(57)【要約】  本発明は、ＣＤＫ８／１９阻害薬の性質を示す式Ｉ：2021533143.tif 000044の新規化合物、前記化合物を含む医薬組成物、ならびに疾患および障害を処置するための医薬としてのその使用に関する。
2021533143.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
2021533143.tif 000039
または薬学的に許容されるその塩もしくは立体異性体
［式中、Ｌは、−［ＣＨ２］０−３−、−［ＣＨ２］０−２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−［ＣＨ２］０−２−であり、
Ｒは、−ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ６であり、
Ｒ１は、−ＮＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ２−６アルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ２−６アルキニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１０で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１１で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、または
Ｒ２およびＲ３は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ２およびＲ３によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されていてもよく、
Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ２−６アルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ２−６アルキニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１５で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１６で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、または
Ｒ４およびＲ５は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ４およびＲ５によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されていてもよく、
Ｒ６は、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１７で置換されているＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ７およびＲ１２は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＳＯ２Ｒ２２、−ＳＯ２ＮＲ２３Ｒ２４；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ９およびＲ１４は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＳＯ２Ｒ２２、−ＳＯ２ＮＲ２３Ｒ２４、オキソ基；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ１６は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＳＯ２Ｒ２２、−ＳＯ２ＮＲ２３Ｒ２４；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、およびＲ２１は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、または
Ｒ１９およびＲ２０は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ１９およびＲ２０によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、またはオキソ基；Ｈａｌ；ＯＨ；ＮＨ２；ＣＮ；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルコキシ；Ｃ１−６アルキルアミノから選択される１つまたは２つの置換基で置換されていてもよい］。
【請求項２】
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、−ＮＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１０で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１１で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、
各Ｒ７およびＲ９は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０であり、
各Ｒ８、Ｒ１０、およびＲ１１は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
各Ｒ１８、Ｒ１９、およびＲ２０は、独立に、Ｈ、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３〜Ｃ７シクロアルキルである、または
Ｒ１が、
【化２】
2021533143.tif 000040
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２６、Ｒ２７、Ｒ２８は、Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１、２、３である、請求項１から２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒが、−ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ６であり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１５で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１６で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、
各Ｒ１２およびＲ１４は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０であり、
各Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ１６は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
各Ｒ１８、Ｒ１９、およびＲ２０は、独立に、Ｈ、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ４およびＲ５によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されていてもよく、
４〜７員ヘテロ環式環は、
【化３】
2021533143.tif 000041
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２８は、Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１、２、３であり、
Ｒ６は、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキルである、請求項１から３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、
【化４】
2021533143.tif 000042
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒが、
【化５】
2021533143.tif 000043
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
８−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルメチル）−５−（４−（１−（２−（ジメチルアミノ）−２−オキソエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．４３）；
８−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルメチル）−５−（４−（１−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．４４）；
８−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルメチル）−５−（４−（１−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．４５）；
８−アミノ−Ｎ−シクロプロピル−５−（４−（１−（２−（ジメチルアミノ）−２−オキソエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．４６）；
８−アミノ−Ｎ−シクロプロピル−５−（４−（１−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．４７）；
８−アミノ−Ｎ−シクロプロピル−５−（４−（１−（２−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．４８）；
２−（４−（４−（８−アミノ−３−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−１，７−ナフチリジン−５−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３．４９）；
２−（４−（４−（８−アミノ−３−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−１，７−ナフチリジン−５−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド二塩酸塩（３．４９×２ＨＣｌ）
２−（４−（４−（８−アミノ−３−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−１，７−ナフチリジン−５−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−１−（４−メチルピペラジン−１イル）エタン−１−オン（３．５０）；
（８−アミノ−５−（４−（１−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−イル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（３．５１）；
２−（４−（４−（８−アミノ−３−（アゼチジン−１−カルボニル）−１，７−ナフチリジン−５−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３．５２）；
２−（４−（４−（８−アミノ−３−（アゼチジン−１−カルボニル）−１，７−ナフチリジン−５−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オン（３．５３）；
（８−アミノ−５−（４−（１−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−イル）（アゼチジン−１−イル）メタノン（３．５４）；
８−アミノ−５−（４−（１−（２−（ジメチルアミノ）−２−オキソエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル−Ｎ−（２−メトキシエチル）−Ｎ−メチル−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．５５）；
８−アミノ−Ｎ−（２−メトキシエチル）−Ｎ−メチル−５−（４−（１−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．５６）；
８−アミノ−Ｎ−（２−メトキシエチル）−５−（４−（１−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−Ｎ−メチル−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（３．５７）
である、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９を、請求項１から７のいずれかに記載の化合物と接触させるステップを含む、対象においてサイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の生物活性を阻害するための方法。
【請求項９】
治療有効量の請求項１から７のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される１種または複数の賦形剤とを含み、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を予防または処置するために製剤されている医薬組成物。
【請求項１０】
サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害が、腫瘍性または血液腫瘍性疾患である、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を予防または処置するための、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
腫瘍性または血液腫瘍性疾患が、結腸直腸がん、黒色腫、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、前立腺がん、転移性卵巣がん、転移性胃がん、白血症、急性骨髄性白血病、膵臓がんを含む群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を処置するための方法であって、それを必要とする対象において、治療有効量の請求項１から７のいずれかに記載の化合物もしくは薬学的に許容されるその塩、または請求項９に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１３】
サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害が、腫瘍性または血液腫瘍性疾患である、請求項１２に記載の疾患または障害を処置するための方法。
【請求項１４】
