(57)【要約】  本発明は、診断試験の前に、本明細書に記載されるような干渉物質を除去、またはバイオマーカーを濃縮するために、本明細書に記載されるような捕捉部位を備える表面を含む粒子（たとえば、微粒子、ナノ粒子；磁性体、非磁性体）を使用するための方法を対象としている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、および、
ｂ）前記混合物を混合して、前記バイオマーカーとの粒子複合体を提供すること、
を含み、
それにより生体サンプルからバイオマーカーを単離する、
方法。
【請求項２】
前記粒子複合体を診断試験に供することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
生体サンプルから干渉物質を除去する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記干渉物質との粒子複合体を提供すること、および、
ｃ）前記粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇した溶液を提供すること、
を含み、
それにより、前記干渉物質の量（たとえば質量、モル濃度、濃度）を低下または減少させる、
方法。
【請求項４】
枯渇させた前記溶液を特性評価（たとえば、診断試験）に供することをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記粒子は、凍結乾燥物（たとえば、ＬｙｏＳｐｈｅｒｅ（商標）（ＢＩＯＬＹＯＰＨ  ＬＬＣ社））として提供される、請求項１または３に記載の方法。
【請求項６】
診断試験の精度を向上させる方法であって、
ａ）生体サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記干渉物質との粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記粒子複合体を除去、または完全に除去して枯渇させた溶液を提供すること、および、
ｄ）枯渇させた前記溶液を診断試験に供すること、
を含み、
それにより、診断試験の精度を向上させる、
方法。
【請求項７】
前記方法に供していない生体サンプルと比較して、少なくとも１％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、の前記干渉物質が除去される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
十分な量の前記干渉物質を除去して、前記生体サンプル中の１００ｐｐｍ未満の前記干渉物質を提供する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
十分な量の前記干渉物質を除去して、前記生体サンプル中の検出可能量未満の前記干渉物質を提供する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記捕捉部位は、ヒト抗動物抗体（たとえば、マウスＩｇＧ、ヒツジＩｇＧ、ヤギＩｇＧ、ウサギＩｇＧ、ウシＩｇＧ、ブタＩｇＧ、ウマＩｇＧ）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記捕捉部位は、異好抗体（たとえば、ＦＲ（Ｆｃ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、重合ＩｇＧ（１、２ａ、２ｂ型ＩｇＧおよびＩｇＧ断片）、血清成分）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記捕捉部位は、アッセイ特異的な結合剤（たとえば、ビオチン、フルオレセイン、抗フルオレセインポリ／Ｍａｂ、抗ビオチンポリ／Ｍａｂ、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記捕捉部位は、アッセイ特異的なシグナル分子（たとえば、ＨＲＰ、ＡＬＰ、アクリジニウムエステル、イソルミノール／ルミノール、ルテニウム、ＡＢＥＩ／環状ＡＢＥＩ）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記捕捉部位は、アッセイ特異的な遮断剤（たとえば、ＢＳＡ、魚皮ゼラチン、カゼイン、卵白アルブミン、ＰＶＰ、ＰＶＡ）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記捕捉部位は、アッセイ特異的な結合リンカー（たとえば、ＬＣ、ＬＣ−ＬＣ、ＰＥＯ４、ＰＥＯ１６）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記捕捉部位は、抗原自己抗体（たとえば、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記捕捉部位は、タンパク質自己抗体（たとえば、ＭＴＳＨ、ＴｎＩ、ＴｎＴ、非心臓性ＴｎＴ（骨格筋疾患））である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記捕捉部位は、化学発光基質（たとえば、ルミノール、イソルミノール、イソルミノール誘導体、ＡＢＥＩ、ＡＢＥＩ誘導体、ルテニウム、アクリジニウムエステル）、または蛍光標識（たとえば、フルオレセインまたは他の蛍光色素分子、および染色剤）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記捕捉部位は、捕捉部位（たとえば、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、アビジン、キャプトアビジン、ポリＡ、ポリＤＴ、アプタマー、抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、抗体断片、組み換えタンパク質、酵素、タンパク質、生体分子、ポリマー）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記捕捉部位は、ビオチン、フルオレセイン、ポリＤＴ、ポリＡ、または抗原である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記除去、または前記完全な除去は、分離である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記分離には、物理的分離が含まれる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記分離には、磁気的分離が含まれる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記分離には、化学的分離が含まれる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記除去、または前記完全な除去には、１０００×ｇ以上で、少なくとも１分間、２分間、３分間、４分間または５分間遠心分離して、ペレットおよび上清を提供し、前記上清を除去することが含まれる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記除去、または前記完全な除去には、濾過（たとえば、フィルターを通す）が含まれる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記フィルターは、多孔性であるか、または前記粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）の直径より十分に小さい分画分子量（ＭＷＣＯ）を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記濾過は、重力、真空、または遠心分離による、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記除去、または前記完全な除去には、磁化が含まれる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記磁化は、強力な磁石（たとえば、ネオジム磁石）を使用して行い、ペレットおよび上清を提供する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記磁石は遠心分離ローター中にある、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記磁石は、使い捨てピペットチップ、カバーまたはシース内の磁石である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記バイオマーカーを含む粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記混合物から前記粒子複合体を除去すること、および、
ｄ）前記混合物に切断試薬、または放出剤を加え、バイオマーカーを含む単離物を提供すること、
を含み、
それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する、
方法。
【請求項３４】
バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を、前記捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、三次複合体を提供すること、
ｃ）前記混合物から前記三次複合体を除去して、単離物を提供すること、および、
ｄ）前記三次複合体の指標が前記単離物中に存在するか否かを判定すること、
を含み、
それにより、バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する、
方法。
【請求項３５】
バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記干渉物質との粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇させた溶液を提供すること、
ｄ）枯渇させた前記溶液を、第２の捕捉部位を含む第２の粒子と組み合わせて、第２の混合物を提供すること、
ｅ）前記第２の混合物を混合して、前記バイオマーカーを含む第２の粒子複合体を提供すること、
ｆ）前記第２の混合物から前記第２の粒子複合体を除去すること、および、
ｇ）前記第２の混合物に切断試薬または放出剤を加えて、前記バイオマーカーを含む単離物を提供すること、
を含み、
それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する、
方法。
【請求項３６】
前記粒子複合体を希釈剤で洗浄することをさらに含む、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記切断試薬はジスルフィド結合還元剤である、請求項３３または３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記バイオマーカーについて診断試験を行うことをさらに含む、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
サンプル中のバイオマーカーの量を濃縮する方法であって、
ａ）前記サンプルに、捕捉部位を含む粒子を加えて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記粒子複合体を分離して、ペレットおよび上清を提供すること、
ｅ）前記ペレットから前記上清を除去すること、
ｆ）前記ペレットを希釈剤で洗浄すること、および、
ｇ）前記ペレットから前記バイオマーカーを溶出して、濃縮されたサンプルを提供すること、
を含み、
それにより、サンプル中のバイオマーカーの量を濃縮する、
方法。
【請求項４０】
前記バイオマーカーは、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の指標である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記バイオマーカーは、ｓ−１００β、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）、切断型タウタンパク質（Ｃ−ｔａｕ）、およびユビキチンＣ末端加水分解酵素Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記バイオマーカーは、アルツハイマー病（ＡＤ）の指標である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記バイオマーカーは、アミロイドベータ、ＢＡＣＥ１、可溶性Ａβ前駆体タンパク質（ｓＡＰＰ）である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
前記バイオマーカーは、性感染症（ＳＴＤ）の指標である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＳＴＤは、クラミジア、淋病、梅毒、トリコモナス、ＨＰＶ、ヘルペス、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記バイオマーカーは、細菌感染の指標である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記バイオマーカーは、細菌のための捕捉部位である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】
前記バイオマーカーは、切断試薬によって複合体から切断される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】
前記バイオマーカーの存在はＭＡＬＤＩ−ＭＳにより判定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】
前記干渉物質はフィブリノーゲンであり、前記除去、または前記完全な除去は、遠心分離による物理的分離等の分離であり、前記粒子複合体は血栓中に捕捉される、請求項３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１８年7月２７日に出願された米国仮特許出願番号第６２／７１１，３９１号に基づき優先権を主張する。前述の出願の内容全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、診断試験の前に、その後の除去または濃縮用途のためのバイオマーカーを単離するために、本明細書に記載されているような捕獲部位を備える表面を含む粒子（たとえば、マイクロ粒子、ナノ粒子；磁性体、非磁性体）を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
臨床検査は、健康アセスメント、ヘルスケア、および究極的には公衆衛生に重要な役割があり、あらゆるライフステージの人に影響を与える。ほとんどの人が一生の間に１回以上臨床検査をするであろう。米国だけで、毎年推定７０〜１００億の臨床検査が行われており、臨床検査の結果は医療の決定のおおよそ７０％に影響を与える。
【０００４】
さらに、２０１８年１月にメディケア・メディケイドサービスセンター（ＣＭＳ）で、メディケアアクセス保護法（ＰＡＭＡ）により求められている新しい臨床検査料金表（ＣＬＦＳ）を実施して以来、ＰＡＭＡは臨床検査の償還金を削減している。ラボの結果が最初に正確であり、トラブルシューティングの努力が軽減され、または時間が短縮され、ラボのワークフローに影響を与えないことは、さらに重要である。
【０００５】
干渉物質とは、たとえば抗体結合に干渉することによって診断試験の結果の正しい値を変化させることができ、または架橋、立体障害、もしくは自己抗体のメカニズムによってアッセイシグナルを増加もしくは減少させることができる、患者のサンプル中に存在する物質である。イムノアッセイが干渉の影響を受けやすいことが知られている一方、誤った結果が装置（分析装置）もしくは検査室で認識されず、警告シグナルがない場合、または患者の結果が臨床像と合致しないことを医師が検査室に伝えなかった場合、臨床検査室は依然として誤った結果を報告しているかもしれない。問題を引き起こす可能性のあるそのようなサンプルを事前に特定するための実用的な手段がなければ、任意のサンプルで予期せず不正確な結果が生じる可能性がある。そのような干渉の結果、誤った結果により偽陰性および偽陽性の検査結果となる可能性があり、患者の治療に影響を与え、不要な侵襲的、診断的、もしくは治療的手段につながり、または患者の治療に失敗する可能性がある。
【０００６】
干渉から生じる問題にもかかわらず、たとえば生体サンプル中の存在量または存在比が少ないため、バイオマーカーのスクリーニングおよび診断試験が困難な場合がある。
【０００７】
したがって、体内のバイオマーカーは疾患を検出、予測、管理するために使用することができる一方、多くは存在比が低すぎて、現在市販されている試験を使用して検出することができない。新しい診断技術に対する、試験の精度を改善する、見つけにくいバイオマーカー測定する、コストを低減する、最終的には生命を救うために臨床サンプルを調製するという、満たされていない臨床的なニーズがある。
【０００８】
ビタミンＢ７としても知られるビオチンは、マルチビタミン中、ならびに店頭の健康および美容サプリメントによくみられる水溶性のビタミンＢである。ストレプトアビジン−ビオチンの結合メカニズムを使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏの臨床診断試験は、高い血中ビオチン濃度の影響を受ける可能性がある。ビオチンは、アビジン、ストレプトアビジン、またはニュートラアビジンタンパク質との特異的な非共有結合に最小の影響で、共有結合によりさまざまな標的−大きい抗体からステロイドホルモンまで−に結合することができる。したがって、ビオチンは、様々な形態のイムノアッセイの検出系において頻繁に使用されている。
【０００９】
イムノアッセイは一般的に、サンドイッチイムノアッセイ（非競合）または競合阻害イムノアッセイのいずれかに分類される。一般的に、ストレプトアビジン−ビオチン結合は、サンドイッチイムノアッセイにおいてビオチン化抗体を、または競合イムノアッセイにおいてビオチン抗原をカップリングするためのアッセイインキュベーション中に、表面をストレプトアビジン被覆するために使用する。生物学的試料にビオチンが過剰に含まれている場合、ビオチンは、ストレプトアビジンで被覆された表面に結合するために、ビオチン化抗体または抗原と競合し、ビオチン化抗体または抗原の捕捉の減少をもたらす。サンドイッチイムノアッセイでは、アッセイシグナルがサンプルの濃度に正比例するため、過剰のビオチンにより誤って低い結果となる。競合イムノアッセイでは、アッセイシグナルがサンプルの濃度と反比例するため、過剰のビオチンにより誤って高い結果となる。
【００１０】
食事および通常の代謝による通常の血中ビオチン濃度は低すぎて（１ｎｇ／ｍＬ未満）ビオチン化イムノアッセイの妨げとならない。しかし、高用量のビオチンサプリメント（たとえば５ｍｇ以上）の摂取により、通常使用されるビオチン化イムノアッセイを妨げ得るように、血中濃度が顕著に上昇する可能性がある。ある病状では、極端に高いビオチン用量（たとえば１００ｍｇ以上）により、１０００ｎｇ／ｍＬ超の血清濃度または血漿濃度となることがある。
【００１１】
ビオチン系のイムノアッセイにおいて、高濃度のビオチンを摂取した患者から採集した血中または他のサンプル中のビオチンにより、アッセイの設計に応じて誤って高いまたは誤って低い結果となる可能性がある。不正確な試験結果は、誤診だけでなく、不適切な患者管理につながる可能性がある。
【００１２】
ビオチン干渉物質の閾値は、単一のプラットフォーム上であってさえ、アッセイ間で大きく異なる。ビオチン干渉物質の閾値が５１ｎｇ／ｍＬ未満の検査は、危険性の高い検査、または脆弱な免疫測定および競合法とみなされる。
【００１３】
したがって、検査室のワークフローおよびターンアラウンドタイムに影響を与えることなく、診断試験の前にサンプル干渉物質を除去または最小化し、バイオマーカー濃度を濃縮するための、簡易で、安価で、自動化可能かつ効果的な解決策に対する臨床的ニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本明細書に記載されるのは、マウスモノクローナル抗体による治療を受けている患者または診断目的でマウスモノクローナル抗体を受けたことのある患者における異好抗体など、誤った検査結果をもたらす可能性があり、患者の安全性に対する危険性の増大をもたらす可能性がある多数の既知のサンプル特異的な干渉物質を管理および低減するために、生体サンプルの、簡易で、効果的かつ費用効果の高い調節のための方法である。本明細書に記載される方法はまた、健康、美容、体重減少、または治療、たとえば多発性硬化症の治療のために消費者が摂取する処方箋なし（ＯＴＣ）のサプリメント、マルチビタミン、および植物性の生薬由来であり得るビオチンから生じる、サンプル特異的な干渉を管理および低減することもできる。
【００１５】
また、本明細書に記載されるのは、生体サンプル中のバイオマーカーの濃度の濃縮または増加のための方法である。
【００１６】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法であって、ａ）サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、およびｂ）混合物を混合して、バイオマーカーとの粒子複合体を提供することを含み、それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法である。
【００１７】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、生体サンプルから干渉物質を除去する方法であって、ａ）サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて混合物を提供すること、ｂ）混合物を混合して、干渉物質との粒子複合体を提供すること、およびｃ）粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇させた溶液を提供することを含み、それにより、干渉物質の量（たとえば質量、モル濃度、濃度）を低下または減少させる方法である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、本明細書に記載された粒子による生体サンプルからの干渉物質の除去（または枯渇）に基づく確認および失格アッセイのスキームを示す。
【図２】図２は、本明細書に記載された凍結乾燥粒子による生体サンプルからの干渉物質の除去（または枯渇）に基づく枯渇アッセイのスキームを示す。
【図３】図３は、本明細書に記載された磁化ピペットチップによる生体サンプルからの干渉物質の除去（または枯渇）に基づく枯渇アッセイのスキームを示す。
【図４】図４は、ビオチン摂取後の経時的なビオチン濃度を示すグラフである。
【図５】図５は、ビオチン枯渇を示すグラフである。
【図６】図６は、ビオチン枯渇を示すグラフである。
【図７】図７は、ビオチン摂取後の経時的なビオチン濃度を示すグラフである。
【図８】図８は、異なる用量のビオチンを摂取した後のビオチン濃度を示すグラフである。
【図９】図９は、ビオチン枯渇を示すグラフである。
【図１０】図１０は、ＰＴＨ濃度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書に記載されるのは、本明細書に記載されるような粒子を本明細書に記載されるような生体サンプルと組み合わせることを含む、生体サンプルを枯渇または濃縮するための方法である。
【００２０】
