(57)【要約】  複合体は、薬物またはプローブ、細胞結合物質、及びキノン含有リンカーを含む。キノン含有リンカーは、細胞内で還元されて薬物またはプローブの放出を引き起こし得る。これらの複合体は、薬物またはプローブを、その活性薬物またはプローブの局所放出のための目的の作用部位へ選択的に送達し得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃｂ−（Ｇ）p
（Ｉ）
［式中、
Ｃｂは、細胞結合部分であり、
ｐは、１〜２０の数であり、
Ｇは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）であり、
2021533102.tif 000247
（ＩＩ）
2021533102.tif 000248
（ＩＩＩ）
2021533102.tif 000249
（ＩＶ）
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロ、及びアミノからなる群から選択されるか、または式（ＩＩ）もしくは（ＩＶ）のＲ11とＲ12は、それらが結合している原子と共に縮合フェニル環を形成し、
Ｌ1は、第１のリンカー部分であり、
Ｌ2は、第２のリンカー部分であり、
Ｇ1は、−Ａ2、
2021533102.tif 000250
または
2021533102.tif 000251
であり、
Ｇ2は、
2021533102.tif 000252
または
2021533102.tif 000253
であり、
Ｘ1及びＸ2は、それぞれ抗体連結部分であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ14及びＲ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分であり、かつ
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である、式（Ｉ）の複合体、またはその塩。
【請求項２】
Ｘ1またはＸ2は、
2021533102.tif 000254
−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2−、−ＮＨＣ（Ｓ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、
2021533102.tif 000255
−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｃ1-6アルキル）−である、請求項１に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３】
Ｇは、式（ＩＩ）または（ＩＶ）である、請求項１もしくは２に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４】
Ｌ1は、Ｌ1aまたはＬ1a−Ｌ1bであり、ここで、Ｌ1bはＸ1に結合され、
Ｌ1aは、−Ｃ1-12アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、
Ｌ1bは、１つ以上の共有結合で結合している二価のメンバーを含み、前記１つ以上の二価のメンバーは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ20−、−Ｃ（Ｒ21）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000256
、アミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、
Ｌ1a及び／またはＬ1bの前記Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、及びヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、
Ｒ20及びＲ21は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルであり、かつ
ｘは、１〜２０の整数である、請求項３に記載の複合体、またはその塩。
【請求項５】
Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ1c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、
2021533102.tif 000257
、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、かつ
Ｌ1cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000258
である、請求項４に記載の複合体、またはその塩。
【請求項６】
Ｌ1a−Ｌ1bは、
−Ｃ1-12アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c  −、Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c  −、−Ｃ1-12アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c  −、−Ｃ3-8シクロアルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c  −、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ｃｉｔ−ｖａｌ  −Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-12アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-12アルキレン、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロ−Ｃ1-6アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）X−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、または−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）X−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−である、請求項５に記載の複合体、またはその塩。
【請求項７】
Ｌ1aは、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）1-2−ＣＨ2ＣＨ2−であり、
Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）5−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）5−、または
2021533102.tif 000259
であり、かつ
Ｌ1cは、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（ＣＨ3）−１，４−フェニレン−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、または
2021533102.tif 000260
である、請求項４〜６のいずれかに記載の複合体、またはその塩。
【請求項８】
Ｌ1b−Ｘ1は、
2021533102.tif 000261
−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、または
2021533102.tif 000262
である、請求項４〜６のいずれかに記載の複合体、またはその塩。
【請求項９】
Ｌ1−Ｘ1は、
2021533102.tif 000263
2021533102.tif 000264
である、請求項４に記載の複合体、またはその塩。
【請求項１０】
Ｇは式（ＩＩＩ）である、請求項１もしくは２に記載の複合体、またはその塩。
【請求項１１】
Ｌ2は、Ｌ2aまたはＬ2a−Ｌ2bであり、ここで、Ｌ2bはＸ2に結合され、
Ｌ2aは−Ｃ2-6アルキレン−であり、
Ｌ2bは、１つ以上の共有結合で結合している二価のメンバーを含み、前記１つ以上の二価のメンバーは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ30−、−Ｃ（Ｒ31）＝Ｎ−Ｎ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000265
、アミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、
Ｌ1bの前記Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、及びヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、かつ
Ｒ30及びＲ31は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルである、請求項１０に記載の複合体、またはその塩。
【請求項１２】
Ｌ2bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｌ2c−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｌ2c−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ2c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、
2021533102.tif 000266
、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、かつ
Ｌ2cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000267
である、請求項１１に記載の複合体、またはその塩。
【請求項１３】
Ｌ2b−Ｘ2は、
2021533102.tif 000268
−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、または
2021533102.tif 000269
である、請求項１２に記載の複合体、またはその塩。
【請求項１４】
Ａ1は細胞傷害性部分である、請求項１〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
Ａ1は、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、アウリスタチン、ドキソルビシン、ＳＮ−３８、またはメイタンシノイドに由来する抗がん剤部分である、請求項１〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
前記抗がん剤部分Ａ1は、
2021533102.tif 000270
2021533102.tif 000271
である、請求項１〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
Ａ2は、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、アウリスタチン、ドキソルビシン、ＳＮ−３８、またはメイタンシノイドに由来する抗がん剤部分である、請求項１０〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
前記抗がん剤部分Ａ2は、
2021533102.tif 000272
2021533102.tif 000273
2021533102.tif 000274
である、請求項１０〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
前記細胞結合部分は、抗体部分Ａｂである、請求項１〜１８のいずれかに記載の複合体、またはその塩。
【請求項２０】
前記細胞結合部分は、小分子薬物部分であり、ｐは１である、請求項１〜１８のいずれかに記載の複合体、またはその塩。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかに記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項２２】
ｐは１〜２０の範囲であり、細胞結合部分あたりのＧ単位の平均数である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ｐは２〜５の範囲であり、細胞結合部分あたりのＧ単位の平均数である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
治療的有効量の請求項１〜２０のいずれかに記載の複合体、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項２１〜２３に記載の組成物を投与することを、増殖性障害の治療を必要とする患者に対して行うことを含む、増殖性障害を治療する方法。
【請求項２５】
請求項１〜２０のいずれかに記載の複合体、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項２１〜２３に記載の組成物、及び使用説明書を含む、キット。
【請求項２６】
式７
2021533102.tif 000275
７
［式中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロ、及びアミノからなる群から選択されるか、またはＲ11とＲ12は、それらが結合している原子と共に縮合フェニル環を形成し、
Ｌ1は、第１のリンカー部分であり、
Ｘ1aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000276
−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000277
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
Ｒ14は、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎ’は、０または１であり、かつ
Ａ1は、置換可能な酸素原子を介して結合したペイロード部分である］の化合物、またはその塩。
【請求項２７】
式１０
2021533102.tif 000278
１０
［式中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロ、及びアミノからなる群から選択されるか、またはＲ11とＲ12は、それらが結合している原子と共に縮合フェニル環を形成し、
Ｌ1は、第１のリンカー部分であり、
Ｇ2は、
2021533102.tif 000279
または
2021533102.tif 000280
であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
Ｘ1aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000281
−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000282
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
ｍ’は、０または１であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子を介して結合したペイロード部分であり、
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である］の化合物、またはその塩。
【請求項２８】
式１２
2021533102.tif 000283
１２
［式中、
Ｇ1は、−Ａ2、
2021533102.tif 000284
であり、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロ及びアミノからなる群から選択され、
Ｌ2は、第２のリンカー部分であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ14及びＲ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ｘ2aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000285
−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000286
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分であり、かつ
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である］の化合物、またはその塩。
【請求項２９】
Ａ1はレポーター部分である、請求項１〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその塩。
【請求項３０】
前記レポーター部分は、生物発光レポーター部分、蛍光レポーター部分、または比色レポーター部分を含む、請求項２９に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３１】
前記生物発光レポーター部分は、ルシフェラーゼに対する基質を含む、請求項３０に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３２】
前記基質は、ルシフェリン、ルシフェリンの誘導体または類似体、プレルシフェリンまたはプレルシフェリン類似体、セレンテラジン、またはセレンテラジンの誘導体もしくは類似体を含む、請求項３１に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３３】
前記基質は、フリマジン、セレンテラジンＨ、Ｈ、またはルシフェリンである、請求項３１に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３４】
前記ルシフェラーゼは、甲虫ルシフェラーゼ、ウミシイタケルシフェラーゼ、オプロフォーラス（Oplophorus）ルシフェラーゼ、またはその変異型である、請求項３１に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３５】
前記レポーター部分は蛍光レポーター部分を含む、請求項３０に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３６】
前記蛍光レポーター部分はフルオロフォアを含む、請求項３５に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３７】
前記フルオロフォアは、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レソルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、請求項３６に記載の複合体、またはその塩。
【請求項３８】
Ａ2はレポーター部分である、請求項１０〜１３のいずれかに記載の複合体、またはその塩。
【請求項３９】
前記レポーター部分は、生物発光レポーター部分、蛍光レポーター部分、または比色レポーター部分を含む、請求項３８に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４０】
前記生物発光レポーター部分は、ルシフェラーゼに対する基質を含む、請求項３９に記載の複合体。
【請求項４１】
前記基質は、ルシフェリン、ルシフェリンの誘導体または類似体、プレルシフェリンまたはプレルシフェリン類似体、セレンテラジン、またはセレンテラジンの誘導体もしくは類似体を含む、請求項４０に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４２】
前記基質は、フリマジン、セレンテラジンＨ、Ｈ、またはルシフェリンである、請求項４０に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４３】
前記ルシフェラーゼは、甲虫ルシフェラーゼ、ウミシイタケルシフェラーゼ、オプロフォーラスルシフェラーゼ、またはその変異型である、請求項４０に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４４】
前記レポーター部分は蛍光レポーター部分を含む、請求項３９に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４５】
前記蛍光レポーター部分はフルオロフォアを含む、請求項４４に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４６】
前記フルオロフォアは、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レソルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、請求項４５に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４７】
前記レポーター部分は蛍光レポーター部分を含む、請求項３８に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４８】
前記蛍光レポーター部分はフルオロフォアを含む、請求項４７に記載の複合体、またはその塩。
【請求項４９】
前記フルオロフォアは、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レソルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、請求項４８に記載の複合体、またはその塩。
【請求項５０】
薬剤の細胞内への取り込みを評価するための方法であって、
ａ）細胞を含む試料を、請求項２９〜４９のいずれか１項に記載の複合体、またはその塩と接触させること、及び
ｂ）発光を検出することであって、
それによる前記発光の検出が、前記薬剤の細胞内取り込み示すこと
を含む前記方法。
【請求項５１】
前記薬剤の前記細胞内取り込みにより、前記化合物の還元及び放出されたレポーター部分の生成がもたらされる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記レポーター部分は蛍光レポーター部分を含む、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
発光を検出することは、前記試料をある光の波長に曝露すること、及び前記試料の蛍光レベルを検出することを含み、ここで、対照試料の蛍光または蛍光波長と比較した、蛍光の増大または蛍光波長の変化は、前記薬剤の細胞内取り込みを示す、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記対照試料は、標識付き薬剤と接触させていない試料である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記対照試料は、前記薬剤の取り込み能力がない試料である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
蛍光は、前記細胞内部で検出される、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５７】
蛍光は、前記細胞外部で検出される、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記レポーター部分は生物発光レポーター部分を含む、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５９】
前記生物発光レポーター部分は、ルシフェラーゼに対する基質を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記細胞はルシフェラーゼを含む、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記細胞は前記ルシフェラーゼを発現する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
発光を検出することは、前記放出されたレポーター部分を利用して前記ルシフェラーゼにより生成される前記発光を検出することを含む、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記試料をルシフェラーゼと接触させることをさらに含み、発光を検出することは、前記放出されたレポーター部分を利用して前記ルシフェラーゼにより生成される前記発光を検出することを含む、請求項５８〜６２のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
前記発光は、前記細胞の内部または外部で検出される、請求項５８〜６３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／７１１，３２８号の優先権の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は一般に、複合体、化合物、組成物、ならびにかかる複合体、化合物、及び組成物を使用する方法であって、増殖性障害の検出、及び／または治療が含まれる方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、腫瘍細胞を選択的に標的にして破壊するよう設計されている。それらは、ペイロードとして知られる細胞傷害性分子、一般には有糸分裂阻害剤と、標的腫瘍細胞上の抗原と選択的に結合する抗体とをリンカーを手段として接続することによって組み立てられる。結合したＡＤＣは、標的細胞によってエンドサイトーシスを介して取り込まれ、分解のためにリソソームに送達され、そこで細胞傷害性ペイロードが放出され、腫瘍細胞を死滅させる。
【０００４】
現在ＡＤＣに使用されているリンカー化学は、切断可能または切断不可能として記載されている。切断可能形態では、標的細胞内部で引き起こされる特異的な放出機構が組み込まれている。これらには、ヒドラゾン、ジスルフィド、ピロリン酸ジエステル、及びペプチドのリンカーが含まれる。最もよく知られているペプチドリンカーは、タンパク質分解性切断後の無痕跡のペイロード脱離を容易にするアミノベンジルオキシカルボニル基を有する、カテプシンＢの基質である。切断不可能形態では、サイトゾル及びリソソームでの非特異的な切断／分解の後にペイロードが放出される。この機構ではリンカー切断が不均一になり、残留リンカー原子のために効力にばらつきのあるペイロードが送達され得る。この方法である程度の成功は収められたが、放出されたペイロード分子のプールが不均一であることは、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）及び吸収・分布・代謝・排泄（ＡＤＭＥ）／毒性特性がかなりの程度で複雑になる原因となっている。さらに、循環中でのペイロード放出によるオフターゲット毒性を回避するために、血流中でのＡＤＣの安定性は重要である。これは、ヒドラゾン及びジスルフィドで連結されたＡＤＣで問題となっていたが、切断不可能なリンカーを用いて改善されている。したがって、特定の標的に対して理想的なＡＤＣ設計を可能にする可能性を秘めた、ＡＤＣの設計及び開発に利用可能な選択肢を増やすために、特性が改善された新規リンカー化学が必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、薬物またはプローブと細胞結合物質（例えば、抗体）とがキノン含有リンカーを介して連結されている複合体に関する。これらの複合体は、細胞毒素を、活性薬物の局所放出のための目的作用部位に選択的に送達し得る。キノン含有リンカーは、インサイチュで還元されて細胞障害性薬物の放出を引き起し得る。
