(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩、前記化合物の製造方法、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群の治療薬物又は抗炎症薬物を製造するためのこれらの使用を提供する。2021505594.tif 000046  式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、アルキル基、シアノ基とハロゲン化アルキル基から選ばれ、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、アルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれ、且つ、Ｒ１とＲ２とＲ３は同時に水素ではなく、且つ、Ｒ２とＲ３の一方がニトロ基又はハロゲンである場合は、Ｒ１、Ｒ２とＲ３の残りの２つは同時に水素ではない。当該化合物は、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群に対する治療効果と抗炎症効果に優れており、しかも薬物依存性等の副作用はない。【選択図】なし
2021505594.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
2021505594.tif 000041
[式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、アルキル基、シアノ基とハロゲン化アルキル基から選ばれ、
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、アルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれ、且つ、Ｒ１とＲ２とＲ３は同時に水素にならず、
且つ、Ｒ２とＲ３の一方がニトロ基又はハロゲンである場合は、Ｒ１、Ｒ２とＲ３の残りの２つは同時に水素ではない]で示される化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項２】
2021505594.tif 000042
[式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、アルキル基、シアノ基とハロゲン化アルキル基から選ばれ、
Ｒ２は、水素、ハロゲン、アルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれ、且つ、Ｒ１とＲ２は同時に水素ではない]で示される請求項１に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項３】
2021505594.tif 000043
[式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、又はハロゲン化アルキル基から選ばれ、Ｒ２は、水素又はニトロ基から選ばれる]で示される請求項２に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ１はアルキル基、シアノ基、ハロゲン、又はハロゲン化アルキル基から選ばれ、且つ、Ｒ２は水素である請求項２に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ１はハロゲン、又はハロゲン化アルキル基から選ばれ、且つ、Ｒ２は水素である請求項２〜４のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項６】
前記アルキル基は、メチル基、エチル基、又はプロピル基から選ばれる請求項２〜５のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項７】
前記ハロゲン化アルキル基は、トリフルオロメチル基である請求項２〜６のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項８】
2021505594.tif 000044
選ばれる化合物である請求項２〜７のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項９】
原料のハロゲン化ベンゼン試薬（Ａ）、金属触媒、配位子、塩基を溶媒に溶解し、次に１−Ｂｏｃ−ピペラジン（Ｂ）を加え、アルゴンガスで保護して４０〜１４０℃の反応温度で反応させることによって、中間体化合物（Ｃ）を得るステップ（１）と、
前記中間体化合物（Ｃ）に塩酸−有機溶媒を加え、室温で攪拌して、脱保護中間体（Ｄ）を得るステップ（２）と、
前記脱保護中間体（Ｄ）を溶媒に溶解し、ＮａＨＣＯ３の存在下で１，４−ジブロモブタンと反応させて、式（Ｉ）で示される前記化合物を得るステップ（３）とを含み、
2021505594.tif 000045
ステップ（１）及びステップ（３）において、前記溶媒はアルコール系、ケトン系、ニトリル系、塩素化炭化水素系溶媒、ベンゼン系溶媒、ＤＭＳＯ又はＤＭＦであり、
前記金属触媒は、塩化パラジウム、酢酸銅、ヨウ化第一銅又は塩化第二鉄から選ばれ、
前記配位子はα−アミノ酸、ｏ−ヒドロキシベンズアミド、又はビナフトールであり、
ステップ（２）において、前記有機溶媒はアルコール系溶媒又はエステル系溶媒である式（Ｉ）で示される化合物の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩を含み、所望により薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む抗神経障害性疼痛用の医薬品。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む抗炎症用の医薬品。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩をその必要がある被験者に投与することを含む鎮痛方法。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩をその必要がある被験者に投与することを含む抗炎症方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群を治療する新規な化合物、その製造方法及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
疼痛は一般的な疾患であり、生理性疼痛、炎症性疼痛、神経障害性疼痛（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｐａｉｎ、略称ＮＰＰ）の３つの種類に大別される。
【０００３】
神経障害性疼痛は臨床でよく見られる１種の疾患であり、２００８年国際疼痛学会（ＩＡＳＰ）ではこれを体性感覚系の損傷又は疾患により生じる疼痛と定義している。神経障害性疼痛は例えば、末梢神経系又は中枢神経系の損傷又は機能障害により引き起こされ、臨床ではまだ効果的な治療手段がない難治性の慢性疼痛である。神経障害性疼痛に属する疾患には、例えば、帯状疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経痛、手術後持続性疼痛もしくは外傷後疼痛等、痛覚過敏又は異常な疼みを症状とする疾患が含まれる。世界的難題ともいえる神経障害性疼痛は、全世界で患者数が百万人に上り、患者の生活の質に深刻な影響を与えている。
【０００４】
慢性疼痛に分類されているとはいえ、神経障害性疼痛は炎症性疼痛と本質的に違っている。従来、神経障害性疼痛の治療方法としては、非ステロイド性抗炎症薬、オピオイド系物質等の伝統的な鎮痛薬、及び抗けいれん薬や三環系抗うつ薬を含む他の薬物の使用が挙げられる（Ｍａｘ，Ｍ．Ｂ．  Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ，３５（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ５０−Ｓ５３（１９９４）；Ｒａｊａ，Ｓ．Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，５９：１０１５（２００２）；Ｇａｌｅｒ，Ｂ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｉｎ，８０：５３３（１９９９））。しかしながら、これらの薬物は痛みを十分に緩和できないか、例えば薬剤耐性、薬物依存性等の好ましくない副作用が伴う。
【０００５】
スピロピペラジン第四級アンモニウム塩系化合物は、北京大学の李潤涛氏が率いる研究グループが、第四級アンモニウム塩系ニコチン受容体作動薬１，１−ジメチル−４−フェニルヨウ化ピペラジン（ＤＭＰＰ）の構造を改変して得た１種の化合物である。これまでは、スピロピペラジン第四級アンモニウム塩系化合物の鎮痛活性に関する研究が報告されており、当該化合物には薬物依存性がない（Ｙｕｅ，Ｃ．Ｑ．，Ｙｅ，Ｊ．，Ｌｉ，Ｃ．Ｌ．，Ｌｉ，Ｒ．Ｔ．，Ｓｕｎ，Ｑ．，２００７．Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｉｒｏｃｙｃｌｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｉｕｍ  ｓａｌｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ＬＸＭ−１０  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｅｈａｖ  ８６，ｐ６４３−６５０参照）。その鎮痛メカニズムは、アセチルコリン受容体の活性化と関係する可能性がある（Ｚｈａｏ，Ｘ．，Ｙｅ，Ｊ．，Ｓｕｎ，Ｑ．，Ｘｉｏｎｇ，Ｙ．，Ｌｉ，Ｒ．，Ｊｉａｎｇ，Ｙ．，２０１１．Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｐｉｒｏｃｙｃｌｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｉｕｍ  ｓａｌｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ＬＸＭ−１５  ｖｉａ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ａｌｐｈａ７  ｎＡＣｈＲ  ａｎｄ  Ｍ４  ｍＡＣｈＲ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６０，ｐ４４６−４５２参照）。
