(57)【要約】  配列番号１〜配列番号４２の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤。また、麻酔誘発性神経毒性を処置する方法。当該方法は、製剤を投与することを含んでよい。製剤は、フッ化化合物を含む全身麻酔薬の投与の前に、投与と同時に、投与の後に、又はそれらの組合せで投与されてよい。オリゴヌクレオチドは、キャリア系、例えば、リポソーム、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリン、核酸複合体、ウイロソーム、又はそれらの組合せ中に組み込まれてもよい。また、麻酔誘発性神経毒性を処置する方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜配列番号４２の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む、製剤。
【請求項２】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
オリゴヌクレオチドが、キャリア系中に組み込まれている、請求項１に記載の製剤。
【請求項７】
キャリア系がリポソームを含む、請求項６に記載の製剤。
【請求項８】
キャリア系が、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、又はシクロデキストリンを含む、請求項６に記載の製剤。
【請求項９】
キャリア系が核酸複合体を含む、請求項６に記載の製剤。
【請求項１０】
キャリア系がウイロソームを含む、請求項６に記載の製剤。
【請求項１１】
以下を含む、麻酔誘発性神経毒性を処置する方法：
配列番号１〜配列番号４２の配列の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤を対象に投与すること、前記製剤は、フッ化化合物を含む全身麻酔薬の投与の前に、投与と同時に、投与の後に、又はそれらの組合せで投与される。
【請求項１２】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の配列の１つを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
オリゴヌクレオチドが、キャリア系中に組み込まれている、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
キャリア系がリポソームを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
キャリア系が、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、又はシクロデキストリンを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
キャリア系が核酸複合体を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
キャリア系がウイロソームを含む、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
「４９８３＿０１３００＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と題される、６，３８０バイトのサイズの配列表のＡＳＣＩＩテキストファイルの内容を、２０１８年６月１８日にＰａｔｅｎｔＩｎバージョン３．５を用いて作成して、ＵＳＰＴＯの「ＥＦＳ−Ｗｅｂ」特許出願を介して電子的に提出した。これによる文書提出系は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。組み込まれる配列表は、配列番号１〜配列番号４２を含む。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、Ｊｏｈｎ  Ｍａｎｓｅｌｌ博士による２０１８年６月２９日出願の米国仮特許出願第６２／６９２，４６０号明細書（表題「麻酔誘発性神経毒性の処置のための組成物及び方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）」）の優先権を主張する。この出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本開示は、一般に、麻酔誘発性神経毒性の処置のための組成物及び方法論に関する。より詳細には、本開示は、小児対象における麻酔誘発性神経毒性の処置のためのオリゴヌクレオチドの予防的かつ／又は治療的利用に関する。
【背景技術】
【０００４】
米国では毎年、１５０万人の乳児を含む約６００万人の子供が、全身麻酔を伴う外科手術を受けており、多くの場合、繰返しの曝露を必要とする。全身麻酔は、鎮痛作用、鎮静作用、及び筋弛緩作用を誘導する薬剤の投与を包含する。全身麻酔薬の作用機序はまだ完全には理解されていないが、最近のデータによれば、麻酔薬が、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタート（ＮＭＤＡ）受容体を阻害することによって、又は逆にγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）受容体を活性化することによって、２つの主要な神経伝達物質受容体群を主に調節することが示唆されている。活動依存型可塑性（ａｃｔｉｖｉｔｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ）の崩壊に対してより感受性の高い発達中の脳においては、この一過性の阻害が、神経発達に長期的な影響を及ぼす場合がある。前臨床研究から蓄積されてきた報告によれば、新生児の発達中の脳において、麻酔薬が、アポトーシス及び神経変性が挙げられる細胞毒性を引き起こすことが示されている。重要なことに、動物研究及び臨床研究によれば、全身麻酔薬への曝露が、ＣＮＳの発達に影響を及ぼして、学習障害及び記憶障害等の長期にわたる認知欠陥及び行動欠陥、ならびに社会的記憶及び社会的活動の異常をもたらす虞があることが示されている。
【０００５】
遺伝子発現分析によれば、観察される麻酔誘発性神経毒性の潜在的な原因の１つとして、オートファジー促進タンパク質の発現の増大が示唆されている。例えば、Ｒａｓ／ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路におけるシグナル伝達の調節不全が、多くの場合、アポトーシス誘導剤に対する感受性の増大をもたらす。麻酔誘発性神経毒性（ＡＩＮ）を緩和するための方法及び組成物が、継続して必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
一部の実施形態は、配列番号１〜配列番号４２の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤である。例えば、オリゴヌクレオチドは、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも７５％の配列同一性、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも８５％の配列同一性、又は配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有してもよいし、配列番号１〜配列番号４２の１つを含んでもよい。一部の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、キャリア系、例えば、リポソーム、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリン、核酸複合体、ウイロソーム、又はそれらの組合せ中に組み込まれてもよい。
