(57)【要約】 【課題】金(III) 錯体を含む医薬組成物とそれを生成する方法を提供する。【解決手段】  本発明の金(III) 錯体は下記の化学式（Ｉ）を有する。 2021523936.tif 000014Ｒ１は、アリールとアミンから、Ｒ２は、第１群（アルキルとシクロアルキル）から、Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アルキル、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アミノジアルキル、ヒドロキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、 アルキルチオ、シクロアルキル、第２群（アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体）から、Ｒ４は、前記第１群、アルキルアルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、トリアルキルホスヒノ、ジアルキルアリールホスフィノ、アルキルジアリールホスフィノ、トリアリールホスフィノ、前記第２群から、それぞれ独立して選択される。
2021523936.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式(I)を含む金(III)錯体において、

2021523936.tif 000011
ここで、
Ｒ１は、アリールとアミンから独立して選択され、
Ｒ２は、アルキルとシクロアルキルから独立して選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アルキル、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アミノジアルキル、ヒドロキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、 アルキルチオ、シクロアルキル、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択され、
Ｒ４は、アルキル、シクロアルキル、アルキルアルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、トリアルキルホスヒノ、ジアルキルアリールホスフィノ、アルキルジアリールホスフィノ、トリアリールホスフィノ、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択される
ことを特徴とする化学式(I)を有す金(III)錯体。
【請求項２】
ピペラジン環により結合された２つのタイプ(I)構造を有する錯体を更に有する
ことを特徴とする請求項１記載の金(III)錯体。
【請求項３】
タイプ（Ｉ）のホモとヘテロのバイ核錯体を更に有し、Ｒ４は、他の金属への配位位置を有する
ことを特徴とする請求項２記載の金(III)錯体。
【請求項４】
Ｒ１は、フェニルを含み、Ｒ２は、アルキル又はシクロアルキルを含み、Ｒ３は、水素を含み、Ｒ４は、脂肪族アミンを含む
ことを特徴とする請求項１記載の金(III)錯体。
【請求項５】
前記脂肪族アミンは、ＮMｅ２，ＮＥｔ２，Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）２，ピロリジル、ピペリジニル、及びアゼパニル結合、又はピペラジニル又はモルホリニルを含む複素環式を含む
ことを特徴とする請求項４記載の金(III)錯体。
【請求項６】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体と医薬坦持体を含む
ことを特徴とするコンジュゲート。
【請求項７】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体又は請求項６記載のコンジュゲートと薬学的に許容される賦形剤を含む
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体、請求項６記載のコンジュゲート、又は請求項７記載の医薬生成物
の薬剤として使用。
【請求項９】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体、請求項６記載のコンジュゲート、又は請求項７記載の医薬生成物
の感染症の治療薬又は予防薬としての使用。
【請求項１０】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体、請求項６記載のコンジュゲート、又は請求項７記載の医薬生成物
の細菌感染症の治療薬又は予防薬としての使用。
【請求項１１】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体、請求項６記載のコンジュゲート、又は請求項７記載の医薬生成物
の多剤耐性細菌により引き起こされる細菌感染症の治療薬又は予防薬としての使用。
【請求項１２】
請求項１−５のいずれかに記載の金(III)錯体、請求項６記載のコンジュゲート、又は請求項４記載の医薬生成物の
バイオフィルムの形成又は発達を阻害し、成熟したバイオフィルムを排除し、バイオフィルムバイオマスを減少させる為の使用。
【請求項１３】
請求項１記載の金(III) 錯体を製造する方法において、
（A）  化学式（Ｖ）を、化学式（ＶＩ）の化合物で反応させるステップと、
2021523936.tif 000012
2021523936.tif 000013
（B）    有機酸又は無機酸又はそれらに対応する塩で処理することにより、得られた錯体の薬学的に安定な塩又はソルバントを形成するステップと、
を含み、
ここで、
Ｘ１は、ハロゲン、水酸化物、又はアセトキシから独立して選択され、
Ｘ２は、ハロゲン、水酸化物、又はアセトキシから独立して選択され、
Ｒ１は、アリールとアミンから独立して選択され、
Ｒ２は、アルキルとシクロアルキルから独立して選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アルキル、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アミノジアルキル、ヒドロキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、 アルキルチオ、シクロアルキル、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択され、
