(57)【要約】  本発明は、フェニルプロピオンアミド誘導体の塩およびその製造方法を提供する。本発明は特に、４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキソ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデカン−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸の、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、またはフマル酸塩を提供する。本発明の式（Ｉ）の化合物の塩は良好な安定性を有し、その単純な方法は、容易な操作を容易にする。本発明は、臨床治療により適している。    【化１】2021505596.tif 000013
2021505596.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキソ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデカン−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸の、薬学的に許容される塩。
【化１】
2021505596.tif 000012
ここで、薬学的に許容される塩は、無機塩または有機塩であり、好ましくは酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、またはフマル酸塩である。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される化合物と酸（ラジカル）とのモル比は、１：１〜１：５、好ましくは１：１、１：２、または１：３である請求項１に記載の薬学的に許容される塩。
【請求項３】
式（Ｉ）で表される化合物と塩化水素分子とのモル比は、好ましくは１：１、１：２、または１：３、より好ましくは１：３であり、
式（Ｉ）で表される化合物とリン酸分子とのモル比は、好ましくは１：３であり、
式（Ｉ）で表される化合物とクエン酸分子とのモル比は、好ましくは１：１、１：２、または１：３、より好ましくは１：１であり、
式（Ｉ）で表される化合物と安息香酸分子とのモル比は、好ましくは１：２であり、
式（Ｉ）で表される化合物とフマル酸分子とのモル比は、好ましくは１：２である請求項２に記載の薬学的に許容される塩。
【請求項４】
式（Ｉ）で表される化合物と酸との塩化反応工程を含む請求項３に記載の薬学的に許容される塩の調製方法。
【請求項５】
塩化反応が溶媒中で行われ、前記溶媒は、好ましくはアルコール溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、エーテル溶媒、ニトリル溶媒、アルコールとエーテル溶媒との混合溶媒、またはハロゲン化炭化水素溶媒とエーテル溶媒との混合溶媒、であり、前記アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、イソプロパノール、またはｎ−ブタノールであり、前記エーテル溶媒は、好ましくはジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、イソプロピルエーテル、またはジオキサンであり、前記ニトリル溶媒は、好ましくはアセトニトリルであり、前記ハロゲン化炭化水素溶媒は、好ましくはジクロロメタンであり、
アルコール溶媒とエーテル溶媒との前記混合溶媒は、好ましくはエタノール／イソプロピルエーテルまたはエタノール／イソプロパノール／イソプロピルエーテルの混合溶媒であり、
ハロゲン化炭化水素溶媒とエーテル溶媒との前記混合溶媒は、好ましくはジクロロメタン／イソプロピルエーテルの混合溶媒である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
塩化反応が完了したとき、貧溶媒を添加するステップ、前記溶媒を揮発させるステップ、または冷却するステップがさらに含まれ、前記貧溶媒は、好ましくはエーテル溶媒であり、当該エーテル溶媒は、好ましくはジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、イソプロピルエーテル、またはジオキサンである請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記方法は、塩変換法を使用し、好ましくはトリフルオロ酢酸塩を酢酸塩に変換するものであり、より好ましくは、前記式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩を高速液体クロマトグラフィーに供し、溶離剤として酢酸を含有する水で溶離し、濃縮し、乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩を得ることを特徴とする請求項３に記載の薬学的に許容される塩の調製方法。
【請求項８】
前記溶離剤は、酢酸アンモニウム、アセトニトリル、または酢酸アンモニウム／アセトニトリルをさらに含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記溶離剤中の酢酸の体積比は、０．１％である請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬学的に許容される塩、および場合により薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項１１】
κ−オピオイド受容体アゴニストによって媒介される関連疾患を予防および／または治療するための医薬を製造する請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物、または、請求項１０に記載の医薬組成物、の使用であって、前記疾患は、疼痛、炎症、そう痒、浮腫、低ナトリウム血症、低カリウム血症、腸閉塞、咳および緑内障、好ましくは疼痛からなる群より選択され、前記疼痛は、神経障害性疼痛、体幹疼痛、内臓疼痛、皮膚疼痛、関節炎性疼痛、腎臓結石疼痛、子宮痙攣、月経困難症、子宮内膜症、消化不良症、術後疼痛、内科的処置後疼痛、眼痛、中耳炎疼痛、爆発性癌疼痛、および消化管障害に関連する疼痛からなる群より選択されることが望ましい使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１２月６日に出願された中国特許出願第２０１７１１２７２４７４．１号の優先権を主張する。ここでは、中国の特許出願の内容を参考にしている。
【０００２】
本発明は、４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキソ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデカン−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸の塩、ならびにその調製方法、ならびにκオピオイド受容体（ＫＯＲ受容体）アゴニストおよびその製造における使用および／または痛みおよび痛みに関連する病気の予防のための薬剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
オピオイド受容体は内因性オピオイドペプチドとオピオイド薬の併用の標的となる重要なＧタンパク質共役受容体の一種であり、オピオイド受容体の活性化は神経系の免疫や内分泌系に対して調節作用を有し、オピオイド薬は現在最も強力で一般的に使用されている中枢性鎮痛薬である。内因性オピオイドペプチドは、哺乳類において自然に生成されるオピオイド活性物質であり、現在、周知の内因性オピオイドペプチドは、エンケファリン、エンドルフィン、ダイノルフィン、およびネオエンドルフィンに大別され、中枢神経系に存在する対応するオピオイド受容体、すなわちμ、δ、κ受容体などが存在する。
【０００４】
κ‐オピオイド受容体（ＫＯＲ）は、３８０のアミノ酸からなり、ダイノルフィンはその内因性リガンドである。感覚ニューロン、後根神経節細胞、一次求心性ニューロン末端に発現し、痛覚、神経内分泌、情動行動、認知などの重要な生理活性に関与する。ＫＯＲはまた、内向き整流カリウムチャネルおよびＮ型カルシウムイオンチャネルとも結合している。ＫＯＲアゴニストは、損傷や炎症の前に末梢の感覚神経末端からサブスタンスＰの放出を抑制（カルシウムイオン依存性）できるため、ＫＯＲアゴニストが抗損傷、抗炎症作用を有する理由と考えられる。ジノルフィンに加えて、種々の天然アルカロイドおよび合成リガンドをＫＯＲと組み合わせることもできる。ＫＯＲは自然な嗜癖制御機構を提供するため、受容体作動薬としての薬物は薬物嗜癖治療の可能性を有する。
【０００５】
ＫＯＲアゴニスト薬には、アシマドリン、Ｕ−５０４８８、およびナロキソンが含まれ、ＫＯＲアゴニストを開示する特許出願には国際公開第２００７／００１３９８号（特許文献１）、国際公開第２００８／０６０５５２号（特許文献２）、国際公開第９９／３２５１０号（特許文献３）、国際公開第２０１３／１８４７９４号（特許文献４）、国際公開第２０１４／０８９０１９号（特許文献５）、国際公開第２０１４／１８４３５６号（特許文献６）および国際公開第２０１５／０６５８６７号（特許文献７）が含まれる。
【０００６】
国際公開第２０１７／２１１２７２号（特許文献８、出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８７３２８、出願日２０１７年６月６日）は、ｈ−ＫＯＲ受容体に対する明らかなアゴニスト効果、良好な薬物動態特性を有し、より顕著な利点を有する疼痛を改善することができるＫＯＲアゴニスト化合物を開示しており、その化合物は式（Ｉ）によって示される構造を有する。
【化１】
2021505596.tif 000003
【０００７】
