(57)【要約】  本発明は、腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス及びこれを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物；及び新規なラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株及びこれらを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物を提供する。前記新規なプロバイオティクス、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株、及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株は、優れるインドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を示す。
2021505211.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記方法で嬰児の糞便から分離された菌株を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス：
（ａ）生後１２ヶ月以下の嬰児の糞便を滅菌水で希釈してＭＲＳ培地に接種して培養する段階；
（ｂ）前記ＭＲＳ培地で生成された乳白色の単一コロニーを継代培養する段階；及び
（ｃ）前記（ｂ）段階で継代培養されたコロニーから乳酸菌を選別して得る段階。
【請求項２】
前記プロバイオティクスは、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）の中で選択される１種以上を含むことを特徴とする請求項１に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス。
【請求項３】
前記プロバイオティクスは、１×１０１〜１×１０１５ＣＦＵ／ｇの生菌含量を有することを特徴とする請求項１に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス。
【請求項４】
請求項１ないし請求項３のいずれか一項に記載のプロバイオティクス；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項５】
前記組成物は、薬剤学的組成物または食品組成物であることを特徴とする請求項４に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項６】
前記薬剤学的組成物は、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、リモナーデ剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質または硬質ゼラチンカプセルの中で選択されるいずれか一つであることを特徴とする請求項５に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項７】
ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）。
【請求項８】
前記菌株は、インドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を有することを特徴とする請求項７に記載のラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）。
【請求項９】
請求項７に記載の菌株；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、薬剤学的組成物または食品組成物であることを特徴とする請求項９に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項１１】
前記薬剤学的組成物は、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、リモナーデ剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質または硬質ゼラチンカプセルの中で選択されるいずれか一つであることを特徴とする請求項１０に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項１２】
ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）。
【請求項１３】
前記菌株は、インドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を有することを特徴とする請求項１２に記載のラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）。
【請求項１４】
請求項１２に記載の菌株；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項１５】
前記組成物は、薬剤学的組成物または食品組成物であることを特徴とする請求項１４に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【請求項１６】
前記薬剤学的組成物は、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、リモナーデ剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質または硬質ゼラチンカプセルの中で選択されるいずれか一つであることを特徴とする請求項１５に記載の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１２月１５日付韓国特許出願第１０‐２０１７‐０１７３５９０号に基づく優先権の利益を主張し、該当韓国特許出願の文献に開示されている全ての内容は本明細書の一部として含む。
【０００２】
本発明は、腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス及びこれを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物；及び新規なラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株及びこれらを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
