、例えば、ラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム又は炭酸カルシウムなどの希釈剤、顆粒化剤及びトウモロコシデンプンなどの崩壊剤、又はアルギン酸；デンプンなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸若しくはタルクなどの滑沢剤；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル又はｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルなどの保存剤；並びにアスコルビン酸などの抗酸化剤が挙げられる。錠剤処方物は、その崩壊を調整するため又は活性成分の胃腸管におけるその後の吸着を調整するため、又はその安定性及び／又は外観を改善するためのいずれかの場合に、当該分野で周知の従来のコーティング剤及び手順を用いて、コーティングされていてもよく、又はされていなくてもよい。
【００６７】
経口用途のための組成物は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はカオリンと混合されている硬質ゼラチンカプセル、あるいは活性成分が水若しくは油、例えばピーナツ油、液体パラフィン又はオリーブ油と混合されている軟質ゼラチンカプセルの形態で処方されてもよい。
【００６８】
水性懸濁液は、一般的に、微細粉末形態の活性成分を、１種以上の懸濁化剤と共に含む：例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガム、分散剤又は湿潤剤、例えばレシチン又はアルキレンオキシドと脂肪酸との濃縮生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの濃縮生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとの濃縮生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、又はエチレンオキシドと脂肪酸及び無水ヘキシトール由来の部分エステルとの濃縮生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエート、を共に含む。水性懸濁液はまた、１種以上の保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル又はｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、着色剤、着香剤、及び／又は甘味料（例えば、ショ糖、サッカリン又はアスパルテーム）を含んでもよい。
【００６９】
油性懸濁液は、活性成分を、植物油（例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油又はココナツ油）又は鉱物油（例えば、液体パラフィン）中に懸濁することによって処方され得る。油性懸濁液はまた、ミツロウ、硬質パラフィン又はセチルアルコールなどの増粘剤を含んでもよい。上で示された甘味料及び着香剤は、口当たりの良好な経口調製物を提供するために添加され得る。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって、保存されてもよい。
【００７０】
水の添加による水性懸濁液の調製のために好適である、分散可能散剤及び顆粒は、活性成分を、分散剤又は湿潤剤、懸濁化剤及び１種以上の保存料と一緒に含む。好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤は、既に上で言及したように例示される。甘味料、着香剤及び着色料などのさらなる賦形剤もまた、存在してもよい。
【００７１】
本開示の医薬組成物はまた、水中油エマルジョンの形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油又は落花生油、又は鉱物油、例えば液体パラフィン、又はこれらのいずれかの混合物であってもよい。好適な乳化剤としては、例えば、天然に存在するゴム、例えばアカシアゴム又はトラガカントゴム、天然に存在するリン脂質、例えば大豆、レシチン、脂肪酸及び無水ヘキシトール由来のエステル類又は部分エステル類（例えばソルビタンモノオレエート）及び上記の部分エステル類とエチレンオキシドとの濃縮生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。エマルジョンはまた、甘味料、着香剤及び保存料を含んでもよい。
【００７２】
シロップ及びエリキシル剤は、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテーム又はショ糖などの甘味料とともに処方されてもよく、及び粘滑剤、保存料、着香剤及び／又は着色料をも含んでもよい。
【００７３】
坐剤処方物は、活性成分を、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、かくして直腸で溶解して薬物を放出する、好適な非刺激性賦形剤と混合することによって調製され得る。好適な賦形剤としては、例えば、カカオバター及びポリオキシエチレングリコールが挙げられる。膣投与のために好適な処方物は、活性成分に加えて当該分野で適切であることが公知の担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡又はスプレー処方物として存在してもよい。
【００７４】
局所処方物、例えばクリーム剤、軟膏、ゲル剤及び水性又は油性の溶液又は懸濁液は、一般に、活性成分を、従来の局所的に許容できるビヒクル又は希釈剤と共に、当該分野で公知の従来手順を用いてしょほうすることによって、得られ得る。
【００７５】
経皮投与のための組成物は、当業者に周知の経皮皮膚パッチの形態であってもよい。
【００７６】
吹送による投与のための組成物は、例えば、３０μｍ又はそれよりずっと小さい平均径の粒子を含む、微粉末の形態であってもよく、粉末それ自体が、活性成分を単独で含むか、又は１種以上の生理学的に許容できる担体、例えばラクトースで希釈されている。次いで、吸入のための粉末は、ターボ吸入器、例えば公知の薬剤であるクロモグリク酸ナトリウムの吹送法のために使用される吸入器と一緒に使用するために、例えば、活性成分を１〜５０ｍｇ含むカプセル中に都合よく保持される。
【００７７】
吸入による投与のための組成物は、微粉固体を含むエアロゾル又は液滴のいずれかとして活性成分を投与するように構成された、従来の加圧エアロゾルの形態であってもよい。揮発性のフッ化炭化水素又は炭化水素などの従来のエアロゾル高圧ガスが使用されてもよく、エアロゾルデバイスは、測定された量の活性成分を投与するのに都合よく構成される。
【００７８】
適用のための医薬組成物（又は処方物）は、薬物の投与のために使用される方法に依存して、種々の方法で梱包されてもよい。例えば、配給のための物品は、適切な形態の医薬組成物が中に入れられている容器が挙げられ得る。好適な容器は、当業者に周知であり、例えば、瓶（プラスチック又はガラス）、サシェ、アンプル、プラスチックバッグ、金属筒などのような材料が挙げられる。容器はまた、包装の内容物への無分別な接近を防ぐための、不正開封防止機構を含んでもよい。加えて、容器は、その表面に、容器の内容物を記載するラベルを張り付けられている。ラベルはまた、適切な注意書きを含んでもよい。処方物はまた、単位用量容器又は多回用量容器、例えば、封入アンプル及びバイアル中に入っていてもよく、使用直前に注射のために、無菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とする、凍結乾燥の（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥の（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保存されてもよい。即時調製注射溶液及び懸濁液は、上記の種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好ましい単位投薬処方物は、本明細書中で上に挙げた通り、活性成分の、日用量を含むか又は単に部分日用量を含むものであり、又はその適切な画分を含む。
【００７９】