ある観点では、本明細書に記載されるのは、生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法であって、ａ）サンプルを、捕捉部位を備える粒子と組み合わせて混合物を提供すること、およびｂ）混合物を混合して、バイオマーカーとの粒子複合体を提供することを含み、それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、該方法は、粒子複合体を診断試験に供することをさらに含む。
【００２２】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、生体サンプルから干渉を除去する方法であって、ａ）サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて混合物を提供すること、ｂ）混合物を混合して、干渉物質との粒子複合体を提供すること、およびｃ）粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇させた溶液を提供することを含み、それにより、干渉物質の量（たとえば質量、モル濃度、濃度）を低下または減少させる方法である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、該方法は、枯渇させた溶液を特性評価（例えば、診断試験）に供することをさらに含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、粒子は凍結乾燥物（たとえば、ＬｙｏＳｐｈｅｒｅ（商標）（ＢＩＯＬＹＯＰＨ  ＬＬＣ社））として提供される。
【００２５】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、診断試験の精度を向上させるための方法であって、ａ）生体サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて混合物を提供すること、ｂ）混合物を混合して、干渉物質との粒子複合体を提供すること、ｃ）粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇させた溶液を提供すること、およびｄ）枯渇させた溶液を診断試験に供することを含み、それにより、診断試験の精度を向上させる方法である。
【００２６】
いくつかの実施形態では、該方法に供していない生体サンプルと比較して、少なくとも１％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％の干渉物質が除去される。いくつかの実施形態では、生体サンプル中１００ｐｐｍ未満の干渉物質を提供するために十分な量の干渉物質が除去される。いくつかの実施形態では、診断試験において検出可能量未満の干渉物質を提供するために十分な量の干渉物質が除去される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、捕捉部位は、ヒト抗動物抗体（たとえば、マウスＩｇＧ、ヒツジＩｇＧ、ヤギＩｇＧ、ウサギＩｇＧ、ウシＩｇＧ、ブタＩｇＧ、ウマＩｇＧ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、異好抗体（たとえば、ＦＲ（Ｆｃ特異的））Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、重合ＩｇＧ（１、２ａ、２ｂ型ＩｇＧおよびＩｇＧ断片、血清成分）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はアッセイ特異的な結合剤（たとえば、ビオチン、フルオレセイン、抗フルオレセインｐｏｌｙ／Ｍａｂ、抗ビオチンｐｏｌｙ／Ｍａｂ、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン）である。いくつかの実施形態では、アッセイ特異的なシグナル分子（たとえば、ＨＲＰ、ＡＬＰ、アクリジニウムエステル、イソルミノール／ルミノール、ルテニウム、Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール（ＡＢＥＩ）／環状ＡＢＥＩ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はアッセイ特異的な遮断剤（たとえば、ＢＳＡ、魚皮ゼラチン、カゼイン、卵白アルブミン、ＰＶＰ、ＰＶＡ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、アッセイ特異的な結合リンカー（たとえば、ＬＣ、ＬＣ−ＬＣ、ＰＥＯ４、ＰＥＯ１６）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、抗原自己抗体（たとえば、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、タンパク質自己抗体（たとえば、ＭＴＳＨ、ＴｎＩ、ＴｎＴ、非心臓性ＴｎＴ（骨格筋疾患））である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、化学発光基質（たとえば、ルミノール、イソルミノール、イソルミノール誘導体、ＡＢＥＩ、ＡＢＥＩ誘導体、ルテニウム、アクリジニウムエステル）、または蛍光標識（フルオレセインまたは他の蛍光色素分子、および染色剤）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、アビジン、ポリＡ、ポリＤＴ、アプタマー、抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、抗体断片、組み換えタンパク質、酵素、タンパク質、生体分子、または重合体である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、ビオチン、フルオレセイン、ポリＤＴ、ポリＡ、抗原等である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、除去、または完全な除去は分離である。いくつかの実施形態では、分離には物理的分離が含まれる。いくつかの実施形態では、分離には磁気的分離が含まれる。いくつかの実施形態では、磁気的分離のための磁石は、大型ピペット装置上の１〜１２のサンプル調製チューブを保持するように設計されたラック中に２〜１２の磁石を備える多磁石装置である。そのようなピペット装置の例には、限定されないが、ＨａｍｉｌｔｏｎまたはＴｅｃａｎにより製造されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、磁気的分離のための磁石は、９６穴または３８４穴のマイクロタイタープレートを磁化するように設計された９６または３８４の磁石を備える多磁石装置である。いくつかの実施形態では、分離には化学的分離が含まれる。いくつかの実施形態では、除去、または完全な除去には、１０００×ｇ以上で少なくとも１分間、２分間、３分間、４分間、または５分間の遠心分離して、ペレットおよび上清を提供し、上清を除去することが含まれる。いくつかの実施形態では、除去、または完全な除去には濾過（たとえばフィルターを通す）が含まれる。いくつかの実施形態では、フィルターは多孔性であるか、または粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）の直径より十分に小さい分画分子量（ＭＷＣＯ）を有する。いくつかの実施形態では、濾過は、重力、真空、または遠心分離による。いくつかの実施形態では、除去、または完全な除去には、磁化が含まれる。いくつかの実施形態では、磁化は、ペレットおよび上清を提供するため強力な磁石（たとえば、ネオジム磁石）を使用することで起こる。いくつかの実施形態では、磁石は遠心分離ローター中にある。いくつかの実施形態では、磁石は、使い捨てピペットチップ、カバーまたはシース内の磁石である。
【００２９】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、生体サンプルからバイオマーカーを単離するための方法であって、ａ）サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて混合物を提供すること、ｂ）混合物を混合して、バイオマーカーを含む粒子複合体を提供すること、ｃ）混合物から粒子複合体を除去すること、およびｄ）混合物に切断試薬または放出剤を加えて、バイオマーカーを含む単離物を提供することを含み、それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法である。いくつかの実施形態では、生体サンプルからバイオマーカーを単離するための方法は、診断試験を生体サンプルについて行う前に行われる。
【００３０】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定するための方法であって、ａ）サンプルを捕捉部位と組み合わせて混合物を提供すること、ｂ）混合物を、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて三次複合体を提供すること、ｃ）混合物から三次複合体を除去して単離物を提供すること、およびｄ）三次複合体の指標が単離物中に存在するか否かを判定することを含み、それにより、バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する方法である。
【００３１】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定するための方法であって、ａ）サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて混合物を提供すること、ｂ）混合物を混合して、干渉物質との粒子複合体を提供すること、ｃ）粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇させた溶液を提供すること、ｄ）枯渇させた溶液を、第２の捕捉部位を含む第２の粒子と組み合わせて、第２の混合物を提供すること、ｅ）第２の混合物を混合して、バイオマーカーを含む第２の粒子複合体を提供すること、ｆ）第２の混合物から第２の粒子複合体を除去すること、およびｇ）第２の混合物に切断試薬または放出剤を加えて、バイオマーカーを含む単離物を提供することを含み、それにより、生体サンプルからバイオマーカーを分離する方法である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、該方法には、希釈剤で粒子複合体を洗浄することがさらに含まれる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、切断試薬はジスルフィド結合還元剤である。
【００３４】
いくつかの実施形態では、該方法には、バイオマーカーについて診断試験を行うことがさらに含まれる。
【００３５】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、サンプル中のバイオマーカーの量を濃縮するための方法であって、ａ）サンプルに、捕捉部位を含む粒子を加えて混合物を提供すること、ｂ）混合物を混合して粒子複合体を提供すること、ｃ）粒子複合体を分離してペレットおよび上清を提供すること、ｅ）ペレットから上清を除去すること、ｆ）ペレットを希釈剤で洗浄すること、およびｇ）ペレットからバイオマーカーを溶出して、濃縮されたサンプルを提供することを含み、それにより、サンプル中のバイオマーカーの量を濃縮する方法である。いくつかの実施形態では、生体サンプルからバイオマーカーを濃縮するための方法は、診断試験を行う前に生体サンプルに対して行われる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の指標である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ｓ−１００β、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）、切断型タウタンパク質（Ｃ−ｔａｕ）、およびユビキチンＣ末端加水分解酵素Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーはアルツハイマー病（ＡＤ）の指標である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーはアミロイドベータ、ＢＡＣＥ１、可溶性Ａβ前駆体タンパク質（ｓＡＰＰ）である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは性感染症（ＳＴＤ）の指標である。いくつかの実施形態では、ＳＴＤはクラミジア、淋病、梅毒、トリコモナス、ＨＰＶ、ヘルペス、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは細菌感染の指標である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは細菌の捕捉部位である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは切断試薬によって複合体から切断される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーの存在はＭＡＬＤＩ−ＭＳにより判定される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーの存在は、分子診断法により判定される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーの存在は、イムノアッセイにより判定される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、干渉物質はフィブリノーゲンであり、除去または完全な除去は遠心分離による物理的分離等の分離であり、粒子複合体は血栓中に捕捉される。
【００３８】
図１によると、スキームは、本明細書で説明される粒子による生体サンプルからの干渉物質の除去（または枯渇）に基づく、確認または失格のアッセイを示す。生体サンプルを一次採血チューブ（ＰＢＣＴ）から吸引し、二次トランスファーチューブ（ＳＴＴ）に分注しする。本明細書に記載されている粒子、たとえば、遊離ビオチンおよび／または異好抗体に対する捕捉部位を備える表面を含む粒子をＳＴＴに加え、サンプルの干渉物質と結合させ、枯渇させる。
【００３９】
図２では、スキームは、本明細書に記載された凍結乾燥粒子による生体サンプルからの干渉物質の除去（または枯渇）に基づく枯渇アッセイを示す。凍結乾燥粒子（たとえば本明細書に記載されているような粒子）が生体サンプルを受容し、粒子と生体サンプルの再懸濁および分散をもたらす。
【００４０】
図３では、スキームは、本明細書に記載された磁化ピペットチップによる生体サンプルからの干渉物質の除去（または枯渇）に基づく枯渇アッセイを示す。磁石を備える微ペットチップを生体サンプルに加えて、本明細書に記載されたような干渉物質または本明細書に記載されたようなバイオマーカーを生体サンプルから除去する。
【００４１】
（分離の方法）
本明細書に記載された粒子は、生体サンプルを加える前に、一次採血チューブ、２４時間採尿器、採尿器、唾液採集チューブ、採便器、精液採集器、採血バッグ、または任意のサンプル採集チューブもしくは装置等の採集装置に加えることができる。
【００４２】
本明細書に記載された粒子はまた、採集装置にサンプルを採集した後、または第１採集装置から、プラスチックまたはガラスのチューブ、バイアル、瓶、ビーカー、フラスコ、バッグ、缶、マイクロタイタープレート、ＥＬＩＳＡプレート、９６穴プレート、３８４穴プレート、１５３６穴プレート、キュベット、反応モジュール、リザーバー、もしくは液体サンプルの保持、保存、もしくは処理に適した任意の容器等の保存用もしくは移動用装置にサンプルを移した後に、サンプルに加えることもできる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された粒子は、生体サンプルを含む採集装置に加えられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された粒子は、生体サンプルを加える前に、採集装置に加えられる。
【００４４】
ある観点では、本明細書に記載されるのは、採尿器などの、生体サンプルを含む本明細書に記載された採集装置を含む、粒子を放出するための装置（すなわち、放出機構のトリガーとなるスクリューキャップ）である。たとえば、装置は、スクリューキャップを閉じると本明細書に記載された粒子を放出するスクリューキャップを備えるチューブである。
【００４５】
ある観点では、本明細書に記載されるのは、生体サンプル（すなわち、カプセル化された組成物または定義された速度または時点で溶液に溶解する組成物）を含む容器に粒子を放出させる化学物質を含む装置である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される装置は、たとえば、診断試験の前にサンプルの前処理を提供するために、本明細書に記載される粒子の添加を遅延させるように構成されている。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるサンプルは、本明細書に記載される粒子の添加の前に、たとえばｐＨを調整したり、サンプル特異的な干渉物質を枯渇もしくは競合させたり、および／または標的バイオマーカーに対するナノ粒子の特異性と結合速度を向上させるためにサンプルにナノ粒子を添加、導入、分散、または混合する前に、マトリックス特有の課題を処理したりするために、化学物質、タンパク質、遮断剤、界面活性剤、またはそれらの組み合わせで前処理することができる。サンプルの前処理後の、サンプルへのナノ粒子の添加の遅延は、サンプルの前処理後のサンプルへのナノ粒子の添加によって物理的に制御することができる。ナノ粒子はまた、ナノ粒子がサンプル中に放出、添加、分散、もしくは混合される前に化学物質、重合体、もしくは糖を溶解する必要があるように、ナノ粒子が化学物質、重合体もしくは糖の殻、コーティング、または重合化によってカプセル化、遮蔽または保護されている場合されている場合、サンプルの前処理の間、サンプル中に存在することもできる。ナノ粒子の遅延放出は、遅延薬物放出技術において今日使用されているような、当業者に知られている化学物質を使用することができる。
【００４７】
粒子の磁気的分離の方法
【００４８】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、生体サンプルから干渉物質を除去する方法（たとえば診断試験の前）、または磁性粒子を単離もしくは分離する方法（たとえば、一次採血チューブ、カスタムのサンプル採集装置、二次トランスファーチューブまたはカスタムのサンプル装置内）である。たとえば、磁石ベースの装置は早急に（２分未満、好ましくは３０秒未満）磁性ナノ粒子を側面および／または底面に単離して、本質的に粒子を含まない上清を形成するであろう。粒子を含まない上清は、粒子を含むペレットを崩壊することなく連続して吸引することができ、診断試験のための別個の移動チューブに分注することができる。いくつかの実施形態では、ペレットは分離されるか、または診断試験に供される。
【００４９】
粒子の磁気的分離のための装置
【００５０】
本明細書で提供されるのは、たとえば診断試験のためのバイオマーカーを除去または枯渇させるために本明細書に記載される方法において使用することができる、本明細書に記載される粒子を含む装置である。いくつかの実施形態では、装置には、本明細書に記載される粒子と本明細書に記載されるサンプルの組み合わせを遅延させるための物理的なメカニズムが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される装置は、本明細書に記載される粒子と本明細書に記載されるサンプルの組み合わせを遅延させるための持続放出メカニズムが含まれる。
【００５１】
（磁性チューブホルダー）
粒子を含まない上清のその後の診断試験のためにサンプルラック内に挿入することができる、カスタムの磁性チューブホルダー、またはスタンドから取り外すことができるカスタムの磁性チューブホルダー。カスタムの磁性チューブホルダーは、サンプルチューブバーコードを解析装置で検出および読み取りができるような物理的な開口部、または曇りのない／透明なプラスチックを有するように設計することができ（磁石または磁石アレイが存在しない部分）、また、脂血症、溶血、細胞破片／血栓検出、濃度感知などの指標検査が解析装置で実行できるような設計にすることができる。サンプルチューブは、磁気チューブホルダーの開口部（スペース）を確保するために、特定の向きでカスタムの磁気チューブホルダーにのみ適合するように切欠き、または突端および溝を有するように設計されたカスタムサンプルチューブであってもよく、または曇りのない／透明なプラスチックは、分析者がバーコードを見て読み取ることを可能にし、および／または脂血症、溶血、細胞破片／血栓の検出、濃度感知などの指標試験を実行できるように設計されたカスタムサンプルチューブであってもよい。
【００５２】
いくつかの実施形態では、磁石は、接着剤、ベルクロ（登録商標）、またはその他の方法でサンプルラックに取り付けることができる。一旦磁性ナノ粒子を含むサンプルチューブがサンプルラックに取り付けられた磁石の位置に挿入されると、磁性ナノ粒子は即座にサンプルチューブの側面および／または底面に分離し、サンプルラック特有の検査プラットフォームまたは解析装置による診断試験のための本質的に粒子を含まないサンプル上清を形成する。
【００５３】
カスタムの磁気サンプルラックとしてのサンプルラック自体は、所定の分析装置（たとえば、Ａｂｂｏｔｔ社のＡＲＣＨＩＴＥＣＴ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社のＡＤＶＩＡ  Ｃｅｎｔａｕｒ  ＸＰ、Ｒｏｃｈｅ社のｃｏｂａｓ  ｅ４１１／ｅ６０１／６０２／ｅ８０１、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社のＡｃｃｅｓｓ２／ＤｘＩ４００／ＤｘＩ８００、ＤｉａＳｏｒｉｎ社のＬＩＡＩＳＯＮ／ＬＩＡＩＳＯＮ  ＸＬ等に特化したもの））と互換性がある。たとえば、ラック中の全てのチューブ位置は、磁性ナノ粒子が、サンプルチューブの側面および／または底面に即座に分離して、診断試験のための本質的に粒子を含まないサンプル上清を形成するように設計された磁石の配列を有している。
【００５４】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、試験管のラックのための、磁石を含むホルダー（たとえば試験管ホルダー）を含む装置（たとえば、分離装置）である。
【００５５】
（使い捨てピペットチップ）
ある観点では、装置は、磁性ナノ粒子を、本質的に粒子を含まないサンプル上清からピペットチップの表面に速やかに分離するために、使い捨てチップ内に挿入されたカスタムの磁石を含む、使い捨てピペットチップである。カスタムの磁石を備える使い捨てピペットチップは、その後、粒子を含むペレットを崩壊することなくサンプルから取り除くことができる。粒子を含む使い捨てチップは、粒子が捕捉したものを測定したり、特性評価したりする必要がない場合には捨てることができ（すなわち、干渉物質が枯渇）、またはその後の診断試験における粒子の分離および特性評価のために新しいチューブに挿入してもよい（すなわち濃縮）。たとえば、粒子を含む使い捨てチップは、バッファーが入った二次トランスファーチューブに挿入することができる。磁石がチップから取り除かれた場合、または磁石がオフになった場合（たとえば電磁石）、粒子はバッファー中に遊離し、分散される。
【００５６】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、磁石を含む使い捨てチップを含む装置である。
【００５７】
粒子の物理的分離の方法