年寄り人口の増加によって成人病である糖尿病及び高血圧患者が増加する成り行きである。このような糖尿病及び高血圧は、慢性腎不全を起こす最もありがちな原因で、これによる慢性腎不全患者の数も急増している。
【０００４】
慢性腎臓疾患は世界的に有病率が増加していて、アメリカの有病率は１４％、中国の有病率は１０％に達する非常に深刻な疾病として知られている。国内慢性腎臓疾患の患者数は約１７万人で（２０１５年）、２００８年に比べて１０７％増加したと報告され、２０１５年基準で慢性腎臓疾患関連患者の医療費も約１兆５６００億に達すると報告されている。
【０００５】
慢性腎臓疾患は根本的な治療方法がない非可逆的疾病で、慢性腎臓患者の９０％は末期腎不全に進行される。末期腎不全は新代替療法として血液透析、腹膜透析及び腎臓移植を行う。よって、初期症状の時に腎不全の進行を抑制することが重要であるため、有効な腎臓疾患進行抑制剤、腎臓疾患予防物質が要望されている。
【０００６】
腎不全患者の体内では、腎不全進行因子や血管障害因子になる尿毒物質のインドキシル硫酸とパラクレゾールの血中濃度が高く、新機能障害の指標であるクレアチニンの血中濃度、中性脂肪値が高くなることが一般的に知られている。
【０００７】
この中でも、特にインドキシル硫酸とパラクレゾールは腎不全進行因子として証明された尿毒物質で報告されていて、慢性腎不全患者の血中インドキシル硫酸濃度は健康な人の血中インドキシル硫酸濃度と比べて非常に高い。
【０００８】
インドキシル硫酸は、前述したように腎臓疾患を進行及び悪化させ、心血管疾患、糸救体硬化を誘発する物質である点で、腎不全患者の血中インドキシル硫酸濃度を低下させることで、腎臓機能の障害が顕著に低減し、腎不全の進行を抑制することができると考えられている。一方、インドキシル硫酸とパラクレゾールのような尿毒物質は、タンパク質との結合力が高くて前記新代替療法によっても取り除くことができない物質である。
【０００９】
そのため、従来の腎不全進行抑制剤として球形吸着炭が腸管内でインドキシル硫酸の前駆体であるインドールを吸着して糞便中に排泄させることで、血中インドキシル硫酸濃度を低下すると知られている。その結果、腎不全の進行を抑制すること以外、腎不全に係わる心血管疾患の発病による死亡率も下げるという報告がされている。
【００１０】
しかし、球形吸着炭は１日６ｇ、３０カプセルに達する量を服用しなければならないため、内服に負担がかかるだけでなく、副作用として腹部膨満感、便秘などの症状がひどくて、長期にわたる内服によって非常に大きい苦痛を伴うので、服薬の中止を希望する患者も多く確認されている。
【００１１】
そのため、より少ない投与量で、再び腹部膨満や便秘を起こさないなど、患者の苦痛や負担を軽減する新しい薬剤が要求されている。
【００１２】
また、慢性腎不全患者は、リンの排出能力が減少し、血液内のリンが大きく増加する現象によって高リン酸血症が発病する。血液内のリンが増加すれば、相対的にカルシウムとリンの割合を維持するために、副甲状線を刺激して副甲状線ホルモンを分泌させ、これは骨からカルシウムが出るようにする。この現象が維持されると、もっと多くのカルシウムが骨から出るようになって骨が弱くなり、骨粗鬆症を伴う腎性骨粗鬆症へと生き方の質が急激に落ちる。よって、慢性腎不全患者にとって血液内のリン濃度を管理することは、生き方の質に直結され、疾患の初期から管理が要される。
【００１３】
健康な人の血液内のリン濃度の基準は５．５ｍｇ／ｄＬ以下であり、殆どの慢性腎不全患者はリンの含有量が低い食べ物を食べるように教育を受け、さらに食べ物の中のリンが身体の中に吸収されることを防ぐため、食事中にリン結合剤を服用する。しかし、全体血液透析患者の４０〜５０％の患者が目標とした血中リン濃度を達成したと報告されたほど、血中リン濃度の調節は容易ではないことが現実である。
【００１４】
一方、血中のリン増加を治療するための薬物としては、カルシウムに基づくリン結合剤、前記リン結合剤を代替する形態の薬物などがある。リン結合剤は、場内で食べ物の中のリンと結合して大便で排出されることによって血中リン濃度の上昇を抑制する薬物としてリンの血中濃度を制御するが、カルシウムの血中濃度を増加させ、消化不良及び便秘の副作用を引き起こし、値段が高いという短所がある。
【００１５】
前記リン結合剤を代替する形態の薬物としては、リンを吸収する菌株を利用するプロバイオティクス基盤の薬物が紹介されている。しかし、尿毒物質を取り除くプロバイオティクスの研究は微々たるものであり、腎臓疾患の進行抑制及び予防においては、尿毒物質の管理が最も重要である。今まで紹介されたプロバイオティクス基盤の薬物は、従来の他の薬物を代替することができるほどの効果及び安全性に対する信頼度が足りない状態である。
【００１６】
そのため、既存の副作用が大きい球形吸着炭を代替することができて、体内の尿毒物質を除去、及びリンを排出する安全且つ効果的な方法の開発を急ぐ実情である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】韓国登録特許第１０‐１６８４２８９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、従来技術の前記のような問題点を解決するために案出されたものであって、消化不良及び便秘などの副作用から自由であり、インドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能などに優れ、人体に安全な腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス及びこれを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物；及び新規なラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株及びこれらを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
前記課題を解決するために、本発明は、
下記方法で嬰児の糞便から分離された菌株を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクスを提供する：
（ａ）生後１２ヶ月以下の嬰児の糞便を滅菌水で希釈してＭＲＳ培地に接種して培養する段階；
（ｂ）前記ＭＲＳ培地で生成された乳白色の単一コロニーを継代培養する段階；及び
