(57)【要約】本発明は、式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグを提供する。本発明は、それを含む医薬組成物を提供し、またチロシンキナーゼが介在する疾患を治療するための薬物の調製における、前記化合物、医薬組成物の使用をさらに提供する。本発明により提供される化合物及びその医薬組成物は、顕著なチロシンキナーゼ阻害活性を有し、腫瘍の薬剤耐性を克服でき、血液脳関門を突破でき、優れた薬物動態学的性質及び極めてよい経口バイオアベイラビリティをさらに有し、比較的少ない投与量で施用でき、これにより、患者の治療コスト及び可能な毒性副作用を低減でき、このため、大きな適用の潜在力を有する。2021519828.tif 000073【選択図】図１
2021519828.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ。
2021519828.tif 000069
（式（１）において、
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＣＲａＲｂ−から選ばれ、
Ｒａ、Ｒｂは、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基、シアノ基から選ばれるか、又は、ＣＲａＲｂは共同して３〜１０員のシクロアルキル基又は少なくとも１つのヘテロ原子を含有する３〜１０員の複素環基を形成し、
Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲ６−から選ばれるか、又は、単結合であり、
Ｌ２は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−又は−ＮＲ６−から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基又はシアノ基から選ばれ、
各Ｃ原子上の置換基Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基、シアノ基から選ばれるか、又は、Ｘ基と共に３〜１０員のシクロアルキル基、少なくとも１つのヘテロ原子を含有する３〜１０員の複素環基又は少なくとも１つのヘテロ原子を含有する５〜１０員のヘテロアリール基を形成するか、又は、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して前記Ｃ原子と隣接する大員環の環原子とを結合する単結合であり、
Ｒ３’、Ｒ４’は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基、シアノ基から選ばれるか、又は、結合しているＣ及Ｌ２と共に少なくとも１つのヘテロ原子を含有する３〜１０員の複素環基又は少なくとも１つのヘテロ原子を含有する５〜１０員のヘテロアリール基を形成し、
Ｒ６は、置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基又はシアノ基から選ばれ、
Ｚは、環原子としてＣ又はヘテロ原子を表し、
ｎは、１〜１０の整数を表し、
前記基の置換基は、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基又はシアノ基から選ばれ、
前記ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ又はＳから選ばれる。）
【請求項２】
前記化合物は、下記式（２）で示されるものである、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ。
2021519828.tif 000070
（式（２）において、Ｒ１は、フッ素又は臭素から選ばれ、及び／又は、
Ｒ２は、水素、フッ素又は臭素から選ばれる。）
【請求項３】
式（１）又は式（２）において、Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−から選ばれるか、又は、単結合であり、及び／又は、Ｌ２は、−ＮＲ６−から選ばれる、
請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ。
【請求項４】
式（１）又は式（２）において、ｎは、２、３、４、５又は６の整数を表す、
請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ。
【請求項５】
式（１）又は式（２）において、各Ｃ原子上の置換基Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基から選ばれるか、又は、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して前記Ｃ原子と隣接する大員環の環原子とを結合する単結合であり、及び／又は、
Ｒ３’、Ｒ４’は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基から選ばれか、又は、結合しているＣ及Ｌ２と共に少なくとも１つのヘテロ原子を含有する４〜８員の複素環基を形成し、及び／又は、
Ｒ５は、置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、アミノ基又はシアノ基から選ばれ、及び／又は、
Ｒ６は、置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基又はＣ３〜６シクロアルキル基から選ばれ、及び／又は、
上記の置換基は、フッ素、臭素、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル基）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル基）２、−ＣＯ２Ｃ１〜４アルキル基、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル基、−ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル基）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル基）２、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基、Ｃ３〜６複素環基、Ｃ６〜１０アリール基又はＣ５〜１０ヘテロアリール基から選ばれる、
請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ。
【請求項６】
前記化合物は、以下の構造から選ばれる
2021519828.tif 000071
2021519828.tif 000072
請求項１から請求項５のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ。
【請求項７】
請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項８】
チロシンキナーゼが介在する疾患を治療するための薬物の調製における、請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ、及び請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
前記チロシンキナーゼは、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＦＡＫ、ＡＸＬ、ＡＲＫ５から選ばれる１種又は複数種である、
請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記チロシンキナーゼが介在する疾患は、癌、疼痛、神経疾患、自己免疫疾患及び炎症を含む、
請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
患者に請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ、又は請求項７に記載の医薬組成物を有効量で投与する、
チロシンキナーゼが介在する疾患を治療するための方法。
【請求項１２】
前記チロシンキナーゼは、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＦＡＫ、ＡＸＬ、ＡＲＫ５から選ばれる１種又は複数種である、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記チロシンキナーゼが介在する疾患は、癌、疼痛、神経疾患、自己免疫疾患及び炎症を含む、
請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬分野に関し、詳しくは、ジアリール大員環化合物、それを含む医薬組成物及びその用途に関する。
【０００２】
本願は、２０１８年０４月２５日に出願された、出願番号が２０１８１０３７７８１１．１号である中国発明特許出願に基づき優先権を主張し、その内容全体が本願に本開示の一部として援用される。
【背景技術】
【０００３】
プロテインキナーゼは、細胞の成長、増殖及び生存の重要な調節剤である。癌、疼痛、神経疾患、自己免疫疾患、及び炎症を含む複数種の疾患は、ＴＲＫ、ＲＯＳ１、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＦＡＫ、ＡＲＫ５、ＡＸＬなどの受容体型チロシンキナーゼが介在するものである。
【０００４】
神経栄養因子チロシンキナーゼ受容体（ＮＴＲＫ／ＴＲＫ）は、受容体型チロシンキナーゼファミリーに属する。ＴＲＫファミリーは、主にＮＴＲＫ１／ＴＲＫＡ、ＮＴＲＫ２／ＴＲＫＢ、ＮＴＲＫ３／ＴＲＫＣという３つのメンバーを含む。ＴＲＫ融合タンパク質は、腫瘍と密接に関連しており、ＣＤ７４−ＮＴＲＫ１、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１、ＱＫＩ−ＮＴＲＫ２、ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３、ＢＴＢ１−ＮＴＲＫ３などの複数種の融合タンパク質は、結腸癌、肺癌、頭頸部癌、乳癌、甲状腺癌、神経膠腫などの複数種の腫瘍で発見された。従って、近年、ＴＲＫ融合タンパク質は、既に抗癌有効なターゲット及び研究のホットスポットとなっており、例えばＷＯ２０１００４８３１４、ＷＯ２０１００３３９４１などは、いずれも異なる母核を持つＴＲＫキナーゼ阻害剤を開示している。なお、持続投与後に現れるターゲット変異は、腫瘍に薬剤耐性が生じる重要な原因である。最近、臨床においてＮＴＲＫ１ Ｇ５９５Ｒ及びＧ６６７Ｃの変異（Ｒｕｓｓｏ Ｍなど、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２０１６、６（１）、３６−４４）、ＮＴＲＫ３ Ｇ６２３Ｒの変異（Ｄｒｉｌｏｎ Ａ．など、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１６、２７（５）、９２０−９２６）など、ＮＴＲＫ変異の症例が既に見られた。新たなＴＲＫキナーゼ阻害剤を見出すことによって、ＮＴＲＫ変異による腫瘍の薬剤耐性の問題を解決することが期待される。
【０００５】
ＡＬＫ（Ａｎａｐｌａｓｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｋｉｎａｓｅ）阻害剤は、異常なＡＬＫ遺伝子を有する肺癌患者に対する治療において大きな成功を遂げたが、腫瘍の薬剤耐性の出現によって、これらの薬物の長期臨床使用が制限される。薬剤耐性のメカニズムは、通常、標的遺伝子の増幅、後天性薬剤耐性変異、バイパス及び下流経路の活性化、上皮間葉転換及び腫瘍の転移などを含む。現在市販されているＡＬＫ阻害剤には、バイパスの活性化や上皮間葉転換による薬剤耐性を克服できるものはない。多重耐性メカニズムを同時に克服できるＡＬＫ阻害剤を開発することが強く要望されている。
【０００６】
ＲＯＳ１キナーゼは、遺伝子再構成後、例えば膠芽腫、非小細胞肺癌、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫、血管肉腫、類上皮血管内皮腫などの様々な癌において構成型活性融合タンパク質（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｅ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）を産生し、ＲＯＳ１融合タンパク質を阻害することによって、ＲＯＳ１陽性の腫瘍を効果的に抑制することができる。ＦＤＡは、既にＡＬＫ陽性の非小細胞肺癌を治療する複数の新薬を承認しているが、ＲＯＳ１陽性の非小細胞肺癌患者の場合、選択可能な薬は、依然として有限のものであり、現在、ＲＯＳ１陽性の非小細胞肺癌の治療にはクリゾチニブのみが承認されている。なお、クリゾチニブの臨床使用において、後天性薬剤耐性は既に現れており、薬剤耐性の変異部位は、主にＲＯＳ１ Ｇ２０３２及びＲＯＳ１ Ｌ２０２６Ｍである。野生及び多剤耐性変異に対するＲＯＳ１阻害剤を開発することが強く要望されている。
【０００７】
ＥＧＦＲ阻害剤は、非小細胞肺癌患者に対する治療において大きな成功を遂げたが、腫瘍の薬剤耐性も現れている。ＥＧＦＲ薬剤耐性の人々では、ＭＥＴ、ＣＤＣＰ１、ＡＸＬ、ＳＨＰ２などの複数種のシグナル経路の過剰発現が発見されている。なお、ＳＴＡＴ３及びＳｒｃ−ＹＡＰ１シグナル経路もＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に影響を与える一方、ＪＡＫ２は、下流のＳＴＡＴ３の発現を調節することができる。ＪＡＫ２、Ｓｒｃ／ＦＡＫ、ＡＸＬに作用する多重阻害剤の開発によって、ＥＧＦＲ阻害剤と併用してバイパス代償性のＥＧＦＲ耐性を克服することが期待される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の１つの目的は、優れたチロシンキナーゼ阻害活性を有する新規化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグを提供することである。
【０００９】
本発明の他の目的は、医薬組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、新規化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグの用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグを提供し、
2021519828.tif 000003
式（１）において、Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＣＲａＲｂ−から選ばれ、Ｒａ、Ｒｂは、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基、シアノ基から選ばれるか、又は、ＣＲａＲｂは共同して３〜１０員のシクロアルキル基又は少なくとも１つのヘテロ原子を含有する３〜１０員の複素環基を形成し、Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲ６−から選ばれるか、又は、単結合であり、Ｌ２は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−又は−ＮＲ６−から選ばれ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基又はシアノ基から選ばれ、各Ｃ原子上の置換基Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基、シアノ基から選ばれるか、又は、Ｘ基と共に３〜１０員のシクロアルキル基、少なくとも１つのヘテロ原子を含有する３〜１０員の複素環基又は少なくとも１つのヘテロ原子を含有する５〜１０員のヘテロアリール基を形成するか、又は、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して前記Ｃ原子と隣接する大員環の環原子とを結合する単結合である。