式（Ｉ）で表される化合物の溶解度が低いため、化合物の溶解度をさらに向上させるべく、式（Ｉ）で表される化合物について塩形成研究を行った。調査された塩には、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、またはフマル酸塩などが含まれる。生成物の溶解度は塩形成後に大幅に改善され、塩の安定性および他の問題も調査され、疼痛の治療において重要な研究意義を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００７／００１３９８号
【特許文献２】国際公開第２００８／０６０５５２号
【特許文献３】国際公開第９９／３２５１０号
【特許文献４】国際公開第２０１３／１８４７９４号
【特許文献５】国際公開第２０１４／０８９０１９号
【特許文献６】国際公開第２０１４／１８４３５６号
【特許文献７】国際公開第２０１５／０６５８６７号
【特許文献８】国際公開第２０１７／２１１２７２号
【特許文献９】米国特許出願公開第２０１１／０２１２８８２号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Bioorganic Medicinal Chemistry Letters, 2007, 7(9), 2448-2451
【非特許文献２】Chem. Med. Chem., 2015, 10 (7), 1232-1239
【非特許文献３】Angewandte Chemie, International Edition, 2003, 42(39), 4793-4795
【非特許文献４】The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2007, 322(2):686-694
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明が解決しようとする技術的課題は４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキソ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデカン−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸の塩を提供することであり、この塩は良好な安定性を有し、臨床に良好に適用することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の技術的解決策は以下の通りである。
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）で表される、４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキソ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデカン−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸の薬学的に許容される塩を提供する。
【化２】
2021505596.tif 000004
薬学的に許容される塩は、無機塩または有機塩であり、好ましくは酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、またはフマル酸塩である。
【００１３】
好ましくは、薬学的に許容される塩中の式（Ｉ）で表される化合物の酸（ラジカル）に対するモル比が１：１〜１：５、好ましくは１：１、１：２、または１：３である。
【００１４】
より好ましくは、薬学的に許容される塩中の式（Ｉ）で表される化合物と塩化水素分子とのモル比は、好ましくは１：１、１：２、または１：３、より好ましくは１：３である。
式（Ｉ）で表される化合物とリン酸分子とのモル比は、好ましくは１：３である。
式（Ｉ）で表される化合物とクエン酸分子とのモル比は、好ましくは１：１、１：２、または１：３、より好ましくは１：１である。
式（Ｉ）で表される化合物と安息香酸分子とのモル比は、好ましくは１：２である。
式（Ｉ）で表される化合物とフマル酸分子とのモル比は、好ましくは１：２である。
【００１５】
本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物と対応する酸との塩化反応の工程を含む、薬学的に許容される塩を調製するための方法を提供する。
【００１６】
本方法において、塩化反応は溶媒中で行われ、溶媒は、好ましくはアルコール溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、エーテル溶媒、ニトリル溶媒、アルコール溶媒とエーテル溶媒との混合溶媒、またはハロゲン化炭化水素溶媒とエーテル溶媒との混合溶媒であり、アルコール溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール、イソプロパノール、またはｎ−ブタノールであり、エーテル溶媒は、好ましくはジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、イソプロピルエーテル、またはジオキサンであり、ニトリル溶媒は、好ましくはアセトニトリルであり、ハロゲン化炭化水素溶媒は、好ましくはジクロロメタンである。
【００１７】
他実施形態では、アルコール溶媒とエーテル溶媒との混合溶媒は、エタノール／イソプロピルエーテルの混合溶媒、または、エタノール／イソプロピルアルコール／イソプロピルエーテルの混合溶媒であることが好ましい。別の他実施形態では、ハロゲン化炭化水素溶媒とエーテル溶媒との混合溶媒は、ジクロロメタン／イソプロピルエーテルの混合溶媒であることが好ましい。
【００１８】
好ましくは、塩化反応が完了したとき、貧溶媒を添加するステップ、溶媒を揮発させるステップ、または冷却するステップがさらに含まれ、貧溶媒は、好ましくはエーテル溶媒であり、エーテル溶媒は、好ましくはジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、イソプロピルエーテル、またはジオキサンである。
【００１９】
本発明はまた、薬学的に受容可能な塩を調製するための方法を提供し、ここで、塩変換法が使用され、好ましくは、トリフルオロ酢酸塩を酢酸塩に変換する。代替の実施形態において、塩変換方法は、式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩を高速液体クロマトグラフィーに供し、溶離剤として酢酸を含有する水で溶離し、濃縮し、乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩を得ることを含む。
【００２０】
塩変換方法において、溶離剤は、酢酸アンモニウム、アセトニトリル、または酢酸アンモニウム／アセトニトリルをさらに含んでもよい。
【００２１】
好ましくは、溶離液中の酢酸の体積比は、０．１％である。
【００２２】
本発明はまた、上記の薬学的に受容可能な塩、および任意に薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００２３】
本発明はまた、κオピオイド受容体作動薬によって媒介される関連疾患を予防および／または治療するための医薬を製造する際の塩または医薬組成物の使用を提供する。疾患は、疼痛、炎症、そう痒、浮腫、低ナトリウム血症、低カリウム血症、腸閉塞、咳および緑内障、好ましくは疼痛からなる群から選択される。疼痛は、神経障害性疼痛、体幹疼痛、内臓疼痛、皮膚疼痛、関節炎性疼痛、腎臓結石疼痛、子宮痙攣、月経困難症、子宮内膜症、消化不良症、術後疼痛、内科的治療後疼痛、眼痛、中耳炎疼痛、消化管障害に関連する爆発性癌疼痛および疼痛、からなる群から選択されることが望ましい。
【００２４】
特に明記しない限り、本出願の説明および特許請求の範囲において本明細書で使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有する。しかしながら、本発明をより良く理解するために、いくつかの関連する用語の定義および説明を以下に提供する。さらに、本出願において提供される用語の定義および解釈が、当業者によって一般に理解される意味と一致しない場合、本出願において提供される用語の定義および解釈が優先されるものとする。
【００２５】
本発明で用いる「ハロ」とは、「ハロゲン原子」で置換されていることをいい、「ハロゲン原子」とはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などをいう。
【００２６】
本発明で使用される用語「Ｃ１−６アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル基を表し、具体例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、１，２−ジメチルプロピルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
本発明で用いられる「エーテル系溶媒」とは、エーテル結合−Ｏ−および炭素数１〜１０の鎖状化合物または環状化合物を表し、具体的には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、または１，４−ジオキサンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
本発明において使用される「アルコール溶媒」という用語は、「Ｃ１−６アルキル」上の一つ以上の水素原子を一つ以上の「ヒドロキシル（−ＯＨ）」で置換することで誘導される溶媒を指す。「ヒドロキシル」および「Ｃ１−６アルキル」は上記で定義されるとおりであり、特定の例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、イソペンタノール、またはトリフルオロエタノールが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
