(57)【要約】  本発明は、ムメフラールを含む認知障害関連疾患の予防又は治療用組成物に関し、具体的にはムメフラール又はその許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は治療用薬学組成物、機能性食品組成物、飼料組成物、学習、認知機能又は記憶力改善用機能性食品組成物、及び前記薬学組成物を用いた認知障害関連疾患の治療方法に関する。  本発明のムメフラールは、基底前脳、白質、海馬などの脳の損傷に対して優れた正常化効果及び記憶力増進効果を発揮するので、それにより発症する認知症、アルツハイマー病などの退行性神経疾患、記憶障害などに関する認知障害の治療、学習、認知機能、記憶力改善などに有用である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムメフラール（Mumefural）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記ムメフラールは、下記化学式１で表される、請求項１に記載の薬学組成物。
【化１】
2021519330.tif 000005
【請求項３】
前記認知障害関連疾患は、認知症、アルツハイマー病（Alzheimer's disease）及び記憶障害からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項４】
前記認知症は、血管性認知症又はアルツハイマー型認知症である、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記組成物は、前記化合物を０．０１〜８０重量％含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を認知障害関連疾患の疑いのある個体に投与するステップを含む、認知障害関連疾患の治療方法。
【請求項８】
ムメフラール（Mumefural）又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用機能性食品組成物。
【請求項９】
ムメフラール（Mumefural）又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、学習、認知機能又は記憶力改善用機能性食品組成物。
【請求項１０】
ムメフラール（Mumefural）又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ムメフラールを含む認知障害関連疾患の予防又は治療用組成物に関し、具体的にはムメフラール又はその許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は治療用薬学組成物、機能性食品組成物、飼料組成物、学習、認知機能又は記憶力改善用機能性食品組成物、及び前記薬学組成物を用いた認知障害関連疾患の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
認知能力とは、記憶能力、時空間把握能力、判断力、言語能力、計算能力などを包括したものであり、他人の援助なく日常生活を可能にするものである。しかし、脳卒中、外傷などにより誘発される急速な神経細胞死や、退行性脳疾患を誘発する緩慢な神経細胞死などの全ての脳損傷においては、直ちに神経回路網の非可逆的な機能障害をもたらす。最終的には、認知能力が低下して健忘症、記憶障害、認知症、アルツハイマー病などの疾患が生じ、これまでのレベルの日常生活を維持できなくなる。個人の苦痛だけでなく、生産人口の減少を引き起こす前記認知障害関連疾患の患者数は、２０３０年に７４７０万人以上に増加するものと予想されており（非特許文献１）、その治療剤や治療方法の開発が切に求められている。
【０００３】
現在まで、韓国において、多くの認知障害治療及び認知能力改善効能を示す組成物に関する特許が公開、登録されている。その代表的な公開特許は次の通りである。特許文献１は、ユズ抽出物を有効成分として含む記憶力及び学習能力増進用組成物に関するものであり、特許文献２は、キジムシロ抽出物を有効成分として含有する認知機能障害の予防、改善又は治療用組成物に関するものであり、特許文献３は、記憶力改善、認知能力改善、認知症予防、遅延又は治療効果を示すホウセンカ抽出物に関するものである。しかし、このような化学薬剤及び天然組成物が市販されているにもかかわらず、いまだ効能が確実な優れた製剤が開発されていない現状である。また、市販されている薬剤は、肝毒性、不眠症、高血圧、嘔吐などの多くの副作用を引き起こす。よって、副作用が少なく、認知障害関連障害を効果的に治療できる製剤の開発が切に求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】韓国公開特許第２０１４−０１４４７８５号公報
【特許文献２】韓国登録特許第１０−１８３７４４４号公報
【特許文献３】韓国登録特許第１０−１８２３８９２号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Abate G, 2017, Oxid Med Cell Longev. 2017:10
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、認知症、アルツハイマー病、記憶障害などの認知障害関連疾患を治療できる物質を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、ムメフラールが脳損傷に対して優れた治療効果を発揮することを確認し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ムメフラール（Mumefural）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は治療用薬学組成物を提供することを目的とする。
【０００８】
また、本発明は、ムメフラール（Mumefural）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む組成物の認知障害関連疾患の予防又は治療用途を提供することを目的とする。
【０００９】
さらに、本発明は、前記薬学組成物を認知障害関連疾患の疑いのある個体に投与するステップを含む、認知障害関連疾患の治療方法を提供することを目的とする。
【００１０】
さらに、本発明は、ムメフラールを有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用機能性食品組成物を提供することを目的とする。
【００１１】
さらに、本発明は、ムメフラールを有効成分として含む、学習、認知機能又は記憶力改善用機能性食品組成物を提供することを目的とする。
【００１２】
さらに、本発明は、ムメフラールを有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用飼料組成物を提供することを目的とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のムメフラールは、基底前脳、白質、海馬などの脳の損傷に対して優れた正常化効果及び記憶力増進効果を発揮するので、それにより発症する認知症、アルツハイマー病などの退行性神経疾患、記憶障害などに関する認知障害の治療、学習、認知機能、記憶力改善などに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ムメフラール（mumefural）の空間記憶能力増進効果を示す図であり、各実行回数（sessions）における逃避に要する時間を示す。ここで、Ｓｈａｍ＋Ｖｅｈｉｃｌｅ（生理食塩水，saline）は正常対照群としての偽手術群であり、ＢＣＣＡ０＋Ｖｅｈｉｃｌｅ（生理食塩水，saline）は脳損傷群を生理食塩水で処理した陰性対照群であり、ＢＣＣＡ０＋ＭＦ２０は脳損傷群をムメフラール２０ｍｇ／ｋｇで処理した実験群であり、ＢＣＣＡ０＋ＭＦ４０は脳損傷群をムメフラール４０ｍｇ／ｋｇで処理した実験群であり、ＢＣＣＡ０＋ＭＦ８０は脳損傷群をムメフラール８０ｍｇ／ｋｇで処理した実験群である。前記カテゴリーは以下の図面においても同様である。
