(57)【要約】  全Ｄアミノ酸ペプチドおよび医薬的に許容可能な担体から成る組成物を調製する段階を含む、患者の発作、てんかん、または、脳機能の喪失を治療する方法。Ｄペプチドは、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅの全体構造を有する。ＡはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、ＢはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＣはＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐ、ＤはＴｙｒ、ＥはＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｙである。Ｄペプチドにおけるすべてのアミノ酸は、Ｄ立体配置であり、上記ペプチド組成物は、治療有効量で投与され、上記組成物は、脳機能の喪失の根底にある炎症を抑制するように機能する。血中からの放出および脳への侵入を促進することにより、組織内分布を増大させるために、Ｄペプチドは、Ｅにおいてエステル化、グリコシル化、または、アミド化され得る。
2021530570.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳損傷の患者の脳卒中、てんかん、発作、または脳機能の喪失を治療するための方法であって、Ｄペプチドおよび許容可能な担体を含む組成物を投与する段階であって、前記Ｄペプチドは更に、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅの全体構造を有する５個の連続アミノ酸を含み、ＡはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、ＢはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＣはＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、ＤはＴｙｒ、ＥはＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｙであり、すべてのアミノ酸はＤ立体配置であり、治療有効量の前記組成物が前記患者に投与され、前記組成物は、前記患者の脳卒中、てんかん、発作、または脳機能の喪失を治療するように作用する、段階を備える方法。
【請求項２】
前記ＤペプチドはＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｄペプチドは、最大で８個の長さの全Ｄアミノ酸残基であり、
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １）  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２）  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ａｒｇ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ３）  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ４）  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ５）  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ６）  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７）  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｒｇ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ８）  Ｉｌｅ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ９）  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １０）  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １１）  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １２）  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ａｒｇ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １３）  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｔｙｒ  Ａｒｇ
の群から選択される配列を含む５個の連続するＤアミノ酸残基を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物は更に、抗炎症活性を有する経口錠剤を含み、前記組成物における前記ペプチドは、０．０５μｇ〜１０００μｇの範囲の濃度で存在する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
組織内分布および脳への侵入を増大させるために、Ｅはエステル化、グリコシル化、またはアミド化され得る、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物は更に、抗炎症活性を有する経口錠剤を含み、前記組成物における前記ペプチドは、０．０５μｇ〜１０００μｇの範囲の濃度で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗炎症活性は、ＣＣＲ５またはＣＣＲ２受容体拮抗作用から成る、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗炎症活性は、デュアルＣＣＲ５およびＣＣＲ２拮抗作用から成る、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記抗炎症活性は、ＴＮＦα、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、およびＩＬ−２３から選択される炎症性サイトカインの低減を生じさせる、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗炎症活性は、ＩＬ−４およびＩＬ−１０を含む抗炎症性サイトカインの増加を生じさせる、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗炎症活性は、ケモカインＣＣＬ２およびＣＣＬ３、ならびに、ケモカイン受容体ＣＣＲ２およびＣＣＲ５の低減を生じさせる、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物は更に、ペプチド溶液における凝集を防止するためのマンノースおよびベンジルアルコールを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物は更に、デルタ１ペプチドＴアミド（ＤＡＰＴＡ）抗炎症活性を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物は更に、ペプチド溶液における凝集を防止するためのマンノースおよびベンジルアルコールを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物は更に、全Ｄ−ＡＳＴＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）抗炎症活性を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物は更に、ペプチド溶液における凝集を防止するためのマンノースおよびベンジルアルコールを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物は更に、全Ｄ−ＡＳＴＴＴＮＹＴ−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）抗炎症活性を含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１７年７月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／５３３，８５４号の恩恵を主張するものである。