Ｒ４は、アルキル、シクロアルキル、アルキルアルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、トリアルキルホスヒノ、ジアルキルアリールホスフィノ、アルキルジアリールホスフィノ、トリアリールホスフィノ、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択される
ことを特徴とする請求項１記載の金(III)錯体を製造する方法。
【請求項１４】
ピペラジン環により結合された２つのタイプ(I)の構造を有する錯体と、タイプ（Ｉ）のホモとヘテロの二核錯体とを更に有し、Ｒ４は、他の金属への配位位置を有する
ことを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ１は、フェニルを含み、Ｒ２は、アルキル又はシクロアルキルを含み、Ｒ３は、水素を含み、Ｒ４は、脂肪族アミンを含む
ことを特徴とする請求項１３又は１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に医薬化合物に関し、特に、化学式（Ｉ）を有する金(III) 錯体であって、抗生物質又は抗バイオフィルム剤として使用されるものに関する。
【背景技術】
【０００２】
バクテリアや他の微生物の急速な出現は、抗生物質の有効性を危機にさらしている。抗生物質は、医学を変え、何百万もの人と動物の命を救ってきた。多剤耐性菌は、世界的な脅威であり、毎年７０万人が死亡すると推定されている。２０５０年までに、世界中で毎年１千万人が細菌感染症で亡くなるであろう。その数は、癌による１８０万の死者数をこえる。最近、ＷＨＯは、多剤耐性菌のあるグループを特定した。その多剤耐性菌のグループとは、全ての既知の抗生物質の殺菌作用から逃れることができ、特に懸念される病原菌、感染菌、耐性菌の新しいパラダイムを表す。その多剤耐性菌の一例は、Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa (PAO) , Enterobacteriaceae speciesである。
【０００３】
金(I)錯体は、歴史的に抗菌剤として研究されてきた。それに関連する例は、金(I)錯体オーラノフィン（auranofin）である。これは、当初抗リューマチ剤として承認され、潜在的に強い抗菌活性も持っている薬剤である。
【非特許文献１】Glisic, BD, et al., Dalton Trans. 2014, 43, 5950
【非特許文献２】O&ntilde;a-Burgos, P, Fern&aacute;ndez, I, Roces, L, Torre-Fern&aacute;ndez, L, Garc&iacute;a-Granda, S, L&oacute;pez-Ortiz, F,Organometallics 2009, 28, 1739−1747
【非特許文献３】S&aacute;nchez, EB, Iglesias, MJ, el Hajjouji, H, Roces, L, Garc&iacute;a−Granda, S, Villuendas, P, Urriolabeitia, EP, L&oacute;pez−Ortiz, F, Organometallics 2017, 36, 1962−1973,
【非特許文献４】Ronconi, L et al., Adv. Anticancer Agents Med. Chem. 2013, 2, 130−172.
【非特許文献５】e.g., tetrachlorides, carboxylates, etc. Borhade, S, Int. Res. J. Pharm. 2012, 3, 189−193. Al−Khodir, F.A.I, Refat, M.S. J. Pharm. Innov. 2015, 10, 335−347. Glisic, BD., et al MedChemComm 2016, 7, 1356−1366
【非特許文献６】Glisic, BD., Djuran, MI, Dalton Trans. 2014, 43, 5950-5969. Pintus, A, et al. J. Inorg. Biochem. 2017, 170, 188-194. Mignani, SM, et al. Mol. Pharmaceutics 2017, 14, 4087−4097.
【非特許文献７】Savic, ND, et al. RSC Advances 2016, 6, 13193−13206
【非特許文献８】Radulovic, NS, et al. Polyhedron 2018, 141, 164−180
【非特許文献９】Shaik, N et al. Inorg. Chem. 2009, 48, 1577−1587. L. Vela et al. J. Inorg. Biochem. 2011, 105, 1306.
【非特許文献１０】Parish, RV, Inorg. Chem. 1996, 35, 1659
【非特許文献１１】Viente, J, Arcas, A, Marc, M, J. Organomet. Chem 1986, 309, 3689−378,
【非特許文献１２】Hofer, M., Gomez-Bengoa, E, Nevado, C, Organometallics 2014, 33, 1328−1332
【非特許文献１３】Winston, MS, Wolf, WJ, Toste, FD, J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 7777−7782
【非特許文献１４】Price, GA, et al. Dalton Trans., 2011, 40, 11696−11697
【非特許文献１５】Betteridge, PW, Carruthers, JR, Cooper, RI, Prout, K, Watkin, DJ, J. Appl. Cryst. 2003 36, 1487
【非特許文献１６】Kilpin, K.J. et al. Dalton Trans. 2010, 39, 1855−1864
【非特許文献１７】Flower, KR, et al. Dalton Transactions 2010, 39, 3509−3520
