(57)【要約】本開示は、抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む、天然に存在しない単離された操作ＣＢ１結合性タンパク質を提供する。ＣＢ１結合性タンパク質は、ＣＢ１媒介性の容態、疾患及び障害の処置及び診断において有用性を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、その結合性タンパク質が６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含み、その際、
ＣＤＲ−Ｈ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｄ−Ｙ−Ｗ（配列番号３２９の残基２６〜３３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＧの置換はＳであり；３位でのＴの置換はＥであり；５位でのＴの置換はＳまたはＮであり；６位でのＤの置換はＲまたはＹであり；７位でのＹの置換はＨであり；かつ８位でのＷの置換はＡまたはＮであり；
ＣＤＲ−Ｈ２は、アミノ酸配列Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｙ−Ｄ−Ｇ−Ｄ−Ｔ（配列番号３２９の残基５１〜５８）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＩの置換はＦであり；２位でのＹの置換はＤ、Ｓ、またはＴであり；３位でのＰの置換はＴであり；４位でのＹの置換はＧ、Ｄ、またはＳであり；５位でのＤの置換はＹまたはＳであり；６位でのＧの置換はＳであり；７位でのＤの置換はＥ、Ｇ、またはＲであり；かつ８位でのＴの置換はＡ、Ｓ、またはＩであり；
ＣＤＲ−Ｈ３は、アミノ酸配列Ａ−Ｒ−Ｇ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｗ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｙ（配列番号３２９の残基９８〜１１３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＡの置換はＳであり；３位でのＧの置換はＳであり；４位でのＸ１はＱ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、もしくはＧであるか、または存在せず；５位でのＸ２はＥ、Ｙ、ＬもしくはＧであるか、または存在せず；６位でのＸ３はＹもしくはＰであるか、または存在せず；７位でのＸ４はＹ、Ｒ、もしくはＥであるか、または存在せず；８位でのＸ５はＧであるか、または存在せず；９位でのＸ６はＴであるか、または存在せず；１０位でのＸ７はＮもしくはＤであるか、または存在せず；１１位でのＸ８はＹ、Ｎ、Ａ、もしくはＧであるか、または存在せず；１２位でのＸ９はＮ、Ｙ、Ｓ、Ａ、もしくはＲであるか、または存在せず；１３位でのＷの置換はＹ、Ａ、またはＰであり；１４位でのＸ１０はＬ、Ｍ、Ｆ、もしくはＧであるか、または存在せず；１５位でのＸ１１はＰ、Ｄ、Ａ、もしくはＴであるか、または存在せず；１６位でのＹの置換はＶであり；
ＣＤＲ−Ｌ１は、アミノ酸配列Ｑ−Ｘ１−Ｉ−Ｓ−Ｓ−Ｘ２−Ｙ（配列番号３３０の残基２７〜３３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＱの置換はＳまたはＥであり；２位でのＸ１はＥ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｇ、またはＲであり；３位でのＩの置換はＶであり；４位でのＳの置換はＡ、Ｒ、またはＧであり；５位でのＳの置換はＧ、Ｎ、またはＴであり；６位でのＸ２はＳ、Ｎ、ペプチドＦ−Ｒ−Ｙ−Ｓであるか、または存在せず；かつ７位でのＹの置換はＦ、Ｄ、またはＮであり；
ＣＤＲ−Ｌ２は、アミノ酸配列：Ｘ１−Ｔ−Ｓ（配列番号３３０の残基５１〜５３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＸ１はＡ、Ｙ、Ｇ、Ｒ、Ｄ、またはＳであり；２位でのＴの置換はＡであり；３位でのＳの置換はＲであり；かつ
ＣＤＲ−Ｌ３は、アミノ酸配列：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｘ１−Ｓ−Ｘ２−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号３３０の残基９１〜９９）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＱの置換はＬまたはＨであり；２位でのＱの置換はＨであり；３位でのＹの置換はＳまたはＧであり；４位でのＸ１はＳ、Ｗ、Ｈ、Ｙ、Ｎ、またはＩであり；５位でのＳの置換はＥ、Ｒ、Ｇ、Ｔ、またはＮであり；６位でのＸ２はＹ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、またはＷであり；かつ８位でのＹの置換はＰ、Ｌ、Ｆであるか、または存在せず；かつその際、少なくとも１個のアミノ酸残基の前記置換、付加、または欠失が、ヒトＣＢ１に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片の能力を阻害しない、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が可変重（ＶＨ）ドメイン配列のＣＤＲ及び可変軽（ＶＬ）ドメイン配列のＣＤＲを含み、その際、前記ＶＨドメイン配列が、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択され、及び／または前記ＶＬドメインが、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択される、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が可変重（ＶＨ）ドメイン配列及び可変軽（ＶＬ）ドメイン配列を含み、その際、前記ＶＨドメイン配列が、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択され、及び／または前記ＶＬドメインが、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択される、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項３に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む、請求項４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
（２０、２１、２２）；（３２、３３、３４）；（４４、４５、４６）；（５６、５７、５８）；（６８、６９、７０）；（８０、８１、８２）；（９２、９３、９４）；（１０４、１０５、１０６）；（１１６、１１７、１１８）；（１２８、１２９、１３０）；（１４０、１４１、１４２）；（１５２、１５３、１５４）；（１６４、１６５、１６６）；（１７６、１７７、１７８）；（１８８、１８９、１９０）；（２００、２０１、２０２）；（２１２、２１３、２１４）；（２２４、２２５、２２６）；（２３６、２３７、２３８）；（２４８、２４９、２５０）；（２６０、２６１、２６２）；（２７２、２７３、２７４）；（２８４、２８５、２８６）；（２９６、２９７、２９８）；（３０８、３０９、３１０）；及び（３２０、３２１、３２２）からなる群から選択されるＨＣＤＲセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）ならびに（２６、２７、２８）；（３８、３９、４０）；（５０、５１、５２）；（６２、６３、６４）；（７４、７５、７６）；（８６、８７、８８）；（９８、９９、１００）；（１１０、１１１、１１２）；（１２２、１２３、１２４）；（１３４、１３５、１３６）；（１４６、１４７、１４８）；（１５８、１５９、１６０）；（１７０、１７１、１７２）；（１８２、１８３、１８４）；（１９４、１９５、１９６）；（２０６、２０７、２０８）；（２１８、２１９、２２０）；（２３０、２３１、２３２）；（２４２、２４３、２４４）；（２５４、２５５、２５６）；（２６６、２６７、２６８）；（２７８、２７９、２８０）；（２９０、２９１、２９２）；（３０２、３０３、３０４）；（３１４、３１５、３１６）；及び（３２６、３２７、３２８）からなる群から選択されるＬＣＤＲセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む、請求項３に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
配列番号（２０、２１、２２／２６、２７、２８）；（３２、３３、３４／３８、３９、４０）；（４４、４５、４６／５０、５１、５２）；（５６、５７、５８／６２、６３、６４）；（６８、６９、７０／７４、７５、７６）；（８０、８１、８２／８６、８７、８８）；（９２、９３、９４／９８、９９、１００）；（１０４、１０５、１０６／１１０、１１１、１１２）；（１１６、１１７、１１８／１２２、１２３、１２４）；（１２８、１２９、１３０／１３４、１３５、１３６）；（１４０、１４１、１４２／１４６、１４７、１４８）；（１５２、１５３、１５４／１５８、１５９、１６０）；（１６４、１６５、１６６／１７０、１７１、１７２）；（１７６、１７７、１７８／１８２、１８３、１８４）；（１８８、１８９、１９０／１９４、１９５、１９６）；（２００、２０１、２０２／２０６、２０７、２０８）；（２１２、２１３、２１４／２１８、２１９、２２０）；（２２４、２２５、２２６／２３０、２３１、２３２）；（２３６、２３７、２３８／２４２、２４３、２４４）；（２４８、２４９、２５０／２５４、２５５、２５６）；（２６０、２６１、２６２／２６６、２６７、２６８）；（２７２、２７３、２７４／２７８、２７９、２８０）；（２８４、２８５、２８６／２９０、２９１、２９２）；（２９６、２９７、２９８／３０２、３０３、３０４）；（３０８、３０９、３１０／３１４、３１５、３１６）；及び（３２０、３２１、３２２／３２６、３２７、３２８）からなる群から選択される（ＨＣＤＲセット／ＬＣＤＲセット）対を含む、請求項６に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
配列番号１７／２３、２９／３５、４１／４７、５３／５９、６５／７１、７７／８３、８９／９５、１０１／１０７、１１３／１１９、１２５／１３１、１３７／１４３、１４９／１５５、１６１／１６７、１７３／１７９、１８５／１９１、１９７／２０３、２０９／２１５、２２１／２２７、２３３／２３９、２４５／２５１、２５７／２６３、２６９／２７５、２８１／２８７、２８３／２８９、３０５／３１１、及び３１７／３２３からなる群から選択されるＨＣ／ＬＣ対を含む、請求項７に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が可変重（ＶＨ）ドメイン配列のＣＤＲ及び可変軽（ＶＬ）ドメイン配列のＣＤＲを含み、その際、前記ＶＨドメイン配列が、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有し、及び／または前記ＶＬドメイン配列が、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
前記ＶＨが配列番号１１４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１２０で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
前記ＶＨが配列番号１２６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１３２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記ＶＨが配列番号１３８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１４４で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
前記ＶＨが配列番号１５０で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１５６で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
前記ＶＨが配列番号１６２で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１６８で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
前記ＶＨが配列番号１７４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１８０で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１６】
前記ＶＨが配列番号１８６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１９２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７】
前記ＶＨが配列番号１９８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２０４で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１８】
前記ＶＨが配列番号２１０で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２１６で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
前記ＶＨが配列番号２２２で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２２８で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２０】
前記ＶＨが配列番号２３４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２４０で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２１】
前記ＶＨが配列番号２４６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２５２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
前記ＶＨが配列番号２５８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２６４で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２３】
前記ＶＨが配列番号２７０で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２７６で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２４】
前記ＶＨが配列番号２８２で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２８８で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２５】
前記ＶＨが配列番号２９４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号３００で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２６】
前記ＶＨが配列番号３０６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号３１２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２７】
前記ＶＨが配列番号３１８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号３２４で示される、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２８】
前記抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２９】
前記断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）２断片またはｓｃＦｖ断片を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ  Ｆｃからなる群から選択されるヒトＦｃ領域を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３１】
改変ヒトＦｃ領域を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３２】
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ｑからなる群から選択される変異を含む改変ヒトＦｃ領域を含む、請求項３１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗原結合性断片を含む、多重特異性結合性タンパク質。
【請求項３４】
ＣＢ１シグナル伝達活性を阻害する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３５】
ＣＢ１シグナル伝達活性を増強する、または活性化する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３６】
ＣＢ１シグナル伝達活性に対するインバースアゴニストである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３７】
ヒト化抗体である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３８】
完全ヒト型抗体である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３９】
ＣＢ１への結合について、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離抗ヒトＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と競合する、単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４０】
結合について競合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項３９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
請求項１〜３８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と実質的に同じＣＢ１のエピトープに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４２】
実質的に同じＣＢ１のエピトープに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片がヒトまたはヒト化抗体である、請求項４１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４３】
ＣＢ１について約１μＭ以下の結合親和性Ｋｄを有する、カンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４４】
ＣＢ１について約１００ｎＭ以下の結合親和性Ｋｄを有する、請求項４３に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４５】
リモナバンと比較した場合に、脳透過の減少を示す、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４６】
リモナバンと比較した場合に、少なくとも２倍高くＣＢ１シグナル伝達を阻害する、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４７】
リモナバンと比べて、ＣＮＳ副作用の減少を示す、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４８】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離核酸分子。
【請求項４９】
請求項４８に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項５０】
請求項４９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項５１】
ＣＢ１シグナル伝達を調節する方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５２】
ＣＢ１をアンタゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５３】
ＣＢ１をアゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５４】
ＣＢ１をインバースアゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５５】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片と、少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項５６】
それを必要とする対象においてＣＢ１の生物学的活性を阻害するための方法であって、有効量の請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それにより、前記対象において前記ＣＢ１タンパク質の活性を阻害することを含む、前記方法。
【請求項５７】
ＣＢ１活性と関連する疾患を処置するための方法であって、請求項５５に記載の医薬組成物を、前記疾患に罹患している対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項５８】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達の調節に応答する疾患または障害を処置する方法であって、請求項５５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項５９】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達のアンタゴニズムまたはインバースアゴニズムに応答する疾患または障害を処置する方法であって、前記対象に請求項５５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６０】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達のアゴニズムに応答する疾患または障害を処置する方法であって、前記対象に請求項５５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６１】
ＣＢ１と関連する疾患または障害を診断するための方法であって、細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項６２】
前記疾患または障害が、肥満、プラーダー−ヴィリ症候群（ＰＷＳ）、アルストレーム症候群、バルデー−ビードル症候群（ＢＢＳ）、アルブライド遺伝性骨ジストロフィー（ＡＨＯ）、及びＳＩＭ１欠失症候群を含む症候性肥満；糖尿病及び関連合併症；脂質異常症；例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患、及び原発性胆汁性肝硬変などの肝臓疾患；線維症、例えば、腎臓線維症；慢性腎臓疾患；糖尿病性神経障害、巣状分節性糸球体硬化症、腎疾患；代謝性疾患、骨粗鬆症、アテローム硬化症、炎症性疾患、心臓血管疾患、がん、疼痛、全身性硬化症、多発性硬化症痙縮、緑内障、及びニコチン中毒からなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片を含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合性断片が、治療薬、細胞傷害薬、免疫接着分子、及びイメージング薬からなる群から選択される薬剤にコンジュゲートしている、前記抗体コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１８年４月３０日出願の米国特許仮出願第６２／６６４，８８２号に対する優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、カンナビノイド受容体１型（ＣＢ１）結合性タンパク質及びその使用に関する。
【０００３】
参照による組み込み
本出願を通じて引用され得るすべての引用参照文献（参考文献、特許、特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容は、その全体があらゆる目的のために参照により明らかに本明細書に組み込まれ、そこで引用されている参照文献も同様である。本開示は、別段に示されていない限り、当技術分野で周知である免疫学、分子生物学、細胞生物学、医薬品開発及び薬物送達の従来の技術を使用することとする。
【背景技術】
【０００４】
カンナビノイド受容体１型（ＣＢ１）は、主に脳において、さらには末梢では肺、肝臓、腎臓、及び脂肪組織において発現するＧタンパク質共役受容体スーパーファミリーの７回膜貫通型細胞膜受容体である。ＣＢ１は、エンドカンナビノイドと呼ばれる体内で天然に生成するカンナビノイド（エイコシノイド（ｅｉｃｏｓｉｎｏｉｄ）など）、もしくは体内に導入されるカンナビノイド（カンナビスなど）、または関連合成化合物により活性化される。カンナビノイドは、ＣＢ１に可逆的に、かつ立体選択的に結合する。ＣＢ１に係合した後に、複数の細胞内シグナル伝達経路が活性化されて、アデニリルシクラーゼの阻害及びマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼの活性化、プレシナプスＮ型及びＰ／Ｑ型カルシウムチャネル及びＤ型外向きカリウムチャネルの阻害、ならびに内向き整流及びＡ型外向きカリウムチャネルの活性化が生じる。ＣＢ１の発現は、過剰なニューロン活性の発生を阻止するように神経伝達物質の放出を調節して、疼痛及び他の炎症性症状を減少させ、さらには、食物摂取を調節すると考えられる。
【０００５】
異常なＣＢ１活性は、脂質異常症、糖尿病、線維症、脂肪肝などの肝臓疾患、腎臓疾患、心臓血管疾患及びがんなどの肥満及び関連障害を含むいくつかの疾患に関係している。
【０００６】
プラダー・ウィリー症候群（ＰＷＳ）は、ある特定の父系遺伝子の欠損が原因の遺伝性障害であり、肥満、２型糖尿病、発育の遅れ、及び筋力低下により特徴づけられる。ＣＢ−１は、ＰＷＳにおいて、インバースアゴニストであるリモナバンの標的として確認された（Ｍｏｔａｇｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．５４：１４−１８）。リモナバン（ＳＲ１４１７１６、Ａｃｏｍｐｌｉａ、及びＺｉｍｕｌｔｉとも呼ばれる）は、経口中枢ＣＢ１アンタゴニストとしてＳａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓにより開発及び発売された食欲抑制抗肥満薬であった。この製品は、食事及び運動と併せて、２型糖尿病または脂質異常症などの関連リスク因子を有する肥満及び過体重の患者の処置に適応とされた。２００６年６月に、この薬物はＥＭＥＡにより肥満について認可された。２００８年に、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓは、自殺念慮を含む重篤な精神医学的問題のリスクにより、この薬物のすべての開発及びマーケティングをすべての適応症について中断した。２００９年１月に、ＥＣは、この薬物の販売許可を停止した。
【０００７】
別のインバースアゴニストであるタラナバント（ＭＫ−０３６４）がＭｅｒｃｋにより研究されたが、その第３相治験は、うつ病及び不安を含む高レベルの副作用により中止された。数種の他のＣＢ１インバースアゴニスト（例えば、ＡＭ２５１、ＡＭ１３８７、及びＡＭ４１１３）及びアンタゴニスト（例えば、カンナビゲロール、イビピナバント、オテナバント、スリナバント、テトラヒドロカンナビバリン、及びビロダミン）が研究されているが、それらは研究の初期段階にあるか、またはＣＮＳ副作用により、非ヒト研究に格下げされている。
