(57)【要約】診断剤および潜在的治療剤の両方を心臓に送達するための、細胞透過ペプチドのより大きなクラスに属する合成の天然に存在しない１２アミノ酸ペプチドである心臓標的化ペプチドが開示される。適用の中でも、心房細動または心室細動を処置するために抗不整脈薬を被験体にＣＴＰ媒介性送達する、収縮期心不全（ＳＨＦ）の処置のためのニューレグリン−１β、および拡張期うっ血性心不全の処置のためのＳｚｅｔｏ−ＳｃｈｉｌｌｅｒペプチドをＣＴＰ媒介性送達するための心臓取り込みの、改善されたより高い効率を有するこの心臓標的化ペプチドのその後の世代が、本明細書で開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗不整脈特性を有する部分に連結した配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４の配列の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）を含むペプチド。
【請求項２】
前記部分は、クラスＩＩＩ抗不整脈化合物またはクラスＩＶ抗不整脈化合物である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記部分は、アミオダロンである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
前記ＣＴＰは、配列番号１、配列番号２、および配列番号５からなるなる群より選択される配列を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
抗不整脈特性を有する前記部分は、シッフ塩基化学反応を使用して前記ＣＴＰに連結される、請求項１〜４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項６】
抗不整脈特性を有する前記部分は、前記ＣＴＰペプチドのＮ末端の上流に連結される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項７】
前記ペプチドは、必要に応じて、そのＮ末端および／またはそのＣ末端において標識にさらに結合される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項８】
前記ペプチドは、必要に応じて、そのＣ末端において標識にさらに結合される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項９】
前記標識は、緑色蛍光部分または赤色蛍光部分である、請求項７または８に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記緑色蛍光部分は、６−カルボキシフルオレセインである、請求項９に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記赤色蛍光部分は、Ｃｙ５．５である、請求項９に記載のペプチド。
【請求項１２】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む製剤。
【請求項１３】
持続送達製剤である、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記製剤は、制御放出システムを使用する、請求項１２または１３に記載の製剤。
【請求項１５】
前記製剤は、緩慢放出システムを使用する、請求項１２または１３に記載の製剤。
【請求項１６】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドを少なくとも６時間の期間にわたって送達する、請求項１２または１３に記載の製剤。
【請求項１７】
前記送達は、少なくとも１２時間の期間にわたる、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１８】
前記送達は、少なくとも２４時間の期間にわたる、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１９】
前記製剤は、少なくとも毎日１回投与される、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２０】
前記製剤は、少なくとも１週間に１回、２週間ごとに１回、１ヶ月に１回、３０日ごとに１回、４５日ごとに１回、または６０日ごとに１回、投与される、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２１】
抗不整脈特性を有する部分を心筋細胞に導入する方法であって、前記方法は、前記心筋細胞に、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドまたは請求項１２〜２０のいずれか１項に記載の製剤を、抗不整脈特性を有する前記部分を前記筋細胞に導入するために有効な量で投与することを包含する方法。
【請求項２２】
前記ペプチドは、マイクロスフェアまたはナノ粒子をさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
心房不整脈および／または心室不整脈に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、前記方法は、前記ヒト被験体に、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドまたは請求項１〜５に記載のペプチドを含み請求項１２〜２０のいずれか１項に記載の製剤を投与することを包含する方法。
【請求項２４】
前記心室不整脈は、心室性期外収縮、心室頻拍、および心室細動から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記心房不整脈は、心房細動である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
Ｘａａ１  Ｘａａ２  Ｙ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔ（配列番号４）の配列を含む、６アミノ酸心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ６ａａ）。
【請求項２７】
Ｓ  Ｑ  Ｘａａ１  Ｓ  Ｒ  Ｘａａ２（配列番号６）の配列を含む、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項２８】
Ｘａａ１はセリン（Ｓ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項２９】
Ｘａａ２はグルタミン（Ｑ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３０】
Ｘａａ３はセリン（Ｓ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３１】
Ｘａａ４はアルギニン（Ｒ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３２】
Ｘａａ１およびＸａａ２は、それぞれ、セリン（Ｓ）およびグルタミン（Ｑ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３３】
Ｘａａ１およびＸａａ３は、ともにセリン（Ｓ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３４】
Ｘａａ１およびＸａａ４は、それぞれ、セリン（Ｓ）およびアルギニン（Ｒ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３５】
Ｘａａ２およびＸａａ３は、それぞれ、グルタミン（Ｑ）およびセリン（Ｓ）である、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３６】
前記ＣＴＰ６ａａは、配列ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む、請求項２６に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３７】
Ｘａａ１はアラニン（Ａ）でありかつ前記ＣＴＰ６ａａはＳＱＡＳＲＸａａ２（配列番号７）の配列を含むか、または必要に応じて、Ｘａａ１はトリプトファン（Ｗ）でありかつ前記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＷＳＲＸａａ２（配列番号８）の配列を含むか、またはＸａａ１はチロシン（Ｙ）でありかつ前記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＹＳＲＸａａ２（配列番号９）の配列を含む、請求項２7に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３８】
Ｘａａ２はスレオニン（Ｔ）であり、Ｘａａ１は、アラニン（Ａ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）であり、それぞれ、ＳＱＡＳＲＴ（配列番号１０）、ＳＱＷＳＲＴ（配列番号１１）、またはＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を含む、請求項２7に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項３９】
Ｘａａ２はアラニン（Ａ）である、請求項２7に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４０】
Ｘａａ１はチロシン（Ｙ）であり、Ｘａａ２はアラニン（Ａ）である、請求項２7に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４１】
前記ＣＴＰ６ａａは、配列ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む、請求項２7に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４２】
前記ＣＴＰ６ａａは、ナノ粒子または抗不整脈特性を有する部分に結合体化または融合される、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４３】
心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法であって、前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の、請求項４２に記載の結合体化または融合されたＣＴＰ６ａａを含む組成物を投与することを包含する方法。
【請求項４４】
前記ＣＴＰ６ａａは、タファジンペプチドに結合体化または融合される、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４５】
前記ＣＴＰ６ａａは、前記タファジンペプチドに、ポリペプチドリンカーを通じて結合体化または融合される、請求項４４に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４６】
タファジン欠損症または再構成カルジオリピン欠損症と関連する障害を有する被験体を処置する方法であって、前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の、請求項４４または４５に記載のタファジン結合体化ＣＴＰ６ａａを含む組成物を投与することを包含する方法。
【請求項４７】
バース症候群を有するかまたは発生させるリスクにある被験体を処置する方法であって、前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の、請求項４４または４５に記載のタファジン結合体化ＣＴＰ６ａａを含む組成物を投与することを包含する方法。
【請求項４８】
前記ＣＴＰ６ａａは、検出可能な剤に結合体化される、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項４９】
前記検出可能な剤は、放射性核種もしくは放射活性部分、ビオチン、ルシフェラーゼ、酵素、ローダミン、発蛍光団、ナノ粒子、マイクロバブル、リポソームまたは発光部分である、請求項４８に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項５０】
送達ビヒクル／剤として製剤化される、請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項５１】
前記ＣＴＰ６ａａは、薬物もしくは治療薬、ナノ粒子、ペプチド、タンパク質、または検出可能な剤に結合体化される、請求項５０に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項５２】
前記ＣＴＰ６ａａは、エステル結合、ジスルフィドまたはプロテアーゼ感受性リンカーを介して、前記薬物もしくは治療薬、前記ナノ粒子、前記ペプチド、前記タンパク質、または前記検出可能な剤に結合体化される、請求項５１に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項５３】
前記ナノ粒子は、薬物または治療剤を含む、請求項５１または５２に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項５４】
前記薬物または治療剤は、抗体もしくはそのフラグメント、ＳＢ２３９０６３、スーパーオキシドジスムターゼ、ＨＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＳＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦ、ＩＡＰ、プロスタグランジン、パモ酸ピルビニウム、Ｄｉｐｒｏｔｉｎ  Ａ、Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチド、シクロスポリン、およびアミオダロンから選択される、請求項５１〜５３のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａ。
【請求項５５】
心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法であって、前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の、請求項５４に記載のＣＴＰ６ａａを含む組成物を投与することを包含する方法。
【請求項５６】
カーゴを心筋細胞に導入する方法であって、前記方法は、前記心筋細胞に、カーゴを前記筋細胞に導入するために有効な量の、前記カーゴに連結した請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含する方法。
【請求項５７】
前記カーゴは、放射性同位体、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカー、ルシフェラーゼマーカー、マイクロスフェアまたはナノ粒子を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
心筋梗塞に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、前記方法は、カーゴを、前記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、前記導入することは、前記ヒト被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含し、ここで前記カーゴは、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する、収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである方法。
【請求項５９】
前記カーゴは、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＳＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦ、クラスＩＩＩ抗不整脈化合物、クラスＩＶ抗不整脈化合物、およびＩＡＰから選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
心筋梗塞に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、前記方法は、カーゴを、前記ヒト被験体の心臓組織に導入することを包含し、前記導入することは、前記ヒト被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含し、ここで前記カーゴは、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する、収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである方法。
【請求項６１】
前記カーゴは、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＢＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦ、クラスＩＩＩ抗不整脈化合物、クラスＩＶ抗不整脈化合物、およびＩＡＰから選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、前記方法は、カーゴを、前記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、前記導入することは、前記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含し、ここで前記カーゴは、前記代謝欠損を修正する方法。
【請求項６３】
前記代謝欠損は、ゴーシェ病であり、前記カーゴは、グルコセレブロシダーゼである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、前記方法は、カーゴを、前記ヒト被験体の心臓組織に導入することを包含し、前記導入することは、前記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した請求項２６〜４１のいずれか１項に記載のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含し、ここで前記カーゴは、前記代謝欠損を修正する方法。
【請求項６５】
前記代謝欠損は、ゴーシェ病であり、前記カーゴは、グルコセレブロシダーゼである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
ＳＳペプチドに連結した配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４の配列の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）を含むペプチド。
【請求項６７】
前記ＳＳペプチドは、ＣＴＰペプチドのＮ末端の上流に連結される、請求項６６に記載のペプチド。
【請求項６８】
前記ＣＴＰと前記ＳＳペプチドとの間にエステル結合を含む、請求項６７に記載のペプチド。
【請求項６９】
前記エステル結合は、細胞内エステラーゼによって切断可能なエステル結合である、請求項６８に記載のペプチド。
【請求項７０】
ヘムオキシゲナーゼ１タンパク質に連結した配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４の配列の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）を含むペプチド。
【請求項７１】
前記ヘムオキシゲナーゼ１タンパク質は、エステル結合で前記ＣＴＰペプチドのＮ末端の上流に連結される、請求項７０に記載のペプチド。
【請求項７２】
レスベラトロール、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−α−フェニルニトロン、および４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシルから選択される低分子に連結される、配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４の配列の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）を含むペプチド。
【請求項７３】
拡張期心不全（ＤＨＦ）に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、前記方法は、カーゴを、前記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、前記導入することは、前記被験体に、請求項６６〜６９のいずれか１項に記載のペプチドを投与することによるものであり、ここで前記ＳＳペプチドは、Ｈ２Ｏ２、およびＯＮＯＯ−、ならびに／またはＬＤＬ酸化を除去する方法。
【請求項７４】
前記カーゴは、ＳＳ−０２およびＳＳ−０３１からなる群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
加齢および／または酸化的ストレスに関連する疾患および／または障害を、その状態にある被験体において処置する方法であって、前記方法は、請求項６６〜６９のいずれか１項に記載のペプチドを、前記被験体の器官または組織に導入することを包含する方法。
【請求項７６】
前記疾患および／または障害は、虚血性再灌流傷害、神経変性疾患、糖尿病、炎症性疾患、例えば、アテローム硬化症、関節炎、および肝炎から選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ミトコンドリア透過性遷移（ＭＰＴ）を阻害する、ミトコンドリア膨張を防止する、および／またはＣａ２＋過負荷に応じたシトクロムｃ放出を低減する、ことによる被験体を処置する方法における使用のための、請求項６６〜７２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項７８】
ミトコンドリア透過性遷移（ＭＰＴ）誘導性ＲＯＳ蓄積を最小限にし、それによって、ミトコンドリアに対する酸化的損傷を低減することによる、被験体を処置する方法における使用のための、請求項６６〜７２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項７９】
心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、前記方法は、ＲＯＳ除去特性を有するペプチドを前記被験体の心筋細胞に導入することを包含し、前記導入することは、前記被験体に、請求項６６〜６９のいずれか１項に記載のＳＳペプチドに連結したＣＴＰを投与することを包含し、ここで前記ＳＳペプチドは、前記代謝欠損を修正する方法。
【請求項８０】
前記代謝欠損はゴーシェ病である、請求項７９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年５月２３日出願の米国仮特許出願番号第６２／６７５，３０７号；２０１８年１２月１１日出願の米国仮特許出願番号第６２／７７８，０３３号；および２０１９年２月２７日出願の米国仮特許出願番号第６２／８１１，０７７号（これらの各々の開示は、全ての目的のためにその全体において本明細書において参考として援用される）の利益および優先権を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて電子提出されている配列表を含み、その全体において参考として援用される。上記ＡＳＣＩＩコピー（作成日：２０１９年５月２１日）は、ＵＰＢ−０１３ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称であり、サイズは１１，２９３バイトである。
【０００３】
発明の分野
本発明は、一般に、心房細動または心室細動を処置するための抗不整脈特性を有する部分の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）媒介性送達、および収縮期心不全（ＳＨＦ）を処置するためのニューレグリン−１βのＣＴＰ媒介性送達に関する。本発明はまた、一般に、心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ６ａａ）、ＣＴＰ６ａａの組成物、心臓状態を処置する方法における上記ＣＴＰ６ａａまたはその組成物の使用、ならびに分子カーゴを心臓の細胞に特異的に送達することにおけるＣＴＰ６ａａの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