【０００６】
一態様では、式（Ｉ）の複合体、またはその塩を提供し、
Ｃｂ−（Ｇ）p
（Ｉ）
式中、
Ｃｂは、細胞結合部分であり、
ｐは、１〜２０の数であり、
Ｇは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）であり、
2021533102.tif 000002
（ＩＩ）
2021533102.tif 000003
（ＩＩＩ）
2021533102.tif 000004
（ＩＶ）
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロもしくはアミノであるか、または式（ＩＩ）もしくは（ＩＶ）のＲ11とＲ12は、それらが結合している原子と共に縮合フェニル環を形成し、
Ｌ1は、第１のリンカー部分であり、
Ｌ2は、第２のリンカー部分であり、
Ｇ1は、−Ａ2、
2021533102.tif 000005
、または
2021533102.tif 000006
であり、
Ｇ2は、
2021533102.tif 000007
または
2021533102.tif 000008
であり、
Ｘ1及びＸ2は、それぞれ抗体連結部分であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ14及びＲ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分であり、かつ
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である。
【０００７】
別の態様では、式７の化合物、またはその塩を提供し、
2021533102.tif 000009
７
式中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロもしくはアミノであるか、またはＲ11とＲ12は、それらが結合している原子と共に縮合フェニル環を形成し、
Ｌ1は、第１のリンカー部分であり、
Ｘ1aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000010
、
2021533102.tif 000011
、
2021533102.tif 000012
、−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000013
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
Ｒ14は、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎ’は、０または１であり、かつ
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分である。
【０００８】
別の態様では、式１０の化合物、またはその塩を提供し、
2021533102.tif 000014
１０
式中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロもしくはアミノであるか、またはＲ11とＲ12は、それらが結合している原子と共に縮合フェニル環を形成し、
Ｌ1は、第１のリンカー部分であり、
Ｇ2は、
2021533102.tif 000015
または
2021533102.tif 000016
であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
Ｘ1aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000017
、
2021533102.tif 000018
、
2021533102.tif 000019
、−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000020
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
ｍ’は、０または１であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分であり、かつ
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である。
【０００９】
別の態様では、式１２の化合物、またはその塩を提供し、
2021533102.tif 000021
１２
式中、
Ｇ1は、−Ａ2、
2021533102.tif 000022
、または
2021533102.tif 000023
であり、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11及びＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロまたはアミノであり、
Ｌ2は、第２のリンカー部分であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ14及びＲ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ｘ2aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000024
、
2021533102.tif 000025
、
2021533102.tif 000026
、−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000027
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分であり、かつ
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である。
【００１０】
別の態様では、式（Ｉ）の複合体、またはその塩と、担体とを含む組成物を提供する。
【００１１】
別の態様では、式（Ｉ）の複合体、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
別の態様では、増殖性障害を治療する方法であって、治療的有効量の、式（Ｉ）の複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。例えば、本発明は、細胞を死滅させる方法を提供し、本発明の複合体化合物を、細胞に対し、細胞を死滅させるのに十分な量にて投与する。
【００１３】
他の態様では、ａ）細胞を含む試料と、薬剤及び式（Ｉ）の化合物に由来する標識付き薬剤とを接触させること、及びｂ）発光を検出することであり、その発光の検出により薬剤の細胞内への取り込みが示されることを含む、薬剤の細胞内への取り込みを評価するための方法を開示する。
【００１４】
別の態様では、式（Ｉ）の複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物、及び使用説明書を含むキットを提供する。
【００１５】
別の態様では、式７の化合物、またはその塩もしくは組成物、及び使用説明書を含むキットを提供する。
【００１６】
別の態様では、式１０の化合物、またはその塩もしくは組成物、及び使用説明書を含むキットを提供する。
【００１７】
別の態様では、式１２の複合体、またはその塩もしくは組成物、及び使用説明書を含むキットを提供する。
【００１８】
化合物、組成物、方法、及びプロセスは本明細書で詳述される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＨＥＲの陽性細胞及び陰性細胞における、ハーセプチン複合体ＰＢＩ−５５０８またはＰＢＩ−６８５５からの細胞性ルシフェリン放出時のルシフェリン発光（ＲＬＵ＝相対発光量）を示す（実施例７）。
【図２】ＨＥＲの陽性細胞及び陰性細胞における、ハーセプチン複合体ＰＢＩ−５５０８またはＰＢＩ−６８５５からの細胞性ルシフェリン放出時のルシフェリン発光を示す（実施例７）。
【図３】ＰＢＩ−４３１２、ならびにハーセプチン、ＢＳＡ、及びプラルエントのＰＢＩ−５５０８複合体からの非細胞性ルシフェリン放出時のルシフェリン発光を示す（実施例８）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
１．用語の定義
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾がある場合は、定義も含め、本書類が優先する。好ましい方法及び材料を以下に記載するが、本発明の実施または試験においては本明細書に記載の方法及び材料と類似または同等のものを使用することができる。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、及び例は、例示的なものに過ぎず、限定されることを意図しない。
【００２１】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」、及びそれらの変形は、本明細書で使用される場合、追加の行為または構造の可能性を除外しないオープンエンドの移行句、用語、または単語であることが意図される。本開示はまた、明示的に記載されているか否かにかかわらず、本明細書で提示された実施形態または要素「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」他の実施形態も企図している。
【００２２】
「アルキル」、「シクロアルキル」、「アルキレン」等のような用語には、特定の場合におけるその基に存在する原子の数を示す表記が前に付けられる場合がある（例えば、「Ｃ1-4アルキル」、「Ｃ3-8シクロアルキル」、「Ｃ1-6アルキレン」）。これらの表記は、当該技術分野の当業者によって一般に理解されているように使用される。例えば、「Ｃ」の後に下付きの数字が続く表現は、その後に続く基に存在する炭素原子の数を示す。したがって、「Ｃ3アルキル」は、３個の炭素原子を有するアルキル基（すなわち、ｎ−プロピル、イソプロピル）である。「Ｃ1-4」のように範囲が与えられている場合、後に続く基のメンバーは、記述された範囲内に入る任意の数の炭素原子を有し得る。例えば、「Ｃ1-4アルキル」は、どのように配列されているかを問わず、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基である。
【００２３】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」とは、２個の水素の除去によって形成される炭素−炭素二重結合を少なくとも１つ含有する直鎖または分岐の炭化水素鎖を指す。アルケニルの代表的な例には、エテニル、２−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−メチル−１−ヘプテニル、及び３−デセニルが含まれるが、これらに限定されない。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部位に付加された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。アルコキシの代表的な例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、及びヘキシルオキシが含まれるが、これらに限定されない。
【００２５】
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」とは、直鎖または分岐の飽和炭化水素ラジカルを指す。代表的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルが含まれる。
【００２６】
本明細書で使用される場合、用語「アルキレン」とは、直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素から誘導される二価基を意味する。アルキレンの代表的な例には、−ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−、及び−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−が含まれるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニレン」とは、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖または分岐鎖の炭化水素から誘導される二価基を意味する。アルケニレンの代表的な例には、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ−、及び−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ3）−が含まれるが、これらに限定されない。
【００２８】
本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」とは、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐の炭化水素ラジカルを指す。本発明のアルキニル基には、エチニル、プロピニル、及びブチニルが含まれるが、これらに限定されない。
【００２９】
本明細書で使用される場合、用語「アミド」とは、−ＣＯＮＨ2を指す。
【００３０】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ」とは、−ＮＨ2基を指す。
【００３１】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」とは、天然及び非天然の両方のアミノ酸を指す。これには、保護された天然及び非天然のアミノ酸も含まれる。
【００３２】
本明細書で使用される場合、用語「アリール」とは、フェニルまたは二環式アリールを意味する。二環式アリールは、ナフチル、ジヒドロナフタレニル、テトラヒドロナフタレニル、インダニル、またはインデニルである。フェニル及び二環式アリールは、そのフェニルまたは二環式アリール内に含有される任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語「フェニレン」とは、二価のフェニルラジカル、例えば、
2021533102.tif 000028
を意味する。
【００３４】
本明細書での使用の場合、用語「アジド」または「アジド」とは、−Ｎ＝Ｎ+＝Ｎ-（すなわち、−Ｎ3）基を指す。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「誘導体」とは、何らかの化学的または物理的なプロセスによって類似化合物から誘導される化合物を指し得る。誘導体は、同様の化学構造の化合物である。誘導体は、構造類似体であってよい。
【００３６】
本明細書で使用される場合、用語「カルボキシ」とは、−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ基を指す。
【００３７】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」とは、環原子としてゼロのヘテロ原子及びゼロの二重結合を含有する飽和炭素環系を意味する。単環式シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが含まれるが、これらに限定されない。本発明のシクロアルキル基は、基の２つの隣接していない炭素原子を連結する、１個、２個、３個、または４個の炭素原子のアルキレン架橋を含有し得る。そのような架橋系の例には、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル及びビシクロ［２．２．２］オクタニルが含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載のシクロアルキル基は、任意の置換可能な炭素原子を介して親分子部分に付加され得る。
【００３８】
本明細書で使用される場合、用語「ジ（アルキル）アミノ」とは、本明細書で定義されるようなアミノ基を介して親分子部分に付加される、２つの独立して選択される、本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。ジ（アルキル）アミノの代表的な例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、及びＮ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノが含まれるが、これらに限定されない。
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「ハロゲン」または「ハロ」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードのラジカルを指す。
【００４０】
本明細書で使用される場合、用語「ハロアルコキシ」とは、１個、２個、３個、または４個のハロゲン原子によって置換された、本明細書で定義されるようなアルコキシ基を指す。ハロアルコキシの代表的な例には、クロロメトキシ、２−フルオロエトキシ、トリフルオロメトキシ、及びペンタフルオロエトキシが含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
本明細書で使用される場合、用語「ハロアルキル」とは、１個、２個、３個、または４個のハロゲン原子よって置換された、本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。ハロアルキルの代表的な例には、クロロメチル、２−フルオロエチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、２−クロロ−３−フルオロペンチル、及び４，４，４，−トリフルオロブチルが含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシ」とは、−ＯＨ基を指す。
【００４３】
用語「リンカー」とは、二価の化学基または二価の化学基の組み合わせを指し、かかる二価基は環または鎖を含み得る。二価の化学基（複数可）は、共有結合によって接続された原子または原子の組み合わせで構成される。リンカー（例えば、第１及び第２のリンカー部分）は、例えば、抗体連結部分（Ｘ1またはＸ2）を親分子部分に接続する等、別々の化学部分を接続する。リンカーは、抗体連結部分及び親分子部分に共有結合によって接続される。リンカーの長さは、特定の用途に応じて異なってよい。一般に、第１及び第２のリンカー部分は、鎖（複数可）及び／または環（複数可）の組み合わせを介した、少なくとも、２〜５０個の原子の直鎖配列を含有し、かかる直鎖配列には、分岐側鎖及び／または置換が含まれてよい。リンカーには、酸素、窒素、硫黄、またはリン等の１つ以上のヘテロ原子が含まれてよい。リンカーは、オキソ基、アミノ基、アルキル基、ハロゲン及びニトロ基を含有してよい。リンカーはまた、アリール基を含有してもよい。例示的な二価基には、−Ｃ1-12アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ20−、−Ｃ（Ｒ21）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000029
、アミノ酸部分、保護されたアミノ酸部分、及びフェニレンが含まれ、ここで、Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、及びヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、Ｒ20及びＲ21は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルであり、ｘは、１〜２０の整数である。いくつかの実施形態では、第１または第２のリンカー部分は、親分子部分に結合される、−Ｃ1-12アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−、またはＣ3-8シクロアルキレンのうちの少なくとも１つ、及び任意選択で、抗体連結部分（Ｘ1またはＸ2）に接続されるよう配列された１つ以上の追加の二価部分を含有するかまたはそれらからなり、１つ以上の追加の二価部分は、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ20−、−Ｃ（Ｒ21）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000030
、アミノ酸部分、保護されたアミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、ここで、Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、及びヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、ｘ、Ｒ20、及びＲ21は、本明細書で定義されるとおりである。
【００４４】
リンカーは、「無痕跡型」または「自壊性」リンカーであり得る。用語「無痕跡型リンカー」または「自壊性リンカー」とは、複合体の生体内変化が親分子部分からのリンカーの自発的切断をもたらすリンカーを指す。
【００４５】
抗体連結部分（Ｘ1またはＸ2）は、それぞれ、第１または第２のリンカー部分の末端に結合され、細胞結合部分（例えば、抗体部分、小分子薬物部分、ポリヌクレオチド）に接続される二価の化学基である。例示的な抗体連結部分には、
2021533102.tif 000031
、
2021533102.tif 000032
、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2−、−ＮＨＣ（Ｓ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、
2021533102.tif 000033
、
2021533102.tif 000034
、
2021533102.tif 000035
、−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｃ1-6アルキル）−が含まれる。抗体連結部分は、Ｃｂに、ＣｂのＮ末端システインを介して、スルフヒドリル基（例えば、システイン）を介して、アミノ（例えば、リジン、ｄＵアリルアミン）を介して、カルボニル部分（Ｃｂ内カルボキシル由来）を介して、またはクリックケミストリーによって形成された環（例えば、トリアゾール）を介して結合され得る。例えば、抗体結合部分
2021533102.tif 000036
は、抗体内の
2021533102.tif 000037
に結合されてトリアゾール部分（例えば、
2021533102.tif 000038
）を形成する。トリアゾールは、アルキンへのアジドの［３＋２］付加環化によって形成され、その場合、アジドがＸ1a／Ｘ2aに、またアルキンが抗体に由来しても、その逆であってもよい。
【００４６】
用語「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸及び合成／非天然アミノ酸を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるもの、ならびに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、及びＯ−ホスホセリンである。例えば、用語「天然アミノ酸」とは、タンパク質に見出される天然に存在する一般的なＬ−アミノ酸のいずれか１つを指し、それらには、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈは）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、システイン（Ｃｙｓ）、及びメチオニン（Ｍｅｔ）が含まれる。本明細書で使用される場合、用語「非天然アミノ酸」とは、上記の天然アミノ酸ではないすべてのアミノ酸を指す。そのようなアミノ酸には、上記の天然に存在するアミノ酸のいずれかのＤ異性体が含まれる。非天然アミノ酸には、ホモセリン、オルニチン、ノルロイシン、及びチロキシンも含まれる。細胞結合物質の一部としての非天然アミノ酸は、Ｘ1a／Ｘ2aでの対応する官能基による付加環化を受けてトリアゾールを形成することができるアルキン基またはアジド基を含有し得る。追加の非天然アミノ酸は当業者に周知である。非天然アミノ酸は、Ｄ異性体またはＬ異性体であってよい。非天然アミノ酸は、アルファアミノ酸またはベータアミノ酸であってもよい。非天然アミノ酸は、リン酸化されたセリン、トレオニンもしくはチロシン、アシル化されたリジン、またはアルキル化されたリジンもしくはアルギニン等、翻訳後修飾されたアミノ酸であってもよい。翻訳後修飾されたアミノ酸の多くの形態が知られている。特に使用され得るアミノ酸の１つはシトルリン（ｃｉｔ）であり、これは、アルギニンの前駆体であり、肝臓での尿素形成に関与する。
【００４７】
いくつかの実施形態では、Ｌ1bまたはＬ2bは、腫瘍組織に発現されるプロテアーゼによって切断可能なペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチド配列は、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ9−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ9−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙからなる群から選択される。特定の実施形態では、ペプチド配列は、Ｖａｌ−ＣｉｔまたはＶａｌ−Ｌｙｓである。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「保護されたアミノ酸」とは、保護された官能基をさらに含有するアミノ酸側鎖を指す。保護基は当該技術分野において周知であり、アミノ基、ヒドロキシ基、チオ基、またはカルボキシ基のような官能基を、合成手順中の望ましくない反応から保護することを目的とする。保護基は、合成後の化学反応によって除去されてよい。保護されたアミノ酸側鎖の例には、セリンに由来するベンジルオキシメチル、チロシンに由来する（４−メトキシフェニル）メチル、及びグルタミン酸に由来するプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
【００４９】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸側鎖」とは、アミノ酸のα炭素に結合している基を指す。これは、アミノ酸の特徴的部分であり、対応するアミノ酸からＮＨ2ＣＨＣ（Ｏ）ＯＨ部分の除去により得られる。例えば、アラニンのアミノ酸側鎖はメチルであり、フェニルアラニンのアミノ酸側鎖はフェニルメチルである。アミノ酸側鎖は、天然アミノ酸側鎖であっても非天然アミノ酸側鎖であってもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸側鎖は保護されたアミノ酸側鎖であり得る。
【００５０】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ保護基」とは、その保護基が結合している窒素原子上で化学反応が生じることを防ぐ部分を指す。アミノ保護基はまた、化学反応によって除去可能でなければならない。そのような基は、当該技術分野において周知であり、それらには、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３rd  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９に詳述されているものが含まれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。好適なアミノ保護基には、カルボベンジルオキシ（−ＮＨＣＯ−ＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5または−ＮＨ−Ｃｂｚ）；ｔ−ブチルオキシカルボニル（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ3）3または−ＮＨ−Ｂｏｃ）；９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ｆｍｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ｔｒｏｃ）、及びアリルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ａｌｌｏｃ）が含まれるが、これらに限定されない。（上記の各々において、−ＮＨ−は、保護されているアミノ基からの窒素を表す）。