【００１２】
Ｒ３’、Ｒ４’は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基、シアノ基から選ばれるか、又は、結合しているＣ及Ｌ２と共に少なくとも１つのヘテロ原子を含有する３〜１０員の複素環基又は少なくとも１つのヘテロ原子を含有する５〜１０員のヘテロアリール基を形成し、Ｒ６は、置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基又はシアノ基から選ばれ、Ｚは、環原子としてＣ又はヘテロ原子を表し、ｎは、１〜１０の整数を表し、前記基の置換基は、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基、Ｃ１〜８アルコキシ基、Ｃ３〜８シクロアルキル基、Ｃ３〜８複素環基、Ｃ６〜２０アリール基、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、エステル基、アシル基、アミノ基、アミド基、スルホニル基又はシアノ基から選ばれ、前記ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ又はＳから選ばれる。
【００１３】
選択的に、式（１）における不飽和単環は、他の類似した構造で置換されていてもよく、例えば、環において１つ又は複数のＯ、Ｓ、Ｎなどのヘテロ原子を追加してもよい。例えば、式（１）に示される環原子「Ｚ」は、Ｎを表すことができる。
【００１４】
選択的に、式（１）における２員のヘテロアリール基
2021519828.tif 000004
は、他の類似した構造で置換されていてもよく、例えば、Ｎ原子の置換位置を変更したり、環において１つ又は複数のＮ原子を追加又は減少したりしてもよい。好ましくは、
2021519828.tif 000005
又は
2021519828.tif 000006
で置換されている。
【００１５】
上記の式（１）において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ６及びその選択可能な置換基で表される基は、以下の基を含むが、これらに限定されない。
【００１６】
水素は、−Ｈで表され、二重水素、三重水素などの同位体で置換されていてもよい。
【００１７】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を含んでもよい。
【００１８】
Ｃ１〜８アルキル基は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、２−メチル−ｌ−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−ｌ−ブチル基、２−メチル−３−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−ｌ−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２，２−ジメチル−ｌ−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔ−ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基などを含んでもよい。
【００１９】
Ｃ１〜８アルコキシ基は、−ＯＣ１〜８アルキル基で表され、その中のＣ１〜８アルキル基に含まれる基は、上記と同義である。例えば、Ｃ１〜８アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基などを含んでもよい。
【００２０】
Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基は、Ｃ１〜８アルキル基における任意の数の水素原子がハロゲンで置換された基で表され、その中のＣ１〜８アルキル基、ハロゲン基に含まれる基は、上記と同義である。例えば、Ｃ１〜８ハロゲン化アルキル基は、−ＣＦ３などを含んでもよい。
【００２１】
Ｃ３〜８シクロアルキル基は、非芳香族の飽和炭素環で表され、単環炭素環（１つの環を有する）及二環炭素環（２つの環を有する）を含み、例えば、Ｃ３〜８シクロアルキル基は、
2021519828.tif 000007
などを含んでもよい。
【００２２】
Ｃ３〜８複素環基は、Ｃ３〜８シクロアルキル基における任意の数の環原子がＯ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉなどのヘテロ原子で置換された基で表され、その中のＣ３〜８シクロアルキル基に含まれる基は、上記と同義である。例えば、Ｃ３〜８複素環基は、オキシラニル（ｏｘｉｒａｎｙｌ）、チイラン基（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｓｕｌｆｉｄｅ）、アジリジニル基（ａｚｉｒｉｄｉｎｙｌ）、アゼチジニル基、オキセタニル基（ｏｘｅｔａｎｙｌ）、チエタニル基（ｔｈｉｅｔａｎｙｌ）、テトラヒドロフラニル基、ピロリジニル基、オキサゾリジニル基、テトラヒドロピラゾリル基、ピロリニル基、ジヒドロフラニル基、ジヒドロチエニル基、ピペリジニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、モルホリニル基、ピペラジニル基、ジヒドロピリジル基、テトラヒドロピリジル基、ジヒドロピラニル基、テトラヒドロピラニル基、ジヒドロチオピラニル基、アゼパニル基、オキセパニル基、チエパニル基、オキサ−アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル基、アザスピロ［３．３］ヘプチル基などを含んでもよい。
【００２３】
Ｃ６〜２０アリール基は、単環式アリール基、二環式アリール基又はそれ以上の環のアリール基を含んでもよく、例えば、フェニル基、ビフェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、アントリル基、アズレニル基などを含んでもよい。
【００２４】
Ｃ５〜２０ヘテロアリール基は、環原子として任意の数のＯ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉなどのヘテロ原子を含有する不飽和基を表すことができる。例えば、Ｃ５〜２０ヘテロアリール基は、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、キノリジニル基、イソキノリジニル基、テトラゾリル基、トリアゾイル基、トリアジニル基、ベンゾフラニル基、ベンゾチオフェニル基、インドリル基、イソインドリル基などを含んでもよい。
【００２５】
ヒドロキシ基は、−ＯＨで表される。メルカプト基は、−ＳＨで表される。カルボキシル基は、−ＣＯＯＨで表される。エステル基は、−ＣＯＯＲ’で表され、Ｒ’は、式（１）に記載された置換基と同義であってもよく、例えばＣ１〜８アルキル基で置換されているエステル基は、−ＣＯＯＣ１〜８アルキル基で表され、その中のＣ１〜８アルキル基に含まれる基は、上記と同義である。
【００２６】
アシル基は、−ＣＯＲ’で表され、Ｒ’は、式（１）に記載された置換基と同義であってもよく、例えばＣ１〜８アルキル基で置換されているアシル基は、−ＣＯＣ１〜８アルキル基で表され、その中のＣ１〜８アルキル基に含まれる基は、上記と同義である。
【００２７】
アミノ基は、−ＮＨ２、−ＮＨＲ’又は−Ｎ（Ｒ’）２で表され、Ｒ’は、式（１）に記載された置換基と同義であってもよく、例えばＣ１〜８アルキル基で置換されているアミノ基は、−ＮＨＣ１〜８アルキル基又は−Ｎ（Ｃ１〜８アルキル基）２で表され、その中のＣ１〜８アルキル基に含まれる基は、上記と同義である。
【００２８】
アミド基は、−ＣＯアミノ基で表され、その中のアミノ基は、上記と同義である。
【００２９】
スルホニル基は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’で表され、Ｒ’は、式（１）に記載された置換基と同義であってもよく、例えばＣ１〜８アルキル基で置換されているスルホニル基は、−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜８アルキル基で表され、その中のＣ１〜８アルキル基に含まれる基は、上記と同義である。
【００３０】
シアノ基は、−ＣＮで表される。
【００３１】
上記の定義において、炭素原子の数が変化する場合、上記の定義は、炭素原子の数のみの変化に応じて変化し、その基の種類の定義に影響を与えない。例えば、「Ｃ１〜５アルキル基」は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基などの前記「Ｃ１〜８アルキル基」の定義における炭素原子の数が１〜５のすべての基を含んでもよい。
【００３２】
さらに、上記の式（１）において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ６及びその選択可能な置換基で表される基は、水素、二重水素、フッ素、塩素、臭素、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル基）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル基）２、−ＣＯ２Ｃ１〜４アルキル基、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル基、−ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル基）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル基）２、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、ピロリジニル基、ピラゾリル基、ピペリジニル基、ピリジル基、ピペラジニル基、トリアジニル基、フラニル基、チオフラニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基、ターフェニル基などを含むが、これらに限定されない。
【００３３】
本発明の一実施形態によれば、前記化合物は、式（２）に示すようなものであり、
2021519828.tif 000008
式（２）において、Ｒ１は、フッ素又は臭素から選ばれる。
【００３４】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）におけるＲ２は、水素、フッ素又は臭素から選ばれる。
【００３５】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）におけるＬ１は、−Ｏ−、−Ｓ−から選ばれるか、又は、単結合である。本明細書における単結合とは、Ｌ１基がないことを意味し、即ち、Ｘ基から最も遠い−（ＣＲ３Ｒ４）−におけるＣは、芳香族環単位に直接に結合されている。
【００３６】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）におけるＬ２は、−ＮＲ６−から選ばれる。
【００３７】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）におけるｎは、２、３、４、５又は６の整数を表す。
【００３８】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、Ｃ原子上の置換基Ｒ３、Ｒ４がそれぞれ独立してＸ基と共にシクロアルキル基、複素環基又はヘテロアリール基を形成することは、Ｘ基と隣接する−（ＣＲ３Ｒ４）−基においてＲ３又はＲ４が結合するＣ及びＸ基と共に形成することである。
【００３９】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、Ｒ３、Ｒ４がそれぞれ独立して前記Ｃ原子と隣接する大員環の環原子とを結合する単結合である場合、隣接する大員環の環原子は、それに隣接する他の−（ＣＲ３Ｒ４）−基における環原子Ｃであってもよく、それに隣接するＸ基における環原子であってもよい。好ましい実施形態において、Ｘ基に近接する−（ＣＲ３Ｒ４）−基におけるＲ３、Ｒ４は、それぞれ独立して前記Ｃ原子と前記Ｘ基とを結合する単結合であってもよく、即ち、Ｒ３及び／又はＲ４は、Ｃ原子とＸ中心原子（即ち−ＣＲａＲｂ−におけるＣ）とを結合する単結合である。例えば、Ｒ３、Ｒ４のうちの１つが単結合である場合、Ｘ基は、隣接する−（ＣＲ３Ｒ４）−基と二重結合を形成し、Ｒ３、Ｒ４のうちの２つが単結合である場合、Ｘ基は、隣接する−（ＣＲ３Ｒ４）−基と三重結合を形成する。
【００４０】
同様に、大員環における隣接する２つの−（ＣＲ３Ｒ４）−基の間、Ｃ、Ｃ原子の間には、置換若しくは無置換の二重結合又は三重結合が形成されてもよい。
【００４１】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、各Ｃ原子上の置換基Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基から選ばれるか、又は、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して前記Ｃ原子と隣接する大員環の環原子とを結合する単結合である。
【００４２】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、Ｒ３’、Ｒ４’は、それぞれ独立して置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基から選ばれか、又は、結合されるＣ及Ｌ２と共に少なくとも１つのヘテロ原子を含有する４〜８員の複素環基を形成する。好ましくは、ここで複素環基は、ピロリジニル基又はピペリジニル基であってもよく、その中のＮがＬ２に由来する。
【００４３】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、−ＣＲ３Ｒ４−基又は−ＣＲ３’Ｒ４’−基における大員環原子Ｃ又は置換基におけるＣは、異なる基に応じて１つ又は複数のキラル中心を生成し、本発明は、すべての光学異性体及ラセミ体を含む。
【００４４】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、Ｒ５は、置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシル基、アミノ基又はシアノ基から選ばれる。
【００４５】
本発明の一実施形態によれば、式（１）又は式（２）において、Ｒ６は、置換若しくは無置換の水素、ハロゲン、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ１〜５アルコキシ基、Ｃ１〜５ハロゲン化アルキル基又はＣ３〜６シクロアルキル基から選ばれる。
【００４６】
本発明の一実施形態によれば、上記の実施形態における選択可能な置換基は、フッ素、臭素、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル基）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル基）２、−ＣＯ２Ｃ１〜４アルキル基、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル基、−ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル基）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル基）２、Ｃ１〜５アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基、Ｃ３〜６複素環基、Ｃ６〜１０アリール基又はＣ５〜１０ヘテロアリール基から選ばれる。
【００４７】
本発明の一実施形態によれば、前記化合物は、以下の構造から選ばれる。
2021519828.tif 000009
2021519828.tif 000010
【００４８】