腫瘍性または血液腫瘍性疾患が、結腸直腸がん、黒色腫、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、前立腺がん、転移性卵巣がん、転移性胃がん、白血症、急性骨髄性白血病、膵臓がんを含む群から選択される、請求項１３に記載の疾患を処置するための方法。
【請求項１５】
それを必要とする対象において、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を処置するための、請求項１から７のいずれかに記載の化合物もしくは薬学的に許容されるその塩、または請求項９に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１６】
サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害が、腫瘍性または血液腫瘍性疾患である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
腫瘍性およびまたは血液腫瘍性疾患が、結腸直腸がん、黒色腫、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、前立腺がん、転移性卵巣がん、転移性胃がん、白血症、急性骨髄性白血病、膵臓がんを含む群から選択される、請求項１６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のＣＤＫ８／１９阻害薬、その調製方法、本化合物を含む医薬組成物、ならびに前記化合物または前記組成物を疾患および障害の処置において使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤＫ８は、構造および機能に関して密接に関係しているそのアイソフォームであるＣＤＫ１９と共に、発癌性転写調節キナーゼである（Ｘｕ，Ｗ．＆  Ｊｉ，Ｊ．Ｙ．（２０１１）、Ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤＫ８  ａｎｄ  Ｃｙｃｌｉｎ  Ｃ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ、Ｊ．Ｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３８、４３９〜４５２；Ｇａｌｂｒａｉｔｈ，Ｍ．Ｄ．ら（２０１０）；Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ，Ｒ．＆Ｈａｈｎ，Ｗ．Ｃ．（２００９）。ＣＤＫ１、ＣＤＫ２およびＣＤＫ４／６キナーゼとは対照的に、ＣＤＫ８は、細胞周期調節において役割を果たさず、したがって、ＣＤＫ８をブロックすることによって、正常細胞の増殖は抑制されない（Ａｄｌｅｒ，Ａ．Ｓ．ら（２０１２）、ＣＤＫ８  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｔｕｍｏｒ  ｄｅ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７２、２１２９〜２１３９；Ｋａｐｏｏｒ，Ａ．ら（２０１０）、Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｖａｒｉａｎｔ  ｍａｃｒｏＨ２Ａ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤＫ８、Ｎａｔｕｒｅ  ４６８、１１０５〜１１０９）。しかし、ＣＤＫ８は、多能性幹細胞表現型の形成において本質的な役割を果たすため（Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ，Ｒ．ら（２００８））、胚性幹細胞においてＣＤＫ８がノックアウトされると、胚発生が妨げられる（Ａｄｌｅｒ，Ａ．Ｓ．ら（２０１２））。ＣＤＫ８の発癌における役割は、いくつかの転写プログラムの調節因子としてのその独特な機能によるものである（Ｘｕ，Ｗ．＆Ｊｉ，Ｊ．Ｙ．（２０１１））。ＣＤＫ８過剰発現は、結腸がん（Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ，Ｒ．ら（２０１０））、黒色腫（Ｋａｐｏｏｒ，Ａ．ら（２０１０））、乳がん（Ｂｒｏｕｄｅ  Ｅ．ら（２０１５））の５０％において観察されており、不良な予後と関連付けられている（Ｇｙｏｒｆｆｙ，Ｂ．ら（２０１０））。
【０００３】
ＣＤＫ８の発癌作用には、Ｗｎｔ／βシグナル伝達経路の上向き調節（Ｋａｐｏｏｒ，Ａ．ら（２０１０）；Ａｌａｒｃｏｎ，Ｃ．ら（２００９）、Ｎｕｃｌｅａｒ  ＣＤＫｓ  ｄｒｉｖｅ  Ｓｍａｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ｉｎ  ＢＭＰ  ａｎｄ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｐａｔｈｗａｙｓ、Ｃｅｌｌ  １３９、７５７〜７６９）、成長因子ＮＦ−ｋＢによって誘発される転写（ＤｉＤｏｎａｔｏ，Ｊ．Ａ．ら（２０１２）、ＮＦ−ｋａｐｐａＢ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｌｉｎｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２４６、３７９〜４００）、およびＴＧＦβシグナル伝達経路の活性化（Ａｃｈａｒｙｙａ，Ｓ．ら（２０１２）、Ａ  ＣＸＣＬ１  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｌｉｎｋｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ、Ｃｅｌｌ  １５０、１６５〜１７８）が介在する。化学療法薬が、ＤＮＡ損傷、ＴＮＦα誘導、転写因子ＮＦｋＢの活性化の一因になることは知られている（Ｆａｂｉａｎら（２００５）、Ａ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３、３２９〜３３６）。間質由来ＴＮＦａは、腫瘍細胞に作用し、そこで、サイトカインであるＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２の、ＮＦｋＢを介した産生を誘導し、腫瘍細胞の増殖を促進する。ＣＸＣＬ１／２は、骨髄性細胞表面上のＣＸＣＲ２受容体に結合することにより、骨髄性細胞を腫瘍へと誘引する。次に、骨髄性細胞が、慢性炎症および腫瘍成長と関連するＳ１００Ａ８／９タンパク質を分泌する（Ｈｕａｎｇら（２０１２）、ＭＥＤ１２  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−β  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｃｅｌｌ  １５１、９３７〜９５０）。ＣＤＫ８は、胚性幹細胞の多能性の表現型を維持する場合があり、がん幹細胞表現型と関連しうることも示されている（Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ，Ｒ．ら（２００８）、ＣＤＫ８  ｉｓ  ａ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｔｈａｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ、Ｎａｔｕｒｅ  ４５５、５４７〜５５１）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
現在、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９を阻害する新たな化合物を探索することへの関心が高まっている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の記述において使用する用語を以下に示す。
「アルキル」とは、１〜１２個の炭素原子、より好ましくは、１〜６個の炭素原子を有する脂肪族の直鎖または分鎖炭化水素基を意味する。「分」鎖とは、１つまたは複数の「低級アルキル」置換基を有するアルキル鎖を意味する。アルキル基の例としては、限定はしないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ｎｅｏ−ペンチル、ｎ−ヘキシルが挙げられる。アルキルは、同じ構造でも異なる構造でもよい置換基を有する場合がある。
【０００６】
「アルケニル」とは、１〜１２個の炭素原子、より好ましくは、１〜６個の炭素原子を有し、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合（ｄｏｕｂｌｅ  ｂｏｕｎｄ）を含んでいる、脂肪族の直鎖または分鎖炭化水素基を意味する。アルケニルは、同じ構造でも異なる構造でもよい置換基を有する場合がある。典型的なアルケニル基は、限定はせず、ビニル、アリル、１−メチルエテニル、プロパ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−３−エニル、１−メチルプロパ−１−エニル、１−メチルプロパ−２−エニル、２−メチルプロパ−１−エニル、２−メチルプロパ−２−エニルである。
【０００７】
「アルキニル」とは、２〜１２個の炭素原子、より好ましくは、２〜６個の炭素原子を有し、１つまたは複数の炭素−炭素三重結合（ｔｒｉｐｌｅ  ｂｏｕｎｄ）を含んでいる、直鎖または分鎖炭化水素基を意味する。アルキニルは、同じ構造でも異なる構造でもよい置換基を有する場合がある。アルキニル基の例としては、限定はしないが、エテニル、プロパルギル、１−メチルプロパ−２−イニル、２−メチルプロパ−１−エニル、ブタ−１−イニル、ブタ−２−イニル、ブタ−３−イニルが挙げられる。
【０００８】
「シクロアルキル」とは、３〜１０個の炭素環原子を含んだ飽和炭素環を意味する。シクロアルキル基の例としては、限定はしないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシルなどの単環式基、ビシクロヘプチルやビシクロオクチルなどの二環式基が挙げられる。シクロアルキルは、同じ構造でも異なる構造でもよい置換基を有する場合もある。
【０００９】
「シクロアルケニル」とは、環に３〜１０個の炭素原子を含む非芳香族炭素環系を意味し、環は、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合を含んでいる。シクロアルケニルは、同じ構造でも異なる構造でもよい置換基を有する場合もある。シクロアルケニル基の例としては、限定はしないが、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル、シクロノネニル、シクロデセニルなどの単環式基が挙げられる。
【００１０】
「アリール」とは、６〜１４個の炭素原子、より好ましくは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族の単環または多環系を意味する。アリールは、同じ構造でも異なる構造でもよい環系置換基を有する場合もある。アリールは、シクロアルキル、ヘテロ環、またはヘテロアリールと縮環されている場合がある。アリール基の例としては、限定はしないが、フェニル、ナフチル、アントラニルなどが挙げられる。
【００１１】
「アルキルオキシ」または「アルコキシ」とは、アルキル−Ｏ−基を意味し、アルキルは、本節において定義している。アルコキシ基の例としては、限定はしないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉｓｏ−プロポキシ、およびｎ−ブトキシが挙げられる。
【００１２】
「アミノ基」とは、Ｒ’Ｒ”Ｎ−基を意味する。
Ｒ’およびＲ”の例としては、限定はしないが、本明細書で定義する、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリールを含む群から選択される置換基が挙げられ、またはＲ’およびＲ”は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、４〜７員ヘテロシクリルまたは５〜１０員ヘテロアリールを形成する。
【００１３】
「アルキルスルホニル」（−Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１〜Ｃ６アルキル）とは、スルホニル基−ＳＯ２−を介して適切な分子断片に結合している、上で定義したとおりの「アルキル」を意味する。アルキルスルホニルの例としては、限定はしないが、メチルスルホニル、エチルスルホニルなどが挙げられる。
【００１４】
「低級アルキル」とは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分鎖アルキルを意味する。
「ハロ」または「ハロゲン」（Ｈａｌ）とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを意味する。
【００１５】
「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロ環式環」とは、３〜１１個の炭素原子を有し、そのうち１個または複数の炭素原子が窒素、酸素、硫黄などの１個または複数のヘテロ原子で置換されている、単環または多環非芳香族系を意味する。ヘテロ環は、アリールまたはヘテロアリールと縮合している場合がある。ヘテロ環は、同じ構造でも異なる構造でもよい１つまたは複数の置換基を有する場合もある。ヘテロ環の窒素および硫黄原子は、酸化されてＮ−オキシド、Ｓ−オキシド、またはＳ−ジオキシドになっていてもよい。ヘテロ環は、完全飽和、部分飽和および不飽和である場合がある。ヘテロ環の例としては、限定はしないが、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン、ピペラジン、モルホリン他が挙げられる。
【００１６】
「ヘテロアリール」とは、５〜１１個、好ましくは５〜１０個の炭素原子を有し、そのうち１個または複数の炭素原子が窒素、硫黄、酸素などの１個または複数のヘテロ原子で置換されている、芳香族の単環または多環系を意味する。ヘテロ環の窒素原子は、酸化されてＮ−オキシドになっていてもよい。ヘテロアリールは、同じ構造でも異なる構造でもよい１つまたは複数の置換基を有する場合もある。ヘテロアリールは、シクロアルキル、ヘテロ環、またはアリールと縮環されている場合もある。ヘテロアリールの例としては、限定はしないが、ピロリル、フラニル、チエニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フラザニル、トリアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、キノキサリニル、フタラジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾリル、ベンゾフラザニル、インドリル、アザインドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゼニル、キノリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チエノピリジル、キナゾリニル、ナフチリジニル、チエノピリミジニル、ピロロピリジニル、イミダゾピリジル、イソキノリニル、ベンゾアザインドリル、１，２，４−トリアジニル、チエノピロリル、フロピロリルなどが挙げられる。
