(57)【要約】本明細書では、単一の核酸ベクターまたは２つの異なる核酸ベクターを含む組成物、ならびに対象において聴力喪失及び／または視力喪失を治療するためのこれらの組成物の使用が提供される。本発明は、少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物に関し、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、これを用いて、哺乳類細胞において活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする配列を生成し、それによって、治療を必要とする対象においてＣＬＲＮ１に関連する聴力喪失及び／または視力喪失を治療することができる。本発明はまた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１及び／または第２のアイソフォームのコード配列を含む単一の核酸ベクターを含む、組成物にも関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が任意選択で、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、
前記少なくとも２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含み、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記少なくとも２つの異なるベクターが互いに相同組換えを経て、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項２】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも２つの異なるベクターのうちの少なくとも１つが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２４】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２５】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２９】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３２】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記コードされた部分のうちのいずれの部分のアミノ酸配列も、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と重複していない、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記重複するアミノ酸配列が、約３０アミノ酸残基〜約２０２アミノ酸残基の長さである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ベクターが、２つの異なるベクターを含み、前記２つの異なるベクターの各々が、イントロンの異なるセグメントを含み、前記イントロンが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み、前記２つの異なるイントロンセグメントの配列が、少なくとも１００ヌクレオチド重複する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記２つの異なるイントロンセグメントの配列が、１００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド重複する、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体が、約５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチドの長さである、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体が、５００ヌクレオチド〜５，０００ヌクレオチドの長さである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物中の異なるベクターの数が２つである、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記２つの異なるベクターのうちの第１のベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含む、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｎ末端部分が、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｎ末端部分が、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記第１のベクターが、５’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５０】
前記第１のベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、請求項４１〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記２つの異なるベクターのうちの第２のベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む、請求項４０〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｃ末端部分が、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
前記第２のベクターが、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５６】
前記第２のベクターが、３’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項６２】
単一の核酸ベクターを含む組成物であって、前記ベクターが、（ｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする第１のコード配列、及び（ｉｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする第２のコード配列のうちの一方または両方を含み、
前記第１及び第２のコード配列のうちの一方または両方が、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するイントロンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、前記組成物。
【請求項６３】
前記単一の核酸ベクターが、前記第１のコード配列を含有し、前記第２のコード配列は含有しない、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
前記単一の核酸ベクターが、前記第２のコード配列を含有し、前記第１のコード配列は含有しない、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６５】
前記単一の核酸ベクターが、前記第１のコード配列及び前記第２のコード配列の両方を含有する、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項６２、６３、及び６５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項６２、６４、及び６５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
前記単一の核酸ベクターが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方をさらに含む、請求項６２〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７３】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７９】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項８３】
前記単一の核酸ベクターが、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８４】
前記単一の核酸ベクターが、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８５】
前記単一の核酸ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８６】
前記単一の核酸ベクターが、ＡＡＶベクターである、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
前記単一の核酸ベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８８】
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
前記単一の核酸ベクターが、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項８７に記載の組成物。
【請求項９０】
薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１〜８９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９１】
請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項９２】
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、請求項９１に記載のキット。
【請求項９３】
哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、方法。
【請求項９４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項９３または９４に記載の方法。
【請求項９６】
哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を前記哺乳類細胞に導入することを含む、前記方法。
【請求項９７】
前記哺乳類細胞が蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記哺乳類細胞が網膜細胞である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９９】
前記哺乳類細胞がヒト細胞である、請求項９６〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
前記哺乳類細胞が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている、請求項９６〜９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０１】
哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記蝸牛に、治療上有効量の請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、前記方法。
【請求項１０２】
哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記眼に、治療上有効量の請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を眼内投与することを含む、前記方法。
【請求項１０３】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項１０１または１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０１〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記蝸牛に投与することを含む、前記方法。
【請求項１０６】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記眼に投与することを含む、前記方法。
【請求項１０７】
前記対象が、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する、請求項１０５または１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記対象がヒトである、請求項１０５〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記投与ステップの前に、前記対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む、請求項１０５〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１０】
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、スプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端におけるポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記２つのコードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項１１１】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１１２に記載の組成物。
【請求項１１４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１１５に記載の組成物。
【請求項１１７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１１８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１１７に記載の組成物。
【請求項１１９】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１２０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１２１に記載の組成物。
【請求項１２３】
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１２３に記載の組成物。
【請求項１２５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１２４に記載の組成物。
【請求項１２６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１２５に記載の組成物。
【請求項１２７】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１１０〜１２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２８】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１２９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２８に記載の組成物。
【請求項１３０】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２９に記載の組成物。
【請求項１３１】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３２】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１３３】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１３４】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３３に記載の組成物。
【請求項１３５】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３４に記載の組成物。
【請求項１３６】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３５に記載の組成物。
【請求項１３７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１３８】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３９】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４０】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４１】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項１４０に記載の組成物。
【請求項１４２】
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、請求項１１０〜１４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４３】
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、前記スプライスドナー配列の３’側に位置付けられた第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、第２の検出可能マーカー遺伝子と、前記第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項１４４】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１４３に記載の組成物。
【請求項１４５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１４４に記載の組成物。
【請求項１４６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１４５に記載の組成物。
【請求項１４７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１４６に記載の組成物。
【請求項１４８】
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１４４に記載の組成物。
【請求項１４９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１４８に記載の組成物。
【請求項１５０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１５０に記載の組成物。
【請求項１５２】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１４３に記載の組成物。
【請求項１５３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１５２に記載の組成物。
【請求項１５４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１５３に記載の組成物。
【請求項１５５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１５４に記載の組成物。
【請求項１５６】
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１５２に記載の組成物。
【請求項１５７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１５６に記載の組成物。
【請求項１５８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１５７に記載の組成物。
【請求項１５９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１５８に記載の組成物。
【請求項１６０】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１４３〜１５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６１】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１６２】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６１に記載の組成物。
【請求項１６３】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６２に記載の組成物。
【請求項１６４】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６３に記載の組成物。
【請求項１６５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１６６】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１６７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６６に記載の組成物。
【請求項１６８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６７に記載の組成物。
【請求項１６９】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６８に記載の組成物。
【請求項１７０】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１７１】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７２】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７３】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７４】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項１７３に記載の組成物。
【請求項１７５】
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、請求項１４３〜１７４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７６】
前記第１または第２の検出可能マーカー遺伝子が、アルカリホスファターゼである、請求項１４３〜１７５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７７】
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターに対して３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、前記スプライスドナー配列に対して３’側に位置付けられたＦ１ファージ組換え誘導領域とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、前記Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記２つのコードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記２つのコードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項１７８】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１７７に記載の組成物。
【請求項１７９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１７８に記載の組成物。
【請求項１８０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１７９に記載の組成物。
【請求項１８１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１８０に記載の組成物。
【請求項１８２】
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１７８に記載の組成物。
【請求項１８３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１８２に記載の組成物。
【請求項１８４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１８３に記載の組成物。
【請求項１８５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１８４に記載の組成物。
【請求項１８６】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１７７に記載の組成物。
【請求項１８７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１８６に記載の組成物。
【請求項１８８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１８７に記載の組成物。
【請求項１８９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１８８に記載の組成物。
【請求項１９０】
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１８６に記載の組成物。
【請求項１９１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１９０に記載の組成物。
【請求項１９２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１９１に記載の組成物。
【請求項１９３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１９２に記載の組成物。
【請求項１９４】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１７７〜１９３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項１９６】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９５に記載の組成物。
【請求項１９７】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９６に記載の組成物。
【請求項１９８】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９７に記載の組成物。
【請求項１９９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項２００】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項２０１】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２００に記載の組成物。
【請求項２０２】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２０１に記載の組成物。
【請求項２０３】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２０２に記載の組成物。
【請求項２０４】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項２０５】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０６】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０７】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０８】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項２０７に記載の組成物。
【請求項２０９】
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１０】
請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項２１１】
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、請求項２１０に記載のキット。
【請求項２１２】
哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、方法。
【請求項２１３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１４】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項２１２または２１３に記載の方法。
【請求項２１５】
哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を前記哺乳類細胞に導入することを含む、前記方法。
【請求項２１６】
前記哺乳類細胞が蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である、請求項２１５に記載の方法。
【請求項２１７】
前記哺乳類細胞が網膜細胞である、請求項２１５に記載の方法。
【請求項２１８】
前記哺乳類細胞がヒト細胞である、請求項２１５〜２１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１９】
前記哺乳類細胞が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている、請求項２１５〜２１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２０】
哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記蝸牛に、治療上有効量の請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、前記方法。
【請求項２２１】
哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記眼に、治療上有効量の請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を眼内投与することを含む、前記方法。
【請求項２２２】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項２２０または２２１に記載の方法。
【請求項２２３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２２０〜２２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２４】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記蝸牛に投与することを含む、前記方法。
【請求項２２５】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記眼に投与することを含む、前記方法。
【請求項２２６】
前記対象が、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する、請求項２２４または２２５に記載の方法。
【請求項２２７】
前記対象がヒトである、請求項２２４〜２２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２８】
前記投与ステップの前に、前記対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む、請求項２２４〜２２７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１８年６月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／６８９，６６０号の優先権を主張し、その全内容は参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本開示は全般的に、ヒト対象において聴力喪失、視力喪失、または両方を治療するための核酸の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
聴力喪失に対する現在の治療は主として、軽度から重度の聴力喪失に対する聴力増幅、及び重度から深刻な聴力喪失に対する蝸牛移植からなる。しかしながら、症候性難聴を予防するかまたは好転させるための薬剤及び方法に対する長年認識されてきた必要性が残っている。
【０００４】
聴力喪失は、伝音性（外耳道または中耳から発生する）、感音性（内耳または聴神経から発生する）、または混合型であり得る。症候性難聴のほとんどの形態は、内耳における構造への損傷によって引き起こされる永久的聴力喪失に関連するが（感音性難聴）、一部の形態は、中耳における変化を伴い得る（伝音性聴力喪失）。ヒトの感音性聴力喪失の大多数は、蝸牛内のコルチ器管の有毛細胞における異常（良好でない有毛細胞機能）によって引き起こされる。有毛細胞は出生時に異常である場合もあれば、個体の生涯の間に損傷を受ける（例えば、騒音性外傷または感染の結果として）場合もある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物に関し、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、これを用いて、哺乳類細胞において活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする配列を生成し、それによって、治療を必要とする対象においてＣＬＲＮ１に関連する聴力喪失及び／または視力喪失を治療することができる。本発明はまた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１及び／または第２のアイソフォームのコード配列を含む単一の核酸ベクターを含む、組成物にも関する。
【０００６】
本明細書では、少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物が提供され、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は任意選択で、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、該少なくとも２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、該コード配列のうちの少なくとも１つは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含み、哺乳類細胞に導入されるとき、該少なくとも２つの異なるベクターは互いに相同組換えを経て、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。
【０００７】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターのうちの少なくとも１つは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む。
【０００８】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＡＡＶベクターである。
【０００９】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該コードされた部分のうちのいずれの部分のアミノ酸配列も、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と重複していない。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複する。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該重複するアミノ酸配列は、約３０アミノ酸残基〜約２０２アミノ酸残基の長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ベクターは、２つの異なるベクターを含み、該２つの異なるベクターの各々は、イントロンの異なるセグメントを含み、該イントロンは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み、該２つの異なるイントロンセグメントの配列は、少なくとも１００ヌクレオチド重複する。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該２つの異なるイントロンセグメントの配列は、１００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド重複する。
【００１０】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体は、約５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチドの長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体は、５００ヌクレオチド〜５，０００ヌクレオチドの長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該組成物中の異なるベクターの数は、２つである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該２つの異なるベクターのうちの第１のベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該Ｎ末端部分は、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該Ｎ末端部分は、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のベクターは、５’ＵＴＲ配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のベクターは、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該２つの異なるベクターのうちの第２のベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該Ｃ末端部分は、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該Ｃ末端部分は、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第２のベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第２のベクターは、３’ＵＴＲ配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む。
【００１１】
本明細書ではまた、単一の核酸ベクターを含む組成物も提供され、該ベクターは、（ｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする第１のコード配列、及び（ｉｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする第２のコード配列のうちの一方または両方を含み、該第１及び第２のコード配列のうちの一方または両方が、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するイントロンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、該第１のコード配列を含有し、該第２のコード配列は含有しない。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、該第２のコード配列を含有し、該第１のコード配列は含有しない。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、該第１のコード配列及び該第２のコード配列の両方を含有する。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。
【００１２】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む。
【００１３】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、ＡＡＶベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該単一の核酸ベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【００１４】
本明細書ではまた、本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを含むキットも提供される。本明細書に提供されるキットのうちのいずれかの一部の実施形態は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを含むかまたは含有する、充填済みシリンジをさらに含む。
【００１５】
本明細書ではまた、哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを導入することを含む方法も提供される。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、ヒトである。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている。
【００１６】
本明細書ではまた、哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを該哺乳類細胞に導入することを含む。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、網膜細胞である。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、ヒト細胞である。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている。
【００１７】
本明細書ではまた、哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、該哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを導入することを含む。本明細書ではまた、哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、該哺乳動物の眼に、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを眼内投与することを含む。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、ヒトである。
【００１８】
本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを該対象の蝸牛に投与することを含む。本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを該対象の眼に投与することを含む。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該対象は、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該対象は、ヒトである。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、該投与ステップの前に、該対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む。
【００１９】
本明細書ではまた、２つの異なる核酸ベクターを含む組成物も提供され、該２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターは、プロモーターと、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み、該２つの異なる核酸ベクターの第２の核酸ベクターは、スプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端におけるポリアデニル化シグナル配列とを含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該２つのコードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、哺乳類細胞に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のコード配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、該第２のコード配列は、該第１のアイソフォームＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第２の核酸ベクターのうちの該第１の核酸ベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。
【００２０】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のコード配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、該第２のコード配列は、該第２のアイソフォームＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターまたは該第２の核酸ベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。
【００２１】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む。
【００２２】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、ＡＡＶベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該コード配列のうちの少なくとも１つは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む。
【００２３】
本明細書ではまた、２つの異なる核酸ベクターを含む組成物も提供され、該２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターは、プロモーターと、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、該スプライスドナー配列の３’側に位置付けられた第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み、該２つの異なる核酸ベクターの第２の核酸ベクターは、第２の検出可能マーカー遺伝子と、該第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該コードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、哺乳類細胞に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のコード配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、該第２のコード配列は、該第１のアイソフォームＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第２の核酸ベクターのうちの該第１の核酸ベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のコード配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、該第２のコード配列は、該第２のアイソフォームＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターまたは該第２の核酸ベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。
【００２４】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。
【００２５】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む。
【００２６】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、ＡＡＶベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該コード配列のうちの少なくとも１つは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１または第２の検出可能マーカー遺伝子は、アルカリホスファターゼである。
【００２７】
本明細書ではまた、２つの異なる核酸ベクターを含む組成物も提供され、該２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターは、プロモーターと、該プロモーターに対して３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、該スプライスドナー配列に対して３’側に位置付けられたＦ１ファージ組換え誘導領域とを含み、該２つの異なる核酸ベクターの第２の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、該Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、該２つのコードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該２つのコードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、哺乳類細胞に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のコード配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、該第２のコード配列は、該第１のアイソフォームＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第２の核酸ベクターのうちの該第１の核酸ベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。
【００２８】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１のコード配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、該第２のコード配列は、該第２のアイソフォームＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第２のアイソフォームは、配列番号５からなる。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターまたは該第２の核酸ベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該ＣＬＲＮ１タンパク質の該第１のアイソフォームは、配列番号３からなる。
【００２９】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該５’ＵＴＲは、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該３’ＵＴＲは、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む。
【００３０】
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該第１の核酸ベクター及び該第２の核酸ベクターの各々は、ＡＡＶベクターである。本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、該コード配列のうちの少なくとも１つは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む。
【００３１】
本明細書ではまた、本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを含むキットも提供される。本明細書に提供されるキットのうちのいずれかの一部の実施形態は、該組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む。
【００３２】
本明細書ではまた、哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを導入することを含む方法も提供される。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、ヒトである。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている。
【００３３】
本明細書ではまた、哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを該哺乳類細胞に導入することを含む。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、網膜細胞である。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、ヒト細胞である。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている。
【００３４】
本明細書ではまた、哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、該哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを導入することを含む。本明細書ではまた、哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、該哺乳動物の眼に、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを眼内投与することを含む。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、ヒトである。
【００３５】
本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを該対象の蝸牛に投与することを含む。本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを該対象の眼に投与することを含む。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該対象は、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該対象は、ヒトである。本明細書に提供される方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、該投与ステップの前に、該対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む。
【００３６】
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的語の１つまたは１つよりも多く（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例として、「（ａｎ）要素」は、１つの要素及び１つよりも多くの要素を包含する。
【００３７】
「ＣＬＲＮ１遺伝子における変異」という用語は、野生型ＣＬＲＮ１タンパク質と比較して１つもしくは複数のアミノ酸の欠失、１つもしくは複数のアミノ酸置換、及び１つもしくは複数のアミノ酸挿入のうちの１つもしくは複数を有するＣＬＲＮ１タンパク質の生産をもたらす、及び／または変異を有しない哺乳類細胞におけるコードされたＣＬＲＮ１タンパク質の発現されたレベルと比較して、哺乳類細胞におけるコードされたＣＬＲＮ１タンパク質の発現されたレベルの減少をもたらす、野生型ＣＬＲＮ１遺伝子における修飾を指す。一部の実施形態では、変異は、１つまたは複数のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸）の欠失を有するＣＬＲＮ１タンパク質の生産をもたらし得る。一部の実施形態では、変異は、ＣＬＲＮ１遺伝子におけるフレームシフトをもたらし得る。「フレームシフト」という用語は、当該技術分野で、コード配列のリーディングフレームのシフトをもたらす、コード配列における任意の変異を包含することが知られている。一部の実施形態では、フレームシフトは、機能しないタンパク質をもたらし得る。一部の実施形態では、点変異は、ナンセンス変異（すなわち、遺伝子のエクソンにおいて未成熟終止コドンをもたらす）であり得る。ナンセンス変異は、機能的である場合も、そうでない場合もある短縮型タンパク質（対応する野生型タンパク質と比較して）の生産をもたらし得る。一部の実施形態では、変異は、ＣＬＲＮ１  ｍＲＮＡもしくはＣＬＲＮ１タンパク質、またはｍＲＮＡ及びタンパク質の両方の発現の喪失（またはレベルの減少）をもたらし得る。一部の実施形態では、変異は、野生型ＣＬＲＮ１タンパク質と比較して１つまたは複数の生物学的活性（機能）の喪失または減少を有する、変化したＣＬＲＮ１タンパク質の生産をもたらし得る。
