(57)【要約】本開示は、それを必要とするヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、（ｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）タンパク質ならびに（ｉｉ）フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）のＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドを、ある投薬間隔で被験体に投与することを含む方法を提供する。本開示は例えば、血友病Ａの処置を必要とするヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、（ｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）ポリペプチドならびに（ｉｉ）フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）のＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で前記被験体に投与することを含み、前記複数用量の少なくとも１つが約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり、前記投薬間隔が少なくとも約７日である方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血友病Ａの処置を必要とするヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、（ｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）のＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、前記被験体に投与することを含み、
前記複数用量の少なくとも１つが、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり、前記投薬間隔が、少なくとも約７日である、方法。
【請求項２】
前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、共有結合によって前記ＶＷＦ断片と結び付いている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記共有結合が、ペプチド結合またはジスルフィド結合である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、第１の半減期延長部分を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の半減期延長部分が、前記ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端またはＮ末端に融合されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の半減期延長部分が、前記ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されている、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記第１の半減期延長部分が、前記ＦＶＩＩＩポリペプチドのＢドメイン内に挿入されている、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記第１の半減期延長部分が、配列番号６５のアミノ酸残基７４５に対応するアミノ酸のすぐ下流の前記ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されている、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の半減期延長部分が、リンカーによって前記ＦＶＩＩＩポリペプチドに融合されている、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＶＷＦ断片が、第２の半減期延長部分を含む、請求項４〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第２の半減期延長部分が、前記ＶＷＦ断片のＣ末端またはＮ末端に融合されている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第２の半減期延長部分が、前記ＶＷＦ断片内に挿入されている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の半減期延長部分が、前記ＶＷＦ断片のＣ末端に融合されている、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の半減期延長部分が、リンカーによって前記ＶＷＦ断片に融合されている、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の半減期延長部分、前記第２の半減期延長部分またはそれらの両方が、アルブミン、免疫グロブリンＦｃ領域、ＸＴＥＮ配列、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリン、アルブミン結合部分、またはそれらの任意の断片、誘導体、バリアントおよび任意の組合せからなる群より選択される、請求項４〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の半減期延長部分が、第１のＸＴＥＮを含む、請求項４〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１のＸＴＥＮが、配列番号６５のアミノ酸残基７４５に対応するアミノ酸のすぐ下流の前記ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２の半減期延長部分が、第２のＸＴＥＮを含む、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２のＸＴＥＮが、前記ＶＷＦ断片のＣ末端に融合されている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域またはその部分を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１のＩｇ定常領域またはその部分が、前記ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端またはＮ末端に融合されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１のＩｇ定常領域またはその部分が、前記ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１のＩｇ定常領域またはその部分が、前記ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端に融合されている、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１のＩｇ定常領域またはその部分が、リンカーによって前記ＦＶＩＩＩポリペプチドに融合されている、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１のＩｇ定常領域またはその部分が、第１のＦｃドメインまたはその部分を含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＶＷＦ断片が、第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第２のＩｇ定常領域またはその部分が、前記ＶＷＦ断片のＣ末端またはＮ末端に融合されている、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記第２のＩｇ定常領域またはその部分が、前記ＶＷＦ断片内に挿入されている、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２のＩｇ定常領域またはその部分が、前記ＶＷＦ断片のＣ末端に融合されている、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２のＩｇ定常領域またはその部分が、リンカーによって前記ＶＷＦ断片に融合されている、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記第２のＩｇ定常領域またはその部分が、第２のＦｃドメインまたはその部分を含む、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ＦＶＩＩＩタンパク質および前記ＶＷＦ断片が、前記第１のＦｃドメインおよび前記第２のＦｃドメインの間の共有結合により互いに結び付いている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＦＶＩＩＩタンパク質および前記ＶＷＦ断片が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質および前記ＶＷＦ断片の間の非共有結合的な相互作用により互いにさらに結び付いている、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、キメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、それを必要とする前記被験体に投与することを含み、前記キメラポリペプチドが、
（ｉ）（ａ）配列番号２１５のアミノ酸配列を含む第１のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、
（ｂ）配列番号８（ＡＥ２８８）のアミノ酸配列を含む第１のＸＴＥＮ配列、
（ｃ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含む第２のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、および
（ｄ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含む第１のＦｃ領域
を含むＦＶＩＩＩタンパク質、
（ｉｉ）（ａ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ’ドメイン、
（ｂ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ３ドメイン、
（ｃ）配列番号５８（ＡＥ１４４＿５Ａ）のアミノ酸配列を含む第２のＸＴＥＮ配列、
（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むａ２リンカー、および
（ｅ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含む第２のＦｃ領域
を含むＶＷＦタンパク質を含み、
前記第１のＦｃ領域が、ジスルフィド結合によって前記第２のＦｃ領域に共有結合的に連結されている、方法。
【請求項３６】
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩシグナルペプチドをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＶＷＦタンパク質が、配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＷＦシグナルペプチドをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＶＷＦタンパク質が、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ１Ｄ２ドメインをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、キメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、それを必要とする前記被験体に投与することを含み、前記キメラポリペプチドが、
（ｉ）配列番号１７３、配列番号２０１、配列番号２０３または配列番号２０７と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および
（ｉｉ）配列番号１９７、配列番号２０２または配列番号２０５と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質
を含む、方法。
【請求項４０】
ヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、キメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、それを必要とする前記被験体に投与することを含み、前記キメラポリペプチドが、
（ｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および
（ｉｉ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質
を含む、方法。
【請求項４１】
ヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、キメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、それを必要とする前記被験体に投与することを含み、前記キメラポリペプチドが、
（ｉ）ＦＶＩＩＩ−１６１（配列番号６９）、ＦＶＩＩＩ−１６９（配列番号７０）、ＦＶＩＩＩ−１７０（配列番号７１）、ＦＶＩＩＩ−１７３（配列番号７２）；ＦＶＩＩＩ−１９５（配列番号７３）；ＦＶＩＩＩ−１９６（配列番号７４）、ＦＶＩＩＩ１９９（配列番号７５）、ＦＶＩＩＩ−２０１（配列番号７６）；ＦＶＩＩＩ−２０３（配列番号７７）、ＦＶＩＩＩ−２０４（配列番号７８）、ＦＶＩＩＩ−２０５（配列番号７９）、ＦＶＩＩＩ−２６６（配列番号８０）、ＦＶＩＩＩ−２６７（配列番号８１）、ＦＶＩＩＩ−２６８（配列番号８２）、ＦＶＩＩＩ−２６９（配列番号８３）、ＦＶＩＩＩ−２７１（配列番号８４）、ＦＶＩＩＩ−２７２（配列番号８５）、ＦＶＩＩＩ−３１２（配列番号１７３）、またはＦＶＩＩＩ−３１２Ａ（配列番号２０３）から選択される配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および
（ｉｉ）ＶＷＦ０３１（配列番号８６）、ＶＷＦ０３４（配列番号８７）、ＶＷＦ０５９（配列番号１９７）、ＶＷＦ０５９Ａ（配列番号２０２）またはＶＷＦ０３６から選択される配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質
を含む、方法。
【請求項４２】
前記複数用量の少なくとも１つが、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり、前記投薬間隔が、少なくとも約７日である、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記複数用量の少なくとも１つが、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、前記投薬間隔が、少なくとも約５日または約７日である、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記複数用量が、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも４用量、少なくとも５用量、少なくとも６用量、少なくとも７用量、少なくとも８用量、少なくとも９用量、少なくとも１０用量、少なくとも１１用量、少なくとも１２用量、少なくとも１３用量、少なくとも１４用量、少なくとも１５用量、少なくとも１６用量、少なくとも１７用量、少なくとも１８用量、少なくとも１９用量、少なくとも２０用量、またはそれよりも多くの用量を含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記血友病Ａの処置が、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードの発生率もしくは頻度を制御または減少させることを含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記血友病Ａの処置が、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードを予防または処置することを含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記複数用量の少なくとも１つが、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約４５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約４０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約３５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約３０ＩＵ／ｋｇ、または約２０ＩＵ／ｋｇ〜約２５ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記複数用量の少なくとも１つが、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、または約９０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記複数用量の少なくとも１つが、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約６０ＩＵ／ｋｇ、または約４５ＩＵ／ｋｇ〜約５５ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記複数用量の少なくとも１つが、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記複数用量の少なくとも１つが、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、または約１００ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記複数用量の少なくとも１つが、約２５ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記複数用量の少なくとも１つが、約６５ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記複数用量の少なくとも１つが、約８０ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記投薬間隔が、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約２１日、少なくとも約２２日、少なくとも約２３日、少なくとも約２４日、少なくとも約２５日、少なくとも約２６日、少なくとも約２７日、少なくとも約２８日、少なくとも約２９日、少なくとも約３０日、または少なくとも約３１日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記用量の頻度が、１週間ごとに少なくとも１回、２週間ごとに少なくとも１回、３週間ごとに少なくとも１回、または４週間ごとに少なくとも１回である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記用量の頻度が、１週間ごとに少なくとも１回である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記用量の頻度が、２週間ごとに少なくとも１回である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記キメラポリペプチドが、予防的処置のために投与される、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記キメラポリペプチドが、静脈内注射、静脈内注入、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、経鼻投与および肺投与からなる群より選択される経路によって投与される、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記投与後の前記キメラポリペプチドが、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、または少なくとも約１０％のＦＶＩＩＩの血漿活性レベルをもたらす、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、少なくとも約３％である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、少なくとも約５％である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記投与後の前記キメラポリペプチドが、少なくとも約１ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約２ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約４ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約６ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約７ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約８ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約９ＩＵ／ｄＬ、または少なくとも約１０ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩの血漿活性レベルをもたらす、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、前記キメラポリペプチドの前記投与の少なくとも約５日後に、少なくとも約１０ＩＵ／ｄＬである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、前記キメラポリペプチドの前記投与の少なくとも約７日後に、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、前記キメラポリペプチドの前記投与の少なくとも約８日後に、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルが、前記キメラポリペプチドの前記投与の少なくとも約１０日後に、少なくとも約１ＩＵ／ｄＬである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記複数用量の少なくとも１つが、約５０ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記複数用量が、約５０Ｕ／ｋｇであり、前記投薬間隔が、約７日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記キメラポリペプチドの前記投与が、約７日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約２０日間、約２４日間、約２５日間、約２８日間、約３０日間、または約３５日間の前記投与後に、ＦＶＩＩＩ阻害剤を誘導しない、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記キメラポリペプチドの前記投与が、約２８日間の前記投与後に、ＦＶＩＩＩ阻害剤を誘導しない、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記複数用量の少なくとも１つが、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記複数用量の少なくとも１つが、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記複数用量の少なくとも１つが、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記投薬間隔が、少なくとも約７日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記投薬間隔が、約７日〜約１４日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記投薬間隔が、少なくとも約１０日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記投薬間隔が、約１０日〜約２１日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記投薬間隔が、約１４日〜約２１日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記投薬間隔が、約１４日である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ヒト被験体が、女性である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ヒト被験体が、子供である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ヒト被験体が、約１２歳またはそれ未満、約１１歳未満、約１０歳未満、約９歳未満、約８歳未満、約７歳未満、約６歳未満、約５歳未満、約４歳未満、約３歳未満、約２歳未満、または約１歳未満の子供である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記投与が、前記ヒト被験体においてＦＶＩＩＩに対する免疫寛容を誘導する、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記投与が、前記ヒト被験体においてＦＶＩＩＩに対する阻害性免疫応答を低減する、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
ＦＶＩＩＩに対する前記阻害性免疫応答が、前記ヒト被験体における高力価の抗ＦＶＩＩＩ抗体を含む、請求項８８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権出願への参照
本出願は、２０１８年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／６７３，６７０号、２０１８年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／７１２，８８０号、２０１８年１１月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／７７３，７８５号、および２０１９年２月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８０１，５７６号に対する優先権の利益を主張し、これらのそれぞれは、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出された配列表への参照
ＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：ＳＡ９−４６１ＰＣ＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ；サイズ：９２２キロバイト；作成日：２０１９年５月１４日）において電子的に提出された配列表の内容は、その全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
血友病Ａは第ＶＩＩＩ凝血因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする遺伝子の欠損によって引き起こされる出血性障害であり、男児出生１０，０００人に１〜２人が発症する。Ｇｒａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｅｔ．  ６（６）：  ４８８−５０１  （２００５）。血友病Ａに罹った患者は、精製されたＦＶＩＩＩまたは組換え的に製造されたＦＶＩＩＩの注入によって処置され得る。多くの市販のＦＶＩＩＩ製品は、約８〜１２時間の半減期を有することが知られており、患者への頻繁な静脈内投与を必要とする。Ｗｅｉｎｅｒ  Ｍ．Ａ．  ａｎｄ  Ｃａｉｒｏ，  Ｍ．Ｓ．，  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｒｅｔｓ，  Ｌｅｅ，  Ｍ．Ｔ．，  １２．  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２００１；Ｌｉｌｌｉｃｒａｐ，  Ｄ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｒｅｓ．  １２２  Ｓｕｐｐｌ  ４：Ｓ２−８  （２００８）を参照されたい。加えて、ＦＶＩＩＩの半減期を延長するために多数のアプローチが試みられている。例えば、凝固因子の半減期を延長するための開発におけるアプローチとしては、ペグ化、グリコペグ化、およびアルブミンとのコンジュゲーションが挙げられる。Ｄｕｍｏｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ．  １１９（１３）：  ３０２４−３０３０  （２０１２）を参照されたい。一貫した結果がヒトにおいて実証されており、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃは、血友病Ａの患者において、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）と比較して、約１．７倍まで半減期を改善することが報告された。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ．  １１９（１３）：  ３０３１−３０３７  （２０１２）を参照されたい。したがって、半減期の増大は、軽微な改善にもかかわらず、他の半減期制限因子の存在を示す。Ｌｉｕ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７  ＩＳＴＨ  ｍｅｅｔｉｎｇ，  ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃Ｐ−Ｍ−０３５；Ｈｅｎｒｉｋ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１  ＩＳＴＨ  ｍｅｅｔｉｎｇ，  ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃Ｐ＝ＭＯ−１８１；Ｌｉｕ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１  ＩＳＴＨ  ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃Ｐ−ＷＥ−１３１を参照されたい。
【０００４】
現在推奨されている標準治療は、出血エピソードの数を最小化するためのＦＶＩＩＩの定期的な投与（日常的な予防）を含む。日常的な予防は、長期転帰における改善と関連しているが、頻繁な静脈内（ＩＶ）投与についての必要性によって制限される要求の多いレジメンである。Ｍａｎｃｏ−Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３５７（６）：５３５−４４  （２００７）を参照されたい。半減期が延長されたＦＶＩＩＩ製品は、予防のためのＦＶＩＩＩ投与の頻度を低減し、しかしながら、すべてが、フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）と相互作用し、内因性ＶＷＦの半減期に起因するｒＦＶＩＩＩバリアントの半減期における上限と一致する、同等の循環の半減期を有する。例えば、Ｐｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ．  １２８（１６）：２００７−１６  （２０１６）を参照されたい。これらのＦＶＩＩＩ製品についての予防的投薬は、３〜５日ごとである。
より少ない頻度での投与をもたらす、長期間出血エピソードを予防および制御する次世代の半減期が延長されたＦＶＩＩＩ製品は、要求の多い予防レジメンの順守の課題に対して潜在的に対処し、これは、今度は、血友病患者の生活の質を改善する可能性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｇｒａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｅｔ．  ６（６）：  ４８８−５０１  （２００５）
【非特許文献２】Ｗｅｉｎｅｒ  Ｍ．Ａ．  ａｎｄ  Ｃａｉｒｏ，  Ｍ．Ｓ．，  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｒｅｔｓ
【非特許文献３】Ｌｅｅ，  Ｍ．Ｔ．，  １２．  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２００１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示のある特定の態様は、それを必要とするヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、（ｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）タンパク質、ならびに（ｉｉ）フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）のＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つが、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔が、少なくとも約７日ごとである、方法に関する。
【０００７】
一部の実施形態では、複数用量は、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも４用量、少なくとも５用量、少なくとも６用量、少なくとも７用量、少なくとも８用量、少なくとも９用量、少なくとも１０用量、少なくとも１１用量、少なくとも１２用量、少なくとも１３用量、少なくとも１４用量、少なくとも１５用量、少なくとも１６用量、少なくとも１７用量、少なくとも１８用量、少なくとも１９用量、少なくとも２０用量、またはそれよりも多くの用量を含む。
【０００８】
一部の実施形態では、血友病Ａの処置は、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードの発生率もしくは頻度を制御または減少させることを含む。一部の実施形態では、血友病Ａの処置は、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードを予防または処置することを含む。
【０００９】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約４５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約４０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約３５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約３０ＩＵ／ｋｇ、または約２０ＩＵ／ｋｇ〜約２５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、または約９０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。
【００１０】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約６０ＩＵ／ｋｇ、または約４５ＩＵ／ｋｇ〜約５５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。
【００１１】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、または約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇである。
【００１２】
一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約２１日、少なくとも約２２日、少なくとも約２３日、少なくとも約２４日、少なくとも約２５日、少なくとも約２６日、少なくとも約２７日、少なくとも約２８日、少なくとも約２９日、少なくとも約３０日、または少なくとも約３１日である。
【００１３】
一部の実施形態では、投薬頻度は、１週間ごとに少なくとも１回、２週間ごとに少なくとも１回、３週間ごとに少なくとも１回、または４週間ごとに少なくとも１回である。一部の実施形態では、投薬間隔は、１週間ごとに少なくとも１回である。一部の実施形態では、投薬間隔は、２週間ごとに少なくとも１回である。
【００１４】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、予防的処置のために投与される。
【００１５】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、共有結合によってＶＷＦ断片と結び付く。一部の実施形態では、共有結合は、ペプチド結合またはジスルフィド結合である。
【００１６】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩポリペプチドおよび第１の半減期延長部分を含む。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端またはＮ末端に融合される。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入される。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＢドメイン内に挿入される。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、配列番号６５のアミノ酸残基７４５に対応するアミノ酸のすぐ下流のＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入される。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、リンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドに融合される。
【００１７】
一部の実施形態では、ＶＷＦ断片は、第２の半減期延長部分を含む。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、ＶＷＦ断片のＣ末端またはＮ末端に融合される。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、ＶＷＦ断片内に挿入される。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、ＶＷＦ断片のＣ末端に融合される。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、リンカーによってＶＷＦ断片に融合される。
【００１８】
一部の実施形態では、第１の半減期延長部分、第２の半減期延長部分またはそれらの両方は、アルブミン、免疫グロブリンＦｃ領域、ＸＴＥＮ配列、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリン、アルブミン結合部分、またはそれらの任意の断片、誘導体、バリアントおよび任意の組合せからなる群より選択される。
【００１９】
一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、第１のＸＴＥＮを含む。
【００２０】
一部の実施形態では、第１のＸＴＥＮは、配列番号６５のアミノ酸残基７４５に対応するアミノ酸のすぐ下流のＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入される。
【００２１】
一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、第２のＸＴＥＮを含む。一部の実施形態では、第２のＸＴＥＮは、ＶＷＦ断片のＣ末端に融合される。
【００２２】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域またはその部分を含む。一部の実施形態では、第１のＩｇ定常領域またはその部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端またはＮ末端に融合される。一部の実施形態では、第１のＩｇ定常領域またはその部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入される。一部の実施形態では、第１のＩｇ定常領域またはその部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端に融合される。一部の実施形態では、第１のＩｇ定常領域またはその部分は、リンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドに融合される。一部の実施形態では、第１のＩｇ定常領域またはその部分は、第１のＦｃドメインまたはその部分を含む。
【００２３】
一部の実施形態では、ＶＷＦ断片は、第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む。一部の実施形態では、第２のＩｇ定常領域またはその部分は、ＶＷＦ断片のＣ末端またはＮ末端に融合される。一部の実施形態では、第２のＩｇ定常領域またはその部分は、ＶＷＦ断片内に挿入される。一部の実施形態では、第２のＩｇ定常領域またはその部分は、ＶＷＦ断片のＣ末端に融合される。一部の実施形態では、第２のＩｇ定常領域またはその部分は、リンカーによってＶＷＦ断片に融合される。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、第２のＩｇ定常領域またはその部分は、第２のＦｃドメインまたはその部分を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインの間の共有結合により互いに結び付く。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片の間の非共有結合的な相互作用により互いにさらに結び付く。
【００２５】
一態様では、ヒト被験体における血友病Ａを処置する方法であって、キメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、それを必要とする被験体に投与することを含み、キメラポリペプチドが、（ｉ）配列番号２１５のアミノ酸配列を含む第１のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、配列番号８（ＡＥ２８８）のアミノ酸配列を含む第１のＸＴＥＮ配列、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む第２のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、および配列番号２１７のアミノ酸配列を含む第１のＦｃ領域を含むＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ’ドメイン、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ３ドメイン、配列番号５８（ＡＥ１４４＿５Ａ）のアミノ酸配列を含む第２のＸＴＥＮ配列、配列番号８８のアミノ酸配列を含むａ２リンカー、および配列番号２１７のアミノ酸配列を含む第２のＦｃ領域を含むＶＷＦタンパク質を含み、第１のＦｃ領域が、ジスルフィド結合によって第２のＦｃ領域に共有結合的に連結される、方法が本明細書に開示される。
【００２６】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチド、第１のＸＴＥＮ配列、第１のＦｃ領域を含むＦＶＩＩＩタンパク質、ならびにＶＷＦのＤ’ドメイン、ＶＷＦのＤ３ドメイン、第２のＸＴＥＮ配列、ＦＶＩＩＩのａ２リンカーおよび第２のＦｃ領域を含むＶＷＦタンパク質を含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドが、配列番号２１５のアミノ酸配列を含み、第１のＸＴＥＮ配列がＡＥ２８８（配列番号８）のアミノ酸配列を含み、配列番号２１５のＣ末端に融合され、ＦＶＩＩＩポリペプチドが、配列番号２１６のアミノ酸配列をさらに含み、第１のＦｃ領域が、配列番号２１７のアミノ酸配列を含み、配列番号２１６のＣ末端に融合され、ＶＷＦのＤ’ドメインが、配列番号２１０のアミノ酸配列を含み、ＶＷＦのＤ３ドメインが、配列番号２１４のアミノ酸配列を含み、第２のＸＴＥＮ配列が、ＡＥ１４４＿５Ａ（配列番号５８）のアミノ酸配列を含み、ＶＷＦのＤ３ドメインのＣ末端に融合され、ａ２リンカーが、配列番号８８のアミノ酸配列を含み、第２のＸＴＥＮ配列のＣ末端に融合され、第２のＦｃ領域が、配列番号２１７のアミノ酸配列を含み、ａ２リンカーのＣ末端に融合され、第１のＦｃ領域が、ジスルフィド結合によって第２のＦｃ領域に共有結合的に連結される。
【００２７】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩシグナルペプチドを含むＦＶＩＩＩタンパク質を含む。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＷＦシグナルペプチドを含むＶＷＦタンパク質を含む。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ１Ｄ２ドメインを含むＶＷＦタンパク質を含む。
【００２８】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０１、配列番号２０３または配列番号２０７と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および配列番号２０２または配列番号２０５と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。
【００２９】
一実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。別の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。別の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。
【００３０】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＶＩＩＩ−１６１（配列番号６９）、ＦＶＩＩＩ−１６９（配列番号７０）、ＦＶＩＩＩ−１７０（配列番号７１）、ＦＶＩＩＩ−１７３（配列番号７２）；ＦＶＩＩＩ−１９５（配列番号７３）；ＦＶＩＩＩ−１９６（配列番号７４）、ＦＶＩＩＩ１９９（配列番号７５）、ＦＶＩＩＩ−２０１（配列番号７６）；ＦＶＩＩＩ−２０３（配列番号７７）、ＦＶＩＩＩ−２０４（配列番号７８）、ＦＶＩＩＩ−２０５（配列番号７９）、ＦＶＩＩＩ−２６６（配列番号８０）、ＦＶＩＩＩ−２６７（配列番号８１）、ＦＶＩＩＩ−２６８（配列番号８２）、ＦＶＩＩＩ−２６９（配列番号８３）、ＦＶＩＩＩ−２７１（配列番号８４）、ＦＶＩＩＩ−２７２（配列番号８５）、ＦＶＩＩＩ−３１２（配列番号１７３）、またはＦＶＩＩＩ−３１２Ａ（配列番号２０３）から選択される配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、およびＶＷＦ０３１（配列番号８６）、ＶＷＦ０３４（配列番号８７）、ＶＷＦ０５９（配列番号１９７）、ＶＷＦ０５９Ａ（配列番号２０２）またはＶＷＦ０３６から選択される配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。
【００３１】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、静脈内注射、静脈内注入、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、経鼻投与および肺投与からなる群より選択される経路によって投与される。
【００３２】
一部の実施形態では、投与後のキメラポリペプチドは、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、または少なくとも約１０％のＦＶＩＩＩの血漿活性レベルをもたらす。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約３％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約５％である。
【００３３】
一部の実施形態では、投与後のキメラポリペプチドは、少なくとも約１ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約２ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約４ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約６ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約７ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約８ＩＵ／ｄＬ、少なくとも約９ＩＵ／ｄＬ、または少なくとも約１０ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩの血漿活性レベルをもたらす。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬである。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬである。
【００３４】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、キメラポリペプチドの投与の少なくとも約５日後に、少なくとも約１０ＩＵ／ｄＬである。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、キメラポリペプチドの投与の少なくとも約７日後に、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬである。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、キメラポリペプチドの投与の少なくとも約８日後に、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬである。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、キメラポリペプチドの投与の少なくとも約１０日後に、少なくとも約１ＩＵ／ｄＬである。
【００３５】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。
【００３６】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量は、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、約５日である。一部の実施形態では、複数用量は、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、約７日である。一部の実施形態では、複数用量は、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、約１４日である。
【００３７】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。
【００３８】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。
【００３９】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。
【００４０】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１週間である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１週間である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１週間である。
【００４１】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約２週間である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約２週間である。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約２週間である。
【００４２】
一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約５日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約７日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、約５日〜約１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、約７日〜約１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、約１０日〜約２１日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、約１４日〜約２１日である。一部の実施形態では、投薬間隔は、約１４日である。