本発明で使用される「ニトリル溶媒」という用語は、「Ｃ１−６アルキル」上の一つ以上の水素原子を一つ以上の「シアノ（−ＣＮ）」で置換することから誘導される溶媒を指す。「シアノ」および「Ｃ１−６アルキル」は上記で定義される通りであり、特定の例としては、アセトニトリルまたはプロピオニトリルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明で使用される「ハロゲン化炭化水素溶媒」は、「Ｃ１−６アルキル」上の一つ以上の水素原子を一つ以上の「ハロゲン原子」で置換することから誘導される溶媒を指す。「ハロゲン原子」および「Ｃ１−６アルキル」は上記で定義されるとおりであり、特定の例としては、塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、または四塩化炭素が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
本発明で用いる「混合溶媒」とは、一種以上の各有機溶媒を一定の割合で混合した溶媒、または有機溶媒と水とを一定の割合で混合した溶媒をいい、好ましくは一種以上のアルコールと一種以上のエーテルとを混合したもの、または、一種以上のハロゲン化炭化水素溶媒と一種以上のエーテル溶媒とを混合したもの、であり、アルコール溶媒、エーテル溶媒、およびハロゲン化炭化水素溶媒は、上記で定義した通りであり、一定の割合は、０．０５：１〜１：０．０５、好ましくは１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：８、１：１０、または１：２０である。
【００３２】
本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物の塩と、場合により一つ以上の医薬担体および／または希釈剤とを含む医薬製剤に関する。医薬製剤は、任意の薬学的に許容される剤形にすることができる。たとえば、本発明の塩または医薬製剤は、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、注射剤（注射剤、注射用滅菌粉末、および注射用濃縮溶液を含む。）、坐剤、吸入剤またはスプレー剤に製剤化することができる。
【００３３】
さらに、本発明の医薬製剤は、経口、非経口、直腸投与、肺投与、または局所投与などの任意の適切な投与様式で、このような治療を必要とする患者または対象に適用できる。経口投与に使用される場合、医薬組成物は、経口固形製剤、たとえば錠剤、カプセル、丸剤、顆粒剤などの経口製剤、または経口溶液、経口懸濁液、シロップなどの経口液体製剤に、製剤化できる。経口製剤に形成される場合、医薬製剤はまた、適切な充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤などを含有する可能性がある。非経口投与のために使用される場合、医薬調製物は、注射液、注射のための滅菌粉末、および注射のための濃縮溶液を含む注射剤に処方され得る。注射剤として形成される場合、医薬組成物は、従来の医薬分野における従来の方法によって製造できる。注射剤に処方される場合、医薬調製物に添加される添加剤は存在し得ず、一方、適切な添加剤は、薬剤の性質に従って添加さうる。直腸投与のために使用される場合、医薬調製物は、坐剤などに製剤化されうる。肺投与に使用される場合、医薬製剤は、吸入剤またはスプレーなどに製剤化されうる。特定の好ましい実施形態において、本発明の塩の治療的および／または予防的有効量は、医薬調製物または医薬中に存在する。特定の好ましい実施形態において、本発明の塩は、医薬調製物または医薬中に単位用量形態で存在する。
【発明の効果】
【００３４】
従来技術と比較して、本発明の技術的解決策は、以下の利点を有する。
【００３５】
研究により、本発明により調製された式（Ｉ）で表される化合物の塩は、照明、高温、および高湿度の条件下で、高純度、ＨＰＬＣ純度のわずかな変化および高い化学的安定性を有することが示される。本発明の技術的解決策により得られる式（Ｉ）で表される化合物の塩は、製造、輸送、および貯蔵の医学的要件を満たすことができ、安定した製造プロセスを有し、繰り返し制御することができ、工業生産に適しうることが示される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】ラットにおけるカラゲナン誘発炎症性疼痛に対する式（Ｉ）で表される化合物の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明は本発明の技術的解決策を例示するためだけのものであり、本発明の本質および範囲を限定するものではない実施例を参照して、以下でさらに詳細に説明される。
【００３８】
化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）または／および質量分析（ＭＳ）によって決定される。ＮＭＲシフト（ｄ）は、１０〜６（ｐｐｍ）の単位で与えられる。ＮＭＲはＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ−４００  ＮＭＲ装置によって測定し、測定溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）であり、内部標準は、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）であった。
【００３９】
ＭＳの測定は、ＦＩＮＮＩＧＡＮ  ＬＣＱＡｄ（ＥＳＩ）質量分析計（製造者：Ｔｈｅｒｍｏ、モデル：Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  ａｄｖｉｔｉｅｎｔ  ＭＡＸ）によって行う。
【００４０】
ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００ＤＡＤ高圧液体クロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  １５０×４．６ｍｍカラム）およびＷａｔｅｒｓ  ２６９５−２９９６高圧液体クロマトグラフィー（Ｇｉｍｉｎｉ  Ｃ１８  １５０×４．６ｍｍカラム）を使用することによって決定した。
【００４１】
イオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）:装置：Ｄｉｏｎｅｘｉｓ−５０００＋イオンクロマトグラフィー、分離カラム：ＩｏｎＰａｃ  ＡＳ１１−ＨＣ、検出モード：コンダクタンス、リンス溶液：  ＮａＯＨ  ０．０３Ｍ、流速：１．５ｍＬ／分
【００４２】
実施例１：式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（７１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびイソプロパノール（０．２５ｍＬ）を反応フラスコに加え、５０℃に加熱し、完全に溶解するまで撹拌し、酢酸（６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を５０℃で滴下し、続いてイソプロピルエーテル（０．２５ｍＬ）を滴下し、次いで５０℃で２時間撹拌し、室温に自然冷却し、１６時間撹拌し、次いで反応混合物を濾過し、濾過ケーキを真空下で乾燥させて、表題生成物（３０ｍｇ、収率３９％）を得た。
【００４３】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示すが、核磁気データは、塩中の主成分と酢酸のモル比が１：１であることを示している。
【００４４】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.37-7.11 (m, 10H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 3.86 (brs., 1H), 3.83-3.58 (m, 3H), 3.24-3.03 (m, 3H), 2.96-2.72 (m, 4 H), 2.61 (dd, 1H), 2.52 (dd, 1H), 2.19 (brs., 2H), 1.90 (s, 3H), 1.83-1.53 (m, 9H), 1.44 (d, 2H), 1.19 (d, 3H), 1.01-0.87 (m, 6H).
【００４５】
実施例２：式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（３００ｍｇ、０．４２４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に加え、撹拌溶解し、ジクロロメタン０．５ｍＬに酢酸（２６．７ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）をあらかじめ溶解した溶液を加え、５０℃に加熱し、わずかに沸騰した状態で２時間撹拌し、次いでイソプロピルエーテル（３ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌し、反応混合物を濾過し、濾過ケーキをイソプロピルエーテル（５ｍＬ×２）ですすぎ、排水し、真空下で乾燥させて、表題生成物（３００ｍｇ、収率９２％）を得た。
【００４６】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示すが、核磁気データは、塩中の主成分と酢酸のモル比が１：１であることを示している。
【００４７】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.40-7.12 (m, 10H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.39 (dd, 1H), 3.97-3.69 (m, 4H), 3.23-3.06 (m, 3H), 2.98-2.73 (m, 4 H), 2.61 (dd, 1H), 2.53 (dd, 1H), 2.20 (d, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.87-1.74 (m, 2H), 1.74-1.51(m, 7H), 1.44 (d, 2H), 1.19 (d, 3H), 1.01-0.87 (m, 6H).