【非特許文献１８】Pena−L&oacute;pez, M, et al Org. Biomol. Chem. 2012, 10, 1686−1694
【非特許文献１９】Espinet, P, Organometallics, 2000, 19, 290−295
【０００４】
これに対し、金(III)錯体は、抗腫瘍剤の可能性があるとして集中的に研究されてきた。その理由は白金(II)錯体に類似するためである。近年まで、その抗菌活性に関する言及はあまり無かった。近年になって、抗生物質耐性のある「スーパーバグ」の深刻な脅威により実証されるようになった（非特許文献１）。＋３酸化状態の安定化は、あらゆるタイプの生物活性化を観測するために最重要である。それ以外の場合は、金属中心（metal center）の点に関し、有機金属シクロメタル化金化合物（organometallic cyclometalated gold compounds）の利点は、その大きな安定性にある。
【０００５】
このシクロオーレート化錯体（cycloaurated complexes）の有望な生物学的プロファイルを考慮に入れて、本発明者らは、金(III)錯体の新たなクラスの合理的設計の研究・調査を開始した。この金(III)錯体においては、金属中心は、Ｃ，Ｙ−メタラサイクル（Ｙ＝Ｓ、Ｏ）に統合される。この概念を用いて、本発明者は、（Ｏ＾Ｏ）−と（Ｓ＾Ｃ）−のシクロオーレート化錯体の合成を報告した。これらの合成は、それぞれ、オルト置換ホスフィン酸（ortho-substituted phosphinic）（非特許文献２）又はチオホスフィンアミドフレームワーク（thiophosphinic amide frameworks）（非特許文献３）に基づき、対応するオルトクロロジメチルスタニル誘導体（ortho chlorodimethylstannyl derivatives）のスズ（IV）−金(III)交換金属化（tin(IV)-gold(III) trans-metalation）を介して行われていることを報告した。
【０００６】
それに加えて、金(III)錯体の治療への応用は主に抗癌特性に焦点を当てている（非特許文献４）。抗生物質耐性の脅威の高まりにつれ、この化合物クラスの抗菌特性にますます注目が集まっている。
【０００７】
金(III) 錯体で抗菌活性についてテストされたものは、Au(III)の 単純な塩（非特許文献５）かＣ＾Ｎキレート化配列子（Ｃ＾Ｎ chelating ligand,）を含むシクロメタレート（cyclometalates）通常は芳香属窒素含有複素環（aromatic nitrogen-containing heterocycles）のいずれかである。後者の一例は、２，２’−ピピリジン（2,2′-bipyridine），２，２’：６’，２”−ターピリジン（2,2′:6′,2″-terpyridine）、キノリン（quinoline,）、１，１０−フェナントロリン（1,10-phenanthroline）等（非特許文献６）である。
【０００８】
つい最近、抗バイオフィルム剤としての、ＮＨｅｔ・ＡｕＣｌ３（ＮＨｅｔ＝ピラジン（pyrazine）、ピリミジン（pirimidine）、ピリダジン（piridazine）、キノキサリン（quinoxaline）、フェナジン（phenazine））（非特許文献７）と、Ｃ＾Ｎ−安定化金(III) シクロメタレート（cyclometalates）（非特許文献８）の錯体の作用・反応が報告されている。
【０００９】
ジチオカルバメート部分（dithiocarbamate moiety）を含む金(III) 錯体に関しては、ホスファゼン（phosphazenes）に由来する対応するシクロ金酸塩（cycloaurate）は、HeLaヒト子宮頸癌とJurkat-T急性リンパ芽球性白血病細胞に対するin vitroでの耐癌活性を示すと記載されている（非特許文献９）。
【００１０】
それとは別に、ここに１つのレポートがある。同レポートでは、Ｃ＾Ｎ−安定化金(III) シクロメタレート（ジオチルカルバネメート配位子（dithiocarbamate ligand）を坦持するキレート化配位子２−（（ジメチルアミノ）メチル）フェニルを含む３つの例がある）を、抗生物質と抗真菌剤として調査している。この錯体は、対照抗生物質であるシプロフロキサシン（ciprofloxacin）とアンホテリシン（amphotericin）より活性度が低かった（非特許文献１０）。化学式（Ｉ）の金(III)錯体の抗菌性と抗バイオフィルム治療特性に関する従来例は存在しない。同化学式（Ｉ）では、Au(III)は、Ｃ−Ｃ−Ｐ−Ｓ−Ａｕメタラサイクル（C-C-P-S-Au metallacycle）の一部である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、様々な微生物に対し有効で低毒性の安定したシクロメタレートされた金(III)錯体（cyclometalated gold(III) complexes）を提供することである。
【００１２】
１，１−ジチオ配位子（1,1-dithio ligand）を有する（Ｓ＾Ｃ）−シクロメタレートされた金(III)錯体のグループは、化学式（Ｉ）で表されるが、プランクトン状態、バイオフィルム状態の多剤耐性微生物に対して、抗菌活性（即ち細菌のバイオフィルムの形成を回避する活性、又は既成のバイオフィルムを除去する活性）を示す。多剤耐性微生物の一例は、S. aureus, S. maltophilia, PAO, H. influenziae がある。従って、本発明により、これらの菌により引き起こされる感染症を治療する新規な治療ツールが提供される。
【００１３】
更に、化学式（Ｉ）の化合物は、非常に高い活性状態（in vitro 試験で決定された）にあり、かつ生理学的条件下でも非常に安定している。それらは、in vivo でも同様に抗菌活性を維持することが期待される。更に、in vitro とin vivoでのアッセイでは、化学式（Ｉ）の化合物は、低毒性であることを示す。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、第１の態様によれば、化学式(I)を含む金(III)錯体に関する。

2021523936.tif 000003
ここで、
Ｒ１は、アリール（aryl）とアミン（amine）から独立して選択され、