（ｃ）前記（ｂ）段階で継代培養されたコロニーから乳酸菌を選別して得る段階。
【００２０】
前記プロバイオティクスは、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）の中で選択される１種以上を含む特徴を有する。
【００２１】
また、本発明は、
前記プロバイオティクス；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物を提供する。
【００２２】
また、本発明は、
ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）を提供する。
【００２３】
前記菌株は、優れるインドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を示す特徴を有する。
【００２４】
また、本発明は、
前記ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物を提供する。
【００２５】
また、本発明は、
ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）を提供する。
【００２６】
前記菌株は、優れるインドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を示す特徴を有する。
【００２７】
また、本発明は、
前記ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物を提供する。
【００２８】
また、本発明は、
動物に前記プロバイオティクス、または前記プロバイオティクス及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上を含む薬剤学的組成物；
前記ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）または前記ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上を含む薬剤学的組成物；または
前記ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）、または前記ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上を含む薬剤学的組成物；を有効量で投与することを含む腎臓疾患がある動物を治療する方法を提供する。
【発明の効果】
【００２９】
本発明の腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクスは、消化不良及び便秘などの副作用から自由であり、インドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能などに優れ、人体に安全なので、腎臓疾患進行抑制及び予防にとても優れる効果を提供する。
【００３０】
また、本発明の新規なラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株は、消化不良及び便秘などの副作用から自由であり、インドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能などに優れ、人体に安全なので、腎臓疾患進行抑制及び予防にとても優れる効果を提供する。
【００３１】
また、前記プロバイオティクス、新規なラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株またはラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株を含む本発明の腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物は、消化不良及び便秘などの副作用から自由であり、インドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能などに優れ、人体に安全なので、腎臓疾患進行抑制及び予防にとても優れる効果を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】試験例３で実施されたラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（Ｂ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（Ｃ）のリン吸収テストの結果を撮影して示す写真である。
【図２】試験例４でラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の菌株別の１時間当りリン吸収率を測定して示すグラフである。
【図３】試験例４でラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株を９時間培養しながらリン吸収率を測定して示すグラフである。
【図４】試験例４でラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株を９時間培養しながらリン吸収率を測定して示すグラフである。
【図５】試験例５で急性腎臓疾患モデルであるシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）腹腔投与雄鼠（ＳＤ ｒａｔ）を利用して、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株、及びこれらの混合物であるインドキシル硫酸抑制効能を評価した結果を示すグラフである。
【図６】試験例６で急性腎臓疾患モデルであるシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）腹腔投与雄鼠（ＳＤ ｒａｔ）を利用して、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の腎臓保護効能を評価した結果を示すグラフである。
【図７】試験例６で急性腎臓疾患モデルであるシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）腹腔投与雄鼠（ＳＤ ｒａｔ）を利用して、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の腎臓保護効能を評価した結果を示すグラフである。
