(57)【要約】  本発明は、新規なヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）に関し、さらにそれを生成するために有用である新規な方法に関する。本発明はまた、賦形剤としてのこのＨＰβＣＤの使用に関する。本発明はまた、薬剤としての使用を意図した、より詳細には、組織内でのコレステロールの過負荷及び／又は貯蔵及び／又は蓄積に関する疾患又は状態、ひいてはそれらの結果、例えば特定の中枢神経系又は心血管系の病気の治療又は予防を意図した、ＨＰβＣＤに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
−  ０．７１以下の平均モル置換度（ＭＳ）を有し、かつ、
−  乾燥重量で０．３％以下の含量のβ−シクロデキストリン（β−ＣＤ）を有することを特徴とする、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）。
【請求項２】
以下の有機溶媒含量：
−  ２０００ｐｐｍ未満のｄ−リモネン；
−  ２０００ｐｐｍ未満のエタノール；
−  ２０００ｐｐｍ未満のメタノール；
−  ２０００ｐｐｍ未満のアセトニトリル；
−  ２０００ｐｐｍ未満のアセトン；
−  ２０００ｐｐｍ未満のクロロホルム；
を含むことを特徴とし、これらの含量がヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの総乾燥重量に対する前記有機溶媒の乾燥重量で表される、請求項１に記載のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン。
【請求項３】
前記ＭＳが０．５０〜０．７１の範囲内で選択されることを特徴とする、請求項１又は２のいずれか一項に記載のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン。
【請求項４】
前記ＭＳが０．５８〜０．７１の範囲内で選択されることを特徴とする、請求項３に記載のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン。
【請求項５】
β−ＣＤ含量が乾燥重量で０．２％以下であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン。
【請求項６】
β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）及び水酸化ナトリウムを含む水溶液を調製するステップ（ａ）において、使用される水酸化ナトリウムの量がβ−ＣＤの乾燥重量に対する水酸化ナトリウムの乾燥重量で３．７％未満であるステップ（ａ）と；
ステップ（ａ）で得られた前記溶液にプロピレンオキシドを添加するステップ（ｂ）において、
−  前記プロピレンオキシドの導入前のステップ（ａ）で得られた前記溶液の温度が、８０℃〜１２０℃の範囲内で選択される；
−  使用される前記プロピレンオキシド／無水グルコースのモル比が、０．７０／１．００〜０．８６／１．００の範囲内で選択される；
−  プロピレンオキシドの添加速度が、β−ＣＤの０．１５〜０．３０ｋｇ／ｈ／ｋｇの範囲内で選択される；
ことを特徴とするステップ（ｂ）と：
有機溶媒を使用しないことを特徴とする精製ステップ（ｃ）と；
このようにして得られたヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを回収するステップ（ｄ）と、
を含むことを特徴とする、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを調製するための方法。
【請求項７】
薬剤としての使用するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載されるか、又は請求項５に記載の方法により得られた、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン。
【請求項８】
賦形剤として、及び／又は物質をカプセル封入するため、及び／又は物質を水性媒体中に可溶化するため、及び／又は物質の化学的安定性を改善するため、及び／又は物質の生物学的膜への送達と生物学的膜を介した送達を改善するため、及び／又は物質の物理的安
定性を増強するため、及び／又は液体形態から粉末形態にかけて物質を配合するため、及び／又は一方の物質ともう一方の物質との相互作用を阻止するため、及び／又は物質の局所若しくは経口投与後の局所刺激作用を低減するため、及び／又は皮膚などの特定組織内での物質の吸収を阻止するため、及び／又は物質の徐放性を得るため、及び／又は物質の味、特にその苦味をマスクするため、及び／又は物質の匂いをマスクするため、及び／又は物質のバイオアベイラビリティを修飾するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載される、又は請求項５に記載の方法により得られた、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの使用。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか一項に記載されるか、又は請求項５に記載の方法により得られたヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、及び少なくとも１つの他の物質を含む、組成物。
【請求項１０】
前記他の物質が活性薬剤であることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記活性薬剤が活性医薬成分であることを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、及びその調製のために有用な新規な方法に関する。本発明はまた、賦形剤としてのこのＨＰβＣＤの使用に関する。本発明はまた、薬剤として使用するための、より詳細には、組織内でのコレステロールの過負荷、及び／又は貯蔵及び／又は蓄積に関連する疾患又は状態、ひいてはそれらの結果、例えば中枢神経系又は心血管系の特定の障害の治療又は予防のための、ＨＰβＣＤに関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリンは、デンプンの酵素分解に由来する環状オリゴ糖である。３つの最も一般的な天然シクロデキストリンは、α−１，４結合によって互いに結合された６、７又は８のα−Ｄ−グルコピラノース単位から椅子状の配置で構成される。それらは各々、より一般には、α、β、又はγ−シクロデキストリンと称される。それらの三次構造の外観は、シクロデキストリンの高度親水性部分を表すヒドロキシル基であるその外側で、切断された円錐体の形態である。シクロデキストリンの円錐体の内部又は空洞は、Ｃ３及びＣ５炭素による水素原子とさらにグリコシド結合に関与する酸素原子とから構成されることから、非極性がもたらされる。
【０００３】
親水性外側部分及び疎水性空洞を有するシクロデキストリンは、親油性化合物又は基をカプセル封入するそれらの能力、ひいてはこれらの親油性化合物又は親油性基を有する化合物のプロテクター及び可溶化剤におけるそれらの役割として、一般に用いられる。それ故、それらは通常は、食品加工の分野だけでなくガレヌスにおいて見出され、その場合には医薬製剤中の賦形剤として用いられる。
【０００４】
シクロデキストリンの無水グルコース単位は各々、Ｃ２、Ｃ３及びＣ６炭素に由来する、３つの反応性ヒドロキシル基を含む。それ故、これらのヒドロキシル基上で異なる基をグラフト化することにより、極めて多数の誘導体が既に合成されており、中でも、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、メチルシクロデキストリン及びスルホアルキルシクロデキストリンについて言及されることがある。
【０００５】
特に、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）は、活性成分の経口又は非経口送達のためのガレヌスにおいて広範に用いられる。
【０００６】
通常は、ＨＰβＣＤは、β−シクロデキストリンを塩基性媒体中のプロピレンオキシドと反応させることによって得られ、その後反応物は、塩酸を添加することにより中和される。
【０００７】
次に、粗反応生成物は、不純物、即ち典型的には：
−  試薬、例えば残留（未置換）β−シクロデキストリン；
−  塩、プロピレングリコール（プロパン−１，２−ジオール）、ジプロピレングリコールなどの反応副生成物；
−  β−シクロデキストリンの分解生成物又はその直線構造；
−  エンドトキシンなどの微生物学的生成物
を低減するため、精製される。
【０００８】
この精製は、濾過、脱色、脱ミネラル化、エタノールによる洗浄、アセトンによる抽出
、透析などの１以上の処理を用いて実施される。
【０００９】
規制上の観点から、特にＨＰβＣＤが医薬品市場向けである場合、要求される精製度は高い。これらの規制上の要求は、投与経路が侵襲的であると、さらに高まる。
【００１０】
特に、ＨＰβＣＤが、中枢神経系（ＣＮＳ）の特定の疾患、例えばニーマン・ピック病Ｃ型などの特定の難病に対する好ましい効果を有することは知られている。これらの病態では、くも膜下腔内経路が好ましく、安全性への要求は非常に高い。
【００１１】
