(57)【要約】  本願は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体であって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して当該キャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該免疫原性複合体に関する種々の改良を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャリアポリペプチドと糖抗原（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する滅菌容器であって、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合するものである、滅菌容器。
【請求項２】
キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する気密密閉容器であって、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合するものであり、気密密閉に好適な容器には、例えばバイアルが含まれ、内容物は、気密密閉の際に滅菌してあることが好ましい、気密密閉容器。
【請求項３】
例えばバイアル等の滅菌ガラス容器である、請求項１又は２に記載の容器。
【請求項４】
キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する送達デバイスであって、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合するものである、送達デバイス。
【請求項５】
シリンジである、請求項１もしくは請求項２に記載の容器、又は請求項４記載の送達デバイス。
【請求項６】
２種以上の異なる免疫原性複合体と、アルミニウム塩アジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）前記アルミニウム塩アジュバントは水酸化アルミニウムアジュバント又はリン酸アルミニウムアジュバントである、医薬組成物。
【請求項７】
２種以上の異なる免疫原性複合体と、リン酸アルミニウムアジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）当該組成物におけるアルミニウムイオンの濃度は、≦２．５ｍｇ／ｍＬである、医薬組成物。
【請求項８】
２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）前記医薬組成物の量は、０．２５から１．２５ｍＬである、医薬組成物。
【請求項９】
２種以上の異なる免疫原性複合体と防腐剤とを含む医薬組成物であって、各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合するものである、医薬組成物。
【請求項１０】
２種以上の異なる免疫原性複合体を含む、防腐剤を含まない医薬組成物であって、各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合するものである、防腐剤を含まない医薬組成物。
【請求項１１】
２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し、（ｉｉ）当該組成物は、重量オスモル濃度が２００から４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、医薬組成物。
【請求項１２】
２種以上の異なる免疫原性複合体と、少なくとも１つの賦形剤とを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）少なくとも１つの賦形剤は、塩化ナトリウム、コハク酸、及びポリソルベート８０からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項１３】
ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって
（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し；
（ｉｉ）ｎは、３から５０の整数であり、また
（ｉｉｉ）前記ｎ種の免疫原性複合体におけるキャリアポリペプチドの総量は、１用量当たり３ｎμｇ以下であり；
（ｉｖ）前記ｎ種の免疫原性複合体におけるキャリアポリペプチドの総濃度は、６ｎμｇ／ｍｌ以下であり；
（ｖ）前記ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総量は、１用量当たり３ｎμｇ以下であり；
（ｖｉ）前記ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総濃度は、６ｎμｇ／ｍＬ以下であり；
（ｖｉｉ）１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均量は、１用量当たり１から４μｇであり；
（ｖｉｉｉ）１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均濃度は、２から８μｇ／ｍＬであり；
（ｉｘ）１複合体当たりの糖抗原の平均量は、１用量当たり１から４μｇであり；
（ｘ）１複合体当たりの糖抗原の平均濃度は、２から８μｇ／ｍＬであり；
（ｘｉ）当該組成物は、非結合形態でのキャリアポリペプチドを含まず；
（ｘｉｉ）当該組成物は、非結合形態でのキャリアポリペプチドを含有し、前記組成物における非結合形態での当該キャリアポリペプチドの質量は、前記ｎ種の免疫原性複合体におけるそのキャリアポリペプチドの質量のうちの＜１０％であり；
（ｘｉｉｉ）前記組成物は、非結合形態での糖抗原を含まず；及び／又は
（ｘｉｖ）前記組成物は、非結合形態での糖抗原のうちの少なくとも１つを含有し、前記組成物における非結合形態での当該糖抗原の総質量は、前記ｎ種の免疫原性複合体における前記糖抗原の総質量のうちの＜１０％である、医薬組成物。
【請求項１４】
単位用量の医薬組成物を複数調製する方法であって、（ｉ）前記医薬組成物が、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含み、前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）当該方法は、前記免疫原性複合体を含むバルク組成物を調製するステップと、複数の別個の容器に前記バルク組成物から個々の単位用量を包装するステップとを含むものである、方法。
【請求項１５】
医薬組成物を調製する方法であって、前記医薬組成物が、２種以上の異なる免疫原性複合体とアルミニウム塩アジュバントとを含み、（ｉ）当該免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、また（ｉｉ）前記糖抗原が、前記キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合するものであり、そして当該方法は、（Ａ）前記免疫原性複合体のそれぞれをあるアルミニウム塩アジュバントに別個に吸着させて、次いで個々の吸着した複合体を一緒に混合するステップ、又は（Ｂ）前記免疫原性複合体のそれぞれを、前記アルミニウム塩アジュバントに順次吸着させるステップを含むものである、方法。
【請求項１６】
（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；（ｉｉ）Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まず、かつ、（ｉｉｉ）少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を含んだ、アミノ酸配列を含む、キャリアポリペプチド。
【請求項１７】
（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；かつ、（ｉｉ）以下のアミノ酸残基（配列番号１に従って番号付けした）のうちの１又は複数においてｎｎＡＡの置換を含んだアミノ酸配列を含む、キャリアポリペプチド：Ａｓｐ−２１１；Ａｓｐ−２９５；Ａｓｐ−３５２；Ａｓｐ−３９２；Ａｓｐ−４６５；Ａｓｐ−４６７；Ａｓｐ  ５０７；Ａｓｐ  ５１９；Ａｓｎ  ２９６；Ａｓｎ  ３５９；Ａｓｎ  ３９９；Ａｓｎ  ４８１；Ａｓｎ  ４８６；Ａｓｎ  ５０２；Ａｓｎ  ５２４；Ｇｌｕ  ２４０；Ｇｌｕ  ２４８；Ｇｌｕ  ２４９；Ｇｌｕ  ２５６；Ｇｌｕ  ２５９；Ｇｌｕ  ２９２；Ｇｌｕ  ３６２；Ｇｌｎ  ２５２；Ｇｌｎ  ２８７；Ｌｙｓ  ２１２；Ｌｙｓ  ２１８；Ｌｙｓ  ２２１；Ｌｙｓ  ２２９；Ｌｙｓ  ２３６；Ｌｙｓ  ２６４；Ｌｙｓ  ２９９；Ｌｙｓ  ３８５；Ｌｙｓ  ４５６；Ｌｙｓ  ４７４；Ｌｙｓ  ４９８；Ｌｙｓ  ５１６；Ｌｙｓ  ５２２；Ｌｙｓ  ５３４；Ａｒｇ  ３７７；Ａｒｇ  ４０７；Ａｒｇ  ４５５；Ａｒｇ  ４６０；Ａｒｇ  ４６２；Ａｒｇ  ４７２；Ａｒｇ  ４９３；Ｓｅｒ  １９８；Ｓｅｒ  ２００；Ｓｅｒ  ２３１；Ｓｅｒ  ２３３；Ｓｅｒ  ２３９；Ｓｅｒ  ２６１；Ｓｅｒ  ３７４；Ｓｅｒ  ３８１；Ｓｅｒ  ２９７；Ｓｅｒ  ３９７；Ｓｅｒ  ４５１；Ｓｅｒ  ４７５；Ｓｅｒ  ４９４；Ｓｅｒ  ４９５；Ｓｅｒ  ４９６；Ｓｅｒ  ５０１；Ｓｅｒ  ５０５；Ｔｈｒ  ２５３；Ｔｈｒ  ２６５；Ｔｈｒ  ２６７；Ｔｈｒ  ２６９；Ｔｈｒ  ２９３；Ｔｈｒ  ３８６；Ｔｈｒ  ４００；Ｔｈｒ  ４０８；Ｔｈｒ−４６９；及び／又はＴｈｒ  ５１７。
【請求項１８】
配列番号１のうちのＡｒｇ−１９３が、例えばＡｓｎ等である異なるアミノ酸で置換されている、請求項１６又は１７に記載のキャリアポリペプチド。
【請求項１９】
抗原に対して、前記キャリアポリペプチド内のｎｎＡＡ残基を介して結合した、請求項１６又は請求項１７又は請求項１８に記載の前記キャリアポリペプチドを含む、免疫原性複合体。
【請求項２０】
キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体であって、（ｉ）前記キャリアポリペプチドは配列番号４のアミノ酸配列を含み、また（ｉｉ）前記糖抗原は、配列番号４における少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を介して前記キャリアポリペプチドと共有結合する、免疫原性複合体。
【請求項２１】
請求項２０記載の２種以上の異なる免疫原性複合体を含む、医薬組成物。
【請求項２２】
前記キャリアポリペプチドが、４から９個のｎｎＡＡ残基を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２３】
前記キャリアポリペプチドの天然の配列におけるリシンが、少なくとも１個のｎｎＡＡで置換されている、請求項１から２２のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２４】
前記キャリアポリペプチドが配列番号１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２５】
配列番号１又は２におけるＫ２４、Ｋ３３、Ｋ３７、Ｋ３９、Ｋ２１２、Ｋ２１４、Ｋ２２７、Ｋ２４４、Ｋ２６４、Ｋ３８５、Ｋ５２２及び／もしくはＫ５２６が、少なくとも１個のｎｎＡＡで置換されている、請求項２４記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２６】
前記キャリアポリペプチドが配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２７】
前記ｎｎＡＡが、２−アミノ−３−（４−（アジドメチル）フェニル）プロパン酸である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２８】
抗原が、アジド基を介してｎｎＡＡに結合するアルキン基を有する、請求項１から２７のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項２９】
抗原が、細菌性の莢膜糖類であり、例えば、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、Ａ群溶血性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｂ群溶血性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）及びジンジバリス菌（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）からなる群から選択される細菌よりの莢膜糖類である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３０】
抗原が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型の莢膜糖類である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３１】
前記複合体における糖類のキャリアポリペプチドに対する比（ｗ／ｗ）は、１より大きい、請求項１から３０のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３２】
前記キャリアポリペプチドは、３個以上のｎｎＡＡ残基を含み、また前記複合体は分子量が少なくとも５００ｋＤａである、請求項１から３１のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３３】
前記複合体は、分子量が９００ｋＤａから５ＭＤａである、請求項１から３２のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３４】
医薬組成物が、
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される１４種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される１５種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２０種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２１種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２４種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２５種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｘ、及びＹからなる群から選択される４種以上の異なる髄膜炎菌の血清群よりの莢膜糖類の複合体；又は
血清型Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３、Ｋ４、Ｋ５及びＫ６からなる群から選択される２種以上の異なるジンジバリス菌（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｓ）の血清型よりの莢膜糖類の複合体、を含む、請求項１から１５又は２１から３３のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、又は方法。
【請求項３５】
血清型２０は、血清型２０Ｂである、請求項３０から３４のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３６】
血清型２０は、血清型２０Ａである、請求項３０から３４のいずれか一項に記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【請求項３７】
対象において、ある抗原に対する免疫防御抗体応答を引き出す方法であって、非経口投与に好適である賦形剤中の、請求項６から１３もしくは請求項２１から３４のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物又は請求項１９から３３のうちのいずれか一項に記載の免疫原性複合体を、前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願の優先権は、２０１８年７月４日出願の米国仮特許出願シリアル番号第６２／６９３，９８１号の利益であり、その内容を全体として参照により本明細書で援用する。
【０００２】
共に提出される電子テキストファイルの援用
共に電子的に提出する以下のテキストファイルの内容は、その全体として参照により本明細書で援用する：配列表のコンピュータ読み取り可能なフォーマットのコピー（ファイル名：ＳＴＲＯ＿００５＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０１９年７月１日、ファイルサイズ  約２３キロバイト）
【背景技術】
【０００３】
「弱い」糖抗原に対する免疫応答を、例えばジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、又はＣＲＭ１９７等である既知の「強い」キャリアポリペプチド抗原への結合によって増幅させることが可能である。国際公開第２０１８／１２６２２９号（ストロバックス社（ＳｕｔｒｏＶａｘ，Ｉｎｃ）、カリフォルニア州フォスターシティ）では、非天然アミノ酸（ｎｎＡＡ）を含むキャリアポリペプチドを用いた結合型ワクチン抗原の産生に関する、方法、組成物及び技術が開示されている。ｎｎＡＡを介した直交性結合の化学により、抗原のキャリアポリペプチドへの結合が許容され、免疫化に有用である免疫原性複合体が産生される。
【０００４】
こうした方法、組成物及び技術の変形ならびに改良を提供することが、本発明の目的である。以下に記載の変形及び改良は、国際公開第２０１８／１２６２２９号に、もしくはいずれも２０１８年７月４日に出願した米国仮特許出願シリアル番号第６２／６９３，９７８号及び第６２／６９３，９８１号に開示した方法、組成物もしくは技術のいずれかに適用する又は組み合わせることが可能である。上述の特許出願は、その全体として参照により本明細書で援用する。
【発明の概要】
【０００５】
一実施形態においては、キャリアポリペプチドと糖抗原（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する滅菌容器（例えば、バイアル）であって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該滅菌容器を提供する。この容器は、単位用量の医薬組成物を含有し得る。好ましくは、滅菌ガラス容器である。
【０００６】
別の実施形態においては、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する送達デバイス（例えば、シリンジ、ネブライザー、噴霧器、吸入器、皮膚パッチ等）であって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該送達デバイスを提供する。この送達デバイスは、単位用量の医薬組成物を含有し得る。この送達デバイスを用いて、哺乳動物である対象に医薬組成物を投与することが可能である。
【０００７】
別の実施形態においては、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する気密密閉容器であって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該気密密閉容器を提供する。気密密閉に好適な容器には、例えばバイアルが含まれる。この内容物は、気密密閉の際に滅菌してあることが好ましい。
【０００８】
別の実施形態においては、キャリアポリペプチドと糖抗原とをそれぞれが含む、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物を０．２５から０．７５ｍＬ（例えば、０．３から０．７５ｍＬ、好ましくは０．５ｍＬ）で含有するシリンジであって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該シリンジを提供する。
【０００９】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体と、アルミニウム塩アジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、（ｉｉ）アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント又はリン酸アルミニウムアジュバントであり、＜（ｉｉｉ）医薬組成物の量は、０．２５から０．７５ｍＬ（例えば、０．３から０．７５ｍＬ、好ましくは０．５ｍＬ）である、当該医薬組成物を提供する。
【００１０】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体と、リン酸アルミニウムアジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）当該組成物におけるアルミニウムイオンの濃度は、＜３００μｇ／ｍＬ（例えば、１００から３００μｇ／ｍＬの間）である、当該医薬組成物を提供する。アルミニウムイオンの濃度は、≦１．７ｍｇ／ｍＬであることが理想的である。当該組成物内の複合体は、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着することもできる。
【００１１】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体と、リン酸アルミニウムアジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、（ｉｉ）キャリアポリペプチドは、配列番号３を含まず、また（ｉｉｉ）当該組成物におけるアルミニウムイオンの濃度は、＜２．５ｍｇ／ｍＬである、当該医薬組成物を提供する。アルミニウムイオンの濃度は、≦１．７ｍｇ／ｍＬであることが理想的である。当該組成物内の複合体は、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着することができる。
【００１２】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）当該医薬組成物の量は、０．２５から１．２５ｍＬ（例えば、０．３から０．７ｍＬ、好ましくは０．５ｍＬ）である、当該医薬組成物を提供する。この組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含んでもよく、また当該組成物内の複合体は、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着することができる。
【００１３】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体と防腐剤とを含む医薬組成物であって、各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該医薬組成物を提供する。
【００１４】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む、防腐剤を含まない医薬組成物であって、各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該防腐剤を含まない医薬組成物を提供する。
