(57)【要約】  本発明は、ＬＤＬ受容体をアップレギュレートし、細胞外ＬＤＬコレステロールの取込みを促進し、かつ細胞間総コレステロールを減らすためのカルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体の使用に関する。本発明は、カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体とスタチンまたは他の脂質低下剤とを、ＬＤＬコレステロールの低減における相乗効果および副作用低減のための併用療法として使用することにも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＤＬ受容体の活性をアップレギュレートするためと、細胞内の細胞間ＬＤＬコレステロールの取込み、内在化およびクリアランスを促進するためと、スタチンまたは他の脂質低下剤との併用療法により相乗効果を達成する、またはニーズのある患者に対する毒性または副作用を低減するための薬剤の製造における、医薬組成物内の、構造式Ｉに記載の（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体の化合物およびこれらの活性エナンチオマならびにこれらの薬学的に許容される塩の使用方法であって、
前記構造式Ｉは、
【化１】
2021533190.tif 000011
であり、
Ａは、置換または無置換アルキル、置換または無置換アルケニル、置換または無置換アリール、置換または無置換シクロアルキルから選択され、
Ｂは、水素または−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）から選択され、
ＷおよびＸは、独立して、水素、置換または無置換アルキルから選択され、
Ｃは、水素または−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）から選択され、
ＹおよびＺは、独立して、水素、置換または無置換アルキルから選択される、
方法。
【請求項２】
前記化合物は、構造式ＩＩ：
【化２】
2021533190.tif 000012
に示されるＲ−バンブテロールであり、
構造式Ｉにおいて、Ａは、ｎ−ブチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、ＷおよびＸは、メチルであり、Ｃは、−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）であり、ＹおよびＺは、メチルである、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物は、構造式ＩＩＩ：
【化３】
2021533190.tif 000013
３−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシエチル）−５−ヒドロキシフェニルジメチルカルバメートバンブテロールモノカルバメート（ＭＯＮＯ）
に示されるＲ−モノ−バンブテロールであり、
構造式Ｉにおいて、Ａは、ｎ−ブチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、ＷおよびＸは、メチルであり、Ｃは、水素である、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物は、構造式ＩＶ：
【化４】
2021533190.tif 000014
５−（１−ヒドロキシ−２−（ｔｅｒｔ−ペンチルアミノ）エチル）−１，３−フェニレンビス（エチル（メチル）カルバメート）
に示されるエチル化バンブテロールであり、
構造式Ｉにおいて、Ａは、ｔｅｒｔ−ペンチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、Ｗは、メチルであり、Ｘは、エチルであり、Ｃは、−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）であり、Ｙは、メチルであり、Ｚは、エチルである、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アップレギュレートする活性は、前記受容体の発現の増加と、ＬＤＬＣ−ＬＤＬ受容体の結合の増加と、ＬＤＬＣ−ＬＤＬ受容体複合体の細胞空隙から細胞への内在化の増加とを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記クリアランスは、ＬＤＬコレステロールの合成の低減である、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記クリアランスは、ＬＤＬコレステロールの代謝の増加である、
請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記クリアランスは、コレステロールの胆汁酸形式での分泌である、
請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞は、肝細胞、筋細胞、平滑筋細胞、心臓細胞、内皮細胞、腎臓細胞、網膜細胞、神経細胞、グリア細胞、マクロファージ、およびＬＤＬコレステロールを取り込む、または合成することができる他の細胞である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＬＤＬ受容体の前記アップレギュレートする活性またはＬＤＬコレステロールのクリアランスは、酪酸コリンエステラーゼの阻害を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記毒性の低減は、酪酸コリンエステラーゼの阻害を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記脂質低下剤は、スタチンである、
請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記スタチンは、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンより成るグループから選択される、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記脂質低下剤は、エゼチミブ、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート酸（フィブラート）、ニコチン酸、コレスチラミンまたはコレスチポール（樹脂）、コレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害薬より成るグループから選択されるコレステロール吸収または輸送阻害薬である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記脂質低下剤は、エボロクマブ、アリロクマブ、ボコシズマブおよびインクリシランより成るグループから選択されるＰＣＳＫ９阻害薬である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記併用療法は、ニーズのある患者へ同時的、連続的または別々に投与するための、構造式Ｉの化合物のうちの少なくとも１つと、請求項１に記載の少なくとも１つの脂質低下剤とで構成される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記併用療法は、量比１〜９９％である構造式Ｉの化合物のうちの少なくとも１つと、量比１〜９９％である請求項１に記載の少なくとも１つの脂質低下剤とで構成される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記医薬組成物は、錠剤、カプセル、顆粒、坐剤、軟膏、徐放性製剤、皮膚パッチ、水溶液および吸入エアロゾルより成るグループから選択され、経口、局所、直腸、膣、非経口注射、肺吸入、鼻内噴霧または移植に使用される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
薬学的に許容される塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、２水素リン酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化物、硫酸メチル、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、グリコン酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒｉｃ）、乳酸塩（ｌａｃｔｉｃ）、ピルビン酸塩（ｐｙｒｕｖｉｃ）、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩またはパラトルエンスルホン酸塩より成る無機酸または有機酸群から選択される、
