(57)【要約】  本発明の開示は、ＭＵＣ１のがん特異的なグリコシル化バリアントに特異的に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに関連の融合タンパク質および抗体−薬物コンジュゲート、加えてこのような生体分子をコードする核酸に関する。本発明の開示はさらに、がん療法のための、抗体、抗原結合フラグメント、融合タンパク質、抗体−薬物コンジュゲートおよび核酸の使用に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合に関して、（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２】
乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
配列番号９３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４５、配列番号５１、配列番号５７、配列番号６３、配列番号６９、配列番号７５、配列番号８１、または配列番号８７のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５】
ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８、配列番号４６、または配列番号５２のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項６】
ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号５、配列番号１１、配列番号２７、配列番号３３、または配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項７】
ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０、配列番号５４、または配列番号６０のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項８】
ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項９】
ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
（ａ）配列番号３〜５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６〜８のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｂ）配列番号９〜１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１２〜１４のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｃ）配列番号１５〜１７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１８〜２０のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｄ）配列番号２５〜２７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２８〜３０のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｅ）配列番号３１〜３３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号３４〜３６のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｆ）配列番号３７〜３９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号４０〜４２のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｇ）配列番号４５〜４７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号４８〜５０のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｈ）配列番号５１〜５３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号５４〜５６のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｉ）配列番号５７〜５９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６０〜６２のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｊ）配列番号６３〜６５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６６〜６８のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｋ）配列番号６９〜７１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号７２〜７４のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｌ）配列番号７５〜７７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号７８〜８０のＣＤＲを含むＶＬ；
（ｍ）配列番号８１〜８３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号８４〜８６のＣＤＲを含むＶＬ；または
（ｎ）配列番号８７〜８９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号９０〜９２のＣＤＲを含むＶＬ
を有する、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
（ａ）配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号１と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号１と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
を有する、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
（ａ）配列番号２３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号２３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｃ）配列番号２３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
を有する、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項１５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項１６に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項１７に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＡＡＨＧＶ（配列番号１１７）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項１８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項１５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項２０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項２１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項２２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、請求項２３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合に関して、（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＶＨ配列内に第１、第２および第３のＣＤＲ手段を有するＶＨ配列；および
（ｂ）ＶＬ配列内に第４、第５および第６のＣＤＲ手段を有するＶＬ配列
を含み、
前記第１、第２、第３、第４、第５、および第６のＣＤＲ手段は、協同して、前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの前記ＭＵＣ１ペプチドへの結合を生じさせるものであり、前記結合は、前記参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
正常細胞と比較してがん細胞で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優先的に結合する、請求項１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１ｎＭから５０ｎＭ；
（ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、３ｎＭから５０ｎＭ；
（ｃ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、３ｎＭから４０ｎＭ；
（ｄ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、３ｎＭから２５ｎＭ；
（ｅ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、５ｎＭから５０ｎＭ；
（ｆ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、５ｎＭから２５ｎＭ；
（ｇ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１０ｎＭから５０ｎＭ；
（ｈ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１０ｎＭから２５ｎＭ；
（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１５ｎＭから５０ｎＭ；
（ｊ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１５ｎＭから２５ｎＭ；
（ｋ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、２０ｎＭから５０ｎＭ；または
（ｌ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、２５ｎＭから５０ｎＭ
の結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化された前記ＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、請求項１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２８】
多価である、請求項１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２９】
単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、請求項１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３０】
多重特異性抗体の形態である、請求項１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３１】
前記多重特異性抗体が、第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重特異性抗体である、請求項３０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３２】
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂ−アーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、または二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である、請求項３１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３３】
前記第２のエピトープが、ＭＵＣ１エピトープである、請求項３１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３４】
前記第２のエピトープが、正常細胞と比較してがん細胞で過剰発現されるＭＵＣ１エピトープである、請求項３３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３５】
前記第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、請求項３１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３６】
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、請求項３５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３７】
少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、請求項１から３６のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
【請求項３８】
請求項２９に記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項３９】
細胞傷害性物質にコンジュゲートした、請求項１から３６のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを含む抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４０】
請求項１から３６のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのコード領域を含む核酸。
【請求項４１】
請求項４０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項４２】
請求項４０に記載の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
【請求項４３】
請求項４１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４４】
（ａ）請求項１から３６のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、および（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項４５】
がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項１から３６のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを投与することを含む方法。
【請求項４６】
前記対象が、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、脳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、または肝臓がんに罹患している、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
生物学的サンプルでがんを検出する方法であって、サンプルを、請求項１から３６のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法。
【請求項４８】
前記がんが、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、脳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、または肝臓がんである、請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月２９日に出願された米国仮出願第６２／６９１，８８７号、および２０１９年２月８日に出願された米国仮出願第６２／８０２，８６５号の優先権の利益を主張し、これらそれぞれの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に取り込まれる。
【０００２】
２．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、これによりその全体が参照により組み入れられる。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１９年６月２６日に作成され、ＧＯＴ−００２ＷＯ＿ＳＬと名付けられ、３３，３６５バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
３．背景
ヒトムチンＭＵＣ１は、単層上皮および腺上皮の頂端表面上に発現される多形性の膜貫通糖タンパク質である（Taylor-Papadimitriou et al., 1999, Biochim. Biophys. Acta, 1455:301-313)。ＭＵＣ１は、腺癌で高度に過剰発現され、異常にＯ−グリコシル化される。ムチンの細胞外ドメインは、５つの可能性のあるＯ−グリコシル化のための部位を有する２０アミノ酸残基の可変数タンデムリピート（ＴＲ）（２５〜１２５）を含有する。Ｏ−グリカンは、がん細胞中で不完全にプロセシングされ、結果として汎癌（pancarcinoma）炭水化物抗原Ｔｎ（ＧａｌＮＡｃα１−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）の発現が起こる（Springer, 1984, Science 224:1198-1206)。単純なムチン型Ｏ−グリカンであるＴｎは腺癌（乳房および卵巣がんを含む）で広く発現され、正常な成人組織では限定された分布を示す（Springer, 1984, Science 224:1198-1206)。がんにおけるこれらのＯ−グリカンの発現は、予後不良と相関しており、がん患者ではこれらの炭水化物ハプテンに対する天然抗体が増加する（Miles et al., 1995, Br. J. Cancer. 71:1074-1076；Soares et al., 1996, Pathol. Res. Pract. 192:1181-1186；Werther et al., 1996, Int. J. Cancer. 69:193-199）。当業界においてがん細胞で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープを利用する治療法への必要性がある。
【発明の概要】
【０００４】
４．要約
本開示は、グリコＭＵＣ１のがん特異的なエピトープに選択的な抗体および抗原結合フラグメントに基づく治療剤および診断剤を提供することによって、グリコペプチドバリアントの腫瘍特異性を獲得するものである。
【０００５】
本発明の開示は、ＭＵＣ１のがん特異的なグリコシル化バリアントに結合する抗グリコＭＵＣ１抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本発明の開示はさらに、抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを含む融合タンパク質および抗体−薬物コンジュゲート、ならびに抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメントおよび融合タンパク質をコードする核酸を提供する。
【０００６】
本発明の開示はさらに、がん療法のための、抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、融合タンパク質、抗体−薬物コンジュゲートおよび核酸の使用方法を提供する。
【０００７】
特定の態様において、本開示は、ＭＵＣ１のがん特異的なグリコシル化バリアントと、第２のエピトープとに結合する、二重特異性および他の多重特異性を有する抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを提供する。第２のエピトープは、ＭＵＣ１それ自体、がん細胞上でＭＵＣ１と共発現される別のタンパク質、または活性化Ｔ細胞などの異なる細胞上に存在する別のタンパク質のいずれの上にあるものでもよい。さらに、コドン最適化されたコード領域を含む核酸、および特定の宿主細胞における発現にコドン最適化されていないコード領域を含む核酸などの抗体をコードする核酸も開示される。
【０００８】
抗グリコＭＵＣ１抗体および結合フラグメントは、融合パートナーを含有する融合タンパク質の形態であり得る。融合パートナーは、第２の機能、例えば、Ｔ細胞シグナル伝達タンパク質のシグナル伝達ドメインのシグナル伝達機能、Ｔ細胞活性化のペプチドモジュレーター、または標識システムの酵素的な要素を提供するのに有用であり得る。例示的なＴ細胞シグナル伝達タンパク質としては、４−１ＢＢ、ＣＯ３Ｃ、ならびに融合ペプチド、例えば、ＣＤ２８−ＣＤ３−ゼータおよび４−１ＢＢ−ＣＤ３−ゼータが挙げられる。４−１ＢＢ、またはＣＤ１３７は、Ｔ細胞の共刺激受容体であり、ＣＤ３−ゼータは、Ｔ細胞抗原受容体のシグナル伝達要素である。第２の機能を提供する部分は、Ｔ細胞活性化のモジュレーター、例えばＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒａ、またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ融合であってもよく、またはインビボまたはインビトロでの結合の程度および／または場所をモニターするのに有用な標識システムの標識または酵素的な要素をコードしていてもよい。Ｔ細胞、例えば自己Ｔ細胞の状況下に置かれた、これらの予防および治療活性を有する生体分子をコードするコンストラクトは、本開示の一部の実施形態において、様々ながんを防止または処置するための、養子導入されたＴ細胞を補充するための強力なプラットフォームを提供する。
【０００９】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、表１Ａおよび表１Ｂに記載の重鎖および／または軽鎖可変配列を含む（またはヌクレオチド配列によってコードされる）。明確にするために、この文書中で用語「抗グリコＭＵＣ１抗体」が使用される場合、それは、文脈上別段の指示がない限り、単一特異性および多重特異性（二重特異性を含む）抗グリコＭＵＣ１抗体、単一特異性および多重特異性抗体の抗原結合フラグメント、ならびに抗体およびその抗原結合フラグメントを含有する融合タンパク質およびコンジュゲートを含むことが意図される。同様に、用語「抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント」が使用される場合、それはまた、文脈上別段の指示がない限り、単一特異性および多重特異性（二重特異性を含む）抗グリコＭＵＣ１抗体およびその抗原結合フラグメントに加えて、このような抗体および抗原結合フラグメントを含有する融合タンパク質およびコンジュゲートも含むことが意図される。
【００１０】
他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、表１〜３に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列を含む（またはヌクレオチド配列によってコードされる）。表１Ａおよび表１Ｂに記載のＣＤＲ配列は、ＣＤＲの境界を定義するための、ＩＭＧＴ（Lefranc et al., 2003, Dev Comparat Immunol 27:55-77）, Kabat （Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.）、およびChothia（Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol 273:927-948）のスキームに従って定義されるＣＤＲ配列を含む。表１Ｃ、表１Ｄ、および表１Ｅに記載のＣＤＲ配列は、それぞれＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、およびＣｈｏｔｈｉａの定義に従って表１Ａおよび表１Ｂに記載されるＣＤＲ配列由来のコンセンサス配列である。表２Ａおよび表２Ｂに記載のＣＤＲ配列は、それぞれ表１Ａおよび表１Ｂに記載のＣＤＲ配列の組み合わされたオーバーラップ領域であり、ＩＭＧＴ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ配列は、下線の太字で示される。表２Ｃに記載のＣＤＲ配列は、表１Ｃ、表１Ｄ、および表１Ｅに記載のコンセンサスＣＤＲ配列の組み合わされたオーバーラップ領域である。表３Ａおよび表３Ｂに記載のＣＤＲ配列は、それぞれ表１Ａおよび表１Ｂに示されるＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ領域である。表３Ｃに記載のＣＤＲ配列は、表１Ｃ、表１Ｄ、および表１Ｅに記載のＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ領域である。このような抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントのフレームワーク配列は、表１Ａまたは表１Ｂに記載のＶＨおよびＶＬ配列の天然マウスのフレームワーク配列であってもよいし、または非天然（例えば、ヒト化またはヒト）フレームワーク配列であってもよい。
【００１１】
【表１−１】
2021529524.tif 000003
【００１２】
【表１−２】
2021529524.tif 000004
【００１３】
【表１−３】
2021529524.tif 000005
【００１４】
【表１−４】
2021529524.tif 000006
【００１５】
【表２−１】
2021529524.tif 000007
【００１６】
【表２−２】
2021529524.tif 000008
【００１７】
【表２−３】
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【００１８】
【表３】
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【００１９】
【表４】
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【００２０】
【表５】
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【００２１】
【表６】
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【００２２】
【表７】
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【００２３】
【表８】
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【００２４】
【表９】
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【００２５】
【表１０】
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【００２６】
【表１１】
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【００２７】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、番号付けされた実施形態３から４１に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。したがって、特定の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号３、９、１５、２５、３１、３７、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１、８７、または９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号４、１０、１６、２６、３２、３８、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２、８８、または９４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号５、１１、１７、２７、３３、３９、４７、５３、５９、６５、７１、７７、８３、８９、または９５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号６、１２、１８、２８、３４、４０、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、または９６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号７、１３、１９、２９、３５、４１、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５、９１または９７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号８、１４、２０、３０、３６、４２、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６、または９２のアミノ酸配列を含む。
【００２８】
他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲおよび配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号９〜１１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１２〜１４の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１５〜１７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１８〜２０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２５〜２７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２８〜３０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３１〜３３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号３４〜３６の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３７〜３９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号４０〜４２の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４５〜４７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号４８〜５０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号５１〜５３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号５４〜５６の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号５７〜５９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号６０〜６２の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号６３〜６５の重鎖ＣＤＲおよび配列番号６６〜６８の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号６９〜７１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号７２〜７４の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号７５〜７７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号７８〜８０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号８１〜８３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号８４〜８６の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号８７〜８９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号９０〜９２の軽鎖ＣＤＲを含む。
【００２９】
本開示の抗体および抗原結合フラグメントは、マウス、キメラ、ヒト化またはヒトであってもよい。
【００３０】
さらなる態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号１および２の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号３および２の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【００３１】
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２３および２４の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号２３および２４の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【００３２】
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４〜１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの形態であってもよいし、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
【００３３】
抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメントの多量体、二重特異性単鎖可変フラグメント、および二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体の形態であってもよい。一部の実施形態において、単鎖可変フラグメントの多量体は、２価単鎖可変フラグメント、トリボディ（tribody）またはテトラボディ（tetrabody）から選択される。これらの実施形態の一部において、二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。
【００３４】
本開示の他の態様は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗体結合フラグメントをコードする核酸に関心を寄せている。一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントをコードする核酸の部分は、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。特定の態様において、本開示は、配列番号２１または配列番号４３と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖ヌクレオチド配列、および配列番号２２または配列番号４４と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する軽鎖ヌクレオチド配列によってコードされた重鎖および軽鎖可変領域を有する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）および宿主細胞も本開示の範囲内である。重鎖および軽鎖をコードする配列は、単一のベクターに存在していてもよいし、または別個のベクターに存在していてもよい。
【００３５】
本開示のさらに別の態様は、抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸（または核酸の対）、ベクター（または対のベクター）または本開示による宿主細胞、および生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物である。
【００３６】
本開示のさらに別の態様は、キメラ抗原受容体を作製する方法であって、コード領域の発現に好適な条件下で、本開示による核酸またはベクターを含む細胞をインキュベートすること、およびキメラ抗原受容体を収集することを含む方法である。
【００３７】
本開示の別の態様は、がんを検出する方法であって、細胞または組織サンプルを、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および抗体が細胞または組織サンプルに結合しているかどうかを検出することを含む方法である。
【００３８】
本開示のさらに別の態様は、がんを検出することで使用するための本開示による抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントである。
【００３９】
本開示のさらに別の態様は、がんを処置する方法であって、予防的または治療的有効量の本開示による抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法である。
【００４０】
本開示のさらに別の態様は、がんの処置で使用するための、本開示による抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物である。
【００４１】
本開示のさらに別の態様は、がんの処置のための医薬を製造するための、本開示による抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物の使用である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１−１】グリコシル化および非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドに対する１ＡＧおよび４ＡＧの結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。図１Ａ：ペプチドＣ２；図１Ｂ：ペプチドＣ３。
【図１−２】グリコシル化および非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドに対する１ＡＧおよび４ＡＧの結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。図１Ｃ：ペプチドＣ４；図１Ｄ：ペプチド７０。
【図１−３】グリコシル化および非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドに対する１ＡＧおよび４ＡＧの結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。図１Ｅ：ＧＳＴ；図１Ｆ：ＢＳＡでブロックされたウェル（対照）。
【図２−１】異なるグリコシル化および非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドに対する１ＡＧ（図２Ａ）の結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。
【図２−２】異なるグリコシル化および非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドに対する４ＡＧ（図２Ｂ）の結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。
【図３】抗原ＧＳＴＡに対する１ＡＧおよび４ＡＧを用いた抗体滴定アッセイの結果を示す図である。
【図４】腫瘍マイクロアレイＢＣＮ７２１ａを用いた抗体１ＡＧの免疫組織化学スクリーニングの結果を示す図である。
【図５】腫瘍マイクロアレイＢＣＮ７２１ａを用いた抗体４ＡＧの免疫組織化学スクリーニングの結果を示す図である。
【図６】腫瘍マイクロアレイＯＶ２４１ｃを用いた抗体１ＡＧの免疫組織化学スクリーニングの結果を示す図である。
【図７】腫瘍マイクロアレイＯＶ２４１ｃを用いた抗体４ＡＧの免疫組織化学スクリーニングの結果を示す図である。
【図８】腫瘍マイクロアレイＢＣ０００１１９を用いた抗体１ＡＧの免疫組織化学スクリーニングの結果を示す図である。
【図９】腫瘍マイクロアレイＢＣ０００１１９を用いた抗体４ＡＧの免疫組織化学スクリーニングの結果を示す図である。
【図１０】抗体５Ｅ５を用いたアラニンスキャニングの結果を示す図である。
【図１１】抗体１ＡＧを用いたアラニンスキャニングの結果を示す図である。
【図１２】抗体４ＡＧを用いたアラニンスキャニングの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
６．詳細な説明
６．１  抗体
本開示は、腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコフォームに向けられた新規の抗体を提供する。これらは、抗体１ＡＧおよび４ＡＧによって例示される。腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコシル化パターンを模擬するように、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化された、ＭＵＣ１中に存在するグリコシル化１５−ｍｅｒであるＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗体のスクリーニングにおいて、１ＡＧおよび４ＡＧを同定した。
【００４４】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、抗体１ＡＧおよび４ＡＧによって例示され、がんの診断および療法におけるツールとして有用である。
【００４５】
したがって、特定の態様において、本開示は、腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコフォーム（本明細書では「グリコＭＵＣ１」と称される）に、好ましくは、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化された１５−ｍｅｒのペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する抗体および抗原結合フラグメントを提供する。
【００４６】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、遺伝子操作された、および／またはそれ以外の方法で性質が改変されたものであってもよく、例えば、これらに限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、霊長類化抗体、単鎖抗体、二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体などが挙げられる。様々な実施形態において、抗体は、抗体の定常領域の全部または一部を含む。一部の実施形態において、定常領域は、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、およびＩｇＭから選択されるアイソタイプである。具体的な実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、ＩｇＧ１の定常領域のアイソタイプを含む。
【００４７】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術を介して産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、あらゆる真核、原核、またはファージクローンを含み、これらは、当業界において利用可能な、または公知のあらゆる手段によって単一のクローンから誘導される。本発明の開示において有用なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組合せの使用を含む当業界において公知の様々な技術を使用して調製することができる。ヒトにおける抗グリコＭＵＣ１抗体のインビボでの使用を含む本発明の開示の多くの使用において、キメラ、霊長類化、ヒト化、またはヒト抗体を、好適に使用することができる。
