(57)【要約】  感冒またはインフルエンザと関連するウイルス感染に応答して糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法が本明細書に記載され、方法は、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を、それを必要とする対象に投与することを含む。サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するための方法も記載され、方法は、サイトカインまたは受容体を、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることを含む。
2021530553.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス感染により惹起される糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法であって、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−４Ｒα、抗ＩＬ−６受容体、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−６受容体、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、デュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））、アフェリモマブ、ベルサンリマブ、ブラザキズマブ、フォントリズマブ、ゴリムマブ、ネレリモマブ、オロキズマブ、オゾラリズマブ、パスコリズマブ、プラクルマブ、サペリズマブ、サリルマブ、ボバリリズマブ、それらの組み合わせ、それらの誘導体、またはそれらのアナログのうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記糸球体疾患が、ネフローゼ症候群を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記糸球体疾患が、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、またはループス腎炎を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記糸球体疾患が、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、またはループス腎炎により引き起こされる慢性腎疾患の急性再発または悪化を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、ウイルス感染前に糸球体疾患の完全または部分寛解にある、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ウイルス感染が、感冒またはインフルエンザを誘発するウイルスを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ウイルス感染が、ライノウイルス、ヒトコロナウイルス、アデノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス以外のエンテロウイルス、パラインフルエンザウイルス、メタニューモウイルス、インフルエンザ、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
投与が、前記ウイルス感染の発症から約１時間〜約７日以内に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
投与が、前記ウイルス感染の発症後約７日以内に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記投与が、非経口投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記投与が、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記投与が、静脈内投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するための方法であって、前記サイトカインまたは受容体を、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることを含む、前記方法。
【請求項１８】
前記抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記接触が、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のうちの１つ以上の非経口投与を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記非経口投与が、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内投与を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記非経口投与が、静脈内投与を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が、糸球体疾患の急性再発の発症または悪化を経験している、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が、糸球体疾患の悪化前に、糸球体疾患の完全または部分的な寛解状態にある、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象が、ヒトである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１受容体のうちの１つ以上を１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることにより、腎臓疾患におけるＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１の細胞内効果を遮断するための方法。
【請求項２６】
前記遮断薬が、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、またはＴＮＦαのデコイ受容体を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記遮断薬が、１つ以上の小分子を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−４Ｒ、または抗ＩＣＡＭ−１を含む１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の混合物、及び任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、１ｍｇ〜１０，０００ｍｇの各抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物の用量が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記組成物の用量が、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物が、液体または凍結乾燥濃縮物である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３３】
サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するためのキットであって、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＣＡＭ−１、遮断薬、またはそれらの組み合わせを含む１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の混合物を含む１つ以上の容器、及び任意に、送達デバイス、希釈剤、使用説明書、またはラベルを含む、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本出願は、２０１８年７月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／７０２，９７５号の優先権を主張し、この内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
政府の利益
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）／国立糖尿病・消化器・腎臓病研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ａｎｄ  Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）の助成金番号Ｒ０１  ＤＫ１０９７１３；Ｒ０１  ＤＫ１１１１０２；Ｒ０１  ＤＫ１０１６３７の下で米国政府の支援を用いて行われた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
感冒またはインフルエンザと関連するウイルス感染に応答して糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法が本明細書に記載され、方法は、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を、それを必要とする対象に投与することを含む。サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するための方法も記載され、方法は、サイトカインまたは受容体を、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることを含む。
【背景技術】
【０００４】
微小変化型疾患（ＭＣＤ）ならびに巣状及び分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）などの原発性糸球体疾患患者は多くの場合、ネフローゼ症候群、尿中の大量のタンパク質の集まり（タンパク尿）、低アルブミン血症、高脂血症（高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症）、脂質尿症、ならびに浮腫を呈する。
【０００５】
ネフローゼ症候群は、足細胞などの腎臓細胞の病状を伴う。足細胞または内臓上皮細胞は、腎臓の糸球体毛細血管ループの外層にある細胞である。尿を形成する際の最初のステップとして、糸球体は、血液からタンパク質などの大きな分子を濾過し、水、塩、及び糖などの小分子の通過を可能にする。足細胞の長い突起、または「足突起」は、毛細血管の周りを包み込み、糸球体基底膜上に存在する。足突起は、スリット膜と呼ばれる多孔質構造体により連結される。糸球体毛細血管ループの最内層は、小分子の通過を可能にする小孔のある内皮細胞で作られる。ネフローゼ症候群の影響を受けた腎臓は、血液タンパク質の尿への漏出を引き起こして、タンパク尿になる糸球体毛細血管ループの異常を有する。
【０００６】
タンパク尿は、尿中の過剰な血清タンパク質の存在として定義される。特定のタイプのタンパク尿であるアルブミン尿は、アルブミンが尿中に存在する病的状態である。タンパク質が尿に入る時、血漿濃度が減少し、水が身体の他の領域に移動して浮腫を引き起こす。浮腫は、任意の身体領域に生じ得、多くの場合重力に応答し、それは一般に、下肢で、腹部（腹水）で、目の周りで観察される。浮腫に罹患する対象は多くの場合、体重が増加し、疲労を経験し、少ない頻度で排尿し得る。