【００１７】
「部分飽和」とは、少なくとも１つの二重または三重結合を含む環系を意味する。用語「部分飽和」は、飽和の部位を多く有する環に関連し、上で定義したとおりのアリールおよびヘテロアリール系を包含しない。
【００１８】
本文書で使用する用語「オキソ」は、基＝Ｏに関する。
「置換基」とは、骨格（断片）に結合している化学基を意味する。
「溶媒和物」とは、１つまたは複数の溶媒分子を含んだ本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩からなる分子の集合体である。溶媒分子は、レシピエントにとって安全であることがわかっている一般的な医薬用溶媒、たとえば、水、エタノール、エチレングリコールなどの分子である。メタノール、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル、（Ｒ）−プロピレングリコールまたは（Ｓ）−プロピレングリコール、１，４−ブタンジオールなどの他の溶媒は、好ましい溶媒を得るための中間体の溶媒の生成に使用することができる。
【００１９】
「水和物」とは、溶媒としての水との溶媒和物を意味する。
溶媒和物および／または水和物は、結晶質形態で存在することが好ましい。
用語「結合」、「化学結合」、または「単結合」とは、結合によって繋げられる原子が、より大きい下部構造の一部であるとみなされるとき、２つの原子または２つの部分（すなわち、基、断片）が化学的に結合することを指す。
【００２０】
用語「保護基」とは、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基などの官能基の反応性をブロックするのに使用される基を指す。保護基の例としては、限定はしないが、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチルアセタール（ＳＥＭ）、トリアルキルシリル、アルキル（ジアリール）シリルまたはアルキルが挙げられる。
【００２１】
用語「賦形剤」は、本明細書では、本発明の化合物以外のいずれかの成分について述べるのに使用する。
「医薬組成物」とは、本発明の化合物と、薬学的に許容される１種または複数の賦形剤とを含む組成物を意味する。賦形剤は、薬学的に許容され、薬理学的に適合する充填剤、溶媒、希釈剤、担体、佐剤、分配剤および検出剤（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、送達剤、たとえば、保存剤、安定剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤（ｍｏｉｓｔｅｎｅｒ）、乳化剤、懸濁化剤、増粘剤、甘味剤、着香剤、付香剤（ａｒｏｍａｔｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、抗菌剤、殺かび剤、滑沢剤、および長期送達制御剤（ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ）からなる群から選択することができ、その選択および適切な割合は、投与の種類および方法ならびに投与量に応じて決まる。適切な懸濁化剤の例としては、限定はしないが、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレン、ソルビトールおよびソルビトールエーテル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、またこれらの混合物が挙げられる。たとえば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸、および同様の化合物などの、種々の抗菌および殺かび剤によって、微生物の活動からの保護を実現することができる。組成物は、たとえば、糖、塩化ナトリウム、および同様の化合物などの等張剤も含有する場合がある。活性成分の吸収を遅くする薬剤、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンによって、組成物の持続性作用を実現することができる。注射剤について、適切な担体、溶媒、希釈剤、および送達剤の例としては、限定はしないが、水、エタノール、多価アルコール、およびこれらの混合物、（オリーブ油などの）自然の油および（オレイン酸エチルなどの）有機エステルが挙げられる。充填剤の例は、限定はしないが、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなどである。崩壊剤および分配剤（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ）の例は、限定はせず、デンプン、アルギン酸およびその塩、シリケートなどである。適切な滑沢剤の例は、限定はしないが、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、および高分子量ポリエチレングリコールである。活性成分を単独で、または別の活性化合物と組み合わせて、経口、舌下、経皮、筋肉内、静脈内、皮下、局所、または直腸投与するための医薬組成物は、伝統的な医薬用担体との混合物にした標準の投与形態として、ヒトおよび動物に投与することができる。適切な標準投与形態としては、限定はしないが、錠剤、ゼラチンカプセル剤、丸剤、粉末、顆粒、チューインガム、経口溶液または懸濁液などの経口形態；舌下および頬側投与形態；エアロゾル；植込錠；局所、経皮、皮下、筋肉内、静脈内、鼻腔内、または眼内形態、および直腸投与形態が挙げられる。
【００２２】
「薬学的に許容される塩」とは、本発明で開示する酸および塩基の、相対的に非毒性である有機塩および無機塩を意味する。本明細書で提供する化合物の塩は、無機または有機の酸および塩基から得ることができる。そのようにして調製される塩の例としては、限定はしないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、スルファミン酸塩など；ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、およびアルミニウム塩、第一級、第二級、および第三級アミン塩、天然に存在する置換アミン塩を始めとする置換アミン塩、環状アミン塩、たとえば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン（ｔｒｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジンが挙げられる（このような塩調製についての詳細な記述は、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７、６６：１〜１９に示されている）。リシン、オルニチン、およびアルギニンからアミノ酸を選択してもよい。
【００２３】
「医薬（薬）」とは、ヒトおよび動物における生理機能の回復、改善、または修正、疾患の処置および予防、診断、麻酔、避妊、および美容術他を目的とする、錠剤、カプセル剤、注射剤、軟膏、および他の調製済み形態の化合物（または化合物の医薬組成物としての混合物）である。
【００２４】
「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、生物学的障害および／またはそれに付随する症状の少なくとも１つを緩和または排除する方法を指す。疾患、障害、または状態を「緩和する」という用語は、疾患、障害、または状態の症状の重症度および／または発生頻度を低減することを意味する。さらに、本明細書における「処置」への言及は、治癒的、対症的、および予防的処置への言及を包含する。
【００２５】
一側面では、処置の対象、すなわち患者は、哺乳動物、好ましくは、ヒト対象である。前記対象は、いずれかの齢の雄性または雌性である場合がある。
用語「障害」とは、本発明の化合物による処置が恩恵をもたらすいずれかの状態を意味する。この用語は、哺乳動物を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含めて、慢性および急性の障害または疾患を意味する。本明細書において処置対象となる障害の非限定的な例としては、腫瘍性疾患（ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、特に、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、卵巣がん、転移性卵巣がん、胃がん、転移性胃がん、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、または結腸がん；結腸直腸がん、黒色腫、転移性黒色腫、甲状腺、膵臓、前立腺、または膀胱がん；血液腫瘍性疾患、白血症（ｌｅｕｃｏｓｅ）、急性骨髄性白血病、およびリンパ系悪性腫瘍、ニューロン、グリア、星状細胞、視床下部、および他の腺、マクロファージ、上皮、間質、および胞胚腔障害；炎症性、血管形成性、および免疫性障害が挙げられる。
【００２６】
「治療有効量」とは、処置がなされる疾患／障害の症状の１つまたは複数をある程度解消する、投与される治療薬の量を指す。
本記述および後続の特許請求の範囲において、文脈からそうでないことが示されない限り、語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｈａｖｅ」、「ｉｎｃｌｕｄｅ」、または「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｈａｓ」、「ｈａｖｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」などの変形語、およびそのすべての文法的変異は、明記された完全体または完全体の群を含むが、他の完全体または完全体の群を除外しないことを示唆すると理解される。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物：
【００２８】
【化１】
2021533143.tif 000003
【００２９】
または薬学的に許容されるその塩もしくは立体異性体に関する。
式中、Ｌは、−［ＣＨ２］０−３−、−［ＣＨ２］０−２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−［ＣＨ２］０−２−であり、
Ｒは、−ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ６であり、
Ｒ１は、−ＮＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ２−６アルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ２−６アルキニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１０で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１１で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、または
Ｒ２およびＲ３は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ２およびＲ３によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されていてもよく、
Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ２−６アルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ２−６アルキニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１５で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１６で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、または
Ｒ４およびＲ５は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ４およびＲ５によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されていてもよく、
Ｒ６は、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１７で置換されているＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ７およびＲ１２は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＳＯ２Ｒ２２、−ＳＯ２ＮＲ２３Ｒ２４；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ９およびＲ１４は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＳＯ２Ｒ２２、−ＳＯ２ＮＲ２３Ｒ２４、オキソ基；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ１６は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、−ＳＯ２Ｒ２２、−ＳＯ２ＮＲ２３Ｒ２４；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、およびＲ２１は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、または
Ｒ１９およびＲ２０は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ１９およびＲ２０によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、またはオキソ基；Ｈａｌ；ＯＨ；ＮＨ２；ＣＮ；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルコキシ；Ｃ１−６アルキルアミノから選択される１つまたは２つの置換基で置換されていてもよい。
【００３０】
別の一態様では、本発明は、Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−である式Ｉの化合物に関する。
別の一態様では、本発明は、Ｒ１が、−ＮＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ２−６アルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ２−６アルキニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１０で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１１で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１は、上述の意味を有する、または