【００４８】
用語「キメラ」抗体は、本明細書で使用される場合、非ヒト免疫グロブリン、例えばラットまたはマウス抗体由来の可変配列と、典型的にはヒト免疫グロブリンテンプレートから選ばれるヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当業界において公知である。例えば、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7；Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221；Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202；米国特許第５，８０７，７１５号明細書；第４，８１６，５６７号明細書；および第４，８１６３９７号明細書を参照されたい。
【００４９】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化された」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むと予想される。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体ヒト化の方法は、当業界において公知である。例えば、全てが参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６１号明細書；第５，６９３，７６２号明細書；および第６，１８０，３７０号明細書；欧州特許第２３９４００号明細書；ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；欧州特許第５９２１０６号明細書；欧州特許第５１９５９６号明細書；Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498；Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814；Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい。
【００５０】
「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、さらに、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つまたは複数のヒト免疫グロブリンに関してトランスジェニックであり、内因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ方法などの当業界において公知の様々な方法によって作製することができる。これらのそれぞれが参照によりその全体が本明細書に組み入れられる、米国特許第４，４４４，８８７号明細書および第４，７１６，１１１号明細書；ならびにＰＣＴ国際公開第９８／４６６４５号パンフレット；国際公開第９８／５０４３３号パンフレット；国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９８／１６６５４号パンフレット；国際公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；および国際公開第９１／１０７４１号パンフレットを参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用することにより産生することもできる。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；米国特許第５，４１３，９２３号明細書；第５，６２５，１２６号明細書；第５，６３３，４２５号明細書；第５，５６９，８２５号明細書；第５，６６１，０１６号明細書；第５，５４５，８０６号明細書；第５，８１４，３１８号明細書；第５，８８５，７９３号明細書；第５，９１６，７７１号明細書；および第５，９３９，５９８号明細書を参照されたい。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「ガイドされる選択」と称される技術を使用して生成することができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体は、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択をガイドするのに使用される（Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903を参照）。
【００５１】
「霊長類化抗体」は、サル可変領域およびヒト定常領域を含む。霊長類化抗体を産生するための方法は、当業界において公知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、米国特許第５，６５８，５７０号明細書；第５，６８１，７２２号明細書；および第５，６９３，７８０号明細書を参照されたい。
【００５２】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、全長（無傷）抗体分子と、グリコＭＵＣ１と結合することが可能な抗原結合フラグメントの両方を含む。抗原結合フラグメントの例としては、一例として、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、単鎖Ｆｖフラグメントおよび単一ドメインフラグメントが挙げられる。
【００５３】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖（ＣＬ）の定常ドメイン、および重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における数個の残基の付加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化生成物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断によって産生される。抗体フラグメントの追加の化学的カップリングは、当業者公知である。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）１フラグメントは無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、無傷抗体より迅速に動物の循環から排除され、無傷抗体より少ない非特異的な組織結合を有する可能性がある（例えば、Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316を参照）。
【００５４】
「Ｆｖ」フラグメントは、完全な標的認識および結合部位を含有する抗体の最小フラグメントである。この領域は、しっかりとした非共有結合による会合での１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ−ＶＬ二量体）からなる。この立体配置で、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位が規定される。しばしば６つのＣＤＲは、抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら、一部の場合において、単一の可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体より低い親和性ではあるが標的を認識してそれに結合する能力を有する場合がある。
【００５５】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗原結合フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、この場合、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが標的結合にとって望ましい構造を形成することを可能にする。
【００５６】
「単一ドメイン抗体」は、グリコＭＵＣ１に十分な親和性を示す単一のＶＨまたはＶＬドメインで構成される。具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ化抗体である（例えば、Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38を参照）。
【００５７】
また本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、二重特異性および他の多重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体は、同一または異なる抗原上の２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、多くの場合、ヒトまたはヒト化抗体抗体である。本発明の開示において、結合特異性の一方は、グリコＭＵＣ１に向けられていてもよく、他方は、他のあらゆる抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来のタンパク質、ウイルスによってコードされたエンベロープタンパク質、細菌由来のタンパク質、または細菌表面タンパク質などに向けられていてもよい。特定の好ましい実施形態において、二重特異性および他の多重特異性を有する抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントは、第２のＭＵＣ１エピトープ、がん細胞上でＭＵＣ１と共発現される別のタンパク質上のエピトープ、または活性化Ｔ細胞などの異なる細胞上に存在する別のタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。本開示の二重特異性抗体は、ＩｇＧ様式の二重特異性抗体および単鎖ベースの二重特異性抗体を含む。
【００５８】
ＩｇＧ様式の本開示の二重特異性抗体は、当業界において公知の様々な種類のＩｇＧ様式の二重特異性抗体のいずれか、例えば、クアドローマ二重特異性抗体、「ノブ−イン−ホール（knobs-in-hole）」二重特異性抗体、ＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体、電荷対を有する二重特異性抗体、一般的な軽鎖二重特異性抗体、１アームの単鎖Ｆａｂ−免疫グロブリンガンマ二重特異性抗体、ジスルフィドで安定化されたＦｖ二重特異性抗体、ＤｕｅｔＭａｂ、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体、鎖交換操作されたドメインボディの二重特異性抗体、２アームのロイシンジッパーヘテロ二量体モノクローナル二重特異性抗体、κλボディの二重特異性抗体、二重可変ドメイン二重特異性抗体、および交差二重可変ドメイン二重特異性抗体であってもよい。例えば、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495-497；Milstein and Cuello, 1983, Nature 305:537-40；Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9:617-621；Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92；Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285:19637-46；Fischer et al., 2015 Nature Commun 6:6113；Schanzer et al., 2014, J Biol Chem 289:18693-706；Metz et al., 2012 Protein Eng Des Sel 25:571-80；Mazor et al., 2015 MAbs 7:377-89；Labrijn et al., 2013 Proc Natl Acad Sci USA 110:5145-50；Davis et al., 2010 Protein Eng Des Sel 23:195-202；Wranik et al., 2012, J Biol Chem 287:43331-9；Gu et al., 2015, PLoS One 10(5):e0124135；Steinmetz et al., 2016, MAbs 8(5):867-78；Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):1010-1020；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et al., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
【００５９】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂである。ＣｒｏｓｓＭａｂ技術は、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０８０２５１号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５２号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５３号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５４号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３３号パンフレット、国際公開第２０１６／０２０３０９号パンフレット、およびSchaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92で詳細に記載されている。簡単に言えば、ＣｒｏｓｓＭａｂ技術は、正しい鎖会合を促進する二重特異性ＩｇＧの１つのＦａｂアーム内の重鎖と軽鎖との間のドメインの交差に基づく。本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖が交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢ」抗体であってもよい。他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖の可変ドメインのみが交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ−ＶＬ」抗体であってもよい。さらに他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖の定常ドメインのみが交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１−ＣＬ」抗体であってもよい。ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１−ＣＬ抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢおよびＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ−ＶＬとは対照的に、予測された副産物を有さず、それゆえに、一部の実施形態において、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１−ＣＬ二重特異性抗体が好ましい。Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):1010-1020を参照されたい。
【００６０】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体である。Ｆａｂアーム交換二重特異性抗体を作製するための方法は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレットおよびLabrijn et al., 2014 Nat Protoc. 9(10):2450-63に記載されている。簡単に言えば、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体は、ＣＨ３ドメイン中に単一の一致する点突然変異を含有する２つの親ＩｇＧ１を別々に発現させること、インビトロで、酸化還元条件下で親ＩｇＧ１を混合して、半分の分子の組換えを可能にすること、および還元体を除去して鎖間のジスルフィド結合を再酸化し、それにより二重特異性抗体を形成することによって作製することができる。
【００６１】
本開示の二重特異性抗体は、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインを含んでいてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ  Ｆｃドメインである。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。別の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４  Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスの番号付け）を含むＩｇＧ４  Ｆｃドメインである。本明細書において別段の規定がない限り、Ｆｃドメインまたは定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MDに記載されたような、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付けシステムに従う。このアミノ酸置換は、インビボにおいてＩｇＧ４抗体のＦａｂアーム交換を低減させる（Stubenrauch et al., 2010, Drug Metabolism and Disposition 38:84-91を参照）。さらなる特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。よりさらに特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号４２に示される。
【００６２】
特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変を含む。ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の最も大規模なタンパク質−タンパク質相互作用の部位は、ＣＨ３ドメイン中にある。したがって、一実施形態において、前記改変は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメイン中にある。
【００６３】
具体的な実施形態において、前記Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変は、いわゆる「ノブ−イントゥー−ホール（knob-into-hole）」改変であり、これは、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」の改変、およびＦｃドメインの２つのサブユニットの他方に「ホール」の改変を含む。ノブ−イントゥー−ホール技術は、例えば米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第７，６９５，９３６号明細書；Ridgway et al., 1996, Prot Eng 9:617-621、およびCarter, J, 2001, Immunol Meth 248:7-15に記載されている。一般的に、本方法は、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害するように、突起部が空洞に入ることができるように、第１のポリペプチドの境界に突起部（「ノブ」）、および第２のポリペプチドの境界に対応する空洞（「ホール」）を導入することを含む。突起部は、第１のポリペプチドの境界からの小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えばアラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの境界に、突起部と同一または類似のサイズを有するそれに見合った空洞が作り出される。
【００６４】
したがって、一部の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基を、より大きい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えることによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の空洞に入ることができる突起部が生じ、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基を、より小さい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えることによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の突起部を入れることができる空洞が生じる。好ましくは、より大きい側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さい側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、およびバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起部および空洞は、例えば部位特異的突然変異誘発によってポリペプチドをコードする核酸を変更することにより、またはペプチド合成により作製することができる。
【００６５】
特定のこのような実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、３６６位におけるスレオニン残基は、トリプトファン残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、４０７位におけるチロシン残基は、バリン残基で置き換えられ（Ｙ４０７Ｖ）、任意選択で３６６位におけるスレオニン残基は、セリン残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位におけるロイシン残基は、アラニン残基で置き換えられている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、加えて、３５４位におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｓ３５４Ｃ）、または３５６位におけるグルタミン酸残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｅ３５６Ｃ）（特に３５４位におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられている）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、加えて、３４９位におけるチロシン残基は、システイン残基によって置き換えられている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。特定の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。
【００６６】
一部の実施形態において、固定のステアリング（例えば、Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285(25):19637-46に記載される通り）を使用して、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進することができる。
【００６７】
一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能への結合を低減する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
【００６８】
特定の実施形態において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａであり、最も具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態において、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つまたは複数である。特定の実施形態において、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
【００６９】
典型的には、同じ１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに存在する。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低減する。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１、または少なくとも１０分の１にする。
【００７０】
一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態において、アミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含み、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実施形態において、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。より特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含む（「Ｐ３２９Ｇ  ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）。具体的には、特定の実施形態において、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含む（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスの番号付け）、すなわち、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットのそれぞれにおいて、２３４位におけるロイシン残基は、アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３４Ａ）、２３５位におけるロイシン残基は、アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３５Ａ）、３２９位におけるプロリン残基は、グリシン残基によって置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ  ＥＵインデックスによる番号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００７１】
本開示の単鎖ベースの二重特異性抗体は、当業界において公知の様々な種類の単鎖ベースの二重特異性抗体、例えば二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、ダイアボディ、タンデムダイアボディ（ｔａｎｄａｂ）、二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ：dual-affinity retargeting molecule）、および二重特異性キラー細胞エンゲージャーのいずれかであり得る。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Loffler et al., 2000, Blood 95:2098-103；Holliger et al., 1993, Proc Natl Acad Sci USA, 90:6444-8；Kipriyanov et al., 1999, Mol Biol 293:41-56；Johnson et al., 2010, Mol Biol 399:436-49；Wiernik et al., 2013, Clin Cancer Res 19:3844-55；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et al., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
【００７２】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。ＢｉＴＥは、２つの抗原結合ドメインを有する単一のポリペプチド鎖分子であり、抗原結合ドメインの一方がＴ細胞抗原に結合し、第２の抗原結合ドメインが標的の表面上に提示される抗原に結合する（参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第０５／０６１５４７号パンフレット；Baeuerle et al., 2008, Drugs of the Future 33: 137-147；Bargou, et al., 2008, Science 321:974-977を参照）。したがって、本開示のＢｉＴＥは、Ｔ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、およびグリコＭＵＣ１に向けられた第２の抗原結合ドメインを有する。
【００７３】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である。ＤＡＲＴは、会合して（特に共有結合による相互作用を介して）少なくとも２つのエピトープ結合部位を形成する少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、これらのエピトープ結合部位は、同一のエピトープを認識してもよいし、または異なるエピトープを認識してもよい。ＤＡＲＴのポリペプチド鎖のそれぞれは、免疫グロブリン軽鎖可変領域および免疫グロブリン重鎖可変領域を含むが、これらの領域は、相互作用してエピトープ結合部位を形成しない。そうではなく、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、第１の）免疫グロブリン重鎖可変領域は、異なる（例えば、第２の）ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。同様に、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、第１の）の免疫グロブリン軽鎖可変領域は、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の異なる（例えば、第２の）免疫グロブリン重鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。ＤＡＲＴは、単一特異性、二重特異性、三重特異性などであってもよく、したがって、１、２、３またはそれより多くの異なるエピトープ（これらは、同じまたは異なる抗原のものであってもよい）と同時に結合することができる。ＤＡＲＴは、加えて、１価、２価、３価、４価、５価、６価などであってもよく、したがって、１、２、３、４、５、６つまたはそれより多くの分子と同時に結合することができる。ＤＡＲＴのこれら２つの特性（すなわち、特異性の程度および原子価を組み合わせて、例えば、４価の（すなわち、エピトープの４つのセットと結合することが可能な）二重特異性抗体（すなわち、２つのエピトープと結合することが可能な）などを産生することができる。ＤＡＲＴ分子は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２００６／１１３６６５号パンフレット、国際公開第２００８／１５７３７９号パンフレット、および国際公開第２０１０／０８０５３８号パンフレットに開示されている。
【００７４】
本開示の二重特異性抗体の一部の実施形態において、結合特異性の１つは、グリコＭＵＣ１に向けられ、他方は、免疫エフェクター細胞上で発現される抗原に向けられる。用語「免疫エフェクター細胞」または「エフェクター細胞」は、本明細書で使用される場合、活性化されて標的細胞の生存能に影響を与えることができる、哺乳類免疫系中の細胞の天然レパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞としては、リンパ球系細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、またはＢ細胞が挙げられることに加えて、単球またはマクロファージ、樹状細胞および好中性顆粒球などの骨髄系細胞も、免疫エフェクター細胞とみなすことができる。したがって、前記エフェクター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞または好中性顆粒球である。異常な細胞へのエフェクター細胞の補充は、エフェクター細胞が、それらが補充される異常な細胞を直接致死させるか、またはその致死を間接的に開始させることができるように、免疫エフェクター細胞が、異常な標的細胞に近接して取り込まれることを意味する。非特異的な相互作用を回避するために、本開示の二重特異性抗体は、体内の他の細胞と比較して、これらの免疫エフェクター細胞によって少なくとも過剰発現される免疫エフェクター細胞上の抗原を特異的に認識することが好ましい。免疫エフェクター細胞上に提示される標的抗原としては、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ６４、ＣＤ８９、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫｐ４６を挙げることができる。好ましくは、免疫エフェクター細胞上の抗原は、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ３である。
【００７５】
「ＣＤ３」は、本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）およびげっ歯類（例えばマウスおよびラット）などの哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物源由来のあらゆる天然ＣＤ３を指す。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＣＤ３に加えて、細胞中でのプロセシングに起因するＣＤ３のあらゆる形態を包含する。この用語はまた、ＣＤ３の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。免疫エフェクター細胞上の最も好ましい抗原は、ＣＤ３イプシロン鎖である。この抗原は、異常な細胞へのＴ細胞の補充において非常に有効であることが示されている。したがって、本開示の二重特異性抗体は、好ましくは、ＣＤ３イプシロンを特異的に認識する。ヒトＣＤ３イプシロンのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（www.uniprot.org）受託番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）、またはＮＣＢＩ（www.ncbi.nlm.nih.gov/）ＲｅｆＳｅｑ  ＮＰ＿０００７２４．１で示される。カニクイザル［カニクイザル（Macaca fascicularis）］ＣＤ３イプシロンのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８４９．１で示される。ヒトの治療的使用の場合、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３イプシロン鎖）に特異的に結合する二重特異性抗体が使用される。非ヒト動物や細胞株における前臨床試験の場合、前臨床試験に利用される種（例えば、霊長類の試験の場合、カニクイザルＣＤ３）においてＣＤ３結合ドメインがＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体を使用することができる。
【００７６】
本明細書で使用される場合、特定の種由来の標的抗原に「特異的に結合する」またはそれを「特異的に認識する」結合ドメインは、他の種由来の抗原への結合またはその認識を除外せず、したがって、結合ドメインの１つまたは複数が種間の交差反応性を有する抗体を包含する。例えば、ヒトＣＤ３に「特異的に結合する」またはそれを「特異的に認識する」ＣＤ３結合ドメインはまた、カニクイザル（cyomolgus）ＣＤ３に結合する、またはそれを認識することもでき、逆もまた同様である。
【００７７】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体Ｈ２Ｃ（ＰＣＴ国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレットに記載される）と競合することができる。他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体Ｖ９（Rodrigues et al., 1992, Int J Cancer Suppl 7:45-50および米国特許第６，０５４，２９７号明細書に記載される）と競合することができる。さらに他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体ＦＮ１８（Nooij et al., 1986, Eur J Immunol 19:981-984に記載される）と競合することができる。さらに他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体ＳＰ３４（Pessano et al., 1985, EMBO J 4:337-340に記載される）と競合することができる。
【００７８】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、誘導体化された抗体を含む。例えば、ただし限定されないが、誘導体化された抗体は、典型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結によって改変される。様々な化学修飾のいずれも、これらに限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などの公知の技術によって行うことができる。加えて、誘導体は、例えばａｍｂｒｘの技術を使用して、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含有していてもよい（例えば、Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2を参照）。
【００７９】
抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を変更するようにその配列が改変されている抗体またはフラグメントであり得る。例えば、一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体は、改変されていない抗体と比べて、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を低減するように改変されてもよく、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）への結合を低減するように改変される。ＦｃγＲへの結合は、ＦｃγＲ相互作用に必要な特定の領域で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって低減させることができる（例えば、Canfield and Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491；およびLund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662を参照）。抗体のＦｃγＲ結合能の低減はまた、ＦｃγＲ相互作用を頼る他のエフェクター機能、例えばオプソニン化、貪食および抗原依存性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）も低減することができる。
【００８０】
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を獲得するか、または改変されていない抗体に比べて改善する、例えば、ＦｃγＲ相互作用を強化するように改変された抗体および／または結合フラグメントを含む（例えば、米国特許出願公開第２００６／０１３４７０９号明細書を参照）。例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、対応する野生型定常領域より大きい親和性でＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡと結合する定常領域を有していてもよい。
【００８１】
したがって、本開示の抗体は、オプソニン化、貪食、またはＡＤＣＣの増加または減少を引き起こす生物学的活性における変更を有していてもよい。このような変更は、当業界において公知である。例えば、ＡＤＣＣ活性を低減する抗体における改変は、米国特許第５，８３４，５９７号明細書に記載されている。例示的なＡＤＣＣを低下させるバリアントは、残基２３６が欠失し、残基２３４、２３５および２３７（ＥＵの番号付けを使用）がアラニンで置換された「突然変異体３」に相当する（米国特許第５，８３４，５９７号明細書の図４に示される）。別の例示的なＡＤＣＣを低減するバリアントは、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ  ＬＡＬＡ」）を含む。アミノ酸置換の「Ｐ３２９Ｇ  ＬＡＬＡ」の組合せは、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるＰＣＴ公報ＷＯ２０１２／１３０８３１号に記載されたように、ヒトＩｇＧ１  ＦｃドメインのＦｃγ受容体結合（同様に補体結合も）をほぼ完全に破壊する。ＷＯ２０１２／１３０８３１はまた、このような突然変異体Ｆｃドメインの調製方法、およびその特性、例えばＦｃ受容体結合またはエフェクター機能を決定するための方法も記載している。
【００８２】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、低いレベルのフコースを有するか、またはフコースを欠く。フコースを欠く抗体は、特に低用量の抗体で、ＡＤＣＣ活性の強化との相関が示されている。Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740；Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73を参照されたい。フコースが少ない抗体を調製する方法としては、ラット骨髄腫ＹＢ２／０細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６６２）での増殖が挙げられる。ＹＢ２／０細胞は、ポリペプチドのフコシル化に必要な酵素であるα−１，６−フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８  ｍＲＮＡを低いレベルで発現する。
【００８３】
一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、バイセクト型オリゴ糖を含み、例えば、Ｆｃドメインに結合した２分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されているものを含む。このようなバリアントは、上述したように、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えば、Umana et al., 1999, Nat Biotechnol 17:176-180；Ferrara et al., 2006, Biotechn Bioeng 93: 851-861；ＷＯ９９／５４３４２；ＷＯ２００４／０６５５４０；およびＷＯ２００３／０１１８７８に記載されている。
【００８４】