【００３８】
一部の実施形態では、変異は、１つまたは複数のヌクレオチドのＣＬＲＮ１遺伝子への挿入である。一部の実施形態では、変異は、ＣＬＲＮ１遺伝子の制御配列、すなわち、コード配列ではない遺伝子の一部分にある。一部の実施形態では、制御配列における変異は、プロモーターまたはエンハンサー領域にあり得、ＣＬＲＮ１遺伝子の適切な転写を阻止または低減し得る。「保存的変異」という用語は、（コドン縮重に起因して）変異の部位でコードされたアミノ酸を変化させない変異を指す。
【００３９】
修飾は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介性変異誘発等の、当該技術分野で既知の標準的技法によってヌクレオチド配列に導入することができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、及びヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）、極性無電荷側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、及びトリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、及びメチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、及びイソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【００４０】
別途明記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いの縮重バージョンであり、故に同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列が含まれる。
【００４１】
「内因性」という用語は、生物、細胞、または組織内からの任意の材料を指す。
【００４２】
「外因性」という用語は、材料が導入されている同じ生物、細胞、または組織からは生産されない、またはそれに由来しない、生物、細胞、または組織の外部から導入されるか、またはその外部に由来する任意の材料を指す。
【００４３】
「単離され（た）」という用語は、天然の状態から変化しているか、またはそれから除去されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは、「単離され」ていないが、その天然の状態の共存材料から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは、「単離され」ている。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在し得るか、または例えば、宿主細胞等の生来の環境でない環境に存在し得る。
【００４４】
「トランスフェクトされた」、「形質転換された」、または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、「形質転換された」、または「形質導入された」哺乳類細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換、または形質導入された哺乳類細胞である。
【００４５】
「発現」という用語は、タンパク質をコードする特定のヌクレオチド配列の転写及び／または翻訳を指す。
【００４６】
「一過性発現」という用語は、組み込まれていないコード配列の短い一定期間（例えば、数時間または数日）にわたる発現を指す。細胞（例えば、哺乳類細胞）において一過性で発現されるコード配列は、複数回の細胞分裂に際して失われる。
【００４７】
「対象」という用語は、任意の哺乳動物を含むことを意図する。一部の実施形態では、対象は、齧歯類（例えば、ラットまたはマウス）、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、またはヒトである。一部の実施形態では、対象は、聴力喪失及び／または視力喪失を有するか、またはそれらのリスクがある。一部の実施形態では、対象は、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異を有すると以前に特定されている。一部の実施形態では、対象は、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異を有すると特定されており、かつ聴力喪失及び／または視力喪失と診断されている。一部の実施形態では、対象は、聴力喪失及び／または視力喪失を有すると特定されている。
【００４８】
治療は、それが対象（例えば、ヒト）において病態（例えば、聴力喪失または視力喪失）の１つまたは複数の症状の数、重症度、及び頻度のうちの１つまたは複数の低減をもたらす場合、「治療上有効」である。一部の実施形態では、治療上有効量の組成物は、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質、または所望の活性を有するＣＬＲＮ１タンパク質のバリアント）の発現レベルの増加（例えば、該組成物での治療前の発現レベルと比較して）をもたらし得る。一部の実施形態では、治療上有効量の組成物は、標的細胞（例えば、蝸牛内有毛細胞）において活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質、または活性バリアント）の発現レベルの増加をもたらし得る。一部の実施形態では、治療上有効量の組成物は、標的細胞において、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質、または活性バリアント）の発現レベルの増加、及び／またはＣＬＲＮ１タンパク質の１つもしくは複数の活性の増加（例えば、治療前の対象におけるレベル（複数可）、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異を有する対象におけるレベル（複数可）、または聴力喪失及び／または視力喪失を有する対象もしくは対象の集団におけるレベル（複数可）等の参照レベルと比較して）をもたらし得る。
【００４９】
「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖または二本鎖形態のいずれかでのデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）もしくはリボ核酸（ＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照ヌクレオチドと類似した結合特性を有する天然ヌクレオチドの既知の類似体を含有する核酸を包含する。別途指示されない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に示される配列のみならず、相補的配列も黙示的に包含する。本明細書に記載される核酸のうちのいずれかの一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。本明細書に記載される核酸のうちのいずれかの一部の実施形態では、核酸は、ＲＮＡである。
【００５０】
「活性ＣＬＲＮ１タンパク質」という用語は、さもなければ野生型哺乳動物である哺乳動物の聴覚有毛細胞または眼細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする両方の野生型対立遺伝子に取って代わる場合、かつその哺乳動物の聴覚有毛細胞または眼細胞において発現される場合、その哺乳動物が、完全に野生型である類似の哺乳動物の正常な聴力または視力レベルに近似する聴力または視力レベルを有することをもたらすＤＮＡによってコードされる、タンパク質を意味する。活性ＣＬＲＮ１タンパク質の非限定的な例は、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、本明細書に記載される完全長ＣＬＲＮ１タンパク質のうちのいずれか）である。
【００５１】
例えば、活性ＣＬＲＮ１タンパク質は、１個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約８個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約７個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約６個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約５個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約４個のアミノ酸置換、１個のアミノ酸置換〜約３個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約８個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約７個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約６個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約５個のアミノ酸置換、約２個のアミノ酸置換〜約４個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約８個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約７個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約６個のアミノ酸置換、約３個のアミノ酸置換〜約５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約８個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約７個のアミノ酸置換、約４個のアミノ酸置換〜約６個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約８個のアミノ酸置換、約５個のアミノ酸置換〜約７個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、約６個のアミノ酸置換〜約８個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約７個のアミノ酸置換〜約９個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約８個のアミノ酸置換〜約１０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約１０個のアミノ酸置換〜約１５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約１５個のアミノ酸置換〜約２０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸
置換、約２０個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約２０個のアミノ酸置換〜約２５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約２５個のアミノ酸置換〜約３０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約３０個のアミノ酸置換〜約３５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約３５個のアミノ酸置換〜約４０個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約４０個のアミノ酸置換〜約４５個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約４５個のアミノ酸置換〜約５０個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約６０個のアミノ酸置換、約５０個のアミノ酸置換〜約５５個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約７０個のアミノ酸置換、約６０個のアミノ酸置換〜約６５個のアミノ酸置換、約７０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約７０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約７０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約７０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約７０個のアミノ酸置換〜約８０個のアミノ酸置換、約７０個のアミノ酸置換〜約７５個のアミノ酸置換、約８０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約８０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、約８０個のアミノ酸置換〜約９０個のアミノ酸置換、約８０個のアミノ酸置換〜約８５個のアミノ酸置換、約９０個のアミノ酸置換〜約１００個のアミノ酸置換、約９０個のアミノ酸置換〜約９５個のアミノ酸置換、または約９５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸を含む、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、野生型ヒト完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）の配列を含み得る。
【００５２】
当業者であれば、異なる種由来の野生型ＣＬＲＮ１タンパク質の間で保存されていないアミノ酸を、活性を失うことなく変異させることができる一方で、異なる種由来の野生型ＣＬＲＮ１タンパク質の間で保存されているアミノ酸は、それらが活性に関与する可能性が（異なる種の間で保存されていないアミノ酸よりも）高いため、変異させるべきでないことを理解しよう。
【００５３】
活性ＣＬＲＮ１タンパク質は、例えば、約１個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約４個のアミノ酸、約１個のアミノ酸〜約３個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約４個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約３５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約３５個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約３５個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約９５個のア
ミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約４５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、または約５０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸が欠失した、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、野生型ヒト完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）の配列を含み得る。野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の配列から２つ以上のアミノ酸が欠失している一部の実施形態では、該２つ以上の欠失したアミノ酸のうちの少なくとも２つは、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の配列において連続している可能性がある。野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の配列から２つ以上のアミノ酸が欠失している他の実施形態では、該２つ以上の欠失したアミノ酸のいくつかまたは全てが、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の配列において連続していない。当業者であれば、異なる種由来の野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の間で保存されていないアミノ酸を、活性を失うことなく欠失させることができる一方で、異なる種由来の野生型完全長ＣＬＮＲＮ１タンパク質の間で保存されているアミノ酸は、それらが活性に関与する可能性が（異なる種の間で保存されていないアミノ酸よりも）高いため、欠失させるべきでないことを理解しよう。
【００５４】
一部の例では、活性ＣＬＲＮ１タンパク質は、例えば、１個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約４個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜約３個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜約４個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜約５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約７個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜約８個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜約３５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜約４５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約６０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約５５個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約７０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸〜約６５個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸〜約８０個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸〜約７５個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸〜約９５
個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸〜約９０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸〜約８５個のアミノ酸、約９０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約９０個のアミノ酸〜約９５個のアミノ酸、もしくは約９５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸が、そのＮ末端から除去された、及び／または１個のアミノ酸〜１００個のアミノ酸（または本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）が、そのＣ末端から除去された、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の配列を含み得る。
【００５５】
一部の実施形態では、活性ＣＬＲＮ１タンパク質は、例えば、１個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜８個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜７個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜６個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜５個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜４個のアミノ酸、１個のアミノ酸〜３個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜８個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜７個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜６個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸〜４個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜８個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜７個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜６個のアミノ酸、約３個のアミノ酸〜５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜８個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜７個のアミノ酸、約４個のアミノ酸〜６個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜８個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜７個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、約６個のアミノ酸〜８個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約７個のアミノ酸〜９個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸４０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸〜１０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜１５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸〜２０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜２５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸〜３０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸〜３５個のアミノ酸、約３５個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約３５個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、約３５個のアミノ酸〜４０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸〜４５個のアミノ酸、または約４５個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸が挿入されている、野生型完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の配列を含み得る。一部の例では、該１個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸（またはその任意の部分範囲）は、野生型完全長タンパク質の配列に連続配列として挿入され得る。一部の例では、該１個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸（またはその任意の部分範囲）は、野生型完全長タンパク質の配列における複数の非連続箇所に挿入される。当該技術分野で理解され得るように、該１個のアミノ酸〜５０個のアミノ酸は、野生型完全長タンパク質の配列のうち、種の間であまり保存されていない一部分に挿入され得る。
【００５６】
別途規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本発明で使用するための方法及び材料が本明細書に記載されるが、当該技術分野で既知の他の好適な方法及び材料もまた使用することができる。これらの材料、方法、及び例は例示説明にすぎず、限定することは意図していない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が援用される。矛盾がある場合、定義を含めて本明細書が優位に立つ。
【００５７】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び図から、ならびに特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１ベクター（配列番号４０、３３９７塩基対（ｂｐ））の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号６）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−２ＧＦＰベクター（配列番号４１、４１７７ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号６）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ｅＧＦＰ（配列番号３２）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図３】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−３ベクター（配列番号４２、４６０７ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、５’ＵＴＲ−２９１、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、３’ＵＴＲ−１３５７（配列番号３６）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図４】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−４ベクター（配列番号４３、４７９６ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号６）、３’ＵＴＲ−１４０６（配列番号３７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図５】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るｐＩＴＲ−ＣＢＡ−５’ＵＴＲ−ｔＧＦＰ−３’ＵＴＲベクター（５０２６ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、５’ＵＴＲ−２９１、ｔＧＦＰ（配列番号１９）、３’ＵＴＲ−１５９５、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図６】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−６ｅＧＦＰベクター（配列番号４４、４７５６ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ｅＧＦＰ（配列番号３２）、３’ＵＴＲ−１４０６（配列番号３７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図７】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るｐＩＴＲ−ＣＢＡ−３’ＵＴＲ−６００Ａベクター（３９８２ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号４）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号６）、３’ＵＴＲ−６００（配列番号２７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図８】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−８ベクター（配列番号４６、３９８２ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号６）、３’ＵＴＲ−６００Ｂ（配列番号２８）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図９】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−９ベクター（配列番号４７、３９８２ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号６）、３’ＵＴＲ−６００Ｃ（配列番号２９）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１０】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−０ベクター（配列番号３９、４７３２ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、３’ＵＴＲ  １７７３（配列番号１５）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１１】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−７ｅＧＦＰベクター（配列番号４５、３５８０ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ｅＧＦＰ配列（配列番号３２）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１２】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１０（配列番号４８、３５１１ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号４）、ＨＡ配列（配列番号３４）、ＦＰ配列（配列番号３０）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号５）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１３】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１０ｍｙｃベクター（配列番号４９、３５７４ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ｍｙｃ配列（配列番号３３）、ＦＰ配列（配列番号３０）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１４】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１０ＮＦベクター（配列番号５０、３４９９ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＨＡ配列（配列番号３４）、ＣＬＲＮ−１アイソフォーム２（配列番号５）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１５】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１１ベクター（配列番号５１、４９０８ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ＨＡ配列（配列番号３４）、ＦＰ配列（配列番号３０）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ−１アイソフォーム２（配列番号５）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、３’ＵＴＲ−１４０６（配列番号３７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１６】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１１ｍｙｃベクター（配列番号５２、４９７１ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ｍｙｃ配列（配列番号３３）、ＦＰ配列（配列番号３０）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号５）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、３’ＵＴＲ−１４０６（配列番号３７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１７】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１１ＮＦベクター（配列番号５３、４８９６ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ＨＡ配列（配列番号３４）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム２（配列番号５）、３×ＦＬＡＧ配列（配列番号３３）、３’ＵＴＲ−１４０６（配列番号３７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１８】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１２ベクター（配列番号５４、４６４０ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、５’ＵＴＲ−２９１配列（配列番号１２）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ＨＡ配列（配列番号３４）、３’ＵＴＲ−１３５７（配列番号３６）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図１９】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１３ベクター（配列番号５５、４２９１ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム４（配列番号７）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ＨＡ配列（配列番号３４）、３’ＵＴＲ−６００（配列番号２７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２０】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１４ベクター（配列番号５６、４１９２ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム４（配列番号７）、Ｔ２Ａ配列（配列番号３１）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、３’ＵＴＲ−６００（配列番号２７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２１】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１５ベクター（配列番号５７、３５０５ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム４（配列番号７）、３×ＦＬＡＧタグ配列（配列番号３５）、３’ＵＴＲ−６００（配列番号２７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２２】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１６ベクター（配列番号５８、３４３９ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号１６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム４（配列番号７）、３’ＵＴＲ−６００（配列番号２７）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２３】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１７ベクター（配列番号５９、１３０ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、ｓｈ−キメライントロン（配列番号２６）、５’ＵＴＲ−２９１（配列番号１２）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、ＨＡ配列（配列番号３４）、３’ＵＴＲ−１７７３（配列番号１５）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２４】本明細書に記載される本方法のうちのいずれかにおいて使用され得るＣＬＲＮ−１８ベクター（配列番号６０、４２７７ｂｐ）の遺伝子地図の例示的な略図である。当該ベクターは、ＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＣＭＶエンハンサー（配列番号１７）、ニワトリβ−アクチンプロモーター、キメライントロン（配列番号２６）、ＣＬＲＮ１アイソフォーム１（配列番号１）、３’ＵＴＲ−１７７３（配列番号１５）、ｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２０）、及びＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【図２５】抗ＨＡ及び抗ＦＬＡＧ抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後のトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞からのＣＬＲＮ１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−ＣＬＲＮ−１０（３７℃で変性）、列３−ＣＬＲＮ−１１（３７℃で変性）、列４−ＣＬＲＮ−１２（３７℃で変性）、列５−陰性対照、列６−ＣＬＲＮ−１０（５６℃で変性）、列７−ＣＬＲＮ−１１（５６℃で変性）、列８−ＣＬＲＮ−１２（５６℃で変性）、列９−陰性対照。ＣＬＲＮ−１アイソフォームタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質であり、スメアバンドとして移動することが多い。
【図２６】抗ＦＬＡＧ抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後のトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞からのＣＬＲＮ１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−ＣＬＲＮ−１０、列３−ＣＬＲＮ−１１、列４−ＣＬＲＮ−１２、列５−ＣＬＲＮ−１３、列６−ＣＬＲＮ−１５、列７−陰性対照。
【図２７】抗ＦＬＡＧ抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後のトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞からのＣＬＲＮ１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−ＣＬＲＮ−１０、列３−ＣＬＲＮ−１０ＮＦ、列４−ＣＬＲＮ−１０ｍｙｃ、列５−ＣＬＲＮ−１１ＮＦ、列６−ＣＬＲＮ−１１ｍｙｃ、列７−陰性対照。全ての試料は室温で維持された。
【図２８】抗ｍｙｃ抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後のトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞からのＣＬＲＮ１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−ＣＬＲＮ−１０、列３−ＣＬＲＮ−１０ＮＦ、列４−ＣＬＲＮ−１０ｍｙｃ、列５−ＣＬＲＮ−１１ＮＦ、列６−ＣＬＲＮ−１１ｍｙｃ、列７−陰性対照。
【図２９】抗ＨＡ及び抗ＦＬＡＧ抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後のトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞から採取されたＣＬＲＮ１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−ＣＬＲＮ−１３、列３−ＣＬＲＮ−１０、列４−ＣＬＲＮ−１０ＮＦ、列５−ＣＬＲＮ−１０ｍｙｃ、列６−ＣＬＲＮ−１１ＮＦ、列７−ＣＬＲＮ−１１ｍｙｃ、列８−陰性対照。
【図３０】抗ＣＬＲＮ（ＥＫＩＡＮＹＫＥＧＴＹＶＹＫＴＱＳＥＫＹ、配列番号３８）ウサギポリクローナル抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後の本明細書に記載されるプラスミドでトランスフェクトされたＨＥＫ２３９ＦＴ細胞から採取されたＣＬＲＮ１アイソフォーム１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−ＣＬＲＮ−１０、列３−ＣＬＲＮ−１、列４−ＣＬＲＮ−２、列５−ＣＬＲＮ−３、列６−ＣＬＲＮ−４、列７−ＣＬＲＮ−８、列８−ＣＬＲＮ−９、列９−ＣＬＲＮ−１０、列１０−ＣＬＲＮ−１１、列１１−ＣＬＲＮ−１２、列１２−ＣＬＲＮ−１３、列１３−ＣＬＲＮ−１４、列１４−ＣＬＲＮ−１５、列１５−ＣＬＲＮ−１６、列１６−陰性対照、列１７−陰性対照。
【図３１】抗ＣＬＲＮウサギポリクローナル抗体を用いた、トランスフェクションから４８時間後のトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞から採取されたＣＬＲＮ１タンパク質レベルの免疫ブロットの画像である。列１−ＰａｇｅＲｕｌｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ、列２−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−０、列３−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−０＋ＰＮＧａｓｅ  Ｆ、列４−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−３、列５−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−３＋ＰＮＧａｓｅ  Ｆ、列６−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−６ｅＧＦＰ、列７−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−６ｅＧＦＰ＋ＰＮＧａｓｅ  Ｆ、列８−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−１３、列９−Ａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−１３＋ＰＮＧａｓｅ  Ｆ、列１０−ベクターなし、列１１−ベクターなし＋ＰＮＧａｓｅ  Ｆ。ＣＬＲＮ−１アイソフォームタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質であり、スメアバンドとして移動することが多い（列２、４、及び８）。ＰＮＧａｓｅ  Ｆでの処理後、スメアになったバンドは消失し、明瞭なバンドにシフトした（列３、５、及び８）。
【図３２】それぞれＭＯＩ８．４１Ｅ＋０４及びＭＯＩ２．５３Ｅ＋０５でのトランスフェクションから２４時間及び４８時間後に撮像した、ＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ６ｅＧＦＰ形質導入ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞の一組の免疫蛍光画像である。
【図３３】それぞれＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−６ｅＧＦＰ（ＭＯＩ１．０５Ｅ＋０５及びＭＯＩ３．１５Ｅ＋０５で）、ＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−０（ＭＯＩ８．２３Ｅ＋０４及びＭＯＩ２．４７Ｅ＋０５で）、ＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−３（ＭＯＩ８．４１Ｅ＋０４及びＭＯＩ２．５３Ｅ＋０４で）、及びＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−１３（ＭＯＩ８．３３Ｅ＋０４及びＭＯＩ２．５０Ｅ＋０５で）で形質導入されたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞における、相対ＣＬＲＮ１及びＧＦＰ発現量を示す棒グラフである。
【図３４】それぞれＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−６ｅＧＦＰ（ＭＯＩ２．０Ｅ＋０５で）、ＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−０（ＭＯＩ２．５Ｅ＋０５及びＭＯＩ７．６Ｅ＋０．５で）、ＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−３（ＭＯＩ２．０Ｅ＋０５及び６．０３Ｅ＋０５で）、及びＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−１３（ＭＯＩ２．０Ｅ＋０５及びＭＯＩ６．０Ｅ＋０５で）に１６時間感染させたＷＴマウス由来のＰ２蝸牛外植片における、相対ＣＬＲＮ１及びＧＦＰ発現量を示す棒グラフである。
【図３５】Ｍｙｏ７ａ及びＤＡＰＩ染色を示す、１．３Ｅ１０  ＶＧ／蝸牛のＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−０、９．９Ｅ９  ＶＧ／蝸牛のＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−３、及び１．０Ｅ１０  ＶＧ／蝸牛のＡＡＶａｎｃ８０−ＣＬＲＮ−１３に７２時間感染させたＷＴマウス由来のＰ２蝸牛外植片の一組の蛍光画像である。
【図３６】ｅＧＦＰ、Ｍｙｏ７ａ、及びＤＡＰＩ染色を示す、１Ｅ０９  ＶＧ／蝸牛のＡＡＶ  Ａｎｃ８０．ＣＡＧ．ｅＧＦＰ．３’ＵＴＲに７２時間感染させたＷＴマウス由来のＰ２蝸牛外植片の一組の蛍光画像である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
ＣＬＲＮ１遺伝子によってコードされるタンパク質である「クラリン１」における欠損または変異は、聴力喪失及び視力喪失を引き起こす。例えば、ＣＬＲＮ１における変異は、アッシャー症候群ＩＩＩ型及び網膜色素変性症につながる。
【００６０】
本明細書では、少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物が提供され、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は任意選択で、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、該少なくとも２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、該コード配列のうちの少なくとも１つは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含み、哺乳類細胞に導入されるとき、該少なくとも２つの異なるベクターは互いに相同組換えを経て、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。
【００６１】
本明細書では、単一の核酸ベクターを含む組成物が提供され、該ベクターは、（ｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする第１のコード配列、及び（ｉｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする第２のコード配列のうちの一方または両方を含み、該第１及び第２のコード配列のうちの一方または両方が、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ該２つの連続するイントロンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む。
【００６２】
本明細書では、２つの異なる核酸ベクターを含む組成物が提供され、該２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターは、プロモーターと、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み、該２つの異なる核酸ベクターの第２の核酸ベクターは、スプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端におけるポリアデニル化シグナル配列とを含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該２つのコードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、哺乳類細胞に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。
【００６３】
本明細書では、２つの異なる核酸ベクターを含む組成物が提供され、該２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターは、プロモーターと、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、該スプライスドナー配列の３’側に位置付けられた第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み、該２つの異なる核酸ベクターの第２の核酸ベクターは、第２の検出可能マーカー遺伝子と、該第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該コードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、哺乳類細胞に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。
【００６４】
本明細書ではまた、２つの異なる核酸ベクターを含む組成物も提供され、該２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターは、プロモーターと、該プロモーターに対して３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、該スプライスドナー配列に対して３’側に位置付けられたＦ１ファージ組換え誘導領域とを含み、該２つの異なる核酸ベクターの第２の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、該Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、該２つのコードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、該２つのコードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、哺乳類細胞に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される。
【００６５】
本明細書では、哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを導入することを含む方法が提供される。
【００６６】
本明細書では、哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該哺乳類細胞に導入することを含む。
【００６７】
本明細書では、哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法が提供され、該方法は、該哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを導入することを含む。
【００６８】
本明細書では、哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法が提供され、該方法は、該哺乳動物の眼に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを眼内投与することを含む。
【００６９】
本明細書では、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法が提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該対象の蝸牛に投与することを含む。
【００７０】
本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該対象の眼に投与することを含む。
【００７１】
該組成物、キット、及び方法の追加の非限定な態様が本明細書に記載され、これらは限定なしに任意の組み合わせで使用することができる。
【００７２】
ＣＬＲＮ１
ＣＬＲＮ１遺伝子は、内耳の有毛細胞（例えば、内耳有毛細胞、外耳有毛細胞）及び網膜において発現されるタンパク質である「クラリン１」（ＣＬＲＮ１）をコードする。
【００７３】
ヒトＣＬＲＮ１遺伝子は、染色体３ｑ２５．１上に位置する。それは、約４７キロ塩基（ｋｂ）を包含する７つのエクソンを含有する（Ｖａｓｔｉｎｓａｌｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  １９（１）：３０−３５、ＮＣＢＩ受託番号ＮＧ＿００９１６８．１）。
【００７４】
ＣＬＲＮ１遺伝子における種々の変異が、アッシャー症候群ＩＩＩ型（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型Ａ（ＭＩＭ番号６０６３９７）（例えば、Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ７１：６０７−６１７、及びＪｏｅｎｓｕｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ６９：６７３−６８４を参照されたい）及び網膜色素変性症（例えば、Ｋｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１８：１４４４−１４４８を参照されたい）に関連付けられている。アッシャー症候群ＩＩＩ型を引き起こす変異は、ＣＬＲＮ１のエクソン３に優勢的に見出されている。アッシャー症候群ＩＩＩ型難聴は、ＣＬＲＮ１欠損マウスを生成することによってモデル化され得る（例えば、Ｇｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ７（１）：１３４８０を参照されたい）。アッシャー症候群ＩＩＩ型に関連する例示的なＣＬＲＮ１変異には、Ｔ５２８Ｇ、Ｍ１２０Ｋ、Ｍ４４Ｋ、Ｎ４８Ｋ、及びＣ４０Ｇが含まれる。
【００７５】
網膜色素変性症に関連する例示的なＣＬＲＮ１変異には、Ｌ１５４Ｗ及びＰ３１Ｌが含まれる（例えば、Ｋｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１８：１４４４−１４４８を参照されたい）。
【００７６】
