(57)【要約】本開示は神経膠腫などのある癌または腫瘍の治療に有用なホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）の阻害剤の組合せに関する。別の実施態様では、本開示は神経膠腫などのある癌または腫瘍の治療のためのＰＤＥ１の阻害剤および抗腫瘍剤の組合せに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌または腫瘍から選択される状態の治療方法であって、該治療を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法。
【請求項２】
癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１（例えばＰＤＥ１Ｃ）の発現を特徴としている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
状態が、神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病または神経芽腫である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
状態が多形神経膠芽腫である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤を阻害する方法であって、該治療を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法。
【請求項６】
癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１（例えば、ＰＤＥ１Ｃ）の発現を特徴としている、請求項５記載の方法。
【請求項７】
状態が神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病または神経芽腫である、請求項５〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
状態が多形神経膠芽腫である、請求項５〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
神経膠腫の治療方法であって、該治療を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
神経膠腫が、罹患したグリア細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１（例えば、ＰＤＥ１Ｃ）の発現を特徴としている、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
神経膠腫が多形神経膠芽腫である、請求項９〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
患者における癌の治療方法であって、癌細胞が、上昇したＰＤＥ１活性または発現を有しており、例えば癌細胞が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合またはＰＤＥ１酵素活性のうちの１つ以上を示しており、該患者にＰＤＥ１阻害剤の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
サイトカイン放出症候群を阻害する方法であって、該阻害を必要とする患者にＰＤＥ１阻害剤の有効量を投与することを含む方法であり、例えば患者が癌に罹患していて化学療法、免疫療法、遺伝子療法および／または抗体療法のうちの１つ以上を受けている、方法。
【請求項１４】
患者が癌に罹患している、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１（例えば、ＰＤＥ１Ｃ）の発現または活性を特徴としている、請求項１３〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
構成的活性型ＰＤＥ１を特徴とする癌または腫瘍の治療方法であって、該治療を必要とする患者にＰＤＥ１阻害剤の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
癌細胞または腫瘍細胞におけるＰＤＥ１が、Ｃａ２＋／カルモジュリン媒介に依存しないようになっている、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
癌性細胞または腫瘍性細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、請求項１６〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１（例えば、ＰＤＥ１Ｃ）の発現を特徴としている、請求項１６〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
ＰＤＥ１阻害剤が、
（Ａ）  遊離形態、塩形態またはプロドラッグ形態（そのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体を含む）の、式Ｉ：
【化１】
2021525705.tif 000022
［式中、
（ｉ）  Ｒ1は、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチル）であり；
（ｉｉ）  Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、Ｒ2およびＲ3は共にメチルであるか、または、Ｒ2はＨであり、Ｒ3はイソプロピルである）、アリール、ヘテロアリール、(場合によってはヘテロ)アリールアルコキシ、または(場合によってはヘテロ)アリールアルキルであるか；または
Ｒ2は、Ｈであり、Ｒ3およびＲ4は一緒になってジメチレン架橋、トリメチレン架橋またはテトラメチレン架橋を形成し（好ましくは、Ｒ3およびＲ4は一緒になってシス配置を有しており、例えば、Ｒ3およびＲ4を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有している）；
（ｉｉｉ）  Ｒ5は、例えばハロアルキルで置換されている、置換ヘテロアリールアルキルであるか；または
Ｒ5は、式Ｉのピラゾロ部分の窒素の１つに結合しており、式Ａ：
【化２】
2021525705.tif 000023
（式中、Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11およびＲ12は、独立して、Ｈまたはハロゲン（例えば、ＣｌまたはＦ）であり、Ｒ10は、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ハロゲンで置換されていてもよいピリジル（例えば、ピリダ−２−イル）、またはチアジアゾリル（例えば、１,２,３−チアジアゾール−４−イル））、ジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、アリールカルボニル（例えば、ベンゾイル）、アルキルスルホニル（例えば、メチルスルホニル）、ヘテロアリールカルボニル、またはアルコキシカルボニルであり；ただし、Ｘ、ＹまたはＺが窒素である場合、それぞれ、Ｒ8、Ｒ9またはＲ10は存在しない）
で示される部分であり；
（ｉｖ）  Ｒ6は、Ｈ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、アリールアミノ（例えば、フェニルアミノ）、ヘテロアリールアミノ、Ｎ,Ｎ−ジアルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジアリールアミノ、またはＮ−アリール−Ｎ−(アリールアルキル)アミノ（例えば、Ｎ−フェニル−Ｎ−(１,１'−ビフェン−４−イルメチル)アミノ)であり；
（ｖ）  ｎは０または１であり；
（ｖｉ）  ｎが１である場合、Ａは−Ｃ(Ｒ13Ｒ14)−である（ここで、Ｒ13およびＲ14は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキル、アリール、ヘテロアリール、(場合によってはヘテロ)アリールアルコキシまたは(場合によってはヘテロ)アリールアルキルである］；
（Ｂ）  遊離形態、塩形態またはプロドラッグ形態の、式ＩＩ：
【化３】
2021525705.tif 000024
［式中、
（ｉ）  Ｘは、Ｃ1-6アルキレン（例えば、メチレン、エチレンまたはプロパ−２−イン−１−イレン）であり；
（ｉｉ）  Ｙは、単結合、アルキニレン（例えば、−Ｃ≡Ｃ−）、アリーレン（例えば、フェニレン）またはヘテロアリーレン（例えば、ピリジレン）であり；
（ｉｉｉ）  Ｚは、Ｈ、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル、例えば、ピリダ−２−イル）、ハロ（例えば、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ）、ハロＣ1-6アルキル（例えば、トリフルオロメチル）、−Ｃ(Ｏ)−Ｒ1、−Ｎ(Ｒ2)(Ｒ3)、または、ＮもしくはＯからなる群から選択される少なくとも１個の原子を含有していてもよいＣ3-7シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、またはモルホリニル）であり；
（ｉｖ）  Ｒ1は、Ｃ1-6アルキル、ハロＣ1-6アルキル、−ＯＨまたは−ＯＣ1-6アルキル（例えば、−ＯＣＨ3）であり；
（ｖ）  Ｒ2およびＲ3は、独立して、ＨまたはＣ1-6アルキルであり；
（ｖｉ）  Ｒ4およびＲ5は、独立して、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、または、１個以上のハロ（例えば、フルオロフェニル、例えば、４−フルオロフェニル）、ヒドロキシ（例えば、ヒドロキシフェニル、例えば、４−ヒドロキシフェニルまたは２−ヒドロキシフェニル）もしくはＣ1-6アルコキシで置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル）であり；
（ｖｉｉ）  ここで、Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、１個以上のハロ（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、Ｃ1-6アルキル（例えば、メチル）、ハロＣ1-6アルキル（例えば、トリフルオロメチル）で置換されていてもよく、例えば、Ｚは、１個以上のハロ（例えば、６−フルオロピリダ−２−イル、５−フルオロピリダ−２−イル、６−フルオロピリダ−２−イル、３−フルオロピリダ−２−イル、４−フルオロピリダ−２−イル、４,６−ジクロロピリダ−２−イル）、ハロＣ1-6アルキル（例えば、５−トリフルオロメチルピリダ−２−イル）またはＣ1-6−アルキル（例えば、５−メチルピリダ−２−イル）で置換されている、ヘテロアリール、例えばピリジルであるか、またはＺは、１個以上のハロ（例えば、４−フルオロフェニル）で置換されている、アリール、例えばフェニルである］；
(Ｃ)  遊離形態または塩形態の、式ＩＩＩ：
【化４】
2021525705.tif 000025
［式中、
（ｉ）  Ｒ1は、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり；
（ｉｉ）  Ｒ2およびＲ3は、独立して、ＨまたはＣ1-6アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり；
（ｉｉｉ）  Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり；
（ｉｖ）  Ｒ5は、独立して−Ｃ(＝Ｏ)−Ｃ1-6アルキル（例えば、−Ｃ(＝Ｏ)−ＣＨ3）およびＣ1-6−ヒドロキシアルキル（例えば、１−ヒドロキシエチル）から選択される１個以上の基で置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル）であり；
（ｖ）  Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｈ、または、独立してＣ1-6アルキル（例えば、メチルまたはエチル）およびハロゲン（例えば、ＦまたはＣｌ）から選択される１個以上の基で置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル）、例えば非置換フェニル、または１個以上のハロゲン（例えば、Ｆ）で置換されているフェニル、または１個以上のＣ1-6アルキルおよび１個以上のハロゲンで置換されているフェニル、または１個のＣ1-6アルキルおよび１個のハロゲンで置換されているフェニル、例えば４−フルオロフェニルまたは３,４−ジフルオロフェニルまたは４−フルオロ−３−メチルフェニルであり；
（ｖｉ）ｎは、１、２、３または４である］；
（Ｄ）  遊離形態または塩形態の、式ＩＶ
【化５】
2021525705.tif 000026
［式中、
（ｖｉ）  Ｒ1は、Ｃ1-4アルキル（例えば、メチルまたはエチル）、または−ＮＨ(Ｒ2）（ここで、Ｒ2は、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば、４−フルオロフェニルである）であり；
（ｖｉｉ）  Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり；
（ｖｉｉｉ）  Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチル）であるか；または、Ｒ3はＨであり、Ｒ4およびＲ5は一緒になってトリメチレン架橋を形成し（好ましくは、Ｒ4およびＲ5は一緒になってシス配置を有しており、例えば、Ｒ4およびＲ5を担持している炭素はそれぞれＲ配置およびＳ配置を有している）、
（ｉｘ）  Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は、独立して、
Ｈ、
Ｃ1-4アルキル（例えば、メチル）、
ヒドロキシで置換されているピリダ−２−イル、または
−Ｓ(Ｏ)2−ＮＨ2
であり；
ただし、Ｘ、Ｙおよび／またはＺがＮである場合、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7および／またはＲ8は存在しない；また、Ｘ、ＹおよびＺがすべてＣである場合、Ｒ6、Ｒ7またはＲ8の少なくとも１つは−Ｓ(Ｏ)2−ＮＨ2、またはヒドロキシで置換されているピリダ−２−イルである］
（Ｅ）  遊離形態、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ形態（そのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体を含む）の、式１ａ：
【化６】
2021525705.tif 000027
［式中，
（ｉｖ）  Ｒ2およびＲ5は、独立して、Ｈまたはヒドロキシであり、Ｒ3およびＲ4は一緒になってトリメチレン架橋またはテトラメチレン架橋を形成するか［好ましくは、Ｒ3およびＲ4を担持している炭素はそれぞれＲ配置およびＳ配置を有している］；またはＲ2およびＲ3は各々メチルであり、Ｒ4およびＲ5は各々Ｈであるか；または、Ｒ2、Ｒ4およびＲ5はＨであり、Ｒ3は、イソプロピルであり［好ましくは、Ｒ3を担持している炭素はＲ配置を有している］；
（ｖ）  Ｒ6は、(ハロ置換されていてもよい)フェニルアミノ、(ハロ置換されていてもよい)ベンジルアミノ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4アルキルスルフィドであり；例えば、フェニルアミノまたは４−フルオロフェニルアミノであり；
（ｖｉ）  Ｒ10は、Ｃ1-4アルキル、メチルカルボニル、ヒドロキシエチル、カルボン酸、スルホンアミド、(ハロ置換またはヒドロキシ置換されていてもよい)フェニル、(ハロ置換またはヒドロキシ置換されていてもよい)ピリジル（例えば、６−フルオロピリダ−２−イル）、またはチアジアゾリル（例えば、１,２,３−チアジアゾール−４−イル）であり；
ＸおよびＹは、独立して、ＣまたはＮである］
から選択される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
ＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記：
【化７】
2021525705.tif 000028
のいずれかから選択される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤と組み合わせて投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１８年５月２５日に出願された米国仮出願第６２／６７６,６３８号、および２０１８年６月２２日に出願された米国仮出願番号第６２／６８８,６４１号（これらの内容は全体として出典明示により本明細書の一部とする）の優先権および利益を主張する。
【０００２】
開示の技術分野
当該技術分野は、中枢神経系の腫瘍などのある種の癌および腫瘍の治療に有用なホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）の阻害剤に関する。当該技術分野は、また、中枢神経系の腫瘍などのある種の癌および腫瘍の治療のため、またはＰＤＥ１における発現増加を特徴とする関連状態の治療のための、ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）の阻害剤の投与に関する。
【背景技術】
【０００３】
神経膠芽腫は成人に最も一般的な悪性脳腫瘍であり、その発生は、欧米先進諸国において１００,０００人あたり２〜３人の頻度で、すべての原発性脳腫瘍の半分以上を占めている。予後は普遍的に不良であり、生存期間中央値が６〜９か月であり、５年生存率が３％未満である。非特許文献１。
【０００４】
神経膠芽腫は、急速な増殖および正常な脳への浸潤を特徴とする高悪性度腫瘍（aggressive tumour）である。現在の治療法の有効性は、手術中に正常な脳機能を維持することが必要であること、放射線療法に対する腫瘍固有の抵抗性、および多くの薬物が血液脳関門を通過することができないことによって妨げられている。次に続く標的薬剤の第ＩＩＩ相臨床試験では生存率の向上が見られず（非特許文献２）、依然としてテモゾロミド（血液脳関門を通過することができるアルキル化化合物）が神経膠芽腫の治療に利用可能な唯一の有効な化学療法剤の１つであるので、過去３０年間、成人の神経膠芽腫患者に対する改善はほとんど見られていない。デバルキング手術、放射線療法およびテモゾロミドの最大限の治療を行っても、生存期間中央値はわずか１４.６か月である。非特許文献３。
【０００５】
現在、多形神経膠芽腫などの中枢神経系の腫瘍を治療する効果的な方法に対するニーズはほとんど満たされていない。そのような状態を治療するための改善された治療用組成物および方法が緊急に必要とされている。
【０００６】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の１１のファミリーが同定されているが、ファミリーＩのＰＤＥであるＣａ２＋／カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ（ＣａＭ−ＰＤＥ）のみが、Ｃａ２＋／カルモジュリンによって活性化され、カルシウムおよび環状ヌクレオチド（例えば、ｃＧＭＰおよびｃＡＭＰ）シグナル伝達経路を媒介することが示されている。３つの既知のＣａＭ−ＰＤＥ遺伝子、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃは、全て中枢神経系組織において発現している。ＰＤＥ１Ａは、脳、肺および心臓において発現している。ＰＤＥ１Ｂは、主に中枢神経系において発現しているが、単球および好中球においても検出されており、これらの細胞の炎症反応に関与していることが示されている。ＰＤＥ１Ｃは、嗅上皮、小脳顆粒細胞、線条体、心臓、および血管平滑筋において発現している。ＰＤＥ１Ｃは、ヒト平滑筋における平滑筋増殖の主要な調節因子であることが実証されている。
【０００７】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼは、これらの環状ヌクレオチドを、細胞内シグナル伝達経路に関して不活性であるそれらのそれぞれの５'一リン酸（５'ＡＭＰおよび５'ＧＭＰ）に加水分解することによって細胞内ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰシグナル伝達をダウンレギュレートする。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰはどちらも中心的な細胞内セカンドメッセンジャーであり、多くの細胞機能を調節する役割を果たしている。ＰＤＥ１ＡおよびＰＤＥ１Ｂは、ｃＡＭＰよりも優先的にｃＧＭＰを加水分解するが、ＰＤＥ１Ｃは、ｃＧＭＰとｃＡＭＰについてほぼ等しい加水分解を示す。
【０００８】
特にＰＤＥ１Ｃに関しては、最近の証拠では、ＰＤＥ１Ｃは増殖している血管平滑筋細胞において排他的に発現しているので増殖関連遺伝子であることが示されている。（非特許文献４）。加えて、黒色腫（非特許文献５）、神経芽腫（非特許文献６）、および骨肉腫（非特許文献７）などの実験的腫瘍モデルにおけるＰＤＥ１Ｃ発現が他のＰＤＥサブタイプとともに散発的に報告されている。
【０００９】