さらに別の態様において、抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、例えば、ＦｃＲｎ相互作用に関与する特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって、胎児Ｆｃ受容体、ＦｃＲｎへのその結合親和性を増加または減少させる改変を含む（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号パンフレットを参照）。特定の実施形態において、ＩｇＧクラスの抗グリコＭＵＣ１抗体は、重鎖定常領域のアミノ酸残基２５０、３１４、および４２８の少なくとも１つが、例えば２５０および４２８位、または２５０および３１４位、または３１４および４２８位、または２５０、３１４、および４２８位で、単独で、またはそれらのいずれかの組合せで置換されるように突然変異しており、具体的な組合せは２５０および４２８位である。２５０位の場合、置換されるアミノ酸残基は、スレオニン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。３１４位の場合、置換されるアミノ酸残基は、ロイシン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。４２８位の場合、置換されるアミノ酸残基は、メチオニン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。好適なアミノ酸置換の具体的な組合せは、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，２１７，７９７号明細書の表１で特定されている。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、それにより抗体を分解から保護し、その半減期を増加させる。
【００８５】
さらに他の態様において、本開示の抗原結合フラグメントの抗グリコＭＵＣ１抗体は、例えばJung and Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966；Yazaki et al., 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug. 17；および米国特許出願第２００７／０２８０９３１号明細書に記載されるように、その高度可変領域の１つまたは複数に挿入された１つまたは複数のアミノ酸を有する。
【００８６】
診断適用に特に有用なさらに他の態様において、本開示の抗原結合フラグメントの抗グリコＭＵＣ１抗体は、検出可能な部分に取り付けられている。検出可能な部分としては、放射性部分、比色分子、蛍光部分、化学発光部分、抗原、酵素、検出可能なビーズ（例えば磁気または高電子密度（例えば、金）ビーズ）、または別の分子に結合する分子（例えば、ビオチンまたはストレプトアビジン））が挙げられる。
【００８７】
放射性同位体または放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉを挙げることができる。
【００８８】
蛍光標識としては、ローダミン、ランタニド蛍光、フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ＧＦＰ（ＧＦＰは「Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（緑色蛍光タンパク質）」を表す）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド（phthaldehyde）、およびフルオレサミンを挙げることができる。
【００８９】
酵素標識としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ６ＰＤＨ」）、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼおよびペルオキシダーゼを挙げることができる。
【００９０】
化学発光標識または化学発光物質（chemiluminescer）、例えばイソルミノール、ルミノールおよびジオキセタン
【００９１】
他の検出可能な部分としては、ビオチン、ジゴキシゲニンまたは５−ブロモデオキシウリジンなどの分子が挙げられる。
【００９２】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、１ＡＧまたは１ＡＧの重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体もしくは抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号１および２）と競合する。
【００９３】
他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、４ＡＧまたは４ＡＧの重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体もしくは抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号２３および２４）と競合する。
【００９４】
競合は、１ＡＧまたは４ＡＧと結合するグリコＭＵＣ１エピトープまたは１ＡＧまたは４ＡＧと結合するエピトープを含有するグリコシル化ＭＵＣ１ペプチド、例えば、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化された１５−ｍｅｒのペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）を発現する細胞でアッセイすることができる。対照として、エピトープまたはグリコシル化されていないペプチドを発現しない細胞を使用することができる。
【００９５】
競合アッセイを行うことができる細胞としては、これらに限定されないが、乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄ、およびグリコＭＵＣ１エピトープを発現するように操作される組換え細胞が挙げられる。１つの非限定的な例において、ＣＨＯ  ＩｄＩＤ細胞は、ＵＤＰ−Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃエピメラーゼを欠き、それぞれＧａｌＮＡｃおよびＧａｌの外因性の付加の非存在下でＧａｌＮＡｃのＯ−グリコシル化およびガラクトシル化が不十分なものであり、これは、ＭＵＣ１を発現するように操作され、ＧａｌＮＡｃの非存在または存在下で増殖し、後者の場合、１ＡＧおよび４ＡＧが結合するＭＵＣ１のＴｎグリコフォームを発現する細胞を生じる。ＭＵＣ１のグリコシル化されていない形態を発現する細胞は、陰性対照として使用することができる。
【００９６】
競合に関するアッセイとしては、これらに限定されないが、放射活性物質標識によるイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩＳＡ、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）アッセイおよび表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）アッセイが挙げられる。
【００９７】
参照抗体と試験抗体との間の抗体競合アッセイ（種またはアイソタイプに関わりなく）を実行することにおいて、最初に、後続の同定が可能になるように、検出可能な標識、例えばフルオロフォア、ビオチンまたは酵素標識（または放射性標識でも）で参照を標識してもよい。この場合、グリコＭＵＣ１を発現する細胞は、標識されていない試験抗体とインキュベートされ、標識された参照抗体が添加され、結合した標識の強度が測定される。試験抗体が、オーバーラップするエピトープに結合することによって標識された参照抗体と競合する場合、強度は、試験抗体なしで行われた対照反応と比較して減少すると予想される。
【００９８】
このアッセイの具体的な実施形態において、アッセイ条件（例えば、特定された細胞密度）下における最大の結合の８０％をもたらす標識された参照抗体の濃度（「ｃｏｎｃ８０％」）がまず決定され、競合アッセイは、標識されていない試験抗体の１０×ｃｏｎｃ８０％および標識された参照抗体のｃｏｎｃ８０％行われる。
【００９９】
阻害は、阻害定数、またはＫｉとして表すことができ、これは、以下の式：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［参照Ａｂ濃度］／Ｋｄ）
に従って計算され、
式中、ＩＣ５０は、参照抗体の結合の５０％低減をもたらす試験抗体の濃度であり、Ｋｄは、参照抗体の解離定数であり、これは、グリコＭＵＣ１に対するその親和性の尺度である。本明細書で開示される抗グリコＭＵＣ１抗体と競合する抗体は、本明細書に記載されるアッセイ条件下で、１０ｐＭから１０ｎＭのＫｉを有し得る。
【０１００】
様々な実施形態において、使用される特定のアッセイ条件下で最大の結合の８０％である参照抗体濃度、および参照抗体濃度の１０倍高い試験抗体濃度で、少なくとも約２０％またはそれより多く、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくはそれよりさらに多く、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで、試験抗体が参照抗体の結合を減少させる場合、試験抗体は参照抗体と競合するとみなされる。
【０１０１】
競合アッセイの一例では、グリコシル化ＭＵＣ１である１５−ｍｅｒのペプチドを、プレートをペプチドの溶液と接触させることによって（例えば、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの濃度で４℃で一晩）、固体表面、例えばマイクロウェルプレート上に接着させる。プレートを洗浄し（例えば、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０）、ブロックする（例えば、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬで）。ＥＬＩＳＡ緩衝液（例えば、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０）中の飽和未満の量のビオチン化１ＡＧおよび４ＡＧ（例えば、８０ｎｇ／ｍＬの濃度での）および連続希釈した（例えば、２．８μｇ／ｍＬ、８．３μｇ／ｍＬ、または２５μｇ／ｍＬの濃度での）標識されていない１ＡＧおよび４ＡＧ（「参照」抗体）または競合する抗グリコＭＵＣ１抗体（「試験」抗体）抗体の混合物をウェルに添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１時間インキュベートする。プレートを洗浄し、各ウェルにＥＬＩＳＡ緩衝液で希釈した１μｇ／ｍＬのＨＲＰがコンジュゲートしたストレプトアビジンを添加し、プレートを１時間インキュベートする。プレートを洗浄し、基質（例えば、ＴＭＢ、Ｂｉｏｆｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって結合した抗体を検出した。停止緩衝液（例えば、Ｂｉｏ  ＦＸ  Ｓｔｏｐ試薬、Ｂｉｏｆｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって反応を止め、マイクロプレートリーダー（例えば、ＶＥＲＳＡｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、吸光度を６５０ｎｍで測定する。
【０１０２】
１ＡＧおよび４ＡＧと別の抗グリコＭＵＣ１抗体との競合を試験するのに、この競合アッセイにおけるバリエーションも使用することができる。例えば、特定の態様において、抗グリコＭＵＣ１抗体は参照抗体として使用され、１ＡＧおよび４ＡＧは試験抗体として使用される。加えて、グリコシル化ＭＵＣ１である１５−ｍｅｒのペプチドの代わりに、培養中に細胞表面上で（例えば上述の細胞型の１つの表面上で）発現される膜結合型グリコＭＵＣ１を使用してもよい。一般的に、約１０４から１０６個の形質転換体、例えば、約１０５個の形質転換体が使用される。競合アッセイの他の様式は当業界において公知であり、採用することができる。
【０１０３】
様々な実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、抗グリコＭＵＣ１抗体が、０．０８μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の濃度で（例えば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、標識された１ＡＧおよび４ＡＧの結合を、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで低減させる（例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、標識された１ＡＧおよび４ＡＧの結合を、５０％から７０％低減させる）。
【０１０４】
他の実施形態において、１ＡＧおよび４ＡＧが、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の濃度で（例えば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、１ＡＧおよび４ＡＧは、本開示の標識された抗グリコＭＵＣ１抗体の結合を、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで低減させる（例えば、１ＡＧおよび４ＡＧは、本開示の標識された抗グリコＭＵＣ１抗体の結合を、５０％から７０％低減させる）。
【０１０５】
前述のアッセイにおいて、１ＡＧおよび４ＡＧ抗体は、１ＡＧおよび４ＡＧのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変領域を含むあらゆる抗体または抗原結合フラグメント、例えば１ＡＧおよび４ＡＧのヒト化またはキメラカウンターパートで置き換えることができる。
【０１０６】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、１ＡＧまたは４ＡＧのエピトープと同じかまたは類似したエピトープを有する。本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのエピトープは、例えば実施例９に記載されたように、アラニンスキャニングを実行することによって特徴付けることができる。実施例９は、それぞれＭＵＣ１ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０５）と、１３〜２４位のうちの１つにおけるアラニン点突然変異によって（またはＭＵＣ１ペプチドがアラニンを有する場合、グリシン点突然変異によって）異なる１２種の糖ペプチド（配列番号１０６〜１１７）のライブラリーを記載している。ペプチドのそれぞれへの抗体または抗原結合フラグメントの結合をＥＬＩＳＡで測定することによって、抗体または抗原結合フラグメントのエピトープをマッピングすることができる。
【０１０７】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１０８】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）の両方に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１０９】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１０】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１１】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＡＡＨＧＶ（配列番号１１７）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１２】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１３】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１４】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１５】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１６】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１７】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）、およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１８】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ配列番号１１２）、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）およびＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）のそれぞれに結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す。
【０１１９】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、表１Ａまたは表１Ｂに記載の重鎖および／または軽鎖可変配列（またはヌクレオチド配列によってコードされたもの）を含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、表１Ａ、表１Ｂ、表１Ｃ、表１Ｄ、表１Ｅ、表２Ａ、表２Ｂ、表２Ｃ、表３Ａ、または表３Ｂに記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列（またはヌクレオチド配列によってコードされたもの）を含む。このような抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントのフレームワーク配列は、表１Ａまたは表１Ｂに記載のＶＨおよびＶＬ配列の天然マウスのフレームワーク配列であってもよいし、または非天然（例えば、ヒト化またはヒト）フレームワーク配列であってもよい。
【０１２０】
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号１および２と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【０１２１】
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号２３および２４の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【０１２２】
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、重鎖可変フラグメントのＮ末端から軽鎖可変フラグメントまでを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖ重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４〜１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの形態であってもよいし、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
【０１２３】
６．２  抗体−薬物コンジュゲート
本開示の別の態様は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。ＡＤＣは、一般的に、１つまたは複数のリンカーを介して１つまたは複数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質がそれに連結された、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体および／または結合フラグメントを含む。具体的な実施形態において、ＡＤＣは、構造式（Ｉ）：
［Ｄ−Ｌ−ＸＹ］ｎ−Ａｂ
による化合物またはその塩であり、式中、各「Ｄ」は、それぞれ独立して、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質（「薬物」）を表し；各「Ｌ」は、それぞれ独立して、リンカーを表し；「Ａｂ」は、抗グリコＭＵＣ１抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントを表し；各「ＸＹ」は、リンカー上の官能基Ｒｘと抗体上の「相補的」官能基Ｒｙとの間で形成された連結を表し、ｎは、ＡＤＣに連結された薬物の数、またはＡＤＣの薬物対抗体の比率（ＤＡＲ）を表す。
【０１２４】
ＡＤＣを含み得る様々な抗体（Ａｂ）の具体的な実施形態は、上述した抗グリコＭＵＣ１抗体および／または結合フラグメントの様々な実施形態を含む。
【０１２５】
構造式（Ｉ）のＡＤＣおよび／または塩の一部の具体的な実施形態において、各Ｄが同じであり、および／または各Ｌが同じである。
【０１２６】
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣを構成し得る細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質（Ｄ）およびリンカー（Ｌ）に加えて、ＡＤＣに連結された多数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質の具体的な実施形態を、以下でより詳細に説明する。
【０１２７】
６．２．１．細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質
細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、細胞、特にがんおよび／または腫瘍細胞の増殖および／または複製を阻害する、および／またはそのような細胞を致死させることがわかっているあらゆる薬剤であり得る。細胞傷害性および／または細胞増殖抑制特性を有する多数の薬剤が文献公知である。細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質のクラスの非限定的な例としては、一例として、これらに限定されないが、放射性核種、アルキル化剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＤＮＡ挿入剤（例えば、副溝結合剤、例えば副溝バインダー）、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質、細胞周期モジュレーター、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ミトコンドリア阻害剤、および抗有糸分裂剤が挙げられる。
【０１２８】
これらの様々なクラスのうち特定のものの範囲内の薬剤の具体的な非限定的な例を以下に示す。
【０１２９】
アルキル化剤：アサレー（asaley）（（Ｌ−ロイシン、Ｎ−［Ｎ−アセチル−４−［ビス−（２−クロロエチル）アミノ］−ＤＬ−フェニルアラニル］−、エチルエステル；ＮＳＣ１６７７８０；ＣＡＳ登録番号３５７７８９７））；ＡＺＱ（（１，４−シクロヘキサジエン−１，４−ジカルバミン酸、２，５−ビス（１−アジリジニル）−３，６−ジオキソ−、ジエチルエステル；ＮＳＣ１８２９８６；ＣＡＳ登録番号５７９９８６８２））；ＢＣＮＵ（（Ｎ，Ｎ’−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレア；ＮＳＣ４０９９６２；ＣＡＳ登録番号１５４９３８））；ブスルファン（１，４−ブタンジオールジメタンスルホネート；ＮＳＣ７５０；ＣＡＳ登録番号５５９８１）；（カルボキシフタラト）白金（ＮＳＣ２７１６４；ＣＡＳ登録番号６５２９６８１３）；ＣＢＤＣＡ（（ｃｉｓ−（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）ジアンミン白金（ＩＩ））；ＮＳＣ２４１２４０；ＣＡＳ登録番号４１５７５９４４））；ＣＣＮＵ（（Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−シクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア；ＮＳＣ７９０３７；ＣＡＳ登録番号１３０１０４７４））；ＣＨＩＰ（イプロプラチン；ＮＳＣ２５６９２７）；クロラムブシル（ＮＳＣ３０８８；ＣＡＳ登録番号３０５０３３）；クロロゾトシン（（２−［［［（２−クロロエチル）ニトロソアミノ］カルボニル］アミノ］−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース；ＮＳＣ１７８２４８；ＣＡＳ登録番号５４７４９９０５））；シスプラチン（シスプラチン；ＮＳＣ１１９８７５；ＣＡＳ登録番号１５６６３２７１）；クロメソン（clomesone）（ＮＳＣ３３８９４７；ＣＡＳ登録番号８８３４３７２０）；シアノモルホリノドキソルビシン（ＮＣＳ３５７７０４；ＣＡＳ登録番号８８２５４０７３）；シクロジソン（cyclodisone）（ＮＳＣ３４８９４８；ＣＡＳ登録番号９９５９１７３８）；ジアンヒドロガラクチトール（５，６−ジエポキシズルシトール；ＮＳＣ１３２３１３；ＣＡＳ登録番号２３２６１２０３）；フルオロドパン（fluorodopan）（（５−［（２−クロロエチル）−（２−フルオロエチル）アミノ］−６−メチル−ウラシル；ＮＳＣ７３７５４；ＣＡＳ登録番号８３４９１３）；ヘプスルファム（ＮＳＣ３２９６８０；ＣＡＳ登録番号９６８９２５７８）；ヒカントン（ＮＳＣ１４２９８２；ＣＡＳ登録番号２３２５５９３８）；メルファラン（ＮＳＣ８８０６；ＣＡＳ登録番号３２２３０７２）；メチルＣＣＮＵ（（１−（２−クロロエチル）−３−（ｔｒａｎｓ−４−メチルシクロヘキサン）−１−ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４４１；１３９０９０９６）；マイトマイシンＣ（ＮＳＣ２６９８０；ＣＡＳ登録番号５００７７）；ミトゾロミド（mitozolamide）（ＮＳＣ３５３４５１；ＣＡＳ登録番号８５６２２９５３）；ナイトロジェンマスタード（（ビス（２−クロロエチル）メチルアミンヒドロクロリド；ＮＳＣ７６２；ＣＡＳ登録番号５５８６７）；ＰＣＮＵ（（１−（２−クロロエチル）−３−（２，６−ジオキソ−３−ピペリジル）−１−ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４６６；ＣＡＳ登録番号１３９０９０２９））；ピペラジンアルキル化薬（（１−（２−クロロエチル）−４−（３−クロロプロピル）−ピペラジンジヒドロクロ��ド；ＮＳＣ３４４００７））；ピペラジンジオン（ＮＳＣ１３５７５８；ＣＡＳ登録番号４１１０９８０２）；ピポブロマン（（Ｎ，Ｎ−ビス（３−ブロモプロピオニル）ピペラジン；ＮＳＣ２５１５４；ＣＡＳ登録番号５４９１１））；ポルフィロマイシン（Ｎ−メチルマイトマイシンＣ；ＮＳＣ５６４１０；ＣＡＳ登録番号８０１５２５）；スピロヒダントインマスタード（ＮＳＣ１７２１１２；ＣＡＳ登録番号５６６０５１６４）；テロキシロン（teroxirone）（トリグリシジルイソシアヌレート；ＮＳＣ２９６９３４；ＣＡＳ登録番号２４５１６２９）；テトラプラチン（ＮＳＣ３６３８１２；ＣＡＳ登録番号６２８１６９８２）；チオテパ（Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−トリ−１，２−エタンジイルチオホスホルアミド；ＮＳＣ６３９６；ＣＡＳ登録番号５２２４４）；トリエチレンメラミン（ＮＳＣ９７０６；ＣＡＳ登録番号５１１８３）；ウラシルナイトロジェンマスタード（デスメチルドパン（desmethyldopan）；ＮＳＣ３４４６２；ＣＡＳ登録番号６６７５１）；Ｙｏｓｈｉ−８６４（（ビス（３−メシルオキシプロピル）アミンヒドロクロリド；ＮＳＣ１０２６２７；ＣＡＳ登録番号３４５８２２８）。
【０１３０】
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシン（ＮＳＣ９４６００；ＣＡＳ登録番号７６８９−０３−４）；様々なカンプトテシン誘導体および類似体（例えば、ＮＳＣ１００８８０、ＮＳＣ６０３０７１、ＮＳＣ１０７１２４、ＮＳＣ６４３８３３、ＮＳＣ６２９９７１、ＮＳＣ２９５５００、ＮＳＣ２４９９１０、ＮＳＣ６０６９８５、ＮＳＣ７４０２８、ＮＳＣ１７６３２３、ＮＳＣ２９５５０１、ＮＳＣ６０６１７２、ＮＳＣ６０６１７３、ＮＳＣ６１０４５８、ＮＳＣ６１８９３９、ＮＳＣ６１０４５７、ＮＳＣ６１０４５９、ＮＳＣ６０６４９９、ＮＳＣ６１０４５６、ＮＳＣ３６４８３０、およびＮＳＣ６０６４９７）；モルホリンイソキソルビシン（morpholinisoxorubicin）（ＮＳＣ３５４６４６；ＣＡＳ登録番号８９１９６０４３）；ＳＮ−３８（ＮＳＣ６７３５９６；ＣＡＳ登録番号８６６３９−５２−３）。
【０１３１】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：ドキソルビシン（ＮＳＣ１２３１２７；ＣＡＳ登録番号２５３１６４０９）；アモナフィド（ベンゾイソキノリンジオン；ＮＳＣ３０８８４７；ＣＡＳ登録番号６９４０８８１７）；ｍ−ＡＭＳＡ（（４’−（９−アクリジニルアミノ）−３’−メトキシメタンスルホンアニリド；ＮＳＣ２４９９９２；ＣＡＳ登録番号５１２６４１４３））；アントラピラゾール誘導体（（ＮＳＣ３５５６４４）；エトポシド（ＶＰ−１６；ＮＳＣ１４１５４０；ＣＡＳ登録番号３３４１９４２０）；ピラゾロアクリジン（（ピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２（６Ｈ）−プロパンアミン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロ−、モノメタンスルホネート；ＮＳＣ３６６１４０；ＣＡＳ登録番号９９００９２１９）；ビサントレンヒドロクロリド（ＮＳＣ３３７７６６；ＣＡＳ登録番号７１４３９６８４）；ダウノルビシン（ＮＳＣ８２１１５１；ＣＡＳ登録番号２３５４１５０６）；デオキシドキソルビシン（ＮＳＣ２６７４６９；ＣＡＳ登録番号６３９５００６１）；ミトキサントロン（ＮＳＣ３０１７３９；ＣＡＳ登録番号７０４７６８２３）；メノガリル（ＮＳＣ２６９１４８；ＣＡＳ登録番号７１６２８９６１）；Ｎ，Ｎ−ジベンジルダウノマイシン（ＮＳＣ２６８２４２；ＣＡＳ登録番号７０８７８５１２）；オキサントラゾール（oxanthrazole）（ＮＳＣ３４９１７４；ＣＡＳ登録番号１０５１１８１２５）；ルビダゾン（rubidazone）（ＮＳＣ１６４０１１；ＣＡＳ登録番号３６５０８７１１）；テニポシド（ＶＭ−２６；ＮＳＣ１２２８１９；ＣＡＳ登録番号２９７６７２０２）。
【０１３２】
ＤＮＡ挿入剤：アントラマイシン（ＣＡＳ登録番号４８０３２７４）；チカマイシンＡ（ＣＡＳ登録番号８９６７５３７６）；トマイマイシン（ＣＡＳ登録番号３５０５０５５６）；ＤＣ−８１（ＣＡＳ登録番号８１３０７２４６）；シビロマイシン（ＣＡＳ登録番号１２６８４３３２）；ピロロベンゾジアゼピン誘導体（ＣＡＳ登録番号９４５４９００９５）；ＳＧＤ−１８８２（（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−４（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン）；ＳＧ２０００（ＳＪＧ−１３６；（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（プロパン−１，３−ジイルビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン）；ＮＳＣ６９４５０１；ＣＡＳ登録番号２３２９３１５７６）。
【０１３３】
ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質：Ｌ−アラノシン（ＮＳＣ１５３３５３；ＣＡＳ登録番号５９１６３４１６）；５−アザシチジン（ＮＳＣ１０２８１６；ＣＡＳ登録番号３２０６７２）；５−フルオロウラシル（ＮＳＣ１９８９３；ＣＡＳ登録番号５１２１８）；アシビシン（ＮＳＣ１６３５０１；ＣＡＳ登録番号４２２２８９２２）；アミノプテリン誘導体Ｎ−［２−クロロ−５−［［（２，４−ジアミノ−５−メチル−６−キナゾリニル）メチル］アミノ］ベンゾイル−］Ｌ−アスパラギン酸（ＮＳＣ１３２４８３）；アミノプテリン誘導体Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−５−エチル−６−キナゾリニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ−アスパラギン酸（ＮＳＣ１８４６９２）；アミノプテリン誘導体Ｎ−［２−クロロ−４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ−アスパラギン酸一水和物（ＮＳＣ１３４０３３）；葉酸代謝拮抗薬（antifo）（（Ｎα−（４−アミノ−４−デオキシプテロイル）−Ｎ７−ヘミフタロイル−Ｌ−オルニチン；ＮＳＣ６２３０１７））；ベーカー（Baker）の可溶性葉酸代謝拮抗薬（antifol）（ＮＳＣ１３９１０５；ＣＡＳ登録番号４１１９１０４２）；ジクロロアリルローソン（lawsone）（（２−（３，３−ジクロロアリル）−３−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン；ＮＳＣ１２６７７１；ＣＡＳ登録番号３６４１７１６０）；ブレキナル（ＮＳＣ３６８３９０；ＣＡＳ登録番号９６２０１８８６）；フトラフル（（プロドラッグ；５−フルオロ−１−（テトラヒドロ−２−フリル）−ウラシル；ＮＳＣ１４８９５８；ＣＡＳ登録番号３７０７６６８９）；５，６−ジヒドロ−５−アザシチジン（ＮＳＣ２６４８８０；ＣＡＳ登録番号６２４０２３１７）；メトトレキセート（ＮＳＣ７４０；ＣＡＳ登録番号５９０５２）；メトトレキセート誘導体（Ｎ−［［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］−１−ナフタレニル］カルボニル］Ｌ−グルタミン酸；ＮＳＣ１７４１２１）；ＰＡＬＡ（（Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパルテート；ＮＳＣ２２４１３１；ＣＡＳ登録番号６０３４２５５６５）；ピラゾフリン（ＮＳＣ１４３０９５；ＣＡＳ登録番号３０８６８３０５）；トリメトレキセート（ＮＳＣ３５２１２２；ＣＡＳ登録番号８２９５２６４５）。
【０１３４】
ＤＮＡ代謝拮抗物質：３−ＨＰ（ＮＳＣ９５６７８；ＣＡＳ登録番号３８１４７９７）；２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＮＳＣ２７６４０；ＣＡＳ登録番号５０９１９）；５−ＨＰ（ＮＳＣ１０７３９２；ＣＡＳ登録番号１９４９４８９４）；α−ＴＧＤＲ（α−２’−デオキシ−６−チオグアノシン；ＮＳＣ７１８５１  ＣＡＳ登録番号２１３３８１５）；アフィジコリングリシネート（ＮＳＣ３０３８１２；ＣＡＳ登録番号９２８０２８２２）；ａｒａ  Ｃ（シトシンアラビノシド；ＮＳＣ６３８７８；ＣＡＳ登録番号６９７４９）；５−アザ−２’−デオキシシチジン（ＮＳＣ１２７７１６；ＣＡＳ登録番号２３５３３３５）；β−ＴＧＤＲ（β−２’−デオキシ−６−チオグアノシン；ＮＳＣ７１２６１；ＣＡＳ登録番号７８９６１７）；シクロシチジン（ＮＳＣ１４５６６８；ＣＡＳ登録番号１０２１２２５６）；グアナゾール（ＮＳＣ１８９５；ＣＡＳ登録番号１４５５７７２）；ヒドロキシ尿素（ＮＳＣ３２０６５；ＣＡＳ登録番号１２７０７１）；イノシングリコジアルデヒド（ＮＳＣ１１８９９４；ＣＡＳ登録番号２３５９０９９０）；マクベシンＩＩ（ＮＳＣ３３０５００；ＣＡＳ登録番号７３３４１７３８）；ピラゾロイミダゾール（ＮＳＣ５１１４３；ＣＡＳ登録番号６７１４２９０）；チオグアニン（ＮＳＣ７５２；ＣＡＳ登録番号１５４４２７）；チオプリン（ＮＳＣ７５５；ＣＡＳ登録番号５０４４２）。
【０１３５】
細胞周期モジュレーター：シリビニン（ＣＡＳ登録番号２２８８８−７０−６）；没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ；ＣＡＳ登録番号９８９５１５）；プロシアニジン誘導体（例えば、プロシアニジンＡ１［ＣＡＳ登録番号１０３８８３０３０］、プロシアニジンＢ１［ＣＡＳ登録番号２０３１５２５７］、プロシアニジンＢ４［ＣＡＳ登録番号２９１０６５１２］、アレカタニン（arecatannin）Ｂ１［ＣＡＳ登録番号７９７６３２８３］）；イソフラボン（例えば、ゲニステイン［４％５，７−トリヒドロキシイソフラボン；ＣＡＳ登録番号４４６７２０］、ダイゼイン［４’，７−ジヒドロキシイソフラボン、ＣＡＳ登録番号４８６６６８］；インドール−３−カルビノール（ＣＡＳ登録番号７０００６１）；ケルセチン（ＮＳＣ９２１９；ＣＡＳ登録番号１１７３９５）；エストラムスチン（ＮＳＣ８９２０１；ＣＡＳ登録番号２９９８５７４）；ノコダゾール（ＣＡＳ登録番号３１４３０１８９）；ポドフィロトキシン（ＣＡＳ登録番号５１８２８５）；酒石酸ビノレルビン（ＮＳＣ６０８２１０；ＣＡＳ登録番号１２５３１７３９７）；クリプトフィシン（ＮＳＣ６６７６４２；ＣＡＳ登録番号１２４６８９６５２）。
【０１３６】
キナーゼ阻害剤：アファチニブ（ＣＡＳ登録番号８５０１４０７２６）；アキシチニブ（ＣＡＳ登録番号３１９４６０８５０）；ＡＲＲＹ−４３８１６２（ビニメチニブ）（ＣＡＳ登録番号６０６１４３８９９）；ボスチニブ（ＣＡＳ登録番号３８０８４３７５４）；カボザンチニブ（ＣＡＳ登録番号１１４０９０９４８３）；セリチニブ（ＣＡＳ登録番号１０３２９００２５６）；クリゾチニブ（ＣＡＳ登録番号８７７３９９５２５）；ダブラフェニブ（ＣＡＳ登録番号１１９５７６５４５７）；ダサチニブ（ＮＳＣ７３２５１７；ＣＡＳ登録番号３０２９６２４９８）；エルロチニブ（ＮＳＣ７１８７８１；ＣＡＳ登録番号１８３３１９６９９）；エベロリムス（ＮＳＣ７３３５０４；ＣＡＳ登録番号１５９３５１６９６）；フォスタマチニブ（ＮＳＣ７４５９４２；ＣＡＳ登録番号９０１１１９３５５）；ゲフィチニブ（ＮＳＣ７１５０５５；ＣＡＳ登録番号１８４４７５３５２）；イブルチニブ（ＣＡＳ登録番号９３６５６３９６１）；イマチニブ（ＮＳＣ７１６０５１；ＣＡＳ登録番号２２０１２７５７１）；ラパチニブ（ＣＡＳ登録番号３８８０８２７８８）；レンバチニブ（ＣＡＳ登録番号８５７８９０３９２）；ムブリチニブ（ＣＡＳ３６６０１７０９６）；ニロチニブ（ＣＡＳ登録番号９２３２８８９５３）；ニンテダニブ（ＣＡＳ登録番号６５６２４７１７５）；パルボシクリブ（ＣＡＳ登録番号５７１１９０３０２）；パゾパニブ（ＮＳＣ７３７７５４；ＣＡＳ登録番号６３５７０２６４６）；ペガプタニブ（ＣＡＳ登録番号２２２７１６８６１）；ポナチニブ（ＣＡＳ登録番号１１１４５４４３１８）；ラパマイシン（ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８９）；レゴラフェニブ（ＣＡＳ登録番号７５５０３７０３７）；ＡＰ２３５７３（リダフォロリムス）（ＣＡＳ登録番号５７２９２４５４０）；ＩＮＣＢ０１８４２４（ルキソリチニブ）（ＣＡＳ登録番号１０９２９３９１７７）；ＡＲＲＹ−１４２８８６（セルメチニブ）（ＮＳＣ７４１０７８；ＣＡＳ登録番号６０６１４３−５２−６）；シロリムス（ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８９）；ソラフェニブ（ＮＳＣ７２４７７２；ＣＡＳ登録番号４７５２０７５９１）；スニチニブ（ＮＳＣ７３６５１１；ＣＡＳ登録番号３４１０３１５４７）；トファシチニブ（ＣＡＳ登録番号４７７６００７５２）；テムシロリムス（ＮＳＣ６８３８６４；ＣＡＳ登録番号１６３６３５０４３）；トラメチニブ（ＣＡＳ登録番号８７１７００１７３）；バンデタニブ（ＣＡＳ登録番号４４３９１３７３３）；ベムラフェニブ（ＣＡＳ登録番号９１８５０４６５１）；ＳＵ６６５６（ＣＡＳ登録番号３３０１６１８７０）；ＣＥＰ−７０１（レスタウルチニブ（lesaurtinib））（ＣＡＳ登録番号１１１３５８８８４）；ＸＬ０１９（ＣＡＳ登録番号９４５７５５５６６）；ＰＤ−３２５９０１（ＣＡＳ登録番号３９１２１０１０９）；ＰＤ−９８０５９（ＣＡＳ登録番号１６７８６９２１８）；ＡＴＰ競合ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害剤、例えばＰＩ−１０３（ＣＡＳ登録番号３７１９３５７４９）、ＰＰ２４２（ＣＡＳ登録番号１０９２３５１６７１）、ＰＰ３０（ＣＡＳ登録番号１０９２７８８０９４）、Ｔｏｒｉｎ  １（Ｃ��Ｓ登録番号１２２２９９８３６８）、ＬＹ２９４００２（ＣＡＳ登録番号１５４４４７３６６）、ＸＬ−１４７（ＣＡＳ登録番号９３４５２６８９３）、ＣＡＬ−１２０（ＣＡＳ登録番号８７０２８１３４８）、ＥＴＰ−４５６５８（ＣＡＳ登録番号１１９８３５７７９７）、ＰＸ８６６（ＣＡＳ登録番号５０２６３２６６８）、ＧＤＣ−０９４１（ＣＡＳ登録番号９５７０５４３０７）、ＢＧＴ２２６（ＣＡＳ登録番号１２４５５３７６８１）、ＢＥＺ２３５（ＣＡＳ登録番号９１５０１９６５７）、ＸＬ−７６５（ＣＡＳ登録番号９３４４９３７６２）など。
【０１３７】
タンパク質合成阻害剤：アクリフラビン（ＣＡＳ登録番号６５５８９７００）；アミカシン（ＮＳＣ１７７００１；ＣＡＳ登録番号３９８３１５５５）；アルベカシン（ＣＡＳ登録番号５１０２５８５５）；アストロマイシン（ＣＡＳ登録番号５５７７９０６１）；アジスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３２；ＣＡＳ登録番号８３９０５０１５）；ベカナマイシン（ＣＡＳ登録番号４６９６７６８）；クロルテトラサイクリン（ＮＳＣ１３２５２；ＣＡＳ登録番号６４７２２）；クラリスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３３；ＣＡＳ登録番号８１１０３１１９）；クリンダマイシン（ＣＡＳ登録番号１８３２３４４９）；クロモサイクリン（ＣＡＳ登録番号１１８１５４０）；シクロヘキシミド（ＣＡＳ登録番号６６８１９）；ダクチノマイシン（ＮＳＣ３０５３；ＣＡＳ登録番号５０７６０）；ダルホプリスチン（ＣＡＳ登録番号１１２３６２５０２）；デメクロサイクリン（ＣＡＳ登録番号１２７３３３）；ジベカシン（ＣＡＳ登録番号３４４９３９８６）；ジヒドロストレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号１２８４６１）；ジリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号６２０１３０４１）；ドキシサイクリン（ＣＡＳ登録番号１７０８６２８１）；エメチン（ＮＳＣ３３６６９；ＣＡＳ登録番号４８３１８１）；エリスロマイシン（ＮＳＣ５５９２９；ＣＡＳ登録番号１１４０７８）；フルリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号８３６６４２０８）；フラマイセチン（ネオマイシンＢ；ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ゲンタマイシン（ＮＳＣ８２２６１；ＣＡＳ登録番号１４０３６６３）；グリシルシクリン、例えばチゲサイクリン（ＣＡＳ登録番号２２０６２００９７）；ハイグロマイシンＢ（ＣＡＳ登録番号３１２８２０４９）；イセパマイシン（ＣＡＳ登録番号６７８１４７６０）；ジョサマイシン（ＮＳＣ１２２２２３；ＣＡＳ登録番号１６８４６２４５）；カナマイシン（ＣＡＳ登録番号８０６３０７８）；ケトライド、例えばテリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号１９１１１４４８４）、セスロマイシン（ＣＡＳ登録番号２０５１１０４８１）、およびソリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号７６０９８１８３７）；リンコマイシン（ＣＡＳ登録番号１５４２１２）；ライムサイクリン（ＣＡＳ登録番号９９２２１２）；メクロサイクリン（ＮＳＣ７８５０２；ＣＡＳ登録番号２０１３５８３）；メタサイクリン（ロンドマイシン（rondomycin）；ＮＳＣ３５６４６３；ＣＡＳ登録番号９１４００１）；ミデカマイシン（ＣＡＳ登録番号３５４５７８０８）；ミノサイクリン（ＮＳＣ１４１９９３；ＣＡＳ登録番号１０１１８９０８）；ミオカマイシン（ＣＡＳ登録番号５５８８１０７７）；ネオマイシン（ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ネチルマイシン（ＣＡＳ登録番号５６３９１５６１）；オレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号３９２２９０５）；オキサゾリジノン、例えばエペレゾリド（ＣＡＳ登録番号１６５８０００４４）、リネゾリド（ＣＡＳ登録番号１６５８０００３３）、ポジゾリド（posizolid）（ＣＡＳ登録番号２５２２６００２９）、ラデゾリド（ＣＡＳ登録番号８６９８８４７８６）、ランベゾリド（ranbezolid）（ＣＡＳ登録番号３９２６５９３８０）、ステゾリド（ＣＡＳ登録番号１６８８２８５８８）、テジゾリド（���ＡＳ登録番号８５６８６７５５５）；オキシテトラサイクリン（ＮＳＣ９１６９；ＣＡＳ登録番号２０５８４６０）；パロモマイシン（ＣＡＳ登録番号７５４２３７２）；ペニメピサイクリン（ＣＡＳ登録番号４５９９６０４）；ペプチジルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、クロラムフェニコール（ＮＳＣ３０６９；ＣＡＳ登録番号５６７５７）ならびにアジダムフェニコール（ＣＡＳ登録番号１３８３８０８９）、フロルフェニコール（ＣＡＳ登録番号７３２３１３４２）、およびチアンフェニコール（ＣＡＳ登録番号１５３１８４５３）、およびプロイロムチリン、例えばレタパムリン（ＣＡＳ登録番号２２４４５２６６８）、チアムリン（ＣＡＳ登録番号５５２９７９５５）、バルネムリン（ＣＡＳ登録番号１０１３１２９２９）などの誘導体；ピルリマイシン（ＣＡＳ登録番号７９５４８７３５）；ピューロマイシン（ＮＳＣ３０５５；ＣＡＳ登録番号５３７９２）；キヌプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２０１３８５０３）；リボスタマイシン（ＣＡＳ登録番号５３７９７３５６）；ロキタマイシン（ＣＡＳ登録番号７４０１４５１０）；ロリテトラサイクリン（ＣＡＳ登録番号７５１９７３）；ロキシスロマイシン（ＣＡＳ登録番号８０２１４８３１）；シソマイシン（ＣＡＳ登録番号３２３８５１１８）；スペクチノマイシン（ＣＡＳ登録番号１６９５７７８）；スピラマイシン（ＣＡＳ登録番号８０２５８１８）；ストレプトグラミン、例えばプリスチナマイシン（ＣＡＳ登録番号２７００７６６０３）、キヌプリスチン／ダルホプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２６６０２８９９）、およびバージニアマイシン（ＣＡＳ登録番号１１００６７６１）；ストレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号５７９２１）；テトラサイクリン（ＮＳＣ１０８５７９；ＣＡＳ登録番号６０５４８）；トブラマイシン（ＣＡＳ登録番号３２９８６５６４）；トロレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号２７５１０９９）；タイロシン（ＣＡＳ登録番号１４０１６９０）；ベルダマイシン（verdamicin）（ＣＡＳ登録番号４９８６３４８１）。
