(57)【要約】  一般式Ｘ０Ｘ１Ｘ２ＣＸ３Ｘ４Ｘ５ＣＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＹＸ１０Ｘ１１ＣＸ１２Ｘ１３の抗菌ペプチドを提供する。また、これらのペプチドを含む特定の製剤、およびそれらを必要とする動物における皮膚感染を治療するためのこれらのペプチドの使用方法も提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１７〜２２アミノ酸長のアミノ酸配列であって、そのＮ末端において配列番号１２（Ｘ０Ｘ１Ｘ２Ｃ  Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＣＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＹＸ１０Ｘ１１ＣＸ１２Ｘ１３）を含み、
Ｘ０は、存在しない、またはプロリンであり、
Ｘ１は、リジン、アルギニン、グリシン、またはプロリンであり、
Ｘ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、またはアルギニンであり、
Ｘ３は、フェニルアラニン、バリン、またはトリプトファンであり、
Ｘ４は、アルギニン、チロシン、またはフェニルアラニンであり、
Ｘ５は、バリンまたはアラニンであり、
Ｘ６は、チロシン、アルギニン、リジン、またはトリプトファンであり、
Ｘ７は、アルギニン、フェニルアラニン、またはグリシンであり、
Ｘ８は、アルギニンまたはグリシンであり、
Ｘ９は、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、またはバリンであり、
Ｘ１０は、アルギニンまたはヒスチジンであり、
Ｘ１１は、アルギニンまたはリジンであり、
Ｘ１２は、アルギニン、リジン、アラニン、またはアスパラギンであり、
Ｘ１３は、０〜４アミノ酸長ポリペプチドであり、
ただし、
Ｘ０がプロリンの場合、Ｘ１はプロリンではなく、
前記アミノ酸配列が配列番号１３（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲ）または配列番号２８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＫＣＲ）を含む場合、Ｘ１３は、１〜４アミノ酸長であり、
Ｘ１３が１アミノ酸長以上の場合、Ｘ１３中のＮ末端アミノ酸はアスパラギン、アルギニン、アスパラギン酸またはグルタミン酸であり、
配列番号１の位置１に対応する位置のアミノ酸がグリシンである場合、前記グリシンはアシル−またはパルミチン−酸修飾されておらず、
アミノ酸がＸ１１リジンである場合、Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（配列番号１４）はＲＲＲＦ（配列番号１５）ではなく、
アミノ酸がＧＦＣＷＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮ（配列番号１６）である場合、Ｃ末端アスパラギンはアミド化される、アミノ酸配列。
【請求項２】
Ｘ０がプロリンである、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３】
Ｘ６がアルギニンまたはチロシンである、請求項１または２に記載のアミノ酸配列。
【請求項４】
Ｘ７がアルギニンまたはグリシンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項５】
Ｘ７がアルギニンである、請求項４に記載のアミノ酸配列。
【請求項６】
Ｘ９がイソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、またはバリンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項７】
Ｘ９がイソロイシンである、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項８】
Ｘ１がリジンである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項９】
Ｘ１２は、アルギニン、リジン、またはアスパラギンである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１０】
Ｘ１３が１アミノ酸長以上であり、Ｘ１３中のＮ末端アミノ酸はアスパラギン酸またはグルタミン酸である、請求項１〜９のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１１】
Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（配列番号１４）が、ＹＲＧＩ（配列番号１７）、ＹＲＧＶ（配列番号１８）、ＹＲＧＦ（配列番号１９）からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１２】
Ｘ１０がアルギニンである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１３】
Ｘ１１がアルギニンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１４】
Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列ＩＤ番号２０）がＦＲＶ（配列ＩＤ番号２１）、ＷＹＶ（配列ＩＤ番号２２）である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１５】
Ｘ１がプロリンである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１６】
前記配列のＣ末端アミノ酸がアスパラギン酸である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１７】
請求項１６に記載のアミノ酸配列の複数の繰り返しを含む多量体。
【請求項１８】
前記反復が互いに直接結合している、請求項１７に記載の多量体。
【請求項１９】
前記複数が２〜２０である、請求項１７または１８に記載の多量体。
【請求項２０】
ａ）請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の多量体を合成し、
ｂ）前記多量体をマイルドな酸と接触させ、それによってＤ−Ｐ結合を破壊する、ことを含む、請求項１６に記載のアミノ酸配列を作製する方法。
【請求項２１】
ＫＦＣＶＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＫ（配列番号２３）、ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＶＣＹＲＲＣＲ（配列番号２４）、ＫＷＣＦＲＶＣＲＲＲＦＣＹＲＲＣＲ（配列番号２５）、ＧＦＣＷＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮ−ＮＨ２（配列番号２６）、およびＧＦＣＷＹＶＣＹＲＧＦＣＹＲＲＣＮ−ＮＨ２（配列番号２７）、ＰＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲ（配列番号２８）、ＰＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ（配列番号２９）、ＰＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲ（配列番号３０）、ＰＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ（配列番号３１）からなる群より選択される、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項２２】
前記アミノ酸配列が１８〜２１アミノ酸長であり、そのＮ末端に、配列番号１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）または配列番号２９（ＰＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）または配列番号１または配列番号２９と１、２、３、または４アミノ酸だけ異なるペプチドを含み、配列番号１または配列番号２９のアミノ酸と異なるアミノ酸が、
配列番号１の位置１に対応する位置のアルギニンまたはグリシン、
配列番号１の位置２に対応する位置のフェニルアラニンまたはアルギニン、
配列番号１の位置４に対応する位置のバリンまたはトリプトファン、
配列番号１の位置５に対応する位置のチロシン、
配列番号１の位置８に対応する位置のアルギニン、
配列番号１の位置９に対応する位置のグリシン、
配列番号１の位置１０に対応する位置のアルギニン
配列番号１の位置１１に対応する位置のアラニン、フェニルアラニン、またはバリン、
配列番号１の位置１４に対応する位置のヒスチジン、
配列番号１の位置１５に対応する位置のリジン、
