(57)【要約】  抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体、ならびにがんの治療のための抗体を使用する組成物および方法が提供される。【選択図】図１
2021525087.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんの治療のために、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を活性化する際の使用のための、ヒトＰＶＲＩＧに一価結合し、かつＴＩＧＩＴに一価結合する、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項２】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｂ）第１の抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第１の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｖ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第１の軽鎖可変ドメインを含み、
前記抗ＰＶＲＩＧ抗体が、ＣＨＡ．７．５１８．４、ＣＨＡ．７．５１８．１、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２４  ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１、ＣＨＡ．７．５３８＿２、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９，ＣＨＡ．７．５５０、ＣＨＡ７．５３８．１．２、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１９，ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４９、ＣＰＡ．７．０５０、およびＣＨＡ．７．５１８からなる群から選択される、第１の抗原結合部分と、
ｂ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含む第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項３】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含む第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第２の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｖ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第２の軽鎖可変ドメインを含み、
前記抗ＴＩＧＩＴ抗体が、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＨＡ．９．５４７．１８、ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０３、ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．７、およびＣＨＡ．９．５４１．８からなる群から選択される、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項４】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第１の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｖ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第１の軽鎖可変ドメインを含み、
前記抗ＰＶＲＩＧ抗体が、ＣＨＡ．７．５１８．４、ＣＨＡ．７．５１８．１、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１、ＣＨＡ．７．５３８＿２、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９，ＣＨＡ．７．５５０、ＣＨＡ７．５３８．１．２、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１９，ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４９、およびＣＰＡ．７．０５０ＣＨＡ．７．５１８からなる群から選択される、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第２の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｖ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第２の軽鎖可変ドメインを含み、
前記抗ＴＩＧＩＴ抗体が、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＨＡ．９．５４７．１８、ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０３、ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．７、およびＣＨＡ．９．５４１．８からなる群から選択される、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項５】
第１の抗原結合部分が、
ｉｉｉ．ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１の重鎖と、
ｉｖ．ＶＬ−ＣＬを含む第１の軽鎖であって、前記ＣＬが、カッパ抗体またはラムダ抗体のいずれかの定常ドメインである、第１の軽鎖と、を含む、請求項４に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項６】
前記第１の重鎖のＣＨ３が、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、およびＴ３６６Ｗを含む、請求項５に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項７】
前記ＣＬが、カッパである、請求項５に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項８】
前記第２の抗原結合部分が、
ｉｉｉ．ＨＣ−ＣＬ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２の重鎖であって、前記ＣＬが、カッパまたはラムダのいずれかである、第２の重鎖と、
ｉｖ．ＶＬ−ＣＨ１を含む第２の軽鎖と、を含む、請求項４に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項９】
前記第２の重鎖のＣＨ３が、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む、請求項８に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１０】
前記ＣＬが、ラムダである、請求項８に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１１】
前記ＣＬが、カッパである、請求項８に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１２】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｅ）抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含む第１の抗原結合部分と、
ｆ）第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ（ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；配列番号１６３４）を含む、第２の重鎖可変領域、および
ｉｖ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ（ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ；配列番号１６３９）を含む第２の軽鎖可変領域を含む、第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１３】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｇ）抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含む第１の抗原結合部分と、
ｈ）第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．ＣＰＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
【化１】
2021525087.tif 000215
、を含む第２の重鎖可変領域、および
ｉｖ．ＣＰＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
【化２】
2021525087.tif 000216
を含む第２の軽鎖可変領域、を含む、第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１４】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１５３９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１５４４）を含む、第１の軽鎖を含む抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｄ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含む第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１５】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号３１７９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号３１８０）を含む、第１の軽鎖を含む抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｄ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含む第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１６】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１５３９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１５４４）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ（ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；配列番号１６３４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ（ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ；配列番号１６３９）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１７】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号３１７９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号３１８０）を含む、第１の軽鎖を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ（ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；配列番号１６３４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ（ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ；配列番号１６３９）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１８】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１５３９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１５４４）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＨＣ（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１６６４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１６６８）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項１９】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号３１７９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号３１８０）を含む、第１の軽鎖を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＨＣ（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１６６８）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項２０】
前記抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が、ヒト化抗体である、請求項１〜１９および３７〜３８のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含む、組成物。
【請求項２２】
核酸組成物であって、
ｅ）請求項１〜２０のいずれか一項に記載の第１の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸と、
ｆ）請求項１〜２０のいずれか一項に記載の第１の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸と、
ｇ）請求項１〜２０のいずれか一項に記載の第２の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第３の核酸と、
ｈ）請求項１〜２０のいずれか一項に記載の第２の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第４の核酸と、を含む、核酸組成物。
【請求項２３】
発現ベクター組成物であって、
ｅ）請求項２２に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｆ）請求項２２に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｇ）請求項２２に記載の第３の核酸を含む第３の発現ベクターと、
ｈ）請求項２２に記載の第４の核酸を含む第４の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。
【請求項２４】
発現ベクター組成物であって、
ｃ）請求項２２に記載の第１の核酸および第２の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｄ）請求項２２に記載の第３の核酸および第４の核酸を含む第２の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。
【請求項２５】
請求項２３または請求項２４に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
【請求項２６】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を作製する方法であって、
ｃ）請求項２５に記載の宿主細胞を、前記抗体が発現される条件下で培養することと、
ｄ）前記抗体を回収することと、を含む、方法。
【請求項２７】
患者のＴ細胞を活性化する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記Ｔ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項２８】
患者の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記ＣＴＬのサブセットが活性化される、方法。
【請求項２９】
患者のＮＫ細胞を活性化する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記ＮＫ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項３０】
患者のγδＴ細胞を活性化する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記γδＴ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項３１】
患者のＴｈ１細胞を活性化する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記Ｔｈ１細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項３２】
患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるか、または排除する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
患者におけるインターフェロン−γ産生および／または炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項３４】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項１〜２０のいずれかに記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
前記がんが、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記がんが、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第１の重鎖可変ドメイン、および
ｉｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第１の軽鎖可変ドメインを含む、抗ＰＶＲＩＧ抗原結合部分を含み、
前記抗ＰＶＲＩＧ抗原結合部分が、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１９，ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４９、ＣＰＡ．７．０５０、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９、ＣＨＡ．７．５５０、ＣＨＡ．７．５１８．１；ＣＨＡ７．５３８．１．２およびＣＨＡ．７．５１８．４からなる群から選択される、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含み、前記抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインが、図２４および４１、特に、図２４Ａ〜２４ＥＥに提供される抗体に由来する、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項３８】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ｃ）第１の抗原結合部分であって、抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含み、前記抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインが、図３５に提供される抗体に由来する、第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗原結合部分であって、
ｉｉｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第２の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｖ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第２の軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含み、
前記抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインが、ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０３、ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．７、ＣＨＡ．９．５４１．８、およびＣＨＡ．９．５４７．１８からなる群から選択される、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体。
【請求項３９】
抗ＰＶＲＩＧ抗体であって、
ｉ）以下の配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）由来の前記ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む重鎖または重鎖可変ドメインと、
ｉｉ）以下の配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）由来の前記ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３を含む軽鎖または軽鎖可変ドメインと、を含む、抗ＰＶＲＩＧ抗体。
【請求項４０】
抗ＴＩＧＩＴ抗体であって、
ｉ）以下の配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）由来の前記ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む重鎖または重鎖可変ドメインと、
ｉｉ）以下の配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）由来の前記ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３を含む軽鎖または軽鎖可変ドメインと、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体。
【請求項４１】
ｃ）ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化３】
2021525087.tif 000217
を含む重鎖と、
ｄ）ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ；配列番号３３６２）を含む軽鎖と、を含む、請求項３８に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体。
【請求項４２】
請求項３８または請求項４０に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体を含む組成物。
【請求項４３】
核酸組成物であって、
ｉ）請求項３８または請求項４０に記載の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸と、
ｉｉ）請求項３８または請求項４０に記載の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸と、を含む、核酸組成物。
【請求項４４】
請求項３９に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む組成物。
【請求項４５】
核酸組成物であって、
ｉ）請求項３８に記載の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸と、
ｉｉ）請求項３８に記載の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸と、を含む、核酸組成物。
【請求項４６】
発現ベクター組成物であって、
ｉ）請求項４１に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｉｉ）請求項４１に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。
【請求項４７】
発現ベクターであって、
ｉ）請求項４１に記載の第１の核酸と、
ｉｉ）請求項４１に記載の第２の核酸と、を含む、発現ベクター。
【請求項４８】
発現ベクター組成物であって、
ｉ）請求項４３に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｉｉ）請求項４３に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。
【請求項４９】
発現ベクターであって、
ｉ）請求項４３に記載の第１の核酸と、
ｉｉ）請求項４３に記載の第２の核酸と、を含む、発現ベクター。
【請求項５０】
請求項４４〜４７のいずれか一項に記載の発現ベクターまたはベクター組成物を含む、宿主細胞。
【請求項５１】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ抗体を作製する方法であって、
ｉ）請求項４８に記載の宿主細胞を、前記抗体が発現される条件下で培養することと、
ｉｉ）前記抗体を回収することと、を含む、方法。
【請求項５２】
患者のＴ細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記Ｔ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項５３】
患者の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記ＣＴＬのサブセットが活性化される、方法。
【請求項５４】
患者のＮＫ細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記ＮＫ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項５５】
患者のγδＴ細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記γδＴ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項５６】
患者のＴｈ１細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記Ｔｈ１細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項５７】
患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるか、または排除する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項５８】
患者におけるインターフェロン−γ産生および／または炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項５９】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項６０】
前記がんが、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記がんが、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含む併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項６３】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３８に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体と抗ＰＤ−１抗体とを含む併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項６４】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ペンブロリズマブおよびニボルマブからなる群から選択される抗体である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３９に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ−１抗体とを含む併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項６６】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ペンブロリズマブおよびニボルマブからなる群から選択される抗体である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３９に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と請求項３８に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体とを含む併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項６８】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３９に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と、抗ＰＶＲＩＧ抗体と、抗ＰＤ−１抗体とを含む三重併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項６９】
患者におけるがんを治療する方法であって、抗ＴＩＧＩＴと、請求項３８に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体と、抗ＰＤ−１抗体とを含む三重併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項７０】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３９に記載の抗ＴＩＧＩＴと、請求項３８に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体と、抗ＰＤ−１抗体とを含む三重併用療法を施すことを含む、方法。
【請求項７１】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ペンブロリズマブおよびニボルマブからなる群から選択される抗体である、請求項６４〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
患者のＴ細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記Ｔ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項７３】
患者の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記ＣＴＬのサブセットが活性化される、方法。
【請求項７４】
患者のγδＴ細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記γδＴ細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項７５】
患者のＴｈ１細胞を活性化する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含み、前記患者の前記Ｔｈ１細胞のサブセットが活性化される、方法。
【請求項７６】
患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるか、または排除する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項７７】
患者におけるインターフェロン−γ産生および／または炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項７８】
患者におけるがんを治療する方法であって、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項７９】
前記がんが、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記がんが、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月１日に出願された米国仮特許出願第６２／６７９，７０３号および２０１８年１１月３０日に出願された第６２／７７３，５８６号に対する優先権を主張し、これらは全て参照によりその全体が組み込まれる。
【０００２】
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。そのＡＳＣＩＩコピーは、２０１９年５月２９日に作成され、１１４３８６−５０１１−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で２，６３１，２４４バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
ナイーブＴ細胞は、生産的に活性化されるには抗原提示細胞（ＡＰＣ）から２つの独立したシグナルを受け取らなければならない。第１のシグナル１は、抗原特異的であり、Ｔ細胞抗原受容体がＡＰＣ上の適切な抗原−ＭＨＣ複合体に出会うと生じる。免疫応答の運命は、そのＡＰＣで発現されるリガンドに結合するＴ細胞共刺激分子を介して送達される、第２の抗原非依存性シグナル（シグナル２）によって決定付けられる。この第２のシグナルは、刺激性（正の共刺激）または阻害性（負の共刺激または共阻害）のいずれかであり得る。共刺激シグナルの不在下、または共阻害シグナルの存在下では、Ｔ細胞活性化は損なわれるかまたは中断され、これが抗原特異的不応答性（Ｔ細胞アネルギーとして知られる）状態につながり得るか、またはＴ細胞アポトーシス死をもたらし得る。
【０００４】
共刺激分子対は通常、ＡＰＣ上で発現されるリガンドおよびＴ細胞上で発現されるそれらの同種の受容体からなる。共刺激分子のリガンド／受容体対の原型は、Ｂ７／ＣＤ２８およびＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌである。Ｂ７ファミリーは、免疫応答への刺激性または阻害性入力を提供し得る、構造的に関連する細胞表面タンパク質リガンドからなる。Ｂ７ファミリーのメンバーは、構造的に関連しており、このうち細胞外ドメインが、少なくとも１つの可変または定常免疫グロブリンドメインを含有する。
【０００５】
正および負の共刺激シグナルは両方とも、細胞媒介性免疫応答の調節において必要不可欠な役割を果たし、これらのシグナルを媒介する分子は、免疫調節の有効な標的であることが判明している。この知識に基づいて、共刺激分子を標的とすることを伴ういくつかの治療的アプローチが開発されてきており、がんの予防および治療において、がん患者における免疫応答をオンにすること、または免疫応答がオフになるのを予防することによって有用であること、また、自己免疫疾患および炎症性疾患の予防および治療、ならびに同種移植拒絶に対しても、それぞれ、これらの病的状態を有する対象における無制御な免疫応答をオフにすることによって、または負の共刺激（または共阻害）による「オフシグナル」の誘導によって、有用であることが示される。
【０００６】
Ｂ７リガンドによって送達されるシグナルの操作は、自己免疫疾患、炎症性疾患、および移植片拒絶の治療において有望性を示してきた。治療的戦略には、共刺激対のリガンドもしくは受容体に対するモノクローナル抗体を用いた、またはその適切なリガンドに結合しそれを遮断し得る共刺激受容体から構成される可溶性融合タンパク質を用いた、共刺激の遮断が含まれる。別のアプローチは、阻害リガンドの可溶性融合タンパク質を用いた共阻害の誘導である。これらのアプローチは、共刺激（これは細胞生存遺伝子を誘導する）の不在下でＴ細胞がアポトーシス誘導の影響を高度に受けやすくなることを恐らくは理由とする、自己反応性または同種反応性Ｔ細胞（これは、それぞれ自己免疫疾患または移植における病的過程に関与する）の最終的な除去に少なくとも部分的に依存する。故に、病原体から防御する免疫系の能力を損なうことなく共刺激シグナルを調節することが可能である新規の薬剤が、かかる病的状態の治療および予防に大いに有利である。
【０００７】
共刺激経路は、腫瘍発達において重要な役割を果たす。興味深いことに、腫瘍は、Ｂ７−ＣＤ２８およびＴＮＦファミリーにおける共刺激因子の阻害を通してＴ細胞活性化を妨げることによって、ならびに調節Ｔ細胞を誘引することで抗腫瘍Ｔ細胞応答を阻害することによって、免疫による破壊を回避することが示されてきた（Ｗａｎｇ（２００６），“Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ４＋Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ”，Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｂｉｏｌ．１６：７３−７９、Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，ｅｔ  ａｌ．（２００５），“Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ”，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−４８；Ｗａｔｔｓ（２００５），“ＴＮＦ／ＴＮＦＲ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒｓ  ｉｎ  Ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ”，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２３−６８；Ｓａｄｕｍ，ｅｔ  ａｌ．、（２００７）“Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ  Ｒｅｖｅａｌ  Ｕｎｉｑｕｅ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｅｓｃａｐｅ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ”、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．１３（１３）：４０１６−４０２５を参照）。かかる腫瘍で発現される共刺激分子は、魅力的ながんバイオマーカーとなってきており、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）としての役目を果たし得る。さらに、共刺激経路が、Ｔ細胞依存性免疫応答を腫瘍転移内での開始およびエフェクター機能の両方のレベルで減弱する免疫チェックポイントとして特定されてきた。
【０００８】
過去１０年間にわたって、種々の共刺激タンパク質に対する作用物質および／または拮抗物質が、自己免疫疾患、移植片拒絶、アレルギー、およびがんの治療のために開発されてきた。例えば、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ａｂａｔａｃｅｐｔ、Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））はＲＡの治療のために、突然変異ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｂｅｌａｔａｃｅｐｔ、Ｎｕｌｏｊｉｘ（登録商標））は急性腎臓移植拒絶の予防のために承認され、抗ＣＴＬＡ４抗体（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））においては、黒色腫の治療のために最近承認されている。Ｍｅｒｃｋ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））およびＢＭＳ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））の抗ＰＤ−１抗体等の、他の共刺激調節因子が承認されてきており、がん治療のために承認されてきており、またウイルス感染に対しても試験段階にある。
【０００９】
しかしながら、抗チェックポイント阻害剤抗体を用いた単剤療法が有望となってきた一方で、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を調べるいくつかの研究（Ａｈｍａｄｚａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｌｏｏｄ  １１４：１５３７（２００９）、Ｍａｔｓｕｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ  １０７（１７）：７８７５−７８８０（２０１０）、Ｆｏｕｒｃａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７２（４）：８８７−８９６（２０１２）およびＧｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２４（５）：２２４６（２０１４））は、ＴＩＬが、一般的に複数のチェックポイント受容体を発現することを示している。さらに、複数のチェックポイントを発現するＴＩＬが、実際には腫瘍反応性が最も高い可能性がある。対照的に、末梢における非腫瘍反応性Ｔ細胞は、単一のチェックポイントを発現する可能性がより高い。単一特異性の完全長抗体によるチェックポイントの遮断は、自己免疫毒性に寄与すると想定される自己抗原反応性の単一発現Ｔ細胞と比較して、腫瘍反応性ＴＩＬの脱抑制に関して非差別的である可能性が高い。
【００１０】
関心対象の１つはＰＶＲＩＧである。ＰＶＲＩＧは、ポリオウイルス受容体関連免疫グロブリンドメイン含有タンパク質（Ｑ６ＤＫＩ７またはＣ７ｏｒｆ１５）とも称され、シグナルペプチド（アミノ酸１〜４０に及ぶ）、細胞外ドメイン（アミノ酸４１〜１７１に及ぶ）、膜貫通ドメイン（アミノ酸１７２〜１９０に及ぶ）および細胞質ドメイン（アミノ酸１９１〜３２６に及ぶ）を含む、３２６アミノ酸長の膜貫通ドメインタンパク質である。ＰＶＲＩＧは、ＰＶＲＩＧの結合パートナーである、ポリオウイルス受容体関連２タンパク質（ＰＶＬＲ２、別名ネクチン−２、ＣＤ１１２またはヘルペスウイルス侵入メディエーターＢ、（ＨＶＥＢ））と結合する。
【００１１】
別の関心対象はＴＩＧＩＴである。ＴＩＧＩＴは、エフェクター＆制御性（Ｔｒｅｇ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞上で高度に発現される共阻害受容体である。ＴＩＧＩＴは、（１）直接シグナル伝達、（２）リガンドシグナル伝達の誘導、ならびに（３）共刺激受容体ＣＤ２２６（別名ＤＮＡＭ−１）との競合およびそれによるシグナル伝達の妨害によって免疫応答を減弱させることが示されている。ＴＩＧＩＴシグナル伝達は、ＮＫ細胞において最もよく研究されており、その同族リガンドであるポリオウイルス受容体（ＰＶＲ、別名ＣＤ１５５）との結合がその細胞質ＩＴＩＭドメインを介してＮＫ細胞の細胞傷害性を直接抑制することが示されている。ＴＩＧＩＴ遺伝子のノックアウトまたはＴＩＧＩＴ／ＰＶＲ相互作用の抗体遮断は、生体外でのＮＫ細胞殺傷を増強すると共に、インビトロでの自己免疫疾患を悪化させることが示されている。Ｔ細胞およびＮＫ細胞に対するその直接的な影響に加えて、ＴＩＧＩＴは、樹状細胞または腫瘍細胞におけるＰＶＲ媒介性シグナル伝達を誘導し得、これがＩＬ１０等の抗炎症性サイトカインの産生の増加につながる。Ｔ細胞において、ＴＩＧＩＴはまた、共刺激受容体ＣＤ２２６のホモ二量体化を妨害することによって、およびＰＶＲへの結合についてそれと競合することによって、リンパ球応答を阻害し得る。
【００１２】
ＴＩＧＩＴは、様々な種類の腫瘍に浸潤する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびＴｒｅｇを含むリンパ球で高度に発現される。ＰＶＲはまた、腫瘍中で広く発現され、これは、ＴＩＧＩＴ−ＰＶＲシグナル伝達軸ががんの主要な免疫逃避機構であり得ることを示唆している。注目すべきことに、ＴＩＧＩＴ発現は、別の重要な共阻害性受容体ＰＤ１の発現と密接に相関している。ＴＩＧＩＴおよびＰＤ１は、多数のヒトおよびマウスの腫瘍のＴＩＬ上で共発現される。ＴＩＧＩＴおよびＣＴＬＡ４とは異なり、Ｔ細胞応答のＰＤ１阻害は、共刺激受容体とのリガンド結合の競合を伴わない。
【００１３】
したがって、両方の経路を標的とすることが可能なＰＶＲＩＧ／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、単一抗体療法の魅力的な標的である。かかる抗体は、複数のチェックポイント受容体の標的化を可能にし、がんの治療において治療上の重要性を提供する。本明細書に記載のように使用するための抗ＰＶＲＩＧおよび抗ＴＩＧＩＴ抗体も提供される。
【発明の概要】
【００１４】
したがって、本発明は、がんの治療のために、Ｔ細胞を活性化する際の使用のための、ヒトＰＶＲＩＧに一価結合し、ＴＩＧＩＴに一価結合する、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療のために、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を活性化する際の使用のための、ヒトＰＶＲＩＧに一価結合し、ＴＩＧＩＴに一価結合する、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第１の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第１の軽鎖可変ドメインを含み、
抗ＰＶＲＩＧ抗体は、ＣＨＡ．７．５１８．４、ＣＨＡ．７．５１８．１、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２４  ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１、ＣＨＡ．７．５３８＿２、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９，ＣＨＡ．７．５５０、ＣＨＡ７．５３８．１．２、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１９，ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４９、ＣＰＡ．７．０５０、およびＣＨＡ．７．５１８からなる群から選択される、第１の抗原結合部分と、
ａ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含む第２の抗原結合部分と、を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含む第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第２の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第２の軽鎖可変ドメインを含み、
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＨＡ．９．５４７．１８、ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０３、ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．７、およびＣＨＡ．９．５４１．８からなる群から選択される、第２の抗原結合部分と、を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第１の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第１の軽鎖可変ドメインを含み、
抗ＰＶＲＩＧ抗体は、ＣＨＡ．７．５１８．４、ＣＨＡ．７．５１８．１、ヒト化ＣＨＡ．７．５１８、ヒト化ＣＨＡ．７．５２４、ヒト化ＣＨＡ．７．５３０、ヒト化ＣＨＡ．７．５３８＿１、ヒト化ＣＨＡ．７．５３８＿２、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９，ＣＨＡ．７．５５０、ＣＨＡ７．５３８．１．２、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１９，ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４９、およびＣＰＡ．７．０５０ＣＨＡ．７．５１８からなる群から選択される、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第２の重鎖可変ドメイン、ならびに
ｉｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第２の軽鎖可変ドメインを含み、
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＨＡ．９．５４７．１８、ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０３、ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．７、およびＣＨＡ．９．５４１．８からなる群から選択される、第２の抗原結合部分と、を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、第１の抗原結合部分は、
ｉ．ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１の重鎖と、
ｉｉ．ＶＬ−ＣＬを含む第１の軽鎖であって、ＣＬが、カッパ抗体またはラムダ抗体のいずれかの定常ドメインである、第１の軽鎖と、を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、第１の重鎖ＣＨ３は、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、およびＴ３６６Ｗを含む。
【００２１】
いくつかの態様では、ＣＬは、カッパである。
【００２２】
いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、
ｉ．ＨＣ−ＣＬ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２の重鎖であって、ＣＬが、カッパまたはラムダのいずれかである、第２の重鎖と、
ｉｉ．ＶＬ−ＣＨ１を含む第２の軽鎖と、を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、第２の重鎖ＣＨ３は、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む。
【００２４】
いくつかの態様では、ＣＬは、ラムダである。
【００２５】
いくつかの態様では、ＣＬは、カッパである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含む第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ（ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；配列番号１６３４）を含む、第２の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ（ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ；配列番号１６３９）を含む第２の軽鎖可変領域を含む、第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分と、を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ｃ）抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含む第１の抗原結合部分と、
ｄ）第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＰＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
【化１】
2021525087.tif 000003
を含む第２の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＰＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
【化２】
2021525087.tif 000004
を含む第２の軽鎖可変領域を含む、第２の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合部分と、を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１５３９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１５４４）を含む、第１の軽鎖を含む抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｂ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含む第２の抗原結合部分と、を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号３１７９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号３１８０）を含む、第１の軽鎖を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｂ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含む第２の抗原結合部分と、を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１５３９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１５４４）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ（ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；配列番号１６３４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ（ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ；配列番号１６３９）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号３１７９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号３１８０）を含む、第１の軽鎖を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ（ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；配列番号１６３４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ（ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ；配列番号１６３９）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１５３９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１５４４）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＨＣ（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号１６６４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１６６８）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号３１７９）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号３１８０）を含む、第１の軽鎖を含む、抗ＰＶＲＩＧ結合ドーミングを含む、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＨＣ（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）を含む、第１の重鎖可変領域、および
ｉｉ．ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；配列番号１６６８）を含む、第１の軽鎖可変領域を含む、抗ＴＩＧＩＴ結合ドーミングを含む、第２の抗原結合部分と、を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ヒト化抗体である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含む組成物を提供する。
【００３６】
核酸組成物であって、
ａ）本明細書に記載の第１の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸と、
ｂ）本明細書に記載の第１の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸と、
ｃ）本明細書に記載の第２の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第３の核酸と、
ｄ）本明細書に記載の第２の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第４の核酸と、を含む、核酸組成物。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本発明は、発現ベクター組成物であって、
ａ）本明細書に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）本明細書に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｃ）本明細書に記載の第３の核酸を含む第３の発現ベクターと、
ｄ）本明細書に記載の第４の核酸を含む第４の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物を提供する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、本発明は、発現ベクター組成物であって、
ａ）本明細書に記載の第１の核酸および第２の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）本明細書に記載の第３の核酸および第４の核酸を含む第２の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物を提供する。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の発現ベクター組成物を含む宿主細胞を提供する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を作製する方法であって、
ａ）本明細書に記載の宿主細胞を、抗体が発現される条件下で培養することと、
ｂ）抗体を回収することと、を含む、方法を提供する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＴ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含み、患者のＴ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含み、患者のＣＴＬのサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００４３】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＮＫ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含み、患者のＮＫ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のγδＴ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含み、患者のγδＴ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００４５】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＴｈ１細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含み、患者のＴｈ１細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるか、または排除する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるインターフェロン−γ産生および／または炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００４９】
いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ａ）第１の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第１の重鎖可変ドメイン、および
ｉｉ．抗ＰＶＲＩＧ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第１の軽鎖可変ドメインを含む、抗ＰＶＲＩＧ抗原結合部分を含み、
抗ＰＶＲＩＧ抗原結合部分が、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１９，ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４９、ＣＰＡ．７．０５０、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９、ＣＨＡ．７．５５０、ＣＨＡ．７．５１８．１；ＣＨＡ７．５３８．１．２およびＣＨＡ．７．５１８．４からなる群から選択される、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含み、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインが、図２４および４１、特に、図２４Ａ〜２４ＥＥに提供される抗体に由来する、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体であって、
ａ）第１の抗原結合部分であって、抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインを含み、抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインが、図３５に提供される抗体に由来する、第１の抗原結合部分と、
ｂ）第２の抗原結合部分であって、
ｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む、第２の重鎖可変ドメイン、および
ｉｉ．抗ＴＩＧＩＴ抗体由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む、第２の軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインを含み、
抗ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインが、ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０３、ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．７、ＣＨＡ．９．５４１．８、およびＣＨＡ．９．５４７．１８からなる群から選択される、第２の抗原結合部分と、を含む、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ抗体であって、
ｉ）以下の配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む重鎖または重鎖可変ドメインと、
ｉｉ）以下の配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３を含む軽鎖または軽鎖可変ドメインと、を含む、抗ＰＶＲＩＧ抗体を提供する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＩＧＩＴ抗体であって、
ｉ）以下の配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む重鎖または重鎖可変ドメインと、
ｉｉ）以下の配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３を含む軽鎖または軽鎖可変ドメインと、を含む、抗ＴＩＧＩＴ抗体を提供する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ抗体は、
ａ）ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化３】
2021525087.tif 000005
を含む重鎖と、
ｂ）ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ；配列番号３３６２）を含む軽鎖と、を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体を含む組成物を提供する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明は、核酸組成物であって、
ｉ）本明細書に記載の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸と、
ｉｉ）本明細書に記載の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸と、を含む、核酸組成物を提供する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む組成物を提供する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本発明は、核酸組成物であって、
ｉ）本明細書に記載の重鎖または重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸と、
ｉｉ）本明細書に記載の軽鎖または軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸と、を含む、核酸組成物を提供する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本発明は、発現ベクター組成物であって、
ｉ）本明細書に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｉｉ）本明細書に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物を提供する。
【００６１】
発現ベクターであって、
ｉ）本明細書に記載の第１の核酸と、
ｉｉ）本明細書に記載の第２の核酸と、を含む、発現ベクター。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本発明は、発現ベクター組成物であって、
ｉ）本明細書に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｉｉ）本明細書に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物を提供する。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本発明は、発現ベクターであって、
ｉ）本明細書に記載の第１の核酸と、
ｉｉ）本明細書に記載の第２の核酸と、を含む、発現ベクターを提供する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の発現ベクターまたはベクター組成物を含む宿主細胞を提供する。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を作製する方法であって、
ｉ）本明細書に記載の宿主細胞を、抗体が発現される条件下で培養することと、