本開示の化合物はまた、上で規定した少なくとも１種の活性成分を、したがって、獣医学的担体とともに含む、獣医学組成物を提供してもよい。獣医学的担体は、組成物の投与のために有用な物質であり、それ以外の点では獣医学分野で不活性若しくは許容できる物質である、固体、液体又は気体の物質であってよく、活性成分と適合性である。これらの獣医学的組成物は、非経口、経口又は任意の他の所望の経路で投与され得る。
【００８０】
１種以上の賦形剤と組み合わせて単回投薬形態を生じる本開示の化合物の量は、必然的に、治療される患者、障害又は状態の重症度、投与の頻度、化合物の性質及び臨床医の指示に依存して変動する。本発明の化合物又は化合物の混合物の投与は、いくつかの実施形態において、一日に、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約６０ｍｇ／ｋｇ体重の間である。別の実施形態において、投与は、一日に０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約４０ｍｇ／ｋｇ体重の間の量である。いくつかの場合、上述の範囲の下限値を下回る投薬レベルが、適切量よりも多い場合があり、他方で、他の場合では、なおより多くの用量が、何ら有害な副作用を起こさずに使用される場合があるが、但し、このようなより多くの用量は、一日を通した投与のために、いくつかの小用量に最初に分割される。
【００８１】
別の局面において、本明細書中で記載の治療のために有用な物質を含む製品又はキットが、提供される。１つの実施形態において、キットは、本開示の化合物を含む容器を含む。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの、種々の材料から形成され得る。この容器は、治療のために有効な本発明の化合物又は処方物を保持し得、そして無菌のアクセスポートを有し得る。キットは、容器上に、又は容器と共に、ラベル又は包装封入物をさらに含む。包装封入物は、治療薬製品の市販の包装内に慣例上含まれる指示、例えば、このような治療薬製品の仕様を考慮した、指示、用途、投薬量、投与、禁忌、及び／又は注意書きについての情報を、含み得る。
【００８２】
キットは、本開示の組成物及び第２の医薬製剤を含み得る。キットはまた、分割瓶又は分割ホイルパックなどの別個の組成物を含むための容器を含んでもよいが、別個の組成物はまた、１つの、分割されない容器内に含まれてもよい。キットは、別個の構成成分の投与のための手引きを含み得る。キット形態は、好ましくは、別個の構成成分が別個の投薬形態で投与される（例えば、経口及び非経口）か、異なる投薬間隔で投与されるか、又はこの組み合わせにおける個々の構成要素に対しての用量設定が臨床医によって望まれる場合、特に有益である。
【００８３】
以下の実施例は、本発明の実施形態を説明するが、本発明の範囲を限定すると見なされるべきではない。
【実施例】
【００８４】
＜実施例１＞
多くの低分子を、ＰＣ４タンパク質と共にインキュベートし、ＤＮＡ結合を評価した。３１（ＡＧ−１０３１）と同定した低分子のみが、ＰＣ４−ＤＮＡ結合に対して有意な干渉を示した（図５を参照されたい）。
【００８５】
＜実施例２＞
ラット神経膠芽腫細胞株Ｃ６（Ａ）及びヒト非小細胞肺がん細胞株Ｈ８４１（Ｂ）を、適切な培地で増殖させ、異なる濃度の薬物候補ＡＧ−１０３１（Ｐ）及びＡＧ−１５０３（＃３）で処理した。細胞増殖速度を、本発明の選択した低分子の濃度（μＭ）と比較した生細胞の数に基づいて計算した（図６Ａ及び６Ｂを参照されたい）。
【００８６】
＜実施例３＞
ＳＨＯマウスへのＡ５４９接種後に、マウスを、ＩＰ注射を介してＡＧ−１０３１（２０−４０μｇ／マウス）で１日おきに処理して、２８日間フォローした。結果を図７に示す。
【００８７】
＜実施例４＞
腫瘍容積を、ＮＳＣＬＣ細胞をＡＧ−１０３１により処理する間、２８日間にわたって測定した。この結果は、ＡＧ−１０３１が、ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞の増殖を阻害することを示す（図８を参照されたい）。
【００８８】
＜実施例５＞
腫瘍細胞を注射する２週間前に、ＡＧ−１０３１をマウスに注射した（図９を参照されたい）。対照群と比較して、ＡＧ−１０３１処理群の腫瘍容積は、３０２．９ｍｍ３から６９．０ｍｍ３に縮小した。このことは、ＡＧ−１０３１がインビボでＮＳＣＬＣ形成を防ぐことを実証する（図１０をされたい）。
【００８９】
＜実施例６＞
腫瘍容積を、異種移植マウスへのＡＧ−１０３１の投与後３５日間にわたって測定した。図１１Ａ及び１１Ｂに示されるように、ＡＧ−１０３１は、処理マウスにおいて実質的に腫瘍容積を縮小する。
【００９０】
＜実施例７＞
図１２は、ＡＧ−１０３１ワクチン接種したマウスにおける実際の腫瘍サイズを、未処理対照群と比較して測定チャートとして示す。
【００９１】
＜実施例８＞
ＳＨＯマウスに、ＡＧ−１０３１  ４０μｇ／マウスで週１回（×２）のＩＰ注射を行い、及びその後に、Ａ５４９細胞を接種した。Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍増殖に対するＡＧ−１０３１効果を評価。結果を、図１３に示す。
【００９２】
＜実施例９＞
オープンフィールド研究は、ＡＧ−１５０３で処理されている、グリア細胞腫を有するラットの不安及び活動の改善を示す（図１４Ａ及び１４Ｂを参照されたい）。
【００９３】
＜実施例１０＞
ＡＧ−１０３１及びＡＧ−１５０３の両方が、新規の物体認識に対する改善された能力において効果を示した（図１５を参照されたい）。
【００９４】
＜実施例１１＞
電気生理学試験は、研究及び記憶能力の改善を示す（図１６Ａ及び１６Ｂを参照されたい）。
【００９５】
＜実施例１２＞
（Ａ）腫瘍組織及び（Ｂ）カバ組織における、アポトーシス関連タンパク質のウェスタンブロット（図１７Ａ及び１７Ｂを参照されたい）。
【００９６】
＜実施例１３＞
新規な化合物のスクリーニングにより、ＡＧ−１６０１がＮＳＣＬＣ−Ａ５４９細胞及びＮＳＣＬＣ−１４２９９細胞上にて同定された（図１８Ａ及び１８Ｂを参照されたい）。
【００９７】
＜実施例１４＞
新規な化合物のスクリーニングにより、ＡＧ−１６０１及びＡＧ−１６１０（ＡＧ−１６０１の活性の低いバリアントとして）が、ＮＳＣＬＣ−Ｈ８４１細胞（図１９Ａ）及びグリア細胞腫Ｃ６細胞（図１９Ｂ）上にて同定された。
【００９８】
＜実施例１５＞
ＡＧ−１６０１は、低分子であり、これをＤＭＳＯ中に５ｍｇ／ｍｌにて溶解し、４℃にて保存し、使用前に１ｍｇ／ｍＬの最終濃度までＰＢＳで希釈した。塩基性のＴＥＶＰ緩衝液は、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ  ＮａＦ−５０、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  ベンゾアミジン、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、２μｇ／ｍｌ  ロイペプチン及びペプスタチンを２μｇ／ｍｌにて含んでいた。
【００９９】
成体の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（重量２００〜２５０ｇ）が、ｔｈｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｍｉｌｉｔａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ  Ｌｉｂｅｒａｔｉｏｎ  Ａｒｍｙより提供された。ラットを、ｔｈｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｎａｎｋａｉ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙにおいて、制御条件下（２５±２℃；１２ｈ明／暗周期）で収容し、餌及び水を自由に摂取可能にし、実験の前１週間順応させた。全ての実験手順は、「Ｎａｎｋａｉ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ」の認可を受け、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈにより出版されたｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓのガイドラインに沿って、実験のための動物の数及び苦痛を最小限にする努力をもって行った。
【０１００】