【図２】ムメフラールの空間記憶能力増進効果を示す図であり、試験プラットフォームのある場所に最初に到達する時間（Time to 1st platform entry; sec）を示す。
【図３】ムメフラールの生体安全性を示す図であり、各実行回数（sessions）における平均水泳速度（swimming speed; m/sec）を示す。
【図４ａ】ムメフラールの基底前脳損傷の正常化（ＣｈＡＴ陽性コリン作動性細胞の正常化）効果を示す図であり、ＣｈＡＴタンパク質に対する組織免疫染色結果を示す。
【図４ｂ】図４ａにおけるＣｈＡＴ陽性コリン作動性細胞の正常化の組織免疫染色結果を定量化した結果を示す図である。
【図５ａ】基底前脳におけるムメフラールのコリン作動系の正常化効果を示す図であり、ＣｈＡＴ、ＶＡＣｈＴ、ＡＣｈＥタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図５ｂ】図５ａにおけるＣｈＡＴ、ＶＡＣｈＴ、ＡＣｈＥタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図６】基底前脳におけるムメフラールのコリン作動系の正常化効果を示す図であり、ＡＣｈＥ活性についての酵素免疫分析結果を示す。
【図７ａ】海馬におけるムメフラールのコリン作動系の正常化効果を示す図であり、ＣｈＡＴ、ＶＡＣｈＴ、ＡＣｈＥタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図７ｂ】図７ａにおけるＣｈＡＴ、ＶＡＣｈＴ、ＡＣｈＥタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図８】海馬におけるムメフラールのコリン作動系の正常化効果を示す図であり、ＡＣｈＥ活性についての酵素免疫分析結果を示す。
【図９ａ】ムメフラールの海馬、白質のミエリンの脱髄の正常化効果を示す図であり、ＭＢＰタンパク質に対する組織免疫染色結果を示す。
【図９ｂ】図５ａにおけるＭＢＰタンパク質に対する組織免疫染色結果を定量化した結果を示す図である。
【図１０】海馬におけるムメフラールのＭＢＰタンパク質発現の正常化（ＭＢＰタンパク質の脱落抑制）効果を示す図であり、ＭＢＰタンパク質に対するウェスタンブロット結果を示す。
【図１１ａ】海馬におけるムメフラールのシナプスマーカーの正常化（ＰＳＤ−９５及びシナプトフィジン−１タンパク質の発現増加）効果を示す図であり、ＰＳＤ−９５及びシナプトフィジン−１タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図１１ｂ】図１１ａにおけるＰＳＤ−９５及びシナプトフィジン−１タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図１２ａ】海馬におけるムメフラールの神経線維量の正常化（ＮＭＤＡＲ２Ａ及びＮＭＤＡＲ２Ｂタンパク質の発現増加）効果を示す図であり、ＮＭＤＡＲ２Ａ及びＮＭＤＡＲ２Ｂタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図１２ｂ】図１２ａにおけるＮＭＤＡＲ２Ａ及びＮＭＤＡＲ２Ｂタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図１３ａ】海馬におけるムメフラールの神経伝達物質の正常化（ｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＡＭＫＩＩタンパク質の発現増加）効果を示す図であり、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＡＭＫＩＩタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図１３ｂ】図１３ａにおけるｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＡＭＫＩＩタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図１４ａ】海馬におけるムメフラールの神経形成因子の正常化（ＢＤＮＦ及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＲＥＢタンパク質の発現増加）効果を示す図であり、ＢＤＮＦ及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＲＥＢタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図１４ｂ】図１４ａにおけるＢＤＮＦ及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＲＥＢタンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図１５ａ】ムメフラールの海馬損傷の正常化（小膠細胞抑制）効果を示す図であり、Ｉｂａ−１（ionized calcium-binding adaptor molecule）に対する組織免疫染色結果を示す。ここで、ＣＡ１は海馬のアンモン角（Cornus Ammonis）１であり、ＣＡ３は海馬のアンモン角３であり、ＤＧは海馬の歯状回（dentate gyrus）である。
【図１５ｂ】図１５ａにおける組織免疫染色結果を定量化した結果を示す図であり、Ｉｂａ−１に対して陽性反応を示す細胞の数を示す。
【図１５ｃ】ムメフラールの白質損傷の正常化（小膠細胞抑制）効果を示す図であり、Ｉｂａ−１に対する組織免疫染色結果を示す。ここで、白質病変（White matter lesion）は、脳梁（corpus callosum）、海馬采（fimbria hippocampi）、視神経路（Optic tract）である。
【図１５ｄ】図１５ｃにおける組織免疫染色結果を定量化した結果を示す図であり、Ｉｂａ−１に対して陽性反応を示す細胞の数を示す。
【図１６ａ】ムメフラールの海馬損傷の正常化（星状膠細胞抑制）効果を示す図であり、ＧＦＡＰ（Glial fibrillary acidic protein）に対する組織免疫染色結果を示す。ここで、ＣＡ１は海馬のアンモン角１であり、ＣＡ３は海馬のアンモン角３であり、ＤＧは海馬の歯状回である。
【図１６ｂ】図１６ａにおける組織免疫染色結果を定量化した結果を示す図であり、ＧＦＡＰに対して陽性反応を示す細胞の数を示す。
【図１６ｃ】ムメフラールの白質損傷の正常化（星状膠細胞抑制）効果を示す図であり、ＧＦＡＰに対する組織免疫染色結果を示す。ここで、白質病変（White matter lesion）は、脳梁（corpus callosum）、海馬采（fimbria hippocampi）、視神経路（Optic tract）である。
【図１６ｄ】図１６ｃにおける組織免疫染色結果を定量化した結果を示す図であり、ＧＦＡＰに対して陽性反応を示す細胞の数を示す。
【図１７ａ】海馬におけるムメフラールの神経性炎症の正常化（Ｐ２Ｘ７Ｒ、ＴＬＲ４、ＭｙＤ８８、ＮＬＲＰ３、ｃａｓｐａｓｅ１、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８タンパク質の発現減少）効果を示す図であり、Ｐ２Ｘ７Ｒ、ＴＬＲ４、ＭｙＤ８８、ＮＬＲＰ３、ｃａｓｐａｓｅ１、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図１７ｂ】図１７ａにおけるＰ２Ｘ７Ｒ、ＴＬＲ４、ＭｙＤ８８、ＮＬＲＰ３、ｃａｓｐａｓｅ１、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図１８ａ】海馬におけるムメフラールの神経性炎症関連転写因子の正常化（ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３タンパク質の発現減少）効果を示す図であり、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す。