【００５８】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、物理的な力（たとえば重力）によって、本明細書に記載される粒子を除去するための方法である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子は、物理的な力によって生体サンプルから分離され、単離され、または除去される（たとえば遠心分離により）。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載された診断試験方法の適用の前、たとえば、一次採血チューブ中、カスタムのサンプル採集チューブ中、二次トランスファーチューブ中、またはカスタムのサンプル装置中で使用される。いくつかの実施形態では、粒子を除去する方法は濾過である。
【００５９】
たとえば、フィブロネクチン、および／または他の血栓因子に特異的な磁性ナノ粒子、または血栓成分／構成要素のオフ、その後の「血栓」（血清中）の捕捉もしくは結合のための細胞デブリ（すなわち、赤血球膜特異的）、および／または細胞デブリ（血清または血漿中）の捕捉もしくは結合のための磁性ナノ粒子は、遠心分離ローターおよび／またはチューブホルダーにおける強力な磁石または磁気技術の統合により、遠心分離速度および効率（研究室の効率、ワークフローおよびスループットを改善するためのより短いスピン時間）を増大させる。遠心分離のＲＣＦまたはＧと磁性ナノ粒子複合体（血栓＋磁性ビーズ、細胞デブリ＋磁性ビーズ）の磁気的分離の組み合わせにより、サンプルチューブの側面または底面でのはるかに迅速かつ効率的な分離と上清の形成が可能になり、その後の分析のためにサンプルが澄む。たとえば、ほとんどの研究室では、この遠因分離ステップは４分間以上であり、遠心分離と磁性ナノ粒子−血栓／細胞デブリ複合体の磁気的単離／分離の組み合わせにより、２分間以下（好ましくは１分以下）に短縮することができる。
【００６０】
さらに、ナノ粒子または大多数の磁性ナノ粒子が、１、５、１０、２０、３０、またはそれ以上の異なる干渉メカニズム等の１以上の異なるサンプル干渉メカニズムに特異的である場合、それらの干渉物質は、存在するならば、ナノ粒子に捕捉され、遠心分離物からの物理的分離後に、または上述の遠心分離と磁気的分離の組み合わせによって、サンプルから枯渇するであろう。
【００６１】
これらの磁性ナノ粒子はまた、遠心分離、または遠心分離における遠心分離と磁気的分離の組み合わせを介して分離される血栓または細胞デブリへの特異性を必要とせず、それらの表面は、１種超の抗原および／または抗体で共被覆または固定されていてもよく、この場合、１種以上の抗体は血栓または細胞デブリに特異的であり、他の抗原および／または抗体はサンプル干渉物質に特異的である。その際、ナノ粒子は、遠心分離または遠心分離と磁気的分離の組み合わせを介したその後の物理的分離または単離のために、サンプル干渉物質と血栓および／または細胞デブリの両方に特異的に結合するであろう。
【００６２】
血栓および／または細胞デブリに特異的なナノ粒子の使用は、磁性ナノ粒子による特異的に結合、ならびに磁気的分離および単離のためにすべてを磁性体に引っ張ることによって、凝固速度を増加させる。磁場と強度によって形成されたこのビーズベースのペレットはまた、血栓の強制的な近接、またはナノ粒子およびその後の磁石によって特異的に捕捉された凝固因子に基づいて血栓形成を促進する。
【００６３】
粒子の化学的分離の方法
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子は、化学的分離方法により生体サンプルから分離、単離、または除去される。いくつかの実施形態では、化学的分離方法は、診断試験方法が適用される前、たとえば、一次採血チューブ内、カスタムのサンプル採集装置内、二次トランスファーチューブ内、またはカスタムのサンプル装置内で使用される。
【００６５】
ある観点では、提供されるのは、１種以上の塩、溶媒、重合体、または界面活性剤を提供することを含む、粒子の化学的分離のための方法である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、化学的分離方法、たとえば液液相分離は、粒子を相Ａに分画し、ナノ粒子を含まないサンプルを試験される相Ｂに分画する。液液相分離（化学相分離）の薬剤は、塩、可溶性重合体、界面活性剤等によることができる。
【００６７】
たとえば、液液相分離は、極性水性サンプルにヘキサン等の非極性溶媒を加えることで起こすことができ、本明細書に記載されるような診断試験による試験のためのナノ粒子を含まない水相を残して、粒子は非極性相に分画される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される分離の方法は、有機相中にナノ粒子を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される分離の方法は、水相中にナノ粒子を提供する。
【００６８】
粒子および生体サンプルに非極性溶媒と水性極性溶媒を供給して非極性溶媒層および極性溶媒層を提供し、非極性溶媒を含む非極性溶媒層を除去し、粒子を含む水性極性溶媒を単離することにより粒子を単離することを含む、生体サンプル中の粒子を単離する方法。
【００６９】
非極性相を吸引して廃棄する前に、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳのための重水素化された内部標準物質等の内部標準物質を添加して使用することにより、サンプルの回収を調整または修正することができる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、分離は、磁気的分離と組み合わせて使用される物理的分離である。たとえば、ある観点では、提供されるのは装置（たとえば、磁化された遠心分離機、または重力および磁石の磁力の両方による分離を助ける磁石を備えた遠心分離機）である。ある観点では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載される粒子の分離のための、磁石および遠心分離機を備える装置である。いくつかの実施形態では、該装置は遠心分離時間を大幅に削減する。
【００７１】
（干渉物質の除去のための方法）
本明細書に記載されるのは、溶血、脂血症、黄疸、ビリルビン、マイクロフィブリン血栓、細胞デブリ、血球、フィブリノーゲン、または薬物、代謝物、サプリメント、植物性の生薬、マルチビタミンなどの他の干渉物質による既知の解析前および解析の試験誤差（たとえば干渉）の原因を枯渇させる（たとえば軽減、削減、または管理）ことを含む、干渉物質を除去または最小化する方法である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、マトリックス効果またはサンプルタイプの違い（たとえば、動物種、ヒト種）に起因する干渉を除去するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、診断試験（たとえば、臨床試験での診断試験またはバイオマーカー検査）の前に、干渉物質を除去するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される干渉物質を除去するための方法は、臨床試験において本明細書に記載されるバイオマーカーの診断試験の正確性と信頼性を高めるために用いられる。たとえば、本明細書に記載される方法は、患者の選択またはスクリーニング、たとえば、包含基準または除外基準のために使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される除去または枯渇のための方法は、臨床データまたは臨床試験結果における外れ値を特定するために使用することができる。たとえば、臨床データまたは臨床試験結果における外れ値には、本明細書に記載されるバイオマーカーに対する偽陽性または偽陰性の特定が含まれる。
【００７２】
その後の、干渉がない、または干渉が低減された定量的、半定量的、または定性的分析のために十分な量の干渉物質が捕捉および／または除去された場合、枯渇は完全であると定義される。その後の、半定量的、または定性的分析のために十分な量の干渉物質または干渉メカニズムが捕捉および／または除去された場合、枯渇は部分的であると定義され、また、ＬＣＭＳおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（すなわち、重水素化された内部標準）およびＨＰＬＣ（Ｃ１４またはトリチウム化内部放射性同位元素の内部標準）等の、内部標準を使用して、目的の分析物またはバイオマーカーの回収を調整することができる測定方法による定量的、半定量的、または定性的分析のために十分な量の干渉物質または干渉メカニズム、および内部標準が捕捉された場合も、部分的であると定義される。
【００７３】
枯渇は、サンプルから干渉を１００％除去することを意味しないが、残存した干渉が誤った結果をもはやもたらさないことを意味する。しかし、その後の溶出およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析等の特定のアッセイもしくは目的のため、または分子診断のための試料の前処理、核酸精製、濃縮のため、または尿、唾液、便等の困難なサンプルタイプからのバイオマーカーの濃縮のために必要である場合は、サンプルの前処理の枯渇は、干渉を１００％除去することができる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、１週間未満、６日間未満、５日間未満、４日間未満、３日間未満、２日間未満、１日間未満、２４時間未満、２０時間未満、１６時間未満、１２時間未満、８時間未満、４時間未満、２時間未満、１時間未満、３０分間未満、１５分間未満、１０分間未満、５分間未満、またはそれ未満で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、１日間未満行われる。
【００７５】
（干渉物質）
生体サンプル中の干渉物質を減少、最小化、または除去する、本明細書に記載される方法。干渉物質は、たとえば、抗体結合を阻害することによって診断検査の結果の正確な値を変化させたり、または架橋、立体障害、もしくは自己抗体のメカニズムによってアッセイシグナルを増減させたりすることができる、患者のサンプル中に存在する物質である。本明細書で使用する「干渉物質」は、免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ）、タンパク質、抗原、脂質、トリグリセリド、細胞構成要素、夾雑物、化学物質、薬剤、薬剤代謝物、サプリメント、ビタミン、植物性の生薬、異物（ウイルス、細菌（グラム陽性、グラム陰性）、菌類、酵母）、および異物、試験原材料、製剤、生物学的成分および合成成分、試験設計、及び／又は試験形式との特異的もしくは非特異的な相互作用により、試験に干渉し、誤った試験結果をもたらす可能性のある食物または食物中の物質によって作られる老廃物等の、血液、血漿、血清、ＣＦＳ、尿、便、唾液、精液、羊水、その他の体液またはサンプルマトリックス中の内因もしくは外因性の物質、または内因性および／もしくは外因性の物質の組み合わせである。干渉物質は、限定されないが、自己抗体、リウマチ因子（ＲＦ）、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ウシ、マウス、ウマ、ブタ、およびロバのポリクローナルおよび／またはモノクローナル抗体等のヒト抗動物抗体（ＨＡＡＡ）等の、異好性または異好様の干渉物質、および化学発光性基質（ルミノール、イソルミノール、イソルミノール誘導体、ＡＢＥＩ、ＡＢＥＩ誘導体、ルテニウム、アクリジニウムエステル）、フルオレセインまたは他の蛍光色素分子、および染色剤等の蛍光標識、捕獲部位（ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、アビジン、キャプトアビジン、ポリＡ、ポリＤＴ、アプタマー、抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、抗体断片、組み換えタンパク質、酵素、タンパク質、生体分子、ポリマー）およびそれらの結合相手（すなわち、ビオチン、フルオレセイン、ポリＤＴ、ポリＡ、抗原等）、結合リンカー（ＬＣ、ＬＣ−ＬＣ、ＰＥＯ、ＰＥＯｎ）、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、オーバルブミン、ゼラチン、マウス、ヤギ、ヒツジ、およびウサギなどの精製ポリおよびモノクローナルＩｇＧ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、プルロニック（登録商標）およびテトロニック等の三元ブロック共重合体、および、質量分析（すなわち、ＨＰＬＣ、ＭＳ、ＬＣＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、分子診断、ラテラルフロー、ポイントオブケア（ＰｏＣ）、ＣＬＩＡおよびＣＬＩＡ免除の試験および装置による、抗体ベースの診断試験、非抗体ベースの診断試験、またはその後の分析のためのサンプル前処理方法および装置の設計に典型的に使用される、Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ社およびＳｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ社等から市販されているブロッキング剤、ブロッキングタンパク質およびポリマー系のブロッキング試薬等の、試験設計またはアッセイ製剤に使用されるアッセイ特異的な干渉物質であり得る。
【００７６】
ある観点では、本明細書で提供されるのは、捕捉部位（干渉物質と結合する）で誘導体化された粒子を提供することを含む、生体サンプルから干渉物質（たとえばビオチン）を除去するための方法である。いくつかの実施形態では、干渉物質はビオチンである。
【００７７】
別の観点では、サンプルを粒子（たとえばナノ粒子、マイクロ粒子）で前処理して、性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）を枯渇させたサンプルがその後、遊離または生物学的に利用可能なホルモンまたはステロイド（すなわち、遊離テストステロン）を測定するために試験することができるように、血清または血漿からＳＨＢＧまたは性ステロイド結合グロブリン（ＳＳＢＧ）を枯渇させることができる。いくつかの実施形態では、干渉物質は性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）または性ステロイド結合グロブリン（ＳＳＢＧ）である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、干渉物質はビオチン、ＨＡＭＡ、ＲＦ、異好抗体、または抗ＳＡｖである。
【００７９】
（バイオマーカーの除去または濃縮の方法）
本明細書に記載されるのは、生体サンプル中のバイオマーカーの濃度を濃縮する、または増加させるための方法である。「濃縮」は、完全または部分的に、粒子を捕捉し、標的分析物またはバイオマーカーを生体サンプル（たとえば、ヒトもしくは動物の血清、血漿、血液、全血、処理された血液、尿、唾液、便（液体および固体）、精液もしくは精漿、細胞、組織、生検材料、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または任意の液体または固体）からの粒子に結合させることとして定義される。いくつかの実施形態では、濃縮には、たとえば、バイオマーカー特異的ナノ粒子を洗浄して、バイオマーカーの特性評価および測定ステップの前に干渉物質を除去または最小化するために単離することによる、生体サンプルの洗浄および濃縮が含まれる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法は、その後の溶出および試験のため、または診断試験の前にバイオマーカーの濃度を濃縮もしくは増加させるために、生体サンプル中の特定の標的（たとえばバイオマーカー）を分離および精製するために使用される。
【００８１】
バイオマーカー特異的な粒子を洗浄または単離した後、特性評価または測定ステップの前に、粒子は、リン酸塩緩衝生理食塩水（すなわちＰＢＳ  ｐＨ７．２）、またはＬＣ−ＭＳ／ＭＳ互換バッファー等のバッファー中に分散、再構成、または再懸濁することができる。これは、粒子によって捕捉され濃縮されたバイオマーカーの重要な特性評価または測定ステップは、緩衝系内で行われたものであり、同じ特性評価、測定または試験方法または系を使用して血液、血漿、血清または尿中で測定された同じバイオマーカーと比較して、動物の血液、血漿、血清、または尿で測定されたバイオマーカー間のマトリックス効果またはバイアスを導入または引き起こすものである動物またはヒトのマトリックス内でおこなわれたものではないことを意味する。洗浄により、サンプルマトリックス、成分、タンパク質、細胞成分、および関連する干渉またはマトリックス効果を洗い流すことができる。
【００８２】
濃縮は、その後の診断検査、たとえば定量的、半定量的、または定性的分析のために十分な量の分析物が捕捉された場合、完全であると定義され、その後の半定量的分析または定性的分析のために十分な量の分析物またはバイオマーカーが捕捉された場合、部分的であると定義され、また、ＬＣＭＳおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（すなわち、重水素化された内部標準）およびＨＰＬＣ（Ｃ１４またはトリチウム内部放射性同位元素の内部標準）等の、内部標準を使用して、目的の分析物またはバイオマーカーの回収を調整することができる測定方法による、定量的、半定量的、または定性的分析のために十分な量の標的の分析物またはバイオマーカー、および内部標準が捕捉された場合も、部分的であると定義される。
【００８３】
ａ）粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルに加えること、ｂ）粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルと混合すること、ｃ）粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルとインキュベートしてバイオマーカーを粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）に結合および捕捉させること、ｄ）粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルから分離または除去すること、ｅ）粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）を保存すること、ｆ）適切な希釈剤を使用して粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）を洗浄し、非特異的な材料を除去すること、ｇ）バイオマーカー特異的な定量的、半定量的、または定性的な診断試験を用いて、粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）に捕捉されたバイオマーカーの量、質量、モル濃度、濃度、または収量を測定すること、を含む、診断試験の前にサンプル中のバイオマーカーを濃縮するための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、希釈剤には水（たとえば、脱イオン水、注射用水、生理食塩水、緩衝水溶液）が含まれる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される濃縮方法には、洗浄ステップが含まれる。洗浄ステップでは、本明細書に記載されるような干渉物質を除去し、および／または洗浄され、精製され、もしくは単離された関心のあるバイオマーカー（たとえば、本明細書に記載されているようなバイオマーカー）を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される濃縮方法は、マトリックス効果または種の影響を低減させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される濃縮方法は、異なる起源の２つの生体サンプルを比較する診断試験の前に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される濃縮方法は、動物のサンプルとヒトのサンプルを比較する診断試験の前に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される濃縮方法は、血清サンプルと血漿サンプルを比較する診断試験の前に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される濃縮方法は、高粘度のサンプルに使用される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、濃縮方法には、バイオマーカーが濃縮された第１の生体サンプルをバイオマーカーが濃縮された第２の生体サンプルと結合させることが含まれる。
【００８６】
本明細書で提供されるのは、本明細書に記載される切断試薬により、たとえば、ｐＨ（たとえば、炭酸水素ナトリウム等の塩基で増加したｐＨ、酢酸、トリクロロ酢酸、スルホサリチル酸、塩酸、ギ酸等の酸で減少したｐＨ、ｐＨ２．５〜３．０の１００ｍＭグリシンＨＣｌ、ｐＨ３．０の１００ｍＭクエン酸、ｐＨ１１．５の５０〜１００ｍＭトリエチルアミンまたはトリエタノールアミン、ｐＨ１０．５の１５０ｍＭ水酸化アンモニウム等の一般的なｐＨの溶出バッファー）、ディスプレーサ―または置換剤、競合溶出（たとえば、０．１Ｍ超のカウンターリガンドまたは類似体）、イオン強度および／またはカオトロピック効果（たとえば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、１０ｍＭトリス中ｐＨ７．０の３．５〜４．０Ｍ塩化マグネシウム、ｐＨ７．２の１０ｍＬのリン酸緩衝液中５Ｍ塩化リチウム、ｐＨ７．５の２．５Ｍヨウ化ナトリウム、０．２〜３．０Ｍチオシアン酸ナトリウム）、界面活性剤、洗浄剤、濃縮無機塩、変性（たとえば、２〜６ＭグアニジンＨＣｌ、 ２−８Ｍ尿素、１％デオキシコール酸塩、１％ＳＤＳ）、有機溶剤（たとえば、アルコール、クロロホルム、エタノール、メタノール、アセトニトリル、ヘキサン、ＤＭＳＯ、１０％ジオキサン、ｐＨ８〜１１．５の５０％エチレングリコール（カオトロピックも）、放射線または熱（高温）、構造変化、ジスルフィド結合還元剤（２−メルカプトエタノール、ジチオスレイトール、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、酵素不活化、カオトロピック剤（尿素、塩化グアニジン、過塩素酸リチウム）、機械的撹拌、超音波処理、およびタンパク質消化酵素（ペプシン、トリプシン）、ならびにそれらの組み合わせ等の溶出戦略を用いた結合相互作用の破壊によって、粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）から溶出、解離、または解放されることにより、粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）により捕捉および濃縮された標的バイオマーカーの量、質量、モル濃度、濃度、または収量を測定する方法である。
【００８７】
別段の記載がない限り、または本開示から暗示されない限り、本明細書に記載された特定の方法または組成物に関連して記載された任意の実施形態のいずれかは、本明細書に記載された他の実施形態のいずれかと組み合わせて使用することができる。
【００８８】