【００１５】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、（ｉｉ）当該組成物は、重量オスモル濃度が２００から４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、当該医薬組成物を提供する。
【００１６】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体と、少なくとも１つの賦形剤とを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）少なくとも１つの賦形剤は、塩化ナトリウム、コハク酸、及びポリソルベート８０からなる群から選択される、当該医薬組成物を提供する。当該医薬組成物はまた、アルミニウム塩アジュバントを含んでいてもよい。この組成物は、賦形剤として塩化ナトリウムとポリソルベート８０との両方を含むことが可能である。
【００１７】
別の実施形態においては、ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）ｎは３から５０の整数であり；また（ｉｉｉ）ｎ種の免疫原性複合体におけるキャリアポリペプチドの総量は、医薬組成物の１用量当たり３ｎμｇ以下である、当該医薬組成物を提供する。
【００１８】
別の実施形態においては、ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）ｎは３から５０の整数であり；また（ｉｉｉ）ｎ種の免疫原性複合体におけるキャリアポリペプチドの総濃度は、医薬組成物中、６ｎμｇ／ｍＬ以下である、当該医薬組成物を提供する。
【００１９】
別の実施形態においては、ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）ｎは３から５０の整数であり；また（ｉｉｉ）ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総量は、医薬組成物の１用量当たり３ｎμｇ以下である、当該医薬組成物を提供する。
【００２０】
別の実施形態においては、ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）ｎは３から５０の整数であり；また（ｉｉｉ）ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総濃度は、医薬組成物中、６ｎμｇ／ｍＬ以下である、当該医薬組成物を提供する。
【００２１】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均量は、医薬組成物の１用量当たり１から４μｇである、当該医薬組成物を提供する。
【００２２】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均濃度は、医薬組成物中、２から８μｇ／ｍＬである、当該医薬組成物を提供する。
【００２３】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）１複合体当たりの糖抗原の平均量は、医薬組成物の１用量当たり１から４μｇである、当該医薬組成物を提供する。
【００２４】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）１複合体当たりの糖抗原の平均濃度は、医薬組成物中、２から８μｇ／ｍＬである、当該医薬組成物を提供する。
【００２５】
別の実施形態においては、ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）ｎは３から５０の整数であり；また（ｉｉｉ）当該組成物は、非結合形態でのキャリアポリペプチドを含まないか、又は（ｉｖ）当該組成物は、非結合形態でのキャリアポリペプチドを含有し、当該組成物における非結合形態でのキャリアポリペプチドの質量は、ｎ種の免疫原性複合体におけるそのキャリアポリペプチドの質量のうちの＜１０％であるかのいずれかである、当該医薬組成物を提供する。
【００２６】
別の実施形態においては、ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）ｎは３から５０の整数であり；また（ｉｉｉ）当該組成物は、非結合形態での糖抗原を含まないか、又は（ｉｖ）当該組成物は、非結合形態での糖抗原の少なくとも１つを含有し、当該組成物における非結合形態での糖抗原の総質量は、ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総質量のうちの＜４０％（例えば、≦３０％、≦２０％、又は≦１０％）であるかのいずれかである、当該医薬組成物を提供する。
【００２７】
別の実施形態においては、１４種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）１用量当たりのキャリアポリペプチドの総量は、＜４０μｇである、当該医薬組成物を提供する。
【００２８】
別の実施形態においては、１４種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）当たりのキャリアポリペプチドの濃度は、≦８０μｇ／ｍＬである、当該医薬組成物を提供する。
【００２９】
別の実施形態においては、単位用量の医薬組成物を複数調製する方法であって、（ｉ）当該医薬組成物は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）当該方法は、免疫原性複合体を含むバルク組成物を調製するステップと、複数の別個の容器に当該バルク組成物から個々の単位用量を包装するステップとを含む、当該方法を提供する。この方法は、無菌で行うことが理想的である。個々の容器は、各単位用量を個々の容器の中に包装した後で、封止することが可能である。個々の容器は、シリンジであることが理想的である。
【００３０】
別の実施形態においては、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；（ｉｉ）当該組成物は凍結乾燥される、当該医薬組成物を提供する。
【００３１】
別の実施形態においては、医薬組成物を調製する方法であって、当該医薬組成物は、２種以上の異なる免疫原性複合体とアルミニウム塩アジュバントとを含み、（ｉ）免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、また（ｉｉ）糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該方法を提供し、そして当該方法は、（Ａ）免疫原性複合体のそれぞれをあるアルミニウム塩アジュバントに別個に吸着させて、次いで個々の吸着した複合体を一緒に混合するステップ、（Ｂ）免疫原性複合体のそれぞれを、アルミニウム塩アジュバントに順次吸着させるステップ、又は（Ｃ）免疫原性複合体のうちの２種以上（例えば、それらのうちの全て）の混合物を調製して、この混合物をアルミニウム塩アジュバントと組み合わせるステップ、のうちの１つを含む。このアジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントであり得る。
【００３２】
別の実施形態においては、改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリペプチドを提供するものであって、当該キャリアポリペプチドは、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；（ｉｉ）Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まず、かつ、（ｉｉｉ）少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を含んだ、アミノ酸配列を含む。すなわち、例えば配列番号１のうちのＡｒｇ−１９２及び／又はＡｒｇ−１９３が、欠失し得るか又は異なるアミノ酸で置換され得る。ｎｎＡＡ残基は、配列番号１におけるアミノ酸残基の置換により、及び／又は挿入により、導入され得る。改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリぺプチドを用いて、その中のｎｎＡＡ残基を介して免疫原性複合体（例えば、糖抗原の）を調製することができる。
【００３３】
別の実施形態においては、改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリペプチドを提供するものであって、当該キャリアポリペプチドは、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；かつ、（ｉｉ）以下のアミノ酸残基（配列番号１に従って番号付けした）のうちの１又は複数においてｎｎＡＡの置換を含んだアミノ酸配列を含む：Ａｓｐ−２１１；Ａｓｐ−２９５；Ａｓｐ−３５２；Ａｓｐ−３９２；Ａｓｐ−４６５；Ａｓｐ−４６７；Ａｓｐ−５０７；Ａｓｐ−５１９；Ａｓｎ−２９６；Ａｓｎ−３５９；Ａｓｎ−３９９；Ａｓｎ−４８１；Ａｓｎ−４８６；Ａｓｎ−５０２；Ａｓｎ−５２４；Ｇｌｕ−２４０；Ｇｌｕ−２４８；Ｇｌｕ−２４９；Ｇｌｕ−２５６；Ｇｌｕ−２５９；Ｇｌｕ−２９２；Ｇｌｕ−３６２；Ｇｌｎ−２５２；Ｇｌｎ−２８７；Ｌｙｓ−２１２；Ｌｙｓ−２１８；Ｌｙｓ−２２１；Ｌｙｓ−２２９；Ｌｙｓ−２３６；Ｌｙｓ−２６４；Ｌｙｓ−２９９；Ｌｙｓ−３８５；Ｌｙｓ−４５６；Ｌｙｓ−４７４；Ｌｙｓ−４９８；Ｌｙｓ−５１６；Ｌｙｓ−５２２；Ｌｙｓ−５３４；Ａｒｇ−３７７；Ａｒｇ−４０７；Ａｒｇ−４５５；Ａｒｇ−４６０；Ａｒｇ−４６２；Ａｒｇ−４７２；Ａｒｇ−４９３；Ｓｅｒ−１９８；Ｓｅｒ−２００；Ｓｅｒ−２３１；Ｓｅｒ−２３３；Ｓｅｒ−２３９；Ｓｅｒ−２６１；Ｓｅｒ−３７４；Ｓｅｒ−３８１；Ｓｅｒ−２９７；Ｓｅｒ−３９７；Ｓｅｒ−４５１；Ｓｅｒ−４７５；Ｓｅｒ−４９４；Ｓｅｒ−４９５；Ｓｅｒ−４９６；Ｓｅｒ−５０１；Ｓｅｒ−５０５；Ｔｈｒ−２５３；Ｔｈｒ−２６５；Ｔｈｒ−２６７；Ｔｈｒ−２６９；Ｔｈｒ−２９３；Ｔｈｒ−３８６；Ｔｈｒ−４００；Ｔｈｒ−４０８；Ｔｈｒ−４６９；及び／又はＴｈｒ−５１７。改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリぺプチドを用いて、その中のｎｎＡＡ残基を介して免疫原性複合体（例えば、糖抗原の）を調製することができる。
【００３４】
別の実施形態においては、改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリペプチドを提供するものであって、当該キャリアポリペプチドは、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；（ｉｉ）Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まず、かつ、（ｉｉｉ）以下のアミノ酸残基（配列番号１に従って番号付けした）のうちの１又は複数においてｎｎＡＡの置換を含んだアミノ酸配列を含む：Ａｓｐ−２１１；Ａｓｐ−２９５；Ａｓｐ−３５２；Ａｓｐ−３９２；Ａｓｐ−４６５；Ａｓｐ−４６７；Ａｓｐ−５０７；Ａｓｐ−５１９；Ａｓｎ−２９６；Ａｓｎ−３５９；Ａｓｎ−３９９；Ａｓｎ−４８１；Ａｓｎ−４８６；Ａｓｎ−５０２；Ａｓｎ−５２４；Ｇｌｕ−２４０；Ｇｌｕ−２４８；Ｇｌｕ−２４９；Ｇｌｕ−２５６；Ｇｌｕ−２５９；Ｇｌｕ−２９２；Ｇｌｕ−３６２；Ｇｌｎ−２５２；Ｇｌｎ−２８７；Ｌｙｓ−２１２；Ｌｙｓ−２１８；Ｌｙｓ−２２１；Ｌｙｓ−２２９；Ｌｙｓ−２３６；Ｌｙｓ−２６４；Ｌｙｓ−２９９；Ｌｙｓ−３８５；Ｌｙｓ−４５６；Ｌｙｓ−４７４；Ｌｙｓ−４９８；Ｌｙｓ−５１６；Ｌｙｓ−５２２；Ｌｙｓ−５３４；Ａｒｇ−３７７；Ａｒｇ−４０７；Ａｒｇ−４５５；Ａｒｇ−４６０；Ａｒｇ−４６２；Ａｒｇ−４７２；Ａｒｇ−４９３；Ｓｅｒ−１９８；Ｓｅｒ−２００；Ｓｅｒ−２３１；Ｓｅｒ−２３３；Ｓｅｒ−２３９；Ｓｅｒ−２６１；Ｓｅｒ−３７４；Ｓｅｒ−３８１；Ｓｅｒ−２９７；Ｓｅｒ−３９７；Ｓｅｒ−４５１；Ｓｅｒ−４７５；Ｓｅｒ−４９４；Ｓｅｒ−４９５；Ｓｅｒ−４９６；Ｓｅｒ−５０１；Ｓｅｒ−５０５；Ｔｈｒ−２５３；Ｔｈｒ−２６５；Ｔｈｒ−２６７；Ｔｈｒ−２６９；Ｔｈｒ−２９３；Ｔｈｒ−３８６；Ｔｈｒ−４００；Ｔｈｒ−４０８；Ｔｈｒ−４６９；及び／又はＴｈｒ−５１７。改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリぺプチドを用いて、その中のｎｎＡＡ残基を介して免疫原性複合体（例えば、糖抗原の）を調製することができる。
【００３５】
別の実施形態においては、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体であって、（ｉ）キャリアポリペプチドは配列番号４のアミノ酸配列を含み；また（ｉｉ）糖抗原は、配列番号４における少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合する、当該免疫原性複合体を提供する。キャリアポリペプチドと糖抗原とをそれぞれが含む、２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各複合体におけるキャリアポリペプチドは配列番号４のアミノ酸配列を含み、また（ｉｉ）各複合体における糖抗原は配列番号４における少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合する、当該医薬組成物もまた提供する。
【００３６】
別の実施形態においては、キャリアポリペプチドと肺炎球菌の糖抗原とをそれぞれが含む２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有するシリンジであって、非シリコン処理のシリンジである、当該シリンジを提供する。非シリコン処理のシリンジ中の医薬組成物は、１３種以上の異なる肺炎球菌複合体を有することが理想的であり、またキャリアポリペプチドは、ｎｎＡＡを含んでもよいが、代わりに例えばＣＲＭ１９７であってもよい。非シリコン処理のシリンジのさらなる詳細は、以下でもたらされる。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、実施例に記載するような、多糖体／ミョウバン（ａｌｕｍ）製剤及びプレベナー１３（Ｐｒｅｖｎａｒ−１３（商標））に対する、本発明の３２価ワクチンにおける、図示する３２種の血清型のそれぞれに関する幾何平均抗体価（geometric mean titer）である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
結合抗原の産生に関する方法、組成物及び技術の種々の詳細については、国際特許出願の国際公開第２０１８／１２６２２９号に開示されており、その完全な内容を、参照により本明細書で援用する。
【００３９】
免疫原性複合体
この発明は、概して、免疫原性複合体に関することである。これら複合体は、抗原と共有結合するキャリアポリペプチドを含む。この結合は、Ｔ細胞非依存性の免疫原（例えば、糖類）をＴ細胞依存性免疫原に変換して、それによって、引き出される免疫応答を増強させる（特に、小児において）ことが可能である。本明細書で用いる複合体は、抗原とキャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸（「ｎｎＡＡ」）残基との間で形成される共有結合を含む。これらｎｎＡＡ残基は、関心の抗原との反応を促す官能基を提供することが可能である。
【００４０】
典型的には、１つのキャリアポリペプチドは、多様な抗原分子と結合することとなる。この抗原は、あるキャリアポリペプチドと結合する、１分子につき１つの結合基（例えば、糖類の還元末端）を有することが可能であるか、又は、複数の結合基（例えば、複数のアルデヒド基又はシアン酸エステル基）を有することが可能である。抗原分子が複数の結合基を有する場合、このことが、概して、抗原を介した複数のキャリアポリペプチド間での結合を含む、高分子量の架橋複合体又は格子複合体の形成につながる。本明細書においては架橋複合体が好ましく（特に、肺炎球菌に関して）、それゆえに、複数の結合基を伴う抗原もまた好ましい。
【００４１】
共有結合は、抗原とキャリアポリペプチド内のｎｎＡＡ残基との間で形成される。抗原は、キャリアポリペプチド内のリシン残基と結合しないことが好ましく、抗原は、キャリアポリペプチド内の天然アミノ酸残基と結合しないことがより好ましい。
【００４２】
有用なキャリアポリペプチドはＴ細胞エピトープを含有する。種々のこうしたキャリアポリペプチドが当技術分野において公知であり、また承認されたワクチンのうち、ジフテリアトキソイド（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）からの化学的に処理された毒素；「Ｄｔ」）、破傷風トキソイド（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）からの化学的に処理されたテタノスパスミン毒素；「Ｔｔ」）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）からのタンパク質Ｄ（「ＰＤ」又は「ＨｉＤ」）、血清型Ｂ株髄膜炎菌の外膜蛋白複合体（「ＯＭＰＣ」）、及びＣＲＭ１９７変異体ジフテリア菌（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）毒素を用いることが知られている。
【００４３】
本発明のキャリアの基礎となる好ましいキャリアポリペプチドは、ＣＲＭ１９７である。ＣＲＭ１９７は、当技術分野で周知であり（例えば、Ｂｒｏｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１１  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  ３９：１９５−２０４を参照）、以下のアミノ酸配列（配列番号１）を有するものであり、ここで下線の残基（Ｇｌｕ−５２）が天然のジフテリア毒素とは異なり、それによってＧｌｙ→Ｇｌｕの置換が、当該タンパク質における毒性の酵素活性の喪失につながる：
ＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＫＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＲＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＫＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＫＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＫＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＫＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＫＬＳＬＦＦＥＩＫＳ。
【００４４】
本発明は、天然の（ｎａｔｉｖｅ）ＣＲＭ１９７を使用しない。配列番号１を含むＣＲＭ１９７を使用する代わりに、改変されたアミノ酸配列を使用するものであり、これは少なくとも１つのｎｎＡＡを含有する。これら改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリペプチドは、以下により詳細に記載する。
【００４５】
ＣＲＭ１９７の他に、ジフテリア毒素の他の解毒された変異体形態を使用することが可能である。例えば、無毒性のＫ５１Ｅ／Ｅ１４８Ｋ二重変異体をまた、複合体におけるキャリアポリペプチドとして用いて（Ｐｅｃｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．２０１６  Ｖａｃｃｉｎｅ  ３４：１４０５−１１）、そしてｎｎＡＡ残基を、ＣＲＭ１９７における場合と同様の方法で、この二重変異体の配列に組み込むことが可能である。
【００４６】
関心の別のキャリアポリペプチドは、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）よりのＰＤであり、これは天然に、以下のアミノ酸配列（配列番号５）を有する：
ＣＳＳＨＳＳＮＭＡＮＴＱＭＫＳＤＫＩＩＩＡＨＲＧＡＳＧＹＬＰＥＨＴＬＥＳＫＡＬＡＦＡＱＱＡＤＹＬＥＱＤＬＡＭＴＫＤＧＲＬＶＶＩＨＤＨＦＬＤＧＬＴＤＶＡＫＫＦＰＨＲＨＲＫＤＧＲＹＹＶＩＤＦＴＬＫＥＩＱＳＬＥＭＴＥＮＦＥＴＫＤＧＫＱＡＱＶＹＰＮＲＦＰＬＷＫＳＨＦＲＩＨＴＦＥＤＥＩＥＦＩＱＧＬＥＫＳＴＧＫＫＶＧＩＹＰＥＩＫＡＰＷＦＨＨＱＮＧＫＤＩＡＡＥＴＬＫＶＬＫＫＹＧＹＤＫＫＴＤＭＶＹＬＱＴＦＤＦＮＥＬＫＲＩＫＴＥＬＬＰＱＭＧＭＤＬＫＬＶＱＬＩＡＹＴＤＷＫＥＴＱＥＫＤＰＫＧＹＷＶＮＹＮＹＤＷＭＦＫＰＧＡＭＡＥＶＶＫＹＡＤＧＶＧＰＧＷＹＭＬＶＮＫＥＥＳＫＰＤＮＩＶＹＴＰＬＶＫＥＬＡＱＹＮＶＥＶＨＰＹＴＶＲＫＤＡＬＰＥＦＦＴＤＶＮＱＭＹＤＡＬＬＮＫＳＧＡＴＧＶＦＴＤＦＰＤＴＧＶＥＦＬＫＧＩＫ。
【００４７】
天然のＰＤを使用するのではなく、改変されたアミノ酸配列を使用するが、これは少なくとも１つのｎｎＡＡを含有する。例えば、配列番号５内の１又は複数のＬｙｓ残基を、ｎｎＡＡで置換することが可能である。配列番号５内には、３６個のＬｙｓ残基があるので、いくつかをｎｎＡＡで置換して、次いで結合のために使用することが可能である。ＰＤに関するＴ細胞エピトープの予測及び認識は、Ｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：１５５−６１により報告されている。
【００４８】