【０００２】
本発明は、てんかん発作重積状態の発症の後に続き得る、自発性または誘導性のてんかんまたは発作、外傷後てんかん（ＰＴＥ）、または、軽度、中度、もしくは重度の外傷性脳損傷などの頭部外傷の合併症、脳震盪、頭蓋骨骨折、外傷性脳症、振盪性ブラスト、および神経変性に起因する頭蓋内出血（脳神経外科手術によって引き起こされるもの、ならびに、有機りん酸塩（ＯＰ）神経剤曝露、脳感染（細菌、ウイルス、寄生虫）、脳炎、毒素性ショック、子癇けいれん、頭蓋内出血、脳性まひ、低酸素症、低ナトリウム血症、薬剤過剰摂取、アルツハイマー病、脳腫瘍、脳卒中、自閉症スペクトラム障害、ダウン症、アンジェルマン症候群、結節硬化症、神経線維腫症、または、原因が明確でない遺伝子型のような先天性病態による、全般的な脳傷害事象を含む）の治療または防止に広く関連する。
【図面の簡単な説明】
【０００３】
【図１】ＡからＤは、全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）が抗原提示樹状細胞のＴＬＲ４媒介成熟をブロックすることを示す。
【０００４】
【図２】全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）が、ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）によって誘発される、ＣＣＲ２受容体における患者単球の遊走、および、ＭＩＰ−１β（ＣＣＬ４）によって誘発される、ＣＣＲ５受容体における患者単球の遊走を強力に両方ともブロックすることを示す。
【０００５】
【図３】低濃度でＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）遊走をブロックする３つの追加の全Ｄアミノ酸ペプチドの効果を示す。
【０００６】
【図４】ＡからＦは、ラットにおけるケモカインＣＣＬ２およびＣＣＬ３、ケモカイン受容体ＣＣＲ２およびＣＣＲ５、サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦの発現を低下させる全Ｄ−ペンタペプチドＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を示す。  はじめに
【０００７】
てんかんは、患者が脳における制御不能の電気的活動の結果である再発性の非誘発性発作にかかりやすくなる、脳の神経障害である。毎年、約１５万人のアメリカ人が、この中枢神経系障害と診断されている。２６人に１人が一生のうちのてんかんと診断される。てんかんには多くの原因があり、すべての発作がてんかんとみなされるわけではない。発作活動を促進する脳の障害および傷害は他にも多くあるからである。発作のもっとも一般的な４つの原因は、頭部外傷、脳卒中、脳腫瘍、および脳感染である。他の原因として、神経剤毒性、薬剤効果、または中毒、遺伝、および代謝障害が挙げられる。 
【０００８】
ＴＢＩは、一般集団におけるてんかんの最大２０％の病因である。外傷後発作（ＰＴＳ）および外傷後てんかん（ＰＴＥ）は、機能的帰結を大幅に悪化させる、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）合併症である。見積もりによれば、毎年１７０万人のアメリカ人が、軽度から重度の範囲の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っており、米国では、これに加えて、約３６万人の戦闘活動に関与した兵士およびテロリストの攻撃を生き延びた公共安全職員が、爆発（振盪性）の強風が原因でＴＢＩを発症している。外傷性脳損傷の後のてんかんのリスクは、６５歳より上の年齢で、軽度傷害の場合の１．５から、硬膜下血腫、頭蓋骨骨折、意識消失、または、１日以上の健忘症を伴う重度傷害の後の１７．２の範囲に及ぶ。穿通性頭部傷害の患者は、傷害の１０年以上後に、ＰＴＥを発症するリスクが高く、８万〜９万人のアメリカ人がＴＢＩの長期障害を患っている。
【０００９】
中枢神経系の感染もてんかんの主要なリスク因子である。細菌性（髄膜炎、結核）、ウイルス性（例えば、単純ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−６、ＨＩＶ）、寄生虫性（例えば、脳トキソプラズマ症、マラリア）、真菌性（例えば、カンジダ症、コクシジオイデス症、アスペルギルス症）、プリオン感染を含む、幅広い様々な中枢神経系感染が、てんかん発作重積状態の原因となり得る。ＨＳＶ−１脳炎の患者の３０〜５０％は発作を発症し、ピコルナウイルス科のウイルス、例えばエンテロウイルス、コクサッキーウイルスＡおよびＢ、パレコウイルス、エコーウイルスなどは、熱性発作の発症と関連がある。エンテロウイルスは、小児におけるウイルス性脳炎の主要な原因であり、重度の発作を引き起こし得る。中枢神経系感染は、脳の炎症に関連し、いずれの原因による脳の炎症も、発作のリスクである。
【００１０】
有機りん酸塩（ＯＰ）神経剤（ＮＡ）への曝露も、死亡をもたらし得る発作の脳傷害カスケードを作動させるてんかん発作重積状態（ＳＥ）の病態を誘発する脳損傷および炎症の状態を生じさせる。ＳＥの特徴は、迅速かつ持続的な神経炎症反応を有する複数または長期的な発作であり、小膠細胞および星状細胞の活性化、ケモカインおよびサイトカインを含む炎症誘発メディエータの脳中濃度の大幅な増加を特徴とする（１、２）。神経炎症は、永久的な脳傷害をもたらすことが多いＯＰ神経剤の病因において、主要な役割を果たす。
【００１１】
非致死性の曝露において、てんかん発作重積状態（ＳＥ）は、発作関連脳傷害を引き起こし得る。これは、神経発生の低減を伴う、うつ病、睡眠と起床の障害、感覚器関連の併存疾患を含む、持続的な認知機能および行動の障害を引き起こす。
【００１２】
現代の神経剤誘導曝露のための曝露後治療（アトロピン、オキシム、高用量ベンゾジアゼピン）は不十分であり、曝露の数分以内に投与される場合のみ効果的である。生存者は、治療された場合でも、多くの場合、長期的な副作用に苦しむ。これには、軽度から重度の記憶力減退、行動の変化、情動障害、反復発作が含まれる。ＮＡ曝露の神経変性後遺症を治療するための薬剤は無い。高度な難治性、再発性、または、ジアゼパム抵抗性発作を有する急性の神経剤中毒の生存者に対する著しい治療の必要性がなお存在する。
【００１３】
てんかんは、脳における発作性の過剰な神経細胞の放電によって生じる、多くの種類の反復発作を指す。２つの主な一般的な発作は、ミオクローヌス反射、無動発作、けいれんの無い一時的意識消失に関連する小発作、および、意識消失を有する連続的な一連の発作およびけいれんにおいて現れる大発作である。脳の生理機能の構造的または機能的撹乱を引き起こすものは、いずれも発作につながり得る。反復発作事象は「てんかん」と称され得る。
【００１４】
発作障害の主な治療は、抗けいれん薬の長期的、持続的な投与であり、現在において、多くのそのような薬剤が周知である。フェニトイン、フェノバルビタール、カルバマゼピン、バルプロ酸など、複数の抗てんかん薬は、早いＰＴＳの予防に効果的であるが、遅いＰＴＳまたはＰＴＥには効果的でない。残念ながら、利用可能な薬物療法の薬剤は多くあるが、てんかんまたは関連障害を有する集団のうち、大きな割合で良好でない。さらに、現在入手可能な薬剤のいずれも、完全な発作抑制を達成できず、急性かつ持続的な炎症である発作活動の根底にある原因を治療することができず、大部分は望ましくない副作用を有し、使用が制限されている。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、てんかんまたは発作を治療または予防するための組成物に関し、発作、正常機能の喪失、神経細胞の喪失、認知機能障害、更には死亡につながる、過剰なサイトカイン、ケモカイン、およびＴＬＲ４／ＭｙＤ８８受容体の活性化をもたらす自然免疫炎症経路の活性化をもたらす、傷害、外傷、または感染に起因する、ヒトまたは別の哺乳動物などの動物における、特に脳における過剰な免疫応答を調節、特に低減するための方法に関する。