【００４３】
一部の実施形態では、ヒト被験体は女性である。一部の実施形態では、ヒト被験体は子供である。一部の実施形態では、ヒト被験体は、約１２歳またはそれ未満、約１１歳未満、約１０歳未満、約９歳未満、約８歳未満、約７歳未満、約６歳未満、約５歳未満、約４歳未満、約３歳未満、約２歳未満、または約１歳未満の子供である。
【００４４】
一部の実施形態では、投与は、ヒト被験体において、ＦＶＩＩＩに対する免疫寛容を誘導する。一部の実施形態では、投与は、ヒト被験体において、ＦＶＩＩＩに対する阻害性免疫応答を低減する。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩに対する阻害性免疫応答は、ヒト被験体における高力価の抗ＦＶＩＩＩ抗体を含む。
【００４５】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドの投与は、約７日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約２０日間、約２４日間、約２５日間、約２８日間、約３０日間、または約３５日間の投与後に、ＦＶＩＩＩ阻害剤を誘導しない。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの投与は、約２８日間の投与後に、ＦＶＩＩＩ阻害剤を誘導しない。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの概略図である。ＦＶＩＩＩ：第ＶＩＩＩ因子；ＶＷＦ：フォンヴィルブランド因子；Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ｃ１、Ｃ２：ＦＶＩＩＩのドメイン；Ｄ’Ｄ３：ＶＷＦのドメイン；Ｆｃ：免疫グロブリン定常領域のＦｃ領域。
【００４７】
【図２Ａ】図２Ａおよび２Ｂは、２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した低用量コホート（図２Ａ）および６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した高用量コホート（図２Ｂ）のヒト患者におけるｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの安全性および有効性を試験するためのプロトコールを示す。
【図２Ｂ】図２Ａおよび２Ｂは、２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した低用量コホート（図２Ａ）および６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した高用量コホート（図２Ｂ）のヒト患者におけるｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの安全性および有効性を試験するためのプロトコールを示す。
【００４８】
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｂは、２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩの投与後に休薬期間を設けた後２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与したか（図３Ａ；低用量コホート）、または６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩの投与後に休薬期間を設けた後、６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した（図３Ｂ；高用量コホート）、重度血友病Ａを有するヒト被験体における活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験に基づくベースライン補正ＦＶＩＩＩ活性レベルのグラフ表示である。水平方向の破線は、３％、５％、１０％、および２０％のＦＶＩＩＩ活性を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ〜３Ｂは、２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩの投与後に休薬期間を設けた後２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与したか（図３Ａ；低用量コホート）、または６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩの投与後に休薬期間を設けた後、６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した（図３Ｂ；高用量コホート）、重度血友病Ａを有するヒト被験体における活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験に基づくベースライン補正ＦＶＩＩＩ活性レベルのグラフ表示である。水平方向の破線は、３％、５％、１０％、および２０％のＦＶＩＩＩ活性を示す。
【００４９】
【図４】図４は、処置歴がある重度血友病Ａを有する年齢１８歳から６５歳（両端を含む）の成人男性患者（ＰＴＰ）においてｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇまたは６５ＩＵ／ｋｇ用量を週１回、全体で４用量を投与した場合の安全性および忍容性を評価する臨床試験のデザインの概略図である。ＥＯＳ＝試験終了；ＥＴ＝早期中止；ＰＫ＝薬物動態。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本開示は、それを必要とするヒト被験体における、出血性疾患または状態、例えば、血友病Ａを処置する方法であって、（ｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）のＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約５日ごとである。一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約７日ごとである。
【００５１】
Ｉ．定義
「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、１つまたは複数のその実体を指すことに留意すべきであり、例えば、「ヌクレオチド配列（ａ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」は１つまたは複数のヌクレオチド配列を表すように理解される。そのようなものとして、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたは複数」および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換可能に使用することができる。
【００５２】
さらにまた、「および／または」は、本明細書で使用される場合、他のものを伴って、または他のものを伴わずに、２つの特定された特徴または成分のそれぞれの具体的な開示として解釈されるべきである。そのため、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句中で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの語句中で使用される「および／または」という用語は、以下の態様：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
【００５３】
態様が、「含む」という語を用いて本明細書で記載される場合はどんな場合であろうとも、「からなる」および／または「本質的にからなる」の観点で記載される他の類似の態様も提供されることが理解される。
【００５４】
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｕｏ，  Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  ２００２，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ３ｒｄ  ｅｄ．，  １９９９，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｒｅｖｉｓｅｄ，  ２０００，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、本開示において使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【００５５】
単位、接頭辞および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）が許容した形態で示される。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。他に指示されない限り、アミノ酸配列は、左から右にアミノからカルボキシの方向で記述される。本明細書で提供される見出しは、本開示の種々の態様の限定ではない。したがって、直下で定義される用語は、その全体で、本明細書を参照することによってより完全に定義される。
【００５６】
「約」という用語は、およそ、大体、おおよそ、またはその領域で、を意味するように本明細書で使用される。「約」という用語が、数値範囲と併せて使用される場合、これは、示される数値の上および下の境界を拡張することによってその範囲を改変する。一般に、「約」という用語は、例えば、１０パーセントの上または下（高いまたは低い）の分散によって、言及される値の上および下で数値を改変することができる。
【００５７】
「ポリヌクレオチド」または「ヌクレオチド」という用語は、単一の核酸および複数の核酸を包含することが意図され、単離された核酸分子または構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、従来のホスホジエステル結合または従来のものではない結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）において見られるようなアミド結合）を含む。「核酸」という用語は、ポリヌクレオチドに存在する、いずれか１つまたは複数の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡの断片を指す。「単離された」核酸またはポリヌクレオチドに関して、そのネイティブな環境から取り出されている、核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡが意図される。例えば、ベクターに含有される第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、本開示の目的のために単離されると考えられる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種の宿主細胞中で維持される組換えポリヌクレオチド、または溶液中で他のポリヌクレオチドから（部分的または実質的に）精製された組換えポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子は、本開示のポリヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏのＲＮＡ転写物を含む。本開示による単離されたポリヌクレオチドまたは核酸は、合成的に製造されたそのような分子をさらに含む。加えて、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、または転写終結シグナルなどの調節エレメントを含むことができる。
【００５８】
哺乳動物細胞によって分泌されるある特定のタンパク質は、ひとたび成長しているタンパク質鎖の粗面小胞体を横切る輸送が開始されると、成熟タンパク質から切断される分泌シグナルペプチドと結び付く。当業者は、シグナルペプチドが、一般にポリペプチドのＮ末端に融合され、完全または「全長」ポリペプチドから切断されて、ポリペプチドの分泌された形態または「成熟」形態が生成することを知っている。ある特定の実施形態では、ポリペプチドの分泌を指示する能力を保持する、ネイティブのシグナルペプチドまたはその配列の機能的誘導体は、それに作動可能に結び付く。あるいは、異種の哺乳動物のシグナルペプチド、例えば、ヒトの組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）もしくはマウスのβ−グルクロニダーゼのシグナルペプチド、またはそれらの機能的誘導体を使用することができる。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、１つの「ポリペプチド」および複数の「ポリペプチド」を包含することが意図され、アミド結合（ペプチド結合としても公知）によって直鎖状に連結された単量体（アミノ酸）で構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つまたはそれよりも多くのアミノ酸の任意の鎖または複数の鎖を指し、特定の長さの生成物を指すわけではない。そのため、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、あるいは２つもしくはそれよりも多くのアミノ酸の鎖または複数の鎖を指すために使用される任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義の範囲内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、任意のこれらの用語の代わりに、または任意のこれらの用語と互換可能に使用することができる。「ポリペプチド」という用語は、限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾を含む、ポリペプチドの発現後修飾の生成物を指すことも意図される。ポリペプチドは、天然の生物学的起源に由来することができ、または組換え技術で生成させることができるが、指定された核酸配列から必ずしも翻訳されない。これは、化学合成によるものを含む任意の方法で生じさせることができる。
【００６０】
「単離された」ポリペプチド、またはその断片、バリアントもしくは誘導体は、その自然環境にはないポリペプチドを指す。特定のレベルの精製は必要ではない。例えば、単離されたポリペプチドは、そのネイティブまたは天然の環境から簡単に取り出すことができる。宿主細胞中で発現する組換え的に生成したポリペプチドおよびタンパク質は、任意の好適な技術によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製されている、ネイティブまたは組換えのポリペプチドのように、本開示の目的のために単離されると考えられる。
【００６１】
本開示には、ポリペプチドの断片またはバリアント、およびそれらの任意の組合せも含む。「断片」または「バリアント」という用語は、本開示のポリペプチド結合ドメインまたは結合分子を指す場合、参照ポリペプチドの性質（例えば、ＦｃＲｎ結合ドメインまたはＦｃバリアントに対するＦｃＲｎ結合親和性、ＦＶＩＩＩバリアントについての凝血活性、またはＶＷＦ断片に対するＦＶＩＩＩ結合活性）の少なくとも一部を保持する任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドの断片は、本明細書のどこかで議論される特異的な抗体断片に加えて、タンパク質分解断片および欠失断片を含むが、天然に存在する全長ポリペプチド（または成熟ポリペプチド）は含まない。本開示のポリペプチド結合ドメインまたは結合分子のバリアントは、上記に記載の断片を含み、アミノ酸の置換、欠失または挿入に起因して変化したアミノ酸配列を有するポリペプチドも含む。バリアントは、天然に存在することができ、または天然に存在することができない。天然に存在しないバリアントは、当技術分野で公知の変異誘発技術を使用して、生成させることができる。バリアントポリペプチドは、保存的もしくは非保存的なアミノ酸の置換、欠失または付加を含むことができる。
【００６２】
本明細書で使用される「ＶＷＦタンパク質」または「複数のＶＷＦタンパク質」という用語は、ＦＶＩＩＩと相互作用し、全長ＶＷＦによって通常ＦＶＩＩＩに提供される少なくとも１つまたは複数の性質、例えば、ＦＶＩＩＩａへの早期の活性化を防止すること、早期のタンパク質分解を防止すること、早期のクリアランスをもたらし得るリン脂質膜との会合を防止すること、ネイキッドＦＶＩＩＩを結合することができるが、ＶＷＦが結合したＦＶＩＩＩを結合することができないＦＶＩＩＩクリアランス受容体への結合を防止すること、ならびに／またはＦＶＩＩＩの重鎖および軽鎖の相互作用を安定化すること、を保持する任意のＶＷＦ断片を意味する。本明細書で言及されるＶＷＦ断片は、全長未満のＶＷＦタンパク質であるＶＷＦポリペプチドであり、ここで、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩと相互作用する、および／またはＦＶＩＩＩに結合する能力を保持する。
【００６３】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられることである。塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ−分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術において定義されている。このため、ポリペプチド中のアミノ酸が同じ側鎖ファミリーに由来する別のアミノ酸で置き換えられる場合、この置換は保存的であると考えられる。他の実施形態では、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーのメンバーの順序および／または組成において異なる、構造的に類似するストリングで保存的に置き換えることができる。
【００６４】
当技術分野において公知であるように、２つのポリペプチドの間の「配列同一性」は、一方のポリペプチドのアミノ酸配列を第２のポリペプチドの配列と比較することによって決定される。本明細書で議論される場合、任意の特定のポリペプチドが、別のポリペプチドと少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一であるか否かは、限定されるものではないが、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ  ５３７１１）などの当技術分野において公知の方法およびコンピュータプログラム／ソフトウエアを使用して決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２−４８９  （１９８１）のローカル相同性アルゴリズムを使用して、２つの配列の間の相同性の最良のセグメントを見出す。特定の配列が本開示による参照配列と、例えば、９５％同一であるか否かを決定するためにＢＥＳＴＦＩＴまたは任意の他の配列アライメントプログラムを使用する場合、パラメーターは、当然ながら、同一性のパーセンテージが参照ポリペプチド配列の全長にわたって計算され、参照配列におけるアミノ酸の総数の５％までの相同性のギャップが許容されるように設定される。
【００６５】
本明細書で使用される場合、ＶＷＦ配列またはＦＶＩＩＩタンパク質配列における「に対応するアミノ酸」または「同等のアミノ酸」は、第１のＶＷＦもしくはＦＶＩＩＩの配列および第２のＶＷＦもしくはＦＶＩＩＩの配列との間の同一性または類似性を最大化するためのアライメントによって特定される。第２のＶＷＦまたはＦＶＩＩＩの配列における同等のアミノ酸を特定するために使用される数は、第１のＶＷＦまたはＦＶＩＩＩの配列における対応するアミノ酸を特定するために使用される数に基づく。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「挿入部位」という用語は、半減期延長部分または異種部分を挿入することができる位置のすぐ下流である、ＦＶＩＩＩポリペプチド、またはその断片、バリアントもしくは誘導体における位置を指す。「挿入部位」は、数として特定され、その数は、挿入部位が対応する成熟ネイティブＦＶＩＩＩ（配列番号６５）におけるアミノ酸の数であり、これは、挿入の位置のすぐＣ末端側である。例えば、「ａ３は配列番号６５のアミノ酸１６５６に対応する挿入部位でＸＴＥＮを含む」という語句は、異種部分が、配列番号６５のアミノ酸１６５６およびアミノ酸１６５７に対応する２つのアミノ酸の間に位置することを示す。
【００６７】
本明細書で使用される「アミノ酸のすぐ下流」という語句は、アミノ酸の末端カルボキシル基のちょうど隣の位置を指す。例えば、成熟野生型ＦＶＩＩＩタンパク質に対応するアミノ酸７４５のすぐ下流の挿入部位とは、挿入部位が、成熟野生型ＦＶＩＩＩタンパク質に対応するアミノ酸７４５およびアミノ酸７４６の間であることを意味する。同様に、「アミノ酸のすぐ上流」という語句は、アミノ酸の末端アミン基のちょうど隣の位置を指す。
【００６８】
本明細書で使用される「挿入部位の２つのアミノ酸の間」という語句は、ＸＴＥＮまたは任意の他のポリペプチドが、２つの隣接するアミノ酸の間に挿入される位置を指す。そのため「アミノ酸のすぐ下流に挿入される」および「挿入部位の２つのアミノ酸の間に挿入される」という語句は、「挿入部位で挿入される」と同義で使用される。
【００６９】
本明細書で使用される「挿入された（ｉｎｓｅｒｔｅｄ）」、「挿入される（ｉｓ  ｉｎｓｅｒｔｅｄ）」、「に挿入された（ｉｎｓｅｒｔｅｄ  ｉｎｔｏ）」という用語、または文法的に関連する用語は、ネイティブ成熟ヒトＦＶＩＩＩにおける類似の位置に対して、キメラポリペプチド中のＸＴＥＮの位置を指す。本明細書で使用される場合、この用語は、ネイティブ成熟ヒトＦＶＩＩＩに対する組換えＦＶＩＩＩポリペプチドの特徴を指し、キメラポリペプチドが作製される任意の方法またはプロセスを示すものでもなく、暗示するものでもなく、または推察するものでもない。例えば、本明細書で提供されるキメラポリペプチドを参照して、「ＸＴＥＮはＦＶＩＩＩポリペプチドの残基７４５のすぐ下流に挿入される」という語句は、キメラポリペプチドが、ネイティブ成熟ヒトＦＶＩＩＩにおけるアミノ酸７４５に対応するアミノ酸のすぐ下流の（例えば、ネイティブ成熟ヒトＦＶＩＩＩのアミノ酸７４５および７４６に対応するアミノ酸が境界となった）ＸＴＥＮを含むことを意味する。
【００７０】
「融合」または「キメラ」タンパク質は、本来は天然に連結されない第２のアミノ酸配列に連結された第１のアミノ酸配列を含む。別のタンパク質中に通常存在するアミノ酸配列は、融合ポリペプチド中で一緒にされ得るか、または同じタンパク質中に通常存在するアミノ酸配列は、融合ポリペプチド中で、例えば、本開示の第ＶＩＩＩ因子ドメインのＩｇ  Ｆｃドメインとの融合において、新しい配置に置かれ得る。融合タンパク質は、例えば、化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを創出および翻訳することによって、創出される。キメラポリペプチドは、共有結合、非ペプチド結合または非共有結合によって、第１のアミノ酸配列と結び付いた第２のアミノ酸配列をさらに含むことができる。
【００７１】
本明細書で使用される「連結される」という用語は、第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列が、それぞれ、第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に共有結合的または非共有結合的に接合されることを指す。第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に直接接合または並置することができ、あるいは、介在配列が第１の配列を第２の配列に共有結合的に接合することができる。「連結される」という用語は、Ｃ末端またはＮ末端での第１のアミノ酸配列の第２のアミノ酸配列への融合を意味するだけでなく、第１のアミノ酸配列（または第２のアミノ酸配列）全体の第２のアミノ酸配列（またはそれぞれ第１のアミノ酸配列）中の任意の２つのアミノ酸への挿入も含む。一部の実施形態では、第１のアミノ酸配列は、ペプチド結合またはリンカーによって、第２のアミノ酸配列に連結することができる。第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーによって、第２のヌクレオチド配列に連結することができる。リンカーは、ペプチドもしくはポリペプチド（ポリペプチド鎖のため）、またはヌクレオチドもしくはヌクレオチド鎖（ヌクレオチド鎖のため）、または任意の化学部分（ポリペプチド鎖およびポリヌクレオチド鎖の両方のため）であり得る。「連結される」という用語はまた、ハイフン（−）によって示される。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「と結び付く」という用語は、第１のアミノ酸鎖および第２のアミノ酸鎖の間で形成される共有結合または非共有結合を指す。一部の実施形態では、「と結び付く」という用語は、共有結合、非ペプチド結合または非共有結合を意味する。この結び付きは、コロン、すなわち、（：）によって示すことができる。他の実施形態では、これは、ペプチド結合を除く共有結合を意味する。例えば、アミノ酸のシステインは、第２のシステイン残基上のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成することができるチオール基を含む。ほとんどの天然に存在するＩｇＧ分子では、ＣＨ１領域およびＣＬ領域は、ジスルフィド結合によって結び付き、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔ番号方式を使用する２３９および２４２（ＥＵ番号方式の２２６位または２２９位）に対応する位置で、２つのジスルフィド結合によって結び付く。共有結合の例としては、限定されるものではないが、ペプチド結合、金属結合、水素結合、ジスルフィド結合、シグマ結合、パイ結合、デルタ結合、グリコシジル結合、アグノスチック結合（ａｇｎｏｓｔｉｃ  ｂｏｎｄ）、屈曲結合、双極性結合、パイバックボンド（Ｐｉ  ｂａｃｋｂｏｎｄ）、二重結合、三重結合、四重結合、五重結合、六重結合、コンジュゲーション、超コンジュゲーション（ｈｙｐｅｒｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）、芳香族性、ハプト数、または反結合性が挙げられる。非共有結合の非限定的な例としては、イオン結合（例えば、カチオン／パイ結合、または塩結合）、金属結合、水素結合（例えば、二水素結合、二水素錯体、低バリア水素結合（ｌｏｗ−ｂａｒｒｉｅｒ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄ）、または対称水素結合）、ファンデルワールス力、ロンドン分散力、機械的結合、ハロゲン結合、金親和性（ａｕｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ）、インターカレーション、スタッキング、エントロピー力または化学極性が挙げられる。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「切断部位」または「酵素切断部位」という用語は、酵素によって認識される部位を指す。ある特定の酵素切断部位は、細胞内プロセシング部位を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、そのような部位の切断が血塊形成の部位で起こるように、凝固カスケードの間に活性化される酵素によって切断される酵素切断部位を有する。例示的なそのような部位としては、例えば、トロンビン、第ＸＩａ因子または第Ｘａ因子によって認識されるものが挙げられる。例示的なＦＸＩａの切断部位としては、例えば、ＴＱＳＦＮＤＦＴＲ（配列番号１）およびＳＶＳＱＴＳＫＬＴＲ（配列番号３）が挙げられる。例示的なトロンビンの切断部位としては、例えば、ＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲ（配列番号４）、ＴＴＫＩＫＰＲ（配列番号５）、ＬＶＰＲＧ（配列番号６）、ＡＬＲＰＲ（配列番号７）、ＩＳＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１０６）、ＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号８８）、およびＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９４）が挙げられる。他の酵素切断部位は、当技術分野において公知であり、本明細書のどこかに記載される。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「プロセシング部位」または「細胞内プロセシング部位」という用語は、ポリペプチドの翻訳後に機能する酵素についての標的であるポリペプチド中の酵素切断部位の種類を指す。一部の実施形態では、そのような酵素は、ゴルジ内腔からトランスゴルジ区画の輸送の間に機能する。細胞内のプロセシング酵素は、細胞からのタンパク質の分泌の前にポリペプチドを切断する。そのようなプロセシング部位の例としては、例えば、エンドペプチダーゼのＰＡＣＥ／フューリン（ＰＡＣＥは、対合した塩基性アミノ酸切断酵素についての頭字語である）ファミリーによって標的とされるものが挙げられる。これらの酵素は、ゴルジ膜に局在し、配列モチーフＡｒｇ−［任意の残基］−（ＬｙｓまたはＡｒｇ）−Ａｒｇのカルボキシ末端側でタンパク質を切断する。本明細書で使用される場合、酵素の「フューリン」ファミリーとしては、例えば、ＰＣＳＫ１（ＰＣ１／ＰＣ３としても公知）、ＰＣＳＫ２（ＰＣ２としても公知）、ＰＣＳＫ３（フューリンまたはＰＡＣＥとしても公知）、ＰＣＳＫ４（ＰＣ４としても公知）、ＰＣＳＫ５（ＰＣ５またはＰＣ６としても公知）、ＰＣＳＫ６（ＰＡＣＥ４としても公知）、またはＰＣＳＫ７（ＰＣ７／ＬＰＣ、ＰＣ８、またはＳＰＣ７としても公知）が挙げられる。他のプロセシング部位は、当技術分野において公知である。
【００７５】
２以上のプロセシング部位または切断部位を含む構築物において、そのような部位は同一または異なり得ることが理解される。
【００７６】
本明細書で使用される「プロセシング可能なリンカー」は、少なくとも１つの細胞内プロセシング部位を含むリンカーを指し、これは、本明細書のどこかに記載される。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「半減期」という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの特定のポリペプチドの生物学的な半減期を指す。半減期は、被験体に投与された量の半分が、動物中の循環および／または他の組織から消失するために必要な時間によって表すことができる。所与のポリペプチドのクリアランス曲線を時間の関数として構築する場合、曲線は、通常、迅速なα相およびより長いβ相を有する二相性である。α相は、典型的には、血管内空間および血管外空間の間の投与されたＦｃポリペプチドの平衡を表し、部分的には、ポリペプチドのサイズによって決定される。β相は、典型的には、血管内空間におけるポリペプチドの異化を表す。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩおよびＦＶＩＩＩを含むキメラポリペプチドは、単相性であり、したがって、アルファ相を有さないが、単一のベータ相だけを有する。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で使用される半減期という用語は、β相におけるポリペプチドの半減期を指す。ヒト中でのヒト抗体の典型的なベータ相の半減期は２１日である。ある特定の実施形態では、半減期は、最終相の半減期として表される。
【００７８】
止血障害は、本明細書で使用される場合、フィブリン塊を形成する能力の損傷、またはフィブリン塊の形成不能に起因して、自発的または外傷の結果としてのいずれかで、出血の傾向によって特徴付けられる、遺伝的に受け継がれるか、または後天性の状態を意味する。そのような障害の例としては、血友病が挙げられる。３つの主な形態は、血友病Ａ（第ＶＩＩＩ因子欠乏症）、血友病Ｂ（第ＩＸ因子欠乏症、または「クリスマス病」）、および血友病Ｃ（第ＸＩ因子欠乏症、軽度の出血傾向）である。他の止血障害としては、例えば、フォンヴィルブランド病、第ＸＩ因子欠乏症（ＰＴＡの欠乏症）、第ＸＩＩ因子欠乏症、フィブリノーゲン、プロトロンビン、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子もしくは第ＸＩＩＩ因子における欠乏症または構造的異常、ＧＰＩｂにおける欠損もしくは欠乏症であるベルナールスーリエ症候群が挙げられる。ＶＷＦに対する受容体であるＧＰＩｂは、欠損し得、一次血塊形成（一次止血）の欠如および出血傾向の増大）、およびグランツマンおよびネーゲリの血小板無力症（グランツマン血小板無力症）をもたらし得る。肝不全（急性および慢性型）において、肝臓による凝血因子の不十分な産生があり、これは出血の危険性を増大させ得る。
【００７９】
本明細書で使用される「投与する」または「投与すること」は、本明細書に記載の組成物、例えば、キメラポリペプチドを被験体に送達することを指す。組成物、例えば、キメラポリペプチドは、当技術分野において公知の方法を使用して、被験体に投与することができる。特に、組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、または任意の粘膜表面を介して、例えば、経口、舌下、頬側、経鼻、直腸、経膣、または肺の経路を介して、投与することができる。キメラポリペプチド。一部の実施形態では、投与は、自己投与である。一部の実施形態では、親が子供にキメラポリペプチドを投与する。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、医師、研修医（ｍｅｄｉｃ）または看護師などの医療関係者によって被験体に投与される。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「用量」という用語は、被験体への組成物の単回投与を指す。単回用量は、例えば、ボーラスとしてすべてを一度に、または例えば、静脈内注入を介して、ある期間にわたって、投与することができる。「複数用量」という用語は、２以上の用量、例えば、２回以上の投与を意味する。
【００８１】
２以上の組成物の共投与に言及する場合、組成物Ａの用量は、組成物Ｂの用量と同時に投与することができる。あるいは、組成物Ａの用量は、組成物Ｂの用量の前または後に投与することができる。一部の実施形態では、組成物Ａおよび組成物Ｂは、単一の製剤に組み合わされる。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「間隔」または「投薬間隔」という用語は、被験体に投与される組成物Ａの第１の用量および同じ組成物のその後の用量の間に経過する時間の長さを指す。投薬間隔は、第１の用量および第２の用量の間に経過する時間を指すことができ、または投薬間隔は、複数用量の間に経過する時間の長さを指すことができる。
【００８３】
本明細書で使用される「投薬頻度」という用語は、特定の投薬間隔あたりに投与される用量の数を指す。例えば、投薬頻度は、週に１回、２週間ごとに１回などとして記述することができる。したがって、７日の投薬間隔は、７日に１回、または１週間ごとに１回、または週に１回の投薬間隔として記述することもできる。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「予防的処置」という用語は、血友病の処置のための療法の投与を指し、そのような処置は、血友病の１つもしくは複数の症状、例えば、出血エピソード、例えば、１つもしくは複数の自然出血エピソード、および／または関節損傷を予防するかあるいはそれらの重症度を低減することが意図される。Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ｙｕｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  Ｔｒａｎｓｆｕｓ．  １２（３）：３１４−１９  （２０１４）を参照されたい。そのような症状、例えば、出血エピソードおよび関節疾患の進行を予防するかあるいはそれらの重症度を低減するために、血友病Ａの患者は、予防的処置レジメンの一部として、凝固因子の定期的な注入を受け得る。そのような予防的処置の基礎は、１％またはそれよりも高いレベルの凝固因子、例えば、ＦＶＩＩＩを有する血友病患者が、自然出血エピソードを稀に経験すること、および重度の血友病を有する患者と比較して、より少ない血友病関連の併存疾患を有することの観察である。例えば、Ｃｏｐｐｏｌａ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｈｅｍｏｓｔ．  ３８（１）：  ７９−９４  （２０１２）を参照されたい。これらの血友病患者を処置する医療関係者は、定期的な注入によりおおよそ１％で因子のレベルを維持することは、出血エピソードおよび関節損傷を含む血友病の症状の危険性を潜在的に低減させ得ると推量した。同上を参照されたい。その後の研究は、凝固因子による予防的処置を受けている小児の血友病患者におけるこれらの利点を確認し、予防的処置を重度の血友病を有する人々のための目標にする。同上を参照されたい。
【００８５】
「予防的」処置はまた、血友病Ａの１つまたは複数の症状、例えば、出血エピソードの出現または重症度を制御、管理、予防または低減するための、本明細書に記載の組成物、例えば、キメラポリペプチドの被験体への先制投与を指すこともできる。凝固因子、例えば、ＦＶＩＩＩによる予防的処置は、重度の血友病Ａを有する被験体のための標準治療である。例えば、Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇ，  Ｂｌｏｏｄ  １２５：２０３８−４４  （２０１５）を参照されたい。一部の実施形態では、予防的処置は、血友病Ａの１つまたは複数の症状の出現を低減させるために、それを必要とする被験体に本明細書に開示の組成物を投与することを指す。予防的処置は、複数用量の投与を含むことができる。予防的処置において使用される複数用量は、典型的には、特定の投薬間隔で投与される。ある特定の実施形態では、年間出血率（ａｎｎｕａｌｉｚｅｄ  ｂｌｅｅｄｉｎｇ  ｒａｔｅ）は、１０回未満、９回未満、８回未満、７回未満、６回未満、５回未満、４回未満、３回未満、２回未満または１回未満に低減することができる。
【００８６】
「オンデマンド処置」または「エピソード処置（ｅｐｉｓｏｄｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、血友病Ａの症状、例えば、出血エピソードに応答して、または出血を引き起こし得る活動の前に、「必要による」キメラ分子の投与を指す。一態様では、オンデマンド処置は、出血が始まる時、例えば、傷害の後、または出血が予想される時、例えば、手術の前に、被験体に与えることができる。別の態様では、オンデマンド処置は、出血の危険性が増大する活動、例えば、コンタクトスポーツの前に与えることができる。一部の実施形態では、オンデマンド処置は、単回用量として与えられる。他の実施形態では、オンデマンド処置は、第１の用量として与えられ、続いて、１または複数の追加用量が与えられる。キメラポリペプチドがオンデマンドで投与される場合、１または複数の追加用量は、第１の用量の少なくとも約１２時間後、少なくとも約２４時間後、少なくとも約３６時間後、少なくとも約４８時間後、少なくとも約６０時間後、少なくとも約７２時間後、少なくとも約８４時間後、少なくとも約９６時間後、少なくとも約１０８時間後、または少なくとも約１２０時間後に、投与することができる。しかしながら、オンデマンド処置に関連する投薬間隔は、予防的処置のために使用される投薬間隔と同じではないことに留意しなければならない。
【００８７】
一部の実施形態では、一般的な止血剤を必要とする被験体は、手術を受けているか、またはまさに手術を受けようとしている。本開示のキメラポリペプチドは、手術の前または後に投与することができる。本開示のキメラポリペプチドは、手術の間または後に、急性の出血エピソードを制御するために投与することもできる。キメラポリペプチドが手術の前に投与される場合、投与は、手術の少なくとも約１時間前、少なくとも約２時間前、少なくとも約４時間前、少なくとも約８時間前、少なくとも約１２時間前、少なくとも約２４時間前、少なくとも約３６時間前、少なくとも約４８時間前、または少なくとも約７２時間前であり得る。キメラポリペプチドが手術の後に投与される場合、投与は、手術の少なくとも約１時間後、少なくとも約２時間後、少なくとも約４時間後、少なくとも約８時間後、少なくとも約１２時間後、少なくとも約２４時間後、少なくとも約３６時間後、少なくとも約４８時間後、または少なくとも約７２時間後であり得る。手術としては、限定されるものではないが、肝臓移植、肝臓切除、歯科手順または幹細胞移植を挙げることができる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「急性出血」という用語は、根底にある原因を問わない出血エピソードを指す。例えば、被験体は、外傷、尿毒症、遺伝性出血性障害（例えば、第ＶＩＩ因子欠乏症）、血小板障害、または凝固因子に対する抗体の発生が原因の耐性を有し得る。
【００８９】
「処置する」、「処置」、「処置すること」は、本明細書で使用される場合、例えば、疾患もしくは状態の重症度の低減；疾患経過の持続時間の低減；疾患もしくは状態に関連する１つまたは複数の症状の改善；疾患もしくは状態を必ずしも治癒させることなく、疾患もしくは状態を有する被験体への有益な効果の提供；あるいは疾患もしくは状態に関連する１つまたは複数の症状の予防を指す。一部の実施形態では、「処置すること」または「処置」という用語は、本開示のキメラポリペプチドまたはＶＷＦ断片を投与することによって、被験体において、ＦＶＩＩＩのトラフレベルを少なくとも約１ＩＵ／ｄＬ、２ＩＵ／ｄＬ、３ＩＵ／ｄＬ、４ＩＵ／ｄＬ、５ＩＵ／ｄＬ、６ＩＵ／ｄＬ、７ＩＵ／ｄＬ、８ＩＵ／ｄＬ、９ＩＵ／ｄＬ、１０ＩＵ／ｄＬ、１１ＩＵ／ｄＬ、１２ＩＵ／ｄＬ、１３ＩＵ／ｄＬ、１４ＩＵ／ｄＬ、１５ＩＵ／ｄＬ、１６ＩＵ／ｄＬ、１７ＩＵ／ｄＬ、１８ＩＵ／ｄＬ、１９ＩＵ／ｄＬ、または２０ＩＵ／ｄＬで維持することを意味する。本明細書で使用される場合、血友病患者における「トラフレベル」は、次の用量が投与される前に、因子療法、例えば、ＦＶＩＩＩ療法によって達する最低濃度の測定値である。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約１ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩのトラフレベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約３ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩのトラフレベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約５ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩのトラフレベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、約１〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約２〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約３〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約４〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約５〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約６〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約７〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約８〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、約９〜約２０ＩＵ／ｄＬの間、または約１０〜約２０ＩＵ／ｄＬの間のＦＶＩＩＩのトラフレベルを維持することを意味する。
【００９０】
疾患もしくは状態の「処置」または「処置すること」は、投薬間隔の間に、血友病ではない被験体におけるＦＶＩＩＩ活性の少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％に匹敵するレベルで、被験体においてＦＶＩＩＩ活性を維持することも含み得る。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約１％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約２％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約３％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約４％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約５％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約６％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約７％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約８％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約９％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。他の実施形態では、処置すること、または処置は、投薬間隔の間に、少なくとも約１０％のＦＶＩＩＩの活性レベルを維持することを意味する。処置のために必要な最低トラフレベルは、１つまたは複数の公知の方法（例えば、本明細書に記載のａＰＴＴアッセイまたは発色アッセイ）によって測定することができ、それぞれの人のために調節（増大または減少）することができる。
【００９１】
ＩＩ．本開示の方法
本開示のある特定の態様は、それを必要とする被験体における血友病Ａを処置する方法であって、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドを、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含む。他の態様では、本開示は、それを必要とする被験体における、出血性疾患または状態、例えば、血友病Ａを処置する方法であって、ＦＶＩＩＩタンパク質の複数用量およびＶＷＦ断片の複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００９２】
一部の実施形態では、複数用量は、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも４用量、少なくとも５用量、少なくとも６用量、少なくとも７用量、少なくとも８用量、少なくとも９用量、少なくとも１０用量、少なくとも１１用量、少なくとも１２用量、少なくとも１３用量、少なくとも１４用量、少なくとも１５用量、少なくとも１６用量、少なくとも１７用量、少なくとも１８用量、少なくとも１９用量、少なくとも２０用量、またはそれよりも多くの用量を含む。一部の実施形態では、複数用量は、少なくとも約１か月間、少なくとも約２か月間、少なくとも約３か月間、少なくとも約４か月間、少なくとも約５か月間、少なくとも約６か月間、少なくとも約１２か月間、少なくとも約１８か月間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１５年間、少なくとも約２０年間、または少なくとも約２５年間投与される。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本開示の方法は、血友病Ａを処置することに関する。一部の実施形態では、血友病Ａの処置は、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードを予防することを含む。一部の実施形態では、血友病Ａの処置は、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードを処置することを含む。一部の実施形態では、血友病Ａの処置は、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードの発生率または頻度を制御することを含む。一部の実施形態では、血友病Ａの処置は、それを必要とするヒト被験体における出血エピソードの発生率または頻度を減少させることを含む。
【００９４】
Ａ．用量
一部の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、単回用量として、または複数用量として投与される。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの量は同じである。他の実施形態では、複数用量の１つまたは複数は、他の複数用量の１つまたは複数と異なる。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約５ＩＵ／ｋｇ〜約２００ＩＵ／ｋｇ、または約１０ＩＵ／ｋｇ〜約１５０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約４５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約４０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約３５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約３０ＩＵ／ｋｇ、または約２０ＩＵ／ｋｇ〜約２５ＩＵ／ｋｇである。
【００９５】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇ、または約９０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。
【００９６】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１５０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１４０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１３０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１２０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１１０ＩＵ／ｋｇ、または約５０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約９５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約５５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。
【００９７】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１５０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１４０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１３０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１２０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１１０ＩＵ／ｋｇ、または約６０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約９５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約８５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇ、または約６０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。
【００９８】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１５０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１４０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１３０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１２０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１１０ＩＵ／ｋｇ、または約６５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約９５ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８５ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約７５ＩＵ／ｋｇ、または約６５ＩＵ／ｋｇ〜約７０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドの複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇである。