【０００７】
加えて、一部の実施形態は、麻酔誘発性神経毒性を処置する方法である。当該方法は、配列番号１〜配列番号４２の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤を対象に投与することを含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチドは、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも７５％の配列同一性、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも８５％の配列同一性、又は配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有してもよいし、配列番号１〜配列番号４２の１つを含んでもよい。製剤は、フッ化化合物を含む全身麻酔薬の投与の前に、投与と同時に、投与の後に、又はそれらの組合せで投与されてよい。一部の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、キャリア系、例えば、リポソーム、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリン、核酸複合体、ウイロソーム、又はそれらの組合せ中に組み込まれてもよい。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】Ｒａｓ／ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の概略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本明細書中で開示されるのは、ＡＩＮを処置する方法である。一態様において、ＡＩＮは、麻酔、典型的には全身麻酔への曝露の結果である。一態様において、麻酔は吸入麻酔薬である。一態様において、麻酔は静脈内麻酔薬である。例えば、以下に限定されないが、麻酔は、イソフルラン、セボフルラン、ハロタン、又はそれらの組合せを含む。
【００１０】
本明細書中で用いられる用語「処置する」又は「処置」は、疾患もしくは症状、又はそれらの病徴を緩和、軽減、又は改善すること；疾患もしくは症状、又はそれらの病徴を管理すること；更なる病徴を予防すること；病徴の根本的な代謝の原因を改善又は予防すること；疾患又は症状を阻害すること、例えば、疾患又は症状の進行を阻止すること；疾患又は症状を和らげること；疾患又は症状の退行を引き起こすこと；疾患又は症状によって引き起こされる病徴を和らげること；かつ／あるいは疾患又は症状の病徴を止めることを含む。また、本明細書中で用いられる処置は、本明細書中での組成物のあらゆる医薬的又は医学的使用を包含する。
【００１１】
本明細書中で用いられる用語「対象」は、処置、観察、又は実験の対象である動物を指す。ほんの一例として、対象は、哺乳動物であってよいが、これに限定されず、ヒトが挙げられるが、これに限定されない。一態様において、対象は、医療専門家によって吸入麻酔薬が投与される小児患者である。
【００１２】
一態様において、対象は、本明細書中に開示される組成物が、ＡＩＮの１つ以上の病徴を処置、予防、かつ／又は改善するのに十分な、治療的に有効な量で投与される。本明細書中で用いられる、本明細書中に開示されるタイプの特定の組成物の投与によるＡＩＮの病徴の改善は、持続的であるか一過性であるかに拘わらない、あらゆる軽減を指し、これは、本明細書中に開示されるタイプの組成物の投与に起因又は関連し得る。治療的に有効な量は、対象に影響を及ぼす特定の要因を考慮して、１人以上の医療専門家によって最適化され得ることが意図される。
【００１３】
本明細書中で用いられる用語「ＲＮＡ干渉」又は「ＲＮＡｉ」は、サイレンシングされる遺伝子の配列と相補的なｉＲＮＡガイド鎖内にシード領域配列を有するｉＲＮＡ剤（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ）によって開始される、動植物における配列特異的な転写後遺伝子サイレンシングのプロセスを介した、ｉＲＮＡ剤による遺伝子発現のサイレンシング又は低下を指す。本明細書中で用いられる用語「ｉＲＮＡ剤」（「干渉ＲＮＡ剤」の略語）は、標的遺伝子の発現を下方制御することができるＲＮＡ剤、又は化学的に修飾されたＲＮＡを指す。本明細書中で用いられるフレーズ「化学修飾」は、その、当該技術において一般的に受け入れられている意味を引用する。本開示の例示的な核酸分子に関して、当該用語は、天然のｓｉＲＮＡ又は一般的なＲＮＡのヌクレオチドとは異なるヌクレオチドの化学構造のあらゆる修飾を指す。用語「化学修飾」は、本明細書中に記載されるような、又はそうでなければ当該技術において知られているような、糖、塩基、又はヌクレオチド間結合での天然のｓｉＲＮＡ又はＲＮＡの付加、置換、又は修飾を包含する。特定の態様において、用語「化学修飾」は、特定の生体系において天然に存在するＲＮＡの特定の形態、例えば、２’−Ｏ−メチル修飾又はイノシン修飾を指し得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、ｉＲＮＡ剤は、標的ｍＲＮＡの転写後切断、又は転写前もしくは翻訳前機構が挙げられるいくつかの機構の１つ以上によって作用し得る。ｉＲＮＡ剤は、一本鎖（ｓｓ）を含んでも、複数の鎖を含んでもよく、例えば二本鎖（ｄｓ）ＩＲＮＡ剤であってもよい。本明細書中で用いられる用語「ｓｉＲＮＡ」は、低分子干渉ＲＮＡを指す。ｓｉＲＮＡとして、長さが約１５〜６０、１５〜５０、もしくは１５〜４０（二重鎖）ヌクレオチド、より典型的には長さが約１５〜３０、１５〜２５、もしくは１９〜２５（二重鎖）ヌクレオチド、又は長さが約２０〜２４、約２１〜２２、もしくは２１〜２３（二重鎖）ヌクレオチドである短い干渉ＲＮＡが挙げられる（例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡの各相補配列は、長さが１５〜６０、１５〜５０、１５〜４０、１５〜３０、１５〜２５、もしくは１９〜２５ヌクレオチド、又は長さが約２０〜２４、約２１〜２２、もしくは２１〜２３ヌクレオチド、又は長さが１９〜２１ヌクレオチドであり、二本鎖ｓｉＲＮＡは、長さが約１５〜６０、１５〜５０、１５〜４０、１５〜３０、１５〜２５、もしくは１９〜２５、又は約２０〜２４、約２１〜２２、１９〜２１、もしくは２１〜２３塩基対である）。ｓｉＲＮＡ二重鎖は、約１〜約４ヌクレオチド、又は約２〜３ヌクレオチドの３’オーバーハング、及び５’ホスファート末端（５’  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔｅｒｍｉｎｉ）を含んでもよい。一部の態様において、ｓｉＲＮＡは、末端ホスファートを欠いている。一部の態様において、ｓｉＲＮＡの一方の端部又は双方の端部は、例えば、標的配列と相補的でないデオキシチミジン（ｄＴｄＴ）又はウラシル（ＵＵ）といった、長さが２又は３ヌクレオチドである一本鎖３’オーバーハングを含んでもよい。一部の態様において、ｓｉＲＮＡ分子は、ヌクレアーゼ耐性の強化、二重鎖安定性の強化��細胞取込みの強化、又は細胞標的化に役立つ、ヌクレオチド類似体（例えば、チオホスファート又はＧ−クランプヌクレオチド類似体）、代替の塩基結合（例えば、ホスホロチオアート、ホスホノアセタート、又はチオホスホノアセタート）、及び他の修飾を含んでもよい。
