(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａ、式（ＩＩ）で表われる化合物およびその結晶形Ｂ、ならびに単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａ、式（ＩＩ）で表われる化合物およびその結晶形Ｂの使用を開示する。2021529808.tif 000017
2021529808.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｘ線粉末回折パターンが、１０．８１±０．２°、１５．９７±０．２°、２１．６９±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
【化１】
2021529808.tif 000015
式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａ。
【請求項２】
Ｘ線粉末回折パターンが、１０．８１±０．２°、１３．０３±０．２°、１５．９７±０．２°、１８．４８±０．２°、２１．６９±０．２°、２３．７８±０．２°、２５．１４±０．２°、２６．９６±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項３】
図１に示すＸＲＰＤパターンを有する、
請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項４】
示差走査熱量測定曲線が、２１６．０４±３℃に吸熱ピークの開始点を有する、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の結晶形Ａ。
【請求項５】
図２に示すＤＳＣパターンを有する、
請求項４に記載の結晶形Ａ。
【請求項６】
熱重量分析曲線が、１２０±３℃で０．４４４２％の重量損失を有し、２０４±３℃で２．４４９２％の重量損失を有する、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の結晶形Ａ。
【請求項７】
図３に示すＴＧＡパターンを有する、
請求項６に記載の結晶形Ａ。
【請求項８】
式（ＩＩ）で表われる化合物。
【化２】
2021529808.tif 000016
【請求項９】
Ｘ線粉末回折パターンが、１０．１７±０．２°、１１．８５±０．２°、１５．９４±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂ。
【請求項１０】
Ｘ線粉末回折パターンが、８．４６±０．２°、１０．１７±０．２°、１１．８５±０．２°、１３．９８±０．２°、１５．９４±０．２°、２０．３９±０．２°、２１．３２±０．２°、２３．７８±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
請求項９に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１１】
図４に示すＸＲＰＤパターンを有する、
請求項１０に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１２】
示差走査熱量測定曲線が、１８５．８９±３℃に吸熱ピークの開始点を有する、
請求項９〜１１のいずれか一項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１３】
図５に示すＤＳＣパターンを有する、
請求項１２に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１４】
熱重量分析曲線が、１８７．１６±３℃で０．７１６０％の重量損失を有する、
請求項９〜１１のいずれか一項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１５】
図６に示すＴＧＡパターンを有する、
請求項１４に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１６】
単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａの使用。
【請求項１７】
単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における、請求項８に記載の式（ＩＩ）で表われる化合物および請求項９〜１５のいずれか一項に記載の式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願への相互参照＞
本出願は、２０１８年０７月０６日に出願された、出願番号がＣＮ２０１８１０７３８９６３．Ｘである特許出願の優先権を主張する。
【０００２】
＜技術分野＞
本発明は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａ、式（ＩＩ）で表われる化合物およびその結晶形Ｂ、ならびに単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａ、式（ＩＩ）で表われる化合物およびその結晶形Ｂの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ウイルス性疾患の治療において、新しい治療法の開発が強く求められている。さまざまな細菌感染症の治療法の開発は大きく進展しているが、ウイルスの治療法として、実行可能な方法はほとんどないのが現状である。ジドブジンは、ヒト免疫不全ウイルスの治療薬として承認された主要な医薬品である。現在、ヘルペスウイルス感染症の治療において、ガンシクロビル、アシクロビル、ホスカルネットを使用している。しかし、これらの治療法は、宿主細胞のＤＮＡ複製を損傷したり、限られたウイルス感染にしか効果がないため、かなりの副作用がある。さらに、ウイルスは治療に対する耐性を示してきて、治療の効果をますます低下させる可能性があることが知られている。
【０００４】