本発明の方法および組成物は、この分野で知られる任意の適切なアッセイ、たとえば、限定されないが、タンパク質−タンパク質アフィニティアッセイ、タンパク質−リガンドアフィニティアッセイ、核酸アフィニティアッセイ、間接蛍光抗体アッセイ（ＩＦＡＳ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、および酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）を含むこの分野で知られる任意の適切なアフィニティアッセイまたはイムノアッセイ、直接または間接のアッセイ、競合アッセイ、サンドイッチアッセイ、ＣＬＩＡまたはＣＬＩＡ免除試験、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、分析アッセイ等と組み合わせて使用することができる。
【００８９】
診断試験の前に、同じサンプルからサンプルの干渉物質を枯渇させる方法とバイオマーカーを濃縮する方法の両方の方法は、ａ）バイオマーカー特異的な粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルに添加する前に、化学的および／または生物学的試薬、添加剤または組成物をサンプル添加して、サンプル特異的な干渉を遮断または枯渇させること、ｂ）化学的および／または生物学的試薬、添加剤または組成物でサンプルを前処理またはインキュベートした後に、バイオマーカー特異的な粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルに添加すること、ｃ）バイオマーカー特異的な粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）をサンプルとインキュベートして、標的バイオマーカーを粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）に結合させ、捕捉させること、ｄ）粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）を洗浄し、またはサンプル、ならびに化学的および／もしくは生物学的試薬添加剤または組成物からそれを単離すること、ｅ）診断試験を用いて、粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）に捕捉され、濃縮されたバイオマーカーの特性評価をすること、からなる。
【００９０】
たとえば、ある実施形態では、キャプトアビジンに結合した粒子は、中性のｐＨでサンプル中のビオチンに結合するであろう。キャプトアビジンに結合したビオチンは、ｐＨが１０に上昇した場合にビオチンを放出するであろう。
【００９１】
（バイオマーカー）
本明細書に記載されるのは、単離方法、または生体サンプル中に存在するバイオマーカーを単離もしくは濃縮するための方法である。本明細書でいう「バイオマーカー」は、老化または疾患等の進行、事象、または状態の、特徴的な生物学的指標または生物学的に由来する指標（たとえば代謝物）として定義される。バイオマーカーは、内因性および／または外因性分析物、抗原、小分子、大分子、薬物、治療剤、代謝物、生体異物、化学物質、ペプチド、タンパク質、タンパク質消化物、ウイルス抗原、細菌、細胞、細胞溶解物、細胞表面マーカー、抗原決定基、抗体、抗体の断片、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ受容体、受容体のリガンド、ホルモン、ホルモンの受容体、酵素、酵素の基質、一本鎖オリゴヌクレオチド、一本鎖ポリヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖ポリヌクレオチド、ポリマーおよびアプタマーであってもよい。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、本明細書に記載される干渉物質（たとえば、抗体結合を阻害することにより診断試験の結果の正しい値を変化させることができる、または架橋、立体障害、または自己抗体のメカニズムによりアッセイシグナルを増加または減少させることができる、患者のサンプル中に存在する物質）である。本明細書で使用する「干渉物質」は、限定されないが、自己抗体、リウマチ因子（ＲＦ）、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ウシ、マウス、ウマ、ブタ、およびロバのポリクローナルおよび／またはモノクローナル抗体等のヒト抗動物抗体（ＨＡＡＡ）等の、異好性または異好様の干渉物質、および化学発光性基質（ルミノール、イソルミノール、イソルミノール誘導体、ＡＢＥＩ、ＡＢＥＩ誘導体、ルテニウム、アクリジニウムエステル）、フルオレセインまたは他の蛍光色素分子、および染色剤等の蛍光標識、捕獲部位（ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、アビジン、ポリＡ、ポリＤＴ、アプタマー、抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、抗体断片、組み換えタンパク質、酵素、タンパク質、生体分子、ポリマー）およびそれらの結合相手（すなわち、ビオチン、フルオレセイン、ポリＤＴ、ポリＡ、抗原等）、結合リンカー（ＬＣ、ＬＣ−ＬＣ、ＰＥＯ、ＰＥＯｎ）、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、卵白アルブミン、ゼラチン、マウス、ヤギ、ヒツジ、およびウサギなどの精製ポリおよびモノクローナルＩｇＧ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、プルロニック（登録商標）およびテトロニック等の三元ブロック共重合体、および、質量分析（すなわち、ＨＰＬＣ、ＭＳ、ＬＣＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、分子診断、ラテラルフロー、ポイントオブケア（ＰｏＣ）、ＣＬＩＡおよびＣＬＩＡ免除の試験および装置による、抗体ベースの診断試験、非抗体ベースの診断試験、またはその後の分析のためのサンプル前処理方法および装置の設計に典型的に使用される、Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ社およびＳｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ社等から市販されているブロッキング剤、ブロッキングタンパク質およびポリマー系のブロッキング試薬等の、試験設計またはアッセイ製剤に使用されるアッセイ特異的な干渉物質であり得る。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、本明細書に記載された生体サンプル中で確認される。
【００９２】
（フィブリノーゲン）
フィブリノーゲンは、組織や血管の損傷時にトロンビンによってフィブリンに変換され、その結果、フィブリンベースの血栓が形成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用される、本明細書に記載される粒子（たとえば、抗フィブリノーゲン（たとえばマウス抗フィブリノーゲン）で誘導体化された粒子）は、全血中のフィブリノーゲンと結合し、分離（たとえば、化学的分離）を可能にする。フィブリンを介して血栓に結合した粒子は、粒子を含まない血清試験のために、遠心分離後に、血清から単離し、除去することができる。いくつかの実施形態では、バイオマーカーはフィブリノーゲンである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、抗フィブリノーゲンで誘導された粒子を使用して、サンプル（たとえば血液サンプル）の遠心分離の必要性を排除する。
【００９３】
（外傷性脳障害）
ある実施形態では、バイオマーカーは外傷性脳障害のためのものである。急性脳損傷の重症度および大きさ、血液脳関門（ＢＢＢ）の完全性に関連するバイオマーカーは９種類（９）あるが、それらは極めて低い血中循環濃度で存在しており、既存のイムノアッセイ技術や試験プラットフォームを用いて検出および定量するのが非常に困難である。Ｂａｎｙａｎ  ＢＴＩ試験（２０１８年２月１４日にＦＤＡ承認）は、それらのバイオマーカーのうち２種類だけを測定するが、本明細書に記載される方法および装置（たとえば、濃縮方法、濃縮のための装置）は、患者の９種類のバイオマーカー全てを同時に測定し、患者の診断と予後を助けることができる。９種類の各バイオマーカー用の捕捉部位で誘導体化された粒子を、ＴＢＩが疑われる患者からの生体サンプルに添加してもよい。いくつかの実施形態では、外傷性脳障害のバイオマーカーは、Ｓ１００Ｂ、ＧＦＡＰ、ＮＬＦ、ＮＦＨ、γ−エノラーゼ（ＮＳＥ）、α−ＩＩスペクトリン、ＵＣＨ−Ｌ１、総タウ、およびリン酸化タウからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、外傷性脳障害のバイオマーカーは、ＧＦＡＰおよびＵＣＨ−Ｌ１から選択される。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法（たとえば濃縮方法）は、Ｓ１００Ｂ、ＧＦＡＰ、ＮＬＦ、ＮＦＨ、γ−エノラーゼ（ＮＳＥ）、α−ＩＩスペクトリン、ＵＣＨ−Ｌ１、全タウ、およびリン酸化タウからなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、または９種の外傷性脳障害のバイオマーカーを単離または濃縮するために使用される。
【００９５】
（アルツハイマー病）
ある実施形態では、バイオマーカーはアルツハイマー病のためのものである。アルツハイマー病の重症度および大きさに関連するバイオマーカーは２種類（２）ある。いくつかの実施形態では、アルツハイマー病のバイオマーカーは、アミロイドβ、ＢＡＣＥ１、および可溶性Ａβ前駆体タンパク質（ｓＡＰＰ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アルツハイマー病のバイオマーカーは、βアミロイド（１−４２）、ホスホタウ（１８１ｐ）、および全タウからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法（たとえば濃縮方法）は、アミロイドベータ、ＢＡＣＥ１、および可溶性Ａβ前駆体タンパク質（ｓＡＰＰ）からなる群から選択される１、２、または３種のアルツハイマー病のバイオマーカーを単離または濃縮するために使用される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、アミロイドベータ、ＢＡＣＥ１、または可溶性Ａβ前駆体タンパク質（ｓＡＰＰ）である。いくつかの実施形態では、アルツハイマー病のためのバイオマーカーは、生体サンプル（たとえばＣＳＦ）中で確認される。
【００９６】
（性感染症）
ある実施形態では、バイオマーカーは性感染症（ＳＴＤ）のためのものである。ＳＴＤの感染に特徴的なバイオマーカーは少なくとも１０種類（１０）ある。いくつかの実施形態では、ＳＴＤバイオマーカーは、クラミジア、淋病、梅毒、トリコモナス、ＨＰＶ、ヘルペス１および２、ＨＳＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ１および２のためのバイオマーカーである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法（たとえば濃縮方法）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３種類のＳＴＤバイオマーカー：クラミジア、淋病、梅毒、トリコモナス、ＨＰＶ、ヘルペス１および２、ＨＳＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ１および２、ならびにＨＩＶ抗体を単離または濃縮するために使用される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは尿中に存在する（たとえば、クラミジア、淋病、トリコモナス）。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、血中、血清中、または血漿中に存在する（たとえば、梅毒、ＨＰＶ、ヘルペス１および２、ＨＳＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ１および２、ＨＩＶ抗体）。
【００９７】
（細菌の感染）
ある実施形態では、バイオマーカーは細菌の感染のためのものである。細菌感染のための現在のゴールドスタンダードの試験は、陽性結果が分子診断等の確認試験に反映されるまでに２４〜４８時間かかり得る血液培養である。本明細書に記載されているのは、敗血症を予防または管理するために患者を首尾よく治療するために重要である短縮された時間、たとえば６０分以下（例えば、５０分、４０分、３０分、２０分以下）、最短３０分以下で細菌の感染を確定診断／除外診断するための方法である。細菌の感染に特徴的なバイオマーカーは少なくとも３０種類（３０）ある。いくつかの実施形態では、細菌のバイオマーカーは、敗血症を引き起こす細菌種（たとえば、フェシウム菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ））のバイオマーカーからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、フェシウム菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ））のバイオマーカーである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、グラム陽性菌またはグラム陰性菌のバイオマーカーである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、酵母病原体（たとえば、血流病原体に関連する酵母病原体）のバイオマーカーである。
【００９８】
いくつかの実施形態では、グラム陽性菌は、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、レンサ球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、アガラクチア菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、または化膿性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、グラム陰性菌は、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）複合体、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、または霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、酵母病原体は、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、またはカンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）である。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、質量分析法が続く。リンカー（すなわち、粒子を表面捕捉部分に結合させるリンカー）を切断するために、切断剤（例えば、還元剤（例えば、ＤＴＴまたはＴＣＥＰ））を細菌−粒子結合複合体に添加する方法が想定される。得られた細菌を培養、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法により分析する。
【０１０２】
リンカー（すなわち、粒子を表面捕捉部分に結合させるリンカー）を切断するために、切断剤（例えば、還元剤（例えば、ＤＴＴまたはＴＣＥＰ））を細菌−粒子結合複合体に添加する方法が想定される。得られた細菌を培養する、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法により分析する、もしくはＢｉｏＦｉｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社のＦｉｌｍＡｒｒａｙ（登録商標）血液培養同定（ＢＣＩＤ）パネル等の分子診断により分析する。
【０１０３】
（甲状腺機能）
ＴＳＨ濃度は、甲状腺ホルモンの過剰（甲状腺機能亢進症）または欠乏（甲状腺機能低下症）が疑われる患者の甲状腺機能検査の一環として測定される。本明細書のいくつかの実施形態で記載される方法は、甲状腺機能を評価するために使用される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは抗原（たとえばＴＳＨ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、抗原（たとえばＴＳＨ）に対する特異性を有する自己抗体（たとえば遊離自己抗体、複合自己抗体）である。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、干渉物質（甲状腺刺激ホルモン、遊離チロキシン、および遊離トリヨードチロニンの測定に影響する）は、マクロＴＳＨ、ビオチン、抗ストレプトアビジン抗体、抗ルテニウム抗体、甲状腺ホルモン自己抗体、または異好抗体である。
【０１０５】
（心機能）
本明細書のいくつかの実施形態に記載される方法は、心機能を評価するために使用される。トロポニンの血中循環濃度の上昇は、心疾患、たとえば心筋梗塞のバイオマーカーである。Ｃａｒｄｉａｃ  ＩおよびＴは、心筋損傷の特異的な指標である。トロポニンのサブユニットもまた、心臓の健康状態のマーカーである。特にｃＴｎＩおよびｃＴｎＴは、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、たとえば、１型および２型の心筋梗塞、不安定狭心症、術後の心筋外傷、および関連する疾患のバイオマーカーである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、遊離ｃＴｎＩ、遊離ｃＴｎＴ、２成分のｃＴｎＩ−ＴｎＣ、または３成分のｃＴｎＩ−ＴｎＣ−ＴｎＴである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは心不全の指標である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは脳卒中の指標である（たとえば、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｈａｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／１０．１１６１／ＳＴＲＯＫＥＡＨＡ．１１７．０１７０７６、およびｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．３６０ｄｘ．ｃｏｍ／ｂｕｓｉｎｅｓｓ−ｎｅｗｓ／ｒｏｃｈｅ−ｔｅｓｔ−ｈｅｌｐｓ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ−ｂｌｅｅｄｉｎｇ−ｒｉｓｋ−ｓｔｒｏｋｅ−ｒｉｓｋ−ｐａｔｉｅｎｔｓ−ｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎｇ＃．Ｗ１ｊｚ０ｔｈＫｈｃＡに記載されており、それらの全体が参照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは線維症の指標である（たとえば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｎｌｉｎｅｊａｃｃ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／６５／２２／２４４９に記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）の診断のためのものである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、心筋トロポニン（Ｉ、Ｉ−Ｃ、Ｉ−Ｃ−Ｔ、Ｔ）および他の心筋トロポニン断片、ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ、ＡＮＰ、ＣＮＰ）、Ｎ末端断片（たとえば、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＣＮＰ）、グリコシル化、非グリコシル化、ＣＲＰ，ミオグロビン、クレアチニンキナーゼ（ＣＫ）、ＣＫ−ＭＢ、ｓＳＴ２、ＧＤＦ−１５、ガレクチン−３のためのものである。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、正確度および精度は、大きいサンプル量（すなわち、１ｍＬ、１０ｍＬ、１００ｍＬ、１０００ｍＬ等）、また、非常に小さいサンプル量（すなわち、新生児、小児、高齢者）、典型的には現在検査できない、または検査前にサンプルを希釈する必要があって試験の感度、正確度、および精度が低下するサンプルを検査して、非常に希薄または低濃度のバイオマーカーの検出可能性を向上させることができる。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、１ｍＬ、１０ｍＬ、１００ｍＬ、１０００ｍＬ、またはさらに大きい容量である。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、０．５ｍＬ、０．２５ｍＬ、０．１ｍＬ、０．０５ｍＬ、またはそれ未満の容量である。
【０１０７】
また、本明細書で提供されるのは、バイオマーカー特性評価ステップまたは試験方法の前に、洗浄ステップまたは粒子分離の後、粒子から、捕捉したバイオマーカーを選択的に放出もしくは溶出、または捕捉部位−バイオマーカー複合体を選択的に放出もしくは溶出させることによる、診断試験の前に粒子サンプルの前処理を用いてバイオマーカーの濃縮を助ける方法である。
【０１０８】
本明細書で使用される「切断試薬」または「放出剤」は、粒子表面の捕捉部位とバイオマーカーの結合を崩壊させ、たとえば、捕捉部位を置換または溶出させることなくバイオマーカーのみを置換または溶出させる、酸性または塩基性のｐＨ、高モル濃度の塩、糖、化学置換剤、洗浄剤、界面活性剤、および／もしくはキレート剤、またはそれらの組み合わせである。洗浄、または磁石によりサンプルマトリックスから粒子を単離した後、粒子は放出剤を含む溶出溶液で処理し、バイオマーカーを溶液内に選択的に放出させることができる。粒子は、急速に（２分未満、理想的には３０秒未満）サンプル装置（バイアル、試験管、他）の側面および／または底面に単離され、本質的に粒子を含まないサンプル上清を形成することができる。粒子を含まないサンプル上清は、その後、粒子を含むペレットを崩すことなく吸引し、別のトランスファーチューブに分注、またはバイオマーカーを試験するために直接分析系（すなわち、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳまたはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）に入れることができる。
【０１０９】
