(57)【要約】  本発明は、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を調製するための凍結乾燥方法であって、以下の工程：ａ）ゲルを形成することなく、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を準備するのに十分なモル比で、テベレリクスとトリフルオロアセテートとを混合することによって、凍結乾燥懸濁液を準備する工程、およびｂ）凍結乾燥懸濁液を凍結乾燥させることによって、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得る工程を含む凍結乾燥方法に関する。この方法は、「純粋な」、すなわち、組成物中にいずれの望ましくない残留物も含まないテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得ることを可能にする。【選択図】図２
2021529166.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を調製するための凍結乾燥方法であって、前記方法が、以下の工程：
ａ）ゲルを形成することなく、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を準備するのに十分なモル比で、テベレリクスとトリフルオロアセテートとを混合することによって、凍結乾燥懸濁液を準備する工程、および
ｂ）工程ａ）の凍結乾燥懸濁液を凍結乾燥させることによって、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得る工程
を含み、
工程ａ）が、以下の工程：
ａ’）微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を遠心分離または濾過することによって、それぞれ、テベレリクス−ＴＦＡペレットまたはテベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを準備する工程、および
ａ”）前記テベレリクス−ＴＦＡペレットまたは前記テベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを水性懸濁溶液中に懸濁させる工程
をさらに含むことを特徴とする凍結乾燥方法。
【請求項２】
工程ａ）におけるテベレリクスとトリフルオロアセテートとを、少なくとも１：２．１、好ましくは少なくとも１：２．２のモル比で混合する、請求項１に記載の凍結乾燥方法。
【請求項３】
遠心分離後のペレット、または濾過後の濾過ケーキが、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液中のモル比よりも低い、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比を有する、請求項１または２に記載の凍結乾燥方法。
【請求項４】
水性懸濁溶液が、水またはマンニトール溶液である、請求項１から３のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項５】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液が、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が少なくとも１：２．２である場合、水中で作製される、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項６】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液が、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が１：２．２を下回る場合、トリフルオロ酢酸溶液中で作製される、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項７】
工程ｂ）のテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が、ガンマ線滅菌によって滅菌される、請求項１から６のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項８】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液中のテベレリクス−ＴＦＡの濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１から７のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項９】
得られるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物の総重量を基準として、０．３重量％から５重量％の間の量で水を含む程度に、再懸濁ペレットまたは再懸濁濾過ケーキが、凍結乾燥または噴霧乾燥される、請求項１から８のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項１０】
凍結乾燥が、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物の単位投与量で、かつ／または保管のための包装中で直接、実行される、請求項１から９のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法によって得られるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物。
【請求項１２】
請求項１１に記載のテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を復元する方法であって、水性復元溶液をテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物に加えることを含む方法。
【請求項１３】
テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物中のテベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が１：２．１を下回り、前記方法が、トリフルオロアセテートを加えることによってモル比を少なくとも１：２．１に調節することを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、少なくとも１：２．２、好ましくは少なくとも１：２．４に調節される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、１：２．８以下に調節される、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１２から１５のいずれか一項に記載の方法によって得られる、流動的で乳状の微結晶水性テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液。
【請求項１７】
テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、少なくとも１：２．２である、請求項１６に記載の流動的で乳状の微結晶水性懸濁液。
【請求項１８】
テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、１：２．８以下である、請求項１６または１７に記載の流動的で乳状の微結晶水性懸濁液。
【請求項１９】
請求項１６から１８のいずれか一項に記載の流動的で乳状の微結晶水性懸濁液を含む、薬学的製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、凍結乾燥方法、この方法によって得られるテベレリクス（ｔｅｖｅｒｅｌｉｘ）−ＴＦＡ凍結乾燥物、およびこのテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を復元する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