【０００８】
血液脳関門（ＢＢＢ）を超えるＣＢ−１インバースアゴニスト／アンタゴニストの能力を制限することにより、主に末梢で発現するＣＢ１を標的とする、いくつかのＣＢ−１インバースアゴニスト／アンタゴニストが開発中である。例えば、ＴＭ−３８８３７は、肥満及び代謝障害を処置するために７ＴＭ  Ｐｈａｒｍａ  Ａ／Ｓが開発中の第１相のＣＢ１のインバースアゴニスト／アンタゴニストである。まだ臨床に入っていない別の末梢選択的サイレントアンタゴニストは、ＡＭ６５４５である。末梢選択的ＣＢ−１アンタゴニズムは、いくつかの組織における末梢エンドカンナビノイド作用、すなわち（１）肝臓−脂質生成、脂肪蓄積、及びグルコース分泌の減少；（２）筋肉−グルコース取り込み及び酸化の増加；（３）脂肪細胞−脂質生成及び脂肪蓄積の減少；アディポネクチン合成の減少；ならびに（４）胃腸（ＧＩ）−満腹、ＧＩ通過及び吸収の増加（Ｋｌｏｅｔ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｓ（２００９）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１５０：２５３１−２５３６）を標的とするための、より安全かつより有効な方法であり得る。
【０００９】
抗体及び関連結合性タンパク質などの生体分子は、治療薬を送達し、かつＣＮＳ障害及び副作用を回避するための、潜在的により安全かつ有効な方法を提供する。一般に、循環抗体のうちの約０．１％のみが、インタクトなＢＢＢを超える（Ｐｏｄｕｓｌｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：５７０５−５７０９；Ｙｕ  ａｎｄ  Ｗａｔｔｓ（２０１３）Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔ．１０：４５９−４７２）。したがって、ＣＮＳへの機能性抗ＣＢ１生物製剤の本質的に低い曝露は、もっぱら末梢でＣＢ−１に係合し、それにより、ＣＮＳにおいて小分子の薬理により駆動される有害事象を制限する機会を提供する。
【００１０】
最近、ＣＢ１に対する抗体が当技術分野で記載されているが、臨床におけるそれらの利点は分かっていない。米国特許出願公開第２０１７０２１０７９７号及び同第２０１６０１４５３３３号を参照されたい。
【００１１】
したがって、ＢＢＢを有意に透過せず、脳におけるＣＢ１係合の有害な薬理学的作用を回避する、安全かつ有効で末梢に限定される抗ＣＢ１インバースアゴニストまたはアンタゴニストを同定することが必要とされている。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、疾患の処置及び診断において有用な抗体及びその抗原結合性断片などの、カンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）に結合する結合性タンパク質を提供する。
【００１３】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、結合性タンパク質が、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含み、その際、ＣＤＲ−Ｈ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｄ−Ｙ−Ｗ（配列番号３２９の残基２６〜３３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による上記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＧの置換はＳであり；３位でのＴの置換はＥであり；５位でのＴの置換はＳまたはＮであり；６位でのＤの置換はＲまたはＹであり；７位でのＹの置換はＨであり；かつ８位でのＷの置換はＡまたはＮであり；ＣＤＲ−Ｈ２は、アミノ酸配列Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｙ−Ｄ−Ｇ−Ｄ−Ｔ（配列番号３２９の残基５１〜５８）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による上記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＩの置換はＦであり；２位でのＹの置換はＤ、Ｓ、またはＴであり；３位でのＰの置換はＴであり；４位でのＹの置換はＧ、Ｄ、またはＳであり；５位でのＤの置換はＹまたはＳであり；６位でのＧの置換はＳであり；７位でのＤの置換はＥ、Ｇ、またはＲであり；かつ８位でのＴの置換はＡ、Ｓ、またはＩであり；ＣＤＲ−Ｈ３は、アミノ酸配列Ａ−Ｒ−Ｇ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｗ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｙ（配列番号３２９の残基９８〜１１３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による上記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＡの置換はＳであり；３位でのＧの置換はＳであり；４位でのＸ１はＱ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、もしくはＧであるか、または存在せず；５位でのＸ２はＥ、Ｙ、ＬもしくはＧであるか、または存在せず；６位でのＸ３はＹもしくはＰであるか、または存在せず；７位でのＸ４はＹ、Ｒ、もしくはＥであるか、または存在せず；８位でのＸ５はＧであるか、または存在せず；９位でのＸ６はＴであるか、または存在せず；１０位でのＸ７はＮもしくはＤであるか、または存在せず；１１位でのＸ８はＹ、Ｎ、Ａ、もしくはＧであるか、または存在せず；１２位でのＸ９はＮ、Ｙ、Ｓ、Ａ、もしくはＲであるか、または存在せず；１３位でのＷの置換はＹ、Ａ、またはＰであり；１４位でのＸ１０はＬ、Ｍ、Ｆ、もしくはＧであるか、または存在せず；１５位でのＸ１１はＰ、Ｄ、Ａ、もしくはＴであるか、または存在せず；１６位でのＹの置換はＶであり；ＣＤＲ−Ｌ１は、アミノ酸配列Ｑ−Ｘ１−Ｉ−Ｓ−Ｓ−Ｘ２−Ｙ（配列番号３３０の残基２７〜３３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による上記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＱの置換はＳまたはＥであり；２位でのＸ１はＥ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｇ、またはＲであり；３位でのＩの置換はＶであり；４位でのＳの置換はＡ、Ｒ、またはＧであり；５位でのＳの置換はＧ、Ｎ、またはＴであり；６位でのＸ２はＳ、Ｎ、ペプチドＦ−Ｒ−Ｙ−Ｓであるか、または存在せず；かつ７位でのＹの置換はＦ、Ｄ、またはＮであり；ＣＤＲ−Ｌ２は、アミノ酸配列：Ｘ１−Ｔ−Ｓ（配列番号３３０の残基５１〜５３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による上記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＸ１はＡ、Ｙ、Ｇ、Ｒ、Ｄ、またはＳであり；２位でのＴの置換はＡであり；３位でのＳの置換はＲであり；かつＣＤＲ−Ｌ３は、アミノ酸配列：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｘ１−Ｓ−Ｘ２−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号３３０の残基９１〜９９）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による上記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＱの置換はＬまたはＨであり；２位でのＱの置換はＨであり；３位でのＹの置換はＳまたはＧであり；４位でのＸ１はＳ、Ｗ、Ｈ、Ｙ、Ｎ、またはＩであり；５位でのＳの置換はＥ、Ｒ、Ｇ、Ｔ、またはＮであり；６位でのＸ２はＹ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、またはＷであり；かつ８位でのＹの置換はＰ、Ｌ、Ｆであるか、または存在せず；かつその際、少なくとも１個のアミノ酸残基の上記置換、付加、または欠失が、ヒトＣＢ１に結合する上記抗体またはその抗原結合性断片の能力を阻害しない、ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１４】
表５及び表６は、本発明の例示的な抗ＣＢ１抗体、及びその機能性抗原結合性断片を示している。
【００１５】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、上記抗体が可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列のＣＤＲ及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン配列のＣＤＲを含み、その際、上記ＶＨドメイン配列は、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択され、及び／または上記ＶＬドメインは、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択される、ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１６】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、上記抗体が可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン配列を含み、その際、上記ＶＨドメイン配列は、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択され、及び／または上記ＶＬドメインは、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択される、ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１７】
一実施形態では、上記抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。
【００１８】
一実施形態では、上記抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む。
【００１９】
一実施形態では、上記抗体またはその抗原結合性断片は、（２０、２１、２２）；（３２、３３、３４）；（４４、４５、４６）；（５６、５７、５８）；（６８、６９、７０）；（８０、８１、８２）；（９２、９３、９４）；（１０４、１０５、１０６）；（１１６、１１７、１１８）；（１２８、１２９、１３０）；（１４０、１４１、１４２）；（１５２、１５３、１５４）；（１６４、１６５、１６６）；（１７６、１７７、１７８）；（１８８、１８９、１９０）；（２００、２０１、２０２）；（２１２、２１３、２１４）；（２２４、２２５、２２６）；（２３６、２３７、２３８）；（２４８、２４９、２５０）；（２６０、２６１、２６２）；（２７２、２７３、２７４）；（２８４、２８５、２８６）；（２９６、２９７、２９８）；（３０８、３０９、３１０）；及び（３２０、３２１、３２２）からなる群から選択されるＨＣＤＲセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）ならびに（２６、２７、２８）；（３８、３９、４０）；（５０、５１、５２）；（６２、６３、６４）；（７４、７５、７６）；（８６、８７、８８）；（９８、９９、１００）；（１１０、１１１、１１２）；（１２２、１２３、１２４）；（１３４、１３５、１３６）；（１４６、１４７、１４８）；（１５８、１５９、１６０）；（１７０、１７１、１７２）；（１８２、１８３、１８４）；（１９４、１９５、１９６）；（２０６、２０７、２０８）；（２１８、２１９、２２０）；（２３０、２３１、２３２）；（２４２、２４３、２４４）；（２５４、２５５、２５６）；（２６６、２６７、２６８）；（２７８、２７９、２８０）；（２９０、２９１、２９２）；（３０２、３０３、３０４）；（３１４、３１５、３１６）；及び（３２６、３２７、３２８）からなる群から選択されるＬＣＤＲセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む。
【００２０】
一実施形態では、上記抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号（２０、２１、２２／２６、２７、２８）；（３２、３３、３４／３８、３９、４０）；（４４、４５、４６／５０、５１、５２）；（５６、５７、５８／６２、６３、６４）；（６８、６９、７０／７４、７５、７６）；（８０、８１、８２／８６、８７、８８）；（９２、９３、９４／９８、９９、１００）；（１０４、１０５、１０６／１１０、１１１、１１２）；（１１６、１１７、１１８／１２２、１２３、１２４）；（１２８、１２９、１３０／１３４、１３５、１３６）；（１４０、１４１、１４２／１４６、１４７、１４８）；（１５２、１５３、１５４／１５８、１５９、１６０）；（１６４、１６５、１６６／１７０、１７１、１７２）；（１７６、１７７、１７８／１８２、１８３、１８４）；（１８８、１８９、１９０／１９４、１９５、１９６）；（２００、２０１、２０２／２０６、２０７、２０８）；（２１２、２１３、２１４／２１８、２１９、２２０）；（２２４、２２５、２２６／２３０、２３１、２３２）；（２３６、２３７、２３８／２４２、２４３、２４４）；（２４８、２４９、２５０／２５４、２５５、２５６）；（２６０、２６１、２６２／２６６、２６７、２６８）；（２７２、２７３、２７４／２７８、２７９、２８０）；（２８４、２８５、２８６／２９０、２９１、２９２）；（２９６、２９７、２９８／３０２、３０３、３０４）；（３０８、３０９、３１０／３１４、３１５、３１６）；及び（３２０、３２１、３２２／３２６、３２７、３２８）からなる群から選択される（ＨＣＤＲセット／ＬＣＤＲセット）対を含む。
【００２１】
一実施形態では、上記抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７／２３、２９／３５、４１／４７、５３／５９、６５／７１、７７／８３、８９／９５、１０１／１０７、１１３／１１９、１２５／１３１、１３７／１４３、１４９／１５５、１６１／１６７、１７３／１７９、１８５／１９１、１９７／２０３、２０９／２１５、２２１／２２７、２３３／２３９、２４５／２５１、２５７／２６３、２６９／２７５、２８１／２８７、２８３／２８９、３０５／３１１、及び３１７／３２３からなる群から選択されるＨＣ／ＬＣ対を含む。
【００２２】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、上記抗体が可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列のＣＤＲ及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン配列のＣＤＲを含み、その際、上記ＶＨドメイン配列は、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有し、及び／または上記ＶＬドメイン配列は、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する、ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２３】
一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１１４で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１２０で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１２６で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１３２で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１３８で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１４４で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１５０で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１５６で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１６２で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１６８で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１７４で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１８０で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１８６で示され、かつ上記ＶＬは配列番号１９２で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号１９８で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２０４で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２１０で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２１６で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２２２で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２２８で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２３４で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２４０で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２４６で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２５２で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２５８で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２６４で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２７０で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２７６で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２８２で示され、かつ上記ＶＬは配列番号２８８で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号２９４で示され、かつ上記ＶＬは配列番号３００で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号３０６で示され、かつ上記ＶＬは配列番号３１２で示される。一実施形態では、上記ＶＨは配列番号３１８で示され、かつ上記ＶＬは配列番号３２４で示される。
【００２４】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。
【００２５】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗原結合性断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）２断片またはｓｃＦｖ断片を含む。
【００２６】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ  Ｆｃからなる群から選択されるヒトＦｃ領域を含む。
【００２７】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）、Ｓ２２８Ｐ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ｑからなる群から選択される改変ヒトＦｃ領域を含む。
【００２８】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１シグナル伝達活性を阻害するか、またはそのアンタゴニストである。
【００２９】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１シグナル伝達活性を増強または活性化するか、またはそれに対するアゴニストである。
【００３０】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１シグナル伝達活性に対するインバースアゴニストである。
【００３１】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片はヒト化抗体である。
【００３２】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は完全ヒト型抗体である。
【００３３】
単離抗ヒトＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と実質的に同じＣＢ１のエピトープに特異的に結合する抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００３４】
ＣＢ１への結合について、単離抗ヒトＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００３５】
一実施形態では、上記ＣＢ１に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１について約１μＭまたはそれ未満の結合親和性Ｋｄを有する。
【００３６】
一実施形態では、上記ＣＢ１に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１について約１００ｎＭまたはそれ未満の結合親和性Ｋｄを有する。
【００３７】
一実施形態では、抗ＣＢ１抗体または抗原結合性断片は、リモナバンと比較した場合に、脳透過性の低下を示す。
【００３８】
一実施形態では、抗ＣＢ１抗体または抗原結合性断片は、リモナバンと比較した場合に少なくとも２倍高く、ＣＢ１シグナル伝達を阻害する。
【００３９】
一実施形態では、抗ＣＢ１抗体または抗原結合性断片は、リモナバンと比べてＣＮＳ副作用の減少を示す。
【００４０】
抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離核酸分子を提供する。
【００４１】
抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含む発現ベクターを提供する。
【００４２】
抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【００４３】
ＣＢ１シグナル伝達を調節する方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む上記方法を提供する。
【００４４】
ＣＢ１をアンタゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む上記方法を提供する。
【００４５】
ＣＢ１をアゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む上記方法を提供する。
【００４６】
ＣＢ１をインバースアゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む上記方法を提供する。
【００４７】
単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。
【００４８】
それを必要とする対象においてＣＢ１の生物学的活性を阻害するための方法であって、有効量の単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を上記対象に投与し、それにより、上記対象におけるＣＢ１タンパク質の活性を阻害することを含む上記方法を提供する。
【００４９】
ＣＢ１活性と関連する疾患を処置するための方法であって、単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を、上記疾患に罹患している対象に投与することを含む上記方法を提供する。
【００５０】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達の調節に応答性の疾患または障害を処置する方法であって、単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与することを含む上記方法を提供する。
【００５１】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達のアンタゴニズムまたはインバースアゴニズムに応答性の疾患または障害を処置する方法であって、上記対象に、単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与することを含む上記方法を提供する。
【００５２】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達のアゴニズムに応答性の疾患または障害を処置する方法であって、上記対象に、単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与することを含む上記方法を提供する。
【００５３】
ＣＢ１と関連する疾患または障害を診断するための方法であって、細胞を抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む上記方法を提供する。
【００５４】
一実施形態では、上記疾患または障害は、肥満、プラーダー−ヴィリ症候群（ＰＷＳ）、アルストレーム症候群、バルデー−ビードル症候群（ＢＢＳ）、アルブライド遺伝性骨ジストロフィー（ＡＨＯ）、及びＳＩＭ１欠失症候群を含む症候性肥満；糖尿病及び関連合併症；脂質異常症；例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患、及び原発性胆汁性肝硬変などの肝臓疾患；線維症、例えば、腎臓線維症；慢性腎臓疾患；糖尿病性神経障害、巣状分節性糸球体硬化症、腎疾患；代謝性疾患、骨粗鬆症、アテローム硬化症、炎症性疾患、心臓血管疾患、がん、疼痛、全身性硬化症、多発性硬化症痙縮、緑内障、及びニコチン中毒からなる群から選択される。
【００５５】
一実施形態では、上記疾患または障害は、腎臓疾患（巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糖尿病性腎症、アルポート症候群、高血圧性腎臓疾患、ネフローゼ症候群、ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群、微小変化型ネフローゼ症候群、膜性腎症、特発性膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、イムノコンジュゲート媒介性ＭＰＧＮ、補体媒介性ＭＰＧＮ、ループス腎炎、感染後糸球体腎炎、菲薄基底膜病、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、アミロイドーシス（原発性）、ｃｌｑ腎症、急速進行性ＧＮ、抗ＧＢＭ病、Ｃ３糸球体腎炎、高血圧性腎硬化症、ＩｇＡ腎症、タンパク尿性腎臓疾患、微量アルブミン尿症、または微量アルブミン尿症腎臓疾患など）、肺動脈高血圧症、疼痛（神経障害性疼痛または内臓疼痛など）、がん（化学療法抵抗性乳癌、アドリアマイシン抵抗性乳癌、化学療法抵抗性結腸直腸癌、髄芽細胞腫、または腫瘍血管新生など）、不安、うつ病、移植関連ＦＳＧＳ、移植関連ネフローゼ症候群、移植関連タンパク尿、胆汁うっ滞性肝臓疾患、多発性嚢胞腎疾患、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患（ＡＤＰＫＤ）、肥満、インスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病、糖尿病前症、代謝症候群、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、糖尿病性胃不全麻痺、または胃不全麻痺である。