心房細動（ＡＦｉｂまたはＡＦともいわれる）は、血液凝固、発作、心不全および他の心臓関連の合併症をもたらし得る心拍の震えまたは不規則な心拍（不整脈）である。少なくとも２７０万人の米国人が、ＡＦｉｂとともに生きている。心室細動（ＶＦｉｂ）は、生命を脅かす律動および突然死の一般的原因である重篤な心機能障害である。心室細動は、致命的であり得る。この状態を有する多くの人々にとって、不規則な心調律は、冠動脈疾患の第１のかつ唯一のサインである。ＶＦｉｂおよびＡＦｉｂは、不規則な心調律が関わるが、それらは心臓の異なる部分に影響を及ぼす。ＡＦｉｂはまた、重篤な心臓状態を知らせ得るが、それは代表的には、慢性的な問題の症状であって、それ自体は生命を脅かす特徴ではない（出典：  米国心臓協会）。
【０００５】
ＡＦｉｂおよびＶＦｉｂの最も有効な薬物療法のうちの１つであるアミオダロンは、有意な全身性の毒性を有し、長期間の薬物利用の低減をもたらす。本開示は、治療剤を心筋細胞に直接送達し、それによって、オフターゲット効果を低減し、既存の有効な治療の使用を増加させることによって、ＡＦｉｂおよび／またはＶＦｉｂを処置するための心臓治療の標的化送達に関する未だ満たされていない医学的ニーズに対処する。
【０００６】
心臓に特異的なタンパク質導入ペプチドは、梗塞に関する再灌流時に与えられる場合、心臓に時宜を得た様式で生物学的薬剤を送達し得る：タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、細胞膜を横断し得、大きな生物学的に活性な分子を培養物中およびインビボで哺乳動物細胞へと輸送し得る小さなカチオン性のペプチドである。ＰＴＤの限界は、全ての組織タイプの非特異的導入であり、肝臓および腎臓のようないくつかの組織では、心臓組織より遙かに熱心にＰＴＤを取り込む。従って、治療潜在能力のある生物製剤の送達のために心臓組織を特異的に標的化し得るペプチドを特定する必要がある。
【０００７】
今日まで開発が行われてきたが、治療潜在能力のある生物製剤および／またはカーゴの送達のために心臓組織を特異的に標的化し得る新しく有効なペプチドの必要性は依然としてある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の要旨
一局面において、本開示は抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン（ＩＵＰＡＣ名：（２−ブチル−１−ベンゾフラン−３−イル）−［４−［２−（ジエチルアミノ）エトキシ］−３，５−ジヨードフェニル］メタノン；分子式：  Ｃ２５Ｈ２９Ｉ２ＮＯ３））に連結したＡｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ（配列番号１）の配列を有する１２アミノ酸の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ１２ａａ）、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有する６アミノ酸のＣＴＰ（ＣＴＰ６ａａ）、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有する１２アミノ酸のＣＴＰ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を含むペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）は、ＣＴＰ（ＣＴＰ１２ａａ、ＣＴＰ６ａａ、またはＣＴＰ−Ｐ２Ａ）のＮ末端の上流に連結される。
【０００９】
一局面において、配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４のＣＴＰを含むペプチドは、抗不整脈特性を有する部分に連結される。抗不整脈特性を有する部分は、Ｖａｕｇｈａｎ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ分類スキームの下で抗不整脈薬の４つの主要なクラス（クラスＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶ）にグループ分けされ得る化合物を含む。上記Ｖａｕｇｈａｎ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ分類スキームは、抗不整脈薬をそれらの最も有力な細胞電気生理学的効果および作用機構に従ってカテゴリー分けする。
【００１０】
クラスＩ化合物としては、速いナトリウムチャネルを遮断し得、速いチャネル組織において（例えば、機能している心房および心室の筋細胞において、ならびにヒス−プルキンエ系において）伝導を遅らせ得るナトリウムチャネル遮断薬（膜安定化薬物）が挙げられる。クラスＩ化合物は、サブクラスａ、ｂ、およびｃへと下位分類され得る。サブクラスａ化合物（例えば、キニジン、プロカインアミド、およびジソピラミドのような抗コリン作動薬）は、中程度の効果を有し、サブクラスｂ化合物（例えば、リドカインおよびリドカインアナログ（トカイニドおよびメキシレチンが挙げられる））は、弱い作用を有し、サブクラスｃ化合物（例えば、フレカイニド、プロパフェノン、およびモリシジンは、強い効果を有する。
【００１１】
クラスＩＩ化合物としては、β遮断薬が挙げられ、これは、自動能の割合を減少させる、伝導速度を遅くする、および不応状態を長期化することによって、主に遅いチャネル組織（例えば、洞房（ＳＡ）結節組織および房室（ＡＶ）結節組織）に影響を及ぼし得る。クラスＩＩ化合物の例としては、以下が挙げられる：カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、ナドロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、エスモロール、メトプロロール、およびネビボロール。
【００１２】
クラスＩＩＩ化合物としては、カリウムチャネル遮断薬が挙げられ、これは、遅いチャネル組織および速いチャネル組織において活動電位持続時間および不応状態を延ばし得る。クラスＩＩＩ化合物の例としては、アミオダロン、ドロネダロン、ブレチリウム、ソタロール、イブチリド、およびドフェチリドが挙げられる。
【００１３】
クラスＩＶ化合物としては、遅いチャネル組織においてカルシウム依存性活動電位を下げ得、自動能の割合を減少させる、伝導速度を遅くする、および不応状態を延ばすカルシウムチャネル遮断薬、例えば、ジヒドロピリジンおよび非ジヒドロピリジンカルシウムチャネル遮断薬が挙げられる。
【００１４】
クラスＩＶジヒドロピリジン化合物としては、アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、およびニトレンジピンが挙げられる。クラスＩＶ非ジヒドロピリジン化合物としては、ベラパミルおよびジルチアゼムが挙げられる。
【００１５】
本明細書で記載される抗不整脈特性を有する部分としては、クラスＩ抗不整脈薬、クラスＩＩ抗不整脈薬、クラスＩＩＩ抗不整脈薬、およびクラスＩＶ抗不整脈薬として分類される活性医薬化合物が挙げられる。本開示のＣＴＰに結合体化される例示的な抗不整脈薬としては、以下が挙げられる：アミオダロン（同義語：  Ａｍｉｏｄａｒｏｎａ、Ａｍｉｏｄａｒｏｎｕｍ、Ｃｏｒｄａｒｏｎｅ、Ｐａｃｅｒｏｎｅ）、フレカイニド（Ｔａｍｂｏｃｏｒ）、イブチリド（Ｃｏｒｖｅｒｔ）、リドカイン（Ｘｙｌｏｃａｉｎｅ）、プロカインアミド（Ｐｒｏｃａｎ，  Ｐｒｏｃａｎｂｉｄ）、プロパフェノン（Ｒｙｔｈｍｏｌ）、キニジン、およびトカイニド（Ｔｏｎｏｃａｒｉｄ）。例えば、いくつかの実施形態において、本開示は、心房不整脈および／または心室不整脈（例えば、心室性期外収縮、心室頻拍、心房細動、または心室細動）を処置する方法を提供し、ここで上記方法は、アミオダロンに連結したＣＴＰ（例えば、配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４のＣＴＰ）を含むペプチドを、患者、例えば、処置の必要性のある患者に投与することを包含する。
【００１６】
ある種の実施形態において、配列番号１のＣＴＰを含むペプチドは、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結され、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号２のＣＴＰを含むペプチドは、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結され、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰを含むペプチドは、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結され、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、上記心臓状態は、心房不整脈、例えば、心房細動である。ある種の実施形態において、上記心臓状態は、心室不整脈、例えば、心室頻拍である。
【００１７】
一局面において、配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４のＣＴＰを含むペプチドは、ニューレグリン−１βに連結され、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、上記心臓状態は、収縮期心不全（ＳＨＦ）である。従って、いくつかの実施形態において、本開示は、心不全、例えば、ＳＨＦを処置する方法を提供し、ここで上記方法は、ニューレグリン−１βに連結したＣＴＰ（例えば、配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１０、１１、２８、２９、または３４のＣＴＰ）を含むペプチドを、患者、例えば、処置の必要性のある患者に投与することを包含する。
【００１８】
一局面において、本発明は、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）にまたはニューレグリン−１βに連結したＸａａ１  Ｘａａ２  Ｙ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔ（配列番号４）（ここでＸａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、およびＸａａ４は、任意の天然に存在するアミノ酸である）の配列を含むＣＴＰ６ａａをふくむペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、抗不整脈特性を有する部分またはニューレグリン−１βは、ＣＴＰ６ａａのＮ末端の上流に連結される。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、セリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２は、グルタミン（Ｑ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ３は、セリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ４は、アルギニン（Ｒ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１およびＸａａ２は、それぞれ、セリン（Ｓ）およびグルタミン（Ｑ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１およびＸａａ３は、ともにセリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１およびＸａａ４は、それぞれ、セリン（Ｓ）およびアルギニン（Ｒ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２およびＸａａ３は、それぞれ、グルタミン（Ｑ）およびセリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、ＣＴＰ６ａａは、配列ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む。ある種の実施形態において、Ｘａａ１  Ｘａａ２  Ｗ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔ（配列番号２３）（ここでＸａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、およびＸａａ４は、任意の天然に存在するアミノ酸である）の配列を含むＣＴＰ６ａａを含むペプチドは、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に、またはニューレグリン−１βに連結される。
【００１９】
一局面において、本発明は、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結したＳ  Ｑ  Ｘａａ１  Ｓ  Ｒ  Ｘａａ２（配列番号６）の配列を含むＣＴＰ６ａａを含むペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）は、ＣＴＰ６ａａのＮ末端の上流に連結される。
【００２０】
一局面において、本発明は、ニューレグリン−１βに連結したＳ  Ｑ  Ｘａａ１  Ｓ  Ｒ  Ｘａａ２（配列番号６）の配列を含むＣＴＰ６ａａを含むペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、ニューレグリン−１βは、ＣＴＰ６ａａのＮ末端の上流に連結される。
【００２１】
ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、アラニン（Ａ）でありかつ上記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＡＳＲＸａａ２（配列番号７）の配列を含むか、または必要に応じて、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、トリプトファン（Ｗ）でありかつ上記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＷＳＲＸａａ２（配列番号８）の配列を含むか、または配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、チロシン（Ｙ）でありかつ上記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＹＳＲＸａａ２（配列番号９）の配列を含む。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２は、スレオニン（Ｔ）であり、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、アラニン（Ａ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）であり、それぞれ、ＳＱＡＳＲＴ（配列番号１０）、ＳＱＷＳＲＴ（配列番号１１）、またはＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２は、アラニン（Ａ）である。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、チロシン（Ｙ）であり、Ｘａａ２は、アラニン（Ａ）である。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａは、配列ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む。
【００２２】
ある種の実施形態において、配列番号４および配列番号６のＣＴＰ６ａａを含むペプチド、例えば、配列番号５は、組換えペプチドまたは合成して調製されたペプチドである。
【００２３】
いくつかの実施形態において、第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子は、上記ＣＴＰ（ＣＴＰ１２ａａ、ＣＴＰ６ａａ、またはＣＴＰ−Ｐ２Ａ）のＮ末端の上流に連結される。いくつかの実施形態において、上記連結したペプチドは、上記ＣＴＰと上記第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子との間にエステル結合を含み得、上記エステル結合は、細胞内エステラーゼによってのみ切断され得る。
【００２４】
いくつかの実施形態において、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結したＣＴＰ（ＣＴＰ１２ａａ、ＣＴＰ６ａａ、またはＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を含むペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端およびＮ末端の両方においてさらに標識される。例えば、いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、緑色蛍光部分（例えば、６−カルボキシフルオレセイン）および赤色蛍光部分（例えば、Ｃｙ５．５）で標識される。例えば、いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、そのＮ末端において緑色蛍光部分およびそのＣ末端において赤色蛍光部分で標識される。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、そのＮ末端において赤色蛍光部分およびそのＣ末端において緑色蛍光部分で標識される。
【００２５】
配列番号１〜３５の前述のＣＴＰペプチドのうちのいずれかが、例えば、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））に結合体化され得ることが、企図される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））に結合体化される。
【００２６】
別の局面において、本発明は、配列番号１〜３５の前述のＣＴＰペプチドのうちのいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸を提供する。ある種の実施形態において、上記ヌクレオチド配列は、宿主細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ細胞における発現のためにコドン最適化される。本発明はまた、前述のヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む発現ベクターを提供する。同様に、本発明は、前述の発現ベクターのうちの１またはこれより多くを含む宿主細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ細胞を提供する。上記ペプチドは、発現ベクターにおいて単離された状態で、または送達されるペプチド／タンパク質のＣ末端において、エステル結合が間に入って、または連続して、のいずれかで融合ペプチド／タンパク質として生成され得る。
【００２７】
別の局面において、本発明は、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つのペプチドおよび任意のバリアント、ならびに少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアおよび／または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。上記ペプチドは、可溶性形態または結晶形態にあり得る。さらに、上記組成物は、ｐＨ上昇剤を含み得る。上記医薬組成物は、例えば、経口投与形態または非経口投与形態として製剤化され得ることが企図される。ある種の実施形態において、上記組成物は、経口投与され得る散剤、顆粒剤、ペレット剤、マイクロペレット剤、もしくはミニ錠剤として、または静脈内注射のためにノーマルセーラインもしくは脱イオン水で再構成され得る凍結乾燥粉末として、製剤化される。
【００２８】
本発明のこれらのおよび他の局面および特徴は、以下の詳細な説明および請求項に記載される。
【００２９】
本発明は、以下の図面を参照しながらより完全に理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、および図１Ｄは、Ｃｙ５．５で標識した心臓特異的標的化ペプチドアラニン変異体で形質導入したＨ９Ｃ２細胞の蛍光強度を定量する棒グラフである。各示されたアラニン変異体の配列を、表２に提供する。
【図１Ｂ】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、および図１Ｄは、Ｃｙ５．５で標識した心臓特異的標的化ペプチドアラニン変異体で形質導入したＨ９Ｃ２細胞の蛍光強度を定量する棒グラフである。各示されたアラニン変異体の配列を、表２に提供する。
【図１Ｃ】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、および図１Ｄは、Ｃｙ５．５で標識した心臓特異的標的化ペプチドアラニン変異体で形質導入したＨ９Ｃ２細胞の蛍光強度を定量する棒グラフである。各示されたアラニン変異体の配列を、表２に提供する。
【図１Ｄ】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、および図１Ｄは、Ｃｙ５．５で標識した心臓特異的標的化ペプチドアラニン変異体で形質導入したＨ９Ｃ２細胞の蛍光強度を定量する棒グラフである。各示されたアラニン変異体の配列を、表２に提供する。
【００３１】
【図２Ａ】図２は、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントとともにインキュベートした種々の細胞タイプの形質導入効率および生存率を示す一連の棒グラフである。図２Ａは、第１の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｂは、第２の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｃは、Ｈ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の形質導入を示す。図２Ｄは、Ｈ９Ｃ２細胞および３Ｔ３細胞の形質導入を示す。図２Ｅは、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントで形質導入したＨ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の生存率を示す。ＣＴＰ（全長）：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１）；  ＣＴＰ−Ａ：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４）；  ＣＴＰ−Ｂ：  ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（ＣＴＰ６ａａ；配列番号５）；  環状：  示されたペプチドの環化バージョン；  ＣＴＰ−ランダム：  直線状ランダム１２アミノ酸ペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（（配列番号２６））；  ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド。
【図２Ｂ】図２は、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントとともにインキュベートした種々の細胞タイプの形質導入効率および生存率を示す一連の棒グラフである。図２Ａは、第１の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｂは、第２の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｃは、Ｈ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の形質導入を示す。図２Ｄは、Ｈ９Ｃ２細胞および３Ｔ３細胞の形質導入を示す。図２Ｅは、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントで形質導入したＨ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の生存率を示す。ＣＴＰ（全長）：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１）；  ＣＴＰ−Ａ：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４）；  ＣＴＰ−Ｂ：  ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（ＣＴＰ６ａａ；配列番号５）；  環状：  示されたペプチドの環化バージョン；  ＣＴＰ−ランダム：  直線状ランダム１２アミノ酸ペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（（配列番号２６））；  ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド。