【００５１】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ遮断基」とは、その遮断基が結合している窒素原子上で化学反応が生じることを防ぐ部分を指す。アミノ保護基とは対照的に、アミノ遮断基は、化学反応によって除去されることは意図されない。そのような基には、例えば、アセチル（−ＮＨＣＯ−ＣＨ3）及びスクシニル（−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯ-）等のアシル基が含まれる。（上記の各々において、−ＮＨ−は、遮断されているアミノ基からの窒素を表す）。
【００５２】
本明細書で使用される場合、用語「窒素保護基」とは、合成手順中の望ましくない反応からアミノ基を保護することを目的とする基を指す。代表的な窒素保護基には、アセチル、ベンゾイル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ホルミル、フェニルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルアセチル、トリフルオロアセチル、及びトリフェニルメチル（トリチル）が含まれる。
【００５３】
本明細書で使用される場合、用語「オキソ」とは、二重結合酸素（＝Ｏ）ラジカルを指す。
【００５４】
用語「糖類」とは、糖または他の炭水化物、特に単糖を指す。これには、アルファアノマーとβアノマーの両方が含まれる。糖類は、Ｃ6−ポリヒドロキシ化合物、典型的には、Ｃ6−ペンタヒドロキシ、また多くの場合、環状グリカルであり得る。これには、既知の単糖及びそれらの誘導体、ならびに２つ以上の単糖類残基を有する多糖類が含まれる。糖類には、ヒドロキシル基上の保護基が含まれ得る。糖類のヒドロキシル基は、１つ以上のアセトアミド、ハロまたはアミノ基で置き換えることができる。さらに、炭素原子のうち１つ以上は、酸化されて、例えば、ケト基またはカルボニル基になり得る。好適な糖類には、ガラクトース、グルコース、グルクロン酸及びノイロミン酸（ｎｅｕｒｏｍｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）が含まれる。
【００５５】
本明細書で使用される場合、用語「スルホニル」とは、Ｓ（Ｏ）2を指す。
【００５６】
基は、１個以上の水素原子に結合されている少なくとも１個の炭素原子または窒素原子を含む場合、「置換可能」である。したがって、例えば、水素、ハロゲン、及びシアノは、この定義には入らない。
【００５７】
基が「置換される」と記載されている場合、その基の炭素または窒素上には水素ラジカルの代わりに非水素ラジカルがある。したがって、例えば、置換アルキル置換基は、アルキル置換基上の水素ラジカルの代わりに少なくとも１個の非水素ラジカルがあるアルキル置換基である。例示すると、モノフルオロアルキルは、フルオロラジカルで置換されているアルキルであり、ジフルオロアルキルは、２つのフルオロ基で置換されているアルキルである。置換基上に２つ以上の置換がある場合、それぞれの非水素ラジカルは、（別段記述されない限り）同一であっても異なっていてもよいことが認識されるべきである。
【００５８】
基が、「非置換」と呼ばれるか、または「置換される」もしくは「任意選択で置換される」と呼ばれない場合、その基がいかなる置換基も有していないことを意味する。基が「任意選択で置換される」と記載されている場合、その基は、（１）置換されない、または（２）置換される、のいずれであってもよい。基が、特定の数を最高とする非水素ラジカルで任意選択で置換されると記載されている場合、その基は、（１）置換されない、または（２）その特定の数を最高とする非水素ラジカル、もしくはその基の上で置換可能な位置の最大数を最高とする非水素ラジカルのいずれか少ない方によって置換される、のいずれであってもよい。
【００５９】
置換基が、ある群から「独立して選択される」と記載されている場合、それぞれの置換基は他とは独立して選択される。したがって、各置換基は、他の置換基（複数可）と同一であっても異なっていてもよい。
【００６０】
「ペイロード部分」とは、ペイロード内の置換可能な原子において親分子部分に結合しているペイロードラジカル（例えば、−Ａ1、−Ａ2）を指す。好ましい実施形態では、ペイロードは、第一級または第二級アミン、ヒドロキシル、及びスルフヒドリルからなる群から選択される化学的に反応性の官能基を有する。ペイロードＨＡ1及びＨＡ2は、好ましくは、薬物（例えば、細胞障害性薬物、抗生物質）またはレポーター（例えば、プローブ）である。好ましいペイロードの非限定的な例には、デュオカルマイシン（デュオカルマイシンならびにデュオカルマイシンの類似体及び誘導体、ＣＣ−１０６５、ＣＢＩ系デュオカルマイシン類似体、ＭＣＢＩ系デュオカルマイシン類似体、ＣＣＢＩ系デュオカルマイシン類似体）、ドキソルビシン（例えば、ドキソルビシン、ドキソルビシン複合体、モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン）、ドラスタチン（例えば、ドレスタチン−１０）、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン（例えば、メイタンシン、メイタンシン類似体、ＤＭ−１、ＤＭ−４、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００４／１０３２７２に開示されている類似体）、アウリスタチン（例えば、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ））、ピロロベンゾジアゼピン（例えば、ＳＧＮ−１８８２、ＳＧＮ−１９９６、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１１／０２５６１５７及びＵＳ９２４２０１３に開示されているピロロベンゾジアゼピン）、ＳＮ−３８、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、ツブリシン、ジソラゾール、エポチロン、パクリタキセル、ドセタキセル、トポテカン、リゾキシン、エキノマイシン、コルヒチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エストラムスチン、セマドチン、エロイテロビン、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトトレキサート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、メルファラン、ロイロシン、ロイロシデイン（ｌｅｕｒｏｓｉｄｅｉｎｅ）、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン複合体、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アミノプテリン、タリソマイシン、ポドフィロトキシン、ポドフィロトキシン誘導体、エトポシド、リン酸エトポシド、ビンクリスチン、タキソール、タキソテール  レチノイン酸、酪酸、Ｎ8アセチルスペルミジン及びカンプトテシンが含まれる。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ペイロードは抗生物質である。細胞結合物質に結合させるための好適な抗生物質及び方法には、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１４／１９３７２２及びＷＯ２０１４／１９４２４７に記載のものが含まれる。
【００６２】
本発明により提供される他の薬物複合体は、合成グルココルチコイド（例えば、デキサメタゾン）の複合体、キナーゼ阻害剤（例えば、ダサチニブ）の複合体、及び参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１６）１６（５），５９１−５９３に記載されるようなＬＸＲ核内受容体作動薬の複合体である。
【００６３】
本明細書で使用される場合、用語「レポーター部分」とは、適切な条件下で直接または間接的に検出可能なシグナルを発生する部分を指す。例示的なレポーター部分には、フルオロフォア、発光分子、化学発光分子、色素、放射標識、比色分子、及びルシフェラーゼ等の酵素の基質が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、レポーター部分は、例えば、そのレポーター部分が、酵素、例えば、ルシフェラーゼの基質である場合等に、検出可能なシグナルを間接的に発生し得る。その後、酵素と基質の反応により、蛍光または発光等の検出可能なシグナルが生成される。本明細書で使用される場合、用語「生物発光レポーター部分」とは、ルシフェラーゼの基質である部分を指し得る。例えば、生物発光レポーター部分は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、例えば、プレルシフェリン、アミノルシフェリン、キオノリル（ｑｕｉｏｎｏｌｙｌ）−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、フルオロルシフェリン、クロロルシフェリン、ルシフェリン誘導体の前駆体等、セレンテラジン、またはセレンテラジンの誘導体もしくは類似体、例えば、フリマジンであり得る。発生した発光シグナルは、発光光度計を使用して検出され得る。本明細書で使用される場合、用語「蛍光レポーター部分」とは、蛍光を発する部分を指し得る。例えば、蛍光レポーター部分は、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レソルフィン、クレシルバイオレット、シリ・キサンテン、またはカルボピロニン等のフルオロフォアであってよい。蛍光は、蛍光光度計を使用して検出され得る。比色ペイロードの放出は、特定の波長における吸光度の増加として検出され得る。
【００６４】
特定の実施形態では、レポーター部分は、生物発光レポーター部分である。特定の実施形態では、レポーター部分は、ルシフェリン、ルシフェリンの誘導体もしくは類似体、プレルシフェリンもしくは類似体、セレンテラジン、またはセレンテラジンの誘導体もしくは類似体である。いくつかの実施形態では、レポーター部分は、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００３／０４０１００、米国特許公開第２００８０２４８５１１号、米国特許公開第ＵＳ２０１２０１１７６６７号、及び米国特許公開第ＵＳ２０１５／０３０７９１６号に開示されているものに加え、ルシフェリン、プロルシフェリン、アミノルシフェリン、キオノリル（ｑｕｉｏｎｏｌｙｌ）−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、及び２−メチルセレンテラジンである。
【００６５】
特定の実施形態では、レポーター部分は、蛍光レポーター部分である。特定の実施形態では、レポーター部分は、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レソルフィン、クレシルバイオレット、シリ・キサンテン、またはカルボピロニンである。いくつかの実施形態では、レポーター部分は、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ色素（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒの−３５０、−４３０、−４８８、−及び−６６０）、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１のスルホニルクロリド誘導体（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’−もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２，’７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロードール、フルオレセインイソチオシアナート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである。
【００６６】
ペイロード部分−Ａ1は、置換可能な酸素または硫黄によって親分子に結合され得る。例えば、代表的な薬物ペイロード部分−Ａ1には、
2021533102.tif 000039
、
2021533102.tif 000040
、
2021533102.tif 000041
、
2021533102.tif 000042
、
2021533102.tif 000043
、
2021533102.tif 000044
、または
2021533102.tif 000045
が含まれる。
【００６７】
ペイロード部分−Ａ2は、置換可能な酸素原子、窒素原子、または硫黄原子によって親分子に結合され得る。例えば、代表的な薬物ペイロード部分−Ａ2には、
2021533102.tif 000046
、
2021533102.tif 000047
、
2021533102.tif 000048
、
2021533102.tif 000049
、
2021533102.tif 000050
、
2021533102.tif 000051
、
2021533102.tif 000052
、
2021533102.tif 000053
、
2021533102.tif 000054
、または
2021533102.tif 000055
が含まれる。
【００６８】
特定の化合物は、１つ以上の特定の、幾何形態、光学形態、鏡像異性形態、ジアステレオマー形態、エピマー形態、アトロプ形態、立体異性形態、互変異性形態、立体配座形態、またはアノマー形態で存在する場合があり、これには、シス−及びトランス−形；Ｅ−及びＺ−形；ｃ−、ｔ−、及びｒ−形；エンド−及びエキソ形；Ｒ−、Ｓ−、及びメサ−形；Ｄ−及びＬ−形；ｄ−及びｌ−形；（＋）及び（−）形、ケト−、エノール−、及びエノラート−形；シン−及びアンチ形；シンクリナル−及びアンチクリナル−形；α−及びβ−形；アキシャル及びエクアトリアル形、舟−、いす−、ねじれ−、封筒−、及び半いす−形；ならびにそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されるわけではなく、以下、総称して「異性体」（または「異性体形態」）と呼ぶ。「異性体」という用語には、１つ以上の同位体置換を有する化合物が含まれる。例えば、Ｈは、1Ｈ、2Ｈ（Ｄ）、及び3Ｈ（Ｔ）等の任意の同位体形態であってよく、Ｃは、12Ｃ、13Ｃ、及び14Ｃ等の任意の同位体形態であってよく、Ｏは、16Ｏ、及び18Ｏ等の任意の同位体形態であってよい。
【００６９】
細胞結合物質は、任意の種類のものであってよく、ペプチド及び非ペプチドが含まれてよい。これらには、抗体、もしくは少なくとも１つの結合部位を含有する抗体の断片（複数可）、リンホカイン、ホルモン、増殖因子、栄養素輸送分子、または他の任意の細胞結合性の分子もしくは物質（例えば、タンパク質、炭水化物、核酸等）が含まれ得る。細胞結合物質は、ヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであってよく、これには、ＤＮＡ及びＲＮＡ等の核酸、及びｄＵアリルアミンヌクレオチドを含むものが含まれる。細胞結合物質は、ポリペプチドであっても、またはそれを含んでいてもよい。ポリペプチドは、環状ポリペプチドであってよい。他のタンパク質／ペプチドには、ＡｐｏＢ、インスリン、トランスフェリン、及びシデロフォア（例えば、抗生物質との併用のため）が含まれる。シデロフォアは、例えば、ｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｕｎｅ  ２０１４），５（２９０），ｄｏｉ  １０．３３８９／ｆｍｉｃｂ．２０１４．００２９０、Ｓｔａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１４）５７，３８４５−３８５５、及びＭｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｍｅｔ．（１９９１）４（１），６２−９によって記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。細胞結合物質は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１５）５８（２２），８７５１−８７６１、及びＳｒｉｎｉｖａｓａｒａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１５），１４，２０３−２１９に記載されているような小分子薬物であってよい。例えば、小分子薬物は、葉酸塩であってよい。
【００７０】
本明細書で言及される場合、「抗体」という用語には、全抗体及び任意の抗原結合性断片（すなわち「抗原結合部分」）またはその一本鎖（複数可）が含まれる。「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互接続されている少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖とを含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶH）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ1、ＣＨ2、及びＣＨ3という３つのドメインで構成され、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンのアイソタイプのものであり得る。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶL）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、Ｃｏという１つのドメインで構成され、これは、カッパまたはラムダのアイソタイプであり得る。ＶH領域及びＶL領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存性の高い領域が散在する。各ＶH及びＶLは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へ向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４という順序で配列されている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンが、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含め、宿主の組織または因子と結合することを媒介し得る。
【００７１】
「抗体断片」は、完全長抗体の一部分、一般的には、その抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片及びＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体；Ｆａｂ発現ライブラリーにより生成された断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片であって、がん細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的に結合するもの、一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
【００７２】
用語「細胞結合部分」及び「抗体部分」とは、基（例えば、Ｇ）で置換されている、細胞結合ラジカルまたは抗体ラジカルを指す。例えば、Ａｂ−（Ｇ）pでの基Ｇは、抗体上の水素ラジカルの代わりになっている。したがって、抗体部分（または細胞結合部分）には、Ｇに結合されているアミノ酸側鎖ヘテロ原子（例えば、リジンからの−ＮＨ−、システインからの−Ｓ−）が含まれる。非天然アミノ酸側鎖（例えば、アルキンまたはアジドを含有するもの）を持つ操作された抗体の場合、抗体部分には、非天然アミノ酸側鎖に由来する原子である、複合体の原子が含まれる。例えば、クリックケミストリーによってアジドに結合されたアルキン含有側鎖の場合、得られるアルケン−ジイル断片は、抗体部分（例えば、
2021533102.tif 000056
）の一部とみなされる。
【００７３】
抗体は、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（完全または部分的なヒト化）、動物抗体、例えば、限定するわけではないが、トリ（例えば、アヒルまたはガチョウ）、サメ、クジラ、及び非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス等）または非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジー等）を含む哺乳類等の抗体、組換え抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（「ｓｄＦｖ」）、及び抗イディオタイプ（「抗Ｉｄ」）抗体、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）もしくは三重可変ドメイン（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン、ならびに上記のいずれかの機能的に活性なエピトープ結合断片であってよい。特に、抗体には、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、被分析物結合部位を含有する分子が含まれる。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであり得る。
【００７４】
多種多様な腫瘍特異的または他の疾患特異的な抗原が同定されており、それらの抗原に対する抗体が、そのような腫瘍または他の疾患の治療において使用されるか、または使用が提案されている。当該技術分野で公知の抗体は、特に、標的抗原が関連する疾患の治療のために、本発明の複合体において使用することができる。本発明の抗体−リンカー−薬物複合体を指向させることができる標的抗原（及びそれらに関連する疾患）の非限定的な例には、Ｈｅｒ２（乳癌）、ＣＤ２０（リンパ腫）、ＥＧＦＲ（固形腫瘍）、ＣＤ２２（非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫）、ＣＤ５２（慢性リンパ性白血病）、ＣＤ３３（急性骨髄性白血病）、ＣＤ４（関節リウマチを含む、リンパ腫、自己免疫疾患）、ＣＤ３０（を含む、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、Ｍｕｃ１８（黒色腫）、インテグリン（固形腫瘍）、ＰＳＭＡ（前立腺癌、良性前立腺過形成）、ＣＥＡ（大腸癌）、ＣＤ１１ａ（乾癬）、ＣＤ８０（乾癬）、ＣＤ２３（喘息）、ＣＤ４０Ｌ（免疫性血小板減少性紫斑病）、ＣＴＬＡ４（Ｔ細胞性リンパ腫）及びＢＬｙｓ（全身性エリテマトーデスを含む、自己免疫疾患）が含まれる。
【００７５】
抗体例は、表１にも見出される。
表１
2021533102.tif 000057
Ｃｈ：キメラ；Ｈｚ：ヒト化；Ｈｕ：完全ヒト；ＧＰＮＭＢ：糖タンパク質ＮＭＢ；ＰＳＭＡ：前立腺特異的膜抗原。
【００７６】
抗体は、トラスツズマブ（ハーセプチン）、アブシキシマブ（ＲｅｏＰｒｏ）、アダリムマブ（ヒュミラ）、アレムツズマブ（キャンパス）、バシリキシマブ（シムレクト）、ベリムマブ（ベンリスタ）、ベバシズマブ（アバスチン）、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス）、カナキヌマブ（イラリス）、セツキシマブ（アービタックス）、セルトリズマブペゴル（シムジア）、ダクリズマブ（ゼナパックス）、デノスマブ（プロリア、Ｘｇｅｖａ）、エクリズマブ（ソリリス）、エファリズマブ（ラプティバ）、ゲムツズマブ（マイロターグ）、ゴリムマブ（シンポニー）、イブリツモマブ・チウキセタン（ゼヴァリン）、インフリキシマブ（レミケード）、イピリムマブ（ＭＤＸ−１０１；ヤーボイ）、ムロモナブ−ＣＤ３（オルソクローンＯＫＴ３）、ナタリズマブ（タイサブリ）、オファツムマブ（アーゼラ）、オマリズマブ（ゾレア）、パリビズマブ（シナジス）、パニツムマブ（ベクティビックス）、ラニビズマブ（ルセンティス）、リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）、トシリズマブ（またはアトリズマブ）（アクテムラ及びロアクテムラ）、及びトシツモマブ（ベキサール）等の治療用抗体であってよい。
【００７７】
２．複合体
本明細書では、式（Ｉ）のキノン含有複合体が開示される。細胞内空間は、キノン部分を還元し得る還元環境である。細胞による本発明の複合体の取り込み時、キノンは、無痕跡でペイロード（例えば、抗有糸分裂剤）を放出する、すなわち、ペイロード部分に残される残留リンカー原子がないことを意味する細胞内還元電位で還元され得る。ＵＳ２０１５／０３０７９１６に記載されるように、キノン連結カーゴ分子（例えば、ルシフェリン、フルオロフォアまたはフリマジン）は、細胞内への侵入時に効率的に放出された。キノン部分はまた、非還元環境でも安定であるようであり、標的細胞の外部、例えば、血流中で、安定であろうということを示唆している。キノンの還元、それに続く、共有結合付加物の無痕跡脱離は、これまでに試験したすべての細胞型で急速かつ効率的に生じるようであることと、キノン部分は血流中で安定であると予想されることから、キノン含有複合体により、ペイロードを標的細胞内部で効率的かつ選択的に放出させる普遍的手段が提供され得る。
【００７８】
置換可能な酸素原子または硫黄原子によって結合されているペイロードＨＡ1は、キノン部分の細胞内での還元時、スキーム１に示されるように放出され得る。
スキーム１
2021533102.tif 000058
【００７９】
別法として、酸素原子または硫黄原子によって結合されているペイロードＨＡ1は、キノン部分の細胞内での還元時、スキーム２ａに示されるように放出され得る。自壊性の置換可能なベンジルリンカーを介して酸素原子、硫黄原子、または置換可能な窒素原子によって結合されているペイロードＨＡ2は、スキーム２ｂに示されるように、細胞内でのキノン還元時に放出され得る。
スキーム２ａ
2021533102.tif 000059
スキーム２ｂ
2021533102.tif 000060
【００８０】
別の変形例では、スキーム３ａ〜３ｃに示されるように、抗体を第２のＬ2リンカーを介してキノンの片側に結合させ、ペイロードをキノンのもう一方の側に結合させてよい。酸素原子、硫黄原子、または置換可能な窒素原子によって直接結合されているペイロードＨＡ2は、キノン部分の細胞内での還元時、スキーム３ａに示されるように放出され得る。同様に、自壊性のアミンリンカーを介して酸素原子または硫黄原子によって結合されているペイロードＨＡ1は、スキーム３ｂに示されるように、細胞内でのキノン還元時に放出され得る。自壊性の非置換もしくは置換ベンジルリンカーを介して酸素原子、硫黄原子、または置換可能な窒素原子によって結合されているペイロードＨＡ2は、スキーム３ｃに示されるように、細胞内でのキノン還元時に放出され得る。
スキーム３ａ
2021533102.tif 000061
スキーム３ｂ
2021533102.tif 000062
スキーム３ｃ
2021533102.tif 000063
【００８１】