したがって、好ましくは、ＨＰβＣＤは、最大で０．７１に等しい、好ましくは０．５０〜０．７１の範囲内の平均モル置換度（ＭＳ）を有し、且つ可能な限り少ない不純物を有する必要がある。これらの不純物の中で、残留β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）は、有毒な特性を呈し得るものとして同定されている。
【００１２】
注目すべき技術的困難は、このＭＳ範囲を残留β−ＣＤの低含量と一致させることにある。当然ながら、このＭＳ範囲は特に低い。低いＭＳのＨＰβＣＤの調製は、ヒドロキシプロピル化試薬があまり使用されないことを通常は意味する。それから、反応生成物がより多くの未反応のβ−ＣＤ、即ち残留β−ＣＤを含有するということになる。
【００１３】
しかしながら、このβ−ＣＤは、除去するのが困難であるが、その含量が十分に減少すると、これによりＭＳにおける増加がもたらされる。というのは、後者が未置換β−ＣＤを含むすべてのシクロデキストリン分子に基づいて決定されるからである。
【００１４】
さらに、ヒドロキシプロピル化後、例えばプロピレングリコール又はジプロピレングリコールなどの反応副生成物を低減することも必要である。これはさらに、これらの他の副生成物の除去によりＨＰβＣＤの全乾燥質量が減少することから、β−ＣＤの割合における増加をもたらす。ヒドロキシプロピル化後、プロピレングリコール含量は、例えば、当然ながら典型的には、乾燥重量で少なくとも５．０％に等しい。
【００１５】
それ故、所定のＭＳ及び所定のβ−ＣＤ含量を有するＨＰβＣＤを生成することは、特にこのＭＳが最大で０．７１に等しい必要があり、且つβ−ＣＤ含量が可能な限り低い必要があることを考慮すると、困難である。プロピレングリコール及びジプロピレングリコールなどの副生成物を最小化することも所望される場合には、この困難さは増大する。
【００１６】
国際公開第２０１６／２０１１３７号（ＶＴＥＳＳＥ）の出願では、有機化合物との複合体形成、沈降、アルミナ上での吸着クロマトグラフィーを含む、ＨＰβＣＤを精製するための様々な方法が提案されている。本特許出願では、減少したβ−ＣＤ含量及び０．７１未満のＭＳを有するＨＰβＣＤを得ることができた。しかしながら、すべての精製プロセスは、この使用される有機溶媒、例えばアセトン又はメタノールを得ることを可能にする。
【００１７】
これらの有機溶媒の使用には特に制約があり、それを使用する限りにおいては、特に取扱者の安全性を保証するため、厳しい監督が要求される。さらに、これらの溶媒は、最終生成物中の不純物として見出され、消費者にとっては毒性リスクを表す。
【００１８】
それらの結果として、改善された安全性を有する、特に０．７１以下である低いＭＳを有する、且つ特に後者が例えば静脈内又はくも膜下腔内に注射されることが意図されるときにおいて、ＨＰβＣＤを提供するという需要は満たされなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明の１つの目的は、特に賦形剤又は活性医薬成分として使用するための、改善された品質を有するＨＰβＣＤを提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、特に活性薬剤、特に活性医薬成分の可溶化又は安定化に対して特に有効であるＨＰβＣＤを提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、先行技術の場合と対照的に、メタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル及びクロロホルムなどの望ましくない有機溶媒を含まないことがある、減少した含量の残留β−ＣＤを有し、最大で０．７１に等しいＭＳを有するＨＰβＣＤを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
出願人はこれを、膨大な試験の後、最大で０．７１に等しいＭＳ、及び最大で０．３％（乾燥／乾燥）、好ましくは０．２％（乾燥／乾燥）以下のβ−ＣＤ含量を有するＨＰβＣＤの開発という結果に至り、達成している。
【００２３】
さらに、本発明に係るＨＰβＣＤは、特に薬学的活性タンパク質の安定化に関して顕著な適用特性を有してもよい。
【００２４】
このＨＰβＣＤは、特許出願の国際公開第２０１６／２０１１３７号中で用いられたＨＰβＣＤとは異なり、ＨＰβＣＤ精製プロセスから通常生じる有機溶媒を、有利には含まなくてもよい。
【００２５】
事実、本発明のＨＰβＣＤは、有利には、水性媒体中で実施される新規プロセスによって得られてもよい。新規な方法では、溶液はヒドロキシプロピル化ステップにおいて、精製ステップよりも多く存在する。特に、出願人は、ヒドロキシプロピル化パラメータの賢明な選択により、本発明のＨＰβＣＤを得ることが可能になったことを示した。
【００２６】
したがって、最終生成物中に必然的に見出される、望まれない有機溶媒を含む精製ステップを用いて調剤することは可能である。水性媒体中で実施される精製ステップは十分である。そのようにして得られたＨＰβＣＤは、０．７１以下、特に０．５０〜０．７１の範囲内のＭＳを有する。そのβ−ＣＤ含量は減少し、０．３％以下、好ましくは０．２％以下である。プロピレングリコール及びジプロピレングリコールなどの望ましくない反応副生成物もまた、減少し得る。
【００２７】
したがって、本発明の第１の主題は、
−  ０．７１以下の平均モル置換度（ＭＳ）を有し；且つ
−  乾燥重量で０．３％以下、好ましくは０．２％以下の含量のβ−シクロデキストリン（β−ＣＤ）を有することを特徴とする、
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）である。
【００２８】
本発明の別の主題は、
β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）及び水酸化ナトリウムを含む水溶液を調製するステップ（ａ）において、使用される水酸化ナトリウムの量がβ−ＣＤの乾燥重量に対する水酸化ナトリウムの乾燥重量で３．７％未満であるステップ（ａ）と；
ステップ（ａ）で得られた前記溶液にプロピレンオキシドを添加するステップ（ｂ）において、
−  プロピレンオキシドの導入前のステップ（ａ）で得られた溶液の温度が、８０℃〜１２０℃の範囲内で選択される；
−  使用されるプロピレンオキシド／無水グルコースのモル比が、０．７０／１．００〜０．８６／１．００の範囲内で選択される；
−  プロピレンオキシドの添加速度が、β−ＣＤの０．１５〜０．３０ｋｇ／ｈ／ｋｇの範囲内で選択される；
ことを特徴とするステップ（ｂ）と：
有機溶媒を使用しないことを特徴とする精製ステップ（ｃ）と；
このようにして得られたＨＰβＣＤを回収するステップ（ｄ）と、
を含むことを特徴とする、本発明のＨＰβＣＤの調製に特に有用な、ＨＰβＣＤを調製するための方法である。
【００２９】
本発明の別の主題は、本発明のＨＰβＣＤ調製方法によって得られるＨＰβＣＤである。
【００３０】
本発明はまた、薬剤及び／又は賦形剤として、及び／又は物質をカプセル封入するため、及び／又は物質を水性媒体中に可溶化するため、及び／又は物質の化学的安定性を改善するため、及び／又は物質の生物学的膜への送達と生物学的膜を介した送達を改善するため、及び／又は物質の物理的安定性を増強するため、及び／又は液体形態から粉末形態にかけて物質を配合するため、及び／又は一方の物質ともう一方の物質との相互作用を阻止するため、及び／又は物質の局所若しくは経口投与後の局所刺激作用を低減するため、及び／又は皮膚などの特定組織内での物質の吸収を阻止するため、及び／又は物質の徐放性を得るため、及び／又は物質の味、特にその苦味をマスクするため、及び／又は物質の匂いをマスクするため、及び／又は物質のバイオアベイラビリティを修飾するための、本発明に係るＨＰβＣＤの使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】ＵＳＰ４１  ＮＦ３６からのヒドロキシプロピルベータデクス（ＨＰβＣＤ）のモノグラフを提示し、特許出願の説明の不可欠な部分である。
【図２】ＵＳＰ４１  ＮＦ３６からのヒドロキシプロピルベータデクス（ＨＰβＣＤ）のモノグラフを提示し、特許出願の説明の不可欠な部分である。
【図３】ＵＳＰ４１  ＮＦ３６からのヒドロキシプロピルベータデクス（ＨＰβＣＤ）のモノグラフを提示し、特許出願の説明の不可欠な部分である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
したがって、本発明は、０．７１以下の平均モル置換度（ＭＳ）、乾燥重量で０．３％以下のβ−シクロデキストリン（β−ＣＤ）含量を有することを特徴とする、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）に関する。
【００３３】
「ＨＰβＣＤ」との表現は、通常はＨＰβＣＤ分子の混合物、さらにはその調製方法から得られる物質を包含することは、一般に理解されている。実際に、明確に定義された構造を有する化学物質に反するように、ＨＰβＣＤは一般に、異なる置換プロフィール及びパターンを有し、それ故構造的に異なる、ＨＰβＣＤ分子の混合物に相当する。
【００３４】
まず、本発明のＨＰβＣＤは、０．７１以下のその平均モル置換度（ＭＳ）によって特徴づけられる。好ましくは、このＭＳは、０．５０〜０．７１の範囲内で選択される。それは、より好ましくは０．７０以下、好ましくは０．６９以下である。好ましくは、このＭＳは、少なくとも０．５８に等しい、即ち０．５８〜０．７１の範囲内で選択される。さらに、このＭＳは一般に、少なくとも０．６０に等しい、さらに少なくとも０．６５に等しい。それは、典型的には０．６６に等しいか、又は０．６７に等しいか、又は０．６８に等しいか、又は０．６９に等しい。