ｉｉ）抗体を回収することと、を含む、方法を提供する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＴ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＴ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＣＴＬのサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００６８】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＮＫ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＮＫ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のγδＴ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のγδＴ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＴｈ１細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＴｈ１細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるか、または排除する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるインターフェロン−γ産生および／または炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【００７６】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含む併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体と抗ＰＤ−１抗体を含む併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００７８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブおよびニボルマブからなる群から選択される抗体である。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ−１抗体を含む併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００８０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブおよびニボルマブからなる群から選択される抗体である。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体を含む併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００８２】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体と、抗ＰＶＲＩＧ抗体と、抗ＰＤ−１抗体とを含む三重併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、抗ＴＩＧＩＴと、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体と、抗ＰＤ−１抗体とを含む三重併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴと、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ抗体と、抗ＰＤ−１抗体とを含む三重併用療法を施すことを含む、方法を提供する。
【００８５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブおよびニボルマブからなる群から選択される抗体である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＴ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＴ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＣＴＬのサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のγδＴ細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のγδＴ細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＴｈ１細胞を活性化する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含み、患者のＴｈ１細胞のサブセットが活性化される、方法を提供する。
【００９０】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるか、または排除する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００９１】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるインターフェロン−γ産生および／または炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴを患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧまたは抗ＴＩＧＩＴ抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【００９４】
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】ヒトＰＶＲＩＧの配列（２つの異なるメチオニン開始点および完全長配列を示す）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれ、ＥＣＤは二重下線が引かれている。ポリオウイルス受容体関連免疫グロブリンドメイン含有タンパク質、Ｑ６ＤＫＩ７またはＣ７ｏｒｆ１５とも称されるＰＶＲＩＧは、図１に示すＲｅｆＳｅｑ受託識別子ＮＰ＿０７６９７５に示されるアミノ酸および核酸配列に関する。
【図２】ＰＶＲＩＧの結合パートナーである、ヒトポリオウイルス受容体関連２タンパク質（ＰＶＬＲ２、別名ネクチン−２、ＣＤ１１２またはヘルペスウイルス侵入メディエーターＢ、（ＨＶＥＢ））の配列を図示する。ＰＶＬＲ２は、ヒト形質膜糖タンパク質である。
【図３Ａ−Ｃ】ＰＶＲＩＧと、その結合相手であるＰＶＲＬ２との相互作用を首尾良く遮断することが決定されたＦａｂのＣＤＲ配列を示す。
【図４Ａ−ＡＡ】ＰＶＲＩＧに結合し、かつＰＶＲＩＧおよびＰＶＬＲ２の結合を遮断する、列挙する本発明のヒトＣＰＡ抗ＰＶＲＩＧ配列についての、可変重および軽ドメイン、完全長重鎖および軽鎖、ならびに可変重および可変軽ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
【図５Ａ−Ｈ】ＰＶＲＩＧに結合するが、ＰＶＲＩＧおよびＰＶＬＲ２の結合を遮断しない、８個の本発明のヒトＣＰＡ抗ＰＶＲＩＧ配列についての、可変重および軽ドメイン、完全長重鎖および軽鎖、ならびに可変重および可変軽ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。
【図６Ａ−Ｇ】ＰＶＲＩＧおよびＰＶＬＲ２の結合を遮断しないものを含む、ＰＶＲＩＧに結合するように生成された全てのＣＰＡ抗ＰＶＲＩＧ抗体配列についてのＣＤＲを示す。
【図７Ａ−ＡＥ】本発明の列挙するＣＨＡ抗体の各々の可変重鎖および軽鎖、ならびにｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３配列、ＣＨＡ．７．５０２、ＣＨＡ．７．５０３、ＣＨＡ．７．５０６、ＣＨＡ．７．５０８、ＣＨＡ．７．５１０、ＣＨＡ．７．５１２、ＣＨＡ．７．５１４、ＣＨＡ．７．５１６、ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２０．１、ＣＨＡ．７．５２０．２、ＣＨＡ．７．５２２、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５２６、ＣＨＡ．７．５２７、ＣＨＡ．７．５２８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３４、ＣＨＡ．７．５３５、ＣＨＡ．７．５３７、ＣＨＡ．７．５３８．１、ＣＨＡ．７．５３８．２、ＣＨＡ．７．５４３、ＣＨＡ．７．５４４、ＣＨＡ．７．５４５、ＣＨＡ．７．５４６、ＣＨＡ．７．５４７、ＣＨＡ．７．５４８、ＣＨＡ．７．５４９，ＣＨＡ．７．５５０、およびＣＨＡ．７．５１８．４（これらは、マウス配列からの可変重および軽配列（ハイブリドーマ由来）を示す。
【図８Ａ−Ｄ】列挙する本発明のＣＰＡ抗体の各々のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３配列を示し、ＣＰＡ．７．００１〜ＣＰＡ．７．０５０はヒト配列である（ファージディスプレイ由来）。
【図９Ａ−Ｃ】ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の配列を示す。
【図１０】いくつかのヒトＰＶＲＩＧ  ＥＣＤ断片を示す。
【図１１Ａ−Ｉ】５つのＣＨＡ抗体のヒト化配列の照合を示す。
【図１２Ａ−Ｅ】５つのＣＨＡ抗体のヒト化配列の照合を示す。
【図１３】図１１Ａ〜１１Ｉおよび図１２Ａ〜１２Ｅのヒト化ＶＨおよびＶＬ  ＣＨＡ抗体を組み合わせるためのスキームを示す。「ｃｈｉｍＶＨ」および「ｃｈｉｍＶＬ」は、ヒトＩｇＧ定常ドメインに結合したマウス可変重および軽配列である。
【図１４Ａ−ＢＸ】本発明で使用されるいくつかのＰＶＲＩＧ配列および他の配列を示す。
【図１５Ａ−Ｂ】列挙される本発明のＣＨＡ抗体の各々の可変重鎖および軽鎖、ならびにｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３配列、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＨＡ．７．５３８．１．２．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）を示す。
【図１６Ａ−Ｅ】ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５２４、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１およびＣＨＡ．７．５３８＿２の各々についての４つのヒト化配列を示す。全てのヒト化抗体が、Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）置換を含む。ＣＨＡ．７．５３８＿２の軽鎖はＣＨＡ．７．５３８＿１のものと同じであることに留意されたい。各々の「Ｈ１」は、ヒトフレームワークには変化がない「ＣＤＲスワップ」である。続くフレームワークは、より大きい太字で示すフレームワーク変化を改変する。ＣＤＲ配列は太字で記されている。ＣＤＲ定義は、ウェブサイトｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／からのＡｂＭである。ＩＭＧＴ（登録商標）、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）情報系ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ（設立者およびディレクター：Ｍａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  Ｌｅｆｒａｎｃ、Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ）からのヒト生殖細胞系列および接合配列。残基付番は、順次（ｓｅｑ）で示すか、またはウェブサイトｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／からのＣｈｏｔｈｉａ（ＡｂＭ）に従う。「ｂ」は埋まった側鎖を記し、「ｐ」は部分的に埋まっていることを記し、「ｉ」はＶＨドメインとＶＬドメインとの間の界面にある側鎖を記す。ヒト生殖細胞系列とマウス生殖細胞系列との間の配列差異はアスタリスク（＊）で記す。フレームワークにおける可能性のある追加の変異は、配列の下に記す。ＣＤＲ配列における可能性のある変化は、図に記すように、各ＣＤＲ配列の下に記す（＃脱アミド化置換：Ｑ／Ｓ／Ａ、これらはアスパラギン（Ｎ）脱アミド化を防止し得る。＠トリプトファン酸化置換：Ｙ／Ｆ／Ｈ、これらはトリプトファン酸化を防止し得る。＠メチオニン酸化置換：Ｌ／Ｆ／Ａ）。
【図１７Ａ−Ｃ】３つのＣＨＡ抗体：ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５３８．１、およびＣＨＡ．７．５３８．２のヒト化配列の照合を示す。
【図１８】ヒト化ＶＨおよびＶＬ  ＣＨＡ抗体を組み合わせるためのスキームを示す。「ｃｈｉｍＶＨ」および「ｃｈｉｍＶＬ」は、ヒトＩｇＧ定常ドメインに結合したマウス可変重および軽配列である。
【図１９】ＰＶＲＩＧオルソログの配列アラインメント。ヒト、カニクイザル、マーモセット、およびアカゲザルＰＶＲＩＧ細胞外ドメインのアラインメントした配列。ヒトとカニクイザルとの間の差異は黄色で強調表示される。
【図２０Ａ−Ｄ】ＡＢ−４０７（ＢＯＪ−５Ｇ４−Ｆ４）についての可変重鎖（それぞれＡおよびＢ）のアミノ酸配列および核酸配列と、可変軽鎖（それぞれＣおよびＤ）のアミノ酸配列および核酸配列を示す。
【図２１Ａ−Ｂ】ヒトＩｇＧ１（いくつかの有用なアミノ酸置換を有する）、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、本発明において特に有用であるヒンジバリアントを有するＩｇＧ４の定常ドメイン、ならびにカッパおよびラムダ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図２２】ヒトおよびカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）（カニクイザル（ｃｙｎｏ）と称される）ＴＩＧＩＴ  ＥＣＤの配列ならびにヒトＰＶＲ  ＥＣＤタンパク質の配列を示す。
【図２３Ａ−Ｄ】抗ＴＩＧＩＴ抗体の配列を示す。別段の記載がない限り、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ付番を利用する（配列表の抗体を含む。
【図２４Ａ−ＳＳＳＳ】本発明の二重特異性抗体に使用するための多数の抗ＴＩＧＩＴ抗体の配列を示す。
【図２５】ＣｒｏｓｓＭａｂ技術（ＭＡｂｓ．２０１６年８月−９月；８（６）：１０１０−１０２０）およびホール内のノブ技術（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９８  Ｊｕｌ；１６（７）：６７７−８１）を使用した例示的な二重特異性抗体の実施形態の概略図を示す。
【図２６】ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６二重特異性抗体の各アームの重鎖および軽鎖の配列を提供する。可変ドメインは、イタリック体で示されている。ＣＤＲは、赤色で示される。Ｆｃドメインの変異は、太字および下線が付けられている。
【図２７】（Ａ）２つの独立した表面上で捕捉されたＴＩＧＩＴ−ＰＶＲＩＧ二重特異性抗体と結合するヒトＴＩＧＩＴ、および（Ｂ）２つの独立した表面上で捕捉されたＴＩＧＩＴ−ＰＶＲＩＧ二重特異性抗体と結合するヒトＰＶＲＩＧのＳＰＲセンサーグラム（黒色の線）を提供する。（Ａ）および（Ｂ）両方にある赤い線は、単純な１：１動態結合モデルに対するセンサーグラムのグローバルフィットである。ＴＩＧＩＴの濃度範囲は、３６２ｐＭ〜８８ｎＭであり、ＰＶＲＩＧの濃度範囲は、４６０ｐＭ〜１１２ｎＭであった。十分な解離信号減衰データは、ＴＩＧＩＴ抗原を用いた場合には１５分後に存在しなかったため、ｋｄは、任意に、グローバルフィットのために１ｅ−５ｓｅｃ−１で一定に保持された。ＴＩＧＩＴ二重特異性相互作用のためにｋｄを一定に保持する場合、ｋａは、３．９ｅ６Ｍ−１ｓｅｃ−１であると推定され、ｋｄ／ｋａ比率はＫＤ＝２．６ｐＭと計算された。ＰＶＲＩＧ二重特異性抗体相互作用の結合定数は、ｋａ＝１．３ｅ６Ｍ−１ｓｅｃ−１、ｋｄ＝２．４ｅ−４ｓｅｃ−１、ＫＤ＝１８７ｐＭであった。
【図２８】抗ＴＩＧＩＴ−ＰＶＲＩＧ二重特異性抗体に対するヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＶＲＩＧの同時結合を示すＳＰＲ「サンドイッチ」アッセイを示す。二重特異性抗体は、まず、（Ａ）バイオセンサーチップに共有結合で固定化されたヒトＴＩＧＩＴに注入される。次に、ヒトＰＶＲＩＧを、（Ｂ）ＴＩＧＩＴが結合した二重特異性抗体に注入する。
【図２９】ｐｐ６５特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の特徴を示す。Ａ）ＰＢＭＣを、ｐｐ６５（４９５〜５０３）ペプチド、ＩＬ−２、およびＩＬ−７と共に１１日間かけて活性化した。フローサイトメトリーを実施して、ｐｐ６５反応性Ｔ細胞の割合およびＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴ、およびＰＤ−１の発現を評価した。１人のドナーからの代表的なゲーティング階層および２人のドナーからの代表的な四量体染色が示されている。左から右へ、リンパ球は、前方散乱（ＦＳＣ）／側方散乱（ＳＳＣ）（左上）、および生きているＣＤ３＋ＣＤ８＋陽性細胞によってゲートされた。ＣＤ３＋ＣＤ８＋陽性集合体内で、ＨＬＡ−Ａ２０１  ｐｐ６５四量体に結合する細胞の割合が決定され、２人のドナーからのデータが示されている。Ｂ．ｐｐ６５反応性Ｔ細胞上でのＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴ、およびＰＤ−１の発現を、フローサイトメトリーによって評価した。右上隅の数字は、アイソタイプ対照と比較した目的の標的のＭＦＩｒを示す。
【図３０】Ｍｅｌ−６２４  ｐｐ６５がん細胞株との共培養におけるＣＭＶ  ｐｐ６５反応性ＣＤ８  Ｔ細胞に対する阻害性受容体遮断の効果を示す。２人のドナーであるドナー４（Ａ）およびドナー７２（Ｂ）のＣＭＶ  ｐｐ６５反応性Ｔ細胞を、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６いずれか単独、もしくは組み合わせ、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂ、またはヒトＩｇＧアイソタイプ対照の存在する状態で、ｐｐ６５を異所的に発現する修飾Ｍｅｌ−６２４腫瘍細胞株と共に１８時間共培養した。馴化された培地をサイトカイン分泌についてアッセイした。棒グラフの上の数字は、アイソタイプ対照と比較した変化率％を示す。棒グラフは、ＩＦＮ−γ（Ｎ＝２）の平均±標準偏差を示す。
【図３１】Ｍｅｌ−６２４  ｐｐ６５がん細胞株との共培養におけるＣＭＶ  ｐｐ６５反応性ＣＤ８  Ｔ細胞に対する阻害性受容体遮断の用量依存性滴定を示す。２人のドナーであるドナー４（Ａ）およびドナー７２（Ｂ）のＣＭＶ  ｐｐ６５反応性Ｔ細胞を、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６いずれか単独、もしくは組み合わせ、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂ、またはヒトＩｇＧアイソタイプ対照の存在する状態で、ｐｐ６５を異所的に発現する修飾Ｍｅｌ−６２４腫瘍細胞株と共に１８時間共培養した。各抗体について、２０μｇ／ｍｌで開始する１０点、４倍希釈系列を使用した。馴化された培地をサイトカイン分泌についてアッセイした。ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６を用い、二重特異性抗体治療について、併用遮断のためのＥＣ５０（ｎＭ）値を報告する。代表的なデータ（Ｎ＝２）。
【図３２】本発明の二重特異性抗体に適用可能な二重特異性抗体生成において使用するためのＦｃヘテロ二量体化戦略の概要を提供する。例えば、Ｇｏｄａｒ，ｅｔ．ａｌ．、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、２８（３）：２５１−２７６（２０１８）を参照。）
【図３３】本発明の二重特異性抗体に適用可能な非対称二重特異性抗体フォーマットの概要を提供する。（ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｔｈｅ  ｍａｋｉｎｇ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭＡｂｓ、９（２）：１８２−２１２（２０１７）を参照。）
【図３４】本発明の二重特異性抗体に適用可能な対称二重特異性抗体フォーマットの概要を提供する。（ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｔｈｅ  ｍａｋｉｎｇ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭＡｂｓ、９（２）：１８２−２１２（２０１７）を参照。）
【図３５】本発明の二重特異性抗体に使用するための追加の抗ＰＶＲＩＧ抗体を提供する。
【図３６】捕捉されたＰＶＲＩｇ二重特異性抗体および単一特異性抗体と結合するヒトＰＶＲＩｇのＳＰＲセンサーグラム（黒色の線）を提供する。両方にある赤い線は、単純な１：１動態結合モデルに対するセンサーグラムのグローバルフィットである。ＰＶＲＩＧの濃度範囲は、４６０ｐＭ〜１１２ｎＭであった。（Ａ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＨＡ．９．５４７．１８−Ｈ４  ＣｒｏｓｓＭａｂ  ノブ、（Ｂ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６−ＣｒｏｓｓＭａｂ  Ｈ４  ノブ、（Ｃ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）−Ｈ４  ノブ、（Ｄ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）−Ｈ４  ノブ、（Ｅ）ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．７．５１８．１  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｆ）ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＰＡ．９．０８６  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｇ）ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．７．５１８．４  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｈ）ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．９．５４７．１８  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｉ）ＣＨＡ．７．５１８．１  Ｈ４、（Ｉ）（Ｊ）Ｓｙｎａｇｉｓ  Ｈ４。結合親和性は、各抗体についてのｋｄ／ｋａ比率（ＫＤ）の計算から推定し、図３８に示されている。
【図３７】捕捉されたＴＩＧＩＴ二重特異性抗体および単一特異性抗体と結合するヒトＴＩＧＩＴのＳＰＲセンサーグラム（黒色の線）を提供する。赤い線は、単純な１：１動態結合モデルに対するセンサーグラムのグローバルフィットである。ＴＩＧＩＴの濃度範囲は、３６２ｐＭ〜８８ｎＭであった。（Ａ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＨＡ．９．５４７．１８−Ｈ４  ＣｒｏｓｓＭａｂ  ノブ、（Ｂ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６−ＣｒｏｓｓＭａｂ  Ｈ４  ノブ、（Ｃ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）−Ｈ４  ノブ、（Ｄ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）−Ｈ４  ノブ、（Ｅ）ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．７．５１８．１  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｆ）ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＰＡ．９．０８６  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｇ）ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．７．５１８．４  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｈ）ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．９．５４７．１８  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｉ）ＣＰＡ．９．０８６  Ｈ４、（Ｊ）Ｓｙｎａｇｉｓ  Ｈ４。結合親和性は、各抗体についてのｋｄ／ｋａ比率（ＫＤ）の計算から推定し、図３９に示されている。
【図３８】ＳＰＲによって決定された二重特異性抗体および単一特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合親和性を提供する。
【図３９】ＳＰＲによって決定された二重特異性抗体および単一特異性抗体のＴＩＧＩＴ結合親和性を提供する。
【図４０】本発明の二重特異性抗体に使用するための追加の抗ＰＶＲＩＧ抗体を提供する。赤いフォントの文字は、アミノ酸置換を示し、（）は、参照ヒトＩｇＧ４アミノ酸配列に対する欠失を示す。下線付きの文字は、ＣＤＲを示す。灰色で強調表示された文字は、Ｆｃドメインを示す。
【図４１】本発明の二重特異性抗体に使用するための追加の抗ＴＩＧＩＴ抗体を提供する。赤いフォントの文字は、アミノ酸置換を示し、（）は、参照ヒトＩｇＧ４アミノ酸配列に対する欠失を示す。下線付きの文字は、ＣＤＲを示す。灰色で強調表示された文字は、Ｆｃドメインを示す。
【図４２】１つの従来の抗体アームと、重鎖および軽鎖の定常ドメインが入れ替わっているものとを有する、例示的なＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体フォーマットの図を提供する。「ホール内のノブ」フォーマットのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｅｕ付番に従って示される。
【図４３】１つの従来の抗体アームと、１つのｓｃＦｖ−Ｆｃ融合アームとを有する、例示的な「ボトルオープナー」二重特異性抗体フォーマットの図を提供する。「ホール内のノブ」フォーマットのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｅｕ付番に従って示される。
【図４４】１つの従来の抗体アームと、１つのｓｃＦｖ−Ｆｃ融合アームとを有する、例示的な「ボトルオープナー」二重特異性抗体フォーマットの図を提供する。「等容性ヘテロ二量体化」フォーマットのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｅｕ付番に従って示される。ＦｃｇＲ結合の低減に寄与する追加の置換が示されている。
【図４５】ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅアフィニティークロマトグラフィー工程およびサイズ排除クロマトグラフィー後のＬＣ−ＭＳによって決定される場合（アフィニティークロマトグラフィーから単量体が９５％未満である場合）、抗ＰＶＲＩＧ−ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の発現および精製、単量体含有量および正しく組織化された二重特異性抗体％に関するデータを提供する。
【図４６】３人の異なるＴ細胞ドナーでスクリーニングし、治療あたり１０ｕｇ／ｍｌの総抗体濃度で実施される、抗ＰＶＲＩＧ−ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体についてのＣＭＶスクリーニングアッセイに関するデータを提供する。
【図４７】細胞アッセイで使用した組換えＣＨＯ細胞株に対するＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴおよびＰＤ−１リガンド（それぞれ、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２およびＰＤ−Ｌ１）発現のフローサイトメトリーの例を提供する。
【図４８】３人の異なるドナーからのＴ細胞におけるＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴおよびＰＤ−１発現レベルのフローサイトメトリーの例を提供する。
【図４９】ＰＶＲＩＧコーティングプレートを用いて種々の抗ＰＶＲＩＧ−ＴＩＧＩＴ抗体についてのＰＶＲＩＧとＴＩＧＩＴの両方の同時結合と、ビオチン化ＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓおよびストレプトアビジン−ＨＲＰを用いた結合抗体の検出を示すＥＬＩＳＡ結合データを提供する。
【図５０】ＴＩＧＩＴコーティングプレートを用いて種々の抗ＰＶＲＩＧ−ＴＩＧＩＴ抗体についてのＰＶＲＩＧとＴＩＧＩＴの両方の同時結合と、ビオチン化ＰＶＲＩＧ−Ｈｉｓおよびストレプトアビジン−ＨＲＰを用いた結合抗体の検出を示すＥＬＩＳＡ結合データを提供する。
【図５１】図４９および５０に提供されるＥＬＩＳＡアッセイデータのＥＣ−５０データを提供する。
【図５２】示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって評価されるような複数フォーマット中の二重特異性抗体の安定性データ、ならびに低ｐＨ保持および３サイクルの凍結解凍の後の凝集体形成の例を提供する。
【図５３】異なる二重特異性フォーマットの安定性評価を提供する。抗体をｐＨ３でさまざまな時間保持することによってウイルス不活化をシミュレートし、３回の連続した凍結／解凍サイクルを実施することによるストレス試験を行うために、試験を実施した。重鎖（ｓｃＦｖまたはＦａｂ含有）（Ａ）、還元条件下での軽鎖（Ｂ）、または非還元条件（ＣＥ−ＳＤＳ）下でのインタクトの分子（Ｃ）の相対量、および低分子量、高分子量、および単量体種含有量（ＳＥＣ−ＵＰＬＣ）（Ｄ）の変化。データは、Ｔ＝０からの変化として報告される。
【図５４Ａ】３人のドナー（ドナー４、ドナー２１０、およびドナー２３４）からのヒトＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を用いたインビトロ共培養アッセイを利用して、単独で、または組み合わせて、または二重特異性抗体として、抗原特異的サイトカイン分泌に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体（ＣＰＡ．９．０８６およびＣＨＡ．９．５４７．１８）および抗ＰＶＲＩＧ抗体（ＣＨＡ．７．５１８．１、ＣＨＡ．７．５１８．４）の効果を評価した、インビトロ共培養アッセイを提供する。アッセイで使用した標的細胞株は、ｐｐ６５を異所的に発現するように修飾された、ＨＬＡ−Ａ２＋ＰＶＲＬ２＋ＰＶＲ＋を発現する黒色腫６２４（Ｍｅｌ−６２４）細胞株であった。細胞を、９６ウェル丸底組織培養処理プレートに７５，０００細胞／ウェルで播種した。１５，０００のヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を各ウェルに追加した。示した抗ヒトＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴまたはアイソタイプ対照ｈＩｇＧ４抗体を、１μｇ／ｍｌの濃度で添加した。共培養物を、５％ＣＯ２と共に２４時間３７℃でインキュベートした。共培養上清中のヒトＩＦＮγの量を、フローサイトメトリーにより、ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ  ＩＦＮビーズアッセイ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて測定した。ｈＩｇＧ４アイソタイプに対する各抗体のＩＦＮγ分泌の増加率が示されている（ｎ＝２実験、１つの実験からの代表的な結果が示されている）。（Ａ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ｈｏｌｅ＋ＣＰＡ．９．０８６−ＣｒｏｓｓＭａｂ  Ｈ４  ノブ、（Ｂ）ＣＨＡ．７．５１８．４−Ｈ４  ホール＋ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）−Ｈ４  ノブ、（Ｃ）ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＨＡ．７．５１８．１  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｄ）ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）Ｈ４  ｖａｒ１＋ＣＰＡ．９．０８６  Ｆａｂ  Ｈ４  ｖａｒ２、（Ｅ）ＣＨＡ．７．５１８．１  Ｈ４、（Ｆ）ＣＰＡ．９．０８６  Ｈ４、（Ｇ）ＣＨＡ．７．５１８．１  Ｈ４、（Ｈ）ＣＰＡ．９．０８６  Ｈ４、（Ｉ）Ｓｙｎａｇｉｓ  Ｈ４。
【図５４Ｂ】ドナー細胞の異なる増殖で実施された２つのＣＭＶアッセイ複製物のまとめを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
Ａ．概要
本発明は、特にがんの治療に使用するためのいくつかの有用な抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。がんは、患者ががん性細胞を認識し排除する能力がないものと考えることができる。多くの場合、これらの形質転換した（例えば、がん性）細胞は、免疫監視に反作用する。体内でのＴ細胞活性化を制限して無制限なＴ細胞活性を予防する天然の制御機構が存在し、これを、がん性細胞が免疫応答を回避または抑制するために利用し得る。免疫エフェクター細胞、特にＴ細胞ががんを認識し排除する能力を回復させることが、免疫療法の目的である。「免疫療法」と称されることがある免疫腫瘍学の分野は、急速に進化しており、Ｙｅｒｖｏｙ、Ｋｅｙｔｒｕｄａ、およびＯｐｄｉｖｏ等のＴ細胞チェックポイント阻害抗体が、いくつかの最近承認されたものである。これらの抗体は、それらがＴ細胞性免疫の通常は負の制御性因子を遮断するため、一般に「チェックポイント阻害剤」と称される。共刺激性と共阻害性の両方の種々の免疫調節シグナルを使用して、最適な抗原特異的免疫応答を統合することができると一般に理解されている。一般的に、これらの抗体は、通常の状況下では細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の活性化を予防または抑制する、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１等のチェックポイント阻害剤タンパク質に結合する。チェックポイントタンパク質を阻害することにより、例えば、これらのタンパク質を結合する抗体の使用を介して、腫瘍に対する増加したＴ細胞応答を達成することができる。つまり、これらのがんチェックポイントタンパク質は免疫応答を抑制し、このタンパク質が、例えばチェックポイントタンパク質に対する抗体を使用して遮断されるとき、免疫系が活性化されることで免疫刺激につながり、その結果、がんおよび感染性疾患等の状態の治療をもたらす。
【００９７】
本発明は、追加のチェックポイントタンパク質、ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴに対する二重特異性抗体の使用に関する。ＰＶＲＩＧは、ＮＫおよびＴ細胞の細胞表面上で発現され、他の既知の免疫チェックポイントといくつかの類似点を共有する。ＰＶＲＩＧがチェックポイント受容体であることを示すために使用される識別および方法は、参照により本明細書に明示的に組み込まれるＷＯ２０１６／１３４３３３で考察される。ＰＶＬＲ２の相互作用および／または結合を遮断するヒトＰＶＲＩＧに対する抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が本明細書で提供される。ＰＶＲＩＧとそのリガンド（ＰＶＲＬ２）が結合すると、ＮＫおよびＴ細胞の標的細胞に対する免疫応答を減弱させるように作用する（すなわち、ＰＤ−１／ＰＤＬ１に類似した）阻害シグナルが励起される。ＰＶＲＬ２のＰＶＲＩＧへの結合の遮断により、ＰＶＲＩＧのこの阻害シグナルが断たれ、その結果、ＮＫおよびＴ細胞の免疫応答が調節される。ＰＶＲＬ２との結合を遮断する、ＰＶＲＩＧに対する抗体の利用は、ＮＫおよびＴ細胞によるがん細胞の殺傷を増強する治療的アプローチである。ＰＶＲＩＧに結合し、そのリガンドであるＰＶＲＬ２の結合を遮断する遮断抗体が生成されてきた。
【００９８】
同様に、ＴＩＧＩＴは、チェックポイント受容体の属性も有することが示されており、本発明は、ＴＩＧＩＴのＰＶＲへの相互作用および／または結合を遮断する抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。ＴＩＧＩＴにそのリガンド（ＰＶＲ）が結合すると、ＮＫおよびＴ細胞の標的細胞に対する免疫応答を減弱させるように作用する（すなわち、ＰＤ−１／ＰＤＬ１に類似した）阻害シグナルが励起される。ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合の遮断により、ＴＩＧＩＴのこの阻害シグナルが断たれ、その結果、ＮＫおよびＴ細胞の免疫応答が調節される。ＰＶＲとの結合を遮断する、ＴＩＧＩＴに対する抗体の利用は、ＮＫおよびＴ細胞によるがん細胞の殺傷を増強する治療的アプローチである。ＴＩＧＩＴに結合し、そのリガンドであるＰＶＲの結合を遮断する遮断抗体が生成されてきた。
【００９９】
さらに、本発明は、がんの治療に用いるための抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【０１００】
Ｂ．定義
本出願をより完全に理解できるようにするために、いくつかの定義を以下に示す。かかる定義は、文法的同等物を包含することを意図する。
【０１０１】
本明細書で使用されるＩｇＧドメインの定義は、ＩＭＧＴ参照配列（ｗｗｗ．ＩＭＧＴ．ｏｒｇ）に準拠している。
【０１０２】
本明細書において「除去」とは、活性の低下または排除を意味する。いくつかの実施形態では、抗体の定常ドメインから活性を除去することが有用である。したがって、例えば、「ＦｃγＲ結合を切除する」とは、Ｆｃ領域アミノ酸バリアントが、その特定のバリアントを含まないＦｃ領域と比較して５０％未満の開始結合を有することを意味し、７０−８０−９０−９５−９８％未満の活性喪失が好ましく、一般に、活性はＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて検出可能な活性のレベル未満である。図２１に示すように、ＩｇＧ１定常領域における１つの切除バリアントはＮ２９７Ａバリアントであり、これは天然グリコシル化部位を取り除き、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を大幅に低減し、したがって抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を低減する。
【０１０３】
本明細書において「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で考察される標的抗原と特異的に結合する６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。したがって、「ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメイン」は、本明細書に概説されるＴＩＧＩＴ抗原（その配列は図２２に示される）に結合する。同様に、「ＰＶＲＩＧ抗体結合ドメイン」は、本明細書に概説されるＰＶＲＩＧ抗原（その配列は図１に示される）に結合する。当該技術分野で知られているように、これらのＣＤＲは、可変重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲまたはＶＨＣＤＲ）の第１の組および可変軽鎖ＣＤＲの第２の組（ｖｌＣＤＲまたはＶＬＣＤＲ）として一般に存在し、各々が３つのＣＤＲ、すなわち重鎖についてｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、軽鎖についてｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、可変重および可変軽ドメインにそれぞれ存在し、一緒になってＦｖ領域を形成する。したがって、いくつかの場合において、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲには、可変重および可変軽鎖が寄与される。「Ｆａｂ」フォーマットにおいて、６つのＣＤＲのセットには、２つの異なるポリペプチド配列、すなわち可変重ドメイン（ｖｈまたはＶＨ、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２およびｖｈＣＤＲ３を含む）および可変軽ドメイン（ｖｌまたはＶＬ、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３を含む）が寄与され、このうちｖｈドメインのＣ末端が重鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端と結合し、ｖｌドメインのＣ末端が定常軽ドメインのＮ末端と結合している（したがって、軽鎖を形成する）。「抗原結合部分」という句は、ＡＢＤを含んでいてもよく、またはＡＢＤと同義であってもよい。
【０１０４】
本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、および／もしくは欠失、またはタンパク質と化学的に連結された部分に対する改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した改変された炭水化物またはＰＥＧ構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えばＤＮＡおよびＲＮＡ中にコドンを有する２０個のアミノ酸に対するものである。
【０１０５】
本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置換することを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない（生物内で天然に存在しないか、またはいずれの生物中にも存在しないかのいずれか）アミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｎ２９７Ａは、２９７位のアスパラギンがアラニンで置換されているバリアントポリペプチド（この場合はＦｃバリアント）を指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、開始アミノ酸を変化させない（例えば、宿主生物発現レベルを増加させるためにＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（アルギニンをなおコードする）に交換する）ように操作されたタンパク質は、「アミノ酸置換」ではない。すなわち、同じタンパク質をコードする新たな遺伝子の創出にもかかわらず、タンパク質は、それが開始される特定の位置に同じアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。
【０１０６】
本明細書で使用される「アミノ酸挿入」または「挿入」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、−２３３Ｅまたは２３３Ｅは、２３３位の後、および２３４位の前のグルタミン酸の挿入を示す。さらに、−２３３ＡＤＥまたはＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後、かつ２３４位の前のＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。
【０１０７】
本明細書で使用される「アミノ酸欠失」または「欠失」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、Ｅ２３３−またはＥ２３３＃、Ｅ２３３（）またはＥ２３３ｄｅｌは、２３３位のグルタミン酸の欠失を示す。さらに、ＥＤＡ２３３−またはＥＤＡ２３３＃は、２３３位で始まる配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。
【０１０８】
本明細書で使用される「バリアントタンパク質」または「タンパク質バリアント」または「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、タンパク質自体、タンパク質を含む組成物、またはそれをコードするアミノ配列を指し得る。好ましくは、タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親と比較して約１〜約７０個のアミノ酸修飾、好ましくは約１〜約５個のアミノ酸修飾を有する。以下に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４由来のＦｃ領域等のヒト野生型配列であるが、バリアントを有するヒト配列もまた、「親ポリペプチド」としての役割を果たすことができる。本明細書のタンパク質バリアント配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは少なくとも約９５−９８−９９％の同一性を有する。変異型タンパク質は、変異型タンパク質それ自体、タンパク質バリアントを含む組成物、またはそれをコードするＤＮＡ配列を指すことができる。したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」または「バリアント抗体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「ＩｇＧバリアント」または「バリアントＩｇＧ」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親ＩｇＧ（ここでも、多くの場合はヒトＩｇＧに由来）とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」または「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親免疫グロブリン配列のそれとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」または「バリアントＦｃ」とは、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。本発明のＦｃバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、Ｓ２４１ＰまたはＳ２２８Ｐは、親ＩｇＧ４ヒンジポリペプチドと比較して２２８位に置換プロリンを有するヒンジバリアントであり、ここでの付番Ｓ２２８ＰはＥＵインデックスに従い、Ｓ２４１ＰはＫａｂａｔ付番である。ＥＵインデックス、またはＫａｂａｔもしくはＥＵ付番スキームと同様のＥＵインデックスは、ＥＵ抗体の付番を指す（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ６３：７８−８５、参照により全体が本明細書に組み込まれる）。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。置換には、天然に存在するアミノ酸および場合によっては合成アミノ酸が含まれ得る。例としては、米国特許第６，５８６，２０７号；ＷＯ９８／４８０３２；ＷＯ０３／０７３２３８；ＵＳ２００４−０２１４９８８Ａ１；ＷＯ０５／３５７２７Ａ２；ＷＯ０５／７４５２４Ａ２；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎら、（２００２）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２４：９０２６−９０２７；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ、＆  Ｐ．Ｇ��Ｓｃｈｕｌｔｚ、（２００２）、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ  １１：１１３５−１１３７；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎら、（２００２）、ＰＩＣＡＳ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９９：１１０２０−１１０２４；およびＬ．Ｗａｎｇ、＆  Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ、（２００２）、Ｃｈｅｍ．１−１０が挙げられ、全て全体が参照により組み込まれる。
【０１０９】
本明細書で使用されるとき、本明細書における「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、およびペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。ペプチジル基は、天然に存在するアミノ酸およびペプチド結合、または合成ペプチド模倣構造、すなわち、ペプトイド（全体が参照により組み込まれるＳｉｍｏｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ８９（２０）：９３６７（１９９２）を参照）等の「類似体」を含み得る。アミノ酸は、当業者には理解されるであろうとおり、天然に存在するものでも合成物（例えば、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸ではないもの）のいずれかであり得る。例えば、ホモフェニルアラニン、シトルリン、オルニチン、およびノルロイシン（ｎｏｒｅｌｅｕｃｉｎｅ）は、本発明の目的では合成アミノ酸と見なされ、Ｄ−およびＬ−（ＲまたはＳ）立体配置のアミノ酸の両方を利用することができる。本発明のバリアントは、例えば、これらに限定されないが、全て全体が参照により組み込まれる、Ｃｒｏｐｐ＆Ｓｈｕｌｔｚ，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．２０（１２）：６２５−３０、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０１（２）：７５６６−７１、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，３０３（５６５６）：３７１−３、およびＣｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１（５６３５）：９６４−７によって説明される方法を含む、Ｓｃｈｕｌｔｚおよび共同研究者らによって開発された技術を使用して組み込まれた合成アミノ酸の使用を含む修飾を含み得る。さらに、ポリペプチドには、１つ以上の側鎖または末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、円順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質またはタンパク質ドメインへの融合、およびペプチドタグまたは標識の付加が含まれ得る。
【０１１０】
本明細書で使用される「残基」とは、タンパク質における位置、およびその関連するアミノ酸同一性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７またはＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。
【０１１１】
本明細書で使用される「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」とは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆａｂは、単離したこの領域、または完全長抗体もしくは抗体断片との関連でのこの領域を指し得る。
【０１１２】
本明細書で使用される「Ｆｖ」または「Ｆｖ断片」または「Ｆｖ領域」とは、単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含むポリペプチドを意味する。当業者には理解されるであろうとおり、それらは一般に、２本の鎖で構成されている。
【０１１３】
本明細書における「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は概して、本明細書で論じられるｓｃＦｖリンカーを使用してｓｃＦｖまたはｓｃＦｖドメインを形成する、可変軽ドメインに共有結合した可変重ドメインを意味する。ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端（ｖｈ−リンカー−ｖｌまたはｖｌ−リンカー−ｖｈ）のいずれの配向であり得る。一般に、リンカーは、当該技術分野で一般に既知のｓｃＦｖリンカーであり、このうちリンカーペプチドには主として以下のアミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＴｈｒが含まれる。
【０１１４】
「リンカー」とは、一般に、本明細書に記載のｓｃＦｖまたは二重特異性抗体との関連で使用されるペプチドリンカーを意味する。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で２つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約１〜５０アミノ酸長、好ましくは約１〜３０アミノ酸長である。一実施形態では、１〜２０アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態では、約５〜約１０アミノ酸が使用されている。有用なリンカーには、例えば、ｎが少なくとも１つの整数（一般に３〜４）である（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎ、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、ならびに他の可動性リンカーを含むグリシンセリンポリマーが含まれる。代替的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして有用であり得、すなわちリンカーとして有用であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、以下の表１および２にリストされているものから選択される（米国特許第９，６５０，４４６号の図７も参照）。
【０１１５】
【表１】
2021525087.tif 000006
【０１１６】
【表２】
2021525087.tif 000007
【０１１７】
本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」または「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、異なる、整合したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵ位置２９６においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。同様に、ＩｇＧ１は２４１位にプロリンを有し、ＩｇＧ４はそこでセリンを有するため、Ｓ２４１Ｐを有するＩｇＧ４分子は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。サブクラス修飾は、本明細書のアミノ酸置換と考えられることに留意されたい。
【０１１８】
本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」とは、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＩｇＧのうちのいずれも２９７位にＡＮアスパラギンを含まないので、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（またはそれらのハイブリッド）における置換Ｎ２９７Ａは、天然に存在しない修飾であると見なされる。
【０１１９】
本明細書で使用される「アミノ酸」および「アミノ酸同一性」とは、ＤＮＡおよびＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。
【０１２０】
本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣが含まれるが、これらに限定されない。
【０１２１】
本明細書で使用される「ＩｇＧ  Ｆｃリガンド」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Ｆｃリガンドには、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌプロテインＧ、およびウイルスＦｃγＲが含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃリガンドにはまた、ＦｃγＲと相同なＦｃ受容体のファミリーである、Ｆｃ受容体相同体（ＦｃＲＨ）が含まれる（参照により全体が組み込まれる、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ１９０：１２３−１３６）。Ｆｃリガンドは、Ｆｃに結合する未発見の分子を含み得る。特定のＩｇＧ  Ｆｃリガンドは、ＦｃＲｎおよびＦｃガンマ受容体である。本明細書で使用される「Ｆｃリガンド」とは、抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。
【０１２２】
本明細書で使用される「親ポリペプチド」とは、バリアントを生成するようにその後修飾される開始ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、または天然に存在するポリペプチドのバリアントもしくは改変されたバージョンであってもよい。親ポリペプチドは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指してもよい。したがって、本明細書で使用される「親免疫グロブリン」とは、バリアントを生成するように修飾される非修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」とは、バリアント抗体を生成するように修飾される非修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説されるように、既知の市販の組換え産生抗体が含まれることに留意すべきである。
【０１２３】
本明細書で使用される「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」とは、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域、および場合によってはヒンジの一部を含む、ポリペプチドを意味する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、およびこれらのドメインに対する可動性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合は、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧの場合は、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびにＣγ１（Ｃγ１）とＣγ２（Ｃγ２）との間の下部ヒンジ領域を含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むものと定義され、ここでの付番はＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、以下でより詳細に説明されるように、例えば、１つ以上のＦｃγＲ受容体またはＦｃＲｎ受容体との結合を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。
【０１２４】
本明細書における「重鎖定常領域」とは、抗体のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３部分を意味する。
【０１２５】
本明細書で使用される「位置」とは、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順番に付番されるか、または確立されたフォーマット、例えば、抗体付番のためのＥＵインデックスによって付番されてもよい。
【０１２６】
本明細書で使用される「標的抗原」とは、所与の抗体の可変領域が特異的に結合する分子を意味する。本発明の場合、本明細書で目的とする１つの標的抗原は、以下に定義されるように、ＴＩＧＩＴ、通常はヒトＴＩＧＩＴおよび任意にカニクイザルＴＩＧＩＴである。目的とする別の標的抗原は、以下に定義されるように、ＰＶＲＩＧ、通常はヒトＰＶＲＩＧおよび任意にカニクイザルＰＶＲＩＧである。
【０１２７】
本明細書で使用される「標的細胞」とは、標的抗原を発現する細胞を意味する。
【０１２８】
本明細書で使用される「可変領域」とは、実質的にＶκ（Ｖ．カッパ）またはＶλ（Ｖ．ラムダ）のうちのいずれかでコードされる１つ以上のＩｇドメイン、ならびに／または、それぞれ、カッパ、ラムダ、および重鎖免疫グロブリン遺伝子座を構成するＶＨ遺伝子を含む、免疫グロブリンの領域を意味する。
【０１２９】
本明細書における「野生型またはＷＴ」とは、対立遺伝子バリアント型を含む、自然界に見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。
【０１３０】
本発明の抗体は一般に、単離されるか、または組換えである。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される「単離された」とは、それが発現された細胞または細胞培養物から特定および分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって調製されるであろう。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。「組換え」とは、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いて抗体が生成されることを意味する。
【０１３１】
特定の抗原またはエピトープとの「特異的結合」もしくは「〜と特異的に結合する」または特定の抗原またはエピトープ「〜に対して特異的である」とは、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有さない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と同様である対照分子との競合によって決定することができる。
【０１３２】
特定の抗原またはエピトープに対する特異的結合とは、例えば、抗原またはエピトープに対して少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、少なくとも約１０−１２Ｍ、少なくとも約１０−１３Ｍ、少なくとも約１０−１４Ｍ、少なくとも約１０−１５ＭのＫＤを有する抗体によって示され得、ＫＤとは特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫＤを有することになる。
【０１３３】
また、特定の抗原またはエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対するＫＡまたはＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗体によって示され得、ＫＡまたはＫａは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指す。結合親和性は、一般に、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ）および抗原発現細胞によるフローサイトメトリーを用いて測定される。
【０１３４】
Ｃ．配列
配列表は、図２３のフォーマットに基づいていくつかの配列を提供する。配列の標示のためのガイドとして、米国特許出願第６２／５１３，９１６号の図４（参照により本明細書に明示的に組み込まれる）が参照される。可変重ドメインは、識別子「ＣＰＡ．９．０８６」）で標識され、このうち次の配列識別子がｖｈＣＤＲ１へ、次がｖｈＣＤＲ２へのものであり、ｖｈＣＤＲ３、完全長重鎖、可変軽ドメイン、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３および完全長軽鎖であるという点で、次の配列は本明細書の図２３のフォーマット（上記で参照される図４のフォーマットと同一）に従う。したがって、個々の抗体は、１０個の関連する配列識別子を有する）。配列表には、ＢＭ２６マウスＩｇＧ１（ＢＭ２６−Ｍ１）（ＷＯ２０１６／０２８６５６Ａ１、クローン３１Ｃ６）およびＢＭ２９マウスＩｇＧ１（ＢＭ２９−Ｍ１）（ＵＳ２０１６／０１７６９６３Ａ１、クローン２２Ｇ２）の配列が含まれる。注記しない限り、ＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴ抗体の完全長ＨＣ配列はＨ４（Ｓ２４１Ｐ）フォーマットにある。
【０１３５】
Ｄ．ＰＶＲＩＧタンパク質
本発明は、ＰＶＲＩＧタンパク質に特異的に結合し、そのリガンドタンパク質、ＰＶＲＬ２（ヒト原形質膜糖タンパク質）による活性化を防止する抗ＰＶＲＩＧ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。ポリオウイルス受容体関連免疫グロブリンドメイン含有タンパク質、Ｑ６ＤＫＩ７またはＣ７ｏｒｆ１５とも称されるＰＶＲＩＧは、図１に示すＲｅｆＳｅｑ受託識別子ＮＰ＿０７６９７５に示されるアミノ酸および核酸配列に関する。（米国公開第２０１６／０２４４５２１号の実施例５に示される）ＰＶＲＩＧの結合パートナーである、ヒトポリオウイルス受容体関連２タンパク質（ＰＶＬＲ２、別名ネクチン−２、ＣＤ１１２またはヘルペスウイルス侵入メディエーターＢ、（ＨＶＥＢ））の配列は、図２に示される。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ＰＶＲＩＧおよびＰＶＬＲ２の結合が遮断されるように、ＰＶＲＩＧ細胞外ドメインに特異的である。
【０１３６】
ＰＶＲＩＧは、シグナルペプチド（アミノ酸１から４０に及ぶ）、細胞外ドメイン（アミノ酸４１から１７１に及ぶ）、膜貫通ドメイン（アミノ酸１７２から１９０に及ぶ）、および細胞質ドメイン（アミノ酸１９１から３２６に及ぶ）を有する３２６アミノ酸長の膜貫通ドメインタンパク質である。開始コドンであり得るメチオニンが２つあるが、成熟タンパク質は同一である。
【０１３７】
したがって、本明細書で使用する場合、「ＰＶＲＩＧ」または「ＰＶＲＩＧタンパク質」または「ＰＶＲＩＧポリペプチド」という用語は、本明細書に記載の既知のまたは野生型ＰＶＲＩＧを非限定的に含む、任意のかかるタンパク質、またはその変異体、コンジュゲート、または断片、ならびに任意の天然に存在するスプライス変異体、アミノ酸変異体またはアイソフォーム、および特にＰＶＲＩＧのＥＣＤ断片を任意選択で含んでもよい。
【０１３８】
本明細書に注記され、以下でより十分に記載されるように、ＰＶＲＩＧへの結合と、ＰＶＲＬ２による活性化の防止（例えば、最も一般的には、ＰＶＲＩＧとＰＶＬＲ２との相互作用を遮断することによって）との両方を行う抗ＰＶＲＩＧ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞活性化を増強するために使用され、またがんおよび病原体感染等の疾患の治療に使用される。
【０１３９】
Ｅ．ＴＩＧＩＴタンパク質
本発明は、ＴＩＧＩＴタンパク質に特異的に結合し、そのリガンドタンパク質ＰＶＲ、ポリオウイルス受容体（ａｋａ  ＣＤ１５５）ヒト原形質膜糖タンパク質による活性化を防止する抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。ＴＩＧＩＴ、またはＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体は、共抑制性受容体タンパク質、別名ＷＵＣＡＭ、Ｖｓｔｍ３またはＶｓｉｇ９である。ＴＩＧＩＴは、免疫グロブリン可変ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を有し、ＰＶＲタンパク質ファミリーのシグネチャ配列要素を含む。ＴＩＧＩＴおよびＰＶＲの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列を図２２に示す。本発明の抗体は、ＴＩＧＩＴおよびＰＶＲの結合が遮断されるように、ＴＩＧＩＴ  ＥＣＤに特異的である
【０１４０】
したがって、本明細書で使用する場合、「ＴＩＧＩＴ」または「ＴＩＧＩＴタンパク質」または「ＴＩＧＩＴポリペプチド」という用語は、本明細書に記載の既知のまたは野生型ＴＩＧＩＴを非限定的に含む、任意のかかるタンパク質、またはその変異体、コンジュゲート、または断片、ならびに任意の天然に存在するスプライス変異体、アミノ酸変異体またはアイソフォーム、および特にＴＩＧＩＴのＥＣＤ断片を任意選択で含んでもよい。
【０１４１】
本明細書に注記され、以下でより十分に記載されるように、ＴＩＧＩＴへの結合と、ＰＶＲによる活性化の防止（例えば、最も一般的には、ＴＩＧＩＴとＰＶＲとの相互作用を遮断することによって）との両方を行う抗ＴＩＧＩＴ抗体（抗原結合断片を含む）は、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞活性化を増強するために使用され、またがんおよび病原体感染等の疾患の治療に使用される。
【０１４２】
Ｖ．抗体
以下で論じられるように、「抗体」という用語は全般的に使用される。従来の抗体構造単位は、典型的には四量体を含む。各四量体は、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽」鎖（典型的には、約２５ｋＤａの分子量）と、１本の「重」鎖（典型的には、約５０〜７０ｋＤａの分子量）とを有する。ヒト軽鎖は、カッパ軽鎖およびラムダ軽鎖としてクラス分けされる。本発明は、一般にＩｇＧクラスに基づくモノクローナル抗体を対象とし、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。一般に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。ＩｇＧ１は、３５６（ＤまたはＥ）および３５８（ＬまたはＭ）で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に図示される配列は３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプを使用するが、他のアロタイプが本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含む任意の配列は、３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプの代わりに３５６Ｅ／３５８Ｌを有することができる。抗体という用語は、二重特異性抗体、例えば、少なくとも２つの異なる標的に結合する抗体をさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴに結合する二重特異性抗体（本明細書では、抗ＴＩＧＩＴ／抗ＰＶＲＩＧ二重特異性抗体と呼ばれる）である。
【０１４３】
各鎖のアミノ末端部分は、「Ｆｖドメイン」または「Ｆｖ領域」として当該技術分野および本明細書では一般に称される、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。可変領域において、重鎖および軽鎖のＶドメインの各々について３つのループが集約されて、抗原結合部位を形成する。ループの各々は、相補性決定領域（これ以降「ＣＤＲ」と称される）と称され、ここではアミノ酸配列における変形が最も顕著である。「可変」とは、可変領域のある特定のセグメントが抗体間で配列において大きく異なるという事実を指す。可変領域内の可変性は均一に分布していない。その代わり、Ｖ領域は、各々が９〜１５アミノ酸長またはそれ以上長い「超可変領域」と称される極可変性のより短い領域によって隔てられた１５〜３０のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的不変の区間からなる。