本発明の一態様によれば、式（Ｉ）の複合体である。
【００８２】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）はＡｂ−（Ｇ）pであり、式中、Ａｂは抗体部分であり、Ｇ及びｐは、本明細書で定義されるとおりである。
【００８３】
いくつかの実施形態では、細胞結合部分は小分子薬物部分であり、親の小分子薬物は、細胞上の標的受容体に対する親和性を有する。小分子薬物及び標的受容体の代表的な例には、Ｃａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１５）５８（２２），８７５１−８７６１及びＳｒｉｎｉｖａｓａｒａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１５），１４，２０３−２１９に記載されているような、葉酸塩（葉酸塩受容体）、ソマトスタチン類似薬（ソマトスタチン受容体）、及び芳香族スルホンアミド（炭酸脱水酵素ＩＸ）が含まれる。好ましくは、Ｃｂが小分子薬物部分である場合、ｐは１である。好ましい実施形態では、小分子薬物部分は葉酸塩である。
【００８４】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｇは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）であり、であり、Ａ1及び／またはＡ2は抗がん剤である。さらなる実施形態では、式（Ｉ）はＡｂ−（Ｇ）pであり、式中、Ａｂは抗体部分であり、ｐは本明細書で定義されるとおりであり、Ｇは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）であり、Ａ1及び／またはＡ2は抗がん剤である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、Ｇは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）であり、Ａ1及び／またはＡ2はレポーター部分である。好ましい実施形態では、Ｇは、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）であり、Ａ1及び／またはＡ2はレポーター部分である。さらなる実施形態では、式（Ｉ）はＡｂ−（Ｇ）pであり、式中、Ａｂは抗体部分であり、ｐは本明細書で定義されるとおりであり、Ｇは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）であり、Ａ1及び／またはＡ2は、本明細書で定義されるようなレポーター部分である。好ましい実施形態では、式（Ｉ）はＡｂ−（Ｇ）pであり、式中、Ａｂは抗体部分であり、ｐは本明細書で定義されるとおりであり、Ｇは、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）であり、Ａ1及び／またはＡ2はレポーター部分である。他の実施形態では、Ｃｂは小分子薬物部分であり、ｐは１であり、Ａ1及び／またはＡ2は、本明細書で定義されるようなレポーター部分である。さらなる実施形態では、小分子薬物部分は葉酸塩である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、Ｘ1またはＸ2は、
2021533102.tif 000064
、
2021533102.tif 000065
、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2−、−ＮＨＣ（Ｓ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、
2021533102.tif 000066
、
2021533102.tif 000067
2021533102.tif 000068
、−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｃ1-6アルキル）−である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、Ｘ1もしくはＸ2は、Ｃｂ内のスルフヒドリル基（例えば、システイン）を介してＣｂに結合される、
2021533102.tif 000069
、
2021533102.tif 000070
、もしくは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2−であるか、またはＸ1もしくはＸ2は、Ｃｂ内のアミノ（例えば、リジン）を介してＣｂに結合される−ＮＨＣ（Ｓ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、もしくは−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−であるか、またはＸ1もしくはＸ2は、
2021533102.tif 000071
もしくは
2021533102.tif 000072
であるか、またはＸ1もしくはＸ2は、ＣｂのＮ末端システインを介してＣｂに結合される
2021533102.tif 000073
であるか、またはＸ1もしくはＸ2は、Ｃｂのカルボニルを介してＣｂに結合される−ＮＨ−、もしくは−Ｎ（Ｃ1-6アルキル）−である。
【００８８】
さらなる実施形態では、Ｘ1またはＸ2は、葉酸塩に由来するカルボニルを介して葉酸塩に結合される（すなわち
2021533102.tif 000074
）、−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｃ1-6アルキル）−である。
【００８９】
いくつかの実施形態では、第１または第２のリンカー部分は、親分子部分に結合される、−Ｃ1-12アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−、またはＣ3-8シクロアルキレンのうちの少なくとも１つと、任意選択で、抗体連結部分（Ｘ1またはＸ2）に共有結合で連結される１つ以上の追加の二価部分とを含有するか、またはそれらからなり、１つ以上の追加の二価部分は、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ20−、−Ｃ（Ｒ21）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000075
、アミノ酸部分、保護されたアミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、ここで、Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、またはヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、ｘ、Ｒ20及びＲ21は、本明細書で定義されるとおりである。
【００９０】
いくつかの実施形態では、Ｌ1は、Ｌ1aまたはＬ1a−Ｌ1bであり、ここで、Ｌ1bはＸ1に結合され、Ｌ1aは、−Ｃ1-12アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、Ｌ1bは、共有結合で結合している１つ以上の二価のメンバーを含むかまたはそれらからなり、かかる１つ以上の二価のメンバーは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ20−、−Ｃ（Ｒ21）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000076
、アミノ酸部分、保護されたアミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、Ｌ1a及び／またはＬ1bのＣ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、またはヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、Ｒ20及びＲ21は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルであり、ｘは、１〜２０の整数である。前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ1c−、−Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−Ｏ−Ｌ1c−、−Ｓ−Ｌ1c−、−Ｓ（Ｏ）−Ｌ1c−、−Ｓ（Ｏ）2−Ｌ1c−、または−ＮＲ20−Ｌ1c−であり、Ｌ1cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000077
である。前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ1c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、
2021533102.tif 000078
、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、Ｌ1cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000079
である。
【００９１】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1a−Ｌ1bは、−Ｃ1-12アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−Ｃ1-12アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-12アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-12アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、または−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−である。
【００９２】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1a内の−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−は−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−である。
【００９３】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1aは、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）1-2−ＣＨ2ＣＨ2−であり、Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）5−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）5−、または
2021533102.tif 000080
であり、Ｌ1cは、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2−、もしくは−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（ＣＨ3）−１，４−フェニレン−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、または
2021533102.tif 000081
である。
【００９４】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1b−Ｘ1は、
2021533102.tif 000082
、
2021533102.tif 000083
、
2021533102.tif 000084
、
2021533102.tif 000085
、
2021533102.tif 000086
、
2021533102.tif 000087
、
2021533102.tif 000088
、
2021533102.tif 000089
、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、または
2021533102.tif 000090
である。
【００９５】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ1−Ｘ1は、
2021533102.tif 000091
、
2021533102.tif 000092
、
2021533102.tif 000093
、
2021533102.tif 000094
、
2021533102.tif 000095
、
2021533102.tif 000096
、
2021533102.tif 000097
、
2021533102.tif 000098
、
2021533102.tif 000099
、
2021533102.tif 000100
、
2021533102.tif 000101
、
2021533102.tif 000102
、
2021533102.tif 000103
、
2021533102.tif 000104
、または
2021533102.tif 000105
である
【００９６】
前述に含まれる他の実施形態では、さらなる代表的なＬ1−Ｘ1は、以下のとおりである：
2021533102.tif 000106
、
2021533102.tif 000107
、
2021533102.tif 000108
、
2021533102.tif 000109
、
2021533102.tif 000110
、
2021533102.tif 000111
、
2021533102.tif 000112
、
2021533102.tif 000113
、
2021533102.tif 000114
、
2021533102.tif 000115
及び
2021533102.tif 000116
。特定の実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、Ｌ2は、Ｌ2aまたはＬ2a−Ｌ2bであり、ここで、Ｌ2bはＸ2に結合されており、Ｌ2aは−Ｃ2-6アルキレン−であり、Ｌ2bは、共有結合で結合している１つ以上の二価のメンバーを含むかまたはそれらからなり、かかる１つ以上の二価のメンバーは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ30−、−Ｃ（Ｒ31）＝Ｎ−Ｎ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000117
、アミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、Ｌ1bのＣ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、またはヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、Ｒ30及びＲ31は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルである。
【００９８】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ2bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｌ2c−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｌ2c−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ2c−、−Ｃ（Ｏ）−Ｌ2c−、−Ｏ−Ｌ2c−、−Ｓ−Ｌ2c−、−Ｓ（Ｏ）−Ｌ2c−、−Ｓ（Ｏ）2−Ｌ2c−、または−ＮＲ30−Ｌ2c−であり、Ｌ2cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000118
である。前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ2bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｌ2c−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｌ2c−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ2c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、
2021533102.tif 000119
、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、Ｌ２cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000120
である。
【００９９】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ2b−Ｘ2は、
2021533102.tif 000121
、
2021533102.tif 000122
、
2021533102.tif 000123
、
2021533102.tif 000124
、
2021533102.tif 000125
、
2021533102.tif 000126
、
2021533102.tif 000127
、
2021533102.tif 000128
、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、または
2021533102.tif 000129
である。
【０１００】
式（Ｉ）によるいくつかの好ましい実施形態では、Ｒ9及びＲ10はメチルである。
【０１０１】
式（Ｉ）による他の好ましい実施形態では、Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13はそれぞれメチルである。
【０１０２】
式（Ｉ）によるいくつかの実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−6アルキル、−Ｃ1−6アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−6アルキレン−Ｃ1−4アルコキシ、−Ｃ1−6アルキレン−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−6アルキレンアミドである。特定の実施形態では、Ｒ14は−Ｃ2−Ｃ30−アルキレン−ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ14は、−ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）4ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）5ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）6ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）7ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）8ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または−（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ14は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。好ましい実施形態では、Ｒ14はメチルである。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、Ｒ15は、Ｈ、Ｃ1−6アルキル、−Ｃ1−6アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−6アルキレン−Ｃ1−4アルコキシ、−Ｃ1−6アルキレン−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−6アルキレンアミドである。特定の実施形態では、Ｒ15は、ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）4ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）5ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）6ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）7ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）8ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ15は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。
【０１０４】
他の好ましい実施形態では、Ｒ17は水素である。
【０１０５】
好ましい実施形態では、ｍ及びｎの一方は１であり、他方は０である。
【０１０６】
特定の実施形態では、ｘは、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。特定の実施形態では、ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
【０１０７】
好ましい実施形態では、Ｇは式（ＩＩ）である。さらなる実施形態では、式（ＩＩ）は式（ＩＩＡ）であり、
2021533102.tif 000130
（ＩＩＡ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｌ1、Ｘ1、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。いくつかの実施形態では、Ｌ1−Ｘ1は、
2021533102.tif 000131
である。特定の実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
【０１０８】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＩＩＢ）である複合体であり、
2021533102.tif 000132
（ＩＩＢ）
式中、Ｌ1、Ｘ1、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１０９】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＩＩＢ−１）である複合体であり、
2021533102.tif 000133
（ＩＩＢ−１）
式中、ｘ、Ｘ1、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。（ＩＩＢ−１）によるさらなる実施形態では、ｘは、２、３、または４である。前述によるさらなる実施形態では、Ｘ1は、
2021533102.tif 000134
または−Ｃ（Ｏ）−である。
【０１１０】
好ましい実施形態では、Ｇは式（ＩＩＩ）である。さらなる実施形態では、式（ＩＩＩ）は式（ＩＩＩＡ）であり、
2021533102.tif 000135
（ＩＩＩＡ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ13、Ｒ14、Ｌ2、Ｘ2、Ｙ、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１１１】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＩＩＩＢ）である複合体であり、
2021533102.tif 000136
（ＩＩＩＢ）
式中、Ｌ2、Ｘ2、Ｙ、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１１２】
さらなる実施形態では、式（ＩＩＩ）は式（ＩＩＩＣ）であり、
2021533102.tif 000137
（ＩＩＩＣ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ13、Ｌ2、Ｘ2、及びＡ2は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１１３】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＩＩＩＤ）である複合体であり、
2021533102.tif 000138
（ＩＩＩＤ）
式中、Ｌ2、Ｘ2、及びＡ2は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１１４】
さらなる実施形態では、式（ＩＩＩ）は式（ＩＩＩＥ）であり、
2021533102.tif 000139
（ＩＩＩＥ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ16、Ｌ2、Ｘ2、及びＡ2は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１１５】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＩＩＩＦ）である複合体であり、
2021533102.tif 000140
（ＩＩＩＦ）
式中、Ｌ2、Ｘ2、及びＡ2は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１１６】
好ましい実施形態では、Ｇは式（ＩＶ）である。さらなる実施形態では、式（ＩＶ）は式（ＩＶＡ）であり、
2021533102.tif 000141
（ＩＶＡ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ16、Ｌ1、Ｘ1、及びＡ2は、本明細書で定義されるとおりである。いくつかの実施形態では、Ｌ1−Ｘ1は、
2021533102.tif 000142
である。特定の実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
【０１１７】
好ましい実施形態では、Ｇは式（Ｖ）であり、
2021533102.tif 000143
（Ｖ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ17、Ｌ1、Ｘ1、Ｙ、Ａ1、ｍ、及びｎは、本明細書で定義されるとおりである。いくつかの実施形態では、Ｌ1−Ｘ1は、
2021533102.tif 000144
である。特定の実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
【０１１８】
さらなる実施形態では、式（Ｖ）は式（ＶＡ）であり、
2021533102.tif 000145
（ＶＡ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15、Ｌ1、Ｘ1、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。いくつかの実施形態では、Ｌ1−Ｘ1は、
2021533102.tif 000146
である。特定の実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
【０１１９】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＶＡ−１）である複合体である。
2021533102.tif 000147
（ＶＡ−１）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｌ1、Ｘ1、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１２０】
他の好ましい実施形態では、Ｇが式（ＶＡ−２）である複合体である。