【図１８ｂ】図１８ａにおけるｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図１９ａ】海馬におけるムメフラールの神経性炎症シグナル伝達の正常化（ＮＦ−κＢタンパク質の発現減少）効果を示す図であり、ＮＦ−κＢ（ｐ６５，ｐ５０）タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を示す図である。
【図１９ｂ】図１９ａにおけるＮＦ−κＢ（ｐ６５，ｐ５０）タンパク質に対するウェスタンブロット分析結果を定量化した結果を示す図である。
【図２０】海馬におけるムメフラールの神経性炎症サイトカインの正常化（サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−１８の数値減少）効果を示す図であり、サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−１８に対する酵素免疫分析結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
前記目的を達成するために、本発明の一態様は、ムメフラール（Mumefural）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００１６】
また、本発明の他の態様は、ムメフラール（Mumefural）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む組成物の認知障害関連疾患の予防又は治療用途を提供する。
【００１７】
本発明において、ムメフラールは、認知障害関連疾患の治療機序が知られている、空間記憶能力の増進、コリン作動系の正常化、ミエリンの脱髄の正常化、シナプスマーカーの正常化、海馬損傷の正常化、神経膠症の正常化、神経性炎症の減少効果を発揮することが確認されたので、ムメフラールは認知障害関連疾患の予防、改善又は治療に有用であることが確認された。
【００１８】
本発明における「ムメフラール（Mumefural）」とは、化学式１の構造を有する化合物を意味する。ムメフラールは抗ウイルス効果などの薬理学的特性を有することが知られているが、その血管性認知症、アルツハイマー型認知症、アルツハイマー病、記憶障害などの認知障害関連疾患に対する予防、治療又は改善効果は示されておらず、本発明者らによって最初に解明されたものである。
【００１９】
【化１】
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【００２０】
前記ムメフラールを得る方法は、特に限定されるものではなく、当該技術分野で公知の方法により化学的に合成、分離することもでき、市販の物質を用いることもできる。
【００２１】
また、前記化合物は、溶媒和又は非溶媒和（unsolvated）の形態で存在してもよく、結晶又は無定形の形態で存在してもよく、これら全ての物理的形態が本発明に含まれる。
【００２２】
本発明における「認知障害関連疾患」とは、脳損傷による記憶能力、時空間把握能力、判断力、言語能力、計算能力などの認知機能（認知能力）の低下により誘発された疾患を意味する。具体的には、認知症、アルツハイマー病（Alzheimer's disease）又は記憶障害（memory impairment）であってもよく、より具体的には、前記認知症は、血管性認知症又はアルツハイマー型認知症であってもよいが、認知機能に障害のあるものであれば、これらに限定されるものではない。認知障害関連疾患の正確な発症機序と原因については把握されていないが、現在のところ、基底前脳、白質、海馬などの脳の損傷によるシナプスマーカー、神経線維量、神経形成因子などの減少及び神経炎症が発症原因であることが知られている。
【００２３】
認知症は、様々な原因により認知機能に障害が生じた状態であり、原因によって様々な下位疾患が存在する。具体例として、老人性認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、パーキンソン病認知症、ハンチントン病型認知症などが挙げられる。本発明の認知障害関連疾患には、これらの下位疾患が全て含まれる。
【００２４】
アルツハイマー病は、認知症を引き起こす最も多い退行性脳疾患であり、徐々に発症して認知機能の悪化が漸進的に進む病気である。記憶力の減退、言語能力の低下、時空間把握能力の低下、判断力及び日常生活遂行能力の低下、歩行障害、挙動障害などの認知障害症状を呈する。
【００２５】
記憶障害は、物事を記憶したり、過去の経験を思い出すことが困難であるか、全く不可能な病的な状態であり、健忘症、瞬間記憶喪失、短期記憶喪失、長期記憶喪失、一過性記憶障害などが記憶障害に該当する。
【００２６】
本発明の具体的な一実施例において、ムメフラールは、認知症様動物モデルの運動能力に対しては否定的な影響を及ぼすことなく、空間記憶能力を増進させ、基底前脳損傷、白質損傷、海馬損傷などを正常化し、シナプスマーカー、神経線維量、神経形成因子などを増加させ、神経炎症を減少させる効果を発揮することが確認された。また、それらの効果は、認知症が誘発されていない正常対照群と同程度であるか、より優れることが確認された（図１〜図２０）。
【００２７】
これは、ムメフラールが記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることを示唆するものである。
【００２８】
本発明における「予防」とは、前記ムメフラール又はその薬学的に許容される塩を含む組成物の投与により認知障害関連疾患を抑制又は遅延させるあらゆる行為を意味する。
【００２９】
本発明における「治療」とは、前記ムメフラール又はその薬学的に許容される塩を含む組成物の投与により認知障害関連疾患の症状を好転又は有利に変化させるあらゆる行為を意味する。
【００３０】
本発明における「薬学的に許容される塩」とは、陽イオンと陰イオンが静電気的引力により結合している物質である塩のうち薬学的に用いられる形態の塩を意味するが、通常は金属塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性又は酸性アミノ酸との塩などである。例えば、金属塩としては、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩など）、アルミニウム塩などが挙げられ、有機塩基との塩としては、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられ、無機酸との塩としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられ、有機酸との塩としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられ、塩基性アミノ酸との塩としては、アルギニン、リシン、オルニチンなどとの塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。
【００３１】
本発明の薬学組成物は、組成物の総重量に対してムメフラール又はその薬学的に許容される塩を０．０１〜８０％、具体的には０．０１〜７０％、より具体的には０．０１〜６０重量％含んでもよいが、認知障害関連疾患の予防又は治療効果を発揮するものであれば、これらに限定されるものではない。
