(57)【要約】  式（Ｉ）の化合物［式中、塩基、Ｒ1およびＲ2は、請求項１のように定義される］は、ＳＴＩＮＧのモジュレーターである。2021519279.tif 000025
2021519279.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【化１】
2021519279.tif 000024
（式中、
Ｂａｓｅは、アデニン、プリン、グアニンおよびヒポキサンチンからなる群から選択されるプリン核酸塩基を表し、それらのＮ9窒素原子を介して接続され、
Ｒ1は、Ｈ、Ｆもしくはヒドロキシを表し、
Ｒ2はＨを表し、または
Ｒ1は−Ｏ−であり、Ｒ2は−ＣＨ2−であり、一緒に−ＣＨ2−Ｏ−の架橋を形成する）
【請求項２】
Ｂａｓｅがプリンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｂａｓｅがアデニンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｂａｓｅがグアニンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｂａｓｅがヒポキサンチンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1がＦを表し、Ｒ2がＨを表す、請求項２〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物の実質的に純粋な（Ｓｐ，Ｓｐ）、（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）、もしくは（Ｒｐ，Ｓｐ）立体異性体、またはその塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容される塩。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の１つもしくは複数の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を含むワクチン。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の１つもしくは複数の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、１種または複数の追加の治療剤とを含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の１つの化合物と１種または複数の追加の治療剤とを含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
医薬として使用するための請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物のワクチンアジュバントとしての使用。
【請求項１５】
ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置を必要とする患者におけるそのような疾患または状態の処置方法であって、請求項１〜８のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を患者に投与することを特徴とする、方法。
【請求項１６】
ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置方法において使用するための請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物であって、方法が、請求項１〜８のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を患者に投与することを特徴とする、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイトカイン産生を誘導する式（Ｉ）の新規修飾環式ジヌクレオチド化合物（「ＣＤＮ」）、およびその薬学的に許容される塩に関する。さらに、本発明は、医薬組成物および前記化合物を含む組合せ、ならびにＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）に関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患の処置方法におけるそれらの使用に関する。具体的には、本発明の医薬組成物は、炎症、アレルギー性および自己免疫性疾患、感染性疾患、がんの治療に適しており、かつワクチンアジュバントとして適している。
【背景技術】
【０００２】
免疫系の役割は、身体を病原体および悪性細胞から保護することである。しかし、ウイルスおよびがん細胞は、免疫系を逃れる方法を見つける。したがって、免疫療法の目的は、病原性侵入物またはがん性細胞に対する免疫系のある種の細胞型において、抗原特異的免疫応答を開始させることまたは既存の応答を再活性化することである。
