(57)【要約】  本願は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、およびキレート剤のＤＰＴＡなどの１または複数の安定剤を含む医薬製剤を提供する。該製剤は、ポリソルベート８０などの界面活性剤を含め、および／またはそのｐＨを約７.１に調整することによりさらに安定化され得る。製造方法、治療方法およびキットも提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）ポリペプチドおよびアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含む医薬製剤であって、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない対照となる製剤と比べて、安定性が改善されている、医薬製剤。
【請求項２】
（ａ）４０℃で約１か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に関して、ポリペプチドのより遅い速度の脱アミド化；
（ｂ）４０℃で約１か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に関して、高分子量（ＨＭＷ）のポリペプチドのより遅い速度の凝集；または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方
のうちの１または複数を示す、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤が、２５℃および／または４０℃で配列番号：１のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９に相当する１または複数のメチオニンの酸化を軽減する、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤がジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項５】
ＤＴＰＡカチオンキレート剤が、約１０μＭと約１００μＭとの間のＤＴＰＡ、約２０μＭと約９０μＭとの間のＤＴＰＡ、約３０μＭと約８０μＭとの間のＤＴＰＡ、約２５μＭと約７５μＭとの間のＤＴＰＡ、もしくは約４０μＭと約６０μＭとの間のＤＴＰＡ、または約３０μＭと約７０μＭの間のＤＴＰＡ、あるいは約４０μＭと約７０μＭの間のＤＴＰＡの量で存在する、請求項４に記載の医薬製剤。
【請求項６】
ＤＴＰＡカチオンキレート剤が、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、または約６０μＭ  ＤＴＰＡの量で存在する、請求項４または５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
ｐＨが６.５より上、６.６より上、６.７より上、６.８より上、６.９より上、７.０より上、７.１より上、７.２より上、７.３より上、７.４より上、または７.５より上である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項８】
ｐＨが、約６.７と約７.５の間に、約６.８と約７.５の間に、約６.９および約７.４の間に、約７.０と約７.３の間に、約７.１と７.２の間に、約７.１と約７.３の間に、約７.１と約７.４の間に、または約７１と約７.５の間にある、請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項９】
ｐＨが約６.７、約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５である、請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
ｐＨ６.５の対照となる製剤よりも安定している、請求項７〜９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
界面活性剤をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
非イオン性界面活性剤がポリソルベートである、請求項１２に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
ポリソルベートがポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）である、請求項１３に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
ポリソルベート８０界面活性剤が、約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、または約０.０５％〜約０.０６％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１４に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
ポリソルベート８０界面活性剤が、少なくとも約０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０９％（ｗ／ｖ）または少なくとも約０.１％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１４または１５に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
振盪器でかき混ぜられた時に、界面活性剤が粒子および／または気泡の形成を軽減する、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
アミノ酸緩衝剤をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
アミノ酸緩衝剤がヒスチジンである、請求項１８に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
ヒスチジン緩衝剤が、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのヒスチジン、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭのヒスチジン、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭのヒスチジン、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭのヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジン、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭのヒスチジン、約１７.５ｍＭ〜約２２.５ｍＭのヒスチジン、または約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのヒスチジンの量にて存在する、請求項１９に記載の医薬製剤。
【請求項２１】
ヒスチジン緩衝剤が、約１０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジンまたは約５０ｍＭヒスチジンの量にて存在する、請求項１９または２０に記載の医薬製剤。
【請求項２２】
浸透圧調節剤をさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２３】
浸透圧調節剤が糖類を含む、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
糖類がシュークロースである、請求項２３に記載の医薬製剤。
【請求項２５】
シュークロース浸透圧調節剤が、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２００ｍＭ〜約９００ｍＭ、約３００ｍＭ〜約８００ｍＭ、約４００ｍＭ〜約７００ｍＭ、または約５００ｍＭ〜約６００ｍＭのシュークロースの量で存在する、請求項２４に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
シュークロース浸透圧調節剤が、約１００ｍＭシュークロース、約２００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭシュークロース、約８００ｍＭシュークロース、約９００ｍＭシュークロース、または約１Ｍシュークロースの量で存在する、請求項２４または２５に記載の医薬製剤。
【請求項２７】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２８】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、配列番号：３のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する、ポリペプチドを含み、ここで該ポリペプチドがＦＧＦ−２１活性を有する、請求項２７に記載の医薬製剤。
【請求項２９】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、半減期延長部分と連結される、請求項２７または２８に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列中にて天然にてコードされないアミノ酸の側鎖を介して半減期延長部分に連結される、請求項２９に記載の医薬製剤。
【請求項３１】
半減期延長部分が、アルブミン、免疫グロブリン定常領域またはその一部、免疫グロブリン結合ポリペプチド、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、アルブミン−結合ポリペプチド（ＡＢＰ）、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＨＥＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＸＴＥＮ、Ｆｃ領域、およびそれらのいずれかの組み合わせを含む、請求項２９または３０に記載の医薬製剤。
【請求項３２】
半減期延長部分が水溶性ポリマーを含む、請求項２９または３０に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
水溶性ポリマーがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項３２に記載の医薬製剤。
【請求項３４】
ＰＥＧが約１０ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の平均分子量を有する、請求項３３に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
ＰＥＧが約３０ｋＤａの平均分子量を有する、請求項３３または３４に記載の医薬製剤。
【請求項３６】
天然にてコードされないアミノ酸がフェニルアラニン誘導体である、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
フェニルアラニン誘導体がパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
半減期延長部分が、オキシム連結を介して天然にてコードされないアミノ酸と連結される、請求項３６または３７に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
天然にてコードされないアミノ酸が、配列番号：３のアミノ酸グルタミン１０９と置き換わる、請求項３０〜３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、約１ｍｇ／ｍｌと約４０ｍｇ／ｍｌとの間の濃度で存在する、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４１】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、約１０ｍｇ／ｍｌまたは約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項４０に記載の医薬製剤。
【請求項４２】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、用量に付き約１ｍｇと約４０ｍｇの間の量で存在する、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが用量に付き約１ｍｇ、用量に付き約５ｍｇ、用量に付き約１０ｍｇ、用量に付き約２０ｍｇ、または用量に付き約４０ｍｇの量で存在する、請求項４２に記載の医薬製剤。
【請求項４４】
皮下投与用に処方される、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４５】
安全シリンジを用いる皮下投与用に処方される、請求項４４に記載の医薬製剤。
【請求項４６】
毎日または毎週の投与用に処方される、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４７】
水性製剤である、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４８】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドがＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）である、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４９】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；
（ｉｉ）ヒスチジンを約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを約１００ｍＭ〜約１Ｍの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを約１０μＭ〜約１００μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここで、該製剤のｐＨが約６.７と約７.５との間にある、医薬製剤。
【請求項５０】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；
（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが約７.１である、医薬製剤。
【請求項５１】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；
（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤。
【請求項５２】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；
（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；および
（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが約７.０である、医薬製剤。
【請求項５３】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；
（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；および
（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが７.０である、医薬製剤。
【請求項５４】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で；
（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが約７.１である、医薬製剤。
【請求項５５】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で；
（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが約７.１である、医薬製剤。
【請求項５６】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で；
（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤。
【請求項５７】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ２１を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で；
（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、
ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤。
【請求項５８】
アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を混合することからなる、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤の安定性を改善する方法であって、該製剤がアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない対照となる製剤と比べて安定性が改善されている、医薬製剤の安定性を改善する方法。
【請求項５９】
安定性の改善が、（ｉ）ポリペプチドの物理的安定性の向上、（ｉｉ）ポリペプチドの化学的安定性の向上、または（ｉｉｉ）その組み合わせを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
物理的安定性の向上が、（ｉ）ポリペプチドの凝集の防止または減少、（ｉｉ）ポリペプチドの断片化の防止または減少、または（ｉｉｉ）その組み合わせを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
化学的安定性の向上が、（ｉ）ポリペプチドの脱アミド化の防止または減少、（ｉｉ）ポリペプチドの酸化の防止または減少、または（ｉｉｉ）その組み合わせを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
安定性の改善が、
（ａ）４０℃で約１か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に関して、ポリペプチドの脱アミド化の速度を下げるか；
（ｂ）４０℃で約１か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に関して、高分子量（ＨＭＷ）のポリペプチドの凝集速度を下げるか；あるいは
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方
のうちの１つまたは複数を含む、請求項５８〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤が、２５℃および／または４０℃で配列番号：３のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９に対応する１または複数のメチオニンの酸化を軽減する、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤がＤＴＰＡである、請求項５８〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ＤＴＰＡカチオンキレート剤が、約１０μＭ〜約１００μＭ  ＤＴＰＡ、約２０μＭ〜約９０μＭ  ＤＴＰＡ、約２５μＭ〜約７５μＭ  ＤＴＰＡ、約４０μＭ〜約６０μＭ  ＤＴＰＡ、約３０μＭ〜約７０μＭ  ＤＴＰＡ、約３０μＭ〜約８０μＭ  ＤＴＰＡ、または約４０μＭ〜約７０μＭの量で存在する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
ＤＴＰＡカチオンキレート剤が、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、または約６０μＭ  ＤＴＰＡの量で存在する、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項６７】
ｐＨを６.５より上、６.６より上、６.７より上、６.８より上、６.９より上、または７.０より上に調節することをさらに含む、請求項５８〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
ｐＨを約６.８〜約７.５、または約６.９〜約７.４、または約７.０〜約７.３、または約７.１〜７.２、または約７.１〜約７.３、または約７.１〜約７.４、または約７.１〜約７.５に調節する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
調節されるｐＨが約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
製剤がｐＨ６.５の対照となる製剤よりも安定している、請求項６７〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
界面活性剤を混合することをさらに含む、請求項５８〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
非アニオン性界面活性剤がポリソルベートである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ポリソルベートがポリソルベート８０である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
ポリソルベート８０界面活性剤が、約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、または約０.０５％〜約０.０６％（ｗ／ｖ）の量にて混合される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
ポリソルベート８０界面活性剤が、少なくとも約０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０９％（ｗ／ｖ）または少なくとも約０.１％（ｗ／ｖ）の量にて混合される、請求項７４または７５に記載の方法。
【請求項７７】
振盪器でかき混ぜられた場合に、界面活性剤が粒子形成および／または気泡形成を軽減する、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
アミノ酸緩衝剤を混合することをさらに含む、請求項５８〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
アミノ酸緩衝剤がヒスチジンである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
ヒスチジン緩衝剤が、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭヒスチジン、約１７.５ｍＭ〜約２２.５ｍＭヒスチジン、または約４０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジンの量にて混合される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
ヒスチジン緩衝剤が、約１０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジンまたは約５０ｍＭヒスチジンの量にて混合される、請求項７９または８０に記載の方法。
【請求項８２】
浸透圧調節剤を混合することをさらに含む、請求項５８〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
浸透圧調節剤が糖類を含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
糖類がシュークロースである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
シュークロース浸透圧調節剤が、約１００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約２００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、または約５００ｍＭ〜約６００ｍＭシュークロースの量にて混合される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
シュークロース浸透圧調節剤が約１００ｍＭシュークロース、約２００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭシュークロース、約８００ｍＭシュークロース、約９００ｍＭシュークロース、または約１Ｍシュークロースの量にて混合される、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項８７】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドである、請求項５８〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、配列番号：３のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、ここで該ポリペプチドがＦＧＦ−２１活性を有する、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを半減期延長部分に連結させる、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９０】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列にある天然にてコードされないアミノ酸の側鎖を介して、半減期延長部分に連結される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
半減期延長部分が、アルブミン、免疫グロブリン定常領域またはその一部、免疫グロブリン結合ポリペプチド、ＩｇＧ、ＡＢＰ、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＨＥＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＸＴＥＮ、Ｆｃ領域、およびそれらのいずれかの組み合わせを含む、請求項８９または９０に記載の方法。
【請求項９２】
半減期延長部分が水溶性ポリマーを含む、請求項８９または９０に記載の方法。
【請求項９３】
水溶性ポリマーがＰＥＧである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
ＰＥＧが約１０ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の平均分子量を有する、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＰＥＧが約３０ｋＤａの平均分子量を有する、請求項９３または９４に記載の方法。
【請求項９６】
天然にてコードされないアミノ酸がフェニルアラニン誘導体である、請求項９０〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
フェニルアラニン誘導体がパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
半減期延長部分が、オキシム結合を介して天然にてコードされないアミノ酸と連結される、請求項９６または９７に記載の方法。
【請求項９９】
天然にてコードされないアミノ酸が配列番号：３のアミノ酸グルタミン１０９と置き換わる、請求項９０〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが約１ｍｇ／ｍｌと約４０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する、請求項５８〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドが約１０ｍｇ／ｍｌまたは約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
製剤が水性製剤である、請求項５８〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドがＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）である、請求項５８〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを約１０ｍＭと約５０ｍＭの間の濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを約１００ｍＭと約１Ｍの間の濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０１％と約０.１％（ｗ／ｖ）の間の濃度で；
および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを約１０μＭと約１００μＭの間の濃度で混合することを含み；
ここで該製剤のｐＨが約６.７と約７.５の間にある、方法。
【請求項１０５】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが７.１である、方法。
【請求項１０６】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが７.１である、方法。
【請求項１０７】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；および
（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが約７.０である、方法。
【請求項１０８】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；および
（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが７.０である、方法。
【請求項１０９】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが約７.１である、方法。
【請求項１１０】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが約７.１である、方法。
【請求項１１１】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが７.１である、方法。
【請求項１１２】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、
（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；
（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；
（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および
（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合することを含み、
ここでそのｐＨが７.１である、方法。
【請求項１１３】
請求項５８〜１１２のいずれか一項に記載の方法に従って製造される医薬製剤。
【請求項１１４】
（ｉ）請求項１〜５７、または１１３のいずれか一項に記載の医薬製剤、および（ｉｉ）使用説明書を含む、キット。
【請求項１１５】
線維症および／または糖尿病に付随する疾患または症状の治療または予防を必要とする対象において、それらを治療または予防する方法であって、該対象に効果的な量の請求項１〜５７または１１３のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項１１６】
該疾患または症状が糖尿病である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
糖尿病が２型糖尿病である、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
該疾患または症状が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１９】
効果的な量の医薬製剤の対象への投与が、肝硬度を下げ、体脂肪率を下げ、体重を減らし、肝臓の体重に対する割合を減らし、肝脂質含有量を減らし、肝線維症の領域を減らし、空腹時血中グルコースレベルを下げ、空腹時トリグリセリドレベルを下げ、ＬＤＬコレステロールレベルを下げ、ＡｐｏＢレベルを下げ、ＡｐｏＣレベルを下げ、ＨＤＬコレステロールを上げ、またはそれらのいずれかの組み合わせである、請求項１１５〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
約１ｍｇと約４０ｍｇの間のＦＧＦ−２１ポリペプチドを用量当たりで投与する、請求項１１５〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、または約４０ｍｇのＦＧＦ−２１ポリペプチドを用量当たりで投与する、請求項１１５〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
医薬製剤が皮下投与される、請求項１１５〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
医薬製剤が安全シリンジを用いて皮下投与される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
医薬製剤が毎日または毎週投与される、請求項１１５〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
医薬製剤の対象への投与が、未処理対象のレベルと比べて、または該医薬製剤を投与する前の対象と比べて、
（ｉ）肝脂質レベルの低下；
（ｉｉ）肝損傷レベルの低下；
（ｉｉｉ）線維症レベルの低下；
（ｉｖ）線維症バイオマーカー血清Ｐｒｏ−Ｃ３（Ｎ−末端ＩＩＩ型コラーゲンプロぺプチド）レベルの減少；
（ｖ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの減少；
（ｖｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの減少；
（ｖｉｉ）血清中アジポネクチンレベルの増加；
（ｖｉｉｉ）血漿中ＬＤＬレベルの減少；
（ｉｘ）血漿中ＨＤＬレベルの増加；
（ｘ）血漿中トリグリセリドレベルの減少；
（ｘｉ）肝硬度レベルの低下；または
（ｘｉｉ）それらのいずれかの組み合わせ
をもたらす、請求項１１５〜１２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドがＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）である、請求項１１５〜１２５のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１２７】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および
（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの最終濃度を達成する量にて
混合し；そのｐＨを約７.１で調整する工程によって製造される、医薬製剤。
【請求項１２８】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および
（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの最終濃度を達成する量にて
混合し；およびそのｐＨを約７.１で調整する工程によって製造される、医薬製剤。
【請求項１２９】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および
（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの最終濃度を達成する量にて
混合し；およびそのｐＨを７.１で調整する工程によって製造される、医薬製剤。
【請求項１３０】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；
（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および
（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの最終濃度を達成する量にて
混合し；およびそのｐＨを７.１で調整する工程によって製造される、医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（ＥＦＳ−ＷＥＢを通して電子的に提出される配列表への言及）
本願と一緒に提出される電子提出の配列表の内容（名称: 3338_133PC01_SeqListing.txt；大きさ: 5,532バイト；および作成日: June 26、2019）は、その全てが出典明示により本明細書の一部とされる。
【０００２】
（発明の分野）
本願は、とりわけ、例えば、皮下投与を包含する種々の経路を介して投与するために、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）、界面活性剤（例えば、ＰＳ８０）を用いて安定化され、特定のｐＨ値（例えば、約７.１）を有する、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）は、複数の生理作用にて極めて重要な役割を果たす（McKeehanら、Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 59：135-176, 1998；Burgess, W. H.ら、Annu. Rev. Biochem. 58：575-606（1989））、発育中および成熟した組織にて広く発現されるポリペプチドである（Bairdら、Cancer Cells, 3：239-243, 1991）。文献によれば、ＦＧＦファミリーは少なくとも２２種のメンバーから構成される（Reussら、Cell Tissue Res. 313：139-157（2003））。
【０００４】
ＦＧＦ−２１は、線維症に付随する疾患および症状を治療するために使用され得る。線維症は臓器または組織にて線維性結合組織を過度に形成する。線維性組織の過剰な沈着は、臓器または組織の機能の障害に至り得る、病的状態と関連付けられる。影響を受ける臓器は、肺（肺線維症）、肝臓（肝線維症）、腎臓（腎臓線維症）および心臓（心臓線維症）を包含し得る。線維症はまた、関節、皮膚、腸、骨髄等を含む、他の組織および臓器にも影響を与え得る。例示的な線維性症状または疾患として、肝臓に影響を与える、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；腎臓に影響を与える、糖尿病性腎疾患および糖尿病性腎症；および心臓に影響を与える、代謝性心不全が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＮＡＳＨは、アルコールをほとんどまたは全く消費しない人々の肝臓における脂肪の蓄積、炎症および損傷を特徴とし、該疾患は肝硬変に至り得る。ＮＡＳＨは、特定の脂質が高い血中レベルにあることが多い、太り過ぎ、または肥満の中年の人々にて、および糖尿病または糖尿病予備軍にて診断される傾向にある。
【０００５】