【０００６】
しかしながら、当該スピロピペラジン第四級アンモニウム塩系化合物の鎮痛作用については、これらのスピロピペラジン第四級アンモニウム塩系化合物（特に、化合物ＬＸＭ−１０）の生理性疼痛と炎症性疼痛に対する阻害効果が報告されているが（例えば、ＷＯ２００７／１４７３４６）、神経障害性疼痛を治療するために当該化合物が有効であるかどうかは言及されていない。
【０００７】
このため、神経障害性疼痛のより効果的な治療薬物を開発する必要がある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の一つの態様において、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群を治療する新規な化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供することを目的とする。
【０００９】
本発明の別の態様において、上記化合物の製造方法を提供することを目的とする。
【００１０】
本発明は下記の式（Ｉ）で示される化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。
2021505594.tif 000003
式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、アルキル基、シアノ基とハロゲン化アルキル基から選ばれ、
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、アルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれ、且つ、Ｒ１とＲ２とＲ３は同時に水素ではなく、
且つ、Ｒ２とＲ３の一方がニトロ基又はハロゲンである場合は、Ｒ１、Ｒ２とＲ３の残りの２つは同時に水素ではない。
【００１１】
本発明で使用される用語「ハロゲン」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を意味し、フッ素原子、塩素原子、又は臭素原子であることが好ましい。
【００１２】
本発明で使用される用語「ハロゲン化」とは、フッ素化、塩素化、臭素化、又はヨウ化を意味する。
【００１３】
本発明で使用される用語「アルキル基」は、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、炭素数１〜３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基であることがより好ましく、メチル基、エチル基、プロピル基であることが特に好ましい。
【００１４】
本発明で使用される用語「ハロゲン化アルキル基」とは、上記のように定義されたアルキル基が１つ又は複数の、好ましくは１つから５つのハロゲン原子によって置換されたものを意味し、前記ハロゲン原子は本願で定義された用語と同じ意味である。ハロゲン化アルキル基は、モノハロゲン化アルキル基、ジハロゲン化アルキル基、トリハロゲン化アルキル基、ペルハロゲン化アルキル基等、例えば、クロロメチル基、ジクロロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、パーフルオロエチル基、２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジクロロエチル基等を含む。なお、ハロゲン化アルキル基はトリハロゲン化アルキル基であることが好ましく、トリフルオロメチル基であることがより好ましい。
【００１５】
本発明で使用される用語「ニトロ基」とは、−ＮＯ２基を意味する。
【００１６】
本発明で使用される用語「シアノ基」とは、−ＣＮ基を意味する。
【００１７】
本発明の式（Ｉ）の実施形態において、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立してアルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれ、Ｒ１は水素である。
【００１８】
本発明の式（Ｉ）の実施形態において、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立してメチル基、エチル基、トリフルオロメチル基又はニトロ基から選ばれ、Ｒ１は水素である。
【００１９】
本発明の実施形態において、本発明の化合物は下記の式（ＩＩ）で示され、
2021505594.tif 000004
式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、アルキル基、シアノ基とハロゲン化アルキル基から選ばれ、
Ｒ２は、水素、ハロゲン、アルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれ、且つ、Ｒ１とＲ２は同時に水素ではない。
【００２０】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、Ｒ１は、ハロゲン、アルキル基、シアノ基とハロゲン化アルキル基から選ばれ、Ｒ２は、ハロゲン、アルキル基、ハロゲン化アルキル基とニトロ基から選ばれる。
【００２１】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、Ｒ１は、フッ素、塩素、臭素、メチル基、エチル基、シアノ基とトリフルオロメタンから選ばれ、Ｒ２は、フッ素、塩素、臭素、メチル基、エチル基、トリフルオロメタンとニトロ基から選ばれる。
【００２２】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、Ｒ１とＲ２は同時にハロゲンである。
【００２３】
本発明の実施形態において、前記Ｒ１は、水素、ハロゲン、又はハロゲン化アルキル基から選ばれ、Ｒ２は、水素又はニトロ基から選ばれる。
【００２４】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、Ｒ１はアルキル基、シアノ基、ハロゲン、又はハロゲン化アルキル基から選ばれ、且つ、Ｒ２は水素である。
【００２５】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、Ｒ１はハロゲン、又はハロゲン化アルキル基から選ばれ、且つ、Ｒ２は水素である。
【００２６】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、前記アルキル基は、メチル基、エチル基、又はプロピル基から選ばれる。
【００２７】
本発明の式（ＩＩ）の実施形態において、前記ハロゲン化アルキル基は、トリフルオロメチル基である。
【００２８】
好ましくは、本発明の化合物は、
2021505594.tif 000005
から選ばれる。
【００２９】
より好ましくは、本発明の化合物は、
2021505594.tif 000006
から選ばれる。
【００３０】
本発明の化合物は本分野の通常の方法に従って製造でき、以下の反応プロセスに従って製造することが好ましい。
2021505594.tif 000007
【００３１】
本発明の好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）の化合物の製造方法が提供される。当該方法は、
原料のハロゲン化ベンゼン試薬（Ａ）、金属触媒、配位子、塩基を溶媒に溶解し、次に１−Ｂｏｃ−ピペラジン（Ｂ）を加え、アルゴンガスで保護して４０〜１４０℃の反応温度で反応させることによって、中間体化合物（Ｃ）を得るステップ（１）と、
中間体化合物（Ｃ）に塩酸−有機溶媒を加え、室温で攪拌して、脱保護中間体（Ｄ）を得るステップ（２）と、
脱保護中間体（Ｄ）を溶媒に溶解し、ＮａＨＣＯ３の存在下で１，４−ジブロモブタンと反応させて、本発明の一般式（Ｉ）の化合物を得るステップ（３）とを含む。
【００３２】
上記の方法において、ハロゲン化ベンゼン試薬は、トリフルオロメチル基によって置換されたブロモベンゼン、トリフルオロメチル基によって置換されたヨードベンゼン、又はジフルオロメチル基によって置換されたブロモベンゼン、ジフルオロメチル基によって置換されたヨードベンゼン、又はブロモヨードベンゼン、又はニトロ基によって置換されたクロロベンゼン、ニトロ基によって置換されたブロモベンゼン、ニトロ基によって置換されたヨードベンゼン等から選ばれてもよい。
【００３３】
上記の方法において、金属触媒は、塩化パラジウム、酢酸銅、ヨウ化第一銅、塩化第二鉄等から選ばれてもよく、ヨウ化第一銅であることが好ましい。
【００３４】
上記の方法において、配位子は異なるα−アミノ酸、ｏ−ヒドロキシベンズアミド、ビナフトール等から選ばれてもよい。なお、配位子は、ビナフトールであることが好ましい。
【００３５】
上記の方法において、塩基は、有機塩基及び無機塩基、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム等から選ばれてもよい。なお、塩基は、リン酸カリウムであることが好ましい。
【００３６】
上記の方法のステップ（１）において、使用される溶媒は、アルコール系、ケトン系、ニトリル系、塩素化炭化水素系溶媒、ベンゼン系溶媒、ＤＭＳＯ又はＤＭＦであり、前記アルコール系溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、エチレングリコール等であり、前記ケトン系溶媒は、例えば、アセトン、メチルエチルケトン等であり、前記ニトリル系溶媒は、例えば、アセトニトリル等であり、前記塩素化炭化水素系溶媒は、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム等であり、前記ベンゼン系溶媒は、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン等である。溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、アセトン、トルエン、ベンゼン、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、クロロホルム、又はジクロロメタンであることが好ましく、ＤＭＦであることがより好ましい。
【００３７】
上記の方法のステップ（１）において、反応温度は１００℃であることが好ましい。
【００３８】
上記の方法のステップ（１）において、反応時間は６〜４８時間であってもよく、１２〜３２時間であることが好ましく、２４時間であることがより好ましい。