【００４８】
実施例３：式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（５００ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（５ｍＬ）を反応フラスコに加え、撹拌して完全に溶解し、酢酸（４４．４ｍｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を４０℃に加熱し、２時間撹拌した後、ジイソプロピルエーテル（５ｍＬ）を加え、室温まで徐冷し、１時間撹拌を続けた後、反応混合物を濾過し、濾過ケーキを減圧乾燥して標記生成物（５００ｍｇ、収率９２％）を得た。
【００４９】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示すが、核磁気データは、塩中の主成分と酢酸のモル比が１：１であることを示している。
【００５０】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.34-7.05 (m, 10H), 4.83 (dd, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 3.93-3.64 (m, 4H), 3.24-3.04 (m, 3H), 2.97-2.76 (m, 4 H), 2.68-2.47 (m, 2H), 2.30-2.07 (m, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.84-1.55 (m, 9H), 1.44 (d, 2H), 1.19 (d, 3H), 1.06-0.79 (m, 6H).
【００５１】
実施例４  式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（３００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）を反応フラスコに添加し、完全に撹拌溶解し、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）に酢酸（７６．３ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）をあらかじめ溶解した溶液を滴下し、温度を５０℃に上げ、混合物を２時間撹拌し、次いで、イソプロピルエーテル（３ｍＬ）を添加し、次いで、温度を徐々に室温に下げ、混合物を室温で７２時間撹拌し、反応混合物を濾過し、濾過ケーキをイソプロピルエーテル（５ｍＬ×２）で洗浄し、真空下で乾燥させて、表題生成物（３００ｍｇ、収率９２％）を得た。
【００５２】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データには、塩中の酢酸に対する主成分のモル比は１：２であることを示している。
【００５３】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.39-7.13 (m, 10H), 4.83 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.39 (dd, 1H), 3.94-3.65 (m, 4H), 3.27-3.12 (m, 3H), 2.95-2.79 (m, 4 H), 2.70-2.52 (m, 2H), 2.20 (dd, 2H), 1.93 (s, 6H), 1.84-1.55(m, 9H), 1.51-1.40 (d, 2H), 1.20 (d, 3H), 1.01-0.87 (m, 6H).
【００５４】
実施例５：式（Ｉ）で表される化合物の酢酸エステルの調製
ＳｅｐＨａｄｅｘ  ｇ２５（１０ｇ）を２０％エタノール水溶液に３０分間浸漬した後、カラム（直径：高さ＝１：３）に充填し、残りを海砂で満たし、式（Ｉ）で表される化合物（２ｇ、粗生成物）および水（２ｍＬ）を反応フラスコに添加し、溶液のｐＨが約７になるまでアンモニア水を滴下し、試料を湿式処理し、純水ですすぎ、２１４ｎｍおよび２１０ｎｍピークで回収し、回収した溶液を直接凍結乾燥し、残渣を高速液体クロマトグラフィー（カラムＷＡＴＥＲＳ  ２７６７  Ｘｂｒｉｄｇｅ  ３０ｘ１５０ｍｍ、５μｍ、移動相（Ａ：水（０．１％酢酸）、Ｂ：水（１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム）、Ｃ：アセトニトリル）で精製して、表題生成物（５００ｍｇ）を得た。
【００５５】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出の結果、酢酸イオン含有量は１３．５２％であり、塩中の主成分と酢酸のモル比は１：２であった。
【００５６】
実施例６：式（Ｉ）で表される化合物の塩酸塩の調製
式（Ｉ）で表される粗化合物（２ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を塩酸（１６ｍＬ、４Ｍ）に溶解し、２時間撹拌反応させ、減圧下で濃縮して約２ｇの粗生成物を得た。粗生成物を、高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：Ｓｈａｒｐｓｉｌ−Ｈ２０×２５０ｍｍ、５μＭ、Ｃ１８、移動相（Ａ：水（０．０５％  ＨＣｌ）、Ｂ：アセトニトリル））で精製して、表題生成物（８０ｍｇ、収率７０％）を得た。
【００５７】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出結果は、塩化物イオン含有量が９．７３％であり、塩酸に対する塩の主成分のモル比が１：２であることを示している。
【００５８】
実施例７：式（Ｉ）で表される化合物の塩酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（１００ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に溶解し、塩化水素のイソプロピルアルコール溶液（０．１７６ｍＬ、４Ｍ）を滴下し、室温で１６時間固体沈殿させずに撹拌し、ジイソプロピルエーテル（２ｍＬ）を加え、４時間撹拌し、反応混合物を濾過し、濾過ケーキをジイソプロピルエーテル（１ｍＬ）で洗浄し、濾過ケーキを回収し、真空下で乾燥して、表題生成物（８０ｍｇ、収率７０％）を得た。
【００５９】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出結果は、塩化物イオン含有量が１２．５７％であり、塩酸に対する塩の主成分のモル比が１：３であることを示している。
【００６０】
実施例８：式（Ｉ）で表される化合物の塩酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（３５０ｍｇ、０．４９４ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（５ｍＬ）に溶解し、撹拌して完全に溶解し、塩化水素のイソプロパノール溶液（０．４９４ｍｌ、４Ｍ）を滴下し、固体を析出させ、５分間撹拌した後、完全に溶解し、さらに室温で１６時間撹拌し、固体を析出させず、ジイソプロピルエーテル（２ｍＬ）を加え、室温で６時間撹拌し、反応混合物を濾過し、濾過ケーキを回収し、減圧乾燥して表題生成物（２５０ｍｇ、収率６２％）を得た。
【００６１】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出結果は、塩化物イオン含有量が１２．３８％であり、塩酸に対する塩の主成分のモル比が１：３であることを示している。
【００６２】
実施例９：式（Ｉ）で表される化合物の塩酸塩の調製
式（Ｉ）で表される粗化合物（４．０８ｇ、粗生成物）を塩酸（４０ｍＬ、４Ｍ）に０℃で加え、室温で２時間撹拌し、減圧濃縮し、得られた残渣を分取クロマトグラフィーにより精製して、表題生成物（７１０ｍｇ、収率１７％）を得た。
【００６３】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出結果は、塩化物イオン含有量が１２．３８％であり、塩酸に対する塩の主成分のモル比が１：３であることを示している。
【００６４】
実施例１０：式（Ｉ）で表される化合物のクエン酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（７１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（０．３ｍＬ）に溶解し、６０℃に加熱し、クエン酸一水和物（２２ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（０．８ｍＬ）溶液を加え、６０℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、１６時間撹拌し、反応混合物を濾過し、濾過ケーキをイソプロパノール（０．６ｍＬ）ですすぎ、濾過ケーキを回収し、真空下で乾燥させて、表題生成物（６０ｍｇ、収率７８％）を得た。
【００６５】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データは、塩中のクエン酸に対する主成分のモル比が１：１であることを示した。
【００６６】
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.40-7.11 (m, 10H), 4.86-4.79 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.43-4.29 (m, 1H), 3.96-3.81 (m, 3H), 3.76 (d, 2H), 3.69-3.51 (m, 2H), 3.22-3.06 (m, 2H), 3.05-2.90 (m, 4H), 2.79 (dd, 2H), 2.70 (s, 2H), 2.33-2.03 (m, 2H), 1.92-1.65 (m, 7H), 1.65-1.49 (m, 2H), 1.42 (brs., 2H), 1.34-1.25 (m, 3H), 1.02-0.84 (m, 6H).