【０１３８】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤：アベキシノスタット（ＣＡＳ登録番号７８３３５５６０２）；ベリノスタット（ＮＳＣ７２６６３０；ＣＡＳ登録番号４１４８６４００９）；チダミド（chidamide）（ＣＡＳ登録番号７４３４２００２２）；エンチノスタット（ＣＡＳ登録番号２０９７８３８０２）；ギビノスタット（givinostat）（ＣＡＳ登録番号７３２３０２９９７）；モセチノスタット（ＣＡＳ登録番号７２６１６９７３９）；パノビノスタット（ＣＡＳ登録番号４０４９５０８０７）；キシノスタット（ＣＡＳ登録番号８７５３２０２９９）；レスミノスタット（ＣＡＳ登録番号８６４８１４８８０）；ロミデプシン（ＣＡＳ登録番号１２８５１７０７７）；スルホラファン（ＣＡＳ登録番号４４７８９３７）；チオウレイドブチロニトリル（Ｋｅｖｅｔｒｉｎ（商標）；ＣＡＳ登録番号６６５９８９０）；バルプロ酸（ＮＳＣ９３８１９；ＣＡＳ登録番号９９６６１）；ボリノスタット（ＮＳＣ７０１８５２；ＣＡＳ登録番号１４９６４７７８９）；ＡＣＹ−１２１５（ロシリノスタット（rocilinostat）；ＣＡＳ登録番号１３１６２１４５２４）；ＣＵＤＣ−１０１（ＣＡＳ登録番号１０１２０５４５９９）；ＣＨＲ−２８４５（テフィノスタット（tefinostat）；ＣＡＳ登録番号９１４３８２６０８）；ＣＨＲ−３９９６（ＣＡＳ登録番号１２３５８５９１３８）；４ＳＣ−２０２（ＣＡＳ登録番号９１０４６２４３０）；ＣＧ２００７４５（ＣＡＳ登録番号９３６２２１３３９）；ＳＢ９３９（プラシノスタット；ＣＡＳ登録番号９２９０１６９６６）。
【０１３９】
ミトコンドリア阻害剤：パンクラチスタチン（ＮＳＣ３４９１５６；ＣＡＳ登録番号９６２８１３１１）；ローダミン−１２３（ＣＡＳ登録番号６３６６９７０９）；エデルフォシン（edelfosine）（ＮＳＣ３２４３６８；ＣＡＳ登録番号７０６４１５１９）；ｄ−アルファ−コハク酸トコフェロール（ＮＳＣ１７３８４９；ＣＡＳ登録番号４３４５０３３）；化合物１１β（ＣＡＳ登録番号８６５０７０３７７）；アスピリン（ＮＳＣ４０６１８６；ＣＡＳ登録番号５０７８２）；エリプチシン（ＣＡＳ登録番号５１９２３３）；ベルベリン（ＣＡＳ登録番号６３３６５８）；セルレニン（ＣＡＳ登録番号１７３９７８９６）；ＧＸ０１５−０７０（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ（登録商標）；１Ｈ−インドール、２−（２−（（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン）−３−メトキシ−２Ｈ−ピロール−５−イル）−；ＮＳＣ７２９２８０；ＣＡＳ登録番号８０３７１２６７６）；セラストロール（トリプテリン；ＣＡＳ登録番号３４１５７８３０）；メトホルミン（ＮＳＣ９１４８５；ＣＡＳ登録番号１１１５７０４）；ブリリアントグリーン（ＮＳＣ５０１１；ＣＡＳ登録番号６３３０３４）；ＭＥ−３４４（ＣＡＳ登録番号１３７４５２４５５６）。
【０１４０】
抗有糸分裂剤：アロコルヒチン（allocolchicine）（ＮＳＣ４０６０４２）；オーリスタチン、例えばＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ；ＣＡＳ登録番号４７４６４５−２７−７）およびＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ；ＣＡＳ登録番号７４５０１７−９４−１；ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）；コルヒチン（ＮＳＣ７５７；ＣＡＳ登録番号６４８６８）；コルヒチン（cholchicine）誘導体（Ｎ−ベンゾイル−デアセチルベンズアミド；ＮＳＣ３３４１０；ＣＡＳ登録番号６３９８９７５３）；ドラスタチン１０（ＮＳＣ３７６１２８；ＣＡＳ登録番号１１０４１７−８８−４）；メイタンシン（ＮＳＣ１５３８５８；ＣＡＳ登録番号３５８４６−５３−８）；リゾキシン（rhozoxin）（ＮＳＣ３３２５９８；ＣＡＳ登録番号９０９９６５４６）；タキソール（ＮＳＣ１２５９７３；ＣＡＳ登録番号３３０６９６２４）；タキソール誘導体（（２’−Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］グルタメート（glutaramate）タキソール；ＮＳＣ６０８８３２）；チオコルヒチン（３−デメチルチオコルヒチン；ＮＳＣ３６１７９２）；トリチルシステイン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号２７９９０７７）；硫酸ビンブラスチン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号１４３６７９）；硫酸ビンクリスチン（ＮＳＣ６７５７４；ＣＡＳ登録番号２０６８７８２）。
【０１４１】
これらの薬剤のうち、抗体への取り付け部位を含むか、または抗体への取り付け部位を含むように改変できるものはいずれも、本明細書で開示されるＡＤＣに含めることができる。
【０１４２】
具体的な実施形態において、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、抗有糸分裂剤である。
【０１４３】
別の具体的な実施形態において、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、オーリスタチン、例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）またはモノメチルオーリスタチンＦ（「ＭＭＡＦ」）である。
【０１４４】
６．２．２．リンカー
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣにおいて、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、リンカーによって抗体に連結されている。ＡＤＣの抗体に細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を連結するリンカーは、短い、長い、疎水性、親水性、フレキシブルな、または硬いリンカーであってもよく、またはリンカーが異なる特性を有するセグメントを含み得るように、それぞれ独立して上述の特性の１つまたは複数を有するセグメントで構成されていてもよい。リンカーは、それらが１つより多くの薬剤を抗体上の単一の部位に共有結合で連結するように多価であってもよいし、またはそれらが単一の薬剤を抗体上の単一の部位に共有結合で連結するように１価であってもよい。
【０１４５】
当業者は理解していると予想されるように、リンカーは、一方の位置で細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質への共有結合による連結を形成し、他方の位置で抗体への共有結合による連結を形成することによって、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を抗体に連結する。共有結合による連結は、リンカー上の官能基と薬剤および抗体上の官能基との反応によって形成される。本明細書で使用される場合、「リンカー」という表現は、（ｉ）リンカーを細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に共有結合で連結することが可能な官能基と、リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能な官能基とを含む、リンカーのコンジュゲートしていない形態；（ｉｉ）リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能であり、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に共有結合で連結されている官能基を含むか、またはその逆である、リンカーの部分的にコンジュゲートした形態；および（ｉｉｉ）細胞傷害性物質ならびに／または細胞増殖抑制性物質および抗体の両方に共有結合で連結されている、リンカーの完全にコンジュゲートした形態を含むことが意図される。本開示のリンカーおよび抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣに加えて、リンカー−薬剤を抗体にコンジュゲートするのに使用されるシントンの一部の具体的な実施形態において、リンカー上の官能基およびリンカーと抗体との間で形成された共有結合による連結を含む部分は、それぞれＲｘおよびＸＹとして具体的に例示される。
【０１４６】
リンカーは、好ましくは、ただし必ずしもそうでなくてもよいが、細胞の外側の条件に対して化学的に安定であり、細胞の内部で切断される、破壊される、および／またはそれ以外の方法で特異的に分解するように設計されていてもよい。代替として、細胞の内部で特異的に切断または分解されるように設計されていないリンカーを使用してもよい。安定なリンカーと不安定なリンカーとの選択は、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質の毒性によって決まる場合がある。正常細胞に対して毒性の薬剤の場合、安定なリンカーが好ましい。正常細胞に対して選択的であるかまたはそれを標的化して毒性を低める薬剤を利用してもよく、細胞外環境に対するリンカーの化学的安定性は、それほど重要ではない。ＡＤＣの状態で薬物を抗体に連結するのに有用な様々なリンカーは、当業界において公知である。これらのリンカーのいずれか、および他のリンカーは、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣの抗体に連結するのに使用することができる。
【０１４７】
多くの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を単一抗体分子に連結するのに使用できる例示的な多価リンカーは、例えば、その内容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット；国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフレット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット；国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット；国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されている。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらにより開発されたＦｌｅｘｉｍｅｒリンカー技術は、優れた物理化学的な特性を有する高ＤＡＲのＡＤＣを可能にする能力を有する。以下に示すように、Ｍｅｒｓａｎａ技術は、エステル結合の配列を介して可溶性のポリアセタールバックボーンに薬物分子を取り込むことに基づく。この手法は、優れた物理化学的な特性を維持しながら高度にローディングされたＡＤＣ（最大２０のＤＡＲ）をもたらす。
【０１４８】
樹枝型のリンカーのさらなる例は、それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第２００６／１１６４２２号明細書；米国特許出願公開第２００５／２７１６１５号明細書；de Groot et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494；Amir et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499；Shamis et al.(2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731；Sun et al.(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sun et al.(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768；King et al.(2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990に見出すことができる。
【０１４９】
使用できる例示的な１価リンカーは、例えば、それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Nolting, 2013, Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology 1045:71-100；Kitson et al., 2013, CROs/CMOs--Chemica Oggi--Chemistry Today 31(4):30-38；Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13；Zhao et al., 2011, J. Med. Chem. 54:3606-3623；米国特許第７，２２３，８３７号明細書；米国特許第８，５６８，７２８号明細書；米国特許第８，５３５，６７８号明細書；および国際公開第２００４０１０９５７号パンフレットに記載されている。
【０１５０】
一例として、これらに限定されないが、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれ得る一部の切断可能および切断不可能なリンカーは、後述される。
【０１５１】
６．２．３．切断可能なリンカー
特定の実施形態において、選択されたリンカーは、インビボで切断可能である。切断可能なリンカーは、化学的または酵素的に不安定な、または分解可能な連結を含んでいてもよい。切断可能なリンカーは、一般的に、薬物を開放する細胞の内部のプロセス、例えば細胞質内での還元、リソソーム中での酸性条件への曝露、または細胞内の特異的なプロテアーゼまたは他の酵素による切断を頼る。切断可能なリンカーは、一般的に、化学的または酵素的のいずれかで切断可能な１つまたは複数の化学結合を取り込んでおり、それと同時に、リンカーの残部は、切断不可能である。特定の実施形態において、リンカーは、化学的に不安定性の基、例えばヒドラゾンおよび／またはジスルフィド基を含む。化学的に不安定性の基を含むリンカーは、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることを利用する。ヒドラゾンを含有するリンカーの場合の薬物放出を容易にする細胞内条件は、エンドソームおよびリソソームの酸性環境であり、一方、ジスルフィドを含有するリンカーは、高いチオール濃度、例えばグルタチオンを含有するサイトゾル中で還元される。特定の実施形態において、化学的に不安定性の基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に不安定性の基付近の置換基を使用して立体障害を導入することによって増加させることができる。
【０１５２】
酸不安定性の基、例えばヒドラゾンは、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３〜７．５）での体循環の間は無傷のままであるが、ＡＤＣが細胞の弱酸性のエンドソーム（ｐＨ５．０〜６．５）およびリソソーム（ｐＨ４．５〜５．０）の区画に内在化されると加水分解を受けて薬物を放出する。このｐＨ依存性の放出メカニズムは、薬物の非特異的な放出と関連付けられている。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増加させるために、リンカーは、循環中での損失を最小化しながらもリソソーム中でのより効率的な放出を達成するように調整できる化学修飾、例えば置換によって変更してもよい。
【０１５３】
ヒドラゾンを含有するリンカーは、追加の切断部位、例えば追加の酸不安定性の切断部位および／または酵素不安定性の切断部位を含有していてもよい。例示的なヒドラゾンを含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
【０１５４】
【化１】
2021529524.tif 000019
式中、ＤおよびＡｂは、それぞれ細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質（薬物）およびＡｂを表し、ｎは、抗体に連結された薬物−リンカーの数を表す。特定のリンカー、例えばリンカー（Ｉｇ）において、リンカーは、２つの切断可能な基、すなわちジスルフィド部分およびヒドラゾン部分を含む。このようなリンカーの場合、改変されていない遊離の薬物の有効な放出は、酸性ｐＨまたはジスルフィド還元および酸性ｐＨを必要とする。（Ｉｈ）および（Ｉｉ）などのリンカーは、単一のヒドラゾン切断部位に有効であることが示されている。
【０１５５】
体循環の間は無傷のままであるがＡＤＣが酸性細胞区画の内部に内在化されると加水分解を受けて薬物を放出する追加のリンカーとしては、カーボネートが挙げられる。このようなリンカーは、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が、酸素を介して共有結合で取り付けることができる場合、有用な可能性がある。
【０１５６】
リンカー中に含まれ得る他の酸不安定性の基としては、ｃｉｓ−アコニチルを含有するリンカーが挙げられる。ｃｉｓ−アコニチル化学は、酸性条件下でのアミド加水分解を促進するために、アミド結合に並置されたカルボン酸を使用する。
【０１５７】
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基も含み得る。ジスルフィドは、生理学的なｐＨで熱力学的に安定であり、細胞の内部に内在化されると薬物を放出するように設計され、この場合サイトゾルは、細胞外の環境と比較してより有意に高い還元性の環境を提供する。ジスルフィド結合の分離は、一般的に、ジスルフィドを含有するリンカーが循環中で適度に安定であり、サイトゾル中で薬物を選択的に放出するように、細胞質内のチオール補因子、例えば（還元された）グルタチオン（ＧＳＨ）の存在を必要とする。また、細胞内酵素タンパク質であるジスルフィドイソメラーゼ、またはジスルフィド結合の切断が可能な類似の酵素も、細胞の内部におけるジスルフィド結合の優先的な切断に寄与する可能性がある。およそ５つの腫瘍細胞において、循環中でＧＳＨまたはシステイン（これは最も豊富な低分子量チオールである）がより有意に低い濃度であることと比較して、ＧＳＨは、０．５〜１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することが報告されており、この場合、不規則な血流が低酸素状態を引き起こし、還元性酵素の活性が強化され、それゆえにグルタチオン濃度がより一層高くなる。特定の実施形態において、ジスルフィドを含有するリンカーのインビボでの安定性は、リンカーの化学修飾によって、例えば、ジスルフィド結合に隣接する立体障害の使用によって強化することができる。
【０１５８】
例示的なジスルフィドを含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
【０１５９】
【化２】
2021529524.tif 000020
式中、ＤおよびＡｂは、それぞれ薬物および抗体を表し、ｎは、抗体に連結された薬物−リンカーの数を表し、Ｒは、各出現につき、例えば水素またはアルキルから独立して選択される。特定の実施形態において、ジスルフィド結合に隣接する立体障害を増加させることは、リンカーの安定性を増加させる。（Ｉｊ）および（Ｉｌ）などの構造は、１つまたは複数のＲ基が低級アルキルから選択され、例えばメチルである場合、インビボにおける増加した安定性を示す。
【０１６０】
使用することができる別のタイプの切断可能なリンカーは、酵素によって特異的に切断されるリンカーである。このようなリンカーは、典型的にはペプチドベースであるか、または酵素の基質として作用するペプチド領域を含む。ペプチドベースのリンカーは、血漿および細胞外環境中で、化学的に不安定性のリンカーより安定である傾向がある。リソソームのタンパク質分解酵素は、内因性阻害剤およびリソソームと比較して都合悪く高いｐＨ値の血液のために、血液中で非常に低い活性を有するため、一般的に、ペプチド結合は血清中で優れた安定性を有する。抗体からの薬物の放出は、具体的にはリソソームのプロテアーゼ、例えばカテプシンおよびプラスミンの作用に起因して起こる。これらのプロテアーゼは、特定の腫瘍細胞中において高いレベルで存在する場合がある。
【０１６１】
例示的な実施形態において、切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１００）、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１０１）などのテトラペプチド、またはＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ−（Ｄ）Ａｓｐ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、Ａｓｐ−Ｖａｌ、Ｈｉｓ−Ｖａｌ、ＮｏｒＶａｌ−（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ−（Ｄ）Ａｓｐ５、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ、Ａｓｎ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ、Ｍｅ３Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、フェニルＧｌｙ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、ＡＭ  Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、ＡＷ  Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、およびＡｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓなどのジペプチドから選択される。特定の実施形態において、より長いペプチドは疎水性であるため、ジペプチドが、より長いポリペプチドより好ましい。
【０１６２】
ドキソルビシン、マイトマイシン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、タリソマイシン（tallysomycin）およびオーリスタチン／オーリスタチンファミリーメンバーなどの薬物を抗体に連結するのに有用な様々なジペプチドベースの切断可能なリンカーが記載されている（それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Dubowchik et al., 1998, J. Org. Chem. 67:1866-1872；Dubowchik et al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8(21):3341-3346；Walker et al., 2002, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:217-219；Walker et al., 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:4323-4327；Sutherland et al., 2013, Blood 122: 1455-1463；およびFrancisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465を参照）。これらのジペプチドリンカー、またはこれらのジペプチドリンカーの改変されたバージョンの全ては、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣで使用することができる。使用できる他のジペプチドリンカーとしては、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓのブレンツキシマブベドチン（Vendotin）ＳＧＮ−３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ  ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ−７５（抗ＣＤ−７０、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｓｅａｔｔｌｅ  ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ（抗ＣＤ−３３、Ｖａｌ−Ａｌａ−（ＳＧＤ−１８８２））、Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのグレンバツムマブ（ＣＤＸ−０１１）（抗ＮＭＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、およびサイトジェン（Cytogen）ＰＳＭＡ−ＡＤＣ（ＰＳＭＡ−ＡＤＣ−１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＭＭＡＥ）などのＡＤＣに見出されるものが挙げられる。
【０１６３】
酵素的に切断可能なリンカーとしては、酵素的切断部位から薬物を空間的に分離するための自壊性スペーサーを挙げることができる。ペプチドリンカーへの薬物の直接の取り付けは、タンパク質分解による薬物のアミノ酸付加物の放出を引き起こすことができ、それによってその活性が損なわれる。自壊性スペーサーの使用は、アミド結合の加水分解の後に、十分活性な化学的に改変されていない薬物の脱離を可能にする。
【０１６４】
１つの自壊性スペーサーは、二機能性のパラアミノベンジルアルコール基であり、これは、アミノ基を介してペプチドに連結されてアミド結合を形成するが、アミンを含有する薬物は、リンカー（ＰＡＢＣ）のベンジルのヒドロキシル基にカルバミン酸官能性を介して取り付けられていてもよい。得られたプロドラッグは、プロテアーゼ媒介の切断で活性化され、１，６脱離反応を引き起こし、改変されていない薬物、二酸化炭素、およびリンカー基の残部を放出する。以下のスキームは、ｐ−アミドベンジルエーテルのフラグメント化および薬物の放出を描写する。
【０１６５】
【化３】
2021529524.tif 000021
式中、Ｘ−Ｄは、改変されていない薬物を表す。
【０１６６】
この自壊性基の複素環式バリアントも記載されている。例えば参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，９８９，４３４号明細書を参照されたい。
【０１６７】
一部の実施形態において、酵素的に切断可能なリンカーは、β−グルクロン酸ベースのリンカーである。薬物の容易な放出は、リソソーム酵素であるβ−グルクロニダーゼによるβ−グルクロニドグリコシド結合の切断を介して実現することができる。この酵素は、リソソーム内に豊富に存在し、一部の腫瘍タイプにおいて過剰発現されるが、細胞の外側での酵素活性は低い。β−グルクロン酸ベースのリンカーは、β−グルクロニドの親水性の性質のために凝集を受けるＡＤＣの傾向を回避するのに使用することができる。一部の実施形態において、β−グルクロン酸ベースのリンカーは、疎水性薬物に連結されたＡＤＣのためのリンカーとして好ましい。以下のスキームは、β−グルクロン酸ベースのリンカーを含有するＡＤＣからの薬物の放出を描写する。
【０１６８】
【化４】
2021529524.tif 000022
【０１６９】
オーリスタチン、カンプトテシンおよびドキソルビシン類似体、ＣＢＩ副溝バインダー、およびプシムベリン（psymberin）などの薬物を抗体に連結するのに有用な、様々な切断可能なβ−グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている（それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Nolting, Chapter 5 “Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013；Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17:831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；およびJiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255を参照）。これらのβ−グルクロン酸ベースのリンカーは全て、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣで使用することができる。
【０１７０】
加えて、フェノール基を含有する細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、フェノールの酸素を介してリンカーに共有結合で結合させることができる。１つのこのようなリンカーは、国際公開第２００７／０８９１４９号パンフレットに記載されており、ジアミノ−エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」を、フェノールを送達するために従来の「ＰＡＢＯ」ベースの自壊性基と共に使用する手法を頼る。リンカーの切断は、以下に模式的に描写され、式中、Ｄは、フェノールのヒドロキシル基を有する細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を表す。
【０１７１】
【化５】
2021529524.tif 000023
【０１７２】
切断可能なリンカーは、切断不可能な部分またはセグメントを含んでいてもよいし、および／または切断可能なセグメントまたは部分は、それを切断可能にするために、それ以外の切断不可能なリンカー中に含まれていてもよい。単なる例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および関連するポリマーは、ポリマーバックボーン中に切断可能な基を含んでいてもよい。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーリンカーは、１つまたは複数の切断可能な基、例えばジスルフィド、ヒドラゾンまたはジペプチドを含んでいてもよい。
【０１７３】
リンカー中に含まれ得る他の分解可能な連結としては、ＰＥＧのカルボン酸または活性化されたＰＥＧのカルボン酸と生物活性薬剤上のアルコール基との反応によって形成されたエステル連結が挙げられ、この場合、このようなエステル基は一般的に生理学的条件下で加水分解して生物活性薬剤を放出する。加水分解で分解可能な連結としては、これらに限定されないが、炭酸連結；アミンとアルデヒドの反応の結果生じるイミン連結；アルコールをリン酸基と反応させることによって形成されたリン酸エステル連結；アルデヒドとアルコールの反応生成物であるアセタール連結；ギ酸塩とアルコールの反応生成物であるオルトエステル連結；ならびにこれに限定されないが、ポリマーの末端のホスホアミダイト基、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基によって形成されたオリゴヌクレオチド連結が挙げられる。
【０１７４】
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、構造式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）：
【０１７５】
【化６】
2021529524.tif 000024
を含むリンカーまたはその塩を含み、式中、ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（Ｃ→Ｎで例示され、カルボキシおよびアミノ「末端」は示されていない）を表し；Ｔは、１つまたは複数のエチレングリコール単位もしくはアルキレン鎖、またはそれらの組合せを含むポリマーを表し；Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびメチルスルホネートから選択され；ｐは、０から５の範囲の整数であり；ｑは、０または１であり；ｘは、０または１であり；ｙは、０または１であり；
【０１７６】
【化７】
2021529524.tif 000025
は、リンカーの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質への取り付け点を表し；＊は、リンカーの残部への取り付け点を表す。
【０１７７】
特定の実施形態において、ペプチドは、トリペプチドまたはジペプチドから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ；Ｖａｌ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｌｙｓ；Ｖａｌ−Ｌｙｓ；Ａｌａ−Ｌｙｓ；Ｐｈｅ−Ｃｉｔ；Ｌｅｕ−Ｃｉｔ；Ｉｌｅ−Ｃｉｔ；Ｐｈｅ−Ａｒｇ；およびＴｒｐ−Ｃｉｔから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｃｉｔ−Ｖａｌ；およびＡｌａ−Ｖａｌから選択される。
【０１７８】
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶａ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【０１７９】
【化８】
2021529524.tif 000026
【０１８０】
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｂ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【０１８１】
【化９−１】
2021529524.tif 000027
【０１８２】
【化９−２】
2021529524.tif 000028
【０１８３】
【化９−３】
2021529524.tif 000029
【０１８４】
【化９−４】
2021529524.tif 000030
【０１８５】
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、構造式（ＩＶｃ）または（ＩＶｄ）：
【０１８６】
【化１０】
2021529524.tif 000031
を含むリンカーまたはその塩を含み、式中、ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（Ｃ→Ｎで例示され、カルボキシおよびアミノ「末端」は示されていない）を表し；Ｔは、１つまたは複数のエチレングリコール単位もしくはアルキレン鎖、またはそれらの組合せを含むポリマーを表し；Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびメチルスルホネートから選択され；ｐは、０から５の範囲の整数であり；ｑは、０または１であり；ｘは、０または１であり；ｙは、０または１であり；．ｘ
【０１８７】
【化１１】
2021529524.tif 000032
は、リンカーの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質への取り付け点を表し；＊は、リンカーの残部への取り付け点を表す。
【０１８８】
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｃ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【０１８９】
【化１２】
2021529524.tif 000033
【０１９０】
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【０１９１】
【化１３−１】
2021529524.tif 000034
【０１９２】
【化１３−２】
2021529524.tif 000035
【０１９３】
特定の実施形態において、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）、または（ＩＶｄ）を含むリンカーは、酸性媒体への曝露によって切断可能なカーボネート部分をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、酸素を介して細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に取り付けられる。
【０１９４】
６．２．４．切断不可能なリンカー
切断可能なリンカーは一定の利点を提供し得るが、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣを含むリンカーは、必ずしも切断可能でなくてもよい。切断不可能なリンカーの場合、薬物の放出は、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることに依存しない。薬物の放出は、抗原媒介エンドサイトーシスを介したＡＤＣの内在化とリソソーム区画への送達の後に起こり、そこで抗体は、細胞内タンパク質分解を介してアミノ酸レベルに分解されると仮定されている。このプロセスは、薬物、リンカー、およびリンカーが共有結合で取り付けられたアミノ酸残基によって形成される薬物誘導体を放出する。切断不可能なリンカーとのコンジュゲートからのアミノ酸薬物代謝産物は、切断可能なリンカーとのコンジュゲートと比較して、より親水性であり、一般的にはより低い膜透過性であり、それにより、より少ないバイスタンダー作用およびより少ない非特異的な毒性が生じる。一般的に、切断不可能なリンカーとのＡＤＣは、循環中で切断可能なリンカーとのＡＤＣより大きい安定性を有する。切断不可能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、または天然の重合体、例えば、ポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーベースのものであってもよいし、またはアルキレン鎖、ポリアルキレングリコール（glocol）および／またはアミドポリマーのセグメントを含んでいてもよい。
【０１９５】
薬物を抗体に連結するのに使用される様々な切断不可能なリンカーが記載されている。それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17；831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；and Jiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255を参照されたい。これらのリンカーはいずれも、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれていてもよい。
【０１９６】
特定の実施形態において、リンカーは、インビボで切断不可能であり、例えば、構造式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）または（ＶＩｄ）によるリンカーであり（例示された通り）、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基：
【０１９７】
【化１４】
2021529524.tif 000036
またはその塩を含み、式中、Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびメチルスルホネートから選択され；Ｒｘは、リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能な官能基を含む部分であり；
【０１９８】
【化１５】
2021529524.tif 000037
は、リンカーの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質への取り付け点を表す。
【０１９９】
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＶＩａ）〜（ＶＩｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含み、
【０２００】
【化１６】
2021529524.tif 000038
は、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質）への取り付け点を表す。
【０２０１】
【化１７】
2021529524.tif 000039
【０２０２】
６．２．５．リンカーを抗体に取り付けるのに使用される基
リンカー−薬物シントンを抗体に取り付けてＡＤＣを得るために、様々な基を使用することができる。取り付け基は、本質的に求電子性であってもよく、その例としては、マレイミド基、活性化ジスルフィド、活性エステル、例えばＮＨＳエステルおよびＨＯＢｔエステル、ギ酸ハロゲン化物、酸ハロゲン化物、ハロゲン化アルキルおよびベンジル、例えばハロアセトアミドが挙げられる。以下で論じられるように、本開示に従って使用することができる「自己安定化」マレイミドおよび「架橋形成ジスルフィド」に関する新興の技術もある。使用される具体的な基は、抗体への取り付け部位に一部依存すると予想される。
【０２０３】
抗体コンジュゲーション条件下で自発的に加水分解して安定性が改善されたＡＤＣ種を生じる「自己安定化」マレイミド基の一例を以下の略図に描写する。米国特許出願公開第２０１３０３０９２５６号明細書；さらに、Lyon et al., Nature Biotech published online, doi:10.1038/nbt.2968も参照されたい。
【０２０４】
【化１８】
2021529524.tif 000040
【０２０５】
【化１９】
2021529524.tif 000041
【０２０６】
Ｐｏｌｙｔｈｅｒｉｃｓは、天然ヒンジジスルフィド結合の還元から誘導されたスルフヒドリル基の対を架橋する方法を開示している。Badescu et al., 2014, Bioconjugate Chem. 25:1124-1136を参照されたい。この反応を以下の略図に描写する。この手法の利点は、ＩｇＧの完全な還元（スルフヒドリルの４つの対を生じる）とそれに続く４当量のアルキル化剤との反応によって富化したＤＡＲ４  ＡＤＣを合成する能力である。「架橋されたジスルフィド」を含有するＡＤＣも、安定性が増加したと述べられている。
【０２０７】
【化２０】
2021529524.tif 000042
【０２０８】
同様に、以下で描写されるように、スルフヒドリル基の対を架橋することが可能なマレイミド誘導体（１、以下）が開発されている。国際公開第２０１３／０８５９２５号パンフレットを参照されたい。
【０２０９】
【化２１】
2021529524.tif 000043
【０２１０】
６．２．６．リンカー選択の考察
当業者公知のように、特定のＡＤＣのための選択されたリンカーは、これらに限定されないが、抗体への取り付けの部位（例えば、ｌｙｓ、ｃｙｓまたは他のアミノ酸残基）、薬物の薬理作用団の構造的な拘束、および薬物の親油性などの様々な要因によって影響を受ける可能性がある。具体的なＡＤＣのための選択されたリンカーは、具体的な抗体／複合薬に対してこれらの様々な要因のバランスをとることが求められることになる。ＡＤＣにおけるリンカーの選択によって影響を受ける要因の総論に関して、Nolting, Chapter 5 “Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013を参照されたい。
【０２１１】