【００３９】
上記の方法のステップ（２）において、有機溶媒はアルコール系溶媒又はエステル系溶媒から選ばれ、前記アルコール系溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、エチレングリコール等であり、前記エステル系溶媒は、例えば、ギ酸エチル、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸イソプロピル等である。有機溶媒は酢酸エチルであることが好ましい。
【００４０】
本発明において、室温は０〜４０℃であってもよく、１０〜３０℃であることが好ましく、１５〜２５℃であることがより好ましい。
【００４１】
上記の方法のステップ（３）において、使用される溶媒は、アルコール系、ケトン系、ニトリル系、塩素化炭化水素系溶媒、ベンゼン系溶媒、ＤＭＳＯ又はＤＭＦであり、前記アルコール系溶媒、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、エチレングリコール等であり、前記ケトン系溶媒は、例えば、アセトン、メチルエチルケトン等であり、前記ニトリル系溶媒は、例えば、アセトニトリル等であり、前記塩素化炭化水素系溶媒は、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム等であり、前記ベンゼン系溶媒は、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン等であり、溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、アセトン、トルエン、ベンゼン、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、クロロホルム、ジクロロメタン、又はエチレングリコールであることが好ましく、エタノールであることがより好ましい。
【００４２】
上記の方法で得た目的生成物は、通常の方法で精製・純化することができ、例えば、再結晶の方法で分離・純化することができ、再結晶に使用される溶媒は、酢酸エチル−エタノール、アセトン−エタノール、酢酸エチル−メタノール、アセトン−メタノール、アセトン−水、メタノール、エタノール、又はイソプロパノール等であってもよく、酢酸エチル−エタノールであることが好ましい。
【００４３】
本発明の別の態様において、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群を治療する本発明の化合物を含む医薬組成物を提供することを目的とする。当該医薬組成物は所望により薬学的に許容される担体を含んでもよい。必要に応じて、医薬組成物における有効成分の含有量は０．１〜９９％であり、残りは薬学的に許容される担体である。
【００４４】
本発明の医薬組成物は、所望により、製薬分野の通常の方法に従って、例えば、経口製剤、注射剤、直腸投与製剤、局所投与製剤等、例えば、錠剤、丸剤、分散粉末、カプセル剤、顆粒剤、乳剤、溶液剤、懸濁液、シロップ、経膣もしくは直腸投与用の固形坐剤製剤、局所用テープ剤等のさまざまな製剤形態として製剤化されてもよい。注射剤形、経口剤形又は経皮局所投与剤形として製剤化されることが好ましく、徐放型又は放出制御型の剤形が特に好ましい。
【００４５】
本発明の医薬組成物及び当該組成物の各種の製剤は、製薬分野で既知の通常の方法に従って製造できる。
【００４６】
適切な剤形を製造するために、必要に応じて、例えば、賦形剤、充填剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、湿潤剤、防腐剤、甘味料、色素等のさまざまな医薬用補助剤を含む医薬用担体を加えてもよい。
【００４７】
疾患の種類、重症度、患者の状況、例えば、性別、年齢、体重等によって、適切な剤形及び投与量を選択し、一般に、成人の場合は、投与量は１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重／日であり、１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日であることが好ましい。
【００４８】
本発明の別の態様において、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群の治療における一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、上記の物質を適用に適するさまざまな薬用剤形として製造することを含む使用を提供することを目的とする。
【００４９】
好ましくは、本発明は、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群の治療における化合物ＤＸＬ−Ａ−１６、ＤＸＬ−Ａ−１９、ＤＸＬ−Ａ−２１、ＤＸＬ−Ａ−２２、ＤＸＬ−Ａ−２３、ＤＸＬ−Ａ−２４、これらの立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００５０】
本発明の別の態様において、抗炎症における一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、上記の物質を適用に適するさまざま薬用剤形として製造すること含む使用を提供することを目的とする。
【００５１】
本発明の別の態様において、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群の治療薬物を製造するための、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供することを目的とする。
【００５２】
本発明の別の態様において、抗炎症薬物を製造するための、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供することを目的とする。
【００５３】
好ましくは、本発明は、抗炎症薬物を製造するための、化合物ＤＸＬ−Ａ−１６、ＤＸＬ−Ａ−１９、ＤＸＬ−Ａ−２１、ＤＸＬ−Ａ−２２、ＤＸＬ−Ａ−２３、ＤＸＬ−Ａ−２４、これらの立体異性体、互変異性体、誘導体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００５４】
本発明のさらなる目的は、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群の治療方法であって、治療有効量の、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む治療方法を提供することである。
【００５５】
本発明のさらなる目的は、抗炎症方法であって、治療有効量の、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む抗炎症方法を提供することである。
【００５６】
本発明において、神経障害性疼痛は、中枢神経系における原発性病巣又は機能障害によって引き起こされる痛みを意味する。
【００５７】
例えば、神経障害性疼痛症候群は、帯状疱疹後神経痛（帯状疱疹により引き起こされる）、引き抜き損傷、痛みを伴う外傷性単神経障害、痛みを伴う多発性神経障害（特に糖尿病による）、中枢性疼痛症候群（どのような程度の神経系の損傷によっても引き起こされ得る）、術後疼痛症候群（例えば、乳房切除術後症候群、開胸術後症候群、幻覚痛）、複雑な局所疼痛症候群（反射性交感神経ジストロフィー、灼熱痛）を含む。
【００５８】
場合によっては、神経障害性疼痛は、例えば、鈍感（自発的な又は誘発される灼熱痛で、多くの場合はズキズキとする痛みが伴う）等の典型的な症状が伴うが、激しい痛みや薄々と感じた痛みであることもある。他の感覚（例えば、感覚過敏、痛覚過敏、異常な痛み（害のない刺激による痛み）、痛覚過敏（特に不快で、必要以上に感じられる痛み反応））が生じる可能性もある。
【００５９】
本発明において、神経障害性疼痛は、「外周」（末梢神経系による）、「中央」（脳又は脊髄による）に分類される。
【００６０】
中央神経障害性疼痛は、主に視床における脳病変、又は梗塞、例えば、視床梗塞もしくは脳幹梗塞、又は脳腫瘍もしくは膿瘍による視床や脳幹の圧迫、又は多発性硬化症、又は脳部開放手術、例えば、筋肉運動の障害の場合の視床切開術、又は脊髄病変、又は脊髄損傷、又は脊髄手術、例えば、脊髄前外側柱切断術、又は血液性病変、又は前脊髄動脈症候群、又は延髄外側症候群、又は脊髄空洞症等から選ばれる原因となる疼痛である。
【００６１】
本発明において、神経障害性疼痛は中央神経障害性疼痛症候群である。中央神経障害性疼痛症候群は、例えば、脊髄損傷及び／又は脊髄挫傷により引き起こされる。
【００６２】
場合によっては、神経障害性疼痛は中枢性疼痛メカニズムにより引き起こされる頭部疼痛症候群であり、例えば、片頭痛又は頭部の片側に生じる疼痛である。
【００６３】
場合によっては、神経障害性疼痛は、末梢神経障害性疼痛である。末梢神経障害性疼痛は、例えば、慢性圧迫損傷又は坐骨神経結紮により引き起こされる。
【００６４】
本発明において、主な末梢神経障害性疼痛は、全身性疾患、例えば、糖尿病性神経病変、又は薬物誘発性病変、例えば、化学療法により引き起こされる神経病変、又は外傷後症候群と神経圧迫症候群、又は神経根と神経節の病変、又はＨＩＶ感染による神経病変、又は疱疹若しくはヘルペス感染による神経痛、又は神経根裂傷、又は脳神経病変、又は脳神経痛、例えば、三叉神経痛、又は神経性癌性疼痛、又は幻覚痛、又は末梢神経、神経叢と神経根の圧迫、又は腫瘍担持性末梢神経病変と神経節病変、又は癌治療、例えば、化学療法、放射療法、外科手術の合併症、又は複雑な領域に生じる疼痛症候群、Ｉ型病変（旧称は反射性交感神経ジストロフィー）と、ＩＩ型病変（灼熱痛に相当する）から選ばれる種類の神経障害性疼痛及び／又はこれらが原因となる神経障害性疼痛を含む。
【００６５】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、プロドラッグ、又はそれらの薬学的に許容される塩は、神経障害性疼痛及び／又は神経障害性疼痛症候群に対する治療効果と抗炎症効果に優れており、しかも薬物依存性等の副作用はない。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
次に、実施例を用いて本発明を詳細に説明する。
当業者であれば理解されるように、以下の実施例は本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。実施例で技術又は条件の記載がない場合は、本分野の文献に記載される技術もしくは条件、又は製品取扱説明書に準じる。使用される試薬又は装置はメーカーが明記されない場合は、いずれも市販される一般的な製品である。