過去の研究は、ＰＤＥ１（特にアイソフォームＰＤＥ１Ｂ）の阻害がヒト白血病細胞においてアポトーシスを誘発することを示している。非特許文献８。National Cancer Instituteからの６つのヒト神経膠芽腫細胞株のうち５つが高いＰＤＥ１発現（主にＰＤＥ１Ｃ）およびほんのわずかなＰＤＥ４発現を示すことも研究によって示されている。非特許文献９。同様に、ＰＤＥ１Ｃ  ｍＲＮＡはヒト悪性黒色腫関連抗原（ＭＡＡ）細胞において過剰発現し、非選択的ＰＤＥ１阻害剤であるビンポセチンによって増殖が阻害される。非特許文献１０。より最近の研究では、ＰＤＥ１Ｃは正常なヒト脳と比較して神経膠芽腫の２０％において有意に過剰発現し、ＰＤＥ１ＣのｓｉＲＮＡ介したサイレンシングは神経膠芽腫の患者由来細胞培養物における増殖（４５〜５０％）および浸潤（４０〜６０％）を阻害することが示されている。非特許文献１１。
【００１０】
腫瘍促進性細胞増殖、遊走、組織浸潤および炎症は、癌の発生を可能にする特徴と考えられている。これらのプロセスは、それぞれ、時間依存的であり、可変的であり、多数のシグナル伝達経路が関与する複雑なものである。マルチターゲット薬剤はシングルターゲット療法で見られる利益よりも大きな利益をもたらし、許容できる忍容性プロファイルを有し、より広い範囲の腫瘍タイプに対して活性を示すと考えられている。環状ヌクレオチドシグナル伝達の調節は、腫瘍細胞機能の多様な側面に関与する複数の成分経路の複合経路として適切にみなされている。ｃＡＭＰ生成の障害は、様々な癌病理において説明されてきた。抗増殖性でありながら癌細胞において環状ヌクレオチドを直接調節する試みは、高い細胞毒性のために生産的ではなかった。癌細胞におけるｃＡＭＰを調節するための新しく、より安全で選択的な戦略が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Brodbelt A, et al.; (UK) National Cancer Information Network Brain Tumour Group. Glioblastoma in England: 2007-2011. Eur. J. Cancer. 2015 Mar; 51(4):533-42
【非特許文献２】Touat M, et al., Glioblastoma targeted therapy: updated approaches from recent biological insights. Ann. Oncol. 2017 Jul 1;28(7):1457-1472
【非特許文献３】Stupp R, et al., Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma; N Engl J Med. 2005 Mar 10;352(10):987-96
【非特許文献４】Rybalkin SD, et al., Calmodulin-stimulated cyclic nucleotide phosphodiesterase (PDE1C) is induced in human arterial smoothmuscle cells of the synthetic, proliferative phenotype. J Clin Invest 1997;100:2611-2621
【非特許文献５】Watanabe Y, et al., Phosphodiesterase 4 regulates the migration of B16-F10 melanoma cells. Exp Ther Med 2012;4:205-210
【非特許文献６】Jang IS, Juhnn YS. Adaptation of cAMP signaling system in SH-SY5Y neuroblastoma cells following expression of a constitutively active timulatory G protein alpha, Q227L Gsalpha. Exp Mol Med 2001;33:37-45
【非特許文献７】Ahlstroem M, et al., Cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs) in human osteoblastic cells; the effect of PDE inhibition on cAMP accumulation. Cell Mol Biol Lett 2005;10:305-319
【非特許文献８】Jiang X, Paskind M, Weltzien R, Epstein PM. Expression and regulation of mRNA for distinct isoforms of mitogen-stimulated and leukemic human lymphocytes. Cell Biochem Biophys 1998; 28:135-60
【非特許文献９】Marko D, Pahlke G, Merz KH, Eisenbrand G. Cyclic 3',5'-nucleotide phosphodiesterases: potential targets for antitumor therapy. Chem Res Toxicol 2000;13:944-8
【非特許文献１０】Zhao AZ, et al., Recent advances in the study of Ca2+/CaM-activated phosphodiesterases: expression and physiological functions. Adv Second Messenger Phosphoprotein Res 1997;31:237-51
【非特許文献１１】Rowther FB, et al., Cyclic nucleotide phosphodiesterase-1C (PDE1C) drives cell proliferation, migration and invasion in glioblastoma multiforme cells in vitro. Mol Carcinog. 2016 Mar; 55(3):268-79
【発明の概要】
【００１２】
本発明者らは、以前に、本開示化合物を用いたＰＤＥ１活性の阻害が、神経変性および神経炎症、心不全、肺高血圧症および末梢炎症のモデルを含む広範囲の病的状態において、ならびに特的の疾患を有するヒトにおいて、ｃＡＭＰ機能を安全に回復することができることを示した。より最近では、本発明者らは、ＰＤＥ１阻害剤がミクログリアおよび単球の細胞遊走を妨害することを示した。最近の証拠は、ＰＤＥ１、特にＰＤＥ１Ｃアイソフォームが黒色腫、神経芽腫および骨肉腫などの実験腫瘍モデルにおいて発現していることを示している。加えて、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）細胞におけるＰＤＥ１Ｃのフォーカルゲノム過剰出現（focal genomic over representation）が実証されている。ＰＤＥ１Ｃのゲノムゲインは、ＧＢＭ由来細胞培養物における発現の増加と関連しており、癌細胞における細胞増殖、遊走および浸潤を促進するために不可欠である。
【００１３】
多くのタイプの癌細胞は、増加したＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）または酵素活性などの様々なバイオマーカーを介して同定されるＰＤＥ１活性を過剰に発現する。これらの癌細胞はまた、低レベルのｃＡＭＰを示し、これはＰＤＥ１阻害剤によって増加させることができる。このような特性は、ＰＤＥ−１阻害剤単独で、または化学療法、遺伝子療法および／もしくは免疫学的アプローチと組み合わせて、治療することができる。ＰＤＥ１を阻害することにより、アポトーシス細胞死が誘発され、遊走が防止され、転移が制限され、炎症が減少する。このように、ＰＤＥ１阻害剤は、化学療法および免疫学的アプローチと相乗的である。
【００１４】
さらに、多くの遺伝子療法および抗体アプローチは、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を引き起こすことが知られている。ＣＲＳは、免疫療法の影響を受けた免疫細胞から血中へサイトカインが大量かつ急速に放出されることによって引き起こされる。ＰＤＥ１は、炎症性サイトカインＩＬ１β、ＴＮＦαおよびＣｃｌ２の発現を減少させることが従前に知られていた。国際特許公開ＷＯ２０１８／０４９１４７を参照。これらの症例ではＰＤＥ１阻害は予防的に有用であり、ＣＲＳを予防するためにＰＤＥ１阻害剤を副腎皮質ステロイド薬および抗ヒスタミン薬と一緒に投与することができる。
【００１５】
理論に縛られることなく、ｃＡＭＰ（またはｃＧＭＰ）生成の障害は様々な癌病理学におけるＰＤＥ１アイソフォームの過剰発現に起因すると考えられる。細胞内ｃＡＭＰ（および／またはｃＧＭＰ）のレベルを上昇させる選択的ＰＤＥ１アイソフォームの阻害は、広範囲の腫瘍細胞においてアポトーシスおよび細胞周期停止を誘発し、細胞遊走、炎症および組織浸潤を防止する腫瘍微小環境を調節する。したがって、個々のＰＤＥ１およびそのアイソフォーム、特にＰＤＥ１ｃに対して特異的な阻害剤の開発および臨床応用は、正常な細胞内シグナル伝達を選択的に回復させて、有害作用を軽減した抗腫瘍治療を提供することができる。
【００１６】
本開示は、例えばカルシノーマ、黒色腫およびアストロサイトーマを含む癌または腫瘍の治療のためのＰＤＥ１阻害剤の使用に関する。好ましい実施態様では、ＰＤＥ１阻害剤は選択的である。以前の研究では、ＰＤＥ１（すなわち、ＰＤＥ１Ｃ）は、健康な患者（すなわち、神経膠芽腫に罹患していない患者）と比較して、神経膠芽腫患者において有意に過剰発現していることが示されている。ＰＤＥ１ＣのｓｉＲＮＡ媒介サイレンシングは、神経膠芽腫の患者由来細胞培養物において増殖および浸潤を阻害することが示されている。如何なる理論にも縛られることなく、ＰＤＥ１ＣなどのＰＤＥ１の阻害は、神経膠芽腫などの特定の癌または腫瘍の治療的介入において有効であり得る。
【００１７】
特に脳腫瘍の治療には、血液脳関門を通過する能力を有する化合物が必要である。本開示の化合物は、ＰＤＥ１の強力な阻害剤である。特に、本開示の化合物は、ＰＤＥ１ＡおよびＰＤＥ１Ｃアイソフォームの両方に対して高い選択性を示し、血液脳関門を通過することができる。
【００１８】
したがって、様々な実施態様では、本開示は、癌または腫瘍から選択される状態を治療する方法であって、該治療を必要とする対象体に、本明細書に開示されるようなＰＤＥ１阻害剤の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施態様では、癌または腫瘍は、神経膠腫、白血病、黒色腫、神経芽腫または骨肉腫である。いくつかの実施態様では、癌または腫瘍は、アストロサイトーマ、例えば多形神経膠芽腫である。いくつかの実施態様では、ＰＤＥ１阻害剤は、抗腫瘍剤と組み合わせて投与される。
【００１９】
様々な実施態様では、本開示は、腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤を阻害する方法であって、該阻害を必要とする対象体に、本明細書に開示されるようなＰＤＥ１阻害剤の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施態様では、癌または腫瘍は、神経膠腫、白血病、黒色腫、神経芽腫または骨肉腫である。いくつかの実施態様では、癌または腫瘍は、アストロサイトーマ、例えば多形神経膠芽腫である。いくつかの実施態様では、ＰＤＥ１阻害剤は、抗腫瘍剤と組み合わせて投与される。
【００２０】
様々な実施態様では、本願は、神経膠腫の治療方法であって、該治療を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施態様では、癌または腫瘍は、アストロサイトーマ、例えば多形神経膠芽腫である。いくつかの実施態様では、ＰＤＥ１阻害剤は、抗腫瘍剤と組み合わせて投与される。
【００２１】
別の態様では、本開示は、また、遊離形態または塩形態の、下記の式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤を包含する。好ましい実施態様では、ＰＤＥ１阻害剤は、選択的ＰＤＥ１阻害剤である。別の実施態様では、該開示は、さらに、遊離形態または薬学的に許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤を薬学的に許容される担体と混合して含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
様々な実施態様では、本開示は、遊離形態または塩形態の、下記の式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤、および抗腫瘍剤を含む併用療法を提供する。該併用療法は、本明細書に開示されている方法のいずれかと組み合わせて使用することができる。いくつかの実施態様では、抗腫瘍剤は、ＰＤＥ１阻害剤の投与と同時に（concurrently）、投与前または投与後に投与される。
【００２３】
様々な実施態様では、本開示は、また、慣用の希釈剤または賦形剤および当該技術分野で知られている技術を用いて調製される、本開示の化合物を含む医薬組成物を提供する。したがって、経口投与剤形は、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤などを含み得る。
【００２４】
様々な実施態様では、本開示は、また、癌または腫瘍から選択される状態の治療、腫瘍性細胞の増殖、遊走および／もしくは浸潤の阻害、または神経膠腫の治療に用いるための、遊離形態または塩形態の、下記の式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）短期細胞培養物におけるＰＤＥ１Ｃ発現を示す。
【図２】図２は、正常なヒトの星状細胞に関連して提示された新たに凍結したＧＢＭ生検標本におけるＰＤＥ１Ｃ発現の変化を示す。
【図３】図３は、ｓｉＲＮＡを介したＰＤＥ１Ｃの枯渇後の、試験したＧＢＭ細胞培養物の細胞増殖を示す。
【図４】図４は、ＰＤＥ１Ｃを特異的に標的とするように改変した細胞と非標的化細胞の、ポリカーボネート膜を介した細胞遊走の比較を示す。
【図５】図５は、ＰＤＥ１Ｃを特異的に標的とするように改変した細胞と非標的化細胞の、細胞外膜被覆ポリカーボネート膜を介した細胞浸潤の比較を示す。
【図６】図６は、３つの培養物（ＩＮ１４７２、ＩＮ１７６０およびＵ２５１ＭＧ）における、非標的化細胞と比較した、ＰＤＥ１Ｃを特異的に標的とするように改変した細胞における創傷領域内で移動した細胞の数の減少を示す。
【図７】図７は、Ｃａ２＋／カルモジュリンの存在下および不在下の両方で測定したいくつかのＧＢＭ細胞株のＰＤＥ活性を示す
【００２６】
発明の詳細な説明
開示の方法で用いるための化合物
【００２７】
一の実施態様では、本明細書に記載の治療および予防の方法で用いるためのＰＤＥ１阻害剤は、選択的ＰＤＥ１阻害剤である。
【００２８】
ＰＤＥ１阻害剤
【００２９】
一の実施態様では、本発明は、本明細書に記載の治療および予防の方法で用いるためのＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態、塩形態またはプロドラッグ形態（そのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体を含む）の、式Ｉ:
【化１】
2021525705.tif 000002
［式中、
（ｉ）  Ｒ1は、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチル）であり；
（ｉｉ）  Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、Ｒ2およびＲ3は共にメチルであるか、または、Ｒ2はＨであり、Ｒ3はイソプロピルである）、アリール、ヘテロアリール、(場合によってはヘテロ)アリールアルコキシ、または(場合によってはヘテロ)アリールアルキルであるか；または
Ｒ2は、Ｈであり、Ｒ3およびＲ4は一緒になってジメチレン架橋、トリメチレン架橋またはテトラメチレン架橋を形成し（好ましくは、Ｒ3およびＲ4が一緒になってシス配置を有しており、例えば、Ｒ3およびＲ4を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有している）；
（ｉｉｉ）  Ｒ5は、例えばハロアルキルで置換されている、置換ヘテロアリールアルキルであるか；または
Ｒ5は、式Ｉのピラゾロ部分の窒素の１つに結合しており、式Ａ：
【化２】
2021525705.tif 000003
（式中、Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11およびＲ12は、独立して、Ｈまたはハロゲン（例えば、ＣｌまたはＦ）であり、Ｒ10は、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ハロゲンで置換されていてもよいピリジル（例えば、ピリダ−２−イル）、またはチアジアゾリル（例えば、１,２,３−チアジアゾール−４−イル））、ジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、アリールカルボニル（例えば、ベンゾイル）、アルキルスルホニル（例えば、メチルスルホニル）、ヘテロアリールカルボニル、またはアルコキシカルボニルであり；ただし、Ｘ、ＹまたはＺが窒素である場合、それぞれ、Ｒ8、Ｒ9またはＲ10は存在しない）
で示される部分であり；
（ｉｖ）  Ｒ6は、Ｈ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、アリールアミノ（例えば、フェニルアミノ）、ヘテロアリールアミノ、Ｎ,Ｎ−ジアルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジアリールアミノ、またはＮ−アリール−Ｎ−(アリールアルキル)アミノ（例えば、Ｎ−フェニル−Ｎ−(１,１'−ビフェン−４−イルメチル)アミノ)であり；
（ｖ）  ｎは０または１であり；
（ｖｉ）  ｎが１である場合、Ａは、−Ｃ(Ｒ13Ｒ14)−である（ここで、Ｒ13およびＲ14は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキル、アリール、ヘテロアリール、(場合によってはヘテロ)アリールアルコキシまたは(場合によってはヘテロ)アリールアルキルである）］
で示される化合物であることを提供する。
【００３０】
別の実施態様では、本発明は、本明細書に記載の方法で用いるためのＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ形態（そのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体を含む）の、式１ａ：
【化３】
2021525705.tif 000004
［式中、
（ｉ）  Ｒ2およびＲ5は、独立して、Ｈまたはヒドロキシであり、Ｒ3およびＲ4は一緒になってトリメチレン架橋またはテトラメチレン架橋を形成するか［好ましくは、Ｒ3およびＲ4を担持している炭素はそれぞれＲ配置およびＳ配置を有している］；または、Ｒ2およびＲ3は各々メチルであり、Ｒ4およびＲ5は各々Ｈであるか；または、Ｒ2、Ｒ4およびＲ5はＨであり、Ｒ3は、イソプロピルであり［好ましくは、Ｒ3を担持している炭素はＲ配置を有している］；
（ｉｉ）  Ｒ6は、(ハロ置換されていてもよい)フェニルアミノ、(ハロ置換されていてもよい)ベンジルアミノ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4アルキルスルフィドであり；例えば、フェニルアミノまたは４−フルオロフェニルアミノであり；
（ｉｉｉ）  Ｒ10は、Ｃ1-4アルキル、メチルカルボニル、ヒドロキシエチル、カルボン酸、スルホンアミド、(ハロ置換またはヒドロキシ置換されていてもよい)フェニル、(ハロ置換またはヒドロキシ置換されていてもよい)ピリジル（例えば、６−フルオロピリダ−２−イル）、またはチアジアゾリル（例えば、１,２,３−チアジアゾール−４−イル）であり；
ＸおよびＹは、独立して、ＣまたはＮである］
で示される化合物であることを提供する。
【００３１】
別の実施態様では，本発明は、本明細書に記載の治療および予防の方法で用いるためのＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態、塩形態またはプロドラッグ形態の、式ＩＩ：
【化４】
2021525705.tif 000005
［式中、
（ｉ）  Ｘは、Ｃ1-6アルキレン（例えば、メチレン、エチレンまたはプロパ−２−イン−１−イレン）であり；
（ｉｉ）  Ｙは、単結合、アルキニレン（例えば、−Ｃ≡Ｃ−）、アリーレン（例えば、フェニレン）またはヘテロアリーレン（例えば、ピリジレン）であり；
（ｉｉｉ）  Ｚは、Ｈ、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル、例えば、ピリダ−２−イル）、ハロ（例えば、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ）、ハロＣ1-6アルキル（例えば、トリフルオロメチル）、−Ｃ(Ｏ)−Ｒ1、−Ｎ(Ｒ2)(Ｒ3)、または、ＮもしくはＯからなる群から選択される少なくとも１個の原子を含有していてもよいＣ3-7シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、またはモルホリニル）であり；
