(57)【要約】同族体である一系列の低分子免疫アゴニスト、および、標的薬剤とアゴニストとのコンジュゲートにより得られる標的作用および免疫賦活機能を有する二機能性免疫標的化合物を提供する。得られた免疫標的化合物は、標的薬剤の免疫賦活効果および抗腫瘍効果、ならびに他の疾患に対する有効性を増強するのに有利である。このような増強効果は、抗腫瘍免疫因子（IFN-γ）および病原性標的部位の阻害を含む２つの機能の相乗作用によってもたらされる。
2021519792.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩。
【化１】
2021519792.tif 000116
前記式において、
Ａ１は、ＯまたはＣであり、
Ａ２は、ニトロ基、アミノ基、イソシアネート基、アルキレンアミノ基、アルキレンイソシアネート基、または式（II）もしくは（III）から選択される基である。
【化２】
2021519792.tif 000117
前記式において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、(CH2)p(NH)qであり、ここで、ｐは、０、１または２であり、ｑは、０、１または２であり、
Ｒ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ４は、(CH2)x(C=O)y(NH)z[(CH2)2O]r(CH2)s(C=C)tであり、ここで、xは、０〜５の範囲の整数であり、yは、０、１または２であり、zは、０、１または２であり、rは、０、１、２または３であり、ｓは、０〜５の範囲の整数であり、ｔは、０、１または２であり、ここで、ｓ≠０およびｔ＝０のとき、(CH2)sのカルボニル基に隣接する炭素原子は、-NHBoc、アミノ基、-NHFmoc、
【化３】
2021519792.tif 000118
から選択される基で置換されてもよく、または他の炭素原子と二重結合を形成してもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ヒドロキシルアミン基、ビニル基、または
【化４】
2021519792.tif 000119
から選択される基であり、
Ｒ６は、アルキル基または
【化５】
2021519792.tif 000120
から選択される基であり、ここで、＊は、前記炭素原子に結合している部位を示し、
ただし、以下の化合物を除外する。
【化７】
2021519792.tif 000121
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩。
【化１】
2021519792.tif 000122
前記式において、
Ａ１は、ＯまたはＣであり、
Ａ２は、ニトロ基、アミノ基、イソシアネート基、C1-C6アルキレンアミノ基、C1-C6アルキレンイソシアネート基、または式（II）もしくは（III）から選択される基である。
【化２】
2021519792.tif 000123
前記式において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、(CH2)p(NH)qであり、ここで、ｐは、０または１であり、ｑは、０または１であり、
Ｒ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ４は、(CH2)x(C=O)y(NH)z[(CH2)2O]r(CH2)s(C=C)tであり、ここで、xは、０〜５の範囲の整数であり、yは、０または１であり、zは、０または１であり、rは、０、１、２または３であり、ｓは、０〜５の範囲の整数であり、ｔは、０または１であり、ここで、ｓ≠０およびｔ＝０のとき、(CH2)sのカルボニル基に隣接する炭素原子は、-NHBoc、アミノ基、-NHFmoc、
【化３】
2021519792.tif 000124
から選択される基で置換されてもよく、または他の炭素原子と二重結合を形成してもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシ基、C1-C6 アルコキシ基、ヒドロキシルアミン基、ビニル基、または
【化４】
2021519792.tif 000125
から選択される基であり、
Ｒ６は、C1-C6アルキル基または
【化５】
2021519792.tif 000126
から選択される基であり、ここで、＊は、前記炭素原子に結合している部位を示し、
ただし、以下の化合物を除外する。
【化７】
2021519792.tif 000127
【請求項３】
請求項２に記載の式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩。
【化１】
2021519792.tif 000128
前記式において、
Ａ１  は、ＯまたはＣであり、
Ａ２は、ニトロ基、アミノ基、イソシアネート基、メチレンアミノ基、メチレンイソシアネート基、または、式（II）もしくは式（III）から選択される基である。
【化２】
2021519792.tif 000129
前記式において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、(CH2)p(NH)qであり、ここで、ｐは、０または１であり、ｑは、０または１であり、
Ｒ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ４は、(CH2)x(C=O)y(NH)z[(CH2)2O]r(CH2)s(C=C)tであり、ここで、xは、０〜５の範囲の整数であり、yは、０または１であり、zは、０または１であり、rは、０、１、２または３であり、ｓは、０〜５の範囲の整数であり、ｔは、０または１であり、ここで、ｓ≠０およびｔ＝０のとき、(CH2)sのカルボニル基に隣接する炭素原子は、-NHBoc、アミノ基、-NHFmoc、
【化３】
2021519792.tif 000130
から選択される基で置換されてもよく、または他の炭素原子と二重結合を形成してもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシル基、メトキシ基、ヒドロキシルアミン基、ビニル基、または
【化４】
2021519792.tif 000131
から選択される基であり、
Ｒ６は、メチル基または
【化５】
2021519792.tif 000132
から選択される基であり、ここで、＊は、前記炭素原子に結合している部位を示し、
以下の化合物を除外する。
【化７】
2021519792.tif 000133
【請求項４】
SZU-104, SZU-105, SZU-107, SZU-108, SZU-109, SZU-110, SZU-111, SZU-112, SZU-113, SZU-115, SZU-118, SZU-120, SZU-127, SZU-128, SZU-129, SZU-131, SZU-132, SZU-133, SZU-134, SZU-135, SZU-136, SZU-137, SZU- 138, SZU-139, SZU-140, SZU-142, SZU-143, SZU-144, SZU-145, SZU-149, SZU-158, SZU-159, SZU-160, SZU-161, SZU-162, SZU-163, SZU-166およびSZU-171からなる群から選択されたSZU系列の化合物、または薬学的に許容されるそれらの塩である、請求項３に記載の式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩。
【請求項５】
低分子免疫アゴニストまたは前記免疫アゴニストとグルタチオンのようなメルカプト含有ポリペプチドとから形成される付加生成物を、標的薬剤または抗体と共有結合的にコンジュゲートさせることにより形成され、以下の一般式で表される、免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
(TLA)n-L-(Tar)m
前記式において、
TLAは、低分子免疫アゴニスト、またはそれとグルタチオンのようなメルカプト含有ポリペプチドとの付加生成物であり、Tarは、標的薬剤または抗体であり、ｎおよびｍは、それぞれ独立して１〜５の範囲の数値であり、Ｌは、リンカーであり、前記リンカーは、直鎖または分枝のアルカンもしくはポリエチレングリコール鎖であり、Ｌの両端は、TLAおよび／またはTarに直接または付加基を介して共有結合的に連結されている。
【請求項６】
前記低分子免疫アゴニストが、請求項１〜３のいずれか１項に記載の低分子免疫アゴニストと、以下の化合物からなる群から選択される化合物とからなる、請求項５に記載の免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
【化７】
2021519792.tif 000134
【請求項７】
前記低分子免疫アゴニストは、SZU-102, SZU-104, SZU- 105, SZU-106, SZU-107, SZU-108, SZU-109, SZU-110, SZU-111, SZU-112, SZU-113, SZU-115, SZU-118, SZU-120, SZU-127, SZU-128, SZU-129, SZU-131, SZU-132, SZU-133, SZU-134, SZU-135, SZU-136, SZU-137, SZU-138, SZU-139, SZU-140, SZU- 142, SZU-143, SZU-144, SZU-145, SZU-149, SZU-158, SZU-159, SZU-160, SZU-161, SZU-162, SZU-163, SZU-166, SZU-171, SZU-101, SZU-103, SZU-114, SZU-117, SZU-122 およびSZU-130からなる群から選択されたSZU系列の化合物、または薬学的に許容されるその塩である、請求項５に記載の免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
前記TLAは、SZU-114-GSH, SZU-117-GSH, SZU-122-GSH, SZU-127-GSH, SZU-133-GSH, SZU-138-GSHおよびSZU-144-GSHからなる群から選択された化合物である、請求項５に記載の免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
前記Tarは、ダサチニブ、イマチニブ、サラカチニブ、ポナチニブ、ニロチニブ、ダヌセルチブ、AT9283デグラシン、バフェチニブ、kw-2449、nyp-bhg712、dcc-2036、GZD824、GNF-2、PD173955、GNF-5、ボスチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、ラパチニブ、バンデタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、アクシチニブ、ニンテダニブ、レゴラフェニブ、パゾパニブ、レンバチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、カボザンチニブ、DWF、アファチニブ、イブルチニブ、ニラパリブ、パルボシクリブ、B43、KU004、フォレイニブ、KRCA-0008、PF-06439015、PF-06463922、カネルリニブ、GSA-10、GW2974、GW583340、W24002、CP-380736、D2667、ムブリチニブ、PD153035、PD168393、ペリニチブ、PF-06459988、PF06672131、PF-6422899、PKI166、リベロマイシンA、チルホスチン1、チルホスチン23、リルホスチン51(lyrphostin51)、チルホスチンAG528、チルホスチンAG658、チルホスチンAG825、チルホスチンAG835、チルホスチンAG1478、チルホスチンRG13022、チルホスチンRG14620、B178、GSK1838705A、PD-161570、PD173074、SU-5402、ロスリン2、ピクロポドフィロトキシン（Picropodophyllotoxin）、PQ401、i-ome-チルホスチン、AG538、GNF5837、GW441756、チルホスチン、AG879、DMPQ、jnj-10198409、PLX647、トラピジル、チルホスチンA9、チルホスチン、AG370、レスタウルスチニブ、DMH4、エルダナマイシン（Eldanamvcin）、ゲニステイン、Gw2580、ハービマイシンA、ラベンダスチン（Lavendustin）、Cミドスタウリン（CMidostaurin）、nvp-bhg712、PD158780、pd-166866、pf-0627334、PP2、RPL、SU11274、SU5614、シマデックス（Symadex）、チルホスチンAG34、チルホスチンAG974、チルホスチンAG1007、UNC2881、ホノキオール（Honokiol）、SU1498、SKLB1002、cp-547632、jk-p3、KRN633、sc-1、ST638、SU 5416、スロクリン、チルホスチンSU1498、ロシレチニブ、ダコミチニブ、チバンチニブ、ネラチニブ、マシチニブ、バタラニブ、イコチニブ、xl-184、ossi-930、AB1010、キザルチニブ、AZD9291、タンドゥチニブ。HM61713、ブリガンチニブ、ベムラフェニブ(plx-4032)、セマクサニブ、AZD2171、クレノラニブ、ダムナカンタール、フォスタマチニブ、モテサニブ、ラドチニブ、osi-027、リンシチニブ、BIX02189、PF-431396、PND-1186、タンドゥニチブ、HM61713、ブリガンチニブ、ベムラフェニブ (plx-4032)、セマキサニブ、AZD2171、クレノラニブ、ダムナカンタール、フォスタマチニブ、モテサニブ、ラドチニブ、osi-027、リンシチニブ、BIX02189、PF-431396、PND-1186、PF-03814735、PF-431396、シロルムス、テムシロリムス、エベロリムス、デフォロリムス、ゾタロリムス、BEZ235、INK128、オミパリシブ、AZD8055、MHY1485、PI-103、KU-0063794、ETP-46464、GDC0349、XL388、WYE-354、WYE-132、GiSK1059615、WAY-600、PF-04691502、wYE-687、PP121、BGT226、AZD2o014、PP242、CH5132799、P529、GDC0980、GDC-0994、XMD82、ユリセルチニブ、FR180204、SCH772984、トラメチニブ、PD184352、PD98059、セルメチニブ、PD325901、U0126、ピマセルチニブ、tak-733、AZD8330、ビニメチニブ、PD318088、SL-327、レファメチニブ、gdc-0623、コビメチニブ、b1-847325、アダホスチン、GNF2、PPYA、aim-100、ASP 3026、LFM、トセラニブ、JQ1、ニラパリブ、フズオパリ、パルボシクリブ、ARS-853、ARS-1620、クロラゾールバイオレットN（ダイレクトバイオレットN）、miRNA-21、PreS、ジドブジン、レンバチニブ、LY-364947、ARS-1620またはレパリキシン、EGFR阻害剤、TKI阻害剤、BRD4阻害剤、KRAS経路関連標的阻害剤、BRAF阻害剤、BTK阻害剤、PARP阻害剤、PD-L1阻害剤（抗体および低分子を含む)）、PD-1阻害剤（抗体および低分子を含む）、OX40アゴニスト（抗体および低分子を含む）、CD122抗体、CD3抗体、CD19阻害剤、CD20阻害剤、MUC1阻害剤、MUC16阻害剤、CDK4/6阻害剤、TGF-β阻害剤、CXCR阻害剤、CCLケモカイン阻害剤、およびCXCLケモカイン阻害剤、ならびにmiRNAからなる群から選択された少なくとも一つである、請求項５に記載の免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
