(57)【要約】  本発明は、医薬組成物及びその用途を開示する。本発明の医薬組成物は、重量部基準で、フェノール酸系成分２〜２０部と、フラボン系成分０．５〜５部と、タンシノン系成分０．００５〜０．５部と、サポニン系成分５〜２０部と、揮発油系成分１０〜１８部とを含み、心筋障害に対して保護効果があり心不全の治療効果を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
フェノール酸系成分２〜２０重量部と、フラボン系成分０．５〜５重量部と、タンシノン系成分０．００５〜０．５重量部と、サポニン系成分５〜２０重量部と、揮発油系成分１０〜１８重量部とを含む医薬組成物。
【請求項２】
フェノール酸系成分４〜１８重量部と、フラボン系成分０．８〜４重量部と、タンシノン系成分０．０１〜０．３重量部と、サポニン系成分６〜１８重量部と、揮発油系成分１４〜１７重量部とを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
フェノール酸系成分６〜１６重量部と、フラボン系成分１〜３重量部と、タンシノン系成分０．０５〜０．２重量部と、サポニン系成分８〜１６重量部と、揮発油系成分１５〜１６重量部とを含む請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝（３．０〜１１．０）：（０．０６〜０．１５）：（０．２〜０．５５）：（０．２〜０．５５）：（０．４〜１．３）：（０．０２〜０．０５）：（０．３〜０．８）：（０．０５〜０．４０）：（０．１０〜０．４０）：（０．０７〜０．１２）：（０．０１５〜０．０４）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝（０．６〜１．８）：（０．３〜０．７）：（０．０３〜０．１８）：（０．０３〜０．６５）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝（０．００１〜０．０３）：（０．００５〜０．０４）：（０．００２〜０．０２５）：（０．００４〜０．０３）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝（１．８〜３．５）：（２．５〜５．４）：（１．３〜５．０）：（０．３０〜０．６０）：（０．４〜０．６）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：ネロリドールの酸化生成物＝（２５〜３８）：（５５〜７６）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ネロリドールの酸化生成物は、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール、及び（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オールを含み、重量部の比率は、（３〜６）：（４〜７）：（２５〜３３）：（２３〜３０）であることを特徴とする請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
心筋障害を軽減させる薬剤を製造するための、又は心不全、好ましくは駆出率が低下した心不全もしくは駆出率が保持された心不全を治療もしくは予防する薬剤を製造するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬分野に関し、特に、医薬組成物及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
心機能不全（ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ）は心不全とも呼ばれ、心臓の収縮機能及び（又は）拡張機能が障害されるため、静脈還流量を心臓から十分に拍出できないことが原因となる静脈系のうっ血や動脈系の血液灌流の不十分が引き起こす心臓循環障害症候群を言う。当該障害症候群は、肺うっ血、大静脈うっ血が主な症状である。心不全は独立した疾患ではなく、終末段階に進行している心臓疾患の表れである。なお、心不全では左心不全、即ち肺循環うっ血として発症する場合が殆どである。
【０００３】
心不全は左室駆出率（ＬＶＥＦ）によって収縮性心不全、拡張性心不全に分類できる。疫学調査によると、慢性心不全患者では４０〜７１％が拡張性心不全（ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ、略称ＤＨＦ）であり、しかも高齢者や女性、高血圧又は糖尿病に罹患している集団に多発する。
【０００４】
欧州心臓病学会（ＥＳＣ）による２００８年心不全指針では、ＤＨＦが左室駆出率が保持された心不全（ＨＦ−ＰＥＦ）と命名されている。これまでの臨床作業において、左室収縮性心不全により多くの注目が向けられているが、左室駆出率正常型心不全の心不全患者全体に占める割合は約５０％であり、収縮性心不全よりも予後が芳しくないだけでなく、突然死の発生率が高い。
【０００５】
【表０】
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【０００６】
左室駆出率が保持された心不全は、心室拡張期で能動的弛緩能力が障害され心筋の硬直が増すことで拡張期に左室の充満が障害されることが原因であり、近年当該タイプの心不全の発生率が上昇している。左室駆出率が保持された心不全は臨床において常に収縮機能の障害より先に心不全の初期に生じるため、ＨＦ−ＰＥＦの経過と進行の緩和そしてその治癒は、患者の苦痛を和らげ、経済的負担を軽減することができる。
【０００７】
ＨＦ−ＰＥＦに対する従来の治療は、積極的な血圧コントロール、心房細動の解消、心房細動時の心拍数規制、利尿薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）とβ遮断薬による左室肥大の逆転、拡張機能の改善を含む。実際の臨床作業において、上記の薬物治療を受けた後も満足のいく効果が得られず、生活の質が顕著に低下している患者は少なからずいる。
【０００８】
漢方薬由来のフェノール酸系成分は、スイカズラ科スイカズラ属のキンギンカ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、バラ科のタクバンコン（Ｒｕｂｕｓ  ｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｓ）、キク科のホコウエイ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）、トウサンカ（Ｅｒｉｇｅｒｏｎ  ｂｒｅｖｉｓｃａｐｕｓ）、シソ科のソビソウ（Ｓａｌｖｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、カンラン科のホウラン（Ｃａｎａｒｉｕｍ  ｂｅｎｇａｌｅｎｓｅ）、セリ科のトウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、センキュウ（Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ  ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ）等の薬用植物に幅広く分布している。これらの植物中の様々なフェノール酸系成分は、フリーラジカルの除去、抗炎症、抗ウイルス、免疫調節、抗凝固、抗腫瘍等の薬理活性を有するため、大きな注目を得ている。
【０００９】
フェノール酸系成分は、コウドク（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂｕｌｂｉｆｅｒａ）、ホコウエイ等に由来する安息香酸を母核とするフェノール酸系成分、トウキ、センキュウ、ホコウエイ等生薬の水溶性抽出物における主なモノマー有効成分のフェルラ酸、シソ科ソビソウ、タンジン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）より分離されたリトスペルミン酸等のケイ皮酸を母核とするフェノール酸系成分、ホコウエイに由来するパラヒドロキシフェニル酢酸、レンギョウ（Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ  ｓｕｓｐｅｎｓａ）の果実より得たパラヒドロキシフェニル酢酸等のフェニル酢酸を母核とするフェノール酸系成分に分けられる。
【００１０】
タンシノンは総タンシノンとしても知られる。漢方薬タンジン（シソ科植物タンジン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ  Ｂｕｎｇｅ）の根）から抽出された抗菌効果がある脂溶性フェナントレンキノン化合物であり、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、タンシノンＩＩＢ、クリプトタンシノン、イソクリプトタンシノン等の十数のタンシノンモノマーが分離される。クリプトタンシノン、ジヒドロタンシノンＩＩ、ヒドロキシタンシノン、タンシノン酸メチル、タンシノンＩＩＢの５つのモノマーは抗菌効果を有し、抗炎症、冷却の効果もある。タンシノンＩＩＡのスルホン化生成物のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムは水に可溶であり、臨床で使用したところ狭心症の治療に顕著な効果が確認され、しかも副作用が小さいため、冠状動脈性心疾患の新規な治療薬になる。総タンシノンは抗菌、抗炎症、循環促進と血の停滞解消、創傷愈合の促進等の様々な効果があり、長期に投与されても顕著な副作用はない。
【００１１】
サポニンはトリテルペン又はスピロステラン系化合物をアグリコンとする一連のグルコシドであり、主に陸生高等植物に分布している。ニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）、キキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｓ）、サイコ（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ  ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍ）等多くの漢方生薬の主な有効成分にサポニンが含まれている。サポニンに抗がん活性、腫瘍細胞の増殖阻害、アポトーシス誘導、腫瘍細胞内の信号伝達への影響、腫瘍血管の新生と腫瘍細胞の転移阻害の効果がある。血糖低減と血中脂質低減、抗ウイルス、免疫調節等の機能があるため、世界中の研究者から大きな注目を集めいている。
【００１２】
フラボン系化合物は、２−フェニルクロモン（フラボン）を母核とする一連の化合物と定義されているが、現在では一般に、２つのベンゼン環（Ａ環とＢ環）が中間の３炭素鎖を介してつながって形成された一連の化学成分を指す。Ａ環とＢ環の間の３炭素鎖の酸化された程度、Ｂ環の連結された位置、３炭素鎖が環化しているか等の特徴により、主な天然のフラボン系化合物を分類することができる。フラボンは植物の二次代謝物であり、抗酸化、血管新生阻害、抗炎症、抗ウイルス、血糖低減、血中脂質低減、抗骨粗しょう症等様々な生理活性を有し、果菜類等様々な植物に幅広く分布している。関連の研究により、フラボンを豊富に含む食事をとることで、結腸がん、前立腺がん、乳がん等のがんに罹患するリスクの低減につながることがすでに証明されている。
【００１３】
漢方薬揮発油は主に芳香族系成分含有の漢方薬に由来し、水蒸気の蒸留により得られた水不溶性の揮発性油状成分の総称である。植物に幅広く存在しており、においのある植物であれば多少の揮発油が含まれると言っても過言ではない。揮発油の含有量が比較的高い植物は、主にキク科、ミカン科、クスノキ科、シソ科、セリ科、フトモモ科、ツツジ科、イネ科、ショウガ科、マメ科、バラ科、モクレン科、ユリ科、ヒノキ科等に集中している。
【００１４】
揮発油は主にテルペン系、芳香族化合物、それらの含酸素誘導体（アルコール、アルデヒド、ケトン、フェノール、エーテル、ラクトン等を含む）からなり、他にも含窒素化合物、含硫黄化合物が含まれる。それは無色ないし淡黄色で大量の透明な油状液体であり、常温でも揮発する。抗炎症、抗アレルギー、抗微生物、抗突然変異と抗がん、駆虫効果、酵素阻害効果を有し、中枢神経系や呼吸器系にも効果がある。
【００１５】
従来の技術においては、サルビアノール酸系成分、タンシノン系成分、サポニン系成分、フラボン系成分、揮発油系成分を組み合わせた医薬品に関する報告はなかった。これらの成分を特定の比率で組み合わせて心不全の治療に使用する例も報告されていない。
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、上記の技術的課題を解決するために、医薬組成物を提供する。
【００１７】
さらに、本発明は、心不全を治療するための、当該医薬組成物の用途を提供する。
【００１８】
本発明は、下記の技術的解決手段より実現している。
本願は、フェノール酸系成分２〜２０重量部と、フラボン系成分０．５〜５重量部と、タンシノン系成分０．００５〜０．５重量部と、サポニン系成分５〜２０重量部と、揮発油系成分１０〜１８重量部とを含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
さらに、本願は、フェノール酸系成分４〜１８重量部と、フラボン系成分０．８〜４重量部と、タンシノン系成分０．０１〜０．３重量部と、サポニン系成分６〜１８重量部と、揮発油系成分１４〜１７重量部とを含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
さらに、本願は、フェノール酸系成分６〜１６重量部と、フラボン系成分１〜３重量部と、タンシノン系成分０．０５〜０．２重量部と、サポニン系成分８〜１６重量部と、揮発油系成分１５〜１６重量部とを含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
上記の医薬組成物において、前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝（３．０〜１１．０）：（０．０６〜０．１５）：（０．２〜０．５５）：（０．２〜０．５５）：（０．４〜１．３）：（０．０２〜０．０５）：（０．３〜０．８）：（０．０５〜０．４０）：（０．１０〜０．４０）：（０．０７〜０．１２）：（０．０１５〜０．０４）を含む。
【００２２】
上記の医薬組成物において、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝（０．６〜１．８）：（０．３〜０．７）：（０．０３〜０．１８）：（０．０３〜０．６５）を含む。
【００２３】
上記の医薬組成物において、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝（０．００１〜０．０３）：（０．００５〜０．０４）：（０．００２〜０．０２５）：（０．００４〜０．０３）を含む。
【００２４】
上記の漢方薬医薬組成物において、前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝（１．８〜３．５）：（２．５〜５．４）：（１．３〜５．０）：（０．３０〜０．６０）：（０．４〜０．６）を含む。
【００２５】
上記の医薬組成物において、前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：ネロリドールの酸化生成物＝（２５〜３８）：（５５〜７６）を含む。ただし、ネロリドールの酸化生成物は、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール、及び（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オールを含み、重量部の比率は、（３〜６）：（４〜７）：（２５〜３３）：（２３〜３０）である。
【００２６】