例えば、ＡＤＣは、抗原陽性腫瘍細胞の近くに存在するバイスタンダー抗原陰性細胞を致死させることが観察されている。ＡＤＣによるバイスタンダー細胞致死のメカニズムは、ＡＤＣの細胞内プロセシング中に形成された代謝産物が役割を果たし得ることを示した。抗原陽性細胞中でのＡＤＣの代謝によって生成した中性の細胞傷害性の代謝産物は、バイスタンダー細胞致死において役割を果たすようであるが、電荷を有する代謝産物は、膜を介した媒体への拡散が阻止される可能性があり、それゆえにバイスタンダー致死に影響を与えることができない。特定の実施形態において、リンカーは、ＡＤＣの細胞代謝産物によって引き起こされるバイスタンダー致死作用を弱めるように選択される。特定の実施形態において、リンカーは、バイスタンダー致死作用を増加させるように選択される。
【０２１２】
またリンカーの特性も、使用および／または貯蔵条件下でＡＤＣの凝集に影響を与える可能性がある。典型的には、文献で報告されたＡＤＣは、抗体分子１個当たり３〜４個以下の薬物分子を含有する（例えば、Chari, 2008, Acc Chem Res 41:98-107を参照）。より高い薬物対抗体の比率（「ＤＡＲ」）を得ようとする試みは、特に薬物とリンカーの両方が疎水性の場合、ＡＤＣが凝集するため失敗することが多い（King et al., 2002, J Med Chem 45:4336-4343；Hollander et al., 2008, Bioconjugate Chem 19:358-361；Burke et al., 2009 Bioconjugate Chem 20:1242-1250）。多くの例において、３〜４より高いＤＡＲが、効力増加の手段として有益であり得る。細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が本質的に疎水性である例において、特に３〜４より大きいＤＡＲが望ましい例において、ＡＤＣ凝集を低減させる手段として、相対的に親水性のリンカーを選択することが望ましい場合がある。したがって、特定の実施形態において、リンカーは、貯蔵および／または使用中にＡＤＣの凝集を低減する化学成分を取り込んでいる。リンカーは、ＡＤＣの凝集を低減するために、極性または親水性基、例えば電荷を有する基または生理学的なｐＨで電荷を有するようになる基を取り込んでいてもよい。例えば、リンカーは、生理学的なｐＨで、例えばカルボン酸を脱プロトン化する、または例えばアミンをプロトン化する、電荷を有する基、例えば塩または基を取り込んでいてもよい。
【０２１３】
２０もの高いＤＡＲをもたらすと報告されている、多数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を抗体に連結するのに使用できる例示的な多価リンカーは、その内容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット；国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフレット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット；国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット；国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されている。
【０２１４】
特定の実施形態において、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定した場合、約１０％未満である。特定の実施形態において、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定した場合、１０％未満、例えば、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．１％未満であるか、またはそれよりさらに低い。
【０２１５】
６．２．７．抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣを作製する方法
本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣは、周知の化学的方法を使用して合成することができる。選択された化学的方法は、数ある中でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質、リンカーを抗体に取り付けるのに使用されるリンカーおよび基の性質に依存すると予想される。一般的に、式（Ｉ）によるＡＤＣは、以下のスキームに従って調製することができる：
Ｄ−Ｌ−Ｒｘ＋Ａｂ−Ｒｙ→［Ｄ−Ｌ−ＸＹ］ｎ−Ａｂ  （Ｉ）
式中、Ｄ、Ｌ、Ａｂ、ＸＹおよびｎはこれまでに定義した通りであり、ＲｘおよびＲｙは、上記で論じられたように、互いに共有結合による連結を形成することが可能な補完的な基を表す。
【０２１６】
ＲｘおよびＲｙ基の性質は、シントンＤ−Ｌ−Ｒｘを抗体に連結するのに使用される化学的方法に依存すると予想される。一般的に、使用される化学的方法は、抗体の完全性、例えばその標的に結合するその能力を変更しないものであるべきである。好ましくは、コンジュゲートした抗体の結合特性は、コンジュゲートしていない抗体の結合特性に極めて類似していると予想される。分子を抗体などの生体分子にコンジュゲートするための様々な化学的方法および技術が当業界において公知であり、特に抗体にコンジュゲートするためのものが周知である。例えば、Amon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,” in: Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. Eds., Alan R. Liss, Inc., 1985；Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery,” in: Controlled Drug Delivery, Robinson et al. Eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd Ed. 1987；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,” in: Monoclonal Antibodies ‘84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al., Eds., 1985；“Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy,” in: Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al., Eds., Academic Press, 1985；Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；ＰＣＴ国際公開第８９／１２６２４号パンフレットを参照されたい。これらの化学的方法のいずれも、シントンを抗体に連結するのに使用することができる。
【０２１７】
接近可能なリシン残基にシントンを連結するのに有用な官能基Ｒｘの数および化学的方法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが、ＮＨＳ−エステルおよびイソチオシアネートが挙げられる。
【０２１８】
システイン残基の接近可能な遊離のスルフヒドリル基にシントンを連結するのに有用な官能基Ｒｘの数および化学的方法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが、ハロアセチルおよびマレイミドが挙げられる。
【０２１９】
しかしながら、コンジュゲーションの化学的性質は、利用可能な側鎖基に限定されない。アミンなどの側鎖は、適切な小分子をアミンに連結することによって、他の有用な基、例えばヒドロキシルに変換することができる。この戦略は、抗体の接近可能なアミノ酸残基の側鎖に多官能性の小分子をコンジュゲートすることによって抗体上の利用可能な連結部位の数を増加させるために使用することができる。次いで、これらの「変換された」官能基にシントンを共有結合で連結するのに好適な官能基Ｒｘが、シントンに含まれる。
【０２２０】
抗体はまた、コンジュゲーションのためのアミノ酸残基を含むように操作することができる。ＡＤＣの状態で薬物をコンジュゲートするのに有用な非遺伝子コード化アミノ酸残基を含むように抗体を操作するためのアプローチは、非コード化アミノ酸にシントンを連結するのに有用な化学的方法および官能基と共に、Axupet al., 2012, Proc Natl Acad Sci USA. 109(40):16101-16106によって記載されている。
【０２２１】
典型的には、シントンは、抗体のアミノ酸残基の側鎖に、例えば、接近可能なリシン残基の一級アミノ基または接近可能なシステイン残基のスルフヒドリル基などに連結されている。遊離のスルフヒドリル基は、鎖間のジスルフィド結合を還元することにより得ることができる。
【０２２２】
Ｒｙがスルフヒドリル基である場合（例えば、Ｒｘがマレイミドである場合）の連結では、一般的に、抗体はまず完全または部分的に還元して、システイン残基間の鎖間のジスルフィド架橋を崩壊させる。
【０２２３】
１つまたは複数のコドンの突然変異によって、ジスルフィド架橋に参加しないシステイン残基が抗体に入るように操作することができる。これらの対応のないシステインの還元により、コンジュゲーションに好適なスルフヒドリル基が生じる。操作されたシステインを取り込むのに好ましい位置としては、一例として、これらに限定されないが、ヒトＩｇＧ１重鎖上の、Ｓ１１２Ｃ位、Ｓ１１３Ｃ位、Ａ１１４Ｃ位、Ｓ１１５Ｃ位、Ａ１７６Ｃ位、５１８０Ｃ位、Ｓ２５２Ｃ位、Ｖ２８６Ｃ位、Ｖ２９２Ｃ位、Ｓ３５７Ｃ位、Ａ３５９Ｃ位、Ｓ３９８Ｃ位、Ｓ４２８Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）、およびヒトＩｇカッパ軽鎖上の、Ｖ１１０Ｃ位、Ｓ１１４Ｃ位、Ｓ１２１Ｃ位、Ｓ１２７Ｃ位、Ｓ１６８Ｃ位、Ｖ２０５Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）が挙げられる（例えば、米国特許第７，５２１，５４１号明細書、米国特許第７，８５５，２７５号明細書および米国特許第８，４５５，６２２号明細書を参照）。
【０２２４】
当業者により理解されていると予想されるように、抗体分子に連結された多数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、一部の抗体は１つの連結された薬剤を含有する、一部の抗体は２つの連結された薬剤を含有する、一部の抗体は３つの連結された薬剤を含有するなど（一部の抗体は連結された薬剤を含有しない）、ＡＤＣの集合体が本質的に不均質であり得るように変更することが可能である。不均質性の程度は、数ある中でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を連結するのに使用される化学的方法に依存すると予想される。例えば、抗体が還元されて取り付けのためのスルフヒドリル基が生じる場合、分子１個当たり０、２、４、６または８個の連結された薬剤を有する抗体の不均質な混合物が産生されることが多い。さらに、取り付け化合物のモル比を制限することによって、分子１個当たり０、１、２、３、４、５、６、７または８個の連結された薬剤を有する抗体が産生されることが多い。したがって、文脈に応じて、述べられるＤＡＲは、抗体の集合体の平均であり得ることが理解されると予想される。例えば、「ＤＡＲ４」は、特定のＤＡＲピークを単離するために精製に供されておらず、抗体１個当たりの取り付けられた細胞増殖抑制性物質および／または細胞傷害性物質の数が異なる（例えば、抗体１個当たり０、２、４、６、８個の薬剤）ＡＤＣ分子の不均質な混合物を含み得るが、平均の薬物対抗体の比率が４であるＡＤＣ調製物を指すことができる。同様に、一部の実施形態において、「ＤＡＲ２」は、平均の薬物対抗体の比率が２である不均質なＡＤＣ調製物を指す。
【０２２５】
富化した調製物が望ましい場合、既定の数の連結された細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を有する抗体は、不均質な混合物の精製を介して、例えば、カラムクロマトグラフィー、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーを介して得ることができる。
【０２２６】
純度は、当業界において公知のように、様々な方法によって評価することができる。具体的な例として、ＡＤＣ調製物は、ＨＰＬＣまたは他のクロマトグラフィーを介して分析してもよく、純度は、得られたピークの曲線下面積を分析することによって評価してもよい。
【０２２７】
６．３  キメラ抗原受容体
本発明の開示は、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【０２２８】
本開示のＣＡＲは、典型的には、膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメインを含み、これが順にシグナル伝達のための細胞内ドメインに作動可能に連結している。
【０２２９】
本開示のＣＡＲの細胞外ドメインは、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの配列（例えば、セクション６．１または実施形態１から１４５に記載される通り）を含む。
【０２３０】
例示的な膜貫通ドメイン配列および細胞内ドメイン配列は、それぞれセクション６．３．１および６．３．２に記載されている。
【０２３１】
本明細書に記載される数々の融合タンパク質（例えば、実施形態１５２および１５３）は、ＣＡＲであり、ＣＡＲに関連する開示は、このような融合タンパク質に適用される。
【０２３２】
６．３．１．膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに作動可能に連結された（例えば、融合した）膜貫通ドメインを含むように設計することができる。
【０２３３】
膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれに由来するものでもよい。源が天然である場合、ドメインは、あらゆる膜結合または膜貫通タンパク質由来であり得る。この開示における特定の用途の膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４のアルファ、ベータまたはゼータ鎖由来であってもよい（すなわち、その少なくとも膜貫通領域を含んでいてもよい）。一部の場合において、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジなどの様々なヒトヒンジも同様に採用することができる。
【０２３４】
一実施形態において、膜貫通ドメインは、合成である（すなわち、天然に存在しない）。合成膜貫通ドメインの例は、ロイシンおよびバリンなどの主として疎水性の残基を含むペプチドである。好ましくは、合成膜貫通ドメインの各末端に、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンの三つ組が見出されると予想される。任意選択で、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、膜貫通ドメインとＣＡＲの細胞質内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成することができる。グリシン−セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
【０２３５】
一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインである。一実施形態において、ＣＤ８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＹＬＨＬＧＡＬＧＲＤＬＷＧＰＳＰＶＴＧＹＨＰＬＬ（配列番号１０２）を含む。
【０２３６】
一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。一実施形態において、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１０３）を含む。
【０２３７】
一部の場合において、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣ（配列番号１０４）を含む。
【０２３８】
６．３．２．細胞内ドメイン
本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化した機能を指す。例えばＴ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを変換し、細胞が特殊化した機能を実行するように方向付けるタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が採用できるが、多くの場合において、鎖全体を使用することは必ずしも必要ではない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮化された部分が使用される限りにおいて、このような短縮化された部分は、それがエフェクター機能シグナルを変換しさえすれば、無傷の鎖の代わりに使用することができる。したがって細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを変換するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆる短縮化された部分を含むことを意味する。
【０２３９】
本開示のＣＡＲで使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの好ましい例としては、抗原受容体と結合した後に協同的に作用してシグナル伝達を開始させるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および補助受容体の細胞質内配列、加えて、これらの配列のあらゆる誘導体またはバリアント、および同じ機能的な能力を有するあらゆる合成配列が挙げられる。
【０２４０】
ＴＣＲ単独により生成したシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分な場合があり、二次または共刺激シグナルも必要である。したがって、Ｔ細胞の活性化は、２つの別個のクラスの細胞質内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始させるシグナル伝達配列（一次細胞質内シグナル伝達配列）、および抗原非依存性の方式で作用して、二次または共刺激シグナルをもたらすシグナル伝達配列（二次細胞質内シグナル伝達配列）によって媒介されると言うことができる。
【０２４１】
一次細胞質内シグナル伝達配列は、刺激によるか、または阻害によるかのいずれかでＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激による方式で作用する一次細胞質内シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含有していてもよい。
【０２４２】
本開示のＣＡＲにおいて特定の用途を有するＩＴＡＭを含有する一次細胞質内シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ由来のものが挙げられる。本開示のＣＡＲにおける細胞質内シグナル伝達分子は、ＣＤ３−ゼータ由来の細胞質内シグナル伝達配列を含むことが特に好ましい。
【０２４３】
好ましい実施形態において、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＩＴＡＭを含有する一次細胞質内シグナル伝達配列ドメイン（例えば、ＣＤ３−ゼータのもの）そのものを含む、または本開示のＣＡＲの状況で有用な他のあらゆる望ましい細胞質内ドメインと組み合わせて含むように設計される。例えば、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分および共刺激シグナル伝達領域を含んでいてもよい。
【０２４４】
共刺激シグナル伝達領域は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、リンパ球の抗原への効率的な応答に必要な、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
【０２４５】
本開示のＣＡＲの細胞質内シグナル伝達部分内の細胞質内シグナル伝達配列は、ランダムな、または特定された順番で互いに連結されていてもよい。任意選択で、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、連結を形成することができる。グリシン−セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
【０２４６】
一実施形態において、細胞質内ドメインは、ＣＤ３−ゼータのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含む。別の実施形態において、細胞質内ドメインは、ＣＤ３−ゼータのシグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含む。
【０２４７】
６．４  核酸、組換えベクターおよび宿主細胞
本発明の開示は、抗グリコＭＵＣ１抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子をコードする核酸分子、このような核酸を含むベクター、および本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体を産生することが可能な宿主細胞を包含する。特定の態様において、核酸分子は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗体結合フラグメント（例えば、セクション６．１および実施形態１〜１４５に記載される通り）、加えて、それらを含有する融合タンパク質（例えば、実施形態１４６〜１５１に記載される通り）およびキメラ抗原受容体（例えば、セクション６．３および実施形態１５２〜１５３に記載される通り）をコードし、宿主細胞は、それらを発現することが可能である。本開示の例示的なベクターは、実施形態１６６〜１６８に記載されており、例示的な宿主細胞は、実施形態１６９〜１７２に記載されている。
【０２４８】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、宿主細胞中での免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子の組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え発現するために、宿主細胞は、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡフラグメントを有する１つまたは複数の組換え発現ベクターをトランスフェクトされ、それにより、軽鎖および重鎖が宿主細胞中で発現され、任意選択でそれらは宿主細胞が培養される培地に分泌され、その培地から抗体を回収することができる。標準的な組換えＤＮＡ手法は、抗体重鎖および軽鎖遺伝子を得て、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、ベクターを、宿主細胞に、例えば、Molecular Cloning；A Laboratory Manual, Second Edition (Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., eds., Greene Publishing Associates, 1989)および米国特許第４，８１６，３９７号明細書に記載されるものに導入するのに使用される。
【０２４９】
このような抗グリコＭＵＣ１抗体をコードする核酸を生成するために、まず、軽鎖および重鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを得る。これらのＤＮＡは、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、軽鎖および重鎖可変配列をコードする生殖細胞系ＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅および改変することにより得ることができる。ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、当業界において公知である（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベースを参照されたい；Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242；Tomlinson et al., 1992, J. Mol. Biol. 22T:116-198；and Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836も参照されたい；これらそれぞれの内容は参照により本明細書に組み入れられる）。
【０２５０】
抗グリコＭＵＣ１抗体関連のＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られたら、これらのＤＮＡフラグメントはさらに、標準的な組換えＤＮＡ技術によって操作して、例えば、可変領域遺伝子を、全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＨまたはＶＬをコードするＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質、例えば抗体定常領域またはフレキシブルなリンカーをコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に連結されている。用語「作動可能に連結される」は、この状況で使用される場合、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされたアミノ酸配列がフレーム内に残るように２つのＤＮＡフラグメントが合体することを意味することが意図される。
【０２５１】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および任意選択でＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤの定常領域であってもよいが、特定の実施形態において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４の定常領域である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結されていてもよい。
【０２５２】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（加えてＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であってもよいが、特定の実施形態において、カッパ定常領域である。
【０２５３】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグメントは、ＶＨおよびＶＬ配列が、ＶＨおよびＶＬ領域がフレキシブルなリンカーによって合体した連続する単鎖タンパク質として発現できるように、フレキシブルなリンカーをコードする別のフラグメント、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４〜Ｓｅｒ）３をコードする別のフラグメントに作動可能に連結されていてもよい（例えば、Bird et al., 1988, Science 242:423-426；Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554を参照）。
【０２５４】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体を発現させるために、上述したようにして得られた部分的なまたは全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入される。この文脈において、用語「作動可能に連結した」は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するそれらの意図した機能を発揮するように、抗体遺伝子がベクターにライゲートされることを意味することが意図される。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞に適合するように選ばれる。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクターに挿入されていてもよいし、またはより典型的には、両方の遺伝子が同じ発現ベクターに挿入される。
【０２５５】
抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクター上の相補的制限部位ライゲーション、または制限部位が存在しない場合、平滑末端のライゲーション）によって発現ベクターに挿入される。抗グリコＭＵＣ１抗体関連の軽鎖または重鎖配列の挿入の前に、発現ベクターは、すでに抗体定常領域配列を有していてもよい。例えば、抗グリコＭＵＣ１モノクローナル抗体関連のＶＨおよびＶＬ配列を全長抗体遺伝子に変換するための１つのアプローチは、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結されるように、重鎖定常および軽鎖定常領域をそれぞれ予めコードする発現ベクターにそれらを挿入することである。加えて、または代替として、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードしていてもよい。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドがフレーム内で抗体鎖遺伝子のアミノ末端に連結されるように、ベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンのシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であってもよい。
【０２５６】
抗体鎖遺伝子に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞中で抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー、および抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif., 1990に記載されている。当業者であれば、調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換しようとする宿主細胞の選択、望ましいタンパク質の発現のレベルなどのような要因によって決まる可能性があることを理解していると予想される。哺乳類宿主細胞発現に好適な調節配列としては、哺乳類細胞における高レベルのタンパク質発現を指示するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えばＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ならびにポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが挙げられる。ウイルス調節エレメントおよびその配列のさらなる説明に関して、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号明細書、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号明細書、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号明細書を参照されたい。
【０２５７】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞中でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能マーカー遺伝子などの追加の配列を有していてもよい。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、全てＡｘｅｌらによる、米国特許第４，３９９，２１６号明細書、第４，６３４，６６５号明細書および第５，１７９，０１７号明細書を参照）。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキセートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入された宿主細胞に付与する。好適な選択可能マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（ＤＨＦＲ−宿主細胞でメトトレキセート選択／増幅と共に使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどの、原核または真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的に使用される様々な技術を包含することが意図される。
【０２５８】
原核または真核宿主細胞のいずれかで本開示の抗体を発現することが考えられる。特定の実施形態において、抗体の発現、または適切にフォールディングされ免疫学的に活性な抗体の最適な分泌は、真核細胞、例えば、哺乳類宿主細胞で実行される。本開示の組換え抗体を発現するための例示的な哺乳類宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されるＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞などであり、これは、例えば、Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現または宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたり、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。宿主細胞も、無傷抗体の一部、例えばＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子を産生するために使用することができる。上記の手順のバリエーションは本発明の開示の範囲内であることが理解される。例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体の軽鎖または重鎖のいずれか（ただし両方ではない）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある。
【０２５９】
本開示のＣＡＲの発現に関して、例えばセクション６．３として、さらに実施形態１５２および１５３に記載される通り、好ましくは、宿主細胞はＴ細胞であり、好ましくはヒトＴ細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は、細胞が腫瘍細胞上のＭＵＣ１と架橋されると、抗腫瘍免疫を示す。本開示のＴ細胞を産生するための詳細な方法は、セクション６．４．１に記載されている。
【０２６０】
組換えＤＮＡ技術はまた、グリコＭＵＣ１への結合に必ずしも必要ではない軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去するのに使用することもできる。このような短縮化されたＤＮＡ分子から発現される分子も、本開示の抗体に包含される。
【０２６１】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体の組換え発現のために、宿主細胞は、２つの本開示の発現ベクター、すなわち、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターをコトランスフェクトされてもよい。２つのベクターは、同一な選択可能マーカーを含有していてもよく、またはそれらは、それぞれ別の選択可能マーカーを含有していてもよい。代替として、両方の重鎖および軽鎖ポリペプチドをコードする単一のベクターを使用してもよい。
【０２６２】
核酸が抗グリコＭＵＣ１抗体の１つまたは複数の部分をコードするようになれば、例えば、異なるＣＤＲ配列を有する抗体、Ｆｃ受容体への親和性が低減した抗体、または異なるサブクラスの抗体をコードする核酸を生成するように、さらなる変更または突然変異をコード配列に導入することができる。
【０２６３】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体はまた、化学合成によって（例えば、Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.に記載される方法によって）産生することもできる。バリアント抗体も、無細胞プラットフォームを使用して生成することができる（例えば、Chu et al., Biochemia No.2, 2001 (Roche Molecular Biologicals)およびMurray et al., 2013, Current Opinion in Chemical Biology, 17:420-426を参照）。
【０２６４】
組換え発現によって本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体が産生されたら、免疫グロブリン分子の精製に関する当業界において公知のあらゆる方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、分別溶解によって、または他のあらゆる標準的なタンパク質精製技術によってこれを精製することができる。さらに、本発明の開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／または結合フラグメントは、精製を容易にするために、本明細書に記載される、またはそれ以外の当業界において公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
【０２６５】
抗グリコＭＵＣ１抗体は、単離されたら、必要に応じて、例えば高速液体クロマトグラフィーによって（Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology, Work and Burdon, eds., Elsevier, 1980を参照）、またはＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）７５カラム（Pharmacia Biotech AB、Uppsala、Sweden）でのゲルろ過クロマトグラフィーによってさらに精製してもよい。
【０２６６】
６．４．１．Ｔ細胞におけるＣＡＲの組換え産生
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１  ＣＡＲをコードする核酸は、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用して細胞に送達される。ＣＡＲを発現するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクターは、担体として形質導入された細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のベクターの無細胞の局所または全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織および生物全体にも送達することができる。使用される方法は、安定な発現が必要であるかまたは十分なあらゆる目的のための方法であり得る。
【０２６７】
他の実施形態において、ＣＡＲ配列は、インビトロで転写されたｍＲＮＡを使用して細胞に送達される。インビトロで転写されたｍＲＮＡ  ＣＡＲは、担体としてトランスフェクトされた細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のｍＲＮＡの無細胞の局所または全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織および生物全体にも送達することができる。使用される方法は、一過性発現が必要であるかまたは十分なあらゆる目的のための方法であり得る。
【０２６８】
別の実施形態において、望ましいＣＡＲは、トランスポゾンによって細胞中で発現させることができる。
【０２６９】
本開示のＲＮＡトランスフェクション方法の１つの利点は、ＲＮＡトランスフェクションは、本質的に一過性であり、ベクターを含まないことであり、すなわちＲＮＡ導入遺伝子は、リンパ球に送達され、短時間のインビトロにおける細胞活性化の後、いかなる追加のウイルス配列も必要とせずに、最小限の発現カセットとしてそこで発現される。これらの条件下で、宿主細胞ゲノムへの導入遺伝子の組込みが起こる可能性は低い。細胞のクローニングは、必ずしもＲＮＡのトランスフェクション効率やリンパ球集団全体を均一に改変するその能力によるわけではない。
【０２７０】
インビトロで転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ−ＲＮＡ）でのＴ細胞の遺伝学的改変は、両方とも様々な動物モデルで継続的に試験されている２つの異なる戦略を利用する。細胞に、リポフェクションまたはエレクトロポレーションによって、インビトロで転写されたＲＮＡをトランスフェクトする。好ましくは、移入されたＩＶＴ−ＲＮＡの持続的な発現を達成するために、様々な改変を使用してＩＶＴ−ＲＮＡを安定化させることが望ましい。
【０２７１】
一部のＩＶＴベクターが、インビトロでの転写のためのテンプレートとして標準化された方式で利用されており、安定化されたＲＮＡ転写物が産生されるように遺伝子改変されていることが文献公知である。現在のところ、当業界で使用されるプロトコールは、以下の構造：ＲＮＡ転写を可能にする５’ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、それに続き３’および／または５’のいずれかで非翻訳領域（ＵＴＲ）に隣接する目的の遺伝子、および５０〜７０個のＡヌクレオチドを含有する３’ポリアデニルカセットを有するプラスミドベクターに基づく。インビトロでの転写の前に、環状プラスミドを、ポリアデニルカセットの下流でＩＩ型制限酵素（認識配列は切断部位に対応する）によって線形化する。したがってポリアデニルカセットは、転写物中の後期ポリ（Ａ）配列に対応する。この手順の結果として、一部のヌクレオチドは、線形化後に酵素切断部位の一部として残り、３’末端におけるポリ（Ａ）配列を伸長させるかまたはマスキングする。この非生理学的なオーバーハングが、このようなコンストラクトから細胞内で産生されたタンパク質の量に影響を与えるかどうかは不明確である。
【０２７２】
ＲＮＡは、より伝統的なプラスミドまたはウイルスアプローチを超える数々の利点を有する。ＲＮＡ源からの遺伝子発現は、転写を必要とせず、タンパク質生成物は、トランスフェクションのすぐ後に産生される。さらに、ＲＮＡは、核ではなく細胞質に侵入するだけでよいため、典型的なトランスフェクション方法は、極めて高いトランスフェクション率をもたらす。加えて、プラスミドベースアプローチは、研究中の細胞中で目的の遺伝子の発現を駆動させるプロモーターを活性にすることを必要とする。
【０２７３】
別の態様において、ＲＮＡコンストラクトは、エレクトロポレーションによって細胞に送達することができる。例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４６４５号明細書、米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号明細書、米国特許出願公開第２００５／００７０８４１号明細書、米国特許出願公開第２００４／００５９２８５号明細書、米国特許出願公開第２００４／００９２９０７号明細書で教示されるような、哺乳類細胞への核酸コンストラクトのエレクトロポレーションの配合物および手法を参照されたい。あらゆる公知の細胞型のエレクトロポレーションに必要な電場強度などの様々なパラメーターは、一般的に、この分野の関連する研究文献に加えて多数の特許および出願において公知である。例えば、米国特許第６，６７８，５５６号明細書、米国特許第７，１７１，２６４号明細書、および米国特許第７，１７３，１１６号明細書を参照されたい。エレクトロポレーションの治療適用のための装置、例えば、ＭｅｄＰｕｌｓｅｒ（商標）ＤＮＡエレクトロポレーション治療システム（Ｉｎｏｖｉｏ／Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）が商業的に利用可能であり、米国特許第６，５６７，６９４号明細書；米国特許第６，５１６，２２３号明細書、米国特許第５，９９３，４３４号明細書、米国特許第６，１８１，９６４号明細書、米国特許第６，２４１，７０１号明細書、および米国特許第６，２３３，４８２号明細書などの特許に記載されており、エレクトロポレーションは、例えば米国特許出願公開第２００７０１２８７０８号明細書で記載されるように、インビトロでの細胞のトランスフェクションのためにも使用することができる。またエレクトロポレーションは、インビトロで核酸を細胞に送達することにも利用することができる。したがって、当業者公知の多くの利用可能なデバイスおよびエレクトロポレーションシステムのいずれかを利用する、発現コンストラクトを含む核酸の細胞へのエレクトロポレーション媒介投与は、標的細胞に目的のＲＮＡを送達するためのエキサイティングな新しい手段を提供する。