ヘルペスウイルス科は、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）、仮性狂犬病ウイルス、および鼻気管炎ウイルスなどを含むＤＮＡウイルスのファミリーである。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａを提供する。そのＸ線粉末回折パターンは、１０．８１±０．２°、１５．９７±０．２°、２１．６９±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する。
【化１】
2021529808.tif 000003
【０００６】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＡのＸ線粉末回折パターンは、１０．８１±０．２°、１３．０３±０．２°、１５．９７±０．２°、１８．４８±０．２°、２１．６９±０．２°、２３．７８±０．２°、２５．１４±０．２°、２６．９６±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する。
【０００７】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＡのＸ線粉末回折パターンは、６．５８１°、１０．８０７°、１３．０３１°、１５．３０１°、１５．６３７°、１５．９７１°、１７．２５３°、１８．１６０°、１８．４７５°、２０．０７６°、２０．６４４°、２１．６８８°、２２．３８１°、２３．７８２°、２５．１４１°、２６．１６７°、２６．９５９°、２９．１０８°、３１．４９２°、３１．９０４°、３２．０６１°、３３．３８５°、および３６．６２３°の２θ角に特徴的回折ピークを有する。
【０００８】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＡのＸＲＰＤパターンを図１に示す。
【０００９】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＡのＸＲＰＤパターンの解析データを表１に示す。
【００１０】
表１．結晶形ＡのＸＲＰＤパターンの解析データ
【表１】
2021529808.tif 000004
【００１１】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形Ａの示差走査熱量測定曲線は、２１６．０４±３℃に吸熱ピークの開始点を有する。
【００１２】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＡのＤＳＣパターンを図２に示す。
【００１３】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形Ａの熱重量分析（ＴＧＡ）曲線は、１２０±３℃で０．４４４２％の重量損失を有し、２０４±３℃で２．４４９２％の重量損失を有する。
【００１４】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＡのＴＧＡパターンを図３に示す。
【００１５】
本発明は、式（ＩＩ）で表われる化合物を提供する。
【化２】
2021529808.tif 000005
【００１６】
本発明は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂを提供する。そのＸ線粉末回折パターンは、１０．１７±０．２°、１１．８５±０．２°、１５．９４±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する。
【００１７】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＢのＸ線粉末回折パターンは、８．４６±０．２°、１０．１７±０．２°、１１．８５±０．２°、１３．９８±０．２°、１５．９４±０．２°、２０．３９±０．２°、２１．３２±０．２°、２３．７８±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する。
【００１８】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＢのＸ線粉末回折パターンは、８．４６０°、１０．１７４°、１１．５３５°、１１．８５０°、１３．９８２°、１５．９３５°、１９．１１０°、１９．４６４°、１９．９３９°、２０．３９１°、２１．８８８°、２３．３０９°、２３．７８０°、２４．５１７°、２４．９２９°、２６．０３４°、２６．３６７°、２６．９５９°、２７．３５２°、２８．７７２°、３０．６２６°、３１．２９７°、３２．０６７°、３３．８４５°、および３８．２３５°の２θ角に特徴的回折ピークを有する。
【００１９】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＢのＸＲＰＤパターンを図４に示す。
【００２０】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＢのＸＲＰＤパターンの解析データを表２に示す。
【００２１】
表２．結晶形ＢのＸＲＰＤパターンの解析データ
【表２】
2021529808.tif 000006
【００２２】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形Ｂの示差走査熱量測定曲線は、１８５．８９±３℃に吸熱ピークの開始点を有する。
【００２３】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＢのＤＳＣパターンを図５に示す。
【００２４】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形Ｂの熱重量分析（ＴＧＡ）曲線は、１８７．１６±３℃で０．７１６０％の重量損失を有する。
【００２５】
本発明の一部の実施形態において、前記の結晶形ＢのＴＧＡパターンを図６に示す。
【００２６】
さらに、本発明は、単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における、前記の結晶形Ａの使用を提供する。
【００２７】