Ｒ１が、
【００３１】
【化２】
2021533143.tif 000004
【００３２】
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２６、Ｒ２７、Ｒ２８は、Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１、２、３である、式Ｉの化合物に関する。
【００３３】
別の一態様では、本発明は、Ｒが、−ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ６であり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ２−６アルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ２−６アルキニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルケニル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１５で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１６で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６は、上述の意味を有する、または
Ｒ４およびＲ５は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ４およびＲ５によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されていてもよく、
４〜７員ヘテロ環式環は、
【００３４】
【化３】
2021533143.tif 000005
【００３５】
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２８は、Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１、２、３であり、
Ｒ６は、非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１７で置換されているＣ１−６アルキルであり、
Ｒ１７は、上述の意味を有する、式Ｉの化合物に関する。
【００３６】
別の一態様では、本発明は、Ｒ１が、−ＮＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ８で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ９で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１０で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１１で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、
各Ｒ７およびＲ９は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０であり、
各Ｒ８、Ｒ１０、およびＲ１１は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
各Ｒ１８、Ｒ１９、およびＲ２０は、独立に、Ｈ、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、または
Ｒ１が、
【００３７】
【化４】
2021533143.tif 000006
【００３８】
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２６、Ｒ２７、Ｒ２８は、Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１、２、３である、式Ｉの化合物に関する。
【００３９】
別の一態様では、本発明は、Ｒが、−ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ６であり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ１−６アルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１３で置換されているＣ３−７シクロアルキル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１５で置換されているアリール；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１６で置換されている、Ｎ、Ｏ、および／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、
各Ｒ１２およびＲ１４は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０であり、
各Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ１６は、独立に、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＮ、−ＯＲ１８、−ＮＲ１９Ｒ２０、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１９Ｒ２０、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
各Ｒ１８、Ｒ１９、およびＲ２０は、独立に、Ｈ、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、または
Ｒ４およびＲ５は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎおよび／またはＯから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロ環式環を形成しており、Ｒ４およびＲ５によって形成されるヘテロ環式環は、非置換でも、または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１４で置換されていてもよく、
４〜７員ヘテロ環式環は、
【００４０】
【化５】
2021533143.tif 000007
【００４１】
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２８は、Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１、２、３であり、
Ｒ６は、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキルである、式Ｉの化合物に関する。
【００４２】
別の一態様では、本発明は、Ｒ１が、−ＮＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ７で置換されているＣ１−６アルキルであり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ１８；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
Ｒ１８は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである、または
Ｒ１が、
【００４３】
【化６】
2021533143.tif 000008
【００４４】
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２６およびＲ２８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１である、式Ｉの化合物に関する。
【００４５】
別の一態様では、本発明は、Ｒが、−ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ６であり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかの置換基Ｒ１２で置換されているＣ１−６アルキルであり、
Ｒ６は、非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１−６アルキルであり、
Ｒ１２は、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ１８；非置換またはＣ１−６アルキル、ハロゲンから選択される１つもしくはいくつかの基で置換されているＣ３−７シクロアルキルであり、
各Ｒ１８は、独立に、Ｈ；非置換または１つもしくはいくつかのハロゲンで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルである、または
Ｒが、
【００４６】
【化７】
2021533143.tif 000009
【００４７】
であり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ２８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシであり、
ｎは、０、１である、式Ｉの化合物に関する。
【００４８】
別の一態様では、本発明は、
Ｒ１が、
【００４９】
【化８】
2021533143.tif 000010
【００５０】
、−ＮＲ２Ｒ３であり、
各Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ；非置換またはＨａｌ、−ＯＲ１８、Ｃ３−７シクロアルキルで置換されているＣ１−６アルキル；Ｃ３−７シクロアルキルであり、
Ｒ１８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキルである、式Ｉの化合物に関する。
【００５１】
別の一態様では、本発明は、
Ｒ１が、
【００５２】
【化９】
2021533143.tif 000011
【００５３】
である、式Ｉの化合物に関する。
別の一態様では、本発明は、
Ｒが、
【００５４】
【化１０】
2021533143.tif 000012
【００５５】
、−ＮＲ４Ｒ５、−Ｏ−Ｒ６であり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立に、Ｈ、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキルである、式Ｉの化合物に関する。
【００５６】
別の一態様では、本発明は、
Ｒが、
【００５７】
【化１１】
2021533143.tif 000013
【００５８】
である、式Ｉの化合物に関する。
別の一態様では、本発明は、
−Ｌ−Ｒが、
【００５９】
【化１２】
2021533143.tif 000014
【００６０】
である、式Ｉの化合物に関する。
本発明において記載する化合物は、薬学的に許容される塩として生成および／または使用することができる。薬学的に許容される塩の種類には、限定はしないが、遊離塩基形態の化合物を、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタリン酸などの薬学的に許容される無機酸、または酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−メチルビシクロ−［２．２．２］オクタ−２−エン−ｌ−カルボン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス−３−ヒドロキシ−２−エン−ｌ−カルボン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸と反応させることにより生成される酸性塩が挙げられる。
【００６１】
薬学的に許容される塩の対応する対イオンは、限定はしないが、イオン交換クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動、誘導結合高周波プラズマ、原子吸光分光法、質量分析、またはこれらのいずれかの組合せを始めとする種々の方法を使用して、分析および特定することができる。
【００６２】
塩は、次の方法、すなわち、濾過、非溶媒を用いた沈殿に続く濾過、溶媒の蒸発、または、水溶液の場合では、凍結乾燥の少なくとも１つを使用することにより回収される。薬学的に許容される塩への言及は、その溶媒付加形態または結晶形態（ｃｒｙｓｔａｌ  ｆｏｒｍ）、特に、溶媒和物または多形体を包含することを理解すべきである。溶媒和物は、化学量論量または非化学量論量の溶媒を含有し、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒を用いた結晶化の過程で生成しうる。溶媒が水であるとき、水和物が生成し、または溶媒がアルコールであるとき、アルコール和物が生成する。本明細書に記載の溶媒和物は、本明細書に記載の工程の間に好都合に調製または生成することができる。加えて、本明細書で提供する化合物は、溶媒和した形態だけでなく、溶媒和していない形態としても存在しうる。一般に、溶媒和した形態は、本明細書で提供する化合物および方法の目的では、溶媒和していない形態と同等であるとみなされる。
【００６３】
本明細書に記載の化合物は、限定はしないが、非晶質形態、微粉砕形態、およびナノ粒子形態を始めとする、様々な形態になりうる。加えて、本明細書に記載の化合物には、多形体としても知られる結晶質形態も含まれる。多形体には、異なる結晶充填配置の同じ元素組成の化合物が含まれる。多形体は、異なるＸ線回折パターン、赤外スペクトル、融点、密度、硬さ、結晶形状、光学的および電気的性質、安定性、および溶解性を有するのが普通である。再結晶溶媒、結晶化速度、貯蔵温度などの種々の要素によって、１つの結晶形（ｃｒｙｓｔａｌ  ｆｏｒｍ）が優勢となりうる。
【００６４】
薬学的に許容される塩、多形体、および／または溶媒和物のスクリーニングおよび特徴付けは、限定はしないが、熱分析、Ｘ線回折、分光法、蒸気収着、および顕微鏡法を始めとする様々な技術を使用して実現することができる。熱分析法は、熱化学分解、または限定はしないが多形転移を始めとする熱による物理的過程の分析に対処するものであり、このような方法は、多形体型間の関係性の分析、重量減少の定量、ガラス転移温度の検出、または賦形剤適合性研究に使用される。このような方法には、限定はしないが、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、変調示差走査熱量測定（ＭＤＣＳ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、熱重量赤外分析（ＴＧ／ＩＲ）が含まれる。Ｘ線回折方法には、限定はしないが、単結晶および粉末回折計およびシンクロトロン光源が含まれる。使用される種々の分光技術には、限定はしないが、ラマン、ＦＴＩＲ、ＵＶＩＳ、およびＮＭＲ（液体および固体）が含まれる。種々の顕微鏡技術には、限定はしないが、偏光顕微鏡法、エネルギー分散Ｘ線分析（ＥＤＸ）を用いた走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、（気体または水蒸気雰囲気中での）ＥＤＸを用いた環境制御走査型電子顕微鏡法、ＩＲ顕微鏡法、およびラマン顕微鏡法が含まれる。