本発明の医薬組成物中のフェノール酸系成分（ダンシェンス、プロトカテクアルデヒド、サルビアノール酸Ｔ、サルビアノール酸Ｕ、サルビアノール酸Ｄ、サルビアノール酸Ｇ、ロスマリン酸、リトスペルミン酸、サルビアノール酸Ｂ、サルビアノール酸Ａ、イソサルビアノール酸Ｃ）、タンシノン系成分（ジヒドロタンシノンＩ、クリプトタンシノン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ）、サポニン系成分（ノトギンセノシドＲ１、ギンセノシドＲｇ１、ギンセノシドＲｂ１、アストラガロシド、ギンセノシドＲｄ）、フラボン系成分（カリコシン７−グルコシド、オノニン、カリコシン、ホルモノネチン）は、従来の技術を利用して抽出精製の方法で製造してもよいし、市販品から得てもよい。揮発油系成分トランス−ネロリドールは従来技術に該当する。（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オールも従来技術に該当し、これに関しては、文献「Ｔａｏ  Ｙ，Ｗａｎｇ  Ｙ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ｄａｌｂｅｒｇｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ  Ｔ．Ｃｈｅｎ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２０１０，８１（５）：３９３−３９９．」を参照できる。
【００２７】
【化１】
2021519335.tif 000003
【００２８】
さらに、本発明は、前記医薬組成物を含む医薬品製剤を提供する。好ましい実施形態において、前記漢方薬医薬組成物は医薬品製剤に有効成分として占める重量パーセントが０．１〜９９．９％であり、残りは薬学的に許容される担体である。別の実施形態において、本発明の漢方薬医薬組成物は単位用量の医薬品製剤の形態として製剤化される。前記単位用量の形態は、例えば、錠剤の場合は１錠、カプセルの場合は１カプセル、経口液剤の場合は１ボトル、顆粒剤の場合は１袋というように製剤の単位を指す。
【００２９】
本発明に係る製剤は、経口投与、非経口投与（注射又は薬物輸送システムによる皮下、皮内、髄腔内、薬物輸送システムによる筋肉内、静脉内等を含む）、直腸投与、局所（舌下）投与に適するが、最適な投与経路は患者の症状によって決定される。
【００３０】
本明細書で、使用される薬用担体は、固形製剤に用いる賦形剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤等の漢方薬医薬組成物と併用して投与されることが可能な様々な有機担体又は無機担体であり、着色剤、甘味剤等の薬用添加剤も使用できる。前記薬用担体は、マンニトール、ソルビトール、キシリトール等の糖アルコール、システイン塩酸塩、メチオニン、グリシン等のアミノ酸、ビタミンＣ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、一価アルカリ金属の炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩又はこれらの水溶液等の無機塩、塩化ナトリウム、塩化カリウム、二亜硫酸二ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素カルシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸塩、塩酸、酢酸、硫酸、リン酸等の無機酸、乳酸ナトリウム等の有機酸塩、マルトース、グルコース、フルクトース、デキストラン、スクロース、ラクトース、シクロデキストリン（例えば、β−シクロデキストリン）、デンプン等のオリゴ糖、多糖、セルロースとこれらの誘導体、シリコン誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、グリセリン、寒天、ポリソルベート８０等の界面活性剤、ポリエチレングリコール、リン脂質系材料、カオリン、タルク等から選択される。
【００３１】
本発明の医薬品製剤は、任意の医薬品用の剤形であってもよい。具体的には、糖衣錠剤、フィルムコーティング錠剤、腸溶コーティング錠剤等の錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤等のカプセル剤、経口液剤、トローチ剤、顆粒剤、丸剤、散剤、軟膏剤、練剤、懸濁液、粉剤、溶液剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤等の軟膏剤、クリーム剤、スプレー剤、滴剤、テープ剤が挙げられる。本発明の製剤は、カプセル剤、錠剤、経口液剤、顆粒剤、丸剤、散剤、練剤、軟膏剤等の経口剤形、粉末注射剤、注射液、輸液剤等の注射剤であることが好ましい。本発明の製剤は、錠剤であることが最も好ましい。
【００３２】
経口投与用製剤は、一般的な賦形剤、結合剤、充填剤、希釈剤、錠成形剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤、湿潤剤を含んでもよく、必要であれば、錠剤にコーティングを行ってもよい。
【００３３】
充填剤の好適例は、セルロース、マンニトール、ラクトース、他の類似の充填剤を含む。
【００３４】
賦形剤の好ましい例は、ラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン（例えば、α−デンプン）、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、アミロペクチン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム等を含む。
【００３５】
潤滑剤の好ましい例は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、シリカゲル、ドデシル硫酸ナトリウム等を含む。
【００３６】
結合剤の好ましい例は、α−デンプン、スクロース、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、糖類、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、アミロペクチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ピロリドン等を含む。
【００３７】
崩壊剤の好ましい例は、ラクトース、糖類、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、アミノアルキルナトリウム、カルボキシメチルデンプンナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、グリコール酸デンプンナトリウム等を含む。
【００３８】
コーティング剤の好ましい例は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等を含む。
【００３９】
着色剤の好ましい例は、水溶性タートラジン色素（例えば、食用赤色２号、３号、食用黄色４号、５号、食用青色１号、２号等の食用色素）、水不溶性のレーキ色素（例えば、上記の水溶性タートラジン色素のアルミニウム塩）、天然色素（例えば、β−カロテン、クロロフィル、ベンガラ）等を含む。
【００４０】
甘味剤の好ましい例は、サッカリンナトリウム、グリチルレチン酸、アスパルテーム、ステビオシド等を含む。
【００４１】
錠剤の一般的な製造方法は、本発明の漢方薬医薬組成物と薬学的に許容される１種以上の添加剤に対してプレス成形又は金型成形を行うことである。
【００４２】
本発明の漢方薬医薬組成物は、水性又は油性の懸濁液、溶液、乳剤、シロップ剤等の経口液体製剤に製剤化することもできる。また本発明の漢方薬医薬組成物は、水もしくは他の適切な担体で混合して使用する乾燥された製品であってもよい。このような液体製剤は、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル又は硬化脂肪等の懸濁剤、レシチン、ソルビタンモノオレアート又はアラビアゴム等の乳化剤、アーモンドオイル、分留ココナッツオイル、油性エステル、プロピレングリコール又はエタノール等の非水系担体（食用油を含んでもよい）、パラヒドロキシ安息香酸メチル又はパラヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸の防腐剤を含む一般的な添加剤を含んでもよい。必要であれば、一般的な香味剤又は着色剤を含んでもよい。
【００４３】
非経口投与用の製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、抗菌剤、等張剤等を含む水系又は非水系の滅菌注射液、及び懸濁剤と増粘剤を含む水系又は非水系の無菌懸濁液を含む。製剤は、凍結乾燥（フリーズドライ）の条件において、単回投与用量又は複数回投与用量の容器に、例えば、密封されたアンプル又は小瓶に保管されてもよい。使用する前に、注射用水等の無菌の液体担体を添加すればよい。
【００４４】
直腸投与用の製剤は、ココアバター、飽和脂肪酸もしくは他のグリセリド、又はエチレングリコール等の一般的な坐剤基剤を含む坐剤であってもよい。
【００４５】
頬側投与又は舌下投与等の口腔局所投与用の製剤は、スクロース、アラビアゴム等の矯味基剤に有効成分が含まれる錠剤、ゼラチンとグリセリン、もしくはスクロースとアラビアゴムの基剤に有効成分が含まれる香錠を含む。
【００４６】
本発明の漢方薬医薬組成物は、薬物輸送システム製剤として製剤化されもよい。このような長期作用型の製剤は、埋め込み（例えば、皮下もしくは筋肉内）又は筋肉内注射より投与される。そのため、本発明の漢方薬医薬組成物は適切なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容される油中乳剤）又はイオン交換樹脂において製剤化されてもよいし、微溶性塩等の微溶性の誘導体として製剤化されてもよい。
【００４７】
さらに、本発明は、冠状動脈性心疾患の治療薬を製造するための本発明の医薬組成物の用途を提供する。
【００４８】
さらに、本発明は、心筋障害、特に心不全による心筋障害を軽減させる薬剤を製造するための、本発明の医薬組成物の用途を提供する。
【００４９】
さらに、本発明は、心不全を治療又は予防する薬剤を製造するための本発明の医薬組成物の用途を提供する。前記心不全は、駆出率が低下した心不全又は駆出率が保持された心不全であることが好ましい。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、心不全後の炎症反応、及び／又は心筋線維化、及び／又は心筋細胞のアポトーシスを阻害できる。
【００５１】
本発明は、心筋障害に罹患している又は心筋障害に罹患するリスクのある適用者に有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む心筋障害を軽減させる方法を提供する。前記心筋障害は、心不全による心筋障害であることが好ましい。
【００５２】
さらに、本発明は、心筋障害を軽減させるための本発明の上記の医薬組成物の用途を提供する。前記心筋障害は、心不全による心筋障害であることが好ましい。
【００５３】
本発明は、心不全に罹患している又は心不全に罹患するリスクのある適用者に有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む心不全を治療又は予防する方法を提供する。前記心不全は、駆出率が低下した心不全又は駆出率が保持された心不全であることが好ましい。
【００５４】
さらに、本発明は、心不全を治療又は予防するための、本発明の上記の医薬組成物の用途を提供する。前記心不全は、駆出率が低下した心不全又は駆出率が保持された心不全であることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、ＬＡＤ法（左前下行枝結紮）誘導心不全ラットの各実験群における左室機能への影響に関し２８日目にＭモード心臓超音波検査を行って計測された典型的な画像である。
【図２】図２は、ＨＥ染色の典型的な画像（４００×拡大）である。ＤＡＰＩ染色された細胞核は青色に標識されている。
【図３】図３は、ＴＵＮＥＬ法による染色の典型的な顕微鏡画像（４００×拡大）である。アポトーシスした細胞核は緑色に標識されている。
【図４】図４は、酸欠誘導Ｈ９ｃ２心筋細胞損傷おける細胞核の数量とミトコンドリアの生理機能に対する各実験群の保護効果である。蛍光色素を用いてＨ９ｃ２の細胞核の数量とミトコンドリアの質に関しハイコンテンツイメージングを行って典型的な画像を得る。Ｈｏｅｃｈｓｔ蛍光色素でトランスフェクションされた細胞核は青色であり、Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ蛍光色素でトランスフェクションされたミトコンドリアは赤色であり、Ｍｅｒｇｅは両者を重畳させた画像である。
【図５】図５は、本発明薬剤の投与期間における各群の心臓拡張早期の僧帽弁輪部の最大移動速度の変化値（ΔＥａ）である。
【図６】図６は、本発明薬剤の投与期間における各群の心臓拡張機能Ｅ／Ｅａ値の変化率（ΔＥ／Ｅａ）である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
次に、図面を用いて、本発明の実施形態を詳細に説明する。なお、本発明の保護範囲はこれらの実施形態に限定されるものではない。
【００５７】
別途説明がある場合を除き、明細書全体と特許請求の範囲に使用される用語「含む」、又は同じ意味合いの類似の用語は、記載された構成要素を有し、他にも類似の要素が存在する場合を除外しないように理解される。
【実施例】
【００５８】
［実施例１］
フェノール酸系成分１６ｇ、フラボン系成分３．５ｇ、タンシノン系成分０．２ｇ、サポニン系成分１６ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１６ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００５９】
当該医薬組成物は、ダンシェンス１１．５５ｇ、プロトカテクアルデヒド０．１５ｇ、サルビアノール酸Ｔ  ０．６ｇ、サルビアノール酸Ｕ  ０．６ｇ、サルビアノール酸Ｄ  １．３ｇ、サルビアノール酸Ｇ  ０．０５ｇ、ロスマリン酸０．８ｇ、リトスペルミン酸０．４ｇ、サルビアノール酸Ｂ  ０．４ｇ、サルビアノール酸Ａ  ０．１２ｇ、イソサルビアノール酸Ｃ  ０．０４ｇ、カリコシン７−グルコシド２．１ｇ、オノニン０．８ｇ、カリコシン０．２ｇ、ホルモノネチン０．７８ｇ、ジヒドロタンシノンＩ  ０．０４８ｇ、クリプトタンシノン０．０６４ｇ、タンシノンＩ  ０．０４ｇ、タンシノンＩＩＡ  ０．０４８ｇ、ノトギンセノシドＲ１  ３ｇ、ギンセノシドＲｇ１  ４．６ｇ、ギンセノシドＲｂ１  ４．３ｇ、アストラガロシド  ０．５２ｇ、ギンセノシドＲｄ  ０．５２ｇ、トランス−ネロリドール５．３ｇ、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．８４ｇ、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．９８ｇ、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．６３ｇ、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．２１ｇを含む。
【００６０】
［実施例２］
フェノール酸系成分１５．３６ｇ、フラボン系成分３．３３ｇ、タンシノン系成分０．１３ｇ、サポニン系成分１８．６ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１６ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６１】
当該医薬組成物は、ダンシェンス１１ｇ、プロトカテクアルデヒド０．１５ｇ、サルビアノール酸Ｔ  ０．５５ｇ、サルビアノール酸Ｕ  ０．５５ｇ、サルビアノール酸Ｄ  １．３ｇ、サルビアノール酸Ｇ  ０．０５ｇ、ロスマリン酸０．８ｇ、リトスペルミン酸０．４ｇ、サルビアノール酸Ｂ  ０．４ｇ、サルビアノール酸Ａ  ０．１２ｇ、イソサルビアノール酸Ｃ  ０．０４ｇ、カリコシン７−グルコシド１．８ｇ、オノニン０．７ｇ、カリコシン０．１８ｇ、ホルモノネチン０．６５ｇ、ジヒドロタンシノンＩ  ０．０３ｇ、クリプトタンシノン０．０４ｇ、タンシノンＩ  ０．０２５ｇ、タンシノンＩＩＡ  ０．０３ｇ、ノトギンセノシドＲ１  ３．５ｇ、ギンセノシドＲｇ１  ５．４ｇ、ギンセノシドＲｂ１  ５ｇ、アストラガロシド  ０．６ｇ、ギンセノシドＲｄ  ０．６ｇ、トランス−ネロリドール５．３ｇ、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．８４ｇ、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．９８ｇ、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．６３ｇ、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．２１ｇを含む。
