(57)【要約】本発明は、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の新規阻害剤としての一般式（Ｉ）の化合物、その合成の方法、および、血液凝固第ＸＩＩＩ因子に関連する疾患の予防または治療のためのその使用に関する。【化１】2021522200.tif 000229【選択図】図４Ｂ
2021522200.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2021522200.tif 000194
［式中、
Ｒ１は、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９または−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１を表し、
Ｒ２は、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ｅ、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ３は、
【化２】
2021522200.tif 000195
を表し、
Ｒ４は、−ＯＲ＊、−ＮＨ２、−ＮＨＲ＃または−ＮＲ＊Ｒ＃を表し、
Ｒ＊およびＲ＃は、互いに独立に、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−Ｐｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３を表し、
Ａ１は、
【化３】
2021522200.tif 000196
を表し、
Ａ２〜Ａ５は、互いに独立に、
【化４】
2021522200.tif 000197
2021522200.tif 000198
2021522200.tif 000199
を表し、
Ｅは、−ＯＲ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＨＳＯ２Ｒ１３、−Ｏ−Ｌ１−Ｒ１３、−Ｏ−Ｌ１−Ｏ−Ｒ１３、−ＮＨ−Ｌ１−Ｏ−Ｒ１３、−ＮＨ−Ｌ１−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＨＳＯ２−Ｌ１−Ｒ１３、
【化５】
2021522200.tif 000200
を表し、
Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立に、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、
【化６】
2021522200.tif 000201
を表し、
ＲＮ、ＲＮ１およびＲＮ２は、互いに独立に、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２Ｉ、−ＣＨ２−
ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２−ＣＨＦ２、−ＣＨ２−ＣＦ３、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｉ、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）２または−ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３を表し、
Ｌ１〜Ｌ８は、互いに独立に、共有結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＯ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、
【化７】
2021522200.tif 000202
を表し、
Ｒ５〜Ｒ１２、Ｒ４’〜Ｒ７’、およびＲ１５〜Ｒ２３は、互いに独立に、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２Ｉ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２−ＣＨＦ２、−ＣＨ２−ＣＦ３、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｉ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＯＣ４Ｈ９、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ２ＣＦ３、−ＯＣ２Ｆ５、−ＯＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−Ｃ２Ｈ４−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−
ＣＯＣＦ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３、−ＯＯＣ−ＣＨ３、−ＯＯＣ−ＣＦ３、−ＯＯＣ−Ｃ２Ｈ５、−ＯＯＣ−Ｃ３Ｈ７、−ＯＯＣ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＯＣ−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ３Ｈ７、−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２、−Ｎ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−Ｎ［Ｃ（ＣＨ３）３］２、−ＮＨＣＯＣＨ３、−ＮＨＣＯＣＦ３、−ＮＨＣＯＣ２Ｈ５、−ＮＨＣＯＣ３Ｈ７、−ＮＨＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＯＮＨＣ２Ｈ５、−ＣＯＮＨＣ３Ｈ７、−ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＮＨ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＯＮＨＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２、−ＣＯＮ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＣＯＮ（Ｃ３Ｈ７）２、−ＣＯＮ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−ＣＯＮ［Ｃ（ＣＨ３）３］２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＣＨ３、−ＳＯ２ＮＨＣ２Ｈ５、−ＳＯ２ＮＨＣ３Ｈ７、−ＳＯ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＳＯ２ＮＨ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＳＯ２ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２、−ＳＯ２Ｎ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−ＳＯ２Ｎ［Ｃ（ＣＨ３）３］２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−ＮＨＳＯ２ＣＦ３、−ＮＨＳＯ２Ｃ２Ｈ５、−ＮＨＳＯ２Ｃ３Ｈ７、−ＮＨＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＳＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｐｈ、−Ｏ−Ｐｈまたは−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ、
【化８】
2021522200.tif 000203
を表し、
または、Ｒ７とＲ８とは、もしくはＲ８とＲ９とは、一緒になって下記の環部分：
【化９】
2021522200.tif 000204
のうちの１つを形成する］
またはそのＥ／Ｚ−異性体、レジオマー、ジアステレオマー、エナンチオマー、Ｅ／Ｚ−異性体の混合物、レジオマーの混合物、ジアステレオマーの混合物、エナンチオマーの混合物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式（ＩＩ−１）から（ＩＩ−３）：
【化１０】
2021522200.tif 000205
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項１に定義の通りの意味を有する）
のうちのいずれか１つを有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａ２が、
【化１１】
2021522200.tif 000206
から選択され、
および／または、Ａ２が、
【化１２】
2021522200.tif 000207
から好ましくは選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
−Ａ１−Ａ２−が、
【化１３】
2021522200.tif 000208
を表す、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
−Ａ２−Ａ３−が、
【化１４】
2021522200.tif 000209
を表す、請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、
【化１５】
2021522200.tif 000210
を表し、
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９が、請求項１に定義の通りの意味を有する、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
一般式（ＩＩＩ）：
【化１６】
2021522200.tif 000211
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＥは、請求項１に定義の通りの意味を有する］
の、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式（ＩＶ−１）から（ＩＶ−４）：
【化１７】
2021522200.tif 000212
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ４は、−ＯＣＨ３または−ＯＣＨ２ＣＨ３を表し、
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、互いに独立に、−Ｈ、−Ｃｌ、−ＯＨ、−ＮＯ２または−ＣＯＯＨから選択され、
Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＥは、請求項１に定義の通りの意味を有する］
のうちのいずれか１つを有する、請求項１または７に記載の化合物。
【請求項９】
式（Ｖ−１）および（Ｖ−２）：
【化１８】
2021522200.tif 000213
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ４は、−ＯＣＨ３または−ＯＣＨ２ＣＨ３を表し、
Ａ１は、
【化１９】
2021522200.tif 000214
を表し、
Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＥは、請求項１に定義の通りの意味を有する］
のうちのいずれか１つを有する、請求項１から８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
式（ＶＩ）：
【化２０】
2021522200.tif 000215
［式中、
Ｅ１は、−Ｅ、−Ａ４−Ｅまたは−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ３は、
【化２１】
2021522200.tif 000216
を表し、
Ａ１、Ａ４、Ａ５、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＥは、請求項７に定義の通りの意味を有する］
を有する、請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
化合物１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３、４、５ａ、５ｂ、６、７ａ、７ｂ、８ａ、８ｂ、９ａ、９ｂ、１０ａ、１０ｂ、１１ａ、１１ｂ、１２ａ、１２ｂ、１３ａ、１３ｂ、１４ａ、１４ｂ、１５ａ、１５ｂ、１６ａ、１６ｂ、１７ａ、１７ｂ、１８ａ、１８ｂ、１９ａ、１９ｂ、２０ａ、２０ｂ、２１ａ、２１ｂ、２２ａ、２２ｂ、２３ａ、２３ｂ、２４ａ、２４ｂ、２５ａ、２５ｂ、２６ａ、２６ｂ、２７、２８、２９、３０、３１ａ、３１ｂ、３２ａ、３２ｂ、３３ａ、３３ｂ、３４ａ、３４ｂ、３５ａ、３５ｂ、３６ａ、３６ｂ、３７ａ、３７ｂ、３８、３９ａ、３９ｂ、４０、４１、４２ａ、４２ｂ、４３、４４、４５ａおよび４５ｂからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
医薬品として使用するための、特に、抗凝固およびＦＸＩＩＩａ阻害における医薬品として使用するための、請求項１から１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
活性成分としての請求項１から１１のいずれか１項に記載の化合物の少なくとも１つを、薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤の少なくとも１つと一緒に含む、医薬組成物。
【請求項１４】
セリアック病、デューリング−ブローク病、グルテン運動失調症、組織線維症、嚢胞性線維症、腎線維症および糖尿病性腎症、肝線維症、白内障、魚鱗癬、ざ瘡、乾癬、皮膚老化、カンジダ症、神経変性障害でありハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病を含む障害ならびにアテローム性動脈硬化症、血栓症、血小板減少症の治療または予防、ならびに血栓予防への適応における使用のための、さらには、敗血症、脳卒中、再発性閉塞の治療ならびに急性腎傷害、急性肺傷害および急性冠症候群を含む救急治療場面における抗凝固剤としての使用のための、請求項１から１１のいずれか１項に記載の化合物または請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物を生産するための方法であって、
ステップ（０Ｂ）：固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）に好適な樹脂
【化２２】
2021522200.tif 000217
を用意するステップと、
ステップ（１Ｂ）（ａ）：対応するＣ末端アミノ酸ブリディング・ブロックＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−ＯＨのカップリング反応を実施するステップ、
（ｄ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ４を脱保護するステップ、
（ｅ）前記ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは１〜５である）繰り返すステップ
により、樹脂と結合した中間化合物（ＩＩＩｃ）
【化２３】
2021522200.tif 000218
を得るステップと、
ステップ（２Ｂ）：樹脂から切断し保護基ＰＧ４を脱保護することにより中間化合物（ＩＩＩｄ）
【化２４】
2021522200.tif 000219
を得るステップと、
ステップ（３Ｂ）：前記中間化合物ＩＩＩｄとアミノ酸ビルディング・ブロックＡ０
【化２５】
2021522200.tif 000220
とのカップリング反応を実施することにより化合物ＩＶｃ
【化２６】
2021522200.tif 000221
を得るステップと、
ステップ（４Ｂ）：保護基ＰＧ５を脱保護し、続いて、保護されたアミノ酸Ｉａ
【化２７】
2021522200.tif 000222
とのカップリング反応を実施することにより化合物ＩＶｃ
【化２８】
2021522200.tif 000223
を得るステップと、
ステップ（５Ｂ）：保護基ＰＧ１を脱保護し、続いて、Ｎ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施することにより前記式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む、
または、
ステップ（０Ｃ）：Ｎ−脱保護されたＣ末端ビルディング・ブロックＨ−ＥもしくはＨ−Ａｉ−Ｅを用意するステップと、
ステップ（１Ｃ）：（ａ）対応するＣ末端アミノ酸ブリディング・ブロックＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−ＯＨもしくはＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−１−ＯＨのカップリング反応を実施するステップ、
（ｄ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ４を脱保護するステップ、
（ｅ）前記ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは、１〜５または１〜４である）繰り返すステップ
により中間化合物（ＩＩＩｄ）
【化２９】
2021522200.tif 000224
を得るステップと、
ステップ（３Ｂ）：前記中間化合物ＩＩＩｄとアミノ酸ビルディング・ブロックＡ０
【化３０】
2021522200.tif 000225
とのカップリング反応を実施することにより化合物ＩＶｃ
【化３１】
2021522200.tif 000226
を得るステップと、
ステップ（４Ｂ）：保護基ＰＧ５を脱保護し、続いて、保護されたアミノ酸Ｉａ
【化３２】
2021522200.tif 000227
とのカップリング反応を実施することにより化合物Ｖｃ
【化３３】
2021522200.tif 000228
を得るステップと、
ステップ（５Ｂ）：保護基ＰＧ１を脱保護し、続いて、Ｎ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施することにより前記式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、血液凝固第ＸＩＩＩ因子（ｂｌｏｏｄ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＸＩＩＩ）の新規阻害剤、その合成の方法、および、血液凝固第ＸＩＩＩ因子に関連する疾患の予防または治療のためのその使用に関する。
【０００２】
［発明の背景］
静脈血栓塞栓症、急性冠症候群を防止および治療することを目的とした、または心房細動患者における脳卒中のリスクを低減するための、凝固因子または血小板活性化を標的とする薬物の開発には、これまで多大な努力が捧げられてきた。凝固第ＸＩＩＩ因子（ＦＸＩＩＩ、Ｆ１３）は、有望ではあるが依然として未開拓の部分が多く、薬物開発にとっては難易度の高い標的である（ＬＯＲＡＮＤ  Ｌ．、ＪＡＣＯＢＳＥＮ  Ａ．、Ｎａｔｕｒｅ  １９６２、１９５：９１１〜２；Ｓｔｉｅｌｅｒ  Ｍら、Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍｉｅ
Ｉｎｔ  Ｅｄ  ２０１３、５２：１１９３０〜４；Ｂｏｈｍ  Ｍら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２０１４、５７：１０３５５〜６５）。凝固カスケードに含まれる他の酵素がすべてセリン・プロテアーゼであるのに対して、ＦＸＩＩＩ−Ａサブユニットは、８つのヒト・アイソエンザイム（ＦＸＩＩＩ−ＡおよびＴＧ１〜ＴＧ７）からなるトランスグルタミナーゼ・ファミリー（ＥＣ２．３．２．１３：タンパク質−グルタミン  γ−グルタミルトランスフェラーゼ）に属する。トランスグルタミナーゼの最も特徴的な触媒機能は、タンパク質結合を起こしやすい（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｏｕｎｄ）グルタミン残基とリジン残基の側鎖間でのイソペプチド結合を、厳密に制御された様式で形成することである。