（ｉｖ）  Ｒ1は、Ｃ1-6アルキル、ハロＣ1-6アルキル、−ＯＨまたは−ＯＣ1-6アルキル（例えば、−ＯＣＨ3）であり；
（ｖ）  Ｒ2およびＲ3は、独立して、ＨまたはＣ1-6アルキルであり；
（ｖｉ）  Ｒ4およびＲ5は、独立して、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、または、１個以上のハロ（例えば、フルオロフェニル、例えば、４−フルオロフェニル）、ヒドロキシ（例えば、ヒドロキシフェニル、例えば、４−ヒドロキシフェニルまたは２−ヒドロキシフェニル）もしくはＣ1-6アルコキシで置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル）であり；
（ｖｉｉ）  ここで、Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、１個以上のハロ（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、Ｃ1-6アルキル（例えば、メチル）、ハロＣ1-6アルキル（例えば、トリフルオロメチル）で置換されていてもよく、例えば、Ｚは、１個以上のハロ（例えば、６−フルオロピリダ−２−イル、５−フルオロピリダ−２−イル、６−フルオロピリダ−２−イル、３−フルオロピリダ−２−イル、４−フルオロピリダ−２−イル、４,６−ジクロロピリダ−２−イル）、ハロＣ1-6アルキル（例えば、５−トリフルオロメチルピリダ−２−イル）またはＣ1-6−アルキル（例えば、５−メチルピリダ−２−イル）で置換されている、ヘテロアリール、例えばピリジルであるか、またはＺは、１個以上のハロ（例えば、４−フルオロフェニル）で置換されている、アリール、例えばフェニルである］
で示される化合物であることを提供する。
【００３２】
さらに別の実施態様では、本発明は、本明細書に記載の治療および予防の方法で用いるためのＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または塩形態の、式ＩＩＩ：
【化５】
2021525705.tif 000006
［式中、
（ｉ）  Ｒ1は、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり；
（ｉｉ）  Ｒ2およびＲ3は、独立して、ＨまたはＣ1-6アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり；
（ｉｉｉ）  Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり；
（ｉｖ）  Ｒ5は、独立して−Ｃ(＝Ｏ)−Ｃ1-6アルキル（例えば、−Ｃ(＝Ｏ)−ＣＨ3）およびＣ1-6−ヒドロキシアルキル（例えば、１−ヒドロキシエチル）から選択される１個以上の基で置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル）であり；
（ｖ）  Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｈ、または、独立してＣ1-6アルキル（例えば、メチルまたはエチル）およびハロゲン（例えば、ＦまたはＣｌ）から選択される１個以上の基で置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル）、例えば非置換フェニル、または１個以上のハロゲン（例えば、Ｆ）で置換されているフェニル、または１個以上のＣ1-6アルキルおよび１個以上のハロゲンで置換されているフェニル、または１個のＣ1-6アルキルおよび１個のハロゲンで置換されているフェニル、例えば４−フルオロフェニルまたは３,４−ジフルオロフェニルまたは４−フルオロ−３−メチルフェニルであり；
（ｖｉ）ｎは、１、２、３または４である］
であることを提供する。
【００３３】
さらに別の実施態様では、本発明は、本明細書に記載の治療および予防の方法で用いるためのＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または塩形態の、式ＩＶ：
【化６】
2021525705.tif 000007
［式中、
（ｉ）  Ｒ1は、Ｃ1-4アルキル（例えば、メチルまたはエチル）、または−ＮＨ(Ｒ2)（ここで、Ｒ2は、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば４−フルオロフェニルである）であり；
（ｉｉ）  Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり；
（ｉｉｉ）  Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキル（例えば、メチル）であるか；または、Ｒ3はＨであり、Ｒ4およびＲ5は一緒になってトリメチレン架橋を形成し（好ましくは、Ｒ4およびＲ5は一緒になってシス配置を有しており、例えば、Ｒ4およびＲ5を担持している炭素はそれぞれＲ配置およびＳ配置を有している）、
（ｉｖ）  Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は、独立して、
Ｈ、
Ｃ1-4アルキル（例えば、メチル）、
ヒドロキシで置換されているピリダ−２−イル、または
−Ｓ(Ｏ)2−ＮＨ2
であり；
（ｖ）  ただし、Ｘ、Ｙおよび／またはＺがＮである場合、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7および／またはＲ8は存在しない；また、Ｘ、ＹおよびＺがすべてＣである場合、Ｒ6、Ｒ7またはＲ8の少なくとも１つは−Ｓ(Ｏ)2−ＮＨ2、またはヒドロキシで置換されているピリダ−２−イルである］
であることを提供する。
【００３４】
一の実施態様では、本発明は、炎症または炎症関連疾患もしくは障害の治療または予防のための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記：
【化７】
2021525705.tif 000008
で示される化合物であるＰＤＥ１阻害剤の投与を提供する。
【００３５】
さらに別の実施態様では、本発明は、炎症または炎症関連疾患もしくは障害の治療または予防のための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記：
【化８】
2021525705.tif 000009
で示される化合物であるＰＤＥ１阻害剤の投与を提供する。
【００３６】
さらに別の実施態様では、本発明は、炎症または炎症関連疾患もしくは障害の治療または予防のための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記：
【化９】
2021525705.tif 000010
で示される化合物であるＰＤＥ１阻害剤の投与を提供する。
【００３７】
さらに別の実施態様では、本発明は、炎症または炎症関連疾患もしくは障害の治療または予防のための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記：
【化１０】
2021525705.tif 000011
で示される化合物であるＰＤＥ１阻害剤の投与を提供する。
【００３８】
さらに別の実施態様では、本発明は、炎症または炎症関連疾患もしくは障害の治療または予防のための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記：
【化１１】
2021525705.tif 000012
で示される化合物であるＰＤＥ１阻害剤の投与を提供する
【００３９】
一の実施態様では、上記の式（例えば、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶ）のいずれかで示される選択的ＰＤＥ１阻害剤は、ｃＧＭＰのホスホジエステラーゼ媒介（例えば、ＰＤＥ１媒介、特にＰＤＥ１Ｂ媒介）加水分解を阻害する化合物であり、例えば、好ましい化合物は、遊離形態または塩形態で、固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにて、１μＭ未満、好ましくは５００ｎＭ未満、好ましくは５０ｎＭ未満、好ましくは５ｎＭ未満のＩＣ50を有する。
【００４０】
他の実施態様では、本発明は、癌または腫瘍から選択される状態の治療のため；腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤の阻害のため；ならびに／または神経膠腫の治療のための、下記：
【化１２】
2021525705.tif 000013
で示される化合物であるＰＤＥ１阻害剤の投与を提供する。
【００４１】
本明細書で説明されている方法および治療における使用に適しているＰＤＥ１阻害剤のさらなる例は、国際公開第２００６１３３２６１号（Ａ２）；米国特許第８,２７３,７５０号；米国特許第９,０００,００１号；米国特許第９,６２４,２３０号；国際公開第２００９０７５７８４号（Ａ１）；米国特許第８,２７３,７５１号；米国特許第８,８２９,００８号；米国特許第９,４０３,８３６号；国際公開第２０１４１５１４０９号（Ａ１）、米国特許第９,０７３,９３６号；米国特許第９,５９８,４２６号；米国特許第９,５５６,１８６号；米国特許出願公開第２０１７／０２３１９９４号（Ａ１）、国際公開第２０１６０２２８９３号（Ａ１）および米国特許出願公開第２０１７／０２２６１１７号（Ａ１）に見ることができる（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部とする）。
【００４２】
本明細書で説明されている方法および治療における使用に適しているＰＤＥ１阻害剤のさらにさらなる例は、国際公開第２０１８００７２４９号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１８／００００７８６号；国際公開第２０１５１１８０９７号（Ａ１）；米国特許第９,７１８,８３２号；国際公開第２０１５０９１８０５号（Ａ１）；米国特許第９,７０１,６６５号；米国特許出願公開第２０１５／０１７５５８４号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１７／０２６７６６４号（Ａ１）；国際公開第２０１６０５５６１８号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１７／０２９８０７２号（Ａ１）；国際公開第２０１６１７００６４号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１６／０３１１８３１号（Ａ１）；国際公開第２０１５１５０２５４号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１７／００２２１８６号（Ａ１）；国際公開第２０１６１７４１８８号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１６／０３１８９３９号（Ａ１）；米国特許出願公開第２０１７／０２９１９０３号（Ａ１）；国際公開第２０１８０７３２５１号（Ａ１）；国際公開第２０１７１７８３５０号（Ａ１）；および米国特許出願公開第２０１７／０２９１９０１号（Ａ１）に見ることができる（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部とする）。出典明示により本明細書の一部とされる文書の記載が本開示における記載と矛盾するか、または互換性がない場合には、本開示の記載が支配的であると理解されなければならない。
【００４３】
別段の指定がない場合、または文脈から明らかでない場合、本明細書における以下の用語は、以下の意味を有する：
【００４４】
（ａ）  「選択的ＰＤＥ１阻害剤」とは、本明細書で用いられる場合、ＰＤＥ１阻害が他のいずれものＰＤＥアイソフォームの阻害よりも少なくとも１００倍の選択性を有するＰＤＥ１阻害剤をいう。
【００４５】
（ｂ）  「アルキル」とは、本明細書で用いられる場合、飽和または不飽和炭化水素部分であり、好ましくは飽和であり、好ましくは１〜６個の炭素原子を有しており、直鎖または分枝鎖であってよく、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで、モノ置換、ジ置換またはトリ置換されていてもよい。
【００４６】
（ｃ）  「シクロアルキル」とは、本明細書で用いられる場合、飽和または不飽和非芳香族炭化水素部分であり、好ましくは飽和であり、好ましくは３〜９個の炭素原子を含んでおり、それらのうち少なくともいくつかが非芳香族単環式または二環式または架橋の環状構造を形成しており、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで、置換されていてもよい。シクロアルキルがＮおよびＯおよび／またはＳから選択される１個以上の原子を含んでいてもよい場合、該シクロアルキルはヘテロシクロアルキルであってもよい。
【００４７】
（ｄ）  「ヘテロシクロアルキル」とは、特記しない限り、飽和または不飽和非芳香族炭化水素部分であり、好ましくは飽和であり、好ましくは３〜９個の炭素原子を含んでおり、それらのうち少なくともいくつかが非芳香族単環式または二環式または架橋の環状構造を形成しており、少なくとも１個の炭素原子がＮ、ＯまたはＳに置き換わっており、ヘテロシクロアルキルは、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで、置換されていてもよい。
【００４８】
（ｅ）  「アリール」とは、本明細書で用いられる場合、単環式または二環式芳香族炭化水素であり、好ましくはフェニルであり、例えばアルキル（例えば、メチル）、ハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、ヒドロキシ、カルボキシ、またはさらなるアリールもしくはヘテロアリール（例えば、ビフェニルまたはピリジルフェニル）で置換されていてもよい。
【００４９】
（ｆ）  「ヘテロアリール」とは、本明細書で用いられる場合、芳香環を構成する原子の１個以上が炭素ではなくて硫黄または窒素である芳香族部分であり、例えばピリジルまたはチアジアゾリルであり、例えばアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシまたはカルボキシで、置換されていてもよい。
【００５０】
本開示化合物（Compounds of the Disclosure）、例えば本明細書に記載されているＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または塩形態で、例えば酸付加塩として、存在し得る。本明細書では、特記しない限り、「本開示化合物」などの文言は、何らかの形態、例えば遊離形態または酸付加塩形態の化合物、または化合物が酸性置換基を含有する場合には塩基付加塩形態の化合物を包含すると解されるべきである。本開示化合物は、
医薬品としての使用を目的としているため、薬学的に許容される塩が好ましい。医薬用途に適さない塩は、例えば遊離の本開示化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の単離または精製に有用であり得、したがって、該塩も包含される。
【００５１】
本開示化合物は、場合によっては、プロドラッグ形態でも存在し得る。プロドラッグ形態は、体内で本開示化合物に変換される化合物である。例えば、本開示化合物がヒドロキシ置換基またはカルボキシ置換基を含有する場合、これらの置換基は、生理学的に加水分解可能で許容されるエステルを形成し得る。本明細書で用いる場合、「生理学的に加水分解可能で許容されるエステル」とは、生理学的条件下で加水分解可能であり、自体が投与されるべき用量で生理学的に許容される酸（ヒドロキシ置換基を有する本開示化合物の場合）またはアルコール（カルボキシ置換基を有する本開示化合物の場合）を生成する、本開示化合物のエステルを意味する。したがって、本開示化合物がヒドロキシ基を含有する場合、例えば化合物−ＯＨである場合、該化合物のアシルエステルプロドラッグ、すなわち、化合物−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-4アルキルは、体内で加水分解して、一方では生理学的に加水分解可能なアルコール（化合物−ＯＨ）を形成し、他方では酸（例えば、ＨＯＣ(Ｏ)−Ｃ1-4アルキル）を形成することができる。別法として、本開示化合物がカルボン酸を含有する場合、例えば化合物−Ｃ(Ｏ)ＯＨである場合、該化合物の酸エステルプロドラッグ、化合物−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1-4アルキルは、加水分解して、化合物−Ｃ(Ｏ)ＯＨおよびＨＯ−Ｃ1-4アルキルを形成することができる。したがって、理解されるように、この用語は、慣用の医薬プロドラッグ形態を包含する。
【００５２】
別の実施態様では、本開示は、さらに、ＰＤＥ１阻害剤を抗腫瘍剤と組み合わせて、それぞれが遊離形態または薬学的に許容される塩形態で、薬学的に許容される担体と混合して含む医薬組成物を提供する。用語「組み合わせ」とは、本明細書で用いられる場合、ＰＤＥ１阻害剤と抗腫瘍剤との同時（simultaneous）、連続（sequential）または同時期（contemporaneous）投与を包含する。別の実施態様では、本開示は、このような化合物を含有する医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様では、ＰＤＥ１阻害剤と抗腫瘍剤との組み合わせにより、抗腫瘍剤を、単独の単剤療法として投与した場合に有効であるであろう量よりも低い量で投与することができる。
【００５３】
本開示化合物を使用する方法
【００５４】
別の実施態様では、本願は、癌または腫瘍から選択される状態の治療方法であって、該治療を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤（すなわち、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤）の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法（方法１）を提供する。
【００５５】
１.１  癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１の発現を特徴とする、方法１。
【００５６】
１.２  癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１Ｃの発現を特徴とする、いずれかの上記の方法
【００５７】
１.３  癌細胞が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示す、上記の方法のいずれか。
【００５８】
１.４  状態が腫瘍である、いずれかの上記の方法。
【００５９】
１.５  腫瘍が、聴神経腫瘍、アストロサイトーマ、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合膠腫、視神経膠腫）、上衣下腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、シュワン細胞腫、腺腫（例えば、好塩基性腺腫、好酸性腺腫、嫌色素性腺腫、副甲状腺腺腫、膵島腺腫、線維腺腫）、類線維腫（線維性組織球腫）、線維腫、血管腫、脂肪腫（例えば、血管脂肪腫、骨髄脂肪腫、線維脂肪腫、紡錘細胞脂肪腫、褐色脂肪腫、非定型脂肪腫）、粘液腫、骨腫、前白血病、横紋筋腫（rhadomyoma）、乳頭腫、脂漏性角化症、皮膚付属器腫瘍、肝腺腫、腎尿細管腺腫、胆管腺腫、移行細胞乳頭腫、胞状奇胎、神経節神経腫、メニンゴーマ（meningoma）、神経鞘腫、神経線維腫、Ｃ細胞過形成、褐色細胞腫、インスリノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ケモデクトーマ、傍神経節腫、母斑、光線角化症、子宮頚部異形成、化生（例えば、肺の化生）、白斑症、血管腫、リンパ管腫、カルシノーマ（例えば、有棘細胞癌、類表皮癌、腺癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、腎細胞癌、胆管細胞癌、移行上皮癌、胚性細胞癌（embryonal cell carcinoma）、副甲状腺癌、甲状腺髄様癌、気管支カルチノイド、燕麦細胞癌、膵島細胞癌、悪性カルチノイド）、肉腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、血管肉腫（hemangiosarcoma）、血管肉腫（angiosarcoma）、リンパ管肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、神経線維肉腫）、芽細胞腫（例えば、髄芽腫および神経膠芽腫、脳腫瘍の類型（types of brain tumor）、網膜芽細胞腫、眼の網膜の腫瘍、骨芽細胞腫、骨腫瘍、神経芽腫）、胚細胞腫瘍、中皮腫、悪性皮膚付属器腫瘍、グラヴィッツ腫瘍（hypernephroma）、精上皮腫、神経膠腫、悪性髄膜腫、悪性シュワン細胞腫（malignant shwannoma）、悪性褐色細胞腫、悪性傍神経節腫、黒色腫、メルケル細胞新生物（mercell cell neoplasm）、葉状嚢肉腫（cystosarcoma phylloides）、またはウィルムス腫瘍のうちの１つ以上から選択される、いずれかの上記の方法。