【図２Ｃ】図２は、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントとともにインキュベートした種々の細胞タイプの形質導入効率および生存率を示す一連の棒グラフである。図２Ａは、第１の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｂは、第２の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｃは、Ｈ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の形質導入を示す。図２Ｄは、Ｈ９Ｃ２細胞および３Ｔ３細胞の形質導入を示す。図２Ｅは、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントで形質導入したＨ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の生存率を示す。ＣＴＰ（全長）：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１）；  ＣＴＰ−Ａ：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４）；  ＣＴＰ−Ｂ：  ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（ＣＴＰ６ａａ；配列番号５）；  環状：  示されたペプチドの環化バージョン；  ＣＴＰ−ランダム：  直線状ランダム１２アミノ酸ペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（（配列番号２６））；  ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド。
【図２Ｄ】図２は、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントとともにインキュベートした種々の細胞タイプの形質導入効率および生存率を示す一連の棒グラフである。図２Ａは、第１の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｂは、第２の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｃは、Ｈ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の形質導入を示す。図２Ｄは、Ｈ９Ｃ２細胞および３Ｔ３細胞の形質導入を示す。図２Ｅは、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントで形質導入したＨ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の生存率を示す。ＣＴＰ（全長）：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１）；  ＣＴＰ−Ａ：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４）；  ＣＴＰ−Ｂ：  ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（ＣＴＰ６ａａ；配列番号５）；  環状：  示されたペプチドの環化バージョン；  ＣＴＰ−ランダム：  直線状ランダム１２アミノ酸ペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（（配列番号２６））；  ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド。
【図２Ｅ】図２は、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントとともにインキュベートした種々の細胞タイプの形質導入効率および生存率を示す一連の棒グラフである。図２Ａは、第１の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｂは、第２の実験におけるＨ９Ｃ２細胞の形質導入を示す。図２Ｃは、Ｈ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の形質導入を示す。図２Ｄは、Ｈ９Ｃ２細胞および３Ｔ３細胞の形質導入を示す。図２Ｅは、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントで形質導入したＨ９Ｃ２細胞およびＭＥＦ細胞の生存率を示す。ＣＴＰ（全長）：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１）；  ＣＴＰ−Ａ：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４）；  ＣＴＰ−Ｂ：  ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（ＣＴＰ６ａａ；配列番号５）；  環状：  示されたペプチドの環化バージョン；  ＣＴＰ−ランダム：  直線状ランダム１２アミノ酸ペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（（配列番号２６））；  ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド。
【００３２】
【図３Ａ】図３は、ローダミンカーゴを全長ＣＴＰ（例えば、ＣＴＰ６ａａ）のＣ末端において結合体化した場合の心筋細胞の細胞内区画へのローダミンカーゴの送達を示す。二重標識カルボキシフルオレセイン（緑）およびローダミン（赤）心臓特異的標的化ペプチドで形質導入したヒトｉＰＳＣ由来の拍動する心筋細胞の免疫組織化学的特徴付けを、行った。ｉＰＳＣ由来心筋細胞は、トロポニン（図３Ａ）、カルシウムトランジェント（図３Ｂ）、および上記ローダミンカーゴの頑強な送達に関する染色を示す一方で、ＣＴＰのＮ末端に結合体化したカルボキシフルオレセインは、上記細胞から放出／分泌されるようである（図３Ｃ）。図３Ｄは、細胞構造の暗視野画像である。スケールバーは、３０μｍを表す。
【図３Ｂ】図３は、ローダミンカーゴを全長ＣＴＰ（例えば、ＣＴＰ６ａａ）のＣ末端において結合体化した場合の心筋細胞の細胞内区画へのローダミンカーゴの送達を示す。二重標識カルボキシフルオレセイン（緑）およびローダミン（赤）心臓特異的標的化ペプチドで形質導入したヒトｉＰＳＣ由来の拍動する心筋細胞の免疫組織化学的特徴付けを、行った。ｉＰＳＣ由来心筋細胞は、トロポニン（図３Ａ）、カルシウムトランジェント（図３Ｂ）、および上記ローダミンカーゴの頑強な送達に関する染色を示す一方で、ＣＴＰのＮ末端に結合体化したカルボキシフルオレセインは、上記細胞から放出／分泌されるようである（図３Ｃ）。図３Ｄは、細胞構造の暗視野画像である。スケールバーは、３０μｍを表す。
【図３Ｃ】図３は、ローダミンカーゴを全長ＣＴＰ（例えば、ＣＴＰ６ａａ）のＣ末端において結合体化した場合の心筋細胞の細胞内区画へのローダミンカーゴの送達を示す。二重標識カルボキシフルオレセイン（緑）およびローダミン（赤）心臓特異的標的化ペプチドで形質導入したヒトｉＰＳＣ由来の拍動する心筋細胞の免疫組織化学的特徴付けを、行った。ｉＰＳＣ由来心筋細胞は、トロポニン（図３Ａ）、カルシウムトランジェント（図３Ｂ）、および上記ローダミンカーゴの頑強な送達に関する染色を示す一方で、ＣＴＰのＮ末端に結合体化したカルボキシフルオレセインは、上記細胞から放出／分泌されるようである（図３Ｃ）。図３Ｄは、細胞構造の暗視野画像である。スケールバーは、３０μｍを表す。
【図３Ｄ】図３は、ローダミンカーゴを全長ＣＴＰ（例えば、ＣＴＰ６ａａ）のＣ末端において結合体化した場合の心筋細胞の細胞内区画へのローダミンカーゴの送達を示す。二重標識カルボキシフルオレセイン（緑）およびローダミン（赤）心臓特異的標的化ペプチドで形質導入したヒトｉＰＳＣ由来の拍動する心筋細胞の免疫組織化学的特徴付けを、行った。ｉＰＳＣ由来心筋細胞は、トロポニン（図３Ａ）、カルシウムトランジェント（図３Ｂ）、および上記ローダミンカーゴの頑強な送達に関する染色を示す一方で、ＣＴＰのＮ末端に結合体化したカルボキシフルオレセインは、上記細胞から放出／分泌されるようである（図３Ｃ）。図３Ｄは、細胞構造の暗視野画像である。スケールバーは、３０μｍを表す。
【００３３】
【図４】図４は、Ｃｙ５．５標識心臓特異的標的化ペプチドバリアントとともにインキュベートしたＨ９Ｃ２細胞の形質導入効率を示す一連の棒グラフである。ＣＴＰ（全長）：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１）；  ＣＴＰ−Ａ：  ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４）；  ＣＴＰ−Ｂ：  ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（ＣＴＰ６ａａ；  配列番号５）；  環状：  上記ペプチドの環化バージョン；  ＲＡＮ：  直線状ランダム１２アミノ酸ペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（配列番号２６））；  ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド。
【００３４】
【図５】図５は、ＣＴＰ−Ｃｙ５．５またはＣｙ５．５に融合したコントロールランダムペプチド配列（ＲＡＮ−Ｃｙ５．５）の注射後の種々の時点（１５分、３０分、４５分、６０分、９０分または３６０分）でのマウス心筋組織におけるＣｙ５．５強度（任意単位（「ＡＵ」））を示す棒グラフである。
【００３５】
【図６】図６Ａおよび図６Ｂは、ＣＴＰ構築物（ＣＴＰ、ＣＴＰ−Ｂ、Ｈ４Ａ、またはＰ２Ａ）またはランダムコントロールペプチド配列（ＲＡＮ）を注射した心臓組織において測定した平均蛍光強度を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
詳細な説明
本発明は、部分的に、６アミノ酸心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ６ａａ）の予測外の発見、それとともに、効率的心臓組織特異的形質導入／細胞透過特性、および実際には、効率的心臓組織特異的カーゴ送達および治療特性に基づく。本開示のＣＴＰ６ａａは、米国特許第９，２４９，１８４号に記載される全長ＣＴＰより少ないアミノ酸を有し、従って、全長ＣＴＰより免疫原性が少ない。本開示は、本開示のＣＴＰ６ａａが、全長ＣＴＰまたは上記ＣＴＰのＮ末端フラグメントと比較して、哺乳動物被験体（例えば、ヒト）の心臓組織へのカーゴおよび／または治療剤を送達することにおいて有利であることを示す。
【００３７】
本発明の種々の特徴および局面は、以下でより詳細に考察される。
【００３８】
ある種の実施形態において、本開示は、心臓疾患および／または状態を処置するための治療部分に連結した本明細書中以下の表１のＣＴＰペプチドを提供する。
【００３９】
【表１−１】
2021525246.tif 000003
【表１−２】
2021525246.tif 000004
【００４０】
配列番号１〜３５のうちのいずれか１つのＣＴＰは、組換えペプチドまたは合成して調製されたペプチドである／。
【００４１】
Ｉ．６アミノ酸心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ６ａａ）
本開示は、心臓標的化ペプチド（「ＣＴＰ」）を提供する。ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰは、心臓組織を特異的に標的とする。「心臓組織を特異的に標的とする」とは、カーゴ分子に連結されてＣＴＰ−カーゴ複合体を形成する上記ＣＴＰが哺乳動物に注射される場合、上記ＣＴＰ−カーゴ複合体が、心臓組織へと、他の組織（例えば、肝臓、腎臓、肺、骨格筋、または脳のような）に形質導入されるより遙かに高いレベルで導入されることを意味する。ある種の実施形態において、心臓組織へと、肝臓、腎臓、肺、骨格筋、または脳と比較して「心臓組織を特異的に標的とする」ＣＴＰの形質導入の比は、少なくとも２：１または少なくとも３：１である。
【００４２】
一局面において、本発明は、部分的には、Ｘａａ１  Ｘａａ２  Ｙ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔ（配列番号４）の配列を含む６アミノ酸心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ６ａａ）の発見に基づく。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、セリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２は、グルタミン（Ｑ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ３は、セリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、配列番号１のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ４は、アルギニン（Ｒ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１およびＸａａ２は、それぞれ、セリン（Ｓ）およびグルタミン（Ｑ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１およびＸａａ３は、ともにセリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１およびＸａａ４は、それぞれ、セリン（Ｓ）およびアルギニン（Ｒ）である。ある種の実施形態において、配列番号４のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２およびＸａａ３は、それぞれ、グルタミン（Ｑ）およびセリン（Ｓ）である。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａは、配列ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む。
【００４３】
一局面において、本発明は、部分的に、Ｓ  Ｑ  Ｘａａ１  Ｓ  Ｒ  Ｘａａ２（配列番号６）の配列を含む６アミノ酸心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ６ａａ）の発見に基づく。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、アラニン（Ａ）でありかつ上記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＡＳＲＸａａ２（配列番号７）の配列を含むか、または必要に応じて、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、トリプトファン（Ｗ）でありかつ上記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＷＳＲＸａａ２（配列番号８）の配列を含むか、または配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、チロシン（Ｙ）でありかつ上記ＣＴＰ６ａａは、ＳＱＹＳＲＸａａ２（配列番号８）の配列を含む。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２は、スレオニン（Ｔ）であり、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、アラニン（Ａ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）であり、それぞれ、ＳＱＡＳＲＴ（配列番号１０）、ＳＱＷＳＲＴ（配列番号１１）、またはＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を含む。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ２は、アラニン（Ａ）である。ある種の実施形態において、配列番号６のＣＴＰ６ａａにおけるＸａａ１は、チロシン（Ｙ）であり、Ｘａａ２は、アラニン（Ａ）である。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａは、配列ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）を含む。
【００４４】
ある種の実施形態において、配列番号４および配列番号６のＣＴＰ６ａａ、例えば、配列番号５は、組換えペプチドまたは合成して調製されたペプチドである。
【００４５】
一局面において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、ナノ粒子に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、ナノ粒子に結合体化される。
【００４６】
ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａは、ｐＨ＝７において約＋０．８〜＋１．２の間の正味の電荷を有する。ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａペプチドは、ｐＨ＝７において約１．１の正味の電荷を有する。
【００４７】
ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａは、ｐＨ８〜ｐＨ９の間において等電点を有する。ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａペプチドは、ｐＨ８．５６において等電点を有する。
【００４８】
ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａは、−０．２〜−０．６の間の平均親水性インデックスを有する。ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ６ａａペプチドは、−０．４の平均親水性インデックスを有する。
【００４９】
ある種の非限定的実施形態において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つのＣＴＰは、（Ｌ）アミノ酸から構成される。
【００５０】
ある種の非限定的実施形態において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つのＣＴＰは、（Ｄ）アミノ酸から構成される。
【００５１】
ある種の実施形態において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つの前述のＣＴＰペプチドのいずれかは、単離され得る。例えば、ある種の実施形態において、配列番号１、２、または５のＣＴＰ６ａａが単離される。
【００５２】
別の局面において、本発明は、配列番号５の野生型ＣＴＰ６ａａに相当する位置において少なくとも１個（例えば、１個または２個）の変異を含むＣＴＰ６ａａを提供し、ここで上記少なくとも１個の変異は、３位または６位に存在する。ある種の実施形態において、上記変異は、配列番号５の野生型ＣＴＰ６ａａに対する保存的置換であり得るのに対して、ある種の他の実施形態において、上記変異は、配列番号５の野生型ＣＴＰ６ａａに対する非保存的置換であり得る。
【００５３】
本明細書で使用される場合、用語「保存的置換」とは、構造的に類似のアミノ酸での置換をいう。非保存的置換は、保存的置換でないアミノ酸置換である。
【００５４】
本明細書で開示される場合、配列番号５〜９のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰ６ａａ配列は、配列番号１または２４のものより高い形質導入／透過活性を有する。例えば、配列番号５または６のＣＴＰ６ａａは、配列番号１または２４のものより２〜５０倍高い形質導入活性を有し得る。ある種の実施形態において、配列番号５〜９のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、配列番号１または２のものより約２〜約５０、約２〜約４０、約２〜約３０、約２〜約２０、約２〜約１０、約２〜約５、約５〜約５０、約５〜約４０、約５〜約３０、約５〜約２０、約５〜約１０、約１０〜約５０、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２０、約２０〜約５０、約２０〜約４０、約２０〜約３０、約３０〜約５０、約３０〜約４０、約４０〜約５０、約２、約５、約１０、約２０、約３０、約４０、または約５０倍高い形質導入活性を有する。
【００５５】
配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５の開示されるＣＴＰが、改変されていてもよく、操作されていてもよく、化学的に結合体化されていてもよいことは、企図される。例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５の開示されるＣＴＰが、標準的なインビトロコンジュゲーション化学反応を使用して、エフェクター因子に結合体化され得ることは、企図される。上記エフェクター因子が、別のポリペプチドである場合、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰは、上記エフェクターに化学的に結合体化され得るか、または融合タンパク質として上記エフェクターに結合され得る。融合タンパク質の構築は、当該分野の通常の技術範囲内である。
【００５６】
ある種の実施形態において、特定の投与様式または活性の部位に依存して、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５の開示されるＣＴＰは、循環中での、例えば、血液、血清、もしくは他の組織中でのその安定化および／または保持を改善する部分で改変され得る。例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５の開示されるＣＴＰは、ポリマー、例えば、実質的に非抗原性のポリマー（例えば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシド）に結合体化され得る。ある種の実施形態において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５の開示されるＣＴＰは、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンに結合体化される。このようなポリマーの例としては、ポリアルキレンオキシドホモポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール）、ポリオキシエチレン化ポリオール、これらのコポリマーおよびこれらのブロックコポリマーが挙げられる。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシアルキレン（例えば、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのブロックコポリマー、ポリメタクリレート、カルボマー、ならびに分枝状または非分枝状のポリサッカリドが挙げられる。
【００５７】
別の局面において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、検出可能な剤に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、検出可能な剤に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して検出可能な剤に結合体化される。
【００５８】
ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、放射性核種もしくは放射活性部分、ビオチン、ルシフェラーゼ、酵素、ローダミン、発蛍光団、ナノ粒子、マイクロバブル、リポソームまたは発光部分に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、放射性核種もしくは放射活性部分、ビオチン、ルシフェラーゼ、酵素、ローダミン、発蛍光団、ナノ粒子、マイクロバブル、リポソームまたは発光部分に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、放射性核種もしくは放射活性部分、ビオチン、ルシフェラーゼ、酵素、ローダミン、発蛍光団、ナノ粒子、マイクロバブル、リポソームまたは発光部分に結合体化される。
【００５９】