2021533102.tif 000148
（ＶＡ−２）
式中、ｘ、Ｘ1、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。（ＶＡ−２）によるさらなる実施形態では、ｘは、２、３、または４である。前述によるさらなる実施形態では、Ｘ1は、
2021533102.tif 000149
または−Ｃ（Ｏ）−である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、ｐは１〜１０の数である。他の実施形態では、ｐは１〜５の数である。さらに他の実施形態では、ｐは２〜５の数である。さらに他の実施形態では、ｐは、３、４、または５である。複数の式（Ｉ）の複合体を含む組成物では、ｐは、抗体あたりの基Ｇの平均数を表し、薬物抗体比（ＤＡＲ）とも呼ばれる。したがって、複数の複合体を含む組成物では、ｐは、非整数値（例えば、３．５）を有し得る。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは２〜５である。さらに他の実施形態では、ＤＡＲは３〜５である。好ましいＤＡＲは、特定の抗体、ペイロード、リンカー、及び治療される状態に従って異なり得る。
【０１２２】
３．結合試薬
本発明の他の態様によるものは、抗体または他の細胞結合物質とのカップリングのための結合試薬及びそれらの化学的前駆体である。結合試薬では、Ｘ1a／Ｘ2aは、抗体のアミノ、スルフヒドリル、もしくはＮ末端システインとのカップリングに好適な反応性官能基、または修飾抗体における、アジドもしくはアルキンを含有する側鎖を含む非天然型アミノ酸である、あるいはＸ1a／Ｘ2aは、保護された反応性官能基であるか、またはかかる反応性官能基の化学的前駆体である。
【０１２３】
さらに、結合試薬は、固体支持体／表面、ナノ粒子、例えば、［６０］フラーレン、コアシェルナノ粒子、リポソーム、デンドリマー、及び金ナノ粒子等、ならびに界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない非生物学的物質を標識するために使用され得る。界面活性剤は、薬物送達効率を試験するために任意選択で使用され得るリポソーム、及び／または固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）の内部に含まれ得る。界面活性剤は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００またはＦｕｇｅｎｅ  ６等のトランスフェクション試薬であってよい。
【０１２４】
いくつかの態様では、結合試薬は、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはポリヌクレオチドと結合させることができる。本発明の結合試薬は、ホスホロアミダイト、活性化エステル、または反応性白金錯体を介する等、当業者に既知の任意の方法でヌクレオシド、ヌクレオチド、またはポリヌクレオチドと結合され得る。特定の実施形態では、標識結合試薬は、ＮＨＳエステル、ペンタフルオロベンゼンエステル、無水物、塩化アセチル等の活性化カルボン酸を使用して、またはカルボン酸とアミンとの直接カップリング反応、もしくはクリックケミストリー、もしくはマレイミド、もしくは活性化炭酸塩、もしくはホスホロアミダイトを使用して、物質に結合され得る。
【０１２５】
例えば、結合試薬は、ｄＵアリルアミンホスホアミダイトに結合させ、従来のホスホアミダイト化学によって目的オリゴマーにさらに組み込むことができる。別法として、目的のｄＵアリルアミン修飾オリゴマーは、後標識によって活性化エステルを介して結合試薬で標識することができる。標識したオリゴマーが目的プライマーである場合、それらを使用して、ＰＣＲで目的配列を増幅させることもできる。
【０１２６】
他の態様では、結合試薬には、式７もしくは式１０の化合物、またはそれらの塩が含まれ、
2021533102.tif 000150
７
2021533102.tif 000151
１０
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ17、Ｌ1、Ｘ1a、Ｇ2、ｍ、ｎ’、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、Ｌ1は、Ｌ1aまたはＬ1a−Ｌ1bであり、ここで、Ｌ1bは、Ｘ1aに結合され、Ｌ1aは、−Ｃ1-12アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−、もしくはＣ3-8シクロアルキレンであり、Ｌ1bは、共有結合で結合している１つ以上の二価のメンバーを含むかまたはそれらからなり、かかる１つ以上の二価のメンバーは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ20−、−Ｃ（Ｒ21）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000152
、アミノ酸部分、及びフェニレンから選択され、Ｌ1a及び／またはＬ1bのＣ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、またはヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、Ｒ20及びＲ21は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルであり、ｘは、１〜２０の整数である。
【０１２８】
前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ1c−、−Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−Ｏ−Ｌ1c−、−Ｓ−Ｌ1c−、−Ｓ（Ｏ）−Ｌ1c−、−Ｓ（Ｏ）2−Ｌ1c−、または−ＮＲ20−Ｌ1c−であり、Ｌ1cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000153
である。前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ1c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、
2021533102.tif 000154
、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、Ｌ1cは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000155
である。
【０１２９】
前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1a−Ｌ1bは、−Ｃ1-12アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−Ｃ1-12アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｌ1c−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-12アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-12アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、または−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）x−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−である。
【０１３０】
前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1aは、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）1-2−ＣＨ2ＣＨ2−であり、
【０１３１】
Ｌ1bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）5−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）5−、または
2021533102.tif 000156
であり、Ｌ1cは、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2−、または−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（ＣＨ3）−１，４−フェニレン−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、または
2021533102.tif 000157
である。
【０１３２】
前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1b−Ｘ1aは、
2021533102.tif 000158
、
2021533102.tif 000159
、
2021533102.tif 000160
、
2021533102.tif 000161
、
2021533102.tif 000162
、
2021533102.tif 000163
、
2021533102.tif 000164
、
2021533102.tif 000165
、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ40、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ40、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ20Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ21）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ40、または
2021533102.tif 000166
である。
【０１３３】
前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1−Ｘ1aは、
2021533102.tif 000167
、
2021533102.tif 000168
、
2021533102.tif 000169
、
2021533102.tif 000170
、
2021533102.tif 000171
、
2021533102.tif 000172
、
2021533102.tif 000173
、
2021533102.tif 000174
、
2021533102.tif 000175
、
2021533102.tif 000176
、
2021533102.tif 000177
、
2021533102.tif 000178
、
2021533102.tif 000179
、
2021533102.tif 000180
、または
2021533102.tif 000181
である。
【０１３４】
前述に含まれる他の実施形態では、Ｌ1−Ｘ1aは、
2021533102.tif 000182
であり、ここで、Ｒ40は、本明細書で定義されるとおりである。特定の実施形態では、Ｒ40は水素である。特定の実施形態では、Ｒ40は
2021533102.tif 000183
である。特定の実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
【０１３５】
前述に含まれる特定の実施形態では、Ｌ1−Ｘ1aは、
2021533102.tif 000184
または
2021533102.tif 000185
である。
【０１３６】
式（７）または式（１０）によるいくつかの好ましい実施形態では、Ｒ9及びＲ10はメチルである。
【０１３７】
式（７）または式（１０）による他の好ましい実施形態では、Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13はそれぞれメチルである。
【０１３８】
式（７）によるいくつかの実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−6アルキル、−Ｃ1−6アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−6アルキレン−Ｃ1−4アルコキシ、−Ｃ1−6アルキレン−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−6アルキレンアミドである。特定の実施形態では、Ｒ14は−Ｃ2−Ｃ30−アルキレン−ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ14は、−ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）4ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）5ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）6ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）7ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）8ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または−（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ14は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。好ましい実施形態では、Ｒ14はメチルである。
【０１３９】
式（１０）によるいくつかの実施形態では、Ｇ2は
2021533102.tif 000186
であり、ＹはＮＲ15であり、Ｒ15は、Ｈ、Ｃ1−6アルキル、−Ｃ1−6アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−6アルキレン−Ｃ1−4アルコキシ、−Ｃ1−6アルキレン−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−6アルキレンアミドである。
【０１４０】
特定の実施形態では、Ｒ15は、−Ｃ2−Ｃ30−アルキレン−ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ15は、ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）4ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）5ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）6ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）7ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）8ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ15は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。
【０１４１】
好ましい実施形態では、Ｒ15はメチルである。
【０１４２】
式（７）または式（１０）の他の好ましい実施形態では、Ｒ17は水素である。
【０１４３】
式（７）または式（１０）の好ましい実施形態では、ｍは０であり、Ｎ’は０である。
【０１４４】
式（７）または式（１０）の特定の実施形態では、ｘは、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。特定の実施形態では、ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
【０１４５】
特定の実施形態では、式（７）の化合物は、式（７Ａ）、またはその塩を有し、
2021533102.tif 000187
（７Ａ）
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ40、ｘ、及びＡ1は、上記で定義されるとおりである。
【０１４６】
特定の実施形態では、式（７）の化合物は、式（７Ｂ）、またはその塩を有し、
2021533102.tif 000188
（７Ｂ）、
式中、ｚは１〜３０から選択される整数であり、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＡ1は、上記で定義されるとおりである。特定の実施形態では、ｚは１６である。
【０１４７】
他の好ましい実施形態では、式（７Ｃ）の化合物であり、
2021533102.tif 000189
（７Ｃ）
式中、Ｌ1、Ｘ1a、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１４８】
他の好ましい実施形態では、式（７Ｅ）の化合物であり、
2021533102.tif 000190
（７Ｅ）
式中、ｘ、Ｘ1a、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。（７Ｅ）によるさらなる実施形態では、ｘは、２、３、または４である。前述によるさらなる実施形態では、Ｘ1aは、
2021533102.tif 000191
または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40である。
【０１４９】
特定の実施形態では、式（１０）の化合物は式（１０Ａ）を有し、
2021533102.tif 000192
（１０Ａ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ17、Ｙ、ｍ’、ｎ、Ｌ1、Ｘ1a、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５０】
特定の実施形態では、式（１０）の化合物は、式（１０Ａ−ａ）、またはその塩を有し、
2021533102.tif 000193
（１０Ａ−ａ）
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15、Ｒ40、ｘ、及びＡ1は、上記で定義された通りである。
【０１５１】
特定の実施形態では、式（１０）の化合物は、式（１０Ａーｂ）またはその塩を有し、
2021533102.tif 000194
（１０Ａ−ｂ）
式中、ｚは１〜３０から選択される整数であり、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15、及びＡ1は、上記で定義されるとおりである。特定の実施形態では、ｚは１６である。
【０１５２】
他の好ましい実施形態では、式（１０Ａ−ｃ）の化合物であり、
2021533102.tif 000195
（１０Ａ−ｃ）
前記Ｌ1、Ｘ1a、及びＡ1は本明細書で定義されるとおりである。
【０１５３】
他の好ましい実施形態では、式（１０Ａ−ｄ）の化合物であり、
2021533102.tif 000196
（１０Ａ−ｄ）
式中、ｘ、Ｘ1a、及びＡ1は、本明細書で定義されるとおりである。（１０Ａ−ｄ）によるさらなる実施形態では、ｘは、２、３、または４である。前述によるさらなる実施形態では、Ｘ1aは、
2021533102.tif 000197
または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40である。
【０１５４】
特定の実施形態では、式（１０）の化合物は式（１０Ｂ）を有し、
2021533102.tif 000198
（１０Ｂ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ16、Ｌ1、Ｘ1a、及びＡ2は、上記で定義されるとおりである。
【０１５５】
他の好ましい実施形態では、式（１０Ｂ−ａ）の化合物であり、
2021533102.tif 000199
（１０Ｂ−ａ）
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｌ1、Ｘ1a、及びＡ2は、上記で定義されるとおりである。
【０１５６】
他の好ましい実施形態では、式（１０Ｂ−ｂ）の化合物であり、
2021533102.tif 000200
１０Ｂ−ｂ
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ40、ｚ、及びＡ2は、上記で定義されるとおりである。
【０１５７】
他の好ましい実施形態では、式（１０Ｂ−ｃ）の化合物であり、
2021533102.tif 000201
（１０Ｂ−ｃ）
式中、ｘ、Ｘ1a、及びＡ2は、上記で定義されるとおりである。
【０１５８】
別の態様では、結合試薬は、式１２の化合物、またはそれらの塩であり、
2021533102.tif 000202
１２
式中、
Ｇ1は、−Ａ2、
2021533102.tif 000203
、または
2021533102.tif 000204
であり、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＣ1-4アルキルから選択され、
Ｒ11及びＲ13はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ブロモ、クロロ及びアミノからなる群から選択され、
Ｌ2は、第２のリンカー部分であり、
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり、
Ｒ14及びＲ15は、それぞれ独立して、Ｈ、任意選択で１〜８個のハロゲンで置換されるＣ1−30アルキル、−Ｃ1−30アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−30アルキレン−Ｃ1-4アルコキシ、−Ｃ1−30アルキレン−ＣＯＯＨ、または−Ｃ1−30アルキレンアミドであり、
Ｒ16は、各出現において、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＮＯ2であり、
Ｒ17は、各出現において、独立して、ＨもしくはＣ1-4アルキルであるか、または両Ｒ17は、それらが結合している炭素と共に３〜７個の炭素を有するシクロアルキル環を形成し、
ｍは、０〜２の整数であり、
ｎは、０〜２の整数であり、
Ｘ2aは、−ＯＳＯ2Ｒ50、ＯＨ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ3、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＮ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ40、−ＣＯＪ1、−ＣＨ（ＳＯ3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ40、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｊ1、
2021533102.tif 000205
、
2021533102.tif 000206
、
2021533102.tif 000207
、−ＮＨ2、または−ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）であり、
Ｒ40は、Ｃ1-6アルキル、４−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、テトラフルオロフェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ41、または
2021533102.tif 000208
であり、
Ｒ41は、Ｃ1-6アルキルまたはフェニルであり、
Ｊ1は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、または−ＯＳＯ2Ｒ50であり、
Ｒ50は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6ハロアルキル、フェニル、４−メチルフェニル、４−ニトロフェニル、または４−ブロモフェニルであり、
Ａ1は、置換可能な酸素原子または硫黄原子を介して結合したペイロード部分であり、かつ
Ａ2は、置換可能な酸素原子、硫黄原子、または窒素原子を介して結合したペイロード部分である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、Ｌ2は、Ｌ2aまたはＬ2a−Ｌ2bであり、ここで、Ｌ2bはＸ2aに結合されており、Ｌ2aは−Ｃ2-6アルキレン−であり、Ｌ2bは、共有結合で結合している１つ以上の二価のメンバーを含むかまたはそれらからなり、かかる１つ以上の二価のメンバーは、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＲ30−、−Ｃ（Ｒ31）＝Ｎ−Ｎ−、−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−、
2021533102.tif 000209
、アミノ酸部分、及びフェニレンからなる群から選択され、Ｌ1bのＣ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、任意選択で独立して、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、及びヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４つの置換基で置換され、Ｒ30及びＲ31は、各出現において、独立して水素またはＣ1-4アルキルである。
【０１６０】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ2bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｌ2c−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｌ2c−、−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ2c−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-6アルキレン−、−ｃｉｔ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−ａｌａ−ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、
2021533102.tif 000210
、−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ2-6アルキレン−Ｏ−、またはＣ3-8シクロアルキレンであり、Ｌ2cは、
−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン、−（Ｃ2-6アルキレン−Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−、−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ3-8シクロアルキレン−Ｃ1-6アルキレン−、−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−、または
2021533102.tif 000211
である。
【０１６１】
前述に含まれるさらなる実施形態では、Ｌ2b−Ｘ2aは、
2021533102.tif 000212
、
2021533102.tif 000213
、
2021533102.tif 000214
、
2021533102.tif 000215
、
2021533102.tif 000216
、
2021533102.tif 000217
、
2021533102.tif 000218