Ｒ２は、アルキル（alkyl）とシクロアルキル（cycloarkyl）から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ（cyano）、アルキル（alkyl）、アルキルオキシ（alkyloxy）、アルキルアミノ（alkylamino）、アミノジアルキル（aminodialkyl）、ヒドロキシアルキル（hydroxyalkyl）、トリアルキルシリル（trialkylsilyl）、アリールジアルキルシリル（aryldialkylsilyl）、 アルキルチオ（alkylthio）、シクロアルキル（cycloalkyl）、アリール（aryl）、複素環（heterocycle）,多環（polycycle）、アミノ酸(amino acid)、ペプチド(peptide)、炭水化物誘導体(carbohydrate derivative)から独立して選択され、
Ｒ４は、アルキル、シクロアルキル、アルキルアルコキシ（alkylalkoxy）、アルキルアミノ（alkylamino）、ジアルキルアミノ（dialkylamino）、アルキルチオ（alkylthio）、トリアルキルホスヒノ（trialkylphosphino）、ジアルキルアリールホスフィノ（dialkylarylphosphino）、アルキルジアリールホスフィノ（alkyldiarylphosphino）、トリアリールホスフィノ（triarylphosphino）、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択される。
【００１５】
一実施例においては、本発明には、化学式（Ｉ）に類似したバイ（二）核錯体（binuclear complexes）が含まれる。この点に関し、ピペラジン環（piperazine ring）により結合された２つのタイプ（I）構造を有する錯体が使用される。同様に、ホモとヘテロのバイ核の錯体（homo and heterobinuclear complexes）が使用できる。それらは、他の金属への配位位置を有するＲ４置換基を用いて製造される錯体を含む。
【００１６】
一実施例において、使用可能なラジカルは以下のとおりである。
Ｒ１＝フェニル，N（R2)2、Ｒ２＝ジアルキル（dialkyl）（即ち、N（R2)2、＝N（iPr)2、N（Et)2）ピペラジン（piperazine）、
Ｒ３＝水素、
Ｒ４＝脂肪族アミン（aliphatic amine）、その一例は、ＮMe２，ＮＥｔ２，Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）２，ピロリジル（pyrrolidyl）結合、ピペリジニル（piperidinyl）結合、アゼパニル（aziperaepany）結合、又はピペラジニル（piperazinyl ）又はモルホリニル（morpholinyl）を含む複素環式である。
Ｒ４は、二核錯体（dinuclear complexes）の配位子として、例えば、ピペラジン（piperazine）即ちホモ核錯体（homonuclear complex）である。アミンは、2番目の電子供与原子を含むよう変更できる。これの最も簡単な方法は、ピリジン（pyridine）やアゾ−ル（azoles）のような複素環系のアミンを使用することである。これにより、他の金属が配位される2番目の位置が残る。他の金属の一例は、AuCl-L（L=Ph3P、テトラヒドロチオフェン（tetrahydrothiophene））、AuCl3、銅塩である。
【００１７】
本発明の他の態様によれば、本発明はコンジュゲート（conjugate）に関し、このコンジュゲートは、化学式（I）の金(III) 錯体と、少なくとも１つの坦持体（好ましくは医薬坦持体）を含む。
【００１８】
本発明の他の態様によれば、本発明は医薬組成物に関する。この医薬組成物は、化学式（I）の金(III)錯体又は前記のコンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００１９】
一実施例においては、前記の金(III)錯体、前記のコンジュゲート、又は医薬生成物が、医薬品の製造の為に  例えば細菌感染症の治療薬として使用される。
【００２０】
一実施例においては、前記の金(III)錯体、前記のコンジュゲート、又は医薬生成物が、多剤耐性細菌又は他の微生物により引き起こされる細菌感染症の治療薬又は予防薬として使用される。
【００２１】
他の実施例においては、前記の金(III)錯体、前記のコンジュゲート、又は医薬生成物を用いて、バイオフィルムの形成又は発達を阻害し、成熟したバイオフィルムを排除し、バイオフィルム・バイオマスを減少させる。
【００２２】
本発明の他の態様によれば、本発明は、請求項１記載の金(III) 錯体を製造する方法において、
（A）  化学式（Ｖ）を、化学式（ＶＩ）の化合物で反応させるステップと、その後、
2021523936.tif 000004
2021523936.tif 000005
（B）    有機酸又は無機酸又はそれらに対応する塩で処理することにより、得られた錯体の薬学的に安定な塩又はソルバントを形成するステップと、
を含む。
Ｘ１は、ハロゲン、水酸化物、又はアセトキシ（acetoxy）から独立して選択され、
Ｘ２は、ハロゲン、水酸化物、又はアセトキシから独立して選択され、
Ｒ１は、アリールとアミンから独立して選択され、
Ｒ２は、アルキルとシクロアルキルから独立して選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アルキル、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アミノジアルキル、ヒドロキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、 アルキルチオ、シクロアルキル、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択され、
Ｒ４は、アルキル、シクロアルキル、アルキルアルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、トリアルキルホスヒノ、ジアルキルアリールホスフィノ、アルキルジアリールホスフィノ、トリアリールホスフィノ、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択される
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】錯体２ｂの構造を表す図。
【図２】錯体２ｆの構造を表す図。
【図３】錯体２ｇの構造を表す図。