たとえば、本明細書に記載される切断試薬または放出剤は、（たとえば、炭酸水素ナトリウム等の塩基で増加したｐＨ、酢酸、トリクロロ酢酸、スルホサリチル酸、塩酸、ギ酸等の酸で減少したｐＨ、ｐＨ２．５〜３．０の１００ｍＭグリシンＨＣｌ、ｐＨ３．０の１００ｍＭクエン酸、ｐＨ１１．５の５０〜１００ｍＭトリエチルアミンまたはトリエタノールアミン、ｐＨ１０．５の１５０ｍＭ水酸化アンモニウム等の一般的なｐＨの溶出バッファー）、ディスプレーサ―または置換剤、競合溶出（たとえば、０．１Ｍ超のカウンターリガンドまたは類似体）、イオン強度および／またはカオトロピック効果（たとえば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、１０ｍＭトリス中ｐＨ７．０の３．５〜４．０Ｍ塩化マグネシウム、ｐＨ７．２の１０ｍＬのリン酸緩衝液中５Ｍ塩化リチウム、ｐＨ７．５の２．５Ｍヨウ化ナトリウム、０．２〜３．０Ｍチオシアン酸ナトリウム）、界面活性剤、洗浄剤、濃縮無機塩、変性（たとえば、２〜６ＭグアニジンＨＣｌ、 ２−８Ｍ尿素、１％デオキシコール酸塩、１％ＳＤＳ）、有機溶剤（たとえば、アルコール、クロロホルム、エタノール、メタノール、アセトニトリル、ヘキサン、ＤＭＳＯ、１０％ジオキサン、ｐＨ８〜１１．５の５０％エチレングリコール（カオトロピックも）、放射線または熱（高温）、構造変化、ジスルフィド結合還元剤（２−メルカプトエタノール、ジチオスレイトール、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、酵素不活化、カオトロピック剤（尿素、塩化グアニジン、過塩素酸リチウム）、機械的撹拌、超音波処理、およびタンパク質消化酵素（ペプシン、トリプシン）、ならびにそれらの組み合わせ等の溶出戦略を用いて、本明細書に記載される粒子と本明細書に記載される捕捉部位の間の、本明細書に記載される結合相互作用または切断可能な結合を崩壊させる。
【０１１０】
（特性評価の方法）
本明細書に記載されるのは、その後の特性評価、または診断試験のために、バイオマーカーを枯渇させる、および／または濃縮するための方法である。本明細書に記載されたバイオマーカー（たとえば干渉物質）の特性評価には、本明細書に記載されたバイオマーカー（たとえば、本明細書に記載された干渉物質）の同定および／または定量が含まれる。
【０１１１】
（本発明の粒子）
本明細書に記載されるのは、生体サンプルの単離、枯渇、および／または濃縮のための粒子である。いくつかの実施形態では、粒子には、切断可能な結合および捕捉部位（たとえば、１つの捕捉部位を提示する機能がある粒子表面）が含まれる。いくつかの実施形態では、粒子には、切断不可能な結合および捕捉部位（たとえば、１つの捕捉部位を提示する機能がある粒子表面）が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子には、捕捉部位（たとえば、本明細書に記載されるバイオマーカーに高い特異性を有する捕獲部位）が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子（たとえば、本明細書に記載される粒子の表面、本明細書に記載される捕捉部位と結合していない粒子表面）は、不活性（たとえば、本明細書に記載のバイオマーカーへの有意な結合を示さない）である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子は、粒子または診断試験にさらなる変更を加えることなく、本明細書に記載される診断試験において使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子は、サンプルを変化させることなく（たとえばさらなるバイオマーカー（たとえば干渉）を追加または除去することなく）、サンプルに添加したり、サンプルから除去したりすることができる。
【０１１２】
本明細書に記載される粒子は、平均直径が０．０５０マイクロメートル〜最大３．００マイクロメートル、または好ましくは直径０．１００マイクロメートル〜１．１マイクロメートル、さらに好ましくは０．２００マイクロメートル〜０．６００マイクロメートル、さらに好ましくは直径０．１００マイクロメートル〜０．５００マイクロメートルであり、十分に小さい。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される粒子（たとえば、マイクロ粒子、ナノ粒子）にはコアまたは支持体が含まれ、コアまたは支持体は、酸化鉄、強磁性酸化鉄、Ｆｅ２Ｏ３、およびＦｅ３Ｏ４、マグヘマイト、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される常磁性または超常磁性の材料である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、粒子の表面には、疎水性の有機重合体または共重合体が含まれる。いくつかの実施形態では、粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）の表面には、限定されないが、セラミック、ガラス、重合体、共重合体、金属、ラテックス、シリカ、金、銀、または合金等のコロイド状金属、ポリスチレン、誘導体化ポリスチレン、ポリ（ジビニルベンゼン）、スチレンアシル酸エステル共重合体、スチレンブタジエン共重合体、スチレンジビニルベンゼン共重合体、ポリ（スチレンオキシエチレン）、ポリメタクリル酸メチル、ポリメタクリル酸エステル、ポリウレタン、ポリグルタルアルデヒド、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、ポリオレフィン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、ポリ（エーテルスルホン）、熱分解物質、ブロック共重合体、および前述の共重合体、シリコーン、またはシリカ、メチロールメラミン、デキストランもしくはポリ（エチレングリコール）デキストラン（ＰＥＧ−ＤＥＸ）などの生分解性ポリマー、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される材料等の有機重合体または共重合体が含まれる。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「遮断剤」は、タンパク質、重合体、界面活性剤、洗浄剤、またはそれらの組み合わせをいう。いくつかの実施形態では、捕捉部位の本明細書に記載される粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）への結合は、タンパク質、重合体、界面活性剤、洗浄剤、またはそれらの組み合わせ等の遮断剤で遮断される。遮断剤は、アルブミン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、卵白アルブミン、ゼラチン、カゼイン、酸加水分解カゼイン、ガンマグロブリン、精製ＩｇＧ、動物の血清、ポリクローナル抗体、およびモノクローナル抗体等のタンパク質、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の重合体、タンパク質と重合体の組み合わせ、ペプチド、（ＰＥＯ）ｎ−ＮＨＳまたは（ＰＥＯ）ｎ−マレイミド等のＰＥＧ化試薬、プルロニック（登録商標）Ｆ１０８、Ｆ１２７、およびＦ６８等のトリブロック共重合体等の重合体、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）、およびＴｗｅｅｎ ８０（非イオン性）等の非イオン性洗浄剤、ＣＨＡＰＳ等の双性イオン洗浄剤、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、デオキシコール酸塩、コール酸塩、およびサルコシル等のイオン性洗浄剤、界面活性剤、ショ糖等の糖、および異好抗体遮断試薬（Ｓｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ社）、ＭＡＫ３３（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）、免疫グロブリン阻害試薬（ＩＩＲ）（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ社）、ヘテロブロック（Ｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社）、ブロックマスター（ＪＳＲ社）、ＴＲＵ  Ｂｌｏｃｋ（Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、ならびにＳｔａｂｉｌＣｏａｔ（登録商標）およびＳｔａｂｉｌＧｕａｒｄ（登録商標）（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ社）等の市販の遮断剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、遮断剤は、本明細書に記載される粒子に結合している（たとえば、共有結合、非共有結合）。いくつかの実施形態では、遮断剤は、本明細書に記載される粒子に結合（たとえば、共有結合、非共有結合）していない。
【０１１６】
（切断可能な結合）
ある観点では、捕捉部位は本明細書に記載される切断可能な結合によってバイオマーカーに結合している。切断可能な結合は、共有結合または非共有結合を介してなされることができる。非共有結合の例には、親和性、イオン性、ファンデルワールス（たとえば、双極子／双極子またはロンドン力）、水素結合（たとえば、ポリヌクレオチド二重鎖間）、および疎水性相互作用が含まれる。結合が非共有結合である場合、物体間の結合は、好ましくは特異的である。特異的な非共有結合の非限定的な例には、ビオチンと、アビジン、キャプトアビジン、ＳＡ、ニュートラアビジン、ＳＡの断片、アビジンの断片、ニュートラアビジンの断片、またはそれらの混合物等のビオチン結合タンパク質との間の結合相互作用；ビオチン化Ｆａｂ、ビオチン化免疫グロブリンもしくはその断片、ビオチン化小分子（たとえば、ホルモンまたは受容体のリガンド）、ビオチン化ポリヌクレオチド、ビオチン化巨大分子（たとえば、タンパク質、または天然もしくは合成重合体）の、アビジン、ＳＡ，ニュートラアビジン、ＳＡの断片、アビジンの断片、ニュートラアビジンの断片、またはそれらの混合物等のビオチン結合タンパク質への結合；酵素への基質の結合；糖タンパク質に特異的なレクチンへの糖タンパク質の結合；リガンドに特異的な受容体へのリガンドの結合；抗体が産生される抗原への抗体の結合；およびポリヌクレオチドと相補的または実質的に相補的なポリヌクレオチドとの間の二重鎖形成等が含まれる。
【０１１７】
ジスルフィド結合（Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ）等の切断可能な結合は、捕捉部位（すなわち、ＳＨ−Ｆａｂ等の抗体または抗体断片）を粒子に固定または捕捉させるために使用される。サンプルマトリックスから粒子を洗浄または単離した後、粒子をＴＣＥＰまたはＤＴＴ等の還元剤を含む溶液で処理してジスルフィド結合を切断し、捕捉部位−バイオマーカー複合体を溶液中に放出することができる。粒子は早急（２分未満、理想的には３０秒未満）にサンプル装置（バイアル、試験管、他）の側面および／または底面に単離して、本質的に粒子を含まないサンプル上清を形成することができる。粒子を含まないサンプル上清は、その後、粒子を含むペレットを崩すことなく吸引し、別のトランスファーチューブに分注、または捕捉部位−バイオマーカー複合体を試験するために、直接、分析系（すなわち、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳもしくはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、またはＦｉｌｍＡｒｒａｙ血液培養パネル等の分子診断）に入れることができる。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、切断可能な結合はジスルフィド結合（Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ）である。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、切断可能な結合は、ストレプトアビジン、キャプトアビジン、またはアビジンと、ビオチンの間の非共有結合である。
【０１２０】
（捕捉部位）
本明細書に記載されるのは、本明細書に記載されるような干渉物質、または本明細書に記載されるようなバイオマーカーと結合する１種の捕捉部位を含む粒子である。本明細書に記載されるように、「捕捉部位」は、抗体、抗体の結合断片、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、受容体、受容体のリガンド、ホルモン、ホルモンの受容体、酵素、酵素の基質、一本鎖オリゴヌクレオチド、一本鎖ポリヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖ポリヌクレオチド、抗原、ペプチド、ポリマー、アプタマー、およびタンパク質からなる群から選択される。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、捕捉部位はタンパク質である。タンパク質は、たとえば、一量体、二量体、多量体、または融合タンパク質であり得る。特定の実施形態では、タンパク質には、たとえば抗体、抗体の断片、ＢＳＡ、卵白アルブミン、ＢＳＡの断片、卵白アルブミンの断片、マウスＩｇＧ、重合マウスＩｇＧ、標的ＨＡＭＡおよびＲＦ干渉メカニズムに対する抗体断片（Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２）および異なるサブクラスのマウスＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＤ）、標的ＨＡＡＡ干渉に対する精製した動物ポリクローナル抗体（すなわち、ウシ、ヤギ、マウス、ウサギ、ヒツジ）、ストレプトアビジン、ＡＬＰ、ＨＲＰ、標的ＭＡＳＩ干渉に対するＢＳＡ（イソルミノール、ルテニウム、アクリジニウムとのコンジュゲート）等の少なくとも１種のアルブミンまたはそれらの混合物が含まれる。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、捕捉部位はヒト抗動物抗体（たとえば、マウスＩｇＧ、ヒツジＩｇＧ、ヤギＩｇＧ、ウサギＩｇＧ、ウシＩｇＧ、ブタＩｇＧ、ウマＩｇＧ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は異好抗体（たとえば、ＦＲ（Ｆｃ特異的）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、重合ＩｇＧ（１、２ａ、２ｂ型ＩｇＧおよびＩｇＧ断片、血清成分）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はアッセイ特異的な結合剤（たとえば、ビオチン、フルオレセイン、抗フルオレセインポリ／Ｍａｂ、抗ビオチンポリ／Ｍａｂ、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はアッセイ特異的な単一分子（たとえば、ＨＰＲ、ＡＬＰ、アクリジニウムエステル、イソルミノール／ルミノール、ルテニウム、ＡＢＥＩ／環状ＡＢＥＩ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はアッセイ特異的な遮断剤（たとえば、ＢＳＡ、魚皮ゼラチン、カゼイン、卵白アルブミン、ＰＶＰ、ＰＶＡ）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はアッセイ特異的な結合リンカー（たとえば、ＬＣ、ＬＣ−ＬＣ、ＰＥＯ４、ＰＥＯ１６）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は抗原自己抗体（たとえば、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位はタンパク質自己抗体（たとえば、ＭＴＳＨ、ＴｎＩ、ＴｎＴ、非心臓性ＴｎＴ（骨格筋疾患））である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は化学発光基質（たとえば、ルミノール、イソルミノール、イソルミノール誘導体、ＡＢＥＩ、ＡＢＥＩ誘導体、ルテニウム、アクリジニウムエステル）、または蛍光標識（たとえば、フルオレセインまたは他の蛍光色素分子、および染色剤）である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、アビジン、ポリＡ、ポリＤＴ、アプタマー、抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、抗体断片、組み換えタンパク質、酵素、タンパク質、生体分子、重合体、または分子インプリント重合体である。いくつかの実施形態では、捕捉部位は、ビオチン、フルオレセイン、ポリＤＴ、ポリＡ、抗原等である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、捕捉部位はビオチンに結合する（たとえば、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、キャプトアビジン、抗ビオチン抗体、抗体断片、アプタマー、分子インプリントポリマー等）。
【０１２４】
少なくとも１つの実施形態では、本発明は結合表面に２種以上の異なる捕捉部位を提供する。
【０１２５】
（捕捉部位の生成）
ある観点では、提供されるのは、遊離自己抗体または自己抗体複合体に対する複合体特異的、または構造特異的な抗体を産生または生成することを含む、捕捉部位を製造する方法である。遊離自己抗体は、まだ抗原標的と複合体化していない自己抗体である。複合自己抗体は、抗原標的と複合体を形成している自己抗体である。
【０１２６】
ある観点では、提供されるのは、ＭＴＳＨ等の自己抗体複合体に対する複合体特異的、または構造特異的な抗体を産生または生成することを含む、捕捉部位を製造する方法である。いくつかの実施形態では、自己抗体はトリヨードチロニン（Ｔ３）またはチロキシン（Ｔ４）である。いくつかの実施形態では、自己抗体複合体はＭＴＳＨである。たとえば、複合体特異的または構造特異的な抗体は、ＭＴＳＨ等の自己抗体複合体に産生され、ヒト血清から精製することができ、捕捉部位として使用することができる。このようにして、抗体は、ｈＩｇＧまたはｈＩｇＭとＴＳＨの複合体に対してのみ特異性を有するであろう。ＭＴＳＨは、技術および公表された方法に基づいて、またはタンパク質生化学および精製の分野の当業者によって精製することができる。いくつかの実施形態では、自己抗体アッセイの干渉の可能性が最も高い自己免疫疾患患者は、自己抗体を産生または生成するために使用される。たとえば、その全体が引用される参考文献である国際公開第２０１４１１４７８０号、国際公開第２０１６１１３７１９号、および国際公開第２０１６１１３７２０号のＢＮＰのためのＨｙＴｅｓｔ  ＳＥＳアッセイを参照。
【０１２７】
（甲状腺特異的な抗体）
たとえば、ある実施形態では、自己抗体は、抗甲状腺自己抗体（抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体、サイロトロピン受容体抗体、サイログロブリン抗体）である。抗甲状腺自己抗体は、甲状腺の１以上の構成要素を標的とする自己抗体標的である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、自己抗体は遊離自己抗体（たとえばサイロトロピン（ＴＳＨ））である。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、自己抗体は複合自己抗体（たとえばＭＴＳＨ）である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される捕捉部位は、複合自己抗体に対する特異性、またはＭＴＳＨ等の抗原標的に既に結合しているｈＩｇＧおよび／またはｈＩｇＭに対する構造特異性を備えて生成される抗体である。
【０１３０】
以下に示すのは、アフィニティアッセイが設計される用途に応じて、分析物の結合剤（捕捉部位）と分析物からなる結合対の一方のメンバーとして、または他方のメンバーとして機能し得る物質の非限定的なリストである。このような物質は、たとえば捕捉部位（分析物の結合剤）として使用することができ、または本発明で使用することができる捕捉部位を生成するために使用することができる（たとえば、特異的な抗体を生成するためのハプテン／抗原としての使用による）。イムノアッセイを含むアフィニティアッセイは、サンプル中の分析物であるそのような物質の存在および／または濃度を検出するために、本発明に従って設計することができる。特定の実施形態では、分析物に結合する本発明の捕捉部位は、サンプル中の分析物としてのこれらの物質を検出するために使用することができる。あるいは、以下にリストアップする物質は、本発明に従って固相支持体表面に関連づけられ、それらと相互作用する捕捉分子（たとえば、リストアップした物質に特異的な抗体もしくはその断片、結合タンパク質、または酵素等）を捕捉するために使用することができる。
【０１３１】
