(57)【要約】  本発明は、ベータ−１，３−グルカン；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防、改善または治療に使用するための組成物および抗炎症用組成物に関し、また、ベータ−１，３−グルカン；配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；および抗生剤；を含む敗血症の原因菌に対する抗菌用組成物に関し、また、ベータ−１，３−グルカン；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を患者に投与する段階を含む炎症性疾患の予防または治療方法に関する。したがって、本発明のベータ−１，３−グルカンおよび配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドを含む場合、敗血症マウスの活性酸素、敗血症の原因菌および炎症性サイトカインの水準を低減し、生存率を有意的に増加させることができるので、敗血症など炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物および予防または治療方法として効果的である。【選択図】図１
2021529216.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項２】
前記ベータ−１，３−グルカンと前記ペプチドをスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）で連結したことを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項３】
前記スペーサーは、ＧＧＧＧアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする請求項２に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項４】
前記ベータ−１，３−グルカンは、シゾフィラン（ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌａｎ；ＳＰＧ）であることを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項５】
前記組成物は、抗生剤をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項６】
前記抗生剤は、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系、ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系、ベータ−ラクタム／ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系、キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系、グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系、アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系、マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系、サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系、アズトレオナム（ａｚｔｒｅｏｎａｍ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、チゲサイクリン（ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ）、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム（ｃｏｌｉｓｔｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）およびスピラマイシン（ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）よりなる群から一つ以上選ばれることを特徴とする請求項５に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項７】
前記セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系抗生剤は、セファゾリン（ｃｅｆａｚｏｌｉｎ）、セフカペンピボキシル（ｃｅｆｃａｐｅｎｅ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフポドキシムプロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ  ｐｒｏｘｅｔｉｌ）、セフラジン（ｃｅｐｈｒａｄｉｎｅ）、セフトリアキソン（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ）、セフブペラゾン（ｃｅｆｂｕｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフォタキシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）、セフミノクス（ｃｅｆｍｉｎｏｘ）、セフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ）、セフピロム（ｃｅｆｐｉｒｏｍｅ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セファレキシン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、セフジニル（ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、セフロキサジン（ｃｅｆｒｏｘａｄｉｎｅ）、セフロキシム（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ）、セファドロキシル（ｃｅｆａｄｒｏｘｉｌ）、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ）、セフェタメットピボキシル（ｃｅｆｅｔａｍｅｔ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）、セファマンドールナファート（ｃｅｆａｍａｎｄｏｌｅ  ｎａｆａｔｅ）、セファゼドン（ｃｅｆａｚｅｄｏｎｅ）、セフテラムピボキシル（ｃｅｆｔｅｒａｍ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフテゾール（ｃｅｆｔｅｚｏｌｅ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフォテタン（ｃｅｆｏｔｅｔａｎ）、セフメノキシム（ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ）、セフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セファトリジンプロピレングリコール（ｃｅｆａｔｒｉｚｉｎｅ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、セフォチアム（ｃｅｆｏｔｉａｍ）、塩酸セフォチアムヘキセチル（ｃｅｆｏｔｉａｍ  ｈｅｘｅｔｉｌ  ｈｃｌ）、セフチブテン（ｃｅｆｔｉｂｕｔｅｎ）、セファクロル（ｃｅｆａｃｌｏｒ）、セフォペラゾン（ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフピラミド（ｃｅｆｐｉｒａｍｉｄｅ）、セファロチン（ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｎ）、セフォジジム（ｃｅｆｏｄｉｚｉｍｅ）、セフォニサイド（ｃｅｆｏｎｉｃｉｄ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）およびセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系抗生剤は、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｌｉｎ）、ピペラシリン（ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）およびアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系抗生剤は、スルバクタム（ｓｕｌｂａｃｔａｍ）、タゾバクタム（ｔａｚｏｂａｃｔａｍ）、トシル酸スルタミシリン（ｓｕｌｔａｍｉｃｉｌｌｉｎ  ｔｏｓｙｌａｔｅ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）、クラブラン酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ）、チカルシリン（ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ）およびピボキシルスルバクタム（ｐｉｖｏｘｙｌ  ｓｕｌｂａｃｔａｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系抗生剤は、シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、モキシフロキサシン（ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）およびロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系抗生剤は、バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、リネゾリド（ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ）およびテイコプラニン（ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系抗生剤は、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、ドリペネムモノハイドレート（ｄｏｒｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）、シラスタチン（ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）およびイミペネムモノハイドレート（ｉｍｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系抗生剤は、アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン（ｎｅｔｉｌｍｉｃｉｎ）、シソマイシン（ｓｉｓｏｍｉｃｉｎ）、イセパマイシン（ｉｓｅｐａｍｉｃｉｎ）、ホスホマイシン（ｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ）およびゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系抗生剤は、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ロキシスロマイシン（ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）およびアジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；かつ、