別の局面において、本開示は、組織を画像化または検出する方法であって、上記方法は、有効量の、検出可能な剤に結合体化した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む組成物、被験体に投与すること；上記被験体を、上記ＣＴＰ６ａａ結合体の検出を促す条件に曝すこと；および画像を得ることを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、上記検出可能な剤を結合体化した配列番号５のＣＴＰ６ａａは、組織を画像化または検出する方法において使用される。
【００６０】
別の局面において、本開示は、送達ビヒクル／剤として製剤化される配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを提供する。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、薬物もしくは治療薬（drug  or  therapeutic）、ナノ粒子、ペプチド、タンパク質、または検出可能な剤に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、薬物もしくは治療薬、ナノ粒子、ペプチド、タンパク質、または検出可能な剤に結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、送達ビヒクル／剤として製剤化される。
【００６１】
ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合、ジスルフィドまたはプロテアーゼ感受性リンカーを介して、上記薬物もしくは治療薬、上記ナノ粒子、上記ペプチド、上記タンパク質、または上記検出可能な剤に連結／結合体化される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、エステル結合、ジスルフィドまたはプロテアーゼ感受性リンカーを介して、上記薬物もしくは治療薬、上記ナノ粒子、上記ペプチド、上記タンパク質、または上記検出可能な剤に連結／結合体化される。
【００６２】
ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａに結合体化した上記ナノ粒子は、抗体またはそのフラグメント、ＳＢ２３９０６３、スーパーオキシドジスムターゼ、ＨＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＳＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦ、ＩＡＰ、プロスタグランジン、パモ酸ピルビニウム、およびＤｉｐｒｏｔｉｎ  Ａ、Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチド、シクロスポリン、アミオダロンから選択される薬物または治療剤（drug  or  therapeutic  agent）を含む。
【００６３】
別の局面において、本開示は、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む組成物を投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法において使用される。
【００６４】
別の局面において、本開示は、カーゴを心筋細胞に導入する方法であって、上記方法は、上記心筋細胞に、カーゴを上記筋細胞に導入するために有効な量の、上記カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、上記カーゴは、放射性同位体、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカー、ルシフェラーゼマーカー、マイクロスフェアまたはナノ粒子を含む。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、カーゴを心筋細胞に導入する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに結合体化される。
【００６５】
別の局面において、本開示は、心筋梗塞に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、上記導入することは、上記ヒト被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する。収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである。ある種の実施形態において、上記カーゴは、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＳＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦおよびＩＡＰから選択される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、心筋梗塞に罹患しているヒト被験体を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに結合体化される。
【００６６】
別の局面において、本開示は、心筋梗塞に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、上記導入することは、上記ヒト被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する、収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである。ある種の実施形態において、上記カーゴは、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＢＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦおよびＩＡＰから選択される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに連結／結合体化される。
【００６７】
別の局面において、本開示は、心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、上記導入することは、上記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、上記代謝欠損を修正する。ある種の実施形態において、上記代謝欠損は、ゴーシェ病であり、上記カーゴは、グルコセレブロシダーゼである。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに連結／結合体化される。
【００６８】
別の局面において、本開示は、心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、上記導入することは、上記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、上記代謝欠損を修正する。ある種の実施形態において、上記代謝欠損は、ゴーシェ病であり、上記カーゴは、グルコセレブロシダーゼである。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに連結／結合体化される。
【００６９】
別の局面において、本開示は、検出可能なカーゴを心筋細胞に導入する方法であって、上記方法は、上記心筋細胞に、上記カーゴを上記筋細胞に導入するために有効な量の、上記カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含し、ここで上記カーゴは、検出可能な化合物を含む方法を提供する。ある種の実施形態において、上記検出可能な化合物は、検出可能な放射性同位体、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカー、またはルシフェラーゼマーカーを含む。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、検出可能なカーゴを心筋細胞に導入する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに連結／結合体化される。
【００７０】
別の局面において、本開示は、検出可能なカーゴを心筋細胞に導入する方法であって、上記方法は、上記心筋細胞に、上記カーゴを上記筋細胞に導入するために有効な量の、上記カーゴに連結した配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａを含む複合体を投与することを包含し、ここで上記カーゴは、検出可能な化合物を含む方法を提供する。ある種の実施形態において、上記検出可能な化合物は、検出可能な放射性同位体、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカー、またはルシフェラーゼマーカーを含む。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、検出可能なカーゴを心筋細胞に導入する方法において使用される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、エステル結合を介して、上記カーゴに結合体化される。
【００７１】
別の局面において、本発明は、例えば、実施例１に示される条件下で、配列番号１または配列番号２４のペプチドの形質導入と比較して、より高いレベルの心臓形質導入を有する配列番号５〜９のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰ６ａａを提供する。
【００７２】
前述の配列番号４〜１１のＣＴＰ６ａａペプチドのうちのいずれかが、配列番号１または配列番号２４のペプチドと比較して、例えば、５〜２０倍高い形質導入能力を有し得ることは、企図される。
【００７３】
ＩＩ．カーゴ
本発明によれば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰは、必要に応じてリンカー分子を介して、複合体を形成するためにカーゴ分子と連結される。上記カーゴ分子は、タンパク質（糖タンパク質を含む）、核酸、炭水化物、脂質、またはこれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態において、上記カーゴ分子は、活性医薬成分、例えば、抗不整脈特性を有する活性医薬成分である。例えば、本明細書で記載されるいくつかの実施形態において、カーゴ分子は、以下である：クラスＩ抗不整脈化合物（例えば、サブクラスａ化合物、サブクラスｂ化合物、またはサブクラスｃ化合物）、クラスＩＩ抗不整脈化合物、クラスＩＩＩ抗不整脈化合物、クラスＩＶ抗不整脈化合物、ナトリウムチャネル遮断薬、抗コリン作動性化合物、キニジン、アジュマリン、ヒドロキニジン、ロラジミン（ｌｏｒａｊｍｉｎｅ）、プラジマリン、スパルテイン、プロカインアミド、ジソピラミド、リドカイン、リドカインアナログ、フェニトイン、トカイニド、メキシレチン、フレカイニド、インデカイニド、ロルカイニド、エンカイニド、エタシジン、プロパフェノン、モラシジン、β遮断薬、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、ナドロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、エスモロール、メトプロロール、ネビボロール、カリウムチャネル遮断薬、アミオダロン、ドロネダロン、Ｅ−４０３１、ベルナカラント、ニフェカラント、ブレチリウム、ブラフチン、セリバロン（ｃｅｌｉｖａｒｏｎｅ）、ソタロール、イブチリド、ドフェチリド、デジサミル（ｔｅｄｉｓａｍｉｌ）、カルシウムチャネル遮断薬、ジヒドロピリジン  カルシウムチャネル遮断薬、非ジヒドロピリジン  カルシウムチャネル遮断薬、アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ベラパミル、ジルチアゼム、アデノシン、ベンゾジアゼピン、バルビツレート、ムスカリンアンタゴニスト、ムスカリンアゴニスト、ジゴキシン、ジギトキシン、ウアバイン、硫酸マグネシウム、またはアトロピン。
【００７４】
ある種の非限定的実施形態において、上記カーゴはタンパク質である。ある種の非限定的実施形態において、上記タンパク質は、サイトカイン、成長因子、酵素、イオンチャネル、および抗炎症性タンパク質からなる群より選択される。
【００７５】
ある種の非限定的実施形態において、上記カーゴは抗酸化剤である。
【００７６】
ある種の非限定的実施形態において、上記カーゴは核酸である。このような核酸の非限定的例としては、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、干渉ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、触媒性ＲＮＡ、および触媒性ＤＮＡが挙げられる。
【００７７】
本開示は、ニューレグリン−１β−ＣＴＰまたは抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結／結合体化した心臓標的化ペプチド（「ＣＴＰ」）を提供する。ある種の非限定的実施形態において、ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）のＮ末端は、ニューレグリン−１β−ＣＴＰまたは抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結／結合体化される。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰは、第２の抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結／結合体化される。
【００７８】
ある種の非限定的実施形態において、治療的部分に連結した上記ＣＴＰは、心臓組織を特異的に標的とする。「心臓組織を特異的に標的とする」とは、結合体化タンパク質を形成するために第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結した上記ＣＴＰ結合体が、哺乳動物に注射される場合、上記結合体化タンパク質は、心臓組織へと、他の組織（例えば、肝臓、腎臓、肺、骨格筋、または脳）に形質導入されるより遙かに高レベルで導入されることを意味する。
【００７９】
ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ（例えば、配列番号５のＣＴＰ６ａａ）は、−０．２〜−０．６の間の平均親水性指数を有する。ある種の非限定的実施形態において、上記ＣＴＰ（例えば、配列番号５のＣＴＰ）は、−０．４の平均親水性指数を有する。
【００８０】
ある種の非限定的実施形態において、配列番号１、２、３、４、または５のＣＴＰは、（Ｌ）アミノ酸から構成される。ある種の非限定的実施形態において、配列番号１、２、３、４、または５のＣＴＰは、（Ｄ）アミノ酸から構成される。
【００８１】
本開示は、部分的に、ペプチド送達を心臓の細胞（例えば、心筋細胞）に向けるためにＣＴＰを使用して、ニューレグリン−１βまたは抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）を心臓に直接送達することに基づく。例えば、いくつかの実施形態において、本発明は、ニューレグリン−１βまたは抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）を、被験体の心臓の細胞（例えば、被験体の心筋細胞）に送達する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。従って、いくつかの実施形態において、本発明は、ニューレグリン−１βまたは抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）を、ヒト被験体の心臓の細胞（例えば、ヒト被験体の心筋細胞）に送達する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、抗不整脈薬に、例えば、シッフ塩基化学反応によって結合体化したＣＴＰを含むペプチド）を上記被験体に投与することによって、ニューレグリン−１βまたは抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）を、被験体の心臓の細胞（例えば、被験体の心筋細胞）に送達する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ＣＴＰ配列をコードする核酸を含む細胞またはウイルスによって導入され得る。
【００８２】
ある種の実施形態において、本発明は、安定な製剤において、インビトロで細胞におよび静脈内灌流を介して動物に送達するために、ペプチド組成物、例えば、抗不整脈薬部分−ＣＴＰ組成物またはニューレグリン−１β−ＣＴＰ組成物を製剤化することを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、上記製剤化した組成物を哺乳動物の心筋芽細胞に送達することおよび細胞生存度アッセイを行うことによって、細胞毒性をモニターすることを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、ペプチド、例えば、抗不整脈薬部分−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰを、哺乳動物の心筋芽細胞株に送達することを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、抗不整脈薬部分−ＣＴＰを、不整脈、例えば、心房細動および／または心室細動を有する哺乳動物に送達することを提供する。いくつかの実施形態において、本発明はまた、１またはこれより多くの心エコーパラメーター、例えば、左室壁厚、左室機能、および／または僧帽弁流入パターン（ｍｉｔｒａｌ  ｉｎ−ｆｌｏｗ  ｐａｔｔｅｒｎ）を観察して、送達および／または処置の前、間、および／または後の種々の時点での拡張期弛緩を評価することを含む。ある種の実施形態において、本発明は、抗不整脈薬部分−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰを、毎週、例えば、６〜１２週間にわたって静脈内投与すること、肝臓、腎臓、ＣＮＳ、および／または心臓毒性に関して、血液化学および／または組織学を使用して評価することを提供する。
【００８３】
ある種の実施形態において、本発明は、安定な製剤において、インビトロで細胞におよび静脈内灌流を介して動物に送達するために、抗不整脈特性を有する第２の部分に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチド組成物を製剤化することを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、上記製剤化した組成物を哺乳動物の心筋芽細胞に送達することおよび細胞生存度アッセイを行うことによって、細胞毒性をモニターすることを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、抗不整脈特性を有する第２の部分に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを、哺乳動物の心筋芽細胞株に送達することを提供する。ある種の実施形態において、本開示は、抗不整脈特性を有する第２の部分に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを投与する方法であって、ここで上記投与は、毎週を基本として、指定された期間、例えば、６〜１２週間にわたって静脈内灌流される方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記方法は、肝臓、腎臓、ＣＮＳ、および／または心臓毒性に関して、血液化学および／または組織学を使用して評価することをさらに包含する。
【００８４】
別の局面において、本開示はまた、ニューレグリン−１βまたは抗不整脈特性を有する部分に連結／結合体化した心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）を含むペプチドを送達する注射に適した徐放性製剤（長期間持続製剤）を提供する。
【００８５】
別の局面において、本開示は、抗不整脈特性を有する部分に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを被験体に投与すること；上記被験体を、上記ペプチドの検出を促す条件に曝すこと；および画像を得ることによって、心臓組織（例えば、ヒト心臓組織）を画像化または検出する方法を提供する。
【００８６】
実施形態において、本発明は、活性酸素種（ＲＯＳ）除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＡｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ（配列番号１）の配列を含む１２アミノ酸心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ１２ａａ）を含むペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、上記第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子は、上記ＣＴＰペプチドのＮ末端の上流に結合体化される。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、上記ＣＴＰと上記第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子との間にエステル結合を含み得、上記エステル結合は、細胞内エステラーゼによってのみ切断され得る。ＲＯＳ除去特性を有するペプチド配列、タンパク質、および低分子の例としては、ヘムオキシゲナーゼ１、レスベラトロール、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−α−フェニルニトロン、および４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端およびＮ末端の両方においてさらに標識される。例えば、いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、緑色蛍光部分（例えば、６−カルボキシフルオレセイン）および赤色蛍光部分（例えば、Ｃｙ５．５）で標識される。例えば、いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、そのＮ末端において緑色蛍光部分、およびそのＣ末端において赤色蛍光部分で標識される。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、そのＮ末端において赤色蛍光部分、およびそのＣ末端において緑色蛍光部分で標識される。
【００８８】
本開示は、部分的に、ＣＴＰを使用して、ペプチド送達を心臓の細胞（例えば、心筋細胞）に向ける、心臓へのＲＯＳ除去ペプチド（例えば、ＳＳ−３１またはＳＳ−０２）、タンパク質、または低分子の直接送達に基づく。ＲＯＳ除去ペプチドとしては、芳香族アミノ酸および塩基性アミノ酸を交互に含み、チロシンまたはジメチルチロシンを含み、高度に細胞透過性であるＳｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒ（ＳＳ）ペプチド（例えば、ＳＳ−０１、ＳＳ−０２、およびＳＳ−３１）を含む。ＳＳペプチドは、Ｓｚｅｔｏ  ＨＨ，  （２００６）  “Ｃｅｌｌ−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ，  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ−ｔａｒｇｅｔｅｄ，  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ”  Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ８（２）：Ｅ２７７−Ｅ２８３（その内容全体は、本明細書に参考として援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＯＳ除去ペプチド（例えば、ＳＳ−３１またはＳＳ−０２）、タンパク質、または低分子を被験体の心臓の細胞（例えば、被験体の心筋細胞）に送達する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。従って、いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＯＳ除去ペプチド（例えば、ＳＳ−３１またはＳＳ−０２）、タンパク質、または低分子をヒト被験体の心臓の細胞（例えば、ヒト被験体の心筋細胞）に送達する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、エステル結合によってＲＯＳ除去ペプチド（例えば、ＳＳ−３１またはＳＳ−０２）、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを、例えば、上記被験体に投与することによって、ＲＯＳ除去ペプチド（例えば、ＳＳ−３１またはＳＳ−０２）、タンパク質、または低分子を被験体の心臓の細胞（例えば、被験体の心筋細胞）に送達する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ＣＴＰが連結／結合体化したペプチド配列をコードする核酸を含む細胞またはウイルスによって導入され得る。