【００１４】
一態様において、本明細書中に開示されるオリゴヌクレオチドは、小児ＡＩＮを処置するのに用いられるので、ＰＡＩＮと呼ばれる。本明細書中で用いられるＰＡＩＮは、ＲＮＡのみを含有する分子に限定される必要はなく、化学的に修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドを更に包含してもよい。特定の態様において、本開示のＰＡＩＮは、別個のセンス配列又は領域及びアンチセンス配列又は領域を含み、センス領域及びアンチセンス領域は、当該技術において知られているように、ヌクレオチドリンカー分子もしくは非ヌクレオチドリンカー分子によって共有結合され、又はイオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、及び／もしくはスタッキング相互作用によって非共有結合的に結合される。特定の態様において、本開示のＰＡＩＮは、標的遺伝子のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む。別の態様において、本開示のＰＡＩＮは、標的遺伝子の発現の阻害を引き起こすように、標的遺伝子のヌクレオチド配列と相互作用する。
【００１５】
本明細書中で用いられる「修飾パーセント」は、ＰＡＩＮ（例えば、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡの各鎖、又は集合的ｄｓＲＮＡ）内の修飾されたヌクレオチドの数を指す。例えば、ＰＡＩＮのアンチセンス鎖の１９％の修飾は、２１ヌクレオチド配列（２１ｍｅｒ）内での最大４ヌクレオチド／ｂｐの修飾を指す。１００％の修飾とは、完全に修飾されたｄｓＲＮＡを指す。化学修飾の程度は、例えば、標的ｍＲＮＡ、オフ標的サイレンシング、エンドヌクレアーゼ分解の程度といった種々の要因によって決まることとなる。
【００１６】
本明細書中で用いられる用語「ｓｈＲＮＡ」又は「ショートヘアピンＲＮＡ」は、ＲＮＡｉ機構によってｓｉＲＮＡにプロセシングされるステムループ構造を採用している個々の転写物を指す。典型的なｓｈＲＮＡ分子は、ループ配列によって分離されているセンス標的配列及びアンチセンス標的配列を含有する２つの逆向き反復を含む。塩基対セグメントは、１７〜２９ヌクレオチドで変動し得、塩基対形成されたステムの一方の鎖が、標的遺伝子のｍＲＮＡと相補的である。ｓｈＲＮＡステムループ構造のループは、インビボでの標的遺伝子の不活化を可能にする、適切なあらゆる長さであってよい。ループは長さが３〜３０ヌクレオチドであってよいが、典型的には１〜１０ヌクレオチドの長さである。塩基対形成されたステムは、完全に塩基対形成されてもよいし、１つ又は２つのミスマッチ塩基対を有してもよい。二重鎖部分は、典型的には含有しないが、１つ以上の対形成されないヌクレオチドからなる１つ以上のバルジを含有してもよい。ｓｈＲＮＡは、塩基対形成されたステムから伸長する塩基対形成されない５’配列及び３’配列を有してもよい。しかしながら、典型的には、５’伸長はない。ｓｈＲＮＡの５’末端の最初のヌクレオチドはＧである。なぜなら、ポリメラーゼＩＩＩによって転写される最初のヌクレオチドであるからである。Ｇが標的配列内の最初の塩基として存在しなければ、Ｇが、特定の標的配列の前に付加されてもよい。５’Ｇは典型的に、塩基対形成されたステムの一部を形成する。典型的には、ｓｈＲＮＡの３’末端は、ポリＵセグメントである。これは、転写終結シグナルであり、塩基対形成される構造を形成しない。本出願において記載され、そして当業者に知られているように、ｓｈＲＮＡは、保存された細胞ＲＮＡｉ機構によってｓｉＲＮＡにプロセシングされる。ゆえに、ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡの前駆体であり、そして一般に、標的ｍＲＮＡ転写物の発現を同様に阻害することができる。
【００１７】
本明細書中で用いられる用語、単離された核酸分子（例えば、ＰＡＩＮ）の文脈における「単離された」は、ヒトの介入によって自然状態から変更され、又は取り出されているものである。例えば、生きている動物に自然に存在するＲＮＡは、「単離」されていない。自然状態の共存材料から部分的に、又は完全に分離されている合成ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、又はマイクロＲＮＡ分子は、「単離」されている。
【００１８】
本明細書中で用いられる用語「相補的」は、標準的なワトソン−クリック相補則に従って塩基対形成することができる核酸配列を指す。すなわち、より大きなプリンは、より小さなピリミジンと塩基対形成して、グアニンとシトシン（Ｇ：Ｃ）の塩基対形成の組合せ、そしてアデニンとチミン（Ａ：Ｔ）（ＤＮＡの場合）の塩基対形成の、又はアデニンとウラシル（Ａ：Ｕ）（ＲＮＡの場合）の塩基対形成の組合せを形成することとなる。
【００１９】
本明細書中で用いられる用語「遺伝子」は、ＲＮＡ及び／もしくはポリペプチド、又はその前駆体の産生に必要なコード配列、ならびに当該コード配列の５’末端及び３’末端を包囲する非コード配列（非翻訳領域）を含む核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）配列を指す。用語「遺伝子」は、遺伝子のｃＤＮＡ形態及びゲノム形態の双方を包含する。機能的ポリペプチドは、ポリペプチドの所望の活性又は機能的特性（例えば、酵素活性、リガンド結合、シグナル伝達、抗原提示）が保持されている限り、完全長のコード配列によって、又はコード配列のいずれかの部分によってコードされ得る。コード領域の５’に位置決めされており、そしてｍＲＮＡ上に存在する配列は、５’非翻訳配列（「５’ＵＴＲ」）と呼ばれる。コード領域の３’又は下流に位置決めされており、そしてｍＲＮＡ上に存在する配列は、３’非翻訳配列（又は「３’ＵＴＲ」）と呼ばれる。
【００２０】
本明細書中で用いられる用語「実質的なサイレンシング」は、標的遺伝子（例えば、ＰＴＥＮ）のｍＲＮＡが、導入されたＰＡＩＮの存在によって、標的遺伝子の発現が、ＰＡＩＮが存在しない場合に見られる発現レベルと比較して、約１０％〜１００％引き下げられるように阻害かつ／又は分解されることを意味する。一般に、遺伝子が実質的にサイレンシングされる場合、ＰＡＩＮが存在しない場合と比較して、発現が少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、例えば、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％〜７９％、一般に少なくとも８０％、例えば８１％〜８４％、少なくとも８５％、例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更に１００％引き下げられることとなる。本明細書中で用いられる用語「実質的に正常な活性」は、ＰＡＩＮが導入されていない場合の遺伝子の発現レベルを意味する。本明細書中で用いられる用語「阻害する」、「下方制御する」、又は「引き下げる」は、その、当該技術において一般に受け入れられている意味を引用する。本開示の例示的な核酸分子を参照して、当該用語は一般に、遺伝子の発現、１つ以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードするＲＮＡ分子もしくは等価のＲＮＡ分子のレベル、又は、本開示の核酸分子（例えば、ＰＡＩＮ）の不在下で観察されるものを下回る、１つ以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性の引下げを指す。また、下方制御は、ＲＮＡｉ媒介切断等の転写後サイレンシング、又はＤＮＡメチル化パターンもしくはＤＮＡクロマチン構造の変更と関連する場合がある。ＰＡＩＮによる阻害、下方制御、又は引下げは、不活性分子、弱毒化分子、スクランブル配列を有するオリゴヌクレオチド、もしくはミスマッチを有するオリゴヌクレオチドに関連する場合もあるし、代わりにオリゴヌクレオチドの不在下での系に関連する場合もある。
