(57)【要約】  ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子、キメラ受容体及び改変免疫細胞が本発明によって開示される。本発明は、ＳＴＥＡＰ１抗原結合分子及び改変免疫細胞を用いたベクター、組成物並びに治療及び／又は検出方法に更に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体であって、前記抗原結合分子は：
ａ）配列番号８９、９９、１０９、１１９、１２９又は１３９のアミノ酸配列とは３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ１；又は
ｂ）配列番号９０、１００、１１０、１２０、１３０又は１４０のアミノ酸配列とは３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ２；又は
ｃ）配列番号９１、１０１、１１１、１２１、１３１又は１４１のアミノ酸配列とは３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号９４、１０４、１１４、１２４、１３４又は１４４のアミノ酸配列とは３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ１；又は
ｅ）配列番号９５、１０５、１１５、１２５、１３５又は１４５のアミノ酸配列とは３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ２；又は
ｆ）配列番号９６、１０６、１１６、１２６、１３６又は１４６のアミノ酸配列とは３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ３；又は
ｇ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変重鎖ＣＤＲ１配列のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ１；又は
ｈ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変重鎖ＣＤＲ２配列のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ２；又は
ｉ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変重鎖ＣＤＲ３配列のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３；又は
ｊ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変軽鎖ＣＤＲ１配列のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ１；又は
ｋ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変軽鎖ＣＤＲ２配列のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ２；又は
ｌ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変軽鎖ＣＤＲ３配列のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ３；又は
ｍ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４、又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変重鎖配列とは１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下の残基だけ異なる可変重鎖配列；又は
ｎ）クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４、又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変軽鎖配列とは１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下の残基だけ異なる可変軽鎖配列
を含む、キメラ抗原受容体。
【請求項２】
少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３】
少なくとも１つの活性化ドメインを更に含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項５】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８を含む、請求項４に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項６】
ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６又は配列番号８の配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なる配列を含む、請求項５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項７】
ＣＤ８共刺激ドメインは、配列番号１４の配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なる配列を含む、請求項３に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項８】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３を含む、請求項３に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項９】
前記ＣＤ３は、ＣＤ３ζを含む、請求項７に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１０】
前記ＣＤ３ζは、配列番号１０の配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なる配列を含む、請求項８に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１１】
前記共刺激ドメインは、配列番号２の配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なる配列を含み、及び前記活性化ドメインは、配列番号１０の配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なる配列を含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１２】
請求項１に記載のキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１４】
レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
請求項１３に記載のベクターを含む免疫細胞。
【請求項１６】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項１５に記載の免疫細胞。
【請求項１７】
前記細胞は、自己Ｔ細胞である、請求項１６に記載の免疫細胞。
【請求項１８】
前記細胞は、同種異系Ｔ細胞である、請求項１６に記載の免疫細胞。
【請求項１９】
前記ベクターは、患者の身体から単離される、又は患者の身体から採取された試料から増殖させられる細胞に導入される、請求項１５に記載の免疫細胞。
【請求項２０】
前記ベクターは、ドナーの身体から単離される、又は患者の身体から採取された試料から増殖させられる細胞に導入される、請求項１５に記載の免疫細胞。
【請求項２１】
請求項１５に記載の免疫細胞を含む医薬組成物。
【請求項２２】
（ａ）クローン２Ｆ３のＶＨ領域及びクローン２Ｆ３のＶＬ領域；
（ｂ）クローン１１Ｃ２のＶＨ領域及びクローン１１Ｃ２のＶＬ領域；
（ｃ）クローン１Ａ１のＶＨ領域及びクローン１Ａ１のＶＬ領域：
（ｄ）クローン７Ａ４のＶＨ領域及びクローン７Ａ４のＶＬ領域；
（ｅ）クローン７Ａ５のＶＨ領域及びクローン７Ａ５のＶＬ領域；又は
（ｆ）クローン１４Ｃ１のＶＨ領域及びクローン１４Ｃ１のＶＬ領域；
を含むキメラ抗原受容体であって、前記ＶＨ領域及びＶＬ領域は、少なくとも１つのリンカーによって連結されている、キメラ抗原受容体。
【請求項２３】
前記リンカーは、ｓｃＦｖ  Ｇ４Ｓリンカー又はｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーを含む、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２４】
共刺激ドメインを更に含む、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２５】
活性化ドメインを更に含む、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２６】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項２４に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２７】
請求項２２に記載のキメラ抗原受容体を含む免疫細胞。
【請求項２８】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項２７に記載の免疫細胞。
【請求項２９】
自己Ｔ細胞である、請求項２８に記載のＴ細胞。
【請求項３０】
同種異系Ｔ細胞である、請求項２９に記載のＴ細胞。
【請求項３１】
請求項２７に記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項３２】
請求項２２に記載のキメラ抗原受容体をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項３３】
請求項３２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３４】
請求項３３に記載のベクターを含む免疫細胞。
【請求項３５】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項３４に記載の免疫細胞。
【請求項３６】
自己Ｔ細胞である、請求項３５に記載のＴ細胞。
【請求項３７】
同種異系Ｔ細胞である、請求項３５に記載のＴ細胞。
【請求項３８】
構築物２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ、構築物２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８、構築物２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ、構築物２Ｆ３−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８、構築物２Ｆ３−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ、構築物１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ、構築物１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８、構築物１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ、構築物１１Ｃ２−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８、構築物１１Ｃ２−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ、構築物１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ、構築物１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８、構築物１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ、構築物１Ａ１−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８、構築物１Ａ１−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ、構築物７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ、構築物７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８、構築物７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ、構築物７Ａ４−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８、構築物７Ａ４−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ、構築物７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ、構築物７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８、構築物７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ、構築物７Ａ５−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８、構築物７Ａ５−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ、構築物１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ、構築物１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８、構築物１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ、構築物１４Ｃ１−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８又は構築物１４Ｃ１−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ２Ｆ３  ＣＤ２８のアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項３９】
請求項３８に記載のポリペプチドをコードするベクター。
【請求項４０】
請求項３８に記載のポリペプチドを含む免疫細胞。
【請求項４１】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項４０に記載の免疫細胞。
【請求項４２】
自己Ｔ細胞である、請求項４１に記載のＴ細胞。
【請求項４３】
同種異系Ｔ細胞である、請求項４１に記載のＴ細胞。
【請求項４４】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子は、クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４、クローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４５】
活性化ドメインを更に含む、請求項４４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４６】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３である、請求項４５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４７】
前記ＣＤ３は、ＣＤ３ζである、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
前記ＣＤ３ζは、配列番号９に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
共刺激ドメインを更に含む、請求項４４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項４９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号２に記載されたアミノ酸配列をコードする、請求項５０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
請求項４１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項５３】
請求項４９に記載のベクターを含む免疫細胞。
【請求項５４】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項５０に記載の免疫細胞。
【請求項５５】
自己Ｔ細胞である、請求項５１に記載のＴ細胞。
【請求項５６】
同種異系Ｔ細胞である、請求項５１に記載のＴ細胞。
【請求項５７】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記ＣＡＲ又はＴＣＲは、ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含み、前記抗原結合分子は、
ａ．クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４、又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変重鎖配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下の残基だけ異なる可変重鎖配列；及び／又は
ｂ．クローン２Ｆ３、クローン１１Ｃ２、クローン１Ａ１、クローン７Ａ４又はクローン７Ａ５又はクローン１４Ｃ１の可変軽鎖配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下の残基だけ異なる可変軽鎖配列を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項５８】
活性化ドメインを更に含む、請求項５４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５９】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３である、請求項５５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６０】
前記ＣＤ３は、ＣＤ３ζである、請求項５６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６１】
前記ＣＤ３ζは、配列番号９に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項６０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６２】
共刺激ドメインを更に含む、請求項５７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６３】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項６２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６４】
ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号３に記載されたヌクレオチド配列を含む、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６５】
ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１に記載されたヌクレオチド配列を含む、請求項６４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６６】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号８９）、ＣＤＲ２（配列番号９０）及びＣＤＲ３（配列番号９１）を含み、前記抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号９４）、ＣＤＲ２（配列番号９５）及びＣＤＲ３（配列番号９６）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項６７】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号９９）、ＣＤＲ２（配列番号１００）及びＣＤＲ３（配列番号１０１）を含み、前記抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１０４）、ＣＤＲ２（配列番号１０５）及びＣＤＲ３（配列番号１０６）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項６８】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１０９）、ＣＤＲ２（配列番号１１０）及びＣＤＲ３（配列番号１１１）を含み、前記抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１１４）、ＣＤＲ２（配列番号１１５）及びＣＤＲ３（配列番号１１６）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項６９】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１１９）、ＣＤＲ２（配列番号１２０）及びＣＤＲ３（配列番号１２１）を含み、前記抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１２４）、ＣＤＲ２（配列番号１２５）及びＣＤＲ３（配列番号１２６）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７０】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１２９）、ＣＤＲ２（配列番号１３０）及びＣＤＲ３（配列番号１３１）を含み、前記抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１３４）、ＣＤＲ２（配列番号１３５）及びＣＤＲ３（配列番号１３６）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７１】
ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１３９）、ＣＤＲ２（配列番号１４０）及びＣＤＲ３（配列番号１４１）を含み、前記抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１４４）、ＣＤＲ２（配列番号１４５）及びＣＤＲ３（配列番号１４６）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７２】
治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１２、４４、５７、６６、６７、６８、６９、７０又は７１に記載のポリヌクレオチドを前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項７３】
治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、請求項３８に記載のポリペプチドを前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項７４】
治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１又は２２に記載のキメラ抗原受容体を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項７５】
治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１５、２７、３４、４０又は５３に記載の細胞を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項７６】
治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、請求項２１又は３１に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項７７】
前記疾患又は障害は、がんである、請求項７２、７３、７４、７５又は７６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記がんは、前立腺がんである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記がんは、転移性去勢抵抗性前立腺がんである、請求項７８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
前立腺がんは、男性において皮膚癌は別として最も頻回に診断されるがんである。２０１２年においては推定２８，１７０例の死亡例が生じ、前立腺がんは、男性におけるがん死亡の第２の原因である。より進行性の疾患を治療するためには、ホルモン療法、化学療法、放射線又はこれらの治療の組み合わせが使用される。前立腺がん療法における上記に同定した進歩にもかかわらず、アンドロゲン受容体阻害剤未治療前立腺がんを含む前立腺がんの進行を効果的に阻害することができる追加の治療薬に対する大きなニーズがある。
【０００２】
改変免疫細胞は、特に腫瘍学における治療処置における所望の質を有することが示されている。改変免疫細胞の２つの主なタイプは、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」若しくは「ＣＡＲ−Ｔ」と称される）及びＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）を含有するものである。これらの改変細胞は、標的細胞を認識して死滅させるその能力を保持又は強化しながら、抗原特異性を得るように改変される。キメラ抗原受容体は、例えば、（ｉ）抗原特異的成分（「抗原結合分子」）、（ｉｉ）１つ以上の共刺激ドメイン、及び（ｉｉｉ）１つ以上の活性化ドメインを含み得る。各ドメインは、異種であってよく、即ち、異なるタンパク質鎖由来の配列を包含し得る。キメラ抗原受容体発現免疫細胞（Ｔ細胞等）は、がん療法を含む様々な療法に用いることができる。本明細書で定義される共刺激ポリペプチドを使用すると、標的抗原に対するＣＡＲ発現細胞の活性化を強化し、従って養子免疫療法の効力を増大させ得ることが理解されるであろう。
【０００３】
Ｔ細胞は、１種以上の所望の標的に対する特異性を有するように改変され得る。例えば、Ｔ細胞は、１つ以上のシグナル伝達分子及び／又はＣＤ３ζ（ゼータ）等の１つ以上の活性化ドメインと併せて、抗体の１つ以上の単鎖可変断片（「ｓｃＦｖ」）等の抗原結合分子をコードするＤＮＡ又は他の遺伝物質を形質導入することができる。
【０００４】
標的細胞を認識して破壊するＣＡＲ−Ｔ細胞の能力に加えて、成功したＴ細胞療法は、抗原に応答して増殖する能力を持続させて維持するＣＡＲ−Ｔ細胞の能力から利益を得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＳＴＥＡＰ１が関連する疾患及び障害を治療するための新規且つ改善された療法を特定する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、改変免疫細胞（ＣＡＲ若しくはＴＣＲ等）、ＳＴＥＡＰ１に対する特異性を有する抗原結合分子（これらの抗原結合分子の抗体、ｓｃＦｖ、重鎖及び／又は軽鎖並びにＣＤＲが挙げられるが、これらに限定されない）に関する。
【０００７】
本発明のキメラ抗原受容体は、典型的には：（ｉ）ＳＴＥＡＰ１特異性抗原結合分子、（ｉｉ）１つ以上の共刺激ドメイン、及び（ｉｉｉ）１つ以上の活性化ドメインを含む。各ドメインは、異種であり得る、従って異なるタンパク質鎖由来の配列を包含し得ることが理解されるであろう。
【０００８】
幾つかの実施形態では、本発明は、ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体であって、抗原結合分子が：（ａ）配列番号８９、９９、１０９、１１９、１２９又は１３９のアミノ酸配列と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９０、１００、１１０、１２０、１３０又は１４０のアミノ酸配列と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９１、１０１、１１１、１２１、１３１又は１４１と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号９４、１０４、１１４、１２４、１３４又は１４のアミノ酸配列と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号９５、１０５、１１５、１２５、１３５又は１４５のアミノ酸配列と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ２；（ｆ）配列番号９６、１０６、１１６、１２６、１３６又は１４６のアミノ酸配列と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ３の内の少なくとも１つを含むキメラ抗原受容体に関する。
【０００９】
他の実施形態では、キメラ抗原受容体は、少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む。更なる実施形態では、キメラ抗原受容体は、少なくとも１つの活性化ドメインを更に含む。
【００１０】
特定の実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε（イプシロン）、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（アルファ）（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ（ガンマ）受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β（ベータ）、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である。
【００１１】
幾つかの実施形態では、共刺激ドメインは、４−１ＢＢに由来する。他の実施形態では、共刺激ドメインは、ＯＸ４０に由来する。更に、Ｈｏｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２  Ｊｕｌ．１；１（４）：４５８−４６６も参照されたい。更に他の実施形態では、Ｇｕｅｄａｎ  ｅｔ  ａｌ．及びＳｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）６：３３に記載されたように、共刺激ドメインは、ＩＣＯＳを含む。更に他の実施形態では、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２  Ｊｕｌ．１；１（４）：５４７−５４９に記載されたように、共刺激ドメインは、ＣＤ２７を含む。
【００１２】
特定の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６又は配列番号８を含む。追加の実施形態では、ＣＤ８共刺激ドメインは、配列番号１４を含む。更なる実施形態では、活性化ドメインは、ＣＤ３、ＣＤ３ζ又は配列番号１０に記載された配列を有するＣＤ３ζを含む。
【００１３】
他の実施形態では、本発明は、共刺激ドメインが配列番号２を含み、活性化ドメインが配列番号１０を含む、キメラ抗原受容体に関する。
【００１４】
本発明は、キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド及びポリヌクレオチドを含むベクターに更に関する。ベクターは、例えば、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター又はこれらの任意の組み合わせであり得る。本発明は、ベクターを含む免疫細胞に更に関する。幾つかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｐＧＡＲベクターである。
【００１５】
例示的な免疫細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞は、自己、同種異系又は異種であり得る。他の実施形態では、本発明は、本明細書で説明する免疫細胞を含む医薬組成物に関する。
【００１６】
特定の実施形態では、本発明は、
（ａ）２Ｆ３のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び２Ｆ３のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域；
（ｂ）１１Ｃ２のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び１１Ｃ２のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域；
（ｃ）１Ａ１のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び１Ａ１のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域；
（ｄ）７Ａ４のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び７Ａ４のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域；
（ｅ）７Ａ５のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び７Ａ５のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域；
（ｆ）１４Ｃ１のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び１４Ｃ１のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域
の少なくとも１つを含む抗原結合分子（及びこれらの分子を含むキメラ抗原受容体）であって、１つ又は複数のＶＨ及びＶＬ領域が、少なくとも１つのリンカーによって連結される、抗原結合分子（及びこれらの分子を含むキメラ抗原受容体）に関する。
【００１７】
他の実施形態では、本発明は、リンカーがｓｃＦｖ  Ｇ４Ｓリンカー及びｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーの少なくとも１つを含む、抗原結合分子（及びこれらの分子を含むキメラ抗原受容体）に関する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチドをコードするベクター及びこれらのポリペプチドを含む免疫細胞に関する。好ましい免疫細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞が挙げられる。Ｔ細胞は、自己、同種異系又は異種であり得る。
【００１９】
他の実施形態では、本発明は、ＳＴＥＡＰ１に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、抗原結合分子が、配列番号１９又は配列番号２７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ３を含む単離ポリヌクレオチドに関する。ポリヌクレオチドは、活性化ドメインを更に含み得る。好ましい実施形態では、活性化ドメインは、ＣＤ３、より好ましくはＣＤ３ζ、より好ましくは配列番号９に記載されたアミノ酸配列である。
【００２０】
他の実施形態では、本発明は、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ３（α、β、δ、ε、γ、ζ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８））、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３リガンド等の共刺激ドメイン又はこれらの断片若しくは組み合わせを含む。好ましい共刺激ドメインは、以下に引用する。
【００２１】
本発明は、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物を対象に投与することを含む方法に更に関する。治療のための好適な疾患としては、転移性去勢抵抗性前立腺がんを含む前立腺がんが挙げられるがそれらに限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ヒト細胞株上のＳＴＥＡＰ１細胞表面発現に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。
【図２】様々なＣＡＲをコードするｍＲＮＡを用いて電気穿孔された一次ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現を示す図である。
【図３】多数の細胞株に対する電気穿孔ＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞溶解活性を示す図である。
【図４】電気穿孔ＣＡＲ  Ｔ細胞によるＩＦＮγ、ＩＬ−２及びＴＮＦαの産生を示す、図３Ａ及び３Ｂを含む図である。
【図５】２人の健常ドナー由来のレンチウイルス形質導入ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現を示す図である。
【図６】ｐＧＡＲのベクターマップを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ又はＣＡＲ−Ｔ）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が遺伝子改変受容体であることは、理解されるであろう。これらの改変受容体は、当技術分野で既知の技法に従って、Ｔ細胞を含む免疫細胞に容易に挿入することができ、その免疫細胞によって容易に発現され得る。ＣＡＲを用いると、特異性抗原を認識すること、及びその抗原と結合すると、その抗原を担持する細胞を攻撃して破壊するように免疫細胞を活性化することの両方を行うように、単一の受容体をプログラムすることができる。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在すると、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、その腫瘍細胞を標的化して死滅させることができる。
【００２４】
ＣＡＲは、標的化抗原と相互作用する抗原結合分子を組み込むことにより、抗原（細胞表面抗原等）に結合するように改変することができる。好ましくは、抗原結合分子は、その抗体断片、更に好ましくは１つ以上の単鎖抗体断片（「ｓｃＦｖ」）である。ｓｃＦｖは、一体に連結された抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を有する単鎖抗体断片である。米国特許第７，７４１，４６５号明細書及び同第６，３１９，４９４号明細書並びにＥｓｈｈａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９７）４５：１３１−１３６を参照されたい。ｓｃＦｖは、標的抗原と特異的に相互作用する親抗体の能力を保持している。ｓｃＦｖは、他のＣＡＲ成分と共に単鎖の一部として発現されるように改変され得るため、キメラ抗原受容体で使用するために好ましい。同上、更に、Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ  １８８，Ｎｏ．４，１９９８（６１９−６２６）；Ｆｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６１：２７９１−２７９７も参照されたい。抗原結合分子は、典型的には、それが目的の抗原を認識してそれと結合することができるように、ＣＡＲの細胞外部分内に含有されることは理解されるであろう。本発明の範囲内では、２つ以上の目的の標的に対する特異性を有する二重特異性及び多重特異性のＣＡＲが企図されている。
【００２５】
共刺激ドメイン。キメラ抗原受容体は、その効能を高めるために、共刺激（シグナル伝達）ドメインを組み込むことができる。米国特許第７，７４１，４６５号明細書及び同第６，３１９，４９４号明細書並びにＫｒａｕｓｅ，ｅｔ  ａｌ．及びＦｉｎｎｅｙ，ｅｔ  ａｌ．（上記）、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１９：６９６−７０６（２０１２）；Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３：９５（２０１１）；Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：７２５−３３（２０１１）及びＧｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．５６：５９−８３（２０１６）を参照されたい。例えば、ＣＤ２８は、Ｔ細胞上で自然に見出される共刺激タンパク質である。ＣＤ２８の完全天然アミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６１３０．１に記載されている。完全天然ＣＤ２８核酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６１３９．１に記載されている。
【００２６】
特定のＣＤ２８ドメインは、キメラ抗原受容体に使用されてきた。一実施形態では、「ＣＤ２８Ｔ」と称される新規なＣＤ２８細胞外ドメインを使用することができ、これは予想外にもＣＡＲ構築物において利用されると特定の利益を提供することが見出されている。
【００２７】
細胞外ＣＤ２８Ｔドメイン並びにＣＤ２８膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むＣＤ２８Ｔ分子のヌクレオチド配列は、配列番号１：
【化１】
2021530233.tif 000002
に記載されている。
【００２８】
対応するアミノ酸配列は、配列番号２：
【化２】
2021530233.tif 000003
に記載されている。
【００２９】
ＣＤ２８Ｔの細胞外部分のヌクレオチド配列は、配列番号３：
【化３】
2021530233.tif 000004
に記載されている。
【００３０】
ＣＤ２８Ｔ細胞外ドメインの対応するアミノ酸配列は、配列番号４：ＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩ  ＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰ  ＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰに記載されている。
【００３１】
ＣＤ２８膜貫通ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号５：
【化４】
2021530233.tif 000005
に記載されている。
【００３２】
ＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、配列番号６：ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶ  ＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶ  ＡＦＩＩＦＷＶに記載されている。
【００３３】
ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号７：
【化５】
2021530233.tif 000006
に記載されている。
【００３４】
ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列は、配列番号８：ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳに記載されている。
【００３５】
本発明で使用するのに好適な追加のＣＤ２８配列としては、配列番号１１：
【化６】
2021530233.tif 000007
に記載されたＣＤ２８ヌクレオチド配列が挙げられる。
【００３６】
対応するアミノ酸配列は、配列番号１２：ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰに記載されている。
【００３７】
他の好適な細胞外又は膜貫通配列は、ＣＤ８に由来し得る。好適なＣＤ８の細胞外及び膜貫通ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号１３：
【化７】
2021530233.tif 000008
に記載されている。
【００３８】
対応するアミノ酸配列は、配列番号１４：
【化８】
2021530233.tif 000009
に記載されている。
【００３９】