【００６７】
実施例１１：式（Ｉ）で表される化合物のクエン酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（５００ｍｇ、０．７０６ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（１０ｍＬ）に溶解し、撹拌して溶解し、４０℃に加熱し、イソプロパノール（１０ｍＬ）にクエン酸一水和物（１５６ｍｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）をあらかじめ溶解した溶液を滴下し、白色固体懸濁液が現れ、混合物を４０℃で２時間撹拌し、氷浴中で冷却し、０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをイソプロピルアルコールですすぎ、次いで濾過ケーキを収集し、真空下で乾燥させて、表題生成物（６００ｍｇ、収率９４％）を得た。
【００６８】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データは、塩中の主成分対クエン酸のモル比が１：１であることを示す。
【００６９】
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.48-7.29 (m, 2H), 7.29-7.04 (m, 8H), 4.87-4.81 (m, 1H), 4.56 (dd, 1H), 4.35 (dt, 1H), 3.98-3.75 (m, 4H), 3.75-3.57 (m, 2H), 3.57-3.50 (m, 2 H), 3.21-3.14 (m, 1H), 3.13-2.89 (m, 5H), 2.79 (dd, 2H), 2.69 (dd, 2H), 2.30-2.01 (m, 2H), 1.88-1.61 (m, 8H), 1.61-1.49 (m, 1H), 1.49-1.33 (m, 2H), 1.33-1.24 (m, 3H), 1.06-0.76 (m, 6H).
【００７０】
実施例１２：式（Ｉ）で表される化合物のクエン酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（３００ｍｇ、０．４２４ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（４ｍＬ）に溶解し、クエン酸一水和物（１８７ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）のイソプロパノール溶液（４ｍＬ）溶液を８０℃で加え、８０℃で溶解し、２時間撹拌し、さらに室温で７２時間撹拌し、固体を濾別し、イソプロパノール（５ｍｌ×３）で洗浄した後、濾過ケーキを回収し、減圧乾燥して標記生成物（３００ｍｇ、収率７７％）を得た。
【００７１】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データは、塩中の主成分対クエン酸のモル比が１：２であることを示す。
【００７２】
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.43-7.20 (m, 9H), 7.15 (t, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.58 (dd, 1H), 4.41-4.26 (m, 1 H), 3.92-3.78 (m, 4H), 3.70-3.55 (m, 3 H), 3.27-3.00 (m, 4H), 2.99-2.86 (m, 2H), 2.82 (dd, 4H), 2.72 (dd, 4H), 2.32-2.08 (m, 2H), 1.88-1.62 (m, 8H), 1.62-1.48 (m, 2H), 1.48-1.37 (m, 2H), 1.33-1.25 (m, 3H), 1.02-0.88 (m, 6H).
【００７３】
実施例１３：式（Ｉ）で表される化合物のクエン酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（３００ｍｇ、０．４２３ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（５ｍＬ）に溶解し、クエン酸一水和物（３５６．２ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を加え、６０℃まで昇温し、２時間撹拌した。反応混合物を室温まで徐冷し、濾過し、濾過ケーキを回収し、減圧乾燥して標記生成物（２６０ｍｇ、収率６６％）を得た。
【００７４】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データは、塩中の主成分対クエン酸のモル比が１：３であることを示す。
【００７５】
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.39-7.32 (m, 2H), 7.32-7.19 (m, 7H), 7.15 (t, 1H), 4.89-4.84 (m, 1H), 4.75-4.57 (m, 1H), 4.40-4.30 (m, 1H), 3.98-3.78 (m, 5H), 3.76-3.58 (m, 2H), 3.25-3.00 (m, 4H), 2.98-2.88 (m, 3H), 2.85 (dd, 5H), 2.77 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.32-2.06 (m, 2H), 1.87-1.65 (m, 7H), 1.65-1.47 (m, 2H), 1.43 (brs., 2H), 1.35-1.26 (m, 3H), 1.01-0.81 (m, 6H).
【００７６】
実施例１４：式（Ｉ）で表される化合物のリン酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（３０８ｍｇ、０．４３６ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（５ｍＬ）に溶解し、リン酸（２００ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、純度８５％）を加え、６０℃まで昇温し、反応混合物を２時間撹拌し、室温まで徐々に降温し、さらに１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、フィルターケーキを集め、真空下で乾燥させて、表題生成物（５２０ｍｇ、収率５１．９％）を得た。
【００７７】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出結果はリン酸イオン含量が３１．４３％であり、塩中のリン酸に対する主成分のモル比が１：３であることを示している。
【００７８】
実施例１５：式（Ｉ）で表される化合物のリン酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（５００ｍｇ、０．７０６ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（４０ｍＬ）に溶解し、４０℃に昇温し、イソプロピルアルコール（１０ｍＬ）にリン酸（３６９ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ、純度８５％）をあらかじめ溶解した溶液を加え、４０℃で２時間、０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをイソプロピルアルコール（１ｍｌ×３）ですすぎ、次いで濾過ケーキを収集し、真空下で乾燥させて、表題生成物（６６０ｍｇ、収率９０％）を得た。
【００７９】
得られた生成物のイオンクロマトグラフィー（ＨＰＩＣ）検出結果から、リン酸イオン含有量は２９．０８％であり、塩中の主成分とリン酸のモル比は１：３であった。
【００８０】
実施例１６：式（Ｉ）で表される化合物の安息香酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（５５ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（１ｍＬ）に溶解し、５０℃に加熱し、完全に溶解するまで撹拌し、イソプロパノール（０．３ｍＬ）に安息香酸（３８ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をあらかじめ溶解した溶液を加え、５０℃で２時間撹拌し、室温まで徐冷し、１６時間撹拌を続け、反応混合物を濾過し、濾過ケーキを回収し、減圧乾燥して、表題生成物（３５ｍｇ、収率５４％）を得た。
【００８１】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データは、塩中の主成分対安息香酸のモル比が１：２であることを示す。
【００８２】
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.21-7.96 (m, 10H), 7.44-7.21 (m, 10H), 4.84 (d, 1H), 4.69-4.57 (m, 1H), 4.38 (s., 1H), 4.00-3.83 (m, 3H), 3.77 (brs, 2H), 3.31-3.24 (m, 3 H), 3.20 (s, 1H), 2.97-2.81 (m, 4H), 2.76-2.60 (m., 2H), 1.83-1.53 (m, 9H), 1.43 (brs, 2H), 1.28-1.18 (m, 3H), 0.95 (d, 3H), 0.91 (d, 3H).
【００８３】
実施例１７：式（Ｉ）で表される化合物のフマル酸塩の調製
式（Ｉ）で表される化合物（５０ｍｇ、０．０７０６ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（０．５ｍＬ）に溶解した後、フマル酸（３３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、６０℃まで昇温し、２時間撹拌し、室温まで冷却し、濾過し、濾過ケーキを回収し、真空下で乾燥して、表題生成物（２６ｍｇ、収率４４．６％）を得た。
【００８４】
得られた生成物の１Ｈ  ＮＭＲを以下に示す。核磁気データは、塩中のフマル酸に対する主成分のモル比が１：２であることを示した。
【００８５】
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.41-7.31 (m, 2H), 7.31-7.20 (m, 7H), 7.20-7.10 (m, 1H), 6.69 (s, 4H), 4.84 (dd, 1H), 4.73-4.60 (m, 1H), 4.37 (dd , 1H), 3.96-3.78 (m, 3H), 3.78-3.63 (m, 2H), 3.60-3.51 (m, 1H), 3.26-3.15 (m, 1H), 3.13-2.96 (m, 3H), 2.96-2.79 (m, 3H), 2.31-2.08 (m, 2H), 1.83-1.54 (m, 8H), 1.49-1.38 (m, 2H), 1.33-1.26 (m, 3H), 1.00-0.82 (m, 6H).