さらに、本発明は、単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における、前記の式（ＩＩ）で表われる化合物およびその結晶形Ｂの使用を提供する。
【発明の効果】
【００２８】
新規のチアゾール系化合物として、本発明の化合物は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に対して良好な抗ウイルス活性を有し；また、インビボでの薬物動態研究において、同じ有効量での血漿中曝露量がより低く、より優れた安全性を示した。本発明の式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａおよび式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂは、安定であり、光、熱や湿度の影響を受けにくく、且つインビボでの投与の効果が優れているため、良好なドラッガビリティを有することを示唆している。
【００２９】
定義と説明
特に断らない限り、本明細書で使用される以下の用語および語句は、以下の意味を有する。特定の用語や語句は、特定の定義がなければ、不明瞭または不明確であると見なされるべきではなく、通常の意味で理解されるべきである。本明細書に商品名が記載されている場合、対応する商品またはその有効成分を指すものである。
【００３０】
本発明の中間化合物は、以下に列挙される特定の実施形態、それらを他の化学合成方法と組み合わせることにより形成される実施形態、および当業者に周知の同等の代替方法を含む、当業者に周知の様々な合成方法によって調製することができる。好ましい実施形態は、本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
本明細書に開示される特定の実施形態における化学反応は、本発明の化学変化および必要とされる試薬や材料に適する適切な溶媒中で行う。本発明の化合物を得るために、当業者が、既存の実施形態に基づいて合成工程または反応スキームを変更または選択する必要がある場合がある。
【００３２】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、これらの実施例は、本発明を限定するものではない。
【００３３】
本発明で使用されるすべての溶媒は市販されるものであり、さらに精製することなく使用される。
【００３４】
本発明で使用される溶媒は市販されるもの。本発明は以下の略語を使用する。ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し；ＴｓＯＨはｐ−トルエンスルホン酸を表し；ｍｐは融点を表し；ＥｔＳＯ３Ｈはエタンスルホン酸を表し；ＭｅＳＯ３Ｈはメタンスルホン酸を表し；ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し；ＮＢＳはＮ−ブロモスクシンイミドを表し；ＡＩＢＮはアゾビスイソブチロニトリルを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを表し；ＥＤＣＩはカルボジイミドを表し；ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを表す。
【００３５】
本発明における粉末Ｘ線回折（Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ，ＸＲＰＤ）法
機器モデル：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８  ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回折計
試験方法：約１０〜２０ｍｇのサンプルをＸＲＰＤ分析に使用した。
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下の通りである。
ライトチューブ：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Å）
ライトチューブ電圧：４０ｋＶ、ライトチューブ電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
検出器スリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４〜４０ｄｅｇ
ステップサイズ：０．０２ｄｅｇ
ステップ長さ：０．１２秒
サンプルディスクの回転速度：１５ｒｐｍ
【００３６】
本発明における示差走査熱量測定（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ，ＤＳＣ）法
機器モデル：ＴＡ  Ｑ２０００示差走査熱量計
試験方法：サンプル（〜１ｍｇ）を採取し、ＤＳＣアルミニウムポットに入れて試験を行った。５０ｍＬ／ｍｉｎのＮ２の条件下、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で３０℃（室温）から３００℃（または３５０℃）にサンプルを加熱した。
【００３７】
本発明における熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ，ＴＧＡ）法
機器モデル：ＴＡ  Ｑ５０００ＩＲ熱重量分析器
試験方法：サンプル（２〜５ｍｇ）を採取し、ＴＧＡプラチナポットに入れて試験を行った。２５ｍＬ／ｍｉｎのＮ２の条件下、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で室温から３５０℃までまたは２０％の重量損失となるまで、サンプルを加熱した。
【００３８】
動的蒸気吸着分析（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｖａｐｏｒ  Ｓｏｒｐｔｉｏｎ，  ＤＶＳ）法
機器モデル：ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気吸着測定装置
測定条件：サンプル（１０〜１５ｍｇ）をＤＶＳサンプルパンに採取して測定した。
詳細なＤＶＳパラメータは以下の通りである。