他の好適な細胞内シグナル伝達配列は、４１−ＢＢに由来し得る。好適な４１−ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号１５：
【化９】
2021530233.tif 000010
に記載されている。
【００４０】
対応するアミノ酸配列は、配列番号１６：ＲＦＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬに記載されている。
【００４１】
本発明の範囲内に含まれる好適な共刺激ドメインは、他の供給源の中でもとりわけ、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ３（α、β、δ、ε、γ、ζ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３リガンド又はこれらの断片若しくは組み合わせに由来し得る。
【００４２】
活性化ドメイン。
ＣＤ３は、天然Ｔ細胞上のＴ細胞受容体の一要素であり、ＣＡＲにおいて重要な細胞内活性化要素であることが証明されている。好ましい実施形態では、ＣＤ３は、ＣＤ３ζであり、そのヌクレオチド配列は、配列番号９：
【化１０】
2021530233.tif 000011
に記載されている。
【００４３】
細胞内ＣＤ３ζの対応するアミノ酸は、配列番号１０：
【化１１】
2021530233.tif 000012
に記載されている。
【００４４】
ドメイン配向
構造的に、これらのドメインが、免疫細胞に相対する位置に対応することは理解されるであろう。従って、これらのドメインは、（ｉ）「ヒンジ」若しくは細胞外（ＥＣ）ドメイン（ＥＣ）、（ｉｉ）膜貫通（ＴＭ）ドメイン、及び／又は（ｉｉｉ）細胞内（細胞質）ドメイン（ＩＣ）の一部であり得る。細胞内成分は、抗原結合分子がその標的に結合するとＴ細胞を活性化することができる、ＣＤ３ファミリーのメンバー、好ましくはＣＤ３ζを一部に含むことが多い。一実施形態では、ヒンジドメインは、典型的には、本明細書で定義される少なくとも１つの共刺激ドメインを包含する。
【００４５】
ヒンジ領域は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ等の免疫グロブリンファミリーのメンバー又はこれらの断片の一部若しくは全部も含有し得ることも理解されるであろう。
【００４６】
本発明による例示的なＣＡＲ構築物は、表１に記載した。
【００４７】
【表１】
2021530233.tif 000013
【００４８】
【表２】
2021530233.tif 000014
【００４９】
【表３】
2021530233.tif 000015
【００５０】
細胞に比較したドメイン
受容体を担持する細胞に比較して、本発明の改変Ｔ細胞は、抗原結合分子（ｓｃＦｖ等）、細胞外ドメイン（「ヒンジ」ドメインを含み得る）、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むことは理解されるであろう。細胞内ドメインは、少なくとも一部には、好ましくはＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ又はそれらの一部等のＣＤ３ファミリーメンバーを包含する活性化ドメインを含む。更に、抗原結合分子（例えば、１つ以上のｓｃＦｖ）が、その１つ以上の標的を認識して結合できるように、分子／構築物の細胞外部分内に位置するように改変されていることも理解されるであろう。
【００５１】
細胞外ドメイン。細胞外ドメインは、シグナル伝達のために、及び抗原に対するリンパ球の効率的な応答のために有益である。本発明における特定の使用の細胞外ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせに由来し得る（即ちこれらを含み得る）。細胞外ドメインは、天然の供給源又は合成の供給源の何れかに由来し得る。
【００５２】
本明細書で説明するように、細胞外ドメインは、ヒンジ部分を含む場合が多い。これは、「スペーサー」領域と呼ばれる場合がある細胞外ドメインの一部分である。上記で考察した共刺激分子並びに免疫グロブリン（Ｉｇ）配列又は他の好適な分子を含む様々なヒンジを本発明に従って使用すると、標的細胞からの所望の特定の距離を達成することができる。幾つかの実施形態では、全細胞外領域がヒンジ領域を含む。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８Ｔ又はＣＤ２８のＥＣドメインを含む。
【００５３】
膜貫通ドメイン。ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合した膜貫通ドメインを含むように設計され得る。ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞内ドメインにも同様に融合され得る。一実施形態では、ＣＡＲのドメインの１つと自然に結び付いている膜貫通ドメインが使用される。幾つかの場合、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするために、膜貫通ドメインの同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの結合を回避するためのアミノ酸置換によって選択又は改変することができる。膜貫通ドメインは、天然供給源又は合成供給源の何れかに由来し得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明における特定の使用の膜貫通領域は、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせに由来し得る（即ちこれらを含み得る）。
【００５４】
任意選択的に、短いリンカーは、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインの何れか又は幾つかの間で結合を形成し得る。
【００５５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインである。一実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号１３の核酸配列の膜貫通部分を含む。別の実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号１４内に含有される膜貫通アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。
【００５６】
特定の実施形態では、本発明のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。一実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号５の核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【００５７】
細胞内（細胞質）ドメイン。本発明の改変Ｔ細胞の細胞内（細胞質）ドメインは、免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化を提供することができる。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。
【００５８】
好適な細胞内分子としては、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせが挙げられる（即ちこれらを含む）が、これらに限定されないことは理解されるであろう。
【００５９】
好ましい実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを単独で又は本発明のＣＡＲとの関係において有用な任意の他の所望の細胞質ドメインとの組み合わせで含むように設計され得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分及び共刺激シグナル伝達領域を含むことができる。
【００６０】
本発明のＣＡＲの細胞質シグナル伝達部分内の細胞質シグナル伝達配列は、互いにランダムな順序又は特定の順序で連結され得る。
【００６１】
好ましい一実施形態では、細胞質ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインとＣＤ２８のシグナル伝達ドメインとを含むように設計される。別の一実施形態では、細胞質ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインと４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインとを含むように設計されるが、ここで細胞質ＣＤ２８は、配列番号１５に記載された核酸配列及び配列番号１６に記載されたアミノ酸配列を含む。別の一実施形態では、本発明のＣＡＲにおける細胞質ドメインは、ＣＤ２８の一部分及びＣＤ３ζを含むように設計されるが、ここで細胞質ＣＤ２８は、配列番号７に記載された核酸配列及び配列番号８に記載されたアミノ酸配列を含む。ＣＤ３ζ核酸配列は、配列番号９に記載されており、アミノ酸配列は、配列番号８に記載されている。
【００６２】
本発明によるＣＡＲの好ましい配向の１つが共刺激ドメイン及び活性化ドメインと並行して抗原結合分子（ｓｃＦｖ等）を含むことは、理解されるであろう。共刺激ドメインは、細胞外部分、膜貫通部分及び細胞内部分の１つ以上を含み得る。複数の共刺激ドメインが並行して利用され得ることも又、理解されるであろう。
【００６３】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子、少なくとも１つの共刺激分子及び活性化ドメインをコードする第１ポリヌクレオチドに操作可能に連結したプロモーターを含む核酸が提供される。
【００６４】
幾つかの実施形態では、核酸構築物は、ウイルスベクター内に含有される。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター及びワクシニアウイルスベクターから成る群から選択される。幾つかの実施形態では、核酸は、プラスミド内に含有される。
【００６５】
本発明は、キメラ抗原受容体をコードする単離ポリヌクレオチド及びポリヌクレオチドを含むベクターに更に関する。当技術分野で既知の任意のベクターは、本発明に好適であり得る。幾つかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター（ｐＭＳＶＧ１等）、ＤＮＡベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター（ｐＧＡＲ等）又はこれらの任意の組み合わせである。ｐＧＡＲのベクターマップは、図６に示した。ｐＧＡＲの配列は、以下の通りである：
【化１２】
2021530233.tif 000016
【化１３】
2021530233.tif 000017
【化１４】
2021530233.tif 000018
【化１５】
2021530233.tif 000019
【化１６】
2021530233.tif 000020
【００６６】
好適な追加の例示的ベクターとしては、例えば、ｐＢＡＢＥ−ｐｕｒｏ、ｐＢＡＢＥ−ｎｅｏ  ｌａｒｇｅＴｃＤＮＡ、ｐＢＡＢＥ−ｈｙｇｒｏ−ｈＴＥＲＴ、ｐＭＫＯ．１  ＧＦＰ、ＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ、ｐＭＳＣＶ  ＰＩＧ（Ｐｕｒｏ  ＩＲＥＳ  ＧＦＰ空プラスミド）、ｐＭＳＣＶ−ｌｏｘｐ−ｄｓＲｅｄ−ｌｏｘｐ−ｅＧＦＰ−Ｐｕｒｏ−ＷＰＲＥ、ＭＳＣＶ  ＩＲＥＳルシフェラーゼ、ｐＭＩＧ、ＭＤＨ１−ＰＧＫ−ＧＦＰ＿２．０、ＴｔＲＭＰＶＩＲ、ｐＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ｍＣｈｅｒｒｙ  ＦＰ、ｐＲｅｔｒｏＸ  ＧＦＰ  Ｔ２Ａ  Ｃｒｅ、ｐＲＸＴＮ、ｐＬｎｃＥＸＰ及びｐＬＸＩＮ−Ｌｕｃが挙げられる。
【００６７】
幾つかの実施形態では、改変免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は、末梢血から得られるか又は調製される。幾つかの実施形態では、細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から得られるか又は調製される。幾つかの実施形態では、細胞は、骨髄から得られるか又は調製される。幾つかの実施形態では、細胞は、臍帯血から得られるか又は調製される。幾つかの実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は、エレクトロポレーション、ソノポレーション、微粒子銃（例えば、遺伝子銃）、脂質形質移入、ポリマー形質移入、ナノ粒子又はポリプレックスから成る群から選択される方法を用いて、核酸ベクターによって形質移入又は形質導入される。
【００６８】
幾つかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、本出願の核酸を含む改変免疫細胞中で発現する。本出願のこれらのキメラ抗原受容体は、幾つかの実施形態では、（ｉ）抗原結合分子（ｓｃＦｖ等）、（ｉｉ）膜貫通領域、及び（ｉｉｉ）Ｔ細胞活性化分子又は領域を含み得る。
【００６９】
抗原結合分子
抗原結合分子は、本発明の範囲内に含まれる。
【００７０】
本明細書で使用する「抗原結合分子」は、特定の標的抗原と結合する任意のタンパク質を意味する。本出願では、特定の標的抗原は、ＳＴＥＡＰ１タンパク質又はその断片である。抗原結合分子としては、抗体及び免疫学的に機能性の断片等のその結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。ペプチボディ（即ちペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。
【００７１】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、腫瘍細胞上の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患に関与する細胞上の抗原又はウイルス性若しくは細菌性抗原に結合する。特定の実施形態では、抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ１に結合する。更なる実施形態では、抗原結合分子は、その相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ以上を含むその断片の抗体である。更なる実施形態では、抗原結合分子は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【００７２】
抗原結合分子の用語「免疫学的に機能性の断片」（又は「断片」）は、完全長鎖中に存在するアミノ酸の少なくとも一部分を欠いているが、なお抗原に特異的に結合することができる抗体の一部分（その部分がどのように得られるか又は合成されるかに関わらず）を含む抗原結合分子の種である。そのような断片は、それが標的抗原に結合するという点で生物学的に活性であり、所与のエピトープへの結合に関してインタクトな抗体を含む他の抗原結合分子と競合し得る。幾つかの実施形態では、断片は、中和断片である。幾つかの実施形態では、断片は、ＳＴＥＡＰ１の活性を遮断又は低減することができる。一態様では、このような断片は、完全長軽鎖又は重鎖中に存在する少なくとも１つのＣＤＲを保持し、幾つかの実施形態では単一の重鎖及び／若しくは軽鎖又はその一部分を含むであろう。これらの断片は、組み換えＤＮＡ技法によって生成することができるか、又はインタクトな抗体を含む、抗原結合分子の酵素的若しくは化学的切断によって生成することができる。
【００７３】
免疫学的に機能性の免疫グロブリン断片としては、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片（Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等）、１つ以上のＣＤＲ、ダイアボディ（同一鎖上の２つのドメインを対合するには短すぎる短いペプチドリンカーを介して接続された軽鎖可変ドメインと同じポリペプチドにおける重鎖可変ドメイン）、ドメイン抗体及び単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。これらの断片は、ヒト、マウス、ラット、ラクダ又はウサギが挙げられるが、これらに限定されない任意の哺乳類供給源に由来し得る。当業者によって理解されるように、抗原結合分子は、非タンパク質成分を含むことができる。
【００７４】
例えば、本明細書に記載される配列のアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９９％又は９９％超の同一性を有する可変軽鎖及び／又は可変重鎖等の抗原結合分子の変異体も本発明の範囲内にある。幾つかの場合、そのような分子は、少なくとも１本の重鎖及び１本の軽鎖を含み、他の場合、変異形態は、２本の同一の軽鎖及び２本の同一の重鎖（又はその下位部分）を含む。当業者であれば、周知の手法を使用して、本明細書に記載される抗原結合分子の好適な変異体を決定することができるであろう。特定の実施形態では、当業者は、活性にとって重要ではないと考えられる領域を標的とすることにより、活性を損なうことなく変更が可能な分子の好適な領域を同定し得る。
【００７５】
特定の実施形態では、抗原結合分子のポリペプチド構造は、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣体」と称する場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称する場合がある）及びそれぞれその断片を含むが、これらに限定されない抗体に基づく。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、アビマーを含むか又はアビマーから成る。
【００７６】
幾つかの実施形態では、ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子は、単独で投与される。他の実施形態では、ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子は、ＣＡＲ、ＴＣＲ又は他の免疫細胞の一部として投与される。このような免疫細胞では、ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子は、同じプロモーター領域又は別々のプロモーターの制御下にあり得る。特定の実施形態では、ＳＴＥＡＰ１に対するタンパク質物質及び／又は抗原結合分子をコードする遺伝子は、別々のベクター中にあり得る。
【００７７】
本発明は、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存料及び／又はアジュバントと共に、ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子を含む医薬組成物を更に提供する。特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＴＥＡＰ１に対する２つ以上の異なる抗原結合分子を含むであろう。特定の実施形態では、医薬組成物は、ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子が２つ以上のエピトープを結合する、ＳＴＥＡＰ１に対する２つ以上の抗原結合分子を含むであろう。幾つかの実施形態では、様々な抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ１への結合に関して互いに競合しない。
【００７８】
他の実施形態では、医薬組成物は、非経口送達、吸入又は経口等の消化管を介した送達のために選択され得る。こうした薬学的に許容可能な組成物の調製は、当業者の能力の範囲内である。特定の実施形態では、緩衝剤は、組成物を生理学的ｐＨ又は僅かに低いｐＨ、典型的には約５〜約８のｐＨ範囲内に維持するために使用される。特定の実施形態では、非経口投与が検討される場合、治療組成物は、追加の治療剤の有無に関わらず、薬学的に許容可能なビヒクル中でＳＴＥＡＰ１に対する所望の抗原結合分子を含む、発熱物質を含まない、非経口で許容可能な水溶液の形態であり得る。特定の実施形態では、非経口注入のためのビヒクルは、少なくとも１つの追加の治療剤の有無に関わらず、ＳＴＥＡＰ１に対する抗原結合分子が適正に保存された無菌の等張溶液として配合されている無菌蒸留水である。特定の実施形態では、調製は、所望の分子と、その後、蓄積注射を介して送達され得る生成物の制御放出又は持続放出を提供することができるポリマー化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸等）、ビーズ又はリポソームとの配合を伴い得る。特定の実施形態では、所望の分子を導入するために、埋め込み可能な薬剤送達デバイスが使用され得る。
【００７９】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子が診断ツール又は検証ツールとして使用される。抗原結合分子を用いると、試料及び／又は対象中に存在するＳＴＥＡＰ１の量をアッセイすることができる。幾つかの実施形態では、診断用抗原結合分子は、中和性ではない。幾つかの実施形態では、本明細書で開示した抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ１レベルの変化に関連する疾患又は障害をスクリーニング／診断するために、哺乳類の組織又は細胞中でＳＴＥＡＰ１を検出するためのアッセイキット及び／又は方法で使用又は提供される。キットは、存在する場合にはＳＴＥＡＰ１との抗原結合分子の結合及び任意選択的にＳＴＥＡＰ１タンパク質レベルを示す手段と共に、ＳＴＥＡＰ１を結合する抗原結合分子を含むことができる。
【００８０】
抗原結合分子は、以下の定義及び記載を考慮することで更に理解されるであろう。
【００８１】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖断片を含む。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合及びＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって一体にまとめられる。
【００８２】