聴力喪失を有する対象において検出されたＣＬＲＮ１遺伝子における追加の例示的な変異、及びＣＬＲＮ１をコードする核酸の配列決定方法は、例えば、Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ７１：６０７−６１７、Ｊｏｅｎｓｕｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ６９：６７３−６８４、Ａｄａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｅｕｒｏｐ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  １０：３３９−３５０、Ａｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００４），Ｃｌｉｎ  Ｇｅｎｅｔ  ６６：５２５−５２９に記載される。遺伝子における変異の検出方法は、当該技術分野で周知である。かかる技法の非限定的な例としては、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＰＣＲ、配列決定法、サザンブロット法、及びノーザンブロット法が挙げられる。
【００７７】
例示的なヒト野生型ＣＬＲＮ１タンパク質は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、及び配列番号７の配列であるか、またはそれを含む。野生型ＣＬＲＮ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８であるか、またはそれを含む。
【００７８】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質は、配列番号１と少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である配列を含む。
【００７９】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質は、配列番号３と少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である配列を含む。
【００８０】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質は、配列番号５と少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である配列を含む。
【００８１】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質は、配列番号７と少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である配列を含む。
【００８２】
ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＤ（配列番号１）
【化１】
2021529519.tif 000003
【００８３】
ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＤ  ｃＤＮＡ（配列番号２）
【化２】
2021529519.tif 000004
【００８４】
ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＡ（配列番号３）
【化３】
2021529519.tif 000005
【００８５】
ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＡ  ｃＤＮＡ（配列番号４）
【化４】
2021529519.tif 000006
【００８６】
ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＣ（配列番号５）
【化５】
2021529519.tif 000007
【００８７】
ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＣ  ｃＤＮＡ（配列番号６）
【化６】
2021529519.tif 000008
【００８８】
ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＥ（配列番号７）
【化７】
2021529519.tif 000009
【００８９】
ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＥ  ｃＤＮＡ（配列番号８）
【化８】
2021529519.tif 000010
【００９０】
ヒト野生型ＣＬＲＮ１ゲノム配列（配列番号９）
【化９−１】
2021529519.tif 000011
【化９−２】
2021529519.tif 000012
【化９−３】
2021529519.tif 000013
【化９−４】
2021529519.tif 000014
【化９−５】
2021529519.tif 000015
【化９−６】
2021529519.tif 000016
【化９−７】
2021529519.tif 000017
【化９−８】
2021529519.tif 000018
【化９−９】
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【化９−１０】
2021529519.tif 000020
【化９−１１】
2021529519.tif 000021
【化９−１２】
2021529519.tif 000022
【化９−１３】
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【化９−１４】
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【化９−１５】
2021529519.tif 000025
【化９−１６】
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【化９−１７】
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【化９−１８】
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【化９−１９】
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【化９−２０】
2021529519.tif 000030
【化９−２１】
2021529519.tif 000031
【００９１】
ヒト野生型ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡ配列の非限定的な例は、配列番号９である。配列番号９におけるエクソンは、ヌクレオチド１〜５４４位（エクソン１）、ヌクレオチド２８７６４〜２９１８０位（エクソン２）、ヌクレオチド３１２３９〜３１４１８位（エクソン３）、ヌクレオチド３２４８１〜３２５１９位（エクソン４）、ヌクレオチド４４７９９〜４６４３３位（エクソン５）、ヌクレオチド４４７９９〜４４９３５位（エクソン６）、及びヌクレオチド４６１２８〜４６８３７位（エクソン７）である。イントロンは、配列番号９におけるこれらのエクソンの各対の間、すなわち、ヌクレオチド５４５〜２８７６３位（イントロン１）、ヌクレオチド２９１８１〜３１２３８位（イントロン２）、ヌクレオチド３１４１９〜３２４８０位（イントロン３）、ヌクレオチド３２５２０〜４４７９８位（イントロン４）、及びヌクレオチド４４９３６〜４６１２７位（イントロン７）に位置する。
【００９２】
マウスＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォーム１（配列番号１０）
【化１０】
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【００９３】
イヌＣＬＲＮ１タンパク質（配列番号１１）
【化１１】
2021529519.tif 000033
【００９４】
ベクター
本明細書に提供される組成物は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の核酸ベクターを含み、ここで、該少なくとも２つ異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸（例えば、約３０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約３０アミノ酸〜約２００アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１７０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１６０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１３０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１２０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１１０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約１００アミノ酸、約３０アミノ酸〜約９０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約８０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約７０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約６０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約５０アミノ酸、約３０アミノ酸〜約４０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約６０アミノ酸〜約２００アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１７０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１６０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１３０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１２０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１１０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約１００アミノ酸、約６０アミノ酸〜約９０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約８０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約７０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約９０アミノ酸〜約２００アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１７０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１６０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１３０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１２０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１１０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１００アミノ酸、約１００アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約１００アミノ酸〜約２００アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１７０アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１６０アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１３０アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１２０アミノ酸、約９０アミノ酸〜約１１０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約２００アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１７０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１６０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１３０アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約２００アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約１７０アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約１６０アミノ酸、約１７０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、約１７０アミノ酸〜約２００アミノ酸、約１７０アミノ酸〜約１８０アミノ酸、約１９０アミノ酸〜約２０２アミノ酸、または約１９０アミノ酸〜約２００アミノ酸）の長さである。
【００９５】
これらの組成物の一部の実施形態では、該コード配列のうちの少なくとも１つは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び（例えば、エクソン１及び２、またはエクソン５及び６）、かつ該２つの連続するエクソンの間に天然に存在するイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む。
【００９６】
一部の実施形態では、該コードされた部分のうちのいずれの部分のアミノ酸配列も、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的にさえ重複していない。一部の実施形態では、該コードされた部分のうちの１つまたは複数のアミノ酸配列は、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複する。一部の実施形態では、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は、該コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複する。
【００９７】
一部の実施形態では、重複するアミノ酸配列は、約３０アミノ酸残基〜約２０２アミノ酸（例えば、または本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）の長さである。
【００９８】
一部の例では、ベクターは、２つの異なるベクターを含み、これらの各々が、イントロンの異なるセグメントを含み、該イントロンは、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載される配列番号９における例示的なイントロンのうちのいずれか）を含み、該２つの異なるセグメントは、少なくとも１００ヌクレオチド（例えば、約１００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約１，５００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約６００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約４００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド〜約２００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約１，５００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約６００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド〜約４００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約１，５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド〜約６００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約１，５００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１，５００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約１，５００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約２，０００ヌクレオチド〜約２，５００ヌクレオチド、約２，５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約２，５００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約２，５００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約２，５００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約２，５００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約２，５００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約３，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約３，０００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約３，０００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約３，０００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約３，０００ヌクレオチド〜約３，５００ヌクレオチド、約３，５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約３，５００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約３，５００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約３，５００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約４，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約４，０００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約４，０００ヌクレオチド〜約４，５００ヌクレオチド、約４，５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド約４，５００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、または約５，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド）の長さだけ配列が重複する。
【００９９】
該異なるベクターのうちのいずれか２つにおいて重複するヌクレオチド配列は、ＣＬＲＮ１遺伝子の１つまたは複数のエクソンの一部または全て（例えば、本明細書に記載される配列番号９における例示的なエクソンのうちのいずれか１つまたは複数）を含み得る。
【０１００】
一部の実施形態では、該組成物中の異なるベクターの数は、２つ、３つ、４つ、または５つである。組成物中の異なるベクターの数が２つである組成物中では、２つの異なるベクターのうちの第１のベクターは、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含み得る。一部の例では、ＣＬＲＮ１遺伝子のＮ末端部分は、約３０アミノ酸〜約２０２アミノ酸（または上述のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）の長さである。一部の例では、該第１のベクターは、プロモーター（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のプロモーターのうちのいずれか）及びコザック配列（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知の例示的なコザック配列のうちのいずれか）のうちの一方または両方をさらに含む。一部の例では、該第１のベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む。一部の例では、該２つの異なるベクターのうちの第２のベクターは、該ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む。一部の例では、該ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分は、３０アミノ酸〜約２０２アミノ酸（または上述のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）の長さである。一部の例では、該第２のベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【０１０１】
組成物中の異なるベクターの数が２つである一部の例では、該２つのベクターのうちの１つによってコードされるＮ末端部分は、野生型ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、配列番号１、３、５、または７）のアミノ酸１位から、以下のうちのいずれか、すなわち、およそアミノ酸２０２位、およそアミノ酸２００位、およそアミノ酸１９０位、およそアミノ酸１８０位、およそアミノ酸１７０位、およそアミノ酸１６０位、およそアミノ酸１５０位、およそアミノ酸１４０位、およそアミノ酸１３０位、およそアミノ酸１２０位、およそアミノ酸１１０位、およそアミノ酸１００位、およそアミノ酸９０位、およそアミノ酸８０位、およそアミノ酸７０位、およそアミノ酸６０位、およそアミノ酸５０位、またはおよそアミノ酸４０位を含む部分を含み得る。
【０１０２】
組成物中の異なるベクターの数が２つである一部の例では、前駆体ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分は、野生型ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、配列番号１、３、５、または７）のアミノ酸１位〜アミノ酸２０２位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸２００位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１９０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１８０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１７０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１６０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１５０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１４０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１３０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１２０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１１０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸１００位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸９０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸８０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸７０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸６０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸５０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸４０位、アミノ酸１位〜およそアミノ酸３０位を含む部分を含み得る。
【０１０３】
本明細書で使用されるとき、「ベクター」という用語は、少なくとも１つの外因性核酸断片を運搬することのできるポリヌクレオチドを含む組成物、例えば、プラスミドベクター、トランスポゾン、コスミド、人工染色体（例えば、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ））、ウイルスベクター（例えば、本明細書に記載されるような任意のアデノウイルスベクター（例えば、ｐＳＶまたはｐＣＭＶベクター）または任意のレトロウイルスベクター）、及び任意のＧａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクターを意味する。ベクターは、例えば、発現のために十分なシス作用エレメントを含む可能性があり、発現のための他のエレメントは、宿主哺乳類細胞によって、またはインビトロ発現系において供給され得る。「ベクター」という用語は、適切な調節エレメントに関連付けられた際に複製能を持つ任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、ウイルスベクター等）を含む。故に、この用語は、ウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクター）のみならず、クローニング及び発現ベクターも含む。
【０１０４】
ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込む、コスミド、プラスミド（例えば、裸でまたはリポソームに含まれて）、及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含めた、当該技術分野で既知の全てのベクターが含まれる。当業者であれば、本明細書に記載される核酸のうちのいずれかを作製するために好適なベクター及び哺乳類細胞を選択可能であろう。
【０１０５】
一部の実施形態では、ベクターは、プラスミド（すなわち、細胞の内部で自律的に複製することができる環状ＤＮＡ分子）である。一部の実施形態では、ベクターは、コスミドであり得る（例えば、ｐＷＥ及びｓＣｏｓシリーズ（Ｗａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７），Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９））。
【０１０６】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、人工染色体である。人工染色体は、大きなＤＮＡインサートを運搬するためのベクターとして使用され得る、遺伝子操作された染色体である。一部の実施形態では、人工染色体は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）である（例えば、Ｋｏｕｐｒｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  １１（４）：５１７−５３５，２０１４、Ｂａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．５３：８４３−８５３，２００６、Ｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｖ．２（１）：４３−５０，２００６、Ｋａｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１９（９）：１５９１−１６０１，２０１１、Ｋａｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎ．Ｔｈｅｒ．１８：３８４−３９３，２０１１、及びＫａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３２１：２８０−２９０，２００４を参照されたい）。
【０１０７】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、酵母人工染色体（ＹＡＣ）である（例えば、Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：１８９−１９３，１９８３、Ｉｋｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：４３１−４３９，１９９８を参照されたい）。一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、細菌人工染色体（ＢＡＣ）である（例えば、ｐＢｅｌｏＢＡＣ１１、ｐＥＣＢＡＣ１、及びｐＢＡＣ１０８Ｌ）。一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、Ｐ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である。人工染色体の例は、当該技術分野で既知である。
【０１０８】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、ウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、及びレトロウイルス）である。ウイルスベクターの非限定的な例が本明細書に記載される。一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）である（例えば、Ａｓｏｋａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０：６９９−７０８０，２０１２を参照されたい）。組換えＡＡＶベクターまたは「ｒＡＡＶ」は典型的には、最低限でも導入遺伝子またはその一部分及び制御配列、ならびに任意選択で５’及び３’ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）で構成される。かかる組換えＡＡＶベクターは、カプシド中にパッケージングされ、選択の標的細胞（例えば、蝸牛有毛細胞）に送達される。
【０１０９】
ベクターのＡＡＶ配列は典型的には、シス作用５’及び３’ＩＴＲ配列を含む（例えば、Ｂ．Ｊ．Ｃａｒｔｅｒ，ｉｎ  “Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｅｓ”，ｅｄ．，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｒ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１５５  １６８，１９９０を参照されたい）。典型的なＡＡＶ  ＩＴＲ配列は、約１４５ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、典型的なＩＴＲ配列の少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％）がＡＡＶベクターに組み込まれる。これらのＩＴＲ配列を修飾する能力は、当業者の技能の範囲内である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９、及びＫ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．７０：５２０  ５３２，１９９６を参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコード配列のうちのいずれかには、ＡＡＶベクターにおいて５’及び３’ＡＡＶ  ＩＴＲ配列が隣接する。ＡＡＶ  ＩＴＲ配列は、現在同定されたＡＡＶ型を含めた、任意の既知のＡＡＶから得られてもよい。
【０１１０】
本明細書に記載されるようなＡＡＶベクターは、本明細書に記載される制御エレメントのうちのいずれか（例えば、プロモーター、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））シグナル配列、及びＩＲＥＳのうちの１つまたは複数）を含んでもよい。
【０１１１】
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１ベクター、ＡＡＶ２ベクター、ＡＡＶ３ベクター、ＡＡＶ４ベクター、ＡＡＶ５ベクター、ＡＡＶ６ベクター、ＡＡＶ７ベクター、ＡＡＶ８ベクター、ＡＡＶ９ベクター、ＡＡＶ２．７ｍ８ベクター、ＡＡＶ８ＢＰ２ベクター、及びＡＡＶ２９３ベクターからなる群から選択される。本明細書で使用され得る追加の例示的なＡＡＶベクターは、当該技術分野で既知である。例えば、Ｋａｎａａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ８：１８４−１９７，２０１７、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（７）：１２５２−１２６０、Ａｄａｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．５：３０７５，２０１４、Ｉｓｇｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１０（１）：４２７，２０１９、及びＧａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８（１２）：６３８１−６３８８を参照されたい。
【０１１２】
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターは、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である配列を含むか、またはそれからなる。一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、アデノウイルスである（例えば、Ｄｍｉｔｒｉｅｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：９７０６−９７１３、及びＰｏｕｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  ８：１００７４−１００８６，２０１０を参照されたい）。一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、レトロウイルスである（例えば、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｆｕｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ５：１５０７−２３を参照されたい）。
【０１１３】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、レンチウイルスである（例えば、Ｍａｔｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．１８：４７７−４９０、Ｂａｎａｓｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１７：１５０−７、及びＷａｎｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：１３１６−３２を参照されたい）。レンチウイルスベクターは、とりわけ、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に記載されるような自己不活化型レンチウイルスベクターを含めた、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。診療所で使用され得る非限定的なレンチウイルスベクターには、Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクター系等が含まれる。他の種類のレンチウイルスベクターもまた利用可能であり、当業者には既知であろう。
【０１１４】
本明細書に提供されるベクターは、異なるサイズのものであり得る。本明細書に記載される組成物、キット、及び方法のうちのいずれかで使用されるベクターの選定は、ベクターのサイズに左右され得る。
【０１１５】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、プラスミドであり、最大約１ｋｂ、最大約２ｋｂ、最大約３ｋｂ、最大約４ｋｂ、最大約５ｋｂ、最大約６ｋｂ、最大約７ｋｂ、最大約８ｋｂ、最大約９ｋｂ、最大約１０ｋｂ、最大約１１ｋｂ、最大約１２ｋｂ、最大約１３ｋｂ、最大約１４ｋｂ、または最大約１５ｋｂの全長を含み得る。一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、プラスミドであり、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約１ｋｂ〜約９ｋｂ、約１ｋｂ〜約１０ｋｂ、約１ｋｂ〜約１１ｋｂ、約１ｋｂ〜約１２ｋｂ、約１ｋｂ〜約１３ｋｂ、約１ｋｂ〜約１４ｋｂ、または約１ｋｂ〜約１５ｋｂの範囲の全長を有し得る。
【０１１６】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、トランスポゾン（例えば、ＰｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポゾン）であり、２００ｋｂ超を含み得る。一部の例では、ベクター（複数可）は、約１ｋｂ〜約１０ｋｂ、約１ｋｂ〜約２０ｋｂ、約１ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１ｋｂ〜約６０ｋｂ、約１ｋｂ〜約７０ｋｂ、約１ｋｂ〜約８０ｋｂ、約１ｋｂ〜約９０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約２０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約７０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約２０ｋｂ〜約３０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約７０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約８０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約３０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約７０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約８０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約４０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約７０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約８０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約５０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約５０ｋｂ〜約７０ｋｂ、約５０ｋｂ〜約８０ｋｂ、約５０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約５０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約６０ｋｂ〜約７０ｋｂ、約６０ｋｂ〜約８０ｋｂ、約６０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約６０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約７０ｋｂ〜約８０ｋｂ、約７０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約７０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約８０ｋｂ〜約９０ｋｂ、約８０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約９０ｋｂ〜約１００ｋｂ、約１ｋｂ〜約１００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約２００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約３００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約４００ｋｂ、または約１００ｋｂ〜約５００ｋｂの範囲の全長を有するトランスポゾンである。
【０１１７】
一部の実施形態では、ベクターは、コスミドであり、最大５５ｋｂの全長を有し得る。一部の例では、ベクターは、コスミドであり、約１ｋｂ〜約１０ｋｂ、約１ｋｂ〜約２０ｋｂ、約１ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１ｋｂ〜約５５ｋｂ、約１０ｋｂ〜約２０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約５５ｋｂ、約１５ｋｂ〜約５５ｋｂ、約１５ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１５ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１５ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１５ｋｂ〜約２０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約５５ｋｂ、約２０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約３０ｋｂ、約２５ｋｂ〜約５５ｋｂ、約２５ｋｂ〜約５０ｋｂ、約２５ｋｂ〜約４０ｋｂ、約２５ｋｂ〜約３０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約５５ｋｂ、約３０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約３５ｋｂ〜約５５ｋｂ、約４０ｋｂ〜約５５ｋｂ、約４０ｋｂ〜約５０ｋｂ、または約４５ｋｂ〜約５５ｋｂのヌクレオチドの総数を有する。
【０１１８】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、人工染色体であり、約１００ｋｂ〜約２０００ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の実施形態では、人工染色体（複数可）は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）であり、約１ｋｂ〜約１０ｋｂ、１ｋｂ〜約２０ｋｂ、約１ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１ｋｂ〜約６０、約１０ｋｂ〜約２０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約３０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約１０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約３０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約２０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約４０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約３０ｋｂ〜約６０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約５０ｋｂ、約４０ｋｂ〜約６０ｋｂ、または約５０ｋｂ〜約６０ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１１９】
一部の実施形態では、人工染色体（複数可）は、酵母人工染色体（ＹＡＣ）であり、最大１０００ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の実施形態では、人工染色体（複数可）は、約１００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約４００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約３００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約２００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約４００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約３００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約４００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約６００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約６００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約６００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約６００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約７００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約７００ｋｂ〜約９００ｋｂ、約７００ｋｂ〜約８００ｋｂ、約８００ｋｂ〜約１，０００ｋｂ、約８００ｋｂ〜約９００ｋｂ、または約９００ｋｂ〜約１，０００ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を有するＹＡＣである。
【０１２０】
一部の実施形態では、人工染色体（複数可）は、細菌人工染色体（ＢＡＣ）であり、最大７５０ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の実施形態では、人工染色体（複数可）は、ＢＡＣであり、約１００ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約１００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約４００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約３００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約２００ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約７００ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約６００ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約５００ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約４００ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約３００ｋｂ、約１５０ｋｂ〜約２００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約２００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約４００ｋｂ、約２００ｋｂ〜約３００ｋｂ、約２５０ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約２５０ｋｂ〜約７００ｋｂ、約２５０ｋｂ〜約６００ｋｂ、約２５０ｋｂ〜約５００ｋｂ、約２５０ｋｂ〜約４００ｋｂ、約２５０ｋｂ〜約３００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約３００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約５００ｋｂ、約３００ｋｂ〜約４００ｋｂ、約３５０ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約３５０ｋｂ〜約７００ｋｂ、約３５０ｋｂ〜約６００ｋｂ、約３５０ｋｂ〜約５００ｋｂ、約３５０ｋｂ〜約４００ｋｂ、約４００ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約４００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約４５０ｋｂ〜約６００ｋｂ、約４５０ｋｂ〜約５００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約５００ｋｂ〜約７００ｋｂ、約５００ｋｂ〜約６００ｋｂ、約５５０ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約５５０ｋｂ〜約７００ｋｂ、約５５０ｋｂ〜約６００ｋｂ、約６００ｋｂ〜約７５０ｋｂ、約６００ｋｂ〜約７００ｋｂ、または約６５０ｋｂ〜約７５０ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１２１】
一部の実施形態では、人工染色体（複数可）は、Ｐ１由来人工染色体（ＰＡＣ）であり、最大３００ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の実施形態では、Ｐ１由来人工染色体（複数可）であり、約１００ｋｂ〜約３００ｋｂ、約１００ｋｂ〜約２００ｋｂ、または約２００ｋｂ〜約３００ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１２２】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、ウイルスベクターであり、最大１０ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の実施形態では、ウイルスベクター（複数可）であり、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約１ｋｂ〜約９ｋｂ、約１ｋｂ〜約１０ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約６ｋｂ、約２ｋｂ〜約７ｋｂ、約２ｋｂ〜約８ｋｂ、約２ｋｂ〜約９ｋｂ、約２ｋｂ〜約１０ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約６ｋｂ、約３ｋｂ〜約７ｋｂ、約３ｋｂ〜約８ｋｂ、約３ｋｂ〜約９ｋｂ、約３ｋｂ〜約１０ｋｂ、約４ｋｂ〜約５ｋｂ、約４ｋｂ〜約６ｋｂ、約４ｋｂ〜約７ｋｂ、約４ｋｂ〜約８ｋｂ、約４ｋｂ〜約９ｋｂ、約４ｋｂ〜約１０ｋｂ、約５ｋｂ〜約６ｋｂ、約５ｋｂ〜約７ｋｂ、約５ｋｂ〜約８ｋｂ、約５ｋｂ〜約９ｋｂ、約５ｋｂ〜約１０ｋｂ、約６ｋｂ〜約７ｋｂ、約６ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約９ｋｂ、約６ｋｂ〜約１０ｋｂ、約７ｋｂ〜約８ｋｂ、約７ｋｂ〜約９ｋｂ、約７ｋｂ〜約１０ｋｂ、約８ｋｂ〜約９ｋｂ、約８ｋｂ〜約１０ｋｂ、または約９ｋｂ〜約１０ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１２３】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、レンチウイルスであり、最大８ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の例では、レンチウイルス（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約６ｋｂ、約２ｋｂ〜約７ｋｂ、約２ｋｂ〜約８ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約６ｋｂ、約３ｋｂ〜約７ｋｂ、約３ｋｂ〜約８ｋｂ、約４ｋｂ〜約５ｋｂ、約４ｋｂ〜約６ｋｂ、約４ｋｂ〜約７ｋｂ、約４ｋｂ〜約８ｋｂ、約５ｋｂ〜約６ｋｂ、約５ｋｂ〜約７ｋｂ、約５ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約７ｋｂ、または約７ｋｂ〜約８ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１２４】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、アデノウイルスであり、最大８ｋｂのヌクレオチドの総数を有し得る。一部の実施形態では、アデノウイルス（複数可）であり、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約６ｋｂ、約２ｋｂ〜約７ｋｂ、約２ｋｂ〜約８ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約６ｋｂ、約３ｋｂ〜約７ｋｂ、約３ｋｂ〜約８ｋｂ、約４ｋｂ〜約５ｋｂ、約４ｋｂ〜約６ｋｂ、約４ｋｂ〜約７ｋｂ、約４ｋｂ〜約８ｋｂ、約５ｋｂ〜約６ｋｂ、約５ｋｂ〜約７ｋｂ、約５ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約７ｋｈ、約６ｋｂ〜約８ｋｂ、または約７ｋｂ〜約８ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１２５】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶベクター）であり、最大５ｋｂのヌクレオチドの総数を含み得る。一部の実施形態では、ＡＡＶベクター（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、または約４ｋｂ〜約５ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を含み得る。
【０１２６】
一部の実施形態では、ベクター（複数可）は、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクターであり、最大５ｋｂのヌクレオチドの総数を含み得る。一部の実施形態では、各Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクター（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、または約４ｋｂ〜約５ｋｂの範囲のヌクレオチドの総数を含む。
【０１２７】
本明細書に提供される組成物、キット、及び方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターは、実質的に同じ種類のベクターであり得、サイズが異なってもよい。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターは、異なる種類のベクターであり得、実質的に同じサイズを有しても、または異なるサイズを有してもよい。
【０１２８】
