(57)【要約】  本発明は、癌、特にＤＮＡミスマッチ修復欠損によって特徴付けられない癌を処置するためのＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤の使用に関する。癌の処置方法並びにＤＮＡミスマッチ修復欠損によって特徴付けられない癌を処置するのに有用な組成物及びキットが提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置し、且つ／又は抗腫瘍免疫応答を引き起こすことを、それを必要としている個人において行う方法であって、前記個人は、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ（ＭＳＩ−Ｈ）でなく、且つ／又はＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）欠損でない腫瘍を有し、前記方法は、治療的に有効な量のＮＫＧ２Ａ中和剤及び治療的に有効な量のＰＤ−１中和剤を前記個人に投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記個人は、２つ以上のマイクロサテライトマーカーにおいて検出されるマイクロサテライト不安定性を有さない腫瘍を有し、任意選択的に、前記個人は、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及びＭＯＮＯ２７からなる群から選択される前記マイクロサテライトマーカーの２つ以上において検出される変化を有さない腫瘍を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記個人は、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）タンパク質の発現の変化を有さない腫瘍を有し、任意選択的に、前記個人は、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２から選択される少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の低下した発現又は発現の非存在を有さない腫瘍を有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記個人は、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）である腫瘍を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記個人は、大腸癌、結腸癌及び直腸癌からなる群から選択される癌を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記個人は、大腸癌、任意選択的に進行した再発性又は転移性大腸癌を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記個人は、ＭＳＳ−大腸癌（ＭＳＳ−ＣＲＣ）を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ａ）前記個人が、ＭＳＩ−Ｈ及び／又はＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有するかどうかを決定し、任意選択的に、前記個人が、２つ以上のマイクロサテライトマーカーにおいて検出されるマイクロサテライト不安定性を有さない腫瘍を有するかどうかを決定する予備ステップであって、任意選択的に、前記個人は、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及びＭＯＮＯ２７からなる群から選択される前記マイクロサテライトマーカーの２つ以上において検出される変化を有さない腫瘍を有する、予備ステップ；及び／又は
ｂ）前記個人が、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）タンパク質の発現の変化を有さない腫瘍を有するかどうか、任意選択的に、前記個人が、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２から選択される少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の低下した発現又は発現の非存在を有さない腫瘍を有するかどうかを決定する予備ステップ
を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ヒトＮＫＧ２Ａタンパク質に結合する抗体、任意選択的にヒト化又はヒト抗ＮＫＧ２Ａ抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ＨＬＡ−ＥへのＮＫＧ２Ａの結合を阻害する抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、それぞれ配列番号１６〜１８の配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号１９〜２１の配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、モナリズマブである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＰＤ−１中和剤は、抗体である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＰＤ−１中和剤は、ヒトＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体であり、任意選択的に、前記ＰＤ−１中和剤は、ヒト抗ＰＤ−１抗体である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＰＤ−１中和剤は、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに結合する抗体であり、任意選択的に、前記ＰＤ−１中和剤は、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＰＤ−１中和剤は、それぞれ配列番号２８〜３０のアミノ酸配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号３１〜３３のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、請求項１〜１３又は１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＰＤ−１中和剤は、デュルバルマブである、請求項１〜１３又は１５若しくは１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、モナリズマブであり、及び前記ＰＤ−１中和剤は、デュルバルマブである、請求項１〜１３又は１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤及び前記ＰＤ−１中和剤は、同時に、別々に又は連続的に投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤及び前記ＰＤ−１中和剤は、別々の投与のために処方され、且つ同時又は連続的に投与される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与され、及び前記ＰＤ−１中和剤は、１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与され、任意選択的に、前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、及び前記ＰＤ−１中和剤は、２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、任意選択的に、前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、２週間毎に７５０ｍｇの一定の用量で投与されるモナリズマブであり、及び前記ＰＤ−１中和剤は、４週間毎に１５００ｍｇ／ｋｇの一定の用量で投与されるデュルバルマブである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＭＳＳ−ＣＲＣ患者の腫瘍に対する抗腫瘍活性を増大するためのキットであって、
（ｉ）抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤及び抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤を含有する医薬組成物、又は
（ｉｉ）抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤を含有する第１の医薬組成物及び抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤を含有する第２の医薬組成物、又は
（ｉｉｉ）抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤を含有する医薬組成物及び抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤と共に前記ＮＫＧ２Ａ中和剤を投与するための使用説明書、又は
（ｉｖ）抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤を含有する医薬組成物及び抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤と共に前記ＰＤ−１中和剤を投与するための使用説明書
を含み、ＭＳＳ−ＣＲＣの処置であって、それを必要としている患者におけるＭＳＳ−ＣＲＣの処置での使用のために適合されたキット。
【請求項２３】
ＭＳＳ−ＣＲＣの処置における使用のための使用説明書をさらに含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、モナリズマブであり、及び前記ＰＤ−１中和剤は、デュルバルマブである、請求項２２又は２３に記載のキット。
【請求項２５】
癌を有するヒト個人を処置するのに使用するためのＮＫＧ２Ａ中和剤であって、前記個人は、ＭＳＩ−Ｈでなく、且つ／又はＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）欠損でない腫瘍を有し、前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ＰＤ−１中和剤と併用して投与される、ＮＫＧ２Ａ中和剤。
【請求項２６】
癌を有するヒト個人を処置するのに使用するためのＰＤ−１中和剤であって、前記個人は、ＭＳＩ−Ｈでなく、且つ／又はＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）欠損でない腫瘍を有し、前記ＰＤ−１中和剤は、ＮＫＧ２Ａ中和剤と併用して投与される、ＰＤ−１中和剤。
【請求項２７】
前記個人は、２つ以上のマイクロサテライトマーカーにおいて検出されるマイクロサテライト不安定性を有さない腫瘍を有し、任意選択的に、前記個人は、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及びＭＯＮＯ２７からなる群から選択される前記マイクロサテライトマーカーの２つ以上において検出される変化を有さない腫瘍を有する、請求項２５又は２６に記載の使用のための薬剤。
【請求項２８】
前記個人は、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）タンパク質の発現の変化を有さない腫瘍を有し、任意選択的に、前記個人は、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２から選択される少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の低下した発現又は発現の非存在を有さない腫瘍を有する、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項２９】
前記個人は、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）である腫瘍を有する、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３０】
前記個人は、大腸癌、結腸癌及び直腸癌からなる群から選択される癌を有する、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３１】
前記個人は、大腸癌、任意選択的に進行した再発性又は転移性大腸癌を有する、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３２】
前記個人は、ＭＳＳ−大腸癌（ＭＳＳ−ＣＲＣ）を有する、請求項２５〜３１のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３３】
前記個人は、
ａ）前記個人が、ＭＳＩ−Ｈ及び／又はＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有するかどうかを決定し、任意選択的に、前記個人が、２つ以上のマイクロサテライトマーカーにおいて検出されるマイクロサテライト不安定性を有さない腫瘍を有するかどうかを決定する予備ステップであって、任意選択的に、前記個人は、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及びＭＯＮＯ２７からなる群から選択される前記マイクロサテライトマーカーの２つ以上において検出される変化を有さない腫瘍を有する、予備ステップ；及び／又は
ｂ）前記個人が、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）タンパク質の発現の変化を有さない腫瘍を有するかどうか、任意選択的に、前記個人が、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２から選択される少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の低下した発現又は発現の非存在を有さない腫瘍を有するかどうかを決定する予備ステップ
を受けている、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３４】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ヒト化又はヒトＮＫＧ２Ａタンパク質に結合する抗体、任意選択的にヒト又はヒト化抗ＮＫＧ２Ａ抗体である、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３５】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ＨＬＡ−ＥへのＮＫＧ２Ａの結合を阻害する抗体である、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３６】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、それぞれ配列番号１６〜１８の配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号１９〜２１の配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、請求項２５〜３４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３７】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、モナリズマブである、請求項２５〜３４又は３６のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３８】
前記ＰＤ−１中和剤は、抗体である、請求項２５〜３７のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項３９】
前記ＰＤ−１中和剤は、ヒトＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体であり、任意選択的に、前記ＰＤ−１中和剤は、ヒト抗ＰＤ−１抗体である、請求項２５〜３８のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４０】
前記ＰＤ−１中和剤は、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに結合する抗体であり、任意選択的に、前記ＰＤ−１中和剤は、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４１】
前記ＰＤ−１中和剤は、配列番号２８〜３０のアミノ酸配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号３１〜３３のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３ドメインを含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４２】
前記ＰＤ−１中和剤は、デュルバルマブである、請求項２５〜３９又は４１のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４３】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、モナリズマブであり、及び前記ＰＤ−１中和剤は、デュルバルマブである、請求項２５〜３９又は４１若しくは４２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４４】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤及び前記ＰＤ−１中和剤は、同時に、別々に又は連続的に投与される、請求項２５〜４３のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４５】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤及び前記ＰＤ−１中和剤は、別々の投与のために処方され、且つ同時又は連続的に投与される、請求項２５〜４４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項４６】
前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与され、及び前記ＰＤ−１中和剤は、１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与され、任意選択的に、前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、２週間毎に７５０ｍｇの一定の用量で投与されるモナリズマブであり、及び前記ＰＤ−１中和剤は、４週間毎に１５００ｍｇの一定の用量で投与されるデュルバルマブである、請求項２５〜４５のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌、特にＤＮＡミスマッチ修復欠損によって特徴付けられない癌を処置するためのＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤の使用に関する。ＭＳＳ癌の処置が含まれる。本発明は、進行した再発性又は転移性大腸癌を処置するのに特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
ＮＫ細胞活性は、活性化シグナル及び阻害性シグナルの両方を含む複雑な機構によって制御される。ＨＬＡクラスＩ欠損標的細胞のＮＫ細胞媒介性の認識及び死滅において重要な役割を果たすいくつかの別個のＮＫ特異的受容体が同定されている。天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）は、活性化受容体タンパク質の種類及びこれらを発現する遺伝子（ＮＫ細胞において特異的に発現される）を指す。ＮＣＲの例としては、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４及びＮＫｐ４６が挙げられる。これらの受容体は、Ｉｇスーパーファミリーのメンバーであり、特異的なモノクローナル抗体によって誘導されるこれらの架橋は、強力なＮＫ細胞活性化をもたらし、その結果、細胞内Ｃａ＋＋レベルの増大、細胞毒性の誘発及びリンホカインの放出並びに多くのタイプの標的細胞に対するＮＫ細胞毒性の活性化が生じる。
【０００３】
ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、リンパ球のサブセットにおいて見出される阻害性受容体である。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ−リガンドＨＬＡ−Ｅを発現する細胞に対する特定のリンパ球のサイトカイン放出及び細胞毒性反応を制限する。また、ＨＬＡ−Ｅは、特定の腫瘍細胞及び活性化内皮細胞によって可溶性形態で分泌されることも見出されている。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を阻害する抗体は、ＨＬＡ−Ｅ発現腫瘍細胞又はウイルス感染細胞に対するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性ＮＫ細胞の応答など、ＨＬＡ−Ｅ陽性標的細胞に対するリンパ球のサイトカイン放出及び細胞溶解活性を増大し得る。従って、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を中和することが癌の処置に有用であり得る。
【０００４】
大腸癌（ＣＲＣ）は、全ての癌の１０％〜１５％を占め、西欧諸国における癌死亡の主な原因である。転移性ＣＲＣ（ｍＣＲＣ）の処置のための標準治療は、依然として細胞毒性薬の使用である。より最近では、免疫療法薬がＣＲＣにおいて試験されている。Ｌｅら（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２０１５；３７２：２５０９−２５２０）は、抗プログラム細胞死１免疫チェックポイント阻害剤であるペンブロリズマブを用いてＣＲＣにおける第２相臨床試験を行っており、免疫関連客観的奏効率及び免疫関連ＰＦＳ率がそれぞれＭＳＩ−Ｈ  ＣＲＣについて４０％（１０人の患者中４人）及び７８％（９人の患者中７人）であり、マイクロサテライト安定性／正常（ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｔ）ＭＳＳ  ＣＲＣについて０％（１８人の患者中０人）及び１１％（１８人の患者中２人）であったことが分かった。ＭＳＳ  ＣＲＣ患者の１８人中１１人と比較して、ＭＳＩ−Ｈ  ＣＲＣの１０人の患者中１人のみが疾患進行を経験した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
残念ながら、化学療法剤及び／又は標的療法は、非ＭＳＩ−Ｈ  ＣＲＣを有する患者に十分な及び／又は持続的な抗腫瘍反応を与えない。従って、ＤＮＡ修復欠損を有さない処置患者に対する利益の改善が当技術分野において必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、特に、ＭＳＳ−ＣＲＣを有するヒト患者がＮＫＧ２Ａ中和剤モナリズマブ及びＰＤ−１中和剤デュルバルマブで処置されたときに有望な抗腫瘍反応を示したという観察から生じたものである。ＰＤ−１中和剤は、ＭＳＳ−ＣＲＣに適していると考えられていなかったが、これらの２つの薬剤の組み合わせは、ＭＳＳ−ＣＲＣを処置するのに有益であり得ることが意外にも分かった。理論によって拘束されるのを望むものではないが、ＨＬＡ−Ｅ／ＮＫＧ２Ａ軸（ＨＬＡ−Ｅ／ＮＫＧ２Ａ  ａｘｉｓ）の中和により、ＭＳＳ−ＣＲＣ腫瘍が宿主免疫系による認識及び／又は溶解に対して感受性になることがあり得る。
【０００７】
１つの態様では、本発明は、癌を処置及び／若しくは予防し、且つ／又は抗腫瘍免疫応答を引き起こすことを、それを必要としている個人において行う方法であって、前記個人は、非ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ腫瘍を有し、方法は、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で前記個人を処置するステップを含む、方法を提供する。一実施形態では、腫瘍は、ＭＳＩ−Ｌｏｗである。別の実施形態では、腫瘍は、ＭＳＳである。一実施形態では、癌又は腫瘍は、大腸癌（ＣＲＣ）、任意選択的に進行した再発性又は転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）である。
【０００８】
１つの態様では、本発明は、癌を処置及び／若しくは予防し、且つ／又は抗腫瘍免疫応答を引き起こすことを、それを必要としている個人において行う方法であって、前記個人は、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）欠損でない腫瘍を有し、方法は、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で前記個人を処置するステップを含む、方法を提供する。一実施形態では、腫瘍は、ＭＳＩ−Ｌｏｗである。別の実施形態では、腫瘍は、ＭＳＳである。一実施形態では、癌又は腫瘍は、大腸癌（ＣＲＣ）、任意選択的に進行した再発性又は転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）である。
【０００９】
１つの態様では、本発明は、癌を処置し、且つ／又は抗腫瘍免疫応答を引き起こすことを、それを必要としている個人において行う方法であって、前記個人は、進行した再発性又は転移性大腸癌、任意選択的にＭＳＩ−Ｈｉｇｈ（ＭＳＩ−Ｈ）でない転移性大腸癌を有し、方法は、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で前記個人を処置するステップを含む、方法を提供する。
【００１０】
１つの態様では、本発明は、癌を処置し、且つ／又は抗腫瘍免疫応答を引き起こすことを、それを必要としている個人において行う方法であって、前記個人は、進行した再発性又は転移性大腸癌、任意選択的に低マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｌｏｗ）又はマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）である転移性大腸癌を有し、方法は、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で前記個人を処置するステップを含む、方法を提供する。
【００１１】
一実施形態では、個人において癌、任意選択的にＣＲＣ又はｍＣＲＣを処置又は予防するための方法であって、（ｉ）ＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有する個人を同定するステップと、（ｉｉ）有効量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及び有効量の、ＰＤ−１を中和する薬剤を個人に投与するステップとを含む方法が提供される。
【００１２】
一実施形態では、個人において癌、任意選択的にＣＲＣ又はｍＣＲＣを処置又は予防するための方法であって、（ｉ）ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ腫瘍でない腫瘍を有する個人を同定するステップと、（ｉｉ）有効量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及び有効量の、ＰＤ−１を中和する薬剤を個人に投与するステップとを含む方法が提供される。
【００１３】
一実施形態では、個人において癌、任意選択的にＣＲＣ又はｍＣＲＣを処置又は予防するための方法であって、（ｉ）ＭＳＳ腫瘍である腫瘍を有する個人を同定するステップと、（ｉｉ）有効量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及び有効量の、ＰＤ−１を中和する薬剤を個人に投与するステップとを含む方法が提供される。
【００１４】
別の実施形態では、癌、任意選択的にＣＲＣ又はｍＣＲＣを有する個人が、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤による処置から特定の利益を得るかどうか、そのような処置に応答するかどうか及び／又はそのような処置に好適であるかどうかを決定するための方法が提供され、この方法は、前記個人が、ＤＮＡミスマッチ修復欠損である腫瘍を有するかどうかを決定するステップを含み、腫瘍がＤＮＡミスマッチ修復欠損でないという決定は、個人が、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びヒトＰＤ−１ポリペプチドを中和する薬剤による処置から特定の利益を得、そのような処置に応答し、且つ／又はそのような処置に好適であることを示す。
【００１５】
別の実施形態では、癌、任意選択的にＣＲＣ又はｍＣＲＣを有する個人が、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤による処置から特定の利益を得るかどうか、そのような処置に応答するかどうか及び／又はそのような処置に好適であるかどうかを決定するための方法が提供され、この方法は、前記個人が、マイクロサテライト不安定性を有さない腫瘍を有する（例えば、個人がＭＳＳ腫瘍を有する）かどうかを決定するステップを含み、腫瘍がマイクロサテライト不安定性を有さない（例えば、個人がＭＳＳ腫瘍を有する）という決定は、個人が、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びヒトＰＤ−１ポリペプチドを中和する薬剤による処置から特定の利益を得、そのような処置に応答し、且つ／又はそのような処置に好適であることを示す。
【００１６】
マイクロサテライト不安定性は、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）障害に起因する遺伝的易変異性の状態である。ＭＳＩの存在は、ＭＭＲが正常に機能していないことの表現型エビデンスを表す。ほとんどの場合、ＭＳＩ腫瘍における不安定性の遺伝的基盤は、５つのヒトＭＭＲ遺伝子：ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６、ＰＭＳ２及びＰＭＳ１のいずれか１つ又は複数の遺伝的な生殖細胞系列の変化である。従って、腫瘍におけるマイクロサテライト不安定性は、マイクロサテライトマーカー及び／又はＭＭＲ遺伝子を評価することによって決定され得る。
【００１７】
一実施形態では、腫瘍がマイクロサテライト不安定性を有さない（例えば、腫瘍がマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）である）個人を同定するステップは、（ａ）腫瘍細胞を含む個人から生体サンプルを得るステップ（例えば、生検を得ることを含む）と、（ｂ）生体サンプル中の腫瘍細胞のマイクロサテライトステータスを決定するステップとを含む。個人が、マイクロサテライト不安定性によって特徴付けられない腫瘍を有する（例えば、腫瘍は、ＭＳＳであり、腫瘍は、マイクロサテライト安定性によって特徴付けられる）という所見は、個人が、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で有利に処置され得ることを示す。
【００１８】
一実施形態では、腫瘍細胞のマイクロサテライトステータスを決定するステップは、腫瘍細胞におけるＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）タンパク質の発現の変化を検出するステップを含み、任意選択的に、ＭＭＲタンパク質は、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６、ＰＭＳ２及びＰＭＳ１から選択され、任意選択的に、ＭＭＲ遺伝子又はタンパク質は、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２から選択される。一実施形態では、個人が、少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の減少又は非存在によって特徴付けられる腫瘍を有するという所見は、腫瘍が、マイクロサテライト不安定性によって特徴付けられることを示す。腫瘍が少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の減少又は非存在を有さない個人は、腫瘍がマイクロサテライト安定性（例えば、ＭＳＳ）によって特徴付けられることを示すものと規定され得、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で有利に処置され得る。ＭＭＲタンパク質の減少は、例えば、ＤＮＡミスマッチ修復欠損を評価するための標準方法及び指針に従って評価され得る。任意選択的に、ＭＭＲタンパク質の発現の減少は、ＭＳＳに関連する基準値と比較した減少に相当し得；任意選択的に、ＭＭＲタンパク質の発現の減少は、ＭＳＩに関連する基準値に相当する。代わりに、少なくとも１つのＭＭＲタンパク質の減少は、例えば、同じ個人の健康な組織中で測定される同じＭＭＲタンパク質のレベル、又は異なる期間で分析される同じ個人の腫瘍サンプル中で測定される同じＭＭＲタンパク質のレベル、又は癌に罹患していない個人などの健康な個人からの生体サンプル中の同じＭＭＲタンパク質の平均レベルであり得る基準値との比較によって評価され得る。
【００１９】
一実施形態では、腫瘍細胞のマイクロサテライトステータスを決定するステップは、マイクロサテライトマーカー又はマイクロサテライトマーカーパネルの変化を検出するステップを含む。任意選択的に、変化は、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４、ＭＯＮＯ２７、Ｄ５Ｓ３４６、Ｄ２Ｓ１２３及びＤ１７Ｓ２５０からなる群から、より特定的にはＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及びＭＯＮＯ２７からなる群から選択される１つ又は複数のマイクロサテライトマーカー中で検出される。腫瘍が高頻度マイクロサテライト不安定性を有さない個人は、腫瘍がマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）又は低マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｌｏｗ）によって特徴付けられることを示し、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤及びＰＤ−１を中和する薬剤で有利に処置され得る。
【００２０】
一実施形態では、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤は、任意選択的に、ヒトＨＬＡ−Ｅ及びヒトＮＫＧ２Ａタンパク質間の相互作用を阻害することにより、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和するタンパク質（例えば、抗体）である。一実施形態では、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤は、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドに結合し、且つヒトＨＬＡ−Ｅ及びヒトＮＫＧ２Ａタンパク質間の相互作用を阻害することによるか又はそれによらずにヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和するタンパク質（例えば、抗体）である。一実施形態では、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤は、ヒトＨＬＡ−Ｅポリペプチドに結合し、ヒトＨＬＡ−Ｅ及びヒトＮＫＧ２Ａタンパク質間の相互作用を阻害するタンパク質（例えば、抗体）である。
【００２１】
一実施形態では、ヒトＰＤ−１ポリペプチドを中和する薬剤は、ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗ＰＤ−１又は抗ＰＤＬ−１抗体である。個人は、ヒトであると規定され得る。
【００２２】
一実施形態では、ＤＮＡミスマッチ修復欠損によって特徴付けられない腫瘍（例えば、ＣＲＣ、ｍＣＲＣ）を有する個人において腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の活性及び／又は数を増大する方法が提供され、この方法は、治療的に有効な量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する化合物及び治療的に有効な量の、ＰＤ−１ポリペプチドを中和する化合物を個人に投与するステップを含む。
【００２３】
一実施形態では、マイクロサテライト不安定性によって特徴付けられない腫瘍（例えば、ＣＲＣ、ｍＣＲＣ）（例えば、ＭＳＳとして特徴付けられる癌）を有する個人において腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の活性及び／又は数を増大する方法が提供され、この方法は、治療的に有効な量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する化合物及び治療的に有効な量の、ＰＤ−１ポリペプチドを中和する化合物を個人に投与するステップを含む。
【００２４】
一実施形態では、マイクロサテライト不安定性によって特徴付けられない大腸癌（例えば、ｍＣＲＣ）（例えば、ＭＳＳとして特徴付けられる癌）の処置に使用するための、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤、任意選択的に抗ＮＫＧ２Ａ抗体が提供され、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤は、ＰＤ−１を中和する薬剤、任意選択的に抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与される。
【００２５】
一実施形態では、マイクロサテライト不安定性によって特徴付けられない大腸癌（例えば、ｍＣＲＣ）（例えば、ＭＳＳとして特徴付けられる癌）の処置に使用するための、ヒトＰＤ−１ポリペプチドを中和する薬剤、任意選択的に抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗ＰＤ−１抗体が提供され、ヒトＰＤ−１ポリペプチドを中和する薬剤は、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤、任意選択的に抗ＮＫＧ２Ａ抗体と併用して投与される。
【００２６】
本明細書の任意の実施形態の１つの態様では、個人は、放射線療法、手術、化学療法及び／又は生物剤による処置による以前の処置を受けている。
【００２７】
これらの態様は、本明細書で提供される本発明の説明においてより詳細に記載されており、付加的な態様、特徴及び利点は、本明細書で提供される本発明の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ＭＳＳ−ＣＲＣ試験の拡大コホートにおける各患者（横軸）についてのベースラインからの腫瘍サイズの最良の変化（％、左側の縦軸）及び評価可能な集団における治療反応の期間（週数、ｚ軸）の３次元表示である。
【図２】図１と比較してより長い期間におけるＭＳＳ−ＣＲＣ試験の拡大コホートにおける各患者（横軸）についてのベースラインからの腫瘍サイズの最良の変化（％、左側の縦軸）及び評価可能な集団における治療反応の期間（週数、ｚ軸）の３次元表示である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
定義
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ又は複数を意味し得る。特許請求の範囲において使用される場合、単語「含む」と共に使用されると、単語「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ又は２つ以上を意味し得る。本明細書で使用される場合、「別の」は、少なくとも第２の又はそれを超えるものを意味し得る。
【００３０】
「含む」が使用される場合、これは、任意選択的に、「から本質的になる」又は「からなる」によって置き換えることができる。
【００３１】
ＮＫＧ２Ａ（ＯＭＩＭ１６１５５５、その開示全体は、参照によって本明細書に援用される）は、転写物のＮＫＧ２グループのメンバーである（Ｈｏｕｃｈｉｎｓ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１０１７−１０２０）。ＮＫＧ２Ａは、２５ｋｂに及ぶ７つのエクソンによってコードされ、いくらかの差別的スプライシングを示す。ＣＤ９４と一緒に、ＮＫＧ２Ａは、ＮＫ細胞、α／βＴ細胞、γ／δＴ細胞及びＮＫＴ細胞のサブセットの表面において見出されるヘテロ二量体の阻害性受容体ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを形成する。阻害性ＫＩＲ受容体と同様に、それは、その細胞質ドメインにＩＴＩＭを有する。本明細書で使用される場合、「ＮＫＧ２Ａ」は、ＮＫＧ２Ａ遺伝子又はコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体又はアイソフォームを指す。ヒトＮＫＧ２Ａは、以下の配列：
【化１】
2021523170.tif 000003
の２３３のアミノ酸を３つのドメインに含み、細胞質ドメインが残基１〜７０を含み、膜貫通領域が残基７１〜９３を含み、細胞外領域が残基９４〜２３３を含む。
【００３２】
