(57)【要約】  本発明は、ダブラフェニブ、トラメチニブ及びＥｒｋ阻害剤を含む医薬品の組合せ；それを含む医薬組成物；並びにＭＡＰＫ経路阻害が有益である状態の処置又は予防、例えば癌の処置においてこのような組合せ及び組成物を使用する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物及び４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品の組合せ。
【請求項２】
Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）又はその薬学的に許容される塩及び４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩は、任意の順序で別々に、同時に又は逐次的に投与される、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
経口投与のためのものである、請求項１又は２に記載の医薬品の組合せ。
【請求項４】
Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、経口剤形におけるものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ。
【請求項５】
Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）は、経口剤形におけるものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ。
【請求項６】
４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、経口剤形におけるものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物又は商業用パッケージ。
【請求項８】
癌の処置において使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ又は請求項７に記載の医薬組成物若しくは商業用パッケージ。
【請求項９】
前記癌は、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される、請求項８に記載の使用のための医薬品の組合せ又は医薬組成物若しくは商業用パッケージ。
【請求項１０】
前記癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌であり、任意選択で、前記癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣである、請求項８に記載の使用のための医薬品の組合せ又は医薬組成物若しくは商業用パッケージ。
【請求項１１】
癌の処置のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ又は請求項７に記載の医薬組成物若しくは商業用パッケージの使用。
【請求項１２】
前記癌は、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択され、任意選択で、前記癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌であり、任意選択で、前記癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣである、請求項１１に記載の医薬品の組合せ又は医薬組成物の使用。
【請求項１３】
乳癌、胆管癌、結腸直腸癌（例えば、進行性又は転移性結腸直腸癌、任意選択で、前記癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣである）、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ若しくは商業用パッケージ又は請求項７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１４】
Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、１日当たり約１〜約１５０ｍｇ（例えば、１日当たり１、２、５、１０、５０、１００又は１５０ｍｇ）の用量で経口的に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）は、１日当たり約０．５〜約２ｍｇ（例えば、１日当たり約０．５、１又は２ｍｇ、例えば１日当たりトラメチニブジメチルスルホキシドの形態で約０．５６３５、１．１２７又は２．２５４ｍｇ）の用量で経口的に投与される、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、１日当たり約５０〜約１００ｍｇの用量、例えば１日当たり約５０、７５又は１００ｍｇの用量で経口的に投与される、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩、トラメチニブ又はその薬学的塩若しくは溶媒和物及びＥｒｋ阻害剤（ＥＲＫｉ）、例えば４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（「化合物Ａ」）又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品の組合せ；それを含む医薬組成物；それを含む商業用パッケージ；並びにＭＡＰＫ経路阻害が有益である状態の処置又は予防、例えば癌の処置においてこのような組合せ及び組成物を使用する方法に関する。本発明は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、例えばＢＲＡＦ機能獲得型結腸直腸癌を含むこのような状態又は癌の処置において使用するためのこのような組合せを提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＡＰＫ経路は、細胞増殖、分化及び生存を推進する重要なシグナル伝達カスケードである。この経路の調節不全は、腫瘍化の多くの例の根底にある。ＭＡＰＫ経路の異常なシグナル伝達又は不適当な活性化は、複数の腫瘍タイプにおいて示されており、ＲＡＳ及びＢＲＡＦにおける活性化変異を含めたいくつかの別個の機序を通して起こり得る。ＭＡＰＫ経路は、ヒト癌において多くの場合に変異しており、ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦ変異は、最も頻度が高い（概ね３０％）。ＲＡＳ変異、特に機能獲得型変異は、全ての癌の９〜３０％において検出されており、ＫＲＡＳ変異は、最も蔓延している（８６％）。
【０００３】
細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）は、細胞及び細胞内小器官への細胞外シグナルの伝達に関与しているシグナル伝達キナーゼの１つのクラスである。ＥＲＫ１及びＥＲＫ２は、広範囲の活性をレギュレートすることに関与しており、ＥＲＫ１／２カスケードの調節不全は、神経変性疾患、発育異常疾患、糖尿病及び癌を含めた種々の病態をもたらすことが公知である。そのシグナル伝達カスケードにおけるＥＲＫ１／２の上流の活性化変異は、全ての癌の半分超について関与していると考えられるため、癌におけるＥＲＫ１／２の役割は、特に重要である。さらに、過剰なＥＲＫ１／２活性は、癌でも見出され、ここで、上流の構成成分は、変異しておらず、これは、ＥＲＫ１／２シグナル伝達が、変異性活性化を伴わない癌においてでさえ発癌において役割を果たしていることを示唆する。ＥＲＫ経路は、腫瘍細胞移動及び浸潤を制御することも示されており、このように転移と関連し得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
特定の癌を患っている患者についての予後は、依然として不良である。処置に対する耐性が頻繁に起こり、全ての患者が利用可能な処置に対して応答するとは限らない。例えば、ＢＲＡＦ変異を伴う進行性結腸直腸癌を患っている患者についての生存期間の中央値は、１２カ月未満である。このように、癌を患っている患者のための新規な治療を開発し、より良好な臨床成績を達成することが重要である。より良好な耐容性を示し、且つ／又は耐久性のある抗腫瘍応答を実現する処置法の選択肢も望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の組合せであるダブラフェニブ、トラメチニブ及びＥｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａは、これらに限定されないが、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌を含めた、ＭＡＰＫ経路の異常な活性からもたらされる疾患又は障害の処置のための治療として使用することができる。ダブラフェニブ、トラメチニブ及びＥｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａの組合せは、ＢＲＡＦ機能獲得型又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体である、進行性又は転移性の結腸直腸癌を含めた結腸直腸癌（ＣＲＣ）の処置において特に有用である。
【０００６】
本発明は、
（ａ）構造：
【化１】
2021519285.tif 000002
を有するＮ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、
（ｂ）構造：
【化２】
2021519285.tif 000003
を有するＮ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、及び
（ｃ）構造：
【化３】
2021519285.tif 000004
を有する４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩
を含む医薬品の組合せを提供する。
【０００７】
ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩、トラメチニブ又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物及び化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩の医薬品の組合せは、本明細書において「本発明の組合せ」とも称される。
【０００８】
癌の処置において使用するための、例えば乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌において使用するための本発明の組合せが提供される。
【０００９】