【図４】錯体２ｎの構造を表す図。
【図５】錯体２ｇの分子構造を示し、部分的な原子標識スキームと５０％の確率レベルで描かれた変位楕円体（displacement ellipsoids）を表す図。
【図６】錯体２ｇの毒性を表すグラフ。
【図７】錯体２ｂの１Ｈ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図８】錯体２ｂの１３Ｃ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図９】錯体２ｂの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１０】錯体２ｇの１Ｈ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１１】錯体２ｇの１３Ｃ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１２】錯体２ｇの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１３】溶解直後にとられた、３７℃で、０．２５ｍＬのＣＤ３ＣＮ／０．２５ｍＬ中のリン酸緩衝液中の錯体２ｆの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１４】溶解３日後にとられた、３７℃で、０．２５ｍＬＣＤ３ＣＮ／０．２５ｍＬ中のリン酸緩衝液中の錯体２ｆの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１５】０．２５ｍＬＣＤ３ＣＮと０．２５ｍＬのＤ２Ｏ中のＩＳＯ培養ブロス（culture broth）中の錯体２ｆの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１６】０．２５ｍＬＣＤ３ＣＮと０．２５ｍＬのＨ２Ｏ中の１等量のグルタチオン（glutathione）中の錯体２ｆの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１７】０．２５ｍＬＣＤ３ＣＮと０．２５ｍＬのＨ２Ｏ中の１等量のアスコルビン酸（ascorbic acid ）中の錯体２ｆの３１Ｐ−NMRスペクトルを表すグラフ。
【図１８】化学式（II-IV）を表す。
【図１９】表１の前半部分を表す。
【図２０】表１の後半部分を表す。
【図２１】表２を表す。
【図２２】表３、４、５を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、第１実施例では、化学式(I)を有する金(III)錯体に関する。

2021523936.tif 000006
ここで、
Ｒ１は、アリールとアミンから独立して選択され、
Ｒ２は、アルキルとシクロアルキルから独立して選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アルキル、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アミノジアルキル、ヒドロキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、 アルキルチオ、シクロアルキル、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択され、
Ｒ４は、アルキル、シクロアルキル、アルキルアルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、トリアルキルホスヒノ、ジアルキルアリールホスフィノ、アルキルジアリールホスフィノ、トリアリールホスフィノ、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択される。
【００２５】
化学式（Ｉ）の化合物は、正電荷を含み、有機酸又は無機酸の塩を形成できる。そのため、化学式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩も本発明に含まれる。本明細書に記載されている化学式（Ｉ）の化合物への言及は、この化学式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩への言及を含む。本明細書に記載されている「薬学的に許容される塩」は、無制限にあらゆる塩を含む。ただし、患者への投与が許容されることが条件である。「薬学的に許容される塩」の一例は、塩化物、臭化物、マロン酸塩（malonate）、ピルビン酸塩（pyruvate）等を含む。ヘキサフルオロホスフェート（hexafluorophosphate）が好ましい。
【００２６】
他の実施例において、本発明は化学式（Ｉ）の化合物に関する。その化合物の最小抑制濃度（ＭＩＣ：Minimum  Inhibitory Concentration ）は、黄色ブドウ球菌（S. aureus）に対しては0.125-0.5 mg/L、エスマルトフィリア（S. maltophilia）に対して は2-4 mg/L，インフルエンザ菌（influenziae,）に対しては1-2 mg/L である。これらの値は、これらの微生物が引き起こす感染症の治療で使用される他の抗生物質のＭＩＣより低い。このことは黄色ブドウ球菌の実験例２に記載されている。実施例に示されているように、本発明の化合物は、メチシリン（methicillin）、クリンダマイシン（clindamycin）、エリスロマイシン（erythomycin）、シプロフロキシサン（ciprofloxacin）に耐性を有する一連の菌株（strains）に対し高い抗菌活性を示す。そのＭＩＣの値は、テストされた全ての化合物に対し０．５ｍｇ／Ｌ以下である。
【００２７】
従って、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物を提供し、又は薬剤の製造に際しその化合物を使用して薬学的に許容可能な塩を提供し、微生物感染症を治療する又は予防することができる。
【００２８】
他の実施例においては、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物を、多剤耐性微生物の感染に苦しむ人間又は動物の治療用の抗菌剤として使用することに関する。この治療は患者に化学式（Ｉ）の化合物を含有する医薬化合物の有効量を投与することを含む。実施例３に示すように、化学式（Ｉ）の化合物は、その活性時の濃度より遙かに高い５ｍｇ／ｋｇ（重量）を超えるドーズ量でも、マウスにおいて極低毒性（low-null toxicity）を示す。