本発明は、以上の技術案のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【００４９】
前記医薬組成物は、経口剤形、非経口投与剤形、外用剤形及び直腸投与剤形を含むが、これらに限定されない。例えば、前記医薬組成物は、経口錠剤、カプセル、丸剤、粉剤、徐放性製剤、溶液及び懸濁液、非経口注射用の滅菌溶液、懸濁液若しくは乳液、外用の軟膏剤、クリーム、ゲル剤など、又は直腸投与に用いられる坐剤であってもよい。
【００５０】
前記医薬組成物は、前記化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグと併用する他の活性成分又は薬物をさらに含んでもよい。
【００５１】
本発明は、チロシンキナーゼが介在する疾患を治療するための薬物の調製における、上記の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、活性代謝物、多形体、同位体標識物、異性体又はプロドラッグ、及び上記の医薬組成物の使用をさらに提供する。
【００５２】
さらに、前記チロシンキナーゼは、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＦＡＫ、ＡＸＬ、ＡＲＫ５から選ばれる１種又は複数種である。
【００５３】
さらに、前記チロシンキナーゼが介在する疾患は、癌、疼痛、神経疾患、自己免疫疾患及び炎症を含む。
【００５４】
さらに、前記チロシンキナーゼが介在する癌は、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、甲状腺癌、前立腺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、胃と食道癌、胆管癌、神経膠腫、膠芽腫、頭頸部癌、炎症性筋線維芽細胞腫、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、未分化大細胞型リンパ腫などを含んでもよい。
【００５５】
さらに、前記チロシンキナーゼが介在する疼痛は、癌性疼痛、化学療法による疼痛、神経疼痛、損傷による疼痛又は他の由来の疼痛を含む、いずれかの由来又は病因による疼痛であってもよい。
【００５６】
さらに、前記チロシンキナーゼが介在する自己免疫疾患は、関節リウマチ、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデスなどを含む。
【００５７】
さらに、前記チロシンキナーゼが介在する神経疾患は、アルツハイマー症（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）などを含む。
【００５８】
さらに、前記チロシンキナーゼが介在する炎症疾患は、動脈硬化症、アレルギー、感染又は損傷による炎症などを含む。
【００５９】
本発明によって提供されるジアリール大員環化合物及びその医薬組成物は、顕著なチロシンキナーゼ阻害活性を有し、腫瘍の薬剤耐性を克服でき、血液脳関門を突破でき、優れた薬物動態学的性質及び極めてよい経口バイオアベイラビリティをさらに有し、比較的少ない投与量で施用でき、これにより、患者の治療コスト及び可能な毒性副作用を低減でき、このため、大きな適用の潜在力を有する。
【００６０】
詳細
別途定義されない限り、本発明の全ての技術及び科学用語は、請求項の主題が属する分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。特別な説明がない限り、本明細書に引用されるすべての特許、特許出願、公開資料は、何れもその全体を参照によって本明細書に組み込まれている。本明細書において商品名が現れる場合、対応する商品又はその活性成分を意味する。
【００６１】
なお、上記の簡単な説明及び以下の詳細な説明は例示的なものであり、解釈に用いられるものに過ぎず、本発明の主題を限定するものではない。本願では、特に明記されていない限り、本明細書及び添付する特許請求の範囲に記載の単数形式は、言及されたものの複数の形式も含む。なお、特別な説明がない限り、使用される「又は」、「或いは」は、「及び／又は」を意味する。また、使用される用語「含む」及びその他の形態、例えば「含む」、「有する」及び「含有する」は、いずれも非限定的な説明である。
【００６２】
標準化学用語の定義は参考文献（Ｃａｒｅｙ  ａｎｄ  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４ｔｈ  Ｅｄ，Ｖｏｌ  Ａ（２０００）ａｎｄ  Ｂ（２００１）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを含む）に記載されている。特別な説明がない限り、質量分析法、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、蛋白質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、薬理学的方法といったこの分野の技術範囲内にある常法が使用される。別途定義されない限り、本明細書において分析化学、有機合成化学、医薬及び医薬化学などの化学に関連する命名及び実験室の操作と技術は当業者に知られている。標準的な技術は、化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤、送達、及び患者に対する治療において使用されることができる。標準的な技術は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチドの合成、組織培養及び形質変換（例えば電気穿孔法（エレクトロポレーション）、リポソームトランスフェクション）において使用されることができる。例えば、メーカより提供された説明書付きのキットを使用するか、又は当分野における公知の方法、又は本発明に記載の方法により反応及び精製技術を実施することができる。一般的に、前記技術及びステップは、当該技術分野においてよく知られている従来の方法、及び種々の一般的な文献又はより具体的な文献に記載された従来の方法により実施されることができ、これらの文献は、本発明において引用及び議論されている。
【００６３】
置換基が左から右に書かれた通常の化学式で明記される場合、構造式を右から左に書く場合に得られる化学的に等価な置換基もそれらの置換基に含まれ、例えば−ＣＨ２Ｏ−は−ＯＣＨ２−に相当する。
【００６４】
用語「置換」は、特定の原子の原子価状態が正常で置換後の化合物が安定である場合、特定の原子上の任意の１つ又は複数の水素原子が置換基で置換されていることを意味する。置換基がオキソ（即ち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されていることを意味し、芳香族基ではオキソ基で置換されることはない。
【００６５】
化合物の組成又は構造において任意の変数（例えばＲ）は１回以上現れる場合、いずれにおいてその変数の定義は独立している。このため、例えば、基が０〜２個のＲで置換されている場合、前記基は、多くとも２個のＲで置換されていてもよく、且つ、いずれの場合においても、Ｒは独立した選択肢がある。なお、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物を形成する場合にのみ許容される。
【００６６】
本明細書に使用されるＣｍ〜ｎは、この部分においてｍ〜ｎ個の炭素原子を有することを意味する。例えば、前記「Ｃ１〜８」基は、この部分において１〜８個の炭素原子を有し、即ち、基が１つの炭素原子、２つの炭素原子、３つの炭素原子…８つの炭素原子を含むことを意味する。このため、例えば、「Ｃ１〜８アルキル基」は、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基を意味し、即ち、前記アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、オクチル基などから選ばれる。本明細書における数字の範囲は、例えば「１〜８」は、所定の範囲内の各整数を意味し、例えば「１〜８個の炭素原子」は、前記基が１つの炭素原子、２つの炭素原子、３つの炭素原子、４つの炭素原子、５つの炭素原子、６つの炭素原子、７つの炭素原子又は８つの炭素原子を有してもよいことを意味する。
【００６７】
用語「員」は、環を構成する骨格原子の数を意味する。例えば、ピリジンが六員環であり、ピロールが五員環である。
【００６８】
用語「薬学的に許容される」は、それらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形について、信頼できる医学的判断の範囲内において、人や動物の組織と接触して使用するのに適しているが、過度の毒性、刺激性、過敏性反応又はその他の問題又は合併症がなく、合理的な利益／リスク比に見合ったものである。
【００６９】
用語「医薬組成物」は、薬学的に許容される化学成分又は試薬を少なくとも１つ混合した、任意の生物活性化合物を意味し、前記薬学的に許容される化学成分又は試薬は「担体」であり、化合物を細胞又は組織に導入することに寄与し、安定化剤、希釈剤、懸濁剤、増粘剤及び／又は賦形剤を含むが、これらに限定されない。
【００７０】
用語「薬学的に許容される塩」は、所定の化合物の遊離酸及び遊離塩基の生物学的効果を保持し、且つ生物学又は他の点で悪影響がない塩を意味する。特別な説明がない限り、本発明における塩として、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基と形成した塩、無機酸と形成した塩、有機酸と形成した塩、塩基性又は酸性アミノ酸と形成した塩などが挙げられる。金属塩の非限定的な例は、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属の塩、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩などのアルカリ土類金属の塩、アルミニウム塩などを含むが、これらに限定されない。有機塩基と形成した塩の非限定的な例は、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、メチルピリジン、２，６−ジメチルピリジン、エタノールアミノ、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどと形成した塩を含むが、これらに限定されない。無機酸と形成した塩の非限定的な例は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などと形成した塩を含むが、これらに限定されない。有機酸と形成した塩の非限定的な例は、蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などと形成した塩を含むが、これらに限定されない。塩基性アミノ酸と形成した塩の非限定的な例は、アルギニン、リジン、オルニチンなどと形成した塩を含むが、これらに限定されない。酸性アミノ酸と形成した塩の非限定的な例は、アスパラギン酸、グルタミン酸などと形成した塩を含むが、これらに限定されない。
【００７１】
薬学的に許容される塩は、酸根又は塩基性基を含む親化合物から通常の化学的方法によって合成されることができる。通常の場合、このような塩の調製方法は、水又は有機溶媒又は両者の混合物において、遊離酸又はアルカリの形態のこれらの化合物と化学量論的に適切なアルカリ又は酸とを反応させて調製する。一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール又はアセトニトリルなどの非水媒体が好ましい。
【００７２】
用語「溶媒和物」は、本発明における１つの化合物と１つ又は複数の溶媒分子とから形成される物理的な集合体を意味し、この物理的な集合体は、様々な程度のイオン及び例えば水素結合などの共有結合を含む。この溶媒和物が分離可能であることが確認されており、例えば、結晶の格子に１つ又は複数の溶媒分子が混在している場合、「溶媒和物」は溶媒相と分離可能な溶媒和物の２つの部分を含む。対応する溶媒和物には、エタノール溶媒和物、メタノール溶媒和物などを含む多くの例がある。「水和物」は、水（Ｈ２Ｏ）分子を溶媒とする溶媒和物を意味する。本発明における１つ又は複数の化合物は、いずれも任意に溶媒和物として調製することができる。溶媒和物の調製はよく知られており、例えば、Ｍ．Ｃａｉｒａなど，Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉ．，９３（３），６０１−６１１（２００４）に抗真菌薬であるフルコナゾールの溶媒和物の調製、即ち酢酸エチルと水を用いた調製が記載されている。Ｅ．Ｃ．ｖａｎＴｏｎｄｅｒなど，ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ．，５（１），ａｒｔｉｃｌｅ  １２（２００４）及びＡ．Ｌ．Ｂｉｎｇｈａｍなど，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，６０３−６０４（２００１）にも、溶媒和物や水和物の類似した調製方法が記載されている。典型的且つ非限定的な調製過程は、常温より高い温度で本発明の化合物を必要量の理想溶媒（有機溶媒、水又はそれらの混合溶媒）に溶解し、降温し、放置し晶析させ、その後、標準的な方法で結晶を分離及び抽出する。Ｉ．Ｒ．分光分析技術によって、結晶において溶媒和物（水和物）を形成する溶媒（水）の存在を確認することができる。
【００７３】
用語「活性代謝物」は、化合物の代謝の時に形成される当該化合物の活性誘導体を意味する。
【００７４】
用語「多形体」は、異なる結晶格子の形態で存在する本発明の化合物を意味する。
【００７５】
用語「同位体標識物」は、同位体標識を有する本発明の化合物を意味する。例えば本発明の化合物における同位体は、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｆ、Ｓなどの元素の様々な同位体、例えば２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ及び３６Ｓを含んでもよい。
【００７６】
用語「薬学的に許容されるプロドラッグ」又は「プロドラッグ」は、本発明の化合物の任意の薬学的に許容される塩、エステル、エステルの塩又は他の誘導体を意味し、受容体に投与された後に本発明の化合物又は薬学的活性を有するその代謝物又は残基を直接又は間接的に提供することができる。特に好ましい誘導体又はプロドラッグは、患者に投与される場合に本願の化合物のバイオアベイラビリティを向上させるか（例えば、経口化合物をより容易に血液中に吸収させることができる）、又は親化合物の生物学的器官や作用部位（例えば脳やリンパ系など）への送達を促進することができる化合物である。通常の操作又は体内で親化合物に分解できるような修飾方式により、化合物に存在する官能基を修飾し、プロドラッグを調製することができる。様々なプロドラッグの形態は当分野でよく知られているものである。Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉとＶ．ＳｔｅｌｌａのＰｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８７）Ｖｏｌ．１４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，（１９８７）Ｅｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ及びＰｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓに提示されたプロドラッグに関する議論を参照する。Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ａ．Ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｗ，１９８５  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｗｉｄｄｅｒ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｄ．；Ａｃａｄｅｍｉｃ，１９８５，ｖｏｌ．４２，ｐ．３０９−３９６；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｈ．“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”ｉｎ  Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｋｒｏｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ  ａｎｄ  Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｄ．，１９９１，第５章、１１３−１９１頁；及びＢｕｎｄｇａａｒｄ，Ｈ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗ，１９９２，８，１−３８という文献は、引用により本明細書に組み込まれている。