温度：２５℃
平衡：ｄｍ／ｄｔ＝０．０１％／ｍｉｎ（最短時間：１０ｍｉｎ，最長時間：１８０ｍｉｎ）
乾燥：０％ＲＨで１２０ｍｉｎ乾燥させた。
ＲＨ（％）測定勾配：１０％
ＲＨ（％）測定勾配の範囲：０％〜９０％〜０％
吸湿性評価の分類は以下の通りである。
【表３】
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【００３９】
＊２５±１℃および８０±２％ＲＨでの吸湿による重量増加
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形ＡのＣｕ−Ｋα放射線によるＸＲＰＤパターンである。
【図２】図２は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形ＡのＤＳＣ曲線である。
【図３】図３は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形ＡのＴＧＡ曲線である。
【図４】図４は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形ＢのＣｕ−Ｋα放射線によるＸＲＰＤパターンである。
【図５】図５は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形ＢのＤＳＣ曲線である。
【図６】図６は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形ＢのＴＧＡ曲線である。
【図７】図７は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形ＢのＤＶＳ等温線である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
以下、本発明の内容をよりよく理解するために、特定の実施例によって本発明をさらに説明するが、これらの特定の実施形態は、本発明の内容を限定するものではない。
【００４２】
実施例１：式（Ｉ）で表われる化合物の調製
【化３】
2021529808.tif 000008
【化４】
2021529808.tif 000009
【００４３】
工程１：化合物２の合成
化合物１（３０．００ｇ，１６２．１１ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（４００．００ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（５７．７０ｇ，３２４．２２ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（５．３２ｇ，３２．４２ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で反応系をさらに２時間攪拌した。反応が完了した後、減圧下で濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の油状物として化合物２を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５５（ｓ，１Ｈ），７．４７−７．４５（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．２５（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｓ，２Ｈ）。
【００４４】
工程２：化合物３の合成
水素化ナトリウム（９．６０ｇ，２４０．０２ｍｍｏｌ，含有量６０％）を、エタノール（１４４．００ｍＬ）とテトラヒドロフラン（４３２．００ｍＬ）の溶液にゆっくり加え、室温で５分間攪拌した後、この系に、マロン酸ジエチル（１８．２２ｇ，１１３．７５ｍｍｏｌ）および化合物２（３９．００ｇ，１１３．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で反応系を３０分間攪拌した。反応が完了した後、水でクエンチし、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の油状物として化合物３を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．３６（ｓ，１Ｈ），７．３４−７．３２（ｍ，１Ｈ），７．２２−７．１２（ｍ，１Ｈ），４．１３（ｑ，Ｊ１＝１４．０Ｈｚ，Ｊ２＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），１．１８−１．１４（ｍ，８Ｈ）。
【００４５】
工程３：化合物４の合成
化合物３（１０．００ｇ，２９．３１ｍｍｏｌ）の水（１０．００ｍＬ）とＤＭＳＯ（１００．００ｍＬ）の溶液に、塩化リチウム（７．４５ｇ，１７５．８６ｍｍｏｌ）を加え、１６０℃で反応系を４時間攪拌した。反応が完了した後、１００ｍＬの水を添加し、系に対して酢酸エチル（５０ｍＬ×５）で抽出を行い、炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ×２）で有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）によって精製して、黄色の油状物として化合物４を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．４０（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４２−３．３５（ｍ，１Ｈ），３．１６−３．０４（ｍ，４Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【００４６】
工程４：化合物５の合成