【０００７】
糸球体疾患患者は多くの場合、病状が休止状態であり且つ症状が軽減または最小限に抑えられる寛解期を有する。感冒またはインフルエンザと関連するウイルス感染などのストレッサーに直面する場合、対象は多くの場合、タンパク尿、低アルブミン血症、高脂血症、脂質尿症、及び浮腫の増加を含む糸球体疾患の急性再発または悪化を有する。サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、またはＴＮＦαは、ウイルス感染の期間に増加する。糸球体疾患の急性再発または悪化は、ウイルス感染に応答して産生されるサイトカインストームにより引き起こされる。現在、ウイルス感染と関連する糸球体疾患の急性再発または悪化に有効な既知の処置はない。
【０００８】
感冒またはインフルエンザと関連するウイルス感染により惹起される急性糸球体疾患の悪化の再発または悪化を抑制する方法が必要である。加えて、ウイルス感染後に、全身の血液循環からＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαを枯渇させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害する方法が必要とされる。
【発明の概要】
【０００９】
本明細書に記載の一実施形態は、ウイルス感染により惹起される糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法であり、方法は、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−４Ｒα、抗ＩＬ−６受容体、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。別の態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−６受容体、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。別の態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、デュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））、アフェリモマブ、ベルサンリマブ（ｂｅｒｓａｎｌｉｍａｂ）、ブラザキズマブ（ｂｌａｚａｋｉｚｕｍａｂ）、フォントリズマブ、ゴリムマブ、ネレリモマブ、オロキズマブ、オゾラリズマブ、パスコリズマブ、プラクルマブ、サペリズマブ（ｓａｐｅｌｉｚｕｍａｂ）、サリルマブ、ボバリリズマブ、それらの組み合わせ、それらの誘導体、またはそれらのアナログのうちの１つ以上を含む。別の態様では、糸球体疾患は、ネフローゼ症候群を含む。別の態様では、糸球体疾患は、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、またはループス腎炎を含む。別の態様では、糸球体疾患は、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、またはループス腎炎により引き起こされる慢性腎疾患の急性再発または悪化を含む。別の態様では、対象は、ウイルス感染の前に糸球体疾患の完全または部分的な寛解状態にある。別の態様では、ウイルス感染は、感冒またはインフルエンザを誘発するウイルスを含む。別の態様では、ウイルス感染は、ライノウイルス、ヒトコロナウイルス、アデノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス以外のエンテロウイルス、パラインフルエンザウイルス、メタニューモウイルス、インフルエンザ、またはそれらの組み合わせを含む。別の態様では、投与は、ウイルス感染の発症から約１時間〜約７日以内に行われる。別の態様では、投与は、ウイルス感染の発症後約７日以内に行われる。別の態様では、投与は、非経口投与を含む。別の態様では、投与は、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内投与を含む。別の態様では、投与は、静脈内投与を含む。別の態様では、対象は、ヒトである。
【００１０】
本明細書に記載の別の実施形態は、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するための方法であり、方法は、サイトカインまたは受容体を、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることを含む。一態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせを含む。別の態様では、接触は、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のうちの１つ以上の非経口投与を含む。別の態様では、非経口投与は、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内投与を含む。別の態様では、非経口投与は、静脈内投与を含む。別の態様では、対象は、糸球体疾患の急性再発の発症または悪化を経験している。別の態様では、対象は、糸球体疾患の悪化前に、糸球体疾患の完全または部分的な寛解状態にある。別の態様では、対象は、ヒトである。
【００１１】
本明細書に記載の別の実施形態は、１つ以上のＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１受容体を１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることにより、腎臓疾患におけるＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１の細胞内効果を遮断するための方法である。一態様では、遮断薬は、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１のデコイ受容体を含む。別の態様では、遮断薬は、１つ以上の小分子を含む。
【００１２】
本明細書に記載の別の実施形態は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−４Ｒ、または抗ＩＣＡＭ−１を含む、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の混合物、及び任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物である。一態様では、組成物は、１ｍｇ〜１０，０００ｍｇの各抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含む。別の態様では、組成物の用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、組成物の用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、組成物は、液体または凍結乾燥濃縮物である。
【００１３】
本明細書に記載の別の実施形態は、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するためのキットであり、これは、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−４Ｒ、もしくは抗ＩＣＡＭ−１、遮断薬、またはそれらの組み合わせを含む１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の混合物を含む１つ以上の容器、及び任意に、送達デバイス、希釈剤、使用説明書、またはラベルを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】Ｂａｌｂ／ｃ及びＢａｌｂ／ｃＪマウスにおける循環サイトカイン及び受容体（用量「Ｘ」）または対照生理食塩水のパネルの静脈内注射後のアルブミン尿レベルを示す（ｎ＝１群当たり５匹のマウス、（＊ｐ＜０．０５））。
【図１Ｂ】用量「Ｘ」の個々の構成成分（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＣＡＭ−１）をＢａｌｂ／ｃＪマウスに注射した後のアルブミン尿レベルを示す（ｎ＝１群当たり４匹のマウス）。
【図２Ａ】減少するパーセンテージ（１００、５０、１０、及び１）の用量「Ｘ」をＢａｌｂ／ｃＪマウスに注射した後のアルブミン尿レベルを示す（ｎ＝１群当たり３匹のマウス、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図２Ｂ】Ｂａｌｂ／ｃ及びＢａｌｂ／ｃＪマウスに注射されるサイトカインカクテル用量Ｘ／２から個々の構成成分（例えば、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６、ＴＮＦα）を除去した後のアルブミン尿レベルを示す（ｎ＝１群当たり５匹のマウス、＊ｐ＜０．０５）。
【図３Ａ】サイトカインカクテル用量（Ｘ／２）の注射の１時間後に、少用量の抗ＴＮＦα抗体（２５μｇ）または対照ＩｇＧをＢａｌｂ／ｃＪマウスに注射すると、抗ＴＮＦα群中の１日目のアルブミン尿より大幅に低くなることを示す（ｎ＝１群当たり７匹のマウス、＊ｐ＜０．０５）。
【図３Ｂ】足細胞特異的Ｚｈｘ２欠損及びｆｌｏｘｅｄ対照マウスにサイトカインカクテル用量Ｘ／１５を注入した後のアルブミン尿レベルを示す（両群の０日目の＊ｐ＜０．０５、Ｚｈｘ２  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ／Ｃｒｅの０日目〜１日目の＃ｐ＜０．０５）。
【図４Ａ】Ｅｎｐｅｐ、Ｚｈｘ２、またはその両方を欠損したマウスにサイトカインカクテル用量Ｘ／５を注射した後のアルブミン尿レベルを示す（ｎ＝１群当たり７匹のマウス）。図４Ａの右側のサブパネルは、Ｘ／５の用量と比較したＸ／２の用量で５倍を超える平均アルブミン尿を示す（ｎ＝１群当たり６匹のマウス）（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【図４Ｂ】Ｅｎｐｅｐ、Ｚｈｘ２、またはその両方を欠損したマウスにサイトカインカクテル用量Ｘ／５を注射した後のアルブミン尿レベルの倍数変化を示す（ｎ＝１群当たり７匹のマウス、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【図５Ａ】図５は、Ｂａｌｂ／ｃ及びＢａｌｂ／ｃＪマウスにサイトカインカクテルを注射してから２４時間後の末梢及び核区画における足細胞Ｚｈｘタンパク質（Ｚｈｘ１及びＺｈｘ３）の分布を示す。図５Ａは、Ｚｈｘ１の分布を示す。図５Ａの白矢印は、サイトカインカクテルで処置されたＢａｌｂ／ｃＪマウスの足細胞核における核Ｚｈｘ１の増加を示す。スケールバー：「生理食塩水」及び左の「サイトカイン」の縦列については１２．５μｍ、右のサイトカインの縦列については７．９μｍ。
【図５Ｂ】図５は、Ｂａｌｂ／ｃ及びＢａｌｂ／ｃＪマウスにサイトカインカクテルを注射してから２４時間後の末梢及び核区画における足細胞Ｚｈｘタンパク質（Ｚｈｘ１及びＺｈｘ３）の分布を示す。図５Ｂは、Ｚｈｘ３の分布を示す。スケールバー：「生理食塩水」及び「サイトカイン」の縦列については１２．５μｍ。
【図６】ラットサイトカインカクテル最小腎炎惹起性用量Ｘ／５０の注射の最大７日後のＢｕｆｆａｌｏ／Ｍｎａラットにおけるベースラインからのタンパク尿のピーク変化を示す（ｎ＝７匹のラット、＊ｐ＜０．０５）。