ＦＧＦ−２１は、インビボにてタンパク質分解を受け、インビトロにて凝集体を形成し、脱アミドを受ける傾向があると報告されており（(GimenoおよびMoller、Trends Endocrinol Metab. 2014 June, 25(6)：303-11；米国特許第8,361,963号；Hechtら、PLoS One. 2012, 7(11)：e49345；米国特許公開番号2007/0293430；WO 2006/0065582）、ＦＧＦ−２１を含有する医薬組成物の保存可能期間を制限する可能性がある。治療用ポリペプチドの凝集体および脱アミド形態は免疫原性を高める可能性がある（米国保健福祉省、「治療用タンパク質製品の免疫原性評価（Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products）」、２０１４年８月； Subramanyam（編）、「治療用タンパク質免疫原性フォーカス基ニュースレター（Therapeutic Protein Immunogenicity Focus Group Newsletter）」、American Association of Pharmaceutical Scientists, Vol. 1, Issue 3（２０１１年１２月）を参照のこと）。
【０００６】
本開示は、とりわけ、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、特に修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む、医薬製剤の製造と関連付けられる問題を処理する、医薬製剤の必要性に対処する。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）ポリペプチド、例えば、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、およびジエチレントリアミン五酢酸（ペンテト酸またはＤＴＰＡとしても公知）などのアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含む、医薬製剤であって、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない対照製剤と比べて、安定性の改良された製剤を提供する。これらの医薬製剤は、当該分野にて公知の代替となる製剤について１または複数の強化を、例えば、例として４０℃で約１か月にわたって貯蔵した場合に脱アミドの速度がより遅いこと、および／または、例えば、４０℃で約１か月貯蔵した場合に高分子量（ＨＭＷ）の凝集速度がより遅いことを示す。
【０００８】
アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤が開示の製剤中に存在することはまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチド酸化を、特にメチオニン酸化を軽減する。例えば、製剤中にＤＴＰＡを配合することは、２５℃および／または４０℃で、配列番号：３のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９（または配列番号：１および２中の対応するメチオニン）に相当する１または複数のＦＧＦ−２１メチオニンの酸化を軽減または防止し得る。
【０００９】
いくつかの態様において、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ〜約１００μＭのＤＴＰＡ、約２０μＭ〜約９０μＭのＤＴＰＡ、約３０μＭ〜約８０μＭのＤＴＰＡ、約２５μＭ〜約７５μＭのＤＴＰＡ、約４０μＭ〜約６０μＭのＤＴＰＡ、約３０μＭ〜約７０μＭのＤＴＰＡ、または約４０μＭ〜約７０μＭのＤＴＰＡの量で存在する。別の態様にて、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭまたは約６０μＭ  ＤＴＰＡの量で存在する。
【００１０】
本明細書に開示の医薬製剤のいくつかの態様において、製剤のｐＨは６.５より上、６.６より上、６.７より上、６.８より上、６.９より上、７.０より上、７.１より上、７.２より上、７.３より上、７.４より上、または７.５より上である。
【００１１】
いくつかの態様において、ｐＨは約６.７〜約７.５、約６.８〜約７.５、約６.９〜約７.４、約７.０〜約７.３、約７.１〜約７.２、約７.１〜約７.３、約７.１〜約７.４、または約７.１〜約７.５である。いくつかの態様において、ｐＨは約６.７、約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５である。いくつかの態様において、該医薬製剤はｐＨが６.５の対照となる製剤よりも安定している。
【００１２】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤はさらに、界面活性剤、例えば、非イオン性界面活性剤を含む。いくつかの態様において、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）である。いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、または約０.０５％〜約０.０６％（ｗ／ｖ）の量にて存在する。
【００１３】
いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は、少なくとも約０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０９％（ｗ／ｖ）、または少なくとも約０.１％（ｗ／ｖ）の量で配合される。いくつかの態様において、界面活性剤は、例えば、振盪器でかき混ぜられた場合に、粒子および／または気泡形成を軽減する。
【００１４】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤はさらに、アミノ酸緩衝剤、例えば、ヒスチジンを含む。いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ  ヒスチジン、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭ  ヒスチジン、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭ  ヒスチジン、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭ  ヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ  ヒスチジン、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭ  ヒスチジン、約１７.５ｍＭ〜約２２.５ｍＭ  ヒスチジン、または約４０ｍＭ〜約６０ｍＭ  ヒスチジンの量で配合される。いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ  ヒスチジン、約１５ｍＭ  ヒスチジン、約２０ｍＭ  ヒスチジン、約２５ｍＭ  ヒスチジン、約３０ｍＭ  ヒスチジン、約３５ｍＭ  ヒスチジン、約４０ｍＭ  ヒスチジン、約４５ｍＭ  ヒスチジン、または約５０ｍＭ  ヒスチジンの量で配合される。
【００１５】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤はさらに、浸透圧調節剤、例えば、糖を含む。いくつかの態様において、糖はシュークロースである。いくつかの態様において、シュークロース浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ〜約１Ｍ  シュークロース、約２００ｍＭ〜約９００ｍＭ  シュークロース、約３００ｍＭ〜約８００ｍＭ  シュークロース、約４００ｍＭ〜約７００ｍＭ  シュークロース、または約５００ｍＭ〜約６００ｍＭ  シュークロースの量で存在する。いくつかの態様において、シュークロース浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ  シュークロース、約２００ｍＭ  シュークロース、約３００ｍＭ  シュークロース、約４００ｍＭ  シュークロース、約５００ｍＭ  シュークロース、約６００ｍＭ  シュークロース、約７００ｍＭ  シュークロース、約８００ｍＭ  シュークロース、約９００ｍＭ  シュークロース、または約１Ｍ  シュークロースの量で存在する。
【００１６】
本明細書に開示の医薬製剤のいくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含むか、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドから構成されるか、または本質的に修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドからなる。いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：３のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含み、ここで該ポリペプチドはＦＧＦ−２１活性を有する。
【００１７】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは半減期延長部分と連結される。いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列中の天然にてコードされないアミノ酸の側鎖を介して半減期延長部分と連結される。いくつかの態様において、半減期延長部分は、アルブミン、免疫グロブリン定常領域またはその一部、免疫グロブリン結合ポリペプチド、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、アルブミン結合ポリペプチド（ＡＢＰ）、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＨＥＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＸＴＥＮ、Ｆｃ領域、およびそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、半減期延長部分は水溶性ポリマーを含む。いくつかの態様において、水溶性ポリマーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。いくつかの態様において、ＰＥＧは平均分子量が約１０ｋＤａ〜約４０ｋＤａである。いくつかの態様において、ＰＥＧは平均分子量が約３０ｋＤａである。
【００１８】
本明細書に開示の製剤のいくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸はフェニルアラニン誘導体である。いくつかの態様において、フェニルアラニン誘導体はパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである。いくつかの態様において、半減期延長部分は、オキシム連結を介して天然にてコードされないアミノ酸と連結される。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸が、配列番号：３のアミノ酸グルタミン１０９に取って代わる。
【００１９】
本明細書に開示の製剤のいくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは約１０ｍｇ／ｍｌまたは約２０ｍｇ／ｍｌ濃度で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは約１ｍｇ〜約４０ｍｇ／用量の量で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは約１ｍｇ／用量、約５ｍｇ／用量、約１０ｍｇ／用量、約２０ｍｇ／用量、または約４０ｍｇ／用量の量で存在する。
【００２０】
いくつかの態様において、製剤は皮下投与用に処方される。いくつかの態様において、製剤は安全シリンジを用いる皮下投与用に処方される。いくつかの態様において、製剤は毎日または毎週の投与用に処方される。いくつかの態様において、製剤は水性製剤である。本明細書に開示のいくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドはＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）である。
【００２１】
本開示は、（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約１００ｍＭ〜約１Ｍの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを約１０μＭ〜約１００μＭの濃度で含む医薬製剤であって、その製剤のｐＨが約６.７〜約７.５である、医薬製剤を提供する。
【００２２】
本開示はまた、（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが約７.１である、医薬製剤を提供する。（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【００２３】
本開示はまた、（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；および（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが約７.０である、医薬製剤を提供する。（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；および（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが７.０である、医薬製剤も提供される。
【００２４】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；およびＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが約７.１である、医薬製剤も提供される。
【００２５】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；およびＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが約７.１である、医薬製剤も提供される。
【００２６】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；およびＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【００２７】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；およびＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【００２８】
本開示はまた、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を混合することを含む、ＦＧＦ−２１ポリペプチドから構成される医薬製剤の安定性を改善する方法であって、ここで該製剤が、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない対照となる製剤と比べて、安定性が改善されている、方法を提供する。１の態様において、安定性の改善は、（ｉ）物理的安定性の増加、（ｉｉ）化学的安定性の増加、または（ｉｉｉ）その組み合わせを含む。１の態様において、物理的安定性の増加は（ｉ）ポリペプチド凝集の防止または減少、（ｉｉ）ポリペプチド断片化の防止または減少、あるいは（ｉｉｉ）それらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、化学的安定性の増加は（ｉ）脱アミド化の防止または減少、（ｉｉ）酸化の防止または減少、あるいは（ｉｉｉ）それらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、安定性の改善は、１または複数の
（ａ）対照製剤との関係で４０℃で１か月貯蔵した場合に脱アミド化速度が低いこと；
（ｂ）対照製剤との関係で４０℃で１か月貯蔵した場合に高分子量（ＨＭＷ）の凝集割合が低いこと；または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方
を含む。
【００２９】
本明細書にて開示される医薬製剤の安定性を改善するための方法のいくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、２５℃および／または４０℃で、配列番号：３のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９に対応する１または複数のメチオニン（あるいは配列番号：１または配列番号：２、または他の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドにある対応するメチオニン）の酸化を軽減する。いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤はＤＴＰＡである。いくつかの態様において、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ〜約１００μＭ  ＤＴＰＡ、約２０μＭ〜約９０μＭ  ＤＴＰＡ、約２５μＭ〜約７５μＭ  ＤＴＰＡ、約４０μＭ〜約６０μＭ  ＤＴＰＡ、約３０μＭ〜約７０μＭ  ＤＴＰＡ、約３０μＭ〜約８０μＭ  ＤＴＰＡ、または約４０μＭ〜約７０μＭ  ＤＴＰＡの量で存在する。いくつかの態様において、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、または約６０μＭ  ＤＴＰＡの量で存在する。
【００３０】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤の安定性を改善するための方法は、該製剤のｐＨを６.５より上に、６.６より上に、６.７より上に、６.８より上に、６.９より上に、または７.０より上に調整することをさらに含む。いくつかの態様において、該ｐＨは、約６.８〜約７.５、または約６.９〜約７.４、あるいは約７.０〜約７.３、または約７.１〜７.２、または約７.１〜約７.３、または約７.１〜約７.４、または約７.１〜約７.５のｐＨ値に調整される。いくつかの態様において、調整されたｐＨは約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５である。いくつかの態様において、ｐＨ調整された製剤は、ｐＨが６.５である対照製剤（すなわち、濃度は同じであるが、ｐＨの異なる、成分が同じの製剤）よりも安定している。
【００３１】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤の安定性を改善するための方法は、界面活性剤を混合することをさらに含む。いくつかの態様において、界面活性剤は非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベートである。いくつかの態様において、ポリソルベートはポリソルベート８０である。いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は、約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、または約０.０５％〜約０.０６％（ｗ／ｖ）の量で混合される。いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は、少なくとも約０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０９％（ｗ／ｖ）または少なくとも約０.１％（ｗ／ｖ）の量で混合される。いくつかの態様において、界面活性剤は、例えば振盪器上で製剤がかき混ぜられる場合に、粒子および／または気泡の形成を軽減する。
【００３２】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤の安定性を改善するための方法は、アミノ酸緩衝剤、例えば、ヒスチジンを混合することをさらに含む。いくつかの態様において、該ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭヒスチジン、約１７.５ｍＭ〜約２２.５ｍＭヒスチジン、または約４０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジンの量にて混合される。いくつかの態様において、該ヒスチジン緩衝剤は約１０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量で混合される。
【００３３】
いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤の安定性を改善するための方法は、浸透圧調節剤、例えば、糖を混合することをさらに含む。いくつかの態様において、該糖はシュークロースである。いくつかの態様において、該シュークロース浸透圧調節剤は約１００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約２００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、または約５００ｍＭ〜約６００ｍＭシュークロースの量で混合される。いくつかの態様において、該シュークロース浸透圧調節剤は約１００ｍＭシュークロース、約２００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭシュークロース、約８００ｍＭシュークロース、約９００ｍＭシュークロース、または約１Ｍシュークロースの量で混合される。
【００３４】
本明細書に開示の医薬製剤の安定性を改善するための方法のいくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドである。いくつかの態様において、該修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：３のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する、ＦＧＦ−２１ポリペプチド配列を含み、ここで該ポリペプチドはＦＧＦ−２１活性を有する。いくつかの態様において、該修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは半減期延長部分と連結される。いくつかの態様において、該修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列において天然にてコードされないアミノ酸の側鎖を介して半減期延長部分と連結される。
【００３５】
いくつかの態様において、半減期延長部分は、例えば、アルブミン、免疫グロブリン定常領域またはその一部、免疫グロブリン結合ポリペプチド、ＩｇＧ、ＡＢＰ、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＨＥＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＸＴＥＮ、Ｆｃ領域、およびそれらのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの態様において、該半減期延長部分は水溶性ポリマーを含む。いくつかの態様において、該水溶性ポリマーはＰＥＧである。いくつかの態様において、該ＰＥＧは約１０ｋＤａ〜約４０ｋＤａの平均分子量を有する。いくつかの態様において、該ＰＥＧは約３０ｋＤａの平均分子量を有する。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸はフェニルアラニン誘導体である。いくつかの態様において、該フェニルアラニン誘導体はパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである。いくつかの態様において、該半減期延長部分は、オキシム連結を介して、天然にてコードされないアミノ酸と連結される。いくつかの態様において、その天然にてコードされないアミノ酸が配列番号：３のアミン酸グルタミン１０９に取って代わる。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは約１０ｍｇ／ｍｌまたは約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、該製剤は水性製剤である。上記の方法のいくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドはＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）である。
【００３６】
本開示はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約１００ｍＭ〜約１Ｍの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約１０μＭ〜約１００μＭの濃度で混合し、ここで該製剤のｐＨが約６.７〜約７.５であることを含む、方法を提供する。ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが約７.１であることを含む、方法も提供される。ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが７.１であることを含む、方法も提供される。
【００３７】
本開示はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で混合し、ここでそのｐＨが約７.０であることを含む、方法を提供する。本開示はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが７.０であることを含む、方法も提供される。ＦＧＦ−２１ポリペプチドを約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが約７.１であることを含む、方法も提供される。
【００３８】
本開示はまた、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが約７.１であることを含む、方法も提供される。ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが７.１であることを含む、方法も提供される。
【００３９】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合し；ここでそのｐＨが７.１であることを含む、方法も提供される。
【００４０】
本開示はまた、本明細書にて開示される、ＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む製剤の安定性を改善するためのいずれかの方法に従って製造される医薬製剤を提供する。また、（ｉ）本明細書に開示のＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む医薬製剤と、（ｉｉ）使用説明書とを含む、キットも提供される。
【００４１】
本開示はまた、線維症および／または糖尿病に付随する疾患または症状を治療または予防する必要のある対象におけるその治療または予防方法であって、該対象に本明細書に開示の効果的な量のＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様において、該疾患または症状は糖尿病である。いくつかの態様において、該糖尿病は２型糖尿病である。いくつかの態様において、該疾患または症状は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。いくつかの態様において、効果的な量の本明細書に開示のＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む医薬製剤の対象への投与は、肝硬直を減らし、体脂肪の割合を減らし、体重を減らし、体重に対する肝臓の重量割合を減らし、肝脂質含量を減らし、肝線維症領域を減らし、空腹時血糖レベルを下げ、空腹時トリグリセリドレベルを下げ、ＬＤＬコレステロールレベルを下げ、ＡｐｏＢレベルを下げ、ＡｐｏＣレベルを下げ、ＨＤＬコレステロールを増加させ、あるいはそれらのいずれかの組み合わせをもたらす。いくつかの態様において、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ／用量のＦＧＦ−２１ポリペプチドが投与される。いくつかの態様において、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、または約４０ｍｇ／用量のＦＧＦ−２１ポリペプチドが投与される。いくつかの態様において、医薬製剤は皮下投与される。いくつかの態様において、医薬製剤は安全シリンジを用いて皮下投与される。いくつかの態様において、医薬製剤は毎日または毎週投与される。
【００４２】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される治療方法に従って、本明細書に開示のＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む医薬製剤の対象への投与は、未処理の対象でのレベルと比べて、または医薬製剤を投与する前の対象と比べて、（ｉ）肝脂肪のレベルを下げ；（ｉｉ）肝障害のレベルを下げ；（ｉｉｉ）線維症のレベルを下げ；（ｉｖ）線維症バイオマーカー血清Ｐｒｏ−Ｃ３（Ｎ−末端ＩＩＩ型コラーゲンプロぺプチド）のレベルを低下させ；（ｖ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを低下させ；（ｖｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベルを低下させ；（ｖｉｉ）血清中アディポネクチンのレベルを上昇させ；（ｖｉｉｉ）血漿中ＬＤＬのレベルを低下させ、血漿中ＨＤＬのレベルを上昇させ；（ｉｘ）血漿中トリグリセリドのレベルを低下させ；（ｘ）肝硬直のレベルを下げ；または（ｘｉ）それらのいずれかの組み合わせをもたらす。
【００４３】
いくつかの態様において、医薬製剤は、（ｉ）約１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの最終濃度を達成する量のシュークロース；（ｉｖ）約０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０μＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡを混合し；そのｐＨを約７.１に調整するプロセスによって製造される。
【００４４】
いくつかの態様において、医薬製剤は、（ｉ）約２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの最終濃度を達成する量のシュークロース；（ｉｖ）約０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０μＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡを混合し；そのｐＨを約７.１に調整するプロセスによって製造される。
【００４５】
いくつかの態様において、医薬製剤は、（ｉ）１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１；（ｉｉ）２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの最終濃度を達成する量のシュークロース；（ｉｖ）０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）５０μＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡを混合し；そのｐＨを７.１に調整するプロセスによって製造される。
【００４６】
いくつかの態様において、医薬製剤は、（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１；（ｉｉ）２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの最終濃度を達成する量のシュークロース；（ｉｖ）０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）５０μＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡを混合し；そのｐＨを７.１に調整するプロセスによって製造される。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、製剤の組成における関数としてのＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の脱アミド化を示す。図１Ａはペンテト酸（ＤＴＰＡ）またはポリソルベート８０を含まない製剤での脱アミド化を示す。図１Ｂはペンテト酸（ＤＴＰＡ）およびポリソルベート８０を含む製剤での脱アミド化を示す。
【００４８】
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、５０μＭ  ＤＴＰＡ（ペンテト酸としても知られる）の有無におけるメチオニン１（図２Ａ）およびメチオニン１６９（図２Ｂ）でのＰＥＧ−ＦＧＦ−２１ポリペプチドの金属触媒酸化を示す。
【００４９】
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１凝集に対するｐＨの影響を示す。図３Ａは、時間、ｐＨ、および使用される緩衝系の関数としての凝集を示す。図３Ｂは異なる温度と時間（５℃、１４か月；２５℃、１か月；４０℃、１日）および異なるｐＨでの凝集を示す。
【００５０】
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、製剤の組成における関数としてのＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の凝集を示す。図４Ａはペンテト酸（ＤＴＰＡ）またはポリソルベート８０を含まない製剤での凝集を示す。図４Ｂはペンテト酸（ＤＴＰＡ）およびポリソルベート８０を含む製剤での凝集を示す。
【００５１】
【図５】ＰＳ８０不含の高濃度のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１が、３００ｒｐｍのオービタルシェーカーで２４時間経過後に（左図）またはリストアクションで６時間振盪させた後に（右図）混濁したことを示す。ポリソルベート８０の０.０１％〜０.１％（ｗ／ｖ）での添加は試料の混濁を減らした。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
本開示は、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む、安定した医薬製剤を提供する。ＤＴＰＡなどのアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤の存在は、ＦＧＦ−２１ポリペプチドにある１または複数のアミノ酸残基、例えば、メチオニンの酸化を減らすことが観察された。ＤＴＰＡのＦＧＦ−２１製剤への組み込みも、貯蔵の間のＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化の速度を低下させ、また貯蔵の間の高分子量の凝集割合を減らす。製剤のｐＨを７.１に調整することによりさらなる安定化が達成され得る。また、製剤はポリソルベート８０などの界面活性剤を添加することによりさらに安定化され得る。
【００５３】
本開示はまた、開示の製剤を製造するための方法、ならびに該開示の方法を適用することで生成される製剤を提供する。線維症に付随する疾患、例えば、ＮＡＳＨおよび糖尿病を治療または予防する方法であって、その開示の安定した製剤をその必要とする対象に投与することを含む、方法も提供される。
【００５４】
定義
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語をまず定義する。本明細書にて使用される場合、本明細書で明示的に規定される場合を除き、次の用語は、各々、下記の意義を有するものとする。さらなる定義も明細書全体に記載される。
【００５５】
本開示は、正確にはグループの１つの部材が、所定の生成物または方法にて存在するか、利用されるか、さもなければ関連する、態様を包含する。本開示は、グループの１または複数の、あるいは全ての部材が、所定の生成物または方法にて存在するか、利用されるか、さもなければ関連する、態様を包含する。
【００５６】
単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈でそうでないと明示されない限り、複数の指示対象を包含する。「ａ」（または「ａｎ」）なる語、ならびに「１または複数」および「少なくとも１つ」なる語は、本明細書にて同義的に使用され得る。特定の態様にて、「ａ」または「ａｎ」なる語は「単一」を意味する。別の態様において、「ａ」または「ａｎ」なる語は「２以上」または「複数」を包含する。かくして、例えば、「ＦＧＦ−２１」または「ＦＧＦ−２１ポリペプチド」への言及は、１または複数のかかるタンパク質への言及であり、当業者に公知のその均等物等を包含する。
【００５７】
さらには、本明細書にて使用される、「および／または」は、２つの特定の特徴または構成要素の、他方と共にまたはなしで、各々の個々の開示として解釈されるべきである。かくして、本明細書にて「Ａおよび／またはＢ」などの区にて用いられる「および／または」なる語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を包含するものとする。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの区にて用いられる「および／または」なる語は、以下の態様：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）およびＣ（単独）の各々を包含するものとする。
【００５８】
本明細書にて使用される「約」なる語は、当業者によって決定される特定の値または構成について許容される誤差の範囲内にある値または構成をいい、それはその値または構成がどのように測定されるか、または決定されるかに、すなわち測定システムの限界にある程度は依存するであろう。例えば、「約」は、当該分野での実践に付き標準偏差が１以内、または１より大きいことを意味し得る。あるいはまた、「約」は２０％までの範囲を意味し得る。さらには、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、該用語は、最大で１桁、または最大で５倍の値を意味し得る。特定の値または構成が本願および特許請求の範囲において提供される場合、特記されない限り、「約」の意義は、その特定の値または構成について許容される誤差の範囲内にあると想定されるべきである。「約」なる語が数値範囲と合わさって使用される場合、それは、示された数値の上限および下限を拡張することによりその範囲を変更する。「約１０−２０」は「約１０〜約２０」を意味する。一般に、「約」なる語は、数値を、例えば１０％の上下（より高いか、低い）の変動により、記載された値の上に、または下に変更し得る。
【００５９】
特記されない限り、本明細書にて使用されるすべての技術および科学用語は、本開示と関連付けられる分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意義を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology、Juo, Pei-Show、第2版、2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology、第3版、1999、Academic Press；およびthe Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology、2000年改訂、Oxford University Pressは、本開示にて使用される多くの用語についての一般的な辞書を当業者に提供する。