【００２９】
他の実施例においては、多剤耐性微生物に対する化学式（Ｉ）の化合物の高活性度故、これらの化合物は、他の抗菌剤−典型的には広域抗生物質（broad spectrum antibiotics）と組み合わせて、使用することができる。これにより治療の際の抗菌効果を高めることができる。化学式（Ｉ）の化合物は、治療で使用される任意の抗菌剤と組み合わせることができる。この抗菌剤の一例は、これに限定されないが、バンコマイシン（vancomycin）、ダプトマイシン（daptomycin）、ホスホマイシン（fosfomycin）、シプロフロキサシン（ciprofloxacin）、イミペネム（imipenem）がある。
【００３０】
化学式（Ｉ）の化合物と追加の抗菌剤との組み合わせは、両物質を、医薬投与形態で所定ドーズ量の組み合わせで投与することにより、達成できる。或いは、両方の医薬を、組み合わせ治療の手順に従って、独立して投与することもできる。
【００３１】
別法として、化学式（Ｉ）の化合物は、他の抗菌剤と組み合わせることもできる。これは、両方の化合物を共有結合して単一分子を形成することにより、行われる。例えば、化学式（Ｉ）の化合物は、図１８に示す化学式（ＩＩ−ＩＶ）に従って、フルオロキノロン（fluoroquinolone）、カルバペネミック（carbapenemic）、又はペニリシン（penicillin）の誘導体の抗菌化合物に結合することができる。
【００３２】
他の実施例においては、化学式（Ｉ）の化合物の抗菌活性に関与する生合成経路が研究されている。以下の作用／現象におけるそれらの可能な役割が、プロテオミクス（proteomics）、ゲノミクス（genomics）、顕微鏡を用いて研究されている。前記の作用／現象は、細胞内タンパクと酵素の相互作用、様々な細胞内プロセスの触媒作用、細菌ＤＮＡを変異させる能力、遺伝子とその結果生じるタンパク質の過剰発現又は抑制である。
【００３３】
他の実施例においては、本発明は医薬組成物に関する。この医薬組成物は、化学式（I）の化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤又は坦持体を含む。
【００３４】
本発明の他の実施例は、本発明の化合物の使用に関する。この使用により、バイオフィルムの形成又は発達を阻害し、存在するバイオフィルムを排除し、バイオフィルム・バイオマスを減少させる。
【００３５】
本発明は、バイオフィルムの形成を阻止する方法も提案する。この方法は、形成されたバイオフィルムを、有効量の本発明の化合物に晒し、根絶することを含む。かくして実施例４に示すように、化学式（Ｉ）の化合物の最小バイオフィルム抑制濃度（ＭＢＩＣ）は、これらの感染症の治療に使用される抗生物質のそれよりも低い。これは黄色ブドウ球菌の場合と同様である。
【００３６】
ある実施例においては、本発明の化合物は、バイオフィルム形成しやすい表面に含浸又は堆積される。
【００３７】
この表面は医療機器の表面である。その一例は、手術器具、インプラント又はプロテーゼ、カテーテル（尿道用、静脈用）、ステント、ペースメーカー、透析装置、心臓弁と医療用固定器具（プレート、ねじ、、釘等）である。
【００３８】
本発明の他の実施例は、化学式（I）の化合物を生成する方法に関する。本発明の方法は、ステップ（Ａ）（Ｂ）を有する。
（A）  化学式（Ｖ）の化合物を化学式（ＶＩ）の化合物で反応させるステップ、
2021523936.tif 000007
2021523936.tif 000008
（Ｂ）  得られた錯体の薬学的に安定な塩又は溶融化合物（solvate）を、有機酸又は無機酸又はそれらに対応する塩で処理することにより、形成するステップ。
ここで、
Ｘ１は、ハロゲン（halogen）、水酸化物（hydroxide）、又はアセトキシ（acetoxy）から独立して選択され、
Ｘ２は、ハロゲン、水酸化物、又はアセトキシから独立して選択され、
Ｒ１は、アリールとアミンから独立して選択され、
Ｒ２は、アルキルとシクロアルキルから独立して選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アルキル、アルキルオキシ（alkyloxy）、アルキルアミノ（alkylamino）、アミノジアルキル（aminodialkyl）、ヒドロキシアルキル（hydroxyalkyl）、トリアルキルシリル（trialkylsilyl）、アリールジアルキルシリル（aryldialkylsilyl）、 アルキルチオ（alkylthio）、シクロアルキル（cycloalkyl）、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択され、
Ｒ４は、アルキル、シクロアルキル、アルキルアルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、トリアルキルホスヒノ、ジアルキルアリールホスフィノ、アルキルジアリールホスフィノ、トリアリールホスフィノ、アリール、複素環、多環、アミノ酸、ペプチド、炭水化物誘導体から独立して選択される。
【００３９】
この手順は、下記のスキームＩで表すことができる。
2021523936.tif 000009
【００４０】
本発明は、化合物（Ｖ）の調整／製造方法に関する。この方法は、（A） チオホスフィン（thiophosphinic）又はチオホスホン（thiophosphonic）アミド・フレームワークのオルトメタル化（ortho-metallation）ステップと、それに続く、（B）金(I) 塩との金属交換反応（transmetallation with a gold(I) salt）と金(III)  への酸化ステップからなる。これをスキームIIに示す。
2021523936.tif 000010
ここで、
Lは、三級ホスフィン（tertiary phosphine）（非特許文献１７）、三次アルシン（tertiary arsine）（非特許文献１８）、チオエーテル（thioether）（非特許文献１９）から独立して選択される。
【００４１】
注意すべき点として、化合物Ｖの誘導体（ここではR1=Net2，N(R２)2=Net2、R3＝H, X1=X2=Cl）は、非特許文献１６の方法でHg(II)/Au((III) 交換を介して既に合成されている。即ちこのHg(II)/Au((III) 交換は、本明細書の記載した方法（Sn(IV)/Au((III)交換)とは異なる。