【００１６】
獲得性および自然免疫系経路が、てんかん発作の病理機構に直接関与し（３）、その炎症が次に、発作の発生および重篤度、ならびに、発作関連神経細胞の死亡に影響することが多くのデータにおいて示唆される。てんかん、神経変性、および発作活動の認知機能の病理における病因としての自然免疫炎症反応の役割を支持するものとして、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）を有する人々（４）、および、難治性てんかんを有する人々の切除された脳組織からの血清においてＩＬ−１、ＴＮＦα、およびＩＬ−６の増大が検出された（５）。ＯＰ薬剤に曝露された動物において、皮質および海馬におけるＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＬ−６、プロスタグランジンＥ２、およびケモカイン（ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５）の著しい増加があり、この増大は数日続く（６）。
【００１７】
リポ多糖体（ＬＰＳ）の海馬注入は、ＩＬ１β、ＴＮＦα、および、神経細胞一酸化窒素合成酵素の発現が増大したラットにおけるてんかん発作を誘導した（７）。このことは、ＴＬＲ４／ＭｙＤ８８自然免疫経路が、急性の発作活動の誘導因子であることを示している。マウスにおける出産後期間の早期における起炎物質ＬＰＳへの全身曝露も、星状細胞、小膠細胞の脳活性化を引き起こし、興奮性シナプスの発達を促進し、ＭｙＤ８８に依存した方式で、増大された発作感受性をもたらした（８）。したがって、早い発達性炎症発作は、発作発生の生涯にわたる傾向を生じさせ得る。星状細胞におけるＭｙＤ８８の削除またはＥｒｋ１／２の抑制は、ＬＰＳ誘導性の発達異常から救出した。これらの経路は、抗発作薬の介入のための効果的な標的であり得ることが示唆される。
【００１８】
末梢炎症刺激はまた、発作の傾向に影響し得、ケモカインは、上記の発作およびてんかんの神経炎症プロセス中に脳への白血球の遊走において役割を果たし得る。ケモカインＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）は、医薬抵抗性てんかんの患者におけるもっとも増大された炎症メディエータの１つであり、ＣＣＬ２は、けいれん促進効果がある（９）。抗ＣＣＬ２抗体の脳内投与は、慢性てんかん動物において、ＬＰＳが媒介する発作の増大を抑制した。これらの結果は、ＣＣＬ２が、末梢炎症と神経細胞過剰興奮性とをつなげる、分子経路における主要メディエータであることを示し、発作抑制におけるＣＣＬ２およびその受容体ＣＣＲ２の重要な役割を実証する。
【００１９】
頭部傷害に起因する皮質挫傷は、神経細胞を殺して発作を引き起こし得るフリーラジカルおよび興奮毒性を生成する興奮性神経伝達物質（グルタミン酸塩、アセチルコリン、アスパラギン酸）の放出を引き起こす。グルタミン酸塩類似体であるカイニン酸（ＫＡ）は、ヒトのてんかんにおいて見られるものと非常に類似する、ラットにおける発作関連脳傷害のパターンを実験的に生じさせるために使用される。 
【００２０】
腹腔内ＫＡ投与に基づく実験ラットモデルは、誘導された発作により、微小血管系におけるＣＣＲ５リガンドＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）の発現が増大し、ＣＣＲ５＋細胞の脳侵入が増加したことを示した。これは、海馬における神経細胞の喪失、炎症、および、神経膠症に関連する効果である（１０）。ＣＣＬ５は、発作誘発効果として、ＤＡＰＴＡ（１１）、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５デュアル受容体アンタゴニスト（１２）によってブロックされる興奮性神経伝達物質アスパラギン酸のマウスシナプトソームからの放出を促進した。減少したＣＣＲ５は、興奮性毒誘導性発作、血液脳関門の漏出、中枢神経系傷害、炎症から強力に保護し、神経修復を促進した（１０）。
【００２１】
ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、およびＴＮＦαは、神経剤毒性、中枢神経系ストレス、および傷害に対する急性期応答の間にアップレギュレーションされる主要なサイトカインとして周知である。ＴＮＦαおよび他の炎症性サイトカインの放出は、グリア細胞の活性化、ならびに、Ｔｈ１からＴｈ２サイクルへ切り替え、神経膠症を促進する生理学的応答を悪化させ、星状膠細胞のグルタミン酸塩の取り込みを阻害し、特に、希突起膠細胞においてアポトーシスを誘導し、それにより、損傷性の脱髄に寄与する。外傷性中枢神経系傷害の早期におけるＴＮＦαおよび他の炎症アクティベータの作用を阻害する能力は、発作のリスクを防止または制限するために、有益な臨床上の帰結を生じさせ得る。
【００２２】
脳損傷に関連する発作における、これらの受容体の標的を更にサポートするものとして、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５のブロックは、脳卒中（１３、１４）および外傷性脳損傷（ＴＢＩ）（１５）において保護作用を有し、デュアルＣＣＲ２／５アンタゴニストは、高齢のＴＢＩ動物において、傷害誘導性の後遺症を大幅に改善したと報告されている。
【００２３】
これらの発見は、サイトカイン生成のブロック、ケモカイン放出、ＭｙＤ８８経路の活性化、小膠細胞および星状細胞活性化の抑制、末梢単球の脳への侵入、ケモカインに媒介される興奮性アミノ酸放出の防止による、根底にある自然免疫炎症の処理は、様々な独自の治療効果を提供し、多様な原因の発作およびてんかん発作の病態において、新規の治療機会を生じさせることを示す（１６）。
【００２４】
本発明のＤＡＰＴＡおよびペプチドは、部分的に、転写因子ＮＦｋＢ（１９）およびＳＴＡＴ３（２０）をブロックすることによって、ケモカイン受容体ＣＣＲ２およびＣＣＲ５をブロックし、サイトカイン平衡を炎症（Ｍ１）から修復（Ｍ２）応答にシフトする（１２、１７、１８）。ＨＩＶの試験対象患者５人において、ＤＡＰＴＡは特異的に、サイトカインＴＮＦα、ＩＬ−１、６、８を低減し、ＩＬ−４、１０．１３を増大させる（１８）（表１）。低減されたＴＮＦα、ＩＬ−１、６、８、および、ＩＬ−４、ＩＬ−１０応答へのシフトは、ＴＢＩにおける神経保護および生存を増大する（２１、２２）。
【００２５】
ＤＡＰＴＡ、および、本発明の関連類似体は、単に「炎症のアンタゴニスト」ではなく、サイトカインプロファイルを「Ｍ１」状態から「Ｍ２」状態へシフトするための、より微妙な効果を有するという点で、有用かつ新規な作用を有する（表１）。これは、神経変性病態において、独自の有益な治療効果を及ぼす（２３）。そのような効果は、人々における脳損傷および抗発作効果において利点を有すると予想される。より広範には、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）（２３）などの神経変性疾患において基本的役割を担う脳小膠細胞のサイトカインプロファイル（Ｍ１からＭ２）をシフトすることにより、本発明のペプチドは、これら、および、他の神経変性病態における治療上の利点を提供する。
【００２６】
特定の実施形態において、本発明は、サイトカイン、ケモカイン、およびｔｏｌｌ受容体／ＭｙＤ８８炎症経路を介して生じる、脳損傷の後に生じる慢性免疫活性化に関連する神経細胞の損傷、神経細胞の喪失、神経細胞過剰興奮性の予防または治療に関する。具体的な実施形態は、本発明による有効量のペプチドの抗けいれん薬を含む治療組成物である。
【００２７】
本発明はまた、認知能力の増大または改善、または、認知機能低下を緩和して、年齢的に一致した正常で健康的な被験者の機能と近くなるように類似させることに関連する、病態の治療のための化合物、組成物および方法に関する。本発明の一実施形態において、患者は、増大された正常な認知機能を有する。更なる実施形態において、患者は、改善される、加齢において生じるものなどの神経炎症に起因する脳損傷に関連する認知機能障害を示す。
【００２８】
