(57)【要約】本発明は、ヒトＩＬ−３６受容体に特異的に結合する抗体および抗原結合フラグメント（例えば、ヒト抗体）を提供する。抗体およびフラグメントを使用して、ＩＬ３６Ｒにより仲介される疾患（例えば、掌蹠膿疱性乾癬、掌蹠膿疱症、汎発性膿疱性乾癬、潰瘍性大腸炎またはＩＢＤのような皮膚または結腸の炎症性状態）を治療または予防する方法もまた、抗体およびフラグメントを作製する方法と共に提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
残基１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９、１１６〜１２２、２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／または２７１〜２７６にて配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する；
または
（ｉ）参照抗体またはその抗原結合フラグメントと同じ、ＩＬ３６Ｒ上のエピトープに特異的に結合する；または
（ｉｉ）ＩＬ３６Ｒポリペプチドへの結合について、参照抗体またはその抗原結合フラグメントと競合し、
前記参照抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；および／または
（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたは可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントである単離抗原結合タンパク質。
【請求項２】
（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；および／または
（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む、単離抗原結合タンパク質。
【請求項３】
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；および／または
（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項４】
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載のアミノ酸配列、および配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域の前記ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；および／または
（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列、および配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を含む軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域の前記ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項５】
配列番号４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号２０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号２２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号３６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号３８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号４０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号５２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号５４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号５６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号６８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号７０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号７２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号８４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号８６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号８８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号１００に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１０２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号１０４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号１１６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１１８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１２０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号１３２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１３４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１３６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号１４０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１４２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１４４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号１５６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１５８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１６０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３
および／または
配列番号１７２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１７４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
および配列番号１７６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域
および／または
配列番号１２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号１６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号２８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号３０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号３２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号４４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号４６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号４８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号６０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号６２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号６４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号７６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号７８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号８０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号９２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号９４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号９６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号１０８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１１２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号１２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１２６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；および
配列番号１２８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号１４８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１５０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１５２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３
および／または
配列番号１６４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１６６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１６８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項６】
（１）
配列番号４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；および
配列番号８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（２）
配列番号２０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号２２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号２８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号３０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号３２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（３）
配列番号３６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号３８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号４０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号４４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号４６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号４８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（４）
配列番号５２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号５４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号５６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号６０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号６２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号６４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（５）
配列番号６８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号７０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号７２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号７６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号７８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および配列番号８０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（６）
配列番号８４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号８６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号８８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号９２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号９４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号９６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（７）
配列番号１００に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１０２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１０４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１０８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１１２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（８）
配列番号１１６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１１８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１２０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１２６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１２８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（９）
配列番号１３２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１３４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１３６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１２６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１２８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（１０）
配列番号１４０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１４２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１４４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１４８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１５０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１５２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
（１１）
配列番号１５６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１５８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１６０に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１６４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１６６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１６８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
または
（１２）
配列番号１７２に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ１；
配列番号１７４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ２；
および
配列番号１７６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
ならびに
配列番号１２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ１；
配列番号１２６に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ２；
および
配列番号１２８に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載のアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；
および／または
（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項８】
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｂ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｃ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｄ）配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｅ）配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｆ）配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｇ）配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｈ）配列番号１１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｉ）配列番号１３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｊ）配列番号１３８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１４６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；
（ｋ）配列番号１５４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１６２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに／または
（ｌ）配列番号１７０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項９】
前記重鎖免疫グロブリン可変領域が、ＩｇＧ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４重鎖定常領域に結合し、前記軽鎖免疫グロブリン可変領域が、カッパまたはラムダ軽鎖定常領域に結合する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１０】
（ａ）配列番号１８０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１８２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｂ）配列番号１８４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１８６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｃ）配列番号１８８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｄ）配列番号１９２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１９４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｅ）配列番号１９６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１９８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｆ）配列番号２００に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２０２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｇ）配列番号２０４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２０６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｈ）配列番号２０８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｉ）配列番号２１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２１４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｊ）配列番号２１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２１８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；
（ｋ）配列番号２２０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；ならびに／または
（ｌ）配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１１】
抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１２】
多特異性である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１３】
以下の特性：
・  ヒトＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）に、２５℃で約２．１８ｎＭ〜約１３．９ｎＭのＫＤで、または３７℃で約４．２５ｎＭ〜約２９．５ｎＭのＫＤで結合する；
・  カニクイザルＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）に、２５℃で約７．８７ｎＭ〜約３４．４ｎＭのＫＤで、または３７℃で約１４．４ｎＭ〜約５８．２ｎＭのＫＤで結合する；
・  マウスＩｇＧ２ａに融合されたヒトＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）に、２５℃で約１７３ｐＭ〜約５．７９ｎＭのＫＤで、または３７℃で約２０５ｐＭ〜約２８．７ｎＭのＫＤで結合する；
・  マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃタグと共に発現されたＩＬ１ＲＡｃＰ細胞外ドメインに融合されたヒトＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）に、２５℃で約２１２ｐＭ〜約１４ｎＭのＫＤで、または３７℃で約２６４ｐＭ〜約４０．９ｎＭのＫＤで結合する；
・  ＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）への結合について、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２と競合し、任意選択で、但し、前記抗原結合タンパク質は、ＡＰＥ６１５５でもその抗原結合フラグメントでもない；
・  ＩＬ−１ＲＡｃＰおよびＩＬ３６Ｒリガンドの存在下で、ＩＬ−３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）により、宿主細胞において、レポーター遺伝子に融合された、一つ以上のＮＦκＢエレメントの活性化を遮断する；
・  皮膚炎症に罹患している対象において、皮膚炎症を予防もしくは改善するか、または皮膚厚みもしくは総病理スコアを低減するか、または炎症促進性サイトカインレベルを低減する；
・  かかる大腸炎または炎症を有する対象において、大腸炎もしくは結腸炎を予防するか、または改善する、あるいはＬＣＮ２ポリペプチドの糞便レベルを低減する；
・  配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むヒトＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）の、（ａ）残基１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９および／もしくは１１６〜１２２；ならびに／または（ｂ）２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／もしくは２７１〜２７６を、結合したとき、ペプシンおよび／もしくはプロテアーゼＸＩＩＩでの消化、ならびに／または重水素の存在下での重水素化から保護する；
・  残基１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９、１１６〜１２２、２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／または２７１〜２７６の配列番号２２７に記載されるアミノ酸配列を含むＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）に結合する；
・  ＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）のドメインＩＩに結合する；
・  アミノ酸配列ＹＫＱＩＬＨＬＧＫＤ（配列番号２２９）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１２２）を含むポリペプチドに結合する；
・  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ表皮角化細胞、腸の筋線維芽細胞および／またはＣＤ１４＋単球におけるＩＬ３６α、ＩＬ３６βおよび／またはＩＬ３６γを、約１〜６ｎＭのＩＣ５０で阻害する；および／または
・  ＩＬ３６ＲによるＮＦκＢのＩＬ３６α、ＩＬ３６βおよび／またはＩＬ３６γ介在性活性化を競合的に阻害する一つ以上を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１４】
ＩＬ３６Ｒポリペプチドに結合した、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質を含む、複合体。
【請求項１５】
（ａ）前記抗原結合タンパク質の免疫グロブリン鎖をコードする一つ以上のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入すること；
（ｂ）前記宿主細胞を培地においてポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養すること；および
（ｃ）任意選択で、前記抗原結合タンパク質または免疫グロブリン鎖を前記宿主細胞および／または前記宿主細胞が成長している培地から単離すること、を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質またはその免疫グロブリン鎖を製造する方法。
【請求項１６】
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１５〜１６のいずれか一項に記載の方法の産物である、抗原結合タンパク質または免疫グロブリン鎖。
【請求項１８】
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む、重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３；および／または
（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む、軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３；
または
（ｃ）配列番号１〜２２６からなる群から選択されるメンバーにおいて記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアント、を含む、ポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１８に記載のポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項２０】
請求項１９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２１】
請求項１〜１３、１７、１８、１９または２０のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質もしくは免疫グロブリン鎖またはポリペプチドもしくはポリヌクレオチドもしくはベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２２】
任意選択で、さらなる治療剤と関連して、請求項１〜１３および１７のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質の一つ以上を含む、組成物またはキット。
【請求項２３】
請求項１〜１３および１７のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質、ならびに医薬的に許容される担体、および任意選択で、さらなる治療剤を含む、医薬組成物。
【請求項２４】
抗炎症剤であるさらなる治療剤と関連した、請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の組成物またはキット。
【請求項２５】
前記さらなる治療剤が、抗ＴＮＦアルファ抗体またはその抗原結合フラグメント、免疫グロブリン、ＩＬ１７阻害剤、ＩＬ２３ｐ１９阻害剤、ＩＬ１２ｐ４０阻害剤、グセルクマブ、ウステキヌマブ、ブロダルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト、デュピルマブ、サリルマブ、トシリズマブ、ゴリムマブ、アバタセプト、トファシチニブ、アバタセプト、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、イブプロフェン、ナプロキセン、アセトアミノフェン、アスピリン、セレコキシブ、シクロホスファミド、メトトレキサート、コルチコステロイド、コルチゾンおよびプレドニゾンに結合した一つ以上のヒトＴＮＦ受容体またはそのフラグメントからなる群から選択されるメンバーである、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の組成物またはキット。
【請求項２６】
請求項１〜１３、１７または２２〜２５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質または組成物を含む、容器または注射装置。
【請求項２７】
任意選択で、さらなる治療剤と関連して、請求項１〜１３または１７のいずれか一項に記載の治療上有効量の抗原結合タンパク質を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＩＬ−３６Ｒ介在性疾患を治療または予防する方法。
【請求項２８】
任意選択で、さらなる治療剤と関連して、請求項１〜１３または１７のいずれか一項に記載の治療上有効量の抗原結合タンパク質を投与することを含む、炎症性障害、自己免疫障害、インターロイキンＩＬ−３６受容体アンタゴニスト（ＤＩＴＲＡ）症候群の欠損、疱疹状膿痂疹、肢端皮膚炎、皮膚好中球性膿疱性疾患、膿疱性疾患、乾癬、汎発性膿疱性乾癬、膿疱性疾患、掌蹠膿疱性乾癬、掌蹠膿疱症、大腸炎、気道炎症、関節の炎症、腎臓の炎症、円形脱毛症、皮膚炎症、表皮肥厚、角化症、キンドラー症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ネフローゼ症候群、ＡＮＣＡ（抗好中球細胞質抗体）関連血管障害、細管間質性病変および糸球体腎炎を治療または予防する方法。
【請求項２９】
乾癬または炎症性腸疾患を治療または予防するための、請求項２７〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１〜１３または１７のいずれか一項に記載の対象の身体に抗原結合タンパク質を投与する方法であって、前記抗原結合タンパク質を、任意選択で、さらなる治療剤と関連して、前記対象の身体に注入することを含む、方法。
【請求項３１】
前記抗原結合タンパク質が、前記対象の身体に皮下、静脈内または筋肉内注射される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象が、ホモ接合性またはヘテロ接合性のＩＬ３６ＲＮ変異遺伝子型を有する、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／６９８，４８２号；２０１９年５月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／８４６，９８９号；および２０１９年６月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／８６６，０２８号の利益を主張するものであり、その各々が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の分野は、部分的には、ＩＬ−３６受容体に結合する抗体、および乾癬または炎症性腸疾患を含む炎症性障害を治療するためのかかる抗体の使用に関する。
【０００３】
参照による配列表の援用
２０１９年７月１５日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して米国特許商標庁に提出された、１７６ＫＢの３６４３２＿１０４８４ＵＳ０１＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇという名称のＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表が、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
インターロイキン（ＩＬ）−３６サイトカインは、ＩＬ−３６ＲおよびＩＬ−１ＲＡｃＰから構成される共通受容体に結合して、炎症応答を刺激する、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、およびＩＬ−３６γの三つのアゴニストを含む。ＩＬ−３６受容体（ＩＬ−３６Ｒ）は、ＩＬ−１ファミリーのサブセットのサイトカイン、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、およびＩＬ−３６γに対する単一貫通型膜受容体であり、これらのリガンドのいずれかに結合する際、その共受容体であるＩＬ−１Ｒ補助タンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）が動員され、これが、ＮＦκＢに関与するシグナル伝達カスケードおよびマイトジェン活性化キナーゼ経路を誘導する（Ｓｉｍｓら、２０１０年）。
【０００５】
乾癬のような一部の炎症性皮膚状態のメディエーターは、ＩＬ−３６である。乾癬は、尋常性乾癬および汎発性膿疱性乾癬を含む、一般的な免疫介在性炎症性皮膚疾患である。標準的な治療ガイドラインには、局所ステロイド、局所ビタミンＤ、全身性免疫抑制剤並びに抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、抗インターロイキン（ＩＬ）−２３および抗ＩＬ−１７抗体のような様々な生物製剤の使用が含まれる。ＩＬ−３６メンバーは、尋常性乾癬の損傷皮膚に置いて過剰発現しており、ＩＬ−３６Ｒの活性化は、ＴＮＦ−α／ＩＬ−２３／ＩＬ−１７／ＩＬ−２２軸と共に乾癬性炎症の持続性および永続性に関与し得る。（Ｄｉ  Ｃｅｓａｒｅら、Ｔｈｅ  ＩＬ−２３／Ｔｈ１７  ａｘｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １２９：１３３９〜１３５０（２００９年）およびＢｌｕｍｂｅｒｇら、ＩＬ−１ＲＬ２  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：４３５４〜４３６２（２０１０年））。
しかしながら、掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）および掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰＰ）の現在利用可能な治療は限られる。スペソリマブおよびＡＮＢ０１９は、臨床開発中の抗ＩＬ３６Ｒ抗体であり、免疫原性および効力に関連する欠点に悩まされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｄｉ  Ｃｅｓａｒｅら、Ｔｈｅ  ＩＬ−２３／Ｔｈ１７  ａｘｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １２９：１３３９〜１３５０（２００９年）
【非特許文献２】Ｂｌｕｍｂｅｒｇら、ＩＬ−１ＲＬ２  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：４３５４〜４３６２（２０１０年）
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、優れた特性を示す抗ＩＬ３６Ｒ抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。例えば、本発明者らは、１群当たり３匹のカニクイザル（０．５および５ｍｇ／ｋｇの皮下投与群、ｎ＝３／群）における薬物動態研究において、本明細書に記載される抗ＩＬ３６Ｒ抗体（例えば、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２）が、抗ＩＬ３６Ｒ抗体、ＡＰＥ６１５５よりも約１．２倍高い曝露を示したことを観察した。さらに、本発明者らはまた、ＡＰＥ６１５５が、例えば、ＩＭＱ誘導性皮膚炎症における皮膚の厚さおよび病理スコアの減少、ならびに皮膚における炎症促進性サイトカインの減少において、本明細書に記載される抗ＩＬ３６Ｒ抗体よりも少ない効力を示したことも観察した。ヒト化抗ＩＬ３６Ｒ抗体であるスペソリマブは、高レベルの、ヒト対象におけるＧＰＰを有する抗薬物抗体を呈した。第Ｉ相の臨床試験では、７人の患者のうち３人が、２週目に抗薬物抗体を有し、これらは、単回投与の２０週後まで持続した。スペソリマブのこの特性は、慢性長期治療にとって理想的ではない。競合の抗ＩＬ３６のＧＰＰにおけるアミンの第一のデータは、ＡＮＢ０１９、速報、企業アップデート、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ、Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ（２０１８年９月１６日）の概念証明を提供する。本発明のヒト抗ＩＬ３６Ｒ抗体は、ヒトにおいて高い免疫原性であるとは予想されない。
【０００８】