【図８】試験例６で急性腎臓疾患モデルであるシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）腹腔投与雄鼠（ＳＤ ｒａｔ）を利用して、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の投与による短鎖脂肪酸の体内での変化を糞便を利用して確認した結果を示すグラフである。
【図９】ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の投与による短鎖脂肪酸量の変化（試験例６）がＢＰ１２１投与効果であるか否かを検証するために、試験例７でラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の単一培養を通じて、時間による短鎖脂肪酸量を測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００３４】
本発明で使われる全ての技術用語は、別に定義されない限り、本発明の関連分野で通常の当業者が一般的に理解するものと同一な意味で使われる。また、本明細書では、好ましい方法や試料が記載されるが、これと類似したり、同等なものなども本発明の範疇に含まれる。本明細書に参考文献として記載される全ての刊行物の内容は、全体が本明細書に参考として統合される。
【００３５】
本発明は、下記の方法で人の糞便、好ましくは嬰児の糞便から分離された菌株を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクスに関する：
（ａ）生後１２ヶ月以下の嬰児の糞便を滅菌水で希釈してＭＲＳ培地に接種して培養する段階；
（ｂ）前記ＭＲＳ培地で生成された乳白色の単一コロニーを継代培養する段階；及び
（ｃ）前記（ｂ）段階で継代培養されたコロニーから乳酸菌を選別して得る段階。
【００３６】
前記プロバイオティクスは、下記表１に示すように、１５種の菌株を含む。
【表１】
2021505211.tif 000003
【００３７】
前記菌株は、本発明のプロバイオティクスを１６ｓ ｒＲＮＡ分析によって同定したものである。
【００３８】
特に、前記プロバイオティクスは、受託番号ＫＣＣＭ１２１６９Ｐで寄託されたラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及び受託番号ＫＣＣＭ１２１７０Ｐで寄託されたラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）を含む特徴を有する。
【００３９】
前記新規な菌株であるラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株は、前記名称で名付けて２０１７年１１月１６日に韓国微生物保存センターに寄託した。受託番号はＫＣＣＭ１２１６９Ｐ、ＫＣＣＭ１２１７０Ｐである。
【００４０】
前記１５種それぞれの菌株は、いずれもインドキシル硫酸除去及びパラクレゾール除去において優れる効果を示す。特に、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株は、インドキシル硫酸除去及びパラクレゾール除去においてとても優れる効果を示し、リン吸収率においてもとても優れる効果を示す。
【００４１】
本発明のプロバイオティクスは、１×１０１〜１×１０１５ＣＦＵ／ｇの生菌含量を有するものが使われることができるが、これに限定されることではない。
【００４２】
また、本発明は、前記プロバイオティクス；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物に関する。
【００４３】
前記腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物は、薬剤学的組成物または食品組成物であってもよい。
【００４４】
前記薬剤学的組成物は、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、リモナーデ剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質または硬質ゼラチンカプセルであってもよい。
【００４５】
前記食品組成物の種類は、特に限定されず、一般的な食品組成物だけでなく、健康機能性食品組成物も含む。
【００４６】
また、本発明は、受託番号ＫＣＣＭ１２１６９Ｐで寄託されたラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株に関する。
【００４７】
前記菌株は、優れるインドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を有する。
【００４８】
また、本発明は、前記ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物に関する。
【００４９】
前記腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物は、薬剤学的組成物または食品組成物であってもよい。
【００５０】
前記薬剤学的組成物は、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、リモナーデ剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質または硬質ゼラチンカプセルであってもよい。
【００５１】
前記食品組成物の種類は、特に限定されず、一般的な食品組成物だけでなく、健康機能性食品組成物も含む。
【００５２】
また、本発明は、受託番号ＫＣＣＭ１２１７０Ｐで寄託されたラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株に関する。
【００５３】
前記菌株は、優れるインドキシル硫酸除去能、パラクレゾール除去能及びリン吸収能を有する。
【００５４】
また、本発明は、前記ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株；及びその培養物、濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、液状物、希釈物及び破砕物の中で選択される１種以上；の中で選択される１種以上を含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物に関する。
【００５５】