【００６２】
［実施例３］
フェノール酸系成分４．４２ｇ、フラボン系成分０．９６ｇ、タンシノン系成分０．０１２ｇ、サポニン系成分６．３ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１５ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６３】
当該医薬組成物は、ダンシェンス３ｇ、プロトカテクアルデヒド０．０６ｇ、サルビアノール酸Ｔ  ０．２ｇ、サルビアノール酸Ｕ  ０．２ｇ、サルビアノール酸Ｄ  ０．４ｇ、サルビアノール酸Ｇ  ０．０２ｇ、ロスマリン酸０．３ｇ、リトスペルミン酸０．０５ｇ、サルビアノール酸Ｂ  ０．１ｇ、サルビアノール酸Ａ  ０．０７ｇ、イソサルビアノール酸Ｃ  ０．０１５ｇ、カリコシン７−グルコシド０．６ｇ、オノニン０．３ｇ、カリコシン０．０３ｇ、ホルモノネチン０．０３ｇ、ジヒドロタンシノンＩ  ０．００１ｇ、クリプトタンシノン０．００５ｇ、タンシノンＩ  ０．００２ｇ、タンシノンＩＩＡ  ０．００４ｇ、ノトギンセノシドＲ１  １．８ｇ、ギンセノシドＲｇ１  ２．５ｇ、ギンセノシドＲｂ１  １．３ｇ、アストラガロシド  ０．３ｇ、ギンセノシドＲｄ  ０．４ｇ、トランス−ネロリドール６．８ｇ、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．８２ｇ、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール１．０９ｇ、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール６．８２ｇ、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール６．２７ｇを含む。
【００６４】
［実施例４］
フェノール酸系成分１８ｇ、フラボン系成分４ｇ、タンシノン系成分０．３ｇ、サポニン系成分１８ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１６ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６５】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝１１：０．１５：０．５５：０．５５：１．３：０．０５：０．８：０．４０：０．４０：０．１２：０．０４を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝１．８：０．７：０．１８：０．６５を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．０３：０．０４：０．０２５：０．０３を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝３．５：５．４：５．０：０．６０：０．６を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝３８：６：７：３３：３０を含む。
【００６６】
［実施例５］
フェノール酸系成分１８ｇ、フラボン系成分４ｇ、タンシノン系成分０．３ｇ、サポニン系成分１８ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１７ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６７】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝３：０．０６：０．２：０.０２：０．４：０．０２：０．３：０．０５：０．１：０．０７：０．０１５を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝０．６：０．３：０．０３：０．０３を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．００１：０．００５：０．００２：０．００４を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝１．８：２５：１．３：０．３：０．４を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝２５：３：４：２５：２３を含む。
【００６８】
［実施例６］
フェノール酸系成分２０ｇ、フラボン系成分５ｇ、タンシノン系成分０．５ｇ、サポニン系成分２０ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１８ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６９】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝１１：０．１５：０．５５：０．５５：１．３：０．０５：０．８：０．４０：０．４０：０．１２：０．０４を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝１．８：０．７：０．１８：０．６５を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．０３：０．０４：０．０２５：０．０３を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝３．５：５．４：５．０：０．６０：０．６を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝３８：６：７：３３：３０を含む。
【００７０】
［実施例７］
フェノール酸系成分２ｇ、フラボン系成分０．５ｇ、タンシノン系成分０．００５ｇ、サポニン系成分５ｇを均一に混合にし、さらに揮発油系成分１０ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００７１】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝３：０．０６：０．２：０.０２：０．４：０．０２：０．３：０．０５：０．１：０．０７：０．０１５を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝０．６：０．３：０．０３：０．０３を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．００１：０．００５：０．００２：０．００４を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝１．８：２５：１．３：０．３：０．４を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝２５：３：４：２５：２３を含む。
【００７２】
［実施例８］
実施例１の漢方薬医薬組成物０．５ｇをＰＥＧ−６０００  １０．５ｇと均一に混合して加熱し、融解した後、滴丸製造容器に移し、薬液を６〜８℃の流動パラフィンに滴加し、油分を除去して、小粒状に練り上げていわゆる滴丸４００粒を得る。
【００７３】
［実施例９］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをグルコース４．５ｇ、チオ硫酸ナトリウム０．９ｇ、蒸留水１ｍｌと均一に混合し、凍結乾燥させて、５００本に小分けして、粉末注射剤を得る。
【００７４】
［実施例１０］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをマンニトール５．５ｇ、エデト酸カルシウム二ナトリウム０．９ｇ、蒸留水２ｍｌと均一に混合し、凍結乾燥させて、３００本に小分けして、粉末注射剤を得る。
【００７５】
［実施例１１］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをデンプン５０ｇ、スクロース５０ｇと均一に混合して造粒し、錠成形を行って錠剤を得る。
【００７６】
［実施例１２］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをデンプン５０ｇ、スクロース５０ｇと均一に混合して造粒し、カプセルに入れてカプセル剤を得る。
【実験例】
【００７７】
次に、実験例を用いて、本発明の有益な効果を説明する。
【００７８】
実験例１：駆出率が低下した心不全
１．  動物モデルと投与方式
１．１．  実験動物
全ての動物は天津中医薬大学実験動物管理センターから使用許可を得る（ＴＣＭ−ＬＡＥＣ２０１７００３）。体重２００±２０ｇの清潔級ＳＤ雄性ラットを用いる。飼育温度は２２〜２５℃、湿度は４０〜７０％である。飼育の過程で、昼夜の区別なく光照射を提供し、定時的に顆粒状の標準飼料を給餌し、滅菌飲料水を与え、実験環境に適応するよう１週間飼育した後実験を行う。
１．２．  実験薬剤
本発明薬剤群：実施例２の薬剤１６９ｇ（ＱＳＹＱ‐１）。
対照薬剤群：実施例２の薬剤から揮発油系成分除去後１６９ｇ（ＱＳＹＱ‐２）。
１．３．  実験方法
ラットは手術前に１２時間禁食し、飲水制限はしない。ラットの体重を記録し、５％抱水クロラール（６ｍＬ／ｋｇ）を腹腔内に注射して麻酔する。ラットが麻酔状態になる（約２〜５分間後に、ラットのつま先を握って痛み反射がない）と、次の操作を行う。
【００７９】
ヨードフォアアルコールで胸元の手術領域を消毒し、ラットの左胸部の第３、第４の肋骨の間に長さ約５ｍｍの切り目を入れる。筋肉層を鈍的剥離して、第３、第４の肋骨の間に止血鉗子で胸腔を開け、リトラクターで牽引して、胸腔を露出する。実体顕微鏡の視野下で、心臓の位置を見つけ、心膜を徐々に引き裂き、左前下行枝の位置（動脈円錐と左心耳の境界）を見つける。左心耳の基部で冠動脈出発点の下方より２〜３ｍｍに、５−０号針付縫合糸で結紮を実施する。結紮後に心臓の表面の対象領域が鮮赤色から蒼白色になり、血管の及ぶ範囲に心筋チアノーゼが出現することが目視観察で確認される。ラットの心拍数が顕著に早くなり、呼吸が窮迫し、心臓の拍動が弱くなる。リトラクターを解いて、綿棒で胸腔内に残留した液体を吸収し、胸腔内のガスを絞り出して、速やかに３−０糸で筋肉と皮膚を縫合する。手術後、ラットを電気毛布に置き、自発呼吸が回復したら、気管挿管を解除し、ペニシリンを投与する。偽手術群では、左前下行枝の下方に結紮を実施せずに糸の貫通だけを行い、他は上記同様の処理を行う。
【００８０】
モデル作成後の１２〜１３日目に、各ラットにそれぞれ心臓の超音波検査を行ってモデル作成の成否を評価する。モデル作成に成功するラットをモデル群、偽手術群（細胞培養実験ではブランク対照群）、本発明薬剤群、対照薬剤群とランダムに４群に分ける。本発明薬剤群では、臨床上の成人１日投与量に基づき、手術後の１４日目から、１００ｍｇ／ｋｇの臨床等価用量で、１４日間にわたって毎日本発明の医薬組成物をラットに強制経口投与する。対照薬剤群では、臨床上の成人１日投与量に基づき、手術後の１４日目から、１００ｍｇ／ｋｇの臨床等価用量で、１４日間にわたって毎日ラットに強制経口投与を実施する。
【００８１】
２．  検体採取
血液検体：ラットに血行動態検査を行った後、腹大動脈より採血し、採血後に、管口にラベルをつけ、３７℃の水浴に３０分間置いてから、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して、血清を取り分けて１．５ｍＬ遠心管に入れて、−８０℃で保管しておく。
【００８２】
心臓検体：腹大動脈採血後に、心臓を摘出し、４％パラホルムアルデヒド溶液で２回洗い流してホルマリン溶液に入れて固定し、保管しておく。
【００８３】
３．  動物モデル評価
超音波評価：手術後１４日目に、ラットに心臓の超音波検査を行って評価し、左室駆出率（ＥＦ値）が３８〜５０％の範囲である場合は、心不全モデル作成に成功すると判断する。酵素結合免疫吸着法（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ＝ＥＬＩＳＡ）により血清検体中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ１−βの含有量を検出する。生化学自動分析装置でＣＫ、ＣＫ−ＭＢ、ＬＤＨを検出する。
【００８４】
心臓検体の脱水、包埋、切片を行って、ＨＥ染色とＴＵＮＥＬ法による蛍光染色で切片を染色する。
【００８５】
４．  データ処理
ソフトウェアＳＰＳＳ２２．０で実験データの統計学的処理を行い、実験結果は平均値±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表示される。群間比較では一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を適用し、Ｐ＜０．０５である場合は、統計学的有意差がある。図中のデータは平均値±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表示される。
【００８６】
５．  結果
５．１．  各治療群におけるラットの心機能への影響
Ｍモード超音波評価の結果では、図１のＭモード超音波検査の典型的な画像に示すように、モデル群は正常な対照群よりも心室腔に進行性の拡張が確認され、しかも左室の室壁運動が弱くなり、収縮力が低下しているのに対し、本発明薬剤群、対照薬剤群では、心室腔の拡張程度にも収縮力にも改善が確認されている。左前下行枝結紮モデルの作成後、ラットの駆出率、内径短縮率及び左室面積変化率は正常な対照群（偽手術群）よりも顕著に低減し、各群薬物の投与治療後、モデル群との比較で、投与群ラットの左室駆出率の進行性低減が遅くなり、しかも統計学的有意差がある。左室の内径短縮率は左室駆出率に一致する変化を呈し、しかも左室の内径短縮率（ＦＳ）はモデル群との比較で統計学的有意差がある。各実験群（本発明薬剤群、対照薬剤群）ではＬＡＤ法誘導心不全ラットの心機能に対する保護効果が認められる。２８日目以後に測定された駆出率（ＥＦ）、内径短縮率（ＦＳ）のデータを表１、表２に示す。本発明薬剤群のＥＦ、ＦＳがいずれも対照薬剤群より高いことから、本発明の医薬組成物中の揮発油はサルビアノール酸系成分、サポニン系成分、フラボン系成分、タンシノン系成分の吸収を促進する効果を有し、心不全患者においてこれらと共に心機能を保護するように作用することが判明した。
【００８７】
【表１】
2021519335.tif 000004
【００８８】
【表２】
2021519335.tif 000005
【００８９】
５．２．  心筋マーカー指標結果
各実験群（本発明薬剤群、対照薬剤群）におけるＬＡＤ法誘導心不全ラットの心筋マーカー放出と心筋組織学に与える影響を検討する。投与群ラットはモデル群よりも血清中ＣＫ、ＬＤＨ、ＣＫ−ＭＢの含有量がいずれも低減しており、投与群で心筋マーカーを低減する効果がある。クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベルでは、本発明薬剤群が対照薬剤群と基本的に同じであり、クレアチンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）レベル、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）レベルでは、いずれも対照薬剤群よりも低減効果が優れていることから、本発明薬剤群で揮発油は他の成分と共に作用することが示される。詳細は、表３、表４、表５を参照する。
【００９０】
【表３】
2021519335.tif 000006
【００９１】
【表４】
2021519335.tif 000007
【００９２】
【表５】
2021519335.tif 000008
【００９３】
５．３．  病理学的結果
ＨＥ染色結果を図２に示す。ＨＥ染色の典型的な画像（４００×拡大）では、ＤＡＰＩ染色された細胞核が青色に標識されている。モデル群は正常な偽手術群よりも、白血球浸潤が顕著に増加し、心筋線維の破裂が顕著であることから、各種の投与治療により心筋障害の程度が顕著に軽減されたことが判明している。