請求項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＬＤＬ受容体をアップレギュレートし、かつ肝細胞および他の細胞によるＬＤＬコレステロールの取込みを促進するための、Ｒ−バンブテロールを含むカルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体の使用法に関する。また、本発明は、細胞間ＬＤＬコレステロールの代謝回転またはクリアランスを増強し、よって血液からのＬＤＬコレステロールのクリアランスを促進するための、Ｒ−バンブテロールを含むカルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体の使用法にも関する。ＬＤＬコレステロールを下げることは、高脂血症の治療における最も重要な目標である。ＬＤＬコレステロールと心血管リスクとの因果関係は、十分に確立されている［Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｇ．Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬＤＬ−Ｃ  ａｎｄ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｉｓｋ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ．ＪＡＭＡ  Ｖｏｌｕｍｅ  ３１６：１２，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２７，２０１６］。しかしながら、心血管リスクと血中総コレステロールまたはトリグリセリド濃度との関係についてはいまだ論争がある［Ｍｅｅｒａ  Ｓｅｎｔｈｉｌｉｎｇａｍ，Ｓｔａｔｉｎｓ  ｏｒ  ｎｏｔ？  Ｎｅｗ  ｓｔｕｄｙ  ａｉｍｓ  ｔｏ  ｈｅｌｐ  ｄｏｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｄｅｃｉｄｅ，ＣＮＮ，Ｓｅｐ８，２０１６；Ｒｏｂｅｒｔ  ＤｕＢｒｏｆｆ，Ｍｉｃｈｅｌ  ｄｅ  Ｌｏｒｇｅｒｉｌ，Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｃｏｎｆｕｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔａｔｉｎ  ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｙ，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２０１５  Ｊｕｌｙ  ２６；７（７）：４０４−４０９］。
【０００２】
ＬＤＬ受容体およびＬＤＬコレステロールは、高脂血症の臨床管理にとって最も重要な治療標的である。一般的に使用されるスタチンの主たる標的またはメカニズムは、総コレステロールの合成をブロックすることである。スタチンの欠点は、副作用にある。主な副作用は、筋肉痛、糖尿病、肝障害、神経系、他であった。コレステロールは、生理学的機能において重要な役割を果たす様々な脂質やホルモンの構成成分でもあることから、スタチンによる、血中コレステロールを下げること以外のこれらのオフターゲット作用は、体組織内でのスタチンによるコレステロール合成の非選択的阻害によるものであった。よって、細胞内ＬＤＬコレステロールを精確に標的とすることができ、かつ副作用がより少ない薬を提供することが望ましい。こうした目的で入手可能な薬は、ほとんどない。本発明は、ＬＤＬ受容体に明確に作用して、細胞内の、実際には肝細胞におけるＬＤＬコレステロールのクリアランスを増強する、満たされていないこの医療ニーズに応える新しいクラスの薬剤を開示している。
【０００３】
スタチンは、２０年以上使用されていて、今や高脂血症治療薬市場全体の約９０％を占める。スタチンは、今もなお最も一般的に使用されている薬剤であるが、深刻な副作用がある。加えて、スタチン療法は、患者の３０％には効果がない。本発明は、ＬＤＬコレステロールを下げることにおいて増強された、かつ相乗的な治療効果を達成するために、Ｒ−バンブテロールを含むカルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体を、高脂血症治療におけるスタチンおよび他の脂質低下剤と組み合わせる使用法にも関する。また、本発明は、スタチンおよび他の脂質低下剤により誘発される毒性および副作用を低減するために、カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体をスタチンおよび他の脂質低下剤と組み合わる使用法にも関する。
【背景技術】
【０００４】
脂質異常症は、広範囲の疾患である。これには、血中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）複合型コレステロールおよび低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）複合型コレステロールの増加が含まれ得る。脂質異常症の主な合併症は、コレステロールの沈着による主幹動脈の損傷および炎症反応であり、これにより、動脈硬化およびプラークが形成される。抵抗性細動脈の動脈硬化は、高血圧に繋がる可能性もある。一方で、損傷した冠動脈または脳動脈は、組織虚血を引き起こす可能性もあり、さらに、血管壁からのプラークの落下は、心臓アタッチまたは脳卒中を引き起こす閉塞物を即時形成する可能性もある。高脂血症が心血管疾患のリスクを高めることは、医学界における一般的理解である。最近では、高い血中コレステロールが心血管疾患の罹患率を高くするものではなく、かなりの数の心血管疾患が血中脂質またはコレステロールの正常な患者、または低い患者にも認められたことを示す臨床試験のメタ分析によって、高血中脂質と心血管罹患率との間に因果関係があるかどうかについて論争がある。とはいえ、血中ＬＤＬコレステロールと心血管疾患リスクとの間に明確な因果関係があったということについては、主要な臨床試験によって十分に受け入れられ、かつ追認されている。血中ＬＤＬコレステロール濃度が低いほど、患者の心血管転帰に対するより有益な効果に関連することが多い。したがって、脂質異常症の現在の診療管理の主たる目標は、依然として、血中ＬＤＬコレステロールの濃度を下げることにある。
【０００５】
過去数十年、親油性スタチンは、脂質低下、特にＬＤＬコレステロールを低下させるための主要な薬剤である。スタチンの主たる作用機序は、鍵酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを競合的に阻害することによって、コレステロールの合成を阻止するというものである。しかしながら、患者の約３０％以上は、スタチンによる治療に反応しない。加えて、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼは、コルチコステロイド、性ホルモン、他などの、他のステロイド化合物の体内合成に関与する鍵酵素でもある。したがって、スタチンの長期使用は、筋肉痛および糖尿病、肝毒性さらには最近報告されている心臓障害のリスクなどの深刻な副作用を引き起こす［Ｆｒａｎｃｏｉｓ  Ｍａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｔａｔｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ  ｖｓ．ｔｈｅ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ，ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ，ｒｅｎａｌ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ  ａｎｄ  ｃａｔａｒａｃｔ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌｕｍｅ  ３９，Ｉｓｓｕｅ  ２７，１４  Ｊｕｌｙ  ２０１８，Ｐａｇｅｓ  ２５２６、ＬＰ  Ｃａｈａｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｔａｔｉｎｓ  ｏｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｘｅｒｃｉｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｖｅｒｓｕｓ  ｓｙｓｔｏｌｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ  Ｃｈｅｓｔ．１３６（４）（２００９）］。
【０００６】
また、患者の約３０％には、スタチン療法に耐性がある。よって、より精密にＬＤＬコレステロールを標的とし、かつ副作用が少ない薬剤を提供することが望ましい。こうした目的で入手可能な薬は、ほとんどない。本発明は、ＬＤＬ受容体に明確に作用して、細胞内ＬＤＬコレステロールを下げる、満たされていないこの医療ニーズに応える新しいクラスの薬剤を開示している。
【０００７】
エゼチミブは、別のクラスの脂質低下薬を代表するものである。エゼチミブは、肝臓ならびに腸におけるコレステロール輸送に関与するニーマンピックＣ１様１タンパク質（ＮＰＣ１Ｌ１）を阻害することによる、腸のコレステロール吸収の阻害薬である。したがって、これは、より良い血中脂質低下効果を達成するために、コレステロール合成阻害薬スタチンと組み合わせて使用されることが多い。
【０００８】
