(57)【要約】本発明は、Ｚ-アミノクロチル-グリシンエステルの不斉クライゼン転位、およびその後の、アシラーゼによる生成物ジアステレオマー混合物の動力学的分割、および引き続く、得られた２-アミノ-３-メチルペンタ−４-エン酸誘導体のシャープレス  ジヒドロキシル化の工程を含む、４，５-ジヒドロキシイソロイシン誘導体の調製方法に関する（図１）。
2021519818.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノペンタ−４−エン酸（３０）の製造方法であって、
2021519818.tif 000072
ここで、
前記方法は、以下を含む。
a)キラルリガンドの存在下に、Ｚ−クロチル−グリシンエステル誘導体２００を反応させ、２−アミノペンタ−４−エン酸誘導体（３００）を得る、クライゼン転位の工程；
2021519818.tif 000073
（式中、Ｒ2Aは、クライゼン転位に有利な条件下で安定な、アミノ保護基である。）
2021519818.tif 000074
および、
ｂ）２−アミノペンタ−４−エン酸誘導体（３１０）を変換して、（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノペンタ−４−エン酸（３０）を得る、酵素分割工程。
2021519818.tif 000075
【請求項２】
前記キラルリガンドが、エフェドリン、バリノール、シンコニジン、キニジンおよびシンコニンから選択され、特にキラルリガンドが、キニジンであり、特に前記キラルリガンドが、化合物２００に対して、２〜３モル当量で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
クライゼン転位工程が、非極性有機溶媒に可溶性の強力な非求核塩基の存在下で（特にリチウムもしくはカリウムアルキルアミドまたはリチウムもしくはカリウムシリルアルキルアミド、より好ましくはＬＤＡ、ＬｉＴＭＰおよびＬｉＨＭＤＳから選択される塩基、さらにより好ましくはＬｉＨＭＤＳの存在下で）進行する、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ2Aおよび／またはＲ2Bが、ＣＨxＦ3-x（ＣＨyＦ2-y）nＣＯ−であって、ｎが０または１であり、ｘが０、１、２および３から選択され、ｙが０、１および２から選択され、特にＲ2Aおよび／またはＲ2BがＣＦ3ＣＯ−、ＣＨＦ2ＣＯ−、ＣＨ2ＦＣＯ−、ＣＦ3ＣＯ−およびＣＦ3ＣＦ2ＣＯ−から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記クライゼン転位工程が、ＬｉＨＭＤＳの存在下で進行し、Ｒ2AがＣＦ3ＣＯ-である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ2AがＲ2Bと同じであり、酵素分割工程が、クライゼン転位工程の直後に行われる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
クロチルグリシンエステル誘導体（２００）から、下記の２-アミノ-３-メチルペンタ-４-エン酸誘導体の調製方法。
2021519818.tif 000076
ここで
前記方法が、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法を含み、さらに、以下を含む：
a)（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）または（３０）の誘導体に、アミノ基の保護部分  Ｒ2Cを導入し、それによって、保護基部分によってアミノ部分を修飾して、（３２０）を得る工程、または  、工程ｂ）をこの工程ａ）の前に行った場合には、（３３０）を得る工程
および／または
ｂ）（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）または工程ａ）で得られた誘導体（３２０）に、カルボン酸基の保護部分Ｒ1Cを導入し、それによって保護基部分によって修飾されたカルボン酸部分を修飾して、（３５０）または（３３０）を得る工程。
【請求項８】
クロチルグリシンエステル誘導体（２００）から、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）-４，５-ジヒドロキシイソロイシン誘導体（４００）の製造方法。
2021519818.tif 000077
ここで、
Ｒ1は、Ｈまたはカルボン酸部分の保護基である、
Ｒ2は、Ｈまたはアミノ部分の保護基である、
Ｒ3とＲ4は、Ｈと、ＯＨ部分の保護基から、互いに独立して選択されるか、あるいは、Ｒ3とＲ4の両方が１つの、ビシナルジオールの保護基部分である。
ここで、前記方法は、上記請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法を含み、さらに以下を含む。
a)シャープレス  ジヒドロキシル化工程：
ここで、２−アミノ−３−メチルペンタ−４−エン酸誘導体（３３０）を、
2021519818.tif 000078
キラルリガンド、特にヒドロキニジン、１，４−フタラジンジイルジエーテルと錯体を形成したＯｓ（ＶＩＩＩ）の存在下で反応させ、２−アミノ−３−メチル−４，５−ジヒドロキシペンタン酸誘導体（４３０）を製造する。
2021519818.tif 000079
あるいは
b)シャープレス  エポキシ化工程：
ここで、
２−アミノ−３−メチルペンタ−４−エン酸誘導体（３３０）を、
2021519818.tif 000080
キラルリガンドおよびチタンイソプロポキシドを含む触媒の存在下で反応させ、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４、５−エポキシ−ペンタン酸誘導体（３６０）を製造する。
2021519818.tif 000081
そして、その後、エポキシドヒドロラーゼによって触媒された、酵素的に変換されて、２−アミノ−３−メチル−４，５−ジヒドロキシペンタン酸誘導体（４３０）を製造した。
2021519818.tif 000082
ここで、任意選択で、工程ａ）またはｂ）の後に、
任意のアミノ基の保護部分Ｒ2Cおよび／またはカルボン酸基の保護部分Ｒ1Cを、（４３０）から選択的に除去して、遊離（２Ｓ、３Ｒ、４Ｒ）-４、５-ジヒドロキシイソロイシンを得るか、または、
（４３０）は、ビシナルジオールの保護基と反応させて、特に以下から選択される化合物を得る。
2021519818.tif 000083
ここで、Ｒ1CとＲ2Cは、上記で定義されたものと同じ意味を持ち、Ｒ5とＲ5'は、ＨとＣＨ3から独立し
て選択される。
【請求項９】
クロチルグリシンエステル誘導体（２００）から、（２Ｓ、３Ｒ）−５-ヒドロキシイソロイシン誘導体（４１０）を調製するための方法であって、
前記方法は、先行する請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法を含み、さらに、シャープレス  エポキシ化工程を含み、２-アミノ-３-メチルペンタ-４-エン酸誘導体（３３０）が、キラルリガンドおよびチタンイソプロポキシドを含む触媒の存在下で、反応して、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）-２-アミノ-３-メチル-４、５-エポキシ-ペンタン酸誘導体（３６０）を得、続いて、還元剤の存在下に反応され、２-アミノ-３-メチル-５-ヒドロキシペンタン酸誘導体（４１０）を得る。
2021519818.tif 000084
ここで、Ｒ1CおよびＲ2Cは、上記と同じ意味を有する、方法。
【請求項１０】
クロチルグリシンエステル誘導体（２００）から、（２Ｓ、３Ｒ）−４-ヒドロキシイソロイシン誘導体（４４０）を調製するための方法であって、
前記方法が上記請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法を含み、さらに、シャープレス  エポキシ化工程を含み、２-アミノ-３-メチルペンタ-４-エン酸誘導体（３３０）が、キラルリガンドおよびチタニウムイソプロポキシドを含む触媒の存在下で反応させ、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）-２-アミノ-３-メチル-４、５-エポキシ-ペンタン酸誘導体（３６０）を得、
続いて、還元剤の存在下で反応させ、２-アミノ-３-メチル-４-ヒドロキシペンタン酸誘導体（４４０）を得、
2021519818.tif 000085
ここで、Ｒ1CおよびＲ2Cは、上記と同じ意味を有する、方法。
【請求項１１】
請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法：
ここで、
＊Ｒ1Cは、酸性条件下で開裂可能なカルボン酸部分の保護基であり、
特に、Ｒ1は、-Ｃ（ＲXＲYＲZ）であり、ＲX、ＲYおよびＲZは独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、または置換もしくは非置換アリールから選択され；
より特に、Ｒ1は、−Ｃ（ＲXＲYＲZ）であり、ここでＲX、ＲYおよびＲZは、独立して、メチル、シクロプロピル、アルキルシクロプロピル、フェニル、（ｐ−）Ｃ6Ｈ4Ｘから選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＮＯ2、およびＯＣＨ3から選択され、または、Ｒ1は、２，４−ジメトキシベンジル、２−フェニルイソプロピル、および２−３，５−ジメトキシフェニルイソプロピルから選択され、さらにより好ましくは、Ｒ1は、ｔｅｒｔ−ブチル（−Ｃ（ＣＨ3）3）、ＣＨ2（シクロプロピル）、ＣＨ（ＣＨ3）（シクロプロピル）、Ｃ（ＣＨ3）2（シクロプロピル）、ＣＨ（シクロプロピル）2、Ｃ（ＣＨ3）（シクロプロピル）2、およびＣ（シクロプロピル）3から選択される。
および／または
＊Ｒ2は、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）である；
および／または
＊Ｒ3とＲ4は、互いに独立して、ＯＣＨ3、Ｘ−Ｃ6Ｈ4（Ｘは、ｏ／ｍ／ｐ−ハロゲン、ＯＣＨ3、ＮＯ2）から選択されるか、または、
Ｒ3とＲ4が一緒になって、シクロペンチルまたはシクロヘキシル（シクロペンタノン／シクロヘキサノンのケタール）であるか、または、
Ｒ3とＲ4が一緒になって、２，２，３，３−ジメトキシブタンまたは１，２−ジメトキシシクロヘキサン、または３，３'，４，４'−テトラヒドロ−６，６'−ｂｉ−２Ｈ−ピラン、または４ａ，９ａ−ジヒドロ−、（４ａＳ，９ａＳ）−９Ｈ−キサンテン−９−オン、であるか、またはＲ3とＲ4が一緒になって、ＳｉＲ'3Ｒ'4またはＳｉＲ'3Ｒ'4ＯＳｉＲ'3Ｒ'4であり、ここで、各Ｒ'3およびＲ'4は、独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、または置換もしくは無置換アリールから選択され、特に、各Ｒ'3およびＲ'4は、独立して、ＣＨ3、ｉ−Ｃ3Ｈ7、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルから選択される。
【請求項１２】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
ここで、
ａ．Ｒ1は、Ｈまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、および／または
ｂ．Ｒ2は、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはＨ；および／または
ｃ．Ｒ3および／またはＲ4は、ｐ−メトキシベンジリデン、アセトニド、アセテートおよびトリアルキルシリル（特に、トリメチルシリル、ｔｅｒｔ．−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ．−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリル）から選択される。
ｄ．Ｒ2は、Ｆｍｏｃであり、ならびに、Ｒ3およびＲ4は一緒になって、ベンジルまたは置換フェニルメチル（例えば、ｐ-メトキシベンジリデン）、ジアルキル置換シリル基または４置換シロキサン部分である。
【請求項１３】
以下から選択される、（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）またはその誘導体の合成における中間体：
ａ．［（Ｚ）−ブタ−２−エニル］２−［（２，２，２−トリフルオロアセチル）アミノ］アセテート、
ｂ．［（Ｚ）−ブタ−２−エニル］２−［（２，２−ジフルオロアセチル）アミノ］アセテート、
ｃ．［（Ｚ）−ブタ−２−エニル］２−［（２−フルオロアセチル）アミノ］アセテート、
ｄ．［（Ｚ）−ブタ−２−エニル］２−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロパノイルアミノ）アセテート。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に従って製造された、化合物（３６０）の誘導体。