前記サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系抗生剤は、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）およびトリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上である；ことを特徴とする請求項６に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項８】
前記組成物は、マクロファージ、樹枝状細胞、単核細胞、肥満細胞および好中球よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の食細胞の活性酸素の生産を減少させることを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項９】
前記炎症性疾患は、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＢＤ）、腹膜炎、腎臓炎、急性気管支炎、慢性気管支炎、骨関節炎、腸疾患脊椎炎、慢性閉鎖性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＯＰＤ）、リューマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、急性肺損傷（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ）および気管支肺異形成症（ｂｒｏｎｃｈｏ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上であることを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物。
【請求項１０】
ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防または改善に用いるための健康機能食品組成物。
【請求項１１】
ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む抗炎症用組成物。
【請求項１２】
ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；および抗生剤；を含む敗血症の原因菌に対する抗菌用組成物。
【請求項１３】
ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を患者に投与する段階を含む炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項１４】
前記ベータ−１，３−グルカンと前記ペプチドをスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）で連結したことを特徴とする請求項１３に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項１５】
前記スペーサーは、ＧＧＧＧアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする請求項１４に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項１６】
前記ベータ−１，３−グルカンは、シゾフィラン（ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌａｎ；ＳＰＧ）であることを特徴とする請求項１３に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項１７】
前記方法は、患者に抗生剤を投与する段階をさらに含むことを特徴とする請求項１３に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項１８】
前記抗生剤は、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系、ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系、ベータ−ラクタム／ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系、キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系、グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系、アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系、マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系、サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系、アズトレオナム（ａｚｔｒｅｏｎａｍ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、チゲサイクリン（ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ）、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム（ｃｏｌｉｓｔｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）およびスピラマイシン（ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）よりなる群から一つ以上選ばれることを特徴とする請求項１７に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項１９】
前記セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系抗生剤は、セファゾリン（ｃｅｆａｚｏｌｉｎ）、セフカペンピボキシル（ｃｅｆｃａｐｅｎｅ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフポドキシムプロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ  ｐｒｏｘｅｔｉｌ）、セフラジン（ｃｅｐｈｒａｄｉｎｅ）、セフトリアキソン（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ）、セフブペラゾン（ｃｅｆｂｕｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフォタキシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）、セフミノクス（ｃｅｆｍｉｎｏｘ）、セフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ）、セフピロム（ｃｅｆｐｉｒｏｍｅ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セファレキシン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、セフジニル（ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、セフロキサジン（ｃｅｆｒｏｘａｄｉｎｅ）、セフロキシム（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ）、セファドロキシル（ｃｅｆａｄｒｏｘｉｌ）、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ）、セフェタメットピボキシル（ｃｅｆｅｔａｍｅｔ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）、セファマンドールナファート（ｃｅｆａｍａｎｄｏｌｅ  ｎａｆａｔｅ）、セファゼドン（ｃｅｆａｚｅｄｏｎｅ）、セフテラムピボキシル（ｃｅｆｔｅｒａｍ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフテゾール（ｃｅｆｔｅｚｏｌｅ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフォテタン（ｃｅｆｏｔｅｔａｎ）、セフメノキシム（ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ）、セフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セファトリジンプロピレングリコール（ｃｅｆａｔｒｉｚｉｎｅ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、セフォチアム（ｃｅｆｏｔｉａｍ）、塩酸セフォチアムヘキセチル（ｃｅｆｏｔｉａｍ  ｈｅｘｅｔｉｌ  ｈｃｌ）、セフチブテン（ｃｅｆｔｉｂｕｔｅｎ）、セファクロル（ｃｅｆａｃｌｏｒ）、セフォペラゾン（ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフピラミド（ｃｅｆｐｉｒａｍｉｄｅ）、セファロチン（ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｎ）、セフォジジム（ｃｅｆｏｄｉｚｉｍｅ）、セフォニサイド（ｃｅｆｏｎｉｃｉｄ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）およびセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系抗生剤は、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｌｉｎ）、ピペラシリン（ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）およびアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系抗生剤は、スルバクタム（ｓｕｌｂａｃｔａｍ）、タゾバクタム（ｔａｚｏｂａｃｔａｍ）、トシル酸スルタミシリン（ｓｕｌｔａｍｉｃｉｌｌｉｎ  ｔｏｓｙｌａｔｅ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）、クラブラン酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ）、チカルシリン（ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ）およびピボキシルスルバクタム（ｐｉｖｏｘｙｌ  ｓｕｌｂａｃｔａｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系抗生剤は、シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、モキシフロキサシン（ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）およびロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系抗生剤は、バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、リネゾリド（ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ）およびテイコプラニン（ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系抗生剤は、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、ドリペネムモノハイドレート（ｄｏｒｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）、シラスタチン（ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）およびイミペネムモノハイドレート（ｉｍｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系抗生剤は、アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン（ｎｅｔｉｌｍｉｃｉｎ）、シソマイシン（ｓｉｓｏｍｉｃｉｎ）、イセパマイシン（ｉｓｅｐａｍｉｃｉｎ）、ホスホマイシン（ｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ）およびゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系抗生剤は、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ロキシスロマイシン（ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）およびアジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；かつ、
前記サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系抗生剤は、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）およびトリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上である；ことを特徴とする請求項１８に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【請求項２０】
前記炎症性疾患は、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＢＤ）、腹膜炎、腎臓炎、急性気管支炎、慢性気管支炎、骨関節炎、腸疾患脊椎炎、慢性閉鎖性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＯＰＤ）、リューマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、急性肺損傷（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ）および気管支肺異形成症（ｂｒｏｎｃｈｏ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上であることを特徴とする請求項１３に記載の炎症性疾患の予防または治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年０６月２０日に出願された韓国特許出願第１０−２０１８−００７０８４６号を優先権として主張し、前記明細書の全体は、本出願の参考文献である。
【０００２】
本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防、改善または治療に使用するための組成物および抗炎症用組成物に関する。
【０００３】
本発明は、また、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；および抗生剤；を含む敗血症の原因菌に対する抗菌用組成物に関する。
【０００４】
本発明は、また、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を患者に投与する段階を含む炎症性疾患の予防または治療方法に関する。
【背景技術】
【０００５】
細胞内活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ；ＲＯＳ）により誘発される過度な炎症反応は、敗血症を含む多様な炎症性疾患を誘発することができる。敗血症は、病原性グラム陰性細菌が生体に感染した場合、細胞壁の成分であるリポ多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ＬＰＳ）が毒素として作用して生体の免疫体系が過度に活性化されることによって誘発される炎症反応であって、全身に感染症を起こしたり、症状がひどい場合、ショックを伴うことがある。最近、敗血症と関連した急性肺損傷でｃ−Ｓｒｃが媒介された急性炎症反応の重要性が明らかにされた。
【０００６】
体内でＲＯＳが発生する原因としては、大きく、二つに分けられるが、ミトコンドリアの呼吸過程および食細胞（ｐｈａｇｏｃｙｔｅ）の食菌過程がそれである。
【０００７】
食細胞の食菌作用により吸収された物質の分解は、タンパク質酵素を通じて行われ、これは、いわゆる酸化的破壊（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｂｕｒｓｔ）により促進される。これは、ＲＯＳおよび酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ；ＮＯ）の生産を伴う。食細胞の膜に存在するＮＡＤＰＨ酸化酵素（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  ａｄｅｎｉｎｅ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｏｘｉｄａｓｅ；ＮＯＸ）は、酸素（Ｏ２）を超酸化物アニオン（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ａｎｉｏｎ；Ｏ２−）に減少させる。これは、フェントン反応（Ｆｅｎｔｏｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）やミエロペルオキシダーゼ（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）による次亜塩素酸塩（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ）合成を通じて過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）の形成および高い反応性の水酸基ラジカルの形成を誘導する。また、ＲＯＳとＮＯが反応して発生するペルオキシニトライト（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ）は、次亜塩素酸塩と共に非常に効果的な抗菌剤である。このような反応種を活性酸素または窒素種と呼ぶ。
【０００８】
ミトコンドリアの呼吸で発生したＲＯＳ（ｍｔＲＯＳ）は、多様な先天的免疫信号伝達経路で重要な役割をする。これらは、ＮＯＸおよびＮＬＲＰ３インフラマソームを活性化させ、炎症性サイトカインの合成にも関与する。しかも、ｍｔＲＯＳは、マクロファージの食細胞作用も増加させると知られている。ｍｔＲＯＳの生成は、ＮＯと一酸化炭素（ＣＯ）のような二原子気体媒介子により調節されると知られている。
【０００９】
ＮＯＸは、ｆｌａｖｏｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｂ成分（ｇｐ９１ｐｈｏｘ／ＮＯＸ２  ａｎｄ  ｐ２２ｐｈｏｘ）および食細胞の４種の細胞液タンパク質（ｐ４７ｐｈｏｘ，ｐ６７ｐｈｏｘ，ｐ４０ｐｈｏｘ，ａｎｄ  Ｒａｃ１／２）からなる複合体である。ＮＯＸ複合体が活性化するためには、様々なセリン残基に存在するｐ４７ｐｈｏｘのリン酸化が必須である。その他にも、ｐ２２ｐｈｏｘと様々な調節パートナーとの結合が必須であるが、調節パートナーとしては、ｐ４７ｐｈｏｘと同じＮＯＸ  ｏｒｇａｎｉｚｅｒ  １（ＮＯＸＯ１）、ｐ６７ｐｈｏｘと同じＮＯＸ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  １（ＮＯＸＡ１）およびＲａｃ１  ＧＴＰａｓｅなどがある。ＲＯＳ生産で重要な役割をするＮＯＸを特定して標的することは、致命的な疾病において治療効果をもたらすことができる。このような信号伝達物質を研究することは、特定の治療標的（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）の開発に役に立つことができる。ＮＯＸの一部小さい化学的（非ペプチド）抑制子（ｄｉｐｈｅｎｙｌｅｎｅ  ｉｏｄｏｎｉｕｍ，４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ，ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅ  ｏｘｉｄｅおよび４−（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）−ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｆｌｕｏｒｉｄｅなど）は、ＲＯＳ生成を抑制するのに用いられている。しかしながら、これらは、特異性がなくて、ＮＯＸと類似しているか、関係のない酵素までも抑制する。
【００１０】
スエヒロタケ（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｃｏｍｍｕｎｅ）の可溶性β−グルカンから収得したシゾフィラン（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌａｎ；ＳＰＧ）は、β−（１−３）−グルカン種類の多糖類である。これは、中性溶液で三重らせんを形成する。ＳＰＧのアルカリ性溶液が中性化されれば、単一鎖に変形され、疎水性相互作用および水素結合を通じて本来の三重らせんに戻る。
【００１１】
このような物理化学的な相互作用が起こる間、２種の主な鎖グルコースであるβ−（１−３）−グルカンと一つのオリゴヌクレオチド（ｏｉｌｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ；ＯＤＮ）塩基またはペプチドが結合して、化学量論的複合体（ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｘ）を形成する。この複合体を用いて、ＳＰＧ基礎の薬物伝達システムは、標的細胞に機能性ＯＤＮを伝達できるように設計された。
【００１２】