免疫系は、自然免疫系と適応免疫系の２群に大別することができるいくつかの特殊化された系列からなる。免疫反応の成功には、両群に由来する系列が協調的に働かなければならない。自然免疫系の主要な役割は、病原体または悪性細胞に対して、適応系とは異なり、抗原特異的かつ持続的というわけではない迅速な免疫応答に取りかかることである。病原体または形質転換細胞の直接死滅に加えて、自然免疫系は、適応免疫系の活性化とその後の指揮も行う。樹状細胞などの抗原提示細胞は、抗原を捕獲し、ペプチド−主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）複合体の形でリンパ組織のＴ細胞に提示する。この抗原提示はある種のサイトカインの分泌と共に、抗原特異的エフェクターＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の活性化および分化を引き起こす。抗原提示細胞および他の細胞型によるＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）産生は、Ｉ型ＩＦＮの欠如によりウイルス感染または腫瘍細胞に対するＴ細胞依存性免疫応答が低減されたので、Ｔ細胞の活性化における重要な事象と考えられる（Zitvogel et al, Nature Reviews Immunology 15, 405-414, 2015）。一方、がん治療時におけるＩ型ＩＦＮシグニチャーの存在は、腫瘍浸潤Ｔ細胞数の増加および潜在的に良好な臨床成績に関連している（Sistigu et al, Nature Medicine 20, 1301-1309, 2014）。
【０００３】
マウスの最近の研究により、腫瘍微小環境におけるＩ型ＩＦＮの効率的な分泌およびがん細胞に対するＴ細胞依存性免疫応答の誘導は、インターフェロン遺伝子のアダプタータンパク質刺激因子（Ｔｍｅｍ１７３、ＭＰＹＳ、ＭＩＴＡ、ＥＲＩＳとも呼ばれるＳＴＩＮＧ）の存在に依存することが示された（Woo et al, Immunity 41, 5, 830-842, 2014; Corrales et al, Cell Reports 11, 1018-1030, 2015; Deng et al, Immunity 41, 5, 843-852, 2014）。Ｉ型ＩＦＮの存在の重要性は、ＳＴＩＮＧの欠損が腫瘍微小環境におけるＩ型ＩＦＮレベルの低下および数種のマウス腫瘍モデルにおける抗腫瘍効果の低下をもたらしたという事実により強調された。一方、ＳＴＩＮＧの特異的活性化により、がん細胞に対する抗原特異的Ｔ細胞免疫応答が改善された。
【０００４】
ＳＴＩＮＧは、核酸センサーのファミリーに属し、サイトゾルＤＮＡシグナル伝達のアダプターである。ＳＴＩＮＧは、その基礎状態では二量体として存在し、そのＮ末端ドメインはＥＲに留められ、Ｃ末端ドメインはサイトゾルに存在する。タンパク質の環式ＧＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）によって産生された環式ジヌクレオチド（ＣＤＮ）は、ＳＴＩＮＧの天然リガンドである（Ablasser et al, Nature 498, 380-384, 2013）。ＣＤＮとＳＴＩＮＧとの結合は、立体構造変化を誘導し、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）およびインターフェロン制御因子３（ＩＲＦ３）の結合および活性化ならびにＥＲから核周囲のエンドソームへの再局在化が可能になる（Liu et al, Science 347, Issue 6227, 2630-1-2630-14, 2015）。ＴＢＫ１による転写因子ＩＲＦ３およびＮＦ−ｋＢのリン酸化によって、Ｉ型ＩＦＮを含めて複数のサイトカインが発現する。
【０００５】
ウイルス感染症を含めて、いくつかの悪性病変およびがん治療におけるＩ型ＩＦＮの重要性を考えれば、ＳＴＩＮＧの特異的活性化を可能にする戦略は、治療上の重要である。
国際公開第２０１４／０９３９３６号には、２種のプリン核酸塩基および２種のカノニカルな３’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環式ジヌクレオチド化合物が記載されている。
米国特許第７，７０９，４５８号には、２種のプリン核酸塩基および２種のカノニカルな３’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、がん細胞増殖の阻害またはがん細胞アポトーシスの増加を行うために使用することができる環式ジヌクレオチド化合物、特に対称的な細菌ＣＤＮのｃ−ジ−ＧＭＰが記載されている。
米国特許第７，５９２，３２６号には、２種のプリン核酸塩基および２種のカノニカルな３’，５’ホスホジエステル部分を特徴とする免疫賦活性の環式ジヌクレオチド化合物、特に対称的な細菌ＣＤＮのｃ−ジ−ＧＭＰが記載されている。
【０００６】
国際公開第２０１６／０９６１７４号および国際公開第２０１６／１４５１０２号には、２種のプリン核酸塩基および２種のカノニカルな３’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環式ジヌクレオチド化合物が記載されている。
国際公開第２０１８／００９４６６号には、ロックド核酸部分および２種のホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環式ジヌクレオチド化合物が記載されている。
Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 5631-5634には、対称的な細菌ＣＤＮのｃ−ジ−ＧＭＰの免疫賦活性のモノ−およびビス−ホスホロチオエート類似体が記載されている。