前記Tarは、TKIs、EGFR阻害剤、KRAS阻害剤、BRAF阻害剤、BTK阻害剤、BRD4阻害剤、PD-L1阻害剤、PD-1阻害剤、OX40アゴニスト、PARP阻害剤およびCDK4/6阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、請求項９に記載の免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１１】
Lは、下記式である、請求項５に記載の免疫標的化化合物または薬学的に許容されるその塩。
【化８】
2021519792.tif 000135
【請求項１２】
前記付加基は、アミド基、アルコキシ結合、アルキルチオ結合、置換アミン基、第四級アミン塩、クリック反応により形成される複素環、プロテアーゼによって解離可能なアミノ酸基、ウレイド基またはチオ尿素基を含む、請求項５に記載の免疫標的化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１３】
SZU-116, SZU-119, SZU-124, SZU-125, SZU-146, SZU-147, SZU-168, SZU-169, SZU-174, SZU-175, SZU-176, SZU-177, SZU-178, SZU-179, SZU-180, SZU-181, SZU-158-PD-L1, SZU-158-OX40, SZU-158-PD-1 およびSZU-136-miRNA21からなる群から選択されたSZU系列化合物、または薬学的に許容されるその塩である、請求項５に記載の免疫標的化化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１４】
免疫調節に関与する医薬品製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩、請求項５〜１３のいずれか１項に記載の化合物SZU-101、SZU-103、SZU-114、SZU-117、SZU-122もしくはSZU-130、前記免疫標的化合物、または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１５】
抗腫瘍医薬品もしくは抗ウイルス医薬品、または標的タンパク質を除去するための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩、請求項５〜１３のいずれか１項に記載の化合物SZU-101, SZU-103, SZU-114, SZU-117, SZU-122 もしくはSZU-130、前記免疫標的化合物、または薬学的に許容される塩のその使用。
【請求項１６】
RNAを免疫学的に標的とする医薬品の製造における、化合物SZU-136-miRNA21、またはその類似体の使用。
【請求項１７】
抗エイズ剤または抗Ｂ型肝炎剤である医薬品の製造における、化合物SZU-179、SZU-180またはSZU-181の使用。
【請求項１８】
タンパク質薬剤または細胞とコンジュゲートした低分子免疫アゴニストのコンジュゲート度を決定するための化合物SZU-161またはSZU-162の使用。
【請求項１９】
化合物SZU-116またはSZU-124がタンパク質または標的薬剤とコンジュゲートされている、in vivoでのタンパク質または標的薬剤の細胞吸収および分布を観察および研究するための、化合物SZU-116またはSZU-124の使用。
【請求項２０】
前記化合物SZU-114、SZU-117、SZU-122、SZU-127、SZU-133、SZU-138またはSZU-143が標的薬剤または抗体とコンジュゲートされている、二重免疫標的機能を有する医薬品の製造における、化合物SZU-114、SZU-117、SZU-122、SZU-127、SZU-133、SZU-138またはSZU-143の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、同族体である一系列の低分子免疫アゴニスト、前記アゴニストと標的薬剤とのコンジュゲートにより得られる免疫標的化合物、およびそれらの用途に関し、医薬化学と免疫学をカバーする学際科学の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
Toll様レセプター（TLR）は、生物の防御システムの第一の防御ラインを担っている（非特許文献１、非特許文献２）。特に、天然リガンドとして一本鎖RNA(ssRNA)により活性化されるトール様レセプター7（TLR7）は、ssRNAウイルスの侵入に対する防御において重要な役割を果たしている（非特許文献３）。さらに、TLR7は、人工的に合成された低分子化合物によって活性化され、生体の免疫調節を誘導でき、このため、抗ウイルスおよび抗腫瘍療法の両方において重要な役割を果たしている（非特許文献４）。
【０００３】
チロシンキナーゼ阻害剤（TKI）は、抗腫瘍標的治療薬の代表格であり、患者の寿命を延長できるが、ほとんどの患者は約1年以内に薬剤耐性を発症する。TKIsの薬剤耐性に対処するため、以前の研究では、免疫標的の相乗効果を得るために、TKIsおよびTLR7免疫アゴニストの併用投与を検討した。それにもかかわらず、研究室の結果は、TKIが、免疫細胞におけるTLR7アゴニストの免疫賦活作用に拮抗し、免疫賦活サイトカインの産生を阻害することを示した（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Kaisho, T. &Akira, S. Toll-like receptor function and signaling. J. Allergy Clin. Immunol. 117, 979-987 (2006)
【非特許文献２】Miyake, K. Innate immune sensing of pathogens and danger signals by cell surface Toll-like receptors. Semin. Immunol.19, 3-10 (2007)
【非特許文献３】Blasius, A.L. & Beutler, B. Intracellular toll-like receptors. Immunity 32, 305-315 (2010)
【非特許文献４】Huju Chi, Chunman Li, Flora Sha Zhao, Li Zhang, Tzi Bun Ng, Guangyi Jin and Ou Sha. Anti-tumor Activity of Toll-Like Receptor 7 Agonists. Front Pharmacol.2017 May 31; 8:304. doi:10.3389/fphar.2017.00304)
【非特許文献５】Scientific Reports, 2016 Dec 21; 6:39598.doi:10.10.1038/srep39598）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、一方では、免疫賦活効果を有する一系列の低分子免疫アゴニストおよびその用途を提供すること、他方では、前記低分子免疫アゴニストと標的薬剤とのコンジュゲートにより得られる免疫標的化合物およびその用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
第１の側面において、本発明は、式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩に関する。
【化１】
2021519792.tif 000003
前記式において、
Ａ１は、ＯまたはＣであり、
Ａ２は、ニトロ基、アミノ基、イソシアネート基、アルキレンアミノ基、アルキレンイソシアネート基、または式（II）もしくは（III）から選択される基である。
【化２】
2021519792.tif 000004
前記式において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、(CH2)p(NH)qであり、ここで、ｐは、０、１または２であり、ｑは、０、１または２であり、
Ｒ３は、OまたはSであり、
Ｒ４は、(CH2)x(C=O)y(NH)z[(CH2)2O]r(CH2)s(C=C)tであり、ここで、xは、０〜５の範囲の整数であり、yは、０、１または２であり、zは、０、１または２であり、rは、０、１、２または３であり、ｓは、０〜５の範囲の整数であり、ｔは、０、１または２であり、ここで、ｓ≠０およびｔ＝０のとき、(CH2)sのカルボニル基に隣接する炭素原子は、-NHBoc、アミノ基、-NHFmoc、
【化３】
2021519792.tif 000005
から選択される基で置換されてもよく、または他の炭素原子と二重結合を形成してもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ヒドロキシルアミン基、ビニル基、または
【化４】
2021519792.tif 000006
から選択される基であり、
Ｒ６は、アルキル基または
【化５】
2021519792.tif 000007
から選択される基であり、ここで、＊は、前記炭素原子に結合している部位を示し、
ただし、以下の化合物を除外する。
【化６】
2021519792.tif 000008
【０００７】
好ましくは、前記異性体は、幾何異性体またはエナンチオマーである。
【０００８】
好ましい実施形態では、本発明は、前記式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩に関する。
【化１】
2021519792.tif 000009
前記式において、
Ａ１は、ＯまたはＣであり、
Ａ２は、ニトロ基、アミノ基、イソシアネート基、C1-C6アルキレンアミノ基、C1-C6アルキレンイソシアネート基、または式（II）もしくは（III）から選択される基を表す。
【化２】
2021519792.tif 000010
前記式において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、(CH2)p(NH)qであり、ここで、ｐは、０または１であり、ｑは、０または１であり、
Ｒ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ４は、(CH2)x(C=O)y(NH)z[(CH2)2O]r(CH2)s(C=C)tであり、ここで、xは、０〜５の範囲の整数であり、yは、０または１であり、zは、０または１であり、rは、０、１、２または３であり、ｓは、０〜５の範囲の整数であり、ｔは、０または１であり、ここで、ｓ≠０およびｔ＝０のとき、(CH2)sのカルボニル基に隣接する炭素原子は、-NHBoc、アミノ基、-NHFmoc、
【化３】
2021519792.tif 000011
から選択される基で置換されてもよく、または他の炭素原子と二重結合を形成してもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシ基、C1-C6 アルコキシ基、ヒドロキシルアミン基、ビニル基、または
【化４】
2021519792.tif 000012
から選択される基であり、
Ｒ６は、C1-C6アルキル基または
【化５】
2021519792.tif 000013
から選択される基であり、ここで、＊は、前記炭素原子に結合している部位を示し、
ただし、以下の化合物を除外する。
【化７】
2021519792.tif 000014
【０００９】
さらに好ましい実施形態では、本発明は、前記式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩に関する。
【化１】
2021519792.tif 000015
前記式において、
Ａ１は、ＯまたはＣであり、
Ａ２は、ニトロ基、アミノ基、イソシアネート基、メチレンアミノ基、メチレンイソシアネート基、または、式（II）もしくは式（III）から選択される基である。
【化２】
2021519792.tif 000016
前記式において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、(CH2)p(NH)qであり、ここで、ｐは、０または１であり、ｑは、０または１であり、
Ｒ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ４は、(CH2)x(C=O)y(NH)z[(CH2)2O]r(CH2)s(C=C)tであり、ここで、xは、０〜５の範囲の整数であり、yは、０または１であり、zは、０または１であり、rは、０、１、２または３であり、ｓは、０〜５の範囲の整数であり、ｔは、０または１であり、ここで、ｓ≠０およびｔ＝０のとき、(CH2)sのカルボニル基に隣接する炭素原子は、-NHBoc、アミノ基、-NHFmoc、
【化３】
2021519792.tif 000017
から選択される基で置換されてもよく、または他の炭素原子と二重結合を形成してもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシル基、メトキシ基、ヒドロキシルアミン基、ビニル基、または
【化４】
2021519792.tif 000018
から選択される基であり、
Ｒ６は、メチル基または
【化５】
2021519792.tif 000019