【００５６】
単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を含む抗体コンジュゲートであって、上記抗体またはその抗原結合性断片が、治療薬、細胞傷害薬、免疫接着分子、及びイメージング薬からなる群から選択される薬剤とコンジュゲートされている上記抗体コンジュゲートを提供する。
【００５７】
単離抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片、及び免疫学的アッセイにおいて上記抗体を使用するための指示書を含むキットを提供する。
【００５８】
次の実施形態の説明を添付の図面と併せて読むことで、本発明の上述及び他の特徴及び利点、さらには本発明自体がより完全に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】ｃＡＭＰアッセイの結果を示している。ｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＮＲ１  Ｇｉ細胞をＣＢ１抗体、アイソタイプ対照、または小分子ＣＢ１アンタゴニストＪＤ５０３７で処理し、続いて、フォルスコリンの存在下で３０ｎＭ  ＣＰ−５５，９４０（「Ｐｌｕｓ  ＣＰ」と示されている）でアゴニスト攻撃した。アンタゴニストをまた、ＣＰ−５５，９４０を添加せずに試験して、それら自体がアゴニスト活性を有するかどうかを立証した。略語：ＣＡＢ＝細胞アッセイバッファー（アッセイ背景を示している）；ＣＡＢ／Ｆ＝ＣＡＢ＋１５μＭフォルスコリン（アッセイにおけるｃＡＭＰの最大量を表している）；ＣＡＢ／Ｆ／ＣＰ＝ＣＡＢ／Ｆ＋３０ｎＭ  ＣＰ−５５，９４０（ＣＰ−５５，９４０でのほぼＥＣ８０に対応する）。
【図２】ｐ−ＥＲＫアッセイの結果を示している。ホスホ／総ＥＲＫアッセイを、ｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＮＲ１  Ｇｉ細胞を使用して行った。細胞をマウス抗ＣＢ１抗体または小分子ＣＢ１アンタゴニストＪＤ５０３７で処理し、続いて、フォルスコリンの存在下で３０ｎＭ  ＣＰ−５５，９４０でアゴニスト攻撃した。処理の終了時に、プレートをｐ−ＥＲＫ／総ＥＲＫについて、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）キットを使用して処理した。結果は、最大応答のパーセンテージとして表されている（最大％）。
【図３】図３Ａは、ｈｕＣＢ１−ＣＨＯ細胞へのマウス抗ｈｕＣＢ１抗体の結合を示している。精製マウス抗ＣＢ１抗体の結合曲線を、２００ｎＭ抗体濃度から出発して３倍滴定した。すべての抗体がｈｕＣＢ１−ＣＨＯ細胞に対する特異的結合を示している。図３Ｂは、ｍｏＣＢ１−ＣＨＯ細胞へのマウス抗ｈｕＣＢ１抗体の結合を示している。すべての抗体が、ｍｏＣＢ１−ＣＨＯ細胞への結合の欠如を示している。
【図４】それぞれアゴニスト及びアンタゴニストＣＢ１小分子ＣＰ５９９０及びＪＤ５０３７の存在及び非存在下での精製抗ＣＢ１抗体の結合の評価を示している。
【図５Ａ】ハイブリドーマ抗体Ｍ１〜Ｍ８からの重鎖可変領域アミノ酸配列のアラインメントから得られたコンセンサス配列を示している。
【図５Ｂ】ハイブリドーマ抗体Ｍ１〜Ｍ８からの軽鎖可変領域アミノ酸配列のアラインメントから得られたコンセンサス配列を示している。
【図６Ａ】ヒト化抗体Ｍ７−Ｈ１〜Ｍ７−Ｈ１６、Ｍ５−Ｈ１、及びＭ５−Ｈ２からの重鎖可変領域アミノ酸配列のアラインメントから得られたコンセンサス配列を示している。
【図６Ｂ】ヒト化抗体Ｍ７−Ｈ１〜Ｍ７−Ｈ１６、Ｍ５−Ｈ１、及びＭ５−Ｈ２からの軽鎖可変領域アミノ酸配列のアラインメントから得られたコンセンサス配列を示している。
【図７Ａ】クローンＭ５及びＭ７のヒト化ＣＢ−１抗体バリアントのＣＨＯ−ｈｕＣＢ−１及びＣＨＯ親細胞への、３０μｇ／ｍＬの単一抗体濃度での細胞結合を示している。
【図７Ｂ】クローンＭ７のヒト化ＣＢ−１抗体バリアントのＣＨＯ−ｈｕＣＢ−１及びＣＨＯ親細胞への、３０μｇ／ｍＬの単一抗体濃度での細胞結合を示している。
【図８】図８Ａは、実施例３に記載のとおりのｃＡＭＰアッセイの結果を示している。図８Ａは、Ｍ５抗体での異なる主鎖間のサイドバイサイド比較を示している。図８Ｂは、実施例３に記載のとおりのｃＡＭＰアッセイの結果を示している。図８Ｂは、Ｍ７抗体での異なる主鎖間のサイドバイサイド比較を示している。
【図９】図９Ａは、実施例４に記載のとおりのｐ−ＥＲＫアッセイの結果を示している。図９Ａは、Ｍ５抗体での異なる主鎖間のサイドバイサイド比較を示している。図９Ｂは、実施例４に記載のとおりのｐ−ＥＲＫアッセイの結果を示している。図９Ｂは、Ｍ７抗体での異なる主鎖間のサイドバイサイド比較を示している。
【図１０】実施例３に記載の方法と類似の方法を使用してのインバースアゴニズムでのｃＡＭＰアッセイの結果を示している。ｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＮＲ１  Ｇｉ細胞をＣＢ１抗体またはアイソタイプ対照で処理し、続いて、フォルスコリンを添加した。紫色の点線は、フォルスコリンでの処理で放出されたｃＡＭＰのレベル、アッセイにおけるｃＡＭＰの最大量を表している。赤色の線は、アッセイで対照として使用されたＣＢ１小分子アゴニストＣＰ−５５，９４０に対応する。インバースアゴニズム活性を有する化合物は、アゴニストとは逆方向に、ＣＡＢ／Ｆラインの頂部へと進む曲線を示す。この実験は、試験したＭ７バリアントの両方がインバースアゴニズム活性を有することを実証している。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
別段に定義されていない限り、本明細書で使用する科学用語及び専門用語は、当業者が一般に理解する意味を有する。任意の潜在的曖昧性がある場合には、本明細書に示す定義が、いずれの辞書または外部定義にも優先される。文脈により別段に必要とされていない限り、単数形の用語は複数形を含むこととし、かつ複数形の用語は単数形を含むこととする。単語「ａ」または「ａｎ」は、別段に示されていない限り「少なくとも１つ」を意味する。「少なくとも１つ」という語句の意味は、「１つまたは複数」という語句の意味と同等である。単語「または」は、別段に示されていない限り「及び／または」を意味する。本明細書で使用する場合、「含む」、「含むこと」、「含有すること」、「有すること」などの用語は、米国特許法でそれらに付与されている意味を有してよく、かつ「包含する」、「包含すること」などを意味してよく；「から本質的になること」または「本質的になる」も同様に、米国特許法で付与されている意味を有し、この用語は、開放型であり、基本的または新規の特性が変化しない限り、記載されたものより多くの存在を許容するが、従来技術の実施形態は排除する。具体的に述べられていない限り、または文脈から明白でない限り、本明細書で使用する場合、「約」という用語は、当技術分野の通常の許容の範囲内、例えば、平均値の２標準偏差内と理解される。約は、記述された値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％内と理解され得る。文脈から別段に明らかでない限り、本明細書に示す数値はすべて、約という用語により修飾される。
【００６１】
本明細書に示す方法及び技術は一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、かつ別段に示されていない限り本明細書を通じて引用及び論述されている様々な一般的かつより具体的な参照文献に記載されているとおりに行われる。本明細書に記載の命名法、細胞及び組織培養の実験室手順及び技術、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学及びタンパク質及び核酸化学及びハイブリッド形成、分析化学、合成有機化学、ならびに医学及び医薬化学は、当技術分野で周知の一般に使用されるものである。標準的な技術を、酵素反応及び精製技術、化学合成、化学分析、医薬調製、処方、送達、及び患者の処置で使用する。
【００６２】
本明細書において示す範囲は、その範囲内の値のすべてについての略記であると理解される。例えば、１から５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または副範囲を含むと理解される。
【００６３】
「カンナビノイド受容体１型」または「ＣＢ１」という用語は、ＣＮＲ１遺伝子によりコードされる、かつ配列番号１の正準アミノ酸配列を有する７回膜貫通型細胞膜受容体を意味する（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ２１５５４を参照されたい）。表１に、この配列、さらには、このタンパク質のドメインのそれぞれを開示する。
【００６４】
【表１】
2021525059.tif 000002
【００６５】
「中枢性ＣＢ１」という用語は、脳及びＣＮＳを含む身体のいずれかに局在化されるＣＢ１を意味する。
【００６６】
「末梢性ＣＢ１」という用語は、脳またはＣＮＳに局在化されないＣＢ１（例えば、末梢限定ＣＢ１）を意味する。
【００６７】
「抗体」という用語は、特定の抗原に特異的に結合する、またはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む任意の抗原結合性分子または分子複合体を意味する。この用語には、これに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性、非特異性、ヒト化、一本鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異、及び移植抗体が含まれる。「インタクトな抗体」においてのように「インタクトな」という用語により別段に修飾されていない限り、本開示のこの目的では、「抗体」という用語には、抗原結合機能、すなわち、ＣＢ１に特異的に結合する能力を保持するＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、及び他の抗体断片などの抗体断片も含まれる。典型的には、そのような断片は、抗原結合性ドメインを含むであろう。「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、すなわち、ジスルフィド結合により相互に連結した２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、さらにはその多量体を含む。全長抗体の一実施形態では、各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。ＣＨは、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＣＬは、単一のＣＬドメインから構成される。ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的な領域に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分され得る。一般に、各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置されている３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。本発明の異なる実施形態では、抗ＣＢ１抗体のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよいし、または天然で、もしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲ及び／またはＦＲのサイドバイサイド分析に基づき規定することができる。抗体分子は、いずれの型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであってもよい。
【００６８】
「ＨＣＤＲセット」及び「ＬＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる重鎖または軽鎖それぞれの単一可変領域に生じる３つのＣＤＲからなる群を指す。「（ＨＣＤＲセット／ＬＣＤＲセット）対」という用語は、ＨＣＤＲセット及びＬＣＤＲの対合を指し、抗原結合性部位を構成する６つのＣＤＲを示している。これらのＣＤＲの正確な境界は、システムの違いに従って、異なって規定されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）及び（１９９１））により記載されるシステムは、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを規定する正確な残基の境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと称されることもある。「Ｋａｂａｔナンバリング」という用語は、抗体、またはその抗原結合性断片の重鎖及び軽鎖可変領域において他のアミノ酸残基よりもさらに可変（すなわち、超可変）であるアミノ酸残基をナンバリングするシステムを意味する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域では、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０〜６５、及びＣＤＲ３ではアミノ酸位置９５〜１０２の範囲である。軽鎖可変領域では、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置２４〜３４、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０〜５６、及びＣＤＲ３ではアミノ酸位置８９〜９７の範囲である。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者ら（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内のある特定のサブ部分が、アミノ酸配列のレベルでは大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格構造を採用することを見出した。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３またはＨ１、Ｈ２及びＨ３と名付けられ、その際、「Ｌ」及び「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を示している。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称されることもあり、これは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する他の境界が、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９及びＭａｃｃａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−４５）に記載されている。さらに他のＣＤＲ境界の規定は、上記のシステムのうちの１つに厳密に従わないこともあるが、それでもなお、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するであろうが、それらは、特定の残基または残基の群またはＣＤＲ全体さえも抗原結合性に有意な影響を及ぼさないという予測または実験所見を考慮して、短縮または伸長されてもよい。本明細書に記載の組成物及び方法は、これらの��ステムのうちのいずれかに従って規定されるＣＤＲを利用してよい。
【００６９】
「ＶＨ／ＶＬ対」という用語は、対合されていて、かつ抗原に結合することができるＶＨ及びＶＬを指す。
【００７０】
「ＨＣ／ＬＣ対」という用語は、対合されていて、かつ抗原に結合することができるＨＣ及びＬＣを指す。
【００７１】
「Ｆｃ領域」という用語は、インタクトな抗体のパパイン消化により生成し得る免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域であってよい。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２つの定常ドメイン、１つのＣＨ２ドメイン及び１つのＣＨ３ドメインを含み、かつ任意選択で１つのＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるためのＦｃ部分でのアミノ酸残基の置換が当技術分野で公知である（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号及び同第５，６２４，８２１号）。Ｆｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、ならびに抗体及び抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。ある場合には、これらのエフェクター機能は、治療用免疫グロブリンに望ましいが、他の場合には、治療目標に応じて、不必要であるか、または有害でさえありうる。
【００７２】
「ＣＢ１に結合する抗体」及び「抗ＣＢ１抗体」という用語は、可溶性ＣＢ１タンパク質またはその断片（例えば、ＣＢ１の細胞外ドメインの一部分）及び／または細胞表面で発現するＣＢ１に結合する抗体、及びその抗原結合性断片を意味する。「細胞表面で発現するＣＢ１」という表現は、インビトロまたはインビボで細胞の表面で発現して、ＣＢ１タンパク質の少なくとも一部分が細胞膜の細胞外に露出し、抗体の抗原結合性部分にアクセス可能であるようになっているＣＢ１タンパク質またはその部分を意味する。
【００７３】
「ＣＢ１結合性タンパク質」または「抗ＣＢ１結合性タンパク質」という用語は、抗原結合性断片の全部または一部分を含むＣＢ１に結合するタンパク質を意味し、それには、組換え多価または多重特異性免疫グロブリン、さらにはコンジュゲート及び融合タンパク質などの定型抗体ドメインまたはフレームワークの代替の配置を含むタンパク質が含まれる。本発明のＣＢ１結合性タンパク質ならびにそのバリアント及び変異体は、ＣＢ１結合及び機能を保持しているか、または追加または代替の機能を提供し得る。そのようなＣＢ１結合性タンパク質は、本発明の範囲内であり、当業者に周知である。
【００７４】
抗体などの結合性タンパク質に関する「抗原結合性ドメイン」及び「抗原結合性断片」という用語は、抗体の標的抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体、またはそのバリアントもしくは変異体の部分または断片を意味し、それには、抗原に特異的に結合して、複合体を形成する任意の天然に存在するか、酵素的に入手可能か、合成か、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質が含まれる。タンパク質分解性消化または抗体可変ドメイン及び任意選択で定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現を伴う組換え遺伝子工学技術などの任意の適切な標準的な技術を使用して、抗体の抗原結合性断片を例えば完全抗体分子から得ることができる。１つまたは複数の可変及び／または定常ドメインをアレンジして適切な配置にするか、またはコドンを導入する、システイン残基を作製する、アミノ酸を改変、付加、もしくは欠失させることなどができる。抗原結合性断片を含む多数の断片、変異体またはバリアント抗体形式が当技術分野で公知である。抗原結合性断片の非限定的例には、（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン及びＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインを含むＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメイン及びＶＨドメインを含むＦｖ断片；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片；ならびに（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが含まれる。ドメイン特異的抗体、シングルドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ディアボディ、線状抗体（相補的軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合性部位の対を形成するタンデム型Ｆｖセグメントの対；ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１を含む）、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作分子も、本明細書で使用する場合の「抗原結合性断片」という表現の範囲内に包含される。「その抗原結合性断片」という用語は、限定を意味するものではなく、追加の、または再編成された抗体領域を有してもよいバリアント分子内に含まれる断片、例えば、特定の抗原への同じ抗原結合を保持している多重特異性抗体及び抗体コンジュゲートを含む。
【００７５】
抗体の抗原結合性断片は典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むこととなる。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってよく、一般に、１つまたは複数のフレームワーク配列に隣接するか、またはそれとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合しているＶＨドメインを有する抗原結合性断片において、ＶＨ及びＶＬドメインは、任意の適切な配置で相互に位置していてよい。例えば、可変領域は二量体であってよく、ＶＨ−ＶＨ二量体、ＶＨ−ＶＬ二量体またはＶＬ−ＶＬ二量体を含んでよい。別法では、抗体の抗原結合性断片は、単量体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを含んでもよい。
【００７６】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合性に連結した少なくとも１つの可変ドメインを含んでもよい。本発明の抗体の抗原結合性断片内で見い出され得る可変及び定常ドメインの非限定的な例示的配置には：（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；及び（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが含まれる。上に列挙した例示的な配置のいずれも含めて、可変及び定常ドメインのいずれの配置においても、可変及び定常ドメインは、直接相互に連結していてもよいし、または完全もしくは部分的なヒンジまたはリンカー領域により連結していてもよい。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接する可変及び／または定常ドメイン間にフレキシブルまたは半フレキシブルな連結をもたらす、少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなってよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、相互に、及び／または１つまたは複数の単量体ＶＨもしくはＶＬドメイン（例えば、ジスルフィド結合により）と非共有結合性会合で、上に列挙した可変及び定常ドメイン配置のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
【００７７】
完全抗体分子を含むとき、抗原結合性断片は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。抗体の多重特異性抗原結合性断片は典型的には通常、各可変ドメインが別の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープと特異的に結合することができる少なくとも２つの異なる可変ドメインを含むであろう。本明細書に開示の例示的な二重特異性抗体形式を含む、任意の多重特異性抗体形式を、当技術分野で利用可能なルーチン的な技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合性断片の状況で使用するために採用することができる。
【００７８】
結合性タンパク質に関する「特異的」または「に特異的な」という用語は、例えば任意の他の標的または抗原についてよりも高い親和性（すなわち、低いＫｄ値）で、標的または抗原に選択的に結合する結合性タンパク質の能力を意味する。
【００７９】
本発明の抗体は、ある特定の実施形態では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能し得る。ＣＤＣは、補体の存在下での本発明の抗体による抗原発現性細胞の溶解を指す。ＡＤＣＣは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識して標的細胞の溶解をもたらす細胞媒介性反応を指す。ＣＤＣ及びＡＤＣＣは、当技術分野で周知かつ利用可能なアッセイを使用して測定することができる（例えば、米国特許第５，５００，３６２号及び同第５，８２１，３３７号、ならびにＣｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６を参照されたい）。
【００８０】
「マウス抗体」という用語は、マウス生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を意味する。マウス抗体は、例えばＣＤＲ、殊にＣＤＲ３に、マウス生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロで無作為もしくは部位特異的変異誘発により、またはインビボで体細胞変異により導入される変異）を含んでもよい。しかしながら、「マウス抗体」という用語は、ヒトなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がマウスフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図されていない。
【００８１】
「組換え抗体」という用語は、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現させる抗体、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される抗体、免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離される抗体または他のＤＮＡ配列への免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを伴う任意の他の手段により調製、発現、作製もしくは単離される抗体など、組換え手段により調製、発現、作製、または単離される抗体を意味する。ある特定の実施形態では、そのような組換え抗体を、インビトロ変異誘発（または、免疫グロブリン配列についてトランスジェニックな動物を使用する場合には、インビボ体性変異誘発）に掛けるので、組換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、生殖細胞系ＶＨ配列及びＶＬ配列由来に由来し、それに関連しても、インビボで特定の抗体生殖細胞系レパートリー内に天然には存在し得ない配列である。
【００８２】
「単離抗体」という用語は、その天然環境の少なくとも１つの構成要素から同定及び分離及び／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの構成要素から、または抗体が天然に存在するか、もしくは天然に産生される組織もしくは細胞から分離または除去された抗体が、本発明の目的での「単離抗体」である。単離抗体には、組換え細胞内のその場の抗体も含まれる。単離抗体は、少なくとも１つの精製または単離ステップに掛けられた抗体である。ある特定の実施形態によると、単離抗体は、他の細胞物質及び／または化学物質を実質的に含まないこともある。
【００８３】
「中和」または「遮断」抗体という用語は、そのリガンドまたは抗原への結合がリガンドまたは抗原の生物学的活性を妨げる抗体を意味する。一実施形態では、中和結合性タンパク質は、抗原（例えば、サイトカイン）に結合して、その生物学的活性を少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上低下させる。ＣＢ１に結合する中和抗体は：（ｉ）ＣＢ１またはＣＢ１断片とＣＢ１リガンド（例えば、カンナビノイドなど）との相互作用に干渉する、及び／または（ｉｉ）ＣＢ１の少なくとも１つの生物学的機能の阻害をもたらす。ＣＢ１中和または遮断抗体に起因する阻害は、適切なアッセイを使用して検出可能である限り、完全である必要はない。ＣＢ１阻害を検出するための例示的なアッセイを本明細書に記載する。