配列番号１の位置１７に対応する位置のアスパラギン、からなる群から独立して選択される、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項２３】
配列番号１の位置１８に対応する位置にアスパラギン酸を含む、請求項２２に記載のアミノ酸配列。
【請求項２４】
配列番号１の位置１７に対応する位置にアスパラギンを含む、請求項２２〜２３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項２５】
配列番号１の位置１に対応する位置にグリシンを含む、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項２６】
配列番号１の位置１１に対応する位置にアラニンを含む、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項２７】
アルギニンが、配列番号１の位置１４に対応する位置、配列番号１の１５位に対応する位置、またはその両方に存在する、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項２８】
配列番号１の位置１４に対応する位置および配列番号１の位置１５に対応する位置にアルギニンを含む、請求項２２〜２７のいずれか１項に記載のアミノ酸配列
【請求項２９】
前記アミノ酸配列が１８アミノ酸長である、請求項２２〜２８のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項３０】
ペプチドが、３、２、または１アミノ酸だけ配列番号１と異なる、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項３１】
そのＮ末端に、配列番号１、配列番号２（ＲＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号３（ＧＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号４（ＫＦＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号５（ＫＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号６（ＫＷＣＦＲＶＣＲＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号７（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＶＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＡＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＦＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＨＲＣＲＤ）、配列番号１１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）を含む、請求項２２に記載のアミノ酸配列。
【請求項３２】
配列番号１、配列番号３または配列番号１２を含む、請求項３１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３３】
配列番号４または配列番号５または配列番号６または配列番号８を含む、請求項３１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３４】
請求項１〜１６、２２〜３３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を含む製剤を動物に投与することを含む、それを必要とする動物における皮膚感染を治療する方法。
【請求項３５】
請求項２２〜３３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を含む製剤を動物に投与することを含む、それを必要とする動物における皮膚感染を治療する方法。
【請求項３６】
前記製剤が局所的に投与される、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
動物がイヌである、請求項３３〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１〜１６、２２〜３３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を含む製剤を動物に投与することを含む、それを必要とする動物における乳腺炎を治療する方法。
【請求項３９】
前記製剤が、前記動物の乳腺に投与される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記動物が、雌ウシ、ヒツジ、ブタ、またはヤギである、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１〜１６、２２〜３３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を含む製剤を動物に投与することを含む、それを必要とする動物における呼吸器感染症を治療する方法。
【請求項４２】
前記動物が、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマ、ネコまたはイヌの動物である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
動物における医学的状態の治療のための、請求項１〜１６、２２〜３３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項４４】
動物における医学的状態の治療のための、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項４５】
前記医学的状態が皮膚感染である、請求項４３または４４に記載のアミノ酸配列。
【請求項４６】
動物がイヌである、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項４７】
前記医学的状態が呼吸器感染症または乳房炎である、請求項４３または４４に記載のアミノ酸配列。
【請求項４８】
局所投与のために製剤化された、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載のアミノ酸配列。
【請求項４９】
クリーム、軟膏、噴霧剤、または乳剤に製剤化された、請求項４８に記載のアミノ酸配列。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌ペプチドの分野、および感染症の治療のためのそのようなペプチドの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗生物質は、希釈溶液中で、微生物を殺すか、または微生物の増殖を阻害する能力を有する化学物質である。ホストに対して十分に毒性のない抗生物質は、ヒト、動物、および植物の感染症を治療するための化学療法剤として使用される。この用語は、もともと微生物によって産生される物質に限定されていたが、同様の化学活性を有する合成および半合成化合物を含むように拡張されている。
【０００３】
抗菌薬の広範かつ広範な使用は、微生物の耐性株の出現につながった。これらの微生物は、現在入手可能な抗菌薬にもはや感受性ではない。致死的な感染症を低下または予防し、公衆衛生を維持するためには、新しい抗菌薬が必要である。
【０００４】
抗菌ペプチド（ＡＭＰ）は、自然界全体にわたる生物の宿主防御系の必須成分であり、侵入する病原体からの防御を提供する。これらはグラム陽性およびグラム陰性細菌、真菌、寄生虫およびウイルスに対して強力な抗菌活性を示す。より小さなＡＭＰ（通常、約１５〜４０アミノ酸）は、主に、微生物細胞膜（メンブラン）の構造または機能を破壊することによって大きく作用し、それらは、単一の規定された分子構造を標的としない。したがって、従来の抗生物質とは対照的に、バクテリアの代謝活性にかかわらず有効である。デフェンシンやカテリシジン（ＬＬ−３７）などのヒトＡＭＰは白血球に存在し、皮膚や粘膜表面の様々な上皮から分泌される。ＡＭＰはその抗菌活性に加えて、炎症、免疫活性化、創傷治癒において重要なエフェクター分子である。ＡＭＰは、配列および二次構造が非常に多様であるが、いくつかの共通の特性を共有する。それらは、通常、カチオン性、両親媒性であり、バクテリアメンブランの完全性を損なうことによってそれらの殺菌作用を発揮する。標的微生物のアニオン性メンブラン面とのＡＭＰの相互作用は、膜透過性化、細胞溶解および死滅をもたらす。
【発明の概要】
【０００５】