から選択される基であり、ここで、＊は、前記炭素原子に結合している部位を示し、
ただし、以下の化合物を除外する。
【化７】
2021519792.tif 000020
【００１０】
好ましい実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩であって、以下の群から選択されるSZU系列（シリーズ）の化合物である（具体的な構造式は、以下の表１を参照）。SZU-104, SZU-105, SZU-107, SZU-108, SZU-109, SZU-110, SZU-111, SZU-112, SZU-113, SZU-115, SZU-118, SZU-120, SZU-127, SZU-128, SZU-129, SZU-131, SZU-132, SZU-133, SZU-134, SZU-135, SZU-136, SZU-137, SZU- 138, SZU-139, SZU-140, SZU-142, SZU-143, SZU-144, SZU-145, SZU-149, SZU-158, SZU-159, SZU-160, SZU-161, SZU-162, SZU-163, SZU-166 および SZU-171, または薬学的に許容されるそれらの塩。
【００１１】
第２の側面において、本発明は、免疫標的化合物またはその薬学的に許容される塩に関し、前記低分子免疫アゴニストまたはその付加生成物（前記免疫アゴニストとグルタチオンのようなメルカプト含有ポリペプチドとから形成される）と、標的薬剤または抗体との、共有結合的なコンジュゲートにより形成され、以下の一般式で表される。
【００１２】
(TLA)n-L-(Tar)m
前記式において、
TLAは、低分子免疫アゴニスト、またはそれとグルタチオンのようなメルカプト含有ポリペプチドとの付加生成物であり、Tarは、標的薬剤または抗体であり、ｎおよびｍは、それぞれ独立して１〜５の範囲の数値であり、Ｌは、リンカーであり、前記リンカーは、直鎖または分枝のアルキルもしくはポリエチレングリコール鎖であり、Ｌの両端は、TLAおよび／またはTarに直接または付加基を介して共有結合的に連結されている。
【００１３】
好ましい実施形態において、前記低分子免疫アゴニストは、本発明の第１の側面に記載の前記低分子免疫アゴニストと、以下の群から選択される化合物とからなる。
【化７】
2021519792.tif 000021
【００１４】
好ましい実施形態において、前記低分子免疫アゴニストは、以下の群から選択されるSZU系列の化合物である（具体的な構造式は、以下の表１を参照）。SZU-102, SZU-104, SZU- 105, SZU-106, SZU-107, SZU-108, SZU-109, SZU-110, SZU-111, SZU-112, SZU-113, SZU-115, SZU-118, SZU-120, SZU-127, SZU-128, SZU-129, SZU-131, SZU-132, SZU-133, SZU-134, SZU-135, SZU-136, SZU-137, SZU-138, SZU-139, SZU-140, SZU- 142, SZU-143, SZU-144, SZU-145, SZU-149, SZU-158, SZU-159, SZU-160, SZU-161, SZU-162, SZU-163, SZU-166, SZU-171, SZU-101, SZU-103, SZU-114, SZU-117, SZU-122 および SZU-130, または薬学的に許容されるそれらの塩。
【００１５】
好ましい実施形態において、TLAは、以下の群から選択される化合物である（具体的な構造式は、以下の表３を参照）。SZU-103-GSH, SZU-114-GSH, SZU-117-GSH, SZU-122-GSH, SZU-127-GSH, SZU-133-GSH, SZU-138-GSH および SZU-144-GSH。
【００１６】
好ましい実施形態において、Tarは、以下の群から選択される少なくとも１つの化合物である。ダサチニブ、イマチニブ、サラカチニブ、ポナチニブ、ニロチニブ、ダヌセルチブ、AT9283デグラシン、バフェチニブ、kw-2449、nyp-bhg712、dcc-2036、GZD824、GNF-2、PD173955、GNF-5、ボスチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、ラパチニブ、バンデタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、アクシチニブ、ニンテダニブ、レゴラフェニブ。パゾパニブ、レンバチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、カボザンチニブ、DWF、アファチニブ、イブルチニブ、ニラパリブ、パルボシクリブ、B43、KU004、フォレイニブ、KRCA-0008、PF-06439015、PF-06463922、カネルリニブ、GSA-10、GW2974、GW583340、W24002、CP-380736、D2667、ムブリチニブ、PD153035、PD168393、ペリニチブ、PF-06459988、PF06672131、PF-6422899、PKI166、リベロマイシンA、チルホスチン1、チルホスチン23、リルホスチン51(lyrphostin51)、チルホスチンAG528、チルホスチンAG658、チルホスチンAG825、チルホスチンAG835、チルホスチンAG1478、チルホスチンRG13022、チルホスチンRG14620、B178、GSK1838705A、PD-161570、PD173074、SU-5402、ロスリン2、ピクロポドフィロトキシン（Picropodophyllotoxin）、PQ401、i-ome-チルホスチン、AG538、GNF5837、GW441756、チルホスチン、AG879、DMPQ、jnj-10198409、PLX647、トラピジル、チルホスチンA9、チルホスチン、AG370、レスタウルスチニブ、DMH4、エルダナマイシン（Eldanamvcin）、ゲニステイン、Gw2580、ハービマイシンA、ラベンダスチン（Lavendustin）、Cミドスタウリン（CMidostaurin）、nvp-bhg712、PD158780、pd-166866、pf-0627334、PP2、RPL、SU11274、SU5614、シマデックス（Symadex）、チルホスチンAG34、シルホスチンAG974、チルホスチンAG1007、UNC2881、ホノキオール（Honokiol）、SU1498、SKLB1002、cp-547632、jk-p3、KRN633、sc-1、ST638、SU 5416、スロクリン、チルホスチンSU1498、ロシレチニブ、ダコミチニブ、チバンチニブ、ネラチニブ、マシチニブ、バタラニブ、イコチニブ、xl-184、ossi-930、AB1010、キザルチニブ、AZD9291、タンドゥチニブ、HM61713、ブリガンチニブ、ベムラフェニブ(plx-4032)、セマクサニブ、AZD2171、クレノラニブ、ダムナカンタール、フォスタマチニブ、モテサニブ、ラドチニブ、osi-027、リンシチニブ、BIX02189、PF-431396、PND-1186, タンドゥニチブ、HM61713、ブリガンチニブ、ベムラフェニブ(plx-4032)、セマキサニブ、AZD2171、クレノラニブ、ダムナカンタール、フォスタマチニブ、モテサニブ、ラドチニブ、osi-027、リンシチニブ、BIX02189、PF-431396、PND-1186、PF-03814735、PF-431396、シロルムス、テムシロリムス、エベロリムス、デフォロリムス、ゾタロリムス、BEZ235、INK128、オミパリシブ、AZD8055、MHY1485、PI-103、KU-0063794、ETP-46464、GDC0349、XL388、WYE-354、WYE-132、GiSK1059615、WAY-600、PF-04691502、wYE-687、PP121、BGT226、AZD2o014、PP242、CH5132799、P529、GDC0980、GDC-0994、XMD82、ユリセルチニブ、FR180204、SCH772984、トラメチニブ、PD184352、PD98059、セルメチニブ、PD325901、U0126、ピマセルチニブ、tak-733、AZD8330、ビニメチニブ、PD318088、SL-327、レファメチニブ、gdc-0623、コビメチニブ、b1-847325、アダホスチン、GNF2、PPYA、aim-100、ASP 3026、LFM、トセラニブ、JQ1、ニラパリブ、フズオパリ、パルボシクリブ、ARS-853、ARS-1620、クロラゾールバイオレットN（ダイレクトバイオレットN）、miRNA-21、PreS、ジドブジン、レンバチニブ、LY-364947、ARS-1620またはレパリ��シン、EGFR阻害剤、TKI阻害剤、BRD4 阻害剤、KRAS経路関連標的阻害剤、BRAF阻害剤、BTK阻害剤、PARP阻害剤、PD-L1阻害剤（抗体および低分子を含む)、PD-1阻害剤(抗体および低分子を含む)、OX40アゴニスト(抗体および低分子を含む)、CD122抗体、D3抗体、CD19阻害剤、CD20阻害剤、MUC1阻害剤、MUC16阻害剤、CDK4/6阻害剤、TGF-β阻害剤、CXCR阻害剤、CCLケモカイン阻害剤、およびCXCLケモカイン阻害剤、ならびにmiRNA。
【００１７】
さらに好ましい実施形態において、Tarは、以下の群から選択される少なくとも１つの化合物である。TKI、EGFR阻害剤、KRAS阻害剤、BRAF阻害剤、BTK阻害剤、BRD4阻害剤、PD―L1阻害剤、PD-1阻害剤、OX40アゴニスト、PARP阻害剤およびCDK4/6阻害剤。
【００１８】
好ましい実施形態において、Ｌは、下記式である。
【化８】
2021519792.tif 000022
【００１９】
好ましい実施形態において、前記付加基は、アミド基、アルコキシ結合、アルキルチオ結合、置換アミン基、第四級アミン塩、クリック反応により形成されるヘテロ環、プロテアーゼにより解離可能なアミノ酸基、ウレイド基またはチオ尿素基を含む。
【００２０】
好ましい実施形態において、前記免疫標的化合物または薬学的に許容できるその塩は、以下の群から選択されるSZU系列の化合物である（具体的な構造式は、以下の表４を参照）。SZU-116, SZU-119, SZU-124, SZU-125, SZU-146, SZU-147, SZU-168, SZU-169, SZU-174, SZU-175, SZU-176, SZU-177, SZU-178, SZU-179, SZU-180, SZU-181, SZU-158-PD-L1, SZU-158-OX40, SZU-158-PD-1 もしくは SZU-136-miRNA21, またはそれらの薬学的に許容できる塩。
【００２１】
第３の側面において、本発明は、免疫調節に関係する医薬品の製造における、本発明の第１の側面の前記式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩、本発明の第２の側面の化合物SZU-101, SZU-103, SZU-114, SZU-117, SZU-122 および SZU-130（具体的な構造式は、以下の表２を参照）、ならびに前記免疫標的化合物、または薬学的に許容されるそれらの塩の使用に関する。
【００２２】
第４の側面において、本発明は、抗腫瘍医薬品もしくは抗ウイルス医薬品、または標的タンパク質を除去する医薬品の製造における、本発明の第１の側面の前記式（Ｉ）の低分子免疫アゴニスト、その異性体、または薬学的に許容されるそれらの塩、本発明の第２の側面の化合物SZU-101, SZU-103, SZU-114, SZU-117, SZU-122 および SZU-130、ならびに前記免疫標的化合物、または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２３】
本発明は、さらに、RNAを標的とする免疫学的な医薬品の製造における、化合物SZU-136-miRNA21およびその類似体の使用に関する。ここで、前記化合物SZU-136-miRNA21およびその類似体は、免疫標的用の低分子RNAとして有用であり、前記医薬品は、固体製剤、液体製剤、および様々なビヒクルと前記医薬品から形成されたコンジュゲート体、または前記医薬品の結晶性水和物を含む、様々な投与形態をとりうる。
【００２４】
本発明は、さらに、抗エイズ剤および抗Ｂ型肝炎剤としての医薬品の製造における、化合物SZU-179, SZU-180 および SZU-181の使用に関し、ここで、前記化合物SZU-179, SZU-180 および SZU-181は、抗ウイルス免疫標的化合物として有用である。
【００２５】
本発明は、さらに、タンパク質薬剤および細胞とコンジュゲートした前記低分子免疫アゴニストのコンジュゲート度を決定するための、化合物SZU-161 および SZU-162の使用に関し、ここで、前記化合物SZU-161 および SZU-162は、特異的な紫外線吸収を有する低分子免疫アゴニストとして有用である。
【００２６】
本発明は、さらに、in vivoでのタンパク質または標的薬剤の細胞吸収および分布の観察ならびに研究における、化合物SZU-116およびSZU-124の使用に関し、ここで、前記化合物SZU-116およびSZU-124は、タンパク質または標的薬剤とコンジュゲートし、低分子免疫アゴニスト用の発色指標の光学的追跡特性を有する化合物として有用である。これらの化合物は、タンパク質または標的薬剤とコンジュゲートした後、in vivoでのタンパク質または標的薬剤の細胞吸収および分布をリアルタイムで示すことができる。
【００２７】
本発明は、さらに、二重免疫標的機能を有する医薬品の製造における、化合物SZU-114, SZU-117, SZU-122, SZU-127, SZU-133, SZU-138, および SZU-143の使用に関し、ここで、前記化合物SZU-114, SZU-117, SZU-122, SZU-127, SZU-133, SZU-138, and SZU-143は、標的薬剤または抗体とコンジュゲートされている。
【００２８】
当業者は、本発明の低分子免疫アゴニストそれ自体が、免疫賦活効果を有することを発見した。TKIとTLR7免疫アゴニストとの併用により、TKIが、免疫細胞におけるTLR7アゴニストの活性化に拮抗し、それにより免疫刺激性サイトカインの産生を阻害することは、当業者によく知られている。しかし、本発明者らは、驚くことに、標的薬剤としてのTKIをTLR7低分子免疫アゴニストと共有結合的にコンジュゲートすることによって、このような共有結合的なコンジュゲート化合物が、前記低分子免疫アゴニストの免疫賦活作用を維持または向上させるだけでなく、前記標的薬剤の抗腫瘍効果を増強させることを見出した。本発明の方法により得られる前記免疫標的化合物は、腫瘍の長期的かつ高効果の治療に大きな意義がある。