【００８９】
いくつかの局面において、本発明は、細胞培養物（例えば、細胞および／または細胞培養培地）を、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドに曝すことによって、細胞培養物においてＲＯＳを除去する方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明は、細胞培養物を、ＳＳ−３１（ＳＳ−ＣＴＰ−３１）に連結／結合体化したＣＴＰまたはＳＳ−０２（ＳＳ−ＣＴＰ−０２）に結合体化したＣＴＰを含むペプチドに曝すことによって、細胞培養物においてＲＯＳを除去する方法を提供する。いくつかの実施形態において、細胞培養物を、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドに曝すことは、上記ペプチドを上記細胞培養物中の１もしくはこれより多くの細胞において発現させることによって、および／またはウイルス感染によって達成される。
【００９０】
ある種の実施形態において、本発明は、安定な製剤において、インビトロで細胞におよび静脈内灌流を介して動物に送達するために、ペプチド組成物、例えば、ＳＳ−ＣＴＰ組成物を製剤化することを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、上記製剤化した組成物を哺乳動物の心筋芽細胞に送達すること、および細胞毒性に関して細胞生存度アッセイを行うことによってモニターすることを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、ペプチド（例えば、ＳＳ−ＣＴＰ）を、ストレッサーとして酸化的ストレスでチャレンジした哺乳動物の心筋芽細胞株（例えば、過酸化水素を使用する酸化的ストレスでチャレンジした心筋芽細胞株）に送達することを提供する。いくつかの実施形態において、本発明はまた、Ｈ２Ｏ２を伴うストレス下で、およびＨ２Ｏ２でチャレンジする前にＳＳ−ＣＴＰで処理した細胞において、Ｓｅａｈｏｒｓｅ分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を使用して、ベースライン時のミトコンドリア機能を評価することを含む。ある種の実施形態において、本発明は、ＳＳ−ＣＴＰを、拡張期心不全（ＤＨＦ）を有する哺乳動物に送達することをを提供する。いくつかの実施形態において、本発明はまた、１またはこれより多くの心エコーパラメーター、例えば、左室壁厚、左室機能、および／または僧帽弁流入パターンを観察して、送達および／または処理の前、間、および／または後の種々の時点での拡張期弛緩を評価することを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、ＳＳ−ＣＴＰを、毎週、例えば、６〜１２週間にわたって静脈内投与すること、ならびに肝臓、腎臓、ＣＮＳ、および／または心臓毒性に関して、血液化学および／または組織学を使用して評価することを提供する。
【００９１】
ある種の実施形態において、本発明は、安定な製剤において、インビトロで細胞におよび静脈内灌流を介して動物に送達するために、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチド組成物を製剤化することを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、上記製剤化した組成物を哺乳動物の心筋芽細胞に送達することおよび細胞生存度アッセイを行うことによって、細胞毒性をモニターすることを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを、ストレッサーとして酸化的ストレスでチャレンジした哺乳動物の心筋芽細胞株（例えば、過酸化水素を使用する酸化的ストレスでチャレンジした心筋芽細胞株）に送達することを提供する。いくつかの実施形態において、本発明はまた、Ｈ２Ｏ２を伴うストレス下で、およびＨ２Ｏ２でチャレンジする前に上記ペプチドで処理した細胞において、Ｓｅａｈｏｒｓｅを使用して、ベースライン時のミトコンドリア機能を評価することを含む。ある種の実施形態において、本発明は、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを、拡張期心不全（ＤＨＦ）を有する哺乳動物に送達することを提供する。いくつかの実施形態において、本発明はまた、１またはこれより多くの心エコーパラメーター、例えば、左室壁厚、左室機能、および／または僧帽弁流入パターンを観察して、送達および／または処理の前、間、および／または後の種々の時点での拡張期弛緩を評価することを含む。ある種の実施形態において、本発明は、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰを含むペプチドを、毎週、例えば、６〜１２週間にわたって静脈内投与すること、ならびに肝臓、腎臓、ＣＮＳ、および／または心臓毒性に関して、血液化学および／または組織学を使用して評価することを提供する。
【００９２】
別の局面において、本開示は、ＲＯＳ除去特性を有する第２のペプチド配列、タンパク質、または低分子に連結／結合体化したＣＴＰ（例えば、ＳＳ−ＣＴＰ結合体）を含むペプチドを、被験体に投与し；上記被験体を、上記ペプチドの検出を促す条件に曝し、画像を得ることによって、心臓組織（例えば、ヒト心臓組織）を画像化または検出する方法を提供する。
【００９３】
ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、タファジンペプチドに連結／結合体化または融合される。ある種の実施形態において、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のＣＴＰ６ａａは、ポリペプチドリンカーを通じて、タファジンペプチドに連結／結合体化または融合される。ある種の実施形態において、配列番号５のＣＴＰ６ａａは、タファジンペプチドに結合体化または融合される。
【００９４】
ある種の実施形態において、カーゴの１つの具体的な非限定的例は、ＮＦ−κＢインヒビター、例えば、ＮＢＤペプチド  ＴＡＬＤＷＳＷＬＱＴＥ（配列番号３５）である。カーゴの１つの具体的な非限定的例は、ヘムオキシゲナーゼ、例えば、ヒトヘムオキシゲナーゼである。カーゴの１つの具体的な非限定的例は、誘導性一酸化窒素シンターゼ（「ｉＮＯＳ」）、例えば、ヒトｉＮＯＳである。
【００９５】
ある種の実施形態において、カーゴの１つの具体的な非限定的例は、Ｓ１００Ａ１（心筋の収縮性の変力調節因子（ｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ））である。カーゴの１つの具体的な非限定的例は、細胞外スーパーオキシドジスムターゼである。カーゴのさらに具体的な非限定的例としては、Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ、Ｍｎ−ＳＯＤ、カタラーゼ、およびグルタチオンペルオキシダーゼが挙げられる。カーゴの１つの具体的非限定的例は、トランスフォーミング成長因子-β（「ＴＧＦβ」）タイプＩＩレセプター（Ａｄ．ＣＡＧ−ｓ  ＴＧＦβＩＩ）、ＴＧＦβの競合性インヒビターである。カーゴの１つの具体的非限定的例は、ＶＥＧＦ（血管内皮成長因子）、例えば、ヒトＶＥＧＦである。カーゴの１つの具体的非限定的例は、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、例えば、ヒトＦＧＦ−１またはＦＧＦ−２である。カーゴの１つの具体的非限定的例は、肝細胞成長因子（「ＨＧＦ」）である。カーゴの非限定的例のうちの１セットは、アポトーシスインヒビター、例えば、いわゆるアポトーシスのインヒビター（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）（「ＩＡＰ」）のうちの１つ、例えば、ヒトＩＡＰｓ  ｃ−ＩＡＰ１、ｃ−ＩＡＰ２、およびＸＩＡＰ）である。カーゴの１つの具体的非限定的例は、ソニックヘッジホッグタンパク質である。カーゴの１つの具体的非限定的例は、グルコセレブロシダーゼ、例えば、ゴーシェ病における処置のために使用されるヒトグルコセレブロシダーゼである。カーゴの１つの具体的非限定的例は、ＴＧＦβの発現を阻害するＲＮＡｉである。
【００９６】
非限定的な実施形態の別のセットにおいて、上記カーゴは、診断剤または治療剤を含む、ナノ粒子またはマイクロスフェアである。非限定的な実施形態の別のセットにおいて、上記カーゴは、治療用遺伝子を含むベクター、例えば、アデノウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。非限定的な実施形態の別のセットにおいて、上記カーゴは、虚血損傷後に、生きていない細胞に対して生きている心筋細胞における取り込みを分析するための検出可能な化合物である。検出可能な化合物の非限定的例としては、フルオロデオキシグルコース、テクネチウム−９９または他の放射性同位体標識カーゴ、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカーなどが挙げられる。放射性同位体標識カーゴの１つの非限定的例は、Ｓｅｓｔａｍｉｂｉ、放射性同位体テクネチウム−９９ｍと配位子メトキシイソブチルイソニトリル（「ＭＩＢＩ」）との配位複合体である。
【００９７】
ＩＩＩ．リンカー
配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰ、および上記カーゴは、共有結合的にまたは非共有結合的に、必要に応じて、１またはこれより多くのリンカー分子を介して連結される。結合が共有結合である場合、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つのＣＴＰおよびカーゴは、必要に応じて、間のリンカー（複数可）とともに、当該分野で一般におよび周知の方法に従って作製され得る、１またはこれより多くのペプチド結合、チオエステル結合、チオエーテル結合、カルバメート結合などを介して結合され得る。
【００９８】
ある種の実施形態において、上記リンカーは、酵素的切断または化学的切断に際して、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰをそのカーゴから放出し得る切断部位を含み得る。ある種の非限定的実施形態において、上記リンカーは、リガンド対であり得る。１つの具体例として、上記リンカーは、アビジン／ビオチン対であり得る。
【００９９】
よって、本発明は、カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む複合体を提供する。上記複合体は、さらなる要素を含み得る。例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、もしくは５のＣＴＰ、および／またはカーゴは、送達または安定性を改善する１またはこれより多くのさらなる分子に結合体化され得る。１つの非限定的例として、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰ、および／またはカーゴは、ＰＥＧ化され得る。別の非限定的例として、上記カーゴは、核輸送ペプチドに連結され得る。別の非限定的例として、上記カーゴは、検出可能な化合物に連結され得る。
【０１００】
ＩＶ．カーゴを導入する方法
別の局面において、本開示は、カーゴを心臓組織に導入する方法であって、上記方法は、上記心臓組織に、上記カーゴ分子に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。
【０１０１】
本開示は、カーゴを心筋細胞に導入する方法であって、上記方法は、上記心筋細胞に、上記カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。例えば、本開示は、カーゴを心筋細胞に導入する方法であって、上記方法は、上記心筋細胞に、上記カーゴを上記筋細胞に導入するために有効な量の、上記カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、上記カーゴは、放射性同位体、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカー、ルシフェラーゼマーカー、マイクロスフェアまたはナノ粒子を含む。
【０１０２】
本開示は、カーゴを被験体における心臓組織に選択的に送達する方法であって、上記方法は、上記被験体に、上記カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。本開示は、カーゴを被験体における心筋細胞に選択的に送達する方法であって、上記方法は、上記被験体に、上記カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。
【０１０３】
別の局面において、本開示は、検出可能なカーゴを心筋細胞に導入する方法であって、上記方法は、上記心筋細胞に、上記カーゴを上記筋細胞に導入するために有効な量の、上記カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含し、ここで上記カーゴは検出可能な化合物を含む方法を提供する。ある種の実施形態において、上記検出可能な化合物は、検出可能な放射性同位体、蛍光マーカー、ガドリニウムマーカー、またはルシフェラーゼマーカーを含む。
【０１０４】
Ｖ．使用方法
一局面において、本開示は、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、心臓疾患および／または状態を処置するために治療剤に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む組成物を投与することを包含する方法を提供する。
【０１０５】
ある種の実施形態において、本開示は、抗不整脈特性を有する部分を心筋細胞に導入する方法であって、ここで上記方法は、上記心筋細胞に、ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、または抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に結合体化したＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を、上記抗不整脈特性を有する部分を上記筋細胞に導入するために有効な量で投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、上記ペプチドは、マイクロスフェアまたはナノ粒子をさらに含む。
【０１０６】
ある種の実施形態において、本開示は、心房不整脈および／または心室不整脈に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記ヒト被験体に、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に結合体化したＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を投与することによって、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、本開示は、上記ヒト被験体に、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に結合体化したＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を投与することによって、心室性期外収縮、心室頻拍、および心室細動から選択される心室不整脈を処置する方法を提供する。
【０１０７】
ある種の実施形態において、本開示は、ＳＨＦに罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記ヒト被験体に、ニューレグリン−１βに結合体化したＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を投与することによって、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含する方法を提供する。
【０１０８】
ある種の実施形態において、本開示は、被験体に、例えば、配列番号１、２、４、または５を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）を投与し、ＰｌａｎａｒまたはＳＰＥＣＴイメージングを通じて、上記被験体の心臓への上記結合体の送達をモニターすることによって、上記被験体の心筋灌流分析を行う方法を提供する。
【０１０９】
ある種の実施形態において、本開示は、被験体に、例えば、配列番号１を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）を投与すること；上記被験体を、上記ＣＴＰ結合体の検出を促す条件に曝すこと；および画像を得ることによって、心臓組織を画像化または検出する方法を提供する。この局面において、上記抗不整脈薬−ＣＴＰは、必要に応じて、検出可能な部分をさらに含む。ある種の実施形態において、上記抗不整脈薬−ＣＴＰは、検出可能な部分をさらに含む。
【０１１０】
例えば、配列番号１を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）が被験体に投与される場合、上記被験体は、ヒト被験体または非ヒト被験体、例えば、霊長類、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、ウマ）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）または家畜（ウシ、ヤギなど）であり得る。
【０１１１】
例えば、配列番号１、２、４、または５を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）は、静脈内、心房内、腹腔内、皮下、経口、直腸などが挙げられるが、これらに限定されない任意の経路によって投与され得る。
【０１１２】
本開示は、治療剤に連結した例えば、配列番号１、２、４、または５を含むＣＴＰ（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）、および適切な薬学的キャリア（例えば、水または生理食塩水）を含む医薬組成物を提供する。
【０１１３】
本明細書で開示される配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰは、被験体において心臓組織または筋肉と関連する種々の疾患または障害を処置するために使用され得る。ある種の実施形態において、上記方法は、有効量の、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５の開示されるＣＴＰを、単独でまたは別の治療剤との組み合わせのいずれかにおいて、上記被験体に経口投与して、上記被験体における疾患または障害を処置することを包含する。
【０１１４】
ある種の実施形態において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰは、タファジンペプチドに結合体化または融合される。ある種の実施形態において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰは、ポリペプチドリンカーを通じて、上記タファジンペプチドに結合体化または融合される。
【０１１５】
別の局面において、本開示は、タファジン欠損症または再構成カルジオリピン欠損症（remodeled  cardiolipin  deficiency）と関連する障害を有する被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、タファジン結合体化した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰを含む組成物を投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、配列番号５の上記タファジン結合体化ＣＴＰ６ａａは、タファジン欠損症または再構成カルジオリピン欠損症と関連する障害を有する被験体を処置することにおいて使用される。
【０１１６】
別の局面において、本開示は、バース症候群を有するかまたは発生させるリスクにある被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のタファジン結合体化ＣＴＰを含む組成物を投与することを包含する方法を提供する。
【０１１７】
ある種の実施形態において、本開示は、バース症候群を有するかまたは発生させるリスクにある被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、配列番号４、６、７、８、５、９、１０、または１１のタファジン結合体化ＣＴＰ６ａａを含む組成物を投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、配列番号５のタファジン結合体化ＣＴＰ６ａａは、バース症候群を有するかまたは発生させるリスクにある被験体を処置するために使用される。
【０１１８】
一局面において、本開示は、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つのナノ粒子を結合体化したＣＴＰを含む組成物を投与することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、配列番号１、２、または５のＣＴＰは、心臓組織または心臓状態を処置することを必要とする被験体において心臓組織または心臓状態を処置するために使用され、上記被験体に、治療上有効な量の、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１、２、または５のナノ粒子を結合体化したＣＴＰを含む組成物を投与することを含む。
【０１１９】
別の局面において、本開示は、心筋梗塞に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、カーゴを、上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、上記導入することは、上記ヒト被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する、収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである。ある種の実施形態において、上記カーゴは、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＳＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＨＧＦおよびＩＡＰから選択される。
【０１２０】
別の局面において、本開示は、心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、カーゴを上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含し、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、代謝欠損を修正する。ある種の実施形態において、上記代謝欠損は、ゴーシェ病であり、上記カーゴは、グルコセレブロシダーゼである。
【０１２１】
本開示は、心筋梗塞に罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、上記カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴ（上記カーゴの生物学的機能を意味する）は、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する、収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである。
【０１２２】
本開示は、アンギナに罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、心筋梗塞のリスクを低減する、細胞死を阻害する、不整脈を阻害する、収縮性を改善する、被験体の生存を延ばす、またはこれらの組み合わせである。
【０１２３】
心筋梗塞および／またはアンギナを処置するために使用され得るカーゴの非限定的例としては、ＮＦ−κＢインヒビター、ＮＢＤペプチド、ヘムオキシゲナーゼ、抗酸化剤、ｉＮＯＳ、Ｓ１００Ａ１、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ＴＧＦβインヒビター、ＶＥＧＦ、ソニックヘッジホッグタンパク質、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＨＧＦ、およびＩＡＰが挙げられる。