本発明は、（ｉ）参照抗原結合タンパク質と同じ、ＩＬ３６Ｒ上のエピトープに特異的に結合する；または（ｉｉ）ＩＬ３６Ｒポリペプチドへの結合について、参照抗原結合タンパク質と競合する、抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）であって、参照抗原結合タンパク質が、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列を含む、重鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖免疫グロブリン；および／（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列を含む、軽鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリンを含む、抗原結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列を含む、重鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン；および／または（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列を含む、軽鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；および／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域を含む。例えば、本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列、および配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を含む、重鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン；および／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列、および配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を含む、軽鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１００に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１０４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１３４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１４０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１５８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１７４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、ならびに／または配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３ならびに／または配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号４６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号９２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号１０８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号１４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１５２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号１６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、ならびに／または配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む重鎖免疫グロブリンを含む。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、（１）配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（２）配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（３）配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号４６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（４）配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（５）配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（６）配列番号８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号９２に記載のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（７）配列番号１００に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１０４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１０８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（８）配列番号１１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（９）配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１３４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（１０）配列番号１４０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１５２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（１１）配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１５８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；または（１２）配列番号１７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号１７４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および配列番号１７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域を含む。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン；および／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。本発明は、（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｂ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｃ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｄ）配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｅ）配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｆ）配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｇ）配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｈ）配列番号１１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｉ）配列番号１３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｊ）配列番号１３８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１４６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；（ｋ）配列番号１５４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１６２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域；ならびに／または（ｌ）配列番号１７０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン可変領域、および配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン可変領域を含む抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）を含み、例えば、重鎖免疫グロブリン可変領域は、重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４））に結合し、軽鎖免疫グロブリン可変領域は、軽鎖定常領域（例えば、ラムダまたはカッパ）に結合する。例えば、軽鎖および重鎖定常領域は、ヒト定常領域である。本発明の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、（ａ）配列番号１８０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１８２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｂ）配列番号１８４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１８６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｃ）配列番号１８８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｄ）配列番号１９２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１９４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｅ）配列番号１９６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号１９８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｆ）配列番号２００に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２０２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｇ）配列番号２０４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２０６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｈ）配列番号２０８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｉ）配列番号２１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２１４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｊ）配列番号２１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２１８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；（ｋ）配列番号２２０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン；ならびに／または（ｌ）配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号２２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０００９】
本発明の抗原結合タンパク質は、本発明の実施形態では、例えば、シルドアッセイフォーマットで測定された、以下の特性：
・  ２５℃で約２．１８ｎＭ〜約１３．９ｎＭのＫＤで、または３７℃で約４．２５ｎＭ〜約２９．５ｎＭのＫＤで、ヒトＩＬ３６Ｒに結合する；
・  ２５℃で約７．８７ｎＭ〜約３４．４ｎＭのＫＤで、または３７℃で約１４．４ｎＭ〜約５８．２ｎＭのＫＤで、カニクイザルＩＬ３６Ｒに結合する；
・  ２５℃で約１７３ｐＭ〜約５．７９ｎＭのＫＤで、または３７℃で約２０５ｐＭ〜約２８．７ｎＭのＫＤで、マウスＩｇＧ２ａに融合したヒトＩＬ３６Ｒに結合する；
・  ２５℃で約２１２ｐＭ〜約１４ｎＭのＫＤで、または３７℃で約２６４ｐＭ〜約４０．９ｎＭのＫＤで、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃタグと共に発現されたＩＬ１ＲＡｃＰ細胞外ドメインに融合したヒトＩＬ３６Ｒに結合する；
・  ＩＬ３６Ｒへの結合についてＨ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２と競合する；
・  ＩＬ−１ＲＡｃＰおよびＩＬ３６Ｒリガンドの存在下で、ＩＬ−３６Ｒ（例えば、ヒトまたはカニクイザル）により、宿主細胞においてレポーター遺伝子に融合した、一つ以上のＮＦκＢエレメントの活性化を遮断する；
・  皮膚炎症に罹患している対象において、皮膚炎症を予防もしくは改善するか、または皮膚厚みもしくは総病理スコアを低減するか、または炎症促進性サイトカインレベルを低減する；
・  大腸炎もしくは結腸炎を予防もしくは改善するか、またはそのような大腸炎もしくは炎症を有する対象における糞便のＬＣＮ２ポリペプチドのレベルを低減する；
・  結合したとき、本明細書において配列番号２２７に記載のヒトＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）の残基（ａ）１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９および／もしくは１１６〜１２２；ならびに／または（ｂ）２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／もしくは２７１〜２７６（または野生型ＩＬ−１ＲＬ２における対応する残基）を、ペプシンおよび／もしくはプロテアーゼＸＩＩＩでの消化ならびに／または重水素の存在下での重水素化から保護する；
・  本明細書において配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むヒトＩＬ３６Ｒの残基１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９、１１６〜１２２、２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／もしくは２７１〜２７６（または野生型ＩＬ−１ＲＬ２における対応する残基）でＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）（例えば、ヒトＩＬ３６Ｒ）に結合する；
・  ＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）（例えば、ヒトＩＬ３６Ｒ）のドメインＩＩに、例えば、約８０．０、８０．１、８１．０もしくは８１．５％のカバー度または約８０〜８１もしくは８０〜８２％のカバー度で結合する；および／または
・  アミノ酸配列  ＹＫＱＩＬＨＬＧＫＤ（配列番号２２９）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１２２）を含むポリペプチドに結合する；
・  例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ表皮角化細胞、腸の筋線維芽細胞および／またはＣＤ１４＋単球におけるＩＬ３６α、ＩＬ３６βおよび／またはＩＬ３６γ（例えば、濃度約１０ｎＭ）を、約１、２、３、４、５もしくは６ｎＭまたは１〜６ｎＭのＩＣ５０で阻害する；および／または
・  例えば、シルドアッセイフォーマットで測定される、ＩＬ３６Ｒによる、ＮＦκＢ（例えば、ＨＥＫ２９３のような細胞におけるＮＦκＢ応答エレメント（５×）−ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰレポーター）のＩＬ３６α、ＩＬ３６βおよび／またはＩＬ３６γ介在性活性化を競合的に阻害する、の一つ以上により特徴付けられ得る。
【００１０】
本発明の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）と複合体を形成したＩＬ３６Ｒポリペプチドまたはその抗原フラグメントを含む複合体もまた、本発明の範囲内である。
【００１１】
（ａ）当該抗原結合タンパク質の免疫グロブリン鎖をコードする一つ以上のポリヌクレオチドを宿主細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）に導入する工程；（ｂ）宿主細胞をポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養する工程；および（ｃ）任意選択で、抗原結合タンパク質または免疫グロブリン鎖を宿主細胞および／または宿主細胞が成長している培地から単離する工程を含む、本発明の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）あるいはその免疫グロブリン鎖を作製する方法がまた、本発明により提供される。かかる方法の産物である、抗原結合タンパク質および免疫グロブリン鎖もまた、本発明の一部である。
【００１２】
本発明はまた、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４、１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の免疫グロブリン重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３；ならびに／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の免疫グロブリン軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３；または本明細書に記載の任意のアミノ酸配列、例えば、（ｃ）配列番号１〜２２６からなる郡から選択されるメンバーに記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。かかるポリペプチドの一つ以上（例えば、二つの、例えば、本明細書に記載の重鎖および軽鎖免疫グロブリン）をコードするポリヌクレオチドもまた、本発明の一部である。かかるポリヌクレオチドを含む、ベクター、例えば、プラスミドも本発明の一部である。本明細書に記載の任意の抗原結合タンパク質もしくは免疫グロブリン鎖またはポリペプチドもしくはポリヌクレオチドもしくはベクターを含む宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）は、本発明の一部であり、例えば、ポリヌクレオチドおよび／またはベクターは、宿主細胞の染色体に組み込まれるか、または異所性である。
【００１３】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）の一つ以上を、任意選択的でさらなる治療剤（例えば、抗炎症剤、抗ＴＮＦアルファ抗体またはその抗原結合フラグメント、ＩＬ１７阻害剤、ＩＬ２３ｐ１９阻害剤、ＩＬ１２ｐ４０阻害剤、グセルクマブ、ウステキヌマブ、ブロダルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、免疫グロブリンに結合した一つ以上のヒトＴＮＦ受容体またはそのフラグメント、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト、デュピルマブ、サリルマブ、トシリズマブ、ゴリムマブ、アバタセプト、トファシチニブ、アバタセプト、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、イブプロフェン、ナプロキセン、アセトアミノフェン、アスピリン、セレコキシブ、シクロホスファミド、メトトレキサート、コルチコステロイド、コルチゾンおよびプレドニゾンと関連して含む、組成物またはキットは、本発明の一部を形成する。
【００１４】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）および医薬的に許容される担体、ならびに任意選択で、さらなる治療剤を含む医薬組成物はまた、本発明の一部である。
【００１５】
本発明はまた、抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）あるいは本明細書に記載の組成物を含む容器または注射装置（例えば、予め充填されたシリンジ）を提供する。
【００１６】
本発明は、対象に、治療上有効量の本明細書に記載の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）を、任意選択で、さらなる治療剤（例えば、抗炎症剤）と関連して投与（例えば、非経口的に）する工程を含む、それを必要とする対象（例えば、ヒト）においてＩＬ３６Ｒにより仲介される障害（例えば、炎症性もしくは自己免疫疾患または炎症性腸疾患）を治療または予防する方法をさらに提供する。
【００１７】
本発明はまた、抗原結合タンパク質を対象の身体に、任意選択で、さらなる治療剤（例えば、抗炎症剤）と関連して注射する（例えば、皮下、静脈内または筋肉内）工程を含む、本明細書に記載の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは多特異性抗体）を、対象（例えば、ヒト）の身体に投与する方法を提供する。
【００１８】
本発明は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４，１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２および／もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列を含む任意のポリペプチドまたはそのバリアントを包含する。
【００１９】
本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３，１７５、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９、２２３、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１および／もしくは２２５に記載されるヌクレオチド配列またはそのバリアントを含む任意のポリヌクレオチドを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１。生殖細胞系列とＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２のＶＨおよびＶＬとの間の配列比較。
【００２１】
【図２】図２。生殖細胞系列とＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２のＶＨおよびＶＬとの間の配列比較。
【００２２】
【図３】図３（Ａ〜Ｆ）。増加する濃度のＨ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２は、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２による阻害の競合性（ＲＬＵ、相対的光単位）を明らかにする、ＩＬ−３６α（ＡおよびＤ）、ＩＬ−３６β（ＢおよびＥ）、またはＩＬ−３６γ（ＣおよびＦ）用量応答曲線の右方向へのシフトを生じた。
【００２３】
【図４】図４。０．５ｍｇ／ｋｇまたは５．０ｍｇ／ｋｇ抗体を皮下投与されたカニクイザルにおけるＨ４Ｈ１４１７０６Ｐ２およびＡＰＥ６１５５薬物動態解析（経時的な血清中の抗体の濃度）。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明に従い、当該技術分野の技術範囲である従来からの分子生物学、微生物学、および組み換えＤＮＡ技術が利用されてもよい。かかる技術は、文献内で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第二編（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（本明細書において「Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年」）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編、１９８５年）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４年）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、（１９８５年））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  （Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４年））；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、（１９８６年））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、（１９８６年））；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４年）を参照のこと。
【００２５】
抗ＩＬ３６Ｒの「抗原結合タンパク質」は、ＩＬ１ＲＬ２サブユニット（ＩＬ−１Ｒｒｐ２）でＩＬ３６受容体に特異的に結合する、単一ポリペプチド（例えば、ＳｃＦｖ（１本鎖可変フラグメント））または一つより多くのポリペプチド（例えば、四量体ＩｇＧ抗体）の複合体である。ＩＬ−３６Ｒは、それに対する抗原結合タンパク質の結合の文脈において、ＩＬ−１ＲＬ２を指す。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、単一特異性もしくは多特異性（例えば、二重特異性）であるか、または一価もしくは多価（例えば、二価）であるかに関わらず、抗体または抗原結合フラグメントである。一価抗原結合タンパク質は、単一の抗原結合ドメインを有し、一方、二価抗原結合タンパク質は、二つの抗原結合ドメインを有する。
【００２６】
ポリヌクレオチドは、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。本発明は、プロモーターまたは他の発現制御配列に作動可能に結合された本発明の任意のポリヌクレオチドを含む。
【００２７】
一般に、「プロモーター」または「プロモーター配列」は、細胞（例えば、直接または他のプロモーター結合ポリペプチドもしくは物質を通じて）においてＲＮＡポリメラーゼに結合し、コード配列の転写を開始させる能力があるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は、一般に、その３’末端で転写開始部位により結合され、上流（５’方向）に伸長して、任意のレベルで転写を開始するために必要な最低数の塩基またはエレメントを含む。プロモーター配列内に、転写開始部位（例えば、ヌクレアーゼＳ１とのマッピングにより便利に定義される）、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が見出され得る。プロモーターは、エンハンサーおよびリプレッサー配列を含む他の発現制御配列、または本発明の核酸に作動可能に結合されてもよい。遺伝子発現を制御するために使用され得るプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第５，３８５，８３９号および第５，１６８，０６２号）、ＳＶ４０早期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔら、（１９８１年）Ｎａｔｕｒｅ  ２９０：３０４〜３１０）、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端リピートに含有されるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、（１９８０年）Ｃｅｌｌ  ２２：７８７〜７９７）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、（１９８１年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：１４４１〜１４４５）、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、（１９８２年）Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９〜４２）、ベータ−ラクタマーゼプロモーター（ＶＩＩＩａ−Ｋｏｍａｒｏｆｆら、（１９７８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：３７２７〜３７３１）、またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、（１９８３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２１〜２５）のような原核生物の発現ベクター、また、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ（１９８０年）２４２：７４〜９４における「組み換え細菌由来の有用なタンパク質」、および酵母またはＧａｌ  ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコール脱水素酵素）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、もしくはアルカリホスファターゼプロモーターのような他の真菌由来のプロモーターエレメントが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、細胞において、配列が、コード配列のＲＮＡ、好ましくは、ｍＲＮＡへのＲＮＡポリメラーゼ仲介性転写を指示し、次に、ＲＮＡスプライシングされ（それが、イントロンを含有する場合）、任意選択的で、コード配列によりコードされるタンパク質に翻訳され得る、プロモーターまたは他の発現制御配列に「作動可能に結合される」。
インターロイキン−３６受容体（ＩＬ３６Ｒ）
【００２９】
ＩＬ−３６Ｒは、四つのシグナル伝達複合体：ＩＬ−１ＲＩ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−３３Ｒ、およびＩＬ−３６Ｒを形成する６つの受容体タンパク質、ならびに二つのデコイ受容体および二つの負の調節因子を含有するＩＬ−１受容体ファミリーのメンバーである。ＩＬ−３６Ｒは、ＩＬ−１Ｒｒｐ２（ＩＬ−１ＲＬ２、インターロイキン１受容体様２またはインターロイキン１受容体関連タンパク質２としても知られる）と命名された受容体サブユニット、および共受容体サブユニットインターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質ＩＬ−１ＲＡｃＰからなるヘテロ二量体である。受容体は、三つの異なるアゴニスト、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、およびＩＬ−３６γ（ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、およびＩＬ−１Ｆ９としても知られる）を認識して、炎症性サイトカインの発現を誘導することができる。また、ＩＬ−３６受容体に結合し、炎症性サイトカインの発現を減少させる、二つの受容体アンタゴニスト、ＩＬ−３６ＲａおよびＩＬ−３８も存在する。ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、およびＩＬ−３６γは、ＩＬ−３６Ｒ／ＩＬ−１ＲＡｃＰ受容体を通じてシグナルを伝達して、ＮＦ−ｋＢならびにｐ３８およびＪＮＫのようなＭＡＰＫを活性化し、炎症反応を促進する。
【００３０】
本発明の実施形態では、ホモサピエンスＩＬ１ＲＬ２配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３８４５．２の下入手可能である。本発明の実施形態では、ホモサピエンスＩＬ１ＲＬ２のアミノ酸配列は、配列番号１７７において記載される。
【００３１】
本発明の実施形態では、ホモサピエンスＩＬ−１ＲＡｃＰ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２１７３．１の下入手可能である。本発明の実施形態では、ホモサピエンスＩＬ−１ＲＡｃＰのアミノ酸配列は、配列番号１７８において記載される。
抗ＩＬ３６抗体およびその抗原結合フラグメント
【００３２】
本発明は、ＩＬ３６Ｒタンパク質またはその抗原フラグメントに特異的に結合する、抗体（例えば、ヒト抗体）およびその抗原結合フラグメントのような、抗原結合タンパク質を提供する。本明細書に記載される抗原結合タンパク質のいずれかと同じ、ＩＬ３６Ｒ上のエピトープに結合するか、またはＩＬ３６Ｒへの結合について競合する抗原結合タンパク質もまた、本発明の一部である。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、ジスルフィド結合により内部で結合された、四つのポリペプチド鎖、二つの重鎖（ＨＣ）および二つの軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」、ならびにその多量体、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２を指す。本発明の実施形態では、各重鎖（ＨＣ）は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）（例えば、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４もしくは１７０またはそのバリアント）および重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む）を含み、各軽鎖（ＬＣＶ）は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）（例えば、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６もしくは１６２またはそのバリアント）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へとさらに細分化することができる。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された、三つのＣＤＲおよび四つのＦＲを含む。本発明の特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合フラグメント）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であるか、または天然もしくは人工的に修飾されている。
【００３４】
典型的には、重鎖と軽鎖免疫グロブリン鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる三つの超可変領域を含む。一般に、Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。本発明の実施形態では、各ドメインへのアミノ酸の割当は、免疫グロブリンの関心のタンパク質の配列の定義、Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．；第５編；ＮＩＨ公開第９１〜３２４２号（１９９１年）；Ｋａｂａｔ（１９７８年）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１〜７５；Ｋａｂａｔら、（１９７７年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９〜６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９８７年）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７またはＣｈｏｔｈｉａら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８〜８８３に従う。
【００３５】
例えば、本発明は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列および配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも７０、８０または９０％のアミノ酸配列同一性を含む重鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖免疫グロブリン；および（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列および配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも７０、８０または９０％のアミノ酸配列同一性を含む軽鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖免疫グロブリンを含む抗原結合タンパク質を提供する。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質は、（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３；またはそのバリアントを含む重鎖免疫グロブリン；および（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３；またはそのバリアントを含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【００３６】
本発明の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む重鎖免疫グロブリンを含み、
ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４０、１５６もしくは１７２に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含み；
ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１４２、１５８もしくは１７４に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含み；および
ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１４４、１６０もしくは１７６に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含み；および
ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む軽鎖免疫グロブリン：
ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１２４、１４８もしくは１６４に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含み；
ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１２６、１５０もしくは１６６に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含み；および
ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１２８、１５２もしくは１６８に記載されるアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む、を含む。
【００３７】
本発明は、モノクローナル抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに複数の単離されたモノクローナル抗原結合タンパク質を含むモノクローナル組成物を含む。本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」という用語は、実質的に同種の抗体の集団のメンバーを指し、すなわち、集団を含む抗体分子は、わずかな量で存在し得る可能性のある天然で生じる変異を除き、アミノ酸配列において同一である。組成物におけるかかるモノクローナル抗体およびフラグメントの「複数性」は、例えば、マウスまたはヒトのような宿主生物の血液中、天然で通常生じるものを上回る、同一の（すなわち、わずかな量で存在し得る可能性のある天然で生じる変異を除き、アミノ酸配列において、上で考察された）抗体およびフラグメントの濃度を指す。
【００３８】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、ＩｇＡ型（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）またはＩｇＭの重鎖定常ドメインを含む。本発明の実施形態では、抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、カッパまたはラムダタイプの軽鎖定常ドメインを含む。
【００３９】
本発明は、ヒト抗原結合タンパク質を含む。本明細書において使用される場合、抗体または抗原結合フラグメントのような「ヒト」抗原結合タンパク質という用語は、ヒト細胞において、または非ヒト細胞、例えば、マウス細胞に移植されているかにかかわらず、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体およびフラグメントを含む。例えば、ＵＳ８５０２０１８、ＵＳ６５９６５４１、またはＵＳ５７８９２１５を参照のこと。本発明のヒトｍＡｂは、例えばＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでランダムもしくは部位特異的変異誘導により、またはｉｎ  ｖｉｖｏで体細胞変異により導入される変異）を含んでもよい。しかしながら、本明細書にて使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳類種（例えば、マウス）の生殖系列由来のＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列上に移植されているｍＡｂを含むようには意図されていない。用語は、非ヒト哺乳類において、または非ヒト哺乳類の細胞において組み換え産生された抗体を含む。用語は、ヒト対象から直接単離された天然の抗体を含むようには意図されていない。
【００４０】
本発明は、抗ＩＬ３６Ｒキメラ抗原結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびにその使用方法を含む。本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、第一の抗体由来の可変ドメインおよび第二の抗体由来の定常ドメインを有する抗体であり、第一および第二の抗体は、異なる種由来のものである（例えば、ＵＳ４８１６５６７；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、（１９８４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１〜６８５５を参照）。
【００４１】
抗体または抗原結合フラグメントのような、「組み換え」抗原結合タンパク質という用語は、例えば、ＤＮＡスプライシングおよびトランスジェニック発現を含む、組み換えＤＮＡ技術として当技術分野で公知のテクノロジーまたは方法により作製、発現、単離または得られたかかる分子を指す。この用語は、非ヒト哺乳類（例えば、トランスジェニック非ヒト哺乳類、例えば、トランスジェニックマウスを含む）または細胞発現系のような細胞で発現され、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体を指す。
【００４２】
本明細書において開示される、組み換え抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体および抗原結合フラグメントはまた、大腸菌／Ｔ７発現系で産生されてもよい。この実施形態では、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗体免疫グロブリン分子（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）をコードする核酸は、ｐＥＴベースのプラスミドに挿入され、大腸菌／Ｔ７系で発現されてもよい。例えば、本発明は、Ｔ７プロモーターに作動可能に結合された免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドも含む細胞においてＴ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現させる工程を含む、宿主細胞（例えば、ＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３のような大腸菌のような細菌宿主細胞）において、抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させる方法を含む。例えば、本発明の実施形態では、大腸菌のような、細菌宿主細胞は、ｌａｃプロモーターに作動可能に結合されたＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、ポリメラーゼおよび鎖の発現は、宿主細胞のＩＰＴＧ（イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）とのインキュベーションにより誘導される。ＵＳ４９５２４９６およびＵＳ５６９３４８９、またはＳｔｕｄｉｅｒおよびＭｏｆｆａｔｔ、Ｕｓｅ  ｏｆ  ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ  Ｔ７  ＲＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｔｏ  ｄｉｒｅｃｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９８６年５月５日；１８９（１）：１１３〜３０を参照のこと。
【００４３】
当技術分野で公知の組み換え抗体を産生するためのいくつかの方法がある。抗体の組み換え生成方法の一例は、ＵＳ４８１６５６７において開示されている。
【００４４】