【００９４】
ＴＵＮＥＬ法による染色結果を図３に示す。ＴＵＮＥＬ法による染色の典型的な顕微鏡画像（４００×拡大）では、アポトーシス細胞核が緑色に標識されていることが、左前下行枝結紮がラットの心筋細胞損傷を誘導したことを示す。図２から分かるように、染色後にフルオレセインで標識されているアポトーシス小体が明らかに確認され、心筋細胞のアポトーシス率は正常な偽手術群よりも顕著に上昇している。
【００９５】
５．１〜５．３の研究結果から分かるように、左前下行枝結紮心不全ラットモデルでは、左室前壁の運動が大幅に弱くなり、心筋収縮力が顕著に低下しており、モデル群は偽手術群よりも心機能が顕著に低下している。本発明薬剤群では、左室の変化が顕著に低減され、左前下行枝結紮誘導ラットにおける心臓障害によるＥＦ、ＦＳの進行性低減が顕著に緩和され、心筋収縮力が維持され、心臓が送り出す血液量が保証されている。心筋マーカー実験結果では、投与後にモデルラットにおけるＣＫ、ＣＫ−ＭＢ、ＬＤＨの含有量が低減される。また、モデルの作成に時間がかかるため、これらの酵素の含有量は心筋障害後に急性に上昇している現象が経時的に回復した後においても、本発明薬剤群が心筋マーカー低減の効果を示すことから、投与後にある程度心臓保護の効果があることが示されている。また、ＨＥ染色結果、ＴＵＮＥＬ法による染色結果では、投与後に心不全モデルラットにおける炎症反応、心筋線維化、心筋細胞のアポトーシス等を阻害して、心筋細胞を保護する効果が得られることが示されている。
【００９６】
実験例２：細胞培養と活性評価
１．実験薬剤：実験例１と同様に本発明薬剤群、対照薬剤群と、ダンシェンス、プロトカテクアルデヒド、サルビアノール酸Ｔ、サルビアノール酸Ｕ、サルビアノール酸Ｄ、サルビアノール酸Ｇ、ロスマリン酸、リトスペルミン酸、サルビアノール酸Ｂ、サルビアノール酸Ａ、イソサルビアノール酸Ｃ、カリコシン７−グルコシド、オノニン、カリコシン、ホルモノネチン、ジヒドロタンシノンＩ、クリプトタンシノン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、ノトギンセノシドＲ１、ギンセノシドＲｇ１、ギンセノシドＲｂ１、アストラガロシド、ギンセノシドＲｄ各１６０ｇの各有効成分群とを設ける。
【００９７】
２．実験方法：本発明薬剤群、対照薬剤群、各有効成分群は、ＤＭＳＯ超音波溶解により０．４ｍｇ／ｍＬの保存溶液を調製し、インビトロ活性評価を行う時、実験培地を用いてそれぞれ等倍に希釈する。
【００９８】
対数増殖期細胞を採集し、黒色ウェル／透明底の９６ウェルプレートに、各ウェルに５０００個細胞の濃度で１００μＬを加え、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターに２４時間培養する。次に実験群にそれぞれ各被験群を加え、２４時間インキュベートする。次に低酸素環境に置いて、窒素ガス９５％とＣＯ２５％からなる混合ガスを１５Ｌ／分間の流速で１０分間流し込み、３７℃で酸欠障害を誘導して８時間インキュベートし、モデル群では酸欠状態でのインキュベーションだけを８時間実施し、ブランク対照群は普通にインキュベートを実施する。
【００９９】
次の操作で細胞蛍光プローブによる標識を行う。蛍光プローブＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２母液を１０００倍に希釈してＤＭＥＭ基礎培地に入れる。次に、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ  Ｄｅｅｐ  Ｒｅｄ  ＦＭ母液を１００００倍に希釈してＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２を含む培地に入れて「複合」染色剤として用いる。プレートから培地を除去し、各ウェルに５０μＬの「複合」染色剤を入れ替え、インキュベーターにおいて遮光状態で３０分間培養する。次に遮光状態でプレートを取り出し、ＤＭＥＭ高糖培地でプレートを３回洗浄し、洗浄されるたびに５分間後に生細胞イメージングを行う。
【０１００】
以下の操作でハイコンテントスクリーニング（ＨＣＳ）を利用して生細胞イメージングを行う。励起光３６０〜４００／発射光４１０〜４８０により、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で標識された細胞核に対してイメージングを行う。励起光６２０〜６４０／発射光６５０〜７６０により、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ  Ｄｅｅｐ  Ｒｅｄ  ＦＭで標識されたミトコンドリアに対してイメージングを行う。ソフトウェアＨａｒｍｏｎｙ  ３．０を用いてＨＣＳイメージング結果を分析し、細胞核蛍光強度／細胞質蛍光強度を読み取る。ＨＣＳスクリーニングシステムに自動蛍光顕微鏡イメージング機能が搭載されているため、ハイスループットの多指標分析を実施できる。高効率画像・データ管理と分析システムとして、パーキンエルマー社のイメージデータベースシステムＣｏｌｕｍｂｕｓを利用して、画像とデータの二次分析と管理を行って、用量反応関係曲線を描画する。
【０１０１】
データ処理方法：実験例１と同じ。
【０１０２】
３．実験結果：図３（表４）の酸欠誘導心筋細胞損傷モデルでは、ブランク対照群よりも生細胞核の数量が顕著に低減し、本発明薬剤が投与された実験群では、揮発油を含まない対照薬剤群よりも優れた保護効果が顕著に示されている。表５は、酸欠誘導Ｈ９ｃ２心筋細胞損傷における細胞核の数量に対する本発明薬剤中の単一成分の保護効果の研究結果を示す。本発明薬剤中のフェノール酸系成分、フラボン系成分、サポニン系成分、タンシノン系成分はいずれもある程度心筋細胞の数量を保護する効果があるが、単一成分の効果は、いずれも本発明薬剤の心筋細胞損傷に対する保護効果に劣っていることから、本発明薬剤中の各成分を組み合わせると相乗効果があることが示される。
【０１０３】
【表６】
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【０１０４】
【表７】
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【０１０５】
ミトコンドリアの質に関して、図３、表６でモデル群とブランク対照群の比較で、心筋の酸欠障害により酸素供給が不足するため、細胞内の酸素センサーの代償的調節により酸素の利用度が高まり、モデル群でミトコンドリアの質が顕著に向上している。本発明薬剤が投与された実験群では、揮発油を含まない対照薬剤群よりも優れた保護効果が顕著に示されている。表７は、酸欠誘導Ｈ９ｃ２心筋細胞損傷におけるミトコンドリアの機能に対する本発明薬剤群とその単一成分の保護効果を示す。結果では、本発明薬剤中のフェノール酸系成分、フラボン系成分、サポニン系成分、タンシノン系成分がいずれもある程度心筋細胞のミトコンドリアの機能を保護する効果はあるが、心筋障害後のミトコンドリア機能に対する保護効果において、各成分はいずれも本発明薬剤に劣っていることから、本発明薬剤中の各成分を組み合わせると相乗効果があることが示されている。
【０１０６】
【表８】
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【０１０７】
【表９】
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【０１０８】
４．結論：表４〜表７では、本発明薬剤、２４の成分からなる医薬組成物（対照薬剤）及び単一成分に関する活性評価が示されている。本発明薬剤は顕著な活性を有し、本発明薬剤の各成分に相乗効果があること判明している。
【０１０９】
実験例３：駆出率が保持された心不全
本発明薬剤の９０日間連続投与の自発性慢性心不全アカゲザルに対する有効性を研究する。
１．  研究目的
本発明薬剤を臨床等価用量で９０日間連続投与し、自発性慢性心不全（ＮＹＨＡ分類ＩＩ〜ＩＶ度、ＨｆｐＥＦ）アカゲザル（中年／老年）に対する有効性を研究する。主な薬力学的指標は、心臓超音波検査指標による心臓構造分析、投与前後の収縮機能と拡張機能の変化である。
【０１１０】
２．  実験材料と方法
２．１．  実験材料
２．１．１．  実験動物
動物種：アカゲザル。
等級：普通。一般検査、２回の結核菌検査、寄生虫検査、サルモネラ菌検査、赤痢菌検査、Ｂウイルス検査を含む実験前検査に合格している。
動物識別：ネックリングに数字がプリントされたステンレス鋼製ナンバープレートを付け、胸元に印字する。
【０１１１】
（１）組み入れ基準
雄性、年齢１２〜２３歳（成人４０〜７０歳に相当する）。
体重：９〜１３ｋｇ。
ＮＹＨＡ分類ＩＩ〜ＩＶ度。各群では半数の動物がＨＦｐＥＦである。
ＨＦｐＥＦ（中度以上障害）：ｅ’（Ｅａ）＜８又はＥ／ｅ’（Ｅ／Ｅａ）＞１０（臨床診断基準参照）。
【０１１２】
（２）排除基準
２級ないし３級の高血圧（収縮期血圧（ＳＢＰ）＞１４０ｍｍＨｇ、拡張期血圧（ＤＢＰ）＞９０ｍｍＨｇ）。
重度の肝機能又は腎機能障害、貧血、白血球増加、血小板減少、電解質異常、体重異常変動。
内分泌、免疫、凝固、泌尿生殖器系に明確な臨床的異常症状又は疾患がある。
薬力学的評価に影響を与える他の既往歴がある。
【０１１３】
２．１．２．  被験物
本発明薬剤（実施例１、天士力医薬集団股フン有限公司提供、ＱＳＹＱ）を投与の便宜上、所定の比率でＰＥＧと混合して動物実験用の滴丸に製剤化する。ロット番号は、２０１８０２１５である。
【０１１４】
２．２．  群分けと投与
本実験では、偽薬群、本発明薬剤の低用量群、本発明薬剤の高用量群と３群に分け、各群が動物４匹を含む。
【０１１５】
投与経路：経鼻、１日１次。
投与量決定：各回秤量された体重に基づいて次週の投与量を算出する。
投与時間：毎日８時〜１０時。
詳しくは、表８が参照される。
【０１１６】
【表１０】
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【０１１７】
２．３．  測定指標
主な薬力学的指標：投与前、投与後から３０日目、後６０日目、後９０日目にそれぞれ心不全サルの心機能を測定し、傍胸骨左室長軸断面の左室波群により拡張末期及び収縮末期の左室内径を測定して、左室の拡張末期容積（Ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ−ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｖｏｌｕｍｅ＝ＬＶＥＤＶ）、左室収縮末期容積（Ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ−ｓｙｓｔｏｌｉｃ  ｖｏｌｕｍｅ＝ＬＶＥＳＶ）、一回拍出量（ｓｔｒｏｋｅ  ｖｏｌｕｍｅ＝ＳＶ）、Ｅａ値、Ｅ／Ｅａ値等パラメータを算出することによって、心不全サルの収縮機能及び拡張機能に対する本発明薬剤の影響を評価する。
【０１１８】
二次的な薬力学的指標：投与前、投与後から３０日目、後６０日目、後９０日目にそれぞれサルの血圧変化を測定する。
【０１１９】
観測：投与期間に毎日、運動量や摂食量、体重などの動物の日常的な状態を観測する。
【０１２０】
３．  データ処理
測定されたデータは、いずれも平均±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表示される。群間比較では、ソフトウェアＳＰＳＳ１１．５で反復測定分散分析を行う（データが球面分布に従わない場合は２次曲線当てはめ分析を用いる）。有意水準α＝０．０５で検定する。
【０１２１】
４．  実験結果
１）自発性慢性心不全アカゲザルの血圧に対する影響
表９の研究結果より、本発明薬剤は心不全サルの収縮期血圧にある程度改善があり、血圧降下効果が用量依存的であることが示されている。
【０１２２】
【表１１】
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【０１２３】
２）自発性慢性心不全アカゲザルの心機能に対する影響
表１０の研究結果より、心不全サルの左室駆出率に対する影響に関する本発明薬剤と溶媒群の比較で統計学的有意差があることから、本発明薬剤は心不全サルの左室収縮力にある程度の影響を有し、ある程度心不全サルの左心機能を改善できることが示される。
【０１２４】
また、拡張機能の検査でＥａ、Ｅ／Ｅａはいずれも心臓の左室拡張機能を評価するために一般的に使用されるパラメータであり感度が高い指標でもある。サルの場合は一般にＥ／Ｅａ値が９前後である。研究の結果より、投与群ではモデル群よりも、拡張早期の僧帽弁輪部の最大移動速度の変化値（ΔＥａ）、Ｅ／Ｅａ値の変化率（ΔＥ／Ｅａ）がいずれも改善されたことが判明している（図５、図６参照）。
【０１２５】
【表１２】
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【０１２６】
３）日常的観測
投与期間に毎日実験動物を観測したところ、偽薬群の動物には運動量の低減、運動後の呼吸困難、体力低下、力不足、摂食量の減少等の所見があるが、本発明薬剤投与群では、偽薬群よりも動物の１日平均運動量が多く、活発であり、体力が優れており、呼吸窮迫等の症状が少なく、摂食量が正常であることが示される。
【０１２７】
５．結論
本発明薬剤の９０日間連続投与は、駆出率が保持された心不全モデルのサルの駆出率を高め、収縮機能を改善することができ、拡張機能にもある程度の改善効果がある。
【０１２８】
上記の内容に記載された本発明の実施形態は説明及び例示の目的のものである。これらの実施形態は、本発明を開示されている内容に具体的に限定するためのものではない。なお、上記の開示には様々な変更を行うことができる。特定の実施形態を選択して例示的な説明をすることは、本発明に係る特定の原理及びその実際の用途を解釈することによって、当業者が本発明に係る様々な示例的な実施形態を実施し、適宜選択と変更を行うことを可能にするためである。本発明の範囲は、特許請求の範囲及び同等な形式の内容によって限定される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１２９】
【非特許文献１】Ｔａｏ  Ｙ，Ｗａｎｇ  Ｙ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ｄａｌｂｅｒｇｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ  Ｔ．Ｃｈｅｎ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２０１０，８１（５）：３９３−３９９．
【図１】
2021519335.tif 000016
【図２】
2021519335.tif 000017
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年12月3日(2020.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フェノール酸系成分２〜２０重量部と、フラボン系成分０．５〜５重量部と、タンシノン系成分０．００５〜０．５重量部と、サポニン系成分５〜２０重量部と、揮発油系成分１０〜１８重量部とを含む医薬組成物。
【請求項２】
フェノール酸系成分４〜１８重量部と、フラボン系成分０．８〜４重量部と、タンシノン系成分０．０１〜０．３重量部と、サポニン系成分６〜１８重量部と、揮発油系成分１４〜１７重量部とを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