【００３５】
ここで、「平均モル置換度（ＭＳ）」が無水グルコース１単位あたりのヒドロキシプロピル基の平均数に相当することが想起される。ＭＳが、シクロデキストリン１分子あたりのヒドロキシプロピル基の平均数に対応する平均分子置換度（ＤＳ）とは異なり、それ故、出発シクロデキストリンを構成する無水グルコース単位の数の関数であることは注目されるべきである。したがって、ＨＰβＣＤの場合、β−シクロデキストリンが７つの無水グルコース単位からなることから、ＤＳはＭＳの７倍に等しい。
【００３６】
ＭＳは、通常、好ましくは付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の「ヒドロキシプロピルベータデクス；モル置換」法に従い、プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）により、当業者によって決定され得る。
【００３７】
上述のように、この混合物は、通常、残留天然β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）分子、即ちヒドロキシプロピル化されないが有利には本発明のＨＰβＣＤ中で低減される分子を含有する。
【００３８】
したがって、本発明のＨＰβＣＤは、０．３％以下、好ましくは０．２％以下、好ましくは０．１％以下のβ−ＣＤ含量を有し、このパーセンテージはＨＰβＣＤの総乾燥重量に対するβ−ＣＤの乾燥重量として表される。
【００３９】
この残留β−ＣＤ含量は、通常、好ましくは付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の方法（「ヒドロキシプロピルベータデクス；ベータデクス、プロピレングリコール、及び他の関連物質の限度」）による手順に従い、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、当業者によって決定され得る。
【００４０】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤの置換パターンは、次の通りである：
未置換（ｎｏ−ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、２５．０％、好ましくは３０．０％、好ましくは３５．０％、好ましくは４０．０％に等しい；及び／又は、
−  最大で、５５．０％、好ましくは５２．０％、好ましくは５０．０％、好ましくは４９．０％、好ましくは４８．０％に等しい；及び／又は、
Ｃ２置換（２ＯＨＰ）部分の割合は：
少なくとも１５．０％、好ましくは２０．０％、好ましくは２４．０％、好ましくは２５．０％、好ましくは２６．０％、好ましくは２７．０％、好ましくは２８．０％、好ましくは２８．５％に等しい；及び／又は、
−  最大で、３５．０％、好ましくは３１．０％、好ましくは３０．５％に等しい；及び／又は、
Ｃ３置換（３ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、５．０％、好ましくは６．０％、より好ましくは７．０％に等しい；及び／又は
−  最大で、１０．０％、好ましくは９．０％、好ましくは８．０％に等しい；及び／又は、
Ｃ６置換（ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、１．０％、さらには２．０％に等しい；及び／又は
−  最大で、１０．０％、好ましくは７．０％、好ましくは６．０％、好ましくは５．０％、好ましくは４．０％に等しい；及び／又は、
Ｃ２及びＣ３置換（２，３−ジ−ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、５．０％、好ましくは８．０％、好ましくは９．０％に等しい；及び／又は、
−  最大で、２５．０％、好ましくは２０．０％、好ましくは１５．０％、好ましくは１２．０％、好ましくは１１．０％、好ましくは１０．０％に等しい；及び／又は、
Ｃ２及びＣ６置換（２，６−ジ−ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、１．０％、好ましくは２．０％に等しい；及び／又は、
−最大で、１０．０％、好ましくは６．０％、好ましくは５．０％、好ましくは４．０％に等しい；及び／又は、
２回のＣ３置換（３，３’−ジ−ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、０．２％、好ましくは０．３％、より好ましくは０．５％に等しい；及び／又は
−  最大で、２．０％、好ましくは１．５％、好ましくは１．０％、好ましくは０．８％に等しい；及び／又は
Ｃ２、Ｃ３及びＣ６置換（２，３，６−トリ−ＯＨＰ）部分の割合は：
−  少なくとも、０．５％、好ましくは０．６％、好ましくは０．７％、好ましくは０．８％に等しい；及び／又は、
−  最大で、４．０％、好ましくは３．０％、より好ましくは２．０％、好ましくは１．５％、好ましくは０．８％に等しい。
【００４１】
これらのパーセンテージは、検討される置換のタイプを有する無水グルコース単位のパーセンテージに相当する。例えば、３０．０％に等しい２ＯＨＰ値の場合、ＨＰβＣＤの無水グルコース単位の３０．０モル％がＣ２炭素でヒドロキシプロピル基によって置換されると推定される。さらなる例として、０．４％に等しい３，３’−ジ−ＯＨＰ値の場合、ＨＰβＣＤの無水グルコース単位の０．４モル％がＣ３炭素で２回置換される（即ち、Ｃ３炭素は２つのヒドロキシプロピル基を有する）と推定される。最後の例として、５．０％に等しい２，６−ジ−ＯＨＰ値の場合、ＨＰβＣＤの無水グルコース単位の５．０モル％がＣ２炭素及びＣ６炭素の双方でヒドロキシプロピル基により置換されると推定される。最初の例においては一置換に関して言及される一方で、最後の２つの例においては二置換に関して言及されることになる。
【００４２】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、例えば３，６−ＯＨＰ置換といった上に列挙された置換以外の置換の５．０％未満、好ましくは４．０％未満、好ましくは３．０％未満、好ましくは２．０％未満、好ましくは１．０％未満、好ましくは０．５％未満を含む。より好ましくは、本発明のＨＰβＣＤは、上に列挙される置換とは別のタイプの置換を含まない。「別のタイプの置換がない」との表現は、かかる置換を含む無水グルコース単位が特に「箱守」法により検出できないことを意味すると理解され、ここで前記方法は、ＨＰβＣＤに以下の連続ステップ：過メチル化、加水分解、還元、過アセチル化を施すことを含む。
【００４３】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤ置換パターンは、次の通りである：
・一置換に相当する置換の割合は：
〇少なくとも、６０％、好ましくは７０％、好ましくは７３％に等しい、及び／又は
〇最大で、８０％、さらには７８％、さらには７７％、さらには７８％に等しい；及び／又は、
・二置換に相当する置換の割合は：
〇少なくとも、１５％、さらには２０％、さらには２２％、さらには２３％に等しい；及び／又は、
〇最大で、４０％、好ましくは３５％、好ましくは３０％、好ましくは２８％、好ましくは２６％、好ましくは２５％に等しい；及び／又は
・三置換に相当する置換の割合は：
〇少なくとも、１％、さらには２％に等しい；及び／又は、
〇最大で、５％、好ましくは４％、好ましくは３％、さらには２％に等しい；及び／又は、
・Ｃ２／Ｃ６置換比は：
〇少なくとも、２．０、好ましくは３．０、好ましくは４．０、好ましくは５．０に等しい；及び／又は、
〇最大で、１０．０、さらには８．０、さらに７．５に等しい；及び／又は、
・Ｃ２／Ｃ３置換比は：
〇少なくとも、１．５、好ましくは２．０、好ましくは２．１、好ましくは２．２に等しい；及び／又は、
〇最大で、３．０、さらには２．５に等しい。
【００４４】
これらの置換パターンは、例えば「箱守」法と同様の方法に従い、典型的にはＨＰβＣＤを以下の連続ステップ：過メチル化、加水分解、還元、過アセチル化を施すことにより、当業者によって決定され得る。
【００４５】
例えば、カラム６、実施例９〜カラム７、実施例１０を含む米国特許第５，０９６，８９３号明細書に記載のような方法に従うことは可能であり、前記方法は参照により援用される。典型的には、米国特許第５，０９６，８９３号明細書に記載の方法は、以下の通りである：