【００６５】
別の態様では、本発明は、以下の群から選択される化合物に関する。
【００６６】
【表１−１】
2021533143.tif 000015
【００６７】
【表１−２】
2021533143.tif 000016
【００６８】
【表１−３】
2021533143.tif 000017
【００６９】
【表１−４】
2021533143.tif 000018
【００７０】
【表１−５】
2021533143.tif 000019
【００７１】
【表１−６】
2021533143.tif 000020
【００７２】
本発明はまた、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９を、本明細書に記載の化合物と接触させることを含む、対象においてサイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の生物活性を阻害するための方法に関する。
【００７３】
一態様では、本発明は、治療有効量の本明細書に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物の少なくとも１種と、薬学的に許容される１種または複数の賦形剤とを含む医薬組成物に関する。別の一態様では、本発明の医薬組成物は、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を処置または予防するためのものである。別の一態様では、本発明は、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を予防または処置するための医薬組成物に関するものであり、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害は、腫瘍性または血液腫瘍性である。別の一態様では、本発明の医薬組成物は、結腸直腸がん、黒色腫、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、前立腺がん、転移性卵巣がん、転移性胃がん、白血症（ｌｅｕｃｏｓｉｓ）、急性骨髄性白血病、膵臓がんを処置または予防するためのものである。
【００７４】
本発明の医薬組成物は、たとえば、約１０％〜約１００％の活性成分、好ましくは、約２０％〜約６０％の活性成分を含む。複数の投与によって十分な有効量を実現することができるので、各投与量単位は、１種または複数の活性成分を有効量含まなくてもよい。
【００７５】
典型的な組成物は、本明細書に記載の化合物を１種または数種の賦形剤と混合することにより調製される。賦形剤の例としては、限定はしないが、希釈剤、担体、充填剤が挙げられる。適切な担体、希釈剤、および充填剤は、当業者によく知られており、限定はしないが、炭水化物、蝋、水溶性および／または水膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水などの材料が挙げられる。使用する特定の担体、希釈剤、または充填剤は、本発明の化合物を適用する手段および目的に応じて決まる。溶媒は、一般に、哺乳動物に投与するのに安全であると当業者が認める溶媒に準拠して選択される。一般に、安全な溶媒は、水などの非毒性水性溶媒、および水に可溶性または混和性である他の非毒性溶媒である。適切な水性溶媒は、主要な成分としての水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（たとえば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、およびこれらの混合物を含む。組成物は、薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）を洗練された体裁にし、または医薬製品（すなわち、医薬）製造の助けとするために、１種または複数の緩衝剤、安定剤、界面活性剤、湿潤剤（ｗｅｆｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、酸化防止剤、不透明化剤（ｏｐａｑｕｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、着香剤、香味剤、および他の既知の添加剤も含んでよい。
【００７６】
医薬組成物は、本発明の化合物の溶媒和物、および水和物、または安定化された形態の化合物（たとえば、シクロデキストリン誘導体または既知の他の錯形成剤との錯体）も含む。
【００７７】
本発明の医薬組成物は、経口経路投与用に製剤することができる。経口投与は、化合物が消化管に入るように医薬品を嚥下すること、および／または化合物が口から直接血流に入る、頬側、舌側、もしくは舌下投与を含みうる。
【００７８】
経口投与に適する製剤には、錠剤；顆粒；多重粒子もしくはナノ粒子、液体、または粉末を含有する軟または硬カプセル剤；口中錠（液体充填型を含める）；チュアブル剤（ｃｈｅｗ）；ゲル；急速分散型剤形；フィルム；腔坐剤；スプレー；頬側／粘膜付着性パッチなどの、固体、半固体、および液体系が含まれる。
【００７９】
液体製剤には、懸濁液、溶液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。このような製剤は、（たとえば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース製の）軟または硬カプセル剤への充填剤として用いることができ、通常は、担体、たとえば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油、ならびに１種または複数の乳化剤および／または懸濁化剤を含む。液体製剤は、たとえばサシェ剤から、固体の再構成によって調製される場合もある。
【００８０】
本発明の医薬組成物は、非経口投与に使用してよいことになる。本明細書で使用するとき、医薬組成物の「非経口投与」は、対象の組織の物理的突破、および組織における突破口からの医薬組成物の投与を特徴とし、したがって、一般に、血流、筋肉、または内臓への直接の投与がなされる結果となる、いずれかの投与経路を包含する。したがって、非経口投与には、限定はしないが、組成物の注射、外科的切開による組成物の適用、組織を貫通する非外科的創傷からの組成物の適用などによる、医薬組成物の投与が含まれる。特に、非経口投与には、限定はしないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内、静脈内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、頭蓋内、滑液包内注射または注入、および腎臓透析注入技術が含まれることが企図される。腫瘍内送達、たとえば、腫瘍内注射が有利となる場合もある。局所潅流も企図される。
【００８１】
非経口投与に適する医薬組成物の製剤は、通常は、滅菌水や滅菌等張性食塩水などの薬学的に許容される担体と組み合わされた活性成分を含む。このような製剤は、ボーラス投与または継続投与に適する形態で調製、包装、販売することができる。注射用製剤は、単位剤形として、たとえば、アンプル、または保存剤を含有する多回投与容器として調製、包装、販売することができる。非経口投与用の製剤には、限定はしないが、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、乳濁液、泥膏などが含まれる。
【００８２】
製剤を、即時および／または変更型放出がなされるように製剤してもよい。変更型放出製剤には、遅延、持続、パルス、制御、標的化、およびプログラム放出が含まれる。
一態様では、本発明は、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害を処置するための方法であって、それを必要とする対象において、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容されるその塩または本発明の医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００８３】
別の一態様では、本発明は、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する、腫瘍性または血液腫瘍性のいずれかである疾患または障害を処置するための方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載のいずれかの化合物または本発明の医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００８４】
別の一態様では、本発明は、腫瘍性および血液腫瘍性疾患が、結腸直腸がん、黒色腫、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、前立腺がん、転移性卵巣がん、転移性胃がん、白血症、急性骨髄性白血病、膵臓がんからなる群から選択される、上述の方法に関する。
【００８５】
本発明の化合物は、上述のとおりの処置の方法、上述のとおりの処置、および／または治療用途のための医薬の製造において使用することができると理解される。
本明細書で使用するとき、化合物と他の１種または複数の治療薬に関しての用語「共投与」、「共投与される」、および「組み合わせて」は、次の事項：
・  本発明の化合物と治療薬のそうした組合せの、処置を必要とする患者への同時投与［こうした成分を一緒に製剤して、前記成分を前記患者に対して実質的に同時に放出する単一剤形にする場合］、
・  本発明の化合物と治療薬のそうした組合せの、処置を必要とする患者への実質的な同時投与［こうした成分を互いに別々に製剤して、前記患者に実質的に同時に投与され、その後前記成分が前記患者に対して実質的に同時に放出される別個の剤形にする場合］、
・  本発明の化合物と治療薬のそうした組合せの、処置を必要とする患者への順次投与［こうした成分を互いに別々に製剤して、前記患者に各投与の間に有意な時間間隔をおいて連続的に投与され、その後前記成分が前記患者に対して実質的に異なる時期に放出される別個の剤形にする場合］、および
・  本発明の化合物と治療薬のそうした組合せの、処置を必要とする患者への順次投与［こうした成分を一緒に製剤して、成分が前記患者に対して、同じおよび／または異なる時期に、併行して、連続して、かつ／または一部重複して放出されることになるように前記成分を制御されたかたちで放出する単一剤形にする場合］
を意味し、指し、包含し、各部分は、同じまたは異なる経路で投与される場合がある。
【００８６】
当業者によく知られているように、薬物が組合せ処置において使用されるとき、治療有効投与量は、様々となりうる。組合せ処置レジメンにおいて使用される薬物および他の薬剤の治療有効投与量を実験的に求める方法は、文献に記載されている。たとえば、メトロノーム投薬の使用、すなわち、毒性副作用を最小限に抑えるために、より少ない用量をより頻繁に提供することが、文献に記載されている。組合せ処置には、患者の臨床管理を援助するために、種々の時期に開始および中断される周期的な処置がさらに含まれる。本明細書に記載の併用療法について、共投与される化合物の投与量は、当然のことながら、用いる併用薬物（ｃｏ−ｄｒｕｇ）の種類、用いる特定の薬物、処置がなされる状態または障害などに応じて様々となる。
【００８７】
加えて、本明細書に記載の化合物は、対象に相加的または相乗的な利益をもたらしうる手順と組み合わせて使用することもできる。単なる例として、本発明の医薬組成物および／または他の治療薬との組合せが、当該個体がある特定の疾患または状態と相関があることが知られる突然変異遺伝子のキャリヤーであるかどうかを判定するための遺伝子検査と組み合わせられている本明細書に記載の方法において、対象は、治療的および／または予防的な恩恵を受けることが予想される。
【００８８】
ＣＤＫ８／１９の阻害薬である化合物は、上述の処置方法において、単剤療法の形で、または手術、放射線療法、もしくは薬物療法と組み合わせて使用することができる。
そのような薬物療法は、抗がん薬の１種または複数の投与を含むものでよい。抗がん薬の例としては、限定はしないが、次の薬剤、すなわち、アルキル化薬、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、またはトリアゼン；代謝拮抗薬  ホルモンおよび拮抗薬；白金化合物；抗がん抗生物質；トポイソメラーゼ阻害薬のいずれかが挙げられる。
【００８９】
代謝拮抗薬の例としては、限定はしないが、葉酸類似体（メトトレキセート、トリメトレキセート、ペメトレキセド、プララトレキセート、ラルチトレキセド、レボホリナートカルシウムなど）、ピリミジン類似体（シタラビン、テガフール、フルオロウラシル、カペシタビン、フロクスウリジン、アザシチジン、エノシタビン、カルモフール、ゲムシタビン、サパシタビン、エラシタラビン、ドキシフルリジンなど）、プリン類似体（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、フルダラビン、クラドリビン、ネララビン、アザチオプリン、クロファラビンなど）、またはアスパラギナーゼが挙げられる。
【００９０】
アルキル化薬の例としては、限定はしないが、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、ベンダムスチン、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ラロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、イホスファミド、インプロスルファン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ラニムスチン、テモゾロミド、トレオスルファン、カルボコン、アパジコン、ホテムスチン、アルトレタミン、グルホスファミド、ピポブロマン、トロホスファミド、ウラムスチン、エボホスファミド、ＶＡＬ−０８３が挙げられる。
【００９１】
ホルモンおよび拮抗薬の例としては、限定はしないが、プレドニゾン、プレドニゾロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール、エストラジオール、タモキシフェン、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、フルタミド、ロイプロリド、アバレリックス、アビラテロン、ビカルタミド、ブセレリン、カルステロン、クロロトリアニセン、デガレリクス、デキサメタゾン、フルオコルトロン、フルベストラント、ゴセレリン、ヒストレリン、リュープロレリン、ミトタン、ナファレリン、ナンドロロン、ニルタミド、オクトレオチド、ラロキシフェン、チロトロピンアルファ、トレミフェン、トリプトレリン、ジエチルスチルベストロール、アコルビフェン、ダナゾール、デスロレリン、エピチオスタノール、オルテロネル、エンザルタミド、アミノグルテチミド、アナストロゾール、エキセメスタン、ファドロゾール、レトロゾール、テストラクトン、ホルメスタンが挙げられる。
【００９２】