より概略的には、Ｔ細胞エピトープを含むあらゆるポリペプチドを、キャリアポリペプチドとして使用することが可能である。Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣクラスＩＩに結合して、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体と相互作用して、それによって、それに結合した抗原又はハプテンに対する抗体応答を増強することが可能である（例えば、Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１１，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ６：１０４５−６６を参照）。Ｍｉｃｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２３，１４５１では、種々のキャリアポリペプチドとそれらの選択基準とについて概説している。Ｔｏｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｖａｃｃｉｎｅ  ３４：４２３５−４２では、２８種のキャリアポリペプチドの前臨床試験について議論されており、これには糖抗原に対する抗体を誘導するそれらの能力に関する試験が含まれる。種々のパソゲン由来抗原からの多様な、広い反応性（すなわち、大部分のヒトＭＨＣクラスＩＩ分子の文脈における免疫原性）をもつヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞エピトープを含有するポリエピトープキャリアポリペプチドが設計されてきたが、例えば、Ｆａｌｕｇｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１：３８１６−２４、Ｂａｒａｌｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２：４８８４−７、ならびに米国特許第６，８５５，３２１号及び第７，８６７，４９８号に開示される、Ｎ１９及び他のポリペプチドである。これらポリペピトープ（ｐｏｌｙｐｅｐｉｔｏｐｅ）キャリアを設計する能力により、当業者の、多様な源から好適なＴ細胞エピトープを特定して、またそれらを用いて有効なキャリアポリペプチドを設計する能力が示される。米国特許出願第２０１６−０１０１１８７号もまた参照されたい。公知のキャリア（例えば、Ｔｔ、ＰＤ、ＣＲＭ１９７）内に存在するＴ細胞エピトープを使用可能である。例えば、Ｔｔ、Ｄｔ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）Ａ及びＢの毒素等、種々の解毒された細菌性毒素が、キャリアとして良好に使用されてきた。多くの様々なキャリアポリペプチドが、肺炎球菌糖類（ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ  ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）に関して使用されてきたが、例えばプレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））におけるＣＲＭ１９７、シンフロリックス（Ｓｙｎｆｌｏｒｉｘ（商標））におけるＰＤ、Ｔｔ及びＤｔ、ならびにＶｅｌａｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６３：９６１−８における種々のペプチドがある。この発明は、少なくとも１つのｎｎＡＡを含むように改変された、これら多数のキャリアポリペプチドのいずれかを使用して、関心の抗原の免疫原性を増強することが可能である。
【００４９】
本発明で用いようとする、ｎｎＡＡを含有するキャリアポリペプチドは、概して、国際公開第２０１８／１２６２２９号のセクション６（“Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（キャリアタンパク質の産生方法）”）に開示の技術を用いて調製可能である。好ましいキャリアは、当該キャリアの少なくとも１つのＴ細胞エピトープの他に、ｎｎＡＡを含有する。あるキャリアに関してＴ細胞エピトープ領域がわかっていなければ、当業者は標準技術を用いて当該エピトープを特定することが可能であるが、例えばＲｅｅｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＩＪ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１：６１７５−８４、Ｂｅｉｓｓｂａｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１  Ｓｕｐｐｌ  １：ｉ２９−３７、Ｍａｃｉｅｌ  Ｊｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｖｉｒｏｌ  ３７８：１０５−１７、Ｆｒｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌ  １：１２５８−７０等を参照されたい（経験的アプローチ及び／又は予測的アプローチを含む）。キャリアポリペプチドの配列の任意の特定の改変は、例えば本明細書における糖類等である、結合抗原に対する所望のＴ細胞応答を除去しないことも確認することが可能である。好ましい群のキャリアは、Ｔ細胞エピトープ内に、ｎｎＡＡの挿入又は置換を含めていずれの改変も含有しない。特に好ましいキャリアは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５又は少なくとも６個のｎｎＡＡを含有する。特に好ましいキャリアはまた、最大で１０、９、８、７又は６個のｎｎＡＡを有し得る。キャリアポリペプチド内のｎｎＡＡの特に好ましい範囲は、２〜１０個、２〜９個、２〜８個、２〜７個、２〜６個、３〜１０個、３〜９個、３〜８個、３〜７個、３〜６個、４〜１０個、４〜９個、４〜８個、４〜７個、及び４〜６個のｎｎＡＡである。
【００５０】
本明細書で使用される免疫原性複合体内に、種々の抗原が含まれ得る。典型的には、抗原は、糖類である。「糖類（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）」の語には、５０以上の繰り返し単位を有する多糖体と、５０より少ない繰り返し単位を有するオリゴ糖とが含まれる。典型的には、多糖体は、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０又は９５の繰り返し単位から約２，０００（これより多いこともある）の繰り返し単位であり、また任意に約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、６００、７００、８００、９００又は１０００の繰り返し単位から約１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００又は１９００の繰り返し単位である。オリゴ糖は、典型的には、約６、７、８、９又は１０の繰り返し単位から約１５、２０、２５、３０又は３５から約４０又は４５の繰り返し単位である。
【００５１】
免疫原性複合体に組み込まれる有用な糖類には、細菌中に存在するものが含まれる。これらは、非莢膜の糖類（エキソポリサッカライド等であり、例えば黄色ブドウ状球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）エキソポリサッカライド）であり得るが、好ましくは細菌性の莢膜糖類である。
【００５２】
細菌性莢膜糖類は、グラム陽性菌又はグラム陰性菌の莢膜に存在する高分子量の糖類であり、またそれらは、ワクチン抗原として使用することが可能である。こうした莢膜糖類は、概して、透析濾過（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、タンパク質除去、エタノール沈殿、核酸除去、及び凍結乾燥を伴う処理を経て、対応する細菌の全細胞可溶化物又は培養上清から調製される。本発明で用いる細菌性糖類は、細菌中に存在するようにインタクトであり得るか、又は、例えば細菌から精製した糖類の加水分解によって得られるものである、インタクトな糖類から得た断片であり得る。
【００５３】
特に関心の糖抗原は、以下を含むが、これに限定されない：
−肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の莢膜糖類：本発明を実施するための抗原として有用である肺炎球菌の莢膜糖類のさらなる詳細は、以下で与える。
−Ａ群溶血性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の糖類：この抗原は、Ａ群溶血性レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）よりの糖類であり得る。一実施形態においては、当該抗原はＡ群溶血性レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の莢膜糖類であり、これは高分子量のポリマーであるヒアルロン酸からなるものであり、その繰り返し単位は以下の構造を有し：
［→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＵＡｐ−（１→３）−β−Ｄ−ＧｌｃｐＮＡｃ−（→］
これはＡ群溶血性レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の血清型間で不変であるように見える。別の実施形態においては、抗原は、例えばＡ群レンサ球菌細胞壁糖類（ｇｒｏｕｐ−Ａ−ｓｔｒｅｐ  ｃｅｌｌ  ｗａｌｌ  ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）等であるＡ群溶血性レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）よりの非莢膜糖類であり、これはα−Ｌ−（１→３）結合及びα−Ｌ−（１→２）結合を交互にさせることによって結合したポリ−Ｌ−ラムノピラノシル単位の骨格を含み、これには、Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン残基が、ラムノース骨格の３位に結合している。
−Ｂ群溶血性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）の莢膜糖類：抗原は、Ｓ．アガラクティエ（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群レンサ球菌又はＧＢＳ）よりの莢膜糖類であり得る。異なる莢膜糖類の繰り返し単位（Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ−ＩＸ）を伴う少なくとも１０種のＧＢＳ血清型があるが、通常、数種の血清型のみが、疾患の原因となる。これらには、血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＶが含まれ、これらの血清型よりの莢膜糖類の複合体を調製可能である。
−インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の莢膜糖類：抗原は、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）よりの莢膜糖類であり得る。異なる莢膜糖類の化学構造を伴う、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の少なくとも６種の血清型がある（ａ型〜ｆ型）。しかしながら、ａ型およびｂ型のみが、「高毒性」の株であると考えられているため、本発明で用いるインフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の莢膜糖類の好ましい型は、ｂ型（Ｈｉｂ）である。
−髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜糖類：抗原は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）よりの莢膜糖類であり得る。異なる莢膜糖類の化学構造を伴う、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の少なくとも１３種の血清群がある（血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ−２９、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ−１３５、Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＺ’）が、６種（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ−１３５、Ｘ、Ｙ）のみが致死的であると考えられている。糖抗原は、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｘ、又はＹのうちのいずれかに由来することが有益である。
−ジンジバリス菌（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）の莢膜糖類：抗原は、ジンジバリス菌（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）の６種の血清型Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３、Ｋ４、Ｋ５及びＫ６のうちの１つに由来する莢膜糖類であり得る。
−チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）の莢膜糖類：抗原は、Ｖｉ糖類であり得る。Ｖｉは、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）（サルモネラ菌（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ）のチフス（ｔｙｐｈｉ）血清型）の莢膜糖類である。Ｖｉ糖類は、Ｃ−３位が６０〜９０％アセチル化されている、ヘキソサミンウロン酸（ｈｅｘｏｓａｍｉｎｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、α１，４−Ｎ−アセチルガラクトサミノウロン酸（α１，４−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｏｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）の直鎖ホモポリマーである。
−黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）の糖類：抗原は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）よりの糖類であり得る。糖類は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ｐｏｌｙ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）（ＰＮＡＧ）である、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のエキソポリサッカライドであり得るか、又は例えば血清型５、血清型８、もしくは血清型３３６であり得る黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の莢膜糖類であり得る。
−クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の表面糖類：抗原は、例えばＰＳ−Ｉ又はＰＳ−ＩＩ等であるＣ．ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）からの表面グリカンであり得る。
−グルカン：抗原は、β−１，３−結合及び／又はβ−１，６−結合を含有するグルカンであり得る。これら結合したグルカンは、例えばカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対して、抗真菌免疫応答を生じるのに有用であり得る。
【００５４】
これら糖抗原のさらなる詳細については、国際公開第２０１８／１２６２２９号に見ることが可能である。
【００５５】
抗原は、結合に好適又は理想的である官能基を本来含有していないことがよくある。そのため、抗原は、ｎｎＡＡに対するその結合の前に、官能化させる必要があることがある。こうした官能化のさらなる詳細については、以下に与える。
【００５６】
肺炎球菌の莢膜糖類
本発明で用いる好ましい抗原は、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）よりの莢膜糖類である。肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、肺炎、菌血症及び髄膜炎の原因となり得る、莢膜性のグラム陽性菌である。血清型特異的な繰り返し単位構造を伴う莢膜糖類を担持する肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の異なる記録された血清型が少なくとも９０種ある（例えば、Ｋａｌｉｎ，Ｍ．Ｔｈｏｒａｘ  １９９８；５３：１５９−１６２を参照）。当業者により理解されることとなるように、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型２０は、実際に、２種の密接に関連する血清型から作られることが提唱されており、その莢膜多糖体同士は大きく交差防御している（Ｃａｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．２０１２  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８７：２７８８５−９４）。すなわち、当業者によりさらに認識されることとなるように、血清型２０は、血清型２０として当技術分野でこれまでに分類されてきたであろう糖類を指すものであるため、Ｃａｌｉｘらが開示するように、構造的には２０Ａ又は２０Ｂ（血清型２０として当技術分野でこれまで分類されてきたであろう菌株であるが、遺伝子型的では２０Ａ又は２０Ｂのいずれかであり得る菌株よりの）のいずれかであり得る。例えば、ニューモバックス（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ（商標））（メルク社）における血清型２０の多糖体を産生するために用いる菌株は、ここでは血清型２０Ａであると考えられる。一部の例においては、２０Ａが好ましいものであり得る。他の例においては、２０Ｂが好ましいものであり得る。標的集団における有病率は、これら血清型間での選別の基礎となり得る。それにもかかわらず、２０、２０Ａ及び２０Ｂとして分類されている菌株が血清学的に同様であることを理由として、それら菌株は、ワクチンにおいて大きく交差防御的であるため、菌株間での選択が重大な意味をもつことにはならないであろう。
【００５７】
本発明で用いる抗原は、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、８、９Ａ、９Ｌ、９Ｎ、９Ｖ、１０Ｆ、１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、１１Ｆ、１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃ、１１Ｄ、１２Ｆ、１２Ａ、１２Ｂ、１３、１４、１５Ｆ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１６Ａ、１７Ｆ、１７Ａ、１８Ｆ、１８Ａ、１８Ｂ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、１９Ｂ、１９Ｃ、２０、２１、２２Ｆ、２２Ａ、２３Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、２４Ａ、２４Ｂ、２５Ｆ、２５Ａ、２７、２８Ｆ、２８Ａ、２９、３１、３２Ｆ、３２Ａ、３３Ｆ、３３Ａ、３３Ｂ、３３Ｃ、３３Ｄ、３４、３５Ｆ、３５Ａ、３５Ｂ、３５Ｃ、３６、３７、３８、３９、４０、４１Ｆ、４１Ａ、４２、４３、４４、４５、４６、４７Ｆ、４７Ａ、又は４８のいずれかよりの莢膜糖類とすることが可能である（Ｈｅｎｒｉｃｈｓｅｎ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １９９５；３３：２７５９−２７６２）。しかしながら、これら血清型のサブセットだけが、通常、臨床的に有意の細菌性感染の原因となるため、抗原は、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１、及び３３Ｆのいずれかよりの莢膜糖類とすることが可能である。血清型６Ｃ、７Ｃ、１５Ａ、１５Ｃ、１６Ｆ、２０Ａ、２０Ｂ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、３７、及び３８もまた臨床的懸念となってきたため、抗原は、これら肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のうちの１つよりの莢膜糖類とすることが可能である。
【００５８】
本発明が、異なる肺炎球菌血清型よりの複合体を用いる場合、少なくとも１４種の異なる肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５種又はそれ以上の）よりの糖類を含むことが好ましい。組成物が１４種以上の血清型を含む場合、これらは、１３種の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆを含むことが好ましい。これら１３種の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に加えて、組成物は、血清型２、８、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、１７Ｆ、２０（代替として、２０Ａ又は２０Ｂ）、２２Ｆ、及び／もしくは３３Ｆのうちの１種又は複数種を含むことが好ましい。あるいは、上記の１３種の血清型に加えて、組成物は、１種又は複数種の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、６Ｃ、８、９Ｎ、１０Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２０Ａ、２０Ｂ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、２４Ｂ、３１、３３Ｆ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ及び３８を含むことが好ましい。１５種以上（例えば１６種以上）の血清型の有用な組み合わせとしては、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆのそれぞれを含み、また血清型８も含み得る。２０種以上（例えば２１種以上）の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型の有用な組み合わせとしては、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆのそれぞれを含む。２４種以上の血清型の有用な組み合わせとしては、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆのそれぞれを含む。
【００５９】
よくある肺炎球菌血清型の莢膜糖類の繰り返し単位の構造は、Ｊｏｎｅｓらが記載している（Ｊｏｎｅｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎ  Ａｃａｄ  Ｂｒａｓ  Ｃｉｅｎｃ．２００５  Ｊｕｎ；７７（２）：２９３−３２４）：
１型
［→３）−Ｄ−ＡＡＴ−α−Ｇａｌｐ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌｐＡ（２／３ＯＡｃ）−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌｐＡ−（１→］
２型
［→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→３）−［α−Ｄ−ＧｌｃｐＡ−（１→６）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→２）］−α−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→３）−α−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→３）β−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→］