水素化ナトリウム（０．０７モル）がアルゴン下で無水ジメチルスルホキシド（２０ｍｌ）に添加され、混合物は約６０℃で１時間加熱される。次に、（１１０℃で３時間）乾燥され、ジメチルスルホキシド（１５ｍｌ）中に溶解されているＨＰβＣＤ（４ｇ）が添加され、室温で３時間撹拌しながらアルゴン下に放置される。反応媒体が氷槽内で冷却され、ヨウ化メチル（１０ｍｌ、０．１６１モル）が滴下される。氷槽内でさらに１時間後、混合物は撹拌しながら一晩放置される。次に、水（２４ｍｌ）が冷却しながら添加される一方で、生成物がクロロホルム（全部で９０ｍｌ）で２回抽出される。抽出物が水（２０ｍｌ）で洗浄され、蒸発される。残渣が水（２５ｍｌ）で処理され、エーテル（全部で７５ｍｌ）で３回抽出される。抽出物が水で洗浄され、次に蒸発される。残渣がエーテル（１００ｍｌ）に溶解され、次に中性アルミナの存在下で３０分間撹拌され、濾過され、次に典型的には３．７ｇの過メチル化生成物が得られるまで蒸発される。３ｍｇの過メチル化生成物が水性トリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）中に溶解され、次いでスクリューキャップチューブ内、１００℃で一晩貯蔵され、空気でリンスすることで濃縮される。残渣及び水素化ホウ素ナトリウム（１００ｍｇ）が水性アンモニア（０．５ｍｌ）中に溶解され、溶液が室温で１時間放置される。溶液は、５０％酢酸（２滴）で酸性化され、次に濃縮される。最初に酢酸／メタノール混合物（１：９、５ｍｌ）、次にメタノール（２５ｍｌ）との共蒸留により、ホウ酸が蒸発される。残渣が、酢酸無水物及びピリジン（２：１、０．５ｍｌ）で、１００℃で３０分間処理され、濃縮され、クロロホルムと水（２：１、６ｍｌ）の間で分離される。クロロホルム相が濃縮され、残渣がガスクロマトグラフィー及び質量分析と結合されたガス−液体クロマトグラフィー（ＧＬＣ−ＭＳ）により分析される。ガス−液体クロマトグラフィーは、例えば、キャリアガスとして水素を用いる、水素炎イオン化検出器を装備したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ５８３０Ａ機器上で実施される。質量分析と結合されたガス−液体クロマトグラフィーは、例えば、キャリアガスとしてヘリウムを用いる、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ５７９０−５９７０システム上で実施される。例えばＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｕｌｔｒａ  ２タイプの、（架橋された５％メチルフェニルシリコーン）融合ガラス製のキャピラリーカラム（長さが２５ｍ、内径が０．２０ｍｍ）が使用される。温度は、次のようにプログラムされる：１８５℃で８分、５℃／分で２５０℃へ、２５０℃で１０分間。
【００４６】
発明者は、ＨＰβＣＤが特異的な置換パターンを有したときに、ＨＰβＣＤの性能が増強されたことを見出している。より具体的には、発明者は、タンパク質、特に治療目的のタンパク質（ホルモン、抗体など）の安定化が改善されたことを示している。
【００４７】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、有機溶媒含量として、以下：
−  ｄ−リモネンを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；
−  エタノールを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；
−  メタノールを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；
−  アセトニトリルを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；
−  アセトンを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；
−  クロロホルムを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；
を有し、これらの含量は、ＨＰβＣＤの総乾燥重量に対する前記有機溶媒の乾燥重量で表される。
【００４８】
これらの有機溶媒含量は、通常、質量分析による検出を伴うガスクロマトグラフィー（ＧＣ／ＭＳ）により、好ましくはヘッドスペースＧＣ／ＭＳによる分析を実施することにより、当業者により決定可能である。例えば、実施例のセクションＡに記載のような方法に従うことは可能である。
【００４９】
最も好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、ｄ−リモネン、及び／又はエタノール、及び／又はメタノール、及び／又はアセトニトリル、及び／又はアセトン、及び／又はクロロホルムを検出可能な量で含有しない。
【００５０】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤはまた、有機溶媒含量として、以下：
−  ｐ−キシレンを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；及び／又は
−  トルエンを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；及び／又は
−  ｌ−メントールを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満；及び／又は
−  トリクロロエチレンを２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、好ましくは５ｐｐｍ未満、好ましくは１ｐｐｍ未満；
を有する。
【００５１】
最も好ましくは、本発明のＨＰβＣＤは、ｐ−キシレン、及び／又はトルエン、及び／又はｌ−メントール、及び／又はトリクロロエチレンを検出可能な量で含有しない。
【００５２】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐ
ｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満の、ＵＳＰ４１  ＮＦ３６のジェネラルチャプターの「＜４６７＞残留溶媒」セクションに従うクラス１有機溶媒の全含量を有する。
【００５３】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満の、ＵＳＰ４１  ＮＦ３６のジェネラルチャプターの「＜４６７＞残留溶媒」セクションに従うクラス２有機溶媒の全含量を有する。
【００５４】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、２０００ｐｐｍ未満、好ましくは１０００ｐｐｍ未満、好ましくは５００ｐｐｍ未満、好ましくは２００ｐｐｍ未満、好ましくは１００ｐｐｍ未満、好ましくは５０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満の、ＵＳＰ４１  ＮＦ３６のジェネラルチャプターの「＜４６７＞残留溶媒」セクションに従うクラス３有機溶媒の全含量を有する。
【００５５】
代替として、又は有機溶媒の含量による特性決定に加えて、ＨＰβＣＤは、有機溶媒の使用を除外する、即ち全体的に水性媒体中で実施される、ヒドロキシプロピル化及び精製のプロセスによりそれが入手可能である、又は得られるという事実により定義され得る。
【００５６】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、エレクトロスプレーイオン化−質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）によって決定されるような以下の置換プロフィール：
−  未置換β−ＣＤに対応するシグナル（ＨＰ０）：０．０％に等しい；及び／又は
−  １に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ１）：３％以下、好ましくは１％以下、好ましくは０％に等しい；及び／又は
−  ２に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ２）：５％以下、好ましくは０〜４％、好ましくは１〜３％の範囲内、及び／又は
−  ３に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ３）：１〜１０％、好ましくは２〜８％、好ましくは３〜７％の範囲内；及び／又は
−  ４に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ４）：５〜２０％、好ましくは７〜１７％、好ましくは９〜１５％の範囲内；及び／又は
−  ５に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ５）：１０〜３０％、好ましくは１５〜２５％、好ましくは１７〜２５％の範囲内；及び／又は
−  ６に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ６）：１５〜３５％、好ましくは２０〜３０％、好ましくは２４．０〜２８．０％の範囲内；及び／又は−  ７に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ７）：１０〜３０％、好ましくは１５〜２５％、好ましくは１７〜２５％の範囲内；及び／又は
−  ８に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ８）：５〜２０％、好ましくは５〜１５％、好ましくは６〜１３％の範囲内；及び／又は
−  ９に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ９）：１から１０％、好ましくは２〜８％、好ましくは２〜６％の範囲内；及び／又は
−  １０に等しい置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ１０）：５％未満、好ましくは２％未満、好ましくは１％以下、好ましくは１％に等しい；及び／又は−  １１以上の置換度を有するＨＰβＣＤ分子に対応するシグナル（ＨＰ≧１１）：２％以下、好ましくは１％以下、好ましくは０％に等しい；