【００２１】
一態様において、本明細書中に開示される組成物は、ＰＴＥＮによってコードされるホスファチジルイノシトール−３，４，５−トリスリン酸３の発現の下方制御又は引下げをもたらすＰＡＩＮを含む。別の態様において、本明細書中に開示される組成物は、ＡＫＴ１によってコードされるＲＡＣ−アルファセリン／スレオニン−プロテインキナーゼ（プロテインキナーゼＢ又はＰＫＢ）の下方制御又は引下げをもたらすＰＡＩＮを含む。代替の態様において、本明細書中に開示される組成物は、ＤＤＩＴ３によってコードされるＣ／ＥＢＰ相同タンパク質（ＣＨＯＰ）の下方制御又は引下げをもたらすＰＡＩＮを含む。
【００２２】
別の態様において、ＰＡＩＮは、ＡＫＴ１の発現を阻害し、又は代わりにＡＫＴ１の発現を実質的にサイレンシングするオリゴヌクレオチドを含む。更に別の態様において、ＰＡＩＮは、ＤＤＩＴ３の発現を阻害し、又は代わりにＤＤＩＴ３の発現を実質的にサイレンシングするオリゴヌクレオチドを含む。
【００２３】
一態様において、ＰＡＩＮは、ＰＴＥＮタンパク質をコードする遺伝子の発現を阻害し、又は代わりにＰＴＥＮタンパク質をコードする遺伝子の発現を実質的にサイレンシングするオリゴヌクレオチドを含む。ホスファターゼ及びテンシンホモログ（ＰＴＥＮ）は、正常な細胞の維持に不可欠であり、重要な腫瘍抑制因子として十分に特徴付けられている。ＰＴＥＮは、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ＰＩ−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔシグナル伝達経路の調節において重要であるので、ＰＴＥＮ発現の小さな変化ですら、正常な細胞の機能に大きな影響を及ぼすことが示されている。ＰＴＥＮタンパク質は、核と細胞質の間を移動して、ＰＴＥＮに特有の区分された機能を可能にする。分子レベルでは、ＰＴＥＮの発現及び細胞の存在量は、転写、翻訳後、及び転写後のレベルにて厳密に調節される。ＰＴＥＮ遺伝子は、９つのエクソン内にコードされており、そして１２１２ヌクレオチド（ｎｔ）のオープン・リーディング・フレームを有する。当該遺伝子は、相対分子質量が４７ｋＤａである４０３個のアミノ酸のポリペプチドをコードする。ＰＴＥＮタンパク質は、Ｎ末端ホスファターゼ触媒ドメイン（残基７〜１８５）及びＣ末端ドメイン（残基１８６〜３５１）の２つの主要ドメインからなる。これらの２つのドメインは、一緒になって最小の触媒ユニットを形成し、そして非常に短いＮ末端テールのみを除いてほぼ完全なタンパク質を構成する。
【００２４】
別の態様において、ＰＡＩＮは、ＡＫＴ１の発現を阻害し、又は代わりにＡＫＴ１の発現を実質的にサイレンシングするオリゴヌクレオチドを含む。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路は、癌研究において最も集中的に調査されているシグナル伝達ネットワークの１つである。ＡＫＴは、ＰＴＥＮの喪失、ＰＩ３Ｋの触媒サブユニット、ｐ１１０αを活性化する変異、Ａｋｔアイソフォームを活性化する変異、ＲＡＳ及び成長因子受容体の活性化、ならびにＰＩ３Ｋ及びＡｋｔの触媒サブユニットをコードする遺伝子の増幅が挙げられる複数の機構によって、癌細胞内で過剰に活性化される。ＡＫＴ１は、インスリン様成長因子に応答するグリコーゲンシンターゼ（ＧＳＫ３β）の不活化因子として元々同定された５７ｋＤａのセリン／スレオニンキナーゼをコードする。ＰＫＢは、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）によるアミノ酸Ｔｈｒ３０８及びＳｅｒ４７３のリン酸化によって活性化されると、いくつかの重要な影響（リン酸化によるアポトーシスの阻害、ならびにアポトーシス促進因子Ｂａｄ及びカスパーゼ−９の不活化が挙げられる）を及ぼす。
【００２５】
転写因子ＣＣＡＡＴエンハンサ結合タンパク質相同タンパク質（ＣＨＯＰ）は、小胞体（ＥＲ）ストレス誘発性アポトーシスに関与する分子として最初に報告された。ＣＨＯＰの発現は、ストレスのない条件下では低いが、その発現は、ＥＲストレスに応答して、ＩＲＥ１、ＰＥＲＫ、及びＡＴＦ６に依存する転写誘導を介して著しく増大する。ｅＩＦ２αのＰＥＲＫ媒介リン酸化によって誘導されるＡＴＦ４の活性化は、ＥＲストレスに応答したＣＨＯＰの誘導において支配的な役割を果たすと考えられている。ＣＨＯＰの過剰発現は、いくつかの細胞株においてアポトーシスを促進するが、ＣＨＯＰ欠損細胞は、ＥＲストレス誘発性アポトーシスに対して耐性がある。したがって、ＣＨＯＰは、アポトーシスの誘導において重要な役割を果たす。ＣＨＯＰの２つのアイソフォームが、そのｍＲＮＡから、リボソームスキャン機構によって生成される（１４、１５）。全長タンパク質は４２ｋＤａであり、３つのトランス活性化ドメインを含有する。
【００２６】
ＰＴＥＮ、ＡＫＴ１、ＤＤＩＴ３、又はそれらのそれぞれの遺伝子産物の下方制御の程度は、適切なあらゆるアッセイを用いて判定することができる。適切なアッセイとして、限定されないが、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、マイクロアレイハイブリダイゼーション、免疫沈降、酵素機能、及び当業者に知られている表現型アッセイ等の適切なあらゆる技術を用いたタンパク質又はｍＲＮＡレベルの試験が挙げられる。遺伝子サイレンシングの程度を調査するために、試験サンプル（例えば、標的遺伝子を発現する、注目する生物由来の生体サンプル、又は標的遺伝子を発現する、培養下の細胞のサンプル）を、標的遺伝子の発現をサイレンシングし、引き下げ、又は阻害するＰＡＩＮと接触させる。試験サンプルにおける標的遺伝子の発現を、ＰＡＩＮと接触していない対照サンプル（例えば、標的遺伝子を発現する、注目する生物由来の生体サンプル、又は標的遺伝子を発現する、培養下の細胞のサンプル）における標的遺伝子の発現と比較する。対照サンプル（すなわち、標的遺伝子を発現するサンプル）には、１００％の値を割り当てる。一態様において、標的遺伝子の発現の実質的なサイレンシング、阻害、下方制御、又は引下げは、対照サンプルに対する試験サンプルの値が、約９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、又は１０％である場合、達成されている。
【００２７】
一態様において、ＰＡＩＮは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲ）である。ｍｉＲは、遺伝子発現を調節する、一般に長さが２１〜２３ヌクレオチドである一本鎖ＲＮＡ分子を指す。マイクロＲＮＡは、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡとして知られている一次転写物から、前駆体（ｐｒｅ）−ｍｉＲＮＡと呼ばれる短いステムループ構造に、そして最終的に、機能的な成熟マイクロＲＮＡにプロセシングされる。成熟マイクロＲＮＡ分子は、１つ以上のメッセンジャーＲＮＡ分子と部分的に相補的であり、そしてその主な機能は、ＲＮＡｉ経路を介して遺伝子発現を下方制御することである。
【００２８】