【００２９】
免疫賦活効果を有し、且つ、上述のように標的作用を有する免疫標的化合物を形成するために、標的薬剤とコンジュゲートできる新規な低分子免疫アゴニストを、以下の表１に示す。
【００３０】
【表１Ａ】
2021519792.tif 000023
【表１Ｂ】
2021519792.tif 000024
【表１Ｃ】
2021519792.tif 000025
【表１Ｄ】
2021519792.tif 000026
【表１Ｅ】
2021519792.tif 000027
【表１Ｆ】
2021519792.tif 000028
【表１Ｇ】
2021519792.tif 000029
【００３１】
免疫賦活効果を有し、且つ、標的作用を有する免疫標的化合物を形成するために標的薬剤とコンジュゲートできる他の低分子免疫アゴニストを、下記表２に示す。
【００３２】
【表２Ａ】
2021519792.tif 000030
【表２Ｂ】
2021519792.tif 000031
【００３３】
このような化合物のうち、化合物SZU-103, SZU-114, SZU-117, SZU-122 および SZU-130の構造式ならびにそれらの製造工程は、中国特許出願CN107281483Aに開示されており、また、化合物SZU-102 および SZU-106の構造式ならびにそれらの製造工程は、中国特許出願CN106267188Aに開示されており、ここで、化合物１は、化合物SZU-102に対応し、化合物１９は、SZU-106に対応する。
【００３４】
表１および表２にあげられたいくつかの低分子免疫アゴニストは、グルタチオン（GSH）のようなメルカプト含有ポリペプチドとの付加生成物を形成でき、これはグルタチオントランスフェラーゼを標的とすることができ、化学療法薬剤、不可逆的TKI標的薬剤および他の不可逆的標的薬剤と相乗的に作用することにより、疾患に対する治療効果の改善をもたらし、免疫学的作用を活性化しつつ、薬剤耐性を除去できる。前記付加生成物の一つ、すなわち、以下のスキームで示される合成工程を経てSZU-117とグルタチオンとを反応させて形成されたSZU-117-GSHを、例として示す。前記低分子免疫アゴニストとGSHとから形成される付加生成物の例を、表３に示す。
【化９】
2021519792.tif 000032
【００３５】
【表３Ａ】
2021519792.tif 000033
【表３Ｂ】
2021519792.tif 000034
【００３６】
他のメルカプト含有化合物としては、例えば、2-メチルアミノエタネチオール、および下記SZU-033T等があげられる。
【化１０】
2021519792.tif 000035
【００３７】
表１および表２に記載の前記低分子免疫アゴニスト、および、いくつかの低分子免疫アゴニストとＧＳＨとから形成された表３に記載の化合物は、標的薬剤とコンジュゲートさせることで、免疫標的化効果を有する二機能性の免疫標的化合物を得ることができる。得られる免疫標的化合物を、以下の表４に示す。
【００３８】
【表４Ａ】
2021519792.tif 000036
【表４Ｂ】
2021519792.tif 000037
【表４Ｃ】
2021519792.tif 000038
【表４Ｄ】
2021519792.tif 000039
【００３９】
低分子免疫アゴニストは、以下に示す合成スキームを介して、標的薬剤とコンジュゲートして免疫標的化合物を形成する。低分子免疫アゴニストは、下記合成スキームＩを介して、標的薬剤（target drug）とコンジュゲートさせてもよい。
【化１１】
2021519792.tif 000040
【００４０】
低分子免疫アゴニスト（例としてSZU-137を使用）は、下記合成スキームIIを介して標的薬剤（targeted drug）とコンジュゲートさせてもよい。
【化１２】
2021519792.tif 000041
【００４１】
また、SZU-144またはSZU-133と標的薬剤とをコンジュゲートして免疫標的化合物を形成する場合も、上記と同様の工程を適用してもよい。また、前記リンカーは、単純な直鎖アルカンでもよいし、所望により置換された他のリンカーでもよい。
【００４２】
カルボキシル含有低分子免疫アゴニスト（例えば、SZU-138）は、付加反応およびコンジュゲーション反応により抗体とコンジュゲートして、可溶性の機能性タンパク質ポリペプチドコンジュゲート体を形成でき、このコンジュゲート体は、ジメチルアミノ基の存在により塩を形成し、イオン化された正電荷を提供できる。このため、治療効果および水溶性の向上に有利であり、それにより、コンジュゲート生成物の溶解性の問題を解決できる。
【００４３】
さらに、前述したようなカルボキシル含有低分子免疫アゴニストは、2種類の異なる標的薬剤とコンジュゲートして、二重標的免疫化合物を形成することもできる。
【００４４】
低分子免疫アゴニスト（例としてSZU-171を使用）は、下記合成スキームIIIを介して標的薬剤（targeted drug）とコンジュゲートさせてもよい。
【化１３】
2021519792.tif 000042
【００４５】
低分子免疫アゴニストとグルタチオンとから形成される生成物（例えば、SZU-114-GSHを使用）は、また、治療効果を高めるために、2種類の異なる標的薬剤とコンジュゲートできる。
【００４６】
低分子免疫アゴニストは、下記合成スキームIVを介して標的薬剤（targeted drug）とコンジュゲートさせてもよい。
【化１４】
2021519792.tif 000043
【００４７】
本明細書で使用されるように、前記標的薬剤は、種々のTKI剤および腫瘍標的薬剤、またはCD3抗体、PD-1抗体、OX40抗体、CD19抗体、CD20抗体、HER2抗体、MUC1抗体、ならびに種々の腫瘍タンパク質および病原体に対する抗体のような抗体のいずれでもよく、前記リンカーは、アルカン鎖またはアルコキシ鎖でもよく、溶解および代謝を最適化するための要件に応じて調整できる。
【００４８】
上記のような二重コンジュゲート免疫標的化合物は、以下のような利点を有する。
・２つの正のアミノイオン基（アミノ塩 -HN+- および- NH3+）を形成できる。
・高い溶解性。
・二重ターゲットは、必要に応じて調整および最適化でき、例えば、ターゲット1は、T細胞を標的とするCD3抗体またはCD122抗体であり、ターゲット2は、癌細胞を標的とするHER2阻害剤である。
・腫瘍微小環境へのT細胞の浸潤を促進する。
・免疫TLR7受容体を活性化しながら抗腫瘍効果を増強する。
・免疫標的記憶の形成。
【００４９】
低分子免疫アゴニスト（例としてSZU-166の使用。これは、アミノ化合物とのマイルドな定量的コンジュゲート付加のメリットを有する独自のイソシアネート低分子免疫アゴニストである）は、下記合成スキームVを介して標的薬剤（targeted drug）とコンジュゲートさせてもよい。
【化１５】
2021519792.tif 000044
【００５０】
化合物SZU-115およびSZU-160は、主に以下の2つの機能を有するクリック反応性基を持つ新規低分子免疫アゴニストである。すなわち、１）高分子および生理活性物質とコンジュゲートした後、クリック反応を介して発色指示薬に連結することによりコンジュゲート生成物の光学的追跡に有用であり、例えば、タンパク質または標的薬物とコンジュゲートした場合、タンパク質および標的薬剤のin vivoでの細胞吸収および分布を観察できる。
【００５１】
低分子免疫アゴニストは、下記合成スキームVIを介して標的薬剤とコンジュゲートさせてもよい。
【化１６】
2021519792.tif 000045
【００５２】
２）SZU-115は、また、抗体および標的薬剤に同時に結合させることができ、それにより、抗体のオフターゲット効果を低減させ、標的薬剤の有効性を高め、抗腫瘍免疫を活性化できる。
【化１７】
2021519792.tif 000046
【００５３】
化合物SZU-136およびSZU-160は、類似の作用機序と応用効果を有する。
【００５４】
本発明の化合物SZU-139は、SZU-136とリボースとのクリック反応により調製される
【化１８】
2021519792.tif 000047
【００５５】
また、低分子免疫アゴニストと低分子RNA（miRNA）とのコンジュゲートにも、同様のプロセスを適用できる。例えば、miRNA21（microRNA21）は、腫瘍の発生および発達に重要な役割を果たす（Cell Death Dis. 2018 Feb 13; 9(2):219. doi: 10.1038/s41419-017-0243-9; Proc Natl Acad Sci S U.S.A. 2015 Jun 30; 112(26): E3355-64. doi: 10.1073/pnas.1504630112; Cancer Lett. 2017 May 1; 393: 86 -93.doi:10.1016/j.canlet.2017.02.019; https://en.wikipedia.org/wiki/MIRN21）。病原性miRNAとコンジュゲートした低分子免疫アゴニストの応用は、根源となる疾患の発症、関連タンパク質の変化、および関連疾患の発症をブロックするために、免疫系を誘導できる。
【００５６】
低分子免疫アゴニストは、下記合成スキームVIIを介して標的薬剤とコンジュゲートさせてもよい。
【化１９】
2021519792.tif 000048
【００５７】
アジドmiRNAの合成は、文献に記載されている（Bioconjug Chem. 2003 May-Jun; 14(3):697-701)。
【００５８】
【化２０】
2021519792.tif 000049
【００５９】
前記アルキン免疫アゴニストは、SZU-115で置換できる。SZU-115のカルボキシル基は、Argonauteとコンジュゲートして、コンジュゲート体を形成できる。このコンジュゲート体は、miRNAとArgonauteとのコンジュゲート形成を阻害し、TLR7アゴニストの作用下で免疫細胞のエンドソームに向けられ、免疫消去と記憶とを得ることができる。
【化２１】
2021519792.tif 000050
【００６０】
最近の研究では、腫瘍エキソソームから放出される病原性miRNAが、薬剤耐性および腫瘍転移の重要な原因となることが確認されている（Proc, Natl, Acad, Sci, U, A, 2018, Feb, 12.pii:201717363.doi:10.1073/pnas.1717363115, J Clin Invest. 2016 Apr 1; 126(4): 1163-72.doi: 10.1172/JCI81130)。ヒトの体内で生成された自己miRNA、特に癌細胞から放出された自己miRNAは、一般に免疫を誘導できない。前記標的miRNAは、外因性アンチセンスオリゴヌクレオチドRNAによって特異的に認識できるが、そのほとんどは、免疫原性のためにin vivoで速やかに消去または分解される。前記プロセスを用いることにより、病原性の自己miRNAを自然免疫で認識可能な免疫原性のmiRNAに変換することが可能である。また、miRNA30c等の他の病原性miRNAにも、同様のプロセスを適用できる。
【００６１】
miRNAの重要な役割は、標的mRNAの切断または転写抑制を開始するために、対応するArgonauteタンパク質をガイドすることである(https://en.wikipedia.org/wiki/Argonaute)。したがって、ヒトの体内で自己miRNAとコンジュゲートしたTLR7免疫アゴニストによって達成される革新的な効果の1つは、Argonauteタンパク質への結合における免疫標的干渉であり、それによって関連する病原性を排除できる。この効果は、図69に模式的に示されている。要約すると、本発明者らは、一系列の低分子免疫アゴニストを発見した。これらは、標的薬剤とコンジュゲートして、免疫賦活機能を有する新規な免疫標的化合物を形成でき、それにより、in vitroおよびin vivoで標的薬剤の免疫賦活効果が増大し、腫瘍および他の疾患に対する有効性を促進でき、前記標的薬剤に二重の機能を付与できる（二機能標的薬剤）。このような増強された効果は、抗腫瘍免疫因子（例えば、IFN-γ）および病原性標的部位における阻害を含む2つの機能の相乗的な作用に起因する。したがって、本発明は、2つの機能の組み合わせを有する新規な高効果標的薬剤を対象とする。
【００６２】
本発明の前記免疫標的化合物は、図70に示すように、免疫経路を介して病原性標的（タンパク質）を排除することにより、適切に作用する。低分子免疫アゴニストと標的薬剤とのコンジュゲートにより形成された免疫標的化合物は、前記標的薬剤によって病原性タンパク質にガイドされ、その結果、標的細胞が死滅し、病原性タンパク質が放出される。さらに、前記免疫標的化合物は、前記免疫アゴニストにより抗原提示細胞（例えば、DC）にガイドされ、前記細胞において前記病原性タンパク質が切断され、その結果、これらのタンパク質が分解される。本発明において、低分子免疫アゴニストと標的薬剤（例えば、TKI）とのコンジュゲートにより形成された免疫標的化合物は、薬剤耐性を克服し、治療効果を向上できる。
【００６３】
酸性低分子免疫アゴニストとして有用なリジン誘導体化合物SZU-104、SZU-105、SZU-112およびSZU-113は、免疫アゴニストの活性を有するアミノ酸誘導体であり、免疫原性ポリペプチドの調製において、所望の特定部位にポリペプチド（または抗体）を挿入することにより、部位特異的コンジュゲーションの目的を達成できる。
【化２２】
2021519792.tif 000051
【００６４】
タンパク質薬剤とのコンジュゲートに適した低分子免疫アゴニストであるSZU-161およびSZU-162は、特異的な紫外線吸収ピーク（342nM）を有し、タンパク質薬剤とコンジュゲートした低分子免疫アゴニストのコンジュゲート度を測定するために、一般的に使用できる。
【化２３】
2021519792.tif 000052
【００６５】
前記測定方法は、以下の通りである。１）SZU-161は、異なる濃度で342nMにおける光吸収の強度が測定される。濃度と吸収との標準曲線をプロットして、濃度と吸収との関係式を得る。２）タンパク質とのコンジュゲーションの後、コンジュゲート化したタンパク質は、ある濃度で342nMにおける吸収が測定される。得られた値を前記関係式に入れることで、コンジュゲート体中のSZU-161の相対濃度（即ち、コンジュゲート度）を容易に得られる。同様の効果を得るためにSZU-162を適用してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