３型
［→３）−β−Ｄ−ＧｌｃＡ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→］
４型
［→３）−β−Ｄ−ＭａｎｐＮＡｃ−（１→３）−α−Ｌ−ＦｕｃｐＮＡｃ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌｐＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ２，３（Ｓ）Ｐｙ−（１→］
５型
［→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−［α−Ｌ−ＰｎｅｐＮＡｃ−（１→２）−β−Ｄ−ＧｌｃｐＡ−（１→３）］−α−Ｌ−ＦｕｃｐＮＡｃ−（１→３）−β−Ｄ−Ｓｕｇｐ−（１→］
６Ｂ型
［→２）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→３）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→３）−α−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→４）−Ｄ−Ｒｉｂ−ｏｌ−（５→Ｐ→］
９Ｎ型
［→４）−α−Ｄ−ＧｌｃｐＡ−（１→３）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→３）−β−Ｄ−ＭａｎｐＮＡｃ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−ＧｌｃｐＮＡｃ−（１→］
９Ｖ型
［→４）−α−Ｄ−ＧｌｃｐＡ（２／３ＯＡｃ）−（１→３）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→３）−β−Ｄ−ＭａｎｐＮＡｃ（４／６ＯＡｃ）−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→］
１２Ｆ型
［→４）−［α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→３）］α−Ｌ−ＦｕｃｐＮＡｃ−（１→３）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→４）−［α−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→２）−α−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→３）］−β−Ｄ−ＭａｎＮＡｃＡ−（→］
１４型
［→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→６）−［β−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）］−β−Ｄ−ＧｌｃｐＮＡｃ−（１→３）−β−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→］
１８Ｃ型
［→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−［α−Ｄ−Ｇｌｃｐ（６ＯＡｃ）（１→２）］［Ｇｒｏ−（１→Ｐ→３）］−β−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→３）−β−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→］
１９Ｆ型
［→４）−β−Ｄ−ＭａｎｐＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→２）−α−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→Ｐ→］
２３Ｆ型
［→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−［α−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→２）］−［Ｇｒｏ−（２→Ｐ→３）］−β−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｌ−Ｒｈａｐ−（１→］
【００６０】
当該糖類のより広範囲にわたる議論は、Ｇｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．２８：８７１−９９に見られ、その表１で、公知の９７種の血清型の構造を示している。この表はまた、アセチル化が完全でない場合にはアセチル化されている糖類の残基の割合を開示する。
【００６１】
莢膜糖類は、Ｏ−アセチル化することが可能である。一部の実施形態においては、血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１、及び３３Ｆよりの莢膜糖類は、Ｏ−アセチル化の程度が、１０から１００％、２０から１００％、３０から１００％、４０から１００％、５０から１００％、６０から１００％、７０から１００％、７５から１００％、８０から１００％、９０から１００％、５０から９０％、６０から９０％、７０から９０％、又は８０から９０％、である糖類を含む。他の実施形態においては、Ｏ−アセチル化の程度が、１０％を超える、２０％を超える、３０％を超える、４０％を超える、５０％を超える、６０％を超える、７０％を超える、８０％を超える、９０％を超える、又は約１００％である。糖類のＯ−アセチル化の程度は、プロトンＮＭＲで判断することが可能である（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒ＆Ｊｏｎｅｓ（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２９６：８３−９６；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ３０：１２３３−１２４７を参照）。通常、複合体を調製するために用いる糖類は、細菌から精製した出発莢膜糖類で見られるＯ−アセチル化レベルのうち少なくとも５０％（例えば、７５％、又は１００％）を保持することとなる。
【００６２】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の莢膜糖類は、当業者にとって公知である単離方法を用いて、細菌から直接得ることが可能である（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、及び第２００８／０１０２４９８、及び国際公開第２００８／１１８７５２号に開示の方法を参照）。代替としては、それらは、市販の供給元（例えば、ＡＴＣＣ社）から得てもよい。
【００６３】
本発明で用いる肺炎球菌の莢膜糖抗原は、１０ｋＤａから４，０００ｋＤａであって、例えば５０ｋＤａから３，０００ｋＤａ、又は１００ｋＤａから２，０００ｋＤａ、の分子量を有し得ることが有益である。例えば、当該分子量は、１００ｋＤａから２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａから１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａから１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａから１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａから１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａから７５０ｋＤａ；１００ｋＤａから５００ｋＤａ；２００ｋＤａから４，０００ｋＤａ；２００ｋＤａから３，５００ｋＤａ；２００ｋＤａから３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａから２，５００ｋＤａ；２００ｋＤａから２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａから２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａから１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａから１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａから１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａから１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａから７５０ｋＤａ；又は２００ｋＤａから５００ｋＤａであり得る。分子量に関するさらなる詳細及び案内は、先に本明細書において参照により援用した、米国シリアル番号第６２／６９３，９７８号において利用可能である。
【００６４】
莢膜糖類は、天然に存在する莢膜糖類に対して化学的に改変をしていてもよい。例えば、糖類は、脱Ｏ−アセチル化（部分的又は完全に）、脱Ｎ−アセチル化（部分的又は完全に）、Ｎ−プロピオン化（部分的又は完全に）等されていてもよい。脱−アセチル化は、活性化前、活性化中もしくは活性化後に、誘導体化前、誘導体化中もしくは誘導体化後に、又は結合前、結合中もしくは結合後に生じてもよいが、典型的には結合前に生じる。
【００６５】
本発明の一部の実施形態は、２以上の異なる複合体の使用を伴う。肺炎球菌の莢膜糖類複合体に関して、このことは、各「異なる」複合体が、異なる肺炎球菌血清型よりの糖類を有している（複合体ごとに単一の種類のキャリアポリペプチドを用いる場合）ということを意味する。
【００６６】
多価複合体
本発明の好ましい組成物は、例えば単一の医薬組成物内で、２以上の異なる複合体の使用を伴う。これら実施形態はまた、多価とも呼ぶ。任意の２つの複合体を「異なる」として記載する場合、すなわちある「多価」組成物において異なる価数をもたらす場合、これは、それら２つの複合体におけるキャリアポリペプチドと抗原との組み合わせにおける相違を指している。例えば、単一の種類の改変ＣＲＭ１９７（例えば、配列番号４）が、肺炎球菌の単一の血清型よりの莢膜糖類と結合する場合、反応生成物は、多数の異なる種類の分子を含有する（分子量が異なる、各分子内の結合のパターンが異なる等）こととなるが、本明細書においては単一の複合体としてみなす。当業者は、分子レベルでのこの不均一性に精通し、また同様に、複合体組成物内の平均となる他の性質（例えば分子量）と共に特定の複合体の抗原−キャリアの組み合わせで、あるワクチンの個々の複合体を規定する。２つの「異なる」複合体は、ある異なるキャリアポリペプチド（すなわち、ある異なるアミノ酸配列を有する）、及び／又はある異なる抗原（すなわち、ある異なる抗原性構造を有する）を有する。
【００６７】
例えば、莢膜糖抗原は、肺炎球菌の２種の異なる血清型より精製してもよい。これら２種の異なる莢膜糖類は、別個に、あるキャリアポリペプチド（これは同じであっても異なっていてもよい）と結合して、２種の異なる複合体をもたらすことが可能である。すなわち、細菌性の莢膜糖類複合体に関して、２種の「異なる」複合体間の相違は、典型的には、一方がある細菌種の第１の血清型又は血清群よりの莢膜糖類を含有している一方で、他方がその細菌種の第２の血清型又は血清群よりの莢膜糖類を含有しているということであり、例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の異なる血清型よりの莢膜糖類、又は髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の異なる血清群よりの莢膜糖類である。２種の複合体はまた、それらが複数の細菌種よりの抗原的に異なる莢膜糖類を含んでいれば「異なる」こととなり、例えばＨｉｂの糖類複合体及び髄膜炎菌の糖類複合体である。
【００６８】
本発明の好ましい多価組成物は、ｎ種の異なる免疫原性糖類複合体を含むものであって、ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれにおける糖抗原は、その他のｎ−１種の免疫原性複合体の糖抗原とは違うものである。例えば、組成物が単一の細菌種よりの抗原を含む場合、その種のｎ種の異なる血清型又はｎ種の血清群よりの莢膜糖類が存在し得る。
【００６９】
「異なる」複合体に関連するこの命名は、結合型ワクチンの分野で用いられる。例えば、Ｇｌｅｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２１２：１８−２７では、プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））ＰＣＶ１３ワクチンが、別個にＣＲＭ１９７と結合した１３種の異なる肺炎球菌血清型よりの糖抗原を含むということから、「１３種の異なる複合体」を含有するということに言及している。同様に、欧州特許出願公開第２９３２９７９号（ＥＰ−Ａ−２９３２９７９）は、「１３種の異なる多糖体−タンパク質複合体を含む免疫原性組成物」に言及している。
【００７０】
すなわち、ＰＣＶ７プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））ワクチンは、７種の異なる複合体を有し、ＰＣＶ１３プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））ワクチンは、１３種の異なる複合体を有し、メンベオ（Ｍｅｎｖｅｏ（商標））ワクチンは、４種の異なる複合体を有し、メナクトラ（Ｍｅｎａｃｔｒａ（商標））ワクチンは、４種の異なる複合体を有し、ニメンリックス（Ｎｉｍｅｎｒｉｘ（商標））ワクチンは、４種の異なる複合体を有し、Ｍｅｎｉｔｏｒｉｘ（商標）ワクチンは、２種の異なる複合体を有し、Ｍｅｎｈｉｂｒｉｘ（商標）ワクチンは、３種の異なる複合体を有し、シンフロリックス（Ｓｙｎｆｌｏｒｉｘ（商標））ワクチンは、１０種の異なる複合体を有する等である。
【００７１】
肺炎球菌複合体の多価組成物は、１３種以上の、例えば１４、１５、２０、２１、２４、２５種又はそれ以上の、異なる複合体を含むことが好ましい。これら１３価を超える組成物に関する血清型の好適な選択は、上記で述べている。
【００７２】
高価数のワクチン（例えば、１３種を超える異なる複合体を含む）に関して、複数のキャリアポリペプチドを用いてキャリア抑制の可能性を低減することが好ましい場合があり得る（例えば、国際公開第９８／５１３３９及び国際公開第２０１１／１１０２４１号）。例えば、ｎ種の異なる複合体を含む多価ワクチンでは、第１のキャリアポリペプチドは、ｎ−ｙ種の異なる抗原と結合して（例えば、異なる細菌の血清型又は血清群よりの莢膜糖類）、そして第２のキャリアポリペプチドが、残りのｙ種の抗原と結合する。同様の手法で、３、４種又はそれ以上のキャリアを、それらの間で分けられたｎ種の抗原と共に用いることができる。複数のキャリアを用いる場合、少なくとも第１のキャリアが、本発明によるｎｎＡＡ含有キャリアポリペプチドである。好ましい実施形態においては、少なくとも第１のキャリア及び第２のキャリアが、本発明によるｎｎＡＡ含有キャリアポリペプチドである。
【００７３】
非天然アミノ酸
上記に記載したように、本明細書で用いる複合体は、抗原と、キャリアポリペプチドにおけるｎｎＡＡ残基内の官能基との間に共有結合を含む。ｎｎＡＡ残基の側鎖が、キャリアポリペプチドにおける別々の部位に対して抗原を結合させるのに有用である反応性の官能基を提供することが可能である。
【００７４】
概略的にいえば、ｎｎＡＡは、翻訳中にポリペプチド内に組み込むことが可能であるが通常の２０種のアミノ酸のうちの１つではない、任意のアミノ酸とすることが可能である。好都合にも、ｎｎＡＡは、ｔＲＮＡ分子をそのコドンが天然の同族のアミノ酸ではなくｎｎＡＡを組み込むように変換することによって、ポリペプチドに組み込むことが可能である。これを達成するための技術のひとつは、「サプレッション（抑制）コドン」を用いること、すなわち、ヌクレオチドトリプレットであって、所望の位置においてコード配列に導入して、天然の終止コドン（例えば、アンバー、オーカー、又はオパール終止コドン）を認識することが可能である特異的なｔＲＮＡによって認識されるが、翻訳の継続は可能である、ｎｎＡＡの組み込みを伴う（それによって天然の終止コドンが抑制される）、当該ヌクレオチドトリプレットを用いることを伴う。
【００７５】
ｎｎＡＡ残基は、本明細書で記載のｎｎＡＡ残基のいずれかであるか、又は細胞ベースのもしくは無細胞のタンパク質合成と両立可能であるとして特定されているその他のものであり得る（例えば、Ｓｃｈｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１０；７９：４１３−４４、特にｐｐ．４１８−４２０；及び、Ｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１４；８３：５．１−５．３０であって、参照により本明細書で援用するこれらを参照）。理想的には、ｎｎＡＡは、通常の２０種のアミノ酸（例えば、ピロリシン、セレノシステイン、ホスホチロシン、ホルミルメチオニン等）のうちの１つの改変によって、細胞内において天然に生じるものではない。
【００７６】
特に、本明細書で用いる好ましいｎｎＡＡは、天然の２０種のアミノ酸のうちのいずれかの側鎖に存在しない官能基を提供する側鎖をもつ、翻訳中に組み込むこと（細胞系又は無細胞の系で）が可能であるものである。ポリペプチド内にこうしたアミノ酸を組み込むための種々の技術は公知であり、例えば、Ｙｏｕｎｇ＆Ｓｃｈｕｌｔｚ（２０１０）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８５：１１０３９−４４、Ｍａｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２６：１８８４−９、及びＺｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２５：３５１−６１を参照されたい。国際公開第２０１８／１２６２２９号は、ｎｎＡＡ残基を、例えば無細胞発現混合物、ｎｎＡＡに特異的な直交性ｔＲＮＡ／アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ対、サプレッションコドン等を用いて、キャリアポリペプチドに組み込むことができる方法について詳細に開示している。米国特許出願第２０１７／０２６７６３７号もまた参照されたい。
【００７７】
ｎｎＡＡは、関心の抗原における対応する基での「クリック」ケミストリー反応に好適である化学基を含み得る。「クリック」ケミストリーに好適な化学基には、アジド基（−Ｎ３）、アルキン基（−Ｃ≡Ｃ−）、アルケン基（−Ｃ＝Ｃ−）及び１，２，４，５−テトラジン基
【化１】
2021530468.tif 000002
及びホスフィン基（例えば、−Ｐ（Ｐｈ）２）が含まれるが、これに限定されない。
【００７８】
ｎｎＡＡは、２−アミノ−３−（４−アジドフェニル）プロパン酸（パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、又はｐＡＦ）、２−アミノ−３−（４−（アジドメチル）フェニル）プロパン酸（パラ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン、又はｐＡＭＦ）、２−アミノ−３−（５−（アジドメチル）ピリジン−２−イル）プロパン酸、２−アミノ−３−（４−（アジドメチル）ピリジン−２−イル）プロパン酸、２−アミノ−３−（６−（アジドメチル）ピリジン−３−イル）プロパン酸、又は２−アミノ−５−アジドペンタン酸のいずれかであり得る。
【００７９】
本明細書で用いる最も好ましいｎｎＡＡは、以下のｐＡＭＦであり：
【化２】
2021530468.tif 000003
ｐＡＭＦは、複合体を生成するために非常に有利な反応速度をもたらす（例えば、ＳＰＡＡＣ法でアルキン含有糖抗原と反応する際に、ｐＡＦを用いるよりもずっと速い）。
【００８０】
ｎｎＡＡは、以下を保持する２，３−二置換プロパン酸であり得る：２位におけるアミノ置換基；及び、３位における、アジド含有置換基、１，２，４，５−テトラジニル含有置換基、又はエチニル含有置換基。好ましくは、３位における置換基は、アジド含有置換基、特に、結合基を介して３位の炭素原子に結合する末端アジド基を含むアジド含有置換基である。例えば、結合基は、任意に置換されて任意にヘテロ原子を含有しているアリーレン（ａｒｙｌｅｎｅ）部分を含み得る。例えば、結合基は、０から４個のヘテロ原子及び０から４個の非水素の環の置換基を含有する５又は６員のアリーレン部分を含み得る。
【００８１】
ｎｎＡＡは、以下の一般式ＸＩＩの構造を有することが可能である：
【化３】
2021530468.tif 000004
（ＸＩＩ）
式中、Ａｒは、少なくとも１つのヘテロ原子を含有してもよい５員又は６員の芳香族環を含み；Ｗ５はＣ１−Ｃ１０アルキレン、−ＮＨ−、−Ｏ−、及び−Ｓ−から選択され；Ｑ１はゼロ又は１であり；ならびにＷ６は、アジドと、低級アルキル基でＣ置換されていてもよい１，２，４，５−テトラジニルと、エチニルとから選択される。一部の実施形態においては、Ａｒは、いずれのヘテロ原子も含有せず、この場合においては好ましいリンカーは、非置換のフェニレン基（すなわち、Ａｒは、−Ｃ６Ｈ４−）である。他の実施形態においては、Ａｒは、窒素ヘテロ原子と、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される少なくとも１つのさらなるヘテロ原子とを含有する。例示的な窒素複素環は、以下に記載しており、またＡｒは、例えばピリジン又はピリダジンであり得る。特に好ましい実施形態においては、Ｑ１は１であり、Ｗ５は低級アルキレンであり、またＷ６はアジドである。
【００８２】
ｎｎＡＡは、例えば以下の一般式ＩのｎｎＡＡである、アジド含有ｎｎＡＡであり得る：
【化４】
2021530468.tif 000005
式中、Ｄは−Ａｒ−Ｗ３−又は−Ｗ１−Ｙ１−Ｃ（Ｏ）−Ｙ２−Ｗ２−であり；Ｗ１、Ｗ２及びＷ３のそれぞれは、独立に、単結合又は低級アルキレンであり；各Ｘ１は、独立に、−ＮＨ−、−Ｏ−、又は−Ｓ−であり；各Ｙ１は、独立に、単結合、−ＮＨ−、又は−Ｏ−であり；各Ｙ２は、独立に、単結合、−ＮＨ−、−Ｏ−、又はＮ結合もしくはＣ結合のピロリジニレン（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌｅｎｅ）であり；Ａｒは
【化５】
2021530468.tif 000006
であり；
ならびにＺ１、Ｚ２及びＺ３のうちの１つは−Ｎ−であり、及びＺ１、Ｚ２及びＺ３のうちのその他は、独立に、−ＣＨ−である。
【００８３】
他の実施形態においては、ｎｎＡＡは以下の一般式ＩＩを有する：
【化６】
2021530468.tif 000007
式中、Ｗ４はＣ１−Ｃ１０アルキレンである。
【００８４】
一般式Ｉ及びＩＩに係るアジド含有アミノ酸の調製は、例えば、Ｓｔａｆｆｏｒｄらの米国特許出願公開第２０１４−００６６５９８Ａ１号の特に段落［０３３１］から［０３３３］に見られ、これらは参照により援用する。この方法は、塩化チオニルを用いた対応するアリールアミノ酸の誘導体における塩化物に対するヒドロキシル基の置換と、その後に続くアジドでの当該塩化物の求核置換を伴う。アミノ酸を含有する好適なアリール側鎖はまた、市販品でも得られる。