【００６０】
態様が本明細書にて「含む（comprising）」なる語を用いて記載される場合は常に、「構成される（consisting of）」および／または「本質的に・・・からなる（consisting essentially of）」なる語において記載される他の類似する態様もまた提供されることが理解される。
【００６１】
単位、接頭辞、および記号は、国際単位系（ＳＩ）で承認された形態にて示される。数値範囲は範囲を規定する数も含まれる。特記されない限り、アミノ酸配列はアミノからカルボキシの方向で左から右に記載される。本明細書で提供される見出しは、本開示の種々の態様を限定するものではなく、それは明細書全体に言及することによってもたらされ得る。従って、すぐ下記にて定義される用語は明細書全体を参照とすることによってより詳細に規定される。
【００６２】
アミノ酸は、その周知の３文字記号、またはIUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commissionが推奨する１文字記号のいずれかで本明細書に言及される。特記されない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向で左から右に記載される。
【００６３】
凝集：「凝集」なる語は、ポリペプチド、例えば、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドが他の分子（同じポリペプチドの他の分子など）との非共有結合複合体を形成する傾向にあり、それによって高分子量の複合体を形成することをいう。凝集体の形成を測定する例示的な方法として、本明細書の実施例に記載されるような分析サイズ排除クロマトグラフィーが挙げられる。凝集の相対量は、例えば、凝集の減少したポリペプチドを同定するために、対照となる化合物に対して決定されてもよい。凝集の相対量はまた、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドが凝集を軽減させた製剤を同定するために、対照となる製剤に対して決定され得る。
【００６４】
アミノ酸置換：「アミノ酸置換」なる語は、親配列または対照配列（例えば、野生型配列）にあるアミノ酸残基をもう一つ別のアミノ酸残基と置き換えることをいう。アミノ酸は、親配列または対照配列（例えば、野生型ポリペプチド配列）において、例えば、化学ペプチド合成を介して、または当該分野にて公知の組換え技法を通して置換され得る。従って、「位置Ｘでの置換」についての言及は、位置Ｘにあるアミノ酸の別のアミノ酸残基との置換をいう。いくつかの態様において、置換パターンは、スキーマ：ＡｎＹ（ここで、Ａは位置ｎに天然でまたは元々あるアミノ酸に対応する１文字コードであり、Ｙは置換アミノ酸残基である）に従って、記載することができる。別の態様において、置換パターンは、スキーマ：Ａｎ（ＹＺ）（ここで、Ａは位置ｎに天然でまたは元々あるアミノ酸と置き換わるアミノ酸残基に対応する１文字コードであり、ＹおよびＺはＡと置き換わり得る別の置換アミノ酸残基である）に従って、記載することができる。
【００６５】
本開示の文脈において、置換（それらがアミノ酸置換と称される場合であっても）は、核酸レベルで行われ、すなわち、アミノ酸残基と代替アミノ酸残基との置換は、第１アミノ酸をコードするコドンを、第２アミノ酸をコードするコドンと置換することにより行われる。
【００６６】
およそ：本明細書で使用される場合、「およそ」なる語は、目的とする１または複数の値に適用される時は、記載される対照値と同様の値を言う。特定の態様において、「およそ」なる語は、特記されない限り、または文脈から明らかでない限り、指定された対照値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい方向）にて１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内にある一連の値を言う（ただし、かかる数値は可能性のある値の１００％超える場合を除く）。
【００６７】
付随する：疾患に関して本明細書で使用される場合、「付随する」なる語は、問題の症状、測定、特徴、または状態が、その疾患の診断、発症、存在、または進行と関連付けられることを意味する。関連付けは、疾患と因果関係がある可能性があるが、そうである必要はない。
【００６８】
生物学的に活性な：本明細書に開示される分子、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに適用される「生物学的に活性な」なる語は、生物学的システム、経路、分子、または生体に関連する相互作用の任意の物理的または生化学的特性に影響し得るいずれの物質も意味する。特に、本明細書で使用される場合、生物学的に活性な分子は、ヒトまたは他の動物における、疾患または症状、例えば線維症に付随する疾患または症状の診断、治癒、緩和、治療または予防を意図とする、さもなければヒトまたは動物の身体的または精神的な幸福度を高める、いずれの物質も包含するが、これらに限定されない。
【００６９】
保存的アミノ酸置換：「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似する側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられている、置換である。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、またはヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）、非荷電性極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、またはシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、またはトリプトファン）、ベータ−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および 芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはヒスチジン）を含め、当該分野において規定される。かくして、ポリぺプチドのアミノ酸が同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸と置き換えられている場合、そのアミノ酸置換は保存的であると考えられる。もう一つ別の態様において、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似するストリングと保存的に置き換えることができる。
【００７０】
非保存的アミノ酸置換は、（ｉ）電気陽性側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＬｙｓ）が電気陰性残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）の代わりに用いられるか、またはそれによって置換されるか、（ｉｉ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＰｈｅまたはＶａｌ）の代わりに用いられるか、またはそれによって置換されるか、（ｉｉｉ）システインまたはプロリンが他のいずれかの残基の代わりに用いられるか、またはそれによって置換されるか、あるいは（ｉｖ）嵩高い疎水性または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、ＩｌｅまたはＴｒｐ）がより小さな側鎖を有する残基（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）または側鎖のない残基（例えば、Ｇｌｙ）の代わりに用いられるか、またはそれによって置換される、アミノ酸置換を包含する。
【００７１】
他のアミノ酸置換も用いることができる。例えば、アミノ酸アラニンでは、Ｄ−アラニン、グリシン、ベータ−アラニン、Ｌ−システインおよびＤ−システインのいずれか１つと置換を行うことができる。リシンでは、置換はＤ−リシン、アルギニン、Ｄ−アルギニン、ホモ−アルギニン、メチオニン、Ｄ−メチオニン、オルニチンまたはＤ−オルニチンのいずれか１つとすることができる。一般に、単離ポリペプチドの特性において変化を誘発すると期待され得る機能的に重要な領域の置換は、（ｉ）極性残基、例えば、セリンまたはスレオニンが、疎水性残基、例えば、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、またはアラニンの代わりに用いられるか（またはそれによって置換される）；（ｉｉ）システイン残基がいずれか別の残基の代わりに用いられるか（またはそれによって置換される）；（ｉｉｉ）電気陽性側鎖を有する残基、例えば、リジン、アルギニンまたはヒスチジンが電気陰性側鎖を有する残基、例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸の代わりに用いられるか（またはそれによって置換される）；あるいは（ｉｖ）嵩高い側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンがかかる側鎖を有しない残基、例えば、グリシンの代わりに用いられるか、またはそれによって置換される、ものである。上記した非保存的置換の１つがタンパク質の機能性を改変しうる可能性はまた、タンパク質の機能的に重要な領域に関する置換の位置とも相関しており、従って、非保存的置換のいくつかは生物学的特性にほとんど、または全く影響を付与し得ない。
【００７２】
保存された：本明細書で使用される場合、「保存された」なる語は、ポリペプチドのアミノ酸残基が、２またはそれ以上の配列を比較した時に同じ位置で、各々、残基の改変が生じていないことをいう。相対的に保存されるアミノ酸は、配列の他の位置にあるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連性の高い配列間で保存されているものである。
【００７３】
いくつかの態様において、２またはそれ以上の配列は、仮にそれらが相互に１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一である」と言われる。いくつかの態様において、２またはそれ以上の配列は、仮にそれらが相互に少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様において、２またはそれ以上の配列は、仮にそれらが相互に約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％または約９９％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様において、２またはそれ以上の配列は、仮にそれらが相互に少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。いくつかの態様において、２またはそれ以上の配列は、仮にそれらが相互に約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用されてもよく、あるいはその一部、領域または特徴に適用されてもよい。
【００７４】
脱アミド化：「脱アミド化」なる語は、ポリペプチド内のアミノ酸残基が自発的に脱アミド化反応を起こし、それによって、アミノ酸の化学構造が変化し、潜在的にポリペプチドの機能に影響を及ぼすという傾向をいう。脱アミド化を測定する例示的方法が本明細書の実施例に開示されている。脱アミド化の相対量は、対照となる化合物に対して、例えば、脱アミド化の減少したポリペプチドを同定して決定されてもよい。脱アミド化の相対量はまた、対照となる製剤に対して、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化の減少した製剤を同定して決定されてもよい。
【００７５】
線維症に付随する疾患：「線維症に付随する疾患」なる語は、線維症の発症が観察されるか、または線維症が疾患の病因、進行、または徴候に付随するか、または寄与することが知られているか、またはそうと考えられるか、あるいは疾患が進行するにつれて線維症を発症することが知られているか、またはそうと考えられる、疾患、障害、および症状を包含する。
【００７６】
線維症は、膵臓、肺、心臓、腎臓、肝臓、眼、神経系、骨髄、リンパ節、心筋内膜、または後腹膜などの器官または組織に影響を及ぼすかもしれない。線維症に付随する例示的な疾患として、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症、前肝硬変、肝硬変、びまん性実質性肺疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、進行性塊状線維症、特発性肺線維症、インジェクション線維症、腎線維症、慢性腎疾患、糖尿病性腎疾患、巣状分節状糸球体硬化症、膜性腎症、ＩｇＡ腎症、骨髄線維症、心不全、代謝性心不全、心線維症、白内障線維症、白内障、眼瘢痕、膵線維症、皮膚線維症、腸線維症、腸狭窄、心内膜心筋線維症、心房線維症、縦隔線維症、クローン病、腹膜後線維症、ケロイド、腎性全身性線維症、強皮症、全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー症候群、デュプイトラン拘縮、糖尿病性神経障害、癒着性関節包炎、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、ウイルス性肝炎、胆管疾患、原発性ヘモクロマトーシス、薬物関連肝硬変、原因不明肝硬変、ウィルソン病、および、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、ヒト線維性肺疾患、黄斑変性症、レチナール網膜症（retinal retinopathy）、硝子体網膜症、心筋線維症、グレーブス眼症、薬物誘発性麦角病、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症／再狭窄、肥大性瘢痕、原発性または特発性骨髄線維症、および炎症性腸疾患（コラーゲン蓄積大腸炎を含むが、これに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、肝線維症、腎線維症、肺線維症および心線維症を包含し得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は肝線維症であり得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患はＮＡＳＨであり得る。
【００７７】
効果的な量：本明細書で使用される場合、本明細書にて開示されるＦＧＦ−２１製剤の「効果的な量」なる語は、有益なまたは所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、「効果的な量」それ自体は、それが適用される状況に依存する。例えば、ＮＡＳＨを治療するＦＧＦ−２１ポリペプチドを投与する状況において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの効果的な量は、例えば、肝脂肪、肝損傷または線維症を改善する（例えば、治療していない対象におけるレベルについて、または治療の投与を行う前の対象におけるレベルについて肝脂肪、肝損傷または線維症を軽減させる）のに十分な量である。
【００７８】
いくつかの態様において、ＮＡＳＨを治療するのに効果的な量のＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、治療していない対象におけるレベルについて、または治療の投与を行う前の対象におけるレベルについて、１または複数の線維症バイオマーカーのレベルを変えること：例えば、血清Ｐｒｏ−Ｃ３を減らし；ＡＬＴまたはＡＳＴを減らし；血清中アジポネクチンを増やし；血漿中ＬＤＬを減らし；血漿中ＨＤＬを増やし；血漿中トリグリセリドレベルを下げること、またはそれらのいずれの組み合わせも可能である。
【００７９】
「効果的な量」なる語は、「効果的な用量」、「治療的に効果的な量」または「治療的に効果的な用量」と互換的に使用され得る。
【００８０】
ＦＧＦ−２１活性：「ＦＧＦ−２１活性」なる語は、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性をいう。「生物学的活性」なる語は、分子、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの、生物（ウイルス、細菌、バクテリオファージ、トランスポゾン、プリオン、昆虫、真菌、植物、動物およびヒトを含むが、これらに限定されない）に関連する、生物学的システム、経路、分子または相互作用の物理的または生化学的特性に影響を及ぼす能力をいう。
【００８１】
例えば、改変されていないか、または改変されたＦＧＦ−２１の状況において、生物学的活性は、ＦＧＦ−２１によって実行されるいずれかの生物学的機能を包含する。分子が野生型ＦＧＦ−２１（配列番号：３の野生型ＦＧＦ−２１ポリペプチドなど）の少なくとも１つの生物学的活性を有するかどうかを決定する例維持的方法は、米国出願公開番号２０１７／０１８９４８６（出典明示により本明細書の一部とする）の実施例５および１７に開示の方法を含め、当該分野にて公知のいずれの機能アッセイも包含し得る。
【００８２】
生物学的活性の相対レベルは、対照となる化合物に関して、例えば、生物学的活性を有するか、または意図する治療的使用に対して十分に高い生物学的活性を有する、例えば、ＥＣ５０が対照となる化合物のＥＣ５０の５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、５０倍未満、または１００倍未満である、ポリペプチドを同定するのに決定され得る。生物学的活性の相対レベルはまた、対照となる製剤に関して、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、生物学的活性を有するか、または意図する治療的使用に対して十分に高い生物学的活性を有する、例えば、ＥＣ５０が対照となる製剤中のＦＧＦ−２１ポリペプチドのＥＣ５０の５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、５０倍未満、または１００倍未満である、製剤を同定するのに決定され得る。
【００８３】
本明細書に記載の対照となる化合物は、本明細書にて記載される修飾などの、修飾を欠くＦＧＦ−２１配列であり得る。例えば、対照となる化合物は、野生型ＦＧＦ−２１、または融合パートナーを含まない、例えばＰＥＧを含まない、同じ修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド配列であり得る。ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１について例示的な対照となる化合物は、配列番号：３の野生型ＦＧＦ−２１ポリペプチド、および配列番号：１の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含むが、これらに限定されない。
【００８４】
いくつかの態様において、対照となる化合物は、リンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、ペプチド、ポリペプチド、または本明細書に記載の半減期延長部分（例えば、ＰＥＧ）に連結され得る、少なくとも１つの天然にてコードされないアミノ酸を含有し得る。いくつかの態様において、対照となる化合物は、リンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、ペプチド、ポリペプチド、または本明細書に記載の半減期延長部分（例えば、ＰＥＧ）に連結され得ない、少なくとも１つの天然にてコードされないアミノ酸を含有し得る。いくつかの態様において、対照となる化合物は、さらなるアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有してもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドのペグ化または非ペグ化形態で、比較を行うことができ；前者の場合、天然にてコードされないアミノ酸を含む、または含まないポリペプチドで、比較を行うことができる。
【００８５】
ＦＧＦ−２１ポリペプチド：「ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語は、野生型ＦＧＦ−２１ポリペプチドおよび修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドをいう。
【００８６】
半減期延長部分：「半減期延長部分」なる語は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドに、所望により天然にてコードされないアミノ酸を介してもよく、直接的にまたはリンカーを介して、共有結合（「コンジュゲート」または「融合」）した医薬的に許容される部分、ドメイン、または分子であって、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドのコンジュゲートしていない形態、または野生型ＦＧＦ−２１ポリペプチドなどの対照となる化合物と比べて、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドのインビボでのタンパク質分解または他の活性を低下させる化学修飾を防止または軽減させ、半減期を増大させ、および／または他の薬物動態学的または生物物理学的特性を改善または改変させる（吸収速度の増加、毒性の減少、溶解性の改善、タンパク質凝集の減少、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの生物学的活性および／または標的選択性の増加、製造可能性の増加、および／または修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの免疫原性の低下をもたらす）、部分、ドメイン、または分子をいう。
【００８７】
同一性：本明細書にて使用される場合、「同一性」なる語は、ポリマー分子間の、例えばポリぺプチド分子間のモノマー全体の保存をいう。付加的な修飾子のない「同一」なる語は、例えば、タンパク質Ａはタンパク質Ｂと同一であるということは、配列が１００％同一であること（１００％配列同一性）を意味する。２つの配列を、例えば、「７０％同一」と記載することは、それは、例えば、「７０％配列同一性」と記載することと同等である。
【００８８】
例えば、２つのポリペプチド配列のパーセント同一性の計算は、２つの配列を最適な比較を目的として整列させることで実行され得る（例えば、最適な整列のために第１および第２のポリペプチド配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較を目的として同一でない配列は無視され得る）。特定の態様において、比較を目的として整列された配列の長さは、対照となる配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次に対応するアミノ酸位置にあるアミノ酸を比較する。
【００８９】
第１配列における位置が第２配列での対応する位置と同じアミノ酸で占められている時、その場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列の最適な整列のために導入される必要のある、ギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて行うことができる。
【００９０】
タンパク質およびヌクレオチド配列の両方を整列させるのに、適切なソフトウェアプログラムは様々な供給源から入手可能である。パーセント配列の同一性を測定するのに適切な１のプログラムが、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センターのＢＬＡＳＴウェブサイト（blast.ncbi.nlm.nih.gov）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴスイートの一部である、ｂ１２ｓｅｑである。ｂ１２ｓｅｑはＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを用いて２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列を比較するのに用いられ、一方でＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するのに使用される。他の適切なプログラムが、例えば、Needle、Stretcher、Water、またはMatcher、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳパッケージソフトの一部であり、European Bioinformatics Institute（ＥＢＩ）からもwww.ebi.ac.uk/Tools/psaで入手可能である。配列の整列は、MAFFT、Clustal（ClustalW、Clustal XまたはClustal Omega）、MUSCLE等などの当該分野にて公知の方法を用いて行われ得る。
【００９１】
対照となるポリペプチド配列と整列する標的となる単一のポリペプチド配列内にある異なる領域は、各々、その独自のパーセント配列同一性を有し得る。そのパーセント配列同一性の値は最も近い小数第１位に四捨五入されることに留意する。例えば、８０.１１、８０.１２、８０.１３、および８０.１４は８０.１に切り捨てられ、一方で８０.１５、８０.１６、８０.１７、８０.１８、および８０.１９は８０.２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数であることにも留意する。
【００９２】
特定の態様において、第１アミノ酸配列の第２アミノ酸配列に対するパーセンテージ同一性（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００ｘ（Ｙ／Ｚ）の式で計算され、式中のＹは第１および第２配列のアライメント（目視検査または特定の配列アライメントプログラムによって整列されるようなアライメント）において完全に一致するものとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｚは第２配列の残基の総数である。第１配列の長さが第２配列よりも長い場合、第１配列の第２配列に対するパーセント同一性は、第２配列の第１配列に対するパーセント同一性よりも高いであろう。
【００９３】
当業者であれば、パーセント配列同一性を計算するための配列アライメントの生成が、一次配列データにより排他的に駆動されるバイナリー配列−配列の比較に限定されないことを理解するであろう。配列アライメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統発生データなどの異種供給源からのデータと統合することによって生成され得ることも理解されよう。異種データを統合して複数の配列アライメントを生成するのに適切なプログラムが、www.tcoffee.orgで入手可能な、あるいはまた、例えばEBIより入手可能なT-Coffeeである。パーセント配列同一性を計算するのに使用される最終アライメントは、自動または手動のいずれかでキュレートされ得ることも理解されよう。
【００９４】
インビボタンパク質分解：「インビボタンパク質分解」なる語は、生体系に導入された時に（例えば、生物に注入された時に）、該生物において生じる、プロテアーゼよりもたらされ得る、ポリペプチドの切断を言う。タンパク質分解はポリペプチドの生物学的活性または半減期に潜在的に影響を及ぼし得る。例えば、野生型ＦＧＦ−２１はＣ−末端での切断を受け、トランケートの不活性なポリペプチドが結果として生じ得る。ＦＧＦ−２１のインビボタンパク質分解を測定する例示としての方法が、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１７／０１８９４８６の実施例１０に記載のメソスケールディスカバリー（Meso Scale Discovery（ＭＳＤ））ベースの電気化学発光免疫吸着検定法（ＥＣＬＩＡ）である。インビボまたはインビトロタンパク質分解の相対量は、対照となる化合物に関して、例えば、インビボタンパク質分解の減少したポリペプチドを同定するのに測定されてもよい。インビボタンパク質分解の相対量はまた、対照となる製剤に関して、すなわち、ＦＧＦ−２１ポリペプチドがインビトロタンパク質分解を減少させた製剤を同定するのに測定され得る。
【００９５】
単離された：本明細書で使用される場合、「単離された」なる語は、物質または実体（例えば、ポリペプチド）が（天然にて、または実験的セッティングのいずれかにて）結合する、少なくともいくつかの成分から分離されることをいう。単離された物質（例えば、タンパク質）は、それらが結合する物質に対して、可変レベルの純度を有し得る。
【００９６】
連結した：本明細書で使用される「連結した」または「結合した」なる語は、アミノ酸配列の、分子、例えば水溶性ポリマーとの共有結合または非共有結合をいう。「連結した」なる語は、アミノ酸配列（例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチド）のＣ−末端またはＮ−末端での第２アミノ酸配列（例えば、アルブミン半減期延長剤）との融合または連結だけを意味するものではない。それはまた、全アミノ酸配列（例えば、ＸＴＥＮ半減期延長剤）の第２アミノ酸配列（例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチド）における２個のいずれかのアミノ酸への挿入を包含する。いくつかの態様において、第１アミノ酸配列におけるアミノ酸の側鎖（例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチド）と第２分子（例えば、第２アミノ酸配列またはＰＥＧなどの可溶性ポリマー）との間で連結が起こり得る。本開示の文脈において、「融合した」または「融合」なる語は、少なくとも２個のポリペプチド鎖が作動可能に連結され、組換え的に発現されることを示す。いくつかの態様において、２つのポリペプチド鎖は化学合成の結果として「融合され」得る。本開示の文脈において、「コンジュゲート」または「コンジュゲーション」なる語は、２つの分子の実体（例えば、２つのポリペプチド、または１つのポリペプチドと、ＰＥＧなどのポリマー）が化学的に連結していることを意味する。
【００９７】
修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド：本明細書で使用される場合、「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」、「修飾線維芽細胞成長因子２１」または「修飾ＦＧＦ−２１」およびそれらのハイフンの無い形態は、交換可能に使用され、野生型ＦＧＦ−２１（例えば、配列番号：３の野生型ヒトＦＧＦ−２１）と異なり、典型的には線維芽細胞成長因子２１の少なくとも１つの生物学的活性を有する、それらのポリペプチドおよびタンパク質、ならびにその同じものの生物学的活性に関係なく、ＦＧＦ−２１アナログ、ＦＧＦ−２１イソ形態、ＦＧＦ−２１模倣体、ＦＧＦ−２１フラグメント、ハイブリッドＦＧＦ−２１タンパク質、融合タンパク質、オリゴマーおよびマルチマー、ホモログ、グリコシル化パターン変種、変種、スプライス変種、およびその変異タンパク質を包含するであろう。この定義に含まれる修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを下記にさらに詳細に記載する。
【００９８】
変異：本開示の内容において、上記される「変異」および「アミノ酸置換」（時には単に「置換」と称される）なる語は、交換可能であると考えられる。
【００９９】
天然にてコードされないアミノ酸：「天然にてコードされないアミノ酸」は、２０種の一般的アミノ酸あるいはピロリシンまたはセレノシステインの１つでない、アミノ酸をいう。「天然にてコードされないアミノ酸」なる語と同義的に使用され得る他の用語が、「非天然アミノ酸」、「天然にないアミノ酸」、「天然にて存在しないアミノ酸」およびその種々のハイフンおよびハイフンのないバージョンである。「天然にてコードされないアミノ酸」なる語はまた、天然にてコードされるアミノ酸（２０種の一般的アミノ酸を含むが、限定されない）を修飾（例えば、翻訳後修飾）することで生じるが、それら自体が翻訳複合体によって成長ポリペプチド鎖に自然に組み込まれない、アミノ酸を包含するが、これらに限定されない。かかる天然にてコードされないアミノ酸の例として、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−スレオニン、およびＯ−ホスホチロシンが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の１の特定の態様において、天然にてコードされないアミノ酸はパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである。
【０１００】
患者：本明細書で使用される場合、「患者」は、治療を求めるか、または必要とし得るか、治療を要求するか、治療を受けているか、治療を受けるであろう対象を、あるいは特定の疾患または症状について訓練を受けた熟練者による治癒の下にある対象をいう。
【０１０１】
医薬組成物：「医薬組成物」なる語は、活性成分（ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の生物学的活性が効果的であることを容認するような形態であり、該組成物が投与される対象に対して許容できないほどに毒性であるさらなる成分（例えば、賦形剤および水）を含有しない、製剤をいう。かかる組成物は滅菌であり得る。
【０１０２】
医薬的に許容される：「医薬的に許容される」なる語は、本明細書にて、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症がなく、合理的な利益／危険の割合に見合った、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適する、それらの化合物、材料、組成物、および／または剤形を言うのに使用される。一般に、動物、より具体的にはヒトにおいて用いるための、連邦政府または州政府の規制当局による承認（または米国薬局方もしくは他の一般的に認識される薬局方にて列挙される承認）は、それらの化合物、材料、組成物、および／または剤形が医薬的に許容されることを意味する。治療目的のために安全であると一般に許容される化合物、材料、組成物、および／または剤形は「治療的に許容される」である。
【０１０３】
医薬的に許容される賦形剤：本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される賦形剤」なる語は、本明細書に記載されている活性な化合物以外の成分であって、対象において実質的に非毒性かつ非炎症性である特性を有するいずれの成分（例えば、活性な化合物の懸濁または溶解能を有するビヒクル）をもいう。賦形剤は、例えば、キレート剤、界面活性剤、緩衝剤、浸透圧調節剤、酸化防止剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、保存剤、吸着剤、沈殿防止剤または分散剤、甘味剤、および水和水を包含し得る。治療目的のために安全であると一般に許容される賦形剤は「治療的に許容される賦形剤」である。
【０１０４】
医薬的に許容される塩：本開示はまた、本明細書に記載の化合物の医薬的に許容される塩を包含する。本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される塩」は開示される化合物の誘導体をいい、ここでは親化合物が、存在する酸または塩基部分がその塩形態に変換されることによって（例えば、遊離塩基の基を適切な有機酸と反応させることにより）修飾される。医薬的に許容される塩の例として、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸との塩；カルボン酸などの酸性残基とのアルカリまたは有機塩等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
ポリペプチド：「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」なる語は、本明細書において互換的に使用され、いずれの長さのアミノ酸のポリマーをもいう。該ポリマーは修飾アミノ酸を含み得る。該用語はまた、自然に、または介入によって、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化によって、あるいは標識成分とのコンジュゲーションなどの他のいずれかの操作または修飾によって、修飾されているアミノ酸ポリマーを包含する。例えば、アミノ酸の１または複数のアナログ（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ−アセチルフェニルアラニン、Ｄ−アミノ酸、およびクレアチンなどの非天然アミノ酸を包含する）を含有するポリペプチドならびに当該分野にて公知の他の修飾も該定義に含まれる。
【０１０６】
本明細書で使用される場合の用語は、いずれの大きさ、構造または機能のタンパク質、ポリペプチド、およびペプチドをもいう。ポリペプチドは、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、フラグメントおよび他の均等物、変種、および上記した物のアナログを包含する。ポリペプチドは単一ポリペプチドとすることができ、あるいは二量体、三量体または四量体などの他分子複合体とすることもできる。それらは一本鎖または多鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的なジスルフィド結合が多鎖ポリペプチドにて見られる。ポリペプチドなる語はまた、１または複数のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学アナログである、アミノ酸ポリマーに適用できる。いくつかの態様において、「ペプチド」は長さが５０個以下のアミノ酸、例えば、長さが約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸とすることができる。
【０１０７】
予防する：本明細書で使用される場合、「予防する」なる語は、疾患、障害および／または症状の発症を部分的にまたは完全に遅らせること；特定の疾患、障害および／または症状の１または複数の徴候、特徴または臨床兆候の発症を部分的にまたは完全に遅らせること；特定の疾患、障害および／または症状の１または複数の徴候、特徴または兆候の発症を部分的にまたは完全に遅らせること；特定の疾患、障害および／または症状からの進行を部分的にまたは完全に遅らせること；および／または疾患、障害および／または症状に付随する病状を発症するリスクを低減することをいう。いくつかの態様において、本出願にて開示される医薬製剤は、発症を防止し、徴候を妨げ、またはＮＡＳＨまたは糖尿病などの線維症に付随する疾患または症状の合併症を予防するのに使用され得る。
【０１０８】
予防的：本明細書で使用される場合、「予防的」は疾患または症状の発症を予防するのに、または、例えば、線維症に付随する疾患または症状、例えば、ＮＡＳＨの徴候を防止または遅らせるのに使用される治療的または一連の作用をいう。いくつかの態様において、本願にて開示される医薬製剤は予防的に使用され得る。
【０１０９】
予防：本明細書で使用される場合、「予防」は、健康を維持し、線維症に付随する疾患または症状、例えば、ＮＡＳＨまたは糖尿病の発症を予防または遅らせるために、あるいは疾患または症状に付随する徴候を予防または遅らせるために取られる措置をいう。
【０１１０】
組換え体：「組換え」ポリペプチドまたはタンパク質は、組換えＤＮＡ技法を介して産生されるポリペプチドまたはタンパク質をいう。遺伝子操作された宿主細胞にて発現される組換え産生ポリペプチドおよびタンパク質は、いずれか適切な技法によって分離されるか、分画されるか、あるいは部分的に、または実質的に精製された天然または組換えポリペプチドであるように、本開示の目的のために単離されると考えられる。本明細書にて開示されるＦＧＦ−２１ポリペプチドは、当該分野にて公知の方法を用いて組換え技法により産生され得る。本明細書に開示のタンパク質およびペプチドもまた、化学的に合成され得る。