【００８４】
「親和性」という用語は、結合性タンパク質とその標的抗原との間の相互作用の強度を意味し、結合性タンパク質のＣＤＲの配列により、さらには、それらのサイズ、形状、及び／または電荷などの抗原及び抗体の性質により決定される。結合性タンパク質を、マイナスの副作用を最小限にしつつ所望の治療上の終点をもたらす親和性で選択することができる。親和性は、当業者に公知の方法を使用して測定することができる。
【００８５】
「親和性成熟抗体」という用語は、１つまたは複数の改変がその１つまたは複数のＣＤＲまたはＦＲで行われていて、それらが、それらの改変（複数可）を持たない改変されていない「親」抗体と比較して、その標的抗原についての抗体の親和性の改善をもたらしていることを意味する。例示的な親和性成熟抗体は、標的抗原についてナノモルの、またはピコモルの親和性さえも有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順により生成される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３には、ＶＨドメイン及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６に記載されており、かつ活性増強性アミノ酸残基を有する選択的変異誘発位置、接触または超変異位置における変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【００８６】
「ＣＤＲ移植抗体」という用語は、ＶＨの、及び／またはＶＬのＣＤＲ領域のうちの１つまたは複数の配列が別の抗体のＣＤＲ配列で置き換えられている重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む抗体を意味する。例えば、マウス重鎖可変領域及びマウス軽鎖可変領域を有する抗体であって、マウスＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数がヒトＣＤＲ配列で置き換えられている抗体など、その２つの抗体は異なる種に由来してよい。
【００８７】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト生殖細胞系配列に、より類似するように変更されている非ヒト種からの抗体を意味する。ヒト化抗体の１種は、１つまたは複数のＣＤＲ配列が非ヒトであり、かつフレームワーク領域（ＦＲ）配列がヒトまたは実質的にヒトである（例えば、それらは、ヒト抗体のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である）ＣＤＲ移植抗体である。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、かつＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列がヒト免疫グロブリンのものである、可変ドメインの実質的にすべて、少なくとも１つ、典型的には２つを含んでよい（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）。ヒト化抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含んでよい。一実施形態では、ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖を含むだけである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖を含むだけである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／または重鎖のヒト化可変ドメインを含むだけである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖、さらには少なくとも重鎖の可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、重鎖、さらには少なくとも軽鎖の可変ドメインを含む。
【００８８】
「効力」という用語は、所望の作用を達成する結合性タンパク質の能力を意味し、かつその治療有効性の尺度である。効力は、当業者に公知の方法を使用して評価することができる。
【００８９】
「有効量」という用語は、ＣＢ１の活性を減少させて、患者において症状の寛解をもたらす、または所望の生物学的結果を達成するために十分な投薬量または量を意味する。所望の生物学的結果には、例えば、ＣＢ１活性の低下または上昇が含まれる。
【００９０】
「交差反応性」という用語は、抗体を生じさせた抗原以外の標的抗原に結合する結合性タンパク質の能力を意味する。一般に、結合性タンパク質は、その標的抗原に適切に高い親和性で結合するはずであるが、別の種の同じ標的抗原に結合し得るか、または非標的抗原について低い親和性を示し得る。個々の結合性タンパク質を一般に、２つの基準：（１）抗体標的の既知の発現に適した組織染色；及び（２）同じ器官からのヒト組織と毒性試験種（例えば、マウス及びカニクイザル）の組織とで類似の染色パターンを満たすように選択する。交差反応性を評価するこれらの及び他の方法は当業者に公知である。
【００９１】
「生物学的機能」という用語は、天然に存在するか、または組換え手段により可能となるかにかかわらず、結合性タンパク質の特異的なインビトロ活性またはインビボ活性を意味する。結合性タンパク質は、複数のクラスの抗原を標的とし、複数の作用機序を介して所望の治療結果を達成し得る。結合性タンパク質は、それらの標的の活性をアゴナイズ、アンタゴナイズ、または中和し得る。結合性タンパク質は、それが結合する標的のクリアランスを援助し得るか、または細胞に結合した場合に細胞傷害性をもたらし得る。２つ以上の抗体の部分を１つの多価形式に組み込んで、単一の結合性タンパク質分子において別個の機能を達成してもよい。生物学的活性には、これに限定されないが、受容体への結合、細胞増殖の誘導、細胞成長の阻害、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導、及び酵素活性が含まれる。生物学的機能を評価するために使用されるインビトロアッセイ及びインビボモデルは当業者に公知である。
【００９２】
「安定な」という用語は、その物理的、化学的、及び／または生物学的完全性または活性を所与の時間または貯蔵条件内で保持することができることを意味する。長期間にわたって様々な温度で、インビトロで安定な結合性タンパク質が一般に望ましい。結合性タンパク質を安定化させる、及び様々な温度でのそれらの安定性を評価する方法は当業者に公知である。
【００９３】
「溶解性」という用語は、水溶液内で分散し続けるタンパク質の能力を意味する。水性製剤におけるタンパク質の溶解性は、疎水性アミノ酸残基及び親水性アミノ酸残基の適正な分布に依存し、したがって、溶解性は、正確にフォールディングされたタンパク質の生成と関与し得る。当業者は、ルーチン的なＨＰＬＣ技術及び当業者に公知の方法を使用して結合性タンパク質の溶解性の上昇または低下を検出することができるであろう。
【００９４】
用語「免疫原性」は、免疫応答を誘導する物質の能力を意味する。治療用結合性タンパク質の投与は、免疫応答のある特定の発生率をもたらし得る。抗体及び結合性タンパク質の免疫原性を低下させる方法は当業者に公知である。
【００９５】
「検出可能な標識」という用語は、抗体またはその分析物などの、特異的な結合対のメンバーに付着して、その特異的な結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能にする部分を意味する。特異的な結合対の標識付きメンバーは、「検出可能に標識付けされた」と称される。したがって、「標識付き結合性タンパク質」という用語は、結合性タンパク質の同定をもたらす検出可能な標識が組み込まれているタンパク質を指す。一実施形態では、検出可能な標識は、視覚的または機器による手段により検出可能なシグナルを生ずることができ、例えば、放射標識アミノ酸の組み込み、またはアビジン（例えば、光学的または比色方法により検出することができる蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチドのための検出可能な標識の例には、これに限定されないが、放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）；色素原；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド発光体（ｐｈｏｓｐｈｏｒｓ）；酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；及びガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれる。イムノアッセイで一般に用いられる標識の代表的な例には、光を生じる部分、例えば、アクリジニウム化合物、及び蛍光を生じる部分、例えば、フルオレセインが含まれる。これに関して、その部分自体は、検出可能に標識付けされていなくてもよいが、また別の部分と反応すると検出可能になり得る。
【００９６】
「コンジュゲート」という用語は、治療薬、細胞傷害薬、細胞増殖抑制薬、またはイメージング薬などの別の機能性分子または第２の化学的部分に化学的に連結している抗体などの結合性タンパク質を指す（例えば、第７，８５０，９６２号を参照されたい）。「薬剤」という用語には、化学化合物、化学化合物の混合物、タンパク質のペプチドなどの生物高分子、または生物物質から作製された抽出物が含まれる。一実施形態では、治療薬または細胞傷害薬には、これに限定されないが、代謝拮抗薬、アルキル化薬、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生薬、抗有糸分裂薬、アンスラサイクリン、毒素、及びアポトーシス薬が含まれる。有用な薬剤には、例えば、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアンスラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシンならびにそれらの及び類似体または同族体が含まれる。抗ＣＢ１結合性タンパク質コンジュゲートの作製において有用なイメージング薬には、これに限定されないが、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、及びビオチンが含まれる。イムノアッセイの文脈において用いる場合、コンジュゲート抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であってよい。抗体を化学的架橋または組換え方法により連結することができる。抗体をまた、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号；または同第４，１７９，３３７号に示されている方法で、様々な非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンのいずれかに連結することもできる。抗体をポリマーへの共有結合性のコンジュゲーションにより化学的に改変して、例えば、それらの循環半減期を延長することができる。例示的なポリマー及びそれらを結合するための方法は、米国特許第４，７６６，１０６号；同第４，１７９，３３７号；同第４，４９５，２８５号、及び同第４，６０９，５４６号にも示されている。
【００９７】
「結晶化（された）」という用語は、結晶の形態で存在する結合性タンパク質を意味する。結晶は、物質の固体状態の１つの形態であり、これは、非晶質固体状態または液晶状態などの他の形態とは別個である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）、または分子アセンブリー（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的で繰り返しの三次元アレイから構成される。
【００９８】
「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの１つの型が「プラスミド」であり、これは、別のＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の型はウイルスベクターであり、この場合、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノム中にライゲートすることができる。他のベクターにはＲＮＡベクターが含まれる。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中において自律複製し得る（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクターは、宿主細胞に導入する際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムと共に複製される（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）。「組換え発現ベクター」または「発現ベクター」は、作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」を互換的に使用することができ、それというのも、プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるためである。しかしながら、等価な機能を供する、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの他の形態の発現ベクターも含まれる。
【００９９】
「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」という用語は、外因性ＤＮＡまたはＲＮＡが導入された細胞を意味する。このような用語は、特定の対象細胞だけではなく、そのような細胞の後代も指す。ある特定の改変は、変異または環境のいずれかの影響に起因して、後の世代において生じ得るので、このような後代は、実際には、親細胞と同一ではないかもしれないが、なお本明細書で使用する場合の用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。一実施形態では、宿主細胞には、原核細胞及び真核細胞が含まれる。一実施形態では、真核細胞には、原生生物細胞、真菌細胞、植物細胞及び動物細胞が含まれる。別の実施形態では、宿主細胞には、これに限定されないが、原核細胞系Ｅ．ｃｏｌｉ；哺乳動物細胞系ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＮＳＯ、ＳＰ２及びＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞系Ｓｆ９；ならびに真菌細胞Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが含まれる。
【０１００】
「トランスフェクション」という用語は、宿主細胞に外因性核酸を導入するために一般に使用される様々な技術、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを意味する。
【０１０１】
「生体サンプル」という用語は、生物または死んだ生物からのある量の物質を意味する。そのような物質には、これに限定されないが、血液、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓が含まれる。
【０１０２】
「対照」という用語は、分析物を含まない（「陰性対照」）、または分析物を含む（「陽性対照」）ことが分かっている組成物を指す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含んでよいか、またはアッセイ性能特性を立証するために使用することができ、試薬の完全性の有用な指標である。
【０１０３】
「特異的結合対」という用語は、化学的または物理的手段を介して相互に特異的に結合する２種の異なる分子を意味する。特異的な結合対には、例えば、抗体とその抗原、ビオチンとアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物とレクチン、相補的ヌクレオチド配列、エフェクターと受容体分子、補因子と酵素、酵素阻害薬と酵素、ならびに特異的な結合を保持するその断片及び類似体が含まれる。特異的結合対の例は、抗体のＶＨ及びＶＬ領域（「ＶＨ／ＶＬ」）である。
【０１０４】
「リンカー」という用語は、２つのポリペプチド（例えば、２つのＶＨドメインまたは２つのＶＬドメイン）を連結させるために使用される、１個のアミノ酸残基またはペプチド結合により一緒になった２個以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを意味する。リンカーは、当技術分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。
【０１０５】
「エピトープ」という用語は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域中の特異的抗原結合性部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が、１つよりも多いエピトープを有することがある。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域と結合することもあり、かつ異なる生物学的作用を有することがある。エピトープは、立体構造または線状のいずれかであり得る。立体構造エピトープは、線状ポリペプチド鎖の種々のセグメントから、空間的に並列に並ぶアミノ酸により生成される。線状エピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基により生成されるものである。ある特定の状況では、エピトープは、抗原上のアミノ酸、糖、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得、かつ特異的三次元構造特性、及び／または特異的電荷特性を有し得る。結合性タンパク質は、抗原上の同じアミノ酸に結合するならば「同じエピトープに結合する」、また、交差競合し得る（一方の抗体が、他方の結合または調節作用を阻止し得る）。加えて、エピトープの構造的規定（重複、類似、同一）は情報を与えるものであり；機能的規定は、構造（結合）及び機能（調節、競合）パラメーターを包含する。
【０１０６】
「薬物動態」という用語は、薬物が生物により吸収され、分散され、代謝され、かつ排出されるプロセスを意味する。
【０１０７】
「生物学的利用能」という用語は、投与後に、その標的に達する実薬の量を意味する。生物学的利用能は、安定性、溶解性、免疫原性及び薬物動態を含む複数の特性の関数であり、当業者に公知の方法を使用して評価することができる。
【０１０８】
「表面プラスモン共鳴」という用語は、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出により、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ；Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６）を使用して、リアルタイム生物特異的相互作用の分析を可能にする光学的現象を意味する。
【０１０９】
「Ｋｏｎ」、「会合速度定数」、及び「Ｋａ」は、結合性タンパク質／抗原複合体を形成するための、抗原への結合性タンパク質（例えば、抗体）の会合についてのオンレート定数を意味する。この値は、下式により示されるとおり、結合性タンパク質とその標的抗原との結合速度、または結合性タンパク質と抗原との間での複合体形成の速度を示している：
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→「Ａｂ−Ａｇ」
【０１１０】
「Ｋｏｆｆ」及び「解離速度定数」という用語は、結合性タンパク質／抗原複合体からの結合性タンパク質（例えば、抗体）の解離についてのオフレート定数を意味する。この値は、下式により示されるとおり、その標的抗原からの結合性タンパク質の解離速度、または遊離抗体及び抗原への経時的なＡｂ−Ａｇ複合体の分離を示している：
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
【０１１１】
「Ｋｄ」及び「平衡解離定数」という用語は、平衡時の滴定測定で、または解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を会合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることにより得られる値を意味する。会合及び解離速度定数を決定するための方法は、当技術分野で周知である。蛍光ベースの技術が、平衡時の生理学的バッファー中のサンプルを調べる高い感度及び能力を提供する。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイ（ＢＩＡｃｏｒｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）またはＫｉｎＥｘＡ（登録商標）アッセイ（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）などの他の実験アプローチ及び機器を使用することもできる。
【０１１２】
「バリアント」という用語は、アミノ酸の付加、挿入、欠失、または保存的置換によりアミノ酸配列が所与のポリペプチドとは異なるが、所与のポリペプチドの生物学的活性を保持しているポリペプチドを意味する（例えば、バリアント抗体は、その標的への結合について、天然の抗体と競合し得る）。アミノ酸の保存的置換は、あるアミノ酸を、類似の特性（例えば、親水性ならびに荷電領域の程度及び分布）の異なるアミノ酸で置き換えるものであり、典型的にはわずかな変化を伴うと当技術分野で認識されている。これらのわずかな変化は一部では、当技術分野で理解されるとおり、アミノ酸のハイドロパシー指数を検討することにより同定することができる。アミノ酸のハイドロパシー指数は、その疎水性及び電荷の検討に基づく。タンパク質において類似のハイドロパシー指数のアミノ酸は置換することができ、そのタンパク質はタンパク質機能をなお保持する。一態様では、±２のハイドロパシー指数を有するアミノ酸を置換する。アミノ酸の親水性を使用して、生物学的機能を保持しているタンパク質をもたらすであろう置換を明らかにすることもできる。ペプチドの状況におけるアミノ酸の親水性の考慮は、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算を可能にし、これは、抗原性及び免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度である。類似の親水性の値を有するアミノ酸の置換は、当技術分野で理解されるとおり、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様では、相互に±２以内の親水性の値を有するアミノ酸で置換を行う。アミノ酸の疎水性指数及び親水性の値は両方とも、そのアミノ酸の特定の側鎖により影響される。その観察と一致して、生物学的機能と適合性であるアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、及び他の特性により明らかになるとおり、アミノ酸、及び特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解される。「バリアント」という用語にはまた、タンパク質分解、リン酸化、または他の翻訳後修飾などにより差別的にプロセシングされているが、生物学的活性または抗原反応性をまだ保持しているポリペプチドまたはその断片が含まれる。「バリアント」という用語は、別段に定義されていない限り、バリアントの断片を包含する。バリアントは、野生型配列に対して９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、または７５％同一であり得る。
【０１１３】
本明細書に開示の抗ＣＢ１抗体は、その抗体が由来する対応する生殖細胞系配列と比較した場合に、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク及び／またはＣＤＲ領域に１つまたは複数のアミノ酸置換、付加、挿入及び／または欠失を含んでよい。そのような変異は、本明細書に開示のアミノ酸配列を公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖細胞系配列と比較することにより容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示のアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、及びその抗原結合性断片であって、１つまたは複数のフレームワーク及び／またはＣＤＲ領域内の１個または複数のアミノ酸が、その抗体が由来する生殖細胞系配列の対応する残基（複数可）に、または別のヒト生殖細胞系配列の対応する残基（複数可）に、または対応する生殖細胞系残基（複数可）の保存的アミノ酸置換に変異している抗体、及びその抗原結合性断片を含む（そのような配列変化は本発明では総じて「生殖細胞系変異」と称される）。当業者は、本明細書に開示の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列から出発して、１つもしくは複数の個々の生殖細胞系変異またはそれらの組み合わせを含む多数の抗体及び抗原結合性断片を容易に生成することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨドメイン及び／またはＶＬドメイン内のフレームワーク及び／またはＣＤＲ残基のすべてを、その抗体が由来する元の生殖細胞系配列において見い出される残基に戻し変異させる。他の実施形態では、ある特定の残基のみを、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内で、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内で見い出される変異残基のみを、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内で見い出される変異残基のみを元の生殖細胞系配列に戻し変異させる。他の実施形態では、フレームワーク及び／またはＣＤＲ残基（複数可）の１個または複数を、異なる生殖細胞系配列（すなわち、その抗体が元々由来する生殖細胞系配列とは異なる生殖細胞系配列）の対応する残基（複数可）に変異させる。さらに、本発明の抗体は、フレームワーク及び／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖細胞系変異の任意の組み合わせを含んでもよく、例えば、その際、ある特定の個々の残基を特定の生殖細胞系配列の対応する残基に変異させる一方で、元の生殖細胞系配列とは異なるある特定の他の残基は維持するか、または異なる生殖細胞系配列の対応する残基に変異させる。得られたら、１つまたは複数の生殖細胞系変異を含む抗体及び抗原結合性断片を、結合特異性の改善、結合親和性の上昇、アンタゴニスト生物学的特性またはアゴニスト生物学的特性の向上または増強（場合により）、免疫原性の低下などの１つまたは複数の所望の特性について容易に試験することができる。この一般手法で得られる抗体及び抗原結合性断片は本発明に包含される。
【０１１４】
核酸に関する場合の「実質的同一性」及び「実質的に同一な」という用語は、適切なヌクレオチド挿入または欠失で別の核酸（またはその相補的ストランド）と最適にアラインさせた場合に、下に論述するとおりのＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐなどの配列同一性の任意の周知のアルゴリズムにより測定して、それぞれヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％においてヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対して実質的同一性を有する核酸分子は、ある特定の状況で、参照核酸分子がコードするポリペプチドと同じか、または実質的に同様のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
【０１１５】