ＮＫＧ２Ｃ（ＯＭＩＭ６０２８９１、その開示全体は、参照によって本明細書に援用される）及びＮＫＧ２Ｅ（ＯＭＩＭ６０２８９２、その開示全体は、参照によって本明細書に援用される）は、転写物のＮＫＧ２グループの２つの他のメンバーである（Ｇｉｌｅｎｋｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４８：１６３−１７３）。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅ受容体は、ＮＫ細胞及びＴ細胞などのリンパ球のサブセットの表面において見出される活性化受容体である。
【００３３】
ＨＬＡ−Ｅ（ＯＭＩＭ１４３０１０、その開示全体は、参照によって本明細書に援用される）は、細胞表面で発現され、例えば他のＭＨＣクラスＩ分子のシグナル配列に由来する断片などのペプチドの結合によって制御される非古典的なＭＨＣ分子である。ＨＬＡ−Ｅの可溶性型も同定されている。そのＴ細胞受容体結合特性に加えて、ＨＬＡ−Ｅは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｂ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃに特異的に結合することにより、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びＴ細胞（α／β及びγ／δ）のサブセットに結合する（例えば、その開示全体が参照によって本明細書に援用されるＢｒａｕｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：７９５−７９９を参照されたい）。ＨＬＡ−Ｅの表面発現は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ、Ｔ又はＮＫＴ細胞クローンによる溶解から標的細胞を保護する。本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ−Ｅ」は、ＨＬＡ−Ｅ遺伝子又はコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体又はアイソフォームを指す。
【００３４】
本発明との関連において、「ＮＫＧ２Ａ」又は「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ」、「陽性リンパ球」又は「制限リンパ球」は、細胞表面においてＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するリンパ球系（例えば、ＮＫ−、ＮＫＴ−及びＴ細胞）の細胞を指し、これは、例えば、ＣＤ９４及びＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ又は及びＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープを特異的に認識する抗体を用いるフローサイトメトリーによって検出することができる。また、「ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」は、リンパ球由来の不死細胞株（例えば、ＮＫＬ、ＮＫ−９２）も含む。
【００３５】
本発明との関連において、「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる」、「ＮＫＧ２Ａを中和する」又は「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する」は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａが細胞内プロセスに悪影響を与えるその能力において阻害され、サイトカイン放出及び細胞毒性応答などのリンパ球応答をもたらすプロセスを指す。これは、例えば、ＮＫ−又はＴ細胞ベースの細胞毒性アッセイにおいて測定することができ、このアッセイでは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球によるＨＬＡ−Ｅ陽性細胞の死滅を刺激する治療用化合物の能力が測定される。一実施形態では、ＮＫＧ２Ａを中和する抗体調製物は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞毒性の少なくとも１０％の増強、任意選択的に前記リンパ球細胞毒性の少なくとも４０％又は５０％の増強、任意選択的に前記リンパ球細胞毒性の少なくとも７０％の増強、任意選択的にＮＫ細胞毒性の少なくとも７０％の増強を引き起し、本明細書で記載される細胞毒性アッセイが参照される。抗ＮＫＧ２Ａ抗体がＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡのＨＬＡ−Ｅとの相互作用を低減又は遮断すれば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞毒性が増大され得る。これは、例えば、例えばＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞及びＨＬＡ−Ｅを発現する標的細胞を用いて、標準的な４時間インビトロ細胞毒性アッセイにおいて評価することができる。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ−Ｅを認識して、リンパ球媒介性の細胞溶解を防止する阻害性シグナル伝達の開始及び伝播をもたらすため、このようなＮＫ細胞は、ＨＬＡ−Ｅを発現する標的を効率的に死滅させない。このようなインビトロ細胞毒性アッセイは、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）に記載されるように、当技術分野において周知の標準的な方法によって実行することができる。また、抗体がリンパ球を刺激してＰ８１５、Ｋ５６２細胞又は適切な腫瘍細胞などの標的細胞を死滅させる能力を評価するためのクロム放出及び／又は他のパラメータは、Ｓｉｖｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９−１１３６；Ｖｉｔａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８７：２０６５−２０７２；Ｐｅｓｓｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８８：９５３−９６０；Ｎｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎ．２００１；８：１１３１−１１３５；Ｐｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９９；１９０：１５０５−１５１６（これらのそれぞれの開示全体は、参照によって本明細書に援用される）に開示されている。標的細胞は、ＮＫ細胞の添加前に５１Ｃｒによって標識化され、次に死滅の結果としての細胞から培地への５１Ｃｒの放出に比例するように死滅が推定される。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ−Ｅへ結合するのを防止する抗体を添加すると、結果的に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａによる阻害性シグナル伝達の開始及び伝播が防止される。従って、このような薬剤の添加の結果、リンパ球媒介性の標的細胞���死滅が増大される。このステップは、これにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに誘導される負のシグナル伝達を例えばリガンド結合の遮断によって防止する薬剤を同定する。特定の５１Ｃｒ放出細胞毒性アッセイにおいて、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現ＮＫエフェクター細胞は、ＨＬＡ−Ｅ陰性ＬＣＬ７２１．２２１標的細胞を死滅させることができるが、ＨＬＡ−Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１−Ｃｗ３対照細胞についてあまり死滅させない。対照的に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを欠いているＹＴＳエフェクター細胞は、両方の細胞株を効率的に死滅させる。従って、ＮＫエフェクター細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ−Ｅ誘導性阻害性シグナル伝達のために、ＨＬＡ−Ｅ＋ＬＣＬ７２１．２２１−Ｃｗ３細胞をあまり効率的に死滅させない。このような５１Ｃｒ放出細胞毒性アッセイにおいて、ＮＫ細胞が、本明細書で記載される遮断性の抗ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ抗体と共にプレインキュベートされる場合、ＨＬＡ−Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１−Ｃｗ３細胞は、抗体濃度に依存した方式でより効率的に死滅される。また、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の阻害活性（すなわち細胞毒性増強能）は、いくつかの他の方法のいずれかにおいて、例えば、例えばＳｉｖｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９−１１３６（その開示は、参照によって本明細書に援用される）に記載されるような、細胞内遊離カルシウムに対するその効果によって評価することもできる。ＮＫ細胞の細胞毒性の活性化は、例えば、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ−γ産生）又は細胞毒性マーカー（例えば、ＣＤ１０７又はＣＤ１３７動員）の増大を測定することによって評価することができる。例示的なプロトコルでは、ＰＢＭＣからのＩＦＮ−ｙの産生は、培養下で４日後に細胞表面及び細胞質内染色並びにフローサイトメトリーによる分析によって評価される。簡単に言うと、ブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）が培養の最後の４時間に５μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。次に、細胞は、透過処理（ＩｎｔｒａＰｒｅｐ（商標）；Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）及びＰＥ−抗ＩＦＮ−ｙ又はＰＥ−ＩｇＧ１（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）による染色前に抗ＣＤ３及び抗ＣＤ５６モノクローナル抗体と共にインキュベートされる。ポリクローナル活性化ＮＫ細胞からのＧＭ−ＣＳＦ及びＩＦＮ−ｙの産生は、ＥＬＩＳＡ（ＧＭ−ＣＳＦ：ＤｕｏＳｅｔ  Ｅｌｉｓａ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ、ＩＦＮ−ｙ：ＯｐｔＥｌＡ  ｓｅｔ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて上清において測定される。
【００３６】
一実施形態では、ＤＮＡミスマッチ修復欠損によって特徴付けられない腫瘍（例えば、ＣＲＣ、ｍＣＲＣ）を有する個人において腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の活性及び／又は数を増大する方法が提供され、この方法は、治療的に有効な量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する化合物及び治療的に有効な量の、ＰＤ−１ポリペプチドを中和する化合物を個人に投与するステップを含む。
【００３７】
一実施形態では、マイクロサテライト不安定性によって特徴付けられない腫瘍（例えば、ＣＲＣ、ｍＣＲＣ）（例えば、ＭＳＳとして特徴付けられる癌）を有する個人において腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の活性及び／又は数を増大する方法が提供され、この方法は、治療的に有効な量の、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する化合物及び治療的に有効な量の、ＰＤ−１ポリペプチドを中和する化合物を個人に投与するステップを含む。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「処置」及び「処置すること」などは、一般に、所望の薬理学的及び生理学的効果を得ることを意味する。効果は、疾患、その症状若しくは病態を予防するか若しくは部分的に予防する点で予防的であり得、且つ／又は疾患、病態、症状若しくは疾患に起因する有害作用の部分的若しくは完全な治癒の点で治療的であり得る。本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、哺乳類、特にヒトにおける疾患の任意の処置を包含し、（ａ）疾患に罹患しやすいが、依然として罹患していると診断されていない対象において、疾患を発症しないように予防すること（例えば、予防的早期無症候性介入）；（ｂ）例えば、疾患に罹患していると診断された対象において疾患を抑制すること、例えばその進行を食い止めること；又は疾患を軽減すること、例えば疾患及び／若しくはその症状若しくは病態を退縮させること（例えば、損傷の改善若しくは修復）を含む。任意選択的に、処置は、腫瘍負荷の減少、病変のサイズ及び／又は数の減少、癌の進行の軽減若しくは遅延（例えば、無増悪生存率の増加）、癌転移の遅延若しくは予防及び／又は生存率の増加を引き起こし得る（例えば、それらを引き起こす方法として特徴付けられ得る）。任意選択的に、処置は、例えば、標準的な基準、任意選択的にＲＥＣＩＳＴ基準に従い、対象における安定、部分奏効又は完全奏効を引き起こすか又は提供し得る（例えば、それらを引き起こすか又は提供する方法として特徴付けられ得る）。
【００３９】
「癌の処置」などがＮＫＧ２Ａ中和剤（例えば、抗体）及び／又はＰＤ−１中和剤（例えば、抗体）と関連して言及される場合には常に以下のことが含まれる：
（ａ）癌を処置する方法であり、前記方法は、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を（例えば、薬学的に許容可能な担体材料中で一緒に又はそれぞれ別々に）、癌の処置を可能にする用量（治療的に有効な量）、任意選択的に本明細書で指定される用量（量）において、このような処置を必要としている個人、哺乳類、特にヒトに投与する（少なくとも１つの処置のために）ステップを含み；
（ｂ）癌の処置のためのＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤の使用；
（ｃ）癌（特にヒトにおける）の処置に使用するためのＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤；
（ｄ）癌（特にヒトにおける）の処置に使用するためのＮＫＧ２Ａ中和剤であり、前記ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ＰＤ−１中和剤と併用して投与され；
（ｅ）癌（特にヒトにおける）の処置に使用するためのＰＤ−１中和剤であり、前記ＰＤ−１中和剤は、ＮＫＧ２Ａ中和剤と併用して投与され；
（ｆ）癌の処置のための医薬品を製造するためのＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤の使用、
（ｇ）ＮＫＧ２Ａ中和剤及び／又はＰＤ−１中和剤を薬学的に許容可能な担体と混合することを含む、癌の処置のための医薬品を製造するためにＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を使用する方法、
（ｈ）癌の処置のために適切な有効用量のＮＫＧ２Ａ中和剤及び／又はＰＤ−１中和剤を含む医薬品；
（ｉ）本出願が提出された国において特許が認められる主題に従う（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）及び（ｈ）の任意の組み合わせ。
【００４０】
「生検」という用語は、本明細書で使用される場合、診断の確立などの検査の目的で組織を除去することと定義される。生検のタイプの例としては、例えば、シリンジに取り付けられた針を介した吸引の適用によるもの；組織の断片の機器による除去によるもの；内視鏡を介する適切な機器を用いた除去によるもの；外科的切除、例えば病変全体の外科的切除によるものなどが挙げられる。
【００４１】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリクローナル及びモノクローナル抗体を指す。重鎖内の定常ドメインのタイプに応じて、抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの１つに割り当てられる。これらのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのサブクラス又はアイソタイプにさらに分類される。例示的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一のペアのポリペプチド鎖で構成され、各ペアは、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０又はそれを超えるアミノ酸の可変領域を画定する。可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖及び重鎖を指す。免疫グロブリンの種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」及び「ミュー」と呼ばれる。免疫グロブリンの種々のクラスのサブユニット構造及び三次元配置は、周知である。ＩｇＧは、生理学的状況下で最も一般的な抗体であり、研究室環境で最も容易に作製されるため、本明細書で使用される抗体の例示的な種類である。任意選択的に、抗体は、モノクローナル抗体である。抗体の特定の例は、ヒト化、キメラ、ヒト又は別の方法でヒトに適した抗体である。また、「抗体」は、本明細書に記載される抗体のいずれかの任意の断片又は誘導体も含む。
【００４２】
「特異的に結合する」という用語は、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ又は単離した標的細胞の表面に存在する天然タンパク質のいずれかを用いて評価されるとき、抗体が、好ましくは、競合的結合アッセイにおいて結合パートナー、例えば抗ＮＫＧ２Ａ抗体についてＮＫＧ２Ａ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体についてＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１抗体についてＰＤ−１に結合できることを意味する。特異的な結合を決定するための競合的結合アッセイ及び他の方法は、当技術分野において周知である。例えば、結合は、放射標識、質量分析などの物理的方法又は例えば細胞蛍光測定分析（例えば、ＦＡＣＳｃａｎ）を用いて検出される直接若しくは間接的な蛍光標識によって検出することができる。対照の非特異的な薬剤で見られる量を超える結合は、その薬剤が標的に結合することを示す。ＮＫＧ２Ａに特異的に結合する薬剤は、単独のＮＫＧ２Ａ又はＣＤ９４との二量体としてのＮＫＧ２Ａに結合し得る。
【００４３】
抗体が特定のモノクローナル抗体「と競合する」と言われる場合、それは、組換え分子（例えば、ＮＫＧ２Ａ）又は表面発現分子（例えば、ＮＫＧ２Ａ）のいずれかを用いる結合アッセイにおいて抗体がモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が、結合アッセイにおいて、配列番号４〜８のいずれかの重鎖可変領域及び配列番号９の軽鎖可変領域を有する抗体の、ＮＫＧ２Ａポリペプチド又はＮＫＧ２Ａ発現細胞に対する結合を低減すると、抗体は、このような抗体とそれぞれ「競合する」と言われる。
【００４４】
「親和性」という用語は、本明細書で使用される場合、エピトープに対する抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］（式中、［Ａｂ−Ａｇ］は、抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は、非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は、非結合抗原のモル濃度である）として定義される解離定数Ｋｄによって与えられる。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄにより定義される。モノクローナル抗体の親和性を決定する方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）において見出すことができ、これらの参考文献は、参照によって本明細書に完全に援用される。モノクローナル抗体の親和性を測定するための当技術分野において周知の１つの標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置を用いた分析によるものなど）の使用である。