一態様において、ＰＡＩＮは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。天然に存在するＲＮＡｉ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ／ヘリカーゼタンパク質、Ｄｉｃｅｒによって、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子（１９〜２７ヌクレオチド（ｎｔ）のｄｓＲＮＡ、３’末端に２ｎｔのオーバーハングを有する）に切断される。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれるマルチコンポーネントリボヌクレアーゼ中に組み込まれる。ｓｉＲＮＡの一方の鎖は、ＲＩＳＣと結合したままであり、ＲＩＳＣ内のガイダーｓｓ−ｓｉＲＮＡと相補的な配列を有する同族ＲＮＡに向けて複合体を誘導する。このｓｉＲＮＡに誘導されるエンドヌクレアーゼが、ＲＮＡを消化することによって、これを不活化する。ＲＩＳＣ、ｓｉＲＮＡ分子、及びＲＮＡｉのこれらの、そして他の特性が説明されている。
【００２９】
本開示の一態様において、ＰＡＩＮはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、相補的な標的に結合して、当該標的の機能を抑制する合成核酸である。典型的には、ＡＳＯは、ＲＮＡ標的、特にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）種又はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）種の発現を引き下げ、又は変更するのに用いられる。一般的な原則として、ＡＳＯは、２つの異なる作用機序を介して遺伝子発現を抑制することができ：１）ＡＳＯが標的核酸にしっかりと結合して、その種を不活化して、細胞生物学への関与を妨げる、立体ブロッキングによるもの、又は２）ＡＳＯが標的に結合して、標的核酸種を分解する細胞ヌクレアーゼの活性化をもたらす、分解をトリガすることによるものが挙げられる。「標的分解」ＡＳＯの一クラスが、「ＲＮａｓｅ  Ｈ活性」である；標的ＲＮＡの、ＤＮＡ含有「ＲＮａｓｅ  Ｈ活性」ＡＳＯとのハイブリダイゼーションによるヘテロ二重鎖核酸の形成が、酵素ＲＮａｓｅ  Ｈの基質を形成する。ＲＮａｓｅ  Ｈは、ヘテロ二重鎖分子のＲＮＡ部分を分解することによって、その種の発現を引き下げる。標的ＲＮＡの分解により、分解されていないＡＳＯが放出され、これはその後、自由にリサイクルでき、そして同じ配列の別のＲＮＡ標的に結合することができる。
【００３０】
一態様において、ＰＡＩＮは、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＡＳＯ、ｉＲＮＡ、ｉＲＮＡ剤、ｓｈＲＮＡ、それらの機能的変異体；又はそれらの組合せを含む。一部の態様において、本明細書中に開示されるオリゴヌクレオチドの機能的変異体は、本明細書中に開示されるいずれかの配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。一般に、「同一性」は、オリゴヌクレオチド配列又はポリヌクレオチド配列の２つのヌクレオチド間の正確な一致を指す。同一性パーセントは、配列をアラインして、２つのアラインされた配列間の正確な一致数を数えて、短い方の配列の長さで割って、結果に１００を掛けることによって、２つの分子間の配列情報を直接比較することによって求めることができる。容易に入手可能なコンピュータプログラム、例えばＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、バージョン８（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）から入手可能）（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムに依拠する、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＧＡＰプログラム）を用いて、分析を支援することができる。これらのプログラムは、メーカーによって推奨され、かつ先で参照したＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅに記載されているデフォルトのパラメータにより、容易に利用できる。例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性アルゴリズムを、デフォルトのスコアリングテーブル、及び６ヌクレオチド位置のギャップペナルティと用いて、基準配列に対する特定のヌクレオチド配列の同一性パーセントを求めることができる。
【００３１】
これ以外にも、相同性は、相同領域間で安定した二重鎖を形成する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーションに続く、一本鎖特異的ヌクレアーゼによる消化、及び消化されたフラグメントのサイズ決定によって求めることができる。実質的に相同であるＤＮＡ配列は、例えば、特定の系について定義されているストリンジェントな条件下でのサザンハイブリダイゼーション実験で同定することができる。適切なハイブリダイゼーション条件を定義することは、当該技術の範囲内である。
【００３２】
以下の配列表に示されているように、配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）は、本明細書中に記載されるＰＡＩＮの代表的なものである。一態様において、ＰＡＩＮは、配列番号１〜配列番号４２のいずれか１つを有するオリゴヌクレオチド、又はその機能的変異体を含む。一部の態様において、本開示での使用に適したＰＡＩＮは、配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）のいずれか１つと少なくとも７０％の配列同一性、配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）のいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性、配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性、配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）のいずれか１つと少なくとも８５％の配列同一性、配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性、又は配列番号１〜配列番号４２（すなわち、＜２１０＞１〜＜２１０＞４２）のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【００３３】
一態様において、ＰＡＩＮは、約２０％〜約９０％の修飾、又は約４０％〜約６０％の修飾を有する。
【００３４】
一態様において、本開示のＰＡＩＮ（修飾されている、又は修飾されていない）は、化学的に合成される。オリゴヌクレオチド（例えば、リボヌクレオチドを欠く特定の修飾オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの部分）は、例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら，１９９２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２１１，３−１９、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，国際公開第９９／５４４５９号パンフレット、Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２３，２６７７−２６８４、Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９、Ｂｒｅｎｎａｎら，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．６１，３３−４５、及びＢｒｅｎｎａｎ，米国特許第６，００１，３１１号明細書に記載されているような、当該技術において知られているプロトコルを用いて合成される。オリゴヌクレオチドの合成は、５’末端のジメトキシトリチル、及び３’末端のホスホルアミダイト等の一般的な核酸保護基及びカップリング基を使用する。