【００６０】
１.６  状態が、神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病または神経芽腫である、いずれかの上記の方法。
【００６１】
１.７  状態が、神経膠腫（例えば、上衣腫、アストロサイトーマ、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、または混合膠腫、例えば、オリゴアストロサイトーマ）である、いずれかの上記の方法。
【００６２】
１.８  神経膠腫がアストロサイトーマ（例えば、多形神経膠芽腫）である、方法１.６。
【００６３】
１.９  状態が多形神経膠芽腫である、いずれかの上記の方法。
【００６４】
１.１０  状態が癌である、方法１〜１.２のいずれか。
【００６５】
１.１１  状態が白血病である、方法１〜１.２または１.１０のいずれか。
【００６６】
１.１２  白血病がリンパ性白血病（lymphoctic leukemia）または骨髄性白血病である、方法１.１１。
【００６７】
１.１３  患者に抗腫瘍剤を投与する工程をさらに含む、いずれかの上記の方法。
【００６８】
１.１４  抗腫瘍剤がＰＤＥ１阻害剤と同時に（concurrently）投与される、方法１.１３。
【００６９】
１.１５  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与する前に投与される、方法１.１３。
【００７０】
１.１６  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与した後に投与される、方法１.１３。
【００７１】
１.１７  ＰＤＥ１阻害剤が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法とともに投与される、上記の方法のいずれか。
【００７２】
１.１８  ＰＤＥ１阻害剤が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法と同時に（concurrently）投与される、上記の方法のいずれか。
【００７３】
１.１９  ＰＤＥ１阻害剤が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の前に投与される、上記の方法のいずれか。
【００７４】
１.２０  ＰＤＥ１阻害剤が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の後に投与される、上記の方法のいずれか。
【００７５】
１.２１  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法および／または免疫療法と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【００７６】
１.２２  ＰＤＥ１阻害剤の投与が、癌細胞または腫瘍細胞において、アポトーシス細胞死、遊走の阻害、転移の阻害、および／または炎症の減少のうちの１つ以上を誘導するのに効果的である、上記の方法のいずれか。
【００７７】
１.２３  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法、免疫療法、コルチコステロイド、および／または抗ヒスタミン剤と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【００７８】
１.２４  癌または腫瘍がＰＤＥによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【００７９】
１.２５  癌または腫瘍がＰＤＥ１によって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【００８０】
１.２６  癌または腫瘍がＰＤＥ１Ｃによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【００８１】
１.２７  癌または腫瘍がカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失を特徴としている、上記の方法のいずれか。
【００８２】
１.２８  癌性細胞または腫瘍性細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、上記の方法のいずれか。
【００８３】
本開示は、さらに、癌または腫瘍から選択される状態の治療方法において用いるためのＰＤＥ１阻害剤、例えば方法１以降のいずれかにおいて用いるためのＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【００８４】
本開示は、さらに、癌または腫瘍から選択される状態の治療方法において用いるための医薬、例えば方法１以降のいずれかにおいて用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用を提供する。
【００８５】
本発明は、さらに、方法１以降のいずれかにおいて用いるための、ＰＤＥ１阻害剤、例えば式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示される化合物のいずれかを含む、医薬組成物を提供する。
【００８６】
別の実施態様では、癌性細胞または腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤を阻害する方法であって、該阻害を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤（すなわち、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤）の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法（方法２）を提供する。
【００８７】
２.１  癌性細胞または腫瘍性細胞の増殖を阻害するためである、方法２。
【００８８】
２.２  癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１の発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【００８９】
２.３  癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１Ｃの発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【００９０】
２.４  癌細胞が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示す、上記の方法のいずれか。
【００９１】
２.５  状態が腫瘍である、いずれかの上記の方法。
【００９２】
２.６  腫瘍が、聴神経腫瘍、アストロサイトーマ、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合膠腫、視神経膠腫）、上衣下腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、シュワン細胞腫、腺腫（例えば、好塩基性腺腫、好酸性腺腫、嫌色素性腺腫、副甲状腺腺腫、膵島腺腫、線維腺腫）、類線維腫（線維性組織球腫）、線維腫、血管腫、脂肪腫（例えば、血管脂肪腫、骨髄脂肪腫、線維脂肪腫、紡錘細胞脂肪腫、褐色脂肪腫、非定型脂肪腫）、粘液腫、骨腫、前白血病、横紋筋腫（rhadomyoma）、乳頭腫、脂漏性角化症、皮膚付属器腫瘍、肝腺腫、腎尿細管腺腫、胆管腺腫、移行細胞乳頭腫、胞状奇胎、神経節神経腫、メニンゴーマ（meningoma）、神経鞘腫、神経線維腫、Ｃ細胞過形成、褐色細胞腫、インスリノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ケモデクトーマ、傍神経節腫、母斑、光線角化症、子宮頚部異形成、化生（例えば、肺の化生）、白斑症、血管腫、リンパ管腫、カルシノーマ（例えば、有棘細胞癌、類表皮癌、腺癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、腎細胞癌、胆管細胞癌、移行上皮癌、胚性細胞癌（embryonal cell carcinoma）、副甲状腺癌、甲状腺髄様癌、気管支カルチノイド、燕麦細胞癌、膵島細胞癌、悪性カルチノイド,）、肉腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、血管肉腫（hemangiosarcoma）、血管肉腫（angiosarcoma）、リンパ管肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、神経線維肉腫）、芽細胞腫（例えば、髄芽腫および神経膠芽腫、脳腫瘍の類型（types of brain tumor）、網膜芽細胞腫、眼の網膜の腫瘍、骨芽細胞腫、骨腫瘍、神経芽腫）、胚細胞腫瘍、中皮腫、悪性皮膚付属器腫瘍、グラヴィッツ腫瘍（hypernephroma）、精上皮腫、神経膠腫、悪性髄膜腫、悪性シュワン細胞腫（malignant shwannoma）、悪性褐色細胞腫、悪性傍神経節腫、黒色腫、メルケル細胞新生物（mercell cell neoplasm）、葉状嚢肉腫（cystosarcoma phylloides）、またはウィルムス腫瘍のうちの１つ以上から選択される、いずれかの上記の方法。
【００９３】
２.７  状態が、神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病、または神経芽腫である、いずれかの上記の方法。
【００９４】
２.８  状態が、神経膠腫（例えば、上衣腫、アストロサイトーマ、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、または混合膠腫、例えば、オリゴアストロサイトーマ）である、いずれかの上記の方法。
【００９５】
２.９  神経膠腫がアストロサイトーマ（例えば、多形神経膠芽腫）である、方法２.５。
【００９６】
２.１０  状態が多形神経膠芽腫である、いずれかの上記の方法。
【００９７】
２.１１  状態が癌である、方法２〜２.３のいずれか。
【００９８】
２.１２  状態が白血病である、方法２〜２.３または２.１１のいずれか。
【００９９】
２.１３  白血病がリンパ性白血病（lymphoctic leukemia）または骨髄性白血病である、方法２.１１。
【０１００】
２.１４  患者に抗腫瘍剤を投与する工程をさらに含む、いずれかの上記の方法。
【０１０１】
２.１５  抗腫瘍剤がＰＤＥ１阻害剤と同時に（concurrently）投与される、方法２.１４。
【０１０２】
２.１６  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与する前に投与される、方法２.１４。
【０１０３】
２.１７  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与した後に投与される、方法２.１４。
【０１０４】
２.１８  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法とともに投与される、上記の方法のいずれか。
【０１０５】
２.１９  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法と同時に（concurrently）投与される、上記の方法のいずれか。
【０１０６】
２.２０  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の前に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１０７】
２.２１  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の後に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１０８】
２.２２  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法および／または免疫療法と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１０９】
２.２３  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法、免疫療法、コルチコステロイド、および／または抗ヒスタミン剤と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１１０】
２.２４  癌または腫瘍がＰＤＥによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１１１】
２.２５  癌または腫瘍がＰＤＥ１によって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１１２】
２.２６  癌または腫瘍がＰＤＥ１Ｃによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１１３】
２.２７  癌または腫瘍がカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失を特徴としている、上記の方法のいずれか。
【０１１４】
２.２８  癌性細胞または腫瘍性細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、上記の方法のいずれか。
【０１１５】
２.２９  対象体の、発現したＰＤＥ１におけるカルシウム／カルモジュリン感受性、環状ヌクレオチドレベルの回復、ＰＤＥ１のＲＮＡ発現、またはＰＤＥ１遺伝子の変異の程度を評価する工程をさらに含む、上記の方法のいずれか。
【０１１６】
本開示は、さらに、癌性細胞または腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤を阻害する方法において用いるためのＰＤＥ１阻害剤、例えば方法２以降のいずれかにおいて用いるためのＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【０１１７】
本開示は、さらに、癌性細胞または腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤を阻害する方法において用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用、例えば方法２以降のいずれかにおいて用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用を提供する。
【０１１８】
本発明は、さらに、方法２以降のいずれかにおいて用いるための、ＰＤＥ１阻害剤、例えば式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示される化合物のいずれかを含む、医薬組成物を提供する。
【０１１９】
別の実施態様では、本願は、神経膠腫の治療方法であって、該治療を必要とする対象体にＰＤＥ１阻害剤（すなわち、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤）の薬学的に許容される量を投与することを含む、方法（方法３）を提供する。
【０１２０】
３.１  神経膠腫が、罹患したグリア細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１の発現を特徴とする、方法３。
【０１２１】
３.２  神経膠腫が、罹患したグリア細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１Ｃの発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０１２２】
３.３  神経膠腫が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を特徴とする、上記の方法のいずれか。
【０１２３】
３.４  神経膠腫がアストロサイトーマ（例えば、多形神経膠芽腫）である、いずれかの上記の方法。
【０１２４】
３.５  状態が多形神経膠芽腫である、いずれかの上記の方法。
【０１２５】
３.６  患者に抗腫瘍剤を投与する工程をさらに含む、いずれかの上記の方法。
【０１２６】
３.７  抗腫瘍剤がＰＤＥ１阻害剤と同時に（concurrently）投与される、方法３.６。
【０１２７】
３.８  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与する前に投与される、方法３.６。
【０１２８】
３.９  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与した後に投与される、方法３.６。
【０１２９】
３.１０  ＰＤＥ１阻害剤が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法とともに投与される、上記の方法のいずれか。
【０１３０】
３.１１  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法と同時に（concurrently）投与される、上記の方法のいずれか。
【０１３１】
３.１２  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の前に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１３２】
３.１３  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の後に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１３３】
３.１４  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法および／または免疫療法と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１３４】
３.１５  ＰＤＥ１阻害剤の投与が、神経膠腫において、アポトーシス細胞死、遊走の阻害、転移の阻害、および／または炎症の減少のうちの１つ以上を誘導するのに効果的である、上記の方法のいずれか。
【０１３５】
３.１６  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法、免疫療法、コルチコステロイド、および／または抗ヒスタミン剤と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１３６】
３.１７  神経膠腫がＰＤＥによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１３７】
３.１８  神経膠腫がＰＤＥ１によって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１３８】
３.１９  神経膠腫がＰＤＥ１Ｃによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１３９】
３.２０  神経膠腫がカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失を特徴としている、上記の方法のいずれか。
【０１４０】
３.２１  神経膠腫細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、上記の方法のいずれか。
【０１４１】
本開示は、さらに、神経膠腫の治療方法において用いるためのＰＤＥ１阻害剤、例えば方法３以降のいずれかにおいて用いるためのＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【０１４２】
本開示は、さらに、神経膠腫の治療方法において用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用、例えば方法３以降のいずれかにおいて用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用を提供する。
【０１４３】
本発明は、さらに、方法４以降のいずれかにおいて用いるための、ＰＤＥ１阻害剤、例えば式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示される化合物のいずれかを含む医薬組成物を提供する。
【０１４４】
別の実施態様では、本願は、患者における癌の治療方法であって、癌細胞が上昇したＰＤＥ１活性または発現を有しており、例えば癌細胞が癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示しており、該治療を必要とする対象体に、該患者にＰＤＥ１阻害剤（すなわち、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤）の有効量を単独でまたは化学療法、遺伝子療法および／または免疫療法と組み合わせて投与することを含む、方法（方法４）を提供する。
【０１４５】
４.１  癌性細胞または腫瘍性細胞の増殖を阻害するためである、方法４。
【０１４６】
