(57)【要約】  本発明は、様々な治療的、審美的及び／又は美容的な目的で対象に投与することができるボツリヌス毒素を含む注射用組成物を提供する。本発明に包含される注射用組成物は、抗原性の低減、注射後に不要な局所的な拡散を起こす傾向の低減、臨床効能の持続期間の増加又は効力の強化、より高い応答者率、臨床効能のより速い開始、及び／又は安定性の改善を含む、従来のボツリヌス毒素製剤より１又は２以上の利点を示す。本発明によれば、注射による組成物の単回治療は、記載された治療方法によって提供される治療を受けている対象において、有意な臨床応答及び少なくとも２６週間の効果の持続期間をもたらし、加えて後続の治療後に、より一層高い応答者率及び／又はより長い効果の持続期間をもたらす。
2021505570.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボツリヌス毒素を投与して、個体において持続期間が延長された治療効果又は美容効果を実現する方法であって、
それを必要とする前記個体の領域に、治療用量の滅菌注射用組成物を注射によって投与して、前記組成物での治療後に前記治療効果又は美容効果を実現するステップ
を含み；
前記組成物が、
注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；及び
ボツリヌス毒素、ボツリヌス毒素複合体、及び低減されたボツリヌス毒素複合体からなる群から選択されるボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記個体に投与される前記ボツリヌス毒素成分の前記治療用量が、注射治療１回当たり約１０Ｕ〜約１００Ｕであり；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記個体への注射によって投与される前記組成物の前記治療用量が、少なくとも約２８週間の効果持続期間を有する前記持続期間が延長された治療効果を実現する、前記方法。
【請求項２】
それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減する方法であって、前記個体の眉間しわ線に関連する１又は２以上の筋肉又は顔の構造に、
注射用の薬学的に許容される希釈剤；
ボツリヌス毒素、ボツリヌス毒素複合体、及び低減されたボツリヌス毒素複合体からなる群から選択されるボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含む組成物を注射することによって前記個体に投与するステップ
を含み；
前記ボツリヌス毒素成分が、注射治療１回当たり約１０Ｕ〜約１００Ｕの治療用量の量で前記個体に投与され；
前記正に帯電した担体が、ボツリヌス成分と非共有結合的に会合しており；
前記組成物の前記注射が、前記個体のしわ、しわ線、又は溝の低減において少なくとも約２８週間の効果持続期間を有する単回治療用量を提供し、それによって前記個体の治療間隔の持続期間を延長する、前記方法。
【請求項３】
ボツリヌス毒素を投与して、個体において持続期間が延長された治療効果又は美容効果を実現することにおける使用のための滅菌注射製剤中の医薬組成物であって、
前記組成物が、
注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；
１０Ｕ〜１００Ｕの治療用量の、ボツリヌス毒素複合体、低減されたボツリヌス毒素複合体、及びボツリヌス毒素からなる群から選択されるボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記組成物の前記治療用量が、前記製剤が注射によって投与された個体において少なくとも約２８週間の効果持続期間を有する前記持続期間が延長された治療効果又は美容効果を実現する、前記医薬組成物。
【請求項４】
それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝の低減における使用のための滅菌注射製剤中の医薬組成物であって、前記組成物が、
約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量の、ボツリヌス毒素複合体、低減されたボツリヌス毒素複合体、及びボツリヌス毒素からなる群から選択されるボツリヌス毒素成分、
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分；及び
注射用の薬学的に許容される希釈剤
を含み；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記組成物の前記用量が、前記個体のしわ、しわ線、又は溝の低減において少なくとも約２８週間の効果持続期間を有する単回治療を提供し、それによって前記個体の治療間隔の持続期間を延長する、前記医薬組成物。
【請求項５】
組成物が、少なくとも約３２週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１又は２に記載の方法、又は請求項３若しくは４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項６】
組成物が、血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む、請求項５に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７】
組成物が、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む、請求項６に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項８】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項９】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１０】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１】
（ｉ）下付き文字ｐ及びｑが、それぞれ独立して、０〜８の整数であるか；又は（ｉｉ）それぞれ独立して、２〜５の整数である、請求項１〜１０のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２】
１又は２以上の正に帯電した効率基が、正に帯電した担体の正に帯電したポリリジン主鎖の両方の末端に結合している、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３】
正に帯電した担体が、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する、請求項１２に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４】
組成物が、注射後、注射の部位から局所的に拡散しない、請求項１〜１３のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１５】
ボツリヌス毒素の治療用量が、注射治療１回当たり約４０Ｕの量で個体に投与される、請求項１〜１４のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１６】
正に帯電した担体及びボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で医薬組成物中に存在する、請求項１〜１５のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１７】
正に帯電した担体が、ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり約８μｇ〜約１５μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項１６に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１８】
賦形剤が、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１９】
賦形剤が、トレハロース二水和物を含む、請求項１８に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２０】
方法又は使用が、医薬組成物の単回投与を含む、請求項１〜１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２１】
治療効果又は美容効果が、片側顔面痙攣、成人発症型痙性斜頚、裂肛、眼瞼痙攣、脳性麻痺、頸部ジストニア、足底筋膜炎、片頭痛、斜視、顎関節障害、神経学的な痛み、過活動膀胱、鼻炎、副鼻腔炎、座瘡、ジストニア、ジストニアによる筋収縮、多汗、及びコリン作用性の神経系によって制御される腺の分泌過多からなる群から選択される障害に関連する症状の低減である、請求項１〜２０のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２２】
治療効果又は美容効果が、個体のしわ、しわ線、又は溝の低減である、請求項１〜２０のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２３】
治療効果又は美容効果が、眉間しわ線の重症度の低減である、請求項２２に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２４】
投与が、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含む、請求項２２又は２３に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２５】
約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記右の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、左の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記左の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、鼻根筋に注射される、請求項２４に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項２６】
約１０Ｕ〜約１００Ｕから選択される投薬量の、ボツリヌス毒素、ボツリヌス毒素複合体、及び低減されたボツリヌス毒素複合体からなる群から選択されるボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分；及び
注射用の薬学的に許容される希釈剤
を含む滅菌注射用組成物であって、
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
賦形剤が、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物から選択される少なくとも１つの成分を含み；
前記正に帯電した担体が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の前記ボツリヌス毒素成分に対する質量比率で前記医薬組成物中に存在し；
前記組成物が、個体を注射用組成物で単回治療した後、少なくとも約２８週間持続する治療効果又は美容効果を提供する、前記滅菌注射用組成物。
【請求項２７】
正に帯電した担体が、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
組成物が、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む、請求項２６又は２７に記載の組成物。
【請求項２９】
個体に投与されるボツリヌス毒素成分の治療用量が、約４０Ｕである、請求項２６〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
賦形剤が、トレハロース二水和物を含む、請求項２６〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
それを必要とする個体を注射可能なボツリヌス毒素で治療する方法であって、前記治療方法が、長期化された効果持続期間と治療間隔の持続期間とを含む複数の治療間隔を有する治療過程を含み、前記治療過程が、
それを必要とする前記個体の領域に、滅菌注射用組成物の最初の治療用量を注射によって投与して、前記組成物での前記最初の治療後に治療効果又は美容効果を実現するステップであって、
前記組成物が、
注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；
ボツリヌス毒素、ボツリヌス毒素複合体、及び低減されたボツリヌス毒素複合体からなる群から選択されるボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記ボツリヌス毒素成分が、注射治療１回当たり約１０Ｕ〜約１００Ｕの治療用量で前記個体に投与され；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記個体への注射によって投与される前記組成物の前記最初の治療用量が、少なくとも約２８週間にわたり続く治療効果持続期間を提供する、ステップ；並びに
前記組成物の後続の治療用量を、前記最初の治療用量の後及び各後続の治療用量の間、約２８週間以上から少なくとも約５２週間の持続期間を含む治療間隔で、前記個体に注射によって投与するステップ
を含む、前記方法。
【請求項３２】
組成物が、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型のボツリヌス毒素を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３５】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３６】
（ｉ）下付き文字ｐ及びｑが、それぞれ独立して、０〜８の整数であるか；又は（ｉｉ）それぞれ独立して、２〜５の整数である、請求項３１〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
１又は２以上の正に帯電した効率基が、正に帯電した担体の正に帯電したポリリジン主鎖の両方の末端に結合している、請求項３１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
正に帯電した担体が、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３９】
組成物が、注射後、注射の部位から局所的に拡散しない、請求項３１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
ボツリヌス毒素が、注射治療１回当たり約４０Ｕの量で個体に投与される、請求項３１〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
正に帯電した担体及びボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で医薬組成物中に存在する、請求項３１〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
正に帯電した担体が、ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり約８μｇ〜約１５μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
賦形剤が、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む、請求項３１〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
賦形剤が、トレハロース二水和物を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
治療間隔の持続期間が、３２週間より長い持続期間を含む、請求項３１〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
治療間隔の持続期間が、３６週間より長い持続期間を含む、請求項３１〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
治療間隔の持続期間が、少なくとも３２週間〜４０週間の持続期間を含む、請求項３１〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
治療効果又は美容効果が、個体のしわ、しわ線、又は溝の低減である、請求項３１〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
治療効果又は美容効果が、眉間しわ線の重症度の低減である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
投与が、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含む、請求項４８又は４９に記載の方法。
【請求項５１】
約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記右の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、左の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記左の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、鼻根筋に注射される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
治療効果又は美容効果が、片側顔面痙攣、成人発症型痙性斜頚、裂肛、眼瞼痙攣、脳性麻痺、頸部ジストニア、足底筋膜炎、片頭痛、斜視、顎関節障害、神経学的な痛み、過活動膀胱、鼻炎、副鼻腔炎、座瘡、ジストニア、ジストニアによる筋収縮、多汗、及びコリン作用性の神経系によって制御される腺の分泌過多からなる群から選択される障害に関連する症状の低減である、請求項３１〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
治療効果又は美容効果が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の５５％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項１〜５２のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項５４】
治療効果又は美容効果が、医薬組成物が投与された個体の６０％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項５３に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項５５】
治療効果又は美容効果が、医薬組成物が投与された個体の７０％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項５４に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項５６】
治療効果又は美容効果が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の３５％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項１〜５２のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項５７】
治療効果又は美容効果が、医薬組成物が投与された個体の５０％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項５６に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項５８】
治療効果又は美容効果が、医薬組成物が投与された個体の７０％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項５７に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項５９】
治療効果又は美容効果が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の１５％より多くにおいて少なくとも約２４週間持続する、請求項１〜５２のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項６０】
治療効果又は美容効果が、医薬組成物が投与された個体の２５％より多くにおいて少なくとも約２４週間持続する、請求項５９に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項６１】
それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減する方法であって、前記個体の前記しわ、しわ線、又は溝に関連する１又は２以上の筋肉又は顔の構造に、
注射用の薬学的に許容される希釈剤；
アクセサリー非毒素タンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素である、ボツリヌス毒素成分；
アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体
を含む組成物を注射することによって前記個体に投与するステップ
を含み；
前記ボツリヌス毒素成分が、注射治療１回当たり約４０Ｕの治療用量の量で前記個体に投与され；
前記正に帯電した担体が、ボツリヌス菌成分と非共有結合的に会合しており；
前記組成物の前記注射が、前記個体の前記しわ、しわ線、又は溝の低減において少なくとも約２６週間の効果持続期間を有する単回治療用量を提供し、それによって前記個体の治療間隔の持続期間を延長する、前記方法。
【請求項６２】
それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝の低減における使用のための滅菌注射製剤中の医薬組成物であって、前記組成物が、
アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素である約４０Ｕの用量のボツリヌス毒素成分、
アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体；及び
注射用の薬学的に許容される希釈剤
を含み；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記組成物の前記用量が、前記個体の前記しわ、しわ線、又は溝の低減において少なくとも約２６週間の効果持続期間を有する単回治療を提供し、それによって前記個体の治療間隔の持続期間を延長する、前記医薬組成物。
【請求項６３】
組成物が、少なくとも約２７週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項６１に記載の方法又は請求項２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項６４】
組成物が、少なくとも約２８週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項６１に記載の方法又は請求項２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項６５】
組成物が、少なくとも約３０週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項６１に記載の方法又は請求項４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項６６】
正に帯電した担体及びボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で医薬組成物中に存在する、請求項６１〜６５のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項６７】
正に帯電した担体が、ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり８μｇ〜約１５μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項６６に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項６８】
賦形剤が、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む、請求項６１〜６７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項６９】
賦形剤が、トレハロース二水和物を含む、請求項６８に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７０】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、眉間しわ線の重症度の低減を含む、請求項６１〜６９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７１】
投与が、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含む、請求項６１〜７０のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７２】
約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記右の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、左の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記左の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、鼻根筋に注射される、請求項７１に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７３】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の５５％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項６１〜７２のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７４】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の６０％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項７３に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７５】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の７０％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項７４に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７６】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の３５％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項６１〜７２のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７７】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の５０％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項７６に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７８】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の７０％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項７７に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項７９】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の１５％より多くにおいて少なくとも約２４週間持続する、請求項６１〜７２のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項８０】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の２５％より多くにおいて少なくとも約２４週間持続する、請求項７９に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項８１】
それを必要とする個体における眉間しわ線を注射可能なボツリヌス毒素で治療する方法であって、長期化された効果持続期間と治療間隔の持続期間とを含む複数の治療間隔を有する治療過程を含み、前記治療過程が、
前記個体の眉間複合体に、滅菌注射用組成物の最初の治療用量を注射によって投与して、前記組成物での前記最初の治療後に、前記眉間しわ線の重症度の低減を実現するステップであって；
前記組成物が、
注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；
アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素であるボツリヌス毒素成分；及び
アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体
を含み；
前記ボツリヌス毒素成分が、注射治療１回当たり約４０Ｕの治療用量で前記個体に投与され；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記個体への注射によって投与される前記組成物の前記最初の治療用量が、少なくとも約２６週間にわたり続く効果持続期間を提供する、ステップ；並びに
前記組成物の後続の治療用量を、前記最初の治療用量の後及び各後続の治療用量の間、約２６週間以上から少なくとも約４０週間の持続期間を含む治療間隔で、前記個体に注射によって投与するステップ
を含む、前記方法。
【請求項８２】
組成物が、少なくとも約２７週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
組成物が、少なくとも約２８週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
組成物が、少なくとも約２９週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８５】
治療間隔の持続期間が、少なくとも３０週間の持続期間を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８６】
正に帯電した担体及びボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で医薬組成物中に存在する、請求項８１〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８７】
正に帯電した担体が、ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり約８μｇ〜約１５μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
賦形剤が、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む、請求項８１〜８７のいずれかに記載の方法。
【請求項８９】
賦形剤が、トレハロース二水和物を含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
低減が、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）及び／又は患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）によって査定される場合の眉間しわ線の重症度の低減を含む、請求項８１〜８９のいずれかに記載の方法。
【請求項９１】
投与が、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含む、請求項８１〜９０のいずれかに記載の方法。
【請求項９２】
約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記右の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、左の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記左の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、鼻根筋に注射される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の５５％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項８１〜９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９４】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の６０％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の７０％より多くにおいて少なくとも約４週間持続する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の３５％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項８１〜９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９７】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の５０％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の７０％より多くにおいて少なくとも約１６週間持続する、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の１５％より多くにおいて少なくとも約２４週間持続する、請求項８１〜９２のいずれかに記載の方法。
【請求項１００】
眉間しわ線の低減が、それぞれ医薬組成物が投与された個体の２５％より多くにおいて少なくとも約２４週間持続する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するためのボツリヌス毒素の効果持続期間を増加させる方法であって、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与するステップを含み、
ボツリヌス毒素組成物の第１の治療が、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって、前記個体に投与され、
前記組成物が、
注射用の薬学的に許容される希釈剤；
約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量の、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含むボツリヌス毒素成分、及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記正に帯電した担体が、ボツリヌス菌成分と非共有結合的に会合しており；
前記投与するステップを繰り返す少なくとも１回の連続した治療が前記個体に投与され；
前記第１の治療が、少なくとも約２０週間にわたり前記しわ、しわ線、又は溝を低減し、１又は２以上の前記連続した治療が、前記第１の治療後に実現されるものより長い持続期間にわたり、前記しわ、しわ線、又は溝を低減する、前記方法。
【請求項１０２】
複数の連続した治療における反復投与のための、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するためのボツリヌス毒素の効果持続期間の増加における使用のための滅菌注射製剤中の医薬組成物であって、前記組成物が、
注射用の薬学的に許容される希釈剤；
約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量の、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含むボツリヌス毒素成分、及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
少なくとも１回の連続した治療が前記個体に投与され；
前記第１の治療が、少なくとも約２０週間にわたり前記しわ、しわ線、又は溝を低減し、１又は２以上の前記連続した治療が、前記第１の治療後に実現されるものより長い持続期間にわたり、前記しわ、しわ線、又は溝を低減する、前記医薬組成物。
【請求項１０３】
それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するボツリヌス毒素応答を実現する可能性を増加させる方法であって、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与するステップを含み、
ボツリヌス毒素組成物の第１の治療が、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって個体に投与され、
前記組成物が、
注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；
約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量の、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含むボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
前記投与するステップを繰り返す少なくとも１回の連続した治療が前記個体に投与され；
１又は２以上の前記連続した治療が、前記第１の治療と比較して、前記個体における前記しわ、しわ線、又は溝を低減するより大きい可能性を有する、前記方法。
【請求項１０４】
複数の連続した治療における反復投与のための、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減する可能性の増加における使用のための滅菌注射製剤中の医薬組成物であって、前記組成物が、
注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；
約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量の、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含むボツリヌス毒素成分；及び
（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分
を含み；
前記正に帯電した担体が、前記ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；
少なくとも１回の連続した治療が前記個体に投与され；
１又は２以上の前記連続した治療が、前記第１の治療と比較して、前記個体における前記しわ、しわ線、又は溝を低減するより大きい可能性を有する、前記医薬組成物。
【請求項１０５】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項１０１若しくは１０３に記載の方法又は請求項１０２若しくは１０４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１０６】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項１０１若しくは１０３に記載の方法又は請求項１０２若しくは１０４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１０７】
正に帯電したポリリジン主鎖が、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている、請求項１０１若しくは１０３に記載の方法又は請求項１０２若しくは１０４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１０８】
（ｉ）下付き文字ｐ及びｑが、それぞれ独立して、０〜８の整数であるか；又は（ｉｉ）それぞれ独立して、２〜５の整数である、請求項１０１〜１０７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１０９】
１又は２以上の正に帯電した効率基が、正に帯電した担体の正に帯電したポリリジン主鎖の両方の末端に結合している、請求項１０１〜１０８のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１０】
正に帯電した担体が、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する、請求項１０９に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１１】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約２４週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１２】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約２５週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１３】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約２６週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１４】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約２８週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１５】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約３０週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１６】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約３２週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１７】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約３４週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１８】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約３５週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１１９】
組成物が、第１の治療の後、少なくとも約３６週間の延長された効果持続期間を実現する、請求項１１０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２０】
少なくとも１回の連続した治療が、前の治療の後、約１２週間〜約３６週間投与される、請求項１１０〜１１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２１】
少なくとも１回の連続した治療が、前の治療の後、約１６週間〜約３２週間投与される、請求項１１０〜１１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２２】
少なくとも１回の連続した治療が、前の治療の後、約２０週間〜約３６週間投与される、請求項１１０〜１１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２３】
少なくとも１回の連続した治療が、前の治療の後、約２２週間〜約３４週間投与される、請求項１１０〜１１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２４】
少なくとも１回の連続した治療が、前の治療の後、約２４週間〜約３２週間投与される、請求項１１０〜１１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２５】
少なくとも１回の連続した治療が、前の治療の後、約２６週間〜約３０週間投与される、請求項１１０〜１１９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２６】
連続した治療が、第２の治療である、請求項１２０〜１２５のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２７】
個体に投与されるボツリヌス毒素の治療用量が、注射治療１回当たり約２０Ｕ〜約６０Ｕである、請求項１１０〜１２６のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２８】
個体に投与されるボツリヌス毒素の治療用量が、注射治療１回当たり約４０Ｕである、請求項１２７に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１２９】
正に帯電した担体及びボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で医薬組成物中に存在する、請求項１０１〜１２８のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３０】
正に帯電した担体が、ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり約８μｇ〜約１５μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項１２９に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３１】
正に帯電した担体が、４０Ｕ当たり１１．７μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項１３０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３２】
賦形剤が、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む、請求項１０１〜１３１のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３３】
賦形剤が、トレハロース二水和物を含む、請求項１３２に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３４】
しわ、しわ線、又は溝が、眉間しわ線である、請求項１０１〜１３３のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３５】
投与が、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含む、請求項１３４に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３６】
約１６Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋に注射され、約１６Ｕのボツリヌス毒素成分が、左の皺眉筋に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、鼻根筋に注射される、請求項１３５又は請求項１００〜１０９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３７】
約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記右の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、左の皺眉筋の内側面に注射され、約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、前記左の皺眉筋の外側面に注射され；約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、鼻根筋に注射される、請求項１３６に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３８】