なお更なる実施形態において、アルツハイマー病、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、自閉症、失読症、注意欠陥活動亢進障害、強迫性障害、精神病、双極性障害、うつ病、トゥーレット症候群、小児、青年および成人の学習障害、年齢に関連する記憶障害、年齢に関連する認知機能低下、パーキンソン病、ダウン症、外傷性脳損傷、神経エイズ、ハンチントン病、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、ＨＩＶ、脳卒中、血管疾患、ピックまたはクロイツフェルト−ヤコブ病、多発性硬化症（ＭＳ）、その他の白質障害、統合失調症、および薬物誘発性認知機能障害などの疾患または障害に関連する認知機能障害の患者が改善され得る。
【００２９】
前臨床動物モデルにおいて、本発明によるＤＡＰＴＡおよびペプチドは、加齢による神経細胞の喪失を予防し、活性化された小膠細胞によって媒介される神経毒。ならびに、認知機能低下に関連するサイトカインおよびケモカインの放出をブロックした。ヒトにおいて、ＤＡＰＴＡは、神経エイズにおける病態、情報処理速度、脳機能イメージングを改善した（２４、２５）。従って、本発明による化合物は、共有される神経変性炎症機構に起因して、示される病態における認知機能障害を改善する強力な効力を有すると考えられる。
【００３０】
ジスキネジアは、不要で余分な動きが生じる、大脳基底核を伴うことが多い障害のグループである。大脳基底核における障害は、自発的な動きの一部に類似する、早く、ピクピクする、無目的の動きをもたらし得る。ジスキネジアは、不随意、迅速、ランダム、異常で、ピクピクした動き（舞踏病）；互いに流れるように見える、比較的遅く、身をよじるような動き（アテトーシス）；反復的、ねじれ、パターン化された動き、歪んだ姿勢を伴う筋緊張の増加（ジストニア）；腕、脚、または両方の制御不能な振り動かす動き（バリスムス）の任意の組み合わせを含み得る。
【００３１】
原発性ジスキネジアは、多くの異なる疾患において生じる。シドナム舞踏病は、通常、線条体の一時的な機能不全を引き起こすと考えられる毒性または感染障害に関連する疾患であり、通常は、小児に影響を及ぼす。ハンチントン舞踏病（ＨＤ）は、中年に始まる優性遺伝障害であり、発症した患者において、精神機能低下、および、線条体の進行的変性を引き起こす。脳性まひは、運動機能または協調の障害を指す一般的な用語であり、異常な脳発達、または、出生に関連する傷害によって引き起こされ得る複数の種類の脳傷害によってもたらされる。アテトーゼなどの脳性まひのいくつかの症状は、大脳基底核機能不全に関連する。
【００３２】
二次性ジスキネジアは、二次症状（頭部傷害、多発性硬化症）として、または、薬剤治療の結果として、様々な疾患において観察される。筋硬直、表情の喪失、震え、遅い引きずり歩行、運動の全般的喪失を特徴とするパーキンソン病（ＰＤ）は、黒質における機能不全によって引き起こされる。パーキンソン病における筋硬直の増加は、黒質による、大脳基底核の一部の欠陥的阻害によってもたらされる。もっとも一般的な種類のジスキネジアは、舞踏病およびジストニアであり、これらは混在することが多い。ハンチントン病の研究は、活性化した小膠細胞、および、ＩＦＮα、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−１βの分泌を伴う免疫応答の変化を実証し（２６）、主題のペプチドで標準化され得るジスキネジアにおける特異的な免疫−病原体標的が同定された。
【００３３】
なお更なる実施形態において、疼痛は炎症の原因（炎症性頭痛）を有し得るので、頭痛を患う患者は恩恵を受け得る。もっとも一般的な種類の血管性頭痛は片頭痛である。片頭痛の次にもっとも一般的な種類の血管性頭痛は、熱によって生じる頭痛である。肺炎、麻疹、流行性耳下腺炎、扁桃炎は、重度の毒性血管性頭痛を生じさせ得る疾患である。毒性頭痛はまた、身体における外部の化学物質の存在によっても生じ得る。他の種類の血管性頭痛として、激しい疼痛の反復的な発症を引き起こす「群発頭痛」、および、血圧の上昇によって生じる頭痛が挙げられる。本発明による化合物は、示される病態におけるてんかん薬剤の効果に起因して、また、発作傾向の炎症誘発を示す近年の研究と併せて、示される病態における頭痛を改善する強力な効力を有すると考えられる。
【００３４】
本発明はまた、過剰興奮性組織に関連し、グルタミン酸塩−ＮＭＤＡ受容体などのイオンチャンネルの機能不全に関連し得る疾患など、過剰興奮性に関連する疾患を治療するための一群のペプチド化合物の使用に関する。過剰興奮性は、シナプス入力に対する中枢または末梢神経系神経細胞の応答の異常な増加として定義され、病態生理学的な炎症事象によって生じ得る。過剰興奮性に関連する疾患の例は、チャネロパチー、ジストニア、筋強直、筋緊張症、運動失調、ＱＴ延長症候群、不安およびストレス疾患である。 
【００３５】
本発明の化合物の作用機序は、典型的にはイオンチャンネルに影響して興奮性組織におけるシグナル伝搬に影響する過剰興奮性の治療に使用される一般的な薬剤と異なる。対照的に、本発明のペプチドは、てんかん発作を促進する興奮性神経伝達物質の放出を促進するケモカインの作用をブロックする（２７）。
【００３６】
動物モデルにおいて支持される本発明に関連するＤＡＰＴＡの抗炎症の利点のいくつかの例として、外傷性脳損傷（２８）、糖尿病ニューロパチーを含む多様な原因のニューロパチー（２９．３０）、興奮性神経毒の放出のブロック（１１）、および、脳卒中／脳虚血からの回復（１４）が挙げられる。ＤＡＰＴＡ、または、主題の全Ｄ−ペプチドの使用は、脳損傷の後のてんかん発作活性を伴う一般的な炎症機構に起因する、これらおよび更なる病態に対する有益な治療であり得る。
【００３７】
開示される実施形態は、発作およびてんかんのリスクの増加につながる多くの病態においてサイトカイン平衡をシフトすることによって炎症反応を緩和する５〜２０のアミノ酸の小さい受容体活性ペプチドを作るための一般的方法を教示する。これらの病態として、脳損傷、神経剤曝露、アルツハイマー病、頭蓋内出血、脳腫瘍、脳卒中、自閉症、ダウン症、アンジェルマン症候群、結節硬化症、神経線維腫症などの先天性病態、または原因が明確でない遺伝子型、ウイルス性、細菌性、真菌性またはその他の感染症、特に、例えば抗ウイルス療法または免疫抑制療法中、または免疫抑制状態が存在する状況、または免疫再構築炎症反応症候群における、感染が日和見的に現れる可能性のある疾患が挙げられる。
経口バイオアベイラビリティを生じさせる方法
【００３８】
ペプチド設計の当業者であれば、特にペプチドにおける受容体活性部位でのＤアミノ酸の置換を含むペプチド主鎖の修飾が活性の喪失を引き起こし、いくつかの修飾では完全な非活性を引き起こすことが非常に多いことを理解する。実際、Ｄアミノ酸置換の使用は一般に、機能の喪失によって、ペプチドにおける重要なファーマコフォア残基を同定するために使用される。
【００３９】
したがって、本発明の予期されない、明確でない側面は、細胞表面ＧＰＣＲ受容体などのキラル分子を標的にする経口生理活性ペプチドの作成における全Ｄアミノ酸の使用である。治療用タンパク質およびペプチドの経口投与の近年の検討（３１）によれば、多大な研究努力にも関わらず、治療用ペプチドまたはタンパク質の経口投与は、医薬業界および研究者にとって課題であり続けていることが示される。従って、インビボにおけるペプチドによって示される短い血中半減期に起因して、それらは頻繁に投与される必要があり、治療コストの増加、および、患者コンプライアンスの低下がもたらされ、多くの場合において、経口投与は可能でないことさえある。一般に、タンパク質およびペプチド薬は、胃液の低ｐＨ環境、または、消化管における加水分解酵素によって、急速に変性または分解され、経口投与は、典型的には受容体標的ペプチドで達成が困難な、好ましい経路である。
【００４０】
受容体におけるリガンド作用のキラル選択性は驚くべきものではなく、酵素学の原理としてよく理解される。例えば、キラル特異性は、多数のＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症薬）において認められる。ＮＳＡＩＤの場合、Ｓ構成を有する光学異性体は、プロスタグランジン活性を阻害する能力をほぼ独占的に保持する。ＮＳＡＩＤのＲ光学異性体は、低いＣＯＸ阻害活性を有する（３２）。モルヒネ受容体は、リガンド立体選択性を示すＧタンパク質共役受容体の例であり、レボルファノールがラセミ混合物ラセモルファンの活性鎮痛成分であり、その立体異性体デキストロファンは非活性である。