【０００３】
ＦＸＩＩＩは、凝血塊（ｃｌｏｔ）の形成、成熟および組成において鍵となる役割を果たす（Ｍｕｓｚｂｅｋ  Ｌら、Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ２０１１、９１：９３１〜７２；Ｂｙｒｎｅｓ  ＪＲら、Ｂｌｏｏｄ  ２０１５、１２６、１９４０〜８）。
【０００４】
ＦＸＩＩＩは、フィブリンを基質として認識し、フィブリン・γ鎖を、次いで規則正しい順序で、フィブリン線維に機械的安定性をもたらすフィブリン・α鎖を、共有結合的に架橋させる。並行して、α２−抗プラスミンなどの抗線維素溶解性のタンパク質が酵素的に取り込まれることにより、凝血塊は生化学的に安定になる。血液中では、非共有結合性のＦＸＩＩＩ−Ａ２Ｂ２ヘテロテトラマー（ｐＦＸＩＩＩ）は、フィブリノゲンと結合している。活性化中、トロンビンは、ＦＸＩＩＩ−ＡサブユニットからＮ末端活性化ペプチドを切断する。続いて起こるカルシウムイオンの結合が、担体であるＢサブユニットの解離を促進し、これにより、活性なＦＸＩＩＩａが生じる。
【０００５】
凝血調節機能（ｃｌｏｔ−ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、およびトロンビンの下流という位置付けが、ＦＸＩＩＩを薬物開発の有望な標的としている（Ｌｏｒａｎｄ  Ｌ、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．、２０００、２０：２〜９）。ＦＸＩＩＩを標的とする特異的な阻害剤であれば、トロンビン生成やフィブリン形成も血小板活性化も妨げないであろう。現在入手可能な抗凝固剤による直接または上流のＦＸａ経由でのトロンビンの遮断には、出血リスクが高まるという特徴があり、そのため多くの患者は有益な治療を受けられない（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＪＨ、Ｎａｔｕｒｅ、１９９５、３７８：３３７〜８）。この周知の医学的必要性を考慮すれば、出血リスクのきわめて小さいまたは皆無である新規の治療的アプローチが是が非でも必要である（Ｗｅｉｔｚ  ＪＩ、Ｆｒｅｄｅｎｂｕｒｇｈ  ＪＣ．、Ｆｒｏｎｔ  Ｍｅｄ  ２０１７、４）。ＦＸＩＩＩ阻害剤の開発によりそのような選択肢がもたらされる可能性があるとはいえ、これまでに同定または合成されているＦＸＩＩＩ遮断剤は著しく少ない。
【０００６】
Ｆｉｎｎｅｙらは、巨大なアマゾンヒルＨａｅｍｅｎｔｅｒｉａ  ｇｈｉｌｉａｎｉｉの唾液腺に由来する、６６アミノ酸長のポリペプチド「トリデギン（ｔｒｉｄｅｇｉｎ）」が、効力を有するＦＸＩＩＩ阻害剤であることを報告した（Ｆｉｎｎｅｙ  Ｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ、１９９７、３２４（パート３：７９７〜８０５）。さらに、１９８０年代後半には、ＦＸＩＩＩａを不可逆的に阻害する一連の小分子が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの凝血塊溶解の亢進を促進するｔ−ＰＡの存在下で、血栓症の動物モデルにおいて探索された（Ｌｅｉｄｙ  ＥＭら、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｒｅｓ、１９９０、５９：１５〜２６；Ｓｈｅｂｕｓｋｉ  ＲＪら、Ｂｌｏｏｄ  １９９０、７５：１４５５〜９）。選択性および効力に乏しいうえ血漿中半減期もわずか数分と短いことから、これらの阻害剤は専ら薬理学的ツールであって有力な候補薬ではない、と考えられた。候補薬の設計および選択を支持および促進する目的で、チアジアゾール弾頭基（ｗａｒｈｅａｄ）を有する不可逆的に作用する阻害剤の薬物動態プロファイルが、ウサギを用いて試験された（Ｎｏｖａｋｏｖｉｃ  Ｊら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ  ２００５、３８：２９３〜７）。さらに、医薬品化学者により、真菌に由来するシクロプロペノン誘導体および合成類似体が、効力を有するＦＸＩＩＩａ阻害剤として報告された（Ｋｏｇｅｎ  Ｈら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．  ２０００、１２２、１８４２〜１８４３）。どちらの事例においても、創薬の観点からは、これらの化合物は効力が低いため、さらなる開発には不適格である。この前提により、（前）臨床試験はこれまで一件も報告されてこなかった。
【０００７】
治療概念のさらなる探索が依然として不足している、効力を有しドラッグライクネスを備えたＦＸＩＩＩ阻害剤が不可欠である。
【０００８】
本発明の目的は、血液凝固第ＸＩＩＩ因子のほぼ確実に不可逆的な新規阻害剤およびその合成の方法、ならびに、血液凝固第ＸＩＩＩ因子に関連する疾患の予防および治療のためのその使用を提供することである。
【０００９】
前記目的は、独立請求項の技術的な教示によって解決される。本発明のさらなる有利な実施形態、態様および詳細は、従属請求項、発明の詳細な説明および実施例から明らかである。
【００１０】
驚くべきことに、マイケル受容体弾頭基を有する、特定のペプチド模倣性阻害剤が、効力を有しかつ選択的なＦＸＩＩＩａ阻害剤であることが見出された。本特許出願は、弾頭基のＣ末端に向かって２番目の位置を特徴とする好ましい構造を開示するものである。厳密にその位置で制約されたペプチド模倣アミノ酸（ｐｅｐｔｉｄｅ−ｍｉｍｅｔｉｃ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）が、効力を有しかつ／または選択的なＦＸＩＩＩａ阻害剤を得るために好ましいことが見出された。そのペプチド模倣骨格は、活性部位であるシステインの方向を完全に向いた状態で、柔軟な求電子性弾頭基を配置している。作用機序に基づく本阻害剤は、マイケル受容体弾頭基の固有反応性が低い場合にもＦＸＩＩＩａを効率的に不活性化させる。このことは、副作用および毒性を回避するための必要条件である。
【００１１】
したがって、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物：
【００１２】
【化１】
2021522200.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９または−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１を表し、
Ｒ２は、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ｅ、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ３は、
【００１３】
【化２】
2021522200.tif 000004
を表し、
Ｒ４は、−ＯＲ＊、−ＮＨ２、−ＮＨＲ＃または−ＮＲ＊Ｒ＃を表し、
Ｒ＊およびＲ＃は、互いに独立に、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−Ｐｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３を表し、
Ａ１は、
【００１４】
【化３】
2021522200.tif 000005
を表し、
Ａ２〜Ａ５は、互いに独立に、
【００１５】
【化４】
2021522200.tif 000006
2021522200.tif 000007
2021522200.tif 000008
を表し、
Ｅは、−ＯＲ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＨＳＯ２Ｒ１３、−Ｏ−Ｌ１−Ｒ１３、−Ｏ−Ｌ１−Ｏ−Ｒ１３、−ＮＨ−Ｌ１−Ｏ−Ｒ１３、−ＮＨ−Ｌ１−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＨＳＯ２−Ｌ１−Ｒ１３、
【００１６】
【化５】
2021522200.tif 000009
を表し、
Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立に、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、
【００１７】
【化６】
2021522200.tif 000010
を表し、
ＲＮ、ＲＮ１およびＲＮ２は、互いに独立に、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２Ｉ、−ＣＨ２−
ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２−ＣＨＦ２、−ＣＨ２−ＣＦ３、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｉ、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）２または−ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３を表し、
Ｌ１〜Ｌ８は、互いに独立に、共有結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＯ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、
【００１８】
【化７】
2021522200.tif 000011
を表し、
Ｒ５〜Ｒ１２、Ｒ４’〜Ｒ７’、およびＲ１５〜Ｒ２３は、互いに独立に、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−
Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２Ｉ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２−ＣＨＦ２、−ＣＨ２−ＣＦ３、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｉ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＯＣ４Ｈ９、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ２ＣＦ３、−ＯＣ２Ｆ５、−ＯＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−Ｃ２Ｈ４−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣＦ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３、−ＯＯＣ−ＣＨ３、−ＯＯＣ−ＣＦ３、−ＯＯＣ−Ｃ２Ｈ５、−ＯＯＣ−Ｃ３Ｈ７、−ＯＯＣ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＯＣ−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ３Ｈ７、−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２、−Ｎ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−Ｎ［Ｃ（ＣＨ３）３］２、−ＮＨＣＯＣＨ３、−ＮＨＣＯＣＦ３、−ＮＨＣＯＣ２Ｈ５、−ＮＨＣＯＣ３Ｈ７、−ＮＨＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＯＮＨＣ２Ｈ５、−ＣＯＮＨＣ３Ｈ７、−ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＮＨ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＯＮＨＣ（ＣＨ３）３、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２、−ＣＯＮ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＣＯＮ（Ｃ３Ｈ７）２、−ＣＯＮ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−ＣＯＮ［Ｃ（ＣＨ３）３］２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＣＨ３、−ＳＯ２ＮＨＣ２Ｈ５、−ＳＯ２ＮＨＣ３Ｈ７、−ＳＯ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＳＯ２ＮＨ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＳＯ２ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２、−ＳＯ２Ｎ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−ＳＯ２Ｎ［Ｃ（ＣＨ３）３］２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−ＮＨＳＯ２ＣＦ３、−ＮＨＳＯ２Ｃ２Ｈ５、−ＮＨＳＯ２Ｃ３Ｈ７、−ＮＨＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＳＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｐｈ、−Ｏ−Ｐｈもしくは−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ、
【００１９】
【化８】
2021522200.tif 000012
を表し、
または、Ｒ７とＲ８とは、もしくはＲ８とＲ９とは、一緒になって下記の環部分：
【００２０】
【化９】
2021522200.tif 000013
のうちの１つを形成する］
またはそのＥ／Ｚ−異性体、レジオマー（ｒｅｇｉｏｍｅｒ）、ジアステレオマー、エナンチオマー、Ｅ／Ｚ−異性体の混合物、レジオマーの混合物、ジアステレオマーの混合物、エナンチオマーの混合物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは薬学的に許容される塩に関する。
【００２１】
第ＸＩＩＩ因子阻害剤とＦＸＩＩＩａ阻害剤とは本願においては同義的に使用される用語であるが、驚くべきことに、良好な第ＸＩＩＩ因子阻害剤またはＦＸＩＩＩａ阻害剤は、特定のペプチド骨格またはペプチド模倣骨格を有する不可逆的な阻害剤でなくてはならないことが見出された。可逆的な阻害剤は、本願において開示される不可逆的な阻害剤と比較すると効率性で劣ることが証明されており、後者の不可逆的な阻害剤は、加えて、ＦＸＩＩＩａに対してきわめて特異的であり、そのため、一定の構造要件が満たされている場合には、最低限の副作用しか示さない。さらに、不可逆的に作用する阻害剤は、ＦＸＩＩＩ活性がリバウンドする潜在的可能性を回避する。１つの具体的要件は、ペプチド骨格またはペプチド模倣骨格は、本願に開示のアミノ酸誘導体およびペプチド模倣体を含め、少なくとも５アミノ酸長という一定の長さを有さなければならない、ということである（Ｒｅｆ．６およびＲｅｆ．７を参照されたい）。したがって、Ｒ２＝−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ｅであればペンタペプチドという結果が得られ、Ｒ２＝−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｅであればヘキサペプチドが、Ｒ２＝−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅであればヘプタペプチドが得られる。好ましいのは、Ｒ２＝−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｅであるヘキサペプチド、ならびに、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅであるヘプタペプチドである。弾頭基をもつアミノ酸が第１のアミノ酸であり、第２は置換基Ｒ１を有するアミノ酸であり、第３のアミノ酸はＡ１であり、以下同様である。これより長い７アミノ酸長を超えるペプチドは、アミノ酸誘導体およびペプチド模倣体を含め、阻害活性のみを考慮した場合には良好から中程度のＦＸＩＩＩａ阻害剤であることに変わりないが、治療的価値は低下している。その根拠は、このようなより長いペプチドは数分以内に血液中で分解され、そのため、治療的に有用なＦＸＩＩＩａ阻害剤になるには血液中における半減期も安定性も十分に備えていないことを本発明者らが見出したことにある（Ｒｅｆ．１７およびＲｅｆ．１８を参照されたい）。したがって、本願において開示されるＦＸＩＩＩａ阻害剤は、立体配座が制約されたアミノ酸であるＡ１、すなわち（Ｓ）−プロリン（Ｌ−プロリン）、または同じ立体配置を有する本願に開示の環状プロリン誘導体、すなわちＬ−プロリン誘導体と、アルキルまたはシクロアルキル側鎖を有するアミノ酸であるＡ２とを含有する、ペンタペプチド、ヘキサペプチドおよびヘプタペプチドである。最低限の長さのペプチド骨格またはペプチド模倣骨格がこのように必要であることに加え、マイケル・システムを有するアミノ酸にｃ末端が結び付いている２つのアミノ酸がきわめて重要である。一般式（Ｉ）において、マイケル・システムをもつアミノ酸にｃ末端が結び付いているアミノ酸は、
【００２２】
【化１０】
2021522200.tif 000014
として描かれる（式中、置換基Ｒ１は、アルキルおよびシクロアルキル残基の小さい基ならびにメチオニンに限定される）。イオン性もしくは極性基（ＧｌｕまたはＧｌｎの側鎖など）、または芳香族基、または、７個を超える、好ましくは６個を超える炭素原子を有する相当に嵩高い基は、阻害剤活性を大幅に低下させることが見出されている（Ｒｅｆ．１１、Ｒｅｆ．２０およびＲｅｆ．２１を参照されたい）。一般式（Ｉ）に示すように、置換基Ｒ１の立体化学も重要である。特に重要なのは、Ｒ１を有するアミノ酸と連結しているアミノ酸であり、このアミノ酸は、マイケル受容体システム（弾頭基）を有するアミノ酸にＣ末端が連結している２番目のアミノ酸である。Ｒ１を有するアミノ酸と連結しているアミノ酸またはアミノ酸誘導体を、本願においてはＡ１と呼ぶ。Ａ１は、環状アミノ酸、すなわち本願に開示のプロリンまたはプロリン誘導体でなければならない。Ａ１の立体化学もきわめて重要であり、プロリンの場合は（Ｓ）またはＬでなければならず、プロリン誘導体の場合は（Ｓ）−プロリンと同じ空間的方向性が必要であり、Ｌ立体配置が最も好ましい（Ｒｅｆ．４を参照されたい）。参考例４におけるＡ１のピペリジン環の立体中心は（Ｓ）立体配置を有するが、この場合はプロリン部分とは逆の空間的方向性を有しており、第ＸＩＩＩ因子阻害剤としては不活性であることが見出された。さらに、プロリン部分Ａ１における立体中心は、さらなる置換基を有してはならず、すなわち、プロリン部分の立体中心には１個の水素原子が存在していなければならない（Ｒｅｆ．５を参照されたい）。参考例５においてはメチル基が立体中心に存在しており、そのことが、この化合物を第ＸＩＩＩ因子阻害剤としては完全に不活性なものとしている。さらに、ピリジノン部分はプロリン誘導体ではなく、ピリジノン部分がＡ１である場合も化合物は第ＸＩＩＩ因子阻害剤として不活性なものになることは強調しなければならない（Ｒｅｆ．１〜Ｒｅｆ．３を参照されたい）。Ａ１については、立体配置がＬ立体配置であることがきわめて重要であり、実際には、キラル中心は第３級炭素原子でなければならない（すなわち、第４の置換基は存在しない）。さらに、Ｎ末端には、アミド結合を形成するカルボニル官能基を介して環状基が結び付いているべきである。（オキソ）プロリン以外のさらなるアミノ酸がＮ末端に結び付いていてはならない。Ｎ末端の環状基は、好ましくは、六員の環状基、より好ましくは芳香族基、より好ましくは芳香族の六員の炭素環式またはＮ−複素環式基、例えばフェニルおよびピリジルである。したがって、ＦＸＩＩＩａに関する阻害活性と本願に開示される阻害剤の構造的特徴との間には、密接な構造的関係［ＳＡＲ（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ−Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ）：構造活性相関］がある。こうしたＳＡＲは最先端の研究からは明らかになっておらず、そのことは、ともかく驚くべきことである。