テベレリクスは、下垂体前葉で受容体に結合する内因性神経ホルモンＧｎＲＨ（別名、黄体化ホルモン放出ホルモン、ＬＨＲＨとして知られる）に競合する、合成ゴナドトロピン放出ホルモンアンタゴニスト（ＧｎＲＨアンタゴニスト）である。ＧｎＲＨアンタゴニストは、ＧｎＲＨの作用を低下させる、またはブロックすることによって、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および黄体化ホルモン（ＬＨ）が下垂体前葉から放出されることを抑制する。
【０００３】
ＦＳＨおよびＬＨはいずれも、正常な生殖機能に関与する。女性においては、ＦＳＨは、未成熟なグラーフ卵胞の成長を刺激して成熟させ、ＬＨレベルの変化は、排卵を制御する。一方、男性においては、ＦＳＨは、精子形成に重要な役割を果たし、ＬＨは、精巣においてテストステロンの生成を刺激する。
【０００４】
したがって、テベレリクスは、良性前立腺肥大、ホルモン依存性前立腺がん、子宮内膜症、および子宮横紋筋肉腫のような、ホルモン依存性症状の治療に好適である。
【０００５】
持続放出製剤は通例、小体積の水またはいくつかの他の好適な溶媒中に溶解した、非常に高濃度の活性成分を必要とする。テベレリクス（Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｄ−ｐＣｌＰｈｅ−Ｄ−Ｐａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｈｃｉ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ２）は疎水性ペプチドであるため、水中または他の溶媒中に自由に溶解しない。テベレリクスはさらに、低濃度においてさえ、水性溶媒中または他の溶媒中でゲルを形成する傾向を有し、これによって、持続放出製剤における使用は大きく限定される。
【０００６】
ＷＯ２００３／０２２２４３は、この問題を解決することを目指し、テベレリクスペプチドを対イオン、例えばトリフルオロアセテート（ＴＦＡ）と接触させることによって、ゲルの形成が防止されうることを開示している。ＷＯ２００３／０２２２４３によれば、所望の微結晶懸濁液を確実に得るためには、少なくとも１：１．６というテベレリクスと対イオンのトリフルオロアセテートの比は必須であり、そうでなければ、ゲルが形成されることになる。しかしながら、本発明の発明者は、ＷＯ２００３／０２２２４３に開示されているモル比は、望ましくないゲル形成と、均一でない懸濁液との両方を生じるであろうことを見出した。これは、このような懸濁液は注射が困難であろうためだけでなく、このペプチドの所望の持続作用にゲルが干渉するので、テベレリクスペプチドの生物学的利用能が損なわれるため、問題である。
【０００７】
本発明の発明者はさらに、ＷＯ２００３／０２２２４３の製造によって提供されるテベレリクスと対イオンＴＦＡとのモル比には、適用される製造条件および方法が、バッチ同士で同一であるにもかかわらず、バッチによる差異が存在することを発見した。所望の微結晶懸濁液を得るためには、上記モル比が必須であるため、この比の差異は、薬学的製剤中のテベレリクスの生物学的利用能に影響を及ぼしうる。そのため、製造によって提供されるテベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比を頼りにできることは、医療従事者および他の使用者にとって必須である。
【０００８】
ＷＯ２００３／０２２２４３のテベレリクス組成物による別の問題は、この組成物が、例えば冷蔵および室温における保管中に安定ではなく、したがって、このような条件下では、テベレリクスが比較的短い貯蔵寿命を有することである。
【０００９】
凍結乾燥（冷凍乾燥）は、医薬品の安定性を改善するために広く用いられる方法であり、ＷＯ２００３／０２２２４３はテベレリクスの冷凍乾燥および凍結乾燥に言及しているが、この文書は、「材料を一晩、冷凍乾燥させる」のような一般的な方法における技法、および他の同様の記載の一般的な記述に言及しているに過ぎず、テベレリクス−ＴＦＡの凍結乾燥に必要な具体的要件を開示していない。
【発明の概要】
【００１０】
テベレリクス−ＴＦＡは、水中では非常に低い溶解度を有し、凍結乾燥方法を行うことができる溶液を準備するためには、テベレリクス−ＴＦＡを溶解させなければならない。しかしながら、これは、強酸、例えば濃酸中でのみ達成することができる。溶媒としての強酸の使用は、冷凍乾燥方法へのさらなる注意が必要となるだけでなく、溶媒を冷凍および濃縮するために低温も必要となるが、この溶媒はコンデンサーを容易に回避することができ、例えば真空ポンプへの損害をもたらすことになる。したがって、装置への損害を防止するためには、専用の凍結乾燥装置が必要であり、凍結乾燥方法全体の費用に上乗せされる。
【００１１】
さらに、不揮発性化合物は、関係する活性成分、すなわちテベレリクスとともに濃縮するであろうから、凍結乾燥を開始する前、試料のすべての不揮発性化合物を注意深く検討することは、非常に重要である。不揮発性の酸または塩基は、極端なｐＨを生じる場合があり、塩の存在は、試料を再可溶化した際に、非常に高いイオン強度をもたらす場合がある。そのため、得られる凍結乾燥物は、最後には残留酸を含み、意図する使用への有害作用を有するであろうから、テベレリクス組成物を凍結乾燥させる場合、特別な注意を払うことは必須である。復元されたテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を、例えば、皮下および／または筋肉内注射によって、安全に患者に投与できることを確実にするためには、凍結乾燥物中のすべての溶媒を除去することが重要であるため、このことは、凍結乾燥方法にさらなる複雑さを加える。
【００１２】
最後に、テベレリクス−ＴＦＡ溶液の粘性は、滅菌フィルターに目詰まりを生じ、さらには滅菌プロセスは労力を要し、費用がかさむものになる。
【００１３】
したがって、長い貯蔵寿命を有する、安定な滅菌されたテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を製造する新しい方法を開発する需要が存在する。
【００１４】
そのため、テベレリクス−ＴＦＡを溶解させるための強有機溶媒の使用が排除された、単純かつ効率的な、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を提供するための新規凍結乾燥方法を提供することが、本発明の第１の態様であり、
滅菌テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を提供するための、濾過滅菌工程を必要としない凍結乾燥方法を提供することが、本発明による第２の態様であり、
従来公知のものよりも高いテベレリクス−ＴＦＡ濃度を有するテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を提供することが、本発明による第３の態様であり、
水性再懸濁液体に容易に再懸濁させることができ、それによって、均一な（homogen）水性テベレリクス−ＴＦＡ製剤を提供することができるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を提供することが、本発明による第４の態様であり、
水性テベレリクス−ＴＦＡ製剤中のペプチドと対イオンとのモル比を調節する方法を提供することが、本発明による第５の態様である。
【００１５】
これらの態様およびさらなる態様は、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を調製するための凍結乾燥方法であって、以下の工程：
ａ）ゲルを形成することなく、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を準備するのに十分なモル比で、テベレリクスとトリフルオロアセテートとを混合することによって、凍結乾燥懸濁液を準備する工程、および
ｂ）凍結乾燥懸濁液を凍結乾燥させることによって、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得る工程
を含む凍結乾燥方法を提供することにより、本発明によって達成される。
【００１６】