一部の実施形態では、該少なくとも２つのベクターのうちのいずれかは、約５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約８，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約７，８００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約７，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約７，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約７，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約７，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約６，８００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約６，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約６，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約６，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約６，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約５，８００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約５，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約５，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約５，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約４，８００ヌクレオチド、約４，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約４，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約４，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約３，８００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約３，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約３，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約３，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約２，８００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約２，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約２，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約２，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１，８００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１，６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１，４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１，２００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド，約８００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約８，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約７，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約７，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約７，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約７，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約７，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約６，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約６，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約６，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約６，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約６，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約５，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約５，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約５，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約５，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，８００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，６００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，４００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，２００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド〜約１，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約８，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約７，８００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約７，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約７，４００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約７，２００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約７，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約６，８００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約６，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約６，４００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約６，２００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約６，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約５，８００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約５，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約５，４００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約５，２００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，８００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，４００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，２００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，８００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，４００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，２００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約２，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約２，４００ヌクレオチド，約１，０００ヌクレオチド〜約２，２００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１，８００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１，６００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１，４００ヌクレオチド、約１，０００ヌクレオチド〜約１，２００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約８，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約７，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約７，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約７，４００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約７，２００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約７，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約６，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約６，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約６，４００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約６，２００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約６，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約５，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約５，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約５，４００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約５，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約４，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約４，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約４，４００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約４，２００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約４，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約３，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約３，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約３，４００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約３，２００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約３，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約２，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約２，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約２，４００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約２，２００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約２，０００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１，８００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１，６００ヌクレオチド、約１，２００ヌクレオチド〜約１，４００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１，４００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド
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０ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１２，０
００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約８，０００ヌクレオチド、約７，６００ヌクレオチド〜約７，８００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約７，８００ヌクレオチド〜約８，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約８，０００ヌクレオチド〜約８，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約８，５００ヌクレオチド〜約９，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約９，０００ヌクレオチド〜約９，５００ヌクレオチド、約９，５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約１０，０００ヌクレオチド〜約１０，５００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約１０，５００ヌクレオチド〜約１１，０００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約１１，０００ヌクレオチド〜約１１，５００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１１，５００ヌクレオチド〜約１２，０００ヌクレオチド、約１２，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１２，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１２，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１２，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１２，０００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１２，０００ヌクレオチド〜約１２，５００ヌクレオチド、約１２，５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１２，５００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１２，５００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１２，５００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１２，５００ヌクレオチド〜約１３，０００ヌクレオチド、約１３，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１３，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１３，０００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１３，０００ヌクレオチド〜約１３，５００ヌクレオチド、約１３，５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１３，５００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、約１３，５００ヌクレオチド〜約１４，０００ヌクレオチド、約１４，０００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド、約１４，０００ヌクレオチド〜約１４，５００ヌクレオチド、または約１４，５００ヌクレオチド〜約１５，０００ヌクレオチド（境界値を含む）の範囲のヌクレオチドの総数を有し得る。
【０１２９】
本明細書では、本明細書に記載される組成物及び方法のうちのいずれかにおいて使用され得る例示的なベクターが提供される。例えば、図１〜２４を参照されたい。
【０１３０】
当該技術分野で既知の様々な異なる方法を用いて、本明細書に開示されるベクターのうちのいずれかを哺乳類細胞（例えば、蝸牛内有毛細胞、蝸牛外有毛細胞、網膜細胞）に導入することができる。核酸を哺乳類細胞に導入するための方法の非限定的な例としては、リポフェクション、トランスフェクション（例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、高分岐有機化合物を用いたトランスフェクション、カチオン性ポリマーを用いたトランスフェクション、デンドリマーベースのトランスフェクション、光学トランスフェクション、粒子ベースのトランスフェクション（例えば、ナノ粒子トランスフェクション）、またはリポソーム（例えば、カチオン性リポソーム）を用いたトランスフェクション）、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、細胞圧搾、ソノポレーション、原形質体融合、インペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、流体力学的送達、遺伝子銃、マグネトフェクション、ウイルストランスフェクション、及びヌクレオフェクションが挙げられる。
【０１３１】
当業者であれば、本明細書に記載されるベクターのうちのいずれかを、例えばリポフェクションによって哺乳類細胞に導入することができ、内因性の遺伝子座（例えば、ＣＬＲＮ１遺伝子座）に安定に組み込むことができることを理解しよう。一部の実施形態では、本明細書に提供されるベクターは、内因性の欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子座に安定に組み込まれ、それによって、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子が、機能している（例えば、野生型）ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする核酸と置き換えられる。
【０１３２】
変異（複数可）及び／または欠失（複数可）を内因性遺伝子に導入するために使用され得る種々の分子生物学技法もまた、当該技術分野で既知である。かかる技法の非限定的な例としては、部位特異的変異誘発、ＣＲＩＳＰＲ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９誘導性ノックイン変異及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９誘導性ノックアウト変異）、及びＴＡＬＥＮが挙げられる。これらの方法を用いて、標的細胞の染色体に存在する欠陥のある内因性遺伝子の配列を補正することができる。
【０１３３】
本明細書に記載されるベクターのうちのいずれかは、調節配列、例えば、転写開始配列、転写終結配列、プロモーター配列、エンハンサー配列、ＲＮＡスプライシング配列、ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル、及びコザックコンセンサス配列の群から選択される調節配列をさらに含み得る。これらの調節配列の非限定的な例が本明細書に記載される。一部の実施形態では、プロモーターは、ネイティブプロモーター、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、及び／または組織特異的プロモーターであり得る。
【０１３４】
プロモーター
「プロモーター」という用語は、特定の遺伝子（例えば、ＣＬＲＮ１遺伝子）の転写を開始するために必要とされる、哺乳類細胞における酵素／タンパク質によって認識されるＤＮＡ配列を意味する。プロモーターは典型的には、例えば、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または任意の関連因子が結合し、転写が開始されるヌクレオチド配列を指す。プロモーターの非限定的な例が本明細書に記載される。プロモーターの追加の例は、当該技術分野で既知である。
【０１３５】
一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、ヒトＣＬＲＮ１タンパク質）のＮ末端部分をコードするベクターは、プロモーター及び／またはエンハンサーを含み得る。ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードするベクターは、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のプロモーター及び／またはエンハンサーのうちのいずれかを含み得る。
【０１３６】
一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、哺乳類細胞プロモーター、ウイルスプロモーター、キメラプロモーター、操作されたプロモーター、組織特異的プロモーター、または当該技術分野で既知の任意の他の種類のプロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、哺乳類ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター等のＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、Ｈ１プロモーター、ヒトＵ６プロモーター、マウスＵ６プロモーター、またはブタＵ６プロモーターを含むが、これらに限定されない、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターである。プロモーターは一般に、内有毛細胞において転写を促進することができるものである。一部の例では、プロモーターは、蝸牛特異的プロモーターまたは蝸牛指向性プロモーターである。
【０１３７】
本明細書で使用され得る様々なプロモーターが当該技術分野で既知である。本明細書で使用され得るプロモーターの非限定的な例としては、ヒトＥＦ１ａ、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（米国特許第５，１６８，０６２号）、ヒトユビキチンＣ（ＵＢＣ）、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１、ポリオーマアデノウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、β−グロビン、β−アクチン、α−フェトプロテイン、γ−グロビン、β−インターフェロン、γ−グルタミルトランスフェラーゼ、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ラウス肉腫ウイルス、ラットインスリン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、メタロチオネインＩＩ（ＭＴ  ＩＩ）、アミラーゼ、カテプシン、ＭＩムスカリン受容体、レトロウイルスＬＴＲ（例えば、ヒトＴ細胞性白血病ウイルスＨＴＬＶ）、ＡＡＶ  ＩＴＲ、インターロイキン−２、コラゲナーゼ、血小板由来成長因子、アデノウイルス５  Ｅ２、ストロメリシン、マウスＭＸ遺伝子、グルコース制御タンパク質（ＧＲＰ７８及びＧＲＰ９４）、α−２−マクログロブリン、ビメンチン、ＭＨＣクラスＩ遺伝子Ｈ−２κ  ｂ、ＨＳＰ７０、プロリフェリン、腫瘍壊死因子、甲状腺刺激ホルモンα遺伝子、免疫グロブリン軽鎖、Ｔ細胞受容体、ＨＬＡ  ＤＱα及びＤＱβ、インターロイキン−２受容体、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＨＣクラスＩＩ  ＨＬＡ−ＤＲα、筋クレアチンキナーゼ、プレアルブミン（トランスチレチン）、エラスターゼＩ、アルブミン遺伝子、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ＨＡ−ｒａｓ、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、Ｈ２Ｂ（ＴＨ２Ｂ）ヒストン、ラット成長ホルモン、ヒト血清アミロイド（ＳＡＡ）、トロポニンＩ（ＴＮ  Ｉ）、デュシェンヌ筋ジストロフィー、ヒト免疫不全ウイルス、ならびにテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）プロモーターが挙げられる。プロモーターの追加の例は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｌｏｄｉｓｈ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ２００７を参照されたい。一部の実施形態では、プロモーターは、ＣＭＶ最初期プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターまたはＣＡＧ／ＣＢＡプロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、ＣＢＡプロモーター、例えば、配列番号１８を含むか、またはそれからなるＣＢＡプロモーターである。
【０１３８】
「構成的」プロモーターという用語は、タンパク質（例えば、ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする核酸に作動可能に連結された際に、ほとんどまたは全ての生理的条件下で哺乳類細胞において核酸からのＲＮＡの転写を引き起こすヌクレオチド配列を指す。
【０１３９】
構成的プロモーターの例としては、限定されないが、レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０，１９８５を参照されたい）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、ベータ−アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１−アルファプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が挙げられる。
【０１４０】
誘導性プロモーターは遺伝子発現の制御を可能にし、外因性で供給される化合物、温度等の環境因子、もしくは特定の生理的状態、例えば、急性期、細胞の特定の分化状態の存在によって、または複製中の細胞においてのみ制御され得る。誘導性プロモーター及び誘導系は、限定されないが、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、及びＡｒｉａｄを含めた、様々な商業的供給源から入手可能である。誘導性プロモーターの追加の例は、当該技術分野で既知である。
【０１４１】
外因性で供給される化合物によって制御される誘導性プロモーターの例としては、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオニン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）（ＭＴ）プロモーター、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）誘導性マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、Ｔ７ポリメラーゼプロモーター系（ＷＯ９８／１００８８）；エクジソン昆虫プロモーター（Ｎｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：３３４６−３３５１，１９９６）、テトラサイクリン抑制系（Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：５５４７−５５５１，１９９２）、テトラサイクリン誘導系（Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８：１７６６−１７６９，１９９５、また、Ｈａｒｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５１２−５１８，１９９８も参照されたい）、ＲＵ４８６誘導系（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：２３９−２４３，１９９７）及びＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：４３２−４４１，１９９７）、及びラパマイシン誘導系（Ｍａｇａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：２８６５−２８７２，１９９７）が挙げられる。
【０１４２】
「組織特異的」プロモーターという用語は、ある特定の細胞型及び／または組織においてのみ活性なプロモーターを指す（例えば、特定の遺伝子の転写が、組織特異的プロモーターに結合する転写制御タンパク質を発現する細胞内でのみ生じる）。
【０１４３】
一部の実施形態では、制御配列は、組織特異的遺伝子発現能を与える。一部の実例では、組織特異的制御配列は、組織特異的様態で転写を誘導する組織特異的転写因子に結合する。
【０１４４】
例示的な組織特異的プロモーターには、以下のもの、すなわち、肝臓特異的チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、インスリンプロモーター、グルカゴンプロモーター、ソマトスタチンプロモーター、膵ポリペプチド（ＰＰＹ）プロモーター、シナプシン−１（Ｓｙｎ）プロモーター、クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）プロモーター、哺乳類デスミン（ＤＥＳ）プロモーター、アルファ−ミオシン重鎖（ａ−ＭＨＣ）プロモーター、及び心臓トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）プロモーターが含まれるが、これらに限定されない。追加の例示的なプロモーターには、ベータ−アクチンプロモーター、Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター（Ｓａｎｄｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．３：１００２−１００９，１９９６）、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーター（Ａｒｂｕｔｈｎｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１５０３−１５１４，１９９６）、骨オステオカルシンプロモーター（Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．２４：１８５−１９６，１９９７）；骨シアロタンパク質プロモーター（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１１：６５４−６６４，１９９６）、ＣＤ２プロモーター（Ｈａｎｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：１０６３−１０６８，１９９８）；免疫グロブリン重鎖プロモーター；Ｔ細胞受容体アルファ鎖プロモーター、神経細胞、例えば神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター（Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１３：５０３−５１５，１９９３）、神経フィラメント軽鎖遺伝子プロモーター（Ｐｉｃｃｉｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８８：５６１１−５６１５，１９９１）、及び神経特異的ｖｇｆ遺伝子プロモーター（Ｐｉｃｃｉｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  １５：３７３−３８４，１９９５）が含まれる。
【０１４５】
一部の実施形態では、組織特異的プロモーターは、蝸牛特異的プロモーターである。一部の実施形態では、組織特異的プロモーターは、蝸牛有毛細胞特異的プロモーターである。蝸牛有毛細胞特異的プロモーターの非限定的な例としては、ＡＴＯＨ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＬＨＸ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＭＹＯ６プロモーター、α９ＡＣＨＲプロモーター、及びα１０ＡＣＨＲプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、プロモーターは、ＰＲＥＳＴＩＮプロモーターまたはＯＮＣＯＭＯＤプロモーター等の蝸牛有毛細胞特異的プロモーターである。例えば、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０５：１４９−１５５，２０００、Ｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２３１：１９９−２０３，２００４、及びＲｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ．６６：９９−１１５，２００９を参照されたい。
【０１４６】
エンハンサー
一部の事例では、ベクターは、エンハンサー配列を含み得る。「エンハンサー」という用語は、目的のタンパク質（例えば、ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする核酸の転写レベルを増加させることができるヌクレオチド配列を指す。エンハンサー配列（５０〜１５００塩基対の長さ）は一般に、転写関連タンパク質（例えば、転写因子）に追加の結合部位を提供することによって転写レベルを増加させる。一部の実施形態では、エンハンサー配列は、イントロン配列内に見出される。プロモーター配列とは異なり、エンハンサー配列は、転写開始部位から（例えば、プロモーターと比較して）はるかに遠く離れて作用することができる。エンハンサーの非限定的な例としては、ＲＳＶエンハンサー、ＣＭＶエンハンサー、及びＳＶ４０エンハンサーが挙げられる。一部の実施形態では、ＣＭＶエンハンサー配列は、配列番号１７を含むか、またはそれからなる。
【０１４７】
ポリ（Ａ）シグナル
一部の実施形態では、本明細書に提供されるベクターのうちのいずれかは、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））シグナル配列を含み得る。真核生物のほとんどの新生ｍＲＮＡは、それらの３’末端に、ポリ（Ａ）シグナル配列によって駆動される一次転写産物の切断及び共役したポリアデニル化反応を含む複合プロセス中に付加される、ポリ（Ａ）テールを持つ（例えば、Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １０８：５０１−５１２，２００２を参照されたい）。ポリ（Ａ）テールは、ｍＲＮＡ安定性及び移行性を付与する（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｂ．Ａｌｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９４）。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端をコードする核酸配列に対して３’側に位置付けられる。
【０１４８】
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子への、ポリアデニリル（ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌｙｌ）部分、またはその修飾バリアントの共有結合を指す。真核生物において、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素であるポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によりプレｍＲＮＡに付加される、アデニンヌクレオチドの長い連なり（例えば、５０、６０、７０、１００、２００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、または５０００）である。より高等の真核生物においては、ポリ（Ａ）テールは、特定の配列であるポリアデニル化（またはポリ（Ａ））シグナルを含有する転写産物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのを助ける。ポリアデニル化はまた、転写終結、ｍＲＮＡの核外への搬出、及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化シグナルは、ＤＮＡのＲＮＡへの転写直後に核内で生じるが、より後で細胞質においても生じ得る。転写が終結した後、ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用により切断される。切断部位は通常、切断部位の近くにある塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在を特徴とする。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が切断部位の空いている３’末端に付加される。
【０１４９】
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）シグナル配列」または「ポリアデニル化シグナル配列」は、ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断及び切断されたｍＲＮＡの３’末端への一連のアデノシンの付加を誘発する配列である。
【０１５０】
使用され得るいくつかのポリ（Ａ）シグナル配列が存在し、これには、ウシ成長ホルモン（ｂｇｈ）（Ｗｏｙｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１（１３）：３９４４−３９４８，１９８４、米国特許第５，１２２，４５８号）、マウス−β−グロビン、マウス−α−グロビン（Ｏｒｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．４（２）：４５３−４５６，１９８５、Ｔｈｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ７１（２）：３１３−３１９，１９８８）、ヒトコラーゲン、ポリオーマウイルス（Ｂａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５（９）：４７８３−４７９０，１９９５）、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ  ＴＫ）、ＩｇＧ重鎖遺伝子ポリアデニル化シグナル（ＵＳ２００６／００４０３５４）、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）（Ｓｚｙｍａｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ  １５（７）：１３４０−１３４７，２００７）、ＳＶ４０後期及び初期ポリ（Ａ）部位等のＳＶ４０ポリ（Ａ）部位からなる群（Ｓｃｈｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２（１２）：５３８６−５３９３，１９９２）に由来するものが含まれる。
【０１５１】
ポリ（Ａ）シグナル配列は、ＡＡＴＡＡＡであり得る。ＡＡＴＡＡＡ配列は、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ、ＣＡＴＡＡＡ、ＴＡＴＡＡＡ、ＧＡＴＡＡＡ、ＡＣＴＡＡＡ、ＡＡＴＡＴＡ、ＡＡＧＡＡＡ、ＡＡＴＡＡＴ、ＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＴＧＡＡ、ＡＡＴＣＡＡ、ＡＡＣＡＡＡ、ＡＡＴＣＡＡ、ＡＡＴＡＡＣ、ＡＡＴＡＧＡ、ＡＡＴＴＡＡ、またはＡＡＴＡＡＧを含めた、ＡＡＴＡＡＡに対して相同性を有し、かつポリアデニル化をシグナル伝達することが可能な他のヘキサヌクレオチド配列と置換されてもよい（例えば、ＷＯ０６／１２４１４を参照されたい）。
【０１５２】
一部の実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、合成ポリアデニル化シグナル部位である（例えば、Ｌｅｖｉｔｔ  ｅｌ  ａｌ，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．３（７）：１０１９−１０２５，１９８９を参照されたい）。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、ウシ成長ホルモン（ＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧ（配列番号２０））のポリアデニル化シグナルである。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、可溶性ニューロピリン−１（ｓＮＲＰ）（ＡＡＡＴＡＡＡＡＴＡＣＧＡＡＡＴＧ（配列番号２１））のポリアデニル化シグナルである（例えば、ＷＯ０５／０７３３８４を参照されたい）。ポリ（Ａ）シグナル配列の追加の例は、当該技術分野で既知である。
【０１５３】
内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）
一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするベクターは、ポリヌクレオチド内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含み得る。ＩＲＥＳ配列は、単一の遺伝子転写産物から１つよりも多くのポリペプチドを生産するために使用される。ＩＲＥＳは、ＩＲＥＳが位置する場所からすぐ下流のｍＲＮＡでの任意の位置から翻訳開始が起こることを可能にする、複雑な二次構造を形成する（例えば、Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８（３）：１１０３−１１１２，１９８８を参照されたい）。
【０１５４】
例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、コオロギ麻痺ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、及びポリオウイルス（ＰＶ）からのＩＲＥＳ配列を含めた、当業者に既知のいくつかのＩＲＥＳ配列が存在する。例えば、Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２、及びＨｅｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５（１３）：１５９３−６１２，２００１を参照されたい。
【０１５５】
一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするベクターに組み込まれるＩＲＥＳ配列は、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａ配列である。口蹄疫ウイルス２Ａ配列は、ポリタンパク質の切断を媒介することが示された低分子ペプチド（およそ１８アミノ酸の長さ）である（Ｒｙａｎ，Ｍ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  ４：９２８−９３３，１９９４、Ｍａｔｔｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７０：８１２４−８１２７，１９９６、Ｆｕｒｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：８６４−８７３，２００１、及びＨａｌｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４：４５３−４５９，１９９９）。２Ａ配列の切断活性は、プラスミド及び遺伝子療法ベクター（ＡＡＶ及びレトロウイルス）を含む人工系において以前に実証された（Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  ４：９２８−９３３，１９９４、Ｍａｔｔｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７０：８１２４−８１２７，１９９６、Ｆｕｒｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：８６４−８７３，２００１、及びＨａｌｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４：４５３−４５９，１９９９、ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ６：１９８−２０８，１９９９、ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １１：１９２１−１９３１，２０００、及びＫｌｕｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：８１１−８１７，２００１）。
【０１５６】
レポーター配列
本明細書に提供されるベクターのうちのいずれかは任意選択で、レポータータンパク質をコードする配列（「レポーター配列」）を含み得る。レポーター配列の非限定的な例としては、ベータ−ラクタマーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、及びルシフェラーゼをコードするＤＮＡ配列が挙げられる。レポーター配列の追加の例は、当該技術分野で既知である。レポーター配列の発現を駆動する制御エレメントに関連付けられた際、レポーター配列は、酵素、Ｘ線撮影、比色、蛍光、または他の分光撮影アッセイ；蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）アッセイ；免疫学的アッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学法）を含めた従来の手段によって検出可能なシグナルを提供することができる。
【０１５７】
一部の実施形態では、レポーター配列は、ｔＧＦＰ（配列番号１９）である。一部の実施形態では、レポーター配列は、ＬａｃＺ遺伝子であり、哺乳類細胞（例えば、蝸牛有毛細胞、網膜細胞等の眼細胞）における、ＬａｃＺ遺伝子を運搬するベクターの存在が、ベータ−ガラクトシダーゼ活性に関してアッセイによって検出される。レポーターが蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質）またはルシフェラーゼである場合、哺乳類細胞（例えば、蝸牛有毛細胞、網膜細胞等の眼細胞）における、蛍光タンパク質またはルシフェラーゼを運搬するベクターの存在が、蛍光技法（例えば、蛍光顕微鏡法またはＦＡＣＳ）により、またはルミノメーター（例えば、分光光度計またはＩＶＩＳ撮像装置）において光生産により測定されてもよい。一部の実施形態では、レポーター配列を用いて、本明細書に記載されるベクターのうちのいずれかの組織特異的標的化能力及び組織特異的プロモーター制御活性を検証することができる。
【０１５８】
隣接領域非翻訳領域（ＵＴＲ）
一部の実施形態では、本明細書に記載されるベクターのうちのいずれか（例えば、該少なくとも２つの異なるベクターのうちのいずれか）は、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲ等の非翻訳領域を含み得る。
【０１５９】
遺伝子の非翻訳領域（ＵＴＲ）は、転写されるが、翻訳はされない。５’ＵＴＲは、転写開始部位で開始し、開始コドンまで継続するが、開始コドンは含まない。３’ＵＴＲは、終止コドンの直後から開始し、転写終結シグナルまで継続する。核酸分子の安定性及び翻訳の点でＵＴＲが果たす制御性の役割についての証拠が増えてきている。ＵＴＲの制御性特徴は、ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を強化するために、本明細書に記載されるようなベクター、組成物、キット、または方法のうちのいずれかに組み込むことができる。
【０１６０】
天然の５’ＵＴＲは、翻訳開始において役割を果たす配列を含む。それらは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが一般に知られている、コザック配列のようなシグネチャを含有する。コザック配列は、コンセンサス配列ＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧを有し、ここで、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（ＡまたはＧ）であり、開始コドンの後には別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲはまた、伸長因子の結合に関与する二次構造を形成することが知られている。
【０１６１】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲが、本明細書に記載されるベクターのうちのいずれかに含まれる。以下の遺伝子、すなわち、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、アルファフェトプロテイン、エリスロポエチン、及び第ＶＩＩＩ因子からの５’ＵＴＲを含めた、５’ＵＴＲの非限定的な例を用いて、ｍＲＮＡ等の核酸分子の発現を強化することができる。
【０１６２】
一部の実施形態では、蝸牛または網膜内の細胞によって転写されるｍＲＮＡからの５’ＵＴＲが、本明細書に記載されるベクター、組成物、キット、及び方法のうちのいずれかに含まれ得る。
【０１６３】
３’ＵＴＲは、それらの中に埋め込まれた一続きのアデノシン及びウリジン（ＲＮＡ形態で）またはチミジン（ＤＮＡ形態で）を有することが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャは、高い回転率を有する遺伝子において特に広く見られる。それらの配列特徴及び機能的特性に基づいて、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）は、下記の３つの部類に分離することができる（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：５７７７−５７８８，１９９５；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５：２０１０−２０１８，１９９５）。クラスＩ  ＡＲＥは、Ｕリッチ領域内にＡＵＵＵＡモチーフのいくつかの分散したコピーを含有する。例えば、ｃ−Ｍｙｃ及びＭｙｏＤ  ｍＲＮＡは、クラスＩ  ＡＲＥを含有する。クラスＩＩ  ＡＲＥは、２つ以上の重複するＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を持つ。ＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−アルファｍＲＮＡは、クラスＩＩ  ＡＲＥを含有する例である。クラスＩＩＩ  ＡＲＥは、あまりよく定義されていない。これらのＵリッチ領域は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。このクラスの２つのよく研究された例は、ｃ−Ｊｕｎ及びミオゲニンｍＲＮＡである。
【０１６４】
ＡＲＥに結合するほとんどのタンパク質は、メッセンジャーを不安定にすることが知られているが、一方で、ＥＬＡＶファミリーのメンバー、とりわけＨｕＲは、ｍＲＮＡの安定性を増加させることが実証された。ＨｕＲは、これら３つのクラス全てのＡＲＥに結合する。ＨｕＲ特異的結合部位を核酸分子の３’ＵＴＲに導入操作することにより、ＨｕＲ結合、ひいてはインビボでのメッセージの安定化がもたらされよう。
【０１６５】
例示的なヒト野生型５’ＵＴＲは、配列番号１２または配列番号１３の配列であるか、またはそれを含む。例示的なヒト野生型５’ＵＴＲは、配列番号１４または配列番号１５の配列であるか、またはそれを含む。
【０１６６】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方が、ベクター（例えば、本明細書に記載されるベクターのうちのいずれか）に含まれる。例えば、本明細書に記載される５’−ＵＴＲのうちのいずれかを、本明細書に記載されるコード配列のうちのいずれかにおいて開始コドンに作動的に連結することができる。例えば、３’−ＵＴＲのうちのいずれかを、本明細書に記載されるコード配列のうちのいずれかにおいて３’末端コドン（最後のコドン）に作動的に連結することができる。
【０１６７】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号１２または配列番号１３内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続（例えば、少なくとも１５個の連続、少なくとも２０個の連続、少なくとも２５個の連続、少なくとも３０個の連続、少なくとも３５個の連続、少なくとも４０個の連続、少なくとも４５個の連続、少なくとも５０個の連続、少なくとも５５個の連続、少なくとも６０個の連続、少なくとも６５個の連続、少なくとも７０個の連続、少なくとも７５個の連続、少なくとも８０個の連続、少なくとも８５個の連続、少なくとも９０個の連続、少なくとも１００個の連続、少なくとも１０５個の連続、少なくとも１１０個の連続、少なくとも１１５個の連続、少なくとも１２０個の連続、少なくとも１２５個の連続、少なくとも１３０個の連続、少なくとも１３５個の連続、少なくとも１４０個の連続、少なくとも１４５個の連続、少なくとも１５０個の連続、少なくとも１５５個の連続、少なくとも１６０個の連続、少なくとも１６５個の連続、少なくとも１７０個の連続、少なくとも１７５個の連続、少なくとも１８０個の連続、少なくとも１８５個の連続、少なくとも１９０個の連続、少なくとも１９５個の連続、少なくとも２００個の連続、少なくとも２０５個の連続、少なくとも２１０個の連続、少なくとも２１５個の連続、少なくとも２２０個の連続、少なくとも２２５個の連続、少なくとも２３０個の連続、少なくとも２３５個の連続、少なくとも２４０個の連続、少なくとも２４５個の連続、少なくとも２５０個の連続、少なくとも２５５個の連続、または少なくとも２６０個の連続）ヌクレオチドを含む。
【０１６８】