「Ｆａｂ断片」は、１本の軽鎖並びに１本の重鎖のＣＨ１及び可変領域を含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆａｂ’断片」は、１本の軽鎖並びにＶＨドメインとＣＨ１ドメイン含有する１本の重鎖の一部分、更にＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域も含むので、その結果、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成するために２つのＦａｂ’断片の２本の重鎖間に鎖間ジスルフィド結合を形成することができる。「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２本の軽鎖並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部分を含む２本の重鎖とを含むので、その結果、２本の重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。そのため、Ｆ（ａｂ’）２断片は、２本の重鎖間のジスルフィド結合によって共にまとめられた２つのＦａｂ’断片から構成される。
【００８３】
「Ｆｖ領域」は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００８４】
「単鎖可変断片」（「ｓｃＦｖ」、「単鎖抗体」とも称する）は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が可動性リンカーによって連結されることで、抗原結合領域を形成する単一のポリペプチド鎖を形成するＦｖ分子を指す。その開示全体が参照により組み込まれる国際公開第８８／０１６４９号パンフレット並びに米国特許第４，９４６，７７８号明細書及び同第５，２６０，２０３号明細書を参照されたい。
【００８５】
「二価の抗原結合分子」は、２つの抗原結合部位を含む。幾つかの場合、２つの結合部位は、同一の抗原特異性を有する。二価の抗原結合分子は、二重特異性であり得る。「多重特異性抗原結合分子」は、２つ以上の抗原又はエピトープを標的とするものである。「二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）」、「二重特異性（ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」又は「二官能性（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）」の抗原結合分子は、それぞれ２つの異なる抗原結合部位を有するハイブリッドの抗原結合分子又は抗体である。二重特異性抗原結合分子の２つの結合部位は、同一の又は異なるタンパク質標的上に存在し得る２つの異なるエピトープに結合する。
【００８６】
抗原結合分子は、解離定数（Ｋｄ）が約１×１０−７Ｍである場合、その標的抗原と「特異的に結合する」と言われている。抗原結合分子は、Ｋｄが１〜５×１０−９Ｍである場合には「高親和性」で、且つＫｄが１〜５×１０−１０Ｍである場合には「非常に高い親和性」で抗原と特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合分子は、１０−９ＭのＫｄを有する。一実施形態では、オフレートは、＜１×１０−５である。他の実施形態では、抗原結合分子は、約１０−７Ｍ〜１０−１３ＭのＫｄでヒトＳＴＥＡＰ１に結合し、更に別の実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄ１．０〜５×１０−１０で結合する。
【００８７】
抗原結合分子は、それが第２の標的に結合するよりも強固に１つの標的に結合する場合、「選択的」であると言われる。
【００８８】
用語「抗体」は、任意のアイソタイプのインタクトな免疫グロブリン又は標的抗原への特異的結合についてインタクトな抗体と競合できるその断片を指し、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体及び二重特異性抗体を含む。「抗体」は、本明細書で定義される抗原結合分子の一種である。インタクトな抗体は、一般に少なくとも２本の完全長の重鎖と２本の完全長の軽鎖とを含むが、場合により重鎖のみを含み得るラクダにおいて天然に存在する抗体等より少数の鎖を含み得る。抗体は、単一の供給源のみに由来する場合があるか、又はキメラであり得る、即ちその抗体の異なる部分が以下で更に詳細に記載する２種の異なる抗体に由来し得る。抗原結合分子、抗体又は結合断片は、ハイブリドーマ中において、組み換えＤＮＡ手法又はインタクトな抗体の酵素的若しくは化学的な切断により生成され得る。別段の指摘がない限り、用語「抗体」としては、２本の完全長重鎖と２本の完全長軽鎖とを含む抗体に加えて、その例については以下に記載するそれらの誘導体、変異体、断片及び突然変異タンパク質が挙げられる。更に、明示的に除外されない限り、抗体としては、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣体」と称する場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称する場合がある）及びこれらの断片がそれぞれ挙げられる。
【００８９】
可変領域は、典型的には、３つの超可変領域（即ち「ＣＤＲ」）によって連結された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。各対の２本の鎖由来のＣＤＲは、典型的には、特定のエピトープへの結合を可能にし得るフレームワーク領域によって整列させらる。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖可変領域の両方が、典型的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。慣例により、重鎖におけるＣＤＲ領域は、典型的には、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称される。軽鎖におけるＣＤＲ領域は、典型的には、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称される。各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、典型的には、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９８７  ａｎｄ  １９９１））又はＣｈｏｔｈｉａ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７８−８８３（１９８９））の定義に従う。Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａのみならず、ＡｂＭの定義も含む種々の分析方法を使用すると、ＣＤＲ領域を同定するか又は見積もることができる。
【００９０】
用語「軽鎖」は、完全長軽鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長軽鎖は、可変領域ドメイン（ＶＬ）及び定常領域ドメイン（ＣＬ）を含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖には、κ（カッパ）鎖及びλ（ラムダ）鎖が含まれる。
【００９１】
用語「重鎖」は、完全長重鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長重鎖は、可変領域ドメイン（ＶＨ）並びに３つの定常領域ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を含む。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨドメインは、カルボキシル末端にあり、ＣＨ３は、ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ及びＩｇＥを含む任意のアイソタイプから成り得る。
【００９２】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の一部分を指し、典型的には重鎖中にほぼ１２０〜１３０のアミノ末端アミノ酸を含み、軽鎖中に約１００〜１１０のアミノ末端アミノ酸を含む。抗体の可変領域は、典型的には、その標的に対する特定の抗体の特異性を決定する。
【００９３】
可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一に分布しているのではなく、重鎖及び軽鎖可変領域の各々のサブドメインに集中している。これらのサブドメインは、「超可変領域」又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる。可変ドメインのより保存的な（即ち非超可変）部分は、「フレームワーク」領域（ＦＲＭ又はＦＲ）と呼ばれ、抗原結合表面を形成する三次元空間内における６つのＣＤＲのための足場を提供する。天然に存在する重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、大部分がβシート配置を取る４つのＦＲＭ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）をそれぞれ含み、これらは、ループ接続を形成し、場合によりβシート構造の一部を形成する３つの超可変領域によって接続される。各鎖の超可変領域は、ＦＲＭによって近接して一体で保持されており、他の鎖の超可変領域と共に抗原結合部位の形成に寄与する（前掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。
【００９４】
用語「ＣＤＲ」及びその複数形「ＣＤＲｓ」は、そのうちの３つが軽鎖可変領域の結合特性を構成し（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３）、３つが重鎖可変領域の結合特性を構成する（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）相補性決定領域を指す。ＣＤＲは、抗体と抗原との特異的相互作用を担う残基の大部分を含み、従って抗体分子の機能的活性に寄与する。ＣＤＲは、抗原特異性の主要な決定基である。
【００９５】
ＣＤＲの境界及び長さの厳密な定義は、各種の分類及び付番方式に従う。従って、ＣＤＲは、本明細書に記載した付番方式を含む、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、接触又は任意の他の境界定義によって表わされ得る。境界が異なっていても、これらの方式の各々は、可変配列内のいわゆる「超可変領域」を構成する部分においてある程度の重複を有する。従って、これらの方式によるＣＤＲの定義は、長さ及び隣接するフレームワーク領域に関する境界領域が相違する場合がある。例えば、Ｋａｂａｔ（異種間の配列可変性に基づく手法）、Ｃｈｏｔｈｉａ（抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づく手法）及び／又はＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，１９８７，１９６：９０１−９１７；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，１９９６，２６２：７３２）を参照されたい。抗原結合部位の特性決定のための更に別の基準は、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられるＡｂＭ定義である。例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。２つの残基同定技法が、重複するが、同一ではない領域を定義する限り、それらを組み合わせてハイブリッドＣＤＲを定義することができる。しかしながら、いわゆるＫａｂａｔ方式による付番が好ましい。
【００９６】
典型的には、ＣＤＲは、カノニカル構造として分類することのできるループ構造を形成する。用語「カノニカル構造」は、抗原結合（ＣＤＲ）ループがとる主鎖コンホメーションを指す。比較構造研究から、６つの抗原結合ループのうちの５つは、利用可能な立体構造の限られたレパートリーのみを有することが見出された。各カノニカル構造をポリペプチド骨格のねじれ角によって特徴付けることができる。従って、抗体間の対応するループは、ループの大部分において、高いアミノ酸配列の可変性が見られるにも関わらず、非常に類似した三次元構造を有し得る（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９８７，１９６：９０１；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８９，３４２：８７７；Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，１９９６，２６３：８００）。更に、取られるループ構造と、その周囲のアミノ酸配列との間には、関連性がある。特定のカノニカルクラスのコンホメーションは、ループの長さにより、且つそのループ内及び保存されたフレームワーク内（即ちループ外）の重要な位置に存在するアミノ酸残基により決定される。従って、特定のカノニカルクラスへの割り当ては、これらの重要なアミノ酸残基の存在に基づいて行われ得る。
【００９７】
用語「カノニカル構造」は、例えば、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）により分類される通り、抗体の線状配列に関する検討も含み得る。Ｋａｂａｔの付番スキーム（方式）は、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を一貫した様式で付番するために広く採用されている基準であり、本明細書の他の箇所でも言及されるように本発明で適用される好ましいスキームである。更なる構造の検討が抗体のカノニカル構造を決定するために使用される場合もある。例えば、Ｋａｂａｔの付番法では十分に反映されない相違をＣｈｏｔｈｉａらの付番方式によって記載することができ、且つ／又は他の技術、例えば結晶学及び二次元若しくは三次元コンピュータモデリングによって明らかにすることができる。従って、所与の抗体配列は、とりわけ、（例えば、種々のカノニカル構造をライブラリに含めるという要求に基づいて）適切なシャーシ配列の同定が可能であるカノニカルクラスに分類され得る。抗体のアミノ酸配列のＫａｂａｔ付番法及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（前掲）に記載される構造の検討並びに抗体構造のカノニカルな側面の解釈に対するそれらの意義については、文献に記載されている。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元配置は、当技術分野でよく知られている。抗体構造の概説については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｅｄｓ．Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８を参照されたい。
【００９８】
軽鎖のＣＤＲ３及び特に重鎖のＣＤＲ３は、軽鎖及び重鎖可変領域内での抗原結合において最も重要な決定因子となる場合がある。幾つかの抗体構築物では、重鎖ＣＤＲ３が抗原と抗体との間の主要な接触領域になると思われる。ＣＤＲ３のみを変化させるインビトロ選択スキームを使用して、抗体の結合特性を変化させることができるか、又は何れの残基が抗原の結合に寄与するかを決定することができる。従って、ＣＤＲ３は、典型的には抗体結合部位内における分子多様性の最大の供給源である。例えば、Ｈ３は、２個のアミノ酸残基ほど短いか又は２６個超のアミノ酸であり得る。
【００９９】
用語「中和」は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的作用を妨げるか又は低下させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ又は抗体をそれぞれ指す。これは、例えば、リガンド上の結合部位を直接遮断することにより、又はリガンドに結合し、間接的手段によってリガンドの結合する能力を変化させること（リガンドにおける構造的又はエネルギー的変化等）により行うことができる。幾つかの実施形態では、この用語は、それが結合するタンパク質が生物学的機能を実施することを妨げる抗原結合分子を意味することもできる。
【０１００】
用語「標的」又は「抗原」は、抗原結合分子によって結合され得る分子又は分子の一部分を指す。特定の実施形態では、標的は、１つ以上のエピトープを有し得る。
【０１０１】
用語「競合する」は、同じエピトープに関して競合する抗原結合分子との関連で用いられる場合、試験されている抗原結合分子（例えば、抗体又はその免疫機能性断片）が、抗原に対する参照抗原結合分子の特異的な結合を妨げるか又は阻害する（例えば、低減する）アッセイによって判定される、抗原結合分子間の競合を意味する。多くの種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，９：２４２−２５３）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）；１−１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１７６：５４６−５５２）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）がある。用語「エピトープ」には、本発明のｓｃＦｖ、抗体又は免疫細胞等の抗原結合分子によって結合され得る任意の決定基が含まれる。エピトープは、その抗原を標的とする抗原結合分子によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗原結合分子と直接接触する特定のアミノ酸を含む。
【０１０２】
本明細書で使用する用語「標識」又は「標識される」は、例えば、放射性標識されたアミノ酸の組み込みによるか、又は印を付けられたアビジン（例えば、光学法又は比色分析法によって検出することができる蛍光マーカー又は酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチン部分のポリペプチドの連結による、検出可能なマーカーの組み込みを指す。特定の実施形態では、標識又はマーカーは、治療のためのものでもあり得る。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野で既知であり、使用され得る。
【０１０３】
本発明によれば、オン・オフタイプ又は他のタイプの制御スイッチ技法が本明細書に組み込まれ得る。これらの技法は、二量体化ドメイン及びそのようなドメイン二量体化の任意の活性化剤の使用を採用し得る。これらの技法としては、例えば、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる、特定の細胞中でＦＫＢＰ／ラパログ二量体化系を用いるＷｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４  ３５０（６２５８）によって説明されるものが挙げられる。更なる二量体化技術は、例えば、その内容全体が参照により同様に本明細書に組み込まれるＦｅｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１０，１１０，３３１５〜３３３６並びに米国特許第５，８３０，４６２号明細書、同第５，８３４，２６６号明細書、同第５，８６９，３３７号明細書及び同第６，１６５，７８７号明細書で説明される。追加の二量体化ペアとしては、シクロスポリンＡ／シクロフィリン、受容体、エストロゲン／エストロゲン受容体（任意選択的にタモキシフェンを用いる）、グルココルチコイド／グルココルチコイド受容体、テトラサイクリン／テトラサイクリン受容体、ビタミンＤ／ビタミンＤ受容体が挙げられ得る。二量体化技術の更なる例は、例えば、それらの内容全体が参照により本明細書に更に組み込まれる国際公開第２０１４／１２７２６１号パンフレット、同第２０１５／０９０２２９号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０２８６９８７号明細書、同第２０１５／０２６６９７３号明細書、同第２０１６／００４６７００号明細書、米国特許第８，４８６，６９３号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０１７１６４９号明細書及び同第２０１２／０１３００７６号明細書で見出され得る。
【０１０４】
治療方法
養子免疫療法を用いて、天然Ｔ細胞を（ｉ）患者から取り出し、（ｉｉ）少なくとも１つの腫瘍抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変し、（ｉｉｉ）エクスビボで改変Ｔ細胞の大きい集団に増殖させ、且つ（ｉｖ）患者に再導入することができる。例えば、米国特許第７，７４１，４６５号明細書及び同第６，３１９，４９４号明細書、Ｅｓｈｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、上記）；Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（上記）；  Ｆｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（上記）を参照されたい。改変Ｔ細胞が患者に再導入された後、これらは、腫瘍抗原を発現している細胞に対する免疫応答を媒介する。例えば、Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ  １８８，Ｎｏ．４，１９９８（６１９−６２６）を参照されたい。この免疫応答としては、Ｔ細胞によるＩＬ−２及び他のサイトカインの分泌、腫瘍抗原を認識するＴ細胞のクローン増殖及びＴ細胞が媒介する特異的な標的陽性細胞の殺傷が挙げられる。Ｈｏｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．１６７：６１２３−６１３１（２００１）を参照されたい。
【０１０５】
従って、幾つかの態様では、本発明は、患者における望ましくない及び／又は上昇したＳＴＥＡＰ１レベルに関連する状態を治療又は予防する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書で開示される有効量の少なくとも１つの単離抗原結合分子であるＣＡＲ又はＴＣＲを投与するステップを含む方法を含む。
【０１０６】
がんを含む疾患又は障害を治療するための方法が提供される。幾つかの実施形態では、本発明は、本出願の有効量の改変免疫細胞を対象に投与するステップを含む、対象においてＴ細胞媒介性免疫応答を作り出すことに関する。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞媒介性免疫応答は、１個又は複数の標的細胞に対して向けられる。幾つかの実施形態では、改変免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む。幾つかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。幾つかの態様では、本発明は、悪性腫瘍を治療又は予防する方法を含み、前記方法は、それを必要とする対象に、本明細書で説明する有効量の少なくとも１つの単離抗原結合分子を投与するステップを含む。幾つかの態様では、本発明は、悪性腫瘍を治療又は予防するための方法を含み、前記方法は、それを必要とする対象に、有効量の少なくとも１個の免疫細胞を投与するステップであって、ここで、免疫細胞が、本明細書に記載した少なくとも１つのキメラ抗原受容体、Ｔ細胞受容体及び／又は単離抗原結合分子を含むステップを含む。