【００４５】
本明細書に関連して、「決定基」は、ポリペプチド上の相互作用又は結合の部位を指定する。
【００４６】
「エピトープ」という用語は、抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上の区域又は領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、特異的抗原結合抗体又はペプチドにより効果的に遮断されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基とを含み得る。それは、例えば、抗体又は受容体と結合し得る複雑な抗原分子上の最も単純な形態又は最小の構造領域である。エピトープは、直線的又は立体構造的／構造的であり得る。「直線的エピトープ」という用語は、アミノ酸の直鎖配列（一次構造）上で連続するアミノ酸残基で構成されるエピトープとして定義される。「立体構造的又は構造的エピトープ」という用語は、全てが連続しているわけではなく、従って分子の折り畳み（二次、三次及び／又は四次構造）により互いに近接されるアミノ酸の直鎖配列の分離部を表すアミノ酸残基で構成されるエピトープとして定義される。立体構造的エピトープは、三次元構造に依存する。「立体構造的」という用語は、従って、「構造的」と互換的に使用されることが多い。
【００４７】
「薬剤」という用語は、本明細書では、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子又は生物学的材料から作製される抽出物を示すために使用される。「治療薬」という用語は、生物活性を有する薬剤を指す。
【００４８】
本明細書の目的のために、「ヒト化」又は「ヒト」抗体は、１つ又は複数のヒト免疫グロブリンの定常及び可変フレームワーク領域が動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合された抗体を指す。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を保持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。このような抗体は、抗原負荷に応答して特異的ヒト抗体を産生するように「操作された」トランスジェニックマウス又は他の動物から得ることができる（例えば、その教示全体が参照によって本明細書に援用されるＧｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６：５７９を参照されたい）。また、完全ヒト抗体は、遺伝子又は染色体トランスフェクション法及びファージディスプレイ技術によって構築することができ、これらは、全て当技術分野において知られている（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３を参照されたい）。また、ヒト抗体は、インビトロの活性化Ｂ細胞により生成することもできる（例えば、参照によってその全体が援用される米国特許第５，５６７，６１０号明細書及び米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい）。
【００４９】
「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なる若しくは改変されたクラス、エフェクター機能及び／若しくは種の定常領域又はキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように、定常領域又はその一部が改変、置換又は交換された抗体分子であるか、或いは（ｂ）可変領域又はその一部が、異なる又は改変された抗原特異性を有する可変領域によって改変、置換又は交換された抗体分子である。
【００５０】
「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」及び「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣ末端断片、例えばヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０〜約ａａ４５０又は他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体のα、δ、ε及びμ）におけるその対応物の配列又はその天然に存在するアロタイプを指す。他に規定されない限り、本開示の全体を通して、免疫グロブリンに対して一般的に容認されたＫａｂａｔのアミノ酸番号付けが使用される（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい）。
【００５１】
「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」という用語は、材料がその天然の状態で見出される際に通常付随される成分を実質的又は本質的に含まない材料を指す。純度及び均質性は、通常、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィなどの分析化学技術を用いて決定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は、実質的に精製される。
【００５２】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。この用語は、１つ又は複数のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマーと、天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーとに適用される。
【００５３】
「組換え」という用語は、例えば、細胞、核酸、タンパク質又はベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質又はベクターが、異種核酸若しくはタンパク質の導入又は天然核酸若しくはタンパク質の改変によって修飾されていること、或いは細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。従って、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態において見出されない遺伝子を発現するか、或いは改変されていなければ異常発現されるか、低発現されるか、又は全く発現されない天然遺伝子を発現する。
【００５４】
本明細書に関連して、ポリペプチド又はエピトープに「結合する」抗体という用語は、特異性及び／又は親和性により前記決定基に結合する抗体を示す。
【００５５】
「同一性」又は「同一性の」という用語は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基の鎖間のマッチの数によって決定されるようなポリペプチド間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデル又はコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）により対処されるギャップアライメント（存在する場合）による２つ以上の配列の小さい方の間での同一のマッチのパーセントを測る。関連ポリペプチドの同一性は、既知の方法によって容易に計算することができる。このような方法には、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；及びＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【００５６】
同一性を決定する方法は、試験される配列間の最大マッチを与えるように設計される。同一性の決定方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記載される。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータプログラム方法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））を含むＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及び他の供給源（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、上記）から公的に入手可能である。周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用され得る。
【００５７】
ＮＫＧ２Ａ中和治療剤
ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体又はそのリガンドＨＬＡ−Ｅの細胞外部分に結合し、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球の表面で発現されるヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の阻害活性を低下させる。一実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合においてＨＬＡ−Ｅと競合する。すなわち、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとそのリガンドＨＬＡ−Ｅとの間の相互作用を遮断する。別の実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに結合するが、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合においてＨＬＡ−Ｅと競合しない。すなわち、薬剤は、ＨＬＡ−Ｅと同時にＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに結合することができる。一実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに結合する抗体である。抗体は、ＣＤ９４及びＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ又は及びＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープに結合し得る。別の実施形態では、薬剤は、ＨＬＡ−Ｅに結合し、ヒトＨＬＡ−Ｅ及びヒトＮＫＧ２Ａタンパク質間の相互作用を阻害する抗体である。
【００５８】
１つの態様では、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体及びキメラ抗体から選択される抗体である。１つの態様では、薬剤は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４抗体に由来する定常ドメインを含む。１つの態様では、薬剤は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。１つの態様では、薬剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマ又はラクダＩｇ）、ＶＨＨ断片、単一ドメインＦＶ及び単鎖抗体断片から選択される抗体断片である。１つの態様では、薬剤は、ｓｃＦＶ、ｄｓＦＶ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、カッパボディ、ＩｇＮＡＲ；及び多特異性抗体から選択される合成又は半合成抗体由来の分子である。
【００５９】
任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＦｃγ受容体、例えばＣＤ１６に対する実質的な特異的結合を示さない。任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、実質的な特異的結合を欠いており、或いはヒトＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ又はＣＤ６４の１つ若しくは複数又は全てに対する低い又は低減された特異的結合を有する。例示的な抗体は、Ｆｃγ受容体に結合しないか又は低い結合を有することが知られている様々な重鎖の定常領域を含み得る。１つのこのような例は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。一実施形態では、ＩｇＧ４抗体は、インビボでの半抗体の形成（ｆａｂアーム交換）を防ぐような修飾を含み、例えば、抗体は、ＥＵインデックスに従う２２８位に対応する残基２４１におけるセリンからプロリンへの突然変異を含むＩｇＧ４重鎖を含む（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  ｅｄ．，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＬ，１９９１）。このような修飾ＩｇＧ４抗体は、結合親和性を変化させ得る一価の様式でＮＫＧ２Ａに結合するようにインビボでｆａｂアーム交換を受ける天然ＩｇＧ４と対照的に、インビボで原形を保ち、ＮＫＧ２Ａへの二価（高親和性）結合を維持する。代わりに、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ’）２断片などの定常領域を含まない抗体断片を使用して、Ｆｃ受容体結合を回避することができる。Ｆｃ受容体結合は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて抗体のＦｃ受容体タンパク質への結合を試験することを含む、当技術分野において知られている方法に従って評価することができる。また、Ｆｃ受容体への結合を最小限又は除去するようにＦｃ部分が修飾された任意のヒト抗体タイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）を使用することもできる（例えば、参照によってその開示が本明細書に援用される国際公開第０３１０１４８５号パンフレットを参照されたい）。Ｆｃ受容体結合を評価するためのアッセイ、例えば細胞ベースのアッセイなどは、当技術分野において周知であり、例えば国際公開第０３１０１４８５号パンフレットに記載されている。
【００６０】
従って、本発明は、ＮＫＧ２Ａに結合する抗体又は他の薬剤に関する。１つの態様では、抗体は、ヒトＮＫＧ２Ｃ及び／又はＮＫＧ２Ｅに対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａに結合する。
【００６１】
本発明の１つの態様では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を妨害することにより、例えばＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ−Ｅの結合を妨害すること、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の立体構造変化を防止若しくは誘導すること並びに／又はＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の二量体化及び／若しくはクラスター化に影響することにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現リンパ球のＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ媒介性の阻害を低減する。
【００６２】
本発明の１つの態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。さらに好ましい態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも少なくとも１５０、２００、３００、４００又は１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。本発明の別の態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ及び／又はＮＫＧ２Ｈ分子に対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。さらに好ましい態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ及び／又はＮＫＧ２Ｈ分子に対するよりも少なくとも１５０、２００、３００、４００又は１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。これは、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ実験において測定することができ、固定化ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されるか又は生物系で産生される）の細胞外部分に結合する薬剤の能力が測定され、同じアッセイにおいて同様に生成されたＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及び／又は他のＣＤ９４／ＮＫＧ２変異体に対する薬剤の結合と比較される。代わりに、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを天然に発現するか、又は過剰発現（例えば、一過性又は安定したトランスフェクション後）する細胞への薬剤の結合が測定され、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及び／又は他のＣＤ９４／ＮＫＧ２変異体を発現する細胞の結合と比較され得る。抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、任意選択的に、ＣＤ９４と一緒に阻害性受容体を形成するＮＫＧ２Ａスプライス変異体であるＮＫＧ２Ｂと結合し得る。一実施形態では、親和性は、例えば、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書に援用される）の実施例８に示されるようにＢｉａｃｏｒｅによって共有結合で固定化されたＮＫＧ２Ａ−ＣＤ９４−Ｆｃ融合タンパク質への結合を評価することにより、米国特許第８，２０６，７０９号明細書に開示される方法を用いて測定することができる。
【００６３】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、例えば、例えばＶＨ１＿１８、ＶＨ５＿ａ、ＶＨ５＿５１、ＶＨ１＿ｆ及びＶＨ１＿４６から選択されるヒトアクセプター配列からのＶＨヒトアクセプターフレームワークと、ＪＨ６  Ｊ−セグメント又は当技術分野で知られている他のヒト生殖系ＶＨフレームワーク配列とを含むヒト化抗体であり得る。ＶＬ領域ヒトアクセプター配列は、例えば、ＶＫＩ＿Ｏ２／ＪＫ４であり得る。
【００６４】
一実施形態では、抗体は、抗体Ｚ２７０に基づくヒト化抗体である。種々のヒト化Ｚ２７０重鎖可変領域は、配列番号４〜８に示され、任意選択的にＣ末端セリン（Ｓ）残基をさらに含む。配列番号４のＨｕｍＺ２７０ＶＨ６可変領域は、ヒトＶＨ５＿５１遺伝子に基づき；配列番号５のＨｕｍＺ２７０ＶＨ１可変領域は、ヒトＶＨ１＿１８遺伝子に基づき；配列番号６のｈｕｍＺ２７０ＶＨ５可変領域は、ヒトＶＨ５＿ａ遺伝子に基づき；配列番号７のｈｕｍＺ２７０ＶＨ７可変領域は、ヒトＶＨ１＿ｆ遺伝子に基づき；配列番号８のｈｕｍＺ２７０ＶＨ８可変領域は、ヒトＶＨ１＿４６遺伝子に基づき；これらは、全てヒトＪＨ６  Ｊ−セグメントを有する。これらの抗体のそれぞれは、ＮＫＧ２Ａへの高親和性結合を保持しており、ヒト化構築物のそれぞれのＫａｂａｔ  Ｈ−ＣＤＲ２の６つのＣ末端アミノ酸残基がヒトアクセプターフレームワークと同一であるため、抗体に対する宿主免疫応答の可能性が低い。アライメントプログラムＶｅｃｔｏｒＮＴＩを用いて、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ１とｈｕｍＺ２７０ＶＨ５、−６、−７及び−８との間の以下の配列同一性を得た：７８，２％（ＶＨ１対ＶＨ５）、７９，０％（ＶＨ１対ＶＨ６）、８８，７％（ＶＨ１対ＶＨ７）及び９６，０％（ＶＨ１対ＶＨ８）。
【００６５】
１つの態様では、薬剤は、（ｉ）配列番号４〜８又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号９又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを含む。１つの態様では、薬剤は、（ｉ）配列番号１０〜１４のいずれかのアミノ酸配列又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００６６】