国際公開第２０１４／１８９８０５号には、２種のプリン核酸塩基および少なくとも１種の非カノニカルな２’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環式ジヌクレオチド化合物が記載されている。
国際公開第２０１５／１８５５６５号には、２種のプリン核酸塩基、リボーステトラヒドロフラン環の代わりに１種または２種のシクロペンタン、および１種の非カノニカルな２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧをモジュレートする環式ジヌクレオチド化合物が記載されている。
国際公開第２０１６／１２０３０５号には、２種のプリン核酸塩基、２’−ＯＨが２’−Ｆで置き換えられている１種のリボース部分、および１種の非カノニカルな２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧをモジュレートする環式ジヌクレオチド化合物が記載されている。
【０００７】
米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８９号、国際公開第２０１４／０９９８２４号、国際公開第２０１５／０１７６５２号、Cell 154, 748-762 (2013)、およびMolecular Cell 51, 226-235 (2013)には、２種のプリン核酸塩基、１種のカノニカルな３’，５’および１種の非カノニカルな２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とする環式ジヌクレオチド２’３’−ｃＧＡＭＰ（環式［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］）が記載されている。非カノニカルに連結される２’３’−ｃＧＡＭＰは、カノニカルに連結される３’３’−ｃＧＡＭＰまたは対称的な細菌ｃ−ジ−ＧＭＰより高い親和性でヒトＳＴＩＮＧに結合し、Ｉ型インターフェロン産生を誘導する。
２’，５’−２’，５’または２’，５’−３’，５’結合性を有する別の環式ジヌクレオチドがＳＴＩＮＧアゴニストとして、それぞれ国際公開第２０１７／０２７６４５号および国際公開第２０１７／０２７６４６号に開示されている。
【発明の概要】
【０００８】
第１の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物
【化１】
2021519279.tif 000003
［式中、
Ｂａｓｅは、アデニン、プリン、グアニンおよびヒポキサンチンからなる群から選択されるプリン核酸塩基を表し、それらのＮ9窒素原子を介して接続され、
Ｒ1は、Ｈ、Ｆもしくはヒドロキシを表し、
Ｒ2はＨを表し、または
Ｒ1は−Ｏ−であり、Ｒ2は−ＣＨ2−であり、一緒に−ＣＨ2−Ｏ−の架橋（「ロックド核酸」；「ＬＮＡ」）を形成する］、
そのアイソフォーム、互変異性体、立体異性体、代謝産物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物、および塩、特に無機または有機塩基とのその生理学的に許容される塩に関する。
【０００９】
第２の態様において、本発明は、前もしくは後に定義される式（Ｉ）の１つもしくは複数の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物に関する。
第３の態様において、本発明は、前もしくは後に定義される式（Ｉ）の１つもしくは複数の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および１種または複数の追加の治療剤を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物に関する。
第４の態様において、本発明は、医薬として使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。
第５の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩のワクチンアジュバントとしての使用に関する。
【００１０】
第６の態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置を必要とする患者におけるそのような疾患または状態の処置方法に関する。
また、本発明は、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置を必要とする患者におけるそのような疾患または状態の処置薬の製造における前記阻害剤の１種または複数の使用にも関する。
また、本発明は、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置を必要とする患者におけるそのような疾患または状態の処置方法において使用するための、前もしくは後に定義される式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩にも関する。
本発明の他の態様は、以上および以下の説明および実施例から直接に当業者に明らかになる。
【００１１】
一般用語および定義
本明細書に具体的に定義されていない用語には、本開示内容および文脈を考慮に入れて、当業者であれば与えるはずの意味が与えられるべきである。しかし、本明細書において使用されるように、別段の指定のない限り、以下の用語には指示された意味があり、以下の慣例が守られている。