形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する任意の公知の方法によるものであり得る。哺乳類細胞への異種ポリヌクレオチドの導入方法は、当該技術分野で周知であり、デキストラン仲介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン仲介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソームにおけるポリヌクレオチドのカプセル化、微粒子銃注入およびＤＮＡの核への直接マイクロインジェクションを含む。さらに、核酸分子は、ウイルスベクターにより哺乳類細胞に導入されてもよい。細胞を形質転換する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号および第４，９５９，４５５号を参照のこと。したがって、本発明は、（ｉ）抗原結合タンパク質の免疫グロブリン軽および／または重鎖、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２をコードする一つ以上のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３および／もしくは２２５のいずれか一つ以上におけるヌクレオチド配列；またはそのバリアントを含む）を導入する工程、例えば、ポリヌクレオチドは、ベクター中にあり；ならびに／または宿主細胞染色体に組み込まれ、および／もしくはプロモーターに作動可能に結合される；（ｉｉ）宿主細胞（例えば、ＣＨＯまたはピキア（Ｐｉｃｈｉａ）もしくはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ））を、ポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養する工程、および（ｉｉｉ）任意選択で、抗原結合タンパク質（例えば、抗体もしくはフラグメント）または鎖を、宿主細胞および／または宿主細胞が成長する培地から単離する工程を含む、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその免疫グロブリン鎖のような、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質を作製する組み換え方法を含む。一つより多くの免疫グロブリン鎖を含む抗原結合タンパク質（例えば、抗体または抗原結合フラグメント）、例えば、二つの免疫グロブリン重鎖および二つの免疫���ロブリン軽鎖を含む抗体を作製するとき、単一の宿主細胞における鎖の共発現が、例えば、細胞においてまたは細胞表面上、またはかかる鎖が分泌されるなら、細胞外で、抗原結合タンパク質（例えば、抗体または抗原結合フラグメント）を形成するように鎖の追合を導く。本発明の方法は、免疫グロブリン重鎖のみもしくは免疫グロブリン軽鎖のみ、または両方（例えば、成熟フラグメントおよび／もしくはその可変ドメインを含む、本明細書において開示されるもののいずれか）が、細胞において発現されているものを含む。かかる１本鎖は、例えば、抗体またはかかる鎖を含む抗原結合フラグメントの発現における中間体として有用である。例えば、本発明はまた、かかる製造方法、および任意選択で、本明細書に記載の精製方法の産物である、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１３７、１５３、１６９、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９または２２３に記載されるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる重鎖免疫グロブリン（またはそのもしくはそのＣＤＲを含む可変ドメイン）；および配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１４５、１６１、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１または２２５に記載されるヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖免疫グロブリン（またはそのもしくはそのＣＤＲを含む可変ドメイン）を含む、抗体およびその抗原結合フラグメントのような抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質を含む。例えば、本発明の実施形態では、方法の産物は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリンまたはＶＨおよび配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンまたはＶＬを含む、抗体あるいはフラグメントである抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質である。
【００４５】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法は、抗原結合タンパク質を、例えば、カラムクロマトグラフィー、沈殿および／または濾過により精製する方法を含む。かかる方法の産物はまた、本発明の一部を形成する。
【００４６】
哺乳類細胞を含む真核生物および原核生物の宿主細胞を、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）の発現のための宿主として使用してもよい。かかる宿主細胞は、当該技術分野で周知であり、多くは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能である。これらの宿主細胞としては、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞および多数の他の細胞株が挙げられる。哺乳類宿主細胞には、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスター細胞が挙げられる。使用され得る他の細胞株は、昆虫細胞株（例えば、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）またはトリコプラスシア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ））、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞である。真菌細胞には、例えば、ピキア、ピキア・パストリス、ピキア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロフィルア（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピキア・コクラマエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）（オガタエアミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピキア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピキア・オプンティアエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・サーモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・ゲルクウム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピキア・ピッペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア種、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス種、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クリベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）種、クリベロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニジュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ロックンオウンズ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓ���ｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）を含む酵母ならびに糸状真菌細胞が挙げられる。本発明は、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰもしくはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２のような抗原結合タンパク質；および／または一つ以上のその免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、単離された宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞または任意のタイプの上記の宿主細胞）を含む。
【００４７】
本発明はまた、本発明の抗原結合タンパク質、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２が結合する、ＩＬ３６Ｒもしくは抗原フラグメントまたはその融合物（例えば、Ｈｉｓ６、Ｆｃおよび／またはｍｙｃ）を発現する細胞を含み、例えば、細胞は、対象の体内またはｉｎ  ｖｉｔｒｏにある。
【００４８】
加えて、本発明はまた、ＩＬ３６Ｒポリペプチドもしくはその抗原フラグメントまたはその融合物と、および／あるいは抗ＩＬ３６Ｒ抗体またはフラグメントに特異的に結合する２次抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、検出可能に標識された２次抗体）と複合体を形成した、本明細書において考察された、抗ＩＬ３６Ｒ  抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを含む複合体を提供する。本発明の実施形態では、複合体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏである（例えば、固体基材に固定化される）か、または対象の体内にある。
【００４９】
用語「特異的に結合する」は、例えば、２５℃または３７℃での、リアルタイム、ラベルフリービオレイヤーインターフェロメトリーアッセイ、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサーにより、または表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により、または溶液親和性ＥＬＩＳＡにより測定された、少なくとも約５８ｎＭ（例えば、１０−９Ｍ；１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍ）のＫＤとして発現された、ＩＬ３６Ｒタンパク質のような抗原に対する結合親和性を有するこれらの抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）を指す。本発明は、ＩＬ３６Ｒタンパク質に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含む。本発明の実施形態では、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質は、ヒトおよび／またはカニクイザル  ＩＬ３６Ｒへの結合についてＫＤ値を含み、その値は、表４−１〜４−８のいずれかにおいて記載される。
【００５０】
本明細書で使用される場合、抗体または抗原結合タンパク質の「抗原結合部分」または「抗原結合フラグメント」などの用語は、抗原に特異的に結合して、複合体を形成する、任意の天然に生じる、酵素的に得ることができる、合成、もしくは遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗原結合フラグメントの非限定的な例としては、抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束性ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドからなる、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、および（ｖｉ）ｄＡｂフラグメントが挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディおよび小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）のような他の操作された分子もまた、本明細書で使用される場合、「抗原結合フラグメント」という表現に包含される。本発明の実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３；もしくはＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）の三つ以上のＣＤＲを含む。
【００５１】
抗体の抗原結合フラグメントは、本発明の実施形態では、少なくとも一つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、概して、一つ以上のフレームワーク配列に隣接しているか、またはインフレームである、少なくとも一つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと結合したＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の適当な配置で互いに対して配置され得る。例えば、可変領域は、二量体であってもよく、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有してもよい。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体のＶＨまたはＶＬドメインを含有してもよい。
【００５２】
特定の実施形態では、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも一つの定常ドメインに共有結合された少なくとも一つの可変ドメインを含有してもよい。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内で見られ得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な構成には、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上で列挙された例示的な構成のいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインのいずれの構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接結合されてもよいか、または完全もしくは部分ヒンジまたはリンカー領域により結合されてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間に可動性または半可動性の結合をもたらす、少なくとも二つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなってもよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、互いにおよび／または一つ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと（例えば、ジスルフィド結合により）非共有会合で上で列挙された可変ドメイン構成および定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（もしくは他の多量体）を含んでもよい。
【００５３】
抗原結合タンパク質（例えば、抗体および抗原結合フラグメント）は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。多特異性抗原結合タンパク質は、本明細書においてさらに考察される。
【００５４】
特定の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質（例えば、抗体または抗体フラグメント）は、かかるリガンド、検出可能な標識または治療用部分（「イムノコンジュゲート」）、２次抗ＩＬ３６Ｒ抗体、または任意の他の治療部分にコンジュゲートされてもよい。
【００５５】
「単離された」抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）、ポリペプチド、ポリヌクレオチドおよびベクターは、細胞またはそれらが産生されている細胞培養物から、他の生物分子を少なくとも部分的に含まない。かかる生物学的分子には、核酸、タンパク質、他の抗体もしくは抗原結合フラグメント、脂質、炭水化物、または細胞破片および成長培地のような他の物質が挙げられる。単離された抗原結合タンパク質はさらに、宿主細胞またはその成長培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に含まなくてもよい。概して、用語「単離された」は、かかる生物学的分子の完全な不在、または水、バッファー、もしくは塩の不在、または抗原結合タンパク質（例えば、抗体または抗原結合フラグメント）を含む医薬製剤の成分の不在を指すことを意図していない。
【００５６】
本発明は、本発明の抗原結合タンパク質（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）と同じエピトープに結合する、抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを含む。
【００５７】
用語「エピトープ」は、パラトープとして知られる、抗原結合タンパク質の特定の抗原結合部位、例えば、抗体分子の可変領域と相互作用する抗原決定基（例えば、ＩＬ１ＲＬ２上）を指す。単一の抗原は、二つより多くのエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合してもよく、異なる生物学的効果を有してもよい。用語「エピトープ」はまた、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位、および／または抗体が結合する抗原の領域を指してもよい。エピトープは、構造上または機能上として定義されてもよい。機能的エピトープは、概して、構造エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接関与する残基を有する。エピトープは、線形または立体的、すなわち、非線形アミノ酸から構成されてもよい。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基のような分子の化学的に活性のある表面基である決定基を含んでもよく、ある特定の実施形態では、特異的三次元構造特徴、および／または特定の比電荷特徴を有してもよい。
【００５８】
抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはフラグメントまたはポリペプチドのエピトープを決定する方法としては、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：４４３〜６３）、ペプチド切断解析、結晶学的研究およびＮＭＲ解析が挙げられる。さらに、抗原のエピトープ切り出し、エピトープ抽出および化学修飾のような方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７〜４９６）。抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはフラグメントまたはポリペプチド）が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量解析により検出される水素／重水素交換である。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７：２５２〜２５９；Ｅｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ〜２６５Ａを参照のこと。
【００５９】
本発明は、本発明の抗原結合タンパク質、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２と、ＩＬ３６Ｒへの結合について競合する抗原結合タンパク質、例えば、本明細書において考察されるバリアントＩＬ３６Ｒエピトープを含む。本明細書で使用される場合、用語「競合する」は、抗原（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）に結合し、別の抗原結合タンパク質（例えば、抗体もしくはその抗原結合フラグメント）の抗原への結合を阻害するか、または遮断する、抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）を指す。用語はまた、二つの抗原結合タンパク質、例えば、抗体間の両方向の競合、すなわち、第二の抗体に結合し、結合を遮断する第一の抗体、およびその逆も含む。特定の実施形態では、第一の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）および第二の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）は、同じエピトープに結合してもよい。あるいは、第一および第二の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）は、異なるが、例えば、重複するエピトープに結合してもよく、一つの結合が、例えば、立体障害を介して、２次抗体の結合を阻害または遮断する。抗原結合タンパク質（例えば、抗体）間の競合は、当技術分野で公知の方法、例えば、リアルタイムラベルフリーバイオレイヤーインターフェロメトリーアッセイにより測定されてもよい。また、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質（例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ））間の結合競合は、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ３８４バイオセンサー（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｃｏｒｐ．）上のリアルタイムラベルフリーバイオレイヤーインターフェロメトリーアッセイを使用して決定することができる。
【００６０】
典型的には、何らかの方法で修飾される本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ３６Ｒに特異的に結合する能力を保持し、例えば、その活性がモルベースで発現されるとき、そのＩＬ３６Ｒ結合活性の少なくとも１０％を保持する（親抗体と比較したとき）。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、親抗体としてのＩＬ３６Ｒ結合親和性の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％以上を保持する。また、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、その生物学的活性を実質的には変えない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的バリアント」または「機能的に保存されたバリアント」と称される）を含み得ることも意図される。
【００６１】
免疫グロブリン鎖（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰもしくはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２  ＶＨ、ＶＬ、ＨＣまたはＬＣ）のような、ポリペプチドの「バリアント」は、比較が、ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより行われるとき、アルゴリズムのパラメータは、相対的参照配列の全長を超えた相対配列間で最も長い一致を与えるよう選択され（例えば、予想域値：１０；ワードサイズ：３；クエリー範囲における最大一致：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  マトリックス；ギャップコスト：存在１１、伸長１；コンディショナル組成スコアマトリックス調整）、本明細書に記載される参照アミノ酸配列と少なくとも約７０〜９９．９％（例えば、７０、７２、７４、７５、７６、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．９％）同一または類似するアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４または２２６のいずれか）を含むポリペプチドを指す。
【００６２】
ポリヌクレオチドの「バリアント」は、比較が、ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより行われるとき、アルゴリズムのパラメータは、相対的参照配列の全長を超えた相対配列間で最も長い一致を与えるよう選択され（例えば、予想域値：１０；ワードサイズ：２８；クエリー範囲における最大一致：０；一致／ミスマッチスコア：１、−２；ギャップコスト：線形）、本明細書に記載される参照ヌクレオチド配列と少なくとも約７０〜９９．９％（例えば、７０、７２、７４、７５、７６、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．９％）同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３，１７５、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９、２２３、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１および／または２２５のいずれか）を指す。
【００６３】
以下の参考文献は、配列解析によく使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関するものである：ＢＬＡＳＴ  ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（２００５年）ＦＥＢＳ  Ｊ．２７２（２０）：５１０１〜５１０９；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ら、（１９９３年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．３：２６６〜２７２；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、（１９９６年）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１〜１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ら、（１９９７年）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：６４９〜６５６；Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．ら、（１９９３年）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９〜１６３；Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ら、（１９９４年）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７〜７０；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＣＯＲＩＮＧ  ＳＹＳＴＥＭＳ：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．ら、「Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．」  ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８年）第５巻、補足３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編）、３４５〜３５２頁、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．ら、「Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．」  ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、（１９７８年）第５巻、補足３．’’Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編）、３５３〜３５８頁、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．、（１９９１年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５〜５６５；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．ら、（１９９１年）方法３：６６〜７０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．ら、（１９９２年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５〜１０９１９；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、（１９９３年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０〜３００；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら、（１９９０年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４〜２２６８；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら、（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３〜５８７７；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．ら、（１９９４年）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２〜２０３９；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．「Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．」  ｉｎ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ編）、（１９９７年）１〜１４頁、Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎ．Ｙ．。
【００６４】
抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、本発明の実施形態では、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０もしくは２２４に記載のアミノ酸と少なくとも７０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％）のアミノ酸配列同一性を有する重鎖免疫グロブリンまたはその可変領域；および／あるいは配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２もしくは２２６に記載のアミノ酸と少なくとも７０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％）のアミノ酸配列を有する軽鎖免疫グロブリンまたはその可変領域を含む。
【００６５】
さらに、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質は、例えば、ミスセンス変異（例えば、保存的置換）、ナンセンス変異、欠失、または挿入のような一つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の変異を除き、本明細書に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含んでもよい。例えば、本発明は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６に記載されるアミノ酸配列を含むが、かかる変異の一つ以上を有する、免疫グロブリン軽鎖（もしくはＶＬ）バリアント、および／または配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４に記載されるアミノ酸配列を含むが、かかる変異の一つ以上を有する、免疫グロブリン重鎖（もしくはＶＨ）バリアントを含む、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質を含む。本発明の実施形態では、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質は、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含み、かかるＣＤＲの一つ以上（例えば、１もしくは２もしくは３）が、かかる変異（例えば、保存的置換）の一つ以上を有する、免疫グロブリン軽鎖バリアント、および／またはＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含み、かかるＣＤＲの一つ以上（例えば、１もしくは２もしくは３）が、かかる変異（例えば、保存的置換）の一つ以上を有する、免疫グロブリン重鎖バリアントを含む。
【００６６】
本発明の実施形態はまた、具体的に本明細書に記載の対応するＶＨ、ＶＬ、ＨＣまたはＬＣと７０％以上（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％もしくは９９％）の全アミノ酸配列同一性または類似性を有するバリアントアミノ酸配列を含む、免疫グロブリンＶＨおよびＶＬ；またはＨＣおよびＬＣを含む、抗原結合タンパク質、例えば、抗ＩＬ３６Ｒ抗体およびその抗原結合フラグメントを含むが、かかる免疫グロブリンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３は、バリアントではなく、具体的に本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。したがって、かかる実施形態では、バリアント抗原結合タンパク質内のＣＤＲは、それ自体はバリアントではない。
【００６７】
例えば、本明細書に記載の免疫グロブリン鎖の「保存的に修飾されたバリアント」または「保存的置換」は、バリアントを指し、類似の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造および剛性など）を有する他のアミノ酸を有するポリペプチドにおけるアミノ酸の一つ以上の置換が存在する。そのような変化は、抗体またはフラグメントの生物学的活性を著しく破壊することなく、頻繁になされ得る。当業者は、概して、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換が、生物学的活性を実質的に変えないことを認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら、（１９８７年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ、Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，２２４頁（第４編））を参照されたい。さらに、構造的または機能的に類似のアミノ酸の置換は、生物活性を著しく破壊する可能性が低い。本発明は、かかる保存的に修飾されたバリアント免疫グロブリン鎖を含む抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質を含む。
【００６８】
類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、Ｇｏｎｎｅｔら、（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３  ４５において開示されるＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。
【００６９】
例えば、バリアント免疫グロブリン鎖を含む、本明細書に記載される抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質は、以下の特性：
・  ヒトＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）（例えば、ｍｙｃ−ｍｙｃ−Ｈｉｓ６タグに融合された）に、例えば、２５℃で、約２．１８ｎＭ〜約１３．９ｎＭのＫＤで、または例えば、３７℃で、約４．２５ｎＭ〜約２９．５ｎＭのＫＤで結合する；
・  カニクイザルＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）（例えば、ｍｙｃ−ｍｙｃ−Ｈｉｓ６タグに融合された）に、例えば、２５℃で、約７．８７ｎＭ〜約３４．４ｎＭのＫＤで、または例えば、３７℃で、約１４．４ｎＭ〜約５８．２ｎＭのＫＤで結合する；
・  ヒトＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）（例えば、マウスＩｇＧ２ａに融合された）に、例えば、２５℃で、約１７３ｐＭ〜約５．７９ｎＭのＫＤで、または例えば、３７℃で、約２０５ｐＭ〜約２８．７ｎＭのＫＤで結合する；
・  ヒトＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）（例えば、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃタグと共に発現されたＩＬ１ＲＡｃＰ細胞外ドメインに融合された）に、例えば、２５℃で、約２１２ｐＭ〜約１４ｎＭのＫＤで、または例えば、３７℃で、約２６４ｐＭ〜約４０．９ｎＭのＫＤで結合する；
・  ＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）への結合について、以下の抗ＩＬ３６Ｒ抗体：Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８Ｐおよび／またはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２の一つ以上と競合する、任意選択で、但し、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８Ｐおよび／またはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２と競合する、かかる抗ＩＬ３６Ｒ抗体またはフラグメントは、抗体ＡＰＥ３７９８；ＡＰＥ４０８６；ＡＰＥ５１２５／ＡＰＥ５１００；ＡＰＥ５２１６；ＡＰＥ５２８１；ＡＰＥ５２１４／ＡＰＥ４８８１；ＡＰＥ５２８０；ＡＰＥ５２５７；ＡＰＥ５２５８／ＡＰＥ５０７６；ＡＰＥ５２１２；ＡＰＥ５２１３／５０６６；ＡＰＥ５２１１；ＡＰＥ５２１７／ＡＰＥ５０６０；ＡＰＥ３８４９；ＡＰＥ３８５０；ＡＰＥ５６００；ＡＰＥ５５９８；ＡＰＥ５６２７；ＡＰＥ６０６４；ＡＰＥ６０６０；ＡＰＥ６１５７；ＡＰＥ６１５５／ＡＰＥ６９１７；ＡＰＥ６１９４；ＡＰＥ３８４７；ＡＰＥ５７１３；ＡＰＥ６０８３；ＡＰＥ６９０３／ＡＰＥ７２４７；ＡＰＥ６９０４；および／もしくはＡＰＥ６９０７（例えば、ＡＰＥ６１５５）あるいはＣＤＲもしくはその可変領域を含む抗原結合フラグメントでも抗原結合タンパク質でもない（国際公開第２０１６／１６８５４２号を参照）；
・  約１×１０−１０Ｍ〜７×１０−９ＭのＩＣ５０で、ＩＬ−１ＲＡｃＰならびにｈＩＬ−３６α、ｈＩＬ−３６β、および／またはｈＩＬ−３６γのようなリガンドの存在下で、ＩＬ−３６Ｒ（例えば、ヒトまたはカニクイザル）によるＮＦκＢの活性化を遮断し、例えば、ＮＦκＢは、例えば、ＮＦκＢ応答エレメント（５×）−ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰを含有する、例えば、ＨＥＫ２９３のような宿主細胞にある；
・  例えば、かかる抗原結合タンパク質で治療されていない対象と比較して、例えば、化学的に誘導された皮膚炎症（例えば、イミキモド誘導性）に罹患している対象における、例えば、ヒトＤＩＴＲＡ（インターロイキン３６受容体アンタゴニストの欠損）疾患の症状を示すマウスのようなマウスにおいて、皮膚炎症（例えば、慢性もしくは急性）、または皮膚の厚さもしくは総病理スコアを予防あるいは改善するか、あるいは炎症誘導性サイトカインレベル（例えば、ＫＣ−ＧＲＯ、ＩＬ６、ＩＬ１ｂおよび／またはＴＮＦアルファ）を低減し、疾患は、例えば、Ｍａｒｒａｋｃｈｉら、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３６−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｐｕｓｔｕｌａｒ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６５：６２０〜６２８（２０１１年）に記載されている；および／または
・  例えば、かかる抗原結合タンパク質で治療されていない対象と比較して、かかる大腸炎または結腸炎を有する対象において、例えば、ＤＩＴＲＡマウスのようなマウスにおいて、例えば、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）もしくはオキサゾロンにより誘導された、大腸炎または結腸炎、例えば、化学的に誘導された大腸炎または結腸炎を予防または改善するか、あるいはＬＣＮ２ポリペプチドの糞便レベルを低減する；
・  配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むＩＬ３６Ｒポリペプチドの残基（ａ）１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９および／もしくは１１６〜１２２、ならびに／または（ｂ）２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／もしくは２７１〜２７６を、結合したとき、ペプシンおよび／もしくはプロテアーゼＸＩＩ（例えば、アスペルギルス・サイトイ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓａｉｔｏｉ）由来）の消化ならびに／または重水素（例えば、Ｄ２Ｏ）の存在かでの重水素化から保護する；＊
・  ＩＬ３６Ｒ、例えば、そのＩＬ１ＲＬ２サブユニットに、配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むＩＬ３６Ｒポリペプチドの残基１１３〜１１９、１１３〜１２２、１１６〜１１９、１１６〜１２２、２６４〜２７１、２６７〜２７１、２６８〜２７１、２６８〜２７６、２６８〜２７７および／または２７１〜２７６で結合する；＊
・  ＩＬ３６ＲのドメインＩＩに、例えば、約８０．０、８０．１、８１．０または８１．５％のカバー度で結合する；
・  アミノ酸配列ＹＫＱＩＬＨＬＧＫＤ（配列番号２２９）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１２２）および／またはＧＶＥＴＨＶＳＦＲＥＨＮＹＬ（配列番号２３０）（配列番号２２７のアミノ酸２６４〜２７７）を含むポリペプチドに結合する；
・  例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ表皮角化細胞、腸の筋線維芽細胞および／またはＣＤ１４＋単球におけるＩＬ３６α、ＩＬ３６βおよび／またはＩＬ３６γ（例えば、濃度約１０ｎＭ）を、約１、２、３、４、５もしくは６ｎＭまたは１〜６ｎＭのＩＣ５０で阻害する；および／または
・  例えば、シルドアッセイフォーマットで測定される、ＩＬ３６Ｒによる、ＮＦκＢ（例えば、ＨＥＫ２９３のような細胞におけるＮＦκＢ応答エレメント（５×）−ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰレポーター）のＩＬ３６α、ＩＬ３６βおよび／またはＩＬ３６γ介在性活性化を競合的に阻害する、の一つ以上を示し得る。
＊は、配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むタグ付されたＩＬ３６Ｒポリペプチド  において記載されるものに対応する残基で、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ９ＨＢ２９の元で記載される、天然のＩＬ３６Ｒ（ＩＬ１−ＲＬ２）に結合する抗原結合タンパク質を含む。以下を参照：