配列番号４〜８のいずれかの重鎖可変領域と、配列番号９の軽鎖可変領域とを有する抗体は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和するが、実質的に活性化受容体ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ又はＮＫＧ２Ｈに結合しない。さらに、この抗体は、細胞表面のＮＫＧ２Ａへの結合についてＨＬＡ−Ｅと競合する。１つの態様では、薬剤は、配列番号４〜８のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域に由来するＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及び／又はＨ−ＣＤＲ３配列を含む。本発明の１つの態様では、薬剤は、配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域に由来するＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及び／又はＬ−ＣＤＲ３配列を含む。
【００６７】
重鎖可変領域
ＶＨ６
【化２】
2021523170.tif 000004
ＶＨ１：
【化３】
2021523170.tif 000005
ＶＨ５：
【化４】
2021523170.tif 000006
ＶＨ７：
【化５】
2021523170.tif 000007
ＶＨ８：
【化６】
2021523170.tif 000008
【００６８】
軽鎖可変領域
【化７】
2021523170.tif 000009
【００６９】
重鎖（可変領域ドメインアミノ酸に下線）
ＶＨ６：
【化８】
2021523170.tif 000010
ＶＨ１：
【化９】
2021523170.tif 000011
ＶＨ５：
【化１０】
2021523170.tif 000012
ＶＨ７：
【化１１】
2021523170.tif 000013
ＶＨ８：
【化１２】
2021523170.tif 000014
【００７０】
軽鎖（可変領域ドメインアミノ酸に下線）
【化１３】
2021523170.tif 000015
【００７１】
モナリズマブ、重鎖及び軽鎖におけるＣＤＲ
Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従う重鎖ＣＤＲ：
Ｈ−ＣＤＲ１：ＳＹＷＭＮ（配列番号１６）
Ｈ−ＣＤＲ２：ＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹＡＱＫＬＱＧ（配列番号１７）
Ｈ−ＣＤＲ３：ＧＧＹＤＦＤＶＧＴＬＹＷＦＦＤＶ（配列番号１８）
Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従う軽鎖ＣＤＲ：
Ｌ−ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１９）
Ｌ−ＣＤＲ２：ＮＡＫＴＬＡＥ（配列番号２０）
Ｌ−ＣＤＲ３：ＱＨＨＹＧＴＰＲＴ（配列番号２１）
【００７２】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４〜８（又は配列番号１０〜１４）の残基３１〜３５に対応するＨ−ＣＤＲ１、配列番号４〜８（又は配列番号１０〜１４）の残基５０〜６０（任意選択的に、ヒト由来のアミノ酸を含む場合、５０〜６６）に対応するＨ−ＣＤＲ２及び配列番号４〜８（又は配列番号１０〜１４）の残基９９〜１１４（Ｋａｂａｔに従って９５〜１０２）に対応するＨ−ＣＤＲ３を含む抗体である。一実施形態では、配列番号４〜８（又は配列番号１０〜１４）の残基５０〜６６に対応するＨ−ＣＤＲ２である。任意選択的に、ＣＤＲは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるアミノ酸置換を含み得る。
【００７３】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号９又は１５の残基２４〜３４に対応するＬ−ＣＤＲ１、配列番号９又は１５の残基５０〜５６に対応するＬ−ＣＤＲ２及び配列番号９又は１５の残基８９〜９７に対応するＬ−ＣＤＲ３を含む抗体である。任意選択的に、ＣＤＲは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるアミノ酸置換を含み得る。
【００７４】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４〜８の残基３１〜３５に対応するＨ−ＣＤＲ１、配列番号４〜８の残基５０〜６０（任意選択的に５０〜６６）に対応するＨ−ＣＤＲ２及び配列番号４〜８の残基９９〜１１４（Ｋａｂａｔに従って９５〜１０２）に対応するＨ−ＣＤＲ３、配列番号９の残基２４〜３４に対応するＬ−ＣＤＲ１、配列番号９の残基５０〜５６に対応するＬ−ＣＤＲ２及び配列番号９の残基８９〜９７に対応するＬ−ＣＤＲ３を含む抗体である。
【００７５】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、それぞれ配列番号１６〜１８のアミノ酸配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号１９〜２１のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む抗体である。
【００７６】
１つの態様では、薬剤は、配列番号５の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号９の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する抗ＮＫＧ２Ａ抗体であるモナリズマブである。１つの態様では、薬剤は、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１５の軽鎖アミノ酸配列を有する抗ＮＫＧ２Ａ抗体であるモナリズマブである。
【００７７】
１つの態様では、薬剤は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨに由来するＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及び／又はＨ−ＣＤＲ３配列を含む。本発明の１つの態様では、薬剤は、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及び／又はＬ−ＣＤＲ３配列を含む。１つの態様では、薬剤は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨに由来するＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及び／又はＨ−ＣＤＲ３配列並びに配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及び／又はＬ−ＣＤＲ３配列を含む。配列番号２２の重鎖可変領域及び配列番号２３の軽鎖可変領域を有する抗体は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和し、また活性化受容体ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ又はＮＫＧ２Ｈに結合する。この抗体は、細胞表面のＮＫＧ２Ａへの結合についてＨＬＡ−Ｅと競合しない（すなわち、それは、ＮＫＧ２Ａの非競合的アンタゴニストである）。
【化１４】
2021523170.tif 000016
【化１５】
2021523170.tif 000017
【００７８】
１つの態様では、薬剤は、任意選択的に、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるアミノ酸置換を有する、重鎖可変（ＶＨ）ドメインのアミノ酸残基３１〜３５、５０〜６０、６２、６４、６６及び９９〜１０８（配列番号２２並びに軽鎖可変（ＶＬ）ドメインのアミノ酸残基２４〜３３、４９〜５５及び８８〜９６（配列番号２３）を含む。１つの態様では、薬剤は、ヒト化抗体、例えば開示内容が参照により本明細書に援用されるＰＣＴ公開番号国際公開第２００９／０９２８０５号パンフレットに開示される重鎖及び軽鎖可変領域を含む薬剤である。
【００７９】
１つの態様では、薬剤は、上記の抗体のいずれかが結合するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａエピトープに対して産生された完全ヒト抗体である。
【００８０】
上記の抗体を使用可能であるが、抗体がＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和を引き起す限り、他の抗体もＮＫＧ２Ａポリペプチドの任意の部分を認識して、それに対して産生され得ることが理解されるであろう。例えば、ＮＫＧ２Ａ、好ましくは（しかし、排他的ではない）ヒトＮＫＧ２Ａの任意の断片又はＮＫＧ２Ａ断片の任意の組み合わせを免疫原として使用して、抗体を産生させることができ、抗体は、本明細書に記載されるようにＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞においてそのようにできる限り、ＮＫＧ２Ａポリペプチド内の任意の位置のエピトープを認識することができる。任意選択的に、エピトープは、配列番号４〜８の重鎖可変領域及び配列番号９の軽鎖可変領域を有する抗体によって特異的に認識されるエピトープである。
【００８１】
１つの態様では、薬剤は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分への結合において、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書に援用される）に開示されるｈｕｍＺ２７０抗体と競合する。競合的結合は、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ実験において測定することができ、ｈｕｍＺ２７０で飽和された固定化ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されるか又は生物系で産生される）の細胞外部分に結合するための薬剤の能力が測定される。代わりに、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体を天然に発現するか、又は過剰発現（例えば、一過性又は安定したトランスフェクション後）する細胞（これは、飽和用量のＺ２７０と共にインキュベートされている）への薬剤の結合が測定される。一実施形態では、競合的結合は、例えば、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書に援用される）の実施例１５に示されるようにフローサイトメトリーによってＢａ／Ｆ３−ＣＤ９４−ＮＫＧ２Ａ細胞への結合を評価することにより、米国特許第８，２０６，７０９号明細書に開示される方法を用いて測定することができる。
【００８２】
ＰＤ−１中和剤
本明細書で使用される場合、「ＰＤ−１」という用語は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む、受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーであるタンパク質プログラム細胞死１（ＰＤ−１）（「プログラム細胞死１」とも呼ばれる）を指す。完全なヒトＰＤ−１配列は、以下のように示されるＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３において見出され得る。
【化１６】
2021523170.tif 000018
【００８３】
「ＰＤ−１」は、ＰＤ−１遺伝子又はコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体又はアイソフォームも含む。ＰＤ−１は、活性化されたＢ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞上で発現される（Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９−８２；Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０：７１１−８）。このファミリーの最初のメンバー、ＣＤ２８及びＩＣＯＳは、モノクローナル抗体の添加後のＴ細胞増殖の増大に対する機能的効果によって発見された（Ｈｕｔｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  ３９７：２６３−２６６；Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｓ  １０：２４７−２６０）。ＰＤ−１に対する２つのリガンドＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２が同定されており、これらは、ＰＤ−１への結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方は、ＰＤ−１に結合するが、他のＣＤ２８ファミリーメンバーに結合しないＢ７相同体である。
【００８４】
完全なヒトＰＤ−Ｌ１配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、識別子Ｑ９ＮＺＱ７−１で見出すことができ、以下のように示される。
【化１７】
2021523170.tif 000019
【００８５】
ＰＤ−Ｌ１は、様々なヒト癌で豊富にある（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用により、腫瘍浸潤リンパ球が減少し、Ｔ細胞受容体に媒介される増殖が減少し、癌性細胞による免疫回避が起こる（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００）。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することによって反転させることができ、この効果は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用が同様に遮断されるときに相加的である。
【００８６】
ＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−１を中和する薬剤であるか、又はヒトＰＤ−１の阻害活性を低下させる。本発明との関連において、「ヒトＰＤ−１の阻害活性を低下させる」、「ＰＤ−１を中和する」又は「ヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する」は、ＰＤ−１と、その結合パートナー（ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２など）の１つ又は複数との相互作用から生じる、ＰＤ−１のシグナル伝達能力が阻害されるプロセスを指す。ＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤は、ＰＤ−１と、その結合パートナー（ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２など）の１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を低減するか、遮断するか、阻害するか、抑止するか又は妨げる。それにより、このような薬剤は、増殖、サイトカイン産生及び／又は細胞毒性などのＴ細胞エフェクター機能を促進するように、Ｔリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減することができる。ＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−１及び／又はその結合パートナー、例えばＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の１つ又は複数と相互作用し得る。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合を阻害する抗ＰＤ−１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、免疫付着因子（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分を含む免疫付着因子である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、ＭＤＸ−１１０５及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標））からなる群から選択される。ＢＭＳ−９３６５５９としても知られているＭＤＸ−１１０５は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットに記載される抗ＰＤ−Ｌ１である。本発明の方法に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例及びその作製方法は、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１０／０７７６３４  Ａ１号パンフレット及び米国特許第８，２１７，１４９号明細書にも記載されている。
【００８９】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、デュルバルマブであるＰＤ−Ｌ１抗体である。デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、Ｉｍｆｉｎｚｉ（商標））は、ＰＤ−１及びＣＤ８０受容体の両方へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害することが可能である、ヒトＰＤ−Ｌ１に対するヒトモノクローナル抗体である。デュルバルマブに関連する開示は、参照により本明細書に援用される米国特許第８，７７９，１０８号明細書及び同第９，４９３，５６５号明細書に見出され得る。デュルバルマブは、アミノ酸配列配列番号２６及び配列番号２７のそれぞれの重鎖及び軽鎖を有する。デュルバルマブの重鎖可変領域は、配列番号２４に示され、デュルバルマブの軽鎖可変領域は、配列番号２５に示される。
【００９０】
別の実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−Ｌ１への結合についてデュルバルマブと競合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体（又はその抗原結合部分）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、デュルバルマブと同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、デュルバルマブと同じ重鎖及び軽鎖ＣＤＲを有する。
【００９１】
１つの態様では、ＰＤ−１中和剤（例えば、デュルバルマブに由来する薬剤）は、（ｉ）配列番号２４又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号２５又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む。１つの態様では、ＰＤ−１中和剤（例えば、デュルバルマブに由来する薬剤）は、（ｉ）配列番号２６又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一のアミノ酸配列の重鎖、及び（ｉｉ）配列番号２７又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一のアミノ酸配列の軽鎖を含む。１つの態様では、ＰＤ−１中和剤は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に由来するＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及び／又はＨ−ＣＤＲ３配列を含む。１つの態様では、ＰＤ−１中和剤は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域に由来するＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及び／又はＬ−ＣＤＲ３配列を含む。任意選択的に、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定される。
【００９２】
１つの態様では、ＰＤ−１中和剤は、それぞれ配列番号２８〜３０のアミノ酸配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号３１〜３３のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３ドメインを含む。
【００９３】
デュルバルマブの重鎖可変領域：
【化１８】
2021523170.tif 000020
【００９４】
デュルバルマブの軽鎖可変領域
【化１９】
2021523170.tif 000021
【００９５】
デュルバルマブの重鎖（可変領域に下線）
【化２０】
2021523170.tif 000022
【００９６】
デュルバルマブの軽鎖（可変領域に下線）
【化２１】
2021523170.tif 000023
【００９７】
デュルバルマブ、重鎖ＣＤＲ：