【００６７】
試薬及び溶媒はいずれも化学用又は分析用の純度の市販品であり、説明がない限り、処理せずに直接使用する。石油エーテルは６０〜９０℃の留分であり、無水ジオキサンは活性化されたモレキュラーシーブによって乾燥され、無水ＴＨＦはナトリウムで処理される。原料及び試薬は中国メーカー、Ａｒｃｏｓ社、薩恩社、伊諾凱社等から提供される。
【００６８】
カラムクロマトグラフィー：青島海洋化工厂製、シリカゲル２００〜３００メッシュ、発色剤としてヨウ素を使用、又はＵＶランプにより検出。
【００６９】
核磁気共鳴装置：ＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥ  ＩＩＩ  ４００、高分解能質量分析計：Ｗａｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｇ２  Ｑ−ＴＯＦ液体クロマトグラフ質量分析計。
【００７０】
合成法１（化合物ＤＸＬ−Ａ−１０の合成を例に）
2021505594.tif 000008
イソプロパノール２５ｍＬが入った１００ｍＬ丸底フラスコに３−ヨードトルエン（２．１８ｇ、０．０１ｍｏｌ）を加え、次に無水ピペラジン（１．７６ｇ、０．０２ｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（０．５ｇ、２５ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（４．６６ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）、エチレングリコール（１．５ｍＬ）を加え、アルゴンガスで保護して１８時間還流して反応させた。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により反応終了を検出した。濾過し、減圧して溶媒を除去し、水２０ｍＬを加え、クロロホルムで３０ｍＬ抽出し（３回）、抽出液を合わせ、飽和食塩水と水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。液体がなくなるまで濃縮させ、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ：ＭｅＯＨ：ＮＨ３・Ｈ２Ｏ＝２５：３：２）により無色の油状生成物２−２２  ０．５ｇを得た。収率は２３％であった。
【００７１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．１８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄｄ，Ｊ＝１７．８，８．７Ｈｚ，３Ｈ），３．１４（ｓ，８Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）．
【００７２】
2021505594.tif 000009
５０ｍＬ丸底フラスコにエタノール１８ｍＬを加え、原料３−１（０．５ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）、１，４−ジブロモブタン（０．６ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）を加え、ＮａＨＣＯ３（１．６７ｇ、１９．８８ｍｍｏｌ）を細かく研磨し、攪拌しながら上記の体系に加え、８０℃で加熱して６時間還流して反応させ、薄層クロマトグラフィーにより検出して原料が残る場合は、引き続き１８時間まで反応させて、反応終了とした。濾過して、炭酸水素ナトリウム固体を除去し、濾液をエバポレーターで乾燥させ白色固体となる粗生成物（０．９３ｇ）を得た。当該固体に酢酸エチル２０ｍＬを加え、５分間超音波処理し、濾過して、酢酸エチルを除去して、固体の粗生成物を得た。次に、酢酸エチル／エタノール再結晶により白色固体となる生成物７３０ｍｇを得た。収率は８３％であった。
【００７３】
合成法２（化合物ＤＸＬ−Ａ−０８の合成を例に）
2021505594.tif 000010
１，４−ジオキサン４０ｍＬが入った２５０ｍＬ丸底フラスコに、原料２−２３の３−ブロモ安息香酸メチル（２．１５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（６２２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（４５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６．５ｇ、２０ｍｍｏｌ）、２−２４のＢｏｃ−ピペラジン（１．８６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガスで保護して、１００℃で１８時間還流して反応させ、ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により反応終了を検出した。珪藻土で濾過して、固体を除去した。濾液をエバポレーターで乾燥させ、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により淡黄色の油状生成物７２０ｍｇを得た。収率は２３％であった。
【００７４】
2021505594.tif 000011
原料２−２５（７２０ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに加え、塩化水素・酢酸エチル（２．８Ｍ）を加え、５時間攪拌し、ＴＬＣにより原料の反応終了を検出した。濾過して、塩化水素・酢酸エチルを除去し、酢酸エチルで繰り返し洗浄し、薄層クロマトグラフィーにより１つの生成物だけが検出され、白色固体となる生成物２−２６  ５７０ｍｇを得た。収率は９９％であった。
【００７５】
2021505594.tif 000012
原料２−２６（５７０ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解し、次にＮａＨＣＯ３（１．５ｇ、１７．７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間攪拌し（ＨＣｌ解離）、次に１，４−ジブロモブタン（５２７ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を加え、６時間還流して反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応終了を検出した。濾過して、ＮａＨＣＯ３固体を除去し、濾液をエバポレーターで乾燥させ、酢酸エチル２０ｍＬを加え、２回洗浄した。濾過して白色の粗生成物を得た。酢酸エチル／エタノール再結晶により、白色固体となる生成物１６０ｍｇを得た。収率は２０．３％であった。
【００７６】
合成法３（化合物ＤＸＬ−Ａ−２６の合成を例に）
2021505594.tif 000013
原料４−ヨードアニソール２−２７（２．３４ｇ、１０ｍｍｏｌ）、配位子（４３０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（５８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（５．３２ｇ、２０ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、次にＢｏｃ−ピペラジン２−２４（２．８ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガスで保護して、１００℃で２４時間反応させた。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により原料の反応終了を検出した。ジクロロメタン５０ｍＬで３回抽出し、抽出液を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液と水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により黄色固体となる生成物７２０ｍｇを得た。収率は２４．６％であった。
【００７７】
2021505594.tif 000014
原料２−２８（７２０ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに加え、塩化水素・酢酸エチル（３．８Ｍ）を加え、室温で２４時間攪拌し、濾過して、白色固体となる生成物６００ｍｇを得た。収率は９０％であった。
【００７８】
2021505594.tif 000015
原料２−２９（６００ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（１．７６ｇ、２０．９６ｍｍｏｌ）を加え、攪拌しながら１，４−ジブロモブタン（５６７ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を加えた。６時間還流して反応させて、ＴＬＣにより反応終了を検出した。濾過してＮａＨＣＯ３を除去し、エバポレーターで溶媒を乾燥させ固体を得る。当該固体を酢酸エチル（２０ｍＬ）で２回洗浄し、濾過して固体を得た。当該固体は加熱してジクロロメタンで２回洗浄し、濾過して固体の粗生成物を得た。酢酸エチル／ジクロロメタン再結晶により、白色固体となる生成物８００ｍｇを得た。収率は９３％であった。
【００７９】
実施例１  ＤＸＬ−Ａ−１６の製造
８−（４−フルオロフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−フルオロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000016
【００８０】
合成法３により、白色の固体を得た。収率は４３％であった。
【００８１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．２４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６１−３．２６（ｍ，１２Ｈ），２．１０（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５９．２６，１５６．８９，１４５．４１，１１９．２７，１１９．１９，１１６．０３，１１５．８１，６２．６６，５９．０１，４５．６９，２１．０８．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ２０ＢｒＦＮ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２３５．３１９８５、測定値は２３５．１６０４１であった。