【００２３】
好ましくは、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物、およびそのＥ／Ｚ−異性体、ジアステレオマー、エナンチオマー、Ｅ／Ｚ−異性体の混合物、ジアステレオマーの混合物、エナンチオマーの混合物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物または薬学的に許容される塩に関し、
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｃ
Ｈ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９または−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１を表し、
Ｒ２は、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ｅ、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ３は
【００２４】
【化１１】
2021522200.tif 000015
を表し、
Ｒ４は、−ＯＲ＊、−ＮＨ２、−ＮＨＲ＃または−ＮＲ＊Ｒ＃を表し；
Ｒ＊およびＲ＃は、互いに独立に、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２−Ｐｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３を表し、
Ａ１は、
【００２５】
【化１２】
2021522200.tif 000016
を表し、
Ａ２〜Ａ５は、互いに独立に、
【００２６】
【化１３】
2021522200.tif 000017
2021522200.tif 000018
2021522200.tif 000019
を表し、
Ｅは、−ＯＲ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＨＳＯ２Ｒ１３、−Ｏ−Ｌ１−Ｒ１３、−Ｏ−Ｌ１−Ｏ−Ｒ１３、−ＮＨ−Ｌ１−Ｏ−Ｒ１３、−ＮＨ−Ｌ１−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＨＳＯ２−Ｌ１−Ｒ１３、
【００２７】
【化１４】
2021522200.tif 000020
を表し、
Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立に、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、
【００２８】
【化１５】
2021522200.tif 000021
を表し、
ＲＮ、ＲＮ１およびＲＮ２は、−Ｈを表し、
Ｌ１〜Ｌ８は、互いに独立に、共有結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）２−、
【００２９】
【化１６】
2021522200.tif 000022
を表し、
Ｒ４’、Ｒ５’、Ｒ６’およびＲ７’は、−Ｈを表し、
Ｒ５〜Ｒ１２、およびＲ１５〜Ｒ２３は、互いに独立に、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（ＣＨ３）３、−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−Ｃ２Ｈ４−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ３Ｈ７、−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（ＣＨ３）３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２または−Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２−ＣＯＮＨ２を表す。
【００３０】
本願において開示されるすべての一般式については、別段の定義がない限り、アミノ酸残基Ａ２〜Ａ５は、好ましくは、互いに独立に、
【００３１】
【化１７】
2021522200.tif 000023
2021522200.tif 000024
を表す。
【００３２】
オリゴペプチド残基−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ｅ、−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｅおよび−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅは、トリ、テトラおよびペンタペプチドを表し、式中、アミノ酸Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５は、アミド結合を介して互いに連結しており、アミノ酸Ａ１のＮ末端は、マイケル・システムをもつアミノ酸に隣接している、Ｒ１側鎖をもつアミノ酸のＣ末端に結び付いている。したがって、アミノ酸が互いに結び付いている方向は、明確に定まっている。
【００３３】
好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、Ｒ１は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１または−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３を表し、より好ましくは、Ｒ１は、本願において開示される任意の一般式において、−Ｃ（ＣＨ３）３、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３または−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５を表し、最も好ましくは、Ｒ１は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３または−ＣＨ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５を表す。
【００３４】
したがって、好ましいのは、式（ＩＩ−１）から（ＩＩ−３）：
【００３５】
【化１８】
2021522200.tif 000025
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、式（Ｉ）において定義されているものと同じ意味を有する）
のうちの任意の１つの化合物である。
【００３６】
さらに、本願において開示される任意の一般式において、特に、式（Ｉ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）のうちの任意の１つにおいて、Ａ１は、好ましくは、
【００３７】
【化１９】
2021522200.tif 000026
から選択され、
および／または、Ａ２は、好ましくは、
【００３８】
【化２０】
2021522200.tif 000027
から選択される。
【００３９】
より好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、特に、式（Ｉ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）のうちの任意の１つにおいて、Ａ１は、
【００４０】
【化２１】
2021522200.tif 000028
を表す。
【００４１】
より好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、特に、式（Ｉ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）のうちの任意の１つにおいて、Ａ２は、
【００４２】
【化２２】
2021522200.tif 000029
を表し、最も好ましくは、Ａ２は、
【００４３】
【化２３】
2021522200.tif 000030
を表す。
【００４４】
また、本願において開示される任意の一般式において、特に、式（Ｉ）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）において、残基−Ａ１−Ａ２−が、
【００４５】
【化２４】
2021522200.tif 000031
を表すことも好ましい。
【００４６】
好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、特に、式（Ｉ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）のうちの任意の１つにおいて、Ａ３は、
【００４７】
【化２５】
2021522200.tif 000032
を表し、より好ましくは、−Ａ２−Ａ３−は、
【００４８】
【化２６】
2021522200.tif 000033
を表す。
【００４９】
好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、特に、式（Ｉ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）のうちの任意の１つにおいて、Ｒ３は、
【００５０】
【化２７】
2021522200.tif 000034
（式中、置換基ＲＮ、Ｒ５〜Ｒ１２は、本願において開示される通りの意味を有する）を表し、より好ましくは、Ｒ３は、
【００５１】
【化２８】
2021522200.tif 000035
を表し、より一層好ましくは、Ｒ３は、
【００５２】
【化２９】
2021522200.tif 000036
を表し、より一層好ましくは、Ｒ３は、
【００５３】
【化３０】
2021522200.tif 000037
を表し、ＲＮ、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、本願または式（Ｉ）において定義されているものと同じ意味を有し、より一層好ましくは、Ｒ３は、
【００５４】
【化３１】
2021522200.tif 000038
を表し、最も好ましくは、Ｒ３は、
【００５５】
【化３２】
2021522200.tif 000039
を表す。
【００５６】
より好ましくは、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物：
【００５７】
【化３３】
2021522200.tif 000040
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＥは、本願において定義されている通りの意味および好ましい意味を有する］；または、より詳細には、式（ＩＩＩ−１）もしくは（ＩＩＩ−２）の化合物：
【００５８】
【化３４】
2021522200.tif 000041
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ３は、
【００５９】
【化３５】
2021522200.tif 000042
、好ましくは
【００６０】
【化３６】
2021522200.tif 000043
を表し、
Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５、ＲＮ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＥは、本願において定義されているものと同じ意味を有する］
を対象とする。
【００６１】
より一層好ましくは、本発明は、式（ＩＶ−１）〜（ＩＶ−５）のうちの任意の１つの化合物：
【００６２】
【化３７】
2021522200.tif 000044
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ４は、−ＯＣＨ３または−ＯＣ２Ｈ５を表し、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、互いに独立に、−Ｈ、−Ｃｌ、−ＯＨ、−ＮＯ２または−ＣＯ２Ｈを表し、Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＥは、本願において定義されているものと同じ意味を有する］
を対象とする。
【００６３】
さらにより好ましいのは、式（Ｖ−１）および（Ｖ−２）のうちの任意の１つの化合物：
【００６４】
【化３８】
2021522200.tif 000045
［式中、
Ｅ２は、−Ｅ、−Ａ３−Ｅ、−Ａ３−Ａ４−Ｅまたは−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ４は、−ＯＣＨ３または−ＯＣ２Ｈ５を表し、
Ａ１は、
【００６５】
【化３９】
2021522200.tif 000046
を表し、
Ａ３、Ａ４、Ａ５およびＥは、先に定義されているものと同じ意味を有する］
である。
【００６６】
さらにより好ましいのは、式（ＶＩ）の化合物：
【００６７】
【化４０】
2021522200.tif 000047
［Ｅ１は、−Ｅ、−Ａ４−Ｅまたは−Ａ４−Ａ５−Ｅを表し、
Ｒ３は、
【００６８】
【化４１】
2021522200.tif 000048
を表し；
Ａ１、Ａ４、Ａ５、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＥは、本願において定義されているものと同じ意味、または、より好ましくは式（Ｖ−１）において定義されているものと同じ意味を有する］
である。
【００６９】
好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、Ｒ３は、
【００７０】
【化４２】
2021522200.tif 000049
からなる群から選択され、より好ましくは、Ｒ３は、
【００７１】
【化４３】
2021522200.tif 000050
を表す。
【００７２】
好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、Ｒ４’、Ｒ５’、Ｒ６’およびＲ７’は、互いに独立に、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＨ３、−ＣＨ
２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｍｅ、−ＯＣＯＣＨ３、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣＯＣＨ３、−ＮＨＣＯＣＦ３、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−ＮＨＳＯ２ＣＦ３、−ＳＣＨ３、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＣＨ３または−ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、より好ましくは、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ３、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｍｅ、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、最も好ましくは−Ｈを表す。
【００７３】
好ましくは、本願において開示される任意の一般式において、Ｅは、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、
【００７４】
【化４４】
2021522200.tif 000051
からなるＣ末端基から選択され、より好ましくは、Ｅは、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、
【００７５】
【化４５】
2021522200.tif 000052
からなるＣ末端基から選択される。
【００７６】
また、
【００７７】
【化４６】
2021522200.tif 000053
2021522200.tif 000054
2021522200.tif 000055
2021522200.tif 000056
2021522200.tif 000057
2021522200.tif 000058
2021522200.tif 000059
2021522200.tif 000060
2021522200.tif 000061
2021522200.tif 000062
2021522200.tif 000063
2021522200.tif 000064
2021522200.tif 000065
2021522200.tif 000066
からなる群から選択される下記の化合物も好ましい。
【００７８】
本発明のさらなる一態様は、式（Ｉ）の化合物の生産に関する。スキーム１に示すように、本発明の化合物を生産するための方法は、
ステップ（０）：保護されたアミノ酸Ｉａ
【００７９】
【化４７】
2021522200.tif 000067
を用意するステップと、
ステップ１：（ａ）保護されたアミノ酸Ｉａとアミノ酸ビルディング・ブロック（ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｌｏｃｋ）ＩＩａ
【００８０】
【化４８】
2021522200.tif 000068
とのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物のアミノ保護基ＰＧ２を脱保護するステップ
により中間化合物３ａ
【００８１】
【化４９】
2021522200.tif 000069
を得るステップと、
ステップ２：（ａ）ステップ１の中間化合物ＩＩＩａと、対応するＣ末端アミノ酸ビルディング・ブロックＨ２−Ａｉ−ＯＰＧ３とのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ３を脱保護するステップ、
（ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは１〜５である）繰り返すステップ
により中間化合物ＩＶａ
【００８２】
【化５０】
2021522200.tif 000070
を得るステップと、
ステップ３：ステップ２の中間化合物ＩＶａと、対応するＣ末端ビルディング・ブロックＨ−Ｅとのカップリング反応を実施すること
により中間化合物Ｖａ
【００８３】
【化５１】
2021522200.tif 000071
を得るステップと、
ステップ４：（ａ）中間化合物Ｖａの保護基ＰＧ１を脱保護するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物とＮ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施するステップにより式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む。
【００８４】
【化５２】
2021522200.tif 000072
【００８５】
スキーム２に示すように、本発明の化合物を生産するための代替方法は、
ステップ（０）：保護されたアミノ酸ＩＩｂ
【００８６】
【化５３】
2021522200.tif 000073
を用意するステップと、
ステップ１Ａ：（ａ）保護されたアミノ酸ＩＩｂとＮ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物のアミノ保護基ＰＧ４を脱保護するステップ
により中間化合物ＩＩｂ
【００８７】
【化５４】
2021522200.tif 000074
を得るステップと、
ステップ２Ａ：（ａ）中間化合物ＩＩｂとアミノ酸ビルディング・ブロックＩＩａ