癌の処置において使用するための、例えば乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌において使用するための、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩、トラメチニブ又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物及びＥｒｋ阻害剤の医薬品の組合せが提供される。ＢＲＡＦ機能獲得型又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体である、結腸直腸癌（進行性又は転移性結腸直腸癌を含む）の処置において使用するための、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩、トラメチニブ又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物及びＥｒｋ阻害剤の組合せも提供される。
【００１０】
本明細書においてまた提供するのは、ＢＲＡＦ機能獲得型又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体である、結腸直腸癌（進行性又は転移性結腸直腸癌を含む）の処置において使用するための本発明の組合せである。
【００１１】
ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩及びトラメチニブ又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物との同時の投与による、癌の処置において使用するための、例えば乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌において使用するためのＥｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩も提供される。
【００１２】
ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩及びトラメチニブ又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物との同時の投与による、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣである結腸直腸癌（進行性又は転移性結腸直腸癌を含む）において且つＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体結腸直腸癌の処置において使用するためのＥｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩も提供される。
【００１３】
本発明の組合せの別の実施形態では、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩と、トラメチニブ又はその薬学的に許容される塩と、化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩とは、同じ製剤中に存在する。
【００１４】
本発明の組合せの別の実施形態では、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩と、トラメチニブ又はその薬学的に許容される塩と、化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩とは、別々の製剤中に存在する。
【００１５】
別の実施形態では、本発明の組合せは、同時又は（任意の順序の）順次投与のためのものである。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に治療的有効量の本発明の組合せを投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
方法のさらなる実施形態では、癌は、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される。
【００１８】
さらなる実施形態では、本発明の組合せは、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置するための医薬の製造における使用を提供する。
【００１９】
さらなる実施形態では、本発明は、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置するための医薬の製造における使用のための本発明の組合せを提供する。
【００２０】
別の実施形態では、本発明の組合せを含む医薬組成物又は商業用パッケージ（例えば、パーツのキット）を提供する。
【００２１】
さらなる実施形態では、医薬組成物は、１種又は複数の薬学的に許容される添加剤をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ダブラフェニブ＋トラメチニブ、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブの組合せの抗腫瘍効果である。
【図２】ダブラフェニブ＋トラメチニブ、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブで処置されたＨＣＯＸ１３２９モデルにおける体重（ＢＷ）変化である。
【図３】ダブラフェニブ＋トラメチニブ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａの組合せの抗腫瘍効果である。
【図４】ダブラフェニブ＋トラメチニブ、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋Ｃｅｔｉｘｉｍａｂで処置されたＨＣＯＸ５４２１モデルの組合せにおける体重の変化である。
【図５】ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＨＴ２９ヒトＣＲＣ異種移植片モデルを移植された胸腺欠損のヌードマウスに投与された化合物Ａ、ダブラフェニブ、トラメチニブ及び組合せの抗腫瘍有効性である。
【図６】ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＨＴ２９ヒトＣＲＣ異種移植片モデルを移植された胸腺欠損のヌードマウスに投与された化合物Ａ、ダブラフェニブ、トラメチニブ及び組合せと関連する体重の変化である。最終ＢＷ変化パーセントは、全ての群にわたって統計的に同様であった（Ｐ＞０．０５）。
【図７】図の下に示された処置を投与されたヌードマウスに移植されたＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＨＴ２９ＣＲＣ異種移植片におけるＤＵＳＰ６転写物量である。
【図８】図の下に示された処置を投与されたヌードマウスの背側の皮膚におけるＤＵＳＰ６転写物量である。
【図９】ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＨＴ２９ヒトＣＲＣ異種移植片モデルを移植された胸腺欠損のヌードマウスに投与されたトラメチニブ＋ダブラフェニブ、化合物Ａ＋トラメチニブ、トラメチニブ＋ダブラフェニブ＋セツキシマブ及び化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブの抗腫瘍有効性である。
【図１０】ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＨＴ２９ヒトＣＲＣ異種移植片モデルを移植された胸腺欠損のヌードマウスに投与された化合物Ａ、ダブラフェニブ、トラメチニブ及び組合せと関連する体重の変化である。ハッシュマークは、マウスが研究から早期に取り除かれた例を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本明細書の上記及び下記で使用される一般用語は、好ましくは、本開示に関連して、他に示さない限り、下記の意味を有し、より一般の用語が使用される場合には常に、互いに独立に、より特定の定義によって置き換えられるか又はそのままであり、このように本発明のより詳細な実施形態を定義し得る。
【００２４】
「ダブラフェニブ」は、Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド、ＢＲＡＦ阻害剤である（Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド；Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）；及びＮ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド、メタンスルホン酸塩としても公知である）。
【００２５】
「トラメチニブ」は、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド、ＭＥＫ阻害剤である（Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシド溶媒和物；Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標）としても公知である）。
【００２６】
「セツキシマブ」は、転移性結腸直腸癌、転移性非小細胞肺癌及び頭頸部癌の処置のために使用される上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤である。セツキシマブは、転移性ＣＲＣの処置においてイリノテカンと組み合わせた使用又は単独療法として承認された、上皮成長因子受容体を標的とするＩｇＧ１モノクローナル抗体である。セツキシマブは、静脈内注入によって与えられるキメラ（マウス／ヒト）モノクローナル抗体である。
【００２７】
「化合物Ａ」は、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）１／２の阻害剤である。「化合物Ａ」は、４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミドである。化合物Ａの特に好ましい塩は、その塩酸塩である。
【００２８】
用語「対象」又は「患者」は、本明細書において使用する場合、癌又は癌と直接的若しくは間接的に関与している任意の障害を患うか又は苦しめられ得る動物を含むことを意図する。対象の例は、哺乳動物、例えばヒト、類人猿、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット及びトランスジェニックなヒトではない動物を含む。一実施形態では、対象は、ヒト、例えば癌を患っているか、癌を患う危険性があるか又は潜在的に癌を患い得るヒトである。
【００２９】
用語「処置する」又は「処置」は、本明細書において使用する場合、対象において少なくとも１つの症状を緩和、低減若しくは軽減するか、又は疾患の進行の遅延をもたらす処置を含む。例えば、処置は、障害の１つ又はいくつかの症状の減少又は障害、例えば癌の完全な根絶であり得る。本開示の意味において、用語「処置する」は、発症を抑止し、遅延させ（すなわち疾患の臨床徴候前の期間）、且つ／又は疾患を発生若しくは悪化させる危険性を低減させることも意味する。
【００３０】
用語「含む」及び「含める」は、他に断らない限り、本明細書において、それらの拡張可能及び非限定的な意味で使用される。