【００３２】
また、前記薬学組成物は、薬学組成物の製造に通常用いられる薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含んでもよく、前記担体は、非天然担体（non-naturally occuring carrier）を含んでもよい。前記担体、賦形剤及び希釈剤の具体例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３３】
また、前記薬学組成物は、それぞれ通常の方法で錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、凍結乾燥剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれかの剤形を有し、経口又は非経口の様々な剤形であってもよい。製剤化する場合は、通常用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調製される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤には、少なくとも１つの賦形剤、例えばデンプン、炭酸カルシウム、スクロース（sucrose）又はラクトース（lactose）、ゼラチンなどが用いられてもよい。また、通常の賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤も用いられてもよい。経口用液体製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが挙げられ、通常用いられる通常の希釈剤である水、液体パラフィン以外にも種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが用いられてもよい。非経口用製剤としては、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤、坐剤などが挙げられる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（propylene glycol）、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられてもよい。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（witepsol）、マクロゴール、ツイーン（tween）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが用いられてもよいが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
本発明のさらに他の態様は、前記組成物を認知障害関連疾患の疑いのある個体に投与するステップを含む、認知障害関連疾患の治療方法を提供する。
【００３５】
ここで、前記「認知障害関連疾患」及び「治療」については前述した通りである。
【００３６】
本発明における「投与」とは、適切な方法で個体に前記薬学組成物を導入することを意味する。
【００３７】
本発明における「個体」とは、認知障害関連疾患が発症したか、発症するリスクのある、ヒトをはじめとする、ラット、マウス、家畜などのあらゆる動物を意味する。具体例として、ヒトを含む哺乳動物が挙げられる。
【００３８】
本発明の薬学組成物は、薬学的に有効な量で投与する。
【００３９】
前記「薬学的に有効な量」とは、医学的治療に適用できる合理的な利益／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量レベルは、個体の種類及び重症度、年齢、性別、薬物の活性、薬物に対する感受性、投与時間、投与経路及び排出率、治療期間、同時に用いられる薬物が含まれる要素、並びにその他医学分野で公知の要素により決定される。
【００４０】
前記薬学的組成物は、単独で又は他の治療剤と併用して投与してもよく、従来の治療剤と順次又は同時に投与してもよい。また、単一又は多重投与してもよい。前記要素を全て考慮して副作用なく最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者により容易に決定されてもよい。
【００４１】
また、前記薬学組成物は、目的とする方法に応じて経口投与又は非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内又は局所に適用）されてもよく、投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び時間によって異なるが、当業者により適宜選択されてもよい。一般に、前記薬学的組成物は、具体的には０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、より具体的には０．０５〜２００ｍｇ／ｋｇ、最も具体的には０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を１日１回又は数回に分けて投与することができるが、好ましい投与量は、個体の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間に応じて当業者により適宜選択されてもよい。
【００４２】
本発明のさらに他の態様は、ムメフラール又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用機能性食品組成物を提供する。
【００４３】
本発明のさらに他の態様は、ムメフラール又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、学習、認知機能又は記憶力改善用機能性食品組成物を提供する。
【００４４】
ここで、前記「ムメフラール」、「認知障害関連疾患」及び「予防」については前述した通りである。
【００４５】
本発明における「学習」（learning）とは、自らの行動を知覚して変化させる能力又は行動を意味し、空間知覚力、認知力、集中力などが含まれるものである。
【００４６】
本発明における「認知機能」とは、情報を取得し、それを維持して活用する能力を意味し、記憶能力、時空間把握能力、判断力、言語能力、計算能力などの認知能力が含まれるものである。
【００４７】
本発明における「記憶」又は「記憶力」とは、周囲の環境から得た新たな情報や学習した経験、知識を脳の特定部位に符号化して保存し、それを再び回想する能力を意味する。
【００４８】
本発明における「生理学的に許容される塩」とは、生理学的に許容され、生物体に投与された際に通常は胃腸障害、めまいなどのアレルギー反応又は類似反応を起こさず、投与される化合物が目的とする効果を発揮でき、通常用いられるものを意味する。
【００４９】
本発明における「改善」とは、ムメフラールを含む組成物の投与により治療される状態に関するパラメーター、例えば症状の程度を少なくとも減少させるあらゆる行為を意味する。
【００５０】
本発明によるムメフラールは、優れた脳損傷治療及び記憶力増進効果を発揮するので、認知障害関連疾患の予防もしくは改善、又は学習、認知機能もしくは記憶力の改善を目的として機能性食品組成物に含まれてもよく、前記機能性食品組成物は日常的に摂取できるので、認知障害関連疾患の予防もしくは改善、又は学習、認知機能もしくは記憶力の改善に高い効果が期待される。
【００５１】
本発明における「機能性食品」とは、健康機能食品に関する法律第６７２７号による人体に有用な機能性を有する原料や成分を用いて製造及び加工した食品を意味し、「機能性」とは、人体の構造及び機能に対して栄養素を調節するか、生理学的作用などの保健用途に有用な効果を与えることを意味する。一方、健康食品とは、一般食品に比べて積極的な健康維持や増進効果を有する食品を意味し、健康補助食品とは、健康補助目的の食品を意味するが、場合によっては、機能性食品、健康食品、健康補助食品は混用される。