【００４１】
細菌の細胞膜を破壊するが哺乳動物の細胞膜を破壊しないカチオンペプチドである抗菌性ヒトθディフェンシンなど、全Ｄ‐ペプチド活性のいくつかの例が存在する。膜に対するカチオンペプチドの立体選択的生物学的相互作用は無い。ディフェンシン活性は、膜の電荷を混乱させることに由来する。これは、立体特異的な細胞表面受容体を標的とし、リガンドの構造および形状に対する感受性が高い本発明のペプチドの作用と異なる。
【００４２】
受容体活性全Ｄペプチドの生体活性は、以前の研究、Ｐｅｒｔ（３３）、図３および図４、直鎖ペプチドＡＳＴＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）におけるＬ−Ｄ置換により、効力の大幅な喪失が生じ得ることを示した、関連するＵＳ５２７６０１６号を考慮すると、本発明の予期されない、明確でない側面である。
【００４３】
特定の位置Ｎｏ１で、ＤＡＰＴＡにおいて１つのＤ置換を有する（Ｄ‐ａｌａ）ことにより、受容体の効力が保持される。それは主に、ペプチドのこの残基は、生体活性に必要でないからであり、実際、完全に除去してもよい。しかしながら、末端ペンタペプチドは、生物作用能を担い、これらの残基のＤアミノ酸修飾は、許容性が高くない。
【００４４】
したがって、位置Ｎｏ８（Ｄ−Ｔｈｒ）での、活性に要求される末端ペンタペプチドにおけるＤＡＰＴＡにおける追加のＤ置換を行うことにより、活性の９９〜９９．９％の喪失がもたらされる。従って、Ｌ−Ｄ置換の導入は、一般的な方式で行うことができず、これらの修飾は典型的には、受容体効力に要求されるペプチド構造を撹乱することによって生物作用能を消失させ得ることが示される。
【００４５】
この点は、ペプチドＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を具体的に参照するＢｒｅｎｎｅｍａｎ，１９８８（３４）において更に説明される。図２および表１を参照されたい。位置４（Ｔｙｒ）においてＬ−Ｄ置換を行うと、ペプチドは活性を完全に失う。
【００４６】
ペプチドＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）およびＬ−Ｄ置換の詳細な研究は、Ｓｍｉｔｈ，１９８８（３５）において公開された。図３を参照されたい。
【００４７】
各位置１、２、３、４における単一のＬ−Ｄ置換の導入は、効力の喪失をもたらし、Ｄ−アミノ酸置換のすべては、非常に低い活性（５０ｘ）から完全な非活性である。
【００４８】
ホルモンの全Ｄペプチドを調製したＳｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｗｏｏｌｌｅｙ（３６）の長く受け入れられた技法を考慮すると、全Ｄペプチドが著しい効力を保持するという考え方は一層新規である。例えば、その論文によれば、「単一残基の変化とは対照的に、ＭＳＨのホルモン活性を有するペンタペプチドにおけるすべてのアミノ酸残基の反転は、ホルモン活性の喪失を生じさせることが分かった」。
【００４９】
この論文において、著者は更に、「ペプチドの代謝拮抗物質を作るために要求される構造的要件を予想する一般的方法はまだ無いので、全Ｄブラジキニン（Ａｎｄｅｒｓｏｎの８アミノ酸Ｆｏｒｍｕｌａ  １ペプチドと同様のサイズの９アミノ酸であることに留意されたい）を合成し、ペプチドのアミノ酸のすべての反転が、ペプチドアンタゴニストの合成のための一般に応用可能な方法であり得るかどうかを検討することに取り組んだ」。
【００５０】
そして著者は、「ブラジキニンの標準的なチャレンジの最大５万倍の全Ｄ−ブラジキニンの量は、ブラジキニンに対する応答のいかなる阻害も、または、いかなるブラジキニン様効果も示さず、したがって、アミノ酸残基すべての反転は、生物活性ペプチドの代謝拮抗物質の形成のための一般に応用可能な方法でないかもしれない」と結論付けた。
【００５１】
ＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＴｒｉｇｇ（ＵＳ５，７９８，３３５号）は、すべてではないが、いくつかの位置にＤアミノ酸を組み込んだＤＡＰＴＡの修飾類似体を主張した。Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ（ＵＳ６０１１０１４号およびＵＳ６，２６５，３７４号）はまた、すべてではないがいくつかの位置においてＤアミノ酸を組み込んだＤＡＰＴＡおよびＤＡＰＴＡの修飾類似体を使用して、炎症および多発性硬化症の治療を主張した。いかなる全Ｄアミノ酸修飾ペプチドの実施化も提案または提供されなかった。主張された利点、または、全Ｄアミノ酸ペンタペプチドを用いる治療使用の例は示されなかった。本発明のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１３の全Ｄ‐ペプチドは、これらの従来の出願において主張されなかった。
【００５２】
しかしながら、すべての位置におけるＬ−Ｄアミノ酸置換の能力は、経口的に安定的なペプチド化合物を作る可能性を生じさせる。消化酵素に起因する、標的組織におけるペプチドの安定性は、それらの幅広い有用性を限定してきた。効力を保持する全Ｄペプチドを生成する能力は、生物作用能を保持しながら、タンパク質分解に対して安定化され得るペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１３、および、場合によっては他のものを生じさせる、予期されない一般的方法である。そのため、これらのペプチドは、増大した安定性から恩恵を受ける。
【００５３】
したがって、最初にオクタペプチドＰｅｐｔｉｄｅ  Ｔ（ＡＳＴＴＴＮＹＴ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）におけるＤアミノ酸を使用して類似体ＤＡＰＴＡ（デルタ１ペプチドＴアミド）を生成したＰｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ（ＵＳ  ５２７６０１６号）も、または、ＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＴｒｉｇｇ（ＵＳ５，７９８，３３５号）もしくはＡｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ（ＵＳ６０１１０１４号およびＵＳ６，２６５，３７４号）も、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＴまたはＤＡＰＴＡにおけるＤアミノ酸による、天然に生じるＬアミノ酸のすべての置換を教示しない。
【００５４】
ＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＴｒｉｇｇまたはＡｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．によって主張された「各」位置におけるＤ−置換の使用は、「すべて」の位置を意味するものとは推論できず、いかなる場合においても、これらの発明において実施化されなかった。Ｂｒｅｎｎｅｍｅｎ，１９９８（３４）およびＳｍｉｔｈ，１９８８（３５）のデータは、いかなる場合も、配列ＩＤ１におけるＬ−Ｄアミノ酸置換は、全Ｌ形態と同等の効力を達成せず、むしろ、Ｄ置換は、活性の喪失、場合によっては、位置依存的な方式で生物作用能の完全な喪失をもたらすことを示す。
【００５５】
従って、アミノ酸のすべてをＤ−形態にすることは明らかであると主張できない。過去に公開された技術と比較した、本発明のペプチドに関連する具体的な事実は、全Ｄペプチドは、ケモカイン受容体などの自然免疫系Ｇタンパク質共役受容体を標的とする抗炎症剤として有効ではないという正反対の考え方を伝える。
【００５６】
この種類の構造−機能分析は、薬剤設計に重要であり、各事例において実験的に決定される必要がある。全Ｄアミノ酸から構成されるＤＡＰＴＡ（配列ＩＤ１）のペンタペプチド断片は、大きな効力を保持するという認識に基づいて、特定のケモカイン受容体機能的試験において、全Ｄアミノ酸形態として、他のペプタペプチドが活性を保持すると判定した。
【００５７】