【０１０７】
幾つかの態様では、本発明は、本明細書に記載した少なくとも１つの抗原結合分子及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を含む。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、追加の活性剤を更に含む。
【０１０８】
本発明の抗原結合分子、ＣＡＲ、ＴＣＲ、免疫細胞等は、前立腺がん、好ましい一態様では、転移性去勢抵抗性前立腺がんを含むが、それには限定されないＳＴＥＡＰ１発現性疾患を治療するために使用することができる。
【０１０９】
ＣＡＲ＋／ＣＡＲ−Ｔ＋／ＴＣＲ＋細胞の標的用量は、好ましくは、１×１０６〜２×１０１０個の細胞／ｋｇ、より好ましくは２×１０６個の細胞／ｋｇの範囲であり得ることが理解されるであろう。特定の対象には、この範囲を上回る及び下回る用量が適当である場合があり、適当な用量のレベルは、必要に応じて医療サービス提供者によって決定され得ることが理解されるであろう。更に、本発明に従って細胞の複数回用量を提供することができる。
【０１１０】
対象における腫瘍の寸法を低減する方法であって、対象に本発明の改変細胞を投与するステップを含む方法も提供されるが、ここで、細胞は、キメラ抗原受容体、Ｔ細胞受容体を含むか、又は抗原結合分子を含むＴ細胞受容体ベースのキメラ抗原受容体は、腫瘍上の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、対象は、固形腫瘍又はリンパ腫若しくは白血病等の血液悪性腫瘍を有する。幾つかの実施形態では、改変細胞は、腫瘍床に送達される。幾つかの実施形態では、がんは、対象の骨髄中に存在する。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、改変細胞は、自己Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、改変細胞は、同種異系Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、改変細胞は、異種Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、本出願の改変細胞は、インビボで形質移入又は形質導入される。他の実施形態では、改変細胞は、エクスビボで形質移入又は形質導入される。
【０１１２】
方法は、１種以上の化学療法剤を投与するステップを更に含み得る。特定の実施形態では、化学療法剤は、リンパ球枯渇（前条件付け）化学療法剤である。有益な前条件付け治療計画は、相関関係にある有益な生体マーカーと共に、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／２６２，１４３号明細書及び同第６２／１６７，７５０号明細書に記載されている。これらは、例えば、患者に特定の有益用量のシクロホスファミド（２００ｍｇ／ｍ２／日〜２０００ｍｇ／ｍ２／日）及び特定用量のフルダラビン（２０ｍｇ／ｍ２／日〜９００ｍｇ／ｍ２／日）を投与するステップを含む、Ｔ細胞療法を必要とする患者を条件付けする方法を説明している。好ましい投薬計画は、治療有効量の改変Ｔ細胞を患者に投与する前に約５００ｍｇ／ｍ２／日のシクロホスファミド及び約６０ｍｇ／ｍ２／日のフルダラビンを３日間患者に毎日投与するステップを含む、患者を治療することを伴う。
【０１１３】
他の実施形態では、抗原結合分子、形質導入した（又は他の場合には改変した）細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）及び化学療法剤をそれぞれ有効量で投与して、対象における疾患又は状態を治療する。
【０１１４】
特定の実施形態では、本明細書で開示するＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と併用して投与することができる。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ及びウレドパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチルオロメラミンレジュメを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；クロランブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン等のニトロソウレア；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、プロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝抗物質；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤；フォリン酸等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メソトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロミチン（ＤＭＦＯ）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンディフティトックス）等のレチノイン酸誘導体；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上記の何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられる。例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン；並びに例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリン等の抗アンドロゲン；並びに上記の何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体等の腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤もこの定義に含められる。必要に応じて、ＣＨＯＰ、即ちシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、ドキソルビシン（ヒドロキシドキソルビシン）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））及びプレドニゾンが挙げられるが、これに限定されない化学療法剤の組み合わせも投与される。
【０１１５】
幾つかの実施形態では、化学療法剤は、改変細胞又は核酸の投与と同時に又は投与後１週間以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、改変細胞又は核酸の投与後１〜４週間又は１週間〜１ヵ月、１週間〜２ヵ月、１週間〜３ヵ月、１週間〜６ヵ月、１週間〜９ヵ月若しくは１週間〜１２ヵ月で投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、細胞又は核酸の投与の少なくとも１ヵ月前に投与される。幾つかの実施形態では、方法は、２種以上の化学療法剤を投与することを更に含む。
【０１１６】
本明細書に記載した組成物と併せて様々な追加の治療剤を使用することができる。例えば、潜在的に有用な追加の治療剤としては、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ及びアテゾリズマブ等のＰＤ−１阻害剤並びにイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））等のＣＴＬＡ−４阻害剤が挙げられる。
【０１１７】
本発明と組み合わせて使用するために好適な追加の治療剤としては、酢酸アビラテロン、アパルタミド、ビカルタミド、カバジタキセル、カソデクス（ビカルタミド）、デガレリクス、ドセタキセル、エンザルタミド、Ｅｒｌｅａｄａ（登録商標）（アパルタミド）、フルタミド、Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（酢酸ロイプロリド）、Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ−Ｐｅｄ（酢酸ロイプロリド）、塩酸ミトキサントロン、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）（ニルタミド）ニルタミド、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）（Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ）、ラジウム２２３二塩化物、ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ、タキソテール（ドセタキセル）、Ｖｉａｄｕｒ（酢酸ロイプロリド）、ゾーフィーゴ（ラジウム２２３二塩化物）、Ｘｔａｎｄｉ（エンザルタミド）、Ｚｏｌａｄｅｘ（酢酸ゴセレリン）若しくはＺｙｔｉｇａ（酢酸アビラテロン）を挙げられるが、それらに限定されない。
【０１１８】
追加の実施形態では、ＣＡＲ含有免疫を含む組成物を抗炎症剤と共に投与することができる。抗炎症剤又は抗炎症薬としては、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、ハイドロコルチゾン酢酸塩、ハイドロコルチゾン、ハイドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬物、シクロホスファミド及びミコフェノレートを含む非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なＮＳＡＩＤとしては、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤及びシアル酸塩が挙げられる。例示的な鎮痛剤としては、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポルキシフェンのトラマドールが挙げられる。例示的なグルココルチコイドとしては、コルチゾン、デキサメタゾン、ハイドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物学的反応調節剤としては、細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５等）に向けられた分子、ＴＮＦ拮抗剤（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））等のサイトカイン阻害剤、ケモカイン阻害剤並びに接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的反応調節剤としては、モノクローナル抗体のみならず、分子の改変形態が挙げられる。例示的なＤＭＡＲＤとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、ゴールド（経口（アウラノフィン）及び筋肉内）及びミノサイクリンが挙げられる。
【０１１９】
特定の実施形態では、本明細書で説明する組成物は、サイトカインと併用して投与される。本明細書で使用するとき、「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用する１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を指すことを意味する。サイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。特にサイトカインに含められるのは、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ミュラー管抑制物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−β等の神経増殖因子（ＮＧＦ）；血小板増殖因子；ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β等の形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポイエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα、β及びγ等のインターフェロン；マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；並びに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５等のインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−α又はＴＮＦ−β等の腫瘍壊死因子；並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で使用する用語サイトカインは、天然供給源由来タンパク質、組み換え細胞培養物由来タンパク質及び天然配列のサイトカインの生物学的に活性な均等物を含む。
【０１２０】
幾つかの態様では、本発明は、１００ｐＭより小さいＫｄでＳＴＥＡＰ１に結合する抗原結合分子を含む。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、１０ｐＭより小さいＫｄで結合する。他の実施形態では、抗原結合分子は、５ｐＭ未満のＫｄで結合する。
【０１２１】
製造方法
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、ベクター、抗原結合分子、免疫細胞、組成物等を製造するために様々な既知の技法を利用することができる。
【０１２２】
本明細書に記載される免疫細胞のインビトロ操作又は遺伝子組み換え前に、細胞は対象から入手することができる。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多くの供給源から入手することができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離等の当業者に既知の任意の数の技法を用いて、対象から採取した血液の単位から入手することができる。細胞は、好ましくは、アフェレーシスによって個人の循環血液から入手され得る。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞を含むリンパ球、他の有核白血球、赤血球及び血小板を含有する。特定の実施形態では、アフェレーシスによって採取された細胞は、洗浄して血漿分画を取り除き、その後の処理のために適当な緩衝液又は培地に入れられ得る。細胞は、ＰＢＳで洗浄され得る。理解されるように、半自動化フロースルー遠心機、例えばＣｏｂｅ（商標）２９９１細胞処理機、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）等を使用すること等によって洗浄工程が用いられ得る。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性緩衝液又は緩衝液を含むか若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁され得る。特定の実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分を取り除き得る。
【０１２３】
特定の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離を用いて単球を枯渇させることによってＰＢＭＣから単離される。ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞等のＴ細胞の特定の亜集団を、当技術分野で既知の正又は負の選択技法によって更に単離することができる。例えば、負の選択によるＴ細胞集団の富化は、負に選択される細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組み合わせによって達成することができる。本明細書で使用するための１つの方法は、負に選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する負の磁気免疫付着又はフローサイトメトリーによる細胞の選別及び／又は選択である。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。フローサイトメトリー及び細胞選別は、本発明で使用するための対象の細胞集団を単離するためにも使用され得る。
【０１２４】
ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を用いた免疫細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）による遺伝子組み換えに直接使用され得る。特定の実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後、Ｔリンパ球を更に単離することができ、細胞傷害性Ｔリンパ球及びヘルパーＴリンパ球の両方を遺伝子組み換え及び／又は増殖前又は後の何れかでナイーブ、メモリー及びエフェクターのＴ細胞亜集団に選別することができる。
【０１２５】
幾つかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞のナイーブ、セントラルメモリー及びエフェクターの型のそれぞれに関連する細胞表面抗原を特定することにより、ＣＤ８＋細胞は、これらの細胞に更に選別される。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３及びＣＤ１２７を含み、グランザイムＢに対して陰性である。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。幾つかの実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８及びＣＤ１２７に対して陰性であり、グランザイムＢ及びパーフォリンに対して陽性である。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、亜集団に更に選別される。例えば、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を特定することにより、ナイーブ、セントラルメモリー及びエフェクター細胞に選別することができる。
【０１２６】
Ｔ細胞等の免疫細胞は、既知の方法を用いて単離した後で遺伝子組み換えすることができるか、又は遺伝子組み換え前にインビトロで免疫細胞を活性化又は増殖（又は前駆細胞の場合には分化）させることができる。別の実施形態では、Ｔ細胞等の免疫細胞を、本明細書に記載されているキメラ抗原受容体によって遺伝子組み換えし（例えば、ＣＡＲをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むウイルスベクターで形質導入し）、続いてインビトロで活性化及び／又は増殖させる。Ｔ細胞を活性化及び増殖させる方法は、当技術分野で既知であり、これらは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，９０５，８７４号明細書、同第６，８６７，０４１号明細書、同第６，７９７，５１４号明細書及び国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載されている。一般に、こうした方法としては、ＩＬ−２等の適切なサイトカインを含む培養培地中において、ＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞と、ビーズ又は他の表面に概ね付着させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体等の刺激剤及び共刺激剤とを接触させることが挙げられる。同じビーズに付着させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。１つの例は、ヒトＴ細胞の生理学的活性化に対するＣＤ３／ＣＤ２８活性化剤／刺激剤システムであるＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）システムである。
【０１２７】
他の実施形態では、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，０４０，１７７号明細書及び同第５，８２７，６４２号明細書並びに国際公開第２０１２１２９５１４号パンフレットに記載されるもの等の方法を使用し、フィーダー細胞並びに適切な抗体及びサイトカインによってＴ細胞は、活性化及び刺激されて増殖し得る。
【０１２８】
本発明の構築物及び改変免疫細胞を製造する特定の方法は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第１５／１４５２０号明細書に記載されている。構築物及び細胞を製造する追加の方法は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／２４４０３６号明細書に見出すことができる。
【０１２９】
ＰＢＭＣは、ＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞等の他の細胞傷害性リンパ球を更に含み得ることが理解されるであろう。本明細書で開示されるキメラ受容体のコード配列を運ぶ発現ベクターをヒトドナーのＴ細胞、ＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞の集団に導入することができる。発現ベクターを運ぶ成功裏に形質導入されたＴ細胞は、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離するためにフローサイトメトリーを用いて選別し、続いて本明細書の他の箇所に記載される当技術分野で既知の抗ＣＤ３抗体及びＩＬ−２又は他の方法を用いた細胞活性化に加えて、これらのＣＡＲ発現Ｔ細胞の数を増やすために更に繁殖させることができる。ＣＡＲ発現Ｔ細胞を、ヒト対象において使用するために保存及び／又は調製するために凍結保存するために、標準の手順が用いられる。一実施形態では、Ｔ細胞のインビトロ形質導入、培養及び／又は増殖は、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ）及びウシ胎仔血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）等の非ヒト動物由来生成物の不在下で実施される。