【０１４４】
各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配列された３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）および４つのＦＲで構成される。
【０１４５】
超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域においておよそ、アミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１、「Ｌ」は軽鎖を表す）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域においてはおよそ約３１〜３５Ｂ（ＨＣＤＲ１、「Ｈ」は重鎖を表す）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）からのアミノ酸残基（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）および／または超可変ループを形成する残基（例えば、軽鎖可変領域中の残基２６−３２（ＬＣＤＲ１）、５０−５２（ＬＣＤＲ２）および９１−９６（ＬＣＤＲ３）および重鎖可変領域中の２６−３２（ＨＣＤＲ１）、５３−５５（ＨＣＤＲ２）および９６−１０１（ＨＣＤＲ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を包含する。本発明の特定のＣＤＲを以下に記載する。
【０１４６】
当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確な付番および配置は、異なる付番システムで異なり得る。しかしながら、可変重および／または可変軽配列の開示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３）の開示である。ＣＤＲ付番の有用な比較は以下のとおりであり、Ｌａｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７（２００３）を参照。
【表３】
2021525087.tif 000008
【０１４７】
本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ付番系は一般に、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１〜１０７および重鎖可変領域の残基１〜１１３）およびヒンジを参照する場合に使用され、ＥＵ付番系は、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、上述（１９９１）を参照）。
【０１４８】
本発明は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この場合において、「完全ＣＤＲセット」は、３つの可変軽鎖および３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞれより大きな可変軽または可変重ドメインの一部であり得る。さらに、本明細書により詳細に概説されるように、可変重および可変軽ドメインは、重および軽鎖が使用される場合には別個のポリペプチド鎖上に、またはｓｃＦｖ配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。
【０１４９】
ＣＤＲは、抗原結合の形成、またはより具体的には、抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖等の分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、２つ以上のエピトープを有してもよい。
【０１５０】
エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。
【０１５１】
エピトープは、立体配座または直線状のいずれかであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって作り出される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって作り出されるものである。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。
【０１５２】
エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、または８〜１０個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された抗原結合ドメインおよび本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。
【０１５３】
各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を定義する。Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づき、Ｋａｂａｔらは、個々の一次配列をＣＤＲおよびフレームワークに分類し、そのリストを作成した（参照により全体が組み込まれるＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照）。
【０１５４】
免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書の「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重（ＣＨ）ドメインおよびヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、各々、３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの関連における「ＣＨ」ドメインは以下のとおりである。「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う１１８〜２２０位を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う２３７〜３４０位を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う３４１〜４４７位を指す。
【０１５５】
重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において、「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、抗体の第１および第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧ  ＣＨ１ドメインはＥＵ位置２２０で終わり、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインは残基ＥＵ位置２３７で始まる。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、本明細書において、２２１位（ＩｇＧ１中のＤ２２１）〜２３６位（ＩｇＧ１中のＧ２３６）を含むように定義され、付番はＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う。
【０１５６】
軽鎖は、一般に、可変軽鎖ドメイン（軽鎖ＣＤＲを含み、可変重ドメインと共にＦｖ領域を形成する）、および定常軽鎖領域（しばしばＣＬまたはＣκと称される）の２つのドメインを含む。一般に、定常ラムダまたは定常カッパドメインのいずれかを用いることができ、このうちラムダが一般に本発明で有用である。
【０１５７】
以下に概説される追加の置換のための目的とする別の領域は、Ｆｃ領域である。
【０１５８】
Ａ．キメラおよびヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本明細書の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、異なる種由来の混合物、例えばキメラ抗体および／またはヒト化抗体に由来し得る。一般に、「キメラ抗体」と「ヒト化抗体」の両方は、２つ以上の種由来の領域を組み合わせる抗体を指す。例えば、「キメラ抗体」は伝統的に、マウス（または場合によってはラット）由来の可変領域（複数可）およびヒト由来の定常領域（複数可）を含む。「ヒト化抗体」は一般に、可変ドメインフレームワーク領域がヒト抗体に見出される配列でスワップされた、非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体において、ＣＤＲを除く抗体全体は、ヒト由来のポリヌクレオチドによってコードされるか、またはそのＣＤＲ内を除いてかかる抗体と同一である。非ヒト生物を起源とする核酸によって一部または全てがコードされるＣＤＲを、ヒト抗体可変領域のベータシートフレームワークにグラフティングして、その特異性がグラフティングされたＣＤＲによって決定される抗体を作製する。かかる抗体の生成は、例えば、ＷＯ９２／１１０１８、Ｊｏｎｅｓ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６に記載され、全て全体が参照により組み込まれる。選択されたアクセプターフレームワーク残基の、対応するドナー残基への「逆突然変異」が、最初のグラフト構築物において失われた親和性を回復するためにしばしば必要とされる（ＵＳ５５３０１０１、ＵＳ５５８５０８９、ＵＳ５６９３７６１、ＵＳ５６９３７６２、ＵＳ６１８０３７０、ＵＳ５８５９２０５、ＵＳ５８２１３３７、ＵＳ６０５４２９７、ＵＳ６４０７２１３（全て全体が参照により組み込まれる））。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、通常は全部を含み、したがって典型的にはヒトＦｃ領域を含むであろう。ヒト化抗体はまた、遺伝子操作された免疫系を有するマウスを用いて生成され得る。Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．、２００４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４、全体が参照により組み込まれる。非ヒト抗体をヒト化および再形成するための様々な技法および方法は、当技術分野で周知である（全て全体が参照により組み込まれる、Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ  ＆  Ｖａｓｑｕｅｚ，２００４，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂ  Ｃｅｌｌｓ，５３３−５４５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）、およびそこで引用される参考文献を参照）。ヒト化方法としては、限定されないが、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８８；Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８９、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、ＵＳＡ  ８６：１００２９−３３；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９−１０３５；Ｃａｒ���ｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、１９９２、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５−９、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７（２０）：４５９３−９；Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：４１８１−４１８５；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．、１９９８、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １１：３２１−８に記載される方法が挙げられ、全て全体が参照により組み込まれる。ヒト化、または非ヒト抗体の可変領域の免疫原性を低下させる他の方法には、例えば、参照により全体が組み込まれるＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３に記載されているような表面再構成法が含まれ得る。
【０１５９】
したがって、本明細書における列挙された抗体のいずれか由来のｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲは、ヒト化され（またはすでにヒト化されているものに対して「再ヒト化」され）てもよい。
【０１６０】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域および／または特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、かかる抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」であるかまたはそれ「に由来する」重鎖または軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るか、あるいはそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である（すなわち、最も高い同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって、そのようなものとして特定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞変異または部位特異的変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、ＣＤＲを除いて生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９５、９６、９７、９８もしくは９９％、またはさらには少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得る。すなわち、ＣＤＲはマウスであってもよいが、可変領域（重鎖または軽鎖のいずれか）のフレームワーク領域は、１つのヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるフレームワークアミノ酸と、アミノ酸配列において少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得る。
【０１６１】
典型的には、特定のヒト生殖細胞系列配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０〜２０アミノ酸以下の相違しか示さない。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５アミノ酸以下、またはさらには４、３、２、もしくは１アミノ酸以下の相違しか示さない場合がある（ここでも、本明細書における任意のバリアントの導入前、すなわち、バリアントの数は一般的に低い）。
【０１６２】
一実施形態では、親抗体は、当技術分野で既知のとおり、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、米国特許出願第１１／００４，５９０号に記載されているように、ヒト化および親和性成熟のために用いられ得る。選択に基づく方法を使用して、抗体可変領域をヒト化および／または親和性成熟してもよく、限定されないが、Ｗｕら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２；Ｂａｃａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８−１０６８４；Ｒｏｓｏｋら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１−２２６１８；Ｒａｄｅｒら、１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：８９１０−８９１５；Ｋｒａｕｓｓら、２００３、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １６（１０）：７５３−７５９に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみを移植することを含んでいてもよく、限定されないが、米国特許出願第０９／８１０，５１０号；Ｔａｎら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５；Ｄｅ  Ｐａｓｃａｌｉｓら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６−３０８４に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。
【０１６３】
Ｂ．任意選択の抗体操作
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、アミノ酸置換によってアミノ酸配列を改変するように修飾または操作され得る。本明細書で考察されるように、アミノ酸置換は、タンパク質に対するＣＤＲの親和性を改変するため（例えば、ＴＩＧＩＴまたはＰＶＲＩＧ、結合の増加および減少の両方を含む）、ならびに抗体の追加の機能特性を改変するために行われ得る。例えば、抗体は、Ｆｃ領域内に修飾を含むように、典型的には、抗体の１つ以上の機能特性、例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞傷害性を改変するように操作され得る。さらに、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従う抗体は、同じく抗体の１つ以上の機能特性を改変するために、化学修飾され得る（例えば、１つ以上の化学的部分が抗体に結合し得る）か、またはそのグリコシル化を改変するように修飾され得る。かかる実施形態については、以下にさらに記載される。Ｆｃ領域内の残基の付番は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスの付番である。
【０１６４】
一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が改変される、例えば、増加または減少するように修飾される。このアプローチについては、米国特許第５，６７７，４２５号（Ｂｏｄｍｅｒら）にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽および重鎖のアセンブリを容易にするように、または抗体の安定性を増加もしくは減少させるように改変される。
【０１６５】
さらに別の実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、特にＩｇＧ４定常ドメインが使用される場合、生体内でのＦａｂアーム交換を抑止するように修飾され得る。具体的には、このプロセスは、機能的に一価である二重特異性抗体を効果的にもたらす他のＩｇＧ４抗体間でのＩｇＧ４半分子（重鎖１本＋軽鎖１本）の交換を伴う。重鎖のヒンジ領域および定常ドメインに対する変異がこの交換を抑止する（Ａａｌｂｅｒｓｅ，ＲＣ，Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ  Ｊ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５：９−１９を参照）。本明細書に概説されるように、本発明において特に有用である変異は、ＩｇＧ４定常ドメインの関連におけるＳ２４１Ｐである。ＩｇＧ４は、顕著なエフェクター機能を有しないため本発明で有用であり、したがって、細胞の枯渇なしにそのリガンドへの（例えばＰＶＲＩＧのＰＶＲＬ２への、またはＴＩＧＩＴのＰＶＲへの）受容体結合を遮断するために使用される。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、一般にＦｃγＲ受容体との結合を改変するために、Ｆｃ領域内で行われ得る。本明細書で使用される「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、または「ＦｃガンマＲ」とは、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、かつＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）（アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、およびＦｃγＲＩｃを含む）；ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）（アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１およびＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）、およびＦｃγＲＩＩｃ；ならびにＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（アイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８およびＦ１５８を含む）およびＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ２を含む）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５（参照により全体が組み込まれる））、ならびに任意の発見されていないヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。マウスＦｃγＲには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ−１（ＣＤ１６）、およびＦｃγＲＩＩＩ−２（ＣＤ１６−２）、ならびに任意の発見されていないマウスＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６７】
ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上との結合を改変するために行われ得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。結合の増加および結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａとの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）との結合の減少も有益であり得る。本発明で有用なアミノ酸置換には、米国特許出願第１１／１２４，６２０号（特に図４１）および米国特許第６，７３７，０５６号に記載されているものが含まれ、これらの両方は、参照によりそれらの全体、特にその中に開示されるバリアントが本明細書に明示的に組み込まれる。
【０１６８】
なおも別の例では、Ｆｃ領域は、以下の位置：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、もしくは４３９の１つ以上のアミノ酸を修飾することによって、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の能力を増加させ、かつ／または
2021525087.tif 000009
受容体に対する抗体の親和性を増加させ、かつ／またはＦｃＲｎ結合を増加させるように修飾される。このアプローチについては、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開第ＷＯ００／４２０７２号にさらに記載される。さらに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、結合が改善されたバリアントが記載される（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照）。２５６、２９０、２９８、３３３、３３４、および３３９位での特異的変異が、ＦｃγＲＩＩＩとの結合を改善することが示される。さらに、以下の変異体の組み合わせ：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ、およびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａが、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示される。さらに、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥまたはＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ等の変異が、ＦｃＲｎとの結合を改善し、抗体の循環半減期を増加させる（Ｃｈａｎ  ＣＡ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＰＪ（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：３０１−３１６を参照）。
【０１６９】
さらに、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号（Ｗａｒｄ）に記載されるように、以下の変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆのうちの１つ以上が導入され得る。あるいは、生物学的半減期を増加するために、抗体は、米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号（Ｐｒｅｓｔａら）に記載されるように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから得られるサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１またはＣＬ領域内で改変され得る。血清半減期を増加させるためのさらなる変異は、米国特許第８，８８３，９７３号、同第６，７３７，０５６号、および同第７，３７１，８２６号に開示され、これには４２８Ｌ、４３４Ａ、４３４Ｓ、および４２８Ｌ／４３４Ｓが含まれる。
【０１７０】
さらに別の実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のグリコシル化を改変することができる。例えば、アグリコシル化抗体が作製され得る（例えば、抗体はグリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるか、またはＡＤＣＣ等のエフェクター機能を低減するように改変され得る。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位、例えば、Ｎ２９７を改変することによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化領域の排除をもたらす、１つ以上のアミノ酸置換を行ない、それによってその部位でのグリコシル化を排除することができ、いくつかの実施形態ではアラニン置換が有用である。
【０１７１】
加えてまたは代替的に、改変した種類のグリコシル化を有する抗体、例えば、フコシル残基の量が低減した低フコシル化抗体または二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が作製され得る。かかるグリコシル化パターンの改変は、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが示されている。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体をグリコシル化機構が改変された宿主細胞で発現させることによって達成され得る。グリコシル化機構が改変された細胞については、当該技術分野で説明されており、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従う組換え抗体を発現させ、それによりグリコシル化が改変された抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号およびＷＯ２００３／０３５８３５を参照。
【０１７２】
本発明によって企図される本明細書における抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の別の修飾は、例えば、半減期を高めるための、ＰＥＧ化、すなわち他の水溶性部分（典型的にはポリマー）の付加である。抗体は、当該技術分野で知られているように、例えば、抗体の生物学的（例えば血清）半減期を増加させるためにＰＥＧ化することができる。
【０１７３】
ＦｃγＲおよび／もしくはＦｃＲｎに対する結合親和性を改変し、ならびに／または生体内血清半減期を増加させるために行われる置換に加えて、以下にさらに詳細に記載されるように、追加の抗体修飾が行われ得る。
【０１７４】
いくつかの場合において、親和性成熟が行われる。ＣＤＲにおけるアミノ酸修飾は、「親和性成熟」と称されることがある。「親和性成熟」抗体は、１つ以上のＣＤＲにおいて１つ以上の改変（複数可）を有するものであり、この改変は、それらの改変（複数可）を有しない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。いくつかの場合において、抗体のその抗原に対する親和性を低下させることが望ましい場合がある。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＣＤＲのうちの１つ以上において行われる（例えば、ＰＶＲＩＧ  ＣＤＲまたはＴＩＧＩＴ  ＣＤＲ）。一般に、任意の単一のＣＤＲにおいて１または２または３アミノ酸のみが置換され、一般に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以下の変化が、６つのＣＤＲのセット（例えば、ｖｈＣＤＲ１−３およびｖｌＣＤＲ１−３）内で作製される。しかしながら、任意のＣＤＲにおける無置換、１、２、または３置換の任意の組み合わせが、独立してかつ任意選択で、任意の他の置換と組み合わされ得ることを理解されたい。
【０１７６】
親和性成熟は、「親」抗体と比較して抗原に対する抗体の結合親和性を少なくとも約１０％〜５０〜１００〜１５０％以上、または１〜５倍増加させるために行われ得る。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は、抗原に対してナノモル親和性またはさらにはピコモル親和性を有する。親和性成熟抗体は、公知の手順によって生成される。親和性と有効性との相関関係については後述する。
【０１７７】
代替的に、例えば、抗原に対する抗体の親和性を著しく改変しない「サイレント」なアミノ酸修飾が、本発明の抗体のＣＤＲのうちの１つ以上で行われ得る。これらは、（本発明の抗体をコードする核酸に対して行われ得るような）発現の最適化を含むいくつかの理由で行われ得る。
【０１７８】
したがって、バリアントＣＤＲおよび抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が本発明のＣＤＲおよび抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の定義に含まれ、つまり、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、本発明の列挙される抗体のＣＤＲのうちの１つ以上にアミノ酸修飾を含み得る。さらに、以下に概説されるように、アミノ酸修飾は、独立してかつ任意選択で、フレームワークおよび定常領域を含む、ＣＤＲ外の任意の領域でも行われ得る。
【０１７９】
ＶＩ．本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体
本発明は、二重特異性抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ抗体、ならびに抗ＰＶＲＩＧおよび／または抗ＴＩＧＩＴ抗体を提供する。（便宜上、「抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ抗体」および「二重特異性ＰＶＲＩＧ／ＴＩＧＩＴ抗体」および「抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体」は互換的に使用される。）本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ヒトＴＩＧＩＴ、好ましくはヒトＴＩＧＩＴのＥＣＤ、ならびにＰＶＲＩＧ、そして再び好ましくはヒトＰＶＲＩＧのＥＣＤに特異的に結合する。本発明は、ＴＩＧＩＴに結合する６つのＣＤＲとＰＶＲＩＧに結合する６つのＣＤＲといった１２つのＣＤＲのセットが列挙される、完全長抗体を含む、抗原結合ドメインをさらに提供する。
【０１８０】
本発明はまた、単一特異性抗体または二重特異性抗体との関連であり得る抗ＰＶＲＩＧ抗体を提供する。かかる抗体には、以下が含まれる。
ＰＶＲＩＧの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化４】
2021525087.tif 000010
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
【化５】
2021525087.tif 000011
【０１８１】
本発明はまた、単一特異性抗体または二重特異性抗体との関連であり得る抗ＴＩＧＩＴ抗体を提供する。かかる抗体には、以下が含まれる。
ＴＩＧＩＴの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
【化６】
2021525087.tif 000012
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
【化７】
2021525087.tif 000013
【０１８２】
ＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴ、あるいはＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴのエピトープに対する特異的結合は、少なくとも約１０−４Ｍ、少なくとも約１０−５Ｍ、少なくとも約１０−６Ｍ、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、代替的には少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、少なくとも約１０−１２Ｍ、少なくとも約１０−１３Ｍ、少なくとも約１０−１４Ｍ、少なくとも約１０−１５Ｍ、またはそれを超えるＫＤを有する抗体によって示され得、ここでＫＤは、独立して各抗原についての特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、ＴＩＧＩＴ抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫＤを有することになる。
【０１８３】
しかしながら、ＮＫおよびＴ細胞の表面上で発現されるＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴへの最適な結合のためには、抗体は、好ましくは５０ｎＭ未満、最も好ましくは１ｎＭ未満のＫＤを有し、０．１ｎＭ未満および１ｐＭ未満が本発明の方法に有用である。
【０１８４】
また、特定の抗原またはエピトープへの特異的結合は、例えば、ＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴ抗原またはエピトープに対するｋａ（会合速度定数を指す）が、対照と比較して、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗体によって示すことができ、ここで、ｋａは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度定数を指す。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、もしくは１ｎＭ以下のＫＤ（つまり、より高い結合親和性）、または１ｐＭ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴおよび／またはヒトＰＶＲＩＧに結合し、ＫＤは、既知の方法、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ）、ＥＬＩＳＡ、ＫＩＮＥＸＡ、最も典型的にはＳＰＲによって２５℃または３７℃で決定される。
【０１８６】
Ａ．二重特異性および／またはヘテロ二量体抗体
本発明は、自己集合してヘテロ二量体であるＦｃドメインおよびヘテロ二量体抗体である抗体（例えば、二重特異性抗体）を形成する、２つの異なる重鎖バリアントＦｃ配列の使用に依存する二重特異性ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴチェックポイント抗体を提供する。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴの両方への結合を可能にする抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。本明細書に記載の抗体構築物は、二量体へと組織化する、２つの重鎖からの２つのＦｃドメイン（例えば、２つのＦｃドメイン、２つのＦｃドメインを含む２つの可変領域、および／または２つの重鎖）の自己組織化および対形成に基づく。いくつかの実施形態では、各単量体のアミノ酸配列は、単量体から二量体への組織化を容易にするために変更される。いくつかの実施形態では、これらのアミノ酸バリアントおよび／または改変は、定常領域内にある。いくつかの実施形態では、アミノ酸バリアントは、ホモ二量体組織化と比較して、ヘテロ二量体組織化を促進および／または容易にするために、各定常領域において異なっている。二重特異性抗体のための多数の方法およびフォーマットが、当技術分野で知られている（例えば、Ｇｏｄａｒ，ｅｔ．ａｌ．、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、２８（３）：２５１−２７６（２０１８）およびＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｔｈｅ  ｍａｋｉｎｇ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭＡｂｓ、９（２）：１８２−２１２（２０１７）を参照、これらは両方とも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１８８】
本明細書で提供されるように、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性ヘテロ二量体抗体は、２つの抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含み、これらはそれぞれ異なるチェックポイントタンパク質、特に、ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴに結合する。これらのヘテロ二量体抗体は、二重特異性および二価（各抗原は、例えば、単一のＡＢＤによって結合する）であってもよく、または二重特異性および三価（ある抗原が単一のＡＢＤによって結合し、他方が２つのＡＢＤによって結合する）であってもよい。本明細書に記載されている全ての可変重鎖および軽鎖ドメインについて、さらなるバリアントを作製することができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、例えば、図４、７、８、１１、１２、１５、１６、１７、２３、２４、４０、および４１において、本明細書に列挙される可変重および軽ドメインおよび／または鎖のいずれかからのＡＢＤを含むことができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、例えば、図４、７、８、１１、１２、１５、１６、１７、２３、２４、４０、および４１において、本明細書に列挙される可変重および軽ドメインおよび／または鎖のいずれかからのＣＤＲを含むことができる。本明細書で概説されるように、いくつかの実施形態では、６つのＣＤＲのセットは、０、１、２、３、４または５個のアミノ酸修飾（特に有用なアミノ酸置換を有する）と、フレームワーク（ＣＤＲを除く）が、ヒト生殖系列配列に対して少なくとも約８０、８５、または９０％の同一性を保持している限り、可変重および軽ドメインのフレームワーク領域中に変化を有していてもよい。したがって、例えば、フレームワーク領域が、ヒト生殖系列配列に対して少なくとも約８０、８５、または９０％の同一性を保持している限り、本明細書に記載の同一のＣＤＲを、ヒト生殖系列配列からの異なるフレームワーク配列と組み合わせることができる。代替的に、ＣＤＲは、ＣＤＲのセット中に、アミノ酸修飾（例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸修飾）を有していてもよく（すなわち、ＣＤＲは、６つのＣＤＲのセット中の総変化数が、６アミノ酸修飾未満である限り、修飾されてもよく、ＣＤＲの任意の組み合わせが変更され、例えば、ｖｌＣＤＲｌ中に１つの変更、ｖｈＣＤＲ２中に２つの変更が存在し、ｖｈＣＤＲ３中に存在しない、等）、また、フレームワーク領域が、ヒト生殖系列配列に対して少なくとも約８０、８５、または９０％の同一性を保持している限り、フレームワーク領域の変化を有する。
【０１８９】
本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。二重特異性抗体は、一般に、宿主細胞の各重鎖および軽鎖の遺伝子を発現させることによって作られる。これにより、一般に、２つのホモ二量体（Ａ−ＡおよびＢ−Ｂ（軽鎖ヘテロ二量体の問題は含まない））だけでなく、所望のヘテロ二量体（Ａ−Ｂ）が形成される。
【０１９０】
ホモ二量体およびヘテロ二量体の抗体形成を取り巻く問題（および精製中の２つの分離に関する問題）に対処するために、ホモ二量体形態ではなくヘテロ二量体形態の方に自己組織化を偏らせる方法が開発された。いくつかの機構および方法を使用して、ヘテロ二量体抗体を生成することができ、特に、図４、７、８、１１、１２、１５、１６、１７、２３、２４、４０、および４１のものを含め、本発明のＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴ抗体配列を用いてヘテロ二量体を生成することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、図２６、４０、および４１に提供される配列（配列番号３２１３〜３６１２）を含む。いくつかの実施形態では、メカニズムおよび方法を組み合わせて、高い割合のヘテロ二量体化を確実にする。
【０１９１】
ヘテロ二量体化バリアントを促進し得るバリアント（時に、「ヘテロ二量体化バリアント」と呼ばれる）は、立体的バリアント（例えば、図２５、４２、および４３の一例として提供されるような「ノブアンドホール」、または以下に記載される「スキューバリアント」、および以下に記載される「電荷対」バリアント）、ならびに「ｐｉバリアント」を含んでいてもよく、ヘテロ二量体からのホモ二量体の精製を可能にする。かかる方法は、ＷＯ１９９６／０２７０１１およびＷＯ２０１４／１４５８０６（「ヘテロ二量体化バリアント」の議論のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ＷＯ２００６／１０６９０５またはＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されるような、「ノブアンドホール」（「ＫＩＨ」、本明細書では、時に、「スキュー」バリアント、「静電ステアリング」または「電荷対」を含むヘテロ二量体化のための有用な機構、ＷＯ２００７／１１４３２５またはＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されるｐｉバリアント、ならびにＷＯ２０１７／２１８７０７およびＷＯ２０１８０４５１１０を含む、種々の特許刊行物に記載されており、その全てが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１９２】
１．ヘテロ二量体化バリアント
本発明は、ヘテロ二量体形成および／またはホモ二量体からの精製を可能にするためにヘテロ二量体化バリアントを利用する、様々なフォーマットでの抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体抗体を提供する。
【０１９３】
ヘテロ二量体化スキューバリアントのセットのいくつかの好適な対が存在する。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。いくつかの実施形態では、対の１つのセットが、第１の単量体に組み込まれ、対の他のセットが、第２の単量体に組み込まれる。いくつかの実施形態では、これらのセットは、一方の単量体上の残基と他方の単量体上の残基との間で一対一の対応関係を有する「ホール内のノブ」バリアントとして必ずしも挙動しないことであり、むしろ、これらのセットの対は、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げる２つの単量体間の界面を形成し、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロ二量体の割合を予想される５０％（２５％ホモ二量体Ａ／Ａ：５０％ヘテロ二量体Ａ／Ｂ：２５％ホモ二量体Ｂ／Ｂ）ではなく９０％以上にすることを可能にする。いくつかの実施形態では、形成されるヘテロ二量体の割合は、９０％を超え、９１％を超え、９２％を超え、９３％を超え、９４％を超え、９５％を超え、９６％を超え、９７％を超え、９８％を超えるか、または９９％を超える。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体の形成は、立体的バリアントの付加によって促進され得る。いくつかの実施形態では、各重鎖中のアミノ酸を変えることによって、異なる重鎖が会合して、同じＦｃアミノ酸配列を有するホモ二量体を形成するよりも、ヘテロ二量体構造を形成する可能性が高い（例えば、ＨＣ／ＨＣミスペアリングを防ぐ）。適切な立体的バリアントは、当該技術分野で知られており、以下にさらに詳細に記載される。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を不利にする立体的影響を作り出すアミノ酸操作を指す、「ノブアンドホール」または「ホール内のノブ」と呼ばれる機構も、任意選択的に使用することができる。これは、時折、Ｒｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９（７）：６１７（１９９６）；Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７  ２７０：２６；米国特許第８，２１６，８０５号；およびＷＯ１９９６／０２７０１１（それらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、「ホール内のノブ」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、「ノブ」は、ＣＨ３ドメインａバリアントＴ３６６Ｙを指し、「ホール」は、ＣＨ３ドメインｂバリアントＹ４０７Ｔを指す。いくつかの実施形態では、「ノブ」は、ＣＨ３ドメインａバリアントＳ３５４Ｃ／Ｔ３６６Ｗを指し、「ホール」は、ＣＨ３ドメインｂバリアンＹ３４９Ｃ／Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを指す。さらに、Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７（１９９８）に記載されているように、これらの「ノブアンドホール」変異を、ヘテロ二量体化に対するスキュー形成のためにジスルフィド結合と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、対からの置換の１つのセットを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、対からの置換の他のセットを含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、対からの「ノブ」置換を含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、「ホール」置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ結合部分は、対からの「ノブ」置換を含み、ＰＶＲＩＧ結合部分は、「ホール」置換を含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、置換Ｓ３５４Ｃ／Ｔ３６６Ｗを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、置換Ｙ３４９Ｃ／Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、置換Ｓ３５４Ｃ／Ｅ３５６Ｄ／Ｍ３５８Ｌ／Ｔ３６６Ｗを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、置換Ｙ３４９Ｃ／Ｅ３５６Ｄ／Ｍ３５８Ｌ／Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含む。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、静電ステアリング効果を作り出すために変異を導入するアミノ酸操作を指す、「ＡＲＴ−Ｉｇ」（非対称再操作技術−免疫グロブリン）と呼ばれる機構も、任意選択的に使用することができる。例えば、これらは、静電ステアリング効果を作り出すためのＬＣ／ＨＣペアリング（フレームワーク／相補性決定領域のシャッフリングによる一般的なＬＣ）と、変異の導入によって解決されるＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処する。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、対からの置換の１つのセットを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、対からの置換の他のセットを含む。かかる方法は、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７（２０１０）およびＷＯ２００６／１０６９０５に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。この方法は、「電荷対」と呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、静電気を使用して、形成をヘテロ二量体化の方に向かわせる。これらの置換は、πに対しても影響を有することができるため、精製時に、いくつかの実施形態では、ｐｉバリアントとみなすこともできる。いくつかの実施形態では、かかる置換は、「立体的バリアント」とみなされ、かつ／または呼ばれる。いくつかの実施形態では、これらは、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対形成された置換Ｄ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅのセットを含むＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ３電荷対（ＥＥＥ−ＲＲＲ）を含む。いくつかの実施形態では、これらは、Ｃ２２３Ｒ／Ｅ２２５Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対形成された置換Ｃ２２３Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅのセットを含むＩｇＧ２ヒンジ／ＣＨ３電荷対（ＥＥＥ−ＲＲＲＲ）を含む。いくつかの実施形態では、これらは、Ｅ３５６Ｋ／Ｄ３９９Ｋと対形成されたＣＨ３電荷対（ＤＤ−ＫＫ）Ｋ３９２Ｄ／Ｋ４０９Ｄを含む。いくつかの実施形態では、これらは、ＥＷ−ＲＶＴ対を含み、Ｑ３４７Ｒ／Ｄ３９９Ｖ／Ｆ４０５Ｔと対形成されたＫ３６０Ｅ／Ｋ４０９Ｗを有する。いくつかの実施形態では、これらは、ＥＷ−ＲＶＴＳ−Ｓ対を含み、Ｑ３４７Ｒ／Ｄ３９９Ｖ／Ｆ４０５Ｔ／Ｓ３５４Ｃと対形成されたＫ３６０Ｅ／Ｋ４０９Ｗ／Ｙ３４９Ｃを有する。いくつかの実施形態では、これらは、３４９、３６８、３４９、または３４９＋３５５で３５１ＤまたはＥまたはＤと対形成された３６６Ｋ（＋３５１Ｋ）を含む。いくつかの実施形態では、これらは、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｌ−Ｒ）対を含み、Ｋ４０９Ｒと対形成されたＦ４０５Ｌを有する。いくつかの実施形態では、これらは、ＳＥＥＤｂｏｄｙ対を含み、ＩｇＧ／Ａキメラと対形成されたＩｇＧ／Ａキメラを有する。いくつかの実施形態では、これらは、ＢＥＡＴ対を含み、ＴＣＲβ界面からの残基と対形成されたＴＣＲα界面からの残基を有する。いくつかの実施形態では、これらは、ＢＥＡＴ対を含み、ＣＨ３ドメインｂ中のＴＣＲβ界面からの残基と対形成されたＣＨ３ドメインａ中のＴＣＲα界面からの残基を有する。いくつかの実施形態では、これらは、７．８．６０（ＤＭＡ−ＲＲＶＶ）対を含み、Ｅ３４５Ｒ／Ｑ３４７Ｒ／Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｖと対形成されたＫ３６０Ｄ／Ｄ３９９Ｍ／���４０７Ａを有する。いくつかの実施形態では、これらは、２０．８．３４（ＳＹＭＶ−ＧＤＱＡ）対を含み、Ｅ３５６Ｇ／Ｅ３５７Ｄ／Ｓ３６４Ｑ／Ｙ４０７Ａと対形成されたＹ３４９Ｓ／Ｋ３７０Ｙ／Ｔ３６６Ｍ／Ｋ４０９Ｖを有する。例えば、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｔｈｅ  ｍａｋｉｎｇ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭＡｂｓ、９（２）：１８２−２１２（２０１７）を参照。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、対からの置換の１つのセットを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、対からの置換の他のセットを含む。例えば、ＷＯ２０１２／１３１５５５およびＷＯ２０１１／１３１７４６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、ＣｒｏｓｓＭＡｂと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処することができる。いくつかの実施形態では、ＣｒｏｓｓＭＡｂＶＨ−ＶＬは、ＶＨドメインとＶＬドメインを交換するために使用される。いくつかの実施形態では、ＣｒｏｓｓＭＡｂＣＨ１−ＣＬは、ＣＨ１ドメインとＣＬドメインを交換するために使用される。いくつかの実施形態では、ＣｒｏｓｓＭＡｂＦａｂは、ＶＨ−ＣＨ１ドメインとＶＬ−ＣＬドメインを交換するために使用される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性ヘテロ二量体抗体は、ＣｒｏｓｓＭＡｂＣＨ１−ＣＬを使用し、ＣＨ１ドメインとＣＬドメインが交換される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性ヘテロ二量体抗体は、ＣｒｏｓｓＭＡｂＶＨ−ＶＬを使用し、ＶＨドメインとＶＬドメインが交換される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性ヘテロ二量体抗体は、ＣｒｏｓｓＭＡｂＦａｂを使用し、ＶＨ−ＣＨ１ドメインとＶＬ−ＣＬドメインが交換される。例えば、ＷＯ２００９／０８０２５１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、ＢｉＭＡｂと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣおよびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処し、そして所望の二重特異性抗体の形成を促進することができる。例えば、ＷＯ２０１０／１２９３０４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。いくつかの実施形態では、ＬＣ／ＨＣおよびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題は、例えば、ヒトＩｇＧ２において、静電ステアリング効果を作り出すための変異を導入することによって解決することができる。いくつかの実施形態では、これらは、ＢｉＭＡｂ対を含み、ＣＨ３ドメインｂの置換Ｅ２３６Ｋ／Ｄ２７８Ｋと対形成されたＣＨ３ドメインａの置換Ｋ２４９Ｅ／Ｋ２８８Ｅを有する。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＢｉＭＡｂ対からの置換の１つのセットを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＢｉＭＡｂ対からの置換の他のセットを含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、ＦｃΔＡｄｐと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣおよびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処し、そして所望の二重特異性抗体の形成を促進することができる。例えば、ＷＯ２０１０／１５１７９２（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。いくつかの実施形態では、ＬＣ／ＨＣおよびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題は、変異を導入して異なるプロテインＡ親和性を作り出すことによって解決することができる。いくつかの実施形態では、これらは、ＦｃΔＡｄｐ対を含み、ＣＨ３ドメイン中に置換がないものと対形成されたＣＨ３ドメインａの置換Ｈ４３５Ｒを有する。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＦｃΔＡｄｐ対からの置換の１つのセットを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＦｃΔＡｄｐ対からの置換の他のセットを含む。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ＸｍＡｂと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ）およびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処し、そして所望の二重特異性抗体の形成を促進することができる。例えば、ＷＯ２０１１／０２８９５２（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。いくつかの実施形態では、ＬＣ／ＨＣ（Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ）およびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題は、ＨＡ−ＴＦ置換を導入することによって解決することができる。いくつかの実施形態では、ＨＡ−ＴＦ対は、ＣＨ３ドメインａ置換Ｓ３６４Ｈ／Ｆ４０５Ａと、ＣＨ３ドメインｂ置換Ｙ３４９Ｔ／Ｔ３９４Ｆとを含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＸｍＡｂ対からの置換の１つのセットを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＸｍＡｂ対からの置換の他のセットを含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ＤｕｏＢｏｄｙと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣ（交換された制御されたＦａｂ−アーム）およびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処し、そして所望の二重特異性抗体の形成を促進することができる。例えば、ＷＯ２０１１／１３１７４６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。いくつかの実施形態では、ＬＣ／ＨＣおよびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題は、ＣＨ３ドメイン置換を導入することによって解決することができる。いくつかの実施形態では、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｌ−Ｒ）対は、ＣＨ３ドメインｂ置換Ｋ４０９Ｒと対形成されたＣＨ３ドメインａ置換Ｆ４０５Ｌを含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＤｕｏＢｏｄｙ対からの置換のうちの１つを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＤｕｏＢｏｄｙ対からの他の置換を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣ（ｏｒｔｈｏＦａｂ−Ｉｇ）およびＨＣ／ＨＣミスペアリングの問題に対処し、そして所望の二重特異性抗体の形成を促進することができる。例えば、ＷＯ２０１２／０５８７６８（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。いくつかの実施形態では、ミスペアリングの問題は、ＺＷ１ドメイン置換を導入することによって解決することができる。いくつかの実施形態では、ＺＷ１対は、ＣＨ３ドメインｂ置換Ｔ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｎ３９０Ｒ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗと対形成されたＣＨ３ドメインａ置換Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｓ４００Ｅ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＺＷ１対からの置換のうちの１つを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＺＷ１対からの他の置換を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓと呼ばれる機構を使用して、ＬＣ／ＨＣ（トランスジェニックマウスＭｅＭｏとファージディスプレイライブラリを用いることによって作られる一般的なＬＣ）およびＨＣ／ＨＣミスペアリングミスペアリングの問題に対処し、そして所望の二重特異性抗体の形成を促進することができる。例えば、ＷＯ２０１３／１５７９５３（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照。いくつかの実施形態では、ミスペアリングの問題は、様々な置換を導入することによって解決することができる。いくつかの実施形態では、置換対は、Ｙ３４９、Ｌ３６８、またはＹ３４９、および＋Ｒ３５５のうちのいずれか１つで、ＣＨ３ドメインｂ置換Ｌ３５１Ｄ／ＥまたはＤと対形成されたＣＨ３ドメインａ置換Ｔ３６６Ｋ（＋Ｌ３５１Ｋ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ対からの置換のうちの１つを含み、ＴＩＧＩＴ結合部分は、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ対からの他の置換を含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される立体的バリアントは、一方または両方の単量体中に、任意のｐｉバリアントまたは他のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント、ＦｃＲｎバリアント等）と共に、任意選択的に、かつ独立して組み込むことができ、独立して、かつ任意選択的に、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体に含まれてもよく、または除外されてもよい。
【０２０５】
２．例示的な二重特異性抗体フォーマット
当業者によって理解され、以下でより完全に議論されるように、本発明の抗ＴＩＧＩＴ／抗ＰＶＲＩＦ二重特異性ヘテロ二量体抗体は、図３３（非対称フォーマット）および３４（対称フォーマット）で提供されるように、種々の構成で生じ得る（また、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｔｈｅ  ｍａｋｉｎｇ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭＡｂｓ、９（２）：１８２−２１２（２０１７）を参照、参照により本明細書に組み入れられる）。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ／抗ＰＶＲＩＦ二重特異性抗体のヘテロ二量体フォーマットは、異なる価数を有するだけではなく、二重特異性であってもよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ／抗ＰＶＲＩＦ二重特異性ヘテロ二量体抗体は、二価かつ二重特異性であってもよく、１つのチェックポイント標的（例えば、ＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴのいずれか）が、１つの結合部分または抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）によって結合し、他のチェックポイント標的（例えば、ＴＩＧＩＴまたはＰＶＲＩＧのいずれか）が、第２の結合部分または抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）によって結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＩＧＩＴ／抗ＰＶＲＩＦ二重特異性ヘテロ二量体抗体はまた、三価かつ二重特異性であってもよく、第１のチェックポイント標的（例えば、ＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴのいずれか）が、２つの結合部分または抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）によって結合し、第２のチェックポイント標的（例えば、ＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴのいずれか）が、第２の結合部分または抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）によって結合する。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、フォーマットは、例えば、図３３および３４、ならびに参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１４９０７７Ａ１およびＷＯ２０１７／２１８７０７に提供されるもののいずれか１つである。これらのフォーマットは、同様に、上述のバリアントのいずれかと組み合わせることができる。
【０２０７】
Ｂ．抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分
ＰＶＲＩＧまたはＰＶＲＩＧのエピトープに対する特異的結合は、少なくとも約１０−４  Ｍ、少なくとも約１０−５  Ｍ、少なくとも約１０−６  Ｍ、少なくとも約１０−７  Ｍ、少なくとも約１０−８  Ｍ、少なくとも約１０−９  Ｍ、代替的には少なくとも１０−１０  Ｍ、少なくとも約１０−１１  Ｍ、少なくとも約１０−１２  Ｍ、またはそれを超えるＫＤを有する抗体によって示され得、ここでＫＤは、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、ＰＶＲＩＧ抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫＤを有することになる。
【０２０８】
一般的に、ＮＫおよびＴ細胞の表面上で発現されるＰＶＲＩＧへの最適な結合のためには、抗体は、好ましくは５０ｎＭ未満、最も好ましくは１ｎＭ未満のＫＤを有し、０．１ｎＭ未満、１ｐＭ未満、および０．１ｐＭが、本発明の方法に有用である。
【０２０９】
また、特定の抗原またはエピトープへの特異的結合は、例えば、ＰＶＲＩＧ抗原またはエピトープについてのＫＡまたはＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗体によって示され得、ＫＡまたはＫａは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指す。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、もしくは１ｎＭ以下のＫＤ（つまり、より高い結合親和性）、または１ｐＭ以下のＫＤでヒトＰＶＲＩＧに結合し、ＫＤは、既知の方法、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ）、ＥＬＩＳＡ、ＫＩＮＥＸＡ、最も典型的にはＳＰＲによって２５℃または３７℃で決定される。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体に対する結合親和性は、活性と相関させることができる。Ｔ細胞上で最も高い最大シグナルを示す抗体は、ピコモル範囲の親和性と相関させることができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、それらの親和性に部分的に基づくＴ細胞に基づく免疫療法に有用であり得る。ＷＯ２０１６／１３４３３３からの抗体配列に参照がなされ、これは参照により、特に、図３８（ＰＶＲＩＧに結合し、ＰＶＲＩＧとＰＶＲＬ２との相互作用を遮断する配列を示し、本明細書では図４のものを含む）、図３９（ＰＶＲＩＧに結合するが、ＰＶＲＩＧとＰＶＲＬ２との相互作用を遮断しない配列を示し、本明細書では図５のものを含む）、図４０（これらの抗体からのＣＤＲおよびデータを示し、本明細書では図６のものを含む）、および図４１（結合し、遮断するハイブリドーマからのＣＤＲを示し、本明細書では図７のものを含む）、ならびに抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体で使用するための追加のＰＶＲＩＧ結合部分を提供する図３５に概説される抗ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメインについて、本明細書に組み込まれる。すなわち、ＷＯ２０１６／１３４３３３による図および凡例、ならびに全てのＣＰＡ．７およびＣＨＡ．７抗体（ＣＤＲ、ＶＨおよびＶＬならびに完全長配列を含む）からの特定の配列および配列番号が、本明細書に明示的に組み込まれる。