第１の態様において、本発明は、１７〜２２アミノ酸長のアミノ酸配列であって、そのＮ末端において配列番号１２（Ｘ０Ｘ１Ｘ２ＣＸ３Ｘ４Ｘ５ＣＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＹＸ１０Ｘ１１ＣＸ１２Ｘ１３）を含み、Ｘ０は、存在しない、またはプロリンであり、Ｘ１は、リジン、アルギニン、グリシン、またはプロリンであり、Ｘ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、またはアルギニンであり、Ｘ３は、フェニルアラニン、バリン、またはトリプトファンであり、Ｘ４は、アルギニン、チロシン、またはフェニルアラニンであり、Ｘ５は、バリンまたはアラニンであり、Ｘ６は、チロシン、アルギニン、リジン、またはトリプトファンであり、Ｘ７は、アルギニン、フェニルアラニン、またはグリシンであり、Ｘ８は、アルギニン、フェニルアラニン、またはグリシンであり、Ｘ９は、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、またはバリンであり、Ｘ１０は、アルギニンまたはヒスチジンであり、Ｘ１１は、アルギニンまたはリジンであり、Ｘ１２は、アルギニン、リジン、アラニン、またはアスパラギンであり、Ｘ１３は、０〜４アミノ酸長ポリペプチドであり、ただし、Ｘ０がプロリンの場合、Ｘ１はプロリンではなく、前記アミノ酸配列が配列番号１３（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲ）または配列番号２８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＫＣＲ）を含む場合、Ｘ１３は、１〜４アミノ酸長であり、Ｘ１３が１アミノ酸長以上の場合、Ｘ１３中のＮ末端アミノ酸はアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、配列番号１の位置１に対応する位置のアミノ酸がグリシンである場合、前記グリシンはアシル−またはパルミチン−酸修飾されておらず、アミノ酸がＸ１１リジンである場合、Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（配列番号１４）はＲＲＲＦ（配列番号１５）ではなく、アミノ酸がＧＦＣＷＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮ（配列番号１６）である場合、Ｃ末端アスパラギンはアミド化される、
アミノ酸配列、を提供する。
【０００６】
特定の実施形態では、Ｘ０は存在せず、Ｘ６はアルギニンまたはリジンであり、および／またはＸ７はアルギニンまたはリジンであり、Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（配列番号１４）はＹＲＧＩ（配列番号１７）、ＹＲＧＶ（配列番号１８）、ＹＲＧＦ（配列番号１９）から選択され、および／またはＸ１０はアルギニンであり、および／またはＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号２０）は、ＦＲＶ（配列番号２１）、ＷＹＶ（配列番号２２）であり、および／またはＸ１３は１アミノ酸長またはそれ以上であり、Ｘ１３中のＮ末端配列はアスパラギン酸である。
【０００７】
特定の一連の実施形態において、アミノ酸配列は、１７〜２１アミノ酸長であり、そのＮ末端に、配列番号１２（Ｘ０Ｘ１Ｘ２ＣＸ３Ｘ４Ｘ５ＣＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＹＸ１０Ｘ１１ＣＸ１２Ｘ１３）を含み、ここで、Ｘ０は存在せず、Ｘ１は、リジン、アルギニン、またはグリシンであり、Ｘ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、またはアルギニンであり、Ｘ３は、フェニルアラニン、バリン、またはトリプトファンであり、Ｘ４は、チロシンまたはフェニルアラニンであり、Ｘ５はバリンまたはアラニンであり、Ｘ６はチロシンまたはアルギニンであり、Ｘ７はアルギニンまたはグリシンであり、Ｘ８はアルギニン、フェニルアラニンまたはグリシンであり、Ｘ９はアラニン、フェニルアラニン、チロシンまたはバリンであり、Ｘ１０はアルギニンまたはヒスチジンであり、Ｘ１１はアルギニンまたはリジン、Ｘ１２はアルギニン、リジン、またはアスパラギンであり、Ｘ１３は０〜４アミノ酸長のポリペプチドである。
【０００８】
第１の態様による別のセットの実施形態では、アミノ酸配列は、１８〜２１アミノ酸長であり、そのＮ末端に、配列番号１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）または配列番号１とは１、２、３、または４アミノ酸だけ異なるペプチドを含み、ここで、配列番号１のアミノ酸配列と異なるアミノ酸は、配列番号１の位置１に対応する位置のアルギニンまたはグリシン、配列番号１の位置２に対応する位置のフェニルアラニンまたはアルギニン、配列番号１の位置４に対応する位置のバリンまたはトリプトファン、配列番号１の位置５に対応する位置のチロシン、配列番号１の位置８に対応する位置のアルギニン、配列番号１の位置９に対応する位置のグリシン、配列番号１の位置１０に対応する位置のアルギニン、配列番号１の位置１１に対応する位置のアラニン、フェニルアラニン、またはバリン、配列番号１の位置１４に対応する位置のヒスチジン、配列番号１の位置１５に対応する位置のリジン、配列番号１の位置１７に対応する位置のアスパラギンからなる群から独立して選択される。
【０００９】
より具体的には、アミノ酸配列は、配列番号１の位置１８に対応する位置にアスパラギン酸、および／または配列番号１の位置１７に対応する位置にアスパラギン、および／または配列番号１の位置１に対応する位置にグリシン、配列番号１の位置１１に対応する位置にアラニン、および／または配列番号１の位置１４に対応する位置にアルギニン、配列番号１の位置１５に対応する位置にアルギニン、またはその両方を含む。
【００１０】
実施形態のセットにおいて、アミノ酸配列は、それぞれのＮ末端において、配列番号１、配列番号２（ＲＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号３（ＧＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号４（ＫＦＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）；配列番号５（ＫＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号６（ＫＷＣＦＲＶＣＲＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号７（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＶＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＡＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＦＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＨＲＣＲＤ）、または配列番号１１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）を含むアミノ酸配列からなる群から選択される。
【００１１】
追加の実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号９７（ＫＲＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９８（ＫＷＣＶＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９９（ＫＷＣＦＦＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１００（ＫＷＣＦＷＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０２（ＫＷＣＦＲＡＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０４（ＫＷＣＦＲＶＣＹＦＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０５（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＮ）、配列番号１０６（ＫＷＣＷＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０７（ＫＷＣＦＲＶＣＷＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＧＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０９（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＲＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１０（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＹＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１２（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＫＤ）、配列番号１１３（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＡＤ）、配列番号１１４（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＲ）、配列番号１１５（ＧＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）、配列番号１１６（ＫＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）、配列番号１１７（ＧＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１８（ＧＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）からなる群から選択される。