【０１１１】
類似性：本明細書で使用される場合、「類似性」なる語は、ポリマー分子間の、例えばポリペプチド分子間の全体としての関係性をいう。ポリマー分子の相互のパーセント類似性の計算は、パーセント類似性の計算が当該分野において理解されるように、保存的置換を考慮することを除き、パーセント同一性の計算と同じ方法で行われ得る。
【０１１２】
溶解性：「溶解性」なる語は、もう一つ別の物質中に溶解し得る物質の量、例えば水溶液中に溶解し得る未修飾または修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの量をいう。未修飾または修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの溶解性を測定する例示的な方法が、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１７／０１８９４８６の実施例８に記載のプラグフロー溶解度試験である。相対溶解度は、対照となる化合物に対して、例えば、溶解度の高いポリペプチドを同定するのに測定され得る。いくつかの態様において、相対溶解度は、対照となる製剤に対して、例えば、ポリペプチドが高い溶解度を有する製剤を同定するのに測定され得る。
【０１１３】
対象：「対象」または「個体」または「動物」または「哺乳動物」とは、診断、予後、または治療が望まれる、いずれかの対象、特に哺乳動物の対象を意味する。哺乳動物の対象として、ヒト、家畜、農園の動物、動物園の動物、スポーツ用動物、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、雌ウシなどのペット動物；類人猿、サル、オランウータン、およびチンパンジーなどの霊長類；イヌおよびオオカミなどのイヌ科動物；ネコ、ライオン、およびトラなどのネコ科動物；ウマ、ロバ、およびシマウマなどのウマ科動物；クマ；ウシ、ブタ、およびヒツジなどの食用動物；シカおよびキリンなどの有蹄動物；マウス、ラット、ハムスターおよびモルモットなどの齧歯動物等が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において、哺乳動物はヒト対象である。他の態様において、対象はヒト患者である。特定の態様にて、対象は、インビボ、インビトロまたはエクスビボのいずれであっても、本明細書に記載の方法に適した、ヒト患者またはその細胞である。
【０１１４】
患っている：疾患、障害および／または症状を「患っている」個体は、疾患、障害および／または症状の１または複数の徴候と診断されているか、またはそれらを示している。いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤は、ＮＡＳＨまたは糖尿病などの線維症に付随する疾患または症状を患っている対象に投与され得る。
【０１１５】
感受的：疾患、障害、および／または症状に対して「感受的」である個体は、該疾患、障害、および／または症状であると診断されないし、および／またはその徴候を示さない可能性があるが、疾患またはその徴候を発症する傾向を宿す。いくつかの態様において、疾患、障害、および／または症状（例えば、がん）に対して感受的である個体は、１または複数の次の事項：（１）疾患、障害、および／または症状の発症と関連付けられる遺伝的変異；（２）疾患、障害、および／または症状の発症と関連付けられる遺伝的多型；（３）疾患、障害、および／または症状と関連付けられるタンパク質および／または核酸の発現および／または活性の増加および／または減少；（４）疾患、障害、および／または症状の発症と関連付けられる習慣および／またはライフスタイル；（５）疾患、障害、および／または症状の家族の病歴；および（６）疾患、障害、および／または症状の発症と関連付けられる微生物への暴露および／または微生物での感染、によって特徴付けられ得る。
【０１１６】
いくつかの態様において、疾患、障害、および／または症状に対して感受的である個体は、該疾患、障害、および／または症状を発症するであろう。いくつかの態様において、疾患、障害、および／または症状に対して感受的である個体は、該疾患、障害、および／または症状を発症しないであろう。いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬製剤は、ＮＡＳＨまたは糖尿病などの線維症に付随する疾患または症状に対して感受的である対象に投与され得る。
【０１１７】
治療剤：「治療剤」または「薬剤」なる語は、対象に投与された時に、治療、診断、および／または予防効果を有し、および／または所望の生物学的および／または薬理学的効果を誘発する分子の実体をいう。例えば、いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１）は治療剤であり得る。いくつかの態様において、薬剤は、本明細書に開示の少なくとも１つのＦＧＦ−２１ポリペプチドとの併用療法の一部として共同投与されるもう一つ別の分子である。
【０１１８】
治療的に効果的な量：本明細書で使用される場合、「治療的に効果的な量」なる語は、感染、疾患、障害、および／または症状を患っているか、または感受的である対象に投与される場合、該感染、疾患、障害、および／または症状を治療し、その徴候を改善し、診断し、予防し、および／またはその発症を遅らせるのに十分である、送達されるべき薬剤（例えば、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドまたは該ポリペプチドを含む製剤）の量を意味する。一般に、治療的に効果的な量の投与は治療的に効果的な成果をもたらすと考えられる。
【０１１９】
治療的に効果的な成果：本明細書で使用される場合、「治療的に効果的な成果」なる語は、感染、疾患、障害、および／または症状を患っているか、または感受的である対象において、該感染、疾患、障害、および／または症状を治療し、その徴候を改善し、診断し、予防し、および／またはその発症を遅らせるのに十分である、成果を意味する。
【０１２０】
治療する、治療、療法：本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」または「療法」なる語またはそれらの文法的変形は、線維症に付随する疾患または症状、例えば、ＮＡＳＨまたは糖尿病の１または複数の徴候または特徴を、部分的または完全に防止し、軽減し、改良し、改善し、緩和し、その発症を遅らせ、その進行を阻害し、その重篤度を軽減し、および／またはその発生率を減らすことをいう。例えば、線維症に付随する疾患を「治療する」とは、徴候を予防し、徴候を改良し、疾患または障害あるいはその徴候の発症を遅らせること等、ということができる。治療は、疾患、障害、および／または症状に付随する病状を発症するリスクを軽減する目的で、疾患、障害、および／または症状のサインを示さない対象に、および／または疾患、障害、および／または症状のほんの初期のサインを示す対象に投与され得る。
【０１２１】
ｕｇ、ｕＭ、ｕＬ：本明細書で使用される場合、「ｕｇ」、「ｕＭ」および「ｕＬ」なる語は、「μｇ」、「μＭ」および「μＬ」と、各々、互換的に使用される。
【０１２２】
水溶性ポリマー：本明細書で使用される場合、「水溶性ポリマー」なる語は、水性溶媒に可溶性であるいずれかのポリマーをいう。水溶性ポリマーの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドとの連結は、血清（インビボ）半減期の増加または調節、あるいは非修飾形態と比べた治療半減期の増加または調節、免疫原性または毒性の調節、凝集および多量体形成などの物理的会合特性の調節、受容体結合の改変、１または複数の結合パートナーとの結合の改変、および受容体の二量体化または多量体化の改変を含め、変化をもたらし得るが、これらに限定されない。
【０１２３】
水溶性ポリマーは、それ自体が生物学的活性を有しても、有しなくてもよく、修飾ＦＧＦ−２１を他の物質（１または複数の非修飾または修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、あるいは１または複数の生物学的に活性な分子を含むが、これらに限定されない）に結合させるためのリンカーとして利用することができる。適切なポリマーとして、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、そのモノＣ１−Ｃ１０アルコキシまたはアリールオキシ誘導体（出典明示により本明細書の一部とされる米国特許第５,２５２,７１４号に記載される）、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、ディスクリートＰＥＧ、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアミド酸、ジビニルエーテルマレイン酸無水物、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミド、デキストラン、硫酸デキストランを含むデキストラン誘導体、ポリプロピレングリコール、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ヘパリン、ヘパリンフラグメント、多糖類、オリゴ糖類、グリカン、セルロースおよびセルロース誘導体（メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースを含むが、これらに限定されない）、澱粉および澱粉誘導体、ポリペプチド、ポリアルキレングリコールおよびその誘導体、ポリアルキレングリコールおよびその誘導体のコポリマー、ポリビニルエチルエーテル、およびアルファ−ベータ−ポリ［（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド等、あるいはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。かかる水溶性ポリマーの例として、ポリエチレングリコールおよび血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
本開示の様々な態様は、以下のサブセクションにてさらに詳細に記載される。
【０１２５】
Ｉ．  ＦＧＦ−２１製剤
本開示は、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、およびアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）を含む医薬製剤であって、ここで対照となる製剤、すなわち、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しないことを除いて、同じ成分を含有する、対応する製剤と比べて安定性が改善されている医薬製剤を提供する。
【０１２６】
「キレート剤」または「カチオンキレート剤」なる語は互換性があり、元の金属イオンの化学特性と異なる特性を有する新たな錯イオンを形成することによって溶液系から金属イオンを取り除くことのできるいずれの物質をもいう。特に、本明細書に開示のカチオンキレート剤は、二価金属、例えば、Ｃａ＋＋と特異的に結合するキレート剤である。
【０１２７】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される医薬製剤は、安定性において１または複数の改善、例えば、脱アミド化速度の低下、凝集速度の低下を示す。例えば、ＤＴＰＡなどのアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を医薬製剤に配合することで、特定の温度（例えば、４０℃）で特定の期間（例えば、１か月）にわたって貯蔵した場合に、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の脱アミド化速度を、対照となる製剤に対して、低下させることができる。
【０１２８】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で貯蔵した医薬製剤におけるＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の脱アミド化速度を、対照となる製剤に対して、下げることができる。いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、２５℃より上、３０℃より上、３５℃より上、約４０℃、または約４５℃の温度で貯蔵した医薬製剤におけるＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の脱アミド化速度を、対照となる製剤に対して、下げることができる。
【０１２９】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、約２０℃と約２５℃との間、約２５℃と約３０℃との間、約３０℃と約３５℃との間、または約４０℃と約４５℃との間で貯蔵した医薬製剤におけるＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の脱アミド化速度を、対照となる製剤に対して、下げることができる。
【０１３０】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、上記される温度または温度範囲で約１週間、約２週間、約３週間、約１か月、約２か月、約３か月、または約４か月にわたって貯蔵した後で、医薬製剤中でのＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の脱アミド化速度を下げることができる。特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、４０℃で約１か月にわたって貯蔵した医薬製剤中でのＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の脱アミド化速度を下げることができる。
【０１３１】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、約２５℃で、約３０℃で、約３５℃で、約４０℃で、または約４５℃で貯蔵した医薬製剤中でのＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の高分子量（ＨＭＷ）の凝集速度を下げることができる。いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、２５℃より上、３０℃より上、３５℃より上、約４０℃、または約４５℃の温度で貯蔵した医薬製剤中でのＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）のＨＭＷの凝集速度を下げることができる。
【０１３２】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、約２０℃〜約２５℃、約２５℃〜約３０℃、約３０℃〜約３５℃、または約４０℃〜約４５℃で貯蔵した医薬製剤中のＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）のＨＭＷの凝集速度を下げることができる。
【０１３３】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、上記される温度または温度範囲で約１週間、約２週間、約３週間、約１か月、約２か月、約３か月、または約４か月にわたって貯蔵した後の、医薬製剤中でのＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）のＨＭＷの凝集速度を下げることができる。特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、対照となる製剤に対して、４０℃で約１か月貯蔵した医薬製剤中でのＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）のＨＭＷの凝集速度を下げることができる。
【０１３４】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）における１または複数のアミノ酸、例えば、メチオニンの酸化を防止または減らす。特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、２５℃および／または４０℃で、配列番号：３のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９（あるいは配列番号：１もしくは配列番号：２または他のいずれかのＦＧＦ−２１ポリペプチドの対応するアミノ酸）の酸化を防止または減らす。
【０１３５】
いくつかの特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤はＤＴＰＡである。ペンテト酸またはジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）は、５個のカルボキシメチル基を有するジエチレントリアミン骨格からなるアミノポリカルボン酸である。ＤＴＰＡの共役塩基は金属カチオンに対して高親和性を有する。かくして、ペンタ−アニオン  ＤＴＰＡ５−は、各窒素中心と、各ＣＯＯ−基を配位の中心として数えると仮定して潜在的に八座配位子である。その錯体の形成定数はＥＤＴＡの定数よりも約１００大きい。ＤＴＰＡは、キレート剤として、８個までの結合を形成することによって金属イオンを包み込む。しかしながら、遷移金属は、通常、８個未満の配位結合を形成する。それで、金属と錯体を形成した後でも、ＤＴＰＡはまだ、その誘導性ペンデチドによって示されるように、他の試薬と結合する能力がある。例えば、その銅（ＩＩ）との錯体において、ＤＴＰＡは、３個のアミン中心と、５個のカルボキシレートのうちの３個を利用して六座様式にて結合する。
【０１３６】
他のいくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラ四酢酸（ＥＧＴＡ）、１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７,１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、または関連化合物、例えば、チウキセタン（その炭素骨格がイソチオシアナトベンジルとメチル基を含有するＤＴＰＡの修飾バージョン）などのもう一つ別のアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤であり得る。当該分野において公知のＤＴＰＡおよびＥＤＴＡと関連する他のキレート剤は、アミド基の窒素が１または複数のＣ１−１８アルキル基と置換されてもよいキレート剤、例えば、ＤＴＰＡ・ＢＭＡおよびＥＤＴＡ・ＢＭＡである。
【０１３７】
いくつかの態様において、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭと約１００μＭとの間、１５μＭと約９５μＭとの間、約２０μＭと約９０μＭとの間、約２５μＭと約８５μＭとの間、約３０μＭと約８０μＭとの間、約３５μＭと約７５μＭとの間、約４０μＭと約７０μＭとの間、約４５μＭと約６５μＭとの間、約５０μＭと約６０μＭとの間、約２５μＭと約７５μＭとの間、約４０μＭと約６０μＭとの間、約３０μＭと約７０μＭとの間、または約４０μＭと約７５μＭとの間の量で存在する。
【０１３８】
いくつかの態様において、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ、約１５μＭ、約２０μＭ、約２５μＭ、約３０μＭ、約３５μＭ、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、約６０μＭ、約６５μＭ、約７０μＭ、約７５μＭ、約８０μＭ、約８５μＭ、約９０μＭ、約９５μＭまたは約１００μＭの量で存在する。
【０１３９】
いくつかの態様において、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、少なくとも約１５μＭ、少なくとも約２０μＭ、少なくとも約２５μＭ、少なくとも約３０μＭ、少なくとも約３５μＭ、少なくとも約４０μＭ、少なくとも約４５μＭ、少なくとも約５０μＭ、少なくとも約５５μＭ、少なくとも約６０μＭ、少なくとも約６５μＭ、少なくとも約７０μＭ、または少なくとも約７５μＭの量で存在する。
【０１４０】
特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、５０μＭの量で存在する。
【０１４１】
いくつかの態様において、本明細書において開示される製剤のｐＨは、約６.５より上、約６.６より上、約６.７より上、約６.８より上、約６.９より上、約７.０より上、約７.１より上、約７.２より上、約７.３より上、約７.４より上、または約７.５より上である。いくつかの態様において、該製剤のｐＨは６.５より上、６.６より上、６.７より上、６.８より上、６.９より上、７.０より上、７.１より上、７.２より上、７.３より上、７.４より上、または７.５より上である。いくつかの態様において、該製剤のｐＨは約６.５、約６.６、約６.７、約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５である。
【０１４２】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは約６.５〜約７.５、約６.６〜約７.５、約６.７〜約７.５、約６.８〜約７.５、約６.９〜約７.５、約７.０〜約７.５、約７.１〜約７.５、約７.２〜約７.５、約７.３〜約７.５、約７.４〜約７.５、約６.５〜約７.４、約６.５〜約７.３、約６.５〜約７.２、約６.５〜約７.１、約６.５〜約７.０、約６.５〜約６.９、約６.５〜約６.８、約６.５〜約６.７、約６.６〜約７.４、約６.７〜約７.４、約６.８〜約７.４、約６.９〜約７.４、約７.０〜約７.４、約７.１〜約７.４、約７.２〜約７.４、約７.３〜約７.４、約６.５〜約７.３、約６.６〜約７.３、約６.７〜約７.３、約６.７〜約７.３、約６.８〜約７.３、約６.９〜約７.３、約７.０〜約７.３、約７.１〜約７.３、約７.２〜約７.３、約６.５〜約７.２、約６.６〜約７.２、約６.７〜約７.２、約６.８〜約７.２、約６.９〜約７.２、約７.０〜約７.２、約７.１〜約７.２、約６.９〜約７.１、または約７.０〜約７.１である。
【０１４３】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５である。いくつかの態様において、該医薬製剤は、ｐＨが６.５の対照となる製剤よりも安定している。
【０１４４】
いくつかの態様において、該医薬製剤はさらに界面活性剤を含む。「界面活性剤」なる語は、本明細書で使用される場合、水または水溶液に溶解または懸濁される時に表面張力を低下させるか、あるいは２種の液体間、または液体と固体の間の界面張力を低下させる、いずれかの化合物、典型的には、両親媒性分子を意味する。本開示の文脈において、界面活性剤は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む溶液での、界面応力および剪断力を減少させる任意の化合物である。
【０１４５】
いくつかの態様において、界面活性剤は非イオン性界面活性剤であり、すなわち、中性溶液中で正味の電荷を有しにくい、界面活性剤である。いくつかの態様において、非陰イオン性界面活性剤はポリソルベートである。ポリソルベートは、界面誘発性凝集に拮抗してタンパク質を安定化させ、タンパク質の表面吸着を最小とするのに、タンパク質の医薬品において広く用いられる、重要な一連の非イオン性界面活性剤である（Wang W 2005. Protein aggregation and its inhibition in biopharmaceutics. Int J Pharm 289（1-2）:1-30）。ポリソルベートは、ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）ソルビタンの脂肪酸エステルから構成される両親媒性非イオン性界面活性剤である。市販のポリソルベートは主にソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを含有する化学的に多様な混合物である。
【０１４６】
本明細書で使用される場合、「ポリソルベート」なる語は、典型的には酸化エチレンと共重合した、ソルビトールおよびその無水物のオレイン酸エステルをいう。例示的なポリソルベートは、ポリソルベート２０（TWEEN 20；PS20）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）；ポリソルベート４０（TWEEN 40；PS40）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）；ポリソルベート６０（TWEEN 60；PS60）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）；およびポリソルベート８０（TWEEN 80；PS80）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を包含する。
【０１４７】
「ポリオキシエチレン」部分の後にある数２０は、分子中にあるオキシエチレン−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−基の総数をいう。「ポリソルベート」部分の後にある数は、分子のポリオキシエチレンソルビタン部分と結合する脂肪酸の型と関連付けられる。モノラウレートは２０で示され、モノパルミテートは４０で、モノステアレートは６０で、およびモノオレエートは８０で示される。いくつかの態様において、非イオン性界面活性剤は、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を越える量で、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルでは、およそ少なくとも０.０１ｍｇ／ｍｌの量で、存在する。WanおよびLee、Journal of Pharm Sci, 63, p.136, 1974を参照のこと。
【０１４８】
いくつかの態様において、ポリソルベートは、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）である。いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は、約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０７％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０８％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０９％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０７％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０８％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０７％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、または約０.０５％〜約０.０６％（ｗ／ｖ）の量で存在する。
【０１４９】
いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は、少なくとも約０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０９％（ｗ／ｖ）または少なくとも約０.１％（ｗ／ｖ）の量で存在する。
【０１５０】
いくつかの態様において、界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０は、例えば、該製剤が振盪器上で撹拌されると、粒子および／または気泡形成を軽減する。いくつかの態様において、製剤中での界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０の存在は、対照となる製剤中での粒子形成のレベルと比較して、粒子形成を、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％減少させることができる。いくつかの態様において、製剤中での界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０の存在は、対照となる製剤中での気泡形成のレベルと比べて、気泡形成を、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％減らすことができる。
【０１５１】
いくつかの態様において、医薬製剤はさらにアミノ酸緩衝剤を含む。アミノ酸は容易に代謝可能な自然に存在する物質であるため、それらは医薬用途にて緩衝剤として有利に使用されてもよい。さらには、緩衝剤として使用されるアミノ酸は、仮に該製剤が凍結乾燥されるならば、非晶質相にあるタンパク質を保護することもできる。適切なアミノ酸緩衝剤は、ヒスチジン、リジン、および／またはアルギニンを含有し得る。ヒスチジンはｐＨ７の付近で優れた緩衝能がある。
【０１５２】
本明細書において使用される場合、「ヒスチジン」なる語は、Ｌ−ヒスチジンまたはＤ−ヒスチジンのいずれか、ヒスチジンの溶媒和形態、ヒスチジンの水和形態（例えば、一水和物）、またはヒスチジンの無水形態、あるいはそれらの混合物を含む。本開示の製剤中の他の適切な緩衝剤は、ほんの数例を挙げるとして、グルタメート、トリスまたはスクシネートである。
【０１５３】
いくつかの特定の態様において、アミノ酸緩衝剤はＬ−ヒスチジンである。
【０１５４】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約３０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約９０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、または約９５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジンの量で存在する。
【０１５５】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジンの量で存在する。
【０１５６】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約５０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭヒスチジン、または約２０ｍＭ〜約２５ｍＭの量で存在する。
【０１５７】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１５ｍＭ〜約２０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約１５.５ｍＭ〜約２４.５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭ〜約２４ｍＭヒスチジン、約１６.５ｍＭ〜約２３.５ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭ〜約２３ｍＭヒスチジン、約１７.５ｍＭ〜約２２.５ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭ〜約２２ｍＭヒスチジン、約１８.５ｍＭ〜約２１.５ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭ〜約２１ｍＭヒスチジン、または約１９.５ｍＭ〜約２０.５ｍＭヒスチジンの量で存在する。
【０１５８】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約１１ｍＭヒスチジン、約１２ｍＭヒスチジン、約１３ｍＭヒスチジン、約１４ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２１ｍＭヒスチジン、約２２ｍＭヒスチジン、約２３ｍＭヒスチジン、約２４ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約２６ｍＭヒスチジン、約２７ｍＭヒスチジン、約２８ｍＭヒスチジン、約２９ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３１ｍＭヒスチジン、約３２ｍＭヒスチジン、約３３ｍＭヒスチジン、約３４ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約３６ｍＭヒスチジン、約３７ｍＭヒスチジン、約３８ｍＭヒスチジン、約３９ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４１ｍＭヒスチジン、約４２ｍＭヒスチジン、約４３ｍＭヒスチジン、約４４ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、約４６ｍＭヒスチジン、約４７ｍＭヒスチジン、約４８ｍＭヒスチジン、約４９ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量で存在する。
【０１５９】
いくつかの態様において、該医薬製剤は浸透圧調節剤（当該分野において張性剤としても知られる）をさらに含む。本開示によれば、浸透圧調節剤（張性剤）は、ポリオール、糖質、炭水化物、塩化ナトリウムなどの塩、またはそれらの混合物を含み得る。例示的なポリオールは、分子量が約６００ｋＤ未満の（例えば、１２０〜４００ｋＤの範囲にある）ポリオール、例えば、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはそれらの混合物を含む。
【０１６０】
糖質または炭水化物の浸透圧調節剤は、単糖類、二糖類および多糖類またはそれらの混合物を含む。いくつかの態様において、糖質または炭水化物は、フルクトース、グルコース、マンノース、シュークロース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、シュークロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、およびそれらの混合物からなる群より選択される。
【０１６１】
いくつかの態様において、浸透圧調節剤は、還元糖または非還元糖あるいはそれらの混合物の群より選択される糖質を含む。いくつかの態様において、浸透圧調節剤または張性剤は、非還元糖、好ましくは、シュークロース、トレハロース、およびそれらの混合物からなる群より選択される糖である、糖質を含む。いくつかの態様において、非還元糖はシュークロースである。
【０１６２】
いくつかの態様において、シュークロースの浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約２００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約３００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約４００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約５００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約６００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約７００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約８００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約９００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約２００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約８００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、または約５００ｍＭ〜約６００ｍＭシュークロースの量で存在する。
【０１６３】
いくつかの態様において、シュークロースの浸透圧調節剤は、約１００ｍＭシュークロース、約１５０ｍＭシュークロース、約２００ｍＭシュークロース、約２５０ｍＭシュークロース、約３００ｍＭシュークロース、約３５０ｍＭシュークロース、約４００ｍＭシュークロース、約４５０ｍＭシュークロース、約５００ｍＭシュークロース、約５５０ｍＭシュークロース、約６００ｍＭシュークロース、約６５０ｍＭシュークロース、約７００ｍＭシュークロース、約７５０ｍＭシュークロース、約８００ｍＭシュークロース、約８５０ｍＭシュークロース、約９００ｍＭシュークロース、約９５０ｍＭシュークロース、または約１Ｍシュークロースの量で存在する。
【０１６４】
本明細書にて開示される医薬製剤のいくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドである。当該分野において公知である多数の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドが、本明細書にて開示される製剤、例えば、米国特許第８,０１２,９３１および９,４３４,７８８（その両方は出典明示により本明細書の一部とされる）に開示の製剤にて使用され得る。線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）は文献（Nishimuraら、Biochimica et Biophysica Acta, 1492：203-206（2000）；ＷＯ  ０１／３６６４０；およびＷＯ  ０１／１８１７２、ならびに米国特許公開番号２００４０２５９７８０（それらの各々の内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されている。他のＦＧＦと異なり、ＦＧＦ−２１は増殖性および腫瘍原性作用を有しないと報告されている（OrnitzおよびItoh、Genome Biology 2001, 2(3）：reviews 3005.1-3005.12）。
【０１６５】
特定のＦＧＦ−２１ポリペプチドおよびその使用は、米国特許公開番号２００１００１２６２８、米国特許第６,７１６,６２６号、米国特許公開番号２００４／０２５９７８０、ＷＯ  ０３／０１１２１３、Kharitonenkov ら、J Clin Invest. 2005 June；115(6）：1627-35、ＷＯ  ０３／０５９２７０、米国特許公開番号２００５／０１７６６３１、ＷＯ  ２００５／０９１９４４、ＷＯ  ２００７／０２９３４３０、米国特許公開番号２００７／０２９３４３０、ＷＯ／２００８／１２１５６３、米国特許第４,９０４,５８４、ＷＯ  ９９／６７２９１、ＷＯ  ９９／０３８８７、ＷＯ  ００／２６３５４、および米国特許第５,２１８,０９２号（それらの内容は、各々、出典明示により本明細書の一部とされる）に記載される。
【０１６６】
本願において開示されるように処方され得るさらなるＦＧＦ−２１は、下記により詳細に記載される。
【０１６７】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：１または配列番号：３のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列の同一性を有するポリペプチドを含み、ここで該ポリペプチドはＦＧＦ−２１活性を有する。
【０１６８】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：１または配列番号：３のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列の同一性を有するポリペプチドから構成されるか、または本質的にそれらからなり、ここで該ポリペプチドはＦＧＦ−２１活性を有する。