【００５２】
本発明のムメフラールは、そのまま添加してもよく、他の食品又は食品成分と共に用いてもよく、通常の方法で適宜用いられてもよい。
【００５３】
本発明の機能性食品組成物は、当該技術分野で通常用いられる方法により製造することができ、その製造時には当該技術分野で通常添加する原料及び成分を添加して製造することができる。具体的には、前記機能性食品組成物は、生理学的に許容される担体をさらに含んでもよいが、担体の種類は特に限定されるものではなく、当該技術分野で通常用いられる担体であればいかなるものでも用いられてもよい。
【００５４】
また、前記機能性食品組成物は、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、着色剤、発色剤、漂白剤、調味料、甘味料、香料、膨張剤、強化剤、乳化剤、増粘剤、被膜剤、ガムベース、泡抑制剤、溶剤、改良剤などの食品添加物を含んでもよい。前記添加物は、食品の種類に応じて選択されて適切な量で用いられる。
【００５５】
さらに、前記機能性食品の剤形は、食品として認められる剤形であれば限定されるものではない。本発明の機能性食品用組成物は、様々な形態の剤形に製造することができ、一般薬品とは異なり、食品を原料とするので、薬品の長期服用時に発生し得る副作用などがないという利点があり、携帯性に優れるので、本発明の食品は、認知障害関連疾患の予防又は改善の効果を増進させる補助剤として摂取することができる。
【００５６】
本発明のムメフラールは、認知障害関連疾患の予防もしくは改善、又は学習、認知機能もしくは記憶力の改善の効果を発揮するものであれば、機能性食品組成物に様々な重量％で含まれてもよい。具体的には、機能性食品組成物の総重量に対して０．００００１〜１００重量％、又は０．０１〜８０重量％の量で含まれてもよいが、これらに限定されるものではない。健康及び衛生を目的とする長期間の摂取においては、前記範囲以下の含有量であってもよく、安全性面で何ら問題がないので、有効成分は前記範囲以上の量で用いてもよい。
【００５７】
本発明のさらに他の態様は、ムメフラール又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用飼料組成物を提供する。
【００５８】
ここで、前記「ムメフラール」、「生理学的に許容される塩」、「認知障害関連疾患」、「予防」及び「改善」については前述した通りである。
【００５９】
本発明における「飼料」とは、動物が食べて摂取し、消化させるための、もしくはそれに適した任意の天然もしくは人工の規定食、一食など、又は前記一食の成分を意味する。
【００６０】
前記飼料の種類は特に限定されるものではなく、当該技術分野で通常用いられる飼料を用いることができる。前記飼料の例としては、穀物類、根果類、食品加工副産物類、藻類、繊維質類、製薬副産物類、油脂類、デンプン類、ミール類、穀物副産物類などの植物性飼料と、タンパク質類、無機物類、油脂類、鉱物性類、単細胞タンパク質類、動物性プランクトン類、飲食物などの動物性飼料が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。
【００６１】
本発明の飼料組成物は、当該技術分野で公知の様々な形態に製造することができる。また、栄養素補充及び体重減少予防、飼料中の繊維素の消化利用性向上、乳質改善、繁殖障害予防及び受胎率向上、夏期高温ストレス予防など様々な効果を発揮する物質をさらに含んでもよい。例えば、炭酸水素ナトリウム、ベントナイト（bentonite）、酸化マグネシウム、複合鉱物質などの鉱物質製剤、亜鉛、銅、コバルト、セレンなどの微量鉱物質であるミネラル製剤、カロテン、ビタミンＥ、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、ニコチン酸、ビタミンＢ複合体などのビタミン剤、メチオニン、リシンなどの保護アミノ酸剤、脂肪酸カルシウム塩などの保護脂肪酸剤、生菌剤（乳酸菌剤）、酵母培養物、カビ発酵物などの生菌、酵母剤などがさらに含まれてもよい。
【実施例】
【００６２】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。しかし、これらの実施例は本発明を例示するものにすぎず、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
【００６３】
実施例１
認知症様動物モデルの作製及び薬物経口投与方法の確立
実施例１−１．認知症様動物モデルの作製方法
ムメフラール（mumefural: MF）の血管性認知症又は記憶力減退の進行抑制効果を確認するために、まず認知症様動物モデルを作製した。
【００６４】
なお、本発明に用いたムメフラール（mumefural: MF）は、ユーケム（ソウル所在）に合成を依頼して購入し（純度９５％以上）、ＮＭＲ及びＭａｓｓ分析による検証を経て実験に用いた。
【００６５】
具体的には、実験動物として３５０〜３８０ｇの１２週齢のウィスターラット（Wister rat）を用いた。実験動物入手後に外観を肉眼で検査し、次いで７日間の馴化期間中に一般症状を観察して健康な動物を選択し、各体重範囲でランダム法により群分けして実験を行った。馴化及び実験期間中の飼育環境は、温度を２３±３℃、相対湿度を５０±１０％、換気回数を１時間当たり１２〜１６回、照明を１２時間明暗周期（点灯７：００，消灯１９：００）、照度を１５０〜３００Ｌｘに調整し、一定の飼育環境条件を維持した。消毒した器具を用いて実験を行い、水と固形飼料（PMI nutrition, USA）は２４時間自由に摂取できるようにした。
【００６６】
血管性認知症様動物モデルを作製するために、慢性大脳低灌流（Chronic cerebral hypoperfusion）を両側総頸動脈閉塞（Bilateral common carotid artery occlusion, 2VO, 以下「脳損傷（ＢＣＣＡｏ）」という）により誘導した（Wakita et al., 1994）。ラットを４％イソフルラン（isoflurane）で麻酔し、手術中は１．５％イソフルラン（isoflurane）で麻酔した。頸中部を切開し、迷走神経が損傷しないように注意して両側総頸動脈を露出し、３番絹糸で２回結紮して脳損傷により認知症が誘発された動物モデルを作製した。
【００６７】
実施例１−２．ムメフラール経口投与方法
ウィスターラットにＢＣＣＡｏを施し、２１日経過後から４２日間ムメフラールを経口投与した。表１に示す全５群のグループに区分し、対照群には生理食塩水（saline）を経口投与した。経口投与濃度は、低濃度（２０ｍｇ／ｋｇ）、中濃度（４０ｍｇ／ｋｇ）及び高濃度（８０ｍｇ／ｋｇ）に設定した。
【００６８】
【表１】
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【００６９】
実施例２
ムメフラールの空間記憶能力増進効果の確認
認知症様動物モデルにおけるムメフラールの空間記憶能力増進効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後水迷路試験を行った。
【００７０】
具体的には、円形の水タンク（直径１８０ｃｍ，高さ５８ｃｍ）に２６±２℃の水をプラットフォームの約２ｃｍ上まで充填し、光が水に照射しないように四方に仕切りを設け、色素を入れて床が見えないようにした。また、仕切りの特定位置（直径１２ｃｍ，高さ３３．５ｃｍ）に標識を付着してラットがプラットフォームを探し出すための手がかりを与えた。空間記憶能力訓練は１日４セッション、全８日間の午前中（午前９時から）に１日１回ずつ計８回行った。ラットが隠れたプラットフォームを探し出すのにかかった時間や速度などを測定して記憶の標識（marker）とし、各グループにおいて１日毎に短縮される時間を比較した。その後、水迷路試験を訓練の８日後に行った。この試験では、ラットが隠れたプラットフォームを最初に探し出すのにかかった時間を測定して記憶の標識とした。すなわち、時間が大幅に短縮されるほど、記憶能力が増進したものとみなした。