脂質異常症の治療における最近の成功は、静脈内に投与される新開発の薬剤ＰＣＳＫ９抗体の販売である。ＰＣＳＫ９抗体は、血中ＬＤＬコレステロールを大幅に低下させることができる。ＰＣＳＫ９の作用機序は、スタチンとは異なり、ＰＣＳＫ９と呼ばれる血液中の特定のタンパク質を阻止する。ＰＣＳＫ９は、細胞質ゾル内のＬＤＬ受容体を分解できるプロテアーゼとして作用することが分かっており、よって、ターンオーバの速度および膜に戻るＬＤＬの量を減らす。ＬＤＬ受容体の減少は、血中ＬＤＬコレステロールの輸送および代謝物質を減少させ、血中ＬＤＬコレステロールの増加をもたらす。患者におけるＬＤＬコレステロールの上昇は、ＰＣＳＫ９抗体を用いるＰＣＳＫ９タンパク質の阻止によって大幅に減少される［Ｆｉｏｒｅｌｌａ  Ｄｅｖｉｔｏ  ｅｔ．ａｔ．Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ：Ａ  ＰＣＳＫ９  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｖｏｌ．１２０，Ｄｅｃ．（２０１５）］。
【０００９】
しかしながら、脂質異常症は慢性的であって、即または直に生命を脅かす疾患ではないことから、ＰＣＳＫ９の静脈内注射製剤に対する患者のコンプライアンスがその臨床適用の主な欠点となっている。さらに、ＰＫＳＣ９抗体治療を受けた患者に認知障害などの何らかの深刻な悪影響があることを明らかにしている臨床試験も幾つか存在する［Ｓｗｉｇｅｒ  ＫＪ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ  ＳＳ．ＰＣＳＫ９  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔｓ：ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ＦＤＡ  ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ａ  ｐｒｏｐｏｓａｌ  ｆｏｒ  Ｎ−ｏｆ−１  ｔｒｉａｌｓ．Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ．Ｊｕｎ；３８（６）：５１９−２６，（２０１５）］。
【００１０】
Ｒ−バンブテロールは、マウスおよびヒト被検者において脂質低下効果を有する［Ｗｅｎ  Ｔａｎ，Ｒ−Ｂａｍｂｕｔｅｒｏｌ，ｉｔｓ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅｓ，ＥＰ２００２０８０７６７８］。Ｒ−バンブテロールは、経口投与されると血中の総コレステロールおよびＬＤＬコレステロールを下げる［Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｌｉｐｉｄ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｒ−ｂａｍｂｕｔｅｒｏｌ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ：Ａ  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｙ，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ２（２０１５）３５６］。
【００１１】
しかしながら、血中コレステロールが影響を受け得る方法は、多様である。血中コレステロールは、腸内での吸収、合成、胆汁酸吸着剤、血液と細胞との間コレステロール輸送、肝臓または他の臓器によるコレステロールの取込み、ＬＤＬ受容体の活性または機能、他によって影響される可能性もある。Ｒ−バンブテロールの作用機序または作用標的は、これまでのところ明確でない。ＬＤＬ受容体に対するＲ−バンブテロールの役割、ならびに細胞内ＬＤＬコレステロールの代謝回転に対するその役割は、不明なままである。
【００１２】
これは、Ｒ−バンブテロールが酪酸コリンエステラーゼ（ＢｕＣｈＥ）の最も効力のある阻害薬のうちの１つであるという理由で、ＢｕＣｈＥの活性の阻害に関連づけられ得る。ＢｕＣｈＥの高度な発現または増強された活性は、高脂血症および肥満に関連づけられている［Ｋｕｔｔｙ，ＫＭ  ｅｔ，ａｌ．Ｓｅｒｕｍ  ｐｓｅｕｄｏｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ：ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｒａｔｉｏ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  １１５（１）：５５−６１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ（１９８１）、Ｃａｌｄｅｒｏｎ−Ｍａｒｇａｌｉｔ  ｅｔ  ａｌ．：ＢｕＣｈＥ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｉｓｋ  Ｆａｃｔｏｒｓ，ａｎｄ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：５０００（２００６）］。しかしながら、論争もまた存在する。ＢｕＣｈＥとＬＤＬまたはコレステロールとの因果関係は、確立されていない。ＢｕＣｈＥのノックアウトマウスでは、高脂肪食を与えた場合、野生型マウスより体重が増加したことが報告されている［Ｃｈｅｎ  ＹＰ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｕｔｙｒｉｃ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｌｉｐｉｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ  ｏｎ  ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５７：３０８６−３０５９，（２０１６）］。
【００１３】
Ｒ−バンブテロールは、テルブタリンのプロドラッグである。本発明で開示しているＬＤＬ受容体およびＬＤＬコレステロールに対する効果は、我々の調査では、その親ドラッグであるテルブタリンに関連づけられなかった。さらに、ＢｕＣｈＥとＬＤＬ受容体、ならびにＢｕＣｈＥ阻害薬とＬＤＬ受容体との関係は、これまでに研究されたことがない。従来技術において、Ｒ−バンブテロールによる血中の脂質およびＬＤＬコレステロールの低下を担う標的が何であるかについては、不明のままである。Ｒ−バンブテロールが作用する対象がＬＤＬ受容体であるか、細胞内コレステロールのクリアランスであるか、もしくはその双方であるかについては、研究されていない［ＷｅｎＴａｎ，Ｒ−Ｂａｍｂｕｔｅｒｏｌ，ｉｔｓ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅｓ，ＥＰ２００２０８０７６７８］。
【００１４】
さらに、Ｒ−バンブテロールは、β２アゴニストであるテルブタリンのプロドラッグである。β２アゴニストは、脂質に関与する幾つかの経路を調整し、よってコレステロールおよびＬＤＬ−Ｃを下げ得ると考えられている。テルブタリンのようなβ２アゴニストは、コレステロール、脂肪酸およびトリグリセリドの生合成を調節するステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）を刺激し得る。Ｒ−バンブテロールの脂質低下作用は、親ドラッグであるテルブタリンに起因し得ると考えられている。したがって、Ｒ−バンブテロールが脂質を低下させるという事実は、脂質代謝におけるベータ−２アゴニストの役割を実証するものであり、脂質異常症患者の満たされていない臨床ニーズに対処する別のクラスの薬剤が提供され得る［Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｈ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｂｅｔａ−２  Ａｇｏｎｉｓｍ：Ａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ．ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ  ２（２０１５）２８４］。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｆｒａｎｃｏｉｓ  Ｍａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｔａｔｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ  ｖｓ．ｔｈｅ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ，ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ，ｒｅｎａｌ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ  ａｎｄ  ｃａｔａｒａｃｔ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌｕｍｅ  ３９，Ｉｓｓｕｅ  ２７，１４  Ｊｕｌｙ  ２０１８，Ｐａｇｅｓ  ２５２６、ＬＰ  Ｃａｈａｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｔａｔｉｎｓ  ｏｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｘｅｒｃｉｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｖｅｒｓｕｓ  ｓｙｓｔｏｌｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ  Ｃｈｅｓｔ．１３６（４）（２００９）