韓国公開特許第１０−２０１６−０１４０４７２号公報は、微生物発酵および酵素処理生物転換工程を通じて生物転換された山椒生物転換産物に関し、前記微生物は、スエヒロタケであり得、前記山椒生物転換産物を有効成分として含む場合、敗血症の予防または治療用薬学組成物として使用可能であることが開示されている。しかしながら、シゾフィランなどのベータグルカンとペプチドを結合させた複合体およびこれと抗生剤を併用する方法などに関する研究は行われたことがない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
これより、本発明者らは、活性酸素の発生に重要な役割をするＮＡＤＰＨ酸化酵素を特異的にターゲットして、敗血症など炎症性疾患に効果的な組成物を提供するために努力した結果、ベータグルカンの種類であるシゾフィランと特定のペプチドを結合したベータグルカン−ペプチド複合体およびこれと抗生剤を併用する場合、盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ；Ｃｅｃａｌ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）方法で敗血症を誘導したマウスの生存率を有意的に増加させ、活性酸素、敗血症の原因菌および炎症性サイトカインの水準を低減する効果があるので、敗血症など炎症性疾患の予防、改善または治療に用いることができることを確認し、本発明を完成した。
【００１４】
したがって、本発明の目的は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防、改善または治療に用いるための組成物および抗炎症用組成物に関する。
【００１５】
本発明のさらに他の目的は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；および抗生剤；を含む敗血症の原因菌に対する抗菌用組成物を提供することにある。
【００１６】
本発明のさらに他の目的は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を患者に投与する段階を含む炎症性疾患の予防または治療方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
前記目的を達成するために、本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防または治療に用いるための薬学的組成物および炎症性疾患の予防または治療方法を提供することができる。
【００１８】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記ベータ−１，３−グルカンと前記ペプチドをスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）で連結したものでありうる。
【００１９】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記スペーサーは、ＧＧＧＧアミノ酸配列を含むペプチドでありうる。
【００２０】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記ベータ−１，３−グルカンは、シゾフィラン（ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌａｎ；ＳＰＧ）でありうる。
【００２１】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記組成物は、抗生剤をさらに含むものでありうる。
【００２２】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記抗生剤は、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系、ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系、ベータ−ラクタム／ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系、キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系、グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系、アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系、マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系、モノバクタム（ｍｏｎｏｂａｃｔａｍ）系、サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、チゲサイクリン（ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ）、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム（ｃｏｌｉｓｔｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）およびスピラマイシン（ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）よりなる群から一つ以上選ばれるものでありうる。
【００２３】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系抗生剤は、セファゾリン（ｃｅｆａｚｏｌｉｎ）、セフカペンピボキシル（ｃｅｆｃａｐｅｎｅ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフポドキシムプロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ  ｐｒｏｘｅｔｉｌ）、セフラジン（ｃｅｐｈｒａｄｉｎｅ）、セフトリアキソン（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ）、セフブペラゾン（ｃｅｆｂｕｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフォタキシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）、セフミノクス（ｃｅｆｍｉｎｏｘ）、セフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ）、セフピロム（ｃｅｆｐｉｒｏｍｅ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セファレキシン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、セフジニル（ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、セフロキサジン（ｃｅｆｒｏｘａｄｉｎｅ）、セフロキシム（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ）、セファドロキシル（ｃｅｆａｄｒｏｘｉｌ）、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ）、セフェタメットピボキシル（ｃｅｆｅｔａｍｅｔ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）、セファマンドールナファート（ｃｅｆａｍａｎｄｏｌｅ  ｎａｆａｔｅ）、セファゼドン（ｃｅｆａｚｅｄｏｎｅ）、セフテラムピボキシル（ｃｅｆｔｅｒａｍ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフテゾール（ｃｅｆｔｅｚｏｌｅ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフォテタン（ｃｅｆｏｔｅｔａｎ）、セフメノキシム（ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ）、セフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セファトリジンプロピレングリコール（ｃｅｆａｔｒｉｚｉｎｅ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、セフォチアム（ｃｅｆｏｔｉａｍ）、塩酸セフォチアムヘキセチル（ｃｅｆｏｔｉａｍ  ｈｅｘｅｔｉｌ  ｈｃｌ）、セフチブテン（ｃｅｆｔｉｂｕｔｅｎ）、セファクロル（ｃｅｆａｃｌｏｒ）、セフォペラゾン（ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフピラミド（ｃｅｆｐｉｒａｍｉｄｅ）、セファロチン（ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｎ）、セフォジジム（ｃｅｆｏｄｉｚｉｍｅ）、セフォニサイド（ｃｅｆｏｎｉｃｉｄ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）およびセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系抗生剤は、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｌｉｎ）、ピペラシリン（ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）およびアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系抗生剤は、スルバクタム（ｓｕｌｂａｃｔａｍ）、タゾバクタム（ｔａｚｏｂａｃｔａｍ）、トシル酸スルタミシリン（ｓｕｌｔａｍｉｃｉｌｌｉｎ  ｔｏｓｙｌａｔｅ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）、クラブラン酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ）、チカルシリン（ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ）およびピボキシルスルバクタム（ｐｉｖｏｘｙｌ  ｓｕｌｂａｃｔａｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系抗生剤は、シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、モキシフロキサシン（ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）およびロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系抗生剤は、バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、リネゾリド（ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ）およびテイコプラニン（ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系抗生剤は、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、ドリペネムモノハイドレート（ｄｏｒｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）、シラスタチン（ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）およびイミペネムモノハイドレート（ｉｍｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系抗生剤は、アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン（ｎｅｔｉｌｍｉｃｉｎ）、シソマイシン（ｓｉｓｏｍｉｃｉｎ）、イセパマイシン（ｉｓｅｐａｍｉｃｉｎ）、ホスホマイシン（ｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ）およびゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系抗生剤は、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ロキシスロマイシン（ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）およびアジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；かつ、