フェノール酸系成分６〜１６重量部と、フラボン系成分１〜３重量部と、タンシノン系成分０．０５〜０．２重量部と、サポニン系成分８〜１６重量部と、揮発油系成分１５〜１６重量部とを含む請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝（３．０〜１１．０）：（０．０６〜０．１５）：（０．２〜０．５５）：（０．２〜０．５５）：（０．４〜１．３）：（０．０２〜０．０５）：（０．３〜０．８）：（０．０５〜０．４０）：（０．１０〜０．４０）：（０．０７〜０．１２）：（０．０１５〜０．０４）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝（０．６〜１．８）：（０．３〜０．７）：（０．０３〜０．１８）：（０．０３〜０．６５）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝（０．００１〜０．０３）：（０．００５〜０．０４）：（０．００２〜０．０２５）：（０．００４〜０．０３）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝（１．８〜３．５）：（２．５〜５．４）：（１．３〜５．０）：（０．３０〜０．６０）：（０．４〜０．６）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：ネロリドールの酸化生成物＝（２５〜３８）：（５５〜７６）を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ネロリドールの酸化生成物は、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール、及び（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オールを含み、重量部の比率は、（３〜６）：（４〜７）：（２５〜３３）：（２３〜３０）であることを特徴とする請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む医薬品製剤であって、前記医薬組成物は前記医薬品製剤の０．１ｗｔ％〜９９．９ｗｔ％を占め、残りは薬学的に許容される担体であることを特徴とする、前記医薬品製剤。
【請求項１１】
前記薬学的に許容される担体は、賦形剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、着色剤及び甘味剤から選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬品製剤。
【請求項１２】
前記薬学的に許容される担体は、糖アルコール、好ましくはマンニトール、ソルビトール、キシリトール；アミノ酸、好ましくはシステイン塩酸塩、メチオニン、グリシン；ビタミンＣ；ＥＤＴＡ二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム；無機塩、好ましくは一価アルカリ金属の炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩又はこれらの水溶液；塩化ナトリウム、塩化カリウム；二亜硫酸二ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム；炭酸カルシウム、炭酸水素カルシウム；ステアリン酸塩、好ましくはステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム；無機酸、好ましくは塩酸、酢酸、硫酸、リン酸；有機酸塩、好ましくは乳酸ナトリウム；オリゴ糖、多糖、セルロースとこれらの誘導体、好ましくはマルトース、グルコース、フルクトース、デキストラン、スクロース、ラクトース、β−シクロデキストリン、デンプン；シリコン誘導体；アルギン酸塩；ゼラチン；ポリビニルピロリドン；グリセリン；寒天；界面活性剤、好ましくはポリソルベート８０；ポリエチレングリコール；リン脂質系材料；カオリン；及びタルクから選択されることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の医薬品製剤。
【請求項１３】
剤形は、錠剤、好ましくは糖衣錠剤、フィルムコーティング錠剤及び腸溶コーティング錠剤；カプセル剤、好ましくは硬カプセル剤及び軟カプセル剤；経口液剤；トローチ剤；顆粒剤；丸剤；散剤；膏剤；練剤；懸濁液；粉剤；溶液剤；注射剤；坐剤；膏剤、好ましくは軟膏剤、硬膏剤；クリーム剤；スプレー剤；滴剤；及びテープ剤から選択されることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の医薬品製剤。
【請求項１４】
剤形は、経口剤形、好ましくはカプセル剤、錠剤、経口液剤、顆粒剤、丸剤、散剤、練剤及び膏剤等；及び、注射剤、好ましくは粉末注射剤、注射液及び輸液剤から選択されることを特徴とする、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の医薬品製剤。
【請求項１５】
心筋障害、好ましくは心不全による心筋障害を軽減させるための、及び／又は心不全、好ましくは駆出率が低下した心不全もしくは駆出率が保持された心不全を治療もしくは予防するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物又は請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の医薬品製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬分野に関し、特に、医薬組成物及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
心機能不全（ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ）は心不全とも呼ばれ、心臓の収縮機能及び（又は）拡張機能が障害されるため、静脈還流量を心臓から十分に拍出できないことが原因となる静脈系のうっ血や動脈系の血液灌流の不十分が引き起こす心臓循環障害症候群を言う。当該障害症候群は、肺うっ血、大静脈うっ血が主な症状である。心不全は独立した疾患ではなく、終末段階に進行している心臓疾患の表れである。なお、心不全では左心不全、即ち肺循環うっ血として発症する場合が殆どである。
【０００３】
心不全は左室駆出率（ＬＶＥＦ）によって収縮性心不全、拡張性心不全に分類できる。疫学調査によると、慢性心不全患者では４０〜７１％が拡張性心不全（ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ、略称ＤＨＦ）であり、しかも高齢者や女性、高血圧又は糖尿病に罹患している集団に多発する。
【０００４】
欧州心臓病学会（ＥＳＣ）による２００８年心不全指針では、ＤＨＦが左室駆出率が保持された心不全（ＨＦ−ＰＥＦ）と命名されている。これまでの臨床作業において、左室収縮性心不全により多くの注目が向けられているが、左室駆出率正常型心不全の心不全患者全体に占める割合は約５０％であり、収縮性心不全よりも予後が芳しくないだけでなく、突然死の発生率が高い。
【０００５】
【表０】
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【０００６】
左室駆出率が保持された心不全は、心室拡張期で能動的弛緩能力が障害され心筋の硬直が増すことで拡張期に左室の充満が障害されることが原因であり、近年当該タイプの心不全の発生率が上昇している。左室駆出率が保持された心不全は臨床において常に収縮機能の障害より先に心不全の初期に生じるため、ＨＦ−ＰＥＦの経過と進行の緩和そしてその治癒は、患者の苦痛を和らげ、経済的負担を軽減することができる。
【０００７】
ＨＦ−ＰＥＦに対する従来の治療は、積極的な血圧コントロール、心房細動の解消、心房細動時の心拍数規制、利尿薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）とβ遮断薬による左室肥大の逆転、拡張機能の改善を含む。実際の臨床作業において、上記の薬物治療を受けた後も満足のいく効果が得られず、生活の質が顕著に低下している患者は少なからずいる。
【０００８】
漢方薬由来のフェノール酸系成分は、スイカズラ科スイカズラ属のキンギンカ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、バラ科のタクバンコン（Ｒｕｂｕｓ  ｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｓ）、キク科のホコウエイ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）、トウサンカ（Ｅｒｉｇｅｒｏｎ  ｂｒｅｖｉｓｃａｐｕｓ）、シソ科のソビソウ（Ｓａｌｖｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、カンラン科のホウラン（Ｃａｎａｒｉｕｍ  ｂｅｎｇａｌｅｎｓｅ）、セリ科のトウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、センキュウ（Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ  ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ）等の薬用植物に幅広く分布している。これらの植物中の様々なフェノール酸系成分は、フリーラジカルの除去、抗炎症、抗ウイルス、免疫調節、抗凝固、抗腫瘍等の薬理活性を有するため、大きな注目を得ている。
【０００９】
フェノール酸系成分は、コウドク（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂｕｌｂｉｆｅｒａ）、ホコウエイ等に由来する安息香酸を母核とするフェノール酸系成分、トウキ、センキュウ、ホコウエイ等生薬の水溶性抽出物における主なモノマー有効成分のフェルラ酸、シソ科ソビソウ、タンジン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）より分離されたリトスペルミン酸等のケイ皮酸を母核とするフェノール酸系成分、ホコウエイに由来するパラヒドロキシフェニル酢酸、レンギョウ（Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ  ｓｕｓｐｅｎｓａ）の果実より得たパラヒドロキシフェニル酢酸等のフェニル酢酸を母核とするフェノール酸系成分に分けられる。
【００１０】
タンシノンは総タンシノンとしても知られる。漢方薬タンジン（シソ科植物タンジン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ  Ｂｕｎｇｅ）の根）から抽出された抗菌効果がある脂溶性フェナントレンキノン化合物であり、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、タンシノンＩＩＢ、クリプトタンシノン、イソクリプトタンシノン等の十数のタンシノンモノマーが分離される。クリプトタンシノン、ジヒドロタンシノンＩＩ、ヒドロキシタンシノン、タンシノン酸メチル、タンシノンＩＩＢの５つのモノマーは抗菌効果を有し、抗炎症、冷却の効果もある。タンシノンＩＩＡのスルホン化生成物のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムは水に可溶であり、臨床で使用したところ狭心症の治療に顕著な効果が確認され、しかも副作用が小さいため、冠状動脈性心疾患の新規な治療薬になる。総タンシノンは抗菌、抗炎症、循環促進と血の停滞解消、創傷愈合の促進等の様々な効果があり、長期に投与されても顕著な副作用はない。
【００１１】
サポニンはトリテルペン又はスピロステラン系化合物をアグリコンとする一連のグルコシドであり、主に陸生高等植物に分布している。ニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）、キキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｓ）、サイコ（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ  ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍ）等多くの漢方生薬の主な有効成分にサポニンが含まれている。サポニンに抗がん活性、腫瘍細胞の増殖阻害、アポトーシス誘導、腫瘍細胞内の信号伝達への影響、腫瘍血管の新生と腫瘍細胞の転移阻害の効果がある。血糖低減と血中脂質低減、抗ウイルス、免疫調節等の機能があるため、世界中の研究者から大きな注目を集めいている。
【００１２】
フラボン系化合物は、２−フェニルクロモン（フラボン）を母核とする一連の化合物と定義されているが、現在では一般に、２つのベンゼン環（Ａ環とＢ環）が中間の３炭素鎖を介してつながって形成された一連の化学成分を指す。Ａ環とＢ環の間の３炭素鎖の酸化された程度、Ｂ環の連結された位置、３炭素鎖が環化しているか等の特徴により、主な天然のフラボン系化合物を分類することができる。フラボンは植物の二次代謝物であり、抗酸化、血管新生阻害、抗炎症、抗ウイルス、血糖低減、血中脂質低減、抗骨粗しょう症等様々な生理活性を有し、果菜類等様々な植物に幅広く分布している。関連の研究により、フラボンを豊富に含む食事をとることで、結腸がん、前立腺がん、乳がん等のがんに罹患するリスクの低減につながることがすでに証明されている。
【００１３】
漢方薬揮発油は主に芳香族系成分含有の漢方薬に由来し、水蒸気の蒸留により得られた水不溶性の揮発性油状成分の総称である。植物に幅広く存在しており、においのある植物であれば多少の揮発油が含まれると言っても過言ではない。揮発油の含有量が比較的高い植物は、主にキク科、ミカン科、クスノキ科、シソ科、セリ科、フトモモ科、ツツジ科、イネ科、ショウガ科、マメ科、バラ科、モクレン科、ユリ科、ヒノキ科等に集中している。
【００１４】
揮発油は主にテルペン系、芳香族化合物、それらの含酸素誘導体（アルコール、アルデヒド、ケトン、フェノール、エーテル、ラクトン等を含む）からなり、他にも含窒素化合物、含硫黄化合物が含まれる。それは無色ないし淡黄色で大量の透明な油状液体であり、常温でも揮発する。抗炎症、抗アレルギー、抗微生物、抗突然変異と抗がん、駆虫効果、酵素阻害効果を有し、中枢神経系や呼吸器系にも効果がある。
【００１５】
従来の技術においては、サルビアノール酸系成分、タンシノン系成分、サポニン系成分、フラボン系成分、揮発油系成分を組み合わせた医薬品に関する報告はなかった。これらの成分を特定の比率で組み合わせて心不全の治療に使用する例も報告されていない。
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、上記の技術的課題を解決するために、医薬組成物を提供する。
【００１７】
さらに、本発明は、心不全を治療するための、当該医薬組成物の用途を提供する。
【００１８】
本発明は、下記の技術的解決手段より実現している。
本願は、フェノール酸系成分２〜２０重量部と、フラボン系成分０．５〜５重量部と、タンシノン系成分０．００５〜０．５重量部と、サポニン系成分５〜２０重量部と、揮発油系成分１０〜１８重量部とを含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
さらに、本願は、フェノール酸系成分４〜１８重量部と、フラボン系成分０．８〜４重量部と、タンシノン系成分０．０１〜０．３重量部と、サポニン系成分６〜１８重量部と、揮発油系成分１４〜１７重量部とを含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
さらに、本願は、フェノール酸系成分６〜１６重量部と、フラボン系成分１〜３重量部と、タンシノン系成分０．０５〜０．２重量部と、サポニン系成分８〜１６重量部と、揮発油系成分１５〜１６重量部とを含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
上記の医薬組成物において、前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝（３．０〜１１．０）：（０．０６〜０．１５）：（０．２〜０．５５）：（０．２〜０．５５）：（０．４〜１．３）：（０．０２〜０．０５）：（０．３〜０．８）：（０．０５〜０．４０）：（０．１０〜０．４０）：（０．０７〜０．１２）：（０．０１５〜０．０４）を含む。
【００２２】
上記の医薬組成物において、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝（０．６〜１．８）：（０．３〜０．７）：（０．０３〜０．１８）：（０．０３〜０．６５）を含む。
【００２３】
上記の医薬組成物において、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝（０．００１〜０．０３）：（０．００５〜０．０４）：（０．００２〜０．０２５）：（０．００４〜０．０３）を含む。
【００２４】
上記の漢方薬医薬組成物において、前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝（１．８〜３．５）：（２．５〜５．４）：（１．３〜５．０）：（０．３０〜０．６０）：（０．４〜０．６）を含む。