【００９９】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５ＩＵ／ｋｇ、約１０ＩＵ／ｋｇ、約１５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、約１７５ＩＵ／ｋｇ、または約２００ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約３０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約３５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約４０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約４５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約７０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約７５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約９０ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約９５ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約１００ＩＵ／ｋｇである。
【０１００】
一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約２５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約３０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約３５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約４０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約４５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約５０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約５５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約６０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約６５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約７０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約７５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約８０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約８５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約９０ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約９５ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、複数用量のそれぞれの用量は、約１００ＩＵ／ｋｇである。
【０１０１】
一部の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、予防的に投与される。予防的に投与される場合、複数用量の少なくとも１つは、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり得る。ある特定の実施形態では、予防的に投与される複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、または約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、予防的に投与される複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇである。他の実施形態では、予防的に投与される複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇである。他の実施形態では、予防的に投与される複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇである。他の実施形態では、予防的に投与される複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇである。
【０１０２】
一部の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、オンデマンドで投与される。オンデマンドで投与される場合、キメラポリペプチドは、単回用量として、または複数用量として投与することができる。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの１用量または複数用量として投与される。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、または約１００ＩＵ／ｋｇの１用量または複数用量としてオンデマンドで投与される。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、約２５ＩＵ／ｋｇの１用量または複数用量としてオンデマンドで投与される。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、約５０ＩＵ／ｋｇの１用量または複数用量としてオンデマンドで投与される。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、約６５ＩＵ／ｋｇの１用量または複数用量としてオンデマンドで投与される。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、約８０ＩＵ／ｋｇの１用量または複数用量としてオンデマンドで投与される。
【０１０３】
一部の実施形態では、本方法によるキメラポリペプチドの投与は、約７日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約２０日間、約２４日間、約２５日間、約２８日間、約３０日間、または約３５日間の投与後に、ＦＶＩＩＩ阻害剤を誘導しない。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの投与は、約２８日間の投与後に、ＦＶＩＩＩ阻害剤を誘導しない。
【０１０４】
Ｂ．投薬間隔
特に予防的処置のためのある特定の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、投薬間隔で、複数用量として投与される。一部の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約２１日、少なくとも約２２日、少なくとも約２３日、少なくとも約２４日、少なくとも約２５日、少なくとも約２６日、少なくとも約２７日、少なくとも約２８日、少なくとも約２９日、少なくとも約３０日、または少なくとも約３１日である。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約５日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約６日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約８日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約９日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１１日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１２日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１３日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１４日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約２１日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約２７日である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約３０日である。
【０１０６】
一部の実施形態では、投薬頻度、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬頻度は、１週間ごとに少なくとも２回、１週間ごとに少なくとも１回、２週間ごとに少なくとも１回、３週間ごとに少なくとも１回、４週間ごとに少なくとも１回、５週間ごとに少なくとも１回、または６週間ごとに少なくとも１回である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、１週間ごとに少なくとも１回である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも２週間である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも３週間である。ある特定の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも４週間である。
【０１０７】
一部の実施形態では、投薬頻度、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬頻度は、３か月ごとに約２回、１か月ごとに約１回、１か月ごとに約２回、１か月ごとに約３回、１か月ごとに約４回、１か月ごとに約５回、１か月ごとに約６回、１か月ごとに約７回、または１か月ごとに約８回である。ある特定の実施形態では、投薬頻度は、１か月ごとに約１回である。ある特定の実施形態では、投薬頻度は、１か月ごとに約２回である。ある特定の実施形態では、投薬頻度は、１か月ごとに約３回である。ある特定の実施形態では、投薬頻度は、１か月ごとに約４回である。ある特定の実施形態では、投薬頻度は、１か月ごとに約５回である。ある特定の実施形態では、投薬頻度は、１か月ごとに約６回である。
【０１０８】
一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約３〜５日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約４〜６日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約４〜７日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約４〜８日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約４〜９日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約４〜１０日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約５〜７日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約５〜８日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約５〜９日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約５〜１０日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約６〜８日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約６〜９日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約６〜１０日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７〜９日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７〜１０日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７〜１１日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７〜１２日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７〜１３日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約７〜１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約８〜１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約９〜１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１０〜１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１１〜１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１０〜２１日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１２〜１４日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１２〜１５日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１３〜１５日である。一部の実施形態では、投薬間隔、例えば、血友病Ａの予防的処置のための投薬間隔は、少なくとも約１４〜２１日である。
【０１０９】
一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、表１に記載の用量および投薬頻度に従って投与される。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【０１１０】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１１】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１２】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１３】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１４】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１５】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１６】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１７】
血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１８】
小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜８日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４〜９日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４〜１０日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４〜１１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４〜１２日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４〜１３日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８〜１４日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０〜２１日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３〜１５日の投薬間隔で、投与される。一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４〜２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１１９】
小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約７日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約６日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約５日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約４日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約３日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約８日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約９日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１０日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１１日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１２日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１３日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１４日の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約２１日の投薬間隔で、投与される。
【０１２０】
小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも約１週間の投薬間隔で、投与される。小児の被験体における血友病Ａの予防的処置のためなどの一部の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇ〜約８０ＩＵ／ｋｇの用量で、約１週間ごとに少なくとも２回の投薬頻度で、投与される。
【０１２１】
血友病Ａの予防的処置のためなどのある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。血友病Ａの予防的処置のためなどのある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約１５ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１１日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１２日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１３日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１５日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１６日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約２０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約２１日である。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約６日である。一部の実施形態では、この方法は、血友病Ａの予防的処置のためである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１１日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１２日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１３日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１５日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１６日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約２５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２１日である。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約６日である。一部の実施形態では、この方法は、血友病Ａの予防的処置のためである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１１日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１２日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１３日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１５日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１６日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約５０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２１日である。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約６日である。一部の実施形態では、この方法は、血友病Ａの予防的処置のためである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１１日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１２日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１３日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１５日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１６日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約６５ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２１日である。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約５日である。ある特定の実施形態では、この方法は、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドの複数用量を、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約６日である。一部の実施形態では、この方法は、血友病Ａの予防的処置のためである。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１１日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１２日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１３日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、少なくとも約１４日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１５日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１６日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１７日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１８日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約１９日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２０日である。ある特定の実施形態では、複数用量の少なくとも１つは、約８０ＩＵ／ｋｇからであり、投薬間隔は、少なくとも約２１日である。
【０１２６】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、血友病Ａの予防的処置のために投与される。血友病Ａの予防的処置は、連続した基準、またはほぼ連続した基準で、血友病Ａの症状の重症度を緩和または低減することを含む。一部の実施形態では、予防的処置は、血友病Ａの症状の出現の前、例えば、出血事象の前に投与される。他の実施形態では、予防的処置は、症状の開始の前に、症状の開始を予防するため、または症状の重症度を低下させるために、定期的な基準で、例えば、本明細書に記載の投薬間隔で投与される。本明細書に開示の任意の投薬間隔を、血友病Ａの予防的処置において使用することができる。
【０１２７】
他の実施形態では、キメラポリペプチドは、血友病Ａの１つまたは複数の症状を起こし得る活動の前に、例えば、オンデマンド処置として、投与される。例えば、本開示のキメラポリペプチドは、それ以外の状況で物理的外傷および／または出血事象の危険性を増大させる活動において、被験体が手術または戦闘を受ける前に、血友病Ａを患う被験体に投与することができる。オンデマンドで投与される場合、キメラポリペプチドは、単回用量として、または複数用量として投与することができる。一部の実施形態では、オンデマンド処置は、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、または少なくとも約１２０時間の投薬間隔で、複数用量のキメラポリペプチドを投与することを含む。ある特定の実施形態では、オンデマンド処置は、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも４用量、または少なくとも５用量のキメラポリペプチドを投与することを含む。
【０１２８】
一部の実施形態では、被験体は、１つまたは複数のＦＶＩＩＩ補充療法で以前に処置されている。ある特定の実施形態において、被験体は、以前のＦＶＩＩＩ補充療法に応答しなかった。ある特定の実施形態において、ＦＶＩＩＩ補充療法は、ＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標）またはＡＤＶＡＴＥ（登録商標）である。一部の実施形態では、被験体は成人である。一部の実施形態では、被験体は成人男性である。一部の実施形態では、被験体は成人女性である。他の実施形態では、被験体は、子供、例えば、約１２歳もしくはそれ未満、約１１歳もしくはそれ未満、約１０歳もしくはそれ未満、約９歳もしくはそれ未満、約８歳もしくはそれ未満、約７歳もしくはそれ未満、約６歳もしくはそれ未満、約５歳もしくはそれ未満、約４歳もしくはそれ未満、約３歳もしくはそれ未満、約２歳もしくはそれ未満、または約１歳もしくはそれ未満）の子供である。一部の実施形態では、被験体は女性である。一部の実施形態では、被験体は男性である。一部の実施形態では、被験体は、約１２歳またはそれ未満の女性である。一部の実施形態では、被験体は、約１１歳またはそれ未満の女性である。一部の実施形態では、被験体は、約１０歳またはそれ未満の女性である。
【０１２９】
本明細書に記載のキメラポリペプチドは、当技術分野において公知の任意の手段によって投与することができる。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、静脈内注射、静脈内注入、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、経鼻投与および肺投与からなる群より選択される経路によって投与される。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、静脈内に投与される。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、皮下に投与される。
【０１３０】
一部の実施形態では、投与後のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、または少なくとも約１０％のＦＶＩＩＩの血漿活性レベルをもたらす。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約３％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約４％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約５％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約４％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約５％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約５．６％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約７％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約１０％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約１２％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、少なくとも約１２．９５％である。本明細書で使用される場合、血漿活性レベルは、パーセント（％）として表される。あるいは、血漿活性は、ＩＵ／ｄＬ単位で表すことができ、ここで、１％は１ＩＵ／ｄＬに等しい。
【０１３１】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約５日後に、少なくとも約１０％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約５日後に、少なくとも約１２％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約５日後に、少なくとも約１２．９５％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約７日後に、少なくとも約５％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約７日後に、少なくとも約５．６％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約８日後に、少なくとも約３％である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩの血漿活性レベルは、例えば、２５ＩＵ／ｋｇの用量でのキメラポリペプチドの投与の少なくとも約１０日後に、少なくとも約１％である。
【０１３２】
本開示は、血友病Ａを処置する方法であって、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、および（ｉｉ）ＶＷＦ断片を含む組成物を被験体に投与することを含む方法も含む。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、第１の製剤中に存在し、ＶＷＦ断片は、第２の製剤中に存在する。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、同じ製剤中に存在する。特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、単一製剤の別の成分である。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質、例えば、一本鎖ＦＶＩＩＩ、ＦＶＩＩＩ−Ｆｃ、ペグ化ＦＶＩＩＩ、全長成熟ＦＶＩＩＩ、またはＢドメインが欠失したＦＶＩＩＩは、本明細書に開示の用量、例えば、２５ＩＵ／ｋｇ、３０ＩＵ／ｋｇ、３５ＩＵ／ｋｇ、４０ＩＵ／ｋｇ、４５ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、５５ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、または６５ＩＵ／ｋｇの用量で、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、または少なくとも１４日の投薬間隔で投与され、ＶＷＦ断片は、少なくとも約０．２５：１、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、１００：１、２００：１、３００：１、４００：１、５００：１、１０００：１、２０００：１、３０００：１、４０００：１、５０００：１、１０，０００：１、５０，０００：１、１００，０００：１、または５００，０００：１の、投与されるＶＷＦ断片とＦＶＩＩＩ分子との用量で投与される。他の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質と同時に、直後に、または直前に、被験体に投与される。ある特定の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質の約０．５時間前、約１時間前、約１．５時間前、約２時間前、約２．５時間前、約３時間前、約３．５時間前、約４時間前、約４．５時間前、約５時間前、約５．５時間前、または約６時間前に投与される。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＶＷＦ断片の約０．５時間前、約１時間前、約１．５時間前、約２時間前、約２．５時間前、約３時間前、約３．５時間前、約４時間前、約４．５時間前、約５時間前、約５．５時間前、または約６時間前に投与される。
【０１３３】
Ｃ．免疫寛容の誘導
本開示のある特定の態様は、それを必要とする被験体における血友病Ａを処置する方法であって、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドを、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、キメラポリペプチドが、被験体においてＦＶＩＩＩに対する免疫寛容を誘導する、方法に関する。本開示の一部の態様は、それを必要とする被験体における血友病Ａを処置する方法であって、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドを、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、キメラポリペプチドが、被験体においてＦＶＩＩＩに対する阻害性応答を低減する、方法に関する。本開示の一部の態様は、それを必要とする被験体における血友病Ａを処置する方法であって、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片を含むキメラポリペプチドを、ある投薬間隔で、被験体に投与することを含み、キメラポリペプチドが、投与後にキメラポリペプチドに対する免疫応答を誘導しない、方法に関する。本開示の別の態様は、血友病を有するヒトにおいて免疫寛容を誘導する方法であって、（１）有効量の本明細書に記載のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮをヒトに投与することを含み、有効量のキメラポリペプチドが、ヒトにおいて免疫寛容を誘導する、方法に関する。ＦＶＩＩＩおよびＦｃを含むキメラポリペプチドを使用する免疫寛容の誘導の種々の方法は、国際公開第２０１８／１０２７６０Ａ１号に開示されており、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、この方法は、（２）免疫寛容の誘導後、組成物またはキメラポリペプチドの漸減レジメンをヒトに投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、免疫寛容の誘導は、ヒトにおける阻害性抗体の力価が約０．６ＢＵ未満である場合に、起こる。ある特定の実施形態では、免疫寛容の誘導は、ヒトにおける阻害性抗体の力価が約０．６ＢＵ未満、かつ血漿中で監視される凝固因子の活性の６０％の回復である場合に、起こる。本開示の一部の実施形態では、この方法は、（３）漸減レジメン後、凝固因子、例えば、本明細書に記載のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの予防用量を、ヒトに投与することをさらに含む。
【０１３５】
ある特定の態様では、ヒトは、凝固因子に対する、例えば、ＦＶＩＩＩに対する、以前の免疫寛容療法で処置されていない。キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、ヒトが、例えば、ヒトにおける阻害性免疫応答のレベルを測定した後、阻害剤の免疫応答を発生したと決定された任意の時に、ヒトに投与することができる。他の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、阻害剤の免疫応答の発生を防止するために１つまたは複数の阻害剤の免疫応答をまだ発生していないヒトに投与することができる。一部の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、阻害剤の免疫応答を発生する高い可能性（例えば、家族歴、遺伝的素因、またはバイオマーカーを示す）を持つヒトに投与される。一部の実施形態では、この方法は、投与の前に、阻害性免疫応答のレベルまたは阻害剤の免疫応答を発生する可能性を測定することをさらに含む。
【０１３６】
一部の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、例えば、ヒトにおける阻害性免疫応答のレベルまたは阻害剤の免疫応答を発生する可能性を測定した後に、ヒトが阻害剤の免疫応答を発生したか、またはヒトが阻害剤の免疫応答を発生する可能性を有すると決定された後、約１日未満、約２日未満、約３日未満、約４日未満、約５日未満、約６日未満、約７日未満、約２週間未満、約３週間未満、約４週間未満、約２か月未満、約３か月未満、約４か月未満、約５か月未満、約６か月未満、約１年未満、約２年未満、約３年未満、約４年未満、または約５年未満で、ヒトに投与される。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、例えば、ヒトにおける阻害性免疫応答のレベルまたは阻害剤の免疫応答を発生する可能性を測定した後に、ヒトが阻害剤の免疫応答を発生したか、またはヒトが阻害剤の免疫応答を発生する可能性を有すると決定された直後に、ヒトに投与される。特定の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、例えば、ヒトにおける阻害性免疫応答のレベルまたは阻害剤の免疫応答を発生する可能性を測定した後に、ヒトが阻害剤の免疫応答を発生したか、またはヒトが阻害剤の免疫応答を発生する可能性を有すると決定された後、約５分未満、約１０分未満、約１５分未満、約２０分未満、約３０分未満、約４５分未満、約１時間未満、約２時間未満、約３時間未満、約４時間未満、約５時間未満、約６時間未満、約７時間未満、約８時間未満、約９時間未満、約１０時間未満、約１１時間未満、約１２時間未満、約１８時間未満、または約２４時間未満で、ヒトに投与される。特定の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、例えば、ヒトにおける阻害性免疫応答のレベルまたは阻害剤の免疫応答を発生する可能性を測定した後に、ヒトが阻害剤の免疫応答を発生したか、またはヒトが阻害剤の免疫応答を発生する可能性を有すると決定された後、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間で、ヒトに投与される。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、例えば、ヒトにおける阻害性免疫応答のレベルまたは阻害剤の免疫応答を発生する可能性を測定した後に、ヒトが阻害剤の免疫応答を発生したか、またはヒトが阻害剤の免疫応答を発生する可能性を有すると決定された後から約１日未満で、ヒトに投与される。
【０１３７】
免疫応答の誘導は、阻害剤のレベルがある特定のレベルよりも低下するまで、または阻害剤が検出可能ではなくなるまで、継続することができる。ある特定の実施形態では、誘導期間は、少なくとも約２４週間、少なくとも約２６週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３０週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３４週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約３８週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４２週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４６週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５０週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５４週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約５８週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６２週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７０週間、継続し得る。特定の実施形態では、誘導期間は、６０週間未満である。
【０１３８】
本発明の方法によって処置される阻害性免疫応答は、凝固因子の処置の１つまたは複数の効果に負の影響を与えるヒト内の任意の応答を含み得る。一部の実施形態では、阻害性免疫応答は、凝固因子に対する阻害性抗体、例えば、阻害性抗ＦＶＩＩＩ抗体の産生を含む。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、有効量の本明細書に記載のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮまたはそれをコードするポリヌクレオチドを投与する前（例えば、ベースライン）、または投与した後において、ヒトにおける１つまたは複数の阻害性抗体の力価を測定することをさらに含む。一部の実施形態では、投与前（例えば、ベースライン）の阻害性抗体の力価は、少なくとも約０．６ベセスダ単位（ＢＵ）である。ある特定の実施形態では、投与前（例えば、ベースライン）の阻害性抗体の力価は、少なくとも約１ＢＵ、少なくとも約２ＢＵ、少なくとも約３ＢＵ、少なくとも約４ＢＵ、少なくとも約５ＢＵ、少なくとも約６ＢＵ、少なくとも約７ＢＵ、少なくとも約１０ＢＵ、少なくとも約２０ＢＵ、少なくとも約３０ＢＵ、少なくとも約４０ＢＵ、少なくとも約５０ＢＵ、少なくとも約１００ＢＵ、少なくとも約１５０ＢＵ、または少なくとも約２００ＢＵである。特定の一実施形態では、投与前（例えば、ベースライン）の阻害性抗体の力価は、少なくとも約５ＢＵである。
【０１３９】
一部の実施形態では、本発明の方法は、投与前の阻害性抗体の力価に対して、ヒト被験体における阻害性抗体の力価を低減する。ある特定の実施形態では、投与後の阻害性抗体の力価は、約０．６ＢＵ未満である。一部の実施形態では、投与後の阻害性抗体の力価は、約０．５ＢＵ未満、約０．４ＢＵ未満、約０．３ＢＵ未満、約０．２ＢＵ未満、または約０．１ＢＵ未満である。特定の一実施形態では、投与後の阻害性抗体の力価は、０ＢＵである。他の実施形態では、投与後の阻害性抗体の力価は、５ＢＵ未満、４ＢＵ未満、３ＢＵ未満、２ＢＵ未満、１ＢＵ未満、０．９ＢＵ未満、０．８ＢＵ未満、０．７ＢＵ未満、または０．６ＢＵ未満である。
【０１４０】
一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの投与は、未処置の対照および凝固因子単独で処置されたヒトにおけるマクロファージの分化と比較して、Ｍ２様表現型へのヒトにおけるマクロファージの分化を増加させる。一部の実施形態では、Ｍ２様表現型は、ＮＲＦ２経路、ＰＰＡＲガンマ経路、またはＮＲＦ２経路およびＰＰＡＲガンマ経路の両方の上方制御を含む。一部の実施形態では、Ｍ２様表現型は、ＣＤ２０６（ＭＲＣ１）の上方制御を含む。一部の実施形態では、Ｍ２様表現型は、ＡＲＧ１の上方制御を含む。一部の実施形態では、Ｍ２様表現型は、ＣＤ２０６（ＭＲＣ１）およびＡＲＧ１の上方制御を含む。
【０１４１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの投与は、未処置の被験体または凝固因子単独で処置された被験体における１つまたは複数の遺伝子の発現に対して、ヒトにおける１つまたは複数の遺伝子のより高い発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、Ｈｍｏｘ１、ＰＰＡＲガンマ、ＬＰＬ、ＥＧＲ２、ＳＬＣＯ４Ａ１、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）、酸化的ストレス誘導性増殖阻害剤１（ＯＳＧＩＮ１）、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）、グルタチオン−ジスルフィドレダクターゼ（ＧＳＲ）、グルタミン酸−システインリガーゼ触媒サブユニット（ＧＣＬＣ）、グルタミン酸−システインリガーゼ修飾サブユニット（ＧＣＬＭ）、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈキノンデヒドロゲナーゼ１（ＮＱＯ１）、脂肪酸結合タンパク質５（ＦＡＢＰ５）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＳＬＡＭファミリーメンバー３（ＳＬＡＭＦ３；リンパ球抗原９；ＬＹ９）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、マンノース受容体Ｃ−１型（ＭＲＣ１）、溶質輸送体ファミリー１２のメンバー４（ＳＬＣ１２Ａ）、ニューロピリン１（ＮＲＰ１）、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される１つまたは複数の遺伝子のより高い発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、ＮＲＦ２経路の１つまたは複数の遺伝子のより高い発現をもたらす。ある特定の実施形態では、ＮＲＦ２経路の１つまたは複数の遺伝子は、ＨＯ−１、ＯＳＧＩＮ１、ＳＯＤ１、ＧＳＲ、ＧＣＬＣ、ＧＣＬＭ、ＮＱＯ１およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される。一部の実施形態では、投与は、ＰＰＡＲガンマ経路の１つまたは複数の遺伝子のより高い発現をもたらす。一部の実施形態では、ＰＰＡＲガンマ経路の１つまたは複数の遺伝子は、ＰＰＡＲガンマ、ＬＰＬ、ＦＡＢＰ５、ＥＧＲ２およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される。一部の実施形態では、投与は、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＳＬＡＭＦ３、ＳＬＡＭＦ７、ＭＲＣ１、ＳＬＣ１２Ａ、ＮＲＰ１およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される１つまたは複数の遺伝子のより高い発現をもたらす。特定の実施形態では、投与は、未処置のヒトまたは凝固因子単独を投与されたヒトにおける１つまたは複数の遺伝子の発現に対して、１つまたは複数の遺伝子のより高い発現をもたらし、発現は、少なくとも約１．５倍高い、少なくとも約２倍高い、少なくとも約２．５倍高い、少なくとも約３倍高い、少なくとも約３．５倍高い、少なくとも約４倍高い、少なくとも約４．５倍高い、または少なくとも約５倍高い。
【０１４２】
一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子の差次的発現は、本明細書に記載のキメラポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの投与後から６時間未満で観察される。一部の実施形態では、差次的発現は、投与後から１２時間未満で観察される。一部の実施形態では、差次的発現は、投与後から１８時間未満で観察される。一部の実施形態では、差次的発現は、投与後から２４時間未満で観察される。
【０１４３】
一部の実施形態では、阻害性免疫応答は、細胞媒介性免疫応答を含む。ある特定の実施形態では、細胞媒介性免疫応答は、サイトカインの放出を含む。一部の実施形態では、サイトカインは、免疫応答の増大と関連する任意のサイトカインである。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１６、ＩＬ−１２、ＩＬ−４、ＩＬ−１７、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターフェロンα、インターフェロンγおよびそれらの任意の組合せからなる群より選択される。一実施形態では、細胞媒介性免疫応答は、ＩＬ−１２の血清レベルの増大を含む。別の実施形態では、細胞媒介性免疫応答は、ＩＬ−４の血清レベルの増大を含む。別の実施形態では、細胞媒介性免疫応答は、ＩＬ−１７の血清レベルの増大を含む。別の実施形態では、細胞媒介性免疫応答は、ＴＮＦ−αの血清レベルの増大を含む。
【０１４４】
種々の遺伝子の変異は、阻害性免疫応答を発生する危険性の増大と関連している。例えば、ＴＮＦの構成的および誘導的転写レベルの増大と関連するＨａｐ２内のＴＮＦ−α−３０８Ｇ＞Ａの多型は、阻害性免疫応答を発生する危険性の増大と関連している。その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ａｓｔｅｒｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０８：  ３７３９−３７４５  （２００６）を参照されたい。このため、一部の実施形態では、ヒトは、ＴＮＦ−αの増大と関連する遺伝的多型を有する。一部の実施形態では、多型は、ＴＮＦ−α−３０８Ｇ＞Ａの多型である。一部の実施形態では、ヒトは、ＩＬ１０遺伝子における多型、例えば、ＩＬ１０の分泌の増大に関連する多型を有する。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩ−Ｆｃは、ＩＬ１０遺伝子のプロモーター領域におけるＩＬ１０Ｇマイクロサテライトの対立遺伝子１３４を有する被験体に投与される。その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ａｓｔｅｒｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｓ，  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，  ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １０８：  ３７３９−３７４５  （２００６）を参照されたい。
【０１４５】
一部の実施形態では、ヒトは、ＣＴＬＡ−４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４）の発現の減少と関連する遺伝的多型を有する。一部の実施形態では、ヒトは、ＤＲ１５（ＨＬＡ−ＤＲ１５）またはＤＱＢ０６０２  ＭＨＣ（主要組織適合複合体）クラスＩＩ分子に変異を有する。血友病を有する被験体における阻害性免疫応答の発生と関連する他のＭＨＣクラスＩＩ分子は、Ａ３、Ｂ７、Ｃ７、ＤＱＡ０１０２、Ｃ２、ＤＱＡ０１０３、ＤＱＢ０６０３およびＤＲ１３である（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ，  Ｅ．Ｃ．  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｍｅｒｃｈａｎ  ＆  Ｃ．Ａ．  Ｌｅｅ，  Ｅｄｓ．，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｌｔｄ，，  ２００２を参照されたい）。
【０１４６】
一部の実施形態では、本開示の方法は、ＦＶＩＩＩタンパク質からなるポリペプチドによる以前の処置後の被験体における１つまたは複数のサイトカインのレベルと比較して、被験体における１つまたは複数のサイトカインのレベルを低減する。別の実施形態では、本開示の方法は、投与の前の被験体における１つまたは複数のサイトカインのレベルと比較して、被験体における１つまたは複数のサイトカインのレベルを低減する。他の実施形態では、１つまたは複数の免疫寛容原性分子の発現は、投与の前の１つまたは複数の免疫寛容原性分子の発現レベルに対して、本開示の方法の投与後に増大する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の免疫寛容原性分子は、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−３５、ＩＤＯ−１およびそれらの任意の組合せから選択される。
【０１４７】