化合物４（３．５０ｇ，１３．００ｍｍｏｌ）およびトリブチル（ピリジン−２−イル）スタンナン（７．１８ｇ，１９．５０ｍｍｏｌ）のトルエン（５０．００ｍＬ）溶液を、窒素ガスで３回置換した後、反応液にテトラ（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（９０１．６７ｍｇ，７８０．００μｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下、１１０℃で反応系を５時間攪拌した。反応が完了した後、減圧下で濃縮した。残留物を分取クロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）により精製して、淡黄色の固体として化合物５を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．６２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９２−７．８１（ｍ，４Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ１＝１８．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４０−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．２１−３．１５（ｍ，４Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００４７】
工程５：化合物６の合成
２０℃で、化合物５（２．００ｇ，７．４８ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）と水（５ｍＬ）との混合溶液に、水酸化ナトリウム（１．５０ｇ，３７．４１ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で反応系を３０分間攪拌した。反応が完了した後、反応液を濃縮乾固させた。固体を２０ｍＬの水に溶解させ、ｐＨ４〜６に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。無水硫酸ナトリウムで有機相を乾燥させ、濾過し、濃縮し、淡黄色の油状物として化合物６を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．６３（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９４−７．８３（ｍ，３Ｈ），７．３４−７．３１（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．００（ｍ，１Ｈ），３．２２−３．１６（ｍ，４Ｈ）。
【００４８】
工程６：化合物８の合成
化合物６（２００．００ｍｇ，８３５．８８μｍｏｌ）および化合物７（２０７．９０ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．００ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（１９２．２９ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１３５．５３ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で反応系を６時間攪拌した。反応が完了した後、減圧下で濃縮し、反応液を濃縮乾固させ、残留物を分取クロマトグラフィーにより精製して、白色の固体として化合物８を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  ８．７０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），（ｓ，１Ｈ），７．８１−７．７１（ｍ，３Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．２５（ｍ，１Ｈ），（ｓ，２Ｈ），３．９１−３．８３（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．３５（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ）。
【００４９】
工程７：化合物（Ｉ）の調製
化合物８（６９０．００ｍｇ，１．６１ｍｍｏｌ）を超臨界流体クロマトグラフィー（装置：ＳＦＣ−１０；キラルカラム：ＡＤ（２５０ｍｍ＊５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相：超臨界ＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）＝５５／４５，流量１８０ｍＬ／ｍｉｎ；カラム温度：３８  ℃）によりキラル分離し、回転異性体化合物（Ｉ）を得た。保持時間は約１．７ｍｉｎである。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．６２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），（ｍ，４Ｈ），７．６３（ｓ，２Ｈ），７．３４−７．２９（ｍ，２Ｈ），４．０９−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），（ｍ，４Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ）。
【００５０】
実施例２：式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａの調製
式（Ｉ）で表われる化合物約２０ｇを秤量し、８００ｍＬのエタノールに加え、マグネチックスターラーで一晩撹拌した。混合物を濾過し、少量のエタノールでフィルターケーキをすすぎ、得られた固体を減圧下で乾燥させた。ＸＲＰＤ測定は、式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａが得られたことを示した。
【００５１】
実施例３：式（ＩＩ）で表われる結晶形Ｂの調製
【化５】
2021529808.tif 000010
【００５２】