【０２１２】
本発明の抗ＰＶＲＩＧおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ピコモル範囲、例えば、０．１〜９ｐＭ（約０．２〜約２が好ましく、約０．２〜約０．５が特に有用である）の（本明細書に概説される技法を用いて測定される）結合親和性を有する。
【０２１３】
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分を提供する際に有用であり得るＰＶＲＩＧ抗体は、以下のように名付けられている。本明細書に記載されるこれらのＰＶＲＩＧ抗体は、以下のように名付けられる。ＰＶＲＩＧ抗体は、例えば「ＣＰＡ．７．０１３」のような参照番号を有する。これは、例えば、図４Ａ〜４ＡＡおよび図５Ａ〜５Ｈに図示するように、可変重鎖および可変軽鎖の組み合わせを表す。「ＣＰＡ．７．０１３．ＶＨ」はＣＰＡ．７．０１３の可変重部分を指し、一方「ＣＰＡ．７．０１３．ＶＬ」は可変軽鎖である。「ＣＰＡ．７．０１３．ｖｈＣＤＲ１」、「ＣＰＡ．７．０１３．ｖｈＣＤＲ２」、「ＣＰＡ．７．０１３．ｖｈＣＤＲ３」、「ＣＰＡ．７．０１３．ｖｌＣＤＲ１」、「ＣＰＡ．７．０１３．ｖｌＣＤＲ２」、および「ＣＰＡ．７．０１３．ｖｌＣＤＲ３」は、示されるＣＤＲを指す。「ＣＰＡ．７．０１３．ＨＣ」は、この分子の重鎖全体（例えば、可変および定常ドメイン）を指し、「ＣＰＡ．７．０１３．ＬＣ」は、同じ分子の軽鎖全体（例えば、可変および定常ドメイン）を指す。「ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ１」は、ヒトＩｇＧ１の定常ドメインを含む可変重および軽ドメインを含む完全長抗体を指す（したがって、例えば、Ｈ１；ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４配列を図９および２１に示す）。したがって、「ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ２」は、ヒトＩｇＧ２と連結されたＣＰＡ．７．０１３可変ドメインである。「ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ３」は、ヒトＩｇＧ３と連結されたＣＰＡ．７．０１３可変ドメインであり、「ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ４」は、ヒトＩｇＧ４と連結されたＣＰＡ．７．０１３可変ドメインである。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＰＶＲＩＧ抗体配列および／またはＰＶＲＩＧ抗原結合ドメイン配列のいずれかを含むことができる。
【０２１４】
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分を提供する際に有用であり得るＰＶＲＩＧ抗体は、以下のように名付けられている。これらの抗体は参照番号、例えば「ＣＨＡ．７．５１８．１」を有する。これは、これらの抗体が２本の重鎖および２本の軽鎖を含むという理解に基づいて、例えば図７に図示されるような、可変重鎖および可変軽鎖の組み合わせを表す。「ＣＰＡ．７．５１８．１．ＶＨ」はＣＰＡ．７．５１８．１の可変重部分を指し、一方「ＣＰＡ．７．５１８．１．ＶＬ」は可変軽鎖である。「ＣＰＡ．７．５１８．１．ｖｈＣＤＲ１」、「ＣＰＡ．７．５１８．１．ｖｈＣＤＲ２」、「ＣＰＡ．７．５１８．１．ｖｈＣＤＲ３」、「ＣＰＡ．７．５１８．１．ｖｌＣＤＲ１」、「ＣＰＡ．７．５１８．１．ｖｌＣＤＲ２」、および「ＣＰＡ．７．５１８．１．ｖｌＣＤＲ３」は、示されるＣＤＲを指す。「ＣＰＡ．７．５１８．１．ＨＣ」は、この分子の重鎖全体（例えば、可変および定常ドメイン）を指し、「ＣＰＡ．７．５１８．１．ＬＣ」は、同じ分子の軽鎖全体（例えば、可変および定常ドメイン）を指す。一般に、ヒトカッパ軽鎖は、本明細書における各ファージ（またはヒト化ハイブリドーマ）抗体の定常ドメインに使用されるが、いくつかの実施形態では、ラムダ軽鎖定常ドメインが使用される。「ＣＰＡ．７．５１８．１．Ｈ１」は、ヒトＩｇＧ１の定常ドメインを含む可変重ドメインおよび軽ドメインを含む完全長抗体を指す（したがって、Ｈ１；ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４配列は図２１に示す）。したがって、「ＣＰＡ．７．５１８．１．Ｈ２」は、ヒトＩｇＧ２と連結されたＣＰＡ．７．５１８．１可変ドメインである。「ＣＰＡ．７．５１８．１．Ｈ３」は、ヒトＩｇＧ３と連結されたＣＰＡ．７．５１８．１可変ドメインであり、「ＣＰＡ．７．５１８．１．Ｈ４」は、ヒトＩｇＧ４と連結されたＣＰＡ．７．５１８．１可変ドメインである。場合によっては、ヒトＩｇＧは、追加の変異を有し得、かかるものは以下に記載され、これには注釈を付けられ得ることに留意されたい。例えば、多くの実施形態では、ヒトＩｇＧ４にＳ２４１Ｐ変異が存在し得、これは、例えば、「ＣＰＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）」と注釈を付けられ得る。このＳ２４１Ｐヒンジバリアントを有するヒトＩｇＧ４配列を図２１に示す。他の可能性のあるバリアントは、ＩｇＧ１（Ｎ２９７Ａ）（またはこの部位でグリコシル化を切除し、したがってＦｃγＲＩＩＩａ結合に関連するエフェクター機能の多くを切除した他のバリアント）、およびＦｃγＲ受容体との結合を低減させるＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）である。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＰＶＲＩＧ抗体配列のいずれかを含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＰＶＲＩＧ抗原結合ドメイン配列のいずれかを含むことができる。
【０２１５】
本発明は、可変重および軽ドメイン、ならびに完全長重および軽鎖をさらに提供し、それらのいずれも、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ結合部分の一部として利用することができる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本発明は、上記で概説したｓｃＦｖリンカーによって連結された可変重ドメインおよび可変軽ドメインを含むＰＶＲＩＧと結合するｓｃＦｖを提供する。ＶＬおよびＶＨドメインは、いずれかの配向、例えばＮ末端からＣ末端まで「ＶＨ−リンカー−ＶＬ」または「ＶＬ−リンカー」ＶＨ」であり得る。これらは、それらの構成要素部分によって命名され、例えば、「ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．７．５１８．１ＶＨ−リンカー−ＶＬ」または「ｓｃＦｖ−ＣＰＡ．７．５１８．１．ＶＬ−リンカー−ＶＨ」である。したがって、「ｓｃＦｖ−ＣＰＡ．７．５１８．１」は、いずれの配向であり得る。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＰＶＲＩＧと結合するｓｃＦｖを含むことができる。
【０２１７】
本発明は、いくつかの列挙される６つのＣＤＲのセットを含む、全長抗体を含む抗原結合ドメインを提供する。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分に、本明細書で提供されるＰＶＲＩＧ抗体配列からの６つのＣＤＲのセットのいずれかを含むことができる。
【０２１８】
本発明は、可変重および軽ドメイン、ならびに完全長重および軽鎖をさらに提供する。
【０２１９】
多くの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ヒト（ファージ由来）であり、ＰＶＲＩＧとＰＶＬＲ２との結合を遮断する。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、受容体−リガンド相互作用の結合および遮断の両方が可能なＰＶＲＩＧ抗体ならびに／または抗原結合ドメイン配列を含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、受容体−リガンド相互作用の結合および遮断の両方が可能なＰＶＲＩＧ抗体配列からのＣＤＲを含むことができる。受容体−リガンド相互作用の結合および遮断の両方を行うＣＰＡ抗体、ならびにＣＤＲ配列は以下のとおりであり、その構成要素も概説されており、その配列を図４に示す；
【０２２０】
ＣＰＡ．７．００１、ＣＰＡ．７．００１．ＶＨ、ＣＰＡ．７．００１．ＶＬ、ＣＰＡ．７．００１．ＨＣ、ＣＰＡ．７．００１．ＬＣ、およびＣＰＡ．７．００１．Ｈ１、ＣＰＡ．７．００１．Ｈ２、ＣＰＡ．７．００１．Ｈ３、ＣＰＡ．７．００１．Ｈ４；ＣＰＡ．７．００１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．００１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．００１．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２１】
ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００３．ＶＨ、ＣＰＡ．７．００３．ＶＬ、ＣＰＡ．７．００３．ＨＣ、ＣＰＡ．７．００３．ＬＣ、ＣＰＡ．７．００３．Ｈ１、ＣＰＡ．７．００３．Ｈ２、ＣＰＡ．７．００３．Ｈ３、ＣＰＡ．７．００３．Ｈ４；ＣＰＡ．７．００３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．００３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．００３．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２２】
ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００４．ＶＨ、ＣＰＡ．７．００４．ＶＬ、ＣＰＡ．７．００４．ＨＣ、ＣＰＡ．７．００４．ＬＣ、ＣＰＡ．７．００４．Ｈ１、ＣＰＡ．７．００４．Ｈ２、ＣＰＡ．７．００４．Ｈ３  ＣＰＡ．７．００４．Ｈ４；ＣＰＡ．７．００４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．００４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．００４．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２３】
ＣＰＡ．７．００６、ＣＰＡ．７．００６．ＶＨ、ＣＰＡ．７．００６．ＶＬ、ＣＰＡ．７．００６．ＨＣ、ＣＰＡ．７．００６．ＬＣ、ＣＰＡ．７．００６．Ｈ１、ＣＰＡ．７．００６．Ｈ２、ＣＰＡ．７．００６．Ｈ３  ＣＰＡ．７．００６．Ｈ４；ＣＰＡ．７．００６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．００６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．００６．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２４】
ＣＰＡ．７．００８、ＣＰＡ．７．００８．ＶＨ、ＣＰＡ．７．００８．ＶＬ、ＣＰＡ．７．００８．ＨＣ、ＣＰＡ．７．００８．ＬＣ、ＣＰＡ．７．００８．Ｈ１、ＣＰＡ．７．００８．Ｈ２、ＣＰＡ．７．００８．Ｈ３  ＣＰＡ．７．００８．Ｈ４；ＣＰＡ．７．００８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．００８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．００８．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２５】
ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．００９．ＶＨ、ＣＰＡ．７．００９．ＶＬ、ＣＰＡ．７．００９．ＨＣ、ＣＰＡ．７．００９．ＬＣ、ＣＰＡ．７．００９．Ｈ１、ＣＰＡ．７．００９．Ｈ２、ＣＰＡ．７．００９．Ｈ３  ＣＰＡ．７．００９．Ｈ４；ＣＰＡ．７．００９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．００９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００９．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．００９．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２６】
ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１０．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１０．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１０．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１０．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１０．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１０．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１０．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１０．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１０．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２７】
ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１１．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１１．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１１．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１１．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１１．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１１．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１１．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１１．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１１．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２８】
ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１２．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１２．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１２．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１２．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１２．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１２．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１２．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１２．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１２．ｖｌＣＤＲ３；
【０２２９】
ＣＰＡ．７．０１３、ＣＰＡ．７．０１３．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１３．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１３．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１３．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１３．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１３．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３０】
ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１４．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１４．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１４．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１４．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１４．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１４．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１４．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１４．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１４．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３１】
ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１５．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１５．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１５．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１５．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１５．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１５．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１５．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１５．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１５．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１５．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３２】
ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１７．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１７．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１７．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１７．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１７Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１７．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１７．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１７．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０００１７１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１７．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３３】
ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０１８．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１８．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１８．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１８．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１８．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１８．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１８．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１８．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１７．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３４】
ＣＰＡ．７．０１９、ＣＰＡ．７．０１９．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１９．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１９．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１９．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１９．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１９．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１９．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０１９．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１９．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１９．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３５】
ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．０２１．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０２１．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０２１．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０２１．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０２１．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０２１．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０２１．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０２１．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０２１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０２１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０２１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０２１．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３６】
ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２２．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０２２．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０２２．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０２２．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０２２．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０２２．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０２２．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０２２．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０２２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．００２２０１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０２２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０２２．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３７】
ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０２３．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０２３．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０２３．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０２３．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０２３．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０２３．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０２３．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０２３．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０２３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０２３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０２３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０２３．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３８】
ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０２４．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０２４．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０２４．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０２４．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０２４．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０２４．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０２４．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０２４．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０２４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０２４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０２４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０２４．ｖｌＣＤＲ３；
【０２３９】
ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３３．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０３３．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０３３．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０３３．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０３３．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０３３．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０３３．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０３３．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０３３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０３３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０３３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０３３．ｖｌＣＤＲ３；
【０２４０】
ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０３４．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０３４．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０３４．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０３４．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０３４．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０３４．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０３４．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０３４．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０３４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０３４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０３４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０３４．ｖｌＣＤＲ３；
【０２４１】
ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０３６．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０３６．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０３６．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０３６．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０３６．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０３６．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０３６．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０３６．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０３６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０３６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０３６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０３６．ｖｌＣＤＲ３；
【０２４２】
ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４０．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４０．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４０．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４０．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４０．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４０．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４０．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０４０．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４０．ｖｌＣＤＲ３；
【０２４３】
ＣＰＡ．７．０４６、ＣＰＡ．７．０４６．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４６．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４６．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４６．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４６．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４６．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４６．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０４６．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４６．ｖｌＣＤＲ３；
【０２４４】
ＣＰＡ．７．０４７、ＣＰＡ．７．０４７．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４７．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４７．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４７．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４７．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４７．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４７．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０４７．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．００４７０１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４７．ｖｌＣＤＲ３；
【０２４５】
ＣＰＡ．７．０４９、ＣＰＡ．７．０４９．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４９．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４９．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４９．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４９．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４９．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４９．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０４９．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４９．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４９．ｖｌＣＤＲ３；ならびに
【０２４６】
ＣＰＡ．７．０５０、ＣＰＡ．７．０５０．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０５０．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０５０．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０５０．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０５０．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０５０．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０５０．Ｈ３  ＣＰＡ．７．０５０．Ｈ４、ＣＰＡ．７．０５０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０５０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０５０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０５０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０５０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０５０．ｖｌＣＤＲ３。
【０２４７】
さらに、ＰＶＲＩＧと結合したが、ＰＶＲＩＧとＰＶＬＲ２との相互作用を遮断しなかったいくつかのＣＰＡ抗体が本明細書で生成された。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、受容体−リガンド相互作用の結合が可能であるが、遮断は可能ではないＰＶＲＩＧ抗体ならびに／または抗原結合ドメイン配列を含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、受容体−リガンド相互作用の結合が可能であるが、遮断は可能ではない配列が可能なＰＶＲＩＧ抗体配列からのＣＤＲを含むことができる。受容体−リガンド相互作用を結合するが、遮断しないＣＰＡ抗体、およびＣＤＲ配列は以下の通りであり、その構成要素も概説されており、その配列を図４に示す：
【０２４８】
ＣＰＡ．７．０２８、ＣＰＡ．７．０２８．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０２８．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０２８．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０２８．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０２８．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０２８．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０２８．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０２８．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０２８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０２８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０２８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０２８．ｖｌＣＤＲ３。
【０２４９】
ＣＰＡ．７．０３０、ＣＰＡ．７．０３０．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０３０．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０３０．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０３０．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０３０．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０３０．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０３０．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０３０．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０３０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０３０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０３０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０３０．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５０】
ＣＰＡ．７．０４１、ＣＰＡ．７．０４１．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４１．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４１．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４１．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４１．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４１．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４１．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０４１．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４１．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５１】
ＣＰＡ．７．０１６、ＣＰＡ．７．０１６．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０１６．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０１６．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０１６．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０１６．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０１６．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０１６．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０１６．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０１６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０１６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０１６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０１６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０１６．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５２】
ＣＰＡ．７．０２０、ＣＰＡ．７．０２０．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０２０．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０２０．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０２０．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０２０．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０２０．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０２０．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０２０．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０２０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０２０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０２０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０２０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０２０．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５３】
ＣＰＡ．７．０３８、ＣＰＡ．７．０３８．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０３８．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０３８．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０３８．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０３８．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０３８．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０３８．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０３８．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０３８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０３８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０３８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０３８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０３８．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５４】
ＣＰＡ．７．０４４、ＣＰＡ．７．０４４．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４４．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４４．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４４．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４４．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４４．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４４．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０４４．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４４．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５５】
ＣＰＡ．７．０４５、ＣＰＡ．７．０４５．ＶＨ、ＣＰＡ．７．０４５．ＶＬ、ＣＰＡ．７．０４５．ＨＣ、ＣＰＡ．７．０４５．ＬＣ、ＣＰＡ．７．０４５．Ｈ１、ＣＰＡ．７．０４５．Ｈ２、ＣＰＡ．７．０４５．Ｈ３、およびＣＰＡ．７．０４５．Ｈ４；ＣＰＡ．７．０４５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．７．０４５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．７．０４５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．７．０４５．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＰＡ．７．０４５．ｖｌＣＤＲ３。
【０２５６】
本明細書で考察されるように、本発明は、上記で概説されるＣＤＲにおけるバリアントを含む、上記の構成要素のバリアントをさらに提供する。さらに、可変重鎖は、本明細書の「ＶＨ」配列と、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得、および／またはＦｃバリアントを使用する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸変化を含み得る。本明細書の「ＶＬ」配列と、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得、および／またはＦｃバリアントを使用する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸変化を含み得る、可変軽鎖が提供される。同様に、本明細書の「ＨＣ」および「ＬＣ」配列と、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり、および／またはＦｃバリアントを使用する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸変化を含む、重鎖および軽鎖が提供される。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、これらのＰＶＲＩＧ抗体および／または抗原結合ドメイン配列のいずれかを含むことができる。
【０２５７】
さらに、本発明は、ハイブリドーマから生成されたマウス抗体であるいくつかのＣＨＡ抗体を提供する。当該技術分野で周知のように、６つのＣＤＲは、ヒトフレームワーク可変重および可変軽領域のいずれかに入れられる場合、または可変重および軽ドメインがヒト化される場合に有用である。
【０２５８】
本発明の抗ＰＶＲＩＧおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分の一部として、ＰＶＲＩＧ抗体配列からの以下のＣＤＲのＣＨＡのセットのいずれかを含むことができる。したがって、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分の一部として以下のＣＤＲのＣＨＡのセットを含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供し、その配列は、図７に示される。
【０２５９】
ＣＨＡ．７．５０２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５０２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５０２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５０２．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６０】
ＣＨＡ．７．５０３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５０３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５０３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５０３．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６１】
ＣＨＡ．７．５０６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５０６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５０６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５０６．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６２】
ＣＨＡ．７．５０８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５０８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５０８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５０８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５０８．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６３】
ＣＨＡ．７．５１０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５１０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５１０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５１０．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６４】
ＣＨＡ．７．５１２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５１２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５１２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５１２．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６５】
ＣＨＡ．７．５１４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５１４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５１４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５１４．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６６】
ＣＨＡ．７．５１６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５１６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５１６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５１６．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６７】
ＣＨＡ．７．５１８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５１８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５１８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５１８．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６８】
ＣＨＡ．７．５２０＿１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２０＿１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２０＿１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２０＿１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２０＿１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２０＿１．ｖｌＣＤＲ３。
【０２６９】
ＣＨＡ．７．５２０＿２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２０＿２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２０＿２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２０＿２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２０＿２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２０＿２．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７０】
ＣＨＡ．７．５２２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２２．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７１】
ＣＨＡ．７．５２４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２４．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７２】
ＣＨＡ．７．５２６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２６．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７３】
ＣＨＡ．７．５２７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２７．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７４】
ＣＨＡ．７．５２８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５２８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５２８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５２８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５２８．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７５】
ＣＨＡ．７．５３０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５３０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５３０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５３０．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７６】
ＣＨＡ．７．５３４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５３４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５３４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５３４．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７７】
ＣＨＡ．７．５３５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５３５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５３５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３５．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５３５．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７８】
ＣＨＡ．７．５３７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５３７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５３７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５３７．ｖｌＣＤＲ３。
【０２７９】
ＣＨＡ．７．５３８＿１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３８＿１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５３８＿１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５３８＿１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３８＿１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５３８＿１．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８０】
ＣＨＡ．７．５３８＿２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３８＿２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５３８＿２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５３８＿２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５３８＿２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５３８＿２．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８１】
ＣＨＡ．７．５４３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４３．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８２】
ＣＨＡ．７．５４４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４４．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８３】
ＣＨＡ．７．５４５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４５．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４５．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８４】
ＣＨＡ．７．５４６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４６．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８５】
ＣＨＡ．７．５４７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４７．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８６】
ＣＨＡ．７．５４８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４８．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８７】
ＣＨＡ．７．５４９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５４９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５４９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５４９．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５４９．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８８】
ＣＨＡ．７．５５０．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５５０．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５５０．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５５０．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５５０．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５５０．ｖｌＣＤＲ３。
【０２８９】
ＣＨＡ．７．５１８．４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１８．４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．７．５１８．４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．７．５１８．４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．７．５１８．４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．７．５１８．４．ｖｌＣＤＲ３。
【０２９０】
上記のように、これらのＣＤＲのセットは、上述されるアミノ酸バリアントでもあり得る。
【０２９１】
さらに、可変重および可変軽鎖のフレームワーク領域は、当技術分野で公知のようにヒト化することができ（時折、バリアントが必要に応じてＣＤＲにおいて生成される）、したがって図７Ａ〜７ＤＤのＶＨおよびＶＬ鎖のヒト化バリアントを生成することができた。さらに、続いてヒト化可変重および軽ドメインを、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からの定常領域等のヒト定常領域と融合させることができる。
【０２９２】