【００７１】
その結果、図１から分かるように、ムメフラール投与及び学習が進むほど、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、隠れたプラットフォームを探し出す速度が速くなり、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度に速くなることが確認された。
【００７２】
また、図２から分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群である生理食塩水投与群に比べて、隠れたプラットフォームに最初に到達する時間が短縮され、特にムメフラール４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の短時間で到達することが確認された。
【００７３】
さらに、図３から分かるように、平均水泳速度はグループ間に差がないことが確認された。
【００７４】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により減少した空間記憶能力を効果的に正常化させ、運動障害などの副作用を示さないので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【００７５】
実施例３
ムメフラールのコリン作動系の正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおけるムメフラールのコリン作動系の正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後基底前脳のコリン作動性ニューロンの数を分析した。
【００７６】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから脳を摘出し、４０μｍの厚さで剥片を剥離した。その後、基底前脳のコリン作動性ニューロン（cholinergic neuron）を探すために、コリン作動性ニューロンに発現することが知られているＣｈＡＴ（choline acetyltransferase）タンパク質を用いた。１次抗体として抗ＣｈＡＴ抗体、２次抗体としてロバ（donkey）抗ヤギ（goat）抗体を用いて脳剥片に免疫蛍光染色を行い、抗ＣｈＡＴ陽性（positive）細胞を検索した。
【００７７】
その結果、図４ａ及び図４ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、抗ＣｈＡＴ抗体に陽性反応を示す細胞の数が基底前脳において大幅に増加することが確認され、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００７８】
また、図５ａ及び図５ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群である生理食塩水投与群に比べて、基底前脳においてＣｈＡＴ、ＶＡＣｈＴのタンパク質発現が増加し、ＡＣｈＥのタンパク質発現が減少することが確認され、図６から分かるように、ＡＣｈＥの活性が低下することが確認され、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００７９】
さらに、図７ａ及び図７ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、海馬におけるＣｈＡＴ、ＶＡＣｈＴのタンパク質発現が増加し、ＡＣｈＥのタンパク質発現が減少することが確認され、図８から分かるように、ＡＣｈＥの活性が低下することが確認され、ムメフラール４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００８０】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により減少したコリン作動性ニューロンの数を増加させ、基底前脳内のコリン作動性ニューロンを正常化させるだけでなく、海馬内のＡＣｈＥの活性を減少させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【００８１】
実施例４
ムメフラールのミエリン（myelin）の脱髄（degradation）の正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおけるミエリンの脱髄の正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後海馬、脳弓（fornix）、内側中隔（medial septum）、脳梁（corpus callosum）、海馬采（fimbria）中の希突起膠細胞（oligodendrocyte）の脱髄の程度を分析した。
【００８２】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから脳を摘出し、４０μｍの厚さで剥片を剥離した。その後、海馬、脳弓、内側中隔、脳梁、海馬采中の希突起膠細胞を探すために、希突起膠細胞ミエリン鞘に発現するＭＢＰ（myelin basic protein）タンパク質を用いた。１次抗体として抗ＭＢＰ抗体、２次抗体としてウマ抗マウス抗体を用いて脳剥片に組織免疫染色を行い、抗ＭＢＰ陽性反応を検索した。
【００８３】
その結果、図９ａ及び図９ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、ミエリンの脱髄が減少することが確認され、図１０から分かるように、海馬におけるＭＢＰタンパク質の密度が増加することが確認された。また、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００８４】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により脱髄したミエリンを正常化させ、海馬、脳弓、内側中隔、脳梁、海馬采中の希突起膠細胞を正常化させ、海馬におけるミエリンのタンパク質発現を正常化させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【００８５】
実施例５
ムメフラールのシナプスマーカーの正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおけるシナプスマーカーの正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後海馬のＰＳＤ−９５及びシナプトフィジン−１（synaptophysin-1）タンパク質発現の程度を分析した。
【００８６】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから海馬を摘出してタンパク質を抽出し、ウェスタンブロットによりＰＳＤ−９５及びシナプトフィジン−１タンパク質の発現量を分析した。β−アクチンをローディング対照群として用いた。
【００８７】
その結果、図１１ａ及び図１１ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、ＰＳＤ−９５及びシナプトフィジン−１タンパク質の発現量が増加することが確認された。また、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００８８】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により減少したシナプスマーカーを正常化させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【００８９】