【００７７】
用語「立体異性体」は、分子内の原子の異なる空間的な配列方式によって生成される異性体を意味する。本発明の化合物は、不斉又はキラル中心及び二重結合などの構造を含むので、光学異性体、幾何異性体、互変異性体、アトロプ異性体などの様々な異性体の形態を含み得る。これらの異性体及びそれらの単一異性体、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に含まれる。例えば、光学異性体については、キラル分離、キラル合成、キラル試薬又はその他の通常の技術により光学活性な（Ｒ）−及び（Ｓ）−異性体及びＤとＬ異性体を調製することができる。例えば、適当な光学活性物質（例えばキラルアルコールやモッシャー（Ｍｏｓｈｅｒ｀ｓ）の酸塩化物）と反応してジアステレオマーに変換し、これを分離して対応する単一異性体に変換する（例えば加水分解）ことができる。また、例えば、カラムにより分離することもできる。
【００７８】
本明細書における「医薬組成物」は、薬剤分野でよく知られている方法で調製することができ、局所的又は全身的な治療が必要か否か及び治療される領域に応じて、様々な経路により投与又は施用することができる。局所（例えば、鼻、膣、直腸投与を含む経皮、皮膚、眼、粘膜）、肺（例えば、噴霧器により粉末又はエアロゾル剤を気管内や鼻内に吸入又は吹入させる）、経口又は非経口で投与する。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は筋肉内の注射又は注入、又は鞘内や脳室内などの頭蓋内の投与が含まれる。１回高用量で非経口投与するか、又は例えば連続注入ポンプで投与してもよい。本明細書の医薬組成物は、錠剤、丸剤、散剤、トローチ剤、サシェ（ｓａｃｈｅｔｓ）、カシェ(ｃａｃｈｅｔｓ)剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ、エアロゾル剤（固体又は液体溶媒に溶解）；活性化合物を例えば１０重量％と高い割合で含有する軟膏剤、軟と硬ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液及び無菌包装粉末などの形を含むが、これらに限定されない。
【００７９】
本明細書の医薬組成物は、単位剤形で調製することができ、各投与量は、約０．１〜１０００ｍｇ、通常約５〜１０００ｍｇ、さらに約１００〜５００ｍｇの活性成分を含んでもよい。用語「単位剤形」は、ヒト患者と他の哺乳動物に適している、物理的に離散した単一投与量単位であり、各単位は、適切な薬物担体と混合された、計算により所望の治療効果を産生できる所定量の活物質を含有する。
【００８０】
用語「個体」は、疾患、病症又は病状などに罹患している個体を意味し、哺乳動物と非哺乳動物とを含む。哺乳動物の実施例として、哺乳綱のあらゆるメンバーを含むが、これらに限定されなく、ヒト、ヒト以外の霊長類動物（例えばチンパンジー、その他の猿類及びサル）、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜、例えばウサギ、イヌ、ネコなどの家庭動物、げっ歯類の動物、例えばラット、マウス、モルモットなどを含む実験動物が挙げられる。
【００８１】
用語「治療」とその他の類似の同義語は、疾患又は病症の症状を寛解、軽減又は改善すること、及び、その他の症状を予防すること、症状に繋がる潜在的な代謝要因を改善又は予防すること、疾患又は病症を抑制すること、例えば、疾患又は病症の発展を阻止すること、疾患又は病症を寛解すること、疾患又は病症を好転させること、疾患又は病症による症状を寛解すること、或いは疾患又は病症の症状を中止することを含み、また、当該用語は予防の目的を含むこともできる。当該用語は治療効果及び／又は予防効果を得ることをさらに含む。前記治療効果は、治療される潜在的な疾患を治癒又は改善することを意味する。なお、潜在的な疾患に関連する１種又は複数種の生理症状に対する治癒又は改善も治療効果であり、例えば、患者は依然として潜在的な疾患の影響を受ける可能性があるものの、患者の状況の改善が見られる。予防効果について、特定の疾患に罹患するリスクがある患者に前記組成物又は化合物を投与し、又は、疾患が未だ診断されていないものの、当該疾患の１つ又は複数の生理症状が現れた患者に前記組成物又は化合物を投与することができる。
【００８２】
用語「必要な治療効果を得る投与量」又は「治療有効量」は、施用後に治療される疾患又は病症の１つ又は複数の症状をある程度寛解するのに十分な少なくとも１種の薬剤又は化合物の量を意味する。その結果は、兆候、症状又は病因の低減及び／又は寛解であってもよいし、又は生物系の任意のその他の所望変化であってもよい。例えば用量漸増試験の技術を使用して任意の個体の症例に最適な有効量を測定することができる。実際的に投与される化合物、医薬組成物又は薬剤の量は、通常、治療される病症、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び反応、ならびに患者の症状の重症度を含む関連する状況に応じて医師によって決定される。
【００８３】
薬用組成物における本発明の化合物の割合又は濃度は、一定でなくてもよく、投与量、化学特性（例えば疎水性）、投与経路などを含む様々な要因に依存する。本発明の化合物は、非経口投与のために、例えば約０．１〜１０％ｗ／ｖの当該化合物を含む緩衝生理水溶液で提供することができる。典型的な投与量の範囲は、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ体重／日である。いくつかの実施形態において、投与量の範囲は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である。投与量は、疾患又は病症の種類及び進行度、具体的な患者の一般的健康状態、選択される化合物の相対的な生物学的効果、賦形剤及びその投与経路などのような変数に依存する可能性がある。
【００８４】
用語「施用」は、化合物又は組成物を生物学的作用が行われる所望サイトまで送達できる方法を意味する。これらの方法は、経口投与、経十二指腸投与、非経口注射（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、動脈内に注射若しくは注入することを含む）、外用、及び経直腸投与を含むが、これらに限定されない。本明細書に記載の化合物及び方法に使用される施用技術、例えばＧｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔｅｄ．；Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに検討されたものは、当業者によく知られている。
【００８５】
用語「ＩＣ５０」は、このような効果を測定する分析において最大効果を５０％阻害する効果が得られることを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】実施例１の合成経路の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００８７】
以下、本発明の目的、技術案と利点をさらに明確にするために、本発明の例示的な実施例の技術案についてさらに説明する。
【００８８】
本発明は、下記の方法により本発明に記載の化合物を調製することができる。以下の方法及び実施例は、これらの方法を説明するためのものである。これらの流れ及び実施例は、任意の方式により本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。当業者に知られている標準的な合成技術を使用して本明細書に記載されるような化合物を合成し、又は当該分野で知られている方法と本明細書に記載される方法とを組み合わせて使用することもできる。
【００８９】
本発明の実施例の化学反応は、本発明の化学変化及びそれに必要な試薬及び材料に適した適切な溶媒中で行われる。本発明の化合物を得るために、当業者が既存の実施形態に基づいて合成ステップ又は反応の流れを修正又は選択する必要がある場合がある。
【００９０】
本分野の任意の合成経路計画における重要な考慮事項の１つは、反応性官能基（例えば、本発明におけるアミノ基）のために適切な保護基を選択することである。訓練を受けた当業者にとって、Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓの（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  Ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）はこの方面において権威的である。本発明に引用されている参考文献のすべては、その全体を本発明に組み込まれている。
【００９１】
本分野で知られている任意の適切な方法に従って本明細書に記載された反応をモニタリングすることができる。例えば、核磁気共鳴スペクトル（例えば１Ｈ又は１３Ｃ）、赤外スペクトル、分光光度測定（例えばＵＶ−可視光）、質量分析法などの広いスペクトル法、又は、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は薄層クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーにより生成物の形成をモニタリングすることができる。
【００９２】
実施例１（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，６Ｓ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン（(13E,14E,3R,6S)-45-fluoro-3,6-dimethyl-5,8-dioxa-2-aza-1(5,3)-pyrazolo[1,5-a]pyrimidina-4(1,2)-benzenacyclononaphan-9-one）
2021519828.tif 000011
合成経路は、図１に示すようである。
【００９３】
ステップＡ：（Ｅ）−Ｎ−（５−フルオロ−２−ヒドロキシベンジリデン）ｔ−ブチルスルフィンアミド
2021519828.tif 000012
【００９４】
５．８ｇ（４１．４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の５−フルオロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド及び５．０ｇ（４１．４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）の（Ｒ）−ｔ−ブチルスルフィンアミドを１００ｍＬのジクロロメタンに加え、磁気攪拌下で２１．５ｇ（６６．３ｍｍｏｌ、１．６ｅｑ）の炭酸セシウムを加えて終夜反応させた。反応終了後、吸引濾過し、ジクロロメタンで濾過ケーキを洗い流した。濾液を濃縮して得られた生成物をそのまま次のステップに用いた（８．５ｇ、収率＝８５％）。
【００９５】
ステップＢ：Ｎ−（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）ｔ−ブチルスルフィンアミド
2021519828.tif 000013
【００９６】
２４ｇ（１００ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｅ）−Ｎ−（５−フルオロ−２−ヒドロキシベンジリデン）ｔ−ブチルスルフィンアミドを３００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解して−６５℃に降温し、Ｎ２雰囲気下で臭化メチルマグネシウム１００ｍＬ（３Ｎ、３．０ｅｑ）をゆっくりと加え、反応温度を−５０℃以下に保った。添加終了後、ゆっくりと室温まで上昇し、終夜反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、氷浴で５００ｍＬの水を加えて反応を徐々にクエンチした。５００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機相を水及び飽和食塩水で２回順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（８．５ｇ、収率＝３３％）。
【００９７】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０２（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６５−６．５１（ｍ，１Ｈ），６．５０−６．４１（ｍ，１Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４５−４．３０（ｍ，１Ｈ），１．５３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）．
【００９８】
ステップＣ：（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）−４−フルオロフェノール塩酸塩
2021519828.tif 000014
【００９９】
８．５ｇ（３２．８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＮ−（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）ｔ−ブチルスルフィンアミドを１００ｍＬのジオキサン（４Ｎ）溶液に溶解し、室温で３時間反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、溶媒を蒸発乾固し、残留物に１００ｍＬの酢酸エチルを加えて叩解し、吸引濾過し、酢酸エチルで洗い流し、固体を収集し、乾燥して目標生成物を得た（５．４ｇ、収率＝８７％）。
【０１００】
ステップＤ：（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチル
2021519828.tif 000015
【０１０１】
５．３ｇ（２７．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）−４−フルオロフェノール塩酸塩、６．２９ｇ（２７．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の５−クロロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチル、１２ｍＬ（１６７ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）のジイソプロピルエチルアミンを６０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、体系を１２０℃まで昇温して５時間反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、反応液を濃縮して蒸発乾固し、１００ｍＬの水、２００ｍＬの酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を水及び飽和食塩水で２回順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（２．９ｇ、収率＝３１％）。