前記腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物は、薬剤学的組成物または食品組成物であってもよい。
【００５６】
前記薬剤学的組成物の形態は、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、リモナーデ剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質または硬質ゼラチンカプセルであってもよいが、これらに限定されることではない。
【００５７】
前記食品組成物の種類は、特に限定されず、一般的な食品組成物だけでなく、健康機能性食品組成物も含む。
【００５８】
本発明において、前述された薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体をさらに含むことができる。本発明の薬剤学的組成物に含まれる薬剤学的に許容される担体は、精製時に通常利用されるものであって、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微小結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルなどを含むが、これに限定されることではない。
【００５９】
本発明の薬剤学的組成物は、前記成分以外に滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などをさらに含むことができる。
【００６０】
本発明の薬剤学的組成物は、経口または非経口投与ができる。
【００６１】
本発明の薬剤学的組成物は、当該発明が属する技術分野で通常の知識を有する者が容易に実施することができる方法によって、薬剤学的に許容される担体及び／または賦形剤を利用して精製化することで、単位用量の形態で製造されたり、または多用量容器内に入れて製造されることができる。
【００６２】
本発明において、前述された食品組成物は、有効成分以外に、食品製造時に通常添加される成分を含むことができ、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤、甘味剤及び香味剤を含むことができるが、これに限定されることではない。前記炭水化物の例では、モノサッカライド、例えば、葡萄糖、果糖など；ジサッカライド、例えば、マルトース、スクロース、オリゴ糖など；及びポリサッカライド、例えば、デキストリン、シクロデキストリンなど；のような通常の糖及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールを挙げることができる。前記甘味剤では、天然甘味剤（ソーマチン、ステビア抽出物、レバウジオシドＡ、グリシリジンなど）及び合成甘味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を使うことができる。
【００６３】
前記食品組成物の例では、患者栄養食、肉類、穀類、カフェイン飲料、一般飲料、乳製品、チョコレート、パン類、スナック類、お菓子類、ピザ、ゼリー、麺類、ガム類、アイスクリーム類、アルコール性飲料、お酒、ビタミン複合剤、その他の健康補助食品類などを挙げることができるが、これらに限定されることではない。前記のような食品組成物の形態で製造される場合、血液内の尿毒物質増加及び血中リン濃度増加による疾病を病んでいる患者が楽で容易に服用することができて好ましい。
【００６４】
本発明において、前記プロバイオティクス、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株、及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の投与量は、投与方法、服用者の年齢、性別、体重及び疾患の重度などを考慮して決めた方がよい。
【００６５】
一例として、前記プロバイオティクス、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株、及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株は、１日１×１０１〜１×１０１５ＣＦＵ／ｇの生菌含量を１回以上投与することができる。
【００６６】
また、前記成分を含む薬剤学的組成物または食品組成物は、有効成分を基準とした時、１日１×１０１〜１×１０１５ＣＦＵ／ｇの生菌含量を１回以上投与することができる。
【００６７】
しかし、前記投与量は一例に過ぎず、服用者の状態によって医者の処方によって変化されることができる。
【実施例】
【００６８】
以下、本発明を下記実施例に基づいて詳細に説明する。ただし、下記実施例は本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれに限定されることではない。
【００６９】
実施例１：プロバイオティクスの分離
１ヶ月になった嬰児の糞便を滅菌水で１０段階ずつ希釈し、平板希釈法（Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｐｌａｔｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）で菌株を分離した。希釈した糞便サンプルをＭＲＳ培地（ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈ  ａｇａｒ；ＢＤ Ｄｉｆｃｏ）に塗抹接種した後、３７℃で７２時間嫌気培養した。ＭＲＳ ａｇａｒ ｐｌａｔｅで表れた乳白色の単一コロニーを継代培養して本発明のプロバイオティクスを純粋分離した。
【００７０】
実施例２：プロバイオティクスに含まれた菌株の同定
前記実施例１で純粋分離された菌株に対し、染色体ＤＮＡ抽出及び錠剤を行った。２つのユニバーサルプライマー（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｐｒｉｍｅｒｓ）である２７Ｆ（５'‐AGAGTTTGATCMTGGCTCAG‐３'）及び１４９２Ｒ（５'‐TACGGYTACCTTGTTACGACTT‐３'）を使って、１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を増幅した後、増幅された１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のシークエンシングを分析した。分析した１６ｓ ｒＲＮＡシーケンスデータとＥｚＴａｘｏｎ  ｓｅｒｖｅｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｚｂｉｏｃｌｏｕｄ．ｎｅｔ）を利用してＧＲＡＳ（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ａｓ  Ｓａｆｅ）に該当する１５種の菌株のみを選別して下記表２に示す。