以下の図において言及される「免疫サイトカイン」は、サイトカイン（IFN-γ、IL-12、IL-6、およびTNF-αを含む）を意味し、それらの濃度レベルは、前記化合物によって刺激される免疫細胞応答性のレベルを示すために使用できる。
【００６７】
図１は、免疫サイトカイン（IL-6）に対するSZU-GSH系列化合物の刺激効果を示す図である。
図２は、蛍光標識されたSZU-116の細胞内での分布を示す図である。
図３は、免疫サイトカイン（IFN-γ）に対するSZU-102、103、106、107、108、110、111、114、115、116、117および118の刺激効果を示す図であり、ここで、標準対照としてのSZU-101およびR848は、国際的に認められた、免疫賦活機能を有する標準的な低分子免疫アゴニストである（以下同様）。
図４は、SZU-143、144、146、147、149の免疫サイトカイン（IFN-γ）に対する刺激効果を示す図であり、ここで、「con」はPBSブランクコントロールである（以下同様）。
図５は、免疫サイトカイン（IL-12）に対するSZU-143、144、144、146、147、149の刺激効果を示す。
図６は、免疫サイトカイン（TNF-α）に対するSZU-143、144、146、147、149の刺激効果を示す。
図７は、免疫サイトカイン（IL-6）に対するSZU-143、144、146、147、149の刺激効果を示す。
図８は、免疫サイトカイン（IFN-γ）に対するSZU-145、158、104、109、112、124の刺激効果を示す。
図９は、免疫サイトカイン（IL-12）に対するSZU-145、158、104、109、112、124の刺激効果を示す。
図１０は、免疫サイトカイン（TNF-α）に対するSZU-145、158、104、109、112、124の刺激効果を示す。
図１１は、免疫サイトカイン（IL-6）に対するSZU-145、158、104、109、112、124の刺激効果を示す。
図１２は、いくつかの免疫サイトカインに対するSZU-125の刺激効果を示す。
図１３は、免疫サイトカイン（IFN-γ）に対するSZU-105の刺激効果を示す。
図１４は、免疫サイトカイン（IL-12）に対するSZU-105の刺激効果を示す。
図１５は、免疫サイトカイン（IFN-γ）に対するSZU-113の刺激効果を示す。
図１６は、免疫サイトカイン（IL-12）に対するSZU-113の刺激効果を示す。
図１７は、免疫サイトカイン（IL-12）に対するSZU-119の刺激効果を示す。
図１８は、免疫サイトカイン（IL-6）に対するSZU-119の刺激効果を示す。
図１９は、免疫サイトカイン（IFN-γ）に対するSZU-120の刺激効果を示す。
図２０は、免疫サイトカイン（IL-6）に対するSZU-120の刺激効果を示す。
【００６８】
図２１〜５４は、免疫サイトカインに対する本発明の低分子免疫アゴニストSZU-122および127-142のそれぞれの刺激効果を示す。
図５５は、IFN-γを産生するための、SZU-102、119、125、146、147、169、174、175、168、176、177、179の免疫細胞に対する刺激効果を示す。
図５６は、IL-12を産生するための、SZU-102、119、125、146、147、169、174、175、168、176、177、179の免疫細胞に対する刺激効果を示す。
図５７は、新規免疫標的化合物のin vivoにおける抗腫瘍（CT26）活性を示す。Veh（未処理対照）、Ａ（SZU-177）、Ｂ（SZU-175）、Ｃ（SZU-174）、Ｄ（SZU-147）、およびＥ（SZU-176）。
図５８は、新規免疫標的化合物のin vivoにおける抗腫瘍（B16）活性を示す。VEH（未処理対照）、Ｇ（PD-L1抗体）、Ｈ（SZU-178）、Ｉ（SZU-158-PD-L1）、Ｊ（SZU-158-OX40）、Ｋ（PD-1抗体）、およびＬ（SZU-158-PD-1）。
図５９は、TLR7アゴニストとしてのSZU-101の活性に対するJQ1の阻害を示す。ここで、SZU-119は、免疫サイトカインを刺激するためのTLR7アゴニストの活性を保持する。
図６０は、TLR7アゴニストとしてのSZU-101の活性に対するJQ1の阻害を示す。ここで、SZU-119は、免疫サイトカインを刺激するためのTLR7アゴニストの活性を保持する。
図６１は、B16細胞のCD274（PD-L1）に対するJQ1の阻害活性をSZU-119が保持していることを示す。ここで、「コントロール」は、ブランクコントロールを表す。
図６２は、IFN-γを産生するための、SZU-163およびSZU-166の免疫細胞に対する刺激効果を示す。
図６３は、IFN-γを産生するための、SZU-180およびSZU-136-miRNA21の免疫細胞に対する刺激効果を示す。
図６４は、PD-1抗体、PD-L1抗体、OX40抗体、それらのSZU-158コンジュゲート体、およびSZU-178の抗腫瘍（4T1）生存率を示す。
図６５は、IFN-γを産生するための、PD-1抗体、PD-L1抗体、OX40抗体、それらのSZU-158コンジュゲート体、およびSZU-178の免疫細胞に対する刺激効果を示す。
図６６は、IFN-γを産生するための、SZU-181の免疫細胞に対する刺激効果を示す。
図６７は、IFN-γを産生するための、SZU-106、SZU-158およびSZU-160の免疫細胞に対する刺激効果を示す。ここで、「コントロール」は、PBSブランクコントロールを表す。
図６８は、IL-6を産生するための、SZU-106、SZU-158、およびSZU-160の免疫細胞に対する刺激効果を示す。ここで、「コントロール」は、ブランクコントロールを表す。
図６９は、タンパク質へのアゴニストの結合における免疫標的干渉のための、ヒト体内で自己-miRNAとコンジュゲートしたTLR7低分子免疫アゴニストの機能メカニズムを示す概略図であり、それによりタンパク質関連の病原性が除去される。
図７０は、本発明の免疫標的化合物が免疫経路を介して病原性標的（タンパク質）を排除するための機能メカニズムを示す模式図である。
【００６９】
［発明の詳細な説明］
本発明の関連化合物の合成のためのプロセスは、以下のように例示される。例示された合成プロセスは、本明細書に記載されているような前記新規化合物の合成を達成するために、当業者に示唆し得る。しかしながら、本発明の新規化合物の合成は、これらの例示的な合成プロセスに限定されない。
【００７０】
［調製例］
（SZU-112）
【化２４】
2021519792.tif 000053
【００７１】
1gのSZU-101、311mgのN-ヒドロキシスクシンイミド（NHS）および518mgのジクロロエタン（EDC）を無水N,N-ジメチルホルムアミド（DMF）12mLに溶解した。この混合物を、窒素雰囲気の保護下、室温で２時間反応させた。この反応を薄層クロマトグラフィー（TLC）でモニターした。反応が完了したら、前記反応液を水に注ぎ、沈殿物を濾過し、乾燥させて粗SZU-009Tを得た。これを次のステップで直接反応させた。
【００７２】
500mgのSZU-009Tおよび339mgのFmoc-D-リジンを10mLの無水DMFに溶解した。この混合物を室温で1時間撹拌した。反応完了後、この混合物を水と混和し、沈殿した固体を吸引ろ過した。残渣をカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝3：1）で精製し、収率78.9％で白色固体（576mg）を得た。ESI-MS：m/z＝795.3 [M+H]+
【００７３】
（SZU-107）
【化２５】
2021519792.tif 000054
【００７４】
1gのSZU-101を20倍重量の無水DMSOに溶解し、等モルの化合物１）、２）および３）を順次添加した。この反応物を室温、１２時間攪拌下で混合し、反応量に応じて１０倍量の水を加えた。この混合物を遠心分離して粗生成物として沈殿物を得、これを飽和炭酸ナトリウム水溶液20mLに添加した。得られた混合物を１０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃塩酸でpH3に調整し、純粋な生成物SZU-107を析出させ、真空下で乾燥した（収率65%）。ESI-MS：m/z=647.6865 [M+H]+
【００７５】
（SZU-113）
【化２６】
2021519792.tif 000055
【００７６】
50mgのSZU-112を1mLのジエチルアミンに溶解し、この混合物を室温で１時間撹拌した。この反応の進行をTLCによりモニターした。反応完了後、ジエチルアミンを減圧下で除去した。残渣をジクロロメタン1mLの添加で洗浄し、10,000rpmで5分間遠心分離し、上清を除去した。沈殿物を再び洗浄し、減圧下で乾燥させ、収率90％で白色固体32mgを得た。ESI-MS: m/z=573.2 [M+H]+
【００７７】
（SZU-115）
【化２７】
2021519792.tif 000056
【００７８】
108mgのSZU-009Tを2mLの無水DMFに溶解し、31mgのSZU-013Tと100μLのN,N-ジイソプロピルエチルアミン（DIEA）を連続的に添加した。この混合物を室温で一晩撹拌した。この反応の進行をLC-MSでモニターした。反応完了後、残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、収率56%で白色固体65mgを得た。ESI-MS：m/z=582.2 [M+H]+
【００７９】
（SZU-116）
【化２８】
2021519792.tif 000057
【００８０】
264mgのSZU-017T、324mgのHBTUおよび119 mgの1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）を5mLの無水DMFに溶解し、256μLのDIEAを滴下添加した。この混合物を室温で10分間撹拌し、SZU-020T（230mg）を含む無水DMF 5mLを添加し、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。この反応液を5%塩酸100mLに注ぎ、ジクロロメタン30mLで3回抽出した。それらの有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、5%塩酸、および飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝50:1）で精製し、収率51.6%で紫赤色半固体SZU-021T 180mgを得た。
【００８１】
SZU-021T 28mgをジメチルスルホキシド（DMSO）0.1mLに溶解し、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン（TCEP）水溶液0.5mL（97mg）、TBTA(18mg)を含むDMSO 0.1mL、および無水硫酸銅水溶液0.5mL（54mg）を混和した。メタノール／水混合溶液2mLにSZU-115 20mgを添加した。この混合物を室温で2時間撹拌し、カラムクロマトグラフィーで精製し、収率66%で31mgの紫赤色固体を得た。ESI-MS：m/z=1393.7 [M+H]+
【００８２】
（SZU-119）
【化２９】
2021519792.tif 000058
【００８３】
667mgのSZU-009Tを2mLの無水DMFに溶解し、300mgのSZU-020Tを添加し、この混合物を室温で一晩撹拌した。反応完了後、この反応液を水に注いだ。白色の固体を析出させ、乾燥させて粗SZU-030Tを得た。
【００８４】
上記ステップで得られたSZU-030Tを無水テトラヒドロフラン（THF）10mLに溶解し、氷浴下でトリフェニルホスフィン484mgを添加した。この混合物を室温に移し、一晩攪拌下で反応を続けた。反応の進行をLC-MSでモニターした。反応完了後、水20mLを加えた。この混合物をさらに30分間撹拌し、減圧下で吸引して濾過した。残渣を水で2回洗浄し、乾燥させて、２段階をあわせた収率79%でSZU-031T 625mgを得た。
【００８５】
SZU-031T 71mg、(+)-JQ-1-COOH（JQ1、活性異性体）42mg、HBTU 46mgを2mLの無水DMFに溶解し、触媒量の4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）およびN, N-ジイソプロピルエチルアミン（DIPEA）を添加した。この混合物を室温で24時間撹拌した。反応の進行をLC-MSでモニターした。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥して、収率27%で淡黄色固体27mgを得た。ESI-MS: m/z = 1001.2 [M+H]+
【００８６】
（SZU-124）
【化３０】
2021519792.tif 000059
【００８７】
SZU-124は、SZU-117TをFITCで置換した以外は、SZU-116と同様の方法で調製し、草緑色の半固体を得た。２段階を合わせた収率は31%であった。ESI-MS: m/z =11999.5 [M+H]+
【００８８】
（SZU-125）
【化３１】
2021519792.tif 000060
【００８９】
34mgのSZU-008Tを500μLの無水DMFに溶解し、PD-1/PD-L1阻害剤（CAS#:1675203-84-5）53mg、HBTU 43mg、トリエチルアミン（TEA）42μＬおよび触媒量のDMAPを連続的に添加した。この混合物を室温で５時間撹拌した。反応完了後、残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥し、収率56%で白色固体45mgを得た。ESI-MS: m/z = 802.3 [M+H]+
【００９０】
（SZU-127）
【化３２】
2021519792.tif 000061
【００９１】
SZU-127は、PD-1/PD-L1阻害剤をレチノイン酸（Retinoic acid）に置換した以外は、SZU-125と同様の方法で調製し、黄色の固体を得た。ESI-MS：m/z=627.4[M+H]+
【００９２】
（SZU-134）
【化３３】
2021519792.tif 000062
【００９３】
SZU-134は、PD-1/PD-L1阻害剤を無水グルタル酸（Glutaric anhydride）に置換した以外は、SZU-125と同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS：m/z=459.1[M+H]+
【００９４】
（SZU-138）
【化３４】