前記サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系抗生剤は、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）およびトリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上でありうる。
【００２４】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記組成物は、マクロファージ、樹枝状細胞、単核細胞、肥満細胞および好中球よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の食細胞の活性酸素の生産を減少させるものでありうる。
【００２５】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記炎症性疾患は、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）、敗血性ショック、炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＢＤ）、腹膜炎、腎臓炎、急性気管支炎、慢性気管支炎、骨関節炎、腸疾患脊椎炎、慢性閉鎖性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＯＰＤ）、リューマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、急性肺損傷（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ）および気管支肺異形成症（ｂｒｏｎｃｈｏ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上でありうる。
【００２６】
本発明の好ましい一実施例によれば、前記方法は、患者に抗生剤を投与する段階をさらに含むものでありうる。
【００２７】
本発明は、また、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防または改善に用いるための健康機能食品組成物を提供することができる。
【００２８】
本発明は、また、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む抗炎症用組成物を提供することができる。
【００２９】
本発明は、また、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；および抗生剤；を含む敗血症の原因菌に対する抗菌用組成物を提供することができる。
【００３０】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００３１】
上述したように、従来技術では、ＲＯＳを抑制するために、ＮＡＤＰＨ酸化酵素（ＮＯＸ）の抑制子などを用いたが、これらは、特異性が不足して、効果的にＲＯＳを抑制することができなかった。ＮＯＸを特異的にターゲットし、ＲＯＳの他に敗血症などの炎症性疾患に対する治療効果を上昇させることができる組成物に関する開発が要求されているが、特異性と抗炎効果を全部上昇させる効果的な構成に関する研究は、まだ不十分である。
【００３２】
本発明によるベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む組成物は、炎症性疾患に感染した個体の生存率が有意的に上昇し、活性酸素、敗血症の原因菌および炎症性サイトカインの発現水準を減少させ、これに抗生剤を併用して用いる場合、その水準は、さらに有意的に上昇するので、炎症性疾患に対する予防、改善または治療用途に効果的である。
【００３３】
したがって、本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【００３４】
本発明の前記薬学的組成物は、ＣＬＰマウスに腹腔で投与されて、その抗炎症効果を確認した。具体的に、前記ＣＬＰマウスは、ペントタールソジウム（ｐｅｎｔｏｔｈａｌ  ｓｏｄｉｕｍ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔に投与して麻酔した後、腹部を切開して盲腸を露出させた。盲腸の回盲弁（ｉｌｅｏｃｅｃａｌ  ｖａｌｖｅ）の下を結紮し、２２ゲージ針で２回刺した後、さらに腹部に入れた後に閉じた。
【００３５】
前記配列番号４のアミノ酸配列は、ｃ−Ｓｒｃ配列でＮＡＤＰＨ酸化酵素の構成要素であるｐ６７ｐｈｏｘおよびｐ４７ｐｈｏｘと関係のあるＳＨ３−１およびＳＨ３−２配列を基礎として製造した（図１）。単純にＳＨ３−１配列とＳＨ３−２配列を連結させず、最も高い抗炎症関連効果を奏することができる配列を研究して、組合せおよび導出した。
【００３６】
本発明の前記ベータ−１，３−グルカンと前記ペプチドをスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）で連結したことが好ましいが、これに限定されない。前記スペーサーは、ＳＰＧ配列とＳＨ３ペプチド配列を一つの配列で連結させる部分であり、１個〜１０個のアミノ酸配列を含むペプチドであることが好ましい。より好ましくは、３個〜７個のアミノ酸配列であることが好ましく、最も好ましくは、４個〜５個のアミノ酸配列であることが好ましい。
【００３７】
前記スペーサーのアミノ酸配列は、同じアミノ酸を繰り返してなることが好ましく、最も好ましくは、グリシン（Ｇ）が繰り返されることが最も好ましい。
【００３８】
本発明の前記ベータ−１，３−グルカンは、シゾフィラン（ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌａｎ；ＳＰＧ）であることが好ましい。前記シゾフィランは、スエヒロタケから収得したことが好ましいが、これに限定されない。
【００３９】
本発明の前記組成物は、抗生剤をさらに含むことができる。前記抗生剤は、１種以上含まれ得、２種以上含まれる場合、各抗生剤は、同じ割合で含まれ得る。
【００４０】
敗血症を起こす感染は、通常、グラム陽性菌およびグラム陰性菌による細菌性感染であるが、かびまたはウイルスにより感染され得る。本発明の前記抗生剤は、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系、ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系、ベータ−ラクタム／ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系、キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系、グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系、アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系、マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系、サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系、アズトレオナム（ａｚｔｒｅｏｎａｍ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、チゲサイクリン（ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ）、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム（ｃｏｌｉｓｔｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）およびスピラマイシン（ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）よりなる群から一つ以上選ばれることが好ましく、最も好ましくはセファロスポリン系およびアミノグリコシド系から選択することが好ましい。
【００４１】
前記セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）系抗生剤は、セファゾリン（ｃｅｆａｚｏｌｉｎ）、セフカペンピボキシル（ｃｅｆｃａｐｅｎｅ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフポドキシムプロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ  ｐｒｏｘｅｔｉｌ）、セフラジン（ｃｅｐｈｒａｄｉｎｅ）、セフトリアキソン（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ）、セフブペラゾン（ｃｅｆｂｕｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフォタキシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）、セフミノクス（ｃｅｆｍｉｎｏｘ）、セフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ）、セフピロム（ｃｅｆｐｉｒｏｍｅ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セファレキシン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、セフジニル（ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、セフロキサジン（ｃｅｆｒｏｘａｄｉｎｅ）、セフロキシム（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ）、セファドロキシル（ｃｅｆａｄｒｏｘｉｌ）、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ）、セフェタメットピボキシル（ｃｅｆｅｔａｍｅｔ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）、セファマンドールナファート（ｃｅｆａｍａｎｄｏｌｅ  