特に、当該技術分野で公知のように、マウスＶＨおよびＶＬ鎖は、例えば、ヒト化方法について参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＹｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４１：Ｗ３４−Ｗ４０（２０１３）に概説されるように、ＮＣＢＩウェブサイトのＩｇＢＬＡＳＴプログラムを用いて、当該技術分野で公知のようにヒト化することができる。ＩｇＢＬＡＳＴは、マウスＶＨおよび／またはＶＬ配列を採取し、それを既知のヒト生殖細胞系列配列のライブラリと比較する。本明細書に示されるように、本明細書で生成されるヒト化配列について、使用したデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、２７３生殖細胞系列配列）およびＩＭＧＴヒトＶＬカッパ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４生殖細胞系列配列）であった。例となる５つのＣＨＡ配列を選択した：ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１、ＣＨＡ．７．５３８＿２、およびＣＨＡ．７．５２４（ＶＨおよびＶＬ配列については図７Ａ〜７ＤＤを参照）。このヒト化の実施形態のために、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ１−４６（対立遺伝子１）を、アクセプタ配列およびヒト重鎖ＩＧＨＪ４（対立遺伝子１）接合領域（Ｊ遺伝子）として５つ全てについて選択した。４つ（ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１、およびＣＨＡ．７．５３８＿２）のうちの３つについては、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ１−３９（対立遺伝子１）をアクセプタ配列として選択し、ヒト軽鎖ＩＧＫＪ２（対立遺伝子１）（Ｊ遺伝子）を選択した。Ｊ遺伝子は、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇのｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム、ＩＭＧＴ（登録商標）にてコンパイルされたヒト接合領域配列から選択した。ＣＤＲは、ＡｂＭ定義（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／を参照）に従って定義した。図１１Ａ〜１１Ｉは、ヒト化配列、ならびにＰＶＲＩＧへの結合を最適化するためのいくつかの可能性のある変化を図示する。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、これらのヒト化ＰＶＲＩＧ抗体または抗原結合ドメイン配列のいずれかを含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＣＨＡ．７．５１８  ＰＶＲＩＧ抗体配列を含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＣＨＡ．７．５３０  ＰＶＲＩＧ抗体配列を含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＣＨＡ．７．５３８＿１  ＰＶＲＩＧ抗体配列を含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＣＨＡ．７．５３８＿２  ＰＶＲＩＧ抗体配列を含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、ＣＨＡ．７．５１８．４  ＰＶＲＩＧ抗体配列を含むことができる。
【０２９３】
ＣＨＡ抗体の特異的ヒト化抗体は、図１１Ａ〜１１Ｉ、図１２Ａ〜１２Ｅおよび図１３に示すものを含む。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として、図１１Ａ〜１１Ｉ、図１２Ａ〜１２Ｅおよび図１３に示すＣＨＡ  ＰＶＲＩＧ抗体配列を含むことができる。当該技術分野で公知のように、各ヒト化可変重（ヒト化重；ＨＨ）および可変光（ヒト化軽；ＨＬ）配列は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の定常領域と組み合わせることができる。すなわち、ＣＨＡ．７．５１８．ＨＨ１は最初のヒト化可変重鎖であり、ＣＨＡ．７．５１８．ＨＨ１．１は、ＩｇＧ１定常領域を有する「ＨＨ１」ヒト化配列を含む完全長重鎖である（ＣＨＡ．７．５１８．ＨＨ１．２は、ＩｇＧ２を有するＣＨＡ．７．５１８．ＨＨ１、等々である）。いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ＰＶＲＩＧ結合部分として、図４、５、７、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２６、および／または４０に提供されるＰＶＲＩＧ配列を含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ抗体は、異なる抗ＰＶＲＩＧ抗体のＶＨおよびＶＬ配列が「混合化および適合化」され、他の抗ＰＶＲＩＧ抗体を創出することができる抗ＰＶＲＩＧ抗体を含む。かかる「混合化および適合化」抗体のＰＶＲＩＧ結合は、上述される結合アッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ）を使用して試験することができる。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬ鎖が混合化および適合化される場合、特定のＶＨ／ＶＬ対からのＶＨ配列が構造的に同様のＶＨ配列と置き換えられる。同様に、いくつかの実施形態では、特定のＶＨ／ＶＬ対からのＶＬ配列が構造的同様のＶＬ配列と置き換えられる。例えば、同種抗体のＶＨおよびＶＬ配列は、混合化および適合化に特に適している。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分として「混合化および適合化」された異なる抗ＰＶＲＩＧ抗体からのＰＶＲＩＧ  ＶＨおよびＶＬ配列を含むことができる。
【０２９５】
したがって、本発明の抗体は、（ａ）本明細書に列挙される配列、（ｂ）（ａ）で指定したＣＤＲアミノ酸配列とは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸置換だけ異なる配列；（ｃ）（ａ）または（ｂ）で指定した配列との９０％以上、９５％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；（ｄ）本明細書に列挙されるアミノ酸をコードする核酸配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる群から選択される、ＣＤＲアミノ酸配列を含む。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分の一部として、ＰＶＲＩＧバリアントＣＤＲ配列を含むことができる。
【０２９６】
加えて、本明細書に列挙するＰＶＲＩＧ抗体との同一性を共有する抗体がＰＶＲＩＧ抗体の定義に含まれる。すなわち、特定の実施形態では、本発明に従う抗ＰＶＲＩＧ抗体は、それぞれ好ましい抗ＰＶＲＩＧ免疫分子の単離された抗ＰＶＲＩＧアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含む重および軽鎖可変領域を含み、抗体は、親抗ＰＶＲＩＧ抗体の所望の機能特性を保持する。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列を最適にアラインメントするために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、それらの配列が共有する同一位置の数の関数である（例えば、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な実施例において記載するように、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、本明細書に記載される単離された抗ＰＶＲＩＧアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含む重および軽鎖可変領域を含むことができる。
【０２９７】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残差テーブル（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（市販されている）中のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【０２９８】
加えてまたは代替的に、本発明のタンパク質配列をさらに「クエリ配列」として使用して、例えば関連配列を特定するために、公的なデータベースに対して検索を行うことができる。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行って、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従う抗体分子と相同であるアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップのあるアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されるように利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムの利用時には、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータを使用することができる。
【０２９９】
一般に、ＰＶＲＩＧ抗体間の比較のための同一性の割合は、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％であり、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％パーセント同一性を有することが好ましい。同一性の割合は、全アミノ酸配列、例えば重もしくは軽鎖全体にかかるか、または鎖の一部にかかるものであり得る。例えば、可変領域全体にかけて（例えば、同一性が可変領域にかけて９５％または９８％同一である場合）、または定常領域全体にかけて、またはＦｃドメインのみにかけて同一性を共有するものが、本発明の抗ＰＶＲＩＧ抗体の定義に含まれる。特に、本発明は、ＰＶＲＩＧ結合部分または抗原結合ドメインを有し、ＣＨＡ．７．５１８．４抗体と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％を有し、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント同一性が好ましい、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【０３００】
加えて、同一のＣＤＲを有し得るが、可変ドメイン（または重鎖もしくは軽鎖全体）内に変化を有し得る配列も含まれる。例えば、ＰＶＲＩＧ抗体には、ＣＤＲは図８Ａ〜８Ｄに示すものと同一であるが、可変領域にかけての同一性がより低い、例えば、９５または９８％の同一性パーセントであり得るものが含まれる。特に、本発明は、ＣＨＡ．７．５１８．４と同一のＣＤＲを有するが、ＣＨＡ．７．５１８．４と９５％または９８％同一のフレームワーク領域を有するＰＶＲＩＧ結合部分または抗原結合ドメインを有する、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【０３０１】
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分の一部として、図８Ａ〜８Ｄに示されるものと同一のＣＤＲを含むことができる。
【０３０２】
加えて、同一のＣＤＲを有し得るが、可変ドメイン（または重鎖もしくは軽鎖全体）内に変化を有し得る配列も含まれる。例えば、ＰＶＲＩＧ抗体には、ＣＤＲは図３５Ａ〜３５Ｄに示すものと同一であるが、可変領域にかけての同一性がより低い、例えば、９５または９８％の同一性パーセントであり得るものが含まれる。
【０３０３】
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分の一部として、図３５Ａ〜３５Ｄに示されるものと同一のＣＤＲを含むことができる。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＷＯ２０１７／０４１００４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＰＶＲＩＧ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＰＶＲＩＧ結合部分は、ＷＯ２０１８／０１７８６４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＰＶＲＩＧ抗体に由来する。
【０３０５】
１．結合について列挙される抗体と競合するＰＶＲＩＧ抗体
本発明は、列挙される抗体だけでなく、ＰＶＲＩＧ分子と特異的に結合するために列挙される抗体（ＰＶＲＩＧと特異的に結合する本明細書に列挙されるＣＰＡおよびＣＨＡ数）と競合する追加の抗体も提供する。本発明のＰＶＲＩＧ抗体は、異なるエピトープビンに「ビニング」される。４つの別個のビンを本明細書で概説する。１）ＣＰＡ．７．００２、ＣＰＡ．７．００３、ＣＰＡ．７．００５、ＣＰＡ．７．００７、ＣＰＡ．７．０１０、ＣＰＡ．７．０１２、ＣＰＡ．７．０１５、ＣＰＡ．７．０１６、ＣＰＡ．７．０１７、ＣＰＡ．７．０１９、ＣＰＡ．７．０２０、ＣＰＡ．７．０２１、ＣＰＡ．７．０２４、ＣＰＡ．７．０２８、ＣＰＡ．７．０３２、ＣＰＡ．７．０３３、ＣＰＡ．７．０３６、ＣＰＡ．７．０３７、ＣＰＡ．７．０３８、ＣＰＡ．７．０４３、ＣＰＡ．７．０４６およびＣＰＡ．７．０４１の全てが入るエピトープビン、２）ＣＰＡ．７．００４、ＣＰＡ．７．００９、ＣＰＡ．７．０１１、ＣＰＡ．７．０１４、ＣＰＡ．７．０１８、ＣＰＡ．７．０２２、ＣＰＡ．７．０２３、ＣＰＡ．７．０３４、ＣＰＡ．７．０４０、ＣＰＡ．７．０４５およびＣＰＡ．７．０４７の全てが入るエピトープビン、３）ビン１とビン２との間の区別を定義し、ビン１がＣＰＡ．７．０３９結合を遮断し、ビン２がＣＰＡ．７．０３９とのリガンドを挟む、ＣＰＡ．７．０３９、ならびに４）ＣＰＡ．７．０５０を有するビン。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分の一部として、列挙される抗体（ＰＶＲＩＧと特異的に結合する本明細書に列挙されるＣＰＡおよびＣＨＡ数）と競合することが可能なＰＶＲＩＧ抗体および／または抗原結合ドメイン配列を含むことができる。
【０３０６】
したがって、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供し、ここで、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＰＶＲＩＧ結合部分は、ビン１中の抗体、ビン２中の抗体、ビン３中の抗体、および／またはビン４中の抗体との結合と競合することが可能である。
【０３０７】
列挙される抗体と競合する追加のＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、当該技術分野で知られているように、また以下で一般に概説するように、生成される。競合的結合研究は、一般に、ＳＰＲ／Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）結合アッセイ、ならびにＥＬＩＳＡおよび細胞系アッセイを使用して、当該技術分野で知られているように行うことができる。
【０３０８】
Ｃ．抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ結合部分
本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ＴＩＧＩＴ結合部分の一部として、ＴＩＧＩＴ抗体および／または抗原結合ドメイン配列を含むことができ、ＴＩＧＩＴ抗体は、以下のように名付けられる。かかるＴＩＧＩＴ抗体は、例えば「ＣＰＡ．９．０８６」のような参照番号を有する。これは、これらの抗体が２本の重鎖および２本の軽鎖を含むという理解に基づいて、例えば図２３に図示されるような、可変重鎖および可変軽鎖の組み合わせを表す。「ＣＰＡ．９．０８６．ＶＨ」はＣＰＡ．９．０８６の可変重部分を指し、一方「ＣＰＡ．９．０８６．ＶＬ」は可変軽鎖である。「ＣＰＡ．９．０８６．ｖｈＣＤＲ１」、「ＣＰＡ．９．０８６．ｖｈＣＤＲ２」、「ＣＰＡ．９．０８６．ｖｈＣＤＲ３」、「ＣＰＡ．９．０８６．ｖｌＣＤＲ１」、「ＣＰＡ．９．０８６．ｖｌＣＤＲ２」、および「ＣＰＡ．９．０８６．ｖｌＣＤＲ３」は、示されるＣＤＲを指す。「ＣＰＡ．９．０８６．ＨＣ」は、この分子の重鎖全体（例えば、可変および定常ドメイン）を指し、「ＣＰＡ．９．０８６．ＬＣ」は、同じ分子の軽鎖全体（例えば、可変および定常ドメイン）を指す。一般に、ヒトカッパ軽鎖は、本明細書における各ファージ（またはヒト化ハイブリドーマ）抗体の定常ドメインに使用されるが、いくつかの実施形態では、ラムダ軽鎖定常ドメインが使用される。「ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ１」は、ヒトＩｇＧ１の定常ドメインを含む可変重および軽ドメインを含む完全長抗体を指す（したがって例えばＨ１；ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４配列を図９および２１に示す）。したがって、「ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ２」は、ヒトＩｇＧ２と連結されたＣＰＡ．９．０８６可変ドメインである。「ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ３」は、ヒトＩｇＧ３と連結されたＣＰＡ．９．０８６可変ドメインであり、「ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ４」は、ヒトＩｇＧ４と連結されたＣＰＡ．９．０８６可変ドメインである。場合によっては、ヒトＩｇＧは、追加の変異を有し得、かかるものは以下に記載され、これには注釈を付けられ得ることに留意されたい。例えば、多くの実施形態では、ヒトＩｇＧ４にＳ２４１Ｐ変異が存在し得、これは、例えば、「ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）」と注釈を付けられ得る。このＳ２４１Ｐヒンジバリアントを有するヒトＩｇＧ４配列を図２１に示す。他の可能性のあるバリアントは、ＩｇＧ１（Ｎ２９７Ａ）（またはこの部位でグリコシル化を切除し、したがってＦｃγＲＩＩＩａ結合に関連するエフェクター機能の多くを切除した他のバリアント）、およびＦｃγＲ受容体との結合を低減させるＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）である。本発明の抗ＴＩＧＩＴおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＴＩＧＩＴおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ結合部分として、ＴＩＧＩＴ抗体ドメイン配列のいずれかを含むことができる。本発明の抗ＴＩＧＩＴおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＴＩＧＩＴおよび／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ結合部分として、ＴＩＧＩＴ抗原結合ドメインのいずれかを含むこ��ができる。
【０３０９】
本発明は、可変重および軽ドメイン、ならびに完全長重および軽鎖をさらに提供する。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、本発明は、上記で概説したｓｃＦｖリンカーによって連結された可変重ドメインおよび可変軽ドメインを含むＴＩＧＩＴと結合するｓｃＦｖを提供する。ＶＬおよびＶＨドメインは、いずれかの配向、例えばＮ末端からＣ末端まで「ＶＨ−リンカー−ＶＬ」または「ＶＬ−リンカー」ＶＨ」であり得る。これらは、それらの構成要素部分によって命名され、例えば、「ｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０８６．ＶＨ−リンカー−ＶＬ」または「ｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０８６．ＶＬ−リンカー−ＶＨ」である。したがって、「ｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０８６」は、いずれの配向であり得る。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ結合部分の一部として、ＴＩＧＩＴに結合する任意のｓｃＦｖを含むことができる。本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ抗原結合部分の一部として、ＴＩＧＩＴに結合する任意のｓｃＦｖを含むことができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、ＰＶＲＩＧ結合部分として、図２６に提供されるＰＶＲＩＧ配列を含む。多くの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト（ファージに由来する）であり、ＴＩＧＩＴおよびＰＶＲの結合を遮断する。図３および４に示すように、受容体−リガンド相互作用の結合と遮断との両方を行うＣＰＡ抗体は以下の通りであり、これらの構成要素も概説される（「配列」の節で考察されるように、ｓｃＦｖ構築物を除く全ての配列が、配列表内にあり、図２４で提供される）。
【０３１１】
ＣＰＡ．９．０１８、ＣＰＡ．９．０１８．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０１８．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０１８．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０１８．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０１８．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０１８．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０１８．Ｈ３、ＣＰＡ．９．０１８．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０１８．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０１８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０１８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０１８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０１８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０１８．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０１８．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０１８；
【０３１２】
ＣＰＡ．９．０２７、ＣＰＡ．９．０２７．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０２７．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０２７．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０２７．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０２７．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０２７．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０２７．Ｈ３、ＣＰＡ．９．０２７．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０１８．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０２７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０２７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０２７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０２７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０２７．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０２７．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０２７；
【０３１３】
ＣＰＡ．９．０４９、ＣＰＡ．９．０４９．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０４９．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０４９．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０４９．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０４９．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０４９．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０４９．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０４９．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０４９．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０４９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０４９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０４９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０４９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０４９．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０４９．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０４９；
【０３１４】
ＣＰＡ．９．０５７、ＣＰＡ．９．０５７．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０５７．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０５７．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０５７．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０５７．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０５７．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０５７．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０５７．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０５７．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０５７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０５７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０５７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０５７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０５７．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０５７．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０５７；
【０３１５】
ＣＰＡ．９．０５９、ＣＰＡ．９．０５９．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０５９．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０５９．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０５９．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０５９．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０５９．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０５９．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０５９．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０５９．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０５９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０５９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０５９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０５９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０５９．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０５９．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０５９；
【０３１６】
ＣＰＡ．９．０８３、ＣＰＡ．９．０８３．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０８３．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０８３．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０８３．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０８３．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０８３．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０８３．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０８３．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０８３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０８３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０８３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０８３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０８３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０８３．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０８３．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０８３；
【０３１７】
ＣＰＡ．９．０８６、ＣＰＡ．９．０８６．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０８６．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０８６．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０８６．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０８６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０８６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０８６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０８６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０８６．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０８６．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０８６；
【０３１８】
ＣＰＡ．９．０８９、ＣＰＡ．９．０８９．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０８９．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０８９．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０８９．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０８９．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０８９．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０８９．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０８９．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０８９．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０８９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０８９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０８９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０８９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０８９．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０８９．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０８９；
【０３１９】
ＣＰＡ．９．０９３、ＣＰＡ．９．０９３．ＶＨ、ＣＰＡ．９．０９３．ＶＬ、ＣＰＡ．９．０９３．ＨＣ、ＣＰＡ．９．０９３．ＬＣ、ＣＰＡ．９．０９３．Ｈ１、ＣＰＡ．９．０９３．Ｈ２、ＣＰＡ．９．０９３．Ｈ３；ＣＰＡ．９．０９３．Ｈ４；ＣＰＡ．９．０９３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．０９３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０９３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０９３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．０９３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．０９３．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．０９３．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．０９３；
【０３２０】
ＣＰＡ．９．１０１、ＣＰＡ．９．１０１．ＶＨ、ＣＰＡ．９．１０１．ＶＬ、ＣＰＡ．９．１０１．ＨＣ、ＣＰＡ．９．１０１．ＬＣ、ＣＰＡ．９．１０１．Ｈ１、ＣＰＡ．９．１０１．Ｈ２、ＣＰＡ．９．１０１．Ｈ３；ＣＰＡ．９．１０１．Ｈ４；ＣＰＡ．９．１０１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．１０１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．１０１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．１０１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．１０１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．１０１．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．１０１．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．１０１；ならびに
【０３２１】
ＣＰＡ．９．１０３、ＣＰＡ．９．１０３．ＶＨ、ＣＰＡ．９．１０３．ＶＬ、ＣＰＡ．９．１０３．ＨＣ、ＣＰＡ．９．１０３．ＬＣ、ＣＰＡ．９．１０３．Ｈ１、ＣＰＡ．９．１０３．Ｈ２、ＣＰＡ．９．１０３．Ｈ３；ＣＰＡ．９．１０３．Ｈ４；ＣＰＡ．９．１０３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＰＡ．９．１０３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．１０３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．１０３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＰＡ．９．１０３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＰＡ．９．１０３．ｖｌＣＤＲ２、ＣＰＡ．９．１０３．ｖｌＣＤＲ３、およびｓｃＦｖ−ＣＰＡ．９．１０３。
【０３２２】
さらに、本発明は、ハイブリドーマから生成されたマウス抗体であるいくつかのＣＨＡ抗体を提供する。当該技術分野でよく知られているように、６つのＣＤＲは、ヒトフレームワーク可変重および可変軽領域のいずれかに配置される場合、または可変重ドメインおよび軽ドメインがヒト化される場合に有用である。したがって、本発明は、以下のＣＤＲのセットを含む抗体、通常は完全長またはｓｃＦｖドメインを提供し、その配列は、図２３および／または配列表に示されている。
【０３２３】
ＣＨＡ．９．５３６．１、ＣＨＡ．９．５３６．１．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．１．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．１．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．１．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．１．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．１．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．１．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．１．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５３６．１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．１．ｖｈＣＤＲ３；
【０３２４】
ＣＨＡ．９．５３６．３、ＣＨＡ．９．５３６．３．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．３．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．３．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．３．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．３．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．３．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．３．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．３．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＨＡ．９．５３６．３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．３．ｖｈＣＤＲ３；
【０３２５】
ＣＨＡ．９．５３６．４、ＣＨＡ．９．５３６．４．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．４．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．４．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．４．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．４．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．４．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．４．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．４．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．４．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５３６．４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．４．ｖｈＣＤＲ３；
【０３２６】
ＣＨＡ．９．５３６．５、ＣＨＡ．９．５３６．５．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．５．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．５．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．５．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．５．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．５．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．５．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．５．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．５．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５３６．５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．５．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．５．ｖｈＣＤＲ３；
【０３２７】
ＣＨＡ．９．５３６．６、ＣＨＡ．９．５３６．６．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．６．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．６．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．６．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．６．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．６．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．６．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．６．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．６．ｖｈＣＤＲ３；
【０３２８】
ＣＨＡ．９．５３６．７、ＣＨＡ．９．５３６．７．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．７．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．７．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．７．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．７．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．７．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．７．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．７．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．５．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＨＡ．９．５３６．７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．７．ｖｈＣＤＲ３；
【０３２９】
ＣＨＡ．９．５３６．８、ＣＨＡ．９．５３６．８．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５３６．８．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５３６．８．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５３６．８．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５３６．８．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５３６．８．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５３６．８．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５３６．８．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３６．８．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５３６．８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５３６．８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５３６．８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５３６．８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５３６．８．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３０】
ＣＨＡ．９．５６０．１、ＣＨＡ．９．５６０．１ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．１．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５６０．１．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．１．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．１．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５６０．１．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．１．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．１．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５６０．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５６０．１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５６０．１．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３１】
ＣＨＡ．９．５６０．３、ＣＨＡ．９．５６０．３ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．３．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５６０．３．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．３．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．３．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５６０．３．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．３．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．３．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５６０．３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＨＡ．９．５６０．３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５６０．３．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３２】
ＣＨＡ．９．５６０．４、ＣＨＡ．９．５６０．４ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．４．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５６０．４．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．４．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．４．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５６０．４．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．４．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．４．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５６０．４．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５６０．４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５６０．４．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３３】
ＣＨＡ．９．５６０．５、ＣＨＡ．９．５６０．５ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．５．ＶＬ，ＣＨＡ．９．５６０．５．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．５．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．５．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５６０．５．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．５．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．５．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５６０．５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．５．ｖｌＣＤＲ２  ａｎｄ  ＣＨＡ．９．５６０．５．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３４】
ＣＨＡ．９．５６０．６、ＣＨＡ．９．５６０．６ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．６．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５６０．６．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．６．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．６．Ｈ１、ＣＨＡ．９５６０．６．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．６．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．６．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５６０．６．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５６０．６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５６０．６．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３５】
ＣＨＡ．９．５６０．７、ＣＨＡ．９．５６０．７ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．７．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５６０．７．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．７．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．７．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５６０．７．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．７．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．７．Ｈ４；ＣＨＡ．９．５６０．７．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＨＡ．９．５６０．７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．７．ｖｌＣＤＲ２  ａｎｄ  ＣＨＡ．９．５６０．７．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３６】
ＣＨＡ．９．５６０．８、ＣＨＡ．９．５６０．８ＶＨ、ＣＨＡ．９．５６０．８．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５６０．８．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５６０．８．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５６０．８．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５６０．８．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５６０．８．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５６０．８．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５６０．８．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＨＡ．９．５６０．８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５６０．８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５６０．８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５６０．８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５６０．８．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３７】
ＣＨＡ．９．５４６．１、ＣＨＡ．９．５４６．１ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４６．１．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４６．１．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４６．１．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４６．１．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４６．１．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４６．１．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４６．１．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４６．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４６．１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４６．１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４６．１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４６．１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４６．１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４６．１．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３８】
ＣＨＡ．９．５４７．１、ＣＨＡ．９．５４７．１ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．１．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．１．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．１．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．１．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．１．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．１．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．１．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．１．ｖｈＣＤＲ３；
【０３３９】
ＣＨＡ．９．５４７．２、ＣＨＡ．９．５４７．２ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．２．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．２．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．２．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．２．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．２．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．２．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．２．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．２．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．２．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．２．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．２．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．２．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．２．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．２．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４０】
ＣＨＡ．９．５４７．３、ＣＨＡ．９．５４７．３ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．３．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．３．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．３．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．３．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．３．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．３．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．３．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．３．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４１】
ＣＨＡ．９．５４７．４、ＣＨＡ．９．５４７．４ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．４．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．４．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．４．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．４．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．４．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．４．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．４．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．４．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．４．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４２】
ＣＨＡ．９．５４７．６、ＣＨＡ．９．５４７．６  ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．６．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．６．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．６．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．６．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．６．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．６．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．６．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．６．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．６．ｖｌＣＤＲ２およびＣＨＡ．９．５４７．６．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４３】
ＣＨＡ．９．５４７．７、ＣＨＡ．９．５４７．７ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．７．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．７．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．７．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．７．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．７．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４４】
ＣＨＡ．９．５４７．８、ＣＨＡ．９．５４７．８ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．８．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．８．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．８．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．８．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．８．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．８．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．８．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．８．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．８．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．８．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．８．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４５】
ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．９、ＣＨＡ．９．５４７．９ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．９．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．９．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．９．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．９．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．９．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．９．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．９．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．９．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．９．ｖｌＣＤＲ２およびＣＨＡ．９．５４７．９．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４６】
ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４７．１３、ＣＨＡ．９．５４７．１３ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．１３．ｖｌＣＤＲ２  ａｎｄ  ＣＨＡ．９．５４７．１３．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４７】
ＣＨＡ．９．５４１．１、ＣＨＡ．９．５４１．１．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．１．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．１．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．１．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．１．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．１．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．１．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．１．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４１．１．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．１．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．１．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．１．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．１．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４１．１．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４８】
ＣＨＡ．９．５４１．３、ＣＨＡ．９．５４１．３．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．３．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．３．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．３．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．３．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．３．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．３．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．３．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４１．３．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．３．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．３．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．３．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．３．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４１．３．ｖｈＣＤＲ３；
【０３４９】
ＣＨＡ．９．５４１．４、ＣＨＡ．９．５４１．４．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．４．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．４．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．４．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．４．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．４．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．４．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．４．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．４．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４１．４．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．４．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．４．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．４．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．４．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４１．４．ｖｈＣＤＲ３；
【０３５０】
ＣＨＡ．９．５４１．５、ＣＨＡ．９．５４１．５．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．５．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．５．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．５．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．５．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．５．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．５．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．５．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．５．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４１．５．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．５．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．５．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．５．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．５．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４１．５．ｖｈＣＤＲ３；
【０３５１】
ＣＨＡ．９．５４１．６、ＣＨＡ．９．５４１．６．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．６．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．６．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．６．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．６．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．６．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．６．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．６．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．６．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４１．６．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．６．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．６．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．６．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．６．ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４１．６．ｖｈＣＤＲ３；
【０３５２】
ＣＨＡ．９．５４１．７、ＣＨＡ．９．５４１．７．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．７．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．７．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．７．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．７．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．７．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．７．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．７．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．７．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４１．７．ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．７．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．７．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．７．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．７．ｖｌＣＤＲ２およびＣＨＡ．９．５４１．７．ｖｈＣＤＲ３；および
【０３５３】
ＣＨＡ．９．５４１．８、ＣＨＡ．９．５４１．８．ＶＨ、ＣＨＡ．９．５４１．８．ＶＬ、ＣＨＡ．９．５４１．８．ＨＣ、ＣＨＡ．９．５４１．８．ＬＣ、ＣＨＡ．９．５４１．８．Ｈ１、ＣＨＡ．９．５４１．８．Ｈ２、ＣＨＡ．９．５４１．８．Ｈ３；ＣＨＡ．９．５４１．８．Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４１．８．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）；ＣＨＡ．９．５４１．８ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４１．８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４１．８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４１．８．ｖｌＣＤＲ２およびＣＨＡ．９．５４１．８．ｖｈＣＤＲ３．
【０３５４】
ＣＨＡ．９．５４７．１８ｖｈＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．１８．ｖｈＣＤＲ２、ＣＨＡ．９．５４７．１８．ｖｈＣＤＲ３、ＣＨＡ．９．５４７．１８．ｖｌＣＤＲ１、ＣＨＡ．９．５４７．１８ｖｌＣＤＲ２、およびＣＨＡ．９．５４７．１８．ｖｌＣＤＲ３。
【０３５５】
上記の抗体のＣＤＲを含むｓｃＦｖの場合、これらは、ｓｃＦｖと標示され、ｓｃＦｖは、上記のように再びいずれかの配向で、ｖｈＣＤＲを有する可変重ドメイン、リンカー、およびｖｌＣＤＲを有する可変軽ドメインを含む。したがって、本発明は、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５３６．３．１、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５３６．３、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５３６．４、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５３６．５、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５３６．７、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５３６．８、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．１、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．３、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．４、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．５、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．６、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．７、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５６０．８、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４６．１、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．１、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．２、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．３、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．４、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．６、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．７、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．８、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．９、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４７．１３、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．１、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．３、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．４、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．５、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．６、ｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．７およびｓｃＦｖ−ＣＨＡ．９．５４１．８を含む。
【０３５６】
さらに、ＣＨＡ．９．５４３は、ＴＩＧＩＴと結合するが、ＴＩＧＩＴ−ＰＶＲ相互作用を遮断しない。
【０３５７】
本明細書で考察されるように、本発明は、上で概説されるＣＤＲにおけるバリアントを含む、上記の構成要素（ＣＰＡおよびＣＨＡ）のバリアントをさらに提供する。したがって、本発明は、抗体が依然としてＴＩＧＩＴと結合する限り、一組のＣＤＲに１つ、２つまたは３つのアミノ酸の相違を含み得る、本明細書に概説される６つ一組のＣＤＲを含む抗体を提供する。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ等の、本明細書に概説されるＣＤＲ配列と比較して変異を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体かを試験するための好適なアッセイが、当該技術分野で知られている。
【０３５８】
さらに、本発明は、上記の可変重鎖および軽鎖のバリアントをさらに提供する。この場合、可変重鎖は、本明細書の「ＶＨ」配列と、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得、かつ／あるいは、Ｆｃ変異体を使用する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸変化を含み得る。本明細書の「ＶＬ」配列（および特にＣＰＡ．９．０８６）と、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得、および／またはＦｃバリアントを使用する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸変化を含み得る、可変軽鎖が提供される。これらの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が依然としてＴＩＧＩＴと結合する限り、これらのバリアントを含む。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ等の、本明細書に概説されるＣＤＲ配列と比較して変異を含む抗ＴＩＧＩＴ抗体かを試験するための好適なアッセイが、当該技術分野で知られている。
【０３５９】
同様に、本明細書の完全長「ＨＣ」および「ＬＣ」配列（および特にＣＰＡ．９．０８６）と、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり、および／またはＦｃバリアントを使用する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸変化を含む、重鎖および軽鎖が提供される。これらの実施形態では、本発明は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が依然としてＴＩＧＩＴと結合する限り、これらのバリアントを含む。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ等の、本明細書に概説されるＣＤＲ配列と比較して変異を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体かを試験するための好適なアッセイが、当該技術分野で知られている。
【０３６０】
加えて、本明細書のＣＰＡまたはＣＨＡ抗体のいずれかの可変重および可変軽鎖のフレームワーク領域は、当該技術分野で知られているようにヒト化（あるいは、ＣＨＡ抗体の場合、代替のヒト化方法が行われ得る範囲で「再ヒト化」）することができ（時折、バリアントが必要に応じてＣＤＲにおいて生成される）、このようにして、図２３のＶＨ鎖およびＶＬ鎖のヒト化バリアント（および特にＣＰＡ．９．０８６）を生成することができる。さらに、続いてヒト化可変重および軽ドメインを、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４（ＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）を含む）由来の定常領域等のヒト定常領域と融合させることができる。
【０３６１】
特に、当該技術分野で公知のように、マウスＶＨおよびＶＬ鎖は、例えば、ヒト化方法について参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＹｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４１：Ｗ３４−Ｗ４０（２０１３）に概説されるように、ＮＣＢＩウェブサイトのＩｇＢＬＡＳＴプログラムを用いて、当該技術分野で公知のようにヒト化することができる。ＩｇＢＬＡＳＴは、マウスＶＨおよび／またはＶＬ配列を採取し、それを既知のヒト生殖細胞系列配列のライブラリと比較する。本明細書に示されるように、本明細書で生成されるヒト化配列について、使用したデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、２７３生殖細胞系列配列）およびＩＭＧＴヒトＶＬカッパ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４生殖細胞系列配列）であった。例となる５つのＣＨＡ配列を選択した：ＣＨＡ．９．５３６、ＣＨＡ９．５６０、ＣＨＡ．９．５４６、ＣＨＡ．９．５４７およびＣＨＡ．９．５４１（図２３参照）。このヒト化の実施形態のために、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ１−４６（対立遺伝子１）を、アクセプタ配列およびヒト重鎖ＩＧＨＪ４（対立遺伝子１）接合領域（Ｊ遺伝子）として５つ全てについて選択した。４つ（ＣＨＡ．７．５１８、ＣＨＡ．７．５３０、ＣＨＡ．７．５３８＿１、およびＣＨＡ．７．５３８＿２）のうちの３つについては、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ１−３９（対立遺伝子１）をアクセプタ配列として選択し、ヒト軽鎖ＩＧＫＪ２（対立遺伝子１）（Ｊ遺伝子）を選択した。Ｊ遺伝子は、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇのｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム、ＩＭＧＴ（登録商標）にてコンパイルされたヒト接合領域配列から選択した。ＣＤＲは、ＡｂＭ定義（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／を参照）に従って定義した。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体には、ＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインが含まれ、異なるＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインのＶＨおよびＶＬ配列は、「混合化および適合化」され、他のＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインを創出することができる。かかる「混合化および適合化」抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ結合は、上述される結合アッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅアッセイ）を使用して試験することができる。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬ鎖が混合化および適合化される場合、特定のＶＨ／ＶＬ対からのＶＨ配列が構造的に同様のＶＨ配列と置き換えられる。同様に、いくつかの実施形態では、特定のＶＨ／ＶＬ対からのＶＬ配列が構造的同様のＶＬ配列と置き換えられる。例えば、同種抗体のＶＨおよびＶＬ配列は、混合化および適合化に特に適している。
【０３６２】
したがって、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、（ａ）本明細書に列挙される配列、（ｂ）（ａ）で指定したＣＤＲアミノ酸配列とは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多くのアミノ酸置換だけ異なる配列；（ｃ）（ａ）または（ｂ）で指定した配列との９０％以上、９５％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；（ｄ）本明細書に列挙されるアミノ酸をコードする核酸配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる群から選択される、ＣＤＲアミノ酸配列を含む。特に、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）から選択される配列を有することができるＣＰＡ．９．０８６抗体からの抗原結合ドメインを含むことができる。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む（図２６：ノブからホールへのヘテロ二量体化アプローチのアミノ酸置換は、太字および下線が付けられている）。
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＨ  ＩｇＧ１  ＣＨ１  ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３  Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｗ
【化８】
2021525087.tif 000014
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＬ  Ｃｋａｐｐａ
【化９】
2021525087.tif 000015
ＣＰＡ．９．０８６  ＨＣ  Ｃｌａｍｂｄａ  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ＩｇＧ４  Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
【化１０】
2021525087.tif 000016
ＣＰＡ．９．０８６  ＬＣ  ＣＨ１
【化１１】
2021525087.tif 000017
【０３６４】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列の１つを含む。以下の配列の（）は、参照ヒトＩｇＧ４アミノ酸配列に対する欠失を示す。太字の文字は、参照ＩｇＧ４配列に対するアミノ酸置換を示す。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の配列の１つを含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１２】
2021525087.tif 000018
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１３】
2021525087.tif 000019
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１４】
2021525087.tif 000020
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５】
2021525087.tif 000021
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１６】
2021525087.tif 000022
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１７】
2021525087.tif 000023
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１８】
2021525087.tif 000024
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１９】
2021525087.tif 000025
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化２０】
2021525087.tif 000026
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化２１】
2021525087.tif 000027
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化２２】
2021525087.tif 000028
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化２３】
2021525087.tif 000029
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化２４】
2021525087.tif 000030
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化２５】
2021525087.tif 000031
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化２６】
2021525087.tif 000032
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化２７】
2021525087.tif 000033
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化２８】
2021525087.tif 000034
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化２９】
2021525087.tif 000035
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化３０】
2021525087.tif 000036
または
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化３１】
2021525087.tif 000037
【０３７０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列の１つを含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化３２】
2021525087.tif 000038
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化３３】
2021525087.tif 000039
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化３４】
2021525087.tif 000040
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化３５】
2021525087.tif 000041
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化３６】
2021525087.tif 000042
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化３７】
2021525087.tif 000043
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化３８】
2021525087.tif 000044
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化３９】
2021525087.tif 000045
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化４０】
2021525087.tif 000046
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化４１】
2021525087.tif 000047
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化４２】
2021525087.tif 000048
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化４３】
2021525087.tif 000049
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化４４】
2021525087.tif 000050
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化４５】
2021525087.tif 000051
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化４６】
2021525087.tif 000052
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化４７】
2021525087.tif 000053
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化４８】
2021525087.tif 000054
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化４９】
2021525087.tif 000055
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化５０】
2021525087.tif 000056
または
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化５１】
2021525087.tif 000057
【０３７１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化５２】
2021525087.tif 000058
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化５３】
2021525087.tif 000059
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化５４】
2021525087.tif 000060
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化５５】
2021525087.tif 000061
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化５６】
2021525087.tif 000062
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化５７】
2021525087.tif 000063
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化５８】
2021525087.tif 000064
【０３７２】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化５９】
2021525087.tif 000065
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６０】
2021525087.tif 000066
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６１】
2021525087.tif 000067
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６２】
2021525087.tif 000068
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６３】
2021525087.tif 000069
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６４】
2021525087.tif 000070
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６５】
2021525087.tif 000071
【０３７３】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化６６】
2021525087.tif 000072
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６７】
2021525087.tif 000073
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６８】
2021525087.tif 000074
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化６９】
2021525087.tif 000075
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化７０】
2021525087.tif 000076
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化７１】
2021525087.tif 000077
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化７２】
2021525087.tif 000078
【０３７４】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化７３】
2021525087.tif 000079
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化７４】
2021525087.tif 000080
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化７５】
2021525087.tif 000081
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化７６】
2021525087.tif 000082
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化７７】
2021525087.tif 000083
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化７８】
2021525087.tif 000084
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化７９】
2021525087.tif 000085
【０３７５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化８０】
2021525087.tif 000086
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８１】
2021525087.tif 000087
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８２】
2021525087.tif 000088
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８３】
2021525087.tif 000089
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８４】
2021525087.tif 000090
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８５】
2021525087.tif 000091
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８６】
2021525087.tif 000092
【０３７６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化８７】
2021525087.tif 000093
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化８８】
2021525087.tif 000094
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化８９】
2021525087.tif 000095
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化９０】
2021525087.tif 000096
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化９１】
2021525087.tif 000097
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化９２】
2021525087.tif 000098
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化９３】
2021525087.tif 000099
【０３７７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化９４】
2021525087.tif 000100
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化９５】
2021525087.tif 000101
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化９６】
2021525087.tif 000102
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化９７】
2021525087.tif 000103
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化９８】
2021525087.tif 000104
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化９９】
2021525087.tif 000105
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１００】
2021525087.tif 000106
【０３７８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１０１】
2021525087.tif 000107
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１０２】
2021525087.tif 000108
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１０３】
2021525087.tif 000109
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１０４】
2021525087.tif 000110
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１０５】
2021525087.tif 000111
【０３７９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１０６】
2021525087.tif 000112
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１０７】
2021525087.tif 000113
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１０８】
2021525087.tif 000114
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１０９】
2021525087.tif 000115
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１１０】
2021525087.tif 000116
【０３８０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１１１】
2021525087.tif 000117
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１１２】
2021525087.tif 000118
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１１３】
2021525087.tif 000119
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１１４】
2021525087.tif 000120
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１１５】
2021525087.tif 000121
【０３８１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１１６】
2021525087.tif 000122
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１１７】
2021525087.tif 000123
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１１８】
2021525087.tif 000124
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１１９】
2021525087.tif 000125
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１２０】
2021525087.tif 000126
【０３８２】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１２１】
2021525087.tif 000127
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２２】
2021525087.tif 000128
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２３】
2021525087.tif 000129
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２４】
2021525087.tif 000130
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２５】
2021525087.tif 000131
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２６】
2021525087.tif 000132
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２７】
2021525087.tif 000133
【０３８３】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１２８】
2021525087.tif 000134
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１２９】
2021525087.tif 000135
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１３０】
2021525087.tif 000136
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１３１】
2021525087.tif 000137
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１３２】
2021525087.tif 000138
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１３３】
2021525087.tif 000139
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１３４】
2021525087.tif 000140
【０３８４】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１３５】
2021525087.tif 000141
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１３６】
2021525087.tif 000142
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１３７】
2021525087.tif 000143
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１３８】
2021525087.tif 000144
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１３９】
2021525087.tif 000145
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４０】
2021525087.tif 000146
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４１】
2021525087.tif 000147
【０３８５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１４２】
2021525087.tif 000148
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４３】
2021525087.tif 000149
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４４】
2021525087.tif 000150
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４５】
2021525087.tif 000151
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４６】
2021525087.tif 000152
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４７】
2021525087.tif 000153
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４８】
2021525087.tif 000154
【０３８６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１４９】
2021525087.tif 000155
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５０】
2021525087.tif 000156
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５１】
2021525087.tif 000157
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５２】
2021525087.tif 000158
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５３】
2021525087.tif 000159
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５４】
2021525087.tif 000160
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５５】
2021525087.tif 000161
【０３８７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ｈＩｇＧ４バリアント２
【化１５６】
2021525087.tif 000162
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１５７】
2021525087.tif 000163
ＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１５８】
2021525087.tif 000164
ＣＰＡ．９．０８６  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１５９】
2021525087.tif 000165
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＬ−リンカー−ＶＨ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１６０】
2021525087.tif 000166
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ（ＶＨ−リンカー−ＶＬ）ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１６１】
2021525087.tif 000167
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ｈＩｇＧ４バリアント１
【化１６２】
2021525087.tif 000168
【０３８８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１６３】
2021525087.tif 000169
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１６４】
2021525087.tif 000170
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１６５】
2021525087.tif 000171
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１６６】
2021525087.tif 000172
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１６７】
2021525087.tif 000173
【０３８９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１６８】
2021525087.tif 000174
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１６９】
2021525087.tif 000175
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１７０】
2021525087.tif 000176
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１７１】
2021525087.tif 000177
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１７２】
2021525087.tif 000178
【０３９０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１７３】
2021525087.tif 000179
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１７４】
2021525087.tif 000180
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１７５】
2021525087.tif 000181
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１７６】
2021525087.tif 000182
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１７７】
2021525087.tif 000183
【０３９１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＰＶＲＩＧ部分は、以下の抗ＰＶＲＩＧ配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３５４Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｍ３４８Ｌ  Ｔ３６６Ｗ  ノブ
【化１７８】
2021525087.tif 000184
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の抗ＴＩＧＩＴ部分は、以下の配列からなる群から選択される抗ＴＩＧＩＴ配列を含む。
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１７９】
2021525087.tif 000185
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１８０】
2021525087.tif 000186
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  Ｃｌａｍｂｄａ−ＶＬ−ＣＨ１  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１８１】
2021525087.tif 000187
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ  ｈＩｇＧ４  Ｆｃ  Ｙ３４９Ｃ  Ｅ３５６Ｄ  Ｌ３５８Ｌ  Ｔ３６６Ｓ  Ｌ３６８Ａ  Ｙ４０７Ｖ  ホール
【化１８２】
2021525087.tif 000188
【０３９２】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の定義には、本明細書に列挙されるＴＩＧＩＴ抗体からの結合ドメインと同一性を共有するＴＩＧＩＴ結合ドメインを含む抗体がさらに含まれる。つまり、特定の実施形態では、本発明に従う抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、好ましい抗ＴＩＧＩＴ抗体の抗ＴＩＧＩＴアミノ酸配列からの結合ドメインの全てまたは一部とそれぞれ同一であるアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域を含み、この抗体は、親抗ＴＩＧＩＴ抗体の所望の機能特性を保持する。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列を最適にアラインメントするために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、それらの配列が共有する同一位置の数の関数である（すなわち、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な実施例において記載するように、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。
【０３９３】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残差テーブル（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（市販されている）中のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【０３９４】
加えてまたは代替的に、本発明のタンパク質配列をさらに「クエリ配列」として使用して、例えば関連配列を特定するために、公的なデータベースに対して検索を行うことができる。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行って、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従う抗体分子と相同であるアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップのあるアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されるように利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムの利用時には、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータを使用することができる。
【０３９５】
一般に、ＴＩＧＩＴ結合ドメインまたは抗原結合ドメイン間の比較のための同一性の割合は、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％であり、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％パーセント同一性を有することが好ましい。同一性の割合は、全アミノ酸配列、例えば重もしくは軽鎖全体にかかるか、または鎖の一部にかかるものであり得る。例えば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の定義に含まれるのは、そのＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインが可変領域全体（例えば、同一性が可変領域にかけて９５％または９８％同一である場合）、もしくは定常領域全体、もしくはＦｃドメインのみにかけて同一性を共有する抗体である。特に、本発明は、ＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインを有し、ＣＰＡ．９．０８６抗体と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％を有し、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント同一性が好ましい、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。特に、本発明は、ＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインを有し、ＣＨＡ．９．５４７．１８抗体と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％を有し、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント同一性が好ましい、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【０３９６】
加えて、ＣＤＲは同一であるが、可変ドメイン（または重もしくは軽鎖全体）のフレームワーク部分において変化を有し得る配列もまた含まれる。例えば、ＴＩＧＩＴ抗体には、ＣＤＲは図２３に示すものと同一であるが、可変領域にかけての同一性がより低い、例えば、９５または９８％の同一性パーセントであり得るものが含まれる。特に、本発明は、ＣＰＡ．９．０８６と同一のＣＤＲを有するが、ＣＰＡ．９．０８６と９５％または９８％同一のフレームワーク領域を有するＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインを有する、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。特に、本発明は、ＣＨＡ．９．５４７．１８と同一のＣＤＲを有するが、ＣＨＡ．９．５４７．１８と９５％または９８％同一のフレームワーク領域を有するＴＩＧＩＴ結合部分または抗原結合ドメインを有する、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【０３９７】
加えて、ＣＤＲは同一であるが、可変ドメイン（または重もしくは軽鎖全体）のフレームワーク部分において変化を有し得る配列もまた含まれる。例えば、ＴＩＧＩＴ抗体には、ＣＤＲは図２４Ａ〜２４ＳＳＳＳに示すものと同一であるが、可変領域にかけての同一性がより低い、例えば、９５または９８％の同一性パーセントであり得るものが含まれる。
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＵＳ２０１６／０１７６９６３Ａ１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＵＳ２０１７／０２８１７６４号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＷＯ２０１５／００９８５６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＵＳ９７１３６４１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ結合部分は、ＷＯ２０１６／０２８６５６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体に由来する。
【０３９８】
１．結合について競合するＴＩＧＩＴ抗体
本発明は、列挙される抗体だけでなく、ＴＩＧＩＴ分子と特異的に結合するために列挙される抗体（ＴＩＧＩＴと特異的に結合する本明細書に列挙されるＣＰＡ数）と競合する追加の抗体も提供する。本発明のＴＩＧＩＴ抗体は、異なるエピトープビンに「ビニング」される。エピトープビニング研究における４４個のＴＩＧＩＴ抗体の中には、それぞれが関連する対合遮断パターンを有する４つのコミュニティがあり、これらは、本明細書に概説される総計１２個の個別ビンに分離する。本明細書では１２個の個別のビンが概説される。１）ＢＭ９−Ｈ４、ＣＨＡ．９．５２５、ＣＰＡ．９．０８１−Ｈ４、ＣＨＡ．９．５３８、ＣＨＡ．９．５５３、ＣＰＡ．９．０６９−Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４３、ＣＨＡ．９．５５６、ＣＰＡ．９．０７７−Ｈ４およびＣＨＡ．９．５６１；２）ＣＨＡ．９．５６０およびＣＨＡ．９．５２８；３）ＣＨＡ．９．５５２、ＣＨＡ．９．５２１、ＣＨＡ．９．５４１、ＣＨＡ．９．５２９、ＣＨＡ．９．５１９、ＣＨＡ．９．５２７およびＣＨＡ．９．５４９；４）ＣＰＡ．９．０５７−Ｈ４およびＣＨＡ．９．５５４；５）ＣＨＡ．９．５４６、ＣＰＡ．９．０１２−Ｈ４、ＣＨＡ．９．５４７、ＣＰＡ．９．０１３−Ｈ４、ＣＰＡ．９．０１８−Ｈ４、ＭＢＳＡ４３−Ｍ１、ＳｉｎｏＰＶＲ−Ｆｃ（リガンド）、ＣＨＡ．９．５５５、ＰＶＲ−ＦｃＭ２Ａ（リガンド）、ＢＭ２９−Ｈ４、ＣＰＡ．９．０２７−Ｈ４、ＣＰＡ．９．０４９−Ｈ４およびＣＰＡ．９．０５３−Ｈ４；６）ＣＰＡ．９．０６４−Ｈ４；７）ＢＭ２６−Ｈ４；８）ＣＰＡ．９．０５９−Ｈ４；９）ＣＨＡ．９．５３５およびＣＰＡ．９．００９−Ｈ４；１０）ＣＨＡ．９．５３６、ＣＨＡ．９．５２２およびＣＰＡ．９．０１５−Ｈ４；１１）ＣＰＡ．９．０１１−Ｈ４およびＢＭ８−Ｈ４ならびに１２）ＣＰＡ．９．０７１−Ｈ４。ＷＯ２０１８／０３３７９８で論じられているように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３９９】
したがって、本発明は、個別のエピトープビン１〜１２にある抗体との結合について競合する抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＰＡ．９．０８６との結合について競合し、ＣＰＡ．９．０８６と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を提供する。
【０４００】
列挙される抗体と競合する追加の抗体である抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、当該技術分野で知られているように、また以下で一般に概説するように、生成される。競合的結合研究は、一般に、ＳＰＲ／Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）結合アッセイ、ならびにＥＬＩＳＡおよび細胞系アッセイを使用して、当該技術分野で知られているように行うことができる。
【０４０１】
ＶＩＩ．抗体をコードする核酸
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体をコードする核酸組成物、ならびに核酸および核酸で形質転換した宿主細胞を含む発現ベクター、および／または発現ベクター組成物も提供される。当該技術者には理解されようが、本明細書に図示されるタンパク質配列は、遺伝コードの縮重に起因して、任意の数の可能性のある核酸配列によってコードされ得る。
【０４０２】
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体をコードする核酸組成物は、抗体の形式に依存することになる。２本の重鎖および２本の軽鎖を含む従来の四量体抗体は、一方は重鎖をコードする核酸し、もう一方は軽鎖をコードする核酸という２つの異なる核酸によってコードされる。これらは、当該技術分野で公知であるように、単一の発現ベクターまたは２つの発現ベクターの内に入れ、宿主細胞に形質転換することができ、そこでそれらが発現されて本発明の抗体を形成する。いくつかの実施形態では、例えばｓｃＦｖ構築物を使用する場合、可変重鎖−リンカー−可変軽鎖をコードする単一の核酸が通常使用され、これを宿主細胞への形質転換のために発現ベクター内に挿入し得る。核酸は、シグナルおよび分泌配列、調節配列、プロモーター、複製起点、選択遺伝子等が含まれるがこれらに限定されない、適切な転写および翻訳制御配列を含む発現ベクター内に入れることができる。