【００８６】
実施例１８：本発明の結晶形態の影響因子に関する実験
式（Ｉ）で表される化合物と、式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩、塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩をそれぞれ開封し、均等に広げて、室温、加熱（４０℃、６０℃）、照明（４５００ルクス）、高湿度（ＲＨ７５％、ＲＨ９０％）の条件下で試料の安定性を調べた。サンプリング期間は２０日間である。
【００８７】
実験結果
表１：式（Ｉ）で表される化合物の遊離状態および塩に影響を及ぼす因子の実験結果
【表１】
2021505596.tif 000005
注記：記号「／」は、測定されていないことを示す。
【００８８】
実験的結論
影響因子の実験結果は、以下のことを示した。２０日間にわたる照明および高温の条件下で、遊離状態は大きく劣化し、高温は遊離状態の安定性に大きな影響を及ぼす。
【００８９】
酢酸塩（１：１または１：２）は、４０℃、６０℃の照射下で、さまざまな程度で分解した。酢酸塩（１：２）は、高温で不十分な安定性を有した。２０日間の実験が完了した後、高温下でのイオンクロマトグラフィーの結果は、アセテート（ラジカル）含有量が大幅に減少したことを示した。
【００９０】
塩酸塩（１：２）は照明および高温の条件下でわずかに分解し、塩酸塩（１：３）は照明条件下でわずかに分解し、他の条件下では安定であった。
【００９１】
クエン酸塩（１：２または１：３）は６０℃の高温で大きく分解した。
【００９２】
リン酸塩（１：３）は、照射および高温条件下で比較的安定であるか、またはわずかに劣化した。
【００９３】
すべての塩試料は遮光し、密封した状態で、照明から離して保管すべきであることが示唆される。
【００９４】
実施例１９：本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の異なる塩種の長期加速安定性実験
式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩、塩酸塩、クエン酸塩、およびリン酸塩のサンプルを、暗所および密閉条件下（内側パッケージは医薬用低密度ポリエチレン複合フィルムであり、外側パッケージはアルミニウム箔である。）、湿度（６０％ＲＨ）、温度（４℃、２５℃）および窒素保護あり／なしで、６ヶ月間、長期加速安定性調査に供した。
【００９５】
実験結果
表２：式（Ｉ）で表される化合物の塩の長期加速安定性試験結果
【表２】
2021505596.tif 000006
【００９６】
実験的結論
長期加速安定性試験の結果は、式（Ｉ）で表される化合物の酢酸塩（１：１）、塩酸塩（１：３）、クエン酸塩（１：１）、およびリン酸塩（１：３）の非晶質試料が、窒素保護あり／なしで、４℃、２５℃、６０％ＲＨの条件下で６ヶ月間安定であることを示した。
【００９７】
実施例２０：式（Ｉ）で表される化合物の調製は、国際公開第２０１７／２１１２７２号（特許文献８、出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８７３２８、出願日２０１７年６月６日）の方法を参照することができる。
４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキソ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデカン−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸  （Ｉ）
【化３】
2021505596.tif 000007
【００９８】
【化４】
2021505596.tif 000008
【００９９】
第１ステップ
４−ベンジル  １−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ピペリジン−１，４−ジカルボン酸  １ｂ
４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸１ａ（１．２ｇ、０．００３２ｍｏｌ、Bioorganic Medicinal Chemistry Letters, 2007, 7(9), 2448-2451（非特許文献１）に記載の周知の方法による。）、臭化ベンジル（０．６５ｇ、０．００３８ｍｏｌ）、炭酸セシウム（２．１ｇ、０．００６４ｍｏｌ）を２０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、濾液を減圧濃縮し、得られた残渣を薄層クロマトグラフィー（溶離液としてｎ−ヘキサンおよび酢酸エチル）で精製することにより標記生成物１ｂ（８００ｍｇ、収率５３％）を得た。
【０１００】
第２ステップ
ベンジル  ４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ピペリジン−４−カルボキシレート塩酸塩  １ｃ
化合物１ｂ（８００ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を２ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いで１，４−ジオキサン溶液中の２ｍｌの４Ｍ塩化水素を添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗表題生成物１ｃ（８００ｍｇ）を得、生成物を精製せずに直接次の反応に供した。
【０１０１】
第３ステップ
ベンジル  （Ｒ）−１−（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−６−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサノイル）−４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ピペリジン−４−カルボキシレート  １ｅ
１ｃ（８００ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）の粗生成物および（Ｒ）−２−（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸１ｄ（９２６ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ））を、Chem. Med. Chem., 2015, 10 (7), 1232-1239（非特許文献２）に記載された周知の方法を用いて２０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いで２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート（１．１２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７ｍＬ、３．９４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。次いで、反応混合物を２Ｎクエン酸に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物１ｅ（１．６ｇ）を得た。生成物を精製せずに次の反応に直接供した。
【０１０２】
第４ステップ
ベンジル  （Ｒ）−１−（２−アミノ−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサノイル）−４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ピペリジン−４−カルボキシレート  １ｆ
１ｅの粗生成物（１．６ｇ、０．００２モル）をジクロロメタン１０ｍＬに溶解し、ピペリジン１０ｍＬを加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した後、得られた残渣を薄層クロマトグラフィー（溶離液としてジクロロメタンおよびメタノール）により精製して、表題生成物１ｆ（９００ｍｇ、収率７７％）を得た。
【０１０３】
第５ステップ
ベンジル  （Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（２−クロロアセトアミド）−３−フェニルプロパンアミド）−４−メチルペンタノエート  １ｉ
ベンジル  （Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（２−アミノ−３−フェニルプロパンアミド）−４−メチルペンタノエート１ｇ（５００ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ、米国特許出願公開第２０１１／０２１２８８２号明細書（特許文献９）に開示された方法によって調製）およびトリエチルアミン（２７５ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いで塩化クロロアセチル（２３０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗表題生成物１ｉ（５００ｍｇ）を得た。生成物を精製せずに次の反応に直接供した。
【０１０４】
第６ステップ
ベンジル  （Ｒ）−４−メチル−２−（（Ｒ）−３−フェニル−２−（２−（（（Ｒ）−２−フェニルプロピル）アミノ）アセトアミド）プロピオンアミド）ペンタノエート  １ｋ