【図７】感冒後のサイトカインストームの概略図、及びサイトカインカクテルの理論的根拠を示す。ライノウイルスは、感冒の最も一般的な原因である。ライノウイルスＡ型及びＢ型は、鼻上皮の受容体である細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）に結合して、細胞に入る。ＴＮＦα、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０は、自然免疫の一部として分泌されるが、ＩＬ−２及びＩＦＮ−γは、適応免疫の一部として分泌される。ＩＬ−４Ｒは、あらゆる形態の鼻炎で増加する。ＩＣＡＭ−１は、負傷または感染した鼻上皮から放出される。集合的に、これらのサイトカイン及び可溶性受容体は、足細胞表面との相互作用が足細胞疾患の再発または悪化を誘発する複合体を形成する。本明細書に示されるサイトカインカクテルの任意のメンバーに対する抗体を使用する治療的介入は、再発または疾患の悪化の強度を防止または低減する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書に記載の一実施形態は、糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法であり、方法は、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様では、悪化または再発は、ウイルス感染により惹起される。別の態様では、ウイルス感染は、感冒またはインフルエンザと関連する。誤解を避けるために、本方法は、進行中の糸球体疾患を処置もしくは治癒すること、または進行中の糸球体疾患の進行を抑制することを意図しない。本方法は、インフルエンザの感冒と関連するウイルス感染に起因するサイトカインストームにより悪化する糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制する。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「サイトカイン」（複数可）という用語は、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、成長因子、または他の細胞に影響を及ぼすことができる他の分子を指す。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「受容体」という用語は、サイトカインまたは他の分子の受容体、例えば、インターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒαを含む）、細胞内接着分子（ＩＣＡＭ）、または他の細胞表面受容体を指す。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「可溶性受容体」という用語は、サイトカインと相互作用することができる受容体、通常は、組み換え体を指す。例としては、可溶性腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ受容体）またはＩＬ−４Ｒが挙げられる。さらに、可溶性受容体という用語はまた、抗サイトカイン抗体の代替物を指す。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「抗サイトカイン抗体」（複数可）という用語は、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、成長因子、または他の細胞に影響を及ぼすことができる他の分子などの１つ以上のサイトカインを認識する抗体を指す。抗体は、天然、ポリクローナル、モノクローナル、単鎖、組み換え、またはヒト化であってよい。ヒト化抗体は特に有用である。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「抗受容体抗体」（複数可）という用語は、インターロイキン４受容体（抗ＩＬ−４Ｒ）、細胞内接着分子（ＩＣＡＭ−１）、または他のサイトカインもしくは細胞表面受容体などの１つ以上のサイトカイン受容体分子を認識する抗体を指す。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「遮断薬」という用語は、サイトカイン、サイトカイン受容体、可溶性受容体、細胞表面受容体などと相互作用し、その天然の機能を抑制することができる分子を指す。通常、阻害は、分子が受容体または天然リガンドに結合する能力を遮断することを含む。遮断薬は、タンパク質または小分子などの生体分子であってよい。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「急性再発」または「再発」という用語は、健康の悪化、及び改善または寛解の期間後の病状または症状の激化を指す。「急性再発」は具体的には、多くの場合ストレッサーに応答して、病状または症状の突然の悪化または激化を指す。一態様では、ストレッサーは、ウイルス感染である。追加のストレッサーには、他の感染症、炎症、糖尿病、自己免疫障害、または外傷を含む。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「悪化」、具体的には、「糸球体疾患の悪化」という用語は、病状または症状のさらなる激化を指す。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「寛解」という用語は、疾患または疾患症状の重症度または強度の低下を指す。寛解は、完全または部分的（一部の症状は減少するが持続する）であり得る。一態様では、寛解は、糸球体疾患の症状がないことを指す。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「処置」、「処置する」、及び「処置すること」という用語は、症状、態様、または特徴を除去または低減するために、そのような疾患または状態の症状、態様、または特徴の発症後に開始される一連の行為（例えば、化合物または医薬組成物の投与）を指す。そのような処置は、有用であることが明白である必要はない。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「それを必要とする」または「処置を必要とする」という用語は、患者が処置を必要とする、または処置から恩恵を受けることになるという、介護者によりなされる判断を指す。この判断は、介護者の専門知識の範囲内にあるが、本開示の方法または化合物により処置可能な疾患または状態の結果として、患者が病気であるか、または病気になるという知見を含む様々な要因に基づいて行われる。
【００２７】
本明細書で使用される「対象」または「患者」という用語は、マウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、イノシシ、ウシ、ヒツジ、ウマ、非ヒト霊長類、またはヒトなどの哺乳動物を含む任意の動物を指す。一態様では、対象は、ヒトである。別の態様では、対象は、ヒト小児または成人である。別の態様では、対象は、それを必要とするか、または処置を必要とする。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「治療的有効量」という用語は、疾患または状態の任意の症状、態様、または特徴に、任意の検出可能な好ましい効果を有することが可能な、単独のまたは医薬組成物の一部としての化合物の量を指す。そのような効果は、有益であることが明白である必要はない。抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を指す場合、「治療的有効量」という用語は、急性糸球体疾患の再発の発症を止めるのに十分なそのような種の量を指す。各抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の治療的有効量は、変動するであろう。例えば、３つの特定の抗サイトカイン抗体を含む組成物は、潜在的に、３つの独立した治療的有効量（各抗サイトカイン抗体に１つ）を有するであろう。
【００２９】
本明細書で使用される「約」及び「およそ」という用語は、測定の性質または精度を考えた上で、測定された量の許容可能な程度の誤差または変動を指す。代表的な例示的な誤差または変動の程度は、所与の値または値の範囲の２０％以内または１０％以内である。生物学的システムの場合、「約」という用語は、許容可能な誤差の標準偏差、好ましくは、所与の値の多くとも２倍を指す。本明細書に示される数量は、別途記載のない限り、概算であり、「約」または「およそ」という用語は、明示的に記載されていない場合に推測することができることを意味する。
【００３０】
本明細書に記載の結果により、アルブミン尿などの糸球体疾患の症状は、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、及びＩＣＡＭ−１のサイトカインカクテルの投与により、転写因子ＺＨＸ２の発現が低減しているＢａｌｂ／ｃＪマウスにおいて誘発することができることが示される。個々のサイトカインは、アルブミン尿を誘発しなかった。これらの結果に基づいて、ウイルス感染により惹起される糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法を開発した。
【００３１】
本明細書に記載の一実施形態は、ウイルス感染により惹起される糸球体疾患の急性再発または悪化を抑制するための方法であり、方法は、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−６受容体、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。別の態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−６受容体、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。別の態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、デュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））、アフェリモマブ、ベルサンリマブ、ブラザキズマブ、フォントリズマブ、ゴリムマブ、ネレリモマブ、オロキズマブ、オゾラリズマブ、パスコリズマブ、プラクルマブ、サペリズマブ、サリルマブ、ボバリリズマブ、それらの組み合わせ、それらの誘導体、またはそれらのアナログのうちの１つ以上を含む。
【００３２】
一実施形態では、糸球体疾患は、タンパク尿、低アルブミン血症、高脂血症（高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症）、脂質尿症、浮腫、またはそれらの組み合わせを特徴とするネフローゼ症候群を含む。一部の態様では、糸球体疾患は、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、またはループス腎炎を含む。別の態様では、糸球体疾患は、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、またはループス腎炎により引き起こされる慢性腎疾患の急性再発または悪化を含む。
【００３３】
一実施形態では、糸球体疾患の急性再発または悪化の前に、対象は、病状からの完全または部分的な寛解状態にある。一態様では、ネフローゼ症候群の症状は、寛解期間中に軽減または低減される。別の態様では、糸球体疾患は、静止状態にある。別の態様では、糸球体疾患は、持続するが、軽減された病状にある。