【０１０２】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３−６．９０（ｍ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．４１（ｔ，３Ｈ）．
【０１０３】
ステップＥ：（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピルピバレート（(R)-2-hydroxypropyl pivalate）
2021519828.tif 000016
【０１０４】
７．６ｇ（１００ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−プロパン−１，２−ジオール及び１６ｍＬ（２００ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のピリジンを８０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、氷浴で反応系に１２．６ｇ（１００ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のピバロイルクロリドを徐々に滴下した。滴下終了後、室温まで昇温して終夜反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、反応液を濃縮して蒸発乾固し、１００ｍＬの水及び２５０ｍＬの酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を水及び飽和食塩水で２回順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（１０．５ｇ、収率＝６６％）。
【０１０５】
ステップＦ：化合物１１
2021519828.tif 000017
【０１０６】
２．０ｇ（５．８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチル、１．３９ｇ（８．７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピルピバレート、３．０４ｇ（１１．６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のトリフェニルホスフィンを３５ｍＬのジクロロメタンに溶解し、氷浴で反応系に２．０２ｇ（１１．６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のアゾジカルボン酸ジイソプロピルを徐々に滴下した。添加終了後、室温まで昇温して終夜反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、１００ｍＬの水及び２５０ｍＬの酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を水及び飽和食塩水で２回順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（２．１ｇ、収率＝７５％）。
【０１０７】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２５（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｓ，１Ｈ），４．７４−４．６５（ｍ，１Ｈ），４．３８（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２８−４．１３（ｍ，３Ｈ），１．５６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２０（ｔ，９Ｈ）．
【０１０８】
ステップＧ：化合物１２
2021519828.tif 000018
【０１０９】
１．５ｇ（３．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の化合物１１を１０ｍＬのメタノールに溶解し、氷浴で３．１ｍＬ（１０Ｎ、１０．０ｅｑ）の水酸化ナトリウム水溶液を加えた。添加終了後、室温まで昇温して２時間反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、濃縮して溶媒を除去し、１Ｎの塩酸水溶液を加えてｐＨを中性に調整し、吸引濾過して固体を収集し、２００ｍＬの水で濾過ケーキを洗い流し、乾燥して目標生成物１２を得た（０．７２ｇ、収率＝６３％）。
【０１１０】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１１．５０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．１５−６．９４（ｍ，３Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５２−４．３５（ｍ，１Ｈ），３．６８−３．４２（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ）．
【０１１１】
ステップＨ：（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，６Ｓ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン（(13E,14E,3R,6S)-45-fluoro-3,6-dimethyl-5,8-dioxa-2-aza-1(5,3)-pyrazolo[1, 5 -a]pyrimidina-4(1,2)-benzenacyclononaphan-9-one）
2021519828.tif 000019
【０１１２】
１５０ｍｇ（０．４０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の化合物１２、４８９ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ、５．０ｅｑ）の２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド、２８０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）のトリエチルアミンを１０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、室温で３０ｍｉｎ攪拌反応させた。その後、上記の反応液を４８８ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ、１０．０ｅｑ）の４−ジメチルアミノピリジンのトルエン溶液５００ｍＬに徐々に滴下し、この反応液を１００℃まで昇温して２時間撹拌し、その後、室温まで降温して終夜反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、濃縮して溶媒を除去し、残留物に３０ｍＬの水、５０ｍＬの酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を水及び飽和食塩水で２回順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（２３ｍｇ、収率＝１６％）。
【０１１３】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１１４】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２６−８．２０（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７−６．６９（ｍ，２Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．０１−５．８５（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｓ，１Ｈ），４．８９（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），１．６３−１．５２（ｍ，６Ｈ）．
【０１１５】
実施例２（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｓ，６Ｓ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン（(13E,14E,3S,6S)-45-fluoro-3,6-dimethyl-5,8-dioxa-2-aza-1(5,3)-pyrazolo[1,5-a]pyrimidina-4(1,2)-benzenacyclononaphan-9-one）
2021519828.tif 000020
【０１１６】
実施例１に記載されたステップを参照して目標化合物（２０ｍｇ、１５％）を調製した。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１１７】
実施例３（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｓ，６Ｒ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン（(13E,14E,3S,6R)-45-fluoro-3,6-dimethyl-5,8-dioxa-2-aza-1(5,3)-pyrazolo [1,5-a]pyrimidina-4(1,2)-benzenacyclononaphan-9-one）
【０１１８】
2021519828.tif 000021
【０１１９】
実施例１に記載されたステップを参照して目標化合物を調製した（３１ｍｇ、２２％）。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１２０】
実施例４（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，６Ｒ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン（(13E,14E,3R,6R)-45-fluoro-3,6-dimethyl-5,8-dioxa-2-aza-1(5,3)-pyrazolo[1,5-a]pyrimidina-4(1,2)-benzenacyclononaphan-9-one）
2021519828.tif 000022
【０１２１】
実施例１に記載されたステップを参照して目標化合物を調製した（３５ｍｇ、２４％）。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１２２】
以下の化合物は、実施例１を参照して類似した方法により合成される。
2021519828.tif 000023
2021519828.tif 000024
2021519828.tif 000025
2021519828.tif 000026
【０１２３】
実施例６（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，７Ｒ）−４５−フルオロ−３，７−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000027
ステップＡ：（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル−４−メチルベンゼンスルホン酸
2021519828.tif 000028
【０１２４】
２．０８ｇ（２７．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−１，２−プロピレングリコールのジクロロメタン溶液にトリエチルアミン８．３ｇ（８１．９ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ）を加え、その後、４−メチルベンゼンスルホニルクロリド５．２ｇ（２７．３４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、さらに触媒量のＤＭＡＰを加え、室温で終夜反応させ、水を加え、ジクロロメタンで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（２．１ｇ、収率＝３３％）。
【０１２５】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．１６−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．８７（ｍ，１Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），１．２０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）．
【０１２６】
ステップＢ：５−（（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロポキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
2021519828.tif 000029
６８０ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチルのＤＭＦ溶液に炭酸カリウム１．３６ｇ（９．８５ｍｍｏｌ、５．０ｅｑ）を加え、その後、５００ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル−４−メチルベンゼンスルホン酸を加え、添加終了後、オイルバスで８０℃に加熱して４時間反応させ、室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（２７８ｍｇ、収率＝３５％）。
【０１２７】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４０３［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１２８】
ステップＣ：５−（（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロポキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸
2021519828.tif 000030
【０１２９】
実験操作について、実施例１３におけるステップＣを参照する。
【０１３０】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３７５［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１３１】
ステップＤ：（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，７Ｒ）−４５−フルオロ−３，７−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000031
【０１３２】
実験操作について、実施例１３におけるステップＤを参照する。
【０１３３】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２４（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８−６．８６（ｍ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），６．１７−６．１５（ｍ，２Ｈ），５．６２（ｓ，１Ｈ），５．５２（ｓ，１Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），１．７１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１３４】