【表２】
2021505211.tif 000004
【００７１】
ＢＰ１０５‐Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  １６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列の分析結果は次のとおりであった：
＜１６Ｓ ｒＲＮＡ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎ、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５＞
CTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAGCTGAACCAACAGATTCACTTCGGTGATGACGTTGGGAACGCGAGCGGCGGATGGGTGAGTAACACGTGGGGAACCTGCCCCATAGTCTGGGATACCACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGGATAAGAAAGCAGATCGCATGATCAGCTTATAAAAGGCGGCGTAAGCTGTCGCTATGGGATGGCCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAGGGTAACGGCCTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTGGTGAAGAAGGATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGAAGAATAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAACTGCATCGGAAACTGTTTTTCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTAGTGCAATCCGTAGAGATACGGAGTTCCCTTCGGGGACACTAAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGTACAACGAGGAGCAAGCCTGCGAAGGCAAGCGAATCTCTTAAAGCTGTTCTCAGTTCGGACTGCAGTCTGCAACTCGACTGCACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGGCCCGTCACACCATGGGAAGTCTGCAATGCCCCAAACCCGG
【００７２】
ＢＰ１２１‐Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  １６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列の分析結果は次のとおりであった：
＜１６Ｓ ｒＲＮＡ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎ、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１＞
CCTAGATATAGTTTTTTTAATGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAAACTTTCTTACACCGAATGCTTGCATTCATCGTAAGAAGTTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTAAAAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGTATATCTCTAAGGATCGCATGATCCTTAGATGAAAGATGGTTCTGCTATCGCTTTTAGATGGACCCGCGGCGTATTAACTAGTTGGTGGGGTAACGGCCTACCAAGGTGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACACGAGTGAGAGTAACTGTTCATTCGATGACGGTATCTAACCAGCAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGAACGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGGAGTAGTGCATTGGAAACTGGAAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGTTCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCAATAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACCTAAGAGATTAGGCTTTCCCTTCGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTGTCAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGCGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGTCGCGAGACCGCGAGGTTTAGCTAATCTCTTAAAGCCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGCATGTCGCGGTGAATACGTT
【００７３】
試験例１：インドキシル硫酸除去能評価
腎臓で酸化ストレスを誘発するものとして知られているインドキシル硫酸を除去及び分解する微生物を分離するため、前記実施例２で分離された１５種の菌株を対象にしてインドキシル硫酸除去能を評価した。ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈにそれぞれ２４時間前培養した後、６０μｇ／ｍｌ濃度のインドキシル硫酸が添加されたＭＲＳ  ｂｒｏｔｈに各１％で接種して２４、４８、７２時間培養した。
【００７４】