【００２５】
上記の医薬組成物において、前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：ネロリドールの酸化生成物＝（２５〜３８）：（５５〜７６）を含む。ただし、ネロリドールの酸化生成物は、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール、及び（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オールを含み、重量部の比率は、（３〜６）：（４〜７）：（２５〜３３）：（２３〜３０）である。
【００２６】
本発明の医薬組成物中のフェノール酸系成分（ダンシェンス、プロトカテクアルデヒド、サルビアノール酸Ｔ、サルビアノール酸Ｕ、サルビアノール酸Ｄ、サルビアノール酸Ｇ、ロスマリン酸、リトスペルミン酸、サルビアノール酸Ｂ、サルビアノール酸Ａ、イソサルビアノール酸Ｃ）、タンシノン系成分（ジヒドロタンシノンＩ、クリプトタンシノン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ）、サポニン系成分（ノトギンセノシドＲ１、ギンセノシドＲｇ１、ギンセノシドＲｂ１、アストラガロシド、ギンセノシドＲｄ）、フラボン系成分（カリコシン７−グルコシド、オノニン、カリコシン、ホルモノネチン）は、従来の技術を利用して抽出精製の方法で製造してもよいし、市販品から得てもよい。揮発油系成分トランス−ネロリドールは従来技術に該当する。（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オールも従来技術に該当し、これに関しては、文献「Ｔａｏ  Ｙ，Ｗａｎｇ  Ｙ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ｄａｌｂｅｒｇｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ  Ｔ．Ｃｈｅｎ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２０１０，８１（５）：３９３−３９９．」を参照できる。
【００２７】
【化１】
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【００２８】
さらに、本発明は、前記医薬組成物を含む医薬品製剤を提供する。好ましい実施形態において、前記漢方薬医薬組成物は医薬品製剤に有効成分として占める重量パーセントが０．１〜９９．９％であり、残りは薬学的に許容される担体である。別の実施形態において、本発明の漢方薬医薬組成物は単位用量の医薬品製剤の形態として製剤化される。前記単位用量の形態は、例えば、錠剤の場合は１錠、カプセルの場合は１カプセル、経口液剤の場合は１ボトル、顆粒剤の場合は１袋というように製剤の単位を指す。
【００２９】
本発明に係る製剤は、経口投与、非経口投与（注射又は薬物輸送システムによる皮下、皮内、髄腔内、薬物輸送システムによる筋肉内、静脉内等を含む）、直腸投与、局所（舌下）投与に適するが、最適な投与経路は患者の症状によって決定される。
【００３０】
本明細書で、使用される薬用担体は、固形製剤に用いる賦形剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤等の漢方薬医薬組成物と併用して投与されることが可能な様々な有機担体又は無機担体であり、着色剤、甘味剤等の薬用添加剤も使用できる。前記薬用担体は、マンニトール、ソルビトール、キシリトール等の糖アルコール、システイン塩酸塩、メチオニン、グリシン等のアミノ酸、ビタミンＣ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、一価アルカリ金属の炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩又はこれらの水溶液等の無機塩、塩化ナトリウム、塩化カリウム、二亜硫酸二ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素カルシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸塩、塩酸、酢酸、硫酸、リン酸等の無機酸、乳酸ナトリウム等の有機酸塩、マルトース、グルコース、フルクトース、デキストラン、スクロース、ラクトース、シクロデキストリン（例えば、β−シクロデキストリン）、デンプン等のオリゴ糖、多糖、セルロースとこれらの誘導体、シリコン誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、グリセリン、寒天、ポリソルベート８０等の界面活性剤、ポリエチレングリコール、リン脂質系材料、カオリン、タルク等から選択される。
【００３１】
本発明の医薬品製剤は、任意の医薬品用の剤形であってもよい。具体的には、糖衣錠剤、フィルムコーティング錠剤、腸溶コーティング錠剤等の錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤等のカプセル剤、経口液剤、トローチ剤、顆粒剤、丸剤、散剤、軟膏剤、練剤、懸濁液、粉剤、溶液剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤等の軟膏剤、クリーム剤、スプレー剤、滴剤、テープ剤が挙げられる。本発明の製剤は、カプセル剤、錠剤、経口液剤、顆粒剤、丸剤、散剤、練剤、軟膏剤等の経口剤形、粉末注射剤、注射液、輸液剤等の注射剤であることが好ましい。本発明の製剤は、錠剤であることが最も好ましい。
【００３２】
経口投与用製剤は、一般的な賦形剤、結合剤、充填剤、希釈剤、錠成形剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤、湿潤剤を含んでもよく、必要であれば、錠剤にコーティングを行ってもよい。
【００３３】
充填剤の好適例は、セルロース、マンニトール、ラクトース、他の類似の充填剤を含む。
【００３４】
賦形剤の好ましい例は、ラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン（例えば、α−デンプン）、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、アミロペクチン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム等を含む。
【００３５】
潤滑剤の好ましい例は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、シリカゲル、ドデシル硫酸ナトリウム等を含む。
【００３６】
結合剤の好ましい例は、α−デンプン、スクロース、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、糖類、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、アミロペクチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ピロリドン等を含む。
【００３７】
崩壊剤の好ましい例は、ラクトース、糖類、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、アミノアルキルナトリウム、カルボキシメチルデンプンナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、グリコール酸デンプンナトリウム等を含む。
【００３８】
コーティング剤の好ましい例は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等を含む。
【００３９】
着色剤の好ましい例は、水溶性タートラジン色素（例えば、食用赤色２号、３号、食用黄色４号、５号、食用青色１号、２号等の食用色素）、水不溶性のレーキ色素（例えば、上記の水溶性タートラジン色素のアルミニウム塩）、天然色素（例えば、β−カロテン、クロロフィル、ベンガラ）等を含む。
【００４０】
甘味剤の好ましい例は、サッカリンナトリウム、グリチルレチン酸、アスパルテーム、ステビオシド等を含む。
【００４１】
錠剤の一般的な製造方法は、本発明の漢方薬医薬組成物と薬学的に許容される１種以上の添加剤に対してプレス成形又は金型成形を行うことである。
【００４２】
本発明の漢方薬医薬組成物は、水性又は油性の懸濁液、溶液、乳剤、シロップ剤等の経口液体製剤に製剤化することもできる。また本発明の漢方薬医薬組成物は、水もしくは他の適切な担体で混合して使用する乾燥された製品であってもよい。このような液体製剤は、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル又は硬化脂肪等の懸濁剤、レシチン、ソルビタンモノオレアート又はアラビアゴム等の乳化剤、アーモンドオイル、分留ココナッツオイル、油性エステル、プロピレングリコール又はエタノール等の非水系担体（食用油を含んでもよい）、パラヒドロキシ安息香酸メチル又はパラヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸の防腐剤を含む一般的な添加剤を含んでもよい。必要であれば、一般的な香味剤又は着色剤を含んでもよい。
【００４３】
非経口投与用の製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、抗菌剤、等張剤等を含む水系又は非水系の滅菌注射液、及び懸濁剤と増粘剤を含む水系又は非水系の無菌懸濁液を含む。製剤は、凍結乾燥（フリーズドライ）の条件において、単回投与用量又は複数回投与用量の容器に、例えば、密封されたアンプル又は小瓶に保管されてもよい。使用する前に、注射用水等の無菌の液体担体を添加すればよい。
【００４４】
直腸投与用の製剤は、ココアバター、飽和脂肪酸もしくは他のグリセリド、又はエチレングリコール等の一般的な坐剤基剤を含む坐剤であってもよい。
【００４５】
頬側投与又は舌下投与等の口腔局所投与用の製剤は、スクロース、アラビアゴム等の矯味基剤に有効成分が含まれる錠剤、ゼラチンとグリセリン、もしくはスクロースとアラビアゴムの基剤に有効成分が含まれる香錠を含む。
【００４６】
本発明の漢方薬医薬組成物は、薬物輸送システム製剤として製剤化されもよい。このような長期作用型の製剤は、埋め込み（例えば、皮下もしくは筋肉内）又は筋肉内注射より投与される。そのため、本発明の漢方薬医薬組成物は適切なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容される油中乳剤）又はイオン交換樹脂において製剤化されてもよいし、微溶性塩等の微溶性の誘導体として製剤化されてもよい。
【００４７】
さらに、本発明は、冠状動脈性心疾患の治療薬を製造するための本発明の医薬組成物の用途を提供する。
【００４８】
さらに、本発明は、心筋障害、特に心不全による心筋障害を軽減させる薬剤を製造するための、本発明の医薬組成物の用途を提供する。
【００４９】
さらに、本発明は、心不全を治療又は予防する薬剤を製造するための本発明の医薬組成物の用途を提供する。前記心不全は、駆出率が低下した心不全又は駆出率が保持された心不全であることが好ましい。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、心不全後の炎症反応、及び／又は心筋線維化、及び／又は心筋細胞のアポトーシスを阻害できる。
【００５１】
本発明は、心筋障害に罹患している又は心筋障害に罹患するリスクのある適用者に有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む心筋障害を軽減させる方法を提供する。前記心筋障害は、心不全による心筋障害であることが好ましい。
【００５２】
さらに、本発明は、心筋障害を軽減させるための本発明の上記の医薬組成物の用途を提供する。前記心筋障害は、心不全による心筋障害であることが好ましい。
【００５３】
本発明は、心不全に罹患している又は心不全に罹患するリスクのある適用者に有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む心不全を治療又は予防する方法を提供する。前記心不全は、駆出率が低下した心不全又は駆出率が保持された心不全であることが好ましい。
【００５４】
さらに、本発明は、心不全を治療又は予防するための、本発明の上記の医薬組成物の用途を提供する。前記心不全は、駆出率が低下した心不全又は駆出率が保持された心不全であることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、ＬＡＤ法（左前下行枝結紮）誘導心不全ラットの各実験群における左室機能への影響に関し２８日目にＭモード心臓超音波検査を行って計測された典型的な画像である。
【図２】図２は、ＨＥ染色の典型的な画像（４００×拡大）である。ＤＡＰＩ染色された細胞核は青色に標識されている。
【図３】図３は、ＴＵＮＥＬ法による染色の典型的な顕微鏡画像（４００×拡大）である。アポトーシスした細胞核は緑色に標識されている。
【図４】図４は、酸欠誘導Ｈ９ｃ２心筋細胞損傷おける細胞核の数量とミトコンドリアの生理機能に対する各実験群の保護効果である。蛍光色素を用いてＨ９ｃ２の細胞核の数量とミトコンドリアの質に関しハイコンテンツイメージングを行って典型的な画像を得る。Ｈｏｅｃｈｓｔ蛍光色素でトランスフェクションされた細胞核は青色であり、Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ蛍光色素でトランスフェクションされたミトコンドリアは赤色であり、Ｍｅｒｇｅは両者を重畳させた画像である。
【図５】図５は、本発明薬剤の投与期間における各群の心臓拡張早期の僧帽弁輪部の最大移動速度の変化値（ΔＥａ）である。
【図６】図６は、本発明薬剤の投与期間における各群の心臓拡張機能Ｅ／Ｅａ値の変化率（ΔＥ／Ｅａ）である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
次に、図面を用いて、本発明の実施形態を詳細に説明する。なお、本発明の保護範囲はこれらの実施形態に限定されるものではない。
【００５７】
別途説明がある場合を除き、明細書全体と特許請求の範囲に使用される用語「含む」、又は同じ意味合いの類似の用語は、記載された構成要素を有し、他にも類似の要素が存在する場合を除外しないように理解される。
【実施例】
【００５８】
［実施例１］
フェノール酸系成分１６ｇ、フラボン系成分３．５ｇ、タンシノン系成分０．２ｇ、サポニン系成分１６ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１６ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００５９】
当該医薬組成物は、ダンシェンス１１．５５ｇ、プロトカテクアルデヒド０．１５ｇ、サルビアノール酸Ｔ  ０．６ｇ、サルビアノール酸Ｕ  ０．６ｇ、サルビアノール酸Ｄ  １．３ｇ、サルビアノール酸Ｇ  ０．０５ｇ、ロスマリン酸０．８ｇ、リトスペルミン酸０．４ｇ、サルビアノール酸Ｂ  ０．４ｇ、サルビアノール酸Ａ  ０．１２ｇ、イソサルビアノール酸Ｃ  ０．０４ｇ、カリコシン７−グルコシド２．１ｇ、オノニン０．８ｇ、カリコシン０．２ｇ、ホルモノネチン０．７８ｇ、ジヒドロタンシノンＩ  ０．０４８ｇ、クリプトタンシノン０．０６４ｇ、タンシノンＩ  ０．０４ｇ、タンシノンＩＩＡ  ０．０４８ｇ、ノトギンセノシドＲ１  ３ｇ、ギンセノシドＲｇ１  ４．６ｇ、ギンセノシドＲｂ１  ４．３ｇ、アストラガロシド  ０．５２ｇ、ギンセノシドＲｄ  ０．５２ｇ、トランス−ネロリドール５．３ｇ、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．８４ｇ、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．９８ｇ、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．６３ｇ、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．２１ｇを含む。
【００６０】
［実施例２］