を有し、これらのパーセンテージは、各置換度において得られたシグナルの和に対して表され、ここでシグナルはバックグラウンドノイズの場合よりも大きかった。
【００５７】
当然ながら、用語「シグナル」が目的の置換度に対応するイオンの曲線下面積を意味す
ることは受け入れられている。
【００５８】
本明細書では、置換プロフィールは、好ましくは３通りに実施された測定値の平均をとることにより、ＥＳＩ−ＭＳによって決定される。この置換プロフィールの決定においては、特に実施例のセクションＡにおける下記のような方法に従うことは可能である。
【００５９】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、５．００％以下のプロピレングリコール含量を有し、このパーセンテージはＨＰβＣＤの総乾燥重量に対するプロピレングリコールの乾燥重量によって表される。このプロピレングリコール含量は、好ましくは２．５０％以下、好ましくは１．００％以下、好ましくは０．５０％以下、好ましくは０．１０％以下、好ましくは０．０５％以下である。
【００６０】
このプロピレングリコール含量は、通常、好ましくは付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の方法（「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；ベータデクス、プロピレングリコール、及び他の関連物質の限度」）による手順に従い、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、当業者によって決定され得る。
【００６１】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、０．１０％以下のジプロピレングリコール含量を有し、このパーセンテージはＨＰβＣＤの総乾燥重量に対するジプロピレングリコールの乾燥重量によって表される。このジプロピレングリコール含量は、好ましくは０．０５％以下、好ましくは０．０３％以下である。それは例えば、０．０１〜０．０５％の範囲内にある。
【００６２】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、１．０％以下の還元糖含量を有し、このパーセンテージはＨＰβＣＤの総乾燥重量に対する還元糖の乾燥重量によって表される。好ましくは、この還元糖含量は、０．５％以下、好ましくは０．１％以下である。
【００６３】
この還元糖含量は、通常、例えば下記の実施例のセクションＡに記載のような方法に従い、ベルトラン法により、当業者によって決定され得る。
【００６４】
一般に、有利には、本発明に係るＨＰβＣＤは、１０００ｐｐｍ以下の塩化物含量を有し、この含量はＨＰβＣＤの総乾燥重量に対する塩化物イオンの乾燥重量によって表される。好ましくは、この塩化物含量は、５００ｐｐｍ以下、好ましくは１００ｐｐｍ以下、好ましくは５０ｐｐｍ以下、好ましくは５０ｐｐｍ未満である。
【００６５】
この塩化物含量は、通常は、既知濃度の硝酸銀の溶液を用いてのＨＰβＣＤ溶液の電位差滴定により、当業者によって決定され得る。
【００６６】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、２３０〜４００ｎｍで１．００以下の最大吸光度を有し；前記最大吸光度は、１０ｍｍの光経路長さを有するセルを用いて、溶液１００ｍｌあたり２．５０ｇ（乾燥）のＨＰβＣＤを含有する蒸留水溶液に基づいて測定される。好ましくは、この最大吸光度は、０．５０未満、好ましくは０．１０未満、好ましくは０．０５未満であり、例えば０．０１〜０．５０の範囲内である。
【００６７】
有利な実施形態では、本発明のＨＰβＣＤは、粉末形態である。この場合、それは有利には、１０．０％以下、好ましくは５．０％以下の、例えば２．０〜５．０％の範囲から選択される、乾燥時の質量の欠損（又は「水分含量」）を示す。
【００６８】
この水含量は、通常、好ましくは付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の方法（「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；乾燥時の欠損」）による手順に従い、乾
燥時の質量の欠損を測定することにより、当業者によって決定され得る。
【００６９】
この粉末形態は、特にＨＰβＣＤの貯蔵及び輸送において有利である。
【００７０】
有利なことに、この粉末状ＨＰβＣＤは、微粒化生成物の形態、即ちＨＰβＣＤの溶液を噴霧乾燥することによって得られる粉末の形態である。
【００７１】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、５．０〜７．５の範囲内のｐＨを有し；前記ｐＨは、２ｇの乾燥ＨＰβＣＤ、９８ｇの蒸留水及び２２５ｇ／Ｌの塩化カリウム溶液０．３ｍｌからなるＨＰβＣＤの溶液に基づいて測定される。
【００７２】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、２００μＳ／ｃｍ以下の伝導率を有し、前記伝導率は、１０％（乾燥）ＨＰβＣＤを含有する蒸留水溶液に基づいて測定される。好ましくは、この伝導率は、１００μＳ／ｃｍ以下、好ましくは５０μＳ／ｃｍ以下、好ましくは２５μＳ／ｃｍ以下、好ましくは１０μＳ／ｃｍ以下である。この伝導率は、例えば、１〜１０μＳ／ｃｍ、さらには２〜５μＳ／ｃｍの範囲内である。
【００７３】
この伝導率は、通常、付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６に記載の方法（「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；伝導率」）による手順に従い、当業者によって決定され得る。例えば、下記の実施例のセクションＡに記載の方法に従うことは可能である。
【００７４】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤは、０．５％未満、好ましくは０．１％未満の、プロピレングリコール及びβ−ＣＤ以外のＨＰβＣＤに関する不純物の含量を有する。
【００７５】
プロピレングリコール及びβ−ＣＤ以外のＨＰβＣＤに関する不純物のこの含量は、通常、好ましくは付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の方法（「ベータデクス、プロピレングリコール、及び他の関連物質の限度」）による手順に従い、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、当業者によって決定され得、プロピレングリコール及びβ−ＣＤ以外のＨＰβＣＤに関する不純物が前記方法における「他の関連物質」に相当すると理解されている。
【００７６】
好ましくは、本発明に係るＨＰβＣＤはまた、２０１８年６月１日発効の米国モノグラフに従う。好ましくは、本発明のＨＰβＣＤはまた、２０１８年６月１日発効の中国モノグラフに従う。好ましくは、本発明のＨＰβＣＤはまた、２０１８年６月１日発効の欧州モノグラフに従う。
【００７７】
本発明の別の主題は、
β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）及び水酸化ナトリウムを含む水溶液を調製するステップ（ａ）において、使用される水酸化ナトリウムの量がβ−ＣＤの乾燥重量に対する水酸化ナトリウムの乾燥重量で３．７％未満であるステップ（ａ）と；
ステップ（ａ）で得られた溶液にプロピレンオキシドを添加するステップ（ｂ）において、
−  プロピレンオキシドの導入前のステップ（ａ）で得られた溶液の温度が、８０℃〜１２０℃の範囲内で選択される；
−  使用されるプロピレンオキシド／無水グルコースのモル比が、０．７０／１．００〜０．８６／１．００の範囲内で選択される；
−  プロピレンオキシドの添加速度が、β−ＣＤの０．１５〜０．３０ｋｇ／ｈ／ｋｇの範囲内で選択される；
ことを特徴とするステップ（ｂ）と：
有機溶媒を使用しないことを特徴とする精製ステップ（ｃ）と；
このようにして得られたＨＰβＣＤを回収するステップ（ｄ）と、
を含むことを特徴とする、上記のようなＨＰβＣＤの調製に特に有用な、ＨＰβＣＤを調製するための方法である。
【００７８】
好ましくは、ステップ（ａ）の溶液中のβ−ＣＤの乾燥質量は、３０〜７０重量％の範囲内で選択され、このパーセンテージは溶液の総重量に対するβ−ＣＤの乾燥重量によって表される。好ましくは、β−ＣＤのこの乾燥質量は、４０〜６０％、好ましくは４５〜５５％、好ましくは５０〜５５％の範囲内で選択される。
【００７９】
好ましくは、ステップ（ａ）の溶液中の水酸化ナトリウムの量は、β−ＣＤの乾燥重量に対する水酸化ナトリウムの乾燥重量で０．５〜３．６％の範囲内で選択される。より好ましくは、水酸化ナトリウムのこの量は、１．０％以上、好ましくは１．２％以上、好ましくは１．３％以上、好ましくは１．４％以上、好ましくは１．５％以上、さらに１．６％以上、さらに１．７％以上、さらに１．８％以上、さらに１．９％以上、さらに２．０％以上、さらに２．１％以上、さらに２．２％以上、さらに２．３％以上、さらに２．４％以上、さらに２．５％以上、さらに２．６％以上、さらに２．７％以上、さらに２．８％以上、さらに２．９％以上である。好ましくは、水酸化ナトリウムのこの量は、３．５％以下、好ましくは３．４％以下、好ましくは３．３％以下、好ましくは３．２％以下、好ましくは３．１％以下、好ましくは３．０％以下、好ましくは２．９％以下である。