Ａβ１−４２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）を再蒸留水中に５μｇ／μｌの濃度で溶解し、手術前の１週間３７℃でインキュベートした。ラットを、偽（ｎ＝８）、偽＋  ＡＧ−１６０１（ｎ＝８）、Ａβ１−４２（ｎ＝８）及びＡβ１−４２＋ＡＧ−１６０１（ｎ＝８）の４つの群に無作為に分けた。アルツハイマー病ラットモデルを、Ａβ１−４２塊の側脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）注射によって確立した。動物を、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によって麻酔し、脳定位固定装置に置いた（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ、Ｊａｐａｎ）。ラットの頭皮を開き、頭蓋骨の両側に２つの小さな穴を、以下の位置においてドリルで開けた：ブレグマの０．８ｍｍ後方、矢状縫合の±１．４ｍｍ側方、脳表面の４．０ｍｍ下方。Ａβ１−４２（片側につき２．０μｌ）を、マイクロシリンジを介して、側脳室の両側に注射した。注射の５分間後に針を抜き、塊が完全に注入されたことを確認した。偽群のラットには、Ａβ１−４２の代わりに同量の再蒸留水を注射して、同様の手術を行った。手術後、全てのラットに対し、ペニシリン（１００、０００Ｕ）を後肢筋に注射して、感染症を予防した。手術後回復のための１週間の後に、１４日間毎日、偽＋ＡＧ−１６０１及びＡβ１−４２＋ＡＧ−１６０１群の動物に、ＡＧ−１６０１（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内注射を与え、他の群には同容量のビヒクルをあてがった。
【０１０１】
オープンフィールド試験を実施し、運動量及び探索行動を評価した。この試験を、わずかな改変を用いて、以前に説明されている通りに（Ｓｕｇｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．、２０１５）実施した。オープンフィールド試験は、環状装置からなる（直径８０ｃｍ、高さ３０ｃｍ）。環状装置を、中央領域（装置の中心部である、直径３０ｃｍ）及び同心外環領域に分けた。ラットを、装置の外環に別個に配置し、５分間自由に探索させた。各ラットの歩いた道のりを、カメラ駆動追跡システムによって追跡した（Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎ２．０、Ｎｏｌｄｕｓ、Ｗａｇｅｎｉｇｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）。中央領域への侵入回数、全移動距離及び試験の間の移動速度を、分析した。
【０１０２】
動物の短間及び長期記憶機能を、オープンフィールド試験の後に実施したＮＯＲ試験を用いて評価した。実験を、以前に記載された通り（Ｓｕｇｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．、２０１５）、オープンフィールド試験で用いたのと同じ装置で実施した。この試験は、４つの異なる段階を含む：慣らし段階、訓練段階、短期記憶試験段階及び長期記憶試験段階。したがって、オープンフィールド試験を、本研究における慣らしの段階として用いた。オープンフィールド探索の２４時間後、２つの同一のプラスチックボトル（物体Ａ１及びＡ２）をオープンフィールドの径上に配置した。物体の間隔を、互い及び壁から等距離に置いた。訓練段階において、５分間にわたりラットに装置の中を自由に探索させた。１時間後、短期記憶試験を開始した。ラットは、見慣れた物体のうちの１つが新規な物体Ｂ（三角柱）と置き換わっている場を、５分間探索した。認識指数を、ＴＢ／（ＴＡ＋ＴＢ）（ＴＡ：見慣れた物体Ａを探すのに費やした時間；ＴＢ：新規な物体Ｂを探すのに費やした時間Ｂ）のパーセンテージにより計算した。長期記憶試験を、訓練の２４時間後に行い、ラットに、物体Ａ及び第３の物体Ｃ（金属管）の存在する場を、５分間探索させて、短期記憶試験と同様に認識指数を評価した。訓練段階におけるの５０％の認識指数は、チャンスレベルを表し、試験段階における高い試験認識指数は、好ましい物体の認識記憶を反映する。この実験に使用した全ての物体は、ラットが動かすには重すぎ、各試験の間には７０％エタノール溶液で洗浄された。動物の行動を、ビデオカメラで捕捉した。
【０１０３】
ラットを、３０％ウレタン（０．４ｇ／ｋｇ  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）の腹腔内注射後に脳定位固定装置に配置した。我々の以前のプロトコール（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．、２０１５）に従い、頭皮に適切に切開し、頭蓋を露出して、小さな穴をドリルで開けた。両極性刺激電極を、Ｓｃｈａｆｆｅｒ側枝に配置し（ブレグマの後方４．２ｍｍ、３．８ｍｍｌ側方、硬膜の２〜３．５ｍｍ下）、単極記録電極を、同側のＣＡ１領域に埋植した（ブレグマの３．５ｍｍ後方、２．５ｍｍ側方、硬膜の１．５〜２ｍｍ下）。両電極の深さを最適化して、適切な振幅の誘発電位を得た。その後、一種の単回刺激強度を、０．１ｍＡから１ｍＡに段階的に増大して、最大の興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）勾配を決定し、最大ｆＥＰＳＰ勾配の７０％を誘発した刺激強度を、シータバースト刺激（ＴＢＳ）前後の誘発ｆＥＰＳＰとして選択した。試験刺激を３０秒ごとに与え、ベースラインとして２０分間にわたって記録した。次いで、ＬＴＰを、ＴＢＳ（２００Ｈｚにて１２回のパルスの３０連）によって誘発し、６０秒ごとに６０分間にわたり記録した。その後、低頻度刺激（ＬＦＳ、１５分間にわたって１Ｈｚ）を行って、脱増強（ＤＥＰ）を誘発し、同じ単回パルス記録を、６０秒ごとに６０分間にわたり続けた。ＬＴＰの最後の２０分間に対するｆＥＰＳＰ勾配を平均化し、ＤＥＰのベースラインとして表した。
【０１０４】
以前に記載されたプロトコールに従い、Ｇｏｌｇｉ−Ｃｏｘ染色法を使用し、本研究のＣＡ１錐体細胞の尖端樹状突起棘の密度を決定するために使用した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１６）。簡潔にいうと、新鮮な脳組織サンプル（各群ｎ＝３）を麻酔したラットから摘出し、完全な海馬を含む冠状ブロックに切断した。次いで、組織を、Ｇｏｌｇｉ−Ｃｏｘ溶液中（５％重クロム酸カリウム、５％クロム酸カリウム、及び塩化水銀の５％溶液）に直ちに入れて、室温で維持し、光を１４日間遠ざけた。Ｇｏｌｇｉ−Ｃｏｘ溶液を、その間、４８時間ごとに３回交換した。その後、脳組織を、ビブラトーム（Ｌｅｉｃａ−ＶＴ１０００Ｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で切り出した。切片（１５０μｍ厚）を、２０分間にわたり、６％炭酸水素ナトリウム溶液に移した。その後、これを蒸留水で洗浄し、アルコールの連続希釈で脱水し（７０％、９０％、１００％）、最終的に、キシレン溶液で２０分間にわたり維持した。最後に、切片を、樹脂媒体を用いてカバーガラスで覆った。スライドを、室温で乾燥させ、その後、顕微鏡下（１００倍）で観察して、細胞形態学部分析を行った。動物１匹につき、海馬のＣＡ１領域における６本のニューロンを、分析した。１０μｍの樹状細胞長あたり平均的な樹状棘密度を、各動物について計算した。
【０１０５】
各群につき３匹のラットを、無作為に選択して屠殺し、そしてその海馬組織を、０℃で直ちに摘出し、マイナス８０℃で保存した。細胞内分画のために、１００〜２００ｍｇの重さのラット海馬組織を使用した。この手順は、記載されている（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１７）。この組織を、３２０ｍＭショ糖を含む５００μｌのＴＥＶＰ緩衝液中で３０秒間にわたってホモジナイズし、ホモジネートを得た。ホモジネート（Ｈ）を、９００×ｇで１０分間にわたり４℃にて遠心分離し、上清（Ｓ１）を２０分間にわたって１００００×ｇで４℃にて遠心分離して、細胞質／明膜画分（Ｓ２）及び粗シナプトソーム画分ペレット（Ｐ２）を得た。ペレットを、３５．６ｍＭショ糖溶液を含むＴＥＶＰ緩衝液中に再懸濁し、次いで、２５、０００×ｇにて２０分間４℃にて遠心分離した。上清をマイナス８０℃で保存し、シナプス小胞画分（ＬＳ１）と呼んだ。ペレット、シナプス細胞膜（ＬＰ１）を、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含むＴＥＶＰ緩衝液中に再懸濁し、３３０、０００×ｇにて３０分間にわたり４℃にて遠心分離した。Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００可溶性画分（ＴＳＦ）と呼ばれる上清を、マイナス８０℃で保存した。最終ペレットは、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００不溶性画分（ＴＩＦ）であり、これを、１％  ＳＤＳ含有のＴＥＶＰ緩衝液中にホモジナイズした。