【０１２４】
本開示は、心臓を損傷する代謝欠損に罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、カーゴに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供し、ここで上記カーゴは、上記代謝欠損を修正する。
【０１２５】
本開示は、ゴーシェ病に罹患している被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、グルコセレブロシダーゼに連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む複合体を投与することを包含する方法を提供する。
【０１２６】
配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰ／カーゴ複合体が被験体に投与される場合、上記被験体は、ヒト被験体または非ヒト被験体、例えば、霊長類、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、ウマ）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）または家畜（ウシ、ヤギなど）であり得る。
【０１２７】
配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰ−カーゴ複合体は、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、経口、直腸などが挙げられるが、これらに限定されない任意の経路によって投与され得る。
【０１２８】
本開示は、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰ−カーゴおよび適切な薬学的キャリア（例えば、水、生理食塩水）を含む医薬組成物を提供する。
【０１２９】
一局面において、本開示は、心房不整脈および／または心室不整脈に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記ヒト被験体に、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に連結したＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を投与することによって、カーゴを上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含する方法を提供する。ある種の実施形態において、本開示は、上記ヒト被験体に、抗不整脈特性を有する部分（例えば、アミオダロン）に結合体化したＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を投与することによって、心室性期外収縮、心室頻拍、および心室細動から選択される心室不整脈を処置する方法を提供する。
【０１３０】
一局面において、本開示は、ＳＨＦに罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、上記方法は、上記ヒト被験体に、ニューレグリン−１βに結合体化したＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）の配列を含むＣＴＰ１２ａａ、ＳＱＹＳＲＴ（配列番号５）の配列を有するＣＴＰ６ａａ、またはＡＡＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号２）の配列を有するＣＴＰ１２ａａ（ＣＴＰ−Ｐ２Ａ）を投与することによって、カーゴを上記ヒト被験体の心筋細胞に導入することを包含する方法を提供する。
【０１３１】
一局面において、本開示は、上記被験体に、例えば、配列番号１、２、４、または５を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）を投与し、ＰｌａｎａｒまたはＳＰＥＣＴイメージングを通じて、上記被験体の心臓への上記結合体の送達をモニターすることによって、被験体の心筋灌流分析を行う方法を提供する。
【０１３２】
別の局面において、本開示は、上記被験体に、例えば、配列番号１を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）を投与すること；上記被験体を上記ＣＴＰ結合体の検出を促す条件に曝すこと；および画像を得ることによって、心臓組織を画像化または検出する方法を提供する。この局面において、上記抗不整脈薬−ＣＴＰは、必要に応じて、検出可能な部分をさらに含む。
【０１３３】
例えば、配列番号１を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）が被験体に投与される場合、上記被験体は、ヒト被験体または非ヒト被験体、例えば、霊長類、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、ウマ）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）または家畜（ウシ、ヤギなど）であり得る。
【０１３４】
例えば、配列番号１、２、４、または５を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）は、静脈内、心房内、腹腔内、皮下、経口、直腸などが挙げられるが、これらに限定されない任意の経路によって投与され得る。
【０１３５】
本開示は、例えば、配列番号１、２、４、または５を含むＣＴＰの結合体（例えば、抗不整脈薬−ＣＴＰまたはニューレグリン−１β−ＣＴＰ）および適切な薬学的キャリア（例えば、水または生理食塩水）を含む医薬組成物を提供する。
【０１３６】
ＶＩ．医薬組成物
治療用途に関しては、本明細書で記載される治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰは、好ましくは、薬学的に受容可能なキャリアと合わせられる。用語「薬学的に受容可能な」とは、本明細書で使用される場合、妥当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、や他の問題もしくは合併症もなく、ヒトおよび動物の組織と接触させての使用に適切な、合理的な利益／リスク比に相応した、それら化合物、物質、組成物、および／または投与形態に言及する。
【０１３７】
用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、本明細書で使用される場合、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、や他の問題もしくは合併症もなく、ヒトおよび動物の組織と接触させての使用に適切な、合理的な利益／リスク比に相応した、バッファ、キャリア、および賦形剤に言及する。薬学的に受容可能なキャリアとしては、標準的な薬学的キャリアのうちのいずれか、例えば、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン（例えば、油／水もしくは水／油エマルジョンのような）、および種々のタイプの湿潤剤が挙げられる。上記組成物はまた、安定化剤および保存剤を含み得る。キャリア、安定化剤および補助剤の例に関しては、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１５版，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ  ［１９７５］を参照のこと。薬学的に受容可能なキャリアとしては、薬学的投与と適合性である、バッファ、溶媒、分散媒、コーティング、等張化剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および剤の使用は、当該分野で公知である。
【０１３８】
ある種の実施形態において、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰは、例えば、酸性環境において、例えば、消化管において、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰの安定性を増強するために、製剤化され得るか、または例えば、経腸的経路（例えば、経口）によってｐＨ上昇剤、例えば、プロトンポンプインヒビター（ＰＰＩ）と共投与され得る（同時または逐次的のいずれかにおいて）。
【０１３９】
プロトンポンプインヒビターは、主な作用が著しくかつ長時間作用性の胃酸生成の低減である薬物の群である。プロトンポンプインヒビターは、胃壁細胞の水素／カリウムアデノシントリホスファターゼ酵素系（Ｈ＋／Ｋ＋  ＡＴＰａｓｅ、またはより一般には、単に胃プロトンポンプ）を遮断することによって作用する。上記プロトンポンプは、胃内腔へのＨ＋イオンの分泌を直接的に担い、酸分泌を阻害するための理想的な標的となる胃酸分泌における最終段階である。プロトンポンプインヒビターの例としては、以下が挙げられる：  オメプラゾール（商標名：  ＬＯＳＥＣ（登録商標）、ＰＲＩＬＯＳＥＣ（登録商標）、ＺＥＧＥＲＩＤ（登録商標））；ランソプラゾール（商標名：  ＰＲＥＶＡＣＩＤ（登録商標）、ＺＯＴＯＮ（登録商標）、ＩＮＨＩＢＩＴＯＬ（登録商標））；エソメプラゾール（商標名：  ＮＥＸＩＵＭ（登録商標））；およびパントプラゾール（商標名：  ＰＲＯＴＯＮＩＸ（登録商標）、ＳＯＭＡＣ（登録商標）、ＰＡＮＴＯＬＯＣ（登録商標））。
【０１４０】
本明細書で開示される、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰを含む医薬組成物は、単位投与形態において示され得、任意の適切な方法によって調製され得る。医薬組成物は、その意図した投与経路と適合するように製剤化されるべきである。上記医薬組成物は、種々の形態にあり得る。これらとしては、例えば、液体、半固体および固体の投与形態（例えば、溶液（例えば、注射用液剤および注入用液剤）、分散液剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤および坐剤が挙げられる。好ましい形態は、意図した投与様式および治療用途に依存する。
【０１４１】
上記組成物は、好ましくは経腸的（例えば、経口的）投与のために製剤化されるが、このような組成物は、非経口的様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）によって投与され得る。語句「非経口的投与」および「非経口的に投与される」とは、本明細書で使用される場合、経腸的投与および局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、包内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨下の注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
上記組成物は、液剤、マイクロエマルジョン剤、分散液剤、リポソーム剤、または高濃度での安定な貯蔵に適した他の秩序だった構造物として製剤化され得る。滅菌注射用液剤は、本明細書で記載される薬剤を必要とされる量において、適切な溶媒の中に、必要な場合には上記で列挙した成分の１またはこれより多くの組み合わせとともに組み込み、続いて、濾過滅菌することによって調製され得る。概して、分散液剤は、本明細書で記載される薬剤を、基本的な分散媒および上記で列挙されるものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射用液剤の調製のための滅菌粉末の場合には、好ましい調製方法は、本明細書で記載される薬剤と任意のさらなる所望の成分との粉末を、予め滅菌濾過したそれらの溶液から得る真空乾燥および凍結乾燥である。液剤の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散液剤の場合には必要とされる粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射用組成物の長期間吸収は、上記組成物の中に、吸収を遅らせる剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を含めることによってもたらされ得る。
【０１４３】
投与様式に依存して、例えば、非経口投与によって、滅菌されている医薬製剤を生成することは望ましいことであり得る。滅菌は、任意の適切な方法、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって達成され得る。上記組成物が凍結乾燥される場合、濾過滅菌は、凍結乾燥および再構成の前または後に行われ得る。
【０１４４】
ある種の実施形態において、開示される組成物は、例えば、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号５のＣＴＰをコーティングし得るポリイオン性（ｐｏｌｙｉｏｎｉｃ）試薬を含む。すなわち、上記組成物は、ポリイオン性コーティングを含む。例示的なポリイオン性試薬としては、ＰＳＳ（ポリ（４−スチレンスルホン酸ナトリウム）、ＰＡＡ（ポリアクリル酸ナトリウム塩）、ＰＭＧ（ポリ（メチレン−ｃｏ−グアニジン）ヒドロクロリド）、ＤＳ（デキストラン硫酸）、ＰＭＡ（ポリ（アクリル酸メチル））、またはＰＶＳ（ポリビニルシロキサン）が挙げられる。
【０１４５】
凍結乾燥製剤
本開示の処置方法における使用のための凍結乾燥製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）および凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む。ある種の実施形態において、本開示の処置方法における使用のための凍結乾燥製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１のＣＴＰ１２ａａおよび凍結乾燥保護剤を含む。ある種の実施形態において、本開示の処置方法における使用のための凍結乾燥製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号２のＣＴＰ１２ａａおよび凍結乾燥保護剤を含む。ある種の実施形態において、本開示の処置方法における使用のための凍結乾燥製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号５のＣＴＰ６ａａおよび凍結乾燥保護剤を含む。ある種の実施形態において、上記凍結乾燥保護剤は、糖、例えば、ジサッカリドであり得る。ある種の実施形態において、上記凍結乾燥保護剤は、スクロースまたはマルトースであり得る。ある種の実施形態において、上記凍結乾燥製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、増量剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、および／または保存剤のうちの１またはこれより多くを含み得る。
【０１４６】
上記凍結乾燥した薬物生成物の安定化のために有用なスクロースまたはマルトースの量は、少なくとも１：２のタンパク質  対  スクロースまたはマルトースの重量比にあり得る。ある種の実施形態において、上記タンパク質  対  スクロースまたはマルトース重量比は、１：２〜１：５であり得る。
【０１４７】
ある種の実施形態において、上記製剤のｐＨは、凍結乾燥前に、薬学的に受容可能な酸および／または塩基の添加によって設定され得る。ある種の実施形態において、上記薬学的に受容可能な酸は、塩酸であり得る。ある種の実施形態において、上記薬学的に受容可能な塩基は、水酸化ナトリウムであり得る。
【０１４８】
凍結乾燥の前に、本開示のタンパク質を含む液剤のｐＨは、約６〜約８の間に調整され得る。ある種の実施形態において、上記凍結乾燥した薬物生成物のｐＨは、約７〜約８であり得る。
【０１４９】
ある種の実施形態において、塩または緩衝液構成成分は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの量で添加され得る。上記塩および／または緩衝液は、薬学的に受容可能でありかつ種々の公知の酸（無機および有機）と「塩基形成（ｂａｓｅ  ｆｏｒｍｉｎｇ）」金属またはアミンとから得られる。ある種の実施形態において、上記緩衝液は、リン酸緩衝液であり得る。ある種の実施形態において、上記緩衝液は、グリシネート緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液であり得る。その場合、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムイオンは、対イオンとして働き得る。
【０１５０】
ある種の実施形態において、「増量剤」が添加され得る。「増量剤」は、凍結乾燥混合物にかさをあたえ、凍結乾燥ケークの物理的構造に寄与する（例えば、開孔構造を維持する本質的に一様な凍結乾燥ケークの生成を容易にする）化合物である。例示的な増量剤としては、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびソルビトールが挙げられる。本開示の凍結乾燥製剤は、このような増量剤を含み得る。
【０１５１】
保存剤は、必要に応じて、細菌の活動を低減するために、本明細書で記載される製剤に添加され得る。保存剤の添加は、例えば、複数回使用（複数用量）製剤の生成を容易にし得る。
【０１５２】
ある種の実施形態において、本開示の処置方法における使用のための凍結乾燥した薬物生成物は、水性キャリアで構成され得る。本明細書中の目的の水性キャリアは、薬学的に受容可能（例えば、ヒトへの投与に関して安全かつ非毒性）であり、凍結乾燥後に、液体製剤の調製のために有用であるキャリアである。例示的な希釈剤としては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝化溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。
【０１５３】
ある種の実施形態において、本開示の凍結乾燥した薬物生成物は、滅菌注射用水、ＵＳＰ（ＳＷＦＩ）または０．９％  塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰのいずれかで再構成される。再構成の間に、上記凍結乾燥粉末は、溶液へと溶解する。
【０１５４】
ある種の実施形態において、本開示の凍結乾燥したタンパク質生成物は、約４．５ｍＬ  注射用水へと構成され、０．９％  食塩水溶液（塩化ナトリウム溶液）で希釈される。
【０１５５】
液体製剤
実施形態において、本開示の薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）は、本明細書で記載される処置方法における使用のための液体製剤として製剤化される。上記液体製剤は、ゴム栓で閉じて、アルミニウムクリンプシールクロージャーでシールしたＵＳＰ／Ｐｈ  Ｅｕｒ  タイプＩ  ５０Ｒバイアルにおいて１０ｍｇ／ｍＬ  濃度で提示され得る。上記栓は、ＵＳＰおよびＰｈ  Ｅｕｒに従うエラストマーから作製され得る。ある種の実施形態において、バイアルは、抜き取り可能な容積を可能にするために、有効量の、薬物または治療剤に結合体化したＣＴＰの溶液で満たされ得る。ある種の実施形態において、上記液体製剤は、０．９％  食塩水溶液で希釈され得る。
【０１５６】
ある種の実施形態において、本開示の方法における使用のための液体製剤は、安定化レベルで、糖と組み合わせて液剤として調製され得る。ある種の実施形態において、上記液体製剤は、水性キャリア中に調製され得る。ある種の実施形態において、安定化剤は、静脈内投与に望ましくないまたは不適切な粘性を生じ得る量以下の量で添加され得る。ある種の実施形態において、上記糖は、ジサッカリド、例えば、スクロースであり得る。ある種の実施形態において、上記液体製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、および保存剤のうちの１またはこれより多くを含み得る。
【０１５７】
ある種の実施形態において、上記液体製剤のｐＨは、薬学的に受容可能な酸および／または塩基の添加によって設定され得る。ある種の実施形態において、上記薬学的に受容可能な酸は、塩酸であり得る。ある種の実施形態において、上記塩基は、水酸化ナトリウムであり得る。
【０１５８】
凝集に加えて、脱アミド化は、発酵、採取／細胞清澄化、精製、薬物物質／薬物生成物貯蔵の間、ならびにサンプル分析の間に起こり得るペプチドおよびタンパク質の一般的な生成物場アリアンとである。脱アミド化は、加水分解を受け得るスクシンイミド中間体を形成するタンパク質からＮＨ３を失わせることである。上記スクシンイミド中間体は、親ペプチドの１７単位質量減少を生じる。その後の加水分解は、１８単位質量の増加を生じる。上記スクシンイミド中間体の単離は、水性条件下での不安定性に起因して困難である。よって、脱アミド化は代表的には、１単位質量の増加として検出可能である。アスパラギンの脱アミド化は、アスパラギン酸またはイソアスパラギン酸のいずれかを生じる。脱アミド化の速度に影響を及ぼすパラメーターとしては、ｐＨ、温度、溶媒誘電率、イオン強度、一次配列、局所的ポリペプチドコンホメーションおよび三次構造が挙げられる。上記ペプチド鎖におけるＡｓｎに隣接するアミノ酸残基は、脱アミド化速度に影響を及ぼす。タンパク質配列におけるＡｓｎの後に続くＧｌｙおよびＳｅｒは、脱アミド化に対してより高い感受性を生じる。
【０１５９】
ある種の実施形態において、本開示で記載される処置方法における使用のための液体製剤は、上記タンパク質生成物の脱アミド化を防止するｐＨおよび湿度の条件下で保存され得る。
【０１６０】
本明細書中の目的の水性キャリアは、薬学的に受容可能な（ヒトへの投与に関して安全かつ非毒性）であり、液体製剤調製のために有用であるキャリアである。例示的なキャリアとしては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝化溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。
【０１６１】
保存剤は、必要に応じて、細菌の活動を低減するために、本明細書中の製剤に添加され得る。保存剤の添加は、例えば、複数回使用（複数用量）製剤の生成を容易にし得る。
【０１６２】
静脈内（ＩＶ）製剤は、特定の場合において、例えば、患者が移植後に病院にいて、ＩＶ経路を介して全ての薬物を受容する場合に、好ましい投与経路であり得る。ある種の実施形態において、上記液体製剤は、投与前に０．９％  塩化ナトリウム溶液で希釈される。ある種の実施形態において、上記希釈した注射用の薬物生成物は、等張性であり、静脈内注入による投与に適切である。
【０１６３】
ある種の実施形態において、塩または緩衝液構成成分は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの量で添加され得る。上記塩および／または緩衝液は、薬学的に受容可能でありかつ種々の公知の酸（無機および有機）と「塩基形成」金属またはアミンとから得られる。ある種の実施形態において、上記緩衝液は、リン酸緩衝液であり得る。ある種の実施形態において、上記緩衝液は、グリシネート緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液であり得る。その場合、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムイオンは、対イオンとして働き得る。
【０１６４】
保存剤は、細菌の活動を低減するために、本明細書中の製剤に添加され得る。保存剤の添加は、例えば、複数回使用（複数用量）製剤の生成を容易にし得る。
【０１６５】
本明細書中の目的の水性キャリアは、薬学的に受容可能（例えば、ヒトへの投与に関して安全かつ非毒性）であり、液体製剤の調製のために有用であるキャリアである。例示的なキャリアとしては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝化溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。
【０１６６】
保存剤は、必要に応じて、細菌の活動を低減するために、本明細書中の製剤に添加され得る。保存剤の添加は、例えば、複数回使用（複数用量）製剤の生成を容易にし得る。
【０１６７】
別の局面において、本開示はまた、ニューレグリン−１βまたは抗不整脈特性を有する部分に結合体化した心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）を含む、送達するために注射に適した徐放性製剤（長期間持続製剤）を提供する。
【０１６８】
ＶＩＩ．投与レジメン