例えば、５’ＵＴＲは、配列番号１２または１３のヌクレオチド１位〜２９１位、ヌクレオチド１位〜２９０位、ヌクレオチド１位〜２８０位、ヌクレオチド１位〜２７０位、ヌクレオチド１位〜２６０位、ヌクレオチド１位〜２５０位、ヌクレオチド１位〜２４０位、ヌクレオチド１位〜２３０位、ヌクレオチド１位〜２２０位、ヌクレオチド１位〜２１０位、ヌクレオチド１位〜２００位、ヌクレオチド１位〜１９０位、ヌクレオチド１位〜１８０位、ヌクレオチド１位〜１７０位、ヌクレオチド１位〜１６０位、ヌクレオチド１位〜１５０位、ヌクレオチド１位〜１４０位、ヌクレオチド１位〜１３０位、ヌクレオチド１位〜１２０位、ヌクレオチド１位〜１１０位、ヌクレオチド１位〜１００位、ヌクレオチド１位〜９０位、ヌクレオチド１位〜８０位、ヌクレオチド１位〜７０位、ヌクレオチド１位〜６０位、ヌクレオチド１位〜５０位、ヌクレオチド１位〜４０位、ヌクレオチド１位〜３０位、ヌクレオチド１位〜２０位、ヌクレオチド１位〜１０位、ヌクレオチド１０位〜２９１位、ヌクレオチド１０位〜２９０位、ヌクレオチド１０位〜２８０位、ヌクレオチド１０位〜２７０位、ヌクレオチド１０位〜２６０位、ヌクレオチド１０位〜２５０位、ヌクレオチド１０位〜２４０位、ヌクレオチド１０位〜２３０位、ヌクレオチド１０位〜２２０位、ヌクレオチド１０位〜２１０位、ヌクレオチド１０位〜２００位、ヌクレオチド１０位〜１９０位、ヌクレオチド１０位〜１８０位、ヌクレオチド１０位〜１７０位、ヌクレオチド１０位〜１６０位、ヌクレオチド１０位〜１５０位、ヌクレオチド１０位〜１４０位、ヌクレオチド１０位〜１３０位、ヌクレオチド１０位〜１２０位、ヌクレオチド１０位〜１１０位、ヌクレオチド１０位〜１００位、ヌクレオチド１０位〜９０位、ヌクレオチド１０位〜８０位、ヌクレオチド１０位〜７０位、ヌクレオチド１０位〜６０位、ヌクレオチド１０位〜５０位、ヌクレオチド１０位〜４０位、ヌクレオチド１０位〜３０位、ヌクレオチド１０位〜２０位、ヌクレオチド２０位〜２９１位、ヌクレオチド２０位〜２９０位、ヌクレオチド２０位〜２８０位、ヌクレオチド２０位〜２７０位、ヌクレオチド２０位〜２６０位、ヌクレオチド２０位〜２５０位、ヌクレオチド２０位〜２４０位、ヌクレオチド２０位〜２３０位、ヌクレオチド２０位〜２２０位、ヌクレオチド２０位〜２１０位、ヌクレオチド２０位〜２００位、ヌクレオチド２０位〜１９０位、ヌクレオチド２０位〜１８０位、ヌクレオチド２０位〜１７０位、ヌクレオチド２０位〜１６０位、ヌクレオチド２０位〜１５０位、ヌクレオチド２０位〜１４０位、ヌクレオチド２０位〜１３０位、ヌクレオチド２０位〜１２０位、ヌクレオチド２０位〜１１０位、ヌクレオチド２０位〜１００位、ヌクレオチド２０位〜９０位、ヌクレオチド２０位〜８０位、ヌクレオチド２０位〜７０位、ヌクレオチド２０位〜６０位、ヌクレオチド２０位〜５０位、ヌクレオチド２０位〜４０位、ヌクレオチド２０位〜３０位、ヌクレオチド３０位〜２９１位、ヌクレオチド３０位〜２９０位、ヌクレオチド３０位〜２８０位、ヌクレオチド３０位〜２７０位、ヌクレオチド３０位〜２６０位、ヌクレオチド３０位〜２５０位、ヌクレオチド３０位〜２４０位、ヌクレオチド３０位〜２３０位、ヌクレオチド３０位〜２２０位、ヌクレオチド３０位〜２１０位、ヌクレオチド３０位〜２００位、ヌクレオチド３０位〜１９０位、ヌクレオチド３０位〜１８０位、ヌクレオチド３０位〜１７０位、ヌクレオチド３０位〜１６０位、ヌクレオチド３０位〜１５０位、ヌクレオチド３０位〜１４０位、ヌクレオチド３０位〜１３０位、ヌクレオチド３０位〜１２０位、ヌクレオチド３０位〜１１０位、ヌクレオチド３０位〜１００位、ヌクレオチド３０位〜９０位、ヌクレオチド３０位〜８０位、ヌクレオチド３０位〜７０位、ヌクレオチド３０位〜６０位、ヌクレオチド３０位〜５０位、ヌクレオチド３０位〜４０位、ヌクレオチド４０位〜２９１位、ヌクレオチド４０位〜２９０位、ヌクレオチド４０位〜２８０位、ヌクレオチド４０位〜２７０位、ヌクレオチド４０位〜２６０位、ヌクレオチド４０位〜２５０位、ヌクレオチド４０位〜２４０位、ヌクレオチド４０位〜２３０位、ヌクレオチド４０位〜２２０位、ヌクレオチド４０位〜２１０位、ヌクレオチド４０位〜２００位、ヌクレオチド４０位〜１９０位、ヌクレオチド４０位〜１８０位、ヌクレオチド４０位〜１７０位、ヌクレオチド４０位〜１６０位、ヌクレオチド４０位〜１５０位、ヌクレオチド４０位〜１４０位、ヌクレオチド４０位〜１３０位、ヌクレオチド４０位〜１２０位、ヌクレオチド４０位〜１１０位、ヌクレオチド４０位〜１００位、ヌクレオチド４０位〜９０位、ヌクレオチド４０位〜８０位、ヌクレオチド４０位〜７０位、ヌクレオチド４０位〜６０位、ヌクレオチド４０位〜５０位、ヌクレオチド５０位〜２９１位、ヌクレオチド５０位〜２９０位、ヌクレオチド５０位〜２８０位、ヌクレオチド５０位〜２７０位、ヌクレオチド５０位〜２６０位、ヌクレオチド５０位〜２５０位、ヌクレオチド５０位〜２４０位、ヌクレオチド５０位〜２３０位、ヌクレオチド５０位〜２２０位、ヌクレオチド５０位〜２１０位、ヌクレオチド５０位〜２００位、ヌクレオチド５０位〜１９０位、ヌクレオチド５０位〜１８０位、ヌクレオチド５０位〜１７０位、ヌクレオチド５０位〜１６０位、ヌクレオチド５０位〜１５０位、ヌクレオチド５０位〜１４０位、ヌクレオチド５０位〜１３０位、ヌクレオチド５０位〜１２０位、ヌクレオチド５０位〜１１０位、ヌクレオチド５０位〜１００位、ヌクレオチド５０位〜９０位、ヌクレオチド５０位〜８０位、ヌクレオチド５０位〜７０位、ヌクレオチド５０位〜６０位、ヌクレオチド６０位〜２９１位、ヌクレオチド６０位〜２９０位、ヌクレオチド６０位〜２８０位、ヌクレオチド６０位〜２７０位、ヌクレオチド６０位〜２６０位、ヌクレオチド６０位〜２５０位、ヌクレオチド６０位〜２４０位、ヌクレオチド６０位〜２３０位、ヌクレオチド６０位〜２２０位、ヌクレオチド６０位〜２１０位、ヌクレオチド６０位〜２００位、ヌクレオチド６０位〜１９０位、ヌクレオチド６０位〜１８０位、ヌクレオチド６０位〜１７０位、ヌクレオチド６０位〜１６０位、ヌクレオチド６０位〜１５０位、ヌクレオチド６０位〜１４０位、ヌクレオチド６０位〜１３０位、ヌクレオチド６０位〜１２０位、ヌクレオチド６０位〜１１０位、ヌクレオチド６０位〜１００位、ヌクレオチド６０位〜９０位、ヌクレオチド６０位〜８０位、ヌクレオチド６０位〜７０位、ヌクレオチド７０位〜２９１位、ヌクレオチド７０位〜２９０位、ヌクレオチド７０位〜２８０位、ヌクレオチド７０位〜２７０位、ヌクレオチド７０位〜２６０位、ヌクレオチド７０位〜２５０位、ヌクレオチド７０位〜２４０位、ヌクレオチド７０位〜２３０位、ヌクレオチド７０位〜２２０位、ヌクレオチド７０位〜２１０位、ヌクレオチド７０位〜２００位、ヌクレオチド７０位〜１９０位、ヌクレオチド７０位〜１８０位、ヌクレオチド７０位〜１７０位、ヌクレオチド７０位〜１６０位、ヌクレオチド７０位〜１５０位、ヌクレオチド７０位〜１４０位、ヌクレオチド７０位〜１３０位、ヌクレオチド７０位〜１２０位、ヌクレオチド７０位〜１１０位、ヌクレオチド７０位〜１００位、ヌクレオチド７０位〜９０位、ヌクレオチド７０位〜８０位、ヌクレオチド８０位〜２９１位、ヌクレオチド８０位〜２９０位、ヌクレオチド８０位〜２８０位、ヌクレオチド８０位〜２７０位、ヌクレオチド８０位〜２６０位、ヌクレオチド８０位〜２５０位、ヌクレオチド８０位〜２４０位、ヌクレオチド８０位〜２３０位、ヌクレオチド８０位〜２２０位、ヌクレオチド８０位〜２１０位、ヌクレオチド８０位〜２００位、ヌクレオチド８０位〜１９０位、ヌクレオチド８０位〜１８０位、ヌクレオチド８０位〜１７０位、ヌクレオチド８０位〜１６０位、ヌクレオチド８０位〜１５０位、ヌクレオチド８０位〜１４０位、ヌクレオチド８０位〜１３０位、ヌクレオチド８０位〜１２０位、ヌクレオチド８０位〜１１０位、ヌクレオチド８０位〜１００位、ヌクレオチド８０位〜９０位、ヌクレオチド９０位〜２９１位、ヌクレオチド９０位〜２９０位、ヌクレオチド９０位〜２８０位、ヌクレオチド９０位〜２７０位、ヌクレオチド９０位〜２６０位、ヌクレオチド９０位〜２５０位、ヌクレオチド９０位〜２４０位、ヌクレオチド９０位〜２３０位、ヌクレオチド９０位〜２２０位、ヌクレオチド９０位〜２１０位、ヌクレオチド９０位〜２００位、ヌクレオチド９０位〜１９０位、ヌクレオチド９０位〜１８０位、ヌクレオチド９０位〜１７０位、ヌクレオチド９０位〜１６０位、ヌクレオチド９０位〜１５０位、ヌクレオチド９０位〜１４０位、ヌクレオチド９０位〜１３０位、ヌクレオチド９０位〜１２０位、ヌクレオチド９０位〜１１０位、ヌクレオチド９０位〜１００位、ヌクレオチド１００位〜２９１位、ヌクレオチド１００位〜２９０位、ヌクレオチド１００位〜２８０位、ヌクレオチド１００位〜２７０位、ヌクレオチド１００位〜２６０位、ヌクレオチド１００位〜２５０位、ヌクレオチド１００位〜２４０位、ヌクレオチド１００位〜２３０位、ヌクレオチド１００位〜２２０位、ヌクレオチド１００位〜２１０位、ヌクレオチド１００位〜２００位、ヌクレオチド１００位〜１９０位、ヌクレオチド１００位〜１８０位、ヌクレオチド１００位〜１７０位、ヌクレオチド１００位〜１６０位、ヌクレオチド１００位〜１５０位、ヌクレオチド１００位〜１４０位、ヌクレオチド１００位〜１３０位、ヌクレオチド１００位〜１２０位、ヌクレオチド１００位〜１１０位、ヌクレオチド１１０位〜２９１位、ヌクレオチド１１０位〜２９０位、ヌクレオチド１１０位〜２８０位、ヌクレオチド１１０位〜２７０位、ヌクレオチド１１０位〜２６０位、ヌクレオチド１１０位〜２５０位、ヌクレオチド１１０位〜２４０位、ヌクレオチド１１０位〜２３０位、ヌクレオチド１１０位〜２２０位、ヌクレオチド１１０位〜２１０位、ヌクレオチド１１０位〜２００位、ヌクレオチド１１０位〜１９０位、ヌクレオチド１１０位〜１８０位、ヌクレオチド１１０位〜１７０位、ヌクレオチド１１０位〜１６０位、ヌクレオチド１１０位〜１５０位、ヌクレオチド１１０位〜１４０位、ヌクレオチド１１０位〜１３０位、ヌクレオチド１１０位〜１２０位、ヌクレオチド１２０位〜２９１位、ヌクレオチド１２０位〜２９０位、ヌクレオチド１２０位〜２８０位、ヌクレオチド１２０位〜２７０位、ヌクレオチド１２０位〜２６０位、ヌクレオチド１２０位〜２５０位、ヌクレオチド１２０位〜２４０位、ヌクレオチド１２０位〜２３０位、ヌクレオチド１２０位〜２２０位、ヌクレオチド１２０位〜２１０位、ヌクレオチド１２０位〜２００位、ヌクレオチド１２０位〜１９０位、ヌクレオチド１２０位〜１８０位、ヌクレオチド１２０位〜１７０位、ヌクレオチド１２０位〜１６０位、ヌクレオチド１２０位〜１５０位、ヌクレオチド１２０位〜１４０位、ヌクレオチド１２０位〜１３０位、ヌクレオチド１３０位〜２９１位、ヌクレオチド１３０位〜２９０位、ヌクレオチド１３０位〜２８０位、ヌクレオチド１３０位〜２７０位、ヌクレオチド１３０位〜２６０位、ヌクレオチド１３０位〜２５０位、ヌクレオチド１３０位〜２４０位、ヌクレオチド１３０位〜２３０位、ヌクレオチド１３０位〜２２０位、ヌクレオチド１３０位〜２１０位、ヌクレオチド１３０位〜２００位、ヌクレオチド１３０位〜１９０位、ヌクレオチド１３０位〜１８０位、ヌクレオチド１３０位〜１７０位、ヌクレオチド１３０位〜１６０位、ヌクレオチド１３０位〜１５０位、ヌクレオチド１３０位〜１４０位、ヌクレオチド１４０位〜２９１位、ヌクレオチド１４０位〜２９０位、ヌクレオチド１４０位〜２８０位、ヌクレオチド１４０位〜２７０位、ヌクレオチド１４０位〜２６０位、ヌクレオチド１４０位〜２５０位、ヌクレオチド１４０位〜２４０位、ヌクレオチド１４０位〜２３０位、ヌクレオチド１４０位〜２２０位、ヌクレオチド１４０位〜２１０位、ヌクレ
オチド１４０位〜２００位、ヌクレオチド１４０位〜１９０位、ヌクレオチド１４０位〜１８０位、ヌクレオチド１４０位〜１７０位、ヌクレオチド１４０位〜１６０位、ヌクレオチド１４０位〜１５０位、ヌクレオチド１５０位〜２９１位、ヌクレオチド１５０位〜２９０位、ヌクレオチド１５０位〜２８０位、ヌクレオチド１５０位〜２７０位、ヌクレオチド１５０位〜２６０位、ヌクレオチド１５０位〜２５０位、ヌクレオチド１５０位〜２４０位、ヌクレオチド１５０位〜２３０位、ヌクレオチド１５０位〜２２０位、ヌクレオチド１５０位〜２１０位、ヌクレオチド１５０位〜２００位、ヌクレオチド１５０位〜１９０位、ヌクレオチド１５０位〜１８０位、ヌクレオチド１５０位〜１７０位、ヌクレオチド１５０位〜１６０位、ヌクレオチド１６０位〜２９１位、ヌクレオチド１６０位〜２９０位、ヌクレオチド１６０位〜２８０位、ヌクレオチド１６０位〜２７０位、ヌクレオチド１６０位〜２６０位、ヌクレオチド１６０位〜２５０位、ヌクレオチド１６０位〜２４０位、ヌクレオチド１６０位〜２３０位、ヌクレオチド１６０位〜２２０位、ヌクレオチド１６０位〜２１０位、ヌクレオチド１６０位〜２００位、ヌクレオチド１６０位〜１９０位、ヌクレオチド１６０位〜１８０位、ヌクレオチド１６０位〜１７０位、ヌクレオチド１７０位〜２９１位、ヌクレオチド１７０位〜２９０位、ヌクレオチド１７０位〜２８０位、ヌクレオチド１７０位〜２７０位、ヌクレオチド１７０位〜２６０位、ヌクレオチド１７０位〜２５０位、ヌクレオチド１７０位〜２４０位、ヌクレオチド１７０位〜２３０位、ヌクレオチド１７０位〜２２０位、ヌクレオチド１７０位〜２１０位、ヌクレオチド１７０位〜２００位、ヌクレオチド１７０位〜１９０位、ヌクレオチド１７０位〜１８０位、ヌクレオチド１８０位〜２９１位、ヌクレオチド１８０位〜２９０位、ヌクレオチド１８０位〜２８０位、ヌクレオチド１８０位〜２７０位、ヌクレオチド１８０位〜２６０位、ヌクレオチド１８０位〜２５０位、ヌクレオチド１８０位〜２４０位、ヌクレオチド１８０位〜２３０位、ヌクレオチド１８０位〜２２０位、ヌクレオチド１８０位〜２１０位、ヌクレオチド１８０位〜２００位、ヌクレオチド１８０位〜１９０位、ヌクレオチド１９０位〜２９１位、ヌクレオチド１９０位〜２９０位、ヌクレオチド１９０位〜２８０位、ヌクレオチド１９０位〜２７０位、ヌクレオチド１９０位〜２６０位、ヌクレオチド１９０位〜２５０位、ヌクレオチド１９０位〜２４０位、ヌクレオチド１９０位〜２３０位、ヌクレオチド１９０位〜２２０位、ヌクレオチド１９０位〜２１０位、ヌクレオチド１９０位〜２００位、ヌクレオチド２００位〜２９１位、ヌクレオチド２００位〜２９０位、ヌクレオチド２００位〜２８０位、ヌクレオチド２００位〜２７０位、ヌクレオチド２００位〜２６０位、ヌクレオチド２００位〜２５０位、ヌクレオチド２００位〜２４０位、ヌクレオチド２００位〜２３０位、ヌクレオチド２００位〜２２０位、ヌクレオチド２００位〜２１０位、ヌクレオチド２１０位〜２９１位、ヌクレオチド２１０位〜２９０位、ヌクレオチド２１０位〜２８０位、ヌクレオチド２１０位〜２７０位、ヌクレオチド２１０位〜２６０位、ヌクレオチド２１０位〜２５０位、ヌクレオチド２１０位〜２４０位、ヌクレオチド２１０位〜２３０位、ヌクレオチド２１０位〜２２０位、ヌクレオチド２２０位〜２９１位、ヌクレオチド２２０位〜２９０位、ヌクレオチド２２０位〜２８０位、ヌクレオチド２２０位〜２７０位、ヌクレオチド２２０位〜２６０位、ヌクレオチド２２０位〜２５０位、ヌクレオチド２２０位〜２４０位、ヌクレオチド２２０位〜２３０位、ヌクレオチド２３０位〜２９１位、ヌクレオチド２３０位〜２９０位、ヌクレオチド２３０位〜２８０位、ヌクレオチド２３０位〜２７０位、ヌクレオチド２３０位〜２６０位、ヌクレオチド２３０位〜２５０位、ヌクレオチド２３０位〜２４０位、ヌクレオチド２４０位〜２９１位、ヌクレオチド２４０位〜２９０位、ヌクレオチド２４０位〜２８０位、ヌクレオチド２４０位〜２７０位、ヌクレオチド２４０位〜２６０位、ヌクレオチド２４０位〜２５０位、ヌクレオチド２５０位〜２９１位、ヌクレオチド２５０位〜２９０位、ヌクレオチド２５０位〜２８０位、ヌクレオチド２５０位〜２７０位、ヌクレオチド２５０位〜２６０位、ヌクレオチド２６０位〜２９１位、ヌクレオチド２６０位〜２９０位、ヌクレオチド２６０位〜２８０位、ヌクレオチド２６０位〜２７０位、ヌクレオチド２７０位〜２９１位、ヌクレオチド２７０位〜２９０位、ヌクレオチド２７０位〜２８０位、ヌクレオチド２８０位〜２９１位、またはヌクレオチド２８０位〜２９０位のうちの１つまたは複数を含み得るか、またはそれからなり得る。
【０１６９】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号１２または１３と少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列を含む。
【０１７０】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、配列番号１４または１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続（例えば、少なくとも１５個の連続、少なくとも２０個の連続、少なくとも２５個の連続、少なくとも３０個の連続、少なくとも３５個の連続、少なくとも４０個の連続、少なくとも４５個の連続、少なくとも５０個の連続、少なくとも５５個の連続、少なくとも６０個の連続、少なくとも６５個の連続、少なくとも７０個の連続、少なくとも７５個の連続、少なくとも８０個の連続、少なくとも８５個の連続、少なくとも９０個の連続、少なくとも１００個の連続、少なくとも１０５個の連続、少なくとも１１０個の連続、少なくとも１１５個の連続、少なくとも１２０個の連続、少なくとも１２５個の連続、少なくとも１３０個の連続、少なくとも１３５個の連続、少なくとも１４０個の連続、少なくとも１４５個の連続、少なくとも１５０個の連続、少なくとも１５５個の連続、少なくとも１６０個の連続、少なくとも１６５個の連続、少なくとも１７０個の連続、少なくとも１７５個の連続、少なくとも１８０個の連続、少なくとも１８５個の連続、少なくとも１９０個の連続、少なくとも１９５個の連続、少なくとも２００個の連続、少なくとも２０５個の連続、少なくとも２１０個の連続、少なくとも２１５個の連続、少なくとも２２０個の連続、少なくとも２２５個の連続、少なくとも２３０個の連続、少なくとも２３５個の連続、少なくとも２４０個の連続、少なくとも２４５個の連続、少なくとも２５０個の連続、少なくとも２５５個の連続、少なくとも２６０個の連続、少なくとも２６５個の連続、少なくとも２７０個の連続、少なくとも２７５個の連続、少なくとも２８０個の連続、少なくとも２８５個の連続、少なくとも２９０個の連続、少なくとも２９５個の連続、少なくとも３００個の連続、少なくとも３０５個の連続、少なくとも３１０個の連続、少なくとも３１５個の連続、少なくとも３２０個の連続、少なくとも３２５個の連続、少なくとも３３０個の連続、少なくとも３３５個の連続、少なくとも３４０個の連続、少なくとも３４５個の連続、少なくとも３５０個の連続、少なくとも３５５個の連続、少なくとも３６０個の連続、少なくとも３６５個の連続、少なくとも３７０個の連続、少なくとも３７５個の連続、少なくとも３８０個の連続、少なくとも３８５個の連続、少なくとも３９０個の連続、少なくとも３９５個の連続、少なくとも４００個の連続、少なくとも４５０個の連続、少なくとも５００個の連続、少なくとも５５０個の連続、少なくとも６００個の連続、少なくとも６５０個の連続、少なくとも７００個の連続、少なくとも７５０個の連続、少なくとも８００個の連続、少なくとも８５０個の連続、少なくとも９００個の連続、少なくとも９５０個の連続、少なくとも１０００個の連続、少なくとも１０５０個の連続、少なくとも１１００個の連続、少なくとも１１５０個の連続、少なくとも１２００個の連続、少なくとも１２５０個の連続、少なくとも１３００個の連続、少なくとも１３５０個の連続、少なくとも１４００個の連続、少なくとも１４５０個の連続、少なくとも１５００個の連続、少なくとも１５５０個の連続、少なくとも１６００個の連続、少なくとも１６５０個の連続、少なくとも１７００個の連続、または少なくとも１７５０個の連続）ヌクレオチドを含む。
【０１７１】
例えば、５’ＵＴＲは、配列番号１４または１５のヌクレオチド１位〜１７７３位、ヌクレオチド１位〜１７７０位、ヌクレオチド１位〜１７５０位、ヌクレオチド１位〜１７００位、ヌクレオチド１位〜１６５０位、ヌクレオチド１位〜１６００位、ヌクレオチド１位〜１５５０位、ヌクレオチド１位〜１５００位、ヌクレオチド１位〜１４５０位、ヌクレオチド１位〜１４００位、ヌクレオチド１位〜１３５０位、ヌクレオチド１位〜１３００位、ヌクレオチド１位〜１２５０位、ヌクレオチド１位〜１２００位、ヌクレオチド１位〜１１５０位、ヌクレオチド１位〜１１００位、ヌクレオチド１位〜１０５０位、ヌクレオチド１位〜１０００位、ヌクレオチド１位〜９５０位、ヌクレオチド１位〜９００位、ヌクレオチド１位〜８５０位、ヌクレオチド１位〜８００位、ヌクレオチド１位〜７５０位、ヌクレオチド１位〜７００位、ヌクレオチド１位〜６５０位、ヌクレオチド１位〜６００位、ヌクレオチド１位〜５５０位、ヌクレオチド１位〜５００位、ヌクレオチド１位〜４５０位、ヌクレオチド１位〜４００位、ヌクレオチド１位〜３５０位、ヌクレオチド１位〜３００位、ヌクレオチド１位〜２５０位、ヌクレオチド１位〜２００位、ヌクレオチド１位〜１５０位、ヌクレオチド１位〜１００位、ヌクレオチド１位〜５０位、ヌクレオチド１位〜２５位、ヌクレオチド２５位〜１７７３位、ヌクレオチド２５位〜１７７０位、ヌクレオチド２５位〜１７５０位、ヌクレオチド２５位〜１７００位、ヌクレオチド２５位〜１６５０位、ヌクレオチド２５位〜１６００位、ヌクレオチド２５位〜１５５０位、ヌクレオチド２５位〜１５００位、ヌクレオチド２５位〜１４５０位、ヌクレオチド２５位〜１４００位、ヌクレオチド２５位〜１３５０位、ヌクレオチド２５位〜１３００位、ヌクレオチド２５位〜１２５０位、ヌクレオチド２５位〜１２００位、ヌクレオチド２５位〜１１５０位、ヌクレオチド２５位〜１１００位、ヌクレオチド２５位〜１０５０位、ヌクレオチド２５位〜１０００位、ヌクレオチド２５位〜９５０位、ヌクレオチド２５位〜９００位、ヌクレオチド２５位〜８５０位、ヌクレオチド２５位〜８００位、ヌクレオチド２５位〜７５０位、ヌクレオチド２５位〜７００位、ヌクレオチド２５位〜６５０位、ヌクレオチド２５位〜６００位、ヌクレオチド２５位〜５５０位、ヌクレオチド２５位〜５００位、ヌクレオチド２５位〜４５０位、ヌクレオチド２５位〜４００位、ヌクレオチド２５位〜３５０位、ヌクレオチド２５位〜３００位、ヌクレオチド２５位〜２５０位、ヌクレオチド２５位〜２００位、ヌクレオチド２５位〜１５０位、ヌクレオチド２５位〜１００位、ヌクレオチド２５位〜５０位、ヌクレオチド５０位〜１７７３位、ヌクレオチド５０位〜１７７０位、ヌクレオチド５０位〜１７５０位、ヌクレオチド５０位〜１７００位、ヌクレオチド５０位〜１６５０位、ヌクレオチド５０位〜１６００位、ヌクレオチド５０位〜１５５０位、ヌクレオチド５０位〜１５００位、ヌクレオチド５０位〜１４５０位、ヌクレオチド５０位〜１４００位、ヌクレオチド５０位〜１３５０位、ヌクレオチド５０位〜１３００位、ヌクレオチド５０位〜１２５０位、ヌクレオチド５０位〜１２００位、ヌクレオチド５０位〜１１５０位、ヌクレオチド５０位〜１１００位、ヌクレオチド５０位〜１０５０位、ヌクレオチド５０位〜１０００位、ヌクレオチド５０位〜９５０位、ヌクレオチド５０位〜９００位、ヌクレオチド５０位〜８５０位、ヌクレオチド５０位〜８００位、ヌクレオチド５０位〜７５０位、ヌクレオチド５０位〜７００位、ヌクレオチド５０位〜６５０位、ヌクレオチド５０位〜６００位、ヌクレオチド５０位〜５５０位、ヌクレオチド５０位〜５００位、ヌクレオチド５０位〜４５０位、ヌクレオチド５０位〜４００位、ヌクレオチド５０位〜３５０位、ヌクレオチド５０位〜３００位、ヌクレオチド５０位〜２５０位、ヌクレオチド５０位〜２００位、ヌクレオチド５０位〜１５０位、ヌクレオチド５０位〜１００位、ヌクレオチド１００位〜１７７３位、ヌクレオチド１００位〜１７７０位、ヌクレオチド１００位〜１７５０位、ヌクレオチド１００位〜１７００位、ヌクレオチド１００位〜１６５０位、ヌクレオチド１００位〜１６００位、ヌクレオチド１００位〜１５５０位、ヌクレオチド１００位〜１５００位、ヌクレオチド１００位〜１４５０位、ヌクレオチド１００位〜１４００位、ヌクレオチド１００位〜１３５０位、ヌクレオチド１００位〜１３００位、ヌクレオチド１００位〜１２５０位、ヌクレオチド１００位〜１２００位、ヌクレオチド１００位〜１１５０位、ヌクレオチド１００位〜１１００位、ヌクレオチド１００位〜１０５０位、ヌクレオチド１００位〜１０００位、ヌクレオチド１００位〜９５０位、ヌクレオチド１００位〜９００位、ヌクレオチド１００位〜８５０位、ヌクレオチド１００位〜８００位、ヌクレオチド１００位〜７５０位、ヌクレオチド１００位〜７００位、ヌクレオチド１００位〜６５０位、ヌクレオチド１００位〜６００位、ヌクレオチド１００位〜５５０位、ヌクレオチド１００位〜５００位、ヌクレオチド１００位〜４５０位、ヌクレオチド１００位〜４００位、ヌクレオチド１００位〜３５０位、ヌクレオチド１００位〜３００位、ヌクレオチド１００位〜２５０位、ヌクレオチド１００位〜２００位、ヌクレオチド１００位〜１５０位、ヌクレオチド１５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１５０位〜１７００位、ヌクレオチド１５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１５０位〜１６００位、ヌクレオチド１５０位〜１５５０位、ヌクレオチド１５０位〜１５００位、ヌクレオチド１５０位〜１４５０位、ヌクレオチド１５０位〜１４００位、ヌクレオチド１５０位〜１３５０位、ヌクレオチド１５０位〜１３００位、ヌクレオチド１５０位〜１２５０位、ヌクレオチド１５０位〜１２００位、ヌクレオチド１５０位〜１１５０位、ヌクレオチド１５０位〜１１００位、ヌクレオチド１５０位〜１０５０位、ヌクレオチド１５０位〜１０００位、ヌクレオチド１５０位〜９５０位、ヌクレオチド１５０位〜９００位、ヌクレオチド１５０位〜８５０位、ヌクレオチド１５０位〜８００位、ヌクレオチド１５０位〜７５０位、ヌクレオチド１５０位〜７００位、ヌクレオチド１５０位〜６５０位、ヌクレオチド１５０位〜６００位、ヌクレオチド１５０位〜５５０位、ヌクレオチド１５０位〜５００位、ヌクレオチド１５０位〜４５０位、ヌクレオチド１５０位〜４００位、ヌクレオチド１５０位〜３５０位、ヌクレオチド１５０位〜３００位、ヌクレオチド１５０位〜２５０位、ヌクレオチド１５０位〜２００位、ヌクレオチド２００位〜１７７３位、ヌクレオチド２００位〜１７７０位、ヌクレオチド２００位〜１７５０位、ヌクレオチド２００位〜１７００位、ヌクレオチド２００位〜１６５０位、ヌクレオチド２００位〜１６００位、ヌクレオチド２００位〜１５５０位、ヌクレオチド２００位〜１５００位、ヌクレオチド２００位〜１４５０位、ヌクレオチド２００位〜１４００位、ヌクレオチド２００位〜１３５０位、ヌクレオチド２００位〜１３００位、ヌクレオチド２００位〜１２５０位、ヌクレオチド２００位〜１２００位、ヌクレオチド２００位〜１１５０位、ヌクレオチド２００位〜１１００位、ヌクレオチド２００位〜１０５０位、ヌクレオチド２００位〜１０００位、ヌクレオチド２００位〜９５０位、ヌクレオチド２００位〜９００位、ヌクレオチド２００位〜８５０位、ヌクレオチド２００位〜８００位、ヌクレオチド２００位〜７５０位、ヌクレオチド２００位〜７００位、ヌクレオチド２００位〜６５０位、ヌクレオチド２００位〜６００位、ヌクレオチド２００位〜５５０位、ヌクレオチド２００位〜５００位、ヌクレオチド２００位〜４５０位、ヌクレオチド２００位〜４００位、ヌクレオチド２００位〜３５０位、ヌクレオチド２００位〜３００位、ヌクレオチド２００位〜２５０位、ヌクレオチド２５０位〜１７７３位、ヌクレオチド２５０位〜１７７０位、ヌクレオチド２５０位〜１７５０位、ヌクレオチド２５０位〜１７００位、ヌクレオチド２５０位〜１６５０位、ヌクレオチド２５０位〜１６００位、ヌクレオチド２５０位〜１５５０位、ヌクレオチド２５０位〜１５００位、ヌクレオチド２５０位〜１４５０位、ヌクレオチド２５０位〜１４００位、ヌクレオチド２５０位〜１３５０位、ヌクレオチド２５０位〜１３００位、ヌクレオチド２５０位〜１２５０位、ヌクレオチド２５０位〜１２００位、ヌクレオチド２５０位〜１１５０位、ヌクレオチド２５０位〜１１００位、ヌクレオチド２５０位〜１０５０位、ヌクレオチド２５０位〜１０００位、ヌクレオチド２５０位〜９５０位、ヌクレオチド２５０位〜９００位、ヌクレオチド２５０位〜８５０位、ヌクレオチド２５０位〜８００位、ヌクレオチド２５０位〜７５０位、ヌクレオチド２５０位〜７００位、ヌクレオチド２５０位〜６５０位、ヌクレオチド２５０位〜６００位、ヌクレオチド２５０位〜５５０位、ヌクレオチド２５０位〜５００位、ヌクレオチド２５０位〜４５０位、ヌクレオチド２５０位〜４００位、ヌクレオチド２５０位〜３５０位、ヌクレオチド２５０位〜３００位、ヌクレオチド３００位〜１７７３位、ヌクレオチド３００位〜１７７０位、ヌクレオチド３００位〜１７５０位、ヌクレオチド３００位〜１７００位、ヌクレオチド３００位〜１６５０位、ヌクレオチド３００位〜１６００位、ヌクレオチド３００位〜１５５０位、ヌクレオチド３００位〜１５００位、ヌクレオチド３００位〜１４５０位、ヌクレオチド３００位〜１４００位、ヌクレオチド３００位〜１３５０位、ヌクレオチド３００位〜１３００位、ヌクレオチド３００位〜１２５０位、ヌクレオチド３００位〜１２００位、ヌクレオチド３００位〜１１５０位、ヌクレオチド３００位〜１１００位、ヌクレオチド３００位〜１０５０位、ヌクレオチド３００位〜１０００位、ヌクレオチド３００位〜９５０位、ヌクレオチド３００位〜９００位、ヌクレオチド３００位〜８５０位、ヌクレオチド３００位〜８００位、ヌクレオチド３００位〜７５０位、ヌクレオチド３００位〜７００位、ヌクレオチド３００位〜６５０位、ヌクレオチド３００位〜６００位、ヌクレオチド３００位〜５５０位、ヌクレオチド３００位〜５００位、ヌクレオチド３００位〜４５０位、ヌクレオチド３００位〜４００位、ヌクレオチド３００位〜３５０位、ヌクレオチド３５０位〜１７７３位、ヌクレオチド３５０位〜１７７０位、ヌクレオチド３５０位〜１７５０位、ヌクレオチド３５０位〜１７００位、ヌクレオチド３５０位〜１６５０位、ヌクレオチド３５０位〜１６００位、ヌクレオチド３５０位〜１５５０位、ヌクレオチド３５０位〜１５００位、ヌクレオチド３５０位〜１４５０位、ヌクレオチド３５０位〜１４００位、ヌクレオチド３５０位〜１３５０位、ヌクレオチド３５０位〜１３００位、ヌクレオチド３５０位〜１２５０位、ヌクレオチド３５０位〜１２００位、ヌクレオチド３５０位〜１１５０位、ヌクレオチド３５０位〜１１００位、ヌクレオチド３５０位〜１０５０位、ヌクレオチド３５０位〜１０００位、ヌクレオチド３５０位〜９５０位、ヌクレオチド３５０位〜９００位、ヌクレオチド３５０位〜８５０位、ヌクレオチド３５０位〜８００位、ヌクレオチド３５０位〜７５０位、ヌクレオチド３５０位〜７００位、ヌクレオチド３５０位〜６５０位、ヌクレオチド３５０位〜６００位、ヌクレオチド３５０位〜５５０位、ヌクレオチド３５０位〜５００位、ヌクレオチド３５０位〜４５０位、ヌクレオチド３５０位〜４００位、ヌクレオチド４００位〜１７７３位、ヌクレオチド４００位〜１７７０位、ヌクレオチド４００位〜１７５０位、ヌクレオチド４００位〜１７００位、ヌクレオチド４００位〜１６５０位、ヌクレオチド４００位〜１６００位、ヌクレオチド４００位〜１５５０位、ヌクレオチド４００位〜１５００位、ヌクレオチド４００位〜１４５０位、ヌクレオチド４００位〜１４００位、ヌクレオチド４００位〜１３５０位、ヌクレオ
チド４００位〜１３００位、ヌクレオチド４００位〜１２５０位、ヌクレオチド４００位〜１２００位、ヌクレオチド４００位〜１１５０位、ヌクレオチド４００位〜１１００位、ヌクレオチド４００位〜１０５０位、ヌクレオチド４００位〜１０００位、ヌクレオチド４００位〜９５０位、ヌクレオチド４００位〜９００位、ヌクレオチド４００位〜８５０位、ヌクレオチド４００位〜８００位、ヌクレオチド４００位〜７５０位、ヌクレオチド４００位〜７００位、ヌクレオチド４００位〜６５０位、ヌクレオチド４００位〜６００位、ヌクレオチド４００位〜５５０位、ヌクレオチド４００位〜５００位、ヌクレオチド４００位〜４５０位、ヌクレオチド４５０位〜１７７３位、ヌクレオチド４５０位〜１７７０位、ヌクレオチド４５０位〜１７５０位、ヌクレオチド４５０位〜１７００位、ヌクレオチド４５０位〜１６５０位、ヌクレオチド４５０位〜１６００位、ヌクレオチド４５０位〜１５５０位、ヌクレオチド４５０位〜１５００位、ヌクレオチド４５０位〜１４５０位、ヌクレオチド４５０位〜１４００位、ヌクレオチド４５０位〜１３５０位、ヌクレオチド４５０位〜１３００位、ヌクレオチド４５０位〜１２５０位、ヌクレオチド４５０位〜１２００位、ヌクレオチド４５０位〜１１５０位、ヌクレオチド４５０位〜１１００位、ヌクレオチド４５０位〜１０５０位、ヌクレオチド４５０位〜１０００位、ヌクレオチド４５０位〜９５０位、ヌクレオチド４５０位〜９００位、ヌクレオチド４５０位〜８５０位、ヌクレオチド４５０位〜８００位、ヌクレオチド４５０位〜７５０位、ヌクレオチド４５０位〜７００位、ヌクレオチド４５０位〜６５０位、ヌクレオチド４５０位〜６００位、ヌクレオチド４５０位〜５５０位、ヌクレオチド４５０位〜５００位、ヌクレオチド５００位〜１７７３位、ヌクレオチド５００位〜１７７０位、ヌクレオチド５００位〜１７５０位、ヌクレオチド５００位〜１７００位、ヌクレオチド５００位〜１６５０位、ヌクレオチド５００位〜１６００位、ヌクレオチド５００位〜１５５０位、ヌクレオチド５００位〜１５００位、ヌクレオチド５００位〜１４５０位、ヌクレオチド５００位〜１４００位、ヌクレオチド５００位〜１３５０位、ヌクレオチド５００位〜１３００位、ヌクレオチド５００位〜１２５０位、ヌクレオチド５００位〜１２００位、ヌクレオチド５００位〜１１５０位、ヌクレオチド５００位〜１１００位、ヌクレオチド５００位〜１０５０位、ヌクレオチド５００位〜１０００位、ヌクレオチド５００位〜９５０位、ヌクレオチド５００位〜９００位、ヌクレオチド５００位〜８５０位、ヌクレオチド５００位〜８００位、ヌクレオチド５００位〜７５０位、ヌクレオチド５００位〜７００位、ヌクレオチド５００位〜６５０位、ヌクレオチド５００位〜６００位、ヌクレオチド５００位〜５５０位、ヌクレオチド５５０位〜１７７３位、ヌクレオチド５５０位〜１７７０位、ヌクレオチド５５０位〜１７５０位、ヌクレオチド５５０位〜１７００位、ヌクレオチド５５０位〜１６５０位、ヌクレオチド５５０位〜１６００位、ヌクレオチド５５０位〜１５５０位、ヌクレオチド５５０位〜１５００位、ヌクレオチド５５０位〜１４５０位、ヌクレオチド５５０位〜１４００位、ヌクレオチド５５０位〜１３５０位、ヌクレオチド５５０位〜１３００位、ヌクレオチド５５０位〜１２５０位、ヌクレオチド５５０位〜１２００位、ヌクレオチド５５０位〜１１５０位、ヌクレオチド５５０位〜１１００位、ヌクレオチド５５０位〜１０５０位、ヌクレオチド５５０位〜１０００位、ヌクレオチド５５０位〜９５０位、ヌクレオチド５５０位〜９００位、ヌクレオチド５５０位〜８５０位、ヌクレオチド５５０位〜８００位、ヌクレオチド５５０位〜７５０位、ヌクレオチド５５０位〜７００位、ヌクレオチド５５０位〜６５０位、ヌクレオチド５５０位〜６００位、ヌクレオチド６００位〜１７７３位、ヌクレオチド６００位〜１７７０位、ヌクレオチド６００位〜１７５０位、ヌクレオチド６００位〜１７００位、ヌクレオチド６００位〜１６５０位、ヌクレオチド６００位〜１６００位、ヌクレオチド６００位〜１５５０位、ヌクレオチド６００位〜１５００位、ヌクレオチド６００位〜１４５０位、ヌクレオチド６００位〜１４００位、ヌクレオチド６００位〜１３５０位、ヌクレオチド６００位〜１３００位、ヌクレオチド６００位〜１２５０位、ヌクレオチド６００位〜１２００位、ヌクレオチド６００位〜１１５０位、ヌクレオチド６００位〜１１００位、ヌクレオチド６００位〜１０５０位、ヌクレオチド６００位〜１０００位、ヌクレオチド６００位〜９５０位、ヌクレオチド６００位〜９００位、ヌクレオチド６００位〜８５０位、ヌクレオチド６００位〜８００位、ヌクレオチド６００位〜７５０位、ヌクレオチド６００位〜７００位、ヌクレオチド６００位〜６５０位、ヌクレオチド６５０位〜１７７３位、ヌクレオチド６５０位〜１７７０位、ヌクレオチド６５０位〜１７５０位、ヌクレオチド６５０位〜１７００位、ヌクレオチド６５０位〜１６５０位、ヌクレオチド６５０位〜１６００位、ヌクレオチド６５０位〜１５５０位、ヌクレオチド６５０位〜１５００位、ヌクレオチド６５０位〜１４５０位、ヌクレオチド６５０位〜１４００位、ヌクレオチド６５０位〜１３５０位、ヌクレオチド６５０位〜１３００位、ヌクレオチド６５０位〜１２５０位、ヌクレオチド６５０位〜１２００位、ヌクレオチド６５０位〜１１５０位、ヌクレオチド６５０位〜１１００位、ヌクレオチド６５０位〜１０５０位、ヌクレオチド６５０位〜１０００位、ヌクレオチド６５０位〜９５０位、ヌクレオチド６５０位〜９００位、ヌクレオチド６５０位〜８５０位、ヌクレオチド６５０位〜８００位、ヌクレオチド６５０位〜７５０位、ヌクレオチド６５０位〜７００位、ヌクレオチド７００位〜１７７３位、ヌクレオチド７００位〜１７７０位、ヌクレオチド７００位〜１７５０位、ヌクレオチド７００位〜１７００位、ヌクレオチド７００位〜１６５０位、ヌクレオチド７００位〜１６００位、ヌクレオチド７００位〜１５５０位、ヌクレオチド７００位〜１５００位、ヌクレオチド７００位〜１４５０位、ヌクレオチド７００位〜１４００位、ヌクレオチド７００位〜１３５０位、ヌクレオチド７００位〜１３００位、ヌクレオチド７００位〜１２５０位、ヌクレオチド７００位〜１２００位、ヌクレオチド７００位〜１１５０位、ヌクレオチド７００位〜１１００位、ヌクレオチド７００位〜１０５０位、ヌクレオチド７００位〜１０００位、ヌクレオチド７００位〜９５０位、ヌクレオチド７００位〜９００位、ヌクレオチド７００位〜８５０位、ヌクレオチド７００位〜８００位、ヌクレオチド７００位〜７５０位、ヌクレオチド７５０位〜１７７３位、ヌクレオチド７５０位〜１７７０位、ヌクレオチド７５０位〜１７５０位、ヌクレオチド７５０位〜１７００位、ヌクレオチド７５０位〜１６５０位、ヌクレオチド７５０位〜１６００位、ヌクレオチド７５０位〜１５５０位、ヌクレオチド７５０位〜１５００位、ヌクレオチド７５０位〜１４５０位、ヌクレオチド７５０位〜１４００位、ヌクレオチド７５０位〜１３５０位、ヌクレオチド７５０位〜１３００位、ヌクレオチド７５０位〜１２５０位、ヌクレオチド７５０位〜１２００位、ヌクレオチド７５０位〜１１５０位、ヌクレオチド７５０位〜１１００位、ヌクレオチド７５０位〜１０５０位、ヌクレオチド７５０位〜１０００位、ヌクレオチド７５０位〜９５０位、ヌクレオチド７５０位〜９００位、ヌクレオチド７５０位〜８５０位、ヌクレオチド７５０位〜８００位、ヌクレオチド８００位〜１７７３位、ヌクレオチド８００位〜１７７０位、ヌクレオチド８００位〜１７５０位、ヌクレオチド８００位〜１７００位、ヌクレオチド８００位〜１６５０位、ヌクレオチド８００位〜１６００位、ヌクレオチド８００位〜１５５０位、ヌクレオチド８００位〜１５００位、ヌクレオチド８００位〜１４５０位、ヌクレオチド８００位〜１４００位、ヌクレオチド８００位〜１３５０位、ヌクレオチド８００位〜１３００位、ヌクレオチド８００位〜１２５０位、ヌクレオチド８００位〜１２００位、ヌクレオチド８００位〜１１５０位、ヌクレオチド８００位〜１１００位、ヌクレオチド８００位〜１０５０位、ヌクレオチド８００位〜１０００位、ヌクレオチド８００位〜９５０位、ヌクレオチド８００位〜９００位、ヌクレオチド８００位〜８５０位、ヌクレオチド８５０位〜１７７３位、ヌクレオチド８５０位〜１７７０位、ヌクレオチド８５０位〜１７５０位、ヌクレオチド８５０位〜１７００位、ヌクレオチド８５０位〜１６５０位、ヌクレオチド８５０位〜１６００位、ヌクレオチド８５０位〜１５５０位、ヌクレオチド８５０位〜１５００位、ヌクレオチド８５０位〜１４５０位、ヌクレオチド８５０位〜１４００位、ヌクレオチド８５０位〜１３５０位、ヌクレオチド８５０位〜１３００位、ヌクレオチド８５０位〜１２５０位、ヌクレオチド８５０位〜１２００位、ヌクレオチド８５０位〜１１５０位、ヌクレオチド８５０位〜１１００位、ヌクレオチド８５０位〜１０５０位、ヌクレオチド８５０位〜１０００位、ヌクレオチド８５０位〜９５０位、ヌクレオチド８５０位〜９００位、ヌクレオチド９００位〜１７７３位、ヌクレオチド９００位〜１７７０位、ヌクレオチド９００位〜１７５０位、ヌクレオチド９００位〜１７００位、ヌクレオチド９００位〜１６５０位、ヌクレオチド９００位〜１６００位、ヌクレオチド９００位〜１５５０位、ヌクレオチド９００位〜１５００位、ヌクレオチド９００位〜１４５０位、ヌクレオチド９００位〜１４００位、ヌクレオチド９００位〜１３５０位、ヌクレオチド９００位〜１３００位、ヌクレオチド９００位〜１２５０位、ヌクレオチド９００位〜１２００位、ヌクレオチド９００位〜１１５０位、ヌクレオチド９００位〜１１００位、ヌクレオチド９００位〜１０５０位、ヌクレオチド９００位〜１０００位、ヌクレオチド９００位〜９５０位、ヌクレオチド９５０位〜１７７３位、ヌクレオチド９５０位〜１７７０位、ヌクレオチド９５０位〜１７５０位、ヌクレオチド９５０位〜１７００位、ヌクレオチド９５０位〜１６５０位、ヌクレオチド９５０位〜１６００位、ヌクレオチド９５０位〜１５５０位、ヌクレオチド９５０位〜１５００位、ヌクレオチド９５０位〜１４５０位、ヌクレオチド９５０位〜１４００位、ヌクレオチド９５０位〜１３５０位、ヌクレオチド９５０位〜１３００位、ヌクレオチド９５０位〜１２５０位、ヌクレオチド９５０位〜１２００位、ヌクレオチド９５０位〜１１５０位、ヌクレオチド９５０位〜１１００位、ヌクレオチド９５０位〜１０５０位、ヌクレオチド９５０位〜１０００位、ヌクレオチド１０００位〜１７７３位、ヌクレオチド１０００位〜１７７０位、ヌクレオチド１０００位〜１７５０位、ヌクレオチド１０００位〜１７００位、ヌクレオチド１０００位〜１６５０位、ヌクレオチド１０００位〜１６００位、ヌクレオチド１０００位〜１５５０位、ヌクレオチド１０００位〜１５００位、ヌクレオチド１０００位〜１４５０位、ヌクレオチド１０００位〜１４００位、ヌクレオチド１０００位〜１３５０位、ヌクレオチド１０００位〜１３００位、ヌクレオチド１０００位〜１２５０位、ヌクレオチド１０００位〜１２００位、ヌクレオチド１０００位〜１１５０位、ヌクレオチド１０００位〜１１００位、ヌクレオチド１０００位〜１０５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１０５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１０５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１７００位、ヌクレオチド１０５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１６００位、ヌクレオチド１０５０位〜１５５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１５００位、ヌクレオチド１０５０位〜１４５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１４００位、ヌクレオチド１０５０位〜１３５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１３００位、ヌクレオチド１０５０位〜１２５０位、ヌクレオチド１０５０位〜１２００位、ヌクレオチド１０５０位〜１１５０位、ヌクレオチド１０
５０位〜１１００位、ヌクレオチド１１００位〜１７７３位、ヌクレオチド１１００位〜１７７０位、ヌクレオチド１１００位〜１７５０位、ヌクレオチド１１００位〜１７００位、ヌクレオチド１１００位〜１６５０位、ヌクレオチド１１００位〜１６００位、ヌクレオチド１１００位〜１５５０位、ヌクレオチド１１００位〜１５００位、ヌクレオチド１１００位〜１４５０位、ヌクレオチド１１００位〜１４００位、ヌクレオチド１１００位〜１３５０位、ヌクレオチド１１００位〜１３００位、ヌクレオチド１１００位〜１２５０位、ヌクレオチド１１００位〜１２００位、ヌクレオチド１１００位〜１１５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１１５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１１５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１７００位、ヌクレオチド１１５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１６００位、ヌクレオチド１１５０位〜１５５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１５００位、ヌクレオチド１１５０位〜１４５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１４００位、ヌクレオチド１１５０位〜１３５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１３００位、ヌクレオチド１１５０位〜１２５０位、ヌクレオチド１１５０位〜１２００位、ヌクレオチド１２００位〜１７７３位、ヌクレオチド１２００位〜１７７０位、ヌクレオチド１２００位〜１７５０位、ヌクレオチド１２００位〜１７００位、ヌクレオチド１２００位〜１６５０位、ヌクレオチド１２００位〜１６００位、ヌクレオチド１２００位〜１５５０位、ヌクレオチド１２００位〜１５００位、ヌクレオチド１２００位〜１４５０位、ヌクレオチド１２００位〜１４００位、ヌクレオチド１２００位〜１３５０位、ヌクレオチド１２００位〜１３００位、ヌクレオチド１２００位〜１２５０位、ヌクレオチド１２５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１２５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１２５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１２５０位〜１７００位、ヌクレオチド１２５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１２５０位〜１６００位、ヌクレオチド１２５０位〜１５５０位、ヌクレオチド１２５０位〜１５００位、ヌクレオチド１２５０位〜１４５０位、ヌクレオチド１２５０位〜１４００位、ヌクレオチド１２５０位〜１３５０位、ヌクレオチド１２５０位〜１３００位、ヌクレオチド１３００位〜１７７３位、ヌクレオチド１３００位〜１７７０位、ヌクレオチド１３００位〜１７５０位、ヌクレオチド１３００位〜１７００位、ヌクレオチド１３００位〜１６５０位、ヌクレオチド１３００位〜１６００位、ヌクレオチド１３００位〜１５５０位、ヌクレオチド１３００位〜１５００位、ヌクレオチド１３００位〜１４５０位、ヌクレオチド１３００位〜１４００位、ヌクレオチド１３００位〜１３５０位、ヌクレオチド１３５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１３５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１３５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１３５０位〜１７００位、ヌクレオチド１３５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１３５０位〜１６００位、ヌクレオチド１３５０位〜１５５０位、ヌクレオチド１３５０位〜１５００位、ヌクレオチド１３５０位〜１４５０位、ヌクレオチド１３５０位〜１４００位、ヌクレオチド１４００位〜１７７３位、ヌクレオチド１４００位〜１７７０位、ヌクレオチド１４００位〜１７５０位、ヌクレオチド１４００位〜１７００位、ヌクレオチド１４００位〜１６５０位、ヌクレオチド１４００位〜１６００位、ヌクレオチド１４００位〜１５５０位、ヌクレオチド１４００位〜１５００位、ヌクレオチド１４００位〜１４５０位、ヌクレオチド１４５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１４５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１４５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１４５０位〜１７００位、ヌクレオチド１４５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１４５０位〜１６００位、ヌクレオチド１４５０位〜１５５０位、ヌクレオチド１４５０位〜１５００位、ヌクレオチド１５００位〜１７７３位、ヌクレオチド１５００位〜１７７０位、ヌクレオチド１５００位〜１７５０位、ヌクレオチド１５００位〜１７００位、ヌクレオチド１５００位〜１６５０位、ヌクレオチド１５００位〜１６００位、ヌクレオチド１５００位〜１５５０位、ヌクレオチド１５５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１５５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１５５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１５５０位〜１７００位、ヌクレオチド１５５０位〜１６５０位、ヌクレオチド１５５０位〜１６００位、ヌクレオチド１６００位〜１７７３位、ヌクレオチド１６００位〜１７７０位、ヌクレオチド１６００位〜１７５０位、ヌクレオチド１６００位〜１７００位、ヌクレオチド１６００位〜１６５０位、ヌクレオチド１６５０位〜１７７３位、ヌクレオチド１６５０位〜１７７０位、ヌクレオチド１６５０位〜１７５０位、ヌクレオチド１６５０位〜１７００位、ヌクレオチド１７００位〜１７７３位、ヌクレオチド１７００位〜１７７０位、ヌクレオチド１７００位〜１７５０位、ヌクレオチド１７５０位〜１７７３位、またはヌクレオチド１７５０位〜１７７０位のうちの１つまたは複数を含み得るか、またはそれからなり得る。
【０１７２】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、配列番号１４または１５と少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列を含む。
【０１７３】
ＣＬＲＮ１のヒト５’ＵＴＲ（配列番号１２）
【化１２】
2021529519.tif 000034
【０１７４】
ＣＬＲＮ１のヒト５’ＵＴＲ（配列番号１３）
【化１３】
2021529519.tif 000035
【０１７５】
ＣＬＲＮ１のヒト３’ＵＴＲ（配列番号１４）
【化１４】
2021529519.tif 000036
【０１７６】
ＣＬＲＮ１のヒト３’ＵＴＲ（配列番号１５）
【化１５】
2021529519.tif 000037
【０１７７】
一部の実施形態では、３’ＵＴＲ  ＡＲＥの導入、除去、または修飾を用いて、ＣＬＲＮ１タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性を調節することができる。他の実施形態では、ＡＲＥを除去するか、または変異させて、ＣＬＲＮ１タンパク質の細胞内安定性を増加させ、ひいてはその翻訳及び生産を増加させることができる。
【０１７８】
他の実施形態では、非ＡＲＥ配列が５’または３’ＵＴＲに組み込まれてもよい。一部の実施形態では、イントロンまたはイントロン配列の一部分が、本明細書に提供されるベクター、組成物、キット、及び方法のうちのいずれかにおいて、該ポリヌクレオチドの隣接領域に組み込まれてもよい。イントロン配列の組み込みは、ｍＲＮＡレベルと同様に、タンパク質生産を増加させ得る。
【０１７９】
本明細書に記載されるベクターのうちのいずれかの一部の実施形態では、ベクターは、キメライントロン配列（配列番号１６）を含む。
【０１８０】
哺乳類細胞
本明細書ではまた、本明細書に記載される核酸、ベクター（例えば、本明細書に記載される少なくとも２つの異なるベクター）、または組成物のうちのいずれかを含む細胞（例えば、哺乳類細胞）も提供される。当業者であれば、本明細書に記載される核酸及びベクターが任意の哺乳類細胞に導入され得ることを理解しよう。ベクター及びベクターを哺乳類細胞に導入するための方法の非限定的な例が本明細書に記載される。
【０１８１】
一部の実施形態では、細胞は、ヒト細胞、マウス細胞、ブタ細胞、ウサギ細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ラット細胞、または非ヒト霊長類細胞である。一部の実施形態では、細胞は、蝸牛の特殊化した細胞である。一部の実施形態では、細胞は、蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞等の蝸牛有毛細胞である。一部の実施形態では、細胞は、眼細胞（例えば、網膜細胞、網膜神経節細胞、無軸索細胞、水平（ｈｏｒｔｉｚｏｎｔａｌ）細胞、双極細胞、光受容細胞）である。
【０１８２】
一部の実施形態では、哺乳類細胞は、インビトロにある。一部の実施形態では、哺乳類細胞は、哺乳動物中に存在する。一部の実施形態では、哺乳類細胞は、対象から得られ、かつエクスビボで培養された自家細胞である。
【０１８３】
方法
本明細書ではまた、哺乳動物（例えば、ヒト）の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを導入することを含む方法も提供される。
【０１８４】
本明細書ではまた、哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該哺乳類細胞に導入することを含む。
【０１８５】
本明細書ではまた、哺乳動物（例えば、ヒト）の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、該哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを導入することを含む。
【０１８６】
本明細書ではまた、哺乳動物（例えば、ヒト）の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、該哺乳動物の眼に、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを眼内投与することを含む。
【０１８７】
本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該対象の蝸牛に投与することを含む。
【０１８８】
本明細書ではまた、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法も提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該対象の眼に投与することを含む。
【０１８９】
これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該哺乳動物は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、ＣＬＲＮ１遺伝子によってコードされるＣＬＲＮ１タンパク質の発現及び／または活性の減少をもたらす変異を有するＣＬＲＮ１遺伝子）を有すると以前に特定されている。これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、導入または投与ステップの前に、該対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む。これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、対象においてＣＬＲＮ１遺伝子における変異を検出することをさらに含み得る。該方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、対象が聴力喪失及び／または視力喪失を有すると特定するか、または診断することをさらに含み得る。
【０１９０】
これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの２回以上の用量が、哺乳動物または対象の蝸牛に導入または投与される。これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、該組成物の第１の用量を哺乳動物または対象の蝸牛に導入または投与することと、第１の用量の導入または投与に続いて哺乳動物または対象の聴力機能を評価することと、該組成物の追加の用量を、（例えば、当該技術分野で既知の任意の聴力検査を用いて判定したときに）正常な範囲の聴力機能を有しないことが見出された哺乳動物または対象の蝸牛に投与することとを含み得る。
【０１９１】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該組成物は、蝸牛内投与用に製剤化することができる。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、蝸牛内投与または局所投与を介して投与することができる。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該組成物は、医療デバイス（例えば、本明細書に記載される例示的な医療デバイスのうちのいずれか）の使用により投与される。
【０１９２】
一部の実施形態では、蝸牛内投与は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを用いて実施することができる。例えば、組成物は、以下の外科的技法を用いて、蝸牛に投与または導入することができる。まず、０度、２．５ｍｍ硬性内視鏡での可視化を用いて、外耳道をきれいにし、ラウンドナイフを用いておよそ５ｍｍの外耳道鼓膜弁の輪郭を鋭く線引きする。次いで、外耳道鼓膜弁を挙上し、後方から中耳に進入する。鼓索神経を特定して分割し、キュレットを用いて、上鼓室側壁の（ｓｃｕｔａｌ）骨を除去して、正円窓膜を露出させる。投与または導入された組成物の頂部への分布を強化するために、手術用レーザを用いて、卵円窓に小さな２ｍｍの開窓を作製して、組成物の経正円窓膜注入の際に外リンパ置換を可能にしてもよい。次いで、微量注入デバイスをプライミングし、術野に至らしめる。デバイスを正円窓へと操縦し、先端を正円窓の骨質突出部内に設置して、マイクロニードル（複数可）による膜の穿通を可能にする。フットペダルを連動させて、組成物を測定された一定量で注入できるようにする。次いで、デバイスを後退させ、正円窓及びアブミ骨底をゼルフォームパッチで封止する。
【０１９３】
これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの２回以上の用量が、哺乳動物または対象の眼に導入または投与される。これらの方法のうちのいずれかの一部の実施形態は、該組成物の第１の用量を哺乳動物または対象の眼（例えば、眼内空間）に導入または投与することと、第１の用量の導入または投与に続いて哺乳動物または対象の聴力機能を評価することと、該組成物の追加の用量を、（例えば、当該技術分野で既知の任意の視力検査を用いて判定したときに）正常な範囲の視力機能を有しないことが見出された哺乳動物または対象の眼に投与することとを含み得る。
【０１９４】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該組成物は、眼内投与用に製剤化することができる。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、眼内投与または局所投与を介して投与することができる。
【０１９５】
一部の実施形態では、眼内投与は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを用いて実施することができる。
【０１９６】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物は、齧歯類、非ヒト霊長類、またはヒトである。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物は、成体、ティーンエイジャー、若齢個体、幼齢個体、幼児期個体、乳児期個体、または新生児期個体である。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物の年齢は、１〜５、１〜１０、１〜２０、１〜３０、１〜４０、１〜５０、１〜６０、１〜７０、１〜８０、１〜９０、１〜１００、１〜１１０、２〜５、２〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１１０、１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、１０〜６０、１０〜７０、１０〜８０、１０〜９０、１０〜１００、１０〜１１０、２０〜４０、２０〜５０、２０〜６０、２０〜７０、２０〜８０、２０〜９０、２０〜１００、２０〜１１０、３０〜５０、３０〜６０、３０〜７０、３０〜８０、３０〜９０、３０〜１００、４０〜６０、４０〜７０、４０〜８０、４０〜９０、４０〜１００、５０〜７０、５０〜８０、５０〜９０、５０〜１００、６０〜８０、６０〜９０、６０〜１００、７０〜９０、７０〜１００、７０〜１１０、８０〜１００、８０〜１１０、または９０〜１１０歳である。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物の月齢は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月である。