「本発明による化合物」、「式（Ｉ）の化合物」、「本発明の化合物」などの用語は、本発明による式（Ｉ）の化合物を意味し、その互変異性体、立体異性体および混合物と、その塩、特にその薬学的に許容される塩、ならびにその互変異性体、立体異性体および塩を含めて、そのような化合物の溶媒和物および水和物を含む。
具体的に指示されていない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲の全体にわたって、所与の化学式または名称は、互変異性体、すべての立体、光学および幾何異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、Ｅ／Ｚ異性体など）と、そのラセミ体、および別個のエナンチオマーを異なる割合で含む混合物、ジアステレオマーの混合物、またはそのような異性体およびエナンチオマーが存在する場合上述の形の任意の混合物、ならびにその薬学的に許容される塩を含めて塩、および遊離化合物の溶媒和物または化合物の塩の溶媒和物を含めて、例えば水和物などのその溶媒和物を包含するものとする。
本発明の化合物が化学名の形および式で描かれている場合に、何らかの矛盾がある場合は、式が優先するものとする。
定義されたコア分子に接続されている結合を示すために、星印を部分式で使用することができる。
式（Ｉ）の化合物に関して本明細書において用いられる「実質的に純粋な」という用語は、リン原子に関して考えうる他のジアステレオマーに対して少なくとも７５％の純度を有する１つの（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｓｐ，Ｓｐ）ジアステレオマーを指す。好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）の実質的に純粋な化合物は、少なくとも８５％の純度、少なくとも９０％の純度、少なくとも９５％の純度、少なくとも９７％の純度、または少なくとも９９％の純度を有する。
【００１２】
本明細書において用いられる「保護基」という用語は、別段の定義がない限り、酸素、窒素またはリン原子に結合して、その原子のさらなる反応の防止、または他の目的を行う化学官能基を指す。多種多様な保護基は、有機合成の当業者に公知であり、例えば、“Protective Groups in Organic Synthesis” by T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Third Edition, 1999に記載されている。
「薬学的に許容される」という用語は、妥当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしにヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適しており、合理的なベネフィット／リスク比に相応した、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために本明細書で使用されている。
【００１３】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される塩」は、親化合物の酸または塩基塩を作製することにより親化合物が修飾される、開示された化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩；ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分などの酸性残基のアルカリ塩、アンモニウム塩または有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書において用いられる「モジュレートされた」もしくは「モジュレートすること」、または「モジュレートする」という用語は別段の指示がない限り、この場合にはＳＴＩＮＧアゴニストを表す本発明の化合物を１つまたは複数用いて、ＳＴＩＮＧ経路を活性化することを指す。
【００１４】
本明細書において用いられる「処置（treatment）」および「処置すること（treating）」という用語は、治療的、すなわち治癒的および／または姑息的処置と、予防的（preventive）、すなわち予防的（prophylactic）処置の両方を包含する。
治療的処置は、前記状態の１種または複数を顕性、急性または慢性の形で既に発症している患者の処置を指す。治療的処置は、特定の徴候の症状を緩和するための対症的処置、あるいは徴候の状態を逆行もしくは部分逆行させるためのまたは疾患の進行を停止もしくは減速するための原因的処置とすることができる。また、治療的処置は、ある期間にわたる処置および長期治療も包含する。
予防的（preventive）処置（「予防」（prevention）、「予防的（prophylactic）処置」）は、前記状態の１つまたは複数を疾患の臨床的発症より前に発症するリスクがある患者において前記リスクを低減するための処置を指す。
「処置」および「処置すること」という用語は、症状もしくは合併症の発症を予防もしくは遅延させ、疾患、状態もしくは障害の発生の予防もしくは遅延させるために、かつ／または疾患、状態もしくは障害を除去または制御し、ならびに疾患、状態もしくは障害に伴う症状もしくは合併症を軽減するために１種または複数の活性化合物を投与することを含む。