実施例９（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，６Ｓ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−８−オキサ−５−チア−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000032
【０１３５】
ステップＡ：（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
2021519828.tif 000033
【０１３６】
氷浴で０．７１ｇ（２．０６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチルのジクロロメタン溶液にピリジン４８９ｍｇ（３．１８ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ）を加え、その後、トリフルオロメタンスルホン酸無水物８７２ｍｇ（３．０９ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、室温で攪拌し続けて２時間反応させ、水を加え、ジクロロメタンで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（７８５ｍｇ、収率＝８０％）。
【０１３７】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４７７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１３８】
ステップＢ：（Ｒ）−１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−イル４−メチルベンゼンスルホン酸
2021519828.tif 000034
実験操作は、実施例６における的ステップＡを参照する。
【０１３９】
ステップＣ：（Ｓ）−Ｓ−（１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−イル）エタンチオール
2021519828.tif 000035
【０１４０】
２．０ｇ（５．８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｓ）−Ｓ−（１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−イル）エタンチオールのＤＭＦ溶液にチオ酢酸カリウム７９６ｍｇ（６．９６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を加え、添加終了後、オイルバスで６０℃に加熱して攪拌し続けて４時間反応させ、室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、さらに水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（１．０ｇ、収率＝６９％）。
【０１４１】
ステップＤ：（Ｓ）−１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−チオール
2021519828.tif 000036
【０１４２】
氷浴で１．０ｇ（４．０２ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｓ）−Ｓ−（１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−イル）エタンチオールのメタノール／水（５：１）溶液に水酸化ナトリウム２４１ｍｇ（６．０３ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、攪拌し続けて０．５時間反応させ、減圧蒸留してメタノールを除去し、ジクロロメタンで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（７００ｍｇ、収率＝８４％）。
【０１４３】
ステップＥ：５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−イル）チオ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチル
2021519828.tif 000037
【０１４４】
６４６ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチルのジオキサン溶液に７００ｍｇ（３．３９ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）の（Ｓ）−１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−２−チオール、１５６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）のキサントホス（Ｘａｎｔｐｈｏｓ）、１．３ｍＬ（８．１ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）のＤＩＥＡ及び１２４ｍｇ（０．１３５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）のＰｄ２（ｄｂａ）３を加え、Ｎ２で３回置換し、オイルバスで１２０℃に加熱して終夜反応させ、室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（３９０ｍｇ、収率＝５４％）。
【０１４５】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５３３［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１４６】
ステップＦ：５−（（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル）チオ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
2021519828.tif 000038
【０１４７】
実験操作について、実施例１３におけるステップＢを参照する。
【０１４８】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４１９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１４９】
ステップＧ：５−（（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル）チオ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸
2021519828.tif 000039
【０１５０】
実験操作について、実施例１３におけるステップＣを参照する。
【０１５１】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３９１［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１５２】
ステップＨ：（１３Ｅ，１４Ｅ，３Ｒ，６Ｓ）−４５−フルオロ−３，６−ジメチル−８−オキサ−５−チア−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000040
【０１５３】
実験操作について、実施例１３におけるステップＤを参照する。
【０１５４】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３６−８．２４（ｍ，２Ｈ），７．４９−７．４７（ｍ，１Ｈ），７．１３−６．９４（ｍ，２Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１２−６．０１（ｍ，１Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），５．０３（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５０−３．４９（ｍ，１Ｈ），１．７４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．
【０１５５】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３７３［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１５６】
実施例１３（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５−フルオロ−３−メチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000041
【０１５７】
ステップＡ：（Ｒ）−５−（（１−（２−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
2021519828.tif 000042
【０１５８】
６００ｍｇ（１．７４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−蟻酸エチル、６１４ｍｇ（２．４８ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピルピバレート及び９１１ｍｇ（３．４８ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のトリフェニルホスフィンを３５ｍＬのジクロロメタンに溶解し、氷浴で反応系に７０３ｍｇ（３．４８ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のアゾジカルボン酸ジイソプロピルを徐々に滴下した。添加終了後、室温まで昇温して終夜反応させた。ＴＬＣで反応終了をモニタリングし、減圧蒸留して濃縮した残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（７１９ｍｇ、収率＝８２％）。
【０１５９】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５０３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６０】
ステップＢ：（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
2021519828.tif 000043
【０１６１】
氷浴で７１９ｍｇ（１．４３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（２−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチルのテトラヒドロフラン溶液にフッ化テトラブチルアンモニウム・三水和物９００ｍｇ（２．８６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を加えた。添加終了後、室温まで昇温して１．５時間反応を続け、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（５１９ｍｇ、収率＝９３％）。
【０１６２】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３８９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１６３】
ステップＣ：（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸
2021519828.tif 000044
【０１６４】
５１９ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチルのメタノール／水（５：１）溶液に水酸化ナトリウム１．６ｇ（４０．２ｍｍｏｌ、４０．０ｅｑ）を加えた。添加終了後、オイルバスで８０℃に加熱して５時間反応を続けた。室温まで冷却し、減圧蒸留して溶媒を除去して残渣を得て、１Ｎ塩酸溶液でｐＨを５に調整し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮して生成物を得た（４８２ｍｇ、収率＝１００％）。
【０１６５】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３６１［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１６６】
ステップＤ：（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５−フルオロ−３−メチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000045
【０１６７】
１５０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸のジクロロメタン溶液に１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．８４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を加え、その後、４−ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ、０．１ｅｑ）を加え、オイルバスで加熱しながら、５時間還流反応させ、室温まで冷却し、水を加え、ジクロロメタンで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（６０ｍｇ、収率＝４２％）。
【０１６８】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２６（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９５−６．７８（ｍ，２Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１４−６．０１（ｍ，１Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６２−４．５９（ｍ，１Ｈ），４．４９−４．４５（ｍ，１Ｈ），４．３９−４．１９（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３４３［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１６９】
実施例２３（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５−フルオロ−２，３−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000046
【０１７０】
ステップＡ：（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）カルバミン酸ｔ−ブチル
2021519828.tif 000047
【０１７１】
３．７ｇ（１９．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）−４−フルオロフェノール塩酸塩のジクロロメタン溶液にトリエチルアミン５．４ｍＬ（３８．６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を加え、その後、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート４．６ｇ（２１．２ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を滴下し，滴下終了後、室温で２時間反応を続け、減圧蒸留して濃縮し、残渣を得て、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（４．９ｇ、収率＝１００％）。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２５６［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１７２】