【００８０】
好ましくは、ステップ（ｂ）では、プロピレンオキシドの導入前のβ−ＣＤの水溶液の温度は、８５℃以上、好ましくは９０℃以上である。この温度はまた、好ましくは１１０℃以下、好ましくは１００℃以下である。それは例えば、９０〜１００℃、好ましくは９４〜９６℃の範囲内で選択される。それは例えば、約９５℃に等しい。
【００８１】
好ましくは、ステップ（ｂ）では、使用されるプロピレンオキシド／無水グルコースのモル比は、０．７５／１．００以上、好ましくは０．８０／１．００以上、好ましくは０．８２／１．００以上、好ましくは０．８４／１．００以上、好ましくは０．８５／１．００に等しい。
【００８２】
好ましくは、ステップ（ｂ）では、プロピレンオキシドの添加速度は、β−ＣＤの０．２０〜０．３０ｋｇ／ｈ／ｋｇ、好ましくはβ−ＣＤの０．２０〜０．２５ｋｇ／ｈ／ｋｇ、好ましくはβ−ＣＤの０．２１〜０．２３ｋｇ／ｈ／ｋｇの範囲内で選択され、例えばβ−ＣＤの０．２２ｋｇ／ｈ／ｋｇに等しい。
【００８３】
次に、反応は、例えば塩酸を添加することにより中和され得る。
【００８４】
ステップ（ｃ）を実施するため、ステップ（ｂ）で得られるＨＰβＣＤは、典型的には濾過、ナノ濾過、活性炭による処理及び脱ミネラル化から選択される１以上の処理を行うことができる。
【００８５】
好ましくは、この精製は、好ましくはこの順序：
（ｂ．１）脱色；
（ｂ．２）濾過；
（ｂ．３）膜精製
で実施される処理を含む。
【００８６】
好ましくは、脱色ステップ（ｂ．１）は、典型的にはバッチモードで実施される活性炭処理を用いて実施される。好ましくは、この処理は、７０℃±５℃で少なくとも１時間実
施される。
【００８７】
好ましくは、ステップ（ｂ．２）は、バッグフィルターを通過する少なくとも１つの濾過ステップを含む。好ましくは、ステップ（ｂ．２）は、０．２２μｍのカートリッジフィルターを通過する少なくとも１つの濾過ステップを含む。好ましくは、ステップ（ｂ．２）は、好ましくは任意選択的に０．２２μｍのカートリッジフィルターで実施される濾過の前に、０．１μｍカートリッジフィルターを通過する少なくとも１つの濾過ステップを含む。
【００８８】
好ましくは、膜精製ステップ（ｂ．３）は、好ましくは、３５バール未満の圧力及び４５℃を超える温度で、８００Ｄａ未満のカットオフ閾値又は６５％超のＣａＣｌ２の呼び保持率を有する膜を備えたナノ濾過モジュールを用いて、ナノ濾過により実施される。
【００８９】
好ましくは、該精製は、有利にはカチオン交換カラムを通過し、次いでアニオン交換カラムを通過するステップを含む、脱ミネラル化ステップ（ｂ．４）をさらに含む。好ましくは、脱ミネラル化は、混合ベッドを通過する通路をさらに含む。好ましくは、ステップ（ｂ．４）は、出口での生成物の抵抗率が５００，０００Ω・ｃｍを超えるように実施される。
【００９０】
好ましくは、処理（ｂ．１）及び（ｂ．２）は、膜精製（ｂ．３）後、又は任意選択的に実施される脱ミネラル化処理（ｂ．４）後、繰り返される。
【００９１】
有利には、特に粉末ＨＰβＣＤを得ることが所望される場合、本発明の方法は、該精製後に、ヒドロキシプロピル化され、任意選択的に精製された生成物を乾燥させるステップを含む。この乾燥ステップは、当業者に公知の任意の手法により、典型的には、蒸発により又は噴霧乾燥により、好ましくは噴霧乾燥により、実施され得る。
【００９２】
この噴霧乾燥は、一段階又は多段階噴霧乾燥であってもよい。多段階噴霧乾燥の場合、噴霧乾燥器が流動層に結合され、任意選択的には噴霧乾燥タワーと一体化され、噴霧乾燥によって形成される粒子を凝集させることが可能になる。後者のプロセスは、より大きい平均直径の粉末を得ることが所望される場合や、得られる粉末にとって望ましいフローに応じて、特に有利である。
【００９３】
本発明のＨＰβＣＤは、様々な用途にて使用可能であり、それらの中では、ここで治療的用途と非治療的用途との間で区別される。
【００９４】
したがって、本発明は、第一に、薬物として使用するための、本発明に係るＨＰβＣＤに関する。
【００９５】
好ましくは、この使用は、組織内でのコレステロールの過負荷、及び／又は貯蔵及び／若しくは蓄積に関連する状態又は疾患、及びそれらの結果の治療又は予防を対象とする。これは、例えば、心血管疾患、血管疾患、アテローム性動脈硬化症若しくはアテロームに関連する合併症などの閉塞性末梢動脈疾患、中枢神経系の疾患、例えば、中枢神経系を冒す、アルツハイマー病、パーキンソン病、巣状分節性糸球体硬化症、及びリソソーム症、例えば、ニーマン・ピック病、例えば、ニーマン・ピック病Ａ型、ニーマン・ピック病Ｂ型、又はニーマン・ピック病Ｃ型などを含む。本発明に係るＨＰβＣＤの使用により治療及び／又は予防されるアテロームに関連する合併症は、非限定的には、虚血、例えば、心筋虚血、冠疾患、狭心症、急性冠症候群、心筋梗塞、腸間膜梗塞、脳卒中、動脈瘤又は下肢の動脈症である。
【００９６】
本発明のＨＰβＣＤは、ニーマン・ピック病Ｃ型の治療における使用、又は巣状分節性糸球体硬化症の治療における使用が意図される。
【００９７】
好ましくは、本発明のＨＰβＣＤは、ヒト又は動物、好ましくはヒトへの投与が意図される。
【００９８】
本発明のＨＰβＣＤは、経口的に、非経口的に、皮膚性に又は粘膜に投与可能である。非経口経路は、例えば、皮下、静脈内、筋肉内又は腹腔内投与を含むが、後者はむしろ動物用に準備される。粘膜経路は、例えば、経鼻投与、経肺投与又は直腸粘膜を介する投与を含む。皮膚経路は、例えば、特に経皮デバイス、典型的にはパッチを介する経皮経路を含む。中枢神経系の疾患の治療及び／又は予防の場合には、くも膜下腔内経路又は脊髄経路も用いられてもよい。
【００９９】
本発明はまた、特に上記の状態及び疾患を治療及び／又は予防することを意図した薬剤の製造における本発明に係るＨＰβＣＤの使用に関する。それはまた、対象における上記の状態及び疾患を治療及び／又は予防するための方法であって、本発明に係るＨＰβＣＤの治療有効量での投与を含む方法に関する。
【０１００】
本発明に係るＨＰβＣＤはまた、特に通常はこのタイプの生成物において見出される用途から選択される、他の可能な用途を有する。
【０１０１】
したがって、本発明はまた、賦形剤として、及び／又は物質をカプセル封入するため、及び／又は物質を水性媒体中に可溶化するため、及び／又は物質の化学的安定性を改善するため、及び／又は物質の生物学的膜への送達と生物学的膜を介した送達を改善するため、及び／又は物質の物理的安定性を増強するため、及び／又は液体形態から粉末形態にかけて物質を配合するため、及び／又は一方の物質ともう一方の物質との相互作用を阻止するため、及び／又は物質の局所若しくは経口投与後の局所刺激作用を低減するため、及び／又は皮膚などの特定組織内での物質の吸収を阻止するため、及び／又は物質の徐放性を得るため、及び／又は物質の味、特にその苦味をマスクするため、及び／又は物質の匂いをマスクするため、及び／又は物質のバイオアベイラビリティを修飾するための、本発明に係るＨＰβＣＤの使用に関する。
【０１０２】
好ましくは、これらの物質は、親油性化合物又は少なくとも１つの親油性基を有する化合物である。
【０１０３】
これらの親油性化合物又は少なくとも１つの親油性基を有する化合物は、例えば、室温（１５〜２５℃）で、水に対して、やや溶けにくい化合物、非常にやや溶けにくい化合物、さらに実質的に水に不溶性である化合物から選択され得る。「やや溶けにくい水溶性化合物」は、通常は、１グラムの前記化合物を溶かすのに１００〜１０００ｍｌの水の体積が必要であることを意味することが意図される。「非常にやや溶けにくい水溶性化合物」の場合、水のこの体積は１０００ｍｌを超え、最大で１０，０００ｍｌに及ぶ。「実質的に水に不溶性である化合物」の場合、水のこの体積は１０，０００ｍｌを超える。この点では、［図１、２、３］や、特に欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）における参照「１．４  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ，０７／２０１４：１０，０００」で示される定義を参照されたい。
【０１０４】
ここで指定される物質は、通常は、選択される用途に応じた活性薬剤又は望ましくない物質であってもよい。例えば、本発明のＨＰβＣＤは、悪臭をマスクするため、例えば脱臭エアロゾルの形態で使用され得る。それらはまた、食料組成物中の香料の効果を延長するため、又は活性薬剤を溶解及び／又は安定化するために使用することができる。
【０１０５】
「活性薬剤」は、通常は、例えば、目的の医薬品、動物薬、食品、栄養補助食品、化粧品又は農薬の任意の物質を意味するように理解される。かかる活性薬剤の例として、活性医薬成分、着色剤、香料が挙げられる。好ましくは、本発明の活性薬剤は、好ましくはヒト用を意図した活性医薬成分である。
【０１０６】
本発明にとって有用な活性薬剤、特に活性医薬成分は、例えば、タンパク質；核酸、例えばＤＮＡ若しくはＲＮＡ由来のもの；細胞；又はウイルスに基づく又は由来する有効成分の場合のように、化学分子だけでなく、「生物学的」活性薬剤であり得る。本発明における好ましい活性薬剤の例としては、治療活性タンパク質、例えば抗体又はホルモンが挙げられる。
【０１０７】
本発明の主題はまた、本発明に係るＨＰβＣＤ及び少なくとも１つの他の物質を含む組成物である。