【００４２】
酸化剤は、Ｘ２（非特許文献１１），ＰｈＩＸ２（非特許文献１２），又はＣＦ３Ｉ（非特許文献１３）から選択される。
【００４３】
別法として、化合物（V）は、ホウ素／Ａｕ(III)メタセシス反応（metathetical reaction）により調整される。これは、ホスフィノチオイックアミドＶＩＩ（phosphinothioic amide VII）の対応するオルトホウ素化誘導体（ortho borinated derivative）を用いて行われる（非特許文献１４）。
【００４４】
本発明の化合物と中間体は、本明細書に記載した方法又はそのわずかな変形方法により、又は代替方法で調整・準備できる。
【００４５】
本発明の更なる態様は、生理学的条件下かつ従来の還元剤とヒト血清アルブミンの存在下での化学式（Ｉ）の化合物の安定性に関する。
【００４６】
実施例
本発明の実施例を、金(III) 錯体の合成と評価の為のプロトコルを含めて、記載する。
【００４７】
金(III) 錯体の合成
全ての反応は、不活性雰囲気中で予め乾燥させたシュレンク（Schlenks）内で実施した。CH3CNは、P2O5の存在下で蒸発され脱気して使用した。市販の試薬は納入されたまま使用した。
【００４８】
錯体２の合成：CH3CN (6 mL)中のAu(III) 錯体 1 (0.20 mmol)の溶液に、対応するジチオカルバメート塩（dithiocarbamate salt） (0.20 mmol) を加えた。反応混合液を室温で１２時間撹拌した。飽和ヘキサフルオロリン酸カリウム水溶液（aqueous saturated potassium hexafluorophosphate）を添加した後、得られた固体を濾過し、残留物を水とジエチルエーテル（diethyl ether）で洗浄し、錯体２が明るい黄色の固体として生成された。選択された金(III) 錯体の最も関連する解析データを表１（図１９．２０）に示す。
【００４９】
NMR実験
NMRスペクトルが、Bruker Avance III HD 300 (1H 300.13 MHz; 13C 75.47 MHz; 31P 121.49 MHz) とBruker Avance III HD 500 (1H 500.13 MHz; 13C 125.76 MHz; 31P 202.46 MHz)で得られた。化学シフトは、内部基準として１Hと１３Cに対してはテトラメチルシラン（TMS）を用いて、外部基準として３１Pに対しては８５％H３PO4を用いて、ppmで与えられる。１H｛３１P｝と３１PのNMRスペクトルは、溶媒としてCDCl3又はCD3CNの全ての反応原物（reaction crudes）から得られた。以下の略号を使用して複数の信号を示す。ｓ：一重項（singlet）、ｄ：二重項（doublet）、ｔ：三重項（triplet）、ｑ：四重項（quartet）、ｓｅｐ：セプレット（septet）。全てのNMRスペクトルは、合成化合物の構造を支持している。
【００５０】
質量分析
高解像度質量スペクトル(HRMS)が、Agilent Technologies社製のLC/MSD-TOF とHP 1100 MSD分光計に、電子スプレイ・イオン化技術を用いて、記録された。      
【００５１】
オウラサイクリック錯体（auracyclic complexes）２は、電子スプレイ・イオン化質量分析（ＥＳI−ＭＳ）で特徴づけられ、金カチオンによる強いピークを示した。計算上の同位体クラスターは、実験値と良く一致していた。これを表１に示す。
【００５２】
代表例として、化合物２ｂ、２ｇのNMRスペクトルのコピーを図７−１２に示す。即ち、化合物２ｂについては、１H−NMRスペクトル（図７）、１３C−NMRスペクトル（図８）、３１P−NMRスペクトル（図９）を示す。化合物２ｂについては、１H−NMRスペクトル（図１０）、１３C−NMRスペクトル（図１１）、３１P−NMRスペクトル（図１２）を示す。
【００５３】
X線回折
単一結晶のX線回折のデータを、CuKα放射線（λ＝1.54178A）を用い、１００Ｋで、Bruker社製のD８Ventureの回析計で収集した。Aはオングストロームである。データ収集と セルの改良は、Bruker社のインスツメント・サービスｖ４．２．２で行われた。同等の反射を用いた経験的なマルチスキャン吸収補正は、SADABSプログラムを用いて行われた。構造回折とF^2をベースにした完全行列最小二乗法による改良は、CRYSTALS（非特許文献１５）により行われた。
【００５４】
水素を除く全ての原子は異方的に精製された。水素原子は、独立した精製と制約された精製の組み合わせにより処理された。化合物２ｇの結晶データと精製の詳細の概要は、表２（図２１）に示す。図５は、プログラムPLATONを用いて描かれた。
【００５５】
選択された結合距離と結合角を表３（図２２）に示す。
【００５６】
金(III) 錯体２の安定性の検証
CD２CN (0.25 mL)中の化合物２ｆの溶液を、D２O中の０．２５ｍＬの生理食塩水リン酸塩の緩衝液（saline phosphate buffer）(pH 7.4)と混合した。この混合物を、３日間に渡って、３７℃で１Ｈと３１ＰのNMR分光計を介してモニターした。図１３，１４に示すように、錯体の３１ＰNMR信号は、３日間に渡って変化しなかった。この観察は、生理的条件下での金(III)錯体２の安定性の証拠を示す。
【００５７】
錯体２も、生物活性アッセイで使用される条件下で安定である。この証拠は、CD2CN (0.25 mL)と０．２５ｍＬのＩＳＯセンシテスト培養液の中の化合物２ｆの溶液の３１ＰNMRスペクトルで示されている。両液ともＤ２Ｏ中で用意された（図１５）。
【００５８】
これらの金(III) 化合物２の安定性と溶液挙動をより完全に把握するために、スペクトル変化も、従来の還元剤即ちグルタチオン（glutathione：ＧＳＨ）とアスコロビン酸（ascorbic acid：AsAc）を添加して、調べた。かくして、CD3CN (0.25 mL)中の化合物２ｆの溶液に、０．２５ｍＬの水中のGSH又はAsAcのいずれかを含む溶液と混合した。３１ＰNMRスペクトルは、金錯体はその化学的完全性を維持していることを、明白に示している。その証拠は図１６，１７に示すNMRスペクトルである。
【００５９】
実験例２：抗菌作用を表４（図２２）に示す。