白金化合物の例としては、限定はしないが、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、エプタプラチン、ミリプラチン水和物、ロバプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチンが挙げられる。
【００９３】
抗腫瘍抗生物質の例としては、限定はしないが、ドキソルビシン、ダウヌロビシン（ｄａｕｎｕｒｏｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、カルビシン、バルルビシン、ゾルビシン、アクラルビシン、ピラルビシン、ネモルビシン、アムルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ペプロマイシン、マイトマイシンＣ、ジノスタチン、ストレプトゾシンが挙げられる。
【００９４】
トポイソメラーゼ阻害薬の例としては、限定はしないが、イリノテカン、トポテカン、ベロテカン、テニポシド、エトポシド、ボレロキシン、アモナフィドが挙げられる。
抗がん薬の例としては、限定はしないが、次の薬剤、すなわち、微小管を標的とする薬物、たとえば、タキサン（たとえば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、テゼタキセル（ｔｅｚｅｔａｘｅｌ））、ビンカアルカロイド（たとえば、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン）；分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼシグナル伝達阻害薬（たとえば、Ｕ０１２６、ＰＤ９８０５９、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、ＡＲＲＹ−１４２８８６、ＳＢ２３９０６３、ＳＰ６００１２５、ＢＡＹ４３−９００６、ワートマニン、ＬＹ２９４００２）；ｍＴＯＲ阻害薬（たとえば、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス）；抗体（たとえば、リツキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、ベシレソマブ、セツキシマブ、デノスマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、トシツモマブ、カツマクソマブ、エロツズマブ、エプラツズマブ、ファーレツズマブ、モガムリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オレゴボマブ、ラムシルマブ、リロツムマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、マツズマブ、ダロツズマブ、オナルツズマブ、ラコツモマブ（ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、タバルマブ、ＥＤＭ−５２５７９７）；キナーゼ阻害薬（ホスタマチニブ、エントスプレテニブ（ｅｎｔｏｓｐｌｅｔｅｎｉｂ）、エルロチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ベムラフェニブ、ゲフィチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ボスチニブ、アキシチニブ、アファチニブ、アリセルチブ、ダブラフェニブ、ダコミチニブ、ジナシクリブ、ドビチニブ、ニンテダニブ、レンバチニブ、リニファニブ、リンシチニブ、マシチニブ、モテサニブ、ネラチニブ、オランチニブ、ポナチニブ、ラドチニブ、ティピファニブ、チバンチニブ、チボザニブ、トラメチニブ、アパチニブ、イブルチニブ、アカラブルチニブ、コビメチニブ、フェドラチニブ、ブリバニブアラニネート、セジラニブ、カボザンチニブ、イコチニブ、シパチニブ（ｃｉｐａｔｉｎｉｂ）、リゴサチブ、ピマセルチブ、ブパリシブ、イデラリシブ、ミドスタウリン、ペリホシン、ＸＬ−６４７）；光増感剤（たとえば、タラポルフィン、テモポルフィン、ポルフィマーナトリウム）；サイトカイン（たとえば、アルデスロイキン、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、セルモロイキン、タソネルミン、組換え型インターロイキン２、オプレルベキン、組換え型インターフェロンベータ−１ａ）；ワクチン（たとえば、ピシバニール、シプロイセルＴ、ビテスペン、エメペピムト−Ｓ、ｏｎｃｏＶＡＸ、リンドペピムト、ｔｒｏＶＡＸ、ＭＧＮ−１６０１、ＭＧＮ−１７０３）；ビサントレン、デシタビン、ミトキサントロン、プロカルバジン、トラベクテジン、アムサクリン、ブロスタリシン、ミルテホシン、ロミデプシン、プリチデプシン、エリブリン、イクサベピロン、フォスブレタブリン、デニロイキンジフチトクス、イブリツモマブチウキセタン、プレドニムスチン、トラスツズマブエムタンシン、エストラムスチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、アフリベルセプト、オポルツズマブモナトクス（ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ  ｍｏｎａｔｏｘ）、シントレデキンベスドトクス（ｃｉｎｔｒｅｄｅｋｉｎ  ｂｅｓｕｄｏｔｏｘ）、エドトレオチド、イノツズマブオゾガマイシン、ナプツモマブエスタフェナトクス、ビンタフォリド、ブレンツキシマブベドチン、ボルテゾミブ、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド、ゾレドロン酸、イバンドロン酸、パミドロン酸、アリトレチノイン、トレチノイン、ペレチノイン、ベキサロテン、タミバロテン、イミキモド、レンチナン、ミファムルチド、ロムルチド、ペグアスパラガーゼ、ペントスタチン、エンドスタチン、シゾフィラン、ビスモデギブ、ボリノスタット、エンチノスタット、パノビノスタット、セレコキシブ、シレンギチド、エタニダゾール、ガネテスピブ、イドロノクシル（ｉｄｒｏｎｏｋｓｉｌ）、イニパリブ、ロニダミン、ニモラゾール、プロコダゾール、タスキニモド、テロトリスタット、ベリノスタット、サイマルファシン、チラパザミン、トセドスタット、トラベデルセン、ウベニメクス、バルスポダール、ゲンジシン、レオリシン、レタスピマイシン、トレバナニブ、ビルリジンのいずれかが挙げられる。
【００９５】
一態様では、本発明は、それを必要とする対象における、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する疾患または障害の処置への、本明細書に記載の化合物もしくは薬学的に許容されるその塩または本発明の医薬組成物の使用に関する。
【００９６】
別の一態様では、本発明は、それを必要とする対象における、サイクリン依存性タンパク質キナーゼＣＤＫ８／１９の活性化が介在する、腫瘍性または血液腫瘍性のいずれかである疾患または障害の処置への、本明細書に記載の化合物もしくは薬学的に許容されるその塩または本発明の医薬組成物の使用に関する。
【００９７】
別の一態様では、本発明は、そのような処置を必要とする対象における、結腸直腸がん、黒色腫、転移性黒色腫、乳がん、三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）、前立腺がん、転移性卵巣がん、転移性胃がん、白血症、急性骨髄性白血病、膵臓がんを含む群から選択される腫瘍性または血液腫瘍性疾患の処置への、上述の化合物もしくは薬学的に許容されるその塩または本発明の医薬組成物の使用に関する。こうした態様のすべてにおいて、対象は、ヒトでよい。
【００９８】
本発明の化合物は、問題の状態の処置に有効な量で、すなわち、所望の結果を実現するのに必要な投与量および期間で投与される。治療有効量は、処置がなされる特定の状態、患者の年齢、性別、および体重、ならびに化合物が独立型の処置として投与されるのか、追加の１種または複数の処置と組み合わせて投与されるのかなどの要素に従って様々となりうる。
【００９９】
所望の最適な応答が得られるように、投与レジメンを調整することができる。たとえば、単一用量が投与される場合もあり、いくつかに分けた用量が時間をかけて投与される場合もあり、または治療状況の緊急性による必要に応じて用量が増減される場合もある。経口組成物を投与量単位形態にして製剤することは、投与が容易になり、投与量が均一になるため、特に有利である。本明細書で使用する投薬単位剤形とは、処置を受ける患者／対象のための単位式投与量として適した、物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同で所望の治療効果を生じるように算出された、予め決められた量の活性化合物を含有する。
【０１００】
さらに、特定のいずれかの対象について、詳細な投与レジメンは、個々の必要、および組成物の投与を管理または監督する者の専門的な判断に従って、経時的に調整すべきであること、ならびに、本明細書で明記する投与量範囲は、例示的なものにすぎず、具体化された組成物の範囲または実用を限定するものではないことが理解される。さらに、本発明の組成物を用いた投与レジメンは、疾患のタイプ、患者の年齢、体重、性別、医学的状態、状態の重症度、投与経路、および用いられる特定の化合物を始めとする、様々な要素に基づくものになりうる。したがって、投与レジメンは、変化に富む場合があるが、標準の方法を使用して型通りに決定することができる。たとえば、毒作用および／または臨床検査値などの臨床効果を含みうる、薬動学的または薬力学的パラメーターに基づき、用量を調整することができる。したがって、本発明は、当業者によって決定されるような、患者内での用量漸増を包含する。適切な投与量およびレジメンの決定は、関連業界でよく知られており、本明細書で開示する教示を得れば当業者によって遂行されると理解される。
【０１０１】
一般に、成人の標準１日投与量は、１日０．０２ｍｇ〜５０００ｍｇまたは１日約１ｍｇ〜約１５００ｍｇの範囲にある。
患者の状態の改善が見出されれば、必要なら、維持量が投与される。その後、症状に応じて、投与量もしくは投与頻度または両方を、疾患または障害の改善が実現されるレベルまで減らすことができる。症状が再発すると、患者には、周期的な処置が長期的に必要となる場合がある。
【０１０２】
個々の処置レジメンに関しては可変要素の数が多いため、前述の範囲は、単に提唱するものにすぎず、こうした推奨値から少なからず逸脱することは珍しくない。こうした投与量は、使用する化合物の活性、処置がなされる障害または状態、投与の方法、個々の対象の要件、処置がなされる障害または状態の重症度、および医師の判断に限らない、いくつかの可変要素に応じて変更してよい。
【０１０３】
本明細書において引用したすべての刊行物、特許、および特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。前述の発明について、理解を明瞭にする目的で、図表および例を用いて多少詳しく述べてきたが、本発明の教示に照らして、添付の態様の真意および範囲から逸脱することなく、ある特定の変更および改変がこれに対してなされてもよいことは、当業者に容易に理解されよう。
【０１０４】
本発明がより深く理解されるように、以下の実施例を示している。こうした実施例は、説明する目的のためだけにあり、いかなる形でも本発明の範囲を限定するとは解釈されない。
【０１０５】
以下に記載する説明的なスキームおよび実施例において示されるものを含めて、本記述における略語は、当業者によく知られている。略語の一部は、次のとおりである。
ジメチルスルホキシド−  ＤＭＳＯ
（±）−２．２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１．１’−ジナフタレン−  ＢＩＮＡＰ
Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩−  ＥＤＣ×ＨＣｌ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物−  ＨＯＢｔ
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−  ＤＭＦ
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）−  Ｐｄ（ＰＰｈ３）４
テトラヒドロフラン−  ＴＨＦ
テトラメチルエチレンジアミン−  ＴＭＥＤＡ
ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド−  ＮａＨＭＤＳ
［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ），ジクロロメタン錯体−  ＰｄｄｐｐｆＣｌ２×ＤＣＭ．
４−ジメチルアミノピリジン−  ＤＭＡＰ
【実施例】
【０１０６】
実施例１
化合物１．０の調製方法
【０１０７】
【化１３】
2021533143.tif 000021
【０１０８】
ステップ１．窒素流中にて、４３ｍｌの２Ｍ  ＮａＨＭＤＳ（８６ｍｍｏｌ）ＴＨＦ溶液に、−１０℃で、３−アミノ−２−クロロピリジン（５．００ｇ、３９ｍｍｏｌ）の５０ｍｌのＴＨＦ溶液を、滴下によって加えた。反応混合物を０℃で１０分間インキュベートし、次いで、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（８．９１ｇ、４１ｍｍｏｌ）の２０ｍｌのＴＨＦ溶液を、温度が８℃を超えないような速度で、滴下によって加えた。３０分後、１５０ｍｌの１Ｍ  ＨＣｌ水溶液および５０ｍｌの酢酸エチルを加えた。有機層を水で洗浄し、真空濃縮した。ヘキサン−ジクロロメタン−酢酸エチル（８：２：０．５）を溶離液として使用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、生成物１．０．６を淡黄色の粉末として単離した。収率：８．１０ｇ（９１％）。
【０１０９】
ステップ２．窒素流中にて、１．０．６（３．００ｇ、１３ｍｍｏｌ）の５０ｍｌのＴＨＦ溶液に、４．３３ｍｌのＴＭＥＤＡ（２９ｍｍｏｌ）を加え、１１．５ｍｌの２．５Ｍ  ブチルリチウム（２９ｍｍｏｌ）ヘキサン溶液を−７８℃に冷却し、滴下によって加えた。加え終える頃、反応混合物を４０分間−７０℃に、２０分間−２０℃に保った。再び−７８℃に冷却した後、ＤＭＦ（２．０３ｍｌ、２６ｍｍｏｌ）を滴下によって加えた。反応混合物を１時間−７０℃に保った後、−２０℃に加熱し、５０ｍｌの飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加えた。得られる混合物に、２０ｍＬの水および５０ｍｌの酢酸エチルを加えた。有機層を分離し、水で洗浄し、真空濃縮した。ヘキサン−酢酸エチル（８：２）を溶離液として使用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、生成物１．０．５を黄色の油状物として単離した。収率：２．８６ｇ（８５％）。
【０１１０】