2021519792.tif 000063
【００９５】
SZU-138は、PD-1/PD-L1阻害剤を無水イタコン酸（Itaconic anhydride）に置換した以外は、SZU-125と同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS：m/z=457.1[M+H]+
【００９６】
（SZU-140）
【化３５】
2021519792.tif 000064
【００９７】
SZU-140は、PD-1/PD-L1阻害剤を無水酢酸（Acetic anhydride）に置換した以外は、SZU-125と同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS：m/z=387.1[M+H]+。
【００９８】
（SZU-103-GSH）
【化３６】
2021519792.tif 000065
【００９９】
SZU-103と当量のグルタチオン（Glutathione, GSH）とを無水DMFに溶解し、この混合物を室温で一晩撹拌した。反応の進行をLC-MSによりモニターした。反応完了後、残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、収率85%で白色固体を得た。ESI-MS：m/z=936.2 [M+H]+
【０１００】
（SZU-142）
【化３７】
2021519792.tif 000066
【０１０１】
丸底フラスコにSZU-005T 5g入れ、濃縮塩酸を加え、この混合物を12時間反応させた。反応完了後、得られた混合物を水酸化ナトリウムでpH3〜4に調整し、4.56gの白色固体を析出させた（収率95％）。ESI-MS: m/z=345.2[M+H]+
【０１０２】
（SZU-145）
【化３８】
2021519792.tif 000067
【０１０３】
20mgのSZU-138を2mLの無水DMFに溶解し、8.7mgのD-グルコサミン（Glucosamine）、9.2mgのEDC、および6.5mgのHOBtを順次添加した。この混合物を室温で2時間撹拌した。反応完了後、残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、12mgの白色固体を得た（収率44％）。ESI-MS: m/z = 618.2 [M+H]+
【０１０４】
（SZU-114-GSH）
【化３９】
2021519792.tif 000068
【０１０５】
SZU-114-GSHは、SZU-103をSZU-114に置換した以外は、SZU-103-GSHと同じ方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS: m/z=763.3[M+H]+
【０１０６】
（SZU-117-GSH）
【化４０】
2021519792.tif 000069
【０１０７】
SZU-117-GSHは、SZU-103をSZU-117に置換した以外は、SZU-103-GSHと同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS: m/z=874.3[M+H]+
【０１０８】
（SZU-158）
【化４１】
2021519792.tif 000070
【０１０９】
SZU-158は、SZU-103をSZU-138に置換し、グルタチオンを2-（ジメチルアミノ）エタン-1-チオールに置換した以外は、SZU-103-GSHと同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS: m/z=562.2[M +H]+。SZU-159は、SZU-138をSZU-144に置換し、これを2-（ジメチルアミノ）エタン-1-チオールと室温で24時間反応させる以外は、同様の方法で調製できる。
【０１１０】
（SZU-161）
【化４２】
2021519792.tif 000071
【０１１１】
SZU-161は、SZU-103をSZU-138に置換し、グルタチオンをSZU-033Tに置換した以外は、SZU-103-GSHと同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS: m/z=708.4[M+H]+
【０１１２】
（SZU-162）
SZU-162は、SZU-161と同様の方法で調製した。ESI-MS: m/z=695.81[M+H]+
【０１１３】
（SZU-160）
【化４３】
2021519792.tif 000072
【０１１４】
SZU-160は、SZU-013TをSZU-032Tに置換した以外は、SZU-115と同様の方法で調製し、白色固体を得た。ESI-MS: m/z=599.3[M+H]+
【０１１５】
（SZU-114）
【化４４】
2021519792.tif 000073
【０１１６】
HBTU、DMAPおよびTEAをTL-008の無水DMF溶液に0℃で添加した。この混合物を室温で0.5時間撹拌した。次いで、トランス-4-ジメチルアミノクロトン酸塩酸塩を0℃で添加した。得られた混合物を室温で24時間反応させた。この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS: m/z=456.6 [M+H]+）。
【０１１７】
（SZU-117）
【化４５】
2021519792.tif 000074
【０１１８】
（SZU-01Sの合成）
SZU-101の無水DMF溶液に1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（EDCI）、HOBtおよびDIPEAを0℃で添加した。この混合物を室温で0.5時間撹拌した。次いで、N-Bocピペラジン（Piperizine）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で24時間反応させた。この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=613.4 [M+H]+）。
【０１１９】
（SZU-130の合成）
SZU-01Sのジクロロメタン溶液にトリフルオロ酢酸を滴下添加した。2時間攪拌した後、この反応液を減圧下で濃縮した。その後、エタノール5mLと2N塩酸水溶液とを加え、塩酸塩を得た。減圧下で溶媒を留去した後、ジエチルエーテルまたはジクロロメタンを加え、再び減圧下で溶媒を留去した。この手順を数回繰り返し、純粋な固体生成物を得た（ESI-MS: m/z = 513.5 [M+H]+）。
【０１２０】
（SZU-117の合成）
SZU-130の無水DMF溶液にTEAおよびアクリロイルクロリドを0℃で順次添加した。室温で2時間攪拌した後、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS: m/z=567.7[M+H]+）。
【０１２１】
（SZU-118）
【化４６】
2021519792.tif 000075
【０１２２】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。この混合物を室温で0.5時間反応させた後、塩酸ヒドロキシルアミンを0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させた。この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=460.4 [M+H]+）。
【０１２３】
（SZU-120）
【化４７】
2021519792.tif 000076
【０１２４】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた混合物を室温で0.5時間反応させた後、モルホリン（Morpholine）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させた。この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS: m/z=514.5[M+H]+）。
【０１２５】
（SZU-122）
【化４８】
2021519792.tif 000077
【０１２６】
SZU-142の無水DMF溶液にTEAおよびアクリロイルクロリド（acryloyl chloride）を0℃で順次添加し、室温で2時間攪拌した後、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=399.4[M+H]+）。
【０１２７】
（SZU-128）
【０１２８】
【化４９】
2021519792.tif 000078
【０１２９】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた混合物を室温で0.5時間反応させた後、1-メチルピペラジン（1-Methylpiperazine）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=527.7 [M+H]+）。
【０１３０】
（SZU-129）
【化５０】
2021519792.tif 000079
【０１３１】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた混合物を室温で0.5時間反応させた後、0℃でチオモルホリン（Thiomorpholine）を添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=530.6 [M+H]+）。
【０１３２】
（SZU-131）
【化５１】
2021519792.tif 000080
【０１３３】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた混合物を室温で0.5時間反応させた後、1-アセチルピペラジン（1-Acetylpiperazine）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=555.6 [M+H]+）。
【０１３４】
（SZU-132）
【化５２】
2021519792.tif 000081
【０１３５】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた混合物を室温で0.5時間反応させた後、ピロリジン（Pyrrolidine）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させた。この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=498.5 [M+H]+）。
【０１３６】
（SZU-133）
【化５３】
2021519792.tif 000082
【０１３７】
SZU-142の無水DMF溶液に無水マレイン酸（Maleic anhydride）を添加した。得られた溶液を一晩反応させた後、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=443.3 [M+H]+）。
【０１３８】
（SZU-143）
【化５４】
2021519792.tif 000083
【０１３９】
フマル酸モノメチル（Methyl fumarate）の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた溶液を室温で0.5時間反応させた後、0℃でSZU-142を添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=457.4 [M+H]+）。
【０１４０】
（SZU-144）
【化５５】
2021519792.tif 000084
【０１４１】
SZU-143のメタノール／水（1:1）混合溶液に水酸化ナトリウム（1.1当量）を添加した。室温で8時間撹拌した後、反応が完了した後、この反応液を1N塩酸水溶液で中和し、それから吸引濾過し、水で洗浄して粗生成物を得、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で精製し、純生成物を得た（ESI-MS: m/z=443.5[M+H ]+）
【０１４２】
（SZU-146）
【化５６】
2021519792.tif 000085
【０１４３】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた溶液を室温で0.5時間反応させた後、3-(トリフルオロメチル)-5,6,7,8-テトラヒドロ-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]ピラジン（フズオパリの中間体）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを液相分離により精製して純生成物を得た（ESI-MS：m/z=619.6 [M+H]+）。
【０１４４】
（SZU-147）
【化５７】
2021519792.tif 000086
【０１４５】
SZU-101の無水DMF溶液にEDCIおよびHOBtを等モルで添加し、15分間撹拌した後、0℃でDIPEAを添加した。得られた溶液を室温で0.5時間反応させた後、等モルのニラパリブ（Niraparib）を0℃で添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、吸引濾過して粗生成物を得、これを高速液体クロマトグラフ（HPLC）で精製し、純生成物SZU-147を得た(SI-MS: m/z=747.77[M+H]+)。
【０１４６】
（SZU-148）
【化５８】
2021519792.tif 000087
【０１４７】
水酸化リチウムおよびSZU-101（比1:1）を水に添加した。得られた溶液を2〜3時間撹拌した後、凍結乾燥して溶媒を除去し、純粋な生成物を得た。
【０１４８】
（SZU-150, 151, 152 および 153）
【化５９】
2021519792.tif 000088
【０１４９】
（SZU-151の合成）
N,N - ジメチルエタノールアミンに金属Naを加えてナトリウム塩を形成した後、この反応液に出発原料を加え、95℃に加熱し3時間反応させた。減圧下で溶媒を留去した後、水を加えた。この反応液を吸引濾過して固体を得、これをpH7〜8になるよう水で洗浄し、減圧下で乾燥し、純生成物SZU-151を得た。
【０１５０】
（SZU-152の合成）
SZU-151の酢酸溶液に臭素を滴下しながらゆっくりと添加し、一晩攪拌した後、この反応液をNaHCO3で中和した。得られた粘性化合物に、少量のエタノールを添加した後、チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、残った臭素を除去した。この反応液を吸引ろ過し、乾燥して固体を得た後、10% NaOH水溶液を加えた。得られた溶液をさらに吸引でろ過し、減圧下で乾燥させた。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、臭化物を得た。