ポリペプチドに関する場合の「実質的類似性」及び「実質的に類似な」という用語は、２つのポリペプチド配列が、デフォルトのギャップウェイト（ｄｅｆａｕｌｔ  ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔｓ）を用いるＧＡＰプログラムまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムなどにより最適にアラインさせた場合に、少なくとも約９５％の配列同一性、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を共有することを意味する。一実施形態では、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。本発明はまた、１つまたは複数の保存的置換を有する本明細書に開示のＶＨ、ＶＬ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む抗ＣＢ１抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書に開示のＶＨ、ＶＬ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比べて、例えば、１０以下、８以下、６以下、４以下などの保存的アミノ酸置換を含むＶＨ、ＶＬ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＣＢ１抗体を含む。「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を持つ側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換されるものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないはずである。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換により相互に異なる場合、配列同一性パーセントまたは類似性の程度を上方調節して、置換の保存的性質を修正することができる。この調節を行う手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照されたい。類似の化学的特性を持つ側鎖を有するアミノ酸の群の例には（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリン及びトレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、及びヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパルタート及びグルタマート、ならびに（７）硫黄含有側鎖：システイン及びメチオニンが含まれる。好ましい保存的アミノ酸置換基は：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタマート−アスパルタート、及びアスパラギン−グルタミンである。別法では、保存的置き換えは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５に開示のＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。「適度な保存的」置き換えは、１４４３−１４４５に開示のＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負ではない値を有する任意の変化である。
【０１１６】
配列同一性とも称されるポリペプチドでの配列類似性は典型的には、配列解析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、様々な置換、欠失及び他の改変に割り当てられた類似性の尺度を用いて類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物からの相同的ポリペプチドなどの密接に関係があるポリペプチド間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定するためのデフォルトパラメーターを用いて使用され得るＧａｐ及びＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含む。例えば、ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１を参照されたい。ポリペプチド配列を、デフォルトまたは推奨パラメーターを用いて、ＦＡＳＴＡを使用して比較することもでき、ＧＣＧバージョン６．１．ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）のプログラムは、クエリ配列と検索配列との間の最適オーバーラップの領域のアラインメント及び配列同一性パーセンテージを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）前出）。本発明の配列を、異なる生物からの多数の配列を含むデータベースと比較するとき、別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメーターを用いた、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれるＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照されたい。
【０１１７】
抗体の生物学的特徴
本発明は、ＣＢ１に高親和性で結合する抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片を含む。
【０１１８】
表面プラスモン共鳴により測定した場合に、ＣＢ１に対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオンレート定数（Ｋｏｎ）を有する、本発明の抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片を提供する。
【０１１９】
表面プラスモン共鳴により測定した場合に、上記標的に対して高くても約１０−３ｓ−１；高くても約１０−４ｓ−１；高くても約１０−５ｓ−１；及び高くても約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフレート定数（Ｋｏｆｆ）を有する、本発明の抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片を提供する。
【０１２０】
上記標的に対して高くても約１０−７Ｍ；高くても約１０−８Ｍ；高くても約１０−９Ｍ；高くても約１０−１０Ｍ；高くても約１０−１１Ｍ；高くても約１０−１３Ｍ；及び高くても１０−１４Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する、本発明の抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片を提供する。抗ＣＢ１抗体及びその断片は、ＣＢ１について約０．０１ｎＭ〜約５００ｎＭ、約０．０２ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約０．０２〜約２００ｎＭ、約０．０５〜約１００ｎＭ、約０．０５〜約５０ｎＭの範囲の結合親和性Ｋｄ値を有し得る。上記抗体及びその断片は、ＣＢ１について約５００ｎＭ以下、約２５０ｎＭ以下、約２００ｎＭ以下、約１５０ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約５００ｐＭ以下、約２５０ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、または約１０ｐＭ以下の結合親和性Ｋｄ値を有し得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、約１５ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約８ｐＭ未満、約６ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、または約１ｐＭ未満のＫｄでＣＢ１に結合する。
【０１２１】
一部の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、リモナバン、タラナバント、ＡＭ２５１、ＡＭ１３８７、ＡＭ４１１３、カンナビゲロール、イビピナバント、オテナバント、スリナバント、テトラヒドロカンナビバリン、及びビロダミン、及びＡＭ６５４５などの小分子ＣＢ１受容体調節物質と少なくとも同様の効力がある。一部の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、リモナバン、タラナバント、ＡＭ２５１、ＡＭ１３８７、ＡＭ４１１３、カンナビゲロール、イビピナバント、オテナバント、スリナバント、テトラヒドロカンナビバリン、及びビロダミン、及びＡＭ６５４５などの小分子ＣＢ１受容体調節物質よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、または少なくとも２０倍高いＣＢ１アンタゴニストまたはインバースアゴニスト活性を有する。一部の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片はＣＢ１アゴニスト媒介性シグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、ＣＢ１アゴニスト媒介性シグナル伝達の阻害を、細胞内ｃＡＭＰレベル及び／または下流のＥＲＫリン酸化を決定することにより測定する。
【０１２２】
一部の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片は、ＢＢＢ透過または脳曝露の減少または非存在という利点を有する。一部の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片のＢＢＢ透過は、小分子ＣＢ１アゴニスト、アンタゴニスト、またはインバースアゴニスト（例えば、リモナバン、タラナバント、ＡＭ２５１、ＡＭ１３８７、ＡＭ４１１３、カンナビゲロール、イビピナバント、オテナバント、スリナバント、テトラヒドロカンナビバリン、及びビロダミン、及びＡＭ６５４５）と比べて脳透過の減少を示す。一部の実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片は治療効果を、小分子ＣＢ１受容体アゴニスト、アンタゴニスト、またはインバースアゴニストと比べてＣＮＳ副作用の減少と共に提供する。小分子ＣＢ１受容体アンタゴニストのリモナバンと関連するＣＮＳ副作用には、例えば、不安、うつ病、激昂、摂食障害、過敏性、攻撃性、及び不眠症が含まれる（Ｍｏｒｅｉｒａ（２００９）Ｒｅｖ．Ｂｒａｓ．Ｐｓｉｑｕｉａｔｒ．３１（２）：１４５−１５３）。
【０１２３】
エピトープマッピング及び関連技術
本発明は、ヒトＣＢ１の細胞外ドメイン内で（例えば、アミノ酸１〜１１６、及び／または細胞外ループｅ１（アミノ酸１７６〜１８７；配列番号６）、ｅ２（アミノ酸２５６〜２７３；配列番号１０）、及び／またはｅ３（アミノ酸３６６〜３７７；配列番号１４）内で）見い出される１個または複数のアミノ酸と相互作用する抗ＣＢ１抗体を含む。上記抗体が結合するエピトープは、ＣＢ１の細胞外ドメイン内に位置する３個以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上）のアミノ酸の単一連続配列から成り得る。別法では、上記エピトープは、ＣＢ１の細胞外ドメイン内に位置する複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）から成り得る。さらに、ＣＢ抗体が結合するエピトープは、構造変化または結合による曝露により細胞外ではないＣＢ１の部分を含んでよい。ＣＢ１及びその様々なドメインの配列を表１に示す。
【０１２４】
当業者に公知の様々な技術を使用して、抗体がポリペプチドまたはタンパク質内で「１個または複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定することができる。例示的な技術には、例えばＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．，Ｎ．Ｙ．）に記載されたものなどのルーチン的なクロスブロッキングアッセイ、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット解析（（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：４４３−４６３）、及びペプチド切断解析が含まれる。加えて、エピトープ切り出し、エピトープ抽出及び抗原の化学修飾などの方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析法により検出される水素／重水素交換である。一般に、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識すること、続いて、抗体を、その重水素標識タンパク質と結合させることを伴う。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、水素−重水素交換が、抗体により保護されている残基を除くすべての残基で生じることを可能にする（重水素標識を維持する）。抗体の解離後に、標的タンパク質をプロテアーゼ切断及び質量分析に掛け、それにより、抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７（２）：２５２−２５９；Ｅｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照されたい。
【０１２５】
本発明はさらに、本明細書に記載の特異的な例示的な抗体（例えば、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５（及びそのヒト化バリアント）、Ｍ６、Ｍ７（及びそのヒト化バリアント）、及びＭ８）のいずれかと同じエピトープに結合する抗ＣＢ１抗体を含む。同様に、本発明は、ＣＢ１への結合について、本明細書に記載の特異的な例示的な抗体（例えば、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５（及びそのヒト化バリアント）、Ｍ６、Ｍ７（及びそのヒト化バリアント）、及びＭ８）のいずれかと競合する抗ＣＢ１抗体も含む。
【０１２６】
当技術分野で公知のルーチン的な方法を使用することにより、ある抗体が、参照抗ＣＢ１抗体と同じエピトープに結合するか、またはそれと、結合について競合するかを容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗ＣＢ１抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体をＣＢ１タンパク質（例えば、ＣＢ１細胞外ドメインの可溶性部分または細胞表面で発現するＣＢ１）に結合させる。次に、そのＣＢ１分子に結合する試験抗体の能力を評価する。その試験抗体が、参照抗ＣＢ１抗体との飽和結合後に、ＣＢ１に結合することができれば、その試験抗体は参照抗ＣＢ１抗体とは異なるエピトープに結合すると結論することができる。他方で、その試験抗体が、参照抗ＣＢ１抗体との飽和結合後に、ＣＢ１に結合することができなければ、その試験抗体は、本発明の参照抗ＣＢ１抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合し得る。次いで、追加のルーチン的な実験（例えば、ペプチド変異及び結合分析）を実施して、試験抗体の結合が観察されなかったことが実際に、参照抗体と同じエピトープへの結合によるのか、または立体的遮断（または別の現象）が、結合が観察されなかったことの原因かを確認することができる。この種の実験は、当技術分野で利用可能なＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリーまたは任意の他の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを使用して行うことができる。本発明の特定の実施形態では、競合結合アッセイで測定して、例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍過剰の１つの抗体が、他方の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％またはさらに９９％も阻害するならば、その２つの抗体は、同じ（または重複する）エピトープに結合する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５−１５０２を参照されたい）。別法では、一方の抗体の結合を減少させる、または除去する抗原における本質的にすべてのアミノ酸変異が、他方の結合を減少させる、または除去するならば、その２つの抗体は同じエピトープに結合すると考えられる。一方の抗体の結合を減少させる、または除去するアミノ酸変異のサブセットのみが、他方の結合を減少させる、または除去するならば、その２つの抗体は「重複エピトープ」を有すると考えられる。
【０１２７】
一部の実施形態では、本発明は、ＣＢ１への結合について本明細書に開示の抗体またはその抗原結合性断片と競合し得る抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。そのような抗体は、ルーチン的な競合結合アッセイを使用して同定することができる。例えば、ある抗体が、結合について参照抗ＣＢ１抗体と競合するかを決定するために、上記結合方法を、２つの方向で行う：第１の方向性では、参照抗体を飽和条件下でＣＢ１タンパク質（例えば、ＣＢ１細胞外ドメインの可溶性部分または細胞表面で発現するＣＢ１）に結合させ、続いて、ＣＢ１分子への試験抗体の結合を評価する。第２の方向性では、試験抗体を飽和条件下でＣＢ１分子に結合させ、続いて、ＣＢ１分子への参照抗体の結合を評価する。両方の方向性において、第１の（飽和）抗体のみがＣＢ１分子に結合することができるならば、試験抗体及び参照抗体はＣＢ１への結合について競合すると結論される。結合について参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と同じエピトープに必ずしも結合しなくてもよいが、参照抗体の結合を、例えば、重複または隣接エピトープへの結合により立体的に遮断し得る。競合は、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、または表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイにより測定することができる。さらに、交差競合及びエピトープビニングアッセイを、Ｏｃｔｅｔ  ＨＴＸ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＬＬＣ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ  ９４５３８）を使用して行うことができる。
【０１２８】
一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２０、３２、４４、５６、６８、８０、９２、１０４、１１６、１２８、１４０、１５２、１６４、１７６、１８８、２００、２１２、２２４、２３６、２４８、２６０、２７２、２８４、２９６、３０８、及び３２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖ＣＤＲ１配列を含む。別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２１、３３、４５、５７、６９、８１、９３、１０５、１１７、１２９、１４１、１５３、１６５、１７７、１８９、２０１、２１３、２２５、２３７、２４９、２６１、２７３、２８５、２９７、３０９、及び３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖ＣＤＲ２配列を含む。別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２、３４、４６、５８、７０、８２、９４、１０６、１１８、１３０、１４２、１５４、１６６、１７８、１９０、２０２、２１４、２２６、２３８、２５０、２６２、２７４、２８６、２９８、３１０、及び３２２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖ＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２６、３８、５０、６２、７４、８６、９８、１１０、１２２、１３４、１４６、１５８、１７０、１８２、１９４、２０６、２１８、２３０、２４２、２５４、２６６、２７８、２９０、３０２、３１４、及び３２６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２７、３９、５１、６３、７５、８７、９９、１１１、１２３、１３５、１４７、１５９、１７１、１８３、１９５、２０７、２１９、２３１、２４３、２５５、２６７、２７９、２９１、３０３、３１５、及び３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２配列を含む。別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２８、４０、５２、６４、７６、８８、１００、１１２、１２４、１３６、１４８、１６０、１７２、１８４、１９６、２０８、２２０、２３２、２４４、２５６、２６８、２８０、２９２、３０４、３１６、及び３２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
【０１２９】
本明細書で提供する抗ＣＢ１抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを独立に選択及びマッチングして、本明細書で提供する抗体からの任意の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；ならびに任意の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を形成してもよい。本明細書で提供する抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を独立に選択及びマッチングして、本明細書で提供する抗体からの任意の重鎖及び軽鎖を含む抗体または抗原結合性断片を形成してもよい。
【０１３０】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する可変重（ＶＨ）鎖配列を含む。
【０１３１】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％  少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する可変軽（ＶＬ）鎖配列を含む。
【０１３２】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７、２９、４１、５３、６５、７７、８９、１０１、１１３、１２５、１３７、１４９、１６１、１７３、１８５、１９７、２０９、２２１、２３３、２４５、２５７、２６９、２８１、２８３、３０５、及び３１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖配列を含む。
【０１３３】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２３、３５、４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９、１３１、１４３、１５５、１６７、１７９、１９１、２０３、２１５、２２７、２３９、２５１、２６３、２７５、２８７、２９９、３１１、及び３２３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖配列を含む。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片、ＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、重鎖及び／または軽鎖は、少なくとも約２０％、少なくとも約１５％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％、少なくとも約４％、少なくとも約３％、少なくとも約２％、または少なくとも約１％の保存的バリアントアミノ酸を含む。
【０１３５】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、（２０、２１、２２）；（３２、３３、３４）；（４４、４５、４６）；（５６、５７、５８）；（６８、６９、７０）；（８０、８１、８２）；（９２、９３、９４）；（１０４、１０５、１０６）；（１１６、１１７、１１８）；（１２８、１２９、１３０）；（１４０、１４１、１４２）；（１５２、１５３、１５４）；（１６４、１６５、１６６）；（１７６、１７７、１７８）；（１８８、１８９、１９０）；（２００、２０１、２０２）；（２１２、２１３、２１４）；（２２４、２２５、２２６）；（２３６、２３７、２３８）；（２４８、２４９、２５０）；（２６０、２６１、２６２）；（２７２、２７３、２７４）；（２８４、２８５、２８６）；（２９６、２９７、２９８）；（３０８、３０９、３１０）；及び（３２０、３２１、３２２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲセットを含む。
【０１３６】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号（２６、２７、２８）；（３８、３９、４０）；（５０、５１、５２）；（６２、６３、６４）；（７４、７５、７６）；（８６、８７、８８）；（９８、９９、１００）；（１１０、１１１、１１２）；（１２２、１２３、１２４）；（１３４、１３５、１３６）；（１４６、１４７、１４８）；（１５８、１５９、１６０）；（１７０、１７１、１７２）；（１８２、１８３、１８４）；（１９４、１９５、１９６）；（２０６、２０７、２０８）；（２１８、２１９、２２０）；（２３０、２３１、２３２）；（２４２、２４３、２４４）；（２５４、２５５、２５６）；（２６６、２６７、２６８）；（２７８、２７９、２８０）；（２９０、２９１、２９２）；（３０２、３０３、３０４）；（３１４、３１５、３１６）；及び（３２６、３２７、３２８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲセットを含む。
【０１３７】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ／ＶＬセットを含む。
【０１３８】
別の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７／２３、２９／３５、４１／４７、５３／５９、６５／７１、７７／８３、８９／９５、１０１／１０７、１１３／１１９、１２５／１３１、１３７／１４３、１４９／１５５、１６１／１６７、１７３／１７９、１８５／１９１、１９７／２０３、２０９／２１５、２２１／２２７、２３３／２３９、２４５／２５１、２５７／２６３、２６９／２７５、２８１／２８７、２８３／２８９、３０５／３１１、及び３１７／３２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖セット及び軽鎖セットを含む。
【０１３９】