【０１０６】
各構成成分の濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈｉｎａ）によって測定した。構成成分を、最後に、４×ローディングバッファーで１００℃にて１５分間沸騰させ、ウェスタンブロットアッセイのためにマイナス８０℃で保存した。
【０１０７】
ホモジネート全体（Ｈ）及びシナプトソーム画分を、分析した。各サンプルから２０μｇの等量を、１０％又は１３％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを介して各サンプルから分離し、その後、ＰＶＤＦ膜上に移した（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）。膜を、５％無脂肪乾燥乳で、１時間室温でブロッキングし、次いで、一次抗体（抗シナプトフィジン、１：１０００、Ａｂｃａｍ；抗ＮＲ  ２Ａ、１：２０００、Ａｂｃａｍ；抗ＮＲ２Ｂ、１：２０００、Ａｂｃａｍ；抗ＰＳＤ−９５、１：２０００、Ａｂｃａｍ；抗ＣＲＥＢ、１：２０００、Ａｂｃａｍ；抗ＣＲＥＢリン酸化、１：２０００、Ａｂｃａｍ；抗ＳＩＲＴ１、１：２０００、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；抗β−アクチン、１：５０００、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）とともに、一晩４℃でインキュベートした。次いで、膜を、室温で１時間、ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体（Ｐｒｏｍｅｇａ）とともに、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳＴ緩衝液で洗浄後、シグナルをＨＲＰ基質（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）で可視化し、化学発光キットで検出した（Ｔａｎｏｎ  ５５００、Ｔａｎｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈｉｎａ）。タンパク質バンドのグレースケール値を、ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ  Ｊ  ｐｒｏｇｒａｍによって定量した。
【０１０８】
全てのデータを、平均±ＳＥＭ（標準誤差平均）として表した。統計学的分析を、ＳＰＳＳ  １９ソフトウェア（Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）によって処理した。ＬＳＤ事後検定を用いた一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、群の間でデータを比較するために適用した。統計学的有意性をＰ＜０．０５で示した。
【０１０９】
実施例１６
Ａβ１−４２誘発性認知障害に対するＡＧ−１０６１の効果を、決定した。ラットの運動量を、オープンフィールド試験の間に観察した。偽群と比較して、Ａβ１−４２群は、中央領域への侵入回数の有意な低下を示した（Ｐ＜０．０１）。中央領域への侵入回数は、Ａβ１−４２群と比較したＡβ１−４２＋ＡＧ−１０６１群（Ｐ＜０．０５）において、有意に増加した。この結果は、全移動距離及び移動速度において、これらの４つの群の間で有意差はなかったことを示した（Ｐ＝０．９５４、Ｐ＝０．１２７）。このことは、全てのラットが、運動欠損を示さなかったことを表す。
【０１１０】
ＮＯＲ試験は、新たな物体を探すげっ歯類の自発的な傾向に基づいている（Ｅｎｎａｃｅｕｒ  ａｎｄ  Ｄｅｌａｃｏｕｒ、１９８９）。短期及び長期の両方の記憶能力を、この試験によって検出した。訓練段階において、４群のラットは、２つの同一の物体を探索するために相当する時間を過ごしており、各群の認識指数は、約５０％であった（Ｐ＝０．８１）。短期記憶試験段階において、認識指数は、偽群において、約５０％であったチャンスレベルよりも有意に高かった。しかし、Ａβ１−４２群のラットは、短期記憶試験において、見慣れた物体と新規な物体「とを区別することができず、認識指数は、偽群よりも有意に低かった（Ｐ＜０．０１）。さらに、Ａβ１−４２＋ＡＧ−１０６１群は、Ａβ１−４２群と比較して、認識指数の有意な増大を示した（Ｐ＜０．０５）。長期記憶試験の結果は、同様の効果を示した（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）。ラットのＣＡ１領域における海馬シナプスの可塑性を評価し、Ａβ１−４２誘発性認知障害に対するＡＧ−１０６１の神経保護効果を説明した。２０分間のベースラインｆＥＰＳＰの安定的な記録後、ＴＢＳを、Ｓｃｈａｆｆｅｒ側枝に送達し、ＬＴＰを誘発した。ＣＡ１領域において増強されたｆＥＰＳＰを、６０分間にわたり連続的に記録した。次いで、ＬＦＳを、１５分間にわたって投与して、ＤＥＰを誘発した。ＬＴＰ及びＤＥＰの最後の２０分間のデータを、分析した。この結果は、ＬＴＰのｆＥＰＳＰ勾配が、偽群と比較して、Ａβ１−４２群において低下していることを示した（Ｐ＜０．００１）。しかし、抑制されたＬＴＰは、ＡＧ−１０６１によって有意に増強した（Ｐ＜０．０１）。また、ＤＥＰに対して、目に見える有意な効果があった。このデータは、Ａβ１−４２注射は、ＤＥＰのｆＥＰＳＰ勾配を有意に増大するが（Ｐ＜０．００１）、他方で、副作用は、ＡＧ−１０６１治療によって効果的に反転することを示した（Ｐ＜０．００１）。
【０１１１】
Ａβ１−４２誘発性のＬＴＰ及びＤＥＰの抑制に対する、ＡＧ−１０６１の効果を決定するために、海馬シナプスを分画し、次いで、ウェスタンブロットアッセイによって評価した。シナプス位置及びシナプス外位置を、ＮＲ２Ａ、ＮＲ２Ｂ、ＰＳＤ−９５及びＳＹＰによってプローブ検出した。ＳＹＰは、最終的にＴＳＦ画分において増えた。ＳＹＰとは対照的に、ＮＲ２Ａ、ＮＲ２Ｂ及びＰＳＤ−９５の発現は、シナプス後膜肥厚（ＰＳＤ）を含むＴＩＦ画分において増えた。Ａβ１−４２注射は、Ｈ画分（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）及び特にＴＩＦ画分（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０１）において、ＮＲ２Ａ、ＮＲ２Ｂ及びＰＳＤ−９５のレベルを低下させることが見いだされた。同時に、ＳＹＰの発現レベルは、ＴＳＦ画分において劇的に低下した（Ｐ＜０．０５）。しかし、ＮＲ２Ａ、ＮＲ２Ｂ及びＰＳＤ−９５レベルは、Ａβ１−４２＋ＡＧ−１０６１において、Ｈ画分（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）及びＴＩＦ画分において上昇した（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１）。加えて、ＴＳＦ画分におけるＳＹＰのレベルもまた、Ａβ１−４２群と比較して上昇した（Ｐ＜０．０５）。これらの知見は、ＡＧ−１０６１は、シナプスタンパク質の発現レベルを上方制御することにより、ＬＴＰ及びＤＥＰを反転する可能性が高いことを示す。
【０１１２】
海馬におけるシナプスの欠損は、ＡＤのひとつの主要な兆候である。これにより、海馬におけるＡβ１−４２誘発性のシナプス毒性（ｓｙｎａｐｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）に対してＡＧ−１０６１が保護するかどうかを決定した。海馬切片のＧｏｌｇｉ−Ｃｏｘ染色を行い、樹状細胞棘を可視化しそして定量した。Ａβ１−４２群のラットは、ＣＡ１領域における樹状細胞棘の密度において、偽群と比較して有意な低下を示した（Ｐ＜０．００１）。対照的に、樹状細胞棘欠損の顕著な反転が、Ａβ１−４２＋ＡＧ−１０６１群において観察された（Ｐ＜０．０１）。