【非特許文献２】Ｆｉｏｒｅｌｌａ  Ｄｅｖｉｔｏ  ｅｔ．ａｔ．Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ：Ａ  ＰＣＳＫ９  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｖｏｌ．１２０，Ｄｅｃ．（２０１５）
【非特許文献３】Ｓｗｉｇｅｒ  ＫＪ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ  ＳＳ．ＰＣＳＫ９  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔｓ：ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ＦＤＡ  ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ａ  ｐｒｏｐｏｓａｌ  ｆｏｒ  Ｎ−ｏｆ−１  ｔｒｉａｌｓ．Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ．Ｊｕｎ；３８（６）：５１９−２６，（２０１５）
【非特許文献４】Ｗｅｎ  Ｔａｎ，Ｒ−Ｂａｍｂｕｔｅｒｏｌ，ｉｔｓ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅｓ，ＥＰ２００２０８０７６７８
【非特許文献５】Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｌｉｐｉｄ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｒ−ｂａｍｂｕｔｅｒｏｌ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ：Ａ  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｙ，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ２（２０１５）３５６
【非特許文献６】Ｋｕｔｔｙ，ＫＭ  ｅｔ，ａｌ．Ｓｅｒｕｍ  ｐｓｅｕｄｏｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ：ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｒａｔｉｏ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  １１５（１）：５５−６１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ（１９８１）、Ｃａｌｄｅｒｏｎ−Ｍａｒｇａｌｉｔ  ｅｔ  ａｌ．：ＢｕＣｈＥ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｉｓｋ  Ｆａｃｔｏｒｓ，ａｎｄ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：５０００（２００６）
【非特許文献７】Ｃｈｅｎ  ＹＰ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｕｔｙｒｉｃ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｌｉｐｉｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ  ｏｎ  ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５７：３０８６−３０５９，（２０１６）
【非特許文献８】ＷｅｎＴａｎ，Ｒ−Ｂａｍｂｕｔｅｒｏｌ，ｉｔｓ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅｓ，ＥＰ２００２０８０７６７８
【非特許文献９】Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｈ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｂｅｔａ−２  Ａｇｏｎｉｓｍ：Ａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ．ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ  ２（２０１５）２８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
脂質異常症に対する満たされていない医学的ニーズは、ＬＤＬコレステロールの受容体およびＬＤＬコレステロールの細胞内クリアランスに明確に作用できる、副作用の少ない薬剤を発見することである。加えて、今日の主たる抗脂質薬となっているスタチンの毒性を減らし、かつその効力を高め得る薬剤を発見することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
ある実施形態において、本発明は、Ｒ−バンブテロールの新しい使用法を開示している。本発明は、Ｒ−バンブテロールが、蛍光標識ＬＤＬコレステロールを用いて、ＬＤＬコレステロールならびに酸化ＬＤＬ（ｏｘ−ＬＤＬ）の細胞外間隙から肝細胞内へのエンドサイトーシスまたは輸送を促進できることを明らかにした。さらに、Ｒ−バンブテロールで治療した後には、細胞膜におけるＬＤＬ受容体発現のアップレギュレーション、ならびにＬＤＬコレステロールの受容体への結合増加も存在する。これらは、蛍光標識ＬＤＬ−Ｃおよび抗ＬＤＬ受容体抗体の双方を用いて実証された。結果として、Ｒ−バンブテロールは、ＬＤＬ−Ｃおよびｏｘ−ＬＤＬ−Ｃの細胞内への輸送を促進し、かつＬＤＬおよびｏｘ−ＬＤＬコレステロールを細胞外間隙または血液から排除し、よって、ＬＤＬおよびｏｘ−ＬＤＬコレステロールの濃度が低下される。
【００１８】
本発明は、ＬＤＬコレステロールを低下させるＲ−バンブテロールの標的およびメカニズムが、主としてコレステロールの細胞内合成を阻害することによるものであるスタチンとは異なることを開示した。また、本発明で開示しているＲ−バンブテロールの治療標的も、ＰＣＳＫ９酵素を不活性化することによってＬＤＬ受容体の細胞間分解を遅らせるＰＣＳＫ９抗体とは異なる。本発明におけるＲ−バンブテロールのこの新たな使用法の発見は、先行技術において報告されておらず、よって当業者により予想可能なものではない。したがって、これは、新規であると見なされるべきものであって、進歩性を含む。
【００１９】
ある実施形態において、本発明は、用量依存的様式のＲ−バンブテロールで治療された場合に、肝細胞間ＬＤＬコレステロールに多大な低減があったことをも提示している。一方で、酪酸コリンエステラーゼの活性の阻害が存在した。
【００２０】
Ｒ−バンブテロールの経口投与によって血中の脂質およびＬＤＬを低減できることは、Ｗ  Ｔａｎ＆Ｊ  Ｃｈｅｎによる先行技術において知られている［米国特許、２００２年］。しかしながら、これが吸収、排除または他の標的もしくはメカニズムに関与するものであるかどうかは、不明のままである。Ｒ−バンブテロールによる細胞間ＬＤＬコレステロールのこの増強されたクリアランスまたは代謝回転は、代謝物質の増加、肝細胞の場合の胆汁酸分泌の増加、またはコレステロール合成の低減のいずれかを介するものであり得る。本発明で開示しているＬＤＬ受容体に対するこれらの作用は、先行技術において報告されたことがない。脂質異常または高脂血症は、異なるメカニズムまたは疾患標的に関わる症状である。患者に対しては、明確かつ特異的な生理学的標的を有する薬物を用いて治療することが望ましい。本発明は、増加したＬＤＬコレステロールを治療するためのクラス化合物の新規使用法を、ニーズのある患者に提供する。
【００２１】
スタチンは、第一に使用されかつ広く処方されている薬である。スタチンは、より良い効果を達成するために、Ｒ−バンブテロールと組み合わせることが望ましい。本発明は、Ｒ−バンブテロールおよびスタチンの双方を組み合わせて使用すると、多大な相乗効果があることを開示している。
【００２２】
ある実施形態において、本発明は、Ｒ−バンブテロール、スタチンのいずれも、比較的低用量では、細胞内コレステロールの低減または合成に対する阻害作用を示さないことを明らかにしている。しかしながら、Ｒ−バンブテロールおよび双方を上記と同じ用量で組み合わせて使用すると、細胞内コレステロールは、大幅に減少する。さらに、ＬＤＬの細胞外間隙から細胞内への取込みまたは輸送についても、Ｒ−バンブテロールとスタチンとの組合せは、Ｒ−バンブテロールまたはスタチンのいずれの単独使用より格段に高い効果を有する。細胞内コレステロールのこの減少またはクリアランスは、コレステロール合成の減少および他の化合物への代謝物質の増加、または肝細胞による胆汁酸形式での分泌に起因する可能性がある。この相乗効果は、先行技術で報告されたことがない。また、当業者がこれを予想することはできない。