化合物１ｉの粗生成物（５００ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−フェニルプロパン−１−アミン１ｊ（２２８ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、Angewandte Chemie, International Edition, 2003, 42(39), 4793-4795（非特許文献３）に記載された周知の方法によって調製した）を、１０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、次いでヨウ化カリウム（３７２ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３０９ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を６０℃に加熱し、１２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水を添加し、次いでジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物１ｋ（６００ｍｇ）の粗生成物を得た。生成物を精製せずに次の反応に直接供した。
【０１０５】
第７ステップ
ベンジル  （９Ｒ，１２Ｒ）−９−ベンジル−１２−イソブチル−２，２−ジメチル−４，７，１０−トリオキシ−５−（（Ｒ）−２−フェニルプロピル）−３−オキサ−５，８，１１−トリアザ−１３−トリデカノエート  １ｌ
化合物１ｋの粗生成物（６００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３６１ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２２２ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を薄層クロマトグラフィー（溶離液としてジクロロメタンおよびメタノール）によって精製して、表題生成物１ｌ（５８０ｍｇ、収率８２％）を得た。
【０１０６】
第８ステップ
（９Ｒ，１２Ｒ）−９−ベンジル−１２−イソブチル−２，２−ジメチル−４，７，１０−トリオキシ−５−（（Ｒ）−２−フェニルプロピル）−３−オキサ−５，８，１１−トリアザ−１３−トリデカン酸  １ｍ
化合物１ｌ（５８０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｍＬに溶解した後、パラジウム炭素（６０ｍｇ、触媒量）を添加し、添加後、混合物を水素で３回通気し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を珪藻土で濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物１ｍ（５００ｍｇ）を得た。生成物を精製せずに次の反応に直接供した。
【０１０７】
第９ステップ
ベンジル  １−（（９Ｒ，１２Ｒ，１５Ｒ）−９−ベンジル−１５−（４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）−１２−イソブチル−２，２−ジメチル−４，７，１０，１３−テトラオキシ−５−（（Ｒ）−２−フェニルプロピル）−３−オキサ−５，８，１１，１４−テトラアザヘキサデシル−１６−アシル）−４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ピペリジン−４−カルボキシレート  １ｎ
化合物１ｍ（３６５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の粗生成物、化合物１ｆ（３９３ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート（３７６ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｍＬ、０．９９ｍｍｏｌ）を１０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を薄層クロマトグラフィー（溶離液としてジクロロメタンおよびメタノール）によって精製して、表題生成物１ｎ（１７０ｍｇ、収率２３％）を得た。
【０１０８】
第１０ステップ
４−アミノ−１−（（９Ｒ，１２Ｒ，１５Ｒ）−９−ベンジル−１５−（４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）−１２−イソブチル−２，２−ジメチル−４，７，１０，１３−テトラオキソ−５−（（Ｒ）−２−フェニルプロピル）−３−オキサ−５，８，１１，１４−テトラアザセチル−１６−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸  １ｏ
化合物１ｎ（８０ｍｇ、０．０７０６ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｍＬに溶解し、パラジウム炭素（１０ｍｇ、触媒量）を加え、添加後３回水素で通気し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を珪藻土で濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物１ｏ（６０ｍｇ）を得た。生成物を精製せずに次の反応に直接供した。
【０１０９】
第１１ステップ
４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキシ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデシル−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸トリフルオロアセテート  １ｐ
１ｏの粗化合物（６０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）を２ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いで１，４−ジオキサン中の４Ｍ塩化水素の１ｍｌ溶液を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を高速液体クロマトグラフィーにより精製して、表題生成物１ｐ（３０ｍｇ、収率５５．６％）を得た。
MS m/z (ESI): 708.6 [M+1]
【０１１０】
第１２ステップ
４−アミノ−１−（（２Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１４Ｒ）−２−（４−アミノブチル）−８−ベンジル−５−イソブチル−４，７，１０−トリオキシ−１４−フェニル−３，６，９，１２−テトラアザペンタデシル−１−アシル）ピペリジン−４−カルボン酸  （Ｉ）
化合物１ｐ（１ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）を水１０ｍＬに溶解し、氷浴中で冷却した後、アンモニア水をｐＨ＝７〜８になるまで滴下し、反応混合物を０．５時間撹拌し、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーにより調製、精製して、表題生成物（６００ｍｇ、収率８９％）を得た。
MS m/z (ESI): 708.6 [M+1]
【０１１１】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 7.32-7.18 (m, 10H), 4.86-4.84 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 3.86 (brs, 1H), 3.83-3.58 (m, 3H), 3.24-3.03 (m, 3H),  2.96-2.72 (m, 4 H), 2.61 (dd, 1H), 2.52 (dd, 1H), 2.19 (brs, 2H), 1.83-1.53 (m, 9H), 1.44 (d, 2H), 1.18 (d, 3H), 0.96-0.90 (m, 6H).
【０１１２】
試験例１
１．  実験の目的
この実験の目的はヒトＫＯＲ（ｈ−ＫＯＲ）受容体に対する式（Ｉ）で表される化合物のアゴニスト効果を試験し、ＥＣ５０値に従って化合物のインビトロ活性を評価することである。
【０１１３】
２．  ｈ−ＫＯＲ活性の試験
２．１  実験の目的
本発明の化合物はｈ−ＫＯＲ受容体を活性化し、それによって細胞内ｃＡＭＰレベルを低下させることができ、セカンドメッセンジャーｃＡＭＰは核に入り、ＤＮＡのＣＲＥと結合して、下流でルシフェラーゼの発現を開始し、ルシフェラーゼはその基質と反応して蛍光を発し、化合物の励起活性は、蛍光シグナルの測定によって反映される。
【０１１４】
２．２  実験方法
ｈ−ＫＯＲを活性化し、それによって下流ｃＡＭＰのレベルに影響を及ぼす式（Ｉ）によって表される化合物の活性を、以下の方法によって試験する。
【０１１５】
２．２．１  実験材料・装置
１）  実験装置
１．  マイクロプレートリーダー（ＰＥ、ベクター３）
【０１１６】
２）  実験材料
【表３】
2021505596.tif 000009
【０１１７】
２．２．２  実験手順
１）  ＨＥＫ２９３／ＫＯＲ／ＣＲＥモノクローナル細胞株の調製
ヒトＫＯＲ／ｐｃＤＮＡ３．１（＋）およびＣＲＥ／ｐＧＬ４．２９を、Ｇ４１８およびハイグロマイシンを培養培地に添加することによってＨＥＫ２９３細胞株に移し、ＨＥＫ２９３／ＫＯＲ／ＣＲＥノモノクローナル細胞株を９６ウェルプレートからスクリーニングした。