【０１１３】
Ａβ１−４２誘発性認知障害のＡＧ−１０６１による予防を裏打ちする、考えられる分子メカニズムをさらに調査するために、ＳＩＲＴ１及びｐ−ＣＲＥＢ海馬のレベルを、決定した。偽群と比較して、ＳＩＲＴ１タンパク質レベルは、Ａβ１−４２群において有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、この減退は、ＡＧ−１０６１治療によって予防される（Ｐ＜０．０５）。ｐ−ＣＲＥＢのレベルもまた調べた。Ａβ１−４２群は、偽群と比較してｐ−ＣＲＥＢレベルにおける低下を示したが、他方で、ＡＧ−１０６１治療は、ｐ−ＣＲＥＢタンパク質の発現を有意に増大した（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）。
【０１１４】
ＡＤのラットモデルにおける、Ａβ１−４２誘発性認知障害に対するＡＧ−１０６１の効果及び考えられるメカニズムを、決定した。Ａβ１−４２注射は、ラットにおいて、学習及び記憶、並びに海馬シナプスの可塑性を損ない、ＡＧ−１０６１は、この障害を、Ａβ１−４２によって低下されるＳＩＲＴ１及びｐ−ＣＲＥＢのレベルを増大にさせるよって、この障害をレスキューすることが見いだされた。ＡＤ患者における認知の低下は、Ａβ１−４２の脳レベルの上昇と関連する。Ａβ１−４２の脳室内注射の後、げっ歯類は、いくつかの行動試験において、学習障害及び記憶障害を含む行動不能性を示した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１５）。現在の研究において、オープンフィールド試験及び新規物体認識試験を行い、Ａβ１−４２ラットにおける認知機能障害に対する、ＡＧ−１０６１の有益な効果を調べた。認知行動試験のほとんどは、一般的運動量に依存するため、オープンフィールド試験が実施された。この試験において、動物は、新たな環境にさらされた場合、自発的にな運動性及び探索行動を示した。結果は、Ａβ１−４２による探索行動不能性を、ＡＧ−１０６１が改善したことを示した。さらに、この試験における運動量は、いずれの群の間でも異ならなかった。Ａβ曝露されたラットは、海馬依存的学習及び記憶欠損を示していた。（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１６）。ＮＯＲ試験は、ＡＤラットモデルにおける認知欠損を研究するために、最も広範に使用されている試験の１つである。これらの結果は、ＮＯＲ試験性能において、Ａβ１−４２は、短期及び長期の学習不全及び記憶不全を起こしたが、ＡＧ−１０６１治療は、これらの認知の変更を劇的に反転し得ることが示された。さらに、認知欠損は、ラットの運動量の差異に寄与していなかった。シナプス可塑性は、学習及び記憶機能を支持するメカニズムであると考えられ得る。多くの証拠により、シナプス可塑性欠損が、一般に、ＡＤ患者及びＡＤモデル動物の脳にのみ見いだされることが示された。（Ｈｅｍａｒ  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅ、２０１１；Ｊｉ  ａｎｄ  Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ、２０１３）。海馬におけるシナプス可塑性の実験的形態であるＬＴＰは、学習及び記憶の細胞的メカニズムであると考えられる。ＬＴＰ後に誘発されたＤＥＰは、ＬＴＰプロセスにおいて増強されたシナプスの強度を反転する現象であり、海馬の新規な情報の保存に関与する（Ｑｉ  ｅｔ  ａｌ．、２０１３；Ｗａｇｎｅｒ  ａｎｄ  Ａｌｇｅｒ、２０１５）。この研究は、Ａβ１−４２が、海馬におけるＬＴＰ及びＤＥＰの両方を有意に損なうことを示し、これは、先行研究と一致する（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．、２０１４；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１６）。ＡＧ−１０６１は、ラットにおいてＡβ１−４２で誘発された、ＬＴＰ及びＤＥＰ損傷を改善した。
【０１１５】
多くの研究が、Ｎ−メチルＤ−アスパルテートレセプター（ＮＭＤＡＲ）に対する、Ａβの神経毒性効果に注目しているが、これは、ＮＭＤＡレセプター依存的可塑性が、シナプス記憶メカニズムの根底にある可能性が高い（Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．、２００１）。ＮＭＤＡＲは、興奮性シナプスのシナプス後膜にて、シナプス足場タンパク質、シナプス後肥厚部タンパク質９５（ＰＳＤ−９５）によって安定化する。精製された興奮性ＰＳＤをラット海馬から単離する、ための細胞内分画アプローチを用いて、ＮＲ２Ａ、ＮＲ２Ｂ及びＰＳＤ−９５のレベルが、全ホモジネート（Ｈ）及びＴＩＦ画分中において、Ａβ１−４２によって低下し、これは、シナプス可塑性に対する明らかな阻害効果をもたらし得ることが見出された。シナプス小胞膜上にあるシナプトフィジン（ＳＹＰ）は、神経伝達物質の放出に関連する（Ｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００３）。この研究における、Ａβ１−４２ラットのＨ及びＴＳＦ中における低下したＳＹＰは、先行研究と一致する（Ｇｈｕｍａｔｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．、２０１８）。にもかかわらず、前及び後シナプスタンパク質の低下したレベルは、ＡＧ−１０６１によって上昇する。結果として、ＡＧ−１０６１は、これらのシナプスタンパク質を上方制御し、学習及び記憶に寄与するＬＴＰ及びＤＥＰを増大すると結論づけられた。加えて、シナプス欠損は、ＡＤの海馬における神経生理学的兆候であり、学習及び記憶欠損の基礎となり得る（Ｓｃｈｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．、２００６）。Ａβの堆積は、シナプスシグナル伝達経路を妨害し、樹状細胞棘を破壊することによって、認知欠損をもたらす（Ｐｏｚｕｅｔａ  ｅｔ  ａｌ．、２０１３）。証拠はまた、シナプスの形態及び機能の保護が、ＡＤの動物モデルにおいて観察された認知障害を改善できることをも示す（Ｍｃｃｌｅａｎ  ａｎｄ  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ、２０１４；Ｗｅｉ  ｅｔ  ａｌ．、２０１５）。この研究において、樹状細胞棘の密度は、Ａβ誘発性ラットにおいて有意に低下した；しかし、この欠損は、ＡＧ−１０６１治療によって減弱され、これは、シナプス可塑性及び認知障害の改善を支援した。さらに、ＳＹＰ及びＰＳＤ−９５の増強したレベルは、それぞれ、前及び後シナプスのマーカーであり、これもまた、ＡＧ−１０６１がＡβ１−４２誘発性シナプス欠損を改善したことを示した。ＳＩＲＴ１及びＣＲＥＢの発現は、認知機能を制御することが、さらに評価された。Ａβ１−４２は、海馬においてＳＩＲＴ１発現レベルを低下させ、他方で、ＡＧ−１０６１治療は、この抑制効果を反転することが見いだされた。ＳＩＲＴ１は、ＡＤにおける学習及び記憶機能の調節において、正の効果を有する。Ｊｕｌｉｅｎらは、ＡＤ患者の脳における海馬ＣＡ１及びＣＡ３領域において観察された、ＳＩＲＴ１転写を低減する最初の直接的な証拠を提示した（Ｊｕｌｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００９）。さらに、類似の結果は、ＲＷａｎｇらによる研究においても観察され、この研究は、Ａβ１−４２が、脳において海馬ＳＩＲＴ１発現レベルを抑制し、ラットのシナプス可塑性及び空間学習記憶不全をもたらしたことを示した（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１６）。その上さらに、レスベ���トロールからもたらされた、学習及び記憶形成並びにＬＴＰ誘発の増強効果は、ＳＩＲＴ１突然変異体マウスにおいて遮断された（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．、２０１３）。まとめると、これらの研究は、ＳＩＲＴ１と学習及び記憶機能との間に、明らかな正の関係性があることを示していた。結果は、ＡＧ−１０６１が、ＳＩＲＴ１の低下を防ぎ、Ａβ１−４２によって誘発されたシナプス可塑性及び認知欠損を、緩和することを示した。