【０１６９】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列にある天然にてコードされないアミノの側鎖を介して、半減期延長部分に連結される。本開示の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、配列番号：１のＦＧＦ−２１ポリペプチドと連結し得る半減期延長部分は、例えば、アルブミン、免疫グロブリン定常領域またはその一部、免疫グロブリン結合ポリペプチド、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、アルブミン−結合ポリペプチド（ＡＢＰ）、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＨＥＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＸＴＥＮ、Ｆｃ領域、およびそれらのいずれかの組み合わせを含む。ＦＧＦ−２１ポリペプチドを修飾するのに用いることのできる半減期延長部分は下記により詳細に記載される。
【０１７０】
いくつかの態様において、半減期延長部分は、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。いくつかの態様において、該ＰＥＧは約１０ｋＤａと約４０ｋＤａの間の平均分子量を有する。かくして、いくつかの態様において、該ＰＥＧは、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、または約４０ｋＤａの平均分子量を有する。
【０１７１】
いくつかの態様において、該ＰＥＧは、約３０ｋＤａの平均分子量を有する。いくつかの態様において、該ＰＥＧ、約１５ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の、約２０ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の、約２５ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の、約３０ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の、約３５ｋＤａと約４０ｋＤａとの間の、約１５ｋＤａと約３５ｋＤａとの間の、約１５ｋＤａと約３０ｋＤａとの間の、約１５ｋＤａと約２５ｋＤａとの間の、約１５ｋＤａと約２０ｋＤａとの間の、約２０ｋＤａと約３５ｋＤａとの間の、約２５ｋＤａと約３５ｋＤａとの間の、または約３０ｋＤａと約３５ｋＤａとの間の平均分子量を有する。
【０１７２】
いくつかの態様において、半減期延長部分、例えば、ＰＥＧは、天然にてコードされないアミノ酸、例えば、フェニルアラニン誘導体を介してＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、配列番号：１または配列番号：２の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）に連結される。いくつかの態様において、該フェニルアラニン誘導体はパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである。いくつかの態様において、半減期延長部分はオキシム連結を介して天然にてコードされないアミノ酸と連結される。いくつかの態様において、該天然にてコードされないアミノ酸は配列番号：３（野生型ＦＧＦ−２１）のアミノ酸グルタミン１０９と置き換わる。
【０１７３】
本開示のいくつかの特定の態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）、すなわち、野生型ＦＧＦ−２１（配列番号：３）のグルタミン１０９がパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンと置き換えられ、３０ｋＤａのＰＥＧ鎖がオキシム連結を介して位置１０９でパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンに共有結合している、配列番号：１の修飾ＦＧＦ−２１の誘導体である。
【０１７４】
いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）は、約１ｍｇ／ｍｌと約４０ｍｇ／ｍｌとの間の濃度で存在する。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）は、約１ｍｇ／ｍｌと５ｍｇ／ｍｌとの間の、約５ｍｇ／ｍｌと約１０ｍｇ／ｍｌとの間の、約１０ｍｇ／ｍｌと約１５ｍｇ／ｍｌとの間の、約１５ｍｇ／ｍｌと約２０ｍｇ／ｍｌとの間の、約２０ｍｇ／ｍｌと約２５ｍｇ／ｍｌとの間の、約２５ｍｇ／ｍｌと約３０ｍｇ／ｍｌとの間の、約３０ｍｇ／ｍｌと約３５ｍｇ／ｍｌとの間の、または約３５ｍｇ／ｍｌと約４０ｍｇ／ｍｌとの間の濃度で存在する。
【０１７５】
いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）は、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２１ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌ、２３ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、２６ｍｇ／ｍｌ、２７ｍｇ／ｍｌ、２８ｍｇ／ｍｌ、２９ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３１ｍｇ／ｍｌ、３２ｍｇ／ｍｌ、３３ｍｇ／ｍｌ、３４ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、３６ｍｇ／ｍｌ、３７ｍｇ／ｍｌ、３８ｍｇ／ｍｌ、３９ｍｇ／ｍｌ、または４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの濃度は、当該分野にて既知の方法、または本明細書の実施例のセクションにて開示の特定の方法に従って決定される。
【０１７６】
いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）は、本明細書にて開示される製剤において約１ｍｇと約４０ｍｇ／用量の間の量で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）は、本明細書にて開示される製剤中に、約１ｍｇと約５ｍｇ／用量との間の、約５ｍｇと約１０ｍｇ／用量との間の、または約１０ｍｇと約１５ｍｇ／用量との間の、約１５ｍｇと約２０ｍｇ／用量との間の、または約２０ｍｇと約２５ｍｇ／用量との間の、約２５ｍｇと約３０ｍｇ／用量との間の、または約３０ｍｇと約３５ｍｇ／用量との間の、または約３５ｍｇと約４０ｍｇ／用量との間の量で存在する。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、本明細書にて開示される製剤中に、４０ｍｇ／用量よりも多い量で存在する。
【０１７７】
いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）は、本明細書にて開示される製剤中に、約１ｍｇ／用量、約２ｍｇ／用量、約３ｍｇ／用量、約４ｍｇ／用量、約５ｍｇ／用量、約６ｍｇ／用量、約７ｍｇ／用量、約８ｍｇ／用量、約９ｍｇ／用量、約１０ｍｇ／用量、約１１ｍｇ／用量、約１２ｍｇ／用量、約１３ｍｇ／用量、約１４ｍｇ／用量、約１５ｍｇ／用量、約１６ｍｇ／用量、約１７ｍｇ／用量、約１８ｍｇ／用量、約１９ｍｇ／用量、約２０ｍｇ／用量、約２１ｍｇ／用量、約２２ｍｇ／用量、約２３ｍｇ／用量、約２４ｍｇ／用量、約２５ｍｇ／用量、約２６ｍｇ／用量、約２７ｍｇ／用量、約２８ｍｇ／用量、約２９ｍｇ／用量、約３０ｍｇ／用量、約３１ｍｇ／用量、約３２ｍｇ／用量、約３３ｍｇ／用量、約３４ｍｇ／用量、約３５ｍｇ／用量、約３６ｍｇ／用量、約３７ｍｇ／用量、約３８ｍｇ／用量、約３９ｍｇ／用量または約４０ｍｇ／用量の量で存在する。
【０１７８】
いくつかの態様において、医薬製剤は皮下投与用に処方される。下記に示されるように、本明細書にて開示される他の医薬製剤は他の経路を通して投与され得る。いくつかの態様において、医薬製剤は、例えば、安全シリンジを用いて皮下投与用に処方される。いくつかの態様において、該製剤は、毎日または毎週の投与用に、例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日毎に、週毎または２週毎に処方される。いくつかの態様において、該製剤は水性製剤である。
【０１７９】
いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを約１０ｍＭと約５０ｍＭとの間の濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約１００ｍＭと約１Ｍとの間の濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０１％と約０.１％（ｗ／ｖ）との間の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを約１０μＭと約１００μＭとの間の濃度で含み；ここで該製剤のｐＨが約６.７と約７.５との間にある、医薬製剤を提供する。
【０１８０】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【０１８１】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【０１８２】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；および（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが約７.０である、医薬製剤も提供される。
【０１８３】
（ｉ）ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；および（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で含む医薬製剤であって、そのｐＨが７.０である、医薬製剤も提供される。
【０１８４】
いくつかの特定の態様において、本開示は（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤を提供する。
【０１８５】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で含む医薬製剤であって、ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤が提供される。
【０１８６】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【０１８７】
（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ２１を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で含む、医薬製剤であって、ここでそのｐＨが７.１である、医薬製剤も提供される。
【０１８８】
本開示はまた、下記に開示されるＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む製剤の安定性を改善するためにいずれかの方法に従って製造される医薬製剤を提供する。
【０１８９】
ＩＩ．製造方法
本開示はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤の安定性を改善または強化するための方法であって、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡを混合することを含み、ここで該製剤がアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない対照となる製剤と比べて安定性が改善される、方法を提供する。これらの安定化方法は、（ｉ）アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を該製剤と混合するか、（ｉｉ）ポリソルベート界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０と混合するか、（ｉｉｉ）該製剤のｐＨを約７.１に調整するか、または（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせを含む。
【０１９０】
いくつかの態様において、本明細書に記載の医薬製剤は、（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの最終濃度を達成する量にて混合し；そしてそのｐＨを約７.１に調整する方法によって製造される。
【０１９１】
いくつかの態様において、本明細書に記載の医薬製剤は、（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を約２０ｍｇ／ｍＬＬの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｖ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および（ｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの最終濃度を達成する量にて混合し；そしてそのｐＨを約７.１に調整する方法によって製造される。
【０１９２】
いくつかの態様において、本明細書に記載の医薬製剤は、（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの最終濃度を達成する量にて混合し；そしてそのｐＨを７.１に調整する方法によって製造される。
【０１９３】
いくつかの態様において、本明細書に記載の医薬製剤は、（ｉ）ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの最終濃度を達成する量にて；（ｉｖ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量にて；および（ｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの最終濃度を達成する量にて混合し；そしてそのｐＨを７.１に調整する方法によって製造される。
【０１９４】
本明細書において使用される場合、「混合する」なる語は、当該分野にて既知のいずれかの手段により開示される濃度を得るために、予め定められていない順序で本明細書に開示の製剤の成分を合わせることをいう。例えば、本明細書に開示の医薬製剤中の賦形剤はＦＧＦ−２１ポリペプチド溶液に連続してまたは同時に添加され得る。あるいはまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの濃縮溶液を該製剤のあらゆるまたは一部の賦形剤を含む溶液に添加することができる。他の態様において、賦形剤を、例えば、透析または濾過を用いて、該製剤に組み込むことができる。
【０１９５】
いくつかの態様において、開示される方法を適用することで得られる安定性の改善は、例えば、（ｉ）対照となる製剤に対して、物理的安定性の向上、（ｉｉ）対照となる製剤に対して、化学的安定性の向上、または（ｉｉｉ）その組み合わせを含む。
【０１９６】
いくつかの態様において、物理的安定性の向上は、（ｉ）ポリペプチドの凝集の防止または減少、（ｉｉ）ポリペプチドの分画の防止または減少、あるいは（ｉｉｉ）それらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの凝集は、対照となる製剤において観察される凝集の約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの凝集は、対照となる製剤において観察される凝集の９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの分画は、対照となる製剤において観察される分画の約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの分画は、対照となる製剤において観察される凝集の９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。
【０１９７】
いくつかの態様において、化学的安定性の向上は、（ｉ）ポリペプチドの脱アミド化の防止または減少、（ｉｉ）ポリペプチドの酸化の防止または減少、あるいは（ｉｉｉ）それらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの脱アミド化は、対照となる製剤において観察されるポリペプチドの脱アミド化の約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの脱アミド化は、対照となる製剤において観察されるポリペプチドの脱アミド化の９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの酸化は、対照となる製剤において観察されるポリペプチドの酸化の約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。いくつかの態様において、本明細書に開示される医薬組成物において観察されるポリペプチドの酸化は、対照となる製剤において観察されるポリペプチドの酸化の９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。
【０１９８】
いくつかの態様において、本明細書に開示される製剤を安定化させる（安定性を改善または強化する）方法は、分解レベルだけでなく、分解速度も下げることができる：例えば、開示される方法は、対照となる製剤に対して、ポリペプチドの脱アミド化の速度を低下させ、ポリペプチドの酸化の速度を低下させ、ポリペプチドの凝集の速度を低下させ、タンパク質の分解速度を低下させ、またはそれらのいずれかの組み合わせとすることができる。
【０１９９】
例えば、ＤＴＰＡなどのアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤の本明細書に開示される医薬製剤における混合は、対照となる製剤に対して、特定の温度で特定の期間貯蔵した場合に、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化速度を低下させることができる。
【０２００】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）のＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、対照となる製剤に対して、該医薬製剤を、例えば、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で貯蔵した場合に、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化速度を低下させることができる。いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、該医薬製剤を、２５℃より上、３０℃より上、３５℃より上、約４０℃、または約４５℃の温度で貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化速度を低下させることができる。いくつかの態様において、該アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、該医薬製剤を、約２０℃と約２５℃、約２５℃と約３０℃、約３０℃と約３５℃、または約４０℃と約４５℃の間で貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化速度を低下させることができる。
【０２０１】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、上記した温度または温度範囲で、約１週間、約２週間、約３週間、約１か月、約２か月、約３か月、または約４か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化速度を低下させることができる。
【０２０２】
特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、４０℃で、約１か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドの脱アミド化速度を低下させることができる。
【０２０３】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの高分子量（ＨＭＷ）の凝集速度を低下させることができる。
【０２０４】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、２５℃より上、３０℃より上、３５℃より上、約４０℃、または約４５℃の温度で貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、ＦＧＦ−２１ポリペプチドのＨＭＷの凝集速度を低下させることができる。いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、約２０℃と約２５℃、約２５℃と約３０℃、約３０℃と約３５℃、または約４０℃と約４５℃との間の濃度で貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、ＦＧＦ−２１ポリペプチドのＨＭＷの凝集速度を低下させることができる。
【０２０５】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、上記した温度または温度範囲で、約１週間、約２週間、約３週間、約１か月、約２か月、約３か月、または約４か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドのＨＭＷの凝集速度を低下させることができる。
【０２０６】
特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、該医薬製剤を、４０℃で、約１か月貯蔵した場合に、対照となる製剤に対して、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドのＨＭＷの凝集速度を低下させることができる。
【０２０７】
いくつかの態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、ＦＧＦ−２１ポリペプチドにある１または複数のメチオニンの酸化を防止または軽減することができる。
【０２０８】
特定の態様において、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、ＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）を含む医薬製剤への混合は、例えば、２５℃、および／または４０℃で、配列番号：３のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９（あるいは配列番号：１、２または他のいずれかのＦＧＦ−２１ポリペプチドにある対応するアミノ酸）の酸化を防止または軽減することができる。
【０２０９】
開示された方法は、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤  ＤＴＰＡを使用し得る。しかしながら、他のいくつかの態様にて、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＤＯＴＡ、チウキセタンなどのＤＴＰＡ関連の化合物、または当該分野にて既知のＤＴＰＡおよびＥＤＴＡと関連するいずれかのキレート剤、例えば、ＤＴＰＡ・ＢＭＡおよびＥＤＴＡ・ＢＭＡなどのもう一つ別のアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤であり得る。
【０２１０】
いくつかの態様において、該ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭと約１００μＭの間、１５μＭと約９５μＭの間、約２０μＭと約９０μＭの間、約２５μＭと約８５μＭの間、約３０μＭと約８０μＭの間、約３５μＭと約７５μＭの間、約４０μＭと約７０μＭの間、約４５μＭと約６５μＭの間、約５０μＭと約６０μＭの間、約２５μＭと約７５μＭの間、約４０μＭと約６０μＭの間、約３０μＭと約７０μＭの間、または約４０μＭと約７５μＭの間の量まで混合され得る。
【０２１１】
いくつかの態様において、該ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ、約１５μＭ、約２０μＭ、約２５μＭ、約３０μＭ、約３５μＭ、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、約６０μＭ、約６５μＭ、約７０μＭ、約７５μＭ、約８０μＭ、約８５μＭ、約９０μＭ、約９５μＭまたは約１００μＭの量まで混合され得る。
【０２１２】
いくつかの態様において、該ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、少なくとも約１５μＭ、少なくとも約２０μＭ、少なくとも約２５μＭ、少なくとも約３０μＭ、少なくとも約３５μＭ、少なくとも約４０μＭ、少なくとも約４５μＭ、少なくとも約５０μＭ、少なくとも約５５μＭ、少なくとも約６０μＭ、少なくとも約６５μＭ、少なくとも約７０μＭ、または少なくとも約７５μＭの量まで混合され得る。
【０２１３】
特定の態様において、該アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、５０μＭの量まで混合される。
【０２１４】
本明細書に開示される方法のいくつかの態様において、製剤のｐＨは、約６.５より上、約６.６より上、約６.７より上、約６.８より上、約６.９より上、約７.０より上、約７.１より上、約７.２より上、約７.３より上、約７.４より上、または約７.５より上のｐＨに調整される。
【０２１５】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは、６.５より上、６.６より上、６.７より上、６.８より上、６.９より上、７.０より上、７.１より上、７.２より上、７.３より上、７.４より上、または７.５より上のｐＨに調整される。
【０２１６】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは、６.５、６.６、６.７、６.８、６.９、７.０、７.１、７.２、７.３、７.４、または７.５のｐＨに調整される。
【０２１７】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは、約６.５と約７.５、約６.６と約７.５、約６.７と約７.５、約６.８と約７.５、約６.９と約７.５、約７.０と約７.５、約７.１と約７.５、約７.２と約７.５、約７.３と約７.５、約７.４と約７.５、約６.５と約７.４、約６.５と約７.３、約６.５と約７.２、約６.５と約７.１、約６.５と約７.０、約６.５と約６.９、約６.５と約６.８、約６.５と約６.７、約６.６と約７.４、約６.７と約７.４、約６.８と約７.４、約６.９と約７.４、約７.０と約７.４、約７.１と約７.４、約７.２と約７.４、約７.３と約７.４、約６.５と約７.３、約６.６と約７.３、約６.７と約７.３、約６.７と約７.３、約６.８と約７.３、約６.９と約７.３、約７.０と約７.３、約７.１と約７.３、約７.２と約７.３、約６.５と約７.２、約６.６と約７.２、約６.７と約７.２、約６.８と約７.２、約６.９と約７.２、約７.０と約７.２、約７.１と約７.２、約６.９と約７.１、または約７.０と約７.１の間のｐＨに調整される。
【０２１８】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは、約６.８、約６.９、約７.０、約７.１、約７.２、約７.３、約７.４、または約７.５のｐＨに調整される。いくつかの態様において、該医薬製剤は、そのｐＨを調整した後、ｐＨが６.５の対照となる製剤よりも安定している。
【０２１９】
いくつかの態様において、該製剤のｐＨは、６.８、６.９、７.０、７.１、７.２、７.３、７.４、または７.５のｐＨに調整される。いくつかの態様において、該医薬製剤は、そのｐＨを調整した後、ｐＨが６.５の対照となる製剤よりも安定している。
【０２２０】
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の安定性を改善する方法は、界面活性剤を混合することをさらに含む。いくつかの態様において、混合される界面活性剤は非イオン性界面活性剤、すなわち、中性溶液中で正味の電荷を有しにくい、界面活性剤である。いくつかの態様において、混合される非陰イオン性界面活性剤はポリソルベートである。いくつかの態様において、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルでは、おおよそ、少なくとも０.０１ｍｇ／ｍｌの量である、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）よりも高い量にて混合される。WanおよびLee、Journal of Pharm Sci, 63, p.136, 1974を参照のこと。本方法のいくつかの態様において、ポリソルベートはポリソルベート８０（ＰＳ８０）である。
【０２２１】
いくつかの態様において、ＰＳ８０界面活性剤は、該医薬製剤に、約０.０１％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０７％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０８％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０９％〜約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０３％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０７％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０８％〜約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０７％〜約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０４％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、約０.０５％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、約０.０６％〜約０.０７％（ｗ／ｖ）、または約０.０５％〜約０.０６％（ｗ／ｖ）の量にて混合される。
【０２２２】
いくつかの態様において、ポリソルベート８０界面活性剤は、少なくとも約０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０.０９％（ｗ／ｖ）または少なくとも約０.１％（ｗ／ｖ）の量にて混合される。いくつかの態様において、該界面活性剤、例えば、ＰＳ８０は、該製剤を（例えば、振盪器で）かき混ぜた時に、粒子形成および／または気泡形成を軽減または防止するのに十分な量で投与される。
【０２２３】
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の安定性を改善する方法は、アミノ酸緩衝、例えば、ヒスチジン（すなわち、Ｌ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、溶媒和ヒスチジン、水和ヒスチジン、無水ヒスチジン、またはそれらの混合物）を混合することをさらに含む。
【０２２４】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約９０ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約９５ｍＭ〜約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ〜約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ〜約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ〜約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ〜約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ〜約２５ｍＭ、約１５ｍＭ〜約２０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約１５.５ｍＭ 〜約２４.５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭ〜約２４ｍＭヒスチジン、約１６.５ｍＭ〜約２３.５ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭ〜約２３ｍＭヒスチジン、約１７.５ｍＭ〜約２２.５ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭ〜約２２ｍＭヒスチジン、約１８.５ｍＭ〜約２１.５ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭ〜約２１ｍＭヒスチジン、または約１９.５ｍＭ〜約２０.５ｍＭヒスチジンの量にて混合される。
【０２２５】
いくつかの態様において、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約１１ｍＭヒスチジン、約１２ｍＭヒスチジン、約１３ｍＭヒスチジン、約１４ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２１ｍＭヒスチジン、約２２ｍＭヒスチジン、約２３ｍＭヒスチジン、約２４ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約２６ｍＭヒスチジン、約２７ｍＭヒスチジン、約２８ｍＭヒスチジン、約２９ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３１ｍＭヒスチジン、約３２ｍＭヒスチジン、約３３ｍＭヒスチジン、約３４ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約３６ｍＭヒスチジン、約３７ｍＭヒスチジン、約３８ｍＭヒスチジン、約３９ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４１ｍＭヒスチジン、約４２ｍＭヒスチジン、約４３ｍＭヒスチジン、約４４ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、約４６ｍＭヒスチジン、約４７ｍＭヒスチジン、約４８ｍＭヒスチジン、約４９ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量にて混合される。
【０２２６】
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の安定性を改善する方法は、浸透圧調節剤（張性剤）を混合することをさらに含む。本開示によれば、浸透圧調節剤（張性剤）は、ポリオール、糖質、炭水化物、塩化ナトリウムなどの塩、またはそれらの混合物を含み得る。例示的なポリオールは、分子量が約６００ｋＤ未満（例えば、１２０〜４００ｋＤの範囲にある）であるもの、例えば、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはそれらの混合物を含む。糖質または炭水化物の浸透圧調節剤は、単糖類、二糖類および多糖類またはそれらの混合物を含む。いくつかの態様において、該糖質または炭水化物は、フルクトース、グルコース、マンノース、シュークロース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、シュークロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、およびそれらの混合物からなる群より選択される。いくつかの態様において、浸透圧調節剤は、還元糖または非還元糖あるいはそれらの混合物の群より選択される糖質を含む。いくつかの態様において、浸透圧調節剤または張性剤は、非還元糖、好ましくは、シュークロース、トレハロース、およびそれらの混合物からなる群より選択される糖である、糖質を含む。いくつかの態様において、非還元糖はシュークロースである。いくつかの特定の態様において、非還元糖はシュークロースである。
【０２２７】
いくつかの態様において、シュークロース浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約２００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約３００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約４００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約５００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約６００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約７００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約８００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約９００ｍＭ〜約１Ｍシュークロース、約２００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約８００ｍＭ〜約９００ｍＭシュークロース、約３００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約７００ｍＭ〜約８００ｍＭシュークロース、約４００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、約５００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、約６００ｍＭ〜約７００ｍＭシュークロース、または約５００ｍＭ〜約６００ｍＭシュークロースの量にて混合される。
【０２２８】
いくつかの態様において、シュークロース浸透圧調節剤は、約１００ｍＭシュークロース、約１５０ｍＭシュークロース、約２００ｍＭシュークロース、約２５０ｍＭシュークロース、約３００ｍＭシュークロース、約３５０ｍＭシュークロース、約４００ｍＭシュークロース、約４５０ｍＭシュークロース、約５００ｍＭシュークロース、約５５０ｍＭシュークロース、約６００ｍＭシュークロース、約６５０ｍＭシュークロース、約７００ｍＭシュークロース、約７５０ｍＭシュークロース、約８００ｍＭシュークロース、約８５０ｍＭシュークロース、約９００ｍＭシュークロース、約９５０ｍＭシュークロース、または約１Ｍシュークロースの量にて混合される。
【０２２９】
いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドである。当該分野にて既知の多数の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、本明細書に開示の方法、例えば、米国特許第８,０１２,９３１号および第９,４３４,７８８号（両方共に出典明示により本明細書の一部とされる）にて開示される方法にて使用され得る。本願において開示されるように処方され得る、さらなるＦＧＦ−２１を下記においてさらに詳細に記載する。