【０２７４】
６．４．１．１  Ｔ細胞源
Ｔ細胞源は、増加させ遺伝学的に改変する前に、対象から得られる。用語「対象」は、免疫応答を惹起できる生物（例えば、哺乳動物）を含むことが意図される。対象の例としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が挙げられる。好ましくは、対象は、ヒトである。
【０２７５】
Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸膜滲出液、脾臓組織、および腫瘍などの多数の源から得ることができる。本発明の開示の特定の実施形態において、当業界において入手可能な様々なＴ細胞株を使用することができる。本発明の開示の特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者公知の様々な技術を使用して対象から収集された血液単位から得ることができる。好ましい一実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスにより得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施形態において、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、それに続く処理工程のために、細胞を適切な緩衝液または媒体中に入れることができる。本開示の一実施形態において、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠いていてもよく、または部分的であっても多くの２価カチオンを欠いていてもよい。ここでも、驚くべきことに、カルシウムの非存在下における最初の活性化工程は、一層の活性化をもたらす。当業者であれば容易に理解していると予想されるように、洗浄工程は、当業者公知の方法によって、例えば、製造元の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用することによって達成してもよい。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性の緩衝液、例えば、Ｃａ非含有、Ｍｇ非含有ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝液含有もしくは非含有の他の塩類溶液などに再懸濁してもよい。代替として、アフェレーシスサンプルの不要な成分を除去して、細胞を培養培地に直接再懸濁してもよい。
【０２７６】
別の実施形態において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離または対向流遠心溶出法により単球を枯渇させることによって末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の部分集団、例えばＣＤ３＋、ＣＤ２８’、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離することができる。例えば、一実施形態において、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８個の）コンジュゲートビーズ、例えばＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔと、望ましいＴ細胞の陽性選択に十分な期間にわたりインキュベートすることによって単離される。一実施形態において、期間は、約３０分である。さらなる実施形態において、期間は、３０分から、３６時間またはそれより長い時間の範囲、その間の全ての整数値の範囲である。さらなる実施形態において、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい実施形態において、期間は、１０から２４時間である。好ましい一実施形態において、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からのＴ細胞の単離の場合、より長いインキュベーション時間、例えば２４時間の使用は、細胞収量を上昇させることができる。より長いインキュベーション時間は、腫瘍組織または免疫不全個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合のように、他の細胞型と比較してＴ細胞が極めて少ないあらゆる状況でＴ細胞を単離するのに使用することができる。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を増加させることができる。したがって、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を短くするまたは長くすることによって、および／またはビーズのＴ細胞に対する比率を増加または減少させることによって（本明細書でさらに記載される通り）、培養開始のときに、またはプロセス中の他のタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにかかわらず優先的に選択することができる。加えて、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、培養開始のときに、または他の望ましいタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにかかわらず優先的に選択することができる。当業者であれば、本開示の状況において複数回の選択も使用できることを認識しているものと予想される。特定の実施形態において、選択手順を実行し、活性化および増加プロセスで「選択されなかった」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されなかった」細胞はまた、さらなる回数の選択に供することもできる。
【０２７７】
陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択された細胞に固有な表面マーカーに対する抗体を併用して達成することができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に提示される細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫接着またはフローサイトメトリーを介したセルソーティングおよび／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。特定の実施形態において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化する、またはそれらを陽性選択することが望ましい場合がある。代替として、特定の実施形態において、調節性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似の選択方法によって、枯渇される。
【０２７８】
陽性または陰性選択による望ましい細胞集団の単離のために、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、様々であってもよい。特定の実施形態において、ビーズおよび細胞を一緒に混合する体積を顕著に減少させ（すなわち、細胞の濃度を増加させる）、細胞およびビーズの最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば、一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞２０億個の濃度が使用される。一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１０億個の濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、または５０００万個の細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態において、１ｍｌ当たり細胞７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個からの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億２５００万または１億５０００万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、細胞収量の上昇、細胞の活性化、および細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞のより効率的な捕捉、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病の血液、腫瘍組織など）からの捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が比較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０２７９】
関連する実施形態において、より低い細胞濃度を使用することが望ましい場合がある。Ｔ細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の混合物を顕著に希釈することによって、粒子と細胞との間の相互作用が最小化される。これは、粒子に結合させようとする望ましい抗原を大量に発現する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、より高いレベルのＣＤ２８を発現し、希薄な濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕捉される。一実施形態において、使用される細胞濃度は、５×１０６／ｍｌである。他の実施形態において、使用される濃度は、約１×１０５／ｍｌから１×１０６／ｍｌ、およびその間のあらゆる整数値の範囲であってもよい。
【０２８０】
他の実施形態において、細胞は、回転器において、様々な長さの時間にわたり、様々な速度で、２℃〜１０℃または室温のいずれかでインキュベートしてもよい。
【０２８１】
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後に凍結してもよい。理論に縛られるつもりはないが、凍結およびそれに続く融解工程は、細胞集団中の顆粒球やある程度の単球を除去することによって、より均質な生成物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄工程後に、細胞を凍結溶液中に懸濁してもよい。多くの凍結溶液およびパラメーターが当業界において公知であり、この状況において有用であると予想されるが、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、または１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、および７．５％ＤＭＳＯを含有する培養培地、または例えばＨｅｓｐａｎおよびＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含有する他の好適な細胞凍結培地を使用することを含み、次いで細胞は、１°／分の速度で−８０℃に凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵される。他の制御冷凍方法も、−２０℃で即座の、または液体窒素中の制御されていない冷凍と同様に使用することができる。
【０２８２】
特定の実施形態において、本発明の開示の方法を使用して活性化する前に、低温保存された細胞を融解し、本明細書に記載される通り洗浄し、室温で１時間そのまま静置する。
【０２８３】
また、本明細書に記載される増加した細胞が必要と思われるときの前の期間に、対象から血液サンプルまたはアフェレーシス生成物を収集することも本開示の状況において予期される。したがって、増加させようとする細胞の源は、必要なあらゆるタイムポイントで収集でき、望ましい細胞、例えばＴ細胞を、Ｔ細胞療法によって利益を得ると予想される様々な疾患または状態、例えば本明細書に記載される疾患または状態のためのＴ細胞療法での後の使用のために単離および凍結することができる。一実施形態において、血液サンプルまたはアフェレーシスは、全体的に健康な対象から採取される。特定の実施形態において、血液サンプルまたはアフェレーシスは、疾患を発症させるリスクがあるが疾患をまだ発症させていない全体的に健康な対象から採取され、目的の細胞は、後の使用のために単離および凍結される。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、その後の時間で増加する、凍結する、および使用することが可能である。特定の実施形態において、サンプルは、本明細書に記載される特定の疾患の診断の直後に、ただしいずれかの処置の前に、患者から収集される。さらなる実施形態において、様々な関連する処置法、例えば、これらに限定されないが、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸塩、およびＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、および放射線照射などの薬剤での処置の前に、細胞は、対象からの血液サンプルまたはアフェレーシスから単離される。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファターゼであるカルシニューリンを阻害するか（シクロスポリンおよびＦＫ５０６）、または増殖因子によって誘導されたシグナル伝達にとって重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害するか（ラパマイシン）のいずれかである。（Liu et al., Cell 66:807-815, 1991；Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991；Bierer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993）。さらなる実施形態において、細胞は、化学療法剤、例えばフルダラビン、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドのいずれかを使用する骨髄もしくは幹細胞移植またはＴ細胞除去療法を併用する（例えば、その前の、それと同時の、またはその後の）後の使用のために、患者ごとに単離され、凍結される。
【０２８４】
本発明の開示のさらなる実施形態において、Ｔ細胞は、処置の直後に患者から得られる。これに関して、特定のがん処置の後、特に免疫系に損傷を与える薬物での処置の後、患者が通常処置から回復すると予想される期間中の処置の直後に、得られたＴ細胞の品質は、そのエクスビボで増加する能力に関して最適であるかまたは改善されている可能性があることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用するエクスビボでの操作の後、これらの細胞は、生着およびインビボでの増加の強化にとって好ましい状況にある可能性がある。したがって、本発明の開示の状況において、この回復期間中、Ｔ細胞、樹状細胞、または他の造血系統の細胞を含む血液細胞を収集することが予期される。さらに、特定の実施形態において、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの動員）およびコンディショニングレジメンは、特に療法後の既定された時間枠中に特定の細胞型の再定着、再循環、再生、および／または増加にとって好ましい、対象における状態を生じさせるために使用することができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および他の免疫系細胞が挙げられる。
【０２８５】
６．４．１．２  Ｔ細胞の活性化および増加
Ｔ細胞は、一般的に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；第６，５３４，０５５号明細書；第６，９０５，６８０号明細書；第６，６９２，９６４号明細書；第５，８５８，３５８号明細書；第６，８８７，４６６号明細書；第６，９０５，６８１号明細書；第７，１４４，５７５号明細書；第７，０６７，３１８号明細書；第７，１７２，８６９号明細書；第７，２３２，５６６号明細書；第７，１７５，８４３号明細書；第５，８８３，２２３号明細書；第６，９０５，８７４号明細書；第６，７９７，５１４号明細書；第６，８６７，０４１号明細書；および米国特許公開公報第２００６０１２１００５号明細書に記載されるような方法を使用して活性化および増加される。
【０２８６】
一般的に、本開示のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤およびＴ細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが取り付けられた表面と接触させることによって増加される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または表面上に固定された抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、またはカルシウムイオノフォアと共にプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチン）と接触させることによって、本明細書に記載されるように刺激することができる。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、一般的に当業界で公知の他の方法と同様に使用できる（Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999）。
【０２８７】
特定の実施形態において、Ｔ細胞に関する一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、様々なプロトコールによって提供することができる。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液の形態であってもよいし、または表面にカップリングされていてもよい。表面にカップリングされる場合、薬剤は、同じ表面に（すなわち、「ｃｉｓ」構成で）または別の表面に（すなわち、「ｔｒａｎｓ」構成で）カップリングされていてもよい。代替として、一方の薬剤が表面にカップリングされ、他方の薬剤が溶液の形態であってもよい。一実施形態において、共刺激シグナルを提供する薬剤が、細胞表面に結合しており、一次活性化シグナルを提供する薬剤が、溶液の形態であるかまたは表面にカップリングされている。特定の実施形態において、両方の薬剤が、溶液の形態であってもよい。別の実施形態において、薬剤は、可溶性の形態であってもよく、次いで、Ｆｃ受容体を発現する細胞などの表面に、または薬剤に結合すると予想される抗体もしくは他の結合剤に架橋されてもよい。これに関して、例えば、本発明の開示においてＴ細胞の活性化および増加での使用に関して予期される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に関して、米国特許出願公開公報第２００４０１０１５１９号明細書および第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
【０２８８】
一実施形態において、２つの薬剤は、同じビーズ上、すなわち「ｃｉｓ」、または別のビーズ上、すなわち「ｔｒａｎｓ」のいずれかで、ビーズ上に固定される。一例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、両方の薬剤は、同等の分子の量で同じビーズ共に固定される。一実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加およびＴ細胞増殖のために、１：１比率のビーズに結合した各抗体が使用される。本発明の開示の特定の態様において、１：１の比率を使用して観察された増加と比較してＴ細胞増加における上昇が観察されるような、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率が使用される。１つの特定の実施形態において、１：１の比率を使用して観察された増加と比較して、約１から約３倍の上昇が観察される。一実施形態において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率は、１００：１から、１：１００の範囲、およびその間の全ての整数値の範囲である。本発明の開示の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比率は、１未満である。本開示の特定の実施形態において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体の抗ＣＤ３抗体に対する比率は、２：１より大きい。１つの特定の実施形態において、１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。さらなる実施形態において、１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。好ましい一実施形態において、１：１０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。さらに別の実施形態において、３：１のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。
【０２８９】
１：５００から５００：１、およびその間のあらゆる整数値の粒子の細胞に対する比率が、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激するのに使用することができる。当業者であれば容易に理解できるように、粒子の細胞に対する比率は、標的細胞に対する粒度によって決まる可能性がある。例えば、小さいサイズのビーズは数個の細胞としか結合できないが、より大きいビーズは多くの細胞と結合できる。特定の実施形態において細胞の粒子に対する比率は、１：１００から１００：１の範囲、およびその間のあらゆる整数値であり、さらなる実施形態において、比率は、１：９から９：１の範囲、およびその間のあらゆる整数値を含み、これらもＴ細胞を刺激するのに使用することができる。Ｔ細胞刺激が起こる抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８がカップリングした粒子とＴ細胞の比率は、上述したように様々であってもよいが、特定の好ましい値としては、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、および１５：１が挙げられ、１つの好ましい比率は、少なくとも１：１の粒子のＴ細胞に対する比率である。一実施形態において、１：１またはそれより低い粒子の細胞に対する比率が使用される。１つの特定の実施形態において、好ましい粒子：細胞の比率は、１：５である。さらなる実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の日に応じて変更することができる。例えば、一実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、１日目に１：１から１０：１であり、その後、１０日まで、追加の粒子が、１：１から１：１０の最終的な比率で（添加の日の細胞数に基づく）毎日または１日おきに細胞に添加される。１つの特定の実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の１日目に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調整される。別の実施形態において、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終的な比率に、刺激の３日目および５日目に１：５にする。別の実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の１日目に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。別の実施形態において、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終的な比率に、刺激の３日目および５日目に１：１０にする。当業者は、様々な他の比率が、本発明の開示で使用するのに適している可能性があることを理解しているものと予想される。特に、比率は、粒度および細胞のサイズおよびタイプに応じて様々であると予想される。
【０２９０】
本発明の開示のさらなる実施形態において、細胞、例えばＴ細胞を、薬剤でコーティングされたビーズと合わせ、その後、ビーズおよび細胞を分離し、次いで細胞を培養する。代替の実施形態において、培養の前に、薬剤でコーティングされたビーズおよび細胞を分離しないが、一緒に培養する。さらなる実施形態において、まず磁力などの力の適用によってビーズおよび細胞を濃縮し、その結果として細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それによって細胞の刺激を誘導する。
【０２９１】
一例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が取り付けられている常磁性ビーズ（３×２８個のビーズ）をＴ細胞と接触させることによってライゲートさせることができる。一実施形態において、細胞（例えば、１０４から１０９個のＴ細胞）およびビーズ（例えば、１：１の比率のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔ常磁性ビーズ）を、緩衝液中で、好ましくはＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムなどの２価カチオンを含まない）中で合わせる。ここでも当業者は、あらゆる細胞濃度が使用できることを容易に理解することができる。例えば、標的細胞は、サンプル中で非常に希少であってもよいし、サンプルの０．０１％を構成するだけでもよく、またはサンプル全体（すなわち、１００％）が目的の標的細胞で構成されていてもよい。したがって、あらゆる細胞数が、本発明の開示の内容に含まれる。特定の実施形態において、粒子および細胞が一緒に混合される体積を有意に減少させて（すなわち、細胞の濃度を増加させて）、細胞と粒子との最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば、一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞約２０億個の濃度が使用される。別の実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり、細胞１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３０００万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個の細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態において、１ｍｌ当たり、細胞７５００万個、８０００万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個の細胞濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億２５００万個または１億５０００万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、細胞収量の上昇、細胞の活性化、および細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞のより効率的な捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、特定の実施形態において入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が比較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０２９２】
本発明の開示の一実施形態において、混合物は、数時間（約３時間）から約１４日にわたり、またはその間の整数値のいずれかの時間で培養することができる。別の実施形態において、混合物は、２１日間培養することができる。本開示の一実施形態において、ビーズおよびＴ細胞は、約８日間、一緒に培養される。別の実施形態において、ビーズおよびＴ細胞は、２〜３日間、一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間を６０日またはそれより長くできるように、数サイクルの刺激が望ましい場合もある。Ｔ細胞培養に適切な条件としては、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ−αなどの増殖および生存に必要な因子、または当業者公知の細胞増殖のための他のあらゆる添加剤を含有していてもよい適切な培地（例えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０または、Ｘ−ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ））が挙げられる。細胞増殖のための他の添加剤としては、これらに限定されないが、界面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ−アセチル−システインおよび２−メルカプトエタノールなどの還元剤が挙げられる。培地としては、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加された、無血清か、または適切な量の血清（または血漿）または既定されたセットのホルモン、および／またはＴ細胞の増殖および増加に十分な量のサイトカインが補充されたかのいずれかの、ＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ  １５、およびＸ−Ｖｉｖｏ  ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを挙げることができる。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験培養でのみ含まれ、対象に注入しようとする細胞の培養には含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件下で、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、空気に加えて５％ＣＯ２）下で維持される。
【０２９３】
様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液またはアフェレーシスを受けた末梢血単核細胞生成物は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。エクスビボでのＣＤ３およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞の増加は、約８〜９日目の前、主としてＴＨ細胞からなるＴ細胞の集団を産生するが、約８〜９日目の後、Ｔ細胞の集団は、より一層大きいＴＣ細胞の集団を含む。したがって、処置の目的に応じて、主としてＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが、有利な場合がある。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的なサブセットが単離された場合、このサブセットをより高度に増加させることが有益な場合がある。
【０２９４】
さらに、ＣＤ４およびＣＤ８マーカーに加えて、細胞増加プロセスの経過中、他の表現型マーカーは、顕著に、ただし大部分は再現性よく変化する。したがって、このような再現性は、活性化Ｔ細胞生成物を特定の目的に合わせる能力を可能にする。
【０２９５】
６．５  組成物
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／または抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣは、抗グリコＭＵＣ１抗体および／またはＡＤＣ、ならびに１つまたは複数の担体、賦形剤および／または希釈剤を含む組成物の形態であってもよい。組成物は、特定の使用のために、例えば、獣医学的な使用またはヒトでの医薬的な使用のために製剤化されてもよい。使用される組成物（例えば、乾燥粉末、液体配合物など）ならびに賦形剤、希釈剤および／または担体の形態は、抗体および／またはＡＤＣの意図される使用によって、さらに治療的使用、投与様式ごとに決まると予想される。
【０２９６】
治療的使用の場合、組成物は、医薬的に許容される担体を含む滅菌された医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、あらゆる好適な形態であり得る（患者にそれを投与する望ましい方法に応じて）。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、クモ膜下、外用または局所などの様々な経路によって患者に投与することができる。いずれかの所与の場合における最も好適な投与経路は、特定の抗体および／またはＡＤＣ、対象、ならびに対象の疾患および身体的な状態の性質および重症度によって決まると予想される。典型的には、医薬組成物は、静脈内または皮下投与されると予想される。
【０２９７】
医薬組成物は、１用量当たり予め決定された量の本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／または抗グリコＭＵＣ１  ＡＤＣを含有する単位剤形で都合よく提供することができる。単位用量に含まれる抗体および／またはＡＤＣの量は、処置されている疾患、加えて当業界において周知の他の要因によって決まると予想される。このような単位投薬は、単回投与に好適な抗体および／またはＡＤＣの量を含有する凍結乾燥された乾燥粉末の形態であってもよいし、または液体の形態であってもよい。乾燥粉末の単位剤形は、キット中に、シリンジ、好適な量の希釈剤および／または投与に有用な他の成分と共にパッケージ化されていてもよい。液体形態での単位投薬は、単回投与に好適な量の抗体および／またはＡＤＣで予め充填されたシリンジの形態で都合よく供給することができる。
【０２９８】
医薬組成物はまた、複数回投与に好適な量のＡＤＣを含有するバルクの形態で供給されてもよい。
【０２９９】
医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液として貯蔵するために、望ましい純度を有する抗体および／またはＡＤＣを、当業界において典型的に採用される任意選択の医薬的に許容される担体、賦形剤または安定剤（これらは全て、本明細書では「担体」と称される）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性デタージェント、抗酸化剤、および他の混成の添加剤と混合することによって調製してもよい。Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed.1980)を参照されたい。このような添加剤は、受容者に対して、採用された投薬および濃度で非毒性であるべきである。
【０３００】
緩衝剤は、ｐＨを生理学的条件に近い範囲に維持することを助ける。緩衝剤は、様々な濃度で存在していてもよいが、典型的には約２ｍＭから約５０ｍＭの範囲の濃度で存在すると予想される。本発明の開示で使用するために好適な緩衝剤としては、例えば、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム−クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸−コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸−水酸化ナトリウム混合物、コハク酸−コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸−酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸−酒石酸カリウム混合物、酒石酸−水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸−フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸−フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム−フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸−グルコン酸ナトリウム（sodium glyconate）混合物、グルコン酸−水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸−グルコン酸カリウム（potassium glyuconate）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸−シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸−水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸−シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸−乳酸ナトリウム混合物、乳酸−水酸化ナトリウム混合物、乳酸−乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸−酢酸ナトリウム混合物、酢酸−水酸化ナトリウム混合物など）などの、有機および無機酸の両方ならびにその塩が挙げられる。加えて、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリメチルアミン塩、例えばトリスを使用することができる。
【０３０１】
微生物の増殖を妨害するために、保存剤が添加されていてもよく、約０．２％〜１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本発明の開示で使用するために好適な保存剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびアルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、ならびに３−ペンタノールが挙げられる。等張化剤は、時には「安定剤」としても公知であり、本発明の開示の液体組成物の等張性を確実にするために添加することができ、その例としては、多価糖アルコール、例えば３水酸基またはそれより多くの水酸基を有する糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられる。安定剤は、賦形剤の広義のカテゴリーを指し、これは、増量剤から、治療剤を可溶化したり、または変性または容器壁への接着の防止を助けたりする添加剤まで機能面で様々なものであり得る。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記列挙されたもの）；例えばアルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸、例えばラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクチトール、グリセロールなど、例えばシクリトール、例えばイノシトールなどの有機糖または糖アルコール；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄を含有する還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基またはそれより少ない残基のペプチド）；例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、例えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなどの単糖；例えばラクトース、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどの二糖類；ならびに例えばラフィノースなどの三糖（trisaccacharide）；ならびに例えばデキストランなどの多糖類であり得る。安定剤は、ＡＤＣの重量に対して０．５から１０ｗｔ％の範囲の量で存在していてもよい。
【０３０２】
非イオン界面活性剤またはデタージェント（「湿潤剤」としても公知）は、糖タンパク質の可溶化を助けることに加えて、撹拌により誘発される凝集から糖タンパク質を保護するために添加されてもよく、それにより、タンパク質変性を引き起こすことなく配合物がストレスを受けた剪断面に曝されることも許容する。好適な非イオン界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（polyoxamer）（１８４、１８８など）、およびプルロニックポリオールが挙げられる。非イオン界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば約０．０７ｍｇ／ｍＬから約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在していてもよい。
【０３０３】
追加の混成の賦形剤としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が挙げられる。
【０３０４】
６．６  使用方法
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、様々な診断アッセイで使用することができる。例えば、抗体および結合フラグメントは、イムノアッセイ、例えば競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイ、例えば、免疫組織化学法、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびウェスタンブロットなどで採用することができる。
【０３０５】
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントはまた、インビボの放射線撮影画像化にも有用であり、その場合、放射線不透過性の薬剤または放射線同位体などの検出可能な部分で標識された抗体が、対象に、好ましくは血流に投与され、標識された抗体の宿主中の存在および位置がアッセイされる。この画像化技術は、悪性腫瘍の病期分類および処置において有用である。
【０３０６】
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメント、ＡＤＣおよびＣＡＲは、グリコＭＵＣ１を発現するがん、例えば、膀胱がん、肺がん、脳がん、乳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、卵巣がん；結腸直腸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、肝臓がん、子宮がん、および子宮頸がんなどを処置するのに有用である。一部の実施形態において、がんは、上皮がん、例えば乳がん、卵巣がん、膵臓がん、または肺がんである。
【０３０７】
したがって、本開示は、例えば、がん、例えば前の段落で同定されたがんのいずれかの処置で使用するための医薬として使用するための、診断アッセイで使用するための、および放射線写真のインビボにおける画像化で使用するための、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体、結合フラグメント、ＡＤＣ、およびＣＡＲを提供する。本開示は、さらに、例えば、がん、例えば前の段落で同定されたがんのいずれかの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体、結合フラグメント、ＡＤＣおよびＣＡＲの使用を提供する。
【０３０８】
療法に本開示のＣＡＲを使用する場合、本開示の治療方法は、グリコＭＵＣ１を発現する腫瘍を有する対象に、例えばセクション６．３または実施形態１５２または実施形態１５３に記載されるように、本開示のＣＡＲを発現するように操作された遺伝子改変された細胞の有効量を投与することを含む。ＣＡＲを発現するように細胞、特にＴ細胞を改変する方法は、セクション６．４．１に記載されている。