近年の研究は、証明している。ＳＩＲＴ１が、転写レギュレーター並びに学習及び記憶のメディエーターであるＣＲＥＢの翻訳後修飾を制御し、シナプス可塑性及び認知機能を維持することを実証している（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．、２０１０；Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．、２０１３；Ｈｅｒｓｋｏｖｉｔｓ  ａｎｄ  Ｇｕａｒｅｎｔｅ、２０１４）。ＣＲＥＢ活性化が、培養した海馬ニューロンにおけるＡβの曝露において低下したことが、実証されている（Ｍａｔｓｕｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００６）。したがって、我々の研究においては、ＣＲＥＢ及びｐ−ＣＲＥＢの発現を、ラットの海馬において分析した。これらの結果は、Ａβ１−４２が、ＣＲＥＢ及びｐ−ＣＲＥＢの発現を阻害し、そしてＡＧ−１０６１処理が、その低下をレスキューしたことを示した。これえらの結果は、ＣＲＥＢ活性化の下方制御が、Ａβ１−４２毒性によるものであり、それにより、ラットのシナプス可塑性及び認知欠損が調整されることを示した。同時に、ＣＲＥＢ活性化の回復は、Ａβ１−４２によって誘発された損傷を予防する。結果はまた、ｐ−ＣＲＥＢの低下が、ＳＩＲＴ１の下方制御された発現を伴うという、先行研究に沿ったものであった。海馬において、ＳＩＲＴ１は、転写因子Ｙｉｎ  Ｙａｎｇ  １（ＹＹ１）と共同してマイクロＲＮＡ−１３４の発現を抑制し、それにより、ＣＲＥＢ及び脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の過剰発現、それによるシナプス可塑性及び記憶形成の調節をもたらした（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．、２０１０）。さらに、レスベラトロールによるＳＩＲＴ１及びｐ−ＣＲＥＢの上方制御レベルは、ＡＤラットにおいて、学習及び記憶機能を改善し得た（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、２０１６）。まとめると、ＡＧ−１０６１の神経保護効果は、ＳＩＲＴ１及びｐ−ＣＲＥＢの発現の上昇によるものであろう。
【０１１６】
これらの知見は、Ａβ１−４２が行動で見られる学習及び記憶を損ない、インビボで海馬ＣＡ１２領域におけるシナプス可塑性及び樹状細胞棘の密度を損なうことを示す。ＡＧ−１０６１は、Ａβ１−４２によって低下したＳＩＲＴ１及びｐ−ＣＲＥＢの発現レベルを上昇させることにより、欠損を反転させ、このことは、学習及び記憶並びにシナプス可塑性に対する、ＡＧ−１０６１の神経保護効果を明らかにし得る。
【０１１７】
＜実施例１７  ＡＧ−１６０１及びアルツハイマー病＞
ＡＧ１６０１は、Ａβ４２誘発性の認知損傷を改善する。ＡＧ−１６０１は、Ａβ４２誘発性ＡＤラットモデルにおいて、新規物体認識（ＮＯＲ）試験における認知損傷を有意に反転することが、決定されている（図２０Ａ〜Ｄを参照されたい）。実験の時間チャートを、図２０Ａに示す。動物の運動量を、オープンフィールド試験の間観察した。偽群と比較して、Ａβ４２群は、中央領域への侵入回数の有意な低下を示した（図２０Ｂ、Ｐ＜０．０１）。しかし、中央領域への侵入回数は、ＡＧ１６０１処理群において劇的に増加した（Ａβ４２＋ＡＧ１６０１、図２０Ｂ、Ｐ＜０．０５）。しかし、全移動距離及び移動速度の試験においては、有意な効果は観察されなかった。
【０１１８】
ＮＯＲ試験は、新規な物体を探索するげっ歯類の自発的傾向に基づく。短期記憶試験において、認識指数は、偽群において、５０％チャンスレベルよりも明らかに高かった。しかし、Ａβ４２群動物は、短期記憶試験において、見慣れた物体を新規な物体と区別することができず、偽群と比較して認識指数は有意に低下した（図２０Ｂ、Ｐ＜０．０１）。さらに、ＡＧ１６０１処理群は、Ａβ４２群と比較して、認識指数の有意な増大を示した（図２０Ｃ、Ｐ＜０．０５）。類似の効果が、長期記憶試験においても観察された（図２０Ｄ、Ｐ＜０．０５）。
【０１１９】
ＡＧ１６０１は、Ａβ４２で誘発された動物における、海馬の抑制されたＬＴＰ及びＤＥＰを反転する。図２１Ａに示すように、インビボ電気生理学を記録に使用して、この動物のＣＡ１領域における海馬シナプス可塑性を評価した。記録したデータの最後の２０分間に基づくと、ＬＴＰ（長期記憶増強）の興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）勾配は、偽群と比較して、Ａβ４２群において低下していた（ｐ＜０．００１）。しかし、抑制されたＬＴＰは、ＡＧ−１６０１によって有意に回復し（図２１Ｂ、ｐ＜０．０１）、他方で、Ａβ４２によってもたらされたＤＥＰ（脱増強）の上昇は、ＡＧ−１０６１処理によって有効に反転した（図２１Ｃ、ｐ＜０．００１）。
【０１２０】
ＡＧ１６０１は、Ａｂ４２誘発された動物における、海馬のシナプスタンパク質の発現を増強する。いかに、ＡＧ１６０１が、ＬＴＰ及びＤＥＰのＡβ４２誘発型抑制に影響を及ぼすのかを調査するために、海馬シナプス組織を分画し、ウェスタンブロットによって、ＰＳＤ−９５及びＳＹＰの発現を評価した（図２２Ａ〜Ｂ）。図２２Ａで示されるように、ＰＳＤ−９５タンパク質及びＳＹＰタンパク質の両方の発現は、Ａβ４２誘発された動物において劇的に阻害されたが（Ｐ＜０．０５、図２２Ｂ）、この効果は、ＡＧ１６０１処理群において克服された（ＰＳＤ−９５についてＰ＜０．０１及びＳＹＰについてＰ＜０．０１、図２２Ｂを参照されたい）。これらの結果は、シナプスタンパク質の上方制御に起因し得る、ＬＴＰ及びＤＥＰ反転の分子メカニズムを示す。
【０１２１】
ＡＧ１６０１は、ＳＩＲＴ１及びリン酸化ＣＲＥＢのレベルを上方制御する。ＳＩＲＴ１は、成人の脳内で広範に発現し、神経新生及び神経保護を含む多くの複合的生理学的プロセスに関与する。ＳＩＲＴ１は、シナプス可塑性及び認知機能に必須であることが報告されている。ＳＩＲＴ１の過剰発現は、ＡＤに対して保護することができた。ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質）は、周知の核転写因子であり、ＣＲＥＢリン酸化（ｐ−ＣＲＥＢ）は、シナプス可塑性に重要な役割を果たす。シナプス強化の現象である長期増強（ＬＴＰ）は、学習及び記憶の細胞性メカニズムであると考えられ、ＣＲＥＢノックアウトマウスは、ＬＴＰ及び長期記憶の両方において欠損を示し、他方で、ＬＴＰ及び記憶は、ＣＲＥＢの活性形態を発現することによって増強される。多くの研究が、ＡＤ患者の損傷した記憶機能は、ＣＲＥＢ活性化の低減と密接に関連していると報告してきた。
【０１２２】
ＡＧ−１６０１はまた、ＡＤラットモデルにおけるＣＡ１領域において樹状細胞棘の密度において、Ａβ１−４２誘発性であるＳＩＲＴ１及びＣＲＥＢの低減を防ぐことが可能である（図２３Ａ〜Ｄ）。ＳＴＲＴ１は、Ａβ１−４２群において有意に低下するが、この低下は、ＡＧ−１６０１処理によって妨げられる（図２３Ａ及び４Ｂ）；ｐ−ＣＲＥＢ発現もまた、ＡＧ−１６０１処理において、Ａβ１−４２と比較して有意に増加する（図２３Ｃ及びＤ）。
【０１２３】
＜実施例１８  細胞培養及び細胞増殖アッセイ＞
Ｕ２５１、ＳＦ５３９、ＳＦ２９５のヒトグリア細胞腫細胞株を、ＮＣＩ／ＤＴＰから得、及びＵ８７をＡＴＣＣから得た。Ｕ２５１、ＳＦ５３９、及びＳＦ２９５細胞を、ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）培地中で増殖させ；Ｕ８７細胞を、ＥＭＥＭ培地（ＡＴＣＣ）中で増殖させ、１０％  ＦＢＳ及び１００単位／ｍｌのペニシリンーストレプトマイシンを含む全ての細胞培養培地、並びに細胞を、３７℃／５％ＣＯ２湿潤フードにてインキュベートした。化学化合物処理の１日前に、４種の細胞Ｕ２５１、ＳＦ５３９、ＳＦ２９５、及びＵ８７を、９６ウェルプレート上に１０、０００細胞／ウェル（１００μｌ）に３連で蒔いた。培養培地を除去し、細胞を一連の異なる濃度のＡＧ１６０１（対応する新鮮な培地中）で処理した。３７℃／５％ＣＯ２にて４８時間のさらなるインキュベーションの後、細胞増殖アッセイを、細胞計数キット−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃ＣＫ０４）を用いて実施し、１００μｌの新鮮培地で置き換えた後、１０μｌの試薬を各ウェルに加えて、ウェルを混ぜ、さらに２〜３時間、３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートし、９６ウェルプレートリーダーによりＯＤ４５０ｎＭの波長で読み取って（Ｖｉｃｔｏｒ  ２、１４２０Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  ｃｏｕｎｔｅｒ）、データ分析をＥｘｃｅｌで行い、相対平均ＯＤ４５０ｎＭ＋／−平均の標準誤差で得た。