【０１３０】
ポリヌクレオチドのクローニングの場合、ベクターを宿主細胞（単離された宿主細胞）に導入してベクター自体の複製を可能にし、それによってその中に含有されるポリヌクレオチドのコピーを増幅させることができる。クローニングベクターは、複製開始点、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサ配列及び選択可能なマーカーが一般的に挙げられるが、これらに限定されない配列成分を含有し得る。これらの要素は、当業者により必要に応じて選択され得る。例えば、宿主細胞におけるベクターの自律的複製を促進するために複製開始点を選択し得る。
【０１３１】
特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるベクターを含有する単離された宿主細胞を提供する。ベクターを含有する宿主細胞は、ベクターに含有されるポリヌクレオチドの発現又はクローニングに有用であり得る。好適な宿主細胞としては、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞又は哺乳類細胞等の高等真核細胞を挙げることができるが、これらに限定されない。この目的のための好適な原核細胞としては、グラム陰性又はグラム陽性微生物等の真正細菌、例えば腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｈａｃｅａｅ）、例えばエシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えばサルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えばセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）並びにバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）、例えばＢ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、例えば緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）並びにストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３２】
ベクターは、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介送達、リン酸カルシウム沈殿法、カチオン性脂質媒介送達、リポソーム媒介形質移入、エレクトロポレーション、微粒子銃、受容体媒介遺伝子送達、ポリリシン、ヒストン、キトサン及びペプチド媒介送達が挙げられるが、これらに限定されない当技術分野で既知の任意の好適な方法を用いて、宿主細胞に導入することができる。対象とするベクターを発現させるための、細胞の形質移入及び形質転換のための標準方法は、当技術分野で周知である。更なる実施形態では、免疫エフェクター細胞のドナー集団を遺伝子組み換えするのに様々な発現ベクターの混合物を使用することができ、ここで、各ベクターは、本明細書で開示されるように異なるＣＡＲをコードする。得られる形質導入された免疫エフェクター細胞は、改変細胞の混合集団を形成し、改変細胞の一部は、２つ以上の異なるＣＡＲを発現する。
【０１３３】
一実施形態では、本発明は、ＳＴＥＡＰ１タンパク質を標的とするＣＡＲ又はＴＣＲを発現する遺伝子改変細胞を保存するための方法を提供する。これは、解凍時に細胞が生存可能なままであるように免疫細胞を凍結保存することを伴う。ＣＡＲを発現する免疫細胞の画分を、当技術分野で既知の方法によって凍結保存し、悪性腫瘍を患う患者の将来の治療のための、こうした細胞の永続的な供給源を提供することができる。必要に応じて、凍結保存した形質転換された免疫細胞を解凍し、成長させ、更に多くのこうした細胞に増殖させることができる。
【０１３４】
本明細書で使用するとき、「凍結保存する」とは、（典型的には）７７ケルビン又は−１９６℃（液体窒素の沸点）等の氷点下温度に冷却することによる細胞の保存を指す。氷点下温度では、低温での凍結又は室温への加温による損傷から保存された細胞を保護するために凍結保護剤を用いることが多い。凍結保護剤及び最適な冷却速度により、細胞損傷に対する保護が可能である。本発明に従って使用できる凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ＆Ｂｉｓｈｏｐ，Ｎａｔｕｒｅ，（１９５９）；１８３：１３９４−１３９５；Ａｓｈｗｏｏｄ−Ｓｍｉｔｈ，Ｎａｔｕｒｅ，（１９６１）；１９０：１２０４−１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９６０）；８５：５７６）及びポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ＆Ｒａｖｄｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，（１９６２）；１９６：４８）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい冷却速度は、１℃〜３℃／分である。
【０１３５】
用語「実質的に純粋な」は、所与の成分が高濃度で存在することを示すために用いられる。成分は、望ましくは、組成物中に存在する主要成分である。好ましくは、これは、３０％超、５０％超、７５％超、９０％超又は更に９５％超の濃度で存在し、前記濃度は、検討中の全組成物に対する乾燥重量／乾燥重量基準で決定される。非常に高い濃度（例えば、９０％超、９５％超又は９９％超の濃度）では、その成分は、「純粋形態」であると見なすことができる。本発明の生物学的に活性な物質（ポリペプチド、核酸分子、抗原結合分子、部分を含む）は、他の場合には物質が結合される場合のある１つ以上の不純物を実質的に含まない形態で提供され得る。組成物が所与の不純物を実質的に含まない場合、不純物は、低濃度（例えば、上記で設定した乾燥重量／乾燥重量基準で１０％未満、５％未満又は１％未満の濃度）となる。
【０１３６】
幾つかの実施形態では、細胞は、最初にこれらの培養培地からこれらを採取し、続いて洗浄し、治療有効量での投与に好適な培地及び容器システム（「薬学的に許容可能な」担体）中で細胞を濃縮することによって配合される。好適な注入媒体は、任意の等張媒体配合物、典型的には生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ（商標）Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）又はＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ（商標）Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）であり得るが、５％デキストロース水溶液又は乳酸リンゲル液を利用することもできる。注入媒体にヒト血清アルブミンを補充し得る。
【０１３７】
組成物における細胞の所望の治療量は、一般的には少なくとも２個の細胞（例えば、少なくとも１個のＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞及び少なくとも１個のＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞のサブセット）であるか、又はより典型的には１０２個超の細胞及び最大１０６個、最大１０８若しくは１０９個までの細胞であり、又１０１０個超の細胞であり得る。細胞の数は、組成物が意図される所望の用途及びそれに含まれる細胞の種類に依存する。所望の細胞の密度は、典型的には１０６個超の細胞／ｍｌであり、一般には１０７個超の細胞／ｍｌ、一般には１０８個以上の細胞／ｍｌである。免疫細胞の臨床的に関連する数は、累積すると１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１又は１０１２個の細胞と等しいか又はこれを上回る複数回の注入に分割することができる。本発明の幾つかの態様では、特に注入される細胞の全てが特定の標的抗原（ＳＴＥＡＰ１）に再指向されるため、１０６／キログラム（患者当たり１０６〜１０１１）の範囲でのより少ない数の細胞が投与され得る。ＣＡＲ治療は、これらの範囲内での投与量で複数回投与され得る。細胞は、治療を受ける患者に対して自己、同種異系又は異種であり得る。
【０１３８】
本発明のＣＡＲ発現細胞集団は、単独で投与され得るか、又は希釈剤及び／又はＩＬ−２又は他のサイトカイン若しくは細胞集団等の他の成分と組み合わせた医薬組成物として投与され得る。本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的又は生理的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤との組み合わせで、本明細書に記載されるＴ細胞等のＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞集団を含み得る。こうした組成物は、中性緩衝化生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水等といった緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトール等の炭水化物；タンパク質；ポリペプチド又はグリシン等のアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオン等のキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び保存剤を含み得る。本発明の組成物は、好ましくは、静脈内投与のために配合される。
【０１３９】
医薬組成物（溶液、懸濁液等）は、注射用水、生理食塩水溶液、好ましくは生理学的生理食塩水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム等の無菌希釈剤、溶媒又は懸濁媒としての役割を果たし得る合成モノグリセリド又はジグリセリド等の固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム等の抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等の緩衝液及び塩化ナトリウム又はデキストロース等の浸透圧を調整するための剤の１つ以上を含み得る。非経口製剤は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は複数回投与バイアルに封入することができる。注射可能な医薬組成物は、好ましくは、無菌である。
【０１４０】
有害事象は、自殺遺伝子を免疫細胞（１つ以上のＣＡＲ又はＴＣＲを含有する）に形質導入することによって最小化され得ることが理解されるであろう。更に、誘導性の「オン」又は「促進」スイッチを免疫細胞に組み込むことが望まれる場合もある。好適な技法としては、細胞に本発明のＣＡＲ構築物を形質導入する前、後又はそれと同時に誘導性のカスパーゼ−９（米国特許出願公開第２０１１／０２８６９８０号明細書）又はチミジンキナーゼを使用することが挙げられる。自殺遺伝子及び／又は「オン」スイッチを導入する追加の方法としては、ＴＡＬＥＮＳ、亜鉛フィンガー、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス技法及び当技術分野で既知の他の技法が挙げられる。
【０１４１】
本明細書の記述は、例示的且つ説明的であるに過ぎず、特許請求される本発明を限定するものでないことが理解されるであろう。本出願では、単数形の使用は、特に断りのない限り複数形を含む。
【０１４２】
本明細書で使用される項目の見出しは、単に構成を目的とするものに過ぎず、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。特許、特許出願、論文、書籍及び学術論文が挙げられるが、これらに限定されない、本出願で引用される全ての文献又は文献の一部は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。本開示に従って利用される場合、以下の用語は、特に断りのない限り、以下の意味を有するものとして理解される。
【０１４３】
本出願では、「又は」の使用は、特に断りのない限り「及び／又は」を意味する。更に、用語「含んでいる」並びに「含む」及び「含まれる」等の他の形態の使用は、限定的ではない。更に、「要素」又は「成分」等の用語は、特に断りのない限り、１つのユニットを含む要素及び成分並びに２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分の両方を包含する。
【０１４４】
用語「ＳＴＥＡＰ１活性」には、ＳＴＥＡＰ１の任意の生物学的効果が含まれる。特定の実施形態では、ＳＴＥＡＰ１活性には、基質又は受容体と相互作用又は結合するＳＴＥＡＰ１の能力が含まれる。
【０１４５】
「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」又は「核酸」という用語は、一本鎖のヌクレオチドポリマーと二本鎖のヌクレオチドポリマーとの両方を含む。ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド又は何れかの型のヌクレオチドの組み換え形態であり得る。前記改変には、ブロモウリジン及びイノシン誘導体等の塩基改変、２’，３’−ジデオキシリボース等のリボース改変並びにホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホロアニラダート及びホスホロアミダート等のヌクレオチド間連結の改変が含まれる。
【０１４６】
用語「オリゴヌクレオチド」は、２００以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを指す。オリゴヌクレオチドは、例えば、変異遺伝子の構築において使用するための一本鎖又は二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチド又はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドは、検出アッセイのための放射標識、蛍光標識、ハプテン又は抗原性標識を含む、標識を含み得る。オリゴヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲプライマー、クローニングプライマー又はハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。
【０１４７】
「制御配列」という用語は、それが連結されるコード配列の発現及びプロセシングに影響を与えることができるポリヌクレオチド配列を指す。そのような制御配列の性質は、宿主生物に依存し得る。特定の実施形態では、原核生物用制御配列は、プロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列を含み得る。例えば、真核生物用制御配列は、転写因子のための認識部位を１つ又は複数含むプロモーター、転写エンハンサ配列及び転写終結配列を含み得る。「制御配列」は、リーダー配列（シグナルペプチド）及び／又は融合パートナー配列を含み得る。
【０１４８】
本明細書で使用される「操作可能に連結した」は、この用語が適用される成分が適切な条件下でその固有機能を実施することが可能になる関係にあることを意味する。
【０１４９】
「ベクター」という用語は、宿主細胞へのタンパク質コード情報の導入に使用される任意の分子又は実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ又はウイルス）を意味する。「発現ベクター」若しくは「発現構築物」という用語は、宿主細胞の形質転換に適しており、そこに操作可能に連結される１つ又は複数の異種性コード領域の発現を（宿主細胞と協働して）誘導及び／又は制御する核酸配列を含むベクターを指す。発現構築物は、転写、翻訳に影響を及ぼすか又はそれを制御し、且つイントロンが存在する場合、それに操作可能に連結したコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列を含み得るが、これらに限定されない。
【０１５０】
用語「宿主細胞」は、核酸配列で形質転換されているか又は形質転換され得、それによって目的遺伝子を発現する細胞を指す。この用語には、目的遺伝子が存在する限り、子孫の形態又は遺伝的構成が元の親細胞と同一であるか否かに関わらず、親細胞の子孫が含まれる。
【０１５１】
用語「形質転換」は、細胞の遺伝的特徴の変化を指し、細胞が新しいＤＮＡ又はＲＮＡを含有するように組み換えられている場合、細胞は、形質転換されている。例えば、形質移入、形質導入又は他の技法を介して新しい遺伝物質を導入することにより、細胞がその天然状態から遺伝子組み換えされている場合、細胞は、形質転換されている。形質移入又は形質導入に続いて、形質転換しているＤＮＡは、細胞の染色体に物理的に組み込むことによって細胞のＤＮＡと再結合することができるか、又はエピソーム要素として複製することなく一時的に維持され得るか、又はプラスミドとして独立して複製することができる。形質転換しているＤＮＡが細胞の分裂と共に複製する場合、細胞は、「安定して形質転換」されていると見なされる。
【０１５２】
用語「形質移入」は外来性又は外因性ＤＮＡの細胞による取り込みを指す。多くの形質移入の技法が当技術分野で周知であり、又本明細書で開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（上述）；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｇｅｎｅ１３：１９７を参照されたい。
【０１５３】
用語「形質導入」は、それによってウイルスベクターを介して外来性ＤＮＡを細胞に導入するプロセスを指す。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｂｏｓｔｏｎ：Ｊｏｎｅｓ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ  Ｐｕｂｌを参照されたい。
【０１５４】
用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、天然配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、それへの付加及び／又はその置換を含む、タンパク質のアミノ酸配列を有する巨大分子を指す。用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、具体的には、ＳＴＥＡＰ１抗原結合分子、抗体又は抗原結合タンパク質の１つ以上のアミノ酸からの欠失、それへの付加及び／又はその置換を有する配列を包含する。「ポリペプチド断片」という用語は、完全長の天然タンパク質と比較してアミノ末端の欠失、カルボキシル末端の欠失及び／又は内部欠失を有するポリペプチドを指す。そのような断片は、天然タンパク質と比較して改変されたアミノ酸も含み得る。有用なポリペプチド断片としては、抗原結合分子の免疫学的に機能性の断片が挙げられる。有用な断片としては、１つ以上のＣＤＲ領域、重鎖及び／又は軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の他の部分の一部分等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５５】
用語「単離された」は、（ｉ）通常、それと共に見出される少なくとも幾つかの他のタンパク質を含まないか、（ｉｉ）例えば同一種等の同一源に由来する他のタンパク質を実質的に含まないか、（ｉｉｉ）天然ではそれに結合しているポリヌクレオチド、脂質、糖質若しくは他の物質の少なくとも約５０パーセントから分離されているか、（ｉｖ）天然ではそれに結合していないポリペプチドと（共有結合的若しくは非共有結合的な相互作用によって）操作可能に結合しているか、又は（ｖ）天然には生じないことを意味する。
【０１５６】
ポリペプチド（例えば、抗原結合分子又は抗体）の「変異体」は、別のポリペプチド配列と比較してアミノ酸配列に１つ又は複数のアミノ酸残基の挿入、欠失及び／又は置換が生じたアミノ酸配列を含む。変異体には、融合タンパク質が含まれる。
【０１５７】
「同一性」という用語は、配列を整列させ、比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「同一性パーセント」は、比較分子におけるアミノ酸又はヌクレオチド間で残基が同一であるパーセントを意味し、比較される分子中で最小のもののサイズに基づいて計算される。これらの計算のために、整列におけるギャップ（存在する場合）は、好ましくは、特定の数学的モデル又はコンピュータプログラム（即ち「アルゴリズム」）によって対処される。
【０１５８】
同一性パーセントを計算するために、比較される配列は、典型的には配列間の最大の一致が得られる方法で整列される。同一性パーセントを決定するのに使用することができるコンピュータプログラムの一例は、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージである（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）。コンピュータアルゴリズムであるＧＡＰは、配列同一性パーセントが決定されることになる２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドを整列するために使用される。配列は、それらのそれぞれのアミノ酸又はヌクレオチドが最適に一致するように整列させられる（アルゴリズムによって決定される「一致スパン」）。特定の実施形態では、標準比較マトリックス（ＰＡＭ  ２５０比較マトリックスについては、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：３４５−３５２を参照されたい；ＢＬＯＳＵＭ  ６２比較マトリックスについては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５−１０９１９を参照されたい）もアルゴリズムによって使用される。
【０１５９】