本発明による凍結乾燥方法を用いることによって、複数の利点が得られる。まず第１に、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液においては、溶媒に溶解したテベレリクス−ＴＦＡの濃度（約１０ｍｇ／ｍｌ）と比較して、高濃度のテベレリクス−ＴＦＡ（約１００ｍｇ／ｍｌ）が得られるため、同じ量のテベレリクス−ＴＦＡを得るために、有意に小さい凍結乾燥体積が必要となる。これによって、従来の凍結乾燥方法よりも高速で、より費用効率が良い凍結乾燥工程が実施されうることが確保される。
【００１７】
第２に、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液が凍結乾燥されるため、テベレリクス−ＴＦＡを溶解させるために強酸を用いる必要性が排除される。したがって、本発明による凍結乾燥方法は、高速かつ単純な方法で、「純粋な」、すなわち、組成物中にいずれの望ましくない残留物も含まないテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得ることを可能にする。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１ａ−１ｇ】懸濁液Ａ１〜Ｇ１の顕微鏡写真である。
【図２】異なるモル比における、可溶型および不溶型テベレリクスの濃度を示すグラフである。
【図３】可溶型対不溶型テベレリクスの割合を示すグラフである。
【図４】異なるＴＦＡ：テベレリクスのモル比における、１時間時点のテベレリクスの血漿濃度を示すグラフである。
【図５】異なるＴＦＡとテベレリクスとのモル比における、テベレリクスＴＦＡの投与についての全選択平均ＰＫプロファイルを示すグラフである。
【図６】４０℃で保管中の溶液において、異なるＴＦＡとテベレリクスとのモル比における、溶液中のテベレリクスＴＦＡの不純物の増加を示すグラフである。
【図７】４０℃で１箇月保管中の溶液において、ＴＦＡとテベレリクスとの異なるモル比における、１０ｍｇ／ｍＬ溶液中のテベレリクスＴＦＡの不純物の増加を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の発明者は、１：２．１を下回るモル比はゲルの形成を生じることになるので、ゲルを形成することなく、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を得るためには、テベレリクスと対イオンのトリフルオロアセテートとのモル比が、少なくとも１：２．１でなければならないことを見出した。モル比が１：２．２を上回る場合も、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液は均一である。
【００２０】
本発明の内容の範囲内で、「テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比」という用語は、テベレリクスとトリフルオロアセテートとの間のモルによる関係を指し、モル比の第１の数は、組成物中のテベレリクスのモル含有量であり、第２の数は、組成物中のＴＦＡのモル含有量を指す。例えば、１：２．２のモル比とは、組成物中のテベレリクス１ｍｏｌにつき、この組成物が２．２ｍｏｌのＴＦＡを含むことを意味し、少なくとも１：２．２のモル比とは、組成物中のテベレリクス１モルにつき、組成物が少なくとも２．２ｍｏｌのトリフルオロアセテート（ＴＦＡ）を含むことを意味する。
【００２１】
得られたテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物は保管され、例えば注射可能な薬学的製剤として用いられうる、水性テベレリクス−ＴＦＡ製剤を調製するために、水または別の好適な水溶液によって復元されうる。
【００２２】
しかしながら、より安定なテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得るために、または意図する使用に応じた特定の上記モル比を提供できるように、モル比を低下させること、すなわち、この組成物中のＴＦＡの含有量を減少させることが望ましく、そのため、工程ａ）は、以下の追加の工程：
ａ’）  工程ａ）の微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を遠心分離または濾過することによって、テベレリクス−ＴＦＡペレットまたはテベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを準備する工程、および
ａ”）  このテベレリクス−ＴＦＡペレットまたはこのテベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを、水性懸濁溶液中に懸濁させる工程
を含む。
【００２３】
凍結乾燥懸濁液は、遠心分離工程または濾過工程を伴わず、直接凍結乾燥させることができるが、懸濁させ、次いで、凍結乾燥工程に供するのは、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を遠心分離または濾過した後に得られる、テベレリクス−ＴＦＡペレットまたはテベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキであることが好ましい。
【００２４】
本発明の発明者は、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液が１：２．１を上回るモル比（ゲルを得ないモル比である）を有する場合、遠心分離後のペレットまたは濾過ケーキにおけるモル比は、１：１．７０と１：１．８５との間のモル比に減少するであろうことを見出した。例えば、発明者は、テベレリクスとトリフルオロアセテートとを１：２．２のモル比で混合し、７５ｍｇ／ｍｌのペプチド濃度を有する場合、遠心分離後のペレットは、約１：１．７７のモル比を有することを見出した。
【００２５】
したがって、本発明による凍結乾燥方法の遠心分離／濾過および懸濁工程は、得られるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液のモル比よりも低い所定のモル比を有することになり、それによって、凍結乾燥物を復元する際に、モル比を任意の所望のモル比（初期モル比を上回る）に、確実に調節することができるという利点を提供する。さらに、凍結乾燥物は、含有量が減少した対イオンのトリフルオロアセテートを有するため、凍結乾燥物におけるｐＨ値は、テベレリクスに起こりうるアミド分解の減少を確保する値に維持され、それによって、保管中のテベレリクスの安定性が上昇する。
【００２６】
凍結乾燥が起こる体積を減少させると同時に、得られる凍結乾燥物中のテベレリクスを確実に高濃度にするため、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液は、一実施形態では、ペレットが確実に形成されるのに十分な条件下で、遠心分離を行う。次いで、ペレットを、比較的少量の水性懸濁溶液中に懸濁させるが、このとき、凍結乾燥懸濁液は懸濁ペレットである。
【００２７】
しかしながら、本発明の発明者は、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を濾過することによって、テベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを得る場合（この懸濁液を遠心分離して、テベレリクス−ＴＦＡペレットを準備する代わりに）、水性テベレリクスおよび過剰なＴＦＡはフィルターを通過するであろうこと、ならびに固体テベレリクス（微結晶）のみが、低いモル比、すなわち、１：１．７０と１：１．８５との間のモル比で、フィルター上に補収されるであろうことを見出した。したがって、テベレリクス−ＴＦＡケーキを準備するための濾過工程の使用は、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液由来の微結晶から本質的になる凍結乾燥生成物を提供し、ひいては、改善された最終的なテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を提供する。
【００２８】
テベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを得るためには、任意の主な種類の濾過技法を用いてよいが、好適なフィルター、例えば０．４５〜０．８μｍの膜フィルターを用いた、圧力フィルターまたは真空フィルター技法を用いることが好ましく、このようなフィルターは、粘性テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を通過させることと、効率的に微結晶を引き止めることの両方ができる。
【００２９】
発明者はさらに、まずペレットまたは濾過ケーキを準備し、次いで、このペレットまたはケーキを水性懸濁溶液中に懸濁させることによって、テベレリクス−ＴＦＡを溶解させるために強酸を用いる必要性が、驚くべきことに排除されることを見出した。ペレットまたは濾過ケーキを懸濁させるための水性懸濁溶液は、好ましい実施形態では、水またはマンニトール溶液、例えば５％マンニトール溶液のいずれかであってよく、したがって、少量の溶媒の残留物が凍結乾燥物中に残存している場合、残留物は、凍結乾燥物が薬学的製剤に用いられる能力に、影響を及ぼさないであろう。
【００３０】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を遠心分離または濾過工程に供することとは関係なく、工程ａ）における微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液は、水中、例えば生理的水中、またはトリフルオロ酢酸溶液中のいずれかで作製することが好ましい。しかしながら、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、少なくとも１：２．２である場合、テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を水中で作製することが好ましく、このモル比が１：２．２を下回る場合、少なくとも１：２．２のモル比を得るため、トリフルオロ酢酸を懸濁液に加えるために、トリフルオロ酢酸溶液中で懸濁液を作製することが好ましい。
【００３１】
トリフルオロアセテートおよびテベレリクスのモル質量は、ＭＴＦＡ＝１１４ｇ／ｍｏｌおよびＭＴｅｖ＝１４５９ｇ／ｍｏｌと計算されており、したがって、懸濁液中のトリフルオロアセテートまたはテベレリクスのモル比および／または含有量は、次の式：
2021529166.tif 000003
を用いて計算することができる。
【００３２】
テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物中に高いテベレリクス濃度を確保するため、工程ａ）における微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液中のテベレリクス−ＴＦＡの濃度は、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌであることが好ましい。懸濁液をその後、遠心分離する場合、高いテベレリクス濃度ではさらに、より少ないペプチドが上清とともに廃棄されるであろうという利点を有する。
【００３３】
凍結乾燥は、当技術分野において周知の方法であり、この方法は、本出願において詳細には論じない。しかしながら、簡単に述べれば、試料、すなわち凍結乾燥懸濁液（微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液、または懸濁ペレットもしくは濾過ケーキのいずれかでありうる）を、１つまたは複数のガラス容器に移し、例えば、容器の外側を液体窒素に浸漬させること、または電気を動力源とする冷凍機を用いることによって、可能な限り迅速に冷凍する。さらに、任意選択で、試料を大きな表面積に広げて冷凍するために、容器を回転させてもよい。次いで、試料を有するガラス容器を、好ましくは、冷却コイルも含有する、極端な低圧空間（真空）に配置する。冷却コイルは、コンデンサーとして機能する。通例、コイルの温度は−５０℃よりも低い。冷凍試料の揮発化合物は、真空中でエバポレートされる（昇華する）ことになる。エバポレーション（この場合は昇華）のプロセスは、熱を吸収する。この効果によって、試料の冷凍が保たれる。エバポレートされた分子は、冷却コイルによって気相から捕獲され、冷却コイル上に冷凍層を形成する。このプロセスの終了時に、テベレリクス−ＴＦＡは、固体形態で容器内に残存する。この方法は、テベレリクスの劣化をもたらさないため、本発明による凍結乾燥方法は、テベレリクスを濃縮するためのみに用いられうるのではなく、長期保存の間、このペプチドを保存するためにも用いられうる。
【００３４】
当業者は、本発明の観点において、工程ａ）の凍結乾燥懸濁液を凍結乾燥プロセスに供する代わりに、粉末生成物および／または粉末様生成物を得るため、本発明による修正された方法において、この懸濁液を、噴霧乾燥プロセスまたは同様の乾燥プロセスに供してもよいことを理解するであろう。
【００３５】
凍結乾燥は、水中またはマンニトール中で作製した凍結乾燥懸濁液において行うため、この懸濁液は、いずれの有害な不揮発性化合物、例えば、極端なｐＨ値を生じうる不揮発性の酸、および非常に高いイオン強度をもたらしうる塩も含まない。したがって、得られる凍結乾燥物は、いずれの望ましくない化合物も含有せず、再懸濁させた水性テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を、そのような治療が必要な患者に、安全に投与することができる。
【００３６】
大部分の従来の凍結乾燥では、初めに、冷凍乾燥させる溶液を無菌に濾過して、いずれの外部固体および微生物も除去する。しかしながら、テベレリクス−ＴＦＡ溶液の粘性は、滅菌フィルターに目詰まりを生じるため、このような滅菌工程は、難儀であるとともに費用がかさむ。本発明の発明者は、本発明による方法によって得られるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を、ガンマ線滅菌に供することによって、濾過滅菌の要件を排除してもよいことを見出した。さらに、無菌条件下、例えばクリーンルーム内で作業することの要件も排除される。
【００３７】
通常、組成物の安定性を維持するため、凍結乾燥物は、実質的に乾燥状態で保管される。しかしながら、本発明の発明者は、本発明によるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物中に少量の水が、すなわち、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物の総重量を基準として、０．３重量％から５重量％の間、好ましくは１〜２重量％前後の量で存在する場合、取り扱い、復元、ひいては使用がより容易な、改善されたテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が提供されることを見出した。
【００３８】
理論に束縛されるものではないが、その水の含有量は、テベレリクスの粒子同士の間に高い静電気力をもたらす場合があり、これは、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を取り扱うとき、例えば、凍結乾燥物を、バイアルまたはシリンジチャンバーに充填する場合に重要である。
【００３９】
好ましい実施形態では、水は、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物の総重量を基準として、１重量％から２重量％の間、好ましくは１．５重量％の量で、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物中に存在し、これは、化学的完全性を保持し、安定な組成物を提供するテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を提供するであろう。
【００４０】
本発明が提供する安定性は、室温におけるより長い貯蔵寿命を可能にし、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物は、例えば滅菌後にも保管されうる。復元可能なテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物は、後の使用のために、包装して保管することができる（例えば、シリンジまたはバイアル中に）。