Ｈ−ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳ（配列番号２８）
Ｈ−ＣＤＲ２：ＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２９）
Ｈ−ＣＤＲ３：ＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹ配列番号３０）
【００９８】
デュルバルマブ、軽鎖ＣＤＲ：
Ｌ−ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号３１）
Ｌ−ＣＤＲ２：ＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号３２）
Ｌ−ＣＤＲ３：ＱＱＹＧＳＬＰＷＴ（配列番号３３）
【００９９】
別の実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）、ＣＡＳ登録番号１４２２１８５−０６−５）である抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。任意選択的に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アミノ酸配列：
【化２２】
2021523170.tif 000024
又は
【化２３】
2021523170.tif 000025
を含む重鎖可変領域並びにアミノ酸配列：
【化２４】
2021523170.tif 000026
を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１００】
１つの態様では、ＰＤ−１中和剤は、（ｉ）配列番号３７又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一のアミノ酸配列の重鎖若しくは重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号３８又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一のアミノ酸配列の軽鎖若しくは軽鎖可変領域を含む。
【化２５】
2021523170.tif 000027
【化２６】
2021523170.tif 000028
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合を阻害する抗ＰＤ−１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブ（「ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）」としても知られている；以前には５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６又はＯＮＯ−４５３８と示されていた）は、ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）との相互作用を選択的に防止し、それにより抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を阻害する完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤抗体である（米国特許第８，００８，４４９号明細書；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２（９）：８４６−５６）。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体又はそのフラグメントは、ＰＤ−１への結合についてニボルマブと競合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブと同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブと同じ重鎖及び軽鎖ＣＤＲを有する。
【０１０２】
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（「ＫＥＹＴＲＵＩＤＡ（登録商標）」、ランブロリズマブ及びＭＫ−３４７５としても知られている）は、ヒト細胞表面受容体ＰＤ−１に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペンブロリズマブは、例えば、米国特許第８，９００，５８７号明細書）に記載されている。ペンブロリズマブは、再発性又は難治性黒色腫及び進行ＮＳＣＬＣの処置についてＦＤＡによって認可されている。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体（又はその抗原結合部分）は、ＰＤ−１への結合についてペンブロリズマブと競合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブと同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブと同じ重鎖及び軽鎖ＣＤＲを有する。
【０１０３】
抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤又はＰＤ−１中和剤は、１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌの濃度で医薬製剤中に取り込むことができ、ここで、前記製剤は、２．０〜１０．０のｐＨを有する。ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤は、同じであるか又は別個の医薬製剤に含まれ得る。製剤は、緩衝系、保存剤、等張化剤、キレート剤、安定剤及び界面活性剤をさらに含み得る。一実施形態では、医薬製剤は、水性製剤、すなわち水を含む製剤である。このような製剤は、通常、溶液又は懸濁液である。さらなる実施形態では、医薬製剤は、水溶液である。「水性製剤」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む製剤であると定義される。同様に、「水溶液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液であると定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液であると定義される。
【０１０４】
別の実施形態では、医薬製剤は、凍結乾燥製剤であり、使用前に医師又は患者によって溶媒及び／又は希釈剤が添加される。
【０１０５】
別の実施形態では、医薬製剤は、事前に溶解することなく直ちに使用可能な乾燥製剤（例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥）である。
【０１０６】
さらなる態様では、医薬製剤は、このような抗体及び緩衝剤の水溶液を含み、ここで、抗体は、１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で存在し、前記製剤は、約２．０〜約１０．０のｐＨを有する。
【０１０７】
別の実施形態では、製剤のｐＨは、約２．０〜約１０．０、約３．０〜約９．０、約４．０〜約８．５、約５．０〜約８．０及び約５．５〜約７．５からなるリストから選択される範囲内である。
【０１０８】
さらなる実施形態では、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム及びトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はこれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の緩衝剤のそれぞれは、本発明の代替実施形態を構成する。
【０１０９】
さらなる実施形態では、製剤は、薬学的に許容可能な保存剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は、等張剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は、キレート剤も含む。本発明のさらなる実施形態では、製剤は、安定剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は、界面活性剤をさらに含む。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。
【０１１０】
本発明の医薬製剤中に他の成分が存在することも可能である。このような付加的な成分には、湿潤剤、乳化剤、酸化防止剤、増量剤、浸透圧調整剤、キレート剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）及び双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン及びヒスチジンなどのアミノ酸）が含まれ得る。このような付加的な成分は、当然ながら、本発明の医薬製剤の全体的な安定性に悪影響を与えてはならない。
【０１１１】
本発明に係る医薬組成物の投与は、いくつかの投与経路（例えば、静脈内）を介して行われ得る。また、適切な抗体製剤は、他の既に開発された治療用モノクローナル抗体による経験を検討することにより決定することができる。
【０１１２】
キットも提供され、例えば、キットは、
（ｉ）抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤及び抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤を含有する医薬組成物、又は
（ｉｉ）抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤を含有する第１の医薬組成物及び抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤を含有する第２の医薬組成物、又は
（ｉｉｉ）抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤を含有する医薬組成物及び抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤と共に前記ＮＫＧ２Ａ中和剤を投与するための使用説明書、又は
（ｉｖ）抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤を含有する医薬組成物及び抗ＮＫＧ２Ａ抗体などのＮＫＧ２Ａ中和剤と共に前記ＰＤ−１中和剤を投与するための使用説明書
を含む。
【０１１３】
医薬組成物は、任意選択的に、薬学的に許容可能な担体を含むものと規定され得る。ＮＫＧ２Ａ又はＰＤ−１中和剤は、任意選択的に、本明細書における方法のいずれかに使用するために適合された治療的に有効な量で存在するものと規定され得る。キットは、実践者（例えば、医師、看護師又は患者）が、このキットに含まれる組成物を、癌（例えば、固形腫瘍、特にＤＮＡミスマッチ修復欠損でなく、且つ／又は２つ以上のマイクロサテライトマーカーにおいて検出されるマイクロサテライト不安定性を有さない腫瘍）を有する患者に投与することを可能にする使用説明書（例えば、投与スケジュールを含む）も任意選択的に含み得る。任意の実施形態では、キットは、任意選択的に、前記ＮＫＧ２Ａ中和剤を前記ＰＤ−１中和剤と同時に、別々に又は連続的に投与するための使用説明書を含み得る。キットは、シリンジも含み得る。
【０１１４】
任意選択的に、キットは、上に示される方法に従う単回投与のために、有効量のＮＫＧ２Ａ中和剤及び／又は抗ＰＤ−１若しくはＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１中和剤をそれぞれ含有する単回用量の医薬組成物の複数のパッケージを含む。医薬組成物を投与するのに必要な機器又はデバイスもキットに含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗ＮＫＧ２Ａ、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含有する１つ又は複数の予め充填されたシリンジを提供し得る。
【０１１５】
一実施形態では、本発明は、ヒト患者の癌又は腫瘍を処置するためのキットであって、前記癌又は腫瘍は、ＭＳＩ−Ｈでなく、且つ／又はＤＮＡミスマッチ修復欠損でなく、キットは、
（ａ）配列番号４〜８のいずれかに記載される配列を有する重鎖可変領域のＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号９に記載される配列を有する軽鎖可変領域のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体；及び／又は
（ｂ）ある用量の抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体、任意選択的にある用量のデュルバルマブ、任意選択的にデュルバルマブの重鎖及び軽鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン、任意選択的に配列番号２４に記載される配列を有する重鎖可変領域のＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号２５に記載される配列を有する軽鎖可変領域のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体；並びに
（ｃ）任意選択的に、本明細書に記載される方法のいずれかにおいて前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び／又は前記抗ＰＤ−１若しくはＰＤ−Ｌ１抗体を使用するための使用説明書
を含む、キットを提供する。
【０１１６】
一実施形態では、本発明は、ヒト患者の癌又は腫瘍を処置するためのキットであって、前記癌又は腫瘍は、ＭＳＩ−Ｈでなく、且つ／又はＤＮＡミスマッチ修復欠損でなく、キットは、
（ａ）それぞれ配列番号１６〜１８の配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号１９〜２１の配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体；及び／又は
（ｂ）それぞれ配列番号２８〜３０のアミノ酸配列を有する重鎖Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号３１〜３３のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体；並びに
（ｃ）任意選択的に、本明細書に記載される方法のいずれかにおいて前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び／又は前記抗ＰＤ−１若しくはＰＤ−Ｌ１抗体を使用するための使用説明書
を含む、キットを提供する。
【０１１７】
悪性腫瘍の診断、予後及び処置
ＤＮＡミスマッチ修復欠損でなく、且つ／又はマイクロサテライト安定性である腫瘍によって特徴付けられる癌、特に大腸癌、任意選択的に進行した再発性又は転移性大腸癌の診断、予後、監視及び処置において有用な方法が記載される。本明細書で使用される場合、大腸癌（ＣＲＣ）は、結腸癌、直腸癌及び大腸癌（結腸部及び直腸部の両方の癌）を指す。
【０１１８】
マイクロサテライトは、ゲノム全体に分布しているＤＮＡの反復配列である。これらのマイクロサテライトの長さは、個人間で大きく異なるが、各個人は、一定の長さのマイクロサテライトを有する。これらの反復配列は、一般的であり、正常である。ヒトにおいて最もよく見られるマイクロサテライトは、ＣＡのジヌクレオチドリピートであり、これは、ゲノムにわたって何万回も発生する。しかしながら、ＤＮＡ修復遺伝子の突然変異を有する細胞において、これらの配列の一部は、エラーを蓄積し、より長く又はより短くなる。個人のＤＮＡ中の異常に長い又は短いマイクロサテライトの発生は、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）と呼ばれる。マイクロサテライト不安定性は、ＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）障害に起因する遺伝的易変異性の状態である。マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）の存在は、ＭＭＲが正常に機能していないことの表現型エビデンスを表す。マイクロサテライト不安定性の非存在は、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）と呼ばれる。
【０１１９】
ＭＳＩは、大腸癌、子宮内膜癌、卵巣癌及び胃癌を含むいくつかの癌の主要な要因である（Ｓｏｒｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ９３：３９５−４０６；Ａｌｉ−Ｆｅｈｍｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２５：２２３−２２９；Ｖａｕｈｋｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０：６５１−６７４）。
【０１２０】
大腸癌研究は、ＭＳＩ発生のための２つの機構を実証した。第１の機構は、遺伝性非ポリポーシス大腸癌（ＨＮＰＣＣ）又はリンチ症候群にあり、ＤＮＡミスマッチ修復遺伝子の遺伝性突然変異により、マイクロサテライトリピート複製エラーが修正されなくなる。複製エラーは、主要な腫瘍抑制遺伝子、最終的に癌の予防を不活性化するか又は変化させるフレームシフト突然変異をもたらす。ＭＳＩが大腸癌を引き起こす第２の機構は、重要なＤＮＡミスマッチ修復遺伝子をサイレンシングするエピジェネティックな変化である。いずれの場合も、腫瘍抑制遺伝子コード領域内のマイクロサテライトの挿入及び欠失は、無制御な細胞分裂及び腫瘍成長をもたらす。
【０１２１】
５つのマーカーは、ＨＮＰＣＣ腫瘍におけるＭＳＩについてスクリーニングするためにアメリカ国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）によって推奨されている（「Ｂｅｔｈｅｓｄａマーカー」と呼ばれることが多い）。ＭＳＩ存在のこれらの５つのマーカーは、２つのモノヌクレオチドリピートＢＡＴ２５及びＢＡＴ２６並びに３つのジヌクレオチドリピートＤ５Ｓ３４６、Ｄ２Ｓ１２３及びＤ１７Ｓ２５０である（Ｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ９６：２６１−２６８）。一般に、５つの「Ｂｅｔｈｅｓｄａマーカー」の２つにおけるＭＳＩ検出が陽性結果又は高確率のＭＳＩ（ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ又はＭＳＩ−Ｈ）と見なされる。生体サンプル中のＭＳＩを検出するための標準方法としては、それらの感受性及び特異性のために選択される５つのモノヌクレオチドマーカーを含むＰｒｏｍｅｇａ（商標）のマイクロサテライト不安定性アッセイ（ＭＳＩ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）の使用が挙げられ、これらの５つのマーカーは、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及びＭＯＮＯ２７である（Ｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ２０：２３７−２５０）。
【０１２２】
ほとんどの場合、ＭＳＩ腫瘍における不安定性の遺伝的基盤は、５つのヒトＭＭＲ遺伝子：ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６、ＰＭＳ２及びＰＭＳ１のいずれか１つ又は複数の遺伝的な生殖細胞系列の変化である。
【０１２３】
選択されたテトラヌクレオチドリピートにおける増加したマイクロサテライト変化（ＥＭＡＳＴ）と呼ばれる別のＭＳＩが最近発見された。しかしながら、ＥＭＡＳＴは、ＭＭＲに由来しない点で独特であり、それは、一般的に、ＴＰ５３突然変異に関連している（Ｂｏｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １３８（６）：２０７３−２０８７）。
【０１２４】
従って、腫瘍におけるマイクロサテライト不安定性は、マイクロサテライトマーカー及び／又はＭＭＲ遺伝子を評価することによって決定され得る。
【０１２５】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤の組み合わせで処置される個人は、不安定性（ＭＳＳ）を有さず、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２遺伝子又はタンパク質（任意選択的にさらなるＰＭＳ１）のいずれにおいても変化（例えば、突然変異、発現の欠損）を有さない。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本発明は、個人において腫瘍、例えば結腸直腸腫瘍を処置する方法であって、（ｉ）ＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有する個人を同定するステップと、（ｉｉ）有効量のＮＫＧ２Ａ中和剤及び有効量のＰＤ−１中和剤を個人に投与するステップとを含む方法を含む。任意選択的に、個人は、マイクロサテライト不安定性を有さず（ＭＳＳ安定性である）、且つＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ６及びＰＭＳ２遺伝子又はタンパク質のいずれにおいても変化を有さない腫瘍を有する。