一部の実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１に結合し、かつ例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、オプソニン作用、及びトランスサイトーシスなどのエフェクター機能の低下を示す。一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＢ１に結合し、かつ１つまたは複数のエフェクター機能を減少させる、減退させる、または除去する１つまたは複数のＦｃ領域の改変を含む。例えば、一実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＢ１抗体及びその抗原結合性断片は、ＣＢ１に結合するが、Ｃ１ｑ結合及び／またはＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣの減少、減退、または非存在を示す。Ｆｃ改変は、アミノ酸の挿入、欠失、もしくは置換であってもよいし、または化学的改変であってもよい。例えば、Ｆｃ領域の改変を行って、補体結合を増加もしくは減少させる、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣを増加もしくは減少させる、またはグリコシル化を改変することができる。様々なＦｃ改変が当技術分野で公知であり、例えば、Ｌａｂｒｉｊｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２７（８）：７６７−７７１；Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：１０９８−１１０４；Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：４４１−４５２；及びＲｏｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５：１２５６−１２６４に記載されている。エフェクター機能を変更するために、当技術分野で公知のＦｃ改変のいずれも、本明細書に開示の例示的なＣＢ１抗体に適用することができる。一実施形態では、上記抗ＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片は、ある特定の変異、例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）、Ｓ２２８Ｐ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ｑを有する。
【０１４０】
本明細書で提供する結合性タンパク質は、当技術分野で公知のいくつかの技術のうちのいずれかにより生成することができる。例えば、宿主細胞からの発現であり、その場合、ＣＢ１結合性タンパク質をコードする発現ベクター（複数可）を、標準的な技術により宿主細胞にトランスフェクトする。本明細書で提供するＣＢ１結合性タンパク質を原核または真核宿主細胞のいずれでも発現させることは可能であるが、原核細胞よりも哺乳動物宿主細胞が、適正にフォールディングされた免疫学的に活性な結合性タンパク質を組み立て、分泌する可能性が高い。
【０１４１】
ＣＢ１結合性タンパク質の組換え発現のための例示的なシステムでは、ＣＢ１抗体重鎖及び軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウム媒介トランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、上記ＣＢ１抗体重鎖配列及び抗体軽鎖配列をそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー及びプロモーター調節エレメントに作動可能に連結して、高レベルの遺伝子の転写を駆動する。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、このベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。選択した形質転換宿主細胞を培養して、ＣＢ１抗体の重鎖及び軽鎖の発現を可能にし、インタクトなＣＢ１抗体を培地から回収する。標準的な分子生物学的技術を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトして、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地からＣＢ１抗体を回収する。
【０１４２】
生物学的同等物
本開示の抗ＣＢ１抗体及び抗体断片は、上記抗体のものからは変化しているが、ヒトＣＢ１に結合する能力を保持しているアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。そのようなバリアント抗体及び抗体断片は、親配列と比較すると、アミノ酸の１つまたは複数の追加、欠失、または置換を含むが、上記抗体の生物学的活性と本質的に同等である生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗ＣＢ１抗体コーディングＤＮＡ配列は、開示の配列と比較すると、ヌクレオチドの１つまたは複数の追加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗ＣＢ１抗体または抗体断片と本質的に生物学的に同等である抗ＣＢ１抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。そのようなバリアントアミノ酸及びＤＮＡ配列の例は上に論述している。
【０１４３】
２つの抗原結合性タンパク質、または抗体が、例えば、類似の実験条件下で同モル用量を単回投与あるいは反復投与で投与した場合に、その吸収の速度及び程度が有意な差を示さない医薬同等物または医薬代替物であるならば、それらは生物学的に同等と判断される。一部の抗体は、それらの吸収の程度では同等であるが、それらの吸収速度では同等でなければ、同等物または医薬代替物と判断されるであろうし、かつそのような吸収速度の差異が意図的であり、標識に反映され、例えば、長期使用で有効な体内薬物濃度の達成に本質的でなく、かつ研究される特定の薬物製品にとって医学的に重要ではないので、生物学的に同等と判断されることもある。
【０１４４】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、それらの安全性、純度、及び効力において臨床的に有意な差異がなければ、それらは生物学的に同等である。一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、患者が、そのような切り換えを伴わない持続的治療と比較した場合に、免疫原性での臨床的有意差、または有効性の減少を含む、有害作用のリスクの上昇が予測されずに、基準製品と生物学的製品との間で、１回または複数回切り換えされ得るならば、それらは生物学的に同等である。一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、その両方が、１つもしくは複数の使用条件について１つまたは複数の共通の作用機序により作用するならば、そのような機序が公知である限りにおいて、それらは生物学的に同等である。
【０１４５】
生物学的同等物は、インビボ及び／またはインビトロの方法により実証することができる。生物学的同等性測定には、例えば、（ａ）抗体濃度または１種もしくは複数のその代謝産物を、時間の関数として、血液、血漿、血清、または他の生体液中で測定する、ヒトまたは他の哺乳動物でのインビボ試験；（ｂ）ヒトインビボ生物学的利用能データと相関があり、合理的に予測され得るインビトロ試験；（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性型薬理作用を時間の関数として測定する、ヒトまたは他の哺乳動物でのインビボ試験；及び（ｄ）抗体の安全性、有効性、または生物学的利用能もしくは生物学的同等性を確立する、十分制御された臨床試験が含まれる。
【０１４６】
抗ＣＢ１抗体の生物学的に同等なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の様々な置換の実施、または生物学的活性に不要な末端もしくは内部残基もしくは配列の欠失により、構築することができる。例えば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基を、再生時の不必要なまたは間違った分子内ジスルフィド架橋形成を防止するため、欠失させる、または、他のアミノ酸で置き換えることができる。他の状況では、生物学的に同等な抗体には、抗体のグリコシル化特性を改変するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を脱離または除去する変異を含む抗ＣＢ１抗体バリアントが含まれ得る。
【０１４７】
種選択性及び種交差反応性
本発明はまた、ヒトＣＢ１に、かつ１種または複数の非ヒト種からのＣＢ１に結合する抗ＣＢ１抗体を含む。例えば、本発明の抗ＣＢ１抗体は、ヒトＣＢ１に結合し得て、かつマウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザルサル、マーモセット、アカゲザルまたはチンパンジーＣＢ１のうちの１種または複数に結合し得る。本発明のある特定の実施形態では、抗ＣＢ１抗体は、ヒトＣＢ１には結合するが、他の種からのＣＢ１には結合しない。
【０１４８】
イムノコンジュゲート
本発明は、細胞毒素、化学療法薬、免疫抑制薬または放射性同位体などの治療薬部分にコンジュゲートした抗ＣＢ１抗体（「イムノコンジュゲート」）を包含する。細胞傷害薬には、細胞に有害な任意の薬剤が含まれる。イムノコンジュゲートを形成するための適切な細胞傷害薬及び化学療法薬の例は、当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。
【０１４９】
多重特異性結合性タンパク質
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープについて特異的であってもよいし、または１つよりも多い標的ポリペプチドについて特異的な抗原結合性ドメインを含んでもよい。例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照されたい。本発明の抗ＣＢ１抗体を、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結させる、またはそれと共に同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片を、別の抗体または抗体断片などの１種または複数の他の分子実体に作動可能に連結させて（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合性会合により、または別段に）、第２の結合特異性を有する二重特異性抗体または多重特異性抗体を生成することができる。例えば、本発明は、免疫グロブリンの一方のアームがヒトＣＢ１またはその断片について特異的であり、かつその免疫グロブリン他方のアームが第２の治療標的について特異的であるが、または治療薬部分にコンジュゲートしている二重特異性抗体を含む。
【０１５０】
様々な疾患における結合性タンパク質の使用
本発明の抗体及び結合性タンパク質は、ＣＢ１発現もしくは活性と関連する、もしくはそれらに媒介されるか、またはＣＢ１とＣＢ１リガンド（例えば、カンナビノイド）との間の相互作用の遮断により、もしくは別段に、ＣＢ１活性及び／またはシグナル伝達の阻害により、及び／または受容体内在化の促進及び／または細胞表面受容体数の低減により処置可能な任意の疾患または障害を処置する、予防する、及び／または寛解させるために有用である。「ＣＢ１活性が有害である障害」という用語は、障害に罹患している対象におけるＣＢ１の存在または活性（例えば、異常または過剰活性）が、その障害もしくは疾患の病態生理の原因であるか、またはその障害または疾患の悪化に寄与する因子である障害または疾患を意味する。したがって、ＣＢ１活性が有害である障害は、ＣＢ１活性の低下がその障害の症状及び／または進行を緩和させると予測される障害である。
【０１５１】
本明細書で提供する結合性タンパク質分子は、例えば、ＣＢ１タンパク質が有害である様々な疾患または容態を処置するための治療用分子として有用である。例えば、本明細書で提供する結合性分子は、ＣＢ１の過剰発現、上方制御、または活性もしくはシグナル伝達の増大か、またはその場合に生じ得る健康上の恒常性制御機構の不全により特徴づけられる任意の疾患または容態を含む。そのような疾患及び容態には、肥満、プラーダー−ヴィリ症候群（ＰＷＳ）、アルストレーム症候群、バルデー−ビードル症候群（ＢＢＳ）、アルブライド遺伝性骨ジストロフィー（ＡＨＯ）、及びＳＩＭ１欠失症候群を含む症候性肥満；糖尿病及び関連合併症；脂質異常症；例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患、及び原発性胆汁性肝硬変などの肝臓疾患；線維症、例えば、腎臓線維症；慢性腎臓疾患；腎疾患；代謝性疾患、骨粗鬆症、アテローム硬化症、炎症性疾患、心臓血管疾患、がん、疼痛、全身性硬化症、多発性硬化症痙縮、緑内障、ならびにニコチン中毒が含まれる。
【０１５２】
医薬組成物
本発明は、抗ＣＢ１結合性タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物を、抗ＣＢ１結合性タンパク質の安定性、送達、忍容性、及び有効性を改善する適切な添加剤、担体、予防薬、治療薬、及び他の薬剤と共に製剤化する。多数の適切な製剤を、すべての薬剤師に公知の処方集において見い出すことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ。これらの製剤には、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー剤、ワックス剤、油剤、脂質、小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡなど）を含む脂質（カチオン性またはアニオン性）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト剤、水中油型及び油中水型乳剤、エマルションカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル剤、ならびにカーボワックスを含む半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１も参照されたい。
【０１５３】
本明細書で提供するＣＢ１結合性タンパク質を含む医薬組成物は、これに限定されないが、障害の診断、検出、または看視において、障害またはその１種もしくは複数の症状の予防、処置、管理、または寛解において、及び／または研究において使用するためのものである。
【０１５４】
様々な送達系が公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム中でのカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現可能な組み換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシスがある（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照されたい）。組成物を任意の従来の経路により、例えば、注入もしくは大量注射により、上皮層もしくは粘膜皮膚層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を介した吸収により投与することができ、かつ他の生物学的活性薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的または局所的であってよい。
【０１５５】
本明細書で提供する予防薬または治療薬を投与する方法には、これに限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、粘膜投与（例えば、鼻腔内及び口腔投与）及び肺投与（例えば、吸入器または噴霧器を用いてのエアロゾル化化合物の投与）が含まれる。特異的投与経路のための医薬組成物の製剤、ならびに様々な投与方法に必要な材料及び技術が利用可能であり、かつ当業者に公知である。
【０１５６】
最適な所望の応答（例えば、治療応答または予防応答）を得るために、投与計画を調節することができる。例えば、単一のボーラス剤を投与することもできるし、複数の分割した用量を、時間をかけて投与することもできるし、または用量を治療状況の緊急性により示されるとおりに比例して減少または増加させてもよい。投与の容易さ、及び投薬量の均一性のためには、非経口組成物を単位剤形で製剤化することが特に有利である。「単位剤形」という用語は、処置されるべき哺乳動物対象のための単位投薬量として適合させた物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本明細書で提供する単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき特定の治療または予防の作用、ならびに（ｂ）個体における感受性を処置するためにこのような活性化合物を配合する際の当技術分野で固有の限定により規定され、それらに直接的に依存する。
【０１５７】
本発明の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジで皮下または静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達器具が、本発明の医薬組成物の送達において容易に適用される。そのようなペン型送達器具は、再利用可能または使い捨てであってよい。再利用可能なペン型送達器具は一般に、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを利用する。そのカートリッジ内のすべての医薬組成物が投与され、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄して、医薬組成物を含む新しいカートリッジと交換することができる。次いで、そのペン型送達器具を再利用することができる。使い捨てのペン型送達器具では、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達器具では、器具内のレザバーに医薬組成物が予め充填されて保持される。そのレザバーから医薬組成物が空になったら、器具全体が廃棄される。
【０１５８】
多数の再利用可能なペン型及び自動注入型送達器具が、本発明の医薬組成物の皮下送達で適用される。例には、これに限定されないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、ＣＨ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）  Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が含まれる。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン型送達器具の例には、これに限定されないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、及びＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（ＡｂｂＶｉｅ，Ｉｎｃ．、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）が含まれる。
【０１５９】
ある特定の状況では、医薬組成物を制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１−２４０）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ）。別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近くに配置して、全身用量の何分の１かだけが必要であるようにすることができる（Ｇｏｏｄｓｏｎ（１９８４）ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，２：１１５−１３８）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３の概説において論述されている。
【０１６０】
注射用製剤には、静脈内、皮下、皮内及び筋肉内注射、点滴などのための剤形が含まれ得る。これらの注射用製剤は公知の方法により調製することができる。例えば、注射用製剤は、例えば、上記抗体またはその塩を、注射剤のために従来使用されている滅菌水性媒体または油性媒体に溶解、懸濁、または乳化させることにより調製することができる。注射剤用の水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤などを含有する等張液があり、これらをアルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物））などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、これらを、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。こうして調製される注射剤を好ましくは、適切なアンプルに充填する。
【０１６１】
有利には、上記経口使用または非経口使用のための医薬組成物を、活性成分の用量に合うように適合させた単位用量の剤形に調製する。単位用量でのそのような剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などが含まれる。含まれる上記抗体の量は一般に、単位用量で；特に注射剤の形態で剤形あたり約５〜約５００ｍｇであり、上記抗体が約５〜約１００ｍｇ、かつ他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇ含まれていることが好ましい。
【０１６２】
患者に投与される抗体の用量は、患者の年齢及び体格、標的疾患、疾患段階、性別、医学的合併症の存在、他の薬物療法、容態、投与経路などに応じて変化し得る。好ましい用量は典型的には、体重または体表面積により計算される。本発明の抗体を成人患者において、ＣＢ１活性と関連する容態または疾患を処置するために使用する場合、本発明の抗体を通常、約０．０１〜約１００ｍｇ／体重の単回用量で静脈内投与することが有利であり得る。容態の重症度に応じて、処置の頻度及び期間を調節することができる。抗ＣＢ１抗体を投与するための有効な投薬量及びスケジュールは、経験的に決定することができ；例えば、患者の進行を定期評価により看視し、それに従って用量を調節することができる。さらに、当技術分野で周知の方法を使用して、投薬量の種間スケーリングを行うことができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１−１３５９）。任意の特定の対象について、具体的な投与計画を、個々の必要性及び組成物を投与する、またはその投与を管理する人の専門的判断に従って経時的に調節してもよいこと、及び本明細書に示す投薬量範囲は例示に過ぎず、かつ特許請求の範囲に記載の組成物の範囲及び実施を限定することを意図したものではないことはさらに理解されるべきである。
【０１６３】
併用療法
本明細書で提供する結合性タンパク質はまた、様々な疾患の処置において有用な１種または複数の追加の治療薬と共に投与することができ、その際、追加の薬剤は、その意図されている目的のために、当業者が選択する。例えば、追加の薬剤は、本明細書で提供するＣＢ１結合性タンパク質により処置される疾患または容態を処置するために有用であると当技術分野において承認されている治療薬であり得る。その組み合わせは、１種よりも多い追加の薬剤を含んでもよい。
【０１６４】
そのような追加の治療活性な成分の非限定的例には、他のＣＢ１アンタゴニスト（例えば、第２の抗ＣＢ１抗体またはＣＢ１の小分子阻害薬（例えば、リモナバン、タラナバント、ＡＭ２５１、ＡＭ１３８７、ＡＭ４１１３、カンナビゲロール、イビピナバント、オテナバント、スリナバント、テトラヒドロカンナビバリン、及びビロダミン、及びＡＭ６５４５）、別のＣＢ１ファミリーメンバーのアンタゴニストが含まれる。
【０１６５】
本発明はまた、本明細書に記載の抗ＣＢ１抗体のいずれかと、追加の阻害薬とを含み、その阻害薬が、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ペプチボディ、ナノボディまたは抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片；Ｆ（ａｂ’）２断片；Ｆｄ断片；Ｆｖ断片；ｓｃＦｖ；ｄＡｂ断片；またはディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ及び最小認識単位などの他の操作分子）である、治療用組み合わせを含む。本発明の抗ＣＢ１抗体を、追加の治療薬と組み合わせて投与する、及び／または同時製剤化することもできる。追加の治療活性な成分（複数可）を本発明の抗ＣＢ１抗体の投与の直前、それと同時、またはその直後に投与してもよい；（本開示の目的では、そのような投与レジメンは、追加の治療活性な成分と「組み合わせての」抗ＣＢ１抗体の投与と判断される）。本発明は、本発明の抗ＣＢ１抗体が本明細書の他の箇所に記載のとおりの追加の治療活性な成分（複数可）のうちの１種または複数と共に同時製剤化されている医薬組成物を含む。
【０１６６】
本発明はまた、「アンタゴニスト抗体」及び「インバースアゴニスト抗体」の組み合わせを含む組成物及び方法を含む。「アンタゴニスト抗ＣＢ１抗体」は、ＣＢ１のリガンド（例えば、カンナビノイド）のシグナル伝達活性を阻害する、縮小させる、または阻止する抗ＣＢ１抗体を意味する。本発明のアンタゴニスト抗体の非限定的例は、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ７−Ｈ１、Ｍ７−Ｈ２、Ｍ７−Ｈ３、Ｍ７−Ｈ４、Ｍ７−Ｈ５、Ｍ７−Ｈ６、Ｍ７−Ｈ７、Ｍ７−Ｈ８、Ｍ７−Ｈ９、Ｍ７−Ｈ１０、Ｍ７−Ｈ１１、Ｍ７−Ｈ１２、Ｍ７−Ｈ１３、Ｍ７−Ｈ１４、Ｍ７−Ｈ１５、Ｍ７−Ｈ１６、Ｍ５−Ｈ１、Ｍ５−Ｈ２である。「インバースアゴニスト抗ＣＢ１抗体」は、アゴニストとは反対の薬理学的応答の誘導をもたらす抗ＣＢ１抗体を意味する。アゴニストが受容体の活性を、その基礎レベルを超えて上昇させる一方で、インバースアゴニストは、その活性を基礎レベル未満に低下させる。本発明のインバースアゴニスト抗体の非限定的例には、Ｍ７が含まれる。本発明者らは、有効性を相乗的に、または別段に改善するためにアンタゴニスト抗体及びインバースアゴニスト抗体を組み合わせることを考えている。したがって、本発明は、少なくとも１種のアンタゴニスト抗体及び少なくとも１種のインバースアゴニスト抗体を含む医薬組成物を含む。本発明はまた、対象に、アンタゴニスト抗体及びインバースアゴニスト抗体の組み合わせ（別々の投与として、または同時製剤として）を投与することを含む治療方法を含む。
【０１６７】
併用療法の薬剤には、これに限定されないが、抗新生物薬、放射線療法、化学療法薬、例えば、ＤＮＡアルキル化薬、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン薬、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン（ｇｅｒｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、ジェムザール、アンスラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害薬（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害薬（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害薬、及びｓｉＲＮＡが含まれる。
【０１６８】
診断
本開示は、これに限定されないが、診断アッセイ方法、１種または複数のＣＢ１結合性タンパク質を含む診断キット、ならびに自動及び／または半自動システムで使用するための方法及びキットの適応を含む、診断用途を提供する。提供する方法、キット、及び適応を、個体における疾患または障害の検出、看視、及び／または処置で使用することができる。
【０１６９】
本発明の抗ＣＢ１抗体はまた、例えば、診断目的で、サンプルにおいてＣＢ１、またはＣＢ１発現細胞を検出及び／または測定するために使用することができる。例えば、抗ＣＢ１抗体、またはその断片を使用して、ＣＢ１の異常な発現（例えば、過剰発現、過小発現、発現の欠如など）により特徴づけられる容態または疾患を診断することができる。ＣＢ１のための例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られたサンプルを本発明の抗ＣＢ１抗体と接触させることを含んでよく、その際、抗ＣＢ１抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている。別法では、標識されていない抗ＣＢ１抗体を診断用途で、それ自体検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせて使用することができる。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、化学発光物質及び放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが含まれ；適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれ；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、及びフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例はルミノールであり、適切な放射性物質の例には、（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、及び１５３Ｓｍが含まれる。