【００３１】
本発明の記載に関連して（特に下記の特許請求の範囲に関連して）、用語「１つの（ａ）」、及び「１つの（ａｎ）」、及び「その」並びに同様の参照対象は、本明細書において他に示さない限り又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数及び複数の両方を包含すると解釈される。複数形が化合物、塩などについて使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味すると考えられる。
【００３２】
「組合せ」、又は「と組み合わせた」、又は「との同時の投与」及び同様のものにより、治療又は治療剤が同時に物理的に混合若しくは投与され、且つ／又は一緒の送達のために配合されなければならないことを暗示することを意図されないが、送達のこれらの方法は、本明細書に記載されている範囲内である。これらの組合せにおける治療剤は、１つ又は複数の他のさらなる治療又は治療剤と併行的に、その前又はその後に投与することができる。治療剤又は治療プロトコルは、任意の順序で投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤のために決定した用量及び／又はタイムスケジュールで投与される。この組合せにおいて利用されるさらなる治療剤は、単一の組成物中で一緒に投与され得るか、又は異なる組成物中で別々に投与され得ることがさらに認識される。一般に、組み合わせて利用されるさらなる治療剤は、それらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予想される。一部の実施形態では、組み合わせて利用されるレベルは、単剤治療法として利用されるものより低い。
【００３３】
投与量又は用量を本明細書において「約」で特定の量として記載するとき、実際の投与量又は用量は、記述した量から１０％まで、例えば５％まで変化し得る。「約」のこの使用は、所与の用量又は剤形中の正確な量が、投与された化合物のインビボでの効果に実質的に影響を与えることなく、様々な理由のために意図する量から僅かに異なり得ることを認識する。治療化合物の用量又は投与量が本明細書において引用される場合、その量は、その遊離形態又は非溶媒和形態での治療化合物の量を指すことを当業者は理解する。
【００３４】
語句「治療有効量」は、本明細書において使用する場合、任意の医療処置に適用可能な合理的な利益／リスク比で、動物（ヒトを含めた）における細胞の少なくとも亜集団においていくらかの所望の治療効果を生じさせるために有効な化合物、材料又は本発明の化合物を含む組成物の量を意味する。
【００３５】
語句「薬学的に許容される」は、本明細書において、正しい医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答又は他の問題若しくは合併症を伴わずに人間及び動物の組織と接触させて使用するのに適し、合理的な利益／リスク比と釣り合うそれらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指すために用いられる。
【００３６】
本発明の組合せであるダブラフェニブ、トラメチニブ又は化合物Ａは、化合物の標識されていない形態及び同位体的に標識された形態を表すことも意図する。同位体標識化合物は、選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えられた１個又は複数の原子を有する。ダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａ中に組み込むことができる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉを含む。本発明は、例えば、その中に放射性同位体、例えば３Ｈ及び１４Ｃ又は非放射性同位体、例えば２Ｈ及び１３Ｃが存在する、同位体的に標識されたダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａを含む。同位体的に標識されたダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａは、代謝研究（１４Ｃによる）、反応速度論研究（例えば、２Ｈ若しくは３Ｈによる）、検出若しくはイメージング技術、例えば薬物若しくは基質組織分布アッセイを含むポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）若しくは単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）において又は患者の放射性処置において有用である。特に、１８Ｆで標識されたダブラフェニブ、トラメチニブ又は化合物Ａは、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究のために特に望ましいことがあり得る。本発明の同位体標識された化合物は、一般に、当業者に公知の従来の技術により、又は適当な同位体標識された試薬を使用して添付の実施例において記載されているものと類似のプロセスにより調製することができる。
【００３７】
さらに、より重い同位体、特に重水素（すなわち２Ｈ又はＤ）による置換は、より大きい代謝安定性、例えばインビボでの半減期の増加、又は投与必要量の低減、又は治療指数における改善に起因する特定の治療上の利益をもたらし得る。重水素は、これに関連して、ダブラフェニブ、トラメチニブ又は化合物Ａの置換基と見なされることが理解される。このようなより重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体濃縮因子によって定義することができる。本明細書で使用される場合、用語「同位体濃縮因子」とは、同位体存在度と、指定同位体の天然存在度との間の比を意味する。ダブラフェニブ、トラメチニブ又は化合物Ａの置換基が重水素と示される場合、こうした化合物は、少なくとも３５００（それぞれ指定された重水素原子における５２．５％重水素の取り込み）、少なくとも４０００（６０％重水素の取り込み）、少なくとも４５００（６７．５％重水素の取り込み）、少なくとも５０００（７５％重水素の取り込み）、少なくとも５５００（８２．５％重水素の取り込み）、少なくとも６０００（９０％重水素の取り込み）、少なくとも６３３３．３（９５％重水素の取り込み）、少なくとも６４６６．７（９７％重水素の取り込み）、少なくとも６６００（９９％重水素の取り込み）又は少なくとも６６３３．３（９９．５％重水素の取り込み）のそれぞれ指定された重水素原子についての同位体濃縮因子を有する。
【００３８】
ダブラフェニブは、ＲＡＦ阻害活性を有する、経口的に生物が利用可能な小分子である。トラメチニブは、ＭＥＫ阻害活性を有する、経口的に生物が利用可能な小分子である。化合物Ａは、ＥＲＫ阻害活性を有する、経口的に生物が利用可能な小分子である。これは、細胞外シグナル調節キナーゼ１及び２（ＥＲＫ１／２）の阻害剤である。
【００３９】
一実施形態では、本発明の医薬品の組合せに関して、Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物及び４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品の組合せである。
【００４０】
さらなる実施形態では、医薬品の組合せであり、ここで、Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物及び４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩は、任意の順序で別々に、同時に又は逐次的に投与される。
【００４１】
別の実施形態では、本発明の医薬品の組合せは、経口投与のためのものである。
【００４２】
さらなる実施形態では、医薬品の組合せであり、ここで、Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、経口剤形におけるものである。
【００４３】
さらなる実施形態では、医薬品の組合せであり、ここで、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）は、経口剤形におけるものである。
【００４４】
さらなる実施形態では、医薬品の組合せであり、ここで、４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、経口剤形におけるものである。
【００４５】
別の実施形態では、前述の請求項のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【００４６】
別の実施形態では、癌の処置における使用のための本発明の医薬品の組合せである。
【００４７】
さらなる実施形態では、癌は、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される。
【００４８】
別の実施形態では、癌の処置のための医薬の製造のための医薬品の組合せ又は医薬組成物の使用である。
【００４９】
さらなる実施形態では、癌は、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される。
【００５０】
別の実施形態では、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に本発明の医薬品の組合せ又は医薬組成物を登用することを含む方法である。
【００５１】
さらなる実施形態では、Ｎ−（３−（５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）チアゾール−４−イル）−２−フルオロフェニル）−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、１日当たり約１、２、５、１０、５０、１００又は１５０ｍｇの用量で経口的に投与される。このように、ダブラフェニブは、本発明の任意の方法又は使用において、１日当たり約１〜約１５０ｍｇの用量又は毎日約１、２、５、１０、５０、１００及び１５０ｍｇから選択される用量で投与され得る。
【００５２】
さらなる実施形態では、Ｎ−（３−（３−シクロプロピル−５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）アセトアミド（トラメチニブ）ジメチルスルホキシドは、１日当たり、１日当たり約０．５６３５、１．１２７又は２．２５４ｍｇの用量で経口的に投与される。このように、トラメチニブは、本発明の任意の方法又は使用において、１日当たり約０．５〜約２ｍｇの用量又は毎日約０．５、１及び２ｍｇから選択される用量で投与され得る。
【００５３】
さらなる実施形態では、４−（３−アミノ−６−（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−（メチルアミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、１日当たり約５０、７５又は１００ｍｇの用量で経口的に投与される。このように、化合物Ａは、本発明の任意の方法又は使用において、１日当たり約５０〜約１００ｍｇの用量又は１日当たり約５０、７５及び１００ｍｇから選択される用量で投与され得る。