【０４０３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従う組換え抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を発現させるための好ましい哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＨＥＫ２９３、および当該技術分野で既知の他の細胞が含まれる。
【０４０４】
核酸は、全細胞において、細胞溶解物において、または部分的に精製されているかもしくは実質的に純粋な形態において存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当該技術分野で周知の他のものを含む標準的な技法によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から精製されるときに、「単離される」または「実質的に純粋にされる」。
【０４０５】
ｓｃＦｖ遺伝子を創出するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ断片を、可動性リンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３および本明細書で考察されるその他をコードする別の断片に動作可能に連結させて、その結果、ＶＨおよびＶＬ配列が連続した１本鎖タンパク質として、ＶＬおよびＶＨ領域が可動性リンカーによって接合された状態で発現され得るようにする。
【０４０６】
ＶＩＩＩ．製剤
前述の方法の実施に使用される治療用組成物（特に、ＣＨＡ．７．５１８．１、ＣＨＡ．７．５１８．４、ＣＰＡ．９．０８６、および／またはＣＨＡ．９．５４７．１８からのＣＤＲを少なくとも含む二重特異性抗体は、所望の送達方法に好適な担体を含む薬学的組成物に製剤化することができる。好適な担体には、治療用組成物と組み合わせたときに、その治療用組成物の抗腫瘍機能を保持し、かつ一般に患者の免疫系と反応性ではない任意の物質が含まれる。例としては、いくつかの標準的な薬学的担体、例えば、無菌リン酸緩衝生理食塩水、静菌水等のうちの任意のものが含まれるが、これらに限定されない（一般には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｏｓａｌ．，Ｅｄ．，１９８０を参照）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対し無毒であり、緩衝液を含み得る。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物に製剤化される抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＨ  ＩｇＧ１  ＣＨ１  ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３  Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｗ
【化１８３】
2021525087.tif 000189
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＬ  Ｃｋａｐｐａ
【化１８４】
2021525087.tif 000190
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＨＣ  Ｃｌａｍｂｄａ  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ＩｇＧ４  Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
【化１８５】
2021525087.tif 000191
ＣＰＡ．９．０８６  ＬＣ  ＣＨ１
【化１８６】
2021525087.tif 000192
【０４０８】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物に製剤化される抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＰＶＲＩＧの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化１８７】
2021525087.tif 000193
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
【化１８８】
2021525087.tif 000194
および
ＴＩＧＩＴの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
【化１８９】
2021525087.tif 000195
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
【化１９０】
2021525087.tif 000196
【０４０９】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物に製剤化される抗ＰＶＲＩＧ抗体は、以下の配列を含む。
ＰＶＲＩＧの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化１９１】
2021525087.tif 000197
および
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
【化１９２】
2021525087.tif 000198
【０４１０】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物に製剤化される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下の配列を含む。
ＴＩＧＩＴの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
【化１９３】
2021525087.tif 000199
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
【化１９４】
2021525087.tif 000200
【０４１１】
好ましい実施形態では、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含む薬学的組成物は、酸付加塩および塩基付加塩の両方を含むことを意図する、薬学的に許容される塩として存在する等、水溶性形態であり得る。「薬学的に許容される酸付加塩」は、無機酸等によって形成された、遊離塩基の生物学的有効性を保持し、かつ生物学的または別様に不適切でない塩を指す。「薬学的に許容される塩基付加塩」には、無機塩基等から誘導されるものが含まれる。
【０４１２】
好ましくは無菌水溶液の形態である本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含む薬学的組成物の投与は、皮下および静脈内を含むがこれらに限定されない様々な方法で行われ得る。
【０４１３】
投薬量および投薬頻度は、好ましい実施形態では、治療的または予防的に有効であるように選択される。当該技術分野で即知であるように、タンパク質分解、全身対局所送達、および新たなプロテアーゼ合成の速度、ならびに年齢、体重、全般的な健康、性別、食生活、投与時間、薬物相互作用、および状態の重症度に対する調整が必要であり得、これは、当業者によって慣習的な実験を用いて確認可能であろう。
【０４１４】
患者を治療するために、治療有効量の本発明のＦｃバリアントが投与され得る。本明細書における「治療有効量」は、それを投与した目的である効果を生む用量を意味する。正確な用量は治療の目的により異なり、既知の技法を使用して当業者によって確認可能であろう。
【０４１５】
ＩＸ．抗体を使用する方法
本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、多くの診断および治療用途で使用することができる。場合によっては、患者にどの抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を投与するかの決定は、試料がＴＩＧＩＴおよび／またはＰＶＲＩＧを過剰発現しているかどうかを決定するための試料腫瘍生検の発現レベル（遺伝子発現レベルまたはタンパク質発現レベルのいずれかであるが、後者が好ましい）の評価を使用して行われ、どのような治療抗体を投与するかを決定する。
【０４１６】
Ａ．診断的使用
したがって、本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体はまた、ＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴのいずれかをそれぞれ過剰発現する腫瘍のインビトロまたはインビボ診断（画像診断を含む）においても有用である。しかしながら、本明細書で考察するように、免疫腫瘍学的標的タンパク質としてのＴＩＧＩＴおよびＰＶＲＩＧの両方は、必ずしもがん細胞上ではなく、むしろがんにおける（例えば、ＴＭＥとも呼ばれる腫瘍微小環境における）免疫浸潤物内で過剰発現されることに留意されたい。故に、がん診断をもたらすのは、作用機序、例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞等の免疫細胞の活性化である。したがって、これらの抗体を使用して、がんを診断することができる。ＰＶＲＩＧ抗体を用いた診断はまた、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１３４３３３、［０４３４〜０４５９］に概説される。
【０４１７】
一般に、診断はいくつかの方法で行うことができる。一実施形態では、生検試料等の患者からの組織を、一般的には標識されている抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体と接触させ、それにより抗体が内因性ＴＩＧＩＴと結合するようにする。シグナルのレベルを、同じ患者または参照試料のいずれかに由来する正常な非がん性組織のレベルと比較して、がんの存否を決定する。生検試料は、固形腫瘍、血液試料（リンパ腫および白血病、例えば、ＡＬＬ、Ｔ細胞リンパ腫等に由来する）に由来し得る。
【０４１８】
一般に、本実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、例えば、当該技術分野で周知であるように、蛍光光度計または他の光学検出系を使用して検出されるフルオロフォアまたは他の光標識で標識する。代替的な実施形態では、二次標識抗体を、当該技術分野で既知であるように、例えば、異なる哺乳動物（マウス、ラット、ウサギ、ヤギ等）由来の抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して試料と接触させ、サンドイッチアッセイを形成する。あるいは、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を直接標識し（例えば、ビオチンを用いて）、当該技術分野の標識剤に向けられた二次Ａｂによって検出を行うことができる。
【０４１９】
ＴＩＧＩＴの過剰発現が見られたら、本明細書で概説する本発明に従う抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の投与により治療を進め得る。
【０４２０】
他の実施形態では、インビボ診断を行う。一般に、本実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（抗体断片を含む）を患者に注射し、画像診断を行う。この実施形態では、例えば、抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は一般に、光標識、またはｍＡｂ（断片を含む）の放射性標識であるガドリニウムキレート剤等のＭＲＩ標識で標識される。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、診断と治療との両方、または診断のみに使用される。抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体が、診断と治療との両方に使用される場合、いくつかの実施形態は、２つの異なるエピトープに対する（例えば、ＴＩＧＩＴまたはＰＶＲＩＧの中の２つの異なるエピトープに対して、またはＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴの両方に結合するその二重特異性に基づく）２つの異なる抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体に依存し、その結果、診断用の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、治療用の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体との結合について競合しないが、場合によっては、この両方に同じ抗体を使用することができる。例えば、これは、異なるビン内にある、例えば、本明細書で概説するもの等のＴＩＧＩＴ上の異なるエピトープまたはＰＶＲＩＧ上の異なるエピトープに結合する抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を用いて行うことができる。したがって、本発明には、診断用の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体と、抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体とを含む組成物が含まれ、いくつかの実施形態では、診断用の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように標識される。加えて、治療用および診断用の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の組成物は、本明細書に概説する他の薬物と共投与することもできる。
【０４２２】
診断における使用に特に有用な抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体には、これらの列挙する抗体、またはバリアント配列を有するＣＤＲを利用する抗体、図５、７、および／または２３の抗体のうちのいずれかとの結合について競合するものが含まれるが、これらに限定されない。
【０４２３】
多くの実施形態では、診断用の、抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、標識されている。本明細書における「標識される」とは、本明細書に開示の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体に、スクリーンまたは診断手順における検出を可能にするために１つ以上の元素、同位体、または化学的化合物を結合させることを意味する。一般に、標識は、いくつかのクラスに分けられる：ａ）抗体によって認識される融合パートナーとして組み込まれるエピトープであり得る、免疫標識、ｂ）放射性または重同位体であり得る、同位体標識、ｃ）蛍光および比色色素、または他の標識方法を可能にするビオチン等の分子を含み得る、小分子標識、ならびにｄ）粒子（超音波標識用のバブルを含む）または身体撮像を可能にする常磁性標識等の標識。標識は、当該技術分野で既知であるように、いずれの位置で抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体に組み込んでもよく、またタンパク質発現中にインビトロまたはインビボで組み込んでもよい。
【０４２４】
診断は、以下に記載のように全身画像診断を可能にする診断用抗体の投与によってインビボで、あるいは患者から取り出した試料においてインビトロで行うことができる。本文脈における「試料」は、体液（血液、尿、血清、リンパ液、唾液、肛門および膣分泌物、汗、ならびに精液を含むがこれらに限定されない）、ならびに関連組織の生検から得られるもの等の組織試料を含むがこれらに限定されない、任意の数のものを含む。
【０４２５】
加えて、以下ならびに実施例および図に概説されるように、ＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴのいずれかのタンパク質発現レベルに関する情報を使用して、どの抗体が患者に投与されるべきかを決定することができる。
【０４２６】
Ｂ．がん治療
本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、単剤療法としてがんの治療に特に有用である。免疫腫瘍学的作用機序の性質に起因して、ＰＶＲＩＧおよび／またはＴＩＧＩＴは、必ずしも特定のがんの種で過剰発現されるか、またはそれと相関する必要はなく、すなわち、目標は、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体にＴ細胞およびＮＫ細胞活性化の抑制を解除させて、免疫系ががんを狙うようにすることである。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、図４、５、７、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２６、および／または４０の抗ＰＶＲＩＧ抗体配列を含む抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体、特に、Ｓ２４１Ｐ置換を含むものは、がんの治療（以下に概説するＴ細胞および／またはＮＫ細胞の活性化を含む）に有用である。図４、５、７、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２６、および／または４０の抗ＰＶＲＩＧ抗体配列を含む任意の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、がんの治療（以下に概説するＴ細胞および／またはＮＫ細胞の活性化を含む）に有用であるが、ＣＨＡ．７．５１８．１、ＣＨＡ．７．５１８．４、および／またはＣＨＡ．７．５３８．２を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、いくつかの実施形態では特に有用である。
【０４２８】
図２３、２４、および／または４１の抗ＴＩＧＩＴ抗体配列を含む任意の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、がんの治療（以下に概説するＴ細胞および／またはＮＫ細胞の活性化を含む）に有用であるが、ＣＰＡ．９．０８６．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＰＡ．９．０８３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、およびＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．１８を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、いくつかの実施形態では特に有用である。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、本発明はまた、がんの治療（以下に概説するＴ細胞および／またはＮＫ細胞の活性化を含む）に有用な、図４、５、７、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２６、および／または４０の抗ＰＶＲＩＧ抗体配列を含む抗ＰＶＲＩＧ抗体も提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＶＲＩＧ抗体は、以下を含む。
ＰＶＲＩＧの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化１９５】
2021525087.tif 000201
および
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
【化１９６】
2021525087.tif 000202
【０４３０】
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体抗体は、がんの治療に特に有用である。一般に、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体抗体は、がん性細胞を直接攻撃するというよりは、本発明の抗体が概してチェックポイント受容体（例えば、ＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴ）の作用を阻害することによって免疫系を刺激するという点において、免疫調節性である。したがって、腫瘍成長および発達に必須である分子経路を阻害すること、ならびに／または腫瘍細胞を枯渇させることを目的とする腫瘍標的化療法とは異なり、がん免疫療法は、患者自身の免疫系を刺激してがん細胞を除外し、息の長い腫瘍破壊を提供することを目的とする。種々のアプローチをがん免疫療法において使用することができ、腫瘍特異的Ｔ細胞応答を誘導するための治療用がんワクチン、および免疫抑制経路を除去するための免疫刺激抗体（例えば、阻害性受容体の拮抗物質＝免疫チェックポイント）がその一部である。
【０４３１】
標的化療法または従来の抗がん療法による臨床応答は、がん細胞が耐性を発達させ、腫瘍の再発が起きるため、一過性である傾向にある。しかしながら、過去数年のがん免疫療法の臨床使用により、この種の療法が永続的な臨床応答を有し得、長期的な生存率に対する劇的な影響を示すことが示されている。しかしながら、応答は長期的ではあるが、少数の患者しか応答しない（多数の患者が応答するが応答は一過性である従来のまたは標的化療法とは相対的）。
【０４３２】
腫瘍が臨床で検出されるまでに、腫瘍は、免疫耐性および免疫抑制特性を獲得すること、ならびに種々の機序および種々の免疫細胞を通して免疫抑制腫瘍微小環境を創出することによって、既に免疫防御系をかいくぐっている。
【０４３３】
したがって、本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体抗体は、がんの治療において有用である。免疫腫瘍学的作用機序の性質に起因して、チェックポイント受容体（ＴＩＧＩＴまたはＰＶＲＩＧ）は、必ずしも特定のがんの種類上で過剰発現されるか、またはそれと相関する必要はなく、これはつまり、目標は、抗体にＴ細胞およびＮＫ細胞活性化の抑制を解除させて、免疫系ががんを狙うようにすることである。
【０４３４】
「がん」は、本明細書で使用する場合、悪性の成長または腫瘍（例えば、調節されていない細胞成長）を引き起こす異常かつ無制御な細胞分化を特徴とする任意の腫瘍性疾患（侵襲性または転移性問わず）を広義に指す。「がん」または「がん性」という用語は、本明細書で使用する場合、悪性の成長または腫瘍を引き起こす異常かつ無制御な細胞分化を特徴とする任意の腫瘍性疾患（侵襲性、非侵襲性、転移性を問わず）を包含すると理解されるべきであり、その非限定的な例が本明細書に記載される。これは、無制御性細胞増殖を典型的に特徴とする哺乳動物におけるいずれの生理学的状態も含む。がんの例は、実施例において例示されており、また、明細書内にも記載される。
【０４３５】
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体抗体を用いて治療することができるがんの非限定的な例としては、がん腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例には、扁平上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、および肺の扁平上皮がんを含む）、腹膜のがん、肝細胞がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がんまたは胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん（胃腸がんを含む）、食道がん、黒色腫、中皮腫、メルケル細胞がん、膵臓がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん、唾液腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝がん、および様々な種類の頭頸部がん、喉頭がん、口腔がん、尿路上皮がん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ならびにＢ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫（低度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ；中程度／濾胞性ＮＨＬ；中程度拡散性ＮＨＬ；高度免疫芽細胞性ＮＨＬ；高度リンパ芽球性ＮＨＬ；高度小型非開裂細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫；骨髄腫；多発性骨髄腫、および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、リンパ系悪性腫瘍、脂肪腫に関連した異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するもの等）、マイグ症候群、直腸がん、腎細胞がん、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイドがん、早期または進行性（転移を含む）の卵巣にかかわるものが含まれる。
【０４３６】
ＷＯ２０１６／１３４３３３の実施例に示されるように、ＰＶＲＩＧは、種々の起源のいくつかの異なる腫瘍において、過剰発現し、かつ／または腫瘍リンパ球浸潤と相関する（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＰＤ−１発現との相関によって示される）ため、任意のがんの治療に有用であり、これらのがんには、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、膵臓がん、胃がん、子宮頚がん、頭頚部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）およびホジキンリンパ腫（ＨＤ））、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、および食道がんが含まれるが、これらに限定されない。
【０４３７】
特に、ＰＶＲＩＧ結合部分としてＣＨＡ．７．５１８．１を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４３８】
特に、ＰＶＲＩＧ結合部分としてＣＨＡ．７．５３８．１．２を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４３９】
特に、ＰＶＲＩＧ結合部分としてＣＨＡ．７．５１８．４を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４０】
特に、ＴＩＧＩＴ結合部分としてＣＰＡ．９．０８６を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
特に、ＴＩＧＩＴ結合部分としてＣＰＡ．９．０８３を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４１】
特に、ＴＩＧＩＴ結合部分としてＣＨＡ．９．５４７．７を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４２】
特に、ＴＩＧＩＴ結合部分としてＣＨＡ．９．５４７．１３を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４３】
特に、ＴＩＧＩＴ結合部分としてＣＰＡ．９．５４７．１８を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、食道がんを治療する際に有用であり得る。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４４】
特に、以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療する際に有用であり得、ここで、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を有する。
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＨ  ＩｇＧ１  ＣＨ１  ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３  Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｗ
【化１９７】
2021525087.tif 000203
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＬ  Ｃｋａｐｐａ
【化１９８】
2021525087.tif 000204
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＨＣ  Ｃｌａｍｂｄａ  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ＩｇＧ４  Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
【化１９９】
2021525087.tif 000205
ＣＰＡ．９．０８６  ＬＣ  ＣＨ１
【化２００】
2021525087.tif 000206
【０４４５】
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
特に、以下の配列を有する抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療する際に有用であり得、ここで、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のいずれか１つを含む。
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
【０４４６】
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４７】
特に、以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療する際に有用であり得、ここで、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のいずれか１つを含む。
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４８】
特に、以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療する際に有用であり得、ここで、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体のいずれか１つを含む。
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）：
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）：
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）：
または
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）：
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）：
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４４９】
特に、以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ抗体は、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、黒色腫、非黒色腫皮膚がん（扁平上皮および基底細胞がん）、神経膠腫、腎がん（ＲＣＣ）、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、膀胱がん、食道がん、メルケル細胞がん、高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療する際に有用であり得る。
以下の配列を含む抗ＰＶＲＩＧ抗体：
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）
および
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）。
いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん  、および高頻度ＭＳＩがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、骨髄腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。
【０４５０】
Ｃ．併用療法
当該技術分野で知られているように、疾患状態に特異的な、免疫療法標的を標的化する治療用の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体および追加の治療薬を含む併用療法は、極めて有望である。例えば、免疫療法の分野では、化学療法剤（小分子薬または抗腫瘍抗体のいずれか）を使用する、または免疫腫瘍学的抗体（例えば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体）と共にした、いくつかの有望な併用療法が存在する。
【０４５１】
「と組み合わせて」および「共投与」という用語は、厳密に同じ時間での予防剤または治療剤の投与に限定されない。その代わり、これらの用語は、抗体および他の薬剤（単数または複数）が、それらが共に作用して、本発明の抗体または他の薬剤（単数または複数）のいずれかのみによる治療と比較して増加した利益を提供するように、順次にかつある時間間隔内で投与されることを意味する。抗体および他の薬剤（単数または複数）は相加的に作用することが好ましく、またそれらは相乗的に作用することが特に好ましい。かかる分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて存在するのが好適である。熟練した医師であれば、経験的に、または薬剤の薬物動態および作用様式を考慮することによって、各治療剤の適切な用量（単数または複数）、ならびに投与の適切なタイミングおよび方法を決定することができる。
【０４５２】
したがって、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、１つ以上の他の治療レジメンまたは薬剤と同時に投与することができる。追加の治療レジメンまたは薬剤を使用して、抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の効能または安全性を改善し得る。また、追加の治療レジメンまたは薬剤を使用して、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の作用を改変するのではなく、同じ疾患または併存疾患を治療してもよい。例えば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、化学療法、放射線療法、または化学療法と放射線療法の両方と共に患者に投与してもよい。
【０４５３】
１．化学療法小分子と共にしたＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴ、および／またはＰＶＲＩＧ／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体
本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、細胞傷害剤、化学療法剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、キナーゼ阻害剤、抗血管新生剤、心臓保護剤、免疫刺激剤、免疫抑制剤、血液細胞の増殖を促進する薬剤、血管新生阻害剤、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）阻害剤、または他の治療薬を含むがこれらに限定されない、１つ以上の他の予防または治療薬と組み合わせて投与してもよい。
【０４５４】
この関連において、「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロホスファミド等のアルキル化剤、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン等のアルキルスルホネート、ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパ、およびウレドパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロールメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ’）；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルチカイン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリースタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン等のニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマＩＩおよびカリケアマイシンオメガＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：  １８３−１８６（１９９４）を参照）；ジネミシンＡを含むジネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−リボフラノシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル��５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カロステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エフロルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシンおよびアンサマイトシン等のマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ．ＲＴＭ．多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクノン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、（ＴＡＸＯＬ（登録商標）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、パクリタキセルのクレモフォールフリーアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ．）、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）；Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲＭ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチン等のプラチナ類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸等のレ��ノイド；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＨＯＰ；シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＶＰ、；オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））と５−ＦＵおよびロイコボリンを併用した治療レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸが挙げられる。
【０４５５】
少なくともいくつかの実施形態によれば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、当該技術分野で既知の標準治療としてのがん治療のいずれかと併用され得る（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃａｎｃｅｒｔｏｐｉｃｓに見出すことができる通り）。
【０４５６】
したがって、場合によっては、本明細書に概説される抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（特に、ＣＨＡ．７．５３８．１．２および／またはＣＨＡ．７．５１８．１をＰＶＲＩＧ結合部分として含むもの）を化学療法剤と組み合わせることができる。同様に、本明細書に概説される抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（特に、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＰＡ．９．０８３および／またはＣＨＡ．９．５４７．１３をＴＩＧＩＴ結合部分として含むもの）を化学療法剤と組み合わせることができる。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、化学療法剤と組み合わせることができる抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＨ  ＩｇＧ１  ＣＨ１  ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３  Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｗ
【化２０１】
2021525087.tif 000207
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＬ  Ｃｋａｐｐａ
【化２０２】
2021525087.tif 000208
ＣＰＡ．９．０８６  ＨＣ  Ｃｌａｍｂｄａ  Ｃｒｏｓｓｍａｂ  ＩｇＧ４  Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
【化２０３】
2021525087.tif 000209
ＣＰＡ．９．０８６  ＬＣ  ＣＨ１
【化２０４】
2021525087.tif 000210
【０４５８】
いくつかの実施形態では、化学療法剤と組み合わせることができる抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＰＶＲＩＧの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
【化２０５】
2021525087.tif 000211
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
【化２０６】
2021525087.tif 000212
および
ＴＩＧＩＴの抗体配列（ＩＭＧＴ  ＣＤＲ定義は、太字および下線が付けられている）
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
【化２０７】
2021525087.tif 000213
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
【化２０８】
2021525087.tif 000214
【０４５９】
いくつかの実施形態では、化学療法剤と組み合わせることができる抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、化学療法剤と組み合わせることができる抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）
および
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＴＧＧＧＬＩＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＡＧＥＶＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＬＰＬＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１６３４）
ＣＰＡ．９．０８６  ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＡＳＧＮＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＲＲＰＶＮＷＹＱＱＩＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＱＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＴＳＡＳＬＴＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＥＹＦＣＡＶＷＤＤＩＧＲＶＬＱＬＧＧＧＴＱＬＡＶＬ（配列番号１６３９）。
【０４６１】
いくつかの実施形態では、化学療法剤と組み合わせることができる抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５３９）
ＣＨＡ．７．５１８．１  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５４４）
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
【０４６２】
いくつかの実施形態では、化学療法剤と組み合わせることができる抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、以下の配列を含む。
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＹＰＹＩＧＧＳＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＫＴＡＲＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１７９）
ＣＨＡ．７．５１８．４  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＶＳＥＮＩＹＤＶＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＴＮＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３１８０）
および
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＳＫＧＱＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＬＬＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６４）
ＣＨＡ．９．５４７．１８  ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＡＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＫＳＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＱＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６６８）。
【０４６３】
Ｄ．治療の評価
一般に、本発明の抗ＰＶＲＩＧ、抗ＴＩＧＩＴ、および／または抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、がんを患う患者に投与され、効能は、本明細書に記載するいくつかの方法で評価される。このため、がん量、腫瘍のサイズ、転移の存在または程度の評価等の、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイおよびインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。例えば、腫瘍量、サイズ、侵襲性、ＬＮ関与、転移等といった「古典的な」測定と併せて、免疫状態（例えば、ｉｐｉ治療後のＩＣＯＳ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の存在）の変化の評価を実施することができる。このため、以下のいずれかまたは全てを評価することができる：ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化もしくは増殖、ＣＤ８＋Ｔ（ＣＴＬ）細胞活性化もしくは増殖、ＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性細胞傷害性活性および／もしくはＣＴＬ媒介性細胞枯渇、ＮＫ細胞活性およびＮＫ媒介性細胞枯渇に対するＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴの抑制効果、Ｔｒｅｇ細胞分化および増殖ならびにＴｒｅｇ細胞もしくは骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）媒介性免疫抑制もしくは免疫耐性に対するＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴの増強効果、ならびに／または免疫細胞による炎症性サイトカイン産生、例えば、Ｔ細胞もしくは他の免疫細胞によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γもしくはＴＮＦ−α産生に対するＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴの影響。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、例えば、ＣＦＳＥ希釈法、免疫エフェクター細胞のＫｉ６７細胞内染色、および３Ｈ−チミジン組み込み法を使用して、免疫細胞増殖を評価することによって行われる。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＰＤ１、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、およびＣＤ１０７Ａの表面発現によって測定される細胞脱顆粒のうちの１つ以上を含む、遺伝子発現の増加または活性化関連マーカーの増加したタンパク質レベルを評価することによって行われる。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、治療の不在下で、例えば、本発明の抗体の投与前に、Ｔ細胞増殖の量を評価することによって行われる。投与後、患者がＴ細胞増殖の増加を有する場合、例えば、患者のＴ細胞のサブセットが増殖している場合、これはＴ細胞が活性化されたことの指標である。
【０４６７】
同様に、本発明の抗体を用いた治療の評価は、治療の有効性を評価するために、投与前および投与後に患者のＩＦＮγレベルを測定することによって行うことができる。これは、数時間または数日以内に行われ得る。
【０４６８】
一般に、遺伝子発現アッセイは、当該技術分野で既知であるように行われる。例えば、Ｇｏｏｄｋｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．２９（３）：５８９（２００５）、Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  １１／１５／１５  ９（Ｓｕｐｐｌ．１）：２９−４６、Ｃａｍｐｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｏｄ．Ｐａｔｈｏｌ．２０１３  Ｊａｎ；２６  ｓｕｐｐｌ．１：Ｓ９７−Ｓ１１０を参照されたく、その遺伝子発現測定技法は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４６９】
一般に、タンパク質発現測定もまた同様に、当該技術分野で即知であるように行われ、例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ−Ｂａｓｅｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１３：９８４：１−１２、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ，ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ３６１５９０，８  ｐａｇｅｓ、Ｂｅｃｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ  ２０１１  Ｊｕｎｅ  １７：７２２（２）：１７１−１８２を参照されたく、その測定技法は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、酵素活性（プロテアーゼ活性を含む）、細胞膜透過性、細胞接着、ＡＴＰ産生、補酵素産生、およびヌクレオチド取り込み活性等の多数の細胞パラメータを推測することを通した標的細胞生存検出によって測定される細胞傷害性活性を評価することによって行なわれる。これらのアッセイの具体的な例としては、トリパンブルーまたはＰＩ染色、５１Ｃｒまたは３５Ｓ放出法、ＬＤＨ活性、ＭＴＴおよび／またはＷＳＴアッセイ、カルセイン−ＡＭアッセイ、発光系アッセイ、ならびに他のものが含まれるが、これらに限定されない。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、サイトカイン産生によって測定されるＴ細胞活性を評価することによって行われ、周知の技法を使用して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ１０、ＩＬ１３を含むがこれらに限定されないサイトカインを使用して、培養上清液中で細胞内のいずれかで測定する。
【０４７２】
したがって、治療の評価は、以下のうちの１つ以上を評価するアッセイを使用して実施することができる。（ｉ）免疫応答を増加させること、（ｉｉ）αβおよび／またはγδのＴ細胞の活性化を増加させること、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性を増加させること、（ｉｖ）ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性を増加させること、（ｖ）αβおよび／またはγδのＴ細胞抑制を軽減させること、（ｖｉ）炎症促進性サイトカイン分泌を増加させること、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌を増加させること、（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生を増加させること、（ｉｘ）Ｔｈ１応答を増加させること、（ｘ）Ｔｈ２応答を減少させること、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるかまたは除外すること。
【０４７３】
Ｅ．有効性を測定するためのアッセイ
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化は、実施例に記載のように、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して評価される。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４７４】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、異なる因子のリン酸化または脱リン酸化によって、または他の翻訳後修飾を測定することによって測定される、免疫応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４７５】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞の活性化の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４７６】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４７７】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、またはＣＤ１０７ａ等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４７８】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞抑制の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４７９】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはマルチプレックスビーズ系方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔ等によって測定される、炎症促進性サイトカイン分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４８０】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズに基づく方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ解析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔ等によって測定されるＩＬ−２分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４８１】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズ系方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ解析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔ等によって測定されるインターフェロン−γ産生の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４８２】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４８３】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ２応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４８４】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４８５】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｍ２マクロファージ細胞数の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４８６】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｍ２マクロファージ腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４８７】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｎ２好中球増加の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４８８】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定されるＮ２好中球腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４８９】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔ細胞活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９０】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＣＴＬ活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９１】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞枯渇の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４９２】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９３】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７等のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、抗原特異的メモリー応答の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９４】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭ等の細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色等のようなフローサイトメトリー系アッセイによって測定される、がん細胞のアポトーシスまたは溶解の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９５】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭ等の細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色等のようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、がん細胞の細胞傷害性または細胞増殖抑制性の効果の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９６】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭ等の細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色等のようなフローサイトメトリー系アッセイによって測定される、がん細胞の直接殺傷の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９７】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイ測定は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１７活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９８】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭ等の細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色等のようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、補体依存性細胞傷害性および／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性の誘導の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４９９】
一実施形態では、Ｔ細胞活性化は、例えば、標的細胞、例えばがん細胞の直接的な殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。Ｔ細胞については、増殖、活性化の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＰＤ１）、細胞傷害性（標的細胞を殺傷する能力）、およびサイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＦＮγ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ）の増加が、がん細胞の強化された殺傷と一致する免疫調節の指標となり得る。
【０５００】
一実施形態では、ＮＫ細胞活性化は、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、またはＣＤ１０７ａ等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。ＮＫ細胞については、増殖、細胞傷害性（標的細胞を殺傷し、ＣＤ１０７ａ、グランザイム、およびパーフォリン発現を増加させる能力）、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよびＴＮＦ）、および細胞表面受容体発現（例えば、ＣＤ２５）の増加が、がん細胞殺傷の増強と一致する免疫調節を示し得る。
【０５０１】
一実施形態では、γδ  Ｔ細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。
【０５０２】
一実施形態では、Ｔｈ１細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。
【０５０３】
活性または応答の適切な増加（または減少、上記で概説されたように適切なもの）は、参照試料または対照試料のいずれか、例えば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を含まない試験試料におけるシグナルと比べた、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８〜９９％の増加である。
【０５０４】
同様に、参照対象または対照試料と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍または５倍の増加が有効性を示す。
【実施例】
【０５０５】
実施例１：抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体の生成および特性評価
１．導入
ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞上で発現する阻害性免疫チェックポイント受容体である。これらの受容体とそれぞれのリガンドとの相互作用を抗体を介して遮断すると、Ｔ細胞活性が増強される。抗ＰＶＲＩＧ抗体療法と抗ＴＩＧＩＴ抗体療法の組み合わせによって、インビトロ機能アッセイにおいて相乗効果または相加効果が生じる。本明細書では、抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を生成し、特性評価し、この抗体が、それぞれの標的抗原に対する各アームの結合親和性を保持していることを示す。さらに、ＰＶＲＩＧ／ＴＩＧＩＴ  ＢｓＡｂは、Ｔ細胞に基づくインビトロ機能アッセイにおける抗ＰＶＲＩＧ抗体および抗ＴＩＧＩＴ抗体の組み合わせと同等である。
【０５０６】
２．プロトコル
抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性構築物の設計：複数の二重特異性ＰＶＲＩＧ／ＴＩＧＩＴ二重阻害剤抗体の代表例を、ＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ、Ｅｕ付番に基づく位置；図４２〜４４も参照）に寄託された配列に基づき、「ホール内のノブ」（ＫＩＨ）Ｆｃ操作およびＣｒｏｓｓＭａｂ、ＫＩＨ  ｓｃＦｖ−Ｆａｂ（「ボトルオープナー」）、および「ボトルオープナー」等容性ヘテロ二量体化（「ＩＨ」）フォーマットの組み合わせを用いた３つの異なるフォーマットで作成した。ＫＩＨ  ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマットで完全なヒト二重特異性抗体を作成するために、ＣＰＡ．９．０８６可変重鎖と、アラニンおよびセリンの２アミノ酸リンカーとを、変異Ｓ２４１Ｐ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８ＬおよびＴ３６６Ｗを含むヒトＩｇＧ４の定常ラムダドメインならびにＣＨ２およびＣＨ３ドメインに融合した。ＣＰＡ．９．０８６可変軽鎖ドメインと２つのセリンのリンカーを、ヒトＩｇＧ４のＣＨ１に融合した。ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）可変重鎖ドメインを、ヒトＩｇＧ４のＣＨ１ドメインと、変異Ｙ３４９Ｃ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含むヒトＩｇＧ４のＣＨ２およびＣＨ３ドメインに融合した。ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）可変軽鎖ドメインを、ヒト定常カッパドメインに融合した。ＫＩＨ「ボトルオープナー」フォーマットについて、上述と同じＣＨＡ．７．５１８．１重鎖および軽鎖構築物を使用し、ヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に融合し、上に列挙した「ノブ」変異を有するＣＨ２およびＣＨ３も含有するＣＰＡ．９．０８６の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）と対を形成した。発現と安定性への影響を評価するために、重鎖と軽鎖の順序を一本鎖フォーマット（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）内で変更した。等容性ヘテロ二量体化ボトルオープナーフォーマットについて、いくつかの可変ドメインの組み合わせを評価した（ＣＨＡ．７．５１８．１と対形成したＣＰＡ．９．０８６  ｓｃＦｖ、ＣＰＡ．９．０８６と対形成したＣＨＡ．７．５１８．１  ｓｃＦｖ、ＣＨＡ．７．５１８．４と対形成したＣＨＡ．９．５４７．１８  ｓｃＦｖ、およびＣＨＡ．５４７．１８と対形成したＣＨＡ．７．５１８．４  ｓｃＦｖ）。ｓｃＦｖを含有する構築物は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに以下の置換を有していた：Ｆ２３４Ｖ  Ｌ２３５Ａ  Ｇ２３６ｄｅｌ  Ｓ２６７Ｋ  Ｓ３５７Ｑ  Ｓ３６４Ｋ。Ｆａｂ構築物は、以下の置換を含んでいた：Ｎ２０８Ｄ  Ｅ２３３Ｐ  Ｆ２３４Ｖ  Ｌ２３５Ａ  Ｇ２３６ｄｅｌ  Ｓ２６７Ｋ  Ｑ２９５Ｅ  Ｌ３６８Ｄ  Ｋ３７０Ｓ  Ｎ３８４Ｄ  Ｑ４１８Ｅ  Ｎ４２１Ｄ。Ｆｃ受容体結合を低減させるために、置換Ｅ２３３Ｐ  Ｆ２３４Ｖ  Ｌ２３５Ａ  Ｇ２３６ｄｅｌ  Ｓ２６７ＫおよびＥ２３３Ｐ  Ｆ２３４Ｖ  Ｌ２３５Ａ  Ｇ２３６ｄｅｌ  Ｓ２６７Ｋ  Ｋ３７０Ｓ  Ｎ３８４Ｄ  Ｑ４１８Ｅ  Ｎ４２１Ｄを組み込んだ。
【０５０７】