【００２３】
さらに、スタチンは、肝毒性および他の副作用を誘発し得ることが知られている［Ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｌａｒｋｅ  ＡＴ  ａｎｄ  ＰＲ．Ｍｉｌｌｓ，Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，３８：７７２．（２００６）］。肝障害の指標であるアミノトランスフェラーゼ濃度は、スタチンに曝露された患者の最大２％で正常上限値（ＵＬＮ）の３倍を超えていた［Ｃｈａｌａｓａｎｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ，Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｉｖｅｒ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｒｅ  ｎｏｔ  ａｔ  ｈｉｇｈｅｒ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ｓｔａｔｉｎ  ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１２６（５）：１２８７−１２９２．（２００４）］。副作用により、治療を終わらせなければならない、またはスタチン治療の効果を低下させる投与量を調整し直さなければならない所定の患者にとって、スタチンは、容認され得ぬものである。
【００２４】
ある態様において、本発明は、アトルバスタチン治療は、細胞による細胞間コレステロール合成を大幅に阻害できるが、同時にこれは、細胞にとって毒性でもあって、用量の増加により細胞の生存能力を低下させることを明らかにしている。これに対して、バンブテロールは、スタチンの４倍の用量でも細胞に対して毒性がない。一方で、これは、細胞間コレステロールの大幅な低減を示した。この点で、Ｒ−バンブテロールは、スタチンよりも優れている。
【００２５】
ある実施形態において、アトルバスタチンとＲ−バンブテロールとの組合せで細胞治療を行った。驚くべきことに、アトルバスタチンの毒作用は、大幅に減少したことが分かった。アトルバスタチンは、用量１０μＭまたは２０μＭで細胞生存能力を著しく阻害する。しかしながら、この量のアトルバスタチンをＲ−バンブテロール２０μＭと組み合わせて治療すると、細胞生存能力の阻害が観察されなかった。したがって、Ｒ−バンブテロールは、アトルバスタチンにより誘発される毒性から細胞を保護し、かつアトルバスタチンおよび他のスタチンによる治療に対する細胞の耐性を高めることができる。これらは、先行技術によって報告されたことがなく、よって新規かつ発明的であると見なされるべきである。
【００２６】
ある実施形態では、高脂肪および高コレステロール食により誘発された高脂血症ウサギにおいて、アトルバスタチンとＲ−バンブテロールとの組合せが、アトルバスタチン単独よりも高い脂質低減効果を示したことを開示した。さらに、病理学検査による毒作用は、アトルバスタチン単独の場合は多大であったが、スタチンとＲ−バンブテロールによる併用グループにおいて、明らかな損傷は観察されなかった。
【００２７】
別の実施形態では、Ｒ−バンブテロールの同様の保護作用が、骨格または平滑筋細胞および心筋細胞においても見出されることを開示している。
【００２８】
一方で、Ｒ−バンブテロールは、先に述べたように、ＬＤＬ受容体の発現を増加させて、ＬＤＬの内在化を促進する。他方で、Ｒ−バンブテロールは、細胞内コレステロールを減らして、細胞内ＬＤＬコレステロールのクリアランスを増強させる。ＬＤＬ受容体の調整および細胞内ＬＤＬコレステロールクリアランスの増強におけるＲ−バンブテロールのこれらの役割は、新規であって、当業者により予想され得ない。
【００２９】
Ｒ−バンブテロールは、テルブタリンのプロドラッグである。Ｒ−バンブテロールの脂質低下作用は、その親の作用によるものと考えられた［Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｈ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｂｅｔａ−２  Ａｇｏｎｉｓｍ：Ａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ，Ｅｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１５］。ある実施形態において、本発明は、ＬＤＬの低下またはスタチンに対する細胞保護のいずれも、テルブタリンに関連づけられなかったことを提示している。したがって、本発明は、広く受け入れられている偏見を克服して、Ｒ−バンブテロールの脂質低下作用がその親ドラッグであるテルブタリンに関連づけられないことを開示している。これは、先行技術から自明ではない。
【００３０】
Ｒ−バンブテロールは、テルブタリンのプロドラッグであり、Ｒ−バンブテロールは、効力のあるＢｕＣｈＥ阻害薬であることが実証されているが、その親ドラッグであるテルブタリンは、そうではない。さらに、Ｒ−バンブテロールの保護作用は、ＢｕＣｈＥの阻害に関連づけられる。脂質低下においては、バンブテロールのＲ−エナンチオマのみが最も有効であることが分かっているが、Ｓ−エナンチオマは、効果が少ないか、効果がない。これは、ＢｕＣｈＥがキラル選択的であることを示している。
【００３１】
ある実施形態において、本発明は、シンバスタチンの毒性に対するＲ−バンブテロールの同様の保護作用が、双方の薬物が組み合わせて使用された場合に見られたことを提示している。Ｒ−バンブテロールは、スタチンクラスの他の薬剤、典型的には、ロバスタチン、パラバスタチン、ロスバスタチン（ｒｕｓｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、フルバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン（ｐｒａｖａｓｔｉｎ）、他などの市販のスタチンにより誘発される毒性に対して保護することができる。
【００３２】
別の実施形態において、本発明は、Ｒ−モノカルボンアミド−バンブテロールまたはエチル化バンブテロールも、ＬＤＬ受容体および細胞内ＬＤＬコレステロールクリアランスに対して同様の作用を有することを明らかにしている。これらは、スタチンと組み合わせて使用する場合に相乗効果を有する。さらに、Ｒ−モノカルボンアミド−バンブテロールまたはエチル化バンブテロールは、その各々が別々にアトルバスタチンまたはシンバスタチン（Ｓｉｍｉｖａｓｔａｔｉｎ）および他のスタチンのうちの１つと組み合わせて使用された場合に、これらのスタチンのいずれかにより誘発される毒性に対して、Ｒ−バンブテロールが行ったものと同様の保護作用を有する。
【００３３】
本発明は、構造式Ｉに記載する（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体の基およびこれらの活性エナンチオマならびにこれらの薬学的に許容される塩が、酪酸コリンエステラーゼにおいて同様の阻害機能を有し、かつＬＤＬ受容体のアップレギュレートにおいて、かつ合成または代謝を介する細胞内ＬＤＬコレステロールクリアランスの増強において、ならびにスタチンおよび他の脂質低下剤により誘発される副作用または毒性からの保護において、Ｒ−バンブテロールと同様の作用を有することを開示している。
【００３４】
さらに、本発明は、Ｒ−バンブテロールおよびその類似体がその脂質低下の役割を、その親ドラッグたるテルブタリンを介して果たすという広く受け入れられている偏見を克服する。
【化１】
2021533190.tif 000002
ここで、
Ａは、置換または無置換アルキル、置換または無置換アルケニル、置換または無置換アリール、置換または無置換シクロアルキルから選択され、
Ｂは、水素または−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）から選択され、
ＷおよびＸは、独立して、水素、置換または無置換アルキルから選択され、
Ｃは、水素または−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）から選択され、
ＹおよびＺは、独立して、水素、置換または無置換アルキルから選択される。
【００３５】
本発明は、Ｒ−バンブテロールが構造式Ｉの化合物からの好ましい選択であって、下記の構造式ＩＩのような構造を有することを開示している。
【化２】
2021533190.tif 000003
ここで、構造式Ｉにおいて、Ａは、ｎ−ブチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、ＷおよびＸは、メチルであり、Ｃは、−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）であり、ＹおよびＺａは、メチルである。
【００３６】