１１３〜１１９：ＹＫＱＩＬＨＬ（配列番号２２８）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１１９）；
１１３〜１２２：ＹＫＱＩＬＨＬＧＫＤ（配列番号２２９）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１２２）；
１１６〜１１９：ＩＬＨＬ（配列番号２３１）（配列番号２２７のアミノ酸１１６〜１１９）；
１１６〜１２２：ＩＬＨＬＧＫＤ（配列番号２３２）（配列番号２２７のアミノ酸１１６〜１２２）；
２６４〜２７１：ＧＶＥＴＨＶＳＦ（配列番号２３３）（配列番号２２７のアミノ酸２６４〜２７１）；
２６７〜２７１：ＴＨＶＳＦ（配列番号２３４）（配列番号２２７のアミノ酸２６７〜２７１）；
２６８〜２７１：ＨＶＳＦ（配列番号２３５）（配列番号２２７のアミノ酸２６８〜２７１）；
２６８〜２７６：ＨＶＳＦＲＥＨＮＬ（配列番号２３６）（配列番号２２７のアミノ酸２６８〜２７６）；
２６８〜２７７：ＨＶＳＦＲＥＨＮＬＹ（配列番号２３７）（配列番号２２７のアミノ酸２６８〜２７７）；
２７１〜２７６：ＦＲＥＨＮＬ（配列番号２３８）（配列番号２２７のアミノ酸２７１〜２７６）。
ヒトＩＬ３６Ｒ（ＩＬ１ＲＬ２）において以下で強調される残基を参照のこと：
MTGLVSLSYF  PLSTRSCALQ  SCRQPGLGMW  SLLLCGLSIA  LPLSVTADGC  KDIFMKNEIL
SASQPFAFNC  TFPPITSGEV  SVTWYKNSSK  IPVSKIIQSR  IHQDETWILF  LPMEWGDSGV
YQCVIKGRDS  CHRIHVNLTV  FEKHWCDTSI  GGLPNLSDEY  KQILHLGKDD  SLTCHLHFPK
SCVLGPIKWY  KDCNEIKGER  FTVLETRLLV  SNVSAEDRGN  YACQAILTHS  GKQYEVLNGI
TVSITERAGY  GGSVPKIIYP  KNHSIEVQLG  TTLIVDCNVT  DTKDNTNLRC  WRVNNTLVDD
YYDESKRIRE  GVETHVSFRE  HNLYTVNITF  LEVKMEDYGL  PFMCHAGVST  AYIILQLPAP
DFRAYLIGGL  IALVAVAVSV  VYIYNIFKID  IVLWYRSAFH  STETIVDGKL  YDAYVLYPKP
HKESQRHAVD  ALVLNILPEV  LERQCGYKLF  IFGRDEFPGQ  AVANVIDENV  KLCRRLIVIV
VPESLGFGLL  KNLSEEQIAV  YSALIQDGMK  VILIELEKIE  DYTVMPESIQ  YIKQKHGAIR
WHGDFTEQSQ  CMKTKFWKTV  RYHMPPRRCR  PFPPVQLLQH  TPCYRTAGPE  LGSRRKKCTLTTG
（配列番号１１７）。
【００７０】
本発明は、任意の検出可能な程度までＩＬ３６Ｒの活性（例えば、ＩＬ３６リガンド結合）を阻害する分子を含む、「中和」または「アンタゴニスト」抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを含む。
【００７１】
「Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ」、「Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ」、「Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ」、「Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ」、「Ｈ４Ｈ１４７５８Ｐ」および「Ｈ４Ｈ１４７６０Ｐ２」は、それぞれ、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１３８、１５４，１７０、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０または２２４の免疫グロブリン重鎖もしくはその可変領域（ＶＨ）（またはそのバリアント）；およびそれぞれ、１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１４６、１６２、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２または２２６の免疫グロブリン軽鎖もしくはその可変領域（ＶＬ）（またはそのバリアント）を含むか；あるいはそのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ１（もしくはそのバリアント）、ＣＤＲ−Ｈ２（もしくはそのバリアント）およびＣＤＲ−Ｈ３（もしくはそのバリアント））を含む重鎖またはＶＨ、および／あるいはそのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１（もしくはそのバリアント）、ＣＤＲ−Ｌ２（もしくはそのバリアント）およびＣＤＲ−Ｌ３（もしくはそのバリアント））を含む軽鎖またはＶＬを含む、抗原結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント（多特異性抗原結合タンパク質を含む）を指し、例えば、免疫グロブリン鎖、可変領域および／またはＣＤＲは、以下で記載される特定のアミノ酸配列を含む。本発明の実施形態では、ＶＨは、ＩｇＧ定常重鎖ドメイン（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）に結合され、および／またはＶＬは、ラムダまたはカッパ定常軽鎖ドメインに結合される。
【００７２】
本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、本明細書に記載のアミノ酸配列ならびに
抗体またはフラグメントに対する細胞およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳後修飾を含む免疫グロブリン鎖を含む。例えば、本発明は、本明細書に記載の重鎖ならびに／または軽鎖のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２および／もしくはＣＤＲ−Ｌ３）を含むＩＬ３６Ｒに特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに一つ以上のアスパラギン、セリンおよび／またはトレオニン残基が、グリコシル化され、一つ以上のアスパラギン残基が、脱アミド化され、一つ以上の残基（例えば、Ｍｅｔ、Ｔｒｐおよび／またはＨｉｓ）が、酸化され、Ｎ末端のグルタミンが、ピログルタミン酸塩（ピロＥ）であり、および／またはＣ末端のリジンが、欠落している、抗体およびフラグメントを含む。
【００７３】
本発明は、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２を含む、容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば、キャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空穴針またはシリンジシリンダを有する）を提供する。
【００７４】
本発明はまた、ＩＬ３６Ｒに特異的に結合する一つ以上の抗原結合タンパク質（例えば、抗体または抗原結合フラグメント）、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰもしくはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２、またはその医薬組成物を含む注射装置を提供する。注射装置は、キット内に包装されてもよい。注射装置は、物質を対象の身体内に非経口経路、例えば、筋肉内、皮下または静脈内を介して導入する装置である。例えば、注射装置は、例えば、注入されるべき流体（例えば、抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を含む）を保持するためのシリンダーまたはバレル、流体の注入のための皮膚および／または血管を貫通するための針を含むシリンジ（例えば、自動注射器のような、医薬組成物が既に充填された）、ならびに流体をシリンダーから針の穴を通って押し出すためのプランジャーであってもよい。
【００７５】
本発明は、抗原結合タンパク質を対象（例えば、ヒト）の体内に、例えば、非経口的に導入する工程を含む、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２を対象に投与する方法をさらに提供する。例えば、方法は、対象の体をシリンジの針で穿刺する工程、抗原結合タンパク質を対象の体内、例えば、対象の静脈、動脈、腫瘍、筋組織または皮下に注射する工程を含む。
ヒト抗体の調製
【００７６】
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、当該技術分野で知られている。任意のかかる公知の方法が、ヒトＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）に特異的に結合するヒト抗体を作製するために、本発明の背景で使用され得る。本発明の特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２ポリペプチドもしくはその免疫原性フラグメント）、または生の弱毒化もしくは不活化ウイルス、またはタンパク質もしくはそのフラグメントをコードするＤＮＡで免疫されたマウスから取得される。あるいは、ＩＬ３６Ｒは、標準的な生化学的技術を使用して作製されてもよく、改変され、免疫原として使用されてもよい。本発明の特定の実施形態では、免疫原は、ＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）ポリペプチドワクチンであってもよい。特定の実施形態では、一つ以上の追加免疫注射が投与されてもよい。特定の実施形態では、免疫原は、大腸菌、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような他の真核細胞もしくは哺乳類細胞において発現される組み換えＩＬ３６Ｒポリペプチド（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）であり得る。
【００７７】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照）またはモノクローナル抗体を生成するための任意の他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＩＬ３６Ｒに対する高親和性キメラ抗体が、最初に単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域座に操作可能に結合されたヒト重鎖可変領域およびヒト軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスを生成することを伴う。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に結合される。次に、完全ヒト抗体を発現することができる細胞においてＤＮＡが発現される。
【００７８】
概して、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに対象の抗原を負荷し、抗体を発現するマウスからリンパ細胞（Ｂ細胞など）が回収される。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合させて不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し得、対象の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するためにかかるハイブリドーマ細胞株が、スクリーニングおよび選択される。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域に結合されてもよい。かかる抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞において産生されてもよい。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離されてもよい。
【００７９】
まず、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体が、単離される。抗体は、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付けられ、選択される。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域で置換され、本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型または修飾されたＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４が生成される。選択された定常領域は、特定の用途に応じ変動し得る一方、高親和性抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に存在する。
Ｆｃバリアントを含む抗ＩＬ３６Ｒ抗体
【００８０】
本発明の特定の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強または減少させる一つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントが提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域に変異を含む抗ＩＬ３６Ｒ抗体を含み、変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲のエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。かかる変異は、動物に投与されたときに抗体の血清半減期の増加をもたらし得る。かかるＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における修飾、または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、またはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４ＦまたはＮ４３４Ｙ］）における修飾、あるいは２５０位および／もしくは４２８位における修飾、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾が挙げられる。一実施形態では、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、ならびに３０７および／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆおよび／または３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、修飾は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
【００８１】
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａおよび４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される変異の一つ以上のペアまたは群を含む、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを含む。
【００８２】
前述のＦｃドメイン変異の任意の可能性のある組み合わせを含む、本明細書に記載のＶＨおよび／またはＶＬを含む、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメントは、本発明の範囲内とみなされる。
【００８３】
本発明はまた、本明細書に記載のＶＨおよびキメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含み、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、抗体または抗原結合フラグメントを含み、キメラＣＨ領域は、一つより多くの免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域からもたらされたセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部または全部と組み合わせた、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部または全部を含むキメラＣＨ領域を含んでもよい。特定の実施形態によると、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けによる位置２２８〜２３６のアミノ酸残基）と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けによる位置２１６〜２２７のアミノ酸残基）を含んでもよい。特定の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１上部ヒンジまたはヒトＩｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基およびヒトＩｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。本明細書において説明されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、特定の実施形態では、抗体の治療特性または薬物動態学的特性に負に影響を与えることなく修飾Ｆｃエフェクター機能を呈する。（例えば、国際公開第２０１４／０２２５４０号を参照のこと）。
多特異性抗原結合タンパク質
【００８４】
本発明は、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびにその使用方法およびかかる抗原結合タンパク質を作製する方法を含む。用語「抗ＩＬ３６Ｒ」抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２由来の抗原結合ドメイン）に特異的に結合する少なくとも一つの第一の抗原結合ドメインおよび異なる抗原または第一の抗原結合ドメイン（例えば、ＩＬ２３−ｐ１９、ＩＬ１２／ＩＬ２３−ｐ４０、ＴＮＦアルファ、ＩＬ−２２、ＭＡＤＣＡＭ、ａ４ｂ７、ＣＣＲ９、および／またはＣＣＲ６）のものと異なる、ＩＬ３６Ｒにおけるエピトープに結合する少なくとも一つの第二の抗原結合ドメインを含む多特異性（例えば、二重特異性または二重パラトープ）分子を含む。本発明の実施形態では、第一および第二のエピトープは、重複する。本発明の別の実施形態では、第一および第二のエピトープは、重複しない。
【００８５】
「Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２」；「Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２」；「Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２」；「Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２」；「Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ」；「Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ」；「Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ」；「Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２」；「Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２」；「Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ」；「Ｈ４Ｈ１４７５８Ｐ」または「Ｈ４Ｈ１４７６０Ｐ２」は、それぞれ、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２のＨＣＤＲおよびＬＣＤＲ、ＶＨおよびＶＬ、またはＨＣおよびＬＣ、ならびに異なるエピトープに結合する一つい上の抗原結合ドメインを含む、多特異性分子、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを含む。
【００８６】
本発明の実施形態では、多特異性分子に含まれ得るＩＬ３６Ｒ（例えば、ＩＬ１ＲＬ２）に特異的に結合する抗原結合ドメインは、
（１）
（ｉ）Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰおよびＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２から選択される免疫グロブリン重鎖由来のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、および
（ｉｉ）それぞれ、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰおよびＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２から選択される免疫グロブリン重鎖由来のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列；
または
（２）
（ｉ）Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰおよびＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；および
（ｉｉ）それぞれ、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰおよびＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列；
および
異なるエピトープに結合する一つ以上の抗原結合ドメインを含む。
【００８７】
本発明の実施形態では、多重特異性抗体またはフラグメントは、例えば、第一および／または第二の抗原結合ドメインと同一であるか、または異なっている、二つより多くの異なる結合特異性（例えば、三特異性分子）、例えば、一つ以上の追加の抗原結合ドメインを含む。
【００８８】
本発明の一実施形態では、二重特異性抗原結合フラグメントは、第一のエピトープ（例えば、ＩＬ３６Ｒ）についての結合特異性を有する、第一のｓｃＦｖ（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰおよびＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２のＶＨおよびＶＬを含む）および第二の異なるエピトープについての結合特異性を有する、第二のｓｃＦｖを含む。例えば、本発明の実施形態では、第一および第二のｓｃＦｖは、リンカー、例えばペプチドリンカー（例えば、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７７）（式中、ｎは、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である）のようなＧＳリンカー）と連結される。
【００８９】
他の二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰおよびＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２の重鎖および軽鎖ＣＤＲ、ならびに異なるエピトープに結合する別の抗体を含む、二重特異性ＩｇＧ抗体のＦ（ａｂ）２を含む。
免疫複合体
【００９０】
本発明は、別の部分、例えば、治療用部分（「免疫複合体」）にコンジュゲートされた、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを包含する。本発明の実施形態では、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、本明細書に記載のさらなる治療剤のいずれかにコンジュゲートされる。本明細書で使用される場合、用語「免疫複合体」は、別の抗原結合タンパク質、放射性物質、レポーター部分、酵素、ペプチド、タンパク質または治療剤に化学的または生物学的に結合された、抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメントを指す。
治療方法および予防方法
【００９１】
本発明は、かかる治療または予防を必要とする治療上有効量の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）を対象（例えば、ヒト）に投与することにより、ＩＬ−３６Ｒ介在性疾患を治療または予防する方法を提供する。
【００９２】
「治療する」または「治療すること」は、ＩＬ３６Ｒ介在性疾患の一つ以上の兆候および／または症状および／または臨床徴候が退行するか、または除去され、および／またはその進行が阻害される（例えば、対象における疾患が、安定化されるか、低減されるか、または除去される）ように、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）を、ＩＬ３６Ｒ介在性疾患を有する対象に投与することを意味する。
【００９３】
ＩＬ３６Ｒ介在性疾患を「予防すること」は、対象の身体における疾患の所見前に、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）を対象に投与することを意味する。
【００９４】
インターロイキンＩＬ−３６ＲＮは、ＩＬ−３６ＲでのＩＬ−３６アルファ、ＩＬ−３６ベータおよびＩＬ−３６ガンマの炎症促進性シグナルに拮抗するＩＬ−１サイトカインファミリーメンバーである。
【００９５】
ＩＬ−３６Ｒ仲介性疾患は、例えば、ＩＬ３６Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−３６ＲＮ）の欠損に起因する、ＩＬ−３６Ｒの活性（例えば、ＩＬ３６γ、ＩＬ３６γおよび／またはＩＬ３６γのようなリガンドの受容体結合によるＮＦκＢおよびＭＡＰキナーゼを介した下流の炎症シグナル伝達の活性化）により引き起こされるか、または悪化する任意の疾患である。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮにおける変異は、ＩＬ−３６Ｒ仲介性疾患の原因となる。かかる疾患の例は、自己免疫性障害および／または炎症性障害である。本発明の実施形態では、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質で治療されるＩＬ３６Ｒ介在性疾患は、炎症性障害、自己免疫障害、インターロイキンＩＬ−３６受容体アンタゴニスト（ＤＩＴＲＡ）症候群の欠損、疱疹状膿痂疹、肢端皮膚炎、皮膚好中球性膿疱性疾患、乾癬、膿疱性疾患、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ、例えば、家族性または孤発性）、尋常性乾癬／尋常性乾癬、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰＰ）、掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）、大腸炎、炎症性腸疾患、クローン病、化学誘導性大腸炎、炎症、気道炎症（例えば、好中球性気道炎症、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）または喘息）、関節の炎症（例えば、強直性脊椎炎、関節リウマチまたは乾癬性関節炎）、腎臓の炎症、円形脱毛症、皮膚炎症（例えば、化学的に誘導された皮膚炎症、乾癬、膿疱性乾癬、全身性膿疱性乾癬、掌板膿疱症、掌足底膿疱性乾癬、尋常性乾癬または乾癬性皮膚病変）、表皮肥厚、過角化症、キンドラー症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ネフローゼ症候群、ＡＮＣＡ（抗好中球細胞質抗体）関連血管障害、細管間質性病変および糸球体腎炎である。
【００９６】
炎症性障害は、健康な組織の破壊を引き起こし得る制御不能または望ましくない炎症により特徴付けられる障害である。
【００９７】
自己免疫性障害は、人の免疫システムが人自身の身体を誤って攻撃する状態である。
【００９８】
疱疹状膿疱（ＩＨ）は、妊娠の希少な皮膚症の一つであり、これは現在、汎発性膿疱性乾癬の形態と考えられている。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮにおける変異は、ＩＨの原因である。
【００９９】
肢端皮膚炎は、例えば、３か月〜１５歳の小児に影響し得る皮膚病態であり、身体上の痒みのある赤色または紫色の水疱、腹部膨満、発熱、および腫脹したリンパ節の痛みにより特徴付けられる。肢端皮膚炎の原因はウイルスであり得る。ＩＬ−３６受容体アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−３６Ｒａ）の変異は、ＧＰＰおよび連続性肢端皮膚炎を有する患者のうち高率で存在する。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮの変異は、肢端皮膚炎の原因である。
【０１００】
乾癬は、分厚く赤く乾燥した皮膚の痒みまたは痛みである、皮膚プラークを引き起こす自己免疫性疾患である。乾癬の最も一般的な形態は、尋常性乾癬（尋常性乾癬）であり、膝、肘、頭皮および体幹を含む、皮膚の任意の領域上に出現し得る、十分に定義された赤色の隆起した皮膚のプラークにより特徴付けられる。プラーク上部の淡い銀白色の蓄積は、鱗屑と呼ばれ、死滅した皮膚細胞から構成される。この鱗屑は崩れてきて、プラークから絶えず脱落する。皮膚症状は、疼痛、痒みおよびひび割れを含む。
【０１０１】
汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）は、重篤な形態の乾癬である。ＧＰＰを有する個人は、通常、皮膚の広い部分が赤くなり、炎症を起こし、小さな膿が充満した水疱（膿疱）を発症するエピソードを繰り返す。ＧＰＰを有する対象の一部は、プラークに罹患している。皮膚の問題は、発熱、極度の疲労（疲労）、筋力低下、増加した数の白血球、および全身の炎症（全身性炎症）の他の兆候を伴い得る。ＩＬ−３６サイトカインは、ＧＰＰの発症において役割を果たすようである。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮにおける変異は、ＧＰＰの原因である。
【０１０２】
掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰＰ；４Ｐ）は、皮膚の手掌および足底表面に生じるプラークおよび膿疱により特徴付けられる限局性膿疱性乾癬の形態である。ＰＰＰＰは、ＩＬ−３６Ｒアンタゴニスト機能における異常を導くホモ接合性または化合物ヘテロ接合性ＩＬ３６ＲＮ遺伝子変異と関連し得る。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮにおける変異は、ＰＰＰＰＰの原因である。
【０１０３】
掌蹠膿疱症（ＰＰＰ；３Ｐ）は、水疱様の膿疱を生じて、対象の手の手掌および対象の足の裏に現れる、免疫介在性障害である。一般に、ＰＰＰを有する対象は、プラークを患っていない。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮにおける変異は、ＰＰＰの原因である。
【０１０４】
インターロイキンＩＬ−３６受容体アンタゴニスト（ＤＩＴＲＡ）症候群の欠損は、ＩＬ３６ＲＮの変異により引き起こされる希少な常染色体劣性疾患である。ＤＩＴＲＡは、ＩＬ３６Ｒアンタゴニスト欠損に起因した、高熱、無力症、および全身性炎症に関連する再発性および重度の紅斑の汎発性膿疱性乾癬により特徴付けられる免疫欠損疾患に伴う希少な遺伝性自己炎症症候群である。乾癬性の爪の変化（例えば、点状おおよび爪甲状出血）ならびに魚介症は、場合により関連し得る。Ｍａｒｒａｋｃｈｉら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．３６５（７）：６２０〜６２８（２０１１年）を参照されたい。本発明の実施形態では、ＩＬ３６ＲＮの変異は、ＤＩＴＲＡの原因である。
【０１０５】
炎症性疾患は、対象の身体内の一つ以上の部位における異常な炎症により特徴付けられる状態である。自己免疫疾患は、対象自身の免疫系による対象の身体組織の異常な攻撃により特徴付けられる状態である。
【０１０６】
ＡＮＣＡ関連血管障害（ＡＡＶ）は、多発血管炎性肉芽腫症（旧称、ウェゲナー）、顕微鏡的多発血管炎、およびＥＧＰＡ／チャーグ・ストラウスを含む炎症性障害である。これらの状態は、血管の閉塞および腎臓の様な重要な器官への血流の減少につながる慢性炎症により特徴付けられる。
【０１０７】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、胃腸（ＧＩ）管の慢性炎症により特徴付けられる二つの状態（クローン病および潰瘍性大腸炎）を含む用語である。
【０１０８】
好中球性気道炎症は、肺への好中球の流入により仲介される気道の炎症である。好中球性気道炎症の兆候および症状は、喘息および喘鳴を含む。
【０１０９】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、肺からの気流の閉塞を引き起こす慢性炎症性肺疾患である。兆候および症状は、呼吸困難、咳、粘液（粘液）産生および喘鳴を含む。
【０１１０】
強直性脊椎炎（ＡＳ）は、脊椎の長期炎症（例えば、仙腸関節（ＳＩ）および軸骨格）により特徴付けられる疾患である。時間が経つにつれ、ＡＳは、脊椎の椎骨の一部を融合させ得る。症状は、腰と臀部の頭痛および硬直を含む。
【０１１１】
関節リウマチは、関節の炎症により特徴付けられる自己免疫性の状態である。症状は、圧痛、熱感、腫脹のある関節、関節の硬直、疲労、発熱および体重減少を含む。
【０１１２】
乾癬性関節炎は、乾癬を有する一部の人々に影響を及ぼす関節炎の形態である。症状は、晴れた指および爪先、足の痛み、腰の痛みを含み得る。
【０１１３】
円形脱毛症は、身体上の小さなはげパッチにより特徴付けられる斑点脱毛症である。
【０１１４】
表皮肥厚は、他の皮膚よりも黒いように見え得る、皮膚の脊柱層（髄細胞層）のびまん性の表皮肥厚（過形成）である。過角化症は、皮膚の外層の肥厚である。
【０１１５】
過角化症は、しばしば、日光からの刺激、化学物質または頻繁な摩擦もしくは圧力による皮膚の肥厚である。皮膚の肥厚は、典型的には、ケラチンと呼ばれる強固で保護的なタンパク質を含有する皮膚の外層で生じる。
【０１１６】
キンドラー症候群は、先天性の頭蓋皮膚水疱、感光性、進行性のポイキロデルマ、およびびまん性皮膚萎縮により特徴付けられる常染色体劣性遺伝性皮膚症である。口腔粘膜、歯肉、および消化管の頻繁な関与を伴う、粘膜徴候が一般的である。
【０１１７】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、自己免疫疾患である。この疾患では、身体の免疫系が、健康な組織を誤って攻撃する。ＳＬＥは、皮膚、関節、腎臓、脳、および他の器官に影響を及ぼし得る。
【０１１８】
腎症症候群は、対象の身体が、対象の尿における過剰なタンパク質を排出する、腎臓障害である。ネフローゼ症候群は、典型的には、老廃物よび過剰な水分を対象の血液から濾過する、腎臓における小さな血管の塊への損傷により引き起こされる。ネフローゼ症候群の症状は、特に足および足首の腫脹（浮腫）、泡状尿、体重増加（体液貯留による）、疲労および食欲喪失を含む。
【０１１９】
糸球体腎炎は、腎糸球体の炎症である。症状は、対象の尿における赤血球細胞由来のインク色またはコーラ様の色のついた尿（血尿）、泡状尿（タンパク尿に起因）、高い血圧（高血圧）、体液貯留（浮腫）を含む。
【０１２０】
ＩＬ３６Ｒ介在性疾患を治療または予防するための、有効または治療上有効用量の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体または抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）は、かかる徴候、兆候および／または症状の退行または軽減を誘導することにより、またはかかる徴候、兆候および／または症状の進行を阻害することにより、治療されうる対象における疾患の臨床徴候、兆候および／または症状の一つ以上を軽減するのに十分な抗体またはフラグメントの量を指す。投与量は、投与されるべき対象の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などによって変動し得る。本発明の実施形態では、例えば、成人のヒト対象において、ＩＬ３６Ｒ介在性疾患を治療または予防するための、有効用量または治療上有効量の本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１ｍｇ／ｋｇ以上、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇである。感染の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調節することができる。特定の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、初回用量で投与され、続いて、１回以上の二次用量が投与され得る。特定の実施形態では、初回用量に続き、初回の用量とほぼ同じか、またはより少ない量での第二または複数回の続く用量の投与であり、続く用量は、少なくとも１日〜３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または少なくとも１４週間あけられる。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、ウサギ）、好ましくは、ヒト、例えば、ＩＬ−３６Ｒ仲介性疾患の予防および／または治療を必要とするヒトを指す。対象は、ＩＬ−３６Ｒ仲介性疾患を有するか、またはかかる疾患を発症する素因を有し得る。本発明の実施形態では、対象は、ホモ接合性またはヘテロ接合性のＩＬ３６ＲＮ変異遺伝子型を有する。
【０１２２】
本発明は、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質をＩＬ３６Ｒ仲介性疾患を発症するリスクがある対象に投与する方法を包含する。例えば、本発明の実施形態では、疾患は、皮膚炎症性疾患または結腸炎症性疾患である。本明細書の実施例５は、皮膚炎症疾患が、イミキモドへの曝露および皮膚炎症症状の発症の前のＤＩＴＲＡ様マウスモデルにおいて予防できることを示した。本発明の実施形態では、ＩＬ３６Ｒ仲介性疾患（例えば、皮膚炎症）は、全ての病理スコア（本明細書において考察される）または皮膚におけるＫＣ−ＧＲＯ、ＩＬ−６、ＩＬ−１ベータまたはＴＮＦアルファのような炎症促進性サイトカインの存在における、任意の臨床上有意な炎症、例えば、皮膚炎症または炎症誘導性皮膚肥厚化の任意の増加の前に、対象への予防用量の抗原結合タンパク質の投与により予防される。本発明の実施形態では、ＩＬ３６Ｒ仲介性疾患を予防するための本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質の用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。
組み合わせおよび医薬組成物
【０１２３】
本発明は、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質および一つ以上の成分を含む組成物、ならびにその使用方法およびかかる組成物を作製する方法を提供する。
【０１２４】
抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）の医薬組成物を調製するために、抗原結合タンパク質は、医薬的に許容される担体または賦形剤と混合される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．（１９８４年）；Ｈａｒｄｍａｎら、（２００１年）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００年）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、およびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓら（編）（１９９３年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００年）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと。かかる組成物は、本発明の一部である。
【０１２５】
本発明の医薬組成物は、例えば、水、バッファー、安定剤、防腐剤、等張剤、非イオン性洗剤、抗酸化剤および／または他の雑多な添加剤の様な、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤および／または安定剤を含む。
【０１２６】
本発明の範囲は、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）を含む乾燥、例えば、凍結乾燥組成物、あるいは医薬的に許容される担体を含むが、水を実質的に欠くその医薬組成物を含む。
【０１２７】
本発明のさらなる実施形態では、本明細書において開示される、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）と関連して対象に投与される、さらなる治療剤は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；第５７編（２００２年１１月１日））に従い対象に投与される。
【０１２８】
抗原結合タンパク質またはその組成物の投与様式は、変動し得る。投与経路は、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口、筋肉内、皮下、皮内、髄内、くも膜下腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、ガス注入、局所的、皮膚、経皮または動脈内を含む。
【０１２９】
本発明は、タンパク質または医薬組成物またはその組み合わせ対象の身体に導入する工程を含む、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）を対象に投与する方法を提供する。例えば、本発明の実施形態では、方法は、対象の身体を、例えば、シリンジの針で穿刺する工程、および抗原結合タンパク質または医薬組成物またはその組み合わせを、対象の身体、例えば、対象の静脈、動脈、腫瘍、筋肉組織または皮下に注射する工程を含む。
【０１３０】
本発明は、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質のいずれか、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）、または医薬的に許容される担体またはその組み合わせを含む医薬組成物を含む、容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば、キャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空穴針またはシリンジシリンダを有する）を提供する。
【０１３１】
本発明は、一つ以上のさらなる治療剤と関連して、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２）を含む組み合わせを含む。抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質およびさらなる治療剤は、単一の組成物または別の組成物中にあり得る。例えば、本発明の実施形態では、さらなる治療薬は、抗炎症薬である。本発明の実施形態では、さらなる治療剤は、別の抗ＩＬ３５Ｒ抗原結合タンパク質、ＩＬ１７阻害剤、ＩＬ２３ｐ１９阻害剤、ＩＬ１２ｐ４０阻害剤、グセルクマブ、ウステキヌマブ、ブロダルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、抗ＴＮＦアルファ抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分のような免疫グロブリンに結合した一つ以上のヒトＴＮＦ受容体またはそのフラグメント、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト、デュピルマブ、サリルマブ、トシリズマブ、ゴリムマブ、アバタセプト、トファシチニブ、アバタセプト、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、イブプロフェン、ナプロキセン、アセトアミノフェン、アスピリン、セレコキシブ、シクロホスファミド、メトトレキサート、コルチコステロイド、コルチゾンまたはプレドニゾンである。