ｎａｆａｔｅ）、セファゼドン（ｃｅｆａｚｅｄｏｎｅ）、セフテラムピボキシル（ｃｅｆｔｅｒａｍ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セフテゾール（ｃｅｆｔｅｚｏｌｅ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフォテタン（ｃｅｆｏｔｅｔａｎ）、セフメノキシム（ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ）、セフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ  ｐｉｖｏｘｉｌ）、セファトリジンプロピレングリコール（ｃｅｆａｔｒｉｚｉｎｅ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、セフォチアム（ｃｅｆｏｔｉａｍ）、塩酸セフォチアムヘキセチル（ｃｅｆｏｔｉａｍ  ｈｅｘｅｔｉｌ  ｈｃｌ）、セフチブテン（ｃｅｆｔｉｂｕｔｅｎ）、セファクロル（ｃｅｆａｃｌｏｒ）、セフォペラゾン（ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフピラミド（ｃｅｆｐｉｒａｍｉｄｅ）、セファロチン（ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｎ）、セフォジジム（ｃｅｆｏｄｉｚｉｍｅ）、セフォニサイド（ｃｅｆｏｎｉｃｉｄ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）およびセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタム（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍ）系抗生剤は、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｌｉｎ）、ピペラシリン（ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）およびアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記ベータ−ラクタマーゼ（ｂｅｔａ−ｌａｃｔａｍａｓｅ）抑制子系抗生剤は、スルバクタム（ｓｕｌｂａｃｔａｍ）、タゾバクタム（ｔａｚｏｂａｃｔａｍ）、トシル酸スルタミシリン（ｓｕｌｔａｍｉｃｉｌｌｉｎ  ｔｏｓｙｌａｔｅ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）、クラブラン酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ）、チカルシリン（ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ）およびピボキシルスルバクタム（ｐｉｖｏｘｙｌ  ｓｕｌｂａｃｔａｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記キロノン（Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）系抗生剤は、シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、モキシフロキサシン（ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）およびロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記グリコペプチド（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）系抗生剤は、バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、リネゾリド（ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ）およびテイコプラニン（ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系抗生剤は、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、ドリペネムモノハイドレート（ｄｏｒｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）、シラスタチン（ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）およびイミペネムモノハイドレート（ｉｍｉｐｅｎｅｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）系抗生剤は、アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン（ｎｅｔｉｌｍｉｃｉｎ）、シソマイシン（ｓｉｓｏｍｉｃｉｎ）、イセパマイシン（ｉｓｅｐａｍｉｃｉｎ）、ホスホマイシン（ｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ）およびゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記マクロライド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）系抗生剤は、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ロキシスロマイシン（ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）およびアジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり；
前記アズトレオナム（ａｚｔｒｅｏｎａｍ）は、モノバクタム（Ｍｏｎｏｂａｃｔａｍ）系であり；かつ、
前記サルファ剤（ｓｕｌｆａ  ｄｒｕｇ）系抗生剤は、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）およびトリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上でありうるが、これに限定されない。
【００４２】
前記抗生剤は、ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ）、塩酸（ＨＣｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、硫酸塩（ｓｕｌｆａｔｅ）およびリン酸塩（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上の物質と１回以上結合されて用いられる。
【００４３】
本発明の前記組成物は、炎症性疾患に感染時に発生する活性酸素を減少させることができるが、活性酸素は、大きく、ミトコンドリアの呼吸過程と食細胞の食菌作用時に発生するものと知られている。本発明のベータグルカン−ペプチド複合体およびこれと抗生剤を併用する場合、特に、食細胞により発生する活性酸素を特異的に減少させることができる。したがって、ミトコンドリアによる活性酸素でなく食細胞による活性酸素の抑制を通した炎症抑制効果をさらに明確に説明することができる。前記食細胞は、マクロファージ、樹枝状細胞、単核細胞、肥満細胞および好中球よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり得、より好ましくは、マクロファージ、樹枝状細胞および好中球であり得、最も好ましくは、マクロファージでありうるが、これに限定されない。
【００４４】
本発明の前記組成物は、活性酸素の他にも、炎症性サイトカインの発現水準が顕著に減少（図５）し、ＣＬＰで敗血症を誘導したマウスの生存率（図４）および敗血症菌に対する抗菌効果（図６）が有意的に上昇して、敗血症などの炎症性疾患に対する予防または治療効果を示すことができる。
【００４５】
本発明の前記炎症性疾患は、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＢＤ）、腹膜炎、腎臓炎、急性気管支炎、慢性気管支炎、骨関節炎、腸疾患脊椎炎、慢性閉鎖性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＯＰＤ）、リューマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、急性肺損傷（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ）および気管支肺異形成症（ｂｒｏｎｃｈｏ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上であることが好ましく、より好ましくは、敗血症、敗血症性ショック、慢性閉鎖性肺疾患、急性肺損傷および気管支肺異形成症であり得、最も好ましくは敗血症でありうる。
【００４６】
また、本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む炎症性疾患の予防または改善に用いるための健康機能食品組成物を提供する。前記ベータ−１，３−グルカンと配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドは、前記薬学的組成物において用いられたものと同じものであるから、その記載に代える。
【００４７】
本発明による食品組成物は、当業界に公知となった通常の方法により多様な形態で製造することができる。一般食品としては、これに限定されないが、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実およびその加工食品（例：果物の缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレードなど）、魚類、肉類およびその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コンビーフなど）、パン類および麺類（例：うどん、ソバ、ラメン、スパゲッティ、マカロニなど）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例えば、味噌、醤油、ソースなど）などに本発明のベータグルカン−ペプチド複合体を添加して製造することができる。また、栄養補助剤としては、これに限定されないが、カプセル、タブレット、丸剤などに本発明のベータグルカン−ペプチド複合体を添加して製造することができる。また、健康機能食品としては、これに限定されないが、例えば、本発明のベータグルカン−ペプチド複合体自体をお茶、ジュースおよびドリンクの形態で製造して、飲用（健康飲料）することができるように、液状化、顆粒化、カプセル化および粉末化して摂取することができる。また、本発明のベータグルカン−ペプチド複合体を食品添加剤の形態で用いるためには、粉末または濃縮液の形態で製造して用いることができる。また、本発明のベータグルカン−ペプチド複合体と炎症性疾患の予防および改善効果があると知られた公知の活性成分と共に混合して、組成物の形態で製造することができる。