2021519818.tif 000086
ここで、
Ｒ1Cは、酸性条件下で開裂可能なカルボン酸部分の保護基である。
特に、Ｒ1は、−Ｃ（ＲXＲYＲZ）（ＲX、ＲYおよびＲZは、独立して、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキルまたは置換または非置換アリールから選択される）を有する。
より好ましくは、Ｒ1は、-Ｃ（ＲXＲYＲZ）であり、ここで、ＲX、ＲYおよびＲZは、メチル、シクロプロピル、アルキルシクロプロピル、フェニル、（ｐ-）Ｃ6Ｈ4Ｘ（Ｘは、Ｃｌ、ＮＯ2およびＯＣＨ3から選択される。）から独立して選択されるか、または、
Ｒ1は、２，４-ジメトキシベンジル、２-フェニルイソプロピルおよび２-３，５-ジメトキシフェニルイソプロピルから選択され、
さらにより好ましくは、Ｒ1は、ｔｅｒｔ-ブチル（−Ｃ（ＣＨ3）3)、ＣＨ2（シクロプロピル）、ＣＨ（ＣＨ3）（シクロプロピル）、Ｃ（ＣＨ3）2（シクロプロピル）、ＣＨ（シクロプロピル）2、Ｃ（ＣＨ3）（シクロプロピル）2，およびＣ（シクロプロピル）3から選択される；
および／または
Ｒ2は、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）である。
【請求項１５】
以下から選択される、（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４，５−ジヒドロキシペンタン酸（４３０）の誘導体；
ａ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000087
ｂ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−６，９−ジオキサスピロ［４．４］ノナン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000088
ｃ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−５，６−ジメトキシ−５，６−ジメチル−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタノ酸；
2021519818.tif 000089
ｄ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−４ａ，８ａ−ジメトキシ−２，３，５，６，７，８−オクタヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−３−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000090
ｅ．（２Ｓ，３Ｒ）−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−３−［（１４Ｒ）−１，１２，１３，１６−テトラオキサジスピロ［５．０．５．４］ヘキサデカン−１４−イル］ブタン酸；
2021519818.tif 000091
ｆ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−２'，７'−ジメチルスピロ［１，３−ジオキソラン−２，９'−キサンテン］−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000092
ｇ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，９'−キサンテン］−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000093
ｈ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−２，２−ジエチル−１，３−ジオキソラン−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000094
ｉ．（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−メチル−４，５−ビス（トリメチルシリル）オキシ２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸
2021519818.tif 000095
ｊ．（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−メチル−４，５−［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000096
ｋ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［２，２，４，４，−テトラメチル−１，３，５−トリオキサ−２，４−ジシロキシルヘプタン−２―イル−］２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸；
2021519818.tif 000097
ｌ．（２Ｓ，３Ｒ）−３−［２，２，４，４，−テトラキス（１−メチルエチル）−１，３，５−トリオキサ−２，４−ジシロキシルヘプタン−２―イル−］２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸
2021519818.tif 000098
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物のいずれか１つの、ｔｅｒｔ．ブチルエステル、シクロプロピルメチルエステルまたはジシクロプロピルメチルエステル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、固相ペプチド合成のための４，５−ジヒドロキシイソロイシン、その誘導体および構築ブロックの合成方法に関する。
【０００２】
発明の詳細な説明
ジヒドロキシイソロイシンは非タンパク質原性の天然に存在するアミノ酸であり、化合物のアマニチンキノコ毒ファミリーの構築ブロックを構成する。
アマニチン複合体は、標的癌治療の候補として研究されており、これらの薬物の異常な構築ブロックのための効率的な合成経路の開発が必要である。
ＥＰ２８７２４７９Ｂ１は、複雑な保護基戦略を含む、アスパラギン酸からの１１段階にわたるジヒドロキシイソロイシンの立体選択的合成を開示している。
合成経路は側鎖カルボン酸をアルコールに還元し、続いてＳｗｅｒｎ酸化に供し、続いてＷｉｔｔｉｇ型反応を行って２-アミノペンテン酸を得、これをシャープレスジヒドロキシル化に供することを含む。
総収率はわずか３％であると計算され、この合成を工業規模で適用する場合、好ましくない経済性につながる。
【０００３】
さらに、ＥＰ２８７２４７９Ｂ１の合成は、アセチル化を使用して、カルボキシル末端の脱保護に際して側鎖ヒドロキシル基がラクトン形成するのを防止する。これは、強塩基性条件下でのラセミ化をもたらし得る。
【０００４】
上記の技術水準に基づいて、本発明の目的は、標題化合物の効率的な合成を提供するための手段および方法を提供することである。この目的は、本明細書の特許請求の範囲によって達成される。
【０００５】
用語および定義
本明細書の文脈における用語「保護基」は、保護基が結合している分子の炭素骨格の完全性またはキラル配向に影響を与えることなく、また、分子に結合された他の保護基に結合された特定の他の保護基を切断することもなく、官能基に選択的に結合され、選択的に除去され得る官能基（特に、本明細書で議論される分子のカルボン酸部分、アミノ部分またはヒドロキシル部分）に共有結合された部分に関する。
現代の保護基化学の包括的な概説は、特に本明細書に開示される化合物に関連するので、Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ、Ｇｒｅｅｎｅ'ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｗｉｌｅｙ  ２０１４に入手可能である。
ＵＳ  ６６９３１７８  Ｂ２  −  「多糖類、天然産物、およびコンビナトリアルライブラリーの合成に有用な保護基」およびＵＳ  ２０１６００２４１４３  Ａ１  −  「脱保護方法」は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００６】
本明細書では、式中の指定されていない位置が飽和炭素であると見なされる有機化学の標準的な慣例に従う。
【０００７】
本発明の文脈において、Ｃ1−Ｃ4アルキルという用語は、１、２、３または４個の炭素原子を有する飽和直鎖または分枝鎖炭化水素を意味し、ここで、特定の実施形態では、１つの炭素-炭素結合が不飽和であってもよく、１つのＣＨ2部分が酸素（エーテル架橋である）または窒素（ＮＨ、またはＮＲ、Ｒはメチル、エチル、またはプロピルである；アミノ架橋である）と交換されてもよい。
Ｃ1−Ｃ4アルキルの非限定的な例は、メチル、エチル、プロピル、２−プロペニル、ｎ−ブチル、２−メチルプロピル、ｔ−ブチル、３−ブテニル、２−プロピニルおよび３−ブチニルである。特定の実施形態では、Ｃ1−Ｃ4アルキルが、メチル、エチル、プロピルまたはブチル部分である。
【０００８】
本発明の文脈において、Ｃ1−Ｃ6アルキルは、１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有する飽和直鎖または分枝鎖炭化水素を意味し、ここで、１つの炭素-炭素結合は不飽和であってもよく、１つのＣＨ2部分は、酸素（エーテル架橋である）または窒素（ＮＨ、またはＮＲ、Ｒはメチル、エチル、またはプロピルである；アミノ架橋である）と交換されてもよい。
Ｃ1−Ｃ6アルキルについての非限定的な例としては、上記のＣ1−Ｃ4アルキルについての例、さらに、３−メチル−ブタ−２−エニル、２−メチルブタ−３−エニル、３−メチルブター３−エニル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１、１−ジメチルプロピル、１、２−ジメチルプロピル、１、２−ジメチルプロピル、４−ペンチニル、３−メチル−２−ペンチル、および４−メチル−２−ペンチルが挙げられる。
特定の実施形態では、Ｃ5アルキルはペンチル部分であり、Ｃ6アルキルはヘキシルまたはシクロヘキシル部分である。
【０００９】
ここで、最も狭い意味で使用されるとき、置換されていないＣnアルキルという用語は、−ＣnＨ2n―部分（その分子の部分の間の架橋として使用される場合）、または、−ＣnＨ2n+1（末端部分の文脈で使用される場合）に関係する。
化学式の文脈で使用される場合、以下の略語を使用することができる：
Ｍｅは、メチル、ＣＨ3；
Ｅｔは、エチル、−ＣＨ2ＣＨ3；
Ｐｒｏｐは、プロピル、−（ＣＨ2）2ＣＨ3（ｎ−プロピル、ｎ−ｐｒ）または−ＣＨ（ＣＨ3）2（ｉｓｏ−プロピル、ｉ−ｐｒ）；
ｂｕｔは、ブチル、−Ｃ4Ｈ9、−（ＣＨ2）3ＣＨ3、−ＣＨＣＨ3ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2または−Ｃ（ＣＨ3）3。
【００１０】
本発明の態様
本発明の第１の態様は（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）の調製方法に関する。
2021519818.tif 000003
この方法はＺ-クロチル-グリシンエステル誘導体（２００）上のクライゼン転位工程を含み
2021519818.tif 000004
キラルリガンド（Ｃ＝Ｃ二重結合を含む）の存在下での（２００）のクライゼン転位に有利な条件下で、２-アミノペンタ-４-エン酸誘導体（３００）を生じ
2021519818.tif 000005
Ｒ2Aは、クライゼン転位に有利な条件下で安定なアミノ保護基である。
【００１１】
特定の実施形態において、Ｒ2Aは、概して、アシル基である。特定の実施形態では、Ｒ2Aはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。
特定の実施形態では、Ｒ2AがＣＨxＦ3-x（ＣＨyＦ2-y）nＣＯ−であり、ここで、ｎは０または１であり、ｘは０、１、２および３から選択され、ｙは０、１および２から選択される。
特定の実施形態では、Ｒ2AはＣＦ3ＣＯ-である。特定の実施形態では、Ｒ2AはＣＨＦ2ＣＯ−である。特定の実施においては、Ｒ2AはＣＨ2ＦＣＯ−である。特定の実施形態では、Ｒ2Aは、アセチルである。
【００１２】
特定の実施形態では、Ｒ2AはＣＦ3ＣＦ2ＣＯ-である。特定の実施形態では、Ｒ2Aは、ＣＨ3ＣＦ2ＣＯ−である。
特定の特定の実施形態では、Ｒ2Aは、トリフルオロアセチルである。
特定の実施形態では、キラルリガンドが、エフェドリン、バリノール、シンコニジン、シンコニンおよびキニジンから選択される。
特定の実施形態では、クライゼン転位工程のジアステレオ選択性が、９０：１０で、特に９３：７、より好ましくは９４：６である。
キラルリガンドとしてキニジンを用いた、クライゼン転位の遷移状態は、以下の構造で表される。当業者は、本発明を実施するのに適した他のキラルリガンドを選択することができるであろう。