【００８８】
【化５５】
2021522200.tif 000075
とのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物のアミノ保護基ＰＧ２を脱保護するステップ
により中間化合物ＩＩＩｂ
【００８９】
【化５６】
2021522200.tif 000076
を得るステップと、
ステップ３Ａ：（ａ）中間化合物ＩＩＩｂと、対応するＣ末端アミノ酸ビルディング・ブロックＨ２−Ａｉ−ＯＰＧ３とのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ３を脱保護するステップ、
（ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは１〜５である）繰り返すステップ
により中間化合物ＩＶｂ
【００９０】
【化５７】
2021522200.tif 000077
を得るステップと、
ステップ４Ａ：中間化合物ＩＶｂと、対応するＣ末端ビルディング・ブロックＨ−Ｅとのカップリング反応を実施することにより式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む。
【００９１】
【化５８】
2021522200.tif 000078
【００９２】
スキーム３に示すように、本発明の化合物を生産するための代替方法は、
ステップ（０Ｂ）：固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）に好適な樹脂
【００９３】
【化５９】
2021522200.tif 000079
を用意するステップと、
ステップ（１Ｂ）（ａ）：対応するＣ末端アミノ酸ブリディング・ブロックＰＧ４ＮＨ−
Ａｉ−ＯＨとのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ４を脱保護するステップ、
（ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは１〜５である）繰り返すステップ
により、樹脂と結合した中間化合物（ＩＩＩｃ）
【００９４】
【化６０】
2021522200.tif 000080
を得るステップと、
ステップ（２Ｂ）：樹脂から切断し保護基ＰＧ４を脱保護することにより中間化合物（ＩＩＩｄ）
【００９５】
【化６１】
2021522200.tif 000081
を得るステップと、
ステップ（３Ｂ）：中間化合物ＩＩＩｄとアミノ酸ビルディング・ブロックＡ０
【化６２】
2021522200.tif 000082
【００９６】
とのカップリング反応を実施することにより中間化合物ＩＶｃ
【００９７】
【化６３】
2021522200.tif 000083
を得るステップと、
ステップ（４Ｂ）：保護基ＰＧ５を脱保護し、続いて、保護されたアミノ酸Ｉａ
【００９８】
【化６４】
2021522200.tif 000084
とのカップリング反応を実施することにより化合物Ｖｃ
【００９９】
【化６５】
2021522200.tif 000085
を得るステップと、
【０１００】
ステップ（５Ｂ）：保護基ＰＧ１を脱保護し、続いて、Ｎ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施することにより式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む。
【０１０１】
【化６６】
2021522200.tif 000086
【０１０２】
スキーム４に示すように、本発明の化合物を生産するための代替方法は、
ステップ（０Ｃ）：Ｎ−脱保護されたＣ末端ビルディング・ブロックＨ−ＥまたはＨ−Ａｉ−Ｅを用意するステップと、
ステップ（１Ｃ）：（ａ）対応するＣ末端アミノ酸ブリディング・ブロックＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−ＯＨまたはＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−１−ＯＨのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ４を脱保護するステップ、
（ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは、１〜５または１〜４である）繰り返すステップ
により中間化合物（ＩＩＩｄ）
【０１０３】
【化６７】
2021522200.tif 000087
を得るステップと、
ステップ（３Ｂ）：中間化合物ＩＩＩｄとアミノ酸ビルディング・ブロックＡ０
【０１０４】
【化６８】
2021522200.tif 000088
とのカップリング反応を実施することにより化合物ＩＶｃ
【０１０５】
【化６９】
2021522200.tif 000089
を得るステップと、
ステップ（４Ｂ）：保護基ＰＧ５を脱保護し、続いて、保護されたアミノ酸Ｉａ
【０１０６】
【化７０】
2021522200.tif 000090
とのカップリング反応を実施することにより化合物Ｖｃ
【０１０７】
【化７１】
2021522200.tif 000091
を得るステップと、
ステップ（５Ｂ）：保護基ＰＧ１を脱保護し、続いて、Ｎ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施することにより式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む。
【０１０８】
【化７２】
2021522200.tif 000092
【０１０９】
スキーム３および４における前述の方法は、次のように組み合わせることもできる。
【０１１０】
本発明の化合物を生産するための方法は、
ステップ（０Ｂ）：固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）に好適な樹脂
【０１１１】
【化７３】
2021522200.tif 000093
を用意するステップと、
ステップ（１Ｂ）（ａ）：対応するＣ末端アミノ酸ブリディング・ブロックＰＧ４ＮＨ−
Ａｉ−ＯＨのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ４を脱保護するステップ、
（ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは１〜５である）繰り返すステップ
により、樹脂と結合した中間化合物（ＩＩＩｃ）
【０１１２】
【化７４】
2021522200.tif 000094
を得るステップと、
ステップ（２Ｂ）：樹脂から切断し保護基ＰＧ４を脱保護することにより中間化合物（ＩＩＩｄ）
【０１１３】
【化７５】
2021522200.tif 000095
を得るステップと、
ステップ（３Ｂ）：中間化合物ＩＩＩｄとアミノ酸ビルディング・ブロックＡ０
【０１１４】
【化７６】
2021522200.tif 000096
とのカップリング反応を実施することにより化合物ＩＶｃ
【０１１５】
【化７７】
2021522200.tif 000097
を得るステップと、
ステップ（４Ｂ）：保護基ＰＧ５を脱保護し、続いて、保護されたアミノ酸Ｉａ
【０１１６】
【化７８】
2021522200.tif 000098
とのカップリング反応を実施することにより化合物Ｖｃ
【０１１７】
【化７９】
2021522200.tif 000099
を得るステップと、
ステップ（５Ｂ）：保護基ＰＧ１を脱保護し、続いて、Ｎ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施することにより式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む；
または、
ステップ（０Ｃ）：Ｎ−脱保護されたＣ末端ビルディング・ブロックＨ−ＥもしくはＨ−Ａｉ−Ｅを用意するステップと、
ステップ（１Ｃ）：（ａ）対応するＣ末端アミノ酸ブリディング・ブロック（ｂｕｌｉｄｉｎｇ  ｂｌｏｃｋ）ＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−ＯＨもしくはＰＧ４ＮＨ−Ａｉ−１−ＯＨのカップリング反応を実施するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）を実施した結果生じた化合物の保護基ＰＧ４を脱保護するステップ、
（ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）をｉ回（ここで、ｉは、１〜５または１〜４である）繰り返すステップ
により中間化合物（ＩＩＩｄ）
【０１１８】
【化８０】
2021522200.tif 000100
を得るステップと、
ステップ（３Ｂ）：中間化合物ＩＩＩｄとアミノ酸ビルディング・ブロックＡ０
【０１１９】
【化８１】
2021522200.tif 000101
とのカップリング反応を実施することにより化合物ＩＶｃ
【０１２０】
【化８２】
2021522200.tif 000102
を得るステップと、
ステップ（４Ｂ）：保護基ＰＧ５を脱保護し、続いて、保護されたアミノ酸Ｉａ
【０１２１】
【化８３】
2021522200.tif 000103
とのカップリング反応を実施することにより化合物Ｖｃ
【０１２２】
【化８４】
2021522200.tif 000104
を得るステップと、
ステップ（５Ｂ）：保護基ＰＧ１を脱保護し、続いて、Ｎ末端ビルディング・ブロックＲ３−ＣＯ２Ｈとのカップリング反応を実施することにより式（Ｉ）の化合物を生産するステップと
を含む。
【０１２３】
本願においては、Ａｉは、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５のうちの１つを表す。Ｈ２−Ａｉ−ＯＰＧ３は、Ａｉ（Ａ１〜Ａ５のうちの１つ）骨格と、無保護の遊離アミノ（Ｈ２Ｎ−）基と、ＰＧ３基により保護されたカルボキシル部分とを有するアミノ酸を意味する。
【０１２４】
用語「保護基」は、本願においては、有機合成において、好ましくはアミノ基およびカルボキシル基に用いるための、一般的に使用される保護基を指す。ＰＧ１およびＰＧ５は、アミノ基に用いるのに好適な保護基である。ＰＧ２、ＰＧ３およびＰＧ４は、カルボキシル基に用いるのに好適な保護基である。好ましくは、ＰＧ１は、アセチル、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびフルオレニルメチレンオキシ（Ｆｍｏｃ）の各基からなる、またはこれらを含む群から選択されることが可能である。ＰＧ２、ＰＧ３およびＰＧ４は、メトキシ、エトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ベンジルオキシの各基からなる、またはこれらを含む群から選択されることが可能であり、好ましくはｔｅｒｔ−ブトキシ基であり得る。
【０１２５】
ステップ１〜４、１Ａ〜４Ａ、１Ｂ、１Ｃ、３Ｂ〜５Ｂにおいて実施されるカップリング反応について、カップリング反応とは、本願においては、ペプチド合成において一般的に用いられるものを指す。カップリング反応の実施については、初めに、活性化基を導入することによりカルボン酸基を活性化して、アミノ酸ビルディング・ブロックのアミノ基とのカップリング反応を促進する。カルボン酸の活性化基は、別の場での反応によってもｉｎ  ｓｉｔｕ反応によっても導入されることが可能である。好ましくは、活性化基は、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｉなどのハロゲン基、−ＯＣＯＣＨ３などの無水物基、Ｎ−オキシベンゾトリアゾール基およびＮ−オキシスクシンイミドからなる、またはこれらを含
む群から選択されることが可能である。好ましくは、活性化基はｉｎ  ｓｉｔｕで導入され、そのことについてはペプチド化学においては周知である。活性化基の導入には、以下のカップリング試薬、すなわち、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＡＯＰ、ＰｙＡＯＰ、ＴＢＴＵ、ＥＥＤＱ、ポリリン酸（ＰＰＡ）、ＤＰＰＡ、ＨＡＴＵ、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＴＦＦＨ、Ｂｒｏｐ、ＰｙＢｒｏｐおよびＣＩＰのうち任意のものを使用することができる。
【０１２６】
弾頭基（ｗａｒｈｅａｒ）は、スキーム５に示す経路に従って合成した。
【０１２７】
【化８５】
2021522200.tif 000105
【０１２８】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、有機または無機の酸または塩基を用いて形成され得る。そのような酸付加塩形成に好適な酸の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、チャイナ酸（ｃｈｉｎａ  ａｃｉｄ）、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、および、当業者に周知の他の鉱酸またはカルボン酸である。酸付加塩は、従来の方式で、遊離塩基体を十分な量の所望の酸と接触させて塩を生成させることにより調製される。
【０１２９】
本発明の化合物が酸性基をもつ場合には、塩は、無機または有機塩基を用いて形成されることも可能である。好適な無機または有機塩基の例は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギニンなどである。塩は、当技術分野において周知の方法を用いた従来の方式で、例えば、先に挙げた群の中から選択された酸の溶液で一般式（Ｉ）の化合物の溶液を処理することにより、調製され得る。
【０１３０】
したがって、本発明の別の態様は、医薬品としての使用のための一般式（Ｉ）による化合物、ならびに医学におけるその使用に関する。特に好ましいのは、抗凝固における、さらには、トランスグルタミナーゼ、とりわけ第ＸＩＩＩ因子の阻害剤としての、使用である。
【０１３１】
本明細書に記載の一般式（Ｉ）による化合物は、トランスグルタミナーゼ、とりわけ第ＸＩＩＩ因子に関連するおよび／またはそれによって引き起こされる疾患の治療および予防に特に適している。
【０１３２】
したがって、本発明の別の態様は、本発明の一般式（Ｉ）の化合物の、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、血栓症、自己免疫疾患、神経変性疾患、線維性障害、皮膚科的疾患、創傷治癒および炎症性疾患の治療または予防のための使用である。
【０１３３】
とりわけ、式（Ｉ）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−１）〜（ＩＩＩ−２）、（ＩＶ−１）〜（ＩＶ−５）、（Ｖ−１）〜（Ｖ−２）および（ＶＩ）のうちの任意の１つの化合物は、セリアック病、デューリング−ブローク病（Ｄｕｈｒｉｎｇ−Ｂｒｏｃｑ−ｄｉｓｅａｓｅ）、グルテン運動失調症、組織線維症、嚢胞性線維症、腎線維症および糖尿病性腎症、肝線維症、白内障、魚鱗癬、ざ瘡、乾癬、皮膚老化、カンジダ症、神経変性障害でありハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病を含む障害ならびにアテローム性動脈硬化症、血栓症、血小板減少症の治療または予防、ならびに血栓予防への適応（ｔｈｒｏｍｂｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）に、さらには、敗血症、脳卒中、再発性閉塞（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）の治療ならびに急性腎傷害、急性肺傷害および急性冠症候群を含む救急治療場面における抗凝固剤としての使用に、有用である。
【０１３４】
本発明の化合物の好ましい潜在的適応としては、主に、永続的な血漿凝固活性化状態（ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  ｐｌａｓｍａｔｉｃ  ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）を示すリスク患者群における血栓予防への適応が挙げられる。このような群には、腫瘍性疾患に罹患している患者、および、何よりもまず、定期的な血液透析療法を受ける必要のある患者が含まれる。好ましいのは、ヘパリン起因性血小板減少症などの出血および／または副作用のリスクの高い患者におけるＦＸＩＩＩ阻害剤を用いての抗凝固である。
【０１３５】
さらなる適応としては、心不全および／または律動不整に罹患している高齢の多疾患併存患者が挙げられ、これらの疾患は、孤立性血管凝固疾患（ｄｉｓｃｒｅｔｅ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）ならびに進行性の慢性腎疾患を高頻度に伴う。その独特の作用様式のため、本化合物は、急性腎傷害、急性肺傷害および急性冠状動脈症候群などの救急治療場面における好ましい抗凝固剤である。さらなる適応としては、敗血症、脳卒中および再発性閉塞が挙げられ、プラスミノゲン活性化因子（例えば、ｔＰＡおよびｕＰＡ）との併用もある。しかし、最も重要な適応は、アテローム性動脈硬化症および血栓症の防止および治療である。
【０１３６】
他のトランスグルタミナーゼ・アイソエンザイムの不活性化が可能であるため、化合物のうちの少なくともいくつかについては、セリアック病、デューリング−ブローク病、グルテン運動失調症、組織線維症、嚢胞性線維症、腎線維症および糖尿病性腎症、肝線維症、白内障、魚鱗癬、ざ瘡、乾癬、皮膚老化およびカンジダ症の治療または予防に関しても特許請求する。さらに、血液脳関門透過性化合物を、神経変性障害でありハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病を含む障害の治療のために使用してもよい。
【０１３７】
用語「トランスグルタミナーゼ依存性疾患」は、体内におけるトランスグルタミナーゼの機能障害、撹乱または機能亢進によって引き起こされる、またはそれらに関係するすべ
ての疾患、機能障害または他の健康障害を含む。あるいは、ある種のリスクがある患者にとっては、例えば血栓形成傾向の患者においては、ＦＸＩＩＩなどのトランスグルタミナーゼを予防的に遮断することが有益である可能性があろう。
【０１３８】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物の特別な適合性は、分子構造に起因する立体的および電子的な特性に関係している。求電子性の弾頭基は、不可逆的なトランスグルタミナーゼ阻害剤の本質的な単位であるように思われ、特に、規定の位置（本願においてプロリン誘導体またはプロリン類似体と呼ぶ、立体配座が制約されたプロリンまたは非天然のプロリン・ベースのアミノ酸の位置など）に一定の種類のアミノ酸を有する一定のペプチド模倣骨格と組み合わせると、効力を有するトランスグルタミナーゼ阻害剤、特に血液凝固第ＸＩＩＩ因子およびトランスグルタミナーゼ２が結果として得られる。選択性は、骨格内の選択された位置に前記構成要素を組み入れることにより得られる。
【０１３９】
本発明による医薬組成物は、本発明による化合物を少なくとも１つ含む。好ましくは、本発明による医薬組成物は、活性成分としての本発明による化合物の少なくとも１つを、薬学的に許容される（すなわち非毒性の）担体、賦形剤および／または希釈剤の少なくとも１つと一緒に含む。
【０１４０】
本発明による医薬組成物は、セリアック病、デューリング−ブローク病、グルテン運動失調症、組織線維症、嚢胞性線維症、腎線維症および糖尿病性腎症、肝線維症、白内障、魚鱗癬、ざ瘡、乾癬、皮膚老化、カンジダ症、神経変性障害でありハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病を含む障害ならびにアテローム性動脈硬化症、血栓症、血小板減少症の治療または予防ならびに血栓予防への適応に、さらには、敗血症、脳卒中、再発性閉塞の治療ならびに急性腎傷害、急性肺傷害および急性冠症候群を含む救急治療場面における抗凝固剤としての使用に有用である。
【０１４１】