【００４１】
テベレリクスの乾燥粒子同士の間の静電気力に起因して、粒子が装置等の表面に貼り付くことになるため、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を、バイアル、容器、またはシリンジチャンバーに移すことが困難な場合がある。したがって、懸濁ペレットまたは懸濁濾過ケーキを凍結乾燥に供する前に、すなわち乾燥させる前に、この懸濁ペレット／濾過ケーキを、すなわち、水性状態にある時点で、懸濁ペレットまたは懸濁濾過ケーキが凍結乾燥に供されうるバイアルまたは容器に入れるか、または他の方法で移すかのいずれかが好ましい。このバイアルまたは容器も、得られるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を保管するために用いてもよいことは、さらに好ましい。
【００４２】
好ましい実施形態では、バイアルまたは容器は、単位投与量の凍結乾燥後のテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を含有するであろう。本発明の文脈の範囲内では、「単位投与量」という用語は、単回投与量において患者に投与されるテベレリクスの量である。
【００４３】
本発明はまた、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を復元する方法であって、水性復元溶液をテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物に加えること、およびトリフルオロアセテートを加えることによって、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比のモル比を調節することを含む方法に関する。この方法は、ゲルを形成することなく、流動的で乳状のテベレリクス−ＴＦＡの微結晶水性懸濁液を得るための、正確な所望のモル比を、効果的かつ単純に達成するであろう。復元後のテベレリクスとＴＦＡとのモル比は、直接用いてもよい水性薬学的製剤を提供するであろうため、すなわち、製剤をすぐに使用できるため、十分な量のトリフルオロアセテートを加えることによって、少なくとも１：２．１、好ましくは少なくとも１：２．２、さらにより好ましくは少なくとも１：２．４に調節することが好ましい。
【００４４】
トリフルオロアセテート含有量は、凍結乾燥物を復元した後に加え／調節してもよいが、好ましい実施形態では、本発明によるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を復元する高速で効率的な方法を、トリフルオロアセテートが確保するため、トリフルオロアセテートは、水性復元溶液の一部である。所望により、水性復元溶液は、マンニトールおよび／または薬学的に許容される添加物などの等張剤を含有してもよい。
【００４５】
加えるトリフルオロアセテートの適正な量は、当業者には容易に計算されうる。例えば、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が１：１．７７のモル比を有する場合、かつ最終的な水性テベレリクス−ＴＦＡ製剤に１：２．２のモル比を所望する場合、組成物中に存在するテベレリクス１ｍｏｌ当たり０．４３ｍｏｌのＴＦＡを、復元プロセス中に加えなければならない。
【００４６】
本発明の発明者はさらに、最終的な水性薬学的製剤中のテベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、少なくとも１：２．１である場合、製剤は、可溶型テベレリクスと不溶型テベレリクスとの両方を含み、それによって、独特なテベレリクスの生物学的利用能を提供することを見出した。
【００４７】
理論に束縛されるものではないが、可溶型テベレリクスは水溶液の形態であり、いくつかの状況ではゲルである。ゲルの存在によって、いずれの自由な水性テベレリクスも阻害されることとなり、そのため、即時の放出は防止されるか、少なくとも減少する。不溶型テベレリクスは、微結晶の形態である。この微結晶は、ゲル形成を防止することとなり、そのため、水性テベレリクスを「開放」する。時間が経つにつれて、本発明による組成物中のＴＦＡは、体に吸収されて比率が低下することとなり、その後、微結晶がゲルとなって、徐放性デポを形成する。したがって、非ゲル−可溶型テベレリクスは直ちに利用可能であって、ほぼ即時の作用の発生を提供し、ゲル−可溶型および不溶型テベレリクス（微結晶）は、テベレリクスの持続放出を提供することを支援することとなる。
【００４８】
したがって、本発明によるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を用いる場合、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物に加えるトリフルオロアセテートの量を単純に調節することにより、注射製剤中の不溶型テベレリクスと可溶型テベレリクスとの比が変化することによって、テベレリクスの放出プロファイルを調節することができる。
【００４９】
テベレリクスは、酸に接触して配置される場合、脱アミド化するため、保管中に、望ましくない分解生成物（不純物）が、組成物／製剤中に現れるであろう。この不純物は、テベレリクス組成物／製剤の品質、安全性、および有効性に影響を及ぼす場合があり、それによって、潜在的に深刻な健康への危険性を生じる。
【００５０】
本発明の発明者は、テベレリクスとＴＦＡとのモル比が１：２．８以下である場合、すなわち、テベレリクス１ｍｏｌ当たりのＴＦＡのモル含有量が２．８以下である場合、不純物のレベルが、許容されるレベルに保たれることを見出した。したがって、本発明によるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物中の最適なモル比は、好ましくは、１：２．２（または１：２．４）から１：２．８の間である。
【００５１】
好ましい実施形態では、本発明はまた、単位投与量のテベレリクスを充填した第１の包装と、少なくとも１：２．１、好ましくは少なくとも１：２．２、さらにより好ましくは約１：２．４以上の所望のモル比であって、任意選択で１：２．８以下のモル比を得るのに十分な量のＴＦＡを含む復元溶液を充填した第２の包装とを含むキットに関する。この第１の包装は、例えばシリンジであってもよく、テベレリクスとＴＦＡとの適正なモル比を確実に得るために、第２の包装は、このシリンジと物理的に接続されていてもよい。互いに物理的に接続された第１および第２の包装の一例として、凍結乾燥生成物のための従来のデュアルチャンバーシリンジを挙げることができる。このようなデュアルチャンバーシリンジは、当技術分野において周知である。
【００５２】
一実施形態では、このキットは、少なくとも１：２．１、好ましくは少なくとも１：２．２、さらにより好ましくは約１：２．４以上、かつ任意選択で、１：２．８以下のテベレリクスと対イオンとのモル比を有する、最終的な流動的で乳状の微結晶水性テベレリクス−ＴＦＡの懸濁液を提供するように手配される。好ましくは、テベレリクスの濃度は、３０ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの間、さらにより好ましくは４５ｍｇ／ｍｌから９０ｍｇ／ｍｌの間、例えば約７５ｍｇ／ｍｌである。テベレリクスの濃度は、いくつかの状況では、約１００ｍｇ／ｍｌよりも高くてもよい。体積は、０．４ｍｌから１．６ｍｌの間、例えば約１．２ｍｌでありうる。この濃度および体積において、皮下および／または筋肉内に与えられる注射は、穏やかな注射部位反応のみを提供することが実証されている。
【００５３】
本発明において提供する凍結乾燥物および製剤は、製造に費用がかさまず、使用の容易さに起因して、非常に単純な投与体制（regime）を提供する。
【実施例】
【００５４】
テベレリクスと対イオンのトリフルオロアセテートとのモル比の影響を確かめるために、複数の試験を実行した。
【００５５】
実施例１：異なるモル比を有するテベレリクス−ＴＦＡ組成物の調製
低いＴＦＡ含有量を有するテベレリクスの特別製造バッチ、バッチＡを入手した。このバッチの特性を、表１に示す。
2021529166.tif 000004
【００５６】