他の実施形態では、免疫応答は、出血傾向の増大、凝固因子の高い消費、凝固因子療法に対する応答の欠如、凝固因子療法の有効性の減少、凝固因子の半減期の短縮、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される臨床症状を含む。ある特定の実施形態では、免疫応答は、出血傾向の増大、凝固因子の高い消費、凝固因子療法に対する応答の欠如、凝固因子療法の有効性の減少、血漿中で監視される凝固因子の活性の回復の減少、凝固因子の半減期の短縮、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される臨床症状を含む。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、ヒトは、阻害性免疫応答を有するとして以前に診断されていた。そのような診断は、当技術分野において公知の任意の方法を使用して行うことができる。例えば、ヒトが、以下の１つまたは複数：（ａ）０．６ＢＵまたはそれを超える凝固因子に対する阻害性抗体の力価；（ｂ）ＩＬ−１２、ＩＬ−４、ＩＬ−１７およびＴＮＦ−αからなる群より選択される１つまたは複数のサイトカインの血清レベルの増大；（ｃ）出血傾向の増大；（ｄ）凝固因子の高い消費；（ｅ）凝固因子療法に対する応答の欠如；（ｆ）凝固因子療法の有効性の減少；（ｇ）凝固因子の半減期の短縮、およびそれらの任意の組合せ、を有する場合、ヒトは、凝固因子、例えば、ＦＶＩＩＩに対する免疫応答を有するとして特徴付けることができる。特定の一実施形態では、ヒトが０．６ＢＵまたはそれを超える凝固因子に対する阻害性抗体の力価を有する場合、ヒトは、凝固因子に対する免疫応答を有するとして特徴付けられる。
【０１４９】
一部の実施形態では、ヒトは、投与の少なくとも約１か月前、少なくとも約２か月前、少なくとも約３か月前、少なくとも約４か月前、少なくとも約５か月前、少なくとも約６か月前、少なくとも約７か月前、少なくとも約８か月前、少なくとも約９か月前、少なくとも約１０か月前、少なくとも約１１か月前、少なくとも約１２か月前、少なくとも約１３か月前、少なくとも約１４か月前、少なくとも約１５か月前、少なくとも約１６か月前、少なくとも約１７か月前、少なくとも約１８か月前、少なくとも約１９か月前、少なくとも約２０か月前、少なくとも約２１か月前、少なくとも約２２か月前、少なくとも約２３か月前、少なくとも約２４か月前、少なくとも約２７か月前、少なくとも約３０か月前、少なくとも約３３か月前、少なくとも約３６か月前、少なくとも約３９か月前、少なくとも約４２か月前、少なくとも約４５か月前、少なくとも約４８年前、少なくとも約５１か月前、少なくとも約５４か月前、少なくとも約５７か月前、少なくとも約６０か月前、少なくとも約６年前、少なくとも約７年前、少なくとも約８年前、少なくとも約１０年前、少なくとも約１５年前、または少なくとも約２０年前に、凝固因子に対する阻害性免疫応答を発生していると以前に診断された。一実施形態では、ヒトは、投与の少なくとも約５年前に、凝固因子に対する阻害性免疫応答を発生していると以前に診断された。
【０１５０】
一部の実施形態では、本開示の方法は、免疫寛容を誘導する標準治療法と比較して、改善された寛容までの時間を提供する。本明細書で使用される「寛容までの時間」という用語は、凝固因子およびＦｃ領域を含む組成物またはキメラタンパク質の第１の用量の投与、ならびにヒトにおける免疫寛容の発生の間の時間の長さを指す。寛容までの時間の減少は、限定されないが、寛容を達成するために必要な総経済的負担を低減することを含む、ヒトのための顕著な利益を有し得る。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約１〜約２４週間、約１〜約２３週間、約１〜約２２週間、約１〜約２１週間、約２〜約２０週間、約２〜約１９週間、約２〜約１８週間、約２〜約１７週間、約３〜約１６週間、約３〜約１５週間、約３〜約１４週間、約３〜約１３週間、約４〜約１２週間、約４〜約１１週間、約４〜約１０週間、約４〜約９週間、約５〜約８週間、約５〜約７週間、約５〜約６週間、約１〜約１２週間、約１〜約１１週間、約１〜約１０週間、約１〜約９週間、約１〜約８週間、約１〜約７週間、約１〜約６週間、約１〜約５週間、または約１〜約４週間である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約７０週間未満、約６５週間未満、約６０週間未満、約５８週間未満、約５６週間未満、約５４週間未満、約５２週間未満、約５０週間未満、約４８週間未満、約４６週間未満、約４４週間未満、約４２週間未満、約４０週間未満、約３８週間未満、約３６週間未満、約３４週間未満、約３２週間未満、約３０週間未満、約２８週間未満、約２６週間未満、約２４週間未満、約２３週間未満、約２２週間未満、約２１週間未満、約２０週間未満、約１９週間未満、約１８週間未満、約１７週間未満、約１６週間未満、約１５週間未満、約１４週間未満、約１３週間未満、約１２週間未満、約１１週間未満、約１０週間未満、約９週間未満、約８週間未満、約７週間未満、約６週間未満、約５週間未満、約４週間未満、約３週間未満、約２週間未満、または約１週間未満である。ある特定の実施形態では、寛容までの時間は、約４〜約１２週間である。一実施形態では、寛容までの時間は、約４週間である。別の実施形態では、寛容までの時間は、約１２週間である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約１０か月未満である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約９か月未満である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約８か月未満である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約７か月未満である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約６か月未満である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約５か月未満である。一部の実施形態では、寛容までの時間は、約４か月未満である。一部の実施形態では、本開示の方法は、凝固因子単独による処置後の寛容までの時間と比較して、凝固因子およびＦｃ領域を含む組成物またはキメラタンパク質による処置後のヒトにおけるより短い寛容までの時間をもたらす。
【０１５１】
一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、約０．６ＢＵ未満の凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、約０．５ＢＵ未満の凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、約０．４ＢＵ未満の凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、約０．３ＢＵ未満の凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、約０．２ＢＵ未満の凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、約０．１ＢＵ未満の凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、０．０ＢＵの凝固因子に対する阻害性抗体の力価によって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、阻害性免疫抗体の力価は、２つの連続した測定で、例えば、４週間の期間内の２つの連続した週で観察される。
【０１５２】
一部の実施形態では、免疫寛容の発生は、＞６６％の増分回収率（ｉｎｃｒｅｍｅｎｔａｌ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）（例えば、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の増分回収率）によって特徴付けられる。本明細書で使用される場合、「増分回収率」は、注入の１５〜３０分後のＦＶＩＩＩレベルのピークを指す。
【０１５３】
誘導期間および漸減期間の終了後、被験体は、次いで、キメラタンパク質の予防的処置をなされ得る。予防的な投薬レジメンは、本明細書に開示の任意の投薬レジメンであり得る。
【０１５４】
一部の実施形態では、本開示の方法を使用して処置されたヒトは、現在免疫賦活療法を受けているか、最近免疫賦活療法を受けている。例えば、阻害剤は、インターフェロンによる処置を受けているＨＣＶ陽性の血友病Ａ患者、および抗レトロウイルス療法に関連する免疫再構築症候群を有するＨＩＶ陽性の血友病Ａ患者においても報告されている。Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｎ  ＦＶＩＩＩ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２８，  ２００６−Ｍａｒｃｈ  ２，  ２００６）を参照されたい。このため、一部の実施形態では、ヒトは、インターフェロン療法を現在受けている。一部の実施形態では、ヒトは、抗ウイルス療法を現在受けている。一部の実施形態では、ヒトは、抗レトロウイルス療法を現在受けており、免疫再構築症候群を有している。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、ヒトは、凝固因子、例えば、ＦＶＩＩＩに対して、１５０曝露日（ＥＤ）未満を有していた。一実施形態では、ヒトは、５０ＥＤ未満を有していた。別の実施形態では、ヒトは、２０ＥＤ未満を有していた。
【０１５６】
本開示の一部の態様は、それを必要とする被験体における凝固因子に対するアレルギー反応またはアナフィラキシー反応の重症度または出現を低減する方法であって、凝固因子およびＦｃ領域を含む組成物またはキメラタンパク質を被験体に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、組成物またはキメラタンパク質の投与は、凝固因子に対するアナフィラキシー様反応の重症度を低減する。一部の実施形態では、組成物またはキメラタンパク質の投与は、凝固因子に対するアレルギー反応の重症度を低減する。
【０１５７】
ＩＩＩ．キメラポリペプチド
本開示のために有用なキメラポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むＦＶＩＩＩタンパク質、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含む。ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質が内因性ＶＷＦと相互作用するのを防止または遮断するために使用され、それによって、ＦＶＩＩＩタンパク質がＶＷＦクリアランス経路を通じて除去されるのを防止する。ＶＷＦ断片からのＦＶＩＩＩタンパク質の解離を防止するために、一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩおよびＶＷＦの間の天然の相互作用よりも強い結び付きにより互いに直接または間接的に結び付けられる。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、共有結合によってＶＷＦ断片と結び付く。共有結合は、当技術分野において公知の任意の共有結合であり得る。一部の実施形態では、共有結合は、ジスルフィド結合である。一部の実施形態では、共有結合は、ペプチド結合である。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片の間の相互作用の強度を増大させるために改変される。他の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片の間の相互作用の強度を増大させるために改変される。さらに他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦタンパク質は両方とも、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片の間の相互作用の強度を増大させるために改変される。
【０１５９】
特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むＦＶＩＩＩタンパク質、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩポリペプチド配列中の少なくとも１つのアミノ酸、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸の間の少なくとも１つの共有結合により、直接結び付く。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩポリペプチド配列中の少なくとも１つのアミノ酸、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインと直接または間接的に融合した異種配列中の少なくとも１つのアミノ酸の間の少なくとも１つの共有結合により、間接的に結び付く。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、ＶＷＦ断片配列中の少なくとも１つのアミノ酸、ならびにＦＶＩＩＩポリペプチドと直接または間接的に融合した異種配列中の少なくとも１つのアミノ酸の間の少なくとも１つの共有結合により、間接的に結び付く。さらに他の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質およびＶＷＦ断片は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインと直接または間接的に融合した異種配列中の少なくとも１つのアミノ酸、ならびにＦＶＩＩＩポリペプチドと直接または間接的に融合した異種配列中の少なくとも１つのアミノ酸の間の少なくとも１つの共有結合により、間接的に結び付く。
【０１６０】
本開示のＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩポリペプチド、およびＦＶＩＩＩポリペプチドと直接もしくは間接的に融合した、１つまたは複数の異種部分、例えば、半減期延長部分を含むことができる。本開示のＶＷＦ断片は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメイン、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインと直接もしくは間接的に融合した、１つまたは複数の異種部分、例えば、半減期延長部分を含むこともできる。一部の実施形態では、本開示のために有用なＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩポリペプチドから本質的になるか、またはＦＶＩＩＩポリペプチドからなり、本開示のために有用なＶＷＦ断片は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメイン、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインと直接もしくは間接的に融合した、１つまたは複数の異種部分、例えば、半減期延長部分を含む。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩポリペプチド、およびＦＶＩＩＩポリペプチドと直接もしくは間接的に融合した、１つまたは複数の異種部分、例えば、半減期延長部分を含み、本開示のために有用なＶＷＦ断片は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインから本質的になるか、またはＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインからなる。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドから本質的になるか、またはＦＶＩＩＩポリペプチドからなるＦＶＩＩＩタンパク質、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインから本質的になるか、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインからなるＶＷＦ断片を含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、本明細書に開示のキメラポリペプチドまたはタンパク質は、ＦＶＩＩＩ−ＸＴＥＮ−Ｆｃ／Ｄ’Ｄ３−ＸＴＥＮ−Ｆｃヘテロ二量体である。一実施形態では、ＦＶＩＩＩ−ＸＴＥＮ−Ｆｃ／Ｄ’Ｄ３−ＸＴＥＮ−Ｆｃヘテロ二量体キメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＢドメイン内に挿入されたＸＴＥＮ、および第１のＦｃ領域を含むＦＶＩＩＩタンパク質、ならびに（ｉｉ）ＶＷＦ断片、第２のＸＴＥＮ配列、ａ２リンカー、および第２のＦｃ領域を含むＶＷＦタンパク質を含む。例示的なＦＶＩＩＩ−ＸＴＥＮ−Ｆｃ／Ｄ’Ｄ３−ＸＴＥＮ−Ｆｃヘテロ二量体、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの概略図を図１に表す。
【０１６２】
詳細な実施形態では、キメラポリペプチドはｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮである。別の詳細な実施形態では、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、（ｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質、および（ｉｉ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。さらに別の詳細な実施形態では、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、（ｉ）ＦＶＩＩＩタンパク質、および（ｉｉ）ジスルフィド結合を介して共有結合的に連結されたＶＷＦタンパク質を含む。
【０１６３】
ＩＩＩ．Ａ．第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド
本明細書で使用される場合、「ＦＶＩＩＩ」として本出願全体にわたって略記される「第ＶＩＩＩ因子」は、他に規定されない限り、凝血時のその通常の役割における、機能的なＦＶＩＩＩポリペプチドを意味する。このため、ＦＶＩＩＩという用語は、機能的であるバリアントポリペプチドを含む。「ＦＶＩＩＩタンパク質」は、ＦＶＩＩＩタンパク質がＦＶＩＩＩの機能／活性を発揮する限り、ＦＶＩＩＩポリペプチド（またはタンパク質）単独、追加のポリペプチドと融合したＦＶＩＩＩポリペプチド、および１つまたは複数の追加のポリペプチドと結び付いたＦＶＩＩＩポリペプチドを指すために使用される。「ＦＶＩＩＩポリペプチド」、「ＦＶＩＩＩ部分」および「ＦＶＩＩＩ」という用語は、ＦＶＩＩＩポリペプチド配列単独を指す。ＦＶＩＩＩの機能／活性の例としては、限定されるものではないが、凝血を活性化する能力、第ＩＸ因子のための補助因子の機能を果たす能力、またはＣａ２＋およびリン脂質の存在下で第ＩＸ因子とテナーゼ複合体を形成し、次いで第Ｘ因子を活性型Ｘａに変換する能力が挙げられる。ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ヒト、ブタ、イヌ、ラットまたはマウスのＦＶＩＩＩポリペプチドであり得る。加えて、ヒト由来および他の種由来のＦＶＩＩＩの間の比較は、機能のために必要である可能性がある保存残基を特定した（Ｃａｍｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ７９：３１７−２２  （１９９８）；ＵＳ６，２５１，６３２）。全長のポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列は、多くの機能的な断片、変異体および改変されたバージョンと同様に知られている。種々のＦＶＩＩＩアミノ酸およびヌクレオチドの配列は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０１５８９２９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２８０Ａ１号、および米国特許出願公開第２０１４／０３７００３５Ａ１号、ならびに国際公開第２０１５／１０６０５２Ａ１号に開示されている。ＦＶＩＩＩポリペプチドとしては、例えば、全長ＦＶＩＩＩ、Ｎ末端にＭｅｔがない全長ＦＶＩＩＩ、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド（シグナル配列がない）、Ｎ末端に追加のＭｅｔを有する成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド、および／またはＢドメインの全欠失もしくは部分欠失を有するＦＶＩＩＩポリペプチドが挙げられる。ＦＶＩＩＩバリアントは、部分欠失かまたは全欠失かにかかわらず、Ｂドメイン欠失を含む。
【０１６４】
本明細書で使用されるキメラポリペプチドのＦＶＩＩＩポリペプチドは、血漿中でＦＶＩＩＩ活性を有する。ＦＶＩＩＩ活性は、当技術分野において公知の任意の方法によって測定することができる。多数の試験が、凝血系の機能を評価するために利用可能である：活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験、発色アッセイ、ＲＯＴＥＭアッセイ、プロトロンビン時間（ＰＴ）試験（ＩＮＲを決定するためにも使用される）、フィブリノーゲン試験（多くの場合、クラウス法による）、血小板計数法、血小板機能試験（多くの場合、ＰＦＡ−１００による）、ＴＣＴ、出血時間、混合試験（患者の血漿が正常な血漿と混合された場合に、異常が是正されるか否か）、凝血因子アッセイ、抗リン脂質抗体、Ｄ−二量体、遺伝学的試験（例えば、第Ｖ因子ライデン、プロトロンビン変異Ｇ２０２１０Ａ）、希釈ラッセルクサリヘビ蛇毒時間（ｄＲＶＶＴ）、種々の血小板機能試験、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧまたはＳｏｎｏｃｌｏｔ）、トロンボエラストメトリー（ＴＥＭ（登録商標）、例えば、ＲＯＴＥＭ（登録商標））、またはオイグロブリン溶解時間（ＥＬＴ）。
【０１６５】
ａＰＴＴ試験は、「固有の」（接触活性化経路とも称される）および共通の凝血経路の両方の有効性を測定する性能の指標である。この試験は、一般に、市販の組換え凝固因子、例えば、ＦＶＩＩＩの凝固活性を測定するために使用される。これは、典型的には、外因性経路を測定するプロトロンビン時間（ＰＴ）と併せて使用される  （例えば、Ｋａｍａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ．，  ８２（７）：８６４−８７３  （２００７）を参照されたい）。一実施形態では、ａＰＴＴは、ＦＶＩＩＩ活性が、ＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）においてＤａｄｅ（登録商標）Ａｃｔｉｎ（登録商標）ＦＳＬ活性化ＰＴＴ試薬（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して測定されるアッセイを使用して、試験される。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、ａＰＴＴ試験によって測定される場合に、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、少なくとも約１０％、少なくとも約１１％、少なくとも約１２％、少なくとも約１３％、少なくとも約１４％、少なくとも約１５％、少なくとも約１５％、少なくとも約１６％、少なくとも約１７％、少なくとも約１８％、少なくとも約１９％、または少なくとも約２０％の血漿ＦＶＩＩＩ活性を有する。
【０１６６】
ａＰＴＴアッセイはまた、患者または被験体への投与の前のキメラポリペプチドの効力を評価するために使用されてもよい（Ｈｕｂｂａｒｄ  ＡＲ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  １１：  ９８８−９  （２０１３））。ａＰＴＴアッセイは、さらに、患者または被験体への投与の前または投与の後のいずれかで、本明細書に記載のいずれかのアッセイと併せて使用されてもよい。
【０１６７】
ＲＯＴＥＭ分析は、止血：凝固時間の全体的な動態、血塊形成、血塊安定性および溶解に関する情報を提供する。トロンボエラストメトリーにおける異なるパラメーターは、血漿の凝血系の活性、血小板機能、線維素溶解、またはこれらの相互作用に影響を与える多くの因子に依存する。このアッセイは、二次止血の全体図を提供することができる。
【０１６８】
発色アッセイの機構は、活性化されたＦＶＩＩＩが、活性化された第ＩＸ因子、リン脂質およびカルシウムイオンの存在下で、第Ｘ因子の第Ｘａ因子への変換を促進する、血液凝固カスケードの原則に基づく。第Ｘａ因子の活性は、第Ｘａ因子に特異的なｐ−ニトロアニリド（ｐＮＡ）基質の加水分解によって評価される。４０５ｎＭで測定されるｐ−ニトロアニリンの放出の初期速度は、第Ｘａ因子の活性と、したがって、試料中のＦＶＩＩＩ活性と正比例する。一実施形態では、発色アッセイは、ＢＩＯＰＨＥＮ  ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイ（Ｈｙｐｈｅｎ  Ｂｉｏｍｅｄ、Ｎｅｕｒｖｉｌｌｅ  ｓｕｒ  Ｏｉｓｅ、Ｆｒａｎｃｅ）である。
【０１６９】
発色アッセイは、国際血栓止血学会（ＩＳＴＨ）の科学的標準化委員会（ＳＳＣ）のＦＶＩＩＩおよび第ＩＸ因子分科委員会によって推奨されている。１９９４年以来、発色アッセイは、ＦＶＩＩＩの濃度の効力の決定に関する、ヨーロッパ薬局方の参照法でもある。このため、一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（登録商標）、ＫＯＧＥＮＡＴＥ  ＦＳ（登録商標）、ＨＥＬＩＸＡＴＥ  ＦＳ（登録商標）、ＸＹＮＴＨＡ／ＲＥＦＡＣＴＯ  ＡＢ（登録商標）、ＨＥＭＯＦＩＬ−Ｍ（登録商標）、ＭＯＮＡＲＣ−Ｍ（登録商標）、ＭＯＮＯＣＬＡＴＥ−Ｐ（登録商標）、ＨＵＭＡＴＥ−Ｐ（登録商標）、ＡＬＰＨＡＮＡＴＥ（登録商標）、ＫＯＡＴＥ−ＤＶＩ（登録商標）、ＡＦＳＴＹＬＡ（登録商標）、およびＨＹＡＴＥ：Ｃ（登録商標））を含むキメラポリペプチドに匹敵するＦＶＩＩＩ活性を有する。
【０１７０】
発色アッセイはまた、患者または被験体への投与の前のキメラポリペプチドの効力を評価するために使用されてもよい（Ｈｕｂｂａｒｄ  ＡＲ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  １１：  ９８８−９  （２０１３））。発色アッセイは、さらに、患者または被験体への投与の前または投与の後のいずれかで、本明細書に記載のいずれかのアッセイと併せて使用されてもよい。
【０１７１】
他の実施形態では、本開示のＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）、またはＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標））を含むキメラポリペプチドに匹敵する第Ｘａ因子の発生速度を有する。
【０１７２】
第Ｘ因子を第Ｘａ因子に活性化するために、活性化された第ＩＸ因子（第ＩＸａ因子）は、Ｃａ２＋、膜リン脂質、およびＦＶＩＩＩ補助因子の存在下、第Ｘａ因子を形成するために、第Ｘ因子における１つのアルギニン−イソロイシン結合を加水分解する。したがって、ＦＶＩＩＩの第ＩＸ因子との相互作用は、凝血経路において重要である。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド配列を含むキメラポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）、またはＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標））に匹敵する速度で、第ＩＸａ因子と相互作用することができる。
【０１７３】
加えて、ＦＶＩＩＩは、フォンヴィルブランド因子に結合するが、循環時に不活性である。ＦＶＩＩＩは、ＶＷＦに結合していない場合、迅速に分解され、トロンビンの作用によってＶＷＦから放出される。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド配列を含むキメラポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）、またはＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標））に匹敵するレベルで、フォンヴィルブランド因子、例えば、本明細書に開示のＶＷＦ断片に結合する。
【０１７４】
ＦＶＩＩＩは、カルシウムおよびリン脂質の存在下、活性化されたプロテインＣによって不活化され得る。活性化されたプロテインＣは、Ａ１ドメイン中のアルギニン３３６の後ろでＦＶＩＩＩ重鎖を切断し、第Ｘ因子基質の相互作用部位を破壊し、Ａ２ドメイン中のアルギニン５６２の後ろで切断して、Ａ２ドメインの解離を増強し、同様に第ＩＸａ因子との相互作用部位を破壊する。この切断はまた、Ａ２ドメイン（４３ｋＤａ）を二分し、Ａ２−Ｎ（１８ｋＤａ）およびＡ２−Ｃ（２５ｋＤａ）ドメインを生じる。このため、活性化されたプロテインＣは、重鎖中の複数の切断部位を触媒することができる。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド配列を含むキメラポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）、またはＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標））に匹敵するレベルで、活性化されたプロテインＣによって不活化される。
【０１７５】
他の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド配列を含むキメラポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）、またはＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標））に匹敵するｉｎ  ｖｉｖｏのＦＶＩＩＩ活性を有する。特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、ＨｅｍＡマウス尾静脈切断モデルにおいて、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド配列を含むキメラポリペプチドまたはＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）、またはＥＬＯＣＴＡＴＥ（登録商標））に匹敵するレベルで、ＨｅｍＡマウスを保護する能力がある。
【０１７６】
ヒトＦＶＩＩＩ配列（全長）の例を下記に示す。
【表２】
2021523878.tif 000008
【表３−１】
2021523878.tif 000009
【表３−２】
2021523878.tif 000010
【表３−３】
2021523878.tif 000011
【０１７７】
ＦＶＩＩＩポリペプチドとしては、全長ＦＶＩＩＩ、Ｎ末端にＭｅｔがない全長ＦＶＩＩＩ、成熟ＦＶＩＩＩ（シグナル配列がない）、Ｎ末端に追加のＭｅｔを有する成熟ＦＶＩＩＩ、および／またはＢドメインの全欠失もしくは部分欠失を有するＦＶＩＩＩが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩバリアントは、部分欠失かまたは全欠失かにかかわらず、Ｂドメイン欠失を含む。
【０１７８】
ネイティブ成熟ヒトＦＶＩＩＩポリペプチドの配列は、配列番号６５として示される。ネイティブＦＶＩＩＩポリペプチドは、以下の式：Ａ１−ａ１−Ａ２−ａ２−Ｂ−ａ３−Ａ３−Ｃ１−Ｃ２（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、構造的に関連する「Ａドメイン」であり、Ｂは、「Ｂドメイン」であり、Ｃ１およびＣ２は、構造的に関連する「Ｃドメイン」であり、ａ１、ａ２およびａ３は、酸性スペーサー領域である）を有する。配列番号６５における一次アミノ酸配列位置を参照すると、ヒトＦＶＩＩＩのＡ１ドメインは、Ａｌａ１から約Ａｒｇ３３６に伸長し、ａ１スペーサー領域は、約Ｍｅｔ３３７から約Ｖａｌ３７４に伸長し、Ａ２ドメインは、約Ａｌａ３７５から約Ｔｙｒ７１９に伸長し、ａ２スペーサー領域は、約Ｇｌｕ７２０から約Ａｒｇ７４０に伸長し、Ｂドメインは、約Ｓｅｒ７４１から約Ａｒｇ１６４８に伸長し、ａ３スペーサー領域は、約Ｇｌｕ１６４９から約Ａｒｇ１６８９に伸長し、Ａ３ドメインは、約Ｓｅｒ１６９０から約Ｌｅｕ２０２５に伸長し、Ｃ１ドメインは、約Ｇｌｙ２０２６から約Ａｓｎ２０７２に伸長し、Ｃ２ドメインは、約Ｓｅｒ２０７３からＴｙｒ２３３２に伸長する。特定のタンパク質分解切断部位以外に、ＦＶＩＩＩのドメインおよび領域の間の境界の位置の指定は、異なる文献の参照において異なり得る。したがって、本明細書で述べる境界は、「約」という用語の使用によって、およそのものとして指定される。
【０１７９】
ヒトＦＶＩＩＩ遺伝子は、哺乳動物細胞中で単離および発現された（Ｔｏｏｌｅ，  Ｊ．  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：３４２−３４７  （１９８４）；Ｇｉｔｓｃｈｉｅｒ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：３２６−３３０  （１９８４）；Ｗｏｏｄ，  Ｗ．  Ｉ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：３３０−３３７  （１９８４）；Ｖｅｈａｒ，  Ｇ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：３３７−３４２  （１９８４）；国際公開第８７／０４１８７号；国際公開第８８／０８０３５号；国際公開第８８／０３５５８号；および米国特許第４，７５７，００６号）。ＦＶＩＩＩアミノ酸配列は、米国特許第４，９６５，１９９号に示されるようにして、ｃＤＮＡから推定した。加えて、部分的または全体的にＢドメインが欠失したＦＶＩＩＩは、米国特許第４，９９４，３７１号および米国特許第４，８６８，１１２号に示されている。一部の実施形態では、ヒトＦＶＩＩＩのＢドメインは、米国特許第５，００４，８０３号に示されているようにして、ヒト第Ｖ因子のＢドメインと置き換えられる。ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードするｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列は、それぞれ、米国特許出願公開第２００５／０１００９９０号の配列番号１および２に示される。
【０１８０】
ブタＦＶＩＩＩ配列は、Ｔｏｏｌｅ，  Ｊ．  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８３：５９３９−５９４２  （１９８６）に公開されている。さらに、ブタ脾臓ｃＤＮＡライブラリーからのＦＶＩＩＩ配列のＰＣＲ増幅から得られた完全ブタｃＤＮＡ配列は、Ｈｅａｌｅｙ，  Ｊ．  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ８８：４２０９−４２１４  （１９９６）に報告されている。すべてのドメイン、すべてのサブユニットおよび特定のアミノ酸配列の置換を有するハイブリッドヒト／ブタＦＶＩＩＩは、ＬｏｌｌａｒおよびＲｕｎｇｅによる米国特許第５，３６４，７７１号、およびＷＯ９３／２００９３に開示された。より最近では、ブタＦＶＩＩＩのＡ１およびＡ２ドメインのヌクレオチドならびに対応するアミノ酸配列、ならびに対応するヒトドメインの代わりにブタＡ１および／またはＡ２ドメインを使用するキメラＦＶＩＩＩが、ＷＯ９４／１１５０３に報告された。米国特許第５，８５９，２０４号、Ｌｏｌｌａｒ，Ｊ．Ｓ．も、ブタｃＤＮＡを開示しており、アミノ酸配列を推定した。米国特許第６，４５８，５６３号は、Ｂドメイン欠失ブタＦＶＩＩＩを開示している。
【０１８１】
Ｌｏｌｌａｒ，Ｊ．Ｓ．に対する米国特許第５，８５９，２０４号は、抗原性が低減され、免疫反応性が低減されているＦＶＩＩＩの機能的変異体を報告している。Ｌｏｌｌａｒ，Ｊ．Ｓ．に対する米国特許第６，３７６，４６３号は、免疫反応性が低減されているＦＶＩＩＩの変異体も報告している。Ｓａｅｎｋｏらに対する米国特許出願公開第２００５／０１００９９０号は、ＦＶＩＩＩのＡ２ドメインにおける機能的変異を報告している。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチド（またはキメラポリペプチドのＦＶＩＩＩ部分）は、配列番号６７のアミノ酸１〜１４３８、もしくは配列番号６５のアミノ酸１〜２３３２（シグナル配列なし）のＦＶＩＩＩアミノ酸配列、または配列番号６４のアミノ酸１〜１９および配列番号６７のアミノ酸１〜１４３８、もしくは配列番号６４のアミノ酸１〜１９および配列番号６５のアミノ酸１〜２３３２（シグナル配列あり）のＦＶＩＩＩアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得、ここで、ＦＶＩＩＩは、凝固活性を有し、例えば、補助因子として第ＩＸ因子を活性化して、第Ｘ因子を活性化された第Ｘ因子に変換する。ＦＶＩＩＩポリペプチド（またはキメラポリペプチドのＦＶＩＩＩ部分）は、配列番号６７のアミノ酸１〜１４３８、または配列番号６５のアミノ酸１〜２３３２（シグナル配列なし）のＦＶＩＩＩアミノ酸配列と同一であり得る。ＦＶＩＩＩポリペプチドは、シグナル配列をさらに含むことができる。
【０１８３】
ＦＶＩＩＩの「Ｂドメイン」は、本明細書で使用される場合、内部アミノ酸配列の同一性およびタンパク質分解切断の部位によって定義される当技術分野において公知のＢドメイン、例えば、全長ヒトＦＶＩＩＩの残基Ｓｅｒ７４１〜Ａｒｇ１６４８と同じである。他のヒトＦＶＩＩＩドメインは、以下のアミノ酸残基によって定義される：Ａ１、残基Ａｌａ１〜Ａｒｇ３７２；Ａ２、残基Ｓｅｒ３７３〜Ａｒｇ７４０；Ａ３、残基Ｓｅｒ１６９０〜Ａｓｎ２０１９；Ｃ１、残基Ｌｙｓ２０２０〜Ａｓｎ２１７２；Ｃ２、残基Ｓｅｒ２１７３〜Ｔｙｒ２３３２。Ａ３−Ｃ１−Ｃ２配列は、残基Ｓｅｒ１６９０〜Ｔｙｒ２３３２を含む。残りの配列である残基Ｇｌｕ１６４９〜Ａｒｇ１６８９は、通常、ａ３酸性領域と称される。ブタ、マウスおよびイヌＦＶＩＩＩのための、Ｂドメインを含むすべてのドメインの境界の位置は、当技術分野においても公知である。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩのＢドメインは欠失している（「Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子」または「ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩ」）。ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩの例は、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）（組換えＢＤＤ  ＦＶＩＩＩ）であり、表４における配列の第ＶＩＩＩ因子の部分と同じ配列を有する（ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩ重鎖に二重下線を引き、Ｂドメインはイタリック体であり、ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩ軽鎖は標準文字である）。一部の実施形態では、Ｂドメイン  ＦＶＩＩＩは、表５に示されるように、５アミノ酸を除いて全Ｂドメインの欠失を有する（配列番号６８）（Ｂドメインはイタリック体である）。
【表４】
2021523878.tif 000012
【表５】
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【０１８４】
「Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩ」は、米国特許第６，３１６，２２６号、米国特許第６，３４６，５１３号、米国特許第７，０４１，６３５号、米国特許第５，７８９，２０３号、米国特許第６，０６０，４４７号、米国特許第５，５９５，８８６号、米国特許第６，２２８，６２０号、米国特許第５，９７２，８８５号、米国特許第６，０４８，７２０号、米国特許第５，５４３，５０２号、米国特許第５，６１０，２７８号、米国特許第５，１７１，８４４号、米国特許第５，１１２，９５０号、米国特許第４，８６８，１１２号、および米国特許第６，４５８，５６３号、米国特許出願公開第２０１７／００７３３９３Ａ１号および米国特許出願公開第２０１２／３０８６４１Ａ１号、ならびに国際公開第２０１１／０４１７７０Ａ１号、国際公開第２０１５／１０６０５２Ａ１号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１０７３８）および国際公開第２０１６／０２５７６４号に開示される、全欠失または部分欠失を有し得る。一部の実施形態では、本開示の方法において使用されるＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩ配列は、米国特許第６，３１６，２２６号（また、ＵＳ６，３４６，５１３）の第４欄４行目〜第５欄２８行目および実施例１〜５に開示されるいずれか１つの欠失を含む。他の実施形態では、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、Ｓ７４３／Ｑ１６３８  Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子（ＳＱ  ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩ）（例えば、アミノ酸７４４〜アミノ酸１６３７の欠失を有する第ＶＩＩＩ因子、例えば、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸１〜７４３およびアミノ酸１６３８〜２３３２を有する第ＶＩＩＩ因子）である。一部の実施形態では、本開示の方法において使用されるＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、米国特許第５，７８９，２０３号（また、ＵＳ６，０６０，４４７、ＵＳ５，５９５，８８６、およびＵＳ６，２２８，６２０）の第２欄、２６〜５１行目および実施例５〜８に開示される欠失を有する。一部の実施形態では、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、米国特許第５，９７２，８８５号の第１欄、２５行目〜第２欄、４０行目；米国特許第６，０４８，７２０号の第６欄、１〜２２行目および実施例１；米国特許第５，５４３，５０２号の第２欄、１７〜４６行目；米国特許第５，１７１，８４４号の第４欄、２２行目〜第５欄、３６行目；米国特許第５，１１２，９５０号の第２欄、５５〜６８行目、図２および実施例１；米国特許第４，８６８，１１２号の第２欄、２行目〜第１９欄、２１行目および表２；米国特許第７，０４１，６３５号の第２欄、１行目〜第３欄、１９行目、第３欄、４０行目〜第４欄、６７行目、第７欄、４３行目〜第８欄、２６行目、および第１１欄、５行目〜第１３欄、３９行目；または米国特許第６，４５８，５６３号の第４欄、２５〜５３行目に記載の欠失を有する。一部の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＷＯ９１／０９１２２に開示されているように、大部分のＢドメインの欠失を有するが、２つのポリペプチド鎖への一次翻訳産物のｉｎ  ｖｉｖｏタンパク質分解プロセシングに必須であるＢドメインのアミノ末端配列を依然として含有する。一部の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩポリペプチドは、アミノ酸７４７〜１６３８の欠失、すな���ち、事実上Ｂドメインの完全な欠失により構築される。Ｈｏｅｂｅｎ  Ｒ．Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５  （１３）：  ７３１８−７３２３  （１９９０）。また、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、ＦＶＩＩＩのアミノ酸７７１〜１６６６またはアミノ酸８６８〜１５６２の欠失も含有し得る。Ｍｅｕｌｉｅｎ  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ２（４）：  ３０１−６  （１９８８）。本開示の一部である追加のＢドメイン欠失は、例えば、アミノ酸９８２から１５６２もしくは７６０から１６３９（Ｔｏｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  （１９８６）  ８３，  ５９３９−５９４２））、７９７から１５６２（Ｅａｔｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９８６）  ２５：８３４３−８３４７））、７４１から１６４６（Ｋａｕｆｍａｎ（ＰＣＴ出願公開ＷＯ８７／０４１８７号））、７４７〜１５６０（Ｓａｒｖｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＤＮＡ  （１９８７）  ６：５５３−５６４））、７４１から１６４８（Ｐａｓｅｋ（ＰＣＴ出願公開第８８／００８３１号））、または８１６から１５９８もしくは７４１から１６４８（Ｌａｇｎｅｒ  （Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔ．  Ｍｉｔｔ．  （１９８８）  Ｎｏ  ８２：１６−２５、ＥＰ２９５５９７））の欠失を含む。特定の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４６〜１６４８の欠失（全長ＦＶＩＩＩの７６５〜１６６５の欠失に対応する）を含む。他の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩポリペプチドは、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４５〜１６４８の欠失（全長ＦＶＩＩＩの７６４〜１６６５の欠失に対応する）を含む。
【０１８５】
他の実施形態では、ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩは、全長ＦＶＩＩＩ配列のアミノ酸配列に対応する、１つまたは複数のＮ連結グリコシル化部位、例えば、残基７５７、７８４、８２８、９００、９６３、または必要に応じて９４３を保持するＢドメインの断片を含有するＦＶＩＩＩポリペプチドを含む。Ｂドメイン断片の例としては、Ｍｉａｏ，  Ｈ．Ｚ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０３（ａ）：  ３４１２−３４１９  （２００４）、Ｋａｓｕｄａ，  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ６：  １３５２−１３５９  （２００８）およびＰｉｐｅ，  Ｓ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ９：  ２２３５−２２４２  （２０１１）に開示されるようなＢドメインの２２６アミノ酸または１６３アミノ酸を含む（すなわち、Ｂドメインの最初の２２６アミノ酸または１６３アミノ酸が保持される）。さらに他の実施形態では、ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩは、ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩポリペプチドの発現を改善するために、残基３０９での点変異（ＰｈｅからＳｅｒ）をさらに含む。Ｍｉａｏ，  Ｈ．Ｚ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０３（ａ）：  ３４１２−３４１９  （２００４）を参照されたい。さらに他の実施形態では、ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩは、Ｂドメインの部分を含有するが、１つまたは複数のフューリン切断部位（例えば、Ａｒｇ１３１３およびＡｒｇ１６４８）を含有しない、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む。Ｐｉｐｅ，  Ｓ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ９：  ２２３５−２２４２  （２０１１）を参照されたい。一部の実施形態では、ＢＤＤ  ＦＶＩＩＩは、成熟全長ＦＶＩＩＩに対応するアミノ酸７６５〜１６５２における欠失を含有する一本鎖ＦＶＩＩＩを含む（ｒＦＶＩＩＩ−ＳｉｎｇｌｅＣｈａｉｎおよびＡＦＳＴＹＬＡ（登録商標）としても公知）。米国特許第７，０４１，６３５号を参照されたい。前述の欠失のそれぞれは、任意のＦＶＩＩＩ配列中で行うことができる。
【０１８６】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩは部分Ｂドメインを有する。一部の実施形態では、部分Ｂドメインを有するＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩ１９８である。ＦＶＩＩＩ１９８は、一本鎖ＦＶＩＩＩＦｃ分子−２２６Ｎ６を含有する部分Ｂドメインである。２２６の数字は、ＦＶＩＩＩのＢドメインのＮ末端の２２６アミノ酸を表し、Ｎ６は、Ｂドメイン中の６つのＮグリコシル化部位を表す。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、国際公開第２０１７／１１７６３０Ａ１号、国際公開第２０１８／０８７２７１Ａ１号、ＵＳ９，８７８，０１７Ｂ２、ＵＳ８，５７５，１０４Ｂ２、ＵＳ８，７５４，１９４Ｂ２、ＵＳ７，９３９，６３２Ｂ２、ＵＳ２０１８／０１６１４０２Ａ１、ＵＳ９，９５６，２６９Ｂ２、ＵＳ９，１０７，９０２Ｂ２、ＵＳ２０１７／２０９５４６Ａ１に開示されたＦＶＩＩＩポリペプチドから選択される。
【０１８８】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩは、アミノ酸１６４８（全長第ＶＩＩＩ因子または配列番号６５における）でのアルギニン、アミノ酸７５４（Ｓ７４３／Ｑ１６３８  Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子または配列番号６７における）でのアルギニン、または対応するアルギニン残基（他のバリアントにおける）の直後で切断され、それによって、重鎖および軽鎖をもたらす。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、金属イオンが媒介する非共有結合によって連結または結び付けられる、重鎖および軽鎖を含む。
【０１８９】
他の実施形態では、ＦＶＩＩＩは、アミノ酸１６４８（全長ＦＶＩＩＩまたは配列番号６５における）でのアルギニン、アミノ酸７５４（Ｓ７４３／Ｑ１６３８  Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩまたは配列番号６７における）でのアルギニン、または対応するアルギニン残基（他のバリアントにおける）の直後で切断されていない一本鎖ＦＶＩＩＩである。一本鎖ＦＶＩＩＩは、１つまたは複数のアミノ酸置換を含むことができる。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、全長成熟第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド（配列番号６５）の残基１６４８、残基１６４５もしくはその両方、またはＳＱ  ＢＤＤ第ＶＩＩＩ因子（配列番号６７）の残基７５４、残基７５１もしくはその両方に対応する残基においてである。アミノ酸置換は、アルギニン以外の任意のアミノ酸、例えば、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、セレノシステイン、セリン、チロシン、ヒスチジン、オルニチン、ピロリシンまたはタウリンであり得る。
【０１９０】
ＦＶＩＩＩは、さらに、トロンビンによって切断され、次いで、ＦＶＩＩＩａとして活性化され、活性化された第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）のための補助因子としての役割を果たすことができる。そして、活性化されたＦＩＸは、活性化されたＦＶＩＩＩと一緒にＸａｓｅ複合体を形成し、第Ｘ因子を活性化された第Ｘ因子（ＦＸａ）に変換する。活性化のために、ＦＶＩＩＩは、アミノ酸３７２、７４０および１６８９（Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩ配列におけるアミノ酸３７２、７４０および７９５に対応する）で、３つのアルギニン残基の後ろでトロンビンによって切断され、切断は、５０ｋＤａのＡ１鎖、４３ｋＤａのＡ２鎖、および７３ｋＤａのＡ３−Ｃ１−Ｃ２鎖を有するＦＶＩＩＩａを生じる。一部の実施形態では、本開示のために有用なＦＶＩＩＩポリペプチドは、非活性のＦＶＩＩＩである。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、活性化されたＦＶＩＩＩである。
【０１９１】
ＶＷＦタンパク質と連結または結び付けられたＦＶＩＩＩポリペプチドを有するタンパク質は、配列番号６５または６７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の配列を含むことができ、ここで、配列は、ＦＶＩＩＩの凝固活性を有し、例えば、補助因子としての第ＩＸ因子を活性化して、第Ｘ因子を活性化された第Ｘ因子（ＦＸａ）に変換する。
【０１９２】