【００８５】
ｎｎＡＡは、１，２，４，５−テトラジン含有ｎｎＡＡであり得る。例えば、以下の一般式ＩＩＩである：
【化７】
2021530468.tif 000008
式中、Ａｒは、
【化８】
2021530468.tif 000009
であり；Ｖは単結合、低級アルキレン又は−Ｗ１−Ｗ２−であり；Ｗ１及びＷ２のうちの１つは存在しないか又は低級アルキレンであり、またその他は−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−であり；Ｚ１、Ｚ２及びＺ３のうちの各１つは、独立に、−ＣＨ−又は−Ｎ−であり；ならびにＸ１は、独立に、−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−であり；ならびにＲは低級アルキルである。
【００８６】
一般式ＩＩＩに係る１，２，４，５−テトラジン含有アミノ酸の調製は、例えば、Ｙａｎｇらの米国特許出願公開第２０１６／０２５１３３６号の特に段落［０３４１］から［０３７７］に見られ、これらは参照により援用する。この方法は、（Ｒ）−２−アミノ−３−ヨードプロパン酸のアミノ／カルボキシル保護された誘導体のアミノピリジルブロミド（ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｙｌ  ｂｒｏｍｉｄｅ）との根岸カップリングによりＡｒを導入することと、その後に続く、アミノ酸内にテトラジン部分を導入するメチルチオ−１，２，４，５−テトラジン誘導体との反応を伴う。
【００８７】
ｎｎＡＡは、アルキン含有ｎｎＡＡであり得る。一実施形態においては、これはプロパルギル基である。種々のプロパルギル含有アミノ酸は、その合成を含めて、Ｂｅａｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００６，４５，７３６４−７；Ｂｅａｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００５（１２７）：１４１５０−１；Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＪＡＣＳ  ２００９（１３１）：８７２０−１に見られる。こうしたプロパルギル含有アミノ酸は、細胞ベースの系を用いたタンパク質への組み込みに好適である。一部の実施形態においては、プロパルギル含有ｎｎＡＡは、ホモプロパルギルグリシン、エチニルフェニルアラニン、及びＮ６−［（２−プロピニルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リシンからなる群から選択される。
【００８８】
本明細書で用いるｎｎＡＡは、概して、α−炭素に不斉中心をもつα−アミノ酸であり、またそれらは、Ｌ−立体異性体であることが好ましい。
【００８９】
本発明で用いられるポリペプチドキャリアは、少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を含む。好ましくは、キャリアポリペプチドは、複数のｎｎＡＡ、例えば２、３、４、５、６、７、８又は９個のｎｎＡＡ残基（又はそれ以上のこともある）、を含む必要がある。１０個より少ないｎｎＡＡ残基をもつキャリアポリペプチドが好ましい。すなわち、ポリペプチドは、２から９個のｎｎＡＡ残基を含み得、好ましくは４から６個のｎｎＡＡ残基を含む。
【００９０】
キャリアポリペプチドが複数のｎｎＡＡ残基を含む場合、単一の種のｎｎＡＡのみを含むことが好ましい（例えば、キャリア内の唯一のｎｎＡＡはｐＡＭＦである）。これにより、同じ共役化学が、各ｎｎＡＡにおいて同時に用いられることが可能になる。２つの異なる抗原を１つのキャリア分子と結合させることを所望する場合には、これは、単一キャリア内に異なるｎｎＡＡ種を用いることと、各抗原をある異なるｎｎＡＡと結合させることとによって達成され得るが、あるキャリア内で単一の種のｎｎＡＡと結合することが好ましい。さらに、複数の異なる複合体を用いる場合（例えば、異なる肺炎球菌血清型）、各複合体が同じ単一の種のｎｎＡＡを含むことが好ましい場合がある。また、組成物が、複数の異なる複合体を含む場合（例えば、異なる肺炎球菌血清型）、各複合体が同じキャリアポリペプチドを含むことが好ましい場合がある。
【００９１】
ｎｎＡＡは、置換によって又は挿入によって（又は、Ｃ末端もしくはＮ末端の伸長によって）、キャリアポリペプチドに組み込むことが可能である。一実施形態においては、ｎｎＡＡ残基は、置換によって組み込まれる。好都合には、天然のポリペプチド内のリシン残基は、ｎｎＡＡで置換可能である。例えば、ＣＲＭ１９７において、配列番号１又は２におけるＫ２４位、Ｋ３３位、Ｋ３７位、Ｋ３９位、Ｋ２１２位、Ｋ２１４位、Ｋ２２７位、Ｋ２４４位、Ｋ２６４位、Ｋ３８５位、Ｋ５２２位、及びＫ５２６位のうちの１又は複数で、置換を行うことが可能である。ｎｎＡＡ（例えば、ｐＡＭＦ）の、Ｋ３３、Ｋ２１２、Ｋ２４４、Ｋ２６４、Ｋ３８５、及びＫ５２６（及び、一実施形態においてはこの他の位置ではない）のそれぞれにおける置換が好ましい。
【００９２】
しかしながら、ｎｎＡＡを組み込む置換は、リシン位置に限定されないものであり、例えばＰｈｅ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、及び／又はＴｈｒである、他のアミノ酸をｎｎＡＡで置換することも可能である。
【００９３】
キャリアポリペプチド内のｎｎＡＡは、理想的には、表面アクセス可能な残基である。これは、ポリペプチドの３Ｄ構造を用いて、又はｎｎＡＡに関して天然アミノ酸の広範囲にわたる置換を行うことと、その後に続く結合試験によって評価して、各部位の有用性を評価することが可能である。
【００９４】
キャリアポリペプチドの機能を保存するために、キャリアポリペプチドのＴ細胞活性化エピトープ内にｎｎＡＡを組み込まないことが好ましい。ｎｎＡＡの使用により、結合のための部位の選択的配置が可能になり、そのためキャリアポリペプチドのＴ細胞活性化エピトープを、抗原結合のための部位となることから回避させることが可能である。上記に記載したとおり、これらエピトープは、容易に特定可能である。例えば、Ｒａｊｕら、Ｂｉｘｌｅｒら、Ｌｅｏｎａｒｄら、及びＰｉｌｌａｉらによるＣＲＭ１９７の研究（例えば、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５  Ｄｅｃ；２５（１２）：３２０７−１４、国際公開第８９／０６９７４号）で、例えば残基Ｐ２７１−Ｄ２９０、Ｖ３２１−Ｇ３８３、及びＱ４１１−Ｉ４５７内において、種々のＴ−細胞エピトープが特定されてきた。すなわち、配列番号１のこれら領域の範囲内にｎｎＡＡを導入することは回避するのが好ましい。
【００９５】
結合
結合は、ｎｎＡＡ残基と抗原との間の共有結合の形成を伴う。これは、ｎｎＡＡ及び抗原の両方において反応性の官能基を必要とする。概して、キャリアポリペプチドに対して、あるｎｎＡＡを選択することとなるが、これは、ｎｎＡＡは既に好適な官能基を有している（例えば、ｐＡＭＦのアジド基）が、抗原は、結合に好適又は理想的である官能基を本来含有していないことが多いからである。すなわち、抗原は、ｎｎＡＡへのその結合の前に官能化する必要があり得る。
【００９６】
結合についての詳細な技術情報は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｇｒｅｇ  Ｔ  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１３）で見ることが可能である。国際公開第２０１８／１２６２２９号は、どのように抗原を官能化して次いでｎｎＡＡに結合させることが可能であるかを詳細に開示している。上記に記載したように、有用なｎｎＡＡは、抗原における官能基での「クリック」ケミストリー反応に好適である官能基（例えば、アジド基）を含む。すなわち、官能化された抗原は、こうした「クリック」反応に好適な基を含むことが理想的である。
【００９７】
そのため、概略的にいえば、結合は、以下の３ステップ：（ａ）抗原を活性化すること；（ｂ）任意に、活性化した抗原を誘導体化して（例えば、リンカー又は求核基により）、抗原に通常存在しない反応性官能基を導入すること；及び（ｃ）ステップ（ａ）か、又は存在すればステップ（ｂ）において導入された基を介して、抗原をキャリアポリペプチドと結合させること、を含む方法により行われる。一部の実施形態においては、ステップ（ａ）は、特定の官能基（例えば、ヒドロキシル、アミン、チオール）がより活性化しやすいように、抗原上の遮断性基を除去するはじめのステップを含む。このステップ（ａ）〜（ｃ）は、本質的に、同時に起こることがある（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド等の反応性部分を抗原に付加する場合）が、他の実施形態においては、ステップ（ａ）から（ｃ）のうちの２以上は、ステップ間に任意の精製を含めて分散させる。
【００９８】
上記に記載したように、架橋結合した複合体が好ましいため、１抗原分子当たり複数の反応性官能基を導入することもまた好ましい。例えば、糖類分子を活性化する際に、複数のアルデヒド基又はシアン酸エステル基を導入することが可能である。次いでこれら基は、例えば、その後にｎｎＡＡ内のアジド基と反応することが可能である反応性のシクロオクチンを導入するように、誘導体化することが可能である。
【００９９】
抗原は、以下を含めるがこれに限定されない様々な化学を用いて活性化することが可能である：例えば国際公開第２０１１／１１０５３１号に開示されるような過ヨウ素酸酸化（例えば、隣接炭素原子におけるヒドロキシル基を酸化して、反応性のアルデヒド基を与える）；例えば１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）を用いた、シアニル化；１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）によるヒドロキシル活性化とその後に続く求核付加；又は、内在性アルデヒド（例えば、糖類の還元末端）のアンマスキング。
【０１００】
過ヨウ素酸酸化とＣＤＡＰでのシアニル化とが、２つの好ましい活性化技術である。過ヨウ素酸酸化は、とりわけ肺炎球菌血清型１、２、３、７Ｆ、８、９Ｎ、及び１１Ａを活性化するのに有用であることが示されている。ＣＤＡＰでのシアニル化は、とりわけ肺炎球菌血清型３、７Ｆ及び１０Ａを活性化するのに有用であることが示されている。
【０１０１】
活性化した抗原は、ｎｎＡＡに直接結合することが可能であるが、通常、活性化した基は、ｎｎＡＡの官能基に対して良好な反応性を示す官能基を導入するように誘導体化される。例えば、アルキニル基を導入することが可能である。アミノ基及びアルキン基をもつ二官能性の試薬は、抗原に導入（例えば、還元的アミノ化を経て）されているアルデヒド基と反応することが可能であり、それによってｎｎＡＡと反応することが可能であるペンダントアルキンが残る。例えば、アミノ基及びＤＢＣＯ官能性基を含む二官能性の試薬を用いることが可能である。
【０１０２】
一実施形態においては、ｎｎＡＡは、抗原におけるアルキニル基（例えば、プロパルギル基）と反応する。抗原内のアルキン基が、例えば銅触媒によるアジド−アルキン環化付加（ＣｕＡＡＣ）、ルテニウム触媒によるアジド−アルキン環化付加（ＲｕＡＡＣ）、又はヒュスゲンのアジド−アルキン１，３−双極子環化付加のような当技術分野で公知である反応を用いたｎｎＡＡ内アジド基との反応に理想的である。アルキニル基は、その反応性を増大させる分子環境を有し得、たとえば、それは環内であり得る。例えば、アルキレンは、例えばジアリールにより歪んだシクロオクチン環（例えば、ＤＢＣＯ）等であるシクロオクチン環（ヘテロ原子を含んでもよい）内にあり得る。この反応は、当技術分野において歪み促進型アジド−アルキン環化付加（ＳＰＡＡＣ）と呼ばれる［３＋２］環化付加であり得る。ＤＩＦＯ系及びＤＢＣＯ系の試薬は、これら反応に容易に利用可能である。
【０１０３】
ＳＰＡＡＣ反応で有用なアルキン含有環は、二フッ素化シクロオクチン（ＤＩＦＯ）及びジベンゾシクロオクチンを含む。これらは、例えば以下の試薬の何れかを用いて、活性化された抗原に結合するためのペンダント官能基と共に利用可能である（例えば、アルデヒド又はシアン化エステルに結合するためのペンダントアミノと共に）：
【化９】
2021530468.tif 000010
【０１０４】
「ＰＥＧｎ」の「ｎ」の値は、オキシエチレン繰り返し単位の数を表す。ｎの値は、１〜２０の範囲にあり、例えば２〜１８、３〜１６、又は４〜１４の範囲内にある。すなわち、ｎは、例えば４、５、１１、１２又は１３のいずれかとすることが可能である。
【０１０５】
抗原及びｎｎＡＡの結合に用いることが可能である他のクリックケミストリー反応には、テトラジン−アルケンの連結反応、ならびにホスフィン及びアジド間のシュタウディンガー連結反応（Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ  ｌｉｇａｔｉｏｎ）が含まれるが、これに限定されない。
【０１０６】
本発明の複合体は、分子量が少なくとも約７５０ｋＤａ、少なくとも約１，０００ｋＤａ、又は少なくとも約１，５００ｋＤａ又はそれ以上であることが可能である。一部の実施形態においては、複合体は、分子量が、約７５０ｋＤａから約５，０００ｋＤａである。一部の実施形態においては、複合体は、分子量が、約８００ｋＤａから約２，８００ｋＤａである。一部の実施形態においては、複合体は、分子量が、約８５０ｋＤａから約２，８００ｋＤＡである。一部の実施形態においては、複合体は、分子量が、約９００ｋＤａから約２，８００ｋＤａである。一部の実施形態においては、複合体は、分子量が、約９５０ｋＤａから約２，８００ｋＤａである。一部の実施形態においては、複合体は、分子量が、約１，０００ｋＤａから約２，８００ｋＤａである。複合体の分子量は、マルチアングルレーザー光散乱（ＭＡＬＳ）と組み合わせた分子ふるいクロマトグラフィー（ＳＥＣ）で計算する。
【０１０７】
本発明の複合体は、抗原（例えば、糖類）とキャリアポリペプチドとを含み、またこれら２つの成分の重量比は、複合体を規定するパラメータとして用いることが可能である。糖類−キャリア複合体に関する抗原：キャリアの重量比がより大きいと、より少ない量のキャリアポリペプチドでより多くの糖抗原が供給可能となる。肺炎球菌結合型ワクチンに関して、この比は、典型的に０．３から３．０の範囲にあるが、これは、血清型と共役化学の態様とにより変動し得る（Ａｎｎｅｘ  ２：Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ；ＷＨＯ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ．９２７，２００５）。市販のワクチンであるプレベナー１３（Ｐｒｅｖｎａｒ−１３（商標））の比は、０．９である。複数の肺炎球菌血清型（例えば、１３種以上の血清型）の複合体を含む組成物に関して、完全な組成物に関する比は、１．０を超える（すなわち、過剰重量の肺炎球菌糖抗原）ものであることが理想的であり、好ましくは、１．５又はそれ以上（例えば、１．５から３．０、又は好ましくは１．５から２．０の範囲内）である。
【０１０８】
改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリペプチド
上記に記載したように、本明細書において主要な関心であるキャリアポリペプチドは、改変された形態のＣＲＭ１９７である。そのため、本発明で用いる好ましいキャリアポリペプチドは、配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、≧８５％、≧９０％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、又は好ましくは≧９８％）であるアミノ酸配列を含む。例えば、キャリアポリペプチドは、上記で述べたように、最大１０個のｎｎＡＡが存在することを除いて、配列番号１のアミノ酸配列を含み得る。
【０１０９】
配列番号１は、１９２〜１９３位にＡｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含む。この配列は、一部の状況において、タンパク分解性の切断を受け得る。所望であれば、この部位を改変して、切断を防止して収量を向上させることが可能である。すなわち、一部の実施形態においては、本明細書で用いる改変されたＣＲＭ１９７のキャリアポリペプチドは、Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まない。例えば配列番号１のうちのＡｒｇ−１９２及び／又はＡｒｇ−１９３が、欠失し得るか又は異なるアミノ酸で置換され得る。そのため、好ましいキャリアポリペプチドは、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％（例えば、≧８５％、≧９０％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、又は好ましくは≧９８％）の配列同一性を有し、（ｉｉ）Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まず、かつ、（ｉｉｉ）少なくとも１個（例えば、上記で述べたように、少なくとも２個、また好ましくはそれ以上）のｎｎＡＡ残基を含んだ、アミノ酸配列を含む。
【０１１０】
こうしたアミノ酸配列の１つは、以下の配列番号２であり、これは配列番号１と、１９３位にＡｒｇ→Ａｓｎ置換を有する点で相違する：
ＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＫＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＮＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＫＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＫＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＫＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＫＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＫＬＳＬＦＦＥＩＫＳ。
【０１１１】
配列番号１を参照する、本明細書又は国際公開第２０１８／１２６２２９号に記載の任意の実施形態は、代わりに配列番号２を用いて実施可能である。
【０１１２】
すなわち、配列番号２のアミノ酸配列を含むキャリアポリペプチドを提供するものであって、配列番号２は、改変されて、１から１０個（例えば、３から９個もしくは２から８個、又は２から６個、又は３から６個、又は４から６個）のｎｎＡＡ残基を含む。これらｎｎＡＡ残基の改変は、配列番号２内に、挿入及び／又は置換として組み込むことが可能である（例えば、配列番号４であり、これは６個のＬｙｓ→ｎｎＡＡへの置換を含む）。配列番号２の残基Ａｓｎ−１９３は、ｎｎＡＡで置換されないことが好ましい。このキャリアポリぺプチドを用いて、その中のｎｎＡＡ残基を介して免疫原性複合体（例えば、糖抗原の）を調製することができる。
【０１１３】
一部の実施形態においては、これらキャリアポリペプチドは、配列番号１もしくは２の上流及び／又は下流でアミノ酸配列を含む。すなわち、例えば、それらは配列番号１又は２のＮ末端アミノ酸残基の上流でメチオニン残基を含むことが可能である。このメチオニン残基は、ホルミル化され得る。野生型ＣＲＭ１９７ではこの位置にメチオニン残基は存在しないが、本明細書においては、天然のリーダー配列全体を必要とすることなく翻訳を開始する（例えば、無細胞ポリペプチド合成系において）ために含むことが可能である。一部の実施形態においては、キャリアポリペプチドは、（ｉ）随意のメチオニンを除いて、配列番号１又は２のＮ末端の上流でアミノ酸配列を含まず、かつ、（ｉｉ）配列番号１又は２のＣ末端の下流でアミノ酸を含まない。
【０１１４】
好ましくは、配列番号１又は２内の少なくとも１つのＬｙｓ残基が、ｎｎＡＡ残基で置換される。配列番号１又は２内の１以上の残基が、ｎｎＡＡで置換されることが好ましく、また理想的には、配列番号１内の１個のみの残基がｎｎＡＡで置換されるものであり、例えばＬｙｓ残基のみが置換される。配列番号１内の１以上の残基がｎｎＡＡで置換される場合、同一のｎｎＡＡを各位置で用いることが好ましく、例えば、各置換位置がｐＡＭＦである。上記に記載したように、一部の実施形態においては、Ｌｙｓ以外の残基が置換される。
【０１１５】
配列番号１又は２のアミノ酸配列を含むキャリアポリペプチドであって、ｎｎＡＡ残基による２から９の置換を伴う（例えば、Ｌｙｓ→ｎｎＡＡの置換、好ましくはＬｙｓ→ｐＡＭＦ）、当該キャリアポリペプチドが好ましく、また理想的には、２から８、２から６、３から８、３から６、４から９、４から８、又は４から６個のｎｎＡＡの置換、例えば４、５又は６個のｎｎＡＡ残基を伴う。これにより、単一のｎｎＡＡを用いるよりも、抗原のキャリアに対するより広範囲な結合が許容され、それによって、天然の配列及び構造の、結果として不溶性をもたらす可能がある過度な崩壊を避けつつ、抗原：キャリアの比が増す。
【０１１６】
ＣＲＭ１９７の構造的な研究により、配列番号１又は２内の以下の２つの全般的な３次元領域が明らかにされる：第一の領域はＮ末端からＡｓｎ−３７３にわたってあり、また第二の領域はＳｅｒ−３７４からＣ末端にわたってある。これらのうち第一の領域は、「Ｃ」及び「Ｔ」（触媒の及び膜貫通の）として知られるドメインに概ね対応し、また第二の領域は、ドメイン「Ｒ」（受容体結合の）に概ね対応する。理想的には、キャリアポリペプチドは、第一の領域における少なくとも１個のｎｎＡＡ及び第二の領域における少なくとも１個のｎｎＡＡを含み、例えば、各領域に少なくとも２個のｎｎＡＡ、又は各領域に少なくとも３個のｎｎＡＡである。これにより、結合した抗原が、キャリアに結合したときに空間的に離間することが可能になる。第一の領域に３個のｎｎＡＡと第二の領域に３個のｎｎＡＡとを含むキャリアが、有用である。
【０１１７】
第一の領域は、２７個のＬｙｓ残基を含有し、また第二の領域は、１２個のＬｙｓ残基を含有する。すなわち、配列番号１又は２の、Ｎ末端の３７４個のアミノ酸内の１個もしくは複数（例えば３個）のＬｙｓ残基と、Ｃ末端の１６２個のアミノ酸内の１個もしくは複数（例えば３個）のＬｙｓ残基とが、例えばｐＡＭＦ内で、ｎｎＡＡで置換可能である。
【０１１８】
ＣＲＭ１９７をベースとしたｎｎＡＡ含有キャリアの好ましい実施形態は、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を有し、当該配列では、残基Ｋ２４、Ｋ３３、Ｋ３７、Ｋ３９、Ｋ２１２、Ｋ２１４、Ｋ２２７、Ｋ２６４、Ｋ３８５、Ｋ５２２、及びＫ５２６のうちの１又は複数が、ｎｎＡＡ（例えばｐＡＭＦ等）で置換されている。こうした配列の１つは以下の配列番号３であり、当該配列では、各ＸはｎｎＡＡを表す（好ましくは、ｐＡＭＦ等の同一のｎｎＡＡ）：
ＭＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＸＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＲＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＸＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＸＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＸＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＸＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＸＬＳＬＦＦＥＩＫＳ（配列番号３）。
【０１１９】
こうした配列の別の配列は、以下の配列番号４であり、当該配列では、各ＸはｎｎＡＡを表す（好ましくは、ｐＡＭＦ等の同一のｎｎＡＡ）：
ＭＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＸＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＮＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＸＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＸＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＸＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＸＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＸＬＳＬＦＦＥＩＫＳ（配列番号４）。
【０１２０】
配列番号３及び４は、肺炎球菌の莢膜糖類と結合したときに良好な溶解性を保持して良好な免疫原性応答を提供しつつ、無細胞タンパク質合成系において非常に良好に発現可能である。配列番号４は、天然のＡｒｇ−Ａｒｇジペプチドを欠いている。
【０１２１】
配列番号４からなるポリペプチドであって、各ＸがｐＡＭＦである、当該ポリペプチドは、本発明で使用する別の好ましいキャリアポリペプチドである。
【０１２２】
国際公開第２０１８／１２６２２９号は、ｎｎＡＡの置換に好適である複数のアミノ酸残基について記載している（例えば、Ｌｙｓ−２４、Ｌｙｓ−３３、Ｌｙｓ−３７、Ｌｙｓ−３９、Ｌｙｓ−２１２、Ｌｙｓ−２１４、Ｌｙｓ−２２７、Ｌｙｓ−２４４、Ｌｙｓ−２６４、Ｌｙｓ−３８５、Ｌｙｓ−５２２、Ｌｙｓ−５２６、Ｐｈｅ−１２、Ｐｈｅ−５３、Ｐｈｅ−１２３、Ｐｈｅ−１２７、Ｐｈｅ−１４０、Ｐｈｅ−１６７、Ｐｈｅ−２５０、Ｐｈｅ−３８９、Ｐｈｅ−５３０、又はＰｈｅ−５３１であり、本明細書における配列番号１に従って番号付けした）。置換可能である他の残基は、以下のものである：Ａｓｐ−２１１；Ａｓｐ−２９５；Ａｓｐ−３５２；Ａｓｐ−３９２；Ａｓｐ−４６５；Ａｓｐ−４６７；Ａｓｐ−５０７；Ａｓｐ−５１９；Ａｓｎ−２９６；Ａｓｎ−３５９；Ａｓｎ−３９９；Ａｓｎ−４８１；Ａｓｎ−４８６；Ａｓｎ−５０２；Ａｓｎ−５２４；Ｇｌｕ−２４０；Ｇｌｕ−２４８；Ｇｌｕ−２４９；Ｇｌｕ−２５６；Ｇｌｕ−２５９；Ｇｌｕ−２９２；Ｇｌｕ−３６２；Ｇｌｎ−２５２；Ｇｌｎ−２８７；Ｌｙｓ−２１２；Ｌｙｓ−２１８；Ｌｙｓ−２２１；Ｌｙｓ−２２９；Ｌｙｓ−２３６；Ｌｙｓ−２６４；Ｌｙｓ−２９９；Ｌｙｓ−３８５；Ｌｙｓ−４５６；Ｌｙｓ−４７４；Ｌｙｓ−４９８；Ｌｙｓ−５１６；Ｌｙｓ−５２２；Ｌｙｓ−５３４；Ａｒｇ−３７７；Ａｒｇ−４０７；Ａｒｇ−４５５；Ａｒｇ−４６０；Ａｒｇ−４６２；Ａｒｇ−４７２；Ａｒｇ−４９３；Ｓｅｒ−１９８；Ｓｅｒ−２００；Ｓｅｒ−２３１；Ｓｅｒ−２３３；Ｓｅｒ−２３９；Ｓｅｒ−２６１；Ｓｅｒ−３７４；Ｓｅｒ−３８１；Ｓｅｒ−２９７；Ｓｅｒ−３９７；Ｓｅｒ−４５１；Ｓｅｒ−４７５；Ｓｅｒ−４９４；Ｓｅｒ−４９５；Ｓｅｒ−４９６；Ｓｅｒ−５０１；Ｓｅｒ−５０５；Ｔｈｒ−２５３；Ｔｈｒ−２６５；Ｔｈｒ−２６７；Ｔｈｒ−２６９；Ｔｈｒ−２９３；Ｔｈｒ−３８６；Ｔｈｒ−４００；Ｔｈｒ−４０８；Ｔｈｒ−４６９；及び／又はＴｈｒ−５１７。
【０１２３】
また、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％（例えば、≧８５％、≧９０％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、又は好ましくは≧９８％）の配列同一性を有し、（ｉｉ）Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まず、かつ、（ｉｉｉ）少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を含んだアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、Ｎ末端メチオニンを有する及び／又は単量体型である、当該ポリペプチドを提供する。
【０１２４】
これらＣＲＭ１９７由来のキャリアポリペプチドは、先行技術（例えば上記Ｂｒｏｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１１、国際公開第２０１５／１１７０９３号等を参照）でＣＲＭ１９７が用いられてきたのと同様の結合方法で用いることが可能であるが、ｎｎＡＡ残基を介して部位特異的な結合が可能となる改善を伴う。それらは、概して、他のＣＲＭ１９７を又はＣＲＭ１９７由来のサブユニットを伴ってポリペプチド多量体を形成するのではなく、単量体型で用いられることとなる。同様に、それらは、概して、例えばＣｙｓ−１８６及びＣｙｓ−２０１（配列番号１に従って番号付けした）の間、ならびに随意にＣｙｓ−４６１及びＣｙｓ−４７１の間に、少なくとも１つのジスルフィド架橋を含むこととなる。
【０１２５】
またこれら種々のキャリアポリペプチドであってそのｎｎＡＡのうちの少なくとも１つを介して糖抗原に結合したこれら種々のキャリアポリペプチドのいずれかを含む免疫原性複合体を提供する。このキャリアポリペプチドは、その中のｎｎＡＡ残基を介して肺炎球菌の莢膜糖類に結合するのに特に有用である。この方法で調製された免疫原性複合体を組み合わせて、本明細書の別の箇所で論じた多価の組成物を形成することが可能である。
【０１２６】
すなわち、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体であって、（ｉ）キャリアポリペプチドは配列番号４のアミノ酸配列であって、例えば各ＸがｐＡＭＦである配列番号４のアミノ酸配列を有し、また（ｉｉ）糖抗原は、配列番号４における少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合する、当該免疫原性複合体を提供する。また２以上のこうした免疫原性複合体を含む多価の医薬組成物を提供する。
【０１２７】
すなわち、複数の異なる複合体（例えば、異なる肺炎球菌血清型）を含む医薬組成物であって、当該複合体のそれぞれが、配列番号４のアミノ酸配列を有するキャリアポリペプチドを含む、当該医薬組成物を提供する。
【０１２８】
またキャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体であって、（ｉ）キャリアポリペプチドは配列番号４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）糖抗原は、配列番号４における少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉｉ）糖抗原は、肺炎球菌血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆのいずれかよりの莢膜糖類である、当該免疫原性複合体を提供する。これら個々の複合体を組み合わせて、本発明の多価の医薬組成物を作製することが可能である。
【０１２９】
また、本明細書に記載のキャリアポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。別の実施形態においては、本開示は、当該ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。別の実施形態においては、本開示は、当該発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【０１３０】
アジュバント
本発明の医薬組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含むことが可能である。このアジュバントは、医薬組成物内において複合体の免疫原性を増強することが可能である。当該組成物内の複合体は、アルミニウム塩アジュバントに吸着することができる。
【０１３１】
有用なアルミニウム塩アジュバントには、水酸化アルミニウムアジュバント及びリン酸アルミニウムアジュバントが含まれるが、これに限定されない。これらアジュバントは、例えばＶａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ・・・（１９９５）ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍの８章及び９章に記載されている。
【０１３２】
「水酸化アルミニウム」として通常知られるアジュバントは、典型的にはオキシ水酸化アルミニウム塩であり、これは通常、少なくとも部分的に結晶体である。一般式ＡｌＯ（ＯＨ）で表すことが可能であるオキシ水酸化アルミニウムは、赤外（ＩＲ）分光法での、特に１０７０ｃｍ−１の吸収帯と、３０９０〜３１００ｃｍ−１における強い強度の肩とが存在することにより、例えばＡｌ（ＯＨ）３等である他のアルミニウム化合物と区別することが可能である（Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎの９章）。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化度は、半値幅（ＷＨＨ）における回折帯の幅で反映され、結晶化度が低い粒子は、その結晶サイズがより小さいことに起因して、より大きなスペクトル線幅の拡大を見せる。ＷＨＨが増加するほど表面積は増加し、ＷＨＨ値が高いアジュバントは、より大きい抗原吸着性能を有することがわかっている。繊維の形態学（例えば、透過型電子顕微鏡写真で見られるような）は、典型的には、水酸化アルミニウムアジュバントでは、例えば約２ｎｍの直径の針状粒子である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは、典型的には約１１であり、すなわち生理的ｐＨにおいては、アジュバント自体はプラスの表面電荷を有する。水酸化アルミニウムアジュバントでは、ｐＨ７．４で、Ａｌ＋＋＋１ｍｇ当たり１．８から２．６ｍｇのタンパク質という吸着性能が報告されている。
【０１３３】
「リン酸アルミニウム」として通常知られるアジュバントは、典型的には、ヒドロキシリン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ）であり、これはまた少量の硫酸塩（すなわち、ヒドロキシリン酸アルミニウム硫酸塩（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｕｌｆａｔｅ））を含有することが多い。それらは、沈殿により得ることができ、また沈殿の際の反応条件及び濃度が、塩における水酸基に対するリン酸塩の置換度に影響を及ぼす。ヒドロキシリン酸塩は、概して、ＰＯ４／Ａｌのモル比が０．３から１．２である。ヒドロキシリン酸塩は、水酸基が存在することで、厳密なＡｌＰＯ４と区別することが可能である。例えば、３１６４ｃｍ−１（例えば、２００℃に加熱したとき）であるＩＲスペクトル帯は、構造上の水酸基の存在を示唆する（Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎの９章）。
【０１３４】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌ３＋のモル比は、概して、０．３から１．２とすることとなり、好ましくは０．８から１．２、またより好ましくは０．９５±０．１とすることとなる。リン酸アルミニウムは、概して非結晶であることとなり、特にヒドロキシリン酸塩で非結晶であることとなる。典型的なアジュバントは、０．６ｍｇ  Ａｌ３＋／ｍｌを含んだ、０．８４から０．９２であるＰＯ４／Ａｌのモル比をもつ非結晶ヒドロキシリン酸アルミニウムである。リン酸アルミニウムは、概して、粒状であることとなる（例えば、透過型電子顕微鏡写真で見られる場合、板状形態であり、５０ｎｍの範囲内に一次粒子を伴う）。粒子の典型的な直径は、任意の抗原吸着後で０．５から２０μｍの範囲（例えば、約５から１０μｍ）である。リン酸アルミニウムアジュバントでは、ｐＨ７．４で、Ａｌ＋＋＋１ｍｇ当たり０．７から１．５ｍｇのタンパク質という吸着性能が報告されている。
【０１３５】
リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ＰＺＣ）は、水酸基に対するリン酸塩の置換度に逆相関しており、またこの置換度は、沈殿による塩の調製に用いる反応物の反応条件及び濃度に依存して変動し得る。ＰＺＣはまた、溶液中の遊離リン酸塩イオンの濃度を変化させることによって（リン酸塩が多い＝ＰＺＣがより酸性）、又はヒスチジン緩衝液等である緩衝液を加えることによって（ＰＺＣをより塩基性にさせる）、変動する。本発明により用いられるリン酸アルミニウムは、概して、４．０から７．０の、より好ましくは５．０から６．５、例えば約５．７である、ＰＺＣを有することとなる。
【０１３６】
患者に投与する組成物中のアルミニウムイオンの濃度は、好ましくは、２．５ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌ等である。好ましい最大濃度は、≦１．７ｍｇ／ｍＬである。本発明の組成物中のＡｌ＋＋＋の範囲は、０．３から１ｍｇ／ｍｌ又は０．３から０．５ｍｇ／ｍｌであり得る。最大が０．８５ｍｇ／用量であることが好ましい。
【０１３７】
溶液中で、リン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウムの両アジュバントは、直径１から１０μｍの安定な多孔性凝集体を形成する傾向がある。組成物には、水酸化アルミニウムアジュバントとリン酸アルミニウムアジュバントとの両方の混合物を含めることが可能である。
【０１３８】
ある組成物が複数の複合体を含み、これらのそれぞれが、あるアルミニウム塩アジュバントに吸着する場合、各複合体は、個々にアルミニウム塩に吸着させてその後混合することが可能であり、又はそれらは、順々にアルミニウム塩に加えられて、それによって混合の複合体組成物を形成することが可能である。いずれのアプローチの混合物も用いることが可能である。
【０１３９】
医薬組成物用賦形剤
本発明の医薬組成物は、概して、１又は複数の薬理学的に許容される賦形剤を含むこととなる。こうした賦形剤の包括的な議論は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（ｅｄ．Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．），６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００９に見ることができる。
【０１４０】
医薬組成物は、特に投与の際に、水性形態であることが好ましいが、それらは、投与のために水性形態に変えることが可能である乾燥形態（例えば、凍結乾燥物として等）で存在することも可能である。
【０１４１】
医薬組成物は、緩衝剤又はｐＨ調整剤を含むことが可能である。緩衝剤は、リン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸塩緩衝液、琥珀酸塩緩衝液、トリス緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液等からなる群から選択することが可能である。緩衝塩を、典型的には、５から２０ｍＭの範囲で含めることとなる。
【０１４２】
医薬組成物は、例えば張度を制御するために、ナトリウム塩等の生理食塩水を含むことが可能である。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が典型的であり、これは、例えば１０±２ｍｇ／ｍｌ又は９ｍｇ／ｍｌである、１から２０ｍｇ／ｍｌで存在し得る。存在し得る他の塩には、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、二ナトリウムリン酸塩デハイドレート（ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等が挙げられる。他の有用な塩は、ナトリウム、カリウム又はアンモニウムの陽イオン、及び塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、又は亜硫酸水素塩の陰イオンを有し得る。
【０１４３】
医薬組成物には、酢酸又はコハク酸等の有機酸を含むことが可能である。これは、緩衝剤系の一部であり得る。
【０１４４】
医薬組成物は、マンニトール又はソルビトール等である糖アルコールを含み得る。医薬組成物は、ショ糖又はブドウ糖等である糖を含み得る。
【０１４５】
医薬組成物は、界面活性剤を含み得る。好適な界面活性剤には、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、及びドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が含まれるが、これに限定されない。一部の実施形態においては、界面活性剤は、０．０００３％から０．３％（ｗ／ｗ）であって、例えば０．０１から０．０３％の濃度で存在する。ポリソルベート８０が、好ましい界面活性剤である。
【０１４６】
医薬組成物は、チオメルサール又は２−フェノキシエタノール等である防腐剤を含み得る。好ましくは、組成物は、実質的に水銀材料を含まない（例えば、＜１０μｇ／ｍｌ）、例えばチオメルサールを含まない、ことが必要である。水銀を含有しない組成物がより好ましい。防腐剤を含めることは、特に、組成物がアルミニウム塩アジュバントを含むときに有用であり得るが、これは、それらの不溶性が、組成物が概して細菌増殖に悪影響を与えることを遮断することが可能である濁った外観の懸濁液である、ということを意味しているからである。防腐剤はまた、組成物が、例えば複数回使用バイアル中であるような複数回用いられる場合に、特に有用である。しかしながら、医薬組成物は、防腐剤を含まないものであり得ることが多い。
【０１４７】
医薬組成物は、２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇであって、例えば２４０から３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は２９０から３１０ｍＯｓｍ／ｋｇである、重量オスモル濃度を有し得る。
【０１４８】
医薬組成物は、典型的には、ｐＨが５．０から９．５であり、例えば５．０から８．０又は６．０から８．０である。
【０１４９】
医薬組成物は、例えば１用量当たり＜１ＥＵ（エンドトキシンユニット、標準尺度）、また好ましくは１用量当たり＜０．１ＥＵを含有する、非発熱性のものが好ましい。
【０１５０】
医薬組成物は、２００から４００ｍＯｓｍ／ｋｇであって、例えば２４０から３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は２８０から３２０ｍＯｓｍ／ｋｇである、重量オスモル濃度を有してもよい。
【０１５１】
医薬組成物は、グルテンを含まないことが好ましい。
【０１５２】
医薬組成物は、動物（及び、特にヒト）である患者への投与に好適であり、すなわちヒト及び獣医での使用の両方を含める。
【０１５３】
医薬組成物は、単位用量の形態で調製され得る。一部の実施形態においては、単位用量は、０．１から１．０ｍｌ、例えば約０．２５ｍＬ又は好ましくは約０．５ｍｌの量であり得る。こうした量は、ヒトにおける注射用であることが理想的である。
【０１５４】
複合体濃度
医薬組成物は、複数の免疫原性複合体を含み得る。現在認可されている髄膜炎菌結合型ワクチンには、４種の異なる血清群よりの莢膜糖類が含まれ、また認可されている肺炎球菌結合型ワクチンには、７、１０又は１３種の異なる血清型よりの莢膜糖類が含まれる。すなわち、本発明の組成物は、例えば３から５０種の異なる複合体（例えば、１４、１５、２０、２１、２４、２５、又はそれ以上）を含むことが可能である。例えば、これら複合体のそれぞれには、同一の菌種の異なる血清型又は血清群（例えば、複数の髄膜炎菌性血清群又は複数の肺炎球菌血清型）よりの莢膜糖類が含まれ得る。
【０１５５】
医薬組成物にｎ種の異なる免疫原性複合体が含まれる場合、それらｎ種の複合体中のキャリアポリペプチドの総量は、１用量当たり３ｎμｇ以下であり得る。言い換えれば、１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均量は、３μｇ未満である。総量は、例えば、１用量当たりｎから２．５ｎμｇであり得る。
【０１５６】
医薬組成物にｎ種の異なる免疫原性複合体が含まれる場合、それらｎ種の複合体中の糖抗原の総量は、１用量当たり４．４ｎμｇ以下であり得る。言い換えれば、１複合体当たりの糖類の平均量は、４．４μｇ未満である。総量は、例えば、１用量当たり０．４ｎから４．４ｎμｇであり、例えば１．１ｎから２．２ｎであり得る。
【０１５７】
医薬組成物にｎ種の異なる免疫原性複合体が含まれる場合、それらｎ種の複合体に関するキャリアポリペプチドの総濃度は、６ｎμｇ／ｍＬ以下であり得る。言い換えれば、１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均濃度は、６μｇ／ｍＬ未満である。総濃度は、例えば、ｎから４ｎμｇ／ｍＬであり得る。
【０１５８】
医薬組成物にｎ種の異なる免疫原性複合体が含まれる場合、それらｎ種の複合体に関する糖抗原の総濃度は、８．８ｎμｇ／ｍＬ以下であり得る。言い換えれば、１複合体当たりの糖類の平均濃度は、８．８μｇ／ｍＬ未満である。総濃度は、例えば、０．８ｎから８．８ｎμｇ／ｍＬであり、例えば２．２ｎから４．４ｎμｇ／ｍＬであり得る。
【０１５９】
一部の実施形態においては、本発明の多価の医薬組成物の単位用量中の結合したキャリアポリペプチドの総量は、４から１２８μｇ、例えば８から６４μｇ又は１６から４８μｇであり得る。本発明の多価の医薬組成物における結合したキャリアポリペプチドの濃度は、８から２５６μｇ／ｍＬ、例えば１６から１２８μｇ／ｍＬ又は３２から９６μｇ／ｍＬであり得る。
【０１６０】
一部の実施形態においては、本発明の多価の医薬組成物の単位用量中の結合した糖抗原の総量は、１０から１２０μｇ、例えば２０から９０μｇ又は３０から６０μｇであり得る。本発明の多価の医薬組成物における結合した糖抗原の濃度は、２０から２４０μｇ／ｍＬ、例えば４０から１８０μｇ／ｍＬ又は６０から１２０μｇ／ｍＬであり得る。
【０１６１】
非結合成分
上記に記載したとおり、医薬組成物は、例えば３から５０種の異なる複合体（例えば、１４、１５、２０、２１、２４、２５、又はそれ以上）である複数の免疫原性複合体を含むことが可能である。例えば、これら複合体のそれぞれには、同一の菌種の異なる血清型又は血清群よりの莢膜糖類が含まれ得る。