ボツリヌス毒素投与の副作用が、第１の治療後の連続した治療の投与後に低減される、請求項１０１〜１３７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１３９】
副作用の低減が、眼瞼下垂の低減である、請求項１３８に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４０】
後続のボツリヌス毒素治療間の間隔の長さが、第１の治療と第２の治療との間の間隔より長い、請求項１０１〜１３９のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４１】
後続のボツリヌス毒素治療間の間隔が、約２０週間より長く約３６週間までである、請求項１４０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４２】
後続のボツリヌス毒素治療間の間隔が、約２２週間より長く約３４週間までである、請求項１４０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４３】
後続のボツリヌス毒素治療間の間隔が、約２４週間より長く約３２週間までである、請求項１４０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４４】
後続のボツリヌス毒素治療間の間隔が、約２６週間より長く約３０週間までである、請求項１４０に記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４５】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、少なくとも約４週間、第１の治療用量の投与後に個体の少なくとも８０％において持続し、及び／又は第２又は後続の治療用量の投与後に個体の少なくとも８５％において持続する、請求項１０１〜１４４のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４６】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、少なくとも約４週間、第１の治療用量の投与後に個体の少なくとも８５％において持続し、及び／又は第２又は後続の治療用量の投与後に個体の少なくとも９０％において持続する、請求項１０１〜１４４のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４７】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、少なくとも約４週間、第１の治療用量の投与後に個体の少なくとも９０％において持続し、及び／又は第２又は後続の治療用量の投与後に個体の少なくとも９５％において持続する、請求項１０１〜１４４のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４８】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、ＩＧＡ−ＦＷＳにおける０又は１のスコアに対応する、請求項１０１〜１４７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１４９】
しわ、しわ線、又は溝の低減が、ＰＦＷＳにおける０又は１のスコアに対応する、請求項１０１〜１４７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１５０】
正に帯電した担体が、４０Ｕ当たり１１．７μｇの量で医薬組成物中に存在する、請求項１７、４２、６７、又は８７のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【請求項１５１】
対象が、少なくとも６５歳である、請求項１〜１５０のいずれかに記載の使用のための方法又は医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連件への相互参照
本出願は、２０１７年１２月４日に出願されたRubioの米国仮特許出願第６２／５９４，５２９号、タイトル「Injectable Botulinum Toxin Formulations and Methods of Use Thereof Having High Response Rate and Long Duration of Effect」の優先権の利益を主張し、２０１８年１２月３日に出願されたRubioの米国仮特許出願第６２／７７４，８５０号、タイトル「Injectable Botulinum Toxin Formulations and Methods of Use Thereof Having High Response Rate and Long Duration of Effect」の優先権の利益を主張し、これらの両方は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、様々な治療的、審美的及び／又は美容的な目的で対象に投与することができるボツリヌス毒素を含む注射用組成物に関する。注射用組成物及びこれらの組成物が使用される方法は、高い応答者率及び長い効果の持続期間、例えば２６〜４０週間にわたる効果の持続期間、加えて後続の治療後に、より一層高い応答者率及び／又はより一層長い効果の持続期間をもたらす有利な治療を提供する。
【背景技術】
【０００３】
皮膚は、体の臓器を外部の環境の脅威から保護し、体温を維持するためのサーモスタットとして作用する。皮膚は、それぞれ特殊化した機能を有するいくつかの異なる層からなる。主要な層は、表皮、真皮及び下皮を含む。表皮は、結合組織からなる真皮の上に重なった上皮細胞の重層化した層である。表皮と真皮の両方はさらに、脂肪組織の内部層である下皮によって支持される。
【０００４】
表皮は、皮膚の一番上の層であり、わずか０．１〜１．５ミリメートルの厚さしかない（Inlander, Skin, New York, N.Y.: People’s Medical Society, 1-7 (1998)）。これは、ケラチノサイトからなり、その分化状況に基づいていくつかの層に分割する。表皮はさらに、上皮角質層と、顆粒状のマルピーギ（melphigian）及び基底細胞からなる生きた表皮に分類できる。上皮角質層は吸湿性であり、そのフレキシビリティーと柔らかさを維持するためには少なくとも１０重量％の水分を必要とする。吸湿性は、ケラチンの保水能力に一部起因する。角質層は、その柔らかさとフレキシビリティーを失うと、粗く、脆くなり、乾燥の皮膚を引き起こす。
【０００５】
真皮は、表皮のちょうど真下にあり、１．５〜４ミリメートルの厚さを有する。これは、皮膚の３つの層のなかでも最も厚い。汗腺及び油腺（これは、毛穴又はコメドと呼ばれる皮膚の穴から物質を分泌する）、毛包、神経終末、並びに血液及びリンパ管を含む皮膚構造のほとんどが、真皮中に見出される（Inlander, Skin, New York, N.Y.: People’s Medical Society, 1-7 (1998)）。しかしながら、真皮の主要成分はコラーゲンとエラスチンである。
【０００６】
下皮は、皮膚の最も深い層である。これは、体熱の保存のための絶縁体と臓器保護のための衝撃吸収材の両方として作用する（Inlander, Skin, New York, N.Y.: People’s Medical Society, 1-7 (1998)）。加えて、下皮はまた、エネルギーを蓄えるための脂肪も貯蔵する。皮膚のｐＨは、通常５から６の間である。この酸性度は、皮脂腺の分泌物からの両性アミノ酸、乳酸、及び脂肪酸の存在による。用語「酸外套」は、皮膚のほとんどの領域上における水溶性物質の存在を指す。皮膚の緩衝能力は、皮膚の角質層に貯蔵されたこれらの分泌物に部分的に起因する。
【０００７】
しわは、隠しがたい老化の兆候の一つであり、環境的なダメージによって皮膚に蓄積する生化学的、組織学的及び生理学的な変化によって引き起こされる可能性がある。（Benedetto, International Journal of Dermatology, 38:641-655 (1999)）。加えて、顔のしわの特徴的な折り重なり、溝、及び襞の原因となり得る他の二次的な要因がある（Stegman et al., The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 2nd ed., St. Louis, Mo.: Mosby Year Book: 5-15 (1990)）。これらの二次的な要因としては、重力による絶え間ない引っ張り、皮膚への頻繁で絶え間ない位置的な圧力（例えば、睡眠中）、及び顔の筋肉の収縮によって引き起こされる繰り返しの顔の動きが挙げられる（Stegman et al., The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 2nd ed., St. Louis, Mo.: Mosby Year Book: 5-15 (1990)）。
【０００８】
老化の兆候の一部を軽減する可能性がある様々な技術が利用されてきた。これらの技術は、アルファヒドロキシ酸及びレチノールを含有するフェイシャルモイスチャライザーから、外科手術や神経毒の注射まで様々である。例えば１９８６年に、眼形成外科医及び皮膚科医からなるJean及びAlastair Carruthersの夫婦チームは、眉間領域における動きに関連するしわを治療するためのＡ型ボツリヌス毒素を使用する方法を開発した（Schantz and Scott, In Lewis G. E. (Ed) Biomedical Aspects of Botulinum, New York: Academic Press, 143-150 (1981)）。しわを治療するためのCarruthersのＡ型ボツリヌス毒素の使用は、１９９２年に、このアプローチの将来性のある公開に至った（Schantz and Scott, In Lewis G. E. (Ed) Biomedical Aspects of Botulinum, New York: Academic Press, 143-150 (1981)）。１９９４年までに、同じチームが、顔における他の動きに関連するしわの体験談を報告した（Scott, Ophthalmol, 87:1044-1049 (1980)）。順にこれが、Ａ型ボツリヌス毒素を使用する美容的治療の新時代の誕生に至った。
【０００９】
Ａ型ボツリヌス毒素は、人が知る天然生物学的物質のなかでも最も高い致死性を有することが報告されている。クロストリジウム・ボツリナム（Clostridium botulinum）の胞子は、土壌に見出され、滅菌や密封が不適切な食物容器中で成長する可能性がある。ボツリヌス中毒は、死に至る場合もあり、細菌の取込みによって引き起こされる可能性がある。ボツリヌス毒素は、神経筋接合部を通るアセチルコリン放出の阻害によりシナプス伝達を防止して筋肉の麻痺を生じるように作用し、他の様式でも同様に作用すると考えられる。その作用は、正常には筋痙攣又は収縮を引き起こすと予想されるシグナルを本質的にブロックして、麻痺をもたらす。この１０年の間、ボツリヌス毒素の筋肉を麻痺させる活性は、様々な治療効果を実現するのに役立ってきた。ボツリヌス毒素の制御投与は、筋肉を麻痺させて、様々な医学的状態、例えば、過活動の骨格筋を特徴とする神経筋障害を治療するのに使用されてきた。ボツリヌス毒素で治療されてきた状態としては、片側顔面痙攣、成人発症型痙性斜頚、裂肛、眼瞼痙攣、脳性麻痺、頸部ジストニア、片頭痛、斜視、顎関節障害、及び様々な種類の筋肉の痙攣及び痙縮が挙げられる。つい最近になって、ボツリヌス毒素の筋肉麻痺効果は、しわ、眉間しわ線、及び顔の筋肉の痙縮又は収縮の他の結果の治療などの治療的及び美容的な顔への適用に応用されている。
【００１０】
Ａ型ボツリヌス毒素に加えて、ボツリヌス毒素の７種の他の血清学的に別個の形態があり、これらもまた、グラム陽性菌であるＣ．ボツリナム（C.botulinum）によって産生される。これらの８種の血清学的に別個のタイプのボツリヌス毒素のなかでも、麻痺を引き起こす可能性がある７種は、ボツリヌス毒素血清型（serotype）Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型及びＧ型と名付けられた。これらのそれぞれは、型特異的な抗体での中和によって区別される。異なる血清型のボツリヌス毒素は、それらが異なる動物種で誘発する麻痺の効果並びに重症度及び持続期間も様々である。例えば、ラットにおいて、麻痺の速度によって測定したところ、Ａ型ボツリヌス毒素は、Ｂ型ボツリヌス毒素より５００倍有効であることが決定された。加えて、Ｂ型ボツリヌス毒素は、霊長類において、Ａ型の霊長類ＬＤ５０の約１２倍である４８０Ｕ／ｋｇの用量で非毒性であることが決定された。
【００１１】
ボツリヌス毒素は、Ｃ．ボツリナム細菌によって放出される場合、付随する非毒素タンパク質と共に、およそ１５０ｋＤのボツリヌス毒素タンパク質分子を含有する毒素複合体の成分である。これらの内因性非毒素タンパク質は、ヘマグルチニンタンパク質のファミリーに加えて、非ヘマグルチニンタンパク質も含むと考えられる。非毒素タンパク質は、毒素複合体中のボツリヌス毒素分子を安定化させ、毒素複合体が摂取されたときに消化性の酸による変性からそれを保護することが報告されている。したがって、毒素複合体の非毒素タンパク質は、ボツリヌス毒素の活性を保護し、それによって、毒素複合体が消化管を介して投与される場合、全身の浸透を強化する。加えて、非毒素タンパク質の一部は、血液中のボツリヌス毒素分子を特異的に安定化させると考えられている。
【００１２】
毒素複合体中の非毒素タンパク質の存在が、典型的に、毒素複合体の分子量をそのままのボツリヌス毒素分子の分子量より大きくする原因である。ボツリヌス毒素タンパク質そのものの分子量は約１５０ｋＤであるが、異なる血清型複合体でサイズは様々である。例えば、Ｃ．ボツリナム細菌は、約９００ｋＤ、５００ｋＤ又は３００ｋＤの分子量を有するＡ型ボツリヌス菌毒素複合体を産生することができる。Ｂ型及びＣ型ボツリヌス毒素は、約７００ｋＤ又は約５００ｋＤの分子量を有する複合体として産生される。Ｄ型ボツリヌス毒素は、約３００ｋＤ又は５００ｋＤの分子量を有する複合体として産生される。Ｅ型及びＦ型ボツリヌス毒素は、約３００ｋＤの分子量を有する複合体としてのみ産生される。
【００１３】
ボツリヌス毒素に追加の安定性を提供するために、毒素複合体は、慣習的に、製造中に複合体をアルブミンと組み合わせることによって安定化される。例えば、BOTOX（登録商標）（Allergan, Inc.社、Irvine、CA）は、アクセサリータンパク質、０．５ミリグラムのヒトアルブミン、及び０．９ミリグラムの塩化ナトリウムと共に１００ＵのＡ型ボツリヌス毒素を含有するボツリヌス毒素含有製剤である。
【００１４】
ボツリヌス毒素の分子サイズ及び分子構造のために、ボツリヌス毒素は、そのままでは皮膚の上皮角質層とその下に存在する皮膚構成の複数の層を通過しない。したがって、ボツリヌス毒素は、典型的に、ボツリヌス毒素複合体及びアルブミンを含有する組成物の注射によって患者に投与される。しかしながら、このアプローチに関連する数々の問題がある。注射が痛いことに加え、典型的に、所望の治療効果又は美容効果を実現するために、大きい注射部位の周りに毒素の真皮下のたまりが局所的に生成する。ボツリヌス毒素は、これらの真皮下のたまりから移動して、体の周辺領域において不要な麻痺を引き起こす場合がある。この問題は、治療しようとする領域が大きく、その領域を治療するのに多くの毒素の注射が必要な場合、悪化する。さらに、注射された毒素複合体は、ボツリヌス毒素を安定化させ、毒素複合体の分子量を増加させる非毒素タンパク質及びアルブミンを含有するため、毒素複合体は、体内で長い半減期を有し、患者において望ましくない抗原性応答を引き起こす可能性がある。例えば、一部の患者は、現行の商業的な製剤で安定剤として使用されるアルブミンに対するアレルギー反応を長期にわたり発生させると予想される。また毒素複合体は、患者の免疫系による中和抗体の形成を誘発することもあり、後続の投与で同じ効果を実現するにはより大量の毒素が必要になる。これが起こる場合、後続の注射は、患者の血流に大量の毒素が放出されることによって致命的な全身中毒を引き起こさないように、慎重に計画しなければならない。アルブミンを含有する製剤は、例えばアルブミンに対する有害応答のリスク、例えば、アレルギー性応答のより大きいリスクに加えて、特定の血液源に関する病原体の汚染のリスクを引き込む。
【００１５】
現行の治療及び現行のボツリヌス毒素製剤に関連する欠点を考慮すれば、有効で安定であるが、低減した抗原性及び注射後に局所的に拡散するより低い傾向を示す注射可能なボツリヌス毒素製剤を得ることが非常に望ましいと予想される。また、治療的及び／又は美容的な目的のために、特定には、副作用を増加させることなく、高い改善された応答率をもたらす介入をほとんど必要としない安定な長時間作用型の治療のために、このようなボツリヌス毒素製剤を使用することも望ましいと予想される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Inlander, Skin, New York, N.Y.: People’s Medical Society, 1-7 (1998)
【非特許文献２】Benedetto, International Journal of Dermatology, 38:641-655 (1999)
【非特許文献３】Stegman et al., The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 2nd ed., St. Louis, Mo.: Mosby Year Book: 5-15 (1990)
【非特許文献４】Stegman et al., The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 2nd ed., St. Louis, Mo.: Mosby Year Book: 5-15 (1990)
【非特許文献５】Schantz and Scott, In Lewis G. E. (Ed) Biomedical Aspects of Botulinum, New York: Academic Press, 143-150 (1981)
【非特許文献６】Scott, Ophthalmol, 87:1044-1049 (1980)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、治療的及び／又は美容的な利益を実現するために個体に投与するための、驚くほど高い応答者率及び長い効果の持続期間を有する注射可能なボツリヌス毒素製剤を使用する方法に関する。
【００１８】
一態様において、本発明は、正に帯電した担体と非共有結合的に会合するボツリヌス毒素を含む注射用組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、BOTOX（登録商標）又はMYOBLOC（登録商標）などの従来の商業的なボツリヌス毒素製剤より１又は２以上の利点を有する。例えば、特定の実施形態において、組成物は、従来の製剤に比べて、抗原性の低減、注射後に周囲の組織への拡散を起こす傾向の低減、臨床効能の持続期間の増加、又は効力の強化などの、従来の注射可能なボツリヌス毒素製剤より１又は２以上の利点を示す可能性がある。
【００１９】
好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素成分は、１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む。ボツリヌス毒素成分は、ボツリヌス毒素複合体（Ｃ．ボツリナムによって産生された天然複合体に見出されるアクセサリータンパク質を有する１５０ｋＤの神経毒を含む）、低減された（reduced）ボツリヌス毒素複合体（天然アクセサリータンパク質の全てではないが一部を有する１５０ｋＤの神経毒を含む）、及びアクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤのボツリヌス毒素分子それ自体から選択され得る。
【００２０】
好ましい実施形態において、特定の非天然分子（すなわち、クロストリジウム・ボツリナム細菌から得られたボツリヌス毒素複合体に見出されない分子）が、組織を介した毒素の拡散を改善するために、ボツリヌス毒素、ボツリヌス毒素複合体、及び特定には低減されたボツリヌス毒素複合体（本明細書において定義される通り）に付加される。非天然分子は、毒素と非共有結合的に会合しており、注射後に標的構造に到達する毒素の能力を改善する浸透促進剤として作用する。さらに、非天然分子は、注射の前及び後に毒素の安定性を増加させることもできる。一例として、浸透促進剤は、固有のボツリヌス菌毒素のような活性を有さず、また本明細書に記載されるような１又は２以上のタンパク質形質導入ドメインを含有する、正に帯電した担体、例えばカチオン性ペプチドであってもよい。
【００２１】
本発明によれば、正に帯電した担体は、毒素分子の共有結合の改変を有さず、正に帯電した担体を含まないボツリヌス毒素組成物と比較して、より長い作用の持続期間及びより高い応答者率などの改善された特徴を有する毒素の注射を可能にする、ボツリヌス毒素のための輸送システムとして適切である。正に帯電した担体は、正に帯電した主鎖（backbone）を含み、これに、効率基（efficiency group）（タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ、protein transduction domain）又は細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ、cell-penetrating peptide）とも称される）が、より好ましくは主鎖の一方又は両方の末端に共有結合している。特定の実施形態において、効率基は、ＨＩＶ−ＴＡＴ又はそれらのフラグメント；アンテナペディアのＰＴＤ又はそのフラグメント；−（ｇｌｙ）ｎ１−（ａｒｇ）ｎ２（配列番号５）（式中、下付き文字ｎ１は、０〜約２０の整数であり、ｎ２は、独立して、約５〜約２５の奇数の整数である）；及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）、及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜約２０の整数である）からなる群から選択されるアミノ酸配列である。１つの特に好ましい実施形態において、正に帯電した担体は、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）（本明細書では、「ＲＴＰ００４」とも称される）を有する。さらに他の実施形態において、正に帯電した担体は、アミノ酸配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｇ−（Ｋ）１５−Ｇ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号７）、ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−Ｇ−（Ｋ）１５−Ｇ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ（配列番号８）、又はＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｑ−（Ｋ）１５−Ｑ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号１１）を有する。
【００２２】
一部の実施形態において、担体は、ボツリヌス毒素を含有する組成物中に、ボツリヌス毒素成分１Ｕ当たり、約０．００１〜約１μｇ、好ましくは約０．０１〜約０．５μｇ／Ｕ、より好ましくは約０．０５〜約０．３５μｇ／Ｕ、又は約０．１〜約０．３μｇ／Ｕ、最も好ましくはボツリヌス毒素１ユニット当たり約０．２３４μｇの量で提供される。例えば、ボツリヌス毒素を含有する組成物は、約１〜約２０μｇ、約５〜約１５μｇ、約７〜約１２μｇ、又は約８〜約１０μｇの担体を含有していてもよい。好ましい一実施形態において、ボツリヌス毒素は、約２０Ｕ〜約６０Ｕからなる群から選択される投薬量で存在し、担体は、ボツリヌス毒素１Ｕ当たり約０．２３４μｇの比率になるように、約４．７〜約１４μｇから選択される量で組成物中に存在する正に帯電した担体である。
【００２３】
一部の実施形態において、ボツリヌス毒素を含有する組成物の賦形剤は、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される１又は２以上の追加の安定化成分を含む。
【００２４】
一部の特に好ましい実施形態において、賦形剤は、トレハロース二水和物を含む。賦形剤は、例えば、５０Ｕのバイアル当たり、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１０〜約８０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約６０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約４０ｍｇ、又は約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、若しくは約４０ｍｇのトレハロースを含んでいてもよい。一部の特に好ましい実施形態において、賦形剤は、ポリソルベート２０を含む。賦形剤は、例えば、５０Ｕのバイアル当たり、約０．０１ｍｇ〜約１ｍｇ、約０．０５〜約０．５ｍｇ、約０．０７５ｍｇ〜約０．２５ｍｇ、約０．０８ｍｇ〜約０．１５ｍｇ、又は約０．０９ｍｇ、約０．０９５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．１０５ｍｇ、約０．１１ｍｇ、約０．１２ｍｇ、約０．１３ｍｇ、約０．１４ｍｇ、若しくは約０．１５ｍｇのポリソルベート２０を含んでいてもよい。特に好ましい実施形態において、賦形剤は、５０Ｕ当たり、約３６ｍｇのトレハロース及び約０．１ｍｇのポリソルベート２０を含有する。
【００２５】
１つの特に好ましい実施形態において、「ＲＴ００２」と称される組成物は、注射製剤であり、これは、アクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない、式ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体ペプチドと非共有結合的に会合する１５０ｋＤのサブタイプＡボツリヌス毒素分子を含有し、アクセサリータンパク質又は動物由来の成分を含有せず、Thompsonらの国際公開第２０１０／１５１８４０号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０１０４号パンフレット）「Albumin-Free Botulinum Toxin Formulations」に記載された通りである。それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＲＴ００２製剤を記載している、Stone et al., 2011, “Characterization and duration of action of a new botulinum toxin type A formulation” Toxicon, 58:159-167；Garcia-Murray, “Safety and efficacy of RT002, an injectable botulinum toxin type A, for treating glabellar lines: results of a phase 1/2, open-label, sequential dose-escalation study” Dermatol Surg. 2015 Jan；41 Suppl 1:S47-55；及びCarruthers, et al., Injectable DaxibotulinumtoxinA for the Treatment of Glabellar Lines: A Phase 2, Randomized, Dose-Ranging, Double-Blind, Multicenter Comparison with Onabotulinumtoxin A and Placebo. Dermatol. Surg. 2017；43: 1321-1331；加えて、Rueggらの国際公開第２０１７／０７５４６８号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５９４９２号パンフレット）、タイトル「Injectable Botulinum Toxin Formulations And Methods Of Use Thereof Having Long Duration Of Therapeutic Or Cosmetic Effect」；２０１８年８月２８日に出願されたRueggの国際出願ＰＣＴ／ＵＳ１８／４８３６１号パンフレット、タイトル「Transmucosal Botulinum Toxin Compositions, Kits, And Methods For Treating Bladder Disorders」；２０１８年１１月５日に出願されたRubioの国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５９２６５号パンフレット、タイトル「Botulinum Toxin Formulations and Methods of Use Thereof in Plantar Fasciitis」；及び２０１８年５月１８日に出願されたRueggの国際出願ＰＣＴ／ＵＳ１８／３３３９７号パンフレット、タイトル「Methods of Treatment for Cervical Dystonia」も参照されたい。ＲＴ００２は、一般的に、５０Ｕのバイアル中、５１，０００：１のペプチド：毒素の質量比率になるように、アクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型ボツリヌス毒素の５０Ｕのバイアル中に、担体として、０．１ｍｇのポリソルベート２０、３６ｍｇのトレハロース、及び１１．７μｇのＲＴＰ００４を含有する凍結乾燥形態で提供される。
【００２６】
別の態様において、本発明は、治療的又は美容的有効量の本発明の組成物をそれを必要とする対象に注射することによって生物学的な効果を生じさせる方法に関する。生物学的な効果としては、例えば、筋肉の麻痺、又はボツリヌス毒素の投与により引き起こされることが公知の他の効果が挙げられる。このような効果としては、例えば、神経学的な痛み、頭痛、又は片頭痛、片側顔面痙攣、成人発症型痙性斜頚、裂肛、眼瞼痙攣、脳性麻痺、斜視、顎関節障害、座瘡、ジストニア、ジストニアによる筋収縮、多汗、又はコリン作用性の神経系によって制御される腺の分泌過多の治療；鼻炎、副鼻腔炎、過活動膀胱、頸部ジストニア、足底筋膜炎の治療又は管理；筋痙攣の低減、及び免疫応答の低減又は強化のいずれか１又は２以上が挙げられる。特定の例において、効果は、特定には顔における、しわ（wrinkle）、微細なしわ線（line）、溝（furrow）の重症度の低減であり、例えば、眉のしわ線（frown line）としても公知の眉間しわ線（glabellar line）の重症度の低減である。
【００２７】
本明細書に記載される方法及び組成物は、ボツリヌス毒素成分を、少なくとも１つの所望の生物学的効果を生じさせるのに有効な量で送達する。特定の実施形態において、ボツリヌス毒素は、約１Ｕ〜約３００Ｕ、好ましくは約１０Ｕ〜約２００Ｕ、より好ましくは約２０Ｕ〜約１００Ｕ又は約２０Ｕ〜約６０Ｕで投与される。好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素は、約１０Ｕ、約２０Ｕ、約３０Ｕ、約４０Ｕ、約６０Ｕ、約８０Ｕ、及び約８０Ｕからなる群から選択される投薬量で、好ましくは約４０Ｕの投薬量で存在する。
【００２８】
別の態様において、本発明は、ボツリヌス毒素を対象に投与して、対象にとって所望の治療的又は美容的な利益に関して持続期間が延長された効果を実現する方法を提供する。特定の例において、本発明は、ボツリヌス毒素を投与して、個体の眉間しわ線を低減することにおいて持続期間が延長された効果を実現する方法を提供する。一部の実施形態において、本方法は、眉間しわ線に関連する１又は２以上の筋肉への所定用量の滅菌注射用組成物の注射によって投与して、治療後に持続期間が延長された効果、すなわち、治療後に、持続的な効能、又は長い持続期間の応答率を実現するステップを含む。例えば、一部の実施形態において、ボツリヌス毒素組成物の投与は、増加した効果の持続期間、例えば従来のボツリヌス毒素製剤での治療より長く続く眉間しわ線における改善をもたらし、それによって治療間隔が延長される。好ましい実施形態は、少なくとも約３カ月〜約１１カ月、約５カ月〜約１０カ月、約６カ月〜約１０カ月、又は約２８週間〜約４０週間にわたる、眉間しわ線の重症度における改善をもたらす。例えば４０Ｕのボツリヌス毒素用量を使用する好ましい実施形態において、効果の持続期間は、第２又は後続の治療用量が投与される前、少なくとも約２４週間、少なくとも約２６週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３０週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３４週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、又は少なくとも約４２週間である。
【００２９】
別の態様において、本発明は、対象にとって所望の治療的又は美容的な利益を実現する方法であって、従来のボツリヌス毒素製剤を使用するレジメンと比較して、長期化された効果の持続期間を含む複数の治療を有する、したがって連続した治療の間の長い間隔を有する投薬レジメンを含む、方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、個体における眉間しわ線を低減する方法であって、従来のボツリヌス毒素製剤を使用する眉間しわ線を低減するためのレジメンと比較して、長期化された効果の持続期間を含む複数の治療を有する、したがって連続した治療の間の長い間隔を有する投薬レジメンを含む、方法を提供する。特定の実施形態において、組成物の第２又は後続の治療用量を投与する前の間隔は、最初の治療用量の後又は後続の治療用量の後、約２６週間以上、約２８週間以上、約３０週間以上、約３２週間以上、約３４週間以上、約３６週間以上、約３８週間以上、約４０週間以上、又は約４２週間以上である。
【００３０】
好ましい実施形態において、効果は、眉間しわ線の重症度の低減である。このような実施形態において、投与は、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含んでいてもよい。例えば、これらの実施形態の一部において、約５〜約１５Ｕ、好ましくは約８Ｕのボツリヌス毒素成分は、右の皺眉筋の内側面に注射され、約５〜約１５Ｕ、好ましくは約８Ｕは、右の皺眉筋の外側面に注射され；約５〜約１５Ｕ、好ましくは約８Ｕは、左の皺眉筋の内側面に注射され、約５〜約１５Ｕ、好ましくは約８Ｕは、左の皺眉筋の外側面に注射され；約５〜約１５Ｕ、好ましくは約８Ｕは、鼻根筋に注射される。
【００３１】
治療方法は、驚くほど長い持続期間及び高い応答者率を実現する。特定の実施形態において、本発明は、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減する方法であって、個体のしわ、しわ線、又は溝に関連する１又は２以上の筋肉又は顔の構造に、注射用の薬学的に許容される希釈剤；アクセサリー非毒素タンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素である、ボツリヌス毒素成分；アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体を含む組成物を注射することによって個体に投与するステップを含み；ボツリヌス毒素成分は、注射治療１回当たり約２０Ｕ〜約６０Ｕ、又は約４０Ｕの治療用量の量で個体に投与され、より好ましくは、治療用量は、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への注射間で分割され；正に帯電した担体は、ボツリヌス成分と非共有結合的に会合しており；組成物の注射は、個体のしわ、しわ線、又は溝の低減において少なくとも約２６週間の効果の持続期間を有する単回治療用量を提供し、それによって個体の治療間隔の持続期間を延長する、方法を提供する。しわ、しわ線、又は溝は、好ましくは個体の顔上にあり、例えば眉間しわ線である。
【００３２】
したがって、医薬組成物の方法及び使用は、上述したように、それを必要とする個体の眉間しわ線を注射可能なボツリヌス毒素で治療する方法を可能にし、本方法は、長期化された効果の持続期間と治療間隔の持続期間とを含む複数の治療間隔を有する治療過程を含み、治療過程は、個体の眉間複合体に、滅菌注射用組成物の最初の治療用量を注射によって投与して、組成物での最初の治療後に、眉間しわ線の重症度の低減を実現するステップであって；組成物は、注射に適切な薬学的に許容される希釈剤；アクセサリー非毒素タンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素である、ボツリヌス毒素成分；及びアミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体を含み；ボツリヌス毒素成分は、注射治療１回当たり約２０Ｕ〜約６０Ｕ、又は約４０Ｕの治療用量で個体に投与され、より好ましくは、治療用量は、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への注射間で分割され；正に帯電した担体は、ボツリヌス毒素成分と非共有結合的に会合しており；個体への注射によって投与される組成物の最初の治療用量は、少なくとも約２６週間にわたり続く効果の持続期間を提供する、ステップ；並びに組成物の後続の治療用量を、最初の治療用量の後及び各後続の治療用量の間、約２６週間以上から少なくとも約４０週間までの持続期間を含む治療間隔で、個体に注射によって投与するステップを含む。
【００３３】
上記の２つの段落に記載される方法及び使用の一部の実施形態において、組成物は、少なくとも約２７週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約２９週間、又は少なくとも約３０週間の効果の延長された持続期間を実現する。一部のこのような実施形態において、正に帯電した担体は、ボツリヌス毒素成分１ユニット当たり約０．１〜約０．３μｇの量で、好ましくはボツリヌス毒素成分１ユニット当たり約０．２３４μｇの量で、前記医薬組成物中に存在する。代替として、又は加えて、一部のこのような実施形態において、賦形剤は、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含み、好ましくはトレハロース二水和物を含む。
【００３４】
本発明の組成物、並びにその方法及び使用によって提供される効果の持続期間は、従来技術と比較して有意な利点をもたらす。ボツリヌス毒素を含有する組成物での治療を受けている対象は、効果の持続期間が高い重要性を有すると考えている。長い、持続的な効果の持続期間は、本発明による有効量を用いた単回治療でも実現することができ、治療過程全体で対象への注射の回数をより少なくすることを可能にする。例えば、本明細書に記載の発明の組成物及び方法によって提供されるような明らかな効能及び安全性を有する製品での単回注射治療による長期化された効果の持続期間は、治療を受けている対象に、より少ない不快感、より低い、及びより高い利便性を提供する。したがって、単回注射治療後に有意で持続的な効果をもたらす製品は、医師と患者の両方に、当業界において未だ満たされていない必要性への解決法を提供する。したがって、本発明の組成物及び方法は、度重なる、苦痛に満ちた、及び不便な治療のいずれか１又は２以上の問題の解決法に加えて、患者の総合的な幸福感の改善を提供する。
【００３５】
別の態様において、本発明は、従来のボツリヌス毒素製剤と比較して、より高い応答者率を有する、対象にとって所望の治療的又は美容的な利益を実現する方法を提供する。一部の実施形態において、本発明は、注射可能なボツリヌス毒素で、それを必要とする個体のしわ、しわ線、溝、又は眉間しわ線を治療する方法であって、個体のしわ、しわ線、又は溝に関連する１又は２以上の筋肉又は顔の構造（例えば眉間複合体）に、注射用の薬学的に許容される希釈剤；アクセサリー非毒素タンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素である、ボツリヌス毒素成分；アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体を含む組成物を注射することによって個体に投与するステップを含み；ボツリヌス毒素成分は、注射治療１回当たり約２０Ｕ〜約６０Ｕ、又は約４０Ｕの治療用量の量で個体に投与され、より好ましくは、治療用量は、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への注射間で分割され；正に帯電した担体は、ボツリヌス成分と非共有結合的に会合しており；組成物の注射は、従来のボツリヌス毒素製剤が投与された個体と比較して、それぞれ医薬組成物が投与された個体の応答の速度が増加した、しわ、しわ線、溝、又は眉間しわ線の重症度を低減する効果を提供する、方法を提供する。
【００３６】
好ましいこのような実施形態において、効果は、少なくとも約４週間、それぞれ医薬組成物が投与された個体の、５５％より多く、好ましくは６０％より多く、より好ましくは７０％より多くにおいて持続する。より好ましい実施形態において、効果は、少なくとも約１６週間、それぞれ医薬組成物が投与された個体の、３５％より多く、好ましくは５０％より多く、より好ましくは７０％より多くにおいて持続する。さらにより一層好ましい実施形態において、効果は、少なくとも約２４週間、それぞれ医薬組成物が投与された個体の、１５％より多く、最も好ましくは２５％より多くにおいて持続する。
【００３７】
本発明はまた、ボツリヌス毒素、ボツリヌス毒素複合体、若しくは低減されたボツリヌス毒素複合体及び正に帯電した担体を含有する製剤、又は順にこのような製剤を生産するのに使用できる予備混合物を調製するためのキットも提供する。また、ボツリヌス毒素成分及び正に帯電した担体を逐次的に投与するための手段を含有するキットも提供される。
【００３８】
さらに別の態様において、本発明は、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与することによって、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するためのボツリヌス毒素の作用の持続期間の増加における使用のための方法及び組成物であって、ボツリヌス毒素組成物の第１の治療は、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって個体に投与され；それに続き、少なくとも１回の連続した治療が投与される、組成物を提供する。好ましい実施形態において、第１の治療は、少なくとも約２０週間にわたり前記しわ、しわ線、又は溝を低減し、１又は２以上の連続した治療は、前記第１の治療後に実現されるものより長い持続期間にわたり、しわ、しわ線、又は溝を低減する。特定の実施形態において、組成物は、アクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む、約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量のボツリヌス毒素成分、及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分を含み；正に帯電した担体は、ボツリヌス成分と非共有結合的に会合している。より好ましい実施形態において、用量は、４０Ｕであり、及び／又は正に帯電した担体は、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する。さらにより一層好ましい実施形態において、前記正に帯電した担体及び前記ボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で前記医薬組成物中に存在し；及び／又は正に帯電した担体は、前記ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり、約１〜約５０μｇ／４０Ｕ、約５〜約２５μｇ／４０；約１０〜約１５μｇ／４０、又は約１２μｇの量で組成物中に存在する。さらにより一層好ましい実施形態において、賦形剤は、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含み、最も好ましくはトレハロース二水和物を含む。
【００３９】
さらに別の態様において、本発明は、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与することによって、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するボツリヌス毒素応答を実現する可能性の増加における使用のための方法及び組成物であって、ボツリヌス毒素組成物の第１の治療は、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって個体に投与され；それに続き、しわ、しわ線、又は溝を低減する可能性が第１の治療より大きい少なくとも１回の連続した治療が投与される、方法及び組成物を提供する。特定の実施形態において、組成物は、１５０ｋＤａの分子量を有する血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む、約１０Ｕ〜約１００Ｕの用量のボツリヌス毒素成分、及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体成分を含み；正に帯電した担体は、ボツリヌス成分と非共有結合的に会合している。より好ましい実施形態において、用量は、４０Ｕであり、及び／又は正に帯電した担体は、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する。さらにより一層好ましい実施形態において、前記正に帯電した担体及び前記ボツリヌス毒素成分が、約２０，０００：１〜約５５，０００：１の質量比率で医薬組成物中に存在し；及び／又は正に帯電した担体は、前記ボツリヌス毒素成分４０Ｕ当たり、約１〜約５０μｇ／４０Ｕ、約５〜約２５μｇ／４０；約１０〜約１５μｇ／４０、又は約１２μｇの量で組成物中に存在する。さらにより一層好ましい実施形態において、賦形剤は、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、ポリソルベート２０、及びトレハロース二水和物からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含み、最も好ましくはトレハロース二水和物を含む。
【００４０】
上の２つの段落に記載される本発明の特定の実施形態において、しわ、しわ線、又は溝は、眉間しわ線である。このような実施形態において、投与は、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含んでもよい。さらにより一層好ましい実施形態において、反復治療は、組成物の投与後の副作用をより少なくし、特定には眼瞼下垂を低減する。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
本特許又は出願ファイルは、色を施した少なくとも１つの図面を含有する。色付き図面（複数可）を伴う本特許又は特許出願公開公報の写しは、要求及び必要な手数料を支払うことで事務局により提供される。
【図１】図１は、BOTOX（登録商標）、又はアクセサリータンパク質を伴わない１５０ｋＤａ  Ａ型ボツリヌス毒素（ＲＴＴ１５０）とアミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電した担体とを含む製剤であるＲＴ００３のいずれかの反復投与後にベースライン指外転スコア（ＤＡＳ，digit abduction score）値（０．４）に戻るために必要とされる時間を示す棒グラフを提示する。
【図２Ａ−２Ｂ】図２Ａは、側方〜正中線注射によって影響を受けたマウス腓腹筋の部分を示すために暗い色素を注射したマウスの後肢を示す。図２Ｂは、正中線注射によって影響を受けたマウス腓腹筋の部分を示すために暗い色素を注射したマウスの後肢を示す。
【図３】図３は、マウスの腓腹筋の側方〜正中線又は正中線部分のいずれかへのＲＴ００３、ＲＴＴ１５０又はBOTOX（登録商標）注射後の時間の関数として測定した指外転スコア（ＤＡＳ）を提示する。
【図４Ａ−４Ｂ】図４Ａ及び４Ｂは、本明細書の実施例５で記載される臨床研究からの様々な治療群における応答の持続期間を示すカプラン・マイヤー曲線を提示する。カプラン・マイヤー曲線は、臨床研究の主要効能分析からの結果を表し、示される治療群における治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ，Investigator Global Assessment-Facial Wrinkle Severity）査定についてのベースラインからの少なくとも１点改善の応答の持続期間を実証する。図４Ａは、プラセボ治療群、VISTABEL（登録商標）／BOTOX（登録商標）２０Ｕ治療群及びＲＴ００２  ４０Ｕ治療群についてのカプラン・マイヤー曲線を提示する。図４Ｂは、プラセボ治療群、VISTABEL（登録商標）／BOTOX（登録商標）２０Ｕ治療群、ＲＴ００２  ２０Ｕ治療群、ＲＴ００２  ４０Ｕ治療群及びＲＴ００２  ６０Ｕ治療群についてのカプラン・マイヤー曲線を提示する。