「ハイブリッド」または「キメラ」ポリペプチドおよびタンパク質は、本明細書で使用される場合、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの組合せを含む。一部の実施形態では、ハイブリッドまたはキメラポリペプチドは、単一のポリペプチド鎖、例えば、ＦＶＩＩＩポリペプチドおよびＸＴＥＮを含むキメラポリペプチドを含む。例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＵＳ２０１５／０１５８９２９Ａ１を参照されたい。一部の実施形態では、ハイブリッドまたはキメラポリペプチドは、第１のポリペプチド鎖、例えば、ＸＴＥＮ配列および第１のＩｇ定常領域またはその部分と融合したＶＷＦ断片と、第２のポリペプチド鎖、例えば、第２のＩｇ定常領域またはその部分と融合したＦＶＩＩＩポリペプチドの組合せを含み、それによってヘテロ二量体を形成する。例えば、それぞれが、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１５／０２６６９４３Ａ１、ＵＳ２０１６／０２５１４０８Ａ１、ＵＳ２０１７／００７３３９３Ａ１を参照されたい。一部の実施形態では、ハイブリッドにおける第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、電荷−電荷または疎水性の相互作用などのタンパク質−タンパク質相互作用を介して、互いに結び付く。他の実施形態では、第１のポリペプチドは、ＶＷＦタンパク質−ＸＴＥＮ−Ｆｃ融合タンパク質を含み、第２のポリペプチドは、ＦＶＩＩＩ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで、ハイブリッドをヘテロ二量体にし、ここで、ＸＴＥＮは、２８８未満のアミノ酸を含有する。他の実施形態では、第１のポリペプチドは、ＶＷＦタンパク質−ＸＴＥＮ−Ｆｃ融合タンパク質を含み、第２のポリペプチドは、ＦＶＩＩＩ（Ｘ）−Ｆｃ融合タンパク質を含んで、ハイブリッドをヘテロ二量体にし、ここで、ＸＴＥＮは、２８８未満のアミノ酸を含有する。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、第１のＦｃ領域および第２のＦｃ領域の間の共有結合、例えば、ジスルフィド結合を通して結び付くことができる。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、さらに、ＶＷＦ断片およびＦＶＩＩＩポリペプチドの間の結合によって、互いに結び付くことができる。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のキメラポリペプチドは、第１のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、ＸＴＥＮ配列、第２のＦＶＩＩＩポリペプチド断片およびＦｃ領域を含むＦＶＩＩＩタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順に、ＸＴＥＮ配列と融合し、第２のＦＶＩＩＩポリペプチド断片と融合し、Ｆｃ領域と融合した、第１のＦＶＩＩＩポリペプチド断片を含む。詳細な実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、配列番号２１５のアミノ酸配列を含む第１のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、配列番号８のアミノ酸配列を含むＸＴＥＮ配列、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む第２のＦＶＩＩＩポリペプチド、および／または配列番号２１７のアミノ酸配列を含む第１のＦｃ領域を含む。
【０１９４】
詳細な一実施形態では、キメラポリペプチドは、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮであり、配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質を含む。別の詳細な実施形態では、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む。
【０１９５】
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩシグナルペプチド配列をさらに含む。詳細な一実施形態では、ＦＶＩＩＩタンパク質は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩシグナルペプチド、配列番号２１５のアミノ酸配列を含む第１のＦＶＩＩＩポリペプチド断片、配列番号８のアミノ酸配列を含むＸＴＥＮ配列、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む第２のＦＶＩＩＩポリペプチド、および／または配列番号２１７のアミノ酸配列を含む第１のＦｃ領域を含む。
【０１９６】
詳細な一実施形態では、キメラポリペプチドは、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮであり、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＦＶＩＩＩタンパク質を含む。別の詳細な実施形態では、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、配列番号２０４の核酸配列またはその断片によってコードされるＦＶＩＩＩタンパク質を含む。本明細書に開示のキメラポリペプチドのＦＶＩＩＩタンパク質に関する追加の例示的なポリペプチド配列を表１８〜１９に示す。
【０１９７】
上記および下記で議論されるように、非常に多くの機能的ＦＶＩＩＩバリアントが公知である。加えて、ＦＶＩＩＩにおける数百の非機能的変異が、血友病患者において特定されており、ＦＶＩＩＩ機能に対するこれらの変異の効果が、置換の性質におけるものよりも、ＦＶＩＩＩの三次元構造内でそれらが位置する場所に、より起因することが決定されており（Ｃｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｕｍ．  Ｍｕｔａｔ．  １９：２７４−８  （２００２））、これはその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。加えて、ヒト由来および他の種由来のＦＶＩＩＩの間の比較は、機能のために必要である可能性がある保存残基を特定しており（Ｃａｍｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ７９：３１７−２２  （１９９８）；ＵＳ６，２５１，６３２）、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１９８】
ＩＩＩ．Ｂ．フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）断片
ＶＷＦ（Ｆ８ＶＷＦとしても公知）は、血液血漿中に存在する大きな多量体糖タンパク質であり、内皮（バイベルパラーデ小体において）、巨核球（血小板のα顆粒）および内皮下層の結合組織において構成的に生成する。塩基性ＶＷＦ単量体は、２８１３アミノ酸のタンパク質である。すべての単量体は、特定の機能を有する多数の特定のドメインである、Ｄ’／Ｄ３ドメイン（第ＶＩＩＩ因子に結合する）、Ａ１ドメイン（血小板ＧＰＩｂ受容体、ヘパリンおよび／またはおそらくコラーゲンに結合する）、Ａ３ドメイン（コラーゲンに結合する）、Ｃ１ドメイン（これが活性化されると、ＲＧＤドメインは血小板のインテグリンαＩＩｂβ３に結合する）、タンパク質のＣ末端での「システインノット」ドメイン（ＶＷＦが血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦβ）およびβ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（βＨＣＧ）と共有する）を含有する。
【０１９９】
本明細書で使用される「ＶＷＦ断片」という用語は、限定されるものではないが、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を阻害する能力があるＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含む機能的ＶＷＦ断片を含む。一部の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質に結合する。他の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質上のＶＷＦ結合部位を遮断し、それによって、ＦＶＩＩＩタンパク質と内因性ＶＷＦの相互作用を阻害する。他の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩの内因性ＶＷＦへの結合を遮断し、それによって、ＶＷＦクリアランス経路を通じたＦＶＩＩＩタンパク質のクリアランスを防止する。ＶＷＦ断片としては、ＶＷＦのこれらの活性を保持する、誘導体、バリアント、変異体または類似体が挙げられる。
【０２００】
ヒトＶＷＦについての２８１３単量体アミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋの受託番号ＮＰ０００５４３．２として報告されている。ヒトＶＷＦをコードするヌクレオチド配列は、Ｇｅｎｂａｎｋの受託番号ＮＭ０００５５２．３として報告されている。ヒトＶＷＦのヌクレオチド配列は、配列番号２０として指定される。配列番号２１は、全長ＶＷＦのアミノ酸配列である。ＶＷＦのそれぞれのドメインを表６に列挙する。
【表６−１】
2021523878.tif 000014
【表６−２】
2021523878.tif 000015
【表６−３】
2021523878.tif 000016
【０２０１】
本明細書で使用されるＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片であり得、ここで、ＶＷＦ断片は第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）に結合し、内因性ＶＷＦ（全長ＶＷＦ）のＦＶＩＩＩへの結合を阻害する。Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片は、Ａ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメイン、Ｄ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、Ｄ４ドメイン、Ｂ１ドメイン、Ｂ２ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、ＣＫドメイン、それらの１つまたは複数の断片、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択されるＶＷＦドメインをさらに含むことができる。一部の実施形態では、ＶＷＦ断片は、（１）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメイン、もしくはそれらの断片、（２）ＶＷＦのＤ１ドメイン、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメイン、もしくはそれらの断片、（３）ＶＷＦのＤ２ドメイン、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメイン、もしくはそれらの断片、（４）ＶＷＦのＤ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメイン、もしくはそれらの断片、または（５）ＶＷＦのＤ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、Ｄ’ドメイン、Ｄ３ドメインおよびＡ１ドメイン、もしくはそれらの断片を、含むか、本質的にこれらからなるか、またはこれらからなる。本明細書に記載のＶＷＦ断片は、ＶＷＦクリアランス受容体に結合する部位を含有しない。他の実施形態では、本明細書に記載のＶＷＦ断片は、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２７４ではない。本開示のＶＷＦ断片は、ＶＷＦ断片に連結または融合された任意の他の配列を含むことができる。例えば、本明細書に記載のＶＷＦ断片は、シグナルペプチドをさらに含むことができる。
【０２０２】
一部の実施形態では、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質に結合するか、またはＦＶＩＩＩタンパク質と結び付く。例えば、それぞれが、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１５／００２３９５９Ａ１、ＵＳ２０１５／０２６６９４３Ａ１、ＵＳ２０１６／０２５１４０８Ａ１、ＵＳ２０１７／００７３３９３Ａ１、ＵＳ２０１８／１８５４５５Ａ１、ＵＳ２０１８／００５１０６７Ａ１、ＵＳ２０１７／０１５２３００Ａ１、ＵＳ９，８７８，０１７Ｂ２、ＵＳ９，４５８，２２３Ｂ２、ＵＳ８，５７５，１０４Ｂ２、ＷＯ２０１７／１１７６３０Ａ１、ＵＳ２０１８／０１６１４０２Ａ１、ＷＯ２０１７／１１７６３１Ａ１、ＷＯ２０１８／０８７２７１Ａ１、ＵＳ９，１０７，９０２Ｂ２、ＷＯ２０１７／２２２３３７Ａ１、ＷＯ２０１５／１８５７５８Ａ１を参照されたい。ＦＶＩＩＩタンパク質に結合するか、またはＦＶＩＩＩタンパク質と結び付くことによって、本開示のＶＷＦ断片は、プロテアーゼ切断およびＦＶＩＩＩの活性化からＦＶＩＩＩを保護し、ＦＶＩＩＩの重鎖および軽鎖を安定化し、スカベンジャー受容体によるＦＶＩＩＩのクリアランスを防止する。他の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質に結合し、またはＦＶＩＩＩタンパク質と結び付き、ＦＶＩＩＩタンパク質のリン脂質および活性化されたプロテインＣへの結合を遮断または防止する。内因性全長ＶＷＦとのＦＶＩＩＩタンパク質の結合を防止または阻害することによって、本開示のＶＷＦ断片は、ＶＷＦクリアランス受容体によるＦＶＩＩＩのクリアランスを低減し、このようにして、キメラポリペプチドの半減期を延長する。したがって、キメラポリペプチドの半減期の延長は、ＦＶＩＩＩタンパク質へのＶＷＦクリアランス受容体の結合部位が欠如しているＶＷＦ断片との結合または結び付き、およびＶＷＦクリアランス受容体の結合部位を含有する内因性ＶＷＦからのＶＷＦ断片によるＦＶＩＩＩタンパク質の遮蔽または保護に起因する。ＶＷＦ断片に結合したか、またはＶＷＦ断片によって保護されたＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩタンパク質の再利用を可能にすることもできる。全長ＶＷＦ分子に含有されるＶＷＦクリアランス経路受容体の結合部位を除くことによって、本開示のＦＶＩＩＩ／ＶＷＦヘテロ二量体は、ＶＷＦクリアランス経路から遮蔽され、さらにＦＶＩＩＩの半減期を延長する。
【０２０３】
一部の実施形態では、本開示のために有用なＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含み、ここで、Ｄ’ドメインは、配列番号２１のアミノ酸７６４〜８６６と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、ＶＷＦタンパク質は、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を防止または阻害する。他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含み、ここで、Ｄ３ドメインは、配列番号２１のアミノ酸８６７〜１２４０と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、ＶＷＦタンパク質は、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を防止または阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなり、これは、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２４０と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、ここで、ＶＷＦタンパク質は、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を防止または阻害する。他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸２３〜１２４０と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の、Ｄ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなり、ここで、ＶＷＦタンパク質は、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を防止または阻害する。さらに他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、それらに作動可能に連結されたシグナルペプチドをさらに含む。
【０２０４】
一部の実施形態では、本開示のために有用なＶＷＦタンパク質は、（１）Ｄ’Ｄ３ドメイン、Ｄ１Ｄ’Ｄ３ドメイン、Ｄ２Ｄ’Ｄ３ドメインまたはＤ１Ｄ２Ｄ’Ｄ３ドメイン、および（２）約１０アミノ酸まで（例えば、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２４０から、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２５０までの任意の配列）、約１５アミノ酸まで（例えば、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２４０から、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２５５までの任意の配列）、約２０アミノ酸まで（例えば、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２４０から、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２６０までの任意の配列）、約２５アミノ酸まで（例えば、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２４０から、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２６５までの任意の配列）、または約３０アミノ酸まで（例えば、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２４０から、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２６０までの任意の配列）の追加のＶＷＦ配列、から本質的になるか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むか、またはこれらから本質的になるＶＷＦタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２７４でもなく、全長成熟ＶＷＦでもない。一部の実施形態では、Ｄ１Ｄ２ドメインは、Ｄ’Ｄ３ドメインとトランスで発現される。一部の実施形態では、Ｄ１Ｄ２ドメインは、Ｄ’Ｄ３ドメインとシスで発現される。
【０２０５】
他の実施形態では、Ｄ１Ｄ２ドメインに連結されたＤ’Ｄ３ドメインを含むＶＷＦタンパク質は、細胞内の切断部位、例えば、（ＰＡＣＥ（フューリン）またはＰＣ５による切断部位）をさらに含み、発現の際に、Ｄ’Ｄ３ドメインからのＤ１Ｄ２ドメインの切断を可能にする。細胞内の切断部位の非限定的な例は、本明細書のどこかに開示される。
【０２０６】
さらに他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むが、（１）配列番号２１に対応するアミノ酸１２４１〜２８１３、（２）配列番号２１に対応するアミノ酸１２７０〜アミノ酸２８１３、（３）配列番号２１に対応するアミノ酸１２７１〜アミノ酸２８１３、（４）配列番号２１に対応するアミノ酸１２７２〜アミノ酸２８１３、（５）配列番号２１に対応するアミノ酸１２７３〜アミノ酸２８１３、（６）配列番号２１に対応するアミノ酸１２７４〜アミノ酸２８１３、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択されるアミノ酸配列を含まない。
【０２０７】
さらに他の実施形態では、本開示のＶＷＦタンパク質は、Ｄ’ドメイン、Ｄ３ドメインおよびＡ１ドメインに対応するアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなり、ここで、アミノ酸配列は、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１４７９と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、ＶＷＦタンパク質は、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を防止する。特定の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸７６４〜１２７４ではない。
【０２０８】
一部の実施形態では、本開示のＶＷＦタンパク質は、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むが、（１）Ａ１ドメイン、（２）Ａ２ドメイン、（３）Ａ３ドメイン、（４）Ｄ４ドメイン、（５）Ｂ１ドメイン、（６）Ｂ２ドメイン、（７）Ｂ３ドメイン、（８）Ｃ１ドメイン、（９）Ｃ２ドメイン、（１０）ＣＫドメイン、（１１）ＣＫドメインおよびＣ２ドメイン、（１２）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、およびＣ１ドメイン、（１３）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、（１４）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｂ２ドメイン、（１５）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｂ２ドメイン、およびＢ１ドメイン、（１６）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｂ２ドメイン、Ｂ１ドメイン、およびＤ４ドメイン、（１７）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｂ２ドメイン、Ｂ１ドメイン、Ｄ４ドメイン、およびＡ３ドメイン、（１８）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｂ２ドメイン、Ｂ１ドメイン、Ｄ４ドメイン、Ａ３ドメイン、およびＡ２ドメイン、（１９）ＣＫドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｂ２ドメイン、Ｂ１ドメイン、Ｄ４ドメイン、Ａ３ドメイン、Ａ２ドメイン、およびＡ１ドメイン、ならびに（２０）それらの任意の組合せからなる群より選択される少なくとも１つのＶＷＦドメインを含まない。
【０２０９】
さらに他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、Ｄ’Ｄ３ドメイン、および１つまたは複数のドメインまたはモジュールを含む。そのようなドメインまたはモジュールの例としては、限定されるものではないが、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ｚｈｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎｌｉｎｅ  Ａｐｒｉｌ  ６，  ２０１２：  ＤＯＩ  １０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２０１２−０１−４０５１３４に開示されたドメインおよびモジュールが挙げられる。例えば、ＶＷＦタンパク質は、Ｄ’Ｄ３ドメイン、ならびにＡ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメイン、Ｄ４Ｎモジュール、ＶＷＤ４モジュール、Ｃ８−４モジュール、ＴＩＬ−４モジュール、Ｃ１モジュール、Ｃ２モジュール、Ｃ３モジュール、Ｃ４モジュール、Ｃ５モジュール、Ｃ５モジュール、Ｃ６モジュール、およびそれらの組合せからなる群より選択される１つまたは複数のドメインまたはモジュールを含むことができる。
【０２１０】
さらに他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、異種部分に連結され、ここで、異種部分は、ＶＷＦタンパク質のＮ末端もしくはＣ末端に連結されるか、またはＶＷＦタンパク質における１つまたは複数のアミノ酸のすぐ下流（例えば、１つまたは複数のＸＴＥＮ挿入部位）に挿入される。例えば、ＶＷＦタンパク質における異種部分のための挿入部位は、Ｄ’ドメイン、Ｄ３ドメイン、または両方であり得る。異種部分は、半減期延長因子であり得る。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、本開示のために有用なＶＷＦタンパク質は、多量体、例えば、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、またはさらに高次の多量体を形成する。他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、唯一のＶＷＦタンパク質を有する単量体である。一部の実施形態では、本開示のＶＷＦタンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠失、付加または修飾を有し得る。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦタンパク質がジスルフィド結合を形成できないように、または二量体もしくは多量体を形成できないように、アミノ酸の置換、欠失、付加または修飾を含むことができる。他の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｄ’ドメインおよびＤ３ドメイン内である。特定の実施形態では、本開示のために有用なＶＷＦタンパク質は、配列番号２１に対応する、残基１０９９、残基１１４２、または残基１０９９および１１４２両方に対応する残基で、少なくとも１つのアミノ酸置換を含有する。少なくとも１つのアミノ酸置換は、野生型ＶＷＦ中で天然に存在しない任意のアミノ酸であり得る。例えば、アミノ酸置換は、システイン以外の任意のアミノ酸、例えば、イソロイシン、アラニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セリン、チロシン、アルギニンまたはヒスチジンであり得る。別の例では、アミノ酸置換は、ＶＷＦタンパク質が多量体を形成するのを防止または阻害する、１つまたは複数のアミノ酸を有する。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、本明細書において有用なＶＷＦタンパク質は、ＦＶＩＩＩとのその相互作用を改善するために、例えば、ＦＶＩＩＩに対する結合親和性を改善するために、さらに改変され得る。非限定的な例として、ＶＷＦタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸７６４に対応する残基でセリン残基を含み、配列番号２１のアミノ酸７７３に対応する残基でリシン残基を含む。残基７６４および／または７７３は、ＶＷＦタンパク質のＦＶＩＩＩに対する結合親和性に寄与し得る。他の実施形態では、本開示のために有用なＶＷＦタンパク質は、他の改変を有することができ、例えば、タンパク質は、ペグ化、グリコシル化、ＨＥＳ化（ｈｅｓｙｌａｔｅｄ）またはポリシアル化され得る。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のキメラポリペプチドは、ＶＷＦ断片、ＸＴＥＮ配列、ＦＶＩＩＩのａ２リンカー、およびＦｃ領域を含むＶＷＦタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順に、ＸＴＥＮ配列と融合し、ａ２リンカーと融合し、Ｆｃ領域と融合した、ＶＷＦ断片を含む。ある特定の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ’ドメイン、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ３ドメイン、配列番号５８（ＡＥ１４４＿５Ａ）のアミノ酸配列を含むＸＴＥＮ配列、配列番号８８のアミノ酸配列を含むａ２リンカー、および／または配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＦｃ領域を含む。
【０２１４】
詳細な一実施形態では、キメラポリペプチドは、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮであり、配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。
【０２１５】
一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦのＤ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、Ｄ’ドメインおよび／またはＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含む。一実施形態では、ＶＷＦ断片は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ１Ｄ２ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦシグナルペプチド配列をさらに含む。一実施形態では、ＶＷＦシグナルペプチドは、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む。詳細な一実施形態では、ＶＷＦタンパク質は、配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＷＦシグナルペプチド、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ１Ｄ２領域、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ’ドメイン、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＶＷＦのＤ３ドメイン、配列番号５８（ＡＥ１４４＿５Ａ）のアミノ酸配列を含むＸＴＥＮ配列、配列番号８８のアミノ酸配列を含むａ２リンカー、および／または配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＦｃ領域を含む。
【０２１６】
詳細な一実施形態では、キメラポリペプチドは、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮであり、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＶＷＦタンパク質を含む。別の詳細な実施形態では、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、配列番号２０６の核酸配列またはその断片によってコードされるＶＷＦタンパク質を含む。本明細書に開示のキメラポリペプチドのＶＷＦタンパク質に関する追加の例示的なポリペプチド配列を表１８〜１９に示す。
【０２１７】
ＩＩＩ．Ｃ．半減期延長部分
一部の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、１つまたは複数の半減期延長部分を含む。一部の実施形態では、キメラポリペプチドのＦＶＩＩＩポリペプチドは、１つまたは複数の半減期延長部分（すなわち、ＦＶＩＩＩタンパク質）に融合されているかまたは結び付いている。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、少なくとも２つの半減期延長部分、すなわちＦＶＩＩＩポリペプチドに融合された第１の半減期延長部分、およびＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインに融合された第２の半減期延長部分を含む。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端またはＮ末端に融合されている。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されている。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＢドメイン内に挿入されている。一部の実施形態では、第１の半減期延長部分は、配列番号６５のアミノ酸残基７４５に対応するアミノ酸のすぐ下流のＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されている。一部の実施形態では、第１の異種部分は、リンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドに融合されている。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、ＶＷＦ断片におけるＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインを、第２の半減期延長部分に融合するかまたは結び付かさせることができる。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、ＶＷＦ断片のＣ末端またはＮ末端に融合されている。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、ＶＷＦ断片内に挿入されている。一部の実施形態では、第２の半減期延長部分は、ＶＷＦ断片のＣ末端に融合されている。ある特定の実施形態では、第２の半減期延長部分は、リンカーによってＶＷＦ断片に融合されている。
【０２１９】
他の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチド、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含み、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインは、１つまたは複数の半減期延長部分に融合されており、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインおよびＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩおよびＶＷＦの間の天然に存在する結合より強い結合で結び付いている。
【０２２０】
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチド、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含み、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインは、リンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドに融合されている。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインはさらに、少なくとも１つの非共有結合によってＦＶＩＩＩポリペプチドに結び付いている。ある特定の実施形態では、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインは、Ｆｃにさらに融合されている。一部の実施形態では、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインは、リンカー（ｃｌｉｎｋｅｒ）によってＦｃに融合されている。一部の実施形態では、Ｆｃは、追加のリンカーによって第２のＦｃに融合されている。ある特定の実施形態では、Ｆｃおよび第２のＦｃは、互いに共有結合、例えばジスルフィド結合によって結び付いている。特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、国際出願公開ＷＯ２０１７／２２２３３７Ａ１号に開示されるように、ＦＶＩＩＩポリペプチド、ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含む。
【０２２１】
第１の半減期延長部分、第２の半減期延長部分、または両方は、ＦｃＲｎ結合パートナー、例えばアルブミンまたは免疫グロブリンＦｃ領域、ＸＴＥＮ配列、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリン、アルブミン結合部分、またはその任意の断片、誘導体、バリアント、およびその任意の組合せからなる群より選択することができる。
【０２２２】
ＩＩＩ．Ｃ．１．Ｉｇ定常領域またはその部分
一部の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドはまた、必要に応じたリンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドに融合された第１のＩｇ定常領域またはその部分も含む。第１のＩｇ定常領域またはその部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入することができ、またはＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端もしくはＮ末端に融合することができる。一部の実施形態では、キメラポリペプチドはさらに、ＶＷＦタンパク質に融合された第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む。第１のＩｇ定常領域またはその部分は、ＶＷＦ断片内に挿入することができ、またはＶＷＦ断片のＣ末端もしくはＮ末端に融合することができる。特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域は、共有結合、例えばジスルフィド結合によって第２のＩｇ定常領域に連結または結び付いている。
【０２２３】
Ｉｇ定常領域またはその部分は、追加の異種部分、例えばＸＴＥＮ配列およびＶＷＦタンパク質と組み合わせてキメラポリペプチドの薬物動態または薬力学特性を改善することができる。ある特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域またはその部分は、Ｉｇ定常領域またはその部分に融合された分子の半減期を延長させる。
【０２２４】
Ｉｇ定常領域は、ＣＨ（定常重鎖）ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２等）と表示されるドメインで構成される。アイソタイプ（すなわち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ）に応じて、定常領域は、３つまたは４つのＣＨドメインで構成され得る。一部のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ）定常領域はまた、ヒンジ領域も含有する。Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｎ．Ｙ．，  Ｎ．Ｙ．を参照されたい。
【０２２５】
本開示のキメラポリペプチドを産生するためのＩｇ定常領域またはその部分は、複数の異なる供給源から得ることができる。一部の実施形態では、Ｉｇ定常領域またはその部分は、ヒトＩｇに由来する。しかし、Ｉｇ定常領域またはその部分は、例えば齧歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）、または非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む別の哺乳動物種のＩｇに由来し得ると理解される。その上、Ｉｇ定常領域またはその部分は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意のＩｇクラス、ならびにＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意のＩｇアイソタイプに由来し得る。一部の実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ１を使用する。
【０２２６】
多様なＩｇ定常領域遺伝子配列（例えば、ヒト定常領域遺伝子配列）は、公共にアクセス可能な寄託物の形態で利用可能である。特定のエフェクター機能を有する（または特定のエフェクター機能を欠如する）、または免疫原性を低減させる特定の改変を有する定常領域ドメイン配列を選択することができる。抗体および抗体コード遺伝子の多くの配列が公表されており、適したＩｇ定常領域配列（例えば、ヒンジ、ＣＨ２、および／またはＣＨ３配列、またはその一部）を、当技術分野で認識された技術を使用してこれらの配列から誘導することができる。次に、前述の方法のいずれかを使用して得た遺伝子材料を変化させるかまたは合成して、本開示のポリペプチドを得ることができる。本開示の範囲は、定常領域ＤＮＡ配列の対立遺伝子、バリアント、および変異を包含するとさらに認識される。
【０２２７】
Ｉｇ定常領域またはその部分の配列は、例えばポリメラーゼ連鎖反応および目的のドメインを増幅するために選択されるプライマーを使用してクローニングすることができる。抗体からＩｇ定常領域の配列またはその部分をクローニングするために、ｍＲＮＡを、ハイブリドーマ、脾臓、またはリンパ細胞から単離することができ、ＤＮＡに逆転写して抗体遺伝子をＰＣＲによって増幅することができる。ＰＣＲ増幅方法は、米国特許第４，６８３，１９５号；第４，６８３，２０２号；第４，８００，１５９号；第４，９６５，１８８号、ならびに例えば、”ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”  Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （１９９０）；Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．  １９８９．  Ｇｅｎｅ  ７７：５１；Ｈｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９３．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２１７：２７０）に詳細に記載されている。ＰＣＲは、コンセンサス定常領域プライマーによって、または公表された重鎖および軽鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列に基づくより特異的なプライマーによって開始することができる。上記で考察したように、ＰＣＲを使用して、抗体軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡクローンを単離することもできる。この場合、ライブラリを、コンセンサスプライマーまたはより大きい相同なプローブ、例えばマウス定常領域プローブによってスクリーニングすることができる。抗体遺伝子の増幅にとって適した多数のプライマーセットが当技術分野で公知である（例えば、精製抗体のＮ末端配列に基づく５’プライマー（Ｂｅｎｈａｒ  ａｎｄ  Ｐａｓｔａｎ．  １９９４．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：１５０９）；ｃＤＮＡ末端の迅速な増幅（Ｒｕｂｅｒｔｉ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  １９９４．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７３：３３）；抗体リーダー配列（Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．  １９８９  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １６０：１２５０））。抗体配列のクローニングは、参照により本明細書に組み込まれている、１９９５年１月２５日に提出されたＮｅｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，６５８，５７０号にさらに記載されている。
【０２２８】
本明細書で使用されるＩｇ定常領域は、全てのドメインおよびヒンジ領域またはその部分を含み得る。一部の実施形態では、Ｉｇ定常領域またはその部分は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびヒンジ領域、すなわち、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含む。
【０２２９】
本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」は、すなわち、その２つの重鎖のそれぞれのＦｃドメインの二量体会合によって形成されるネイティブＩｇのＦｃ領域に対応するポリペプチドの部分として定義される。ネイティブＦｃ領域は、別のＦｃ領域と共にホモ二量体を形成する。これに対し、本明細書で使用される場合、用語「遺伝子融合Ｆｃ領域」、または「一本鎖Ｆｃ領域」（ｓｃＦｃ領域）は、単一のポリペプチド鎖内で遺伝的に連結されたＦｃドメインで構成される合成二量体Ｆｃ領域を指す（すなわち、単一の連続する遺伝子配列においてコードされる）。
【０２３０】
一部の実施形態では、「Ｆｃ領域」は、パパイン切断部位（すなわち、ＩｇＧの残基２１６、重鎖定常領域の最初の残基が１１４であるとした場合）のすぐ上流のヒンジ領域で始まり、抗体のＣ末端で終了する単一のＩｇ重鎖の部分を指す。したがって、完全なＦｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。
【０２３１】
Ｉｇ定常領域のＦｃ領域は、Ｉｇアイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン、ならびにヒンジ領域を含み得る。ＩｇのＦｃ領域を含むキメラポリペプチドは、安定性の増加、血清中半減期の増加（Ｃａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５を参照されたい）、ならびにＦｃ受容体、例えば新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合を含む幾つかの望ましい特性をキメラポリペプチドに与える（その全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第６，０８６，８７５号、第６，４８５，７２６号、第６，０３０，６１３号；ＷＯ０３／０７７８３４；ＵＳ２００３−０２３５５３６Ａ１）。
【０２３２】
Ｉｇ定常領域またはその部分は、ＦｃＲｎ結合パートナーであり得る。ＦｃＲｎは、成体の上皮組織において活性であり、腸の内腔、肺気道、鼻表面、膣表面、結腸および直腸表面において発現される（米国特許第６，４８５，７２６号）。ＦｃＲｎ結合パートナーは、ＦｃＲｎに結合するＩｇの部分である。ＦｃＲｎ結合パートナーの別の例は、以下にさらに記載するアルブミンである。
【０２３３】
ＦｃＲｎ受容体は、ヒトを含む幾つかの哺乳動物種から単離されている。ヒトＦｃＲｎ、サルＦｃＲｎ、ラットＦｃＲｎ、およびマウスＦｃＲｎの配列は公知である（Ｓｔｏｒｙ  ｅｔ  ａｌ，  １９９４，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８０：２３７７）。ＦｃＲｎ受容体は、比較的低いｐＨでＩｇＧに結合し（しかし、他のＩｇクラス、例えばＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥには結合しない）、内腔から漿膜方向に細胞を超えてＩｇＧを能動的に輸送し、その後間質液において見出される比較的高いｐＨでＩｇＧを放出する。これは、肺および腸上皮（Ｉｓｒａｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  １９９７，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９２：６９）、腎近位尿細管上皮（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８２：Ｆ３５８）、ならびに鼻上皮、膣表面、および胆管表面を含む、成体の上皮組織（米国特許第６，４８５，７２６号、第６，０３０，６１３号、第６，０８６，８７５号；ＷＯ０３／０７７８３４；ＵＳ２００３−０２３５５３６Ａ１）において発現される。
【０２３４】
本開示において有用なＦｃＲｎ結合パートナーは、ＩｇＧ全体、ＩｇＧのＦｃ断片、およびＦｃＲｎ受容体の完全な結合領域を含む他の断片を含む、ＦｃＲｎ受容体が特異的に結合することができる分子を包含する。ＦｃＲｎ受容体に結合するＩｇＧのＦｃ部分の領域は、Ｘ線結晶学に基づいて記載されている（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９９４，  Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３７９）。ＦｃとＦｃＲｎとの主要な接触領域は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの接合部近傍である。Ｆｃ−ＦｃＲｎ接触は、全て、単一のＩｇ重鎖内である。ＦｃＲｎ結合パートナーは、ＩｇＧ全体、ＩｇＧのＦｃ断片、およびＦｃＲｎの完全な結合領域を含むＩｇＧの他の断片を含む。主要な接触部位は、ＣＨ２ドメインのアミノ酸残基２４８、２５０〜２５７、２７２、２８５、２８８、２９０〜２９１、３０８〜３１１、および３１４、ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５〜３８７、４２８、および４３３〜４３６を含む。ＩｇまたはＩｇ断片または領域のアミノ酸ナンバリングに対して言及する場合は全て、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９９１，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄに基づいている。
【０２３５】
ＦｃＲｎに結合したＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーは、ＦｃＲｎによる上皮障壁を越えて有効に行き来することができ、このように、所望の治療分子を全身に投与する非侵襲性の手段を提供する。加えて、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含む融合タンパク質は、ＦｃＲｎを発現する細胞によるエンドサイトーシスを受ける。しかしこれらの融合タンパク質は、分解の標的となるのではなく、循環中に再度リサイクルされ、このようにこれらのタンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を増加させる。ある特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域の部分は、典型的にジスルフィド結合および他の非特異的相互作用を介して、別のＦｃ領域または別のＦｃＲｎ結合パートナーと会合して、二量体および高次多量体を形成するＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーである。
【０２３６】
２つのＦｃＲｎ受容体が単一のＦｃ分子に結合することができる。結晶学データは、各々のＦｃＲｎ分子がＦｃホモ二量体の単一のポリペプチドに結合することを示唆している。一部の実施形態では、ＦｃＲｎ結合パートナー、例えばＩｇＧのＦｃ断片を、生物活性分子に連結すると、生物活性分子を、経口、口腔内、舌下、直腸、膣に、鼻腔内に投与されるエアロゾルとして、または肺経路を介して、または眼の経路を介して送達する手段を提供する。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、侵襲性に、例えば皮下、静脈内に投与することができる。
【０２３７】
ＦｃＲｎ結合パートナー領域は、ＦｃＲｎ受容体が特異的に結合することができ、その後Ｆｃ領域のＦｃＲｎ受容体により能動輸送される分子またはその部分である。特異的に結合することは、２つの分子が、生理的条件下で比較的安定な複合体を形成することを指す。特異的結合は、高い親和性および低度から中等度の結合能（ｃａｐａｃｉｔｙ）によって特徴付けられ、通常、親和性が低く中等度から高度の結合能を有する非特異的結合とは区別される。典型的には、結合は、親和性定数ＫＡが１０６Ｍ−１より高い、または１０８Ｍ−１より高い場合に特異的であると考えられる。必要であれば、結合条件を変化させることによって、特異的結合に実質的に影響を及ぼすことなく非特異的結合を低減させることができる。当業者は、適切な結合条件、例えば分子の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合を可能にする時間、ブロッキング剤（例えば、血清アルブミン、乳カゼイン）の濃度等を、通常の技術を使用して最適化することができる。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、Ｆｃ領域にＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合特性を与えるためにそれでもなお十分である１つまたは複数の切断型Ｆｃ領域を含む。例えば、ＦｃＲｎに結合するＦｃ領域の部分（すなわち、ＦｃＲｎ結合部分）は、ＩｇＧ１のＥＵナンバリングによるアミノ酸約２８２〜４３８を含み、一次接触部位は、ＣＨ２ドメインのアミノ酸２４８、２５０〜２５７、２７２、２８５、２８８、２９０〜２９１、３０８〜３１１、および３１４、ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５〜３８７、４２８、および４３３〜４３６である。このように、本開示のＦｃ領域は、ＦｃＲｎ結合部分を含み得るか、またはそれからなり得る。ＦｃＲｎ結合部分は、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプの重鎖に由来し得る。一部の実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ１の抗体からのＦｃＲｎ結合部分を使用する。他の実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ４の抗体からのＦｃＲｎ結合部分を使用する。