【００８２】
実施例２  ＤＸＬ−Ａ−１９の製造
８−（４−シアノフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−シアノフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウムブロミド
2021505594.tif 000017
【００８３】
合成法２により、白色の固体を得た。収率は３７．１％であった。
【００８４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．５４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，９．７Ｈｚ，１２Ｈ），２．１１（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５２．２２，１３３．９２，１２０．５５，１１５．３０，１００．８５，６２．５２，５８．５５，４２．７９，２１．０３．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２０ＢｒＮ３［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２４２．３３８８５、測定値は２４２．１６５１１であった。
【００８５】
実施例３  ＤＸＬ−Ａ−２１の製造
８−（３，４−ジフルオロフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（３，４−ジフルオロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000018
【００８６】
合成法３により、白色の固体を得た。収率は５９．３％であった。
【００８７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．１０（ｄｄ，Ｊ＝１９．３，９．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｍ，Ｊ＝１３．１，６．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６９−３．４４（ｍ，８Ｈ），３．３８（ｓ，４Ｈ），２．１１（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５１．３７，１５１．２２，１４８．９３，１４８．８１，１４６．３５，１４６．２２，１４６．０９，１４５．９７，１４３．９６，１４３．８４，１１７．６５，１１７．４８，１１３．０６，１１３．０４，１１３．０１，１１２．９８，１０６．６１，１０６．４１，６２．６１，５８．８５，４５．０８，２１．０７．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ１９ＢｒＦ２Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２５３．３１０３２、測定値は２５３．１５０８７であった。
【００８８】
実施例４  ＤＸＬ−Ａ−２２の製造
８−（４−ブロモフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000019
【００８９】
合成法３により、白色の固体を得た。収率は８６．９％であった。
【００９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．３８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，７．３Ｈｚ，８Ｈ），３．３９（ｓ，４Ｈ），２．１０（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４８．３０，１３２．２１，１１８．６４，１１３．２０，６２．５６，５８．８３，４４．３７，２１．１３．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ２０Ｂｒ２Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２９６．２２５４５、測定値は２９６．０８３２９であった。
【００９１】
次の方法でＤＸＬ−Ａ−２２を製造することもできる。
【００９２】
１．中間体４−（４−ブロモフェニル）−１−Ｂｏｃ−ピペラジン（Ｃ）の調製
原料の４−ブロモヨードベンゼンＡ（１０ｍｍｏｌ）、１，１’−ジ−２−ナフトール（４３０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（５８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（５．３２ｇ、２０ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、次にＢｏｃ−ピペラジンＢ（２．８ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガスで保護して、１００℃の温度で２４時間反応させた。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により原料の反応終了を検出した。ジクロロメタンで３回抽出し（５０ｍＬ×３）、抽出液を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により黄色固体となる生成物４−（４−ブロモフェニル）−１−ＢｏｃピペラジンＣを得た。
【００９３】
２．中間体１−（４−ブロモフェニル）ピペラジン（Ｄ）の調製
４−（４−ブロモフェニル）−１−ＢｏｃピペラジンＣ（２．４６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに加え、塩化水素・酢酸エチル（３．８Ｍ）を加え、室温で２４時間攪拌し、濾過して、白色固体となる脱保護中間体１−（４−ブロモフェニル）ピペラジン（Ｄ）を得た。
【００９４】
３．Ｉａの調製
脱保護中間体１−（４−ブロモフェニル）ピペラジンＤ（２．６２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（１．７６ｇ、２０．９６ｍｍｏｌ）を加え、攪拌しながら１，４−ジブロモブタン（５６７ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を加えた。６時間還流して反応させて、ＴＬＣにより反応終了を検出する。濾過してＮａＨＣＯ３を除去し、エバポレーターで溶媒を乾燥させ固体を得た。当該固体は酢酸エチル、ジクロロメタンで洗浄し、粗生成物を得て、酢酸エチル／ジクロロメタンにより再結晶させ、白色固体となる生成物Ｉａを得た。収率は８６．９％であった。
【００９５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．３８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，７．３Ｈｚ，８Ｈ），３．３９（ｓ，４Ｈ），２．１０（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４８．３０，１３２．２１，１１８．６４，１１３．２０，６２．５６，５８．８３，４４．３７，２１．１３．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ２０Ｂｒ２Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２９６．２２５４５、測定値は２９６．０８３２９であった。
【００９６】
実施例５  ＤＸＬ−Ａ−２３の製造
８−（４−クロロフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−クロロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000020
【００９７】
合成法３により、白色の固体を得た。収率は１７．５％であった。
【００９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．２５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，７．１Ｈｚ，８Ｈ），３．４０（ｓ，４Ｈ），２．１０（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４７．７５，１２９．２３，１２５．８９，１１８．３８，６２．５６，５８．８５，４４．６３，２１．０８．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ２０ＢｒＣｌＮ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２５１．７７４４５、測定値は２５１．１３０７７であった。
【００９９】
実施例６  ＤＸＬ−Ａ−２４の製造
８−（４−トリフルオロメチルフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000021
【０１００】
合成法３により、白色の固体を得た。収率は７０．７％であった。
【０１０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．５４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１２Ｈ），２．１１（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５１．５５，１２６．６６，１２６．６３，１２５．８３，１２３．１５，１２１．９１，１２１．５９，１２１．２５，１１５．８２，６２．５２，５８．６８，４３．６２，２１．０２．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２０ＢｒＦ３Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２８５．３２７３６、測定値は２８５．１５６８７であった。
【０１０２】
次の方法でＤＸＬ−Ａ−２４を製造することもできる。