本発明は、モノ−バンブテロールが式Ｉからの別の好ましい選択であることを開示している。これは、構造式ＩＩＩと同様の構造を有する。
【化３】
2021533190.tif 000004
３−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシエチル）−５−ヒドロキシフェニルジメチルカルバメートバンブテロールモノカルバメート（ＭＯＮＯ）。ここで、構造式Ｉにおいて、Ａは、ｎ−ブチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、ＷおよびＸは、メチルであり、Ｃは、水素である。
【００３７】
ある実施形態では、モノ−バンブテロールが、Ｒ−バンブテロールの場合と同様に、ＬＤＬ受容体のアップレギュレーションにおいて、および細胞内ＬＤＬコレステロールクリアランスの増強において同様の作用を有するだけでなく、アトルバスタチンまたはシンバスタチン（Ｓｉｍｉｖａｓｔａｔｉｎ）のいずれかと組み合わされた場合に、相乗効果および低下された毒性を有することを開示している。
【００３８】
本発明は、エチル化バンブテロールも構造式Ｉの好ましい選択であって、構造式ＩＶと同様の構造を有することを開示している。
【化４】
2021533190.tif 000005
５−（１−ヒドロキシ−２−（ｔｅｒｔ−ペンチルアミノ）エチル）−１，３−フェニレンビス（エチル（メチル）カルバメート）。ここで、構造式Ｉにおいて、Ａは、ｔｅｒｔ−ペンチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、Ｗは、メチルであり、Ｘは、エチルであり、Ｃは、−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）であり、Ｙは、メチルであり、Ｚは、エチルである。
【００３９】
ある実施形態では、エチル化バンブテロールが、ＬＤＬ受容体のアップレギュレーションにおいて、および細胞内ＬＤＬコレステロールクリアランスの増強においてＲ−バンブテロールと同様の作用を有するだけでなく、アトルバスタチンまたはシンバスタチン（Ｓｉｍｉｖａｓｔａｔｉｎ）のいずれかと組み合わされた場合に、相乗効果および低下された毒性を有することを開示している。
【００４０】
本発明は、（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体が、ＬＤＬ受容体をアップレギュレートし、細胞内ＬＤＬコレステロールのクリアランスを増強し、かつスタチンおよび他の脂質低下剤と組み合わされるとＬＤＬクリアランスに対して相乗効果を有すること、さらに、（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体とスタチンとの組合せが、スタチンにより誘発される毒性から細胞を保護することができ、よって、スタチンの副作用を減らし得ること、を開示している。本発明が開示するこれらの発見は、全て、先行技術において報告されたことがない。
【００４１】
さらに、本発明は、Ｒ−バンブテロールおよびその類似体がその脂質低下の役割を、その親ドラッグたるテルブタリンを介して果たすという広く受け入れられている偏見を克服する。当業者がこれを予想することはできない。
【００４２】
場合によっては、スタチン療法は、臨床的に要求される患者におけるＬＤＬコレステロールの低減を達成できるほどの効果がないことがある。これは、一部には、副作用による用量制限に起因し、かつスタチン自体の効力にも起因する。さらに、患者の約３０％は、スタチン療法に反応しない。したがって、本発明で開示する（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体は、現在のスタチン療法の効力および有効性を大幅に向上させることができる新規方法を提供し、さらに、スタチンが有効でない患者にとって最良の代替物をも提供している。
【００４３】
本発明は、さらに、（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体が、ＬＤＬ受容体、細胞内ＬＤＬクリアランス、具体的には肝細胞、に特異的に作用することを開示している。これらは、先行技術において報告されていない。
【００４４】
本発明は、相乗効果のために、かつニーズのある患者に対する副作用または毒性を低減するために、構造式Ｉに記載しているＲ−バンブテロールまたはカルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体を、スタチンとの、または、エゼチミブ、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート酸（フィブラート）、ニコチン酸、コレスチラミンまたはコレスチポール（樹脂）、コレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害薬、ならびにエボロクマブおよびアリロクマブ、ボコシズマブおよびインクリシランなどのＰＫＳＣ９阻害薬などの他の脂質低下剤との併用療法として用いる方法を開示している。
【００４５】
これらの併用療法は、単なる相加効果というより、効力において相乗効果をもたらし、かつ副作用を大幅に低減する。したがって、本発明で開示しているこれらの併用療法は、ニーズのある患者にスタチンおよび他の脂質低下剤を用いるためのより良い治療指標を提供する。
【００４６】
（±）−カルバメート−β−フェニルエタノールアミン類似体またはＲ−バンブテロールをスタチン類または他の脂質低下剤と併用するこれらの新しい方法は、新規であって、当業者によって予想され得ない。
【００４７】
本発明は、構造式Ｉにおける化合物の活性エナンチオマが、ＬＤＬ受容体の発現および結合のアップレギュレーション、およびＬＤＬコレステロールの取込みの促進、および細胞内ＬＤＬコレステロールのクリアランスの増強において、より良い効果を有することを提示する。また、構造式Ｉにおける化合物の活性エナンチオマも、スタチンと併用されると、資質低下においてより優れた相乗効果を有する。同時に、構造式Ｉにおける化合物の活性エナンチオマは、併用されると、スタチンの毒性に対してより優れた保護作用を有する。
【００４８】
ある実施形態において、本発明は、有効量のＲ−バンブテロールまたは構造式Ｉからの化合物またはそれらの塩類と、アトルバスタチンまたはスタチン類のうちの１つとを含む新規医薬組成物を、併用療法において、ニーズのある患者への経口、吸入、注射、局所、直腸または膣内投与による同時的、連続的または別々の投与に用いるための併用療法準備として提供する。剤形は、固形、溶液、注射可能な形式、軟膏、ソフトカプセルおよび坐剤である。
【００４９】
スタチン類および構造式Ｉからの化合物による併用療法に使用される有効成分量の比率は、活性剤を用いる治療目的ならびに患者の年齢および状態に応じて調整されてもよい。組合せにおいては、量比１％〜９９％である少なくとも１つのスタチンと、量比１％〜９９％である構造式Ｉからの少なくとも１つの化合物とが存在していなければならない。
【００５０】
構造式Ｉからの化合物または本発明によるＲ−バンブテロールの薬学的に許容される塩薬学的に許容される塩としては、従来の医薬的に許容し得る無機酸または有機酸で形成されるもの、たとえば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、２水素リン酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化物、硫酸メチル、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、グリコン酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒｉｃ）、乳酸塩（ｌａｃｔｉｃ）、ピルビン酸塩（ｐｙｒｕｖｉｃ）、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩またはパラトルエンスルホン酸塩が含まれる。
【実施例１】
【００５１】
Ｒ−バンブテロールは、ＬＤＬ受容体の発現を増加させ、かつＬＤＬコレステロールの取込みを促進する。
【００５２】
試験方法：
マウスの肝臓ＡＭＬ１２細胞を２４ウェルプレートのＤＭＥＭ／Ｆ１２内に播種し、１０％熱非働化ウシ胎児血清を補充した。細胞を蛍光標識ＬＤＬと共に培養し、細胞によるＬＤＬコレステロールの取込みおよび代謝物質を研究した。抗ＬＤＬ抗体を用いて、細胞により発現されるＬＤＬ受容体について調べた。細胞を異なるグループに分け、Ｒ−バンブテロール（Ｒ−ＢＭ）、アトルバスタチン（スタチン）、またはＲ−ＢＭ＋スタチンを入れて、各々、コントロール、ＬＤＬ、ＬＤＬ＋スタチン１０μＭ、ＬＤＬ＋Ｒ−ＢＭ１０μＭまたは２０μＭ、ＬＤＬ＋Ｒ−ＢＭ１０μＭ＋スタチン１０μＭ、ＬＤＬ＋Ｒ−ＢＭ２０μＭ＋スタチン２０μＭを含むグループにした。２４時間の処理後、細胞を洗浄し、パラホルムアルデヒドで固定した。
【００５３】
次に、細胞を、１：２００希釈の抗ＬＤＬＲ一次抗体と共に室温で４時間培養した。洗浄後、１：２００希釈の二次抗体Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８を添加し、室温で２時間培養した。
【００５４】