ＣＣＲ５受容体をブロックする高い生物作用能を保持するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に関連するペプチドを含む全Ｄアミノ酸の使用は、最初にＵＳ１２／６８８，８６２において開示された。しかしながら、経口使用は可能でなかった、または、主張されなかった。また、出願番号第ＵＳ１３／０２４３２４号を含むいかなる過去の開示も、脳損傷、または、ＮＡ曝露、または、任意の原因によってもたらされる、てんかん、発作、ジスキネジア、または、頭痛を治療するための使用を同定しなかった。
【００５８】
本発明のペプチド（全Ｄ−ＴＴＮＹＴ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）は、ＣＣＲ５受容体によって引き起こされる炎症の調節において効果的であることが過去に提案された（出願番号第１２／６８８，８６２号、ＵＳ２０１０／０１８４７０５  Ａ１）。ＣＣＲ５、ＣＣＲ２、およびＣＸ３ＣＲ１ケモカイン受容体を標的とすることによる、末梢ニューロパチーにおける疼痛の低減における更なる使用（１３／０２４３２４）も開示された。これらの出願のいずれも、発作、てんかん、ジスキネジア、または頭痛の予防における使用を教示していない。過去の特許ＵＳ５，２４８，６６７号は、ペプチド「ＤＡＰＴＡ」および関連するＤ−ペプチドの使用によって乾癬を治療する方法を教示するが、全Ｄ組成のペプチドではない。
【００５９】
経口投与は、ペプチドに共通する別の問題、すなわち、溶液中において凝集して生物作用能を失う傾向を有するという問題を解決する。なぜなら、ペプチドは、貯蔵寿命が長い経口錠剤などの固体の形態でまとめられるからである。
溶液の安定性を増大させる方法
【００６０】
いくつかの事例において、意識不明患者への注射による使用など、液体剤型が望ましいことがあり得る。その場合、溶液におけるペプチド凝集を限定する手段が使用される必要がある。そのような改善は、炭水化物のアルドヘキソース系列の単糖の追加によって達成できる。例はＤ−マンノースであり、有効濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。ただし、他の濃度も有効である。凝集への追加の抵抗性は、芳香族アルコールの添加によって達成できる。ベンジル基は、主題のペプチドのチロシン部分と相互作用して、それらが互いに「重なる」ことを防止し、ペプチド溶液の凝集を防止する。例の芳香族アルコールは、経静脈薬剤における静菌防腐剤として使用されることが多いベンジルアルコールである。ここでは、その使用は、ペプチド凝集を防止するためのものである。０．５％のベンジルアルコールの濃度が有用であるが、他の濃度も有効である。マンノースおよびベンジルアルコールの組み合わせは特に、主題のペプチドの水溶性医薬組成物を安定化し、溶液貯蔵時の凝集を防止するための好ましい実施形態として有効である。そのような改善は、経口錠剤を摂取可能でない患者への非経口投与によるペプチドの緊急救助時の使用、または、液体経鼻スプレーとしての使用を可能にする。
脳への侵入を増大させる方法
【００６１】
本発明のような水溶性ペプチドは通常、脳毛細血管の壁、すなわち、血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて輸送されない。キメラペプチドは、血液脳関門を越えて輸送可能であり得、非輸送可能ペプチド、例えばβエンドルフィンを輸送可能ペプチドベクター、例えばカチオン化アルブミンに共有結合させることによって形成される。本発明のペプチドに対する単純な手法は、生理ｐＨで末端ＣＯＯＨ部分の電荷を中和することによって、ペプチドを直接的に「カチオン化」することである。したがって、６から８の範囲の生理ｐＨにおけるペプチドの電荷カチオン化によって、組織内分布、具体的には、脳への侵入を増大させるために、エステル化、グリコシル化、またはアミド化など、主題のペプチドの修飾が行われ得る。過去、ＤＡＰＴＡのカルボキシペプチダーゼ分解からの保護を提供するために、Ｐｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（ＵＳ  ＵＳ  ５２７６０１６）によって、また、同様にこの原理を使用したＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＴｒｉｇｇまたはＡｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．を含む他者によって、末端アミド修飾が導入された。それはここでの機能ではない。なぜなら、配列ＩＤ１は、分解から完全に保護され、プロテアーゼをブロックして分解への抵抗性を付与するための末端アミド（−ＮＨ２）、エステル、またはグリコシル部分を必要としないからである。本発明のアミド化ペプチドに関連する従来技術のいずれも、組織内分布、または、脳への侵入の何らかの改善を主張または開示しなかった。本発明の更なる新規の特性は、エステル化、グリコシル化、またはアミド化によって達成される「カチオン化」ペプチドの組織内分布、および、脳への侵入の増加に関連する。従って、そのような修飾は、血中からの放出および標的組織への送達を増大することにより、本発明の特定のペプチドに対して追加の新規の改善を提供する。
ペプチド半減期およびバイオアベイラビリティを増大するための方法
【００６２】
インビボにおけるペプチドの迅速な腎クリアランスは、長いペプチド半減期によって達成され得る、一定の受容体標的化を必要とする疾患の治療を制限する。ペプチドの血中時間を延長する１つの手法は、ペプチドリガンドを長寿血清タンパク質アルブミンに結合することによって達成される。脂肪酸によるアシル化は、ペプチドクリアランスを遅くするためにもっとも確実な方式である。ミリスチン酸またはパルミチン酸のいずれかをインスリンおよびＧＬＰ−１に結合させることが、日常的に使用されるアシル化ペプチド薬の作成につながった。短い直鎖ペプチドと組み合わされた脂肪酸が、増加した親和性でアルブミンを結合可能なペプチドー脂肪酸キメラを作成するために使用され、排泄半減期を約２５倍に延長した（Ｚｏｒｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１７）。
【００６３】
この方式に従って、本発明のペプチドは、ミリスチン酸またはパルミチン酸の結合などによる（いくつかの事例において、Ｎ末端グリシンをペプチドに追加することによる）アシル化によって修飾され得ることを提案する。例は、Ｍｙｒ−ＧＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）またはＭｙｒ−ＧＴＴＮＹＴ−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）の形態のペプチドである。そのようなリガンドは、長期の排泄半減期を有し、組織送達が増大される。Ｚｏｒｚｉ  ｅｔ  ａｌ．のように、短い直鎖ペプチド「タグ」と組み合わされた脂肪酸の使用は、更に長い排泄半減期を有するであろう。
【００６４】
本発明において開示される複数の組み合わされた改善、具体的には、１）発作、てんかん、ジスキネジア、または頭痛の治療、２）予期せず受容体生物作用能を保持する全Ｄアミノ酸修飾の使用による経口バイオアベイラビリティの達成、３）製造および費用を単純化するための、ＤＡＰＴＡと比較したサイズの低減（オクタペプチドと比較したペンタペプチド）、いくつかの使用における、４）組織内分布を更に増大させるためにＣ末端カルボン酸がエステル化、グリコシル化、またはアミド化され得る、ペプチドの「カチオン化」、ならびに、５）治療半減期を延長するためのアシル化により、てんかん、発作、および脳損傷などの過剰な炎症の修正を求める患者にペプチドが投与され得、本発明は、望ましい新規の治療上の利点を提供する有効な組成物を生じさせる。
他の活性化合物
【００６５】
出願者は、ペプチドＳＳＴＹＲ、ＳＴＮＹＴ、ＴＴＳＹＴ、ＮＴＳＹＧ、ＥＴＷＹＳ、ＮＴＳＹＲ、ＩＮＮＹＴ、ＩＤＮＹＴ、ＴＤＮＹＴ、ＴＤＳＹＳ、ＴＮＳＹＲおよびＮＴＲＹＲ（それぞれ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２〜１３）、ならびに、オクタペプチドＡＳＴＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を含む、全Ｄアミノ酸から構成される他のペンタペプチドは、有効であると考える。