分析物の結合剤（捕捉部位）と分析物からなる結合対の一方のメンバーとして、または他方のメンバーとして機能し得る物質の非限定的なリストには、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、ＣＡ１９−９、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−ｔ、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ｓＩＬ−２Ｒ、ｓＩＬ−４Ｒ、ｓＩＬ−６Ｒ、ＳＩＶコア抗原、ＩＬ−１ＲＡ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ；ＰＳＡ、ｐＰＳＡ、ＢＰＳＡ、ｉｎＰＳＡ、非α１抗キモトリプシン複合型ＰＳＡ、α１抗キモトリプシン複合型ＰＳＡ等のＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ｈＫ２、ｈＫ４、およびｈＫ１５、ｅｋ−ｒｈＫ２、Ａｌａ−ｒｈＫ２、ＴＷＴ−ｒｈＫ２、Ｘａ−ｒｈＫ２、ＨＷＴ−ｒｈＫ２、ならびに他のカリクレイン等の前立腺カリクレインのイソ型；ＨＩＶ−１ｐ２４；フェリチン、Ｌフェリチン、トロポニンＩ、ＢＮＰ、レプチン、ジゴキシン、ミオグロビン、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチドまたは脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｎ末端プロＢＮＰ、ＣＮＰ、Ｎ末端プロＣＮＰ（１−５０）、Ｎ末端ＣＮＰ−５３（５１−８１）、ＣＮＰ−２２（８２−１０３）、ＣＮＰ−５３（５１−１０３）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）；ヒト成長ホルモン、骨型アルカリホスファターゼ、ヒト卵胞刺激ホルモン、ヒト黄体ホルモン、プロラクチン；ヒト絨毛性ゴナドトロフィン（たとえば、ＣＧα、ＣＧβ）；可溶性ＳＴ２、サイログロブリン；抗サイログロブリン；ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）防御抗原、炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）致死因子、炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）胞子抗原、野兎病菌（Ｆ．ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）ＬＰＳ、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）エンテロトキシンＢ、ペスト菌（Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ）莢膜Ｆ１抗原、インスリン、アルファフェトプロテイン（たとえば、ＡＦＰ３００）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１５．３抗原、ＣＡ１９．９抗原、ＣＡ１２５抗原、ＨＡＶ  Ａｂ、ＨＡＶ  Ｉｇｍ、ＨＢｃ  Ａｂ、ＨＢｃ  Ｉｇｍ、ＨＩＶ１／２、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｂ、ＨＣＶ  Ａｂ、抗ｐ５３、ヒスタミン；ネオプテリン；ｓ−ＶＣＡＭ−１、セロトニン、ｓＦａｓ、ｓＦａｓリガンド、ｓＧＭ−ＣＳＦＲ、ｓ１ＣＡＭ−１、チミジンキナーゼ、ＩｇＥ、ＥＰＯ、内因子Ａｂ、ハプトグロブリン、抗カルジオリピン、抗ｄｓＤＮＡ、抗Ｒｏ、Ｒｏ、抗Ｌａ、抗ＳＭ、ＳＭ、抗ｎＲＮＰ、抗ヒストン、抗Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−７０、抗核抗体、抗セントロメア抗体、ＳＳ−Ａ、ＳＳ−Ｂ、Ｓｍ、Ｕ１−ＲＮＰ、Ｊｏ−１、ＣＫ、ＣＫ−ＭＢ、ＣＲＰ、虚血変性アルブミン、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ｏｘＬＤＬ、ＶＬＤＬ、トロポニンＴ、トロポニンＩ、トロポニンＣ、微量アルブミン、アミラーゼ、ＡＬＰ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＧＴ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、プレアルブミン、抗ストレプトリジン、クラミジア、ＣＭＶ  ＩｇＧ、トキソＩｇＧ、トキソＩｇＭ、アポリポタンパク質Ａ、アポリポタンパク質Ｂ、Ｃ３、Ｃ４、プロパージン因子Ｂ、アルブミン、α１−酸性糖タンパク質、α１−アンチトリプシン、α１−マイクログロブリン、α２−マイク��グロブリン、抗ストレプトリジン−Ｏ、アンチトロンビンＩＩＩ、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、β２−マイクログロブリン、セルロプラスミン、補体成分Ｃ３、補体成分Ｃ４、Ｃ反応性タンパク質、ＤＮａｓｅＢ、フェリチン、遊離カッパＬ鎖、遊離ラムダＬ鎖、ハプトグロビン、免疫グロブリンＡ、免疫グロブリンＡ（ＣＳＦ）、免疫グロブリンＥ、免疫グロブリンＧ、免疫グロブリンＧ（ＣＳＦ）、免疫グロブリンＧ（尿）、免疫グロブリンＧサブクラス、免疫グロブリンＭ、免疫グロブリンＭ（ＣＳＦ）、カッパＬ鎖、ラムダＬ鎖、リポタンパク質（ａ）、微量アルブミン、プレアルブミン、プロパージン因子Ｂ、リウマチ因子、フェリチン、トランスフェリン、トランスフェリン（尿）、風疹ＩｇＧ、サイログロブリン抗体、トキソプラズマＩｇＭ、トキソプラズマＩｇＧ、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）−３、ヘプシン、ｐｉｍ１キナーゼ、Ｅカドヘリン、ＥＺＨ２、ａ−メチルアシルＣｏＡラセマーゼ、ＴＧＦベータ、ＩＬ６ＳＲ、ＧＡＤ、ＩＡ−２、ＣＤ−６４、好中球ＣＤ−６４、ＣＤ−２０、ＣＤ−３３、ＣＤ−５２、シトクロムＰ４５０のイソ型、ｓ−ＶＣＡＭ−１、ｓＦａｓ、ｓＩＣＡＭ、Ｂ型肝炎表面抗原、トロンボプラスチン、ＨＩＶｐ２４、ＨＩＶｇｐ４１／１２０、ＨＣＶＣ２２、ＨＣＶＣ３３、ヘモグロビンＡ１ｃ、ＧＡＤ６５、ＩＡ２、ビタミンＤ、２５−ＯＨビタミンＤ、１、２５（ＯＨ）２ビタミンＤ、２４、２５（ＯＨ）２ビタミンＤ、２５、２６（ＯＨ）２ビタミンＤ、ビタミンＤの３エピマー、ＦＧＦ２３、スクレロスチン、プロカルシトニン、カルシトニン、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）トキシンＡおよびＢ、ヘリコバクター・ピロリ（ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）、ＨＳＶ１、ＨＳＶ２が含まれる。
【０１３２】
アフィニティアッセイが設計される用途に応じて、分析物の結合剤（捕捉部位）と分析物からなる結合対の一方のメンバーとして、または他方のメンバーとして機能することができ、本発明で使用し得る適切な物質には、たとえば抗体またはその断片のような、生物学的基準のためのＷＨＯ国際研究所によって保持され、特性評価され、および／または配布されているＷＨＯ国際生物学的参照物質（２００５年６月３０日に更新され、当技術分野でよく知られている物質をリストアップしたｈｔｔｐ：／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｂｌｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｒｅ＿ｍａｔｅｒｉａｌｓで入手可能であり、これは参照によって本明細書に援用される）のいずれかに特異的な部位が含まれる。
【０１３３】
物質に続く括弧内のＷＨＯコードによって特定される、そのような適切な国際標準の部分的なリストには：ヒト組み換えトロンボプラスチン（ｒＴＦ／９５）、ウサギトロンボプラスチン（ＲＢＴ／９０）、甲状腺刺激抗体（９０／６７２）、ヒト組み換え組織プラスミノーゲンアクチベーター（９８／７１４）、高分子ウロキナーゼ（８７／５９４）、前立腺特異抗体（９６／６６８）、前立腺特異抗体９０：１０（９６／７００）；ヒト血漿タンパク質Ｃ（８６／６２２）、ヒト血漿タンパク質Ｓ（９３／５９０）、リウマチ関節炎血清（Ｗ１０６６）、血清アミロイドＡタンパク質（９２／６８０）、ストレプトキナーゼ（００／４６４）、ヒトトロンビン（０１／５８０）、ウシ組み合わせトロンボプラスチン（ＯＢＴ／７９）、抗Ｄ陽性対照静注用免疫グロブリン（０２／２２８）、島細胞抗体（９７／５５０）、リポタンパク質ａ（ＩＦＣＣ  ＳＲＭ２Ｂ）、ヒトパルボウイルスＢ１９ＤＮＡ（９９／８００）、ヒトプラスミン（９７／５３６）、ヒトプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤１（９２／６５４）、血小板第４因子（８３／５０５）、プレカリクレインアクチベーター（８２／５３０）、ヒト脳ＣＪＤコントロールおよびヒト脳散発性ＣＪＤ調製物１およびヒト脳散発性ＣＪＤ調製物２およびヒト脳変異体ＣＪＤ（なし；それぞれＷＨＯ  ＴＲＳ  ＥＣＢＳ報告書Ｎｏ．９２６、５３ｓｕｐ．ｒｄ報告書、脳ホモジネートに引用）、Ｃ１ｑ、Ｃ４、Ｃ５、因子Ｂ、および全機能補体ＣＨ５０を含むヒト血清補体成分（Ｗ１０３２）、ヒト血清免疫グロブリンＥ（７５／５０２）、ヒト血清免疫グロブリンＧ、Ａ、およびＭ（６７／８６）、ヒト血清タンパク質アルブミン、アルファ１−アンチトリプシン、アルファ２−マクログロブリン、セルロプラスミン、補体成分Ｃ３、トランスフェリン（Ｗ１０３１）、抗Ｄ陰性対照静注用免疫グロブリン（０２／２２６）、Ａ型肝炎ＲＮＡ（００／５６０）、Ｂ型肝炎表面抗原サブタイプａｄｗ２遺伝子型Ａ（０３／２６２および００／５８８）、Ｂ型肝炎ウイルスＤＮＡ（９７／７４６）、Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡ（９６／７９８）、ＨＩＶ−１  ｐ２４抗原（９０／６３６）、ＨＩＶ−１ＲＮＡ（９７／６５６）、ＨＩＶ−１ＲＮＡ遺伝子型（１０  Ｉ０１／４６６のセット）、ヒトフィブリノーゲン濃縮物（９８／６１４）、ヒト血漿フィブリノーゲン（９８／６１２）、上昇Ａ２ヘモグロビン（８９／６６６）、上昇Ｆヘモグロビン（８５／６１６）、ヘモグロビンシアン化物（９８／７０８）、低分子ヘパリン（８５／６００および９０／６８６）、未分画ヘパリン（９７／５７８）、血液凝固因子ＶＩＩＩおよびフォン・ヴィルブランド因子（０２／１５０）、ヒト血液凝固因子ＶＩＩＩ濃縮物（９９／６７８）、ヒト血液凝固因子ＸＩＩＩ血漿（０２／２０６）、ヒト血液凝固因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ（９９／８２６）、ヒト血液凝固因子ＩＩおよびＸ濃縮物（９８／５９０）、ヒト癌胎児性抗原（７３／６０１）、ヒトＣ反応性タンパク質（８５／５０６）、組み換えヒトフェリチン（９４／５７２）、アポリポタンパク質Ｂ（ＳＰ３−０７）、ベータ２マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、ヒトベータトロンボグロブリン（８３／５０１）、ヒト��液凝固因子ＩＸ濃縮物（９６／８５４）、ヒト血液凝固因子ＩＸａ濃縮物（９７／５６２）、ヒト血液凝固因子Ｖライデン、ヒトｇＤＮＡサンプルＦＶ野生型、ＦＶＬホモ接合体、ＦＶＬヘテロ接合体（０３／２５４、０３／２６０、０３／２４８）、ヒト血液凝固因子ＶＩＩ濃縮物（９７／５９２）、ヒト血液凝固因子ＶＩＩａ濃縮物（８９／６８８）、ヒト抗梅毒血清（ＨＳ）、ヒト抗破傷風免疫グロブリン（ＴＥ−３）、ヒト抗トロンビン濃縮物（９６／５２０）、ヒト血漿抗トロンビン（９３／７６８）、ヒト抗サイログロブリン血清（６５／９３）、抗トキソプラズマ血清（ＴＯＸＭ）、ヒト抗トキソプラズマ血清（ＩｇＧ）（０１／６００）、ヒト抗水痘帯状疱疹免疫グロブリン（Ｗ１０４４）、アポリポタンパク質Ａ−１（ＳＰ１−０１）、ヒト抗インターフェロンベータ血清（Ｇ０３８−５０１−５７２）、ヒト抗はしか血清（６６／２０２）、抗核リボ核タンパク質血清（Ｗ１０６３）、抗核内因子（均質）血清（６６／２３３）、抗パルボウイルスＢ１９（ＩｇＧ）血清（９１／６０２）、１、２、３型抗パルボウイルス血清（６６／２０２）、ヒト抗狂犬病免疫グロブリン（ＲＡＩ）、ヒト抗風疹免疫グロブリン（ＲＵＢＩ−１−９４）、抗平滑筋血清（Ｗ１０６２）、ヒト抗二本鎖ＤＮＡ血清（Ｗｏ／８０）、ヒト抗Ｅ完全血液型別血清（Ｗ１００５）、ヒト抗エキノコックス血清（ＥＣＨＳ）、ヒト抗Ａ型肝炎免疫グロブリン（９７／６４６）、ヒト抗Ｂ型肝炎免疫グロブリン（Ｗ１０４２）、ヒト抗Ｅ型肝炎血清（９５／５８４）、抗ヒト血小板抗原１ａ（９３／７１０）、抗ヒト血小板抗原５ｂ（９９／６６６）、ヒト抗インターフェロンアルファ血清（Ｂ０３７−５０１−５７２）、ヒトアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、アンクロッド（７４／５８１）、ヒト抗Ａ血液型別血清（Ｗ１００１）、ヒト抗Ｂ血液型別血清（Ｗ１００２）、ヒト抗Ｃ完全血液型別血清（Ｗ１００４）、抗Ｄ（抗Ｒｈ０）完全血液型別血清（９９／８３６）、ヒト抗Ｄ（抗Ｒｈ０）不完全血液型別血清（Ｗ１００６）、およびヒト抗Ｄ免疫グロブリン（０１／５７２）が含まれる。
【０１３４】
アフィニティアッセイが設計される用途に応じて分析物の結合剤（捕捉部位）と分析物からなる結合対の一方のメンバーとして、または他方のメンバーとして機能し得る適切な物質の他の例には、化合物を認識することができる抗体を生成するためにハプテンとして使用することができる化合物が含まれ、限定されないが、以下：限定されないが、プロゲステロン、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン、副腎皮質ステロイド、およびデヒドロエピアンドロステロンを含むホルモン、および、ＷＨＯにより国際参照標準としてリストアップされている非タンパク質／非ポリペプチド抗原の任意の塩、エステル、またはエーテルが含まれる。物質に続く括弧内のＷＨＯコードによって特定される、そのような適切な国際参照標準の部分的なリストには、ビタミンＢ１２（ＷＨＯ８１．５６３）、葉酸塩（ＷＨＯ９５／５２８）、ホモシステイン、トランスコバラミン、Ｔ４／Ｔ３、および参照により本明細書に援用されるＷＨＯの国際生物学的参照物質のカタログ（ＷＨＯのウェブ、たとえば２００５年６月３０日に更新されたｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｂｌｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｒｅｆ＿ｍａｔｅｒｉａｌｓ／のページで入手可能）に記載の他の物質が含まれる。本明細書に記載される方法および組成物は、前述のＷＨＯ参照標準または参照標準を含む混合物を含むことができる。
【０１３５】
アフィニティアッセイが設計される用途に応じて分析物の結合剤（捕捉部位）と分析物からなる結合対の一方のメンバーとして、または他方のメンバーとして機能し得る物質の他の例には、乱用薬物が含まれる。乱用薬物には、たとえば、以下の薬剤のリスト：ヘロイン、モルヒネ、ヒドロモルフォン、コデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、フェンタニル、デメロール、メタドン、ダーボン、スタドール、タルウィン、パレゴリック、ブプレネックス；たとえば、アンフェタミン、メタンフェタミン等の覚醒剤；メチルアンフェタミン、エチルアンフェタミン、メチルフェニデート、エフェドリン、プソイドエフェドリン、エフェドラ、麻黄、メチレンジオキシアンフェタミン（ＭＤＳ）、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミン；アミフェナゾール、ベミグリド、ベンズフェタミン、ブロマタン、クロルフェンテルミン、クロプロパミド、クロテタミド、ジエチルプロピオン、ジメチルアンフェタミン、ドキサプラム、エタミバン、フェンカムファミン、メクロフェノキサート、メチルフェニデート、ニケタミド、ペモリン、ペンテトラゾール、フェンジメトラジン、フェンメトラジン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミン、ピクロトキシン、ピプラドール、プロリンタン、ストリキニーネ、シネフリン、フェンシクリジン、およびエンジェルダスト、ＰＣＰ、ケタミン等の類似体；たとえばバルビツール酸塩、グルテチミド、メタカロン、およびメプロバメート、メトヘキシタール、チアミル、チオペンタール、アモバルビタール、ペントバルビタール、セコバルビタール、ブタルビタール、ブタバルビタール、タルブタール、およびアプロバルビタール、フェノバルビタール、メホバルビタールなどの抗うつ剤；たとえばエスタゾラム、フルラゼパム、テマゼパム、トリアゾラム、ミダゾラム、アルプラゾラム、クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸塩、ジアゼパム、ハラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、クロナゼパム、フルニトラゼパムなどのベンゾジアザペン；ガンマヒドロキシル酪酸およびガンマブチロラクトン等のＧＢＨ薬；グルテチミド、メタカロン、メプロバメート、カリソプロドール、ゾルピデム、ザレプロン；テトラヒドラカンナビノールおよび類似体等のカンナビノイド薬；コカイン、３−４メチレンジオキシメタンフェタミン（ＭＤＭＡ）；たとえばメスカリンおよびＬＳＤ等の幻覚剤、ならびにそれらの代謝物（たとえば、血中、尿中、および他の生体物質中に存在する代謝物）、ならびにそれらの任意の塩、エステル、またはエーテルが含まれる。
【０１３６】
（実施例）
（実施例１：高用量のビオチン摂取後のビオチン干渉の枯渇）
内因性（非スパイク）のビオチンサンプルを連続的に採集した。ベースラインの血清サンプルは、明らかに健康な５の成人ボランティア（男性４、女性１）からＢＤブランドのＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（商標）１０ｍＬ赤トップチューブを用いた結膜下静脈採血で採集した。各ボランティアは、その後、２０ｍｇ用量のビオチン（４×５ｍｇ、Ｆｉｎｅｓｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｂｉｏｔｉｎ  ５０００  ｍｃｇ  Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ、速溶性、商品番号９３８５０８、Ｗａｌｇｒｅｅｎｓにより販売）を摂取した。ビオチン摂取後１、３、６、８、２４時間で血清サンプルを採集した。血液をＲＴで１時間凝結させ、ＢｅｃｋｍａｎのＡｌｌｅｇｒａ６Ｒ卓上遠心機で、２０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。各時点について、各ボランティアからの血清サンプルをプールし、ＲＴで１５分間混合し、２ｍＬのクライオバイアル中の１．２ｍＬのアリコートに分注し、−８０℃で凍結した。
【０１３７】
ビオチン代謝物は、遊離ビオチンＥＬＩＳＡを使用して連続採集サンプル中のビオチン濃度を測定することにより決定した。ビオチン血清サンプルは、ＩｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋのＩＤＫ（登録商標）Ｂｉｏｔｉｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（品番Ｋ８１４１、ロット番号１８０９０６、４８．１〜１１００ｐｇ／ｍＬの範囲を測定）により試験した。キットの測定範囲を超えるサンプルは、キットのサンプル希釈バッファーで希釈した。ビオチン摂取後１、３、６、８時間で採集したサンプルは、５０，０００〜５００，０００ｐｇ／ｍＬの範囲であると仮定し、１：１０００に希釈した。ビオチン摂取の２４時間後に採集したサンプルは、２０，０００ｐｇ／ｍＬ付近またはそれ未満であると仮定し、１：２０に希釈した。サンプルはＥＬＩＳＡキットのプロトコールに従って試験され、ビオチン濃度は、２０ｍｇのビオチンを摂取後８時間（６０〜１０７ｎｇ／ｍＬ、ｎ＝５）および２４時間（２４〜３２ｎｇ／ｍＬ、ｎ＝４）でもまだ有意に上昇していた。
【０１３８】
【表１】
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【０１３９】
高濃度の内因性ビオチン（３７０または５５０ｎｇ／ｍＬ）は、ストレプトアビジンで被覆された超常磁性ナノ粒子（ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬）を使用して、２００μＬの血清を１．５ｍＬマイクロ遠心チューブに加え、２０μＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬を加え、１０分間サンプルを穏やかに混合／揺動し、１０分間Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓを使用してＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬を磁気的に分離し、磁性粒子を崩さないように慎重に血清を吸引し、遊離ビオチンＥＬＩＳＡを使用して血清サンプルを試験することにより、連続採集血清サンプルから枯渇させた。
【０１４０】
第１の研究では、同じ高濃度ビオチン（３７０ｎｇ／ｍＬ）の内因性血清サンプルの異なるアリコートにＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬を増量（ｍｇ）して加え、サンプル中の遊離ビオチンを１００％枯渇させるために必要な試薬の量を決定した。２０μＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬（直径２３０ｎｍ、ビーズ１ｍｇあたり３２μｇのストレプトアビジン）を、２０ｍｇのビオチン摂取後１時間で採集した血清の各２００μＬのアリコートに加え、室温で１０分間穏やかに転倒混和することにより混合し、１０分間Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ１．５Ｓ磁石を使用して磁気的に分離した。１７５μＬの血清上清を慎重に吸引し、Ｉｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ  ＩＤＫ（登録商標）Ｂｉｏｔｉｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（品番Ｋ８１４１、ロット番号１８０９０６）により測定し、キットの測定範囲を超えるサンプルはキットのサンプル希釈バッファーで希釈した。２３０ｎｍのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬は、単純な２０分間の工程、２００μＬのサンプル、およびわずか０．３９ｍｇ試薬を使用して、１００％の遊離ビオチンを首尾よく枯渇させた（図５）。
【０１４１】
第２の研究では、同じ高濃度ビオチン（５５０ｎｇ／ｍＬ）の血清サンプルの異なるアリコートに２つの異なるＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬を増量（ｍｇ）して加え、サンプル中の遊離ビオチンを１００％枯渇させるために必要な各試薬の量を決定した。２０μＬの２３０ｎｍＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬（ビーズ１ｍｇあたり３２μｇのストレプトアビジン）、または２０μＬの５５０ｎｍＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬（ビーズ１ｍｇあたり４μｇのストレプトアビジン）を、５０ｍｇのビオチン摂取後１時間で採集した血清サンプルの各２００μＬのアリコートに加え、室温で１０分間穏やかに転倒混和することにより混合し、１０分間Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ１．５Ｓ磁石を使用して磁気的に分離した。１７５μＬの血清上清を慎重に吸引し、Ｉｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ  ＩＤＫ（登録商標）Ｂｉｏｔｉｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（品番Ｋ８１４１、ロット番号１８０９０６）により測定し、キットの測定範囲を超えるサンプルはキットのサンプル希釈バッファーで希釈した。２３０ｎｍのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬は、単純な２０分間の工程、２００μＬのサンプル、およびわずか０．７５ｍｇ試薬を使用して、１００％の遊離ビオチンを首尾よく枯渇させ、一方、５５０ｎｍのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬は、１．８６ｍｇの試薬で８９％の遊離ビオチンを枯渇させただけであった。これらの結果は、ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬の結合能力および結合効率は、より小さいビーズ径で単位量あたりの表面積を増加させ、ビーズ１ｍｇあたりのストレプトアビジンの量およびビオチン結合能力を増加させること、および／またはＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎ試薬の濃度もしくは量（ｍｇ）を増加させることにより改善することを示す（図６）。
【０１４２】
（実施例２：血清サンプル中の高濃度の遊離ビオチンを結合させ、枯渇させるために最適化されたサンプル前処理試薬を使用したビオチン干渉枯渇）
６人のボランティア（２５〜４６歳の明らかに健康な成人が５人、６５歳の２型糖尿病が１人）は、ベースラインの空腹時血清サンプルを肛門前静脈採血によりＢＤブランドのＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（商標）１０ｍＬ赤トップチューブに採集した。各ボランティアはその後、２０ｍｇ、１００ｍｇ、または２００ｍｇの処方箋なし（ＯＴＣ）ビオチンを摂取した。２０ｍｇ用量では、血清サンプルはビオチン摂取後１、３、６、８、および２４時間で採集した。１００および２００ｍｇ用量では、血清サンプルはビオチン摂取後１、６、および２４時間で採集した。血液をＲＴで１時間凝固させ、ＢｅｃｋｍａｎのＡｌｌｅｇｒａ６Ｒ卓上遠心機で、２０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。各時点および各ビオチン用量について、各ボランティアからの血清サンプルをプールし、ＲＴで１５分間混合し、２ｍＬのクライオバイアル中の１．２ｍＬのアリコートに分注し、−８０℃で凍結した。すべてのサンプルは、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳでのビオチン測定のために、９８１９５ＷＡシアトル  パシフィックストリート  ＮＥ１９５９のワシントン大学臨床検査医学部に送られた。２０ｍｇ用量では、ビオチン濃度は１時間で最も高く（９６〜１７９ｎｇ／ｍＬ）、６時間では５人のすべてのボランティアの血清ビオチン濃度はまだ１５ｎｇ／ｍＬ超（１７〜３５）であり、８時間後では５人のうち４人のボランティアの血漿ビオチン濃度は１５ｎｇ／ｍＬ超（１６〜２８）であり、２４時間では既知の２型糖尿病であるボランティア１のビオチン濃度は１５ｎｇ／ｍＬ超（１８）であった（図７）。