７５ｍｇのテベレリクスを含有する組成物Ａを所望する場合、次のように計算して、８８．２８ｍｇのバッチＡを用いなければならない。
2021529166.tif 000005
【００５７】
次いで、組成物Ａ中のテベレリクスとＴＦＡとのモル比を計算することができる。
【００５８】
８８．２８ｍｇのバッチＡ中のＴＦＡ含有量は、８８．２８ｍｇ×１０．９／１００（％ＴＦＡ含有量）＝９．６２ｍｇと計算することができる。
【００５９】
ＴＦＡのモル質量ＭＴＦＡは１１４ｇ／ｍｏｌであり、テベレリクスのモル質量ＭＴＥＶは１４５９ｇ／ｍｏｌであるため、７５ｍｇのテベレリクス組成物中のＴＦＡのモル濃度は０．０８４ｍｍｏｌ、テベレリクスのモル濃度は０．０５１ｍｍｏｌと計算することができる。したがって、組成物Ａ中のテベレリクスとＴＦＡとのモル比は、１：１．６４である。
【００６０】
異なるモル比を有する、複数の異なる水性テベレリクス−ＴＦＡ組成物を調製するために、４４．１４ｍｇ＋５％（４１．９３〜４６．３５ｍｇ）の組成物Ａを含有する２１個の試料を、マイクロピペットによって水溶液を加えることができる蓋を有する、２ｍｌガラスチューブに正確に秤量した。
【００６１】
５％マンニトール中にＴＦＡを含有する７種のＴＦＡ溶液を、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｇｅｅｌ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）から入手したＴＦＡ組成物を用いて調製した。このＴＦＡ組成物は、９９％純粋であり、１．５３５ｇ／ｍｌの密度を有していた。各溶液を表２に示す。
2021529166.tif 000006
【００６２】
マイクロピペットを用いて、４４．１４ｍｇ＋５％（４１．９３〜４６．３５ｍｇ）の組成物Ａを含有する２１個のガラスチューブの蓋を通じて、０．５ｍｌの上の溶液のそれぞれを加えることによって、各水性テベレリクス−ＴＦＡ組成物を調製し、すなわち、同じモル比を有する３つの水性テベレリクス−ＴＦＡ組成物を調製した。ボルテックスを用いて混合物を１分間撹拌し、所望されるテベレリクス−ＴＦＡの流動的で乳状の微結晶均一水性懸濁液を得たか、または代わりにゲルが形成されたかを確かめるために、溶液を１０分間、視覚的に観察した。結果を下の表３にまとめる。
2021529166.tif 000007
【００６３】
第１の試験チューブ内の水性テベレリクス−ＴＦＡ組成物の微結晶内容物を、Ｒｅａｌｕｘ（Ｆｒａｎｃｅ）によって供給された偏光顕微鏡でさらに観察した。それぞれのモル比についての結果を、図１ａ〜図１ｇに示す。これらの観察から、１：１．８５以下のモル比については、微結晶形成が観察されないことは明らかであり、したがって、所望の微結晶形成が開始されるためには、テベレリクスと対イオンのＴＦＡとのモル比が、少なくとも１：２．１を上回らなければならない。
【００６４】
さらに、表３から明白であるように、テベレリクス−ＴＦＡの均一懸濁液は、モル割り当て（ration）が１：２．１を上回るまで得られなかった。したがって、そのために、凍結乾燥懸濁液を準備するために用いる微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液と；復元水性テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液との両方におけるモル比は、１：２．１を上回り、好ましくは少なくとも１：２．２のようにさらに高く、さらにより好ましくは少なくとも１：２．４であることが好ましい。
【００６５】
実施例２：モル比に対する可溶型テベレリクスおよび不溶型テベレリクスの含有量
各試験チューブにおける、不溶型テベレリクスに対する可溶型テベレリクスの含有量を決定するために、それぞれのモル比の第２および第３の試験チューブを、１０〜２０分間、１０，０００ｒｐｍで遠心分離し、上清およびペレット中のテベレリクスの濃度を、ＨＰＬＣ分析を用いて測定した。
【００６６】
ＨＰＬＣ分析についてのクロマトグラフィー条件を、表４に示す。
2021529166.tif 000008
【００６７】
５９．９ｍｇのテベレリクスアセテート（バッチ０８０１１３）を、メスフラスコに秤量し、水：アセトニトリル＝６５：３５（ｖ／ｖ）により体積を１００ｍｌまで満たすことによって、２つの１００％標準を調製した。１０ｍｌのこの溶液を、同じ溶媒によって５０ｍｌまで満たし、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のテベレリクスペプチドを準備した。
【００６８】
２ｍｌの１００％標準を、同じ溶媒によって２００ｍｌに希釈することによって、１％標準溶液を調製し、０．００１ｍｇ／ｍｌの濃度のテベレリクスペプチドを準備した。
【００６９】
２つの１００％標準を用いて、内部標準法を行った。１％標準を用いて、応答の直線性を確認した。１００％標準による回収は、区間９５％〜１０５％になければならない。
【００７０】
遠心分離後に得たペレットを、水：アセトニトリル＝６５：３５（ｖ／ｖ）に可溶化し、同じ溶媒によって、体積を１００ｍＬまで満たした。この溶液を、５倍に希釈し（５０ｍＬ中の１０ｍＬ）、ＨＰＬＣを実行した。
【００７１】
上清をメスフラスコに移し、同じ溶媒、すなわち、水：アセトニトリル＝６５：３５（ｖ／ｖ）によって、体積を１００ｍＬまで満たした。この溶液を、５倍に希釈し（５０ｍＬ中の１０ｍＬ）、ＨＰＬＣを実行した。ＨＰＬＣ分析の結果を、表５に示す。
2021529166.tif 000009
【００７２】
それぞれのモル比の平均濃度を計算したので、表６を参照されたい。結果を図２および３に図示する。
2021529166.tif 000010
【００７３】
表５および６、ならびに図２および３から明白であるように、テベレリクスに対するトリフルオロアセテートの量が増加すると、不溶型テベレリクスの度合いが増加し、したがって、１：２．１のモル比においては、薬学的製剤の約５０％は不溶型テベレリクスからなり、１：２．３６（約１：２．４）のモル比においては、薬学的製剤中の不溶型テベレリクスの量は約８２％である。
【００７４】
実施例３：モル比に対する血漿濃度
テベレリクスの血漿濃度に対するモル比の関連性を評価するため、異なるモル比を含有する５つのガラスバイアルを、実施例１に論じたように調製し、表７に示す水性テベレリクス−ＴＦＡ組成物を含む試験チューブを準備した。
2021529166.tif 000011
【００７５】
それぞれのモル比に対して、５匹のラットを試験した。２５ｍｍ  ２１Ｇルアー６％レギュラーベベル針（Ｔｅｒｕｍｏ（Ｌｅｕｖｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）から入手可能）、および１００μｌルアースリップシリンジ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｒｅｎｏ，ＵＳＡ）から入手可能）を用いて、それぞれのラットに６０μｌの各溶液を注射した。投与の前、次いで、投与後１時間、６時間、２４時間、４８時間、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、および２８日目に、血漿濃度を測定した。
【００７６】
それぞれのラット個体への注射後のテベレリクスのピーク血漿濃度Ｃｍａｘを、表８に示し、図４に図示する。
2021529166.tif 000012
【００７７】
これらの結果から明らかであるように、テベレリクスのＣｍａｘは、１：２．１のモル比までは上昇し、その後、血漿濃度は実質的に安定する。
【００７８】
定期的な間隔で血液試料を採取することによって、４週間の期間にわたる血漿濃度も測定した。
【００７９】
４週間の期間における平均血漿レベルを図５に示すが、テベレリクスの放出プロファイルが、モル比に依存することは明らかである。例えば、１：２．１のモル比を有する懸濁液によって、高いテベレリクスの血漿濃度が示される。したがって、復元の際にテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物に加えるトリフルオロアセテートの量を単純に調節することにより、薬学的製剤中のテベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比を変化させることによって、テベレリクスの放出プロファイルを調節することができる。