【０１９７】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物は、聴力喪失及び／または視力喪失（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型、網膜色素変性症）を有するか、またはそれらを発症するリスクがある。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物は、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異を有すると以前に特定されている。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物は、本明細書に記載されるか、または聴力喪失及び／または視力喪失に関連することが当該技術分野で知られている、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異のうちのいずれかを有する。
【０１９８】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象または哺乳動物は、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異の保因者であると特定されている（例えば、遺伝子検査を介して）。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象またはヒトは、ＣＬＲＮ１遺伝子における変異を有すると特定されており、かつ聴力喪失及び／または視力喪失（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型、網膜色素変性症）と診断されている。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、対象またはヒトは、聴力喪失及び／または視力喪失（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型、網膜色素変性症）を有すると特定されている。
【０１９９】
一部の実施形態では、聴力喪失（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型）の治療成功は、当該技術分野で既知の従来の機能的聴力検査のうちのいずれかを用いて対象において判定することができる。機能的聴力検査の非限定的な例は、種々の種類の聴力測定アッセイ（例えば、純音検査、語音検査、中耳の検査、聴性脳幹反応、及び耳音響放射）である。
【０２００】
一部の実施形態では、視力喪失の治療成功は、当該技術分野で既知の従来の機能的視力検査のうちのいずれかを用いて対象において判定することができる。機能的網膜及び視力検査（ｖｉｓｉｏｎ  ｔｅｓｔ）の非限定的な例は、視力検査（ａｃｕｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ）、眼内圧（ＩＯＰ）検査、及び網膜電図（ＥＲＧ）である。
【０２０１】
本明細書ではまた、哺乳類細胞において活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）の発現を増加させる方法も提供され、該方法は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを該哺乳類細胞に導入することを含む。これらの方法の一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、蝸牛有毛細胞（例えば、内有毛細胞、外有毛細胞）または眼細胞（例えば、網膜細胞）である。これらの方法の一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、ヒト細胞（例えば、ヒト蝸牛有毛細胞）である。これらの方法の一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、インビトロにある。これらの方法の一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、哺乳動物中にある。これらの方法の一部の実施形態では、該哺乳類細胞は、哺乳動物から元々得られ、エクスビボで培養されるものである。一部の実施形態では、哺乳類細胞は、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている。
【０２０２】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを哺乳類細胞に導入するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、リポフェクションを介して、またはウイルスベクター、例えば、本明細書に記載されるウイルスベクターのうちのいずれかの使用により）。
【０２０３】
本明細書に記載されるような活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）の発現の増加は、例えば、対照と比較して、またはベクター（複数可）の導入前の活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）の発現レベルと比較してのものである。
【０２０４】
ＣＬＲＮ１の発現及び／または活性を検出する方法は、当該技術分野で既知である。一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質の発現レベルは、直接検出することができる（例えば、ＣＬＲＮ１タンパク質の検出、またはＣＬＲＮ１  ｍＲＮＡの検出）。ＣＬＲＮ１の発現及び／または活性を直接検出するために使用され得る技法の非限定的な例としては、リアルタイムＰＣＲ、ウェスタンブロット法、免疫沈降法、免疫組織化学法、または免疫蛍光法が挙げられる。一部の実施形態では、ＣＬＲＮ１タンパク質の発現は、間接的に検出することができる（例えば、機能的聴力検査、機能的網膜及び視力検査により）。
【０２０５】
薬学的組成物及びキット
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかは、本明細書に記載される核酸、またはベクターのうちのいずれかの哺乳類細胞中への進入を促進する１つまたは複数の薬剤（例えば、リポソームまたはカチオン性脂質）をさらに含み得る。
【０２０６】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるベクターのうちのいずれかは、天然及び／または合成ポリマーを用いて製剤化することができる。本明細書に記載される組成物のうちのいずれかに含まれ得るポリマーの非限定的な例としては、ＤＹＮＡＭＩＣ  ＰＯＬＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥ（登録商標）（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）、Ｍｉｒｕｓ  Ｂｉｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）及びＲｏｃｈｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）による製剤、限定されないが、ＳＭＡＲＴＴ  ＰＯＬＹＭＥＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）（ＰｈａｓｅＲＸ、Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）等のＰｈａｓｅＲＸポリマー製剤、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、Ｖｉｃａｌ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）によるＶＡＸＦＥＣＴＩＮ（登録商標）アジュバント、キトサン、Ｃａｌａｎｄｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）によるシクロデキストリン、デンドリマー及びポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）ポリマー、ＲＯＮＤＥＬ（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）、ならびに、限定されないが、ＰｈａｓｅＲＸ（Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）により生産されるブロック共重合体等のｐＨ反応性ブロック共重合体が挙げられ得るが、これらに限定されない。これらのポリマーのうちの多くは、哺乳類細胞へのインビボでのオリゴヌクレオチドの送達において有効性を実証した（例えば、ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９：１２５−１３２，２００８、Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：１２９８２−１２８８７，２００７、Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：１２９８２−１２８８７，２００７、Ｈｕ−Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：８９８４−８９８２，２００５、Ｈｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：５７１５−５７２１，２００７を参照されたい）。
【０２０７】
本明細書に記載される組成物のうちのいずれかは、例えば、薬学的組成物であり得る。薬学的組成物は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかと、１つまたは複数の薬学的にまたは生理的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含み得る。かかる組成物は、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水等の１つもしくは複数の緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース、及びデキストラン等の１つもしくは複数の炭水化物；マンニトール；１つもしくは複数のタンパク質、ポリペプチド、もしくはグリシン等のアミノ酸；１つもしくは複数の酸化防止剤；ＥＤＴＡもしくはグルタチオン等の１つもしくは複数のキレート剤；及び／または１つもしくは複数の防腐剤を含んでもよい。
【０２０８】
一部の実施形態では、該組成物は、薬学的に許容される担体（例えば、リン酸緩衝食塩水、食塩水、または静菌水）を含む。製剤化されると、溶液は、剤形に適合する様態で、かつ治療上有効であるような量で投与される。製剤は、注射液、注射用ゲル、薬物放出カプセル等の様々な剤形で容易に投与される。
【０２０９】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬剤投与に適合する溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤等を含む。補助的な活性化合物もまた、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかに組み込むことができる。
【０２１０】
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかの単回用量は、少なくとも１ｎｇ、少なくとも２ｎｇ、少なくとも４ｎｇ、約６ｎｇ、約８ｎｇ、少なくとも１０ｎｇ、少なくとも２０ｎｇ、少なくとも３０ｎｇ、少なくとも４０ｎｇ、少なくとも５０ｎｇ、少なくとも６０ｎｇ、少なくとも７０ｎｇ、少なくとも８０ｎｇ、少なくとも９０ｎｇ、少なくとも１００ｎｇ、少なくとも２００ｎｇ、少なくとも３００ｎｇ、少なくとも４００ｎｇ、少なくとも５００ｎｇ、少なくとも１μｇ、少なくとも２μｇ、少なくとも４μｇ、少なくとも６μｇ、少なくとも８μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも１２μｇ、少なくとも１４μｇ、少なくとも１６μｇ、少なくとも１８μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２２μｇ、少なくとも２４μｇ、少なくとも２６μｇ、少なくとも２８μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３２μｇ、少なくとも３４μｇ、少なくとも３６μｇ、少なくとも３８μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４２μｇ、少なくとも４４μｇ、少なくとも４６μｇ、少なくとも４８μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５２μｇ、少なくとも５４μｇ、少なくとも５６μｇ、少なくとも５８μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６２μｇ、少なくとも６４μｇ、少なくとも６６μｇ、少なくとも６８μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７２μｇ、少なくとも７４μｇ、少なくとも７６μｇ、少なくとも７８μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８２μｇ、少なくとも８４μｇ、少なくとも８６μｇ、少なくとも８８μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９２μｇ、少なくとも９４μｇ、少なくとも９６μｇ、少なくとも９８μｇ、少なくとも１００μｇ、少なくとも１０２μｇ、少なくとも１０４μｇ、少なくとも１０６μｇ、少なくとも１０８μｇ、少なくとも１１０μｇ、少なくとも１１２μｇ、少なくとも１１４μｇ、少なくとも１１６μｇ、少なくとも１１８μｇ、少なくとも１２０μｇ、少なくとも１２２μｇ、少なくとも１２４μｇ、少なくとも１２６μｇ、少なくとも１２８μｇ、少なくとも１３０μｇ、少なくとも１３２μｇ、少なくとも１３４μｇ、少なくとも１３６μｇ、少なくとも１３８μｇ、少なくとも１４０μｇ、少なくとも１４２μｇ、少なくとも１４４μｇ、少なくとも１４６μｇ、少なくとも１４８μｇ、少なくとも１５０μｇ、少なくとも１５２μｇ、少なくとも１５４μｇ、少なくとも１５６μｇ、少なくとも１５８μｇ、少なくとも１６０μｇ、少なくとも１６２μｇ、少なくとも１６４μｇ、少なくとも１６６μｇ、少なくとも１６８μｇ、少なくとも１７０μｇ、少なくとも１７２μｇ、少なくとも１７４μｇ、少なくとも１７６μｇ、少なくとも１７８μｇ、少なくとも１８０μｇ、少なくとも１８２μｇ、少なくとも１８４μｇ、少なくとも１８６μｇ、少なくとも１８８μｇ、少なくとも１９０μｇ、少なくとも１９２μｇ、少なくとも１９４μｇ、少なくとも１９６μｇ、少なくとも１９８μｇ、または少なくとも２００μｇの少なくとも２つの異なるベクターの総和量を、例えば緩衝液中に含み得る。
【０２１１】
本明細書に提供される組成物は、例えば、それらの意図される投与経路に適合するように製剤化することができる。意図される投与経路の非限定的な例は、局所投与（例えば、蝸牛内投与）である。
【０２１２】
一部の実施形態では、治療用組成物は、脂質ナノ粒子を含むように製剤化される。一部の実施形態では、治療用組成物は、ポリマーナノ粒子を含むように製剤化される。一部の実施形態では、治療用組成物は、小環状ＤＮＡを含むように製剤化される。一部の実施形態では、治療用組成物は、ＣＥＬｉＤ  ＤＮＡを含むように製剤化される。一部の実施形態では、治療用組成物は、合成外リンパ液を含むように製剤化される。例示的な合成外リンパ液は、２０〜２００ｍＭのＮａＣｌ、１〜５ｍＭのＫＣｌ、０．１〜１０ｍＭのＣａＣｌ２、１〜１０ｍＭのグルコース、２〜５０ｍＭのＨＥＰＥＳを含み、約６〜約９のｐＨを有する。
【０２１３】
また、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを含むキットも提供される。一部の実施形態では、キットは、固体組成物（例えば、本明細書に記載される少なくとも２つの異なるベクターを含む凍結乾燥組成物）と、凍結乾燥組成物を可溶化させるための液体とを含み得る。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを含む充填済みシリンジを含み得る。
【０２１４】
一部の実施形態では、キットは、（例えば、水性組成物、例えば、水性薬学的組成物として製剤化された）本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを含むバイアルを含む。
【０２１５】
一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法のうちのいずれかを実施するための説明書を含み得る。
【０２１６】
デバイス及び手術方法
本明細書では、聴力喪失及び／または視力喪失（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型、網膜色素変性症）を治療するための治療的送達系が提供される。一態様では、治療的送達系は、ｉ）それを必要とするヒト対象の内耳の正円窓膜に１つまたは複数の切開を作出することができる医療デバイスと、ｉｉ）有効用量の組成物（例えば、本明細書に記載される組成物のうちのいずれか）とを含む。一部の実施形態では、医療デバイスは、複数のマイクロニードルを含む。
【０２１７】
本明細書ではまた、聴力喪失（例えば、アッシャー症候群ＩＩＩ型）の治療のための手術方法も提供される。一部の実施形態では、該方法は、ヒト対象の蝸牛に第１の切開点にて第１の切開点を導入するステップと、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを蝸牛内投与するステップとを含む。一部の実施形態では、該組成物は、第１の切開点にて対象に投与される。一部の実施形態では、該組成物は、第１の切開の中へとまたはそれを通して対象に投与される。
【０２１８】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかは、蝸牛の卵円窓膜の中へとまたはそれを通して対象に投与される。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかは、蝸牛の正円窓膜の中へとまたはそれを通して対象に投与される。本明細書に記載される方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、該組成物は、正円窓膜に複数の切開を作出することができる医療デバイスを用いて投与される。一部の実施形態では、医療デバイスは、複数のマイクロニードルを含む。一部の実施形態では、医療デバイスは、略円形の第１の面を含む複数のマイクロニードルを含み、各マイクロニードルが少なくとも約１０ミクロンの直径を有する。一部の実施形態では、医療デバイスは、該組成物を保有することが可能な基部及び／またはリザーバを含む。一部の実施形態では、医療デバイスは、該組成物を移送することが可能な内腔を個々に含む、複数の中空マイクロニードルを含む。一部の実施形態では、医療デバイスは、少なくとも部分真空を生成するための手段を含む。
【０２１９】
本明細書ではまた、視力喪失（例えば、網膜色素変性症）の治療のための手術方法も提供される。一部の実施形態では、該方法は、治療上有効量の本明細書に提供される組成物のうちのいずれかを眼内投与するステップを含む。
【０２２０】
本発明は、以下の実施例を参照することによりさらに詳述される。これらの実施例は、例示説明の目的で提供されるにすぎず、別途明記されない限り、限定することを意図するものではない。故に、本発明は、決して以下の実施例に限定されるものとして解釈されるべきでなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明白となる、ありとあらゆる変形形態を包含するように解釈されるできである。
【０２２１】
さらなる説明を伴わずに、当業者は、前述の説明及び以下の例示説明となる実施例を用いて、本発明の化合物を作製及び利用するとともに、特許請求される方法を実施することができると考えられる。以下の実施例は、本発明の種々の態様を具体的に指示するものであり、決して本開示の残りの部分を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２２２】
実施例１：ウイルスベクターの構築
組換えＡＡＶを、Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（５）：３９９４−４００３，１９９９により使用されるようなアデノウイルス不含法（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｆｒｅｅ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いたトランスフェクションにより生成する。ＡＡＶ  ＩＴＲを有するシスプラスミド、ＡＡＶ  Ｒｅｐ及びＣａｐ遺伝子を有するトランスプラスミド、ならびにアデノウイルスゲノムからの必須領域を有するヘルパープラスミドを、２９３細胞に１：１：２の比でコトランスフェクトする。ここで使用するＡＡＶベクターは、下記に記載される構築物を用いる複数のデュアルベクター戦略下で、ヒトＣＬＲＮ１またはマウスＣＬＲＮ１を発現する。Ｐｒｙａｄｋｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌ．２：１５００９，２０１５により要約されるように、ＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、ｒｈ８、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、及びＡｎｃ８０を各々、３組のＣＬＲＮ１構築物を封入するように調製して、（ｉ）コンカテマー化−トランススプライシング戦略、（ｉｉ）ハイブリッドイントロン−相同組換え−トランススプライシング戦略、及び（ｉｉｉ）エクソン相同組換え戦略を試験する。
【０２２３】
実施例２：ウイルス粒子の生成及び精製
組換えＡＡＶ−１を、Ｐｒｙａｄｋｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：１５００９，２０１５により記載されるように、トリプルトランスフェクションプロトコルを用いて生産し、２回の連続塩化セシウム（ＣｓＣｌ）密度勾配によって精製する。２回目の遠心分離の終わりに、ＣｓＣｌ密度勾配管から１１個の５００μｌ画分を回収し、１×ＰＢＳ中での透析により精製する。画分をドットブロットによって分析して、ｒＡＡＶゲノムを含有する画分を決定する。各調製物のウイルスゲノム数（ｖｇ）を、ＡＡＶベクターゲノムのＩＴＲ領域に対応するプライマー及びプローブを用いて、定量的リアルタイムＰＣＲベースの力価測定法によって決定する（Ｂａｒｔｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．１３：２０−２８，２００６）。
【０２２４】
実施例３：ウイルス粒子の製剤化
１ｅ１４ｖｇ／ｍＬの力価で生産されたＡＡＶを人工外リンパ中で、３．２ｅ１３、１．０ｅ１３、３．２ｅ１２、１．０ｅ１２ｖｇ／ｍＬの希釈度で調製する。人工外リンパは、以下の試薬を組み合わせることによって調製する。ＮａＣｌ、１２０ｍＭ；ＫＣｌ、３．５ｍＭ；ＣａＣｌ２、１．５ｍＭ；グルコース、５．５ｍＭ；ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭ。人工外リンパをＮａＯＨで滴定して、そのｐＨを７．５に調整する（１３０ｍＭの総Ｎａ＋濃度）（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌ．１１０：１−１９，２００５）。
【０２２５】
実施例４：デバイスの説明
ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１製剤は、正円窓膜（ＲＷＭ）の一貫した安全な穿通用に設計された特殊マイクロカテーテルを用いて蝸牛に送達する。マイクロカテーテルは、送達手順を実施する外科医が、外耳道を介して中耳腔に進入し、マイクロカテーテルの末端をＲＷＭに接触させることができるような形状となっている。マイクロカテーテルの遠位端は、１０〜１，０００ミクロンの直径を有する少なくとも１つのマイクロニードルで構成され、このマイクロニードルは、ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１がおよそ１ｕＬ／分の速度で鼓室階の蝸牛外リンパに進入できるようにするのに十分であるが、外科的修復を伴わずに治癒するのに十分に小さい穿孔をＲＷＭに作り出す。マイクロニードル（複数可）に近位の、マイクロカテーテルの残りの部分には、およそ１ｅ１３ｖｇ／ｍＬの力価のＡＡＶ−ＣＬＲＮ１／人工外リンパ製剤が充填される。マイクロカテーテルの近位端は、およそ１μＬ／分の精確な低容量注入を可能にするマイクロマニピュレータに連結される。
【０２２６】
実施例５：動物モデル１Ａ：老化マウスにおける手術方法
人工外リンパ中で調製したＡＡＶ−ＣＬＲＮ１を、Ｓｈｕら（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ｄｏｉ：１０．１０８９／ｈｕｍ．２０１６．０５３，Ｊｕｎｅ  ２０１６）に記載されるようにマウスの鼓室階に投与する。６週齢の雄性マウスに、キシラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）及びケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を用いて麻酔をかける。電気温熱パッドを用いて体温を３７℃に維持する。右耳介後部から切開を作製し、鼓室胞を露出させる。鼓室胞を外科用針で穿孔し、小さい穴を拡張して、蝸牛へのアクセスをもたらす。鼓室階の蝸牛側壁の骨を、膜性側壁を無傷で残すように、歯科用ドリルで薄くする。ガラスマイクロピペットと結合したナノリットルマイクロインジェクションシステムを用いて、総計およそ３００ｎＬの人工外リンパ中のＡＡＶ−ＣＬＲＮ１を２ｎＬ／秒の速度で鼓室階に送達する。ガラスマイクロピペットを注入後５分間留置する。蝸牛切開及び注射後、鼓室胞の開口部を歯科用セメントで封止し、筋肉及び皮膚を縫合する。マウスを麻酔から覚醒させ、マウスの疼痛を０．１５ｍｇ／ｋｇの塩酸ブプレノルフィンで３日間管理する。
【０２２７】
実施例６：動物モデル２：モルモットにおける往復運動マイクロポンプ
外科的手技
Ｔａｎｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ，ＤＯＩ：１０．１０３９／ｃ５ｌｃ０１３９６ｈ，２０１５により記載されるような往復運動マイクロポンプによる蝸牛内送達後の分布及び毒性を評価するために、人工外リンパ中で調製したＡＡＶ−ＣＬＲＮ１をモルモットに投与する。各々およそ３５０ｇの体重の雄性モルモット（ｎ＝１６）に、ペントバルビタールナトリウム（Ｎｅｍｂｕｔａｌ；２５ｍｇ  ｋｇ−１、腹腔内注射）、フェンタニル（０．２ｍｇ  ｋｇ−１、筋肉内）、及びハロペリドール（１０ｍｇ  ｋｇ−１、筋肉内）の組み合わせで麻酔をかける。エピネフリンと併せたリドカインを局所麻酔として切開部位に皮下投与する。背側アプローチを用いて、鼓室胞に５ｍｍ直径の穴を作製し、正円窓膜のおよそ０．５ｍｍ遠位に蝸牛切開を作出する。マイクロポンプのカニューレ（下記に記載される）を蝸牛切開部に挿入し、蝸牛の頂端側に３ｍｍ通し、一般的なシアノアクリレート接着剤で鼓室胞に接着させる。複合活動電位（ＣＡＰ）測定のために、ペルフルオロアルコキシアルカン絶縁銀線電極（無被覆直径２０３μｍ）を正円窓窩の近くに挿入し、鼓室胞に接着させる。
【０２２８】
歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）及びＣＡＰの測定のための手順を、Ｔａｎｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍｉｃｒｏｄｅｖｉｃｅｓ  １７：３−２１，２０１５に以前に記載されたように実施する。ＤＰＯＡＥは、外科手術の結果として生じるあらゆる損傷をモニタリングするために、蝸牛切開手技の前及び後に３２、２４、１６、１２、８、５．６、４、及び２．７８ｋＨｚの特性周波数で測定する。
【０２２９】
１ｅ１４ｖｇ／ｍＬの最大力価でのＡＡＶ−ＣＬＲＮ１を、Ｔａｎｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ，ＤＯＩ：１０．１０３９／ｃ５ｌｃ０１３９６ｈ，２０１５により記載されるようなマイクロポンプを用いて、モルモットに投与する。マイクロポンプシステムは、４つの選択可能なポートを有する。これらのポートは、（ｉ）人工外リンパ貯蔵に使用される大きな流体キャパシタ、（ｉｉ）蝸牛に連結する排出口、（ｉｉｉ）一体化ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１リザーバからの排出口、（ｉｖ）一体化ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１リザーバへの注入口に連結されている。各ポートは、中央ポンプチャンバに流体連結され、各々が弁により個々に対処されている。ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１送達を往復運動させるための一連の事象は、以下の通りである。（ｉ）内部ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１−リフレッシュループを動作させて、ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１をＡＡＶ−ＣＬＲＮ１リザーバから主要注入−回収ラインへと移送する、（ｉｉ）ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１を蝸牛に注入し、一部の人工外リンパを人工外リンパ貯蔵キャパシタから排出する、（ｉｉｉ）追加の用量を得るために最初の２つのステップを数回繰り返すことができる、（ｉｖ）ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１をしばらくの間拡散させた後、ステップ（ｉ）〜（ｉｉｉ）で注入した容量に等しい容量の外リンパを蝸牛から回収して、人工外リンパ貯蔵キャパシタを再び満たす。このプロセスは、正味ゼロの流体容量が蝸牛に追加される様態での薬物の正味送達をもたらす。
【０２３０】
マイクロポンプにおける流体キャパシタは、薄い（２５．４μｍ）可撓性のポリイミド膜である天井を有する円筒型のチャンバである。ポンプチャンバは３．５ｍｍの直径を有し、流体貯蔵キャパシタは１４ｍｍの直径を有し、残りのキャパシタの全ては４ｍｍの直径を有する。この同じ膜が、弁の各々にて流動を遮断するように撓ませられる。弁チャンバは３．１ｍｍの直径を有する。薬物リザーバを構成する蛇行チャネルは、幅７６２μｍの正方形の断面及び４１０ｍｍの長さを有し、総容量が２３８μＬである。ポンプにおける他のマイクロチャネルの全ては、４００μｍの幅及び２５４μｍの高さを有する。
【０２３１】
モルモットにおける急性薬物送達
マイクロポンプにＡＡＶ−ＣＬＲＮ１及び人工外リンパを充填し、カニューレを、特性周波数感度２４〜３２ｋＨｚの位置の間の蝸牛の領域に作製した蝸牛切開部に挿入し、頂端側に３ｍｍ通し、１２〜１６ｋＨｚ領域において終端させる。ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１／人工外リンパ注入の開始前に、ベースラインＤＰＯＡＥ及びＣＡＰ聴力検査を実施する。次いで、ポンプを作動し、およそ１μＬの人工外リンパを、総計およそ１０μＬの人工外リンパが蝸牛に送達されるまで５分毎に注入する。２０分の待機時間後、およそ１０μＬの外リンパを蝸牛から回収する。次いで、ＡＡＶ−ＣＬＲＮ１送達を、総計およそ１０μＬの流体が送達されるまで５分毎におよそ１μＬの速度で開始する。
【０２３２】
動物を処置後１週間、１ヶ月、３ヶ月、及び６ヶ月で屠殺し（ｎ＝１群当たり４匹）、それらの蝸牛を摘出する。コルチ器沿いのＡＡＶ形質導入及びＣＬＲＮ１発現の程度を、抗ＣＬＲＮ１抗体での免疫染色を介して評価する。有毛細胞（Ｍｙｏ７ａ）及び支持細胞（Ｓｏｘ２）のマーカーに対する抗体を用いて、ＩＨＣ、ＯＨＣ、支持細胞、及び不動毛の形態を定量する。アネキシンＶ染色を用いて、蝸牛感覚上皮沿いの細胞におけるアポトーシスの証拠を評価する。
【０２３３】
実施例７：動物モデル３：ヒツジ
経ＲＷＭ注入を介した蝸牛への送達後の分布及び毒性を評価するために、人工外リンパ中で調製したＡＡＶ−ＣＬＲＮ１を若齢ヒツジに投与する。処置前の内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）機能を評価するために、ベースライン聴性脳幹反応（ＡＢＲ）及び歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）を月齢３ヶ月の雌性ヒツジ（ｎ＝４０）において両側で測定する。ベースラインＡＢＲ及びＤＰＯＡＥ測定に続いて、１．０ｅ１４、３．２ｅ１３、１．０ｅ１３、及び３．２ｅ１２ｖｇ／ｍＬの力価の２０ｕＬのＡＡＶ１−ＣＬＲＮ１をヒツジの左鼓室階の中に注射する（ｎ＝１群当たり１０匹）。各動物の右耳を無処置の対照として残す。外科的手技から１日、５日、及び１０日後にＡＢＲ及びＤＰＯＡＥ測定を両側で再び行う。手技後６ヶ月で、全ての動物から追加の両側ＡＢＲ及びＤＰＯＡＥ測定を行い、その後、動物を屠殺し、それらの蝸牛を取り出す。
【０２３４】
屠殺した動物の半分（ｎ＝用量コホートの各々から５匹）において、有毛細胞構造を特定するとともに、蝸牛感覚上皮沿いのＣＬＲＮ１タンパク質発現を評価するために、免疫染色を実施する。有毛細胞（Ｍｙｏ７ａ）、支持細胞（Ｓｏｘ２）、及びＣＬＲＮ１のマーカーに対する抗体を以前に記載されたように用いる（Ｄｕｎｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１３，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３３（２２）：９５０８−９５１９）。コルチ器の基底回転、中回転、及び頂回転にて、有毛細胞及びＣＬＲＮ１を発現する有毛細胞の総数を２００ｕｍ領域内で計数する。
【０２３５】
屠殺した動物の残りの半分（各用量コホートからの残りの５匹の動物）において、蝸牛組織試料を、上述したのと同じ基底領域、中領域、及び頂端領域から収集し、ＣＬＲＮ１  ｍＲＮＡ転写産物に関してアッセイする。
【０２３６】
実施例８：ヒト臨床例（小児処置）
患者に全身麻酔をかける。外科医は、外耳道から鼓膜にアプローチし、鼓膜につながる外耳道の下縁に小さな切開を作製し、鼓膜をフラップとして挙上して、中耳空間を露出させる。手術用レーザを用いて、アブミ骨底に小さな開口部（およそ２ｍｍ）を作製する。次いで、外科医は、人工外リンパ中１ｅ１３ｖｇ／ｍＬの力価で調製したＡＡＶ−ＣＬＲＮ１の溶液を充填したマイクロカテーテルで正円窓膜を穿通する。マイクロカテーテルを、およそ１ｕＬ／分の速度でおよそ２０ｕＬのＡＡＶ−ＣＬＲＮ１溶液を注入するマイクロマニピュレータに連結するＡＡＶ−ＣＬＲＮ１注入の完了時に、外科医は、マイクロカテーテルを回収し、アブミ骨底及びＲＷＭの穴をゼルフォームパッチで修復する。手技は、鼓膜フラップを元に戻して完了する。
【０２３７】
実施例９：ＣＬＲＮ１変異を検出するための母体血の非侵襲性出生前検査
母体血試料（２０〜４０ｍＬ）をセルフリーＤＮＡ管中に収集する。少なくとも７ｍＬの血漿を、２，０００ｇで２０分間、続いて３，２２０ｇで３０分間、１回目のスピンの後に上清を移す二重遠心分離プロトコルを介して、各試料から単離する。ＱＩＡＧＥＮ  ＱＩＡｍｐ（登録商標）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｎｕｃｌｅｉ  Ａｃｉｄキットを用いて、ｃｆＤＮＡを７〜２０ｍＬの血漿から単離し、４５μＬのＴＥ緩衝液中で溶出させる。純粋な母体ゲノムＤＮＡを、１回目の遠心分離後に得られるバフィーコートから単離する。
【０２３８】
プローブ−プローブ相互作用の可能性を最小限に抑えながらプローブを選択するためのアッセイの熱力学的モデリングを、以前に記載された増幅アプローチ（Ｓｔｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１９（１０）：１８４３−１８４８，２００９）と組み合わせることによって、１１，０００のアッセイの多重化を達成することができる。母体ｃｆＤＮＡ及び母体ゲノムＤＮＡ試料を、１１，０００の標的特異的アッセイを用いて１５サイクルにわたって前増幅し、アリコートを、ネステッドプライマーを用いた１５サイクルの第２のＰＣＲ反応に移す。１２サイクルの第３ラウンドのＰＣＲにおいてバーコード化タグを付加することによって、試料を配列決定用に調製する。次いで、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑシーケンサーを用いて増幅産物を配列決定する。市販のソフトウェアを用いてゲノム配列のアライメントを実施する。
【０２３９】
実施例１０：アデノウイルス（ＡＡＶ）トランススプライシング戦略
少なくとも２つの異なる核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）を用いて、分子間コンカテマー化及びトランススプライシング後に細胞内で活性ＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、完全長ＣＬＲＮ１遺伝子）を再構成することができる。例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７：１２；６７１６−６７２１，２０００を参照されたい。
【０２４０】
一部の例では、２つの異なる核酸ベクターが使用される。第１の核酸ベクターは、プロモーター（例えば、本明細書に記載されるプロモーターのうちのいずれか）と、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分のいずれか）をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み得る。第２の核酸ベクターは、スプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分（すなわち、該ＣＬＲＮ１タンパク質のうちのＮ末端部分に含まれない部分全体）（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分のいずれか）をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端におけるポリアデニル化配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化シグナル配列のうちのいずれか）とを含み得る。一部の実施形態では、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さ（例えば、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも７５アミノ酸、または少なくとも１００アミノ酸の長さ）であり、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は、他のコードされた部分の配列と重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードしていない。哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。
【０２４１】
別の例では、３つの異なる核酸ベクターを使用することができる。第１の核酸ベクターは、プロモーター配列（例えば、本明細書に記載されるプロモーター配列のうちのいずれか）の一部分と、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１の部分をコードするＣＬＲＮ１遺伝子の第１のコード配列（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１コード配列のうちのいずれか）と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられた第１のスプライスドナー配列とを含み得る。第２の核酸ベクターは、第１のスプライスアクセプター配列と、該第１のスプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２の部分をコードするＣＬＲＮ１遺伝子の第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられた第２のスプライスドナー配列（例えば、本明細書に記載されるスプライスドナー配列のうちのいずれか）とを含み得る。該第２の核酸ベクターの特徴は、自己スプライシングが生じ得ない（すなわち、該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列と該第１のスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じない）ことであろう。一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターの該スプライスドナー配列及び該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列は、同じである（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のスプライスドナー配列のうちのいずれか）。一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターの該第１のスプライスドナー配列及び該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列は、異なる（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のスプライスドナー配列のうちのいずれか）。第３の核酸ベクターは、第２のスプライスアクセプター配列と、該第２のスプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第３の部分をコードするＣＬＲＮ１遺伝子の第３のコード配列と、該第３のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化配列のうちのいずれか）とを含む。３つの核酸ベクターが使用される、かかる方法において、該第１のスプライスドナー配列及び該第１のスプライスアクセプター配列は、一緒に会合する（再結合する）ことができ、該第２のスプライスドナー配列及び該第２のスプライスアクセプター配列は、一緒に会合する（再結合する）ことができ、該第１、第２、及び第３のコード配列によってコードされるＣＬＲＮ１タンパク質の部分は重複せず、哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該第１のスプライスドナー配列と該第１のスプライスアクセプター配列との間、及び該第２のスプライスドナー配列と該第２のスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。上記に提供される戦略に基づいて、当業者であれば、４つ、５つ、または６つの異なる核酸ベクターを用いて戦略を開発する方法を理解しよう。
【０２４２】
これらの方法の例のうちのいずれにおいても、該コードされた部分のアミノ酸配列のうちのいずれも、任意の他のコードされた部分と重複しておらず、かついずれの単一のベクターも、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードしていない。
【０２４３】
該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸（例えば、約３０アミノ酸〜約１２００アミノ酸、または本明細書に記載されるこの範囲の他の部分範囲のうちのいずれか）であり得る。
【０２４４】
一部の実施形態では、該コード配列の各々は、配列番号９の少なくとも１つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン（例えば、少なくとも２つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン、少なくとも２つのエクソン及び少なくとも２つのイントロン、少なくとも３つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン、少なくとも３つのエクソン及び少なくとも２つのイントロン、または少なくとも３つのエクソン及び少なくとも３つのイントロン）を含み得る。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々は、該コードされた部分の各々が重複しないように、配列番号１のアミノ酸配列の最大８０％（例えば、配列番号１の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードし得る。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号３のアミノ酸配列の最大８０％（例えば、配列番号３の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号５のアミノ酸配列の最大８０％（例えば、配列番号５の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号７のアミノ酸配列の最大８０％（例えば、配列番号７の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。
【０２４５】
該少なくとも２つの核酸ベクターの各々は、ヘッドトゥテール（ｈｅａｄ−ｔｏ−ｔａｉｌ）組換えを可能にする逆位末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含んでもよい。ＩＴＲはその後、スプライシングを介して除去される。例えば、ＩＴＲは、その全体が本明細書に援用される、Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７（１２）：６７１６−６７２１，２０００に記載されるような、回文構造の二重Ｄ  ＩＴＲ、または、Ｇｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２４−１３０，２００８、及びＧｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２２：７７−８３，２０１１に記載されるような、ＡＡＶ血清型２  ＩＴＲであり得る。スプライスアクセプター及び／またはドナー配列の非限定的な例は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１４（１）：３７−４４，２００３、及びＬａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（１１）：１４３５−１４３９，２００５，２００５を参照されたい。該スプライスドナー及びアクセプター配列は、遺伝子（例えば、ＣＬＲＮ１遺伝子）の任意の内因性イントロンスプライスドナー／アクセプター配列であり得る。例えば、該スプライスドナー配列は、５’−ＧＴＡＡＧＴＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡＣＡＡＧＡＣＡＧＧＴＴＴＡＡＧＧＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＣＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＡＣＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＣＴ−３’（配列番号２２）であり得、該スプライスアクセプター配列は、５’−ＧＡＴＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＧＧＴＣＴＴＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＡＣＡＧ−３’（配列番号２３）であり得る（例えば、Ｔｒａｐａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６（２）：１９４−２１１，２０１４を参照されたい）。スプライシング及びスプライシング効率を評価する方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（１１）：１４３５−１４３９，２００５を参照されたい）。
【０２４６】
実施例１１：アルカリホスファターゼ（ＡＰ）の高度に組換え誘導性の外因性遺伝子領域を用いたハイブリッドベクタートランススプライシング戦略
少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の異なる核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）をまた本明細書に記載される方法のうちのいずれかで用いて、分子間コンカテマー化、マーカー遺伝子媒介性組換え、及びトランススプライシング後に細胞内で活性ＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、完全長ＣＬＲＮ１遺伝子）を再構成することができる。この戦略は、それが相同組換え及び／またはトランススプライシングを含むため、ハイブリッド戦略である。例えば、各々その全体が本明細書に援用される、Ｇｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２４−１３０，２００８、Ｇｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２２：７７−８３，２０１１、及びＤｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：３８３−３９１，２００１を参照されたい。本明細書で使用されるとき、検出可能マーカー遺伝子は、コード配列非依存性の組換えを可能にする高度に組換え誘導性のＤＮＡ配列であり得る。検出可能マーカー遺伝子の非限定的な例は、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）遺伝子である。例えば、検出可能マーカー遺伝子は、８７２ｂｐの長さである、ヒト胎盤ＡＰ相補的ＤＮＡの中央の３分の１であり得る（例えば、Ｇｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００８を参照されたい）。少なくとも２つの異なる核酸ベクターは、検出可能マーカー遺伝子（例えば、本明細書に記載される検出可能マーカー遺伝子のうちのいずれか）を含有する。ハイブリッドベクターは、実施例１０に記載されるようなトランススプライシングベクターに基づいて構築されるため、活性ＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、完全長ＣＬＲＮ１遺伝子）は、ＩＴＲ媒介性組換え及びトランススプライシングまたは検出可能マーカー遺伝子媒介性（例えば、ＡＰ遺伝子媒介性）組換え及びトランススプライシングのいずれかを用いて再構成され得る。トランススプライシング後、活性ＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、完全長ＣＬＲＮ１遺伝子）が、哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される任意の哺乳類細胞）のゲノムＤＮＡにおいて再構成される。
【０２４７】
一例では、２つの異なる核酸ベクターが使用される。第１の核酸ベクターは、プロモーター（例えば、本明細書に記載されるプロモーターのうちのいずれか）と、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分のうちのいずれか）をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、該スプライスドナー配列の３’側に位置付けられた第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み得る。第２の核酸ベクターは、第２の検出可能マーカー遺伝子と、該第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分のいずれか）をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端におけるポリアデニル化配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化配列のうちのいずれか）とを含み得る。一部の実施形態では、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さ（例えば、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも７５アミノ酸、または少なくとも１００アミノ酸の長さ）であり、該コードされた部分のアミノ酸配列は重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードしていない。哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。
【０２４８】
別の例では、３つの異なる核酸ベクターを使用することができる。第１の核酸ベクターは、プロモーター配列（例えば、本明細書に記載されるプロモーター配列のうちのいずれか）の一部分と、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１の部分をコードするＣＬＲＮ１遺伝子の第１のコード配列（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１コード配列のうちのいずれか）と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられた第１のスプライスドナー配列と、第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み得る。第２の核酸ベクターは、第２の検出可能マーカー遺伝子と、該第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられた第１のスプライスアクセプター配列と、該第１のスプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２の部分をコードするＣＬＲＮ１遺伝子の第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられた第２のスプライスドナー配列（例えば、本明細書に記載されるスプライスドナー配列のうちのいずれか）と、第３の検出可能マーカー遺伝子とを含み得る。該第２の核酸ベクターの特徴は、自己スプライシングが生じ得ない（すなわち、該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列と該第１のスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じない）ことであろう。一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターの該スプライスドナー配列及び該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列は、同じである（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のスプライスドナー配列のうちのいずれか）。一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターの該第１のスプライスドナー配列及び該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列は、異なる（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のスプライスドナー配列のうちのいずれか）。第３の核酸ベクターは、第４の検出可能マーカー遺伝子と、該第４の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられた第２のスプライスアクセプター配列と、該第２のスプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第３の部分をコードするＣＬＲＮ１遺伝子の第３のコード配列と、該第３のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化配列のうちのいずれか）とを含み得る。３つの核酸ベクターが使用される、かかる方法において、該第１のスプライスドナー配列及び該第１のスプライスアクセプター配列は、一緒に会合する（再結合する）ことができ、該第２のスプライスドナー配列及び該第２のスプライスアクセプター配列は、一緒に会合する（再結合する）ことができ、該第１、第２、及び第３のコード配列によってコードされるＣＬＲＮ１タンパク質の部分は互いに重複せず、哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該第１のスプライスドナー配列と該第１のスプライスアクセプター配列との間、及び該第２のスプライスドナー配列と該第２のスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。当該技術分野で理解され得るように、３つの核酸ベクターが使用されるとき、該少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの２つは、検出可能マーカー遺伝子（例えば、ＡＰマーカー遺伝子）を含む可能性があり、かつ該少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つは、検出可能マーカー遺伝子を含む核酸ベクターにおけるスプライスドナー配列に相補的であるスプライスアクセプター配列を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、該第１及び第２の核酸ベクターは、検出可能マーカー遺伝子（例えば、ＡＰマーカー遺伝子）を含む可能性があり、かつ該第３の核酸ベクターは、該第２の核酸ベクターにおける該スプライスドナー配列に相補的であるスプライスアクセプター配列を含み、かつ該第３の核酸ベクターは、検出可能マーカー遺伝子（例えば、ＡＰマーカー遺伝子）を含まない。他の例では、該第２及び第３の核酸ベクターは、検出可能マーカー遺伝子（例えば、ＡＰマーカー遺伝子）を含む可能性があり、かつ該第１の核酸ベクターは、該第２の核酸ベクターにおける該スプライスアクセプター配列に相補的であるスプライスドナー配列を含み、かつ該第１の核酸ベクターは、検出可能マーカー遺伝子（例えば、ＡＰマーカー遺伝子）を含まない。