【００１２】
なおさら追加実施において、アミノ酸配列は、配列番号２８、２９、３０、３１からなる群より選択される。
第２の態様では、本発明は、本発明の前の態様によるアミノ酸配列の複数の繰り返しを含む多量体を提供し、さらに、前記配列のＮ末端アミノ酸はプロリンであり、前記配列のＣ末端アミノ酸はアスパラギン酸である。有利には、アミノ酸配列の繰り返しは、互いに直接連結され、それによってＤ−Ｐ結合を形成する。特定の実施形態では、複数は２〜２０である。
【００１３】
本発明はまた、本発明の第２の態様に記載されるように、多量体を作製するために適切なアミノ酸配列を作製する方法を提供する。該方法は、多量体を合成すること、および多量体を穏やかな酸（例えば、蟻酸）と接触させ、それによってＤ−Ｐ結合が破壊されることを含む。
【００１４】
第３の態様において、本発明は、それを必要とする動物における感染を治療する方法であって、本発明の第１の態様によるアミノ酸配列を含む製剤を動物に投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、感染は皮膚感染である。他の実施形態において、感染症は、乳房炎、呼吸器感染症、耳感染症、尿路感染症、または生殖器感染症である。
【００１５】
特定の実施形態において、動物は、コンパニオン動物（例えば、イヌ、ネコ、またはウマ）である。特定の実施形態では、動物はイヌである。特定の実施形態では、製剤は、局所適用のために製剤化される。いくつかの実施形態では、製剤は、ジェル、クリーム、乳剤、またはスプレーである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、ヒト、ビーグル、およびラット赤血球における配列番号１および１３の毒性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
定義
本発明をより良く理解するために、以下の限定されない定義を提供する：
「約」または「およそ」は、測定可能な数値変数と関連して使用される場合、変数の示された値、および示された値の実験誤差内（例えば、平均に対する９５％信頼区間内）または示された値の１０％内のいずれか大きい方である変数のすべての値を指し、「約３週間」が１７〜２５日であり、約２〜約４週間が１０〜４０日である週単位の時間区間に関して約が使用される場合を除く。
【００１８】
「乳剤」は、一方の液体の小液滴が他方の液体の連続相中に懸濁されている２つの非混和性液の構成物を意味する。
「非経口投与」とは、消化管を含まない経路を介して、またはその経路を介して、被検者の体内に、ワクチンなどの物質を導入することをいう。非経口投与には、皮下、筋肉内、経皮、皮内、腹腔内、眼内、静脈内投与がある。
【００１９】
参照配列の特定の位置に対応する「目的の配列中の」位置は、目的の配列のシステイン残留分と参照配列とが互いに一致するように、参照配列と目的の配列とを整列させ、次いで、参照配列中の所望の位置に一致する目的の配列中の位置を決定することによって決定される。
【００２０】
「薬学的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内にあり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずに被検者の組織と接して使用するのに適し、妥当な利益対危険率に見合い、それらの意図された使用に有効な物質を指す。
【００２１】
「治療有効量」は、感染の徴候または症状を予防または軽減するのに十分なアミノ酸または製剤を受容する被検者において反応を誘導するアミノ酸配列および／またはそれを含む製剤の量を指す。
【００２２】
「治療する」とは、限定されるものではないが、そのような用語が適用される感染症を含む、障害、状態、または疾患を予防すること、またはそのような障害、状態、または疾患の１つ以上の症状を予防または軽減することを指す。
【００２３】
「治療」は、上記で定義した「治療する」行為を指す。
ペプチド
概して、本発明は、１７〜２２アミノ酸長のアミノ酸配列であって、そのＮ末端において配列番号１２（Ｘ０Ｘ１Ｘ２ＣＸ３Ｘ４Ｘ５ＣＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＹＸ１０Ｘ１１ＣＸ１２Ｘ１３）を含み、
Ｘ０は、存在しない、またはプロリンであり、
Ｘ１は、リジン、アルギニン、グリシン、またはプロリンであり、
Ｘ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、またはアルギニンであり、
Ｘ３は、フェニルアラニン、バリン、またはトリプトファンであり、
Ｘ４は、アルギニン、チロシン、またはフェニルアラニンであり、
Ｘ５は、バリンまたはアラニンであり、
Ｘ６は、チロシン、またはアルギニンであり、
Ｘ７は、アルギニン、フェニルアラニン、またはグリシンであり、
Ｘ８は、アルギニン、フェニルアラニン、またはグリシンであり、
Ｘ９は、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、またはバリンであり、
Ｘ１０は、アルギニンまたはヒスチジンであり、
Ｘ１１は、アルギニンまたはリジンであり、
Ｘ１２は、アルギニン、リジン、またはアスパラギンであり、
Ｘ１３は、０〜４アミノ酸長ポリペプチドであり、
ただし、
Ｘ０がプロリンの場合、Ｘ１はプロリンではなく、前記アミノ酸配列が配列番号１３（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲ）または配列番号２８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＫＣＲ）を含む場合、Ｘ１３は、１〜４アミノ酸長であり、Ｘ１３が１アミノ酸長以上の場合、Ｘ１３中のＮ末端アミノ酸はアスパラギン、アルギニン、アスパラギン酸またはグルタミン酸であり、配列番号１の位置１に対応する位置のアミノ酸がグリシンである場合、前記グリシンはアシル−またはパルミチン−酸修飾されておらず、アミノ酸がＸ１１リジンである場合、Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（配列番号１４）はＲＲＲＦ（配列番号１５）ではなく、アミノ酸がＧＦＣＷＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮ（配列番号１６）である場合、Ｃ末端アスパラギンはアミド化される、アミノ酸配列、を提供する。
【００２４】
特定の実施形態では、Ｘ０は存在せず、Ｘ６はアルギニンまたはリジンであり、かつ／またはＸ７はアルギニンまたはリジンであり、Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（配列番号１４）はＹＲＧＩ（配列番号１７）、ＹＲＧＶ（配列番号１８）、ＹＲＧＦ（配列番号１９）、および／またはＸ１０はアルギニンであり、および／またはＸ３Ｘ４Ｘ５（配列番号２０）はＦＲＶ（配列番号２１）、ＷＹＶ（配列番号２２）であり、および／またはＸ１３は１個の長さまたはそれ以上（例えば、１、２、３、または４個の長さの）であり、Ｘ１３中のＮ末端配列はアスパラギン酸である。
【００２５】
第１の態様に従う特定のセットの実施形態において、アミノ酸配列は、１８〜２１アミノ酸長であり、そのＮ末端に、配列番号１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）または配列番号１とは１、２、３、または４アミノ酸だけ異なるペプチドを含み、ここで、配列番号１と異なるアミノ酸は、配列番号１の位置１に対応する位置のアルギニンまたはグリシン、配列番号１の位置２に対応する位置のフェニルアラニンまたはアルギニン、配列番号１の位置４に対応する位置のバリンまたはトリプトファン、配列番号１の位置５に対応する位置のチロシン、配列番号１の位置８に対応する位置のアルギニン、配列番号１の位置９に対応する位置のグリシン、配列番号１の位置１０に対応する位置のアルギニン、配列番号１の位置１１に対応する位置のアラニン、フェニルアラニン、またはバリン、配列番号１の１４位に対応する位置のヒスチジン、配列番号１の１５位に対応する位置のリジン、配列番号１の１７位に対応する位置のアスパラギン、から独立して選択される。