【０１３２】
さらなる治療剤と関連して、抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、Ｈ４Ｈ１４６９９Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７００Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７０９Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７２８Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７３２Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７３４Ｐ２；Ｈ４Ｈ１４７５７Ｐ；Ｈ４Ｈ１４７５８ＰまたはＨ４Ｈ１４７６０Ｐ２を投与することによる、当該治療または予防を必要とする対象におけるＩＬ−３６介在性疾患を治療または予防する方法は、本発明の一部である。
【０１３３】
「関連」という用語は、メトトレキサートのような別の薬剤と共に、成分である、本発明の抗ＩＬ３６Ｒ抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが、例えば、同時デリバリーのため、単一の組成物に、または二つ以上の組成物（例えば、各成分を含むキット）に別々に製剤化し得ることを示す。各構成要素は、他の成分が投与されるときとは異なる時に対象に投与することができ、例えば、各投与は、所定の期間に渡り間隔を空けて非同時（例えば、別々または順次）与えられてもよい。さらに、別個の構成要素は、同じ経路によりまたは異なる経路により対象に投与されてもよい。
【実施例】
【０１３４】
以下の実施例は、当業者に、
本発明の組成物を作製する方法および方法を使用する方法の完全な開示および説明を提供するために記載され、
本発明者が本発明とみなす範囲を限定することを意図するものではない。
発明者はその発明とみなす。
【０１３５】
実施例１：ＩＬ−３６Ｒに特異的に結合するヒト抗体の生成
【０１３６】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥマウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む、操作したマウス）を全長ＩＬ３６Ｒ（ＩＬ−１ＲＬ２）配列を含むＤＮＡ免疫原で免疫することにより、抗ＩＬ３６Ｒ抗体を得た。抗体免疫応答を、ＩＬ３６Ｒ特異的免疫アッセイによりモニタリングし、完全ヒト抗ＩＬ３６Ｒ抗体を単離し、精製した。本明細書に記載の通り生成した抗体のＶＨとＶＬの間の２種の典型的な比較、およびそれらのそれぞれの生殖細胞系列を、図１および図２に記載する。
【表１】
2021530229.tif 000002
配列番号１
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATACACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGTTATCAGTTGGA
ATAGTGATATCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAATAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGGATATAACTGGAACTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号２
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAIHWVRQAPGKGLEWVSVISWNSDIIGYADSVKGRFTVSRDNAKNSLY
LQMNSLRTEDTALYYCAKGYNWNFFDYWGQGTLVTVSS;
配列番号３
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号４
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号５
ATC  AGT  TGG  AAT  AGT  GAT  ATC  ATA;
配列番号６
I  S  W  N  S  D  I  I;
配列番号７
GCA  AAA  GGA  TAT  AAC  TGG  AAC  TTC  TTT  GAC  TAT;
配列番号８
A  K  G  Y  N  W  N  F  F  D  Y;
配列番号９
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTATCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAATGCAGCAAACA
GGGCCACTGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
A;
配列番号１０
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYNAANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK;
配列番号１１
CAG  AGT  GTT  AGC  AGC  TAC;
配列番号１２
Q  S  V  S  S  Y;
配列番号１３
AAT  GCA  GCA;
配列番号１４
N  A  A;
配列番号１５
CAG  CAG  CGT  AGC  AAC  TGG  CCT  CTC  ACT;
配列番号１６
Q  Q  R  S  N  W  P  L  T;
配列番号１７
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAACTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTAGTTGGA
ATAGTGATGTCATAGCCTATTCGGACTCTGTGAAGGGCCGCTTCACCATTTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGGGAACTGAGGACACGGCCTTATATTACTGTGCAAAAGGCCATAACTGGAACTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号１８
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQTPGKGLEWVSVISWNSDVIAYSDSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLGTEDTALYYCAKGHNWNFFDYWGQGTLVTVSS;
配列番号１９
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号２０
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号２１
ATT  AGT  TGG  AAT  AGT  GAT  GTC  ATA;
配列番号２２
I  S  W  N  S  D  V  I;
配列番号２３
GCA  AAA  GGC  CAT  AAC  TGG  AAC  TTC  TTT  GAC  TAT;
配列番号２４
A  K  G  H  N  W  N  F  F  D  Y;
配列番号２５
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGAGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAATGTAGCCAACA
GGGCCACAGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCGGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
A;
配列番号２６
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYNVANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISGLEP
EDFAVYFCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK;
配列番号２７
CAG  AGT  GTT  AGC  AGC  TAC;
配列番号２８
Q  S  V  S  S  Y;
配列番号２９
AAT  GTA  GCC;
配列番号３０
N  V  A;
配列番号３１
CAG  CAG  CGT  AGC  AAC  TGG  CCT  CTC  ACT;
配列番号３２
Q  Q  R  S  N  W  P  L  T;
配列番号３３
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATACACTGGGTCCGGCAATCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGTTATCAGTTGGA
ATAGTGATGTCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAGATGAATAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGGATATAACTGGAACTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号３４
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAIHWVRQSPGKGLEWVSVISWNSDVIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTALYYCAKGYNWNFFDYWGQGTLVTVSS;
配列番号３５
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号３６
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号３７
ATC  AGT  TGG  AAT  AGT  GAT  GTC  ATA;
配列番号３８
I  S  W  N  S  D  V  I;
配列番号３９
GCA  AAA  GGA  TAT  AAC  TGG  AAC  TTC  TTT  GAC  TAT;
配列番号４０
A  K  G  Y  N  W  N  F  F  D  Y;
配列番号４１
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTATCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAATGCAGCAAACA
GGGCCACTGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
A;
配列番号４２
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYNAANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK;
配列番号４３
CAG  AGT  GTT  AGC  AGC  TAC;
配列番号４４
Q  S  V  S  S  Y;
配列番号４５
AAT  GCA  GCA;
配列番号４６
N  A  A;
配列番号４７
CAG  CAG  CGT  AGC  AAC  TGG  CCT  CTC  ACT;
配列番号４８
Q  Q  R  S  N  W  P  L  T;
配列番号４９
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCAGTTATTAGTTGGA
ATAGTGATGTCATAGCCTATTCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTATATTACTGTACAAAAGGCCATAAGTGGAGCTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号５０
EVQLVESGGDLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSVISWNSDVIAYSDSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRTEDTALYYCTKGHKWSFFDYWGQGTLVTVSS;
配列番号５１
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号５２
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号５３
ATT  AGT  TGG  AAT  AGT  GAT  GTC  ATA;
配列番号５４
I  S  W  N  S  D  V  I;
配列番号５５
ACA  AAA  GGC  CAT  AAG  TGG  AGC  TTC  TTT  GAC  TAT;
配列番号５６
T  K  G  H  K  W  S  F  F  D  Y;
配列番号５７
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTATTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGACTCCTCATCTTTAATGTAGCCAACA
GGGCCACTGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
A;
配列番号５８
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIFNVANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK;
配列番号５９
CAG  AGT  ATT  AGC  AGC  TAC;
配列番号６０
Q  S  I  S  S  Y;
配列番号６１
AAT  GTA  GCC;
配列番号６２
N  V  A;
配列番号６３
CAG  CAG  CGT  AGC  AAC  TGG  CCT  CTC  ACT;
配列番号６４
Q  Q  R  S  N  W  P  L  T;
配列番号６５
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGCGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTAGCGACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTGGAA
ATGGTGGTGACACATACTACGGAGACTTCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGCATATTTCTGTGTGATAGATCTTGACTATTGGGGTCAGGGAAC
CCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号６６
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISGNGGDTYYGDFVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRGEDTAAYFCVIDLDYWGQGTLVTVSS;
配列番号６７
GGA  TTC  ACC  TTT  AGC  GAC  TAT  GCC;
配列番号６８
G  F  T  F  S  D  Y  A;
配列番号６９
ATT  AGT  GGA  AAT  GGT  GGT  GAC  ACA;
配列番号７０
I  S  G  N  G  G  D  T;
配列番号７１
GTG  ATA  GAT  CTT  GAC  TAT;
配列番号７２
V  I  D  L  D  Y;
配列番号７３
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGAAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCA
GAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAGGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTATTT
TAGGAGATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT
GATGATTTTGCTACTTATTACTGCCACCAGTATAATAGTTATTTGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAA
A;
配列番号７４
DIQMTQSPSTLSASEGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPRLLIYKASILGDGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQP
DDFATYYCHQYNSYLWTFGQGTKVEIK;
配列番号７５
CAG  AGT  ATT  AGT  AGC  TGG;
配列番号７６
Q  S  I  S  S  W;
配列番号７７
AAG  GCG  TCT;
配列番号７８
K  A  S;
配列番号７９
CAC  CAG  TAT  AAT  AGT  TAT  TTG  TGG  ACG;
配列番号８０
H  Q  Y  N  S  Y  L  W  T;
配列番号８１
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTGCTGATTACTATTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGATCCATCT
ATTATACTGGGAGTACTTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATCAATAGACACGTCTGAGAACCAGTTC
TCTTTGAAACTGACCTCTCTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGCGAGGAGGCTAACTGGGGATCCCA
CTTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号８２
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSADYYWSWIRQHPGKGLEWIGSIYYTGSTYYNPSLKSRLTISIDTSENQF
SLKLTSLTAADTAVYYCASEEANWGSHFDSWGQGTLVTVSS;
配列番号８３
GGT  GGC  TCC  ATC  AGC  AGT  GCT  GAT  TAC  TAT;
配列番号８４
G  G  S  I  S  S  A  D  Y  Y;
配列番号８５
ATC  TAT  TAT  ACT  GGG  AGT  ACT;
配列番号８６
I  Y  Y  T  G  S  T;
配列番号８７
GCG  AGC  GAG  GAG  GCT  AAC  TGG  GGA  TCC  CAC  TTT  GAC  TCC;
配列番号８８
A  S  E  E  A  N  W  G  S  H  F  D  S;
配列番号８９
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTGACAACTTTTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCATCTTACTACTGTCAACATAGTCACAGTGCCCATCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAA;
配列番号９０
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDNFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFASYYCQHSHSAHPITFGQGTRLEIK;
配列番号９１
CAG  AGC  ATT  GAC  AAC  TTT;
配列番号９２
Q  S  I  D  N  F;
配列番号９３
GCT  GCA  TCC;
配列番号９４
A  A  S;
配列番号９５
CAA  CAT  AGT  CAC  AGT  GCC  CAT  CCG  ATC  ACC;
配列番号９６
Q  H  S  H  S  A  H  P  I  T;
配列番号９７
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTAGTAATTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGAGACTGGAGTGGATTGGGAGTATCT
ATTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGACTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAATCAGTTC
TCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGAAGCAGCAGCTTTGACGCA
CTTTGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号９８
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSNYYWGWIRQPPGKRLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKTRVTISVDTSKNQF
SLKLTSVTAADTAVYYCAREEAAALTHFDFWGQGTLVTVSS;
配列番号９９
GGT  GGC  TCC  ATC  AGC  AGT  AGT  AAT  TAC  TAC;
配列番号１００
G  G  S  I  S  S  S  N  Y  Y;
配列番号１０１
ATC  TAT  TAT  AGT  GGG  AGC  ACC;
配列番号１０２
I  Y  Y  S  G  S  T;
配列番号１０３
GCG  AGA  GAG  GAA  GCA  GCA  GCT  TTG  ACG  CAC  TTT  GAC  TTC;
配列番号１０４
A  R  E  E  A  A  A  L  T  H  F  D  F;
配列番号１０５
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTTTGCTGCATCCAGTT
TACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACATAGTCACAGTTCCCATCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAA;
配列番号１０６
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIFAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQHSHSSHPITFGQGTRLEIK;
配列番号１０７
CAG  AGC  ATT  AGC  AAC  TAT;
配列番号１０８
Q  S  I  S  N  Y;
配列番号１０９
GCT  GCA  TCC;
配列番号１１０
A  A  S;
配列番号１１１
CAA  CAT  AGT  CAC  AGT  TCC  CAT  CCG  ATC  ACC;
配列番号１１２
Q  H  S  H  S  S  H  P  I  T;
配列番号１１３
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGG
CTGGTTATAACATAGACTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATGCGTGGATTCAGTTATGGTTT
CCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番１１４
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWAGYNIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTALYYCAKDMRGFSYGFPFDYWGQGTLVTVSS;
配列番号１１５
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号１１６
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号１１７
ATT  AAT  TGG  GCT  GGT  TAT  AAC  ATA;
配列番号１１８
I  N  W  A  G  Y  N  I;
配列番号１１９
GCA  AAA  GAT  ATG  CGT  GGA  TTC  AGT  TAT  GGT  TTC  CCC  TTT  GAC  TAC;
配列番号１２０
A  K  D  M  R  G  F  S  Y  G  F  P  F  D  Y;
配列番号１２１
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAA;
配列番号１２２
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK;
配列番号１２３
CAG  AGC  ATT  AGC  AGC  TAT;
配列番号１２４
Q  S  I  S  S  Y;
配列番号１２５
GCT  GCA  TCC;
配列番号１２６
A  A  S;
配列番号１２７
CAA  CAG  AGT  TAC  AGT  ACC  CCT  CCG  ATC  ACC;
配列番号１２８
Q  Q  S  Y  S  T  P  P  I  T;
配列番号１２９
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCGGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
TATTTTCAGTAACGCCTGGATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGCGTGGGTTGGCCGTATTAAAACCG
AAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTAAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGACTCAAAAAACACG
CTGTATCTGCAAATGAACAGCGTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACAGGGGGATACAGCTATGGTGACGA
TAGCAGCAGCTGGAACGAGGGCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号１３０
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFIFSNAWMNWVRQAPGKGLAWVGRIKTETDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNT
LYLQMNSVKTEDTAVYYCTGGYSYGDDSSSWNEGYYYYGMDVWGQGTTVTVSS;
配列番号１３１
GGA  TTT  ATT  TTC  AGT  AAC  GCC  TGG;
配列番号１３２
G  F  I  F  S  N  A  W;
配列番号１３３
ATT  AAA  ACC  GAA  ACT  GAT  GGT  GGG  ACA  ACA;
配列番号１３４
I  K  T  E  T  D  G  G  T  T;
配列番号１３５
ACA  GGG  GGA  TAC  AGC  TAT  GGT  GAC  GAT  AGC  AGC  AGC  TGG  AAC  GAG  GGC  TAC  TAC  TAC  TAC  GGT  ATG  GAC  GTC;
配列番号１３６
T  G  G  Y  S  Y  G  D  D  S  S  S  W  N  E  G  Y  Y  Y  Y  G  M  D  V;
配列番号１３７
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTCGTTGGA
ATGGTGGTAGTATAGGCTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAGTCCCTGCAT
CTGCAAATGAACAGTCTAAAAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATAGGCGATATTTTGACTGGTTT
TTATGGAGAATACGGAATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号１３８
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIRWNGGSIGYVDSVKGRFTISRDNAKKSLH
LQMNSLKTEDTALYYCAKDIGDILTGFYGEYGMDVWGQGTTVTVSS;
配列番号１３９
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号１４０
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号１４１
ATT  CGT  TGG  AAT  GGT  GGT  AGT  ATA;
配列番号１４２
I  R  W  N  G  G  S  I;
配列番号１４３
GCA  AAA  GAT  ATA  GGC  GAT  ATT  TTG  ACT  GGT  TTT  TAT  GGA  GAA  TAC  GGA  ATG  GAC  GTC;
配列番号１４４
A  K  D  I  G  D  I  L  T  G  F  Y  G  E  Y  G  M  D  V;
配列番号１４５
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGAAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACATTATCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA
A;
配列番号１４６
DIQMTQSPSSLSASEGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYIIPYTFGQGTKLEIK;
配列番号１４７
CAG  AGC  ATT  AGC  AGC  TAT;
配列番号１４８
Q  S  I  S  S  Y;
配列番号１４９
GCT  GCA  TCC;
配列番号１５０
A  A  S;
配列番号１５１
CAA  CAG  AGT  TAC  ATT  ATC  CCG  TAC  ACT;
配列番号１５２
Q  Q  S  Y  I  I  P  Y  T;
配列番号１５３
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGGTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAAGTGTTAGGTGGA
ATGGTGGTATTATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGACCTGAGGACACGGCCCTCTATTACTGTGCAAAAGATATAGGCGATGTTTTGACTGGTTA
TTATGGAGAATACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号１５４
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSSVRWNGGIIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRPEDTALYYCAKDIGDVLTGYYGEYGMDVWGQGTTVTVSS;
配列番号１５５
GGA  TTC  ACC  TTT  GAT  GAT  TAT  GCC;
配列番号１５６
G  F  T  F  D  D  Y  A;
配列番号１５７
GTT  AGG  TGG  AAT  GGT  GGT  ATT  ATA;
配列番号１５８
V  R  W  N  G  G  I  I;
配列番号１５９
GCA  AAA  GAT  ATA  GGC  GAT  GTT  TTG  ACT  GGT  TAT  TAT  GGA  GAA  TAC  GGT  ATG  GAC  GTC;
配列番号１６０
A  K  D  I  G  D  V  L  T  G  Y  Y  G  E  Y  G  M  D  V;
配列番号１６１
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCGCTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGTAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACATTTCCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA;
配列番号１６２
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIACRASQSITTYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYISPYTFGQGTKLEIK;
配列番号１６３
CAG  AGC  ATT  ACC  ACC  TAT;
配列番号１６４
Q  S  I  T  T  Y;
配列番号１６５
GCT  GCA  TCC;
配列番号１６６
A  A  S;
配列番号１６７
CAA  CAG  AGT  TAC  ATT  TCC  CCG  TAC  ACT;
配列番号１６８
Q  Q  S  Y  I  S  P  Y  T;
配列番号１６９
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTCAGTAATTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCGATTATATTATATG
ATGGAAGTAATCAACACTATGCAGATTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAATTCCAAAAACACGCTGTAT
CTTCAAATGAACAACCTGAGAGCTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGATCTTGATCTTTGGAGTGGTTATTA
TACAAACGGGGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;
配列番号１７０
QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSNYGIHWVRQAPGKGLEWVAIILYDGSNQHYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNNLRAEDTAVYYCARDLDLWSGYYTNGDGMDVWGQGTTVTVSS;
配列番号１７１
GGA  TTC  ACC  TTC  AGT  AAT  TAT  GGC;
配列番号１７２
G  F  T  F  S  N  Y  G;
配列番号１７３
ATA  TTA  TAT  GAT  GGA  AGT  AAT  CAA;
配列番号１７４
I  L  Y  D  G  S  N  Q;
配列番号１７５
GCG  AGA  GAT  CTT  GAT  CTT  TGG  AGT  GGT  TAT  TAT  ACA  AAC  GGG  GAC  GGT  ATG  GAC  GTC;
配列番号１７６
A  R  D  L  D  L  W  S  G  Y  Y  T  N  G  D  G  M  D  V;
本発明の抗原結合タンパク質の定常ドメインを含む、重鎖および軽鎖免疫グロブリンのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を以下に記載する。
H4H14699P2
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATACACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGTTATCAGTTGGA
ATAGTGATATCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAATAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGGATATAACTGGAACTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCA
GGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAAC
TCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGT
GACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACA
AGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTG
TTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGA
AGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGT
TCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAG
GTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTA
CACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCG
ACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGC
TCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA
TGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号179)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAIHWVRQAPGKGLEWVSVISWNSDIIGYADSVKGRFTVSRDNAKNSLY
LQMNSLRTEDTALYYCAKGYNWNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN
SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG
SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号180)
軽鎖ＤＮＡ
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTATCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAATGCAGCAAACA
GGGCCACTGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GT
(配列番号181)
軽鎖ポリペプチド
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYNAANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号182)
H4H14700P2
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAACTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTAGTTGGA
ATAGTGATGTCATAGCCTATTCGGACTCTGTGAAGGGCCGCTTCACCATTTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGGGAACTGAGGACACGGCCTTATATTACTGTGCAAAAGGCCATAACTGGAACTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCA
GGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAAC
TCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGT
GACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACA
AGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTG
TTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGA
AGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGT
TCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAG
GTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTA
CACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCG
ACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGC
TCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA
TGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号183)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQTPGKGLEWVSVISWNSDVIAYSDSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLGTEDTALYYCAKGHNWNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN
SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG
SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号184)
軽鎖ＤＮＡ
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGAGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAATGTAGCCAACA
GGGCCACAGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCGGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GT
(配列番号185)
軽鎖ポリペプチド
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYNVANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISGLEP
EDFAVYFCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号186)
H4H14706P2