【００５４】
薬理学及び有用性
ＭＡＰＫ経路は、ヒト癌において多くの場合に変異しており、ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦ変異が最も頻度が高い（概ね３０％）。ＲＡＳ変異、特に機能獲得型変異は、全ての癌の９〜３０％において検出されており、ＫＲＡＳ変異は、最も蔓延しており（８６％）、それに続いてＮＲＡＳであり（１１％）、まれにＨＲＡＳである（３％）（Ｃｏｘ  ＡＤ，Ｆｅｓｉｋ  ＳＷ，Ｋｉｍｍｅｌｍａｎ  ＡＣ，ｅｔ  ａｌ  （２０１４），Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｎｏｖ；１３（１１）：８２８−５１．）。選択的ＢＲＡＦ阻害剤（ＢＲＡＦｉ）及びより少ない程度でＭＥＫ阻害剤（ＭＥＫｉ）は、ＢＲＡＦ変異体腫瘍において良好な活性を示しているが、現在、有効な治療は、ＫＲＡＳ変異体腫瘍のために存在しない（Ｃａｎｔｗｅｌｌ−Ｄｏｒｒｉｓ  ＥＲ，Ｏ’Ｌｅａｒｙ  ＪＪ，Ｓｈｅｉｌｓ  ＯＭ（２０１１）Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．Ｍａｒ；１０（３）：３８５−９４．）。
【００５５】
細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）は、細胞及び細胞内小器官への細胞外シグナルの伝達に関与しているシグナル伝達キナーゼの１つのクラスである。ＥＲＫ１及び２（ＥＲＫ１／２）は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路におけるキナーゼであり、それぞれｐ４２及びｐ４４とも称される。ＥＲＫ１及びＥＲＫ２は、細胞において相対的に大量で存在し（１細胞当たり約１０７個の分子）、広範囲の活性をレギュレートすることに関与している。実際、ＥＲＫ１／２カスケードの調節不全は、神経変性疾患、発育異常疾患、糖尿病及び癌を含めた種々の病態をもたらすことが公知である。２０１１年５月９日にオンラインで公開されたＷｏｒｔｚｅｌ  ａｎｄ  Ｓｅｇｅｒ，Ｇｅｎｅｓ＆Ｃａｎｃｅｒ，２：１９５−２０９（２０１１）。
【００５６】
そのシグナル伝達カスケードにおけるＥＲＫ１／２の上流の活性化変異は、全ての癌の半分超について関与していると考えられるため、癌におけるＥＲＫ１／２の役割は、特に重要である。さらに、過剰なＥＲＫ１／２活性は、癌でも見出され、ここで、上流の構成成分は、変異しておらず、これは、ＥＲＫ１／２シグナル伝達が、変異性活性化を伴わない癌においてでさえ発癌において役割を果たしていることを示唆する。ＥＲＫ経路は、腫瘍細胞移動及び浸潤を制御することも示されており、このように転移と関連し得る。Ａ．ｖｏｎ  Ｔｈｕｎ，ｅｔ  ａｌ．，ＥＲＫ２  ｄｒｉｖｅｓ  ｔｕｍｏｕｒ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ３Ｄ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ  ｂｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｂ１７  ａｎｄ  Ｌｉｐｒｉｎ−β２，Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、オンライン公開日２０１２年２月１０日を参照されたい。さらに、ｓｈＲＮＡを使用してＥＲＫ１又はＥＲＫ２を発現停止させることは、培養液中の黒色腫細胞を死滅させ、またＢＲＡＦの阻害剤に対して黒色腫細胞をより感受性とさせたことが報告されている。Ｊ．Ｑｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄ．１０：１５（２０１２）。ＥＲＫ１及び２の阻害剤は、ＭＥＫ阻害剤に対して耐性である腫瘍細胞に対して有効であり、且つＭＥＫ及びＥＲＫの阻害は、相乗的な活性を同時に実現することができることも報告されている。Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｖｏｌ．１１，１１４３（Ｍａｙ  ２０１２）。
【００５７】
肺癌は、世界中の男性及び女性に影響を与える一般のタイプの癌である。ＮＳＣＬＣは、最も一般のタイプ（概ね８５％）の肺癌であり、これらの患者の概ね７０％は、診断を行った時点で進行性疾患（ステージＩＩＩＢ又はステージＩＶ）を提示している。ＮＳＣＬＣ腫瘍の約３０％は、活性化ＫＲＡＳ変異を含有し、これらの変異は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）への耐性と関連している（Ｐａｏ  Ｗ，Ｗａｎｇ  ＴＹ，Ｒｉｅｌｙ  ＧＪ，ｅｔ  ａｌ（２００５）ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ；２（１）：ｅ１７）。活性化ＫＲＡＳ変異は、黒色腫（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１２，２１７−２６（２０１５））、膵臓癌（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１４４（６），１２２０−２９（２０１３））及び卵巣癌（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９９（１２），２０２０−２８（２００８））でも頻繁に見出される。ＢＲＡＦ変異は、ＮＳＣＬＣの３％までにおいて観察されており、またＥＧＦＲ変異陽性ＮＳＣＬＣにおいて耐性機序として説明されている。
【００５８】
また、腸癌及び結腸癌として知られている結腸直腸癌（ＣＲＣ）は、結腸又は直腸からの癌の発生である。結腸直腸癌を患っている患者、特にＢＲＡＦ変異を有する患者についての予後は、不良である。この集団についての生存期間の中央値は、１２カ月未満である。ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異は、ＣＲＣの７〜１０％において存在する。
【００５９】
下記は、様々なＭＡＰＫ経路阻害剤の相互作用を示す。ＢＲＡＦ阻害は、黒色腫においてロバストな単剤活性を示す。しかし、受容体チロシンキナーゼ再活性化は、ＢＲＡＦ機能獲得型結腸直腸癌（ＣＲＣ）において起こり、これにより、ＣＲＣは、ＢＲＡＦ阻害に対して感受性がより低くなる。ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣにおけるＭＥＫ及びＢＲＡＦ阻害剤の二重の組合せの効果に対する応答率は、約１２〜２９％で低いことが見出された。ＥＧＦＲ阻害剤をＢＲＡＦ及びＭＥＫの組合せに加えることは、ＥＧＦＲ、ＲＡＳ、ＲＡＦ及びＭＥＫにおける上流の変異の影響を受けやすいため、ＣＲＣの処置について既に承認されているＥＧＦＲ阻害剤、例えばセツキシマブを加えることは、この状況において応答率を増進させることが予想された。しかし、本発明の組合せ、すなわちダブラフェニブ、トラメチニブ及びＥＲＫ阻害剤である化合物Ａの三重の組合せは、例えば、ダブラフェニブ、トラメチニブ及びＥＧＦＲ阻害剤の三重の組合せで得られるものと比較して、より耐久性のある抗腫瘍応答を達成することを本発明者らは驚くべきことに見出した。
【００６０】
したがって、本発明は、これらに限定されないが、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌を含めた、ＭＡＰＫ経路の異常な活性からもたらされる疾患又は障害の処置のための治療において使用するための、本発明の組合せであるダブラフェニブ、トラメチニブ及びＥｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａを提供する。本発明の組合せは、結腸直腸癌（進行性又は転移性結腸直腸癌を含む）の処置において特に有用であり、例えばＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣの処置において且つＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体結腸直腸癌の処置において特に有用である。
【００６１】
医薬組成物
別の態様において、本発明は、１種又は複数の薬学的に許容される担体（添加物）及び／又は賦形剤と一緒に製剤化される、治療有効量のダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａを含む薬学的に許容される組成物を提供する。以下に詳細に記載するように、本発明の医薬組成物は、経口投与のために適応させたもの、例えば水薬（水溶液又は非水溶液又は懸濁液）、錠剤、例えば口腔内頬側、舌下及び全身的吸収を標的としたもの、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への適用のためのペースト剤を含めて、固体又は液体形態で投与のために特に製剤化され得る。
【００６２】
語句「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用する場合、薬学的に許容される材料、組成物又はビヒクル、例えば液体若しくは固体充填剤、賦形剤、添加剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルクマグネシウム、カルシウム若しくはステアリン酸亜鉛若しくはステアリン酸）又は１つの器官若しくは体の部分から別の器官若しくは体の部分に対象化合物を運搬若しくは輸送することに関与する溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者にとって傷害性でないという意味で「許容され」なくてはならない。薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例は、（１）糖、例えばラクトース、グルコース及びスクロース；（２）デンプン、例えばトウモロコシデンプン及びバレイショデンプン；（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；（４）トラガカント粉末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）添加剤、例えばカカオバター及び坐剤ワックス；（９）油、例えばピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート及び／又はポリ酸無水物；並びに（２２）医薬製剤において用いられる他の無毒性の適合性物質を含む。
【００６３】