式（Ｉ）で表われる化合物（５６．５ｇ，１３１．８５ｍｍｏｌ）を秤量し、３Ｌの丸底フラスコに加え、無水テトラヒドロフラン２Ｌを添加し、５０〜５５℃に加熱し、完全に溶解させた。濾過し、５５℃濾液に、５０ｍＬの無水テトラヒドロフランで希釈したメタンスルホン酸（１２．６７ｇ，１３１．８５ｍｍｏｌ）を滴下し、固体を析出させ、さらに２時間攪拌した。濾過し、濾液を減圧下で乾燥させ、得られた固体を丸底フラスコに加え、無水エタノール１Ｌを添加し、４０℃に加熱し、１４時間攪拌した。濾過し、フィルターケーキを真空下で乾燥させた。ＸＲＰＤ測定は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂが得られたことを示した。
【００５３】
実施例４：式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂの吸湿性に関する研究
実験材料：
ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気吸着測定装置
実験法：
１０〜１５ｍｇの式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形ＢをＤＶＳサンプルパンに取り、測定を行った。
実験結果：
式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形ＢのＤＶＳスペクトルを図７に示した。ΔＷ＝１．１５８％である。
実験の結論：
式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂは、２５℃および８０％ＲＨでの吸湿による重量増加が１．１５８％であり、わずかな吸湿性を有する。
【００５４】
実験例１：単純ヘルペスウイルス１型による細胞変性効果の実験（インビトロでの評価）
実験の目的：
細胞変性効果（ＣＰＥ）の実験により、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）のＧＨＳＶ−ＵＬ４６株に対する化合物の抗ウイルス活性を測定した。
実験装置：
細胞インキュベーター：Ｔｈｅｒｍｏ  ２４０Ｉ
細胞計数装置：Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｖｉ−ＣｅｌｌＴＭ  ＸＲ
自動ディスペンサー：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ
化合物の液体移送システム：Ｌａｂｃｙｔｅ  ＥＣＨＯ  ５５５  ｌｉｑｕｉｄ  ｈａｎｄｌｅｒ
マイクロプレートリーダー：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ３４０ＰＣ３８４。
【００５５】
実験材料：
ウイルス：ＨＳＶ−１  ＧＨＳＶ−ＵＬ４６，ＡＴＣＣ＃ＶＲ−１５４４
細胞：中国科学院武漢ウイルス研究所から寄贈されたアフリカミドリザル腎臓細胞Ｖｅｒｏ  Ｅ６。
【００５６】
実験試薬：
【表４】
2021529808.tif 000011
【００５７】
培地の調製方法：
細胞増殖用培地：５００ｍｌのＤＭＥＭ培地＋５０ｍｌのウシ胎児血清＋５ｍｌ抗生物質（２種類）＋５ｍＬの非必須アミノ酸。
細胞変性効果の実験用培地：５００ｍＬのＤＭＥＭ培地＋１０ｍＬのウシ胎児血清＋５ｍＬ抗生物質（２種類）＋５ｍＬの非必須アミノ酸。
【００５８】
実験の手順：
１．細胞プレーティング（１日目）
１．１．生物学的安全キャビネットの作業面を７５％のアルコールで拭い、安全キャビネットに紫外線を１５分間照射した。ファンがオンになったまま、ガラス窓を警告線の下端まで引き寄せ、キャビネット内の空気の流れを安定させるように５分間維持した。
１．２．細胞密度が８０％になるＶｅｒｏ  Ｅ６細胞のフラスコ（Ｔ１５０細胞培養フラスコ）を取り出した。細胞増殖用培地を吸出し、１０ｍｌのリン酸塩緩衝液で細胞を２回洗浄した。２ｍｌのトリプシンを加え、３７℃のＣＯ２インキュベーターに入れて細胞を消化した。
１．３．細胞を分離して脱落させた後、細胞変性効果の実験用培地１５ｍｌを加えて消化を停止させた。細胞を数回ピペッティングして、１ｍｌの細胞懸濁液を取り、細胞計数装置で計数した。
１．４．細胞変性効果の実験用培地で細胞を１．３３×１０５細胞／ｍｌに希釈した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐにより、希釈した細胞懸濁液を、ウェルあたり３０μｌ（４０００細胞）で３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３７０１）に添加した。
１．５．細胞プレートの周囲を少し振って細胞を均一に分散させた後、細胞プレートを３７℃のＣＯ２細胞インキュベーターに入れ、一晩インキュベートした。
【００５９】
２．化合物の希釈、処理、およびウイルス接種（２日目）
２．１．ＤＭＳＯで化合物を勾配希釈し、希釈した化合物をＥＣＨＯプレートに加えた。
２．２．細胞を播種した３８４ウェルプレートに、ＥＣＨＯ  ５５５  ｌｉｑｕｉｄ  ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎで化合物を添加した。各試験化合物は、８つの濃度で２回測定された。細胞対照ウェルについては、化合物およびウイルスを添加しなかった。ウイルス対照ウェルについては、化合物を追加しなかった。すべてのウェルのＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。
２．３．実験用培地でウイルスを希釈し、１．５ＴＣＩＤ９０／ウェル、３０μｌで接種した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐにより、細胞対照ウェルに、ウェルあたり３０μｌで実験用培地を加えた。次に、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐにより、化合物試験ウェルおよびウイルス対照ウェルに、ウェルあたり３０μｌで希釈したウイルスを加えた。
２．４．細胞プレートを３７℃のＣＯ２細胞インキュベーターに入れ、５日間インキュベートした。
【００６０】
３．細胞の生存率（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）の測定（７日目）