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６二重特異性抗体の発現：これらの各構築物のＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．４発現ベクター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）にクローニングし、４つの別個のベクターを得た。二重特異性抗体を発現するために、各構築物のＤＮＡを、最終総濃度１ｕｇ／ｍｌで、３ｍｌの対数的に増殖するＥｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。還元条件と非還元条件の両方で、ＬａｂＣｈｉｐ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）キャピラリー電気泳動により、発現収率について、種々の比率の重鎖および軽鎖を分析した。これにより、複合体を形成していない重鎖と軽鎖の相対量を、複数の条件で定性的に決定することができる。最適な比率が決定されたら、より大規模な生産が行われ、発現した二重特異性抗体を精製した。
【０５０８】
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６二重特異性抗体の精製：抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体を、アフィニティー精製およびサイズ排除クロマトグラフィーを用いて精製した。
【０５０９】
プロテインＡによるアフィニティー精製：プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（ＰｒｏＡ）を上清に対して実施し、細胞培養上清から二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を精製した。上清１０００ｍＬあたり２０ｍＬの１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ７．４（Ｔｅｋｎｏｖａ）および１００ｍＬの５Ｍ  ＮａＣｌ（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加し、その後、０．２２μｍで濾過することにより、クロマトグラフィー用に上清を調製した。分離は、２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４、０．６Ｍ  ＮａＣｌ（Ｔｅｋｎｏｖａ）で平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の５ｍＬ  ＨｉＴｒａｐカラムを備えたＡＫＴＡ  Ｐｕｒｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で実施した。上清を１．２５ｍＬ／分でロードした。ロード後、カラムを平衡緩衝液で、１０ＣＶ、５ｍＬ／分で洗浄した。溶出は２工程で行った。工程１は、２０ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ３．６、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（Ｔｅｋｎｏｖａ）を使用し、工程２は、１００ｍＭグリシンｐＨ２．７、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（Ｔｅｋｎｏｖａ）を使用した。両方の溶出は、４．３ＣＶ、５ｍＬ／分で行われ、２．２５ｍＬの１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５（Ｔｅｋｎｏｖａ）をあらかじめ充填したチューブに、１２ｍＬの画分を集めた。ＮａｎｏＤｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用し、２８０ｎｍの吸光度によって、画分のタンパク質濃度を分析し、単量体含有量を分析用ＨＰＬＣ−ＳＥＣによって分析した。
【０５１０】
単量体と高分子量（ＨＭＷ）成分の分離：分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、ＨＭＷから単量体を分離するために、プロテインＡによって精製した二重特異性抗体について実施された。ＢｓＡｂを、０．２２μｍ濾過によるＳＥＣクロマトグラフィー用に調製した。分離は、ＰＢＳ、ｐＨ７．３（Ｔｅｋｎｏｖａ）のイソクラティック勾配を行うＡＫＴＡ  Ｐｕｒｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で実施した。ＢｓＡｂを、２．６ｍＬ／分で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇ  ２６／６００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にロードした。溶出は、２．６ｍＬ／分で、１カラム容量（ＣＶ）のＰＢＳで行った。ボイドボリュームの後に、画分を集めた。予想通り、ＨＭＷは、単量体よりも先に溶出した。ピーク画分をＨＰＬＣ−ＳＥＣにかけ、単量体とＨＭＷの百分率を決定し、濃度を２８０ｎｍの吸光度によって決定した。単量体およびＨＭＷを含有する画分を別々にプールした。
【０５１１】
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析：分析を、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを用いて実施し、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  ＳＥＣ、２００Ａ、１．７ｕｍ、４．６ｍｍＸ１５０ｍｍ、１０Ｋ−４５０Ｋ（Ｗａｔｅｒｓ）をＳＥＣカラムとして使用した。ＳＥＣ分離は、ＰＢＳ、ｐＨ  ７．４（Ｔｅｋｎｏｖａ）からなる移動相を使用して、周囲温度でイソクラティックに実施した。流量は、０．２５ｍＬ  ｍｉｎ−１であった。ＢｉＳｐＡｂ単量体、凝集体および断片の相対量は、２８０ｎｍで紫外線（ＵＶ）検出器によって検出されたピーク面積の計算によって定量化された。
【０５１２】
二重特異性抗体とのヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＶＲＩＧ結合のＳＰＲ動態アッセイ：全ての実験は、アッセイ中試料を４℃に保ちながら、２２℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６装置を使用して実施された。まず、標準的なアミンカップリングを用いて、ＧＬＣチップ（Ｂｉｏ  Ｒａｄ）上の全ての垂直捕捉レーンおよび水平インタースポットにわたって固定された、ヤギ抗ヒトＦｃポリクローナル抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用い、高密度捕捉表面を調製した。各レーンのポリクローナル抗体に典型的な固定化レベルは、約４６００ＲＵであった。ヒトＴＩＧＩＴ−ＨＩＳ単量体は、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから入手したが、ヒトＰＶＲＩＧ−ＨＩＳは、社内で調製した。二重特異性抗体を、濾過したＢＳＡを添加して１００μｇ／ｍＬの最終濃度にした１×ＰＢＳＴである泳動緩衝液中で約１μｇ／ｍＬに希釈した。ＰｒｏｔｅＯｎ機器の各「シングルショット動態」サイクルにつき、異なる抗体を２つの固有の垂直捕捉レーンに約２分間捕捉した。ＰｒｏｔｅＯｎの緩衝液流を水平方向に切り替えた後、捕捉表面を約１５〜２０分間安定化させた。別々の捕捉サイクルで、６種類の濃度の３倍希釈系のヒトＴＩＧＩＴ（３６２ｐＭ〜８８ｎＭ）またはヒトＰＶＲＩＧ（４６０ｐＭ〜１１２ｎＭ）を２分間注入し、その後、流速１００μｌ／分で１５分間解離させた。抗原の各濃度系の３つの複製物を、二重参照のための数サイクルの緩衝液注入と共に、捕捉された二重特異性抗体の２つの独立した表面に注入した。１４６ｍＭリン酸の２回の３０秒パルスを用い、各サイクル間に抗ヒト抗体表面を再生させた。捕捉された二重特異性抗体上に注入されたＴＩＧＩＴおよびＰＶＲＩＧのセンサーグラムを、ＰｒｏｔｅＯｎバージョンのスクラバを使用して処理し、質量輸送の項を含む１：１動態結合モデルに適合させた。
【０５１３】
二重特異性抗体に同時に結合したヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＶＲＩＧのＳＰＲサンドイッチアッセイ：実験は、２２℃でＢｉａｃｏｒｅ  ３０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して実施した。ヒトＴＩＧＩＴ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）は、標準的なアミンカップリングを使用して、８００ＲＵ〜１０００ＲＵの範囲のＲＵレベルでＣＭ５  Ｂｉａｃｏｒｅチップの４つのフローチャネル全てに共有結合によって固定化した。二重特異性抗体を、２５μｌ／分の流速で３分間、２５ｎＭの分子濃度で１つのフローセルに注入した。次に、ヒトＰＶＲＩＧを、二重特異性抗体と複合体を形成したＴＩＧＩＴフローセルと、結合した二重特異性抗体を有しない対照ＴＩＧＩＴ表面の両方に、１１６ｎＭの濃度で３分間、２５μｌ／分の流速で同時に注入した。対照のＴＩＧＩＴ表面は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ソフトウェアを使用して参照を差し引き、得られたセンサーグラムを処理した。
【０５１４】
デュアルエンゲージメントＥＬＩＳＡ：二重特異性抗体の結合を分析するためのＥＬＩＳＡプレートを調製するために、プレートを、ＰＢＳ中の１００ｕｌの１ｕｇ／ｍＬ  ＰＶＲＩＧ−ｈＦｃを用い、４℃で一晩コーティングした。次の日、コーティング溶液を捨て、プレートを、２５０μＬの２％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で２時間かけてブロックした。ウェルを、３００μＬの１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（洗浄緩衝液）で３回洗浄した。試料を、１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．２％ＢＳＡ（結合緩衝液）中、１μｇ／ｍＬから１．４ｐｇ／ｍＬまで３倍に段階希釈し、３００ＲＰＭで振とうしながら室温で１時間インキュベートした。対照として、ＰＶＲＩＧ特異的抗体であるＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、およびＴＩＧＩＴ特異的抗体であるＣＰＡ．９．０８６を同様に調製し、二重特異性試料として評価した。上述のようにウェルを洗浄し、１００μＬの１μｇ／ｍＬ  ＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ番号１０９１７−Ｈ０８Ｈ）を添加することによって、ＴＩＧＩＴに結合する能力を評価した。対照抗体の結合を評価するために、１００μＬの１μｇ／ｍＬ  ＰＶＲＩＧ−Ｈｉｓ（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ、ロット２０１７０６２３）をＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）ウェルに添加し、１００ｕｌの１μｇ／ｍＬ  ＴＩＧＩＴ−ＨｉｓをＣＰＡ．９．０８６ウェルに添加した。可溶性リガンドとのインキュベーションは、３００ＲＰＭで振とうしながら室温で１時間行った。上述のようにウェルを洗浄した後、１００ｕｌの１ｕｇ／ｍｌ  抗Ｈｉｓ−Ｔａｇ抗体ＨＲＰコンジュゲート（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ０５０Ｈ、クローン番号ＡＤ１．１．１０を結合緩衝液に添加することによって、可溶性リガンドの結合を検出し、３００ＲＰＭで１時間振とうしながら室温でインキュベートした。上述のようにウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬの室温Ｕｌｔｒａ−ＴＭＢ基質（Ｍｏｓｓ  Ｉｎｃ．）を加えた。現像は、７分間であり、反応を、１００μＬの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４の添加により停止した。プレートを、４５０ｎＭの波長に設定されたＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ３４０ＰＣ−３８４プレートリーダで読み取った。
【０５１５】
二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ捕捉および可溶性ＰＶＲＩＧ結合を評価するために、上で使用したものと同様のアッセイを実施した。この場合、１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４中の１００μＬ／ウェルの１μｇ／ｍｌ  ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ融合タンパク質を４℃で一晩コーティングした。コーティング溶液を捨て、ウェルを１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４、２％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で室温で２時間ブロックした。上で使用した二重特異性および単一特異性の対照は、ＰＶＲＩＧ捕捉実験と同じ範囲で段階希釈した。実験の残りの部分は、ＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓが使用されたＣＰＡ．９．０８６を除く全ての試料の検出について、ＰＶＲＩＧ−Ｈｉｓが使用されたことを除いて、上と同じであった。
【０５１６】
ヒトＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖：ヒトＣＭＶ反応性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（ＣＴＬ）を解凍し、２×１０６細胞／ｍｌで再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で、２ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）および１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−７（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充した完全ＲＰＭＩ培地中で１μｇ／ｍｌのＣＭＶ  ｐｐ６５ペプチド（Ａｎａｓｐｅｃ）によって刺激した。６日後、細胞を１：２に分割し、低用量ヒトＩＬ−２（１００ＩＵ／ｍｌ）と共に静置した。８日目に細胞を採取し、完全ＲＰＭＩ培地中の２００万／ｍｌを、低用量ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）で２日間再播種した。１１日目に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の純度およびＣＭＶ  ｐｐ６５（４９５−５０３）反応性について、細胞表現型を決定する。
【０５１７】
細胞を、抗ＣＤ３（クローン：ＯＫＴ３）−アロフィコシアニンセブン（ＡＰＣ−Ｃｙ７；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ８（クローン：Ｈ１Ｔ８ａ）−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（ＡＦ）４８８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ１４（クローン：ＨＣＤ１４）−ペリジニンクロロフィルタンパク質（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）の組み合わせたカクテル、抗ＣＤ１９（クローン：ＨＩＢＣＤ１４）ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗ＣＤ５６（クローン：ＨＣＤ５６）−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＴＩＧＩＴ（クローン：ＭＢＳＡ４３）−アロフィコシアニン（ＡＰＣ；ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）またはＩｇＧ４（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）−アイソタイプ対照（ＡＰＣ：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）−ＡＦ−６４７（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）またはＩｇＧ４−ＡＦ６４７アイソタイプ対照（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）、および抗ＰＤ−１（クローン：ＥＨ１２．２Ｈ７）−Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ４２１（ＢＶ４２１：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）またはＩｇＧ１（クローン：ＭＯＰＣ２１）ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。四量体反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を評価するために、ＰＢＭＣを、ｉＴＡｇ四量体−ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ＣＭＶ  ｐｐ６５（４９５−５０３）（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ）−フィコエリスリン（ＭＢＬ−ＢＩＯＮ）を用い、室温で３０分間染色した。細胞をＰＢＳ／１％ＢＳＡ／０．０１％アジ化ナトリウム緩衝液で洗浄し、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。
【０５１８】
ｐｐ６５を発現する黒色腫細胞株を用いたヒトＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞共培養アッセイ：ヒトＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を用いたインビトロ共培養アッセイを利用して、ＰＶＲＩＧまたはＴＩＧＩＴに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）と、ＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴに対する二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）が、抗原特異的サイトカイン分泌に及ぼす効果を評価した。共培養アッセイで使用された標的細胞は、修飾Ｍｅｌ−６２４細胞株（ＡＴＣＣ）、Ｍｅｌ−６２４ｐｐ６５であった。この細胞株は、ＣＭＶタンパク質ｐｐ６５を異所的に発現させることによって生成された。これにより、外因性のｐｐ６５ペプチドを追加する必要なく、ｐｐ６５に由来するペプチドのＨＬＡ−Ａ２提示が得られる。Ｍｅｌ−６２４  ｐｐ６５がん細胞株との共培養におけるＣＭＶ  ｐｐ６５反応性ＣＤ８  Ｔ細胞に対する阻害性受容体遮断の用量依存性滴定を実施した。１３２ｎＭで始まり、０．００１ｎＭで終わる、１０点の４倍希釈系列の抗体を、標的細胞（７５，０００）とＴ細胞（１５，０００）との比率５：１で、Ｍｅｌ６２４  ｐｐ６５細胞およびＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞と共に共培養した。Ｔ細胞、腫瘍細胞株、および抗体を、９６ウェルＵ底プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に一緒に加え、３７℃で１８時間インキュベートした。以下の抗体を試験した：抗ＰＶＲＩＧ（ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ））、抗ＴＩＧＩＴ（ＣＰＡ．９．０８６）、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６の組み合わせ、ＰＶＲＩＧとＴＩＧＩＴの両方を標的とする二重特異性抗体（ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）またはＣＨＡ．７．５１８．４／ＣＰＡ．９．０８６またはＣＨＡ．９．５４７．１８  ＢｓＡｂ）、およびヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照。１８時間のインキュベーション時間の後、共培養上清中のヒトインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の量を、サイトメトリービーズアッセイ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリーによって測定した。データは非線形回帰によって分析され、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して、「１部位特異的結合」または「１部位−総および非特異的結合」モデルのいずれかに適合させた。
【０５１９】
示差走査蛍光定量法：溶融温度は、抗体安定性の尺度を提供する。二重特異性抗体および対照である単一特異性抗体を、溶融温度の変性および疎水性染料ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｔｈｅｒｍｏ）の結合について分析した。抗体は、ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅを使用して、所望な緩衝液で適切な濃度に希釈した。ＳｔｅｐＯｎｅ  Ｐｌｕｓ  ＲＴ−ＰＣＲ装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、制御された溶融（２５Ｃ〜９５Ｃ、１度／分上昇）を実施し、ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅの蛍光を１分間隔で検出した。抗体をｐＨ６．０およびｐＨ７．４で分析して、観察された効果が製剤によるものではないことを確実にした。
【０５２０】
ＬＣ−ＭＳ分析：質量分析は、米国カリフォルニア州ベルモントにあるＬａｋｅＰｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．によって実施された。酵素による脱グリコシル化の後、キャピラリーＵＨＰＬＣシステムに接続されたＡｇｉｌｅｎｔ  Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で試料を分析した。インタクト分析は、タンパク質の特性評価のための非還元条件および還元条件下で実施され、Ｗａｔｅｒｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアを使用して結果を分析した。
【０５２１】
凍結解凍安定性分析：試料を、希釈によって１Ｘ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４で濃度を１．０ｍｇ／ｍＬに調整することによって、またはスピンコンセントレータを使用することによって、調製した。１００ｕｌを０．２ｍｌスナップストリップＰＣＲチューブに入れ、−８０℃で少なくとも２４時間凍結した後、室温で解凍させた。凍結と解凍の３サイクルについて、このサイクルを２回繰り返した。２０ｕｌの各試料を、ＳＥＣ−ＵＰＬＣによって、単量体、高分子量（ＨＭＷ）、および低分子量（ＬＭＷ）種について分析した。試料を、ＣＥ−ＳＤＳ（還元および非還元、Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ  ＧＸＩＩ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）でも分析し、遠心分離後に濃度を評価し、沈殿したタンパク質を除去した。
【０５２２】
低ｐＨ保持：試料を、希釈によって１Ｘ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４で濃度を１．０ｍｇ／ｍＬに調整することによって、またはスピンコンセントレータを使用することによって、調製した。各試料のｐＨを、０．１Ｍグリシン  ｐＨ３．２を添加することによってｐＨ３．０に調整し、室温で０、１、２、４および２４時間インキュベートした。試料を１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５で中和し、ＣＥ−ＳＤＳ（還元および非還元、Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ  ＧＸＩＩ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）、ＳＥＣ−ＵＰＬＣで分析し、遠心分離後に、ＮａｎｏＤｒｏｐで２８０ｎｍの吸光度を分析して、沈殿したタンパク質を除去した。
【０５２３】
結果
二重特異性抗体の配列：抗ＰＶＲＩＧ／抗ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体は、２つの異なるＦｃヘテロ二量体化フォーマットと２つの可変ドメイン提示フォーマットを使用して作成された。各断片の配列を図２６、４０、および４１に示す。
【０５２４】
ＳＰＲ動態アッセイ：図２７は、２つの独立した表面上で捕捉された二重特異性抗体と結合する（Ａ）ＴＩＧＩＴおよび（Ｂ）ＰＶＲＩＧのセンサーグラムデータと、単純な１：１動態結合モデルに対するデータのグローバルフィットを示す。ＴＩＧＩＴ−二重特異性抗体相互作用についてのオフレートを十分に推定するための動態モデルについて、十分な解離信号減衰が存在しなかったため、ｋｄ値は、任意に、データを適合させるために、１．０ｅ−５ｓｅｃ−１で一定に保持された。したがって、図２７のＴＩＧＩＴ−二重特異性抗体相互作用からの親和性および速度定数は、概算でしかないとみなされるべきである。ｋｄを１．０ｅ−５ｓｅｃ−１の一定に保持したＳＰＲを用いて測定される場合のＴＩＧＩＴ−二重特異性抗体相互作用の結合定数は、ｋａ＝３．９ｅ６Ｍ−１ｓｅｃ−１であり、ＫＤ＝２．６ｐＭであった。ＰＶＲＩＧ−二重特異性抗体相互作用の結合定数は、ｋａ＝１．３ｅ６Ｍ−１ｓｅｃ−１、ｋｄ＝２．４ｅ−４ｓｅｃ−１、ＫＤ＝１８７ｐＭと概算された。
【０５２５】
ＳＰＲサンドイッチアッセイ：図２８は、（Ａ）固定化されたヒトＴＩＧＩＴを有するＢｉａｃｏｒｅチップに注射された二重特異性抗体の連続的な注射、その後、（Ｂ）ヒトＰＶＲＩＧの注射のセンサーグラムを示し、したがって、二重特異性抗体が、ヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＶＲＩＧの両方に同時に結合する能力を示している。ＴＩＧＩＴ表面に対する二重特異性抗体結合の応答レベルは、約１１００ＲＵであった。ＴＩＧＩＴ表面に対してあらかじめ複合体化された二重特異性抗体に対するヒトＰＶＲＩＧ結合の応答レベルは、約２３０ＲＵであった。
【０５２６】
ＣＭＶｐｐ６５反応性Ｔ細胞は、ＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴ、およびＰＤ−１を発現する：ＣＭＶタンパク質、ｐｐ６５に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞は十分に特徴づけられており、これらのＣＭＶ特異的Ｔ細胞を使用して、Ｔ細胞上の調節受容体の役割を研究することができる。ＣＭＶ  ｐｐ６５ペプチド、ＩＬ−２、およびＩＬ−７を使用したＨＬＡ−Ａ２＋ドナーＰＢＭＣの刺激により、ＣＭＶ  ｐｐ６５特異的Ｔ細胞は、四量体染色により決定される場合、９０〜９５％の範囲の純度までの強力な増殖を生じた。図２９Ａは、増殖後の２つのドナーからのＣＭＶ  ｐｐ６５特異的Ｔ細胞の割合を示す。Ｔ細胞上のＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴおよびＰＤ−１の表面発現はこれらのドナーから評価された。活性化の１１日目に、ＣＭＶ  ｐｐ６５特異的Ｔ細胞は、ＰＶＲＩＧ  ｇＭＦＩ比率（ＭＦＩｒ、標的抗体のＭＦＩを対照抗体のＭＦＩによって割られたものとして定義される）が３〜５倍、ＴＩＧＩＴ  ＭＦＩｒが４倍、ＰＤ−１  ＭＦＩｒが１〜２倍発現した（図２９Ｂ）。
【０５２７】
抗ヒトＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴ抗体は、単独で、またはヒトＣＭＶ特異的Ｔ細胞からの組み合わせで、ＩＦＮ−γ分泌を増加させる：ＣＤ８＋Ｔ細胞でのＴＩＧＩＴおよびＰＶＲＩＧ発現の誘導が、Ｔ細胞機能不全と相関するという理論的根拠により、炎症促進性サイトカイン産生の能力に対するＰＶＲＩＧおよびＴＩＧＩＴ遮断の効果を評価しようと試みた。２人のドナー（ドナー４およびドナー７２）からのＣＭＶ反応性Ｔ細胞を、Ｍｅｌ−６２４（ＰＶＲ＋ＰＶＲＬ２＋）ｐｐ６５細胞と共培養した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞に対するＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＰＡ．９．０８６、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６、ならびにＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂの活性を評価した。ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）が、ＩｇＧ対照抗体と比較して、ＩＦＮ−γ産生を増加させる（３２〜４６％）ことを観察した。ＣＰＡ．９．０８６抗体の添加により、ＩＦＮ−γがさらに増加した（５５〜８６％）。組み合わせた場合、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６の治療は、相乗的に、または場合によっては、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）またはＣＰＡ．９．０８６の単一の遮断と比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞のサイトカイン産生を相加的に増加させた（９９〜１８９％）。ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂは、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６  ２  ｍＡｂの組み合わせと同じ機能効果を示した（１００〜１９１％）。それぞれのアイソタイプ対照抗体に対する各抗体のＩＦＮ−γ分泌の増加率を図３０に示す。
【０５２８】
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂが、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６  ｍＡｂの組み合わせに匹敵するＣＭＶ  ｐｐ６５特異的Ｔ細胞によるＩＦＮ−γ産生の用量依存的な増加を示すことも観察された（図３１）。ドナー４とドナー７２の両方で、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂおよびＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６の組み合わせの平均±ＳＥＭ  ＩＦＮ−γ産生ＥＣ５０値は同様であり、１桁低いｎＭ範囲であると計算された。ドナー４では、ＥＣ５０は、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６の組み合わせについて、０．３８ｎＭであると計算され、一方、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂのＥＣ５０は、０．３６ｎＭであると計算された。ドナー７２では、ＥＣ５０は、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）とＣＰＡ．９．０８６の組み合わせについて、０．５８ｎＭであると計算され、一方、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６ＢｓＡｂのＥＣ５０は、０．５３ｎＭであると計算された（図３１）。
【０５２９】
デュアルエンゲージメントＥＬＩＳＡ：二重特異性および単一特異性抗体を、コーティング抗原に結合し、次に第２の可溶性リガンドに同時に結合する能力について評価した。図４９は、ビオチン化ＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓタンパク質とストレプトアビジン−ＨＲＰの結合による検出を伴う、ＰＶＲＩＧコーティングプレートへの二重特異性抗体および単一特異性抗体の３倍段階希釈の結合を示す。同様に、図５０は、組換えＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓコーティングプレートへの二重特異性抗体および単一特異性抗体の３倍段階希釈の結合と、ビオチン化ＰＶＲＩＧとストレプトアビジン−ＨＲＰの結合による検出を示す。全ての二重特異性フォーマットは、両リガンドに同時に係合することができた。親和性の明らかな変化は、溶液中で正しく組織化された抗体の相対量に起因するものであった。図５１は、ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して計算され、ＬＣ−ＭＳによって決定され、図４５に示されているように、正しく組織化された二重特異性抗体について補正されたＥＣ５０を示す。
【０５３０】
示差走査蛍光定量法：二重特異性抗体および単一特異性抗体を、溶融温度の変性および疎水性染料ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｔｈｅｒｍｏ）の結合について分析した。抗体をｐＨ６．０およびｐＨ７．４で分析して、観察された効果が製剤によるものではないことを確実にした。ＣＨ２ドメインの溶解を反映するＴｍ１は、全ての二重特異性抗体について、ｐＨ７．４で５１．７Ｃ〜６０．４Ｃ、ｐＨ６．０で５０．９Ｃ〜６０．５Ｃの範囲であった（図５２）。単一特異性抗体は全て、ｐＨ７．４で６３．３Ｃ〜６６．２Ｃ、ｐＨ６．０で６２．４Ｃ〜６４．１Ｃの高いＴｍ１を示した。全ての抗体（ＣＨ３およびＦａｂ融解）のＴｍ２は、７０Ｃより高かった（範囲＝ｐＨ７．４で７０．２Ｃ〜７７．１Ｃ、ｐＨ６．０で７０．９Ｃ〜７７．１Ｃ）。
【０５３１】
ＬＣ−ＭＳ分析：脱グリコシル化されたインタクト質量分析は、３つのフォーマット全ての二重特異性抗体で実施された。ホール内のノブＦｃおよびＣｒｏｓｓＭａｂ戦略を利用するヘテロ二量体化によって、３２％および７３％の正しく組織化された二重特異性抗体が得られ、一方、異なるＦｃヘテロ二量体化アプローチ（それぞれ、ホール内のノブおよび等容性ヘテロ二量体化）によるｓｃＦｖ含有アームとインタクト抗体アームを含む２つの「ボトルオープナー」フォーマットにより、９５％以上の正しく組織化された二重特異性抗体が得られた（図４５）。
【０５３２】
低ｐＨ保持：二重特異性抗体および単一特異性の対照抗体を、ｐＨ３で０、１、２、４、および２４時間インキュベートし、凝集体または低分子量生成物の形成について、Ｔ＝０からの単量体含有量％に対する変化によって観察されるように、ＬａｂＣｈｉｐ  ＧＸＩＩ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）およびＳＥＣ−ＵＰＬＣを用いたＣＥ−ＳＤＳによって評価した。全ての二重特異性抗体および単一特異性抗体は、このストレスに対して安定しており、２４時間の時間経過で、単量体含有量の最大６％の変化を示した。
【０５３３】
凍結解凍安定性分析：さまざまな軽鎖拘束およびヘテロ二量体化アプローチを利用した二重特異性抗体および対照の単一特異性抗体を、連続した凍結解凍サイクルに耐える能力について評価した。凍結と解凍を３サイクル行った後、抗体を、溶液中に存在する低分子量（ＬＭＷ）、単量体、および高分子量種の変化についてＳＥＣ−ＵＰＬＣで分析した。正の値は、凍結／解凍サイクル後に報告された種の相対的な割合の増加を表す。二重特異性抗体ＢｓＡｂ−１４は、Ｔ＝０から単量体含有量が５％より多く減少した唯一の試料であった（図５３）。他の全てのフォーマットは、このストレスの後も安定していた。ＣＭＶアッセイの用量応答
【０５３４】
二重特異性、単一特異性、および単一特異性抗体の組み合わせを、用量応答において図３０に記載されているＣＭＶアッセイで試験した。各抗体または混合物の連続３倍希釈を実施し、６６ｎＭ〜０．００３ｎＭの範囲の抗体濃度を得た。単一特異性抗体は、段階希釈の前に非特異的対照抗体と１：１で混合した。試験した二重特異性抗体は、ＢｓＡｂ  ２（ＫＩＨ＋ＣｒｏｓｓＭａｂ）、ＢｓＡｂ  ４（ＫＩＨボトルオープナー）、ＢｓＡｂ  １４、およびＢｓＡｂ  １８（両方ともＩＨボトルオープナー）であった。ＣＨＡ．７．５１８．１およびＣＨＡ．７．５１８．４とＣＰＡ．９．０８６の組み合わせも評価した。二重特異性抗体は全て、試験した全てのフォーマットで抗体の組み合わせに対して少なくとも同等に機能し、２つの独立したアッセイにおいて、試験した３種類のドナーＴ細胞全てで単一特異性抗体よりも優れていた（図５４）。
【０５３５】
要約および結論
ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６をいずれか単独で、または組み合わせて添加すると、Ｍｅｌ−６２４  ｐｐ６５に対するＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂのアッセイは、ＩｇＧ対照抗体と比較して、ＩＦＮ−ｙ分泌における用量依存的な増加を誘導した。組み合わせた場合、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６は、相乗的に、またはドナー７２の場合には、単一の遮断のみと比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞のサイトカイン産生を増加させた。ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ＢｓＡｂは、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）／ＣＰＡ．９．０８６  ｍＡｂの組み合わせと同じ機能効果を示し、両ドナーについてのＥＣ５０値は、１桁低いｎＭ範囲であると計算された。まとめると、これらのデータは、ＣＨＡ．７．５１８．１．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）およびＣＰＡ．９．０８６抗体が、単独で、または組み合わせて、または二重特異性抗体フォーマットで、Ｔ細胞エフェクター機能を増強することができることを示している。
【０５３６】
実施例２：ＥＬＩＳＡアッセイ
ＰＶＲＩＧコーティングプレート
二重特異性抗体の結合を分析するためのＥＬＩＳＡプレートを調製するために、プレートを、ＰＢＳ中の１００ｕｌの１ｕｇ／ｍＬ  ＰＶＲＩＧ−ｈＦｃを用い、４℃で一晩コーティングした。次の日、コーティング溶液を捨て、プレートを、２５０μＬの２％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で２時間かけてブロックした。ウェルを、３００μＬの１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（洗浄緩衝液）で３回洗浄した。試料を、１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．２％ＢＳＡ（結合緩衝液）中、１μｇ／ｍＬから１．４ｐｇ／ｍＬまで３倍に段階希釈し、３００ＲＰＭで振とうしながら室温で１時間インキュベートした。対照として、ＰＶＲＩＧ特異的抗体であるＣＨＡ．７．５１８．１  Ｈ４、およびＴＩＧＩＴ特異的抗体であるＣＰＡ．９．０８６  Ｈ４を同様に調製し、二重特異性試料として評価した。上述のようにウェルを洗浄し、１００μＬの１μｇ／ｍＬ  ＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ番号１０９１７−Ｈ０８Ｈ）を添加することによって、ＴＩＧＩＴに結合する能力を評価した。対照抗体の結合を評価するために、１００μＬの１μｇ／ｍＬ  ＰＶＲＩＧ−Ｈｉｓ（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ、ロット２０１７０６２３）をＣＨＡ．７．５１８．１  Ｈ４ウェルに添加し、１００ｕｌの１μｇ／ｍＬ  ＴＩＧＩＴ−ＨｉｓをＣＰＡ．９．０８６  Ｈ４ウェルに添加した。可溶性リガンドとのインキュベーションは、３００ＲＰＭで振とうしながら室温で１時間行った。上述のようにウェルを洗浄した後、１００ｕｌの１ｕｇ／ｍｌ  抗Ｈｉｓ−Ｔａｇ抗体ＨＲＰコンジュゲート（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ０５０Ｈ、クローン番号ＡＤ１．１．１０を結合緩衝液に添加することによって、可溶性リガンドの結合を検出し、３００ＲＰＭで１時間振とうしながら室温でインキュベートした。上述のようにウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬの室温Ｕｌｔｒａ−ＴＭＢ基質（Ｍｏｓｓ  Ｉｎｃ．）を加えた。現像は、７分間であり、反応を、１００μＬの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４の添加により停止した。プレートを、４５０ｎＭの波長に設定されたＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ３４０ＰＣ−３８４プレートリーダで読み取った。
【０５３７】
二重特異性抗体のＴＩＧＩＴ捕捉および可溶性ＰＶＲＩＧ結合を評価するために、上で使用したものと同様のアッセイを実施した。この場合、１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４中の１００μＬ／ウェルの１μｇ／ｍｌ  ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ融合タンパク質を４℃で一晩コーティングした。コーティング溶液を捨て、ウェルを１ＸＰＢＳ  ｐＨ７．４、２％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で室温で２時間ブロックした。上で使用した二重特異性および単一特異性の対照は、ＰＶＲＩＧ捕捉実験と同じ範囲で段階希釈した。実験の残りの部分は、ＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓが使用されたＣＰＡ．９．０８６  Ｈ４を除く全ての試料の検出について、ＰＶＲＩＧ−Ｈｉｓが使用されたことを除いて、上と同じであった。
【０５３８】
上記の実施例は、当業者に本発明の組成物、システム、および方法の実施形態をどのように作製および使用するかについての完全な開示および説明を与えるために提供されており、本発明者らがそれらの発明とみなすものの範囲を限定することは意図されていない。当業者に明らかである本発明を実施するための上に記載される様式の修正は、以下の特許請求の範囲内にあることが意図される。本明細書中で言及されている全ての特許および刊行物は、本発明が関係する当業者の技術水準を示している。
【０５３９】
全ての見出しおよびセクションの指定は、明確さおよび参照目的のためだけに使用されているにすぎず、決して限定的であると見なされるべきではない。例えば、当業者は、本明細書に記載される本発明の趣旨および範囲に従って、必要に応じて異なる見出しおよびセクションからの様々な態様を組み合わせることの有用性を認識するであろう。
【０５４０】
本明細書に引用された全ての参考文献は、あたかも各個々の刊行物または特許または特許出願が全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されるのと同程度にそれらの全体が全ての目的のために本明細書に参照により組み込まれる。
【０５４１】
当業者には明らかなように、本出願の趣旨および範囲から逸脱することなく、本出願の多くの修正および変形をなすことができる。本明細書に記載された特定の実施形態および実施例は例としてのみ提供され、特許請求の範囲が権利を与えられる同等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。
【図１】
2021525087.tif 000218
【図２】
2021525087.tif 000219
【図３Ａ】
2021525087.tif 000220
【図３Ｂ】
2021525087.tif 000221
【図３Ｃ】
2021525087.tif 000222
【図４Ａ】
2021525087.tif 000223
【図４Ｂ】
2021525087.tif 000224
【図４Ｃ】
2021525087.tif 000225
【図４Ｄ】
2021525087.tif 000226
【図４Ｅ】
2021525087.tif 000227
【図４Ｆ】
2021525087.tif 000228
【図４Ｇ】
2021525087.tif 000229
【図４Ｈ】
2021525087.tif 000230
【図４Ｉ】
2021525087.tif 000231
【図４Ｊ】
2021525087.tif 000232
【図４Ｋ】
2021525087.tif 000233
【図４Ｌ】
2021525087.tif 000234
【図４Ｍ】
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【図４Ｎ】
2021525087.tif 000236
【図４Ｏ】
2021525087.tif 000237
【図４Ｐ】
2021525087.tif 000238
【図４Ｑ】
2021525087.tif 000239
【図４Ｒ】
2021525087.tif 000240
【図４Ｓ】
2021525087.tif 000241
【図４Ｔ】
2021525087.tif 000242
【図４Ｕ】
2021525087.tif 000243
【図４Ｖ】
2021525087.tif 000244
【図４Ｗ】
2021525087.tif 000245
【図４Ｘ】
2021525087.tif 000246
【図４Ｙ】
2021525087.tif 000247
【図４Ｚ】
2021525087.tif 000248
【図４ＡＡ】
2021525087.tif 000249
【図５Ａ】
2021525087.tif 000250
【図５Ｂ】
2021525087.tif 000251
【図５Ｃ】
2021525087.tif 000252
【図５Ｄ】
2021525087.tif 000253
【図５Ｅ】
2021525087.tif 000254
【図５Ｆ】
2021525087.tif 000255
【図５Ｇ】
2021525087.tif 000256
【図５Ｈ】
2021525087.tif 000257
【図６Ａ】
2021525087.tif 000258
【図６Ｂ】
2021525087.tif 000259
【図６Ｃ】
2021525087.tif 000260
【図６Ｄ】
2021525087.tif 000261
【図６Ｅ】
2021525087.tif 000262
【図６Ｆ】
2021525087.tif 000263
【図６Ｇ】
2021525087.tif 000264
【図７Ａ】
2021525087.tif 000265
【図７Ｂ】
2021525087.tif 000266
【図７Ｃ】
2021525087.tif 000267
【図７Ｄ】
2021525087.tif 000268
【図７Ｅ】
2021525087.tif 000269
【図７Ｆ】
2021525087.tif 000270
【図７Ｇ】
2021525087.tif 000271
【図７Ｈ】
2021525087.tif 000272
【図７Ｉ】
2021525087.tif 000273
【図７Ｊ】
2021525087.tif 000274
【図７Ｋ】
2021525087.tif 000275
【図７Ｌ】
2021525087.tif 000276
【図７Ｍ】
2021525087.tif 000277
【図７Ｎ】
2021525087.tif 000278
【図７Ｏ】
2021525087.tif 000279
【図７Ｐ】
2021525087.tif 000280
【図７Ｑ】
2021525087.tif 000281
【図７Ｒ】
2021525087.tif 000282
【図７Ｓ】
2021525087.tif 000283
【図７Ｔ】
2021525087.tif 000284
【図７Ｕ】
2021525087.tif 000285
【図７Ｖ】
2021525087.tif 000286
【図７Ｗ】
2021525087.tif 000287
【図７Ｘ】
2021525087.tif 000288
【図７Ｙ】
2021525087.tif 000289
【図７Ｚ】
2021525087.tif 000290
【図７ＡＡ】
2021525087.tif 000291
【図７ＡＢ】
2021525087.tif 000292
【図７ＡＣ】
2021525087.tif 000293
【図７ＡＤ】
2021525087.tif 000294
【図７ＡＥ】
2021525087.tif 000295
【図８Ａ】
2021525087.tif 000296
【図８Ｂ】
2021525087.tif 000297
【図８Ｃ】
2021525087.tif 000298
【図８Ｄ】
2021525087.tif 000299
【図９Ａ−９Ｃ】
2021525087.tif 000300
【図１０】
2021525087.tif 000301
【図１１Ａ】
2021525087.tif 000302
【図１１Ｂ】
2021525087.tif 000303
【図１１Ｃ】
2021525087.tif 000304
【図１１Ｄ】
2021525087.tif 000305
【図１１Ｅ】
2021525087.tif 000306
【図１１Ｆ】
2021525087.tif 000307
【図１１Ｇ】
2021525087.tif 000308
【図１１Ｈ】
2021525087.tif 000309
【図１１Ｉ】
2021525087.tif 000310
【図１２Ａ】
2021525087.tif 000311
【図１２Ｂ】
2021525087.tif 000312
【図１２Ｃ】
2021525087.tif 000313
【図１２Ｄ】
2021525087.tif 000314
【図１２Ｅ】
2021525087.tif 000315
【図１３】
2021525087.tif 000316
【図１４Ａ】
2021525087.tif 000317
【図１４Ｂ】
2021525087.tif 000318
【図１４Ｃ】
2021525087.tif 000319
【図１４Ｄ】
2021525087.tif 000320
【図１４Ｅ】
2021525087.tif 000321
【図１４Ｆ】
2021525087.tif 000322
【図１４Ｇ】
2021525087.tif 000323
【図１４Ｈ】
2021525087.tif 000324
【図１４Ｉ】
2021525087.tif 000325
【図１４Ｊ】
2021525087.tif 000326
【図１４Ｋ】
2021525087.tif 000327
【図１４Ｌ】
2021525087.tif 000328
【図１４Ｍ】
2021525087.tif 000329
【図１４Ｎ】
2021525087.tif 000330
【図１４Ｏ】
2021525087.tif 000331
【図１４Ｐ】
2021525087.tif 000332
【図１４Ｑ】
2021525087.tif 000333
【図１４Ｒ】
2021525087.tif 000334
【図１４Ｓ】
2021525087.tif 000335
【図１４Ｔ】
2021525087.tif 000336
【図１４Ｕ】
2021525087.tif 000337
【図１４Ｖ】
2021525087.tif 000338
【図１４Ｗ】
2021525087.tif 000339
【図１４Ｘ】
2021525087.tif 000340
【図１４Ｙ】
2021525087.tif 000341
【図１４Ｚ】
2021525087.tif 000342
【図１４ＡＡ】
2021525087.tif 000343
【図１４ＡＢ】
2021525087.tif 000344
【図１４ＡＣ】
2021525087.tif 000345
【図１４ＡＤ】
2021525087.tif 000346
【図１４ＡＥ】
2021525087.tif 000347
【図１４ＡＦ】
2021525087.tif 000348
【図１４ＡＧ】
2021525087.tif 000349
【図１４ＡＨ】
2021525087.tif 000350
【図１４ＡＩ】
2021525087.tif 000351
【図１４ＡＪ】
2021525087.tif 000352
【図１４ＡＫ】
2021525087.tif 000353
【図１４ＡＬ】
2021525087.tif 000354
【図１４ＡＭ】
2021525087.tif 000355
【図１４ＡＮ】
2021525087.tif 000356
【図１４ＡＯ】
2021525087.tif 000357
【図１４ＡＰ】
2021525087.tif 000358
【図１４ＡＱ】
2021525087.tif 000359
【図１４ＡＲ】
2021525087.tif 000360
【図１４ＡＳ】
2021525087.tif 000361
【図１４ＡＴ】
2021525087.tif 000362
【図１４ＡＵ】
2021525087.tif 000363
【図１４ＡＶ】
2021525087.tif 000364
【図１４ＡＷ】
2021525087.tif 000365
【図１４ＡＸ】
2021525087.tif 000366
【図１４ＡＹ】
2021525087.tif 000367
【図１４ＡＺ】
2021525087.tif 000368
【図１４ＢＡ】
2021525087.tif 000369
【図１４ＢＢ】
2021525087.tif 000370
【図１４ＢＣ】
2021525087.tif 000371
【図１４ＢＤ】
2021525087.tif 000372
【図１４ＢＥ】
2021525087.tif 000373
【図１４ＢＦ】
2021525087.tif 000374
【図１４ＢＧ】
2021525087.tif 000375
【図１４ＢＨ】
2021525087.tif 000376
【図１４ＢＩ】
2021525087.tif 000377
【図１４ＢＪ】
2021525087.tif 000378
【図１４ＢＫ】
2021525087.tif 000379
【図１４ＢＬ】
2021525087.tif 000380
【図１４ＢＭ】
2021525087.tif 000381
【図１４ＢＮ】
2021525087.tif 000382
【図１４ＢＯ】
2021525087.tif 000383
【図１４ＢＰ】
2021525087.tif 000384
【図１４ＢＱ】
2021525087.tif 000385
【図１４ＢＲ】
2021525087.tif 000386
【図１４ＢＳ】
2021525087.tif 000387
【図１４ＢＴ】
2021525087.tif 000388
【図１４ＢＵ】
2021525087.tif 000389
【図１４ＢＶ】
2021525087.tif 000390
【図１４ＢＷ】
2021525087.tif 000391
【図１４ＢＸ】
2021525087.tif 000392
【図１５Ａ】
2021525087.tif 000393
【図１５Ｂ】
2021525087.tif 000394
【図１６Ａ】
2021525087.tif 000395
【図１６Ｂ】
2021525087.tif 000396
【図１６Ｃ】
2021525087.tif 000397
【図１６Ｄ】
2021525087.tif 000398
【図１６Ｅ】
2021525087.tif 000399
【図１７Ａ】
2021525087.tif 000400
【図１７Ｂ】
2021525087.tif 000401
【図１７Ｃ】
2021525087.tif 000402
【図１８】
2021525087.tif 000403
【図１９】
2021525087.tif 000404
【図２０Ａ】
2021525087.tif 000405
【図２０Ｂ】
2021525087.tif 000406
【図２０Ｃ】
2021525087.tif 000407
【図２０Ｄ】
2021525087.tif 000408
【図２１Ａ】
2021525087.tif 000409
【図２１Ｂ】
2021525087.tif 000410
【図２２】
2021525087.tif 000411
【図２３Ａ】
2021525087.tif 000412
【図２３Ｂ】
2021525087.tif 000413
【図２３Ｃ】
2021525087.tif 000414
【図２３Ｄ】
2021525087.tif 000415
【図２４Ａ】
2021525087.tif 000416
【図２４Ｂ】
2021525087.tif 000417
【図２４Ｃ】
2021525087.tif 000418
【図２４Ｄ】
2021525087.tif 000419
【図２４Ｅ】
2021525087.tif 000420
【図２４Ｆ】
2021525087.tif 000421
【図２４Ｇ】
2021525087.tif 000422
【図２４Ｈ】
2021525087.tif 000423
【図２４Ｉ】
2021525087.tif 000424
【図２４Ｊ】
2021525087.tif 000425
【図２４Ｋ】
2021525087.tif 000426
【図２４Ｌ】
2021525087.tif 000427
【図２４Ｍ】
2021525087.tif 000428
【図２４Ｎ】
2021525087.tif 000429
【図２４Ｏ】
2021525087.tif 000430
【図２４Ｐ】
2021525087.tif 000431
【図２４Ｑ】
2021525087.tif 000432
【図２４Ｒ】
2021525087.tif 000433
【図２４Ｓ】
2021525087.tif 000434
【図２４Ｔ】
2021525087.tif 000435
【図２４Ｕ】
2021525087.tif 000436
【図２４Ｖ】
2021525087.tif 000437
【図２４Ｗ】
2021525087.tif 000438
【図２４Ｘ】
2021525087.tif 000439
【図２４Ｙ】
2021525087.tif 000440
【図２４Ｚ】
2021525087.tif 000441
【図２４ＡＡ】
2021525087.tif 000442
【図２４ＡＢ】
2021525087.tif 000443
【図２４ＡＣ】
2021525087.tif 000444
【図２４ＡＤ】
2021525087.tif 000445
【図２４ＡＥ】
2021525087.tif 000446
【図２４ＡＦ】
2021525087.tif 000447
【図２４ＡＧ】
2021525087.tif 000448
【図２４ＡＨ】
2021525087.tif 000449
【図２４ＡＩ】
2021525087.tif 000450
【図２４ＡＪ】
2021525087.tif 000451
【図２４ＡＫ】
2021525087.tif 000452
【図２４ＡＬ】
2021525087.tif 000453
【図２４ＡＭ】
2021525087.tif 000454
【図２４ＡＮ】
2021525087.tif 000455
【図２４ＡＯ】
2021525087.tif 000456
【図２４ＡＰ】
2021525087.tif 000457
【図２４ＡＱ】
2021525087.tif 000458
【図２４ＡＲ】
2021525087.tif 000459
【図２４ＡＳ】
2021525087.tif 000460
【図２４ＡＴ】
2021525087.tif 000461
【図２４ＡＵ】
2021525087.tif 000462
【図２４ＡＶ】
2021525087.tif 000463
【図２４ＡＷ】
2021525087.tif 000464
【図２４ＡＸ】
2021525087.tif 000465
【図２４ＡＹ】
2021525087.tif 000466
【図２４ＡＺ】
2021525087.tif 000467
【図２４ＢＡ】
2021525087.tif 000468
【図２４ＢＢ】
2021525087.tif 000469
【図２４ＢＣ】
2021525087.tif 000470
【図２４ＢＤ】
2021525087.tif 000471
【図２４ＢＥ】
2021525087.tif 000472
【図２４ＢＦ】
2021525087.tif 000473
【図２４ＢＧ】
2021525087.tif 000474
【図２４ＢＨ】
2021525087.tif 000475
【図２４ＢＩ】
2021525087.tif 000476
【図２４ＢＪ】
2021525087.tif 000477
【図２４ＢＫ】
2021525087.tif 000478
【図２４ＢＬ】
2021525087.tif 000479
【図２４ＢＭ】
2021525087.tif 000480
【図２４ＢＮ】
2021525087.tif 000481
【図２４ＢＯ】
2021525087.tif 000482
【図２４ＢＰ】
2021525087.tif 000483
【図２４ＢＱ】
2021525087.tif 000484
【図２４ＢＲ】
2021525087.tif 000485
【図２４ＢＳ】
2021525087.tif 000486
【図２４ＢＴ】
2021525087.tif 000487
【図２４ＢＵ】
2021525087.tif 000488
【図２４ＢＶ】
2021525087.tif 000489
【図２４ＢＷ】
2021525087.tif 000490
【図２４ＢＸ】
2021525087.tif 000491
【図２４ＢＹ】
2021525087.tif 000492
【図２４ＢＺ】
2021525087.tif 000493
【図２４ＣＡ】
2021525087.tif 000494
【図２４ＣＢ】
2021525087.tif 000495
【図２４ＣＣ】
2021525087.tif 000496
【図２４ＣＤ】
2021525087.tif 000497
【図２４ＣＥ】
2021525087.tif 000498
【図２４ＣＦ】
2021525087.tif 000499
【図２４ＣＧ】
2021525087.tif 000500
【図２４ＣＨ】
2021525087.tif 000501
【図２４ＣＩ】
2021525087.tif 000502
【図２４ＣＪ】
2021525087.tif 000503
【図２４ＣＫ】
2021525087.tif 000504
【図２４ＣＬ】
2021525087.tif 000505
【図２４ＣＭ】
2021525087.tif 000506
【図２４ＣＮ】
2021525087.tif 000507
【図２４ＣＯ】
2021525087.tif 000508
【図２４ＣＰ】
2021525087.tif 000509
【図２４ＣＱ】
2021525087.tif 000510
【図２４ＣＲ】
2021525087.tif 000511
【図２４ＣＳ】
2021525087.tif 000512
【図２４ＣＴ】
2021525087.tif 000513
【図２４ＣＵ】
2021525087.tif 000514
【図２４ＣＶ】
2021525087.tif 000515
【図２４ＣＷ】
2021525087.tif 000516
【図２４ＣＸ】
2021525087.tif 000517
【図２４ＣＹ】
2021525087.tif 000518
【図２４ＣＺ】
2021525087.tif 000519
【図２４ＤＡ】
2021525087.tif 000520
【図２４ＤＢ】
2021525087.tif 000521
【図２４ＤＣ】
2021525087.tif 000522
【図２４ＤＤ】
2021525087.tif 000523
【図２４ＤＥ】
2021525087.tif 000524
【図２４ＤＦ】
2021525087.tif 000525
【図２４ＤＧ】
2021525087.tif 000526
【図２４ＤＨ】
2021525087.tif 000527
【図２４ＤＩ】
2021525087.tif 000528
【図２４ＤＪ】
2021525087.tif 000529
【図２４ＤＫ】
2021525087.tif 000530
【図２４ＤＬ】
2021525087.tif 000531
【図２４ＤＭ】
2021525087.tif 000532
【図２４ＤＮ】
2021525087.tif 000533
【図２４ＤＯ】
2021525087.tif 000534
【図２４ＤＰ】
2021525087.tif 000535
【図２４ＤＱ】
2021525087.tif 000536
【図２４ＤＲ】
2021525087.tif 000537
【図２４ＤＳ】
2021525087.tif 000538
【図２４ＤＴ】
2021525087.tif 000539
【図２４ＤＵ】
2021525087.tif 000540
【図２４ＤＶ】
2021525087.tif 000541
【図２４ＤＷ】
2021525087.tif 000542
【図２４ＤＸ】
2021525087.tif 000543
【図２４ＤＹ】
2021525087.tif 000544
【図２４ＤＺ】
2021525087.tif 000545
【図２４ＥＡ】
2021525087.tif 000546
【図２４ＥＢ】
2021525087.tif 000547
【図２４ＥＣ】
2021525087.tif 000548
【図２４ＥＤ】
2021525087.tif 000549
【図２４ＥＥ】
2021525087.tif 000550
【図２５】
2021525087.tif 000551
【図２６Ａ】
2021525087.tif 000552
【図２６Ｂ】
2021525087.tif 000553
【図２７】
2021525087.tif 000554
【図２８】
2021525087.tif 000555
【図２９】
2021525087.tif 000556
【図３０】
2021525087.tif 000557
【図３１Ａ】
2021525087.tif 000558
【図３１Ｂ】
2021525087.tif 000559
【図３２】
2021525087.tif 000560
【図３３】
2021525087.tif 000561
【図３４】
2021525087.tif 000562
【図３５Ａ】
2021525087.tif 000563
【図３５Ｂ】
2021525087.tif 000564
【図３５Ｃ】
2021525087.tif 000565
【図３５Ｄ】
2021525087.tif 000566
【図３６】
2021525087.tif 000567
【図３７】
2021525087.tif 000568
【図３８】
2021525087.tif 000569
【図３９】
2021525087.tif 000570
【図４０Ａ】
2021525087.tif 000571
【図４０Ｂ】
2021525087.tif 000572
【図４０Ｃ】
2021525087.tif 000573
【図４０Ｄ】
2021525087.tif 000574
【図４０Ｅ】
2021525087.tif 000575
【図４０Ｆ】
2021525087.tif 000576
【図４０Ｇ】
2021525087.tif 000577
【図４０Ｈ】
2021525087.tif 000578
【図４０Ｉ】
2021525087.tif 000579
【図４０Ｊ】
2021525087.tif 000580
【図４０Ｋ】
2021525087.tif 000581
【図４０Ｌ】
2021525087.tif 000582
【図４０Ｍ】
2021525087.tif 000583
【図４０Ｎ】
2021525087.tif 000584
【図４０Ｏ】
2021525087.tif 000585
【図４０Ｐ】
2021525087.tif 000586
【図４０Ｑ】
2021525087.tif 000587
【図４０Ｒ】
2021525087.tif 000588
【図４０Ｓ】
2021525087.tif 000589
【図４０Ｔ】
2021525087.tif 000590
【図４１Ａ】
2021525087.tif 000591
【図４１Ｂ】
2021525087.tif 000592
【図４１Ｃ】
2021525087.tif 000593
【図４１Ｄ】
2021525087.tif 000594
【図４１Ｅ】
2021525087.tif 000595
【図４１Ｆ】
2021525087.tif 000596
【図４１Ｇ】
2021525087.tif 000597
【図４１Ｈ】
2021525087.tif 000598
【図４１Ｉ】
2021525087.tif 000599
【図４１Ｊ】
2021525087.tif 000600
【図４１Ｋ】
2021525087.tif 000601
【図４１Ｌ】
2021525087.tif 000602
【図４１Ｍ】
2021525087.tif 000603
【図４１Ｎ】
2021525087.tif 000604
【図４１Ｏ】
2021525087.tif 000605
【図４１Ｐ】
2021525087.tif 000606
【図４１Ｑ】
2021525087.tif 000607
【図４１Ｒ】
2021525087.tif 000608
【図４１Ｓ】
2021525087.tif 000609
【図４１Ｔ】
2021525087.tif 000610
【図４２】
2021525087.tif 000611
【図４３】
2021525087.tif 000612
【図４４】
2021525087.tif 000613
【図４５】
2021525087.tif 000614
【図４６Ａ】
2021525087.tif 000615
【図４６Ｂ】
2021525087.tif 000616
【図４６Ｃ】
2021525087.tif 000617
【図４７】
2021525087.tif 000618
【図４８】
2021525087.tif 000619
【図４９】
2021525087.tif 000620
【図５０】
2021525087.tif 000621
【図５１】
2021525087.tif 000622
【図５２】
2021525087.tif 000623
【図５３Ａ】
2021525087.tif 000624
【図５３Ｂ】
2021525087.tif 000625
【図５３Ｃ】
2021525087.tif 000626
【図５３Ｄ】
2021525087.tif 000627
【図５４Ａ】
2021525087.tif 000628
【図５４Ｂ】
2021525087.tif 000629
【配列表】
2021525087000001.app
【国際調査報告】
2021525087.tif 000630
2021525087.tif 000631
2021525087.tif 000632
2021525087.tif 000633
2021525087.tif 000634