フェノール酸系成分１５．３６ｇ、フラボン系成分３．３３ｇ、タンシノン系成分０．１３ｇ、サポニン系成分１８．６ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１６ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６１】
当該医薬組成物は、ダンシェンス１１ｇ、プロトカテクアルデヒド０．１５ｇ、サルビアノール酸Ｔ  ０．５５ｇ、サルビアノール酸Ｕ  ０．５５ｇ、サルビアノール酸Ｄ  １．３ｇ、サルビアノール酸Ｇ  ０．０５ｇ、ロスマリン酸０．８ｇ、リトスペルミン酸０．４ｇ、サルビアノール酸Ｂ  ０．４ｇ、サルビアノール酸Ａ  ０．１２ｇ、イソサルビアノール酸Ｃ  ０．０４ｇ、カリコシン７−グルコシド１．８ｇ、オノニン０．７ｇ、カリコシン０．１８ｇ、ホルモノネチン０．６５ｇ、ジヒドロタンシノンＩ  ０．０３ｇ、クリプトタンシノン０．０４ｇ、タンシノンＩ  ０．０２５ｇ、タンシノンＩＩＡ  ０．０３ｇ、ノトギンセノシドＲ１  ３．５ｇ、ギンセノシドＲｇ１  ５．４ｇ、ギンセノシドＲｂ１  ５ｇ、アストラガロシド  ０．６ｇ、ギンセノシドＲｄ  ０．６ｇ、トランス−ネロリドール５．３ｇ、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．８４ｇ、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．９８ｇ、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．６３ｇ、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール４．２１ｇを含む。
【００６２】
［実施例３］
フェノール酸系成分４．４２ｇ、フラボン系成分０．９６ｇ、タンシノン系成分０．０１２ｇ、サポニン系成分６．３ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１５ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６３】
当該医薬組成物は、ダンシェンス３ｇ、プロトカテクアルデヒド０．０６ｇ、サルビアノール酸Ｔ  ０．２ｇ、サルビアノール酸Ｕ  ０．２ｇ、サルビアノール酸Ｄ  ０．４ｇ、サルビアノール酸Ｇ  ０．０２ｇ、ロスマリン酸０．３ｇ、リトスペルミン酸０．０５ｇ、サルビアノール酸Ｂ  ０．１ｇ、サルビアノール酸Ａ  ０．０７ｇ、イソサルビアノール酸Ｃ  ０．０１５ｇ、カリコシン７−グルコシド０．６ｇ、オノニン０．３ｇ、カリコシン０．０３ｇ、ホルモノネチン０．０３ｇ、ジヒドロタンシノンＩ  ０．００１ｇ、クリプトタンシノン０．００５ｇ、タンシノンＩ  ０．００２ｇ、タンシノンＩＩＡ  ０．００４ｇ、ノトギンセノシドＲ１  １．８ｇ、ギンセノシドＲｇ１  ２．５ｇ、ギンセノシドＲｂ１  １．３ｇ、アストラガロシド  ０．３ｇ、ギンセノシドＲｄ  ０．４ｇ、トランス−ネロリドール６．８ｇ、（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール０．８２ｇ、（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール１．０９ｇ、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール６．８２ｇ、（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール６．２７ｇを含む。
【００６４】
［実施例４］
フェノール酸系成分１８ｇ、フラボン系成分４ｇ、タンシノン系成分０．３ｇ、サポニン系成分１８ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１６ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６５】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝１１：０．１５：０．５５：０．５５：１．３：０．０５：０．８：０．４０：０．４０：０．１２：０．０４を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝１．８：０．７：０．１８：０．６５を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．０３：０．０４：０．０２５：０．０３を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝３．５：５．４：５．０：０．６０：０．６を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝３８：６：７：３３：３０を含む。
【００６６】
［実施例５］
フェノール酸系成分１８ｇ、フラボン系成分４ｇ、タンシノン系成分０．３ｇ、サポニン系成分１８ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１７ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６７】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝３：０．０６：０．２：０.０２：０．４：０．０２：０．３：０．０５：０．１：０．０７：０．０１５を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝０．６：０．３：０．０３：０．０３を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．００１：０．００５：０．００２：０．００４を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝１．８：２５：１．３：０．３：０．４を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝２５：３：４：２５：２３を含む。
【００６８】
［実施例６］
フェノール酸系成分２０ｇ、フラボン系成分５ｇ、タンシノン系成分０．５ｇ、サポニン系成分２０ｇを均一に混合し、さらに揮発油系成分１８ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００６９】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝１１：０．１５：０．５５：０．５５：１．３：０．０５：０．８：０．４０：０．４０：０．１２：０．０４を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝１．８：０．７：０．１８：０．６５を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．０３：０．０４：０．０２５：０．０３を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝３．５：５．４：５．０：０．６０：０．６を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝３８：６：７：３３：３０を含む。
【００７０】
［実施例７］
フェノール酸系成分２ｇ、フラボン系成分０．５ｇ、タンシノン系成分０．００５ｇ、サポニン系成分５ｇを均一に混合にし、さらに揮発油系成分１０ｇと均一に混合して、医薬組成物を得る。
【００７１】
前記フェノール酸系成分は、重量部の比率で、ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｕ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：イソサルビアノール酸Ｃ＝３：０．０６：０．２：０.０２：０．４：０．０２：０．３：０．０５：０．１：０．０７：０．０１５を含み、前記フラボン系成分は、重量部の比率で、カリコシン７−グルコシド：オノニン：カリコシン：ホルモノネチン＝０．６：０．３：０．０３：０．０３を含み、前記タンシノン系成分は、重量部の比率で、ジヒドロタンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩ：タンシノンＩＩＡ＝０．００１：０．００５：０．００２：０．００４を含む。前記サポニン系成分は、重量部の比率で、ノトギンセノシドＲ１：ギンセノシドＲｇ１：ギンセノシドＲｂ１：アストラガロシド：ギンセノシドＲｄ＝１．８：２５：１．３：０．３：０．４を含む。前記揮発油系成分は、重量部の比率で、トランス−ネロリドール：（３Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，７−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−６−オール：（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール：（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）−３，７，１１−トリメチルトリプトファン−３，６−エポキシ−１，１０−ドデカジエン−７−オール＝２５：３：４：２５：２３を含む。
【００７２】
［実施例８］
実施例１の漢方薬医薬組成物０．５ｇをＰＥＧ−６０００  １０．５ｇと均一に混合して加熱し、融解した後、滴丸製造容器に移し、薬液を６〜８℃の流動パラフィンに滴加し、油分を除去して、小粒状に練り上げていわゆる滴丸４００粒を得る。
【００７３】
［実施例９］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをグルコース４．５ｇ、チオ硫酸ナトリウム０．９ｇ、蒸留水１ｍｌと均一に混合し、凍結乾燥させて、５００本に小分けして、粉末注射剤を得る。
【００７４】
［実施例１０］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをマンニトール５．５ｇ、エデト酸カルシウム二ナトリウム０．９ｇ、蒸留水２ｍｌと均一に混合し、凍結乾燥させて、３００本に小分けして、粉末注射剤を得る。
【００７５】
［実施例１１］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをデンプン５０ｇ、スクロース５０ｇと均一に混合して造粒し、錠成形を行って錠剤を得る。
【００７６】
［実施例１２］
実施例２の漢方薬医薬組成物０．５ｇをデンプン５０ｇ、スクロース５０ｇと均一に混合して造粒し、カプセルに入れてカプセル剤を得る。
【実験例】
【００７７】
次に、実験例を用いて、本発明の有益な効果を説明する。
【００７８】
実験例１：駆出率が低下した心不全
１．  動物モデルと投与方式
１．１．  実験動物
全ての動物は天津中医薬大学実験動物管理センターから使用許可を得る（ＴＣＭ−ＬＡＥＣ２０１７００３）。体重２００±２０ｇの清潔級ＳＤ雄性ラットを用いる。飼育温度は２２〜２５℃、湿度は４０〜７０％である。飼育の過程で、昼夜の区別なく光照射を提供し、定時的に顆粒状の標準飼料を給餌し、滅菌飲料水を与え、実験環境に適応するよう１週間飼育した後実験を行う。
１．２．  実験薬剤
本発明薬剤群：実施例２の薬剤１６９ｇ（ＱＳＹＱ‐１）。
対照薬剤群：実施例２の薬剤から揮発油系成分除去後１６９ｇ（ＱＳＹＱ‐２）。
１．３．  実験方法
ラットは手術前に１２時間禁食し、飲水制限はしない。ラットの体重を記録し、５％抱水クロラール（６ｍＬ／ｋｇ）を腹腔内に注射して麻酔する。ラットが麻酔状態になる（約２〜５分間後に、ラットのつま先を握って痛み反射がない）と、次の操作を行う。
【００７９】
ヨードフォアアルコールで胸元の手術領域を消毒し、ラットの左胸部の第３、第４の肋骨の間に長さ約５ｍｍの切り目を入れる。筋肉層を鈍的剥離して、第３、第４の肋骨の間に止血鉗子で胸腔を開け、リトラクターで牽引して、胸腔を露出する。実体顕微鏡の視野下で、心臓の位置を見つけ、心膜を徐々に引き裂き、左前下行枝の位置（動脈円錐と左心耳の境界）を見つける。左心耳の基部で冠動脈出発点の下方より２〜３ｍｍに、５−０号針付縫合糸で結紮を実施する。結紮後に心臓の表面の対象領域が鮮赤色から蒼白色になり、血管の及ぶ範囲に心筋チアノーゼが出現することが目視観察で確認される。ラットの心拍数が顕著に早くなり、呼吸が窮迫し、心臓の拍動が弱くなる。リトラクターを解いて、綿棒で胸腔内に残留した液体を吸収し、胸腔内のガスを絞り出して、速やかに３−０糸で筋肉と皮膚を縫合する。手術後、ラットを電気毛布に置き、自発呼吸が回復したら、気管挿管を解除し、ペニシリンを投与する。偽手術群では、左前下行枝の下方に結紮を実施せずに糸の貫通だけを行い、他は上記同様の処理を行う。
【００８０】
モデル作成後の１２〜１３日目に、各ラットにそれぞれ心臓の超音波検査を行ってモデル作成の成否を評価する。モデル作成に成功するラットをモデル群、偽手術群（細胞培養実験ではブランク対照群）、本発明薬剤群、対照薬剤群とランダムに４群に分ける。本発明薬剤群では、臨床上の成人１日投与量に基づき、手術後の１４日目から、１００ｍｇ／ｋｇの臨床等価用量で、１４日間にわたって毎日本発明の医薬組成物をラットに強制経口投与する。対照薬剤群では、臨床上の成人１日投与量に基づき、手術後の１４日目から、１００ｍｇ／ｋｇの臨床等価用量で、１４日間にわたって毎日ラットに強制経口投与を実施する。
【００８１】
２．  検体採取
血液検体：ラットに血行動態検査を行った後、腹大動脈より採血し、採血後に、管口にラベルをつけ、３７℃の水浴に３０分間置いてから、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して、血清を取り分けて１．５ｍＬ遠心管に入れて、−８０℃で保管しておく。
【００８２】
心臓検体：腹大動脈採血後に、心臓を摘出し、４％パラホルムアルデヒド溶液で２回洗い流してホルマリン溶液に入れて固定し、保管しておく。
【００８３】
３．  動物モデル評価
超音波評価：手術後１４日目に、ラットに心臓の超音波検査を行って評価し、左室駆出率（ＥＦ値）が３８〜５０％の範囲である場合は、心不全モデル作成に成功すると判断する。酵素結合免疫吸着法（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ＝ＥＬＩＳＡ）により血清検体中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ１−βの含有量を検出する。生化学自動分析装置でＣＫ、ＣＫ−ＭＢ、ＬＤＨを検出する。
【００８４】
心臓検体の脱水、包埋、切片を行って、ＨＥ染色とＴＵＮＥＬ法による蛍光染色で切片を染色する。
【００８５】
４．  データ処理
ソフトウェアＳＰＳＳ２２．０で実験データの統計学的処理を行い、実験結果は平均値±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表示される。群間比較では一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を適用し、Ｐ＜０．０５である場合は、統計学的有意差がある。図中のデータは平均値±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表示される。
【００８６】
５．  結果
５．１．  各治療群におけるラットの心機能への影響
Ｍモード超音波評価の結果では、図１のＭモード超音波検査の典型的な画像に示すように、モデル群は正常な対照群よりも心室腔に進行性の拡張が確認され、しかも左室の室壁運動が弱くなり、収縮力が低下しているのに対し、本発明薬剤群、対照薬剤群では、心室腔の拡張程度にも収縮力にも改善が確認されている。左前下行枝結紮モデルの作成後、ラットの駆出率、内径短縮率及び左室面積変化率は正常な対照群（偽手術群）よりも顕著に低減し、各群薬物の投与治療後、モデル群との比較で、投与群ラットの左室駆出率の進行性低減が遅くなり、しかも統計学的有意差がある。左室の内径短縮率は左室駆出率に一致する変化を呈し、しかも左室の内径短縮率（ＦＳ）はモデル群との比較で統計学的有意差がある。各実験群（本発明薬剤群、対照薬剤群）ではＬＡＤ法誘導心不全ラットの心機能に対する保護効果が認められる。２８日目以後に測定された駆出率（ＥＦ）、内径短縮率（ＦＳ）のデータを表１、表２に示す。本発明薬剤群のＥＦ、ＦＳがいずれも対照薬剤群より高いことから、本発明の医薬組成物中の揮発油はサルビアノール酸系成分、サポニン系成分、フラボン系成分、タンシノン系成分の吸収を促進する効果を有し、心不全患者においてこれらと共に心機能を保護するように作用することが判明した。