【実施例】
【０３０９】
[実施例１]
抗グリコＭＵＣ１抗体の同定
７．１．１．材料および方法
７．１．１．１  Ｔｎ  ＭＵＣ１糖ペプチドの合成
ＧＳＴ−ＭＵＣ１  １５−ｍｅｒ（ビオチン−ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ）（配列番号９９）ペプチドを、最初にFontenot et al., 1993, Pept. Res. 6:330-336によって報告されたように、太字と下線の文字で同定されたセリンおよびスレオニン残基上に提示されるＧａｌＮＡｃを有するペプチドを提供するために、グリコシル化部位のために標準的な合成ペプチド化学およびＦ−ＭＯＣ−ＧａｌＮＡｃ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒを使用して合成した。この糖ペプチドは、時には本明細書において「ＧＳＴＡ」と言及される。グリコシル化なしの対照ペプチド７０−ＭＵＣ１（ビオチン−ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ）（配列番号９９）をスクリーニングのために使用した。精製されたグリコペプチドは、ディレイドエクストラクションを備えたＶｏｙａｇｅｒ  ＤＥまたはＶｏｙａｇｅｒ  ＤＥ  Ｐｒｏ  ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって特徴付けられた。ＭＡＬＤＩマトリックスは、０．１％ＴＦＡと３０％アセトニトリル水溶液との２：１混合物中に溶解した１０ｇ／Ｌの２，５−ジヒドロキシ安息香酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）であった。０．１％ＴＦＡ中に約１ｐｍｏｌ／μＬの濃度に溶解したサンプルを、１μＬのサンプル溶液をプローブチップに入れ、続いて１ｕＬのマトリックスを入れることによって分析のために調製した。全ての質量スペクトルをリニアモードで得た。データ処理を、ＧＲＡＭＳ  ／３８６ソフトウェア（Ｇａｌａｃｔｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｓａｌｅｍ、ＮＨ）を使用して行った。
【０３１０】
７．１．１．２  免疫化プロトコール
ＧＳＴ−グリコペプチドを、グルタルアルデヒドを使用してＫＬＨ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）にカップリングした。コンジュゲーションの効率を、画分の抗ＭＵＣ１  ＥＬＩＳＡを使用したＰＤ−１０カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーにより反応を分析することによって評価した。本質的に全ての反応性が、排除された画分で見出され、ペプチドを含有することが予測される排除されなかった画分で、有意ではない反応性が見出された。さらなる評価には、ＥＬＩＳＡでの対応するグリコペプチドとのＫＬＨコンジュゲートの比較滴定分析が含まれていた。コンジュゲーションが完全に近いと、１：３００の、ＫＬＨのグリコペプチドに対する比率がもたらすはずであり、両方の分析はコンジュゲーションが完全に近いことを示した。雌Ｂａｌｂ／ｃ野生型マウスに、総体積２００μＬの１０または１５μｇの（糖）ペプチド（フロイントアジュバント、Ｓｉｇｍａとの１：１の混合物）を皮下注射した。マウスは１４日の間隔をあけて４回の免疫化を受け、３回目および４回目の免疫化から１週間後に尾部または目からの出血によって血液サンプルを得た。
【０３１１】
７．１．１．３  マウスＭＡｂ抗Ｔｎ−ＭＵＣ１の生成
ＫＬＨにカップリングされたＧＳＴ−ＭＵＣ１糖ペプチドで免疫化された野生型Ｂａｌｂ／ｃマウス由来のＭＡｂを、糖ペプチドＥＬＩＳＡ、それに続いて乳がん細胞株（ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ）を用いた免疫細胞学およびがん組織を用いた免疫組織学を使用してスクリーニングした。選択は、同じマウスの総血清に類似する反応性パターンに基づいてなされた。２つの抗体、１ＡＧおよび４ＡＧを、さらなる特徴付けのために選択した。
【０３１２】
［実施例２］
ＥＬＩＳＡによる１ＡＧおよび４ＡＧ抗体の機能的な特徴付け
７．２．１．概要
表４で示されるように異なるグリコシル化部位（非グリコシル化ペプチドを含む）を有する、滴定されるＭＵＣ１ペプチドに対する抗ＭＵＣ１  ｍＡｂの反応性を試験するために、１ＡＧおよび４ＡＧを、間接的なＥＬＩＳＡによって特徴付けた。
【０３１３】
【表１２】
2021529524.tif 000044
【０３１４】
７．２．２．材料および方法
ＥＬＩＳＡプレートを、０．０８μｇ／ｍｌから１０μｇ／ｍｌの範囲の濃度で一晩かけて０．２Ｍの炭酸水素塩緩衝液、ｐＨ９．４中で滴定したＭＵＣ１ペプチドでコーティングした。ＢＳＡを、対照／バックグラウンドの尺度として使用した。次いでプレートを、ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で、室温で１時間ブロックした。プレートを洗浄した後、１ＡＧおよび４ＡＧハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡプレート上で１時間インキュベートした。次いでプレートを洗浄し、次いで二次抗体（１／３０００のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（ａｂｃａｍ  ６２−６５２０））と共に１時間インキュベートした。次いでプレートを洗浄し、１−Ｓｔｅｐ（商標）Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で２分間発色させた。次いで発色を２Ｎ硫酸で止めた。次いで４５０ｎｍでの吸光度を測定した。
【０３１５】
７．２．３．結果
図１Ａ〜図１Ｆおよび図２Ａ〜図２Ｂに、結果を示す。図面で示されるように、１ＡＧおよび４ＡＧは、グリコシル化ペプチドＣ３、Ｃ４およびＧＳＴに特異的に結合するが、グリコシル化ペプチドＣ２または非グリコシル化ペプチド７０に結合しない。
【０３１６】
［実施例３］
抗体滴定による１ＡＧおよび４ＡＧ抗体の機能的な特徴付け
１ＡＧおよび４ＡＧを、一定濃度の抗原ＧＳＴＡに対する抗体滴定アッセイによって特徴付けた。
【０３１７】
図３に、結果を示す。
【０３１８】
［実施例４］
表面プラズモン共鳴による１ＡＧおよび４ＡＧ抗体の機能的な特徴付け
７．４．１．材料および方法
１つのグリコシル化および１つの非グリコシル化ペプチドへの１ＡＧおよび４ＡＧ抗体の結合（表５）を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価した。
【０３１９】
【表１３】
2021529524.tif 000045
【０３２０】
全てのＳＰＲ実験を、各チャネルで１０，０００ＲＵの抗マウス抗体を用いたＣＭ５センサーチップを備えたＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、２５℃で、ランニングおよびサンプル緩衝液としてＨＢＳ−Ｐ＋（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、および１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ）、および再生緩衝液として１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．７を用いて実行した。
【０３２１】
１ＡＧおよび４ＡＧ抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０中の３０μｇ／ｍＬ溶液として、標準的なアミンカップリング化学（ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化）を使用して固定した。抗体補足を、５μＬ／分で７から１０分にわたり、反応緩衝液への１０倍希釈を使用して実行した。６００から１０００ＲＵの固定レベルを使用した。ペプチドサンプルを、ランニング緩衝液中の１００ｎＭの開始濃度を用いた一連の２倍希釈物（６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、および１００ｎＭ）として調製し、単一サイクルの注入で、５０μＬ／分で２分にわたり注入した。解離を５分から３０分にわたりモニターした。
【０３２２】
７．４．２．結果
表６に、結果を示す。表６で示されるように、グリコシル化ペプチドに対する１ＡＧの親和性は、２桁のナノモル濃度範囲内であり、グリコシル化ペプチドに対する４ＡＧの親和性は、１桁のナノモル濃度範囲内である。
【０３２３】
【表１４】
2021529524.tif 000046
【０３２４】
［実施例５］
抗グリコＭｕｃ１抗体の配列分析
ｃＤＮＡ末端の迅速増幅（Ｒａｐｉｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  Ｅｎｄｓ；ＲＡＣＥ）を実行して、１ＡＧおよび４ＡＧの重鎖および軽鎖ヌクレオチド配列を決定した。
【０３２５】
１ＡＧの重鎖および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２１および配列番号２２に記載されている。配列番号２１および配列番号２２によってコードされた重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１および配列番号２に記載されている。予測された重鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列番号３〜５に記載されており、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列番号６〜８に記載されている。予測された重鎖ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔの定義）は、それぞれ配列番号９〜１１に記載されており、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔの定義）は、それぞれ配列番号１２〜１４に記載されている。予測された重鎖ＣＤＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａの定義）は、それぞれ配列番号１５〜１７に記載されており、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａの定義）は、それぞれ配列番号１８〜２０に記載されている。
【０３２６】
４ＡＧの重鎖および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号４３および配列番号４４に記載されている。配列番号４３および配列番号４４によってコードされた重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２３および配列番号２４に記載されている。予測された重鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列番号２５〜２７に記載されており、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列番号２８〜３０に記載されている。予測された重鎖ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔの定義）は、それぞれ配列番号３１〜３３に記載されており、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔの定義）は、それぞれ配列番号３４〜３６に記載されている。予測された重鎖ＣＤＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａの定義）は、それぞれ配列番号３７〜３９に記載されており、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａの定義）は、それぞれ配列番号４０〜４２に記載されている。
【０３２７】
［実施例６］
抗グリコＭｕｃ１抗体を使用した様々な腫瘍組織の免疫組織化学的染色
７．６．１．材料および方法
ヒト組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）ＢＣＮ７２１ａ（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ）を使用して、抗体１ＡＧおよび４ＡＧを、様々な腫瘍組織を染色するそれらの能力についてスクリーニングした。ＴＭＡは、食道、胃、結腸、直腸、肝臓、肺、腎臓、乳房、子宮頸部、卵巣、前立腺および膵臓を含む１２タイプのヒト臓器からの組織サンプルを含有しており、各タイプは、３人の正常なヒト個体から採取され、１ケース当たり単一のコアであった。
【０３２８】
表７に、ＴＭＡにおける各組織の同一性を記載する。
【０３２９】
【表１５−１】
2021529524.tif 000047
【０３３０】
【表１５−２】
2021529524.tif 000048
【０３３１】
【表１５−３】
2021529524.tif 000049
【０３３２】
切片を、冷たい１０％緩衝化中性ホルマリン中で１５分固定した。希釈していないハイブリドーマ上清または精製したＭａｂ（１ＡＧおよび４ＡＧ）と共にスライドを４℃で２４時間または室温で２時間インキュベートすることによって、免疫組織化学（ＩＨＣ）を実行した。結合したｍＡｂを、ＦＩＴＣコンジュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（１：１００；Ｄａｋｏ、Ｄｅｎｍａｒｋ）またはペルオキシダーゼコンジュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリンで検出した。スライドを、Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ褪色防止試薬、ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にマウントし、Ｌｅｉｃａ広視野蛍光顕微鏡で顕微鏡写真を得た。
【０３３３】
７．６．２．結果
図４に、１ＡＧの結果を示す。図５に、４ＡＧの結果を示す。ｍＡｂおよび１ＡＧおよびｍＡｂ  ４ＡＧは、検査されたがん組織の大部分と特異的に反応した。健康な組織の染色から、特に胃組織で細胞内構造の一部の標識が見られたが、表面構造との反応性は極めて限定的であることが実証された。
【０３３４】
［実施例７］
抗グリコＭｕｃ１抗体を使用した卵巣腫瘍組織の免疫組織化学的染色
７．７．１．材料および方法
ヒト組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）ＯＶ２４１ｃ（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ）を使用して、抗体１ＡＧおよび４ＡＧを、卵巣腫瘍組織を染色するそれらの能力についてスクリーニングした。
【０３３５】
表８に、ＴＭＡにおける各組織の同一性を記載する。
【０３３６】
【表１６】
2021529524.tif 000050
【０３３７】
切片を、冷たい１０％緩衝化中性ホルマリン中で１５分固定した。希釈していないハイブリドーマ上清または精製したＭａｂ（１ＡＧおよび４ＡＧ）と共にスライドを４℃で２４時間または室温で２時間インキュベートすることによって、免疫組織化学（ＩＨＣ）を実行した。結合したｍＡｂを、ＦＩＴＣコンジュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（１：１００；Ｄａｋｏ、Ｄｅｎｍａｒｋ）またはペルオキシダーゼコンジュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリンで検出した。スライドを、Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ褪色防止試薬、ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にマウントし、Ｌｅｉｃａ広視野蛍光顕微鏡で顕微鏡写真を得た。
【０３３８】
７．７．２．結果
図６に、１ＡＧの結果を示す。図７に、４ＡＧの結果を示す。ｍＡｂ  ４ＡＧは、卵巣腺癌からの検査された組織の大部分と特異的に反応した。隣接する健康な組織の染色から、細胞内構造の一部が標識されることが実証された。これらの条件下で、卵巣がんおよび腫瘍に隣接する組織のｍＡｂ  １ＡＧで有意な標識は見られなかった。
【０３３９】
［実施例８］
抗グリコＭｕｃ１抗体を使用した腫瘍組織の免疫組織化学的染色
７．８．１．材料および方法
ヒト組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）ＢＣ０００１１９（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ）を使用して、抗体１ＡＧおよび４ＡＧを、様々な腫瘍組織を染色するそれらの能力についてスクリーニングした。ＴＭＡは、乳房浸潤性乳管癌、肺扁平上皮癌、結腸腺癌、前立腺腺癌および膵臓腺癌のそれぞれにつき４０ケースを含有していた。健康対照サンプルを、複数の臓器の正常組織アレイから評価した。
【０３４０】
表９に、ＴＭＡにおける各組織の同一性を記載する。
【０３４１】
【表１７−１】
2021529524.tif 000051
【０３４２】
【表１７−２】
2021529524.tif 000052
【０３４３】
【表１７−３】
2021529524.tif 000053
【０３４４】
【表１７−４】
2021529524.tif 000054
【０３４５】
【表１７−５】
2021529524.tif 000055
【０３４６】
切片を、冷たい１０％緩衝化中性ホルマリン中で１５分固定した。希釈していないハイブリドーマ上清または精製したＭａｂ（１ＡＧおよび４ＡＧ）と共にスライドを４℃で２４時間または室温で２時間インキュベートすることによって、免疫組織化学（ＩＨＣ）を実行した。結合したｍＡｂを、ＦＩＴＣコンジュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（１：１００；Ｄａｋｏ、Ｄｅｎｍａｒｋ）またはペルオキシダーゼコンジュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリンで検出した。スライドを、Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ褪色防止試薬、ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にマウントし、Ｌｅｉｃａ広視野蛍光顕微鏡で顕微鏡写真を得た。
【０３４７】
７．８．２．結果
図８に、１ＡＧの結果を示す。図９に、４ＡＧの結果を示す。ｍＡｂ  １ＡＧは、乳癌、肺癌、結腸癌、および膵臓癌からの組織を含む検査されたがん組織のほとんどからの所定割合の腫瘍と特異的に反応した。ｍＡｂ  ４ＡＧは、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、および膵臓癌からの組織を含む検査されたがんのほとんどからの有意な割合の腫瘍と強く特異的に反応した。
【０３４８】
［実施例９］
アラニンスキャニングによる１ＡＧおよび４ＡＧ抗体のエピトープマッピング
７．９．１．材料および方法
７．９．１．１  材料
以下の試薬を、この実施例において記載される研究に使用した。
【０３４９】
【表１８】
2021529524.tif 000056
【０３５０】
７．９．１．２  ウォーキング（Ｗａｌｋｉｎｇ）アラニンライブラリー合成
ＭＵＣ１タンパク質の２８−ｍｅｒのセクション（ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０５）（式中、太字と下線で示した残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化されている）をベースとする１２種の直鎖状糖ペプチドを含有するウォーキングアラニンライブラリーを構築した。１２種の糖ペプチドはそれぞれ、２８−ｍｅｒのＭＵＣ１タンパク質の１３〜２４位内に固有のアラニン点突然変異を含有する。１３〜２４位内の天然アミノ酸がアラニンの場合、この残基はグリシン残基に突然変異された。表１０Ａに、ライブラリーの糖ペプチドのアミノ酸配列を示す。糖ペプチドを、Ｆｍｏｃ化学を使用して合成した。Ｆｍｏｃ−ＧａｌＮＡｃ−セリン（ＧａｌＮａｃ−Ｓｅｒ）およびＦｍｏｃ−ＧａｌＮＡｃ−スレオニン（ＧａｌＮＡｃ−Ｔｈｒ）ビルディングブロックを、Ｓｕｓｓｅｘ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｏｔｔａｗａ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。２８−ｍｅｒのＭＵＣ１ペプチドの非グリコシル化バージョンを糖ペプチドと並行して合成して、陰性対照として役立てた。合成後にペプチドを凍結乾燥し、使用前、１ｍｇ／ｍｌの濃度に脱イオン水中に再懸濁した。
【０３５１】
７．９．１．３  ５Ｅ５、１ＡＧ、および４ＡＧのエピトープマッピング
ライブラリーをＥＬＩＳＡフォーマットで使用して、以下のＭＵＣ１−Ｔｎ抗体：５Ｅ５、１ＡＧおよび４ＡＧのエピトープをマッピングした。非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドは、陰性対照として役立て、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基上においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）を、陽性対照として使用した。無関係の糖ペプチドを使用して、ＧａｌＮＡｃ交差反応性を測定した。表１０Ｂに、対照ペプチド配列を示す。
【０３５２】
【表１９】
2021529524.tif 000057
【０３５３】
【表２０】
2021529524.tif 000058
【０３５４】
糖ペプチドおよび関連する対照を、０．２Ｍの炭酸水素塩緩衝液、ｐＨ９．８で０．２５μｇ／ｍｌに希釈し、１００μｌを、高結合ＥＬＩＳＡプレートの各ウェル上で平板培養した。次いでプレートを４℃で一晩インキュベートした。コーティング緩衝液を捨てた後、プレートを、ウェル当たり３００μｌのブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ中の２．５％ＢＳＡ）で室温で１時間ブロックした。次いでブロッキング緩衝液を捨て、５Ｅ５、１ＡＧ、および４ＡＧそれぞれにつきウェル当たり１００μｌの抗体上清（ブロッキング緩衝液で希釈した）を添加し、室温で１時間インキュベートした。各抗体につき、抗体上清希釈物を事前に最適化した（データは示されない）。ビオチン化Ｖｉｌｌａ  Ｖｉｌｌｏｓａレクチン（ブロッキング緩衝液中、１μｇ／ｍｌの、ウェル当たり１００μｌ）を、対照としてプレートに添加して、ペプチド上のＧａｌＮＡｃ改変残基の存在を検出した。プレートを、ウェル当たり３００μｌの１×ＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳＴ）で３回洗浄した。二次抗体ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰをブロッキング緩衝液で１／５０００に希釈し、ウェル当たり１００μｌの希釈した抗体を添加し、プレート上で室温で１時間インキュベートした。ストレプトアビジン−ＨＲＰをブロッキング緩衝液で１／３０００に希釈し、１００μｌの希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰを、ビオチン化レクチンを含有するウェルに添加した。第２のインキュベーション後、プレートを、ウェル当たり３００μｌのＴＢＳＴで４回洗浄し、次いで７５μｌの室温の１−Ｓｔｅｐ  ＴＭＢ基質で発色させた。１分後、発色を７５μｌの２Ｎ硫酸を使用して止めた。次いで、プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ｉ３）を使用して、プレートを４５０ｎｍで読んだ。
【０３５５】
７．９．１．４  データ分析
Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌソフトウェアでデータを分析した。「突然変異体」ペプチドに対する各抗体の反応性を、野生型ペプチドと比較した結合パーセントとして変換することによって、データを解釈した。結合パーセントは、式（ＯＤ＿突然変異ペプチド／ＯＤ＿野生型ペプチド）を使用して計算された。次いでパーセント結合を、全ての値を０〜１の間とする棒グラフで表示した。
【０３５６】
７．９．２．結果
ペプチドへの５Ｅ５、１ＡＧ、および４ＡＧの結合パーセントをそれぞれ図１０〜１２に示す。残基１７〜２３の領域内のアラニン置換は、１ＡＧおよび４ＡＧの結合を大幅に低減した。５Ｅ５と比較して、１ＡＧおよび４ＡＧ結合は、より多くのアラニン置換によって低減した。ペプチド５〜１１のそれぞれにつき、４ＡＧ結合は、「野生型」ペプチドと比較して大幅に減少した。これは、４ＡＧの結合エピトープが残基１７〜２３の領域内であることを示唆する。１ＡＧ結合はより一層限定的であり、残基１５〜２４の領域に対応するペプチド３〜１２のそれぞれにつき、野生型と比較して結合は大幅に減少した。残基１９〜２２の領域において、１ＡＧおよび４ＡＧ結合は、ペプチド８におけるＳｅｒ−ＧａｌＮＡｃ置換によってほぼ完全に阻害されたが（それぞれ２．２３％および１．６３％）、それに対して５Ｅ５は、それでもなお結合が可能であった（１８％）。対照的に、ペプチド９におけるＴｈｒ−ＧａｌＮＡｃ置換は、５Ｅ５結合をほぼ完全に阻害したが（２．９３％）、４ＡＧおよび１ＡＧは、それでもなおそれぞれ１４．６２％および６．０７％で結合が可能であった。これは、グリコシル化セリンが、１ＡＧおよび４ＡＧ結合において、ＧａｌＮＡｃ−Ｔｈｒより大きい役割を果たすが、５Ｅ５ではその逆であったことを示唆する。総合すると、アラニンスキャンの結果は、１ＡＧおよび４ＡＧのエピトープは、５Ｅ５と異なると考えられることを示す。その差としては、グリコＭＵＣ１との接触の回数がより多くなることが挙げられ、このことが（理論に縛られることはないが）、より大きい程度のがん抗原への選択性を付与すると考えられる。
【０３５７】
８．具体的な実施形態、参考文献の引用
様々な具体的な実施形態を例示し記載したが、本開示の本質および範囲から逸脱することなく様々な変更をなすことができることが理解されると予想される。本発明の開示は、以下に記載の番号付けされた実施形態によって例示される。
【０３５８】
１．太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合に関して、（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３５９】
２．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６０】
３．配列番号９３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６１】
４．配列番号９３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６２】
５．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６３】
６．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６４】
７．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６５】
８．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６６】
９．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６７】
１０．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６８】
１１．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３６９】
１２．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７０】
１３．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７１】
１４．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７２】
１５．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７３】
１６．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７４】
１７．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３７５】
１８．ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、実施形態３または実施形態４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７６】
１９．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７７】
２０．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７８】
２１．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０３７９】
２２．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８０】
２３．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８１】
２４．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８２】
２５．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８３】
２６．ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１８のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８４】
２７．ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施形態３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８５】
２８．ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、実施形態３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８６】
２９．ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８７】
３０．ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、実施形態３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８８】
３１．ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号４７のアミノ酸配列を含む、実施形態３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３８９】
３２．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９０】
３３．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９１】
３４．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９２】
３５．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９３】
３６．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９４】
３７．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９５】
３８．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９６】
３９．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９７】
４０．ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、実施形態３から３９のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９８】
４１．ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態３から４０のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０３９９】
４２．配列番号３〜５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６〜８のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４００】
４３．配列番号９〜１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１２〜１４のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０１】
４４．配列番号１５〜１７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１８〜２０のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０２】
４５．配列番号２５〜２７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２８〜３０のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０３】
４６．配列番号３１〜３３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号３４〜３６のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０４】
４７．配列番号３７〜３９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号４０〜４２のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０５】
４８．配列番号４５〜４７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号４８〜５０のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０６】
４９．配列番号５１〜５３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号５４〜５６のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０７】
５０．配列番号５７〜５９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６０〜６２のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０８】
５１．配列番号６３〜６５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６６〜６８のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４０９】
５２．配列番号６９〜７１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号７２〜７４のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１０】
５３．配列番号７５〜７７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号７８〜８０のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１１】
５４．配列番号８１〜８３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号８４〜８６のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１２】
５５．配列番号８７〜８９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号９０〜９２のＣＤＲを含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１３】
５６．キメラまたはヒト化抗体である、実施形態１から５５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１４】
５７．配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１５】
５８．配列番号１と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１６】
５９．配列番号１と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１７】
６０．配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１８】
６１．配列番号２３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４１９】
６２．配列番号２３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２０】
６３．配列番号２３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２１】
６４．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２２】
６５．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態１から４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２３】
６６．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２４】
６７．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＡＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１３）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の３％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２５】
６８．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６５から６７のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２６】
６９．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の２０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２７】
７０．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＡＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１４）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の１０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２８】
７１．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６８から７０のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４２９】
７２．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の２０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３０】
７３．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の１０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３１】
７４．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＧＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１５）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３２】
７５．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７１から７４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３３】
７６．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の１０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３４】
７７．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＡＰＡＨＧＶ（配列番号１１６）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３５】
７８．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＡＡＨＧＶ（配列番号１１７）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７５から７７のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３６】
７９．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＡＡＨＧＶ（配列番号１１７）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の８０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３７】
８０．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＡＡＨＧＶ（配列番号１１７）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の７０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３８】
８１．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＡＡＨＧＶ（配列番号１１７）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の２０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態７８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４３９】
８２．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態６５から８１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４０】
８３．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４１】
８４．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＡＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１２）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の３％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４２】