【００６６】
本発明の第１態様によれば、すべてのアミノ酸がＤ−立体配置である、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の直鎖ペプチドの使用が提供される。
配列ＩＤ１：Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ
ＡはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕである。
ＢはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎである。
ＣはＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐである。
ＤはＴｙｒである。
Ｅは、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｙである。
【００６７】
Ｅの候補は、エステル化、グリコシル化、またはアミド化され得る。
【００６８】
てんかん、発作および脳損傷の炎症を治療するために、ペプチドまたはペプチド剤型は、単独で、または、任意の他の医薬活性化合物もしくは賦形剤と組み合わせて使用され得る。有用な医薬組成物は、本発明のペプチド、および、発作の防止、緩和、および／または治療のための少なくとも１つの更なる化合物を含み得、発作の防止、緩和、および／または治療における、この組成の効果は、それぞれの化合物が単独で与えられる場合の効果と比較して、相乗的である。組み合わせの組成物の例は、ペプチドと、ラセタム、ラコサミド、ジベンザゼピン、スルファメート、フェニトイン、またはバルビツール酸塩との組み合わせであり得る。
【００６９】
ペプチドは、経口、口腔内、非経口、局所、直腸、膣内、鼻腔内吸入スプレー、肺内吸入、または、他の経路で投与され得る。特に、本発明のペプチドは、経口投与のための錠剤、除放性剤型、注射（例えば、皮下、筋肉内、経静脈、関節内、または、嚢内注射）、注入のために製剤され得、防腐剤が添加された、アンプルまたはタブレットまたは多人数用バイアルまたは他の包装の単位服用剤型で提供され得る。組成物は、懸濁液、溶液、またはエマルジョンまたはゲルなどの形態であり得、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの配合剤を含み得る。代替的に、有効成分は、直接投与のために、または、使用前の好適なビヒクルの構成（例えば、無菌、発熱性物質除去水、生理食塩水、または、５％デキストロース）のために、粉末および／または凍結乾燥された形態であり得る。ペプチドを含む医薬組成物はまた、場合によっては徐放性の形態で、抗微生物剤または防腐剤などの他の有効成分、錠剤の場合はバインダーおよびフィラーも含み得る。組成物は、０．００１〜９９％（ｗ／ｖ、または好ましくはｗ／ｗ）の活性材料を含み得る。
【００７０】
組成物は、治療的または予防的に効果的な用量、すなわち、１日あたり０．０５〜１０００ｍｇ、特に、１日あたり５〜２５０ｍｇのペプチドを投与される。本発明によるペプチドは非毒性なので、非常に高い用量が使用され得る。しかしながら、通常、これは要求されない。当然、毎日投与される用量は、炎症および炎症反応の程度に依存する。
【００７１】
約７０ｋｇの体重の成人の治療のための組成物の注射または注入による投与は、活性材料が２〜２５０ｍｇの範囲となることが多く、毎日１〜４回投与の形態で投与され得る。
【００７２】
本発明は、てんかん、発作、脳損傷、脳卒中、脊髄傷害、ニューロパチー、認知機能低下、アルツハイマー病、パーキンソン病、神経エイズ、認知症、双極性疾患、うつ病など、特に脳における炎症を伴うものなどの病気または医療的病態、ならびに、ブドウ膜炎、眼の黄斑変性、クローン病、潰瘍性大腸炎、「腸侵漏」を生じさせるディスバイオシスなど腸の炎症性疾患、乾癬、酒さ、湿疹、皮膚炎、または口腔内の歯周炎など、皮膚の炎症性疾患、代謝および内分泌障害に関連する全身性炎症、特に肥満、２型糖尿病、心血管疾患、およびアテローム性動脈硬化など、根底にある炎症病因を有する他の病態の予防または治療に有用である。
【００７３】
本発明のペプチドは、抗ＣＴＬＡ−４抗体などの、いわゆる、がん「チェックポイント阻害剤」の、または、アルファ４（α４）インテグリンに対するヒト化モノクローナル抗体であるナタリズマブのような免疫抑制療法の中止に伴って生じ得る免疫再構築炎症反応症候群における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥｓ）を抑制するために使用され得る。
【００７４】
慢性炎症において、エネルギー消費経路の優勢がオンに切り替えられ、インスリン／ＩＧＦ−１抵抗性など内分泌およびホルモンの変化、低アンドロゲン血症、低ビタミンＤ、軽度の高コルチゾール血症、ならびに、死亡率の増加に寄与する交感神経系およびレニン−アンジオテンシン−アルドステロン系の活性増加につながる。
【００７５】
これら異なるように見える病態のすべては、本明細書に記載されるように、本発明によって調節または抑制され得る特定の自然免疫経路の活性化を共有する。
本発明は、以下の非限定的な例によって例示できる
【００７６】
傷害の後に脳、または身体のどこかで生じ得るものなどの炎症病態における有用性を有する、受容体活性を保持する全Ｄ−ペプチドが生じ得るという仮説を検証するために、最初に分子および細胞的手法を使用して、未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）に由来する単離未成熟ヒト単球における炎症反応を調べた。ＤＣは、分化した未成熟単球に由来し、肝臓、脳、皮膚、および他の組織の自然および獲得抗原提示細胞として機能する。脳のＤＣは、小膠細胞と呼ばれ、これらのセンチネル細胞の活性化は、炎症カスケードを引き起こす傷害および病原に対する早期の宿主反応である。
【００７７】
全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）が抗原提示樹状細胞の成熟をブロックするかどうかを決定するために、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ遠心分離を使用してヒトＰＢＭＣが末梢血液から単離され、次に、イムノビード（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用する負の選択によって、単球が単離された。次に、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ４で単球を処理することにより、ヒト単球由来の未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）を生成した。
【００７８】
ｉＤＣを１０〜１２Ｍの全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、一般名称ＲＡＰ１０３  （１２）で３０分間処理した。３０分後、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を細胞に添加し、フローサイトメトリーによって、蛍光標識抗体を使用して、表面成熟マーカについて、４８時間後に細胞を解析した。図１は、ＴＬＲ４／ＭｙＤ８８活性化（ＬＰＳ）によって誘導されるＣＤ８６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５８（接着分子）およびＩＣＡＭ１（接着分子）発現の結果を示す。全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を添加したものと添加しないものがある。 
【００７９】
脳において、すべての実質細胞または非実質細胞の種類によってＴＬＲ４が発現され、様々な病因によって引き起こされる組織損傷に寄与する。ＴＬＲ４活性化は、キナーゼ活性化（ＥＲＫ１／２、ｐ３８、ＴＢＫ１）、転写因子活性化（ＮＦκＢ、ＩＲＦ３）および、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６などの炎症誘発サイトカインの転写増加につながり、これらの経路すべては、てんかん発作および発作活動に関連する（４、９、１６、３７、３８）。この免疫シグナリングカスケードはまた、主題のペプチドによって治療できる神経変性および脳損傷の他の後遺症において主要役割を果たすと考えられる。