各２４、４８、７２時間培養した菌体を収得した後、１２，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して菌体を取り除いた上等液を取った。菌体を取り除いた培養上等液に残余インドキシル硫酸を測定するために、Ｉｎｄｉｃａｎ  ａｓｓａｙ（ｓｉｇｍａ）を使った。
【００７５】
菌体を取り除いた培養上等液の残余インドキシル硫酸を測定した結果は、下記表３のとおりであった：
【表３】
2021505211.tif 000005
【００７６】
前記表３で確認されたように、時間別に採取された培養上等液のインドキシル硫酸を分析した結果、２４時間培養する時に菌を接種していない培地と比べて１５種の菌株の中で７種の菌株で有意義なインドキシル硫酸の減少が確認された。特に、７２時間培養する時、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株は２７．９±４．４％のインドキシル硫酸を取り除き、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株は３０．１±０．５％のインドキシル硫酸を取り除いて、相対的により優れることが確認された。
【００７７】
試験例２：パラクレゾール除去能評価
心血管疾患を誘発するものとして知られているパラクレゾール（ｐ‐ｃｒｅｓｏｌ）を除去及び分解する微生物を選別するために、前記実施例２で分離された１５種の微生物を各ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈに前培養した。前培養した微生物の１％を２５０μｇ／ｍｌ濃度のパラクレゾールが添加されたＭＲＳ  ｂｒｏｔｈに２４、４８、７２時間培養した。
【００７８】
各２４、４８、７２時間培養した後、時間別に培養液を収得して、１２，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。延伸分離した菌体の上等液を取って、残余パラクレゾールの量を測定するために高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を行った。高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に先立って、全てのサンプルは０．２２μｍ  ｆｉｌｔｅｒ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で前処理した。本実験で使用した高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ｅ２６９５  ｓｙｓｔｅｍで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｋｉｎｔｅｘ  Ｃ１８（５μｍ、４．６×２５０ｍｍ）カラムを利用して分析した。この時、検出機ではＵＶ  ｄｅｔｅｃｔｏｒ（２２０ｎｍ）を使用し、移動相はａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ＡＣＮ）３０％を使ってｉｓｏｃｒａｔｉｃで、流速は１ｍｌ／ｍｉｎで、カラムの温度は３５℃で分析し、その結果を下記表４に示す。
【表４】
2021505211.tif 000006
【００７９】
前記表３で確認されるように、時間別の培養上等液で残余パラクレゾールを分析した結果、２４時間培養した時、菌を接種していない培地と比べてＢＰ１０１、ＢＰ１０３、ＢＰ１０５、ＢＰ１２１、ＢＰ１２３、ＢＰ１３１の総６種で有意義な減少を示した。特に、７２時間まで培養した時、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ＢＰ１２１菌株は５．８９±１．２４％のパラクレゾールを減少させ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ＢＰ１３１菌株は９．０６±０．２３％のパラクレゾールを減少させたものとして表れ、相対的により優れることが確認された。
【００８０】
試験例３：リン吸収率測定
インドキシル硫酸阻害能及びパラクレゾール阻害能が確認された菌株であるラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）の腎臓機能が低下する時、高リン酸血症を引き起こすリン吸収能力を評価した。微生物のリン吸収能力は、５‐ブロモ‐４‐クロロ‐３‐インドリルリン酸塩ジナトリウム塩（５‐ｂｒｏｍｏ‐４‐ｃｈｌｏｒｏ‐３‐ｉｎｄｏｌｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ、ｓｉｇｍａ）を使用し、比色法で行った。 前記比色法によれば、リン酸塩を生育に利用する微生物の場合、青緑を示す。前記実験結果を図１に図示した。
【００８１】
図１で確認されるように、ＢＰ１０９（Ａ）の場合、菌株がリンを吸収しないので色が変化せずに乳白色のコロニーをたたえた。一方、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（Ｂ）（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（Ｃ）（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）の菌株の場合、いずれも青緑を表して、リンを吸収して使用することが確認された。
【００８２】
試験例４：リン吸収率評価
（１）菌株あたりリン吸収率測定
試験例３で確認されたリン吸収能力を定量的に評価するために、菌株別リン吸収率を評価した。それぞれラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）菌株をＭＲＳ  ｂｒｏｔｈに前培養した後、２０ｍＭ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅを含むＭＲＳ培地にＯＤ値が１．０になるように接種した。
【００８３】
先ず、３時間培養して菌株のリン吸収量を測定し、３時間培養した後のＯＤ値を測定して最初のＯＤ値との差（菌株の数に該当）でリン吸収量を除して菌株当たりリン吸収率を導き出した。リン吸収量は、Ｃｅｄｅｘ  ｂｉｏ（Ｒｏｃｈｅ）を利用して測定した。
【００８４】