【０１０８】
好ましくは、前記他の物質は、本発明に係るＨＰβＣＤの使用に関するセクションにおいて上で定義される通りである。それは例えば、活性薬剤、好ましくは活性医薬成分、及び／又は親油性化合物若しくは少なくとも１つの親油性基を有する化合物及び／又は室温（１５〜２５℃）でやや溶けにくい、非常にやや溶けにくい、さらに実質的に水に不溶性である化合物である。
【０１０９】
これらの他の物質はまた、使用及び／又は所望されるガレヌス形態に応じて、後者が本発明で所望される特性に反しない限り、一般に使用される化合物から選択され得る。これらの他の物質は、例えば、結合剤、（超）崩壊剤及び滑沢剤から選択され得る。
【０１１０】
本発明に係るＨＰβＣＤ及びそれらを含む組成物は、特に意図される使用に応じて、当業者が好適とみなす任意のガレヌス形態であり得る。それらは例えば、液体、固体又は半流動体形態であってもよい。それらは例えば、溶液、特に注射用液剤、懸濁液、分散液、エマルション、ペレット、顆粒剤、フィルム、散剤、ゲル剤、クリーム、軟膏剤、ペースト剤、スティック剤、錠剤、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、浸透圧デバイス、パッチであってもよい。
【０１１１】
本発明では、パーセンテージで表される溶液中の物質の濃度について言及されるときや、別段の指示がない限り、後者が通常は溶液１００ｍｌあたりの乾燥物質のグラム量に相当することが想起される。
【０１１２】
物質の乾燥質量（「乾燥重量」）に対して参照がなされるとき、当然ながらそれが無水物質の質量であることも想起される。換言すれば、この質量は、粉末形態での出発物質中に存在する任意の水分を排除している。
【０１１３】
本発明は、例示的かつ非限定的であることが意図される以下の実施例によって、より明確に理解されるであろう。
【実施例】
【０１１４】
Ａ．ＨＰβＣＤを特性決定するために用いられる方法
１．水分含量（乾燥時の質量の欠損）は、付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の方法（「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；乾燥時の欠損」）に従って決定した。
２．還元糖含量は、還元性媒体への酸化第一銅の沈降、焼結ガラス上での濾過及び残渣の秤量により、ベルトラン法によって決定した。
３．溶液のｐＨは、２０〜２５℃で２つの浸漬した電極間の電位差を測定することにより決定した。ＨＰβＣＤ溶液は、２ｇ（乾燥）のＨＰβＣＤ、５００，０００Ω・ｃｍを超える抵抗率を有する９８ｇの蒸留水、及び２２５ｇ／Ｌの塩化カリウム溶液０．３ｍｌからなった。
４．塩化物（Ｃｌ−）含量は、既知濃度の硝酸銀溶液を用いてのＨＰβＣＤ溶液の電位差滴定により決定した。
５．２３０〜４００ｎｍでの最大吸光度は、１０ｍｍの光経路長さを有するセルを用いて、溶液１００ｍｌあたり２．５０ｇ（乾燥）のＨＰβＣＤを含有する蒸留水溶液に基づいて決定した。
６．ＨＰβＣＤにおける関連物質の含量（β−ＣＤ、プロピレングリコール、他の関連不純物（ジプロピレングリコールを含む））は、ＵＳＰ４１  ＮＦ３６に準じる方法（「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；ベータデクス、プロピレングリコール、及び他の関連物質の限度」）に従って決定した。
７．伝導率は、付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６に記載の方法（「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；伝導率」）による手順に従い、５００，０００Ω・ｃｍを超える抵抗率を有する蒸留水で調製した１０％ＨＰβＣＤを含有する１００ｍｌの溶液に基づき、２５℃で測定した。そのようにして得た溶液の抵抗率Ｒを電子導電率計により決定し、伝導率を後者から計算した（１／Ｒ）。
８．平均モル置換度（ＭＳ）は、付録中に再現されたＵＳＰ４１  ＮＦ３６の方法「ヒドロキシプロピルベータデクスのモノグラフ；モル置換」に従い、ＮＭＲにより決定した。９．置換プロフィールは、エレクトロスプレーイオン化−質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）により決定した。１ｇ（乾燥）／ＬのＨＰβＣＤ溶液を、１ｍＭの酢酸ナトリウムを有するメタノール／水混合物（５０／５０，ｖ／ｖ）中で調製した。各サンプルの注入を１０μｌ／分で１分間実施し、ＭＳデータを下記のように記録した。２回の連続注入の間、５００μｌのメタノール／水混合物（５０／５０，ｖ／ｖ）を注入し、イオン源を洗浄した。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）パラメータは次の通りであった：スプレー電圧：５ｋＶ；ネブライザーガス：９、補助ガス：２；スイープガス：０；キャピラリー電圧：２３Ｖ；キャピラリー温度：２７５℃；チューブレンズ：８０Ｖ。質量分析パラメータは次の通りであった：全走査；走査範囲：５０〜２００ｍ／ｚ；質量範囲：正常、走査速度：改善；捕捉時間：１分。置換された各ＨＰβＣＤ分子（ＨＰＸと称される、Ｘはβ−ＣＤ１分子あたりの置換の数である）において、各イオンについて抽出されたイオン電流（ＸＩＣ）を積分し、すべてのＨＰＸイオン電流の和と比較し、そこでは対応するピークの強度はバックグラウンドノイズの強度よりも大きかった。ナトリウム付加物が最も強力なＨＰβＣＤイオンであったことから、各ＨＰＸに対応するピークの曲線下面積を積分し、特性決定（バックグラウンドノイズの強度よりも大きい強度）用に考慮されるＨＰＸイオンの面積の和に関連づけ、それをパーセンテージとして表した。
１０．有機溶媒の含量は、質量分析による検出を伴うガスクロマトグラフィー（ＧＣ／ＭＳ）により決定した。より正確には、該分析は、ヘッドスペースＧＣ／ＭＳにより実施した。動作条件は次の通りであった：３０ｍ＊０．２５ｍｍ、ｄｆ０．２５μｍのＶｆ−ワックスカラムを備えたＢｒｕｋｅｒ  ＧＣ／ＭＳ；温度プログラム：４０℃で５分、２３０℃まで５℃／分；インジェクター２５０℃スプリット比１：１０；ＥＩ＋でのＭＳ検出器。サンプルを次のように調製した：０．２ｇの乾燥ＨＰβＣＤを１ｍｌの超純水に溶解した。
１１．置換パターンは、上で考察した「箱守」法に従って決定した。
【０１１５】
Ｂ．先行技術：市販ＨＰβＣＤのＭＳ及びβ−ＣＤ含量の値
このセクションでは、ＭＳ及びβ−ＣＤ含量の値は、様々な市販ＨＰβＣＤについて測定した（Ｍｅａｓ．）。供給業者の詳細についても、利用可能であったとき、情報として提供した（Ｓｐｅｃ．）。
【０１１６】
【表１】
2021529243.tif 000002
【０１１７】
これらの結果により、市販のＨＰβＣＤが、低いＭＳで低い残留β−ＣＤ含量であることに一致しないことが確認される。したがって、例えば、ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰ、ＣＡＶＡＳＯＬ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ７及びＣＯＭＰＬＥＸＯＬ−ＨＰ製品は、０．３％以下のβ−ＣＤ含量を有するとはいえ、系統的に０．７１を超えるＭＳを有する。逆に、ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰＢ、ＣＡＶＡＳＯＬ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ、ＣＡＶＡＳＯＬ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ５及びＣ＊ＣＡＶＩＴＲＯＮ（登録商標）製品は、０．７１未満のＭＳを有するが、それらの残留β−ＣＤ含量は系統的に０．３％を超える。
【０１１８】
Ｃ．本発明の又は本発明ではないＨＰβＣＤの調製及び特性決定（ＭＳ及びβＣＤ）
１．方法１−脱色、濾過及び膜精製による精製を伴う
このセクションの目的は、得られるＨＰβＣＤの特性に対するヒドロキシプロピル化パラメータの影響を提示することである。
【０１１９】
本発明のＨＰβＣＤ（ＩＮ−１）を次のように調製した：１３１３ｇの市販β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）（１１８８ｇの無水β−ＣＤに相当する）を、不活性雰囲気下のオートクレーブ内で撹拌しながら、アルカリ性媒体に溶解した。このようにして、溶液の総重量に対する乾燥重量で５２％のβ−ＣＤ、及びβ−ＣＤの乾燥重量に対する２．９％の水酸化ナトリウム（下表中の［ＮａＯＨ］）を含む溶液を得た。反応媒体を９５℃の温度［Ｔ］で３０分間維持し、次に３６１．６ｇのプロピレンオキシドを、乾燥β−ＣＤの０．２２ｋｇ／ｈ／ｋｇの速度［Ｄ］、即ち０．８５／１．００のプロピレンオキシド／無水グルコース［ＰＯ／Ｇ］モル比で添加した。プロピレンオキシドの導入の終了後、反応媒体を４時間撹拌し続け、次に塩酸で中和した。
【０１２０】
次に、ＨＰβＣＤを、水性媒体中で、即ち有機溶媒を用いずに、以下の技術により、精製し、乾燥させた：
−  脱色；
−  濾過；
−  膜精製；
−  蒸発乾燥
【０１２１】