４.２  癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１の発現または活性を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０１４７】
４.３  癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１Ｃの発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０１４８】
４.４  癌細胞が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示す、上記の方法のいずれか。
【０１４９】
４.５  状態が腫瘍である、いずれかの上記の方法。
【０１５０】
４.６  腫瘍が、聴神経腫瘍、アストロサイトーマ、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合膠腫、視神経膠腫）、上衣下腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、シュワン細胞腫、腺腫（例えば、好塩基性腺腫、好酸性腺腫、嫌色素性腺腫、副甲状腺腺腫、膵島腺腫、線維腺腫）、類線維腫（線維性組織球腫）、線維腫、血管腫、脂肪腫（例えば、血管脂肪腫、骨髄脂肪腫、線維脂肪腫、紡錘細胞脂肪腫、褐色脂肪腫、非定型脂肪腫）、粘液腫、骨腫、前白血病、横紋筋腫（rhadomyoma）、乳頭腫、脂漏性角化症、皮膚付属器腫瘍、肝腺腫、腎尿細管腺腫、胆管腺腫、移行細胞乳頭腫、胞状奇胎、神経節神経腫、メニンゴーマ（meningoma）、神経鞘腫、神経線維腫、Ｃ細胞過形成、褐色細胞腫、インスリノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ケモデクトーマ、傍神経節腫、母斑、光線角化症、子宮頚部異形成、化生（例えば、肺の化生）、白斑症、血管腫、リンパ管腫、カルシノーマ（例えば、有棘細胞癌、類表皮癌、腺癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、腎細胞癌、胆管細胞癌、移行上皮癌、胚性細胞癌（embryonal cell carcinoma）、副甲状腺癌、甲状腺髄様癌、気管支カルチノイド、燕麦細胞癌、膵島細胞癌、悪性カルチノイド,）、肉腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、血管肉腫（hemangiosarcoma）、血管肉腫（angiosarcoma）、リンパ管肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、神経線維肉腫）、芽細胞腫（例えば、髄芽腫および神経膠芽腫、脳腫瘍の類型（types of brain tumor）、網膜芽細胞腫、眼の網膜の腫瘍、骨芽細胞腫、骨腫瘍、神経芽腫）、胚細胞腫瘍、中皮腫、悪性皮膚付属器腫瘍、グラヴィッツ腫瘍（hypernephroma）、精上皮腫、神経膠腫、悪性髄膜腫、悪性シュワン細胞腫（malignant shwannoma）、悪性褐色細胞腫、悪性傍神経節腫、黒色腫、メルケル細胞新生物（mercell cell neoplasm）、葉状嚢肉腫（cystosarcoma phylloides）、またはウィルムス腫瘍のうちの１つ以上から選択される。いずれかの上記の方法
【０１５１】
４.７  状態が、神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病、または神経芽腫である、いずれかの上記の方法。
【０１５２】
４.８  状態が、神経膠腫（例えば、上衣腫、アストロサイトーマ、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、または混合膠腫、例えば、オリゴアストロサイトーマ）である、いずれかの上記の方法。
【０１５３】
４.９  神経膠腫がアストロサイトーマ（例えば、多形神経膠芽腫）である、方法４.８。
【０１５４】
４.１０  状態が多形神経膠芽腫である、いずれかの上記の方法。
【０１５５】
４.１１  状態が癌である、方法４〜４.３のいずれか。
【０１５６】
４.１２  状態が白血病である、方法４〜４.３または４.１１のいずれか。
【０１５７】
４.１３  白血病がリンパ性白血病（lymphoctic leukemia）または骨髄性白血病である、方法４.１２。
【０１５８】
４.１４  患者に抗腫瘍剤を投与する工程をさらに含む、いずれかの上記の方法。
【０１５９】
４.１５  抗腫瘍剤がＰＤＥ１阻害剤と同時に（concurrently）投与される、方法４.１４。
【０１６０】
４.１６  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与する前に投与される、方法４.１４。
【０１６１】
４.１７  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与した後に投与される、方法４.１４。
【０１６２】
４.１８  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法とともに投与される、上記の方法のいずれか。
【０１６３】
４.１９  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法と同時に（concurrently）投与される、上記の方法のいずれか。
【０１６４】
４.２０  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の前に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１６５】
４.２１  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の後に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１６６】
４.２２  ＰＤＥ１阻害剤の投与が、癌細胞において、アポトーシス細胞死、遊走の阻害、転移の阻害、および／または炎症の減少のうちの１つ以上を誘導するのに効果的である、上記の方法のいずれか。
【０１６７】
４.２３  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法、免疫療法、コルチコステロイド、および／または抗ヒスタミン剤と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１６８】
４.２４  癌または腫瘍がＰＤＥによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１６９】
４.２５  癌または腫瘍がＰＤＥ１によって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１７０】
４.２６  癌または腫瘍がＰＤＥ１Ｃによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０１７１】
４.２７  癌がカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失を特徴としている、上記の方法のいずれか。
【０１７２】
４.２８  癌細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、上記の方法のいずれか。
【０１７３】
本開示は、さらに、患者における癌の治療方法に用いるためのＰＤＥ１阻害剤であって、癌細胞が上昇したＰＤＥ１活性または発現を有しており、例えば癌細胞が癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示している、ＰＤＥ１阻害剤、例えば方法４以降のいずれかにおいて用いるためのＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【０１７４】
本開示は、さらに、患者における癌の治療方法において用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用であって、癌細胞が上昇したＰＤＥ１活性または発現を有しており、例えば癌細胞が癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、該酵素を構成的活性型にするカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示している使用、例えば方法４以降のいずれかにおいて用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用を提供する。
【０１７５】
本発明は、さらに、方法４以降のいずれかにおいて用いるための、ＰＤＥ１阻害剤、例えば式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示される化合物のいずれかを含む医薬組成物を提供する。
【０１７６】
別の実施態様では、本願は、サイトカイン放出症候群を阻害する方法であって、該阻害を必要とする患者にＰＤＥ１阻害剤の有効量を投与することを含む方法であり、例えば該患者が癌に罹患していて化学療法、免疫療法、遺伝子療法および／または抗体療法（癌抗原に対する抗体および／または免疫チェックポイント標的に対する抗体を含む）のうちの１つ以上を受けており、該方法が、該患者への副腎皮質ステロイド薬および/抗ヒスタミン薬の投与をさらに含んでもよい、方法（方法５）を提供する。
【０１７７】
５.１  患者が癌に罹患している、方法５。
【０１７８】
５.２  癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１の発現または活性を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０１７９】
５.３  癌性細胞または腫瘍性細胞が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１Ｃの発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０１８０】
５.４  癌細胞が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を示している、方法５.１〜５.３のいずれか。
【０１８１】
５.５  患者が腫瘍に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８２】
５.６  患者が、聴神経腫瘍、アストロサイトーマ、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合膠腫、視神経膠腫）、上衣下腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、シュワン細胞腫、腺腫（例えば、好塩基性腺腫、好酸性腺腫、嫌色素性腺腫、副甲状腺腺腫、膵島腺腫、線維腺腫）、類線維腫（線維性組織球腫）、線維腫、血管腫、脂肪腫（例えば、血管脂肪腫、骨髄脂肪腫、線維脂肪腫、紡錘細胞脂肪腫、褐色脂肪腫、非定型脂肪腫）、粘液腫、骨腫、前白血病、横紋筋腫（rhadomyoma）、乳頭腫、脂漏性角化症、皮膚付属器腫瘍、肝腺腫、腎尿細管腺腫、胆管腺腫、移行細胞乳頭腫、胞状奇胎、神経節神経腫、メニンゴーマ（meningoma）、神経鞘腫、神経線維腫、Ｃ細胞過形成、褐色細胞腫、インスリノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ケモデクトーマ、傍神経節腫、母斑、光線角化症、子宮頚部異形成、化生（例えば、肺の化生）、白斑症、血管腫、リンパ管腫、カルシノーマ（例えば、有棘細胞癌、類表皮癌、腺癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、腎細胞癌、胆管細胞癌、移行上皮癌、胚性細胞癌（embryonal cell carcinoma）、副甲状腺癌、甲状腺髄様癌、気管支カルチノイド、燕麦細胞癌、膵島細胞癌、悪性カルチノイド,）、肉腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、血管肉腫（hemangiosarcoma）、血管肉腫（angiosarcoma）、リンパ管肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、神経線維肉腫）、芽細胞腫（例えば、髄芽腫および神経膠芽腫、脳腫瘍の類型（types of brain tumor）、網膜芽細胞腫、眼の網膜の腫瘍、骨芽細胞腫、骨腫瘍、神経芽腫）、胚細胞腫瘍、中皮腫、悪性皮膚付属器腫瘍、グラヴィッツ腫瘍（hypernephroma）、精上皮腫、神経膠腫、悪性髄膜腫、悪性シュワン細胞腫（malignant shwannoma）、悪性褐色細胞腫、悪性傍神経節腫、黒色腫、メルケル細胞新生物（mercell cell neoplasm）、葉状嚢肉腫（cystosarcoma phylloides）、またはウィルムス腫瘍のうちの１つ以上から選択される腫瘍に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８３】
５.７  患者が、神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病、または神経芽腫に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８４】
５.８  患者が、神経膠腫（例えば上衣腫、アストロサイトーマ、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、または混合膠腫、例えばオリゴアストロサイトーマ）に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８５】
５.９  患者がアストロサイトーマ（例えば、多形神経膠芽腫）に罹患している、方法５.８。
【０１８６】
５.１０  患者が多形神経膠芽腫に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８７】
５.１１  患者が癌に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８８】
５.１２  患者が白血病に罹患している、いずれかの上記の方法。
【０１８９】
５.１３  白血病がリンパ性白血病（lymphoctic leukemia）または骨髄性白血病である、方法５.１２。
【０１９０】
５.１４  患者に抗腫瘍剤を投与する工程をさらに含む、いずれかの上記の方法。
【０１９１】
５.１５  抗腫瘍剤がＰＤＥ１阻害剤と同時に（concurrently）投与される、方法５.１４。
【０１９２】
５.１６  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与する前に投与される、方法５.１４。
【０１９３】
５.１７  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与した後に投与される、方法５.１４。
【０１９４】
５.１８  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法とともに投与される、上記の方法のいずれか。
【０１９５】
５.１９  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法と同時に（concurrently）投与される、上記の方法のいずれか。
【０１９６】
５.２０  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の前に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１９７】
５.２１  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の後に投与される、上記の方法のいずれか。
【０１９８】
５.２２  ＰＤＥ１阻害剤の投与が、癌細胞においてアポトーシス細胞死、遊走の阻害、転移の阻害、および/または炎症の減少のうちの１つ以上を誘導するのに効果的である、上記の方法のいずれか。
【０１９９】
５.２３  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法、免疫療法、コルチコステロイド、および／または抗ヒスタミン剤と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０２００】
５.２４  癌または腫瘍がＰＤＥによって媒介されている、方法５.１〜５.２３のいずれか。
【０２０１】
５.２５  癌または腫瘍がＰＤＥ１によって媒介されている、方法５.１〜５.２４のいずれか。
【０２０２】
５.２６  癌または腫瘍がＰＤＥ１Ｃによって媒介されている、方法５.１〜５.２５のいずれか。
【０２０３】
５.２７  癌または腫瘍がカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失を特徴としている、方法５.１〜５.２６のいずれか。
【０２０４】
５.２８  癌性細胞または腫瘍性細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、方法５.１〜５.２６のいずれか。
【０２０５】
本開示は、さらに、サイトカイン放出症候群を阻害する方法において用いるためのＰＤＥ１阻害剤、例えば方法５以降のいずれかにおいて用いるためのＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【０２０６】
本開示は、また、サイトカイン放出症候群を阻害する方法において用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用、例えば方法５以降のいずれかにおいて用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用を提供する。
【０２０７】
本発明は、さらに、方法５以降のいずれかにおいて用いるための、ＰＤＥ１阻害剤、例えば式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示される化合物のいずれかを含む、医薬組成物を提供する。
【０２０８】
別の実施態様では、本願は、構成的活性型ＰＤＥ１を特徴とする癌または腫瘍の治療方法であって、該治療を必要とする患者にＰＤＥ１阻害剤（すなわち、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤）の有効量を投与することを含む、方法（方法６）を提供する。
【０２０９】
６.１  癌細胞または腫瘍細胞内のＰＤＥ１がＣａ２＋／カルモジュリン媒介に依存しないようになっている、方法６。
【０２１０】
６.２  ＰＤＥ１がＰＤＥ１Ａである、方法６または６.１。
【０２１１】
６.３  ＰＤＥ１がＰＤＥ１Ｂである、方法６または６.１。
【０２１２】
６.４  ＰＤＥ１がＰＤＥ１Ｃである、方法６または６.１。
【０２１３】
６.５  癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１の発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０２１４】
６.６  癌または腫瘍が、癌性細胞または腫瘍性細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１Ｃの発現を特徴とする、いずれかの上記の方法。
【０２１５】
６.７  癌または腫瘍が、癌細胞と同じ組織型の正常細胞と比較して増加したＰＤＥ１  ＲＮＡ発現、ＤＮＡコピー数、ＰＤＥ１結合（例えば、ＰＤＥ１阻害剤分子のＰＥＴまたは放射性同位体保持）、またはＰＤＥ１酵素活性（例えば、酵素アッセイで測定されるか、または癌細胞または癌細胞の細胞内ドメイン、例えば微小管ドメインにおける低レベルのｃＡＭＰに反映される）のうちの１つ以上を特徴とする、上記の方法のいずれか。
【０２１６】
６.８  状態が腫瘍である、いずれかの上記の方法。
【０２１７】
６.９  腫瘍が、聴神経腫瘍、アストロサイトーマ、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合膠腫、視神経膠腫）、上衣下腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、シュワン細胞腫、腺腫（例えば、好塩基性腺腫、好酸性腺腫、嫌色素性腺腫、副甲状腺腺腫、膵島腺腫、線維腺腫）、類線維腫（線維性組織球腫）、線維腫、血管腫、脂肪腫（例えば、血管脂肪腫、骨髄脂肪腫、線維脂肪腫、紡錘細胞脂肪腫、褐色脂肪腫、非定型脂肪腫）、粘液腫、骨腫、前白血病、横紋筋腫（rhadomyoma）、乳頭腫、脂漏性角化症、皮膚付属器腫瘍、肝腺腫、腎尿細管腺腫、胆管腺腫、移行細胞乳頭腫、胞状奇胎、神経節神経腫、メニンゴーマ（meningoma）、神経鞘腫、神経線維腫、Ｃ細胞過形成、褐色細胞腫、インスリノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ケモデクトーマ、傍神経節腫、母斑、光線角化症、子宮頚部異形成、化生（例えば、肺の化生）、白斑症、血管腫、リンパ管腫、カルシノーマ（例えば、有棘細胞癌、類表皮癌、腺癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、腎細胞癌、胆管細胞癌、移行上皮癌、胚性細胞癌（embryonal cell carcinoma）、副甲状腺癌、甲状腺髄様癌、気管支カルチノイド、燕麦細胞癌、膵島細胞癌、悪性カルチノイド,）、肉腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、血管肉腫（hemangiosarcoma）、血管肉腫（angiosarcoma）、リンパ管肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、神経線維肉腫）、芽細胞腫（例えば、髄芽腫および神経膠芽腫、脳腫瘍の類型（types of brain tumor）、網膜芽細胞腫、眼の網膜の腫瘍、骨芽細胞腫、骨腫瘍、神経芽腫）、胚細胞腫瘍、中皮腫、悪性皮膚付属器腫瘍、グラヴィッツ腫瘍（hypernephroma）、精上皮腫、神経膠腫、悪性髄膜腫、悪性シュワン細胞腫（malignant shwannoma）、悪性褐色細胞腫、悪性傍神経節腫、黒色腫、メルケル細胞新生物（mercell cell neoplasm）、葉状嚢肉腫（cystosarcoma phylloides）、またはウィルムス腫瘍のうちの１つ以上から選択される、いずれかの上記の方法。