【００８０】
臨床的には、これは、患者の個体群の要件、例えば、異なる適応症、年齢、および／または性別に関して、療法を最適化する可能性がある。ある患者群は、高濃度の可溶型テベレリクスが要求される、作用の即時発生を必要としうるが、別の群は、低濃度の可溶型テベレリクスが要求される、テベレリクスの持続放出を必要としうる。同様に、異なる段階の患者の治療においては、異なるモル比を有する、異なる薬学的製剤が投与されうる。さらに、異なる患者群の特定の必要性に合わせてモル比を調節できることによって、患者の受容および療法の適合性が上昇するであろう。
【００８１】
実施例４：モル比に対するテベレリクスの安定性
テベレリクスの安定性に関するテベレリクスと対イオンのトリフルオロアセテートとのモル比の影響を確かめるために、次の試験を実行した。
【００８２】
テベレリクスとＴＦＡとの異なるモル比（低１：１．７；中位１：２．１６；高１：２．８；および超高１：４．０）を有する、４種のバッチのテベレリクスＴＦＡ溶液を、２つの濃度、１０ｍｇ／ｍＬ（ベーステベレリクスとして表す）および１ｍｇ／ｍＬ（ベーステベレリクスとして表す）において調製した。
【００８３】
乾燥粉末として供給される、復元可能なテベレリクスＴＦＡ組成物を入手した。このバッチの特性を、表９に示す。
2021529166.tif 000013
【００８４】
出発材料のモル比を、次の計算を用いて決定した。
2021529166.tif 000014
【００８５】
８つのバッチ：一方は、１０ｍｇ／ｍｌの４種のモル比のそれぞれ、一方は、１ｍｇ／ｍｌの４種のモル比のそれぞれを、以下のように調製した。
【００８６】
１０ｍｇ／ｍＬにおける低モル比（１：１．７）
１．  ０．３１２ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味重量テベレリクス）を、注射用水によって復元して、懸濁液を３．０ｍＬに調合し、１０４ｍｇ／ｍＬの均一ミルク懸濁液を形成した。この濃度では、テベレリクスの９６％が固体テベレリクスを形成することを、先行調査が実証しており、そのため、遠心分離後、およそ３００ｍｇのテベレリクスが、固体テベレリクスとして回収されることになる。
２．  調製物を、４℃において、１０，０００ｒｐｍ（８，５００ｇ）で１０分間、直ちに遠心分離した。
３．  遠心分離された材料の上清を廃棄した。固体テベレリクスが、およそ１：１．７のテベレリクスとＴＦＡとのモル比を有することを、先行調査が実証している。
４．  遠心分離ペレットを、注射用水によって再懸濁させて、３０ｍＬに調合し、およそ１０ｍｇ／ｍＬの、およそ１：１．７のモル比の溶液を形成した。
【００８７】
１０ｍｇ／ｍＬにおける中位モル比（Mid-molar range ratio）（１：２．１６）
１．  ０．１ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味重量テベレリクス）を、１０ｍＬ三角フラスコ中で注射用水によって復元して、１０．０ｍＬ体積の溶液を作製し、１０ｍｇ／ｍＬにおける、１：２．１６のテベレリクスとＴＦＡとのモル比のテベレリクスの溶液を形成した。
【００８８】
１０ｍｇ／ｍＬにおける高モル比（１：２．８）
１．  ０．１ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味重量テベレリクス）を、１０ｍＬ三角フラスコ中で、５ｍＬの０．００９７Ｍ注射用水中トリフルオロ酢酸によって復元した。
２．  溶液を注射用水によって１０．０ｍＬに調合して、１０ｍｇ／ｍＬにおける、１：２．８のテベレリクスとＴＦＡとのモル比のテベレリクスの溶液を形成した。
【００８９】
１０ｍｇ／ｍＬにおける超高モル比（１：４．０）
１．  ０．１ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味重量テベレリクス）を、１０ｍＬ三角フラスコ中で、５ｍＬの０．０２５２Ｍ注射用水中トリフルオロ酢酸によって復元した。
２．  溶液を注射用水によって１０．０ｍＬに調合して、１０ｍｇ／ｍＬにおける、１：４．０のテベレリクスとＴＦＡとのモル比のテベレリクスの溶液を形成した。
【００９０】
１ｍｇ／ｍＬにおける低モル比（１：１．７）
１．  ０．３１２ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味テベレリクス）を、注射用水によって復元して、懸濁液を３．０ｍＬに調合し、１０４ｍｇ／ｍＬの均一ミルク懸濁液を形成した。
２．  調製物を、４℃において、１０，０００ｒｐｍ（８，５００ｇ）で１０分間、直ちに遠心分離した。
３．  遠心分離された材料の上清を廃棄した。
３．  遠心分離ペレットを、注射用水中に再懸濁させて（最終体積３００ｍＬ）、およそ１ｍｇ／ｍＬの、およそ１：１．７のテベレリクスとＴＦＡとのモル比の溶液を調合した。
４．  １０．０ｍＬを、１０ｍＬ三角フラスコに移した。
【００９１】
１ｍｇ／ｍＬにおける中位モル比（Mid-molar range ratio）（１：２．１６）
１．  注射用水中テベレリクスＴＦＡの１ｍｇ／ｍＬ溶液を調製した。
【００９２】
１ｍｇ／ｍＬにおける高モル比（１：２．８）
１．  ０．０１０ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味重量テベレリクス）を、１０ｍＬ三角フラスコ中で、５ｍＬの０．００１Ｍ注射用水中トリフルオロ酢酸によって復元した。
２．  ＷＦＩによって、体積を１０ｍＬまで満たした。
【００９３】
１ｍｇ／ｍＬにおける超高モル比（１：４．０）
１．  ０．０１０ｇのテベレリクスＴＦＡ（正味重量テベレリクス）を、１０ｍＬ三角フラスコ中で、５ｍＬの０．０２０５Ｍ注射用水中トリフルオロ酢酸によって復元した。
２．  ＷＦＩによって、体積を１０ｍＬまで満たした。
【００９４】
すべての溶液を、テベレリクス純度についての分析の前に、研究室温度（２０℃）に保った。
【００９５】
溶液それぞれから、試料を２回採取し、従来のＲＰ−ＨＰＬＣ方法を用いて、テベレリクス純度について分析した。染色（chromatic）条件は、表１０に示した通りである。
2021529166.tif 000015
【００９６】
調製後、すなわち時間０における溶液中のテベレリクスの純度を、表１１に示す。
2021529166.tif 000016
【００９７】
経時的な安定性を評価するために、＋４０℃、７５％の相対湿度のチャンバー内で、各溶液を共栓付きガラス三角フラスコに保管した。
【００９８】
１０ｍｇ／ｍＬ溶液については１箇月後、１ｍｇ／ｍＬ溶液については２週間後、既に記載した方法を用いて、テベレリクス純度分析を繰り返した。該当期間の後の溶液の純度を、下の表１２に提示する。
2021529166.tif 000017
【００９９】
安定性の結果を図６および７に示し、保管中の不純物のパーセンテージの増加を、懸濁液のモル比によって図示する。図は、１モルのテベレリクス当たりのＴＦＡのｍｏｌ含有量を示すことに留意されたい。
【０１００】
これらの図から、溶媒中のより高濃度のトリフルオロアセテートは、有意により高濃度の不純物をもたらすことは明らかであり、したがって、テベレリクスが漸増濃度の酸（トリフルオロアセテート）と接触して配置される場合、望ましくない分解生成物（不純物）が少量現れ、製剤の品質、安全性、および有効性に潜在的に影響を及ぼす場合があり、それによって、潜在的に深刻な健康への危険性を生じることを、結果が証拠立てている。したがって、安定なテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得るためには、低濃度／含有量のトリフルオロアセテートを有する組成物を準備すること、すなわち、テベレリクス１ｍｏｌについてのトリフルオロアセテートのモル含有量を、可能な限り低く保つことが重要である。
【０１０１】
図６および７から、懸濁液中のテベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が１：２．８を下回る（すなわち、１ｍｏｌのテベレリクス対２．８ｍｏｌ以下のＴＦＡ）場合、不純物、すなわち、例えば脱アミド化によって生じる、望ましくない分解生成物のレベルは、許容されるレベルに保たれることが見て取れる。