活性炭脱色ステップは、７０℃±５℃で最低１時間撹拌しながら、バッチモードで実施した。次に、媒体を、クリケットフィルターを通して、次に０．２２μｍのカートリッジフィルターを通して濾過した。膜精製ステップは、特に３５バール未満の圧力及び４５℃を超える温度で、８００Ｄａのカットオフ閾値を有する膜を備えたナノ濾過モジュールを用いて実施した。保持液のプロピレングリコール含量をＨＰＬＣアッセイにより観測した。乾燥生成物に対するプロピレングリコール含量が０．５重量％未満に達した直後に、動作を停止させた。次に、そのようにして得られたＨＰβＣＤを、９５重量％を超える固体含量を有するように、ロータリーエバポレーター内、減圧下で乾燥させた。
【０１２２】
比較対象のＨＰβＣＤ（ＣＰ−１）を次のように調製した：６５６ｇの市販β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）（５９４．４ｇの無水β−ＣＤに相当する）を、不活性雰囲気下のオートクレーブ内で撹拌しながら、アルカリ性媒体に溶解した。このようにして、溶液の総重量に対する乾燥重量で５２％のβ−ＣＤ、及びβ−ＣＤの乾燥重量に対する２．９％の水酸化ナトリウムを含む溶液を得た。反応媒体を７５℃の温度［Ｔ］で３０分間維持し、次に１８２．６ｇのプロピレンオキシドを、乾燥β−ＣＤの０．１４ｋｇ／ｈ／ｋｇの速度［Ｄ］、即ち０．８６／１．００のプロピレンオキシド／無水グルコース［ＰＯ／Ｇ］モル比で添加した。プロピレンオキシドの導入の終了後、反応媒体を４時間撹拌し続け、次に塩酸で中和した。そのようにして得られたＨＰβＣＤを、ＨＰβＣＤ  ＩＮ−１と同様の方法で精製し、乾燥させた。
【０１２３】
得られたＨＰβＣＤを、それらのＭＳ及びそれらのβ−ＣＤ含量に関連して特性決定した。ヒドロキシプロピル化条件とさらにＭＳ及びβ−ＣＤ含量の値とを下表に示す。
【０１２４】
【表２】
2021529243.tif 000003
【０１２５】
次に、他の試験を次のように実施した：
各試験においては、無水β−ＣＤの使用は約２５０ｇであり、導入した水の量及びプロピレンオキシドの量は、ＨＰβＣＤ  ＩＮ−１の調製に使用した量に比例的に対応する。特に、これは、［ＰＯ／Ｇ］モル比が０．８５／１．００に等しかったことを意味する。プロピレンオキシドの導入前の反応媒体の温度［Ｔ］は１１０℃であった。試験した様々な量の水酸化ナトリウム［ＮａＯＨ］を、β−ＣＤの乾燥重量に対する水酸化ナトリウムの乾燥パーセンテージとして下表中に示す。プロピレンオキシドを速度［Ｄ］で添加した。反応後、反応媒体を塩酸で中和した。試験した各水酸化ナトリウム［ＮａＯＨ］含量については、２つの粗反応生成物を生成し、次に精製のナノ濾過ステップ用に十分な材料を有するようにそれらを組み合わせた。このようにして得られたＨＰβＣＤ粗反応生成物を、
ＨＰβＣＤ  ＩＮ−１と同様の方法で精製し、乾燥させた。
【０１２６】
得られたＨＰβＣＤを、それらのＭＳ及びそれらのβ−ＣＤ含量に関連して特性決定した。ヒドロキシプロピル化条件とさらにＭＳ及びβ−ＣＤ含量の値とを下表に示す。
【０１２７】
【表３】
2021529243.tif 000004
【０１２８】
これらの試験のすべては、ヒドロキシプロピル化条件が適切に設計される場合には、本発明による対象としてのＭＳ及びβ−ＣＤ含量を有するＨＰβＣＤを得ることが可能であることを示す。
【０１２９】
精製において非常に有利なことに、有機溶媒を含むことは必要でない。したがって、本発明に係るＨＰβＣＤは、通常はヒドロキシプロピル化ステップ及びこのヒドロキシプロピル化にて用いられる原料から得られる有機物質以外の有機物質を含まない可能性がある。
【０１３０】
２．方法２−脱色及び追加的な濾過を伴う
このセクションの目的は、本発明のＨＰβＣＤの調製における最適化プロセスを提示することである。
【０１３１】
本発明に係るＨＰβＣＤ（ＩＮ−２）を次のように調製した：１３０５ｇの市販β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）（１２０４ｇの無水β−ＣＤに相当する）を、不活性雰囲気下のオートクレーブ内で撹拌しながら、アルカリ性媒体に溶解した。このようにして、
溶液の総重量に対する乾燥重量で５２％のβ−ＣＤ、及びβ−ＣＤの乾燥重量に対する２．９％の水酸化ナトリウムを含む溶液を得た。反応媒体を９５℃の温度［Ｔ］で３０分間維持し、次に３６７ｇのプロピレンオキシドを、乾燥β−ＣＤの０．２２ｋｇ／ｈ／ｋｇの速度［Ｄ］、即ち０．８５／１．００のプロピレンオキシド／無水グルコース［ＰＯ／Ｇ］モル比で添加した。プロピレンオキシドの導入の終了後、反応媒体を４時間撹拌し続け、次に塩酸で中和した。
【０１３２】
次に、得られたＨＰβＣＤを、水性媒体中で、即ち有機溶媒を用いずに、以下のステップを経ることにより、精製し、乾燥させた：
−  脱色；
−  濾過；
−  膜精製；
−  脱ミネラル化；
−  脱色；
−  濾過；
−  噴霧乾燥
【０１３３】
脱色ステップは、７０℃で１時間の活性炭処理により実施した。次に、媒体を、バッグフィルター、次に１μｍ、そして次に０．２２μｍのカートリッジフィルターを通して濾過した。膜精製ステップは、３５バール未満の圧力及び４５℃を超える温度で、８００Ｄａ未満のカットオフ閾値を有する膜を備えたナノ濾過モジュールを用いて実施した。保持液のプロパンジオールグリコール含量をＨＰＬＣアッセイにより観測した。乾燥生成物に対するプロパンジオール含量が０．１重量％未満に達した直後に、ナノ濾過動作を停止させた。脱ミネラル化ステップは、５００，０００Ω・ｃｍを超える出口の抵抗率を得るため、特に、カチオン性、そして次にアニオン性イオン交換カラムを通過させ、最後に混合ベッドを通過させることにより実施した。第２の脱色ステップは、７０℃で少なくとも１時間撹拌しながらの活性炭処理により、バッチモードで実施した。次に、ＨＰβＣＤ溶液を、バッグフィルター、次に１μｍ、そして次に０．２２μｍのカートリッジフィルターを通して濾過した。次に、ＨＰβＣＤ溶液を噴霧乾燥することにより、ＨＰβＣＤを粉末形態で得た。
【０１３４】
次に、本発明のＨＰβＣＤ  ＩＮ−２の徹底的な特性決定を実施した。結果を下表に示す：
【０１３５】
【表４】
2021529243.tif 000005
【０１３６】
Ｄ．本発明の又は本発明ではないＨＰβＣＤの置換パターン
このセクションでは、発明者は、本発明のＨＰβＣＤの置換パターン、比較対象のＨＰβＣＤの置換パターン、さらに市販ＨＰβＣＤの置換パターンを決定している。ＨＰβＣＤ  ＩＮ−２の場合、いくつかのバッチを試験した。
【０１３７】
パーセンテージで表される結果を表５及び６に示す。ＭＳ値及び残留β−ＣＤ値についても報告している。
「モノ」：一置換（２ＯＨＰ、３ＯＨＰ、６ＯＨＰ）に相当する置換の割合；「ジ」：二置換（２，３−ジ−ＯＨＰ、２，６−ジ−ＯＨＰ、３，３’−ジ−ＯＨＰ）に相当する置換の割合；
「トリ」：三置換（２，３，６−トリ−ＯＨＰ）に相当する置換の割合；
「Ｃ２／Ｃ６」：Ｃ２／Ｃ６置換（（２ＯＨＰ＋２，３−ジ−ＯＨＰ＋２，６−ジ−ＯＨ
Ｐ＋２，３，６−トリ−ＯＨＰ）／（６ＯＨＰ＋２，６−ジ−ＯＨＰ＋２，３，６−トリ−ＯＨＰ））の割合；
「Ｃ２／Ｃ３」：Ｃ２／Ｃ３置換（（２ＯＨＰ＋２，３−ジ−ＯＨＰ＋２，６−ジ−ＯＨＰ＋２，３，６−トリ−ＯＨＰ）／（３ＯＨＰ＋２，３−ジ−ＯＨＰ＋３，３’−ジ−ＯＨＰ＋２，３，６−トリ−ＯＨＰ）の割合
【０１３８】
【表５】
2021529243.tif 000006
【０１３９】
【表６】
2021529243.tif 000007
【０１４０】
注：試験したすべてのＨＰβＣＤについて、置換の他のタイプに相当するシグナルが得られなかった（例えば、３，６−ジ−ＯＨＰタイプの場合）。したがって、表５及び６に示される以外の置換のタイプを有する無水グルコース単位では、検出可能な量が得られなかった。
【０１４１】
これらの結果は、本発明に係るＨＰβＣＤが、特に、同じく分析した、ＣＡＶＡＳＯＬ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａ、ＣＡＶＩＴＲＯＮ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ５  Ｐｈａｒｍａ及びＣＡＶＩＴＲＯＮ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ７  Ｐｈａｒｍａ製品と比べて特定の置換パターンを有することを示す。
【０１４２】
発明者によって実施した実験によると（データは本明細書で示していない）、本発明のＨＰβＣＤの場合などの置換パターンは、特定の特性、特に、物質、特に活性医薬成分、より具体的には薬学的活性タンパク質などの生物学的活性薬剤の安定化における改善された効率をもたらすように思われる。特に、治療用タンパク質の安定化のため、本発明のＨＰβＣＤの場合などの置換パターンを有するＨＰβＣＤの場合、ＣＡＶＡＳＯＬ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａ、ＣＡＶＩＴＲＯＮ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ５  Ｐｈａｒｍａ及びＣＡＶＩＴＲＯＮ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ７  Ｐｈａｒｍａ製品で得られる場合と比べてのタンパク質凝集における大幅な減少が得られた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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