、
2021533102.tif 000219
、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ40、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ30Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-6アルキレン−Ｓ−Ｓ−Ｃ1-6アルキレン−ＣＨ（ＳＯ  3Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ40、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｃ1-6アルキレン−ＮＲ  30Ｃ（Ｏ）ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ31）−フェニレン−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ40、または
2021533102.tif 000220
である。
【０１６２】
前述に含まれるいくつかの実施形態では、Ｌ2はＬ2a−Ｌ2bであり、Ｌ2bは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−Ｌ2c−または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ30−である。前述に含まれるさらに別の実施形態では、Ｌ2aは−ＣＨ2ＣＨ2−である。
【０１６３】
式（１２）によるいくつかの好ましい実施形態では、Ｒ9及びＲ10はメチルである。
【０１６４】
式（１２）による他の好ましい実施形態では、Ｒ11及びＲ13はそれぞれメチルである。
【０１６５】
式（１２）によるいくつかの実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−6アルキル、−Ｃ1−6アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−6アルキレン−Ｃ1−4アルコキシ、−Ｃ1−6アルキレン−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−6アルキレンアミドである。特定の実施形態では、Ｒ14は−Ｃ2−Ｃ30−アルキレン−ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ14は−ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）4ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）5ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）6ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）7ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）8ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または−（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ14は−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。好ましい実施形態では、Ｒ14はメチルである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、Ｒ15は、Ｈ、Ｃ1−6アルキル、−Ｃ1−6アルキレン−ＯＨ、−Ｃ1−6アルキレン−Ｃ1−4アルコキシ、−Ｃ1−6アルキレン−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−6アルキレンアミドである。
【０１６７】
特定の実施形態では、Ｒ15は、ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）4ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）5ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）6ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）7ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）8ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。特定の実施形態では、Ｒ15は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。
【０１６８】
好ましい実施形態では、Ｒ15はメチルである。
【０１６９】
他の好ましい実施形態では、Ｒ17は水素である。
【０１７０】
好ましい実施形態では、ｍ及びｎの一方は１であり、他方は０である。
【０１７１】
４．医薬組成物
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明の複合体と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤を提供する。薬学的に許容される担体を含む本明細書に記載の複合体は、筋肉内、皮下、及び静脈内の注射を含め、非経口投与を使用して患者に送達され得る。好ましくは、標的指向性部分として抗体または抗体断片を含む本発明の複合体は非経口で、より好ましくは静脈内に投与される。
【０１７２】
複合体は、注射による、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与用に製剤化されてよい。本発明の組成物の場合、注射は好ましい投与方法である。注射用製剤は、保存剤が添加された単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で提示されてよい。組成物は、油性もしくは水性のビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態を取ってよい。組成物は、リポソームまたはナノ粒子の形態を取ってよい。そのような液体は、他の薬学的に許容される成分、例えば、抗酸化剤、緩衝剤、保存剤、安定化剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤、及び製剤を、意図される被投与者の血液（または他の関連する体液）と等張にする溶質等をさらに含有してよい。懸濁剤、安定化剤、及び／または分散剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩等を加えてよい。添加物の例には、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物性油等が含まれる。そのような製剤での使用に好適な等張担体の例には、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、または乳酸リンゲル注射液が含まれる。典型的には、液体中の有効成分の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、例えば、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌである。
【０１７３】
非経口投与用の医薬製剤には、水溶性形態の複合体水溶液が含まれる。さらに、複合体の懸濁液は、適切な油性注射懸濁液として調製され得る。好適な親油性の溶媒またはビヒクルには、ゴマ油等の脂肪油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド等、またはリポソームが含まれる。水性懸濁注射液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン等を含有してよい。任意選択で、懸濁液は、高濃度溶液の調製を可能にするよう、化合物の溶解度を高める好適な安定化剤または物質を含有してもよい。注射液の場合、本発明の物質は、水溶液中に、好ましくは、ハンクス液、リンゲル液、または生理食塩緩衝液等の生理学的に適合性のある緩衝液中に製剤化されてよい。
【０１７４】
別法として、複合体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、滅菌パイロジェンフリー水で構成するための粉末形態であってよい。先に記載の製剤に加え、複合体は、デポー製剤として製剤化されてもよい。そのような長時間作用性製剤は、移植もしくは経皮送達（例えば、皮下または筋肉内）、筋肉内注射、または経皮吸収パッチによって投与されてよい。したがって、例えば、複合体は、好適なポリマー性もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中エマルジョンとして）またはイオン交換樹脂を用いて、あるいはやや不溶性の誘導体として、例えば、やや不溶性の塩として製剤化されてよい。
【０１７５】
好適な担体、希釈剤、添加物等は、標準的薬学テキストに記載されている。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（ｅｄｓ．Ｍ．Ａｓｈ  ａｎｄ  Ｉ．Ａｓｈ），２００１（Ｓｙｎａｐｓｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｎｄｉｃｏｔｔ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９４を参照のこと。
【０１７６】
化合物及び複合体は、薬学的に許容される塩等の塩の形態であってよい。本明細書で使用される場合、語句「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される有機塩または無機塩類を指す。酸付加塩は、アミノ基で形成することができる。好ましい塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化塩、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩（ａｃｉｄ  ｃｉｔｒａｔｅ）、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシナート（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロナート（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトアート））塩が含まれるが、これらに限定されない。塩基付加塩は、開示されている化合物の最終的な単離及び精製時に、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、もしくはアルミニウム等の金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは重炭酸塩、または有機第一級、第二級、もしくは第三級アミン等、好適な塩基と、カルボキシル基との反応によって調製されてよい。第四級アミン塩は、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、１−エフェナミン及びＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジン等から誘導されるもののように調製することができる。
【０１７７】
好ましい医薬組成物は、静脈内注射等の注射用に製剤化された組成物であり、医薬組成物全体の１００％の重量に基づいて約０．０１重量％〜約１００重量％の薬物複合体を含む。
【０１７８】
５．方法
Ａ．薬物複合体の使用方法
本発明は、本発明の化合物及び複合体を用いて実施され得るいくつかの方法を提供する。本発明の薬物複合体を使用する方法には、腫瘍細胞もしくはがん細胞を死滅させるかまたはそれらの増殖もしくは複製を阻害すること、がんを治療すること、前がん状態を治療すること、自己免疫抗体を発現する細胞を死滅させるかまたはその増殖もしくは複製を阻害すること、自己免疫疾患を治療すること、感染症を治療すること、腫瘍細胞またはがん細胞の増殖を予防すること、がんを予防すること、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防すること、自己免疫疾患を予防すること、感染症を予防すること、及び細胞除去が含まれる。これらの使用方法は、有効量の抗体薬物複合体を投与することを、それを必要とする哺乳類またはヒト等の動物に行うこと含む。本明細書に記載される使用方法の多くの場合に好ましい薬物複合体には抗体及び抗体断片が含まれ、特定の腫瘍細胞、がん細胞、または他の標的領域を標的とする。
【０１７９】
薬物本発明の複合体は、動物におけるがん、自己免疫疾患及び感染症の治療に有用であり得る。薬学的有効量の本発明の組成物を用いて薬学的に許容される様態で組成物を対象に提供することによって腫瘍を治療するための、組成物及び方法を提供する。
【０１８０】
薬物複合体は、動物におけるがんの治療及び腫瘍細胞またはがん細胞の増殖の阻害に特に有用であり得る。がん、または前がん状態には、腫瘍、転移、または制御されない細胞増殖を特徴とする任意の疾患もしくは障害が含まれるが、これらに限定されず、それらは、本発明の抗体薬物複合体の投与によって治療または予防することができる。複合体は、ペイロードを腫瘍細胞またはがん細胞に送達する。一実施形態では、抗体薬物複合体は、がん細胞または腫瘍細胞関連抗原と特異的に結合または会合する。複合体は、例えば、受容体介在性エンドサイトーシスを介して、腫瘍細胞またはがん細胞内部に取り込まれ得る。抗原は、腫瘍細胞またはがん細胞に結合され得、また、腫瘍細胞またはがん細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質であり得る。一旦、細胞内に入ると、キノン部分は還元され、上記のように薬物の放出がもたらされ得る。放出された薬物は、自由に拡散して、細胞傷害活性を誘導し得る。
【０１８１】
複合体は、例えば、腫瘍細胞もしくはがん細胞、腫瘍細胞もしくはがん細胞の表面にある腫瘍細胞もしくはがん細胞の抗原、または腫瘍細胞もしくはがん細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍細胞もしくはがん細胞の抗原に結合し得る。抗体は、特定の腫瘍細胞型またはがん細胞型用に特別に設計されてよい。したがって、効果的に治療され得る腫瘍またはがんの型は抗体の選択により変えることができる。
【０１８２】
複合体によって指向され得る前がん状態の代表的な例には、化生、過形成、異形成、大腸ポリープ、光線角化症、日射性口唇炎、ヒトパピローマウイルス、白斑症、扁平苔癬、及びボーエン病が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８３】
複合体によって指向され得るがんまたは腫瘍の代表的な例には、肺癌、結腸癌、前立腺癌、リンパ腫、黒色腫、乳癌、卵巣癌、精巣癌、ＣＮＳ癌、腎癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、口腔癌、鼻腔癌、子宮頸癌、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。複合体に使用される特定の細胞結合物質は、薬物で治療するべき腫瘍組織に薬物を指向させるよう選択され得る（すなわち、腫瘍特異抗原に特異的な標的指向性物質を選択する）ことは、当業者には容易に明らかとなるであろう。そのような標的指向性抗体の例は当該技術分野において周知であり、非限定的な例は、乳癌の治療のための抗Ｈｅｒ２、リンパ腫の治療のための抗ＣＤ２０、前立腺癌の治療のための抗ＰＳＭＡ、及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫の治療のための抗ＣＤ３０である。
【０１８４】
一実施形態では、本発明は、細胞を死滅させる方法を提供する。方法には、細胞を死滅させるのに十分な量の本発明の複合体を前記細胞に投与することが含まれる。例示的な一実施形態では、複合体は、細胞を持つ対象に投与される。さらなる例示的実施形態では、投与は、細胞（例えば、細胞は腫瘍細胞であり得る）を含む腫瘍の増殖を遅らせるかまたは停止させるのに役立つ。
【０１８５】
増殖を遅らせるための投与の場合、細胞の増殖速度は、投与前の増殖速度よりも少なくとも１０％低くなければならない。好ましくは、増殖速度は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％遅くなるか、または完全に停止する。
【０１８６】
治療において薬物複合体が使用され得る自己免疫疾患には、リウマチ性障害（例えば、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、ＳＬＥ及びループス腎炎等のループス、多発性筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、寒冷グロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、及び乾癬性関節炎等）、変形性関節症、自己免疫性胃腸及び肝障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、及びセリアック病等）、血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、及び多発動脈炎を含む、ＡＮＣＡ関連血管炎等）、自己免疫性神経障害（例えば、多発性硬化症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫性多発ニューロパチー等）、腎障害（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルジェ病等）、自己免疫性皮膚障害（例えば、乾癬、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、じんま疹（ｈｉｖｅｓ）、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚エリテマトーデス等）、血液障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫性溶血性貧血等）、アテローム性動脈硬化、ブドウ膜炎、自己免疫性聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び難聴等）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植、及び自己免疫性内分泌障害（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、アジソン病、及び自己免疫性甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎）等の糖尿病関連自己免疫疾患等）が含まれる。特に対象となる疾患には、例えば、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎が含まれ得る。
【０１８７】
本発明の複合体は、感染症を引き起こす細胞を死滅させるかもしくはその増殖を阻害するため、または感染症を治療するために有用であり得る。したがって、本発明の複合体は、動物における感染症の治療のための様々な状況で使用され得る。複合体は、薬物を標的細胞に送達するために使用され得る。理論に拘束されることなく、一実施形態では、複合体は標的細胞表面の抗原と会合し、その後、受容体介在性エンドサイトーシスによって複合体が標的細胞の内部に取り込まれる。一旦、細胞内に入ると、ペイロード薬物が放出され得る。その後、放出された薬物は、サイトゾル内を自由に遊走し、細胞傷害活性を誘導する。代替の実施形態では、薬物は、標的細胞の外部で複合体から切断され、その後、薬物は細胞に侵入する。一実施形態では、複合体は、特定の感染症を引き起こす細胞を死滅させるかまたはその増殖を阻害する。複合体で治療することができる特定の種類の感染症には、ジフテリア、百日咳、潜在性菌血症、尿路感染症、胃腸炎、蜂窩織炎、喉頭蓋炎、気管炎、アデノイド肥大、咽後膿瘍、膿痂疹、膿瘡、肺炎、心内膜炎、敗血症性関節炎、肺炎球菌、腹膜炎、菌血症、髄膜炎、急性化膿性髄膜炎、尿道炎、子宮頚管炎、直腸炎、咽頭炎、卵管炎、精巣上体炎、淋病、梅毒、リステリア症、炭疽、ノカルジア症、サルモネラ、腸チフス、赤痢、結膜炎、副鼻腔炎、ブルセラ症、野兎病、コレラ、腺ペスト、破傷風、壊死性腸炎、放線菌症、混合嫌気性菌感染症、梅毒、回帰熱、レプトスピラ症、ライム病、鼠咬熱、結核、リンパ節炎、ハンセン病、クラミジア、クラミジア肺炎、トラコーマ、封入体結膜、全身性真菌性疾患（ヒストプラスマ症、コクシジオイデス症、醸母菌症、スポロトリクム症、クリプトコッカス症、全身性カンジダ症、アスペルギルス症、ムコール症、菌腫、黒色真菌症）、リケッチア症（チフス、ロッキー山紅斑熱、エーリキア症、東部ダニ媒介性リケッチア症、リケッチア痘症、Ｑ熱、バルトネラ症）、寄生虫症（マラリア、バベシア症、アフリカ睡眠病、シャーガス病、リーシュマニア症、ダムダム熱、トキソプラズマ症、髄膜脳炎、角膜炎、腸蟯虫症、ジアルジア症、クリプトスポリジウム症、イソスポーラ症、シクロスポラ症、微胞子虫症、回虫症、鞭虫感染症、鉤虫感染症、線虫感染症、眼幼虫移行症、施毛虫症、メジナ虫症、リンパ管フィラリア症、ロア糸状虫症、河川盲目症、犬糸状虫感染症、住血吸虫症、水泳者かゆみ症、肺吸虫、肝吸虫、肝蛭症、肥大吸虫症、オピストルキス症、サナダムシ感染症、包虫症、多包虫症）、ウイルス性疾患（麻疹、亜急性硬化性全脳炎、感冒、流行性耳下腺炎、風疹、バラ疹、第五病、水痘、呼吸器多核体ウイルス感染症、クループ、細気管支炎、伝染性単核球症、脊髄灰白質炎、ヘルパンギーナ、手足口病、ボルンホルム病、性器ヘルペス、性器疣贅、無菌性髄膜炎、心筋炎、心膜炎、胃腸炎、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ライ症候群、川崎症候群、インフルエンザ、気管支炎、ウイルス性「歩く」肺炎、急性熱性呼吸器疾患、急性咽頭結膜熱、流行性角結膜炎、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ−２）、帯状疱疹、巨細胞封入体症、狂犬病、進行性多巣性白質脳症、クールー病、致死性家族性不眠症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、熱帯性痙性不全対麻痺症、西部ウマ脳炎、カリフォルニア脳炎、セントルイス脳炎、黄熱、デング熱、リンパ球性脈絡髄膜炎、ラッサ熱、出血熱、ハンタウイルス肺症候群、マールブルグウイルス感染、エボラウイルス感染症、及び天然痘）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８８】
細胞除去用途には、（１）不整脈の原因となっている心臓ペースメーカー細胞、（２）神経学障害の原因となっている過活動ニューロン、及び（３）活性が亢進した内分泌機能等を、破壊または阻害することが含まれる。
【０１８９】
Ｂ．投与量
本発明との使用に好適な医薬組成物には、有効成分が治療的有効量で、すなわち、その意図された目的を達成するために有効な量で含有されている組成物が含まれる。個別の用途に有効な実際の量は、特に、治療される状態、疾患の重症度と経過、分子が投与されるのが予防のためであるのか、または治療のためであるのかということ、それまでの治療、患者の臨床歴と臨床反応、及び主治医の判断により異なる。有効量の決定は、特に、本明細書の詳細な開示を考慮すれば、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１９０】
本明細書に記載のいかなる化合物についても、治療的有効量は、最初に細胞培養アッセイにより決定することができる。目的血漿濃度は、細胞の増殖または分裂を阻害することができる活性化合物（複数可）の濃度である。好ましい実施形態では、細胞活性は少なくとも２５％阻害される。細胞活性の少なくとも約５０％、７５％、または９０％以上の阻害を誘導することができる活性化合物（複数可）の目的血漿濃度が現在好ましい。患者の細胞活性の阻害パーセンテージをモニターして、達成された血漿中薬物濃度の妥当性を評価することができ、投与量を上方または下方に調整して所望の阻害パーセンテージを達成することができる。
【０１９１】
当該技術分野において周知であるように、ヒトで使用するための治療的有効量は動物モデルにより決定することもできる。例えば、ヒトのための用量は、動物において有効であることが見出されている循環血中濃度を達成するよう製剤化することができる。ヒトでの投与量は、上記のように、細胞阻害をモニタリングし、投与量を上方または下方へ調整することによって調整することができる。
【０１９２】
治療有効用量は、同様の薬理活性を示すことが知られている化合物についてのヒトのデータから決定することもできる。適用された用量は、既知の化合物と比較した、投与化合物の相対的な生物学的利用能及び効力に基づいて調整することができる。
【０１９３】
上記の方法及び当該技術分野で周知の他の方法に基づいて、ヒトにおいて最大効力を達成する用量を調整することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１９４】
局所投与の場合、投与化合物の全身の循環血中濃度は特に重要ではない。そのような場合、化合物は、意図された結果を達成するのに有効な局所領域での濃度を達成するように投与される。
【０１９５】
分子は、一度に、または一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇの分子が、患者に投与するための初回候補投与量であり、例えば、１回以上の個別投与によるか、または持続注入によるかを問わない。典型的な日用量は、上述の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲になる場合がある。患者に投与されるべき複合体の例示的投与量は、患者の体重の１ｋｇあたり約０．１〜約１０ｍｇの範囲である。数日またはそれ以上にわたる反復投与の場合、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療が維持される。例示的な投与レジメンは、複合体の初回負荷量の約４ｍｇ／ｋｇを、その後、追加用量を毎週、２週間ごと、または３週間ごとに投与するというコースを含む。他の投与レジメンが有用な場合がある。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
【０１９６】
他の投与方法の場合、投与量の量と間隔は、治療される特定の臨床適応に有効な投与化合物の血漿濃度を提供するよう個々に調整することができる。例えば、一実施形態では、本発明による化合物は、比較的高濃度で１日に複数回投与することができる。別法として、本発明の化合物を最小有効濃度で投与すること、及び回数の少ない投与レジメンを使用することがより望ましい場合がある。これにより、個人の疾患の重症度に見合った治療的レジメンが提供される。
【０１９７】
本明細書で提供される教示を利用すれば、実質的な毒性を生じさせず、なおかつ特定の患者により示される臨床症状を治療するのに完全に有効である、有効な治療的処置レジメンを計画することができる。こうした計画には、化合物の効力、相対的な生物学的利用能、患者の体重、有害な副作用の存在及び重症度、選択薬剤の好ましい投与方法及び毒性プロファイル等の要素を考慮することによる、活性化合物の慎重な選択が伴わなければならない。
【０１９８】