2021519818.tif 000006
ある特定の実施形態では、キラルリガンドはキニジンである。
2021519818.tif 000007
【００１３】
特定の実施形態において、キラルリガンド、特にキニジンは、化合物２００に対して２〜３モル当量で存在する。
特定の実施形態では、クライゼン転位工程は、（非）−極性有機溶媒に可溶性の強力な非求核性塩基、特に、リチウムアルキルアミドまたはリチウムシリルアルキルアミド、より具体的にはＬＤＡ（リチウムジイソプロピルアミド）、ＬｉＨＭＤＳ（リチウムビス（トリメチルシリル）アミド）およびＬｉＴＭＰ（リチウムテトラメチルピペリジン）から選択される塩基の存在下で進行する。対応するカリウム塩基を代わりに使用してもよい。
【００１４】
クライゼン転位工程のある特定の実施形態をスキーム１に示す：
2021519818.tif 000008
スキーム１：グリシン  シス-クロチルエステル２１および２９のクライゼン転位。
【００１５】
グリシン  シス-クロチルエステル２１および２９のエステルエノラートクライゼン転位は、Ｋａｚｍａｉｅｒら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９４、３３、９９８−９９９）のプロトコールに従って行うことができる。
Ｒ2Aが、Ｔｆａ（トリフルオロアセチル）であるように選択される場合、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）は、グリシンエステル２１のアミン基からＴｆａをある程度切断する。
従って、それらの実施例において、本発明者らは、リチウム  ビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）を選択した。当業者は、発明的活動なしに強塩基の多数の代替物を同定することができる。
【００１６】
本発明者らの手では、Ｃｂｚで保護されたシス-クロチルエステルの［３，３］-シグマトロピック転位は、予想される生成物を生じなかったが、Ｂｏｃで保護されたシス-クロチルエステル（２９）は種々の副生成物を有する比較的低い収率（３４％）を与えた。
最良の収率（５０％）は、より少ない副生物を生じる、Ｔｆａで保護されたシス-クロチルエステル（２１）で達成することができた。
キラルリガンドの非存在下での反応時間は、驚くほど長く（４ｄ）、そして、、ここで、反応混合物が-３０℃および-２０℃の範囲から、室温まで温まる間に転位が起こることが報告されていた、文献と一致しなかった。ここで、反応は、反応混合物が室温で３日間既に撹拌されている場合、４日後にのみ完了した。
【００１７】
Ｃ末端でのＴｆａ保護転位生成物（３１）のメチル化およびその後のキラルＧＣ−ＭＳは、予想通りに、反応は立体選択的な方法で進行しなかったことを明らかにした。
キラルＧＣ-ＭＳクロマトグラムは、（Ｒ，Ｒ）および（Ｓ，Ｓ）鏡像異性体の両方が同程度に形成されたことを示す（図４）。したがって、鏡像体過剰はない。
ジアステレオ選択性は９３：７と計算された。本発明者らは理論によって限定されることを望まないが、キレート架橋エステルエノラートの椅子様遷移状態のために、［３，３］-シグマトロピック転位の間にアンチの生成物（２Ｓ，３Ｓおよび２Ｒ，３Ｒ）の形成が有利であると推定する。
2021519818.tif 000009
スキーム２．キレート架橋エステルエノラートの遷移状態
【００１８】
しかし、キラルリガンドを反応混合物に導入すると、キニジンの場合、所望の（２Ｓ，３Ｓ）‐エナンチオマー生成物の非常に好ましいエナンチオ過剰率が得られた。
2021519818.tif 000010
スキーム３：不斉クライゼン転位
【００１９】
クライゼン転位は、リガンドを含まない場合よりも、キニジンまたはキニンの存在下で、より良好な収率およびより短い反応時間をもたらした。収率はキニジンを用いて７２％であり、キニンを用いて７０％であった。反応は、４日の代わりにわずか２日後に完了した。その後のメチルエステルの形成および生成物のキラルＧＣ-ＭＳへ供することにより、アンチの生成物の形成が有利であることが確認された。
【００２０】
キニンをリガンドとする不斉クライゼン転位生成物のキラルＧＣ−ＭＳクロマトグラム（図１）は、（Ｒ，Ｒ）−鏡像異性体が、７６％の鏡像異性体過剰（ｅｅ）で形成されたことを示している。ジアステレオ選択性（ｄｓ）は８３：１７と計算された。したがって、キニンは、所望の（Ｓ，Ｓ）−エナンチオマーが１０％の程度しか形成されないので、本発明の目的のために適切なリガンドではない。
【００２１】
キニジンを配位子とする不斉クライゼン転位生成物のＧＣ‐ＭＳクロマトグラム（図２）は、（Ｓ，Ｓ）‐エナンチオマーが８７％のエナンチオマー過剰（ｅｅ）で形成されたことを示す。ジアステレオ選択性（ｄｓ）は９４：６と計算された。したがって、キニジンは本発明の目的のために特に適切なリガンドであるが、一般に、特定の実施形態ではシンコニンによって置き換えることもできる。
【００２２】
以下の表は、不斉クライゼン転位の達成された収率、ｅｅおよびｄｓ値を纏めて、比較する：
2021519818.tif 000011
【００２３】
本発明による方法は、２-アミノペンタ-４-エン酸アミド誘導体（３１０）を変換して、（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）を得る酵素分割工程をさらに含む。
2021519818.tif 000012
スキーム４：酵素分割工程
【００２４】
特定の実施形態では、酵素分割工程は、アシラーゼ、特にアスペルギルス種由来のアシラーゼＩ、より好ましくは、アスペルギルス・メレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ）由来のアシラーゼＩによって行われる。
ある態様において、Ｒ2Bは、トリフルオロアセチル（ＣＦ3ＣＯＯ）である。特定の実施形態では、Ｒ2BはＣＦ3ＣＦ2ＣＯＯである。
特定の実施形態では、Ｒ2AはＲ2Bと同じであり、酵素分割工程は、クライゼン転位工程の直後に行われる。
１つの例示的な反応順では、Ｔｆａで保護されたクライゼン転位生成物（３１ａ〜ｄ）を酵素動力学的分割に直接供した。トリフルオロアセチル基は驚くべきことに、アシラーゼ酵素のための適切な基質であると決定された。ＴＦＡで保護された基質の反応は、強塩基性下の、ＴＦＡ脱保護およびアセチル化工程を省略しながら、アセチル保護基質の開裂として、約半分の反応速度で起こる。
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スキーム５：完全に脱保護された（２Ｓ，３Ｓ）および（２Ｓ，３Ｒ）-４，５ジデヒドロイソロイシンが得られる、３１ａ-ｄの事前のＴＦＡ脱保護およびアセチル化を伴わない酵素動力学的分割
【００２５】
分割された生成物（３０ａ−ｂ）の生成物は、Ｎ末端のトリフルオロアセチル化およびＣ末端のメチル化の後、ＧＣ−ＭＳに供された。キラルＧＣ−ＭＳクロマトグラム（図３）は、酵素分割の前にＴＦＡ脱保護およびアセチル化工程を省略することによってラセミ化が起こらなかったことを示している。ジアステレオ選択性は９４：６であり、鏡像体過剰率は９２％であった。  たとえアシラーゼが、Ｌ−配位アミノ酸を特異的に標的とするとしても、少量のＤ−配位アミノ酸は、時間の経過とともに脱保護される。この残存ラセミ化は、より短い反応時間を選択することによって回避することができる。
【００２６】
強酸性イオンカチオン交換樹脂（例えば、Ｄｏｗｅｘ（登録商標）５０ＷＸ８水素形態）を用いて精製した後、酵素動力学的分割生成物の収率を計算した。この樹脂からの切断は、塩基性条件下で行われるので、わずかなラセミ化が起こった。分子が、クライゼン転位工程後に強塩基で処理するとラセミ化しやすい傾向があるので、この合成経路の間、強塩基状態を避ける必要があるということを意味する。したがって、アシラーゼを用いた、以下の酵素分割反応から生じた粗生成物を、さらなる精製することなく次の反応工程に供した。
【００２７】
強酸性状態で、Ｎｉ（ＩＩ）-塩およびキラルプロリンベースのリガンドを使用する、クライゼン転位生成物の非酵素的動力学的分割は、望ましくない（Ｒ，Ｒ）-エナンチオマーへのラセミ化をもたらしたので、不斉クライゼン工程によって得られた濃縮ジアステレオマー生成混合物のアシラーゼ分割は、重要かつ本発明の方法の特徴を置換するのが困難であると思われる。
【００２８】
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スキーム６：クライゼン転位および酵素分割（ｐ＝アミノ保護基）の使用による（２Ｓ，３Ｓ）‐２‐アミノペンタ‐４‐エン酸（３０）の合成
本発明の第２の態様は、クロチルグリシンエステル（２００）から出発して、
2021519818.tif 000015
以下から選択される、２-アミノ-３-メチルペンタ-４-エン酸誘導体の調製方法に関する。
【００２９】
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本方法は、上述の本発明の第一の態様による方法を含み、さらに以下を含む：
a)（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）または（３０）の誘導体に、アミノ基の保護部分Ｒ2Cを導入し、それによって保護基部分によってアミノ部分を修飾して（３２０）を得る工程、または工    程ｂ）をこの工程ａの前に行った場合には（３３０）を得る工程
および／または
b)（２Ｓ，３Ｓ）-２-アミノペンタ-４-エン酸（３０）または工程ａで得られた誘導体（３２０）にカルボン酸基保護部分Ｒ1Cを導入し、それによって保護基部分によって修飾されたカルボン酸部分を修飾して、（３５０）または（３３０）を得る工程。
c)本発明の第３の態様は、クロチルグリシンエステル（２００）から出発して、４，５−ジヒドロキシイソロイシン誘導体（４００）の調製方法に関する。
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ここで、
Ｒ1は、Ｈまたはカルボン酸部分の保護基であり、
Ｒ2は、Ｈまたはアミノ部分の保護基であり、
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立して、Ｈおよび水酸基部分の保護基から選択され、またはＲ3およびＲ4の両方は、１つの単一のビシナルジオールの保護基部分である。
【００３０】
本発明のこの態様による方法は、本発明の第１および第２の態様による方法を含み、２-アミノ-３-メチルペンタ-４-エン酸誘導体（３３０）が、
2021519818.tif 000018
キラルリガンドによって２-アミノ-３-メチル-４，５-ジヒドロキシペンタン酸誘導体（４３０）に錯化されたＯｓ（ＶＩＩＩ）の存在下で反応される、シャープレス  ジヒドロキシル化工程をさらに含む。
2021519818.tif 000019
【００３１】
特定の実施形態において、キラルリガンドは、ヒドロキニジン１，４-フタラジンジイルジエーテル［（ＤＨＱＤ）2-ＰＨＡＬ  ＣＡＳ  Ｎｏ．１４０８５３-１０-７（混合β）］である。
【００３２】
特定の実施形態では、（Ｋ2ＯｓＯ2（ＯＨ）4と、Ｋ3Ｆｅ（ＣＮ）6およびＮ−メチルモルフォリン  Ｎ−オキシドのうちの１つの存在下で、シャープレス  ジヒドロキシレーション反応が実行される。
【００３３】
特定の実施形態において、Ｒ1Cは、ｔｅｒｔ−ブチル（−Ｃ（ＣＨ3）3）、シクロプロピルメチルまたはジシクロプロピルメチルである。これらのカルボキシル保護基は、シャープレス  ジヒドロキシル化工程の間に使用される場合、利点を提供することが証明されている。
【００３４】
特定の実施形態では、Ｒ2Cは、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）である。これにより、標準的な固相ペプチド合成反応化学におけるアミノ官能基に関して、さらなる修飾なしに、シャープレス反応の生成物を使用することができる。
【００３５】
トリイソプロピルシリル、ヘプチルまたはトリクロオレチルのような異なるカルボン酸の保護基を有するＦｍｏｃ保護アミノペンテン酸エステルの、シャープレス  ジヒドロキシル化は、程度の差こそあれ、非常に安定なラクトン（９９）の形成をもたらした。Ｅｄａｇａｗａらは、２００９年に、この種のラクトンの開環がＣα原子のエピメリ化をもたらすことを報告し、これが、（９９）の開環が試みられなかった理由である。
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【００３６】
Ｆｍｏｃ保護ｔｅｒｔ-ブチルエステル（３６）のシャープレス  ジヒドロキシル化は、Ｃ-およびＮ-末端が保護された、４，５-ジヒドロキシノルバリンの形成に特に有利であった。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、これがｔＢｕ−エステルの、強い立体障害および高い安定性によるものであると仮定する。