【０２１８】
６.１０  状態が、神経膠腫、骨肉腫、黒色腫、白血病、または神経芽腫である、いずれかの上記の方法。
【０２１９】
６.１１  状態が、神経膠腫（例えば、上衣腫、アストロサイトーマ、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、または混合膠腫、例えば、オリゴアストロサイトーマ）である、いずれかの上記の方法。
【０２２０】
６.１２  神経膠腫がアストロサイトーマ（例えば、多形神経膠芽腫）である、上記の方法。
【０２２１】
６.１３  状態が多形神経膠芽腫である、いずれかの上記の方法。
【０２２２】
６.１４  状態が、構成的活性型ＰＤＥ１（例えば、ＰＤＥ１Ｃ）の存在を特徴としている多形神経膠芽腫である、いずれかの上記の方法。
【０２２３】
６.１５  状態が癌である、方法６〜６.７のいずれか。
【０２２４】
６.１６  状態が白血病である、方法６〜６.７または６.１５のいずれか。
【０２２５】
６.１７  白血病がリンパ性白血病（lymphoctic leukemia）または骨髄性白血病である、上記の方法。
【０２２６】
６.１８  患者に抗腫瘍剤を投与する工程をさらに含む、いずれかの上記の方法。
【０２２７】
６.１９  抗腫瘍剤がＰＤＥ１阻害剤と同時に（concurrently）投与される、方法６.１８。
【０２２８】
６.２０  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与する前に投与される、方法６.１８。
【０２２９】
６.２１  抗腫瘍剤が、ＰＤＥ１阻害剤を投与した後に投与される、方法６.１８。
【０２３０】
６.２２  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法とともに投与される、上記の方法のいずれか。
【０２３１】
６.２３  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法と同時に（concurrently）投与される、上記の方法のいずれか。
【０２３２】
６.２４  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の前に投与される、上記の方法のいずれか。
【０２３３】
６.２５  ＰＤＥ１阻害剤（inhitor）が、場合によっては抗腫瘍剤も、放射線療法または化学療法の後に投与される、上記の方法のいずれか。
【０２３４】
６.２６  ＰＤＥ１阻害剤が、抗腫瘍剤、化学療法、遺伝子療法および／または免疫療法と一緒に投与される、上記の方法のいずれか。
【０２３５】
６.２７  癌または腫瘍がＰＤＥによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０２３６】
６.２８  癌または腫瘍がＰＤＥ１によって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０２３７】
６.２９  癌または腫瘍がＰＤＥ１Ｃによって媒介されている、上記の方法のいずれか。
【０２３８】
６.３０  癌または腫瘍がカルシウム／カルモジュリンコントロールの喪失を特徴としている、上記の方法のいずれか。
【０２３９】
６.３１  癌性細胞または腫瘍性細胞内のＰＤＥ１酵素が、カルシウム／カルモジュリンによるＰＤＥ１活性のコントロールを変化させる構造変化を受けている、上記の方法のいずれか。
【０２４０】
本開示は、さらに、構成的活性型ＰＤＥ１を特徴と癌または腫瘍の治療方法において用いるためのＰＤＥ１阻害剤、例えば方法６以降のいずれかにおいて用いるためのＰＤＥ１阻害剤を提供する。
【０２４１】
本開示は、さらに、構成的活性型ＰＤＥ１を特徴とする癌または腫瘍の治療方法において用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用、例えば方法６以降のいずれかにおいて用いるための医薬の製造におけるＰＤＥ１阻害剤の使用を提供する。
【０２４２】
本発明は、さらに、方法６以降のいずれかにおいて用いるための、ＰＤＥ１阻害剤、例えば式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶで示される化合物のいずれかを含む、医薬組成物を提供する。
【０２４３】
いくつかの実施態様では、医薬組成物は、１つ以上の抗腫瘍薬、例えば様々なタイプの癌および／または腫瘍の治療または除去に効果があることが知られている薬物と組み合わせて投与される。抗腫瘍薬の非限定的な例は、アベマシクリブ、酢酸アビラテロン、アビトレキセート（Abitrexate）（メトトレキサート）、アブラキサン（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ−ＰＣ、ＡＣ、アカラブルチニブ、ＡＣ−Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、アド−トラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アファチニブ二マレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）、アキンゼオ（Akynzeo）（ネツピタント・パロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（Aldara）（イミキモド）、アルデスロイキン、アレセンサ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アリコパ（Aliqopa）（コパンリシブ塩酸塩）、注射用アルケラン（メルファラン塩酸塩）、アルケラン錠（メルファラン）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アルンブリグ（Alunbrig）（ブリガチニブ）、アンボクロリン（Ambochlorin）（クロラムブシル）、アンボクロリン（Amboclorin）（クロラムブシル）、アミホスチン、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア、パミドロン酸二ナトリウム）、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、亜ヒ酸、アーゼラ（オファツムマブ）、黒脚病菌由来アスパラギナーゼ（Asparaginase Erwinia chrysanthemi）、アテゾリズマブ、アバスチン（ベバシズマブ）、アベルマブ、アキシカブタゲンシロロイセル、アキシチニブ、アザシチジン、バベンチオ（アベルマブ）、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセナム（Becenum）（カルムスチン）、ベレオダック（Beleodaq）（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベスポンサ（イノツズマブオゾガマイシン）、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ビーリンサイト（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリガチニブ、ＢｕＭｅｌ、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カボメティクス（カボザンチニブＳ−リンゴ酸）、カボザンチニブＳ−リンゴ酸、ＣＡＦ、カルケンス（Calquence）（アカラブルチニブ）、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプサール（Camptosar）（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カラック（Carac）（フルオロウラシル−−局所）、カルボプラチン、カルボプラチン−タキソール、カルフィルゾミブ、Ｃarmubris（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチンインプラント、カソデックス（ビカルタミド）、ＣＥＭ、セリチニブ、セルビジン（Cerubidine）（ダウノルビシン塩酸塩）、サーバリックス（遺伝子組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、ＣＥＶ、クロラムブシル、クロラムブシル−プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、クラフェン（Clafen）（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（Clofarex）（クロファラビン）、クロラール（Clolar）（クロファラビン）、ＳＭＦ、コビメチニブ、コメトリック（Cometriq）（カボザンチニブＳ−リンゴ酸）、コパンリシブ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、コスメゲン（ダチノマイシン）、コテリック（Cotellic）（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、サイホス（Cyfos）（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム、サイトサール−Ｕ（シタラビン）、シトキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコジェン（Dacogen）（デシタビン）、ダチノマイシン、ダラツムマブ、ダラザレックス（ダラツムマブ）、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、デファイテリオ（デフィブロチドナトリウム）、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デポサイト（シタラビンリポソーム）、デキサメタゾン、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ−ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、デュルバルマブ、エフデックス（Efudex）（フルオロウラシル−−局所）、エリテク（Elitek）（ラスブリカーゼ）、エレンセ（Ellence）（エピルビシン塩酸塩）、エロツズマブ、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、イメンド（アプレピタント）、エムプリシティ（エロツズマブ）、エナシデニブメシル酸塩、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、エリブリンメシル酸塩、エリベッジ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（Erwinaze）（黒脚病菌由来アスパラギナーゼ（Asparaginase Erwinia chrysanthemi））、エチオール（Ethyol）（アミホスチン）、エトポホス（Etopophos）（エトポシドリン酸塩）、エトポシド、エトポシドリン酸塩、エバセト（Evacet）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エボメラ（Evomela）（メルファラン塩酸塩）、エキセメスタン、５−ＦＵ（フルオロウラシル注射剤）、５−ＦＵ（フルオロウラシル−−局所）、フェアストン（トレミフェン）、ファリーダック（パノビノスタット）、フェソロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（リン酸フルダラビン）、リン酸フルダラビン、フルオロプレックス（Fluoroplex）（フルオロウラシル−−局所）、フルオロウラシル注射剤、フルオロウラシル−局所、フルタミド、フォレックス（Folex）（メトトレキサート）、フォレックスＰＦＳ（Folex PFS）（メトトレキサート）、フォルフィリ、フォルフィリ−ベバシズマブ、フォルフィリ−セツキシマブ、フォルフィリノックス、フォルフォックス、フォロチン（プララトレキサート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（遺伝子組換えＨＰＶ四価ワクチン）、ガーダシル９（遺伝子組換えＨＰＶ九価ワクチン）、ガザイバ（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタ���ン−シスプラチン、ゲムシタビン−オキサリプラチン、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、ジェムザール（ゲムシタビン塩酸塩）、ジロトリフ（Gilotrif）（アファチニブ二マレイン酸塩）、グリベック（イマチニブメシル酸塩）、ギリアデル（カルムスチンインプラント）、ギリアデルウエハ剤（カルムスチンインプラント）、グルカルピダーゼ、ゴセレリン酢酸塩、ハラヴェン（エリブリンメシル酸塩）、ヘマンジオル（Hemangeol）（プロプラノロール塩酸塩）、ハーセプチン（トラツズマブ）、遺伝子組換えＨＰＶ二価ワクチン、遺伝子遺伝子組換えＨＰＶ九価ワクチン、遺伝子組換えＨＰＶ四価ワクチン、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、ハイドレア（ヒドロキシ尿素）、ヒドロキシ尿素、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブ・チウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、イドヒファ（Idhifa）（エナシデニブメシル酸塩）、イフェックス（Ifex）（イホスファミド）、イホスファミド、イホスファミダム（Ifosfamidum）（イホスファミド）、ＩＬ−２（アルデスロイキン）、イマチニブメシル酸塩、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミフィンジ（デュルバルマブ）、イミキモド、イムリジック（Imlygic）（タリモジーン・ラハーパレプベック）、インライタ（アキシチニブ）、イノツズマブオゾガマイシン、遺伝子組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、インターロイキン−２（アルデスロイキン）、イントロンＡ（Intron A）（遺伝子組換えインターフェロンアルファ−２ｂ）、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イリノテカン塩酸塩リポソーム、イストダックス（ロミデプシン）、イクサベピロン、クエン酸イクサゾミブ、イグゼンプラ（イクサベピロン）、ジャカフィ（Jakafi）（ルキソリチニブリン酸塩）、ＪＥＢ、ジェブタナ（カバジタキセル）、カドサイラ（アド−トラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（Keoxifene）（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、キスカリ（Kisqali）（リボシクリブ）、キムリア（チサゲンレクルユーセル）、カイプロリス（カルフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、ラパチニブ二トシル酸塩、ラルトルボ（Lartruvo）（オララツマブ）、レナリドミド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、リュープロリド酢酸塩、ロイスタチン（クラドリビン）、レブラン（Levulan）（アミノレブリン酸）、リンフォリジン（Linfolizin）（クロラムブシル）、リポドックス（LipoDox）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ロムスチン、ロンサーフ（トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩）、リュープロン（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポー（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポー−Ｐｅｄ（リュープロリド酢酸塩）、リムパーザ（オラパリブ）、マルキボ（Marqibo）（ビンクリスチン硫酸塩リポソーム）、マチュラン（Matulane）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メゲストロール酢酸塩、メキニスト（トラメチニブ）��メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（Mesnex）（メスナ）、メタゾラストン（Methazolastone）（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メチルナルトレキソン臭化物、メキサート（Mexate）（メトトレキサート）、メキサート−ＡＱ（Mexate-AQ）（メトトレキサート）、ミドスタウリン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、マイトザイトレックス（Mitozytrex）（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（プレリキサホル）、ムスタルゲン（Mustargen）（メクロレタミン塩酸塩）、ムタマイシン（Mutamycin）（マイトマイシンＣ）、ミレラン（ブスルファン）、マイロサール（Mylosar）（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（ビノレルビン酒石酸塩）、ネシツムマブ、ネララビン、ネオサール（Neosar）（シクロホスファミド）、ネラチニブマレイン酸塩、ネルリンクス（Nerlynx）（ネラチニブマレイン酸塩）、ネツピタント・パロノセトロン塩酸塩、ニューラスタ（Neulasta）（ペグフィルグラスチム）、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（ソラフェニブトシル酸塩）、ニランドロン（Nilandron）（ニルタミド）、ニロチニブ、ニルタミド、ニンラーロ（クエン酸イクサゾミブ）、ニラパリブトシル酸塩一水和物、ニボルマブ、ノルバデックス（タモキシフェンクエン酸塩）、エヌプレート（Nplate）（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、オドムゾ（Odomzo）（ソニデギブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシン・メペサクシネート、オンカスパール（Oncaspar）（ペグアスパルガーゼ（Pegaspagase））、オンダンセトロン塩酸塩、オニバイド（Onivyde）（イリノテカン塩酸塩リポソーム）、オンタック（Ontak）（デニロイキンジフチトクス）、オプジーボ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩およびネツピタント、
パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（Paraplat）（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ＰＥＧ−イントロン（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、パージェタ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（Platinol）（シスプラチン）、プラチノール−ＡＱ（Platinol-AQ）（シスプラチン）、プレリキサホル、ポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、ポートラーザ（ネシツムマブ）、プララトレキサート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（Proleukin）（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロプラノロール塩酸塩、プロベンジ（シプロイセルＴ）、プリネトール（Purinethol）（メルカプトプリン）、プリキサン（Purixan）（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、遺伝子組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、遺伝子組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）九価ワクチン、遺伝子組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、遺伝子組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、レゴラフェニブ、レリストール（メチルナルトレキソン臭化物）、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、レブラミド（レナリドミド）、リウマトレックス（メトトレキサート）、リボシクリブ、Ｒ−ＩＣＥ、リツキサン（リツキシマブ）、リツキサン・ハイセラ（Rituxan Hycela）（リツキシマブおよびヒトヒアルロニダーゼ）、リツキシマブ、リツキシマブおよびヒトヒアルロニダーゼ、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（Rubidomycin）（ダウノルビシン塩酸塩）、ルブラカ（Rubraca）（ルカパリブカンシル酸塩（Rucaparib Camsylate））、ルカパリブカンシル酸塩（Rucaparib Camsylate）、ルキソリチニブリン酸塩、ライダプト（Rydapt）（ミドスタウリン）、スクレロゾール胸膜内エアゾール（Sclerosol Intrapleural Aerosol）（タルク）、シルツキシマブ、シプロイセルＴ、ソマチュリンデポー（ランレオチド酢酸塩）、ソニデギブ、ソラフェニブトシル酸塩、スプリセル（ダサチニブ）、スタンフォードＶ、滅菌タルク粉末（Sterile Talc Powder）（タルク）、ステリタルク（Steritalc）（タルク）、スチバーガ（レゴラフェニブ）、スニチニブリンゴ酸塩、スーテント（スニチニブリンゴ酸塩）、シラトロン（Sylatron）（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）、シルバント（Sylvant）（シルツキシマブ）、シンリボ（Synribo）（オマセタキシン・メペサクシネート）、タブロイド（Tabloid）（チオグアニン）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タグリッソ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジーン・ラハーパレプベック、タモキシフェンクエン酸塩、タラビンＰＦＳ（Tarabine PFS）（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テセントリク（アテゾリズマブ）、テモダール（Temodar）（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、サロミド（Thalomid）（サリドマイド）、チオグアニン、チオテバ、チサゲンレクルユーセル、トーラック（Tolak）（フルオロウラシル−−局所）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トーリセル（テムシロリムス）、トテクト（Totect）（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラツズマブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩、トリセノックス（亜ヒ酸）、タイケルブ（ラパチニブ二トシル酸塩）、ユニツキシン（Unituxin）（ジヌツキシマブ）、ウリジントリアセテート、ＶＡＣ、バルルビシン、バルスター（Valstar）（バルルビシン）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、バルビ（Varubi）（ロラピタント塩酸塩）、ベクティビックス（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、ベルバン（Velban）（ビンブラスチン硫酸塩）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（Velsar）（ビンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、ベネクレクスタ（ベネトクラクス）、ベネトクラクス、ベージニオ（アベマシクリブ）、ビアデュール（Viadur）（リュープロリド酢酸塩）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカサールＰＦＳ（Vincasar PFS）（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム、ビノレルビン酒石酸塩、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ビストガード（Vistogard）（ウリジントリアセテート）、ボラキサーゼ（Voraxaze）（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ塩酸塩）、ヴィキセオス（Vyxeos）（ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム）、ウェルコボリン（Wellcovorin）（ロイコボリンカルシウム）、ザーコリ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、イクスゲバ（Xgeva）（デノスマブ）、ゾーフィゴ（二塩化ラジウム２２３）、イクスタンジ（エンザルタミド）、ヤーボイ（イピリムマブ）、イエスカルタ（アキシカブタゲンシロロイセル）、ヨンデリス（トラベクテジン）、ザルトラップ（Ｚｉｖ−アフリベルセプト）、ザルキシオ（Zarxio）（フィルグラスチム）、ゼジューラ（Zejula）（ニラパリブトシル酸塩一水和物）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ゼヴァリン（イブリツモマブ・チウキセタン）、ジンカード（Zinecard）（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾフラン（オンダンセトロン塩酸塩）、ゾラデックス（ゴセレリン酢酸塩）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（Zydelig）（イデラリシブ）、ジカディア（セリチニブ）、ザイティガ（酢酸アビラテロン）である。
【０２４４】
本明細書で用いられる場合、用語「抗腫瘍剤」は、癌または腫瘍の形成または増殖を防止または阻害するのに有効な化学薬剤または薬物をいうと解される。本明細書で論じられる抗腫瘍剤は、アルキル化剤、抗代謝物、天然物、ホルモン、および／または抗体を包含し得る。腫瘍または癌の治療は、体内の癌性細胞または腫瘍性細胞の増殖、遊走および／または浸潤を制限すること、または該癌または腫瘍に関連する症状を制限することを含み得る。本明細書で用いられる場合、抗腫瘍剤は、抗癌剤を包含し、そうでなければ抗癌剤と同義であると解される。
【０２４５】
本開示化合物の製造方法
【０２４６】
本開示のＰＤＥ１阻害剤およびそれらの薬学的に許容される塩は、米国特許第８,２７３,７５０号、米国特許出願公開第２００６／０１７３８７８号、米国特許第８,２７３,７５１号、米国特許出願公開第２０１０／０２７３７５３号、米国特許第８,６９７,７１０号、米国特許第８,６６４,２０７号、米国特許第８,６３３,１８０号、米国特許第８,５３６,１５９号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０１３号、米国特許出願公開第２０１１／０２８１８３２号、米国特許出願公開第２０１３／００８５１２３号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５６５号、米国特許出願公開第２０１３／０３３８１２４号、米国特許出願公開第２０１３／０３３１３６３号、国際公開第２０１２／１７１０１６号および国際公開第２０１３／１９２５５６号に記載され、例示されているような方法を使用して、また、それらと同様の方法によって、および化学技術分野で知られている方法によって、製造することができる。このような方法としては、以下に記載の方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらのプロセスの出発物質は、市販されていない場合には、既知の化合物の合成方法と同様または類似の技術を用いる化学技術から選択される手順によって製造され得る。
【０２４７】
様々なＰＤＥ１阻害剤およびその出発物質は、米国特許出願公開第２００８−０１８８４９２号（Ａ１）、米国特許出願公開第２０１０−０１７３８７８号（Ａ１）、米国特許出願公開第２０１０−０２７３７５４号（Ａ１）、米国特許出願公開第２０１０−０２７３７５３号（Ａ１）、国際公開第２０１０／０６５１５３号、国際公開第２０１０／０６５１５１号、国際公開第２０１０／０６５１５１号、国際公開第２０１０／０６５１４９号、国際公開第２０１０／０６５１４７号、国際公開第２０１０／０６５１５２号、国際公開第２０１１／１５３１２９号、国際公開第２０１１／１３３２２４号、国際公開第２０１１／１５３１３５号、国際公開第２０１１／１５３１３６号、国際公開第２０１１／１５３１３８号に記載されている方法を使用して製造することができる。本明細書で引用されている参考文献はすべて、出典明示によりその全体として本明細書の一部とする。
【０２４８】
さらなるＰＤＥ１阻害剤および関連方法は、米国仮出願第６２／８３３,４８１号（出典明示によりその全体として本明細書の一部とする）に開示されている。さらなる関連ＰＤＥ１阻害剤および関連方法は、国際公開第２０１８／０４９４１７号（出典明示によりその全体として本明細書の一部とする）に開示されている。
【０２４９】
本開示化合物は、それらのエナンチオマー、ジアステレオマーおよびラセミ体、ならびにそれらの多形体、水和物、溶媒和物および複合体を包含する。本開示の範囲内のいくつかの個々の化合物は、二重結合を含み得る。本開示における二重結合の表現は、二重結合のＥ異性体およびＺ異性体の両方を含むことを意味している。さらに、本開示の範囲内のいくつかの化合物は、１個以上の不斉中心を含み得る。本開示は、光学的に純粋な立体異性体のいずれかおよび立体異性体の組合せの使用を包含する。
【０２５０】
本開示化合物が、その安定な同位体および不安定な同位体を包含することも意図されている。安定な同位体は、同じ種（すなわち、元素）の豊富な核種と比較して、１個のさらなる中性子を含有する非放射性同位体である。このような同位体を含む化合物の活性は保持され、このような化合物は非同位体類似体の薬物動態を測定するための有用性も有すると考えられる。例えば、本開示化合物のある位置の水素原子を重水素（非放射性の安定な同位体）に置き換えることができる。既知の安定な同位体の例としては、重水素、13Ｃ、15Ｎ、18Ｏが挙げられるが、これらに限定されない。別法として、同じ種（すなわち、元素）の豊富な核種と比較して、さらなる複数の中性子を含有している放射性同位体である不安定な同位体、例えば123Ｉ、131Ｉ、125Ｉ、11Ｃ、18Ｆは、Ｉ、ＣおよびＦの対応する豊富な種と置き換わってもよい。本開示の化合物の有用な同位体の別の例は、11Ｃ同位体である。これらの放射性同位体は、本開示の化合物の放射線画像処理および／または薬物動態学的研究に有用である。
【０２５１】
融点は無補正であり、（dec）は分解を示す。温度は摂氏（℃）で示される；特記しない限り、操作は、室温または周囲温度で、すなわち１８〜２５℃の範囲の温度で行われる。クロマトグラフィーとは、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを意味し；薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲルプレートで行われる。ＮＭＲデータは、内部標準としてのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対して百万分率（ｐｐｍ）で表される主要な診断用プロトンのデルタ値で示される。シグナル形状の慣用の略語が使用される。結合定数（Ｊ）は、Ｈｚで表される。質量スペクトル（ＭＳ）について、同位体分割によって複数の質量スペクトルピークが生じる分子については最小質量の主要イオンが報告される。溶媒混合物の組成は、体積百分率または体積比として示される。ＮＭＲスペクトルが複雑な場合には、診断信号のみが報告される。
【０２５２】
「治療」および「治療すること」という語は、したがって、疾患の症状の治療または寛解ならびに疾患の原因の治療を包含するものと解されるべきである。
【０２５３】
治療方法について、「有効量」という語は、特定の疾患または障害を治療するための治療有効量を包含することを意図している。
【０２５４】
「患者」という用語は、ヒトまたは非ヒト（すなわち、動物）患者を含む。特定の実施態様では、本開示は、ヒトおよび非ヒトの両方を包含する。別の実施態様では、本開示は、非ヒトを包含する。他の実施態様では、該用語はヒトを包含する。
【０２５５】
本開示で使用される場合、「含む」という用語は、制限がない（open-ended）ことを意図しており、未記載のさらなる要素または方法ステップを排除しない。
【０２５６】
本開示を実施する際に用いられる用量は、もちろん、例えば治療される特定の疾患または状態、使用される特定の本開示化合物、投与様式、および所望の療法に応じて変化する。本開示化合物は、経口、非経口、経皮、または吸入を含む好適な経路によって投与され得るが、好ましくは経口投与される。一般に、例えば上記のような疾患の治療のための、満足のいく結果は、約０.０１〜２.０ｍｇ／ｋｇのオーダーの用量で経口投与により得られることが示されている。大きな哺乳動物、例えばヒトでは、ＰＤＥ１阻害剤の両方の経口投与のための指示された一日量は、それに応じて、約０.５０〜３００ｍｇの範囲であり、好都合には１日１回投与されるか、または１日２〜４回の分割用量で投与されるか、または徐放性剤形で投与される。したがって、経口投与用の単位剤形は、例えば、薬学的に許容される希釈剤または担体と一緒に本開示化合物約０.２〜１５０または３００ｍｇ、例えば約０.２または２.０〜１０、２５、５０、７５、１００、１５０または２００ｍｇを含むことができる。
【０２５７】
特に方法１〜６以降のいずれかでの使用または投与のための、本開示化合物は、癌または腫瘍、例えば多形神経膠芽腫を治療するために必要に応じてより高い用量で投与することができる。このような方法のためのＰＤＥ１阻害剤の投与は１日に約５０ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲であり得ることが想定される。例えば、方法１〜６以降のいずれかに従って状態のためにＰＤＥ１阻害剤を投与される患者は、式Ｉ、Ｉａ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶで示されるＰＤＥ１阻害剤を１日５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜９００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜８００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜７００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜６００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜５００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜４００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、１日５０ｍｇ〜３００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜２５０ｍｇ、１日５０ｍｇ〜２００ｍｇ、１日５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、または１日５０ｍｇ〜１００ｍｇの量で投与することができる。
【０２５８】
本開示化合物は、経口、非経口（静脈内、筋肉内または皮下）または経皮を含む満足のいく経路によって投与することができるが、好ましくは経口投与される。特定に実施態様では、例えばデポー製剤での、本開示化合物は、好ましくは非経口投与され、例えば注射によって投与される。
【０２５９】
本開示化合物および本開示の医薬組成物は、１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて、特に個々の薬剤が単剤療法として使用される場合よりも低用量で使用されて、慣用の単剤療法で一般的に生じる望ましくない副作用を引き起こすことなく組み合わせた薬剤の治療活性を増強することができる。したがって、本開示化合物は、疾患を治療するのに有用な他の薬剤と、同時に（simultaneously）、別々に、連続して、または同時期に（contemporaneously）投与することができる。別の例では、副作用は、本開示化合物を遊離形態または塩形態の１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて投与する（ここで、（ｉ）第２の治療剤または（ｉｉ）本開示化合物と第２の治療剤の両方の用量が、薬剤／化合物が単剤療法として投与される場合よりも低い）ことによって軽減または最小化することができる。非限定的な例として、このようなさらなる治療剤としては、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断薬などを挙げることができる。
【０２６０】
治療的使用をいう場合の「同時に（simultaneously）」という用語は、２つ以上の活性成分を同一投与経路によって同時またはほぼ同時に投与することを意味する。
【０２６１】
治療的使用をいう場合の「別々に」という用語は、２つ以上の活性成分を異なる投与経路によって同時またはほぼ同時に投与することを意味する。
【０２６２】
本開示化合物を含む医薬組成物は、慣用の希釈剤または賦形剤、および生薬技術分野で知られている技術を使用して調製することができる。したがって、経口投与剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤などを挙げることができる。
【実施例】
【０２６３】
下記の実施例１〜４におけるデータは、F. Rowther, et al. 2016, Cyclic nucleotide phosphodiesterase‐1C (PDE1C) drives cell proliferation, migration and invasion in glioblastoma multiforme cells in vitro. Molecular Carcinogenesis. 55(3):268-79において公表されている。
【０２６４】
比較例１：  多形性神経膠芽腫組織におけるＰＤＥ１Ｃ発現
従前にLewandowicz GM, et al., Chemosensitivity in childhood brain tumours in vitro: Evidence of differential sensitivity to lomustine (CCNU) and vincristine. Eur J Cancer 2000;36:1955に記載されているように、成人多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）生検組織から短期細胞培養物を調製した。該サンプルを、３７８Ｃ非ＣＯ２インキュベーター中にて１０％ウシ胎仔血清を含むＨａｍｓ  Ｆ１０栄養混合物［Invitrogen, UK］中に維持した。正常ヒト星状細胞（ＮＨＡ）［Lonza, UK］および樹立細胞株Ｕ２５１−ＭＧも含まれていた。Ｂｒａｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  ＮＷ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂａｎｋ（Preston, UK）から、同意されたＧＢＭ生検サンプルを採取した。ＧＢＭ組織の組織学的評価をその部位で行い、ＷＨＯ２００７グレーディングスキームに従って腫瘍を分類した。全脳小脳および胎児脳梁を含む正常ヒト脳対照もまた、ＰＤＥ１Ｃ発現を決定するために用いた。
【０２６５】