【０１７０】
本開示が提供するイムノアッセイにはとりわけ、サンドイッチイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、競合−阻害イムノアッセイ、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、及び均一系化学発光アッセイが含まれ得る。
【０１７１】
化学発光微粒子イムノアッセイを使用することができ、これは、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）を使用してよい。
【０１７２】
質量分析法を使用する方法を本開示は提供し、これには、これに限定されないが、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化法）またはＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱離／イオン化法）が含まれる。
【０１７３】
生物学的試験サンプルを収集し、取り扱い、処理し、かつイムノアッセイ及び質量分析法を使用して分析するための方法は当業者に周知である。
【０１７４】
キット
試験サンプル中で分析物、またはその断片の存在、量または濃度について試験サンプルをアッセイするためのキットも提供する。上記キットは、分析物、またはその断片について試験サンプルをアッセイするための少なくとも１つの構成要素と、分析物、またはその断片について試験サンプルをアッセイするための指示書とを含む。分析物、またはその断片について試験サンプルをアッセイするための少なくとも１つの構成要素には、任意選択で固相に固定化されている、本明細書に開示のとおりの結合性タンパク質を含む組成物、及び／または抗分析物結合性タンパク質（またはその断片、バリアント、またはバリアントの断片）が含まれ得る。
【０１７５】
任意選択で、上記キットは、単離されたまたは精製された分析物を含んでもよい較正物質または対照を含んでもよい。上記キットは、イムノアッセイ及び／または質量分析法により、分析物について試験サンプルをアッセイするための少なくとも１つの構成要素を含むことができる。分析物、結合性タンパク質、及び／または抗分析物結合性タンパク質、またはその断片を含むキット構成要素を任意選択で、任意の当技術分野で公知の検出可能な標識を使用して標識してもよい。本開示の実施の際に用意される物質及び生成方法は、当業者に公知であろう。
【０１７６】
上記キット（またはその構成要素）、さらには本明細書に記載のイムノアッセイなどのアッセイにより試験サンプル中の分析物の存在、量または濃度を決定する方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号及び同第５，００６，３０９号に記載されているとおりで、かつ例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）によりＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として市販されているとおりの様々な自動及び半自動システム（固相が微粒子を含むものを含む）で使用するために適応させることができる。Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能な他のプラットフォームには、これに限定されないが、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい）、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）、及びＱｕａｎｔｕｍ  ＴＭ  ＩＩ、さらには他のプラットフォームが含まれる。加えて、上記アッセイ、キット及びキット構成要素を、他の形式で、例えば、電気化学的または他の携帯型または臨床現場即時型アッセイシステムで用いることができる。本開示は例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う市販のＡｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学イムノアッセイシステムに適用可能である。イムノセンサーならびにそれらの製造及び使い捨てデバイスにおける操作方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、同第７，４１９，８２１号、同第７，６８２，８３３号、同第７，７２３，０９９号、及び同第９．０３５，０２７号；ならびに米国特許出願公開第２００４００１８５７７号及び同第２００６０１６０１６４号に記載されている。
【０１７７】
本明細書に記載の方法の他の適切な変更及び適応が明白であり、かつ本明細書に開示の実施形態の範囲から逸脱することなく、適切な同等物を使用して、それを行うことができることは、当業者には容易に明らかであろう。ある特定の実施形態を詳細に記載してきたが、本発明の実施は、例示のためだけに本明細書に示されており、本発明を多少なりとも限定するものと解釈されるべきではない次の実施例により、さらに完全に理解されるであろう。
【実施例】
【０１７８】
実施例１：機能性評価のための抗ＣＢ１抗体の生成及び選択
ＣＤ２Ｆ１マウスを、ＣＢ−１アンタゴニストＪＤ５０３７（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１２０５）の存在または非存在下で、ヒトＣＢ−１抗原で免疫化して、タンパク質を潜在的に安定化させ、それ自体、免疫化の間に十分な構造で存在するようにした。マウスを両方の踵関節において、Ｔｉｔｅｒ  Ｍａｘ  Ｇｏｌｄアジュバント（Ｓｔ．Ｌｏｕｉ、ＭＯ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｔ２６８４）を含む抗原約５μｇ／３０μｌ／踵関節で免疫化した。続いて、マウスをＣｐＧ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＯＤＮ１８２６）及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ｖａｃ−ａｌｕ−２５０）で、週２回、約３０日間にわたって免疫化した。１３及び２６日目に血清を採取し、抗体力価及びその上昇を経時的に決定した。３０日目にマウスを安楽死させ、膝窩及び鼠径リンパ節を融合のために収集し、培地Ｂ（栄養素を添加されていない、ＲＰＭＩ１６４０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ−Ｇｉｂｃｏ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１１８７９０２０）及びＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ、Ａｎａｈｅｉｍ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１２−７２２Ｆ）の１：１混合物）中で洗浄し、単細胞懸濁液を調製した。Ｐ３Ａｇ８．５６３骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＴＡ−９３９３）を培養物から採取し、培地Ｂ中で洗浄した。リンパ球及び骨髄腫細胞を１：１の比で混合し、電気細胞融合ＢＴＸ  Ｈａｒｖａｒｄ装置ＥＣＭ２００１（ＢＴＸ  Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．４５−００１２）を使用して融合させた。融合細胞を回収培地Ｃ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０３８０３）に再懸濁させ、かつＴ７５ｃｍ２フラスコ中で終夜、３７℃で回復させた。翌日、融合細胞を採取し、抗マウスＩｇＧ  ＦＩＴＣ  Ｃｌｏｎｅ  Ｄｅｔｅｃｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ；Ｃａｔ  Ｎｏ．Ｋ８２２０）を含有するハイブリドーマ選択メチルセルロース培地Ｄ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０３８０４）中に再懸濁させた。細胞を混合し、培地Ｄ１０ｍＬあたり１×１０６でプレーティングした。プレーティングした細胞を３７℃で７日間にわたってインキュベートした。Ｃｌｏｎｅ  Ｐｉｘ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用してコロニーのサイズと、ＩｇＧ産生を示す強いＦＩＴＣハローを示すその能力とに基づき、ハイブリドーマコロニーを取り出し、ハイブリドーマ成長培地Ｅ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０３８０５）を含む９６ウェル組織培養プレートに移した。巨視的コロニーが観察された場合には、上清を、ＣＨＯ親細胞及びＣＨＯ−ｈｕＣＢ−１過剰発現細胞を使用して細胞結合についてスクリーニングした。この一次スクリーニングのために、ハイブリドーマ親ＣＨＯ細胞をカルボキシ���ルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｎａｈｅｉｍ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３４５５４）で標識し、非ＣＦＳＥ標識ＣＨＯ−ｈｕＣＢ１過剰発現細胞と混合して、両方の細胞系での効率的かつ同時のスクリーニングを可能にし、かつｈｕＣＢ−１特異的結合体を同定した。ＣＨＯ−ｈｕＣＢ−１過剰発現細胞には特異的に結合し、かつ親ＣＨＯ細胞には結合しなかったクローンを選択し、確認スクリーニングのために先に進めた。合計９７のクローンを、小規模精製に進めるために選択した。関連融合及び一次スクリーニングの概要を表２に示す。
【０１７９】
【表２】
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【０１８０】
実施例２：マウス抗ｈｕＣＢ−１特異的結合クローンの精製
確認一次スクリーニングに基づき選択されたハイブリドーマクローンをさらに、低Ｉｇ培地５０ｍＬ（１００ｍＭピルビン酸ナトリウム溶液５ｍＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１１３６００７０）、１００ｍＭの非必須アミノ酸５ｍｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１１１４００５０）及び１００ｍＭグルタミン５ｍＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３５０５００６１）を含有する、１：１のＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ、Ａｎａｈｅｉｍ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１２−７２２Ｆ）：５％低Ｉｇ血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１６２５００７）を含むハムＦ１２−Ｋ（Ｇｉｂｃｏ、Ａｎｈｅｉｍ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．２１１２７０２２）培地）中で、Ｔ７５ｃｍ２フラスコ内で３〜４週間にわたって増やした。上清を採取し、標準的なプロテインＡ精製方法を使用して精製した。
【０１８１】
実施例３：ｃＡＭＰアッセイにおけるマウス抗ＣＢ１抗体の機能的特性解析
単離されたマウス抗ｈｕＣＢ−１抗体を、それらのアンタゴニスト活性についてｃＡＭＰアッセイにおいて評価した。天然にＧｉ結合型野生型Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を過剰発現し、かつ受容体のアゴニスト刺激に応じて細胞内ｃＡＭＰレベルの上昇を検出するように設計されているｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＮＲ１  Ｇｉ細胞系（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／Ｅｕｒｏｆｉｎｓ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．９５−００７１Ｃ２）を使用して、ｃＡＭＰアッセイを行った。ｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＮＲ１  Ｇｉ細胞をＣＢ１抗体、アイソタイプ対照、または小分子ＣＢ１アンタゴニストＪＤ５０３７で処理し、続いて、フォルスコリンの存在下で３０ｎＭ  ＣＰ−５５，９４０でアゴニスト攻撃した（「Ｐｌｕｓ  ＣＰ」と表示）。アンタゴニストをまた、ＣＰ−５５，９４０を添加せずに試験して、それら自体がアゴニスト活性を有するかどうかを立証した。フォルスコリンは、酵素のアデニル酸シクラーゼを活性化し、ｃＡＭＰの細胞内レベルを上昇させる。Ｇｉ受容体では、アゴニストの結合は、フォルスコリンにより誘導される細胞内ｃＡＭＰ蓄積を阻害する。そのため、Ｇｉ−共役受容体を測定するために、アゴニスト化合物のＣＰ−５５，９４０をフォルスコリンの存在下で添加した。したがって、Ｇｉ−共役受容体の活性化は、ｃＡＭＰのフォルスコリン誘導産生を阻害し、結果として、アゴニスト及びフォルスコリンの存在下で生じる用量反応曲線は負の勾配を有するはずである。簡単に述べると、細胞をＣｅｌｌ  Ｐｌａｔｉｎｇ  ２  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／Ｅｕｒｏｆｉｎｓ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．９３−０５６３Ｒ２Ａ）中で、１．５×１０４細胞／ウェルで、９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３９０９）に播種し、終夜、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。翌日、培養培地をＣｅｌｌ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ３０μｌ（ＣＡＢ；１倍ＨＢＳＳ／１０ｎＭ  ＨＥＰＥＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ａｎａｈｅｉｍ、ＣＡ；それぞれＣａｔ．Ｎｏｓ．１４０２５１３４及び１５６３００８０）に置き換え、試験抗体またはアイソタイプ対照（６倍濃縮作業用希釈液７．５μｌ）で処理した。プレートを３０分間にわたって３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。アゴニスト攻撃７．５μｌ（９０μＭフォルスコリンを含有するＣＡＢ中０．１８μＭ  ＣＰ５５，９４０）を各ウェルに添加し、プレートをさらに３０分間にわたって３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。ＨｉｔＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ｃＡＭＰ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／Ｅｕｒｏｆｉｎｓ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．９０−００７５ＬＭ２５）を製造者指示に従って使用して、プレートをｃＡＭＰ読取りのために処理した。単離されたクローンの当初評価を３０μｇ／ｍＬの単一濃度で行った。
【０１８２】
試験した１１２のクローンのうち、８種のクローンのみがアンタゴニスト活性を示した。２種のクローンはアゴニストの非存在下で、ある程度のアンタゴニズムを示した（Ｍ３及びより低い程度でＭ１）。この８種の抗体Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７、及びＭ８を、Ａｂの濃度を滴定することによりさらに評価して、用量反応曲線及び実際ＥＣ５０値（表３及び図１）を得た。
【０１８３】
実施例４：ｐＥＲＫアッセイにおけるマウス抗ＣＢ１抗体の機能的特性解析
ｃＡＭＰアッセイで機能性アンタゴニストであった８種の抗体を、ｃＡＭＰ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＮＲ１  Ｇｉ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／Ｅｕｒｏｆｉｎｓ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．９５−００７１Ｃ２）を使用して行われるｐＥＲＫリン酸化アッセイでさらに評価した。簡単に述べると、細胞を９６ウェルプレートに、２×１０４細胞／ウェルで、８００μｇ／ｍＬ  Ｇ４１８を含むＫｉｔ−１０７のＡｓｓａｙ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／Ｅｕｒｏｆｉｎｓ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．９２−３１０７Ｇ）中で播種し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。翌日、培養培地を、１００μｌ／ウェルの血清非含有Ｆ−１２Ｋ飢餓培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１１７６５０５４）に取り換えた。プレートをもう１日、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。処理の日に、Ｆ−１２Ｋ培地を３０μｌ／ウェルの新鮮なＦ−１２Ｋ培地に取り換えた。次いで、試験抗体またはアイソタイプ対照（６倍濃縮作業用希釈液７．５μｌ）をウェルに添加し、プレートを１０分間にわたって３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。アゴニスト７．５μｌ（９０μＭフォルスコリンと共にＣＡＢ中０．１８μＭ  ＣＰ５５，９４０を含む６倍作業用溶液）を各ウェルに添加し、プレートをさらに１０分間にわたって３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｋ１５１０７Ｄ）を製造者指示に従って使用して、プレートをｐ−ＥＲＫ／総ＥＲＫのために処理した（表３及び図２）。
【０１８４】
【表３】
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【０１８５】
実施例５：ＣＢ−１  ＣＨＯ過剰発現細胞へのマウス抗ＣＢ−１抗体のＥＣ５０結合
抗体結合を蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）ベースのアッセイで、親ＣＨＯ細胞、ヒトＣＢ−１過剰発現ＣＨＯ細胞及びマウスＣＢ−１過剰発現ＣＨＯ細胞に結合するマウス抗ＣＢ１抗体の能力について試験して、結合曲線及びＥＣ５０値を得た。３つの細胞系を採取し、洗浄し、ｖ底９６ウェルポリカーボネートＦＡＣＳプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、Ｃａｔ．Ｎｏ．３３５７）のウェルあたり１×１０５細胞で、ＦＡＣＳバッファー５０μｌ（１倍ＰＢＳ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１％ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａｎａｈｅｉｍ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０４３８−０２６）中に分配した。抗体の系列希釈液を２倍濃縮で２００ｎＭから出発して調製し、３倍系列希釈した。滴定された抗体を、３つの異なる細胞系（親、ヒト及びマウスＣＢ−１  ＣＨＯ細胞）を含むプレートに添加し、４℃で１時間にわたってインキュベートした。プレートをＦＡＣＳバッファーで３回洗浄した。細胞を１／５，０００希釈のヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ  ５０μｌ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１１５−０３５−００３）に再懸濁させ、４℃で３０分間にわたってインキュベートし、ＦＡＣＳバッファーで３回洗浄し、データをＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３３８９６２）で収集し、ＦｌｏｗＪｏ（ＦｌｏｗＪｏ  ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を使用して解析した（表４）。試験した８種の機能性抗体のいずれも、マウス交差反応性ではなかった（図３）。
【０１８６】
【表４】
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【０１８７】
実施例６：機能性抗ＣＢ−１抗体のＥＣ５０分析及び配座結合についての評価
この実験の目的は、抗ＣＢ１アンタゴニスト抗体が中性、アンタゴニスト、またはアゴニスト状態の確認においてＣＢ１について結合能力差を有するかどうかを決定することであった。４種の異なる細胞系調製物を使用した：ＣＨＯ−ｈｕＣＢ１（社内で生成）、インバースアゴニストＪＤ５０３７（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１３９２１１６−１４−１）と共に事前インキュベートしたＣＨＯ−ｈｕＣＢ１、アゴニストＣＰ−５５，９４０（ＴＯＣＲＩＳ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０９４９）と共に事前インキュベートしたＣＨＯ−ｈｕＣＢ１、及び親ＣＨＯ−Ｓ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｒ８０００７）。２×１０７の親ＣＨＯ−Ｓ及びＣＨＯ−ｈｕ  ＣＢ１細胞はＦＡＣＳバッファー中に残しておいた。加えて、インバースアゴニストＪＤ５０３７またはアゴニストＣＰ−５５，９４０でコーティングされた２×１０７のＣＨＯ−ｈｕＣＢ１細胞は４℃で１時間にわたってインキュベートした。インキュベーション後に、これらの２種のコーティングされた細胞系をＦＡＣＳバッファーで２回洗浄し、かつ２×１０７で、インバースアゴニストまたはアゴニスト分子をそれぞれ含有するＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させた。４種すべての細胞系をｖ底ＦＡＣＳプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３３５７）にプレーティングし、事前滴定した抗ＣＢ１試験抗体を細胞に添加し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３３８９６２）により結合について評価した。図４に示されているとおり、抗体は、ＣＨＯ親細胞（青色の曲線）に結合せず、上記８種の機能性Ａｂ（Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７、及びＭ８）は、すべての条件下で観察された結合により示されたとおり、アゴニストまたはアンタゴニストの存在下で優先的結合を示さなかった（赤色、紫色及び緑色の曲線）。別段にｃＡＭＰまたはｐＥＲＫアッセイにおいて非機能性であった２種の試験抗体のみが、アンタゴニストの存在下で、かつアゴニストの非存在下でそれぞれ、優先的結合を示した。これは、機能性抗ＣＢ１抗体が、既知の受容体アゴニストまたはアンタゴニストの存在下で生じる結合配座と会合し得ないことを示唆している。
【０１８８】
実施例７：マウス抗ＣＢ１抗体の配列の同定及び解析
上記８種のマウス抗ｈｕＣＢ−１抗体のハイブリドーマを細胞ペレットとして採取し、上清を、標準的なマウスアイソタイピングＥＬＩＳＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．３７５０３）を使用してハイブリドーマのそれぞれのアイソタイプを決定するために使用した。抗体のうちの４種（Ｍ１、Ｍ３、Ｍ４、及びＭ６）はＩｇＧ２ａ，Ｋであり、抗体のうちの４種（Ｍ２、Ｍ５、Ｍ７、及びＭ８）はＩｇＧ２ｂ，Ｋであった。ペレットをＲＮＡ及びｃＤＮＡについて処理し、ＳＭＡＲＴＥＲ  ＲＡＣＥ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．６３４８５９）を使用して、シーケンシングのためにｃＤＮＡを処理した。抗体のそれぞれのアイソタイプを使用して、重鎖及び軽鎖カッパ定常領域の定常領域のためのリバースプライマーならびにフォワードプライマーとしてＳｅｑＡｍｐポリメラーゼ（ＣｌｏｎｅＴｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．６３８５０４）を設計した。多くの場合にシーケンシングプロセスの間に現れて、実際の軽鎖可変領域配列の同定に干渉し得る異常な軽鎖の増幅を阻止するために、ＭＯＰＣ２１  ＰＮＡプライマー（配列に基づき合成）を含めた。合計８つの固有の配列及び７つの固有のファミリーが同定された。８種のクローンの配列を表５に示す。ハイブリドーマ抗体の重鎖及び軽鎖のコンセンサス配列をそれぞれ図５Ａ及び図５Ｂに示す。
【０１８９】
【表５−１】
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【０１９０】
【表５−２】
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【０１９１】
【表５−３】
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【０１９２】
【表５−４】
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【０１９３】
【表５−５】
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【０１９４】
【表５−６】
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【０１９５】
【表５−７】
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【０１９６】
【表５−８】
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【０１９７】
実施例８：ヒト化のためのマウス抗ＣＢ１抗体の選択
機能データに基づき、ＰＨＥｎｏｎ（商標）ソフトウェアパッケージ（Ｘｏｍａ、Ｂｅｒｋｌｅｙ、ＣＡ）に由来する予測ヒトエンジニアリングツール（ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｔｏｏｌ)（米国特許第５，７６６，８８６号）を使用して、マウス抗ｈｕＣＢ−１クローンＭ７及びＭ５をヒト化のために選択した。各クローンでのＶＨ及びＶＬ配列がクエリとして提示され、アウトプット配列が、Ｋａｂａｔデータベースから最も近いヒト生殖細胞系マッチに基づき生成された。ＶＨ及びＶＬ配列をヒトフレームワークマッチへと発展させるために、フレームワーク領域における変異のリストを生成した。個々の残基の変異リスクを、一連の基準を介して評価した（米国特許第５，７６６，８８６号）。累積的に、変異をグループ分けして、「低リスク」及び「中間リスク」クローンプールを構成した。アウトプット配列及び導入変異を相同性モデリングによりインシリコで確認した。最終ヒト化ＶＨ及びＶＬ抗体配列をヒトＩｇＧ１ベクター骨格（ＴＣＡＬ  ＤＧＶベクター）にクローニングし、ＣＨＯ細胞で発現させ、標準的な方法に従ってプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。ヒト化クローンの配列を表６に示す。ヒト化Ｍ７抗体及びヒト化Ｍ５抗体の重鎖及び軽鎖のコンセンサス配列をそれぞれ図６Ａ及び図６Ｂに示す
【０１９８】
【表６−１】
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【０１９９】
【表６−２】
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【０２００】
【表６−３】
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【０２０１】
【表６−４】