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【００３７】
１つの例示的な反応例において、酵素分割産物（３０）は、Ｎ末端およびＣ末端にＦｍｏｃおよびｔＢｕを供給された。以下の不斉シャープレス  ジヒドロキシル化は、ラクトン（１１１）および（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）-４，５-ジヒドロキシイソロイシン（４６）の両方の形成をもたらした。
末端アルケン（３６）の変換は、１２時間後に完了しなかった。これが、ラクトンの形成が起こった理由であろう。ラクトン形成の阻止は、反応時間を最大１２時間に維持しながら、より多量の触媒を使用することによって達成され得る。反応混合物を冷却することはまた、Ｃ末端からのｔｅｒｔ−ブチル基の脱離反応を防止するのに役立ち得る。
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スキーム７：４，５-ジデヒドロイソロイシン（３６）の不斉シャープレス  ジヒドロキシル化は、２４時間後に、４，５-ジヒドロキシイソロイシン（４６）および高度に安定なラクトン（１１１）の形成をもたらす。
【００３８】
ＦｍｏｃＯＳｕ：Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド
2021519818.tif 000023
スキーム８：本発明の第１、第２および第３の態様を組み合わせた、４，５-ジヒドロキシイソロイシンの合成を示す実施形態の反応スキーム
【００３９】
本発明の第４の態様は、（２Ｓ、３Ｒ、４Ｒ）-４，５-ジヒドロキシイソロイシン誘導体（４００）の調製方法に関する。
2021519818.tif 000024
ここで、
Ｒ1は、Ｈまたはカルボン酸部分の保護基であり、
Ｒ2は、Ｈまたはアミノ部分の保護基であり、
Ｒ3およびＲ4は、水酸基部分の保護基から独立して、別々に選択され、または、Ｒ3およびＲ4の両方は、１つの単一のビシナルジオールの保護基部分である。
【００４０】
この方法は本発明の１つまたは２つの態様のいずれか１つによる方法を含み、シャープレス  アプローチまたはＳｈｉら、Ｏｒｇ．  Ｌｅｔｔ．，  ２００１，  ３，  １９２９−１９３１．による関連エポキシ化によって表されるようなジアステレオ選択的エポキシ化工程をさらに含む。ここで、２−アミノ−３−メチルペンタ−４−エン酸誘導体（３３０）は、
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キラルリガンドおよびチタンイソプロポキシドを含む触媒の存在下で反応させ、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４，５−エポキシ−ペンタン酸誘導体（３６０）を製造し、
2021519818.tif 000026
次に、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４、５−エポキシ−ペンタン酸誘導体（３６０）のエポキシド環を、以下のいずれかによって開環する：
ｉ）例えば、真菌エポキシドヒドロラーゼ（Ｔｒｅｎｄ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２２（３）、１２３−１３９、２００４に記載されているような）によって触媒される、酵素的変換によって、２−アミノ−３−メチル−４、５−ジヒドロキシペンタン酸誘導体（４３０）にするか、
2021519818.tif 000027
ｉｉ）還元剤の存在下での反応によって、２−アミノ−３−メチル−５−ヒドロキシペンタン酸誘導体（４１０）にする。この工程に適した還元剤の非限定的な例は、水素化ビス（２-メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム（「ＲｅｄＡｌ」）である。
あるいは、オレフィン（３３０）は、Ｖｅｄｅｊｓら、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  ２００５，  １２７，  ５５６６  −  ５５６７に従って、（４１０）へ、ヒドロホウ素化反応によって変換され得る。
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【００４１】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）‐２‐アミノ‐３‐メチル‐４，５−エポキシ‐ペンタン酸誘導体（３６０）のエポキシド環は、エポキシドヒドロラーゼによる酵素反応により、エナンチオ選択的に変換され、２‐アミノ‐３‐メチル‐４，５‐ジヒドロキシペンタン酸誘導体（４３０）を生じる。
2021519818.tif 000029
【００４２】
特定の実施形態では、シャープレス  ジヒドロキシル化の代替として、シャープレス  エポキシ化および酵素的エナンチオ選択的ジヒドロキシル化の使用がスキーム９に示されるように、本発明の第１の態様と組み合わせて使用される。
2021519818.tif 000030
スキーム９：本発明の第１、第２および第４の態様を組み合わせた、４，５-ジヒドロキシイソロイシンの合成を示す実施形態の反応スキーム。
【００４３】
特定の実施形態では、シャープレス  エポキシ化工程の生成物、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）-２-アミノ-３-メチル-４、５-エポキシ-ペンタン酸誘導体（３６０）を、
2021519818.tif 000031
反応させ、２-アミノ-３-メチル-５-ヒドロキシペンタン酸誘導体（４１０）を合成する。
2021519818.tif 000032
【００４４】
同様に、ヨウ素の存在下で、水素化ホウ素で、オレフィン（３３０）を処理し、続いて塩基性条件下で、Ｈ2Ｏ2と反応させることによって、一般式（４１０）のモノ（５）-ヒドロキシ化合物を得ることができる：
2021519818.tif 000033
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＰＧ：：使用される条件に適した任意の保護基；
ｔ-Ｂｕ：ｔｅｒｔ−ブチル。
【００４５】
特定の実施形態では、シャープレス  エポキシ化工程の生成物、（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４、５−エポキシ−ペンタン酸誘導体（３６０）を、
2021519818.tif 000034
複合水素化物のような還元剤を使用して、エポキシド（３６０）の末端の還元的開環によって、２−アミノ−３−メチル−４−ヒドロキシペンタン酸誘導体（４４０）を合成する。
2021519818.tif 000035
【００４６】
当業者は、本発明の重要な特徴が、（２Ｒ，３Ｓ）ジアステレオマーの早期生成および維持を可能にする反応方法に依存するが、標的分子である（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）-４，５-ジヒドロキシイソロイシン（４０）の多数の最終誘導体がそれによって促進されることを理解する。これらは、一般構造（４００）の変形である：
2021519818.tif 000036
【００４７】
特定の実施形態では、Ｒ1はＨである。
特定の実施形態では、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はＦｍｏｃである。
特定の実施形態では、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4はシリルベースのヒドロキシルの保護基である。
特定の実施形態では、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4はトリアルキルシリルである。
特定の実施形態では、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4はトリメチルシリルである。
ある実施態様において、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4は共にベンジルまたは置換フェニルメチル（例えば、ｐ−メトキシベンジリデン）、ジアルキル置換シリル基または四置換シロキサン部分である。
【００４８】
特定の実施形態において、Ｒ1は、ｔｅｒｔ−ブチル（−Ｃ（ＣＨ3）3)、シクロプロピルメチルまたはジシクロプロピルメチルである。
特定の実施形態において、Ｒ1は、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピルメチルまたはジシクロプロピルメチルであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4は、シリルベースの水酸基の保護基である。
特定の実施形態では、Ｒ1はｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピルメチルまたはジシクロプロピルメチルであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4は、トリアルキルシリルである。
特定の実施形態では、Ｒ1はｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピルメチルまたはジシクロプロピルメチルであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4はトリメチルシリルである。
特定の実施形態において、Ｒ1はｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピルメチルまたはジシクロプロピルメチルであり、Ｒ2はＦｍｏｃであり、Ｒ3およびＲ4は一緒になって、ベンジルまたは置換フェニルメチル（例えば、ｐ-メトキシベンジリデン）である。
特定の実施形態では、Ｒ2はフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）である。
特定の実施形態において、Ｒ3および／またはＲ4は、ｐ−メトキシベンジリデン、アセトニド、およびアセテートから選択される。
【００４９】
以下の化合物は、表題化合物をアマニチン誘導体に反応させるのに特に有益であることが証明されている：
2021519818.tif 000037
【００５０】
2021519818.tif 000038
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−１，４−ジオキサスピロ［４．４］ノナン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸  ｔｅｒｔ．−ブチルエステル
【００５１】
2021519818.tif 000039
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタノ酸
【００５２】
2021519818.tif 000040
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−１，４−ジオキサスピロ［４．４］ノナン−２−イル］−２−      （フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸
【００５３】
2021519818.tif 000041
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−５，６−ジメトキシ−５，６−ジメチル−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタノ酸
【００５４】
2021519818.tif 000042
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−５，６−ジメトキシ−５，６−ジメチル−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸  ｔｅｒｔ．ブチルエステル、
【００５５】
2021519818.tif 000043
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−４ａ，８ａ−ジメトキシ−２，３，５，６，７，８−オクタヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸
【００５６】
2021519818.tif 000044
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（２Ｒ）−４ａ，８ａ−ジメトキシ−２，３，５，６，７，８−オクタヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−２−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【００５７】
2021519818.tif 000045