【０１２７】
腫瘍のＤＮＡミスマッチ修復ステータス、任意選択的に個人のＭＭＲステータス及び／又はマイクロサテライトステータスは、任意の組成物を投与するか又は本明細書に開示される任意の方法を用いる前に測定され得る。
【０１２８】
個人、例えば生検からの生体サンプルが入手され、評価され得る。ＭＭＲステータス及び／又はマイクロサテライトステータスは、当技術分野において公知の任意の方法によって決定され得る。例えば、Ｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ２００４；９６（４）：２６１−２６８及びＢａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ２００４；２０：２３７−２５０を参照されたい。一実施形態では、ＭＭＲステータスは、以下のタンパク質：ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６又はＰＭＳ２のいずれか１つ又は複数の発現の存在又は非存在を実証する免疫組織化学的分析によって評価される。一実施形態では、マイクロサテライトステータスは、マイクロサテライトマーカー、例えばＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４、ＭＯＮＯ２７、Ｄ５Ｓ３４６、Ｄ２Ｓ１２３及びＤ１７Ｓ２５０において高頻度マイクロサテライト不安定性を検出することによって評価される。一実施形態では、２つ以上のマイクロサテライトマーカー、例えばＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４及び／又はＭＯＮＯ２７について検出されるマイクロサテライト不安定性は、ＭＳＩ−Ｈステータスを示す一方、単一のＭＳＩマーカーについてのマイクロサテライト不安定性又は試験されるＭＳＩマーカーのいずれについても不安定性を有さないことは、それぞれ低マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｌ）及びマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）として解釈される。
【０１２９】
一実施形態では、ＤＮＡミスマッチ修復欠損でないか又はＭＳＳである腫瘍は、マイクロサテライト不安定性を有さないか、又は２つ未満以上のマイクロサテライトマーカー、例えばＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４又はＭＯＮＯ２７において検出されるマイクロサテライト不安定性を有し、且つタンパク質ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６又はＰＭＳ２のいずれか１つ又は複数におけるタンパク質発現の非存在を有さない。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本発明は、個人において腫瘍、例えば結腸直腸腫瘍を処置する方法であって、（ｉ）ＭＳＳ腫瘍を有する個人を同定するステップと、（ｉｉ）有効量のＮＫＧ２Ａ中和剤を個人に投与し、任意選択的に有効量のＰＤ−１中和剤を個人にさらに投与するステップとを含む方法を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍、例えば結腸直腸腫瘍を処置する方法であって、（ｉ）ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ（ＭＳＩ−Ｈ）腫瘍（例えば、ＭＳＳ又はＭＳＩ−Ｌｏｗ腫瘍）でない腫瘍を有する個人を同定するステップと、（ｉｉ）有効量のＮＫＧ２Ａ中和剤を個人に投与し、任意選択的に有効量のＰＤ−１中和剤を個人にさらに投与するステップとを含む方法を提供する。
【０１３１】
一実施形態では、ＭＳＩ−Ｈ腫瘍は、少なくとも約３０％超の不安定ＭＳＩマーカーを有する。一実施形態では、ＭＳＩ−Ｌ腫瘍は、不安定ＭＳＩマーカーを有するが、前記腫瘍のＭＳＩマーカーの約１０％未満、約２０％未満又は約３０％未満が不安定ＭＳＩマーカーである。一実施形態では、ＭＳＳ腫瘍は、不安定ＭＳＩマーカーを有さない。いくつかの実施形態では、試験されるＭＳＩマーカーの約３０％未満、約２０％未満又は約１０％未満が不安定性を示すとき、大腸癌は、ＭＳＩ−Ｌである。いくつかの実施形態では、試験されるＭＳＩマーカーが不安定性を示さないとき、大腸癌は、ＭＳＳである。
【０１３２】
特定の実施形態では、本発明は、ＭＳＩ−Ｌ又はＭＳＳである癌を処置する方法に関する。
【０１３３】
特定の実施形態では、本発明は、癌を処置する方法であって、１）腫瘍のマイクロサテライトステータスを特定するステップと、２）マイクロサテライトステータスに基づいて、治療剤（例えば、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤）を対象に投与するステップとを含む方法に関する。他の実施形態では、対象は、ＭＳＩ−Ｌを有する。実施形態では、患者は、ＭＳＩ安定性である。
【０１３４】
非ＤＮＡミスマッチ修復欠損腫瘍を有する個人を処置するとき、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物（例えば、抗体）は、有利には、本明細書に記載される処置レジメンに従い、任意選択的に癌細胞を除去するための手術を受けたか又は受けている、癌を有する個人に投与することができる。癌、特にＣＲＣ及びｍＣＲＣに罹患した対象を処置するために、任意選択的にＰＤ−１中和剤、例えば中和抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の非存在下で又は任意選択的にそれらと併用した中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体である。一実施形態では、本発明は、固形腫瘍（例えば、固形腫瘍、進行した難治性固形腫瘍）を有する対象を処置するために、抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び任意選択的にさらに組み合わせて抗ＰＤ−１抗体を提供する。特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４〜８のいずれかの重鎖可変領域及び配列番号９の軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ及びＭＰＤＬ３２８０Ａ、特にデュルバルマブからなる群から選択される。
【０１３５】
本明細書で使用される場合、補助的又は併用投与（同時投与）には、同一若しくは異なる剤形における化合物の同時投与又は化合物の別々の投与（例えば、連続投与）が含まれる。従って、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、ＰＤ−１中和剤と併用され得る。例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、単一の製剤において同時に投与することができる。代わりに、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤は、別々の投与のために処方されることが可能であり、同時又は連続的に投与される。
【０１３６】
任意選択的に、個人は、耐性、非応答性である癌、手術及び／又は治療剤、例えば化学療法剤又は放射線療法による処置にもかかわらず、（例えば、その間又はその後に）再発及び／又は進行した癌を有し得る。本明細書の任意の実施形態では、処置応答は、周知の基準、例えば固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）（第１．１版など）に従って定義及び／又は評価することができ、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４５：２２８−２４７又はＩｍｍｕｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ｉｒＲＣ）を参照されたく、Ｗｏｌｃｈｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １５：７４１２−７４２０を参照されたい。
【０１３７】
別の実施形態では、本開示は、ＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有する個人においてＣＲＣの処置又は予防のための方法であって、
ａ）ＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有する個人を同定し、任意選択的に個人から腫瘍細胞を含む生体サンプルを取得し、腫瘍がＤＮＡミスマッチ修復欠損であるかどうかを決定するステップと、
ｂ）個人からのサンプル中のＰＤ−Ｌ１を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞、腫瘍浸潤免疫細胞、腫瘍浸潤マクロファージ）を検出するステップと、
ｃ）ＰＤ−Ｌ１を発現する細胞がサンプルに含まれることが決定される際、ＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤を個人に投与するステップと
を含む方法を提供する。ＰＤ−Ｌ１基準レベルは、任意の好適な従来使用される基準レベルによって特徴付けられ得る。（例えば、免疫組織化学に基づくアッセイを用いて）例えば腫瘍細胞又は腫瘍組織サンプルに由来する細胞の１％以上、任意選択的に５％以上、任意選択的に１０％以上、任意選択的に５０％以上がＰＤ−Ｌ１を発現する場合である。このようなアッセイの例としては、Ｄａｋｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  Ａ／Ｓ製のｐｈａｒｍＤｘによるＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣ  ２２Ｃ３アッセイが挙げられる。このアッセイでは、ＰＤ−Ｌ１発現レベルは、腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、ＰＤ−Ｌ１についての腫瘍細胞染色の割合（０％〜１００％）を用いて測定される。任意選択的に、基準レベルは、非高ＰＤ−Ｌ１発現のレベルであり、任意選択的に５０％未満の腫瘍細胞がＰＤ−Ｌ１を発現する（例えば、患者は、５０％未満のＴＰＳを有する）。
【０１３８】
本明細書に記載される処置レジメン及び方法は、個人から得られる生体サンプル（例えば、癌細胞、癌組織又は癌隣接組織を含む生体サンプル）中の細胞におけるＨＬＡ−Ｅの発現を検出する前のステップを伴うか又は伴わずに使用され得る。一実施形態では、本明細書に開示される方法で処置される癌は、高レベルのＨＬＡ−Ｅによって特徴付けられる癌である。しかしながら、癌を有する患者は、腫瘍細胞の表面上のＨＬＡ−Ｅの発現を評価するために、前の検出ステップを伴うか又は伴わずにＮＫＧ２Ａ中和剤で処置され得ることが理解されるであろう。有利には、処置方法は、個人からの腫瘍の生体サンプル中（例えば、腫瘍細胞上）のＨＬＡ−Ｅ核酸又はポリペプチドを検出するステップを含み得る。生体サンプルがＨＬＡ−Ｅを発現する（例えば、著しく発現する；基準と比較して高レベルでＨＬＡ−Ｅを発現する、抗ＨＬＡ−Ｅ抗体による高い強度の染色）という決定は、個人が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤による処置から強力な利益を有し得る癌を有することを示す。一実施形態では、本方法は、生体サンプル中のＨＬＡ−Ｅ核酸又はポリペプチドの発現のレベルを決定し、このレベルを健常者に対応する基準レベル（例えば、値、弱い細胞表面染色など）と比較するステップを含む。生体サンプルが基準レベルと比較して増加したレベルでＨＬＡ−Ｅ核酸又はポリペプチドを発現するという決定は、個人が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得る癌を有することを示し得る。
【０１３９】
個人が、ＨＬＡ−Ｅポリペプチドを発現する癌細胞を有するかどうかの決定は、例えば、癌細胞を含む個人からの生体サンプルを入手（例えば、生検の実施により）し、前記細胞を、ＨＬＡ−Ｅポリペプチドに結合する抗体と接触させ、且つ細胞がその表面上でＨＬＡ−Ｅを発現するかどうかを検出することを含み得る。任意選択的に、個人が、ＨＬＡ−Ｅを発現する癌細胞を有するかどうかの決定は、免疫組織化学アッセイを実行することを含む。任意選択的に、個人が、ＨＬＡ−Ｅを発現する癌細胞を有するかどうかの決定は、フローサイトメトリーアッセイを実行することを含む。
【０１４０】
この処置方法では、ＮＫＧ２Ａ中和剤が抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用して投与されるとき、ＮＫＧ２Ａ中和剤及び抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、別々に、一緒に若しくは順次又は混液で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与前に投与される。例えば、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約０〜３０日前に投与され得る。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約３０分間〜約２週間、約３０分間〜約１週間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜１日又は約１〜５日前に投与される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与と同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与後に投与される。例えば、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約０〜３０日後に投与され得る。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約３０分間〜約２週間、約３０分間〜約１週間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜１日又は約１〜５日後に投与される。
【０１４１】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体でヒトを処置するための例示的な処置プロトコルは、例えば、ＮＫＧ２Ａを阻害する抗体を有効量で患者に投与するステップを含み、本方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、ここで、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、投与サイクルは、２週間〜８週間である。
【０１４２】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体でヒトを処置するための例示的な処置プロトコルは、例えば、ＮＫＧ２Ａを阻害する抗体及びヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体のそれぞれを有効量で患者に投与するステップを含み、本方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、ここで、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重又は１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、少なくとも１回の用量の抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体が１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、投与サイクルは、２週間〜８週間である。
【０１４３】
一実施形態では、本方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、サイクルは、８週間以下の期間であり、少なくとも１回のサイクルのそれぞれについて、２回、３回又は４回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、各サイクルは、１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量での２回、３回又は４回の用量の抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与をさらに含む。
【０１４４】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、（例えば、ＰＢＭＣにおいて、ＮＫＧ２Ａ発現細胞に対して抗ＮＫＧ２Ａ抗体を漸増させることによって評価される際に）実質的に完全な（例えば、９０％、９５％）受容体飽和に必要な濃度の少なくとも１０、２０若しくは３０倍高い循環濃度を達成する量において、又は任意選択的に（例えば、ＰＢＭＣにおいて、ＮＫＧ２Ａ発現細胞に対して抗ＮＫＧ２Ａ抗体を漸増させることによって評価される際に）実質的に完全な受容体飽和に必要な濃度の少なくとも１０、２０若しくは３０倍高い血管外組織（例えば、腫瘍組織又は環境）中での濃度を達成する量において有利に投与され得る。
【０１４５】
ＮＫＧ２Ａ＋  ＮＫ細胞応答は、ＨＬＡ−Ｅ発現標的細胞に対するＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞の細胞傷害活性の好適なアッセイを用いて評価され得る。例としては、ＮＫ細胞活性化のマーカー、例えばＣＤ１０７又はＣＤ１３７発現に基づくアッセイが挙げられる。有利には、少なくとも１０μｇ／ｍｌの連続（最低）組織濃度を達成及び／又は維持するような量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与され得る。例えば、組織中の１０μｇ／ｍｌを達成／維持するために達成及び／又は維持される血中濃度は、１００〜１１０μｇ／ｍｌ、１００〜１２０μｇ／ｍｌ、１００〜１３０μｇ／ｍｌ、１００〜１４０μｇ／ｍｌ、１００〜１５０μｇ／ｍｌ、１００〜２００μｇ／ｍｌ、１００〜２５０μｇ／ｍｌ又は１００〜３００μｇ／ｍｌであり得る。
【０１４６】
約１０μｇ／ｍｌのＮＫＧ２Ａ＋  ＮＫ細胞応答についてのＥＣ１００を有する、本明細書の実施例において使用されるｈｕｍＺ２７０（モナリズマブ）などの抗ＮＫＧ２Ａ抗体のための例示的な処置プロトコルは、少なくとも１回の投与サイクルを含み、ここで、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が約１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２〜８ｍｇ／ｋｇ又は任意選択的に２〜４ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。任意選択的に、少なくとも２、３、４、５、６、７又は８回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与される。一実施形態では、投与サイクルは、２週間〜８週間である。一実施形態では、投与サイクルは、８週間である。一実施形態では、投与サイクルは、８週間であり、２週間毎に１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体（すなわち合計で４回の用量）を投与することを含む。
【０１４７】
本明細書の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約２週間毎に１回投与される。
【０１４８】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用するための例示的な処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与間において、少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１ヶ月に２回、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、２〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２〜４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ体重である。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を提供するように投与され得る。４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成することは、約４μｇ／ｍｌの組織（例えば、血管外組織、腫瘍環境）濃度を提供することが予測され、これは、従って、ヒト化Ｚ２７０（モナリズマブ）などの抗体についてのＥＣ５０に対応する。