【図５Ａ−５Ｃ】図５Ａ〜５Ｃは、本明細書の実施例７で記載されるフェーズ３臨床治験の２つの研究アームからの主要エンドポイント結果を提示する。図５Ａは、２つのアームについての４週目（治療意図（ＩＴＴ，Intent-to-Treat）集団）における主要エンドポイントを提示し、最大限に顔をしかめたときの少なくとも２点混成応答を実現した対象の割合を示す（研究センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定についてプラセボに対して＊ｐ＜０．０００１）。図５Ｂは、２つのアーム（観察症例）（ＩＴＴ）についてのＩＧＡ−ＦＷＳ及び患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ，Patient Facial Wrinkle Severity）スケールの両方についてのベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間のカプラン・マイヤープロットを提示する。図５Ｃは、２つのアーム（観察症例）（ＩＴＴ）のＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳスケールのいずれかについてのしわ重症度なし又は軽度のしわ重症度の維持時間のカプラン・マイヤープロットを提示する。
【図６Ａ−６Ｂ】図６Ａ〜６Ｂは、フェーズ３研究の２つのアームを実施例５と比較する。図６Ａは、フェーズ３研究の２つのアームの４週目における主要エンドポイントの、実施例５の結果の主要エンドポイントとの比較を提示し、最大限に顔をしかめたときの少なくとも２点混成応答を実現する各ＩＴＴ集団における対象のパーセンテージを比較する。図６Ｂは、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答の点で、フェーズ３研究の２つのアームを実施例５と比較する。
【図７】図７は、実施例５の結果及び他のボツリヌス毒素製剤と比較した、２つのアームの各々についての経時的なしわなし又は軽度のしわスコアに基づくしわなし又は軽度のしわを維持する対象のパーセントを提示する。
【図８】図８は、実施例５と比較した、フェーズ３研究の２つのアームのＩＴＴのＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答を描写する。
【図９】図９は、実施例５と比較した、及びアボボツリヌス毒素Ａと比較した、フェーズ３研究の２つのアームのＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答を描写する。
【図１０】図１０は、実施例５（ＰＰ）と比較した、フェーズ３研究の２つのアームの経時的なＩＧＡ−ＦＷＳについての１点以上の応答率を描写する。
【図１１】図１１は、２つのアームの各々について、及び実施例５について、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳスコアについてベースラインからの少なくとも１点改善を維持する対象のパーセントを描写する。
【図１２】図１２は、２つのアームの各々について、及び実施例５について、経時的なＰＦＷＳスコアについてベースラインからの少なくとも１点改善を維持する対象のパーセントを描写する。
【図１３】図１３は、フェーズ３研究の２つのアームの各々について、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳスコアについてベースラインからの少なくとも１点改善を維持する対象のパーセントを描写する。
【図１４】図１４は、２つのアームの各々について（紫色及び青色の線）、及び実施例５について（赤色の線）、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳについてなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）を維持する対象のパーセントを描写する。
【図１５】図１５は、４週目における２点混成応答者に基づいて、２つのアームの各々について（紫色及び青色の線）、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳについてなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）を維持する対象のパーセントを描写する。
【図１６】図１６は、２つのアームの各々について（紫色及び青色の線）、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳのいずれかについてなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）を維持する対象のパーセントを描写する。
【図１７】図１７は、フェーズ３研究の２つのアームの各々について（紫色及び青色の線）、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻る対象のパーセントを描写する。
【図１８】図１８は、フェーズ３研究の２つのアームの各々について、治療後の患者の全般的満足度評点を描写する。
【図１９】図１９は、治療後４週目（最大限に顔をしかめたとき）におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについての２点改善；及び２４週目まで通して１点の維持された効果の持続期間を示す対象の写真を提示する。
【図２０Ａ−２０Ｂ】図２０Ａ〜２０Ｂは、治療後４週目（最大限に顔をしかめたとき）におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについての２点改善；及び２４週目（図２０Ｂ）及び３２週目（図２０Ｂ）まで通して１点の維持された効果の持続期間を示す異なる対象の写真を提示する。
【図２１Ａ−２１Ｂ】図２１Ａ〜２１Ｂは、本明細書で記載される非盲検安全性研究についての研究設計（図２１Ａ）、及び実施例７のアーム１及び２と比較したこの研究の概要（図２１Ｂ）を描写する。
【図２２】図２２は、ＲＴ００２による軽度〜中程度の眉間しわ線の治療のための例示的な注射部位を描写する。
【図２３】図２３は、ＲＴ００２の安全性を評価するための臨床治験における例示的な治験査定スケジュールを描写する。
【図２４Ａ−２４Ｂ】図２４Ａ〜２４Ｂは、研究間で４週目において眉間しわ線の改善を維持する対象の割合を描写する。図２４Ａは、実施例８のフェーズ３研究における４週目において少なくとも２点混成応答を実現する対象を描写し、図２４Ｂは、実施例７、アーム１及び２、並びに実施例８のフェーズ３研究にわたり４週目において治験担当医及び対象の両方のＧＡＩＳスコアについて少なくとも＋１のスコアを実現する対象を描写する。
【図２５Ａ−２５Ｂ】図２５Ａ〜２５Ｂは、ＩＧＡ−ＦＷＳ（図２５Ａ）及びＰＦＷＳ（図２５Ｂ）によって査定した、治療後の様々な時点における治療に応答した「なし」又は「軽度」のしわスコアを有する実施例７及び実施例８における対象のパーセントを描写する。
【図２６Ａ−２６Ｂ】図２６Ａ〜２６Ｂは、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についての「なし」又は「軽度」のスコアの喪失（図２６Ａ）、並びにＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインへの戻りの喪失（図２６Ｂ）の、治療後の時間に対する実施例７及び実施例８における対象のパーセントを描写する。
【図２７Ａ−２７Ｂ】図２７Ａ〜２７Ｂは、治療後の経時的な、最大限に顔をしかめたときの対象のＧＡＩＳ（Ｐ−ＧＡＩＳ）によって（図２７Ａ）、又は最大限に顔をしかめたときの治験担当医のＧＡＩＳ（Ｉ−ＧＡＩＳ）によって（図２７Ｂ）査定される応答を示す実施例８における対象のパーセントを描写する。
【図２８Ａ−２８Ｂ】図２８Ａ〜２８Ｂは、４週目におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳによる２点改善を例示する対象の写真を描写し、１６週目まで通した維持された効果の持続期間及び２４週目で残存する１点改善を伴う。
【図２９】図２９は、部分群によるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのなし又は軽度のスコアの喪失までの時間中央値を描写する。
【図３０】図３０は、部分群によるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインに戻るまでの時間中央値を描写する。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明は、ボツリヌス毒素の治療的及び／又は美容的適用において、より高い応答者率及び／若しくはより長い効果の持続期間、又はより長い効果の持続期間を生じさせることにおける使用のための、ボツリヌス毒素を含有する組成物に関する。特定には、本発明は、商業的に入手可能なボツリヌス毒素調製物、例えばBOTOX（登録商標）と比較して、長期間にわたり眉間しわ線を有する患者においてより高い応答者率を生じさせることにおける使用のための、ボツリヌス毒素を含有する組成物に関する。
【００４３】
一態様において、使用される組成物は、注射によって、例えば治療される状態に関連する１又は２以上の筋肉、例えば、中程度から重度の眉間しわ線に関連する１又は２以上の筋肉への注射によって個体に投与できる滅菌注射製剤の形態である。本明細書で使用される場合、組成物及び製剤という用語は、本発明による組成物及び製剤を指す場合、本質的に置き換え可能である。
【００４４】
注射用組成物
好ましい実施形態において、毒素が、従来の商業的なボツリヌス毒素製剤（例えば、BOTOX（登録商標）又はMYOBLOC（登録商標））と比較して、低減された抗原性、より優れた安全性プロファイル、強化された効力、より速い臨床効能の開始、より高い応答者率、及びより長い臨床効能の持続期間などの１又は２以上の利点を有するように、本発明の注射用組成物は、毒素を安定化させるか、及び／又は注射後に組織を介したその送達を可能にする。特に好ましい実施形態において、注射用組成物は、注射後の注射部位からの低減された拡散又は拡がりの特性を提供し、それによって毒素及びその効果を所望の場合に局在化し、注射の部位から遠位の場所での非特異的な、又は不要な毒素の効果を減少させる。注射用組成物は、有効量の正に帯電した担体と非共有結合的に会合したボツリヌス毒素を含み、担体は、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）又は細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）とも称される、共有結合した正に帯電した「効率基」を有する正に帯電した主鎖を含む。本発明によれば、正に帯電した担体は、毒素分子の共有結合の改変を有さず、上記で論じられたような改善された特徴を有する毒素の注射を可能にする、ボツリヌス毒素のための輸送システムとして適切である。
【００４５】
以下のセクションは、本発明で使用するための組成物の様々な成分を記載する。
【００４６】
ボツリヌス毒素成分
本明細書で使用される用語「ボツリヌス毒素」は、細菌によって産生されたか又は組換え技術によって産生されたかにかかわらず、公知の型のボツリヌス毒素（例えば、Ｃ．ボツリナムの異なる血清型に関連する１５０ｋＤのボツリヌス毒素タンパク質分子）のいずれかを指す場合もあり、加えて、新たに発見された血清型や、操作されたバリアント又は融合タンパク質などのその後発見される可能性があるあらゆるタイプを指す場合もある。上述したように、現在７種の免疫学的に別個のボツリヌス菌神経毒、すなわちボツリヌス菌神経毒血清型Ａ型、Ｂ型、Ｃ１型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型及びＧ型が特徴付けられており、これらはそれぞれ、型特異的な抗体での中和によって区別される。異なる血清型のボツリヌス毒素は、それらが影響を与える動物種並びにそれらが誘発する麻痺の重症度及び持続期間において異なっている。好ましい実施形態において、組成物は、血清型Ａ型のボツリヌス毒素を含む。
【００４７】
ボツリヌス毒素血清型は、例えば、Sigma-Aldrich社（St. Louis、MO）から、及びMetabiologics, Inc.社（Madison、WI）から、加えて他の供給源から商業的に入手可能である。少なくとも２つの型のボツリヌス毒素、すなわちＡ型及びＢ型が、特定の状態を治療するための製剤の形態で商業的に入手可能である。Ａ型は、例えば、商標BOTOX（登録商標）を有するAllergan, Inc.社の調製物に含有されており、同様に商標DYSPORT（登録商標）を有するIpsen Limited社の調製物にも含有されている。最初のBotox（登録商標）製剤は、１９７９年にSchantzによって調製された（Schantz et al., “Preparation and characterization of botulinum toxin type A for human treatment” Therapy with Botulinum Toxin. Vol. 109. New York, NY: Marcel Dekker; 1994. pp. 10-24）。Ｂ型は、例えば、商標MYOBLOC（登録商標）を有するElan Pharmaceuticals社の調製物中に含有される。また組換えボツリヌス毒素は、例えば、List Biological Laboratories社、Campbell、CAからも購入できる。
【００４８】
あるいは、用語「ボツリヌス毒素」は、ボツリヌス毒素誘導体、すなわち、ボツリヌス毒素活性を有するが、天然に存在する又は組換え天然ボツリヌス毒素と比べて、いずれかの部分への、又はいずれかのアミノ酸鎖への１又は２以上の化学的又は機能的な変更を含有する化合物を指すこともある。例えば、ボツリヌス毒素は、そのアミノ酸の少なくとも１つが、天然型と比較して、欠失している、改変されている、又は置き換えられている神経毒である改変された神経毒であってもよいし、又は改変された神経毒は、組換え生産された神経毒、又はその誘導体若しくはフラグメントであってもよい。例えば、ボツリヌス毒素は、例えば、その特性を強化するか又は望ましくない副作用を減少させるが、それでもなお所望のボツリヌス毒素活性を保持するように改変されているボツリヌス毒素であってもよい。あるいは、本発明で使用されるボツリヌス毒素は、組換え又は合成化学技術を使用して調製された毒素であってもよく、例えば異なるボツリヌス毒素血清型のサブユニット又はドメインから調製された、例えば組換えペプチド、融合タンパク質、又はハイブリッド神経毒であってもよい（例えば米国特許第６，４４４，２０９号明細書を参照）。またボツリヌス毒素は、必要なボツリヌス毒素活性を有することがすでに示されている分子全体の一部であってもよく、このような場合、それ自体が使用されてもよいし、又は組合せ又はコンジュゲート分子、例えば融合タンパク質の一部として使用されてもよい。あるいは、ボツリヌス毒素は、ボツリヌス毒素前駆体の形態であってもよく、このような形態は、それ自体非毒性であってもよく、例えば、タンパク質分解切断で毒性になる非毒性の亜鉛プロテアーゼであってもよい。
【００４９】
用語「ボツリヌス毒素複合体」、又は「毒素複合体」は、本明細書で使用される場合、関連する内因性非毒素タンパク質（すなわち、Ｃ．ボツリナム細菌によって産生された、ヘマグルチニンタンパク質及び非毒素の非ヘマグルチニンタンパク質）を伴う、およそ１５０ｋＤのボツリヌス毒素タンパク質分子（ボツリヌス毒素血清型Ａ〜Ｇ型のいずれか１つに属する）を指す。一部の実施形態において、ボツリヌス毒素複合体は、必ずしも１つの一体型の毒素複合体としてＣ．ボツリナム細菌から生じるものでなくてもよく、例えば、まず組換えによって調製され、それに続いて非毒素タンパク質と組み合わされたボツリヌス毒素であってもよい。
【００５０】
用語「低減されたボツリヌス毒素複合体」又は「低減された毒素複合体」は、Ｃ．ボツリナム細菌によって産生されたボツリヌス毒素複合体で自然に見出される量と比較して非毒素タンパク質の量が低減されたボツリヌス毒素複合体を指す。一実施形態において、低減されたボツリヌス毒素複合体は、Ｃ．ボツリナム細菌由来のボツリヌス毒素複合体からヘマグルチニンタンパク質又は非毒素非ヘマグルチニンタンパク質の画分を抽出するあらゆる従来のタンパク質分離方法を使用して調製される。例えば、低減されたボツリヌス毒素複合体は、７．３のｐＨで赤血球への曝露を介してボツリヌス毒素複合体を解離させること、ＨＰＬＣ、透析、カラム、遠心分離、及び複合体からタンパク質を抽出するための他の方法によって生産することができる。使用できる他の手順は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Rueggの米国特許第９，４６９，８４９号明細書、タイトル「Methods And Systems For Purifying Non-Complexed Botulinum Neurotoxin」；Allergan, Inc.社の国際公開第２００６／０９６１６３号パンフレット、タイトル「Animal Product Free System And Process For Purifying A Botulinum Toxin」；及びAllergan, Inc.社の欧州特許第１５１４５５６号Ｂ１、タイトル「Botulinum toxin pharmaceutical compositions」に記載されている。あるいは、合成的に生産されたボツリヌス毒素を非毒素タンパク質と組み合わせることによって、低減されたボツリヌス毒素複合体を生産しようとする場合、単に、天然に存在するボツリヌス毒素複合体の場合に存在すると予想されるものより少ないヘマグルチニン又は非毒素、非ヘマグルチニンタンパク質を混合物に添加することも可能である。
【００５１】
低減されたボツリヌス毒素複合体中の非毒素タンパク質のいずれか（例えば、ヘマグルチニンタンパク質若しくは非毒素非ヘマグルチニンタンパク質又は両方）は、独立して、あらゆる量で低減されていてもよい。例えば、一部の場合において、内因性非毒素タンパク質の量が同じ量で低減される場合もあるが、本発明はまた、内因性非毒素タンパク質のそれぞれが異なる量で低減されていること、同様に、内因性非毒素タンパク質の少なくとも１つが低減されているが、それ以外は低減されていないことも企図する。
【００５２】
特定の例示的な実施形態において、１又は２以上の非毒素タンパク質は、ボツリヌス毒素複合体に通常見出される量と比較して、少なくとも約０．５％、１％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％低減される。上述したように、Ｃ．ボツリナム細菌は、毒素の７種の異なる血清型を産生する。商業的な調製物は、非毒素タンパク質の異なる相対量で製造される。例えば、MYOBLOC（登録商標）は、０．０５％のヒト血清アルブミン、０．０１Ｍのコハク酸ナトリウム、及び０．１Ｍの塩化ナトリウムと共に、５０００ＵのＢ型ボツリヌス毒素／ｍｌを有する。DYSPORT（登録商標）は、１２５μｇのアルブミン及び２．４ｍｇのラクトースと共に、５００ＵのＡ型ボツリヌス毒素−ヘマグルチニン複合体を有する。特定の実施形態において、Ｃ．ボツリナム細菌由来のボツリヌス毒素複合体に通常見出されると予想される非毒素タンパク質の実質的に全て（例えば、ヘマグルチニンタンパク質及び非毒素非ヘマグルチニンタンパク質の、９５％より多く、９６％より多く、９７％より多く、９８％より多く、又は９９％より多く）が、ボツリヌス毒素複合体から除去される。
【００５３】
したがって、様々な実施形態において、本発明の組成物のボツリヌス毒素成分は、ボツリヌス毒素複合体（上述したように、Ｃ．ボツリナム細菌によって産生された天然複合体に見出されるアクセサリータンパク質を有する１５０ｋＤの神経毒を含む）、低減されたボツリヌス毒素複合体（天然アクセサリータンパク質の全てではないが一部を有する１５０ｋＤの神経毒を含む）、及びアクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤのボツリヌス毒素分子それ自体から選択することができる。
【００５４】
本発明の組成物において、ボツリヌス毒素は、担体と非共有結合的に会合して、ボツリヌス毒素分子への共有結合の改変がない複合体を形成する。担体とボツリヌス毒素との間の会合は、１又は２以上のタイプの非共有結合的な相互作用を含み、その非限定的な例としては、イオン性相互作用、水素結合、ファンデルワールス力、又はそれらの組合せが挙げられる。例えば、どのように非共有結合的な会合が、送達される毒素分子を共有結合で改変する必要性を回避するかをさらに記載する、Dakeらの国際公開第２００５／０８４４１０号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２００５／００７５２４号パンフレット）、「Compositions and Methods for Topical Application and Transdermal Delivery of Botulinum Toxins」も参照されたい。組成物で使用するための担体分子は、後述される。
【００５５】
担体分子
本発明によれば、正に帯電した担体分子は、本明細書に記載されるように効率基に共有結合しており、ボツリヌス毒素のための適切な輸送システムとして見出されている。特定の実施形態において、正に帯電した担体は、他の酵素的又は治療的な生物学的活性を有さないと予想される。
【００５６】
正に帯電した担体は、標的構造への改善された送達で毒素を注射することができ、結果として、注射された筋肉、例えば眉間しわ線に関連する１又は２以上の筋肉からの拡散を減少させる。ボツリヌス毒素の送達を強化することの他にも、特定の好ましい実施形態において、正に帯電した担体は、分解に対してボツリヌス毒素を安定化させることができる。このような実施形態において、通常、ボツリヌス毒素を安定化させるために存在する、ヘマグルチニンタンパク質及び非毒素、非ヘマグルチニンタンパク質は、低減されていてもよいし、又は例えば上述したようにその全体が無くてもよい。同様に、通常製造中に添加される外因性アルブミンは、無くてもよい。
【００５７】
本発明の注射用組成物で使用することができる例示的な正に帯電した担体は、例えば、Waughらの国際公開第２００２／００７７７３号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２００１／０２３０７２号パンフレット）、「Multi-Component Biological Transport Systems」；Dakeらの国際公開第２００５／０８４４１０号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２００５／００７５２４号パンフレット）、「Compositions and Methods for Topical Application and Transdermal Delivery of Botulinum Toxins」；Thompsonらの国際公開第２０１０／１５１８４０号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０１０４号パンフレット）、「Albumin-Free Botulinum Toxin Formulations」；Stoneらの国際公開第２００９／０１５３８５号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７１３５０号パンフレット）、「Antimicrobial Peptide, Compositions, and Methods of Use」；Waughらの国際公開第２０１３／１１２９７４号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０２３３４３号パンフレット）、「Methods and Assessment Scales for Measuring Wrinkle Severity」；Rueggらの米国特許第９，９５６，４３５号明細書、「Injectable Botulinum Toxin Formulations」；及びRueggらの国際公開第２０１４／０６６９１６号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／６７１５４号パンフレット）、「Compositions and Methods for Safe Treatment of Rhinitis」に記載されており、追加の担体は、例えば、Tanらの米国特許公報第２０１６／０１６６７０３号Ａ１、タイトル「Carrier Molecule Compositions and Related Methods」及びJacobらの米国特許公報第２０１４／００５６８１１号Ａ１、タイトル「New Cell-Penetrating Peptides And Uses Thereof」に記載されており、これらのそれぞれは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００５８】
用語「正に帯電した」又は「カチオン性」の使用は、担体が、少なくともある程度の液相条件下で、より好ましくは、少なくともある程度の生理学的に適合する条件下で正に帯電したことを意味する。より具体的には、「正に帯電した」又は「カチオン性」は、問題の基が、生理学的なｐＨ条件下で電荷を有する官能基、例えば第四アミンを含有すること、又はそのような基が、特定の液相条件下で、例えば第一アミンの場合はｐＨ変化によって正電荷を獲得できる官能基を含有することを意味する。より好ましくは、「正に帯電した」又は「カチオン性」は、本明細書で使用される場合、生理学的に適合する条件にわたりアニオンと会合する挙動を有する基を指す。一般的に、正に帯電した担体は、正に帯電した主鎖を含み、以下でより詳細に記載される。
【００５９】
担体分子の正に帯電した主鎖
正に帯電した主鎖は、典型的には、生理学的なｐＨで正に帯電した鎖中の基を有するか、又は側鎖に結合した正に帯電した基を有するかのいずれかの原子の鎖である。一般的に、主鎖は、直鎖状炭化水素主鎖であり、一部の実施形態において、窒素、酸素、硫黄、ケイ素、及びリンから選択されるヘテロ原子が介在する直鎖状炭化水素主鎖である。主鎖原子の大部分は、通常、炭素である。加えて、主鎖は、繰り返し単位のポリマー（例えば、アミノ酸、ポリ（エチレンオキシ）、ポリ（プロピレンアミン）、ポリアルキレンイミンなど）であることが多いと予想され、ホモポリマー又はヘテロポリマーであってもよい。
【００６０】
特定の好ましい実施形態において、正に帯電した主鎖は、カチオン性ペプチド、例えば、複数の正に帯電した側鎖基（例えば、リシン、アルギニン、オルニチン、ホモアルギニンなど）を有するポリペプチドを含む。当業者は、本発明のこの部分においてアミノ酸が使用される場合、側鎖は、結合中心においてＤ−又はＬ−型（Ｒ又はＳ立体配置）のいずれかを有し得ることを理解しているものと予想される。
【００６１】
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」は、アミノ酸配列を指すが、アミノ酸配列内のアミノ酸残基の数に関する含意はない。したがって、用語「ペプチド」は、ポリペプチド及びタンパク質も包含する場合がある。例えば、本発明のカチオン性ペプチド主鎖は、約５〜約１００アミノ酸残基、約１０〜約５０アミノ酸残基、又は約１２〜約２０アミノ酸残基を含んでいてもよい。好ましい実施形態において、カチオン性ペプチド主鎖は、１０〜２０アミノ酸、又は１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０アミノ酸を含み、好ましくは、ポリリジンアミノ酸残基である。
【００６２】
特に好ましい実施形態において、正に帯電した主鎖は、ポリリジンである。一部の実施形態において、ポリリジンは、少なくとも約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、又は６０００Ｄ、及び約２，０００，０００、１，０００，０００、５００，０００、２５０，０００、１００，０００、７５，０００、５０，０００、及び２５，０００Ｄ未満の分子量を有していてもよい。１００〜２，０００，０００Ｄの範囲内で、範囲の下限及び／又は上限は、それぞれ１００ずつ増加又は減少させることができることが企図され、得られた各部分範囲は、本発明の具体的に企図される実施形態である。本発明によって企図されるポリリジンは、商業的に入手可能な（Sigma Chemical社、St. Louis, Mo.、USA）ポリリジンのいずれかであってもよく、例えば、ＭＷ＞７０，０００を有するポリリジン、７０，０００〜１５０，０００のＭＷを有するポリリジン、１５０，０００〜３００，０００のＭＷを有するポリリジン、及びＭＷ＞３００，０００を有するポリリジンなどであってもよい。
【００６３】
一部の好ましい実施形態において、ポリリジンは、約１，０００〜約１，５００，０００Ｄ、約２，０００〜約８００，０００Ｄ、又は約３，０００〜約２００，０００Ｄの分子量を有する。より好ましい実施形態において、ポリリジンは、約１００〜約１０，０００Ｄ、約５００〜約５，０００Ｄ、約１，０００〜約４，０００Ｄ、約１，５００〜約３，５００Ｄ、又は約２，０００〜約３，０００Ｄの分子量を有する。特に好ましくは、１０〜２０個のリシン（配列番号９）、より好ましくは、１５個のリシンを有するポリリジンポリペプチドである。適切なポリリジンの選択は、組成物の残存する成分に依存すると予想され、正に帯電した担体に全体的な正味の正電荷を提供するのに十分な程度と予想される。
【００６４】
別の実施形態において、正に帯電した主鎖は、非ペプチジルポリマーであり、これは、ヘテロ又はホモポリマー、例えば、ポリアルキレンイミン、例えばポリエチレンイミン又はポリプロピレンイミンであってもよい。一部の実施形態において、正に帯電した主鎖は、ポリプロピレンアミンであり、この場合、アミン窒素原子の数は、正に帯電したアンモニウム基（テトラ置換された）として存在する。実施形態の別の群において、主鎖は、正に帯電した基（例えば、アンモニウム基、ピリジニウム基、ホスホニウム基、スルホニウム基、グアニジニウム基、又はアミジニウム基）を含む複数の側鎖部分が結合している。
【００６５】
あるいは、主鎖は、アミノ酸類似体及び／又は合成アミノ酸を含んでいてもよい。主鎖はまた、ポリペプチドの類似体、例えばペプトイドであってもよい。例えば、Kessler, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32:543 (1993); Zuckermann et al. Chemtracts-Macromol. Chem. 4:80 (1992);及びSimon et al. Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 89:9367 (1992))を参照されたい。簡単に言えば、ペプトイドは、側鎖がアルファ−炭素原子ではなく主鎖窒素原子に結合しているポリグリシンである。上記したように、側鎖の一部又は全ては、典型的には、正に帯電した主鎖成分を提供するために正に帯電した基で終わると予想される。ペプトイドの合成は、例えば、本明細書にその全体が参照により組み込まれる米国特許第５，８７７，２７８号明細書に記載されている。この用語が本明細書で使用される場合、ペプトイド主鎖構造を有する正に帯電した主鎖は、アルファ−炭素の位置で天然に存在する側鎖を有するアミノ酸で構成されないため、それらは「非ペプチド」とみなされる。
【００６６】
様々な他の主鎖を使用することができ、例えば、ペプチドのアミド結合が、エステル結合、チオアミド（−−ＣＳＮＨ−−）、反転したチオアミド（−−ＮＨＣＳ−−）、アミノメチレン（−−ＮＨＣＨ２−−）又は反転したメチレンアミノ（−−ＣＨ２ＮＨ−−）基、ケトメチレン（−−ＣＯＣＨ２−−）基、ホスフィネート（−−ＰＯ２ＲＣＨ２−−）、ホスホンアミデート及びホスホンアミデートエステル（−−ＰＯ２ＲＮＨ−−）、反転したペプチド（−−ＮＨＣＯ−−）、ｔｒａｎｓ−アルケン（−−ＣＲ＝ＣＨ−−）、フルオロアルケン（−−ＣＦ＝ＣＨ−−）、ジメチレン（−−ＣＨ２ＣＨ２−−）、チオエーテル（−−ＣＨ２Ｓ−−）、ヒドロキシエチレン（−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−）、メチレンオキシ（−−ＣＨ２Ｏ−−）、テトラゾール（ＣＮ４）、スルホンアミド（−−ＳＯ２ＮＨ−−）、メチレンスルホンアミド（−−ＣＨＲＳＯ２ＮＨ−−）、反転したスルホンアミド（−−ＮＨＳＯ２−−）などの代用物で置き換えられているポリペプチドの立体的又は電子的な模擬体を採用する主鎖、並びにマロン酸及び／又はジェミナルジアミノ−アルキルサブユニットを有する主鎖、例えば、Fletcher et al. ((1998) Chem. Rev. 98:763)によって概説されたもの、及びそこで引用された文献によって詳述されたものを使用することができる。前述の置換の多くは、アルファ−アミノ酸から形成された主鎖に対してほぼ等配電子のポリマー主鎖を生じる。
【００６７】
１つの特に好ましい実施形態において、担体は、相対的に短いポリリジン又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）主鎖（これは、直鎖状であってもよいし、又は分岐状であってもよい）を含み、共有結合した正に帯電した効率基を有する。担体が相対的に短い直鎖状ポリリジン又はＰＥＩ主鎖を含む場合、主鎖は、７５，０００Ｄ未満の分子量を有すると予想され、より好ましくは３０，０００Ｄ未満、最も好ましくは、２５，０００Ｄ未満の分子量を有する。しかしながら、担体が相対的に短い分岐状ポリリジン又はＰＥＩ主鎖である場合、主鎖は、６０，０００Ｄ未満の分子量を有すると予想され、より好ましくは５５，０００Ｄ未満、最も好ましくは５０，０００Ｄ未満の分子量を有する。より特に好ましい実施形態において、正に帯電した主鎖は、ポリリジンであり、正に帯電した効率基は、Ｃ及び／又はＮ末端でリシンに結合している。効率基は、以下で詳細に説明する。
【００６８】
効率基
一般的に、正に帯電した主鎖は、共有結合した１又は２以上の効率基（ＰＴＤ又はＣＰＰ）を有する。効率基は、主鎖に沿って一定間隔で、又は様々な間隔で配置することができる。好ましい実施形態において、１又は２以上の効率基は、担体の主鎖の末端のいずれかに、又はより好ましくは２つの末端のそれぞれに結合している。加えて、効率基の長さは、類似していてもよいし、又は類似していなくてもよい。ペプトイド主鎖を使用する実施形態において、上記で示されたように、効率基は、主鎖の様々な原子又は基に共有結合していてもよい。例えば、スルホンアミドで連結された主鎖（−−ＳＯ２ＮＨ−−及び−−ＮＨＳＯ２−−）は、窒素原子に結合した効率基を有していてもよい。同様に、ヒドロキシエチレン（−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−）連結は、ヒドロキシ置換基に結合した効率基を有していてもよい。当業者は、標準的な合成方法を使用して効率基を提供するために、他の連結の化学を容易に適合させることができる。
【００６９】
本明細書で使用される場合、効率基は、組織又は細胞膜を介した正に帯電した主鎖の移動を促進する作用、及び／又は主鎖に会合した分子の標的部位への送達を改善する作用を有するあらゆる物質である。効率基の非限定的な例としては、ＨＩＶ−ＴＡＴ又はそのフラグメント、アンテナペディアのＰＴＤ又はそのフラグメント、又は−（ｇｌｙ）ｎ１−（ａｒｇ）ｎ２（配列番号５）（式中、下付き文字ｎ１は、０〜約２０、より好ましくは０〜約８、さらにより好ましくは約２〜約５の整数であり、下付き文字ｎ２は、独立して、約５〜約２５、より好ましくは約７〜約１７、最も好ましくは約７〜約１３の奇数の整数である）が挙げられる。
【００７０】
一部の実施形態において、ＨＩＶ−ＴＡＴフラグメントは、ジスルフィド凝集に関連する問題を最小化するために、ＨＩＶ−ＴＡＴ分子のシステインリッチな領域を含有しない。好ましくは、ＨＩＶ−ＴＡＴのフラグメント及びアンテナペディアのＰＴＤは、全長タンパク質のタンパク質形質導入活性を保持する。好ましい効率基は、例えば、−Ｇｌｙ３Ａｒｇ７（配列番号１０）である。一部の実施形態において、よりさらなる好ましい効率基は、ＨＩＶ−ＴＡＴフラグメントが、アミノ酸配列（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）、又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜約２０の整数であり、又はｐ及びｑは、それぞれ独立して、整数１である）を有するものである。特定の好ましい実施形態において、ｐは、１であり、ｑは、ゼロであるか、又はｐは、ゼロであり、ｑは、１である。好ましいＨＩＶ−ＴＡＴフラグメントは、下付き文字ｐ及びｑが、それぞれ独立して、０〜８、より好ましくは０〜５の整数であるものである。一部の実施形態において、フラグメント又は効率基は、フラグメント又は効率基のアミノ酸配列のＣ末端又はＮ末端のいずれかを介して主鎖に結合している。
【００７１】
一部の実施形態において、効率基は、アンテナペディア（Ａｎｔｐ）のＰＴＤ、又は活性を保持するそのフラグメントである。これらは当業界において、例えば、Console et al., J. Biol. Chem. 278:35109 (2003)により公知であり、本発明により企図されるアンテナペディアのＰＴＤの非限定的な例は、アミノ酸配列ＳＧＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＣ（配列番号６）を有するＰＴＤである。
【００７２】
一部の実施形態において、効率基は、アミノ酸ＫＬＡＫＬＡＫ（配列番号１２）を有するペプチドを含む。他の例示的な効率基としては、それぞれ参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Tanらの米国特許公報第２０１６／０１６６７０３号Ａ１、タイトル「Carrier Molecule Compositions and Related Methods」及びJacobらの米国特許公報第２０１４／００５６８１１号Ａ１、タイトル「New Cell-Penetrating Peptides And Uses Thereof」で開示されたＣＰＰのいずれかが挙げられる。
【００７３】
一部の特に好ましい実施形態において、正に帯電した担体は、本発明の組成物及び方法における使用のための、アミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｇ−（Ｋ）１５−Ｇ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）を有する正に帯電したペプチド；又はアミノ酸配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｇ−（Ｋ）１５−Ｇ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号７）を有する正に帯電したペプチド；又はアミノ酸配列ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−Ｇ−（Ｋ）１５−Ｇ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ（配列番号８）を有する正に帯電したペプチド；又はアミノ酸配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｑ−（Ｋ）１５−Ｑ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号１１）を有する正に帯電したペプチドである。
【００７４】
担体の有効量
本発明の組成物に関して、担体の量は、毒素の安定性及び／又は標的部位への送達を促進するように、組成物中に存在するボツリヌス毒素の量に対して選択される。
【００７５】
理論に縛られることは望まないが、正に帯電した主鎖は、ボツリヌス毒素のアニオン性の表面ドメインと非共有結合的な静電的相互作用を形成して、標的組織への浸透を改善すると考えられる。また担体の正に帯電した主鎖も、投与の時点で負電荷を有する細胞外構造及び細胞表面と相互作用すると考えられ、したがって、これらの相互作用は、標的部位にボツリヌス毒素を限定し、予期せぬ構造への拡がりによる不要な副作用を低減することになる。さらに、本明細書に記載される担体は、輸送効率を劇的に減少させることになる治療用組成物中での主鎖とボツリヌス毒素との凝集の最小化を助けると考えられる。好ましい実施形態において、組成物中の担体の濃度は、眉間しわ線に関連する１又は２以上の筋肉の運動神経プレート、例えば眉間複合体などの分子標的へのボツリヌス毒素の送達を強化するのに十分な程度である。
【００７６】
さらに、ここでも理論に制限されることは望まないが、浸透速度は受容体が媒介する速度論に従うと考えられ、したがって組織への浸透は、浸透を強化する分子の量を輸送速度が一定になる飽和点まで増加させるにつれて増加することになる。したがって、好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素を含有する組成物中の担体の量は、飽和の直前に浸透速度が最大になる量に等しく、又はほぼ等しくなるように選択される。
【００７７】
一部の実施形態において、担体は、ボツリヌス毒素成分１Ｕ当たり約０．００１〜約１μｇの量で、好ましくは約０．０１〜約０．５μｇ／Ｕ、より好ましくは約０．０５〜約０．３５μｇ／Ｕ又は約０．１〜約０．３μｇ／Ｕ、最も好ましくはボツリヌス毒素１ユニット当たり約０．２３４μｇの量で、ボツリヌス毒素を含有する組成物中に提供される。一部の好ましい実施形態において、正に帯電した担体は、アクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤａのボツリヌス毒素分子それ自体の４０Ｕ当たり、約２．５より多く、約５より多く、又は約７．５μｇより多くの量で使用される。例えば、本発明の注射用組成物は、ボツリヌス毒素１Ｕ当たり、約０．１６μｇ／Ｕ、約０．１８μｇ／Ｕ、約０．２μｇ／Ｕ、約０．２１μｇ／Ｕ、約０．２２μｇ／Ｕ、約０．２３μｇ／Ｕ、約０．２３４μｇ／Ｕ、約０．２４μｇ／Ｕ、約０．２５μｇ／Ｕ、約０．２６μｇ／Ｕ、約０．２８μｇ／Ｕ、又は約０．３μｇ／Ｕを含んでいてもよい。
【００７８】
一部の実施形態において、ボツリヌス毒素を含有する組成物は、約１〜約２０μｇ、約５〜約１５μｇ、約７〜約１２μｇ、又は約８〜約１０μｇ、又は約９μｇの担体を含有していてもよい。好ましい一実施形態において、ボツリヌス毒素は、約２０Ｕ〜約６０Ｕ、例えば、約４０Ｕからなる群から選択される投薬量で存在し、担体は、ボツリヌス毒素１Ｕ当たり約０．２３４μｇの比率になるように、約４．７〜約１４μｇから選択される量で組成物中に存在する正に帯電した担体である。
【００７９】
担体、好ましくはＲＴＰ００４と、ボツリヌス毒素成分、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素との質量比率は、一般的に、約１５，０００：１〜約６０，０００：１であり、好ましくは約２０，０００：１〜約５５，０００：１、例えば約２５，０００：１、約３０，０００：１、約３５，０００：１、約４０，０００：１、約４５，０００：１、又は約５０，０００：１である。より特定の実施形態において、担体、好ましくはＲＴＰ００４と、ボツリヌス毒素成分、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素との質量比率は、約２１，０００：１、約２２，０００：１、約２３，０００：１、約２４，０００：１、又は約２５，０００：１であり；一部の他のさらに特定の実施形態において、担体、好ましくはＲＴＰ００４と、ボツリヌス毒素成分、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素との質量比率は、約４９，０００：１、約５０，０００：１、約５１，０００：１、約５２，０００：１、又は約５３，０００：１である。例えば、毒素５０Ｕ当たり又は１００Ｕ当たり、ペプチド担体の質量は、約１０μｇ、約１１μｇ、又は約１２μｇであってもよく、一部の特に好ましい実施形態において、例えば毒素の量が約４０Ｕである場合、例えば、約１１．７μｇであってもよい。一実施形態において、担体、好ましくはＲＴＰ００４と、ボツリヌス毒素成分、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素とのモル比は、３：１の担体：毒素のモル比である。
【００８０】
一部の実施形態において、担体は、ボツリヌス毒素成分１Ｕ当たり約０．００１〜約１μｇの量で、好ましくは約０．０１〜約０．５μｇ／Ｕ、より好ましくは約０．０５〜約０．１μｇ／Ｕ、最も好ましくはボツリヌス毒素１ユニット当たり約０．０７５μｇの量で、ボツリヌス毒素を含有する組成物中に提供される。一部の好ましい実施形態において、正に帯電した担体は、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのボツリヌス毒素分子４０Ｕ当たり約１．７５μｇより多くの量で使用され、すなわち、約０．０４μｇ／Ｕより多く、約０．１μｇ／Ｕ、約０．２μｇ／Ｕ、約０．４μｇ／Ｕ、約０．６μｇ／Ｕ、約０．８μｇ／Ｕ、又は約１μｇ／Ｕまでの量で使用される。例えば、本発明の注射用組成物は、ボツリヌス毒素１Ｕ当たり、約０．０４５μｇ／Ｕ、約０．０５０μｇ／Ｕ、約０．０５５μｇ／Ｕ、約０．０６０μｇ／Ｕ、約０．０６５μｇ／Ｕ、約０．０７０μｇ／Ｕ、約０．０７５μｇ／Ｕ、約０．０８０μｇ／Ｕ、約０．０８５μｇ／Ｕ、約０．０９０μｇ／Ｕ、約０．０９５μｇ／Ｕ、又は約０．１μｇ／Ｕを含んでいてもよい。
【００８１】
１つの特定の実施形態において、正に帯電した担体は、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）（本明細書では、「ＲＴＰ００４」とも称される）であり、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの毒素タンパク質分子として、ボツリヌス毒素４０Ｕ当たり約３μｇで存在する。注射用組成物の特定の実施形態において、ボツリヌス毒素は、約２０Ｕ、４０Ｕ、又は６０Ｕ（アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの毒素タンパク質分子として）の量で存在し、ＲＴＰ００４担体は、それぞれ約１．５μｇ、約３．０μｇ、又は約４．５μｇの量である。
【００８２】
医薬製剤
治療効果又は美容効果の高い応答者率及び／又は長い持続期間を実現することにおける使用のための組成物の医薬製剤は、一般的に、ボツリヌス毒素成分（会合した非毒素タンパク質、低減された会合した非毒素タンパク質、又はアクセサリー非毒素タンパク質を含まない１５０ｋＤの分子単独を含有する）を、本明細書に記載される担体と混合し、さらに注射に適切な１又は２以上の薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤と混合することによって調製される。それらの最も簡単な形態において、それらは、水性の薬学的に許容される希釈剤、例えば緩衝生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）を含有していてもよい。医薬製剤はまた、注射可能な医薬品又は薬用化粧組成物に典型的に見出される他の成分、例えばその適用が予想される組織に適合する、薬学的に許容される担体、ビヒクル、又は媒体などを含有していてもよい。
【００８３】
用語「薬学的に許容される」は、不都合な毒性、不相容性、不安定、アレルギー性応答などを起こすことなく、組成物又は成分の適用が予想される組織との接触において使用する、又は一般的に患者において使用するのに適切な組成物又は成分を記載する。必要に応じて、本発明の組成物は、検討中の分野において、特定には化粧品及び皮膚病学において従来使用されるあらゆる成分を含んでいてもよい。
【００８４】
例えば、注射で使用するための製剤は、必要に応じて、このような製品で典型的に使用される成分、例えば、抗微生物剤、水分を補給する物質、組織充填剤又は組織フィラー、保存剤、乳化剤、天然又は合成油、溶媒、界面活性剤、洗浄剤、ゲル化剤、抗酸化剤、フィラー、増粘剤、粉末、粘度を制御する物質及び水、並びに任意に、麻酔、かゆみ止め活性物質、植物抽出物、コンディショニング剤、鉱物、ポリフェノール、シリコーン又はそれらの誘導体、ビタミン、及び植物性医薬などを含有していてもよい。
【００８５】
好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素を含有する医薬製剤は、アルブミン又は他の動物性タンパク質由来の賦形剤を含まない。上述したように、外因性の安定剤（例えば、アルブミン）は、典型的には、従来のボツリヌス毒素製剤を安定化させるために添加される。例えば、BOTOX（登録商標）の場合、Ａ型ボツリヌス毒素複合体１００Ｕ当たり０．５ｍｇのヒトアルブミンが、複合体を安定化させるのに使用される。好ましい実施形態において、本明細書におけるボツリヌス毒素組成物中の添加された安定剤の量は、それ自体が安定剤として作用する担体成分の能力のために、慣習的に添加される量より少ない。例えば、添加された外因性アルブミンの量は、慣習的な１０００倍過量の外因性アルブミンより少ないあらゆる量であってもよい。特に好ましい実施形態において、本発明の組成物に、外因性アルブミンは安定剤として添加されないため、アルブミン非含有のボツリヌス毒素組成物が生産される。一部のより一層好ましい実施形態において、製剤は、他の動物由来のタンパク質をほとんど含有しないことから、動物性タンパク質非含有の製品が得られる。