【０１６２】
一部の実施形態においては、この組成物は、非結合形態での、複合体のキャリアポリペプチドを含まない。他の実施形態においては、非結合であるキャリアポリペプチドが低レベルで存在するが、ただし、組成物中の非結合であるキャリアポリペプチドの質量は、全体としての組成物のｎ種の免疫原性複合体中のキャリアポリペプチドの質量のうちの＜１０％（例えば、＜５％又は＜２％）である。
【０１６３】
一部の実施形態においては、この組成物は、非結合形態での、複合体の糖類を含まない。他の実施形態においては、非結合である糖類が低レベルで存在するが、ただし、組成物中の非結合である糖類の質量は、組成物のｎ種の免疫原性複合体中の糖類の総質量のうちの＜１０％（例えば、＜５％又は＜２％）である。
【０１６４】
容器、送達デバイス等
免疫原性複合体を含む医薬組成物は、滅菌容器、送達デバイス等内に包装され得る。滅菌は、容器を気密にさせるようにして容器を気密密閉することによって維持され得る。好適な容器には、バイアル、シリンジ、ネブライザー、スプレー、吸入器、皮膚パッチ等が含まれるがこれに限定されない。バイアル及びシリンジが好ましい。
【０１６５】
免疫原性組成物は、バイアル内に含有させることが多い。バイアルは、好ましくは、プラスチック材料で、又は好ましくはガラスでできている。バイアルは、充填後に封止されるが、当該封止は、使用の間際に破ることが可能である。バイアルは、好ましくは、滅菌した後で、組成物をそこに加えてその後封止する。ラテックス感受性患者での問題を回避するため、バイアルは、ラテックスを含まない栓で封止し得、また全ての包装材料中でラテックスを含まないことが好ましい。バイアルは、組成物の１回分の単位用量を含めることが理想的であるが、それは例えば１０回の投与量である、１回以上の投与量（複数回使用バイアル）を含むこともあり得る。好ましいバイアルは、無色のガラス製である。
【０１６６】
バイアルは、シリンジを蓋に挿入して、バイアルとシリンジとの間で材料の移動（両方向に）を促すことが可能であるように適合された蓋（例えば、ルアーロック）を有し得る。バイアルからシリンジを除いた後、次いで針を取り付けることが可能であり、そして組成物を、対象に投与することが可能である。蓋は、蓋に到達可能にする前に封止又はカバーを取り除かなければならないように、封止又はカバーの内側に配置することが好ましい。バイアルは、特に複数回分用量のバイアル用で、その内容物を無菌で取り出すことを可能にする蓋を有し得る。
【０１６７】
組成物は、いつでも対象に投与される状態で、送達デバイス内に含有させることができる。当該組成物は、使用の間際に送達デバイスに（例えばバイアルから）移すことが可能であり、又は当該組成物は、製造段階で送達デバイスに入れることが可能である（例えば、事前充填シリンジの形態で）。
【０１６８】
本発明で使用するシリンジは、ガラス又はプラスチック製（例えば、シクロオレフィン重合体製又はシクロオレフィン共重合体製）であり得る。シリンジ（特に、ガラス製シリンジ）は、シリコン処理をしたシリンジであってもよい。非シリコン処理のシリンジもまた、例えば、テルモ社のＰＬＡＪＥＸ（商標）シリンジで利用可能であるテルモ社のｉ−Ｃｏａｔｉｎｇ（商標）システムを用いて、又は、エチレンテトラフルオロエチレン（ＥＴＦＥ）共重合体を有する大協精工社（Ｄａｉｋｙｏ）製ＣＺ（商標）シリンジを用いて、又はパーフルオロポリエーテル（ＰＦＰＥ）を有するＴｒｉｂｏＧｌｉｄｅ（商標）シリンジを用いて、使用することが可能である。シリコン処理の代わりに、炭素膜が用いられていてもよい（例えば、特開２００１１９０６６５を参照）。シリコンを含まないシリンジは、特開２０１１２１２１８３にも開示されている。欧州特許出願公開第０３７５７７８号公報に開示されるようなプランジャーストッパーを含む非シリコン処理のシリンジもまた用いてもよく、すなわち、この場合ストッパーは、動摩擦係数が小さい熱可塑性樹脂層で少なくとも一部が覆われている熱可塑性エラストマーを有する。
【０１６９】
組成物を、シリンジ内に含有させる場合、シリンジは、シリンジの内容物を対象に注射又はある容器内に注入するための、シリンジに取り付けられる針を有し得る。シリンジは、既に取り付けられている針と共に供給されてもよい。針が取り付けられていない場合、別個の針を、組立もしくは使用のためにシリンジと共に供給し得るか、又は針は、別個の起源であることが可能である。こうした針は、使用の時点で滅菌されている必要があり、また包まれていてもよい。安全針を使用することができる。１インチ、２３ゲージの針、１インチ、２５ゲージの針、及び５／８インチ、２５ゲージの針が典型的である。１／２インチ〜１と１／２インチ、２２〜２５ゲージの針を用いることが可能である。シリンジ及び針が別個に包装されている場合には、針はブチルゴムのシールドと共に装着することが好ましい。
【０１７０】
シリンジは、ロット番号と内容物の使用期限とを印刷することができる剥離ラベルと共に提供され、記録管理を促すことが可能である。シリンジ内のプランジャーに、ストッパーを設け、吸引中に偶発的にプランジャーが外れることを防止することが可能である。シリンジは、ラテックスゴムの蓋及び／又はプランジャーを有し得るが、例えばラテックスを含まないシクロブチルゴム又はラテックスを含まないイソプレンブロモブチルゴムであるラテックスを含まないゴムを用いることが可能である。シリンジは、概して、先端の蓋を有して、針装着前の先端を封止することとなり、また先端の蓋は、例えばラテックスを含まないイソプレンブロモブチルゴムであるブチルゴム製であることが好ましい。有用なシリンジは、例えば、商品名「Ｔｉｐ−Ｌｏｋ」（商標）のもとに市販されているシリンジである。
【０１７１】
容器は、例えば小児への送達を容易にする、半用量の量を示す印がついていてもよい。例えば、０．５ｍｌ用量を含有するシリンジが、０．２５ｍｌ量を示す印を有し得る。シリンジ自体は、用量を超える容積を有してもよく、例えば１ｍｌシリンジを用いて、０．５ｍｌの用量の医薬組成物を含有させることが可能である。使い捨ての又は事前充填のシリンジは、通常、単回用量のワクチンを含有する。
【０１７２】
ガラス容器（例えば、シリンジ又はバイアル）を用いる場合、ソーダ石灰ガラスではなくホウケイ酸ガラス製であることが好ましい。
【０１７３】
容器は、例えば投与指示、ワクチン内の抗原の詳細等であるワクチンの詳細を含めたリーフレットと共に包装してもよい（例えば、同一の箱に）。この指示はまた、例えばワクチン接種後のアナフィラキシー反応の場合に容易に利用可能であるアドレナリン溶液を所有しておくこと等の警告を含有してもよい。複数の容器を、例えば同一の箱に、一緒に包装してもよい。
【０１７４】
医薬組成物は、１容器当たり（例えばシリンジ当たり、又はバイアル当たり）単回用量で、単位用量の形態で存在することが可能である。各単位用量を個々に製造するのではなく、バルク組成物を調製して、単位用量を取り出して、それらの容器内に個々に包装する。すなわち、例えば、複数の単位用量を、当該バルクから取り出して、そして各単位用量を別個の容器に、例えばシリンジ又はバイアルに、移す。
【０１７５】
免疫応答の増加
免疫原性複合体を哺乳動物である対象に投与して、その複合体中の抗原に対する防御免疫応答を引き出すことが可能である。それらは、医薬組成物の形態で投与することとなる。組成物は、本明細書の別の箇所に記載したような複数の免疫原性複合体を含み得るので、多数の抗原に対する防御免疫応答を、同時に引き出すことが可能である。
【０１７６】
すなわち、哺乳動物である対象に、抗原の複合体を投与することによって、当該対象において１又は複数の抗原に対する防御抗体応答を引き出す方法を提供する。
【０１７７】
また、防御抗体応答を引き出す際に使用するための、本明細書に開示するような複合体を提供する。
【０１７８】
また防御抗体応答を引き出すための医薬の製造における、本明細書に開示するような複合体の使用を提供する。
【０１７９】
また、（ｉ）哺乳動物である対象に、本発明の多価の組成物を投与することによって、当該対象において複数の抗原に対する防御抗体応答を引き出す方法と、（ｉｉ）防御抗体応答を引き出す際に用いるための、本発明の多価組成物と、（ｉｉｉ）多数の抗原に対する防御抗体応答を引き出すための多価の医薬組成物の製造における、本明細書に開示するような多数の複合体の使用とを提供する。
【０１８０】
防御免疫応答を引き出す能力とは、例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が引き起こす侵襲性疾患の予防、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が引き起こす中耳炎の予防、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が引き起こす肺炎の予防のための能動免疫、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に曝露する危険性がある対象の能動免疫を提供して、侵襲性疾患を予防すること等に複合体を用いることが可能であることを意味する。
【０１８１】
医薬組成物は、種々の形態に調製可能である。例えば、組成物は、注射剤として、例えば溶液又は懸濁液として、調製できる。筋肉内投与用の注射剤が典型的である。ヒトに対しては、約０．５ｍｌの注射量が好ましい。すなわち、好ましい単位用量の量は、約０．５ｍｌである。筋肉内注射による投与は、典型的には、例えば乳幼児の大腿の前外側面に、又は幼児、小児及び成人の上腕三角筋になされる。
【０１８２】
複合体は、典型的に、多回投与スケジュールに従って投与することとなる。多回投与は、一次免疫スケジュール及び／又は追加免疫スケジュールで用いてもよい。多回投与（典型的には２回投与）の施与は、特に、免疫未感作の患者で有用である。多回投与は、典型的に、少なくとも１週間空けて（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１０週間、約１２週間等）施与することとなる。
【０１８３】
全般
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」のみならず「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、排他的にＸからなり得るか、又は、例えばＸ＋Ｙで追加的に何かを含み得る。
【０１８４】
数値ｘに関連した「約」の語は任意選択であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１８５】
「実質的に」の語は、「完全に」を除外せずに、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要であれば、「実質的に」の文言は、本発明の定義から省いてもよい。
【０１８６】
２つのアミノ酸配列の文脈における「配列同一性」の語は、配列比較アルゴリズム（例えばＢＬＡＳＴＰ）を用いて測定した場合、比較窓に対して最大の一致で比較してアラインしたときに、同一であるか又は特定の割合で同一のアミノ酸残基を有する２つの配列を指す。同一性の割合は、例えば配列番号１又は２で示した参照配列等、本明細書で開示する完全長の参照配列に対して決定する。本明細書で提供するような配列同一性の算出方法は、語長（Ｗ）が３、期待値（Ｅ）が１０で設定されたそのデフォルト値と、ＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列とを有するＢＬＡＳＴＰプログラムである（例えば、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９８９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：１０９１５を参照）。例えば、ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉのワールドワイドウェブ又は他の場所で利用可能であるＢＬＡＳＴアラインメントツールを参照されたい。
【０１８７】
本明細書で用いる場合、また別段に特定していない限り、「低級アルキル」の語は、１から６個の炭素原子を有する飽和の直鎖炭化水素又は分枝鎖炭化水素を指し、すなわちＣ１からＣ６のアルキルである。ある実施形態においては、低級アルキル基は、１級、２級、又は３級の炭化水素である。この語には、飽和部分及び不飽和部分の両方が含まれる。米国特許公開公報第２０１４／００６６５９８号もまた参照されたい。「低級アルキレン」の語は、低級アルキルのアルキレンラジカルを指す。
【０１８８】
別段に規定していない限り、本明細書で用いる全ての技術用語及び科学用語は、通常理解される意味を有する。特に実施者は、Ｇｒｅｅｎ＆Ｓａｍｂｒｏｏｋ（ｅｄｓ．）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２０１２）、及びＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ９９），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２０１２）、及びＰｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．Ａ．，Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｗ．Ａ．，＆Ｏｆｆｉｔ，Ｐ．Ａ．，Ｖａｃｃｉｎｅｓ，６ｔｈ  ｅｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｌｏｎｄｏｎ（２０１３）に誘導される。
【０１８９】
無細胞合成の方法は、Ｓｐｉｒｉｎ＆Ｓｗａｒｔｚ（２００８）Ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙに記載されている。無細胞合成を用いた、非天然アミノ酸をタンパク質に組み込む方法は、Ｓｈｉｍｉｚｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２７３，４１３３−４１４０に、またＣｈｏｎｇ（２０１４）Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１０８：１６．３０．１−１１にも記載されている。
【０１９０】
一部の実施形態においては、この発明は、配列番号３が、２４種の肺炎球菌血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ（国際公開第２０１８／１２６２２９号で例示される）のそれぞれよりの複合体のためのキャリアポリペプチドとして用いられているような組成物を包含しない。より概略的には、一部の実施形態においては、この発明は、配列番号３が、多価の組成物における各複合体のためのキャリアポリペプチドとして用いられているような組成物を包含しない。
【０１９１】
実施形態の列挙
実施形態Ｉ−１  キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する滅菌容器であって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該滅菌容器。
【０１９２】
実施形態Ｉ−２  キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する気密密閉容器であって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該気密密閉容器。気密密閉に好適な容器には、例えばバイアルが含まれる。この内容物は、気密密閉の際に滅菌してあることが好ましい。
【０１９３】
実施形態Ｉ−３  例えばバイアル等の滅菌ガラス容器である、実施形態Ｉ−１又はＩ−２の容器。
【０１９４】
実施形態Ｉ−４  キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含む医薬組成物を含有する送達デバイスであって、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該送達デバイス。
【０１９５】
実施形態Ｉ−５  シリンジである、実施形態Ｉ−１もしくはＩ−２の容器又は実施形態Ｉ−４の送達デバイス。
【０１９６】
実施形態Ｉ−６  ２種以上の異なる免疫原性複合体と、アルミニウム塩アジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）アルミニウム塩アジュバントは水酸化アルミニウムアジュバント又はリン酸アルミニウムアジュバントである、当該医薬組成物。
【０１９７】
実施形態Ｉ−７  ２種以上の異なる免疫原性複合体と、リン酸アルミニウムアジュバントとを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）当該組成物におけるアルミニウムイオンの濃度は、≦２．５ｍｇ／ｍＬである、当該医薬組成物。
【０１９８】
実施形態Ｉ−８  ２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）当該医薬組成物の量は、０．２５から１．２５ｍＬである、当該医薬組成物。
【０１９９】
実施形態Ｉ−９  ２種以上の異なる免疫原性複合体と防腐剤とを含む医薬組成物であって、各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該医薬組成物。
【０２００】
実施形態Ｉ−１０  ２種以上の異なる免疫原性複合体を含む、防腐剤を含まない医薬組成物であって、各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものである、当該防腐剤を含まない医薬組成物。
【０２０１】
実施形態Ｉ−１１  ２種以上の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、（ｉｉ）当該組成物は、重量オスモル濃度が２００から４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、当該医薬組成物。
【０２０２】
実施形態Ｉ−１２  ２種以上の異なる免疫原性複合体と、少なくとも１つの賦形剤とを含む医薬組成物であって、（ｉ）各免疫原性複合体は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し、また（ｉｉ）少なくとも１つの賦形剤は、塩化ナトリウム、コハク酸、及びポリソルベート８０からなる群から選択される、当該医薬組成物。
【０２０３】
実施形態Ｉ−１３  ｎ種の異なる免疫原性複合体を含む医薬組成物であって
（ｉ）ｎ種の免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；
（ｉｉ）ｎは、３から５０の整数であり、また
（ｉｉｉ）ｎ種の免疫原性複合体におけるキャリアポリペプチドの総量は、１用量当たり３ｎμｇ以下であり；
（ｉｖ）ｎ種の免疫原性複合体におけるキャリアポリペプチドの総濃度は、６ｎμｇ／ｍｌ以下であり；
（ｖ）ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総量は、１用量当たり３ｎμｇ以下であり；
（ｖｉ）ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総濃度は、６ｎμｇ／ｍＬ以下であり；
（ｖｉｉ）１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均量は、１用量当たり１から４μｇであり；
（ｖｉｉｉ）１複合体当たりのキャリアポリペプチドの平均濃度は、２から８μｇ／ｍＬであり；
（ｉｘ）１複合体当たりの糖抗原の平均量は、１用量当たり１から４μｇであり；
（ｘ）１複合体当たりの糖抗原の平均濃度は、２から８μｇ／ｍＬであり；
（ｘｉ）当該組成物は、非結合形態でのキャリアポリペプチドを含まず；
（ｘｉｉ）当該組成物は、非結合形態でのキャリアポリペプチドを含有し、組成物における非結合形態での当該キャリアポリペプチドの質量は、ｎ種の免疫原性複合体におけるそのキャリアポリペプチドの質量のうちの＜１０％であり；
（ｘｉｉｉ）当該組成物は、非結合形態での糖抗原を含まず；及び／又は
（ｘｉｖ）当該組成物は、非結合形態での糖抗原の少なくとも１つを含有し、組成物における非結合形態での当該糖抗原の総質量は、ｎ種の免疫原性複合体における糖抗原の総質量のうちの＜１０％である、当該医薬組成物。
【０２０４】
実施形態Ｉ−１４  単位用量の医薬組成物を複数調製する方法であって、（ｉ）当該医薬組成物は、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体を含み、糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合し；また（ｉｉ）当該方法は、免疫原性複合体を含むバルク組成物を調製するステップと、複数の別個の容器に当該バルク組成物から個々の単位用量を包装するステップとを含むものである、当該方法。
【０２０５】
実施形態Ｉ−１５  医薬組成物を調製する方法であって、当該医薬組成物は、２種以上の異なる免疫原性複合体とアルミニウム塩アジュバントとを含み、（ｉ）免疫原性複合体のそれぞれは、キャリアポリペプチドと糖抗原とを含み、また（ｉｉ）糖抗原が、キャリアポリペプチド内の非天然アミノ酸残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合するものであり、そして当該方法は、（Ａ）免疫原性複合体のそれぞれをあるアルミニウム塩アジュバントに別個に吸着させて、次いで個々の吸着した複合体を一緒に混合するステップ、又は（Ｂ）免疫原性複合体のそれぞれを、アルミニウム塩アジュバントに順次吸着させるステップを含むものである、当該方法。
【０２０６】
実施形態Ｉ−１６  （ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；（ｉｉ）Ａｒｇ−Ａｒｇジペプチド配列を含まず、かつ、（ｉｉｉ）少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を含んだ、アミノ酸配列を含む、キャリアポリペプチド。
【０２０７】
実施形態Ｉ−１７  （ｉ）配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し；かつ、（ｉｉ）以下のアミノ酸残基（配列番号１に従って番号付けした）のうちの１又は複数においてｎｎＡＡの置換を含んだアミノ酸配列を含む、キャリアポリペプチド：Ａｓｐ−２１１；Ａｓｐ−２９５；Ａｓｐ−３５２；Ａｓｐ−３９２；Ａｓｐ−４６５；Ａｓｐ−４６７；Ａｓｐ  ５０７；Ａｓｐ  ５１９；Ａｓｎ  ２９６；Ａｓｎ  ３５９；Ａｓｎ  ３９９；Ａｓｎ  ４８１；Ａｓｎ  ４８６；Ａｓｎ  ５０２；Ａｓｎ  ５２４；Ｇｌｕ  ２４０；Ｇｌｕ  ２４８；Ｇｌｕ  ２４９；Ｇｌｕ  ２５６；Ｇｌｕ  ２５９；Ｇｌｕ  ２９２；Ｇｌｕ  ３６２；Ｇｌｎ  ２５２；Ｇｌｎ  ２８７；Ｌｙｓ  ２１２；Ｌｙｓ  ２１８；Ｌｙｓ  ２２１；Ｌｙｓ  ２２９；Ｌｙｓ  ２３６；Ｌｙｓ  ２６４；Ｌｙｓ  ２９９；Ｌｙｓ  ３８５；Ｌｙｓ  ４５６；Ｌｙｓ  ４７４；Ｌｙｓ  ４９８；Ｌｙｓ  ５１６；Ｌｙｓ  ５２２；Ｌｙｓ  ５３４；Ａｒｇ  ３７７；Ａｒｇ  ４０７；Ａｒｇ  ４５５；Ａｒｇ  ４６０；Ａｒｇ  ４６２；Ａｒｇ  ４７２；Ａｒｇ  ４９３；Ｓｅｒ  １９８；Ｓｅｒ  ２００；Ｓｅｒ  ２３１；Ｓｅｒ  ２３３；Ｓｅｒ  ２３９；Ｓｅｒ  ２６１；Ｓｅｒ  ３７４；Ｓｅｒ  ３８１；Ｓｅｒ  ２９７；Ｓｅｒ  ３９７；Ｓｅｒ  ４５１；Ｓｅｒ  ４７５；Ｓｅｒ  ４９４；Ｓｅｒ  ４９５；Ｓｅｒ  ４９６；Ｓｅｒ  ５０１；Ｓｅｒ  ５０５；Ｔｈｒ  ２５３；Ｔｈｒ  ２６５；Ｔｈｒ  ２６７；Ｔｈｒ  ２６９；Ｔｈｒ  ２９３；Ｔｈｒ  ３８６；Ｔｈｒ  ４００；Ｔｈｒ  ４０８；Ｔｈｒ−４６９；及び／又はＴｈｒ  ５１７。