【００２６】
異なる実施形態において、アミノ酸配列は、１、２、または３アミノ酸だけ配列番号１と異なる。
特定の実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号１の位置１８に対応する位置にアスパラギン酸、および／または配列番号１の位置１７に対応する位置にアスパラギン、および／または配列番号１の位置１に対応する位置にグリシン、配列番号１の位置１１に対応する位置にアラニン、および／または配列番号１の位置１４に対応する位置にアルギニン、配列番号１の位置１５に対応する位置にアルギニン、またはその両方を含む。
実施形態のセットにおいて、アミノ酸配列は、それぞれのＮ末端において、配列番号１、配列番号２（ＲＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号３（ＧＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号４（ＫＦＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）；配列番号５（ＫＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号６（ＫＷＣＦＲＶＣＲＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号７（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＶＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＡＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＦＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＨＲＣＲＤ）、または配列番号１１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）を含むアミノ酸配列からなる群から選択される。
【００２７】
さらなるアミノ酸配列は、配列番号９７（ＫＲＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）；配列番号９８（ＫＷＣＶＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９９（ＫＷＣＦＦＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１００（ＫＷＣＦＷＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０１（ＫＷＣＦＲＶＹＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０２（ＫＷＣＦＲＡＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０３（ＫＷＣＦＲＶＣＫＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０４（ＫＷＣＦＲＶＣＹＦＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０５（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＮ）、配列番号１０６（ＫＷＣＷＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０７（ＫＷＣＦＲＶＣＷＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＧＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０９（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＲＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１０（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＹＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１１（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＲＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１２（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＫＤ）、配列番号１１３（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＡＤ）、配列番号１１４（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＲ）、配列番号１１５（ＧＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）、配列番号１１６（ＫＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）、配列番号１１７（ＧＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１８（ＧＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）からみられ得る。
【００２８】
したがって、アミノ酸配列は、配列番号９７（ＫＲＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）；配列番号９８（ＫＷＣＶＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号９９（ＫＷＣＦＦＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１００（ＫＷＣＦＷＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０２（ＫＷＣＦＲＡＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０４（ＫＷＣＦＲＶＣＹＦＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０５（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＮ）、配列番号１０６（ＫＷＣＷＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０７（ＫＷＣＦＲＶＣＷＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０８（ＫＷＣＦＲＶＣＹＧＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１０９（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＲＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１０（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＹＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１２（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＫＤ）、配列番号１１３（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＡＤ）、配列番号１１４（ＫＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＲ）、配列番号１１５（ＧＷＣＦＲＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）、配列番号１１６（ＫＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）、配列番号１１７（ＧＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＲＤ）、配列番号１１８（ＧＷＣＦＹＶＣＹＲＧＩＣＹＲＲＣＮＤ）を含むアミノ酸配列からなる群から選択される。
【００２９】
本発明によるペプチドは、限定されるものではないが、固相ペプチド合成を含む、当技術分野で周知の方法によって製造することができる。ペプチドはまた、真菌系、バクテリア系または真核系におけるバイオエンジニアリング技術（例えば、発酵）を使用して合成され得る。
【００３０】