【００３５】
これ以外にも、ＰＴＥＮ、ＡＫＴ１、又はＤＤＩＴ３と相互作用してこれらを下方制御する本開示のＰＡＩＮは、ＤＮＡベクター又はＲＮＡベクター中に挿入された転写物から発現かつ送達されてもよい。組換えベクターは、ＤＮＡプラスミドベクターであってもウイルスベクターであってもよい。ＰＡＩＮ発現ウイルスベクターの非限定的な例を、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、又はアルファウイルスに基づいて構築することができる。
【００３６】
一部の態様において、ｐｏｌ  ＩＩＩベースの構築体が、本開示のＰＡＩＮを発現させるのに用いられる。ｓｉＮＡ分子配列の転写を、真核生物ＲＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ  Ｉ）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩ）、又はＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩＩ）用のプロモータから駆動させることができる（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，米国特許第５，９０２，８８０号明細書及び米国特許第６，１４６，８８６号明細書参照）。ｐｏｌ  ＩＩプロモータ又はｐｏｌ  ＩＩＩプロモータからの転写物が、全細胞内で高レベルにて発現される；所定の細胞型における所定のｐｏｌ  ＩＩプロモータのレベルは、近くに存在する遺伝子調節配列（エンハンサ、サイレンサ等）の性質によって決まる。原核生物ＲＮＡポリメラーゼ酵素が適切な細胞内で発現されるならば、原核生物ＲＮＡポリメラーゼプロモータを用いることもできる。これらの例示的な転写ユニットは、プラスミドＤＮＡベクター、ウイルスＤＮＡベクター（アデノウイルスベクター又はアデノ随伴ウイルスベクター等）、又はウイルスＲＮＡベクター（レトロウイルスベクター又はアルファウイルスベクター等）が挙げられるがこれらに限定されない、哺乳動物細胞中への導入用の種々のベクター中に組み込むことができる。
【００３７】
本開示のＰＡＩＮを発現させるのに用いられるベクターは、ｓｉＮＡ二重鎖の一方又は双方の鎖をコードしてもよいし、ｓｉＲＮＡ二重鎖に自己ハイブリダイズする単一の自己相補鎖をコードしてもよい。本開示のＰＡＩＮをコードする核酸配列は、ＰＡＩＮの発現を可能にするように作動可能に連結され得る。一部の態様において、ＰＡＩＮを含む構築体は、レポーター遺伝子（例えば、緑色蛍光タンパク質）及び選択遺伝子（例えば、抗生物質耐性について）を更に含んでもよい。
【００３８】
別の態様において、本発明のＰＡＩＮは、直接加えられ、あるいはカチオン性脂質と複合体化されてもよいし、リポソーム内に、又はＰＡＩＮを発現する組換えプラスミドベクターもしくは組換えウイルスベクターとしてパッケージされてもよいし、別の方法で標的細胞又は標的組織に送達されてもよい。核酸分子は、細胞に、以下に限定されないが、リポソーム内へのカプセル化、イオントフォレシス、又は他のビヒクル、例えば生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリンポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、及びＰＬＣＡミクロスフェア、生分解性ナノカプセル、ならびに生体接着性ミクロスフェア中への組込み、又はタンパク質ベクターが挙げられる適切なあらゆる方法論によって投与することができる。一態様において、本開示は、本明細書中に記載されるＰＡＩＮを含有するキャリア系を提供する。一部の態様において、キャリア系は、脂質ベースのキャリア系、カチオン性脂質、リポソーム、核酸複合体、リポソーム、ミセル、ウイロソーム、脂質ナノ粒子、又はそれらの混合物である。他の態様において、キャリア系は、カチオン性ポリマー−核酸複合体等のポリマーベースのキャリア系である。更なる態様において、キャリア系は、シクロデキストリンポリマー−核酸複合体等のシクロデキストリンベースのキャリア系である。更なる態様において、キャリア系は、カチオン性ペプチド−核酸複合体等のタンパク質ベースのキャリア系である。
【００３９】
他の態様において、ＰＡＩＮは、細胞膜を横切って治療化合物を移動させ、薬物動態を変更し、かつ／又は本開示の核酸分子の局在化を調節することによって、治療活性を付与することができる、提供されるコンジュゲート又は複合体の構成要素である。例えば、コンジュゲートは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むことができ、これはＰＡＩＮに共有結合し得る。結合するＰＥＧは、任意の分子量、例えば約１００〜約５０，０００ダルトン（Ｄａ）であってよい。
【００４０】
更に他の態様において、ＰＡＩＮは、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面修飾リポソーム（ＰＥＧ修飾されているリポソーム、長期循環リポソーム、又はステルスリポソーム）及びＰＡＩＮを含む組成物又は製剤の構成要素である。一部の態様において、本開示のｓｉＲＮＡ分子を、ポリエチレンイミン及びその誘導体、例えば、ポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）又はポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−トリ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ｔｒｉＧＡＬ）誘導体と製剤化又は複合体化することもできる。
【００４１】
一態様において、本開示のＰＡＩＮは、対象への投与用の組成物又は製剤に調製される。本明細書中で用いられる用語「組成物」又は「製剤」は、それらの、当該技術において一般的に受け入れられている意味を引用する。当該用語は、一般に、細胞、又は例えばヒトを含む対象中への投与、例えば全身投与又は局所投与に適した形態の、例えば薬学的に許容されるキャリア又は希釈剤中の組成物又は製剤を指す。適切な形態は、部分的に、使用又はエントリ経路（例えば、経口、経皮、吸入、又は静脈内、筋肉内、もしくは髄腔内注射）によって決まる。そのような形態は、組成物又は製剤が、標的細胞（すなわち、負に帯電した核酸が送達を所望される細胞）に到達するのを妨げるべきでない。例えば、血流中に注入される組成物は、可溶性であるべきである。他の要因として、組成物又は製剤が、その効果を発揮するのを妨げる毒性及び形態等の考慮事項が挙げられる。