【０２４９】
上記に提供される戦略に基づいて、当業者であれば、４つ、５つ、または６つのベクターを用いて戦略を開発する方法を理解しよう。
【０２５０】
該少なくとも２つの核酸ベクター（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）において提供されるＣＬＲＮ１コード配列は、重複しない。該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含む可能性があり、該コードされた部分の各々が、例えば、少なくとも３０アミノ酸（例えば、約３０アミノ酸〜約１６００アミノ酸、または本明細書に記載されるこの範囲の他の部分範囲のうちのいずれか）である。
【０２５１】
一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、配列番号９の少なくとも１つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン（例えば、少なくとも２つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン、少なくとも２つのエクソン及び少なくとも２つのイントロン、少なくとも３つのエクソン少なくとも１つのイントロン、少なくとも３つのエクソン及び少なくとも２つのイントロン、または少なくとも３つのエクソン及び少なくとも３つのイントロン）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号１の最大８０％（例えば、配列番号１の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号３の最大８０％（例えば、配列番号３の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号５の最大８０％（例えば、配列番号５の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号７の最大８０％（例えば、配列番号７の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、最大７０％）をコードする。
【０２５２】
実施例１０に記載されるように、該少なくとも２つの核酸ベクターの各々は、ヘッドトゥテール組換えを可能にする逆位末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含んでもよい。ＩＴＲはその後、スプライシングを介して除去される。ＩＴＲならびにスプライスアクセプター配列及び／またはスプライスドナー配列の例は、当該技術分野で既知であり、実施例１０に記載されている。
【０２５３】
実施例１２：Ｆ１ファージの高度に組換え誘導性の外因性遺伝子領域（ＡＫ）を用いたハイブリッドベクタートランススプライシング戦略
少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の異なる核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）をまた本明細書に記載される方法のうちのいずれかで用いて、分子間コンカテマー化、マーカー遺伝子媒介性組換え、及びトランススプライシング後に細胞内で活性ＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、完全長ＣＬＲＮ１遺伝子）を再構成することができる。この戦略は、それが相同組換え及び／またはトランススプライシングを含むため、ハイブリッド戦略である。例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｔｒａｐａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６（２）：１９４−２１１，２０１４を参照されたい。本明細書で使用されるとき、Ｆ１ファージ組換え誘導領域（ＡＫ）は、コード配列非依存性の組換えを可能にするために使用される。Ｆ１ファージ組換え誘導領域は、Ｔｒａｐａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）に記載されるようなＦ１ファージゲノム由来の７７ｂｐの組換え誘導領域であってもよい。少なくとも２つの異なる核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域を含有する。ハイブリッドベクターは、実施例１０に記載されるようなトランススプライシングベクターに基づいて構築されるため、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする核酸は、Ｆ１ファージ組換え誘導領域により誘導される組換え及びトランススプライシングを用いて生成され得る。トランススプライシング後、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする核酸が、哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）において生成される。
【０２５４】
一例では、２つの異なる核酸ベクターが使用される。第１の核酸ベクターは、プロモーター（例えば、本明細書に記載されるプロモーターのうちのいずれか）と、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分のうちのいずれか）をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、該スプライスドナー配列の３’側に位置付けられたＦ１ファージ組換え誘導領域とを含み得る。第２の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、該Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分のいずれか）をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端におけるポリアデニル化配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化配列のうちのいずれか）とを含み得る。一部の実施形態では、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さ（例えば、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも７５アミノ酸、または少なくとも１００アミノ酸の長さ）であり、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードしていない。哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。
【０２５５】
別の例では、３つの異なる核酸ベクターが使用される。第１の核酸ベクターは、プロモーター配列（例えば、本明細書に記載されるプロモーター配列のうちのいずれか）と、該プロモーターの５’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１の部分をコードする第１のコード配列（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１コード配列のうちのいずれか）と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられた第１のスプライスドナー配列と、Ｆ１ファージ組換え誘導領域とを含み得る。第２の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、該Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられた第１のスプライスアクセプター配列と、該第１のスプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２の部分をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端に位置付けられた第２のスプライスドナー配列（例えば、本明細書に記載されるスプライスドナー配列のうちのいずれか）と、Ｆ１ファージ組換え誘導領域とを含み得る。該第２の核酸ベクターの特徴は、自己スプライシングが生じ得ない（すなわち、該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列と該第１のスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じない）ことであろう。一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターの該スプライスドナー配列及び該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列は、同じである（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のスプライスドナー配列のうちのいずれか）。一部の実施形態では、該第１の核酸ベクターの該第１のスプライスドナー配列及び該第２の核酸ベクターの該第２のスプライスドナー配列は、異なる（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で既知のスプライスドナー配列のうちのいずれか）。第３の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、該Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられた第２のスプライスアクセプター配列と、該第２のスプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質の第３の部分をコードする第３のコード配列と、該第３のコード配列の該３’末端に位置付けられたポリアデニル化配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化配列のうちのいずれか）とを含み得る。３つの核酸ベクターが使用される、かかる方法において、該第１のスプライスドナー配列及び該第１のスプライスアクセプター配列は、一緒に会合する（再結合する）ことができ、該第２のスプライスドナー配列及び該第２のスプライスアクセプター配列は、一緒に会合する（再結合する）ことができ、該第１、第２、及び第３のコード配列によってコードされるＣＬＲＮ１タンパク質の部分は重複せず、哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該第１のスプライスドナー配列と該第１のスプライスアクセプター配列との間、及び該第２のスプライスドナー配列と該第２のスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。当該技術分野で理解され得るように、３つの核酸ベクターが使用されるとき、該異なる核酸ベクターのうちの２つは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域を含む可能性があり、かつ該異なる核酸ベクターのうちの１つは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域を含む核酸ベクターにおけるスプライスドナー配列に相補的であるスプライスアクセプター配列を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、該第１及び第２の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域を含む可能性があり、かつ該第３の核酸ベクターは、該第２の核酸ベクターにおける該スプライスドナー配列に相補的であるスプライスアクセプター配列を含み、かつ該第３の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域（例えば、ＡＰマーカー遺伝子）を含まない。他の例では、該第２及び第３の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域を含む可能性があり、かつ該第１の核酸ベクターは、該第２の核酸ベクターにおける該スプライスアクセプター配列に相補的であるスプライスドナー配列を含み、かつ該第１の核酸ベクターは、Ｆ１ファージ組換え誘導領域を含まない。上記に提供される戦略に基づいて、当業者であれば、４つ、５つ、または６つのベクターを用いて戦略を開発する方法を理解しよう。
【０２５６】
該少なくとも２つの核酸ベクター（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の各々において提供されるＣＬＲＮ１コード配列は、重複しない。該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸（例えば、約３０アミノ酸〜約１６００アミノ酸、または本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）である。
【０２５７】
一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、配列番号９の少なくとも１つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン（例えば、少なくとも２つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン、少なくとも２つのエクソン及び少なくとも２つのイントロン、少なくとも３つのエクソン及び少なくとも１つのイントロン、少なくとも３つのエクソン及び少なくとも２つのイントロン、または少なくとも３つのエクソン及び少なくとも３つのイントロン）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が重複しない限り、配列番号１の最大８０％（例えば、配列番号１の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が重複しない限り、配列番号３の最大８０％（例えば、配列番号３の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が重複しない限り、配列番号５の最大８０％（例えば、配列番号５の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が重複しない限り、配列番号７の最大８０％（例えば、配列番号７の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。
【０２５８】
実施例１０に記載されるように、該少なくとも２つの核酸ベクターの各々は、ヘッドトゥテール組換えを可能にする逆位末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含んでもよい。ＩＴＲはその後、スプライシングを介して除去される。ＩＴＲならびにスプライスアクセプター配列及び／またはスプライスドナー配列の例は、当該技術分野で既知であり、実施例１０に記載されている。
【０２５９】
実施例１３．２つのＣＬＲＮ１アイソフォームを用いたハイブリッドベクタートランススプライシング戦略
少なくとも２つの異なる核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）を用いて、分子間コンカテマー化及びトランススプライシング後に細胞内で活性ＣＬＲＮ１遺伝子（例えば、完全長ＣＬＲＮ１遺伝子）を再構成することができる。例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７：１２；６７１６−６７２１，２０００を参照されたい。
【０２６０】
一部の例では、２つの異なる核酸ベクターが使用される。第１の核酸ベクターは、プロモーター（例えば、本明細書に記載されるプロモーターのうちのいずれか）と、該プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分のいずれか）をコードする第１のコード配列と、該第１のコード配列の該３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み得る。
【０２６１】
第２の核酸ベクターは、スプライスアクセプター配列と、該スプライスアクセプター配列の該３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分（すなわち、該ＣＬＲＮ１タンパク質のうちのＮ末端部分に含まれない部分全体）（例えば、本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質の一部分のサイズのうちのいずれか及び／または本明細書に記載されるＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分のいずれか）をコードする第２のコード配列と、該第２のコード配列の該３’末端におけるポリアデニル化シグナル配列（例えば、本明細書に記載されるポリアデニル化シグナル配列のうちのいずれか）とを含み得る。
【０２６２】
一部の実施形態では、該コードされた部分の各々は、少なくとも３０アミノ酸残基の長さ（例えば、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも７５アミノ酸、または少なくとも１００アミノ酸の長さ）であり、該２つのコードされた部分のアミノ酸配列は互いに重複せず、該２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードしていない。
【０２６３】
一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォーム（例えば、配列番号３）の異なる部分をコードするコード配列を含む。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号３のアミノ酸配列の最大８０％（例えば、配列番号３の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。
【０２６４】
一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォーム（例えば、配列番号５）をコードする配列をさらに含む。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該コードされた部分の各々が、該コードされた部分の各々が互いに重複しない限り、配列番号５のアミノ酸配列の最大８０％（例えば、配列番号５の最大１０％、最大２０％、最大３０％、最大４０％、最大５０％、最大６０％、または最大７０％）をコードする。
【０２６５】
一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なるベクターの各々は、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む。一部の実施形態では、該少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つは、該ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む。
【０２６６】
哺乳類細胞（例えば、本明細書に記載される哺乳類細胞のうちのいずれか）に導入されるとき、該スプライスドナー配列と該スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、活性ＣＬＲＮ１タンパク質（例えば、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質）をコードする組換え核酸が形成される。
【０２６７】
かかるベクターの非限定的な例が、図１、２、４、７〜１０、及び１２〜２４に示される。
【０２６８】
実施例１４．ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞におけるＣＬＲＮ１発現
ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を例示的なＣＬＲＮベクターでトランスフェクトした。トランスフェクションから４８時間後、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞溶解物を調製し、ＣＬＲＮ１タンパク質発現をウェスタンブロットによって決定した。図２５〜３１に示されるように、全ての試験された試料中でＣＬＲＮ１タンパク質が検出された。この結果は、ＣＬＲＮ１タンパク質が本明細書に記載される例示的なＣＬＲＮ１ベクターによって発現され得ることを裏付けた。
【０２６９】
図３２は、ＣＬＲＮ１−６ｅＧＦＰベクターでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞が、トランスフェクションから７２時間後という早さで高レベルのＧＦＰを発現することを示した。トランスフェクションから２４時間後では、ごく少数のＨＥＫ２９３ＦＴ細胞が、ＭＯＩ８．４１Ｅ＋０４及び２．５３Ｅ＋０５のＣＬＲＮ１−ｅ６ＧＦＰベクターでのトランスフェクション後にＧＦＰを発現した。トランスフェクションから７２時間後では、ＭＯＩ２．５３Ｅ＋０５のＣＬＲＮ１−ｅ６ＧＦＰベクターでトランスフェクトされたほとんどのＨＥＫ２９３ＦＴ細胞がＧＦＰを発現した一方で、ＭＯＩ８．４１Ｅ＋０４のＣＬＲＮ１−ｅ６ＧＦＰベクターでトランスフェクトされたいくつかのＨＥＫ２９３ＦＴ細胞がＧＦＰを発現した。図３３に示されるように、ＣＬＲＮ１は、ＣＬＲＮ−０ベクター、ＣＬＲＮ−３ベクター、及びＣＬＲＮ−１３ベクターでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＦＴ細胞において高レベルで発現された。
【０２７０】
実施例１５．Ｐ２蝸牛マウス外植片ＣＬＲＮ１発現
ＷＴマウス由来のＰ２蝸牛外植片を播種から１６時間後に感染させ、感染から７２時間後、ＲＮＡ及び免疫蛍光検査のために採取した。図３４に示されるように、ＣＬＲＮ１は、蝸牛外植片において効率的に発現された。図３５に示されるように、Ｐ２蝸牛外植片の外有毛細胞（ＯＨＣ）及び内有毛細胞（ＩＨＣ）は、ＣＬＲＮ−０ベクター（１．３Ｅ１０  ＶＧ／蝸牛）、ＣＬＲＮ−３（９．９Ｅ０９  ＶＧ／蝸牛）、及びＣＬＲＮ−１３（１．０Ｅ１０  ＶＧ／蝸牛）でトランスフェクトされたときにＭｙｏ７ａを発現する。いずれのベクターでのトランスフェクションも、蝸牛のＯＨＣまたはＩＨＣの構造健全性を破壊しなかった。故に、図３５は、生存能力があり組織化された外有毛細胞（ＯＨＣ）、内有毛細胞（ＩＨＣ）、及び不動毛束により、ＣＬＲＮ１構築物の毒性の欠如を示す。図３６に示されるように、ＣＬＲＮ１−３’ＵＴＲを用いたｅＧＦＰ発現は、ＣＡＧプロモーター単独と比較して形質導入を指定するようであった。１Ｅ０９  ＡＡＶ／Ａｎｃ８０．ＣＡＧ．ｅＧＦＰに感染させた蝸牛外植片は、内有毛細胞においてＭｙｏ７ａを発現した。１Ｅ０９  ＡＡＶ／Ａｎｃ８０．ＣＡＧ．ｅＧＦＰ．ＣＬＲＮ−３’ＵＴＲに感染させた蝸牛外植片は、ＯＨＣ及びＩＨＣの両方においてＭｙ０７ａを発現した。ＡＡＶ／Ａｎｃ８０．ＣＡＧ．ｅＧＦＰ．ＣＬＲＮ−３’ＵＴＲに感染させた蝸牛外植片のＯＨＣにおいて、ＣＬＲＮ１のより高い形質導入及び共発現が見られた。ＡＡＶ／Ａｎｃ８０．ＣＡＧ．ｅＧＦＰ．ＣＬＲＮ−３’ＵＴＲに感染させた蝸牛外植片におけるＧＦＰ発現は、ＯＨＣに制限された。
【０２７１】
他の実施形態
本発明は発明を実施するための形態に関連して説明されているが、上記の説明は例示説明を意図しており、本発明の範囲を限定することは意図しておらず、本発明の範囲は添付の特許請求によって定義されることを理解されたい。他の態様、利点、及び変更形態が、添付の特許請求の範囲内にある。
【０２７２】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が援用される。矛盾がある場合、定義を含めて本明細書が優位に立つ。節の見出し、ならびに材料、方法、及び実施例のいずれの説明も例示説明にすぎず、限定することは意図していない。
配列表
配列番号１−ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＤ
【化１６】
2021529519.tif 000038
配列番号２−ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＤ  ｃＤＮＡ
【化１７】
2021529519.tif 000039
配列番号３−ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＡ
【化１８】
2021529519.tif 000040
配列番号４−ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＡ  ｃＤＮＡ
【化１９】
2021529519.tif 000041
配列番号５−ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＣ
【化２０】
2021529519.tif 000042
配列番号６−ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＣ  ｃＤＮＡ
【化２１】
2021529519.tif 000043
配列番号７−ヒト完全長野生型ＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォームＥ
【化２２】
2021529519.tif 000044
配列番号８−ヒト野生型ＣＬＲＮ１アイソフォームＥ  ｃＤＮＡ
【化２３】
2021529519.tif 000045
配列番号９−ヒト野生型ＣＬＲＮ１ゲノム配列
【化２４−１】
2021529519.tif 000046
【化２４−２】
2021529519.tif 000047
【化２４−３】
2021529519.tif 000048
【化２４−４】
2021529519.tif 000049
【化２４−５】
2021529519.tif 000050
【化２４−６】
2021529519.tif 000051
【化２４−７】
2021529519.tif 000052
【化２４−８】
2021529519.tif 000053
【化２４−９】
2021529519.tif 000054
【化２４−１０】
2021529519.tif 000055
【化２４−１１】
2021529519.tif 000056
【化２４−１２】
2021529519.tif 000057
【化２４−１３】
2021529519.tif 000058
【化２４−１４】
2021529519.tif 000059
【化２４−１５】
2021529519.tif 000060
【化２４−１６】
2021529519.tif 000061
【化２４−１７】
2021529519.tif 000062
【化２４−１８】
2021529519.tif 000063
【化２４−１９】
2021529519.tif 000064
【化２４−２０】
2021529519.tif 000065
【化２４−２１】
2021529519.tif 000066
配列番号１０−マウスＣＬＲＮ１タンパク質アイソフォーム１
【化２５】
2021529519.tif 000067
配列番号１１−イヌＣＬＲＮ１タンパク質
【化２６】
2021529519.tif 000068
配列番号１２−５’ＵＴＲ
【化２７】
2021529519.tif 000069
配列番号１３−５’ＩＴＲ
【化２８】
2021529519.tif 000070
配列番号１４−３’ＩＴＲ
【化２９】
2021529519.tif 000071
配列番号１５−３’ＵＴＲ
【化３０】
2021529519.tif 000072
配列番号１６−キメライントロン
【化３１】
2021529519.tif 000073
配列番号１７−ＣＭＶエンハンサー
【化３２】
2021529519.tif 000074
配列番号１８−ＣＢＡプロモーター
【化３３】
2021529519.tif 000075
配列番号１９−ｔＧＦＰ
【化３４】
2021529519.tif 000076
配列番号２０−ウシ成長ホルモンポリ−Ａ
【化３５】
2021529519.tif 000077
配列番号２１−可溶性ニューロピリン−１のポリアデニル化シグナル
【化３６】
2021529519.tif 000078
配列番号２２−スプライスドナー配列
【化３７】
2021529519.tif 000079
配列番号２３−スプライスアクセプター配列
【化３８】
2021529519.tif 000080
配列番号２４−３’ＩＴＲ
【化３９】
2021529519.tif 000081
配列番号２５−ＩＴＲ
【化４０】
2021529519.tif 000082
配列番号２６−ｓｈ−キメライントロン
【化４１】
2021529519.tif 000083
配列番号２７−３’ＵＴＲ  ６００Ａ
【化４２】
2021529519.tif 000084
配列番号２８−３’ＵＴＲ  ６００Ｂ
【化４３】
2021529519.tif 000085
配列番号２９−３’ＵＴＲ  ６００Ｃ
【化４４】
2021529519.tif 000086
配列番号３０−ＦＰ
【化４５】
2021529519.tif 000087
配列番号３１−Ｔ２Ａ
【化４６】
2021529519.tif 000088
配列番号３２−ｅＧＦＰ
【化４７】
2021529519.tif 000089
配列番号３３−Ｍｙｃ
【化４８】
2021529519.tif 000090
配列番号３４−ＨＡ
【化４９】
2021529519.tif 000091
配列番号３５−３×ＦＬＡＧタグ
【化５０】
2021529519.tif 000092
配列番号３６−３’ＵＴＲ  １３５７
【化５１】
2021529519.tif 000093
配列番号３７−３’ＵＴＲ  １４０６
【化５２】
2021529519.tif 000094
配列番号３８−ＣＬＲＮ１抗体エピトープ
【化５３】
2021529519.tif 000095
配列番号３９−ＣＬＲＮ−０
【化５４−１】
2021529519.tif 000096
【化５４−２】
2021529519.tif 000097
配列番号４０−ＣＬＲＮ−１
【化５５−１】
2021529519.tif 000098
【化５５−２】
2021529519.tif 000099
配列番号４１−ＣＬＲＮ−２ｅＧＦＰ
【化５６−１】
2021529519.tif 000100
【化５６−２】
2021529519.tif 000101
【化５６−３】
2021529519.tif 000102
配列番号４２−ＣＬＲＮ−３
【化５７−１】
2021529519.tif 000103
【化５７−２】
2021529519.tif 000104
【化５７−３】
2021529519.tif 000105
配列番号４３−ＣＬＲＮ−４
【化５８−１】
2021529519.tif 000106
【化５８−２】
2021529519.tif 000107
【化５８−３】
2021529519.tif 000108
配列番号４４−ＣＬＲＮ−６ｅＧＦＰ
【化５９−１】
2021529519.tif 000109
【化５９−２】
2021529519.tif 000110
【化５９−３】
2021529519.tif 000111
配列番号４５−ＣＬＲＮ−７ｅＧＦＰ
【化６０−１】
2021529519.tif 000112
【化６０−２】
2021529519.tif 000113
配列番号４６−ＣＬＲＮ−８
【化６１−１】
2021529519.tif 000114
【化６１−２】
2021529519.tif 000115
【化６１−３】
2021529519.tif 000116
配列番号４７−ＣＬＲＮ−９
【化６２−１】
2021529519.tif 000117
【化６２−２】
2021529519.tif 000118
配列番号４８−ＣＬＲＮ−１０
【化６３−１】
2021529519.tif 000119
【化６３−２】
2021529519.tif 000120
【化６３−３】
2021529519.tif 000121
配列番号４９−ＣＬＲＮ−１０ｍｙｃ
【化６４−１】
2021529519.tif 000122
【化６４−２】
2021529519.tif 000123
配列番号５０−ＣＬＲＮ−１０ＮＦ
【化６５−１】
2021529519.tif 000124
【化６５−２】
2021529519.tif 000125
配列番号５１−ＣＬＲＮ−１１
【化６６−１】
2021529519.tif 000126
【化６６−２】
2021529519.tif 000127
【化６６−３】
2021529519.tif 000128
配列番号５２−ＣＬＲＮ−１１ｍｙｃ
【化６７−１】
2021529519.tif 000129
【化６７−２】
2021529519.tif 000130
【化６７−３】
2021529519.tif 000131
配列番号５３−ＣＬＲＮ−１１ＮＦ
【化６８−１】
2021529519.tif 000132
【化６８−２】
2021529519.tif 000133
【化６８−３】
2021529519.tif 000134
配列番号５４−ＣＬＲＮ−１２
【化６９−１】
2021529519.tif 000135
【化６９−２】
2021529519.tif 000136
【化６９−３】
2021529519.tif 000137
配列番号５５−ＣＬＲＮ−１３
【化７０−１】
2021529519.tif 000138
【化７０−２】
2021529519.tif 000139
【化７０−３】
2021529519.tif 000140
配列番号５６−ＣＬＲＮ−１４
【化７１−１】
2021529519.tif 000141
【化７１−２】
2021529519.tif 000142
【化７１−３】
2021529519.tif 000143
配列番号５７−ＣＬＲＮ−１５
【化７２−１】
2021529519.tif 000144
【化７２−２】
2021529519.tif 000145
配列番号５８−ＣＬＲＮ−１６
【化７３−１】
2021529519.tif 000146
【化７３−２】
2021529519.tif 000147
【化７３−３】
2021529519.tif 000148
配列番号５９−ＣＬＲＮ−１７
【化７４】
2021529519.tif 000149
配列番号６０−ＣＬＲＮ−１８
【化７５−１】
2021529519.tif 000150
【化７５−２】
2021529519.tif 000151
【化７５−３】
2021529519.tif 000152
【図１】
2021529519.tif 000153
【図２】
2021529519.tif 000154
【図３】
2021529519.tif 000155
【図４】
2021529519.tif 000156
【図５】
2021529519.tif 000157
【図６】
2021529519.tif 000158
【図７】
2021529519.tif 000159
【図８】
2021529519.tif 000160
【図９】
2021529519.tif 000161
【図１０】
2021529519.tif 000162
【図１１】
2021529519.tif 000163
【図１２】
2021529519.tif 000164
【図１３】
2021529519.tif 000165
【図１４】
2021529519.tif 000166
【図１５】
2021529519.tif 000167
【図１６】
2021529519.tif 000168
【図１７】
2021529519.tif 000169
【図１８】
2021529519.tif 000170
【図１９】
2021529519.tif 000171
【図２０】
2021529519.tif 000172
【図２１】
2021529519.tif 000173
【図２２】
2021529519.tif 000174
【図２３】
2021529519.tif 000175
【図２４】
2021529519.tif 000176
【図２５】
2021529519.tif 000177
【図２６】
2021529519.tif 000178
【図２７】
2021529519.tif 000179
【図２８】
2021529519.tif 000180
【図２９】
2021529519.tif 000181
【図３０】
2021529519.tif 000182
【図３１】
2021529519.tif 000183
【図３２】
2021529519.tif 000184
【図３３】
2021529519.tif 000185
【図３４】
2021529519.tif 000186
【図３５】
2021529519.tif 000187
【図３６】
2021529519.tif 000188
【配列表】
2021529519000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月26日(2021.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が任意選択で、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、
前記少なくとも２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含み、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記少なくとも２つの異なるベクターが互いに相同組換えを経て、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項２】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも２つの異なるベクターのうちの少なくとも１つが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２４】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２５】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２９】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３２】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記コードされた部分のうちのいずれの部分のアミノ酸配列も、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と重複していない、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記重複するアミノ酸配列が、約３０アミノ酸残基〜約２０２アミノ酸残基の長さである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ベクターが、２つの異なるベクターを含み、前記２つの異なるベクターの各々が、イントロンの異なるセグメントを含み、前記イントロンが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み、前記２つの異なるイントロンセグメントの配列が、少なくとも１００ヌクレオチド重複する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記２つの異なるイントロンセグメントの配列が、１００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド重複する、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体が、約５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチドの長さである、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体が、５００ヌクレオチド〜５，０００ヌクレオチドの長さである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物中の異なるベクターの数が２つである、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記２つの異なるベクターのうちの第１のベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含む、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｎ末端部分が、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｎ末端部分が、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記第１のベクターが、５’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５０】
前記第１のベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、請求項４１〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記２つの異なるベクターのうちの第２のベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む、請求項４０〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｃ末端部分が、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
前記第２のベクターが、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５６】
前記第２のベクターが、３’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項６２】
単一の核酸ベクターを含む組成物であって、前記ベクターが、（ｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする第１のコード配列、及び（ｉｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする第２のコード配列のうちの一方または両方を含み、
前記第１及び第２のコード配列のうちの一方または両方が、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するイントロンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、前記組成物。
【請求項６３】
前記単一の核酸ベクターが、前記第１のコード配列を含有し、前記第２のコード配列は含有しない、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
前記単一の核酸ベクターが、前記第２のコード配列を含有し、前記第１のコード配列は含有しない、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６５】
前記単一の核酸ベクターが、前記第１のコード配列及び前記第２のコード配列の両方を含有する、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項６２、６３、及び６５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項６２、６４、及び６５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
前記単一の核酸ベクターが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方をさらに含む、請求項６２〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７３】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７９】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項８３】
前記単一の核酸ベクターが、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８４】
前記単一の核酸ベクターが、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８５】
前記単一の核酸ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８６】
前記単一の核酸ベクターが、ＡＡＶベクターである、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
前記単一の核酸ベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、請求項６２に記載の組成物。
【請求項８８】
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
前記単一の核酸ベクターが、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項８７に記載の組成物。
【請求項９０】
薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１〜８９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９１】
請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項９２】
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、請求項９１に記載のキット。
【請求項９３】
哺乳動物の蝸牛に導入されることを特徴とする、請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項９３または９４に記載の組成物。
【請求項９６】
哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させるための、請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物であって、前記哺乳類細胞に導入されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項９７】
前記哺乳類細胞が蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９８】
前記哺乳類細胞が網膜細胞である、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９９】
前記哺乳類細胞がヒト細胞である、請求項９６〜９８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１００】
前記哺乳類細胞が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている、請求項９６〜９９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０１】
哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させるための、請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物であって、
前記哺乳動物の前記蝸牛に導入されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項１０２】
哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させるための、請求項〜９０のいずれか１項に記載の組成物であって、
前記哺乳動物の前記眼に眼内投与されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項１０３】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項１０１または１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０１〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０５】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法において使用するための、請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物であって、前記方法が、
前記組成物を前記対象の前記蝸牛に投与することを含む、前記組成物。
【請求項１０６】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法において使用するための、請求項１〜９０のいずれか１項に記載の組成物であって、前記方法が、
前記組成物を前記対象の前記眼に投与することを含む、前記組成物。
【請求項１０７】
前記対象が、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する、請求項１０５または１０６に記載の組成物。
【請求項１０８】
前記対象がヒトである、請求項１０５〜１０７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０９】
前記方法が、前記投与ステップの前に、前記対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む、請求項１０５〜１０８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１０】
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、スプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端におけるポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記２つのコードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項１１１】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１１２に記載の組成物。
【請求項１１４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１１５に記載の組成物。
【請求項１１７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１１８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１１７に記載の組成物。
【請求項１１９】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１２０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１２１に記載の組成物。
【請求項１２３】
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１２３に記載の組成物。
【請求項１２５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１２４に記載の組成物。
【請求項１２６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１２５に記載の組成物。
【請求項１２７】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１１０〜１２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２８】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１２９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２８に記載の組成物。
【請求項１３０】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２９に記載の組成物。
【請求項１３１】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３２】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１３３】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１３４】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３３に記載の組成物。
【請求項１３５】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３４に記載の組成物。
【請求項１３６】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１３５に記載の組成物。
【請求項１３７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１２７に記載の組成物。
【請求項１３８】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３９】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４０】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４１】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項１４０に記載の組成物。
【請求項１４２】
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、請求項１１０〜１４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４３】
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、前記スプライスドナー配列の３’側に位置付けられた第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、第２の検出可能マーカー遺伝子と、前記第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項１４４】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１４３に記載の組成物。
【請求項１４５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１４４に記載の組成物。
【請求項１４６】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１４５に記載の組成物。
【請求項１４７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１４６に記載の組成物。
【請求項１４８】
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１４４に記載の組成物。
【請求項１４９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１４８に記載の組成物。
【請求項１５０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１５０に記載の組成物。
【請求項１５２】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１４３に記載の組成物。
【請求項１５３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１５２に記載の組成物。
【請求項１５４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１５３に記載の組成物。
【請求項１５５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１５４に記載の組成物。
【請求項１５６】
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１５２に記載の組成物。