ステップ３．化合物１．０．５（１．００ｇ、３．８６ｍｏｌ）の１０ｍｌのクロロホルム溶液に、エチル３，３−ジエトキシプロピオネート（１．１４ｍｌ、５．７９ｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．５４ｍｌ、４６ｍｍｏｌ）を加え、次いで、溶液を３０分間煮沸した。反応混合物を室温に冷却した後、減圧下で溶媒を留去した。次いで、混合物を、５ｍｌの塩化チオニル中で１時間煮沸した。反応混合物にＮａＨＣＯ３の飽和溶液を加えてｐＨ９とし、酢酸エチルによる抽出を行った。有機抽出物を合わせ、減圧下で溶媒を蒸発させた。ヘキサン−酢酸エチル（８：２）を溶離液として使用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、生成物１．０．４を淡黄色の粉末として単離した。収率：５０２ｍｇ（５５％）。
【０１１１】
ステップ４．化合物１．０．４（２．１６ｇ、９．０６ｍｏｌ）の３０ｍｌの１，４−ジオキサン溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（５．９７ｇ、１８．１ｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（５７０ｍｇ、０．１０当量）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１０３ｍｇ、０．０５当量）、１．２ｍｌの１Ｍカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル溶液（１３．６ｍｏｌ、１．５０当量）を加え、次いで、溶液を１．５時間１００℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。真空下で溶媒を留去し、残渣をジクロロメタンに溶解させ、水で洗浄し、真空濃縮した。ジクロロメタン−酢酸エチル（９６：４）を溶離液として使用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、生成物１．０．３を単離した。収率：２．７３ｇ（９５％）。
【０１１２】
ステップ５：化合物１．０．３（２．８０ｇ、７．５０ｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解させ、１８ｍｌのＨＣｌ  １，４−ジオキサン溶液を加えた。２時間後、減圧下で溶媒を留去し、残渣に飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えた。沈殿を濾過し、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）の混合物で洗浄し、生成物１．０．２を白色の粉末として得た。収率：１．６０ｇ（９８％）。
【０１１３】
ステップ６．化合物１．０．２（１．６０ｇ、７．３７ｍｏｌ）の１５ｍｌのＤＭＦ懸濁液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．３８ｇ、７．７３ｍｏｌ）を加え、次いで、溶液を室温で１時間撹拌した。得られる溶液に、１００ｍｌの水および５ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えた。生成物１．０．１の沈殿を濾別した。収率：１．９５ｇ（８９％）。
【０１１４】
ステップ７．化合物１．０．１（１．００ｇ、３．３４ｍｍｏｌ、１．００当量）の７ｍｌのＴＨＦ溶液に、ＬｉＯＨ×Ｈ２Ｏ（１５６ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ、１．１当量）の７ｍｌの水溶液を加えた。室温で１時間撹拌した後、減圧下でＴＨＦを留去し、１Ｍ  ＨＣｌ溶液で溶液のｐＨを４に調整し、生成物１．０の褐色の沈殿を濾別し、水で洗浄し、加熱および減圧下で乾燥させた。収率：８７０ｍｇ（９７％）。
【０１１５】
実施例２
化合物１．１、１．２、１．３、１．４、１．５の調製方法
【０１１６】
【化１４】
2021533143.tif 000022
【０１１７】
化合物１．０（２００ｍｇ、０．７３９ｍｍｏｌ）、シクロプロパンメチルアミン（１２８μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１７０ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（２０６μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）の３ｍｌのＤＭＦ懸濁液に、氷浴で冷却しながら、ＥＤＣ×ＨＣｌ（２１２ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。１５時間後、減圧下で溶媒を留去した。ヘキサン−ジクロロメタン−メタノール（５：４：１）を溶離液として使用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、生成物１．１を単離した。収率：１７８ｍｇ（７５％）。
【０１１８】
化合物１．２、１．３、１．４、および１．５は、対応する最初の化合物から、同様に調製した。
実施例３
化合物２．０の調製方法
【０１１９】
【化１５】
2021533143.tif 000023
【０１２０】
ステップ１．４−（４−ブロモフェニル）ピラゾール（５００ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）とメチル２−ブロモアセテート（３４０ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）を無水アセトン中で混合し、脱気した。次いで、反応混合物に、砕いた無水Ｋ２ＣＯ３を加え、混合物を撹拌しながら８時間煮沸した。反応塊を濾別し、シリカゲルに通し、真空濃縮し、ヘキサン−ジクロロメタン（１：１）の混合物から再結晶させた。黄色の粉末としての生成物２．０．１が得られた。収率：４８０ｍｇ（７３％）。
【０１２１】
ステップ２．ＴＨＦ−水の混合物中のエーテル２．０．１（１．０７ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ×Ｈ２Ｏ（２２５ｍｇ、５．３７ｍｍｏｌ）を室温で１時間撹拌した。次いで、反応混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで処理し、水層をｐＨ＝１．５に酸性化し、生成物２．０の白色の沈殿を濾別し、空気乾燥した。収率：７２０ｍｇ（８０％）。
【０１２２】
実施例４
化合物２．１および２．２の調製方法
【０１２３】
【化１６】
2021533143.tif 000024
【０１２４】
ステップ１．窒素雰囲気中にある、酸２．０（７２０ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、ジメチルアミン塩酸塩（２５０ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ×ＨＣｌ（５８９ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（７８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（３５７μｌ、２．５６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン中の混合物を、２時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、ジクロロメタン−メタノール（９：１）の混合物を溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーによって、白色の粉末としての生成物２．１．１を単離した。収率：４２０ｍｇ（５３％）。
化合物２．２．１は、対応する最初の化合物から、同様に調製した。
【０１２５】
ステップ２．化合物２．１．１（６８０ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）、ビス−ピナコール−ジボラン（６９０ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ）、および無水酢酸カリウム（６５０ｍｇ、６．５９ｍｍｏｌ）の１０ｍｌの１，４−ジオキサン中の混合物を、窒素で１５分間脱気した。次いで、混合物にＰｄｄｐｐｆＣｌ２×ＤＣＭ（９０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気において混合物を撹拌しながら１２時間煮沸した。次いで、反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、真空濃縮した。混合物を水で洗浄し、塩化メチレンでの抽出を行った。酢酸エチル−メタノール（９：１）の混合物を使用するカラムクロマトグラフィーによって、生成物２．１を単離した。収率：３５０ｍｇ（４５％）。
化合物２．２は、対応する最初の化合物から、同様に調製した。
【０１２６】
実施例５
化合物２．３の調製方法
【０１２７】
【化１７】
2021533143.tif 000025
【０１２８】
ステップ１．３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール（５．００ｇ、３３．７ｍｍｏｌ）を２５ｍｌのエタノールに溶解させ、１−ブロモ−２−メトキシエタン（４．７１ｍｌ、５０．５ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（２．８６ｇ  ５０．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を撹拌しながら６時間煮沸した。次いで、反応混合物を真空濃縮し、水で処理し、抽出によって、黄色の油状物としての生成物２．３．２を単離した。収率は、６．２３ｇ（９０％）であった。
【０１２９】
ステップ２．ブロモピラゾール２．３．２（６．１９ｇ、２９．９ｍｍｏｌ）、ビス−ピナコールジボラン（９．１１ｇ、３５．８ｍｍｏｌ）、および無水酢酸カリウム（８．８０ｇ、８９．７ｍｍｏｌｅ）の５０ｍｌの１，４−ジオキサン中の混合物に、窒素を１５分間通過させた。次いで、混合物にＰｄｄｐｐｆＣｌ２×ＤＣＭ（１．２６ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気において混合物を撹拌しながら５時間煮沸した。次いで、１，４−ジブロモベンゼン（１４．１ｇ、５９．８ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１９．５ｇ、５９．８ｍｍｏｌ）の５０ｍｌの水溶液を加え、反応混合物を窒素で１５分間脱気した。反応塊にＰｄ（ＰＰｈ３）４（１．７３ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気において撹拌しながら塊を４時間煮沸した。次いで、反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、減圧下で濃縮し、水で処理し、酢酸エチルで抽出し、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）を溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーによって、ブロモフェニルピラゾール２．３．１を単離した。収率：３．１１ｇ（３８％）。
【０１３０】
ステップ３．化合物２．１（実施例４、ステップ２）と同様にして、化合物２．３を調製した。
実施例５
化合物３．４３、３．４４、３．４５、３．４６、３．４７、３．４８、３．４９、３．５０、３．５１、３．５２、３．５３、３．５４、３．５５、３．５６、３．５７の調製方法
【０１３１】
【化１８】
2021533143.tif 000026
【０１３２】
化合物１．１（２００ｍｇ、０．６２３ｍｍｏｌ）、化合物２．１（３５５ｍｇ、０．７４７ｍｍｏｌ）、およびＮａＨＣＯ３（１５７ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの１，４−ジオキサンと５ｍｌの水の混合物に溶かした溶液を、窒素流で脱気し、次いで、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（７２ｍｇ、０．１当量）を加えた。反応塊を９０℃で５時間加熱し、その後、減圧下で揮発性化合物を蒸発させた。残渣を酢酸エチルに溶解させ、水で洗浄し、真空濃縮した。ジクロロメタン−酢酸エチル−メタノール（４：６：１）を溶離液として使用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、生成物を単離した。化合物３．４３を、分取クロマトグラフィーによってさらに精製した。収率：１５０ｍｇ（５１％）。
【０１３３】
化合物３．４４、３．４５、３．４６、３．４７、３．４８、３．４９、３．５０、３．５１、３．５２、３．５３、３．５４、３．５５、３．５６、および３．５７も、同様にして調製した。
【０１３４】
実施例６
化合物３．４９×２ＨＣｌの調製方法
【０１３５】
【化１９】
2021533143.tif 000027
【０１３６】
窒素流中で、化合物３．４９（１５ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン−メタノール（１０：１）混合物溶液に、０．４Ｍ  ＨＣｌジエチルエーテル溶液（１８８μｌ、０．０７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を滴下によって加えた。減圧下で揮発性成分を留去し、得られる固体残渣をジエチルエーテルで摩砕した。黄色の沈殿を濾別し、エーテルで２回洗浄し、真空乾燥した。収率：１６ｍｇ（１００％）。
【０１３７】
実施例７
調製された化合物の分析
調製された化合物の純度および構造を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）および１Ｈ  ＮＭＲ分光測定によって確認した（表１）。
【０１３８】
【表２−１】
2021533143.tif 000028
【０１３９】
【表２−２】
2021533143.tif 000029
【０１４０】
【表２−３】
2021533143.tif 000030
【０１４１】
【表２−４】
2021533143.tif 000031
【０１４２】
実施例８
化合物のヒト血漿中における安定性の判定
化合物の血漿安定性を評価するために、本発明者らは、１０人の健康なドナーから採取したヒトプール血漿を使用した。初期候補溶液（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）をプールヒト血漿で希釈して、濃度を１０μｍとした（試験溶液）。試験溶液を、ドライブロックサーモスタットにおいて３７℃で４時間インキュベートした。Ａｇｉｌｅｎｔ１２００液体クロマトグラフィーシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）によるＨＰＬＣを用いて、（インキュベーションより前の）初期試験時および（ドライブロックサーモスタットにおける３７℃で４時間のインキュベーション後の）最終試験時に対応する、試験サンプル中の化合物のピーク面積を求めたが、タンパク質は、アセトニトリルで予め沈殿させた。クロマトグラフィー分析は、勾配溶離方式で、流量を１ｍＬ／分として行った。サーモスタットで調温した後のサンプル中の％による物質量を求めた。
【０１４３】