本発明には、皮膚経由、皮膚内、胃内（ｉｎｔｒａｇａｓｔｒａｌ）、皮内、血管内、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、膣内、口腔内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎ）、経直腸、皮下、舌下、局所または経皮膚の各適用を含む非経口適用のための医薬製剤も含まれ、そのような製剤は、典型的な基剤および／または希釈剤に加え、本発明による化合物の少なくとも１つおよび／またはその薬学的に許容される塩を活性成分として含有する。
【０１４２】
液体形態の製剤としては、溶液剤、懸濁剤および乳剤が挙げられる。例として、非経口注射剤に用いるものとしては水溶液剤もしくは水／プロピレングリコール溶液剤を、または、経口溶液剤、懸濁剤および乳剤に用いるものとしては甘味料および乳白剤の添加を挙げることができる。液体形態の製剤としては、鼻腔内投与のための溶液剤を挙げることもできる。吸入に好適なエアゾール製剤としては、溶液剤および粉末状の固形剤を挙げることができ、これらの製剤は、不活性な圧縮ガス、例えば窒素などの薬学的に許容される担体と組み合わせて存在し得る。
【０１４３】
以下の略語は、本願において言及される一般アミノ酸および修飾アミノ酸に用いられる。
【０１４４】
【表１】
2021522200.tif 000106
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１Ａ】加水分解したフィブリン塊のゲル浸透クロマトグラフィーの結果を示すグラフである。フィブリン塊形成中に化合物５（破線）によりｃＦＸＩＩＩを阻害した結果、メインピークは、阻害剤なしの対照（実線）に比較して、より低分子量の生成物の方向にシフトした。ＧＰＣカラムの空隙容量（Ｖ０）および総容量（Ｖｔ）ならびに（ｘ）ＦＤＰの見かけの分子質量を示す。
【図１Ｂ】ヒトフィブリノゲン（ＦＧＮ）およびゲル浸透クロマトグラフィーのメインピーク画分（ｘＦＤＰ／ＦＤＰ）の、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析の結果を示す写真である。試料は、非還元条件下で分析した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥでは、最も特徴的な「Ｄダイマー」バンドまたは「Ｄドメイン」分解生成物（フラグメントＤ）のいずれかが現れた。フィブリンγ鎖に対するモノクローナル抗体はクーマシー染色と類似のパターンを示したが、新規の「ＤＤ−ＸＬｉｎｋ−ｍａｂ」（Ｚｅｄｉｒａ、Ａ０７６）は、Ｄダイマー生成物におけるイソペプチド結合を特異的に認識した。
【図２】化合物５をスパイクしたヒト全血のトロンボエラストグラムである。グラフは、ＭＣＦ［ｍｍ］の大きい方から小さい方に向かって濃度［μＭ］が０、０．６３、２．５、２０μＭであることを表している。
【図３Ａ】阻害剤なし対照に対する最大凝血塊硬度の低下率（ＭＣＦｃ）を示すグラフである。
【図３Ｂ】対照に対する６０分時凝血塊溶解（ｃｌｏｔ  ｌｙｓｉｓ  ａｔ  ６０  ｍｉｎｕｔｅｓ）の増加率（ＬＩ６０ｃ）を示すグラフである。
【図４Ａ】静脈鬱血および再灌流のウサギモデルの実験スケジュールを示す図である。Ｂ．Ｓ．：血液試料；ＢＬ：ベースライン；ＴＥＧ：トロンボエラストグラフィー。
【図４Ｂ】化合物５を注入した場合にはＰＢＳ対照動物と比較して流量が有意に多くなることがｉｎ  ｖｉｖｏ実験で証明されていることを示すグラフである。データは平均±標準誤差（ｎ＝６〜７）として示す。
【図４Ｃ】静脈流量による、流量の曲線下面積を示すグラフである。化合物５群の方が、３５分時点と１３５分時点との間の、ベースラインに対して正規化した頸静脈流量の平均曲線下面積（ＡＵＣ）が有意に大きい。データは平均±標準誤差（ｎ＝６〜７）として示す。
【図４Ｄ】血栓湿重量が化合物５群において有意に減少していることを示すグラフである。血栓湿重量は、注入の１３５分後に測定した。データは、ドットプロットとして、平均±標準誤差（ｎ＝６〜７、ｐ＝０．０２６５）と共に示す。
【図４Ｅ】テンプレート皮膚出血時間は影響を受けていないという最も重要な点を示すグラフである。テンプレート皮膚出血時間は、注入の６０分後に測定した。ＰＢＳと化合物５との間に差異は観測されなかった。最大観測時間は３００秒と事前に定めた。データは、ドットプロットとして、平均±標準誤差（ｎ＝７〜８）と共に示す。
【発明を実施するための形態】
【０１４６】
［実施例］
本実施例において使用される以下の略語は、以下の意味を有する：
ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ：Ｎ−エチルジイソプロピルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＰｙＡＯＰ：（７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
【０１４７】
化学的実施例
以下の実施例は、選抜した化合物を用いて本発明を例証することを意図したものであり、本願の知的所有権の保護範囲をこれらの具体的な実施例に限定するものではない。類似の化合物および類似の合成法に従って生産された化合物が本願の知的所有権の保護範囲に該当することは、当業者には明らかである。
【０１４８】
化合物ＺＥＤ７８８の調製
【０１４９】
【化８６】
2021522200.tif 000107
【０１５０】
１２．０ｇのＢｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ（３９．６ｍｍｏｌ）および７．０９ｇの炭酸セシウム（２１．８ｍｍｏｌ、０．５５ｅｑ）を１００ｍｌのＤＭＦに懸濁させ、室
温にて１時間撹拌した。２．４７ｍｌのヨードメタン（３９．６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、クエン酸溶液（１０％）、ＮａＨＣＯ３溶液（１０％）およびブラインでそれぞれ２回ずつ洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物は、さらに精製することなく使用した。
収量・収率：１３．４ｇ、＞１００％；ＥＳＩ−ＭＳ：３１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５１】
化合物ＺＥＤ７２０の調製
【０１５２】
【化８７】
2021522200.tif 000108
１３．４ｇのＺＥＤ７８８（約３９．６ｍｍｏｌ）および９８６ｍｇのＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）を３０ｍｌのアセトニトリルに溶解した。１００ｍｌのアセトニトリル中の１７．６ｇの重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７７．１ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を室温にて終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、クエン酸溶液（１０％）、ＮａＨＣＯ３溶液（１０％）およびブラインでそれぞれ２回ずつ洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物は、さらに精製することなく使用した。
収量・収率：１３．７ｇ、８３％
ＥＳＩ−ＭＳ：４１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５３】
化合物ＺＥＤ７２１の調製
【０１５４】
【化８８】
2021522200.tif 000109
１３．７ｇのＺＥＤ７２０（３２．８ｍｍｏｌ）を２００ｍｌの乾燥ジエチルエーテルに溶解し、アルゴン雰囲気下で−７８℃に冷却した。３６．１ｍｌの水素化ジイソブチルアルミニウム（１Ｍ、ヘキサン中）を滴加し、この溶液を−７８℃にて３０分間撹拌した後、酒石酸カリウムナトリウム（ロッシェル塩）溶液でクエンチした。有機層を分離し、
Ｎａ２ＳＯ４で脱水させ、濾過し、濃縮乾固した。粗生成物は、さらに精製することなく使用した。
収量・収率：１３．３ｇ、＞１００％
ＥＳＩ−ＭＳ：３８８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５５】
化合物ＺＥＤ７５５の調製
【０１５６】
【化８９】
2021522200.tif 000110
１３．３ｇのＺＥＤ７２１（約３２．８ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのベンゼンに溶解し、１１．２ｇの（カルブメトキシメチレン（ｃａｒｂｍｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌｅｎｅ））−トリフェニルホスホラン（１ｅｑ）を少しずつ添加した。終夜撹拌した後、溶媒を蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
収量・収率：１２．０ｇ、８３％
ＥＳＩ−ＭＳ：４４４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５７】
化合物Ｉｂの調製
【０１５８】
【化９０】
2021522200.tif 000111
１２．０ｇのＺＥＤ７５５（２７．１ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１）に溶解し、室温にて１時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、残留物を１００ｍｌのＤＭＦおよび９．２３ｍｌのＤＩＰＥＡ（２ｅｑ）に溶解した。７．１５ｇのＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシ）スクシンイミドを添加し、反応物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、クエン酸溶液（１０％）およびブラインでそれぞれ２回ずつ洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水させ、濾過し、溶媒を蒸発さ
せた。残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
収量・収率：５．８９ｇ、７６％
ＥＳＩ−ＭＳ：２８８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５９】
化合物Ｉｃの調製
【０１６０】
【化９１】
2021522200.tif 000112
Ｉｃの合成はＩｂに従って実施し、その際、ステップ４では（カルブエトキシメチレン）−トリフェニルホスホランを用いた。
収量・収率：３．２７ｇ、５９％（最終ステップ）
ＥＳＩ−ＭＳ：３０２．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６１】
化合物Ｉｄの調製
【０１６２】
【化９２】
2021522200.tif 000113
Ｉｄの合成はＩｂに従って実施し、その際、ステップ４ではトリフェニルホスホニウムカルバモイルメチリドを用いた。
収量・収率：６２３ｍｇ、３６％（最終ステップ）
ＥＳＩ−ＭＳ：２７３．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６３】
化合物Ｉｅの調製
【０１６４】
【化９３】
2021522200.tif 000114
Ｉｅの合成はＩｂに従って実施し、その際、ステップ４ではＮ−メチル−トリフェニルホスホニウムカルバモイルメチリドを用いた。
収量・収率：２４１ｍｇ、３２％（最終ステップ）
ＥＳＩ−ＭＳ：２８７．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６５】
化合物ＺＥＤ３４７８の調製
【０１６６】
【化９４】
2021522200.tif 000115
ＺＥＤ３４７８は、出発物質として０．４１ｇ（０．２８ｍｍｏｌ）のＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用い、標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学（ＤＭＦ中での反応、ＴＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＰＥＡを用いたカップリング、ピペリジンを用いた脱保護）により合成した。Ｎ−α−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｌ−シクロヘキシルグリシン（２回）、続いて（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−４−オキソピロリジン−２−カルボン酸のカップリングにより、Ｂｏｃ保護された樹脂と結合した「Ｂｏｃ−ＺＥＤ３４７８−樹脂」がもたらされた。続いて、ＺＥＤ３４７８を樹脂から切断した（９５％ＴＦＡ／２．５％水／２．５％トリイソプロピルシランを用いた）。溶液を還元し、粗生成物（ＴＦＡ塩）をジエチルエーテルから沈殿させた。
収量・収率：１２４ｍｇ、８５％；ＥＳＩ−ＭＳ：４０７．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６７】
化合物ＺＥＤ３４８０の調製
【０１６８】
【化９５】
2021522200.tif 000116
１２４ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）のＺＥＤ３４７８を５ｍｌのＤＭＦに溶解した。５５．５ｍｇ（１ｅｑ）のＢｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ロイシン、９１．３ｍｇ（１ｅｑ）のＨＡＴＵおよび８１．６μｌ（２ｅｑ）のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、クエン酸溶液（１０％）、ＮａＨＣＯ３溶液（１０％）およびブラインでそれぞれ２回ずつ洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物は、さらに精製することなく使用した。
収量・収率：１１９ｍｇ、８０％；ＥＳＩ−ＭＳ：６２０．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６９】
化合物ＺＥＤ３４８１の調製
【０１７０】
【化９６】
2021522200.tif 000117
１１９ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）のＺＥＤ３４８０を６ｍｌのＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１）に溶解し、室温にて１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を５ｍｌのＤＭＦに溶解した。５４．６ｍｇ（１ｅｑ）のＩｂ、７２．２ｍｇ（１ｅｑ）のＨＡＴＵおよび６４．６μｌ（２ｅｑ）のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、クエン酸溶液（１０％）、ＮａＨＣＯ３溶液（１０％
）およびブラインでそれぞれ２回ずつ洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物は、さらに精製することなく使用した。
収量・収率：８６ｍｇ、５７％；ＥＳＩ−ＭＳ：７８９．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７１】
［実施例１−１］
化合物１ａ／ｂの調製：
【０１７２】
【化９７】
2021522200.tif 000118
８６ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のＺＥＤ３４８１を５ｍｌのＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１）に溶解し、室温にて１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を３ｍｌのＤＭＦに溶解した。１９．６ｍｇ（１ｅｑ）の４−ニトロフタル酸無水物および３７μｌ（２ｅｑ）のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＨＰＬＣにより精製した。
収量・収率：２６ｍｇ、２７％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８２．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７３】
［実施例１−２］
化合物２ａ／ｂの調製：
【０１７４】
【化９８】
2021522200.tif 000119
実施例１−２の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：２１ｍｇ、３６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８０．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７５】
［実施例１−３］
化合物３の調製：
【０１７６】
【化９９】
2021522200.tif 000120
実施例１−３の合成は、対応する無水物を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：３９ｍｇ、４９％
ＥＳＩ−ＭＳ：８３９．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７７】
［実施例１−４］
化合物４の調製：
【０１７８】
【化１００】
2021522200.tif 000121
実施例１−４の合成は、対応するカルボン酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１８ｍｇ、２６％
ＥＳＩ−ＭＳ：８８２．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７９】
［実施例１−５］
化合物５ａ／ｂの調製：
【０１８０】
【化１０１】
2021522200.tif 000122
実施例１−５の合成は、対応する無水物を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１．０３ｇ、４８％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８３８．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８１】
［実施例１−６］
化合物６の調製：
【０１８２】
【化１０２】
2021522200.tif 000123
実施例１−６の合成は、対応するカルボン酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１２ｍｇ、１８％
ＥＳＩ−ＭＳ：８５５．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８３】
［実施例１−７］
化合物７ａ／ｂの調製：
【０１８４】
【化１０３】
2021522200.tif 000124
実施例１−７の合成は、対応するビルディング・ブロックＩｃを用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：６３ｍｇ、５２％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８９６．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８５】
［実施例１−８］
化合物８ａ／ｂの調製：
【０１８６】
【化１０４】
2021522200.tif 000125
実施例１−８の合成は、対応する無水物およびビルディング・ブロックＩｃを用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：４６ｍｇ、４９％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８５２．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８７】