特定の実施形態では、抗菌ペプチドのＮ末端アミノ酸がプロリンであり、Ｃ末端アミノ酸がアスパラギン酸である場合、抗菌ペプチドの製造方法は、抗菌ペプチドの多量体を合成することを伴い得る。異なる実施形態において、多量体中のモノマーの数は、１〜約２０、例えば、約５、約１０、または約１５であり得る。都合のいいことには、抗菌ペプチドのモノマーは、上流モノマーのＣ末端アスパラギン酸と下流モノマーのＮ末端プロリンとの間のペプチド結合（Ｄ−Ｐ結合）を介して連結される。このＤ−Ｐ結合は、マイルドな酸（例えば、ギ酸またはクエン酸）加水分解を介して都合よく切断され得る。従って、例えば、（配列番号２９）ｎまたは（配列番号３１）ｎ、ここで、ｎは１〜２０の整数である、のような説明によって包含される分子は、本発明の組成物および方法において使用され得る。
製剤
上記の実施形態によるペプチドは、標的部位（すなわち、感染した部位、または創傷、刺激などによって感染する危険性のある部位）への送達のために処方され得る。限定するものではないが、部位は、表皮、眼、耳、乳腺、生殖器、膀胱、鼻および口腔キャビティを含む。本発明のペプチドを含む組成物は、目的の部位に依存して処方される。
【００３１】
また、種々の細菌感染症を治療または改善するために、本明細書に記載の１つ以上の抗菌ペプチドを、薬学的に許容される担体、賦形剤、バインダー、希釈剤などと混合することによって調製することができる組成物も提供される。治療上有効な用量または量は、感染症の症状の改善をもたらすのに十分な、本明細書に記載の１つ以上の化合物の量を指す。本発明の医薬組成物は、とりわけ、従来の造粒、混合、再溶解、カプセル化、凍結乾燥、または乳化処理などの当技術分野で周知の方法によって製造することができる。組成物は、例えば、顆粒、紛体，タブレット、カプセルシロップ、坐剤、注射剤、乳剤、エリキシル、懸濁液または溶液の形成であり得る。本組成物は、種々の投与経路、例えば、経口投与、局所投与、経粘膜投与、直腸投与、または皮下投与、ならびにくも膜下、静脈内、乳房内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、眼内または心室内注射のために製剤化することができる。本化合物（１または複数）はまた、局部様式（例えば、徐放性製剤としての注入）で投与され得る。以下の剤形は、例として与えられ、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
【００３２】
経口、頬側、および舌下投与のために、紛体、懸濁液、顆粒、タブレット、丸剤、カプセル、ゲルカプセル、およびカプレットは、固形剤形として許容される。これらは、例えば、本発明の１つ以上の化合物、またはその薬学的に許容される塩類もしくは互変異性体を、少なくとも１つの添加剤もしくは賦形剤（例えば、デンプンまたは他の添加剤）と混合することによって調製され得る。好適な添加剤または賦形剤は、ショ糖、ラクトース、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、ソルビトール、デンプン、寒天、アルギン酸塩、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成ポリマーまたはグリセリド、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドンである。必要に応じて、経口投薬形態は、投与を補助するための他の成分（例えば、不活性希釈剤、または潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）、または保存剤（例えば、パラベン酸もしくはソルビン酸）、または老化防止剤（例えば、アスコルビン酸、トコフェロールもしくはシステイン）、崩壊剤、バインダー，増粘剤、緩衝剤、甘味料、香味剤または香料）を含み得る。さらに、染料または顔料を識別のために添加することができる。タブレットおよび丸剤は、当技術分野で公知の好適な塗装材料でさらに処理することができる。
【００３３】
経口投与のための液状剤形は、薬学的に許容される乳剤、シロップ、エリキシル、懸濁液、スラリー液および溶液の形態であり得、これらは、不活性希釈剤（例えば、水）を含み得る。医薬製剤は、限定するものではないが、油、水、アルコール、およびこれらの組み合わせなどの滅菌液体を使用して、液体懸濁液または溶液として調製することができる。薬学的に好適な界面活性剤、懸濁剤、乳化剤を、経口または非経口投与のために添加することができる。
【００３４】
上記のように、懸濁液は油を含むことができる。このような油には、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油および油の混合物が含まれる。懸濁液調製物はまた、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリドおよびアセチル化脂肪酸グリセリドなどの脂肪酸のエステルを含有し得る。懸濁製剤は、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロールおよびプロピレングリコールなどのアルコールを含むことができるが、これらに限定されない。エーテル、例えば、ポリ（エチレングリコール）、石油炭化水素、例えば、鉱物油およびワセリン、ならびに水もまた、懸濁製剤において使用され得るが、これらに限定されない。
【００３５】
特定の投与経路について、医薬製剤は、適当な溶媒および場合により他の化合物（例えば、安定剤、抗菌剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティ調整剤、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）を含む噴霧剤またはエアロゾルであり得る。エアロゾル製剤のための推進剤は、圧空、窒素、炭酸ガス、または炭化水素ベースの低沸点溶剤を含むことができる。本発明の化合物は、噴霧器などからエアロゾルスプレーの形成で都合よく送達される。
【００３６】
注射用剤形には、一般に、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて調製することができる水懸濁液または油懸濁液が含まれる。注射可能な形態は、溶液相または懸濁液の形態であり得、これは、溶媒または希釈剤を用いて調製される。許容される溶媒またはビヒクルには、滅菌水、リンゲル液、または等張食塩水が含まれる。あるいは、無菌油を溶媒または懸濁剤として使用することができる。一般に、油または脂肪酸は、天然または合成油、脂肪酸、モノ−、ジ−またはトリ−グリセリドを含む不揮発性である。
【００３７】
注射のために、医薬製剤は、上記のような適切な液で再構成するのに適した紛体であり得る。これらの例には、凍結乾燥、回転乾燥または噴霧乾燥紛体、非晶質紛体、顆粒、析出物、または粒子が含まれる。注射のために、製剤は、任意に、安定剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティ調整剤、およびこれらの組み合わせを含有することができる。化合物は、注射（例えば、ボーラス注射または連続注入）による非経口投与のために処方され得る。射出のための単位投薬形態は、アンプルまたは複数用量容器であり得る。
【００３８】
直腸投与のために、医薬製剤は、坐剤、軟膏、注腸、タブレット、または腸、Ｓ状屈曲および／または直腸における化合物の放出のためのクリームの形態であり得る。直腸坐剤は、本化合物の１つ以上の化合物、または薬学的に許容される塩類もしくは互変異性体を、許容されるビヒクル（例えば、カカオ脂またはポリエチレングリコール）と混合することによって調製され、これは、通常の貯蔵温度で固相中に存在し、そして体内（例えば、直腸中）で薬剤を放出するのに適した温度で液相中に存在する。油はまた、ソフトゼラチンタイプの製剤および坐剤の調製において使用され得る。水、生理食塩水、デキストロース水溶液および関連する糖溶液、ならびにグリセロールは、懸濁剤（例えば、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロースまたはカルボキシメチルセルロース、ならびに緩衝剤および保存剤）をまた含み得る懸濁製剤の調製において使用され得る。
【００３９】
上記の代表的な剤形の他に、薬学的に受容可能な賦形剤および担体は、当業者に一般に公知であり、したがって、本発明に含まれる。このような賦形剤および担体は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  ＰｕｂＣｏ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）に記載されている。
【００４０】
本発明の製剤は、短時間作用性、速放性、長時間作用性、および持続放出性であるように設計することができる。したがって、医薬製剤は、制御放出または徐放のために製剤化することもできる。
【００４１】
本発明の組成物はまた、例えば、ミセルもしくはリポソーム、またはいくつかの他のカプセル化形態を含み得るか、または長期の貯蔵および／または送達効果を提供するために長期放出形態で投与され得る。従って、医薬製剤は、ペレットまたはシリンダーに圧縮され得、そしてデポー注射として、またはステントのようなインプラントとして、筋肉内または皮下に移植され得る。このようなインプラントは、シリコンおよび生分解性ポリマーなどの既知材料を使用することができる。