３．１．  ５日間培養した後、細胞プレートのすべてのウェルにおける細胞変性効果を観察したところ、対照ウェルの細胞は変性しなかったが、ウイルス対照ウェルの細胞はほとんど変性した。
３．２．Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐにより、細胞プレートに、ウェルあたり６μｌでＣＣＫ８を加えた。
３．３．細胞プレートを３７℃のＣＯ２細胞インキュベーターに入れ、３時間インキュベートした。
細胞プレートを３７℃のＣＯ２細胞インキュベーターに入れ、５日間インキュベートした。
３．４．マイクロプレートリーダーにより、４５０ｎｍの波長で細胞プレートの各ウェルの吸光度値を読み取り、また、６３０ｎｍを参照波長として使用した。生データの値は、４５０ｎｍにおける吸光度から６３０ｎｍにおける吸光度を引いた値（生データ＝ＯＤ４５０−ＯＤ６３０）とした。
【００６１】
４．データ分析
４．１．試験化合物の抗ウイルス活性（％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）は、以下の式で計算した。
【数１】
2021529808.tif 000012
ここで、Ｓａｍｐｌｅは化合物試験ウェルの吸光度値、ｃｅｌｌ  ｃｏｎｔｒｏｌは細胞対照ウェルの吸光度の平均値、ｖｉｒｕｓ  ｃｏｎｔｒｏｌはウイルス対照ウェルの吸光度の平均値である。
４．２．ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して用量−反応曲線をプロットし、試験化合物の半数効果濃度（ＥＣ５０）を得た。
【００６２】
５．実験の結果を表３に示す。
表３．ＨＳＶ−１細胞変性効果の実験結果
【表５】
2021529808.tif 000013
【００６３】
６．結論：本発明の化合物は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に対して良好な抗ウイルス活性を有する。
【００６４】
実験例２：化合物の薬物動態の評価
実験目的：マウスにおける化合物のインビボでの薬物動態を試験する
実験材料：
Ｂａｌｂ／ｃマウス（オス、１８−２２ｇ、６〜８週齢、Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＳＬＡＣ社）
実験の手順：
げっ歯類への静脈内注射および経口投与後の化合物の薬物動態特徴を、標準プロトコルで測定した。候補化合物を、対応する溶液に調製し、単回静脈内注射（１．０ｍｇ／ｋｇ、５％のＤＭＳＯ／９５％の２０％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）または胃内投与（１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５％のメチルセルロースＭＣ４０００）によって投与した。２４時間以内の全血サンプルを採取し、３０００ｇで１５分間遠心分離し、上澄みを分離して血漿サンプルを得た。内部標準を含む４倍量のアセトニトリル溶液を添加して、タンパク質を沈殿させた。得られた混合物を遠心分離し、上澄みを取り出し、それに等量の水を添加して、さらに遠心分離した。上澄みを取り出し、サンプルとして注入し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析法により血漿中薬物濃度を定量的に分析し、ピーク濃度、ピーク時間、クリアランス率、半減期、薬物−時間曲線下面積、バイオアベイラビリティなどの薬物動態パラメータを算出した。
【００６５】
実験の結果を表４に示す。
表４．薬物動態の実験結果
【表６】
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結論：マウスにおける胃内投与のインビボでの薬物動態の研究において、本発明の化合物は、同じ有効量での血漿中曝露量がより低く、より優れた安全性を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年3月23日(2021.3.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｘ線粉末回折パターンが、１０．８１±０．２°、１５．９７±０．２°、２１．６９±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
【化１】
2021529808.tif 000025
式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａ。
【請求項２】
Ｘ線粉末回折パターンが、１０．８１±０．２°、１３．０３±０．２°、１５．９７±０．２°、１８．４８±０．２°、２１．６９±０．２°、２３．７８±０．２°、２５．１４±０．２°、２６．９６±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項３】
図１に示すＸＲＰＤパターンを有する、
請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項４】
示差走査熱量測定曲線が、２１６．０４±３℃に吸熱ピークの開始点を有する、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の結晶形Ａ。
【請求項５】
図２に示すＤＳＣパターンを有する、
請求項４に記載の結晶形Ａ。
【請求項６】
熱重量分析曲線が、１２０±３℃で０．４４４２％の重量損失を有し、２０４±３℃で２．４４９２％の重量損失を有する、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の結晶形Ａ。
【請求項７】
図３に示すＴＧＡパターンを有する、
請求項６に記載の結晶形Ａ。
【請求項８】
式（ＩＩ）で表われる化合物。
【化２】
2021529808.tif 000026
【請求項９】
Ｘ線粉末回折パターンが、１０．１７±０．２°、１１．８５±０．２°、１５．９４±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂ。