【０１０３】
製造方法は、Ａは４−トリフルオロメチルブロモベンゼンである以外、実施例４に記載のＤＸＬ−Ａ−２２の第２の製造方法と同じである。白色固体となる生成物Ｉｂを得た。収率は７０．７％であった。
【０１０４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．５４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１２Ｈ），２．１１（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５１．５５，１２６．６６，１２６．６３，１２５．８３，１２３．１５，１２１．９１，１２１．５９，１２１．２５，１１５．８２，６２．５２，５８．６８，４３．６２，２１．０２．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２０ＢｒＦ３Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２８５．３２７３６、測定値は２８５．１５６８７であった。
【０１０５】
実施例７  ＤＸＬ−Ａ−２７の製造
８−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000022
【０１０６】
合成法２により、白色の固体を得た。収率は７５％であった。
【０１０７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．５２（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，１２Ｈ），２．２１（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４９．９５，１３２．３６，１３２．０３，１３１．７１，１３１．４４，１２４．８６，１２２．２０，１１６．１７，１１４．１８，１１４．１０，１１４．０６，１１４．０２，６２．７１，５８．７８，４３．８６，２１．１６．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１６Ｈ１９ＢｒＦ６Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は３５３．３２５３３、測定値は３５３．１４３６９であった。
【０１０８】
実施例８  ＤＸＬ−Ａ−２８の製造
８−（３−ニトロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（３−ニトロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000023
【０１０９】
合成法２により、黄色の固体を得た。収率は４３．２％であた。
【０１１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．８８（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，１２Ｈ），２．１８（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５０．３６，１４８．９６，１３２．６３，１３２．２７，１３１．８３，１３１．４９，１２４．４７，１１８．２８，１１３．３３，１１１．７４，６２．７０，５８．６６，４３．５３，２１．１７．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ１９ＢｒＦ３Ｎ３Ｏ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は３３０．３２４９２、測定値は３３０．１４１９５であった。
【０１１１】
実施例９  ＤＸＬ−Ａ−２９の製造
８−（３−メチル−５−ニトロフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（３−メチル−５−ニトロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000024
【０１１２】
合成法２により、黄色の固体を得た。収率は２７．１％であった。
【０１１３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．５０（ｓ，２Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），３．７９−３．３２（ｍ，１２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４９．４３，１４８．３８，１２３．１９，１１６．１８，１０７．６９，６２．６３，５８．７８，４３．９９，２１．１４，２０．６４．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２２ＢｒＮ３Ｏ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２７６．３５３５３、測定値は２７６．１７０３３であった。
【０１１４】
実施例１０  ＤＸＬ−Ａ−３０の製造
８−（３−ニトロ−４−メチルフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000025
【０１１５】
合成法２により、黄色の固体を得た。収率は１８．２％であった。
【０１１６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．３１（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６７−３．４９（ｍ，８Ｈ），３．４０（ｓ，４Ｈ），２．１９（ｓ，４Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４８．６７，１４７．６４，１３３．６８，１２６．１３，１２１．８１，１１１．６３，６２．７０，５８．８７，４４．１６，２１．１８，１８．７８．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２２ＢｒＮ３Ｏ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２７６．３５３５３、測定値は２７６．１７０８５であった。
【０１１７】
実施例１１  ＤＸＬ−Ａ−３２の製造
８−（３−ニトロ−４−シアノフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（４−シアノ−３−ニトロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000026
【０１１８】
合成法２により、黄色の固体を得た。収率は３２．６％であった。
【０１１９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．５８（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，５．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１４（ｄｔ，Ｊ＝３３．４，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｓ，４Ｈ），３．６６−３．５１（ｍ，８Ｈ），２．１６（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５２．２７，１３６．６１，１１８．５０，１１７．３４，１１０．５２，９４．２５，６２．６０，５８．２９，４２．１４，２１．０５．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ１９ＢｒＮ４Ｏ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２８７．３３６４１、測定値は２８７．１５１３４であった。
【０１２０】
実施例１２  ＤＸＬ−Ａ−０５の製造
８−（３−クロロフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（３−クロロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000027
【０１２１】
合成法３により、白色の固体を得た。収率は５８．８％であった。
【０１２２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝１７．４，８．１Ｈｚ，２Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝３０．２，２６．７Ｈｚ，１２Ｈ），２．１４（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５０．２４，１３４．６２，１３０．７７，１２１．３４，１１６．６５，１１５．１４，６２．６２，５８．８１，４４．３６，２１．０９．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ２０ＢｒＣｌＮ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２５１．７７４４５、測定値は２５１．１３０８２であった。
【０１２３】
実施例１３  ＤＸＬ−Ａ−０６の製造
８−（３−トリフルオロメチルフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５イウムブロミド
2021505594.tif 000028
【０１２４】
合成法２により、白色の固体を得た。収率は２３．７％であった。
【０１２５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．４６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，５．７Ｈｚ，１２Ｈ），２．１７（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １４９．３７，１３１．２２，１３０．９０，１３０．２９，１２５．４６，１２２．７７，１２０．２４，１１７．９４，１１３．２０，６２．６５，５８．８７，４４．３９，２１．１１．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２０ＢｒＦ３Ｎ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２８５．３２７３６、測定値は２８５．１５７１５であった。