【０１４９】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用するための例示的な処置プロトコルは、例えば、有効量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、抗体は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与間において、少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１ヶ月に２回投与され、４〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４〜８ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約８ｍｇ／ｋｇ又は任意選択的に約１０ｍｇ／ｋｇである。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を提供するように投与され得る。１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成することは、約１０μｇ／ｍｌの組織（例えば、血管外、腫瘍環境）濃度を提供することが予測され、これは、従って、ヒト化Ｚ２７０などの抗体についてのＥＣ１００に対応する。
【０１５０】
特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ）の用量（例えば、各用量）が０．１、０．３、１、３、４、６、８又は１０ｍｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ）の用量（例えば、各用量）が７．５ｍｇ、２２．５ｍｇ、７５ｍｇ、２２５ｍｇ又は７５０ｍｇの一定の用量で投与され、任意選択的に２週間毎に投与される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体の用量（例えば、各用量）が１〜２０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に１０ｍｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）の用量（例えば、各用量）が１０、１５、２０又は２５ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に７５０ｍｇの総用量、任意選択的に１５００ｍｇの総用量で投与され、任意選択的に４週間毎に投与される。特定の実施形態では、併用療法により、抗ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１抗体をより低い用量で投与することが可能となる。
【０１５１】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、以下の用量で投与される：
（ａ）０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び（ｉ）１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体又は（ｉｉ）１〜２０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体；
（ｂ）１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体及び（ｉ）１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体又は（ｉｉ）１〜２０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体；
（ｃ）２２５ｍｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ）及び７５０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）；
（ｄ）７５０ｍｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ）及び７５０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）；
（ｅ）２２５ｍｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ）及び１５００ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）；又は
（ｆ）７５０ｍｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ）及び１５００ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）。
【０１５２】
本明細書の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約２週間毎に１回、任意選択的に４週間毎に１回投与される。本明細書の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、約４週間毎に１回投与される。
【０１５３】
一実施形態では、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び／若しくは抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、静脈内（ｉ．ｖ．）投与される。一実施形態では、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、４週間毎に投与され、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、２週間毎に投与され、ここで、４週間毎に、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体及びＮＫＧ２Ａ抗体は、同日に投与され、任意選択的にさらに静脈内（ｉ．ｖ．）投与される。
【０１５４】
一実施形態では、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤（及び任意選択的にさらにヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤）による処置に個人が適しているかどうかを評価するための方法であって、個人からの生体サンプルにおいて腫瘍ＤＮＡミスマッチ修復ステータスを評価するステップを含む方法が提供される。個人が、ＤＮＡミスマッチ修復欠損でない腫瘍を有するという決定は、患者が、任意選択的に、さらにヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得る癌を有することを示す。一実施形態では、本方法は、本明細書に開示される投与レジメンに従って投与される、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤及びヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤による処置に個人が適しているかどうかを評価するのに使用される。
【０１５５】
別の態様では、癌の進行のリスクを低下させ、ＣＲＣ、任意選択的にｍＣＲＣにおけるさらなる癌のリスクを低下させ、且つ／又はヒト個人における癌の進行を低減するための治療レジメンを提供する方法であって、本開示に従う投与量及び頻度である量のＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を患者に投与するステップを含む方法が提供される。さらなる態様では、ヒト患者などの個人において癌、特に大腸癌の寛解を促進する方法であって、個人における癌の寛解を促進するように、本開示に従う投与量及び頻度において、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を含む医薬組成物を個人に投与するステップを含む方法が提供される。さらなる態様では、ヒト患者などの個人において癌、特に大腸癌の再発を防止する方法であって、癌は、以前の抗癌治療後、寛解期にあり、方法は、個人における癌の寛解を促進するように、本開示に従う投与量及び頻度において、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を含む組成物を個人に投与するステップを含む、方法が提供される。さらなる態様では、癌、特に大腸癌と診断されたヒト患者において関連する期間にわたる生存の可能性を高める方法であって、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を含む医薬組成物を患者に投与するステップを含む方法が提供される。別の態様では、癌患者のクオリティオブライフを改善するための方法であって、患者のクオリティオブライフを改善するのに有効な量において、ＮＫＧ２Ａ中和剤及びＰＤ−１中和剤を含む医薬組成物を患者に投与するステップを含む方法が提供される。さらなる態様では、本明細書に記載される方法は、例えば、癌細胞の総数が減少されるようにヒトにおける癌細胞の数を有意に減少させるために適用され得る。関連する意味において、ヒト癌患者などの哺乳類における癌細胞、特に大腸癌細胞を死滅させる（例えば、そのような細胞の死亡を直接又は間接的に引き起こす）方法が提供される。本明細書に記載される方法のさらに他の実施形態では、前記個人は、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ（ＭＳＩ−Ｈ）でなく、且つ／又はＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）欠損でない腫瘍を有する。
【０１５６】
ＰＤ−１中和剤と併用したＮＫＧ２Ａ中和剤は、１つ又は複数のさらなる治療剤又は治療との併用投与（同時投与）で投与され得る。
【実施例】
【０１５７】
実施例１：用量設定は、モナリズマブと併用したデュルバルマブの第１相多施設共同、非盲検、単群用量漸増及び用量拡大試験である。
モナリズマブ（ＷＨＯ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１，２０１６を参照されたい；ＩＰＨ２２０１とも呼ばれる；配列番号１１の重鎖及び配列番号１５の軽鎖を有する抗体）と併用したデュルバルマブの第１相、多施設共同、非盲検、単群用量漸増及び用量拡大試験を、選択された進行した固形腫瘍を有する成人対象における安全性、忍容性、ＰＫ、免疫原性、薬力学及び抗腫瘍活性を評価するために行った。試験は、２つのパート：用量漸増及び用量拡大からなっていた。
【０１５８】
対象に２回の別個の静脈内（ＩＶ）注入によってデュルバルマブ及びモナリズマブを投与した。対象に対して、許容できない毒性、確定進行（ＰＤ）の証明又は別の理由による対象の離脱の証明までデュルバルマブ及びモナリズマブを投与した。
【０１５９】
組み入れ基準には、以下が含まれる：
１．対象は、進行した再発性又は転移性癌が組織学的に証明されていなければならない。
２．対象は、選択された進行した固形腫瘍を有し、再発性／転移性状況において、少なくとも１回の標準的な全身治療を受けて、増悪又は難治性を示していなければならない。
３．対象は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１によって測定可能な少なくとも１つの病変を有さなければならない。
【０１６０】
除外基準は、以下のとおりであった：
１．免疫療法剤による以前の処置。抗腫瘍ワクチンによる以前の処置は、メディカルモニターとの協議により許容される場合がある。
２．単独又は併用でのデュルバルマブを含む臨床試験への以前の参加、この試験は、登録の目的を有し、主要エンドポイントの分析は、依然として完了されていない。
３．デュルバルマブ及びモナリズマブの最初の投与前の４週間以内に何らかの従来の又は試験中の抗癌治療を受けていること。
４．癌治療のための何らかの同時の化学療法、免疫療法、生物療法又はホルモン療法。癌に関連しない病態のためのホルモンの同時使用は、許容可能である。苦痛緩和の目的のための孤立性病変の局所治療は、メディカルモニターとの事前協議及びメディカルモニターによる同意を得て、ＤＬＴ評価期間を越えると許容可能である。
５．最初の投与前の１４日以内の免疫抑制薬の現在の使用又は以前の使用。
【０１６１】
連続コホートにおける対象に対して、４つのうちの１つの計画された用量レベル（２２．５、７５、２２５又は７５０ｍｇで２週間毎（Ｑ２Ｗ）のモナリズマブと併用してデュルバルマブ（１５００ｍｇを４週間毎（Ｑ４Ｗ））を投与した。
【０１６２】
漸増するモナリズマブ及びデュルバルマブで処置された１５人の患者において、中止につながる治療関連の有害事象（ＴＲＡＥ）はなく、グレード３／４のＴＲＡＥはなく、ＤＬＴはなく、死亡はなく；ＭＴＤに到達しなかった。いずれかのグレードのＴＲＡＥが１２人の患者（８０％）において観察され；最も多いのは、下痢であった（ｎ＝４）。拡大における４０人の患者の安全性は、漸増と同様であった：１９人の患者（４８％）は、いずれかのグレードのＴＲＡＥを有しており、１人の患者がグレード３／４のＴＲＡＥ（敗血症）を有していた。併用した両方の薬物のＰＫは、相互作用を示さなかった。モナリズマブＰＫは、最も高い用量レベルで線形に近づき、従ってこれが拡大パートのために選択された。
【０１６３】
試験の用量漸増パートの最後に、最大耐量（ＭＴＤ）に到達せず、モナリズマブ（７５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ）及びデュルバルマブ（１５００ｍｇ  Ｑ４Ｗ）のコホート４の投与は、用量漸増委員会（ＤＥＣ）によって安全であると見なされた。次に、それらの用量は、現在進行中の試験の用量拡大パートに用いられる。デュルバルマブ１５００ｍｇ  Ｑ４Ｗ及びモナリズマブ７．５ｍｇ  Ｑ２Ｗの用量を用いた用量デエスカレーション（ｄｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ）コホートは、許容できない毒性が最初の用量レベルで生じた場合に実施されることになる。
【０１６４】
実施例２：第Ｉ相臨床試験のＣＲＣ用量拡大パートにおいてモナリズマブ及びデュルバルマブで処置されたＭＳＳ大腸癌患者の応答
第１相試験の用量拡大パートは、現行の治療で十分に処置されない癌に対応する４つのコホートに患者を組み入れることを目的としている。コホートの１つは、再発性又は転移性ＭＳＳ−ＣＲＣの対象を含んでいた。ＭＳＳ−ＣＲＣコホートにおいて、全ての対象は、スクリーニング中に証明された突然変異試験及び登録のための疾患評価により確定された腫瘍部位を有する必要があり、ＣＲＣ癌は、試験によって証明した際にＤＮＡミスマッチ修復欠損（マイクロサテライト不安定性）を有していてはならない。
【０１６５】
ＤＮＡミスマッチ修復欠損は、（ｉ）マイクロサテライトマーカー（ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４若しくはＭＯＮＯ−２７）の２つ以上のパネルにおいて検出される変化を有する高頻度マイクロサテライト不安定性、又は（ｉｉ）以下のタンパク質：ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６若しくはＰＭＳ２のいずれか１つ若しくは複数のタンパク質発現の非存在を示す免疫組織化学的分析のいずれかによって定義された。
【０１６６】
対象コホートに対して、２週間毎（Ｑ２Ｗ）に７５０ｍｇのモナリズマブと併用してデュルバルマブ（１５００ｍｇを４週間毎（Ｑ４Ｗ））を投与した。
【０１６７】
結果は、ＭＳＳ−ＣＲＣ拡大コホートにおいて（少なくとも３回の以前の治療を受けた患者の５８％、ｎ＝３７が有効性について評価可能）、３人の確定した部分奏効（ＰＲ）（応答が部分奏効から不確定完全奏効へと改善された１人の患者を含む）、１１人の安定（ＳＤ）（２００日間超にわたって治療を続けた、腫瘍の減少を有する３人の患者を含む）があったことを示した。１６週の時点での病勢コントロール率（ＤＣＲ）は、２４％であった。
【０１６８】
ＭＳＳ−ＣＲＣ拡大コホートにおけるベースラインからの腫瘍サイズの変化率パーセント及び処置期間が図１に表される。
【０１６９】
上述されるＣＲＣにおけるモナリズマブ及びデュルバルマブに関する第Ｉ相臨床試験の用量拡大パートの更新は、以下の結果を示す。
【０１７０】
対象コホートに対して、２週間毎（Ｑ２Ｗ）に７５０ｍｇのモナリズマブと併用してデュルバルマブ（１５００ｍｇを４週間毎（Ｑ４Ｗ））を投与した。
【０１７１】
結果は、ＭＳＳ−ＣＲＣ拡大コホートにおいて（少なくとも３回の以前の治療を受けた患者の６０％、ｎ＝３９が有効性について評価可能）、１人の確定した完全奏効、２人の確定した部分奏効（ＰＲ）及び１１人の安定（ＳＤ）（表１及び２）があったことを示した。
【０１７２】
【表１】
2021523170.tif 000029
【０１７３】
【表２】
2021523170.tif 000030
【０１７４】
１６週の時点での病勢コントロール率（ＤＣＲ）は、３１％であり、２４週の時点で１８％であった（表３）。
【０１７５】
【表３】
2021523170.tif 000031
【０１７６】
これまでに得られた中央値ＯＳは、有望であり、１０．６ヶ月であり、これは、同様の集団において、５．７ヶ月のＬｏｎｓｕｒｆ／ＴＡＳ−１０２の中央値ＯＳ（Ｍａｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１５，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７２：１９０９−１９１９）又は６．４ヶ月のレゴラフェニブで報告された中央値ＯＳ（Ｇｒｏｔｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ  ２０１３、３８１（９８６３）：３０３−３１２）と比較して有利である。
【０１７７】
このＭＳＳ−ＣＲＣ拡大コホートにおけるベースラインからの腫瘍サイズの変化率パーセント及び処置期間は、図１と比較してより長い期間において図２に表される。
【０１７８】
結論として、モナリズマブ及びデュルバルマブのこのファーストインヒューマンの組み合わせの用量漸増が完了され、管理可能な毒性プロファイルが実証された。データは、モナリズマブ及びデュルバルマブの組み合わせが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断に対して従来非応答性の集団である、ＭＳＳ−ＣＲＣを有する患者に改善された利益をもたらすことができたことを示す。
【０１７９】
本明細書において援用される刊行物、特許出願及び特許を含む全ての参考文献は、参照によってその全体が本明細書に援用され、且つ本明細書の他の箇所で行われる任意の別個に提供される特定の文献の援用に関係なく、各参考文献が参照によって援用されると個々に且つ具体的に示され、その全体が本明細書で説明された場合と同じ程度まで（法律で許容される最大範囲まで）援用される。
【０１８０】
他に規定されない限り、本明細書において提供される全ての正確な値は、対応する概略値を代表する（例えば、特定の因子又は測定に関して提供される全ての正確な例示的な値は、必要に応じて「約」によって修飾される対応する概略測定値も提供すると考えることができる）。数に関連して「約」が使用される場合、これは、規定される数の＋／−１０％に対応する値を含むと規定され得る。
【０１８１】
１つ又は複数の要素に関して、「含む」、「有する」、「包含する」又は「含有する」などの用語を用いて本発明の任意の態様又は実施形態を本明細書で記載することは、他に規定されない限り又は文脈により明らかに否定されない限り、その１つ又は複数の特定の要素「からなる」、「から本質的になる」又は「を実質的に含む」、本発明の同様の態様又は実施形態に対する支持を提供することが意図される（例えば、本明細書において特定の要素を含むと記載される組成物は、他に規定されない限り又は文脈により明らかに否定されない限り、その要素からなる組成物も記載すると理解されるべきである）。
【０１８２】
本明細書において提供されるいずれか及び全ての例又は例示的な言葉（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することのみが意図され、他で主張されない限り、本発明の範囲に限定を課さない。本明細書中の言葉は、特許請求されていない任意の要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されてはならない。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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