【０２３９】
他の実施形態では、「Ｆｃ領域」は、Ｆｃドメインのアミノ酸配列またはＦｃドメインに由来するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、以下の少なくとも１つ：ヒンジ（例えば、上部、中部、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン（ＥＵナンバリングに従う抗体Ｆｃ領域のアミノ酸約２１６〜２３０）、ＣＨ２ドメイン（ＥＵナンバリングに従う抗体Ｆｃ領域のアミノ酸約２３１〜３４０）、ＣＨ３ドメイン（ＥＵナンバリングに従う抗体Ｆｃ領域のアミノ酸約３４１〜４３８）、ＣＨ４ドメイン、またはそのバリアント、部分、もしくは断片を含む。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、完全なＦｃドメイン（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン）を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＨ３ドメイン（またはその部分）に融合されたヒンジドメイン（またはその部分）、ＣＨ２ドメイン（またはその部分）に融合されたヒンジドメイン（またはその部分）、ＣＨ３ドメイン（またはその部分）に融合されたＣＨ２ドメイン（またはその部分）、ヒンジドメイン（またはその部分）およびＣＨ３ドメイン（またはその部分）の両方に融合されたＣＨ２ドメイン（またはその部分）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＨ２ドメインの少なくとも部分（例えば、ＣＨ２ドメインの全てまたは一部）を欠如する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号２２１〜４４７に対応するアミノ酸を含むか、またはそれからなる。
【０２４０】
本明細書においてＦ、Ｆ１、またはＦ２として表示されるＦｃ領域は、多数の異なる供給源から得ることができる。一部の実施形態では、ポリペプチドのＦｃ領域は、ヒトＩｇに由来する。しかし、Ｆｃ領域は、例えば齧歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはモルモット）、または非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む別の哺乳動物種のＩｇに由来し得ると理解される。その上、Ｆｃドメインのポリペプチドまたはその部分は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意のＩｇクラス、ならびにＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意のＩｇアイソタイプに由来し得る。他の実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ１を使用する。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、Ｆｃバリアントは、前記野生型Ｆｃドメインを含むＦｃ領域によって付与される少なくとも１つのエフェクター機能の変化（例えば、Ｆｃ領域がＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、またはＦｃγＲＩＩＩ）もしくは補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）に結合する能力、または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、もしくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣＣ）の誘発能の改善または低減）を与える。他の実施形態では、Ｆｃバリアントは、操作されたシステイン残基を提供する。
【０２４２】
本開示のＦｃ領域は、エフェクター機能および／またはＦｃＲもしくはＦｃＲｎ結合の変化（例えば、増強または低減）を付与することが公知である当技術分野で認識されたＦｃバリアントを使用することができる。具体的には、本開示の結合分子は、例えば、その各々が参照により本明細書に組み込まれている、国際ＰＣＴ公開ＷＯ８８／０７０８９Ａ１、ＷＯ９６／１４３３９Ａ１、ＷＯ９８／０５７８７Ａ１、ＷＯ９８／２３２８９Ａ１、ＷＯ９９／５１６４２Ａ１、ＷＯ９９／５８５７２Ａ１、ＷＯ００／０９５６０Ａ２、ＷＯ００／３２７６７Ａ１、ＷＯ００／４２０７２Ａ２、ＷＯ０２／４４２１５Ａ２、ＷＯ０２／０６０９１９Ａ２、ＷＯ０３／０７４５６９Ａ２、ＷＯ０４／０１６７５０Ａ２、ＷＯ０４／０２９２０７Ａ２、ＷＯ０４／０３５７５２Ａ２、ＷＯ０４／０６３３５１Ａ２、ＷＯ０４／０７４４５５Ａ２、ＷＯ０４／０９９２４９Ａ２、ＷＯ０５／０４０２１７Ａ２、ＷＯ０４／０４４８５９、ＷＯ０５／０７０９６３Ａ１、ＷＯ０５／０７７９８１Ａ２、ＷＯ０５／０９２９２５Ａ２、ＷＯ０５／１２３７８０Ａ２、ＷＯ０６／０１９４４７Ａ１、ＷＯ０６／０４７３５０Ａ２、およびＷＯ０６／０８５９６７Ａ２；米国特許公開第ＵＳ２００７／０２３１３２９号、第ＵＳ２００７／０２３１３２９号、第ＵＳ２００７／０２３７７６５号、第ＵＳ２００７／０２３７７６６号、第ＵＳ２００７／０２３７７６７号、第ＵＳ２００７／０２４３１８８号、第ＵＳ２００７０２４８６０３号、第ＵＳ２００７０２８６８５９号、第ＵＳ２００８００５７０５６号；または米国特許第５，６４８，２６０号；第５，７３９，２７７号；第５，８３４，２５０号；第５，８６９，０４６号；第６，０９６，８７１号；第６，１２１，０２２号；第６，１９４，５５１号；第６，２４２，１９５号；第６，２７７，３７５号；第６，５２８，６２４号；第６，５３８，１２４号；第６，７３７，０５６号；第６，８２１，５０５号；第６，９９８，２５３号；第７，０８３，７８４号；第７，４０４，９５６号、および第７，３１７，０９１号に開示されるアミノ酸位置の１つまたは複数で変化（例えば、置換）を含み得る。一部の実施形態では、特異的変化（例えば、当技術分野で開示される１つまたは複数のアミノ酸の特異的置換）を、本開示のアミノ酸位置の１つまたは複数で作製することができる。他の実施形態では、本開示のアミノ酸位置の１つまたは複数で異なる変化（例えば、当技術分野で開示される１つまたは複数のアミノ酸位置の異なる置換）を作製することができる。
【０２４３】
ＩｇＧのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを、部位特異的変異誘発などの十分に認識された手順に従って改変し、ＦｃＲｎが結合する改変ＩｇＧまたはそのＦｃ断片もしくは部分を生じることができる。そのような改変は、ＦｃＲｎ接触部位から離れた改変、ならびにＦｃＲｎに対する結合を保存またはさらに増強する接触部位内の改変を含む。例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ（Ｆｃγ１）における以下の単一のアミノ酸残基：Ｐ２３８Ａ、Ｓ２３９Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｋ２４８Ａ、Ｄ２４９Ａ、Ｍ２５２Ａ、Ｔ２５６Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｔ２６０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｅ２６９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｅ２７２Ａ、Ｌ２７４Ａ、Ｎ２７６Ａ、Ｙ２７８Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｖ２８２Ａ、Ｅ２８３Ａ、Ｈ２８５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｔ２８９Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ａ、Ｅ２９３Ａ、Ｅ２９４Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｙ２９６Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｆ、Ｒ３０１Ａ、Ｖ３０３Ａ、Ｖ３０５Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｌ３０９Ａ、Ｑ３１１Ａ、Ｄ３１２Ａ、Ｎ３１５Ａ、Ｋ３１７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｓ３２４Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｑ、Ｐ３３１Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｔ３３５Ａ、Ｓ３３７Ａ、Ｋ３３８Ａ、Ｋ３４０Ａ、Ｑ３４２Ａ、Ｒ３４４Ａ、Ｅ３４５Ａ、Ｑ３４７Ａ、Ｒ３５５Ａ、Ｅ３５６Ａ、Ｍ３５８Ａ、Ｔ３５９Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｎ３６１Ａ、Ｑ３６２Ａ、Ｙ３７３Ａ、Ｓ３７５Ａ、Ｄ３７６Ａ、Ａ３７８Ｑ、Ｅ３８０Ａ、Ｅ３８２Ａ、Ｓ３８３Ａ、Ｎ３８４Ａ、Ｑ３８６Ａ、Ｅ３８８Ａ、Ｎ３８９Ａ、Ｎ３９０Ａ、Ｙ３９１Ｆ、Ｋ３９２Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｓ４００Ａ、Ｄ４０１Ａ、Ｄ４１３Ａ、Ｋ４１４Ａ、Ｒ４１６Ａ、Ｑ４１８Ａ、Ｑ４１９Ａ、Ｎ４２１Ａ、Ｖ４２２Ａ、Ｓ４２４Ａ、Ｅ４３０Ａ、Ｎ４３４Ａ、Ｔ４３７Ａ、Ｑ４３８Ａ、Ｋ４３９Ａ、Ｓ４４０Ａ、Ｓ４４４Ａ、およびＫ４４７Ａを、ＦｃＲｎに対するＦｃの結合親和性を有意に喪失することなく置換することができ、例えばＰ２３８Ａは、位置番号２３８でアラニンによって置換された野生型プロリンを表す。一例として、一部の実施形態は、Ｎ２９７Ａ変異を組み入れ、高度に保存されたＮグリコシル化部位を除去する。アラニンに加えて、他のアミノ酸を上記で指定した位置で野生型アミノ酸の代わりに使用することができる。単一の変異をＦｃに導入して、ネイティブＦｃとは異なる１００個より多くのＦｃ領域を生じることができる。加えて、これらの個々の変異の２つ、３つ、またはそれより多くの組合せを共に導入して、何百個ものより多くのＦｃ領域を生じることができる。その上、本開示の構築物のＦｃ領域の１つが変異されており、構築物の他のＦｃ領域が全く変異されていなくてもよく、またはそれら両方が、ただし異なる変異によって、変異されていてもよい。
【０２４４】
上記の変異のある特定のものは、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーに新規機能性を与えることができる。例えば、一部の実施形態は、Ｎ２９７Ａを組み入れ、高度に保存されたＮグリコシル化部位を除去する。この変異の効果は、免疫原性を低減させて、それによってＦｃ領域の循環中の半減期を増強させること、およびＦｃＲｎに対する親和性を損なうことなく、Ｆｃ領域が、ＦｃガンマＲＩ、ＦｃガンマＲＩＩＡ、ＦｃガンマＲＩＩＢ、およびＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合できなくすることである（Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．  １９９５，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０：８４７；Ｆｒｉｅｎｄ  ｅｔ  ａｌ．  １９９９，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６８：１６３２；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９９５，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：６５９１）。上記の変異から生じた新規機能性のさらなる例として、ＦｃＲｎの親和性を、一部の例では野生型の親和性を超えて増加させることができる。この親和性の増加は、「オン」レートの増加、「オフ」レートの減少、または「オン」レートの増加および「オフ」レートの減少の両方を反映し得る。ＦｃＲｎに対する親和性の増加を付与すると考えられる変異の例には、Ｔ２５６Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａが挙げられるがこれらに限定されない（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：６５９１）。
【０２４５】
加えて、少なくとも３つのヒトＦｃガンマ受容体は、より下部のヒンジ領域、一般的にアミノ酸２３４〜２３７内のＩｇＧ上の結合部位を認識するように思われる。したがって、新規機能性および可能性がある免疫原性減少の別の例は、例えばヒトＩｇＧ１「ＥＬＬＧ」のアミノ酸２３３〜２３６をＩｇＧ２「ＰＶＡ」からの対応する配列に交換することによって（１アミノ酸欠失で）この領域の変異から生じることができる。そのような変異が導入されている場合、様々なエフェクター機能を媒介するＦｃγ  ＲＩ、Ｆｃγ  ＲＩＩ、およびＦｃγ  ＲＩＩＩはＩｇＧ１に結合しないことが示されている。Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ  １９９５，  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２：７７、およびＡｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９９９，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：２６１３。
【０２４６】
一部の実施形態では、Ｉｇ定常領域またはその部分、例えばＦｃ領域は、配列ＰＫＮＳＳＭＩＳＮＴＰ（米国特許第５，７３９，２７７号の配列番号８９または配列番号３）を含み、必要に応じてＨＱＳＬＧＴＱ（配列番号９０）、ＨＱＮＬＳＤＧＫ（配列番号９１）、ＨＱＮＩＳＤＧＫ（配列番号９２）、またはＶＩＳＳＨＬＧＱ（配列番号９３）（または米国特許第５，７３９，２７７号のそれぞれ、配列番号１１、１、２、および３１）から選択される配列をさらに含むポリペプチドである。
【０２４７】
他の実施形態では、免疫グロブリン定常領域またはその部分は、別の免疫グロブリン定常領域またはその部分と１つまたは複数のジスルフィド結合を形成するアミノ酸配列をヒンジ領域またはその部分に含む。免疫グロブリン定常領域またはその部分によるジスルフィド結合により、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む第１のポリペプチドおよびＶＷＦ断片を含む第２のポリペプチドは共に、それによって内因性のＶＷＦがＶＷＦ断片を交換せず、ＦＶＩＩＩポリペプチドに結合しないように配置される。したがって、第１の免疫グロブリン定常領域またはその部分と第２の免疫グロブリン定常領域またはその部分との間のジスルフィド結合は、内因性のＶＷＦおよびＦＶＩＩＩポリペプチドの間の相互作用を防止する。ＶＷＦとＦＶＩＩＩポリペプチドとの間の相互作用のこの阻害により、キメラポリペプチドの半減期は２倍の限界を超えることが可能となる。ヒンジ領域またはその部分は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、その断片の１つまたは複数のドメイン、およびその任意の組合せにさらに連結することができる。特定の実施形態では、免疫グロブリン定常領域またはその部分は、ヒンジ領域およびＣＨ２である。
【０２４８】
ある特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域またはその部分は、ヘミグリコシル化されている。例えば、２つのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含むキメラポリペプチドは、第１のグリコシル化Ｆｃ領域（例えば、グリコシル化ＣＨ２領域）またはＦｃＲｎ結合パートナー、および第２の非グリコシル化Ｆｃ領域（例えば、非グリコシル化ＣＨ２領域）またはＦｃＲｎ結合パートナーを含有し得る。一部の実施形態では、リンカーは、グリコシル化および非グリコシル化Ｆｃ領域の間に介在することができる。他の実施形態では、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーは、完全にグリコシル化され、すなわちＦｃ領域の全てがグリコシル化される。他の実施形態では、Ｆｃ領域はグリコシルされていない可能性があり、すなわちＦｃ部分のいずれもグリコシル化されない。
【０２４９】
ある特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、Ｉｇ定常領域の抗原非依存性エフェクター機能、特にタンパク質の循環中の半減期を変化させるＩｇ定常領域またはその部分（例えば、Ｆｃバリアント）に対するアミノ酸置換を含む。
【０２５０】
そのようなタンパク質は、これらの置換を欠如するタンパク質と比較した場合に、ＦｃＲｎに対する結合の増加または減少のいずれかを示し、したがってそれぞれ、血清中の半減期の増加または減少を有する。ＦｃＲｎに対して改善された親和性を有するＦｃバリアントは、より長い血清中半減期を有すると予想され、そのような分子は、投与したポリペプチドの長い半減期が望ましい哺乳動物を処置する方法において、例えば慢性疾患または障害を処置するために有用な適用を有する（米国特許７，３４８，００４、７，４０４，９５６、および７，８６２，８２０を参照されたい）。これに対し、減少したＦｃＲｎ結合親和性を有するＦｃバリアントは、より短い半減期を有すると予想され、そのような分子はまた、例えば循環時間の短縮が有利であり得る場合、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ診断イメージングのために、または出発ポリペプチドが長期間循環中に存在する場合に毒性の副作用を有する状況において、哺乳動物に投与するために有用である。減少したＦｃＲｎ結合親和性を有するＦｃバリアントはまた、胎盤を通過する可能性がより低く、このため、妊娠女性における疾患または障害の処置において有用である。加えて、低減されたＦｃＲｎ結合親和性が望ましくなり得る他の適用は、脳、腎臓、および／または肝臓での局在が望ましい適用を含む。１つの例示的な実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、血管系から腎糸球体の上皮を越える輸送の低減を示す。他の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、脳から血液脳関門（ＢＢＢ）を越える血管腔への輸送の低減を示す。一部の実施形態では、変化したＦｃＲｎ結合を有するタンパク質は、Ｉｇ定常領域の「ＦｃＲｎ結合ループ」内に１つまたは複数のアミノ酸置換を有する少なくとも１つのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナー（例えば、１つまたは２つのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナー）を含む。ＦｃＲｎ結合ループは、野生型、完全長のＦｃ領域のアミノ酸残基２８０〜２９９（ＥＵナンバリングに従う）で構成される。他の実施形態では、変化したＦｃＲｎ結合親和性を有する本開示のキメラポリペプチドにおけるＩｇ定常領域またはその部分は、１５ÅＦｃＲｎ「接触域」内で１つまたは複数のアミノ酸置換を有する少なくとも１つのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含む。本明細書で使用される場合、用語１５ÅＦｃＲｎの「接触域」は、野生型の完全長のＦｃ部分の以下の位置：２４３〜２６１、２７５〜２８０、２８２〜２９３、３０２〜３１９、３３６〜３４８、３６７、３６９、３７２〜３８９、３９１、３９３、４０８、４２４、４２５〜４４０（ＥＵナンバリング）の残基を含む。他の実施形態では、変化したＦｃＲｎ結合親和性を有する本開示のＩｇ定常領域またはその部分は、以下のＥＵ位置：２５６、２７７〜２８１、２８３〜２８８、３０３〜３０９、３１３、３３８、３４２、３７６、３８１、３８４、３８５、３８７、４３４（例えば、Ｎ４３４ＡまたはＮ４３４Ｋ）、および４３８のいずれか１つに対応するアミノ酸位置で１つまたは複数のアミノ酸置換を有する少なくとも１つのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含む。ＦｃＲｎ結合活性が変化した例示的なアミノ酸置換は、参���により本明細書に組み込まれている国際ＰＣＴ公開ＷＯ０５／０４７３２７号に開示されている。
【０２５１】
本開示で使用されるＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーはまた、キメラポリペプチドのグリコシル化を変化させる当技術分野で認識されたアミノ酸置換を含み得る。例えば、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインまたはＦＶＩＩＩポリペプチドに連結されたキメラポリペプチドのＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーは、グリコシル化（例えば、ＮまたはＯ連結グリコシル化）の低減に至る変異を有するＦｃ領域を含み得るか、または野生型Ｆｃ部分の変化したグリコフォーム（例えば、低フコースまたはフコースを含まないグリカン）を含み得る。
【０２５２】
一部の実施形態では、本開示のプロセシングされていないキメラポリペプチドは、本明細書に記載されるＩｇ定常領域またはその部分から独立して選択されるその構成成分であるＩｇ定常領域またはその部分の２つまたはそれより多くを有する遺伝子融合されたＦｃ領域（すなわち、ｓｃＦｃ領域）を含み得る。一部の実施形態では、二量体Ｆｃ領域のＦｃ領域は同じである。他の実施形態では、Ｆｃ領域の少なくとも２つは異なる。例えば、本開示のタンパク質のＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーは、同数のアミノ酸残基を含むか、またはそれらは、長さが１つもしくは複数のアミノ酸残基（例えば、約５アミノ酸残基（例えば、１、２、３、４、または５アミノ酸残基）、約１０残基、約１５残基、約２０残基、約３０残基、約４０残基、または約５０残基）異なり得る。なお他の実施形態では、本開示のタンパク質のＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーは、配列における１つまたは複数のアミノ酸位置が異なり得る。例えば、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーの少なくとも２つは、約５個のアミノ酸位置（例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸位置）、約１０個の位置、約１５個の位置、約２０個の位置、約３０個の位置、約４０個の位置、または約５０個の位置）が異なり得る。
【０２５３】
ＩＩＩ．Ｃ．２．ＸＴＥＮ配列
本明細書で使用される場合、「ＸＴＥＮ配列」は、主に小さい親水性アミノ酸で構成され、生理的条件下で配列が、低い程度の二次もしくは三次構造を有するか、または二次もしくは三次構造を有しない、天然に存在しない実質的に非反復性の配列を有する伸長した長さのポリペプチドを指す。キメラポリペプチドのパートナーとして、ＸＴＥＮは、担体としての役割を果たすことができ、本開示のＶＷＦタンパク質またはＦＶＩＩＩ配列に連結してキメラポリペプチドを作製する場合に、ある特定の望ましい薬物動態、物理化学、および薬学的特性を与える。そのような望ましい特性は、増強された薬物動態パラメーターおよび溶解度特徴を含むがこれらに限定されない。本明細書で使用される場合、「ＸＴＥＮ」は、具体的には、抗体または抗体断片、例えば一本鎖抗体または軽鎖もしくは重鎖のＦｃ断片を除外する。
【０２５４】
一部の実施形態では、より短いＸＴＥＮ配列は、ＸＴＥＮ配列をＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合された場合に、より長いＸＴＥＮ配列と比較して改善された半減期延長特性を提供する。したがって、一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合されたＸＴＥＮ配列は、長さ２８８アミノ酸未満を含有し、すなわち２８８アミノ酸より短い。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合されたＸＴＥＮ配列は、１２アミノ酸から２８７アミノ酸の間の長さを有するアミノ酸配列からなる。他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域またはその部分に融合されたＸＴＥＮ配列は、少なくとも約３６アミノ酸、少なくとも約４２アミノ酸、少なくとも約７２アミノ酸、または少なくとも約１４４アミノ酸、しかし２８８アミノ酸未満を含む。他の実施形態では、ＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合されたＸＴＥＮ配列は、ＡＥ３６、ＡＧ３６、ＡＥ４２、ＡＧ４２、ＡＥ７２、ＡＧ７２、ＡＥ１４４、またはＡＧ１４４から選択される。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合されたＸＴＥＮ配列は、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列であり、キメラポリペプチドは、ＸＴＥＮ配列を有しないキメラポリペプチドと比較して改善された半減期を示す。
【０２５５】
本開示のキメラポリペプチドはさらに、追加の（第２、第３、またはそれより多くの）ＸＴＥＮ配列を含み得る。追加のＸＴＥＮ配列をさらに、ＦＶＩＩＩポリペプチドまたは第１のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合することができる。追加のＸＴＥＮ配列は、任意の長さであり得る。例えば、ＦＶＩＩＩポリペプチドまたは第１のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合された追加のＸＴＥＮ配列は、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１２００、１４００、１６００、１８００、または２０００アミノ酸残基より多くを有するペプチドまたはポリペプチドである。ある特定の実施形態では、追加のＸＴＥＮ配列は、約２０アミノ酸残基より多く約３０００アミノ酸残基まで、約３０残基より多く約２５００残基まで、約４０残基より多く約２０００残基まで、約５０残基より多く約１５００残基まで、約６０残基より多く約１０００残基まで、約７０残基より多く約９００残基まで、約８０残基より多く約８００残基まで、約９０残基より多く約７００残基まで、約１００残基より多く約６００残基まで、約１１０残基より多く約５００残基まで、または約１２０残基より多く約４００残基までを有するペプチドまたはポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドに融合された追加のＸＴＥＮは、少なくとも約２８８アミノ酸を含む。特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドに融合された追加のＸＴＥＮは、約２８８アミノ酸を含む。特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩポリペプチドに融合された追加のＸＴＥＮは、ＡＥ２８８のアミノ酸配列（配列番号８）と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２５６】
ＸＴＥＮ配列（すなわち、ＶＷＦタンパク質および／または第２のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合されたＸＴＥＮ配列、あるいはＦＶＩＩＩポリペプチドおよび／または第１のＩｇ定常領域もしくはその部分に融合された、あるいはＦＶＩＩＩポリペプチド内の１つまたは複数の挿入部位に挿入されたＸＴＥＮ配列）は、９〜１４アミノ酸残基の１つもしくは複数の配列モチーフ、または配列モチーフと少なくとも８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み得、モチーフは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）からなる群より選択される４〜６タイプのアミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる。ＵＳ２０１０−０２３９５５４Ａ１を参照されたい。
【０２５７】
一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、配列の少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または約１００％が、表７から選択される単一モチーフファミリーから選択される重複しない配列の複数の単位からなり、それによってファミリー配列をもたらす、重複しない配列モチーフを含む。本明細書で使用される場合、「ファミリー」は、ＸＴＥＮが、表７の単一モチーフカテゴリー；すなわち、ＡＤ、ＡＥ、ＡＦ、ＡＧ、ＡＭ、ＡＱ、ＢＣ、またはＢＤ  ＸＴＥＮのみから選択されるモチーフを有すること、およびファミリーモチーフからではないＸＴＥＮにおける他の任意のアミノ酸が、必要な特性を達成するように、例えばコードするヌクレオチドによる制限部位の取り込み、切断配列の取り込みを可能にする、またはＦＶＩＩＩもしくはＶＷＦに対するより良好な連結を達成するように選択されることを意味する。ＸＴＥＮファミリーの一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＡＤモチーフファミリー、またはＡＥモチーフファミリー、またはＡＦモチーフファミリー、またはＡＧモチーフファミリー、またはＡＭモチーフファミリー、またはＡＱモチーフファミリー、またはＢＣファミリー、またはＢＤファミリーの重複しない配列モチーフの複数の単位を含み、得られたＸＴＥＮは、上記の相同性の範囲を示す。他の実施形態では、ＸＴＥＮは、表７のモチーフファミリーの２つまたはそれより多くからのモチーフ配列の複数の単位を含む。これらの配列は、以下により詳細に記載する、正味電荷、親水性、二次構造の欠如、またはモチーフのアミノ酸組成によって与えられる反復性の欠如などの特性を含む所望の物理／化学特徴を達成するように選択することができる。本段落の上記で記載した実施形態では、ＸＴＥＮに組み込まれるモチーフを、本明細書に記載の方法を使用して選択およびアセンブルして、約３６〜約３０００アミノ酸残基のＸＴＥＮを達成することができる。
【表７】
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【０２５８】
一部の実施形態では、本開示で使用されるＸＴＥＮ配列は、ＡＥ４２、ＡＧ４２、ＡＥ４８、ＡＭ４８、ＡＥ７２、ＡＧ７２、ＡＥ１０８、ＡＧ１０８、ＡＥ１４４、ＡＦ１４４、ＡＧ１４４、ＡＥ１８０、ＡＧ１８０、ＡＥ２１６、ＡＧ２１６、ＡＥ２５２、ＡＧ２５２、ＡＥ２８８、ＡＧ２８８、ＡＥ３２４、ＡＧ３２４、ＡＥ３６０、ＡＧ３６０、ＡＥ３９６、ＡＧ３９６、ＡＥ４３２、ＡＧ４３２、ＡＥ４６８、ＡＧ４６８、ＡＥ５０４、ＡＧ５０４、ＡＦ５０４、ＡＥ５４０、ＡＧ５４０、ＡＦ５４０、ＡＤ５７６、ＡＥ５７６、ＡＦ５７６、ＡＧ５７６、ＡＥ６１２、ＡＧ６１２、ＡＥ６２４、ＡＥ６４８、ＡＧ６４８、ＡＧ６８４、ＡＥ７２０、ＡＧ７２０、ＡＥ７５６、ＡＧ７５６、ＡＥ７９２、ＡＧ７９２、ＡＥ８２８、ＡＧ８２８、ＡＤ８３６、ＡＥ８６４、ＡＦ８６４、ＡＧ８６４、ＡＭ８７５、ＡＥ９１２、ＡＭ９２３、ＡＭ１３１８、ＢＣ８６４、ＢＤ８６４、ＡＥ９４８、ＡＥ１０４４、ＡＥ１１４０、ＡＥ１２３６、ＡＥ１３３２、ＡＥ１４２８、ＡＥ１５２４、ＡＥ１６２０、ＡＥ１７１６、ＡＥ１８１２、ＡＥ１９０８、ＡＥ２００４Ａ、ＡＧ９４８、ＡＧ１０４４、ＡＧ１１４０、ＡＧ１２３６、ＡＧ１３３２、ＡＧ１４２８、ＡＧ１５２４、ＡＧ１６２０、ＡＧ１７１６、ＡＧ１８１２、ＡＧ１９０８、およびＡＧ２００４からなる群より選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。ＵＳ２０１０−０２３９５５４Ａ１を参照されたい。
【０２５９】
一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＡＥ４２（配列番号９）、ＡＥ７２（配列番号１０）、ＡＥ１４４＿２Ａ（配列番号５５）、ＡＥ１４４＿３Ｂ（配列番号５６）、ＡＥ１４４＿４Ａ（配列番号５７）、ＡＥ１４４＿５Ａ（配列番号５８）、ＡＥ１４４＿６Ｂ（配列番号５９）、ＡＧ１４４＿Ａ（配列番号６０）、ＡＧ１４４＿Ｂ（配列番号６１）、ＡＧ１４４＿Ｃ（配列番号６２）、ＡＧ１４４＿Ｆ（配列番号６３）、ＡＥ８６４（配列番号１５）、ＡＥ５７６（配列番号１６）、ＡＥ２８８（配列番号８）、ＡＥ２８８＿２（配列番号５４）、ＡＥ１４４（配列番号１１）、ＡＧ８６４（配列番号１７）、ＡＧ５７６（配列番号１８）、ＡＧ２８８（配列番号１９）、ＡＧ１４４（配列番号１４）およびその任意の組合せからなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＡＥ４２（配列番号９）、ＡＥ７２（配列番号１０）、ＡＥ１４４＿２Ａ（配列番号５５）、ＡＥ１４４＿３Ｂ（配列番号５６）、ＡＥ１４４＿４Ａ（配列番号５７）、ＡＥ１４４＿５Ａ（配列番号５８）、ＡＥ１４４＿６Ｂ（配列番号５９）、ＡＧ１４４＿Ａ（配列番号６０）、ＡＧ１４４＿Ｂ（配列番号６１）、ＡＧ１４４＿Ｃ（配列番号６２）、ＡＧ１４４＿Ｆ（配列番号６３）、ＡＥ８６４（配列番号１５）、ＡＥ５７６（配列番号１６）、ＡＥ２８８（配列番号８）、ＡＥ２８８＿２（配列番号５４）、ＡＥ１４４（配列番号１１）、ＡＧ８６４（配列番号１７）、ＡＧ５７６（配列番号１８）、ＡＧ２８８（配列番号１９）、ＡＧ１４４（配列番号１４）およびその任意の組合せからなる群より選択される。一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＡＥ２８８である。本開示のある特定のＸＴＥＮ配列のアミノ酸配列を表８に示す。
【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表８−４】
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【０２６０】
ＸＴＥＮ構成要素が、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、およびプロリン（Ｐ）から選択されるアミノ酸の４、５、または６タイプからなるそのアミノ酸の１００％未満、または表７の配列モチーフもしくは表８のＸＴＥＮ配列からなる配列の１００％未満を有する実施形態では、ＸＴＥＮの他のアミノ酸残基は、他の１４個の天然のＬ−アミノ酸のいずれかから選択されるが、優先的にはＸＴＥＮ配列が少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％の親水性アミノ酸を含有するように、親水性アミノ酸から選択される。グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、およびプロリン（Ｐ）ではないＸＴＥＮアミノ酸は、ＸＴＥＮ配列全体に散在しているか、または配列モチーフ内もしくはモチーフ間に位置するか、またはＸＴＥＮ配列の１つもしくは複数の短いストレッチに濃縮され、例えばＸＴＥＮとＦＶＩＩＩもしくはＶＷＦ構成要素の間でリンカーを作製する。ＸＴＥＮ構成要素が、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、およびプロリン（Ｐ）以外のアミノ酸を含むそのような場合では、得られた配列が一般的に二次構造を欠如するように、例えば本明細書に開示の方法によって決定した場合に２％より多くのアルファヘリックスも２％より多くのベータシートも有しないように、アミノ酸の約２％未満またはアミノ酸の約１％未満が疎水性残基であることが好ましい。ＸＴＥＮの構築にとってあまり好ましくない疎水性残基は、トリプトファン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、およびメチオニンを含む。加えて、以下のアミノ酸：システイン（ジスルフィドの形成および酸化を回避するため）、メチオニン（酸化を回避するため）、アスパラギンおよびグルタミン（脱アミド化を回避するため）を、５％未満、もしくは４％未満、もしくは３％未満、もしくは２％未満、もしくは１％未満含有するように、またはいずれも含有しないようにＸＴＥＮ配列を設計することができる。このように一部の実施形態では、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、およびプロリン（Ｐ）に加えて他のアミノ酸を含むＸＴＥＮ構成要素は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのアルゴリズムによって測定した場合にアルファヘリックスおよびベータシートに寄与する残基が５％未満である配列を有し、ＧＯＲアルゴリズムによって測定した場合に少なくとも９０％、または少なくとも約９５％またはそれより多くのランダムコイル形成を有する。
【０２６１】
さらなる実施形態では、本開示で使用されるＸＴＥＮ配列は、本開示のキメラポリペプチドの物理または化学特性、例えば薬物動態に影響を及ぼす。本開示で使用されるＸＴＥＮ配列は、以下の有利な特性：コンフォメーションの柔軟性、水溶解度の増強、高度のプロテアーゼ抵抗性、低い免疫原性、哺乳動物受容体に対する低い結合、または流体力学（またはストークス）半径の増加の１つまたは複数を示すことができる。一部の実施形態では、本開示のＦＶＩＩＩタンパク質に連結されたＸＴＥＮ配列は、より長い終末相半減期、または曲線下面積（ＡＵＣ）の増加などの薬物動態特性を増加させ、それによって本明細書に記載のキメラポリペプチドは、野生型ＦＶＩＩＩと比較して増加した期間、ｉｎ  ｖｉｖｏで留まる。さらなる実施形態では、本開示で使用されるＸＴＥＮ配列は、より長い終末相半減期、または曲線下面積（ＡＵＣ）の増加などの薬物動態特性を増加させ、それによってＦＶＩＩＩタンパク質は、野生型ＦＶＩＩＩと比較して増加した期間、ｉｎ  ｖｉｖｏで留まる。
【０２６２】
多様な方法およびアッセイを使用して、ＸＴＥＮ配列を含むタンパク質の物理／化学特性を決定することができる。そのような方法は、分析的遠心分離、ＥＰＲ、ＨＰＬＣ−イオン交換、ＨＰＬＣ−サイズ排除、ＨＰＬＣ−逆相、光散乱、キャピラリー電気泳動、円偏光二色性、示差走査熱量測定、蛍光、ＨＰＬＣ−イオン交換、ＨＰＬＣ−サイズ排除、ＩＲ、ＮＭＲ、ラマン分光法、屈折率測定、およびＵＶ／可視光分光法を含むがこれらに限定されない。追加の方法は、Ａｍａｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔ  Ｅｘｐｒ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆ  ４８，  １−１３  （２００６）に開示されている。
【０２６３】
本開示に従って使用することができるＸＴＥＮ配列の追加の例は、米国特許公開第２０１０／０２３９５５４Ａ１号、第２０１０／０３２３９５６Ａ１号、第２０１１／００４６０６０Ａ１号、第２０１１／００４６０６１Ａ１号、第２０１１／００７７１９９Ａ１号、または第２０１１／０１７２１４６Ａ１号、または国際特許公開ＷＯ２０１００９１１２２Ａ１号、ＷＯ２０１０１４４５０２Ａ２号、ＷＯ２０１０１４４５０８Ａ１号、ＷＯ２０１１０２８２２８Ａ１号、ＷＯ２０１１０２８２２９Ａ１号、ＷＯ２０１１０２８３４４Ａ２号、またはＷＯ２０１３０１２２６１７Ａ１号に開示されている。
【０２６４】
ＩＩＩ．Ｃ．２．アルブミン
アルブミンまたはその部分は、ＦｃＲｎ結合パートナーであり得る。ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、少なくとも１つのアルブミンポリペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、またはＨＡ）は、その完全長の形態で６０９アミノ酸のタンパク質であり、血清の浸透圧の有意な割合の原因であり、内因性および外因性のリガンドの担体としても機能する。本明細書で使用される場合、用語「アルブミン」は、完全長のアルブミン、またはその機能的断片、バリアント、誘導体、もしくはアナログを含む。アルブミンまたはその断片もしくはバリアントの例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許公開第２００８／０１９４４８１Ａ１号、第２００８／０００４２０６Ａ１号、第２００８／０１６１２４３Ａ１号、第２００８／０２６１８７７Ａ１号、もしくは第２００８／０１５３７５１Ａ１号、またはＰＣＴ出願公開第２００８／０３３４１３Ａ２号、第２００９／０５８３２２Ａ１号、もしくは第２００７／０２１４９４Ａ２号に開示されている。
【０２６５】
アルブミン結合ポリペプチド（ＡＢＰ）は、細菌アルブミン結合ドメイン、アルブミン結合ペプチド、またはアルブミンに結合することができるアルブミン結合性抗体断片を含み得るがこれらに限定されない。Ｋｒａｕｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３７８：１９０−１９４  （１９９６）およびＬｉｎｈｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  １１：２０６−２１３  （２００２）に開示される連鎖球菌プロテインＧからのドメイン３は、細菌アルブミン結合ドメインの例である。アルブミン結合ペプチドの例は、Ｄｅｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  ２７７：  ３５０３５−３５０４３  （２００２）に開示されている。アルブミン結合性抗体断片の例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ９：３１９−３２６  （２００７）；Ｒｏｏｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ５６：３０３−３１７  （２００７）、およびＨｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔ．  Ｅｎｇ．  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｓｃｉ．，  ２１：２８３−２８８  （２００８）に開示されている。
【０２６６】
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、アルブミンに結合することができる非ポリペプチド低分子、そのバリアントまたは誘導体の少なくとも１つの結合部位を含む。例えば、キメラポリペプチドは、１つまたは複数の有機アルブミン結合部分を含み得る。そのようなアルブミン結合部分の例は、Ｔｒｕｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ２０：２２８６−２２９２  （２００９）に開示される２−（３−マレイミドプロパンアミド）−６−（４−（４−ヨードフェニル）ブタンアミド）ヘキサノエート（「Ａｌｂｕ」タグ）である。
【０２６７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＶＷＦ断片をアルブミンに融合させる。一部の実施形態では、ＶＷＦ断片−アルブミン構築物はホモ二量体を形成する。一部の実施形態では、アルブミンに融合されたＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインは、ＦＶＩＩＩポリペプチドと結び付く。ある特定の実施形態では、アルブミンに融合されたＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインは、野生型ＦＶＩＩＩとＶＷＦとの間の天然の非共有結合性の相互作用より強い相互作用によってＦＶＩＩＩポリペプチドと結び付く。特定の実施形態では、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインおよび／またはＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインとＦＶＩＩＩポリペプチドとの間の親和性を増加させる１つまたは複数の変異を含む。ある特定の実施形態では、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインおよび／またはＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＶＷＦのＤ’Ｄ３ドメインおよび／またはＦＶＩＩＩポリペプチドの間でジスルフィド結合の形成を可能にする１つまたは複数の変異を含む。
【０２６８】
ＩＩＩ．Ｃ．３．ＣＴＰ
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットの少なくとも１つのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ＣＴＰペプチドは、そのタンパク質の半減期を増加させることが公知である。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，７１２，１２２号を参照されたい。非制限的な例示的なＣＴＰペプチドは、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第ＵＳ２００９／００８７４１１Ａ１号に開示されている。
【０２６９】
ＩＩＩ．Ｃ．４．ＰＡＳ
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、少なくとも１つのＰＡＳペプチド、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。本明細書で使用される場合、ＰＡＳペプチドまたはＰＡＳ配列は、生理的条件下でランダムコイルコンフォメーションを形成する、主にアラニンおよびセリン残基を含むアミノ酸配列、または主にアラニン、セリン、およびプロリン残基を含むアミノ酸配列を意味する。したがって、ＰＡＳ配列は、キメラポリペプチドにおける異種部分の一部として使用することができる、アラニン、セリン、およびプロリンを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる構築ブロック、アミノ酸ポリマー、または配列カセットである。アミノ酸ポリマーはまた、アラニン、セリン、およびプロリン以外の残基がＰＡＳ配列における微量の構成成分として追加されている場合、ランダムコイルコンフォメーションを形成することができる。「微量の構成成分」とは、アラニン、セリン、およびプロリン以外のアミノ酸を、ＰＡＳ配列にある程度、例えば約１２％まで、すなわちＰＡＳ配列の１００個のアミノ酸中約１２個、アミノ酸の約１０％まで、約９％まで、約８％まで、約６％、約５％、約４％、約３％、すなわち約２％、または約１％追加することができることを意味する。アラニン、セリン、およびプロリンとは異なるアミノ酸は、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌからなる群より選択することができる。生理的条件下で、ＰＡＳペプチドは、ランダムコイルコンフォメーションを形成し、それによって本開示の組換えタンパク質に対して増加したｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性を媒介することができ、凝血促進活性を有する。
【０２７０】
ＰＡＳペプチドの非制限的な例は、例えば米国特許公開第２０１０／０２９２１３０Ａ１号；ＰＣＴ出願公開ＷＯ２００８／１５５１３４Ａ１号；および欧州発行特許ＥＰ２１７３８９０に開示されている。
【０２７１】
ＩＩＩ．Ｃ．５．ＨＡＰ
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、少なくとも１つのホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）ペプチド、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ＨＡＰペプチドは、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも１００アミノ酸、１２０アミノ酸、１４０アミノ酸、１６０アミノ酸、１８０アミノ酸、２００アミノ酸、２５０アミノ酸、３００アミノ酸、３５０アミノ酸、４００アミノ酸、４５０アミノ酸、または５００アミノ酸長を有するグリシンの反復配列を含み得る。ＨＡＰ配列は、ＨＡＰ配列に融合または連結された部分の半減期を延長することが可能である。ＨＡＰ配列の非制限的な例には、（Ｇｌｙ）ｎ、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ、またはＳ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎが挙げられるがこれらに限定されず、式中ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。一部の実施形態では、ｎは、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０である。他の実施形態では、ｎは、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００である。例えば、Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ２０：  ２７３−２８４  （２００７）を参照されたい。
【０２７２】
ＩＩＩ．Ｃ．６．トランスフェリン
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、少なくとも１つのトランスフェリンペプチド、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。任意のトランスフェリンを、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドと融合することができる。一例として、野生型ヒトＴｆ（Ｔｆ）は、遺伝子重複を起源とするように思われる、２つの主要なドメイン、Ｎ（約３３０アミノ酸）およびＣ（約３４０アミノ酸）を有するおよそ７５ｋＤａ（グリコシル化を考慮しない）の６７９アミノ酸のタンパク質である。その全ての全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ００１０６３、ＸＭ００２７９３、Ｍ１２５３０、ＸＭ０３９８４５、ＸＭ０３９８４７、およびＳ９５９３６を参照されたい（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）。
【０２７３】
トランスフェリンは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）媒介エンドサイトーシスを通して鉄を輸送する。鉄がエンドソーム区画に放出され、Ｔｆ−ＴｆＲ複合体が細胞表面にリサイクルされた後、Ｔｆは、イオン輸送の次のサイクルのために細胞外空間に放出し戻される。Ｔｆは、１４〜１７日間を超える長い半減期を保有する（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．  ２３：２０６−２０９  （２００２））。トランスフェリン融合タンパク質は、半減期延長、がん治療のための標的化送達、経口送達、およびプロインスリンの持続的活性化に関して試験されている（Ｂｒａｎｄｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｄｖ．，  ２９：  ２３０−２３８  （２０１１）；Ｂａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０２：７２９２−７２９６  （２００５）；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．，  ３３４：６８２−６９２  （２０１０）；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １５５：３８６−３９２  （２０１１））。
【０２７４】
ＩＩＩ．Ｃ．７．ＰＥＧ
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、非ポリペプチド異種部分、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体の少なくとも１つの結合部位を含む。例えば、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、凝固因子および／またはＦｃ領域における１つまたは複数のアミノ酸残基に結合した１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含み得る。
【０２７５】
タンパク質のＰＥＧ化は、タンパク質と少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子との間に形成されたコンジュゲートを指し得る。非常に多様な分子量および平均分子量範囲のＰＥＧが市販されている。ＰＥＧの平均分子量範囲の典型的な例には、約２００、約３００、約４００、約６００、約１０００、約１３００〜１６００、約１４５０、約２０００、約３０００、約３０００〜３７５０、約３３５０、約３０００〜７０００、約３５００〜４５００、約５０００〜７０００、約７０００〜９０００、約８０００、約１００００、約８５００〜１１５００、約１６０００〜２４０００、約３５０００、約４００００、約６００００、および約８００００ダルトンが挙げられるがこれらに限定されない。これらの平均分子量は、単なる例として提供され、決して制限的ではないことを意味する。
【０２７６】
本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、モノまたはポリ（例えば、２〜４個の）ＰＥＧ部分を含むようにＰＥＧ化することができる。ＰＥＧ化は、当技術分野で公知の任意のＰＥＧ化反応によって実施することができる。ＰＥＧ化タンパク質産物を調製するための方法は、一般的に（ｉ）ポリペプチドを、本開示のペプチドが１つまたは複数のＰＥＧ基に結合する条件下で、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）と反応させること；および（ｉｉ）反応産物を得ることを含む。一般的に、反応にとって最適な反応条件は、公知のパラメーターおよび所望の結果に基づいて場合毎に決定される。