本開示の核酸分子との製剤化に適した剤の非限定的な例として：脂質ナノ粒子（例えば、Ｓｅｍｐｌｅら，２０１０，ネイチャーバイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．），２月号；２８（２）：１７２−６参照）；Ｐ糖タンパク質インヒビタ（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５）；生分解性ポリマー、例えば徐放送達用のポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）ミクロスフェア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，Ｄ  Ｆら，１９９０，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８）；及びロードされるナノ粒子、例えばポリブチルシアノアクリラート製のものが挙げられる。本開示の核酸分子についての送達戦略の他の非限定的な例として、Ｂｏａｄｏら，１９９８，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８７，１３０８−１３１５；Ｔｙｌｅｒら，１９９９，フェブスレター（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．），４２１，２８０−２８４；Ｐａｒｔｒｉｄｇｅら，１９９５，米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．），９２，５５９２−５５９６；Ｂｏａｄｏ，１９９５，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．，１５，７３−１０７；Ａｌｄｒｉａｎ−Ｈｅｒｒａｄａら，１９９８，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２６，４９１０−４９１６；及びＴｙｌｅｒら，１９９９，米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．），９６，７０５３−７０５８に記載される材料が挙げられる。「薬学的に許容される組成物」又は「薬学的に許容される製剤」は、所望される活性について最も適した身体的位置への本開示の核酸分子の効果的な分配を可能にする組成物又は製剤を指し得る。
【００４２】
一態様において、製剤は、更なる成分を含有してもよい。本明細書中で用いられる「更なる成分」として、以下の１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない：賦形剤；界面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒剤及び崩壊剤；結合剤；潤滑剤；甘味料；香料；着色剤；防腐剤；ゼラチン等の生理学的に分解可能な組成物；水性のビヒクル及び溶媒；油性のビヒクル及び溶媒；懸濁化剤；分散剤又は湿潤剤；乳化剤、粘滑剤；バッファ；塩；増粘剤；フィラー；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定化剤；ならびに薬学的に許容されるポリマー材料又は疎水性材料。
【００４３】
代替の態様において、対象は、対象が全身麻酔薬を投与される外科的処置の前に、外科的処置と同時に、外科的処置の後に、本明細書中に開示される配列を有するＰＡＩＮを含む医薬製剤を投与される。そのような態様において、全身麻酔薬は、イソフルラン又はセボフルラン等のハロゲン化ガス状化合物を含んでよい。
【００４４】
理論によって制限されることを望むものではないが、オリゴヌクレオチドのこれらの様々な形態は、ＰＴＥＮタンパク質、プロテインキナーゼＢ、又はＣＨＯＰの効率的な転写を減少させ、ガイド鎖ｍＲＮＡの、翻訳への首尾良い動きを低下させ、そしてＰＴＥＮタンパク質、プロテインキナーゼＢ、又はＣＨＯＰを生成するｍＲＮＡの効率的な翻訳を妨げるであろう。
【００４５】
医学の当業者に知られている従来の方法を用いて、医薬製剤を哺乳動物対象に投与することができる。医薬製剤は、経口、皮下、肺内、経粘膜、腹腔内、子宮内、舌下、髄腔内、又は筋肉内経路を介して投与することができる。
【００４６】
ＰＡＩＮ組成物の注射可能な製剤又は本開示の製剤は、種々のキャリアを含有してよい。生理学的に許容される賦形剤として、例えば、５％デキストロース、０．９％生理食塩水、リンゲル液、又は他の適切な賦形剤が挙げられ得る。筋肉内調製物、例えば、本開示の化合物の無菌製剤を、注射用水、０．９％生理食塩水、又は５％グルコース溶液として、医薬賦形剤中に溶解させて投与することができる。
【００４７】
一部の態様において、本明細書中に開示される製剤は、麻酔薬への曝露の前、曝露中、そして曝露後の期間、神経組織及び他の罹患組織中に存在するように投与されて、麻酔薬によってトリガされるアポトーシス事象を低下させる、又は妨げるであろう。例えば、本明細書中に開示される製剤は、麻酔薬への曝露の少なくとも約３０分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３２時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、もしくは少なくとも約７２時間前に、そして加えて、又は代替的に、麻酔薬への曝露と実質的に同時に、そして加えて、又は代替的に、麻酔薬への曝露の約３０分、約１時間、約２時間、約４時間、約８時間、約１６時間、約２４時間、約３２時間、約４８時間、約６０時間、もしくは約７２時間後に、投与されてよい。
【００４８】
以下の特定の態様は、本開示の特定の態様として、そしてその実践及び利点を実証するために与えられる。特定の態様は、説明のために与えられており、本明細書又は後に続く請求項を、いかなる方法でも制限することが意図されないことが理解される。
【００４９】
実施形態１は、配列番号１〜配列番号４２の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤である。
【００５０】
実施形態２は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する、実施形態１の製剤である。
【００５１】
実施形態３は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態１〜２の１つの製剤である。
【００５２】
実施形態４は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態１〜３の１つの製剤である。
【００５３】
実施形態５は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つを含む、実施形態１〜４の１つの製剤である。
【００５４】
実施形態６は、オリゴヌクレオチドがキャリア系中に組み込まれている、実施形態１〜５の１つの製剤である。
【００５５】
実施形態７は、キャリア系がリポソームを含む、実施形態６の製剤である。
【００５６】
実施形態８は、キャリア系が、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、又はシクロデキストリンを含む、実施形態６〜７の１つの製剤である。
【００５７】
実施形態９は、キャリア系が核酸複合体を含む、実施形態６〜８の１つの製剤である。
【００５８】
実施形態１０は、キャリア系がウイロソームを含む、実施形態６〜９の１つの製剤である。
【００５９】
実施形態１１は、麻酔誘発性神経毒性を処置する方法であり、当該方法は、配列番号１〜配列番号４２の１つを有するオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤を対象に投与することを含み、製剤は、フッ化化合物を含む全身麻酔薬の投与の前に、投与と同時に、投与の後に、又はそれらの組合せで投与される。