化合物の安定性を推定した。本明細書に記載の化合物は、少なくとも９０％の化学的安定性を示し、すなわち、ヒト血漿中において化学的に安定している（表２）。
【０１４４】
【表３】
2021533143.tif 000032
【０１４５】
実施例９
酵素安定性の判定
本化合物の酵素安定性を測定することにより、フェーズＩ生体内変換酵素の作用に対するその安定性の推定が可能になった。
【０１４６】
化合物の酵素分解の速度を、反応混合物をドライブロックヒーターにおいて３７℃でインキュベートすることにより検出したが、反応混合物は、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）中に０．５ｍｇ／ｍＬのヒトプール肝臓ミクロソーム（ＸｅｎｏＴｅｃｈ、米国、カタログ番号Ｈ６０１０）、１０μＭの化合物、２ｍＭのβ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ、英国、カタログ番号ＮＮ１０８７１）、および４ｍＭの塩化マグネシウムを含有していた。反応は、アセトニトリルで失活させた（１００μＬのアセトニトリル／１００μＬの反応混合物）。失活させた後、サンプルを１００００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清液を、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００（Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を使用するクロマトグラフィー技術によって試験した。クロマトグラフィー分析は、勾配溶離方式で、流量を１ｍＬ／分として行った。時間に対する物質ピーク面積の対数のグラフを作成した。線の依存係数（ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ）は排出速度定数Ｋに対応し、これに基づき、薬物の半減期ｔ１／２および分解速度ＣＬｉｎｔを算出した。
排出速度定数（Ｋ）＝（−勾配）
【０１４７】
【数１】
2021533143.tif 000033
【０１４８】
得られたデータに基づき、ヒト肝臓ミクロソームにおける候補物質の酵素安定性を明らかにした。本発明による化合物は、フェーズＩ生体内変換酵素の作用に対する十分な安定性、および４７μＬ／分／ｍｇ未満の酵素分解速度ＣＬｉｎｔを示した。結果を表３に示す。
【０１４９】
本化合物の酵素安定性を測定することにより、フェーズＩＩ生体内変換酵素の作用に対するその安定性の推定が可能になった。
０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）中に０．５ｍｇ／ｍＬのプールヒト肝臓Ｓ９画分（ＸｅｎｏＴｅｃｈ、米国、カタログ番号Ｈ０６１０）、１０μＭの化合物、２ｍＭのβ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ、英国、カタログ番号ＮＮ１０８７１）、および４ｍＭの塩化マグネシウムを含む反応混合物を、ドライブロックサーモスタットにおいて３７℃でインキュベートすることにより、酵素分解速度を測定した。反応は、アセトニトリルで失活させた（１００μＬのアセトニトリル／１００μＬの反応混合物）。失活させた後、サンプルを１００００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清液を、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００（Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を使用するクロマトグラフィー技術によって試験した。クロマトグラフィー分析は、勾配溶離方式で、流量を１ｍＬ／分として行った。時間に対する物質ピーク面積の対数のグラフを作成した。線の依存係数は排出速度定数Ｋに対応し、これに基づき、薬物の半減期ｔ１／２および分解速度ＣＬｉｎｔを算出した。
排出速度定数（Ｋ）＝（−勾配）
【０１５０】
【数２】
2021533143.tif 000034
【０１５１】
得られたデータに基づき、ヒト肝臓Ｓ９画分における候補物質の酵素安定性を明らかにした。化合物は、十分なミクロソーム安定性を示し、その酵素分解速度Ｃｌｉｎｔは、２４μＬ／分／ｍｇ未満である。結果を表３に示す。
【０１５２】
【表４】
2021533143.tif 000035
【０１５３】
実施例１０
化合物のＣａｃｏ−２細胞単層への透過性の推定
Ｃａｃｏ−２細胞単層への透過性を推定することで、物質が能動および受動両方の輸送によって生体膜を貫通しうる能力を評価することが可能になる。
【０１５４】
腸上皮細胞Ｃａｃｏ−２を、フィルター挿入物（孔径０．４μｍ、高密度のＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）上で２１日間増殖させ、次いで、Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を標準プロトコールに従って使用し、単層完全性を確認した。Ａ→Ｂ移動（「腸内腔」から「血流」への移動）では、１０μＭの濃度の試験物質のｐＨ６．５緩衝液（ＨＢＳＳ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５ｍＭのグルコース）溶液を、上方のチャンバーに加え、下方のチャンバーは、ｐＨ７．４緩衝液（ＨＢＳＳ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５ｍＭのグルコース、１％のＢＳＡ）で満たした。Ｂ→Ａ移動（「血流」から「腸内腔」への移動）では、上方のチャンバーをｐＨ６．５緩衝液で満たし、下方のチャンバーに、１０μＭの濃度の試験物質のｐＨ７．４緩衝液溶液を加えた。透過性の高い物質であるプロプラノロールを対照として使用した。
【０１５５】
５％のＣＯ２を含んだ雰囲気中にて３７℃で２時間インキュベートした後、上方および下方のチャンバーの中の試験物質の量を、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００  ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を使用するＨＰＬＣによって測定し、タンパク質は、アセトニトリルで予め沈殿させた。クロマトグラフィー分析は、勾配溶離方式で、流量を１ｍＬ／分として行った。クロマトグラム上で、化合物に対応するピーク面積を検出した。検量用標準試料における化合物のピーク面積に基づき、初期溶液中ならびに上方チャンバーウェルおよび下方チャンバーウェルからのサンプル中の化合物の濃度を測定した。
【０１５６】
細胞透過係数Ｐａｐｐを次式によって算出した。
Ｐａｐｐ＝（Ｃａ（ｔ）×Ｖａ）／（Ｃｄ（０）×ｔ×面積）、ここで、
Ｐａｐｐは、有効透過性定数（ｍ／ｓ）であり、
Ｖは、溶液の体積（Ａ→Ｂ試験では０．８ｍｌ、Ｂ→Ａ試験では０．２ｍｌ）（ｍｌ）であり、
面積は、膜表面積（０．３３ｃｍ２）（ｃｍ２）であり、
ｔは、インキュベート時間（７２００秒）（秒）であり、
Ｃｄ（０）は、初期溶液濃度（μＭ）であり、
Ｃａ（ｔ）は、２時間後の溶液の濃度（Ａ→Ｂ試験では、下方チャンバーのウェルからのサンプル中の濃度、Ｂ→Ａ試験では、上部チャンバーのウェルからのサンプル中の濃度）（μＭ）である。
【０１５７】
流出係数から、細胞が、血流からの物質の排出能を示したことが示された。値は、次式によって算出した。
流出＝Ｐａｐｐ  Ｂ−Ａ／Ｐａｐｐ  Ａ−Ｂ、ここで、
Ｐａｐｐ  Ａ−Ｂは、正のＡ→Ｂ試験透過性値であり、
Ｐａｐｐ  Ｂ−Ａは、逆のＢ→Ａ試験透過性値である。
【０１５８】
本発明の化合物は、高速の正の輸送を示し、流出係数は、２以下であった。結果をもとに、本発明者らは、Ｐｇｐ輸送体が、物質生物学的利用能に制限を課さないと仮定することができる。結果を表４に示す。
【０１５９】
【表５】
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【０１６０】
実施例１１
組換え型ＣＤＫ８タンパク質−サイクリンＣ複合体に対する化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの親和性
ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）アッセイを使用して、本発明の化合物のＣＤＫ８タンパク質への結合能を検出した。本発明者らは、ＡＴＰ結合部位を巡って阻害薬と競合するＣＤＫ８結合性（ＣＤＫ８−ｂｏｕｎｄ）蛍光標識リガンド（トレーサー２３６）の量に比例するＦＲＥＴシグナルを検出した。本発明者らは、３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃ＣＬＳ４５１３）を使用して、１５μｌの反応体積で測定を実施した。酵素ＣＤＫ８／サイクリンＣ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＲ７２６１Ｂ）を、抗体であるＡｎｔｉ−Ｈｉｓ−ｔａｇ−Ｂｉｏｔｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ６０９０）、ストレプトアビジン−Ｅｕ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ６０２５）と混合し、得られる混合物をプレートウェルに加えた（５μｌ／ウェル）。物質の最終濃度は、次のとおりとした。ＣＤＫ８／サイクリンＣ−５ｎＭ、ストレプトアビジン−Ｅｕ−３ｎＭ、Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ−ｔａｇ−Ｂｉｏｔｉｎ−３ｎＭ。スタウロスポリン（Ｓ４４００、Ｓｉｇｍａ）を参考阻害薬として使用し、０．１％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）反応緩衝液溶液をブランクとして使用しており、反応緩衝液は、２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＥＧＴＡ、および０．０５％のＢｒｉｊ−３５を含むものであった。
【０１６１】
当該阻害薬および対照を対応するウェルに加えた（５μｌ／ウェル）。プレートを室温で２０分間インキュベートした。インキュベートした後、５μｌ／ウェルのトレーサー溶液Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６４７（キナーゼトレーサー２３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ５５９２））をウェルに加えた。トレーサーの最終濃度は、１０ｎＭとした。陰性対照として、トレーサー溶液の代わりに反応緩衝液を使用した。プレートを２５℃で４０分間インキュベートし、次いで、ＳＰＡＲＫ２０プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ、スイス国）において、製造者のガイドラインに従って、ＴＲ−ＦＲＥＴシグナルを測定し、値を、キナーゼに結合したトレーサーの量に変換した。ＳｐａｒｋＣｏｎｔｒｏｌ  Ｍａｇｅｌｌａｎ  １．２ソフトウェア（Ｔｅｃａｎ、スイス国）を使用し、Ｌｅｖｅｎｂｅｒｇ−Ｍａｒｑｕａｒｄｔによる最適化を用いながら、４パラメーターロジスティックモデルによって、実験による点を近似して、ＩＣ５０値を算出した（表５）。
【０１６２】
【表６】
2021533143.tif 000037
【０１６３】
実施例１２
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＤＫ８感受性細胞株に対する抗増殖活性
本発明によるＣＤＫ８阻害薬の抗増殖活性を、連続細胞培養物ＭＶ４−１１（二重表現型骨髄単球性白血病、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−９５９１（商標））、ＫＧ−１（急性骨髄性白血病、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２４６（商標））での細胞ベースの試験において、生体染色剤ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＤＡＬ１１００）を使用して測定した。細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１６１４０−０７１）が加えられたＲＰＭＩ−１６４０（ＰａｎＥｃｏ、＃Ｃ３３０ｐ）培地で増殖させ、洗浄し、９６ウェル培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３５９９）において、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１６１４０−０７１）添加培養培地に、ウェルあたり１００μｍの培地中に約１０×１０３細胞として再懸濁した。問題の化合物をＤＭＳＯに溶解させ、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１６１４０−０７１）添加培地で希釈して、最終濃度を０〜１００μＭの範囲とした。次いで、希釈した化合物５０μＭを各ウェルに加え（最終ＤＭＳＯ濃度を１％未満とした）、５％ＣＯ２雰囲気中にて３７℃で１２０時間インキュベートした。インキュベートした後、１５μＬ／ウェルのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＤＡＬ１１００）試薬を加え、オービタルシェーカー（Ｂｉｏｓａｎ、Ｌａｔｖｉａ）において、プレートの中身を混合し、５％ＣＯ２雰囲気中にて３７℃で３〜５時間さらにインキュベートした。マイクロプレート分光光度計（Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００Ｐｒｏ、スイス国）を使用し、５４０ｎｍの励起波長（λＥｘ）および５９０ｎｍの発光波長（λＥｍ）で蛍光シグナルを測定して、生細胞の数を推定した。
【０１６４】
Ｍａｇｅｌｌａｎ７．２ソフトウェア（Ｔｅｃａｎ、スイス国）を使用し、Ｌｅｖｅｎｂｅｒｇ−Ｍａｒｑｕａｒｄｔによる最適化を用いながら、４パラメーターロジスティックモデルによって、実験による点を近似して、ＩＣ５０値を算出した（表６）。
【０１６５】
ＣＣ５０値は、ＨｅｐＧ２細胞（肝細胞癌、ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＢ−８０６５（商標））における一般毒性についての試験において求めた。９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３５９９）に、ウェルあたりの細胞を、１００μＬの培地中に約２０×１０３細胞の濃度で播き、２００〜０．７８μＭの濃度の範囲内の化合物が加えられた状態で、７２時間インキュベートした。上記方法を使用して、細胞生存度を評価した。結果を表６に示す。
【０１６６】
【表７】
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【国際調査報告】
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