上記で示したように、本化合物の特定の実施形態は、塩基性官能基、例えばアミノ又はアルキルアミノを含有し得、したがって薬学的に許容される酸と共に薬学的に許容される塩を形成することができる。用語「薬学的に許容される塩」は、この点において、本発明の化合物の相対的に無毒性の無機及び有機の酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクル若しくは剤形製造プロセスにおいてインサイチューで、又はその遊離塩基の形態の本発明の精製された化合物と適切な有機酸若しくは無機酸とを別々に反応させ、それに続く精製中にこのように形成された塩を単離することによって調製することができる。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナプシル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩及びラウリルスルホン酸塩などを含む。（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。
【００６４】
対象化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、無毒性の有機酸又は無機酸からの、化合物の通常の無毒性塩又は第四級アンモニウム塩を含む。例えば、こうした通常の無毒性塩は、無機酸、例えばヒドロクロリド、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などに由来するもの；及び有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などから調製した塩を含む。
【００６５】
他の場合、本発明の化合物は、１個又は複数の酸性官能基を含有し得、したがって薬学的に許容される塩基と共に薬学的に許容される塩を形成することができる。用語「薬学的に許容される塩」は、これらの場合、本発明の化合物の相対的に無毒性の無機及び有機の塩基付加塩を指す。これらの塩は、同様に、投与ビヒクル若しくは剤形製造プロセスにおいてインサイチューで、又はその遊離酸の形態の精製された化合物と、適切な塩基、例えば薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩若しくは炭酸水素塩、アンモニア又は薬学的に許容される有機第一級、第二級若しくは第三級アミンとを別々に反応させることによって調製することができる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩などを含む。塩基付加塩の形成のために有用な代表的な有機アミンは、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを含む。（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。
【００６６】
ダブラフェニブの特に好ましい塩は、そのメシル酸塩である。トラメチニブの特に好ましい溶媒和物は、そのジメチルスルホキシド溶媒和物である。化合物Ａの特に好ましい塩は、その塩酸塩である。
【００６７】
また、湿潤剤、乳化剤及び潤滑剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム並びに着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味料、香味及び芳香剤、防腐剤及び抗酸化剤が組成物に存在し得る。
【００６８】
薬学的に許容される抗酸化剤の例として、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェノールなどの油溶性抗酸化剤；並びに（３）クエン酸、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が挙げられる。
【００６９】
本発明の製剤は、経口、鼻内、局所（口腔及び舌下を含む）、直腸、膣及び／又は非経口投与に好適なものが挙げられる。製剤は、好都合には、単位剤形で存在し得、調剤の分野でよく知られる任意の方法により調製することができる。担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる活性成分の量は、処置を受ける宿主、投与の特定のモードによって変化する。担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる活性成分の量は、一般に、治療効果を生じさせる化合物のその量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、活性成分の約０．１パーセント〜約９９パーセント、好ましくは約５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセント〜約３０パーセントの範囲である。
【００７０】
特定の実施形態では、本発明の製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば胆汁酸及びポリマー担体、例えばポリエステル及びポリ酸無水物からなる群から選択される添加剤；並びに本発明の化合物を含む。特定の実施形態では、上記の製剤は、本発明の化合物を経口的に生物が利用可能なものとする。
【００７１】
これらの製剤又は組成物を調製する方法は、本発明の化合物を担体、任意選択で１種又は複数の副成分と結合させるステップを含む。一般に、製剤は、本発明の化合物を液体担体若しくは微粉化した固体担体と、又はその両方と均質且つ密接に結合させ、その後、必要に応じて生成物を成形する。
【００７２】
経口投与に好適な本発明の製剤は、カプセル、カシェ、丸薬、錠剤、ロゼンジ（着香ベース、例えば、通常、スクロース及びアカシアガム若しくはトラガカントを用いて）、粉末、顆粒の形態、又は水性若しくは非水性液体中の溶液、懸濁液若しくは固体分散体として、又は水中油形若しくは油中水形エマルジョンとして、又はエリキシル若しくはシロップとして、又は香錠（ゼラチン及びグリセリン若しくはスクロース及びアカシアガムなどの不活性基材を用いて）及び／又はマウスウォッシュなどとして存在し得、これらは、それぞれ活性成分として所定量の本発明の化合物を含有する。本発明の化合物は、ボーラス、舐剤又はペーストとしても投与され得る。
【００７３】
経口投与のための本発明の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤、トローチ剤など）において、活性成分を１種又は複数の薬学的に許容される担体、例えばクエン酸ナトリウム若しくは第二リン酸カルシウム並びに／又は下記のいずれかと混合する：（１）充填剤又は増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び／又はケイ酸；（２）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアカシア；（３）保湿剤、例えばグリセロール；（４）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート及び炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えばパラフィン；（６）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物及び界面活性剤、例えばポロキサマー及びラウリル硫酸ナトリウム；（７）湿潤剤、例えばセチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール及び非イオン性界面活性剤；（８）吸収剤、例えばカオリン及びベントナイトクレイ；（９）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸及びこれらの混合物；（１０）着色剤；並びに（１１）制御放出剤、例えばクロスポビドン又はエチルセルロース。カプセル、錠剤及び丸薬の場合、医薬組成物は、緩衝剤も含み得る。類似のタイプの固体組成物は、ラクトース又は乳糖、さらに高分子量ポリエチレングリコールなどといった賦形剤を用い、軟質及び硬質シェルゼラチンカプセルにおける充填剤としても使用され得る。
【００７４】
錠剤は、任意選択で１種又は複数の補助成分と一緒に圧縮又は成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチン若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、グリコール酸ナトリウムデンプン若しくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤又は分散剤を使用して調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を好適な機械で成形することによって製造することができる。
【００７５】
本発明の医薬組成物の錠剤及び他の固体剤形、例えば糖衣錠、カプセル、丸薬及び顆粒）は、任意選択で、刻み目を入れられ得、コーティング及び殻（例えば、腸溶性コーティング及び医薬製剤化分野で公知の他のコーティング）を備えて調製され得る。これらは、例えば、所望の放出プロフィールを提供するための様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリクス、リポソーム及び／又はミクロスフェアを用いて、活性成分の徐放又は制御放出を達成するようにも製剤化され得る。これらは、急速放出のために製剤化、例えば凍結乾燥され得る。これらは、例えば、細菌保持フィルタを介した濾過により、又は使用直前に、滅菌水若しくはいくつかの他の滅菌注射用媒体中に溶解させることができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を含有させることにより、滅菌することができる。これらの組成物は、任意選択で、不透明化剤も含み得、それらは、活性成分のみを又は好ましくは胃腸管の特定の部分において任意選択で遅延するように放出する組成物であり得る。使用することができる埋込用組成物の例は、ポリマー物質及びワックスを含む。活性成分は、必要に応じて、前述した賦形剤の１種又は複数を含むマイクロカプセル化形態でもあり得る。
【００７６】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルが挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば水又は他の溶媒など、可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなど、油（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル並びにこれらの混合物を含み得る。
【００７７】
不活性希釈剤の他に、経口用組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料、着色剤、芳香剤及び防腐剤などの補助剤を含み得る。
【００７８】
懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁剤、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、ベントナイト、寒天及びトラガカントガム並びにこれらの混合物を含み得る。
【００７９】