細胞を再度洗浄した後、蛍光顕微鏡下で検査した。緑色の蛍光抗体結合ＬＤＬ受容体、および赤色の蛍光標識された結合または内在化ＬＤＬを、個別に、または混合後に調べた。蛍光顕微鏡に、デジタルカメラ（Ａｘｉｏ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ７）を装備した。コンピュータソフトウェアを用いて、抗体に結合したＬＤＬおよびＬＤＬ受容体の量と相関される蛍光強度を定量化した。
【００５５】
試験結果：
１）１０μＭおよび２０μＭ双方のＲ−バンブテロールで処理したグループでは、コントロールおよびＬＤＬ、ＬＤＬ＋スタチン１０μＭならびにＬＤＬ＋スタチン２０μＭのいずれと比較しても、結合および細胞内蛍光標識ＬＤＬが遙かに多く存在する。存在する結合および細胞内標識ＬＤＬは、Ｒ−バンブテロール１０μＭよりＲ−バンブテロール２０μＭの方が多い。この結果は、Ｒ−バンブテロールがＬＤＬコレステロールの肝細胞への輸送を用量依存式で増強したことを示す。肝細胞は、ＬＤＬコレステロールの主たる代謝経路である。したがって、Ｒ−バンブテロールは、ＬＤＬの細胞外間隙または血液からのクリアランスを促進する。
２）アトルバスタチン治療グループにおける結合および細胞内蛍光標識ＬＤＬは、ＬＤＬ単独グループより多いが、Ｒ−バンブテロール治療グループより少ない。これは、アトルバスタチンも、細胞へのＬＤＬ輸送を促進できることを示す。
３）スタチンとＲ−バンブテロールとを併用して治療したグループにおける結合および細胞内蛍光標識ＬＤＬは、Ｒ−バンブテロールまたはスタチンで治療したグループのいずれよりも遙かに多い。この結果は、細胞へのＬＤＬ輸送におけるＲ−バンブテロールとスタチンとの相乗効果を示す。
４）顕微鏡下のフィールド内のランダムに選択した部位における蛍光強度を定量化することにより、各グループにおけるＬＤＬ受容体の量を下表のリストのように定量化することができる。ＬＤＬ受容体は、ＬＤＬをロードした培地ではかなり無規制であったが、Ｒ−バンブテロール治療グループでは、ＬＤＬ受容体がさらに増加している。Ｒ−バンブテロール治療細胞におけるＬＤＬ受容体発現の増加は、スタチン治療グループで見られたものの２倍であった。これらの結果は、Ｒ−バンブテロールがＬＤＬ受容体の発現をアップレギュレートすることができ、この点でスタチンより効力が高いことを示す。
【００５６】
しかしながら、スタチンの作用は、Ｒ−バンブテロールと併用されると、スタチン単剤に比較して大幅に増強された。
【００５７】
【表１】
2021533190.tif 000006
【実施例２】
【００５８】
Ｒ−バンブテロールは、ＬＤＬコレステロールのクリアランスまたは代謝回転を増強し、スタチンとの相乗効果を有する。
【００５９】
ヒト肝臓ＨｅｐＧ２細胞を６ウェルプレートのＤＭＥＭ／Ｆ１２内に播種し、１０％熱非働化ウシ胎児血清を補充した。次に、細胞を、ＬＤＬ（４０μｇ／ｍｌ）の存在下で異なる用量のＲ−バンブテロール（Ｒ−ＢＭ）により治療した。２４時間培養の後、総コレステロール検定キットＥ１０５（中国、北京所在のＡｐｐｌｙｇｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を使用し、製造業者のプロトコルに従って、細胞内および細胞外の総コレステロール含有量を決定した。
【００６０】
１）細胞内ＬＤＬコレステロールのクリアランスの増強
細胞内コレステロールは、コントロールグループおよびＬＤＬグループにおいて類似している。１０μＭのスタチンも１０μＭのＲ−バンブテロールも、細胞内コレステロール濃度に作用しなかった。しかしながら、マウス肝臓ＡＭＬ１２細胞を、ＬＤＬ（４０μｇ／ｍｌ）の存在下でＲ−ＢＭ１０μＭおよびスタチン１０μＭを単独使用または併用して治療した別の実験では、同様の細胞培養培地、およびコレステロール測定方法を用いた。
【００６１】
試験結果
同じ用量のＲ−バンブテロールとアトルバスタチンとを組み合わせて添加すると、細胞内コレステロールが大幅に減少した。これらは、Ｒ−バンブテロールとアトルバスタチンとの併用治療による、細胞内ＬＤＬコレステロールのクリアランスまたは代謝回転に対する相乗効果を示している。
【表２】
2021533190.tif 000007
【００６２】
２）コレステロールの低減におけるＲ−バンブテロールとスタチンとの相乗効果
ＨｅｐＧ２細胞の場合とは異なり、マウス肝臓ＡＭＬ１２細胞では、細胞間コレステロールの低減がＲ−ＢＭ１０μＭによってさほど誘起されない。同様に、アトルバスタチン１０μＭも、細胞間コレステロールにほとんど作用しなかった。しかしながら、Ｒ−ＢＭおよびアトルバスタチン（スタチン）の双方を上述の同じ用量で併用して細胞を治療すると、総コレステロールが大幅に減少した。減少効果は、双方の和を超えるものであり、よって、細胞内ＬＤＬコレステロールのクリアランスにおいて、Ｒ−ＢＭおよびスタチンには相乗作用がある。
【表３】
2021533190.tif 000008
【実施例３】
【００６３】
スタチンにより誘発される毒性に対するＲ−バンブテロールの保護作用。
【００６４】
試験方法
ＨｅｐＧ２細胞または肺動脈平滑筋細胞（ＰＡＳＭＣ）のいずれかを、９６ウェルプレート内へ均一に播種した。細胞が約５０％増殖すると、培地をＦＢＳフリー培地およびアトルバスタチン（スタチン）または／およびＲ−バンブテロール（Ｒ−ＢＭ）に交換した。細胞を、室温で２４時間培養した。次に、細胞を再び１０％ＣＣＫ−８試薬を含むＦＢＳフリー培地と交換し、暗所で３時間培養した。
【００６５】
多機能マイクロプレートリーダ（ＴｒｉＳｔａｒ２Ｓ  ＬＢ９４２）を用いて、細胞生存能力を測定した。
【００６６】
薬剤無添加（０μＭ）の細胞を、コントロールとして用いた。Ｒ−ＢＭもしくはスタチン、あるいは双方からの生存能力を、コントロールのパーセントとして正規化した。スタチンおよびＲ−ＢＭ併用の治療の場合、Ｒ−ＢＭは、Ｒ−ＢＭを添加しなかった（０μＭ）コントロールを除く全てのグループで２０μＭであった。
【００６７】
試験結果
１）肝細胞
Ｒ−バンブテロールは、全ての用量で、肝細胞（ＨｅｐＧ２）の生存能力に対して毒性を示さなかった。しかしながら、スタチンは、初回の用量５μＭで重大な毒作用を有し、細胞の生存能力は、スタチンにより用量依存的様式で阻害された。スタチンの毒性は、Ｒ−バンブテロールとの併用によって大幅に低減され、低用量のスタチングループでは完全に消失した。
【表４】
2021533190.tif 000009
【００６８】
２）肺動脈平滑筋細胞
Ｒ−バンブテロールは、肺動脈平滑筋細胞（ＰＡＳＭＣ）の生存能力に対して毒性を示さず、ＰＡＳＭＣは、アトルバスタンチンに対する耐性がＨｅｐＧ２細胞より高いように思われる。しかしながら、スタチンに曝露された場合、ＰＡＳＭＣの細胞生存能力の用量依存的阻害もあった。同様に、スタチンのこれらの毒性は、ＨｅｐＧ２細胞の場合のようにＲ−バンブテロールとの併用によって大幅に低減された。
【表５】
2021533190.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】令和3年6月2日(2021.6.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＤＬ受容体の活性をアップレギュレートするためと、細胞内の細胞間ＬＤＬコレステロールの取込み、内在化およびクリアランスを促進するためと、スタチンまたは他の脂質低下剤との併用療法により相乗効果を達成する、またはニーズのある患者に対する毒性または副作用を低減するための薬剤の製造における、医薬組成物内の、構造式Ｉに記載のカルバメート類似体を含む（±）−β−フェニルエタノールアミンの酪酸コリンエステラーゼ阻害化合物およびこれらの活性エナンチオマならびにこれらの薬学的に許容される塩の使用方法であって、
前記構造式Ｉは、
【化１】
2021533190.tif 000015
であり、
Ａは、置換または無置換アルキル、置換または無置換アルケニル、置換または無置換アリール、置換または無置換シクロアルキルから選択され、
Ｂは、水素または−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）から選択され、
ＷおよびＸは、独立して、水素、置換または無置換アルキルから選択され、
Ｃは、水素または−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）から選択され、
ＹおよびＺは、独立して、水素、置換または無置換アルキルから選択される、
方法。
【請求項２】
前記化合物は、構造式ＩＩ：
【化２】
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に示されるＲ−バンブテロールであり、
構造式Ｉにおいて、Ａは、ｎ−ブチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、ＷおよびＸは、メチルであり、Ｃは、−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）であり、ＹおよびＺは、メチルである、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物は、構造式ＩＩＩ：
【化３】
2021533190.tif 000017