【０１２４】
＜実施例１９  ＧＢＭ異種移植マウスモデル確立及びインビボ効力研究＞
雌ＳＨＯマウス（Ｃｒｌ：ＳＨＯ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＨｒｈｒ／６〜８週齢）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから購入した。ヒト神経膠芽腫細胞株ＳＦ２９５細胞を、８週齢雌ＳＨＯマウスの右側に皮下注射し（３×１０６／マウス１匹）、接種後約一週間で腫瘍が出現した（７日目）。腫瘍サイズが１００ｍｍ３の容積に達成したら、全部で１２匹のマウスを、無作為に２群（処理＆ビヒクル）に分けた。１．５μｇ／μｌのＡＧ−１６０１（計１５０μｇ／マウス１匹あたり）を１００μｌ、ＩＰを介して処理群の各マウスに一日おきに計２８日間にわたって注射して、同容量のＨ２Ｏをビヒクル群のマウスに注射した。腫瘍サイズ測定値を、デジタルノギスを用いて評価し、腫瘍サイズを、以下の式を用いて計算した［ｍｍ３＝（（Ｌ＋Ｗ）／４）Ｘ（（Ｌ＋Ｗ）／４）Ｘ（（Ｌ＋Ｗ）／４）Ｘ４／３Ｘ３．１４１５９］。データを、相対平均腫瘍容積＋／−平均の標準誤差でプラット（ｐｌａｔｔｅｄ）した。
【０１２５】
＜実施例２０＞
細胞を、示した含量のＡＧ−１６０１で４８時間にわたって処理して、その後、細胞生存アッセイを実施した。ラット細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（図２４Ａ及びＢを参照されたい）、ヒトグリア細胞腫細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（図２５Ａ及び２５Ｂを参照されたい）、Ｃ６及びＵ２５１細胞におけるＡＧ−１６０１の異なるバッチ（図２６Ａ及び２６Ｂを参照されたい）、Ｃ６及びＵ８７細胞におけるＡＧ−１６０１の効力（図２７Ａ及び２７Ｂを参照されたい）、Ｕ２５１細胞におけるＡＧ−１６０１、ＴＭＺ、及びカルムスチンの効力（図２８Ａ及び２８Ｂを参照されたい）、並びにＵ８７細胞におけるＡＧ−１６０１、ＴＭＺ、及びカルムスチンの効力（図２９Ａ及び２９Ｂを参照されたい）。ＡＧ１６０１は、インビトロのグリア細胞腫細胞において、ＴＭＺ及びカルムスチンよりも良好な効力を示した。細胞生存率を、Ｔ９８Ｇ細胞及びＵ２５１細胞において、ＤＭＳＯ、ＴＭＺ、ＡＧ−１６０１及びＴＭＺ＋ＡＧ−１６０１での処理後に決定した（図３０）。
【０１２６】
測定した通り、ＡＧ−１６０１は、Ｕ２５１細胞（図３１Ａ及び３１Ｂを参照されたい）、並びにＵ８７細胞（図３２Ａ及び３２Ｂを参照されたい）におけるＴＭＺの効果を増強する。
【０１２７】
＜実施例２１＞
ＡＧ１６０１は、ＳＦ２９５異種移植腫瘍マウスモデルに対する効力を示す（図３３Ａ〜Ｄを参照されたい）。
【０１２８】
＜実施例２２＞
ＡＧ１６０１は、Ｃ６異種移植腫瘍ラットモデルに対する効力を示した（図３４Ａ（処理）及び図３４Ｂ（対照）を参照されたい）。
【０１２９】
＜実施例２３＞
ＳＤ雄ラット（ｒａｔｅ）を、ＤＭＥＭ培地１０μｌ中（偽及び小＋ＡＧ−１６０１）、及びＣ６細胞を１０μｌ中１×１０６（グリア細胞腫及びグリア細胞腫＋ＡＧ−１６０１）で、頭蓋内注射した。マウスグリア細胞腫細胞株の種類であるＣ６細胞を、ラットの右線条体内に注射し、グリア細胞腫形成を誘発した。Ｃ６細胞を、１０％  ＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で培養した。Ｃ６細胞を、ＤＭＥＭ中に懸濁し、ラットに移植した。１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを注射したラットを、偽として群にした。腫瘍形成を７日間続け、その後、１日に１回６日間、ＡＧ１６０１を静脈内注射した。物理的知見：２日目の体重；シナプス可塑性の効果；ＬＴＰ及びＣＡ３−ＣＡ１の電気生理学試験；研究のメカニズム（ＢＤＮＦ／ＴｒｋＢシグナル伝達経路）；ウェスタンブロット；シナプス可塑性：ＢＤＮＦ／ＴｒｋＢ／ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ＮＭＤＡ／ＰＳＤ９５／ＳＹＰ；腫瘍抑制：ＢＤＮＦ／ＴｒｋＢ／ＲＡＳ／ＥＲＫ／Ｂｃｌ−２／Ｂａｘ；組織学及び免疫組織化学分析；ＨＥ染色及び免疫組織化学染色；脳種類の性質決定（位置、大きさ及び領域）を含めた。
【０１３０】
偽群及び偽＋ＡＧ１６０１群における体重は、有意な相違なしで２週間増加した。Ｇｌｏｍａ及びグリア細胞腫＋ＡＧ１６０１群における体重は、２週間の間に減少し、これらの間に有意差が認められた（図３５、３６、３７、３８Ａ、３８Ｂ、及び３９を参照されたい）。図３３〜３５に示した番号１６０４〜１６１５は、動物番号である。
【０１３１】
グリア細胞腫及びグリア細胞腫＋ＡＧ１６０１群における腫瘍を、脳から除去し、計量した。グリア細胞腫群と比較して、グリア細胞腫＋ＡＧ１６０１群において、容量及び重量が相応して減少した。これらの結果は、ＡＧ１６０１が、グリア細胞腫増殖を抑制し得たことを示す。
【０１３２】
ＡＧ１６０１で処理したグリア細胞腫群におけるラットの生存時間は、処理なしのグリア細胞腫群における時間よりも長かった。
【０１３３】
偽及び偽＋ＡＧ１６０１群における体重は、有意な相違なしで２週間増加した。Ｇｌｏｍａ及びグリア細胞腫＋ＡＧ１６０１群における体重は、２週間の間に減少し、これらの間に有意差が認められた。グリア細胞腫及びグリア細胞腫＋ＡＧ１６０１群における腫瘍を、脳から除去し、計量した。グリア細胞腫群と比較して、グリア細胞腫＋ＡＧ１６０１群において、容量及び重量が相応して減少したことを示した。これらの結果は、ＡＧ１６０１が、グリア細胞腫増殖を抑制し得たことを示す。ＡＧ１６０１で処理したラットの生存時間は、処理なしの時間よりも長かった。
【０１３４】
本発明の他の実施形態及び使用は、明細書および本明細書中に開示される本発明の実施を考慮して、当業者に明らかである。本明細書中に挙げた全ての参考文献は、全ての刊行物、米国及び他国の特許及び特許出願を含めて、具体的かつ完全に参考として組み込まれる。使用された場合、用語含むは、からなる及びから本質的になるを含むことが意図される。さらに、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、及び含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）は、限定を意図しない。明細書及び実施例は、例示のみと考えられるよう意図しており、本発明の真の範囲及び本旨は、以下の特許請求の範囲に示される。
【図１】
2021529782.tif 000003
【図２】
2021529782.tif 000004
【図３】
2021529782.tif 000005
【図４】
2021529782.tif 000006
【図５】
2021529782.tif 000007
【図６Ａ】
2021529782.tif 000008
【図６Ｂ】
2021529782.tif 000009
【図７】
2021529782.tif 000010
【図８】
2021529782.tif 000011
【図９】
2021529782.tif 000012
【図１０】
2021529782.tif 000013
【図１１Ａ】
2021529782.tif 000014
【図１１Ｂ】
2021529782.tif 000015
【図１２】
2021529782.tif 000016
【図１３】
2021529782.tif 000017
【図１４Ａ】
2021529782.tif 000018
【図１４Ｂ】
2021529782.tif 000019
【図１５】
2021529782.tif 000020
【図１６Ａ】
2021529782.tif 000021
【図１６Ｂ】
2021529782.tif 000022
【図１７Ａ】