本発明の医薬組成物に使用することができる好適な水性及び非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用により、分散液の場合には要求される粒度の維持により、さらに界面活性剤の使用によって維持することができる。
【００８０】
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの補助剤を含有し得る。対象化合物に対する微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの含有によって確実にすることができる。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含有させることが望ましい場合もある。
【００８１】
本発明の化合物が医薬品としてヒト及び動物に投与されるとき、これらは、それ自体で、又は薬学的に許容される担体と組み合わされた、例えば０．１〜９９％（より好ましくは、１０〜３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。
【００８２】
本発明の化合物及び／又は本発明の医薬組成物は、当業者に周知の通常の方法により、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【００８３】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与レベルは、患者に対して毒性とならずに、特定の患者、組成物及び投与様式について所望の治療応答を達成する上で有効な活性成分の量を達成するために変動し得る。
【００８４】
選択される投与レベルは、様々な要因に応じて変動し得、こうした要因として、使用する本発明の特定の化合物又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用する特定の化合物の排出又は代謝速度、吸収の速度及び程度、治療期間、使用する特定の化合物と併用される他の薬物、化合物及び／又は材料、治療対象の患者の年齢、性別、体重、病状、健康状態及び過去の病歴並びに医療分野で公知の同様の要因が挙げられる。
【００８５】
当技術分野の通常の技術を有する医師又は獣医は、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師又は獣医は、要望される治療効果を達成するために必要なレベルより低いレベルにおいて、医薬組成物に使用する本発明の化合物の用量を開始し、要望される効果が達成されるまで投薬量を漸増することができる。
【００８６】
一般に、本発明の組合せの好適な１日用量は、治療効果をもたらすのに有効な最も低い用量である各化合物の量となる。こうした有効量は、一般に、前述した要因に左右される。
【００８７】
別の態様において、本発明は、１種又は複数の薬学的に許容される担体（添加物）及び／又は賦形剤と一緒に製剤化された、治療有効量の上記のような対象化合物の１つ又は複数を含む薬学的に許容される組成物を提供する。
【実施例】
【００８８】
実施例１
ダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａ
ダブラフェニブは、国際公開第２００９／１３７３９１号パンフレットの実施例５８ａによって合成する。トラメチニブは、国際公開第２００５／１２１１４２号パンフレットの実施例４−１によって合成する。化合物Ａは、国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレットの実施例１８４によって合成する。国際公開第２００５／１２１１４２号パンフレット、国際公開第２００９／１３７３９１号パンフレット及び国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレットは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されているダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａの組合せの利用は、下記の実施例において試験することによって証明することができる。
【００８９】
実施例２
インビボでのＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣモデルＨＣＯＸ１３２９に対するダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａの組合せの効果
ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ（結腸直腸癌）ＰＤＸ（患者に由来する異種移植片）モデルを移植されたマウスを用いたインビボでの抗腫瘍有効性研究を行い、ＥＲＫ１／２阻害剤、例えば化合物ＡをＭＥＫ１／２阻害剤であるトラメチニブ及びＢＲＡＦ阻害剤であるダブラフェニブの組合せに加えることの治療上の利点を評価した。６〜７週齢の雌性ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスの右腋窩領域への４百万個の腫瘍細胞の直接の皮下（ｓｃ）埋込により、ＨＣＯＸ１３２９を確立した。
【００９０】
マウスは、腫瘍断片埋込の１２日後に１５３〜３２５ｍｍ３の腫瘍体積範囲を伴って処置群（下記の表において要約）に無作為に割り付けた。ダブラフェニブをｐＨ８の脱イオン水、３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。トラメチニブをｐＨ８の脱イオン水、０．０３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。化合物ＡをｐＨ７．４のリン酸緩衝液中の０．５％ＨＰＣ／０．５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７中の懸濁液として配合し、最終ｐＨを４に調節した。セツキシマブをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の溶液として配合した。
【００９１】
【表１】
2021519285.tif 000005
【００９２】
投薬日において動物を秤量し、用量を体重補正し、投薬容量は、１０ｍｌ／ｋｇであった。腫瘍の寸法及び体重を無作為化の時点及びその後研究期間中に週２回集めた。データ収集のそれぞれの日の後に下記のデータを提供した：死亡発生率、個体及び群の平均体重並びに個体及び群の平均腫瘍体積。
【００９３】
体重の変化％は、（ＢＷ現在−ＢＷ最初）／（ＢＷ最初）×１００として計算した。データは、処置開始の日からの体重の変化パーセントとして提示する。
【００９４】
処置／対照（Ｔ／Ｃ）パーセント値は、下記の式を使用して計算した：
Ｔ／Ｃ％＝△Ｔ＞０である場合、１００×△Ｔ／△Ｃ；
退縮％＝△Ｔ＜０である場合、１００×△Ｔ／Ｔ０；
式中、
Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
△Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｔ０＝コホートの日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積；及び
△Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における対照群の平均腫瘍体積。
研究に残っているマウスのパーセント＝６−エンドポイントに達したマウスの数／６＊１００。
【００９５】
全てのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。デルタ腫瘍体積及び体重の変化パーセントは、統計解析のために使用した。群間比較は、一元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いて事後テューキー検定を使用して行った。全ての統計的評価のために、有意水準は、ｐ＜０．０５で設定した。ビヒクル対照群と比較した有意性を、他に記述しない限り報告する。
【００９６】
【表２】
2021519285.tif 000006
【００９７】
ＨＣＯＸ１３２９モデル（図１）において、ダブラフェニブ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ  ｑｄ）及びトラメチニブ（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ  ｑｄ）処置の組合せは、２２％Ｔ／Ｃを伴って統計的に有意な抗腫瘍効果を生じさせた。ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せへのＥＲＫ阻害剤である化合物Ａの添加は、４７％退縮を伴う腫瘍退縮をもたらし、これは、ビヒクル及びダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せと比較して統計的に有意である（ｐ＜０．０５）。対照的に、ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せに対してセツキシマブによるさらなる利益は、存在しない（２９％Ｔ／Ｃ対２６％Ｔ／Ｃ、ｐ＞０．０５）。
【００９８】
これらのデータは、化合物Ａ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せが、ダブラフェニブ＋トラメチニブの二重の組合せに対して、且つまたダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブの三重の組合せに対して、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣを有する患者に改善された治療上の利点を生じさせたことを示唆する。本発明の三重の組合せにおける薬剤は、経口投与に適していることからも恩恵を受け、例えば静脈内注入として投与する必要はない。
【００９９】
さらに、ＨＣＯＸ１３２９についての平均体重の変化を図２に示す。ダブラフェニブ＋トラメチニブ、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブの組合せによるマウスの処置は、それぞれ１．７１％、２．１１％及び２．２８％の体重増加を示す。有害事象の他の徴候は、この研究において観察されなかった。三重の組合せが良好な耐容性を示し得ることをこれらの結果は示す。全ての動物は、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａの三重の組合せ群における１匹の動物を除いて研究を通して生存した。
【０１００】
実施例３
インビボでのＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣモデルＨＣＯＸ５４２１に対するダブラフェニブ、トラメチニブ及び化合物Ａの組合せの効果
ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ（結腸直腸癌）ＰＤＸ（患者に由来する異種移植片）モデルＨＣＯＸ５４２１を移植したマウスを用いたインビボでの抗腫瘍有効性研究を行い、ＥＲＫ１／２阻害剤である化合物ＡをＭＥＫ１／２阻害剤であるトラメチニブ及びＢＲＡＦ阻害剤であるダブラフェニブの組合せに加えることの治療上の利点を評価した。６〜７週齢の雌性ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスの右腋窩領域への５０ｍｇの腫瘍ホモジネート及び５０％マトリゲルの直接の皮下（ｓｃ）埋込により、ＨＣＯＸ５４２１を確立した。
【０１０１】
マウスは、腫瘍断片埋込の１１日後に１８０〜２９９ｍｍ３の腫瘍体積範囲を伴って処置群（下記の表において要約）に無作為に割り付けた。ダブラフェニブをｐＨ８の脱イオン水、３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。トラメチニブをｐＨ８の脱イオン水、０．０３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。化合物ＡをｐＨ７．４のリン酸緩衝液中の０．５％ＨＰＣ／０．５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７中の懸濁液として配合し、最終ｐＨを４に調節した。セツキシマブをＰＢＳ中の溶液として配合した。
【０１０２】
【表３】
2021519285.tif 000007
【０１０３】
投薬日において動物を秤量し、用量を体重補正し、投薬容量は、１０ｍｌ／ｋｇであった。腫瘍の寸法及び体重を無作為化の時点及びその後研究期間中に週２回集めた。データ収集のそれぞれの日の後に下記のデータを提供した：死亡発生率、個体及び群の平均体重並びに個体及び群の平均腫瘍体積。
【０１０４】
体重の変化％は、（ＢＷ現在−ＢＷ最初）／（ＢＷ最初）×１００として計算した。データは、処置開始の日からの体重の変化パーセントとして提示する。
【０１０５】
処置／対照（Ｔ／Ｃ）パーセント値は、下記の式を使用して計算した：
Ｔ／Ｃ％＝△Ｔ＞０である場合、１００×△Ｔ／△Ｃ；
退縮％＝△Ｔ＜０である場合、１００×△Ｔ／Ｔ０；
式中、
Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
△Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｔ０＝コホートの日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積；及び
△Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における対照群の平均腫瘍体積。
研究に残っているマウスのパーセント＝６−エンドポイントに達したマウスの数／６＊１００。
【０１０６】
全てのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。デルタ腫瘍体積及び体重の変化パーセントは、統計解析のために使用した。群間比較は、一元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いて事後テューキー検定を使用して行った。全ての統計的評価のために、有意水準は、ｐ＜０．０５で設定した。ビヒクル対照群と比較した有意性を、他に記述しない限り報告する。
【０１０７】
【表４】
2021519285.tif 000008
【０１０８】
ＨＣＯＸ５４２１モデル（図３）において、ダブラフェニブ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ  ｑｄ）及びトラメチニブ（０．３ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ  ｑｄ）処置の組合せは、４１％Ｔ／Ｃを伴って統計的に有意な抗腫瘍効果を生じさせた。ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せへのＥＲＫ阻害剤である化合物Ａの添加は、２０％Ｔ／Ｃを伴ってさらなる腫瘍成長阻害の増進をもたらし、これは、ビヒクル及びダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せと比較して統計的に有意である（ｐ＜０．０５）。対照的に、Ｃｅｘｔｕｘｉｍａｂは、ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せに対して有意に改善された利益を提供しなかった（２９％Ｔ／Ｃ対４１％Ｔ／Ｃ、ｐ＞０．０５）。
【０１０９】
これらのデータは、化合物Ａ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せが、ダブラフェニブ＋トラメチニブの二重の組合せに対して、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣを有する患者に改善された治療上の利点を生じさせることを示唆する。
【０１１０】
さらに、ＨＣＯＸ５４２１についての平均体重の変化を図４に示す。ダブラフェニブ＋トラメチニブ、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブの組合せによるマウスの処置は、処置の終わりにおいて最小の体重減少、それぞれ−０．６４％、−０．３４％及び−１．９９％を示し、これは、ビヒクル群における体重の変化と同様である。有害事象の他の徴候は、この研究において観察されなかった。ほぼ全ての動物は、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａの三重の組合せ群における１匹を除いて研究を通して生存した。
【０１１１】
実施例４
ＨＴ２９ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ異種移植片モデルにおけるダブラフェニブ及びトラメチニブと合わせた化合物Ａのインビボでの抗腫瘍活性及びＭＡＰＫ経路のモジュレーション
ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ（結腸直腸癌）異種移植片モデルＨＴ２９を埋め込んだ雌性ヌードマウスを用いたインビボでの抗腫瘍有効性研究を行って、ＥＲＫ１／２阻害剤である化合物Ａを、ＭＥＫ１／２阻害剤であるトラメチニブ及びＢＲＡＦ阻害剤であるダブラフェニブの組合せに加える治療上の利点を評価した。
【０１１２】
６〜７週齢の雌性ヌードマウスの右腋窩領域への２×１０６個の細胞の直接の皮下（ｓｃ）埋込により、ＨＴ２９異種移植片を確立した。マウスは、腫瘍細胞埋込の２６日後に２０１〜６１１ｍｍ３の腫瘍体積範囲を伴って処置群（下記の表において要約）に無作為に割り付けた。ダブラフェニブをｐＨ８の脱イオン水、３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。トラメチニブをｐＨ８の脱イオン水、０．０３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。化合物ＡをｐＨ７．４のリン酸緩衝液中の０．５％ＨＰＣ／０．５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７中の懸濁液として配合し、最終ｐＨを４に調節した。
【０１１３】
【表５】
2021519285.tif 000009
【０１１４】
投薬日において動物を秤量し、用量を体重補正し、投薬容量は、１０ｍｌ／ｋｇであった。腫瘍の寸法及び体重を無作為化の時点及びその後研究期間中に週２回集めた。
【０１１５】
体重の変化パーセントは、（ＢＷ現在−ＢＷ最初）／（ＢＷ最初）×１００として計算した。データは、処置開始の日からの体重の変化パーセントとして提示する。
【０１１６】
処置／対照（Ｔ／Ｃ）パーセント値は、下記の式を使用して計算した：
Ｔ／Ｃ％＝△Ｔ＞０である場合、１００×△Ｔ／△Ｃ；
退縮％＝△Ｔ＜０である場合、１００×△Ｔ／Ｔ０；
式中、
Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
△Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｔ０＝コホートの日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積；及び
△Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における対照群の平均腫瘍体積。
【０１１７】
全てのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。デルタ腫瘍体積及び体重の変化パーセントは、統計解析のために使用した。群間比較は、一元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いて事後テューキー検定を使用して行った。全ての統計的評価のために、有意水準は、ｐ＜０．０５で設定した。未処置の対照群と比較した有意性を、他に記述しない限り報告する。
【０１１８】
【表６】
2021519285.tif 000010
【０１１９】
全ての単剤及び併用処置は、未処置の対照マウスに対して有意な腫瘍成長阻害をもたらした（図５）。最も大きい抗腫瘍活性は、下記の処置で達成された：化合物Ａ＋トラメチニブ（９．２％Ｔ／Ｃ）、化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブ（２．７％Ｔ／Ｃ）及びトラメチニブ＋ダブラフェニブ＋セツキシマブ（４．０％Ｔ／Ｃ）。
【０１２０】
この研究において観察される平均体重の変化を図６に示す。腫瘍埋込の３９日後、全ての処置群は、ＢＷの変化を体験し、これは、未処置の対照群と統計的に異ならなかった。全てのマウスは、研究の期間を通して研究に留まった。
【０１２１】
１４日目の毎日の連続した処置投与に続く研究の終わりに、最終の用量後の３つの時点（２時間、７時間又は２４時間）の１つにおいてマウスを安楽死させた。腫瘍及び背側の皮膚を集め、ＭＡＰＫ経路出力の評価のために液体窒素中で急速冷凍した。
【０１２２】
ＭＡＰＫ経路阻害の転写読み出しは、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）を使用してＤＵＳＰ６メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を測定することによって腫瘍及びライセートにおいて評価した。急速冷凍した腫瘍及び皮膚断片を、説明書によって１％の２−メルカプトエタノールの添加を伴ってＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ、＃７４１０４）中で溶解し、Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ２４溶解及び均質化機器（Ｂｅｒｔｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して均質化した。Ｑｉａｃｕｂｅシステムを使用してＲＮＡを急速冷凍された異種移植片断片から抽出した。遺伝子（ｍＲＮＡレベル）の発現を、リアルタイム定量的ＰＣＲに連結した逆転写（ＲＴ）を使用するワンステップＰＣＲによって評価した。ＤＵＳＰ６  Ｔａｑｍａｎプローブ（ＡＢＩ、Ｈｓ００７３７９６２ｍ１）を、ＲＯＸ色素を伴うＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ＲＴ−ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ、２０４６４５）と共に使用し、腫瘍試料中の内在性対照遺伝子ヒトＲＰＬＰ０（大きいリボソームタンパク質、ＨＰＯ、ＡＢＩ４３２６３１４Ｅ）に対して、ＤＵＳＰ６についてのｍＲＮＡ発現の量を決定した。このワンステップＰＣＲ方法は、マウスＤＵＳＰ６のプローブ（ＡＢＩ、Ｍｍ００５１８１８５ｍｌ）及び内在性対照遺伝子としてベータ−アクチン（ＡＢＩ、４３５１３１５）を使用することを除いて、集めた試料についてのＰＤ分析に適用した。ＰＣＲ反応は、ＡＢＩ７９００ＨＴ高速リアルタイムＰＣＲシステム上で行った。自動閾値を伴うＡＢＩ  ＳＤＳソフトウェアｖ２．３システムを使用してデータを分析した。内在性対照遺伝子及び標的遺伝子間の差異を決定し、キャリブレーター試料（未処置の対照試料）と比較した。