ＱＩＡｍｐ  ＤＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ［Qiagen, UK］を用いてＧＢＭ培養物からＤＮＡを抽出した。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ［Qiagen, UK］を使用して、ＧＢＭ短期培養物（１０6細胞）または約５ｍｇのスナップ凍結生検組織から全ＲＮＡを抽出した。ＮａｎｏＤｒｏｐ  ＮＤ−２０００［Thermo Scientific, UK］を使用して、ＤＮＡおよび全ＲＮＡを定量した。ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ［Qiagen, UK］を使用して、全ＲＮＡ（５００ｎｇ）からｃＤＮＡを合成した。
【０２６６】
ＦＡＭレポーター（Ｈｓ０１３６４６９９＿ｃｎ［Life Technologies, UK］を用いたＰＤＥ１Ｃ  ＴａｑＭａｎコピー数アッセイを使用して、ＧＢＭ由来培養物２０ｎｇ／ウェル（９６ウェル）からリアルタイム定量的ＰＣＲを行った。ａＣＧＨがフォーカルゲインを検出したのと同じゲノム位置にプローブの位置を選択した。ＴＥＲＴのＴａｑｍａｎアッセイを内因性対照（ＶＩＣレポーター）として用い［Life Technologies, UK］、ＰＤＥ１Ｃコピー数をそのレベルに正規化した。等量の雄性および雌性のゲノムＤＮＡ［Promega, UK］を混合して参照ＤＮＡを得、正常対照｛アッセイ用ＰＤＥ１Ｃの二倍体コピーを保持している｝として使用した。正確なコピー数データを得るために、ＱＰＣＲ増幅を３つの独立した実験で３重に行った。
【０２６７】
発現解析のために、ＡＢＩ  ７５００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ［Applied Biosystems, UK］で、ＦＡＭレポーター［Thermo Scientific, UK］を用いたＳｏｌａｒｉｓ  ＱＰＣＲ  ＰＤＥ１Ｃ遺伝子発現アッセイを使用して、ＱＰＣＲを行った。低ＲＯＸの１×Ｓｏｌａｒｉｓ  ｑＰＣＲマスター混合物［Thermo Scientific, UK］を使用して、ｃＤＮＡ  ２μＬを２０ｍＬの反応容量で増幅し、増幅を３重に行った。ＰＤＥ１Ｃ発現レベルをＧＡＰＤＨに対して正規化し、２ΔΔCT法を使用して相対的発現を決定した。正常脳対照（全脳ＲＮＡ、ヒト小脳および脳梁）はClontech［France］から入手した。
【０２６８】
ＱＰＣＲ解析の結果は下記の表１に要約されている。
【０２６９】
【表１】
2021525705.tif 000014
【０２７０】
上記に示されるように、ＱＰＣＲ解析により、短期ＧＢＭ細胞培養物におけるＰＤＥ１Ｃのゲインが確認される。ＱＰＣＲ解析を使用した短期培養物におけるＰＤＥ１Ｃの発現、およびゲノム過剰出現とＰＤＥ１Ｃ発現との関連は、（正常なヒト星状細胞と比較して）発現の上昇が、対照培養物ＩＮ２０４５を除いて、ゲノム過剰出現を伴うすべての試験細胞培養物に存在したことから明らかであった（図１）。対照培養物と比較して、各短期培養物において、２３〜３６０倍の範囲の有意な発現上昇が観察された（Ｐ＜０.０００１）。
【０２７１】
比較例２：  ＧＢＭの増殖におけるＰＤＥ１Ｃの役割の決定
血清含有培地中でＤｈａｒｍａＦＥＣＴ−１トランスフェクション試薬を使用してｓｉＲＮＡトランスフェクションを促進し、陽性対照シクロフィリンＢ  ｓｉＲＮＡ［Thermo Scientific, UK］を使用してトランスフェクション効率を評価した。培養物を、同じ濃度の非ターゲティングｓｉＲＮＡプールと並行してトランスフェクトした。非ターゲティングｓｉＲＮＡおよびＰＤＥ１Ｃ特異的ｓｉＲＮＡをｓｉＮＴおよびｓｉＰＤと略記する。細胞を培養密度４０〜５０％で播種し、トランスフェクションを開始する前に４８時間インキュベートした。最初の４８時間のインキュベーションの終わりに、細胞をトランスフェクトし、４日間インキュベートした。５日目に、細胞をトリプシン処理し、新しいフラスコに再播種し、一夜付着させた。６日目に細胞を再トランスフェクトし（ｓｉＮＴまたはｓｉＰＤのいずれかで）、さらに４日間インキュベートした後、さらなる実験のために収集した。ｓｉＮＴおよびｓｉＰＤ細胞を７２時間増殖させ、Vichai V, Kirtikara K. Sulforhodamine B colorimetric assay for cytotoxicity screening. Nat Protoc 2006;1:1112-1116に記載されているように、ＳＲＢを使用して増殖アッセイを行った。ビンポセチンをＤＭＳＯに溶解し、５００μＭ〜０.９７７μＭの段階希釈の用量範囲を使用した。
【０２７２】
図３に示されるように、トランスフェクションを停止した後、細胞の増殖能を評価した。初期のＰＤＥ１Ｃ発現レベルに関わらず、ＩＮ２０４５を除く全ての培養物において、ＰＤＥ１Ｃ枯渇は、ＰＤＥ１Ｃ発現細胞と比較した場合、一貫して増殖を４５〜５４％減少させた（Ｐ＜０.０５）。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ活性は、ＰＤＥ１Ｃの枯渇の後にも評価した。対照培養物ＩＮ２０４５を除いて、ｓｉＮＴ細胞と比較して、ｓｉＰＤ細胞においてｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方の活性の増加（Ｐ＜０.０５）が検出されたことが観察された。
【０２７３】
比較例３：  ＧＢＭ細胞の遊走および浸潤におけるＰＤＥ１Ｃの役割の決定
ＣｙｔｏＳｅｌｅｃｔ  ２４ウェル細胞遊走および浸潤アッセイ［Cell Biolabs, Inc., USA］を使用して、ｓｉＮＴおよびｓｉＰＤの遊走および浸潤の可能性を評価した。２０,０００個のｓｉＮＴまたはｓｉＰＤ細胞を無血清培地中のポリカーボネート膜（８ｍＭ）に播種し、血清含有培地を化学誘引物質として使用した。インキュベーション時間の終わりに、遊走細胞を除去し、膜上の非遊走細胞をクリスタルバイオレットを使用して染色し、比色測定で定量化した。浸潤アッセイのために、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質でプレコートしたポリカーボネート膜を用いた［Cell Biolabs, Inc., USA］。
【０２７４】
細胞遊走はまた、製造業者の指示に従ってＣｙｔｏＳｅｌｅｃｔ  ２４ウェル創傷治癒アッセイ［Cell Biolabs, Inc., USA］を用いて評価した。％遊走を式：
[(創傷領域に遊走した細胞)／(スライド上の細胞の総数)]×１００
によって計算した。
【０２７５】
ｓｉＮＴにおける遊走を１００％として設定した。ビンポセチンについては、アッセイの期間中、処理を継続した。
【０２７６】
図４および５に示されるように、ｓｉＰＤ細胞は、ｓｉＮＴ細胞と比較した場合、遊走（ポリカーボネート膜を介して）および浸潤（ＥＣＭコーティングしたポリカーボネート膜を介して）の両方の能力の低下を示した。遊走および浸潤した細胞を定量化し、ｓｉＮＴと比較してｓｉＰＤ細胞で４０〜６０％の遊走能および浸潤能の低下が認められた。培養物ＩＮ１４７２およびＩＮ１７６０では、細胞遊走および浸潤の減少は統計的に有意であった（Ｐ＜０.０５）。遊走と浸潤の阻害の相対的な程度が個々の培養物のそれぞれで非常に類似していたことに注目することは興味深いことであった。増殖と同様に、ｓｉＰＤ  ＩＮ２０４５細胞では遊走または浸潤の阻害はなかった。ボイデンチャンバーアッセイを使用して得られた結果は、創傷治癒アッセイ（図６）で確認された。この創傷治癒アッセイでは、３つの培養物（ＩＮ１４７２、ＩＮ１７６０、およびＵ２５１ＭＧ）においてｓｉＮＴ細胞と比較してｓｉＰＤ細胞で創傷領域内を遊走した細胞の数が有意に減少した。。これらのデータは、ＰＤＥ１ＣがＧＢＭ細胞の遊走経路および浸潤経路の上流でも作用することを示している。
【０２７７】
比較例４：  ＰＤＥ１Ｃの下流エフェクターの同定
全ゲノム発現解析のために、１ｍｇの総ＲＮＡをＭｅｓｓａｇｅＡｍｐＴＭ  ＩＩＢｉｏｔｉｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｋｉｔ［Ambion; Life Technologies, UK］を用いて逆転写し、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ１３３  Ｐｌｕｓ  ２.０［Affymetrix, UK］にハイブリダイズした。アレイをＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ４５０で洗浄し、ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｓｃａｎｎｅｒ  ３０００  ７Ｇ［Affymetrix, UK］を用いてスキャンした。ｓｉＮＴおよびｓｉＰＤ処理のために、アレイを３重に実施した。
【０２７８】
ｓｉＮＴおよびｓｉＰＤの生物学的レプリケートのそれぞれについて、標準プロトコルを用いて、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＣＥＬファイルからの生マイクロアレイデータを正規化した。アレイバックグラウンド、Ｑ値、および平均強度はすべてのアレイで許容範囲内であった。統計的比較およびデータ可視化は、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸ１２（Agilent Technologies, UK）を使用して行った。まず、ｓｉＮＴと比較してｓｉＰＤ細胞における発現レベルの２倍以上の変化が同定され、その後、１−Ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（Ｐ＜０.０５）およびＢｅｎｊａｍｉｎｉ  ａｎｄ  Ｈｏｃｈｂｅｒｇ  Ｆａｌｓｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｒａｔｅ多重補正検定を用いて、統計的に有意な遺伝子を同定した。ＰＤＥ１Ｃ枯渇によって影響を受ける、有意な生物学的、プロセスネットワーク、遺伝子オントロジー（ＧＯ）プロセスおよび疾患マーカーを、ＭｅｔａｃｏｒｅＴＭ［GeneGo, Thompson Reuters, USA］を用いて同定した。ｃＢＩＯがんゲノミクスポータルを用いて、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）ＧＢＭコホートのＰＤＥ１Ｃ影響遺伝子の発現状況を調査し、患者アウトカムとの相関を調べました。
【０２７９】
増殖、浸潤および遊走に対するＰＤＥ１Ｃ枯渇の影響が最も深かった培養物ＩＮ１４７２およびＩＮ１７６０について全ゲノム発現アレイを行った（図２Ｃ、４Ｂ、４Ｄおよび４Ｆ）。２倍以上の発現の倍数変化およびｓｉＮＴ細胞とｓｉＰＤ細胞との間のＰ＜０.０５の統計的有意性に基づく差次的発現により、５６５個の転写物（４６５遺伝子）が同定された。ＩＮ１７６０については、４１１個の差次的発現遺伝子が検出され、そのうち１４６個がアップレギュレーションされ、２６５個がダウンレギュレーションされた。ＩＮ１４７２では、ｓｉＰＤ細胞において４９個の遺伝子がアップレギュレートされ、５個の遺伝子がダウンレギュレートされた。ＩＮ１４７２およびＩＮ１７６０でそれぞれ３倍および１３倍にノックダウンであったので、ＰＤＥ１Ｃのノックダウンの成功は、発現アレイにおいても確立された。この解析により、現在の研究で用いられているＰＤＥ１Ｃ  ｓｉＲＮＡプールは、他のＰＤＥの発現変化が検出されなかったので、ＰＤＥ１Ｃに非常に特異的であることも確立された。
【０２８０】
ＩＮ１７６０−ｓｉＰＤ細胞において、３〜１３倍のダウンレギュレーションを示した最も一般的にダウンレギュレートされた遺伝子には、ＩＬ８、ＰＤＥ１Ｃ、ＫＣＴＤ４、ＰＬＤ５、ＣＸＣＬ６、ＩＬ１１、Ｂ３ＧＡＬＴ２、ＩＮＨＢＥ、ＯＰＣＭＬ、およびＥＸＴ１が含まれていた（補足ファイルＡ）。同様に、ＳＰＡＲＣＬ１、ＡＰＯＥ、ＣＦＩ、ＣＯＭＰ、ＦＡＢＰ３、ＣＬＵ、ＦＡＭ１０７Ａ、ＰＴＧＤＳ、ＣＨＩ３Ｌ１、ＭＡＮ１Ｃ１、ＴＤＯ２およびＱＰＲＴは、ＩＮ１７６０−ｓｉＰＤ細胞において４〜８倍のアップレギュレーションを示した。逆に、ＩＮ１４７２では、ＰＤＥ１Ｃが、ｓｉＰＤ細胞において３倍を超えるダウンレギュレーションを示した唯一の遺伝子であった（補足ファイルＢ）。ＴＮＦＳＦ１５もまた、ＩＮ１４７２−ｓｉＰＤ細胞において３倍を超えることを示した唯一の遺伝子であった。また、ＩＮ１７６０−ｓｉＰＤ細胞およびＩＮ１４７２−ｓｉＰＤ細胞の両方において、ＡＰＯＥ（アップレギュレートした）、ＨＳＤ１１Ｂ１（アップレギュレートした）、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ５（ダウンレギュレートした）、ＰＤＥ１Ｃ（ダウンレギュレートした）を含む４つの遺伝子が差次的に発現した。
【０２８１】
ＰＤＥ１Ｃ枯渇は、ＧＢＭ細胞における重要な細胞経路に関与する遺伝子を変化させることが示された。以下の表２〜４に示されるように、ＰＤＥ１Ｃノックダウンにより影響を受ける最も重要な経路に関与する遺伝子を同定した。
【０２８２】
【表２】
2021525705.tif 000015
【０２８３】
【表３】
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【０２８４】
【表４】
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【０２８５】
ＰＤＥ１Ｃ枯渇の結果としての差次的発現遺伝子は、ＴＣＧＡ  ＧＢＭコホートの遺伝子発現プロファイルと強く相関していることが観察された。ｓｉＰＤ  ＩＮ１７６０細胞およびＩＮ１４７２細胞の組み合わせた差次的遺伝子発現リストでは、ＰＤＥ１Ｃを介したアップレギュレート遺伝子の３２％がＴＣＧＡコホートではダウンレギュレートされ、ＰＤＥ１Ｃを介したダウンレギュレート遺伝子の５３％がＴＣＧＡコホートではアップレギュレートされた。このＴＣＧＡ遺伝子リスト内で、クエリー遺伝子、すなわちＩＬ８、ＣＸＣＬ２、ＦＯＳＢ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＳＵＢ１、ＳＯＲＢＳ２、ＷＮＴ５ＡおよびＭＭＰ１のうち少なくとも１つ以上のアップレギュレーションは、患者におけるアウトカムの悪化（Ｐ＝０.０１６５）と関連しており、ＰＤＥ１Ｃノックダウンはそれらの発現をダウンレギュレートした。したがって、ＰＤＥ１Ｃ発現単独はアウトカムと関連していないが、ＰＤＥ１Ｃ枯渇の結果としてのその下流エフェクターの発現の変化は、生存を改善する可能性がある。
【０２８６】
実施例１：  ＧＢＭの増殖、浸潤および遊走を阻害する化合物１および２の能力の決定
比較例２および３に記載したように、成体多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）生検組織からＧＢＭ細胞培養物を調製する。培養物に化合物１および２を投与して、ＧＢＭの増殖、浸潤および遊走に対するそれらの効果を評価する。化合物１および２は、
【化１３】
2021525705.tif 000018
である。
【０２８７】
比較例２で上記したように細胞培養物を調製した後、化合物１または化合物２で処理した細胞の増殖能を評価する。化合物の実行の成功は、対照を除くすべての培養物において、ＰＤＥ１Ｃ発現細胞と比較した場合に増殖の低下を示す。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方の活性の増加は、対照培養物を除いて、ｓｉＮＴ細胞と比較してｓｉＰＤ細胞において検出される。
【０２８８】
化合物１または化合物２で処理した細胞の移動能および増殖能も評価される。化合物の実行の成功は、対照培養物と比較して、遊走および／または増殖の減少を示す。
【０２８９】
実施例２：  さまざまなＧＢＭ細胞株に対するＰＤＥ１阻害剤の効果
ＧＢＭ生検から得られた７つの異なる細胞株を得、それぞれが３００万〜４００万個の細胞を含む短期ペレット培養物で調製した。ＰＤＥ活性のためのＩＭＡＰアッセイにおける使用のために調製にするために、細胞ペレットをＴＢＳ（１５０ｎＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４）で１回洗浄した。次いで、ペレットを遠心分離し、上清を除去した。細胞を０.１５ｍＬの溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４、５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、プロテアーゼ阻害剤カクテル）に溶解した。得られた溶液を３０秒間２回超音波処理し、次いで、１５,０００ｒｐｍで４℃で１５分間遠心分離した。上清を新しい容器に移し、直ちに凍結した。次いで、細胞を、実施例１で定義したように、ＰＤＥ１発現および化合物１および２による阻害に対する感受性についてアッセイした。結果を以下の表３にまとめる。
【０２９０】
【表５】
2021525705.tif 000019
【０２９１】
上記に示されるように、ＰＤＥ１Ｃはすべての細胞株で上昇し、ある細胞株ではＰＤＥ１Ｃ発現が７５倍にも増加した。化合物１および化合物２の両方とも、試験したすべての細胞株にわたって同様に有効であることを示した。
【０２９２】
ＧＢＭ細胞の増殖および生存に対する化合物１および２の効果を試験するために、さらなる試験を行った。各細胞集団の増殖は、１０μＭおよび２０μＭの濃度で化合物１および２に対して試験した。細胞集団の変化に関する結果を観察し、８日間毎日記録した。すべての場合において、処理した細胞株は、未処理サンプルと比較して、より遅い速度で増殖した。ＵＷＬＶ３０１、ＵＷＬＶ３０４、ＩＮ１９５１、Ｕ２５１ＭＧおよびＩＮ２０４５では、処理したＧＢＭ細胞集団は、８日目までに全体的な減少を示した。
【０２９３】
したがって、化合物１および２は両方とも、ＧＢＭ細胞株の増殖を遅らせるかまたは排除するのに非常に効果的であることを示した。
【０２９４】
実施例３：  カルシウム依存性および相関を含む、ＰＤＥ１活性に関するＧＢＭ細胞株の分析
実施例２で使用した細胞ペレットをアッセイして、全長酵素対切断型酵素の相対的な存在を推定する手段としてＰＤＥ活性のカルシウム依存性を測定した。切断型酵素は、Ｎ末端調節ドメインを欠いており、したがって、このアッセイでは構成的活性型になる。該アッセイは、実施例２のプロトコルに従って調製した。
【０２９５】
細胞株のＰＤＥ１活性の分析を図７に示す。示されているように、ＵＷＬＶ３０１細胞株およびＵＷＬＶ３０４細胞株は、Ｃａ２＋／カルモジュリンの存在下および非存在下の両方において、非常に活性の高いＰＤＥを示した。このことは、これらの細胞株におけるＰＤＥ活性がカルシウムに依存しないことを示している。また、基質としてｃＡＭＰを使用するＰＤＥ活性は、Ｃａ２＋／カルモジュリンの省略による影響を受けなかった。一方、ＩＮ１５２８およびＵ２５１ＭＧのようないくつかの細胞株は、Ｃａ２＋／カルモジュリンの存在下では、その非存在下よりもはるかに高い活性レベルを示した。
【０２９６】
このことは、ＧＢＭの進行により脳細胞のＰＤＥ１が構成的に活性化される可能性を示唆している。この点を調査するためにさらなる試験を行い、以下の表４にまとめている。示されているように、様々な細胞株を、Ｃａ２＋／カルモジュリンの存在下および非存在下、ならびにカルシウムキレート剤であるＥＧＴＡの存在下で、様々な濃度で試験した。これらの試験により、ＵＷＬＶ３０１細胞株およびＵＷＬＶ３０４細胞株は、構成的活性型であること、すなわち、Ｃａ２＋／カルモジュリンによる調節なしに活性を維持していることが確認された。
【０２９７】
【表６】
2021525705.tif 000020
【０２９８】
主にＧＢＭ細胞増殖に関連するＰＤＥアイソフォームを確認するために、さらなる試験を行った。さまざまなＰＤＥ酵素ファミリーに対する化合物１の阻害定数（Ｋi）値を以下の表５にまとめている。
【０２９９】
【表７】
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【０３００】
ＰＤＥ１Ｃ発現の増加は、ＧＢＭ細胞と関連することが観察されている。ここでの結果は、ＵＷＬＶ３０１細胞株およびＵＷＬＶ３０４細胞株において、化合物１のＰＤＥ活性阻害のためのＩＣ50が精製ＰＤＥ１Ｃで得られたＫi値と厳密に一致することを示しており、これらの細胞株で検出されたＰＤＥ活性はＰＤＥ１Ｃに起因するとの考えを支持している。
【０３０１】
理論に縛られることなく、ＰＤＥ１Ｃが構造的に変化したことにより、ＵＷＬＶ３０１細胞株およびＵＷＬＶ３０４細胞株を構成的に活性化されたと考えられる。さらなる調査の結果、ＵＷＬＶ３０１およびＵＷＬＶ３０４のいずれも検出可能な全長ＰＤＥ１Ｃを示さなかった。テスト中、ＰＤＥ１ＣのＮ末端に対する抗体はカルシウム応答性を失った細胞においてＰＤＥ１Ｃを検出できなくなったため、このことが証明された。一方、ともにＣａ２＋／カルモジュリンによって調節されたままであったＩＮ１５２８およびＵ２５１ＭＧ細胞株は、検出可能な全長ＰＤＥ１Ｃを示した。したがって、これらの試験は、ＧＢＭ癌に冒された細胞がＰＤＥ１Ｃの調節障害および構造変化を引き起こす可能性があることを示唆している。
【０３０２】
提供された実施例の代替的な組み合わせおよびバリエーションは、開示に基づいて明らかになるであろう。記載された実施態様の多くの可能なバリエーションのすべてについて具体的な例を提供することは不可能であるが、そのような組み合わせおよびバリエーションは、最終的に発行される請求項であり得る。
【図１】
2021525705.tif 000029
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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