【０２３０】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される方法において有用な修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：３（野生型ヒトＦＧＦ−２１）のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含み、ここで該ポリペプチドはＦＧＦ−２１活性を有する。
【０２３１】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される方法において有用な修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：３（野生型ヒトＦＧＦ−２１）のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドから構成されるか、または本質的にそれらからなり、ここで該ポリペプチドはＦＧＦ−２１活性を有する。
【０２３２】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される方法において有用な修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、例えば、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列にある天然にてコードされないアミノの側鎖を介して、半減期延長部分に連結される。本開示のＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、配列番号：１の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドと連結し得る半減期延長部分は、例えば、アルブミン、免疫グロブリン定常領域またはその一部、免疫グロブリン結合ポリペプチド、ＩｇＧ、ＡＢＰ、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＨＥＳｙｌａｔｉｏｎ部分、ＸＴＥＮ、Ｆｃ領域、およびそれらのいずれかの組み合わせを含む。ＦＧＦ−２１ポリペプチドを修飾するのに用いることのできる半減期延長部分は下記により詳細に記載される。
【０２３３】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される方法において有用な半減期延長部分は、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。いくつかの態様において、該ＰＥＧは約１０ｋＤａと約４０ｋＤａとの間、例えば、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、または約４０ｋＤａの平均分子量を有する。いくつかの態様において、該ＰＥＧは約３０ｋＤａの平均分子量を有する。いくつかの態様において、該ＰＥＧは約１５ｋＤａと約４０ｋＤａの間、約２０ｋＤａと約４０ｋＤａの間、約２５ｋＤａと約４０ｋＤａの間、約３０ｋＤａと約４０ｋＤａの間、約３５ｋＤａと約４０ｋＤａの間、約１５ｋＤａと約３５ｋＤａの間、約１５ｋＤａと約３０ｋＤａの間、約１５ｋＤａと約２５ｋＤａの間、約１５ｋＤａと約２０ｋＤａの間、約２０ｋＤａと約３５ｋＤａの間、約２５ｋＤａと約３５ｋＤａの間、または３０ｋＤａと約３５ｋＤａの間の平均分子量を有する。
【０２３４】
いくつかの態様において、該半減期延長部分、例えば、ＰＥＧは、天然にてコードされないアミノ酸、例えば、フェニルアラニン誘導体を介してＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される。いくつかの態様において、該フェニルアラニン誘導体はパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンである。いくつかの態様において、該半減期延長部分はオキシム連結を介して天然にてコードされないアミノ酸に連結される。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は配列番号：３のアミノ酸グルタミン１０９と置き換わる。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドはＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）、すなわち、グルタミン１０９がパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンと置き換わり、３０ｋＤａのＰＥＧ鎖がオキシム連結を介してパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンと共有結合している、配列番号：１のＦＧＦ−２１である。
【０２３５】
本明細書にて開示される方法のいくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、約１ｍｇ／ｍｌと約４０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの濃度は、当該分野にて既知の方法、または本明細書の実施例のセクションにおいて開示される特定の方法に従って決定される。
【０２３６】
本明細書にて開示される方法のいくつかの態様において、該製剤は皮下投与用に処方される。いくつかの態様において、該製剤は安全シリンジを用いて皮下投与するために処方される。いくつかの態様において、該製剤は毎日または毎週の投与用に処方される。いくつかの態様において、該製剤は水性製剤である。
【０２３７】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約１０ｍＭと約５０ｍＭの間の濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約１００ｍＭと約１Ｍの間の濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０１％と約０.１％（ｗ／ｖ）の間の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約１０μＭと約１００μＭの間の濃度で混合することを含み；ここで該製剤のｐＨが約６.７と約７.５との間にある、方法を提供する。
【０２３８】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約１５ｍＭと約４５ｍＭの間の濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約２００ｍＭと約９００ｍＭの間の濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０２％と約０.０９％（ｗ／ｖ）の間の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約２０μＭと約９０μＭの間の濃度で混合することを含み；ここで該製剤のｐＨが約６.８と約７.４の間にある、方法を提供する。
【０２３９】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約１５ｍＭと約４０ｍＭの間の濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約３００ｍＭと約８００ｍＭの間の濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０３％と約０.０８％（ｗ／ｖ）の間の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約３０μＭと約８０μＭの間の濃度で混合することを含み；ここで該製剤のｐＨが約６.９と約７.３の間にある、方法を提供する。
【０２４０】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約１５ｍＭと約３０ｍＭの間の濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約４００ｍＭと約８００ｍＭの間の濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０４％と約０.０７％（ｗ／ｖ）の間の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約４０μＭと約７０μＭの間の濃度で混合することを含み；ここで該製剤のｐＨが約７と約７.２の間にある、方法を提供する。
【０２４１】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約１５ｍＭと約２５ｍＭの間の濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約５００ｍＭと約７００ｍＭの間の濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０４％と約０.０６％（ｗ／ｖ）の間の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約４５μＭと約５５μＭの間の濃度で混合することを含み；ここで該製剤のｐＨが約７と約７.１の間にある、方法を提供する。
【０２４２】
本開示はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合することを含み；ここでそのｐＨが７.１である、方法を提供する。
【０２４３】
本開示はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合することを含み、ここで該ｐＨが７.１である、方法を提供する。
【０２４４】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；および（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で混合することを含み；ここでそのｐＨが約７.０である、方法を提供する。
【０２４５】
本開示は、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；および（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で混合することを含み；ここでそのｐＨが７.０である、方法を提供する。
【０２４６】
本開示は、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合することを含み；ここでそのｐＨが７.１である、方法を提供する。
【０２４７】
本開示は、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを約２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを約６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を約０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを約５０μＭの濃度で混合することを含み；ここでそのｐＨが７.１である、方法を提供する。
【０２４８】
本開示は、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）を約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合することを含み、ここでそのｐＨが７.１である、方法を提供する。
【０２４９】
本開示は、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）を約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤の安定性を改善するための方法であって、（ｉ）ヒスチジンを２０ｍＭの濃度で；（ｉｉ）シュークロースを６００ｍＭの濃度で；（ｉｉｉ）ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度で；および（ｉｖ）ＤＴＰＡを５０μＭの濃度で混合することを含み；ここでそのｐＨが７.１である、方法を提供する。
【０２５０】
いくつかの実施態様において、医薬製剤中に含まれる個々の賦形剤（例えば、ＤＴＰＡ、ＰＳ８０、ヒスチジン、シュークロース）の濃度は、完成した医薬製剤の最終容量単位当たりの、その製造の過程において、該医薬製剤に添加される個々の賦形剤の量（重量、モル等）であると決定／算定され得る。他の実施態様において、医薬製剤に含まれる賦形剤（例えば、ＤＴＰＡ、ＰＳ８０、ヒスチジン、シュークロース）の濃度は、該医薬製剤中の個々の賦形剤の実際の量を基礎とする。
【０２５１】
ＩＩＩ．治療方法
本開示はまた、線維症および／または糖尿病に付随する疾患または症状の治療または予防を必要とする対象において、それらを治療または予防する方法であって、該対象に効果的な量の本明細書に開示のＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０２５２】
いくつかの態様において、該疾患または症状は、糖尿病、例えば、２型糖尿病である。いくつかの態様において、該疾患または症状は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。
【０２５３】
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、本明細書に開示の治療または予防方法において、約１ｍｇと約４０ｍｇ／用量の間の量で使用され得る。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、本明細書に開示の治療または予防方法において、約１ｍｇと約５ｍｇ／用量の間、または約５ｍｇと約１０ｍｇ／用量の間、または約１０ｍｇと約１５ｍｇ／用量の間、または約１５ｍｇと約２０ｍｇ／用量の間、または約２０ｍｇと約２５ｍｇ／用量の間、または約２５ｍｇと約３０ｍｇ／用量の間、または約３０ｍｇと約３５ｍｇ／用量の間、または約３５ｍｇと約４０ｍｇ／用量の間の量で使用され得る。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、本明細書に開示の治療または予防方法において、４０ｍｇ／用量よりも多い量で使用され得る。
【０２５４】
いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、本明細書に開示の治療または予防方法において、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、または約４０ｍｇ／用量の量で使用され得る。
【０２５５】
いくつかの態様において、医薬製剤は、例えば、安全シリンジを用いて皮下投与される。いくつかの態様において、該医薬製剤は毎日または毎週投与される。
【０２５６】
いくつかの態様において、効果的な量の本明細書に開示のＦＧＦ−２１（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含む医薬製剤の対象への投与は、肝硬度を下げ、体脂肪率を下げ、体重を減らし、肝臓の体重に対する割合を減らし、肝脂質含有量を減らし、肝線維症の領域を減らし、空腹時血中グルコースレベルを下げ、空腹時トリグリセリドレベルを下げ、ＬＤＬコレステロールレベルを下げ、ＡｐｏＢレベルを下げ、ＡｐｏＣレベルを下げ、ＨＤＬコレステロールを上げ、またはそれらのいずれかの組み合わせである。
【０２５７】
いくつかの態様において、本明細書に開示の治療方法に従って、本明細書にて開示されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド）の対象への投与は、未処理対象のレベルと比べて、または該医薬製剤を投与する前の対象と比べて、（ｉ）肝脂質レベルの減少；（ｉｉ）肝損傷レベルの低下；（ｉｉｉ）線維症レベルの低下；（ｉｖ）線維症バイオマーカー血清Ｐｒｏ−Ｃ３（Ｎ−末端ＩＩＩ型コラーゲンプロぺプチド）レベルの低下；（ｖ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの低下；（ｖｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの低下；（ｖｉｉ）血清中アジポネクチンレベルの上昇；（ｖｉｉｉ）血漿中ＬＤＬレベルの低下；（ｉｘ）血漿中ＨＤＬレベルの上昇；（ｘ）血漿中トリグリセリドレベルの低下；（ｘｉ）肝硬度レベルの低下；または（ｘｉｉ）それらのいずれかの組み合わせをもたらす。
【０２５８】
本開示は、線維症に付随する疾患の治療方法であって、その治療を必要とする対象に、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、膵臓、肺、心臓、腎臓、肝臓、眼、神経系、骨髄、リンパ節、心内膜心筋、および／または後腹膜腔などの器官または組織に影響を及ぼし得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、肝線維症または前肝硬変であり得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、びまん性実質性肺疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、進行性塊状線維症、特発性肺線維症、インジェクション線維症、腎線維症、慢性腎疾患、糖尿病性腎疾患、巣状分節状糸球体硬化症、膜性腎症、ＩｇＡ腎症、骨髄線維症、心不全、急性心不全、慢性心不全、代謝性心不全、心線維症、白内障線維症、白内障、眼瘢痕、膵線維症、皮膚線維症、腸線維症、腸狭窄、心内膜心筋線維症、心房線維症、縦隔線維症、クローン病、腹膜後線維症、ケロイド、腎性全身性線維症、強皮症、全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー症候群、デュプイトラン拘縮、糖尿病性神経障害、癒着性関節包炎、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、ウイルス性肝炎、胆管疾患、原発性ヘモクロマトーシス、薬物関連肝硬変、原因不明肝硬変、ウィルソン病、および、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、ヒト線維性肺疾患、肝線維症、黄斑変性症、レチナール網膜症、硝子体網膜症、心筋線維症、グレーブス眼症、薬物誘発性麦角病、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症／再狭窄、肥大性瘢痕、原発性または特発性骨髄線維症、および炎症性腸疾患（コラーゲン蓄積大腸炎を含むが、これに限定されない）より選択されてもよい。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、１または複数の肺疾患、肺がん、薬物療法、化学療法、または放射線療法よりもたらされる。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、１または複数の加齢、心臓発作、脳卒中、心筋障害、または左心室機能不全よりもたらされる。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、腎線維症、糸球体腎炎、慢性腎臓病、慢性腎不全、および全身性エリテマトーデス、がん、身体的閉塞、毒素、代謝性疾患、免疫病、または糖尿病性腎症に付随する腎炎より選択され得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、１または複数の外傷、脊椎損傷、感染、手術、虚血性損傷、心臓発作、火傷、環境汚染物質暴露、肺炎、結核、または急性呼吸窮迫症候群よりもたらされる。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、肺線維症、間質性肺疾患、ヒト線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、心線維症、心筋線維症、黄斑変性症、レチナール網膜症、硝子体網膜症、グレーブス眼症、薬物誘発性エルゴチズム、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症／再狭窄、ケロイドおよび肥大性瘢痕、原発性または特発性骨髄線維症、炎症性腸疾患、膠原性大腸炎、眼瘢痕および白内障術後線維症より選択され得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、ＮＡＳＨ、肝線維症、および肝硬変より選択され得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患はＮＡＳＨであり得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、糖尿病性腎疾患、慢性腎疾患、および腎線維症より選択され得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は、代謝性心不全および心線維症より選択され得る。いくつかの態様において、線維症に付随する疾患は肺線維症であってもよい。
【０２５９】
いくつかの態様において、本開示は、肝脂肪画分を減らすことを必要とする対象においてそれを減少させる方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含み、ここで所望により該対象はＮＡＳＨを発症するリスクがあるか、またはＮＡＳＨと診断されてもよい、方法を提供する。
【０２６０】
いくつかの態様において、本開示は、次のことを必要とする対象において、肝硬度を下げ、体脂肪率を下げ、体重を減らし、肝臓の体重に対する割合を減らし、肝脂質含有量を減らし、肝線維症の領域を減らし、空腹時血中グルコースレベルを下げ、空腹時トリグリセリドを減らし、ＬＤＬコレステロールを減らし、ＡｐｏＢを減らし、ＡｐｏＣレベルを減らし、および／またはＨＤＬコレステロールを上げる方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含み、ここで所望により該対象はＮＡＳＨを発症するリスクがあるか、またはＮＡＳＨと診断されてもよい、方法を提供する。
【０２６１】
いくつかの態様において、本開示は、アジポネクチンレベルを上げることを必要とする対象においてそれを増大させる方法であって、該対象にＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含み、ここで所望により該対象はＮＡＳＨを発症するリスクがあるか、またはＮＡＳＨと診断されてもよい、方法を提供する。
【０２６２】
いくつかの態様において、本開示は、ＮＡＳＨに付随する１または複数の徴候を治療することを必要とする対象においてそれを治療する方法であって、該対象にＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０２６３】
ＮＡＳＨを治療または予防する必要のある対象において、それを治療または予防する方法であって、該対象に配列番号：１を含む修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む本明細書にて記載される治療的に効果的な量の医薬製剤を投与することを含み、ここでそのｐＡＦ残基が分子量が約３０ｋＤａのポリ（エチレングリコール）部分（ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１）に連結される、方法も提供される。
【０２６４】
いくつかの態様において、対象は、所望により肝生検によって決定されてもよい、ＮＡＳＨ  ＣＲＮ線維症段階１−３を示し得る。いくつかの態様において、治療の前に、対象は少なくとも約６０の脂肪肝指数を示し得る。いくつかの態様において、治療の前に、対象は、所望により、磁気共鳴映像法によって決定されてもよい、少なくとも１０％の肝脂肪画分率を示し得る。
【０２６５】
いくつかの態様において、本開示は、１型糖尿病または２型糖尿病の治療を必要とする対象においてそれを治療する方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む治療的に効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様において、本開示は、肥満の治療を必要とする対象においてそれを治療する方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む治療的に効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様において、本開示は、グルコースおよび脂質ホメオスタシス、グルコースの取り込み、ＧＬＵＴ１発現、および／または血清中グルコース、トリグリセリド、インスリンまたはグルカゴン濃度のうちの少なくとも１つの調節を必要とする対象においてそれを調節する方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０２６６】
いくつかの態様において、本開示は、以下の必要とする対象において、インスリン感受性を亢進し、アジポネクチンレベルを上げ、血中グルコースレベルを下げ、グルカゴンレベルを下げ、トリグリセリドレベルを下げ、フルクトサミンレベルを下げ、低密度コレステロールレベルを下げるか、またはＣ−反応性タンパク質レベルを下げる方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０２６７】
いくつかの態様において、本開示は、肥満、糖尿病、膵炎、インスリン耐性、高インスリン血症、耐糖能異常、高血糖症、メタボリックシンドローム、耐糖能障害、不十分なブドウ糖クリアランス、高血中グルコース、およびプラダ−ウィリ症候群より選択される症状または障害の治療を必要とする対象においてそれを治療する方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０２６８】
いくつかの態様において、本開示は、Ａ型インスリン耐性、Ｃ型インスリン耐性（AKA HAIR-AN症候群）、ラブソン−メンデンホール症候群、ドナヒュー症候群またはレプレショーニズム、アンドロゲン過剰症、多毛症、または黒色表皮腫より選択されるインスリン関連の症状または障害の治療を必要とする対象においてそれらを治療する方法であって、該対象に本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む効果的な量の医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０２６９】
いくつかの態様において、本明細書にて記載されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は注射を介して投与され得る。いくつかの態様において、本明細書にて開示されるＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は皮下注射、ＩＶ注射、腹腔内注射、または筋肉内注射を介して投与され得る。
【０２７０】
いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、一日に付き約１回の頻度か、一日当たり約１回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、一週間に付き約２回の頻度か、一週間当たり約２回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、一週間に付き約１回の頻度か、一週間当たり約２回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、二週間に付き約１回の頻度か、二週間当たり約２回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、三週間に付き約１回の頻度か、一週間当たり約２回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、一か月に付き約１回の頻度か、一か月当たり約１回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、四週間に付き約１回の頻度か、一週間当たり約２回よりも少ない頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、一日に付き約１回の頻度で投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は一週間に付き約１回の頻度で投与され得る。
【０２７１】
いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５、および約１００ｍｇのＦＧＦ−２１ポリペプチド／用量より選択される量にて投与され得る。
【０２７２】
例えば、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、受容対象の体重１ｋ当たり約０.１と１００ｍｇの間のＦＧＦ−２１ポリペプチド濃度で対象に投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、受容対象の体重１ｋ当たり約０.５と５ｍｇの間のＦＧＦ−２１ポリペプチド濃度で対象に投与され得る。もう一つ別の態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドを含む医薬製剤は、一週間に約１回または２回、二日毎に１回、三日毎に１回、四日毎に１回、五日毎に１回、または六日毎に１回などの、一日に１回と二週間に付き１回の間の頻度で受容対象に投与され得る。
【０２７３】
本開示の医薬製剤は、限定されないが、非経口的に、例えば、注射（限定されないが、皮下的または静脈内注射）、あるいは注射または注入の他のいずれかの形態を含む、タンパク質またはペプチドに適した従来のいずれかの経路で投与され得る。
【０２７４】
ＩＶ．  修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド
本開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドは、１または複数のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＦＧＦ−２１ポリペプチドを包含する。例えば、本開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドは、１または複数のアミノ酸置換（例えば、天然に存在するか、天然には存在しないアミノ酸との置換）、欠失（末端または内部欠失）、あるいは異種部分の結合など（アミノ酸配列での割込み／挿入によるか、側鎖結合によるかいずれかのＣ−末端、Ｎ−末端、または内部）の修飾を含む。いくつかの特定の態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：３（野生型ＦＧＦ−２１）の修飾バージョン、または配列番号：１（グルタミン１０９がパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンで置換されることで修飾された野生型配列）を含む。いくつかの特定の態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、例えば、異種部分（例えば、ＰＥＧ）の付着を介する、配列番号：１の誘導体である。特定の態様において、修飾ＦＧＦ−２１はＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）である。
表１：ＦＧＦ−２１ポリペプチドの配列
【表１】
2021529763.tif 000002
【０２７５】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語はまた、多型（例えば、天然に存在するＦＧＦ−２１配列変種）、例えば、ＦＧＦ−２１のＰ−形態またはＬ−形態も包含する。
【０２７６】
天然に存在するＦＧＦ−２１での多種多様なアミノ酸位置の置換が記載されている。置換は、溶解性または安定性を調整する置換、アゴニスト活性を亢進する置換、インビボまたはインビトロにおける半減期を延ばす置換、プロテアーゼ耐性を向上させる置換、ポリペプチドをアンタゴニストに変換する置換、免疫原性または毒性を減らす置換、精製または製造可能性を促進する置換、あるいはそれらのいずれかの組み合わせ（これらに限定されない）を含み、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドなる語でも包含される。
【０２７７】
場合によっては、天然にてコードされないアミノ酸置換を、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド内で他の付加、置換または欠失と組み合わせ、その修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドのもう一つ別のＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、配列番号：３の野生型ＦＧＦ−２１ポリペプチド、配列番号：１の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、配列番号：２のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１ポリペプチド、付加、置換または欠失のない同じＦＧＦ−２１ポリペプチド、あるいはもう一つ別の未修飾または修飾のＦＧＦ−２１の未修飾または修飾のポリペプチド）に対して相対的な他の生物学的特性に影響を与えるようにしてもよい。
【０２７８】
場合によっては、他の付加、置換または欠失が、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの安定性（タンパク質分解に対する耐性を含むが、これに限定されない）を向上させるか、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドのその受容体に対する親和性を増大させるかもしれない。いくつかの場合では、他の付加、置換または欠失が修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの医薬安定性を向上させるかもしれない。いくつかの場合では、他の付加、置換または欠失が修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの溶解性を増大させるかもしれない。
【０２７９】
いくつかの態様において、組換え宿主細胞にて発現した後に、ポリペプチドの溶解性の増大をもたらす非天然アミノ酸を取り込むためのもう一つ別の部位に加えて、天然にてコードされるアミノ酸、または非天然のアミノ酸と置換させるための部位が選択される。
【０２８０】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ＦＧＦ−２１ポリペプチド受容体、結合タンパク質、または関連リガンドに対する親和性を調節し、ＦＧＦ−２１受容体と結合した後のシグナル伝達を調節し、循環半減期を調節し、放出または生物学的利用能を調節し、精製を容易にするか、あるいは特定の投与経路を改善または改変する、もう一つ別の付加、置換または欠失を含む。
【０２８１】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、修飾ＦＧＦ−２１のその受容体に対する親和性を増大させる、付加、置換または欠失を含む。同様に、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ポリペプチドの検出（ＧＦＰを含むが、限定されない）、精製、組織または細胞膜を介する輸送、プロドラッグ放出または活性化、修飾ＦＧＦ−２１の大きさの減少、または他の特性を改善する、化学的または酵素切断配列、プロテアーゼ切断配列、反応基、抗体結合ドメイン（ＦＬＡＧまたはポリ−Ｈｉｓを含むが、限定されない）または他の親和性に基づく配列（ＦＬＡＧ、ポリ−Ｈｉｓ、ＧＳＴ等を含むが、限定されない）または連結分子（ビオチンを含むが、限定されない）を含み得る。
【０２８２】
ＦＧＦ−２１の複数の多形が同定されている。ロイシンまたはプロリンが、米国特許公開番号２００１００１２６２８および米国特許第６,７１６,６２６号にて、同じ位置で記載されている。１個のアミノ酸（ロイシン）が異なるＮ−末端リーダーまたはシグナル配列が、米国特許第６,７１６,６２６号および米国特許公開番号２００４０２５９７８０に示される。ＦＧＦ−２１ポリペプチド変種または変異体は、米国特許第６,７１６,６２６号；米国特許公開番号２００５／０１７６６３１、２００５／００３７４５７、２００４／０１８５４９４、２００４／０２５９７８０、２００２／０１６４７１３、および２００１／００１２６２８；ＷＯ  ０１／３６６４０；ＷＯ  ０３／０１１２１３；ＷＯ  ０３／０５９２７０；ＷＯ  ０４／１１０４７２；ＷＯ  ０５／０６１７１２；ＷＯ  ０５／０７２７６９；ＷＯ  ０５／０９１９４４；ＷＯ  ０５／１１３６０６；ＷＯ  ０６／０２８５９５；ＷＯ  ０６／０２８７１４；ＷＯ  ０６／０５０２４７；ＷＯ  ０６／０６５５８２；ＷＯ  ０６／０７８４６３；ＷＯ０１／０１８１７２；ＷＯ０９／１４９１７１；ＷＯ１０／０４２７４７；ＷＯ１２／０６６０７５；ＷＯ１１／１５４３４９；ＷＯ１３／０５２３１１；ＷＯ１３／１８８１８１（それらの内容を出典明示により本明細書の一部とする）にて開示される変種または変異体を包含するが、これらに限定されない。
【０２８３】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語はまた、天然に存在するＦＧＦ−２１の生物学的に活性なフラグメント、生物学的に活性な変種および立体異性体、ならびに天然に存在するＦＧＦ−２１およびそのポリペプチド融合体のアゴニスト、模倣、およびアンタゴニスト変種を包含する。アミノ末端、カルボキシル末端またはその両方にて付加的なアミノ酸を含む融合体は、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドなる語に包含される。
【０２８４】
例示的な融合体として、限定されないが、例えば、メチオニンがリーダーまたはシグナルペプチドまたはその部分を欠くＦＧＦ−２１の成熟形態の組換え発現より由来のＦＧＦ−２１のＮ−末端に連結している（メチオニンが、例えば、イー・コリにおいて組換え発現より由来のＦＧＦ−２１のＮ−末端に連結している）メチオニルＦＧＦ−２１、精製を目的とした融合体（ポリ−ヒスチジンまたは親和性エピトープを含むが、限定されない）、ＰＫＥアドネクチンなどの血清アルブミン結合ペプチドとの融合体、血清アルブミンなどの血清タンパク質との融合体、およびＦＧＦ−２１および１または複数の他の分子（異種部分）（血清アルブミン、Ｆｃドメイン、免疫グロブリン定常領域、ＸＴＥＮなどの非構造化ポリペプチドを含むが、これらに限定されない）を含む融合タンパク質等が挙げられる。かかるいずれのフラグメントも、標準的な生化学的方法により、または該フラグメントをコードするポリヌクレオチドを発現させることでタンパク質より製造され得る。
【０２８５】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語は、ＰＥＧなどのポリマーとコンジュゲートしたポリペプチドを包含し、所望により１または複数のシステイン、リジンまたは他の残基のさらなる誘導体を含んでもよい。加えて、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドはリンカーまたはポリマーを含んでもよく、ここで該リンカーまたはポリマーがコンジュゲートしたアミノ酸は本開示に係る非天然アミノ酸であってもよく、あるいはリジンまたはシステインとのカップリングのように当該分野にて公知の技法を利用して天然にコードされるアミノ酸とコンジュゲートされてもよい。
【０２８６】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語はまた、いずれかのアミノ酸位置でグリコシル化されたポリペプチド、Ｎ−連結またはＯ−連結されたポリペプチドのグリコシル化形態（これらに限定されない）などのグリコシル化修飾ＦＧＦ−２１を包含する。一塩基変化を含有する変種はまた、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの生物学的に活性な変種であると考えられる。加えて、スプライス変種も包含される。