ステップＢ：（Ｒ）−１−（２−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）カルバミン酸ｔ−ブチル
2021519828.tif 000048
【０１７３】
６００ｍｇ（２．３５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液に炭酸カリウム１．３ｇ（９．４ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ）を加え、その後、１．１ｇ（４．７ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）の（２−ブロモエトキシ）−ｔ−ブチルジメチルシランを加え、オイルバスで８０℃に加熱して４時間反応を続け、室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（６７０ｍｇ、収率＝６９％）。
【０１７４】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４１４［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１７５】
ステップＣ：（Ｒ）−（１−（２−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）（メチル）カルバミン酸ｔ−ブチル
2021519828.tif 000049
【０１７６】
氷浴で６７０ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−１−（２−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）カルバミン酸ｔ−ブチルのＤＭＦ溶液に水素化ナトリウム１９４ｍｇ（４．８６ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ）を加え、添加終了後、当該温度で攪拌し続けて１５分間反応させ、その後、ＣＨ３Ｉ４６０ｍｇ（３．２４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、２時間反応を続け、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（６９２ｍｇ、収率＝１００％）。
【０１７７】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４２８［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１７８】
ステップＤ：（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）（メチル）カルバミン酸ｔ−ブチル
2021519828.tif 000050
【０１７９】
実験操作について、実施例１３におけるステップＢを参照する。
【０１８０】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．１２−６．９４（ｍ，２Ｈ），６．８４−６．８０（ｍＨｚ，１Ｈ），５．９２（ｂＲｓ，１Ｈ），４．６３（ｂＲｓ，１Ｈ），４．１５−４．１３（ｍ，１Ｈ），３．９２−３．８８（ｍ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），１．５３（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３１４［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１８１】
ステップＥ：（Ｒ）−２−（４−フルオロ−２−（１−（メチルアミノ）エチル）フェノキシ）エタン−１−オール
2021519828.tif 000051
【０１８２】
実験操作について、実施例２４におけるステップＣを参照する。
【０１８３】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２１４［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１８４】
ステップＦ：（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
【０１８５】
実験操作について、実施例１におけるステップＤを参照する。
【０１８６】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４０３［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１８７】
ステップＧ：（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）エチル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸
2021519828.tif 000052
【０１８８】
実験操作について、実施例１３におけるステップＣを参照する。
【０１８９】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３７５［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１９０】
ステップＨ：（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５−フルオロ−２，３−ジメチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000053
【０１９１】
実験操作について、実施例１３におけるステップＤを参照する。
【０１９２】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３９−８．２５（ｍ，２Ｈ），７．０１−６．６９（ｍ，４Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０−５．０７（ｍ，１Ｈ），４．５８−５．５６（ｍ，１Ｈ），４．４４−４．４２（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．１５（ｍ，１Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．６２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１９３】
実施例２４（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５，６，６−トリフルオロ−３−メチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000054
【０１９４】
ステップＡ：（Ｒ）−２−（２−（１−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）−４−フルオロフェノキシ）−２，２−ジフルオロ酢酸エチル
2021519828.tif 000055
【０１９５】
７００ｍｇ（２．７５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液にブロモジフルオロ酢酸エチル１．４ｇ（６．８６ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）を加え、その後、ＤＢＵ１．０６ｇ（６．８６ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）を加え、オイルバスで７０℃に加熱して４時間反応させ、室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（７２０ｍｇ、収率＝６９％）。
【０１９６】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３３−７．２３（ｍ，１Ｈ），７．１０−７．０７（ｍ，１Ｈ），６．９７−５．９３（ｍ，１Ｈ），５．１９（ｓ，１Ｈ），４．９８（ｓ，１Ｈ），４．４５（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．４９−１．３９（ｍ，１５Ｈ）．
【０１９７】
ステップＢ：（Ｒ）−１−（２−（１，１−ジフルオロ−２−ヒドロキシエトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）カルバミン酸ｔ−ブチル
2021519828.tif 000056
【０１９８】
氷浴で７２０ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の（Ｒ）−２−（２−（１−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）−４−フルオロフェノキシ）−２，２−ジフルオロ酢酸エチルのテトラヒドロフラン溶液に水素化アルミニウムリチウム１６０ｍｇ（４．２ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）を加え、添加終了後、当該温度で２時間反応を続け、水を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで３回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸留して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して生成物を得た（４５０ｍｇ、収率＝７１％）。
【０１９９】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６−７．３３（ｍ，１Ｈ），７．１４−６．９４（ｍ，２Ｈ），５．２７（ｓ，１Ｈ），４．８７（ｂＲｓ，２Ｈ），４．０５−３．９７（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．４１（ｍ，１２Ｈ）．
【０２００】
ステップＣ：（Ｒ）−２−（２−（１−アミノエチル）−４−フルオロフェノキシ）−２，２−ジフルオロメチル−１−アルコール
2021519828.tif 000057
【０２０１】
４５０ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）のジクロロメタン溶液にトリフルオロ酢酸４ｍＬを加え、添加終了後、室温で攪拌し続けて３時間反応させ、減圧蒸留して濃縮し、残渣を得て、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて塩基性に調整し、酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して生成物を得た（３１５ｍｇ、収率＝１００％）。
【０２０２】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２３６［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０２０３】
ステップＤ：（Ｒ）−５−（（１−（２−（１，１−ジフルオロ−２−ヒドロキシエトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸エチル
2021519828.tif 000058
【０２０４】
実験操作について、実施例１におけるステップＤを参照する。
【０２０５】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４２５［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０２０６】
ステップＥ：（Ｒ）−５−（（１−（２−（１，１−ジフルオロ−２−ヒドロキシエトキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸
2021519828.tif 000059
【０２０７】
実験操作について、実施例１３におけるステップＣを参照する。
【０２０８】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３９７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０２０９】
ステップＦ：（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５，６，６−トリフルオロ−３−メチル−５，８−ジオキサ−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000060
【０２１０】
実験操作について、実施例１３におけるステップＤを参照する。
【０２１１】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２７−８．２５（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９４−６．９０（ｍ，１Ｈ），６．２６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．８５（ｂＲｓ，１Ｈ），５．５７（ｂＲｓ，１Ｈ），５．０１−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．８２−４．７７（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３７９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０２１２】
実施例２５（Ｒ，１３Ｅ，１４Ｅ）−４５−フルオロ−３−メチル−８−オキサ−５−チア−２−アザ−１（５，３）−ピラゾロ［１，５−α］ピリミジナ−４（１，２）−ベンゼナシクロノナファン−９−オン
2021519828.tif 000061
【０２１３】
実施例９の合成を参照する。
【０２１４】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３３−８．２０（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．０６−７．０４（ｍ，１Ｈ），６．９６−６．９４（ｍ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１７−５．９８（ｍ，１Ｈ），５．６４（ｓ，１Ｈ），５．０２−５．００（ｍ，１Ｈ），４．２１−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．７８−３．７６（ｍ，１Ｈ），３．３３−３．１８（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３５９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０２１５】
効果の評価
１．化合物のＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ及びＲＯＳ１に対する酵素阻害活性（ＩＣ５０）の検出
移動度シフト検出技術（Ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｓｈｉｆｔ  ａｓｓａｙ）によりＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ及びＲＯＳ１キナーゼに対して化合物の阻害活性の選別を行う。この選別プラットフォームは、マイクロ流体チップ技術に基づくＭＳＡを中核とし、キャピラリー電気泳動の基本理念をマイクロ流体環境に適用する。実験用基質は、蛍光標識付きのポリペプチドであり、反応系における酵素の触媒作用によって生成物に変換し、それに応じてその電荷も変化した。ＭＳＡは、基質と生成物の電荷の違いによって両者を分離して、それぞれ検出を行う。