【０１５１】
メタノールに金属Naを添加し、撹拌した後、出発物質を添加した。この混合物を80℃に加熱し、2時間反応させた。メタノールを減圧下で除去した。得られた混合物をHClで中和し、吸引で濾過し、減圧下で乾燥して、固体SZU-152を得た。
【０１５２】
（SZU-150およびSZU-153の合成）
SZU-152をHClに加え、12時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで分離し、化合物SZU-150(ESI-MS: 354.5 [M+H]+)およびSZU-153(ESI-MS: m/z = 372.4 [M+H]+)を得た。
【０１５３】
（SZU-154）
【化６０】
2021519792.tif 000089
【０１５４】
SZU-152のエタノール／水（1:1）混合溶液にNaOHを添加し、一晩還流させた。得られた溶液を減圧下で濃縮し、pH3になるように調整し、分取液体クロマトグラフィーで精製して、純粋な生成物SZU-154を得た（ESI-MS: m/z = 387.5 [M+H]+）
【０１５５】
（SZU-155）
【化６１】
2021519792.tif 000090
【０１５６】
SZU-154を濃縮HClに溶解し、一晩撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、純粋な生成物SZU-155を得た（ESI-MS: m/z=373.5 [M+H]+）。
【０１５７】
（SZU-104）
【化６２】
2021519792.tif 000091
【０１５８】
50mgのSZU-102を0.5mLのDMSOに溶解し、tert-ブトキシカルボニル（Boc）で保護されたリジンを41mg添加した。この混合物を室温で一晩撹拌し、反応完了後、DMSOを凍結乾燥により除去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、収率85%で白色固体69mgを得た。ESI-MS：m/z=633.7 [M+H]+。
【０１５９】
（SZU-105）
【化６３】
2021519792.tif 000092
【０１６０】
50mgのSZU-102を0.5mLのDMSOに溶解し、Bocで保護されたリジン47mgを添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、反応完了後、凍結乾燥によりDMSOを除去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、68mgの白色固体を得た（収率83%）。ESI-MS: m/z = 533.6 [M+H]+
【０１６１】
（SZU-108）
【化６４】
2021519792.tif 000093
【０１６２】
109mgのSZU-102を1mLのDMSOに溶解し、50mgのPEG2を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、反応完了後、DMSOを凍結乾燥により除去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、収率79%で白色固体125mgを得た。ESI-MS: m/z = 564.6 [M+H]+
【０１６３】
（SZU-109）
【化６５】
2021519792.tif 000094
【０１６４】
87mgのSZU-102を0.9mLのDMSOに溶解し、50mgのPEG3を添加した。この混合物を室温で一晩撹拌し、反応完了後、凍結乾燥によりDMSOを除去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、収率77％で白色固体105mgを得た。ESI-MS: m/z=608.7 [M+H]+
【０１６５】
（SZU-110）
【化６６】
2021519792.tif 000095
【０１６６】
カルボン酸化合物193mgをDMSO 2mLに溶解し、これにEDCI 100mgおよびＮ-ヒドロキシスクシンイミド（NHS）59mgを順次添加した。室温で2時間撹拌した後、この反応液にPEG2 50mgを加え、室温で一晩撹拌し、反応完了後、凍結乾燥によりDMSOを留去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、白色固体203mgを得た（収率73％）。ESI-MS: m/z = 519.5 [M+H]+
【０１６７】
（SZU-111）
【化６７】
2021519792.tif 000096
【０１６８】
カルボン酸化合物155mgをDMSO 1.5mLに溶解し、EDCI 79mgおよびNHS 47mgを順次添加した。室温で2時間攪拌した後、この反応液にPEG3 50mgを加え、室温で一晩攪拌し、反応完了後、凍結乾燥によりDMSOを留去した。残渣を分取液体クロマトグラフィーで精製し、収率72%で白色固体174mgを得た。ESI-MS: m/z = 563.6 [M+H]+
【０１６９】
（SZU-149 および SZU-163）
【化６８】
2021519792.tif 000097
【０１７０】
無水n-ブタノール100mLに金属Na 0.5gを0℃でゆっくりと加え、30分後、3gの反応物aを加えた。得られた混合物を100℃で8時間撹拌し、室温まで冷却し、多量の水に注いだ。黄色の固体を析出させ、濾過し、テトラヒドロフランで3回洗浄し、乾燥し、2.5gの生成物bを得た。
【０１７１】
2.5gの生成物bをクロロホルム100mLと混合し、均質に撹拌し、臭素10mLを加えた。得られた溶液を室温で24時間反応させ、ろ過し、生成物c 2.2gを得た。これをジオキサン60 mLと混合し、次いで濃塩酸10mLを加えた。この混合物を110℃で12時間反応させた。この反応混合物を水600mLに注ぎ、粗固体生成物を沈殿させ、これをろ過し、1N NaOH 60mLに溶解し、冷却し、塩酸でpH4に中和した。純粋な生成物を沈殿させ、乾燥し、1gのSZU-149を得た（収率55%）。MS (ESI): m/z: [M+Na] 381.42
【０１７２】
無水メタノールにSZU-149を0.5g溶解し、0.5gのRaney Nickelを添加した。得られた溶液を、水素中、3気圧下、24時間水素化反応を行い、濾過し、減圧下で蒸留することにより、0.4gの純生成物SZU-163を得た（収率89%）。MS(ESI): m/z. MS (ESI): m/z: [M+H] 329.41
【０１７３】
（SZU-166およびSZU-181）
【化６９】
2021519792.tif 000098
【０１７４】
（SZU-166の合成）
1.5gのSZU-163を30mLのDMSOに溶解し、1mLのトリエチルアミンおよび0.5gのクロロホルム酸エチルを加えた。この混合物を室温で2時間撹拌し、この反応混合物を真空下で少量にまで蒸留し、室温に冷却し、酢酸エチル30mLを加えた。固体を析出させ、濾過し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥させ、0.75gの純粋な生成物SZU-166を収率46%で得た。MS (ESI): m/z : [M+H]355.40。
【０１７５】
（SZU-181の合成：SZU-166とB型肝炎PreS抗原エピトープとのコンジュゲートにより形成されたコンジュゲート体）
【化７０】
2021519792.tif 000099
【０１７６】
SZU-166（10mg）とPreS-ペプチド（90mg）との混合物を3mLのDMFに溶解し、0.2mLのトリエチルアミンを加えた。この混合物を20℃で24時間攪拌しながら、反応させ、さらに3mLのジクロロメタンを加えた。沈殿物を遠心分離して粗生成物を得、これをHPLCで精製し、凍結乾燥してSZU-181 65mgを得た。質量分析により決定された分子量は、3512.80: (1756.3×2)、(1170.9×3)であった。
【０１７７】
（SZU-136 および SZU-139）
【化７１】
2021519792.tif 000100
【０１７８】
EDCIおよびHOBtを、DMF中の等モルの4-ペンチノイン酸（4-Pentynoic acid）に添加し、15分後、トリエチルアミンを添加した。この混合物を、0℃で15分間、撹拌下で反応させた後、室温で30分間、撹拌下で反応を続けた後、等モルのTL-008を添加した。得られた混合物を室温で一晩反応させ、この反応液を水に注ぎ、析出した生成物を濾過し、真空下で乾燥させて、収率87%でSZU-136を得た。MS (ESI): m/z: [M+1] 425.51
【０１７９】
SZU-136、アジド化合物2およびアスコルビン酸ナトリウムを等モルで、DMSOと水との溶液（1:1）に添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、10倍量の水を加え、濾過した。得られた生成物をHPLCで精製し、乾燥し、収率77%でSZU-139を得た。MS (ESI): m/z: [M+1] 654.72
【０１８０】
（SZU-169）
【化７２】
2021519792.tif 000101
【０１８１】
SZU-134をDMSOに溶解し、NHSおよびEDCIを等モルで添加し、10分間撹拌した後、ダイレクトバイオレットN（OX40アゴニスト）を等モルで添加した。密閉容器内、室温で３日間反応させた後、20倍量の水を加え、固体を析出させ、濾過し、2N NaOHを添加した。この混合物を10℃で30分間撹拌し、濾過した。濾液を2N塩酸で酸性化してpH1に調整し、収率52%で沈殿固体生成物SZU-169を得た。MS (ESI): m/z: [M+2Na] 1611.64
【０１８２】
（SZU-174）
【化７３】
2021519792.tif 000102
【０１８３】
反応物ａを少量のDMFに溶解し、1倍当量のアジ化ナトリウムを添加し、この反応混合物を室温で２４時間、攪拌下で反応させた。この反応混合物に10倍量の水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出相を水で3回洗浄し、溶媒を減圧下で留去し、収率90%で生成物ｂを得た。
【０１８４】
アファチニブ100mgと生成物b 50mgをDMF 15mLに溶解し、微量のNaIを添加し、この反応混合物を60℃で24時間反応させた。この反応混合物に100mLのn-ブタノールを加え、減圧下で少量（約5mL）まで蒸留し、室温まで冷却し、酢酸エチル50mLを加えた。固体生成物ｃを析出させ、真空下で乾燥させ、118mgの生成物ｃを得た。MS (ESI): m/z: [M+H] 688.21
【０１８５】
100mgの生成物c、60mgのSZU-136、10mgの硫酸銅および30mgのビタミンCを、DMSOおよび水の溶液（1:1）に添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、10倍量の水を加え、濾過した。得られた生成物をHPLCで精製し、乾燥させて、収率65%で105mgのSZU-174を得た。MS (ESI): m/z: [M+1] 1112.70
【０１８６】
（SZU-158-PD-1）
【化７４】
2021519792.tif 000103
【０１８７】
5mgのSZU-158を0.5mLのDMSOに溶解し、等モルのNHSおよびEDCIを添加した。この混合物を室温で4時間撹拌し、PD-1抗体（Bioxcell、J43）20mgを含む0.5 mLのPBSを添加した。この混合物を15℃の密閉容器中で一晩撹拌し、この混合反応液をろ過膜でろ過して、SZU-158-PD-1コンジュゲート生成物を得、これを凍結乾燥して、白色固体のSZU-158-PD-1 18mgを得た。質量分析法で求めたコンジュゲーション度は、n=4であった。SZU-158-PD-1は、図58、65に示すように、免疫サイトカイン活性を有し、図58、64、65に示すように、抗体機能を有した。
【０１８８】
（SZU-158-OX40）
【化７５】
2021519792.tif 000104
【０１８９】
5 mgのSZU-158を0.5 mLのDMSOに溶解し、等モルのNHSおよびEDCIを添加した。この混合物を室温で４時間撹拌し、20mgのOX40抗体（Bioxcell、OX-86）を含む0.5mLのPBSを加えた。得られた混合物を密閉容器中で15℃で一晩撹拌した。その混合反応液をろ過膜でろ過して、SZU-158-OX40コンジュゲート生成物を得、これを凍結乾燥して白色固体SZU-158-OX40 17mgを得た。質量分析法で求めたコンジュゲーション度は、n=4であった。SZU-158-OX40は、図58、64、65に示すように、免疫サイトカイン活性を有し、抗体機能を有した。
【０１９０】
（SZU-158-PD-L1）
【化７６】
2021519792.tif 000105
【０１９１】
5mgのSZU-158を0.5mLのDMSOに溶解し、等モルのNHSおよびEDCIを添加した。この混合物を室温で４時間撹拌し、PD-L1抗体（Bioxcellから購入、10F.9G2）20mgを含む0.5mLのPBSを添加した。この混合物を密閉容器中、15℃で一晩撹拌し、この混合反応液をろ過膜でろ過して、SZU-158-PD-L1コンジュゲート生成物を得、これを凍結乾燥して白色固体のSZU-158-PD-L1 15mg得た。質量分析法で求めたコンジュゲート度は、n=4であった。SZU-158-PD-L1は、図58、65に示すような免疫サイトカイン活性を有し、図58、64、65に示すような抗体機能を有した。
【０１９２】
ジメチルアミノ基の存在により、SZU-158と抗体とのコンジュゲートにより形成された新規な免疫標的化合物は、塩を形成し、イオン化された正電荷を帯びることができ、治療効果および水溶性の向上に有利である。
【０１９３】
（SZU-168 および SZU-175）
ベムラフェニブ（Vemurafenib）の前駆体Vemu-1は、WuXi AppTecから購入した。
【化７７】
2021519792.tif 000106
【化７８】
2021519792.tif 000107
【０１９４】