【００３４】
一実施形態では、糸球体疾患の急性再発または悪化は、ウイルス感染に起因する。一態様では、ウイルス感染は、感冒またはインフルエンザを誘発するウイルスを含む。別の態様では、ウイルス感染は、ライノウイルス、ヒトコロナウイルス、アデノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス以外のエンテロウイルス、パラインフルエンザウイルス、メタニューモウイルス、インフルエンザ、またはそれらの組み合わせを含む。
【００３５】
一実施形態では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の投与は、ウイルス感染の発症から約１時間〜約７日以内に行われる。一態様では、投与は、ウイルス感染の発症の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、または約２４時間後に行われる。別の態様では、投与は、ウイルス感染の発症の約０．１日、約０．２５日、約０．５日、約０．７５日、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に行われる。一態様では、ウイルス感染の発症は、ウイルス感染の症状の出現により確認される。ウイルス感染の症状は、鼻水、くしゃみ、喉の痛み、喉の炎症、咳、鼻詰まり、後鼻漏、目の潤み、筋肉痛、関節痛、頭痛、発熱、疲労感、倦怠感、悪心、胃痛、下痢、または嘔吐、それらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【００３６】
別の実施形態では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の投与は、ウイルス感染の発症後約７日以内に行われる。別の態様では、投与は、ウイルス感染の発症後約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日以内に行われる。別の態様では、投与は、ウイルス感染の発症から約１週間以内に行われる。別の態様では、投与は、ウイルス感染の発症後約４８時間以内に行われる。一態様では、ウイルス感染の発症は、鼻水、くしゃみ、喉の痛み、喉の炎症、咳、鼻詰まり、後鼻漏、目の潤み、筋肉痛、関節痛、頭痛、発熱、疲労感、倦怠感、悪心、胃痛、下痢、または嘔吐、それらの組み合わせを含むウイルス感染の症状の出現により確認される。
【００３７】
別の実施形態では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の投与は、薬品を投与するのに有効な任意の手段による。一態様では、投与は、非経口投与を含む。別の態様では、投与は、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内投与を含む。別の態様では、投与は、静脈内投与を含む。別の態様では、投与は、静脈内注入を含む。
【００３８】
本明細書に記載の別の実施形態では、対象は、マウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、非ヒト霊長動物、またはヒトである。一実施形態では、対象は、ヒトまたはそれを必要とするヒトである。別の態様では、対象は、それを必要とするヒト小児または成人である。本明細書で使用される場合、「それを必要とする」という表現は、対象が、内科医により決定される処置の必要があることを示す。
【００３９】
本明細書に記載の別の実施形態は、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαのうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるか、または受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１を阻害するための方法であり、方法は、サイトカインまたは受容体を、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬と接触させることを含む。一態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−６受容体、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。別の態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−６受容体、抗ＴＮＦα、可溶性ＴＮＦ受容体、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。別の態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、デュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））、アフェリモマブ、ベルサンリマブ、ブラザキズマブ、フォントリズマブ、ゴリムマブ、ネレリモマブ、オロキズマブ、オゾラリズマブ、パスコリズマブ、プラクルマブ、サペリズマブ、サリルマブ、ボバリリズマブ、それらの組み合わせ、それらの誘導体、またはそれらのアナログのうちの１つ以上を含む。別の態様では、接触は、対象への抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のうちの１つ以上の非経口投与を含み、これは、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１と相互作用し、サイトカインまたは受容体リガンドを中和して、結合及び下流効果を防ぐことを可能にする。一態様では、非経口投与は、脈内投与を含む。別の態様では、対象は、糸球体疾患の急性再発の発症または悪化を経験している。一態様では、対象は、感冒またはインフルエンザと関連するウイルス感染による糸球体疾患の急性再発の発症または悪化を経験している。別の態様では、対象は、糸球体疾患の悪化前に、糸球体疾患の完全または部分的な寛解にある。一態様では、対象は、ヒトである。
【００４０】
本明細書に記載の別の実施形態は、１つ以上のＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１受容体を１つ以上の遮断薬と接触させることにより、腎臓疾患におけるＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１の細胞内効果を遮断するための方法である。一態様では、遮断薬は、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ、またはＩＣＡＭ−１に対する抗サイトカイン抗体、可溶性受容体、またはデコイ受容体を含む。別の態様では、遮断薬は、受容体に結合し、サイトカインまたは受容体リガンドとの相互作用を遮断することが可能な１つ以上の小分子を含む。一態様では、遮断薬は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−４Ｒ、抗ＩＣＡＭ−１、またはそれらの組み合わせを含む。
【００４１】
本明細書に記載の別の実施形態は、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−４Ｒ、または抗ＩＣＡＭ−１を含む、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の混合物、及び任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。一態様では、組成物は、１ｍｇ〜１０，０００ｍｇの各抗体を含む。別の態様では、組成物の用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、組成物の用量は、約５ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、組成物は、液体または凍結乾燥濃縮物である。
【００４２】
本明細書に記載の別の実施形態は、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、もしくはＴＮＦαまたは受容体ＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１のうちの１つ以上の対象の全身レベルを激減させるためのキットであり、キットは、抗サイトカイン抗体、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１０、抗ＩＮＦ−γ、またはＩＬ−４ＲもしくはＩＣＡＭ−１の抗ＴＮＦ抗体もしくは抗受容体抗体、それらの組み合わせを含む組成物を含む１つ以上の容器、及び任意に、送達デバイス、希釈剤、使用説明書、またはラベルを含む。
【００４３】
注射による投与に適する医薬組成物としては、滅菌の水溶液、懸濁液、または分散液、ならびに滅菌の注射可能な溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末または凍結乾燥物が挙げられる。
【００４４】
静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンガー液、または注射用水が挙げられる。全ての場合、組成物は、滅菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性でなければならない。好ましい医薬製剤は、製造及び貯蔵の条件下で安定であり、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。一般に、関連する担体は、例えば、水、緩衝液、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散の場合に必要な粒子サイズの維持により、または界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成することができる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、アミノ酸、ソルビトール、塩化ナトリウム、またはそれらの組み合わせを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物に含むことにより、もたらすことができる。
【００４５】
特定の注射可能な組成物は、等張水溶液または懸濁液である。そのような組成物は、滅菌され、ならびに／または保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、溶液促進剤、浸透圧を調節するための塩、及び／もしくは緩衝剤などのアジュバントを含んでもよい。さらに、それらはまた、他の治療的に価値のある物質を含有してもよい。該組成物は、それぞれ、従来の方法に従って調製され、約０．１〜７５％を含有するか、または約１〜５０％の活性成分を含有する。
【００４６】
滅菌注射液または懸濁液は、必要に応じて、成分の１つまたは組み合わせと共に、好適な溶媒に必要な量の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を取り込むこと、それに続く濾過滅菌により、調製することができる。一般に、溶液または懸濁液は、滅菌ＰＢＳ及び任意の賦形剤などの滅菌ビヒクルに活性化合物を組み込むことにより調製される。滅菌の注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、これにより、以前に滅菌濾過された溶液から有効成分の粉末及び任意のさらなる所望の成分が得られる。
【００４７】