【００４２】
組成物はまた、オクラチニブおよびその塩類（例えば、ＡＰＯＱＵＥＬ（登録商標）および抗ＩＬ−３１抗体（例えば、ＣＹＴＯＰＯＩＮＴ（商標））を含むが、これらに限定されない、防かゆみ薬を含み得る。
【００４３】
組成物はまた、ステロイドまたは抗真菌薬を含むことができる。適当なステロイドには、限定されるものではないが、ベタメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、ヒドロコルチゾンアセポネート、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、メチルプレドニゾロンアセテートなどが含まれる。適切な抗真菌薬には、限定されないが、クロトリマゾール、エコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾールが含まれる。
【００４４】
組成物は、投与方法に応じて、例えば、約０．１重量％〜約９０重量％以上の抗菌ペプチドを含有することができる。組成物が用量単位を含む場合、各ユニットは、例えば、抗菌ペプチドの用量当たり約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇを含有することができる。例えば、組成物の１用量は、約１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇを含み得る。組成物は、用量当たり約１〜約５ｍｇの抗菌ペプチド、または用量当たり約１．５〜約５ｍｇの抗菌ペプチド、または用量当たり約２．５ｍｇ〜約７．５ｍｇ、または用量当たり約１．５ｍｇ〜約２．５ｍｇを、創傷の重症度および動物の大きさに依存して含有し得る。
方法
さらに別の態様において、本明細書中に記載される１つ以上の化合物の有効量を被検者に投与する工程を包含する、被検者における細菌感染を処置または予防する方法もまた提供する。治療可能な適当な被検者としては、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、家禽、霊長類（例えば、アカゲザルおよびカニクイザル（カニクイザルまたはロングテイルとしても知られる）サル、マーモセット、タマリンド、チンパンジー、マカク）、ウサギ、およびげっ歯類（ラット、マウス、モルモットなどとしても知られる）が挙げられる。特定の実施形態では、被検者はイヌであり、本発明の抗菌ペプチドは、局所的に、鼻腔内に、眼内に、または耳内に送達される。抗菌ペプチドは、滴剤、スプレー、クリーム、ゲル、軟膏などの形態で送達されてもよい。
【００４５】
記載の化合物で治療できる感染症には、外耳感染症、急性中耳炎などの中耳の感染症、頭蓋副鼻腔の感染症、眼感染症、歯、歯肉および粘膜の感染などの口腔感染症、上気道感染症、下気道感染症、泌尿生殖器感染症、消化器感染症、婦人科感染症、敗血症、骨および関節感染症、表皮および表皮構造感染症、熱傷、手術の抗菌予防、ならびに癌化学療法を受けている患者、または臓器移植患者などの免疫抑制被検者における抗菌予防が含まれる。これらの感染は、本明細書中に記載されるように、種々の投与経路を介して、病院またはコミュニティ設定において処置され得る。
【００４６】
本明細書中に記載される化合物または組成物はまた、予防的に使用され得る。従って、本発明の化合物または組成物の１つ以上は、微生物感染を発症する危険性があると考えられる被検者に投与され得る。微生物感染症を発症する危険性のある被検者には、病原性細菌種のような特定の微生物に曝露された個人、免疫系が低下している個人、または易感染性の自然防御（例えば、熱傷または切傷により表皮が損なわれた場合）による感染症に対して特に脆弱な被検者が含まれる。
【００４７】
本明細書中に記載される抗菌ペプチドは、病原性細菌種による感染を含む、種々の細菌生物によって引き起こされる感染性障害の処置または予防のために使用され得る。バクテリア感染の非限定的な例としては、グラム陽性菌とグラム陰性菌のブドウ球菌などの好気性菌と嫌気性菌、たとえば、例えばブドウ球菌、例えばＳ．ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌）；腸球菌、例えばＥ．ｆａｅｃａｌｉｓ；連鎖球菌、例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；エシェリヒア種、例えば、毒素原性、腸内病原性、腸内侵入性、腸出血性および腸内凝集性大腸菌株を含む大腸菌；プロピオニバクテリウム株、例えば、Ｐ．ａｃｎｅｓ、；ヘモフィルス、例えば、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａ；モラクセラ、例えば、Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓを含む。他の例としては、マイコバクテリア、例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉａｎ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｇｅｎａｖｅｎｓｅ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ｘｅｎｏｐｉ、Ｍ．ｓｉｍｉａｅ、Ｍ．ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ、Ｍ．ｍａｌｍｏｅｎｓｅ、Ｍ．ｃｅｌａｔｕｍ、Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍ．ｃｈｅｌｏｎａｅ、Ｍ．ｓｚｕｌｇａｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍ．ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｍ．ｆｏｒｔｕｎｉおよびＭ．ｍａｒｉｎｕｍ；コリネバクテリア、例えば、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ；シュードモナス種、例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；ボレリア種、例えば、Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ；リステリア種、例えば、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ；バチルス種、例えば、Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ；ボルデテラ種、例えば、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ；クレブシエラ種、クロストリジウム種、例えば、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉ；クラミジア種、例えば、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ；リケッチア種、例えば、Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉおよびＲ．ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ；サルモネラ種、例えば、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ；エルシニア種、例えば、Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａおよびＹ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；クレブシエラ種、例えば、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；マイコプラズマ、例えば、Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ；アクチノバチルス、例えば、Ｈ．ｐａｒａｓｕｉｓ；およびＴｒｕｅｐｅｒｅｌｌａ  ｐｙｏｇｅｎｅｓを含む。
【００４８】
ある態様では、バクテリアは、ブドウ球菌、例えば、Ｓ．ｐｓｅｕｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｃｈｌｅｉｆｅｒｉ、Ｓ．ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｓｉｍｕｌａｎｓ、Ｓ．ｘｙｌｏｓｕｓから選択することもできる。また、バクテリアは、連鎖球菌、例えば、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｓｕｉｓら選択することもできる。さらに、パスツレラ科の細菌は、本明細書中に記載される組成物での処置に適切である。適切なパスツレラ科バクテリアには、Ｍ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｈ．ｓｏｍｎｉ、エシェリヒア種、例えば、大腸菌、クレブシエラ種が含まれる。