【００８６】
注射用の製剤
注射製剤は、注射によって投与すること、及び／又はこのような投与で使用するまで貯蔵することに適切なあらゆる形態であり得る。例えば、本発明の一部の実施形態に従って眉間しわ線を治療するのに使用される組成物の注射製剤としては、液剤、エマルジョン（マイクロエマルジョンを含む）、懸濁剤、ゲル剤、粉剤、又はボツリヌス毒素の美容的使用に適した顔における筋肉及び他の標的組織への注射による投与に関連して使用される他の典型的な固体又は液体組成物を挙げることができる。
【００８７】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、シリンジを用いた注射に適切な低粘度の滅菌製剤の形態で存在する。本発明の組成物は、例えば、滅菌生理食塩水又は他の公知の生理学的及び薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又はビヒクル、特に注射製剤での使用に関して公知のものを使用して使用時に再構成される凍結乾燥粉末の形態であってもよい。特定の実施形態において、凍結乾燥粉末は、液体希釈剤で再構成されて、約０．１〜約２０００ｃＰ、より好ましくは約０．２〜約５００ｃＰ、さらにより好ましくは約０．３〜約５０ｃＰ、さらにより好ましくは約０．４〜約２．０ｃＰの粘度を有する注射製剤を形成する。
【００８８】
一部の実施形態において、注射製剤は、ボツリヌス毒素成分及び正に帯電した担体が長期にわたり制御された方法で組織内で放出されるように封入された、又はそれ以外の方法で材料内に含有されているボツリヌス毒素成分及び正に帯電した担体を含む、制御放出又は持続放出組成物の形態であってもよい。例えば、ボツリヌス毒素及び正に帯電した担体を含む組成物は、マトリックス、リポソーム、小胞、マイクロカプセル、マイクロスフェアなどの中に含有されていてもよいし、又は固体微粒子材料内に含有されていてもよく、これらはいずれも、長期にわたりボツリヌス毒素の放出がなされるように選択及び／又は構築される。ボツリヌス毒素及び正に帯電した担体は、一緒に（すなわち、同じカプセル中に）封入されていてもよいし、又は別々に（すなわち別のカプセル中に）封入されていてもよい。
【００８９】
一部の実施形態において、注射用のボツリヌス毒素を含有する組成物の賦形剤は、１又は２以上の追加の安定化成分を含む。一部の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されるボツリヌス毒素及び正に帯電した担体、加えて、非還元糖（例えば非還元二糖又は非還元三糖）、非イオン界面活性剤、及び適切なｐＨを維持することが可能な生理学的に適合する緩衝剤からなる群から選択される１又は２以上を含む液体（水性）製剤を含む。適切なｐＨとしては、例えば、ｐＨ４．５〜ｐＨ７．５、又はｐＨ４．５〜ｐＨ６．８、又はｐＨ４．５〜ｐＨ６．５の範囲のｐＨが挙げられる。適切なｐＨは、範囲の上限及び下限のｐＨ値、例えば、６．５のｐＨ又は７．５のｐＨも含むことが理解されると予想される。このような医薬製剤は、例えば、参照によりそれらの全体が組み込まれる、Thompsonらの米国特許第９，３４０，５８７号明細書、タイトル「Albumin-Free Botulinum Toxin Formulations」；Rueggらの米国特許第９，９５６，４３５号明細書、タイトル「Injectable Botulinum Toxin Formulations」；及びRueggらの国際公開第２０１４／０６６９１６号パンフレット（ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／６７１５４号パンフレット）「Compositions and Methods for Safe Treatment of Rhinitis」に記載されている。
【００９０】
一部の実施形態において、液体組成物中の非還元糖の濃度は、約１０％〜約４０％（ｗ／ｖ）の範囲であり、非イオン界面活性剤の濃度は、約０．００５％〜約０．５％（ｗ／ｖ）の範囲である。液体組成物は、好ましくは凍結乾燥によって乾燥させて安定化された固体組成物を生産してもよく、これはその後、上述したように使用時に再構成することができる。好ましくは、乾燥させた、例えば凍結乾燥させた固体組成物は、非晶質及び無定形の固体組成物であり、粉末の形態であってもよい。
【００９１】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、非還元糖を含有し、非還元糖は、好ましくは二糖であり、その非限定的な例としては、その無水及び水和物の形態を含むトレハロース、又はスクロース、加えてそれらの組合せが挙げられる。一部の実施形態において、トレハロースの水和物の形態であるトレハロース二水和物が好ましい。他の実施形態において、組成物は、三糖を含有し、その非限定的な例は、ラフィノースである。一般的に、非還元糖、好ましくは二糖の濃度は、１０％〜４０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約１０％〜約２５％（ｗ／ｖ）、より好ましくは約１５％〜約２０％（ｗ／ｖ）の範囲である。一部の好ましい実施形態において、非還元糖、好ましくは二糖の濃度は、約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％又は２０％（ｗ／ｖ）である。
【００９２】
一般的に、本発明の組成物は、ボツリヌス毒素を安定化させる能力を有し、医薬用途に適切なあらゆる非イオン界面活性剤を含んでいてもよい。一部の実施形態において、非イオン界面活性剤は、ポリソルベートであり、例えば、非限定的な例として、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、及びポリソルベート８０である。他の実施形態において、非イオン界面活性剤は、ソルビタンエステルであり、その非限定的な例としては、SPAN（登録商標）20、SPAN（登録商標）60、SPAN（登録商標）65、及びSPAN（登録商標）80が挙げられる。非イオン界面活性剤Triton（登録商標）X-100又はNP-40も使用することができる。加えて、異なる非イオン界面活性剤の組合せも使用することができる。特定の好ましい実施形態において、非イオン界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマー及び／又はソルビタンであり、ポリソルベート及びソルビタンが特に好ましい。一部の実施形態において、非イオン界面活性剤は、上限値及び下限値を含む、約０．００５％〜約０．５％、約０．０１％〜約０．２％、約０．０２％〜約０．１％、又は約０．０５〜約０．０８％の範囲で本発明の組成物中に存在する。一部の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、（約）０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．１１％、０．１２％、０．１３％、０．１４％、又は０．１５％の量で非イオン界面活性剤を含有する。
【００９３】
本明細書に記載の注射製剤に関して一般的に、適切なｐＨを維持することが可能なあらゆる生理学的に適合する緩衝剤が使用に適切である。このような緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、及びヒスチジンの塩が挙げられる。適切な緩衝剤濃度の非限定的な例としては、約０．４００％〜約０．６００％、約０．４５０％〜約０．５７５％、又は約０．５００％〜約０．５６５％の範囲の緩衝剤濃度が挙げられる。また本発明の組成物は、緩衝塩の混合物を含んでいてもよく、緩衝塩の混合物の非限定的な例としては、クエン酸塩／酢酸塩、クエン酸塩／ヒスチジン、クエン酸塩／酒石酸塩、マレイン酸塩／ヒスチジン、又はコハク酸塩／ヒスチジンが挙げられる。
【００９４】
本発明の特定の組成物は、ボツリヌス毒素、好ましくは血清型Ａ型のボツリヌス毒素、又はアクセサリータンパク質が会合していない１５０ｋＤａの分子量を有するＡ型ボツリヌス毒素；正に帯電した担体（例えば、ペプチド）；１０％〜４０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する、非還元二糖又は非還元三糖、好ましくは二糖；０．００５％〜０．５％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する、非イオン界面活性剤、好ましくは、ポリソルベート又はソルビタンエステル；及びｐＨを４．５〜７．５に維持するための、０．４００％〜０．６００％；０．４５０％〜０．５７５％、又は０．５００％〜０．５６５％の範囲で存在する、生理学的に適合する緩衝剤、例えばクエン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、又はヒスチジンを含む、アルブミン非含有の液体（水性）組成物である。
【００９５】
特に好ましい実施形態において、注射用の医薬製剤は、さらなる安定化剤として、Ｌ−ヒスチジン及び／又はＬ−ヒスチジン塩酸塩を含む。特に好ましい実施形態において、賦形剤は、トレハロース二水和物、ポリソルベート２０、Ｌ−ヒスチジン及びＬ−ヒスチジン塩酸塩を含む。
【００９６】
注射製剤の使用
本発明の別の態様において、本明細書に記載される医薬製剤は、生物学的効果、好ましくは、持続期間が延長された生物学的効果、及び／又は所望の治療的又は美容的な利益に関して治療された患者のより高いパーセンテージで生じる効果をもたらすために使用される。医薬製剤は、一般的に、治療的又は美容的有効量のボツリヌス毒素が供給されるように、それを必要とする個体に投与される。用語「必要とする」は、薬学的な、又は健康に関連する必要性（例えば、望ましくない顔の筋痙攣を含む状態を治療すること）と、美容的及び主観的な必要性（例えば、顔の組織の外観を変更又は改善すること）の両方を含むことを意味する。
【００９７】
本発明によるボツリヌス毒素製剤は、注射によって（典型的にはシリンジを使用して）皮膚の下に存在する筋肉に、又は皮膚内の腺構造若しくは他の標的構造に、麻痺を生じる、弛緩を生じる、収縮を軽減する、痙縮を防止若しくは軽減する、腺の排出を低減する、又は他の所望の効果を生じる有効量で送達することができる。この方式でのボツリヌス毒素の局所送達は、投薬量を低減する、毒性を低減する、及び他の注射可能な、又は埋め込み可能な材料に関連する所望の効果のためのより正確な投薬量の最適化を可能にすることができる。
【００９８】
本発明の組成物は、治療的又は美容的有効量のボツリヌス毒素を送達するために投与される。用語「有効量」又は「治療的又は美容的有効量」は、本明細書で使用される場合、所望の筋肉の麻痺又は他の生物学的又は審美的な効果を生じさせるのに十分なボツリヌス毒素の量を意味するが、暗黙のうちに、安全な量、すなわち重篤な副作用を回避する程度に十分低い量である。所望の効果としては、例えば、特に顔における微細なしわ線及び／又はしわの外観を減少させること、又は目を広げること、口角を上げること、若しくは上唇から扇状に広がるしわ線を平滑化することなどの他の方法で顔の外観を調整することを目的とした特定の筋肉の弛緩、又は例えば顔又は他所での筋肉の張力の全体的な緩和が挙げられる。
【００９９】
ボツリヌス毒素は、筋肉に、又は他の皮膚に関連する、若しくは標的組織構造に注射によって投与することができる。一般的に、本発明による製剤は、ボツリヌス毒素に関連する効果が求められる１つ又は複数の場所に注射される。投与は、例えば、顔、脚、肩、背中（腰を含む）、腋下、手のひら、足、頸部、顔、鼠径部、手又は足の甲、肘、上腕、膝、太もも、臀部、胴、下腹部、又はボツリヌス毒素の投与が求められる他のあらゆる体の部分に行うことができる。
【０１００】
本発明の注射可能なボツリヌス毒素を含有する組成物の投与は、アセチルコリンのシナプス伝達又は放出の防止が治療的又は美容的な利益を付与すると予想されるあらゆる状態を治療するために行うことができる。例えば、本発明による組成物によって治療され得る状態としては、これらに限定されないが、神経学的な痛み、片頭痛又は他の頭痛の痛み、過活動膀胱、鼻炎、副鼻腔炎、座瘡、ジストニア、ジストニアによる筋収縮（主観的か又は臨床的かにかかわらず）、多汗（主観的か又は臨床的かにかかわらず）、及びコリン作用性の神経系によって制御される１又は２以上の腺の分泌過多が挙げられる。本発明の組成物はまた、免疫応答を低減若しくは強化するため、又は注射によるボツリヌス毒素の投与が示唆又は実行されてきた他の状態の治療のために使用することができる。一部の実施形態において、生物学的効果は、望ましくない顔の筋痙攣、又は他の筋痙縮を低減することである。
【０１０１】
特定の実施形態において、ボツリヌス毒素を含有する組成物は、特定には顔におけるしわ、微細なしわ線、溝の重症度を低減するために、例えば眉間しわ線の重症度を低減するために投与される。本発明の組成物は、特定には、微細なしわ線、例えば対象の顔の微細なしわ線及び眉間しわ線を治療するのに適している。
【０１０２】
眉間は、眉の間及び鼻の上の皮膚である。眉間しわ線又は眉間の顔のしわ線（「眉間しわ線」と呼ばれることが多い）は、眉の間に生じる垂直のしわ線であり、１本の垂直のしわ線として、又は２本又は３本以上のしわ線として出現する場合があり、また目頭に向かって角度をもって出現する場合もある。人が眉をひそめると、下のひたいの筋肉が下の方向に収縮して、眉の間の皮膚にしわが寄る。しわ線は、しわが寄る動作の繰り返しによって、皮膚の弾性が失われることにより形成される。より具体的には、眉間しわ線は、顔における横方向の皺眉筋及び垂直方向の鼻根筋に起因する。皺眉筋は、皮膚を押し下げ、緊張した筋肉の隆起に取り囲まれた垂直のしわ線、すなわち溝（すなわち、眉間しわ線）を作り出す。年齢、太陽への曝露、及び遺伝学が寄与因子である。ボツリヌス毒素は、神経インパルスをブロックして、眉間しわ線の原因となる筋肉を一時的に麻痺させることで、皮膚をより平滑な、より若々しい外観にするのに使用される。
【０１０３】
対象の眉間しわ線の重症度は、医療専門家及び／又は対象のいずれかによって、様々な基準により査定することができる。対象以外の誰かによる査定の場合、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）格付けスコアシステムを使用することができる。具体的には、（０）のＩＧＡ−ＦＷＳ格付けスコアは、顔のしわの重症度がないことを示すのに使用され；（１）のＩＧＡ−ＦＷＳ格付けスコアは、軽度の顔のしわの重症度を示すのに使用され；（２）のＩＧＡ−ＦＷＳ格付けスコアは、中程度の顔のしわの重症度を示すのに使用され；（３）のＩＧＡ−ＦＷＳ格付けスコアは、重度の顔のしわの重症度を示すのに使用される。熟練した医師であれば認識しているように、フォトガイドは、しわの重症度のグレードを示し、事前の訓練中に査定を行う人によって使用されてもよいし、及び／又は査定中の参考として使用されてもよい。
【０１０４】
患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）は、対象の顔のしわの重症度を査定するのに対象自身によって使用することができる。対象は、眉間しわ線の重症度を査定するために最大限眉間にしわをよせた状態に基づいてＰＦＷＳを完成させることができる。対象は、鏡を見てもよいし、又は自身の写真を見てもよい。ＰＦＷＳ格付けスコアシステムは、以下の通りである：（０）のＰＦＷＳ格付けスコアは、しわの重症度がないことを示し、それに関連する説明は、「しわなし」であり；（１）のＰＦＷＳ格付けスコアは、軽度のしわの重症度を示し、それに関連する説明は、「非常に浅いしわ」であり；（２）のＰＦＷＳ格付けスコアは、中程度のしわの重症度を示し、それに関連する説明は、「中程度のしわ」であり；（３）のＰＦＷＳ格付けスコアは、重度のしわの重症度を示し、それに関連する説明は、「深いしわ」である。
【０１０５】
しわ、しわ線、又は溝の可視的な外観はまた、多数の他の又は追加の基準、例えば患者による全般的審美的改善スケール（ＧＡＩＳ）を使用しても査定することができる。このスケールは、対象又は対象以外の人によって、例えば、ベースラインの状態からの改善を決定するために最大限眉間にしわをよせたとき、及び／又は最大限眉間にしわをよせた後の静止時に、眉間しわ線の可視的な外観を査定するのに使用することができる。一部の実施形態において、７ポイントの重症度ＧＡＩＳが使用され、この場合、「３」の格付けスコアは、「非常によく改善した」を示し；「２」の格付けスコアは、「よく改善した」を示し；「１」の格付けスコアは、「改善した」を示し；「０」の格付けスコアは、「変化なし」を示し；「−１」の格付けスコアは、「悪化した」を示し；「−２」の格付けスコアは、「かなり悪化した」を示し；「−３」の格付けスコアは、「非常にかなり悪化した」を示す。対象は、査定のために鏡又は自身の写真を使用することができる。
【０１０６】
一部の実施形態において、本発明の方法は、上述したスケールの１又は２以上に従って中程度及び／又は重度のしわ、好ましくは中程度から重度のしわの重症度の低減の効果をもたらす。重症度の低減は、本明細書に記載される１又は２以上のスケールにおける、１ポイント、２ポイント、又は３ポイントの改善、又はそれより多くのポイントの改善であり得る。
【０１０７】
本明細書に記載される注射製剤の安全性及び効能はまた、顔、頭、又は頸部領域への注射後の１又は２以上の脳神経、例えば標的及び隣接する筋系を刺激する１又は２以上の脳神経を評価することによっても査定することができる。例えば、一部の実施形態において、第II〜VII脳神経が評価され、第II脳神経は、視神経であり、第III脳神経は、動眼神経であり、第IV脳神経は、滑車神経であり、第Ｖ脳神経は、三叉神経であり、第VI脳神経は、外転神経であり、第VII脳神経は、顔面神経である。
【０１０８】
本明細書に記載される注射製剤の安全性及び効能はまた、顔、頭、又は頸部領域への注射後の顔の筋肉の強度を評価することによっても査定することができる。顔の筋肉の強度は、Medical Research Council Scale for Assessment of Muscle Power（ＭＲＣ）を使用して評価することができる。ＭＲＣは、筋力低下の査定のための信頼できる有効であることが認められたスケールであり、末梢神経傷害の調査を助ける。例えば、顔のそれぞれの側の眼輪筋（眼瞼）、横方向の眉の挙筋、及び横方向の輪筋から頬骨筋の強度を評価することができる。ＭＲＣスケールでは、（０）の格付けは、「動きなし」に対応し；（１）の格付けは、「筋肉における感知可能なフリッカー」に対応し；（２）の格付けは、「重力がない場合のみの動き」に対応し；（３）の格付けは、「重力に対して手足を動かすことができる」に対応し；（４）の格付けは、「重力及び審査官によって加えられた何らかの抵抗力に対して動かすことができる」に対応し；（５）の格付けは、「正常な体力」に対応する。
【０１０９】
投薬量及び投与
本明細書に記載される方法及び組成物は、少なくとも１つの生物学的効果、好ましくは所望の治療的又は美容的な利益に関して持続期間が延長された生物学的効果を実現する、より好ましくは、治療を受けている対象のより高いパーセンテージにおいて効果を実現するのに有効な用量又は量で、ボツリヌス毒素成分を送達する。一般的に、治療的又は美容的有効量は、本発明に従う注射による投与のための医薬製剤に含有されるボツリヌス毒素のユニットでの用量として提供される。
【０１１０】
注射製剤を使用する特定の実施形態において、ボツリヌス毒素は、注射治療１回当たり、約１Ｕ〜約３００Ｕ、好ましくは約１０Ｕ〜約２００Ｕ、より好ましくは約２０Ｕ〜約１００Ｕ；又はより具体的には約１０Ｕ〜約３０Ｕ、約３０Ｕ〜約５０Ｕ、又は約５０Ｕ〜約７０Ｕが提供されるように投与される。好ましい実施形態において、本発明のボツリヌス毒素を含有する組成物は、約１０Ｕより多く、約２０Ｕより多く、約３０Ｕより多く、約４０Ｕより多く、約６０Ｕより多く、又は約８０Ｕより多くの用量のボツリヌス毒素が提供されるように、それを必要とする対象に注射によって投与される。好ましい実施形態において、組成物は、注射治療１回当たり、２０Ｕ又は少なくとも２０Ｕ；３０Ｕ又は少なくとも３０Ｕ；４０Ｕ又は少なくとも４０Ｕ；５０Ｕ又は少なくとも５０Ｕ；６０Ｕ又は少なくとも６０Ｕ；７０Ｕ又は少なくとも７０Ｕ；８０Ｕ又は少なくとも８０Ｕ；９０Ｕ又は少なくとも９０Ｕ；又は１００Ｕ又は少なくとも１００Ｕのボツリヌス毒素を提供する量で、注射によって投与される。また、前述の量又は用量の間の量又は用量も企図され、例えば、２５Ｕ又は少なくとも２５Ｕ；３５Ｕ又は少なくとも３５Ｕ；４５Ｕ又は少なくとも４５Ｕなども企図される。特に好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素は、約１０Ｕ、約２０Ｕ、約３０Ｕ、約４０Ｕ、約６０Ｕ、及び約８０Ｕからなる群から選択される投薬量で存在し、より好ましくは血清型Ａ型のボツリヌス毒素であり、最も好ましくはアクセサリータンパク質を含まない血清型Ａ型のボツリヌス毒素の１５０ｋＤａの分子である。一般的に、アクセサリータンパク質を含まないＡ型ボツリヌス毒素の１５０ｋＤａの分子の約１００ｐｇ／ｋｇの量は、本発明の液体注射製剤における約１６Ｕ／ｋｇに対応する。特定の実施形態において、組成物は、単回治療用量として、しわ及び／又は顔のしわ線における減少、例えば眉間しわ線の重症度の低減が生じるように、２０、３０Ｕ、３５Ｕ、４０Ｕ、４５Ｕ、５０Ｕ、又は６０Ｕのボツリヌス毒素を提供する量で、注射によって投与される。
【０１１１】
「注射治療」は、例えば１回の患者来訪中に全てが行われる患者への１又は２以上の注射、例えば、互いに数秒又は数分以内に投与される；及び／又は相対的に近接した（例えば、約１ｃｍ、約２ｃｍ、約３ｃｍ、約４ｃｍ、又は約５ｃｍ離れた）１又は２以上の注射部位を介して患者の体の同じ包括的な領域（例えば、眉間複合体）に投与される一連の注射を含んでいてもよい単回治療を指す。
【０１１２】
一般的に、ボツリヌス毒素の活性を測定するための方法及び手順、すなわち、ボツリヌス毒素活性のユニット（Ｕ）は当業者公知であり、当業者により実施される。簡単に言えば、高い精度でボツリヌス毒素のユニット数を推測するために、マウスにおける半数致死性アッセイ（ＬＤ５０アッセイ）が慣習的に使用される。全ての商業的に入手可能なボツリヌス毒素の用量は、生物学的活性のユニットで表される。一例として、ボツリヌス毒素の１ユニットは、雌スイス−ウェブスターマウスにおける半数腹膜内致死量（ＬＤ５０）の計算値に対応する。同様に当業界における致死性アッセイを記載するHoffman, R.O. et al., 1986, Int. Ophthalmol. Clin., 26:241-50、加えて、DePass, L.R., 1989, Toxicol. Letters, 49:159-170；及びPearce, L.B. et al., 1994, Toxicol. Appl. Pharmacol., 128:69-77を参照されたい。
【０１１３】
より特定には、本発明の組成物のボツリヌス毒素成分のボツリヌス毒素のユニットを決定するための適切な方法は、以下の通りである：体重１７〜２３グラムの４８匹の雌ＣＤ−１マウスを、用量グループ１つ当たり８匹の動物で、試験物品の６種の用量（１．５４、１．３１、１．１１、０．９５、０．８０、及び０．６８Ｕ／０．５ｍＬ）にランダムに割り当てる。試験物品は、アッセイ又は試験されるボツリヌス毒素調製物又はサンプルを指す。動物をケージ１つ当たり８匹で収容し、試験物品投与の２４時間内に体重を量る。投与の日に、試験物品を等張生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で適切な濃度に希釈する。各動物に、０．５ｍＬの希釈した試験物品を腹膜内注射で投与する。注射後、マウスをケージに戻し、致死率を３日間毎日記録する。致死性を注射後７２時間スコア付けし、結果をプロビット又はロジスティック分析によって分析して、同じ用量レジメンを使用して査定される参照標準に対するＬＤ５０値を導き出す。一例として、参照標準は、試験物品の相対的な効力を導き出すための比較のために使用される本発明の同じ組成物の特定の要件を満たした較正済みのロットである。次いで決定されたＬＤ５０値を、純粋な（希釈していない）試験物品の相対的な効力値を割り振るために実行された蓄積的な希釈に関して補正する。
【０１１４】
ＬＤ５０試験の代替例としては、動物試験を回避する神経細胞株を使用するアッセイ又はエンドペプチダーゼアッセイが挙げられる（例えば、Sesardic et al., “Alternatives to the LD50 assay for botulinum toxin potency testing: Strategies and progress towards refinement, reduction and replacement” Proc. 6th World Congress on Alternatives & Animal Use in the Life Sciences, August 21-25, 2007, 14 Special Issue, pp 581-585を参照）。このような方法は、本発明の組成物のボツリヌス毒素成分のボツリヌス毒素のユニットを決定するために、ＬＤ５０アッセイに加えて、又はその代わりに使用することができる。
【０１１５】
本発明の医薬製剤は、単回注射又は単回注射治療などの単回用量治療として適用するための、治療的又は美容的有効量のボツリヌス毒素を含有していてもよい。あるいは、医薬製剤は、例えば、投与の場で希釈するために、より濃縮されていてもよいし、又は複数回の適用で使用するために、例えば、治療経過にわたり、又は所定時間にわたり特定された回数の逐次的な適用で使用するために、治療的又は美容的有効量のボツリヌス毒素を含有していてもよい。ボツリヌス毒素の局所送達は、本明細書に記載されるように、従来のボツリヌス毒素製剤と比べて、投薬量の低減をもたらし、毒性を低減し、所望の効果のためのより正確な投薬量の最適化を可能にする。好ましい実施形態において、用量（例えば、ユニット及び体積で）は、標的受容体／神経伝達物質を含有する筋肉又は筋膜／骨膜の侵害受容体への毒素の送達が最適化されるように選択される。最適化は、例えば、用量希釈分布の原理に基づいていてもよい（例えば、米国特許第８，６３２，７６８号明細書及び米国特許第８，５０６，９７０号明細書を参照）。
【０１１６】
一般的に、ボツリヌス毒素を含有する医薬製剤は、それを必要とする患者における治療しようとする状態に関連する筋肉の１又は２以上への、又はその近辺への注射によって、それを必要とする患者に投与される。構造の「近辺への」又は構造「への」投与は、本明細書で開示されたボツリヌス毒素組成物の低減された拡散を考慮して、構造にボツリヌス毒素成分が容易に拡散できるように十分に構造に近接して投与することを意味する。例えば、眉間複合体の近辺への投与は、標的化される構造から、約０．０５ｍｍ、約０．１ｍｍ、約０．５ｍｍ、約１ｍｍ、約５ｍｍ、約１０ｍｍ、約１５ｍｍ、又は約２０ｍｍ以内の投与を意味する。特定の実施形態において、超音波又は他の可視化技術が、注射の位置又は注射の割合をガイドするのに使用することができる。
【０１１７】
特定の実施形態において、状態は、重度から中程度の眉間しわ線であり、医薬製剤は、眉間複合体の１又は２以上の筋肉に注射される。製剤は、上内側の眼窩縁上に指の圧力を適用しながら、皮膚を通って下に存在する筋肉に針を進めることによって注射することができる。より特定の実施形態において、治療用量は、所与の注射治療中に投与された、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への注射間で分割される。例えば、総治療用量は、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、又は１０分の１などに分割でき、特定の用量が異なる標的構造に注射される。
【０１１８】
例えば、一実施形態において、総治療用量の分割量を、治療を受けている対象の眉の間のひたい上の複数の注射部位のそれぞれに注射する。例えば、約１０Ｕ〜約２０Ｕ、約１０Ｕ〜約１５Ｕ、又は約１３Ｕの用量のボツリヌス毒素が、左の皺眉筋、右の皺眉筋、及び鼻根筋のそれぞれに注射される。別の例として、約１０Ｕ〜約３０Ｕ、約１５Ｕ〜約２０Ｕ、又は約１６Ｕの用量のボツリヌス毒素が、左の皺眉筋及び右の皺眉筋のそれぞれに注射され、約５Ｕ〜約１５Ｕ、約７Ｕ〜約１０Ｕ、又は約８Ｕの用量のボツリヌス毒素が、鼻根筋に注射される。特に好ましい実施形態において、合計５回の注射として、２回の注射が各皺眉筋に適用され、１回の注射が鼻根筋に適用され、例えば、約５Ｕ〜約１５Ｕ、約７Ｕ〜約１０Ｕ、又は約８Ｕの用量のボツリヌス毒素が、左の皺眉筋の内側面、左の皺眉筋の外側面、右の皺眉筋の内側面、右の皺眉筋の外側面、及び鼻根筋のそれぞれに注射される。
【０１１９】
一部の実施形態において、治療しようとする患者は、６５歳、少なくとも６５歳、又は６５歳より高い年齢である。例えば、患者は、６５歳、６６歳、６８歳、７０歳、７２歳、７３歳、７５歳、７７歳、７８歳、８０歳、又はそれより高い年齢であってもよい。
【０１２０】
最も好ましくは、製剤は、医師又は他の健康管理の専門家の指示によって、又はその指示に従って投与される。それらは、単回治療で、又は所定期間にわたる一連の治療で投与されてもよい。ボツリヌス毒素は、その性質のために、好ましくは、重篤な有害な結果又は望ましくない結果を生じることなく所望の結果を生じると予想される量、適用速度、及び頻度で投与される。
【０１２１】
延長された持続期間
別の態様において、本発明は、効果の延長された持続期間を実現するための、本明細書に記載される医薬製剤の方法及び使用を提供する。好ましい実施形態において、本明細書に記載される製剤は、それを必要とする対象にボツリヌス毒素を投与して、従来のボツリヌス毒素製剤を使用する治療と比較して持続期間が延長された治療効果を生じさせるのに使用される。一部の実施形態において、本方法は、好ましくは、眉間しわ線又は他のしわ線又はしわに関連する１又は２以上の筋肉又は他の構造に、本明細書に記載されるように、治療的又は美容的有効量の滅菌注射製剤の注射によって投与して、注射治療後に持続期間が延長された効果を実現するステップを含む。好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素組成物の投与は、増加した効果の持続期間、例えば従来のボツリヌス毒素製剤での治療より長く続く治療的又は美容的な利益に関連する少なくとも生物学的効果における改善をもたらし、それによって治療間の間隔を長くすることができる。
【０１２２】
特に好ましい実施形態は、約３カ月〜約１１カ月、約５カ月〜約１０カ月、約６カ月〜約１０カ月、又は約１６週間〜約２４週間、又は約２８週間〜約４０週間にわたり、治療効果及び／又は美容効果、特定には、眉間しわ線の重症度の低減をもたらす。好ましい実施形態において、効果の持続期間は、第２又は後続の治療用量が投与される前、少なくとも約１６週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約６カ月、少なくとも約２８週間、少なくとも約７カ月、少なくとも約３０週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約８カ月、少なくとも約３４週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約９カ月、少なくとも約４０週間、少なくとも約１０カ月、又は少なくとも約４２週間である。特定の実施形態において、組成物の第２又は後続の治療用量を投与する前の間隔は、最初の治療用量の後又は後続の治療用量の後、２６週間以上、２８週間以上、３０週間以上、３２週間以上、３４週間以上、３６週間以上、３８週間以上、４０週間以上、又は４２週間以上である。
【０１２３】
しわ線、しわ、又は溝を低減することに関する効果の持続期間は、本明細書に記載される、若しくは当業界において公知のあらゆる尺度、又はそれらの組合せによって査定することができる。例えば、本明細書に記載の実施例で、特定には実施例７で論じられるいずれか１又は２以上の尺度、例えば主要及び／又は副次的エンドポイントに関する尺度が、効果の持続期間を測定するのに使用することができる。例えば、眉間しわ線の低減は、しわ線が最初の治療の前のベースラインに戻る時間までは、持続するとみなすことができ；又は本明細書に記載されるようにしわの重症度を査定するための１又は２以上の尺度に基づいて、もう１「ポイント」が失われるまでは、持続するとみなすことができ；又はここでも本明細書に記載されるようにしわの重症度を査定するための１又は２以上の尺度に基づいて、０又は１のスコア（しわがないか又は軽度のしわ）が維持される限りは、持続するとみなすことができる。
【０１２４】
別の態様において、本発明は、治療的又は美容的な利益に関連する生物学的効果を実現するための治療レジメンにおける本明細書に記載される医薬製剤の方法及び使用であって、１又は２以上の連続した治療間の間隔は、例えば治療目標を維持するために複数回の治療が使用される同じ従来のボツリヌス毒素製剤を使用するための治療レジメンにおける間隔より長い、方法及び使用を提供する。例えば、本発明は、一部の実施形態において、対象における眉間しわ線の重症度を低減する方法であって、従来のボツリヌス毒素製剤（すなわち、本明細書に記載されるような担体分子を含有しない製剤）を使用するレジメンと比較して、長期化された効果の持続期間を含む複数の治療を有する、したがって、連続した治療の間の長い間隔を有する治療過程を含む、方法を提供する。例えば、本明細書に記載される担体を含まないボツリヌス毒素を含有する製品は、典型的には、６カ月未満、例えばわずか約３〜４カ月の効果を提供する。
【０１２５】
特定の実施形態において、ボツリヌス毒素を含有する組成物の第２又は後続の治療用量を投与する前の間隔は、最初の治療用量の後又は後続の治療用量の後、少なくとも約２６週間以上、少なくとも約２８週間以上、少なくとも約３０週間以上、少なくとも約３２週間以上、少なくとも約３４週間以上、少なくとも約３６週間以上、少なくとも約３８週間以上、少なくとも約４０週間以上、若しくは少なくとも約４２週間以上であるか、又は約４２週間に等しい。用量間の持続期間の中央値は、２３週間、少なくとも２３週間、又は２３週間より長くてもよいし；２４週間、少なくとも２４週間、又は２４週間より長くてもよいし；２５週間、少なくとも２５週間、又は２５週間より長くてもよいし；２６週間、少なくとも２６週間、又は２６週間より長くてもよいし；２７週間、少なくとも２７週間、又は２７週間より長くてもよいし；２８週間、少なくとも２８週間、又は２８週間より長くてもよいし；３０週間、少なくとも３０週間、又は３０週間より長くてもよいし、例えば、約１年までであってもよい。
【０１２６】
特定には、このセクションの上の段落に記載の結果の１又は２以上は、しわ、顔のしわ線、又は溝に関連する少なくとも１つの筋肉又は顔の構造（例えば眉間複合体）への所定用量の滅菌注射製剤の注射によって投与して、治療後に、好ましくは第１の治療の後にその重症度の低減を実現することを含む実施形態で実現される。一部のこのような実施形態において、組成物は、注射用の薬学的に許容される希釈剤；ボツリヌス毒素、例えばＡ型ボツリヌス毒素、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子；及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）、又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体を含み、好ましくは、担体は、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。より好ましくは、ボツリヌス毒素は、注射治療１回当たり、約１０Ｕ〜約１００Ｕ、又は約２０、４０、若しくは６０Ｕのボツリヌス毒素、最も好ましくは４０Ｕを提供する量での単回治療用量で、個体への注射によって投与される。特定の例において、医薬製剤は、非還元二糖、例えばスクロース又はトレハロース、好ましくはトレハロース二水和物；非イオン界面活性剤、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、又はソルビタンエステル；及び適切なｐＨを維持すること、例えばｐＨ４．５〜ｐＨ６．５の範囲又はｐＨ４．５〜ｐＨ７．５の範囲のｐＨを維持することが可能な、例えば、本明細書に記載されるｗ／ｖの量での、生理学的に適合する緩衝剤、例えばクエン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、及びヒスチジンをさらに含み；及び／又は担体：毒素の質量比率は、約２０，０００：１〜約５５，０００：１、より好ましくは約５１，０００：１である。さらにより一層好ましい実施形態において、製剤は、卵白非含有及び／又は動物性タンパク質非含有であり、医薬組成物は、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素５０Ｕ当たり、０．１ｍｇのポリソルベート２０、３６ｍｇのトレハロース二水和物、並びに８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、及び１５μｇ、最も好ましくは１１．７μｇの、ＲＴＰ００４を含み、治療用量は、４０Ｕである。
【０１２７】
一部のこのような実施形態において、投与は、単回治療で、眉間複合体への約３〜７回の注射、好ましくは５回の注射を含み、例えばその場合、単回治療（例えば、１回の来訪中に、互いに数秒から数分以内の一連の注射で全てが行われる）で、より好ましくは、約０．０１〜約１ｍｌ／注射、約０．０２〜約０．８ｍＬ／注射、約０．０４〜約０．６ｍＬ／注射、約０．０６〜約０．４ｍＬ／注射、約０．０８〜約０．２ｍＬ／注射、又は約０．１ｍＬ／注射を使用して、約５Ｕ〜約１５Ｕ、約７Ｕ〜約１０Ｕ、又は約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面、右の皺眉筋の外側面、左の皺眉筋の内側面、左の皺眉筋の外側面、及び鼻根筋のそれぞれに注射される。実施例７も参照されたい。
【０１２８】
好ましい実施形態、例えば上記で列挙した実施形態において、治療効果又は美容効果は、第２又は後続の治療用量が投与される前、少なくとも約６カ月〜約１０カ月の持続期間、又は約２６週間〜４０週間の持続期間を有していてもよい。より好ましくは、延長された治療効果又は美容効果は、例えば上の段落に記載された医薬製剤によって、組成物の単回注射治療による治療後に実現される。さらにより好ましくは、本明細書に記載される治療レジメンは、顔のしわ線の外観における持続的な改善、例えば眉間しわ線の重症度における持続的な低減を提供する。
【０１２９】
特定の実施形態において、４０Ｕの投薬量での、記載された正に帯電した担体及びアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型ボツリヌス毒素を含有する本発明の組成物の単回用量は、例えば、少なくとも２４週間、２５週間、２６週間、２７週間、若しくは２８週間、又は３０、３２、３４又は３６週間の、例えば、約１年までの、眉間しわ線を治療することにおいて効果の長い持続期間を提供する。
【０１３０】
本発明による治療経過において、注射製剤は、最初の治療用量後、本明細書に記載される治療的及び美容的有効量の本発明の組成物及び方法によってもたらされた効果の延長された持続期間に基づいて、より低い頻度の間隔で投与されてもよい。例えば、本発明の組成物は、年約２回（約６カ月毎）、又は年２回より少ない回数、例えば、７カ月毎、８カ月毎、９カ月毎、又は１０カ月毎、又は１１カ月毎、又は年１回、本発明の方法を実施することによって、必要とする個体に投与（又は投薬）されてもよい。特定の実施形態において、個体は、所定用量の本発明の組成物を年２回投与される。用量間の持続期間の中央値は、治療的若しくは美容的治療及び／又は治療される個体が決定するような治療の要求に応じて、２３週間、２４週間、２５週間、２６週間、２７週間、２８週間、２９週間、又は３０週間、又は３１週間、３２週間、３３週間、３４週間、３５週間、又は３６週間であり得る。
【０１３１】
より高い応答者率
効果の延長された持続期間と併せて、又は代替の実施形態において、驚くべきことに、商業的に入手可能なボツリヌス毒素調製物、例えばBOTOX（登録商標）と比較して、治療を受けている個体のより高い比率で生物学的効果が生じることも見出された。すなわち、一部の好ましい実施形態において、治療効果又は美容効果は、本明細書に記載されるように、本明細書で開示されたボツリヌス毒素を含有する製剤の投与後、従来のボツリヌス毒素製剤、例えば正に帯電した担体が欠失した製剤と比較して、ボツリヌス毒素医薬製剤を受けている個体のより高い比率で起こり、及び／又は延長された持続期間にわたり続く。
【０１３２】
例えば、本明細書に記載される医薬組成物の投与は、少なくとも約４週間、それぞれ製剤が投与された個体の４０〜９０％において持続する、治療的又は美容的な利益を有する生物学的効果、例えばしわ、しわ線（例えば、眉間しわ線）、又は溝の重症度の低減をもたらすことができる。好ましい実施形態において、それぞれ医薬組成物が投与された個体の、約５５〜約６０％、約６５％〜約７０％、又は約６５％〜約７５％において、約４週間、応答が維持されるか、又は効果が持続する。一部の実施形態において、少なくとも約４週間、それぞれ医薬製剤が投与された個体の、少なくとも約５５％より多く、約５６％より多く、約５８％より多く、約６０％より多く、約６２％より多く、約６５％より多く、約６６％より多く、約６８％より多く、約７０％より多く、約７２％より多く、約７３％より多く、又は約７５％より多くにおいて、本明細書に記載されるように（例えば、実施例７でのように）、それぞれ医薬製剤が投与された個体の、約７５％まで、約８０％まで、又は約９０％まで、応答が維持されるか、又は効果が持続する。
【０１３３】
より好ましい実施形態において、しわ、しわ線（例えば、眉間しわ線）、又は溝の重症度の低減などの効果は、少なくとも約１６週間、それぞれ製剤が投与された個体の約３０％〜約８０％において持続し、例えばそれぞれ医薬組成物が投与された個体の、約３５％〜約４０％、約４０％〜約５０％、又は約５０％〜約７０％において約１６週間持続する。一部の実施形態において、少なくとも約１６週間、それぞれ医薬製剤が投与された個体の、少なくとも約３５％より多く、約３６％より多く、約３８％より多く、約４０％より多く、約４３％より多く、約４５％より多く、約４７％より多く、約５０％より多く、約５３％より多く、約５５％より多く、約５７％より多く、約６０％より多く、約６３％より多く、約６５％より多く、約６８％より多く、より好ましくは７０％より多く、７３％より多く、又は７５％より多くにおいて、本明細書に記載されるように（例えば、実施例７でのように）、それぞれ医薬製剤が投与された個体の、約７５％まで、約８０％まで、又は約９０％まで、応答が維持されるか、又は効果が持続する。
【０１３４】
さらにより一層好ましい実施形態において、しわ、しわ線（例えば、眉間しわ線）、又は溝の重症度の低減などの効果は、少なくとも約２４週間、それぞれ製剤が投与された個体の約１０％〜約３０％において持続し、例えば約２４週間、それぞれ医薬組成物が投与された個体の、約１５％〜約２０％、又は約２０％〜約３０％において持続する。一部の実施形態において、少なくとも約２４週間、それぞれ医薬製剤が投与された個体の、少なくとも約１５％より多く、約１６％より多く、約１８％より多く、約２０％より多く、約２２％より多く、約２３％より多く、約２５％より多く、約２７％より多く、又は約３０％より多くにおいて、本明細書に記載されるように（例えば、実施例７でのように）、それぞれ医薬製剤が投与された個体の、約３０％まで、約４０％まで、又は約５０％まで、応答が維持されるか、又は効果が持続する。
【０１３５】
したがって、使用するための方法及び組成物は、上述したように、従来のボツリヌス毒素製剤が投与された個体と比較して、それぞれ医薬組成物が投与された個体に関する応答の速度を増加させた、それを必要とする個体のしわ、しわ線（例えば、眉間しわ線）、又は溝の重症度を低減する方法をもたらす。特定には、このセクションの上の段落に記載の結果の１又は２以上は、しわ、顔のしわ線、又は溝に関連する少なくとも１つの筋肉又は顔の構造（例えば眉間複合体）への所定用量の滅菌注射製剤の注射によって投与して、治療後に、好ましくは第１の治療後にその重症度の低減を実現することを含む実施形態で実現される。一部のこのような実施形態において、組成物は、注射用の薬学的に許容される希釈剤；ボツリヌス毒素、例えばＡ型ボツリヌス毒素、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子；及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）、又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体を含み、好ましくは、担体は、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。より好ましくは、ボツリヌス毒素は、注射治療１回当たり、約１０Ｕ〜約１００Ｕ、又は約２０、４０、若しくは６０Ｕのボツリヌス毒素、最も好ましくは４０Ｕを提供する量での単回治療用量で、前記個体への注射によって投与される。特定の例において、医薬製剤は、非還元二糖、例えばスクロース又はトレハロース、好ましくはトレハロース二水和物；非イオン界面活性剤、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、又はソルビタンエステル；及び適切なｐＨを維持すること、例えばｐＨ４．５〜ｐＨ６．５の範囲又はｐＨ４．５〜ｐＨ７．５の範囲のｐＨを維持することが可能な、例えば、本明細書に記載されるｗ／ｖの量での、生理学的に適合する緩衝剤、例えばクエン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、及びヒスチジンをさらに含み；及び／又は担体：毒素の質量比率は、約２０，０００：１〜約５５，０００：１、より好ましくは約５１，０００：１である。さらにより一層好ましい実施形態において、製剤は、卵白非含有及び／又は動物性タンパク質非含有であり、医薬組成物は、アクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素５０Ｕ当たり、０．１ｍｇのポリソルベート２０、３６ｍｇのトレハロース二水和物、並びに８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、最も好ましくは１１．７μｇの、ＲＴＰ００４を含み、治療用量は、４０Ｕである。
【０１３６】
一部のこのような実施形態において、投与は、単回治療で、眉間複合体への約３〜７回の注射、好ましくは５回の注射を含み、例えばその場合、単回治療（例えば、１回の来訪中に、互いに数秒から数分以内の一連の注射で全てが行われる）で、より好ましくは、約０．０１〜約１ｍｌ／注射、約０．０２〜約０．８ｍＬ／注射、約０．０４〜約０．６ｍＬ／注射、約０．０６〜約０．４ｍＬ／注射、約０．０８〜約０．２ｍＬ／注射、又は約０．１ｍＬ／注射を使用して、約５Ｕ〜約１５Ｕ、約７Ｕ〜約１０Ｕ、又は約８Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋の内側面、右の皺眉筋の外側面、左の皺眉筋の内側面、左の皺眉筋の外側面、及び鼻根筋のそれぞれに注射される。実施例７も参照されたい。
【０１３７】
キット
本発明はまた、所望の治療的又は美容的な利益に関する治療を受けている対象の高いパーセンテージにおいて、生物学的効果、好ましくは持続期間が延長された効果をもたらすために、本明細書に記載されるボツリヌス毒素を含有する組成物を皮膚を通過して投与するための様々な送達デバイスの使用も企図する。このようなデバイスとしては、これらに限定されないが、針及びシリンジを挙げることができ、又は組成物を分配すること、及び分配をモニタリングすること、並びに任意に１又は２以上の観点で対象の状態をモニタリングすること（例えば、分配される物質に対する対象の反応をモニタリングすること）が可能な、より洗練されたデバイスを含んでいてもよい。
【０１３８】
注目すべきことに、デバイス構築のための材料の選択は重要である。送達デバイス構築に好ましい材料は、ボツリヌス毒素の分解又はそのデバイス表面への不要な吸着のいずれかを介して、ボツリヌス毒素／担体組成物の活性の損失を引き起こさない材料である。このような望ましくない挙動は、例えば水溶液中のボツリヌス毒素／担体がポリプロピレン表面と接触する場合に観察されるが、ボツリヌス毒素／担体溶液がポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）表面と接触する場合には観察されない。
【０１３９】
一部の実施形態において、組成物は、送達デバイス中で事前に製剤化されていてもよいし、及び／又は送達デバイス中に事前に組み込まれていてもよい。本発明はまた、１又は２以上の成分が残りの成分とは別々に貯蔵されるキットの形態で組成物が提供される実施形態も企図する。例えば、特定の実施形態において、本発明は、適用時に、又はその前に合わせるために、別の容器（例えば、第１及び第２の容器）中にボツリヌス毒素成分と担体とを別々に貯蔵するキットを提供する。ボツリヌス毒素に対する担体の量は、問題の組成物において使用するためにどの担体が選ばれるかに依存すると予想される。
【０１４０】