【０１１８】
２）  式（Ｉ）で表される化合物のｈ−ＫＯＲへの活性化効果の実験
ＨＥＫ２９３／ｈ−ＫＯＲ／ＣＲＥモノクローナル細胞株をＤＭＥＭ／高グルコース培地（１０％ＦＢＳ、１ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８、２００μｇ／ｍＬハイグロマイシン、均等に混合）中で培養し、３日毎に継代した。実験日に、細胞懸濁液を新鮮な細胞培養培地で調製し、９６ウェルプレート（ＢＤ、＃３５６６９２）を２０，０００細胞／ウェルとインキュベートし、５％二酸化炭素と共に３７℃で培養した。翌日、式（Ｉ）で表される化合物を２０ｍＭの濃度で純粋なＤＭＳＯに溶解し、次いで、２００ｎＭの第一の濃度をＤＭＳＯで調製し、次いで、化合物を８濃度に３倍連続希釈し、９０μＬのＤＭＳＯをブランクウェルおよびコントロールウェルに添加し、次いで、培養培地を、１０μＭのフォルスコリンを含有するＤＭＥＭ／高グルコース（ＳＨ３０２４３．０１Ｂ、ハイクローン）で２０倍希釈した。１日目に接種した細胞培養プレートを取り出し、１０μｌの希釈薬物または対照（０．５％ＤＭＳＯ）を各ウェルに添加し、穏やかに振盪し、混合し、３７℃に４時間置いた。９６ウェルプレートにおいて、１００μｌのルシフェラーゼ検出溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ６１１０）を各ウェルに添加し、プレートを室温で５分間放置し、化学発光値をＶｉｃｔｏｒ３．０によって測定した。化合物のＥＣ５０値を、化合物の濃度および対応するシグナル値に従って、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって計算した。
【０１１９】
２．３  試験結果
式（Ｉ）で表される化合物はｈ−ＫＯＲ受容体を活性化してｃＡＭＰのレベルに影響を与えるＥＣ５０＝１ｐＭであり、化合物はｈ−ＫＯＲ受容体に対して明らかに活性化効果を持つ。
【０１２０】
薬物動態評価
試験例２：イヌ薬物動態試験
１．  概要
ビーグル犬を試験動物として使用し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を使用して、式（Ｉ）で表される化合物の静脈内投与後の異なる時点におけるビーグル犬の血漿中の薬物濃度を決定した。ビーグル犬における本発明の化合物の薬物動態挙動を研究し、その薬物動態特性を評価する。
【０１２１】
２．  試験計画
２．１  試験薬
式（Ｉ）で表される化合物
【０１２２】
２．２  実験動物
Medicilon Pharmaceutical Technology (Shanghai) Co, Ltdが各グループに提供する３匹の雄ビーグル犬。
【０１２３】
２．３  与薬準備
適切な量の試料を秤量し、１００％生理食塩水を加えて溶解させた。
【０１２４】
２．４  管理
ビーグル犬３、雄、１群、１晩絶食後２ｍｌ／ｋｇの静脈内投与。
【０１２５】
３．  操作
静脈内投与群では、投与前、５分、１５分、０．５、１．０、２．０、４．０、８．０、１２．０、２４．０時間後に頚静脈から１．０ｍｌの血液を採取し、ヘパリン処理した試験管に入れ、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離して血漿を分離し、−８０℃で保存した。
【０１２６】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて、静脈内投与後のビーグル犬血漿中の化合物含量を測定した。
【０１２７】
４．  ビーグル犬の薬物動態パラメータ
ビーグル犬における式（Ｉ）で表される化合物の薬物動態パラメータは以下の通りであった。
【表４】
2021505596.tif 000010
【０１２８】
結論
化合物はビーグル犬において良好な薬物動態特性を有する。
【０１２９】
試験例３  ラットのカラゲニンによる炎症性疼痛治療におけるＫＯＲアゴニストの実験報告
１．  実験目的
ラットカラゲニン炎症性疼痛モデルの確立とラットの炎症性疼痛に対するＫＯＲアゴニストの治療効果の評価。
【０１３０】
２．  実験方法および材料
２．１．  実験動物と飼養条件
Shanghai Slack Experimental Animal Co, Ltd.（上海、中国、証明書Ｎｏ．２０１５０００５１３４０８、ライセンスＳＣＸＫ（上海）２０１２−０００２）から購入した実験用雄ウィスター系ラット、購入時１５０−１８０ｇ、ラット５匹／ケージ、１２／１２時間明／暗サイクル調整、恒温２３±１℃、湿度５０〜６０％、水の自由摂取。動物を購入した後、動物を７日以上飼育してから実験を開始した。
【０１３１】
２．２．  実験用医薬品
一般式（Ｉ）で表される化合物
λ−カラゲナン：バッチ番号：  ＢＣＢＰ８９７８Ｖ、シグマ製
０．９％塩化ナトリウム溶液（５００ｍｌ、４．５ｇ）
１％λ−カラゲナンを生理食塩水と混合し、一晩撹拌し、ゼリー懸濁液を形成する。
薬物用量は、塩基に基づいて計算した。
【０１３２】
２．３．  実験計画および方法
２．３．１．  動物のグループ分け
飼育後、ラットを以下の群に分けた。
【表５】
2021505596.tif 000011
【０１３３】
２．３．２．  実験方法［１］：
実験方法は、下記の参考文献（Ｋａｚｕｎａｒｉ  Ｎａｋａｏら）の方法に従って改良された。炎症性疼痛実験前に、ラットを無作為に体重に応じてブランク対照群、モデル群、０．１ｍｇ／ｋｇ群、および０．３ｍｇ／ｋｇ群に分けた。各群に８匹のラットが存在した。炎症性疼痛モデルは、１％カラゲナン（１００μｌ）をウィスター系ラットの足底部に皮下注射することによって確立した。４時間後、ラットを足底圧痛について試験して機械的疼痛閾値を評価し、ラットに試験の３０分前に単回尾静脈投与（１ｍｌ／ｋｇ）を行い、対照群およびモデル群に対応する溶媒を与えた。
【０１３４】
注：参考文献、CJ-023,423, a Novel, Potent and Selective Prostaglandin KOR Receptor Antagonist with Anti-hyperalgesic Properties[J]The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2007, 322(2):686-694（非特許文献４）
【０１３５】
２．４．  実験装置
Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ：  ＵＧＯ  ＢＡＳＩＬＥ、ｔｙｐｅ  ３８４５０
【０１３６】
２．５．  データ表現と統計処理
実験データは、平均±標準偏差（Ｓ．Ｄ．）によって表した。ＥｘｃｅｌソフトウェアＴ試験を用いて統計的比較を行った。モデル群およびブランク対照群のデータを分析し、比較して、有意な統計的有意性があるかどうかを調べた。＊Ｐ＜０．０５はモデル群と対照群との間に有意差があることを示し、＊＊Ｐ＜０．０１は、モデル群と対照群との間に非常に有意な差があることを示す。＃Ｐ＜０．０５はモデル群と投与群との間に有意差が認められ、＃＃Ｐ＜０．０１はモデル群と投与群との間に高い有意差が認められたことを示している。
【０１３７】
３．  結果
ブランク対照群のラットの圧痛閾値は約２０ｇであり、モデル群の圧痛閾値は７．６ｇであり、ブランク対照群と比較して、モデル群のラットの圧痛閾値は有意に減少し（ｐ＜０．０１）、モデル群と比較して、全ての薬剤は炎症性ラットの圧痛閾値を有意に増加させることができ（Ｐ＜０．０１）、０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇの圧痛閾値はそれぞれ１３．７ｇおよび２３．２ｇであり、増加範囲はそれぞれ７９．５％および２０４．５％であり、明らかな用量依存性を示した（図１）。
【０１３８】
４．  議論
λ‐カラギーナンは水生植物カラギーナンから抽出したコロイド状物質であり、アレルギー刺激作用を有する。実験におけるカラゲニン単独は炎症を誘発し、疼痛を引き起こす可能性がある。本実験では、ＫＯＲアゴニストをラットに投与した後の圧痛閾値の変化を観察し、亜急性炎症性疼痛に対する薬物の鎮痛効果とその作用強度を評価するために、カラゲニン炎症性疼痛モデルを確立した。実験では、圧痛に対するラットの反応をＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｖｏｎ  Ｆｒｅｙによって測定した。Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ（ｅ−ＶＦ）は元々Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅによってデザインされ、マウスとラットにおけるアレルギーと接触誘発疼痛を評価した。装置は、動物の刺激時間および刺激強度を自動的に記録することができる。独特の三角プリズム設計は、実験中に試験動物の足底領域を非常に容易に観察することを可能にする。試験プロセスの間、装置は試験された動物を自動的に感知して試験された爪を引っ込めることができ、フットスイッチを介して手動で判断することも可能である。局在はより集中しており、局所疼痛および神経因性疼痛の測定により適している。
【０１３９】
５．  結論
試験した薬物はラットの炎症性疼痛を改善することができ、用量依存性である。
【図１】
2021505596.tif 000014
【国際調査報告】
2021505596.tif 000015
2021505596.tif 000016
2021505596.tif 000017
2021505596.tif 000018