本発明の化合物は、単独で投与しても、または他の治療剤と組み合わせて投与してもよく、治療される状態により、同時であっても連続であってもよい。治療及び治療法の例には、化学療法（例えば、薬物、化学療法剤等を含む、活性薬剤の投与）、免疫療法、手術、及び放射線療法が含まれるが、これらに限定されない。「化学療法剤」は、作用機序にかかわらず、がんの治療に有用な化学物質である。化学療法剤のクラスには、アルキル化剤、代謝拮抗剤、紡錘体毒植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光感受性物質、及びキナーゼ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。化学療法剤には、「標的療法」及び従来の化学療法で使用される化合物が含まれる。腫瘍免疫療法剤のクラスには、ＰＤ−１拮抗薬が含まれる。
【０１９９】
Ｃ．細胞内取り込みを評価する方法
いくつかの態様では、薬剤の細胞内への取り込みを評価する方法を提供する。方法には、細胞を含む試料と、本明細書で詳述されているように標識付き薬剤とを接触させること、及び発光を検出することが含まれ得、その発光検出により、薬剤の細胞内取り込みが示される。薬剤の細胞内への取り込みにより、化合物の還元及び放出されたレポーター部分の生成がもたらされる。
【０２００】
（１）蛍光レポーター部分
いくつかの実施形態では、レポーター部分には、蛍光レポーター部分が含まれ得る。蛍光レポーター部分には、フルオロフォアが含まれ得る。発光は、ある波長の光に試料を曝露し、放出された報告部分により発せられる蛍光を検出することにより検出される。対照試料の蛍光または蛍光波長と比較した蛍光の増大または蛍光波長の変化は、薬剤の細胞内取り込みを示す。フルオロフォアは、その蛍光を消光し、消光されていないフルオロフォアとしてペイロードをその自壊特性によって放出する蛍光発光性または前蛍光性（ｐｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）のプローブが提供されるような方法で結合され得る。対照試料は、細胞を含まない試料培地のみ、細胞を含むが実験的処理をしない試料、または標識付き薬剤と接触させていない試料であってよい。蛍光は、細胞の内部で検出されても外部で検出されてもよい。開示されているキノン標識部分の非還元性類似体を対照標識として使用してよい。
【０２０１】
（２）生物発光レポーター部分
いくつかの態様では、レポーター部分には、生物発光レポーター部分が含まれ得る。生物発光レポーター部分には、ルシフェラーゼに対するプロ基質が含まれ得る。いくつかの実施形態では、細胞にはルシフェラーゼが含まれる。ルシフェラーゼは、細胞において発現され得る。発光は、放出されたレポーター部分を利用してルシフェラーゼにより生成される発光を検出することにより検出される。いかなる発光の検出も、薬剤の細胞内取り込みを示し得る。別法として、試料の発光を対照試料の発光と比較してよく、試料の発光が対照試料の発光よりも高い場合、薬剤の細胞内取り込みが示される。対照試料は、標識付き薬剤と接触させていない試料、または薬剤の取り込み能力がない細胞型であってよい。発光は、細胞の内部で検出されても外部で検出されてもよい。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、細胞はルシフェラーゼを含まないかまたは発現せず、ルシフェラーゼは試料に対して加えられる。発光は、細胞から出るかまたは細胞溶解物中に存在し得る放出されたレポーター部分を利用してルシフェラーゼにより生成される発光を検出することにより検出される。いかなる発光の検出も、薬剤の細胞内取り込みを示し得る。別法として、試料の発光を対照試料の発光と比較してよく、試料の発光が対照試料の発光よりも高い場合、薬剤の細胞内取り込みが示される。対照試料は、細胞を含まない試料培地のみ、細胞を含むが実験的処理をしない試料、薬剤の取り込み能力がない細胞型、または標識付き薬剤と接触させていない試料であってよい。発光は、細胞の内部で検出されても外部で検出されてもよい。開示されているキノン標識部分の非還元性類似体を対照標識として使用してよい。
【０２０３】
（３）試料
標識付き薬剤は、生物学的成分を含有する試料と共に使用され得る。試料は、インビトロまたはインビボでの細胞、組織、または器官を含んでよい。化合物は一般に、使用濃度の範囲内では、生細胞及び他の生物学的成分に対して非毒性である。
【０２０４】
細胞には、真核細胞、例えば、酵母、トリ、植物、昆虫または哺乳類の細胞が含まれ得、これには、ヒト、シミアン、マウス、イヌ、ウシ、ウマの、ネコ、ヒツジ、ヤギもしくはブタ、または原核細胞、あるいは２つ以上異なる生物からの細胞、またはそれらの細胞溶解物もしくは上清が含まれるが、これらに限定されない。細胞は、組換え技術による遺伝子改変がなされていなくても（非組換え細胞）、あるいは組換え細胞であって、組換えＤＮＡで一過性にトランスフェクトされている、及び／またはゲノムが組換えＤＮＡで安定して増大されている、またはゲノムが、遺伝子を破壊するよう、例えば、プロモーター、イントロンもしくはオープンリーディングフレームを破壊するよう、もしくはあるＤＮＡ断片を別のＤＮＡ断片と置き換えるよう改変されている、組換え細胞であってもよい。組換えＤＮＡまたは置換ＤＮＡ断片は、本発明の方法により検出されるべき分子、検出されるべき分子のレベルもしくは活性を変化させる部分、及び／または分子のレベルもしくは活性を変化させる分子もしくは部分には関連しない遺伝子産物をコードし得る。細胞は、ルシフェラーゼを発現しても発現しなくてもよい。
【０２０５】
（４）接触
標識付き薬剤は、化合物と目的試料成分との接触を容易にする方法で試料と組み合わされ得る。典型的には、標識付き薬剤または標識付き薬剤を含有する溶液は、単純に試料に加えられる。
【０２０６】
選択した標識付き薬剤の細胞取り込みレベルは、電気穿孔、ショック処理または高細胞外ＡＴＰ等、原形質膜を透過性にする処理の有無にかかわらずモニターすることができる。別法として、選択した標識付き薬剤は、例えば、圧力マイクロインジェクション、スクレイプローディング、パッチクランプ法、または食作用によって、細胞内に物理的に挿入することができる。
【０２０７】
追加の検出試薬は典型的には、当該技術分野で一般に知られている方法に従って、特定の細胞成分、細胞内物質、または細胞状態の存在に起因した、検出可能な応答を生成する。追加の検出試薬が、対象である標識付き薬剤のスペクトル特性とは異なるスペクトル特性を有するか、またはそのような特性を有する産物を生成する場合、多色適用が可能である。これは、追加の検出試薬が、標識付き薬剤のスペクトル特性とは検出可能な程度異なっているスペクトル特性を有する色素または色素複合体である場合に特に有用である。
【０２０８】
特定の実施形態では、開示された標識試薬及び標識付き薬剤を使用する場合は、洗浄工程は不要である。
【０２０９】
（５）光検出
標識付き薬剤は一般に、上記のような標識付き薬剤と、細胞を含む目的試料とを、検出可能な光学応答または光出力をもたらすよう選択された条件下で合わせることによって利用される。典型的には、試料の特定の特性は、光学応答を、標準または予想される応答と比較することにより決定される。試料は、光学応答を引き出すために選択された波長で照射され得る。別法として、試料からの発光は、ルシフェラーゼ及び生物発光レポーター部分によって発せられた光出力（発光）を測定することができる読み取り装置で、例えば、発光光度計または光電子増倍管を使用して測定され得る。光学応答または光出力はまた、経時的に、例えば、同じ反応チャンバー内で数秒、数分、数時間等の期間、測定され得る。
【０２１０】
検出可能な光学応答とは、観察または機器のいずれかで検出可能な光信号の変化または発生を意味する。典型的には、検出可能な応答は、蛍光もしくは発光の強度、励起もしくは発光の波長分布の変化、蛍光もしくは発光の寿命の変化、蛍光もしくは発光の偏光の変化、またはそれらの組み合わせ等の蛍光もしくは発光の変化である。標準または予想される応答と比較したシグナルの程度及び／または位置は、その試料が所与の特性を持つのか、またどの程度持つのか、ということを示す。
【０２１１】
標識付き薬剤との接触後または接触中の任意の時点で、試料に、検出可能な光学応答が得られるよう選択された、ある波長の光を照射し、光学応答を検出するための手段を用いて観察する。本発明の化合物に照射するのに有用な機器には、携帯型紫外線ランプ、水銀アークランプ、キセノンランプ、レーザー及びレーザーダイオードが含まれるが、これらに限定されない。これらの光源は、任意選択で、レーザースキャナー、蛍光プレートリーダー、標準または小型の蛍光光度計、またはクロマトグラフィー検出器に組み込まれる。
【０２１２】
光学応答または光出力は、任意選択で、目視検査で検出しても、またはＣＣＤカメラ、ビデオカメラ、写真用フィルム、レーザースキャニング装置、蛍光光度計、フォトダイオード、量子カウンター、落射蛍光顕微鏡、走査型顕微鏡、フローサイトメーター、蛍光プレートリーダーといったデバイスのうちのいずれかの使用、もしくは光電子増倍管等の信号を増幅するための手段によって検出してもよい。フローサイトメーターを使用して試料を検査する場合、試料の検査には、任意選択で、試料をその蛍光応答に従って部分に選別することが含まれる。
【０２１３】
６．キット
別の態様では、本発明は、本発明の化合物または組成物のうち１つ以上と、かかる化合物または組成物を使用するための説明書を含有するキットを提供する。例示的な一実施形態では、本発明は、本発明のリンカーアームまたはペイロードを有する本発明のリンカーアームを、別の分子に結合させるためのキットを提供する。キットには、リンカーまたはリンカーとペイロード、及びリンカーを特定の官能基に結合させるための説明書が含まれる。キットには、細胞障害性薬物、標的指向性薬剤、検出可能な標識、医薬塩または緩衝液のうちの１つ以上が含まれてもよい。キットには、容器、及び任意選択で、１つ以上のバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、またはシリンジが含まれてもよい。キットの他のフォーマットは当業者には明らかでり、それらは本発明の範囲内である。
【０２１４】
７．化学合成
Ａ．結合試薬の調製
スキーム４
2021533102.tif 000221
結合試薬７は、スキーム４に一般的に示されるように調製され得る。Ｐ1が窒素保護基であるアルデヒド１は、アミン２との還元アミノ化反応に供されアミン３が提供され得る。典型的な反応条件には、反応物と、溶媒（例えば、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、ジクロロエタン）中の還元剤（例えば、ＮａＢＨ4、ＮａＢＨ3ＣＮ、ＮａＨ（ＯＡｃ）3）とを、任意選択で弱酸（例えば、酢酸、水酸化アンモニウム）の存在下、合わせることが含まれる。ペイロード部分−Ａ1は、塩基（例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン）の存在下、ペイロードＨＡ1と、有機溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中の好適な炭酸塩（例えば、ビス（ペンタフルオロフェニル）ジカルボナート）、クロロギ酸エステル（例えば、クロロギ酸４−ニトロフェニル）、ホスゲン、またはトリホスゲンとを反応させて、アミン３と反応し得る中間体の炭酸塩または塩化カルボニル（図示せず）を形成させることによってアミン３に付加され、カルバメート４が得られてよい。保護基Ｐ1は、当該技術分野で周知の条件を使用して除去してよい。例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を、塩化メチレン等の溶媒中、トリイソプロピルシランまたはチオアニソールの存在下、５０％のトリフルオロ酢酸を用いて室温にて３０分間またはそれ以上で除去して中間体５を得てよく、これを、キノンカルボン酸６と様々な条件下で結合させてよい。例えば、キノン酸６を、溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中で塩基（例えば、Ｎ−メチルモルホリン）の存在下、好適なクロロギ酸エステル（例えば、クロロギ酸イソブチル）との混合無水物に変換させ、この混合無水物と５とを反応させて７を得てよい。別法として、キノン酸６を、標準的ＤＣＣカップリングまたはＤＣＣ／ＨＯＢｔ条件によってアミンリンカーと直接カップリングさせてよい。キノン酸６はまた、塩化オキサリルもしくは塩化チオニルを使用して塩化アセチルに変換させるか、または塩基性条件下でＴＳＴＵを使用してＮＨＳエステルに変換させるか、またはペンタフルオロベンゼンエステルに変換させることによって、活性化させてもよい。
スキーム５
2021533102.tif 000222
【０２１５】
式７の特定の化合物は、Ｘ1a基のさらなる官能性操作によって式７の他の化合物に変換され得る。例えば、Ｘ1aが−ＣＯＯＨである化合物７．１は、塩基性条件下でＴＳＴＵと反応させることにより、Ｘ1aが
2021533102.tif 000223
である化合物７．２に変換され得る。化合物７．２は、溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中で塩基（例えば、ジイスプロピルエチレンアミン）の存在下、
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とさらに反応させて式７．３の化合物を形成させてよく、式中、Ｌ1bは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−であり、Ｌ1cはＣ1-6アルキレンであり、Ｘ1aは
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（スキーム５）である。別法として、対応するカルボン酸７．１を、当該技術分野で周知の標準的なアミド結合形成条件（例えば、ＤＣＣとＨＯＢｔ；ＤＣＣとＤＭＡＰ）を使用してアミンと結合させてよい。
スキーム６
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【０２１６】
結合試薬には、１０Ａファミリー及び１０Ｂファミリー（スキーム６）が含まれる。
スキーム７
2021533102.tif 000227
【０２１７】
結合試薬１０Ｃは、スキーム７に示される一般的方法によって調製され得る。同様に、クロロギ酸イソブチルもしくは塩化アセチルまたは他の好適な標準的カップリング条件を用いてキノン酸６を活性化させることによって、保護されたジアミン中間体３ａにキノン酸６を結合させ、キノンアミド８ａが提供され得る。Ｂｏｃ等のアミン保護基Ｐ1を、トリイソプロピルシランまたはチオアニソール等のラジカルスカベンジャー存在下でＴＦＡによって除去して、キノンジアミン化合物９ａが提供され得る。ペイロードＨＡ1を、塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下、有機溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中の好適な炭酸塩またはクロロギ酸エステル（例えば、ビス（ペンタフルオロフェニル）ジカルボナート、クロロギ酸４−ニトロフェニル）、ホスゲン、またはトリホスゲンを用いて活性化させ、アミン９ａと反応し得る中間体の炭酸塩または塩化カルボニル（図示せず）を形成させて、カルバメート１０Ｃが提供され得る。
スキーム８
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【０２１８】
式１０Ａの特定の化合物は、Ｘ1a基のさらなる官能性操作によって式１０の他の化合物に変換され得る。例えば、Ｘ1aが−ＣＯＯＨである化合物１０Ａ．１は、塩基性条件下でＴＳＴＵと反応させることにより、Ｘ1aが
2021533102.tif 000229
である化合物１０Ａ．２に変換され得る。化合物１０Ａ．２は、溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中で塩基（例えば、ジイスプロピルエチレンアミン）の存在下、
2021533102.tif 000230
とさらに反応させて式１０Ａ．３の化合物を形成させてよく、式中、Ｌ1bは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ20−Ｌ1c−であり、Ｌ1cはＣ1-6アルキレンであり、Ｘ1aは
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（スキーム８）である。別法として、対応するカルボン酸１０Ａ．１を、当該技術分野で周知の標準的なアミド結合形成条件（例えば、ＤＣＣとＨＯＢｔ；ＤＣＣとＤＭＡＰ）を使用してアミンと結合させてよい。
スキーム９
2021533102.tif 000232
【０２１９】
結合試薬１０Ｂファミリーは、スキーム９に示される一般的方法によって調製され得る。キノンカルボン酸６をアミノベンジルアルコール８ｂに結合させて化合物９ｂを発生させてよく、これを、トリホスゲン、クロロギ酸イソブチル、またはビス（ペンタフルオロベンゼン）炭酸塩で活性化させ、ペイロードＡ2部分にさらに結合させることができる。別法として、ペイロードＨＡ2を、塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下、有機溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中の好適な炭酸塩またはクロロギ酸エステル（例えば、ビス（ペンタフルオロフェニル）ジカルボナート、クロロギ酸４−ニトロフェニル）、ホスゲン、またはトリホスゲンを用いて活性化させ、アルコール９ｂと反応し得る中間体の炭酸塩または塩化カルボニル（図示せず）を形成させて、カルバメート１０Ｂが提供され得る。
スキーム１０
2021533102.tif 000233
【０２２０】
結合試薬１２は、スキーム１０に一般的に示されるように、またＺｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）６４（１）１５６−１６１により開示されている化学（例えば、スキーム２〜４）を使用して調製され得る。例えば、ＭＯＭで保護されたラクトンは、好適な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン及び水）中でＮ−ブロモスクシンイミドを用いた酸化によりキノンカルボン酸１１に変換され得る。
スキーム１１
2021533102.tif 000234
【０２２１】
１１から１２への変換では、
2021533102.tif 000235
としてのＧ1をスキーム１１に一般的に示されるように付加してよい。カルボン酸１１は、スキーム４で５から７に変換するために使用された条件と類似の条件を使用してアミン１３と結合させてよい。
スキーム１２
2021533102.tif 000236
【０２２２】
１１から１２への変換では、−Ａ2としてのＧ1をスキーム１２に一般的に示されるように付加してよい。ＨＡ2は、Ａ2が結合しているのが窒素を介しているのか、酸素を介しているのか、または硫黄原子を介しているのかに応じて、アミド、エステル、またはチオエステルを形成させるための標準的アミドカップリング条件下で１１と反応させてよい。
スキーム１３
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【０２２３】
１１から１２への変換では、
2021533102.tif 000238
としてのＧ1をスキーム１３に一般的に示されるように付加してよい。アニリン１５は、標準的なアミド結合形成条件を使用してカルボン酸１１と結合させてよい。アルコール１６を、活性化された炭酸塩（例えば、４−ニトロフェニルー炭酸塩またはペンタフルオロフェニルー炭酸塩）またはクロロギ酸エステルに変換して、ＵＳ２００８／０２７９８６８に開示される条件と類似の条件下でＨＡ2と反応させて、１７が提供され得る。
【０２２４】
Ｂ．薬物複合体の調製
典型的には、複合体化反応時、理論上の最大数より少ない薬物部分が抗体に結合される。抗体は、例えば、薬物−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）またはリンカー試薬とは反応しない多数のリジン残基を含有し得る。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応し得る。また、最も反応性の高いシステインチオール基のみがチオール反応性リンカー試薬と反応し得る。一般に、抗体には、薬物部分に連結され得る遊離の反応性システインチオール基は、あったとしても多くは含有されていない。化合物の抗体中のほとんどのシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在しており、それらは部分的または完全な還元条件下で、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）もしくはＴＣＥＰ等の還元剤により還元されなければならない。ＡＤＣの搭載（薬物抗体比）は、いくつかの異なる様態で制御されてよく、それらには、（ｉ）抗体に対する薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬のモル過剰を制限すること、（ｉｉ）複合体化反応の時間または温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的または限定的な還元条件、が含まれる。
【０２２５】
抗体上の求核基には、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、及び（ｉｖ）そこで抗体がグリコシル化される、糖ヒドロキシルまたはアミノ基、が含まれるが、これらに限定されない。アミン基、チオール基、及びヒドロキシル基は求核性であり、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基、すなわち、（ｉ）マレイミド基（ｉｉ）活性化ジスルフィド、（ｉｉｉ）ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）エステル、ＨＯＢｔ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）エステル、ハロホルマート（ｈａｌｏｆｏｒｍａｔｅ）、及び酸ハロゲン化物等の活性エステル、（ｉｖ）ハロアセトアミド等、ハロゲン化アルキル及びハロゲン化ベンジル、及び（ｖ）カルボキシル等、と反応して共有結合を形成することができる。
【０２２６】
結合試薬は、アルキンとアジドの反応等のクリックケミストリーを使用して、操作された抗体と結合させてもよい。参照により本明細書に組み込まれるＪａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２０１５）３２：３５２６−４０を参照のこと。
【０２２７】
特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわち、システイン架橋を有する。抗体はＤＴＴ（ジチオトレイトール）等の還元剤での処理によって、リンカー試薬との複合体化に対して反応性にしてよい。したがって、各システイン架橋により、理論上は、２つの反応性チオール求核剤が形成される。アミンのチオールへの変換がもたらされる、リジンと２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）の反応を介して追加の求核基を抗体に導入することができる。反応性チオール基は、１つ、２つ、３つ、４つ以上のシステイン残基を導入すること（例えば、１つ以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異抗体を調製すること）によって抗体（またはその断片）に導入され得る。米国特許第７，５２１，５４１号では、反応性システインアミノ酸の導入による抗体操作が教示されている。
【０２２８】
一般に、抗体あたり平均２種の薬物を有する部分的還元抗体の複合体を調製するために、関連抗体は、１ｍＭのＤＴＰＡを含んだ、５０ｍＭのホウ酸塩でｐＨ８に調整されたＰＢＳ中で、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）（約１．８当量）等の還元剤を使用して還元される。溶液を３７℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳ／１ｍＭのＤＴＰＡを４℃で平衡化させた５０ｍＬ  Ｇ２５脱塩カラムを使用して精製する。チオール濃度、タンパク質濃度、及びチオールと抗体の比は、ＵＳ７，８２９，５３１に開示の手順を使用して決定することができる。抗体あたり平均４種の薬物を有する複合体は、抗体を部分的に還元するため約４．２当量の好適な還元剤を使用して、同じ方法を使用して作製することができる。
【０２２９】
部分的に還元された抗体試料を、抗体あたり約２．４及び約４．６モル当量の薬物−リンカー化合物を使用して、対応する薬物−リンカー化合物に結合させ、抗体複合体あたり２種及び４種の薬物がそれぞれ調製され得る。複合体化反応物を氷上で１時間インキュベートし、薬物に対して約２０倍過剰のシステインで反応を停止させ、Ｇ２５脱塩２５カラムで約４℃にて溶出させて精製され得る。得られた薬物−リンカー−抗体複合体は、約３ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、滅菌濾過し、分注して、凍結保存してよい。
【０２３０】
別法として、遊離のチオール基は、抗体のリジンと２−イミノチオランとの反応を介して抗体に導入してよい。最初に、複合体化されるべき抗体は、緩衝液を、５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＤＴＰＡ、ｐＨ８．０を含有する０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に交換されて、５〜１０ｍｇ／ｍＬまで濃縮され得る。チオール化は、抗体への２−イミノチオランの付加を介して達成されてよい。加える２−イミノチオランの量は予備実験で決定され、抗体ごとに異なる。予備実験では、漸増量の２−イミノチオランを滴定しながら抗体に加え、抗体との室温で１時間のインキュベーション後、抗体を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを使用して５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．０緩衝液に脱塩し、導入されたチオール基の数を、ジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）との反応によってすばやく決定する。チオール基とＤＴＤＰの反応により、３２４ｎｍでモニターされるチオピリジンの遊離がもたらされる。タンパク質濃度が０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌの試料を使用してよい。２８０ｎｍでの吸光度を使用して、試料中のタンパク質の濃度を正確に決定してよく、その後、各試料（０．９ｍｌ）の分注量を、０．１ｍｌのＤＴＤＰ（５ｍＭ保存液含有エタノール）と室温で１０分間インキュベートしてよい。緩衝液単独とＤＴＤＰの空試料も一緒にインキュベートしてよい。１０分後、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、チオピリジンの吸光係数１９８００Ｍ-1を使用して、存在するチオール数を定量する。
【０２３１】
典型的には、抗体あたりチオール基が３つというチオール化レベルが望ましい。例えば、これは、１５倍モル過剰の２−イミノチオランを加え、その後、室温で１時間インキュベーションすることにより達成され得る。したがって、複合体化されるべき抗体を２−イミノチオランと共に所望のモル比でインキュベートし、その後、複合体化緩衝液（５ｍＭのグリシン、３％グリセロール、及び２ｍＭのＤＴＰＡを含有する、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．０緩衝液）中に脱塩する。導入されたチオール数を上記のように定量する間、チオール化された材料は氷上に維持する。
【０２３２】