【００４８】
本発明のベータグルカン−ペプチド複合体を健康飲料に用いる場合、前記健康飲料組成物は、通常の飲料のように、様々な香味剤または天然炭水化物などをさらなる成分として含有することができる。上述した天然炭水化物は、葡萄糖、果糖のようなモノサッカライド；マルトース、スクロースのようなジサッカライド；デキストリン、シクロデキストリンのようなポリサッカライド；キシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールでありうる。甘味剤は、ソーマチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤；サッカリン、アスパルテームのような合成甘味剤などを用いることができる。前記天然炭水化物の割合は、本発明の組成物１００ｍＬ当たり一般的に約０.０１〜０.０４ｇ、好ましくは約０.０２〜０.０３ｇである。
【００４９】
また、本発明のベータグルカン−ペプチド複合体は、炎症性疾患の予防および改善用食品組成物の有効成分として含有され得るが、その量は、炎症性疾患の予防および改善作用を達成するのに有効な量であって、特に限定されるものではないが、全体組成物の総重量に対して０.０１〜１００重量％であることが好ましい。本発明の食品組成物は、ベータグルカン−ペプチド複合体とともに炎症性疾患の予防および改善用組成物に効果があると知られた他の活性成分と共に混合して製造され得る。
【００５０】
前記の他に本発明の健康食品は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸、ペクチン酸の塩、アルギン酸、アルギン酸の塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコールまたは炭酸化剤などを含有することができる。その他、本発明の健康食品は、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、または野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、独立してまたは混合して用いることができる。このような添加剤の割合は、大きく重要なものではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０.０１〜０.１重量部の範囲で選ばれることが一般的である。
【００５１】
また、本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を含む抗炎症用組成物を提供する。前記ベータ−１，３−グルカンと配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドは、前記薬学的組成物において用いられたものと同じであるから、その記載に代える。
【００５２】
前記組成物は、食品組成物、化粧料組成物および医薬品組成物よりなる群から選ばれるいずれか一つ以上でありうるが、これに限定されない。
【００５３】
また、本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；および抗生剤；を含む敗血症の原因菌に対する抗菌用組成物を提供する。前記ベータ−１，３−グルカン、配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドおよび抗生剤は、前記薬学的組成物において用いられたものと同じであるから、その記載に代える。
【００５４】
前記敗血症の原因菌は、連鎖球菌、葡萄球菌、大腸菌、肺炎菌、緑膿菌または真菌などでありうるが、敗血症の症状を起こすことができる菌、バクテリア、ウイルスまたはかびなどの微生物であれば、これに限定されない。
【００５５】
また、本発明は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチド；を患者に投与する段階を含む炎症性疾患の予防または治療方法を提供する。前記ベータ−１，３−グルカン、配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドは、前記薬学的組成物において用いられたものと同じであるから、その記載に代える。前記炎症性疾患は、前記薬学的組成物の対象であるものと同じであるから、その記載に代える。
【００５６】
前記方法は、患者に抗生剤を投与する段階をさらに含むことができる。前記抗生剤の投与は、ベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドと同時にまたは順次に投与されることを含む。
【発明の効果】
【００５７】
したがって、本発明のベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドを含む場合、敗血症マウスの活性酸素、敗血症の原因菌および炎症性サイトカインの水準を低減し、生存率を有意的に増加させることができるので、敗血症など炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物および予防または治療方法として効果的である。特に、食細胞により発生する活性酸素を特異的に減少させ、抗生剤と併用する場合、活性酸素、敗血症の原因菌および炎症性サイトカインの発現水準および生存率を有意的に増加させることができるので、さらに優れた効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、ｃ−Ｓｒｃの配列とそれから収得できるＳＨ３−１配列とＳＨ３−２配列、ｐ６７ｐｈｏｘおよびｐ４７ｐｈｏｘ配列を示す。
【図２】図２は、ＲＡＷ２６４７細胞にＬＰＳを処理し、ＳＨ３−１、ＳＨ３−２、ＳＨ３（ＳＨ３−１＋ＳＨ３−２）またはＳＣをそれぞれ濃度別（１、５または１０μｇ／ｍｌ）に処理した後、ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性またはミトコンドリアＲＯＳ（ＭｉｔｏＳＯＸ）の水準を測定した結果を示す。対照群は、どんな処理もしなかった。ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性水準は、ＳＨ３を処理した場合、最も低くなることを確認することができ、ミトコンドリアＲＯＳ水準は、処理物質と関係なく、類似した水準のＲＯＳを生産することを確認することができた。
【図３】図３は、ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＣ、ＳＰＧ−ＳＨ３、抗生剤またはＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理し、ＣＬＰマウスの脾臓で測定したＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性、全体ＲＯＳおよびミトコンドリアＲＯＳの水準を示す。対照群は、どんな処理もしなかった。ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性水準および全体ＲＯＳ水準は、ＳＰＧ−ＳＨ３およびＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理した場合、有意的に減少することを確認することがことできたが、ミトコンドリアＲＯＳ水準は、処理物質と関係なく、類似した水準のＲＯＳを生産することを確認することができた。
【図４】図４は、ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＣ、ＳＰＧ−ＳＨ３、抗生剤またはＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理した後、７日間前記ＣＬＰマウスの生存率を確認した結果を示す。ＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理する場合、シナジー効果としてＣＬＰマウスの約９０％が生存することを確認することができた。
【図５】図５は、ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＣ、ＳＰＧ−ＳＨ３、抗生剤またはＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理した後、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８の炎症性サイトカインの発現水準を示す。ＳＰＧ−ＳＨ３およびＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理した場合、有意的に減少することを確認することができた。
【図６】図６は、ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＣ、ＳＰＧ−ＳＨ３、抗生剤またはＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理した後、末梢血液および腹膜液で敗血症の原因菌の水準を測定して抗菌効果を示す。ＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理する場合、敗血症の原因菌が有意に減少することを確認することができた。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
［実施例１］
実験準備
＜１−１＞細胞およびＣＬＰマウス
マウスマクロファージ細胞株（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＲＡＷ２６４７（ＡＴＣＣＴＩＢ−７１；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）細胞は、１０％ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ピルビン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｐｙｒｕｖａｔｅ）、非必須アミノ酸、ペニシリンＧ（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ、１００ｕｇ／ｍｌ）が含むＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて培養した。
【００６０】
ＣＬＰ（ｃｅｃａｌ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）で誘導された敗血症マウスモデルは、６週齢（６−ｗｅｅｋ−ｏｌｄ）のＣ５７ＢＬ／６雌性マウス（Ｓａｍｔａｋｏ，Ｋｏｒｅａ）を用いて準備した。すべての動物関連手続は、漢陽大学校の動物保護機関と使用委員会により承認された。ＣＬＰマウスは、腹腔内に下記表１のような投与物質を３回投与（３、６および１２時間）した。ＳＰＧ−ＳＣは、ＳＰＧ−ＳＨ３の配列を無作為で混ぜた配列を有するペプチド複合体であり、抗生剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）は、ゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ）とセファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）を混合して用いた。