治療的に用いられる医薬組成物の有効量は、例えば、治療の状況及び目的に依存するであろう。従って、処置のための適切な投薬量レベルが、部分的に、医薬組成物に組み込まれる治療薬、治療薬が使用されている適応症、投与経路、及び患者のサイズ（体重、体表面、または臓器のサイズ）及び状態（年齢及び一般的な健康状態）に応じて変動することを、当業者は理解するであろう。従って、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投薬量を滴定し、投与経路を変更することができる。
【００４８】
抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、標準的なモノクローナル抗体（特に、ヒト化モノクローナル抗体）手法、タンパク質工学、及び当業者らに既知の一般的な分子生物学的手法を使用して産生することができる。
【００４９】
本明細書に記載の方法に有用ないくつかの例示的なＦＤＡが承認した抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬としては、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））（抗ＴＮＦα）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））（抗ＴＮＦα）、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、抗ＴＮＦα）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））（ＴＮＦ受容体融合タンパク質）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））（抗ＩＬ−６）、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（抗ＩＬ−６受容体）、またはデュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））（抗ＩＬ−４Ｒａ）が挙げられる。これらの薬剤の適切な用量及び濃度パラメーターが表１に示される。
【００５０】
ＦＤＡ処方情報、例えば、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、及びデュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））のためのラベルは、具体的な教示のためにそれらへの明示的な参照によりそれぞれが本明細書に組み込まれる。
【００５１】
【表１】
2021530553.tif 000003
【００５２】
表１から観察することができるように、各治療薬の用量は、投与用量、反復投与スケジュール、及び濃度が異なる。さらに、そのようなタンパク質治療薬が糸球体疾患を有する対象に投与される場合、より高い用量が多くの場合、治療効果を達成するために必要とされる。あらゆる理論に拘束されることなく、これは、タンパク尿を引き起こす原因となる糸球体毛細血管ループの異常のために、（他の血液タンパク質の中でも）治療タンパク質（複数可）が尿に漏出することに起因すると考えられる。従って、ラベルに示されるよりも高い抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の用量が、腎臓を介した治療薬の喪失を補うために投与することができる。
【００５３】
他の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、または可溶性受容体は、世界中でヒトへの使用が承認されている。例えば、以下の化合物（標的）が有用である：とりわけ、アフェリモマブ（ＴＮＦα）、ベルサンリマブ（ＩＣＡＭ−１）、クラザキズマブ（ＩＬ−６）、フォントリズマブ（ＩＮＦ−γ）、ゴリムマブ（ＴＮＦα）、ネレリモマブ（ＴＮＦα）、オロキズマブ（ＩＬ−６）、オゾラリズマブ（ＴＮＦα）、パスコリズマブ（ＩＬ−４）、プラクルマブ（ＴＮＦ）、サペリズマブ（ＩＬ−６Ｒ）、サリルマブ（ＩＬ−６）、ボバリリズマブ（ＩＬ−６Ｒ）。これら及び他のアナログ分子は、本明細書に記載の方法及び組成物に有用である。
【００５４】
本明細書に記載の一実施形態は、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のそれぞれを１ｍｇ〜１０，０００ｍｇ含む医薬組成物である。一態様では、組成物は、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のそれぞれについて、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約３０００ｍｇ、約４０００ｍｇ、約５０００ｍｇ、約６０００ｍｇ、約７０００ｍｇ、約８０００ｍｇ、約９０００ｍｇ、約１００００ｍｇ、またはそれ以上の量を含む。
【００５５】
本明細書に記載の別の実施形態は、投与が１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含み、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のそれぞれについて、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２０ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、約３００ｍｇ／ｋｇ、約４００ｍｇ／ｋｇ、約５００ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以上を含む、医薬組成物である。
【００５６】
本明細書に記載の別の実施形態は、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含む医薬組成物であり、それぞれは、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬のそれぞれについて、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度を有する。
【００５７】
本明細書に記載の別の実施形態は、示された用量の各タンパク質を含む、１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬（特に、表１からの任意のもの）を含む医薬組成物である。一態様では、組成物中の各タンパク質の量は独立して、明記された用量の１．５倍〜５０倍（明記された範囲内の各整数を含む）で増加する。別の態様では、組成物中の各タンパク質の量は独立して、示された用量の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、または約１００倍増加する。
【００５８】
投与の頻度は、使用される治療薬の薬物動態パラメーターに依存するであろう。通常、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に達するまで、組成物を投与するであろう。それ故、組成物は、時間と共に単回用量として、２回以上の用量（同じ量の所望の分子を含有してもしなくてもよい）として、または移植デバイスもしくはカテーテルを介した連続的な注入として投与することができる。適切な投薬量のさらなる改良は、日常的に当業者らにより行われ、日常的に当業者らより実施される業務の範囲内である。適切な投薬量は、適切な用量反応データの使用を通して確認することができる。
【００５９】
「注射で投与することができる」、「注射可能な」、または「注射可能性」という表現及び用語は、特定の濃度（ｗ／ｖ）及び特定の温度で液体に溶解させた本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含有するシリンジのプランジャーに加えられる特定の力、そのようなシリンジの出口に連結された所与の内径の針、ならびに針を通してシリンジから特定の体積の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を押し出すのに必要とされる時間などの要因の組み合わせを指す。
【００６０】
一実施形態では、明記されたパーセンテージ範囲内の全ての整数を含む約０．１％〜約２０％（ｗ／ｖ）の濃度に、ＰＢＳまたは生理食塩水に懸濁されて抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬に対する注射可能性の測定が実施される。
【００６１】
本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の医薬組成物である。医薬組成物は、以下のような１つ以上の賦形剤を含み得る：
（ｉ）緩衝剤：ｐＨを所望の範囲に維持するための生理学的に許容される緩衝液、例えば、リン酸ナトリウム、重炭酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、及び酢酸塩、硫酸塩、硝酸塩、塩化物、ピルビン酸塩。Ｍｇ（ＯＨ）２またはＺｎＣＯ３などの制酸剤も使用されてもよい。緩衝能は、ｐＨの安定性に最も敏感な条件に合致するように調整されてもよい。
（ｉｉ）等張性調整剤：注入デポーでの浸透圧差による細胞損傷から生じ得る痛みを最小限に抑える。グリセリン及び塩化ナトリウムが例である。有効濃度は、血清に対して２８５〜３１５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇと想定される浸透圧を使用して、浸透圧測定により決定することができる。
（ｉｉｉ）防腐剤及び／または抗菌剤：複数用量の非経口調製物は、対象が注射の際に感染するリスクを最小限にするのに十分な濃度の保存剤の添加を必要とし得、対応する規制要件が確立されている。代表的な防腐剤としては、ｍ−クレゾール、フェノール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロソル、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸、クロロクレゾール、及び塩化ベンザルコニウムが挙げられる。
（ｉｖ）安定剤：安定化は、タンパク質安定化力の強化、変性状態の不安定化、またはタンパク質への賦形剤の直接結合により達成される。安定剤は、アミノ酸、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グリシン、ヒスチジン、リジン、プロリン、糖、例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、ポリオール、例えば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、塩、例えば、リン酸カリウム、硫酸ナトリウム、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、六リン酸エステル、リガンド、例えば、二価金属イオン（亜鉛、カルシウムなど）、他の塩、または有機分子、例えば、フェノール誘導体であってよい。さらに、オリゴマーまたはポリマー、例えば、シクロデキストリン、デキストラン、デンドリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、プロタミン、またはヒト血清アルブミンが使用されてもよい。