【００８０】
図１のＡからＤのプロットにおいて見られるように、全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）で細胞を前処理にすることにより、図に列挙されるＴＬＲ４刺激成熟マーカのすべての発現が低減される。これらの表面分子は、Ｔ細胞活性化および組織における局所化を制御する。小膠細胞は、脳の抗原提示ＤＣである。ＤＣ／小膠細胞成熟のブロックおよびＴＬＲ４／ＭｙＤ８８による活性化は、発作、てんかん、脳損傷、および認知機能低下における炎症を抑制する。
【００８１】
本発明者の結果は、成熟マーカＣＤ８６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５８（接着分子）およびＩＣＡＭ１（接着分子）が、ＴＬＲ４／ＭｙＤ８８活性化（ＬＰＳ）を介して刺激されたとき、全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を用いた細胞の前処理によって低減されることを示した。これらの成熟マーカの発現は、組織損傷、神経細胞毒性、抗原認識、小膠細胞活性化、ならびにサイトカインケモカイン放出の文脈における免疫細胞トラフィキングおよび免疫応答の仲介において周知である。
【００８２】
しかしながら、全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）は、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）（不図示）に結合する抗微生物ペプチドＬＬ３７によって引き起こされる、これら４つのマーカのＤＣ成熟に対して効果を有しなかった。全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）の作用は、従って、ＴＬＲ４／ＭｙＤ８８に対する特異性を示す。
【００８３】
ＴＬＲ４シグナリングは、小膠細胞、星状細胞、および、更には神経細胞を含む脳の細胞において生じる。そのようなシグナリングは、神経毒、ＳＥ、および発作活動につながる炎症形質を仲介する。ＤＣ成熟の阻害は、同様に発作活動を促進し得る敗血症性ショック、または、ＴＮＦレベルが増大する他の病態において利点を有する。結論として、全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）および関連類似体は、脳における抗原提示樹状細胞（小膠細胞）活性化を調節することにより、発作、てんかん、脳損傷、過剰興奮性、ジスキネジア、および認知機能低下において有益な効果を有し得る。いくつか例を挙げると、肝臓クッパー細胞または皮膚ランゲルハンス細胞など、他の樹状細胞において、これらのペプチドは、非アルコール脂肪性肝炎または乾癬の根底にある炎症を低減できる。
【００８４】
図２は全Ｄ［ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）］、一般名称ＲＡＰ−１０３を示し、ＣＣＲ５およびＣＣＲ２ヒト単球遊走のデュアルアンタゴニストである。単球は、ヒトＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）またはＣＣＬ４（ＭＩＰ−１β）（両方とも５０ｎｇ／ｍＬ）に対する９０分間の遊走の前に、示される用量のＲＡＰ−１０３で３０分間処理された。データ（遊走インデックス）は、平均±ＳＥＭとして示される。ＲＡＰ−１０３無しのＭＣＰ−１の遊走インデックスは、対照の２．５〜３．５倍であった。ＲＡＰ−１０３無しのＭＩＰ−１は、対照の約２倍であった。データは平均±ＳＥＭとして示される。（未処理ＲＡＰ−１０３に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）データは（１２）、図１のものである。結果は、これらのペプチドの更なる有用な作用を示す。ＣＣＲ２／ＣＣＲ５のブロックは、発作、てんかん、脳損傷、および認知機能低下において有益であるからである。デュアルケモカインＣＣＲ２／ＣＣＲ５受容体アンタゴニストは、複数の炎症経路をブロックすることにより、治療の価値を追加し得る。 
【００８５】
図３は、ＤＡＰＴＡ関連ペンタペプチドの全Ｄバージョン３つの更なる例、すなわち、全Ｄ‐ＳＳＴＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、全Ｄ‐ＴＴＳＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、および、全Ｄ‐ＮＴＳＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）が同様に、ＣＣＬ２ヒト単球遊走のアンタゴニストであり、発作、てんかん、脳損傷、および認知機能低下の炎症原因において利点を提供すると予想されることを示す。使用される方法は、図２と同様である。
【００８６】
図４は、炎症の齧歯動物傷害モデルにおけるケモカインＣＣＬ２およびＣＣＬ３、ケモカイン受容体ＣＣＲ２およびＣＣＲ５、ならびに、サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦの低減を示す。具体的な実験の詳細は、Ｐａｄｉ，  ２０１２  （１２）において提供される。デルタ１ペプチドＴアミドおよび全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）の両方は、受容体標的および生物学的効果を共有する。このことは、それらが同一の病原体プロセスを標的とする類似体であることを示す。従って、構造的な関連類似体から予想されるように、記載されるＤＡＰＴＡ関連ペプチドのすべては、同一の作用、利点、および治療機構を共有すると予想される。てんかん、発作、および脳損傷に関連する標的生体分子は、表１にまとめられる。
【００８７】
てんかんまたは発作または一般の脳損傷における炎症の保護に関連する主題のペプチドの更なる作用は、炎症性サイトカイン、ケモカイン、および、疾患プロセスの根底にあるそれらの受容体を減少させる能力である。表１は、デルタ１ペプチドＴアミド（ＤＡＰＴＡ）がヒトにおける炎症性サイトカインレベルを低減することを示す。効果は、神経損傷ラットに７日間にわたって１ｋｇあたり０．０５〜１ｍｇ／ｋｇの用量で強制経口投与されたペンタペプチド全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）（ＲＡＰ−１０３）によって共有される。当該ラットはまた、てんかん、発作、および脳損傷において同定される主要なバイオマーカの低減を示した。
表１．ＤＡＰＴＡおよび全Ｄ−ＴＴＮＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）のバイオマーカ変化の概要
【表１】
2021530570.tif 000003
【００８８】
本発明の主な応用は、脳損傷、てんかん、または他の中枢神経系障害に関連する発作の抑制および防止である。それらの根底にある原因である病因は、ケモカインＣＣＲ２およびＣＣＲ５、ＴＬＲ４、ならびにサイトカイン経路を介する持続的炎症に関連し、これらはすべて、主題のペプチドによって減衰される。
【００８９】
一般には古典的および選択的活性化と称され、Ｍ１およびＭ２とも称され、バイオマーカの選択に関連する複数の機能的表現型を発現するために、マクロファージが活性化され得る。
【００９０】
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【００９１】
【図１】
2021530570.tif 000004
【図２】
2021530570.tif 000005
【図３】
2021530570.tif 000006
【図４】
2021530570.tif 000007
【配列表】
2021530570000001.app
【国際調査報告】
2021530570.tif 000008
2021530570.tif 000009
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