３−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシエチル）−５−ヒドロキシフェニルジメチルカルバメートバンブテロールモノカルバメート（ＭＯＮＯ）
に示されるＲ−モノ−バンブテロールであり、
構造式Ｉにおいて、Ａは、ｎ−ブチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、ＷおよびＸは、メチルであり、Ｃは、水素である、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物は、構造式ＩＶ：
【化４】
2021533190.tif 000018
５−（１−ヒドロキシ−２−（ｔｅｒｔ−ペンチルアミノ）エチル）−１，３−フェニレンビス（エチル（メチル）カルバメート）
に示されるエチル化バンブテロールであり、
構造式Ｉにおいて、Ａは、ｔｅｒｔ−ペンチルであり、Ｂは、−ＣＯ−Ｎ（Ｗ）（Ｘ）であり、Ｗは、メチルであり、Ｘは、エチルであり、Ｃは、−ＣＯ−Ｎ（Ｙ）（Ｚ）であり、Ｙは、メチルであり、Ｚは、エチルである、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アップレギュレートする活性は、前記受容体の発現の増加と、ＬＤＬＣ−ＬＤＬ受容体の結合の増加と、ＬＤＬＣ−ＬＤＬ受容体複合体の細胞空隙から細胞への内在化の増加とを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記クリアランスは、ＬＤＬコレステロールの合成の低減である、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記クリアランスは、ＬＤＬコレステロールの代謝の増加である、
請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記クリアランスは、コレステロールの胆汁酸形式での分泌である、
請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞は、肝細胞、筋細胞、平滑筋細胞、心臓細胞、内皮細胞、腎臓細胞、網膜細胞、神経細胞、グリア細胞、マクロファージ、およびＬＤＬコレステロールを取り込む、または合成することができる他の細胞である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＬＤＬ受容体の前記アップレギュレートする活性またはＬＤＬコレステロールのクリアランスは、酪酸コリンエステラーゼの阻害を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記毒性の低減は、酪酸コリンエステラーゼの阻害を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記脂質低下剤は、スタチンである、
請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記スタチンは、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンより成るグループから選択される、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記脂質低下剤は、エゼチミブ、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート酸（フィブラート）、ニコチン酸、コレスチラミンまたはコレスチポール（樹脂）、コレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害薬より成るグループから選択されるコレステロール吸収または輸送阻害薬である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記脂質低下剤は、エボロクマブ、アリロクマブ、ボコシズマブおよびインクリシランより成るグループから選択されるＰＣＳＫ９阻害薬である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記併用療法は、ニーズのある患者へ同時的、連続的または別々に投与するための、構造式Ｉの化合物のうちの少なくとも１つと、請求項１に記載の少なくとも１つの脂質低下剤とで構成される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記併用療法は、量比１〜９９％である構造式Ｉの化合物のうちの少なくとも１つと、量比１〜９９％である請求項１に記載の少なくとも１つの脂質低下剤とで構成される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記医薬組成物は、錠剤、カプセル、顆粒、坐剤、軟膏、徐放性製剤、皮膚パッチ、水溶液および吸入エアロゾルより成るグループから選択され、経口、局所、直腸、膣、非経口注射、肺吸入、鼻内噴霧または移植に使用される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
薬学的に許容される塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、２水素リン酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化物、硫酸メチル、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、グリコン酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒｉｃ）、乳酸塩（ｌａｃｔｉｃ）、ピルビン酸塩（ｐｙｒｕｖｉｃ）、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩またはパラトルエンスルホン酸塩より成る無機酸または有機酸群から選択される、
請求項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
これは、Ｒ−バンブテロールが酪酸コリンエステラーゼ（ＢｕＣｈＥ）の最も効力のある阻害薬のうちの１つであるという理由で、ＢｕＣｈＥの活性の阻害に関連づけられ得る。
ＢｕＣｈＥの阻害効果は、主としてバンブテロールのカルバメート基に寄与するものであることが知られている。カルバメート基は、酵素の活性中心におけるセリンと相互作用することができ、よって、その活性を阻害する。カルバメートの他の誘導体もＢｕＣｈＥの阻害に効果があると判明していることは、知られている（ＵＳ４４１９３６４）。ＢｕＣｈＥの阻害効果は、これらの誘導体の構造に従って多様である可能性もある。他の研究では、カルバメートを含むフェニルエタノールアミンと多様なカルバメート誘導体とが合成されて、それぞれぜんそく性の犬に経口投与されている。抗ぜんそく効果は、上述の誘導体の場合に観察された。上述のカルバメート誘導体の各々で、血液中に親ドラッグであるテルブタリンが検出されている。これは、上述の多様なカルバメート誘導体がＢｕＣｈＥの基質であって、親ドラッグであるテルブタリンがＢｕＣｈＥによる加水分解によって生成されたことを示すものであった。この研究における長続きする抗ぜんそく効果は、これらのカルバメート誘導体によるＢｕＣｈＥの阻害効果をも示し、その結果として、親ドラッグであるテルブタリンの徐放がある。ＢｕＣｈＥの高度な発現または増強された活性は、高脂血症および肥満に関連づけられている［Ｋｕｔｔｙ，ＫＭ  ｅｔ，ａｌ．Ｓｅｒｕｍ  ｐｓｅｕｄｏｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ：ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｒａｔｉｏ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  １１５（１）：５５−６１，Ｆｅｂｒｕａｒｙ（１９８１）、Ｃａｌｄｅｒｏｎ−Ｍａｒｇａｌｉｔ  ｅｔ  ａｌ．：ＢｕＣｈＥ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｉｓｋ  Ｆａｃｔｏｒｓ，ａｎｄ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：５０００（２００６）］。しかしながら、論争もまた存在する。ＢｕＣｈＥとＬＤＬまたはコレステロールとの因果関係は、確立されていない。ＢｕＣｈＥのノックアウトマウスでは、高脂肪食を与えた場合、野生型マウスより体重が増加したことが報告されている［Ｃｈｅｎ  ＹＰ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｕｔｙｒｉｃ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｌｉｐｉｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ  ｏｎ  ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５７：３０８６−３０５９，（２０１６）］。

【国際調査報告】
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