【請求項１５７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１５６に記載の組成物。
【請求項１５８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１５７に記載の組成物。
【請求項１５９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１５８に記載の組成物。
【請求項１６０】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１４３〜１５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６１】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１６２】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６１に記載の組成物。
【請求項１６３】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６２に記載の組成物。
【請求項１６４】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６３に記載の組成物。
【請求項１６５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１６６】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１６７】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６６に記載の組成物。
【請求項１６８】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６７に記載の組成物。
【請求項１６９】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１６８に記載の組成物。
【請求項１７０】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１６０に記載の組成物。
【請求項１７１】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７２】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７３】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７４】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項１７３に記載の組成物。
【請求項１７５】
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、請求項１４３〜１７４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７６】
前記第１または第２の検出可能マーカー遺伝子が、アルカリホスファターゼである、請求項１４３〜１７５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７７】
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターに対して３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、前記スプライスドナー配列に対して３’側に位置付けられたＦ１ファージ組換え誘導領域とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、前記Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記２つのコードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記２つのコードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
【請求項１７８】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１７７に記載の組成物。
【請求項１７９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１７８に記載の組成物。
【請求項１８０】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１７９に記載の組成物。
【請求項１８１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１８０に記載の組成物。
【請求項１８２】
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１７８に記載の組成物。
【請求項１８３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１８２に記載の組成物。
【請求項１８４】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１８３に記載の組成物。
【請求項１８５】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１８４に記載の組成物。
【請求項１８６】
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、請求項１７７に記載の組成物。
【請求項１８７】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１８６に記載の組成物。
【請求項１８８】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、請求項１８７に記載の組成物。
【請求項１８９】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、請求項１８８に記載の組成物。
【請求項１９０】
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、請求項１８６に記載の組成物。
【請求項１９１】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１９０に記載の組成物。
【請求項１９２】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、請求項１９１に記載の組成物。
【請求項１９３】
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、請求項１９２に記載の組成物。
【請求項１９４】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、請求項１７７〜１９３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９５】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項１９６】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９５に記載の組成物。
【請求項１９７】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９６に記載の組成物。
【請求項１９８】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９７に記載の組成物。
【請求項１９９】
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項２００】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項２０１】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２００に記載の組成物。
【請求項２０２】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２０１に記載の組成物。
【請求項２０３】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２０２に記載の組成物。
【請求項２０４】
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１９４に記載の組成物。
【請求項２０５】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０６】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０７】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０８】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、請求項２０７に記載の組成物。
【請求項２０９】
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、請求項１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１０】
請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項２１１】
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、請求項２１０に記載のキット。
【請求項２１２】
哺乳動物の蝸牛に導入されることを特徴とする、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２１２に記載の組成物。
【請求項２１４】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項２１２または２１３に記載の組成物。
【請求項２１５】
哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させるための、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物であって、前記哺乳類細胞に導入されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項２１６】
前記哺乳類細胞が蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である、請求項２１５に記載の組成物。
【請求項２１７】
前記哺乳類細胞が網膜細胞である、請求項２１５に記載の組成物。
【請求項２１８】
前記哺乳類細胞がヒト細胞である、請求項２１５〜２１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１９】
前記哺乳類細胞が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている、請求項２１５〜２１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２０】
哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させるための、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物であって、
前記哺乳動物の前記蝸牛に導入されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項２２１】
哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させるための、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物であって、
前記哺乳動物の前記眼に眼内投与されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項２２２】
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、請求項２２０または２２１に記載の組成物。
【請求項２２３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２２０〜２２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２４】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法において使用するための、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物であって、前記方法が、
前記組成物を前記対象の前記蝸牛に投与することを含む、前記組成物。
【請求項２２５】
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法において使用するための、請求項１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物であって、前記方法が、
前記組成物を前記対象の前記眼に投与することを含む、前記組成物。
【請求項２２６】
前記対象が、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する、請求項２２４または２２５に記載の組成物。
【請求項２２７】
前記対象がヒトである、請求項２２４〜２２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２８】
前記方法が、前記投与ステップの前に、前記対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む、請求項２２４〜２２７のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び図から、ならびに特許請求の範囲から明らかとなろう。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ＣＬＲＮ１タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が任意選択で、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、
前記少なくとも２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含み、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記少なくとも２つの異なるベクターが互いに相同組換えを経て、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
（項目２）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目２に記載の組成物。
（項目７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目７に記載の組成物。
（項目９）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームの異なる部分をコードするコード配列を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
前記少なくとも２つの異なる核酸ベクターのうちの１つが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
前記少なくとも２つの異なるベクターのうちの少なくとも１つが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、項目１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１９）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１８に記載の組成物。
（項目２０）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２０に記載の組成物。
（項目２２）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１８に記載の組成物。
（項目２４）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１８に記載の組成物。
（項目２５）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１８に記載の組成物。
（項目２９）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、項目１に記載の組成物。
（項目３０）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、項目１に記載の組成物。
（項目３１）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、項目１に記載の組成物。
（項目３２）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、項目３１に記載の組成物。
（項目３３）
前記コードされた部分のうちのいずれの部分のアミノ酸配列も、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と重複していない、項目１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３４）
前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複する、項目１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３５）
前記重複するアミノ酸配列が、約３０アミノ酸残基〜約２０２アミノ酸残基の長さである、項目３４に記載の組成物。
（項目３６）
前記ベクターが、２つの異なるベクターを含み、前記２つの異なるベクターの各々が、イントロンの異なるセグメントを含み、前記イントロンが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み、前記２つの異なるイントロンセグメントの配列が、少なくとも１００ヌクレオチド重複する、項目１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３７）
前記２つの異なるイントロンセグメントの配列が、１００ヌクレオチド〜約８００ヌクレオチド重複する、項目３６に記載の組成物。
（項目３８）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体が、約５００ヌクレオチド〜約１０，０００ヌクレオチドの長さである、項目１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３９）
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列全体が、５００ヌクレオチド〜５，０００ヌクレオチドの長さである、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
前記組成物中の異なるベクターの数が２つである、項目１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目４１）
前記２つの異なるベクターのうちの第１のベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含む、項目４０に記載の組成物。
（項目４２）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｎ末端部分が、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである、項目４１に記載の組成物。
（項目４３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｎ末端部分が、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである、項目４１に記載の組成物。
（項目４４）
前記第１のベクターが、５’ＵＴＲ配列をさらに含む、項目４１に記載の組成物。
（項目４５）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目４５に記載の組成物。
（項目４７）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目４６に記載の組成物。
（項目４８）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目４７に記載の組成物。
（項目４９）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目４４に記載の組成物。
（項目５０）
前記第１のベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、項目４１〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目５１）
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、項目５０に記載の組成物。
（項目５２）
前記２つの異なるベクターのうちの第２のベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む、項目４０〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目５３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸〜２０２アミノ酸の長さである、項目５２に記載の組成物。
（項目５４）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記Ｃ末端部分が、６０アミノ酸〜１７０アミノ酸の長さである、項目５３に記載の組成物。
（項目５５）
前記第２のベクターが、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、項目５２〜５４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目５６）
前記第２のベクターが、３’ＵＴＲ配列をさらに含む、項目５２〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目５７）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目５６に記載の組成物。
（項目５８）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目５７に記載の組成物。
（項目５９）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目５８に記載の組成物。
（項目６０）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目５９に記載の組成物。
（項目６１）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目５６に記載の組成物。
（項目６２）
単一の核酸ベクターを含む組成物であって、前記ベクターが、（ｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする第１のコード配列、及び（ｉｉ）ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする第２のコード配列のうちの一方または両方を含み、
前記第１及び第２のコード配列のうちの一方または両方が、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するイントロンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、前記組成物。
（項目６３）
前記単一の核酸ベクターが、前記第１のコード配列を含有し、前記第２のコード配列は含有しない、項目６２に記載の組成物。
（項目６４）
前記単一の核酸ベクターが、前記第２のコード配列を含有し、前記第１のコード配列は含有しない、項目６２に記載の組成物。
（項目６５）
前記単一の核酸ベクターが、前記第１のコード配列及び前記第２のコード配列の両方を含有する、項目６２に記載の組成物。
（項目６６）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目６２、６３、及び６５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目６７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目６６に記載の組成物。
（項目６８）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目６７に記載の組成物。
（項目６９）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目６２、６４、及び６５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目７０）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目６９に記載の組成物。
（項目７１）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目７０に記載の組成物。
（項目７２）
前記単一の核酸ベクターが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方をさらに含む、項目６２〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目７３）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７２に記載の組成物。
（項目７４）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７３に記載の組成物。
（項目７５）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７４に記載の組成物。
（項目７６）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７５に記載の組成物。
（項目７７）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目７２に記載の組成物。
（項目７８）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７２に記載の組成物。
（項目７９）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７８に記載の組成物。
（項目８０）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目７９に記載の組成物。
（項目８１）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目８０に記載の組成物。
（項目８２）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目７２に記載の組成物。
（項目８３）
前記単一の核酸ベクターが、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、項目６２に記載の組成物。
（項目８４）
前記単一の核酸ベクターが、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、項目６２に記載の組成物。
（項目８５）
前記単一の核酸ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、項目６２に記載の組成物。
（項目８６）
前記単一の核酸ベクターが、ＡＡＶベクターである、項目８５に記載の組成物。
（項目８７）
前記単一の核酸ベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、項目６２に記載の組成物。
（項目８８）
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、項目８７に記載の組成物。
（項目８９）
前記単一の核酸ベクターが、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、項目８７に記載の組成物。
（項目９０）
薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、項目１〜８９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目９１）
項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
（項目９２）
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、項目９１に記載のキット。
（項目９３）
哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、方法。
（項目９４）
前記哺乳動物がヒトである、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、項目９３または９４に記載の方法。
（項目９６）
哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を前記哺乳類細胞に導入することを含む、前記方法。
（項目９７）
前記哺乳類細胞が蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記哺乳類細胞が網膜細胞である、項目９６に記載の方法。
（項目９９）
前記哺乳類細胞がヒト細胞である、項目９６〜９８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１００）
前記哺乳類細胞が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている、項目９６〜９９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０１）
哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記蝸牛に、治療上有効量の項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、前記方法。
（項目１０２）
哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記眼に、治療上有効量の項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を眼内投与することを含む、前記方法。
（項目１０３）
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、項目１０１または１０２に記載の方法。
（項目１０４）
前記哺乳動物がヒトである、項目１０１〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０５）
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記蝸牛に投与することを含む、前記方法。
（項目１０６）
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の項目１〜９０のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記眼に投与することを含む、前記方法。
（項目１０７）
前記対象が、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する、項目１０５または１０６に記載の方法。
（項目１０８）
前記対象がヒトである、項目１０５〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０９）
前記投与ステップの前に、前記対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む、項目１０５〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１０）
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、スプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端におけるポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記２つのコードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
（項目１１１）
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、項目１１０に記載の組成物。
（項目１１２）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１１１に記載の組成物。
（項目１１３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１１２に記載の組成物。
（項目１１４）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１１３に記載の組成物。
（項目１１５）
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１１１に記載の組成物。
（項目１１６）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１１５に記載の組成物。
（項目１１７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１１６に記載の組成物。
（項目１１８）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１１７に記載の組成物。
（項目１１９）
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、項目１１０に記載の組成物。
（項目１２０）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１１９に記載の組成物。
（項目１２１）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１２０に記載の組成物。
（項目１２２）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１２１に記載の組成物。
（項目１２３）
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１１９に記載の組成物。
（項目１２４）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１２３に記載の組成物。
（項目１２５）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１２４に記載の組成物。
（項目１２６）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１２５に記載の組成物。
（項目１２７）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、項目１１０〜１２６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２８）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１２７に記載の組成物。
（項目１２９）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１２８に記載の組成物。
（項目１３０）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１２９に記載の組成物。
（項目１３１）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１３０に記載の組成物。
（項目１３２）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１２７に記載の組成物。
（項目１３３）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１２７に記載の組成物。
（項目１３４）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１３３に記載の組成物。
（項目１３５）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１３４に記載の組成物。
（項目１３６）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１３５に記載の組成物。
（項目１３７）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１２７に記載の組成物。
（項目１３８）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、項目１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３９）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、項目１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１４０）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、項目１１０〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１４１）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、項目１４０に記載の組成物。
（項目１４２）
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、項目１１０〜１４１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１４３）
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、前記スプライスドナー配列の３’側に位置付けられた第１の検出可能マーカー遺伝子とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、第２の検出可能マーカー遺伝子と、前記第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
（項目１４４）
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、項目１４３に記載の組成物。
（項目１４５）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１４４に記載の組成物。
（項目１４６）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１４５に記載の組成物。
（項目１４７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１４６に記載の組成物。
（項目１４８）
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１４４に記載の組成物。
（項目１４９）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１４８に記載の組成物。
（項目１５０）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１４９に記載の組成物。
（項目１５１）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１５０に記載の組成物。
（項目１５２）
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、項目１４３に記載の組成物。
（項目１５３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１５２に記載の組成物。
（項目１５４）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１５３に記載の組成物。
（項目１５５）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１５４に記載の組成物。
（項目１５６）
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１５２に記載の組成物。
（項目１５７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１５６に記載の組成物。
（項目１５８）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１５７に記載の組成物。
（項目１５９）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１５８に記載の組成物。
（項目１６０）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、項目１４３〜１５９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１６１）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６０に記載の組成物。
（項目１６２）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６１に記載の組成物。
（項目１６３）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６２に記載の組成物。
（項目１６４）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６３に記載の組成物。
（項目１６５）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１６０に記載の組成物。
（項目１６６）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６０に記載の組成物。
（項目１６７）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６６に記載の組成物。
（項目１６８）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６７に記載の組成物。
（項目１６９）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１６８に記載の組成物。
（項目１７０）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１６０に記載の組成物。
（項目１７１）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、項目１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１７２）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、項目１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１７３）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、項目１４３〜１７０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１７４）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、項目１７３に記載の組成物。
（項目１７５）
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、項目１４３〜１７４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１７６）
前記第１または第２の検出可能マーカー遺伝子が、アルカリホスファターゼである、項目１４３〜１７５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１７７）
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターに対して３’側に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の前記３’末端に位置付けられたスプライスドナー配列と、前記スプライスドナー配列に対して３’側に位置付けられたＦ１ファージ組換え誘導領域とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、Ｆ１ファージ組換え誘導領域と、前記Ｆ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置付けられたスプライスアクセプター配列と、前記スプライスアクセプター配列の前記３’末端に位置付けられた、ＣＬＲＮ１タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の前記３’末端に位置付けられたポリアデニル化シグナル配列とを含み、
前記２つのコードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記２つのコードされた部分のアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのうちのいずれの単一のベクターも、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードしておらず、
哺乳類細胞に導入されるとき、前記スプライスドナー配列と前記スプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じて、それによって、完全長ＣＬＲＮ１タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
（項目１７８）
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、項目１７７に記載の組成物。
（項目１７９）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１７８に記載の組成物。
（項目１８０）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１７９に記載の組成物。
（項目１８１）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１８０に記載の組成物。
（項目１８２）
前記第２の核酸ベクターのうちの前記第１の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１７８に記載の組成物。
（項目１８３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１８２に記載の組成物。
（項目１８４）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１８３に記載の組成物。
（項目１８５）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１８４に記載の組成物。
（項目１８６）
前記第１のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の第２のアイソフォームのＮ末端部分をコードし、前記第２のコード配列が、ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームのＣ末端部分をコードする、項目１７７に記載の組成物。
（項目１８７）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１８６に記載の組成物。
（項目１８８）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５を含む、項目１８７に記載の組成物。
（項目１８９）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第２のアイソフォームが、配列番号５からなる、項目１８８に記載の組成物。
（項目１９０）
前記第１の核酸ベクターまたは前記第２の核酸ベクターが、前記ＣＬＲＮ１タンパク質の第１のアイソフォームをコードする配列をさらに含む、項目１８６に記載の組成物。
（項目１９１）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、項目１９０に記載の組成物。
（項目１９２）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３を含む、項目１９１に記載の組成物。
（項目１９３）
前記ＣＬＲＮ１タンパク質の前記第１のアイソフォームが、配列番号３からなる、項目１９２に記載の組成物。
（項目１９４）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターのうちの一方または両方が、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または両方を含む、項目１７７〜１９３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１９５）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１９４に記載の組成物。
（項目１９６）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１９５に記載の組成物。
（項目１９７）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１９６に記載の組成物。
（項目１９８）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１９７に記載の組成物。
（項目１９９）
前記５’ＵＴＲが、配列番号１２と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１９４に記載の組成物。
（項目２００）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドを含む、項目１９４に記載の組成物。
（項目２０１）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２００に記載の組成物。
（項目２０２）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２０１に記載の組成物。
（項目２０３）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５内の任意の箇所からの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを含む、項目２０２に記載の組成物。
（項目２０４）
前記３’ＵＴＲが、配列番号１５と少なくとも８０％同一である配列を含む、項目１９４に記載の組成物。
（項目２０５）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルスベクターである、項目１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２０６）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）である、項目１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２０７）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクターである、項目１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２０８）
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターの各々が、ＡＡＶベクターである、項目２０７に記載の組成物。
（項目２０９）
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、ＣＬＲＮ１ゲノムＤＮＡの２つの連続するエクソンに及び、かつ前記２つの連続するエクソンの間にイントロン配列を欠いているヌクレオチド配列を含む、項目１７７〜２０４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２１０）
項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
（項目２１１）
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、項目２１０に記載のキット。
（項目２１２）
哺乳動物の蝸牛に、治療上有効量の項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、方法。
（項目２１３）
前記哺乳動物がヒトである、項目２１２に記載の方法。
（項目２１４）
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、項目２１２または２１３に記載の方法。
（項目２１５）
哺乳類細胞において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を前記哺乳類細胞に導入することを含む、前記方法。
（項目２１６）
前記哺乳類細胞が蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である、項目２１５に記載の方法。
（項目２１７）
前記哺乳類細胞が網膜細胞である、項目２１５に記載の方法。
（項目２１８）
前記哺乳類細胞がヒト細胞である、項目２１５〜２１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１９）
前記哺乳類細胞が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に判定されている、項目２１５〜２１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２０）
哺乳動物の蝸牛内の内有毛細胞、外有毛細胞、または両方において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記蝸牛に、治療上有効量の項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を導入することを含む、前記方法。
（項目２２１）
哺乳動物の眼において完全長ＣＬＲＮ１タンパク質の発現を増加させる方法であって、
前記哺乳動物の前記眼に、治療上有効量の項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を眼内投与することを含む、前記方法。
（項目２２２）
前記哺乳動物が、欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると以前に特定されている、項目２２０または２２１に記載の方法。
（項目２２３）
前記哺乳動物がヒトである、項目２２０〜２２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２４）
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において聴力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記蝸牛に投与することを含む、前記方法。
（項目２２５）
欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有すると特定された対象において視力喪失を治療する方法であって、
治療上有効量の項目１１０〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を前記対象の前記眼に投与することを含む、前記方法。
（項目２２６）
前記対象が、アッシャー症候群ＩＩＩ型を有する、項目２２４または２２５に記載の方法。
（項目２２７）
前記対象がヒトである、項目２２４〜２２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２８）
前記投与ステップの前に、前記対象が欠陥のあるＣＬＲＮ１遺伝子を有することを判定することをさらに含む、項目２２４〜２２７のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
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