一局面において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を含むペプチドの持続送達製剤（sustained-delivery  formulation）が、本明細書で提供される。ある種の実施形態において、上記製剤は、制御放出システムを使用する。ある種の実施形態において、上記製剤は、緩慢放出システムを使用する。ある種の実施形態において、本開示の持続送達製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結したＣＴＰ１２ａａ（配列番号１）を含むペプチドを含む。ある種の実施形態において、本開示の持続送達製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結したＣＴＰ１２ａａ（配列番号２）を含むペプチドを含む。ある種の実施形態において、本開示の持続送達製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結したＣＴＰ６ａａ（配列番号５）を含むペプチドを含む。
【０１６９】
ある種の実施形態において、上記製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した本開示の心臓特異的標的化ペプチド（ＣＴＰ）（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を含むペプチドを、少なくとも６時間（例えば、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間）の期間にわたって送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを、少なくとも６時間（例えば、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間）の期間にわたって送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結された、配列番号２によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを、少なくとも６時間（例えば、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間）の期間にわたって送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結された、配列番号５によって表されたＣＴＰ６ａａを含むペプチドを、少なくとも６時間（例えば、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、または２４時間）の期間にわたって送達する。
【０１７０】
ある種の実施形態において、上記製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、または２４時間の期間にわたって送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、または２４時間の期間にわたって送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号２によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、または２４時間の期間にわたって送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号５によって表されるＣＴＰ６ａａを含むペプチドを、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、または２４時間にわたって送達する。
【０１７１】
ある種の実施形態において、上記製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を、少なくとも毎日１回（例えば、１日１回、１日２回、１日３回）送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを、少なくとも毎日１回（例えば、１日１回、１日２回、１日３回）送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号２によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを、少なくとも毎日１回（例えば、１日１回、１日２回、１日３回）送達する。ある種の実施形態において、上記製剤は、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号５によって表されるＣＴＰ６ａａを含むペプチドを、少なくとも毎日１回（例えば、１日１回、１日２回、１日３回）送達する。
【０１７２】
ある種の実施形態において、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を送達する製剤は、少なくとも１週間に１回（例えば、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、４回、５回、６回、７回、またはこれより多くの回数）投与される。ある種の実施形態において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを送達する製剤は、少なくとも１週間に１回（例えば、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、４回、５回、６回、７回、またはこれより多くの回数）投与される。ある種の実施形態において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号２によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを送達する製剤は、少なくとも１週間に１回（例えば、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、４回、５回、６回、７回、またはこれより多くの回数）投与される。  ある種の実施形態において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号５によって表されるＣＴＰ６ａａを含むペプチドを送達する製剤は、少なくとも１週間に１回（例えば、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、４回、５回、６回、７回、またはこれより多くの回数）投与される。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を送達する製剤は、１ヶ月あたり約１回、２ヶ月ごとに約１回、３ヶ月ごとに約１回、２週間ごとに約１回、３週間ごとに約１回、４週間ごとに約１回、５週間ごとに約１回、６週間ごとに約１回、7週間ごとに約１回、８週間ごとに約１回、９週間ごとに約１回、または１０週間ごとに約１回投与される徐放性製剤である。ある種の実施形態において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号１によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを送達する製剤は、１ヶ月あたり約１回、２ヶ月ごとに約１回、３ヶ月ごとに約１回、２週間ごとに約１回、３週間ごとに約１回、４週間ごとに約１回、５週間ごとに約１回、６週間ごとに約１回、7週間ごとに約１回、８週間ごとに約１回、９週間ごとに約１回、または１０週間ごとに約１回投与される徐放性製剤である。ある種の実施形態において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号２によって表されるＣＴＰ１２ａａを含むペプチドを送達する製剤は、１ヶ月あたり約１回、２ヶ月ごとに約１回、３ヶ月ごとに約１回、２週間ごとに約１回、３週間ごとに約１回、４週間ごとに約１回、５週間ごとに約１回、６週間ごとに約１回、7週間ごとに約１回、８週間ごとに約１回、９週間ごとに約１回、または１０週間ごとに約１回投与される徐放性製剤である。ある種の実施形態において、薬物または治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した配列番号５によって表されるＣＴＰ６ａａを含むペプチドを送達する製剤は、１ヶ月あたり約１回、２ヶ月ごとに約１回、３ヶ月ごとに約１回、２週間ごとに約１回、３週間ごとに約１回、４週間ごとに約１回、５週間ごとに約１回、６週間ごとに約１回、7週間ごとに約１回、８週間ごとに約１回、９週間ごとに約１回、または１０週間ごとに約１回投与される徐放性製剤である。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、治療剤（例えば、アミオダロンまたはニューレグリン−１β）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）は、２４時間の期間、例えば、投与の最初の２４時間の期間にわたって、約１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ、または２０００ｍｇの割合で投与される。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される製剤は、１００ｍｇ〜５００ｍｇの間、１００ｍｇ〜１０００ｍｇの間、５００ｍｇ〜１０００ｍｇの間、７００ｍｇ〜１０００ｍｇの間、７００ｍｇ〜１５００ｍｇの間、１２００ｍｇ〜１５００ｍｇの間、１０００ｍｇ〜１５００ｍｇの間、１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの間、１５００ｍｇ〜２０００ｍｇの間、１７００ｍｇ〜２０００ｍｇの間、８００ｍｇ〜１２００ｍｇの間、８００〜１０００ｍｇの間、８００ｍｇ〜１６００ｍｇの間、６００ｍｇ〜８００ｍｇの間、４００ｍｇ〜６００ｍｇの間、または９００〜１２００ｍｇの間の割合で、２４時間の期間、例えば、投与の最初の２４時間の期間にわたって投与される。いくつかの実施形態において、治療剤（例えば、アミオダロンまたはニューレグリン−１β）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）は、経口的に、静脈内に、経腸的に、非経口的に、局所的に、注射によって、筋肉内に、動脈内に、髄腔内に、包内に、眼窩内に、心臓内に、皮内に、腹腔内に、経気管に、皮下に、表皮下に、関節内に、被膜下に、くも膜下に、脊髄内に、硬膜外もしくは胸骨下注射によって、または注入によって投与される製剤の形態において投与される。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される製剤は、注入プロトコールによって投与され得る。例えば、いくつかの実施形態において、製剤は、例えば、注入によって、例えば、生理食塩水溶液の形態において投与され得、ここで上記溶液は、治療剤（例えば、アミオダロンまたはニューレグリン−１β）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を含む。いくつかの実施形態において、治療剤に連結したペプチドは、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、７２０ｍｇ、７５０ｍｇ、０ｍｇ〜１００ｍｇ、５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、５０ｍｇ、ｔｏ  １００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、２００ｍｇ〜４００ｍｇ、２００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、１５０ｍｇ〜３００ｍｇ、１００ｍｇ〜３６０ｍｇ、１００ｍｇ〜４００ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、または３００ｍｇ〜７００ｍｇの量において、約５分間、１０分間、２０分間、３０分間、４０分間、５０分間、６０分間、９０分間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、または１週間の期間にわたって、患者に投与される。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される製剤は、注入プロトコールによって投与される。例えば、いくつかの実施形態において、製剤は、例えば、注入によって、例えば、生理食塩水溶液の形態において投与され得、ここで上記溶液は、治療剤（例えば、アミオダロンまたはニューレグリン−１β）に連結した本開示のペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）を含む。いくつかの実施形態において、治療剤に連結したペプチドは、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、０ｍｇ〜１００ｍｇ、５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、２００ｍｇ〜４００ｍｇ、２００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、または１５０ｍｇ〜３００ｍｇの量において、注入の最初の約１分間、３分間、５分間、７分間、１０分間、１２分間、１５分間、２０分間、または３０分間にわたって、患者に投与される；その後、上記治療剤に連結したペプチドは、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、７２０ｍｇ、７５０ｍｇ、０ｍｇ〜１００ｍｇ、５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、２００ｍｇ〜４００ｍｇ、２００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、１５０ｍｇ〜３００ｍｇ、１００ｍｇ〜３６０ｍｇ、１００ｍｇ〜４００ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、または  ３００ｍｇ〜７００ｍｇの量において、注入の次の１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、または１５時間にわたって、患者に投与され；その後、上記治療剤に連結したペプチドは、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５１０ｍｇ、５２０ｍｇ、５３０ｍｇ、５４０ｍｇ、５５０ｍｇ、５６０ｍｇ、５７０ｍｇ、５８０ｍｇ、５９０ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、７２０ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１０８０ｍｇ、０ｍｇ〜１００ｍｇ、５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、２００ｍｇ〜４００ｍｇ、２００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、��５０ｍｇ〜３００ｍｇ、１００ｍｇ〜３６０ｍｇ、１００ｍｇ〜４００ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、または  ３００ｍｇ〜７００ｍｇ、１００ｍｇ〜５５０ｍｇ、２００ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５５０ｍｇ、４００ｍｇ〜５５０ｍｇ、５００ｍｇ〜６００ｍｇ、５００ｍｇ〜７００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜９００ｍｇ、５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、５００ｍｇ〜１１００ｍｇ、または４００ｍｇ〜１１００ｍｇの量において、注入の次の３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間  １８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、３０時間、または３６時間にわたって、患者に投与される。特定の局面において、上記治療剤に連結したペプチドは、約１５０ｍｇの量において注入の最初の１０分間にわたって、続いて、３６０ｍｇの量において次の６時間にわたって、および続いて、５４０ｍｇの量において次の１８時間にわたって、上記患者に投与される。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される製剤は、例えば、注入によって投与される。ここで治療剤（例えば、アミオダロンまたはニューレグリン−１β）に連結した本明細書で記載されるペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）は、投与の最初の約２４時間後に、特定の割合で投与される。例えば、本明細書で記載されるいくつかの実施形態において、投与の最初の約２４時間後に、治療剤に連結したペプチドは、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５１０ｍｇ、５２０ｍｇ、５３０ｍｇ、５４０ｍｇ、５５０ｍｇ、５６０ｍｇ、５７０ｍｇ、５８０ｍｇ、５９０ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、７２０ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１０５０ｍｇ、１０８０ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、０ｍｇ〜１００ｍｇ、５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、２００ｍｇ〜４００ｍｇ、２００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜６００ｍｇ、１５０ｍｇ〜３００ｍｇ、１００ｍｇ〜３６０ｍｇ、１００ｍｇ〜４００ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、３００ｍｇ〜６００ｍｇ、または３００ｍｇ〜７００ｍｇ、１００ｍｇ〜５５０ｍｇ、２００ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５５０ｍｇ、４００ｍｇ〜５５０ｍｇ、４００ｍｇ〜６００ｍｇ、５００ｍｇ〜６００ｍｇ、５００ｍｇ〜７００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜９００ｍｇ、５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、５００ｍｇ〜１１００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０００ｍｇ〜１５００ｍｇ、１０００ｍｇ〜１２００ｍｇ、１０００ｍｇ〜１４００ｍｇ、１１００ｍｇ〜１５００ｍｇ、または４００ｍｇ〜１１００ｍｇの量において、投与の最初の２４時間後に、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２７時間、３０時間、または３６時間にわたって、患者に投与される。本明細書で記載される特定の実施形態において、治療剤に連結したペプチドは、投与の最初の２４時間後に、約７２０ｍｇの量において、２４時間にわたって患者に投与される。本明細書で記載される実施形態において、前述の投与は、約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、１０日間、１２日間、２週間、１５日間、１８日間、２０日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、またはこれより長い期間にわたって、継続され得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される製剤は、治療剤（例えば、アミオダロン）に連結した本明細書で記載されるペプチド（例えば、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ）が、患者において約１０〜２５００ｎｇ／ｍＬの治療剤の血清循環レベルを達成するために投与される場合、例えば、注入によってまたは皮下に投与される。例えば、本明細書で記載されるいくつかの実施形態において、投与の最初の２４時間後に、アミオダロンに連結したペプチドは、約１０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２２５ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２７５ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３２５ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７５ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４７５ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、５１０ｎｇ／ｍＬ、５２０ｎｇ／ｍＬ、５３０ｎｇ／ｍＬ、５４０ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５６０ｎｇ／ｍＬ、５７０ｎｇ／ｍＬ、５８０ｎｇ／ｍＬ、５９０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、７２０ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、１０５０ｎｇ／ｍＬ、１０８０ｎｇ／ｍＬ、１１００ｎｇ／ｍＬ、１２００ｎｇ／ｍＬ、１３００ｎｇ／ｍＬ、１４００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１６００ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜２００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ〜４００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜６００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜３６０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜４００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ〜６００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ〜６００ｎｇ／ｍＬ、または３００ｎｇ／ｍＬ〜７００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ〜５５０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ〜５５０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ〜５５０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ〜５５０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ〜６００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜６００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜７００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜８００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜９００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜１１００ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ〜８００ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ〜１５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ〜１２００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ〜１４００ｎｇ／ｍＬ、１１００ｎｇ／ｍＬ〜１５００ｎｇ／ｍＬ、または４００ｎｇ／ｍＬ〜１１００  ｎｇ／ｍＬの血清循環レベルを達成する量で、投与の最初の２４時間後に、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間���５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間  １８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２７時間、３０時間、または３６時間にわたって患者に投与される。本明細書で記載される特定の実施形態において、アミオダロンに連結した配列番号１、２、または５のペプチドは、約１０〜２５００ｎｇ／ｍＬのアミオダロンの血清循環レベルを達成する量で、投与の最初の２４時間後に、２４時間〜７日間にわたって患者に投与される。本明細書で記載される実施形態において、前述の投与は、約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、１０日間、１２日間、２週間、１５日間、１８日間、２０日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、またはより長い期間にわたって継続され得る。