［実施例１−９］
化合物９ａ／ｂの調製：
【０１８８】
【化１０５】
2021522200.tif 000126
実施例１−９の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：７９ｍｇ、５６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８９】
［実施例１−１０］
化合物１０ａ／ｂの調製：
【０１９０】
【化１０６】
2021522200.tif 000127
実施例１−１０の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：２１ｍｇ、３２％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９６０．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９１】
［実施例１−１１］
化合物１１ａ／ｂの調製：
【０１９２】
【化１０７】
2021522200.tif 000128
実施例１−１１の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：３６ｍｇ、４３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９６０．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９３】
［実施例１−１２］
化合物１２ａ／ｂの調製：
【０１９４】
【化１０８】
2021522200.tif 000129
実施例１−１２の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１３ｍｇ、２３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９７４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９５】
［実施例１−１３］
化合物１３ａ／ｂの調製：
【０１９６】
【化１０９】
2021522200.tif 000130
実施例１−１３の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：３６ｍｇ、５６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８５４．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９７】
［実施例１−１４］
化合物１４ａ／ｂの調製：
【０１９８】
【化１１０】
2021522200.tif 000131
実施例１−１４の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：２６ｍｇ、４１％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８２．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９９】
［実施例１−１５］
化合物１５ａ／ｂの調製：
【０２００】
【化１１１】
2021522200.tif 000132
実施例１−１５の合成は、対応する無水物およびビルディング・ブロックＩｄを用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１８ｍｇ、２６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８２３．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０１】
［実施例１−１６］
化合物１６ａ／ｂの調製：
【０２０２】
【化１１２】
2021522200.tif 000133
実施例１−１６の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：３９ｍｇ、５６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８２．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０３】
［実施例１−１７］
化合物１７ａ／ｂの調製：
【０２０４】
【化１１３】
2021522200.tif 000134
実施例１−１７の合成は、対応する無水物およびビルディング・ブロックＩｅを用い、
実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：９ｍｇ、２３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８３７．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０５】
［実施例１−１８］
化合物１８ａ／ｂの調製：
【０２０６】
【化１１４】
2021522200.tif 000135
実施例１−１８の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１７ｍｇ、３１％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９０８．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０７】
［実施例１−１９］
化合物１９ａ／ｂの調製：
【０２０８】
【化１１５】
2021522200.tif 000136
実施例１−１９の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：２５ｍｇ、３６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９２２．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０９】
［実施例１−２０］
化合物２０ａ／ｂの調製：
【０２１０】
【化１１６】
2021522200.tif 000137
実施例１−２０の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１２ｍｇ、２９％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８６．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１１】
［実施例１−２１］
化合物２１ａ／ｂの調製：
【０２１２】
【化１１７】
2021522200.tif 000138
実施例１−２１の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１９ｍｇ、３６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８６．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１３】
［実施例１−２２］
化合物２２ａ／ｂの調製：
【０２１４】
【化１１８】
2021522200.tif 000139
実施例１−２２の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：３６ｍｇ、５３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８６６．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１５】
［実施例１−２３］
化合物２３ａ／ｂの調製：
【０２１６】
【化１１９】
2021522200.tif 000140
実施例１−２３の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：１４ｍｇ、２６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９０４．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１７】
［実施例１−２４］
化合物２４ａ／ｂの調製：
【０２１８】
【化１２０】
2021522200.tif 000141
実施例１−２４の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：２３ｍｇ、３２％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１９】
［実施例１−２５］
化合物２５ａ／ｂの調製：
【０２２０】
【化１２１】
2021522200.tif 000142
実施例１−２５の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：３９ｍｇ、５３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２２１】
［実施例１−２６］
化合物２６ａ／ｂの調製：
【０２２２】
【化１２２】
2021522200.tif 000143
実施例１−２６の合成は、対応するアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。収量・収率：５６ｍｇ、５９％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８７０．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２２３】
［実施例１−２７］
化合物２７の調製：
【０２２４】
【化１２３】
2021522200.tif 000144
実施例１−２７の合成は、対応するカルボン酸およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：７９ｍｇ、５２％
ＥＳＩ−ＭＳ：８２４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２２５】
［実施例１−２８］
化合物２８の調製：
【０２２６】
【化１２４】
2021522200.tif 000145
実施例１−２８の合成は、対応するカルボン酸およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：２６ｍｇ、３２％
ＥＳＩ−ＭＳ：８８１．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２２７】
［実施例１−２９］
化合物２９の調製：
【０２２８】
【化１２５】
2021522200.tif 000146
実施例１−２９の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１５ｍｇ、２７％
ＥＳＩ−ＭＳ：９３１．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２２９】
［実施例１−３０］
化合物３０の調製：
【０２３０】
【化１２６】
2021522200.tif 000147
実施例１−３０の合成は、対応するカルボン酸、アミン（Ｈ−Ｅ）およびアミノ酸を用
い、スキーム４に従って実施した。
収量・収率：３６ｍｇ、５２％
ＥＳＩ−ＭＳ：９９０．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２３１】
［実施例１−３１］
化合物３１ａ／ｂの調製：
【０２３２】
【化１２７】
2021522200.tif 000148
実施例１−３１の合成は、対応する無水物、アミン（Ｈ−Ｅ）およびアミノ酸を用い、スキーム４に従って実施した。
収量・収率：２６ｍｇ、４８％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９７２．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２３３】
［実施例１−３２］
化合物３２ａ／ｂの調製：
【０２３４】
【化１２８】
2021522200.tif 000149
実施例１−３２の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：５６ｍｇ、５３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：１１０７．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２３５】
［実施例１−３３］
化合物３３ａ／ｂの調製：
【０２３６】
【化１２９】
2021522200.tif 000150
実施例１−３３の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：３２ｍｇ、６５％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：１１４５．５［Ｍ＋Ｎａ］＋
【０２３７】
［実施例１−３４］
化合物３４ａ／ｂの調製：
【０２３８】
【化１３０】
2021522200.tif 000151
実施例１−３４の合成は、対応する無水物、アミノ酸およびＷａｎｇ樹脂を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１５ｍｇ、２４％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８３９．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２３９】
［実施例１−３５］
化合物３５ａ／ｂの調製：
【０２４０】
【化１３１】
2021522200.tif 000152
実施例１−３５の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、スキーム４に従って
実施した。
収量・収率：２４ｍｇ、４１％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８５３．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４１】
［実施例１−３６］
化合物３６ａ／ｂの調製：
【０２４２】
【化１３２】
2021522200.tif 000153
実施例１−３６の合成は、対応する無水物、アミノ酸およびＭｅｔｈｙｌ  Ｉｎｄｏｌｅ  ＡＭ樹脂を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：３６ｍｇ、３２％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８５２．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４３】
［実施例１−３７］
化合物３７ａ／ｂの調製：
【０２４４】
【化１３３】
2021522200.tif 000154
実施例１−３７の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：３１ｍｇ、４２％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８５６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４５】
［実施例１−３８］
１．１  化合物Ｒｅｆ．０８の調製：
【０２４６】
【化１３４】
2021522200.tif 000155
骨格テトラペプチドＨ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｃｈｇ−ＮＨ２は、対応するアミノ酸を用い、化合物ＺＥＤ３４７８に従って標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学により構築した。マイケル受容体（アクリル酸エチル）は、化合物Ｉｃを用い、化合物ＺＥＤ３４８１に従って直接カップリングした。最後に、化合物Ｒｅｆ．０８を、Ｃｂｚ−Ｃｌを用い、実施例１−１に従って合成した。
収量・収率：８６ｍｇ、６１％
ＥＳＩ−ＭＳ：７８３．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４７】
１．２  化合物３８の調製：
【０２４８】
【化１３５】
2021522200.tif 000156
化合物３８の合成は、化合物Ｒｅｆ．０６に従って実施し、その際、最終ステップではＣｂｚ−Ｃｌの代わりに４，５−ジクロロフタル酸無水物を用いた。
収量・収率：３６ｍｇ、５１％
ＥＳＩ−ＭＳ：８６５．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４９】
［実施例１−３９］
１．化合物Ｒｅｆ．０９の調製：
【０２５０】
【化１３６】
2021522200.tif 000157
化合物Ｒｅｆ．０９の合成は、化合物Ｒｅｆ．０８に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの合成には、対応するアミノ酸を標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学により用いた。
収量・収率：９３ｍｇ、５７％
ＥＳＩ−ＭＳ：８１２．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２５１】
２．化合物３９ａ／３９ｂ（位置異性体）の調製：
【０２５２】
【化１３７】
2021522200.tif 000158
化合物３９（３９ａ／３９ｂ）の合成は、化合物Ｒｅｆ．０９に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの構築には対応するアミノ酸を、さらに、最終ステップではＣｂｚ−Ｃｌの代わりに３，４−ピリジンジカルボン酸無水物を用いた。
収量・収率：４１ｍｇ、３６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８１２．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２５３】
［実施例１−４０］
１．化合物Ｒｅｆ．１０の調製：
【０２５４】
【化１３８】
2021522200.tif 000159
骨格トリペプチドＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｃｈｇ−ＯＨは、化合物ＺＥＤ３４７８に従って標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学により構築し、その際、２−クロロトリチル樹脂および対応するアミノ酸を用いた。樹脂から切断（９５％ＴＦＡ／２．５％水／２．５％トリイソプロピルシランを用いた）した後、イソペンチルアミンのＣ末端カップリングを、ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用い化合物ＺＥＤ３４８０に従って実施した。続いて、ＤＭＦ中のピペリジンを用いてＦｍｏｃ保護基を除去し、マイケル受容体（アクリル酸エチル）を、化合物Ｉｃを用い化合物ＺＥＤ３４８１に従ってカップリングした。最後に、化合物Ｒｅｆ．１０を、Ｃｂｚ−Ｃｌを用い、実施例１−１に従って合成した。
収量・収率：７２ｍｇ、４５％
ＥＳＩ−ＭＳ：７４０．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２５５】
２．化合物４０の調製：
【０２５６】
【化１３９】
2021522200.tif 000160
化合物４０の合成は、化合物Ｒｅｆ．１０に従って実施し、その際、骨格トリペプチドの構築には対応するアミノ酸を、ただし、最終ステップではＣｂｚ−Ｃｌの代わりに５−ニトロイソフタル酸（ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用い化合物ＺＥＤ３４８０に従ってカップ
リングする）を用いた。
収量・収率：５６ｍｇ、６２％