【０１２３】
計算式：
内在性対照への正規化：△Ｃｔ＝Ｃｔ標的遺伝子−Ｃｔ内在性対照
キャリブレーター試料への正規化：△△Ｃｔ＝△Ｃｔ試料−△Ｃｔキャリブレーター
２−（△△Ｃｔ）は、値２（１サイクルにおけるＤＮＡの増殖）の、試験試料及びキャリブレーター間のサイクル数の差異の数である負の累乗である。この値は、キャリブレーターに対する試験試料の発現を反映し、数倍の差異（ＲＱ値）を計算するために使用される。ＲＱ値が得られると、データセットをビヒクル群の平均ＲＱ値に正規化し、下記の式を使用してビヒクル対照のｍＲＮＡ発現パーセントを計算することによってデータをさらに変換する。
未処置の対照の％＝ｙ／ｋ＊１００
式中、ｙ＝処置試料のＲＱ値であり、ｋ＝未処置の対照の平均ＲＱ値である。
【０１２４】
腫瘍及び皮膚におけるＭＡＰＫ経路出力のモジュレーションを、ｑＰＣＲによるＤＵＳＰ６ｍＲＮＡの転写物量を定量化することによって評価した（図７）。腫瘍におけるＭＡＰＫ経路出力の抑制、すなわちＤＵＳＰ６ｍＲＮＡ存在量は、観察された抗腫瘍活性と大部分が一致した。さらに具体的には、腫瘍ＤＵＰＳ６ｍＲＮＡの最も大きい抑制を生じた処置群は、同様に最も大きい抗腫瘍活性を生じさせた。例えば、化合物Ａ＋トラメチニブは、全ての単剤並びにトラメチニブ＋ダブラフェニブ及び化合物Ａ＋ダブラフェニブより大きい経路抑制及び抗腫瘍活性を示した。これに反して、化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブがＭＡＰＫ経路出力の最も包括的な抑制を示したにも関わらず、化合物Ａ＋トラメチニブ、化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブ、セツキシマブ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブは、この１４日の実験において概ね同様の抗腫瘍活性を生じさせた。長期的な有効性追跡研究をこれらの処置群で設計し、化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブの組合せが、化合物Ａ＋トラメチニブ、化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブ又はセツキシマブ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブより耐久性のある抗腫瘍応答を生じさせるという仮説を試験した。この研究を実施例５において要約する。
【０１２５】
さらに、トラメチニブ＋化合物Ａの組合せへのダブラフェニブの添加は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＨＴ２９異種移植片においてＭＡＰＫ経路出力のさらなる抑制をもたらしたことが観察された（図８）。しかし、ＢＲＡＦ  ＷＴ皮膚において、２つの処置（トラメチニブ＋化合物Ａ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ）は、ＭＡＰＫ経路出力の概ね同様の抑制を生じさせた（図６）。これらのデータは、ダブラフェニブの添加が、正常組織におけるＭＡＰＫ経路抑制と関連するオンターゲット安全性シグナルの増加をもたらさずに、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ腫瘍に対して改善された臨床上の利点を生じさせることができることを示唆する。
【０１２６】
実施例５
ＨＴ２９ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ異種移植片モデルにおけるダブラフェニブ及びトラメチニブと合わせた化合物Ａのインビボでの抗腫瘍活性
ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ（結腸直腸癌）異種移植片モデルＨＴ２９を埋め込んだマウスを用いたインビボでの抗腫瘍有効性研究を行い、ＥＲＫ１／２阻害剤である化合物Ａを、ＭＥＫ１／２阻害剤であるトラメチニブ及びＢＲＡＦ阻害剤であるダブラフェニブの組合せに加えることに関連する治療上の利点の耐久性を評価した。
【０１２７】
６〜７週齢の雌性ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスの右腋窩領域への２×１０６個の細胞の直接の皮下（ｓｃ）埋込により、ＨＴ２９異種移植片を確立した。マウスは、腫瘍細胞埋込の２１日後に１６１．４〜３１７．９ｍｍ３の腫瘍体積範囲を伴って処置群（下記の表において要約）に無作為に割り付けた。ダブラフェニブをｐＨ８の脱イオン水、３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。トラメチニブをｐＨ８の脱イオン水、０．０３ｍｇ／ｍＬ中の０．５％ＨＰＭＣ、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中の溶液として配合した。化合物ＡをｐＨ７．４のリン酸緩衝液中の０．５％ＨＰＣ／０．５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７中の懸濁液として配合し、最終ｐＨを４に調節した。
【０１２８】
【表７】
2021519285.tif 000011
【０１２９】
投薬日において動物を秤量し、用量を体重補正し、投薬容量は、１０ｍｌ／ｋｇであった。腫瘍の寸法及び体重を無作為化の時点及びその後研究期間中に週２回集めた。
【０１３０】
体重の変化パーセントは、（ＢＷ現在−ＢＷ最初）／（ＢＷ最初）×１００として計算した。データは、処置開始の日からの体重の変化パーセントとして提示する。
【０１３１】
処置／対照（Ｔ／Ｃ）パーセント値は、下記の式を使用して計算した：
Ｔ／Ｃ％＝△Ｔ＞０である場合、１００×△Ｔ／△Ｃ
退縮％＝△Ｔ＜０である場合、１００×△Ｔ／Ｔ０
式中、
Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
△Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｔ０＝コホートの日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積；及び
△Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積−投薬の最初の日における対照群の平均腫瘍体積。
【０１３２】
全てのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。デルタ腫瘍体積及び体重の変化パーセントは、統計解析のために使用した。群間比較は、一元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いて事後テューキー検定を使用して行った。全ての統計的評価のために、有意水準は、ｐ＜０．０５で設定した。未処置の対照群と比較した有意性を、他に記述しない限り報告する。
【０１３３】
【表８】
2021519285.tif 000012
【０１３４】
ＨＴ２９ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ＣＲＣ異種移植片を担持するマウスによるこの第２の研究を行い、実施例４において行った観察を追求した。具体的には、この第２の実験は、（トラメチニブ＋化合物Ａ及びセツキシマブ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブに対して）ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａの組合せによってＨＴ２９異種移植片において達成されたより包括的なＭＡＰＫ経路抑制が、より耐久性のある腫瘍成長制御に翻訳できるかを決定することを目的として、長期的な投薬を組み込むように設計した。全ての処置群は、腫瘍細胞埋込の４２日後において未処置の対照マウスに対してかなりの腫瘍成長阻害を生じさせた（図９）。連続した投薬を伴って、化合物Ａ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブの組合せは、セツキシマブ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブを含めた全ての他の処置より数値的に大きい抗腫瘍活性を生じさせ、治療上の利点の改善された耐久性を示唆する。
【０１３５】
この研究において観察される平均体重の変化を図１０に示す。腫瘍埋込の４２日後において、全ての処置群は、トラメチニブ＋ダブラフェニブを除いて、ＢＷの変化を経験し、それは、未処置の対照群より低かった（Ｐ＜０．０５）。ハッシュマークは、マウスが処置から早期に取り除かれた日を示す。これは、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａ群からの２匹のマウス及び化合物Ａ＋トラメチニブ群からの１匹を含んだ。
【０１３６】
本明細書に記載されている実施例及び実施形態は、例示のために過ぎず、それに照らした様々な改変形態又は変更形態が当業者に示唆され、本出願の趣旨及び趣旨並びに添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。
【図１】
2021519285.tif 000013
【図２】
2021519285.tif 000014
【図３】
2021519285.tif 000015
【図４】
2021519285.tif 000016
【図５】
2021519285.tif 000017
【図６】
2021519285.tif 000018
【図７】
2021519285.tif 000019
【図８】
2021519285.tif 000020
【図９】
2021519285.tif 000021
【図１０】
2021519285.tif 000022
【国際調査報告】
2021519285.tif 000023
2021519285.tif 000024
2021519285.tif 000025