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATACACTGGGTCCGGCAATCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGTTATCAGTTGGA
ATAGTGATGTCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAGATGAATAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGGATATAACTGGAACTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCA
GGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAAC
TCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGT
GACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACA
AGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTG
TTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGA
AGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGT
TCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAG
GTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTA
CACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCG
ACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGC
TCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA
TGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号187)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAIHWVRQSPGKGLEWVSVISWNSDVIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTALYYCAKGYNWNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN
SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG
SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号188)
軽鎖ＤＮＡ
【化１】
2021530229.tif 000003
(配列番号189)
軽鎖ポリペプチド
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYNAANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号190)
H4H14708P2
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCAGTTATTAGTTGGA
ATAGTGATGTCATAGCCTATTCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTATATTACTGTACAAAAGGCCATAAGTGGAGCTTCTTTGACTA
TTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCA
GGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAAC
TCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGT
GACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACA
AGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTG
TTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGA
AGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGT
TCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAG
GTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTA
CACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCG
ACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGC
TCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA
TGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号191)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGDLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSVISWNSDVIAYSDSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRTEDTALYYCTKGHKWSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN
SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG
SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号192)
軽鎖ＤＮＡ
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTATTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGACTCCTCATCTTTAATGTAGCCAACA
GGGCCACTGACATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GT
(配列番号193)
軽鎖ポリペプチド
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIFNVANRATDIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号194)
H4H14709P
重鎖ＤＮＡ
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGCGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTAGCGACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTGGAA
ATGGTGGTGACACATACTACGGAGACTTCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGCATATTTCTGTGTGATAGATCTTGACTATTGGGGTCAGGGAAC
CCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGA
GCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACC
AGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG
CAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCA
AATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCC
AAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCA
GTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACC
GTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGC
CTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATC
CCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGT
GGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTAC
AGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAA
CCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号195)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISGNGGDTYYGDFVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRGEDTAAYFCVIDLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT
SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKP
KDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKG
LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY
SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号196)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGAAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCA
GAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAGGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTATTT
TAGGAGATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT
GATGATTTTGCTACTTATTACTGCCACCAGTATAATAGTTATTTGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAA
ACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GT
(配列番号197)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSTLSASEGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPRLLIYKASILGDGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQP
DDFATYYCHQYNSYLWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号198)
H4H14728P
重鎖ＤＮＡ
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTGCTGATTACTATTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGATCCATCT
ATTATACTGGGAGTACTTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATCAATAGACACGTCTGAGAACCAGTTC
TCTTTGAAACTGACCTCTCTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGCGAGGAGGCTAACTGGGGATCCCA
CTTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGC
CCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTG
TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAG
CAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCA
AGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCA
GTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGT
GAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG
AGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTAC
AAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCC
ACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCT
ACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC
TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTC
CGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号199)
重鎖ポリペプチド
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSADYYWSWIRQHPGKGLEWIGSIYYTGSTYYNPSLKSRLTISIDTSENQF
SLKLTSLTAADTAVYYCASEEANWGSHFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTV
SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPS
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY
KCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD
SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号200)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTGACAACTTTTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCATCTTACTACTGTCAACATAGTCACAGTGCCCATCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTG
TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC
CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTA
CGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG
AGTGT
(配列番号201)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDNFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFASYYCQHSHSAHPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS
QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号202)
H4H14731P
重鎖ＤＮＡ
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTAGTAATTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGAGACTGGAGTGGATTGGGAGTATCT
ATTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGACTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAATCAGTTC
TCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGAAGCAGCAGCTTTGACGCA
CTTTGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGC
CCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTG
TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAG
CAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCA
AGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCA
GTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGT
GAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG
AGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTAC
AAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCC
ACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCT
ACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC
TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTC
CGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号203)
重鎖ポリペプチド
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSNYYWGWIRQPPGKRLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKTRVTISVDTSKNQF
SLKLTSVTAADTAVYYCAREEAAALTHFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTV
SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPS
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY
KCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD
SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号204)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTTTGCTGCATCCAGTT
TACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACATAGTCACAGTTCCCATCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTG
TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC
CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTA
CGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG
AGTGT
(配列番号205)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIFAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQHSHSSHPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS
QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号206)
H4H14732P2
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGG
CTGGTTATAACATAGACTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATGCGTGGATTCAGTTATGGTTT
CCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGG
CGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG
GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCT
CAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACA
CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCA
TCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGA
CGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGC
GGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAG
TACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGA
GCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCT
TCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTG
GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATG
CTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号207)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWAGYNIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTALYYCAKDMRGFSYGFPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT
VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGP
SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE
YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL
DSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号208)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GTTAG
(配列番号209)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIKTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号210)
H4H14734P2
重鎖ＤＮＡ
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCGGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
TATTTTCAGTAACGCCTGGATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGCGTGGGTTGGCCGTATTAAAACCG
AAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTAAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGACTCAAAAAACACG
CTGTATCTGCAAATGAACAGCGTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACAGGGGGATACAGCTATGGTGACGA
TAGCAGCAGCTGGAACGAGGGCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAG
CCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGC
CTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC
GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCT
ACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCA
CCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTC
CCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATG
GCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACC
GTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAA
AACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGA
ACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCG
GAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAA
GAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCC
TCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
(配列番号211)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFIFSNAWMNWVRQAPGKGLAWVGRIKTETDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNT
LYLQMNSVKTEDTAVYYCTGGYSYGDDSSSWNEGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC
LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP
PCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP
ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号212)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GTTAG
(配列番号213)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIKTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号214)
H4H14757P
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTCGTTGGA
ATGGTGGTAGTATAGGCTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAGTCCCTGCAT
CTGCAAATGAACAGTCTAAAAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATAGGCGATATTTTGACTGGTTT
TTATGGAGAATACGGAATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGG
TCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC
GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGG
ACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACA
AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTC
CTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTG
CGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA
AGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTG
AACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGG
GCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC
TGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACG
CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAA
TGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAT
GA
(配列番号215)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIRWNGGSIGYVDSVKGRFTISRDNAKKSLH
LQMNSLKTEDTALYYCAKDIGDILTGFYGEYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP
EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT
PPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号216)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGAAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACATTATCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA
ACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GT
(配列番号217)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASEGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYIIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号218)
H4H14758P
重鎖ＤＮＡ
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGGTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAAGTGTTAGGTGGA
ATGGTGGTATTATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGACCTGAGGACACGGCCCTCTATTACTGTGCAAAAGATATAGGCGATGTTTTGACTGGTTA
TTATGGAGAATACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGG
TCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC
GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGG
ACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACA
AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTC
CTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTG
CGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA
AGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTG
AACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGG
GCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC
TGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACG
CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAA
TGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAT
GA
(配列番号219)
重鎖ポリペプチド
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSSVRWNGGIIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRPEDTALYYCAKDIGDVLTGYYGEYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP
EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT
PPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号220)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCGCTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTACCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGTAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACATTTCCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA
ACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GT
(配列番号221)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIACRASQSITTYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYISPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号222)
H4H14760P2
重鎖ＤＮＡ
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTCAGTAATTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCGATTATATTATATG
ATGGAAGTAATCAACACTATGCAGATTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAATTCCAAAAACACGCTGTAT
CTTCAAATGAACAACCTGAGAGCTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGATCTTGATCTTTGGAGTGGTTATTA
TACAAACGGGGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGG
TCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC
GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGG
ACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACA
AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTC
CTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTG
CGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA
AGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTG
AACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGG
GCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC
TGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACG
CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAA
TGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAT
GA
(配列番号223)
重鎖ポリペプチド
QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSNYGIHWVRQAPGKGLEWVAIILYDGSNQHYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNNLRAEDTAVYYCARDLDLWSGYYTNGDGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP
EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT
PPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(配列番号224)
軽鎖ＤＮＡ
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGT
GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAG
GAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA
GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
GTTAG
(配列番号225)
軽鎖ポリペプチド
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIKTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ
ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号226)
【０１３７】
実施例２：ＨＥＫ２９３／Ｄ９（ＮＦκＢ−ルシフェラーゼ）／ｈＩＬ−３６ＲおよびＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ルシフェラーゼ／ｍｆＩＬ−３６Ｒ細胞を用いたバイオアッセイ
【０１３８】
ＩＬ−３６受容体（ＩＬ−３６Ｒ）は、サイトカインのＩＬ−１ファミリーのメンバーのサブセットであるＩＬ−３６ある、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、およびＩＬ−３６γの１回貫通型膜受容体であり、これらのリガンドに結合する際、その共受容体であるＩＬ−１Ｒ補助タンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）が動員され、ＮＦκＢおよびマイトジェン活性化キナーゼ経路に関与するシグナル伝達カスケードを誘導する（Ｓｉｍｓら、２０１０年）。完全長ヒトＩＬ−３６Ｒ（ｈＩＬ−３６Ｒ、アクセッション番号ＮＰ＿００３８４５．２のアミノ酸１〜５７５）またはカニクイザルＩＬ−３６Ｒ（ＭｆＩＬ−３６Ｒ）のいずれかを、ＨＥＫ２９３細胞株でルシフェラーゼレポーター［ＮＦκＢ応答エレメント（５×）−ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ］と共に安定的に発現するレポーター細胞株を使用して、ＩＬ−３６Ｒ活性化を介してＮＦκＢによる転写活性化を検出するバイオアッセイを開発した。ＩＬ−１ＲＡｃＰは、ＨＥＫ２９３細胞株で内在性に発現する。得られた安定な細胞株を、ＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６ＲおよびＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒと呼び、単離し、１０％ＦＢＳ、ＮＥＡＡ、ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、および５００μｇ／ｍＬ  Ｇ４１８を含有するＤＭＥＭ中で維持した。
【０１３９】
バイオアッセイについては、細胞を、０．１％ＦＢＳを添加したＯＰＴＩＭＥＭ中１０，０００細胞／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに播種し、次に、３７℃、５％ＣＯ２中で一晩インキュベーションした。翌日、リガンドの用量応答を決定するために、ヒトＩＬ−３６α（ｈＩＬ−３６α；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃６９９５／ＩＬ）、ヒトＩＬ−３６β（ｈＩＬ−３６β；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃６３３４−ＩＬ）、またはヒトＩＬ−３６γ（ｈＩＬ−３６γ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃６８３５−ＩＬ）を、１：３で連続希釈（１０ｎＭから０．０００２ｎＭまで）し、細胞に添加した。希釈緩衝液を含有するが、ＩＬ−３６リガンドを含有しない対照も、細胞の一つの試料に添加した。阻害を測定するために、抗体を、１：３で連続希釈（１００ｎＭ〜０．００２ｎＭ）し、抗体を含有しない対照試料を加え、細胞と共にプレインキュベーションし、続いて、一定濃度のｈＩＬ−３６α、ｈＩＬ−３６β、またはｈＩＬ−３６γを添加した。ＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞を用いた試験については、２０ｐＭ  ｈＩＬ−３６α、１５ｐＭ  ｈＩＬ−３６β、または１０ｐＭ  ｈＩＬ−３６γを、一定濃度として使用し、ＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｍｆＩＬ−３６Ｒ細胞を用いた試験については、５００ｐＭ  ｈＩＬ−３６α、６００ｐＭ  ｈＩＬ−３６β、または３００ｐＭ  ＩＬ−３６γを一定濃度として使用した。３７℃、５％ＣＯ２での５．５時間のインキュベーション後、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ６０５１）を試料に加え、次に、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダーを使用してルシフェラーゼ活性を測定した。