【００６０】
実施形態１２は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する、実施形態１１の方法である。
【００６１】
実施形態１３は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態１１〜１２の１つの方法である。
【００６２】
実施形態１４は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態１１〜１３の１つの方法である。
【００６３】
実施形態１５は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号４２の１つを含む、実施形態１１〜１４の１つの方法である。
【００６４】
実施形態１６は、オリゴヌクレオチドがキャリア系中に組み込まれている、実施形態１１〜１５の１つの方法である。
【００６５】
実施形態１７は、キャリア系がリポソームを含む、実施形態１６の方法である。
【００６６】
実施形態１８は、キャリア系が、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、又はシクロデキストリンを含む、実施形態１６〜１７の１つの方法である。
【００６７】
実施形態１９は、キャリア系が核酸複合体を含む、実施形態１６〜１８の１つの方法である。
【００６８】
実施形態２０は、キャリア系がウイロソームを含む、実施形態１６〜１９の１つの方法である。
【００６９】
一部の実施形態において、本明細書中に開示される製剤（特に、配列番号１〜配列番号４２の１つ以上を有するオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤）の投与が、麻酔の投与と実質的に同時に（例えば、投与の直前に、投与中に、又は投与の直後に）なされて、当該麻酔への曝露に起因する、認知機能に及ぶ影響を軽減する、すなわち、このクラスの臨床薬への曝露を経験している患者において認知機能を維持する。特定の例において、処置されることとなる症状が、認知機能に何らかの影響を及ぼす傾向がある場合等、麻酔への曝露の影響が悪化する（ｃｏｍｐｏｕｎｄｅｄ）場合がある。これらの場合、本明細書中に開示される製剤（特に、配列番号１〜配列番号４２の１つ以上を有するオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤）が、特に有利であり得る。
【００７０】
例えば、本明細書中に開示される製剤（特に、配列番号１〜配列番号４２の１つ以上を有するオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤）の投与は、小児麻酔薬の状況において特に有利であり得る。
【００７１】
加えて、又は代替的に、本明細書中に開示される製剤（特に、配列番号１〜配列番号４２の１つ以上を有するオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤）の投与は、例えば、脳卒中又は心臓発作等の虚血性事象に起因し得る半影又は境界領域（ｐｅｎｕｍｂｒａｌ  ｏｒ  ｗａｔｅｒｓｈｅｄ）の組織損傷の容量又は重症度を引き下げることにより、そのような事象を患っている、又は患っている疑いがある患者の状況において、特に有利であり得る。
【００７２】
加えて、又は代替的に、本明細書中に開示される製剤（特に、配列番号１〜配列番号４２の１つ以上を有するオリゴヌクレオチド、又はその変異体を含む製剤）の投与は、脳、心臓、内臓、又は四肢の血管再生術の状況において、特に有利であり得る。例えば、開示される製剤の予防的使用は、ストレスの結果として、アポトーシスカスケードのトリガ又は開始に潜在的に関与し得る、そのようなストレスを一時的に受けた組織を保護し得る。
【００７３】
本明細書中に開示される原理に従う種々の実施形態が先で示されて説明されてきたが、その改変が、本開示の精神及び教示から逸脱しない範囲で、当業者によってなされてよい。本明細書中に記載される態様は、代表的なものに過ぎず、限定となることは意図されていない。多くの変形、組合せ、及び改変が、本開示の範囲内で可能である。実施形態の特徴を組み合わせ、統合し、かつ／又は省略することから生じる代替の実施形態もまた、本開示の範囲内である。したがって、保護の範囲は、先の説明によって制限されるのではなく、請求項によって定義され、請求項の主題の全ての均等物を含む範囲に従う。いずれの請求項も、更なる開示として本明細書中に組み込まれ、そして請求項は、本開示の主題の実施形態である。更に、上記のあらゆる利点及び特徴は、特定の実施形態に関連し得るが、発行されたそのような請求項の適用を、先の利点のいずれかもしくは全てを達成する、又は先の特徴のいずれかもしくは全てを有するプロセス及び構造に限定するものではない。
【００７４】
加えて、本明細書中で用いられているあらゆる見出し部は、構成的手がかりを与えるために記載されている。当該見出しは、本開示から発行され得る請求項のいずれかに記載されている主題を制限したり特徴付けたりするものではない。具体的には、例として、見出しが「分野」に言及している場合でも、請求項は、この見出しの下で選択される文言によって、いわゆる分野を説明すると限定されるべきではない。更に、「背景」における技術の記載は、特定の技術が本開示のあらゆる主題に対する先行技術であることを認めるものとして解釈されるべきでない。「要約」も、発行される請求項に記載されている主題の限定的な特徴と見なされるべきでない。全ての場合において、請求項の範囲は、それ自体のメリットについて、本開示に照らして考慮されるものとし、本明細書に記載される見出しによって制約されるべきでない。
【００７５】
「含む」、「挙げられる」、「有する」等のより広い用語の使用は、「からなる」、「から本質的になる」、「で実質的に構成される」等のより狭い用語を支持するものと理解されるべきである。実施形態のあらゆる要素に関する「場合によっては」、「し得る」、「してもよい」、「可能性がある」等の用語の使用は、要素が必要とされない、又は要素が必要とされるという、双方の選択肢が実施形態の範囲内にあることを意味する。また、例への言及は、単に説明の目的で記載されており、排他的であることは意図されていない。
【００７６】
本開示においていくつかの態様が記載されてきたが、開示される態様は、本開示の精神又は範囲から逸脱することなく、他の多くの特定の形態で具体化されてよいと理解されるべきである。本開示の例は、実例となるが、限定的ではないと見なされるべきであり、その意図は、本明細書中に与えられる詳細に限定されるべきでない。例えば、種々の要素又は構成要素が、別の系に組み合わされても統合されてもよいし、特定の形状部分が省略されても実装されなくてもよい。
【００７７】
また、離散的な、又は別個のものとして種々の実施形態において記載かつ説明されている技術、系、サブシステム、及び方法が、本開示の範囲から逸脱することなく、他の系、モジュール、技術、又は方法と組み合わされても統合されてもよい。相互に直接連結又は連通するものとして示され、又は考察されている他のアイテムが、電気的であるか、機械的であるか、その他の方法であるかに拘わらず、何らかのインターフェース、デバイス、又は中間構成要素を介して間接的に連結又は連通されてもよい。変更、置換、及び改変の他の例が、当業者によって確認可能であり、本明細書中に開示される精神及び範囲から逸脱することなくなされ得る。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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