【０１０２】
これらの図から、テベレリクスの濃度もまた、不純物のレベルに関係することも明らかである。しかしながら、注射体積を減少させるためには、懸濁液が、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは少なくとも３０ｍｇ／ｍｌのテベレリクスの濃度を含むことが関係し、したがって、最終的な流動的で乳状の水性懸濁液中のテベレリクスの濃度を単純に低下させることは、現実的には不可能である。しかしながら、低レベルの酸はより安定な生成物を提供することとなるため、この因子によって、凍結乾燥物中の酸（トリフルオロアセテート）の含有量は、保管中にはいっそうより重要となる。
【０１０３】
本発明において提供する組成物および製剤は、製造に費用がかさまず、使用の容易さに起因して、非常に単純な投与体制（regime）も提供する。
【０１０４】
上の原理の修正および組み合わせ、ならびにその組み合わせは、本発明の範囲内で予見される。
【図１ａ−１ｇ】
2021529166.tif 000018
【図２】
2021529166.tif 000019
【図３】
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【図４】
2021529166.tif 000021
【図５】
2021529166.tif 000022
【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年4月28日(2020.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を調製するための凍結乾燥方法であって、前記方法が、以下の工程：
ａ）ゲルを形成することなく、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を準備するのに十分なテベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比で、テベレリクスとトリフルオロアセテートとを混合することによって、凍結乾燥懸濁液を準備する工程であって、組成物が、テベレリクス１ｍｏｌ当たり少なくとも２．１ｍｏｌのトリフルオロアセテートを含む、凍結乾燥懸濁液を準備する工程、
ｂ）工程ａ）の凍結乾燥懸濁液を凍結乾燥させることによって、凍結乾燥懸濁液中のテベレリクス１ｍｏｌ当たりのトリフルオロアセテートのｍｏｌ含有量よりも低い、テベレリクス１ｍｏｌ当たりのトリフルオロアセテートのｍｏｌ含有量を有するテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を得る工程
を含み
工程ａ）が、以下の工程：
ａ’）微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液を、遠心分離または濾過することによって、それぞれ、テベレリクス−ＴＦＡペレットまたはテベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを準備する工程、および
ａ”）前記テベレリクス−ＴＦＡペレットまたは前記テベレリクス−ＴＦＡ濾過ケーキを、水性懸濁溶液中に懸濁させる工程
をさらに含むことを特徴とする凍結乾燥方法。
【請求項２】
工程ａ）におけるテベレリクスとトリフルオロアセテートとを、組成物中のテベレリクス１ｍｏｌにつき、組成物が少なくとも２．２ｍｏｌのトリフルオロアセテートを含むように、少なくとも１：２．２のモル比で混合する、請求項１に記載の凍結乾燥方法。
【請求項３】
遠心分離後のペレット、または濾過後の濾過ケーキが、微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液中のモル比よりも低い、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比を有する、請求項１または２に記載の凍結乾燥方法。
【請求項４】
水性懸濁溶液が、水またはマンニトール溶液である、請求項１から３のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項５】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液が、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が少なくとも１：２．２である場合、組成物中のテベレリクス１ｍｏｌにつき、組成物が少なくとも２．２ｍｏｌのトリフルオロアセテートを含むように、水中で作製される、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項６】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液が、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が１：２．２を下回る場合、組成物中のテベレリクス１ｍｏｌにつき、組成物が２．２ｍｏｌを下回るトリフルオロアセテートを含むように、トリフルオロ酢酸溶液中で作製される、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項７】
工程ｂ）のテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が、ガンマ線滅菌によって滅菌される、請求項１から６のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項８】
微結晶テベレリクス−ＴＦＡ懸濁液中のテベレリクス−ＴＦＡの濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１から７のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項９】
得られるテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物が、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物の総重量を基準として、０．３重量％と５重量％の間の量で水を含む程度に、再懸濁ペレットまたは再懸濁濾過ケーキが、凍結乾燥または噴霧乾燥される、請求項１から８のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項１０】
凍結乾燥が、テベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物の単位投与量で、かつ／または保管のための包装中で直接、実行される、請求項１から９のいずれか一項に記載の凍結乾燥方法。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれの一項によって得たテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物を復元する方法であって、水性復元溶液をテベレリクス−ＴＦＡ凍結乾燥物に加えることを含み、トリフルオロアセテートを加えることによって、組成物中のテベレリクス１ｍｏｌにつき、組成物が少なくとも２．１ｍｏｌのトリフルオロアセテートを含むように、モル比を調節することをさらに含む、方法。
【請求項１２】
テベレリクス１ｍｏｌにつき、組成物が少なくとも２．２ｍｏｌのトリフルオロアセテートを、好ましくは少なくとも２．４を含むように、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、少なくとも１：２．２に、好ましくは少なくとも１：２．４に調節される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
テベレリクス１ｍｏｌにつき、組成物が２．８ｍｏｌ以下のトリフルオロアセテートを含むように、テベレリクスとトリフルオロアセテートとのモル比が、１：２．８以下に調節される、請求項１１または１２に記載の方法。
【国際調査報告】
2021529166.tif 000025
2021529166.tif 000026