【０２８７】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語はまた、化学的手段によって連結されるか、融合タンパク質として発現される、１または複数のいずれかの非修飾または修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド、あるいは他のいずれかのポリペプチド、タンパク質、炭水化物、ポリマー、小分子、リンカー、リガンドまたは他のいずれかの型の生物学的に活性な分子のＦＧＦ−２１ポリペプチドのヘテロダイマー、ホモダイマー、ヘテロマルチマー、またはホモマルチマー、ならびに、例えば、未だに生物学的活性を維持する、特定の欠失または他の修飾を含有するポリペプチドアナログを包含する。
【０２８８】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語はまた、１または複数のアミノ酸置換、挿入または欠失を含むＦＧＦ−２１ポリペプチドを包含する。例えば、本開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドは、所望により１または複数の非天然アミノ酸修飾と組み合わせてもよい、１または複数の天然アミノ酸を用いる修飾から構成されてもよい。アゴニスト活性を亢進し、ポリペプチドの溶解度を上げ、プロテアーゼ感受性を下げ、脱アミド化を減少させ、ポリペプチドをアンタゴニストに変換させ、免疫原性または毒性を減らし、あるいは精製または製造可能性を容易にする等（これらに限定されない）などの医薬安定性を調節し、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの１または複数の生物学的活性を調節する置換を含むが、これらに限定されない、ＦＧＦ−２１ポリペプチドの多種多様なアミノ酸位置での例示的な置換、挿入または欠失は、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドなる語が包含する。
【０２８９】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドの生物学的活性を調節する付加挿入、置換または欠失をさらに含む。例えば、その付加、置換または欠失は修飾ＦＧＦ−２１の１または複数の特性または活性を調節するかもしれない。例えば、該付加、置換または欠失はＦＧＦ−２１ポリペプチド受容体に対する親和性を調節し、循環半減期を調節し、治療半減期を調節し、該ポリペプチドの安定性を調節し、プロテアーゼによる切断を調節し、用量を調節し、放出または生物学的利用能を調節し、精製を容易にし、脱アミド化を減らし、貯蔵寿命を改善し、あるいは特定の投与経路を改善または改変するかもしれない。同様に、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、プロテアーゼ切断配列、反応基、抗体結合ドメイン（ＦＬＡＧまたはポリ−Ｈｉｓを含むが、限定されない）または他の親和性に基づく配列（ＦＬＡＧ、ポリ−Ｈｉｓ、ＧＳＴ等を含むが、限定されない）あるいはポリペプチドの検出（ＧＦＰを含むが、限定されない）、精製または他の特性を改善する連結分子（ビオチンを含むが、限定されない）を含んでもよい。
【０２９０】
「修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチド」なる語はまた、Ｆｃドメインなどの融合パートナーを介して形成されるホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ多量体、およびヘテロ多量体を、あるいは天然にてコードされないアミノ酸側鎖を介して直接的に連結されるものを含むが、限定されない、同じまたは異なる天然にてコードされないアミノ酸側鎖の、または天然にてコードされるアミノ酸側鎖のいずれかに連結される、またはリンカーを介して間接的に連結される、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ多量体、およびヘテロ多量体を包含する。例示的なリンカーとして、小型有機化合物、ポリ（エチレングリコール）またはポリデキストランなどの様々な長さの水溶性ポリマー、あるいは様々な長さのポリペプチドが挙げられるが、限定されない。
【０２９１】
いくつかの態様において、本明細書に記載の天然にてコードされないアミノ酸は、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ヒドラジン基、セミカルバジド基、アジド基、またはアルキン基を含んでもよい。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、カルボニル部分を含み、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジドまたはセミカルバジド部分を含む、リンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結される。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、アミド結合を通してリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結される、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジドまたはセミカルバジド部分を含む。
【０２９２】
いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、アジド部分を介してリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結される、アルキン部分を含む。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、アルキン部分を含むリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結される、アジド部分を含む。いくつかの態様において、１の天然にてコードされないアミノ酸は、アミド結合を介してリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結される、アジドまたはアルキン部分を含む。
【０２９３】
いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、オキシム結合を通してリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結される。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、オキシム結合を通してリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結され、ここで該オキシム結合はカルボニル基がアミノオキシ基と反応することで得られる構造を有する。いくつかの態様において、天然にてコードされないアミノ酸は、オキシム結合を通してリンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分に連結され、ここで該オキシム結合は該天然にてコードされないアミノ酸中に含有されるカルボニル基が該リンカー、ポリマー、生物学的に活性な分子、または半減期延長部分中に含有されるアミノオキシ基と反応することで得られる構造を有する。
【０２９４】
いくつかの態様において、本明細書に記載の修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、配列番号：３のアミノ酸配列を有する、野生型ヒトＦＧＦ−２１ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を有する。
【０２９５】
いくつかの態様において、修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ポリ（エチレングリコール）部分を含む水溶性ポリマーと連結した、少なくとも１つの天然にてコードされないアミノ酸を含む。いくつかの態様において、１または複数の天然にてコードされないアミノ酸は、修飾ＦＧＦ−２１にある１または複数の次の位置：位置１（すなわち、Ｎ−末端）の前に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２（すなわち、タンパク質のカルボキシル末端）に組み込まれる（配列番号：３に相当するアミノ酸位置）。
【０２９６】
いくつかの態様において、本明細書にて開示される医薬製剤中のＦＧＦ−２１ポリペプチドは、例えば、米国特許第９,２７３,１０６号；第９,４５８,２１４号；第９,７４４,２１３号；第８,５４１,３６９号；第８,１８８,０４０号；第９,１２０,８７１号；第９,８９５,４１７号；第９,２６６,９３５号；第６,７１６,６２６号；第４,９０４,５８４号；または第８,７２２,６２２号；米国特許公開番号２０１３／０２３１２７７；２００９／０３０５９８６；２０１１／０１９５８９５；２０１０／０２１６７１５；２００１／００１２６２８；２００４／０２５９７８０；２００５／０１７６６３１；２００７０２９３４３０；または２０１２／００３５０９９；あるいはＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６０４８９９９；ＷＯ２０１００６５４３９；ＷＯ２０１７０９３４６５；ＷＯ２００３０１１２１３；ＷＯ２００３０５９２７０；ＷＯ２００５０９１９４４；ＷＯ２００８１２１５６３；ＷＯ１９９９６７２９１、ＷＯ１９９９０３８８７、ＷＯ２０００２６３５４；またはＷＯ２０１７２２０７０６（それらのすべての内容を出典明示により本明細書の一部とする）にて記載される修飾ＦＧＦ−２１ポリペプチドである。
【０２９７】
Ｖ．  半減期延長部分
本開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドは、いくつかの態様にて、半減期延長部分である、異種部分を含み得る。いくつかの態様において、該半減期延長部分はポリペプチド部分であるのに対して、いくつかの別の態様では該半減期延長部分は非ポリペプチド部分である。いくつかの態様において、該ＦＧＦ−２１ポリペプチドは単一の半減期延長部分を含む。しかしながら、別の態様において、本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドは１つより多くの半減期延長部分を含み得る。
【０２９８】
半減期延長部分は非タンパク質性およびタンパク質性の半減期延長部分を含む。非タンパク質性の半減期延長部分は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの水溶性ポリマー、ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）、脂質、分岐または非分岐アシル基、分岐または非分岐Ｃ８−Ｃ３０アシル基、分岐または非分岐アルキル基、および分岐または非分岐Ｃ８−Ｃ３０アルキル基を包含する。タンパク質性の半減期延長部分は、例えば、血清アルブミン、トランスフェリン、アドネクチン（例えば、アルブミン−結合または薬物動態延長（ＰＫＥ）アドネクチン）、Ｆｃドメイン、およびＸＴＥＮおよびＰＡＳ（例えば、アミノ酸Ｐｒｏ、Ａｌａおよび／またはＳｅｒから構成される立体配座的に無秩序なポリペプチド配列）などの非構造ポリペプチド、ならびに上記したいずれかのフラグメントを包含する。
を包含する。
【０２９９】
ＦＧＦ−２１またはＦＧＦファミリーメンバーの結晶構造およびそのＦＧＦ受容体との相互作用の検査は、特定のアミノ酸残基が溶媒と完全にまたは部分的にアクセス可能である側鎖を有することを示し得る。これらの位置にある天然にてコードされないアミノ酸の側鎖は、タンパク質表面から離れる方向で、溶媒中に向いている可能性があり、かくして、例えば、水溶性ポリマーと結びついているかもしれない。
【０３００】
（ａ）免疫グロブリン定常領域またはその部分
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、免疫グロブリン定常領域またはその一部に連結されており、例えば、融合またはコンジュゲートされている。免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ（constant heavy）ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２等）と称されるドメインで構成される。そのイソ型（すなわち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）に応じて、定常領域は３または４個のＣＨドメインで構成され得る。いくつかのイソ型（例えば ＩｇＧ）の定常領域はまた、ヒンジ領域を含有する。Janewayら、2001, Immunobiology, Garland Publishing, N.Y., N.Y.。
【０３０１】
本開示の融合タンパク質を産生するための免疫グロブリン定常領域またはその一部は多くの異なる供給源から入手することができる。いくつかの態様において、免疫グロブリン定常領域またはその一部はヒト免疫グロブリンより由来する。しかしながら、免疫グロブリン定常領域またはその一部は、例えば、齧歯動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）またはヒト以外の霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む、もう一つ別の哺乳類種の免疫グロブリンより由来してもよいことが理解される。その上、免疫グロブリン定常領域またはその一部は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む、いずれかの免疫グロブリンのクラス、あるいはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む、いずれかの免疫グロブリンのイソ型より由来してもよい。１の態様において、ヒトイソ型ＩｇＧ１が用いられる。
【０３０２】
種々の免疫グロブリン定常領域の遺伝子配列（例えば、ヒト定常領域の遺伝子配列）は公的にアクセス可能な寄託された形態にて利用可能である。定常領域ドメイン配列は、特定のエフェクター機能を有するか（または特定のエフェクター機能を欠くか）、あるいは免疫原性を減らすのに特定の修飾があるかで選択され得る。抗体および抗体をコードする遺伝子の多数の配列は公開されており、適切なＩｇ定常領域の配列（例えば、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３配列、またはその一部）が当該分野にて認識される技法を用いてこれらの配列より誘導され得る。次に上記したいずれかの方法を用いて得られた遺伝物質を改変または合成して本開示のポリペプチドを得てもよい。本開示の範囲が定常領域のＤＮＡ配列の対立遺伝子、変種および変異を包含することが理解されよう。
【０３０３】
免疫グロブリン定常領域またはその一部の配列は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応および目的とするドメインを増幅するのに洗濯されるプライマーを用いてクローン化され得る。免疫グロブリン定常領域またはその一部の配列を抗体からクローン化するために、ｍＲＮＡをハイブリドーマ、脾臓、またはリンパ球から単離し、ＤＮＡに逆転写し、抗体遺伝子をＰＣＲで増幅させることができる。ＰＣＲ増幅方法は、米国特許第４,６８３,１９５号；第４,６８３,２０２号；第４,８００,１５９号；第４,９６５,１８８号にて；および、例えば、「PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications」Innisら編、Academic Press, San Diego, CA（1990）；Hoら1989. Gene 77:51；Horton ら1993. Methods Enzymol. 217:270）において詳細に記載される。ＰＣＲはコンセンサス定常領域プライマーによって、または公開された重鎖および軽鎖ＤＮＡおよびアミノ酸配列に基づくより特異的なプライマーによって開始されてもよい。上記されるように、ＰＣＲはまた、抗体の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡクローンを単離するのに使用され得る。この場合、ライブラリーをコンセンサスプライマーで、またはマウス定常領域プローブなどのより大きな相同的プローブでスクリーニングしてもよい。抗体遺伝子を増幅するのに適する多くのプライマーセットが当該分野にて知られている（例えば、精製された抗体のＮ−末端配列に基づく５’プライマー（BenharおよびPastan. 1994. Protein Engineering 7: 1509）；ｃＤＮＡ末端の迅速増幅（Ruberti, F.ら1994. J. Immunol. Methods 173: 33）；抗体リーダー配列（Larrickら1989 Biochem. Biophys. Res. Commun. 160: 1250））。抗体配列のクローニングは、Newmanら.、米国特許第５,６５８,５７０号（１９９５年１月２５日付け出願）においてさらに記載される。
【０３０４】
本明細書で使用される免疫グロブリン定常領域は、すべてのドメインおよびヒンジ領域またはその一部を包含し得る。一の態様において、免疫グロブリン定常領域またはその一部はＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびヒンジ領域、すなわち、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含む。
【０３０５】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」なる語は、天然免疫グロブリンのＦｃ領域に対応する、すなわち、その２つの重鎖の個々のＦｃドメインの二量体会合によって形成されるような、ポリペプチドの部分として定義される。天然Ｆｃ領域はもう一つ別のＦｃ領域とのホモ二量体を形成する。
【０３０６】
１の態様において、「Ｆｃ領域」は、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域で始まり（すなわち、重鎖定常領域の第１残基が１１４であるとして、ＩｇＧ中で残基２１６’）、抗体のＣ−末端で終える、単一の免疫グロブリン重鎖の部分をいう。従って、完全なＦｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。
【０３０７】
免疫グロブリン定常領域のＦｃ領域は、免疫グロブリンのイソ型に応じて、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメイン、ならびにヒンジ領域を包含することができる。免疫グロブリンのＦｃ領域を含む融合タンパク質は、安定性の増加、血清半減期の増加（Caponら.、1989, Nature 337: 525）、ならびに胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）などのＦｃ受容体との結合を含め、融合タンパク質に数種の望ましい特性を付与する（米国特許第６,０８６,８７５号、第６,４８５,７２６号、第６,０３０,６１３号；ＷＯ０３／０７７８３４；ＵＳ２００３−０２３５５３６Ａ１）。
【０３０８】
いくつかの態様において、「Ｆｃ領域」は、Ｆｃドメインの、またはＦｃドメイン由来のアミノ酸配列を含む。特定の態様において、Ｆｃ領域は、ヒンジ（例えば、上部、中間、および／または下部のヒンジ領域）ドメイン（ＥＵ番号付けによる抗体Ｆｃ領域のアミノ酸２１６−２３０について）、ＣＨ２ドメイン（ＥＵ番号付けによる抗体Ｆｃ領域のアミノ酸２３１−３４０について）、ＣＨ３ドメイン（ＥＵ番号付けによる抗体Ｆｃ領域のアミノ酸３４１−４３８について）、ＣＨ４ドメイン、あるいはその変種、部分またはフラグメントのうちの少なくとも１つを含む。他の態様において、Ｆｃ領域は完全なＦｃドメイン（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン）を含む。いくつかの態様において、Ｆｃ領域は、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）と融合したヒンジドメイン（またはその一部）、ＣＨ２ドメイン（またはその一部）と融合したヒンジドメイン（またはその一部）、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）と融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）、ヒンジドメイン（またはその一部）およびＣＨ３ドメイン（またはその一部）の両方と融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらより構成される。さらに別の態様において、Ｆｃ領域は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または部分）を欠く。特定の態様において、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号２２１〜４４７に対応するアミノ酸を含むか、構成される。
【０３０９】
本明細書においてＦ、Ｆ１またはＦ２と称されるＦｃドメインは、多数の異なる供給源より得ることができる。１の態様において、ポリペプチドのＦｃ領域はヒト免疫グロブリンに由来する。しかしながら、Ｆｃ領域は、例えば、齧歯動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）またはヒト以外の霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む、もう一つ別の哺乳類種の免疫グロブリンに由来してもよいことが理解される。その上、Ｆｃドメインまたはその一部のポリペプチドは、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む、いずれかの免疫グロブリンのクラス、あるいはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む、いずれかの免疫グロブリンのイソ型に由来してもよい。もう一つ別の態様において、ヒトイソ型ＩｇＧ１が用いられる。
【０３１０】
特定の態様において、Ｆｃ変種は、該野生型Ｆｃドメインを含むＦｃ領域によって付与される少なくとも１つのエフェクター機能にて変化（例えば、Ｆｃ領域の、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、またはＦｃγＲＩＩＩ）または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）との結合能の改善または減少、あるいは抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣＣ）を誘発する能力の改善または減少）を与える。他の態様において、Ｆｃ変種は操作されたシステイン残基を提供する。
【０３１１】
本開示のＦｃ領域は、エフェクター機能および／またはＦｃＲ結合において変化（例えば、強化または減少）を付与することが知られている、当該分野で認識されるＦｃ変種を使用してもよい。具体的には、該開示の結合分子は、例えば、国際ＰＣＴ公開  ＷＯ８８／０７０８９Ａ１、ＷＯ９６／１４３３９Ａ１、ＷＯ９８／０５７８７Ａ１、ＷＯ９８／２３２８９Ａ１、ＷＯ９９／５１６４２Ａ１、ＷＯ９９／５８５７２Ａ１、ＷＯ００／０９５６０Ａ２、ＷＯ００／３２７６７Ａ１、ＷＯ００／４２０７２Ａ２、ＷＯ０２／４４２１５Ａ２、ＷＯ０２／０６０９１９Ａ２、ＷＯ０３／０７４５６９Ａ２、ＷＯ０４／０１６７５０Ａ２、ＷＯ０４／０２９２０７Ａ２、ＷＯ０４／０３５７５２Ａ２、ＷＯ０４／０６３３５１Ａ２、ＷＯ０４／０７４４５５Ａ２、ＷＯ０４／０９９２４９Ａ２、ＷＯ０５／０４０２１７Ａ２、ＷＯ０４／０４４８５９、ＷＯ０５／０７０９６３Ａ１、ＷＯ０５／０７７９８１Ａ２、ＷＯ０５／０９２９２５Ａ２、ＷＯ０５／１２３７８０Ａ２、ＷＯ０６／０１９４４７Ａ１、ＷＯ０６／０４７３５０Ａ２、およびＷＯ０６／０８５９６７Ａ２；米国特許公開番号ＵＳ２００７／０２３１３２９、ＵＳ２００７／０２３１３２９、ＵＳ２００７／０２３７７６５、ＵＳ２００７／０２３７７６６、ＵＳ２００７／０２３７７６７、ＵＳ２００７／０２４３１８８、ＵＳ２００７０２４８６０３、ＵＳ２００７０２８６８５９、ＵＳ２００８００５７０５６；または米国特許第５,６４８,２６０号；第５,７３９,２７７号；第５,８３４,２５０号；第５,８６９,０４６号；第６,０９６,８７１号；第６,１２１,０２２号；第６,１９４,５５１号；第６,２４２,１９５号；第６,２７７,３７５号；第６,５２８,６２４号；第６,５３８,１２４号；第６,７３７,０５６号；第６,８２１,５０５号；第６,９９８,２５３号；第７,０８３,７８４号；第７,４０４,９５６号、および第７,３１７,０９１号において開示される、１または複数のアミノ酸位置での変化（例えば、置換）を包含し得る。１の態様において、特定の変化（例えば、当該分野にて開示される１または複数のアミノ酸の特定の置換）は、１または複数の開示されているアミノ酸位置でなされてもよい。もう一つ別の態様において、１または複数の開示されているアミノ酸位置で、異なる変化（例えば、当該分野にて開示される１または複数のアミノ酸位置での異なる置換）がなされてもよい。
【０３１２】
ＩｇＧのＦｃ領域は、部位特異的変異誘発等などの周知操作に従って、Ｆｃ受容体と結合するであろう、修飾ＩｇＧまたはＦｃフラグメントあるいはその部分を生じるように修飾され得る。かかる修飾は、Ｆｃ受容体接触部位から離れた修飾、ならびにＦｃ受容体との結合を維持するか、さらに強化する接触部位の範囲内での修飾を包含する。例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ（Ｆｃγ１）における次の単一アミノ酸残基：Ｐ２３８Ａ、Ｓ２３９Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｋ２４８Ａ、Ｄ２４９Ａ、Ｍ２５２Ａ、Ｔ２５６Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｔ２６０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｅ２６９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｅ２７２Ａ、Ｌ２７４Ａ、Ｎ２７６Ａ、Ｙ２７８Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｖ２８２Ａ、Ｅ２８３Ａ、Ｈ２８５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｔ２８９Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ａ、Ｅ２９３Ａ、Ｅ２９４Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｙ２９６Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｆ、Ｒ３０１Ａ、Ｖ３０３Ａ、Ｖ３０５Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｌ３０９Ａ、Ｑ３１１Ａ、Ｄ３１２Ａ、Ｎ３１５Ａ、Ｋ３１７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｓ３２４Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｑ、Ｐ３３１Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｔ３３５Ａ、Ｓ３３７Ａ、Ｋ３３８Ａ、Ｋ３４０Ａ、Ｑ３４２Ａ、Ｒ３４４Ａ、Ｅ３４５Ａ、Ｑ３４７Ａ、Ｒ３５５Ａ、Ｅ３５６Ａ、Ｍ３５８Ａ、Ｔ３５９Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｎ３６１Ａ、Ｑ３６２Ａ、Ｙ３７３Ａ、Ｓ３７５Ａ、Ｄ３７６Ａ、Ａ３７８Ｑ、Ｅ３８０Ａ、Ｅ３８２Ａ、Ｓ３８３Ａ、Ｎ３８４Ａ、Ｑ３８６Ａ、Ｅ３８８Ａ、Ｎ３８９Ａ、Ｎ３９０Ａ、Ｙ３９１Ｆ、Ｋ３９２Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｓ４００Ａ、Ｄ４０１Ａ、Ｄ４１３Ａ、Ｋ４１４Ａ、Ｒ４１６Ａ、Ｑ４１８Ａ、Ｑ４１９Ａ、Ｎ４２１Ａ、Ｖ４２２Ａ、Ｓ４２４Ａ、Ｅ４３０Ａ、Ｎ４３４Ａ、Ｔ４３７Ａ、Ｑ４３８Ａ、Ｋ４３９Ａ、Ｓ４４０Ａ、Ｓ４４４Ａ、およびＫ４４７Ａは、Ｆｃ受容体に対するＦｃ結合親和性を有意に喪失することなく、置換され得、ここで例えばＰ２３８Ａは番号２３８の位置にある野生型プロリンがアラニンで置換されていることを表す。一例として、特定の態様にてＮ２９７Ａ変異を取り入れ、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位を取り除く。アラニンに加えて、上記の位置で野生型アミノ酸の代わりに他のアミノ酸を用いることができる。変異をＦｃに導入し、１００個を超える天然のＦｃとは異なるＦｃ領域を生じさせてもよい。加えて、２、３またはそれ以上のこれらの個々の変異を組み合わせて一緒に導入され、数百以上のＦｃ領域を生じさせてもよい。その上、本開示の構築のＦｃ領域の１つが変異し、該構築の他のＦｃ領域が全く変異しないか、あるいはそれらの両方が変異するが、異なる変異であｔってもよい。
【０３１３】
特定の上記した変異はＦｃ領域に新しい機能を付与し得る。例えば、１の態様ではＮ２９７Ａを取り入れ、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位を取り除く。この変異の効果は、免疫原性を低下させ、それによってＦｃ領域の循環半減期を延ばし、Ｆｃ領域を、親和性を損なうことなく、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＩＡと結合できないようにすることである（Routledgeら 1995, Transplantation 60: 847；Friendら 1999, Transplantation 68: 1632；Shieldsら 1995, J. Biol. Chem. 276: 6591）。上記した変異から生じる新たな機能のさらなる例として、Ｆｃ受容体に対する親和性が、場合によっては、野生型の親和性を凌駕して増加するかもしれない。この親和性の増加は、「オン」割合の増加、「オフ」割合の減少、または「オン」割合の増加および「オフ」割合の減少の両方を反映するかもしれない。Ｆｃ受容体に対する親和性の増加を付与すると考えられる変異の例が、Ｔ２５６Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａを包含するが、これらに限定されない（Shieldsら 2001, J. Biol. Chem. 276:6591）。
【０３１４】
加えて、少なくとも３個のヒトＦｃガンマ受容体は、下部ヒンジ領域内にあるＩｇＧ上の結合部位、一般にはアミノ酸２３４−２３７を認識するようである。従って、新たな機能性の、および免疫原性が低下する可能性のもう一つ別の例が、例えばヒトＩｇＧ１「ＥＬＬＧ」のアミノ酸２３３-２３６をＩｇＧ２「ＰＶＡ」からの対応する配列（アミノ酸が１個欠失している）に置き換えることによるような、この領域を変異させることで生じるかもしれない。種々のエフェクター機能を媒介するＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩは、かかる変異が導入された場合、ＩｇＧ１と結合しないであろう。WardおよびGhetie 1995, Therapeutic Immunology 2: 77およびArmourら 1999, Eur. J. Immunol. 29: 2613。
【０３１５】
特定の態様において、免疫グロブリン定常領域またはその一部はヘミグリコシル化されている。例えば、２個のＦｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーを含む融合タンパク質は、第１のグリコシル化Ｆｃ領域（例えば、グリコシル化ＣＨ２領域）および第２の非グリコシル化Ｆｃ領域（例えば、非グリコシル化ＣＨ２領域）を含有し得る。１の態様において、リンカーをグリコシル化と非グリコシル化のＦｃ領域の間に入れてもよい。もう一つ別の態様において、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーは完全にグリコシル化され、すなわち、すべてのＦｃ領域がグリコシル化される。他の態様において、Ｆｃ領域は非グリコシル化されてもよく、すなわち、Ｆｃ部分のいずれもグリコシル化されない。
【０３１６】
特定の態様において、本開示の融合タンパク質は、Ｉｇ定常領域の抗原非依存性エフェクター機能、特にタンパク質の循環半減期を改変する、免疫グロブリン定常領域またはその一部（例えば、Ｆｃ変種）へのアミノ酸置換を含む。
【０３１７】
かかるタンパク質は、これらの置換を欠くタンパク質と比べた場合に、Ｆｃ受容体との結合が増加するか、減少するかのいずれかを示し、従って、血清中の半減期が、各々、増加または減少する。Ｆｃ受容体に対する親和性の改善したＦｃ変種はより長い血清中半減期を有すると考えられ、かかる分子は投与されるポリペプチドの長い半減期が望ましい場合の、例えば、慢性疾患または障害を治療するための、哺乳動物の治療方法において有用な用途がある（例えば、米国特許第７,３４８,００４号、第７,４０４,９５６号、および第７,８６２,８２０号を参照のこと）。対照的に、Ｆｃ受容体結合親和性の減少したＦｃ変種は、より短い半減期を有すると考えられ、かかる分子はまた、例えば、短縮された循環時間が有利である場合に、例えば、インビボでの画像診断用に、または出発ポリペプチドが循環中に長期間にわたって存在する場合に毒性の副作用がある状況にて、哺乳動物に投与するのに有用である。Ｆｃ受容体結合親和性の減少したＦｃ変種はまた、胎盤を横切る可能性が低く、かくして妊婦での疾患または障害の治療にて有用である。
【０３１８】
加えて、Ｆｃ受容体結合親和性の減少が望ましい他の用途として、脳、腎臓、および／または肝臓の局在化が望ましいそれらの用途が挙げられる。１の例示的な態様において、本開示の融合タンパク質は、血管系から腎糸球体の上皮を横切る輸送の減少を示す。もう一つ別の態様において、本開示の融合タンパク質は、脳から血管空間に血液脳関門（ＢＢＢ）を横切る輸送の減少を示す。１の態様において、Ｆｃ受容体結合の改変したタンパク質は、Ｉｇ定常領域の「Ｆｃ受容体結合ループ」の範囲内に、１または複数のアミノ酸置換を有する、少なくとも１個のＦｃ領域（例えば、１または２個のＦｃ領域）を含む。Ｆｃ受容体結合ループは、野生型の全長のＦｃ領域のアミノ酸残基２８０−２９９（ＥＵ番号付けによる）で構成される。
【０３１９】
他の態様において、Ｆｃ受容体結合親和性の改変した、本開示のＩｇ定常領域またはその一部は、次のＥＵ位置：２５６、２７７−２８１、２８３−２８８、３０３−３０９、３１３、３３８、３４２、３７６、３８１、３８４、３８５、３８７、４３４（例えば、Ｎ４３４ＡまたはＮ４３４Ｋ）、および４３８のいずれか１つに相当するアミノ酸位置で１または複数のアミノ酸置換を有する、少なくとも１つのＦｃ領域を含む。Ｆｃ受容体結合活性を改変させる例示的なアミノ酸置換がＰＣＴ国際公開ＷＯ０５／０４７３２７にて開示される。
【０３２０】
（ｂ）アルブミンあるいはそのフラグメントまたは変種
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、アルブミンまたはその機能的フラグメントに連結されており、例えば、融合またはコンジュゲートされている。
【０３２１】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、またはＨＡ）、その全長形にて６０９個のアミノ酸のタンパク質は、血清の浸透圧にて有意な割合で関与し、また内因性および外因性リガンドの担体としても機能する。本明細書で使用される場合の「アルブミン」なる語は、全長のアルブミン、あるいはその機能的フラグメント、変種、誘導体、またはアナログを包含する。
【０３２２】
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結した半減期延長部分がアルブミンあるいはそのフラグメントまたは変種であり、それはＦＧＦ−２１ポリペプチドの半減期を延長させる（あるいは延長能を有する）。アルブミンあるいはそのフラグメントまたは変種のさらなる例が米国特許公開番号２００８／０１９４４８１  Ａ１、２００８／０００４２０６  Ａ１、２００８／０１６１２４３  Ａ１、２００８／０２６１８７７  Ａ１、ｏｒ  ２００８／０１５３７５１  Ａ１またはＰＣＴ出願公開番号２００８／０３３４１３  Ａ２、２００９／０５８３２２  Ａ１、または２００７／０２１４９４  Ａ２に開示される。
【０３２３】
（ｃ）アルブミン結合部分
特定の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結する、例えば、融合またはコンジュゲートする半減期延長部分が、アルブミン結合部分であり、それはアルブミン結合ペプチド、細菌アルブミン結合ドメイン、アルブミン結合抗体フラグメント、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。例えば、アルブミン結合タンパク質は、細菌アルブミン結合タンパク質、抗体またはドメイン抗体を含む抗体フラグメントであり得る（米国特許第６,６９６,２４５を参照のこと）。例えば、アルブミン結合タンパク質は、連鎖球菌タンパク質Ｇの１つなどの細菌アルブミン結合ドメインであり得る（Konig, T.およびSkerra, A.（1998） J. Immunol. Methods 218, 73-83）。コンジュゲーションパートナーとして使用され得るアルブミン結合ペプチドの他の例が、例えば、Ｃｙｓ−Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｃｙｓコンセンサス配列を有するものであり、ここで米国特許出願２００３／００６９３９５またはDennisら（Dennisら（2002） J. Biol. Chem. 277, 35035-35043）に記載されるように、Ｘａａ１はＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ２はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；Ｘａａ３はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ４はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒである。
【０３２４】
（ｄ）ＰＡＳ配列