2021529782.tif 000023
【図１７Ｂ】
2021529782.tif 000024
【図１８Ａ】
2021529782.tif 000025
【図１８Ｂ】
2021529782.tif 000026
【図１９Ａ】
2021529782.tif 000027
【図１９Ｂ】
2021529782.tif 000028
【図２０Ａ】
2021529782.tif 000029
【図２０Ｂ】
2021529782.tif 000030
【図２０Ｃ】
2021529782.tif 000031
【図２０Ｄ】
2021529782.tif 000032
【図２１Ａ】
2021529782.tif 000033
【図２１Ｂ】
2021529782.tif 000034
【図２１Ｃ】
2021529782.tif 000035
【図２２Ａ】
2021529782.tif 000036
【図２２Ｂ】
2021529782.tif 000037
【図２３Ａ】
2021529782.tif 000038
【図２３Ｂ】
2021529782.tif 000039
【図２３Ｃ】
2021529782.tif 000040
【図２３Ｄ】
2021529782.tif 000041
【図２４Ａ】
2021529782.tif 000042
【図２４Ｂ】
2021529782.tif 000043
【図２５Ａ】
2021529782.tif 000044
【図２５Ｂ】
2021529782.tif 000045
【図２６Ａ】
2021529782.tif 000046
【図２６Ｂ】
2021529782.tif 000047
【図２７Ａ】
2021529782.tif 000048
【図２７Ｂ】
2021529782.tif 000049
【図２８Ａ】
2021529782.tif 000050
【図２８Ｂ】
2021529782.tif 000051
【図２９Ａ】
2021529782.tif 000052
【図２９Ｂ】
2021529782.tif 000053
【図３０】
2021529782.tif 000054
【図３１Ａ】
2021529782.tif 000055
【図３１Ｂ】
2021529782.tif 000056
【図３２Ａ】
2021529782.tif 000057
【図３２Ｂ】
2021529782.tif 000058
【図３３Ａ】
2021529782.tif 000059
【図３３Ｂ】
2021529782.tif 000060
【図３３Ｃ】
2021529782.tif 000061
【図３３Ｄ】
2021529782.tif 000062
【図３４Ａ】
2021529782.tif 000063
【図３４Ｂ】
2021529782.tif 000064
【図３５】
2021529782.tif 000065
【図３６】
2021529782.tif 000066
【図３７】
2021529782.tif 000067
【図３８Ａ】
2021529782.tif 000068
【図３８Ｂ】
2021529782.tif 000069
【図３９】
2021529782.tif 000070
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月22日(2021.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2021529782.tif 000071

で表される、３−（３，７，１２，１７−テトラメチル−１８−｛３−オキソ−３−［（３−フェニルプロピル）アミノ］プロピル）−８，１３−ジビニルポルフィリン−２−イル｝プロパン酸のＬ及び／又はＳアイソフォームを含む化合物。
【請求項２】
Ｌ対Ｓアイソマー比又はＳ対Ｌアイソマー比が、およそ１：１、１：２以上；１：５以上、１：１０以上、１：２０以上、１：５０以上、又は１：１００以上である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１又は２に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項４】
アジュバントをさらに含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記アジュバントは、アルミニウムを含まない、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記アジュバントは、アルミニウムを含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
水性又は凍結乾燥のものである、請求項３〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
障害を治療又は予防するための、有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項９】
前記有効量が、治療的に有効であるか又は予防的に有効である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記障害が、がん又は神経性障害である、請求項８又は９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記がんが、グリア細胞腫である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記神経性障害が、アルツハイマー病である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
静脈内投与されるか、筋肉内投与されるか、又は経口投与される、請求項８〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１又は２に記載の化合物を含む、ワクチン。
【請求項１５】
腫瘍形成を阻害するか、がん性細胞の増殖を阻害するか、転移性疾患を予防するか及び／又は神経変性を阻害するための、請求項１４に記載のワクチン。
【請求項１６】
神経性障害を治療又は予防するための、有効量の式：
【化２】
2021529782.tif 000072

で表される、９−メチル及び／又は１３−メチルトランス−（±）−１８−エテニル−４，４ａ−ジヒドロ−３，４−ビス（メトキシカルボニル）４ａ，８，１４，１９−テトラメチル−２３Ｈ，２５Ｈ−ベンゾ［ｂ］ポルフィン−９，１３−ジプロパノエートのＬ及び／又はＳアイソフォームの化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
Ｌ対Ｓアイソマー比又はＳ対Ｌアイソマー比が、およそ１：１、１：２以上；１：５以上、１：１０以上、１：２０以上、１：５０以上、又は１：１００以上である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記神経性障害が、アルツハイマー病である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
静脈内投与されるか、筋肉内投与されるか、又は経口投与される、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記有効量が、治療的に有効であるか又は予防的に有効である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
アジュバントをさらに含む、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記アジュバントが、アルミニウムを含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記アジュバントが、アルミニウムを含まない、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
式：
【化３】
2021529782.tif 000073

で表される、３−（３，７，１２，１７−テトラメチル−１８−｛３−オキソ−３−［（３−フェニルプロピル）アミノ］プロピル）−８，１３−ジビニルポルフィリン−２−イル｝プロパン酸のＬ及び／又はＳアイソフォームの化合物をさらに含む、請求項１６〜２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2021529782.tif 000074
2021529782.tif 000075
2021529782.tif 000076