（ｖ）吸着防止剤：組成物の容器の内面に競合的にコーティングまたは吸着する、主にイオン性もしくはイオン−イオン性界面活性剤または他のタンパク質または可溶性ポリマー、例えば、ポロキサマー（プルロニックＦ−６８）、ＰＥＧドデシルエーテル）（Ｂｒｉｊ３５）、ポリソルベート２０及び８０、デキストラン、ポリエチレングリコール、ＰＥＧ−ポリヒスチジン、ＢＳＡ及びＨＳＡ、ならびにゼラチンが使用される。賦形剤の選択された濃度及び種類は、回避する効果に依存するが、通常、界面活性剤の単分子層が、ＣＭＣ値のすぐ上で界面に形成される。
（ｖｉ）凍結乾燥または凍結防止剤：凍結乾燥または噴霧乾燥中に、賦形剤は、水素結合の切断及び水分除去により引き起こされる不安定化効果の影響を弱め得る。この目的の場合、糖及びポリオールが使用されてもよいが、対応する好ましい効果はまた、界面活性剤、アミノ酸、非水溶媒、及び他のペプチドについて観察されている。トレハロースは、水分誘発性の凝集を低減するのに特に効率的であり、また、水にタンパク質疎水性基を露出させることにより潜在的に引き起こされる熱安定性を向上させる。マンニトール及びスクロースはまた、高比率のマンニトールまたはスクロースが凍結乾燥ケーキの物理的安定性を高めることが知られる場合、単独の凍結乾燥／凍結防止剤として、または互いに組み合わせて使用されてもよい。マンニトールはまた、トレハロースと組み合わされてもよい。トレハロースはまた、ソルビトールと組み合わされても、またはソルビトールは、単独の保護剤として使用されもよい。デンプンまたはデンプン誘導体はまた、使用されてもよい。
（ｖｉｉ）酸化防止剤：抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、エクトイン、メチオニン、グルタチオン、モノチオグリセロール、モリン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、プロピルガラート、ビタミンＥ、キレート剤、例えば、クエン酸、ＥＤＴＡ、六リン酸エステル、チオグリコール酸。
（ｖｉｉｉ）増粘剤または粘度増強剤：バイアル及びシリンジ中の粒子の沈降を遅らせ、粒子の混合及び再懸濁を容易にするために、ならびに懸濁液を注射しやすくするために使用される（すなわちシリンジプランジャーにおけるより低い力）。好適な増粘剤または粘度増強剤は、例えば、カルボマー増粘剤、例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９４０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ  １０、セルロース誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース、ＨＰＭＣ）、またはジエチルアミノエチルセルロース（ＤＥＡＥもしくはＤＥＡＥ−Ｃ）、コロイド状ケイ酸マグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）またはケイ酸ナトリウム、ヒドロキシアパタイトゲル、リン酸三カルシウムゲル、キサンタン、カラギーナン、例えば、Ｓａｔｉａｇｕｍ  ＵＴＣ  ３０、脂肪族ポリ（ヒドロキシ酸）、例えば、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸またはＬ−乳酸）（ＰＬＡ）及びポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）ならびにそれらのコポリマー（ＰＬＧＡ）、Ｄ，Ｌ−ラクチド、グリコリド、及びカプロラクトンのターポリマー、ポロキサマー、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）−ポリ（オキシエチレン）（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標））のトリブロックを構成する親水性ポリ（オキシエチレン）ブロック及び疎水性ポリ（オキシプロピレン）ブロック、ポリエーテルエステルコポリマー、例えば、ポリエチレングリコールテレフタレート／ポリブチレンテレフタレートコポリマー、スクロースアセテートイソブチレート（ＳＡＩＢ）、デキストランまたはその誘導体、デキストラン及びＰＥＧの組み合わせ、ポリジメチルシロキサン、コラーゲン、キトサン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）及び誘導体、ポリアルキルイミド、ポリ（アクリルアミド−コ−ジアリルジメチルアンモニウム（ＤＡＤＭＡ））、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、例えば、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロナン、ポリラクチド（ＰＬＡ）またはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）などの疎水性Ａブロック及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリビニルピロリドンなどの親水性ＢブロックからなるＡＢＡトリブロックまたはＡＢブロックコポリマーである。そのようなブロックコポリマー及び上記のポロキサマーは、逆熱ゲル化挙動（室温で投与を容易にする流体状態及び注射後の体温でゾル−ゲル転移温度を超えるゲル状態）を示し得る。
（ｉｘ）拡散剤：限定されないが、結合組織の細胞間空間にみられる多糖類であるヒアルロン酸など間質腔の細胞外マトリックスの構成成分の加水分解を通じて、結合組織の浸透性を変更する。限定されないが、ヒアルロニダーゼなどの拡散剤は、細胞外マトリックスの粘度を一時的に減少させ、注射薬物の拡散を促進する。
（ｘ）他の助剤：例えば、湿潤剤、粘度調整剤、抗生物質、ヒアルロニダーゼ。塩酸及び水酸化ナトリウムなどの酸及び塩基は、製造中のｐＨ調整に必要な助剤である。
【００６２】
一実施形態では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、１つの適用において治療的有効量の生物学的活性剤を少なくとも１２時間提供する組成物で十分に投与される。一態様では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の１回の適用は、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日間、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年、２年、３年、４年、またはそれ以上の間十分である。
【００６３】
一実施形態では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が単回用量として提供され、これは、それが供給される容器が１回の薬学的用量を含有することを意味する。
【００６４】
別の実施形態では、組成物は、複数用量の組成物として提供され、これは、それが複数の治療的用量を含有することを意味する。好ましくは、複数用量の組成物は、少なくとも２回の用量を含有する。そのような複数用量の組成物は、それを必要とする種々の対象に使用するか、または１つの対象で使用され得、残りの用量は、最初の用量の投与後に必要になるまで保存される。
【００６５】
別の実施形態では、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、１つ以上の容器で提供される。液体または懸濁液の組成物の場合、容器は、好ましくは、単一チャンバーシリンジである。乾燥組成物の場合、好ましくは、容器は、二重チャンバーシリンジである。乾燥組成物は、デュアルチャンバーシリンジの第１のチャンバー中で提供され、再構成溶液は、デュアルチャンバーシリンジの第２のチャンバー中で提供される。
【００６６】
抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の乾燥または凍結乾燥組成物を、それを必要とする対象に投与する前に、乾燥組成物を再構成する。再構成は、乾燥組成物が提供される容器、例えば、バイアル、シリンジ、デュアルチャンバーシリンジ、アンプル、及びカートリッジ中で行われ得る。再構成は、乾燥組成物に事前定義された量の再構成溶液を添加することにより行われる。再構成溶液は、リン酸緩衝生理食塩水、等張食塩水、注射用水、または他の緩衝液などの滅菌液体であり、これはさらに、賦形剤、例えば、防腐剤及び／または抗菌剤、例えば、ベンジルアルコール及びクレゾールを含有してもよい。好ましくは、再構成溶液は、注射用の滅菌水である。あるいは、再構成溶液は、生理食塩水または滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【００６７】
別の実施形態は、治療的有効量の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬、及び任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む再構成組成物を調製する方法であり、方法は、組成物をある量の再構成ビヒクルと接触させるステップを含む。次に、再構成抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬は、注射または他の経路により投与されてもよい。
【００６８】
別の実施形態は、治療的有効量の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬、再構成ビヒクル、及び任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む再構成組成物である。
【００６９】
別の実施形態は、治療的有効量の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬、及び任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む溶液または懸濁液を含むプレフィルドシリンジである。一態様では、シリンジは、約０．０１ｍＬ〜約５０ｍＬの本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が充填される。一態様では、シリンジは、約０．０５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約１ｍＬ〜約２０ｍＬ、約１ｍＬ〜約１０ｍＬ、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、または約０．５〜約５ｍＬが充填される。一実施形態では、シリンジは、０．５ｍＬ〜約２ｍＬの本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が充填される。一部の態様では、シリンジは、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、約５ｍＬ、約７．５ｍＬ、約１０ｍＬ、約１５ｍＬ、約２０ｍＬ、約２５ｍＬ、約３０ｍＬ、約４０ｍＬ、約５０ｍＬ、または５０ｍＬ以上の本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が充填される。シリンジは多くの場合、シリンジ及び針内の「デッドスペース」による無駄を考慮に入れるために、患者に投与されるべき所望の用量より多くが充填される。また、患者への注射が容易になるように、シリンジが内科医により用意される場合、所定量の廃棄物が存在してもよい。
【００７０】