【００６１】
【表１】
2021529216.tif 000003
＜１−２＞ＳＰＧ−ＳＨ３の製造
ｃ−Ｓｒｃの配列に由来したＳＨ３−１配列とＳＨ３−２配列からＳＨ３ペプチド配列を製造した。ＳＣ（ｓｃｒａｍｂｌｅ）配列は、ＳＨ３−１配列とＳＨ３−２配列のうち、ＳＨ３配列に含まれないアミノ酸で製造した。各配列は、下記の表２と同じである。
【００６２】
ＳＰＧ−ＳＨ３の複合体は、有機溶媒にベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）を溶解させ、環状無水物（ｃｙｃｌｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）を添加してベータ−１，３−グルカンのヒドロキシ基をカルボキシル基（−ＣＯＯＨ基）に変換させた。その後、カルボキシル基とＳＨ３−１、ＳＨ３−２またはＳＨ３ペプチドのアミン基とそれぞれ結合させて、ベータグルカン−ペプチド複合体ＳＰＧ−ＳＨ３を製造した。
【００６３】
【表２】
2021529216.tif 000004
［実施例２］
ＳＰＧ−ＳＨ３のＲＯＳ生成抑制効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
ＲＡＷ２６４７細胞にＳＰＧ−ＳＨ１、ＳＰＧ−ＳＨ２およびＳＰＧ−ＳＨ３をそれぞれ処理する場合、ＲＯＳの生成を抑制するか否かを確認した。特に、ＮＡＤＰＨ酸化酵素（ＮＡＤＰＨ  ｏｘｉｄａｓｅ；ＮＯＸ）の活性およびミトコンドリアＲＯＳ水準をそれぞれ確認した。
【００６４】
具体的に、ＲＡＷ２６４７細胞には、ＬＰＳで刺激した後、ＳＰＧ−ＳＨ１、ＳＰＧ−ＳＨ２およびＳＰＧ−ＳＨ３をそれぞれ１、５および１０μｇ／ｍｌの濃度で処理した。ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性は、ルシゲニン（ｌｕｃｉｇｅｎｉｎ；ｂｉｓ−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ  ｎｉｔｒａｔｅ）−ＥＣＬ方法で前記ＲＡＷ２６４７細胞内の超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）の生成を測定して確認した。ミトコンドリアＲＯＳの生成は、前記ＲＡＷ２６４７細胞にＭｉｔｏＳＯＸ  ５μＭで３０分間染色した後、ＦＡＣＳ分析で平均蛍光強度（ＭＦＩ；ｍｅａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を測定した。
【００６５】
その結果、図２に示されたように、ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性は、ＳＰＧ−ＳＨ３を処理する場合、最も低くなったが、ミトコンドリアのＲＯＳは、投与物質の種類と関係なく、類似した水準でＲＯＳを継続して生産することを確認することができた。
【００６６】
［実施例３］
ＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤のＲＯＳ生成抑制効果（ｉｎ  ｖｉｖｏ）
ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤を併用処理する場合、ＲＯＳの生成を抑制するか否かを確認した。特に、ＮＡＤＰＨ酸化酵素（ＮＡＤＰＨ  ｏｘｉｄａｓｅ；ＮＯＸ）の活性、トータルＲＯＳ（Ｔｏｔａｌ  ＲＯＳ）およびミトコンドリアＲＯＳ水準をそれぞれ確認した。
【００６７】
具体的に、前記実施例＜１−１＞のような投与物質を投与したＣＬＰマウス（ｎ＝５）を準備した。ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性測定は、ＣＬＰマウスの脾臓（ｓｐｌｅｅｎ）を収得して破砕し、前記実施例２のような方法で測定して確認した。全体ＲＯＳは、ＣＬＰマウスの脾臓を収得および破砕し、Ｔｏｔａｌ  ＲＯＳ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＣＡ−Ｒ９００）の試薬５μＭを６０分間処理した後、４９０／５２５ｎｍでＥｘ／Ｅｍ（励起波長／発光波長）を測定した。ミトコンドリアＲＯＳの生成は、前記ＣＬＰマウスの脾臓を収得および破砕し、前記実施例２のような方法で測定して確認した。または、ＣＬＰマウスの脾臓を収得および破砕し、Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＲＯＳ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＣＡ−Ｒ９３３）の試薬５μＭを６０分間処理した後、４９０／５２５ｎｍでＥｘ／Ｅｍ（励起波長／発光波長）を測定した。対照群（ＵＮ）は、正常マウスにビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）を処理した。
【００６８】
その結果、図３に示されたように、ＮＡＤＰＨ酸化酵素の活性および全体的なＲＯＳ水準は、ＳＰＧ−ＳＨ３またはＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理する場合、有意的に減少することを確認することができた。反面、ミトコンドリアは、投与物質の種類と関係なく、類似した水準でＲＯＳを継続して生産することを確認することができた。
【００６９】
すなわち、前記実施例２および実施例３の結果は、本発明のＳＰＧ−ＳＨ３がＲＯＳ生成原因のうち、ミトコンドリアでなく、マクロファージ、樹枝状細胞または好中球などの食細胞をターゲットしてＲＯＳ生成を減少させることを意味する。
【００７０】
［実施例４］
ＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤の保護効果
本発明のＳＰＧ−ＳＨ３およびこれを抗生剤と併用する場合、ＣＬＰで誘導された全身性敗血症を有するマウスに対して保護効果を有するか否かを死亡率の測定を通じて確認した。
【００７１】
具体的に、前記実施例＜１−１＞と同じ投与物質を投与したＣＬＰマウス（ｎ＝７、２回；合計１４）を投与後に７日間モニターした。
【００７２】
その結果、図４に示されたように、マウスにＣＬＰ処理後に約６０時間が経過したとき、ＳＰＧ−ＳＨ３のみを処理した群は、約７０％の生存率を示し、抗生剤のみを処理した群は、約４０％の生存率を示した。反面、ＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用投与した群は、相乗効果が発生して、９０％の最も高い生存率を示すことを確認した。
【００７３】
［実施例５］
ＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤の抗炎症効果
ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤を併用処理する場合、前炎症性サイトカイン（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ）を抑制するか否かを確認した。
【００７４】
具体的に、前記実施例＜１−１＞のような投与物質を投与したＣＬＰマウスを投与後に２０時間後に末梢血液（ｐｈｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ）を収得した。ＥＬＩＳＡキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて前記血液内ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８の濃度を測定した。
【００７５】
その結果、図５に示されたようにＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８の濃度は、ＳＰＧ−ＳＨ３またはＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理する場合、有意的に減少することを確認することができた。
【００７６】
［実施例６］
ＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤の抗菌効果
ＣＬＰで誘発された敗血症は、末梢血液（ｐｈｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ）および腹膜液（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｆｌｕｉｄ）においての細菌と関連がある。これにより、ＣＬＰマウスにＳＰＧ−ＳＨ３および抗生剤を併用処理する場合、細菌に対する抗菌効果を確認した。
【００７７】
具体的に、前記実施例＜１−１＞のような投与物質を投与したＣＬＰマウスを投与後２０時間後に末梢血液と腹膜液を収得した。血液寒天培地に末梢血液および腹膜液をそれぞれ５μＬずつスポッティング（ｓｐｏｔｔｉｎｇ）した後、３７℃培養器で１８時間の間培養した後、ＣＦＵ（ｃｏｌｏｎｙ  ｐｅｒ  ｕｎｉｔｓ）を測定した。
【００７８】
その結果、図６に示されたように、末梢血液および腹膜液で細菌コロニー形成数（ＣＦＵ）が顕著に減少することを確認することができた。特に、腹膜液では、ＳＰＧ−ＳＨ３と抗生剤を併用して処理する場合、抗菌効果が最も優れていた。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明において提供するベータ−１，３−グルカン（β−１，３−ｇｌｕｃａｎ）；および配列番号４のアミノ酸配列から構成されたペプチドは、ＲＯＳ生成抑制効果および抗炎症効果に優れ、敗血症モデルに対する保護効果および敗血症菌に対する抗菌効果に優れているので、炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物および抗炎症用組成物、抗菌用組成物、炎症性疾患の予防または治療方法に効果的に用いられるので、産業上の利用可能性が大きい。
【００８０】
配列リストＦｒｅｅ  Ｔｅｘｔ
配列番号１は、ｃ−Ｓｒｃに対する配列であって、６２個のアミノ酸配列である。
【００８１】
配列番号２は、ＳＨ３−１に対する配列であって、１８個のアミノ酸配列である。
【００８２】
配列番号３は、ＳＨ３−２に対する配列であって、２０個のアミノ酸配列である。
【００８３】
配列番号４は、ＳＨ３に対する配列であって、１９個のアミノ酸配列である。
【００８４】
配列番号５は、ＳＣ（Ｓｃｒａｍｂｌｅ）に対する配列であって、１９個のアミノ酸配列である。
【図１】
2021529216.tif 000005
【図２】
2021529216.tif 000006
【図３】
2021529216.tif 000007
【図４】
2021529216.tif 000008
【図５】
2021529216.tif 000009
【図６】
2021529216.tif 000010
【配列表】
2021529216000001.app
【国際調査報告】
2021529216.tif 000011
2021529216.tif 000012
2021529216.tif 000013
2021529216.tif 000014
2021529216.tif 000015
2021529216.tif 000016