【０１４０】
結果を、Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて非線形回帰（４パラメータロジスティック）を使用して解析し、ＥＣ５０およびＩＣ５０値を得た。最大阻害を決定するため、各抗体について最大ＲＬＵ値と最小ＲＬＵ値の間の範囲を、アッセイ毎に使用したＩＬ−３６リガンドなしと定量のＩＬ−３６リガンドとの間のＲＬＵ範囲の割合として計算した。
【０１４１】
表２−１に示すように、試験した本発明の１２個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のうち９個は、２０ｐＭ  ｈＩＬ−３６αによるＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞の刺激を、１００ｐＭ〜９７０ｐＭの範囲のＩＣ５０値で完全に遮断した。試験したＩＬ−３６Ｒ抗体の一つは、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞のｈＩＬ−３６α刺激の部分的な遮断を示し、最大遮断率は２２％であった。試験したＩＬ−３６Ｒ抗体のうちの一つは、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞のｈＩＬ−３６α刺激の弱い遮断を示し、最大阻害率は６１％であったが、一方、試験した残りの抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ｈＩＬ−３６α刺激の阻害を示さなかった。試験した本発明の１２個中６個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が、１２０ｐＭ〜１．３ｎＭの範囲のＩＣ５０値で、１５ｐＭ  ｈＩＬ−３６βによるＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞の刺激を完全に遮断した。試験したＩＬ−３６Ｒ抗体のうちの一つが、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞のｈＩＬ−３６β刺激の弱い遮断を示し、最大遮断率は６９％であり、試験した５個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ｈＩＬ−３６β刺激の測定可能な阻害を示さなかった。本発明の１２個中６個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が、１０ｐＭ  ｈＩＬ−３６γによるＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞の刺激を、１２０ｐＭ〜１．２ｎＭの範囲のＩＣ５０値で完全に遮断した。試験した本発明の４個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ｈＩＬ−３６γ刺激の部分的な遮断を示し、最大遮断率は２４〜８７％の範囲であった。試験した本発明の１個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ｈＩＬ−３６γ刺激の弱い遮断を示し、最大遮断率は６９％であり、本発明の１個の抗ＩＬ３６Ｒ抗体は、ｈＩＬ−３６γ刺激の阻害を示さなかった。試験したアイソタイプ対照抗体は、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞のＩＬ−３６リガンド刺激の阻害を示さなかった。表２−１に示すように、ｈＩＬ−３６α、ｈＩＬ−３６β、およびｈＩＬ−３６γは、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞を、それぞれ、１２ｐＭ、１４ｐＭ、および８．４ｐＭのＥＣ５０値で活性化した。
【０１４２】
表２−２に示すように、試験した本発明の１２個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のうち６個が、５００ｐＭのｈＩＬ−３６αによるＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞の刺激を、６０ｐＭ〜３．１ｎＭの範囲のＩＣ５０値で完全にまたはほぼ完全に遮断した。試験した本発明の２個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞のｈＩＬ−３６α刺激の弱い遮断を示し、最大遮断率は２９および４７％であり、一方４個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、この細胞株のｈＩＬ−３６α刺激の阻害を示さなかった。本発明の１２個中６個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が、６００ｐＭ  ｈＩＬ−３６βによるＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞の刺激を、１２０ｐＭ〜７．１ｎＭの範囲のＩＣ５０値で完全にまたはほぼ完全に遮断した。試験した本発明の３個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞のｈＩＬ−３６β刺激の弱い遮断を示し、最大阻害率は３６〜４８％の範囲であり、一方、本発明の３個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、この細胞株のｈＩＬ−３６β刺激の阻害を示さなかった。試験した本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のうち６個が、３００ｐＭ  ｈＩＬ−３６γによるＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞の刺激を、８５ｐＭ〜５．４ｎＭの範囲であるＩＣ５０値で、完全にまたはほぼ完全に遮断した。試験した本発明の３個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞のｈＩＬ−３６γ刺激の弱い遮断を示し、最大遮断率は２５〜４３％であり、一方、本発明の３個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、この細胞株のｈＩＬ−３６γ刺激の阻害を示さなかった。試験したアイソタイプ対照抗体は、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞のＩＬ−３６リガンド刺激の阻害を示さなかった。表２−１に示すように、ｈＩＬ−３６α、ｈＩＬ−３６β、およびｈＩＬ−３６γは、ＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ＭｆＩＬ−３６Ｒ細胞を、それぞれ、１７０ｐＭ、２７０ｐＭ、および６２ｐＭのＥＣ５０値で活性化した。
【表２−１】
2021530229.tif 000004
【表２−２】
2021530229.tif 000005
【０１４３】
実施例３：ＩＬ−３６ＲＯｃｔｅｔ交差競合
【０１４４】
異なる抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のパネル間の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ａ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でのリアルタイム、ラベルフリービオレイヤーインターフェロメトリーアッセイを使用して決定した。実験全体を、２５℃、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ  ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、０．００２％  ＮａＮ３および１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（ＨＢＳ−ＥＴ動態バッファー）中で、プレートを速度１０００ｒｐｍで振盪しながら行った。２個の抗体が、Ｃ末端のｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現した組み換えヒトＩＬ−３６Ｒ細胞外ドメイン上のそれらのそれぞれのエピトープ（ｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨ：ｍＲＯＲ１シグナル伝達配列（Ｍ１−Ａ２９）−ヒトＩＬ３６Ｒ（Ｄ２０−Ｙ３３７）−ｍｙｃｍｙｃＨｉｓ６）への結合について互いに競合することができるかどうかを評価するために、３０μｇ／ｍＬ  ｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨを含有するウェルに浸漬することにより、約０．３ｎＭ  ｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨを、抗Ｈｉｓ抗体でコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ．＃１８〜５０７９）上にまず捕獲した。次に、抗原を捕獲したバイオセンサーを、５０μｇ／ｍＬ  ｍＡｂ−１溶液を含有するウェルに４分間浸漬することにより、第一の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（以後、ｍＡｂ−１と呼ぶ）で飽和させた。次に、バイオセンサーチップを、続いて、５０μｇ／ｍＬ第二の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（以後、ｍＡｂ−２と呼ぶ）を含有するウェル内に３分間浸漬させた。バイオセンサーを、実験の全工程間でＨＢＳ−ＥＴ動態バッファーで洗浄した。リアルタイム結合応答を、実験の過程全体の間にモニタリングし、全ての工程についての最大結合応答を記録した。ｍＡｂ−１と予め複合体化したｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨへのｍＡｂ−２結合の応答を比較し、表３−１に示す通り、異なる抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の競合／非競合挙動を決定した。
【表３−１】
2021530229.tif 000006
【０１４５】
実施例４：抗体結合動態
【０１４６】
精製した抗ＩＬ−３６Ｒ抗体へのＩＬ−３６Ｒ結合についての平衡解離定数（ＫＤ値）を、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００装置を使用したリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、まず、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）とアミン結合させることにより誘導体化して、抗ＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体を捕獲した。全ての結合試験を、０．０１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０（ＨＢＳ−ＥＴランニングバッファー）中、２５℃および３７℃で行った。ＨＢＳ−ＥＴランニングバッファー（１００ｎＭ〜３．７ｎＭの範囲内、３倍希釈）中の異なる濃度のＩＬ−３６Ｒ試薬、Ｃ末端のｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現したヒトＩＬ−３６Ｒ細胞外ドメイン（ｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨ）、Ｃ末端のｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現したカニクイザルＩＬ−３６Ｒ細胞外ドメイン（ｍｆＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨ：ｍＲＯＲ１シグナル配列（Ｍ１−Ａ２９）カニクイザルＩＬ３６Ｒ＿ｅｃｔｏドメイン（Ｄ２０−Ａ３３６）．ｍｙｃｍｙｃＨｉｓ６）、Ｃ末端のマウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ  ｔａｇと共に発現したヒトＩＬ−３６Ｒ細胞外ドメイン（ｈＩＬ−３６Ｒ−ｍＦｃ：ｍＲＯＲ１シグナル配列（Ｍ１−Ａ２９）−ヒトＩＬ３６Ｒ（Ｄ２０−Ｙ３３７）−マウスＩｇＧ２ａＦｃ（Ｅ９８−Ｋ３３０））またはマウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃタグと共に発現したヒトＩＬ−３６Ｒ細胞外ドメインとＩＬ１ＲＡｃＰ細胞外ドメインの直線上融合タンパク質（ｈＩＬ−３６Ｒ−Ｔｒａｐ−ｍＦｃ：ｍＲＯＲ１シグナル配列（Ｍ１−Ａ２９）−ヒトＩＬ３６Ｒエクトドメイン（Ｄ２０−Ｙ３３７）−ヒトＩＬ１ＲａｃＰエクトドメイン（Ｓ２１−Ｅ３５９）−マウスＩｇＧ２ａＦｃ）を、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体捕獲表面上に４分間、流速３０μＬ／分で注ぎ、ＨＢＳ−ＥＴランニングバッファー中のそれらの解離を１０分間モニタリングした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用してリアルタイムセンサーグラムを１：１の結合モデルにフィッティングさせることにより、動態結合速度定数（ｋａ）および解離速度定数（ｋｄ）を決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ1/2）を、
【数１】
2021530229.tif 000007
および
【数２】
2021530229.tif 000008
として、動態速度定数から計算した。
【０１４７】
２５℃および３７℃での本発明の異なる抗ＩＬ−３６Ｒ抗体へのｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨ、ｍｆＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨまたはｈＩＬ−３６Ｒ．ｍＦｃについての結合動態パラメータを、表４−１〜表４−８に示す。２５℃で、ｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨは、表４−１に示す通り、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の全てに、２．１８ｎＭ〜１３．９ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。３７℃で、ｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨは、表４−２に示す通り、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の全てに、４．２５ｎＭ〜２９．５ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。２５℃で、ｍｆＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨは、表４−３に示す通り、本発明の１２個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のうち９個に、７．８７ｎＭ〜３４．４ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。３７℃で、ｍｆＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨは、表４−４に示す通り、本発明の１２個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のうち９個に、１４．４ｎＭ〜５８．２ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。２５℃で、ｈＩＬ−３６Ｒ−ｍＦｃは、表４−５に示す通り、本発明の１２個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のうち１１個に、１７３ｐＭ〜５．７９ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。本発明の１個の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、２５℃の実験条件下で、ｈＩＬ−３６Ｒ−ｍＦｃへの決定的な結合を示した。３７℃で、ｈＩＬ−３６Ｒ−ｍＦｃは、表４−６に示す通り、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の全てに、２０５ｐＭ〜２８．７ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。２５℃で、ｈＩＬ−３６Ｒ−Ｔｒａｐ−ｍＦｃは、表４−７に示す通り、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の全てに、２１２ｐＭ〜１４ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。３７℃で、ｈＩＬ−３６Ｒ−Ｔｒａｐ−ｍＦｃは、表４−８に示す通り、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の全てに、２６４ｐＭ〜４０．９ｎＭの範囲のＫＤ値で結合した。
【表４−１】
2021530229.tif 000009
【表４−２】
2021530229.tif 000010
【表４−３】
2021530229.tif 000011
【表４−４】
2021530229.tif 000012
【表４−５】
2021530229.tif 000013
【表４−６】
2021530229.tif 000014
【表４−７】
2021530229.tif 000015
【表４−８】
2021530229.tif 000016
【０１４８】
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器を使用したリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定した、追加の結合実験を行い、精製抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に結合したＩＬ−３６Ｒの解離速度に対するｐＨの効果を決定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を捕獲するために、まずモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）とアミンカップリングすることにより誘導体化した。これらのＢｉａｃｏｒｅ結合試験を、二つのランニングバッファーＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ７．４（８．１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．９ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、３ｍＭ  ＫＣｌ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４に調整）、およびＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ６．０（６．６ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、３．４ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、３ｍＭ  ＫＣｌ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ６．０に調整）を使用して行った。ＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ７．４バッファー（１００ｎＭ〜１１．１１ｎＭの範囲、３倍希釈）で調製した異なる濃度のｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨおよびｍｆＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨを、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体捕獲表面に４分間、流速５０μＬ／分で注ぎ、二つのランニングバッファー、ＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ７．４およびＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ６．０におけるそれらの解離を、１０分間モニタリングした。これらの結合動態実験の全てを、２５℃および３７℃で行った。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用してリアルタイムセンサーグラムを１：１の結合モデルにフィッティングさせることにより、動態解離定数（ｋｄ）を決定した。結合解離半減期（ｔ１/２）を、
【数３】
2021530229.tif 000017
としてｋｄから計算した。
【０１４９】
二つの実行中の緩衝剤ＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ７．４およびＰＢＳ−Ｔ、ｐＨ６．０における、２５℃および３７℃における異なる抗ＩＬ−３６Ｒ抗体へのｈＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨまたはｍｆＩＬ−３６Ｒ−ＭＭＨ結合の結合解離速度定数を、表４−９〜４−１２に示す。
【表４−９】
2021530229.tif 000018
【表４−１０】
2021530229.tif 000019
【表４−１１】
2021530229.tif 000020
【表４−１２】
2021530229.tif 000021
【０１５０】
実施例５：ＩＭＱ誘導性皮膚炎症および慢性大腸炎マウスモデルにおける抗ＩＬ３６ＲのＩｎ  ｖｉｖｏ評価
【０１５１】
本発明の抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体を、ヒト化ＩＬ−３６Ｒ／ｈＩＬ−３６α、β、γマウスにおける、急性および慢性イミキモド（ＩＭＱ）誘導性皮膚炎症、ならびに慢性デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘導性大腸炎においてＩｎ  ｖｉｖｏで試験した。炎症促進パネル１（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキットを使用して、皮膚および結腸ホモジネートにおいて、サイトカイン検出を行った。糞便ホモジネートにおけるリポカリン２（Ｌｃｎ２）の検出を、マウスデュオセットリポカリン−２／ＮＧＡＬ  ＥＬＩＳＡキットを使用して行った。結腸ホモジネートにおけるミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の測定を、マウスのＭＰＯ  ＥＬＩＳＡキットを使用して行った。
【０１５２】
抗ＩＬ３６Ｒ抗体、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２を、ヒトアイソタイプ一致対照ＩｇＧ４抗体と共に使用した。
【０１５３】
皮膚および腸の炎症におけるＩＬ−３６Ｒの役割を調べ、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｈＩＬ−３６Ｒ拮抗の有効性を試験するために、本発明の抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体を、イミキモド（ＩＭＱ）誘導性皮膚炎症およびＤＳＳ誘導性慢性大腸炎のマウスモデルにおいて試験した。両方のモデルにおいて、ヒトＩＬ−３６ＲならびにヒトＩＬ−３６α、βおよびγ、ならびに内在性マウスＩＬ−３６Ｒａを発現するＶｅｌｏｃｉｇｅｎｅ生成ホモ接合性マウスを利用した（得られたマウスを、ＤＩＴＲＡ（インターロイキン３６受容体アンタゴニストの欠損）患者（Ｍａｒｒａｋｃｈｉら、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３６−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｐｕｓｔｕｌａｒ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６５：６２０〜６２８（２０１１年））において観察された変異に類似するヒトＩＬ−３６Ｒに対するマウスＩＬ−３６Ｒａの親和性の減少から、ＤＩＴＲＡ様マウスと呼ぶ）。
【０１５４】
遺伝子型Ｉｌ１ｒｌ２ｈｕ／ｈｕ  Ｉｌ１ｆ６ｈｕ／ｈｕ  Ｉｌ１ｆ８ｈｕ／ｈｕ  Ｉｌ１ｆ９ｈｕ／ｈｕを有するマウスヒト化系統を生成した。このマウス系統では、ヒトＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ８、およびＩＬ１Ｆ９を、内在性マウスＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ８、およびＩＬ１Ｆ９（それぞれ、ＩＬ３６α、βおよびγも呼ばれる）と置換し、キメラＩＬ１ＲＬ２を、内在性マウスＩＬ１ＲＬ２と置換した。キメラＩＬ１ＲＬ２は、ヒトＩＬ１ＲＬ２細胞外ドメインおよびマウス細胞内ドメインを有していた。これは、細胞外ドメインヒトを提供しながら、細胞内シグナル伝達特異性を維持したキメラ受容体をもたらし、これにより、ヒトリガンドＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ８、およびＩＬ１Ｆ９に結合することができる。
【０１５５】
ＤＩＴＲＡ様マウスにおける急性および慢性ＩＭＱ誘導性皮膚炎症誘導および抗体処置  皮膚炎症を誘導するために、８〜１０週齢のヒト化ＤＩＴＲＡ様のメスのマウスを、ＩＭＱクリーム適用の３日前に、マウスヘアトリマー（Ｏｓｔｅｒ、ＭｉｎｉＭａｘ、カタログ番号７８０４９−１００）を使用して背中の毛を剃り、０．５ｇのＶｅｅｔ毛髪除去ゲルで皮膚を脱毛した。１日局所用量の市販のＩＭＱクリーム（５％）（Ａｌｄａｒａ、ＧＭ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、ＮＤＣ  ９９２０７−２０６−１２）またはワセリン（ＣＶＳ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）６２．５ｍｇを、マウスの毛を剃った背部の皮膚に、急性疾患誘導のため４日間連続で、慢性疾患誘導のため９日間適用した。１日局所用量のアルダラ６２．５ｍｇを、１日用量の活性化合物３．１２５ｍｇに換算した。急性ＩＭＱ誘導性皮膚炎症において、抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体であるＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２を、ＩＭＱ適用開始の３日前（−３ｄ）および１日後（ｄ１）に１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで背部の皮膚に皮下投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照注射を受けた。慢性ＩＭＱ誘導性皮膚炎症において、抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体であるＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２を、１０ｍｇ／ｋｇでｄ４およびｄ８で治療的に背中の皮膚に皮下投与した。ＩＭＱ適用の開始の２日または３日後、マウスの背部皮膚は、紅斑、鱗屑および肥厚の徴候を呈した。炎症の重症度を、臨床Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＰＡＳＩ）の適合版を用いて毎日測定した。紅斑、鱗屑および肥厚を、０〜４のスケールで独立してスコア付けした：０、なし、１、軽度、２、中等度、３、顕著、および４、非常に顕著（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｆｉｔｓら、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ｌｉｋｅ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ＩＬ−２３／ＩＬ−１７  ａｘｉｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９、１８２：５８３６〜５８４５）。急性ＩＭＱ誘導性皮膚炎症のｄ４および慢性ＩＭＱ誘導性皮膚炎症のｄ１１に、ノギス（Ｋａｅｆｅｒ）を使用して、皮膚の厚さを測定した。
【０１５６】
病理組織学  マウスの背部からの直径６ｍｍの皮膚組織を、１０％緩衝ホルマリンで固定し、４〜５μｍのパラフィン包埋切片を、ヘマトキシリン・エオシンで染色した。皮膚切片を、錯角化症、正常角化、マンロー微小膿瘍、表皮肥厚、皮膚潰瘍形成、真皮および皮下組織における炎症、真皮および皮下組織における血管うっ血、毛孔性角化症ならびに上皮過形成の有無について盲検的に評価した。０〜４のスコアリングスケールを使用した：０、正常範囲内、１、最小、２、軽度、３、中度、４、重度。個々の病理組織学的特徴スコアを足すことにより、総病理スコアを、各マウスについて計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。Ｄａｎｉｌｅｎｋｏ、Ｒｅｖｉｅｗ  ｐａｐｅｒ：ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ．２００８年７月；４５（４）：５６３〜７５；Ｌｏｗｅｓら、Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｎａｔｕｒｅ．２００７年２月  ２２；４４５（７１３０）：８６６〜７３；Ｍｅｃｋｌｅｎｂｕｒｇら、Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔ、Ｊ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．２０１３；２６（補足３）：２７Ｓ〜５７Ｓ；Ｕｒｉｂｅ−Ｈｅｒｒａｎｚら、ＩＬ−１Ｒ１  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  Ｍｕｎｒｏ’ｓ  ｍｉｃｒｏａｂｓｃｅｓｓ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｓｉｆｏｒｍ  ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１３年６月；１３３（６）：１５４１〜９；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｆｉｔｓら、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ｌｉｋｅ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ＩＬ−２３／ＩＬ−１７  ａｘｉｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９年５月  １；１８２（９）：５８３６〜４５を参照。
【０１５７】
皮膚ホモジネートにおけるサイトカインの測定  マウスの背部から直径６ｍｍの全層皮膚組織を採取し、Ｔ−ｐｅｒバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３７８５１０）、１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号８７７８６）および５Ｍ  ＥＤＴＡ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号  ７８４２９）を含有する１５ｍＬの試験管に入れた。皮膚組織を、ポリトロン（ＰＴ１０−３５  ＧＴ−Ｄ、カタログ番号９１５８１５８）を使用して２８０００ｒｐｍで１分間破壊し、氷上に置いた。生成した皮膚ホモジネートを、４℃で８分間、１５００ｒｐｍで遠心分離し、上清を９６ウェルプレートに回収した。皮膚ホモジネートを、タンパク質アッセイ色素（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号５００−０００６）を使用してＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイに供し、総タンパク質含有量を定量した。皮膚ホモジネートにおけるサイトカイン濃度を、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  １（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｋ１５０４８Ｄ）を使用して、製造業者の指示に従い測定した。簡潔に述べると、５０μＬ／ウェルのキャリブレータおよび試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１で希釈）を、捕獲抗体で予めコーティングしたプレートに加え、７００ｒｐｍで２時間震盪しながら室温でインキュベーションした。次に、プレートを、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ-２０を含有する１×ＰＢＳで３回洗浄し、続いて、Ｄｉｌｕｅｎｔ４５で希釈した検出抗体溶液２５μＬを加えた。震盪しながら室温で２時間インキュベーション後、プレートを３回洗浄し、２×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ１５０μＬを各ウェルに加えた。電気化学発光を、ＭＳＤ  Ｓｐｅｃｔｏｒ（登録商標）機器で直ちに読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。サイトカインレベルを、総タンパク質含有量に対して正規化した。
【０１５８】
ＤＩＴＲＡ様マウスにおける慢性大腸炎のＤＳＳ誘導モデルおよび抗体処置慢性のＤＳＳ仲介性大腸炎を誘導するために、１２〜２０週齢で平均体重２３ｇ超のメスのＤＩＴＲＡ様マウスに、飲料水中３％ＤＳＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号８７７８６）を７日間与え、続いて、１０日間、蒸留水を与えた。このサイクルを、ｄ２８まで２回繰り返した。対照群には、試験継続中、蒸留水を与えた。抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体であるＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２を、１０ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの隔週で、ｄ７から腹腔内投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照注射を受けた。マウスを毎日体重測定し、大腸炎の臨床徴候（例えば、便の硬さおよび便潜血）についてモニタリングした。ｄ２８に、マウスを安楽死させ、結腸長を測定した。
【０１５９】
結腸ホモジネートにおけるＬｃｎ−２の測定  試験を通して腸炎症を監視するために、個々のＤＩＴＲＡ様マウスからの糞便を２ｍＬの深型ウェルプレートに毎週採取し、−８０℃で保存した。試験終了時、異なる日に採取した糞便をホモジナイズした。簡潔に述べると、糞便試料を、０．１％  Ｔｗｅｅｎ-２０、１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号８７７８６）および５Ｍ  ＥＤＴＡ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号７８４２９）を含有するＰＢＳ１ｍＬで再構成した。二つのタングステン３ｍｍカーバイドビーズをウェル（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号６９９９７）に加えた後、プレートを、４℃で一晩、最高速度のシェーカーに置いた。均質な糞便懸濁液を、４℃で１０分間１２００ｒｐｍで遠心分離し、上清を９６ウェルプレートに回収した。糞便リポカリン‐２（Ｌｃｎ２）レベルを、マウスＤｕｏｓｅｔリポカリン−２／ＮＧＡＬ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ１８５７）を使用し、製造元の指示に従い測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。
【０１６０】
結腸ホモジネートにおけるミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の測定結腸の遠位部の断片を、Ｔ−ｐｅｒバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３７８５１０）、１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号８７７８６）および５Ｍ  ＥＤＴＡ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号７８４２９）を含有する二つのタングステン３ｍｍカーバイドビーズ（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号６９９９７）を含有する２ｍＬの微小遠心管に採取した。Ｑｉａｇｅｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｌｙｓｅｒ  ＩＩを２７．５ｓ−１の頻度で１０分間使用して、結腸組織を破壊した。管を、４℃で８分間１５００ｒｐｍで遠心分離し、上清を９６ウェルプレートに回収した。結腸ホモジネートを、タンパク質アッセイダイ（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号５００−０００６）を使用してＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイに供し、総タンパク質含有量を定量した。結腸ホモジネートにおけるミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を、マウスＭＰＯ  ＥＬＩＳＡキット（ＨＨｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ＨＫ２１０−０２）を使用し、製造元の指示に従い測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。ＭＰＯレベルを、総タンパク質含有量量に対して正規化した。
【０１６１】
結腸ホモジネートにおけるサイトカインの測定  結腸ホモジネートにおけるサイトカイン濃度を、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  １（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｋ１５０４８Ｄ）を使用し、製造元の指示に従い測定した。簡潔に述べると、５０μＬ／ウェルのキャリブレータおよび試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１で希釈）を、捕獲抗体で予めコーティングしたプレートに加え、７００ｒｐｍで２時間震盪しながら室温でインキュベーションした。次に、プレートを０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ-２０を含有する１×ＰＢＳで３回洗浄し、続いて、Ｄｉｌｕｅｎｔ  ４５において希釈した検出抗体溶液２５μＬを加えた。震盪しながら室温で２時間インキュベーション後、プレートを３回洗浄し、各ウェルに２×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ１５０μＬを加えた。電気化学発光を、ＭＳＤ  Ｓｐｅｃｔｏｒ（登録商標）機器で直ちに読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。サイトカインレベルを、総タンパク質含有量に対して正規化した。
【０１６２】
統計解析  群内の統計的有意を、Ｔｕｋｅｙ多重比較事後検定を用いた一元配置Ａｎｏｖａにより決定した（＃、＊ｐ＜０．０１；＃＃、＊＊ｐ＜０．００１；＃＃＃、＊＊＊ｐ＜０．００１；＃＃＃＃、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
結果の概要と結論
【０１６３】
抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体は、予防的用量でＤＩＴＲＡ様マウスにおいて急性皮膚炎症を阻害する。皮膚炎症におけるＩＬ−３６Ｒの役割を調べるために、２個の抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体であるＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２、表現型および組織学的特徴に関して、ヒト乾癬病変に極めて類似する乾癬性皮膚炎のＩＭＱ誘導モデルにおいて試験した（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｆｉｔｓら、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ｌｉｋｅ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ＩＬ−２３／ＩＬ−１７  ａｘｉｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９年、１８２：５８３６-５８４５；Ｓｗｉｎｄｅｌｌら、Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｆｉｖｅ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１年、６：ｅ１８２６６；Ｏｋａｙａｓｕら、Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｄｅｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｌｉａｂｌｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９０年、９８：６９４−７０２）。ＤＩＴＲＡ様マウスの毛を剃った背部皮膚に、ＩＭＱを４日間連続で毎日適用した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体を、−３ｄおよびｄ１で１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇでｈＩｇＧ４アイソタイプ対照注射を受けた。ｄ４に、皮膚の厚さを測り、続く病理組織学的評価およびタンパク質単離のために組織を採取した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体とＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体の両方は、アイソタイプ対照と比較して、用量依存的にＩＭＱ誘導性皮膚の厚さを有意に減少させた（表５−１）。皮膚病変の病理組織評価により、抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体処置により、不全角化およびＭｕｎｒｏの微小膿瘍を含む総病理スコアの有意な減少が明らかになった（表５−２）。
【表５−１】
2021530229.tif 000022
【表５−２】
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【０１６４】
さらに、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体を用いたｈＩＬ−３６Ｒ遮断は、皮膚ホモジネートにおけるＫＣ−ＧＲＯ、ＩＬ−６、ＩＬ−１βおよびＴＮＦα産生を６６〜９３％減少させた（表５−３）。
【表５−３】
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【０１６５】
抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体は、治療用量で慢性皮膚炎症を阻害する。ｉｎ  ｖｉｖｏでのｈＩＬ−３６Ｒ拮抗薬の治療有効性をさらに調べるために、抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体を、皮膚炎症の慢性ＩＭＱ誘導性モデルにおいて試験した。２週間に渡り、ＩＭＱを、ＤＩＴＲＡ様マウスの毛を剃った背部の皮膚に、適用しない２日挟んで９日間適用した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体を、１０ｍｇ／ｋｇの用量でｄ４およびｄ８で皮下投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇでｈＩｇＧ４アイソタイプ対照注射を受けた。ｄ１１に、皮膚の厚さを測定し、続く病理組織学的評価およびタンパク質単離のため、組織を採取した。表５−４および５−５に示す通り、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体は、ＤＩＴＲＡ様マウスにおけるＩＭＱ誘導性皮膚の厚さおよび病理病変スコアの減少において、有意かつ同等の有効性を示した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２のさらなる投与は、ＤＩＴＲＡ様マウスの皮膚における炎症促進性サイトカインのＩＭＱ誘導性産生の有意な阻害をもたらした（表５−６）。
【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【０１６６】
全体として、これらのデータは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＭＱ誘導性皮膚炎症の改善における抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の予防的および治療的有効性を示した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体は、ＤＩＴＲＡ様マウスにおいて、急性ＩＭＱ誘導性皮膚病理と慢性ＩＭＱ誘導性皮膚病理の両方を有意に減少させる同等の能力を示した。
【０１６７】
抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体は、治療用量でＤＩＴＲＡ様マウスにおいてＤＳＳ誘導性慢性大腸炎を改善する。腸炎症におけるＩＬ−３６Ｒ拮抗の役割を探索するために、腸損傷の化学モデルを使用した。このモデルは、結腸上皮を損傷したＤＳＳの経口投与を利用し（Ｏｋａｙａｓｕら、Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｄｅｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｌｉａｂｌｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９０年、９８：６９４〜７０２）、強力な炎症応答を誘導し（Ｒａｋｏｆｆ−Ｎａｈｏｕｍら、Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｍｅｎｓａｌ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｂｙ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｃｅｌｌ  ２００４年、１１８：２２９〜２４１）、ＩＢＤ、特に、潰瘍性大腸炎の主な特徴を示している。ＤＩＴＲＡ様マウスを、２〜３％  ＤＳＳを７日間、続いて水を１０日間、２サイクル投与することにより、慢性ＤＳＳ誘導性大腸炎に供した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体を、ｄ７から開始して１０ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇで２週間に１回投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇでｈＩｇＧ４アイソタイプ対照腹腔内注射を受けた。疾患の様々な段階で腸の炎症をモニターするために、個々のマウスの糞便を毎週収集して、腸損傷における炎症の非侵襲性バイオマーカーである糞便リポカリン−２（Ｌｃｎ２）タンパク質を測定した（Ｔｈｏｒｓｖｉｋら、Ｆｅｃａｌ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｉｐｏｃａｌｉｎ  ａｓ  ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０１７年、３２：１２８〜１３５）。表５−７に示す通り、ＰＢＳ処置群およびｈＩｇＧ４処置群は、水単独と比較してｄ１２、１９（示さない）および２８に糞便Ｌｃｎ２レベルの有意なアップレギュレーションを呈した。対照的に、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２の二つの治療投与は、ＰＢＳ処置群およびアイソタイプ処置群と比較して、ｄ１２で用量依存的な様式でＬｃｎ２レベルの有意な減少をもたらした。糞便Ｌｃｎ２レベルの減少の持続を、ｄ１９（示していない）およびｄ２８で抗ヒトＩＬ−３６抗体処置群において観察し、これは、ＤＩＴＲＡ様マウスにおける腸の炎症の低減における抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の役割を支持している（表５−７）。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体は、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２と比較して、Ｌｃｎ２レベルを低減し、したがって腸の炎症を低減するより良好な能力を示した（表５−７）。
【表５−７】
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【０１６８】
Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体を用いたｈＩＬ−３６Ｒ遮断は、結腸ＤＳＳ処置ＤＩＴＲＡ様マウスにおいて、ＭＰＯ活性の減少（表５−８）、および炎症促進性サイトカインの６１〜９５％の減少（表５−９）をもたらした。
【表５−８】
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【表５−９】
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【０１６９】
より低減したＬｃｎ２レベルの観察と一致し、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体は、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２と比較して、結腸におけるＭＰＯ活性および炎症促進性サイトカインの減少において優れた有効性を示した。
【０１７０】
実施例６．水素重水素交換によるＩＬ−３６ＲへのＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２、およびＨ４Ｈ１４７３１Ｐのエピトープマッピング。
【０１７１】
質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）を用いた水素重水素交換エピトープマッピングを行い、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２、およびＨ４Ｈ１４７３１Ｐ（抗ｈＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体）と相互作用する、ＩＬ−３６Ｒ（ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨとして指定し、配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を有する、組み換えヒトＩＬ−３６Ｒ）のアミノ酸残基を決定した。Ｈ／Ｄ交換方法の一般的な説明は、例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７（２）：２５２〜２５９；およびＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ〜２６５Ａに記載されている。
【０１７２】
ＨＤＸ−ＭＳ実験を、重水素標識およびクエンチングのための、Ｌｅａｐｔｅｃ  ＨＤＸ  ＰＡＬシステム、試料消化および添加のための、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｍ−Ｃｌａｓｓ（Ａｕｘｉｌｉａｒｙ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｍａｎａｇｅｒ）、解析勾配のための、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｍ−Ｃｌａｓｓ（μＢｉｎａｒｙ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｍａｎａｇｅｒ）、およびペプチド質量測定のための、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ  ＨＦ質量分析器からなる、統合ＨＤＸ／ＭＳプラットフォームで行った。
【０１７３】
標識溶液を、ｐＤ７．０でＤ２Ｏ中のＰＢＳバッファー（１０ｍＭリン酸緩衝液、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、および３ｍＭ  ＫＣｌ、２５℃でｐＨ７．４と同等）として調製した。重水素標識については、ＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ（ＲＥＧＮ２１０５、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２実験において４５．６μＭ、またはＨ４Ｈ１４７３１Ｐ実験において６３．３μＭ）または１：０．７のモル比でＨ４Ｈ１４７０６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２、もしくはＨ４Ｈ１４７３１Ｐと予め混合したＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ（Ａｇ−Ａｂ複合体）１１μＬを、２０℃で、Ｄ２Ｏ標識溶液４４μＬと様々な時間ポイント（例えば、非重水素化対照＝０秒；重水素標識、５分および１０分）でデュプリケートでインキュベーションした。重水素化反応を、予め氷冷したクエンチバッファー（０．５Ｍ  ＴＣＥＰ−ＨＣｌ、８Ｍ尿素、および１％ギ酸）５５μＬを各試料に加え、２０℃で５分間インキュベーションすることによりクエンチした。次に、クエンチした試料を、オンラインペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化のために、Ｗａｔｅｒｓ  ＨＤＸ  Ｍａｎａｇｅｒに注入した。消化されたペプチドを、１０％〜３２％Ｂ（移動相Ａ：水中の０．５％のギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％のギ酸）から１３分間の勾配で、Ｃ８カラム（１．０ｍｍ×５０ｍｍ、ＮｏｖａＢｉｏａｓｓａｙｓ）により分離した。溶出したペプチドを、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳモードまたはＬＣ−ＭＳモードでＱ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ  ＨＦ質量分析により解析した。
【０１７４】
重水素化されていないＩＬ−３６Ｒ試料のＬＣ−ＭＳ／ＭＳデータを、ＩＬ−３６Ｒおよびその無作為化配列を含むデータベースに対して、Ｂｙｏｎｉｃ検索エンジン（タンパク質指標）を使用して検索した。検索パラメータ（ＥＬＮにおける）を、非特異的酵素消化およびヒトグリコシル化を共通の可変修飾として使用するデフォルトとして設定した。次に、同定したペプチドのリストを、ＨＤＸ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（バージョン３．３）に取り込み、ＬＣ−ＭＳによって検出した各ペプチドの重水素取り込みを、全ての重水素化試料から計算した。所定のペプチドについて、各時間ポイントでのセントロイド質量（強度加重平均質量）を使用して、重水素取り込み（Ｄ）および重水素取り込みの割合（％Ｄ）を計算した。
【数４】
2021530229.tif 000031
【０１７５】
ＲＥＧＮ２１０５（ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ）由来の計１６３個のペプチドを、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２試料との複合体において、ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ単独とｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨの両方から同定し、これは、ｈＩＬ−３６Ｒの８１．５％の配列カバー度を示した。５％を超える差分パーセントＤ取り込み値を示した任意のペプチドを、有意に保護されたと定義した。ＲＥＧＮ２１０５上のアミノ酸１１３〜１２２（ＹＫＱＩＬＨＬＧＫＤ）（配列番号２２９）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１２２）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２により有意に保護された。
【０１７６】
ＲＥＧＮ２１０５（ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ）由来の計１４８個のペプチドを、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２試料との複合体において、ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ単独とｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨの両方から同定し、これは、ｈＩＬ−３６Ｒの８０．１％の配列カバー度を示した。５％を超える差分パーセントＤ取り込み値を示した任意のペプチドを、有意に保護されたと定義した。ＲＥＧＮ２１０５上のアミノ酸１１３〜１２２（ＹＫＱＩＬＨＬＧＫＤ）（配列番号２２９）（配列番号２２７のアミノ酸１１３〜１２２）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２により有意に保護された。
【０１７７】
ＲＥＧＮ２１０５（ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ）由来の計２３７個のペプチドを、Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐ試料との複合体において、ｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨ単独とｈＩＬ−３６Ｒ．ｍｍＨの両方から同定し、これは、ｈＩＬ−３６Ｒの８８．２％の配列カバー度を示した。５％を超える差分パーセントＤ取り込み値を示した任意のペプチドを、有意に保護されたと定義した。ＲＥＧＮ２１０５上のアミノ酸２６４〜２７７（ＧＶＥＴＨＶＳＦＲＥＨＮＬＹ）（配列番号２３０）（配列番号２２７のアミノ酸２６４〜２７７）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１４７３１Ｐにより有意に保護された。
【表６−１】
2021530229.tif 000032
【表６−２】
2021530229.tif 000033
【表６−３】
2021530229.tif 000034
【０１７８】
組み換えヒトＩＬ−３６Ｒ（ＩＬ１ＲＬ２；インターロイキン１受容体様２；ＲＥＧＮ２１０５）（ｈＩＬ３６Ｒ．ｍｍＨ）のアミノ酸配列：Ｃ末端のｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジン（ｍｍＨ）タグ（下線）を有する、単量体ヒトＩＬ−３６Ｒ（アミノ酸Ｄ２０−Ｙ３３７、受託番号Ｑ９ＨＢ２９）：
DGCKDIFMKNEILSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKHWCDTSIGGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCVLGPIKWYKDCNEIKGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQAILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNHSIEVQLGTTLIVDCNVTDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYDESKRIREGVETHVSFREHNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSTAYIILQLPAPDFRAYEQKLISEEDLGGEQKLISEEDLHHHHHH  （配列番号２２７）。
【０１７９】
実施例７：ＩＭＱ誘導性およびオキサゾロン誘導性皮膚炎症および慢性大腸炎マウスモデルにおける抗ＩＬ３６ＲのＩｎ  ｖｉｖｏ評価
【０１８０】
本発明の抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの初代ヒト細胞アッセイにおいて試験し、ヒト化ＩＬ−３６Ｒ／ｈＩＬ−３６α、β、およびγマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏイミキモド（ＩＭＱ）誘導性皮膚炎症アッセイにおいて、他の抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体と比較した。また、本発明の抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体を、ヒト化ＩＬ−３６Ｒ／ｈＩＬ−３６α、β、およびγマウスにおけるオキサゾロン誘導性大腸炎モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。
【０１８１】
ＩＬ−８を、ヒトＣＸＣＬ８／ＩＬ−８についてのＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して培養上清において検出し、サイトカインを、炎症促進パネル１（マウスおよびヒト）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭＳＤ）を使用して、皮膚および結腸ホモジネートにおいて検出した。試験したモノクローナル抗体は、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２、ＡＰＥ６１５５（ＩｇＧ４）、およびヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照（ＲＥＧＮ１００２）であった。
【０１８２】
ＡＰＥ６１５５重鎖（ＩｇＧ４定常ドメインを含む）は、アミノ酸配列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMNWVRQAPRQGLEWMGMFHPTGDVTRLNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARTTSMIIGGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号２３９）を含む。
【０１８３】
ＡＰＥ６１５５軽鎖（カッパ定常ドメインを含む）は、アミノ酸配列：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSKSLLHRNAITYFYWYLHKPGQPPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号２４０）を含む
【０１８４】
国際公開第２０１６／１６８５４２号を参照のこと。
【０１８５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの初代ヒト細胞アッセイにおけるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の試験  正常なヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＬＦ；Ｌｏｎｚａ、カタログ番号００１９２６２７、ロット番号２５４４９８）および腸内筋線維芽細胞（ＩｎＭｙｏＦｉｂ；Ｌｏｎｚａ、カタログ番号ＣＣ−２９０２、ロット番号００００２５４４９８）を、それぞれ、ＢｕｌｌｅｔＫｉｔ（商標）（Ｌｏｎｚａ、カタログ番号ＣＣ−００１９２０６０、ロット番号００００４８４３８５）を添加したＫＧＭ−Ｇｏｌｄ（商標）およびＢｕｌｌｅｔＫｉｔ（商標）（Ｌｏｎｚａ、カタログ番号ＣＣ−３１８２、ロット番号００００４７３６６９４）を添加したＳｍＧｍ（商標）−２において４〜５継代ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養した。ヒトＣＤ１４＋単球を、製造元の指示に従いＥａｓｙＳｅｐヒト単球単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ、カタログ番号１９３５９）を使用して、３人の異なるドナーの末梢血から単離した。アッセイの１日前に、初代ヒト細胞を、９６ウェル平底プレートの１ウェル当たり１００００個で対応する培地に播種し、３７℃で一晩インキュベーションした。細胞を、一定濃度（１０ｎＭ）の存在下で刺激するか、または連続希釈（１５００ｎＭから開始）したｒｈＩＬ−３６α／ＩＬ−１Ｆ６［ａａ６−１５８］
（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号６９９５−ＩＬ−０１０／ＣＦ、ロット番号ＤＡＦＺ０３１３０５１）、ｒｈＩＬ−３６β／ＩＬ−１Ｆ８  ［ａａ５−１５７］
（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号６８３４−ＩＬ−０１０／ＣＦ、ロット番号ＤＡＫＵ０５１４０６２）およびｒｈＩＬ−３６γ／ＩＬ−１Ｆ９  ［ａａ１８−１６９］
（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号６８３５−ＩＬ−０１０／ＣＦ、ロット番号ＤＡＰＫ０２１５０１１）単独または組み合わせの存在下で刺激した。２４００ｎＭ抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体から始めた連続希釈液をウェルに加えた。プレートを、３７℃で２４時間インキュベーションし、上清を収集して、Ｈｕｍａｎ  ＣＸＣＬ８／ＩＬ−８についてのＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２０８−０５、ロット番号３２５９６３）を使用してＩＬ−８を測定した。ＥＣ５０およびＩＣ５０値を得るために、結果を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアにおける非線形回帰（４パラメータロジスティック）を使用して解析した。
【０１８６】
ＩＭＱ誘導性皮膚炎症における抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の試験および比較  皮膚炎症を誘導するために、８〜１０週齢のヒト化ＤＩＴＲＡ様メスマウスを、ＩＭＱクリーム適用の３日前に、マウスヘアトリマー（Ｏｓｔｅｒ、ＭｉｎｉＭａｘ、カタログ番号７８０４９−１００）を使用して背中の毛を剃り、０．５ｇのＶｅｅｔ毛髪除去ゲルで皮膚を脱毛した。１日局所用量の市販のＩＭＱクリーム（５％）（Ａｌｄａｒａ、ＧＭ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、ＮＤＣ  ９９２０７−２０６−１２、ロット番号ＱＪ０４４Ａ）またはワセリン（ＣＶＳ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、ＮＤＣ  ５９７７９−９０２−８８）６２．５ｍｇを、マウスの毛を剃った背部の皮膚に、４日間連続で適用した。１日局所用量のアルダラ６２．５ｍｇを、１日用量の活性化合物３．１２５ｍｇに換算した。抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体−Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２およびＡＰＥ６１５５（ＩｇＧ４）を、−３ｄおよびｄ１に１０ｍｇ／ｋｇで背中の皮膚に皮下投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照（ＲＥＧＮ１００２）注射を受けた。ＩＭＱ適用の開始の２日または３日後、マウスの背部皮膚は、紅斑、鱗屑および肥厚の徴候を呈した。炎症の重症度を、臨床Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＰＡＳＩ）の適合版を用いて毎日測定した。紅斑、鱗屑および肥厚を、０〜４のスケールで独立してスコア付けした：０、なし、１、軽度、２、中等度、３、顕著、および４、非常に顕著（ｖａｎ  ｄｅｒ  ＦｉｔｓらＩｍｉｑｕｉｍｏｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ｌｉｋｅ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ＩＬ−２３／ＩＬ−１７  ａｘｉｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９、１８２：５８３６〜５８４５）。皮膚の厚さを、ｄ５（Ｋａｅｆｅｒ）でノギスを使用して測定した。
【０１８７】
病理組織学  マウスの背部からの直径６ｍｍの皮膚組織を、１０％緩衝ホルマリンで固定し、４〜５μｍのパラフィン包埋切片を、ヘマトキシリン・エオシンで染色した。皮膚切片を、錯角化症、正常角化、マンロー微小膿瘍、表皮肥厚、皮膚潰瘍形成、真皮および皮下組織における炎症、真皮および皮下組織における血管うっ血、毛孔性角化症ならびに上皮過形成の有無について盲検的に評価した。０〜４のスコアリングスケールを使用した：０、正常範囲内、１、最小、２、軽度、３、中度、４、重度。個々の病理組織学的特徴スコアを足すことにより、総病理スコアを、各マウスについて計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。
【０１８８】
皮膚ホモジネートにおけるサイトカインの測定  皮膚ホモジネートにおけるサイトカインの測定−マウスの背部から直径６ｍｍの全層皮膚組織を採取し、Ｔ−ｐｅｒバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３７８５１０、ロット番号ＲＦ２３６２１７）、１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号８７７８６、ロット番号ＱＧ２２１７６３）および５Ｍ  ＥＤＴＡ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ３  ７８４２９）を含有する１５ｍＬの試験管に入れた。皮膚組織を、ポリトロン（ＰＴ１０−３５  ＧＴ−Ｄ、カタログ番号９１５８１５８）を使用して２８０００ｒｐｍで１分間破壊し、氷上に置いた。生成した皮膚ホモジネートを、４℃で８分間、１５００ｒｐｍで遠心分離し、上清を９６ウェルプレートに回収した。皮膚ホモジネートを、タンパク質アッセイ色素ダイ（ＢｉｏＲａｄ，Ｃａｔ＃  ５００−０００６，ロット＃  ２１０００８１４９）を使用してＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイに供し、総タンパク質含有量を定量した。皮膚ホモジネートにおけるサイトカイン濃度を、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  １（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｋ１５０４８Ｄ）を使用して、製造業者の指示に従い測定した。簡潔に述べると、５０μＬ／ウェルのキャリブレータおよび試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１で希釈）を、捕獲抗体で予めコーティングしたプレートに加え、７００ｒｐｍで２時間震盪しながら室温でインキュベーションした。次に、プレートを０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ-２０を含有する１×ＰＢＳで３回洗浄し、続いて、Ｄｉｌｕｅｎｔ  ４５で希釈した検出抗体溶液２５μＬを加えた。震盪しながら室温で２時間インキュベーション後、プレートを３回洗浄し、２×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ１５０μＬを各ウェルに加えた。電気化学発光を、ＭＳＤ  Ｓｐｅｃｔｏｒ（登録商標）機器で直ちに読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。サイトカインレベルを、総タンパク質含有量に対して正規化した。
【０１８９】
オキサゾロン誘導性腸炎症における抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体の試験−慢性大腸炎のオキサゾロン誘導モデルの導入およびＤＩＴＲＡ様マウスにおける抗体処置  オキサゾロン大腸炎を、前述の通り誘導した（Ｈｅｌｌｅｒら、Ｏｘａｚｏｌｏｎｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ，ａ  Ｔｈ２  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ｒｅｓｅｍｂｌｉｎｇ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ，ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＩＬ−１３−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ＮＫ−Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００２年、１７：６２９〜６３８）。簡潔に述べると、ＤＩＴＲＡ様マウスを予め感作するために、腹部の皮膚の２×２ｃｍ２の範囲の毛を剃り、１００％エタノール中で希釈した３％のオキサゾロン溶液（（４−エトキシメチレンジ−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を１００μｌを適用した。前感作の５日後および７日後に、マウスに、全身麻酔下で５０％エタノールで希釈した１．５％オキサゾロン５０μｌを直腸投与した。対照マウスを、１００％エタノールで予め感作し、５０％エタノールを直腸内注射した。抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体−Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２を、１０ｍｇ／ｋｇでｄ２、５および７で腹腔内投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照（ＲＥＧＮ１００２）注射を受けた。マウスを毎日体重測定し、大腸炎の臨床徴候（例えば、便の硬さおよび便潜血）についてモニタリングした。ｄ８にて、マウスを安楽死させ、結腸を採取した。
【０１９０】
結腸ホモジネートにおけるサイトカインの測定結腸の遠位部の断片を、Ｔ−ｐｅｒバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）および５Ｍ  ＥＤＴＡ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する二つのタングステン３ｍｍカーバイドビーズ（Ｑｉａｇｅｎ）を含有する２ｍＬの微小遠心管に採取した。Ｑｉａｇｅｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｌｙｓｅｒ  ＩＩを使用して、２７．５ｓ−１の頻度で１０分間、結腸組織を破壊した。管を、４℃で８分間１５００ｒｐｍで遠心分離し、上清を９６ウェルプレートに回収した。全ての組織ホモジネートを、タンパク質アッセイ色素ダイ（ＢｉｏＲａｄ）を使用したＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイに供し、総タンパク質含有量を定量した。
【０１９１】
結腸ホモジネートにおけるサイトカイン濃度を、炎症促進パネル１（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｋ１５０４８Ｄ）を使用し、製造元の指示に従い測定した。簡潔に述べると、５０μＬ／ウェルのキャリブレータおよび試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１で希釈）を、捕獲抗体で予めコーティングしたプレートに加え、７００ｒｐｍで２時間震盪しながら室温でインキュベーションした。次に、プレートを、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ-２０を含有する１×ＰＢＳで３回洗浄し、続いて、Ｄｉｌｕｅｎｔ４５で希釈した検出抗体溶液２５μＬを加えた。震盪しながら室温で２時間インキュベーション後、プレートを３回洗浄し、各ウェルに２×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ１５０μＬを加えた。電気化学発光をＭＳＤ  Ｓｐｅｃｔｏｒ（登録商標）機器で直ちに読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。サイトカインレベルを、総タンパク質含有量に対して正規化した。
【０１９２】
統計解析群内の統計的有意を、Ｔｕｋｅｙ多重比較事後検定を用いた一元配置Ａｎｏｖａにより決定した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００００１）。
【０１９３】
結果の要約および結論−抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで初代ヒト細胞においてヒトＩＬ−３６Ｒシグナル伝達を強力に阻害する。ヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）、ヒト腸内筋線維芽細胞（ＩｎＭｙｏＦｉｂ）および末梢血（ＰＢ）由来のＣＤ１４＋単球を、１０ｎＭ  ＩＬ−３６α、βおよびγを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激した。連続希釈した抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体（Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２）を培養物に加え、上清をインキュベーションの２４時間後に回収し、ＩＬ−３６刺激に応答したヒトＩＬ−８産生を測定した。抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体は、ヒト表皮ケラチノサイト、ヒト腸内筋線維芽細胞、および末梢血（ＰＢ）由来のＣＤ１４＋単球における全３種のＩＬ−３６サイトカインをｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＣ５０１〜６ｎＭで強力に阻害する（表７−１）。
【表７−１】
2021530229.tif 000035
【０１９４】
抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２は、ＤＩＴＲＡ様マウスにおけるＩＭＱ誘導性皮膚炎症の阻害において、ＡＰＥ６１５５抗体よりも強力である。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２およびＡＰＥ６１５５抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体を、乾癬性皮膚炎のＩＭＱ誘導モデルにおいて直接比較して試験した。ＤＩＴＲＡ様マウスの毛を剃った背部皮膚に、ＩＭＱを４日間連続で毎日適用した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２およびＡＰＥ６１５５抗体を、−３ｄおよびｄ１で１０ｍｇ／ｋｇで投与した。対照群は、ＰＢＳおよび１０ｍｇ／ｋｇでｈＩｇＧ４アイソタイプ対照注射を受けた。ｄ５に、皮膚の厚さを測り、続く病理組織学的評価およびタンパク質単離のために組織を採取した。Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体とＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体の両方が、ＡＰＥ６１５５と比較して、ＩＭＱ誘導性皮膚の厚さの有意な減少において、より大きな効力を示した（表７−２）。皮膚病変の病理組織評価により、抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体処置による不全角化およびムラノの微小膿瘍を含む総病理スコアのより大きな減少が明らかになった（表７−３）。
【表７−２】
2021530229.tif 000036
【表７−３】
2021530229.tif 000037
【０１９５】
さらに、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２抗体およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２抗体を用いたヒトＩＬ−３６Ｒ遮断は、ＣＯＭＰ５３８２と比較して、皮膚ホモジネートにおけるＫＣ−ＧＲＯ、ＩＬ−６、ＩＬ−１βおよびＴＮＦα産生のより大きな減少をもたらした（表７−４）。
【表７−４】
2021530229.tif 000038
【０１９６】
抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体は、ＤＩＴＲＡ様マウスにおいてオキサゾロン誘導性大腸炎を改善する。腸におけるＩＬ−３６の生物学的機能をさらに探索するために、本発明者らは、ヒト潰瘍性大腸炎と組織学的に類似しているＩＢＤの別の前臨床モデルである、オキサゾロン誘導性大腸炎におけるＩＬ−３６Ｒ遮断の有効性を試験した（Ｈｅｌｌｅｒら）。抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２の予防的投与は、オキサゾロンで処置したＤＩＴＲＡ様マウスの結腸におけるＩＬ−４、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのレベルに反映されるＰＢＳおよびアイソタイプ対照処置群と比較して、ＤＩＴＲＡ様マウスにおいて、オキサゾロン誘導性疾患の重症度を有意に減少させた（表７−５）。
【表７−５】
2021530229.tif 000039
【０１９７】
実施例８：Ｓｃｈｉｌｄ解析のためのヒトＨＥＫ２９３／ＮＦｋＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ３６Ｒ細胞株を使用したバイオアッセイ
【０１９８】
抗ＩＬ３６Ｒ抗体、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２の阻害特性を特徴解析するために、シルド解析を行った。この方法は、多数の条件を満たすとき、阻害剤による拮抗の性質を評価し、競合的アンタゴニストの親和性を測定する（Ｃｏｌｑｕｈｏｕｎ，Ｗｈｙ  ｔｈｅ  Ｓｃｈｉｌｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｉｓ  ｂｅｔｔｅｒ  ｔｈａｎ  Ｓｃｈｉｌｄ  ｒｅａｌｉｚｅｄ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．２００７年１２月；２８（１２）：６０８〜１４）。
【０１９９】
バイオアッセイについては、ＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ−３６Ｒ細胞を、低血清培地、０．１％ＦＢＳおよびＯＰＴＩＭＥＭ中１０，０００細胞／ウェルで９６ウェルアッセイプレート上に播種し、３７℃および５％  ＣＯ２で一晩インキュベーションする。翌日、抗体を、異なる固定濃度（９ｎＭ、３ｎＭ、１ｎＭ、０．３ｎＭまたは０．１ｎＭ）で細胞に加え、細胞と室温で１５分間予めインキュベーションした。抗体を含まない条件も含めた。次に、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、またはＩＬ−３６γを、１００ｎＭ〜２ｐＭまたは１００ｎＭ〜０．１ｐＭまで連続希釈し、任意のリガンドなしで試料と共に細胞に加えた。３７℃および５％ＣＯ２で５．５時間インキュベーション後、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ５またはＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）でルシフェラーゼ活性を検出し、結果を、Ｐｒｉｓｍ  ７（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いたＧａｄｄｕｍ／Ｓｃｈｉｌｄ  ＥＣ５０シフトを使用して解析した。
【０２００】
Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２のシルド解析は、増加する量の抗体によりＩＬ３６リガンド用量反応曲線の平行的な右シフトが生じ、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２の阻害効果は、増加する量のＩＬ３６リガンドにより克服可能であり、これは、Ｈ４Ｈ１４７０６Ｐ２およびＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２の競合的阻害を示唆することを示した（図３（Ａ−Ｆ））。
【０２０１】
実施例９：薬物動態（ＰＫ）試験
【０２０２】
メスのカニクイザルを、ＰＫ特徴決定のために用量群に割り当てた：動物（３匹／群）は、５または０．５ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１４７０８Ｐ２またはＡＰＥ６１５５の単回ＳＣ注射を受けた。投与前、および投与の４、２４、４８、７２、１２０、１６８、２４０、３３６、５０４、５７６、６７２、８４０、９１２、１００８、１０８０、１１７６、１２４８、１３４４、１５１２および１６８０時間後に、全動物から血液試料を採取した。血清中の総Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２またはＡＰＥ６１５５の濃度を、未検証の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して決定した。カニクイザル血清中の総ヒトＩｇＧ濃度を測定する方法を設計した。薬物動態パラメータを、非区画解析を使用して推定した。Ｈ４Ｈ１４７０８Ｐ２は、５ｍｇ／ｋｇの用量でＡＰＥ６１５５よりも約１．３倍高い曝露、および０．５ｍｇ／ｋｇ用量でＡＰＥ６１５５よりも約１．２倍高い曝露を有することを観察した。図４を参照のこと。
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【０２０３】
本明細書に引用される全ての参考文献は、各々の個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が、参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示唆された場合と同じ程度に、参照により取り込まれる。各および全ての個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許に関する、参照による取り込みのこの宣誓は、かかる引用が、参照による取り込みの特化した宣誓とすぐ隣接していなくても、出願人により意図される。本明細書内に、存在するなら、参照による取り込みの特化した宣誓の包含は、参照による取り込みのこの一般的な宣誓いかなる方法でも弱めるものではない。本明細書における参考文献の引用は、参考文献が関連のある先行技術であるという承認として意図されるものではなく、これらの刊行物または文書の内容または日付に関するいかなる承認も構成するものではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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