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−３−［（１４Ｒ）−１，８，１３，１６−テトラオキサジスピロ［５．０．５．４］ヘキサデカン−１４−イル］ブタン酸
【００５８】
2021519818.tif 000046
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−３−［（１４Ｒ）−１，８，１３，１６−テトラオキサジスピロ［５．０．５．４］ヘキサデカン−１４−イル］ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【００５９】
2021519818.tif 000047
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−２'，７'−ジメチルスピロ［１，３−ジオキソラン−２，９'−キサンテン］−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタノ酸
【００６０】
2021519818.tif 000048
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−スピロ［１，３−ジオキソラン−２，９'−キサンテン］−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸  ｔ−ブチルエステル
【００６１】
2021519818.tif 000049
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−２，２−ジエチル−１，３−ジオキソラン−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸ｔ−ブチルエステル
【００６２】
2021519818.tif 000050
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［（４Ｒ）−２，２−ジエチル−１，３−ジオキソラン−４−イル］−２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタノ酸
【００６３】
2021519818.tif 000051
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［２，２，４，４，−テトラキス（１−メチルエチル）−１，３，５−トリオキサ−２，４−ジシロキシルヘプタン−２−イル−］２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタノ酸
【００６４】
2021519818.tif 000052
（２Ｓ，３Ｒ）−３−［２，２，４，４，−テトラキス（１−メチルエチル）−１，３，５−トリオキサ−２，４−ジシロキシルヘプタン−２−イル−］２−（フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）ブタン酸  ｔ−ブチルエステル
【００６５】
要約すると、本発明者らは、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）-４，５-ジヒドロキシイソロイシンの前駆体を、クライゼン転位によって合成することに成功し、不斉シャープレス  ジヒドロキシル化または、シャープレス  エポキシ化に次いで、エポキシド開環に好ましい適切な足場を提供した。収率、エナンチオ過剰率およびジアステレオ選択性に関する特に有利な結果は、不斉クライゼン転位中にキニジンをキラルリガンドとして使用することによって達成された。キラルリガンドを使用しないクライゼン転位は、４，５‐ジデヒドロイソロイシンの低い収率をもたらし、エナンチオ過剰はなく、４日までの長い反応時間をもたらした。
望ましくない（Ｒ，Ｒ）‐および（Ｒ，Ｓ）‐配位の立体異性体は、所望の（Ｓ，Ｓ）‐鏡像異性体から、アシラーゼを用いた酵素動力学的分割によりほぼ完全に分離された。（Ｓ，Ｓ）‐と（Ｓ，Ｒ）‐４，５‐ジデヒドロイソロイシン間の最終のジアステレオ選択性は、９４：６と計算された。
【００６６】
本発明は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）-４，５-ジヒドロキシイソロイシンのグラムスケール合成を容易にする、ＥＰ２８７２４７９の合成経路の貴重な代替物を提供する。
【００６７】
単一の分離可能な特徴の代替が「実施形態」として、本明細書に開示される場合はいつでも、そのような代替は、本明細書に開示される本発明の別個の実施形態を形成するために自由に組み合わされ得ることが理解されるべきである。
【００６８】
本発明は以下の実施例および図面によってさらに説明され、そこから、さらなる実施形態および利点が引き出され得る。これらの実施例は本発明を例示することを意味するが、本発明の範囲を限定することを意味するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】図１は、キニンをリガンドとする不斉クライゼン転位後の、メチル化およびＴＦＡで保護された、４，５−ジデヒドロイソロイシンのキラルＧＣ−ＭＳクロマトグラムを示す。
【図２】図２は、キニジンをリガンドとした不斉クレイゼン転移後の、メチル化およびＴＦＡで保護された、４，５−ジデヒドロイソロイシンのキラルＧＣ−ＭＳクロマトグラムを示す。
【図３】図３は、３１ａ−ｄの酵素動力学的分割後の、トリフルオロアセチル化およびメチル化された、４，５−ジデヒドロイソロイシンのキラルＧＣ−ＭＳクロマトグラムを示す。
【図４】図４は、メチル化およびＴＦＡで保護された、４，５−ジデヒドロイソロイシンのキラルＧＣ−ＭＳクロマトグラムを示す。
【００７０】
実施例
一般
化学物質および溶媒
化学物質および溶媒は、
ＡＢＣＲ（Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ），
ＡＣＲＯＳ  ＯＲＧＡＮＩＣＳ（Ｇｅｅｌ，Ｂｅｌｇｉｕｍ），
ＡＬＦＡ  ＡＥＳＡＲ（Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ），
ＦＬＵＫＡ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ），
ＦＬＵＯＲＯＣＨＥＭ  ＬＩＭＩＴＥＤ（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ，ＵＫ），
ＩＲＩＳ  ＢＩＯＴＥＣＨ（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ，Ｇｅｒｍａｎｙ），
ＣＡＲＬ  ＲＯＴＨ（Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ），
ＭＥＲＣＫ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），
ＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），
ＢＡＣＨＥＭ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）または
ＳＩＧＭＡＡＬＤＲＩＣＨ（Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）
から購入し、さらに精製すうることなく使用した。
ＮＭＲ分光法用の、ＤＭＳＯ‐ｄ6（９９．９％）、ＣＤＣｌ3（９９．９％）およびＤ2Ｏ（９８．８％）を、ＤＥＵＴＥＲＯ（Ｋａｓｔｅｌｌａｕｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＳｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。
【００７１】
不活性ガス
空気および水分に敏感な反応を、オーブン乾燥フラスコ中、アルゴン雰囲気下で行った。
液体試薬は、ＰＥ注射器で添加し、これを、隔壁を介してアルゴンで数回フラッシュした。
固体を溶解し、溶液として添加するか、またはアルゴン流下で粉末として反応容器に導入した。
【００７２】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
ＴＬＣは、ＭＥＲＣＫから購入したシリカプレート（シリカゲル６０Ｆ254）上で行った。
ＵＶ照射（λ＝２５４ｎｍ）および過マンガン酸塩−、ニンヒドリン−およびモリブデン酸塩−染色試薬の使用により化合物を検出した。
【００７３】
カラムクロマトグラフィー
カラムクロマトグラフィーは、加圧空気を用いて、ＧＲＡＣＥ  ＤＡＶＩＳＯＮ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＵＳＡ）から購入した、シリカゲル４０〜６３μｍで行った。
【００７４】
ＮＭＲスペクトル
1Ｈ  ＮＭＲおよび13Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ  ５００およびＡＭ  ４００装置で測定した。
化学シフトδは、百万分率（ｐｐｍ）で、
ＣＤＣｌ3（1Ｈ：δ＝７．２６ｐｐｍ；13Ｃ：δ＝７７．１６ｐｐｍ）および
ＤＭＳＯ-ｄ6（1Ｈ：δ＝２．５ｐｐｍ；13Ｃ：δ＝３９．５ｐｐｍ）の残りのプロトンシグナルに対して、報告される。
結合定数Ｊは、ヘルツ（Ｈｚ）で与えられ、Ｈ−Ｈカップリングを指す。
積分は割り当てに従う。
多重度：
ｓ＝シングレット
ｄ＝ダブレット、
ｔ＝トリプレット、
ｑ＝クワルテット。
多重度が同定できなかった場合、シグナルの化学シフト範囲を与えた（ｍ＝マルチプレット）．
13Ｃ  ＮＭＲスペクトルはプロトンデカップリングされている。
【００７５】
質量スペクトル
ＬＣ-ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）を、ＴＨＥＲＭＯ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣからのハイパーシル１００−Ｃ18-カラムを使用して、ＡＧＩＬＥＮＴ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳからの１２００-ＨＰＬＣと組み合わせた、ＴＨＥＲＭＯ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）からのＯｒｂｉｔｒａｐ  ＸＬ-質量分析計を用いて測定した（（溶媒Ａ：水／０．０２５％  ＨＣＯＯＨ、溶媒Ｂ：ＡｃＮ／０．０２５％ＨＣＯＯＨ；流速：１．３ｍＬ／分）
スペクトルの評価には、Ｘｃａｌｉｂｕｒ（ＴＨＥＲＭＯ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を用いた。
【００７６】
キラルＧＣ−ＭＳ
キラルＧＣ-ＭＳを、ＣＳ  ＥｎａｎｔｉｏＳＥＬＥＣＴ  ＧＣカラム（３０ｍ、２５０μｍ×０．３μｍ：ＣＳ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｅ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  ＧｍｂＨ、Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、ドイツ）を用いて、ＡＧＩＬＥＮＴ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ  からの５９７５Ｃで測定した。
温度勾配（４４分）は、７０℃で２分間の初期保持で開始し、続いて２４０℃まで、４℃／分で増加した。
走査は、キャリアガスとしてヘリウムを用いて、１．２ｍＬ／分の流量で、電子衝撃（ＥＩ）モード（ＭＳ源：３００℃、ＭＳクワッド：１５０℃、発光：１０８．８μＡ、エネルギー：５０ｅＶ）で行った。
【００７７】
分取ＨＰＬＣ
分取ＨＰＬＣによる精製は、ＡＧＩＬＥＮＴ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥからのＰＬＲＰ-Ｓカラム（粒径１０μｍ×１００Å）を使用して、ＡＧＩＬＥＮＴ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥからの１２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙで行った。使用した溶媒は、それぞれ、０．１％  ＴＦＡを添加した、水およびＡｃＮであった。
【００７８】
（Ｚ）−ブタ−２−エン−１−オール（１０）
2021519818.tif 000053
ＭｅＯＨ中の１２ｍＬのブタ-２-イン-１-オール（１０）（１１．２８ｇ、１６０．９４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、窒素で、３０分間脱気した。次いで、１．２ｇのＬｉｎｄｌａｒ触媒（７．５ｇ／ｍｍｏｌ）を添加し、その後、反応混合物を、水素で１時間脱気した。
１．０気圧の水素下、室温で一晩激しく撹拌した後、触媒をセライトのパッドを通して濾過した。