Vemu-1をDMFに溶解し、2倍モルのトリエチルアミンを添加し、この混合物を0℃まで冷却し、次いで1倍モルの塩化ビニルスルホニルを添加した。得られた混合物を室温までゆっくりと温め、8時間撹拌し、次いで10倍量の氷水を加えた。得られた混合物を1時間撹拌し、飽和Na2CO3でpH8になるように調整した。析出した固体をろ過し、水で2回洗浄して乾燥し、Vemu-2を得た。1gのVemu-2を30mLのDMFに溶解し、0.33gのメルカプトエチルアミンを加えた。この混合物を室温で12時間撹拌し、この反応混合物について減圧下で溶媒を留去して粗Vemu-3を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、0.98gの純生成物Vemu-3を収率85%で得た。MS (ESI): m/z. [M+1] 552.04
【０１９５】
0.3gのVemu-3を10mLのDMSOに溶解し、0.2gのSZU-166を添加し、この混合物を、40℃、8時間の攪拌下で反応させた後、水100mLを加えた。この反応液を遠心分離して、沈殿した粗生成物を得、これを氷酢酸20mLに溶解した。濾過後、濾液に水100mLを加え、純生成物SZU-168を沈殿させ、0.33gに乾燥した。MS (ESI): m/z. [M+1] 906.41
【０１９６】
1gのSZU-158を10mLのDMSOに溶解し、0.2gのNHS(N-ヒドロキシスクシンイミド)と0.33gのEDCI(1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩)を加えた。この混合物を、室温で一晩攪拌下、放置し、SZU-137を得た。これにVemu-3 0.9gを添加し、室温でさらに12時間攪拌した。この混合物に水100mLを加え、濾過して粗生成物を得、これを酢酸で再結晶してSZU-175アセテート1.22gを得た。MS(ESI): m/z. [M+1]1095.81
【０１９７】
（SZU-176）
オシメルチニブ（Osimertinib）の中間体は、WuXi AppTecから購入した。
【化７９】
2021519792.tif 000108
【化８０】
2021519792.tif 000109
【０１９８】
1gのSZU-144を10mLのDMSOに溶解し、0.26gのNHSおよび0.4gのEDCIを添加し、この混合物を室温で一晩攪拌下に放置した。これにオシメルチニブの中間体1gを加え、室温でさらに12時間攪拌した。この混合物に水100mLを加え、濾過して粗生成物を得、これを酢酸で再結晶して酢酸SZU-176 1.5gを得た。MS(ESI): m/z. [M+1] 870.81
【０１９９】
（SZU-177）
【化８１】
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【０２００】
エルロチニブ（Erlotinib）100mg、SZU-160 150mg、硫酸銅20mgおよびビタミンC 20mgをDMSOと水（1:1）の溶液（10mL）に添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌下、放置し、10倍量の水を加えた。この反応液をろ過し、HPLCで精製し、乾燥させて、収率70%でSZU-177を176mg得た。MS (ESI): m/z: [M+1] 993.10
【０２０１】
（SZU-178）
【化８２】
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【０２０２】
3.5mgのSZU-160をDMSO 1.5mLに溶解し、等モルのNHSおよびEDCIを添加し、この混合物を、室温、４時間の攪拌下で放置し、さらに、PD-L1抗体（Bioxcell、10F.9G2）20mgを含む0.5 mLのPBSを添加した。この混合物を、密閉容器中、15℃で一晩撹拌した。この混合反応液をろ過膜でろ過して、SZU-160-PD-L1抗体コンジュゲート生成物の溶液を得た。そして、エルロチニブ2.5mg、アスコルビン酸ナトリウム2mg、および硫酸銅2mgを添加し、この混合物を、室温、12時間の攪拌下で反応させた。この反応液をろ過膜でろ過し、凍結乾燥し、白色固体SZU-178（すなわち、SZU-178とエルロチニブおよびPD-L1抗体とのコンジュゲートにより形成されたSZU-160-エルロチニブ-PD-L1コンジュゲート体）12mgを得た。質量分析によって決定されるコンジュゲート度は、n=4であった。SZU-178は、図58、64および65に示されるように、免疫サイトカイン刺激および抗腫瘍機能を有した。
【０２０３】
（SZU-136-miRNA21）
【化８３】
2021519792.tif 000112
【０２０４】
miRNA21（Suzhou Jima Gene Co., Ltd.）71mgをアセトニトリル10mLと水（1:1）との溶媒に溶解し、14mgのAg2CO3を添加した。この混合物を室温で12時間撹拌した。溶媒を減圧下で留去し、69 mgのAg-miRNA21（96%）を得、これを5mgの塩素化アジドを含むアセトニトリル20mLと混合した。この混合物を還流下で4時間加熱し、室温まで冷却し、水50mLを加えた。得られた混合物を15分間撹拌し、濾過し、濾液を減圧下で蒸留し、少量（10mL）にし、50mLのテトラヒドロフランを加えた。これを10分間撹拌した後、この溶液を遠心分離して沈殿物を得、これを真空下で乾燥してN3-miRNA21 45 mg（収率61%）を得た。MS (ESI): m/z: [M+Na] 7307.42
【０２０５】
N3-miRNA21 40mg、SZU-136 3mg、硫酸銅2mgおよびビタミンC 2mgを混合し、これをDMSOおよび水(1:1)の溶液 10mLに添加し、この混合物を室温で一晩撹拌した。得られた生成物をHPLCで精製し、凍結乾燥し、真空下で乾燥させて、14mgのSZU-136-miRNA21（すなわち、SZU-136とmiRNA21とのコンジュゲートにより形成されたコンジュゲート体）を収率33％で得た。MS (ESI): m/z: [M+Na] 7731.86
【０２０６】
（SZU-179）
【化８４】
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【０２０７】
SZU-115 580mg、ジドブジン（Zidovudine）267mg、硫酸銅 25mgおよびアスコルビン酸ナトリウム25mgを混合し、DMSOおよび水（1:1）の溶液25mLに添加し、この混合物を室温で一晩撹拌し、10倍量の水を加えた。この反応液を真空下で少量（約10mL）にまで蒸留し、水30mLを加えた。この混合液を5% NaOHでpH10に調整し、ろ過した。濾液を氷酢酸でpH5に調整し、沈殿物を生成させた。これを濾過し、真空下で乾燥させ、収率86%でSZU-179 728mgを得た。MS (ESI): m/z: [M+Na] 871.42
【０２０８】
（SZU-115-PD-L1標的薬剤：SZU-115とPD-L1抗体と標的薬剤とのコンジュゲートにより形成されるコンジュゲート体）
【０２０９】
SZU-115抗体-標的薬剤のコンジュゲート体
【化８５】
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【０２１０】
（SZU-180）
【化８６】
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【０２１１】
SZU-178の調製と同様の工程により、PD-L1抗体をコンジュゲートさせ、SZU-179の調製と同様の工程によりクリック反応を行い、SZU-180を得た。得られた生成物は、AIDS治療に使用できる。
【０２１２】
［効果実施例］
効果実施例１：本発明の低分子免疫アゴニストSZU系列および新規免疫標的化合物の脾臓リンパ球に対する免疫賦活効果の検出
【０２１３】
1.  脾臓リンパ球の抽出
(1)  BALB/cまたはC57BL/6マウスの脾臓を採取し、マウス脾臓分離培地を入れた小皿で粉砕し、ろ過膜（細孔径0.22μm）でろ過し、細胞懸濁液を得、これを遠心分離処理してリンパ球を得た。単離したリンパ球を15mLの遠心チューブに入れ、その中に1640完全培地10mLを加えた。この混合物を均一に混合し、250gで10分間遠心し、上清を廃棄した。
(2)  前記細胞を赤血球溶解液1mLに再懸濁し、１分間の溶解処理後、処理終了のために1640完全培地4mLを添加した。前記チューブを1,000rpmで5分間遠心し、上清を廃棄した。
(3)  前記細胞を2mLの1640完全培地に再懸濁し、計数した後、1×106細胞／1ウェルの密度で24ウェルプレートに播種した。
【０２１４】
2.  サンプルの準備
24ウェルプレートに播種した脾臓リンパ球を、異なる濃度のSZU系列の低分子免疫アゴニストおよび新規免疫標的化合物で刺激した。前記24ウェルプレートをインキュベーターに移し、刺激の２４時間後、上清を穏やかに吸引した。すなわち、ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）により試験するためのサンプルを吸引した。濃度および濃度勾配は、各被検サンプルの個々の要件に依存させた。
【０２１５】
3.  ELISAテスト
(1)  コーティング
10Xコーティングバッファーを1Xにまで希釈した後、これを用いてキャプチャー抗体を希釈した。希釈したキャプチャー抗体を、96ウェルマイクロタイタープレート（ウェルあたり100μl）に添加した。前記プレートをラップで密封し、37℃で2〜4時間放置し、または冷蔵庫により一晩4℃で放置した。前記プレートの各ウェルから液体内容物を吸引した。その後、前記プレートを洗浄バッファー（PBST: Tweeen-20を含むPBS溶液）で３回洗浄し、パッティングにより乾燥させた。
(2)  ブロッキング
前記プレートに1ウェルあたり200μlの希釈したブロッキング液を添加し、前記プレートをラップで密閉し、室温で1時間ブロッキング処理した。その後、前記プレートをPBSTで3回洗浄し、パッティングにより乾燥させた。
【０２１６】
(3)  サンプルの添加
12種類の標準サンプルを、前記標準サンプルの濃度ごと、2個のウェルに配置し、前記標準サンプルの最高濃度を2,000pg/mLとした。前記サンプルは、希釈バッファーで所望の濃度に希釈した。前記標準サンプルは、以下の濃度、すなわち、2,000 pg/mL、1,000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.5 pg/mL、15.75 pg/mL、7.875 pg/mL、3.9375 pg/mL、1.96875 pg/mL、0 pg/mLとした。異なる濃度の薬剤で脾臓リンパ球を刺激することにより得られた上清サンプルを、対応するウェルに添加した（1サンプルあたり3個のウェル）。また、ブランクコントロールウェルおよびネガティブコントロールウェルも配置し、適宜ラベルを付けた。前記標準サンプルと被検サンプルとを充填した96ウェルマイクロタイタープレートをラップで密封し、室温で2時間、または冷蔵庫により4℃で一晩インキュベートした。各ウェルから液体内容物を吸引した。前記プレートをPBSTで3回洗浄し、パッティングにより乾燥させた。
(4)  二次抗体
テスト抗体を希釈バッファーで所望の濃度に希釈し、前記プレートに1ウェルあたり100μlを添加し、室温で1時間インキュベートした。前記プレートの各ウェルから液体内容物を吸引した。その後、前記プレートをPBSTで5回洗浄し、パッティングにより乾燥させた。
【０２１７】
(5)  酵素標識抗体
アビジン-HRPを希釈バッファーで所望の濃度に希釈し、前記プレートに1ウェルあたり100μlを添加し、室温で30分間インキュベートした。前記プレートの各ウェルから液体内容物を吸引した。その後、前記プレートをPBSTで5回洗浄し、パッティングにより乾燥させた。
(6)  発色
各ウェルに3,3`,5,5’-テトラメチルベンジジン（TMB）発色液100μlを添加し、室温、暗所で15分間インキュベートした。
(7)  停止
発色終了後、各ウェルに50μlの停止液を添加した。前記停止液は、1mol/L H2SO4とした。
(8)  検出
発色停止後の96ウェルマイクロタイタープレートを全波長マイクロプレートリーダーにセットし、450nmの波長で吸光度を測定した。測定データをエクスポートし、ソフトウェアを用いて標準曲線としてプロットし、線形回帰式を導出した。免疫細胞により産生される免疫因子（INF-γ、IL-6等）の濃度を算出した。実験の具体的な結果を添付の図に示す。
【０２１８】
効果実施例２：本発明の新規免疫標的化合物の抗腫瘍効果
【０２１９】
1.  マウスの腫瘍治療プロトコール
(1)  6〜8週齢のBALB/cマウスまたはC57BL/6マウスについて体重を測定し、ペントバルビタールナトリウム（50mg/kg i.p）で麻酔した。腫瘍移植部位（背中側）から毛を除去し、マウスを粘着テープで固定した。
(2)  手術部位を、75％アルコールに浸した綿棒を用いて滅菌した。前記腫瘍移植部位に約1cmの小切開を行い、100μlの癌細胞懸濁液（5×104 CT26細胞、B16細胞または4T1細胞）を注入した。切開部を手術糸で封鎖し、滅菌した。手術後、50,000単位 アンピシリン/100μL/マウスを3日間連続で腹腔内注射した。
【０２２０】
2.  管理
前記マウスに、PBSブランクコントロール、前記免疫アゴニストまたは前記新規免疫標的化合物をそれぞれ投与した。投与量は、実際の必要性に応じて決定した（有効且つ安全な投与量の原則に従う）。各物質を適当な溶媒に溶解し、各投与量を100μlとし、各群のマウスに対して腹腔内注射により投与した。各群とも、腫瘍移植後7日目、15日目、22日目、および29日目に投与し、腫瘍の大きさを定期的に測定した。腫瘍サイズが1500mm3に達したとき、または体重が15%以上になったとき、マウスを安楽死させた。腫瘍抑制率および生存率の結果を、図57、58および64に示す。本発明における新規免疫標的化合物で処理したマウス群は、有意に高い抗腫瘍効果を有していることがわかった。
【０２２１】
本発明の新規低分子免疫アゴニストおよび新規免疫化合物の生物学的活性を試験するための方法は、上記の試験方法に限定されるものではなく、他の既知または許容される活性試験方法も使用できる。相関的に、本発明の活性の模式図は、図示された模式図に限定されないが、これらの模式図は、本発明の新規低分子免疫アゴニストおよび新規免疫標的化化合物の応用効果を達成するために、当業者に示唆し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年2月26日(2021.2.26)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図５２】
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【国際調査報告】
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