【００４９】
特定の実施形態において、バクテリアは、Ｓ．ｐｓｅｕｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓおよび／またはＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである。
本明細書中に記載される組成物は、異なる頻度の領域で投与され得る。例えば、適切なレジメンは、毎日４時間〜毎週１時間、例えば、毎日３時間、毎日２時間、毎日１時間、２日毎、３日毎、週２回、週５回などを含む。同様に、本明細書に記載される発明は、異なる時間のレジメン、例えば、単回投与、２日間、３日間、４日間、１週間、２週間、１ヶ月間、６週間などで投与され得る。用量当たりの抗菌ペプチドの持続期間、頻度および量、ならびに創傷の種および状態および／または感染の状態は、本明細書中に特許請求される抗菌組成物の投与のための適切な用量−時間−頻度レジメンを決定する際に、一緒に考慮され得る。
【００５０】
以下の実施例は、例示的な実施形態として提示されるが、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本発明の多くの変更、変形、修正、および他の使用および用途は、当業者には明らかであろう。
【実施例】
【００５１】
実施例１．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗菌活性と安全性
表１に列挙される配列番号に従うペプチドは、固相合成を使用して、市販の製造業者（ＣＳ  Ｂｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって調製された。抗菌活性は、黄色ブドウ球菌および大腸菌に対する最小阻止濃度（ＭＩＣ）を測定することにより評価した。簡単に述べると、ＣＬＳＩ法（ＶＥＴ０１−Ｓ２）を用いてマイクロブロスＭＩＣを行った。黄色ブドウ球菌および大腸菌ＡＴＣＣ株については、５％溶解ウマ血寒天を含むＴＳＡを、３７℃の周囲大気で一晩培養するために使用した。各ペプチドの０．５ｍＭストックを、細胞培養水、０．０１％酢酸で作製し、５０μＭ〜０．０５μＭのアッセイ用量滴定濃度で９６ウェルプレート中で連続希釈し、スポットした（１０μＬ）。各株の０．５マクファーランドスタンダード（ＭｃＦａｒｌａｎｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ）を、ミューラー・ヒントンブロス（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ）（ＭＨＢ）中で１：２５０に希釈した。次いで、９０μＬの培養懸濁液を、９６ウェルプレート中の薬剤に添加し、１８〜２０時間一晩インキュベートした。ＭＩＣは、対応する濃度で目に見える成長がない最初のウェルで視覚的に決定した。
【００５２】
これらの実験の結果を表１に示す。
【００５３】
【表１−１】
2021505624.tif 000003
【００５４】
【表１−２】
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【００５５】
配列番号１をさらなる研究のために選択した。真核血球に対する配列番号１の毒性をタキプレシン（配列番号１３）の毒性と比較した。標準の、十分な参照赤色血球溶血検定を、多数の種に対して用いて、ペプチドの溶解能を試験した。赤血球（ＲＢＣ）を調製し、数回の遠心分離および洗浄工程によって単離して、血漿画分を除去した。試験ペプチドおよび制御ペプチドメリチンの用量滴定（５０μＭ〜０．０５μＭ）を、３８４ウェルプレート中の５０ｍＭストックからスポットした。調製したＲＢＣをペプチドと共に３７℃で１時間インキュベートした。溶血パーセントは、４０５ｎｍでの光学密度によって測定し、１００パーセント効果（ＨＰＥ）として１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００を、ゼロパーセント効果（ＺＰＥ）としてリン酸緩衝液のみを利用した。
【００５６】
本発明者らは、驚くべきことに、配列番号１が、改善された抗菌活性を有するだけでなく、赤血球に対する毒性も減少させたことを発見した。ヒト、ビーグル、およびラット赤血球を用いた実験の結果を図１に示す。簡潔には、配列番号１は、配列番号１３よりもヒト、ビーグルまたはラット赤血球に対して２〜４倍毒性が低かった。ネズミまたはウシの赤血球では、その差は無視できる程度であった。
【００５７】
配列番号１のさらなる誘導体は、上記の固相合成によって合成された。抗菌活性は、前述のように、黄色ブドウ球菌および大腸菌に対するＭＩＣを測定することにより評価した。これらの実験の結果を表２に示す。
【００５８】
【表２】
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【００５９】
ＭＳＳＰ（メチシリン感受性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｓｅｕｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ））およびＭＲＳＰ（メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス）の異なる菌株に対する表２に挙げたペプチドの抗菌活性をさらに評価した。結果をそれぞれ表３および表４に示す。
【００６０】
【表３】
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【００６１】
【表４】
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【００６２】
さらなるペプチドを上記のように合成した。これらのペプチドの抗菌特性を決定し、以下に要約する。
【００６３】
【表５】
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【００６４】
【表６】
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【００６５】
表２に列挙したペプチドの安全性は、細胞生存率を測定することによって決定した。イヌ由来上皮ケラチノサイト（ＣＰＥＫ）細胞を増殖させて、ペプチドの存在下での細胞生存率を決定した。細胞を、ＣｎＴ−０９−５（サプリメントを含む）中の凍結ストックから、Ｔ７５フラスコ中で予め温めた培地で増殖させ、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。細胞をリン酸緩衝液で洗浄し、予め温めたＣｎＴ−０５−９媒体を再び満たし、細胞が６．６×１０４細胞／ｍＬの密度に達するまで数日間繰り返した。次いで、細胞を３８４ウェルプレートに移し、沈降させ、ペプチドおよびメリチン対照ペプチド（５０μＭ〜０．０５μＭ）を投与し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００（ＨＰＥ）およびリン酸緩衝液のみ（ＺＰＥ）をプレートに添加して、発光読取りのために１０μＬのＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）アッセイ試薬を用いてアッセイを終了した後、効果百分率を計算した。その試験結果を表７に示す。
【００６６】
【表７】
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【００６７】
表６に列挙されるペプチドの安全性は、上記のように細胞生存率を測定することによって決定した。その試験結果を表８に示す。
【００６８】
【表８】
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【００６９】
これらのデータは、本発明の抗菌ペプチドが、試験された細菌株に対して有効であるだけでなく、特に非全身性投与、例えば局所投与に対しても安全であることを実証する。
本明細書で引用される全ての刊行物、特許文献および非特許文献は、本発明が関係する当業者の技術レベルを示す。全てのこれらの刊行物は、あたかも各個々の刊行物が、参照により組み込まれるものとして具体的かつ個別に示されたかのように、同じ程度まで、参照により本明細書に完全に組み込まれる。
【００７０】
本発明を、特定の実施形態を参照して記述したが、当然のことながら、これらの実施形態は本発明の原理および応用を単に説明しただけのものである。したがって、例示的な実施形態に多数の修正を加えることができ、以下の特許請求の範囲によって定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、他の構成を考案することができることを理解されたい。
【図１】
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【国際調査報告】
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