【０１４３】
１００および２００ｍｇ用量では、ビオチン濃度は１時間で、１００ｍｇ用量では２９４〜４５９ｎｇ／ｍＬ、２００ｍｇ用量では６１０〜８６１ｎｇ／ｍＬと最も高かった。６時間では、２０ｍｇまたは１００ｍｇのビオチンを摂取したボランティアの血清ビオチン濃度は、２０ｍｇ用量では１７〜３５ｎｇ／ｍＬで１５ｎｇ／ｍＬ超であり、２００ｍｇ用量では９５〜３４７ｎｇ／ｍＬであった。２４時間では、１００ｍｇのビオチンを摂取した２人のボランティアのビオチン濃度は１５ｎｇ／ｍＬ超であり、既知の糖尿病のボランティア１は８４ｎｇ／ｍＬ、ボランティア６は５４ｎｇ／ｍＬであった（図８）。
【０１４４】
４のサンプルを高内因性ビオチン濃度（２９４〜８６１ｎｇ／ｍＬ）として選択し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで測定した（図９）。ベースラインの血清サンプルは、ＰＴＨ  Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡ（ＤＲＧ  ＰＴＨ  Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡ、品番ＥＩＡ−３６４５）により試験し、ＰＴＨ結果は２８．１ｐｇ／ｍＬ〜５０．３ｐｇ／ｍＬの範囲の値であった。ビオチン摂取後１時間のすべてのサンプルのＰＴＨは１．５７ｐｇ／ｍＬ未満、または検出下限を下回っていた（ＬＬＤ）（図１０）。
【０１４５】
４つのサンプルはすべて、ストレプトアビジンで被覆された最適化された５５０ｎｍの超常磁性ナノ粒子（ＶｅｒａＰｒｅｐ  Ｂｉｏｔｉｎ）で前処理をした。以下のプロトコールを用いて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳでビオチン濃度が５００ｎｇ／ｍＬ未満であったサンプル１および４は０．５ｍＬの試薬で前処理をし、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳでビオチン濃度が５００ｎｇ／ｍＬ超であったサンプル２および３は１．５ｍＬの試薬で前処理をした。
１．  保管場所からＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎバイアルを取り出し、中速で最低１０秒間ボルテックスしてよく混合し、試薬を再懸濁させる。
２．  試薬バイアルをフォームバイアルホルダーに挿入する。
３．  空のマイクロチューブ  ２ｍｌ（ＳＡＲＳＥＤＴ、注文番号７２．６９４）をＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓ磁石に、チューブの首部分が磁石フレームに接触するまで挿入する。
４．  よく混合した試薬の２００μＬ（０．５ｍｇ）または６００μＬ（１．５ｍｇ）を空のチューブに分注し、磁石上の試薬を３０秒以上分離して試薬ペレットを形成する。
５．  すべての保存バッファー上清（約２００μＬまたは約６００μＬ）を、試薬ペレットを崩さずに慎重に吸引して廃棄する。
６．  ４００μLのよく混合した血清または血漿サンプルを、試薬ペレットが入ったチューブに分注する。
７．  チューブのキャップのネジを締め、磁石からチューブを外し、中速で最低１０秒間ボルテックスしてよく混合し、試薬をサンプルに再懸濁させる。
８．  チューブを実験用ミキサーに中速で置き、室温で１０分間インキュベートする。
９．  ネジキャップを緩め、チューブの首部分が磁石フレームに接触するまで、チューブを磁石に挿入する。
１０．  ４分間超かけて試薬を磁気的に分離して、試薬ペレットを形成する。
１１．  試薬ペレットを崩さずにサンプル上清を慎重に吸引し、検査用のトランスファーチューブにサンプルを分注する。注：このステップを慎重に行えば、サンプル上清（約４００μＬ）をすべて吸引することができる。試薬を誤って吸引してしまった場合は、単純にサンプル／試薬混合物をチューブに戻し、ステップ１０に戻る。
１２．  サンプルは試験の準備ができている。
【０１４６】
ビオチン干渉が除去されたことを確かめるために、ＶｅｒａＰｒｅｐ  Ｂｉｏｔｉｎで前処理したサンプルは、ＩｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋのＩＤＫ（登録商標）Ｂｉｏｔｉｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（品番Ｋ８１４１、４８．１〜１，１００ｎｇ／Ｌの範囲を測定）を使用して試験した。ビオチン濃度は、０．２〜１．０ｎｇ／ｍＬの範囲、または正常な血漿濃度以内（２００〜１，２００ｎｇ／Ｌ）であった（図９）。サンプル１〜４をＶｅｒａＰｒｅｐ  Ｂｉｏｔｉｎで前処理した後すぐに、ＰＴＨ  Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡを使用してＰＴＨ値を測定し、ＰＴＨ値は２６．７〜５２．０ｐｇ／ｍＬの範囲であった（図１０）。
【０１４７】
ビオチン摂取後１時間のサンプルでは、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ  でビオチン干渉が高レベル（２９４〜８６１ｎｇ／ｍＬ）で、ＰＴＨ  Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡ  で検出不可能な  ＰＴＨ  値（１．５７ｐｇ／ｍＬ未満）であり、一方、ＶｅｒａＰｒｅｐ  Ｂｉｏｔｉｎで前処理したビオチン摂取後１時間のサンプルは、ビオチンＥＬＩＳＡキットで生理学的に正常なビオチン値（１．１ｎｇ／ｍＬ未満）を示し、ＰＴＨ  Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡで正常なＰＴＨ値（２６．７〜５２．０ｐｇ／ｍＬ）を示した（図９および１０）。ＶｅｒａＰｒｅｐ  Ｂｉｏｔｉｎで前処理したサンプルのＰＴＨ値をベースラインＰＴＨ値と比較すると、結果は９５％〜１１３％回収（平均１０５％回収）した（図１０）。ＶｅｒａＰｒｅｐ  Ｂｉｏｔｉｎでのサンプル前処理後の試験結果における有意な差、またはＰＴＨ  Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡサンドイッチイムノアッセイにおけるＰＴＨ値の有意な増加から、試験された４つのサンプルすべてにおいてビオチン干渉が臨床的に有意であったことが確認された。
【０１４８】
（実施例３：少量のバイオマーカー濃縮）
４０ｍＬのＰＢＳ中の非常に低濃度のバイオマーカー（０．０１９５μＩＵ  ＴＳＨ／ｍＬまたは０．４９７ｐｇ  ＰＴＨ／ｍＬ）は、ストレプトアビジンで被覆された５５０ｎｍの超常磁性ナノ粒子を使用して濃縮し、その後、ビオチン化抗ＴＳＨ抗体（ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨ試薬）またはビオチン化抗ＰＴＨモノクローナル抗体（ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨ試薬）で被覆した。
【０１４９】
第１の研究では、５５０ｎｍのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎをビオチン化抗ＴＳＨ捕捉抗体で被覆することによりＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨ試薬を調製した。０．０８ｍＬのＴＳＨ抗原（１０μＩＵ／ｍＬ、ＥＬＩＳＡ校正用）を、４１ｍＬ  ＰＢＳバッファーで、ＤＲＧ  ＴＳＨ  Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ＥＬＩＳＡ（品番ＥＩＡ−１７９０、ロット番号ＲＮ５８８４９）の機能感度未満（０．０５４μＩＵ／ｍＬ未満）である０．０１９５μＩＵ／ｍＬに希釈し、１ｍＬをベースラインサンプル（濃縮前）として保存した。４０ｍＬのサンプルをＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨのプロトコールを用いて処理し、その後のＴＳＨ  ＥＬＩＳＡ試験用に１．０  ｍＬの濃縮サンプルを作製した。
【０１５０】
１０μＩＵ／ｍＬのＴＳＨ標準液８０μＬを４１．０ｍＬのＰＢＳで０．０１９５μＩＵ／ｍＬに希釈し、ベースラインサンプルとして１．０ｍＬを保存する（濃縮前）。
１．  １０μＩＵ／ｍＬ  ＴＳＨ標準液８０μＬを１．０ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅ  ａｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌで０．８０μＩＵ／ｍＬに希釈する。
２．  ＰＢＳ中の０．０１９６μＩＵ／ｍＬ  ＴＳＨ  ４０μＬを５０ｍＬファルコンチューブに加える。
３．  ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨ混合物を加える。
４．  室温で６０分間混合しながらインキュベートする。
５．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）５０ＳＸを使用して、６０分間ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨを磁気的に分離する。
６．  ４０ｍＬのＰＢＳをデカンテーションして廃棄する。
７．  ４．０ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファーを加え、混合する。
８．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）５０ＳＸを使用して、３０分間、４ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファー中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨを磁気的に分離する。
９．  ４ｍＬのＰＢＳをデカンテーションして廃棄する。
１０．  １ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファーを加え、混合する。
１１．  １ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨを、１．７５ｍＬのコニカル底のスナップキャップバイアルに移す。
１２．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓを使用して、１０分間、１ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファー中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨを磁気的に分離する。
１３．  １ｍＬのＰＢＳを吸引して廃棄する。
１４．  １ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅを加え、混合する。
１５．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓを使用して、１０分間、１ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅ中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨを磁気的に分離する。
１６．  １ｍＬの上清（濃縮サンプル）を吸引して保存し、対照、ベースラインサンプル、および濃縮サンプルを試験した。
【０１５１】
０．０８ｍＬのＴＳＨ抗原（１０μＩＵ／ｍＬ、ＥＬＩＳＡ校正用）も、対照としてＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅ  ｂｕｆｆｅｒ１ｍＬで０．８００μＩＵ／ｍＬに希釈した。ベースラインサンプル、濃縮サンプル、対照をＤＲＧ  ＴＳＨ  Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ＥＬＩＳＡで測定し、濃縮サンプルのＴＳＨ回収率を［濃縮サンプルの結果］／［対照の結果］×１００％として算出した。予想通り、希釈したＴＳＨベースラインサンプルはＵｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ＥＬＩＳＡ  では検出されず、０．００μＩＵ／ｍＬと表示された。わずか０．８０ｍｇの試薬を使用して、ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＴＳＨは、希釈したＴＳＨを、検出不可能な状態から０．７３μＩＵ／ｍＬまで濃縮することに成功した（表２）。対照と比較して９８．６％の回収率であったが、ＴＳＨ  ＥＬＩＳＡにおけるＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅバッファーのマトリックス効果によりアッセイシグナルが抑制された可能性がある（表３）。
【０１５２】
【表２】
2021533383.tif 000004
【０１５３】
【表３】
2021533383.tif 000005
【０１５４】
第２の研究では、５５０ｎｍ  ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｂｉｏｔｉｎをビオチン化抗ＰＴＨ捕捉部位で被覆することにより、ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨ試薬を調製した。０．０２１ｍＬのＰＴＨ抗原（９７１ｐｇ／ｍＬ、ＥＬＩＳＡ校正用）も、ＤＲＧ  ＰＴＨ（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ）Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡ（品番ＥＩＡ−３６４５、ロット番号２８９６）の機能感度未満（１．５６ｐｇ／ｍＬ未満）の４１ｍＬ  ＰＢＳバッファーで０．４９７ｐｇ／ｍＬに希釈し、１ｍＬをベースラインサンプル（濃縮前）として保存した。４０ｍＬのサンプルをＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨのプロトコールを用いて処理し、その後のＰＴＨ  ＥＬＩＳＡ検査用に１．０ｍＬの濃縮サンプルを作製した。
１．  ９７１ｐｇ／ｍＬのＰＴＨ標準液２１μＬを４１．０ｍＬのＰＢＳで０．４９７ｐｇ／ｍＬに希釈し、ベースラインサンプルとして１．０ｍＬを保存する（濃縮前）。
２．  ９７１ｐｇ／ｍＬのＰＴＨ標準液２１μＬを、対照として１．０ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅで２０．４ｐｇ／ｍＬに希釈する。
３．  ＰＢＳ中の０．４９７ｐｇ／ｍＬ  ＰＴＨ  ４０ｍＬを５０ｍＬのファルコンチューブに加える。
４．  ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨを加え、混合する。
５．  室温で３０分間混合しながらインキュベートする。
６．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）５０ＳＸを用いて、１５分間ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨを磁気的に分離する。
７．  ４０ｍＬのＰＢＳをデカンテーションして廃棄する。
８．  ４．０ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファーを加え、混合する。
９．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）５０ＳＸを使用して、１０分間、４ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファー中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨを磁気的に分離する。
１０．  ４ｍＬのＰＢＳをデカンテーションして廃棄する。
１１．  １．０ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファーを加え、混合する。
１２．  １ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨを、１．７５ｍＬのコニカル底のスナップキャップバイアルに移す。
１３．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓを使用して、１０分間、１ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファー中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨを磁気的に分離する。
１４．  １ｍＬのＰＢＳを吸引して廃棄する。
１５．  １ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅを加え、混合する。
１６．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓを使用して、１０分間、１ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅ中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨを磁気的に分離する。
１７．  １ｍＬの上清（濃縮サンプル）を吸引して保存し、対照、ベースラインサンプル、および濃縮サンプルを試験した。
【０１５５】
０．０２１ｍＬのＰＴＨ抗原（９７１ｐｇ／ｍＬ、ＥＬＩＳＡ校正用）も、対照として、ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅバッファー１ｍＬで２０．４ｐｇ／ｍＬに希釈した。ベースラインサンプル、濃縮サンプルおよび対照をＤＲＧ  ＰＴＨ（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ）Ｉｎｔａｃｔ  ＥＬＩＳＡで検査し、濃縮サンプルのＰＴＨ回収率を［濃縮サンプル結果］／［コントロール結果］×１００％として計算した。希釈したＰＴＨベースラインサンプルは、ＥＬＩＳＡアッセイにおけるＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅバッファーのマトリックス効果により１３．５ｐｇ／ｍＬとなった。このマトリックス効果によりアッセイシグナルが向上した。わずか０．８０ｍｇの試薬を使用したＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ  ＰＴＨは、希釈したＰＴＨを４２．３ｐｇ／ｍＬまで濃縮することに成功した（表４）。対照と比較して１０９％の回収であった（表５）。
【０１５６】
【表４】
2021533383.tif 000006
【０１５７】
【表５】
2021533383.tif 000007
【０１５８】
（実施例４：その後の質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳまたはＭＡＬＤＩ−ＭＳ）分析のための尿からの低濃度バイオマーカー濃縮）
以下では、バイオマーカーに特異的な捕捉部位で被覆された超常磁性ナノ粒子を使用して、大容量の尿サンプルから低濃度のバイオマーカー、およびスパイクされた内部標準（ＩＳＴＤ）を濃縮するための質量分析サンプルの前処理プロトコールについて説明する。全く同一のプロトコールはまた、同じサンプルからの２つ以上のバイオマーカーおよび対応するスパイクされたＩＳＴＤを多重化して濃縮するために、各集団が異なる捕捉部位で被覆されている、混合された、またはプールされた異なる複数の超常磁性ナノ粒子集団を使用することができる。２以上のバイオマーカーの濃縮および特性評価により、単一のバイオマーカーの特性評価では不可能な疾患の臨床診断および／または予後のためのアルゴリズムを容易に使用できる。たとえば、閉塞性睡眠時無呼吸（ＯＳＡ）を尿から診断するために、ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ試薬は、カリクレイン−１、ウロモジュリン、ウロコルチン−３、およびオロソムコイド−１を捕捉して濃縮するための４種類の抗体、またはカリクレイン−１、ウロモジュリン、ウロコルチン−３、およびオルソムコイド−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、および高感度Ｃ反応性タンパク質を捕捉して濃縮するための７種類の抗体から構成され得る。
１．  患者の尿を採集する（採尿カップ等の標準的な採尿プロトコールを使用）。
２．  採尿サンプルを混合する。
３．  ４０ｍＬの尿を５０ｍＬのファルコンチューブに加える。
４．  濃縮するための、バイオマーカー用の重水素化した内部標準を加え、混合する。
５．  ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎを加え、混合する。
６．  ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅを加え、混合する。
７．  インキュベート：ＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅによりバイオマーカーおよび重水素化された内部標準が捕捉される。
８．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）５０ＳＸを使用して、４０ｍＬの尿中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅを磁気的に分離する。
９．  尿を吸引して廃棄する。
１０．  ４ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファーを加え、混合する。
１１．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）５０ＳＸを使用して、４ｍＬのＰＢＳ洗浄バッファー中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅを磁気的に分離する。
１２．  尿を吸引して廃棄する。
１３．  ステップ１２をさらに２回（２×）繰り返す。
１４．  １ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅを加え、混合する（質量分析対応バッファー）。
１５．  Ｄｅｘｔｅｒ  ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）１．５Ｓを使用して、１ｍＬのＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｌｅａｖｅ中のＶＥＲＡＰＲＥＰ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅを磁気的に分離する。