その後、混合物を濃縮し、蒸留により精製して、生成物（１０）（７．１ｇ、９８．６ｍｍｏｌ、６１％）を透明な液体として得た。
ＨＲＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ4Ｈ8Ｏ［Ｍ＋Ｈ］+ ７３．０６４８  実測値  ７３．０６４７
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝５．５７−５．６７（ｍ、２Ｈ）、４．１７−４．２１（ｍ、２Ｈ）、１．８５（ｓ、１Ｈ）、１．６４−１．６７（ｍ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１２９．３５、１２７．３６、５８．４０、１３．２２
【００７９】
トリフルオロアセチルグリシン（１１）
2021519818.tif 000054
グリシン（２．５ｇ、３３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＯＨ溶液に、トリエチルアミン（４．６ｍＬ、３３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下した。
５分間撹拌した後、トリフルオロ酢酸エチル（５．２ｍＬ、４３．３ｍｍｏｌ、１．３当量）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌し、その間に透明な溶液が形成された。
次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を２Ｎ  ＨＣｌで酸性化した後、ＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出した。
有機層を合わせ、次いでブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。
溶媒を、真空中で除去して、生成物（１１）を白色結晶性固体（５．４ｇ、３１．６ｍｍｏｌ、９５％）として得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ4Ｈ4Ｆ3ＮＯ3［Ｍ−Ｈ］- １７０．００６０  実測値  １７０．００７３
ＤＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．６。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１２．９７（ｂｒ、１Ｈ）、９．８５（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１６９．９６、１５６．８７、１１７．６１、４１．０８
【００８０】
（Ｚ）-ブタ-２-エニルトリフルオロアセチルグリシネート（２１）
2021519818.tif 000055
ＤＣＣ（１４．９ｇ、７２．１ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＤＭＡＰ（０．７ｇ、５．６ｍｍｏｌ、０．１当量）を、０℃でＤＣＭ中のアリルアルコール（１０）（４．０ｇ、５５．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。
溶液を、-２０℃に冷却し、ＴＦＡで保護されたアミノ酸（１１）（１１．４ｇ、６６．６ｍｍｏｌ、１．２当量）を５分後に添加した。
反応混合物を一晩かけて室温に温めた。
ＤＣＵをろ過し、沈殿物を冷ＤＣＭで洗った後、有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２×２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（１×２００ｍＬ）およびブライン（１×２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、真空中で蒸発させた。
シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１）による精製後、生成物（２１）を淡黄色結晶として得た（１１．２ｇ、４９．９ｍｍｏｌ、９０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ8Ｈ10Ｆ3ＮＯ3［Ｍ＋Ｈ］+  ２２６．０６８６  実測値  ２２６．０６８１。
ＤＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ、４：１）：Ｒf＝０．４。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝６．９４（ｂｒ、１Ｈ）、５．７４−５．８４（ｍ、１Ｈ）、５．５１−５．６０（ｍ、１Ｈ）、４．７６（ｄ、Ｊ＝７．０５Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、１．７２（ｄｄ、Ｊ＝７．１、１．６Ｈｚ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７６．９８，１６０．８１、８３．２９、６６．６７、６１．５７、５６．９２、３３．４５、３２．０１
【００８１】
Ｂｏｃ−グリシン（１８）
2021519818.tif 000056
グリシン（１０ｇ、１３３．２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＮａＨＣＯ3（３３．６ｇ、３９９．６ｍｍｏｌ、３．０当量）を、水／ジオキサンの１：２混合物に溶解した。次いで、Ｂｏｃ2Ｏを滴下し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。
混合物を、減圧下で、濃縮した後、得られた残渣を、沈殿物が溶解するまで水で希釈し、次いで、１Ｎ  ＨＣｌで、ｐＨ３に酸性化した。その後、水溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×２５０ｍＬ）で抽出した。
有機層を合わせ、次いでブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を、真空中で除去して、生成物（１８）を白色結晶性固体（２０．７ｇ、１１８．０ｍｍｏｌ、８７％）として得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ7Ｈ13ＮＯ4［Ｍ＋Ｈ］+ １７６．０９１７  実測値  １７６．０９１９，［Ｍ＋Ｎａ］+ １９８．０７３７  実測値  １９８．０７３８
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．９
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝３．８４−３．９８（ｍ、２Ｈ）、１．４４（ｓ、９Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７４．２１、１５６．３４、８０．６３、４２．４４、２８．６５
【００８２】
（Ｚ）−ブタ−２−エニル  ｂｏｃ−グリシネート（２９）
2021519818.tif 000057
ＤＣＣ（３．７ｇ、１８．０ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＤＭＡＰ（０．２ｇ、１．４ｍｍｏｌ、０．１当量）を、０℃で、ＤＣＭ中のアリルアルコール（１０）（１．０ｇ、１３．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。溶液を、-２０℃に冷却し、５分後にｂｏｃで保護されたアミノ酸（１８）（２．７ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。反応混合物を一晩かけて室温に温めた。
ＤＣＵをろ過し、沈殿物を冷ＤＣＭで洗った後、有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（１×１５０ｍＬ）およびブライン（１×１５０ｍＬ）で洗浄した。
有機層を、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、真空中で蒸発させた。
カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１）による精製の後、生成物（２９）を無色の油状物（２．６ｇ、１１．１ミリモル、８０％）として得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ11Ｈ19ＮＯ4［Ｍ＋Ｈ］+  ２３１．１４２０，  実測値  ２３１．１４２２［Ｍ＋Ｎａ］+  ２５２．１２０６，  実測値  ２５２．１２０７
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ、５：１）：Ｒf＝０．３
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝５．６７−５．７７（ｍ、１Ｈ）、５．４７−５．５７（ｍ、１Ｈ）、５．０６（ｂｒ、１Ｈ）、４．６９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、２Ｈ）、１．６９（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）、１．４３（ｓ、９Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．７５、１５６．０４、１３０．４６、１２３．９０、７９．９４、６１．０７、４２．６７、２８．４６、１３．２７
【００８３】
（Ｚ）-ブタ-２-エニル  ｃｂｚ-グリシネート（２９ｘ）
2021519818.tif 000058
ＤＣＣ（３．７ｇ、７２．１ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＤＭＡＰ（０．２ｇ、１．４ｍｍｏｌ、０．１当量）を、０℃で、ＤＣＭ中のアリルアルコール（１０）（１．０ｇ、１３．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。
溶液を、-２０℃に冷却し、ｃｂｚで保護されたアミノ酸（３．３ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１．２当量）を５分後に添加した。
反応混合物を一晩かけて室温に温めた。
ＤＣＵをろ過し、沈殿物を冷ＤＣＭで洗った後、有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（１×１５０ｍＬ）およびブライン（１×１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、真空中で蒸発させた。
カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１）による精製後、生成物を無色油状物として得た（２．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ、７５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ14Ｈ17ＮＯ4［Ｍ＋Ｈ］+  ２６４．１２３０  実測値  ２６４．１２２３  ［Ｍ＋Ｎａ］+  ２８６．１０５０  実測値  ２８６．１０４３
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ、５：１）：Ｒf＝０．３
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝７．２０−７．２９（ｍ、５Ｈ）、５．６１−５．７１（ｍ、１Ｈ）、５．４０−５．５０（ｍ、１Ｈ）、５．２４（ｂｒ、１Ｈ）、５．０４（ｓ、２Ｈ）、４．４３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．８９（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．６１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．２６、１５６．６５、１３６．３９、１３０．６７、１２８．６９、１２８．３５、１２８．２５、１２３．８７、６７．４２、６１．０８、４２．９９、１３．４５
【００８４】
トリフルオロアセチルジデヒドロイソロイシン（３１）
2021519818.tif 000059
アルゴン雰囲気下、-２０℃で、７．７６ｍＬの乾燥ＴＨＦ中のヘキサメチルジシラザン（４．３ｇ、２６．７ｍｍｏｌ、１．２当量）に、ヘキサン中の２．５Ｍ  ｎＢｕＬｉ（８．９ｍＬ、２２．２ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加することによって、ＬＨＭＤＳ溶液を新たに調製した。
トリフルオロアセチルで保護されたグリシンクロチルエステル（２１）（１．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ、１．０当量）および乾燥塩化亜鉛（１．２ｇ、８．９ｍｍｏｌ、２．０当量）を、８ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、-７８℃に冷却した。