例えば、ボツリヌス毒素に対する担体の量は、ボツリヌス毒素、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素１Ｕ当たり、約０．０１μｇ／Ｕ、約０．０２μｇ／Ｕ、約０．０４μｇ／Ｕ、約０．０６μｇ／Ｕ、約０．０８μｇ／Ｕ、約０．１μｇ／Ｕ、約０．１２μｇ／Ｕ、約０．１４μｇ／Ｕ、約０．１５μｇ／Ｕ、約０．１６μｇ／Ｕ、約０．１８μｇ／Ｕ、約０．２０μｇ／Ｕ、約０．２２μｇ／Ｕ、約０．２３μｇ／Ｕ、約０．２３４μｇ／Ｕ、約０．２４μｇ／Ｕ、約０．２５μｇ／Ｕ、約０．２６μｇ／Ｕ、約０．２８μｇ／Ｕ、約０．３μｇ／Ｕ、約０．３２μｇ／Ｕ、約０．３４μｇ／Ｕ、約０．３６μｇ／Ｕ、約０．３８μｇ／Ｕ、及び約０．４μｇ／Ｕからなる群から選択される比率で提供されてもよく、より好ましくは、担体は、ＲＴＰ００４である。特定の実施形態において、ボツリヌス毒素は、約４０Ｕの量で提供され（アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素タンパク質分子を参照して）、ＲＴＰ００４担体は、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１１μｇ、又は約１２μｇの量で提供される。
【０１４１】
他の実施形態において、担体は、ＲＴＰ００４であり、アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのボツリヌス毒素分子４０Ｕ当たり約１．７５μｇより多くの量で、すなわち、約０．０４μｇ／Ｕより多くの量で提供される。例えば、ボツリヌス毒素に対する担体の量は、ボツリヌス毒素１Ｕ当たり、約０．０４５μｇ／Ｕ、約０．０５０μｇ／Ｕ、約０．０５５μｇ／Ｕ、約０．０６０μｇ／Ｕ、約０．０６５μｇ／Ｕ、約０．０７０μｇ／Ｕ、約０．０７５μｇ／Ｕ、約０．０８０μｇ／Ｕ、約０．０８５μｇ／Ｕ、約０．０９０μｇ／Ｕ、約０．０９５μｇ／Ｕ、及び約０．１μｇ／Ｕからなる群から選択される比率で提供されてもよい。特定の実施形態において、ボツリヌス毒素は、約２０Ｕ、４０Ｕ、又は６０Ｕの量で提供され（アクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの毒素タンパク質分子を参照して）、ＲＴＰ００４担体は、それぞれ約１．５μｇ、約３．０μｇ、又は約４．５μｇの量で提供される。
【０１４２】
本発明はまた、本明細書に記載されるように、治療有効量のボツリヌス毒素が担体と共に投与される、ボツリヌス毒素成分を対象又はそれを必要とする患者に投与するためのアプローチも企図する。「共に」は、２つの成分（ボツリヌス毒素及び担体）が組合せの手順で投与されることを意味し、このような手順は、対象に投与する前にそれらを組み合わせること、又はそれらを別々に投与することのいずれかを含んでいてもよいが、それらが一緒に作用して治療有効量の毒素の必要な送達を提供するような方式でなされる。ボツリヌス毒素は、シリンジ又は他の分配デバイス中で乾燥形態で貯蔵されてもよく、担体は、２つのものが一緒に作用して、結果として上記で詳述したように従来のボツリヌス毒素製剤を超える所望の組織浸透の強化及び／又は他の改善された特徴が生じるように、毒素の適用の前に注射してもよいし、又は外用で適用してもよい。その意味において、２つの物質（担体及びボツリヌス毒素）は、組合せで作用するか、又は相互作用して、インサイチュで組成物又は組合せを形成する。したがって、本発明はまた、ボツリヌス毒素と、担体を含有し、標的組織への外用適用又は注射に適切な液体、ゲルなどとを分配するためのデバイスを有するキットも含む。また健康管理の専門家の指示に従うか又は患者又は対象によるかのいずれかで本発明の組成物を投与するためのキットは、その目的に適切なカスタムアプリケーターも含み得る。
【０１４３】
長い持続期間、高い応答者率、及び継続的な安全性での反復治療
さらに別の態様において、本発明は、上述したように結果及び利点を一貫して提供する、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与することにおける使用のための方法及び組成物を対象とする。特定には、正に帯電した担体と非共有結合的に会合したボツリヌス毒素成分は、特に顔におけるしわ、しわ線、又は溝、例えば、眉間しわ線の重症度を低減するために、個体に１回より多く投与することができる。一部の好ましい実施形態において、後続の治療は、第１又は初期の治療後の効果の持続期間と比較して、治療効果又は美容効果のより長い持続期間、例えばしわ、しわ線、又は溝の低減のより長い持続期間を実現する。一部の好ましい実施形態において、後続の治療は、第１又は初期の治療後の応答率と比較して、治療を受けている個体のより高いパーセントにおいて応答を実現し、例えば、対象のより高いパーセントが、眉間しわ線の低減を示し、及び／又は長期にわたり低減を維持する。一部の好ましい実施形態において、後続の治療は、第１又は初期の治療に関連する副作用と比較して、より少ない副作用で応答を実現し、例えば、眉間しわ線への繰り返しの後、より少ない有害事象で応答を実現する。より好ましい実施形態において、後続の治療は、第１又は初期の治療より２又は３以上の改善を実現し、例えば、より長い持続期間とより少ない有害事象の両方、より長い持続期間とより高い応答の可能性の両方、より高い応答の可能性とより少ない有害事象を実現する。最も好ましい実施形態において、後続の治療は、反復治療を受けている個体において、前の治療後のその個体の応答と比較して、より長い持続期間、より少ない有害事象、及びより高い応答の可能性を実現する。
【０１４４】
特定の実施形態において、反復治療で１又は２以上の改善を実現することにおける使用のための組成物は、ボツリヌス毒素成分を、注射治療１回当たり、約１Ｕ〜約３００Ｕ、好ましくは約１０Ｕ〜約２００Ｕ、より好ましくは約２０Ｕ〜約１００Ｕ；又はより具体的には、約１０Ｕ〜約３０Ｕ、約３０Ｕ〜約５０Ｕ、又は約５０Ｕ〜約７０Ｕの用量で含む。好ましい実施形態において、本発明のボツリヌス毒素を含有する組成物は、約１０Ｕより多く、約２０Ｕより多く、約３０Ｕより多く、約４０Ｕより多く、約６０Ｕより多く、又は約８０Ｕより多くのボツリヌス毒素の用量が提供されるように、それを必要とする対象に注射によって投与される。好ましい実施形態において、組成物は、注射治療１回当たり、２０Ｕ又は少なくとも２０Ｕ；３０Ｕ又は少なくとも３０Ｕ；４０Ｕ又は少なくとも４０Ｕ；５０Ｕ又は少なくとも５０Ｕ；６０Ｕ又は少なくとも６０Ｕ；７０Ｕ又は少なくとも７０Ｕ；８０Ｕ又は少なくとも８０Ｕ；９０Ｕ又は少なくとも９０Ｕ；又は１００Ｕ又は少なくとも１００Ｕのボツリヌス毒素を提供する量で、注射によって投与される。また、前述の量又は用量の間の量又は用量も企図され、例えば、２５Ｕ又は少なくとも２５Ｕ；３５Ｕ又は少なくとも３５Ｕ；４５Ｕ又は少なくとも４５Ｕなども企図される。特に好ましい実施形態において、ボツリヌス毒素は、約１０Ｕ、約２０Ｕ、約３０Ｕ、約４０Ｕ、約６０Ｕ、及び約８０Ｕからなる群から選択される投薬量で存在し、より好ましくは、血清型Ａ型のボツリヌス毒素であり、最も好ましくは血清型Ａ型のボツリヌス毒素の１５０ｋＤａの分子である。一般的に、アクセサリータンパク質を含まないＡ型ボツリヌス毒素の１５０ｋＤａの分子の約１００ｐｇ／ｋｇの量は、本発明の液体注射製剤における約１６Ｕ／ｋｇに対応する。
【０１４５】
反復治療は、同じ用量又は異なる用量を使用してもよいし、例えば異なる治療での漸増用量又は漸減用量を使用してもよい。特定の実施形態において、それぞれほぼ同じ用量、例えば上の段落に記載の用量、好ましくは約２０Ｕ、約４０Ｕ、又は約６０Ｕの用量のアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａのＭＷを有するＡ型ボツリヌス毒素を提供する反復治療で、組成物を注射により投与して、第１又は前の治療後の持続期間を超える延長された持続期間にわたり、しわ、しわ線、又は溝、例えば眉間しわ線の重症度の低減の減少をもたらす。
【０１４６】
特定には、このセクションの上の段落に記載の結果の１又は２以上は、しわ、顔のしわ線、又は溝に関連する少なくとも１つの筋肉又は顔の構造（例えば眉間複合体）への所定用量の滅菌注射製剤の注射によって連続して投与することを含む実施形態で実現される。一部のこのような実施形態において、組成物は、注射用の薬学的に許容される希釈剤；ボツリヌス毒素、例えばＡ型ボツリヌス毒素、好ましくはアクセサリータンパク質を含まない１５０ｋＤａの分子；及び（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号１）、（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号２）、又は（ｇｌｙ）ｐ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号３）（式中、下付き文字ｐ及びｑは、それぞれ独立して、０〜２０の整数である）のアミノ酸配列を有する１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジン主鎖を含む、正に帯電した担体を含み、好ましくは、担体は、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。より好ましくは、ボツリヌス毒素は、注射治療１回当たり、約１０Ｕ〜約１００Ｕ、又は約２０、４０、若しくは６０Ｕのボツリヌス毒素、最も好ましくは４０Ｕを提供する量での治療用量で、前記個体への注射によって投与される。特定の例において、医薬製剤は、非還元二糖、例えばスクロース又はトレハロース、好ましくはトレハロース二水和物；非イオン界面活性剤、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、又はソルビタンエステル；及び適切なｐＨを維持すること、例えばｐＨ４．５〜ｐＨ６．５の範囲又はｐＨ４．５〜ｐＨ７．５の範囲のｐＨを維持することが可能な、例えば、本明細書に記載されるｗ／ｖの量での、生理学的に適合する緩衝剤、例えばクエン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、及びヒスチジンをさらに含み；及び／又は担体：毒素の質量比率は、約２０，０００：１〜約５５，０００：１、より好ましくは約５１，０００：１である。さらにより一層好ましい実施形態において、製剤は、卵白非含有及び／又は動物性タンパク質非含有であり、医薬組成物は、アクセサリー（非毒素）タンパク質を含まない１５０ｋＤａのＡ型毒素５０Ｕ当たり、０．１ｍｇのポリソルベート２０、３６ｍｇのトレハロース二水和物、並びに８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、又は１５μｇ、最も好ましくは１１．７μｇの、ＲＴＰ００４を含み、治療用量は、４０Ｕである。
【０１４７】
一部のこのような実施形態において、投与は、単回治療で、眉間複合体への約３〜７回の注射、好ましくは５回の注射を含み、例えばその場合、所与の治療（例えば、１回の来訪中に、互いに数秒から数分以内の一連の注射で全てが行われる）で、より好ましくは、約０．０１〜約１ｍｌ／注射、約０．０２〜約０．８ｍＬ／注射、約０．０４〜約０．６ｍＬ／注射、約０．０６〜約０．４ｍＬ／注射、約０．０８〜約０．２ｍＬ／注射、又は約０．１ｍＬ／注射を使用して、約１０Ｕ〜約３０Ｕ、約１５Ｕ〜約２０Ｕ、又は約１６Ｕのボツリヌス毒素成分が、右の皺眉筋及び左の皺眉筋のそれぞれに注射され、約５Ｕ〜約１５Ｕ、約７Ｕ〜約１０Ｕ、又は約８Ｕのボツリヌス毒素成分が鼻根筋に注射される。実施例８も参照されたい。
【０１４８】
反復治療後のさらなる延長された持続期間
いくつかの特定の実施形態において、本発明は、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与することによって、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するためのボツリヌス毒素の作用の持続期間の増加における使用のための方法及び組成物であって、ボツリヌス毒素組成物の第１の治療は、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって、前記個体に投与され；それに続き、少なくとも１回の連続した治療が投与される、方法及び組成物を提供する。好ましい実施形態において、第１の治療は、少なくとも約２０週間にわたり前記しわ、しわ線、又は溝を低減し、１又は２以上の連続した治療は、第１の治療後に実現される持続期間より長い持続期間にわたりしわ、しわ線又は溝を低減する。
【０１４９】
特定の実施形態において、重症度を低減させるしわ、しわ線、又は溝は、眉間しわ線である。このような実施形態において、投与は、右の皺眉筋、左の皺眉筋、及び鼻根筋からなる群から選択される１又は２以上の筋肉への少なくとも１回の注射を含んでいてもよい。より特定の実施形態において、投与は、上記で説明した通りであり、以下の実施例７又は実施例８で説明する通りである。
【０１５０】
反復治療後の眉間しわ線を低減することにおける効果の持続期間は、一般的に、第１の治療中に、その後に査定するために上記で開示された、及び／又は実施例８で開示された尺度などの、当業界において公知の、又は本明細書に記載されるあらゆる方法に従って査定することができる。特に好ましい実施形態は、第２又は後続の治療用量が投与される前、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約６カ月、少なくとも約２８週間、少なくとも約７カ月、少なくとも約３０週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約８カ月、少なくとも約３４週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約９カ月、少なくとも約４０週間、少なくとも約１０カ月、又は少なくとも約４２週間、眉間しわ線の重症度の低減をもたらす。特定の実施形態において、組成物の第２又は後続の治療用量を投与する前の間隔は、最初の治療用量の後又は後続の治療用量の後、２６週間以上、２８週間以上、３０週間以上、３２週間以上、３４週間以上、３６週間以上、３８週間以上、４０週間以上、又は４２週間以上である。
【０１５１】
一般的に、後続の、又は連続した治療は、効果の持続期間の期間の後に、例えば、対象の眉間しわ線の重症度が、視認できないか又は軽度から、中程度又は重度に見えるレベルに増加した後に、又はそれらの治療前のベースラインに戻った後に投与される。一部の実施形態において、後続の、又は連続した治療は、初期に投与され、例えば、しわが視認できるようになる前に、又はしわが第１の治療前のその外観に戻る前に投与される。したがって、一部の実施形態において、連続した又は後続の治療は、約１２週間〜約３６週間、約１６週間〜約３４週間、約１６週間〜約３２週間、約１８週間〜約３６週間、約２０週間〜約３６週間、約２１週間〜約３５週間、約２２週間〜約３４週間、約２３週間〜約３３週間、約２４週間〜約３２週間、約２５週間〜約３１週間、及び約２６週間〜約３０週間、投与される。
【０１５２】
一部の実施形態において、治療しようとする患者は、６５歳、少なくとも６５歳、又は６５歳より高い年齢である。例えば、患者は、６５歳、６６歳、６８歳、７０歳、７２歳、７３歳、７５歳、７７歳、７８歳、８０歳、又はそれより高い年齢であってもよい。好ましいこのような実施形態において、効果の延長された持続期間及び／又は連続した治療間の間隔は、上記で開示された期間か又はそれより長い期間のいずれかでもよく、特定には、約２６〜約５２週間、約２７〜約５０週間、約２８〜約４８週間、約２９〜約４６週間、約３０〜約４４週間、約３１〜約４２週間、又は約３２〜約４０週間である。
【０１５３】
後続の治療後の効果の持続期間を増加させることは、連続した治療の間の間隔の時間をより一層長くすることを可能にすることが理解されると予想される。例えば、正に帯電した担体と非共有結合的に会合するボツリヌス毒素を含む組成物での治療の経過は、第１の治療と第２の治療との間の第１の間隔を有していてもよく、第１の治療と第２の治療との間の第１の間隔は、第２の治療と第３の治療との間の第２の間隔より短く、第２の治療と第３の治療との間の第２の間隔は、第３の治療と第４の治療との間の第３の間隔に等しいか又はそれより短くてもよい、などである。例えば、治療過程は、約１２週間の第１の間隔、及び１２週間より長い、例えば約１４週間、約１６週間、又は約２０週間の第２の間隔を含んでいてもよい。治療過程は、約１６週間の第１の間隔、及び１６週間より長い、例えば約１８週間、約２０週間、又は約２２週間の第２の間隔を含んでいてもよい。治療過程は、約２０週間の第１の間隔、及び２０週間より長い、例えば約２２週間、約２４週間、又は約２６週間の第２の間隔を含んでいてもよい。治療過程は、約２４週間の第１の間隔、及び２４週間より長い、例えば約２６週間、約２８週間、又は約３０週間の第２の間隔を含んでいてもよい。治療の経過にわたる間隔は、治療の１、２、３又は４以上のサイクルにわたり増加させてもよいし、又は最初の数サイクルのみにわたり、例えば、１、２、及び３サイクルのみにわたり、若しくは１及び２サイクルのみにわたり増加させてもよい。
【０１５４】
一部の実施形態において、後続のボツリヌス毒素治療間の間隔は、約１２週間〜約３６週間、約１６週間〜約３４週間、約１６週間〜約３２週間、約１８週間〜約３６週間、約２０週間〜約３６週間、約２１週間〜約３５週間、約２２週間〜約３４週間、約２３週間〜約３３週間、約２４週間〜約３２週間、約２５週間〜約３１週間、及び約２６週間〜約３０週間である。好ましい実施形態において、後続のボツリヌス毒素治療間の間隔は、約２０週間より長く約３６週間まで、約２２週間より長く約３４週間まで、約２４週間より長く約３２週間まで、又は約２６週間より長く約３０週間までである。より好ましい実施形態において、後続の間隔は、第２の間隔、第３の間隔、第４の間隔、及び第５の間隔の少なくとも１つである。
【０１５５】
さらに、間隔がより長いことは、所定時間にわたり、例えば対象が治療を望む期間にわたり、治療がより少ないことと解釈されることが理解されると予想される。
【０１５６】
反復治療後の増加した応答者率
いくつかの特定の実施形態において、本発明は、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与することによって、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減するボツリヌス毒素応答を実現する可能性の増加における使用のための方法及び組成物であって、ボツリヌス毒素組成物の第１の治療は、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって、前記個体に投与され；それに続き、しわ、しわ線、又は溝を低減する可能性が第１の治療より大きい少なくとも１回の連続した治療が投与される、方法及び組成物を提供する。好ましい実施形態において、しわ、しわ線、又は溝は、眉間しわ線である。特定には、しわ、しわ線、又は溝を低減することにおける応答は、個体が反復治療後の長期間にわたりボツリヌス毒素応答を維持する可能性の増加を有するような、応答の延長された持続期間である。例えば、第１の治療後の４週間にわたり低減を維持する可能性と比較して、後続の治療後の４週間にわたり、本明細書に記載される１又は２以上の尺度によって査定される場合、対象は、眉間しわ線の低減を維持する可能性の増加を有していてもよい。より好ましくは、それぞれ第１の治療後の８週間、１２週間、１６週間、２０週間、２４週間、２８週間、３２週間、又は３６週間にわたり低減を維持する可能性と比較して、本明細書に記載される１又は２以上の尺度によって査定される場合、対象は、後続の治療後の８週間、１２週間、１６週間、２０週間、２４週間、２８週間、３２週間、又は３６週間にわたり、眉間しわ線の低減を維持する可能性の増加を有する。
【０１５７】
一部の実施形態において、しわ、しわ線、又は溝、例えば眉間しわ線の低減は、少なくとも約４週間、第１の治療用量の投与後に個体の少なくとも８０％において持続し、及び／又は第２又は後続の治療用量の投与後に個体の少なくとも８５％において持続する。好ましい実施形態において、しわ、しわ線、又は溝、例えば眉間しわ線の低減は、少なくとも約４週間、第１の治療用量の投与後に個体の少なくとも８５％において持続し、及び／又は第２又は後続の治療用量の投与後に個体の少なくとも９０％において持続する。より好ましい実施形態において、しわ、しわ線、又は溝、例えば眉間しわ線の低減は、少なくとも約４週間、第１の治療用量の投与後に個体の少なくとも９０％において持続し、及び／又は第２又は後続の治療用量の投与後に個体の少なくとも９５％において持続する（例えば、実施例８を参照）。
【０１５８】
例えば、本明細書に記載される医薬組成物の投与は、第１の治療後に、個体の４０〜９０％において少なくとも約４週間持続する、及び後続の治療後に、より大きいパーセンテージにおいて少なくとも約４週間持続する、しわ、しわ線（例えば、眉間しわ線）、又は溝の重症度の低減をもたらすことができる。好ましい実施形態において、それぞれ第１の治療が投与された個体の、約５５〜約６０％、約６５％〜約７０％、又は約６５％〜約７５％において約４週間、応答が維持されるか、又は効果が持続し、それぞれ第２の治療が投与された個体の、約６０〜約６５％、約７０％〜約７５％、又は約７０％〜約８０％において約４週間持続する。一部の実施形態において、少なくとも約４週間、それぞれ第１の治療が投与された個体の、少なくとも約５５％より多く、約５６％より多く、約５８％より多く、約６０％より多く、約６２％より多く、約６５％より多く、約６６％より多く、約６８％より多く、約７０％より多く、約７２％より多く、約７３％より多く、又は約７５％より多く、約８０％までにおいて、応答が維持されるか、又は効果が持続し、少なくとも約４週間、それぞれ第２の治療が投与された個体の、少なくとも約５７％より多く、約５８％より多く、約６０％より多く、約６２％より多く、約６４％より多く、約６７％より多く、約６８％より多く、約７０％より多く、約７２％より多く、約７４％より多く、約７５％より多く、又は約７７％より多く（例えば、実施例８を参照）、それぞれ医薬製剤の第２の治療が投与された個体の、約８０％まで、約８５％まで、又は約９０％までにおいて、応答が維持されるか、又は効果が持続する。
【０１５９】
反復治療後の副作用の低減
いくつかの特定の実施形態において、本発明は、複数の連続したボツリヌス毒素治療を投与することによって、それを必要とする個体のしわ、しわ線、又は溝を低減することにおけるボツリヌス毒素投与に関連する副作用を低減することにおける使用のための方法及び組成物であって、ボツリヌス毒素組成物の第１の治療は、しわ、しわ線、又は溝に、又はその近辺への注射によって、前記個体に投与され；それに続き、第１の治療より有害作用が少ない少なくとも１回の連続した治療が投与される、方法及び組成物を提供する。好ましい実施形態において、しわ、しわ線、又は溝は、眉間しわ線である。
【０１６０】
ボツリヌス毒素投与に関連する副作用又は有害事象は、例えば実施例８に記載されたように、そのボツリヌス毒素の投与との関係に関して、明確な、起こり得る、又は治療中に発生した可能性のある、又は治療に関連する有害事象であるあらゆる有害事象である。有害事象は、例えば、実施例８に記載されたように、軽度、中程度、重度、又は重篤であり得る。特定には、正に帯電した担体と非共有結合的に会合するボツリヌス毒素を含む組成物の使用は、全般的に毒素の遠位への拡がりに関連する副作用（有害事象）を低減することができる。このような有害事象としては、これらに限定されないが、調節障害、反射消失、誤嚥、霧視、ボツリヌス中毒、眼瞼機能障害、眼瞼下垂、顔面麻痺、顔面不全麻痺、第４脳神経不全麻痺、末梢神経麻痺、末梢麻痺、骨盤底筋力低下、肺炎での誤嚥、瞳孔反射の機能不全、徐脈、眉毛下垂、球麻痺、便秘、脳神経の麻痺、脳神経の完全麻痺、横隔膜麻痺、複視、口内乾燥、構音障害、嚥下困難、発音障害、呼吸困難、外眼筋不全麻痺、不全麻痺、胃腸障害、四肢不全麻痺、頭痛、片側不全麻痺、舌下神経不全麻痺、反射減弱、筋緊張低下、不全単麻痺、筋力低下、麻痺、弛緩性の麻痺、麻痺性イレウス、対不全麻痺、脳神経の不全麻痺、呼吸不全、呼吸停止、呼吸抑制、言語障害、第３脳神経不全麻痺、三叉神経不全麻痺、尿閉、声帯麻痺、声帯不全麻痺、及び眼球乾燥症（ドライアイ）が挙げられる。
【０１６１】
好ましい実施形態において、本明細書に記載の方法及び使用による反復治療は、最初の治療と比較して、このような有害事象の１又は２以上の発生頻度を少なくし、及び／又はその重症度を低減する。より好ましい実施形態において、眼瞼下垂の頻度及び／又は重症度は、第１の治療後の眼瞼下垂と比較して、後続の治療後に低減される。
【０１６２】
本明細書に記載される以下の実施例及び実施形態は、例示的な目的であり、その観点での様々な改変又は変更は、当業者に示唆されると予想され、本出願の本質及び範囲並びに添付の特許請求の範囲内に含まれるものとすることが理解される。本明細書において「約」が付けられた数値はまた、正確な数値も指す。
【０１６３】
本明細書において引用された全ての出版物、特許、及び公開された特許出願は、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
［実施例］
【実施例１】
【０１６４】
マウスモデルにおける局所筋麻痺の持続期間
この実施例は、ＲＴ００３又はBOTOX（登録商標）のいずれかを注射したマウスにおける局所筋麻痺の持続期間を比較する。ＲＴ００３は、Ａ型ボツリヌス毒素（全ての内因性非毒素タンパク質を除去するために精製されている）と配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲを有する正に帯電した担体とを含有する本発明による例示的な注射用製剤である。BOTOX（登録商標）はまた、Ａ型ボツリヌス毒素を含有するが、Ａ型ボツリヌス毒素分子を安定化するために外因性アルブミンが添加されている。
【０１６５】
"A comparison of the safety margins of botulinum neurotoxin serotypes A, B, and F in mice", Toxicon 2001;39(12):1815-1820においてAoki, K.R.によって報告される指外転スコア（ＤＡＳ）アッセイを使用して、筋麻痺を測定した。ＤＡＳアッセイにおいて、マウスが後肢を伸ばし、後肢の指を外転させる特徴的な驚愕反応を引き起こすために、マウスをその尾部によって簡単に吊るす。マウスがこの驚愕反応を顕示することができる程度を、５点スケール（０〜４）でスコア付けし、０は正常驚愕反応を表し、４は指外転及び脚伸長の最大低減を表す。対象マウスがどの程度の神経毒で処置されたかを知らない観察者が、スコア付けを行う。非処置動物集団についてのＤＡＳアッセイを使用するベースラインスコアを０．４と決定した。
【０１６６】
この実施例において報告される研究は、１０匹の動物を含んだ（ＲＴ００３群に５匹のマウス、及びBOTOX（登録商標）群に５匹のマウス）。動物の各々に、各ボツリヌス毒素製剤（すなわち、ＲＴ００３又はBOTOX（登録商標））を３回、各投薬間に４０日の期間を伴って注射した。注射後、各試験群の動物の全てがＤＡＳアッセイの０．４のベースラインを超えた日数をカウントした。図１で示される結果は、ＲＴ００３処置群についてのＤＡＳアッセイスコアは、第１、第２及び第３の処置後、それぞれ、２５、２２及び２１日間、０．４のベースライン値を超えたままであったことを示す。対照的に、BOTOX（登録商標）処置群についてのＤＡＳアッセイスコアは、第１、第２及び第３の処置後、それぞれ、１１、８及び１１日間、０．４のベースライン値を超えたままであった。
【０１６７】
これらのＤＡＳアッセイデータは、ＲＴ００３製剤によって引き起こされた局所筋麻痺は、BOTOX（登録商標）によって引き起こされた局所筋麻痺の約２倍長く続くことを示す。この結果は、ＲＴ００３及び本発明による他の注射用ボツリヌス毒素含有化合物の治療的使用について重要な示唆を有する。特に、本発明による注射用組成物を使用することによって、ボツリヌス毒素によって引き起こされる特定の美容効果又は治療効果を維持するために必要とされるフォローアップ注射の頻度を顕著に低減することができる。次に、対象がボツリヌス毒素に対する抗体を生じる傾向が少なくなるので、適用頻度の低減は、より優れた長期効能をもたらし得る。
【実施例２】
【０１６８】
安全性プロファイルが改善された注射用ボツリヌス毒素製剤
ここ数十年にわたり、ボツリヌス毒素は、しわ、多汗症及び筋痙攣を含む、様々な状態を治療するための治療剤としての使用を見出してきた。しかしながら、ボツリヌス毒素は、ヒトにとって公知の最も強力な天然毒素であるので、毒素の不適切な投与は、非常に危険であり得る。例えば、事故的なボツリヌス毒素の全身送達は、麻痺、呼吸困難及びさらには死亡を引き起こし得る。さらに、ボツリヌス毒素が治療的処置の部分として身体の局所領域に適切に送達されたとしても、毒素は経時的に拡散する自然の傾向を有し、それによって身体の他の部分における不必要な麻痺のリスクを増大させる。例えば、しわを治療するためにボツリヌス毒素が目の周囲に注射される場合、ボツリヌス毒素は眼瞼の運動を制御する筋肉に拡散する場合がある。このようなことが起こった場合、眼瞼筋は、部分的に麻痺する場合があり、眼瞼が部分的に閉じ、正常な視界を干渉する「眼瞼下垂」として公知の周知の状態を引き起こす。
【０１６９】
本発明の一態様は、現在使用可能な市販のボツリヌス毒素製剤と比較して安全性プロファイルが改善された注射用ボツリヌス毒素製剤を提供することである。好ましい実施形態では、注射用ボツリヌス毒素製剤は、注射後に拡散する傾向の低減を有する。このようにして、本発明のある特定の好ましい製剤は、ボツリヌス毒素のより正確な送達を可能にし、ボツリヌス毒素の非制御局所拡散と関連付けられる不必要な副作用を劇的に低減する。
【０１７０】
この実施例は、様々な製剤中のボツリヌス毒素の、注射後に拡散する傾向の比較研究を報告する。研究は、３つのボツリヌス毒素製剤：（１）BOTOX（登録商標）；（２）式ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲを有する正に帯電した担体に非共有結合的に会合した、アクセサリータンパク質を伴わない１５０ｋＤ  Ａ型ボツリヌス毒素分子自体を含有する緩衝安定化溶液であるＲＴ００３；及び（３）ＲＴ００３に存在する正に帯電した担体を含有しないことを除いてはＲＴ００３製剤と同一であるＲＴＴ１５０を含んだ。
【０１７１】
研究で使用されるマウスの各々の腓腹筋に、上記に挙げるボツリヌス毒素製剤のうちの１つを、筋肉の側方〜正中線部分（図２Ａ）又は筋肉の正中線部分（図２Ｂ）のいずれかにおいて注射した。ボツリヌス毒素の注射後４日間、マウスの各々についてＤＡＳアッセイを行って、各製剤のボツリヌス毒素がマウスの腓腹筋から後ろ足へ拡散する任意の傾向を顕示したかどうかを決定した。ＤＡＳアッセイから、試験動物の後肢指を外転させる能力の任意の減少は、ボツリヌス毒素拡散の表示として解釈した。
【０１７２】
図３は、試験動物に上記に説明される様々なボツリヌス毒素製剤を注射した後に行ったＤＡＳアッセイの結果を示す。指外転スコアは、注射が腓腹筋の正中線部分であったか、側方〜正中線部分であったかに対応する２つのクラスターにグループ分けされることに留意されたい。側方〜正中線注射についてのＤＡＳと比較して、正中線注射についての概してより低いＤＡＳスコアは、試験動物の後ろ足の麻痺の程度が正中線注射後、概してより低いことを示す。理論に束縛されるものではないが、このふるまいは、側方〜正中線注射と比較して、正中線注射後にボツリヌス毒素が試験動物の後肢指に達するために移動しなければならないより大きな距離から生ずると考えられる。ボツリヌス毒素のこのより大きな移動距離の必要性は、後肢指の麻痺の可能性を減少させると考えられる。
【０１７３】
図３は、ＲＴ００３製剤の正中線注射後の全ての４日間についての０の指外転スコアを示す。この結果は、ＲＴ００３製剤中のボツリヌス毒素が、注射に際して腓腹筋の正中線部分に局在化したままであること、及び実験の時間スケールでは麻痺を引き起こす拡散が起こらないことを示す。対照的に、ＲＴＴ１５０及びBOTOX（登録商標）製剤の注射後に０．４のＤＡＳベースラインを超える指外転スコアが観察され、平均ＤＡＳスコアはBOTOX（登録商標）製剤についてより高い。ＲＴＴ１５０及びBOTOX（登録商標）製剤についてのＤＡＳ結果は、これらの製剤の正中線注射後、試験動物の後肢指麻痺が観察され、BOTOX（登録商標）製剤の注射後、より大きな程度の麻痺が観察されたことを示す。これらのデータは、ＲＴＴ１５０及びBOTOX（登録商標）製剤中のボツリヌス毒素分子が、注射後に局所的に拡散することができ、BOTOX（登録商標）製剤中のボツリヌス毒素分子についてより大きな程度の局所拡散があることを示唆する。
【０１７４】
図３は、また、特定のボツリヌス毒素製剤にかかわらず、側方〜正中線注射後に全ての試験動物について後肢指麻痺が観察されることを示す。上記に議論される通り、正中線注射と比較して、側方〜正中線注射後のこのより大きな程度の麻痺は、ボツリヌス毒素の、試験動物の後ろ足までのより短い移動距離に関連すると考えられる。しかしながら、全ての３つのボツリヌス毒素製剤は側方〜正中線注射後に麻痺を引き起こす拡散を顕示するが、ＲＴ００３を注射した試験動物における麻痺の程度は、実験の時間スケール中で、ＲＴＴ１５０及びBOTOX（登録商標）製剤について観察された麻痺の程度より平均して小さい。したがって、側方〜正中線注射に対応するＤＡＳアッセイデータは、そのデータがＲＴＴ１５０及びBOTOX（登録商標）と比較して、ＲＴ００３製剤についてボツリヌス毒素の局所拡散の傾向の減少を示す点で、正中線注射についてのＤＡＳアッセイデータと質的に同様である。
【０１７５】
正中線注射及び側方〜正中線注射後の局所拡散率の比較は、式（１）：
【０１７６】
【数１】
2021505570.tif 000003
【０１７７】
により定義される「拡散指数」と呼ばれるパラメータを考慮することによって行うことができる。指外転スコアは０〜４に及ぶ場合があり、側方〜正中線指外転スコアは、正中線指外転スコアより高いと予想されるので（上記に議論される通り）、拡散指数値は典型的に、０〜１００に及ぶ。１００に近い拡散指数値は、正中線指外転スコアと側方〜正中線指外転スコアとの比が１に近いことを示す。これは、注射後の拡散率が十分に高いため、正中線及び側方〜正中線注射後にボツリヌス毒素が試験動物の後肢指に達し、麻痺させる拡散時間が同等又はほとんど同じである場合に起こり得る。対極では、０に近い拡散指数値は、正中線指外転スコアと側方〜正中線指外転スコアとの比が０に近いことを示す。これは、側方〜正中線注射後に麻痺が観察されるとしても、正中線注射後のボツリヌス毒素の拡散は非常に低いため、ボツリヌス毒素の拡散が試験動物の後肢指で麻痺を引き起こすためには不十分である場合に起こり得る。
【０１７８】
以下の表１は、図３に対応する実験で報告される通り、BOTOX（登録商標）、ＲＴ００３及びＲＴＴ１５０の正中線又は側方〜正中線注射後の指外転スコアを使用して計算した拡散指数値を示す。実験の時間スケールでは、BOTOX（登録商標）製剤の注射に対応する拡散指数値は、ＲＴＴ１５０及びＲＴ００３製剤について観察された値より高い。このことは、BOTOX（登録商標）製剤の注射について、正中線指外転スコアと側方〜正中線指外転スコアとの比は、ＲＴＴ１５０及びＲＴ００３製剤について観察された比と比較して、１により近いことを示す。正中線注射後に試験動物の後肢指麻痺を引き起こすためには、ボツリヌス毒素はより遠く拡散しなければならないので、BOTOX（登録商標）注射後の正中線指外転スコアと側方〜正中線指外転スコアとの比が１により近いという観察は、BOTOX（登録商標）の正中線注射後のボツリヌス毒素拡散率が、側方〜正中線注射後の率にかなり実質的に相当することを示唆する。換言すれば、正中線注射と関連付けられる拡散経路長の増大は、あまり後肢指麻痺を引き起こすことの障壁にならない。
【０１７９】
対照的に、ＲＴ００３についての拡散指数値は、実験の４日の時間スケールで全て０である。この結果は、ＲＴ００３の正中線注射後に麻痺を誘発する拡散が観察されないことを示す。換言すれば、正に帯電した担体と非共有結合的に会合したＡ型ボツリヌス毒素分子を含有するＲＴ００３製剤は、注射されたＡ型ボツリヌス毒素の局在化の強化を可能にする。このように、ＲＴ００３製剤は、BOTOX（登録商標）製剤の安全性プロファイルと比較して改善した安全性プロファイルを与え、不必要な麻痺を最小限にする。
【０１８０】
ＲＴＴ１５０について観察された拡散指数値は、ＲＴ００３の場合のように０ではないが、それでもBOTOX（登録商標）製剤について観察された値より低い。表１を参照されたい。この結果は、実験の４日の時間スケールで観察可能な後肢指麻痺を産生するために十分なボツリヌス毒素拡散が起こるが、ボツリヌス毒素の麻痺を引き起こす拡散に必要な時間は、正中線注射後は比較的より長いことを示す。
【０１８１】
【表１】
2021505570.tif 000004
【実施例３】
【０１８２】
抗体を生成する傾向を低減した注射用ボツリヌス毒素製剤
しわ等の不必要な状態を治療するためにボツリヌス毒素が患者に定期的に注射される場合、ボツリヌス毒素の効果の持続期間は同じままであり得るとしても、多くの場合、ボツリヌス毒素の効能は逐次的注射と共に減少することが観察される。この現象は、患者の免疫系によるボツリヌス毒素に対する抗体の形成の結果であると考えられる。同じ効果を実現するためには、ますますより大用量のボツリヌス毒素がその後は必要とされ、このことは安全性及びコストの両方に関連する深刻な問題を提示するので、治療の見通しから、患者によるボツリヌス毒素に対する抗体の形成は、望ましくない。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、本発明は、現在使用可能な市販の注射用ボツリヌス毒素製剤と比較して、抗体形成を誘発する傾向を減少した注射用ボツリヌス毒素製剤を提供する。したがって、これらの実施形態では、ボツリヌス毒素製剤は、同じ効果を実現するためにより少ない毒素を使用することを経時的に可能にすることによって、ボツリヌス毒素注射に伴うリスクを最小限にすることを補助する。
【０１８４】
この実施例では、実施例２で記載される反復ＲＴ００３及びBOTOX（登録商標）注射後に得られるＤＡＳアッセイデータを、時間の関数として分析して、これらの２つの製剤の効能が同じ試験動物への反復投与に際してどのように変化するかを決定する。概して、いずれかの製剤の反復投与後に、ボツリヌス毒素と関連付けられる効果の持続期間は同じであった。しかしながら、反復投与に際しての筋麻痺の程度は、製剤によって変動した。筋麻痺の程度の変化を定量化するために、ＲＴ００３又はBOTOX（登録商標）のいずれかの注射後の指外転スコアのパーセント変化を式（２）：
【０１８５】
【数２】
2021505570.tif 000005
【０１８６】
に従って決定した。
【０１８７】
式（２）の分子は、第ｎの処置と第１の処置について測定された指外転スコアの間の差であるので、第ｎの処置について測定された指外転スコアが、第１の処置について測定された指外転スコアより小さい場合、ＤＡＳのパーセント変化は負になる。換言すれば、第１の処置と比較して、第ｎの処置後により少ない麻痺が観察される場合、ＤＡＳのパーセント変化は負である。表２は、実施例２で記載される手順に従うＲＴ００３及びBOTOX（登録商標）製剤の反復投与後に測定されたＤＡＳ値のパーセント変化を示す。
【０１８８】
【表２】
2021505570.tif 000006
【０１８９】
表２で示される通り、第１の再処置後、指外転スコアのパーセント変化は、BOTOX（登録商標）製剤について−４４％であり、このことは、効能の実質的な下落を示唆する。対照的に、ＲＴ００３製剤についての指外転スコアのパーセント変化は０であり、第２の再処置後のＤＡＳスコアが初期投与及び第１の再処置後と同じであったことを示した。この結果は、ＲＴ００３の第１の再処置後に観察された麻痺の程度は、第１の処置後の麻痺の程度と同じであること、及び第１の再処置後でさえも、試験動物において起こった中和抗体の形成はごくわずかであったことを示す。ＲＴ００３及びBOTOX（登録商標）の第２の再処置後、計算されたＤＡＳ値のパーセント変化は、両方の製剤について負であったが、ＲＴ００３製剤についてのＤＡＳ値のパーセント変化の大きさは、BOTOX（登録商標）について決定された値の半分であった。BOTOX（登録商標）について観察されたＤＡＳ値のより大きな負のパーセント変化は、試験動物が、ＲＴ００３と比較して、BOTOX（登録商標）に対してより高率の抗体生成を有したことを示唆する。したがって、これらのデータは、ＲＴ００３等の本発明によって企図される製剤は、ボツリヌス毒素の効果を中和する抗体の形成を誘発する傾向がより低い場合があることを示す。したがって、この結果は、本発明によって企図される製剤を使用することによって、経時的に、同じ治療効果を実現するためにより少ないボツリヌス毒素を使用することができることを示唆する。
【実施例４】
【０１９０】
安全性が改善された注射用ボツリヌス毒素製剤
この実施例は、本発明の注射用ボツリヌス毒素製剤で使用される正に帯電した担体分子が、製剤の安全性プロファイルを強化する（実施例２）のみでなく、製剤の安定性を改善することを実証する。表３は、ＲＴ００３及びＲＴＴ１５０製剤を４℃（ＲＴ００３のみ）及び４０℃（ＲＴ００３及びＲＴＴ１５０の両方）で様々な時間間隔の間エージングさせるエージング実験の結果を示す。特定の温度で特定の時間エージングさせた後、ＲＴ００３及びＲＴＴ１５０製剤の効力を、一連のマウスＩＰ  ＬＤ５０アッセイにより測定した。表３に要約される結果は、ＲＴ００３の効力は、６カ月後でさえも、４℃でのエージング後に本質的に変化していないことを示す。さらに、ＲＴ００３製剤の効力は、マウスＩＰ  ＬＤ５０アッセイにおける製剤の標的動物を死滅させる能力によって測定される通り、ＲＴ００３製剤を高温（４０℃）で６カ月間エージングさせたとしても、わずかに減少するのみである。対照的に、ＲＴＴ１５０製剤は、１カ月のみの４０℃でのエージング後に効力の顕著な減少を顕示した。ＲＴ００３製剤が式ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲを有する正に帯電した担体分子も含有することを除いて、ＲＴ００３及びＲＴＴ１５０製剤は同一であるので、これらのデータは、正に帯電した担体分子がＲＴ００３製剤中のボツリヌス毒素の安定性を改善することを示す。
【０１９１】
【表３】
2021505570.tif 000007
【実施例５】
【０１９２】
眉間しわ線の治療において長期持続期間の効果を示す注射用ボツリヌス毒素製剤
この実施例は、ＲＴ００２と呼ばれる、Ａ型ボツリヌス毒素と、１又は２以上の正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジンポリペプチドを含む正に帯電した担体とを含有する本発明の注射用組成物の安全性、効能及び効果の持続期間を評価するための、臨床研究及び２４週目での結果の中間分析を説明する。ＲＴ００２製品は、式ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＲＴＰ００４；配列番号４）を有する正に帯電した担体ペプチドと共有結合で会合しておらず、且つアクセサリータンパク質又は動物由来成分を含有しない１５０ｋＤのＡサブ型ボツリヌス毒素分子を含有する、注射用製剤である。ＲＴ００２は、中程度〜重度の眉間しわ線の治療のための研究において使用される。賦形剤は、アクセサリータンパク質を伴わない５０Ｕの１５０ｋＤａ  Ａ型毒素当たり０．１ｍｇポリソルベート２０、３６ｍｇトレハロース二水和物及び１１．７μｇ  ＲＴＰ００４を含み、治療用量は４０Ｕである。
【０１９３】
臨床研究は、成人の眉間しわ線の外観における一時的な改善のためのＲＴ００２注射による単回（１回）治療の安全性及び効能及び効果の持続期間を評価するために設計及び実行されたフェーズ２ランダム化二重盲検用量範囲実薬及びプラセボ対照多施設研究であった。これらの用量、２０Ｕ、４０Ｕ及び６０ＵのＲＴ００２を、実薬、すなわち、VISTABEL（登録商標）／BOTOX（登録商標）（筋内注射による２０Ｕ用量）及びプラセボ対照（筋内注射）と比較して評価した。注射治療は単回筋内注射であった。３つの投与量レベルでのＲＴ００２の単回治療の効果の持続期間も、VISTABEL（登録商標）／BOTOX（登録商標）美容製品に対して査定した。
【０１９４】
ＲＴ００２製品は、凍結乾燥粉末に製剤化された、ＲＴＴ１５０と呼ばれる、アクセサリータンパク質を伴わない精製１５０ｋＤａボツリヌス神経毒で構成される。非臨床研究において、ＲＴ００２は、Ａ型ボツリヌス神経毒（ＢｏＮＴＡ，botulinum neurotoxin A）の他の形態よりも少ない拡散を顕示することが示されており、毒素の近隣の筋肉への遠位の広がりのための副作用がより少なく、標的部位でのより制御された効果を提供し得る。加えて、ＲＴ００２添加物非含有Ａ型ボツリヌス毒素製剤は、製剤中に存在する非活性タンパク質の非存在のために免疫原性の可能性を与える能力がより小さい。加えて、ＲＴ００２は、ラットにおいて最大で５０Ｕ／ｋｇの反復用量筋内投与後に認容性が良好であった。
【０１９５】
投薬レジメン及び注射技術：この研究についてのＲＴ００２の投薬レジメンは、ＲＴ００２（２０Ｕ、４０Ｕ又は６０Ｕ）、プラセボ又は対象当たり２０Ｕで投薬されたVISTABEL（登録商標）／BOTOX（登録商標）のいずれかの、治療を受ける対象の額の眉間の５箇所の注射部位の各々への０．１ｍＬ筋内注射（全部で０．５ｍＬ）としての単回治療であった。全ての治療は、訓練された医師により投与される筋内注射であった。より具体的には、研究対象は、各皺眉筋への２箇所の注射、及び鼻根筋への１箇所の注射の５箇所の注射部位への注射治療当たり０．１ｍＬの単回治療を受容した。治験担当医、施設職員、対象及び治験依頼者は、治療群割り当てについて盲検で行った。登録時に中程度〜重度の眉間しわ線を有する、３０〜６５歳の健康状態の良好なおよそ２５０人の成人女性及び男性対象を研究に登録した。
【０１９６】
顔面の眉間しわ線は、顔面の横方向の皺眉筋及び垂直方向の鼻根筋から生ずる。これらは、患者が最大限に顔をしかめているときの筋肉塊の触診により容易に特定することができる。皺眉筋は皮膚を押し下げ、垂直方向のしわ線、すなわち、緊張した筋肉の隆線により囲まれた深いしわ（すなわち、顔をしかめたときのしわ線）を創出する。筋肉の場所、サイズ及び使用は、個体間で顕著に変動するので、注射用ボツリヌス毒素を投与する医師は、関連する領域の関連する解剖学的構造及び以前の外科的手技のための解剖学的構造への任意の変更を理解しなければならない。眼瞼下垂のリスクを低減させるために、以下のステップは最適に行われる：（ｉ）特により大きな眉下制筋を有する患者においては、上眼瞼挙筋又はその近辺への注射は避けるべきである；（ii）皺眉筋中間注射は、骨の眼窩上隆起よりも少なくとも１センチメートル上であるべきである；（iii）注射体積／用量が正確であることを確実にするべきである；及び（iv）毒素は、眉中央上、１センチメートルよりも近くに注射するべきではない。皮膚を通して下にある筋肉に針を進める間、眼窩縁の上内側に指圧を適用することによって、ボツリヌス毒素を注射する。
【０１９７】
研究のために、対象の眉間しわ線の重症度を、治験担当医及び対象が査定した。治験担当医の査定のために、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）評点スコア法を以下の通り使用した：（０）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、顔面しわ重症度なしを示し；（１）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、軽度の顔面しわ重症度を示し；（２）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、中程度の顔面しわ重症度を示し；（３）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、重度の顔面しわ重症度を示した。熟練した実施者により理解される通り、写真ガイドは、治験担当医及び参照のために使用されるしわ重症度の等級を顕示する。
【０１９８】
患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）査定：対象の顔面しわ重症度の対象による査定のために、患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）を使用した。対象は、スクリーニング来院、治療来院（０日目）治療前、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、眉間しわ線の重症度を査定するために最大限に顔をしかめたときの患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）を記入した。査定フォームは、提供された手鏡を使用して眉間しわ線を再観察しながら記入するために対象に直接提供された。ＰＦＷＳ評点スコア法は、以下の通りであった：（０）のＰＦＷＳ評点スコアは、しわ重症度なしを示し、「しわなし」の関連説明を伴い；（１）のＰＦＷＳ評点スコアは、軽度のしわ重症度を示し、「非常に浅いしわ」の関連説明を伴い；（２）のＰＦＷＳ評点スコアは、中程度のしわ重症度を示し、「中程度のしわ」の関連説明を伴い；（３）のＰＦＷＳ評点スコアは、重度のしわ重症度を示し、「深いしわ」の関連説明を伴った。研究に従って、対象が研究に登録されるためには、対象の眉間しわ線についての（２）中程度又は（３）重度のＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ評点が必要とされた。