導入されたチオール数の確認後、反応性Ｘ1a／Ｘ2a基を含有する薬物−リンカー分子をチオールあたり３倍モル過剰で加えてよい。複合体化反応は、最終濃度５％のエチレングリコールジメチルエーテル（または好適な代替溶媒）も含有する複合体化緩衝液中で行ってよい。薬物−リンカー保存液は、９０％エチレングリコールジメチルエーテル、１０％ジメチルスルホキシドに溶解させてよい。抗体への添加の場合、保存液は、十分なエチレングリコールジメチルエーテルを加えて最終濃度を５％にしたチオール化抗体に直接加えるか、または最終濃度が１０％のエチレングリコールジメチルエーテルを含有する複合体化緩衝液で前希釈してから、等容量のチオール化抗体に添加してよい。
【０２３３】
複合体化反応物は、混合しながら室温で２時間インキュベートされ得る。インキュベーション後、反応混合物を１４０００ＲＰＭで１５分間遠心分離にかけ、すぐに精製しない場合はｐＨを７．２に調整してよい。複合体の精製は、いくつかの方法を使用してクロマトグラフィーにより達成してよい。複合体は、５ｍＭのグリシン、５０ｍＭのＮａＣｌ及び３％グリセロールを含有するｐＨ７．２、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液を用いて事前に平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ２００カラムでサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製してよい。クロマトグラフィーは、２８ｃｍ／時間の線流速で行ってよい。複合体を含有する画分を採取してプールし、濃縮する。別法として、精製は、イオン交換クロマトグラフィーを介して達成してよい。条件は抗体ごとに異なり、それぞれの場合に最適化する必要がある。例えば、抗体−薬物複合体反応混合物は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭのグリシン、３％グリセロール、ｐＨ６．０に事前に平衡化したＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに適用され得る。抗体複合体は、平衡緩衝液中、０〜１Ｍ  ＮａＣｌの勾配を使用して溶出させてよい。複合体を含有する画分をプールして、ｐＨを７．２に調整し、必要に応じて試料を濃縮してよい。
【０２３４】
抗体のアミノ基（例えば、リジン）と結合させるには、抗体の水性緩衝溶液を、反応性基Ｘ1a／Ｘ2aを持つモル過剰の結合試薬と共にインキュベートしてよい。反応混合物は、過剰アミン（等のエタノールアミン系、タウリン等）の添加により反応を停止させてよい。その後、抗体薬物複合体は、ゲル濾過により精製してよい。抗体分子あたりの結合したペイロード分子の数は、分光光度計での測定により決定することができる。抗体分子あたり平均１〜１０個のペイロード分子がこの方法によって連結され得る。いくつかの実施形態では、連結ペイロード分子の好ましい平均数は２〜５である。他の実施形態では、連結ペイロード分子の好ましい平均数は３〜４．５である。
【実施例】
【０２３５】
８．実施例
上記は、以下の実施例を参照することでよりよく理解され得、それらは説明を目的として提示されており、本発明の範囲を限定することを意図していない。
【０２３６】
実施例１
2021533102.tif 000239
Ｎ−［（ＰＥＧ）4−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンの合成。Ｎ−ｔ−ＢｕＯＯＣ−（ＰＥＧ）4−アミン（０．５５７ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（２０ｍＬ）に、（Ｎ−メチル）−Ｎ−Ｂｏｃアセトアルデヒド（０．３ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。ＮａＢＨ4（０．１９６ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を混合物に０℃で加え、得られた混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、室温で１時間撹拌した。５ｍＬの水を加えて反応を停止させた。溶媒除去後、５ｍＬの水を加え、混合物を塩化メチレンで３回抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、生成物を、ヘプタン／酢酸エチルから塩化メチレン／メタノールを使用してフラッシュシリカクロマトグラフィーで精製し、収率６４．５％（０．５３５ｇ）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ、ＣＤ2Ｃｌ2） δ ｐｐｍ： ３．５−３．８ （ｍ、１８Ｈ、ＣＨ2）、３．４５ （ｂｒ、２Ｈ、ＣＨ2）、２．９８ （ｂｒ、２Ｈ、ＣＨ2）、２．８３ （ｓ、３Ｈ、ＮＣＨ3）、２．４６ （ｔ、２Ｈ、ＣＯＣＨ2）、１．４２ （ｓ、１８Ｈ、ＣＨ3）；ＭＳ−ＥＳＩ （ｍ／ｅ）： ４７９．６ ［Ｍ＋Ｈ］。
【０２３７】
同様の手順を使用して、以下の中間体アミンを適切な出発物質から同様に調製した。
表２
2021533102.tif 000240
【０２３８】
実施例２（仮説実施例）
2021533102.tif 000241
Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミンペイロードカルバマート２０の合成（仮説実施例）。ペイロード分子ＨＯ−Ａ1a（０．５２６ｍｍｏｌ）とビス（ペンタフルオロフェニル）ジカルボナート（０．２７６ｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）の混合物の乾燥テトラヒドロフラン溶液（１０ｍＬ）に、トリエチルアミン（０．１０６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をアルゴン下で室温にて加えてよい。混合物を２〜３分撹拌し、Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミン（０．５５３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加えてよい。混合物を室温で３０分間撹拌し、生成物を精製してよい。
【０２３９】
Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯＨ］−（Ｎ’−メチル）−エチレンジアミンペイロードカルバマート２１の合成（仮説実施例）。Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−エチレンジアミンペイロードカルバマート（０．１３６ｍｍｏｌ）及びトリイソプロピルシラン（５０μＬ）を１０ｍＬの塩化メチレンとトリフルオロ酢酸（容量１：１）に溶解させ、混合物を室温で２時間撹拌してよい。溶媒除去後、残渣を高真空下で一晩乾燥してよい。
【０２４０】
２２の合成（仮説実施例）。３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（１０７ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸イソブチル（５８．４ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン溶液（１０ｍＬ）に、Ｎ−メチルモルホリン（８６．５ｍｇ、０．８５５ｍｍｏｌ）を０℃で加えてよい。得られた混合物を０℃で３０分撹拌し、Ｎ’−メチル−Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯＨ］エチレン−ジアミン］ペイロードカルバマート２１のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）を加え、混合物を１時間撹拌してよい。生成物は、フラッシュシリカカラムクロマトグラフィーで直接精製してよい。
【０２４１】
２３の合成（仮説実施例）。２２（０．３１４ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）ウロニウムテトラフルオロボラート（１．５７ｍｍｏｌ）のアセトニトリルと塩化メチレン（１：１）溶液（２０ｍＬ）に、ジイソプロピルエチルアミン（３２５ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を室温で加えてよい。混合物を３０分間撹拌してよい。１２０ｍＬの塩化メチレンを加え、得られた混合物をクエン酸（３０％）溶液と水で洗浄してよい。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し精製してよい。
2021533102.tif 000242
【０２４２】
２５の合成（仮説実施例）。約１００ｍｇ（３９２μｍｏｌ、２当量）の１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンＴＦＡ塩を、２ｍＬのＤＭＦ、及び１ｍＬのＤＭＦに溶解させたそれぞれのＮＨＳエステル２４の１９６μｍｏｌ（１当量）と共にバイアルに加えてよい。７０μＬのジイソプロピルエチルアミン（３９２μｍｏｌ、２当量）を加え、その後、室温で１時間かけて撹拌してよい。反応混合物を乾燥させ、その後、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製してよい。
【０２４３】
実施例３
抗体薬物複合体（リジン複合体化の仮説実施例）
抗体と本発明の結合試薬との複合体化を実証するため、モノクローナル抗体のハーセプチンを２４で標識してよい。凍結乾燥したハーセプチンを０．１Ｍの炭酸水素ナトリウム（ｐＨ８．６）に１０ｍｇ／ｍＬで溶解させ、その後、１００μＬの同じ緩衝液で１ｍｇ／ｍＬまで希釈してよい。２４の５０ｍＭの保存液は１００％ＤＭＳＯに調製してよい。抗体の標識の場合、２４を１００μＬの希釈ハーセプチン（０．６６ｎｍｏｌ）に加えてよい。その後、試料をアルミホイルで覆い、チューブ回転装置上で室温にて６０分間インキュベートしてよい。遊離の２４を除去するには、１００μＬの標識反応物を平衡化したＧ−２５  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ＭｉｃｒｏＳｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、２００μＬのレジン）に置き、３０００ｒｐｍで３０秒の高速回転により溶出させてよい。複合体化したハーセプチンはフロースルーに含有され得る。複合体化効率は、２８０ｎｍと３２０ｎｍでのハーセプチン−２４の吸光度を測定して分光測光法により決定してよい。標識の程度は、ハーセプチン抗体分子１つあたり２４の分子が２．３個であり得る。
【０２４４】
実施例４
抗体薬物複合体（リジン複合体化の仮説実施例）
ｐＨ６．５の水性緩衝液（５０ｍＭのリン酸カリウム、５０ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩）に入れたｈｕＮ９０１抗体（２．５ｍｇ／ｍＬ）溶液は、６倍モル過剰の結合試薬（例えば、２４）を入れたジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）と共にインキュベートして、最終ＤＭＡ濃度を２０％にしてよい。反応は、雰囲気温度で１３時間進行させてよい。反応混合物は、２つの部分に分割してよい。１つの部分は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５ゲル濾過カラムを通過させて精製し、第２の部分はＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ３００ゲル濾過カラムで精製してよい。いずれの場合も、単量体複合体を含有する画分をプールしてよい。複合体の濃度は、分光光度計により決定してよい。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５クロマトグラフィーによる精製により、抗体分子あたり平均２．０８個の連結したペイロード分子を含有する複合体が得られ得る。Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ３００クロマトグラフィーによる精製により、抗体分子あたり平均１．６１個の連結したペイロード分子を含有する複合体が得られ得る。
【０２４５】
実施例５
抗体薬物複合体（チオール複合体化の仮説実施例）
ＰＢＳ／ジエチレントリアミン五酢酸の溶液（２．２ｍＬ）を４．２ｍＬの還元抗体に加え、得られた溶液を氷浴を使用して０℃に冷却してよい。別のフラスコに、結合試薬（例えば、２５）の保存ＤＭＳＯ溶液（還元抗体１ｍｏｌあたり結合試薬８．５ｍｏｌ）をＭｅＣＮで希釈してよい。結合試薬のＭｅＣＮ溶液を抗体溶液に迅速に加え、ボルテックス装置を使用して反応混合物を５〜１０秒間撹拌し、氷浴に戻して０℃で１時間撹拌してよく、その時間の経過後、２１８μＬのシステイン溶液（ＰＢＳ／ＤＴＰＡ中１００ｍＭ）を加えて反応を停止させてよい。反応停止した反応混合物（ｑｕｅｎｃｈｅｄ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｉｘｔｕｒｅ）の６０μＬを「ｑｒｍ」試料として保存してよい。反応が進行する間、３本のＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．から入手可能）を冷蔵室に置き、ＰＢＳ（氷浴を使用して０℃に予冷してあるもの）で平衡化してよい。反応を停止させた、複合体を含有する反応混合物は、冷蔵庫で４℃に予冷され得る２つのＵｌｔｒａｆｒｅｅ  ４遠心式濾過装置（分子量カットオフ３０Ｋのメンブレン；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．；Ｂｅｄｆｏｒｄ，  Ｍａｓｓ．；製造者の指示書に従って使用）を使用して超遠心分離によって約３ｍＬまで濃縮し、濃縮反応混合物を、溶離液としてＰＢＳ（各カラムにつき１ｍＬ）を使用して予冷却したＰＤ１０カラムから溶出させてよい。溶出した複合体を、カラムあたり１．４ｍＬの容量で採取し、総溶出容量を４．２ｍＬとしてよい。その後、溶出した複合体溶液を、０．２ミクロン滅菌シリンジエンドフィルターを使用して濾過し、複合体溶液の２５０μＬを分析用に取り置き、残りの複合体溶液を滅菌バイアルに入れて凍結してよい。複合体の濃度、抗体あたりの薬物分子数、反応停止した薬物−リンカーの量、及び凝集体の百分率は、米国特許第７，８２９，５３１号に開示される手順を使用して決定してよい。
【０２４６】
実施例６
抗体薬物複合体（チオール複合体化の仮説実施例）
本明細書に記載される複合体化方法は、抗体と２−イミノチオランとの反応、それに続く、薬物−リンカー分子と活性マレイミド基との反応を介した、抗体への遊離チオール基の導入に基づく。最初に、複合体化されるべき抗体は、５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＤＴＰＡ、ｐＨ８．０を含有する０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に緩衝液交換し、５〜１０ｍｇ／ｍｌに濃縮してよい。チオール化は、抗体への２−イミノチオランの付加を介して達成されてよい。加える２−イミノチオランの量は、予備実験で決定され、抗体ごとに異なってよい。予備実験では、漸増量の２−イミノチオランを滴定しながら抗体に加えてよく、抗体との室温で１時間のインキュベーション後、抗体を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを使用して５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．０緩衝液に脱塩し、導入されたチオール基の数を、ジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）との反応によってすばやく決定してよい。チオール基とＤＴＤＰの反応により、３２４ｎｍでモニターされるチオピリジンの放出がもたらされる。タンパク質濃度が０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌの試料を使用してよい。２８０ｎｍでの吸光度を使用して、試料中のタンパク質の濃度を正確に決定してよく、その後、各試料（０．９ｍｌ）の分注量を、０．１ｍｌのＤＴＤＰ（５ｍＭ保存液含有エタノール）と室温で１０分間インキュベートしてよい。緩衝液単独とＤＴＤＰの空試料も一緒にインキュベートしてよい。１０分後、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、チオピリジンの吸光係数１９８００Ｍ-1を使用して、存在するチオール数を定量してよい。
【０２４７】
典型的には、抗体あたりチオール基が３つというチオール化レベルが望ましい。例えば、これは、１５倍モル過剰の２−イミノチオランを加え、その後、室温で１時間インキュベーションすることにより達成され得る。したがって、複合体化されるべき抗体を２−イミノチオランと共に所望のモル比でインキュベートし、その後、複合体化緩衝液（５ｍＭのグリシン、３％グリセロール、及び２ｍＭのＤＴＰＡを含有する、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．０緩衝液）中に脱塩してよい。導入されたチオール数を上記のように定量する間、チオール化された材料は氷上に維持してよい。
【０２４８】
導入されたチオール数の確認後、活性マレイミド基を含有する薬物−リンカー分子を、チオールあたり３倍モル過剰で加えてよい。複合体化反応は、最終濃度５％のエチレングリコールジメチルエーテル（または好適な代替溶媒）も含有する複合体化緩衝液中で行ってよい。薬物−リンカー保存液は、９０％エチレングリコールジメチルエーテル、１０％ジメチルスルホキシドに溶解させてよい。抗体への添加の場合、保存液は、十分なエチレングリコールジメチルエーテルを加えて最終濃度を５％にしたチオール化抗体に直接加えるか、または最終濃度が１０％のエチレングリコールジメチルエーテルを含有する複合体化緩衝液で前希釈してから、等容量のチオール化抗体に添加してよい。
【０２４９】
複合体化反応物は、混合しながら室温で２時間インキュベートされ得る。インキュベーション後、反応混合物を１４０００ＲＰＭで１５分間遠心分離にかけ、すぐに精製しない場合はｐＨを７．２に調整してよい。複合体の精製は、いくつかの方法を使用してクロマトグラフィーにより達成してよい。複合体は、５ｍＭのグリシン、５０ｍＭのＮａＣｌ及び３％グリセロールを含有する、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で事前に平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ２００カラムでサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製してよい。クロマトグラフィーは、２８ｃｍ／時間の線流速で行ってよい。複合体を含有する画分を採取してプールし、濃縮してよい。別法として、精製は、イオン交換クロマトグラフィーを介して達成してよい。条件は抗体ごとに異なり、それぞれの場合に最適化する必要があり得る。例えば、抗体−薬物複合体反応混合物は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭのグリシン、３％グリセロール、ｐＨ６．０に事前に平衡化したＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに適用され得る。抗体複合体は、平衡緩衝液中、０〜１Ｍ  ＮａＣｌの勾配を使用して溶出させてよい。複合体を含有する画分をプールしてよく、ｐＨを７．２に調整し、必要に応じて試料を濃縮した。
【０２５０】
実施例７
ハーセプチン複合体のＰＢＩ−５５０８及びＰＢＩ−６８５５からの細胞性ルシフェリン放出
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ＰＢＩ  ５５０８
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ＰＢＩ  ６８５５
本明細書またはＷＯ２０１５／１１６８６７に記載される一般方法を使用して調製され、かつハーセプチンに結合させた、ハーセプチン複合体のＰＢＩ−５５０８（リジン複合体）及びＰＢＩ−６８５５（チオール複合体）は、以下の特徴を示した。
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ＨＩＣ−ＨＰＬＣは未結合抗体の％を示す
ＳＥＣ−ＨＰＬＣは高分子量の凝集の％を示す
【０２５１】
ハーセプチン結合ＰＢＩ−５５０８及びＰＢＩ−６８５５のシアノベンゾチアゾール部分を、Ｄ−システインとのインキュベーションによりＤ−ルシフェリン部分に変換させる。Ｄ−ルシフェリン部分を放出する条件では、ＡＴＰと、Ｍｇ２＋と、遊離Ｄ−ルシフェリンの量に比例して光を生成するルシフェラーゼとを最小限に含有するルシフェリン検出試薬で検出することができる、遊離Ｄ−ルシフェリンが生成される。
【０２５２】
細胞内への取り込み、それに続く、細胞内部の還元環境での放出という、提案された機構と一致して、ルシフェリンは、培養細胞への曝露時にハーセプチン複合体から放出された（図１及び図２）。ＳＫＢＲ２細胞またはＭＣＦ７細胞とのインキュベーション後、図１及び図２の結果が得られた。ＳＫＢＲ３は、その原形質膜の外表面にヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）を発現するため、ＨＥＲ２陽性細胞として知られている。ＭＣＦ７細胞は、ＨＥＲ２を発現しないため、ＨＥＲ２陰性細胞である。ハーセプチン抗体はＨＥＲ２に結合するため、ハーセプチン・ルシフェリン−複合体は、ＨＥＲ２陰性ＭＣＦ７細胞ではなくＨＥＲ陽性ＳＫＢＲ３細胞に結合して、内在化されることが予想される。図１及び図２は、Ｈｅｒ２陽性ＳＫＢＲ３細胞の存在下で両複合体はルシフェリンを放出し、それが経時的に蓄積したことを示す。対照的に、培地のみ、及びＨｅｒ２陰性ＭＣＦ７細胞では、複合体からルシフェリンはほとんどまたはまったく放出されなかった。
【０２５３】
ハーセプチン−５５０８またはハーセプチン−６８５５を、ＨＥＲ２陽性細胞株ＳＫＢ３またはＨＥＲ２陰性細胞株ＭＣＦ７と共に１日、２日間、３日間、４日間、もしくは５日間インキュベートした。ｌ最初に、９６ウェルプレートの５０μＬのマッコイ培地中に１ウェルあたり１０，０００細胞を播種し、１時間後、複合体を加えて、それぞれ濃度３０ｎＭとした。示されている各時点で、培地を、ＡＴＰ及びＵｌｔｒａＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を含有する等容量の溶解性ルシフェリン検出試薬を含む第２のプレートに取り、プレート読み取り発光光度計で発光を読み取った（培地トランスファーアッセイプロトコル、図１）。この場合、細胞内部で放出されたルシフェリンは、それが培地中に核酸した後に検出される。検出試薬は、元のプレートに残存する細胞にも加え、プレート読み取り発光光度計で発光を読み取った（均一系によるアッセイプロトコル、図２）。この場合、細胞と結合したままのルシフェリンが細胞溶解物中で検出される。細胞を含まないマッコイ培地での並行インキュベーションも実施し、それらのウェルからの発光を培地トランスファープロトコル及び均一系によるプロトコルに従って測定した。培地を含むが複合体を加えていないウェルから追加セットの並行測定値を取得し、それらのバックグラウンド値を複合体値から差し引いて正味の発光を得た。
【０２５４】
実施例８
ハーセプチン複合体ＰＢＩ−５５０８からの非細胞性ルシフェリン放出
抗体、及び抗体ではない１つのタンパク質（ウシ血清アルブミン）のプローブペイロードとしてルシフェリン部分を使用したところ、意外にも、タンパク質への複合体化により、ＴＭＱで連結されたペイロードが、還元機構による非細胞媒介性放出に対して安定化されることが見出された。この特性は、ペイロードが、標的細胞の外部で放出されないことが重要であるＡＤＣにおいて、追加の利点を提供し得る。観察結果は以下のとおりである。ＴＭＱリンカーの付加によってＤ−ルシフェリンが６’のヒドロキシルで誘導体化されると、ルシフェラーゼに対する基質としてのその活性は遮断される（ＰＢＩ−４３１２）が、ルシフェラーゼに対し完全に活性な遊離のＤ−ルシフェリンは、
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細胞の内部または外部で還元条件にさらされると、ルシフェリン−ＴＭＱ誘導体からすぐに放出される。ただし、細胞外の還元機構による、タンパク質−ＴＭＱ−ルシフェリン複合体からのＤ−ルシフェリンの放出は、ルシフェリン−ＴＭＱと比較して実質的に減少した。言い換えれば、複合体のタンパク質部分は、ルシフェリンペイロードを、非細胞性環境でのＴＭＱリンカーからの還元的放出に対して安定化させる。非細胞性還元条件には、還元剤水溶液（例えば、ＤＴＴ）またはレダクターゼ反応混合物（図３）が含まれる。このことは、ルシフェリンペイロードを有する２つの複合体、ならびにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を有するルシフェリン−ＴＭＱ複合体の場合に当てはまった。反応条件は、ＰＢＩ−４３１２ではかなりの量の光が生成された（１時間後、９００，０００ＲＬＵ超）が、同様の量のタンパク質複合体からは最小限のシグナルしか生成されなかった（１時間後、８００ＲＬＵ未満）。
【０２５５】
ウシ血清アルブミン、プラルエント（高コレステロール血症を治療するための抗体薬物）、及びハーセプチン（ＨＥＲ２陽性乳癌を治療するための抗体薬物）をＰＢＩ−５５０８に結合させ、精製して未結合反応物を除去した。その後、３つの複合体調製物（ハーセプチン−ＰＢＩ−５５０８、プラルエント−ＰＢＩ−５５０８、ＢＳＡ−ＰＢＩ−５５０８）をＤ−システインと共にインキュベートして、ＣＢＴ部分を、ＴＭＱ部分還元後に遊離Ｄ−ルシフェリンとして放出されると考えられるルシフェリン部分に変換させた。その後、ＰＢＩ−５５０８の複合体、ならびにタンパク質に結合させていないルシフェリン−ＴＭＱ誘導体であるＰＢＩ−４３１２を、レダクターゼ酵素（ヒトジアホラーゼ）及びＮＡＤＨを添加したルシフェリン検出試薬と共に１５分間または１時間インキュベートした。これらの条件はルシフェリンを放出させるが、レダクターゼ／ＮＡＤＨを除くとルシフェリンは放出されないことは、以前に示された。ルシフェリン検出試薬は、ＡＴＰ及びＵｌｔｒａＧｌｏルシフェラーゼを含有し、反応混合物中に存在する遊離Ｄ−ルシフェリンの量に比例して光を生成する。
【０２５６】
抗体への三次複合体化による、ＴＭＱリンカーからのペイロードの細胞外還元的放出に対する安定化は、細胞障害性薬物を持つ複合体に対する追加の安全対策を提供し得る。
【０２５７】
絶対的または近似的に与えられているいかなる範囲も、両方を包含することが意図され、本明細書で使用されるいかなる定義も、明確にすることを意図しており、限定することを意図していない。本発明の広い範囲を示す数字による範囲及びパラメータが近似値であるにもかかわらず、特定の実施例中に示される数値は可能な限り正確に報告される。しかしながら、いかなる数値にも、それらの各試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じるある種の誤差が本質的に含有される。さらに、本明細書に開示されるすべての範囲は、そこに含まれるあらゆる部分的範囲（すべての小数値及び整数値を含む）を包含すると理解されるべきである。
【０２５８】
さらに、本発明は、本明細書に記載される様々な実施形態の一部または全ての、あらゆる可能な組み合わせを包含する。本出願で引用されたあらゆる特許、特許出願、学術論文、及び他の参考文献、ならびにそれらにおいて引用されたいかなる参考文献も、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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2021533102.tif 000291