次に、先に調製したＬＨＭＤＳ溶液をゆっくりと添加した。
反応混合物を、室温まで一晩温め、３日間撹拌した。
ＥｔＯ2（２００ｍＬ）で希釈した後、沈殿物が有機相に完全に溶解するまで、１Ｎ  ＫＨＳＯ4を加えて、反応混合物を加水分解した。
次いで、反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ3（３×１００ｍＬ）で抽出した。
その後、固体ＫＨＳＯ4を注意深く加えて塩基性水溶液をｐＨ１に酸性化し、ＥｔＯ2（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させた。
生成物（３１）を、黄色油として得た（７００．１ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ、７０％）。
生成物の、エナンチオマー比およびジアステレオマー比の測定のために、残渣を、エーテル溶液中のトリメチルシリルジアゾメタンで処理した。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ8Ｈ9Ｆ3ＮＯ3［Ｍ−Ｈ］-  ２２４．０５２９  実測値  ２２４．０５３６
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．９５
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝６．６３（ｂｒ、１Ｈ）、５．６６−５．７７（ｍ、１Ｈ）５．１９−５．２７（ｍ、２Ｈ）、４．６６（ｑ、Ｊ＝４．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０−２．９９（ｍ、１Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝７．０４Ｈｚ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７５．３７、１５７．６７、１３６．３７、１１８．３７、１１７．００、５６．４３、３９．５６、１６．３２
【００８５】
トリフルオロアセチルジデヒドロイソロイシン（３１）
2021519818.tif 000060
トリフルオロアセチルで保護されたグリシンクロチルエステル（２１）（１．０当量）、乾燥アルミニウムイソプロポキシド（１．２５当量）およびキニジン（２．５当量）を乾燥ＴＨＦに溶解し、-７８℃に冷却した。
次に、ＬＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ、５．５当量）をゆっくり添加した。
反応混合物を、室温まで一晩温め、２日間撹拌した。
ＥｔＯ2で希釈した後、沈殿物が有機相に完全に溶解するまで、１Ｍ  ＫＨＳＯ4を加えて、反応混合物を加水分解した。
次に、反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ3で抽出した。
その後、固体ＫＨＳＯ4を注意深く加えて、塩基性水溶液をｐＨ１に酸性化し、ＥｔＯ2で抽出した。
合わせた有機層を、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させた。転位生成物（３１）を黄色油状物（７２％）として得た。
生成物のエナンチオマー比およびジアステレオマー比の測定のために、残渣を、エーテル溶液中のトリメチルシリルジアゾメタンで処理した。
【００８６】
Ｂｏｃ−４，５−ジデヒドロイソロイシン（３９）
2021519818.tif 000061
アルゴン雰囲気下、-２０℃で、６．１ｍＬの乾燥ＴＨＦ中のヘキサメチルジシラザン（３．４ｇ、２０．９ｍｍｏｌ、１．２当量）に、ヘキサン中の２．５Ｍ  ｎＢｕＬｉ（７．０ｍＬ、１７．５ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加することによって、ＬＨＭＤＳ溶液を新たに調製した。
Ｂｏｃで保護されたグリシンクロチルエステル（８３）（８００．０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ、１．０当量）および乾燥塩化亜鉛（９５１．０ｇ、８．９ｍｍｏｌ、２．０当量）を、７ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、-７８℃に冷却した。
次に、先に調製したＬＨＭＤＳ溶液をゆっくりと添加した。
反応混合物を室温まで一晩温め、３日間撹拌した。
ＥｔＯ2（２００ｍＬ）で希釈した後、反応混合物を、沈殿物が有機相に完全に溶解するまで、１Ｎ  ＫＨＳＯ4を加えて加水分解した。
次いで、飽和ＮａＨＣＯ3（３×１００ｍＬ）で抽出した。その後、固体のＫＨＳＯ4を注意深く加えて、塩基性水溶液をｐＨ１に酸性化し、ＥｔＯ2（３×５０ｍＬ）で抽出した。
合わせた有機層を、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させた。
フラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／２％メタノール）による精製後、生成物（３９）を、淡黄色油状物（２６７．２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、３４％）として得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ8Ｈ9Ｆ3ＮＯ3［Ｍ−Ｈ］-  ２２４．０５２９  実測値  ２２４．０５３６
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．９５
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝６．６３（ｂｒ、１Ｈ）、５．６６−５．７７（ｍ、１Ｈ）、５．１９−５．２７（ｍ、２Ｈ）、４．６６（ｑ、Ｊ＝４．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０−２．９９（ｍ、１Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝７．０４Ｈｚ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７５．３７、１５７．６７、１３６．３７、１１８．３７、１１７．００、５６．４３、３９．５６、１６．３２
【００８７】
トリフルオロアセチル  ４，５−ジデヒドロイソロイシンメチルエステル
2021519818.tif 000062
トリフルオロアセチル  ４，５-ジデヒドロイソロイシン（６７）（３０．０ｍｇ、１３３．２μｍｏｌ、１．０当量）を、ＭｅＯＨ／トルオールの１：１混合物に溶解した。
次に、トリメチルシリルジアゾメタン（１５．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下し、反応混合物を、室温で３０分間撹拌した。
溶媒を減圧下で蒸発させた後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、５：１）により精製して、生成物を無色油状物として得た（２９．５ｍｇ、１２３．３μｍｏｌ、９３％）。
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ、４：１）：Ｒf＝０．６
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝６．６８（ｂｒ、１Ｈ）、５．６２−５．７２（ｍ、１Ｈ）、５．１１−５．２１（ｍ、２Ｈ）、４．６１（ｑ、Ｊ＝４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、２．８１−２．９０（ｍ、１Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．６７、１５７．３９、１３６．９２、１１８．１１、１１４．２４、５６．９８、５３．１１、４０．３８、１６．０４
【００８８】
Ｎ−アセチル  ４，５−ジデヒドロイソロイシン（３２）
2021519818.tif 000063
トリフルオロアセチル化アミノ酸（３１）（３７５．０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ、１．０当量）を、８ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、Ｋ2ＣＯ3（１１５３．９ｍｇ、８．４ｍｍｏｌ、５当量）を加えた。
次いで、反応混合物を、ＴＬＣによってモニターし、脱保護が完了するまで２時間還流した。その後、混合物を、ろ過して、Ｋ2ＣＯ3を除去した。溶媒を、減圧下で除去し、得られた残渣を８ｍＬのＴＨＦに溶解した。
次に、無水酢酸（７８７．８μｌ、８．４ｍｍｏｌ、３．０当量）を滴下した。
反応混合物を６時間還流した後、溶媒を真空中で除去した。
フラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／５％メタノール）による精製後、生成物（９１）を褐色油状物として得た（２６０．０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、９０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ8Ｈ13ＮＯ3［ＭＨ］-  １７０．０８１２  実測値  １７０．０８１９
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．９８
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ（ｐｐｍ）＝７．９８（ｔ，Ｊ＝９．９６Ｈｚ、１Ｈ）、５．６８−５．８３（ｍ、１Ｈ）、４．９６−５．０８（ｍ、２Ｈ）、４．３０−４．２２（ｍ、１Ｈ）、２．５６−２．６６（ｍ、１Ｈ）、１．８３−１．９２（ｍ、３Ｈ），０．９７（ｄｄ，Ｊ＝４．４、２．７Ｈｚ、３Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ（ｐｐｍ）＝１７３．０１、１６９．６３、１３９．９２、１１５．３４、５６．３８、２２．４９、１６．８７、１５．２６
【００８９】
４，５−ジデヒドロイソロイシン（３０）
2021519818.tif 000064
０．１Ｍリン酸緩衝液（３０ｍＬ、ｐＨ７．５）および４Ｍ  ＫＯＨ（２．１ｍＬ、８．３ｍｍｏｌ、１．０当量）中のラセミＮ-アセチル化２-アミノ-３-メチルペンテン酸（１４１２．４ｍｇ、８．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、アスペルギルス・メレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ）からのアシラーゼＩ（７００ｍｇ）を添加した。
３５℃で、６時間後、反応混合物をｐＨ３に酸性化し、ＰＴＦＥ膜フィルター（孔径０．２μｍ）を通して濾過した。
その後、濾液を、ジエチルエーテル（３×２０ｍＬ）で抽出し、真空中で濃縮した。粗生成物をさらに精製することなく次の反応工程に供した。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ6Ｈ11ＮＯ2［Ｍ＋Ｈ］+  １３０．０８６３  実測値  １３０．０８５８
［Ｍ＋Ｎａ］+  １５２．０６８２  実測値  １５２．０６８０
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．４５
【００９０】
Ｆｍｏｃ−４，５−ジデヒドロイソロイシン（３５）
2021519818.tif 000065
水／アセトニトリルの１：１混合物１０ｍＬ中の４，５-ジデヒドロイソロイシン３０（３００．０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、ＮａＨＣＯ3（５８５．４ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ、３．０当量）およびＦｍｏｃ-ＯＳｕ（１０２０．０ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。
１６時間撹拌した後、反応混合物を水５０ｍＬで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌで、ｐＨ２に酸性化し、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、真空中で濃縮した。
粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／５％メタノール）により精製して、Ｆｍｏｃで保護されたアミノ酸３５を、白色結晶性固体として得た（７００．０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、８６％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ21Ｈ21ＮＯ4  ［Ｍ＋Ｈ］+  ３７４．１３６３  実測値  ３７４．１３６０