前記実験結果、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）の場合、１時間当り０．０９５５ｍＭのリン吸収率を示し、ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）の場合、１時間当り０．２３８４ｍＭのリン吸収率を示した。前記実験結果、ＢＰ１２１菌株はＢＰ１０５菌株より２．５倍高いリン吸収能力を有することが確認された（図２参照）。
【００８５】
（２）時間によるリン吸収率評価
ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）菌株の時間によるリン吸収率を測定するために、前記と同様の方法で９時間菌株を培養した。その結果、ＢＰ１０５菌株は９時間まで１．６３ｍＭのリンを吸収し（図３参照）、ＢＰ１２１菌株は３．５１ｍＭのリンを吸収したことが確認された（図４参照）。
【００８６】
試験例５：急性腎臓疾患モデルにおけるインドキシル硫酸抑制効能評価
雄鼠（ＳＤ ｒａｔ）に７ｍｇ／ｋｇのシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）を腹腔投与して急性腎臓疾患モデルを樹立した。ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ）及びラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）を各１×１０９ＣＦＵ、そして２つの菌株を１：１の割合で混合して１×１０９ＣＦＵの濃度で作った混合物をシスプラチン誘導前１０日、誘導後４日間経口投与して総１４日投与した。実験は２週間実施し、１４日目に実験動物を犠牲にした。シスプラチンで急性腎臓毒性を誘導して生体内でＢＰ１０５とＢＰ１２１のインドキシル硫酸抑制効能を評価するために、１４日目に最終血中インドキシル硫酸濃度を測定した。その結果、ＢＰ１０５、ＢＰ１２１及びこれらの混合物の投与群は、皆急性腎臓毒性誘発群に比べてインドキシル硫酸の有意義な減少を示した（図５参照）。
【００８７】
試験例６：急性腎臓疾患モデルにおける腎臓保護効能評価
ラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株（受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ）の腎臓保護効果を評価するために、雄鼠（ＳＤ ｒａｔ）に７ｍｇ／ｋｇのＣｉｓｐｌａｔｉｎを腹腔投与して急性腎臓疾患を誘導した後、腎臓機能を評価した。ＢＰ１２１を各１×１０８、１×１０９、１×１０１０ＣＦＵの３グループに投与し、陽性対照群で尿毒症治療剤であるクレメジン（Ｋｒｅｍｅｚｉｎ）を０．５ｇ／匹経口投与した。各グループは、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ誘導前１０日、誘導後４日間経口投与して総１４日投与し、対照群はＰＢＳを同量で使用した。
【００８８】
腎臓保護効果を評価するために、腎臓機能指標である血中ＢＵＮ（Ｂｌｏｏｄ  Ｕｒｅａ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ）とＣｒｅａｔｉｎｉｎｅの濃度を測定した。その結果、ＢＰ１２１高濃度投与群でＢＵＮは２６％が減少し、Ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅは３２％が減少して、いずれも有意義な効能があることが確認された。血中インドキシル硫酸濃度評価結果、約２６％で有意義な減少が確認されたが、３８％の減少が確認された尿毒症治療剤であるクレメジンには及ばなかった（図６参照）。
【００８９】
ＢＰ１２１の投与による炎症指標をそれぞれ血中及び腎臓組職で確認した結果、血清ＴＮＦ‐αの場合、血中では３７％が減少して減少傾向を示し、腎臓組職では３２％が減少して有意性を示す。炎症性サイトカインＩＬ‐６の発現量を確認した結果、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎに誘導された急性腎臓毒性モデルに比べて血清では２６％が減少され、腎臓組職では４１％と著しい減少が確認された。マロンジアルデヒドは脂質過酸化の最終産物であって、シスプラチンの投与によってその量がかなり増加する一方、ＢＰ１２１の高濃度投与群の場合、４１％が減少する有意義な傾向を示し、ＢＰ１２１の投与が抗酸化の役目をすることを確認した（図７参照）。
【００９０】
腎臓保護効果及び場内環境改善効果を提供する、抗炎症物質で知られた短鎖脂肪酸の体内変化を確認するために、ＢＰ１２１の投与最終日に糞便を収集して短鎖脂肪酸の量を分析した。その結果、酢酸、プロピオン酸、及びブチル酸がいずれも有意義に増加したことが確認され、総短鎖脂肪酸はシスプラチン誘導群に比べて４．１倍増加したことが確認された（図８参照）。
【００９１】
試験例７：時間による短鎖脂肪酸生成能評価
試験例６でラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の投与時、糞便で排出された短鎖脂肪酸の量の変化がＢＰ１２１の効果であるか否かを確認するために、ラクトバチルスアシドフィルスＢＰ１０５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＢＰ１０５）菌株とラクトバシラスサリバリウスＢＰ１２１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ＢＰ１２１）菌株の単一培養を通じて時間による短鎖脂肪酸の量を測定した。ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈにそれぞれ２４時間前に培養した後、ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈにＢＰ１０５及びＢＰ１２１を各１％で接種して４８時間培養して０、６、１２、２４、４８時間の培養上等液を測定した。
【００９２】
その結果、時間によってそれぞれの短鎖脂肪酸の量が増加することを確認し、菌を接種していないＣｏｎｔｒｏｌでは、短鎖脂肪酸が測定されていないことを確認した（図９参照）。
【００９３】
受託番号：ＫＣＣＭ１２１６９Ｐ
【表５】
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受託番号：ＫＣＣＭ１２１７０Ｐ
【表６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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