【０１２６】
実施例１４  ＤＸＬ−Ａ−１０の製造
８−（３−トリル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（ｍ−トリル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000029
【０１２７】
合成法１により、白色の固体を得た。収率は８３％であった。
【０１２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．２２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６２−３．４９（ｍ，８Ｈ），３．４４（ｓ，４Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １６０．００，１５０．５２，１３０．６７，１１０．０１，１０７．１５，１０３．４０，６２．６１，５８．９０，５５．４４，４４．８０，２１．０７．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１５Ｈ２３ＢｒＮ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２３１．３５５９７、測定値は２３１．１８５４８であった。
【０１２９】
実施例１５  ＤＸＬ−Ａ−１８の製造
８−（２−フルオロフェニル）−８−アザ−５−アザスピロ［４．５］デカンブロミド
８−（２−フルオロフェニル）−５，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−５−イウム  ブロミド
2021505594.tif 000030
【０１３０】
合成法３により、白色の片状結晶を得た。収率は９１％であった。
【０１３１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  ７．１５−６．９８（ｍ，４Ｈ），３．６３−３．４３（ｍ，８Ｈ），３．３１（ｓ，４Ｈ），２．１１（ｓ，４Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ  １５６．７２，１５４．５１，１３７．０９，１３７．００，１２５．０９，１２５．０５，１２５．０２，１１９．８４，１１６．４７，１１６．２７，６２．８２，５９．２０，４５．７３，２１．０３．
ＥＳ−ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ２０ＢｒＦＮ２［Ｍ−Ｂｒ］＋の計算値は２３５．３１９８５、測定値は２３５．１６０９４であった。
【０１３２】
効果実施例
化合物ＬＸＭ−２１、ＬＸＭ−２２の製造に関しては、ＷＯ２００７／１４７３４６Ａ１を参照する。引用により当該文献の全体が組み込まれる。
【０１３３】
各化合物の投与量は０．４、１、３、４、６、９、１２ｍｇ／ｋｇであり、各化合物が低投与量で投与され、薬効に有意差が認められない場合は、順次投与量を増やす。即ち投与量０．４ｍｇ／ｋｇは対照と有意差が認められない場合は、投与量を１ｍｇ／ｋｇに調整し、このように試験を繰り返す。
【０１３４】
化合物ＤＸＬ−Ａ−２７、ＤＸＬ−Ａ−２８、ＤＸＬ−Ａ−２９、ＤＸＬ−Ａ−３０、ＤＸＬ−Ａ−３２の分子量は他の化合物の分子量と差が大きいため、これらの化合物の投与量は４μｍｏｌ／ｋｇとする。
【０１３５】
実験動物：
北京大学実験動物部が提供するＩＣＲ系マウスを用いる（許可番号：ＳＣＸＫ（京）２０１６−００１０）。体重は１８〜２２ｇであり、オスとメスの数量は５０：５０である。
【０１３６】
以下の試験により、本発明の化合物の鎮痛効果を測定する。
【０１３７】
下記の実施例は本発明の化合物の薬力学実験である。下記の実験において、薬力学実験結果は全て統計処理を行っている。実験結果はソフトウェアＳＰＳＳ  １３．０を用いて分析する。酢酸ライジングテスト、ホルマリン実験では各群間の比較に一元配置分散分析を用いる。ホットプレートテスト及びキシレン誘発マウス耳部浮腫試験には反復測定分散分析を用いる。有意性検定ではＰ＜０．０５を基準とする。
【０１３８】
効果実施例１  ホットプレートテスト
ホットプレートの温度を５５℃に調整し、観察指標はマウスが後足を舐める行動、跳躍反応であり、マウスが銅板に置かれてから前記反応が出現するまでの時間は潜伏期（ｌａｉｅｎｃｙｔｉｍｅ）である。投与から３０分間前に３回潜伏期を測定し、その平均値を基礎閾値とする。これは基礎潜伏期（Ｂａｓｅｌｉｎｅ  ｌａｔｅｎｃｙ、略称ＢＬ）ともいう。潜伏期が１５秒を上回る又は５秒未満の動物を除去し、マウスを無作為に群分けし、各群は８匹であった。溶媒対照群（二回蒸留水）、各被検サンプル群（化合物及びその投与量は表１参照）を設けた。全ての薬物は使用直前に生理食塩水で溶解して、強制経口投与した。投与から２.０時間後の潜伏期を測定した。以下の式により化合物によるマウス疼痛閾値上昇率（Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｅｌｅｖａｔｅｄ  Ｒａｔｅ、略記ＰＴＥ％）を算出した。  ＰＴＥ％＝（試験群の潜伏期−溶媒対照群の潜伏期）／溶媒対照群の潜伏期×１００
【０１３９】
実験結果を表１に示す。本発明の化合物の結果は溶媒群と比較してＰ＜０．０５であり、化合物ＤＸＬ−Ａ−１６、ＤＸＬ−Ａ−１９、ＤＸＬ−Ａ−２１、ＤＸＬ−Ａ−２２、ＤＸＬ−Ａ−２３、ＤＸＬ−Ａ−２４、ＤＸＬ−Ａ−２７、ＤＸＬ−Ａ−２８、ＤＸＬ−Ａ−２９、ＤＸＬ−Ａ−３２は溶媒群と比較してＰ＜０．０１である。
【０１４０】
2021505594.tif 000031
【０１４１】
効果実施例２  酢酸ライジング実験
ＩＣＲ系マウスを用い、オスとメスの数量は５０：５０であった。無作為に群分けし、各群は８匹であった。溶媒対照群（二回蒸留水）、イブプロフェン対照群、各被検サンプル群（化合物及びその投与量は表２参照）を設けた。全ての薬物は使用直前に二回蒸留水で溶解して、所定の投与量で強制経口投与した。投与から２時間後、マウスに０．６％酢酸溶液を腹腔内注射し（１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）、５〜２０分間内にマウスが躯幹をねじる（腹部を細くし、臀部を持ち上げ、身体を引き伸ばす）回数を記録し、以下の式によりマウスの躯幹ねじり行動に対する化合物の疼痛阻害率％を算出した。
阻害率％＝（溶媒対照群の躯幹をねじる回数−試験群の躯幹をねじる回数）／溶媒対照群の躯幹をねじる回数×１００
【０１４２】
酢酸刺激による痛みに対する本発明の化合物の鎮痛作用を表２に示す。本発明の化合物の結果は溶媒群と比較してＰ＜０．０５であり、化合物ＤＸＬ−Ａ−２９及びＤＸＬ−Ａ−３０は溶媒群と比較してＰ＜０．０１である。
【０１４３】
2021505594.tif 000032
注：符号「−」は、当該投与量において得られたデータが溶媒対照群と有意差が認められないことを示す。
【０１４４】
効果実施例３  ホルマリン実験
ＩＣＲ系マウスを用い、オスとメスの数量は５０：５０であった。無作為に群分けし、各群は８匹であった。溶媒対照群（二回蒸留水）、各被検サンプル群（化合物及びその投与量は表３参照）を設けた。全ての薬物は使用直前に二回蒸留水で溶解して、所定の投与量で強制経口投与した。投与から２時間後、マウスの右後足底に２．５％ホルマリン溶液２０μｌを注射し、マウスが足をなめる又は足を噛む行動の続く時間（秒）を疼痛反応の指標として記録し、０〜５分は第Ｉ相であり、１０〜６０分は第ＩＩ相であり、６０分間観察した。以下の式によりマウスの疼痛の第ＩＩ相に対する化合物の阻害率％を算出した。
阻害率％＝（溶媒対照群の足をなめる又は足を噛む行動の続く時間−試験対照群の足をなめる又は足を噛む行動の続く時間）／（溶媒対照群の足をなめる又は足を噛む行動の続く時間）×１００
【０１４５】
ホルマリン刺激による疼痛に対する本発明の化合物の影響を表３に示す。本発明の化合物の結果は溶媒群と比較してＰ＜０．０５であり、ＤＸＬ−Ａ−０５、ＤＸＬ−Ａ−１０、ＤＸＬ−Ａ−１６、ＤＸＬ−Ａ−１９、ＤＸＬ−Ａ−２１、ＤＸＬ−Ａ−２２、ＤＸＬ−Ａ−２３、ＤＸＬ−Ａ−２４は溶媒群と比較してＰ＜０．０１である。
【０１４６】
2021505594.tif 000033
【０１４７】
効果実施例４  キシレン誘発マウス耳部浮腫試験
ＩＣＲ系マウスを用いった。無作為に群分けし、各群は８匹であり、オスとメスは各４匹であった。溶媒対照群（二回蒸留水）、各被検サンプル群（化合物及びその投与量は表４参照）を設けた。全ての薬物は使用直前に二回蒸留水で溶解して、所定の投与量で強制経口投与した。化合物投与から２時間後、マウスの右耳の内側と外側にキシレン５０μＬを均一に塗布し、３０分間後にマウスの左耳と右耳をカットし、パンチャーを用いて左右に同一の位置でそれぞれ同じ大きさの円形の部分を取得して、秤量した。以下の式によりマウスの耳部浮腫に対する化合物の阻害率を算出した。
阻害率％＝（溶媒対照群の耳部浮腫度−試験群の耳部浮腫度）／溶媒対照群の耳部浮腫度×１００
【０１４８】
キシレン誘発マウス耳部浮腫に対する本発明の化合物の影響を表４に示す。本発明の化合物の結果は溶媒群と比較してＰ＜０．０５であり、化合物ＤＸＬ−Ａ−０５、ＤＸＬ−Ａ−０６、ＤＸＬ−Ａ−２１、ＤＸＬ−Ａ−２２、ＤＸＬ−Ａ−２４、ＤＸＬ−Ａ−２９は溶媒群と比較してＰ＜０．０１である。
【０１４９】
2021505594.tif 000034
注：符号「−」は、当該投与量において得られたデータが溶媒対照群と有意差が認められないことを示す。
【０１５０】
効果実施例５  化合物ＤＸＬ−Ａ−２２及びＤＸＬ−Ａ−２４の抗神経障害性疼痛作用に関する研究
材料及び方法：
１  材料：
１．１  動物：
北京大学実験動物部が提供するＳＤ系ラットを用いった。体重は１８０〜２２０ｇであり、オスとメスの数量は同じであった。温度２２±０．５℃と相対湿度５５±５％の標準環境でラットを飼育し、１２時間交代で明暗周期を切り替え、標準飼料を給餌した。
【０１５１】
１．２  試薬：
化合物ＤＸＬ−Ａ−２２及び化合物ＤＸＬ−Ａ−２４（北京大学化学生物学学部が合成する）、ガバペンチン（江蘇恒瑞医薬股フン有限公司が提供する）。
１．３  装置：
ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ電子痛覚計（ＩＩＴＣ  ２３９０、米国製）、熱刺激鎮痛効果測定計（ＬＥ  ７４０６、米国製）。