【００８７】
【表１】
2021519335.tif 000024
【００８８】
【表２】
2021519335.tif 000025
【００８９】
５．２．  心筋マーカー指標結果
各実験群（本発明薬剤群、対照薬剤群）におけるＬＡＤ法誘導心不全ラットの心筋マーカー放出と心筋組織学に与える影響を検討する。投与群ラットはモデル群よりも血清中ＣＫ、ＬＤＨ、ＣＫ−ＭＢの含有量がいずれも低減しており、投与群で心筋マーカーを低減する効果がある。クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベルでは、本発明薬剤群が対照薬剤群と基本的に同じであり、クレアチンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）レベル、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）レベルでは、いずれも対照薬剤群よりも低減効果が優れていることから、本発明薬剤群で揮発油は他の成分と共に作用することが示される。詳細は、表３、表４、表５を参照する。
【００９０】
【表３】
2021519335.tif 000026
【００９１】
【表４】
2021519335.tif 000027
【００９２】
【表５】
2021519335.tif 000028
【００９３】
５．３．  病理学的結果
ＨＥ染色結果を図２に示す。ＨＥ染色の典型的な画像（４００×拡大）では、ＤＡＰＩ染色された細胞核が青色に標識されている。モデル群は正常な偽手術群よりも、白血球浸潤が顕著に増加し、心筋線維の破裂が顕著であることから、各種の投与治療により心筋障害の程度が顕著に軽減されたことが判明している。
【００９４】
ＴＵＮＥＬ法による染色結果を図３に示す。ＴＵＮＥＬ法による染色の典型的な顕微鏡画像（４００×拡大）では、アポトーシス細胞核が緑色に標識されていることが、左前下行枝結紮がラットの心筋細胞損傷を誘導したことを示す。図２から分かるように、染色後にフルオレセインで標識されているアポトーシス小体が明らかに確認され、心筋細胞のアポトーシス率は正常な偽手術群よりも顕著に上昇している。
【００９５】
５．１〜５．３の研究結果から分かるように、左前下行枝結紮心不全ラットモデルでは、左室前壁の運動が大幅に弱くなり、心筋収縮力が顕著に低下しており、モデル群は偽手術群よりも心機能が顕著に低下している。本発明薬剤群では、左室の変化が顕著に低減され、左前下行枝結紮誘導ラットにおける心臓障害によるＥＦ、ＦＳの進行性低減が顕著に緩和され、心筋収縮力が維持され、心臓が送り出す血液量が保証されている。心筋マーカー実験結果では、投与後にモデルラットにおけるＣＫ、ＣＫ−ＭＢ、ＬＤＨの含有量が低減される。また、モデルの作成に時間がかかるため、これらの酵素の含有量は心筋障害後に急性に上昇している現象が経時的に回復した後においても、本発明薬剤群が心筋マーカー低減の効果を示すことから、投与後にある程度心臓保護の効果があることが示されている。また、ＨＥ染色結果、ＴＵＮＥＬ法による染色結果では、投与後に心不全モデルラットにおける炎症反応、心筋線維化、心筋細胞のアポトーシス等を阻害して、心筋細胞を保護する効果が得られることが示されている。
【００９６】
実験例２：細胞培養と活性評価
１．実験薬剤：実験例１と同様に本発明薬剤群、対照薬剤群と、ダンシェンス、プロトカテクアルデヒド、サルビアノール酸Ｔ、サルビアノール酸Ｕ、サルビアノール酸Ｄ、サルビアノール酸Ｇ、ロスマリン酸、リトスペルミン酸、サルビアノール酸Ｂ、サルビアノール酸Ａ、イソサルビアノール酸Ｃ、カリコシン７−グルコシド、オノニン、カリコシン、ホルモノネチン、ジヒドロタンシノンＩ、クリプトタンシノン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、ノトギンセノシドＲ１、ギンセノシドＲｇ１、ギンセノシドＲｂ１、アストラガロシド、ギンセノシドＲｄ各１６０ｇの各有効成分群とを設ける。
【００９７】
２．実験方法：本発明薬剤群、対照薬剤群、各有効成分群は、ＤＭＳＯ超音波溶解により０．４ｍｇ／ｍＬの保存溶液を調製し、インビトロ活性評価を行う時、実験培地を用いてそれぞれ等倍に希釈する。
【００９８】
対数増殖期細胞を採集し、黒色ウェル／透明底の９６ウェルプレートに、各ウェルに５０００個細胞の濃度で１００μＬを加え、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターに２４時間培養する。次に実験群にそれぞれ各被験群を加え、２４時間インキュベートする。次に低酸素環境に置いて、窒素ガス９５％とＣＯ２５％からなる混合ガスを１５Ｌ／分間の流速で１０分間流し込み、３７℃で酸欠障害を誘導して８時間インキュベートし、モデル群では酸欠状態でのインキュベーションだけを８時間実施し、ブランク対照群は普通にインキュベートを実施する。
【００９９】
次の操作で細胞蛍光プローブによる標識を行う。蛍光プローブＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２母液を１０００倍に希釈してＤＭＥＭ基礎培地に入れる。次に、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ  Ｄｅｅｐ  Ｒｅｄ  ＦＭ母液を１００００倍に希釈してＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２を含む培地に入れて「複合」染色剤として用いる。プレートから培地を除去し、各ウェルに５０μＬの「複合」染色剤を入れ替え、インキュベーターにおいて遮光状態で３０分間培養する。次に遮光状態でプレートを取り出し、ＤＭＥＭ高糖培地でプレートを３回洗浄し、洗浄されるたびに５分間後に生細胞イメージングを行う。
【０１００】
以下の操作でハイコンテントスクリーニング（ＨＣＳ）を利用して生細胞イメージングを行う。励起光３６０〜４００／発射光４１０〜４８０により、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で標識された細胞核に対してイメージングを行う。励起光６２０〜６４０／発射光６５０〜７６０により、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ  Ｄｅｅｐ  Ｒｅｄ  ＦＭで標識されたミトコンドリアに対してイメージングを行う。ソフトウェアＨａｒｍｏｎｙ  ３．０を用いてＨＣＳイメージング結果を分析し、細胞核蛍光強度／細胞質蛍光強度を読み取る。ＨＣＳスクリーニングシステムに自動蛍光顕微鏡イメージング機能が搭載されているため、ハイスループットの多指標分析を実施できる。高効率画像・データ管理と分析システムとして、パーキンエルマー社のイメージデータベースシステムＣｏｌｕｍｂｕｓを利用して、画像とデータの二次分析と管理を行って、用量反応関係曲線を描画する。
【０１０１】
データ処理方法：実験例１と同じ。
【０１０２】
３．実験結果：図４（表６）の酸欠誘導心筋細胞損傷モデルでは、ブランク対照群よりも生細胞核の数量が顕著に低減し、本発明薬剤が投与された実験群では、揮発油を含まない対照薬剤群よりも優れた保護効果が顕著に示されている。表７は、酸欠誘導Ｈ９ｃ２心筋細胞損傷における細胞核の数量に対する本発明薬剤中の単一成分の保護効果の研究結果を示す。本発明薬剤中のフェノール酸系成分、フラボン系成分、サポニン系成分、タンシノン系成分はいずれもある程度心筋細胞の数量を保護する効果があるが、単一成分の効果は、いずれも本発明薬剤の心筋細胞損傷に対する保護効果に劣っていることから、本発明薬剤中の各成分を組み合わせると相乗効果があることが示される。
【０１０３】
【表６】
2021519335.tif 000029
【０１０４】
【表７】
2021519335.tif 000030
【０１０５】
ミトコンドリアの質に関して、図４、表８でモデル群とブランク対照群の比較で、心筋の酸欠障害により酸素供給が不足するため、細胞内の酸素センサーの代償的調節により酸素の利用度が高まり、モデル群でミトコンドリアの質が顕著に向上している。本発明薬剤が投与された実験群では、揮発油を含まない対照薬剤群よりも優れた保護効果が顕著に示されている。表９は、酸欠誘導Ｈ９ｃ２心筋細胞損傷におけるミトコンドリアの機能に対する本発明薬剤群とその単一成分の保護効果を示す。結果では、本発明薬剤中のフェノール酸系成分、フラボン系成分、サポニン系成分、タンシノン系成分がいずれもある程度心筋細胞のミトコンドリアの機能を保護する効果はあるが、心筋障害後のミトコンドリア機能に対する保護効果において、各成分はいずれも本発明薬剤に劣っていることから、本発明薬剤中の各成分を組み合わせると相乗効果があることが示されている。
【０１０６】
【表８】
2021519335.tif 000031
【０１０７】
【表９】
2021519335.tif 000032
【０１０８】
４．結論：表６〜表９では、本発明薬剤、２４の成分からなる医薬組成物（対照薬剤）及び単一成分に関する活性評価が示されている。本発明薬剤は顕著な活性を有し、本発明薬剤の各成分に相乗効果があること判明している。
【０１０９】
実験例３：駆出率が保持された心不全
本発明薬剤の９０日間連続投与の自発性慢性心不全アカゲザルに対する有効性を研究する。
１．  研究目的
本発明薬剤を臨床等価用量で９０日間連続投与し、自発性慢性心不全（ＮＹＨＡ分類ＩＩ〜ＩＶ度、ＨｆｐＥＦ）アカゲザル（中年／老年）に対する有効性を研究する。主な薬力学的指標は、心臓超音波検査指標による心臓構造分析、投与前後の収縮機能と拡張機能の変化である。
【０１１０】
２．  実験材料と方法
２．１．  実験材料
２．１．１．  実験動物
動物種：アカゲザル。
等級：普通。一般検査、２回の結核菌検査、寄生虫検査、サルモネラ菌検査、赤痢菌検査、Ｂウイルス検査を含む実験前検査に合格している。
動物識別：ネックリングに数字がプリントされたステンレス鋼製ナンバープレートを付け、胸元に印字する。
【０１１１】
（１）組み入れ基準
雄性、年齢１２〜２３歳（成人４０〜７０歳に相当する）。
体重：９〜１３ｋｇ。
ＮＹＨＡ分類ＩＩ〜ＩＶ度。各群では半数の動物がＨＦｐＥＦである。
ＨＦｐＥＦ（中度以上障害）：ｅ’（Ｅａ）＜８又はＥ／ｅ’（Ｅ／Ｅａ）＞１０（臨床診断基準参照）。
【０１１２】
（２）排除基準
２級ないし３級の高血圧（収縮期血圧（ＳＢＰ）＞１４０ｍｍＨｇ、拡張期血圧（ＤＢＰ）＞９０ｍｍＨｇ）。
重度の肝機能又は腎機能障害、貧血、白血球増加、血小板減少、電解質異常、体重異常変動。
内分泌、免疫、凝固、泌尿生殖器系に明確な臨床的異常症状又は疾患がある。
薬力学的評価に影響を与える他の既往歴がある。
【０１１３】
２．１．２．  被験物
本発明薬剤（実施例１、天士力医薬集団股フン有限公司提供、ＱＳＹＱ）を投与の便宜上、所定の比率でＰＥＧと混合して動物実験用の滴丸に製剤化する。ロット番号は、２０１８０２１５である。
【０１１４】
２．２．  群分けと投与
本実験では、偽薬群、本発明薬剤の低用量群、本発明薬剤の高用量群と３群に分け、各群が動物４匹を含む。
【０１１５】
投与経路：経鼻、１日１次。
投与量決定：各回秤量された体重に基づいて次週の投与量を算出する。
投与時間：毎日８時〜１０時。
詳しくは、表１０が参照される。
【０１１６】
【表１０】
2021519335.tif 000033
【０１１７】
２．３．  測定指標
主な薬力学的指標：投与前、投与後から３０日目、後６０日目、後９０日目にそれぞれ心不全サルの心機能を測定し、傍胸骨左室長軸断面の左室波群により拡張末期及び収縮末期の左室内径を測定して、左室の拡張末期容積（Ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ−ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｖｏｌｕｍｅ＝ＬＶＥＤＶ）、左室収縮末期容積（Ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ−ｓｙｓｔｏｌｉｃ  ｖｏｌｕｍｅ＝ＬＶＥＳＶ）、一回拍出量（ｓｔｒｏｋｅ  ｖｏｌｕｍｅ＝ＳＶ）、Ｅａ値、Ｅ／Ｅａ値等パラメータを算出することによって、心不全サルの収縮機能及び拡張機能に対する本発明薬剤の影響を評価する。
【０１１８】
二次的な薬力学的指標：投与前、投与後から３０日目、後６０日目、後９０日目にそれぞれサルの血圧変化を測定する。
【０１１９】
観測：投与期間に毎日、運動量や摂食量、体重などの動物の日常的な状態を観測する。
【０１２０】
３．  データ処理
測定されたデータは、いずれも平均±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表示される。群間比較では、ソフトウェアＳＰＳＳ１１．５で反復測定分散分析を行う（データが球面分布に従わない場合は２次曲線当てはめ分析を用いる）。有意水準α＝０．０５で検定する。
【０１２１】
４．  実験結果
１）自発性慢性心不全アカゲザルの血圧に対する影響
表１１の研究結果より、本発明薬剤は心不全サルの収縮期血圧にある程度改善があり、血圧降下効果が用量依存的であることが示されている。
【０１２２】
【表１１】
2021519335.tif 000034
【０１２３】
２）自発性慢性心不全アカゲザルの心機能に対する影響
表１２の研究結果より、心不全サルの左室駆出率に対する影響に関する本発明薬剤と溶媒群の比較で統計学的有意差があることから、本発明薬剤は心不全サルの左室収縮力にある程度の影響を有し、ある程度心不全サルの左心機能を改善できることが示される。
【０１２４】
また、拡張機能の検査でＥａ、Ｅ／Ｅａはいずれも心臓の左室拡張機能を評価するために一般的に使用されるパラメータであり感度が高い指標でもある。サルの場合は一般にＥ／Ｅａ値が９前後である。研究の結果より、投与群ではモデル群よりも、拡張早期の僧帽弁輪部の最大移動速度の変化値（ΔＥａ）、Ｅ／Ｅａ値の変化率（ΔＥ／Ｅａ）がいずれも改善されたことが判明している（図５、図６参照）。
【０１２５】
【表１２】
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【０１２６】
３）日常的観測
投与期間に毎日実験動物を観測したところ、偽薬群の動物には運動量の低減、運動後の呼吸困難、体力低下、力不足、摂食量の減少等の所見があるが、本発明薬剤投与群では、偽薬群よりも動物の１日平均運動量が多く、活発であり、体力が優れており、呼吸窮迫等の症状が少なく、摂食量が正常であることが示される。
【０１２７】
５．結論
本発明薬剤の９０日間連続投与は、駆出率が保持された心不全モデルのサルの駆出率を高め、収縮機能を改善することができ、拡張機能にもある程度の改善効果がある。
【０１２８】
上記の内容に記載された本発明の実施形態は説明及び例示の目的のものである。これらの実施形態は、本発明を開示されている内容に具体的に限定するためのものではない。なお、上記の開示には様々な変更を行うことができる。特定の実施形態を選択して例示的な説明をすることは、本発明に係る特定の原理及びその実際の用途を解釈することによって、当業者が本発明に係る様々な示例的な実施形態を実施し、適宜選択と変更を行うことを可能にするためである。本発明の範囲は、特許請求の範囲及び同等な形式の内容によって限定される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１２９】
【非特許文献１】Ｔａｏ  Ｙ，Ｗａｎｇ  Ｙ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ｄａｌｂｅｒｇｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ  Ｔ．Ｃｈｅｎ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２０１０，８１（５）：３９３−３９９．
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2021519335.tif 000044
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