ＥＳＩ−ＭＳ：８２７．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２５７】
［実施例１−４１］
１．化合物Ｒｅｆ．１１の調製：
【０２５８】
【化１４０】
2021522200.tif 000161
化合物Ｒｅｆ．１１の合成は、化合物Ｒｅｆ．０８に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの合成には対応するアミノ酸を、さらに、最終ステップではＣｂｚ−Ｃｌの代わりに２−チオフェンカルボン酸（ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用い化合物ＺＥＤ３４８０に従ってカップリングする）を用いた。
収量・収率：６９ｍｇ、５６％
ＥＳＩ−ＭＳ：７８８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２５９】
２．化合物４１の調製：
【０２６０】
【化１４１】
2021522200.tif 000162
化合物４１の合成は、化合物Ｒｅｆ．１１に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：４５ｍｇ、６１％
ＥＳＩ−ＭＳ：７７１．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２６１】
［実施例１−４２］
１．化合物Ｒｅｆ．１２の調製：
【０２６２】
【化１４２】
2021522200.tif 000163
化合物Ｒｅｆ．１２の合成は、化合物Ｒｅｆ．０８に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドを生じさせる固相化学には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：７８ｍｇ、５２％
ＥＳＩ−ＭＳ：８２３．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２６３】
２．化合物４２ａ／４２ｂ（位置異性体）の調製：
【０２６４】
【化１４３】
2021522200.tif 000164
化合物４２ａ／４２ｂの合成は、化合物Ｒｅｆ．１２に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの構築には対応するアミノ酸を、さらに、最終ステップではＣｂｚ−Ｃｌの代わりに４−ニトロフタル酸無水物を用いた。
収量・収率：３２ｍｇ、３７％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８６８．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２６５】
［実施例１−４３］
１．化合物Ｒｅｆ．１３の調製：
【０２６６】
【化１４４】
2021522200.tif 000165
骨格ペンタペプチドＨ−Ｎｌｅ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−ＯＨは、化合物ＺＥＤ３４７８に従って標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学により構築し、その際、２−クロロトリチル樹脂および対応するアミノ酸を用いた。マイケル受容体（アクリル酸メチル）は、化合物Ｉｂを用い、化合物ＺＥＤ３４８１に従って直接カップリングした。最後に、ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用いてＡｃ−（Ｄ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨをカップリングし、続いて、ＤＣＭ中のＴＦＡを用いてｔｅｒｔ−ブチルエステルを切断することにより、化合物ＺＥＤ３４８０に従って化合物Ｒｅｆ．１３を合成した。
収量・収率：１４２ｍｇ、６５％
ＥＳＩ−ＭＳ：９６７．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２６７】
２．化合物Ｒｅｆ．１４の調製：
【０２６８】
【化１４５】
2021522200.tif 000166
化合物Ｒｅｆ．１４の合成はＲｅｆ．１３に従って実施し、その際、骨格テトラペプチ
ドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：１０７ｍｇ、５９％
ＥＳＩ−ＭＳ：７８１．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２６９】
３．化合物４３の調製：
【０２７０】
【化１４６】
2021522200.tif 000167
化合物４３の合成はＲｅｆ．１４に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの合成には対応するアミノ酸を用いた。Ｎ末端キャッピングは、最終ステップでＡｃ−Ｄ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨの代わりに５−ニトロイソフタル酸（ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用い化合物ＺＥＤ３４８０に従ってカップリングする）を用いることにより得た。
収量・収率：６５ｍｇ、５７％
ＥＳＩ−ＭＳ：８１３．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２７１】
［実施例１−４４］
１．化合物Ｒｅｆ．１５の調製：
【０２７２】
【化１４７】
2021522200.tif 000168
化合物Ｒｅｆ．１５の合成はＲｅｆ．１３に従って実施し、その際、骨格ペンタペプチドの構築には対応するアミノ酸を、さらに、最終ステップではＡｃ−Ｄ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨの代わりに（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−４−オキソピロリジン−２−カルボン酸（ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用い化合物ＺＥＤ３４８０に従ってカップリングする）を用いた。したがって、ＢＯＣ保護基は、ＤＣＭ中のＴＦＡを用いて切断される。
収量・収率：１２７ｍｇ、５７％
ＥＳＩ−ＭＳ：９２１．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２７３】
２．化合物Ｒｅｆ．１６の調製：
【０２７４】
【化１４８】
2021522200.tif 000169
化合物Ｒｅｆ．１６の合成はＲｅｆ．１５に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：９３ｍｇ、４７％
ＥＳＩ−ＭＳ：７３５．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２７５】
３．化合物４４の調製：
【０２７６】
【化１４９】
2021522200.tif 000170
化合物４４の合成はＲｅｆ．１４に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：７８ｍｇ、５９％
ＥＳＩ−ＭＳ：７３３．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２７７】
［実施例１−４５］
１．化合物Ｒｅｆ．１７（ＺＥＤ１２６５）の調製：
【０２７８】
【化１５０】
2021522200.tif 000171
骨格デカペプチドＨ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨは、化合物ＺＥＤ３４７８に従って標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学により構築し、その際、２−クロロトリチル樹脂および対応する（側鎖が保護された）アミノ酸を用いた。マイケル受容体（アクリル酸メチル）は、化合物Ｉｂを用い、化合物ＺＥＤ３４８１に従って直接カップリングした。最後に、ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを用いてＡｃ−Ａｓｎ−ＯＨをカップリングし、続いて、ＤＣＭ中のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を用いてａｌｌｏｃ保護基を切断することにより、化合物ＺＥＤ３４８０に従って化合物ＺＥＤ１２６５を合成した。
収量・収率：１７７ｍｇ、３６％
ＥＳＩ−ＭＳ：１４５３．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２７９】
２．化合物Ｒｅｆ．１８（ＺＥＤ１２４６）の調製：
【０２８０】
【化１５１】
2021522200.tif 000172
化合物ＺＥＤ１２４６の合成はＺＥＤ１２６５に従って実施し、その際、骨格ノナペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：１５８ｍｇ、３９％
ＥＳＩ−ＭＳ：１３２５．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２８１】
３．化合物Ｒｅｆ．１９（ＺＥＤ１２７４）の調製：
【０２８２】
【化１５２】
2021522200.tif 000173
化合物ＺＥＤ１２７４の合成はＺＥＤ１２６５に従って実施し、その際、骨格オクタペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：１３２ｍｇ、４５％
ＥＳＩ−ＭＳ：１２１２．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２８３】
４．化合物Ｒｅｆ．２０（ＺＥＤ１２８２）の調製：
【０２８４】
【化１５３】
2021522200.tif 000174
化合物ＺＥＤ１２８２の合成はＺＥＤ１２６５に従って実施し、その際、骨格ヘプタペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：１６５ｍｇ、６１％  ＥＳＩ−ＭＳ：１０９８．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２８５】
５．化合物Ｒｅｆ．２１（ＺＥＤ１２８３）の調製：
【０２８６】
【化１５４】
2021522200.tif 000175
化合物ＺＥＤ１２８３の合成はＺＥＤ１２６５に従って実施し、その際、骨格ヘキサペプチドの構築には対応するアミノ酸を用いた。
収量・収率：１２７ｍｇ、４７％
ＥＳＩ−ＭＳ：９９７．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２８７】
［実施例１−４６］
化合物４５ａ／４５ｂ（位置異性体）の調製：
【０２８８】
【化１５５】
2021522200.tif 000176
化合物４５ａ／４５ｂの合成はＲｅｆ．１１に従って実施し、その際、骨格テトラペプチドの構築には対応するアミノ酸を、さらに、最終ステップではＡｃ−（Ｄ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨの代わりに３，４−ピリジンジカルボン酸無水物によるキャッピングを用いた。
収量・収率：７７ｍｇ、３２％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：７９９．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２８９】
［実施例１−４７］
参考例１（Ｒｅｆ．１）：
【０２９０】
【化１５６】
2021522200.tif 000177
Ｒｅｆ．１の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１２ｍｇ、２６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９１０．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２９１】
参考例２（Ｒｅｆ．２）：
【０２９２】
【化１５７】
2021522200.tif 000178
Ｒｅｆ．２の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１６ｍｇ、２３％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：１０２３．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２９３】
参考例３（Ｒｅｆ．３）：
【０２９４】
【化１５８】
2021522200.tif 000179
Ｒｅｆ．３の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：１１ｍｇ、１９％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：９２６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２９５】
参考例４（Ｒｅｆ．４）：
【０２９６】
【化１５９】
2021522200.tif 000180
Ｒｅｆ．４の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：７９ｍｇ、５８％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８８２．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２９７】
参考例５（Ｒｅｆ．５）：
【０２９８】
【化１６０】
2021522200.tif 000181
Ｒｅｆ．５の合成は、対応する無水物およびアミノ酸を用い、実施例１−１に従って実施した。
収量・収率：４１ｍｇ、５６％、位置異性体の比率：およそ１：１
ＥＳＩ−ＭＳ：８６８．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２９９】
ＷＯ２００８０５５４８８Ａ１において化合物３８として開示された  参考化合物６（Ｒｅｆ．６）
【０３００】
【化１６１】
2021522200.tif 000182
【０３０１】
ＷＯ２００８０５５４８８Ａ１において化合物４．１として開示された参考化合物７（Ｒｅｆ．７）
【０３０２】
【化１６２】
2021522200.tif 000183
【０３０３】
参考化合物２２（Ｒｅｆ．２２−ＺＥＤ１３０１）：ＷＯ２０１４／０９０８３５の化合物４
【０３０４】
【化１６３】
2021522200.tif 000184
【０３０５】
参考化合物２３（Ｒｅｆ．２３−ＺＥＤ１３９０）：ＷＯ２０１４／０９０８３５の化合物７
【０３０６】
【化１６４】
2021522200.tif 000185
【０３０７】
Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１３、１３１、ｅ２１４〜ｅ２２２において開示された参考化合物２４（Ｒｅｆ．２４−ＺＥＤ１２５１）
【０３０８】
【化１６５】
2021522200.tif 000186
【０３０９】
Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ、２０１７、４９、５８５〜５９５において開示された参考化合物２５（Ｒｅｆ．２５  −  ＺＥＤ１２２７）
【０３１０】
【化１６６】
2021522200.tif 000187
【０３１１】
生物学的実施例
［実施例２−１］
ＦＸＩＩＩ活性アッセイ
Ａ：阻害剤の効力を推定するためのイソペプチダーゼアッセイ
ＦＸＩＩＩａ活性は、α２−抗プラスミンのＮ末端ドデカペプチドをベースにした基質Ａ１０１（Ｚｅｄｉｒａ  ＧｍｂＨ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）を用いて測定した。ＦＸＩＩＩａは、そのイソペプチダーゼ活性により、元の基質のグルタミンの位置にてダーククエンチャーであるジニトロフェニルの放出を触媒する結果、蛍光量の増加（Ｎ末端の２−アミノベンゾイル蛍光色素に基づく）がもたらされる（Ｏｅｒｔｅｌ  Ｋ、Ｈｕｎｆｅｌｄ  Ａ、Ｓｐｅｃｋｅｒ  Ｅ、Ｒｅｉｆｆ  Ｃ、Ｓｅｉｔｚ  Ｒ、Ｐａｓｔｅｒｎａｃｋ  Ｒ、Ｄｏｄｔ  Ｊ、Ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＸＩＩＩ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ．、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００７、３６７：１５２〜８）。
【０３１２】
簡潔に説明すると、１２μＬの組換えｃＦＸＩＩＩ−Ａ２（Ｔ０２７、Ｚｅｄｉｒａ  ＧｍｂＨ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）またはヒト血漿に由来するＦＸＩＩＩ−Ａ２Ｂ２（Ｔ００７）（２５μｇ／ｍＬ）および３μＬのヒトα−トロンビン（０．５Ｕ／ｍＬ、Ｔ０５６、Ｚｅｄｉｒａ）を、５５μＭ  Ａ１０１基質を含有する２７０μＬのアッセイ緩衝液（５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５．５６ｍＭ  グリシンメチルエステル、５ｍＭ  ＤＴＴ、ｐＨ７．５）と混合した。この混合物を室温にて２０分間インキュベートして、ＦＸＩＩＩを活性化させた。１５μＬの阻害剤溶液（１．２５μＭから１．２５ｎＭまでの段階希釈）をＤＭＳＯ／アッセイ緩衝液に溶解したものを添加し、混合し、３分後に反応速度測定を開始した。蛍光発光は、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ蛍光マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ、Ｏｒｔ
ｅｎｂｅｒｇ、ドイツ）を用いて、４１８ｎｍ（λｅｘ＝３１３ｎｍ）および３７℃にて３０分間モニタリングした。阻害剤なしの計測の場合は、１５μＬのアッセイ緩衝液／２％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを添加した。すべての計測は、３回反復で実施した。それぞれのＩＣ５０値は、ＭＡＲＳソフトウェアパッケージ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）を用いて非線形回帰により算出した。
【０３１３】
動物種由来のＦＸＩＩＩａの阻害を、３６μｇ／ｍＬマウスＦＸＩＩＩ−Ａ２（Ｔ０６１、Ｚｅｄｉｒａ）、２７μｇ／ｍＬラットＦＸＩＩＩ−Ａ２（Ｔ０６５）、１１μｇ／ｍＬブタＦＸＩＩＩ−Ａ２（Ｔ０６６）、３２μｇ／ｍＬイヌＦＸＩＩＩ−Ａ２（Ｔ０６２）および２２μｇ／ｍＬカニクイザルｃＦＸＩＩＩ−Ａ２（Ｔ１６１）を由来動物種に応じて用いて実施した。これらはすべて、組換えにより作製されたものである。
【０３１４】
Ｂ：阻害剤の選択性を測定するためのアミド基転移アッセイ
最も関連性のあるオフターゲットは、トランスグルタミナーゼアイソエンザイム、特に組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）であるが、その理由は、この酵素がヒトの全身に遍在的に発現するものだからである。選択性を測定するために、ダンシルカダベリンがトランスグルタミナーゼに触媒されて普遍的なトランスグルタミナーゼ基質であるＮ，Ｎ−ジメチルカゼインに組み込まれた際の蛍光量増加を用いた（Ｌｏｒａｎｄ  Ｌ、Ｌｏｃｋｒｉｄｇｅ  ＯＭ、Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＬＫ、Ｍｙｈｒｍａｎ  Ｒ、Ｂｒｕｎｅｒ−Ｌｏｒａｎｄ  Ｊ、Ｔｒａｎｓａｍｉｄａｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅｓ．、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９７１、４４：２２１〜３１）。
【０３１５】