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【０２０２】
【表６−５】
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【０２０３】
【表６−６】
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【０２０４】
【表６−７】
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【０２０５】
【表６−８】
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【０２０６】
【表６−９】
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【０２０７】
【表６−１０】
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【０２０８】
【表６−１１】
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【０２０９】
【表６−１２】
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【０２１０】
【表６−１３】
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【０２１１】
【表６−１４】
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【０２１２】
【表６−１５】
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【０２１３】
【表６−１６】
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【０２１４】
実施例９：細胞結合及び機能性アッセイにおけるヒト化抗ＣＢ１抗体の再評価
ヒト化抗ＣＢ１バリアントを、ＣＨＯ−ｈｕＣＢ−１細胞に結合するそれらの能力について再評価し、マウス親クローンＭ５及びＭ７（図７Ａ及び図７Ｂ）と比較して、結合が保持されていることを確認した。使用したアッセイ条件は、実施例５に記載の条件と同様であった。結合分析の後に、試験バリアントを、実施例３及び４によるｃＡＭＰ及びｐＥＲＫアッセイにおいてアンタゴニストとしての機能についても評価して（図８Ａ、図8Ｂ、図９Ａ、及び図９Ｂ）、ヒト化後に結合及び活性が保持されていることを確認した。すべてのクローンが、それらの結合及びアンタゴニスト活性を保持した。図１０には、ヒト化抗ＣＢ１  Ａｂ  Ｍ７−Ｈ５及びＩｇＧ２ｂ形式により示されるインバースアゴニズムが示されている。
【０２１５】
同等物
本開示は、その意図または本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的な形態で実施することができる。したがって、上述の実施形態はあらゆる点で、本開示を限定するものではなく例示と考えられるべきである。したがって、本開示の範囲は、上述の記載によってではなく、添付の特許請求の範囲により示され、したがって、特許請求の範囲の同等性の意味及び範囲内に該当するすべての変化は、本開示に包含されることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年2月28日(2020.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含み、その際、
ＣＤＲ−Ｈ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｄ−Ｙ−Ｗ（配列番号３２９の残基２６〜３３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＧの置換はＳであり；３位でのＴの置換はＥであり；５位でのＴの置換はＳまたはＮであり；６位でのＤの置換はＲまたはＹであり；７位でのＹの置換はＨであり；かつ８位でのＷの置換はＡまたはＮであり；
ＣＤＲ−Ｈ２は、アミノ酸配列Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｙ−Ｄ−Ｇ−Ｄ−Ｔ（配列番号３２９の残基５１〜５８）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＩの置換はＦであり；２位でのＹの置換はＤ、Ｓ、またはＴであり；３位でのＰの置換はＴであり；４位でのＹの置換はＧ、Ｄ、またはＳであり；５位でのＤの置換はＹまたはＳであり；６位でのＧの置換はＳであり；７位でのＤの置換はＥ、Ｇ、またはＲであり；かつ８位でのＴの置換はＡ、Ｓ、またはＩであり；
ＣＤＲ−Ｈ３は、アミノ酸配列Ａ−Ｒ−Ｇ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｗ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｙ（配列番号３２９の残基９８〜１１３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＡの置換はＳであり；３位でのＧの置換はＳであり；４位でのＸ１はＱ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、もしくはＧであるか、または存在せず；５位でのＸ２はＥ、Ｙ、ＬもしくはＧであるか、または存在せず；６位でのＸ３はＹもしくはＰであるか、または存在せず；７位でのＸ４はＹ、Ｒ、もしくはＥであるか、または存在せず；８位でのＸ５はＧであるか、または存在せず；９位でのＸ６はＴであるか、または存在せず；１０位でのＸ７はＮもしくはＤであるか、または存在せず；１１位でのＸ８はＹ、Ｎ、Ａ、もしくはＧであるか、または存在せず；１２位でのＸ９はＮ、Ｙ、Ｓ、Ａ、もしくはＲであるか、または存在せず；１３位でのＷの置換はＹ、Ａ、またはＰであり；１４位でのＸ１０はＬ、Ｍ、Ｆ、もしくはＧであるか、または存在せず；１５位でのＸ１１はＰ、Ｄ、Ａ、もしくはＴであるか、または存在せず；１６位でのＹの置換はＶであり；
ＣＤＲ−Ｌ１は、アミノ酸配列Ｑ−Ｘ１−Ｉ−Ｓ−Ｓ−Ｘ２−Ｙ（配列番号３３０の残基２７〜３３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＱの置換はＳまたはＥであり；２位でのＸ１はＥ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｇ、またはＲであり；３位でのＩの置換はＶであり；４位でのＳの置換はＡ、Ｒ、またはＧであり；５位でのＳの置換はＧ、Ｎ、またはＴであり；６位でのＸ２はＳ、Ｎ、ペプチドＦ−Ｒ−Ｙ−Ｓであるか、または存在せず；かつ７位でのＹの置換はＦ、Ｄ、またはＮであり；
ＣＤＲ−Ｌ２は、アミノ酸配列：Ｘ１−Ｔ−Ｓ（配列番号３３０の残基５１〜５３）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＸ１はＡ、Ｙ、Ｇ、Ｒ、Ｄ、またはＳであり；２位でのＴの置換はＡであり；３位でのＳの置換はＲであり；かつ
ＣＤＲ−Ｌ３は、アミノ酸配列：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｘ１−Ｓ−Ｘ２−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号３３０の残基９１〜９９）または少なくとも１個のアミノ酸残基の置換による前記アミノ酸配列の改変形態を有し、その際、１位でのＱの置換はＬまたはＨであり；２位でのＱの置換はＨであり；３位でのＹの置換はＳまたはＧであり；４位でのＸ１はＳ、Ｗ、Ｈ、Ｙ、Ｎ、またはＩであり；５位でのＳの置換はＥ、Ｒ、Ｇ、Ｔ、またはＮであり；６位でのＸ２はＹ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、またはＷであり；かつ８位でのＹの置換はＰ、Ｌ、Ｆであるか、または存在せず；その際、少なくとも１個のアミノ酸残基の前記置換が、ヒトＣＢ１に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片の能力を阻害しない、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が可変重（ＶＨ）ドメイン配列のＣＤＲ及び可変軽（ＶＬ）ドメイン配列のＣＤＲを含み、その際、前記ＶＨドメイン配列が、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択され、及び前記ＶＬドメインが、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択される、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が可変重（ＶＨ）ドメイン配列及び可変軽（ＶＬ）ドメイン配列を含み、その際、前記ＶＨドメイン配列が、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択され、及び／または前記ＶＬドメインが、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択される、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項３に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
配列番号１８／２４、３０／３６、４２／４８、５４／６０、６６／７２、７８／８４、９０／９６、１０２／１０８、１１４／１２０、１２６／１３２、１３８／１４４、１５０／１５６、１６２／１６８、１７４／１８０、１８６／１９２、１９８／２０４、２１０／２１６、２２２／２２８、２３４／２４０、２４６／２５２、２５８／２６４、２７０／２７６、２８２／２８８、２９４／３００、３０６／３１２、及び３１８／３２４からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む、請求項４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
（２０、２１、２２）；（３２、３３、３４）；（４４、４５、４６）；（５６、５７、５８）；（６８、６９、７０）；（８０、８１、８２）；（９２、９３、９４）；（１０４、１０５、１０６）；（１１６、１１７、１１８）；（１２８、１２９、１３０）；（１４０、１４１、１４２）；（１５２、１５３、１５４）；（１６４、１６５、１６６）；（１７６、１７７、１７８）；（１８８、１８９、１９０）；（２００、２０１、２０２）；（２１２、２１３、２１４）；（２２４、２２５、２２６）；（２３６、２３７、２３８）；（２４８、２４９、２５０）；（２６０、２６１、２６２）；（２７２、２７３、２７４）；（２８４、２８５、２８６）；（２９６、２９７、２９８）；（３０８、３０９、３１０）；及び（３２０、３２１、３２２）からなる群から選択されるＨＣＤＲセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）ならびに（２６、２７、２８）；（３８、３９、４０）；（５０、５１、５２）；（６２、６３、６４）；（７４、７５、７６）；（８６、８７、８８）；（９８、９９、１００）；（１１０、１１１、１１２）；（１２２、１２３、１２４）；（１３４、１３５、１３６）；（１４６、１４７、１４８）；（１５８、１５９、１６０）；（１７０、１７１、１７２）；（１８２、１８３、１８４）；（１９４、１９５、１９６）；（２０６、２０７、２０８）；（２１８、２１９、２２０）；（２３０、２３１、２３２）；（２４２、２４３、２４４）；（２５４、２５５、２５６）；（２６６、２６７、２６８）；（２７８、２７９、２８０）；（２９０、２９１、２９２）；（３０２、３０３、３０４）；（３１４、３１５、３１６）；及び（３２６、３２７、３２８）からなる群から選択されるＬＣＤＲセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む、請求項３に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
配列番号（２０、２１、２２／２６、２７、２８）；（３２、３３、３４／３８、３９、４０）；（４４、４５、４６／５０、５１、５２）；（５６、５７、５８／６２、６３、６４）；（６８、６９、７０／７４、７５、７６）；（８０、８１、８２／８６、８７、８８）；（９２、９３、９４／９８、９９、１００）；（１０４、１０５、１０６／１１０、１１１、１１２）；（１１６、１１７、１１８／１２２、１２３、１２４）；（１２８、１２９、１３０／１３４、１３５、１３６）；（１４０、１４１、１４２／１４６、１４７、１４８）；（１５２、１５３、１５４／１５８、１５９、１６０）；（１６４、１６５、１６６／１７０、１７１、１７２）；（１７６、１７７、１７８／１８２、１８３、１８４）；（１８８、１８９、１９０／１９４、１９５、１９６）；（２００、２０１、２０２／２０６、２０７、２０８）；（２１２、２１３、２１４／２１８、２１９、２２０）；（２２４、２２５、２２６／２３０、２３１、２３２）；（２３６、２３７、２３８／２４２、２４３、２４４）；（２４８、２４９、２５０／２５４、２５５、２５６）；（２６０、２６１、２６２／２６６、２６７、２６８）；（２７２、２７３、２７４／２７８、２７９、２８０）；（２８４、２８５、２８６／２９０、２９１、２９２）；（２９６、２９７、２９８／３０２、３０３、３０４）；（３０８、３０９、３１０／３１４、３１５、３１６）；及び（３２０、３２１、３２２／３２６、３２７、３２８）からなる群から選択される（ＨＣＤＲセット／ＬＣＤＲセット）対を含む、請求項６に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
配列番号１７／２３、２９／３５、４１／４７、５３／５９、６５／７１、７７／８３、８９／９５、１０１／１０７、１１３／１１９、１２５／１３１、１３７／１４３、１４９／１５５、１６１／１６７、１７３／１７９、１８５／１９１、１９７／２０３、２０９／２１５、２２１／２２７、２３３／２３９、２４５／２５１、２５７／２６３、２６９／２７５、２８１／２８７、２８３／２８９、３０５／３１１、及び３１７／３２３からなる群から選択されるＨＣ／ＬＣ対を含む、請求項７に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
ヒトカンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）（配列番号１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が可変重（ＶＨ）ドメイン配列のＣＤＲ及び可変軽（ＶＬ）ドメイン配列のＣＤＲを含み、その際、前記ＶＨドメイン配列が、配列番号１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、１７４、１８６、１９８、２１０、２２２、２３４、２４６、２５８、２７０、２８２、２９４、３０６、及び３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有し、及び前記ＶＬドメイン配列が、配列番号２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、及び３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有している、前記単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
前記ＶＨが配列番号１１４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１２０で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
前記ＶＨが配列番号１２６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１３２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記ＶＨが配列番号１３８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１４４で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
前記ＶＨが配列番号１５０で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１５６で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
前記ＶＨが配列番号１６２で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１６８で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
前記ＶＨが配列番号１７４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１８０で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１６】
前記ＶＨが配列番号１８６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号１９２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７】
前記ＶＨが配列番号１９８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２０４で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１８】
前記ＶＨが配列番号２１０で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２１６で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
前記ＶＨが配列番号２２２で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２２８で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２０】
前記ＶＨが配列番号２３４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２４０で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２１】
前記ＶＨが配列番号２４６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２５２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
前記ＶＨが配列番号２５８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２６４で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２３】
前記ＶＨが配列番号２７０で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２７６で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２４】
前記ＶＨが配列番号２８２で示され、かつ前記ＶＬが配列番号２８８で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２５】
前記ＶＨが配列番号２９４で示され、かつ前記ＶＬが配列番号３００で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２６】
前記ＶＨが配列番号３０６で示され、かつ前記ＶＬが配列番号３１２で示される、請求項９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２７】
前記ＶＨが配列番号３１８で示され、かつ前記ＶＬが配列番号３２４で示される、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２８】
前記抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２９】
前記断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）２断片またはｓｃＦｖ断片を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ  Ｆｃからなる群から選択されるヒトＦｃ領域を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３１】
改変ヒトＦｃ領域を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３２】
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ｑからなる群から選択される変異を含む改変ヒトＦｃ領域を含む、請求項３１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の抗原結合性断片を含む、多重特異性結合性タンパク質。
【請求項３４】
ＣＢ１シグナル伝達活性を阻害する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３５】
ＣＢ１シグナル伝達活性を増強する、または活性化する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３６】
ＣＢ１シグナル伝達活性に対するインバースアゴニストである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３７】
ヒト化抗体である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３８】
完全ヒト型抗体である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３９】
ＣＢ１への結合について、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離抗ヒトＣＢ１抗体またはその抗原結合性断片と競合する、単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４０】
結合について競合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項３９に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
請求項１〜３８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と実質的に同じＣＢ１のエピトープに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４２】
実質的に同じＣＢ１のエピトープに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片がヒトまたはヒト化抗体である、請求項４１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４３】
ＣＢ１について約１μＭ以下の結合親和性Ｋｄを有する、カンナビノイド１型受容体（ＣＢ１）に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４４】
ＣＢ１について約１００ｎＭ以下の結合親和性Ｋｄを有する、請求項４３に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４５】
リモナバンと比較した場合に、脳透過の減少を示す、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４６】
リモナバンと比較した場合に、少なくとも２倍高くＣＢ１シグナル伝達を阻害する、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４７】
リモナバンと比べて、ＣＮＳ副作用の減少を示す、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項４８】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離核酸分子。
【請求項４９】
請求項４８に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項５０】
請求項４９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項５１】
ＣＢ１シグナル伝達を調節する方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５２】
ＣＢ１をアンタゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５３】
ＣＢ１をアゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５４】
ＣＢ１をインバースアゴナイズする方法であって、ＣＢ１を発現する細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５５】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片と、少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項５６】
それを必要とする対象においてＣＢ１の生物学的活性を阻害するための方法であって、有効量の請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それにより、前記対象において前記ＣＢ１タンパク質の活性を阻害することを含む、前記方法。
【請求項５７】
ＣＢ１活性と関連する疾患を処置するための方法であって、請求項５５に記載の医薬組成物を、前記疾患に罹患している対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項５８】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達の調節に応答する疾患または障害を処置する方法であって、請求項５５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項５９】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達のアンタゴニズムまたはインバースアゴニズムに応答する疾患または障害を処置する方法であって、前記対象に請求項５５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６０】
それを必要とする対象においてＣＢ１シグナル伝達のアゴニズムに応答する疾患または障害を処置する方法であって、前記対象に請求項５５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６１】
ＣＢ１と関連する疾患または障害を診断するための方法であって、細胞を、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることを含む、前記方法。
【請求項６２】
前記疾患または障害が、肥満、プラーダー−ヴィリ症候群（ＰＷＳ）、アルストレーム症候群、バルデー−ビードル症候群（ＢＢＳ）、アルブライド遺伝性骨ジストロフィー（ＡＨＯ）、及びＳＩＭ１欠失症候群を含む症候性肥満；糖尿病及び関連合併症；脂質異常症；例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患、及び原発性胆汁性肝硬変などの肝臓疾患；線維症、例えば、腎臓線維症；慢性腎臓疾患；糖尿病性神経障害、巣状分節性糸球体硬化症、腎疾患；代謝性疾患、骨粗鬆症、アテローム硬化症、炎症性疾患、心臓血管疾患、がん、疼痛、全身性硬化症、多発性硬化症痙縮、緑内障、及びニコチン中毒からなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片を含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合性断片が、治療薬、細胞傷害薬、免疫接着分子、及びイメージング薬からなる群から選択される薬剤にコンジュゲートしている、前記抗体コンジュゲート。
【国際調査報告】
2021525059.tif 000043
2021525059.tif 000044
2021525059.tif 000045