【０２７７】
当業者に利用可能な多数のＰＥＧ結合方法が存在し、例えばＭａｌｉｋ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２０：１０２８−３５  （１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓ，  Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ３（２）：４−１０  （１９９２）；欧州特許公開第ＥＰ０４０１３８４号、第ＥＰ０１５４３１６号、および第ＥＰ０４０１３８４号；ならびに国際特許出願公開ＷＯ９２／１６２２１号およびＷＯ９５／３４３２６号である。非制限的な例として、ＦＶＩＩＩバリアントは、システイン置換を含有することができ、システインをさらにＰＥＧポリマーにコンジュゲートすることができる。その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｍｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １１６：２７０−２７９  （２０１０）、および米国特許第７，６３２，９２１号を参照されたい。
【０２７８】
ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片に共有結合により連結された一本鎖ＦＶＩＩＩポリペプチドを含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、Ｂドメインの全てまたは部分の欠失を含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドはＰＥＧ化され、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＮ末端に直接または間接的に融合されている（例えば、ＰＥＧ−ｓｃＦＶＩＩＩ−Ｄ’Ｄ３、「ＭＧ１１２１」、またはＬＡＦＡＴＥ）。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片に共有結合により連結された一本鎖ＦＶＩＩＩポリペプチドを含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、Ｂドメインの全てまたは部分の欠失を含み、ＶＷＦ断片はＰＥＧ化され、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＮ末端に直接または間接的に融合されている（例えば、ｓｃＦＶＩＩＩ−Ｄ’Ｄ３−ＰＥＧ）。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片に共有結合により連結された一本鎖ＦＶＩＩＩポリペプチドを含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、Ｂドメインの全てまたは部分の欠失を含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドおよびＶＷＦ断片はＰＥＧ化され、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＮ末端に直接または間接的に融合されている（例えば、ｓｃＦＶＩＩＩ−Ｄ’Ｄ３−ＰＥＧ）。
【０２７９】
ＩＩＩ．Ｃ．８．ＨＥＳ
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、少なくとも１つのヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）ポリマーを含む。ＨＥＳは、天然に存在するアミロペクチンの誘導体であり、体におけるアルファ−アミラーゼによって分解される。ＨＥＳは、有利な生物特性を示し、血液補液剤としておよび診療所での血液希釈療法において使用される。例えば、Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｋｒａｎｋｅｎｈａｕｓｐｈａｒｍａｚｉｅ  ８：２７１−２７８  （１９８７）；およびＷｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｚｎｅｉｍ．−Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ／Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．  ４１：  ４９４−４９８  （１９９１）を参照されたい。
【０２８０】
ＨＥＳは、分子量分布および置換の程度によって主に特徴付けられる。ＨＥＳは、１〜３００ｋＤ、２〜２００ｋＤ、３〜１００ｋＤ、または４〜７０ｋＤの平均分子量（重量平均）を有する。ヒドロキシエチルデンプンはさらに、０．１〜３、０．１〜２、０．１〜０．９、または０．１〜０．８のモル置換度、およびヒドロキシエチル基に関して２〜２０の範囲のＣ２：Ｃ６置換比を示し得る。平均分子量約１３０ｋＤを有するＨＥＳは、ＦｒｅｓｅｎｉｕｓのＶＯＬＵＶＥＮ（登録商標）である。ＶＯＬＵＶＥＮ（登録商標）は、例えば、血液量減少の治療および予防のための治療適応に使用される補液に使用される人工コロイドである。当業者に利用可能な多数のＨＥＳ結合方法、例えば上記の同じＰＥＧ結合方法が存在する。
【０２８１】
ＩＩＩ．Ｃ．９．ＰＳＡ
ある特定の態様では、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドは、少なくとも１つのポリシアル酸（ＰＳＡ）ポリマーを含む。ＰＳＡは、ある特定の細菌株によって、おおよび哺乳動物のある特定の細胞において産生されるシアル酸の天然に存在する非分岐ポリマーである。例えば、Ｒｏｔｈ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）ｉｎ  Ｐｏｌｙｓｉａｌｉｃ  Ａｃｉｄ：  Ｆｒｏｍ  Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  ｔｏ  Ｍａｎ，  ｅｄｓ．  Ｒｏｔｈ  Ｊ．，  Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ  Ｕ．，  Ｔｒｏｙ  Ｆ．  Ａ．  （ＢｉｒｋｈａｅｕｓｅｒＶｅｒｌａｇ，  Ｂａｓｅｌ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ），  ｐｐ．  ３３５−３４８を参照されたい。ＰＳＡは、限定的な酸加水分解によってまたはノイラミニダーゼによる消化によって、またはポリマーの天然の細菌由来形態の分画によって、ｎ＝約８０またはそれより多くのシアル酸残基からｎ＝２までの様々な重合度で産生することができる。当業者に利用可能な複数のＰＳＡ結合方法、例えば上記と同じＰＥＧ結合方法が存在する。ある特定の態様では、活性化ＰＳＡはまた、凝固因子内、例えばＦＶＩＩＩ上、またはＦｃ領域内のシステインアミノ酸残基に結合することができる。例えば米国特許第５８４６９５１号を参照されたい。
【０２８２】
ＩＩＩ．Ｃ．１０．クリアランス受容体
ある特定の態様では、キメラポリペプチドの凝固因子がＦＶＩＩＩポリペプチド、およびＦＶＩＩＩクリアランス受容体の少なくとも１つの断片、またはそのＦＶＩＩＩ結合性断片、バリアント、もしくは誘導体を含む場合、本開示の方法に使用されるキメラポリペプチドの半減期を延長させることができる。クリアランス受容体、例えば低密度リポタンパク質関連タンパク質受容体ＬＲＰ１またはその断片の可溶性形態の挿入は、ＦＶＩＩＩのクリアランス受容体に対する結合を遮断し、それによってその半減期、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長させることができる。ＬＲＰ１は、ＦＶＩＩＩを含む多様なタンパク質の受容体媒介クリアランスに関係する６００ｋＤａの膜内在性タンパク質である。例えば、Ｌｅｎｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ  １６：６−１６  （２０１０）を参照されたい。他の適したＦＶＩＩＩクリアランス受容体は、例えばＬＤＬＲ（低密度リポタンパク質受容体）、ＶＬＤＬＲ（超低密度リポタンパク質受容体）、およびメガリン（ＬＲＰ−２）、またはその断片である。例えば、Ｂｏｖｅｎｓｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０６：９０６−９１２  （２００５）；Ｂｏｖｅｎｓｃｈｅｎ，  Ｂｌｏｏｄ  １１６：５４３９−５４４０  （２０１０）；Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １１６：５６８８−５６９７  （２０１０）を参照されたい。
【０２８３】
ＩＩＩ．Ｄ．挿入部位
一部の態様では、ＦＶＩＩＩポリペプチドにおける挿入部位は、Ｎ末端、Ａ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメイン、Ｂドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ末端、または２つもしくはそれより多くのその組合せであるＦＶＩＩＩポリペプチドの１つもしくは複数のドメインに、あるいはＡ１ドメインおよびａ１酸性領域、ならびにａ１酸性領域およびＡ２ドメイン、Ａ２ドメインおよびａ２酸性領域、ａ２酸性領域およびＢドメイン、ＢドメインおよびＡ３ドメイン、ならびにＡ３ドメインおよびＣ１ドメイン、Ｃ１ドメインおよびＣ２ドメイン、またはその任意の組合せであるＦＶＩＩＩポリペプチドの２つのドメインの間に位置する。例えば、ＸＴＥＮ配列を挿入することができる挿入部位は、Ｎ末端およびＡ１ドメイン、Ｎ末端およびＡ２ドメイン、Ｎ末端およびＡ３ドメイン、Ｎ末端およびＢドメイン、Ｎ末端およびＣ１ドメイン、Ｎ末端およびＣ２ドメイン、Ｎ末端およびＣ末端、Ａ１およびＡ２ドメイン、Ａ１およびＡ３ドメイン、Ａ１およびＢドメイン、Ａ１およびＣ１ドメイン、Ａ１およびＣ２ドメイン、Ａ１ドメインおよびＣ末端、Ａ２およびＡ３ドメイン、Ａ２およびＢドメイン、Ａ２およびＣ１ドメイン、Ａ２およびＣ２ドメイン、Ａ２ドメインおよびＣ末端、Ａ３およびＢドメイン、Ａ３およびＣ１ドメイン、Ａ３およびＣ２ドメイン、Ａ３ドメインおよびＣ末端、ＢおよびＣ１ドメイン、ＢおよびＣ２ドメイン、ＢドメインおよびＣ末端、Ｃ１およびＣ２ドメイン、Ｃ１およびＣ末端、Ｃ２ドメインおよびＣ末端、ならびに２つまたはそれより多くのその組合せからなる群より選択される。
【０２８４】
ＸＴＥＮ配列が、ＦＶＩＩＩポリペプチドにおける１つもしくは複数のアミノ酸（例えば、１つまたは複数のＸＴＥＮ挿入部位）のすぐ下流に挿入されている、またはＣ末端もしくはＮ末端に連結されているＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＸＴＥＮ配列への連結後またはＸＴＥＮ配列による挿入後にＦＶＩＩＩ活性を保持している。ＸＴＥＮ配列を、挿入がＦＶＩＩＩ活性に影響を及ぼさないように（すなわち、ＦＶＩＩＩタンパク質がなおも凝血特性を保持するように）、ＦＶＩＩＩポリペプチドにおいて１回、もしくは１回より多く、２回、３回、４回、５回、または６回挿入することができる。
【０２８５】
本開示において有用なＦＶＩＩＩポリペプチドは、必要に応じたリンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端で１つもしくは複数のＸＴＥＮポリペプチドに連結することができ、または１つもしくは複数の必要に応じたリンカーによってＦＶＩＩＩポリペプチドにおける１つもしくは複数のアミノ酸（例えば、１つまたは複数のＸＴＥＮ挿入部位）のすぐ下流に挿入することができる。
【０２８６】
なお他の実施形態では、１つまたは複数のＸＴＥＮは、ＦＶＩＩＩのＢドメインに挿入される。一例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４０および１６４０の間に挿入され、アミノ酸７４０および１６４０の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。別の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４１および１６９０の間に挿入され、アミノ酸７４０および１６９０の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。他の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４１および１６４８の間に挿入され、アミノ酸７４１および１６４８の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。なお他の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４３および１６３８の間に挿入され、アミノ酸７４３および１６３８の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。さらに他の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４５および１６５６の間に挿入され、アミノ酸７４５および１６５６の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。一部の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４５および１６５７の間に挿入され、アミノ酸７４５および１６５７の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。ある特定の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４５および１６６７の間に挿入され、アミノ酸７４５および１６６７の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。さらに他の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４５および１６８６の間に挿入され、アミノ酸７４５および１６８６の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。一部の他の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７４７および１６４２の間に挿入され、アミノ酸７４７および１６４２の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。さらに他の例では、ＸＴＥＮは、配列番号６５に対応するアミノ酸７５１および１６６７の間に挿入され、アミノ酸７５１および１６６７の間のＦＶＩＩＩ配列は必要に応じて存在しない。一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、成熟ＦＶＩＩＩポリペプチドのアミノ酸７４５および７４６の間、またはＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩポリペプチドの対応する挿入部位に挿入される。特定の実施形態では、ＡＥ２８８（配列番号８）のアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＸＴＥＮ配列が、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸７４５および７４６の間に挿入され、成熟ＦＶＩＩＩは、アミノ酸残基７４６〜１６４８の欠失を有する。特定の実施形態では、ＸＴＥＮは、表５のＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩ（配列番号６８）のアミノ酸７４５のすぐ下流に挿入される。
【０２８７】
ＩＩＩ．Ｅ．リンカー
ある特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドはさらに、ＦＶＩＩＩタンパク質および／またはＶＷＦ断片において１つまたは複数のリンカーを含む。リンカーの１つのタイプは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば凝血部位で被験体に投与した場合に様々なプロテアーゼによって切断することができる切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、ＸＴＥＮ配列から、このように凝血カスケードの部位でのキメラポリペプチドからの部分、例えばＶＷＦタンパク質の切断を可能にし、それによって活性化ＦＶＩＩＩ（ＦＶＩＩＩａ）がそのＦＶＩＩＩａ活性を有することができる。リンカーの別のタイプは、細胞内切断部位を含有し、そのため宿主細胞における細胞内プロセシング酵素によって切断することができ、それによってポリペプチドの簡便な発現およびキメラポリペプチドの形成を可能にするプロセシング可能リンカーである。
【０２８８】
１つまたは複数のリンカーが、キメラポリペプチドにおける任意の２つのタンパク質の間に存在することができる。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、および（ｉｉ）第１のＩｇ定常領域またはその部分を含む第１のポリペプチド、ならびに（ｉｉｉ）ＶＷＦタンパク質、（ｉｖ）リンカー（例えば、切断可能なリンカー）、（ｖ）ＸＴＥＮ配列、および（ｖｉ）第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む第２のポリペプチドを含む。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチドおよび（ｉｉ）第１のＩｇ定常領域またはその部分を含む第１のポリペプチド、ならびに（ｉｉｉ）ＶＷＦタンパク質、（ｉｖ）ＸＴＥＮ配列、（ｖ）リンカー（例えば、切断可能なリンカー）、および（ｖｉ）第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む第２のポリペプチドを含む。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、および（ｉｉ）第１のＩｇ定常領域またはその部分を含む第１のポリペプチド、ならびに（ｉｉｉ）ＶＷＦタンパク質、（ｉｖ）第１のリンカー（例えば、切断可能なリンカー）、（ｖ）ＸＴＥＮ配列、（ｖｉ）第２のリンカー（例えば、切断可能なリンカー）、および（ｖｉｉ）第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドと第１のＩｇ定常領域との間にリンカー、例えば切断可能なリンカーを含む。
【０２８９】
ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、（ｉｉ）第１のＩｇ定常領域またはその部分、（ｉｉｉ）リンカー（例えば、プロセシング可能なリンカー）、（ｉｖ）ＶＷＦタンパク質、（ｖ）ＸＴＥＮ配列、および（ｖｉ）第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む一本鎖を含む。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、（ｉｉ）第１のＩｇ定常領域またはその部分、（ｉｉｉ）第１のリンカー（例えば、プロセシング可能なリンカー）、（ｉｖ）ＶＷＦタンパク質、（ｖ）第２のリンカー（例えば、切断可能なリンカー）、（ｖｉ）ＸＴＥＮ配列、および（ｖｉｉ）第２のＩｇ定常領域またはその部分を含む一本鎖を含む。プロセシング可能なリンカーは、キメラポリペプチドが宿主細胞において発現された後にプロセシングされ得る；このように宿主細胞において産生されたキメラポリペプチドは、２つまたは３つのポリペプチド鎖を含む最終形態であり得る。
【０２９０】
本開示において有用なリンカーは、任意の有機分子を含み得る。本開示のキメラポリペプチドにおいて使用することができるリンカーの例は、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＵＳ２０１１／０１８３９０７Ａ１、ＵＳ２０１６／０２２９９０３Ａ１、およびＵＳ２０１６／０２５１４０８Ａ１に開示されている。一部の実施形態では、リンカーは、ポリマー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。他の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列を含む。リンカーは、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、または２０００アミノ酸を含み得る。リンカーは、１〜５アミノ酸、１〜１０アミノ酸、１〜２０アミノ酸、１０〜５０アミノ酸、５０〜１００アミノ酸、１００〜２００アミノ酸、２００〜３００アミノ酸、３００〜４００アミノ酸、４００〜５００アミノ酸、５００〜６００アミノ酸、６００〜７００アミノ酸、７００〜８００アミノ酸、８００〜９００アミノ酸、または９００〜１０００アミノ酸を含み得る。一部の実施形態では、リンカーは、ＸＴＥＮ配列を含む。ＸＴＥＮの追加の例は、本開示にしたがって使用することができ、米国特許公開第２０１０／０２３９５５４Ａ１号、第２０１０／０３２３９５６Ａ１号、第２０１１／００４６０６０Ａ１号、第２０１１／００４６０６１Ａ１号、第２０１１／００７７１９９Ａ１号、もしくは第２０１１／０１７２１４６Ａ１号、または国際特許公開ＷＯ２０１００９１１２２Ａ１号、ＷＯ２０１０１４４５０２Ａ２号、ＷＯ２０１０１４４５０８Ａ１号、ＷＯ２０１１０２８２２８Ａ１号、ＷＯ２０１１０２８２２９Ａ１号、もしくはＷＯ２０１１０２８３４４Ａ２号に開示されている。他の実施形態では、リンカーはＰＡＳ配列である。
【０２９１】
ある特定の実施形態では、リンカーはポリマー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）である。他の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列である。リンカーは、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、または２０００アミノ酸を含み得る。リンカーは、１〜５アミノ酸、１〜１０アミノ酸、１〜２０アミノ酸、１０〜５０アミノ酸、５０〜１００アミノ酸、１００〜２００アミノ酸、２００〜３００アミノ酸、３００〜４００アミノ酸、４００〜５００アミノ酸、５００〜６００アミノ酸、６００〜７００アミノ酸、７００〜８００アミノ酸、８００〜９００アミノ酸、または９００〜１０００アミノ酸を含み得る。
【０２９２】
リンカーの例は、当技術分野で周知である。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列Ｇｎを含む。リンカーは、配列（ＧＡ）ｎを含み得る。リンカーは、配列（ＧＧＳ）ｎを含み得る。他の実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１０１）を含む。さらに他の実施形態では、リンカーは配列（ＧＧＳ）ｎ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９５）を含む。これらの例では、ｎは、１〜１００の整数であり得る。他の例では、ｎは、１〜２０、すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の整数であり得る。リンカーの例には、ＧＧＧ、ＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号９６）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧ（配列番号９７）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号９９）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１００）が挙げられるがこれらに限定されない。リンカーは、ＶＷＦタンパク質活性または第ＶＩＩＩ因子の凝固活性を除去もしないし減損もさせない。必要に応じて、リンカーは、例えば立体妨害の効果をさらに減損させることによって、およびＶＷＦタンパク質または第ＶＩＩＩ因子部分をその標的結合部位により近づきやすくすることによって、ＶＷＦタンパク質活性または第ＶＩＩＩ因子タンパク質の凝固活性を増強する。
【０２９３】
ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドにとって有用なリンカーは、１５〜２５アミノ酸長である。他の実施形態では、キメラポリペプチドにとって有用なリンカーは、１５〜２０アミノ酸長である。一部の実施形態では、キメラポリペプチドにとって有用なリンカーは、１０〜２５アミノ酸長である。他の実施形態では、キメラポリペプチドのリンカーは、１５アミノ酸長である。さらに他の実施形態では、キメラポリペプチドのリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９４）であり、式中Ｇはグリシンを表し、Ｓはセリンを表し、ｎは１〜２０の整数である。
【０２９４】
ＩＩＩ．Ｆ．切断部位
切断可能なリンカーは、１つの分子を別の分子から放出するために、化学的に（例えば、エステル結合の加水分解）、酵素的に（すなわち、プロテアーゼ切断配列を組み入れること）、または光分解によって（例えば、発色団、例えば３−アミノ−３−（２−ニトロフェニル）プロピオン酸（ＡＮＰ））切断することが可能である部分を組み入れることができる。本開示のキメラポリペプチドにとって適した切断可能なリンカーの例は、例えばその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＵＳ２０１６／０２２９９０３Ａ１およびＵＳ２０１６／０２５１４０８Ａ１に見出され得る。
【０２９５】
ある特定の実施形態では、切断可能なリンカーは、Ｎ末端またはＣ末端またはそれらの両方に１つまたは複数の切断部位を含む。他の実施形態では、切断可能なリンカーは、１つまたは複数の切断可能部位から本質的になるか、またはそれからなる。他の実施形態では、切断可能なリンカーは、本明細書に記載の異種アミノ酸リンカー配列またはポリマーおよび１つまたは複数の切断可能部位を含む。
【０２９６】
ある特定の実施形態では、切断可能なリンカーは、宿主細胞において切断することができる１つまたは複数の切断部位（すなわち、細胞内プロセシング部位）を含む。切断部位の非制限的な例には、ＲＲＲＲ（配列番号１０２）、ＲＫＲＲＫＲ（配列番号１０３）、およびＲＲＲＲＳ（配列番号１０４）が挙げられる。
【０２９７】
一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、ＦＶＩＩＩのａ１領域、ＦＶＩＩＩのａ２領域、ＦＶＩＩＩのａ３領域、Ｘ−Ｖ−Ｐ−Ｒ（配列番号１０５）を含むトロンビン切断可能部位、およびＰＡＲ１エキソサイト相互作用モチーフを含み、式中Ｘは、脂肪族アミノ酸、またはその任意の組合せであり、完全長のＦＶＩＩＩに対応するＧｌｕ７２０〜Ａｒｇ７４０と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むａ２領域を含み、ａ２領域は、トロンビンによって切断することが可能である。特定の実施形態では、本開示にとって有用な切断可能なリンカーは、ＩＳＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１０６）またはＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号８８）を含むａ２領域を含む。他の実施形態では、本開示の切断可能なリンカーは、完全長のＦＶＩＩＩに対応するＭｅｔ３３７〜Ａｒｇ３７２と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むａ１領域を含み、ａ１領域は、トロンビンによって切断することが可能である。特定の実施形態では、ａ１領域は、ＩＳＭＫＮＮＥＥＡＥＤＹＤＤＤＬＴＤＳＥＭＤＶＶＲＦＤＤＤＮＳＰＳＦＩＱＩＲＳＶ（配列番号１０７）を含む。一部の実施形態では、本開示の切断可能なリンカーは、完全長のＦＶＩＩＩに対応するＧｌｕ１６４９〜Ａｒｇ１６８９と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むａ３領域を含み、ａ３領域は、トロンビンによって切断することが可能である。ある特定の実施形態では、本開示の切断可能なリンカーは、ＩＳＥＩＴＲＴＴＬＱＳＤＱＥＥＩＤＹＤＤＴＩＳＶＥＭＫＫＥＤＦＤＩＹＤＥＤＥＮ  ＱＳＰＲＳＦＱ（配列番号１０８）を含むａ３領域を含む。
【０２９８】
他の実施形態では、切断可能なリンカーは、Ｘ−Ｖ−Ｐ−Ｒ（配列番号１０５）を含むトロンビン切断部位およびＰＡＲ１エキソサイト相互作用モチーフを含み、ＰＡＲ１エキソサイト相互作用モチーフは、Ｓ−Ｆ−Ｌ−Ｌ−Ｒ−Ｎ（配列番号１０９）を含む。ＰＡＲ１エキソサイト相互作用モチーフは、Ｐ、Ｐ−Ｎ、Ｐ−Ｎ−Ｄ、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ（配列番号１１０）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ（配列番号１１１）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ（配列番号１１２）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ（配列番号１１３）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ（配列番号１１４）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ−Ｗ（配列番号１１５）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ−Ｗ−Ｅ（配列番号１１６）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ−Ｗ−Ｅ−Ｄ（配列番号１１７）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ｅ（配列番号１１８）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ｅ−Ｅ（配列番号１１９）、Ｐ−Ｎ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｅ−Ｐ−Ｆ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ｅ−Ｅ−Ｓ（配列番号１２０）またはその任意の組合せから選択されるアミノ酸配列をさらに含み得る。一部の実施形態では、脂肪族アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、またはイソロイシンから選択される。
【０２９９】
他の実施形態では、切断可能なリンカーは、切断可能なリンカーを含むキメラポリペプチドが被験体に投与された後、プロテアーゼによって切断される１つまたは複数の切断部位を含む。一部の実施形態では、切断部位は、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、カリクレイン、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ−２、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１７、およびＭＭＰ−２０からなる群より選択されるプロテアーゼによって切断される。他の実施形態では、切断部位は、ＦＸＩａ切断部位（例えば、ＫＬＴＲ↓ＡＥＴ（配列番号１２１））、ＦＸＩａ切断部位（例えば、ＤＦＴＲ↓ＶＶＧ（配列番号１２２））、ＦＸＩＩａ切断部位（例えば、ＴＭＴＲ↓ＩＶＧＧ（配列番号１２３））、カリクレイン切断部位（例えば、ＳＰＦＲ↓ＳＴＧＧ（配列番号１２４））、ＦＶＩＩａ切断部位（例えば、ＬＱＶＲ↓ＩＶＧＧ（配列番号１２５））、ＦＩＸａ切断部位（例えば、ＰＬＧＲ↓ＩＶＧＧ（配列番号１２６））、ＦＸａ切断部位（例えば、ＩＥＧＲ↓ＴＶＧＧ（配列番号１２７））、ＦＩＩａ（トロンビン）切断部位（例えば、ＬＴＰＲ↓ＳＬＬＶ（配列番号１２８））、エラスターゼ−２切断部位（例えば、ＬＧＰＶ↓ＳＧＶＰ（配列番号１２９））、グランザイム−Ｂ切断（例えば、ＶＡＧＤ↓ＳＬＥＥ（配列番号１３０））、ＭＭＰ−１２切断部位（例えば、ＧＰＡＧ↓ＬＧＧＡ（配列番号１３１））、ＭＭＰ−１３切断部位（例えば、ＧＰＡＧ↓ＬＲＧＡ（配列番号１３２））、ＭＭＰ−１７切断部位（例えば、ＡＰＬＧ↓ＬＲＬＲ（配列番号１３３））、ＭＭＰ−２０切断部位（例えば、ＰＡＬＰ↓ＬＶＡＱ（配列番号１３４））、ＴＥＶ切断部位（例えば、ＥＮＬＹＦＱ↓Ｇ（配列番号１３５））、エンテロキナーゼ切断部位（例えば、ＤＤＤＫ↓ＩＶＧＧ（配列番号１３６））、プロテアーゼ３Ｃ（ＰＲＥＳＣＩＳＳＩＯＮ（商標））切断部位（例えば、ＬＥＶＬＦＱ↓ＧＰ（配列番号１３７））、およびソルターゼＡ切断部位（例えば、ＬＰＫＴ↓ＧＳＥＳ）（配列番号１３８）からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、ＦＸＩａ切断部位は、例えばＴＱＳＦＮＤＦＴＲ（配列番号１）およびＳＶＳＱＴＳＫＬＴＲ（配列番号３）を含むがこれらに限定されない。非制限的で例示的なトロンビン切断部位には、例えば、ＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲ（配列番号４）、ＴＴＫＩＫＰＲ（配列番号５）、ＬＶＰＲＧ（配列番号６）、ＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号８８）、またはＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９４）、およびＡＬＲＰＲ（配列番号７）（例えば、ＡＬＲＰＲＶＶＧＧＡ（配列番号１４５））を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる配列が挙げられる。
【０３００】
一部の実施形態では、切断部位は、ＴＬＤＰＲＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦＷＥＤＥＥＫ（配列番号１４６）である。他の実施形態では、切断部位は、ＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号８８）またはその断片を含む。特定の実施形態では、切断部位は、ＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９４）を含む。他の実施形態では、切断部位は、ＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９５）を含み、切断部位は、ＦＶＩＩＩの完全長のａ２領域ではない。さらに他の実施形態では、切断部位は、ＩＥＰＲ（配列番号２００）を含む。なお他の実施形態では、切断部位は、ＩＥＰＲ（配列番号２００）を含み、切断部位は、ＦＶＩＩＩの完全長のａ２領域でもなく、ＦＶＩＩＩの完全長のａ２領域を含みもしない。他の実施形態では、切断部位は、ＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号８８）、ＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１３９）、ＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４０）、ＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４１）、ＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４２）、ＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４３）、ＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４４）、ＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７６）、ＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７７）、ＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７８）、ＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７９）、ＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８０）、ＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８１）、ＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８２）、ＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８３）、ＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８４）、ＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８５）、ＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８６）、ＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８７）、ＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８８）、ＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８９）、ＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９０）、ＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９１）、ＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９２）、ＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９３）、またはＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９４）を含む。他の実施形態では、切断部位は、ＤＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号８８）、ＫＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１３９）、ＮＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４０）、ＴＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４１）、ＧＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４２）、ＤＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４３）、ＹＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１４４）、ＹＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７６）、ＥＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７７）、ＤＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７８）、ＳＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１７９）、ＹＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８０）、ＥＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８１）、ＤＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８２）、ＩＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８３）、ＳＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８４）、ＡＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８５）、ＹＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８６）、ＬＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８７）、ＬＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８８）、ＳＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１８９）、ＫＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９０）、ＮＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９１）、ＮＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９２）、ＡＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９３）、またはＩＥＰＲＳＦＳ（配列番号１９４）を含み、切断部位は、完全長のＦＶＩＩＩ  ａ２領域ではない。ある特定の実施形態では、切断可能なリンカーは、本明細書において提供されるまたは当技術分野で公知のトロンビン切断アッセイにおいて切断可能である。
【０３０１】
特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、第１のＸＴＥＮ配列、および第１のＦｃ領域を含むＦＶＩＩＩタンパク質；ならびに（ｉｉ）ＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメイン、第２のＸＴＥＮ配列、ＦＶＩＩＩのａ２リンカー、ならびに第２のＦｃ領域を含み、
（ａ）ＦＶＩＩＩタンパク質は、成熟ＦＶＩＩＩに対応するアミノ酸７４６〜１６４８の欠失を有し；
（ｂ）第１のＸＴＥＮ配列は、成熟ＦＶＩＩＩに対応するアミノ酸７４５のすぐ下流のＦＶＩＩＩポリペプチド内に挿入されており；
（ｃ）第１のＸＴＥＮ配列は、ＡＥ２８８のアミノ酸配列（配列番号８）と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
（ｄ）第１のＦｃ領域は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＣ末端に融合されており；
（ｅ）第２のＸＴＥＮ配列は、ＶＷＦ断片のＣ末端に融合されており；
（ｆ）第２のＸＴＥＮ配列は、ＡＥ１４４＿５Ａのアミノ酸配列（配列番号５８）と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
（ｇ）ａ２リンカーは、ＸＴＥＮのＣ末端に融合されており；
（ｈ）ａ２リンカーは、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
（ｉ）第２のＦｃ領域は、ａ２リンカーのＣ末端に融合されており；
（ｊ）第１のＦｃ領域は、ジスルフィド結合によって第２のＦｃ領域に共有結合的に連結されている。
【０３０２】
特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、２つのポリペプチド配列、すなわちＦＶＩＩＩ−１６１（配列番号６９）、ＦＶＩＩＩ−１６９（配列番号７０）、ＦＶＩＩＩ−１７０（配列番号７１）、ＦＶＩＩＩ−１７３（配列番号７２）；ＦＶＩＩＩ−１９５（配列番号７３）；ＦＶＩＩＩ−１９６（配列番号７４）、ＦＶＩＩＩ１９９（配列番号７５）、ＦＶＩＩＩ−２０１（配列番号７６）；ＦＶＩＩＩ−２０３（配列番号７７）、ＦＶＩＩＩ−２０４（配列番号７８）、ＦＶＩＩＩ−２０５（配列番号７９）、ＦＶＩＩＩ−２６６（配列番号８０）、ＦＶＩＩＩ−２６７（配列番号８１）、ＦＶＩＩＩ−２６８（配列番号８２）、ＦＶＩＩＩ−２６９（配列番号８３）、ＦＶＩＩＩ−２７１（配列番号８４）またはＦＶＩＩＩ−２７２（配列番号８５）から選択される配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド配列、およびＶＷＦ０３１（配列番号８６）、ＶＷＦ０３４（配列番号８７）、またはＶＷＦ−０３６から選択される配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド配列を含む。
【０３０３】
一部の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、２つのポリペプチド配列、すなわち配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド配列；ならびにＶＷＦのＤ’ドメインおよびＶＷＦのＤ３ドメイン、およびＦｃ領域を含むＶＷＦ断片を含む第２のポリペプチド配列を含む。一部の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、２つのポリペプチド配列、すなわちＦＶＩＩＩポリペプチドおよびＦｃ領域を含む第１のポリペプチド配列；ならびに配列番号２０２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド配列を含む。ある特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、２つのポリペプチド配列、すなわち配列番号２０１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド配列、ならびに配列番号２０２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド配列を含む。特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、２つのポリペプチド配列、すなわち配列番号２０１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド配列、および配列番号２０２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド配列を含む。他の特定の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドは、２つのポリペプチド配列、すなわち配列番号２０１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド配列、および配列番号２０２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド配列を含み、第１のポリペプチド配列および第２のポリペプチド配列は、ジスルフィド結合によって互いに連結されている。
【０３０４】
ＩＶ．医薬組成物
本開示のキメラポリペプチドを含有する組成物は、適した薬学的に許容される担体を含有し得る。例えば、それらは作用部位に送達されるように設計された調製物への活性化合物の加工を促進する賦形剤および／または補助剤を含有し得る。
【０３０５】
医薬組成物は、ボーラス注射による非経口投与（すなわち、静脈内、皮下、または筋肉内）のために製剤化することができる。注射用製剤は、単位剤形、例えば保存剤を添加したアンプルまたは多用量容器で提示することができる。組成物は、懸濁剤、液剤、または油性もしくは水性ビヒクル中の乳剤としての形態をとることができ、処方剤、例えば懸濁化剤、安定化剤、および／または分散化剤を含有し得る。あるいは、活性成分は、適したビヒクル、例えば発熱物質不含水によって構成するための散剤形態であり得る。
【０３０６】
非経口投与のための適した製剤はまた、水溶性形態、例えば水溶性の塩の活性化合物の水溶液も含む。加えて、適切な油性注射用懸濁剤としての活性化合物の懸濁剤を投与することができる。適した親油性溶媒またはビヒクルは、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドを含む。水性注射用懸濁剤は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよびデキストランを含む、懸濁剤の粘度を増加させる物質を含有し得る。必要に応じて、懸濁剤はまた、安定化剤も含有し得る。リポソームはまた、細胞または間質腔に送達するための本開示の分子を封入するために使用することができる。例示的な薬学的に許容される担体は、生理的に適合性の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等である。一部の実施形態では、組成物は、等張剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含む。他の実施形態では、組成物は、活性成分の貯蔵寿命または有効性を増強する薬学的に許容される物質、例えば湿潤剤、または微量の補助物質、例えば湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤もしくは緩衝液を含む。
【０３０７】
本開示の組成物は、例えば液体（例えば、注射可能および注入可能溶液）、分散剤、懸濁剤、半固体、および固体剤形を含む多様な形態であり得る。好ましい形態は、投与様式および治療適用に依存する。
【０３０８】
組成物は、液剤、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム、または高い薬物濃度にとって適した他の規則正しい構造として製剤化することができる。滅菌注射用溶液は、上記で列挙した成分の１つまたは組合せを有する適切な溶媒中に必要量の活性成分を組み入れ、必要に応じて濾過滅菌することにより調製することができる。一般的に、分散剤は、活性成分を、基本分散媒および上記で列挙した成分からの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製することができる。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め濾過滅菌した溶液から活性成分プラス任意の追加の所望の成分の粉末を生じる真空乾燥およびフリーズドライである。溶液の適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要な粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。注射可能組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる作用物質、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
【０３０９】
活性成分は、徐放性製剤またはデバイスによって製剤化することができる。そのような製剤およびデバイスの例には、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムが挙げられる。生物分解性で生体適合性のポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を使用することができる。そのような製剤およびデバイスを調製するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照されたい。
【０３１０】
注射可能なデポー製剤は、生物分解性のポリマー、例えばポリラクチド−ポリグリコリド中で薬物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作製することができる。薬物のポリマーに対する比、および使用されるポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。他の例示的な生物分解性ポリマーは、ポリオルトエステルおよびポリ酸無水物である。デポー注射用製剤はまた、リポソームまたはマイクロエマルションに薬物を捕捉することによって調製することができる。
【０３１１】
補助活性化合物を、組成物に組み入れることができる。一部の実施形態では、本開示のキメラポリペプチドを、別の凝固因子、またはそのバリアント、断片、アナログ、もしくは誘導体と共に製剤化する。例えば、凝固因子には、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロトロンビン、フィブリノーゲン、フォンヴィルブランド因子、もしくは組換え可溶性組織因子（ｒｓＴＦ）、または前述のいずれかの活性化型が挙げられるがこれらに限定されない。止血剤の凝固因子はまた、抗線維素溶解薬、例えばイプシロン−アミノカプロン酸、トラネキサム酸を含み得る。
【０３１２】
最適な所望の応答を提供するために、投薬量レジメンを調整することができる。例えば、１回ボーラスを投与することができ、幾つかの分割用量を時間をわたり投与することができ、または治療状況の緊急性に示される場合、比例して用量を低減もしくは増加させることができる。投与を容易にするためにおよび投薬量の均一性のために単位剤形で非経口組成物を製剤化することが有利である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  １９８０）を参照されたい。
【０３１３】
活性化合物に加えて、液体剤形は、不活性成分、例えば水、エチルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステルを含有し得る。
【０３１４】
適した薬学的担体の非制限的な例もまた、Ｅ．  Ｗ．  ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。賦形剤の一部の例には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。組成物はまた、ｐＨ緩衝試薬、および湿潤剤または乳化剤も含有し得る。