１６．  １ｍＬの上清サンプルを吸引し、ＬＣ−ＭＳで試験した。
１７．  １）４０ｍＬの尿サンプルサイズ、２）バイオマーカーのＬＣ−ＭＳ定量、３）重水素化された内部標準物質の回収率に基づいて報告されたバイオマーカーの値の調整に基づき、最終バイオマーカー濃度を決定した。
【０１５９】
捕捉され濃縮されたバイオマーカー（１または複数）の選択的放出または切断は、ｐＨの変化（グリシンｐＨ２．５の溶出後に中和するなどの酸性ｐＨ、またはｐＨ１０．０以上のアルカリ性ｐＨ）、ＴＣＥＰもしくはＤＴＴのような還元剤で切断されるジスルフィド結合のような切断可能なリンカーの使用、またはコンカナバリンＡ上の結合部位を競合させるモノマーアビジンとのＤ−ビオチンのモル過剰またはコンカナバリンＡとの糖のモル過剰のような競合溶出の使用によって達成することができる。
【０１６０】
（略語）
ＡＢＥＩ  Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール
ＡＬＰ  アルカリホスファターゼ
ＢＳＡ  ウシ血清アルブミン
Ｆａｂ  断片抗体結合
Ｆｃ  断片、結晶化可能
ＨＡＡＡ  ヒト抗動物抗体
ＨＡＭＡ  ヒト抗マウス抗体
ＨＡＳＡ  ヒト抗ヒツジ抗体
ＩＦＵ  使用のための説明
ＩｇＧ  抗体または免疫グロブリン
ＩｇＭ  免疫グロブリンＭ
ＨＲＰ  西洋ワサビペルオキシダーゼ
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ  液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法
ＬＤＴ  研究室で開発された試験
Ｍａｂ  モノクローナル抗体
ＭＡＳＩ  製造アッセイ特異的な干渉
ＭＦＧ  ＩＶＤメーカー
ＰＭＰ  超常磁性微粒子
ＰＢＣＴ  一次採血チューブ
ＲＦ  リウマチ因子
ＲＬＵ  相対光単位またはアッセイ応答シグナル
ＲＵＯ  研究利用に限る
ＳＡｖ  ストレプトアビジン
ＳＴＴ  二次トランスファーチューブ
ＴＡＴ  ターンアラウンドタイム
ＷＦ  ワークフロー
【０１６１】
（定義）
本明細書で使用される「サンプル」または「生体サンプル」は、診断、予後、スクリーニング、リスク評価、重症度分類、および治療薬モニタリング等のモニタリングのために試験される、ヒトまたは動物の血清、血漿（すなわち、ＥＤＴＡ、ヘパリンリチウム、クエン酸ナトリウム）、血液、全血、処理された血液、尿、唾液、便（液体および固体）、精液または精漿、羊水、脳脊髄液、細胞、組織、生検材料、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または任意の液体または溶解した固体、もしくは処理された固体材料をいう。いくつかの実施形態では、サンプルは大容量サンプルである。いくつかの実施形態では、サンプルには複数のサンプル（たとえば、同一または異なる対象からの２以上のサンプル）が含まれる。いくつかの実施形態では、サンプルには、サンプル中に低濃度で存在するバイオマーカーが含まれる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、サンプルは、一次採血チューブ（ＰＢＣＴ）、二次トランスファーチューブ（ＳＳＴ）、２４時間（２４ｈｒ）採尿器、ｖｅｒｉｃｏｒｅチューブ、ナノテイナー（ｎａｎｏｔａｉｎｅｒ）、唾液採集チューブ、血液スポット濾紙、または便および精液用等の任意の採集チューブもしくは装置、ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウム、もしくはヘパリンアンモニウムを含む、淡緑色もしくは緑色トップの血漿分離チューブ（ＰＳＴ）、クエン酸ナトリウム（すなわち、３．２％または３．８％）もしくはクエン酸塩、テオフィリン、アデノシン、ジピリダモール（ＣＴＡＤ）を含む、淡青色トップのチューブ、ガラスチューブ（添加剤なし）もしくはプラスチックチューブ（血栓活性化剤を含む）に血清を採集するための血清学または免疫血液学用の赤トップチューブ、ガラスチューブ（添加剤なし）もしくはプラスチックチューブ（血栓活性化剤を含む）に血清を採集するための化学用の赤トップチューブ、分子診断およびウイルス負荷の検出において血漿を試験するための、ＥＤＴＡ  Ｋ２、ＥＤＴＡ  Ｋ３、液体ＥＤＴＡ溶液（すなわち、８％）を含む紫ラベンダートップのチューブもしくはＥＤＴＡ  Ｋ２／ゲルチューブ、血液銀行ＥＤＴＡ用のピンクトップチューブ、シュウ酸カリウムおよびフッ化ナトリウム、フッ化ナトリウム／ＥＤＴＡ、もしくはフッ化ナトリウムを含む灰色トップチューブ（抗凝血なし、血清サンプル用）、ＡＣＤ溶液ＡまたはＡＣＤ溶液Ｂを含む黄色トップチューブ、ロイヤルブルートップチューブ（血清、添加剤なしまたはヘパリンナトリウム）、白トップチューブ、または任意の用途もしくは診断試験のタイプのための、添加剤なしもしくは任意の添加剤、またはそれらの組み合わせを含む、血液採集用の任意の色もしくは任意の型のチューブに採集される。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、サンプルは、尿、２４時間尿、唾液、および便、または目的のバイオマーカーが希釈されている、もしくは測定が困難である等、困難なタイプのサンプルである。たとえば、生体サンプルは、患者の集団（たとえば、新生児、小児、老人、妊婦、腫瘍、自己免疫疾患）のために困難な場合がある。たとえば、いくつかのバイオマーカーは、たとえば循環中もしくは尿中で希釈されすぎていて、または低濃度すぎて、現行のＰＯＣＴおよび主要な研究室分析装置により確実に検出することができず、正確かつ精密に測定することができない。いくつかの実施形態では、困難なサンプルは脳脊髄液（ＣＳＦ）である。
【０１６４】
本明細書で使用される「採集装置」は、一次採血チューブ（ＰＢＣＴ），２４時間採尿器、採尿器、唾液採集チューブ、採便器、精液採集器、血液採集バッグ、またはサンプルを添加する前の任意のサンプル採集チューブもしくは装置であり得る。
【０１６５】
ＰＣＢＴおよび二次トランスファーチューブ（ＳＳＴ）は、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（ＢＤ）、Ｇｒｅｉｎｅｒ、ＶＷＲ、およびＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ等の会社の市販の標準チューブもしくはカスタムの採集チューブ（ゲル分離剤ありまたはなし）、ガラスチューブ、プラスチックチューブ、ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウム、もしくはヘパリンアンモニウムを含む、淡緑色もしくは緑色トップの血漿分離チューブ（ＰＳＴ）、クエン酸ナトリウム（すなわち、３．２％または３．８％）もしくはクエン酸塩、テオフィリン、アデノシン、ジピリダモール（ＣＴＡＤ）を含む、淡青色トップのチューブ、ガラスチューブ（添加剤なし）もしくはプラスチックチューブ（血栓活性化剤を含む）に血清を採集するための血清学または免疫血液学用の赤トップチューブ、ガラスチューブ（添加剤なし）もしくはプラスチックチューブ（血栓活性化剤を含む）に血清を採集するための化学用の赤トップチューブ、分子診断およびウイルス負荷の検出において血漿を試験するための、ＥＤＴＡ  Ｋ２、ＥＤＴＡ  Ｋ３、液体ＥＤＴＡ溶液（すなわち、８％）を含む紫ラベンダートップのチューブもしくはＥＤＴＡ  Ｋ２／ゲルチューブ、血液銀行ＥＤＴＡ用のピンクトップチューブ、シュウ酸カリウムおよびフッ化ナトリウム、フッ化ナトリウム／ＥＤＴＡ、もしくはフッ化ナトリウムを含む灰色トップチューブ（抗凝血なし、血清サンプル用）、ＡＣＤ溶液ＡまたはＡＣＤ溶液Ｂを含む黄色トップチューブ、ロイヤルブルートップチューブ（血清、添加剤なしまたはヘパリンナトリウム）、白トップチューブ、または任意の用途もしくは診断試験のタイプのための、添加剤なしもしくは任意の添加剤、またはそれらの組み合わせを含む、血液採集用の任意の色もしくは任意の型のチューブであってもよい。
【０１６６】
本明細書で使用される「保存装置」または「トランスファー装置」は、採集装置で受け取ったサンプルおよび／または他の成分を受け取ることができる装置をいう。保存またはトランスファー装置は、プラスチックもしくはガラスのチューブ、バイアル、ボトル、ビーカー、フラスコ、バッグ、缶、マイクロタイタープレート、ＥＬＩＳＡプレート、９６穴プレート、３８４穴プレート、１５３６穴プレート、キュベット、反応モジュール、リザーバー、または、液体サンプルの保持、保存、もしくは処理に適した任意の容器であってもよい。
【０１６７】
本明細書でいう「診断試験」には、限定されないが、抗体系の診断試験、非抗体系の診断試験、免疫抽出（ＩＥ）および固相抽出（ＳＰＥ）等の、クロマトグラフィー法、分光光度法、および質量分析法（すなわち、ＨＰＬＣ、ＭＳ、ＬＣＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によるその後の分析のためのサンプル前処理の方法もしくは装置、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、分子診断、ラテラルフロー（ＬＦ）、ポイントオブケア（ＰｏＣ）、直販（ＤＴＣ）、ＣＬＩＡおよびＣＬＩＡ免除の試験および装置、研究使用に限られる（ＲＵＯ）試験、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ診断（ＩＶＤ）試験、研究室で開発された試験（ＬＤＴ）、コンパニオン診断、ならびに、診断、予後、スクリーニング、リスク評価、重症度分類、および治療薬モニタリング等のモニタリングのための任意の試験が含まれる。いくつかの実施形態では、診断試験には、ターンアラウンドタイムが短い診断試験（ＳＴＡＴ）、外来試験、ラテラルフロー試験、ポイントオブケア（ＰｏＣ）試験、分子診断試験、ＨＰＬＣ、ＭＳ、ＬＣＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、ＣＬＩＡおよびＣＬＩＡ免除の試験、ならびに、診断、予後、スクリーニング、リスク評価、重症度分類、治療モニタリング、および治療薬モニタリングのための任意の診断試験が含まれる。
【０１６８】
（付記）
（付記１）
生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、および、
ｂ）前記混合物を混合して、前記バイオマーカーとの粒子複合体を提供すること、
を含み、
それにより生体サンプルからバイオマーカーを単離する、
方法。
【０１６９】
（付記２）
前記粒子複合体を診断試験に供することをさらに含む、付記１に記載の方法。
【０１７０】
（付記３）
生体サンプルから干渉物質を除去する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記干渉物質との粒子複合体を提供すること、および、
ｃ）前記粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇した溶液を提供すること、
を含み、
それにより、前記干渉物質の量（たとえば質量、モル濃度、濃度）を低下または減少させる、
方法。
【０１７１】
（付記４）
枯渇させた前記溶液を特性評価（たとえば、診断試験）に供することをさらに含む、付記３に記載の方法。
【０１７２】
（付記５）
前記粒子は、凍結乾燥物（たとえば、ＬｙｏＳｐｈｅｒｅ（商標）（ＢＩＯＬＹＯＰＨ  ＬＬＣ社））として提供される、付記１または３に記載の方法。
【０１７３】
（付記６）
診断試験の精度を向上させる方法であって、
ａ）生体サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記干渉物質との粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記粒子複合体を除去、または完全に除去して枯渇させた溶液を提供すること、および、
ｄ）枯渇させた前記溶液を診断試験に供すること、
を含み、
それにより、診断試験の精度を向上させる、
方法。
【０１７４】
（付記７）
前記方法に供していない生体サンプルと比較して、少なくとも１％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、の前記干渉物質が除去される、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１７５】
（付記８）
十分な量の前記干渉物質を除去して、前記生体サンプル中の１００ｐｐｍ未満の前記干渉物質を提供する、付記１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【０１７６】
（付記９）
十分な量の前記干渉物質を除去して、前記生体サンプル中の検出可能量未満の前記干渉物質を提供する、付記１〜８のいずれか１つに記載の方法。
【０１７７】
（付記１０）
前記捕捉部位は、ヒト抗動物抗体（たとえば、マウスＩｇＧ、ヒツジＩｇＧ、ヤギＩｇＧ、ウサギＩｇＧ、ウシＩｇＧ、ブタＩｇＧ、ウマＩｇＧ）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１７８】
（付記１１）
前記捕捉部位は、異好抗体（たとえば、ＦＲ（Ｆｃ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、重合ＩｇＧ（１、２ａ、２ｂ型ＩｇＧおよびＩｇＧ断片）、血清成分）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１７９】
（付記１２）
前記捕捉部位は、アッセイ特異的な結合剤（たとえば、ビオチン、フルオレセイン、抗フルオレセインポリ／Ｍａｂ、抗ビオチンポリ／Ｍａｂ、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８０】
（付記１３）
前記捕捉部位は、アッセイ特異的なシグナル分子（たとえば、ＨＲＰ、ＡＬＰ、アクリジニウムエステル、イソルミノール／ルミノール、ルテニウム、ＡＢＥＩ／環状ＡＢＥＩ）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８１】
（付記１４）
前記捕捉部位は、アッセイ特異的な遮断剤（たとえば、ＢＳＡ、魚皮ゼラチン、カゼイン、卵白アルブミン、ＰＶＰ、ＰＶＡ）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８２】
（付記１５）
前記捕捉部位は、アッセイ特異的な結合リンカー（たとえば、ＬＣ、ＬＣ−ＬＣ、ＰＥＯ４、ＰＥＯ１６）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８３】
（付記１６）
前記捕捉部位は、抗原自己抗体（たとえば、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８４】
（付記１７）
前記捕捉部位は、タンパク質自己抗体（たとえば、ＭＴＳＨ、ＴｎＩ、ＴｎＴ、非心臓性ＴｎＴ（骨格筋疾患））である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８５】
（付記１８）
前記捕捉部位は、化学発光基質（たとえば、ルミノール、イソルミノール、イソルミノール誘導体、ＡＢＥＩ、ＡＢＥＩ誘導体、ルテニウム、アクリジニウムエステル）、または蛍光標識（たとえば、フルオレセインまたは他の蛍光色素分子、および染色剤）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８６】
（付記１９）
前記捕捉部位は、捕捉部位（たとえば、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、アビジン、キャプトアビジン、ポリＡ、ポリＤＴ、アプタマー、抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、抗体断片、組み換えタンパク質、酵素、タンパク質、生体分子、ポリマー）である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８７】
（付記２０）
前記捕捉部位は、ビオチン、フルオレセイン、ポリＤＴ、ポリＡ、または抗原である、付記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０１８８】
（付記２１）
前記除去、または前記完全な除去は、分離である、付記１〜９のいずれか１つに記載の方法。
【０１８９】
（付記２２）
前記分離には、物理的分離が含まれる、付記２１に記載の方法。
【０１９０】
（付記２３）
前記分離には、磁気的分離が含まれる、付記２１に記載の方法。
【０１９１】
（付記２４）
前記分離には、化学的分離が含まれる、付記２１に記載の方法。
【０１９２】
（付記２５）
前記除去、または前記完全な除去には、１０００×ｇ以上で、少なくとも１分間、２分間、３分間、４分間または５分間遠心分離して、ペレットおよび上清を提供し、前記上清を除去することが含まれる、付記２１に記載の方法。
【０１９３】
（付記２６）
前記除去、または前記完全な除去には、濾過（たとえば、フィルターを通す）が含まれる、付記２１に記載の方法。
【０１９４】
（付記２７）
前記フィルターは、多孔性であるか、または前記粒子（たとえば、ナノ粒子、マイクロ粒子）の直径より十分に小さい分画分子量（ＭＷＣＯ）を有する、付記２６に記載の方法。
【０１９５】
（付記２８）
前記濾過は、重力、真空、または遠心分離による、付記２６に記載の方法。
【０１９６】
（付記２９）
前記除去、または前記完全な除去には、磁化が含まれる、付記１〜９のいずれか１つに記載の方法。
【０１９７】
（付記３０）
前記磁化は、強力な磁石（たとえば、ネオジム磁石）を使用して行い、ペレットおよび上清を提供する、付記２９に記載の方法。
【０１９８】
（付記３１）
前記磁石は遠心分離ローター中にある、付記３０に記載の方法。
【０１９９】
（付記３２）
前記磁石は、使い捨てピペットチップ、カバーまたはシース内の磁石である、付記３０に記載の方法。
【０２００】
（付記３３）
生体サンプルからバイオマーカーを単離する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記バイオマーカーを含む粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記混合物から前記粒子複合体を除去すること、および、
ｄ）前記混合物に切断試薬、または放出剤を加え、バイオマーカーを含む単離物を提供すること、
を含み、
それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する、
方法。
【０２０１】
（付記３４）
バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を、前記捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、三次複合体を提供すること、
ｃ）前記混合物から前記三次複合体を除去して、単離物を提供すること、および、
ｄ）前記三次複合体の指標が前記単離物中に存在するか否かを判定すること、
を含み、
それにより、バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する、
方法。
【０２０２】
（付記３５）
バイオマーカーが生体サンプル中に存在するか否かを判定する方法であって、
ａ）前記サンプルを、捕捉部位を含む粒子と組み合わせて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、前記干渉物質との粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記粒子複合体を除去、または完全に除去して、枯渇させた溶液を提供すること、
ｄ）枯渇させた前記溶液を、第２の捕捉部位を含む第２の粒子と組み合わせて、第２の混合物を提供すること、
ｅ）前記第２の混合物を混合して、前記バイオマーカーを含む第２の粒子複合体を提供すること、
ｆ）前記第２の混合物から前記第２の粒子複合体を除去すること、および、
ｇ）前記第２の混合物に切断試薬または放出剤を加えて、前記バイオマーカーを含む単離物を提供すること、
を含み、
それにより、生体サンプルからバイオマーカーを単離する、
方法。
【０２０３】
（付記３６）
前記粒子複合体を希釈剤で洗浄することをさらに含む、付記３３〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【０２０４】
（付記３７）
前記切断試薬はジスルフィド結合還元剤である、付記３３または３５に記載の方法。
【０２０５】
（付記３８）
前記バイオマーカーについて診断試験を行うことをさらに含む、付記３３〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【０２０６】
（付記３９）
サンプル中のバイオマーカーの量を濃縮する方法であって、
ａ）前記サンプルに、捕捉部位を含む粒子を加えて、混合物を提供すること、
ｂ）前記混合物を混合して、粒子複合体を提供すること、
ｃ）前記粒子複合体を分離して、ペレットおよび上清を提供すること、
ｅ）前記ペレットから前記上清を除去すること、
ｆ）前記ペレットを希釈剤で洗浄すること、および、
ｇ）前記ペレットから前記バイオマーカーを溶出して、濃縮されたサンプルを提供すること、
を含み、
それにより、サンプル中のバイオマーカーの量を濃縮する、
方法。
【０２０７】
（付記４０）
前記バイオマーカーは、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の指標である、付記３９に記載の方法。
【０２０８】
（付記４１）
前記バイオマーカーは、ｓ−１００β、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）、切断型タウタンパク質（Ｃ−ｔａｕ）、およびユビキチンＣ末端加水分解酵素Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）である、付記３９に記載の方法。
【０２０９】
（付記４２）
前記バイオマーカーは、アルツハイマー病（ＡＤ）の指標である、付記３９に記載の方法。
【０２１０】
（付記４３）
前記バイオマーカーは、アミロイドベータ、ＢＡＣＥ１、可溶性Ａβ前駆体タンパク質（ｓＡＰＰ）である、付記３９に記載の方法。
【０２１１】
（付記４４）
前記バイオマーカーは、性感染症（ＳＴＤ）の指標である、付記３９に記載の方法。
【０２１２】
（付記４５）
前記ＳＴＤは、クラミジア、淋病、梅毒、トリコモナス、ＨＰＶ、ヘルペス、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶである、付記４４に記載の方法。
【０２１３】
（付記４６）
前記バイオマーカーは、細菌感染の指標である、付記３９に記載の方法。
【０２１４】
（付記４７）
前記バイオマーカーは、細菌のための捕捉部位である、付記３９に記載の方法。
【０２１５】
（付記４８）
前記バイオマーカーは、切断試薬によって複合体から切断される、付記３９に記載の方法。
【０２１６】
（付記４９）
前記バイオマーカーの存在はＭＡＬＤＩ−ＭＳにより判定される、付記３９に記載の方法。
【０２１７】
（付記５０）
前記干渉物質はフィブリノーゲンであり、前記除去、または前記完全な除去は、遠心分離による物理的分離等の分離であり、前記粒子複合体は血栓中に捕捉される、付記３に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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