【０１９９】
対象を、以下の表４の治療のうちの１つに１：１：１：１：１にランダム化した。
【０２００】
【表４】
2021505570.tif 000008
【０２０１】
研究に登録された対象は、最長で３６週間の研究全体を通して、スクリーニング及び治療来院並びにフォローアップ安全性及び効能評価を有した。治療応答の出現を記録するために、最初の２週間の期間、対象日誌が提供された。対象を、研究の１週目の電話で、及び２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目での来院中に評価した。全ての対象を治療後少なくとも２４週間フォローした。対象の最大限に顔をしかめたときの治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）スコアが２４週目〜３６週目来院の間にベースラインに戻った場合、そのスコアが記録された来院を、この対象についての研究終了来院と考えた。
【０２０２】
研究持続期間は、最長で３８週間の研究であり、最長で２週間のスクリーニング期間、その後単回治療、及び治療後最長で３６週間のフォローアップ期間を含んだ。全ての対象を治療後少なくとも２４週間フォローした。スクリーニング来院、治療来院（０日目）治療前後（治験薬への即時反応があったかどうかを決定するために）、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、注射部位を評価した。５箇所の注射部位の全般的評価として査定を行い、対象により記載される紅斑、浮腫、灼熱感又は刺すような痛みの感覚及びかゆみを評価した。
【０２０３】
加えて、治療来院（０日目）治療前時、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）時及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、治験担当医が脳神経II〜VIIを評価した。脳神経査定についてのスコアは、以下のように取った：（１）の評点は「正常」に対応し；（２）の評点は「異常、臨床的に顕著でない」に対応し；（３）の評点は「異常、臨床的に顕著」に対応し；（４）の評点は「査定せず」に対応した。これらの査定について、脳神経IIは視神経であり；脳神経IIIは動眼神経であり；脳神経IVは滑車神経であり；脳神経Ｖは三叉神経であり；脳神経VIは外転神経であり；脳神経VIIは顔面神経である。ハウス・ブラックマン顔面神経部位別評価システム（Regional House-Brackmann Facial Nerve Grading System）（Yen, T.L. et al., 2003, Otol. Neurotol., 24(1):118-122）を設計して、標的及び隣接筋系を神経支配する顔面神経（VII）の共同運動及び４つの主要な分岐を評価した。治験担当医は、治療来院（０日目）治療前、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、顔面神経（VII）の機能性を評価した。
【０２０４】
英国医学研究審議会筋力査定スケール（ＭＲＣ，Medical Research Council Scale for Assessment of Muscle Power）を使用して、顔面筋強度を評価した。ＭＲＣは、筋力低下を査定するための信頼性のある確証されたスケールであり、末梢神経傷害の調査を補助する（Paternostro-Sluga, 2008）。顔面の各側の眼輪筋（眼瞼）、側方眉上引筋及び側方頬骨輪筋を評価した。筋力査定のためのＭＲＣスケールでは、（０）の評点は「運動なし」に対応し；（１）の評点は「知覚できる筋肉の動き」に対応し；（２）の評点は「重力が除去された場合のみの運動」に対応し；（３）の評点は「重力に対して肢を動かすことができる」に対応し；（４）の評点は「重力及び検査者が及ぼしたいくらかの抵抗に対して動くことができる」に対応し；（５）の評点は「正常な力」に対応する。
【０２０５】
治療来院（０日目）治療後、フォローアップ電話（１週目）、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、毒素の遠位の広がりについての質問を対象に行った。加えて、これらの同じ時点で、有害事象（ＡＥ，adverse event）も評価した。限定されるものではないが、ＡＥの例には、複視、眼瞼の麻痺、筋力低下、極度の倦怠感、並びに嚥下、呼吸及び発話困難が含まれる。
【０２０６】
効能査定は、治験担当医による眉間しわ線重症度及び眉間しわ線改善スケールの査定、対象アンケートを含む対象による眉間しわ線重症度及び改善の査定、並びに対象日誌により評価される効果の出現を含んだ。効能査定は、患者について座位で行った。査定中に一定の眼球位置を維持するために、治験担当医は、検査室において対象に固定点に注目するように頼む。査定は、室内で真上からの良好な照明（検査用ライトを使用するべきではない）又は窓からの自然光（ただし、直射日光ではなく）により行うべきである。各クリニック来院時に、治験担当医が、適格４点ＩＧＡ−ＦＷＳスケール／顔面しわ重症度スコアについての評点スコアを使用して、以下のように、眉間しわ線の視覚的外観（最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時）を査定した：（０）の評点スコアは顔面のしわなしに対応し；（１）の評点スコアは軽度の顔面のしわに対応し；（２）の評点スコアは中程度の顔面のしわに対応し；（３）の評点スコアは重度の顔面のしわに対応した。査定は、各所与の時点におけるしわ重症度を表し、治療前レベルとの比較に基づかなかった。査定は、同じ治験担当医により、各来院時に可能な限り１日の同じ時間に近い時間に最適に行われた。治験担当医間でしわ重症度の評点を標準化する努力として、治験担当医の訓練のために、しわ重症度の等級を顕示する１組の訓練用写真を使用した。治験担当医の査定を補助するために、各研究施設に写真ガイドも提供した。
【０２０７】
患者による全般的審美的改善スケール（ＧＡＩＳ，Global Aesthetic Improvement Scale）：治験担当医及び対象は、眉間しわ線の視覚的外観（最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時）のベースライン状態からの改善を、以下の表５に示す７点重症度の患者による全般的審美的改善スケール（ＧＡＩＳ）を使用して査定した。研究対象は、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、眉間しわ線の視覚的外観のベースライン状態からの改善を査定するために、最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時の患者による全般的審美的改善スケール（ＧＡＩＳ）を記入した。ＧＡＩＳ査定フォームは、提供された手鏡を使用して治療領域を再観察しながら記入するために対象に直接提供された。コンタクトレンズを装用している対象は、コンタクトレンズを装用したまま自身の眉間しわ線を最適に観察した。メガネをかけている対象には、可能であればメガネなしで自身の眉間しわ線を観察するようにアドバイスした。対象が自身の眉間しわ線を見るためにメガネが必要な場合は、査定のためにメガネをかけた。治験担当医がＩＧＡ−ＦＷＳ査定を記入する前に、対象の査定が記入された。
【０２０８】
【表５】
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【０２０９】
各クリニック来院時に、対象は、以下の患者による顔面しわ重症度（以下の表６）の対象査定についての適格４点スケールを使用して、眉間しわ線の視覚的外観（最大限に顔をしかめたとき）を査定した。査定フォームは、提供された手鏡を使用して眉間治療領域を再観察しながら記入するために対象に直接提供された。上記のＧＡＩＳ査定について、コンタクトレンズを装用している対象は、コンタクトレンズを装用したまま自身の眉間しわ線を最適に観察した。メガネをかけている対象には、可能であればメガネなしで自身の眉間しわ線を観察するようにアドバイスした。対象が自身の眉間しわ線を見るためにメガネが必要な場合は、査定のためにメガネをかけた。治験担当医がＩＧＡ−ＦＷＳ査定を記入する前に、対象の査定が記入された。査定は、各所与の時点におけるしわ重症度を表し、治療前欠陥レベルとの比較に基づかなかった。査定は、各来院時に可能な限り同じ時間に近い時間に対象によって最適に行われた。
【０２１０】
【表６】
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【０２１１】
研究中の追加の、対象による査定は、審美的治療を選択する場合の効果の持続期間の重要性の評点（治療来院（０日目）で提供される）；治療結果についての対象の満足度を評定するアンケート形態での治療結果についての対象の満足度の評点（４週目来院で）（対象が顔面の治療領域の外観についてどの程度満足又は不満であるかを対象に尋ねた）；及び治療効果の持続期間についての対象の満足度の評点（研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時）を含んだ。
【０２１２】
治療来院（０日目）治療前、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）時及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、治療領域のデジタル写真を撮った。デジタル写真は、管理標準化様式で撮った。参照写真及び適切な訓練を施設職員及び治験担当医に提供した。対象は最適に、眼又は顔面のいかなる種類のメイクアップも装着しなかった。皮膚からの光反射を最小限にするために、いずれの写真を撮る前も治療領域をアルコールパッドで拭き取り、乾燥させて皮脂を除去した。写真は、最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時の対象の正面像を含んだ。
【０２１３】
統計解析：全ての統計プログラミング及び解析は、ＳＡＳバージョン９．３又はそれ以降のバージョンを使用して行った。この研究には０．０５のレベルでの治療群間の任意の統計的有意差を検出する能力を与えていないので、以下に記載される様々な試験から得られるｐ値は、統計的傾向を確立すると予測される。試験の多重度について調節は行わなかった。個体群統計学的特徴及びベースライン特徴を、治療意図（ＩＴＴ）集団、パープロトコール（ＰＰ，ｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ）集団及び安全性集団について要約した。治療群並びに治療群及び地理／国による全ての時点での全ての効能変数について記述統計量を提供した。ＩＴＴ及びＰＰ集団について効能分析を行った。安全性集団について安全性分析を行った。
【０２１４】
集団：ランダム化され、且つ治療（少なくとも１用量の治験薬）を受容した全ての対象は、治療意図（ＩＴＴ）集団に含まれた。ランダム化され、治療を受容し、且つ少なくとも１回の治療後安全性評価を提供した全ての対象は、安全性集団に含まれた。パープロトコール（ＰＰ）集団は、プロトコールからの主要な逸脱のない２４週評価を完了するＩＴＴ集団からの対象を含んだ。以下の理由のいずれかのために対象はＰＰ集団から除外された：（ｉ）対象が選択／除外基準から逸脱した；（ii）対象が２４週目に来院しなかった；（iii）対象が禁止薬物治療を使用した；（iv）対象の２４週目の来院がスケジュールから±５日ずれた（計画された来院日の許容変動外）。
【０２１５】
安全性群及び効能比較のために、対象を５つの治療群（ＲＴ００２  ２０Ｕ；ＲＴ００２  ４０Ｕ；ＲＴ００２  ６０Ｕ；プラセボ；実薬対照）にランダム化した。各ＲＴ００２用量と実薬対照との間；各ＲＴ００２用量とプラセボとの間；及びプラセボに対する実薬対照で主要効能比較を行った。リスク対ベネフィット比を評価して、重要な研究評価（６カ月目での応答者の割合及び最長で３６週間測定した応答持続期間；ＡＥの頻度）における実薬対照に対するＲＴ００２用量の少なくとも１つの有利な傾向を調べた。
【０２１６】
各治療群内で、ＩＴＴ集団のＩＧＡ−ＦＷＳ、ＰＦＷＳ及びＧＡＩＳについての欠測スコアをマルコフ連鎖モンテカルロ（ＭＣＭＣ，Markov Chain Monte Carlo）多重補完法により補完し、応答者の割合に基づく分析を行った。最終観察繰越法（last observation carried forward method）に基づく補完を使用して、主要エンドポイントについての感度分析を行った。
【０２１７】
個体群統計学的特徴（例えば年齢、性別、人種等）及びバックグラウンド特徴（例えばＩＧＡ−ＦＷＳ、ＰＦＷＳ等）を要約するために、記述統計量を使用した。全ての対象について過去又は進行中の病歴、研究来院コンプライアンス、及び以前及び同時の薬物治療使用を要約し、対象毎のリストで提示した。
【０２１８】
効能：効能について、ＩＧＡ−ＦＷＳを使用して最大限に顔をしかめたときの対象の眉間しわ線の重症度を等級付けする盲検評価者により主要臨床効能を査定した。応答者は、ＩＧＡ−ＦＷＳにおいてベースラインに対して１点又はそれよりも大きな改善を有し、且つ評価の時点でベースラインＩＧＡ−ＦＷＳに戻っていない対象として定義する。主要分析の目的のために、２４週目における各ＲＴ００２用量と実薬対照との間で応答者の割合を比較した。各ＲＴ００２治療群を別々に、プラセボ及び実薬対照と比較した。また、各来院において実薬対照をプラセボと比較した。ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル（ＣＭＨ，Cochran-Mantel-Haenszel）検定により比較を行った。
【０２１９】
主要分析の目的のために、カプラン・マイヤー法を使用して、ＲＴ００２用量の各々と実薬対照との間で応答持続期間を比較した。ＩＧＡ−ＦＷＳに基づいて盲検治験担当医により測定される、注射時間から対象が自身のベースライン重症度に逆戻りした時点までの応答持続期間を測定した。対象が４週目又は４週目前にＩＧＡ−ＦＷＳによるベースラインからの１点改善を実現しなかった場合、応答持続期間を０と考えた。対象が４週目又は４週目前にＩＧＡ−ＦＷＳに基づく少なくとも１点改善を実現したが、３６週目（最後の時点）までに自身のベースラインに逆戻りしなかった場合、そのような対象は分析について３６週目（最後の評価日）で打ち切った。ＲＴ００２と実薬対照との間で応答持続期間を比較するために、ログランク検定を使用した。各治療療群について算出したリスク対ベネフィット比は、治療群の対象についての治療関連有害事象の数の合計を応答持続期間日数の合計で割ったものに等しかった。対象が４週目又は４週目前にＩＧＡ−ＦＷＳに基づく少なくとも１点改善を実現したが、３６週目（最後の時点）までに自身のベースラインに逆戻りした場合、ベネフィット合計へのこの対象の寄与は、ベースラインと最後の来院日との間の日数であった。
【０２２０】
副次的分析のために、使用した副次的エンドポイントを、以下のように定義する：（１）２週目及び１２週目及び２４週目の評価に重点を置いた、４〜３６週目での応答者の割合。治療群間の比較は、可能な場合分析された変数のベースライン重症度により層別化されたＣＭＨ検定に基づいた。成功に必要な改善をおそらく可能にし得るベースライン重症度を有した対象について、各治療群をプラセボと比較し、別々に実薬対照と比較した。また、各来院時において実薬対照をプラセボと比較した。
【０２２１】
いくつかの定義に基づいて応答者を評価した：（ｉ）ＩＧＡ−ＦＷＳに基づいてベースラインに対して少なくとも２点改善する対象；（ii）ＩＧＡ−ＦＷＳに基づいてベースラインに対して少なくとも１点改善する対象；（iii）０又は１のＩＧＡ−ＦＷＳスコアを有する対象；（iv）ＰＦＷＳに基づいて少なくとも１点改善する対象；（ｖ）ＰＦＷＳに基づいて少なくとも２点改善する対象；（vi）ＧＡＩＳスケールについて少なくとも１のスコアを有する対象。
【０２２２】
（２）様々な応答持続期間の定義に基づく副次的エンドポイント。４週目までに以下の各定義で特定される改善を実現しなかった対象を０持続期間に割り当て；以下に定義される改善を実現したが、３６週目までにベースラインに逆戻りしなかった対象は３６週目（最後の評価日）で打ち切った。ログランク検定を使用して治療群を比較した。各定義及び治療群について、上に記載される通り、リスク対ベネフィット比を算出した。応答持続期間についての定義は、（ｉ）注射から、ＧＡＩＳにおける少なくとも１つの応答者定義について１未満のＧＡＩＳスコアまでの時間；（ii）注射から、ＩＧＡ−ＦＷＳにおける少なくとも２点改善の応答者定義についてベースラインへの逆戻りまでの時間；（iii）注射から、ＰＦＷＳにおける少なくとも１点改善の応答者定義についてベースラインへの逆戻りまでの時間；（iv）ＰＦＷＳにおける少なくとも２点改善の応答者定義についてベースラインへの逆戻りまでの時間；（ｖ）治療、ベースライン重症度及びベースライン重症度相互作用による治療について比例ハザードモデルを使用する、注射から、ＩＧＡ−ＦＷＳにおける少なくとも１点改善の応答者定義についてベースラインへの逆戻りまでの時間；並びに（vi）治療、ベースライン重症度及びベースライン重症度相互作用による治療について比例ハザードモデルを使用する、注射から、ＰＦＷＳにおける少なくとも１点改善の応答者定義についてベースラインへの逆戻りまでの時間を含む。対象のＧＡＩＳ査定スコアを、１及び２点変化の両方についてのＰＦＷＳに基づく応答者率と相関させるために、探索的分析を行った。適宜、相関解析及びロジスティック回帰分析を使用した。
【０２２３】
患者データ：患者が報告したアウトカムは、ＲＴ００２治療の持続期間及び効能の治験担当医の発見を支持した。２４週目（６カ月）で、４０Ｕ  ＲＴ００２用量は、対象による全般的審美的改善スケール（ＧＡＩＳ）について臨床的に意味のあるより高い応答率を送達し続け、BOTOX（登録商標）美容製品治療対象の３１％に対してＲＴ００２  ４０Ｕ治療対象の４６．３％が、少なくとも１の評点スコアを有した。１６週目で、BOTOX（登録商標）美容製品のラベル情報に基づくBOTOX（登録商標）美容製品の「最長で１２０日間」の持続期間と比較して、ＲＴ００２  ４０Ｕ用量は、患者によるしわ重症度（ＰＷＳ）スケールについての少なくとも１点改善及び対象による全般的審美的改善スケールについての少なくとも１点評点により測定される通り、統計的に有意なより高い応答率を実現した。BOTOX（登録商標）美容製品で治療した対象の５８．５％と比較して、ＲＴ００２  ４０Ｕで治療した対象の７６．９％が、ＰＷＳについて少なくとも１点改善を維持した。加えて、BOTOX（登録商標）美容製品で治療した対象の７０．７％と比較して、ＲＴ００２  ４０Ｕで治療した対象の８９．７％が、ＧＡＩＳについて少なくとも１点スコアを維持した。
【０２２４】
安全性：ＲＴ００２製品は、BOTOX（登録商標）美容製品に非常に匹敵する安全性及び効能プロファイルを顕示した。有害事象は概して軽度であり、主に注射自体からの効果と関連付けられた。全てのＲＴ００２用量群は、優れた全般的安全性プロファイルを顕示し、ＡＥは主として局所性、一過性及び重症度が軽度であった。どの活性用量群でも、重篤なＡＥは起こらなかった。２０Ｕ及び４０ＵのＲＴ００２用量群は認容性が良好であり、眼瞼下垂を引き起こす点についてBOTOX（登録商標）より臨床的に優れていた。加えて、ＲＴ００２は、２０Ｕ及び４０Ｕ用量でより少ない下方向への広がりを顕示した。BOTOX（登録商標）美容製品治療群における１．９％と比較して、２０Ｕ及び４０Ｕ用量の両方は、どの時点でもＲＴ００２のそれらの用量で治療した任意の対象において眼瞼下垂を引き起こさない。ＲＴ００２  ６０Ｕ治療群の対象において、５．７％の眼瞼下垂率が観察された。これらは、典型的にBOTOX（登録商標）治療で見られるものと同様の一過性の性質であった。ＲＴ００２の拡散の低減は、非臨床及び以前の研究と一致し、ボツリヌス毒素Ａ（型）等のボツリヌス毒素と本明細書で記載される１又は２以上の共有結合した正に帯電した効率基を有するポリリジン等の主鎖を含む正に帯電した担体とを含有する、ＲＴ００２等の本発明の組成物で治療した対象において観察される通り、毒素の広がりの低減を支持する。
【０２２５】
投与量及び効果の持続期間：限定されるものではないが、中間分析結果は、高応答者率、効果の持続期間及び正の安全性プロファイルに基づいて、本発明の組成物を含有するボツリヌスによる単回治療のための最適用量として４０Ｕの用量選択を支持する。加えて、ＲＴ００２等の本発明の組成物は、対象への注射による投与後、例えば少なくとも６カ月間の効果の維持された長期持続期間を有する。研究結果の中間分析から決定される通り、ＲＴ００２製品による対象の眉間しわ線の治療は、BOTOX（登録商標）美容製品による対象における眉間しわ線の治療と比較した場合、優れた持続期間の効果を実現した。実際に、カプラン・マイヤー分析法に基づいて、ＲＴ００２  ４０Ｕ用量群におけるＩＧＡについての１点改善の５．９カ月の持続期間中央値（２３．６週間）が、BOTOX（登録商標）美容製品で治療した対象における１８．８週の持続期間に対して実証された（ｐ＝．０２０）。（例えば図４Ａ及び４Ｂを参照のこと）。６カ月で、かなりの人数のＲＴ００２治療対象がまだ応答者であったため、これらの対象が持続期間中間分析から打ち切られたことは特記すべきである。６カ月で、BOTOX（登録商標）美容製品治療群の対象の１２％に対して、ＲＴ００２  ４０Ｕ治療群の対象のほぼ１／３（約３３％）が、単回治療後にまだしわを有しないか、又はほとんどしわを有しなかった（ｐ＝．０４１）。さらに、高用量群を治療後３２週間フォローして、応答持続期間を査定し、治験担当医及び対象の査定の両方に基づく２９．４週間又は７．３カ月間の持続期間中央値を実現した。
【０２２６】
ＲＴ００２等の本発明の組成物並びにその治療方法及び使用により提供される効果の持続期間は、治療を受ける対象が審美的治療について対象にとって重要性が高いと考える利点を提供する。特に、製品、つまり、ＲＴ００２の単回又は１回の注射用量により実現される、そのような効果の長い維持された持続期間は、１人の対象について治療過程当たり、より少ない回数の注射を可能にし、このことは対象の快適さ、便利及び全般的福祉に重要である。有意且つ維持された効果を与える製品は、対象への製品の注射による単回治療用量後少なくとも６カ月の期間維持し、実施者及び患者の両方のための当技術分野における未だ対処されていない要求への解決策を提供する。
【０２２７】
中間結果の要約：結果は、ＲＴ００２製品により代表される本発明の組成物が、ＩＧＡ−ＦＷＳについての１点及び２点改善での効果の持続期間中央値及び応答者率、並びに上に記載されるＩＧＡ−ＦＷＳスコア付けシステムに従うしわなし又は軽度のしわを実現及び維持した患者のパーセンテージにより測定される通り、BOTOX（登録商標）美容製品より優れていると証明されたことを実証する。本研究は、２８日でのＩＧＡ−ＦＷＳについての１点改善の主要効能エンドポイントについて統計的に有意な結果を実現した。２４週目中間分析は、BOTOX（登録商標）美容製品による注射に対して、対象のＲＴ００２の注射用量による単回治療により与えられた結果において臨床的に意味のある差異を実証した。
【０２２８】
また、中間分析により決定される通り、ＲＴ００２は、高い応答者率を伴うおよそ６カ月の効果の持続期間を実現した。ＲＴ００２は、BOTOX（登録商標）美容製品と比較して優れた効果の持続期間を実現し、カプラン・マイヤー分析法に基づいて、BOTOX（登録商標）美容製品についての１８．８週間に対して、４０Ｕ用量群において治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）スケールに基づく眉間しわ線における１点改善の５．９カ月の持続期間中央値（２３．６週間）を実証した（ｐ＝．０２０）。２４週（６カ月）で、４０Ｕ及び６０Ｕの用量のＲＴ００２は、BOTOX（登録商標）美容製品で治療した対象の１９％に対して、それぞれ、３５．９％及び２９．３％の対象で臨床的に意味のあるより高い応答率を送達し続け、１点改善を維持した。ＲＴ００２は、２８日での治験担当医によるスケール（ＩＧＡ−ＦＷＳ）についての少なくとも１点改善及び患者が報告したアウトカムの主要効能エンドポイントを実現した。ＲＴ００２は、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）についての１点改善の２８日主要効能エンドポイントで、全ての用量群において１００％応答率を実現した。ＲＴ００２は、患者による顔面しわスケールについての１点改善の２８日主要効能エンドポイントで、全ての用量治療群において９７％を超える応答率を実現した。効能データは、対象の９６％が、臨床治験担当医による査定によって治療後４週における最大限に顔をしかめたときのしわなし又は軽度のしわ重症度に評定されたこと、及び対象の８３％が同じ時点における最大限に顔をしかめたときのしわなし又は軽度のしわを実現したと自身で査定したことを示した。ＲＴ００２は、認容性が良好であり、重篤な有害事象は発見されなかった。ＲＴ００２  ２０Ｕ又は４０Ｕ用量治療群の対象において、眼瞼下垂は起こらなかった。本研究において、用量応答が観察され；４０Ｕ用量のＲＴ００２を投与した対象は、特に高い応答率を示した。
【０２２９】
全般的に、注射用ＲＴ００２は、全ての用量レベルで認容性が良好であり、任意の全身的若しくは局所的安全性の懸念又は広がりの証拠を伴わなかった。注射用ＲＴＴ１５０は、臨床治験で認容性が良好であり、どの用量でも治療部位を超えた広がりの証拠はなかった。フェーズ１／２用量漸増非盲検臨床治験ＲＴ００２−ＣＬ００１における有害事象は、概して軽度、局所性且つ一過性であった。観察された最も一般的な有害事象は、頭痛及び注射部位反応であった。どのコホートの対象も眼瞼下垂を経験しなかった。重篤な有害事象はなく、有害事象率は、用量増大により頻度、重症度又は種類で変化しなかった。３４人の対象が１３１のＡＥを報告した。報告された最も一般的な有害事象は、頭痛（３１報告；１７人の対象）、注射部位の掻痒（３４事象；８人の対象）、注射部位の痛み（灼熱感）（１４事象；６人の対象）及び眼の障害（１４事象；５人の対象）であった。有害事象に加えて、ＲＴ００２−ＣＬ００１研究における安全性評価は、臨床検査試験（血液学、化学、尿分析及びプロトロンビン時間）、ＲＴＴ１５０毒素及びＲＴＰ００４ペプチドについての血清抗体、脳神経II〜VII及び顔面筋強度の査定、同時治療の薬物治療並びに妊娠の可能性のある女性については尿妊娠検査を含んだ。臨床検査結果及び身体検査に基づいて、どの用量でも治療部位を超えた広がりの証拠及び任意の全身曝露の証拠はなかった。全ての対象は、毒素及びペプチドの両方に対する抗体について陰性であった。
【実施例６】
【０２３０】
眉間しわ線の治療において長期持続期間の効果を示す注射用ボツリヌス毒素製剤についてのフォローアップ研究
ＲＴ００２をまた、カナダにおけるフェーズ２用量範囲実薬及びプラセボ対照臨床治験ＲＴ００２−ＣＬ００２において評価して、成人における中程度〜重度の眉間しわ線の治療のための単回投与の安全性、効能及び持続期間を評価した。治験は、２６８人の対象（治療群当たり５０人を超える）を登録し、これらの対象を２０、４０又は６０ＵのＲＴ００２、２０ＵのBOTOX美容製品又はプラセボで治療した。眉間しわ線の治療のために、提案された臨床治験の投薬レジメンは、対象当たり２０、４０又は６０ユニットの、額の５箇所の注射部位の各々への０．１ｍＬ筋内注射の単回治療であった。現在の塩分強度法に基づく１６、３２、４８又は６４Ｕの用量（以前のゼラチンリン酸緩衝液強度法における２５、５０、７５及び１００Ｕに対応する）は、フェーズ１／２臨床治験において認容性が良好であった（ＲＴ００２−ＣＬ００１研究；用量群当たり１２人の対象；全部で４８人の対象）。
【０２３１】
中間データは、ＲＴ００２が、４週間での全ての３つの用量についてその主要効能測定を実現したことを示した。本研究は、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度スケールについての最大限に顔をしかめたときの眉間しわ線の少なくとも１点改善に基づく６カ月のＲＴ００２効果の持続期間中央値を実証した。対象が報告したアウトカムは、ＲＴ００２の持続期間及び効能の治験担当医による発見と一致した。全てのコホートにわたり、ＲＴ００２は、概して安全且つ認容性が良好であるように見えた。有害事象は、概して軽度、局所性且つ一過性であった。評価した３つの用量のいずれでも、重篤な有害事象又は任意の全身曝露の証拠はなかった。
【実施例７】
【０２３２】
中程度〜重度の眉間しわ線の治療におけるより高い応答者率及び長期持続期間の効果を示す注射用ボツリヌス毒素製剤の効能及び安全性（フェーズ３研究、アーム１及びアーム２）
この実施例は、臨床研究の２つのアーム及び３６週目での結果の主要アウトカム分析を記載して、ボツリヌス毒素Ａと正に帯電した効率基と共有結合されている正に帯電したポリリジンポリペプチドを含む正に帯電した担体とを含有する、ＲＴ００２と呼ばれる本発明の注射用組成物の安全性、効能及び効果の持続期間を評価する。ＲＴ００２製品は、式ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＲＴＰ００４；配列番号４）を有する正に帯電した担体ペプチドと非共有結合的に会合し、且つアクセサリータンパク質又は動物由来成分を含有しない、アクセサリータンパク質を伴わない１５０ｋＤのＡサブ型ボツリヌス毒素分子を含有する、注射用製剤である。ＲＴ００２は、中程度〜重度の眉間しわ線の治療のための研究において使用される。賦形剤は、アクセサリータンパク質を伴わない５０Ｕの１５０ｋＤａ  Ａ型毒素当たり０．１ｍｇポリソルベート２０、３６ｍｇトレハロース二水和物及び１１．７μｇ  ＲＴＰ００４を含む（治療用量は４０Ｕである）。
【０２３３】
成人における中程度〜重度の眉間しわ線の外観における一時的な改善のための、ＲＴ００２注射による単回（１回）投与の安全性、効能及び効果の持続期間を評価するために設計及び実施されたフェーズ３ランダム化二重盲検プラセボ対照中枢多施設研究である臨床研究に、ＲＴ００２による２つの活性治療アームが含まれた。４０Ｕの用量のＲＴ００２を、プラセボ対照と比較して評価した（筋内注射）。注射治療は、眉間複合部内の５箇所の異なる領域である、鼻根筋への１箇所、並びに左右の皺眉筋の中間及び側方局面の１箇所でなされた単回筋内注射であった（各注射部位当たり８Ｕ）。４０Ｕ投与量でのＲＴ００２の単回治療の効果の持続期間も査定した。
【０２３４】
ＲＴ００２製品は、凍結乾燥粉末として製剤化された、ＲＴＴ１５０と呼ばれる、アクセサリータンパク質を伴わない精製１５０ｋＤａボツリヌス神経毒で構成される。非臨床研究において、ＲＴ００２は、ボツリヌス神経毒Ａ（ＢｏＮＴＡ）の他の形態よりも少ない拡散を顕示することが示されており、毒素の近隣の筋肉への遠位の広がりのための副作用がより少なく、標的部位でのより制御された効果を提供し得る。加えて、ＲＴ００２添加物非含有Ａ型ボツリヌス毒素製剤は、製剤中に存在する非活性タンパク質の非存在のために免疫原性の可能性を与える能力がより少ない。加えて、ＲＴ００２は、ラットにおいて最大で５０Ｕ／ｋｇの反復用量筋内投与後に認容性が良好であった。ＲＴＰ００４は、皮膚、遺伝毒性及び生殖研究における効果を伴うことなく最大実行可能用量で投薬され、９５００倍を超える安全性で非経口研究において有意な所見を産生しなかった。
【０２３５】
投薬レジメン及び注射技術：この研究についてのＲＴ００２の投薬レジメンは、ＲＴ００２（４０Ｕ）又はプラセボの、治療を受ける対象の額の眉間の５箇所の注射部位の各々への０．１ｍＬ筋内注射（全部で０．５ｍＬ）としての単回治療であった。全ての治療は、訓練された医師により投与される筋内注射であった。より具体的には、研究対象は、５箇所の注射部位への注射治療：各皺眉筋への２箇所の注射、及び鼻根筋への１箇所の注射当たり０．１ｍＬの単回治療を受容した。治験担当医、施設職員、対象及び治験依頼者は、治療群割り当てについて盲検で行った。登録時に中程度〜重度の眉間しわ線を有する、１８〜７５歳の健康状態の良好なおよそ３００人の成人女性及び男性対象を、２つの研究の各々に登録し、全部で約６００人の対象を登録した。特に、第１のアームに３０３人の患者、第２のアームに３０６人の患者が含まれた。
【０２３６】
持続期間は、最長で３８週間の治験であり、最長で２週間のスクリーニング期間、その後単回治療、及び治療後最長で３６週間のフォローアップ期間を含んだ。全ての患者を治療後少なくとも２４週間フォローした。治療後２４週目に開始して、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）及び患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）査定の両方において、患者の最大限に顔をしかめたときの眉間しわ線のしわ重症度がベースラインに戻るまで、患者をフォローした。
【０２３７】
顔面の眉間しわ線は、顔面の横方向の皺眉筋及び垂直方向の鼻根筋から生ずる。これらは、患者が最大限に顔をしかめているときの筋肉塊の触診により容易に特定することができる。皺眉筋は皮膚を押し下げ、垂直方向のしわ線、すなわち、緊張した筋肉の隆線により囲まれた深いしわ（すなわち、顔をしかめたときのしわ線）を創出する。筋肉の場所、サイズ及び使用は、個体間で顕著に変動するので、注射用ボツリヌス毒素を投与する医師は、関連する領域の関連する解剖学的構造及び以前の外科的手技のための解剖学的構造への任意の変更を理解しなければならない。眼瞼下垂のリスクを低減させるために、以下のステップは最適に行われる：（ｉ）特により大きな眉下制筋を有する患者においては、上眼瞼挙筋又はその近辺への注射は避けるべきである；（ii）皺眉筋中間注射は、骨の眼窩上隆起よりも少なくとも１センチメートル上であるべきである；（iii）注射体積／用量が正確であることを確実にするべきである；及び（iv）毒素は、眉中央上、１センチメートルよりも近くに注射するべきではない。皮膚を通して下にある筋肉に針を進める間、眼窩縁の上内側に指圧を適用することによって、ボツリヌス毒素を注射する。
【０２３８】
サンプルサイズの決定
以前の研究から取った治療効能の見積もりは、注射用ＲＴ００２  ４０Ｕ及びプラセボについてそれぞれ、２００及び１００のサンプルサイズが、主要効能エンドポイント：０．０５のアルファレベルでの両側カイ二乗検定に基づく４週目での２点混成応答者の割合について治療群間の差（１％に対して少なくとも５０％の応答率）を検出する９９％を超える能力を有することを示した。後の来院についての重要な副次的エンドポイントの応答率について治療群間の差を検出する十分な能力を確実にするために、３００人の患者のサンプルサイズを選択した。
【０２３９】
眉間しわ線重症度の査定
研究のために、対象の眉間しわ線の重症度を、治験担当医及び対象が査定した。治験担当医の査定のために、治験担当医による全般的査定尺度−顔面しわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）評点スコア法を以下の通り使用した：（０）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、顔面しわ重症度なし（「なし」）を示し、「しわなし」と説明され；（１）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、軽度の顔面しわ重症度（「軽度」）を示し、「非常に浅いしわ」と説明され；（２）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、中程度の顔面しわ重症度（「中程度」）を示し、「中程度のしわ」と説明され；（３）のＩＧＡ−ＦＷＳ評点スコアは、重度の顔面しわ重症度（「重度」）を示し、「深い溝のしわ」と説明された。査定は、最大限に顔をしかめたとき及びその後の安静時に行う。熟練した実施者により理解される通り、写真ガイドは、参照のために使用されるしわ重症度の等級を顕示する。
【０２４０】
患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）査定：対象の顔面しわ重症度の対象による査定のために、患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）を使用した。対象は、スクリーニング来院、治療来院（０日目）治療前、フォローアップ来院（２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２週目）及び研究終了来院（適宜、２４、２８、３２又は３６週目）又は適用可能な場合早期中断来院時に、眉間しわ線の重症度を査定するために最大限に顔をしかめたときの患者による顔面しわ重症度（ＰＦＷＳ）を記入した。査定フォームは、提供された手鏡を使用して眉間しわ線を再観察しながら記入するために対象に直接提供された。ＰＦＷＳ評点スコア法は、以下の通りであった：（０）のＰＦＷＳ評点スコアは、しわ重症度なしを示し、「しわなし」の関連説明を伴い；（１）のＰＦＷＳ評点スコアは、軽度のしわ重症度を示し、「非常に浅いしわ」の関連説明を伴い；（２）のＰＦＷＳ評点スコアは、中程度のしわ重症度を示し、「中程度のしわ」の関連説明を伴い；（３）のＰＦＷＳ評点スコアは、「重度のしわ」重症度を示し、「深いしわ」の関連説明を伴った。研究に従って、対象が登録されるためには、対象の眉間しわ線についての（２）中程度又は（３）重度のＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ評点が必要とされた。
【０２４１】
対象を、ＲＴ００２又はプラセボ治療群のいずれかに、それぞれ、２：１の比でランダム化した。研究に登録された対象は、研究全体を通して治療後少なくとも２４週間及び最長で３６週間、スクリーニング及び治療来院並びにフォローアップ安全性及び効能評価を有した。０週目に単回投与を与える。患者は１、２、４週目（主要エンドポイント）及びその後４週毎のフォローアップ来院のために来院し、２４週目で最後の強制的来院を開始し、最終来院である３６週目まで４週毎に続ける。
【０２４２】
患者は、治療後最初の２週間の期間、日誌で、本明細書で記載される４点重症度スケールを使用して、最大限に顔をしかめたときのしわ線の外観の患者自身による査定を取った。治療効果の出現は、治療後最初の２週間以内の経時的な眉間しわ線の重症度を評価する患者の日誌に基づいて決定した。治療効果の出現は、患者による評点スコアがベースラインから１点又はそれよりも大きく下落した時間として定義した。これは、副次的エンドポイント査定に含まれた。
【０２４３】
効能及び安全性査定
主要効能査定は、治験担当医による眉間しわ線重症度及び眉間しわ線改善の査定、並びに患者による眉間しわ線重症度及び改善の査定を含んだ。
【０２４４】
顔をしかめたときのしわ重症度  −  患者及び治験担当医による全般的査定
患者（患者による顔をしかめたときのしわ重症度［ＰＦＷＳ］）及び治験担当医（治験担当医による全般的査定尺度−顔をしかめたときのしわ重症度［ＩＧＡ−ＦＷＳ］）の両方によって、表７に示される４点評点スケールを使用して、顔をしかめたときのしわ重症度を査定した。患者及び治験担当医の両方によって、最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時に、重症度を査定する。スコアは、０＝なし〜３＝重度に及ぶ。
【０２４５】
【表７】
2021505570.tif 000011
【０２４６】
主要効能エンドポイント
主要効能エンドポイントは、４週目で得られた最大限に顔をしかめたときのスコアに由来し、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳスケールの両方について同時に、０又は１のスコア（なし又は軽度）及びベースラインからの少なくとも２点改善を実現することと定義した。この応答を「２点混成応答」と略した。
【０２４７】
副次的効能エンドポイント
最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ査定に由来する副次的エンドポイントを、以下に記載する。４週目で２点混成応答を満たした患者において査定されたエンドポイントについて、観察症例の最大限に顔をしかめたときのデータは、この査定を行うために使用するべきである。
【０２４８】
（１）１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目でＩＧＡ−ＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合。
【０２４９】
（２）１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目でＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合。
【０２５０】
（３）１、２、４＊、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目で２点混成応答を実現する患者の割合。（＊これが主要エンドポイントである）。
【０２５１】
（４）１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目でＰＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合。
【０２５２】
（５）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について２点又はそれよりも大きい応答の喪失までの時間。
【０２５３】
（６）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳのいずれかについて２点又はそれよりも大きい応答の喪失までの時間。
【０２５４】
（７）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間。
【０２５５】
（８）ＲＴ００２群の全ての患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間。
【０２５６】
（９）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について中程度又は重度に戻るまでの時間。
【０２５７】
（１０）ＲＴ００２群の全ての患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について中程度又は重度に戻るまでの時間。
【０２５８】
（１１）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳについて中程度又は重度に戻るまでの時間。
【０２５９】
（１２）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳについて中程度又は重度に戻るまでの時間。
【０２６０】
探索的効能エンドポイント
最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ査定に由来する探索的エンドポイントは、以下のものである。
【０２６１】
（１）１週目〜３６週目の各来院においてＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について同時に少なくとも１点改善（今後「１点混成応答」と略される）を実現する患者の割合。
【０２６２】
（２）１〜３６週目の各来院においてＩＧＡ−ＦＷＳについて少なくとも１点改善を実現する患者の割合。
【０２６３】
（３）１〜３６週目の各来院においてＰＦＷＳについて少なくとも１点改善を実現する患者の割合。
【０２６４】
（４）４週目に２点混成応答を実現する患者のサブセットにおける、１〜３６週目の各来院において２点混成応答を実現する患者の割合。
【０２６５】
（５）４週目に２点混成応答を実現する患者のサブセットにおける、１週目〜３６週目の各来院において１点混成応答を実現する患者の割合。
【０２６６】
（６）４週目に２点混成応答を実現する患者のサブセットにおける、１〜３６週目の各来院においてＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合。
【０２６７】
（７）１〜３６週目の各来院においてＩＧＡ−ＦＷＳについて少なくとも２点改善を実現する患者の割合。
【０２６８】
（８）１〜３６週目の各来院においてＰＦＷＳについて少なくとも２点改善を実現する患者の割合。
【０２６９】
追加の査定
患者日誌：患者は、治療後最初の２週間の期間、日誌で、顔をしかめたときのしわ重症度について上に記載される４点重症度スケールを使用して、最大限に顔をしかめたときのしわ線の外観の患者自身による査定を取った。治療効果の出現は、治療後最初の２週間以内の経時的な眉間しわ線の重症度を評価する患者の日誌に基づいて決定した。治療効果の出現は、患者による評点スコアがベースラインから１点又はそれよりも大きく下落した時間として定義した。これは、副次的エンドポイント査定に含まれた。
【０２７０】
治療アンケートによる患者の全般的満足度：４週目において７点スケールを使用して、患者が治療結果についてどの程度満足又は不満であるかを患者に尋ねた。この治療アンケートは、表８に従って、顔面の治療領域がどのように見えるかに基づいた。評点スコアを、副次的エンドポイントとして使用した。
【０２７１】
【表８】
2021505570.tif 000012
【０２７２】
全般的審美的改善スケール：表９に示される以下の７点重症度全般的審美的改善スケールを使用して、治験担当医及び患者は、ベースライン状態からの眉間しわ線改善の視覚的外観（最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時）を査定した。
【０２７３】
【表９】
2021505570.tif 000013
【０２７４】
この査定に由来する探索的効能エンドポイントは、以下のものである。
【０２７５】
（１）１週目〜３６週目の各来院においてＧＡＩＳについて１以上のスコアを実現する患者の割合（別々に要約される、最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の治験担当医による査定、及び最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の患者の自己査定による）。
【０２７６】
（２）１週目〜３６週目の各来院においてＧＡＩＳについて２以上のスコア（すなわち、かなり改善又は非常に改善）を実現する患者の割合（別々に要約される、最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の治験担当医による査定、及び最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の患者の自己査定による）。
【０２７７】
（３）１週目〜３６週目の各来院においてＧＡＩＳについて３以上のスコア（非常に改善）を実現する患者の割合（別々に要約される、最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の治験担当医による査定、及び最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の患者の自己査定による）。
【０２７８】
（４）１週目〜３６週目の経時的なＧＡＩＳスコア（別々に要約される、最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の治験担当医による査定、及び最大限に顔をしかめたとき、最大限に顔をしかめた後の安静時の患者の自己査定による）。
【０２７９】
顔をしかめたときのしわ線影響スケール：顔をしかめたときのしわ線影響スケール（ＦＬＩＳ，Frown Line Impact Scale）を使用して、自身の顔をしかめたときのしわ線の治療結果についての感情を評定するように患者に頼んだ。ＦＬＩＳは５つの質問からなり、各々は０〜１０に及ぶ１１点スケールを有する。０〜５０に及ぶ合計スコアは、５つの質問のスコアの合計である。探索的エンドポイントは、合計スコア及び個々の質問についてのスコアであった。
【０２８０】
顔面年齢自己評価：患者は、顔面年齢自己評価（ＦＡＳＥ，Facial Age Self Evaluation）アンケートについて自身の知覚される年齢を評定し、治療後、自身が何歳に見えると自身が思うかの自身の知覚（実年齢よりも老けている、実年齢よりも若い、実年齢）を評定した。これらの応答を探索的エンドポイントとして使用した。
【０２８１】
写真：写真撮影に同意した患者については、最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時の患者の正面像を含む、治療領域の標準化デジタル写真を撮った。顔をしかめたときのしわ重症度表（上記）のＩＧＡ−ＦＷＳを利用し、独立パネル審査（ＩＰＲ，Independent Panel Review）により、写真を眉間しわ線の重症度についてスコア付けした。加えて、４週目におけるＩＧＡ−ＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）及びベースラインからの少なくとも２点改善を実現すると定義される、２点応答を決定した。
【０２８２】
安全性査定
有害事象：全ての有害事象（ＡＥ）を記録し、ＭｅｄＤＲＡ用語集に基づいて分類した。ＡＥ重症度を、軽度、中程度又は重度として等級付けした。研究治療の日時又はその後の出現を有するＡＥは、治療創発的であった。
【０２８３】
ＡＥに由来する安全性エンドポイントは、以下のものであった。
【０２８４】
（１）治療後最初の４週間及び研究持続期間全体の間の、治療創発的有害事象の頻度、重症度及び治験薬との関係。
【０２８５】
（２）治療後最初の４週間及び研究持続期間全体の間の、治療創発的重篤有害事象の頻度、重症度及び治験薬との関係。
【０２８６】