【０３１５】
一部の実施形態では、医薬組成物は、キメラポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む。キメラポリペプチド中のＦＶＩＩＩタンパク質は、野生型ＦＶＩＩＩタンパク質またはＶＷＦ断片を有しない対応するＦＶＩＩＩタンパク質と比較して延長された半減期を有する。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの半減期は、野生型ＦＶＩＩＩより少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、または少なくとも約１２倍延長される。他の実施形態では、第ＶＩＩＩ因子の半減期は、少なくとも約１７時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約１９時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２１時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２３時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２５時間、少なくとも約２６時間、少なくとも約２７時間、少なくとも約２８時間、少なくとも約２９時間、少なくとも約３０時間、少なくとも約３１時間、少なくとも約３２時間、少なくとも約３３時間、少なくとも約３４時間、少なくとも約３５時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、または少なくとも約１０８時間である。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの半減期は、野生型ＦＶＩＩＩと比較して約３倍延長される。
【０３１６】
一部の実施形態では、組成物は、静脈内または皮下投与であり得る非経口投与によって投与される。
【０３１７】
他の実施形態では、組成物は、それを必要とする被験体における出血性疾患または状態を処置するために使用される。出血性疾患または状態は、出血性凝固障害、関節血症、筋出血、口腔出血、出血、筋肉への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷、消化管出血、頭蓋内出血、腹部内出血、胸部内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙の出血、腹膜後隙の出血、腸腰筋鞘の出血、およびその任意の組合せからなる群より選択される。さらに他の実施形態では、被験体は、手術を受ける予定である。なお他の実施形態では、処置は予防的またはオンデマンドである。
【０３１８】
これまで本開示を詳細に説明してきたことから、本開示は、単に説明目的のために本明細書に含められ、本開示を制限しないと意図される以下の実施例を参照することによってより明白に理解されるであろう。本明細書において言及した全ての特許、刊行物、および論文は、明白かつ具体的に参照により本明細書に組み込まれている。
【実施例】
【０３１９】
（実施例１：ＦＶＩＩＩ−ＸＴＥＮ−Ｆｃ／Ｄ’Ｄ３−ＸＴＥＮ−Ｆｃヘテロ二量体のファースト・イン・ヒューマン研究）
因子に基づく補充療法は、血友病ケアの基礎である。通常の組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）製品は、短い半減期を有し、頻回投与を必要とする。ｒＦＶＩＩＩＦｃ（Ｅｌｏｃｔａｔｅ（登録商標））によって、血友病Ａに関して最も長い投薬間隔；予防的、急性、術中、および緊急状況を含む適切な出血制御；関節の保護およびクオリティオブライフの改善を含む出血制御を超える保護；ならびに長期間の一貫して良好に特徴付けされた安全性プロファイルを含む、患者のケアの有意な進歩がもたらされている。しかし、毎週またはそれより長い第ＶＩＩＩ因子の予防的投薬はなおも、血友病Ａを有する人々の大多数にとって満たされていない需要である。
【０３２０】
本試験は、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド、ＦＶＩＩＩポリペプチドのＢドメイン内に挿入されたＸＴＥＮ、および第１のＦｃ領域；ならびに（ｉｉ）ＶＷＦ断片、第２のＸＴＥＮ配列、ａ２リンカー、および第２のＦｃ領域を含むキメラペプチドである、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの安全性および薬物動態（ＰＫ）を調べる（図１）。
【０３２１】
試験デザイン
【０３２２】
本試験の目的は、ｒＦＶＩＩＩと比較した場合のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの１回用量の安全性、忍容性、およびＦＶＩＩＩ活性（ＰＫ）を評価することであった。患者集団は、ＦＶＩＩＩ製品の曝露日が少なくとも１５０日であり、阻害剤試験陽性の履歴も、ＦＶＩＩＩ投与に対する応答の減少の臨床徴候もない、処置歴がある重度血友病Ａ（＜１ＩＵ／ｄＬ［＜１％］内因性ＦＶＩＩＩ活性レベル）を有する成人男性を含んだ。主要評価項目は、有害事象、および阻害剤の発生を含む臨床検査の臨床的な異常であった。重要な副次評価項目は、消失半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、０から無限大までの曲線下面積（ＡＵＣ０−∞）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、および増分回収率（ＩＲ）を含むがこれらに限定されない薬物動態パラメーターを含んだ。
【０３２３】
患者を、低用量コホート（患者７人；図２Ａ）または高用量コホート（患者９人；図２Ｂ）に登録した。各々の患者に、ｒＦＶＩＩＩ（ＡＤＶＡＴＥ（登録商標））を投薬後、ＰＫ試料採取期間を設けた。短い休薬期間（低用量コホートでは≧３日（図２Ａ）および高用量コホートでは≧４日（図２Ｂ））の後、次に、各被験体にｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与後、ＰＫ試料採取期間を設けた。被験体は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの注射後２８日間の安全性観察を受け、これはｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの注射後１４日および２８日目での阻害剤評価のための試料収集を含んだ。低用量コホートの患者には、２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩ、および２５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した。高用量コホートの患者には、６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩ、および６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した。
【０３２４】
方法
【０３２５】
薬物動態パラメーターを、改変活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）凝固アッセイ（「一段」アッセイ）によって測定した。簡単に説明すると、ＦＶＩＩＩ活性を、ＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）においてＤａｄｅ（登録商標）Ａｃｔｉｎ（登録商標）ＦＳＬ活性化ＰＴＴ試薬（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用する改変ａＰＴＴアッセイによって測定する。７点較正曲線（高：１．５００〜０．０５０ＩＵ／ｍＬ；低：０．１５０〜０．００２５ＩＵ／ｍＬ）を、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ特異的キャリブレーターを使用して作成した。高濃度較正曲線の場合、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮキャリブレーター［１．０００ＩＵ／ｍＬ］をＴｒｉｓ／ＢＳＡ緩衝液（５０ｍＭ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４±０．２、１％ＢＳＡを含有する）中で希釈する。この希釈は、ＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒによって実施し、予め選択した較正ＦＶＩＩＩ活性レベルを生成する。次に、これらをＴｒｉｓ／ＢＳＡ緩衝液中で調製した１：２作業用希釈物で試験する。低濃度較正曲線の場合、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮキャリブレーター［１．０００ＩＵ／ｍＬ］を、免疫枯渇ＦＶＩＩＩ欠損血漿（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）中でＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒによって希釈し、原液で（作業用希釈物の非存在下で）試験する。較正は、２連で実施する。曲線を、ＩＵ／ｍＬでのＦＶＩＩＩ活性（ｘ軸）および秒での凝固時間（ｙ軸）によってプロットする。高濃度および低濃度較正曲線はいずれも、線形ｌｏｇ−ｌｉｎ回帰曲線フィットを使用する。
【０３２６】
試料を高濃度較正曲線ｍｅｔａｔｅｓｔ（Ｔｒｉｓ／ＢＳＡ中での１：２、１：４、および１：８作業用希釈物）、または低濃度較正曲線ｍｅｔａｔｅｓｔ（原液、免疫枯渇ＦＶＩＩＩ欠損血漿中での１：２および１：４作業用希釈物）を使用して２連で試験する。適切な作業用希釈の後、全てのキャリブレーター、患者の試料、および品質管理試料を、０．０１０ＩＵ／ｍＬ未満またはそれに等しいＦＶＩＩＩ活性、および少なくとも０．４００ＩＵ／ｍＬの他の凝固因子を含有する免疫枯渇ＦＶＩＩＩ欠損血漿と１：１で混合する。試料をこの血漿と混合した後、ＡＰＴＴ試薬を添加し、混合物をインキュベートする。インキュベーション後、塩化カルシウムを添加して、血塊形成までの時間を光学的に測定する。次に、アルゴリズムによって、個々の作業用希釈物が平均値の±１５．０％以内に入るか否かを調べ、報告されたＦＶＩＩＩ活性を決定する。報告されたＦＶＩＩＩ活性を決定するためには、定量下限（ＬＬＯＱ）付近を除き、少なくとも２つのｍｅｔａｔｅｓｔ作業用希釈物の結果が必要である。
【０３２７】
結果：低用量コホート
【０３２８】
７人の被験体が低用量コホートに登録した；被験体１人は、試験とは無関係な理由からｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの投与前に試験を中止した。被験体６人に１回低用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ（２５ＩＵ／ｋｇ）を投与した。低用量コホートにおいて処置した最初の４人の被験体の特徴は、処置歴がある重度血友病Ａ（＜１ＩＵ／ｄＬ［＜１％］内因性ＦＶＩＩＩ活性レベル）を有する成人男性被験体を含んだ；被験体は全員が白人であった；被験体の年齢は、１９〜６０歳の範囲であり、平均年齢は３３歳であった；平均体重は８５ｋｇ（６７．２〜１００．６ｋｇの範囲）であった。
【０３２９】
全ての患者において、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、一般的に良好に忍容され、阻害剤は、投薬後１４日目にも２８日目にも観察されなかった。
【０３３０】
１回低用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ（２５ＩＵ／ｋｇ）を投与した最初の６人の被験体の注入後５日目での平均ＦＶＩＩＩ活性は約１２．０％であり、７日目で約５．３％であった（図３Ａ）。平均ＦＶＩＩＩ活性は１０日間を通して１％より上のままであった（図３Ａ）。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ（２５ＩＵ／ｋｇ）およびｒＦＶＩＩＩ（２５ＩＵ／ｋｇ）に関して活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）測定によって測定した薬物動態パラメーターを表９に示す。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、ヒト被験体において約３７．６時間の平均半減期を有することが観察され、これは同じ用量を投与したｒＦＶＩＩＩの平均半減期（約９．１２時間）より４倍を超えて長かった。
【表９】
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【０３３１】
結果：高用量コホート
【０３３２】
９人の被験体が高用量コホートに登録した。被験体に、１回高用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ（６５ＩＵ／ｋｇ）を投与した。被験体１人は、試験とは無関係な理由によりＰＫパラメーターに関して試験できなかった。高用量コホートにおいて処置した被験体の特徴は、処置歴がある重度血友病Ａ（＜１ＩＵ／ｄＬ［＜１％］内因性ＦＶＩＩＩ活性レベル）を有する成人男性被験体を含んだ；被験体９人中７人が白人であった；被験体の年齢は、３２〜６３歳の範囲であり、平均年齢は４４歳であった；平均体重は８１．１ｋｇ（６１．５〜１００．７ｋｇの範囲）であった。
【０３３３】
１回高用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ（６５ＩＵ／ｋｇ）を投与した８人の評価された被験体の注入後５日目での平均ＦＶＩＩＩ活性は約３８．０％であり、７日目で約１７％であった（図３Ｂ）。平均ＦＶＩＩＩ活性は１４日間を通して１％より上のままであった（図３Ｂ）。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ（６５ＩＵ／ｋｇ）およびｒＦＶＩＩＩ（６５ＩＵ／ｋｇ）に関して活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）測定を測定する薬物動態パラメーターを表１０に示す。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、ヒト被験体において約４２．５時間の平均半減期を有することが観察され、これは同じ用量を投与したｒＦＶＩＩＩの平均半減期（約１３時間）より３倍を超えて長かった。
【表１０】
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【０３３４】
結論：
【０３３５】
ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、１回低用量（２５ＩＵ／ｋｇ）または１回高用量（６５ＩＵ／ｋｇ）のいずれかによって処置した全ての重度血友病Ａ患者において良好に忍容された。いずれの患者もＦＶＩＩＩに対する阻害剤を発生しなかった。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、ｒＦＶＩＩＩより３倍〜４倍長い半減期を実証し、ＶＷＦによって課された半減期の限界を超えることを示唆した。持続的な高いＦＶＩＩＩ活性は、全ての出血タイプに対して延長した保護を提供する潜在性を有する。
【０３３６】
（実施例２：ＦＶＩＩＩ−ＸＴＥＮ−Ｆｃ／Ｄ’Ｄ３−ＸＴＥＮ−Ｆｃヘテロ二量体の反復用量研究）
ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮは、１回用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与された被験体のコホートにおいて良好に認容され、持続的なＦＶＩＩＩレベルを提供した（実施例１）。本試験は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの反復用量の安全性および忍容性を評価し、薬物動態を特徴付ける（図１）。
【０３３７】
試験デザイン
【０３３８】
ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの週１回、全体で４用量を、ＦＶＩＩＩ処置による処置歴があり、そのようなＦＶＩＩＩ処置の少なくとも１５０曝露日を受けた重度血友病Ａの成人男性患者に投与する。各々が年齢１８〜６５歳のおよそ１０人の成人男性からなる２つのコホートを登録する。コホート１の各被験体に、５０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの週１回、全体で４用量を１、８、１５、および２２日目に投与する。コホート２の各被験体に、６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの週１回、全体で４用量を１、８、１５、および２２日目に投与する。
【０３３９】
臨床試験のデザインの概略図を図４に表す。投薬前の薬物動態試料を１日目に採取する。加えて、１日目および２２日目の投薬後に複数のＰＫ試料を採取して、８、１５、および２２日目の投薬前に生じるトラフ（１６８時間）試料を採取する。被験体は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの最後の用量後、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの最後の用量後１４および２８日目での阻害剤評価を含む、２８日間の安全性観察期間を受ける。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの週１回、４用量全てを終了した被験体に関して、安全性観察期間は、５０日目（＋３日）での試験終了（ＥＯＳ）診察日で終了する。処置を早期に中止した被験体に関しては、安全性観察期間は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの最後の用量の２８日後の早期中止（ＥＴ）診察日で終了する。
【０３４０】
試験の主要目的は、静脈内（ＩＶ）ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの週１回、全体で４用量の安全性および忍容性を評価することである。主要評価項目は、有害事象（ＡＥ）の発生、およびベセスダ法のナイメーヘン変法（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，  ７３：  ２４７−２５１  （１９９５））を介して決定した場合の阻害剤（ＦＶＩＩＩに対する中和抗体）の発生を含む、臨床検査における臨床的に有意な異常の発生である。
【０３４１】
試験の副次目的は、ＦＶＩＩＩ活性を、実施例１に記載したように一段活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）凝血アッセイによって決定した場合の、週１回、全体で４用量のＩＶ投与後のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの薬物動態の特徴付けである。副次評価項目は、最高活性（Ｃｍａｘ）、半減期（ｔ１／２）、定常状態での総クリアランス（ＣＬｓｓ）、累積指数（ＡＩ）、０時間目から投薬間隔に及ぶ活性時間曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔａｕ）、定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）、平均滞留期間（ＭＲＴ）、ＩＲ、次の用量が投与されるまでに薬物が到達する最低（トラフ）濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）、およびＦＶＩＩＩ活性がベースラインより１％上になるまでの時間を含むがこれらに限定されないパラメーターの推定を介して評価した薬物動態である。
【０３４２】
試験の探索的目的は、ＦＶＩＩＩ活性を二段発色凝固アッセイによって決定した場合の、週１回、全体で４用量のＩＶ投与後のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの薬物動態の特徴付けである。探索的評価項目は、Ｃｍａｘ、ｔ１／２、ＣＬｓｓ、ＡＩ、ＡＵＣ０−ｔａｕ、Ｖｓｓ、ＭＲＴ、ＩＲ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、およびＦＶＩＩＩ活性がベースラインより１％上になるまでの時間を含むがこれらに限定されないパラメーターの推定を介して評価したＰＫである。
【０３４３】
方法
【０３４４】
ＦＶＩＩＩ活性は、実施例１において上記で詳述したように、改変活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）凝固アッセイ（「一段」アッセイ）によって決定した。
【０３４５】
二段発色凝血アッセイは、ＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）においてＢＩＯＰＨＥＮ  ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイ（Ｈｙｐｈｅｎ  Ｂｉｏｍｅｄ  ２２１４０２−ＲＵＯ）を使用してＦＶＩＩＩ活性を測定する。簡単に説明すると、リン脂質、カルシウム、およびトロンビン活性化ＦＶＩＩＩ：Ｃは、一定量の第ＩＸａ因子の存在下で酵素複合体を形成する。次に、この酵素複合体は第Ｘ因子（ＦＸ）を活性化し、これは一定濃度で第Ｘａ因子（ＦＸａ）に対して過剰量で供給される。ＦＸのＦＸａへの活性化は、第ＩＸａ因子の一定量および過剰量の存在下でアッセイにおける制限因子であるＦＶＩＩＩ：Ｃの量に直接関連する。次に、生成されたＦＸａの活性を、特異的発色ＦＸａ基質、ＳＸａ−１１（Ｈｙｐｈｅｎ  Ｂｉｏｍｅｄ）を使用して測定する。第Ｘａ因子は、ＳＸａ−１１を切断してパラニトロアニリン（ｐＮＡ）を放出する。放出されたｐＮＡの量は、生成されたＦＸａの量に直接比例する。試料中のＦＶＩＩＩ：Ｃの量、生成されたＦＸａの量、および放出されたｐＮＡの量の間には直接の相関がある。ｐＮＡの放出は、波長４０５ｎｍでの発色によって決定される。
【０３４６】
８点較正曲線（高：１．５００〜０．１５０ＩＵ／ｍＬ；低：０．２００〜０．００８ＩＵ／ｍＬ）を、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ特異的キャリブレーターを使用して作成する。高濃度較正曲線の場合、１ＩＵ／ｍＬのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを、Ｔｒｉｓ／ＢＳＡ緩衝液中で希釈して、予め選択された較正レベルのＦＶＩＩＩ活性を生じる。この希釈はＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒによって実施する。予め選択された較正レベルのＦＶＩＩＩ活性は、Ｔｒｉｓ／ＢＳＡ緩衝液中で１：４の作業用希釈物で試験する。低濃度較正曲線の場合、１ＩＵ／ｍＬのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを、先天性ＦＶＩＩＩ欠損血漿（Ｈｅｌｅｎａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）中で１：４に予め希釈し、次に、Ｔｒｉｓ／ＢＳＡ緩衝液中でＢＣＳ（登録商標）ＸＰ  ａｎａｌｙｚｅｒによってさらに希釈し、予め選択された較正レベルのＦＶＩＩＩ活性を生成し、これを反応セットアップにおけるさらなる希釈の非存在下で試験する。
【０３４７】
較正を、２連で実施する。曲線をＩＵ／ｍＬでのＦＶＩＩＩ活性（ｘ軸）および吸光度の変化／分（ｙ軸）に関してプロットする。高濃度較正曲線の場合、線形ｌｏｇ−ｌｏｇ回帰曲線フィットを使用する。低濃度較正曲線の場合、線形ｌｉｎ−ｌｉｎ回帰曲線フィットを使用する。試料を、１：４作業用希釈での高濃度較正曲線について、または先天性ＦＶＩＩＩ欠損血漿中で１：４希釈もしくは原液（作業用希釈物の非存在下）を使用する低濃度較正曲線について、２連で試験する。
【０３４８】
結果
【０３４９】
人口統計学およびベースライン特徴
【０３５０】
年齢１８〜６５歳（両端を含む）の１０人の成人男性被験体が、コホート１（５０ＩＵ／ｋｇ）に登録し、年齢１８〜６５歳（両端を含む）の５人の成人男性被験体が、コホート２（６５ＩＵ／ｋｇ）に登録した。５０ＩＵ／ｋｇ投薬コホートの１０人の被験体全員に、４用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した。６５ＩＵ／ｋｇ投薬コホートに登録した被験体５人中３人に、少なくとも１用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与した。登録した被験体１５人全員が、ブルガリアのソフィアで単一の施設からであった。登録した被験体１５人中１３人の被験体に、少なくとも１用量のＢＩＶＶ００１を投与し、人口統計学およびベースライン特徴の要約に含めた。被験体は全員男性であった。年齢の中央値は３５歳（範囲：２５〜５５歳）であり、被験体は全員白人であった。体重の中央値は、８６．７ｋｇ（範囲：５１．０〜１３０．９ｋｇ）であり、ボディマス指数の中央値は、２５．９ｋｇ／ｍ２（範囲：１６．４〜４０．９ｋｇ／ｍ２）であった。
【０３５１】
安全性解析
【０３５２】
中間解析のために、全体で１３人の被験体を、安全性解析対象集団（Ｓａｆｅｔｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｅｔ）（５０ＩＵ／ｋｇコホートではｎ＝１０、および６５ＩＵ／ｋｇコホートではｎ＝３）に含めた。全ての安全性解析は、安全性解析対象集団に基づいて実施し、少なくとも１用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与された全ての被験体を含んだ。
【０３５３】
治験治療下で出現したＡＥ（ＴＥＡＥ）は、第１のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ投与時または投与後に始まり、最終のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ投与後２８日以内の任意の有害事象として定義される。開始日が不明のＡＥは、終了日が投薬日時の前でなければ治験治療下で出現したと仮定する。一般的にＡＥは、コホート毎および全体としての被験体の発生率によって要約され、コホートおよび被験体毎のデータ一覧として提示された。治験治療下で出現した重篤な有害事象（ＴＥＳＡＥ）もまた、各被験体に関して評価したが、処置した被験体において観察されなかった（表１１）。
【０３５４】
登録した１５人の被験体のうち、１３人の被験体に少なくとも１用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与し、安全性解析に含めた。１９例のＴＥＡＥが１３人中８人（６１．５％）の被験体に報告された（表１１）。重篤なＴＥＡＥも関連するＴＥＡＥも報告されず、ＴＥＡＥのために試験を中止した被験体はなかった。最も一般的なＴＥＡＥは、関節痛、上気道感染症、頭痛、および鼻炎（各被験体１３人中２人；１５．４％）であった。ＦＶＩＩＩに対する阻害剤の発生は検出されず、重篤な過敏症もアナフィラキシーも報告はなかった。各被験体レベルの要約では、被験体が１つまたは複数の事象を報告した場合に被験体を１回計数する。表１１に報告したパーセンテージは、各コホートおよび全体において少なくとも１用量のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを投与された被験体の数に基づく。
【表１１】
2021523878.tif 000024
【０３５５】
免疫原性分析
【０３５６】
被験体は全員、スクリーニング時、１日目、８日目、１５日目、２２日目、３６日目および５０日目（ＥＯＳまたはＥＴ診察）に阻害剤の発生および抗ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ抗体に関して評価した。阻害剤に関する試験は、ベセスダ法のナイメーヘン変法を使用して中央検査機関が実施した。ベセスダ法のナイメーヘン変法の結果が≧０．６ＢＵ／ｍＬに戻った場合、別個の試料を収集して、２〜４週間以内に阻害剤発生の確認に関して試験した。可能性がある抗体の形成に関する試験を、検証されたｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ特異的抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイを使用して中央検査機関で実施した。陽性が確認された試料を、ＦＶＩＩＩ、Ｄ’Ｄ３、またはＸＴＥＮに対して特異的な抗体に関してさらに特徴付けた。阻害剤発生に関して試験陽性であった被験体の数およびパーセンテージ、ならびに抗ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ抗体に関して試験陽性であった被験体の数およびパーセンテージを、安全性解析対象集団を使用してコホート毎に要約した。
【０３５７】
ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの投与後の陽性の抗薬物抗体アッセイ結果を示した被験体はなかった。
【０３５８】
薬物動態解析および結果
【０３５９】
一般的に、安全性およびＰＫデータは、連続するおよび分類別のデータの標準的な要約統計値を使用して要約した。データはコホート毎に要約した。連続変数は、非欠測値の数（ｎ）、平均値、標準偏差（ＳＤ）、中央値、最低値、および最高値を含む記述統計値を使用して要約した。薬物動態パラメーターはまた、幾何平均およびパーセント変動係数（％ＣＶ）を使用して要約した。カテゴリー変数は、数およびパーセンテージ毎に要約した。
【０３６０】
全てのＰＫ解析は、ＰＫ解析対象集団（ＰＫＡＳ）に基づいて実施し、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ投与後に適切な血液試料のコレクションを有する５０ＩＵ／ｋｇ投薬コホートからの９人の被験体を含んだ。
【０３６１】
ＦＶＩＩＩ活性
【０３６２】
週に１回、全体で４用量のＩＶ投与後にｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの薬物動態を特徴付けるために、ＦＶＩＩＩ活性を、予め指定された時点で各被験体において決定した。ＦＶＩＩＩ活性を、一段（活性化部分トロンボプラスチン時間［ａＰＴＴ］）凝血アッセイおよび発色凝固アッセイの両方に関してコホート毎、予定されるＰＫ診察毎、および時点毎に要約した。時間プロファイルに対するＦＶＩＩＩ活性を、両方のＦＶＩＩＩ活性アッセイに関して元の目盛および対数目盛の両方でプロットした。個々のＦＶＩＩＩ活性を、各被験体に関して両方のＦＶＩＩＩ活性アッセイのコホート毎、予定されるＰＫ診察毎、および時点毎に列挙した。一段［ａＰＴＴ］アッセイに従うＦＶＩＩＩ活性の結果を表１２に表す。発色アッセイに従うＦＶＩＩＩ活性の結果を表１３に表す。
【０３６３】
簡単に説明すると、１日目の投薬後、一段アッセイおよび発色アッセイに基づく平均ＦＶＩＩＩ活性はそれぞれ、７２時間で４５．５３％および２９．３７％であり、１２０時間で２１．５６％および１３．４９％、ならびに１６８時間で７．９１％および５．９７％であった。２２日目の投薬後、一段アッセイおよび発色アッセイに基づく平均ＦＶＩＩＩ活性はそれぞれ、７２時間で４６．２８％および３０．４６％、１２０時間で２２．３０％および１４．４８％、ならびに１６８時間で９．８３％および６．７４％であった。一般的に全ての患者、時点、および両方のアッセイに関して、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇ  ＱＷでのＣｔｒｏｕｇｈは、この中間解析において７〜１０％の間の範囲であった。
【０３６４】
ＰＫパラメーター
【０３６５】
個々のＰＫパラメーター推定値を、各被験体に関して列挙し、両方のＦＶＩＩＩ活性アッセイに関してコホート毎、予定されるＰＫ診察毎、および時点毎に記述的に要約した。
【０３６６】
この中間解析においてｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを５０ＩＵ／ｋｇ  ＱＷを投与した全ての被験体に関する幾何平均消失半減期（ｔ１／２）は、一段アッセイによれば４１．２４時間（表１６Ｂ）であり、発色アッセイによれば４３．８７時間（表１７Ｂ）であった。
【０３６７】
１日目の投薬後、幾何平均最高ＦＶＩＩＩ活性（Ｃｍａｘ）は、一段アッセイでは１１３ＩＵ／ｄＬ（表１４）であり、発色アッセイでは１０８ＩＵ／ｄＬ（表１５）であった。２２日目の投薬後、定常状態での幾何平均ＦＶＩＩＩ活性（Ｃｍａｘｓｓ）は、一段アッセイによれば１２７ＩＵ／ｄＬ（表１６Ａ）であり、発色アッセイによれば１１５ＩＵ／ｄＬ（表１７Ａ）であった。
【０３６８】
１日目の投薬後、幾何平均累積ＦＶＩＩＩ活性（ＡＵＣ０−ｔａｕ）は、一段アッセイによれば７６５０時間×ＩＵ／ｄＬ（表１４）であり、発色アッセイによれば５６３０時間×ＩＵ／ｄＬ（表１５）であった。２２日目の投薬後、幾何平均ＡＵＣ０−ｔａｕは、一段アッセイによれば８２７０時間×ＩＵ／ｄＬ（表１６Ａ）であり、発色アッセイによれば５８８０時間×ＩＵ／ｄＬ（表１７Ａ）であった。
【０３６９】
１日目および２２日目の投薬でのＣｍａｘおよびＡＵＣ０−ｔａｕデータは、１．０７（一段アッセイ、表１６Ｂ）および１．０８（発色アッセイ、表１７Ｂ）の累積指数（ＡＩ）によって裏付けられる最小の累積を示した。表１２〜１７に提示するＰＫパラメーターデータの全てに関して、定量下限より下の値（ＢＬＱ）は、解析の目的のために０として処理した。ＰＫパラメーターの計算にとって必要であるが、注入終了時間が捉えられなかった場合、注入期間を、試験のＤｉｒｅｃｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｄｍｉｎｓｔｒａｔｉｏｎ文書における投与ガイドラインに従って、各被験体に関して８分であるとして補完した。
【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６Ａ】
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【表１６Ｂ】
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【表１７Ａ】
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【表１７Ｂ】
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【０３７０】
結論
【０３７１】
１回用量試験（実施例１）において観察した結果と一貫して、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの毎週の投薬は一般的に、良好に忍容され、最後のｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ投与後２８日間を通して阻害剤は検出されなかった。ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇ用量は、一段アッセイおよび発色アッセイによってそれぞれ、４１．２４および４３．８７時間の平均消失半減期（ｔ１／２）を示した。これらの中間結果は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの１回投薬において観察された半減期の増強が、反復投薬ＱＷによって維持されることを実証しており、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの利点は、予防的ＦＶＩＩＩ投薬スケジュールに従って処置を受けた血友病Ａ患者によって実現され得ることを強く示している。
【０３７２】
（実施例３：処置歴がある重度血友病Ａ患者におけるｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮのフェーズ３試験）
本試験は、５０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを週１回投与した場合の安全性および忍容性を評価し、薬物動態を特徴付ける（図１）。試験の主要目的は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮのオンデマンド処置と比較してｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの予防的処置の有効性を評価することである。試験の副次目的は、予防的処置としてのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの出血エピソードに及ぼすその効果および消費、関節の健康、ならびに患者報告転帰（ＰＲＯ）によって測定したクオリティオブライフを評価すること、ならびにｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮをオンデマンド処置に関して評価することである。
【０３７３】
加えて、薬物動態（ＰＫ）の目的は、ａＰＴＴ  ＦＶＩＩＩ活性アッセイに基づいて、全ての被験体に関してベースラインでの、および被験体の既定のサブセットに関して３ヶ月間繰り返したｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ予防のＰＫを特徴付けることである。追加の目的は、手術を受ける被験体におけるｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの有効性を評価すること、ならびにｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの安全性および忍容性を評価することである。さらに、関節健康構造転帰を、超音波を介して評価し、他のクオリティオブライフ測定値およびヘルスケア資源利用に関する処置の影響を評価する。
【０３７４】
試験デザイン
【０３７５】
これは、年齢≧１２歳の重度血友病Ａ患者（＜１ＩＵ／ｄＬ［＜１％］内因性ＦＶＩＩＩとして定義される）における静脈内ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの安全性、有効性、およびＰＫに関するピボタルフェーズ３、オープンラベル多施設試験である。オンデマンドレジメンを現在受けているおよそ２５人の被験体に、オンデマンドでｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇ用量のＩＶを２６週間行い、次に、予防的処置レジメンにおいてｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇ用量のＩＶを週１回２６週間行う。予防的処置レジメンを現在受けている被験体に、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇ用量のＩＶを予防的処置レジメンにおいて週１回５２週間行う。
【０３７６】
年齢≧１２歳のおよそ１４０人の被験体が登録する：繰り返しＰＫ評価を１２週目でおよそ１６人の被験体のサブセットについて実施する。
【０３７７】
被験体はスクリーニングを受け、登録基準を満たした後、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの５０ＩＵ／ｋｇ用量のＩＶによる２つの処置レジメン（すなわち、オンデマンドまたは予防的）の１つへと進む。被験体は全員、休薬期間（現在の治療に応じて、少なくとも４〜５日間）後にベースラインＰＫ評価を受ける。被験体は、試験を通して有効性および安全性評価を受ける。これらの安全性評価は、可能性がある阻害剤形成に関する試験を含む。被験体がオープンラベル拡大試験に登録していない場合、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの最後の用量の２８日後に追跡調査の安全性に関する診察または電話連絡を行う。
【０３７８】
試験の終了（ＥＯＳ）は、両方の基準：（ｉ）少なくとも１０４人の被験体が５０曝露日（ＥＤ）に達し、５０番目のＥＤ後に有効な阻害剤試験を終了したこと；および（ｉｉ）少なくとも２５人の被験体が、２６週間の予防的処置期間を含む試験のオンデマンドアームを終了したこと、または試験を早期に中止したことが満たされている場合に起こり得る。加えて、試験の間に手術を受ける任意のアームの被験体を手術サブセットに含める。少なくとも５人の被験体における少なくとも１０例の大手術を標的として手術の状況での出血の管理および防止を評価する。
【０３７９】
被験体は、およそ２８日間のスクリーニング期間内に適格性を決定するために診療所に来院する。スクリーニング診察に加えて、被験体は、ベースライン、４週目、１２週目、２６週目、３６週目、５２週目、およびＥＯＳ／ＥＴで診察のために診療所に再来院する。投薬期間は、５２週間にわたる。予防的処置アームに入る被験体は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの週１回、５２用量を投与され、出血エピソードを処置するために必要に応じて追加の用量を投与される。オンデマンド処置アームに入る被験体は、２６週間のオンデマンド処置期間の間にｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮをオンデマンドで投与され、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮを週１回、２６用量を投与され、その後の２６週間の予防的処置期間の間に出血エピソードを処置するために必要に応じて追加の用量を投与される。試験を通して安全性を評価する。被験体がオープンラベル拡大試験に登録していない場合、ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの最後の用量の２８日後に追跡調査の安全性に関する診察または電話連絡を行う。
【０３８０】
試験の主要評価項目は、被験体がｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮオンデマンド処置（２６週間）を受けている場合  対  週１回の予防的処置（２６週間）を受けている場合の年間出血率（ＡＢＲ）の被験体内比較である。
【０３８１】
試験の副次評価項目は、（ｉ）ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ予防でのＡＢＲと過去のＡＢＲ（以前の観察試験に参加した予防を受けた被験体に関する）との被験体内比較；（ｉｉ）出血エピソードの発生および消費（総ＡＢＲ、タイプおよび位置毎のＡＢＲ、ならびに患者１人あたりの総年間ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ消費）；（ｉｉｉ）処置に対する応答；（ｉｖ）有効性指数（７日目でＬ３％のトラフレベルを維持する被験体のパーセンテージ；（ｖ）関節の健康；ならびに（ｖｉ）クオリティオブライフ尺度の変化（少なくとも年齢１８歳の被験体に関してｈａｅｍ−Ａ−ＱｏＬおよびＰＲＯＭＩＳ−ＳＦ  ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；ならびに年齢１８歳未満の被験体に関してＨＡＥＭＯ−ＱｏＬおよびＰＲＯＭＩＳ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ−ＳＦ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙを含む。
【０３８２】
処置に対する応答は、（ｉ）出血エピソードを消散するために必要なｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮの注入回数および用量；（ｉｉ）消散のために１回注入を必要とする出血エピソードのパーセンテージ；（ｉｉｉ）４点応答スケールに基づく個々の出血エピソードのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ処置に対する応答に関する被験体の評価；ならびに（ｉｖ）４点応答スケールに基づくｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ処置に対する被験体の応答に関する治験責任医師の総合評価を含む。
【０３８３】
関節の健康評価は、（ｉ）関節出血エピソードのＡＢＲ；（ｉｉ）国際血栓止血学会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ）（ＩＳＴＨ）の基準に基づく５２週目での標的関節の消散；（ｉｉｉ）改変Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ  Ｊｏｉｎｔ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｏｒｅ（ｍＨＪＨＳ）またはＨＪＨＳ）によって評価したベースラインから５２週までの絶対変化に基づく機能的転帰；（ｉｖ）ｍＨＪＨＳまたはＨＪＨＳによって評価した５２週目での関節の悪化がない被験体のパーセンテージを含む。
【０３８４】
追加の評価項目は、（ｉ）最高（ピーク）血漿中薬物濃度（Ｃｍａｘ）、消失半減期（ｔ１／２）、累積指数（ＡＩ）、血漿中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、定常状態での見かけの分布容積（Ｖｓｓ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、増分回収率（ＩＲ）、トラフ血漿中濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）、および既定のＦＶＩＩＩ活性レベルを超えた時間；（ｉｉ）４点応答スケールでのｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ処置に対する被験体の止血応答、手術中に止血を維持するために必要な注入の回数および用量、手術期間中での総ｒＦＶＩＩＩＦｃ−ＶＷＦ−ＸＴＥＮ消費、手術中の推定失血量、手術中に必要な血液成分輸血の回数およびタイプ、ならびに手術期間中の術後の出血エピソードに関する治験責任医師または外科医の評価；（ｉｉｉ）有害事象（ＡＥ）および重篤な有害事象（ＳＡＥ）の発生、身体検査、バイタルサイン、および臨床検査における臨床的に有意な異常、ならびに阻害剤（ベセスダ法のナイメーヘン変法を介して決定したＦＶＩＩＩに対する中和抗体）の発生；ならびに（ｉｖ）亜集団における超音波イメージングを介した解剖学的構造関節健康転帰、他のＱｏＬ尺度の変化（ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ、ＰＧＩＣ（５２週目のみ）、ＰＲＯＭＩＳ  Ｐａｉｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ、ＰＲＯＭＩＳ−ＳＦ  Ｐａｉｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ（≧１８歳の被験体）、ＰＲＯＭＩＳ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ−ＳＦ  Ｐａｉｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ（＜１８歳の被験体））、およびＨＲＵを含む。
【０３８５】
組み入れ／除外基準
【０３８６】
適格候補者は、以下の適格基準を満たさなければならない：（１）インフォームドコンセント提出時に年齢≧１２歳；（２）認定された臨床検査機関によって報告された＜１ＩＵ／ｄＬ（＜１％）内因性ＦＶＩＩＩとして定義される重度血友病Ａ；（３）任意の組換えおよび／もしくは血漿由来ＦＶＩＩＩによるまたはクリオプレシピテートによる少なくとも１５０ＥＤの血友病Ａに関する以前の処置（予防的またはオンデマンド）；（４）現在、販売されているＦＶＩＩＩ製品による予防的処置レジメンを受けていて、試験登録前１２ヶ月間で少なくとも４回の出血エピソードを有するか、または現在、販売されているＦＶＩＩＩ製品によるオンデマンド処置レジメンを受けていて、試験登録前１２ヶ月間で少なくとも１２回の出血エピソードを有した；ならびに（５）スクリーニング時の血小板数≧１００，０００個／μＬ（中央検査機関によって実施され、１日目の用量前に審査された試験）。被験体は以下の理由のいずれかにより除外される：（１）血友病Ａに加えて他の公知の凝血障害；（２）任意のＦＶＩＩＩ製品に関連する過敏症またはアナフィラキシーの履歴；（３）阻害剤試験陽性またはＦＶＩＩＩ投与に対する応答の減少の臨床徴候の履歴（阻害剤の家族歴は被験体を除外しない）；（４）スクリーニング時に得た≧０．６ＢＵ／ｍＬとして定義される阻害剤結果陽性；（５）スクリーニング時に得た血清クレアチニン＞２．０ｍｇ／ｄＬとして定義される異常な腎機能；（６）スクリーニング時に得た血清中アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞５×正常値上限（ＵＬＮ）；（７）スクリーニング時に得た血清中総ビリルビン＞３×ＵＬＮ；（８）スクリーニング前１２週間以内のフィツシランまたはエミシズマブの使用；（９）スクリーニング前１２週間以内のモノクローナル抗体治療薬、ｒＦＶＩＩＩＦｃ以外のＦｃ融合タンパク質、または免疫グロブリンのＩＶによる処置；（１０）スクリーニング前２週間以内のアセチルサリチル酸（ＡＳＡ）による処置または各製品の地域の処方情報に明記されている最高用量もしくはそれを超えての非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）による処置；（１１）スクリーニング前１２週間以内の化学療法および／または他の免疫抑制薬による全身処置（Ｃ型肝炎ウイルス［ＨＣＶ］またはＨＩＶの処置を除く；コルチコステロイドの使用は許容されるが、毎日または１日おきに２０ｍｇ／日のプレドニゾンまたはその同等物を＞１４日間投与する全身性コルチコステロイド処置を除く；局所、外用、および／または吸入ステロイドは許容される；ならびに（１２）スクリーニング前８週間以内の大手術（大手術は、必ずしもその限りではないが通常、全身麻酔および／または呼吸補助を伴い、主要な体腔が貫通および曝露され、または身体的もしくは生理的機能の実質的な障害をもたらす（例えば、開腹、開胸、開頭、関節置換、または脚切断）、任意の外科技法（待機的または緊急）として定義される）。
【化１】
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【化２】
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【化４６】
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【化４７】
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【化４９】
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【化５０】
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【化５１】
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【化５２】
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【化５５】
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【化５６】
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【化５７】
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【表１８−１】
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【表１８−２】
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【表１８−３】
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【表１８−４】
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【表１８−５】
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【表１８−６】
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【表１８−７】
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【表１８−８】
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【表１９−１】
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【表１９−２】
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【表１９−３】
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【０３８７】
特定の実施形態の前述の説明は、本開示の全般的性質を十分に明らかにしていることから、当業者の知識を適用することによって、他者がそのような特定の実施形態を、過度の実験を行うことなく、本開示の全般的概念から逸脱することなく、様々な適用のために容易に改変および／または適合させることができる。したがって、そのような適応および改変は、本明細書に提示する教示および指針に基づいて本開示の実施形態の均等物の意味および範囲内であると意図される。本明細書の語句または用語は、説明目的のためで制限ではないと理解され、したがって、本明細書の用語または語句は、教示および指針に照らして当業者によって解釈される。
【０３８８】
本開示の他の実施形態は、本明細書に開示の本開示の明細書および実践を考慮することによって当業者に明らかであろう。明細書および実施例は、単なる例示のためであると考えられ、本開示の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲に示されると意図される。
【０３８９】
本明細書において引用した全ての特許および刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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