MRSA:メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（methicillin resistant S. aureus;）、Cip:  シプロフロキサシン（ciprofloxacin），Cli:  クリダマシン（clindamycin）、Eri: エリスロマイシン（erithromycin）、Pen:  ペニシリン（penicillin）、LVX:  レボフロカサシン（levofloxacin）、Gen:  ゲンタマイシン（gentamicin）  
【００６０】
この実施例は、化学式（Ｉ）の化合物により示された抗菌活性は、シプロフロキサシン(Cip)とレボプロファイル(Lvx)より高いことを示した。両方ともＭＲＳＡにより引き起こされる感染症の治療に用いられる抗菌剤である。この実施例の化合物は、これらの抗菌剤よりも９倍低い濃度まで活性である。化学式（Ｉ）の化合物のＭＩＣが０．２５ｍｇ／Ｌであるのに対し、シプロフロキサシン(Cip)のＭＩＣは１２８ｍｇ／Ｌである。
【００６１】
実験例３：in vivo 毒性アッセイ
治療：化合物２（即ち化学式（Ｉ））の２−１０  ｍｇ／ｋｇの一回の静脈投与（１００μＬ）とビークル対照群ＤＭＳＯ
発育／展開：動物を、接種後、２週間にわたりモニタした。毒性の兆候  例えば、体重減少、剛毛のコート（bristly coat）、動きの減少、流涙症（ocular epiphora）が、確認された。動物は、実験の終了まで、毎日体重を測定した。マウスの初期体重の８０％の減少を最終基準とした。
結論：体重の有意差は、対照群と比較して、分子の2mg／ｋｇの投与量では観測されなかった。図６を参照のこと。
【００６２】
実施例４，抗バイオフィルム活性を表５（図２２）に示す。
MRSA:メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（methicillin resistant S. aureus;）、Cip:  シプロフロキサシン（ciprofloxacin），Cli:  クリダマシン（clindamycin）、Eri: エリスロマイシン（erithromycin）、Pen:  ペニシリン（penicillin）、LVX:  レボフロカサシン（levofloxacin）、Gen:  ゲンタマイシン（gentamicin）  
【００６３】
この実施例では、化学式（Ｉ）の化合物により示される高い抗バイオフィルム活性を、シプロフロキサシン(Cip)，レボプロファイル(Lvx)と比較して、明らかにした。この化合物は、これらの抗菌剤よりも８倍低い濃度まで、活性である。化学式（Ｉ）の化合物のＭＢＩＣが１ｍｇ／Ｌであるのに対し、シプロフロキサシン(Cip)のＭＩＣは２５６ｍｇ／Ｌである。
【００６４】
上記の実施例とその結果に加えて、ここに提案した金(III) 錯体は、コリスチン（colistine）との相乗効果も示す。グラム陰性菌（Gram-negative）における金(III) 錯体とコリスチンの組み合わせのMICは、各抗生物質で別々に得られたそれよりも、遙かに低い。かくして、A．バウマニイ（A. baumannii）に対する金(III) 錯体のMICは４ｍｇ／Ｌであり、コリスチンのＭＩＣは６４ｍｇ／Ｌである。しかし、それらを組み合わせた場合は、各抗生物質のＭＩＣは、それぞれ０．２５ｍｇ／Ｌと、１ｍｇ／Ｌに減少する。
【００６５】
また、ＭＲＳＡの感受性菌を、様々の濃度の金(III) 錯体に３０日間に渡って曝した。毎日、菌の増殖を示すチューブを、寒天のプレートに広げ、コロニーをテストして、金(III) 錯体に対する耐性を得た。ダプトマイシン（Daptomycin）が、耐性獲得の対照として使用された。実験は複製によって行われた。３０日後、MICの増加は見られなかった。それ故、金(III) 錯体は、耐性を生成しない。
【００６６】
in vitroの毒性アッセイが行われた。ジュルカット（Jurkat）E6.1細胞を、様々な濃度の金(III) 錯体に曝した。IC50（即ち細胞の５０％を死滅させる濃度）が計算された。金(III) 錯体は、３．７７ｍｇ／ＬのＩＣ５０を示した。ＭＲＳＡのＭＩＣは、０．０６−０．５ｍｇ／Ｌであることを考慮にいれると、この毒性値は非毒性の範囲に入る。
【００６７】
金(III) 錯体が全ての菌を殺す時間も計算された。他の抗生物質を対照として使用した。この分子は、全ての菌を２ｘＭＩＣで４〜８時間で殺した。
【００６８】
細菌感染を治療する金(III) 錯体の有効性もテストされた。黄色ブドウ球菌による敗血症の感染モデルが確立された。臨床株S54F9が感染に用いられた。マウス１匹当たり６ｘ１０６ｃｆｕ（6x106 cfu/mice）が接種された（又は感染した、以下同じ）。５匹のマウスからなる群が使用された。（ｉ）感染したが治療していない対照マウス、（ｉｉ）５ｍｇ／ｋｇを１回の接種で治療したマウス、(III)２４時間毎に５ｍｇ／ｋｇの複数回の接種で治療したマウスである。対照群のマウス（ｉ）は接種後４８時間後に死亡した。１回の接種のマウス（ｉｉ）は投与後５日後に死亡した。複数回の投与のマウス(III)は投与後４日後に死亡した。
【００６９】
明細書中の元素の特性表示において、元素の質量数（即ち元素記号の前方かつ上部に半角で記載されている数字）は、元素記号の前に全角で表示されている場合もある。例えば３１Pは31Pと同じである。これ以外の記号R,Xに付いても同様である。即ち、例えばR1はR1、X1はX1である。
【００７０】
以上の説明は、本発明の一実施例に関するもので、この技術分野の当業者であれば、本発明の種々の変形例を考え得るが、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。特許請求の範囲の構成要素の後に記載した括弧内の番号は、図面の部品番号に対応し、発明の容易なる理解の為に付したものであり、発明を限定的に解釈するために用いてはならない。また、同一番号でも明細書と特許請求の範囲の部品名は必ずしも同一ではない。これは上記した理由による。用語「又は」に関して、例えば「Ａ又はＢ」は、「Ａのみ」、「Ｂのみ」ならず、「ＡとＢの両方」を選択することも含む。特に記載のない限り、装置又は手段の数は、単数か複数かを問わない。
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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2021523936.tif 000038