実施例６
ムメフラールの海馬損傷の正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおける海馬損傷の正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後海馬内の神経線維の量のレベルを分析した。これは、ＮＭＤＡＲ２Ａ（N-methyl-D-aspartate receptors 2A）、ＮＭＤＡＲ２Ｂ（N-methyl-D-aspartate receptors 2B）タンパク質発現の程度を分析することにより行った。
【００９０】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから海馬を摘出してタンパク質を抽出し、ウェスタンブロットによりＮＭＤＡＲ２Ａ及びＮＭＤＡＲ２Ｂタンパク質の発現量を分析した。β−アクチンをローディング対照群として用いた。
【００９１】
その結果、図１２ａ及び図１２ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、ＮＭＤＡＲ２Ａ及びＮＭＤＡＲ２Ｂタンパク質の発現量が大幅に増加することが確認された。また、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００９２】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により減少した海馬内の神経線維の量を正常化させ、海馬損傷を正常化させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【００９３】
実施例７
ムメフラールの海馬損傷の正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおける海馬損傷の正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後海馬内の神経伝達物質の発現レベルを分析した。
【００９４】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから海馬を摘出してタンパク質を抽出し、ウェスタンブロットによりｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＡＭＫＩＩ（phospho-Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II）、ＣＡＭＫＩＩ（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II）タンパク質の発現量を分析した。β−アクチンをローディング対照群として用いた。
【００９５】
その結果、図１３ａ及び図１３ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＡＭＫＩＩタンパク質の発現量が大幅に増加することが確認された。また、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【００９６】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により減少した海馬内の神経伝達の分泌物質を増加させ、海馬損傷を正常化させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【００９７】
実施例８
ムメフラールの海馬損傷の正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおける海馬損傷の正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後海馬内の神経形成因子の発現レベルを分析した。
【００９８】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから海馬を摘出してタンパク質を抽出し、ウェスタンブロットによりＢＤＮＦ（Brain-derived neurotrophic factor）、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＲＥＢ（phospho-cAMP response element-binding protein）、ＣＲＥＢ（cAMP response element-binding protein）タンパク質の発現量を分析した。β−アクチンをローディング対照群として用いた。
【００９９】
その結果、図１４ａ及び図１４ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、ＢＤＮＦ及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＣＲＥＢタンパク質の発現量が大幅に増加することが確認された。特に、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群の約３倍以上の発現増加効果を示すことが確認された。
【０１００】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により減少した海馬内の神経形成因子の発現を増加させ、海馬損傷を正常化させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【０１０１】
実施例９
ムメフラールの神経膠症の正常化効果の確認
認知症様動物モデルにおける海馬及び脳梁の正常化効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後神経膠症（gliosis）を確認すべく、海馬及び白質中の小膠細胞（microglia）、星状膠細胞（astrocyte）を探した。なお、小膠細胞は、神経組織の老廃物を貪食する食細胞として作用し、組織内で変性したニューロンや異物などを除去し、星状膠細胞は、損傷したニューロンを再生する役割を果たす。よって、小膠細胞又は星状膠細胞の増加により、脳損傷が生じたとみなすことができる。
【０１０２】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから脳を摘出し、４０μｍの厚さで剥片を剥離した。その後、海馬及び白質内の小膠細胞を探すために、前記細胞で発現するＩｂａ−１（ionized calcium-binding adaptor molecule）タンパク質を用いた。また、星状膠細胞を探すために、前記細胞で発現するＧＦＡＰ（Glial fibrillary acidic protein）タンパク質を用いた。１次抗体としてそれぞれ抗Ｉｂａ−１抗体又は抗ＧＦＡＰ抗体、２次抗体としてウマ抗マウス抗体を用いて脳剥片に組織免疫染色を行った。
【０１０３】
その結果、図１５ａ〜図１５ｄから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、海馬（図１５ａ及び図１５ｂ）及び白質（図１５ｃ及び図１５ｄ）において小膠細胞の数が大幅に減少することが確認された。特に、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度の効果を発揮することが確認された。
【０１０４】
また、図１６ａ〜図１６ｄから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、海馬（図１６ａ及び図１６ｂ）及び白質（図１６ｃ及び図１６ｄ）において星状膠細胞の数が大幅に減少することが確認された。特に、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度又は優れた効果を発揮することが確認された。