簡潔に説明すると、１５μＬの組換えトランスグルタミナーゼ酵素［５］［１５μｇ／ｍＬ  ｈＴＧ１（Ｔ０３５、Ｚｅｄｉｒａ）、６９μｇ／ｍＬ  ｈＴＧ２（Ｔ０２２）、２９μｇ／ｍＬ  ｈＴＧ６（Ｔ０２１）、１８μｇ／ｍＬ  ｈＴＧ７（Ｔ０１１）］を、ダンシルカダベリンおよびＮ，Ｎ−ジメチルカゼインを含有する２７０μＬのアッセイ緩衝液と混合した。ＦＸＩＩＩについては、１２μＬのｃＦＸＩＩＩ（２５μｇ／ｍＬ）および３μＬのヒトα−トロンビン（０．５Ｕ／ｍＬ、Ｔ０５６、Ｚｅｄｉｒａ）を２７０μＬのアッセイ緩衝液と混合した。この混合物を室温にて２０分間インキュベートすることによりＦＸＩＩＩを活性化させた。ＴＧ３については、７８μｇのｈＴＧ３（Ｔ０２４）を、１．４ｍＭ  ＣａＣｌ２の存在下で１４μｇのｄｉｓｐａｓｅ  ＩＩ（Ｒｏｃｈｅ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）を用いて活性化させ、２５℃にて３０分間インキュベートした。活性化されたｈＴＧ３を、続いて前述の通りにアッセイした。１５μＬの阻害剤溶液をＤＭＳＯ／アッセイ緩衝液に溶解したものを添加し、混合し、３分後に反応速度計測を開始した。蛍光発光は、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ蛍光プレートリーダーを用いて、５００ｎｍ（λｅｘ＝３３０ｎｍ）および３７℃にて３０分間、継続的にモニタリングした。すべての計測は、３回反復で実施した。それぞれのＩＣ５０値は、ＭＡＲＳソフトウェアパッケージ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ、Ｏｒｔｅｎｂｅｒｇ、ドイツ）を用いて非線形回帰により算出した。
【０３１６】
以下の表は、ヒト血漿由来のＦＸＩＩＩ−Ａ２Ｂ２および組換え細胞型（ＦＸＩＩＩ−Ａ２）に対する化合物５（＝５ａ／ｂ）の阻害データを要約したものである。併せて、異なるアッセイを用いて得た、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ブタおよびカニクイザルに由来するｃＦＸＩＩＩの阻害データも示す。
【０３１７】
【表２】
2021522200.tif 000188
【０３１８】
【表３】
2021522200.tif 000189
【０３１９】
【表４】
2021522200.tif 000190
2021522200.tif 000191
【０３２０】
【表５】
2021522200.tif 000192
【０３２１】
［実施例２−２］
フィブリン架橋形成の阻害、および、フィブリン分解生成物のサイズ排除クロマトグラフィー
フィブリン塊のｉｎ  ｖｉｔｒｏ調製については、ＨＳＡ無添加のヒトフィブリノゲン（２．５ｍｇ／ｍＬ、ＦＩＢ３、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｏｕｔｈ  Ｂｅｎｄ、ＩＮ、ＵＳＡ）を２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４で希釈し、これをｃＦＸＩＩＩ（１０μｇ／ｍＬ、Ｔ０２７、Ｚｅｄｉｒａ）および５ｍＭ  ＣａＣｌ２と混合した。５０Ｕヒトトロンビン（Ｔ０５３、Ｚｅｄｉｒａ）の添加に先行して、ＤＭＳＯ（２．４％ｖ／ｖ）または阻害剤である本発明の化合物（ＤＭＳＯに溶解して最終濃度が１０μＭのもの）のいずれかを、この混合物に添加した。フィブリン架橋形成を完了させるために、インキュベーションを３７℃にて１６時間実施した。続いて、組換えヒトプラスミン（０．２ｍｇ／ｍＬ、Ｐ０１２、Ｚｅｄｉｒａ）を混合物に添加し、３７℃にて１時間インキュベートすることによりフィブリン塊を可溶化した。フィブリン分解生成物の架橋されたものと架橋されていないもの（
それぞれ、ｘＦＤＰ／ＦＤＰ）への分離は、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ−２００カラム（ＣＶ＝１２０ｍＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４で平衡化させたものを用いて実施した。
【０３２２】
ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）をＬａｅｍｍｌｉに従って実施した（Ｌａｅｍｍｌｉ  ＵＫ、Ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｆ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ
ｔｈｅ  ｈｅａｄ  ｏｆ  ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ  Ｔ４．、Ｎａｔｕｒｅ  １９７０、２２７：６８０〜５）。簡潔に説明すると、試料は、非還元、５倍のＳＤＳ−ＰＡＧＥローディング緩衝液（ｐＨ６．８の１２８ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、３０％グリセロール、１０％ＳＤＳおよび０．０５％ブロモフェノールブルー）と混合し、１０％ポリアクリルアミドゲルにロードした。分離は、２００Ｖにて４０分間実施した。ゲルは、クーマシーブリリアント・ブルーＲ−２５０で染色した。電気ブロッティングは、Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  ＳＤセミドライ転写セル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ）を用いて２０Ｖにて８０分間実施した。ブロッティング後、ニトロセルロース膜を４８ｍＭトリス、３９ｍＭグリシン、１．３ｍＭ  ＳＤＳおよび２０％（ｖ／ｖ）メタノールに予浸した。残基結合部位は、ＴＢＳ−Ｔ［１０ｍＭトリス、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ８．０］中の５％スキムミルクで６０分間ブロッキングした。膜は、ＴＢＳ−Ｔ洗浄緩衝液で洗浄し、一次抗体（ＴＢＳ−Ｔで１０，０００倍希釈したもの）で１時間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔで５分間×３回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｃｈｎｅｌｌｄｏｒｆ、ドイツ）をアルカリホスファターゼにコンジュゲートしＴＢＳ−Ｔ緩衝液で１０，０００倍希釈したものを膜に添加し、続いて１時間インキュベーションした。膜は、検出試薬（ＡＰ発色試薬を発色緩衝液で１００倍希釈したもの、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ）中に配置した。過剰な検出試薬を流出させ、染色反応を２０ｍＭトリス−ＨＣｌおよび５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０で停止させた。すべてのステップは、室温にて振盪機上で実施した（図１）。
【０３２３】
［実施例２−３］
トロンボエラストメトリー（ＴＥＭ）
トロンボエラストメトリーは、血液凝固のアセスメントに用いられる、粘弾性を調べる方法である（Ｌａｎｇ  Ｔ、ｖｏｎ  Ｄｅｐｋａ  Ｍ、Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｒｏｍｂｅｌａｓｔｏｍｅｔｒｙ／−ｇｒａｐｈｙ．、Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ  ２００６、２６：Ｓ２０〜９）。凝血塊形成開始までの時間（ＣＴ：ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｔｉｍｅ）、凝血塊形成時間（ＣＦＴ：ｃｌｏｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ）、最大凝血塊硬度（ＭＣＦ：ｍａｘｉｍｕｍ  ｃｌｏｔ  ｆｉｒｍｎｅｓｓ）および６０分時溶解指標（ＬＩ６０:ｌｙｓｉｓ  ｉｎｄｅｘ  ａｔ  ６０  ｍｉｎ）は、ＲＯＴＥＭ（登録商標）ｄｅｌｔａ装置で新鮮全血を用い、製造者の取扱説明書に従って得た。
【０３２４】
阻害剤としての本発明の化合物の効力（最終濃度２０．０μＭ〜０．０８μＭをカバーする段階希釈）を、０．０２μｇ／ｍＬの組織プラスミノゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ；Ｐ０１６、Ｚｅｄｉｒａ）の存在下で調査した。簡潔に説明すると、２０μＬのｓｔａｒ−ＴＥＭ（登録商標）（０．２ｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２）、２０μＬのｒ  ｅｘ−ＴＥＭ（登録商標）（組換え組織因子、リン脂質、ヘパリン阻害剤）、１０μＬの阻害剤ストック溶液（７２０μＭ〜２．８８μＭ）を、１０μＬのｔ−ＰＡストック溶液（０．７２μｇ／ｍＬ）と合わせることにより、ｔ−ＰＡが０．３６μｇ／ｍＬ入っている７．２％ＤＭＳＯ／ＰＢＳ中の濃度を３６０μＭ〜１．４４μＭとしたもの、および３００μＬの新鮮なクエン酸全血（健康な同意ドナー由来のもの）を、使い捨てキュベット中で混合した。
対照としては、阻害剤ストック溶液をＰＢＳ中の３．６％ＤＭＳＯ／０．３６μｇ／ｍＬ
ｔ−ＰＡに置き換えた。
【０３２５】
図２は、０．０２％  ｔ−ＰＡの存在下における、２０μＭ〜０．６３μＭの段階希釈で化合物５をスパイクしたヒト全血のトロンボエラストグラムを、対照との比較で示すものである。
【０３２６】
図３において、２つのグラフ（Ａ）および（Ｂ）は、阻害剤なしの対照に対する最大凝血塊硬度の低下率（ＭＣＦｃ）、および、対照に対する６０分時凝血塊溶解の増加率（ＬＩ６０ｃ）を示している。
【０３２７】
本阻害剤は凝血塊形成開始までの時間（ＣＴ）には影響を及ぼしておらず、このことは、本化合物が他の凝固因子を妨げることなく凝固カスケード、フィブリン形成および血小板活性化を始動させないようにしていることを示している。
【０３２８】
いくつかの公開されたＦＸＩＩＩ阻害剤（例えば、Ｒｅｆ．２２、Ｒｅｆ．２３、Ｒｅｆ．２４、ならびに参考分子Ｒｅｆ．１３、Ｒｅｆ．１４、Ｒｅｆ．１５およびＲｅｆ．１６）の効力を、トロンボエラストメトリーを用いて評価した。好ましい新規化合物である化合物５の鍵となる凝固パラメーターについての詳細な用量依存的影響を、図２、図３Ａおよび図３Ｂに示す。化合物５は、ＦＸＩＩＩ阻害剤が用いられていない対照に対して最大凝血塊硬度を低下させ（ＭＣＦｃ、図３Ａ）、６０分時凝血塊溶解を増加させた（ＬＩ６０ｃ、図３Ｂ）。グラフ３Ａ／３Ｂにおいて詳細を示すように、２．５μＭの濃度では、化合物５は対照に対して、凝血塊硬度（ＭＣＦｃ）を２０％低下させ、一方で溶解を３５％増加させた。
【０３２９】
Ｒｅｆ．２２、Ｒｅｆ．２３、Ｒｅｆ．２４、ならびに参考分子Ｒｅｆ．１３、Ｒｅｆ．１４、Ｒｅｆ．１５およびＲｅｆ．１６の効力を、同じ実験設定において固定濃度２．５μＭにて測定した。ヒト全血中にスパイクしても、これらの化合物は、凝血塊のパラメーターであるＭＣＦｃおよびＬＩ６０ｃに影響を及ぼさなかった。したがって、これらの分子は、本願において主張する新規の構造的特徴を欠くことからも、好ましくないと判断された。これに対し、新規化合物４３、４４および４５ａ／ｂ（同じく２．５μＭでスパイクした）は、凝血塊硬度ＭＣＦｃを８％、７％および１７％低下させ（図３Ａと比較されたい）、一方で凝血塊溶解を１４％、１１％および２７％（ＬＩ６０ｃ、図３Ｂと比較されたい）まで促進する有効性を示した。化合物４３、４４および４５ａ／ｂは、効力を有しドラッグライクネスを備えたＦＸＩＩＩ阻害剤を設計するための、本願において主張する構造的特徴を示す新規化合物である。
【０３３０】
さらに、ドラッグライクネスの前提条件として、血漿中での化合物の安定性を測定した。簡潔に説明すると、化学物質をスパイクしてから血漿を３７℃にてインキュベートした。一定の時点（例えば、１５分時点および１２０分時点）で、３ｖｏｌ．の冷ＭｅＯＨを添加して化合物を抽出した。遠心分離の後、上清をＨＰＬＣにより分析した。半減期は、それぞれの較正曲線に基づいて算出した。化合物Ｒｅｆ．２２、Ｒｅｆ．２３、Ｒｅｆ．２４、ならびに参考分子Ｒｅｆ．１３、Ｒｅｆ．１４、Ｒｅｆ．１５、Ｒｅｆ．１６、Ｒｅｆ．１７およびＲｅｆ．１８は、血漿中半減期が１５分を下回ることから示されるように、血漿中では不安定であった。したがって、血中半減期が短いことを理由に、これらは好適なＦＸＩＩＩ阻害剤ではないと判断した。これらの化合物は、本願において開示される新規の構造的特徴を欠いている。それに対して、化合物１ａ／ｂ、２ａ／ｂ、３、４、５ａ／ｂ、６、７ａ／ｂ、８ａ／ｂ、９ａ／ｂ、１０ａ／ｂ、１１ａ／ｂ、１２ａ／ｂ、１３ａ／ｂ、１４ａ／ｂ、１５ａ／ｂ、１６ａ／ｂ、１７ａ／ｂ、１８ａ／ｂ、１９ａ／ｂ、２０ａ／ｂ、２１ａ／ｂ、２２ａ／ｂ、２３ａ／ｂ、２４ａ／ｂ、２５ａ／ｂ、２６
ａ／ｂ、２７、２８、２９、３０、３１ａ／ｂ、３２ａ／ｂ、３３ａ／ｂ、３４ａ／ｂ、３５ａ／ｂ、３６ａ／ｂ、３７ａ／ｂ、３８、３９ａ／ｂ、４０、４１、４２ａ、４２ｂ、４３、４４および４５ａ／ｂは、２時間にわたり血漿中において安定であることが見出された（ＨＰＬＣによりそれぞれ測定された回収率は＞７５％であった）。
【０３３１】
アミノ酸長が７を超える参考化合物とは対照的に、本発明の各化合物は２時間を超える血漿中半減期を示したことから、本願において開示されるＦＸＩＩＩ阻害剤は、血中半減期が１５分未満の参考化合物とは対照的に、十分にドラッグライクネスを備えている。
【０３３２】
［実施例２−４］
静脈鬱血および再灌流のウサギモデルにおける抗凝固
目的繁殖された動物は、試験施設に到着した時点で、それぞれ対応するガイドラインに従って識別された。雄のニュージーランドホワイト・ウサギ（２〜３ｋｇ）を、処置の継続時間にわたり麻酔下においた。ウサギの右頚静脈を露出させ、静脈鬱血部位に通じる側副静脈があれば結紮した。塞栓を防止するために、結紮に先行して、１０ｃｍ長のポリエステル縫合糸のおよそ４ｃｍ分を所定の鬱血部位の管腔中に上流から挿入することにより、糸周囲に血栓が形成されるようにした。超音波プローブを、静脈鬱血部位の下流にあたる右頚静脈の血管周囲に配置し、血流を継続的に記録した（３ｍｍプローブ、Ｔｒａｎｓｏｎｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ、Ｉｔｈａｃａ、ＵＳＡ）。血液試料を、以下に示すように右大腿動脈から採取した（１ｍＬ、１５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム中）。被験化合物５（ｎ＝７）または陰性対照（ｎ＝６）は、以下に視覚化した通り、選択した濃度および流量にて、ボーラス静注または右大腿静脈経由の注入によって投与した。陰性対照動物には、２×ＰＢＳ／５％グルコースであり、５％（ｗ／ｖ）グルコース当たりＮａＣｌ
２７３．８、ＮａＨ２ＰＯ４×２Ｈ２Ｏ  １４．２、ＫＣｌ  ５．４およびＫＨ２ＰＯ４  ２．９（単位：ｍＭ）を含有しｐＨ７．４±０．０５のものを投与した。この溶液は、被験化合物５と同じ体積で、同じ経路を介して、同じ流量で、投与した（同一の剤形）。被験物質または基剤の緩徐なボーラス注射（注射時間はおよそ６０秒）の１５分後（注射終了時点からカウント）に右頚静脈をクランプしたが、その際、まず下流のクランプを、続いて１０秒遅れて上流のクランプを行った。１５０μＬの血液を大腿動脈から採取し、４５μＬの０．２５Ｍ塩化カルシウムを補添した。次に、２５μＬのヒトα−トロンビン（２．５Ｕ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を血液混合物に添加することにより凝固を誘導した。血液を混合した直後、凝血塊を形成しつつある血液を右頚静脈の孤立させた部分に投与した。静脈鬱血期間である１５分が経過した後、血管クランプを除去して頚静脈からの血流を回復させた。この静脈鬱血期間の間に、被験物質を注入した。遷音速流プローブ（ｔｒａｎｓｏｎｉｃ  ｆｌｏｗ  ｐｒｏｂｅ）を用いて２時間にわたり血流を記録しながら、被験物質を、選択された濃度で注入した（表４を参照されたい）。再灌流の２時間後、静脈鬱血部位を切除し、長軸方向に開き、中身をすべて、５％クエン酸ナトリウム溶液の入ったペトリ皿に出した。血栓が存在すれば取り出して、濾紙上でブロッティングした。血栓のサイズおよび重量を計測し、外観の判定を行った。
【０３３３】
再灌流の開始後、ＩＴＣ  Ｓｕｒｇｉｃｕｔｔ（商標）  Ｂｌｅｅｄｉｎｇ  Ｔｉｍｅ
Ｄｅｖｉｃｅ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｄｙｎｅ  ＳＵ５０Ｉ  ｖｉａ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｏｔｔａｗａ、カナダ）を用いて出血時間の計測を３０分実施した。出血時間は、濾紙を用いて切創の周縁から血液を慎重に採取することによりアセスメントし、濾紙の赤色の染みが観測できなくなった時点で終了した。各計測定において、濾紙は染みのついていない異なる部分を使用した。最大出血時間は３００秒と定めた。
【０３３４】
各血液試料の採取時点ごとに、抗凝固剤として１５０ｍＭ  クエン酸ナトリウムを用いて血漿試料を生成させた。試料は、さらなる分析にかけるまで−２０℃にて保存した。さ
らなる分析においては、化合物５の濃度はＨＰＬＣにより測定し、トロンビン活性化後の残留ＦＸＩＩＩ活性は、前述のイソペプチダーゼアッセイを用いて測定した。加えて、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）に用いるために、被験物質投与の６０分後に血液試料を１本採取した。ＴＥＧ５０００のトレースを、メーカーに従って、６０分間にわたり新鮮全血試料について記録した。計測値はトロンボエラストメトリーと類似しており、キーパラメーターを合わせて凝固指標（ＣＩ）を得た。再灌流後約１５０分の観測期間に引き続き、過剰量のペントバルビタールを投与することにより、心臓内採血を行ってから動物を安楽死させた。
【０３３５】
［統計解析］
対応のないスチューデントｔ検定をすべての実験条件について実施し、被験物質を注射したウサギから得られた値と、陰性対照ウサギから得られた値とを比較した。統計的有意性は、陰性対照動物との比較でｐ≦０．０５である場合に示される。群ごとに、データを平均±標準誤差として表す。
【０３３６】
静脈鬱血および再灌流のウサギモデルの実験スケジュールを、図４Ａに簡潔に提示する。
【０３３７】
【表６】
2021522200.tif 000193
【０３３８】
化合物５を注入した場合にはＰＢＳ対照動物と比較して流量が有意に多くなることが、ｉｎ  ｖｉｖｏ実験で証明されている（図４Ｂ）。流量の曲線下面積は、静脈流量によるものである。化合物５群の方が、３５分時点と１３５分時点との間の、ベースラインに対して正規化した頸静脈流量の平均曲線下面積（ＡＵＣ）が有意に大きい（図４Ｃ）。血栓湿重量は、化合物５群において有意に減少している。血栓湿重量は、注入の１３５分後に測定した（図４Ｄ）。最も重要なのは、テンプレート皮膚出血時間は影響を受けていないことである。テンプレート皮膚出血時間は、注入の６０分後に測定した。ＰＢＳと化合物５との間に差異は観測されなかった。最大観測時間は３００秒と事前に定めた（図４Ｅ）。
【図１Ａ】
2021522200.tif 000230
【図１Ｂ】
2021522200.tif 000231
【図２】
2021522200.tif 000232
【図３Ａ】
2021522200.tif 000233
【図３Ｂ】
2021522200.tif 000234
【図４Ａ】
2021522200.tif 000235
【図４Ｂ】
2021522200.tif 000236
【図４Ｃ】
2021522200.tif 000237
【図４Ｄ】
2021522200.tif 000238
【図４Ｅ】
2021522200.tif 000239
2021522200.tif 000240
【国際調査報告】
2021522200.tif 000241
2021522200.tif 000242
2021522200.tif 000243