【０２１６】
操作方法は、以下のように簡単に説明する。化合物粉末を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８４１８−１Ｌ）に十分に溶解し、１０ｍＭのストック溶液を調製した。化合物の初期実験濃度を１００ｎＭとし、３倍段階希釈して、１０つの濃度を設定し、複数のウェルにて検出した。ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ及びＴＲＫＣキナーゼターゲットの場合、ＬＯＸＯ−１０１（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、Ｃａｔ．Ｓ７９６０）を陽性対照化合物とし、ＲＯＳ１ターゲットの場合、スタウロスポリン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、Ｃａｔ．Ｓ１４２１）を陽性対照化合物とした。段階希釈された化合物及び終濃度が２．５ｎＭ／２．５５ｎＭ／２．５ｎＭ／０．３ｎＭのＴＲＫＡ／ＴＲＫＢ／ＴＲＫＣ／ＲＯＳ１キナーゼ（Ｃａｒｎａ、Ｃａｔ．０８−１８６／０８−１８７／０８−１９７／０８−１６３）をＯｐｔｉｐｌａｔｅ−３８４Ｆウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｃａｔ．６００７２７０）に均一に混合した後、室温で１０分間インキュベートした。その後、終濃度が４７．８μＭ／７１．２μＭ／４４．４μＭ／２６．７μＭのＡＴＰ及び３μＭのキナーゼ基質２２（ＧＬＢｉｏｃｈｅｍ、Ｃａｔ．１１２３９３）を加え、均一に混合した後、それぞれ室温で３０分間／４０分間／２０分間／２０分間反応させた。停止液を加えて酵素反応を停止させた後、Ｃａｌｉｐｅｒ  ＥＺ  ＲｅａｄｅｒＩＩで転化率を読み取った。
【０２１７】
データ解析：
2021519828.tif 000062
【０２１８】
転化率％_サンプル：サンプルの転化率；転化率％_最小：陰性対照ウェルの平均値、酵素活性なしのウェルの転化率の示度を表す。転化率％_最大：陽性対照ウェルの平均比、化合物による阻害なしのウェルの転化率の示度を表す。
【０２１９】
濃度のｌｏｇ値をＸ軸とし、阻害百分率をＹ軸とし、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５で量・反応曲線（ｄｏｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｕｒｖｅ）をフィッティングすることにより、各化合物の酵素活性阻害の強さを示すＩＣ５０値を得た。
【０２２０】
２．化合物のＲＯＳ１−Ｇ２０３２Ｒに対する酵素阻害活性（ＩＣ５０）の検出
Ｌａｎｃｅ  Ｕｌｔｒａ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ＣＲ９７−１００）の原理を利用してＲＯＳ１−Ｇ２０３２Ｒキナーゼ活性検出プラットフォームを構築し、化合物活性の測定を行った。
【０２２１】
化合物粉末を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８４１８）に溶解し、１０ｍＭのストック溶液を調製した。化合物の初期実験濃度を１０００ｎＭとし、３倍段階希釈して、１１つの濃度を設定し、複数のウェルにて検出した。ＴＰＸ−０００５（ＷｕＸｉ  ＡｐｐＴｅｃ．）を陽性対照化合物とした。段階希釈された化合物と終濃度が０．０１６ｎＭのＲＯＳ１−Ｇ２０３２Ｒキナーゼ（Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ．ａｂ２０６０１２）、５０ｎＭのＬＡＮＣＥ  Ｕｌｔｒａ  ＵＬｉｇｈｔ−ｐｏｌｙＧＴ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｃａｔ．ＴＲＦ０１００−Ｍ）及び２．６μＭのＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ａ７６９９）をＯｐｔｉｐｌａｔｅ−３８４Ｆウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｃａｔ．６００７２９９）に均一に混合した後、室温で６０分間インキュベートした。４０ｍＭのＥＤＴＡを５μｌ加えて５分間反応を停止させ、その後、終濃度が２ｎＭのユーロピウム−抗ホスホチロシン（Ｅｕｒｏｐｉｕｍ−ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ）（ＰＴ６６）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｃａｔ．ＡＤ００６９）を加え、十分に混合して室温で６０分間反応させた。ＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、＃２０１４）によりＬＡＮＣＥシグナルを取得した（励起光３２０ｎｍ、発射光６６５ｎｍ）。化合物のＩＣ５０値は、ＸＬＦＩＴ５（ＩＤＢＳ公司）のソフトによって計算された。
【０２２２】
３．化合物のＴＲＫＡ及びＡＬＫ−Ｌ１１９６Ｍに対する酵素阻害活性（ＩＣ５０）の検出
ＣｉｓｂｉｏのＨＴＲＦ（Ｃｉｓｂｉｏ、Ｃａｔ．０８−５２９）の原理に基づくＴＲＫＡ及びＡＬＫ−Ｌ１１９６Ｍキナーゼ活性検出プラットフォームにより化合物活性の測定を行った。化合物粉末を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８４１８）に溶解し、１０ｍＭのストック溶液を調製した。それぞれ化合物の初期実験濃度を１００ｎＭ及び１００００ｎＭとし、３倍段階希釈して、１１つの濃度を設定し、複数のウェルにて検出した。ＲＸＤＸ−１０１（ＷｕＸｉ  ＡｐｐＴｅｃ．）及びＣｒｉｚｏｔｉｎｉｂ（ＷｕＸｉ  ＡｐｐＴｅｃ．）を陽性対照化合物とした。
【０２２３】
段階希釈された化合物、終濃度が０．５ｎＭのＴＲＫＡ（Ｃａｒｎａ、Ｃａｔ．０８−１８６）／ＡＬＫ−Ｌ１１９６Ｍキナーゼ（Ｃａｒｎａ、Ｃａｔ．０８−５２９）、０．３μＭ／１μＭのＴＫ基質−ビオチン及び９０μＭ／３０μＭのＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ａ７６９９）をＯｐｔｉｐｌａｔｅ−３８４Ｆウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｃａｔ．６００７２９９）に均一に混合した後、室温で９０分間／１２０分間インキュベートした。終濃度が０．６７ｎＭのＥｕ標識ＴＫ−抗体及び５０ｎＭのストレプトアビジン標識ＸＬ−６６５を加え、十分に混合して室温で６０分間反応させた。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、＃２０１４）において蛍光値（励起光３２０ｎｍ、発射光６６５ｎｍ）を読み取った。化合物のＩＣ５０値は、ＸＬＦＩＴ５（ＩＤＢＳ公司）ソフトによって計算された。
【０２２４】
４．化合物のＴＲＫ融合及びその変異安定細胞株の増殖に対する阻害作用（ＩＣ５０）の検出
６つの細胞株の成長に対する化合物の阻害作用を検出するために、それぞれＬＯＸＯ−１０１（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、Ｃａｔ．Ｓ７９６０）及びＴＰＸ−０００５（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、Ｃａｔ．Ｓ８５８３）を対照化合物として使用した。この実験に使用された細胞株は、Ｂａ／Ｆ３  ＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１−ＷＴ、Ｂａ／Ｆ３  ＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１−Ｇ５９５Ｒ、Ｂａ／Ｆ３  ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ２−ＷＴ、Ｂａ／Ｆ３  ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ２−Ｇ６３９Ｒ、Ｂａ／Ｆ３ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ２−Ｇ６３９Ｒ及びＢａ／Ｆ３  ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３−Ｇ６２３Ｒであった。６つの細胞株における最高試験薬物濃度は、それぞれ１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、１μＭ及び１０μＭの９つの濃度であり、３．１６倍希釈した。
【０２２５】
実験方法は、以下のように簡単に説明した。対数増殖期の細胞を収穫し、細胞生存率が９０％以上であることを確保した。３０００細胞／ウェルで９６−ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標），Ｃａｔ＃３６０３）に敷き、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９５％で細胞を終夜培養した。細胞が接種された９６ウェルプレートの各ウェルに薬物溶液を加え、薬物濃度につき３ウェルずつ設定し、引き続き７２時間培養した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃Ｇ７５７２）で検出を行った。先ず、ＣＴＧ試薬を解凍して細胞プレートを室温に平衡化した。各ウェルに同体積のＣＴＧ溶液を加えて、シェーカーで５分間振盪して細胞を溶解させた。ルミネセンスシグナルを安定させるように、室温で細胞プレートを２０分間放置した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘマルチラベルマイクロプレート検出器（ＭＤ、２１０４−００１０Ａ）によりルミネセンス値を読み取った。その後、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５．０ソフトを使用してデータを分析し、非線形Ｓ曲線回帰によりデータをフィッティングして投与量−効果曲線を得ることにより、ＩＣ５０値を計算した。
【０２２６】
細胞の生存率（％）＝（Ｌｕｍ被験薬物−Ｌｕｍ培養液対照）／（Ｌｕｍ細胞対照−Ｌｕｍ培養液対照）×１００％
【０２２７】
2021519828.tif 000063
【０２２８】
2021519828.tif 000064
【０２２９】
2021519828.tif 000065
＊マークは、同じバッチの実験結果を表す；＃マークは、同じバッチの実験結果を表す。
【０２３０】
５．細胞レベルでの化合物の相乗効果
インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）においてＨ１９７５細胞（Ｌ８５８Ｒ及びＴ７９０Ｍ二重変異）を１６４０培地＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）及び１％Ｐ／Ｓ（ペニシリン／ストレプトマイシン）で培養した。化合物の検出において、Ｈ１９７５細胞を各ウェルあたり３０００個／１９５μＬの濃度で９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に敷き、化合物を１０ｍＭから、３倍段階希釈して１１つの濃度を設定し、各濃度につき４μＬを９６μＬの１６４０培地に加えて２５×化合物に希釈し、その後、５μＬを１９５μＬの細胞培養液（ＤＭＳＯ終濃度は０．１％、ｖ／ｖ）に加え、７２時間処理後、３５μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａから購入）を加え、説明書の操作フローに従ってＦｌｅｘ  Ｓｔａｔｉｏｎ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）で蛍光シグナルを測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５．０により化合物の細胞増殖に対する阻害を示すＩＣ５０値を計算した。ＣｈｏｕとＴａｌａｌａｙによる組み合わせ指数により薬物併用効果を計算し、組み合わせ指数（ＣｏＩ）値として、０．９≦ＣＩ≦１．１が相加作用を示し、０．８≦ＣＩ＜０．９が低度の相乗作用を示し、０．６≦ＣＩ＜０．８が中等度の相乗作用を示し、０．４≦ＣＩ＜０．６が高度の相乗作用を示し、０．２≦ＣＩ＜０．４が強い相乗作用を示す。
【０２３１】
実験結果から、実施例の化合物をＡＺＤ９２９１と併用する場合、ＥＧＦＲ二重変異細胞Ｈ１９７５（Ｌ８５８ＲとＴ７９０Ｍ二重変異）に対して中等度から高度の相乗作用（実施例１、ＣＩ＝０．５３−０．６７）を奏し、実施例の化合物とＥＧＦＲ阻害剤との併用によりＥＧＦＲ耐性を克服できることが示された。
【０２３２】
６．薬物動態学実験
雄ＳＤラットを３匹ずつ群分けてそれぞれ実施例１の化合物（５ｍｇ／ｋｇ）及びＴＰＸ−０００５（５ｍｇ／ｋｇ）を胃内に単回経口投与し、実施例１の化合物（１ｍｇ／ｋｇ）を静脈内注射した。実験前に動物を終夜絶食させ、投与前１０時間から投与後４時間までの間は絶食とした。経口投与群は、投与から０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時間後に採血し、静脈内注射群は、注射から０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時間後に採血した。小動物用麻酔器によりイソフルランで麻酔した後、眼底静脈叢から全血０．３ｍＬを採取し、ヘパリン抗凝固管に入れ、サンプルを４℃、４０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、血漿を遠心チューブに移して、分析まで−８０℃で保存した。血漿サンプルをタンパク質沈殿法で抽出し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで抽出液を分析した。薬物動態学の実験結果を表２、表３に示す。
【０２３３】
2021519828.tif 000066
【０２３４】
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【０２３５】
以上の結果から、本発明の実施例１の化合物は、従来の化合物ＴＰＸ−０００５よりも経口薬物動態学的性能が優れており、且つ、実施例１の経口バイオアベイラビリティが１００％に達したことが分かる。同様の方法で本発明の他の実施例の化合物を実験したところ、得られた薬物動態学的性能もＴＰＸ−０００５より優れていた。
【０２３６】
７．血液脳分布実験
雄ＳＤラットを１２匹ずつ群分けてそれぞれ実施例の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）を胃内に単回経口投与した。実験前に動物を終夜絶食させ、投与前１０時間から投与後４時間までの間は絶食とした。各ラット群は、投与から０．５、１、４及び１２時間後に致死させて血と脳組織を採取し、サンプルを処理した後、４℃、４０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、血漿を遠心チューブに移して、分析まで−８０℃で保存した。血漿サンプルをタンパク質沈殿法で抽出し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで抽出液を分析した。
【０２３７】
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【０２３８】
本発明を説明するために、本発明の好ましい実施形態を開示したが、当業者は、特許請求の範囲により限定される本発明の構想及び範囲から逸脱することなく、本発明に対して様々な修正、追加及び置換を行うことができることを理解すべきである。
【図１】
2021519828.tif 000074
【国際調査報告】
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