本明細書で使用するとき、２０種の従来の（例えば、天然に存在する）アミノ酸及びそれらの略称は、慣例的な用法に従う。あらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れられるＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照されたい。２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸等の非天然アミノ酸、乳酸及び他の従来のものではないアミノ酸も本発明のポリペプチドにとって好適な成分であり得る。非従来型アミノ酸の例としては、以下の：４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ｅ−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン並びに他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使用されるポリペプチド表記法では、標準的な用法及び慣例に従い、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。
【０１６０】
保存的アミノ酸置換は、非天然供給源のアミノ酸残基も包含し得、こうした非天然供給源のアミノ酸残基は、一般的には、生物学的系における合成によってではなく、化学的ペプチド合成によって組み込まれる。こうしたものには、ペプチド模倣体及びアミノ酸部分が逆転又は反転した他の形態が含まれる。天然供給源の残基は、下記の共通の側鎖特性に基づくクラスに分類することができる：
ａ）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
ｆ）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１６１】
例えば、非保存的置換は、こうしたクラスの１つのメンバーと、別のクラスのメンバーとの交換を含み得る。そのような置換残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域又は分子の非相同領域に導入することができる。
【０１６２】
特定の実施形態に従って改変Ｔ細胞の抗原結合分子、共刺激ドメイン又は活性化ドメインに変化を加える際には、アミノ酸の疎水性指標を検討することができる。各アミノ酸には、その疎水性及び電荷特性に基づいてハイドロパシー指数が割り当てられている。これらは、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リシン（−３．９）；及びアルギニン（−４．５）である。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）を参照されたい。特定のアミノ酸は、類似のハイドロパシー指数又はハイドロパシースコアを有する他のアミノ酸と置換することができるが、依然として類似の生物学的活性を保持し得ることが知られている。同様のアミノ酸の置換は、親水性に基づいて効率的に実施できることも当技術分野において理解されており、特に、それによって創出される生物学的機能性タンパク質又はペプチドは、今回の場合のように、免疫学的な実施形態において使用することが企図されることは、当技術分野においても理解されている。表２に例示的なアミノ酸置換を記載する。
【０１６３】
【表４】
2021530233.tif 000021
【０１６４】
用語「誘導体」は、アミノ酸（又は核酸）の挿入、欠失又は置換以外の化学修飾を含む分子を指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質又は他の有機若しくは無機部分との化学結合が挙げられるが、これらに限定されない共有結合の修飾を含む。特定の実施形態では、化学的に修飾された抗原結合分子は、化学的に修飾されていない抗原結合分子よりも長い循環半減期を有し得る。幾つかの実施形態では、誘導体の抗原結合分子は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール又はポリプロピレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマーの連結を含むように共有結合で修飾される。
【０１６５】
ペプチド類似体は、テンプレートペプチドの特性に類似する特性を有する非ペプチド薬剤として製薬業界で商業的に使用されている。非ペプチド化合物のこれらのタイプは「ペプチド模倣薬（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」又は「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．，１５：２９（１９８６）；Ｖｅｂｅｒ＆Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，ＴＩＮＳ，ｐ．３９２（１９８５）；及びＥｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６６】
用語「治療有効量」は、哺乳類において治療応答を生じると決定されたＳＴＥＡＰ１抗原結合分子の量を指す。こうした治療有効量は、当業者によって容易に確認される。
【０１６７】
用語「患者」及び「対象」は、互換的に使用され、ヒト及び非ヒト動物対象並びに正式に診断された障害を有する対象、正式に認識された障害を有さない対象、治療を受けている対象、障害を発症するリスクのある対象等を含む。
【０１６８】
用語「治療する」及び「治療」は、治療、予防的治療及び対象が障害又は他のリスク因子を発症する危険性を低減する適用を含む。治療は、障害の完全な治癒を必要とせず、症状又は内在するリスク因子を低減する実施形態を包含する。「予防する」という用語は、事象が発生する可能性の１００％排除を必要としない。むしろ、予防するは、事象の発生の可能性が化合物又は方法の存在下で低減されていることを意味する。
【０１６９】
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成並びに組織培養及び形質転換に対しては、標準的な手法（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）を使用することができる。酵素反応及び精製手法は、製造業者の仕様書に従って又は当技術分野で一般に行われているように、又は本明細書に記載したように行うことができる。上記手法及び手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従い、又本明細書全体に渡って引用且つ考察されている様々な一般的且つより具体的な参考文献に記載されるように実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい（この文献は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７０】
以下の配列は、本発明を更に例示するであろう。
【０１７１】
ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ  細胞外、膜貫通、細胞内
【化１７】
2021530233.tif 000022
【０１７２】
ＣＤ２８Ｔ  細胞外、膜貫通、細胞内  ＡＡ：
【化１８】
2021530233.tif 000023
【０１７３】
ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ−細胞外
【化１９】
2021530233.tif 000024
【０１７４】
ＣＤ２８Ｔ  ＡＡ−細胞外
【化２０】
2021530233.tif 000025
【０１７５】
ＣＤ２８  ＤＮＡ  膜貫通ドメイン
【化２１】
2021530233.tif 000026
【０１７６】
ＣＤ２８  ＡＡ  膜貫通ドメイン：
【化２２】
2021530233.tif 000027
【０１７７】
ＣＤ２８  ＤＮＡ  細胞内ドメイン：
【化２３】
2021530233.tif 000028
【０１７８】
ＣＤ２８  ＡＡ  細胞内ドメイン
【化２４】
2021530233.tif 000029
【０１７９】
ＣＤ３ζ  ＤＮＡ
【化２５】
2021530233.tif 000030
【０１８０】
ＣＤ３ζ  ＡＡ
【化２６】
2021530233.tif 000031
【０１８１】
ＣＤ２８  ＤＮＡ
【化２７】
2021530233.tif 000032
【０１８２】
ＣＤ２８  ＡＡ
【化２８】
2021530233.tif 000033
【０１８３】
ＣＤ８  ＤＮＡ  細胞外及び膜貫通ドメイン
【化２９】
2021530233.tif 000034
【０１８４】
ＣＤ８  ＡＡ  細胞外及び膜貫通ドメイン
【化３０】
2021530233.tif 000035
【０１８５】
４−１ＢＢ  ＤＮＡ  細胞内ドメイン
【化３１】
2021530233.tif 000036
【０１８６】
４−１ＢＢ  ＡＡ  細胞内ドメイン
【化３２】
2021530233.tif 000037
【０１８７】
クローン２Ｆ３  ＨＣ  ＤＮＡ
【化３３】
2021530233.tif 000038
【０１８８】
クローン２Ｆ３  ＨＣ  ＡＡ  −  ＣＤＲは下線付き
【化３４】
2021530233.tif 000039
【０１８９】
クローン２Ｆ３  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＴＹＷＩＥ（配列番号８９）
【０１９０】
クローン２Ｆ３  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＥＩＬＰＧＳＧＮＴＤＦＮＥＫＦＱＧ（配列番号９０）
【０１９１】
クローン２Ｆ３  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＷＧＹＹＧＴＲＧＹＦＮＶ（配列番号９１）
【０１９２】
クローン２Ｆ３  ＬＣ  ＤＮＡ
【化３５】
2021530233.tif 000040
【０１９３】
クローン２Ｆ３  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化３６】
2021530233.tif 000041
【０１９４】
クローン２Ｆ３  ＬＣ  ＣＤＲ１  ＡＡ：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号９４）
【０１９５】
クローン２Ｆ３  ＬＣ  ＣＤＲ２  ＡＡ：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号９５）
【０１９６】
クローン２Ｆ３  ＬＣ  ＣＤＲ３  ＡＡ：ＱＱＲＲＳＦＰＹＴ（配列番号９６）
【０１９７】
クローン１１Ｃ２  ＨＣ  ＤＮＡ
【化３７】
2021530233.tif 000042
【０１９８】
クローン１１Ｃ２  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化３８】
2021530233.tif 000043
【０１９９】
クローン１１Ｃ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＮＹＧＭＮ（配列番号９９）
【０２００】
クローン１１Ｃ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＷＭＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＫＦＱＧ（配列番号１００）
【０２０１】
クローン１１Ｃ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＡＧＧＱＬＲＰＧＡＭＤＹ（配列番号１０１）
【０２０２】
クローン１１Ｃ２  ＬＣ  ＤＮＡ
【化３９】
2021530233.tif 000044
【０２０３】
クローン１１Ｃ２  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化４０】
2021530233.tif 000045
【０２０４】
クローン１１Ｃ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＭＮ（配列番号１０４）
【０２０５】
クローン１１Ｃ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＶＡＳＮＬＥＳ（配列番号１０５）
【０２０６】
クローン１１Ｃ２  ＬＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＥＰＰＴ（配列番号１０６）
【０２０７】
クローン１Ａ１  ＨＣ  ＤＮＡ
【化４１】
2021530233.tif 000046
【０２０８】
クローン１Ａ１  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化４２】
2021530233.tif 000047
【０２０９】
クローン１Ａ１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化４３】
2021530233.tif 000048
【０２１０】
クローン１Ａ１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化４４】
2021530233.tif 000049
【０２１１】
クローン１Ａ１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化４５】
2021530233.tif 000050
【０２１２】
クローン１Ａ１  ＬＣ  ＤＮＡ
【化４６】
2021530233.tif 000051
【０２１３】
クローン１Ａ１  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化４７】
2021530233.tif 000052
【０２１４】
クローン１Ａ１  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化４８】
2021530233.tif 000053
【０２１５】
クローン１Ａ１  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化４９】
2021530233.tif 000054
【０２１６】
クローン１Ａ１  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化５０】
2021530233.tif 000055
【０２１７】
クローン７Ａ４  ＨＣ  ＤＮＡ
【化５１】
2021530233.tif 000056
【０２１８】
クローン７Ａ４  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化５２】
2021530233.tif 000057
【０２１９】
クローン７Ａ４  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化５３】
2021530233.tif 000058
【０２２０】
クローン７Ａ４  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化５４】
2021530233.tif 000059
【０２２１】
クローン７Ａ４  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化５５】
2021530233.tif 000060
【０２２２】
クローン７Ａ４  ＬＣ  ＤＮＡ
【化５６】
2021530233.tif 000061
【０２２３】
クローン７Ａ４  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化５７】
2021530233.tif 000062
【０２２４】
クローン７Ａ４  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化５８】
2021530233.tif 000063
【０２２５】
クローン７Ａ４  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化５９】
2021530233.tif 000064
【０２２６】
クローン７Ａ４  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化６０】
2021530233.tif 000065
【０２２７】
クローン７Ａ５  ＨＣ  ＤＮＡ
【化６１】
2021530233.tif 000066
【０２２８】
クローン７Ａ５  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化６２】
2021530233.tif 000067
【０２２９】
クローン７Ａ５  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化６３】
2021530233.tif 000068
【０２３０】
クローン７Ａ５  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化６４】
2021530233.tif 000069
【０２３１】
クローン７Ａ５  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化６５】
2021530233.tif 000070
【０２３２】
クローン７Ａ５  ＬＣ  ＤＮＡ
【化６６】
2021530233.tif 000071
【０２３３】
クローン７Ａ５  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化６７】
2021530233.tif 000072
【０２３４】
クローン７Ａ５  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化６８】
2021530233.tif 000073
【０２３５】
クローン７Ａ５  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化６９】
2021530233.tif 000074
【０２３６】
クローン７Ａ５  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化７０】
2021530233.tif 000075
【０２３７】
クローン１４Ｃ１１  ＨＣ  ＤＮＡ
【化７１】
2021530233.tif 000076
【０２３８】
クローン１４Ｃ１１  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化７２】
2021530233.tif 000077
【０２３９】
クローン１４Ｃ１１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化７３】
2021530233.tif 000078
【０２４０】
クローン１４Ｃ１１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化７４】
2021530233.tif 000079
【０２４１】
クローン１４Ｃ１１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化７５】
2021530233.tif 000080
【０２４２】
クローン１４Ｃ１１  ＬＣ  ＤＮＡ
【化７６】
2021530233.tif 000081
【０２４３】
クローン１４Ｃ１１  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは下線付き）
【化７７】
2021530233.tif 000082
【０２４４】
クローン１４Ｃ１１  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化７８】
2021530233.tif 000083
【０２４５】
クローン１４Ｃ１１  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化７９】
2021530233.tif 000084
【０２４６】
クローン１４Ｃ１１  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化８０】
2021530233.tif 000085
【０２４７】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化８１】
2021530233.tif 000086
【化８２】
2021530233.tif 000087
【０２４８】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化８３】
2021530233.tif 000088
【０２４９】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化８４】
2021530233.tif 000089
【化８５】
2021530233.tif 000090
【０２５０】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化８６】
2021530233.tif 000091
【０２５１】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化８７】
2021530233.tif 000092
【化８８】
2021530233.tif 000093
【化８９】
2021530233.tif 000094
【０２５２】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化９０】
2021530233.tif 000095
【０２５３】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化９１】
2021530233.tif 000096
【化９２】
2021530233.tif 000097
【化９３】
2021530233.tif 000098
【０２５４】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化９４】
2021530233.tif 000099
【０２５５】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化９５】
2021530233.tif 000100
【化９６】
2021530233.tif 000101
【化９７】
2021530233.tif 000102
【０２５６】
構築物  Ｓ１−２Ｆ３−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化９８】
2021530233.tif 000103
【０２５７】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化９９】
2021530233.tif 000104
【化１００】
2021530233.tif 000105
【化１０１】
2021530233.tif 000106
【０２５８】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１０２】
2021530233.tif 000107