８５．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８２から８４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４３】
８６．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の１０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４４】
８７．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＡＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１１）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４５】
８８．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８５から８７のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４６】
８９．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４７】
９０．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＧＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１１０）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の３％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４８】
９１．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態８８から９０のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４４９】
９２．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の８０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５０】
９３．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５１】
９４．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の２０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５２】
９５．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＡＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０９）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の１０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５３】
９６．ＥＬＩＳＡによって測定した場合、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）に結合するより高い親和性で、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合し、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９１から９５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５４】
９７．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の８０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９６に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５５】
９８．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の５０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９６に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５６】
９９．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の２０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９６に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５７】
１００．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＡＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１０８）への結合が、ＥＬＩＳＡによって測定した場合、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの、ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合の１０％未満であり、前記ペプチドにおいて、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基は、ＧａｌＮＡｃでグリコシル化された残基を示す、実施形態９６に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５８】
１０１．ＥＬＩＳＡが、ペプチドが０．２５μｇ／ｍｌの濃度で使用されるＥＬＩＳＡを含む、実施形態６５から１００のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４５９】
１０２．ＥＬＩＳＡが、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを発現する細胞株からの細胞培養上清で実行されるＥＬＩＳＡを含む、実施形態６５から１０１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６０】
１０３．ＥＬＩＳＡが、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを発現する細胞株からの希釈された細胞培養上清で実行されるＥＬＩＳＡを含む、実施形態６５から１０１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６１】
１０４．希釈された細胞培養上清が、緩衝液で２〜２０倍に希釈される細胞培養上清を含む、実施形態１０３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６２】
１０５．ＥＬＩＳＡにおける抗体または抗原結合フラグメントの濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬから２ｍｇ／ｍＬの間の範囲であり、任意選択で、ＥＬＩＳＡにおける抗体または抗原結合フラグメントの濃度が、０．５ｍｇ／ｍＬから１ｍｇ／ｍＬの間の範囲である、実施形態６５から１０４のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６３】
１０６．ＥＬＩＳＡにおける抗体または抗原結合フラグメントの濃度が、ＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合をもたらす、実施形態６５から１０５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６４】
１０７．ＥＬＩＳＡが、実施例９に記載された通りに実行される、実施形態６５から１０６のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６５】
１０８．太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）への結合に関して、（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントであって、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＶＨ配列内に第１、第２および第３のＣＤＲ手段を有するＶＨ配列；および
（ｂ）ＶＬ配列内に第４、第５および第６のＣＤＲ手段を有するＶＬ配列
を含み、
第１、第２、第３、第４、第５、および第６のＣＤＲ手段は、協同して、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの前記ＭＵＣ１ペプチドへの結合を生じさせるものであり、前記結合は、参照抗体または抗原結合フラグメントの結合と競合する、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６６】
１０９．配列番号２３のＶＨ配列および配列番号２４のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１０８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６７】
１１０．配列番号１のＶＨ配列および配列番号２のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１０８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６８】
１１１．正常細胞と比較してがん細胞で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優先的に結合する、実施形態１から１１０のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４６９】
１１２．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１から１１１のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７０】
１１３．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、３ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７１】
１１４．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、３ｎＭから４０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７２】
１１５．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、３ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７３】
１１６．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、５ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７４】
１１７．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、５ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７５】
１１８．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１０ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７６】
１１９．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１０ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７７】
１２０．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１５ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７８】
１２１．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１５ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４７９】
１２２．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、２０ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４８０】
１２３．表面プラズモン共鳴によって測定した場合、２５ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）で、太字と下線の文字で示されるセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＭＵＣ１ペプチドＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号９９）に結合する、実施形態１１２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４８１】
１２４．多価である、実施形態１から１２３のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４８２】
１２５．単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、実施形態１から１２３のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
【０４８３】
１２６．ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む、実施形態１２５に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４８４】
１２７．ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントが、４〜１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している、実施形態１２５または実施形態１２６に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４８５】
１２８．多重特異性抗体の形態である、実施形態１から１２３のいずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４８６】
１２９．多重特異性抗体が、第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重特異性抗体である、実施形態１２８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４８７】
１３０．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂアーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、または二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態１２９に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４８８】
１３１．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂである、実施形態１３０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４８９】
１３２．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢである、実施形態１３１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９０】
１３３．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ−ＶＬである、実施形態１３１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９１】
１３４．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１−ＣＬである、実施形態１３１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９２】
１３５．二重特異性抗体が、Ｆａｂアーム交換抗体である、実施形態１３０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９３】
１３６．二重特異性抗体が、二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態１３０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９４】
１３７．二重特異性抗体が、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である、実施形態１３０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９５】
１３８．第２のエピトープが、ＭＵＣ１エピトープである、実施形態１２９から１３７のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９６】
１３９．第２のエピトープが、正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるＭＵＣ１エピトープである、実施形態１２９から１３７のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９７】
１４０．第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、実施形態１２９から１３７のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９８】
１４１．Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、実施形態１４０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０４９９】
１４２．Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープを含み、ＣＤ３エピトープは、任意選択でヒトＣＤ３中に存在するエピトープである、実施形態１４１に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０５００】
１４３．ＣＤ３エピトープが、ＣＤ３ガンマエピトープ、ＣＤ３デルタエピトープ、ＣＤ３イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、実施形態１４２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０５０１】
１４４．検出可能な部分にコンジュゲートされている、実施形態１から１４３のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０５０２】
１４５．検出可能な部分が、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、実施形態１４４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【０５０３】
１４６．少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、実施形態１から１４５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体のアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
【０５０４】
１４７．第２のアミノ酸配列が、４−１ＢＢ、ＣＤ３−ゼータ、またはそのフラグメントのアミノ酸配列である、実施形態１４６に記載の融合タンパク質。
【０５０５】
１４８．第２のアミノ酸配列が、融合ペプチドのアミノ酸配列である、実施形態１４６に記載の融合タンパク質。
【０５０６】
１４９．融合ペプチドが、ＣＤ２８−ＣＤ３−ゼータまたは４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）−ＣＤ３−ゼータ融合ペプチドである、実施形態１４８に記載の融合タンパク質。
【０５０７】
１５０．第２のアミノ酸配列が、Ｔ細胞の活性化のモジュレーターまたはそのフラグメントのアミノ酸配列である、実施形態１４６に記載の融合タンパク質。
【０５０８】
１５１．Ｔ細胞の活性化のモジュレーターが、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒａである、実施形態１５０に記載の融合タンパク質。
【０５０９】
１５２．実施形態１２５から１２７のいずれか一つに記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【０５１０】
１５３．アミノ末端からカルボキシ末端の順で、ヒトＣＤ８リーダーペプチド、ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３−ゼータシグナル伝達ドメインを含む、実施形態１５２に記載のＣＡＲ。
【０５１１】
１５４．細胞傷害性物質にコンジュゲートした、実施形態１から１４５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、または実施形態１４６から１５１のいずれか一つに記載の融合タンパク質を含む抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１２】
１５５．細胞傷害性物質が、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、アルキル化剤、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシノイド、またはビンカアルカロイドである、実施形態１５４に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１３】
１５６．抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは二重特異性抗体が、リンカーを介して細胞傷害性物質にコンジュゲートされている、実施形態１５５に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１４】
１５７．リンカーが、細胞内条件下で切断可能である、実施形態１５６に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１５】
１５８．切断可能なリンカーが、細胞内のプロテアーゼによって切断可能である、実施形態１５７に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１６】
１５９．リンカーが、ジペプチドを含む、実施形態１５８に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１７】
１６０．ジペプチドが、ｖａｌ−ｃｉｔまたはｐｈｅ−ｌｙｓである、実施形態１５９に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１８】
１６１．切断可能なリンカーが、５．５未満のｐＨで加水分解性である、実施形態１５７に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５１９】
１６２．加水分解性のリンカーが、ヒドラゾンリンカーである、実施形態１６１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５２０】
１６３．切断可能なリンカーが、ジスルフィドリンカーである、実施形態１５７に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【０５２１】
１６４．実施形態１から１４５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実施形態１４６から１５１のいずれか一つに記載の融合タンパク質、または実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲのコード領域を含む核酸。
【０５２２】
１６５．コード領域が、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、実施形態１６４に記載の核酸。
【０５２３】
１６６．実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸を含むベクター。
【０５２４】
１６７．ウイルスベクターである、実施形態１６６に記載のベクター。
【０５２５】
１６８．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１６７に記載のベクター。
【０５２６】
１６９．実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
【０５２７】
１７０．実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲを発現するように操作されたヒトＴ細胞である、実施形態１６９に記載の宿主細胞。
【０５２８】
１７１．実施形態１６６から１６８のいずれか一つに記載のベクターを含む宿主細胞。
【０５２９】
１７２．宿主細胞が、Ｔ細胞であり、ベクターが、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲをコードする、実施形態１７１に記載の宿主細胞。
【０５３０】
１７３．（ａ）実施形態１から１４５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実施形態１４６から１５１のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一つに記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一つに記載のベクター、または実施形態１６９から１７２のいずれか一つに記載の実施形態の宿主細胞、および（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物。
【０５３１】
１７４．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の実施形態１から１４５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実施形態１４６から１５１のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一つに記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一つに記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一つに記載の実施形態の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物を投与することを含む方法
【０５３２】
１７５．対象が、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、脳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、または肝臓がんに罹患している、実施形態１７４に記載の方法
【０５３３】
１７６．対象が、乳がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５３４】
１７７．対象が、肺がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５３５】
１７８．肺がんが、非小細胞肺がんである、実施形態１７７に記載の方法
【０５３６】
１７９．対象が、前立腺がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５３７】
１８０．対象が、膵臓がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５３８】
１８１．対象が、食道がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５３９】
１８２．対象が、結腸直腸がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４０】
１８３．対象が、卵巣がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４１】
１８４．対象が、子宮がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４２】
１８５．対象が、子宮頸がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４３】
１８６．対象が、膀胱がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４４】
１８７．対象が、脳がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４５】
１８８．対象が、非ホジキンリンパ腫に罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４６】
１８９．対象が、子宮頸がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４７】
１９０．対象が、胃がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４８】
１９１．対象が、胆管細胞癌に罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５４９】
１９２．対象が、軟骨肉腫に罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５５０】
１９３．対象が、腎臓がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５５１】
１９４．対象が、皮膚がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５５２】
１９５．対象が、白血病に罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５５３】
１９６．対象が、甲状腺がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法
【０５５４】
１９７．対象が、肝臓がんに罹患している、実施形態１７５に記載の方法。
【０５５５】
１９８．生物学的サンプルでがんを検出する方法であって、サンプルを、実施形態１から１４５のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法。
【０５５６】
１９９．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を定量化することをさらに含む、実施形態１９８に記載の方法。
【０５５７】
２００．結合が、陰性／ベースライン対照としての正常な組織対照と比較される、および／または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、実施形態１９８または実施形態１９９に記載の方法
【０５５８】
２０１．がんが、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、脳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、または肝臓がんである、実施形態１９８から２００のいずれか一項に記載の方法
【０５５９】
２０２．がんが、乳がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６０】
２０３．がんが、肺がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６１】
２０４．肺がんが、非小細胞肺がんである、実施形態２０３に記載の方法
【０５６２】
２０５．がんが、前立腺がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６３】
２０６．がんが、膵臓がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６４】
２０７．がんが、食道がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６５】
２０８．がんが、結腸直腸がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６６】
２０９．がんが、卵巣がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６７】
２１０．がんが、子宮がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６８】
２１１．がんが、子宮頸がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５６９】
２１２．がんが、膀胱がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５７０】
２１３．がんが、脳がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５７１】
２１４．がんが、非ホジキンリンパ腫である、実施形態２０１に記載の方法
【０５７２】
２１５．がんが、子宮頸がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５７３】
２１６．がんが、胃がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５７４】
２１７．がんが、胆管細胞癌である、実施形態２０１に記載の方法
【０５７５】
２１８．がんが、軟骨肉腫である、実施形態２０１に記載の方法
【０５７６】
２１９．がんが、腎臓がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５７７】
２２０．がんが、皮膚がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５７８】
２２１．がんが、白血病である、実施形態２０１に記載の方法
【０５７９】
２２２．がんが、甲状腺がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５８０】
２２３．がんが、肝臓がんである、実施形態２０１に記載の方法
【０５８１】
２２４．医薬として使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８２】
２２５．がんの処置で使用するためであり、任意選択で、がんは、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、脳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、または肝臓がんである、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８３】
２２６．乳がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８４】
２２７．肺がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８５】
２２８．前立腺がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８６】
２２９．膵臓がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８７】
２３０．食道がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８８】
２３１．結腸直腸がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５８９】
２３２．卵巣がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９０】
２３３．子宮がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９１】
２３４．子宮頸がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９２】
２３５．膀胱がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９３】
２３６．脳がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９４】
２３７．非ホジキンリンパ腫の処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９５】
２３８．子宮頸がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９６】
２３９．胃がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９７】
２４０．胆管細胞癌の処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９８】
２４１．軟骨肉腫の処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０５９９】
２４２．腎臓がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０６００】
２４３．皮膚がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０６０１】
２４４．白血病の処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０６０２】
２４５．甲状腺がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０６０３】
２４６．肝臓がんの処置で使用するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物
【０６０４】
２４７．がんの処置のための医薬を製造するための、実施形態１から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形態１４６から１５１のいずれか一項に記載の融合タンパク質、実施形態１５２または実施形態１５３に記載のＣＡＲ、実施形態１５４から１６３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、実施形態１６４または実施形態１６５に記載の核酸、実施形態１６６から１６８のいずれか一項に記載のベクター、実施形態１６９から１７２のいずれか一項に記載の宿主細胞、または実施形態１７３に記載の医薬組成物の使用であって、任意選択で、がんは、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、脳がん、非ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、胃がん、胆管細胞癌、軟骨肉腫、腎臓がん、皮膚がん、白血病、甲状腺がん、または肝臓がんである、使用
【０６０５】
２４８．がんが、乳がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６０６】
２４９．がんが、肺がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６０７】
２５０．がんが、前立腺がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６０８】
２５１．がんが、膵臓がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６０９】
２５２．がんが、食道がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１０】
２５３．がんが、結腸直腸がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１１】
２５４．がんが、卵巣がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１２】
２５５．がんが、子宮がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１３】
２５６．がんが、子宮頸がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１４】
２５７．がんが、膀胱がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１５】
２５８．がんが、脳がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１６】
２５９．がんが、非ホジキンリンパ腫である、実施形態２４７に記載の使用
【０６１７】
２６０．がんが、子宮頸がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１８】
２６１．がんが、胃がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６１９】
２６２．前記がんが、胆管細胞癌である、実施形態２４７に記載の使用
【０６２０】
２６３．前記がんが、軟骨肉腫である、実施形態２４７に記載の使用
【０６２１】
２６４．前記がんが、腎臓がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６２２】
２６５．前記がんが、皮膚がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６２３】
２６６．前記がんが、白血病である、実施形態２４７に記載の使用
【０６２４】
２６７．前記がんが、甲状腺がんである、実施形態２４７に記載の使用
【０６２５】
２６８．前記がんが、肝臓がんである、実施形態２４７に記載の使用。
【０６２６】
本出願で引用された全ての公報、特許、特許出願および他の文書は、それぞれ個々の公報、特許、特許出願または他の文書があらゆる目的のために参照により組み入れられることが個々に示されたのと同程度に、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。本明細書に組み入れられる参考文献の１つまたは複数の教示と本発明の開示との間に不一致がある事象では、本明細書の教示が意図される。
【図１−１】
2021529524.tif 000059
【図１−２】
2021529524.tif 000060
【図１−３】
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【図２−１】
2021529524.tif 000062
【図２−２】
2021529524.tif 000063
【図３】
2021529524.tif 000064
【図４】
2021529524.tif 000065
【図５】
2021529524.tif 000066
【図６】
2021529524.tif 000067
【図７】
2021529524.tif 000068
【図８】
2021529524.tif 000069
【図９】
2021529524.tif 000070
【図１０】
2021529524.tif 000071
【図１１】
2021529524.tif 000072
【図１２】
2021529524.tif 000073
【配列表】
2021529524000001.app
【国際調査報告】
2021529524.tif 000074
2021529524.tif 000075