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｂｕ／Ｈ2Ｏ／ＡｃＯＨ、２：１：１：１）：Ｒf＝０．９
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ（ｐｐｍ）＝８．４９（ｂｒ、１Ｈ）、７．６８（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．４４−７．５４（ｍ、２Ｈ）、７．３２（ｔ、Ｊ＝７．０２Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｔ、Ｊ＝７．０２Ｈｚ、２Ｈ）、５．４５−５．７３（ｍ、１Ｈ）、５．１８−５．３２（ｍ、１Ｈ）、５．０１−５．１７（ｍ、１Ｈ）、４．３０−４．３７（ｍ、２Ｈ）、４．１２−４．１９（ｍ、１Ｈ）、２．３９−２．５４（ｍ、１Ｈ）、２．４４−２．５２（ｍ、１Ｈ）、１．６０（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．０５（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ（ｐｐｍ）＝１７７．０１、１５６．０４、１４３．５８、１４１．４５、１３７．２０、１３０．６７、１２７．９３、１２７．０２、１２５．２０、１２４．１３、１２０．１８、１１７．６０、６７．４６、５８．０４、５３．３３、４７．２５、３９．６５、３５．０９
【００９１】
Ｆｍｏｃ-４，５-ジデヒドロイソロイシン  ｔｅｒｔ-ブチルエステル（３６）
2021519818.tif 000066
ｐ-トルエンスルホニルクロリド（２４４．１ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ、１．５当量）を、３ｍＬピリジン中のＦｍｏｃ保護４，５-ジデヒドロイソロイシン（３５）（３００．０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に添加した。
反応混合物を０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブタノール（１６０．０μｌ、１．７ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加し、室温まで一晩温めた。
１６時間撹拌した後、ジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加した。
有機溶液を、１Ｎ  ＨＣｌ（３×５０ｍＬ）で洗浄し、真空中で蒸発させた。
粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、１０：１）により精製して、完全に保護されたアミノ酸３６を無色の油として得た（２００．５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、５７％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ25Ｈ29ＮＯ4  ［Ｍ＋Ｈ］+  ４４２．２２２４  実測値  ４４２．２２３０
ＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘａｎ／ＥｔＯＡｃ、１０：１）：Ｒf＝０．３。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝７．６８（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．２２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、５．５９−５．６９（ｍ、１Ｈ）、５．１２−５．１９（ｍ、１Ｈ）、４．９９−５．０９（ｍ、２Ｈ）、４．２５−４．３４（ｍ、２Ｈ）、４．１２−４．２５（ｍ、２Ｈ）、２．６４−２．７６（ｍ、１Ｈ）、１．３９（ｓ、９Ｈ）、１．０１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、
13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．６３、１５６．５０、１４４．０４、１４１．７６、１３７．９６、１２７．９３、１２７．０２、１２５．２０、１２５．２０、１２０．１８、１１６．６９、８２．３５、６７．１５、５８．３４、４７．１０、４０．５６、１６．０２
【００９２】
Ｆｍｏｃ−４，５−ジヒドロキシイソロイシン  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４６）
2021519818.tif 000067
末端アルケン３６（１７７．０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を、水／ｔ−ＢｕＯＨの１：１混合物２．７ｍＬに溶解し、次いで、ＡＤ−ｍｉｘ−s（１１２０．０ｍｇ、２８００ｍｇ／ｍｍｏｌ；アルドリッチカタログ番号３９２７６６）を添加した。
１６時間激しく攪拌した後、Ｎａ2ＳＯ3（６００．０ｍｇ、１５００ｍｇ／ｍｍｏｌ）を加えて反応を停止させた。
次に、混合物を３０ｍＬの水で希釈し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。
合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、減圧蒸発させた。
粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／５％メタノール）により精製して、ジヒドロキシル化アミノ酸４６を、白色粉末として得た（７．９ｍｇ、１７．９μｍｏｌ、４％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ25Ｈ31ＮＯ6  ［Ｍ＋Ｈ］+  １１０４．５４６８  実測値  １１０４．５４５４  ［Ｍ＋Ｎａ］+  ４６４．２０４４  実測値  ４６４．２０４６
【００９３】
Ｆｍｏｃ−４，５−ジデヒドロイソロイシン  ジシクロプロピルメチルエステル（４７）
2021519818.tif 000068
化合物３０ａ（８６０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を、１０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＤＭＡＰ（３０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、０．１当量）、ＥＤＣｘＨＣｌ（９１０ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ、１．９当量）およびジシクロプロピルメチルアルコール（４２０ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ、１．５当量）で処理した。溶液を２２℃で、２４時間撹拌した。
溶媒を減圧下で除去し、残渣を、２０ｍＬのメチル  ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）および２０ｍＬの水に溶解した。有機層を、水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。
粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（イソヘキサン／ＭＴＢＥ  ４：１（ｖ／ｖ））により精製して、所望の生成物４７を無色油状物（６００ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ、５６％）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ28Ｈ31ＮＯ4  ［Ｍ＋Ｈ］+  ４４６．２３  実測値  ４４６．２１  ［Ｍ＋Ｈ］+
【００９４】
Ｆｍｏｃ−４，５−ジヒドロキシイソロイシン  ジシクロプロピルメチルエステル（４８）
2021519818.tif 000069
完全に保護されたＦｍｏｃ-４，５-ジデヒドロイソロイシン誘導体４７（２５５ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、１当量）を、１２ｍＬのＣＨＣｌ3／Ｈ2Ｏの１：１混合物（ｖ／ｖ）に溶解し、ＡＤ−ｍｉｘ−s（１５９６．０ｍｇ、２８００ｍｇ／ｍｍｏｌ；アルドリッチカタログ番号３９２７６６）で処理し、２２℃で、７２時間撹拌した。
出発物質が検出されなくなった後（ＨＰＬＣ−ＭＳを介したＩＰＣ）、溶液を濾過し、２つの層を分離した。
有機層を、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。
最後に、２６０ｍｇの粗化合物４８（０．５４ｍｍｏｌ、粗収率９５％）を得、残渣をさらに精製せずに次の反応に使用した。
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ28Ｈ34ＮＯ6   ［Ｍ＋Ｈ］+  ４８０．２９  実測値  ４８０．１８  ［Ｍ＋Ｈ］+および  ５０２．１８  ［Ｍ＋Ｎａ］+
【００９５】
Ｆｍｏｃ-４，５-ジオキシ（テトラ-イソプロピル-ジシロキサン）イソロイシン  ジシクロプロピルメチルエステル（４９）
2021519818.tif 000070
基質４８（２６０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１当量）を５ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解し、イミダゾール（１５５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ、４．２当量）および１，３-ジクロロ-テトラ-イソプロピル-ジシロキサン（３４１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、２当量）で処理した。溶液を２２℃で１６時間撹拌した。
ＩＰＣ（ＨＰＬＣ-ＭＳ）が完全な変換を示した後、２０ｍＬのＥｔＯＡｃおよび２０ｍＬの水を反応溶液に添加した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で再び抽出した。
合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を減圧除去した。
得られた４９の残渣を、さらに精製することなく、次の脱保護反応に使用した。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ40Ｈ60ＮＯ7Ｓｉ2 ［Ｍ＋Ｈ］+  ７２２．３９  実測値  ７２２．３１  ［Ｍ＋Ｈ］+および  ７４４．３１  ［Ｍ＋Ｎａ］+
【００９６】
Ｆｍｏｃ−４，５−ジオキシ（テトライソプロピルジシロキサン）イソロイシン（５０）
2021519818.tif 000071
ジオール保護反応から得た、粗４９（０．５４ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬの０．０３Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解し、２２℃で４８時間撹拌した。
上述の期間の後、ＩＰＣ（ＨＰＬＣ-ＭＳ）は、所望の標的分子への完全な変換を示した。
従って、溶媒を減圧除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  １９０：１０：１（ｖ／ｖ／ｖ））により精製して、所望のアミノ酸誘導体５０（２１８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、５３％）を無色〜わずかに黄色の油状物として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃ  ｆｏｒ  Ｃ33Ｈ50ＮＯ7Ｓｉ2  ［Ｍ＋Ｈ］+  ６２８．３１  実測値  ６２８．２３  ［Ｍ＋Ｈ］+
ＴＬＣ（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ  １９０：１０：１）：Ｒf＝０．２４
【図１】
2021519818.tif 000099
【図２】
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【図３】
2021519818.tif 000101
【図４】
2021519818.tif 000102
【国際調査報告】
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2021519818.tif 000104
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