他の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結する、例えば、融合またはコンジュゲートする半減期延長部分がＰＡＳ配列である。「ＰＡＳ配列」は、本明細書で使用される場合、主にアラニンおよびセリン残基を含むか、または主にアラニン、セリンおよびプロリン残基を含むアミノ酸配列を意味し、該アミノ酸配列は生理学的条件下でランダムコイル構造を形成する。従って、ＰＡＳ配列は、融合タンパク質における異種部分の一部として用いることのできる、アラニン、セリンおよびプロリンを含むか、本質的にそれらからなるか、または構成される、ビルディングブロック、アミノ酸ポリマー、または配列カセットである。それでも、当業者は、アラニン、セリンおよびプロリン以外の残基がＰＡＳ配列における微量成分として付加された場合に、アミノ酸ポリマーもまた、ランダムコイル構造を形成し得ることを認識している。「微量成分」なる語は、本明細書で使用される場合、アラニン、セリンおよびプロリン以外のアミノ酸が、ある程度、例えば、約１２％まで、すなわち、ＰＡＳ配列の１００個のアミノ酸の約１２個まで、約１０％まで、すなわちＰＡＳ配列の１００個のアミノ酸の約１０個まで、約９％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約９個まで、約８％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約８個まで、約６％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約６個まで、約５％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約５個まで、約４％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約４個まで、約３％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約３個まで、約２％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約２個まで、約１％まで、すなわち１００個のアミノ酸の約１個まＰＡＳ配列に付加されてもよい。アラニン、セリンおよびプロリンと異なるアミノ酸は、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＶａｌからなる群より選択され得る。
【０３２５】
生理学的条件下、ＰＡＳ配列ストレッチはランダムコイル構造を形成し、それによってＦＧＦ−２１ポリペプチドに対するインビボおよび／またはインビトロでの安定性の増加を媒介し得る。ランダムコイルドメインはそれ自体では安定した構造または機能を採用していないため、ＦＧＦ−２１によって媒介される生物学的活性が本質的に保存される。他の態様において、ランダムコイルドメインを形成するＰＡＳ配列は、特に血漿中でのタンパク質分解、免疫原性、等電点／静電挙動、細胞表面受容体との結合または内在化に関して、生物学的に不活性であるが、それでも生分解性であり、これはＰＥＧなどの合成ポリマーよりも明白な利点を提供する。
【０３２６】
例示的なＰＡＳ配列が、例えば、米国特許公開２０１０／０２９２１３０  Ａ１およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ  ２００８／１５５１３４  Ａ１（その両方を出典明示により本明細書の一部とする）にて提供される。
【０３２７】
（ｅ）ＨＡＰ配列
特定の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、グリシンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）である。ＨＡＰ配列はグリシンの反復配列を含み、それは長さが少なくとも５０個のアミノ酸、少なくとも１００個のアミノ酸、１２０個のアミノ酸、１４０個のアミノ酸、１６０個のアミノ酸、１８０個のアミノ酸、２００個のアミノ酸、２５０個のアミノ酸、３００個のアミノ酸、３５０個のアミノ酸、４００個のアミノ酸、４５０個のアミノ酸、または５００個のアミノ酸であり得る。
【０３２８】
１の態様において、ＨＡＰ配列は、該ＨＡＰ配列に融合または連結した部分の半減期の延長能を有する。ＨＡＰ配列の非限定的な例として、限定されないが、（Ｇｌｙ）ｎ、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎまたはＳ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎが挙げられ、ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。１の態様において、ｎは２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０である。もう一つ別の態様において、ｎは５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または２００である。
【０３２９】
（ｆ）トランスフェリンまたはそのフラグメント
特定の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、トランスフェリンまたはそのフラグメントである。本開示の融合タンパク質を製造するのにいずれのトランスフェリンを使用してもよい。一例として、野生型ヒトＴｆ（Ｔｆ）は、２つの主たるドメイン、Ｎ（約３３０アミノ酸）とＣ（約３４０アミノ酸）を有する約７５ＫＤａ（グリコシル化を考慮しない）の６７９アミノ酸タンパク質であり、遺伝子重複に由来するようである。GenBank accession numbers NM001063、XM002793、M12530、XM039845、XM 039847およびS95936（www.ncbi.nlm.nih.gov/）を参照のこと。トランスフェリンは２つのドメイン、ＮドメインとＣドメインを含む。Ｎドメインは２つのサブドメイン、Ｎ１ドメインとＮ２ドメインを含み、Ｃドメインは２つのサブドメイン、Ｃ１ドメインとＣ２ドメインを含む。
【０３３０】
１の態様において、融合タンパク質のトランスフェリン部分はトランスフェリンスプライス変種を含む。一例では、トランスフェリンスプライス変種は、ヒトトランスフェリンのスプライス変種、例えば、Genbank Accession AAA61140であり得る。もう一つ別の態様において、融合タンパク質のトランスフェリン部分は、トランスフェリン配列の１または複数のドメイン、例えば、Ｎドメイン、Ｃドメイン、Ｎ１ドメイン、Ｎ２ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメインまたはそれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０３３１】
（ｇ）ポリマー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
他の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、またはポリビニルアルコールを含むが、これらに限定されない、当該分野にて公知の可溶性ポリマーである。本開示のＦＧＦ−２１ポリペプチドの化学的に修飾された誘導体は、ポリペプチドの溶解度、安定性および循環時間の増加、または免疫原性の低下などの付加的な利点を提供し得る（米国特許第４,１７９,３３７を参照のこと）。可溶性ポリマーは、ＦＧＦ−２１ポリペプチド内にあるいずれかの位置に、またはそのＮ−またはＣ−末端に結合し得る、該可溶性ポリマーは、ＦＧＦ−２１ポリペプチド配列内のランダムな位置で、または該ＦＧＦ−２１ポリペプチド内の所定の位置で結合でき、１、２、３またはそれ以上の結合した可溶性ポリマー部分を含んでもよい。いくつかの態様において、該ポリマーは天然に存在するアミノ酸の側鎖に結合する。他の態様において、該ポリマーは、天然にてコードされないアミノ酸、例えば、パラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンなどのフェニルアラニン誘導体の側鎖に結合する。
【０３３２】
可溶性ポリマーはいずれの分子量とすることもでき、分岐または非分岐とすることもできる。ＰＥＧでは、１の態様にて、分子量は、取り扱いおよび製造を容易にするために約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａである。いくつかの態様において、可溶性ポリマー、例えば、ＰＥＧの分子量は約３０ｋＤａである。所望する特性（例えば、所望の徐放性の持続期間、あるならば、生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易性、抗原性の程度または欠如、およびポリエチレングリコールのタンパク質またはアナログに対する他の既知の作用）に応じて、他の大きさを用いてもよい。例えば、該ＰＥＧは、約２００、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０,０００、１０,５００、１１,０００、１１,５００、１２,０００、１２,５００、１３,０００、１３,５００、１４,０００、１４,５００、１５,０００、１５,５００、１６,０００、１６,５００、１７,０００、１７,５００、１８,０００、１８,５００、１９,０００、１９,５００、２０,０００、２５,０００、３０,０００、３５,０００、４０,０００、４５,０００、５０,０００、５５,０００、６０,０００、６５,０００、７０,０００、７５,０００、８０,０００、８５,０００、９０,０００、９５,０００、または１００,０００Ｄａの平均分子量を有する。
【０３３３】
いくつかの態様において、ＰＥＧは分岐構造を有してもよい。分岐したＰＥＧが、例えば、米国特許第５,６４３,５７５；Morpurgoら、Appl. Biochem. Biotechnol. 56: 59-72（1996）；Vorobjevら、Nucleosides Nucleotides 18: 2745-2７５0（1999）；およびCalicetiら、Bioconjug. Chem. 10: 638-646（1999）に記載される。
【０３３４】
ＦＧＦ−２１ポリペプチドと結合したＰＥＧ部分の数も変化し得る。例えば、本開示のＰＥＧ化タンパク質は、平均して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０個またはそれ以上のＰＥＧ分子に連結され得る。同様に、平均置換度は、タンパク質分子に付きＰＥＧ部分が１−３、２−４、３−５、４−６、５−７、６−８、７−９、８−１０、９−１１、１０−１２、１１−１３、１２−１４、１３−１５、１４−１６、１５−１７、１６−１８、１７−１９、または１８−２０個などの範囲内にあってもよい。置換度を測定する方法が、例えば、Delgadoら、Crit. Rev. Thera. Drug Carrier Sys. 9: 249-３０4（1992）に開示されている。
【０３３５】
他の態様において、本開示の製剤にて使用されるＦＧＦ−２１ポリペプチドは、１または複数のポリマーにコンジュゲートされる。該ポリマーは水溶性であって、ＦＧＦ−２１ポリペプチドまたは該ＦＧＦ−２１ポリペプチドにコンジュゲートした他の部分と共有結合または非共有結合し得る。該ポリマーの非限定例は、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、またはポリ（アクリルオキシモルホリン）であり得る。
【０３３６】
（ｈ）ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）
特定の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）またはその誘導体である。ＨＥＳは天然に存在するアミロペクチンの誘導体であり、アルファ−アミラーゼにより体内で分解される。ＨＥＳは炭水化物ポリマーのアミロペクチンの置換誘導体であり、トウモロコシ澱粉中に９５重量％までの濃度で存在する。ＨＥＳは有利な生物学的特性を示し、血液容量置換剤として、クリニックでの血液希釈療法にて使用される（Sommermeyerら、Krankenhauspharmazie, 8(8）, 271-278（1987）；およびWeidlerら、Arzneim.-Forschung/Drug Res., 41, 494-498（1991））。
【０３３７】
アミロペクチンは、その主鎖にアルファ−１,４−グルコシド結合が存在し、分岐部位にてアルファ−１,６−グルコシド結合が見られる、グルコース部分を含有する。この分子の物理化学的特性は、主に、グルコシド結合の型によって決定される。アルファ−１,４−グルコシド結合のニック（nicked）に起因して、ターンに付き約６個のグルコースモノマーのあるらせん構造が産生される。該ポリマーの物理化学的ならびに生化学的特性は置換により修飾され得る。ヒドロキシエチル基の導入はアルカリ性ヒドロキシエチル化を介して達成され得る。反応条件を適合させることにより、ヒドロキシエチル化に関して、非置換グルコースモノマーにある各ヒドロキシ基の異なる反応性を利用することが可能である。このことに起因して、当業者は限られた範囲で置換パターンに影響を及ぼすことができる。
【０３３８】
ＨＥＳは、主として、分子量分布および置換度によって特徴付けられる。ＤＳと称される、置換度は、モル置換に関連し、当業者に公知である。上掲の、Sommermeyerら、Krankenhauspharmazie, 8(8）, 271-278（1987）、特に273頁を参照のこと。 
【０３３９】
一の態様において、ＨＥＳは、平均分子量（重量平均）が１〜３００ｋＤ、２〜２００ｋＤ、３〜１００ｋＤ、または４〜７０ｋＤである。ヒドロキシエチル澱粉はさらに、ヒドロキシエチル基に関して、０.１〜３、好ましくは０.１〜２、より好ましくは０.１〜０.９、好ましくは０.１〜０.８のモル置換度を示し、Ｃ２とＣ６の間の置換の割合が２〜２０の範囲内とすることができる。平均分子量が約１３０ｋＤである、非限定的な例のＨＥＳは、置換度が０.２、０.３、０.４、０.５、０.６、０.７、または０.８などの０.２〜０.８、好ましくは０.４、０.５、０.６、または０.７などの０.４〜０.７であるＨＥＳである。特定の態様において、平均分子量が約１３０ｋＤであるＨＥＳは、Fresenius由来のVoluven（登録商標）である。Voluven（登録商標）は、血液量減少の治療および予防のために治療適応症にて使用される、例えば容量置換に利用される人工コロイドである。Voluven（登録商標）の特性は、平均分子量が１３０,０００＋／−２０,０００Ｄであり、モル置換度が０.４であって、Ｃ２：Ｃ６の割合が約９：１である。他の態様において、ヒドロキシエチル澱粉の平均分子量の範囲は、例えば、４〜７０ｋＤ、または１０〜７０ｋＤ、または１２〜７０ｋＤ、または１８〜７０ｋＤ、または５０〜７０ｋＤ、または４〜５０ｋＤ、または１０〜５０ｋＤ、または１２〜５０ｋＤ、または１８〜５０ｋＤ、または４〜１８ｋＤ、または１０〜１８ｋＤ、または１２〜１８ｋＤ、または４〜１２ｋＤ、または１０〜１２ｋＤ、または４〜１０ｋＤである。さらに別の態様において、利用されるヒドロキシエチル澱粉の平均分子量は、約１０ｋＤなどの４ｋＤより上で７０ｋＤ未満の範囲、または９〜１０ｋＤ、または１０〜１１ｋＤ、または９〜１１ｋＤの範囲、または約１２ｋＤ、あるいは１１〜１２ｋＤ、または１２〜１３ｋＤ、または１１〜１３ｋＤの範囲、または約１８ｋＤ、あるいは１７〜１８ｋＤ、または１８〜１９ｋＤ、または１７〜１９ｋＤの範囲、または約３０ｋＤ、あるいは２９〜３０ｋＤ、または３０〜３１ｋＤの範囲、または約５０ｋＤ、あるいは４９〜５０ｋＤ、または５０〜５１ｋＤ、または４９〜５１ｋＤの範囲にある。
【０３４０】
特定の態様において、半減期延長部分は、平均分子量が異なり、および／または置換度が異なり、および／またはＣ２：Ｃ６置換の割合が異なる、ＨＥＳの混合物であり得る。従って、平均分子量が異なり、置換度が異なり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が異なるか、または平均分子量が異なり、置換度が異なり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が同じか略同じであるか、または平均分子量が異なり、置換度が同じか略同じであり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が異なるか、または平均分子量が同じか略同じであり、置換度が異なり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が異なるか、または平均分子量が異なり、置換度が同じか略同じであり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が同じか略同じであるか、または平均分子量が同じか略同じであり、置換度が異なり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が同じか略同じであるか、または平均分子量が同じか略同じであり、置換度が同じか略同じであり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が異なるかるか、あるいは平均分子量が略同じであり、置換度が略同じであり、Ｃ２：Ｃ６置換の割合が略同じである、ＨＥＳの混合物を利用してもよい。
【０３４１】
（ｉ）ポリシアル酸（ＰＳＡ）
特定の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、ポリシアル酸（ＰＳＡ）またはその誘導体である。ＰＳＡは、特定の細菌株によって、哺乳動物の特定の細胞中にて産生されるシアル酸の天然にて存在する非分岐ポリマーである。Roth J.ら、（1993）in Polysialic Acid: From Microbes to Man、Roth J., Rutishauser U., Troy F. A.編（Birkhauser Verlag, Basel, Switzerland）、pp 335-348。それらは、酸加水分解の制限によるか、ノイラミニダーゼによる消化によって、あるいはポリマーの天然での細菌由来の形態の分画によって、シアル酸残基がｎ＝約８０以上から、ｎ＝２まで降下した種々の重合度にて産生され得る。
【０３４２】
異なるポリシアル酸の組成はまた、ホモポリマー形態、すなわち、イー・コリ菌株Ｋ１および群Ｂ髄膜炎菌の莢膜多糖を含むアルファ−２,８−結合ポリシアル酸があるように変化し、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）の胚型においても見いだされる。イー・コリ菌株Ｋ９２およびN.meningitidisの群Ｃ多糖が交互にあるアルファ−２,８−、アルファ−２,９−ポリシアル酸などの、ヘテロポリマーの形態も存在する。シアル酸はN.meningitidisの群Ｗ１３５または群Ｙなどのシアル酸以外のモノマーとの交互コポリマーにて見いだされることがある。ポリシアル酸は、病原菌による免疫系および補体系の回避、胎児の発育中の未成熟神経細胞のグリア接着の調整を含む、重要な生物学的機能を有するが（ここで、該ポリマーには抗接着機能がある）（ChoおよびTroy、P.N.A.S.、USA, 91（1994）11427-11431）、哺乳動物においてポリシアル酸に対して既知の受容体は存在しない。イー・コリ菌株Ｋ１のアルファ−２,８−結合ポリシアル酸は「コロミン酸」としても知られており、本開示を例証するのに（様々な長さにて）使用される。
【０３４３】
ポリシアル酸をポリペプチドに結合またはコンジュゲートするための様々な方法が記載される（例えば、米国特許第５,８４６,９５１号；ＷＯ−Ａ−０１８７９２２、およびＵＳ２００７／０１９１５９７  Ａ１を参照のこと）。
【０３４４】
（ｊ）ＸＴＥＮ配列
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、ＸＴＥＮ配列である。本明細書にて使用される「ＸＴＥＮ配列」は、生理学的条件下で低度であるか、二次または三次構造を有しない配列を有する、主に小型親水性アミノ酸から構成される天然にて存在しない、実質的に非反復配列の延長した長さのポリペプチドをいう。ＸＴＥＮは、融合タンパク質のパートナーとして、ＦＧＦ−２１ポリペプチドと連結して融合タンパク質を産生する場合に、特定の望ましい薬物動態学的、物理化学的および薬学的特性を付与する、担体として供し得る。かかる望ましい特性は、薬物動態パラメーターおよび溶解特性の強化を含むが、これらに限定されない。
【０３４５】
いくつかの態様において、本開示のＸＴＥＮ配列は、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１２００、１４００、１６００、１８００、または２０００個よりも多くのアミノ酸残基を有するペプチドまたはポリペプチドである。特定の態様において、ＸＴＥＮは、約２０個より多く、約３０００個までのアミノ酸残基、約３０個より多く、約２５００個までの残基、約４０個より多く、約２０００個までの残基、約５０個より多く、約１５００個までの残基、約６０個より多く、約１０００個までの残基、約７０個より多く、約９００個までの残基、約８０個より多く、約８００個までの残基、約９０個より多く、約７００個までの残基、約１００個より多く、約６００個までの残基、約１１０個より多く、約５００個までの残基、または約１２０個より多く、約４００個までの残基を有するペプチドまたはポリペプチドである。
【０３４６】
本開示のＸＴＥＮ配列は、９ないし１４個のアミノ酸残基の１または複数の配列モチーフ、あるいはその配列モチーフと少なくとも８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有することができ、ここでそのモチーフは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）からなる群より選択される４ないし６種のアミノ酸を含むか、本質的にそれらからなるか、または構成される。米国２０１０−０２３９５５４  Ａ１を参照のこと。
【０３４７】
いくつかの態様において、ＸＴＥＮ配列は、ＡＤモチーフファミリー、またはＡＥモチーフファミリー、またはＡＦモチーフファミリー、またはＡＧモチーフファミリー、またはＡＭモチーフファミリー、またはＡＱモチーフファミリー、またはＢＣモチーフファミリー、またはＢＤモチーフファミリーの複数の単位の非重複配列モチーフを含み、その得られるＸＴＥＮは一連の相同性を示す。他の態様において、ＸＴＥＮは２種以上のモチーフファミリーから由来の複数の単位のモチーフ配列を含む。これらの配列は、下記にてより詳細に記載される、モチーフのアミノ酸組成によって付与される、所望の物理的／化学的特性（正味電荷、親水性、二次構造の欠如、または反復性の欠如を含む）を達成するように選択され得る。他の態様において、ＸＴＥＮに組み込まれるモチーフを選択し、本明細書に記載の方法を用いて組み立て、約３６〜約３０００個のアミノ酸残基を得ることができる。
【０３４８】
さらなる態様において、本開示にて使用されるＸＴＥＮ配列は、本開示の融合タンパク質の物理的または化学的特性、例えば、薬物動態に影響を与える。本開示にて使用されるＸＴＥＮ配列は、１または複数の次の有利な特性：配座柔軟性、水可溶性の強化、高度なプロテアーゼ耐性、低免疫原性、哺乳動物受容体との低結合、または流体力学（またはストークス）半径の増大を示し得る。
【０３４９】
いくつかの態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結されるＸＴＥＮ配列は、終末半減期をより長くする、または曲線下面積（ＡＵＣ）を増大させるなどの薬物動態特性を増加させることができ、その結果、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ＸＴＥＮ不含の対応するＦＧＦ−２１ポリペプチドと比べて、長期間にわたってインビボにて留まる。さらなる態様において、本明細書にて開示されるＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結されるＸＴＥＮ配列は、終末半減期をより長くする、または曲線下面積（ＡＵＣ）を増大させるなどの薬物動態特性を増加させることができ、その結果、ＦＧＦ−２１ポリペプチドは、ＸＴＥＮ不含の対応するＦＧＦ−２１ポリペプチドと比べて、長期間にわたってインビボにて留まる。
【０３５０】
種々の方法およびアッセイは、ＸＴＥＮ配列を含むタンパク質の物理的／化学的特性を測定するのに利用され得る。かかる方法は、以下に限定されないが、分析遠心分離法、ＥＰＲ、ＨＰＬＣ−イオン交換法、ＨＰＬＣ−サイズ排除法、ＨＰＬＣ−逆相法、光散乱法、キャピラリー電気泳動法、環状二色法、示差走査熱量測定法、蛍光法、ＨＰＬＣ−イオン交換法、ＨＰＬＣ−サイズ排除法、ＩＲ、ＮＭＲ、ラマン分光法、屈折率測定法、およびＵＶ／可視分光法を包含する。さらなる方法はAmauら、Prot Expr and Purif 48、1-13（2006）に開示される。
【０３５１】
本開示に従って使用され得るＸＴＥＮ配列のさらなる例は、米国特許公開番号２０１０／０２３９５５４  Ａ１、２０１０／０３２３９５６  Ａ１、２０１１／００４６０６０  Ａ１、２０１１／００４６０６１  Ａ１、２０１１／００７７１９９  Ａ１、または２０１１／０１７２１４６  Ａ１、あるいは国際特許公開番号ＷＯ  ２０１００９１１２２  Ａ１、ＷＯ  ２０１０１４４５０２  Ａ２、ＷＯ  ２０１０１４４５０８  Ａ１、ＷＯ  ２０１１０２８２２８  Ａ１、ＷＯ  ２０１１０２８２２９  Ａ１、またはＷＯ  ２０１１０２８３４４  Ａ２に開示され、そのすべてを出典明示により本明細書の一部とする。
【０３５２】
（ｋ）免疫グロブリン結合ペプチド（またはポリペプチド）
特定の態様において、ＦＧＦ−２１ポリペプチドに連結される、例えば、融合またはコンジュゲートされる半減期延長部分は、免疫グロブリン結合ペプチドである。該免疫グロブリン結合ペプチドはＦｃ領域と結合することができ、本明細書に記載の融合タンパク質の半減期を改善し得る。
【０３５３】
いくつかの態様において、本開示に有用な免疫グロブリン結合ペプチドは、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００個よりも多くのアミノ酸残基を有するペプチドまたはポリペプチドである。
【０３５４】
いくつかの態様において、本開示に有用な免疫グロブリン結合ペプチドは、１３−量体のＩｇＧ−Ｆｃドメイン結合ペプチド（ＩｇＧＢＰ）を含む。DeLano WLら、（2000） Science 287：1279-283。他の態様において、本開示に有用な免疫グロブリン結合ペプチドは、米国特許公開番号２０１７０３３４９５４、米国特許公開番号２０１７０２１０７７７、またはＰＣＴ公開番号ＷＯ／２０１７／０６９１５８において開示されるペプチドを含む。
【０３５５】
ＶＩ．  製造品およびキット
本開示はまた、（ｉ）本明細書に開示のＦＧＦ−２１ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１などの修飾ＦＧＦ−２１）を含むＦＧＦ−２１医薬製剤、および（ｉｉ）使用説明書を含む、製品または製造物またはキットを提供する。製造品は容器を含み得る。適切な容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジおよび試験管が挙げられる。該容器は、ガラス、プラスチックまたは金属などの様々な材料より形成されてもよい。該容器は、ＦＧＦ−２１医薬製剤、例えば、液体製剤を保持する。
【０３５６】
容器上の、または容器に付随するラベルは、復元および／または使用のための指示を示し得る。例えば、該ラベルはＦＧＦ−２１医薬製剤が上記のようなタンパク質濃度に希釈されてもよいことを示し得る。該ラベルはさらに、皮下製剤が皮下投与に有用であるか、皮下投与を意図することを示し得る。
【０３５７】
製剤を保持する容器は、例えば、皮下製剤の反復投与（例えば、２〜６回以上の投与）を可能とする複数回使用バイアルであり得る。あるいはまた、該容器は、例えば皮下製剤を含有する予め充填されたシリンジであってもよい。
【０３５８】
製造品またはキットはさらに、例えば、溶媒を含む第２の容器を含んでもよい。製造品はさらに、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明書付きのパッケージインサートを含む、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
【０３５９】
概要および要約のセクションではなく、発明を実施するための形態のセクションは、特許請求の範囲を解釈するのに用いられるのを意図とすることを理解すべきである。概要および要約セクションは、本発明者が予想するような、本開示のすべてではないが、１または複数の例示的な態様を記載することができ、かくして本開示および添付した特許請求の範囲を決して制限することを意図するものではない。
【０３６０】
本開示は、特定の機能およびその関係の実施を説明する機能的構成要素の助けを借りて上記されてきた。これらの機能的構成要素の境界は記載の便宜上で本明細書にて任意に定義されている。特定の機能およびその関係が適切に実行される限り、代わりの境界を定めることができる。
【０３６１】
特定の態様についての上記の記載は本開示の一般的特性を完全に明らかにし、当該分野の技術の範囲内にある知識を適用することで、第三者は、過度の実験を行うことなく、本開示の一般的概念から逸脱することなく、かかる特定の態様を容易に修飾し、および／またはそのための様々な用途に適応することができるであろう。かくして、かかる適応および修飾は、本明細書にて提示される教示および指導に基づいて、開示された態様を意味し、それと均等の範囲内にあるものとする。本明細書の用語は説明を目的とし、制限を目的とするものではなく、本明細書の用語は教示および指導を考慮して当業者により解釈されるべきであることを理解すべきである。
【０３６２】
本開示の幅および範囲は、上記のいずれかの例示的態様により制限されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびその均等の範囲に従ってのみ定義されるべきである。 
【実施例】
【０３６３】
実施例１
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１製剤の開発
初期の研究では、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１は、２０ｍＭトリス、２５０ｍＭシュークロース、ｐＨ８.３中に７.５ｍｇ／ｍＬで処方された。この製剤で観察された高い脱アミド化速度により、医薬品は−２０℃で凍結させて貯蔵することが必要不可欠となった。かくして、医薬品の２〜８℃での貯蔵を可能とする、すぐに使用される（ＲＴＵ）製剤を開発するのに、さらなる作業がなされた。
【０３６４】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１（配列番号：２）は、直線状の３０ｋＤａのＰＥＧ部分を修飾ＦＧＦ−２１（配列番号：１）に部位特異的方法で結合させることで製造された。部位特異的ＰＥＧ化を達成するのに、活性化ＰＥＧを、当該分野にて既知の方法により、ＦＧＦ−２１分子の１０９位にある非天然アミノ酸、パラ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡＦ）と反応させ、化学的に安定したオキシム連結のＰＥＧ−タンパク質コンジュゲートを形成した。
【０３６５】
製剤のｐＨが低いと、分子の凝集速度が増大することが分かり、その一方で製剤のｐＨが高いと、脱アミド化速度が増大することが分かった。１０ｍｇ／ｍＬの標的タンパク質濃度で、ｐＨ７.０が凝集と脱アミド化速度との間で最適なバランスであることが判明した。シュークロース濃度の増加は該分子を凝集に対してさらに安定化することが示された。
【０３６６】
さらなる研究のために選択された製剤が、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、６００ｍＭシュークロース、ｐＨ７.０中の１０ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ−ＦＧＦ−２１であった。２０ｍｇの想定されっる週用量を前提として、予め充填されたシリンジ中の高濃度の医薬品が開発された。高濃度の医薬品を可能とするために、製剤のさらなる最適化を必要とした。 
【０３６７】
高濃度製剤の初期開発は、３ｍＬのＩ型ガラスバイアルで行われた。１５ｍｇ／ｍＬおよび２２ｍｇ／ｍＬ  ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、６００ｍＭシュークロース、ｐＨ７.０中でかき混ぜると、気泡の閉じ込めが観察され、溶液はますます混濁するようになった（図５、左画像）。この問題を軽減するために、ポリソルベート８０を用いた。ポリソルベート８０は気泡の閉じ込めを妨げることができた（図５、右画像）。そこで、ポリソルベート８０を０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度でＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の高濃度の製剤に添加した。
【０３６８】
酸化はＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の臨界的な品質属性であり、Ｃ−末端付近のメチオニン−１６９の酸化は、受容体の結合を無力化し、かくして該分子の活性を無効にする。金属触媒による酸化は、それによってタンパク質が酸化され得る機構の１つである。細胞培養液からの持ち越し、ステンレススチール容器との接触、賦形剤中の不純物、予め充填したシリンジの形成プロセスなどにより、微量の金属がタンパク質製剤中に存在し得る。
【０３６９】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１が金属触媒酸化に敏感であるかどうかを試験するために、０.０５ｍＭ  ペンテチン酸（ジエチレントリアミン五酢酸、ＤＴＰＡ）の存在または不在下で、金属カクテル（２５０ｐｐｍ  Ｆｅ、１０ｐｐｍ  Ｃｕ、１５ｐｐｍ  Ｃｒ、１５ｐｐｍ  Ｎｉ、１０ｐｐｍ  Ｍｏ）を添加した、または添加していないサンプルを、各々、２５℃で１か月、４０℃で２週間にわたってインキュベートし、メチオニン１およびメチオニン１６９での酸化レベルをトリプシンペプチドマッピングで測定した（図２Ａおよび２Ｂ）。
【０３７０】
ペンテト酸（ＤＴＰＡ）の不在下で、金属を添加していないサンプルであっても両方のメチオニン残基の有意な酸化が観察されたが、金属カクテルでスパイクされたサンプルでは酸化レベルはさらに高かった。５０μＭ  ペンテト酸を入れたサンプル中ではいずれのメチオニンでも酸化レベルの増加は観察されなかった。このことは、ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１が金属触媒酸化に敏感であり、製剤中に微量の金属が既に存在することを示唆する。ペンテト酸は製剤中に存在する金属を、ならびに製剤中にスパイクされた付加的な金属を効果的にキレート化し、メチオニン１および１６９の金属触媒酸化を妨げた。そこで、５０μＭペンテト酸を高濃度のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の製剤に添加した。
【０３７１】
高濃度製剤のｐＨを最適化するために、本発明者らはｐＨ６.３と８.５との間で集めたＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の凝集データを検討し、ｐＨ６.８未満で凝集速度が急速に増加したことを示した（図３Ａおよび３Ｂ）。それで、本発明者らは高濃度製剤に対する標的ｐＨをｐＨ７.０からｐＨ７.１に引き上げた。
【０３７２】
新しい高濃度製剤と以前の製剤とを比較するのに、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、６００ｍＭシュークロース、０.０５ｍＭペンテト酸、０.０５％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ７.０（ｐＨ最適化前）中で２０ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ−ＦＧＦ−２１を安定した状態で置き、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、６００ｍＭシュークロース、ｐＨ７.０中で２２.５ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ−ＦＧＦ−２１と比較した。
【０３７３】
図４Ａおよび４Ｂ、図１Ａおよび１Ｂに示されるように、ポリソルベート８０およびペンテト酸のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１製剤への添加は、すべての温度で凝集速度の低下を、４０℃で脱アミド化の減少をもたらした。
【０３７４】
試験方法
凝集：凝集は、市販の分析カラム（Tosoh TSK gel G3000SWXL、7.8 x 300 mm、P/N: 08541）を装着した、市販のシステムでのサイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（例えば、Agilent Technologies 1100 Series HPLCシステム＋PDA検出器またはWaters Alliance e2695 Series HPLC＋PDA検出器）で試験した。９５％リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）および５％エタノールの移動相を０.８ｍｌ／分の流速で用い、高分子量種をタンパク質単量体から分離した。サンプルをＰＢＳで０.５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に希釈し、０.０１ｍｇ（０.０２ｍＬ）を各実験に注入した。凝集体の量を機器ソフトウェアを用いて高分子量ピークの面積を観察されたすべてのピークの総面積で割ることによって測定した。
【０３７５】
脱アミド化：脱アミド化は、市販の分析カラム（Agilent Bio WAX、非細孔、5μｍカラム、4.6 x 250 mm、P/N: 5190-2487）を装着した、市販のシステムでのアニオン交換高性能液体クロマトグラフィー（例えば、Agilent Technologies 1100 Series HPLCシステム＋PDA検出器またはWaters Alliance e2695 Series HPLC＋PDA検出器）で試験した。移動相Ａは２０ｍＭトリス、ｐＨ８.２で構成され、移動相Ｂは２０ｍＭトリス、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ８.２で構成された。１.０ｍｌ／分の流速で２０分間にわたって２％Ｂ〜６７％Ｂへの直線勾配に付し、荷電タンパク質変種を分離した。サンプルを移動相Ａで１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に希釈し、０.０７５ｍｇ（０.０７５ｍＬ）を各実験に注入した。脱アミド化量を機器ソフトウェアを用いて酸性変種ピークの面積を観察されたすべてのピークの総面積で割ることによって測定した。
【０３７６】
酸化：酸化はトリプシンペプチドマッピングのよって試験した。タンパク質サンプルをトリプシンで消化した後、得られたペプチドを、市販の分析カラム（Waters Acquity C18 BEH peptide RP UPLC column、2.1 × 150 mm、1.7-μｍ粒径、130-Å孔径P/N: 186003556）を装着した、市販のシステムでの逆相超高性能液体クロマトグラフィー（例えば、Waters Acquity UPLC）で分離した。移動相Ａは水中０.２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で構成され、移動相Ｂはアセトニトリル中０.２％ＴＦＡで構成される。６０℃の温度および０.３ｍｌ／分の流速で２７分間にわたって１０％Ｂ〜４０％Ｂとする複合的勾配に付し、トリプシンペプチドを分離した。酸化の量を機器ソフトウェアを用いて酸化ペプチドピークの面積を酸化ピークおよび非酸化ピークの総面積で割ることによって測定した。
【０３７７】
粒子形成および気泡形成：目視で観察した。
【０３７８】
ＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の濃度：本明細書にて開示される医薬製剤中のＰＥＧ−ＦＧＦ−２１の濃度は、０.８７（ｍＬ／（ｍｇ＊ｃｍ））の吸光係数を用いて２８０ｎｍで傾斜分光法により測定した。
【０３７９】
ｐＨの測定：ｐＨを標準的方法（ＵＳＰ＜７９１＞）に従って測定した。
【０３８０】
賦形剤の濃度：本明細書にて開示される医薬製剤中の個々の賦形剤（例えば、ＤＴＰＡ、ＰＳ８０、ヒスチジン、シュークロース）の濃度は、完成した医薬製剤の最終体積単位当たりのその製造過程において医薬製剤に添加された個々の賦形剤の量（重量、モル等）であると決定／算定された。あるいはまた、賦形剤の濃度は、医薬製剤中の個々の賦形剤の実際の量に基づくこともできる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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