【０１０５】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて損傷した海馬及び白質損傷を正常化させ、脳神経損傷を低減するので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【０１０６】
実施例１０
ムメフラールの神経性炎症の減少効果の確認
認知症様動物モデルにおける神経性炎症の減少効果を確認するために、実施例１の方法によりムメフラールを投与し、その後海馬におけるＰ２Ｘ７Ｒ（P2X purinoceptor 7）、ＴＬＲ４（toll-like receptor 4）、ＭｙＤ８８（myeloid differentiation primary response 88）、ＮＬＲＰ３（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3）、ｃａｓｐａｓｅ１、ＩＬ（interleukin）−１β、ＩＬ−１８、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３（phospho-signal transducer and activator of transcription 3）、ＮＦ−κＢ（ｐ６５，ｐ５０）タンパク質の発現量を測定した。なお、前記タンパク質は、神経細胞の炎症を触発し、脳に損傷を与えると共に、最終的に認知症などの疾患を引き起こす。
【０１０７】
具体的には、ムメフラールの投与が完了した認知症様ラットから海馬を摘出してタンパク質を抽出し、ウェスタンブロットにより前記タンパク質の発現量を分析した。β−アクチン、ＬａｍｉｎＢ１をローディング対照群として用いた。
【０１０８】
その結果、図１７ａ〜図１９ｂから分かるように、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、Ｐ２Ｘ７Ｒ、ＴＬＲ４、ＭｙＤ８８、ＮＬＲＰ３、ｃａｓｐａｓｅ１、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３、ＮＦ−κＢ（ｐ６５，ｐ５０）タンパク質の発現量が大幅に減少することが確認された。特に、ムメフラール２０、４０及び８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、正常対照群と同程度又は優れた効果を発揮することが確認された。
【０１０９】
また、図２０から分かるように、海馬組織における炎症性サイトカインの数値を確認するために、炎症性サイトカインのＩＬ−１β、ＩＬ−１８に酵素免疫分析を行ったところ、ムメフラール投与群は、陰性対照群に比べて、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８の数値が大幅に減少することが確認された。
【０１１０】
これらの結果から、ムメフラールは、認知症様ラットにおいて脳損傷により生じた神経性炎症を減少させるので、記憶障害、アルツハイマー病、認知症などの認知障害関連疾患の予防、治療などに有用であり、安全に用いられることが分かった。
【０１１１】
以上の説明から、本発明の属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施できることを理解するであろう。なお、前記実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明には、明細書ではなく請求の範囲の意味及び範囲とその等価概念から導かれるあらゆる変更や変形された形態が含まれるものと解釈すべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図１０】
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【図１１ａ】
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【図１１ｂ】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【図１３ａ】
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【図１３ｂ】
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【図１４ａ】
2021519330.tif 000026
【図１４ｂ】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１５ｃ】
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【図１５ｄ】
2021519330.tif 000031
【図１６ａ】
2021519330.tif 000032
【図１６ｂ】
2021519330.tif 000033
【図１６ｃ】
2021519330.tif 000034
【図１６ｄ】
2021519330.tif 000035
【図１７ａ】
2021519330.tif 000036
【図１７ｂ】
2021519330.tif 000037
【図１８ａ】
2021519330.tif 000038
【図１８ｂ】
2021519330.tif 000039
【図１９ａ】
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【図１９ｂ】
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【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年11月27日(2020.11.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムメフラール（Mumefural）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記ムメフラールは、下記化学式１で表される、請求項１に記載の薬学組成物。
【化１】
2021519330.tif 000043
【請求項３】
前記認知障害関連疾患は、認知症、アルツハイマー病（Alzheimer’s disease）及び記憶障害からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項４】
前記認知症は、血管性認知症又はアルツハイマー型認知症である、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記組成物は、前記化合物を０．０１〜８０重量％含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項７】
ムメフラール（Mumefural）又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用機能性食品組成物。
【請求項８】
ムメフラール（Mumefural）又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、学習、認知機能又は記憶力改善用機能性食品組成物。 
【請求項９】
ムメフラール（Mumefural）又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含む、認知障害関連疾患の予防又は改善用飼料組成物。
【国際調査報告】
2021519330.tif 000044
2021519330.tif 000045
2021519330.tif 000046
2021519330.tif 000047
2021519330.tif 000048
2021519330.tif 000049