一実施形態では、シリンジは、本明細書に記載の約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬの、注入経路に応じて約０．０１ｍＬ〜約５ｍＬ（例えば、約０．０１ｍＬ〜約０．１ｍＬ、約０．１ｍＬ〜約０．５ｍＬ、約０．２ｍＬ〜約２ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約５ｍＬ、または約１ｍＬ〜約５ｍＬ）の投薬量（すなわち、患者への送達を目的とする薬品の体積）が充填される。皮下注射を目的とする一実施形態では、シリンジは、本明細書に記載の０．１ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬの濃度（複数可）を有する、約０．１ｍＬ〜約５．０ｍＬの投薬量の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が充填される。他の経路による注射を目的とする他の実施形態では、シリンジは、本明細書に記載の０．１ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する、約０．０１ｍＬ〜約５．０ｍＬの投薬量の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が充填される。一部の態様では、シリンジは、約０．０１ｍＬ、約０．０２ｍＬ、約０．０３ｍＬ、約０．０４ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬ、約２．５ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、または約５ｍＬの本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬が、それを必要とする患者に送達するために充填される。
【００７１】
シリンジは、薬品溶液を含有し、出口は、薬品の無菌性を維持するために可逆的に密封されてもよい。この密封は、ルアーロックまたは改ざん防止シールなどの当該技術分野で既知の密封デバイスで達成されてもよい。
【００７２】
別の実施形態は、本明細書に記載の１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の溶液または懸濁液を含む１つ以上のプレフィルドシリンジを含むキットである。一実施形態では、そのようなキットは、ブリスターパックまたは密封スリーブに本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含むプレフィルドシリンジを含む。ブリスターパックまたはスリーブは、内側が滅菌されてもよい。一態様では、本明細書に記載のプレフィルドシリンジは、滅菌、例えば、最終滅菌を受ける前に、そのようなブリスターパックまたはスリーブ内に入れられてもよい。
【００７３】
そのようなキットはさらに、本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を投与するための１つ以上の針を含んでもよい。そのようなキットはさらに、使用説明書、薬物ラベル、禁忌、警告、または他の関連情報を含んでもよい。本明細書に記載の一実施形態は、ブリスターパック内に含有される本明細書に記載の１つ以上の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬を含む１つ以上のプレフィルドシリンジ、針、及び任意に、投与指示書、薬物ラベル、禁忌、警告、またはその他の関連情報を含むカートンまたはパッケージである。
【００７４】
シリンジを滅菌するために最終滅菌プロセスが使用されてもよく、そのようなプロセスは、エチレンオキシドまたは過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）滅菌プロセスなどの既知のプロセスを使用してもよい。シリンジと共に使用されるべき針は、本明細書に記載のキットと同じ方法で滅菌されてもよい。一態様では、パッケージは、シリンジの外側が滅菌されるまで、滅菌ガスに暴露される。そのようなプロセスの後に、シリンジの外面は、最大６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、またはそれ以上の間、（ブリスターパック内にある間）滅菌のままであり得る。従って、一実施形態では、（ブリスターパック内の）本明細書に記載のプレファイルシリンジは、最大６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、またはそれ以上の貯蔵寿命を有し得る。一実施形態では、百万中に１つ未満のシリンジは、１８ヶ月の貯蔵後にシリンジの外側に検出可能な微生物の存在を有する。一態様では、プレフィルドシリンジは、少なくとも１０−６の滅菌保証レベルを有するエチレンオキシドを使用して滅菌されている。別の態様では、プレフィルドシリンジは、少なくとも１０−６の滅菌保証レベルを有する過酸化水素を使用して滅菌されている。有意な量の滅菌ガスが、シリンジの可変容量チャンバーに入らないようにすべきである。本明細書で使用される「有意な量」という用語は、可変容量チャンバー内の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の溶液または懸濁液の許容できない変性を引き起こすガスの量を指す。一実施形態では、滅菌プロセスは、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の１０％以下（好ましくは、５％以下、３％以下、１％以下）のアルキル化を引き起こす。一実施形態では、プレフィルドシリンジは、エチレンオキシドを使用して滅菌されているが、シリンジの外面は、１ｐｐｍ以下、好ましくは、０．２ｐｐｍ以下のエチレンオキシド残留物を有する。一実施形態では、プレフィルドシリンジは、過酸化水素を使用して滅菌されているが、シリンジの外面は、１ｐｐｍ以下、好ましくは、０．２ｐｐｍ以下の過酸化水素残留物を有する。別の実施形態では、プレフィルドシリンジは、エチレンオキシドを使用して滅菌されており、シリンジの外側及びブリスターパックのシリンジの内側にみられる総エチレンオキシド残留物は、０．１ｍｇ以下である。別の実施形態では、プレフィルドシリンジは、過酸化水素を使用して滅菌されており、シリンジの外側及びブリスターパックの内側にみられる総過酸化水素残留物は、０．１ｍｇ以下である。
【００７５】
別の態様は、パーツのキットである。液体及び懸濁液組成物の場合、投与デバイスが単に皮下シリンジである場合、キットは、シリンジ、針、及びシリンジで使用される抗サイトカイン抗体及び可溶性受容体を含む容器を含んでもよい。乾燥組成物の場合、容器は、抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の乾燥組成物を含有する１つのチャンバー、及び再構成溶液を含む第２のチャンバーを有してもよい。一実施形態では、注射デバイスは、使用中に、容器内の液体または懸濁液または再構成乾燥組成物が注射デバイスの出口と流体接続されるように、抗サイトカイン抗体及び可溶性受容体を含む別々の容器を注射デバイスと係合させることができるように適合される皮下注射である。投与デバイスの例としては、皮下シリンジ及びペンシリンジデバイスが挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい注射デバイスは、ペンシリンジであり、この場合では、容器は、カートリッジ、好ましくは、使い捨てカートリッジである。
【００７６】
別の実施形態は、針、ならびに抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬、及び任意に、再構成溶液をさらに含有する容器を含むキットを含み、容器は、針と共に使用されるために適合される。一態様では、容器は、プレフィルドシリンジである。別の態様では、容器は、二重チャンバーシリンジである。
【００７７】
別の実施形態は、ペンシリンジデバイスと共に使用される、本明細書に記載の抗サイトカイン抗体、抗受容体抗体、可溶性受容体、または遮断薬の組成物を含有するカートリッジである。カートリッジは、単回用量または複数用量の抗サイトカイン抗体及び可溶性受容体を含有してもよい。
【００７８】
本明細書に記載の組成物、製剤、方法、プロセス、及び用途への好適な修正及び適合は、任意の実施形態またはそれらの態様の範囲から逸脱することなく行うことができることが、当業者には明らかであろう。提供される組成物、方法、及び実験は、例示的なものであり、特定の実施形態のいずれかの範囲を制限することを意図するものではない。本明細書に開示の種々の実施形態、態様、及び選択肢の全ては、任意の変形または繰り返しで組み合わせることができる。本明細書に記載の組成物、製剤、方法、及びプロセスの範囲は、本明細書に記載の実施形態、態様、選択肢、例、及び選好の全ての実際のまたは潜在的な組み合わせを含む。本明細書に記載の例示的な組成物及び製剤は、任意の構成成分を除外しても、本明細書に開示の任意の構成成分を代用しても、本明細書の他の箇所に開示された任意の構成成分を含んでもよい。本明細書に開示の組成物もしくは製剤のいずれかの任意の構成要素の質量対製剤中の他の任意の構成成分の質量の比率、または、本明細書に開示の組成物もしくは製剤のいずれかの任意の構成要素の質量対製剤中の他の構成成分の総重量の比率は、明示的に開示されるように、本明細書で開示される。参照により組み込まれる特許または刊行物のいずれかの任意の用語の意味が、本開示で使用される用語の意味と矛盾する場合、本開示の用語または表現の意味が支配的である。本明細書で引用された全ての特許及び刊行物は、その特定の教示について参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【００７９】
実施例１
実施された全ての動物研究は、Ｒｕｓｈ大学またはバーミンガムのＡｌａｂａｍａ大学のＩＡＣＵＣにより承認された。マウスモデルを以下の供給元から入手した：Ｂａｌｂ／ｃＪ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｓ  ＃０００６５１）、Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｓ、Ｅｎｖｉｇｏ、ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＨｓｄ株）、ＮＰＨＳ２−Ｃｒｅ（１２９Ｓ６．Ｃｇ−Ｔｇ（ＮＰＨＳ２−ｃｒｅ）２９５Ｌｂｈ／ＢｒｏＪ、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｓ  ＃００８５２３）、混合１２９／Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＥｎｐｅｐ−／−マウス（Ｄｒｓ．Ｍａｘ  Ｃｏｏｐｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｄｉｈ  Ａｒａｐから寄贈）、Ｃ５７Ｂｌ／６（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＃０２７）。Ｅｎｐｅｐ−／−マウスを、Ｃ５７Ｂｌ／６バックグラウンドに１０世代戻し交配した。ｆｌｏｘｅｄ  Ｚｈｘ２コ構築物（ｚｈｘ２ｔｍ１ａ（ＫＯＭＰ）Ｗｔｓｉ）を含むマウスの精子を、ＵＣ  Ｄａｖｉｓ  ＫＯＭＰ  ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙから入手し、ｆｌｏｘｅｄマウスをＵＡＢ  Ｋａｕｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓで作成した。ＮＰＨＳ２−ｃｒｅマウスをｆｌｏｘｅｄマウスと交配することにより、足細胞特異的Ｚｈｘ２欠損マウスを作成し、遺伝子型を決定し、タンパク質発現を、Ｄｙｎａｂｅａｄ（商標）単離糸球体のウェスタンブロット及び腎臓切片の共焦点イメージングで特性決定した。