【化３】
2021529808.tif 000027
【請求項１０】
Ｘ線粉末回折パターンが、８．４６±０．２°、１０．１７±０．２°、１１．８５±０．２°、１３．９８±０．２°、１５．９４±０．２°、２０．３９±０．２°、２１．３２±０．２°、２３．７８±０．２°の２θ角に特徴的回折ピークを有する、
請求項９に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１１】
図４に示すＸＲＰＤパターンを有する、
請求項１０に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１２】
示差走査熱量測定曲線が、１８５．８９±３℃に吸熱ピークの開始点を有する、
請求項９〜１１のいずれか一項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１３】
図５に示すＤＳＣパターンを有する、
請求項１２に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１４】
熱重量分析曲線が、１８７．１６±３℃で０．７１６０％の重量損失を有する、
請求項９〜１３のいずれか一項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１５】
図６に示すＴＧＡパターンを有する、
請求項１４に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１６】
単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）で表われる化合物の結晶形Ａの使用。
【請求項１７】
単純ヘルペスウイルス関連疾患の治療のための医薬品の調製における、請求項８に記載の式（ＩＩ）で表われる化合物および請求項９〜１５のいずれか一項に記載の式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂの使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
工程６：化合物８の合成
化合物６（２００．００ｍｇ，８３５．８８μｍｏｌ）および化合物７（２０７．９０ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．００ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（１９２．２９ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１３５．５３ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で反応系を６時間攪拌した。反応が完了した後、減圧下で反応液を濃縮乾固させ、残留物を分取クロマトグラフィーにより精製して、白色の固体として化合物８を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  ８．７０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），（ｓ，１Ｈ），７．８１−７．７１（ｍ，３Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．２５（ｍ，１Ｈ），（ｓ，２Ｈ），３．９１−３．８３（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．３５（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
工程７：化合物（Ｉ）の調製
化合物８（６９０．００ｍｇ，１．６１ｍｍｏｌ）を超臨界流体クロマトグラフィー（装置：ＳＦＣ−１０；キラルカラム：ＡＤ（２５０ｍｍ＊５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相：超臨界ＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）＝５５／４５，流量１８０ｍＬ／ｍｉｎ；カラム温度：３８  ℃）によりキラル分離し、化合物（Ｉ）を得た。保持時間は約１．７ｍｉｎである。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．６２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），（ｍ，４Ｈ），７．６３（ｓ，２Ｈ），７．３４−７．２９（ｍ，２Ｈ），４．０９−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），（ｍ，４Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
式（Ｉ）で表われる化合物（５６．５ｇ，１３１．８５ｍｍｏｌ）を秤量し、３Ｌの丸底フラスコに加え、無水テトラヒドロフラン２Ｌを添加し、５０〜５５℃に加熱し、完全に溶解させた。濾過し、５５℃濾液に、５０ｍＬの無水テトラヒドロフランで希釈したメタンスルホン酸（１２．６７ｇ，１３１．８５ｍｍｏｌ）を滴下し、固体を析出させ、さらに２時間攪拌した。濾過し、フィルターケーキを減圧下で乾燥させ、得られた固体を丸底フラスコに加え、無水エタノール１Ｌを添加し、４０℃に加熱し、１４時間攪拌した。濾過し、フィルターケーキを真空下で乾燥させた。ＸＲＰＤ測定は、式（ＩＩ）で表われる化合物の結晶形Ｂが得られたことを示した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2021529808.tif 000034
【国際調査報告】
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2021529808.tif 000036
2021529808.tif 000037
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