【０１７９】
ＶＩＩＩ．定義
用語「ＣＴＰ」とは、本明細書で使用される場合、心臓特異的標的化ペプチドをいう。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰは、６アミノ酸長のペプチド、ＣＴＰ６ａａから構成される。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰ１２ａａは、１２アミノ酸長のペプチドから構成される。ある種の実施形態において、上記ＣＴＰは、抗不整脈特性を有する部分に結合体化される。
【０１８０】
用語「有効量」とは、本明細書で使用される場合、有益なまたは所望の結果をもたらすために十分な活性薬剤（例えば、本開示の、配列番号１〜３５のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号１、２、または５のＣＴＰ）の量に言及する。有効量は、１回またはこれより多くの投与、適用または投与量において投与され得、特定の製剤や投与経路に限定するとは意図されない。
【０１８１】
本明細書で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、被験体、例えば、ヒトにおける疾患の処置を意味する。これは、（ａ）上記疾患を阻害すること、すなわち、その発生を停止させること；および（ｂ）上記疾患を軽減すること、すなわち、疾患状態の退縮を引き起こすことを含む。本明細書で使用される場合、用語「被験体」および「患者」とは、本明細書で記載される方法および組成物によって処置される生物に言及する。このような生物は、好ましくは、哺乳動物（例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）が挙げられるが、これらに限定されず、より好ましくは、ヒトが挙げられる。
【０１８２】
本明細書で記載される方法および組成物は、単独で、または他の治療剤および／もしくはモダリティーと組み合わせて使用され得る。用語「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」投与されるとは、本明細書で使用される場合、２つの（またはこれより多くの）異なる処置が、上記患者に対する上記処置の効果がある時点で重なり合うように、上記被験体が上記障害に苦しむ過程で、上記被験体に送達されることを意味することが理解される。ある種の実施形態において、第２の処置の送達が開始されるときには１つの処置の送達がまだ行われているため、投与に関して重複がある。これはときおり、「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」または「同時送達（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」として本明細書で言及される。他の実施形態において、１つの処置の送達は、他の処置の送達が開始する前に終了する。いずれかの場合のある種の実施形態において、上記処置は、組み合わせ投与が原因でより効果的である。例えば、上記第２の処置は、より有効である。例えば、上記第２の処置が少なくても同等の効果が認められるか、または上記第２の処置は、上記第２の処置が上記第１の処置の非存在下で投与される場合に認められるよりも、または類似の状況が第１の処置で認められるよりも大きな程度まで、症状を低減する。ある種の実施形態において、送達は、症状における低減、または上記障害に関する他のパラメーターが、他の処置の非存在下で送達される１つの処置で観察されるものより大きいようなものである。２つの処置の効果は、部分的に相加的であるか、完全に相加的であるか、または相加的より大きい可能性がある。上記送達は、送達される第１の処置の効果が、第２の処置が送達される場合になお検出可能であるようなものであってよい。
【０１８３】
説明全体を通じて、組成物が、特定の構成成分を有する、包含する、もしくは含むと記載される場合、またはプロセスおよび方法が、特定のステップを有する、包含する、もしくは含むと記載される場合、さらに、記載される構成成分から本質的になるかまたはそれからなる本開示の組成物が存在すること、ならびに記載される処理ステップから本質的になるかまたはそれからなる本開示に従うプロセスおよび方法が存在することは、企図される。
【０１８４】
本出願において、要素または構成成分が、記載される要素または構成成分のリストの中に含まれるおよび／またはリストから選択されるといわれる場合、上記要素もしくは構成成分が、上記記載される要素もしくは構成成分のうちのいずれか１つであり得るか、または上記要素もしくは構成成分が、上記記載される要素もしくは構成成分のうちの２つもしくはこれより多くからなる群より選択され得ることは、理解されるべきである。
【０１８５】
さらに、本明細書で記載される組成物もしくは方法の要素および／もしくは特徴が、本明細書で明示されようが暗示されようが、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく種々の方法で組み合わされ得ることは、理解されるべきである。例えば、特定の化合物に対して言及がなされる場合、その化合物は、文脈から別段理解されない限り、本開示の組成物の実施形態においておよび／または本開示の方法において使用され得る。言い換えると、本出願の範囲内で、実施形態は、明瞭かつ明確な適用が記載されかつ描かれることを可能にする方法で、記載されかつ描写されているが、実施形態が、本教示および発明（複数可）から切り離されることなく、種々に組み合わされ得るかまたは分離され得ることは、意図されかつ認識される。例えば、本明細書で記載されかつ描写される全ての特徴が、本明細書で記載されかつ描写される発明（複数可）の全ての局面に適用可能であり得ることは認識される。
【０１８６】
表現「のうちの少なくとも１つ（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｏｆ）」が、文脈および使用から別段理解されない限り、上記表現の後の記載される物体の各々を個々に、およびその記載される物体のうちの２またはこれより多くの種々の組み合わせを含むことは、理解されるべきである。３またはこれより多くの記載される物体に関連する表現「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」は、文脈から別段理解されない限り、同じ意味を有することが理解されるべきである。
【０１８７】
用語「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む、包含する、含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）、「含む、包含する、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、または「含む、包含する、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」の使用は、これらの文法上の等価物を含め、オープンエンドであり非限定的である、例えば、別段、文脈から具体的に述べられていないかまたは理解されていない限り、さらなる記載されていない要素またはステップを排除しないと概して理解されるべきである。
【０１８８】
用語「約（ａｂｏｕｔ）」の使用が、定量値の前にある場合、本開示はまた、別段具体的に述べられなければ、具体的な定量値自体を含む。本明細書で使用される場合、用語「約」は、別段明記または推測されない限り、名目上の値からの±１０％の変動に言及する。
【０１８９】
ステップの順序またはある種の行為を行うための順序は、本開示が実施可能なままであるかぎりにおいて重要ではないことは、理解されるべきである。さらに、２またはこれより多くのステップまたは行為は、同時に行われてもよい。
【０１９０】
任意のおよび全ての例の使用、または本明細書中の例示的な文言、例えば、「のような、など、例えば（ｓｕｃｈ  ａｓ）」または「が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、本開示をよりよく例証することが意図されるに過ぎず、特許請求されない限り、本発明の範囲に対する限定をもたらさない。本明細書中のいかなる文言も、本開示の実施に本質的であるとして、何らかの特許請求されていない要素を示すとは解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１９１】
以下の実施例は、例証に過ぎず、本発明の範囲または内容を限定するとは如何様にも意図されない。
【０１９２】
実施例１−心臓特異的標的化ペプチドのアラニンスキャン分析
この実施例は、形質導入活性に対する各アミノ酸残基の寄与を決定するために、心臓特異的標的化ペプチドバリアントのデザインおよび試験を記載する。
【０１９３】
以前の試験は、心筋細胞を形質導入し得る合成の１２アミノ酸ペプチド（ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ；  配列番号１）を同定した。ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ（配列番号１）配列のアラニンスキャニング分析を行って、細胞透過能力に対する各アミノ酸残基の重要性および相対的寄与を評価した。
【０１９４】
あらゆるアミノ酸を体系的にアラニンに変異させた配列番号１のバリアントを、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて合成した。各バリアントを、Ｃｙａｎｉｎｅ５．５蛍光色素（Ｃｙ５．５）に結合体化した。ラット心筋細胞株Ｈ９Ｃ２（ＡＴＣＣ，  カタログ番号：  ＣＲＬ−１４４６）を、３０分間、３７℃において、コントロールとしてのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、またはアラニンペプチドバリアントとともにインキュベートした。次いで、細胞を、ＰＢＳで３回洗浄し、トリプシン処理し、再懸濁し、生／死細胞に関して染色し、次いで、Ｃｙ５．５陽性細胞に関してＦＡＣＳソートした。
【０１９５】
試験したアラニンバリアントで形質導入したＨ９Ｃ２細胞の蛍光強度を、図１Ａおよび図１Ｂに示す。各ペプチドバリアントに対してＣｙ５．５陽性Ｈ９Ｃ２細胞のパーセンテージを、変異していないペプチド（配列番号１）に対して正規化し、以下の表２にまとめる。
【０１９６】
【表２】
2021525246.tif 000005
【０１９７】
表３（図１Ｃに表されるデータ）。ペプチド間の蛍光における差異に関して、コントロールに対してＨ９Ｃ２細胞の蛍光活性化セルソーティングを正規化するために、分光光度データを使用して測定した種々のペプチドの蛍光
【表３】
2021525246.tif 000006
【０１９８】
表４（図１Ｄに表されるデータ）：  １０μＭの種々のペプチドとともに３０分間インキュベートした後のＨ９Ｃ２細胞の蛍光活性化セルソーティング
【表４−１】
2021525246.tif 000007
【表４−２】
2021525246.tif 000008
【表４−３】
2021525246.tif 000009
【０１９９】
これらの結果は、配列番号１のＣ末端におけるアミノ酸残基が、上記ペプチドの形質導入能力に大きく寄与することを示した。
【０２００】
実施例２−Ｎ末端およびＣ末端心臓特異的標的化ペプチドのインビトロ形質導入および生存率研究
実施例１に記載される結果は、６個のＣ末端アミノ酸残基における心臓特異的標的化ペプチド（ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ；  配列番号１）残基の細胞透過能力を示唆した。これをさらに評価するために、配列番号１のバリアント（直線状および環化した６アミノ酸のＮ末端およびＣ末端のバリアントを含む）を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて合成した。各バリアントを、Ｃｙ５．５に結合体化した。
【０２０１】
固相ペプチド合成を使用して、全長形態（ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号１））、ならびにＣＴＰ−Ａ（ＮＨ２−ＡＰＷＨＬＳ−ＣＯＯＨ（配列番号２４））といわれるＮ末端６アミノ酸、またはＣＴＰ６ａａ（ＮＨ２−ＳＱＹＳＲＴ−ＣＯＯＨ（配列番号５））ペプチドといわれるＮ末端６アミノ酸を合成した。全長およびＣＴＰ６ａａを、環状形態においても合成した。直線状ランダム１２アミノ酸長のペプチド（ＲＡＮ：  ＮＨ２−ＳＴＬＭＫＦＣＹＶＥＱＮ−ＣＯＯＨ（配列番号２６））もまた、コントロールとして働くように合成した。全てのペプチドを、Ｃｙａｎｉｎｅ５．５（Ｃｙ５．５）で蛍光標識した。単離された、拍動している新生仔マウス心筋細胞（ＣＭＣ）を、１０μＭの上記ペプチドとともに、３７℃において３０分間インキュベートし、ＰＢＳで徹底的に洗浄し、共焦点顕微鏡検査を行った。さらに、Ｈ９Ｃ２細胞（ラット心筋芽細胞株）を、５μＭで３０分間、３７℃において、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはＣｙ５．５で標識した上記ペプチドとともにインキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄し、トリプシン処理し、再懸濁し、生／死細胞に関して染色し、次いで、Ｃｙ５．５陽性細胞に関してＦＡＣＳソートした。
【０２０２】
図２に示されるように、上記心臓特異的標的化ペプチド（ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ；  配列番号１）のより短く、直線状のバージョンほど、試験した３種の細胞株を効率的に形質導入できた。全３種の細胞株にわたって、上記直線状の６アミノ酸Ｃ末端ペプチドバリアントは、少なくとも全長ペプチドと同様に細胞を形質導入した（図２Ａ〜２ＤのＣＴＰ６ａａとＣＴＰとを比較のこと）。上記６アミノ酸ペプチドバリアントの環化は、Ｈ９Ｃ２細胞の形質導入効率をかなり減少させた（図２Ａ〜２Ｂ）。全長ペプチドとＤＭＳＯコントロールとを比較したところ、上記直線状の６アミノ酸Ｃ末端ペプチドバリアントでのＨ９Ｃ２細胞およびＭＥＦの形質導入は、細胞生存率を変化させなかった（図２Ｅ）。
【０２０３】
これらの結果は、６個のＣ末端アミノ酸残基（ＳＱＹＳＲＴ；  配列番号５）が、上記１２アミノ酸の全長心臓特異的標的化ペプチド（ＡＰＷＨＬＳＳＱＹＳＲＴ；  配列番号１）の細胞透過能力を付与するために十分であることを示した。
【０２０４】
実施例３−心臓特異的標的化ペプチドのＣ末端に対する結合体化を介する心筋細胞へのローダミンカーゴの送達
この実施例は、心筋細胞の細胞内区画にローダミンカーゴを送達するために、Ｃ末端において結合体化を介する心臓特異的標的化ペプチドの使用を記載する。
【０２０５】
上記心臓特異的標的化ペプチドを、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて合成し、Ｎ末端においてカルボキシフルオレセイン（緑色）で、およびＣ末端においてエステル結合を通じてローダミン（赤色）で標識した。次いで、ヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来する拍動している心筋細胞を、上記二重標識ペプチドとともに３０分間、３７℃においてインキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄し、その直後に、生細胞画像化を、共焦点顕微鏡検査を使用して行った。
【０２０６】
図３Ｃに示されるように、上記二重標識ペプチドは、拍動しているヒトｉＰＳＣ由来心筋細胞に成功裡に入り、また、上記心臓特異的標的化ペプチドのＣ末端へのカーゴのエステル連結は、細胞内エステラーゼ（複数可）によるエステル結合の切断に起因して、細胞内区画への上記カーゴの送達を生じた。図３Ｃは、ＣＴＰのＣ末端に結合体化した上記ローダミン（赤色）部分が、細胞内部に残る一方で、上記カルボキシフルオレセイン（緑色）部分は排出されたことを示す。従って、データは、心臓特異的標的化ペプチド（例えば、ＣＴＰ６ａａ）のＣ末端へのローダミンカーゴの結合体化が、上記カーゴを細胞内部に送達する一方で、上記Ｎ末端に結合体化したカーゴは排出され、実際に、内部コントロールとして機能することを示した。
【０２０７】
これらの結果は、上記心臓特異的標的化ペプチドのＣ末端が、エステル結合を介して、カーゴ（例えば、ローダミン）に結合体化した場合、上記カーゴを心筋細胞の内部に成功裡に送達することを示した。
【０２０８】
実施例４−心筋組織によるＣｙ５．５標識ＣＴＰの取り込み
心筋組織による標識ＣＴＰペプチドの取り込みの割合を分析するために、６週齢から８週齢の野生型ＣＤ１マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの用量でＣｙ５．５標識ＣＴＰ（ＣＴＰ−Ｃｙ５．５）またはコントロールのＣｙ５．５で標識した１２アミノ酸ランダムペプチド配列（ＲＡＮ−Ｃｙ５．５）を静脈内注射した。上記ペプチドを１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、９０分間、または３６０分間循環させ、その後、マウスを安楽死させ、３ｍＬの１０％  ホルマリンで固定し、心臓組織を解剖した。組織を固定し、パラフィン中に包埋し、切片化した。上記切片を、核染色４０，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で交差染色（ｃｒｏｓｓ−ｓｔａｉｎ）し、マウントし、蛍光顕微鏡法を行った。ＩｍａｇｅＪ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ，  ＵＳＡ）を使用して、蛍光を定量した。全ての時点およびペプチドを、三連で実行した。ＣＴＰ−Ｃｙ５．５の頑強な取り込みが観察され、注射後１５分でピークを迎えた（図５）。有意により多いＣＴＰ−Ｃｙ５．５の取り込みは、ＲＡＮ−Ｃｙ５．５の取り込みと比較して、各時点で観察された。
【０２０９】
さらに、蛍光標識したＣＴＰバリアント（ＣＴＰ、ＣＴＰ−Ｂ、Ｈ４Ａ、Ｐ２Ａ）または蛍光標識したランダムペプチド配列（ＲＡＮ）をマウスに注射し、固定した心筋組織において蛍光強度を測定した。マウスにペプチドを注射し、注射して１５分後に、心臓組織を解剖し、低温切片化し、染色し、蛍光強度に関して分析した。結果を、図６Ａおよび図６Ｂに示す。図６Ｂの結果は、心筋組織における蛍光強度が、ＣＴＰと比較して、ＣＴＰ−ＢまたはＰ２Ａの注射後に有意に大きかったことを示す。これらの結果は、ＣＴＰペプチドが心筋組織によって迅速に取り込まれ（注射の１５分後にピーク取り込みに達する）、ＣＴＰ−Ｂおよびアラニンペプチドバリアントが、ランダムペプチド配列およびＣＴＰと比較して、優れた取り込みを示すことを実証する。
【０２１０】
実施例５−心房不整脈および／または心室不整脈を処置するためのアミオダロン−ＣＴＰ
アミオダロン−ＣＴＰペプチドの固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）化学と、Ｌｉｂｅｒｔｙ  ＣＥＭマイクロ波合成器上でのＯｘｙｍａ／ＤＩＣ（エチル−（２Ｚ）−２−シアノ−２−ヒドロキシイミノアセテート／Ｎ，Ｎ  ジイソプロピルカルボジイミド）活性化とを使用して、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂上でＣＴＰペプチドを合成して行う。ペプチド鎖アセンブリの完了後に、ＮＨ２−ＣＴＰ−ＭＢＨＡ樹脂のＮ末端アミノ基を、ＤＩＰＥＡ／ＴＢＴＵ／Ｈｏｂｔ／ＤＭＦ中の６−（Ｆｍｏｃ−アミノ）−ヘキサン酸で、室温において一晩結合体化する。次に、ＦＭＯＣ基を、室温において３０分間、２０％  ピペリジン／ＤＭＦを使用して、ＦＭＯＣ−ヘキサノイル−ＣＴＰペプチド−ＭＢＨＡ樹脂から除去する。次いで、アミオダロン−ＨＣＬ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）は、イミン結合（シッフ塩基）を介して、ＮＨ２−ヘキサノイル−ＣＴＰペプチド−ＭＢＨＡ樹脂の遊離Ｎ末端へのマイクロ波支援カップリングを受ける。アミオダロン−ヘキサノイル−ＣＴＰペプチド−ＭＢＨＡ樹脂の切断を、室温において２時間、ＴＦＡ／スカベンジャーを使用して達成し、次いで、ジエチルエーテルで沈殿させる。残留スカベンジャーを、３回のエーテル洗浄によって粗製ペプチドから抽出する。
【０２１１】
サンプルを遠心分離して、構成成分を分離する。次いで、得られる粗製アミオダロン−ヘキサノイル−ＣＴＰペプチド−ＣＯＮＨ２ペプチドを風乾し、標準的なアセトニトリル／０．１％ＴＦＡ勾配条件を使用して、Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐｒｅｐ  ４０００クロマトグラフィーシステムで分取用Ｃ−５  ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製する。Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅクロマトグラフィーシステムでの分析用Ｃ−５  ＲＰ−ＨＰＬＣ特徴付け、続いて、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＶｏｙａｇｅｒワークステーションでのＭＡＬＤＩ−Ｔｏｆ分析を使用して、最終生成物の予測純度および質量を確認する。水性溶液中の精製したアミオダロン−ヘキサノイル−ＣＴＰペプチドを平衡化し、続いて、シッフ塩基の加水分解を介するアミオダロンのインビトロ放出を検証するために、分析用逆相ＨＰＬＣをモニターした。
【０２１２】
実施例６−ＳＨＦの処置のためのニューレグリン−１β−ＣＴＰ
ニューレグリン−１βは、そのレセプター（ＥｒｂＢ２−４）とともに、正常な心臓発生に必要とされ、アポトーシス、心筋線維化を低減し、糖尿病の動物モデルにおいて、梗塞だけでなく、梗塞サイズを低減することが示されている。少数の小規模臨床試験がまた、ＳＨＦを有する患者において組換えヒトニューレグリン−１βでの非経口的処置の有効性を示している。しかし、この治療を臨床に橋渡しするにあたっての進展は、有意な肝毒性および低血糖症によって妨げられている。
【０２１３】
この実施例は、ＣＴＰがニューレグリン−１βの下流にあるか、またはそのＣ末端に付着した、ニューレグリン−１βおよびＣＴＰペプチドの融合タンパク質を提供する。ＣＴＰの配列が逆方向配列に付加されたプライマーを、ニューレグリン−１βのためにデザインする。その組み合わせた融合タンパク質配列を、肺、肝臓または腎臓から抽出したマウスゲノムＤＮＡを使用して、ＰＣＲによって生成する。標準的クローニング技術を使用して、上記生成物をクローニングＴ７プラスミドへと平滑末端ライゲーションし、次いで、これを使用して、ＢＬ２１細菌細胞を形質転換する。関連する抗生物質耐性を有して出現するコロニーを配列決定し、正しい配列を有するものを、拡大し、選択した形質転換細胞として保存する。タンパク質生成のために、これらの細胞を、大規模（約５００〜１０００ｍｌ）培養培地中で成長させ、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド刺激下で上記融合タンパク質を生成するように融合する。上記タンパク質を、ＨｉｓタグおよびＨｉｓコーティングビーズを使用して単離し、ウェスタンブロットによって特徴づける。
【０２１４】
援用の表示
本明細書で言及される特許および科学文書の各々の開示全体は、全ての目的のために参考として援用される。
【０２１５】
均等論
本発明は、その趣旨または本質的特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化され得る。前述の実施形態は、従って、本明細書で記載される発明を限定するよりむしろ、全ての点で例証すると考えられるべきである。本発明の範囲は、従って、前述の説明によるよりむしろ、添付の請求項によって示され、請求項の均等物の意味および範囲内にある全ての変更は、請求項の中に包含されることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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