【０２０８】
実施形態Ｉ−１８  配列番号１のうちのＡｒｇ−１９３が、例えばＡｓｎ等である異なるアミノ酸で置換されている、実施形態Ｉ−１６又はＩ−１７に記載のキャリアポリペプチド。
【０２０９】
実施形態Ｉ−１９  抗原に対して、キャリアポリペプチド内のｎｎＡＡ残基を介して結合した、実施形態Ｉ−１６又はＩ−１７又はＩ−１８に記載のキャリアポリペプチドを含む免疫原性複合体。
【０２１０】
実施形態Ｉ−２０  キャリアポリペプチドと糖抗原とを含む免疫原性複合体であって、（ｉ）キャリアポリペプチドは配列番号４のアミノ酸配列を含み、また（ｉｉ）糖抗原は、配列番号における少なくとも１つのｎｎＡＡ残基を介してキャリアポリペプチドと共有結合する、当該免疫原性複合体。
【０２１１】
実施形態Ｉ−２１  実施形態Ｉ−２０記載の２種以上の異なる免疫原性複合体を含む、医薬組成物。
【０２１２】
実施形態Ｉ−２２  キャリアポリペプチドが、４から９個のｎｎＡＡ残基を含む、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１３】
実施形態Ｉ−２３  キャリアポリペプチドの天然の配列におけるリシンが、少なくとも１個のｎｎＡＡで置換されている、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１４】
実施形態Ｉ−２４  キャリアポリペプチドが配列番号１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１５】
実施形態Ｉ−２５  配列番号１又は２におけるＫ２４、Ｋ３３、Ｋ３７、Ｋ３９、Ｋ２１２、Ｋ２１４、Ｋ２２７、Ｋ２４４、Ｋ２６４、Ｋ３８５、Ｋ５２２及び／もしくはＫ５２６が、少なくとも１個のｎｎＡＡで置換されている、実施形態Ｉ−２４記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１６】
実施形態Ｉ−２６  キャリアポリペプチドが配列番号１４のアミノ酸配列を含む、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１７】
実施形態Ｉ−２７  ｎｎＡＡが、２−アミノ−３−（４−（アジドメチル）フェニル）プロパン酸である、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１８】
実施形態Ｉ−２８  抗原が、アジド基を介してｎｎＡＡに結合するアルキン基を有する、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２１９】
実施形態Ｉ−２９  抗原が、細菌性の莢膜糖類であり、例えば、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、Ａ群溶血性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｂ群溶血性レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）及びジンジバリス菌（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）からなる群から選択される細菌よりの莢膜糖類である、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２２０】
実施形態Ｉ−３０  抗原が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型の莢膜糖類である、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２２１】
実施形態Ｉ−３１  複合体における糖類のキャリアポリペプチドに対する比（ｗ／ｗ）は、１より大きい、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２２２】
実施形態Ｉ−３２  キャリアポリペプチドは、３個以上のｎｎＡＡ残基を含み、また複合体は分子量が少なくとも５００ｋＤａである、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２２３】
実施形態Ｉ−３３  複合体は、分子量が９００ｋＤａから５ＭＤａである、上述した実施形態のいずれかに記載の、容器、デバイス、組成物、方法、ポリペプチド、又は複合体。
【０２２４】
実施形態Ｉ−３４  医薬組成物が、
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される１４種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される１５種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２０種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２１種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２４種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１３、１４、１５Ｂ、１６、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３１及び３３Ｆからなる群から選択される２５種以上の異なる肺炎球菌の血清型よりの莢膜糖類の複合体；
血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｘ、及びＹからなる群から選択される４種以上の異なる髄膜炎菌の血清群よりの莢膜糖類の複合体；又は
血清型Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３、Ｋ４、Ｋ５及びＫ６からなる群から選択される２種以上の異なるジンジバリス菌（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｓ）の血清型よりの莢膜糖類の複合体、を含む、実施形態Ｉ−１からＩ−１５又は実施形態Ｉ−２１からＩ−３３のうちのいずれか１つに記載の、容器、デバイス、組成物、又は方法。
【０２２５】
実施形態Ｉ−３５  対象において、ある抗原に対する免疫防御抗体応答を引き出す方法であって、非経口投与に好適である賦形剤中の、実施形態Ｉ−６からＩ−１３もしくは実施形態Ｉ−２１からＩ−３４のうちのいずれか１つに記載の医薬組成物又は実施形態Ｉ−１９からＩ−３３のうちのいずれかに記載の免疫原性複合体を、対象に投与することを含む、方法。
【実施例】
【０２２６】
以下の実施例で、本発明について説明する。材料、方法及び実施例は、例示のみであり、限定することを意図していない。多数の変形、変更及び置き換えが、本発明から逸脱することなく、当業者に想起することとなるであろう。実施例は、別段に詳細に記載している場合を除き、当業者にとって周知及び通例の技術を用いて実行される。
【０２２７】
国際公開第２０１８／１２６２２９号からの実施例
国際公開第２０１８／１２６２２９号の実施例では、一部位ｅＣＲＭ部分（例えばＫ１１ＴＡＧ）の合成について完全に詳細に記載している。これらは、無細胞タンパク質合成（ＣＦＰＳ）抽出物中で発現し、また天然のＬｙｓの代わりに、ｐＡＭＦが組み込まれた。
【０２２８】
１ポリペプチド当たり複数のｎｎＡＡを含有するＣＲＭのバリアントはまた、１タンパク質当たり種々の異なる数のＬｙｓ→ｐＡＭＦ置換を伴って発現した。概して、置換の数が多いほど、より高分子量の複合体を導くキャリアを与えるが、当該キャリアの溶解度はより低いものであることがわかった。６つのｐＡＭＦ残基をもつキャリアは、概して、良好な溶解度（＞＞５０ｍｇ／ｍＬ）と免疫原性との両方をもたらした。天然の配列中の電荷をもつＬｙｓ残基を、疎水性のｐＡＭＦ残基で置換するということは、それがもつ疎水性がその溶解度に影響を及ぼすことが既に報告されているタンパク質であるＣＲＭ１９７の疎水性を増大させることであるから、高溶解度であったことは驚くべきことであった。すなわち、電荷をもつ残基を失っても不溶性を引き起こすことなく、既知のＣＲＭ１９７複合体で用いていた（すなわちＬｙｓ残基）のと同一の付加部位を維持することが可能であるということを示した。
【０２２９】
Ｋ３４、Ｋ２１３、Ｋ２４５、Ｋ２６５、Ｋ３８６及びＫ５２７（配列番号３に従って番号付けした）を用いた、６つのＬｙｓ→ｐＡＭＦの置換が特に有用なセットであることがわかった。驚くべきことにｐＡＭＦ置換の部位のこの組み合わせは有効であるが、これは特に、Ｋ２４５位及びＫ５２７位における個々の置換が、相対的に低いレベル発現を導くからであった。
【０２３０】
この６つの置換のセットは、配列番号１の残基１９２から１９３（ＲＲ→ＲＮ）におけるＡｒｇ−Ａｒｇジペプチドの崩壊と組み合わせて、配列番号４であって各ＸがｐＡＭＦである配列番号４をもたらすことが可能である。
【０２３１】
国際公開第２０１８／１２６２２９号の実施例では、メタ過ヨウ素酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔａ−ｐｅｒｉｏｄａｔｅ）を用いたサッカリド活性に関する、ＤＢＣＯを用いた過ヨウ素酸塩により酸化された多糖体の誘導体化に関する、ＣＤＡＰを用いたサッカリド活性に関する、及び糖類−ＤＢＣＯのｅＣＲＭとの結合に関する、全般的プロトコールについてさらに記載している。先に参照により援用した、米国シリアル番号第６２／６９３，９７８号もまた参照されたい。
【０２３２】
多価免疫原性組成物
２４種の肺炎球菌の血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆのそれぞれに関する複合体の組み合わせを、各複合体におけるキャリアポリペプチドとしてＣＲＭ１９７誘導体の配列番号４（Ｘ＝ｐＡＭＦである）を用いて調製した。この多価組成物の免疫原性は、７羽のウサギの群における、ワクチン０．２５ｍＬの筋肉内注射による３回投与計画を用いて確認した。各投与量には、２４μｇの糖類（１血清型当たり１μｇ）を含み、９６μｇ／ｍＬの濃度であった。
【０２３３】
次いで３２種の肺炎球菌の血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、７Ｃ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１６Ｆ，１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、３１、３３Ｆ及び３５Ｂのそれぞれに関する複合体の組み合わせを調製して、同様の手法で免疫原性を確認した。 
【０２３４】
比較の目的のため、非結合型の血清型６Ａの多糖体を補った２３価ニューモバックス（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ（商標））ワクチンでできた２４価非結合型ワクチンと一緒に、１３価プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））結合型ワクチンもまた試験した。これら３つの組成物は、１血清型当たり同等の多糖体用量を有したが（プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））が２倍の用量を含む６Ｂは除く）、これはプレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））及びニューモバックス（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ（商標））の希釈を伴った。３つの組成物の全てが、リン酸アルミニウムアジュバント（１用量当たり６０μｇのＡｌ＋＋＋）を含んだが、これはこのアジュバントをニューモバックス（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ（商標））に加えることを伴った。当該組成物は、防腐剤を含まなかった。
【０２３５】
２４価の複合体組成物は、それがまた１１個のさらなる血清型よりの莢膜糖類を含んでいたとしても、承認されたプレベナー１３（Ｐｒｅｖｎａｒ−１３（商標））ワクチンにおけるよりも少量のキャリアポリペプチドを含んでいた。２４価の複合体組成物における莢膜糖類のキャリアポリペプチドに対する全重量比は、プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））で見られたものの約２倍であった。
【０２３６】
ＩｇＧ及びＯＰＡ応答を、ウサギで測定した。３回目の投与の後では、非結合型ワクチンを受けたウサギにおけるよりも、２つの結合型ワクチンを受けたウサギにおいて、これら両方の応答がはるかに大きかった。さらに、２４価組成物を用いたＩｇＧ及びＯＰＡ応答は、承認されたワクチンでカバーされる１３種の血清型のプレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））を用いて達成されたものに匹敵したが、加えてプレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ（商標））に含まれていなかった１１種の血清型に対しては上回っていた。驚くべきことに、２４価組成物を用いた、キャリアにより誘導されるエピトープの抑制の証拠はなかった。
【０２３７】
図１は、多糖体／ミョウバン（ａｌｕｍ）製剤及びプレベナー１３（Ｐｒｅｖｎａｒ−１３（商標））に対する、３２価複合体組成物における、３２種の血清型のそれぞれに関する幾何平均力価である。
【０２３８】
多価複合体組成物は、有益に、事前充填滅菌シリンジに包装することが可能であるため、単位用量の形態で容易に配送可能であり、またその後、使用の間際に、バイアルの内容物を注射用シリンジ等に移す必要なく、投与することが可能である。
【０２３９】
ＣＲＭ１９７における置換可能位置
国際公開第２０１８／１２６２２９号に開示の作業に基づいて、天然のＣＲＭ１９７配列（配列番号１）における種々のＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ及びＴｈｒの残基を、それらのコドンをＴＡＧに変異することと、ｎｎＡＡを組み込むｔＲＮＡによってこのコドンが認識されるものである無細胞系における２５℃でのタンパク質発現とによって、個々に、ｐＡＭＦで置換した。変異ポリペプチドは、Ｎ−末端メチオニンと、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙトリペプチドリンカーを介して結合した下流のヘキサヒスチジンタグとにより発現した。Ａｓｎ２７０−Ｉｌｅ２８９、Ａｌａ３２０−Ｇｌｕ３４９及びＰｈｅ４１０−Ｈｉｓ−４４９内の残基は、これら領域において認識されるＴ細胞エピトープ（上記を参照）を理由に、回避した。
【０２４０】
変異タンパク質への１４Ｃ−Ｌｅｕ組み込みを確認し、タンパク質全体及び可溶性タンパク質の両方を見ることによって、発現効率を評価した。概して、ＣＲＭ１９７の触媒ドメインにおける変異が、改変されていないＣＲＭ１９７配列と比べて発現レベルの減少を導き、また最良の発現レベルを伴う変異は、概して、触媒ドメインの末端を描写するために用いることが可能である、Ａｒｇ−１９３の下流での置換を含んだ。
【０２４１】
最良の７２の変異は、タンパク質全体及び可溶性タンパク質の両方の発現レベルを増加させ、また、配列番号１に従って番号付けした、以下の残基における置換を有した：Ｓｅｒ−１９８、Ｓｅｒ−２００、Ａｓｐ−２１１、Ｌｙｓ−２１２、Ｌｙｓ−２１８、Ｌｙｓ−２２１、Ｌｙｓ−２２９、Ｓｅｒ−２３１、Ｓｅｒ−２３３、Ｌｙｓ−２３６、Ｓｅｒ−２３９、Ｇｌｕ−２４０、Ｇｌｕ−２４８、Ｇｌｕ−２４９、Ｇｌｎ−２５２、Ｔｈｒ−２５３、Ｇｌｕ−２５６、Ｇｌｕ−２５９、Ｓｅｒ−２６１、Ｌｙｓ−２６４、Ｔｈｒ−２６５、Ｔｈｒ−２６７、Ｔｈｒ−２６９、Ｇｌｎ−２８７、Ｇｌｕ−２９２、Ｔｈｒ−２９３、Ａｓｐ−２９５、Ａｓｎ−２９６、Ｓｅｒ−２９７、Ｌｙｓ−２９９、Ａｓｐ−３５２、Ａｓｎ−３５９、Ｇｌｕ−３６２、Ｓｅｒ−３７４、Ａｒｇ−３７７、Ｓｅｒ−３８１、Ｌｙｓ−３８５、Ｔｈｒ−３８６、Ａｓｐ−３９２、Ｓｅｒ−３９７、Ａｓｎ−３９９、Ｔｈｒ−４００、Ａｒｇ−４０７、Ｔｈｒ−４０８、Ｓｅｒ−４５１、Ａｒｇ−４５５、Ｌｙｓ−４５６、Ａｒｇ−４６０、Ａｒｇ−４６２、Ａｓｐ−４６５、Ａｓｐ−４６７、Ｔｈｒ−４６９、Ａｒｇ−４７２、Ｌｙｓ−４７４、Ｓｅｒ−４７５、Ａｓｎ−４８１、Ａｓｎ−４８６、Ａｒｇ−４９３、Ｓｅｒ−４９４、Ｓｅｒ−４９５、Ｓｅｒ−４９６、Ｌｙｓ−４９８、Ｓｅｒ−５０１、Ａｓｎ−５０２、Ｓｅｒ−５０５、Ａｓｐ−５０７、Ｌｙｓ−５１６、Ｔｈｒ−５１７、Ａｓｐ−５１９、Ｌｙｓ−５２２、Ａｓｎ−５２４及びＬｙｓ−５３４。
【０２４２】
本明細書に記載の実施形態は、例のみとして提供したものであり、本明細書に記載の実施形態を実施する際に、実施形態に対する様々な代替を除外するものではない。
【０２４３】
配列表
配列番号１（天然のＣＲＭ１９７）
ＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＫＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＲＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＫＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＫＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＫＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＫＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＫＬＳＬＦＦＥＩＫＳ
【０２４４】
配列番号２（Ａｒｇ−Ａｓｎ置換を含むＣＲＭ１９７）
ＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＫＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＮＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＫＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＫＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＫＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＫＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＫＬＳＬＦＦＥＩＫＳ
【０２４５】
配列番号３（６個の好ましいｎｎＡＡ部位及びＮ末端Ｍｅｔ（メチオニン）を含むＣＲＭ１９７）
ＭＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＸＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＲＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＸＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＸＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＸＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＸＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＸＬＳＬＦＦＥＩＫＳ
【０２４６】
配列番号４（Ａｒｇ−Ａｓｎサブセットｎ、６個の好ましいｎｎＡＡ部位、及びＮ末端Ｍｅｔ（メチオニン）を含むＣＲＭ１９７）
ＭＧＡＤＤＶＶＤＳＳＫＳＦＶＭＥＮＦＳＳＹＨＧＴＫＰＧＹＶＤＳＩＱＸＧＩＱＫＰＫＳＧＴＱＧＮＹＤＤＤＷＫＥＦＹＳＴＤＮＫＹＤＡＡＧＹＳＶＤＮＥＮＰＬＳＧＫＡＧＧＶＶＫＶＴＹＰＧＬＴＫＶＬＡＬＫＶＤＮＡＥＴＩＫＫＥＬＧＬＳＬＴＥＰＬＭＥＱＶＧＴＥＥＦＩＫＲＦＧＤＧＡＳＲＶＶＬＳＬＰＦＡＥＧＳＳＳＶＥＹＩＮＮＷＥＱＡＫＡＬＳＶＥＬＥＩＮＦＥＴＲＧＫＲＧＱＤＡＭＹＥＹＭＡＱＡＣＡＧＮＲＶＲＮＳＶＧＳＳＬＳＣＩＮＬＤＷＤＶＩＲＤＸＴＫＴＫＩＥＳＬＫＥＨＧＰＩＫＮＫＭＳＥＳＰＮＫＴＶＳＥＥＫＡＸＱＹＬＥＥＦＨＱＴＡＬＥＨＰＥＬＳＥＬＸＴＶＴＧＴＮＰＶＦＡＧＡＮＹＡＡＷＡＶＮＶＡＱＶＩＤＳＥＴＡＤＮＬＥＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳＶＭＧＩＡＤＧＡＶＨＨＮＴＥＥＩＶＡＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱＡＩＰＬＶＧＥＬＶＤＩＧＦＡＡＹＮＦＶＥＳＩＩＮＬＦＱＶＶＨＮＳＹＮＲＰＡＹＳＰＧＨＸＴＱＰＦＬＨＤＧＹＡＶＳＷＮＴＶＥＤＳＩＩＲＴＧＦＱＧＥＳＧＨＤＩＫＩＴＡＥＮＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫＬＤＶＮＫＳＫＴＨＩＳＶＮＧＲＫＩＲＭＲＣＲＡＩＤＧＤＶＴＦＣＲＰＫＳＰＶＹＶＧＮＧＶＨＡＮＬＨＶＡＦＨＲＳＳＳＥＫＩＨＳＮＥＩＳＳＤＳＩＧＶＬＧＹＱＫＴＶＤＨＴＫＶＮＳＸＬＳＬＦＦＥＩＫＳ
【０２４７】
配列番号５（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）
ＣＳＳＨＳＳＮＭＡＮＴＱＭＫＳＤＫＩＩＩＡＨＲＧＡＳＧＹＬＰＥＨＴＬＥＳＫＡＬＡＦＡＱＱＡＤＹＬＥＱＤＬＡＭＴＫＤＧＲＬＶＶＩＨＤＨＦＬＤＧＬＴＤＶＡＫＫＦＰＨＲＨＲＫＤＧＲＹＹＶＩＤＦＴＬＫＥＩＱＳＬＥＭＴＥＮＦＥＴＫＤＧＫＱＡＱＶＹＰＮＲＦＰＬＷＫＳＨＦＲＩＨＴＦＥＤＥＩＥＦＩＱＧＬＥＫＳＴＧＫＫＶＧＩＹＰＥＩＫＡＰＷＦＨＨＱＮＧＫＤＩＡＡＥＴＬＫＶＬＫＫＹＧＹＤＫＫＴＤＭＶＹＬＱＴＦＤＦＮＥＬＫＲＩＫＴＥＬＬＰＱＭＧＭＤＬＫＬＶＱＬＩＡＹＴＤＷＫＥＴＱＥＫＤＰＫＧＹＷＶＮＹＮＹＤＷＭＦＫＰＧＡＭＡＥＶＶＫＹＡＤＧＶＧＰＧＷＹＭＬＶＮＫＥＥＳＫＰＤＮＩＶＹＴＰＬＶＫＥＬＡＱＹＮＶＥＶＨＰＹＴＶＲＫＤＡＬＰＥＦＦＴＤＶＮＱＭＹＤＡＬＬＮＫＳＧＡＴＧＶＦＴＤＦＰＤＴＧＶＥＦＬＫＧＩＫ
【図１】
2021530468.tif 000011
【配列表】
2021530468000001.app
【国際調査報告】
2021530468.tif 000012
2021530468.tif 000013
2021530468.tif 000014
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