【０１５２】
２  方法：
２．１  坐骨神経慢性圧迫性損傷（ＣＣＩ）モデル：
ラットをペントバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔し、右後肢の施術部を剃毛し、伏臥位で固定し、ラットの右後肢大腿骨の中央に縦方向の切り目を入れ、筋肉を鈍性に分離し、坐骨神経を暴露し、坐骨神経が二股に分かれた位置で、近位端で４−０絹糸を用いて約１ｍｍの間隔で４回緩く結紮し、右後脚が軽く振るのが観察されるように締め付けた。結紮後に筋肉、皮膚を縫合し、偽手術群は坐骨神経を暴露し、結紮はしなかった。手術後ラットの側後肢に足指が閉じる、わずか外反する、常に持ち上げた状態であるかどうかを観察し、機械的刺激によるラット足引っ込め閾値及び熱刺激による足引っ込め潜伏期を測定したことによって、モデル作成の成否を判断した。
【０１５３】
手術前に機械的刺激によるラット足引っ込め閾値及び熱刺激による足引っ込め潜伏期を測定し、測定結果によって、偽手術群（ｓｈａｍ）、溶媒群（二回蒸留水、ｉ．ｇ．）、ＤＸＬ−Ａ−２２群（２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）、ＤＸＬ−Ａ−２４群（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）、ガバペンチン群（１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）と群分けし、使用される化合物及び薬物は全て二回蒸留水で溶解し、１ｍＬ／１００ｇで強制経口投与した。手術後の１日目から毎日投与し、投与から２時間後に機械的刺激による足引っ込め閾値及び熱刺激による足引っ込め潜伏期を測定した。
【０１５４】
２．２  機械的刺激による足引っ込め閾値（ＭＷＴ）の測定：
ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ電子痛覚計を用いて機械的刺激によるラット足引っ込め閾値（ＭＷＴ）を測定した。手術後５日目、７日目、１４日目にそれぞれ測定した。ラットを透明なアクリル樹脂製ボックス（底部に１ｍｍ２メッシュの鉄網が敷かれた）に入れ、３０分間環境に順応させ、ラットは探索行動をやめてから、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ電子痛覚計を用いてラットの施術側の足底の中央部を刺激し、痛覚計によってラットの足引っ込め反応を引き起こす最大作用力（即ちＭＷＴ）を記録した。以下の式により化合物の阻害率を算出した。
絶対上昇率（即ちＰＴＥ％）：ＰＴＥ％＝（試験群ＭＷＴ−溶媒群ＭＷＴ）／溶媒群ＭＷＴ×１００  （１）
相対上昇率：阻害率％＝（試験群ＭＷＴ−溶媒群ＭＷＴ）／（偽手術群ＭＷＴ−溶媒群ＭＷＴ）×１００  （２）
【０１５５】
２．３  熱刺激による足引っ込め潜伏期（ＰＷＬ）の測定：
ホットプレートテストにより、熱刺激による足引っ込め潜伏期（ＰＷＬ）を測定した。手術後５日目、７日目、１４日目にそれぞれ測定した。ホットプレートの温度は５０．５℃であり、ラットがホットプレートテスターに置かれてから身震い、足をなめる反応が出現するまでを計時し、この期間はラットＰＷＬであった。ホットプレート解除時間は１４秒であり、次の式（３）により鎮痛パーセント（即ちＭＰＥ％）を算出した。
ＭＰＥ％＝（試験群ＰＷＬ−溶媒群ＰＷＬ）／（解除時間−溶媒群ＰＷＬ）×１００  （３）
【０１５６】
２．４  統計処理：
結果はいずれも平均値±標準誤差（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示す。ソフトウェアＳＰＳＳ  １９．０を用いて分析し、機械的刺激試験の各群間の比較及び熱刺激試験の各群間の比較ではいずれも反復測定分散分析を用いる。有意性検定ではＰ＜０．０５を基準とする。
【０１５７】
３  実験結果：
３．１  機械的刺激によるＣＣＩラット足引っ込め閾値（ＭＷＴ）に対するＤＸＬ−Ａ−２２の影響（ｍｅａｎ±ＳＥＭ、ｎ＝８）
2021505594.tif 000035
＊＊は、溶媒群と比較してＰ＜０．０１であることを示す。
【０１５８】
３．２  熱刺激によるＣＣＩラット足引っ込め潜伏期（ＰＷＬ）に対するＤＸＬ−Ａ−２２の影響（ｍｅａｎ±ＳＥＭ、ｎ＝８）
2021505594.tif 000036
＊＊は、溶媒群と比較してＰ＜０．０１であることを示す。
【０１５９】
３．３  機械的刺激によるＣＣＩラット足引っ込め閾値（ＭＷＴ）に対するＤＸＬ−Ａ−２４の影響（ｍｅａｎ±ＳＥＭ、ｎ＝８）
2021505594.tif 000037
＊＊は、溶媒群と比較してＰ＜０．０１であることを示す。
【０１６０】
３．４  熱刺激によるＣＣＩラット足引っ込め潜伏期（ＰＷＬ）に対するＤＸＬ−Ａ−２４の影響（ｍｅａｎ±ＳＥＭ、ｎ＝８）
2021505594.tif 000038
＊＊は、溶媒群と比較してＰ＜０．０１であることを示す。
【０１６１】
効果実施例６  化合物ＤＸＬ−Ａ−２２、ＤＸＬ−Ａ−２４の抗炎症作用に関する研究
１  材料：
１．１  動物：
北京大学実験動物部が提供するＩＣＲ系マウスを用いた。体重は１８〜２２ｇであり、オスとメスの数量は同じであった。温度２３±１℃、相対湿度５５±５％の標準環境で動物を飼育し、１２時間交代で明暗周期を切り替え、標準顆粒飼料を給餌した。
【０１６２】
１．２  試薬：
化合物ＤＸＬ−Ａ−２２とＤＸＬ−Ａ−２４（北京大学化学生物学学部が合成する）、酢酸デキサメタゾン錠剤（浙江仙キョ制薬股フン有限公司提供、承認番号：１２０４１５）、キシレン（北京化工厂提供、承認番号：２０１００５１３）、カラギーナン（米シグマアルドリッチ社提供、承認番号：０１５Ｋ０１７２）。
１．３  装置：
自製パンチャー（直径６ｍｍ）、ＹＬＳ−７Ｂ型足底容積測定計（山東省医学科学院装置所提供）。
【０１６３】
２  方法：
２．１  キシレン誘発マウス耳部浮腫試験：
マウスを無作為に５群に分け、各群は８匹であり、オスとメスは各４匹であった。溶媒対照群（二回蒸留水、ｉ．ｇ．）、デキサメタゾン対照群（２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）、化合物ＤＸＬ−Ａ−２２群（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）、化合物ＤＸＬ−Ａ−２４群（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）を設けた。全ての薬物は使用直前に二回蒸留水で溶解して、０．１ｍＬ／１０ｇで強制経口投与した。投与から１時間後、マウスの右耳の内側と外側にそれぞれキシレン３０μＬを均一に塗布することで炎症を誘発し、３０分間後にマウスの左耳と右耳をカットし、パンチャー（直径６ｍｍ）を用いて、左耳と右耳の同一の位置でそれぞれ同じ大きさの円形の部分を取得して、秤量し、左耳部分と右耳部分の重量を計算する。キシレンが塗布された右耳の重量とキシレンを塗布していない左耳の重量の差（即ち浮腫度）を浮腫の度合いを表す指標とした。次の式（１）により浮腫度を算出した。抗炎症作用の強さは阻害率（％）で表す。次の式（２）により阻害率（％）を算出した。
浮腫度＝右耳部分の重量−左耳部分の重量  （１）
炎症阻害率（％）＝（溶媒対照群の耳部浮腫度−投与群の耳部浮腫度）／溶媒対照群の耳部浮腫度×１００％  （２）
【０１６４】
２．２  カラギーナン誘発マウス足浮腫試験：
マウスを専用のホルダー内に固定し、両側の後足を露出し、試験前に足底容積測定の基準として、マーカーでマウスの足首関節より下方０．５ｃｍの位置に線を描いた。投与から３０分間前に、基礎閾値として右後足の容積を測定した。マウスを無作為に５群に分け、各群は８匹であり、オスとメスは各４匹であった。溶媒対照群（二回蒸留水、ｉ．ｇ．）、デキサメタゾン対照群（０．５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）、化合物ＤＸＬ−Ａ−２２群（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）、ＤＸＬ−Ａ−２４群（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｇ．）を設けた。全ての薬物は使用直前に二回蒸留水で溶解して、０．１ｍＬ／１０ｇで投与した。強制経口投与後、直ちにマウスの右後足底に５％カラギーナン含有生理食塩水溶液２０μＬを皮下注射し、注射から３０分間後、１時間後、２時間後にそれぞれ足底容積を測定した。カラギーナン注射後の右足底容積と注射前の右足底容積の差（浮腫度）を浮腫の度合いを表す指標とした。次の式（３）により浮腫度を算出した。抗炎症作用の強さは阻害率（％）で表す。次の式（４）により阻害率（％）を算出した。
浮腫度＝注射後の右足底容積−注射前の右足底容積  （３）
炎症阻害率（％）＝（溶媒対照群の足底浮腫度−投与群の足底浮腫度）／溶媒対照群の足底浮腫度×１００％  （４）
【０１６５】
２．３  統計処理：
結果はいずれも平均値±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で示す。ソフトウェアＳＰＳＳ  １９．０を用いて分析する。キシレン誘発マウス耳部浮腫実験では各群間の比較に一元配置分散分析を用い、カラギーナン誘発マウス足底浮腫実験では各群間の比較に反復測定分散分析を用いる。有意性検定ではＰ＜０．０５を基準とする。
【０１６６】
３  実験結果：
３．１  キシレン誘発マウス耳部浮腫に対する化合物ＤＸＬ−Ａ−２２及びＤＸＬ−Ａ−２４の影響（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝８）
2021505594.tif 000039
＊＊は、溶媒対照群と比較してＰ＜０．０１であることを示す。
【０１６７】
３．２  カラギーナン誘発マウス足浮腫に対する化合物ＤＸＬ−Ａ−２２及びＤＸＬ−Ａ−２４の影響（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝８）
2021505594.tif 000040
＊＊は、同一の時間での溶媒対照群と比較してＰ＜０．０１であることを示す。
【０１６８】
上記の結果から、本発明の化合物は明らかな鎮痛作用を有する化合物であると推測できる。次世代の鎮痛薬として開発されることが期待できる。
【国際調査報告】
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