毒素の遠位の広がりについての質問（特定のＡＥ及び神経筋脱力症状についての質問）：毒素の遠位の広がりについての質問を、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に行った。毒素の遠位の広がりを可能性として示唆する有害事象のリストについて一般的な様式で、患者に質問を行った。
【０２８７】
臨床検査データ：スクリーニング時、４週目及び最終評価来院時に、血液学、化学、凝固（プロトロンビン時間）及び尿分析のための非絶食時試料を収集した。スクリーニング並びに２、４及び１２週目来院時に、抗体のための血液試料を収集した。
【０２８８】
【表１０】
2021505570.tif 000014
【０２８９】
抗体検査：ＲＴ００２及びＲＴＰ００４についての抗体検査を、スクリーニングアッセイを使用して定性的に行い、陽性の場合、確認アッセイにより試験した。確認アッセイは、定性的査定（陽性／陰性）及び陽性の場合、定量的濃度の両方をもたらした。確認アッセイにより陽性を試験する試料は、中和抗体についても試験される。
【０２９０】
バイタルサイン：スクリーニング及び治療来院（治療前後）、２週目、最終評価又は早期中断来院時、並びにボツリヌス毒性の徴候又は症状が報告された任意の来院時に、バイタルサイン（すなわち、体温、呼吸速度、座位橈骨動脈拍並びに座位収縮期血圧及び拡張期血圧）を得た。
【０２９１】
身体検査：スクリーニング、２週目及び最終評価又は早期中断来院時に、バイタルサインに加えて、顔面の神経学的検査、全体的外観、皮膚、首（甲状腺を含む）、眼、耳、鼻、喉、心臓、肺、腹部、リンパ節及び四肢を含む身体検査を行った。被験薬投与前に存在している有意な身体検査所見は、病歴のページに含まれるべきである。有害事象の定義を満たす有意な身体検査所見を記録した。
【０２９２】
１２誘導ＥＣＧ：スクリーニング時及び４週目に、単回標準仰臥位１２誘導ＥＣＧを得た。
【０２９３】
注射部位評価：スクリーニング来院、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、注射部位を評価した。査定は、表１１で示される通り、５箇所の注射部位の全般的評価として行われる。
【０２９４】
【表１１】
2021505570.tif 000015
【０２９５】
脳神経II〜VIIの査定：スクリーニング、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、治験担当医が、脳神経II〜VII（左右の側を別々に）の評価を行った。各脳神経のスコアを、表１２で概略される通りに取った。
【０２９６】
【表１２】
2021505570.tif 000016
【０２９７】
ハウス・ブラックマン顔面神経部位別評価システム：スクリーニング、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、治験担当医が、顔面神経（VII）の機能性を評価した。表１３を参照されたい。
【０２９８】
【表１３】
2021505570.tif 000017
【０２９９】
顔面筋強度の評価：英国医学研究審議会筋力評価（ＭＲＣ）スケールを使用して、顔面筋強度を評価した。顔面の各側の以下の筋肉：眼輪筋（眼瞼）、側方眉上引筋、頬骨筋を評価した。表１４を参照されたい。治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、治験担当医が、顔面筋強度を評価した。
【０３００】
【表１４】
2021505570.tif 000018
【０３０１】
統計解析：全ての統計プログラミングは、統計解析システム（ＳＡＳ）バージョン９．３又はそれ以降のバージョンを使用して行った。
【０３０２】
効能エンドポイントのほとんどを、層別化因子として治験センターで解析した。治験は、各治験センター／施設において各治療群に最少で５人のＩＴＴ患者が登録されるような様式で行うことが意図された。単一の施設において治療アームの患者が少なすぎる事象においては、この施設を別の施設と組み合わせて、１アーム当たりの所望の最少サンプルサイズを実現した。小センター（治療群に５人未満のＩＴＴ患者）を最大のものから最小のものまでプールし、プールしたセンターが、各治療群に５人以上のＩＴＴ患者を有するようにした（William et al, 2006, "Effects of a New Hormone Therapy, Drospirenone and 17-β- Estradiol, in Postmenopausal Women With Hypertension", Hypertension, 48:246-253）。任意のセンターをプールする必要があった場合、治験センターにより行われる任意の解析は、代わりに、プールされたセンターが行った。
【０３０３】
解析集団
治療意図集団：ランダム化され、且つ治療を受容した全ての患者は、治療意図（ＩＴＴ）集団に含まれる。要約は、ランダム化される治療によった。
【０３０４】
パープロトコール集団：パープロトコール（ＰＰ）集団は、プロトコールからの主要な逸脱のない研究の最初の４週間を完了するＩＴＴ集団からの患者を含んだ。ＰＰ集団からの除外についての決定は、不正確な用量／治療を受容した患者を除いて、研究を非盲検化する前に行った。以下の理由のいずれかについてＰＰ集団から患者を除外した：患者が選択／除外基準から逸脱する；患者が不正確な用量を受容する；患者が不正確な治療を受容する；４週目前に患者が禁止薬物治療を使用する；患者が４週目に来院しない；患者の４週目の来院がウィンドウから±３日を超えてずれる；患者が４週目のＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳ評価のいずれかを欠く。
【０３０５】
安全性集団：ランダム化され、治療を受容し、且つ少なくとも１回の治療後安全性評価を提供した全ての患者は、安全性集団に含まれた。要約は、実際に受容される治療によった。
【０３０６】
ｎ、平均、ＳＤ、中央値、最短及び最長持続期間（週）、並びに以下の持続期間カテゴリー：４週間未満、４〜１２週間未満、１２〜２４週間未満及び２４〜３６週間の患者の人数及びパーセンテージを含む、研究への患者の参加持続期間の要約を産生した。
【０３０７】
個体群統計学的特徴及びベースライン特徴：個体群統計学的特徴及びベースライン特徴を、治療群及び全体により要約するために、記述統計量を使用した。非欠測観察数、平均、標準偏差、中央値、最小値及び最大値を使用して、連続変数を要約した。分類別データを、各カテゴリー内の患者の人数及びパーセンテージを使用して要約した。
【０３０８】
個体群統計学データは、年齢、性別、人種及び民族性を含む。治療群及び全体により要約するために、年齢を、１８〜４５歳、４６〜５５歳及び５６〜７５歳のカテゴリー別にした。ベースライン特徴は、以前のＡ型ボツリヌス毒素、以前の最後のＡ型ボツリヌス毒素注射以来の時間、及びフィッツパトリックのスキンタイプ、並びに効能アンケート、ＰＦＷＳ、ＩＧＡ−ＦＷＳ、ＦＬＩＳ及びＦＡＳＥのベースライン査定を含む。ランダム化治療によりＩＴＴ及びＰＰ集団について、並びに受容した実際の治療により安全性集団について要約を産生した。
【０３０９】
効能分析：治療群による全ての時点での全ての効能変数について記述統計量を提供した。
【０３１０】
別に特定しない限り、欠測効能データの主な取り扱い方法は、ＲＴ００２群についての患者レベル最低値アウトカム補完（ＲＴ００２群）及びプラセボ群についての患者レベル最高値アウトカム補完に基づいた（最低値／最高値アウトカム補完）。研究設計に従って、全ての患者は最短で２４週間の間フォローされる予定であった。この理由のために、２４週目までの来院のみ、補完を行った。混成であるエンドポイント及び／又は研究査定由来のエンドポイントについて、元の査定を第１に、欠測データの補完を行った。
【０３１１】
追加の感度分析として、モデルベース多重補完手法も使用した。４週目の後に禁止薬物治療の使用のために選択／除外基準を逸脱した患者は、これらの患者が研究患者の最大で１０％又はそれよりも多くなった場合、上記感度分析に含まれた場合がある。
【０３１２】
第１種過誤制御法を使用して、副次的エンドポイント間の多重度調節を査定した。第１種過誤制御法における規則を検定する仮説をガイドするために、非調節ｐ値を提供した。
【０３１３】
主要効能分析：最低値／最高値アウトカム補完を伴うＩＴＴ集団を使用して、０．０５の第１種過誤率で両側検定を使用して治験センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル（ＣＭＨ）検定を使用して、４週目で２点混成応答を有した患者の割合を、ＲＴ００２とプラセボとの間で比較した。感度分析として、ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完の代わりに、多重補完を使用して、主要分析を反復した。追加の感度分析として、ＰＰ集団においてのみ観察症例を使用して、ＣＭＨ検定を行った。ブレスロー・デイ検定を算出して、オッズ比の均質性について検定した。
【０３１４】
両側ＣＭＨ検定に基づくＰ値を提供した。一般的リスク差のマンテル・ヘンツェル見積もりにより、差の点見積もりを計算した。一貫性をチェックするために、一般的リスク差の要約スコア見積もりも計算し、マンテル・ヘンツェル見積もりと比較したが、表では報告しなかった。Yan及びSu（２０１０年）の方法を使用して、一般的リスク差についての層別化ニューカム（Newcombe）信頼限界により、両側９５％ＣＩを計算した。一般的な（全体の）列割合について層別化ウィルソン信頼限界から層別化ニューカム信頼限界を構築した。第１に、各２×２の表における列割合について、個々のウィルソン信頼限界を算出した（階層）。これらのウィルソン信頼限界の階層を、その後混合して、マンテル・ヘンツェルの重みを使用することによって、全体の列割合についての層別化ウィルソン信頼限界を形成した。
【０３１５】
副次的効能分析：多数の副次的エンドポイントがある。多数の副次的エンドポイントを、それらに適用される統計解析法に基づいてグループ分けした。４つの異なる副次的エンドポイントの群、群Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤがあり、各群について異なる統計検定を有した。群Ａ及びＢについて最低値／最高値アウトカム補完を伴うＩＴＴ集団を使用して、副次的エンドポイントの補完を行った。ＩＴＴ集団において群Ａ及びＢのエンドポイントについて多重補完も行った。群Ａ、Ｂ及びＣについて、行った分析は、全ての患者、及びベースライン重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ査定につき中程度又は重度）による患者についてであり、これらのアウトカム測定値に対するベースラインにおける患者のしわ重症度の治療効果の大きさを査定した。
【０３１６】
群Ａ：様々な応答定義を使用する応答を有する患者の割合の形態であった以下の副次的効能エンドポイントについて、経時的な重症度の低減を評価した。選択来院における各エンドポイントについて、治験センターにより層別化されたＣＭＨ検定を使用して、治療群間で応答を有する患者の割合を比較した。主要エンドポイントと同じ方法を使用して、ｐ値、点見積もり及び９５％ＣＩを算出した。
【０３１７】
（１）（ａ）ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完；（ｂ）ＩＴＴ集団における多重補完；（ｃ）ＰＰ集団における観察症例を使用して、選択来院（２、４、８、１２、１６、２０及び２４週目）までに最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現した患者の割合。
【０３１８】
（２）（ａ）ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完；（ｂ）ＩＴＴ集団における多重補完；（ｃ）ＰＰ集団における観察症例を使用して、選択来院（２、４、８、１２、１６、２０及び２４週目）までに最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現した患者の割合。
【０３１９】
群Ｂ：この群の副次的エンドポイントについて、９０％ワルドＣＩを伴う応答者の割合及び割合の差を、治療群及び来院により要約した。２つの群Ａのエンドポイントは、全ての週を含むため、及びこれらのエンドポイントについて９０％ワルドＣＩを提供するために、群Ｂに含まれた。
【０３２０】
（１）（ａ）ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完；（ｂ）ＩＴＴ集団における多重補完；（ｃ）ＰＰ集団における観察症例；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度によるＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完を使用して、各来院（１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目）における２点混成応答を実現する患者の割合。
【０３２１】
（２）（ａ）ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完；（ｂ）ＩＴＴ集団における多重補完；（ｃ）ＰＰ集団における観察症例；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度によるＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完を使用して、各来院（１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目）におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現した患者の割合。
【０３２２】
（３）（ａ）ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完；（ｂ）ＩＴＴ集団における多重補完；（ｃ）ＰＰ集団における観察症例；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度によるＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完を使用して、各来院（１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目）におけるＩＧＡ−ＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現した患者の割合。
【０３２３】
（４）（ａ）ＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完；（ｂ）ＩＴＴ集団における多重補完；（ｃ）ＰＰ集団における観察症例；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度によるＩＴＴ集団における最低値／最高値アウトカム補完を使用して、各来院（１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目）におけるＰＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合。
【０３２４】
群Ｃ：以下の時間事象エンドポイントについて、ＲＴ００２群のカプラン・マイヤー残存曲線をプロットした。持続期間中央値の点見積もり、及びログ−ログ変換を使用する両側９５％ＣＩを生成した。生存率の見積もり、及び８、１２、１６、２０及び２４週目での率のログ−ログ変換を使用する両側９５％ＣＩも提供した。２及び４週目の率は、ＲＴ００２群の全ての患者を含む分析に含まれた。観察症例を使用してＩＴＴ集団について、全ての分析を行った。
【０３２５】
（１）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についての２点又はそれよりも大きい応答の喪失までの時間。
【０３２６】
（ａ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｂ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときの患者について。
【０３２７】
（２）（ａ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｂ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときの患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳのいずれかについての２点又はそれよりも大きい応答の喪失までの時間。
【０３２８】
（３）（ａ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｂ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｃ）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間。
【０３２９】
（４）（ａ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｂ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｃ）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について中程度又は重度に戻るまでの時間。
【０３３０】
（５）（ａ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｂ）４週目で２点混成応答を満たし、且つＲＴ００２群に含まれる、ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときの患者について；（ｃ）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について；（ｄ）ベースラインＩＧＡ−ＦＷＳ重症度による最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳについて中程度又は重度に戻るまでの時間。
【０３３１】
群Ｄ：群Ｄのエンドポイントを、以下の通り記述的に要約した。
【０３３２】
（１）治療アンケートによる患者全般的満足度を、各応答を有する患者の人数及びパーセンテージを使用して要約した。漸近ワルド信頼区間を使用する両側９０％ＣＩを提示する。
【０３３３】
（２）患者日誌からの治療効果の出現を、効果の出現を有する患者及び効果の出現を有しない患者の人数及びパーセンテージを使用して要約した。加えて、治療効果の出現を有する患者について、出現時間の記述統計量（中央値、最小値、最大値、２５％四分位及び７５％四分位）を提示した。治療効果の出現を研究の最初の１４日間に限定した。
【０３３４】
探索的効能分析：全ての探索的効能エンドポイントを、治療群により、及び来院により記述的に要約する。主要及び副次的効能エンドポイントについて特定した方法と同様の方法を使用して、一部の探索的エンドポイントについて治療群比較を行う。探索的エンドポイントの分析を、観察データのみについて、ＩＴＴ集団に対して行う。
【０３３５】
各来院におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ査定に由来する各探索的エンドポイントについて、治験センターにより層別化されたＣＭＨ検定を使用して、応答を有する患者の割合を治療群間で比較する。主要エンドポイントと同じ方法を使用して、ｐ値、点見積もり及び９５％ＣＩを算出する。
【０３３６】
ベースラインからの少なくとも１点改善の喪失までの時間のカプラン・マイヤー生存曲線を、上記の通りプロットする（群Ｃを参照のこと）。持続期間中央値の点見積もり及びログ−ログ変換を使用する両側９５％ＣＩを生成する。この分析は以下のことについて行われる。
【０３３７】
（１）（ａ）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について；（ｂ）ＩＧＡ−ＦＷＳにおけるベースラインからの少なくとも１点改善を実現し、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳにおけるベースラインからの少なくとも１点改善の喪失までの時間。
【０３３８】
（２）（ａ）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について；（ｂ）ＰＦＷＳにおけるベースラインからの少なくとも１点改善を実現し、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について、ＰＦＷＳにおけるベースラインからの少なくとも１点改善の喪失までの時間。
【０３３９】
（３）（ａ）最大限に顔をしかめたときのＲＴ００２群の全ての患者について；（ｂ）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方におけるベースラインからの少なくとも１点改善を実現し、且つＲＴ００２群に含まれる、最大限に顔をしかめたときの患者について、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方におけるベースラインからの少なくとも１点改善の喪失までの時間。
【０３４０】
ＧＡＩＳ査定に由来するエンドポイントについて、１以上、２以上及び３以上のスコアを実現する患者の人数及びパーセンテージを、治療群及び来院により要約する。ＧＡＩＳスコアについて、各スケールレベルにおける患者の人数及びパーセンテージを、治療群及び来院により要約する。治験担当医及び対象による査定を、最大限に顔をしかめたときに行われた査定及び最大限に顔をしかめた後の安静時に行われた査定の両方について別々に要約する。
【０３４１】
ＦＬＩＳ合計スコア及び個々の質問のスコアを、ｎ、平均（ＳＤ）、ＳＥＭ、中央値、最小値及び最大値について、治療群及び来院により記述的に要約する。
【０３４２】
ＦＡＳＥアンケート「今あなたは何歳に見えると思いますか？」について、年配に見える人数及び若年に見える人数の質問を、ｎ、平均（ＳＤ）、ＳＥＭ、中央値、最小値及び最大値について要約する。「今あなたは実年齢よりも老けて見えると思いますか、若く見えると思いますか？」という質問について、各カテゴリー内の患者の人数及びパーセンテージを、治療群及び来院により要約する。
【０３４３】
独立パネル審査（ＩＰＲ）により査定された写真のＩＧＡ−ＦＷＳ評価を、治療群及び来院により、最大限に顔をしかめたときの各重症度レベルにおける患者の人数及びパーセンテージによって要約する。加えて、４週目においてＩＧＡ−ＦＷＳについて２点応答を有する患者の人数及びパーセンテージを、各治療群について提供し、治療群間の差を、差についての両側９０％ワルドＣＩと共に提示する。
【０３４４】
部分群の検査：
ＩＧＡ−ＦＷＳ及び／又はＰＦＷＳ査定を伴う主要エンドポイント及び重要副次的エンドポイントについての部分群分析を、Ａ型ボツリヌス毒素による以前の治療（あり／なし）、性別及び年齢群（２つの年齢群部分群：１８〜４５歳、４６〜５５歳、５６〜７５歳及び１８〜６５歳、６５歳以上を使用する）により分類した部分群により行う。特に、以下のエンドポイントを、部分群により検査する。
【０３４５】
（１）２点混成応答を実現する患者の割合；（２）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合；（３）ＩＧＡ−ＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合；（４）ＰＦＷＳについて０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合；（５）治療アンケートによる患者の全般的満足度に対する応答；（６）患者日誌に由来する治療効果の出現。
【０３４６】
部分群分析は、全コホート分析よりも本質的に低い統計力を有するので、個々の治療群についての記述統計量のみを提示する。群Ａ及びＢにおける主要エンドポイント及び副次的エンドポイントについての部分群分析を、最低値／最高値アウトカム補完を伴うＩＴＴ集団に対して行う。ＩＴＴ集団についての観察データを使用する、群Ｃ及びＤ副次的エンドポイントについての部分群分析も要約する。
【０３４７】
安全性分析
安全性集団に対して、安全性要約及び分析を行った。安全性データを要約するために、記述統計量を提示した。
【０３４８】
曝露の程度：全ての患者は、被験薬の１回投与を受容した。注射された被験薬の体積の合計、及び５箇所の注射部位の各々において注射された被験薬の体積を、記述統計量（非欠測観察数、平均、中央値、最小値、最大値及び標準偏差）を使用して、治療群により要約した。
【０３４９】
注射部位評価：注射部位評価を、治療群及び来院により各項目（紅斑、浮腫、灼熱感又は刺すような痛みの感覚、かゆみ及び紫斑）の存在を報告する患者の人数及びパーセンテージ、並びに任意の治療後来院において反応を有する患者の人数及びパーセンテージを使用して要約した。加えて、任意の注射部位項目を報告する患者の人数及びパーセンテージを、治療群により、及び来院により、並びに任意の治療後来院において要約した。加えて、特定の項目を有する患者の人数及びパーセンテージを、反応があった最初の来院に従って要約した。
【０３５０】
有害事象：全ての治療創発的ＡＥ（ＴＥＡＥ，treatment-emergent AE）を列挙し、治療群、体系器官分類、優先使用語、重症度、関係及び重篤さにより要約した。重篤な有害事象（ＳＡＥ，serious adverse event）を、治療群、重症度及び研究治療に対する関係により要約し、患者毎に別々に列挙した。
【０３５１】
神経評価：左右各側の、光及び視力調節のための瞳孔反応機能、外眼運動、運動神経及び全般的感覚についての脳神経II〜VII検査を、治療群及び来院により表にした。
【０３５２】
標的及び隣接筋系（額、眼、顔面中央及び口）を神経支配する顔面神経（VII）の４つの主要な分岐の左右の側、及び共同運動の重症度について、ハウス・ブラックマン顔面神経部位別評価システム（Yen, 2003）で表にした。これらの表作成は、治療群及び来院によるものであった。
【０３５３】
眼輪筋、側方眉上引筋及び側方頬骨輪筋の左右各側の顔面筋強度を、治療群及び来院により表にした。
【０３５４】
研究実施又は分析計画の変更：分析計画の変更は、プラセボ群の欠測データの取り扱い方法、副次的エンドポイントの選択及び優先順位付け、並びに研究全体の第１種過誤を制御する試験手順を含む。特に、エンドポイントについての以下の変更を行った。
【０３５５】
（１）査定の週に基づいて副次的か探索的かで分けたＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ応答者分析は、ここで全て副次的エンドポイントにする。
【０３５６】
（２）患者日誌に基づく治療効果の出現及び治療についての患者の全般的満足度は、探索的エンドポイントから副次的エンドポイントに移動した。
【０３５７】
（３）ＧＡＩＳエンドポイントは、副次的と考えられる一部のものではなく、全て探索的エンドポイントである。
【０３５８】
（４）ＩＧＡ−ＦＷＳ及び／又はＰＦＷＳに基づく追加の探索的エンドポイントには、（ａ）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について同時に０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合；（ｂ）ＩＧＡ−ＦＷＳについて、及びＰＦＷＳについて別々に少なくとも１点改善を実現する患者の割合；（ｃ）ＩＧＡ−ＦＷＳについて、及びＰＦＷＳについて別々に少なくとも２点改善を実現する患者の割合；（ｄ）４週目において２点混成応答を実現する患者のサブセットにおける、１又は２点混成応答を実現する患者の割合；（ｅ）４週目において２点混成応答を実現する患者のサブセットにおける、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について０又は１のスコア（なし又は軽度）を実現する患者の割合が含まれた。
【０３５９】
（５）ＩＧＡ−ＦＷＳ及び／又はＰＦＷＳに基づく、２つの追加の時間事象エンドポイントには、（ａ）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についての２点又はそれよりも大きい応答の喪失までの時間；（ｂ）ＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳのいずれかについての２点又はそれよりも大きい応答の喪失までの時間；（ｃ）ＩＧＡ−ＦＷＳについて中程度又は重度に戻るまでの時間が含まれた。
【０３６０】
（６）「経時的な、最大限に顔をしかめた後の安静時のＧＡＩＳ査定による眉間しわ線改善」の探索的エンドポイントは、経時的なスコア平均に加えて、経時的な１以上、２以上及び３以上のスコアを有する患者の割合により査定されるので、このエンドポイントは除去する。
【０３６１】
戻るまでの時間についての査定も行った。（１）治療開始日から、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が、両方のベースラインからの改善が観察される１、２及び４週目の後に、ベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化する最初の来院までの日数（そのような来院が存在しない場合、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が利用可能な最後の来院で、打ち切りが起こる）（１、２及び４週目でＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方におけるベースラインからの改善がない場合、時間は０に設定される）；並びに（２）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインからの最初の改善から、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するその後の早い方までの日数（その後のベースラインへの戻り又はベースラインからの悪化が観察されない場合、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が利用可能な最後の来院で、打ち切りが起こる）（４週目又はその後の任意の来院においてＩＦＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインから改善しない患者について、時間は０に設定される）を含むいくつかの測定値を使用して、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間を査定する。
【０３６２】
研究結果：３６週目における眉間しわ線についての２つの研究アームのフェーズ３見出し結果
対象配置：表１５は、研究の両方のアームにおけるＩＴＴ集団、安全性集団及びパープロトコール集団の配置を記載する。
【０３６３】
【表１５】
2021505570.tif 000019
【０３６４】
表１５が示す通り、高い割合（８９．２〜９７．５％）の対象が、２４週目の来院を完了し、同様に高い割合（９０．５〜９３．６％）の対象が、研究を完了した。研究の両方のアームの６０９人の対象のうちのほとんど全て（９５．１〜９９．５％）が、４週目（主要エンドポイント）来院を完了した。低い早期中断頻度（６．４〜９．５％）により、２つの研究は十分に実行された。パープロトコール集団から除外された対象の割合は、比較的低く、８．８〜２２．５％に及ぶことは特記すべきである。
【０３６５】
集団の分析：表１６は、様々な集団の分析を示す。
【０３６６】
【表１６】
2021505570.tif 000020
【０３６７】
個体群統計：表１７は、研究集団の個体群統計を示す。プラセボ及び活性薬コホートの両方は、女性対象の割合（８６．３〜８９．７％）及び５０歳の平均年齢（４９．０〜５０．９）について十分にバランスが取れていた。
【０３６８】
【表１７】
2021505570.tif 000021
【０３６９】
ベースライン特徴：表１８は、以前のボツリヌス毒素使用のパーセント及び他の特徴を示す。アーム１では、以前のボツリヌス毒素使用の割合は、アーム２（５８．８〜５９．３％）と比較してより低かった（４４．１〜４５．８％）。最後のボツリヌス毒素使用以来の月数（２２．６〜３２．２）、最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳ、及び最大限に顔をしかめたときのＰＦＷＳについてのベースライン値は、アーム１及びアーム２において比較的十分にバランスが取れていた。
【０３７０】
【表１８】
2021505570.tif 000022
【０３７１】
効能：眉間しわ線の治療のための４０Ｕの注射用ＲＴ００２（ＲＴ００２；ダキシ）によるアーム１及び２両方の中枢フェーズ３研究は、実施例５の重要応答率及び持続期間測定値で観察された２４週持続期間のフェーズ２研究で観察された結果を超えたか、又はこれに適合した。
【０３７２】
アーム１及び２において、それぞれ、主要エンドポイントは、プラセボについての０％及び１％に対してＲＴ００２による７４％の４週目における２点混成応答を満たし（ｐ＜０．０００１）、この結果は、実施例５で観察された結果を超えた。結果は、図５Ａに示される。追加の測定値を使用する結果は、図５Ｂ〜５Ｃに示される。
【０３７３】
図５Ｂは、アーム１及びアーム２のＲＴ００２群の患者におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳスケールの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間のカプラン・マイヤープロットを提示する（観察症例）（ＩＴＴ）。ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間は、治療開始日から、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が、両方のベースラインからの改善が観察される１、２及び４週目の後に、ベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化する最初の来院までの日数である。そのような来院が存在しない場合、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が利用可能な最後の来院で、打ち切りが起こる。１、２及び４週目でＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方におけるベースラインからの改善がない場合、時間は０に設定される。
【０３７４】
図５Ｃは、２つの研究アームの各々のＲＴ００２群の患者のＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳスケールのいずれかについてのしわなし又は軽度のしわ重症度の維持時間のカプラン・マイヤープロットを提示する（観察症例）（ＩＴＴ）。ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について中程度又は重度に戻るまでの時間は、治療開始日から、ＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳのいずれかが、ＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳがなし又は軽度である１、２及び４週目の後に、中程度又は重度に戻る最初の来院までの日数である。そのような来院が存在しない場合、ＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳのいずれかが利用可能な最後の来院で、打ち切りが起こる。１、２及び４週目でＩＧＡ−ＦＷＳも、ＰＦＷＳも、なし又は軽度でない場合、時間は０に設定される。
【０３７５】
表１９Ａ〜１９Ｂ及び表２０Ａ〜２０Ｂは、戻るまでの時間分析についての追加のデータを提供する。
【０３７６】
表１９Ａ〜１９Ｂは、２つの研究アームの各々のＲＴ００２群の全ての患者についての、最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方のベースラインへの戻り又はベースラインからの悪化についての統計を提示する（観察症例）（治療意図集団）。Ｎは、ＲＴ００２群の患者人数である。パーセンテージは、Ｎに基づく。ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間は、治療開始日から、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が、両方のベースラインからの改善が観察される１、２及び４週目の後に、ベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化する最初の来院までの日数である。そのような来院が存在しない場合、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が利用可能な最後の来院で、打ち切りが起こる。１、２及び４週目でＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方におけるベースラインからの改善がない場合、時間は０に設定される。要約統計は、カプラン・マイヤー見積もりである。＋は、打ち切られた観察を示す。
【０３７７】
【表１９】
2021505570.tif 000023
【０３７８】
【表２０】
2021505570.tif 000024
【０３７９】
表２０Ａ〜２０Ｂは、４週目で２点混成応答を満たし、且つ２つの研究アームの各々のＲＴ００２群に含まれる患者についての、最大限に顔をしかめたときのＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインへの戻り又はベースラインからの悪化を提示する（観察症例）（治療意図集団）。Ｎは、４週目における２点混成応答者であるＲＴ００２群の患者の人数である。パーセンテージは、Ｎに基づく。ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間は、治療開始日から、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が、両方のベースラインからの改善が観察される１、２及び４週目の後に、ベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化する最初の来院までの日数である。そのような来院が存在しない場合、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方が利用可能な最後の来院で、打ち切りが起こる。１、２及び４週目でＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方におけるベースラインからの改善がない場合、時間は０に設定される。要約統計は、カプラン・マイヤー見積もりである。＋は、打ち切られた観察を示す。
【０３８０】
【表２１】
2021505570.tif 000025
【０３８１】
【表２２】
2021505570.tif 000026
【０３８２】
表２１Ａ〜２１Ｂは、研究の２つのアームの各々についての、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳに基づくなし又は軽度のしわを示す、様々な治療群のパーセンテージについての結果を提供する。両方の場合において、プラセボに対して＊ｐ＜０．０００１。ＩＴＴ集団についての各時点におけるダキシ（ＲＴ００２）対プラセボについての応答率比較のために、研究センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定を使用した。ＲＴ００２についてのベースライン後最低値アウトカム及びプラセボについての最高値アウトカムにより欠測データを補完した。
【０３８３】
【表２３】
2021505570.tif 000027
【０３８４】
【表２４】
2021505570.tif 000028
【０３８５】
表２２Ａ〜２２Ｂは、２つの研究アームの各々の患者について、４週目来院における治療についての患者の全般的満足度（観察症例）（治療意図集団）を提示する。
【０３８６】
【表２５】
2021505570.tif 000029
【０３８７】
【表２６】
2021505570.tif 000030
【０３８８】
表２３Ａ〜２３Ｂは、実施例５の研究の結果と比較した、研究の２つのアームの各々についての、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳに基づく、なし又は軽度のしわを示す、様々な治療群のパーセンテージについての結果を提供する。（両方の場合において、プラセボに対して＊ｐ＜０．０００１；実施例５の研究のプラセボに対して＊＊ｐ＜０．０１）。ＩＴＴ集団についての各時点におけるダキシ（ＲＴ００２）対プラセボについての応答率比較のために、研究センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定を使用した。ＲＴ００２についてのベースライン後最低値アウトカム及びプラセボについての最高値アウトカムにより欠測データを補完した。
【０３８９】
【表２７】
2021505570.tif 000031
【０３９０】
【表２８】
2021505570.tif 000032
【０３９１】
表２４Ａ〜２４Ｂは、治験担当医による査定（ＩＧＡ−ＦＷＳ）（表２４Ａ）について、及び患者による査定（ＰＦＷＳ）（表２４Ｂ）について、２４週目まで通して強固ななし又は軽度の応答率が観察されたことをさらに示す（２４週目まで通した全ての時点においてプラセボに対して＊ｐ＜０．０００１；ＩＴＴ集団についての各時点におけるＲＴ００２対プラセボについての応答率比較のために、研究センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定を使用した；ＲＴ００２についてのベースライン後最低値アウトカム及びプラセボについての最高値アウトカムにより欠測データを補完した）。例えば、アーム１及びアーム２は、それぞれ、ＩＧＡ−ＦＷＳについて１６週目における７１％及び７４％、並びに２４週目における３５％及び２９％の応答率を有した。
【０３９２】
【表２９】
2021505570.tif 000033
【０３９３】
表２５Ａ〜２５Ｂは、これらの結果を実施例５からの結果と比較し、治験担当医による査定（ＩＧＡ−ＦＷＳ）（表２５Ａ）について、及び患者による査定（ＰＦＷＳ）（表２５Ｂ）について、２４週目まで通して観察された強固ななし又は軽度の応答率を示す（＊ｐ＜０．０００１（プラセボに対して）、＊＊ｐ＜０．０１（プラセボに対して）；ＩＴＴ集団についての各時点におけるＲＴ００２対プラセボについての応答率比較のために、研究センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定を使用した；ＲＴ００２についてのベースライン後最低値アウトカム及びプラセボについての最高値アウトカムにより欠測データを補完した）。２４週目まで通してＩＧＡ−ＦＷＳについて観察された強固ななし又は軽度の応答率があった。２つのアームの各々についての応答率は、それぞれ、１６週目における７１％及び７４％、並びに２４週目における３５％及び２９％であった（２４週目まで通した全ての時点においてプラセボに対してｐ＜０．０００１）。実施例５の研究では、オナボツリヌス毒素Ａ  ２０Ｕの３１．７％の１６週目応答率及び１１．９％の２４週目応答率と比較して、ＲＴ００２  ４０Ｕ用量応答率は、１６週目で６７％、及び２４週目で３１％であった（Carruthers 2017；及びAllergan, Inc.社BOTOX（登録商標）（オナボツリヌス毒素Ａ）処方情報、２０１３年を再度参照のこと）。
【０３９４】
【表３０】
2021505570.tif 000034
【０３９５】
また、図６Ａ〜６Ｂで示す通り、これらの結果は、４週目でＲＴ００２により５２．８％の２点混成応答を示した（図６Ａ）実施例５で得られた結果を超える（＊ｐ＜０．０００１（研究センターによって層別化されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定についてプラセボに対して））（Carruthers, 2017も参照のこと）。
【０３９６】
図６Ｂは、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答について、この研究のアーム１及びアーム２を実施例５と比較する。実施例５は、１６週目において６７％の応答、及び２４週目において３１％の応答を示した（図６Ｂ）。フェーズ３研究において、最長で２４週目までの来院について、ベースライン後最低値アウトカム（又はプラセボアームについての最高値アウトカム）により欠測データを補完した。２４週目後の来院については、非応答者補完を使用した。実施例５において、応答率はデータを有する対象の応答率であった。
【０３９７】
図７は、本研究の２つのアームの各々について、実施例５について、及び様々な他のボツリヌス毒素製剤について、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳスコアに基づく、なし又は軽度のしわを維持する対象のパーセントを提示する。図７は、オナボツリヌス毒素Ａ、アボボツリヌス毒素Ａ及びインコボツリヌス毒素Ａの添付文書による経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答を含むことによって図６に基づいて構築される。例えば、オナボツリヌス毒素Ａ  ２０Ｕは、３１．７％の１６週目応答率及び１１．９％の２４週目応答率を示した。特に、鮮青色の実線は、Abobot GL-1（Dysport社のＧＬ−１研究についての同社の米国添付文書で記載されているアボボツリヌス毒素Ａ）を表し；鮮青色の破線は、Abobot GL-3（Dysport社のＧＬ−３研究についての同社の米国添付文書で記載されているアボボツリヌス毒素Ａ）を表し；橙色は、Onabot USP1（対応する米国添付文書で記載されているオナボツリヌス毒素Ａ）を表し；赤色白抜き三角は、Incobot GL-1（Xeomin社のＧＬ−１研究についての同社の米国添付文書で記載されているインコボツリヌス毒素Ａ）を表し；赤色塗りつぶし三角は、Incobot GL-2（Xeomin社のＧＬ−２研究についての同社の米国添付文書で記載されているインコボツリヌス毒素Ａ）を表す。フェーズ３研究アームにおいて、ＩＴＴ集団について、最長で２４週目までの来院について、ベースライン後最低値アウトカム（又はプラセボアームについての最高値アウトカム）により欠測データを補完した。２４週目後の来院については、非応答者補完を使用した。実施例５の結果について、応答率はデータを有するＩＴＴ対象の応答率であった。
【０３９８】
図８〜１０は、フェーズ３研究の結果をさらに提示する。図８は、実施例５と比較したＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答を描写する。フェーズ３研究において、最長で２４週目までの来院について、ベースライン後最低値アウトカム（又はプラセボアームについての最高値アウトカム）により欠測データを補完した。２４週目後の来院については、非応答者補完を使用した。実施例５において、応答率はデータを有する対象の応答率であった。
【０３９９】
図９は、アボボツリヌス毒素Ａと比較したＰＦＷＳについてのなし又は軽度の応答を描写する。フェーズ３研究（ＩＴＴ）において、最長で２４週目までの来院について、ベースライン後最低値アウトカム（又はプラセボアームについての最高値アウトカム）により欠測データを補完した。２４週目後の来院については、非応答者補完を使用した。実施例５において、応答率はデータを有するＩＴＴ対象の応答率であった。
【０４００】
図１０は、実施例５（ＰＰ）と比較した本研究のアーム１及びアーム２（ＩＴＴ）の経時的なＩＧＡ−ＦＷＳについての１点以上の応答率を描写する。フェーズ３研究において、最長で２４週目までの来院について、ベースライン後最低値アウトカム（又はプラセボアームについての最高値アウトカム）により欠測データを補完した。２４週目後の来院については、非応答者補完を使用した。実施例５において、応答率はＰＰ集団の対象の応答率であった。
【０４０１】
図１１〜１３は、これらの結果をさらに要約する。この研究の２つのアームは、中程度〜重度の眉間しわ線を有する患者における最初且つ唯一のフェーズ３治験であり、このフェーズ３治験は、多数の臨床的に意味のあるアウトカム測定値についての２４週間以上の確証的効能を実証した。両方のフェーズ３研究は、実施例５の研究結果を超え、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについてのベースラインからの１点以上の改善の持続期間中央値は、治験担当医による査定（図１１）及び対象による査定（図１２）の両方についてそれぞれ、２４．１及び２３．７〜２３．９週間であった。対照的に、実施例５の研究は、オナボツリヌス毒素Ａ  ２０Ｕによる１８．８週間に対して、ＲＴ００２  ４０Ｕによる２３．６週間の持続期間中央値のＩＧＡ−ＦＷＳについての１点以上の改善を実証した（ｐ＜０．０３）（Carruthers, 2017）。図１３は、この研究の２つのアームについてのＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの比較を描写する。
【０４０２】