【０２５９】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１０３】
2021530233.tif 000108
【化１０４】
2021530233.tif 000109
【化１０５】
2021530233.tif 000110
【０２６０】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１０６】
2021530233.tif 000111
【０２６１】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１０７】
2021530233.tif 000112
【化１０８】
2021530233.tif 000113
【化１０９】
2021530233.tif 000114
【０２６２】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１１０】
2021530233.tif 000115
【０２６３】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１１１】
2021530233.tif 000116
【化１１２】
2021530233.tif 000117
【化１１３】
2021530233.tif 000118
【０２６４】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１１４】
2021530233.tif 000119
【０２６５】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１１５】
2021530233.tif 000120
【化１１６】
2021530233.tif 000121
【化１１７】
2021530233.tif 000122
【０２６６】
構築物  Ｓ１−１１Ｃ２−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１１８】
2021530233.tif 000123
【０２６７】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１１９】
2021530233.tif 000124
【化１２０】
2021530233.tif 000125
【化１２１】
2021530233.tif 000126
【０２６８】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１２２】
2021530233.tif 000127
【０２６９】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１２３】
2021530233.tif 000128
【化１２４】
2021530233.tif 000129
【０２７０】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１２５】
2021530233.tif 000130
【０２７１】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１２６】
2021530233.tif 000131
【化１２７】
2021530233.tif 000132
【０２７２】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１２８】
2021530233.tif 000133
【０２７３】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１２９】
2021530233.tif 000134
【化１３０】
2021530233.tif 000135
【０２７４】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１３１】
2021530233.tif 000136
【０２７５】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１３２】
2021530233.tif 000137
【化１３３】
2021530233.tif 000138
【０２７６】
構築物  Ｓ２−１Ａ１−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１３４】
2021530233.tif 000139
【０２７７】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１３５】
2021530233.tif 000140
【化１３６】
2021530233.tif 000141
【０２７８】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１３７】
2021530233.tif 000142
【０２７９】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１３８】
2021530233.tif 000143
【化１３９】
2021530233.tif 000144
【０２８０】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１４０】
2021530233.tif 000145
【０２８１】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１４１】
2021530233.tif 000146
【化１４２】
2021530233.tif 000147
【０２８２】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１４３】
2021530233.tif 000148
【０２８３】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１４４】
2021530233.tif 000149
【化１４５】
2021530233.tif 000150
【０２８４】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１４６】
2021530233.tif 000151
【０２８５】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１４７】
2021530233.tif 000152
【化１４８】
2021530233.tif 000153
【０２８６】
構築物  Ｓ２−７Ａ４−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１４９】
2021530233.tif 000154
【０２８７】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１５０】
2021530233.tif 000155
【化１５１】
2021530233.tif 000156
【０２８８】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１５２】
2021530233.tif 000157
【０２８９】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１５３】
2021530233.tif 000158
【化１５４】
2021530233.tif 000159
【０２９０】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１５５】
2021530233.tif 000160
【０２９１】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１５６】
2021530233.tif 000161
【化１５７】
2021530233.tif 000162
【化１５８】
2021530233.tif 000163
【０２９２】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１５９】
2021530233.tif 000164
【０２９３】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１６０】
2021530233.tif 000165
【化１６１】
2021530233.tif 000166
【化１６２】
2021530233.tif 000167
【０２９４】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１６３】
2021530233.tif 000168
【０２９５】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１６４】
2021530233.tif 000169
【化１６５】
2021530233.tif 000170
【化１６６】
2021530233.tif 000171
【０２９６】
構築物  Ｓ２−７Ａ５−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１６７】
2021530233.tif 000172
【０２９７】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１６８】
2021530233.tif 000173
【化１６９】
2021530233.tif 000174
【化１７０】
2021530233.tif 000175
【０２９８】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１７１】
2021530233.tif 000176
【０２９９】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１７２】
2021530233.tif 000177
【化１７３】
2021530233.tif 000178
【化１７４】
2021530233.tif 000179
【０３００】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１７５】
2021530233.tif 000180
【０３０１】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１７６】
2021530233.tif 000181
【化１７７】
2021530233.tif 000182
【化１７８】
2021530233.tif 000183
【０３０２】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−ＣＤ２８Ｔ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１７９】
2021530233.tif 000184
【０３０３】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１８０】
2021530233.tif 000185
【化１８１】
2021530233.tif 000186
【０３０４】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−Ｃ８Ｋ−ＣＤ２８  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１８２】
2021530233.tif 000187
【０３０５】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列はボールド体）
【化１８３】
2021530233.tif 000188
【化１８４】
2021530233.tif 000189
【０３０６】
構築物  Ｓ２−１４Ｃ１−Ｃ８Ｋ−４１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列はボールド体；ＣＤＲは下線付き）
【化１８５】
2021530233.tif 000190
【０３０７】
ヒトＳＴＥＡＰ１  ＮＭ＿０１２４４９（ＮＰ＿０３６５８１）ＡＡ
【化１８６】
2021530233.tif 000191
【０３０８】
ＣＡＲ  シグナルペプチド  ＤＮＡ
【化１８７】
2021530233.tif 000192
【０３０９】
ＣＡＲ  シグナルペプチド：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号７９）
【０３１０】
ｓｃＦｖ  Ｇ４Ｓリンカー  ＤＮＡ
ＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＧＧＧＣＴＣＣ（配列番号：８０）
【０３１１】
ｓｃＦｖ  Ｇ４ｓリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８１）
【０３１２】
ｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー  ＤＮＡ
ＧＧＧＴＣＴＡＣＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＧＡＡＧＧＴＡＧＴＡＣＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号８２）
【０３１３】
ｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号８３）
【０３１４】
４−１ＢＢ  核酸配列（細胞内ドメイン）
【化１８８】
2021530233.tif 000193
【０３１５】
４−１ＢＢ  ＡＡ（細胞内ドメイン）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号８５）
【０３１６】
ＯＸ４０  ＡＡ
ＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ（配列番号８６）
【０３１７】
参照による組み込み
本明細書において言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許又は特許出願が具体的且つ個別に参照により組み込まれることが示された場合と同程度に参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の先行技術であることを認めるものとして解釈されるべきではない。参照により組み込まれる参考文献において提供される定義又は用語が、本明細書において提供される用語及び考察と異なる限り、本用語及び定義が優先される。
【０３１８】
均等物
上述の本明細書は、当業者が本発明を実施するのに十分であると考えられる。上述の説明及び実施例は、本発明の特定の好ましい実施形態を詳細に説明し、本発明者らによって考えられた最良の形態を記載するものである。しかし、前述の内容がいかに詳細に記載されていたとしても、本発明は、多くの方法で実施され得、添付の特許請求の範囲及びその均等物に従って本発明が解釈されるべきであることが理解されるであろう。
【０３１９】
実施された実験及び達成された結果を含む以下の実施例は、例示の目的のみのために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０３２０】
実施例１
ＰＮＴ−２、ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３、２２Ｒｖ１、Ｃ４−２Ｂ及びＤＵ１４５細胞株は、ＲＰＭＩ１６４０（Ｌｏｎｚａ）＋１０％のＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）＋１×ペニシリンストレプトマイシンＬ−グルタミン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（Ｒ１０）培地中で培養し、０．５〜２．０×１０６個の細胞／ｍｌの細胞密度で維持した。ＰＮＴ−２及びＤＵ１４５は、陰性対照細胞株である。細胞表面ＳＴＥＡＰ１発現を試験するために、細胞は、抗ＳＴＥＡＰ１抗体（２Ｆ３）又はＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に染色バッファー（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）中で３０分間、４℃でインキュベートした。細胞は、次にデータ取得前にヨウ化プロピジウム（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を含む染色バッファー中に再懸濁させた。標的細胞上でのＳＴＥＡＰ１発現は、図１に示した。
【０３２１】
実施例２
Ｔ７プロモーターをコードするプラスミド、ＣＡＲ構築物及びβグロビン安定化配列は、ＥｃｏＲＩ及びＢａｍＨＩ（ＮＥＢ）を含む１０μｇのＤＮＡを用いた一晩に渡る消化によって線形化した。ＤＮＡは、次にフェノール／クロロホルムを用いて精製したプロテイナーゼＫ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、６００Ｕ／ｍｌ）を用いて５０℃で２時間に渡り消化し、酢酸ナトリウム及び２容積のエタノールを添加することによって沈降させた。次にペレットを乾燥させ、ＲＮＡｓｅ／ＤＮＡｓｅフリーの水に再懸濁させ、ＮａｎｏＤｒｏｐを用いて定量した。次に、ｍＭＥＳＳＡＧＥ  ｍＭＡＣＨＩＮＥ  Ｔ７  Ｕｌｔｒａ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を製造業者の取扱説明書に従って使用するインビトロ転写のために、１μｇの線状ＤＮＡを使用した。ＲＮＡは更に、ＭＥＧＡＣｌｅａｒキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を製造業者の取扱説明書に従って使用して精製し、ＮａｎｏＤｒｏｐを用いて定量した。ｍＲＮＡの完全性は、アガロースゲル上での移動度を用いて評価した。Ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ密度遠心分離装置を製造業者の取扱説明書に従って用いて、健常ドナーのロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋｓ）（Ｈｅｍａｃａｒｅ）からＰＢＭＣを単離した。Ｒ１０培地＋ＩＬ−２（３００ＩＵ／ｍｌ、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ（登録商標）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）中でＯＫＴ３（５０ｎｇ／ｍｌ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ））を用いてＰＢＭＣを刺激した。刺激７日後、Ｔ細胞をＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で２回洗浄し、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で２．５×１０７個の細胞／ｍｌの最終濃度で再懸濁させた。エレクトロポレーション１回当たり１０μｇのｍＲＮＡを使用した。２ｍｍのキュベット内での０．５ミリ秒（ｍｓ）間に単一４００Ｖパルスを送達するために、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｘ２システム（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＢＴＸ）を使用して細胞のエレクトロポレーションを実施した。細胞を直ちにＲ１０＋ＩＬ−２培地に移し、６時間に渡り回復させた。ＣＡＲの発現を調べるため、４℃で３０分間、染色バッファー（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）中のＤＬＬ３−Ｆｃ検出試薬（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）又はビオチン化タンパク質Ｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によってＴ細胞を染色した。続いて、細胞を洗浄し、４℃で３０分間、染色バッファー中の抗ＬＮＧＦＲ−ＰＥ−ＰＥストレプトアビジン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって染色した。細胞を続いて洗浄し、データ取得の前に、ヨウ化プロピジウム（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を含む染色バッファー中で再懸濁させた。エレクトロポレーションにかけたＴ細胞中でのＳＴＥＡＰ１  ＣＡＲの発現は、図２に示した。
【０３２２】
実施例３
エレクトロポレーションにかけたＳＴＥＡＰ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞における細胞溶解活性を調べるために、エフェクター細胞をＲ１０培地中で１：１のＥ：Ｔ比で培養した。共培養の１６時間後、上清をＬｕｍｉｎｅｘ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって分析し、ＣＤ３陰性細胞によるヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析によって標的細胞の生存率を評価した。エレクトロポレーションにかけたＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞溶解活性は、図３に示し、サイトカイン産生率は、図４に示した。
【０３２３】
実施例４
ＳＴＥＡＰ１を発現している標的細胞に応答したＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を評価するために、Ｔ細胞は、Ｒ１０培地中で１：１のＥ：Ｔ比で標的細胞と共培養する前にＣＦＳＥで標識した。５日後、ＣＦＳＥ希釈のフローサイトメトリー分析によってＴ細胞増殖を評価した。ＳＴＥＡＰ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖は、図５に示した。
【図１】
2021530233.tif 000194
【図２−１】
2021530233.tif 000195
【図２−２】
2021530233.tif 000196
【図３】
2021530233.tif 000197
【図４】
2021530233.tif 000198
【図５−１】
2021530233.tif 000199
【図５−２】
2021530233.tif 000200
【図６】
2021530233.tif 000201
【配列表】
2021530233000001.app
【国際調査報告】
2021530233.tif 000202
2021530233.tif 000203
2021530233.tif 000204
2021530233.tif 000205