【００８０】
組み換えマウスサイトカインまたは可溶性受容体を購入した：インターフェロン−γ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ  ＃ＩＦ００５）、腫瘍壊死因子−α（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃Ｔ７５３９）、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃Ｉ３０１９）、ＩＬ−６（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃ＳＲＰ３３３０）、ＩＣＡＭ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃７９６−ＩＣ−０５０）、ＩＬ−４Ｒ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃５３０−ＭＲ−１００）、ＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃４０２−ＭＬ−０２０／ＣＦ）。
【００８１】
最終体積１００μＬの０．９％の滅菌生理食塩水（濃度／用量：１×またはＸ）：ＩＬ−１０  ０．５μｇ；ＩＬ−６及びＴＮＦα  各１μｇ；ならびにＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＮＦ−γ、及びＩＣＡＭ−１  各２μｇで、以下のサイトカイン及び可溶性受容体（ＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＣＡＭ−１）を組み合わせることにより、サイトカインカクテルを作製した。以下の通りに、０．９％の滅菌生理食塩水１００μＬ中でサイトカインカクテルを段階希釈することにより、漸減用量のサイトカインカクテルを調製した：Ｘ／２（２倍希釈）、Ｘ／５（５倍希釈）、Ｘ／１０（１０倍希釈）、Ｘ／１５（１５倍希釈）、及びＸ／１００（１００倍希釈）。
【００８２】
マウスに１００μＬのカクテルまたは希釈液を静脈内注射した。血管内容量を維持するために、静脈内サイトカインカクテル投与の直後に、０．９％の生理食塩水１００μＬのさらなる用量を腹腔内投与した。
【００８３】
サイトカインカクテルは、組み合わせ用量Ｘで、Ｂａｌｂ／ｃＪにおいて急性アルブミン尿を誘発するが、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいては誘発しない（図１Ａ）。Ｂａｌｂ／ｃＪマウスは、ＺＨＸ２及びその膜貫通型パートナーの発現が低減している。１Ｘ濃度のカクテルと同じ投薬量で投与された個々のサイトカインのいずれもが、いずれのマウス株においてもアルブミン尿を引き起こさなかった（図１Ｂ）。腎炎惹起性最小用量を確立するために、用量Ｘの画分を注射し、マウスをアルブミン尿について評価した。併用用量をＸの５０％または２０％に低減させると、依然として、Ｂａｌｂ／ｃＪマウスにおいて有意なアルブミン尿が誘発された（図２Ａ）。組み合わせＸ用量の１０％で、アルブミン尿が存在したが、試験された少数の動物に対しては統計的に有意ではなかった。組み合わせＸ用量の１％で、Ｂａｌｂ／ｃＪマウスではアルブミン尿は、観察されなかった（図２Ｂ）。
【００８４】
サイトカインのカクテルから個別に、抗体が臨床で使用される３つの特定のサイトカインまたは可溶性受容体（ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＬ−４Ｒ）のうちの１つを除去しても、Ｂａｌｂ／ｃＪマウスにアルブミン尿を誘発しなかった（図３Ａ）。これにより、これらのサイトカインのうちのいずれの中和も、糸球体疾患の急性再発を抑制し得ることが示された。サイトカインカクテル用量（Ｘ／２）の注射の１時間後に抗ラットＴＮＦα抗体（２５μｇ）または対照抗体（ＩｇＧ）を用いるＢａｌｂ／ｃＪマウスの注射は、ＩｇＧ対照と比較した抗ＴＮＦα群のＢａｌｂ／ｃＪマウスにおけるサイトカインカクテル誘発性タンパク尿の強度を低減させた（図３Ｂ）。より大量の抗ＴＮＦα抗体を使用すると、サイトカインカクテルにより誘発されるアルブミン尿をなくし得る。
【００８５】
腎炎惹起性最小用量モデルを使用すると、サイトカイン誘発性アルブミン尿はまた、ＺＨＸ２  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ  ｃｒｅ＋＋に認められたが、対照ＺＨＸ２  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウスでは認められなかった（図４Ａ）。この知見は、このプロセスにおける足細胞ＺＨＸ２欠損の特定の役割を示す。Ｅｎｐｅｐが欠損したマウスはまた、サイトカイン誘発性アルブミン尿を有し、ＺＨＸ２及びＥｎｐｅｐの両方が欠損したマウスは、アルブミン尿の最も高い倍数増加を有していた（図４Ｂ）。より高用量のサイトカインを使用すると、さらにアルブミン尿が増加した（図４Ａ、右パネル）。
【００８６】
ラットサイトカインカクテルは、以下の供給元から購入された組み換えラットサイトカインまたは可溶性受容体を含有していた：インターフェロン−γ（Ｒ＆Ｄ  ＃５８５−ＩＦ／ＣＦ）、腫瘍壊死因子−α（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃Ｔ５９４４−５０μ）、インターロイキン−１０（Ｒ＆Ｄ  ＃５２２−ＲＬＢ）、ＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  ＃５０６−ＲＬ／ＣＦ）、ＩＣＡＭ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ＃５８３−ＩＣ）、ＩＬ−４Ｒ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ＃８０１９８−Ｒ０８Ｈ）、ＩＬ−２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃ＳＲＰ３２４２−２０）。１Ｘ用量のカクテルは、０．９％の滅菌生理食塩水１００μＬの最終体積に溶解させたＩＬ−１０  ０．５μｇ、ＩＬ−６及びＩＣＡＭ−１  各１μｇ、ならびにＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＮＦ−γ及びＴＮＦα  各２μｇを含む。Ｘ／５０での腎炎惹起性最小用量は、０．９％の滅菌生理食塩水１００μＬ中の各サイトカインの適切な画分を含有していた。Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｍｎａラットのサイトカイン研究中、３５〜６３ｍｇ／１８時間のベースラインタンパク尿の雄ラット（ｎ＝７）に、Ｘ／５０サイトカインカクテル用量を静脈内注射し、続いてすぐに、０．９％の生理食塩水１ｍＬを腹腔内注射して、血管内水分補給を維持した。時限式尿収集（１８時間）を、１、３、５、及び７日目に行い、各動物についてタンパク尿におけるピークの増加が見られた。
【００８７】
マウスよりも約２０倍重いにもかかわらず、進行中の巣状及び分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を有するＢｕｆｆａｌｏ／Ｍｎａラットは、ベースラインからタンパク尿の有意な増加を誘発するために、ラット「サイトカインカクテル」のはるかに低い用量（Ｘ／５０）を必要とし（図６）、それにより、感冒後の疾患の悪化と類似した症状を呈した。
【００８８】
実施例２
ジンクフィンガー及びホメオボックス（ＺＨＸ）ファミリーの転写因子（ＺＨＸ１、ＺＨＸ２、及びＺＨＸ３）は、腎臓の足細胞で発現された構造的及び機能的に重要な遺伝子の大部分を調節する。ｉｎ  ｖｉｖｏでの足細胞におけるＺＨＸタンパク質の大部分は、核の外側に位置し、ヘテロ二量体またはホモ二量体（例えば、ＺＨＸ１−ＺＨＸ２またはＺＨＸ１−ＺＨＸ１）として細胞膜に連結される。ＺＨＸのヘテロ二量体化またはホモ二量体化がなくなると、核へのＺＨＸタンパク質の移入、続いて、標的遺伝子の発現の変化がもたらされる。
【００８９】
Ｚｈｘ２は、成体マウスにおけるα−フェトプロテイン発現の主要な転写抑制因子である。研究された他の２５のマウス株ではなく、Ｂａｌｂ／ｃＪマウスが、Ｚｈｘ２遺伝子の最初のイントロンにマウス内在性レトロウイルスを有し、これは、主に機能しない転写物をもたらす。これにより、成体Ｂａｌｂ／ｃＪマウスにおけるＺｈｘ２の下方制御及びα−フェトプロテインの高いタンパク質レベルがもたらされる。
【００９０】
Ｚｅｉｓｓ  Ｐａｓｃａｌ  ５共焦点レーザー顕微鏡を使用して、マウス糸球体の共焦点イメージングを実施した。全ての２次抗体を、ジャクソン研究室から購入した。公開された１次抗体は、ウサギ抗ＺＨＸ３（４４５７−２Ｂ５）を含む。以下の１次抗体を購入した：マウス抗ＷＴ１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＃ｓｃ−７３８５）、マウス抗ＺＨＸ２（Ａｂｎｏｖａ、台湾  ＃Ｈ０００２２８８２−Ａ０１）、及びウサギ抗ＺＨＸ３（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＃ｓｃ−２９２３３９）。
【００９１】
サイトカインが注射されたＢａｌｂ／ｃＪマウスは、Ｚｈｘ１の核発現が高かったが（図５Ａ）、核Ｚｈｘ３発現は、増加しなかった（図５Ｂ）。これは、サイトカイン媒介性タンパク尿が、微小変化型疾患で生じるように、主に足細胞の体表面経路を介して媒介されたことを示唆する。このパラダイムの要約が、図７に示される。
【００９２】
感冒後の原発性糸球体疾患の再発または悪化の、頻繁に観察される現象を研究するために、感冒時の血液循環中に存在するサイトカイン及び可溶性受容体のカクテルを開発した。開発された元の用量の組み合わせは、数倍に希釈し、足細胞Ｚｈｘ２欠損、Ｅｎｐｅｐ欠損、または二重欠損マウスにおいてアルブミン尿を誘導する能力を保持することができる。個々のサイトカインは、アルブミン尿を誘発せず、市販の抗体を含むカクテルから３つのサイトカインもしくは可溶性受容体（ＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、ＩＣＡＭ−１）を個々に除去しても誘発しなかった。これらの結果により、再発を止めるために、ＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦα、またはＩＣＡＭ−１に対する市販の抗体を用いる、感冒誘発性再発の影響を受けやすい個体の早期処置に関する将来の臨床研究が促進される。
【図１Ａ】
2021530553.tif 000004
【図１Ｂ】
2021530553.tif 000005
【図２Ａ】
2021530553.tif 000006
【図２Ｂ】
2021530553.tif 000007
【図３Ａ】
2021530553.tif 000008
【図３Ｂ】
2021530553.tif 000009
【図４Ａ】
2021530553.tif 000010
【図４Ｂ】
2021530553.tif 000011
【図５Ａ】
2021530553.tif 000012
【図５Ｂ】
2021530553.tif 000013
【図６】
2021530553.tif 000014
【図７】
2021530553.tif 000015
【国際調査報告】
2021530553.tif 000016