図１４〜１６は、４０ＵのＲＴ００２によるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳについてのなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）の維持が、１点以上の改善結果を伴って観察された持続期間を再現したことを描写する。図１４は、本研究の２つのアームの各々（紫色及び青色の線）について、及び実施例５（赤色の線）について、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳについてのなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）を維持する対象のパーセントを提示する。図１５は、４週目における２点混成応答者に基づいて、本研究の２つのアームの各々（紫色及び青色の線）について、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳについてのなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）を維持する対象のパーセントを提示する。図１６は、本研究の２つのアームの各々（紫色及び青色の線）について、経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ又はＰＦＷＳのいずれかについてのなし又は軽度のしわ重症度状態（０又は１のスコア）を維持する対象のパーセントを提示する。
【０４０３】
図１７は、本研究のアーム１及び２の、それぞれ、２７．７週間（６．５カ月間）及び２６週間（６．１カ月間）の平均持続期間を描写する。ＲＴ００２によるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインしわ重症度に戻るまでの時間中央値は、６カ月間を超えた。
【０４０４】
患者の全般的満足度：研究の両方のアームにわたり４週目で、高い患者の全般的満足率が観察された。図１８は、７点スケールでアーム１及び２についてそれぞれ、９１％及び８８％の「満足」又は「非常に満足」の満足率を描写する。
【０４０５】
図１９〜２０は、フェーズ３研究の例示的な対象の写真を示す。図１９は、ＲＴ００２  ４０Ｕ治療後４週目における（最大限に顔をしかめたときの）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳによる２点改善、並びに２４週目まで通した１点の効果の持続期間の維持を示す対象の写真を提示する。
【０４０６】
図２０Ａ〜２０Ｂは、ＲＴ００２  ４０Ｕ治療後４週目における（最大限に顔をしかめたときの）ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳによる２点改善、並びに２４週目（図２０Ｂ）及び３２週間（図２０Ｂ）まで通した１点の効果の持続期間の維持を示す異なる対象の写真を提示する。
【０４０７】
安全性：
ＲＴ００２  ４０Ｕは、両方のアームにおいて３６週目まで通して概して安全であり、且つ認容性が良好であることが観察された。有害事象を有するアーム１及び２の対象のパーセンテージは、ＲＴ００２群でそれぞれ、３６％及び４６％、プラセボ群でそれぞれ、２５％及び２４％であった。有害事象を要約する表２６を参照されたい。ＲＴ００２群の事象の大部分は、重症度が軽度であり、治験薬に関連しないと考えられた。ＡＥに次いで中断したＲＴ００２群の対象はいなかった。各アームの２人の対象が、ＲＴ００２群において重篤なＡＥを経験し、そのうちのいずれも治療関連しなかった。アーム１及び２の治療関連ＡＥは、ＲＴ００２群でそれぞれ、対象の１７．４％及び２１．０％、プラセボ群でそれぞれ、８％及び９％において起こった。
【０４０８】
【表３１】
2021505570.tif 000035
【０４０９】
両方の研究にわたるＲＴ００２群において、最も一般的な事象は、頭痛（６〜７％）及び注射部位の痛み（２．４％〜５％）であり；注射関連浮腫及び紅斑の率は、２．４％以下であり、全ての症例は重症度が軽度であった。２．２％の全体的な眼瞼下垂率が観察され、平均持続期間は６０日間であった。表２７は、優先使用語（任意のアームにおいて２％を超える）による治療関連有害事象の数を要約する（＊６症例は軽度重症度、３症例は中程度重症度であり；全て後遺症を伴わずに消散した。平均持続期間６０日間；†１群当たり２症例を超える眼障害。全ての症例は重症度が軽度であった。‡３０日間の平均持続期間）。
【０４１０】
【表３２】
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【０４１１】
重度の有害事象及び重篤な有害事象を、表２８及び表２９に提示する。表２８は、優先使用語による重度の有害事象＊＊を要約する（＊重度のＡＥは、重篤なＡＥでもある；＊＊重度の有害事象のいずれも治療に関連しなかった）。
【０４１２】
【表３３】
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【０４１３】
表２９は、優先使用語による重篤な有害事象＊＊を要約する（＊上記の重篤なＡＥのいずれも治療に関連しない）。
【０４１４】
【表３４】
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【実施例８】
【０４１５】
連続した治療にわたる眉間しわ線の治療において安全性の改善、より高い応答者率及びより長い効果の持続期間を示す注射用ボツリヌス毒素製剤についてのフォローアップ安全性研究
２つの中枢計画治験に加えて、フェーズ３プログラムは、成人における中程度〜重度の眉間しわ線の治療についてのＲＴ００２の、単回及び反復治療投与後の長期安全性を評価するように設計される長期非盲検安全性治験を含む。長期安全性治験は、多施設においておよそ１，５００人の対象を登録することが期待される。治療回数及びフォローアップ持続期間に依存して、対象は、最長で８４週間の間治験に含まれ得る。
【０４１６】
安全性研究は、中程度〜重度の眉間しわ線の治療におけるＲＴ００２の単回及び反復投与の安全性を査定するためのフェーズ３前向き非盲検多施設反復用量治験を含んだ。安全性研究は約６０のセンターを含み、反復治療のための、本明細書で記載する実施例７のフェーズ３アーム１及び２からのおよそ６００人のロールオーバー対象に加えて、およそ１，５００人の対象が登録された。対象は、最多で３回の反復治療を受容した。実施例７からの対象は、全部で３回の治療の、親治験における１回の治療及びこの治験における最多で２回の治療を受容し；新規に登録された対象は、最多で２回の治療を受容した。図２１Ａは、研究設計を描写する。フォローアップとは、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方がベースラインに戻る１２週目に開始する再治療に適格な対象を指す。図２１Ｂは、実施例７のアーム１及び２と比較したこの研究の概略を描写する。＊は、米国のセンターを示し；＊＊は米国及びカナダのセンターを示す。
【０４１７】
全ての対象を、安全性査定のために、各治療後少なくとも１２週間、及び最長で３６週間フォローした。最大限に顔をしかめたときのＰＦＷＳ及びＩＧＡ−ＦＷＳスコアの両方が１２週目来院において、又は１２〜３６週目の間の来院においてベースラインに戻る場合、これらの２つのスコアが記録される来院は最終評価来院になり、多数回治療を受容した対象については、この来院は再治療来院として働き、この治験のベースラインを提供し；また、これらの対象は、最終適格治療後１２週目において最終評価来院を有した。
【０４１８】
投与量レジメン：全ての治療は、訓練された医師により投与される筋内注射であった。投与は、実施例７で記載される通りに行われた。この治験で使用した注射部位を示す、図２３も参照されたい。対象は、全部で０．５ｍＬの治療を受容し、各皺眉筋への２箇所の注射、及び鼻根筋への１箇所の注射の５箇所の注射部位への１回の注射当たり０．１ｍＬが投与された。投与量は、１回の注射治療当たり、５箇所の注射部位間で分割される、４０Ｕであった。対象参加持続期間は、治療回数、ＲＴ００２への応答及びフォローアップ持続期間に依存して変動した。対象は、２週間のスクリーニング期間を含む最長で８６週間の間治験に含まれ得る。
【０４１９】
治験来院：スクリーニング（−２週目）、治療（０日目）、１、２、４、８及び１２週目における、その後１６、２０、２４、２８、３２、３６週目における、又は再治療までの第１の治療後フォローアップ。１、２、４、８及び１２週目における、その後１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目における、又は再治療（第３の用量）までの第２の治療後フォローアップ（再治療される対象について）。１、２、４、８及び１２週目における、第３の治療後フォローアップ（第３の治療を受容する対象について）。再治療に適格な対象は、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳ重症度スコアのベースラインへの戻りを示した。来院スケジュールからの許容される変動は、１週目（治療後）について＋／−２日；２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２及び３６週目の各々について＋／−３日であった。
【０４２０】
図２２は、この治験においてフォローされた治験査定のスケジュールをさらに描写する。特に、「ａ」は、治験ＰＴの終わりの実施例７（フェーズ３研究、アーム１及び２）の最終評価来院、及びこの治験におけるロールオーバーについてのベースラインとして働いた１２週目の血清抗体検査を付記し；「ｂ」は、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳが１２週目において、又は１２〜３６週目の間の来院においてベースラインに戻った場合、治療は再治療に適格であり得ることを付記し；「ｃ」は、多数回治療を受容した対象が、最終治療後１２週目において最終評価来院を完了したことを付記し；「ｄ」は、手順が治療前に行われたことを付記し；「ｅ」は、手順が治療後に行われたことを付記し；「ｆ」は、正である場合、この検査が、血清妊娠検査により確認されたことを付記し；「ｇ」は、ＰＴがスクリーニング時にのみ収集されたことを付記し；「ｈ」は、毒素の遠位の広がりの徴候又は症状が報告された場合、バイタルサインが記録されたことを付記し；「ｉ」は、写真が、最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時の対象の正面像を含んだことを付記し、第１の治療中、これらの写真は、ベースライン、４、１６、２０、２４週目及びＥＯＳで撮られ、第２の治療中、写真は、ベースライン、４週目及びＥＯＳで撮られ、選択されたセンターにおいては、また、写真は、ベースライン及び全てのフォローアップ来院時の安静時及びその後最大限に額を上げたときの対象の額を含み；「ｊ」は、眉を弛緩させた状態での正面視、及び眉を上げた状態での正面視での対象の写真を得たことを付記し；「ｋ」は、下垂の徴候が報告又は観察された場合、写真を得たことを付記する。
【０４２１】
安全性評価：臨床研究検査（血液学、化学、プロトロンビン時間［ＰＴ］、尿分析）；妊娠の可能性のある女性（ＷＯＣＢＰ，women of child-bearing potential）については尿妊娠検査（ＵＰＴ，urine pregnancy test）；ＲＴ００２及びＲＴＰ００４についての血清抗体検査；注射部位評価；脳神経II〜VII査定；顔面筋強度の評価；同時薬物治療；有害事象（ＡＥ）の収集；毒素の遠位の広がりの質問；バイタルサイン；並びに身体検査。
【０４２２】
表３０で概略される通り、スクリーニング時、４週目来院、再治療前（適用可能なとき）及び最終評価来院時に、血液学、化学、凝固（プロトロンビン時間；スクリーニングのみ）及び尿分析のための非絶食時試料を収集した。スクリーニング並びに２、４及び１２週目来院時に、抗体のための血液試料を収集した。
【０４２３】
【表３５】
2021505570.tif 000039
【０４２４】
抗体検査：ＲＴ００２治療の過程中に製品に対して抗体力価が生じた場合、その対象からの試料を、中和抗体について検査するためにマウス保護アッセイに供した。
【０４２５】
ＲＴ００２及びＲＴＰ００４についての血清抗体を、記述統計量を使用して要約し、陽性抗体結果について傾向を分析し、免疫原性に関連する臨床的に有意な事象と相関させた。特に、陽性抗体結果の頻度及び経時的な免疫原性と関連する関連付けられる臨床的に有意な事象を示す記述統計量を提示した。
【０４２６】
バイタルサイン：スクリーニング及び治療来院（治療前後）、２週目、最終評価又は早期中断来院時、並びにボツリヌス毒性の徴候又は症状が報告された任意の来院時に、バイタルサイン（すなわち、体温、呼吸速度、座位橈骨動脈拍並びに座位収縮期血圧及び拡張期血圧）を得た。
【０４２７】
身体検査：スクリーニング、２週目及び最終評価又は早期中断来院時に、バイタルサインに加えて、顔面の神経学的検査、全体的外観、皮膚、首（甲状腺を含む）、眼、耳、鼻、喉、心臓、肺、腹部、リンパ節及び四肢を含む身体検査を行った。被験薬投与前に存在している有意な身体検査所見は、病歴として含まれた。有害事象の定義を満たす有意な身体検査所見を記録した。
【０４２８】
注射部位評価：スクリーニング来院、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、注射部位を評価した。査定は、上記表１１で示される通り、５箇所の注射部位の全般的評価として行った。
【０４２９】
脳神経II〜VIIの査定：スクリーニング、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、脳神経II〜VII（左右の側を別々に）の評価を行った。各脳神経のスコアを、上記表１２で概略される通りに取った。検査手順は、表３１で概略される通りである。
【０４３０】
【表３６】
2021505570.tif 000040
【０４３１】
ハウス・ブラックマン顔面神経部位別査定システム：このシステムは、標的及び隣接筋系を神経支配する顔面神経（VII）の共同運動及び４つの主要な分岐を評価するために設計された（Yen, et al., 2003, Otol. Neurotol., 24(1):118-122）。スクリーニング、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、治験担当医が、顔面神経（VII）の機能性を評価した。上記表１３及び以下の表３２を参照されたい。
【０４３２】
【表３７】
2021505570.tif 000041
【０４３３】
顔面筋強度の評価：英国医学研究審議会筋力評価（ＭＲＣ）スケールを使用して、顔面筋強度を評価した（Paternostro-Sluga, et al., 2008, J Rehabil Med.40:665-671）。顔面の各側の以下の筋肉：眼輪筋（眼瞼）、側方眉上引筋、頬骨筋を評価した。表１４を参照されたい。治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に、治験担当医が、顔面筋強度を評価した。
【０４３４】
有害事象：有害事象（ＡＥ）を、軽度、中程度又は重度として等級付けし、治療来院治療後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に評価した。
【０４３５】
毒素の遠位の広がりについての質問（特定のＡＥ及び神経筋脱力症状についての質問）：毒素の遠位の広がりについての質問を、治療来院治療前後、フォローアップ来院及び最終評価来院又は適用可能な場合早期中断来院時に行った。視力調節障害、反射消失、誤嚥、霧視、ボツリヌス中毒症、眼瞼機能障害、眼瞼下垂、顔面神経麻痺、顔面麻痺、第４脳神経不全麻痺、末梢神経麻痺、末梢麻痺、骨盤底筋力低下、誤嚥性肺炎、瞳孔反射不全、徐脈、眉毛下垂、球麻痺、便秘、脳神経麻痺（cranial nerve palsies）、脳神経麻痺（cranial nerve paralysis）、横隔膜麻痺、複視、口渇、構音障害、嚥下障害、発声障害、呼吸困難、外眼筋不全麻痺、不全麻痺、胃腸障害、四肢不全麻痺、頭痛、不全片麻痺、舌下神経不全麻痺、反射低下、筋緊張低下、不全単麻痺、筋力低下、麻痺、弛緩性麻痺、麻痺性イレウス、不全対麻痺、脳神経不全麻痺、呼吸不全、呼吸停止、呼吸抑制、発話障害、第３脳神経不全麻痺、三叉神経不全麻痺、尿閉、声帯麻痺、声帯不全麻痺及び眼球乾燥症（ドライアイ）を含む、毒素の遠位の広がりを可能性として示唆する有害事象のリストについて一般的な様式で、患者に質問を行った。
【０４３６】
有効性評価：治験担当医による全般的査定尺度−顔をしかめたときのしわ重症度（ＩＧＡ−ＦＷＳ）；患者による顔をしかめたときのしわ重症度（ＰＦＷＳ）；並びに治験担当医及び患者による全般的審美的改善スケール（ＧＡＩＳ）。査定は、上に記載する通りである。
【０４３７】
他の評価：治療領域の写真。治療領域の標準化デジタル写真を撮った。下垂の存在を査定する写真のために、比較目的のためのベースライン時、又は下垂の疑いのある徴候が報告若しくは観察された後続の来院時のいずれかに、治験依頼者により供給されたカメラによって標準化様式で写真を撮った。各時点で撮った２枚の写真は、１）眉を弛緩させた状態での正面視での対象、及び２）眉を上げた状態での正面視での対象の写真であった。写真はまた、最大限に額を上げたとき及び最大限に額を上げた後の安静時の対象の額を含んだ。
【０４３８】
診断及び主な略式適格条件：ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳに基づいて最大限に顔をしかめたときに中程度（２）又は重度（３）の眉間しわ線を有する、１８歳以上の健康状態の良好な男性又は妊娠中授乳中でない女性外来患者。
【０４３９】
試験物品、用量、投与：ＲＴ００２、４０Ｕ、ＩＭ注射、０．５ｍＬ。ＲＴ００２製品は、式ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧ−（Ｋ）１５−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＲＴＰ００４；配列番号４）を有する正に帯電した担体ペプチドと非共有結合的に会合し、且つアクセサリータンパク質又は動物由来成分を含有しない、アクセサリータンパク質を伴わない１５０ｋＤのＡサブ型ボツリヌス毒素分子を含有する、注射用製剤である。賦形剤は、アクセサリータンパク質を伴わない５０Ｕの１５０ｋＤａ  Ａ型毒素当たり０．１ｍｇポリソルベート２０、３６ｍｇトレハロース二水和物及び１１．７μｇ  ＲＴＰ００４を含み、治療用量は４０Ｕである。
【０４４０】
統計解析：全ての統計プログラミングは、統計解析システム（ＳＡＳ）バージョン９．４又はそれ以降のバージョンを使用して行われる。
【０４４１】
治験対象は、最多で３回の治療を受容するために適格であった。解析目的のために、各治療について対応する要約期間を定義した。治験全体の要約のために、治験中に観察された全ての使用可能なデータが含まれた。特定の治療と関連付けられる解析のために、要約は、治療以来、次の治療まで、又は後続の治療がない場合、治験の最後の来院までに観察された全てのデータを含んだ。様々な対象フォローアップ持続期間を説明するために、全フォローアップ持続期間（すなわち、患者−年）を各要約期間について計算した。治験全体の要約について、ベースラインは、第１の治療前の最後の使用可能な値であった。特定の治療と関連付けられる要約について、ベースラインは、治療前の最後の使用可能な値（すなわち、再ベースライン化）であった。
【０４４２】
安全性評価可能集団は、被験薬に曝露され、且つ任意の治療後安全性情報を提供する全ての対象を含んだ。治験治療を受容し、且つ特定の治療についての治療後安全性情報を有する対象のみを含む、安全性評価可能集団のサブセットについて、３つの治療期間の各々と特に関連付けられる解析を行った。これらの安全性評価可能サブ集団は、治療１評価可能、治療２評価可能又は治療３評価可能と、それぞれ、特定された。
【０４４３】
以前の治験において活性薬治療群に含まれたロールオーバー対象については、この非盲検安全性治験の第１のＲＴ００２治療は、実際には、対象の第２のＲＴ００２治療であった。対象の以前のＲＴ００２への曝露に基づいて、解析のために以下の２つの要約群：群Ａ及び群Ｂを定義した。前者の群は、実施例７のアーム１又はアーム２のいずれかにおいてＲＴ００２を受容した全ての対象を含み、後者の群は、残りの治験対象を含む。
【０４４４】
安全性分析：治験中に起こった全ての治療創発的有害事象（ＡＥ）を記録し、ＭｅｄＤＲＡ用語集に基づいて、本明細書で記載される通りに分類した。ＡＥは、被験薬の投与に因果関係を必ずしも有しない場合がある、被験薬の投与後、且つ治験参加の終了までに出現又は悪化する任意の不都合な医療発生事象（例えば、徴候、症状、疾患、症候群、併発の病気、臨床的に有意な異常な検査所見、傷害又は事故）として定義され得る。ＡＥはそれゆえ、被験薬と関連すると考えられるかどうかにかかわらず、被験薬の使用に一時的に伴う任意の好ましくない及び／又は意図されない徴候（臨床的に有意な異常な検査結果を含む）、症状若しくは疾患であり得る。治療創発的ＡＥは、治療への任意の曝露期間後に起こるＡＥである。ＡＥは、治療後の治験安全性評価（例えば、バイタルサイン、注射部位評価、脳神経II〜VIIの査定及び顔面筋強度の評価）における任意の臨床的に有意な変化を含む。
【０４４５】
被験薬使用の結果として頻度若しくは重症度が増大するか、又は性質が変化する既存の状態もまた、有害事象と考えられる。予期しないＡＥは、その性質又は重症度が適用可能な製品情報と一致しない有害反応である。
【０４４６】
重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、以下のアウトカム：死亡、致命的な持続的若しくは顕著な障害／不能状態又は対象の通常の生活機能を行う能力の実質的な破壊、入院が必要になること又は入院を延長すること（すなわち、予想された入院期間を超える入院の延長）、先天性異常／先天欠損（すなわち、受胎前又は妊娠中に被験薬に曝露された対象の子又は胎児における有害アウトカム）、上記の重篤な基準のいずれかに適合しないが、適切な医療的判断に基づいて対象を危険にさらし得るか、又は上記に列挙されるアウトカムのうちの１つを予防するために医療的若しくは外科的介入を必要とし得ること（すなわち、顕著な又は重要な医療事象であること）のうちのいずれかをもたらす任意の不都合な医療発生事象である。
【０４４７】
治験期間全体について収集した安全性データを、安全性評価可能集団について要約した。３つの治療期間の各々と関連付けられる要約を、対応するサブ集団（すなわち、治療１評価可能、治療２評価可能又は治療３評価可能）について行った。様々な対象フォローアップ持続期間を説明するために、全フォローアップ持続期間（すなわち、患者−年）を各要約期間について計算した。安全性データを要約するために、記述統計量を提示した。
【０４４８】
被験薬因果関係及び重症度：ＡＥの被験薬への関係を、以下の通り査定した：「確実」は、事象が被験薬の中止に応答する場合、及び／又は被験薬の再投与と共に再発する場合、ＡＥの出現と被験薬の投与との間に臨床的に妥当な時間的連鎖があることを意味し；「おそらく」は、ＡＥの出現と被験薬の投与との間に臨床的に妥当な時間的連鎖があり、ＡＥが同時の／根底にある病気、他の薬物又は手順によって引き起こされることがありそうにないことを意味し；「ことによると」は、ＡＥの出現と被験薬の投与との間に臨床的に妥当な時間的連鎖がある場合も、ない場合もあり、且つ原因を除外することができないことを意味し；「関連しない」は、被験薬投与への一時的関係又は因果関係がないことを意味する。
【０４４９】
ＡＥカテゴリー：「軽度」は、事象が対象に認識される場合があり、日々の活動に影響を及ぼさず、通常、介入を必要としないことを意味し；「中程度」は、事象が対象を不快にさせるほど十分な重症度である場合があり、日々の活動の性能に影響を及ぼす場合があり、介入が必要な場合があることを意味し；「重度」は、事象が重度の不快を引き起こす場合があり、通常、日々の活動に支障をきたし、対象が治験を継続することができない場合があり、治療又は他の介入が通常必要とされることを意味する。
【０４５０】
全ての報告された治療創発的有害事象を、事象を報告した対象の人数、体系器官分類、優先使用語、重症度、治験薬物への関係及び重篤さについて要約した。因果関係及び重症度により事象を要約する場合、各対象は、各分類内の最も大きな関係及び最も高い重症度を有する事象を使用することによって体系器官分類又は優先使用語内で１回のみカウントした。対象の中途での治験中断を引き起こすＡＥのリストを提供した。重篤な有害事象（ＳＡＥ）を、対象毎に列挙し、重症度及び治験治療への関係毎に要約した。ＡＥ及びＳＡＥの要約を、治験全体について、及び３つの治療期間の各々について行った。ＳＡＥ及び重要なＡＥ（毒素の遠位の広がりを示唆するＡＥ等）について、注射当たりの率及び患者−年当たりの率を計算した。９５％信頼区間もまた率について提供した。
【０４５１】
有効性分析：ＩＧＡＦＷＳ、ＰＦＷＳ、ＧＡＩＳ等の有効性アウトカム測定値を、治験中に経時的に、最大限に顔をしかめたとき及び最大限に顔をしかめた後の安静時に評価した。応答率及び応答持続期間を計算した。有効性データを、欠測データの補完を伴わずに観察されたまま要約した。要約群についての全ての時点における全ての有効性変数について記述統計量を提供した。目的の部分群間（例えば、女性対男性、第１の治療対第２の治療等）の差を比較するための９５％信頼区間及び／又はｐ値を適宜提供した。時間事象エンドポイントについてカプラン・マイヤー曲線をプロットした。比較（例えば、女性対男性、第１の治療対第２の治療等）を行う場合、検定は０．０５の有意性レベルで行い、多重度についての調節は行わなかった。
【０４５２】
サンプルサイズの根拠：これは、全ての対象が同じ被験薬で治療された安全性治験であった。およそ２，１００人のサンプルサイズは、いくつかの手法に基づく安全性の査定において十分であると考えられた。この治験において治療されるおよそ２，１００人の対象で、不都合な事象が治験中に起こらなかった場合、９５％の信頼性により、不都合な事象の発生率は０．１５％以下であることが結論付けられた。ｎ＝２，１００で、事象発生率を見積もる正確さ（９５％の正確な信頼区間に基づく）は、真の発生率が約５０％である場合最大で±２．２２％であるか、又は真の発生率が５％の範囲内である場合およそ±１．０％であった。ｎ＝２，１００のサイズはまた、ある特定の事象の発生率が固定発生率と同等であるかどうかを評価するために十分な検定力を有し、例えば、発生率が、１．５％の均等なマージン及び０．０５の有意水準の下で３％と同等であることを実証する９５％を超える検定力がある（２つの片側検定に基づいて）。
【０４５３】
最多で３回の治療を受容した２，１００人の登録された対象のうちの少なくとも４００人で、実際の事象発生率が第１の治療における３％から第３の治療における６％まで増大する場合、０．０５の有意水準で第１の治療から第３の治療までの発生率の増大を検出する８６％の検定力があった（片側検定）。また、ｎ＝４００で、９５％の正確な信頼区間は、３％の観察された発生率について１．６〜５．２％であり、５％の観察された発生率について３．１〜７．６％であった。
【０４５４】
治験エンドポイント
安全性エンドポイント：各治療及び治験全体中の治療創発的有害事象の発生率、重症度及び治験薬物への関係；並びに各治療及び治験全体中の治療創発的重篤有害事象の発生率、重症度及び治験薬物への関係。安全性評価可能集団は、被験薬に曝露された全ての対象を含む。
【０４５５】
有効性エンドポイント：別に特定しない限り、ＩＧＡ−ＦＷＳ、ＰＦＷＳ又はＧＡＩＳと関連付けられる全てのエンドポイントは今後、最大限に顔をしかめたときの査定に基づいた。適用可能な場合、最大限に顔をしかめた後の安静時の査定に基づく同様のエンドポイントも要約した。ベースラインとの比較に由来するエンドポイントについては、ベースラインとは異なる参照時点（すなわち、治験ベースライン又は治療ベースライン）を使用する２つの誘導規則を別々に適用した。これらは、第１の治験治療以来の再治療までの時間（治療１評価可能のみについて）；第２の治験治療以来の再治療までの時間（治療２評価可能のみについて）；ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間；ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方について２又は３（中程度又は重度）に戻るまでの時間；経時的な各来院におけるＩＧＡＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインからの２点以上の改善を有する対象の割合；経時的な各来院におけるＩＧＡ−ＦＷＳについての０又は１のスコア（なし又は軽度）を有する対象の割合；経時的な各来院におけるＰＦＷＳについての０又は１のスコア（なし又は軽度）を有する対象の割合；経時的な各来院におけるＩＧＡＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインからの１点以上の改善を有する対象の割合；経時的な各来院におけるＧＡＩＳについての１点以上の改善（すなわち、改善、かなり改善又は非常に改善）を有する対象の割合（別々に要約される治験担当医による査定及び対象による自己査定により）；経時的な各来院におけるＧＡＩＳについての２点以上の改善（すなわち、かなり改善又は非常に改善）を有する対象の割合（別々に要約される治験担当医による査定及び対象による自己査定により）；経時的な各来院におけるＧＡＩＳについての３点以上の改善（すなわち、非常に改善）を有する対象の割合（別々に要約される治験担当医による査定及び対象による自己査定により）；経時的な各来院における平均ＧＡＩＳスコア（別々に要約される治験担当医による査定及び対象による自己査定により）を含む。
【０４５６】
重要有効性エンドポイント：
−  経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインからの２点以上の改善を有する対象の割合。
−  経時的なＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳにより評価される０又は１のスコア（なし又は軽度）を有する対象の割合。
−  ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのなし又は軽度の喪失までの時間。
−  ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてベースラインに戻るか、又はベースラインよりも悪化するまでの時間。
−  経時的な治験担当医及び対象により評価されるＧＡＩＳについての１点以上の改善を有する対象の割合。
【０４５７】
重要有効性エンドポイントは、治験全体の要約について、及び治験期間毎に行った。
【０４５８】
実施例７との簡単な比較：治験担当医及び対象の両方は、顔をしかめたときの眉間しわ線の重症度を査定するための確証された４点しわ重症度スケールについて治験開始時に訓練を受けた。登録時に、対象は、治験担当医及び対象の両方によって査定される中程度又は重度のいずれかの眉間しわ線しわ重症度を有することが必要とされた。
【０４５９】
実施例８の結果
この研究は、２つのフェーズ３中枢研究（実施例７）で確立された安全性プロファイルを確認し、新しい認容性又は安全性の懸念は報告されず、反復投与後のＡＥの安定な、又は減少する率を伴った。この研究において、２６９１人の対象にＲＴ００２（４０Ｕ）による全部で３８３０回の治療を投与した。３回の治療サイクルにわたり累積的ＡＥの証拠はなく、ＲＴ００２の安全性パターンが反復投薬後に安定なままであることを示唆した。
【０４６０】
安全性の要約：ＲＴ００２は、眉間の（顔をしかめた）しわ線の３，８００回の治療にわたり認容性が良好であり；有害事象は、軽度、局所性及び一過性であり；治療関連ＡＥの率は、連続した治療にわたり減少し；眼瞼下垂率は、治療当たり１％未満であった。治療関連有害事象は、３０の施設で行われた実施例７のアーム１及び２研究（１８％）と比較して、６６の臨床治験施設にわたる実施例８の研究においてより少ない治療（１４％）で起こった。
【０４６１】
ＡＥの要約：対象の３９％が、研究の過程中に有害事象を経験した。全体的に、ＴＥＡＥの発生率は連続した治療サイクルにわたり増大せず、事象の大部分は重症度が軽度であり、ほとんどは治療と関連しないと考えられた。報告された最も一般的な有害事象は、頭痛（５．９％の対象）、上咽頭炎（４．３％）、注射部位の痛み（３．３％）、注射部位の紅斑（２．９％）、注射部位の浮腫（２．６％）、紅斑（２．４％）及び上気道感染（２．０％）であった。重篤なＡＥは、対象の１．１％で起こり、いずれも治療と関連しなかった。
【０４６２】
治療関連ＡＥ：対象の１８％が、ＲＴ００２又は投与手順と関連すると考えられる有害事象を報告した。治療関連ＡＥは概して、重症度が軽度であった。最も頻繁に起こった治療関連ＡＥは、頭痛（対象の４．６％）、注射部位の痛み（３．２％）、注射部位の紅斑（２．７％）、注射部位の浮腫（２．６％）及び紅斑（２．０％）であった。反復治療後、漸進的に対象のより少ない割合が治療関連ＡＥを経験するようになった。３回の連続した治療を受容した対象において、治療１について対象の１３．５％が治療関連ＡＥを経験し、治療２について対象の４．１％が治療関連ＡＥを経験し、治療３について対象の３．８％が治療関連ＡＥを経験した。
【０４６３】
眼瞼下垂：０．９％の低率の眼瞼下垂（３８３０回の治療において３５事象）が観察され、６６の施設における対象の１．３％で起こった。これは、３０の施設における実施例７の研究で治療された４０５人の対象における２．２％の率に勝るとも劣らない。
【０４６４】
驚くべきことに、眼瞼下垂の発生率は、後続のＲＴ００２治療サイクルと共に減少し、治療１について対象の１．０％が治療関連ＡＥを経験し、治療２について対象の０．８％が治療関連ＡＥを経験し、治療３について対象の０．７％が治療関連ＡＥを経験した。１症例を除く全ての眼瞼下垂は、症状が片側性であり、大多数は重症度が軽度であり、４５日間の持続期間中央値を有した。
【０４６５】
有効性／効能の要約：この研究は、４０Ｕの用量のＲＴ００２による実施例７の研究の２つのアームにおいて見られた効能を超えるか、又はこれに匹敵する効能を実証した。ＲＴ００２の効能は、多数回治療サイクル、及び応答率及び効果の持続期間の両方を評価する多エンドポイントにわたり高度に一貫性があった。
【０４６６】
実施例７〜実施例８にわたる効能結果は、中程度〜重度の眉間しわ線のための登録治験において観察された最も高い応答者率及び最も長い効果の持続期間を表す。ダキシ（これらの臨床治験のためのＲＴ００２）の有効性は、単回の治療を超えて維持され、非常に高い割合の対象が、早くも１週目になし又は軽度のしわの治療目的を満たした。全体的に、１週目において９０％を超える応答があり、効能は、実施例７において見られた効能を超えたか、又はこれに匹敵した。
【０４６７】
なし又は軽度の応答率は、全ての３つの治療サイクルにわたり４週目まで通して、治験担当医によるＩＧＡ−ＦＷＳについての少なくとも９５％及び対象によるＰＦＷＳについての９１％まで増大し、実施例７アーム１及び２において観察された強固な応答を確認した。４週目において、実施例８の対象は、９５％を超える応答率及び高い２点混成応答率を実現し、この応答率は、各連続した治療サイクルと共に増大した（治療サイクル１＝７３．２％、治療サイクル２＝７７．５％及び治療サイクル３＝７９．６％）。実施例８の結果は、プラセボ対照実施例７アーム１及び２研究に参加した対象において４週目に観察された、それぞれ、７３．６％及び７４．０％の高い２点混成応答率を確認する。
【０４６８】
応答者率の要約：この研究の結果は、眉間しわ線のための登録治験において観察された最も高い応答者率を表す。非常に高い割合の対象が、治療目的を満たした。全ての治療サイクルにわたり、４週目において、治験担当医の９５％及び対象の９１％が、対象が眉間しわ線を有しないか、又は軽度の眉間しわ線を有すると評定した（それぞれ、ＩＧＡ−ＦＷＳ、ＰＦＷＳスケールで）。さらに、治験担当医の９９％及び対象の９７％が、全ての治療サイクルにおける４週目において、ＧＡＩＳについての眉間しわ線の改善を報告した。７０％を超える治験担当医及び６０％を超える対象が、サイクル１及び２の２４週目における改善の維持を報告した。また、ＦＤＡが義務付けた２点混成応答エンドポイントを満たす対象の割合は、実施例７のアーム１及び２に匹敵し、治療サイクル１、２及び３の４週目において、それぞれ、７３．２％、７７．５％及び７９．６％の応答者率であった。
【０４６９】
３回の治療を受容した対象（ｎ＝３４０）において、ＲＴ００２の反復投薬は有効であり、効果の持続期間の延長及び経時的に増大する高応答率を伴った。
−  ２点改善ＩＧＡ：７３．２％／７７．７％／７９．６％
−  なし又は軽度ＩＧＡスコア：９５．８％／９６．６％／９７．７％
【０４７０】
効果の持続期間の要約：実施例８の結果は、実施例７のアーム１及び２において４０Ｕ用量のＲＴ００１で観察された臨床利益の長い持続期間を確認し、治療サイクルにわたる一貫性を実証する。ベースライン眉間しわ線重症度に戻るまでの時間中央値は、治療サイクル１及び２において２８週間であり、実施例７のアーム１及び２の中枢研究において観察された完全な治療効果の喪失までにかかる時間とも一致する。なし又は軽度のしわ重症度の喪失までの時間中央値は、実施例８治療サイクル１及び２において、治験担当医及び対象の両方によって評価される２４週間であり、実施例７のアーム１及び２において観察された臨床利益の持続期間と同一であった。
【０４７１】
年齢及び以前の毒素曝露部分群における効果の持続期間は、実施例８の全集団と同様であるか、又はそれよりも長く、眉間しわ線の治療におけるＲＴ００２の予測性及び一貫性を実証した。年齢により、６５歳未満の対象について、及び実施例８の全集団についての２８週間と比較して、６５歳以上の対象におけるベースラインしわ重症度に戻るまでの時間は、３１週間であった。６５歳以上の対象は、６５歳未満の対象及び実施例８の全集団と同じ、なし又は軽度のしわ重症度の喪失までの時間を経験し、２４週間の持続期間中央値を有した。以前の毒素曝露により、ＲＴ００２治療時における以前のＢｏＮＴＡ曝露にかかわらず、ベースラインしわ重症度に戻るまでの時間中央値は２８週間であり、なし又は軽度のしわ重症度の喪失までの時間中央値は２４週間であった。
【０４７２】
一貫性の要約：安全性、効能及び持続期間は、実施例７において見られた安全性、効能及び持続期間を超えたか、又はこれらに匹敵し；安全性プロファイルは、実施例７アーム１及び２並びに他の承認されている神経調節物質と一致し；効果の持続期間の延長は、年齢及び毒素治療経験を含む、全ての治療群にわたり見られた。
【０４７３】
結論：この研究は、中程度〜重度の眉間しわ線（ＧＬ，glabellar line）の治療のためのＲＴ００２の多数回治療の長期効能及び安全性を評価した。各治療間の間隔は、３６週間の最長治療持続期間で少なくとも１２週間であった。研究は、最長で８４週間のフォローアップデータ、及び実施例７の治験より広範な研究薬への曝露を提供する。この研究は、臨床現場における経時的な反復投与を模倣するＲＴ００２の最初の長期研究である。全体で２６９１人の対象が登録され、１０３３人の対象が多数回（最多で３回）治療を受容した。
【０４７４】
単回治療後に高い応答率及び長い効果の持続期間が観察され、この研究の多数回治療にわたり維持され、より広い臨床施設の選択を伴うより大きな研究において、実施例７の単回治療療研究において見られたアウトカムを再確認した。
【０４７５】
単回治療実施例７研究において観察された強固な効能は、連続したＲＴ００２治療により維持され、新しい安全性の問題は観察されなかった一方で、治療関連ＡＥの発生率は、連続した治療と共に低下した。この研究は、８４週間にわたるＲＴ００２による眉間しわ線の最多で３回の治療は、認容性が良好であったこと、及び９５％を超える患者が、２４週間続く、なし又は軽度の応答の喪失までの時間中央値として定義される効果の持続期間を伴う、なし又は軽度の重症度の治療目的に達したことを実証した。
【０４７６】
研究結果のさらなる詳細は、以下の通りである。
【０４７７】
この研究は、ほぼ２，７００人の対象を登録し、少なくとも２，１００回の単回治療及び５００回の三重治療の基準を満たした。
【０４７８】
対象配置：表３３及び表３４Ａ〜３４Ｂを参照されたい。
【０４７９】
【表３８】
2021505570.tif 000042
【０４８０】
【表３９】
2021505570.tif 000043
【０４８１】
【表４０】
2021505570.tif 000044
【０４８２】
実施例７と比較した個体群統計：治療集団は、実施例７のアーム１及び２の治療集団と同様であった。表３５及び表３６を参照されたい。
【０４８３】
【表４１】
2021505570.tif 000045
【０４８４】
【表４２】
2021505570.tif 000046
【０４８５】
安全性アウトカム：実施例７と比較した有害事象の要約：ＡＥの大部分は重症度が軽度であり、実施例７及び実施例８の任意の治験において治療関連ＳＡＥは起こらなかった。表３７を参照されたい。
【０４８６】
【表４３】
2021505570.tif 000047
【０４８７】
表３８は、実施例７と比較した、因果関係にかかわらない有害事象（２％以上）を示す。
【０４８８】
【表４４】
2021505570.tif 000048
【０４８９】
表３９Ａ〜３９Ｂ及び表４０は、実施例７と比較した、治療関連有害事象（１％以上）を示す。表３９Ａに示す通り、治療関連ＡＥ率は低く、実施例８の研究において連続した治療と共に減少した。
【０４９０】
【表４５】
2021505570.tif 000049
【０４９１】
【表４６】
2021505570.tif 000050
【０４９２】
【表４７】
2021505570.tif 000051
【０４９３】
表４１は、全ての３回の治療を受容した対象（ｎ＝３４０）における治療サイクルにわたるＡＥを示す。
【０４９４】
【表４８】
2021505570.tif 000052
【０４９５】
効能アウトカム：図２４Ａ〜２４Ｂは、研究間で４週目において眉間しわ線の改善を維持する対象の割合を描写する。図２４Ａは、実施例７のアーム１及び２並びに実施例８における４週目において、最大限に顔をしかめたときの２点以上の混成応答を実現する対象の割合を描写する。示される通り、２点混成応答は、研究間及び治療間で同等であった。さらに、ＲＴ００２は、眉間しわ線重症度の外観を有意に改善し、治療応答は、連続した治療サイクルにわたり増大した。図２４Ｂは、実施例７、アーム１及び２並びに実施例８のフェーズ３研究にわたる４週目において治験担当医及び対象の両方によるＧＡＩＳスコアについて少なくとも＋１のスコアを実現する対象を描写する。
【０４９６】
表４２Ａ及び表４２Ｂは、治療後の様々な時点における治療に応答した、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳによって査定される「なし」又は「軽度」のしわスコアを有する実施例７及び実施例８の対象のパーセントを示す。示される通り、なし／軽度のアウトカムについての重要な測定値について強固な応答率があった。
【０４９７】
【表４９】
2021505570.tif 000053
【０４９８】
図２５Ａ及び図２５Ｂは、このデータをグラフで描写し、治療後の様々な時点における治療に応答した、ＩＧＡ−ＦＷＳ（図２５Ａ）及びＰＦＷＳ（図２５Ｂ）によって査定される「なし」又は「軽度」のしわスコアを有する実施例７及び実施例８の対象のパーセントを示す。示される通り、アウトカムは、研究間及びサイクル間で両方の場合において一致した。
【０４９９】
図２６Ａ及び図２６Ｂは、ＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についての「なし」又は「軽度」のスコアの喪失について（図２６Ａ）、及びＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインへの戻りの喪失の（図２６Ｂ）、治療後の時間に対する実施例７及び実施例８の対象のパーセントを描写する。図２６Ａで示される通り、実施例８の治療サイクル１及び２における（すなわち、第１及び第２のＲＴ００２治療後の）なし／軽度のしわ重症度の喪失までの時間について、２４週間の持続期間中央値が実現され、実施例７のアーム１及び２におけるなし／軽度のスコアの喪失までの時間を確認した。図２６Ｂで示される通り、実施例８の治療サイクル１及び２における（すなわち、第１及び第２のＲＴ００２治療後の）ベースラインに戻るまでの時間について、２８週間の持続期間中央値が実現され、実施例７のアーム１及び２におけるベースラインに戻るまでの時間を確認した。
【０５００】
図２７Ａ及び図２７Ｂは、最大限に顔をしかめたときの対象によるＧＡＩＳ（Ｐ−ＧＡＩＳ）によって（図２７）、又は最大限に顔をしかめたときの治験担当医によるＧＡＩＳ（Ｉ−ＧＡＩＳ）によって（図２７Ｂ）査定される、治療後の経時的な応答を示す実施例８の対象のパーセントを描写する。応答は、１より大きいか、又はこれに等しいスコアである。
【０５０１】
写真：図２８Ａ及び図２８Ｂは、説明されるこの研究の結果を例示する対象の写真を描写する。図２８Ａは、１６週目まで通した効果の持続期間の維持を伴う、４週目におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳによる２点改善；並びに２４週目において残る１点改善の例を描写する。図２８Ｂは、１６週目まで通した効果の持続期間の維持を伴う、４週目におけるＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳによる２点改善；並びに２４週目において残る１点改善の別の例を描写する。
【０５０２】
部分群分析：図２９及び図３０は、部分群毎の応答についての追加情報を提供する。
【０５０３】
図２９は、部分群毎のＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのなし又は軽度のスコアの喪失までの時間中央値を描写する。示される通り、年齢及び以前の毒素経験にかかわらず、２４週間の治療持続期間が実現された。
【０５０４】
図３０は、部分群毎のＩＧＡ−ＦＷＳ及びＰＦＷＳの両方についてのベースラインに戻るまでの時間中央値を描写する。示される通り、以前の毒素経験にかかわらず、６５歳未満の対象において、２８週間の治療持続期間が実現され、６５歳以上の対象においては持続期間が３１．４週間まで延長された。
【０５０５】
全体の要約：この研究では、２，６９１人の患者が、ＲＴ００２で治療され、新しい安全性又は認容性の懸念を伴わず、実施例５及び実施例７における以前の研究と一致する安全性プロファイルを提供した。実施例８の研究において、全部で３，８３０回のＲＴ００２  ４０Ｕ注射が投与された。特に、低率、つまり０．９％（３，８３０回の治療において３５事象）の眼瞼下垂が観察され、６６の施設における対象の１．３％において眼瞼下垂が起こった。これは、３０の施設における実施例７のアーム１及び２で治療された４０５人の対象における２．２％の率と同等である。
【０５０６】
実施例８は、４０Ｕの用量のＲＴ００２による実施例７のアーム１及び２中枢治験において見られた効能を超えるか、又はこれに匹敵する効能を実証した。実施例８の結果は、実施例７のアーム１及び２において４０Ｕ用量のＲＴ００２により観察された臨床利益の長い持続期間を確認し、治療サイクル間での一貫性を実証する。なし又は軽度のしわ重症度の喪失までの時間中央値は、実施例８の治療サイクル１及び治療サイクル２の両方において、治験担当医及び対象の両方により評価される２４週間であった。これは、実施例７のアーム１及び２において観察された臨床利益の持続期間と同一である。ベースライン眉間しわ線重症度に戻るまでの時間中央値は、治療サイクル１及び２で２８週間であり、これもまた、プラセボ対照実施例７のアーム１及び２治験において観察された完全な治療効果の喪失までにかかる時間と一致する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2021505570.tif 000060
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
2021505570.tif 000062
【図６Ｂ】
2021505570.tif 000063
【図７】
2021505570.tif 000064
【図８】
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【図９】
2021505570.tif 000066
【図１０】
2021505570.tif 000067
【図１１】
2021505570.tif 000068
【図１２】
2021505570.tif 000069
【図１３】
2021505570.tif 000070
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
2021505570.tif 000087
【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
2021505570.tif 000089
【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
2021505570.tif 000091
【図２８Ｂ】
2021505570.tif 000092
【図２９】
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【図３０】
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【国際調査報告】
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