「治療有効量」という用語は、（ｉ）特定の疾患または状態を処理または予防し、（ｉｉ）特定の疾患または状態の１つまたは複数の症状を減弱、改善、または除去し、あるいは（ｉｉｉ）本明細書に記載される特定の疾患または状態の１つまたは複数の症状の発症を予防または遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。
本発明は、処置を必要とする患者を指すとき、主に哺乳動物、特にヒトにおける処置に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の化合物
本発明の第１の態様は、前に本発明の概要で定義された、またはさらに詳細には、後に好ましい実施形態として定義される式（Ｉ）の化合物である。式（Ｉ）の修飾ＣＤＮは、薬理的有効性を低用量で達成することを可能にすることができる異なるヒトＳＴＩＮＧ対立遺伝子を有する細胞においてヒトＳＴＩＮＧに対する良好な結合親和性および良好な活性を示す。したがって、本発明の化合物は、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置において有用であることが期待される。
Ｂａｓｅならびに置換基Ｒ1およびＲ2の好ましいいくつかの意味を後に記載する。これらの定義のいずれもそれぞれ、互いに組み合わせることができる。
一実施形態によれば、Ｂａｓｅは、アデニン、プリン、グアニンおよびヒポキサンチンからなる群から選択され、それらのＮ9窒素原子を介して接続される。
別の実施形態によれば、Ｂａｓｅは、アデニンおよびプリンからなる群から選択され、それらのＮ9窒素原子を介して接続される。
別の実施形態によれば、Ｂａｓｅはプリンであり、そのＮ9窒素原子を介して接続される。
別の実施形態によれば、Ｂａｓｅはアデニンであり、そのＮ9窒素原子を介して接続される。
別の実施形態によれば、Ｂａｓｅはグアニンであり、そのＮ9窒素原子を介して接続される。
別の実施形態によれば、Ｂａｓｅ1はヒポキサンチンであり、そのＮ9窒素原子を介して接続される。
【００１６】
一実施形態によれば、Ｒ1およびＲ2は、Ｈを表す。
別の実施形態によれば、Ｒ1はＦを表し、Ｒ2はＨを表す。
別の実施形態によれば、Ｒ1はヒドロキシを表し、Ｒ2はＨを表す。
別の実施形態によれば、Ｒ1は−Ｏ−であり、Ｒ2は−ＣＨ2−であり、一緒に−ＣＨ2−Ｏ−の架橋を形成する。
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−１）である。
【００１７】
【化２】
2021519279.tif 000004
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−２）である。
【００１８】
【化３】
2021519279.tif 000005
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−３）である。
【００１９】
【化４】
2021519279.tif 000006
本発明の化合物は、ＲｐまたはＳｐ立体配置のキラルなリン原子を有する。式（Ｉ）、（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）、および（Ｉ−４）の化合物のすべての立体異性体は実質的に純粋な形またはその混合物で、本発明によって包含される。一般式（Ｉ）、（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）、および（Ｉ−４）の化合物は実質的に純粋な（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｓｐ，Ｓｐ）立体異性体（ｓｔｅｒｅｏｓｉｏｍｅｒ）として好ましい。
【００２０】
調製
当業者に公知であり、有機合成の文献に記載されている合成方法を使用して、本発明による化合物およびその中間体を得ることができる。好ましくは、化合物は、後にさらに十分に説明され、特に実験の部に記載される調製方法と類似して得られる。場合によっては、反応スキームを実施する際に採択される順序を変えてもよい。当業者に公知であるが、ここに詳細に記載されていないこれらの反応の変形も使用することができる。本発明による化合物を調製する一般方法は、以下の方法を検討すると当業者に明らかになる。出発化合物は市販されており、あるいは文献もしくは本明細書に記載される方法によって調製することができ、または類似したもしくは同様の方式で調製することができる。反応が実施される前に、通常の保護基を使用して出発化合物のいずれかの対応する官能基を保護することができる。これらの保護基は、当業者によく知られている方法を使用して、反応順序内の好適な段階で再び切断することができる。
【００２１】
本明細書に開示されるＣＤＮは、以下で詳細に記載されているように、または当業者に公知の他の方法によって調製することができる。これらのスキームは決して限定するものでないこと、本発明の趣旨から逸脱することなく、細部を変更することができることが当業者に理解されている。
ＣＤＮは、Chem. Rev. 113, 7354-7401 (2013)、Org. Lett., 12, 3269-3271 (2010)、Tetrahedron 49, 1115-1132 (1993)、国際公開第２０１７／０２４７６４５号、国際公開第２０１７／０２７６４６号、国際公開第２０１４／１８９８０５号、国際公開第２０１６／０９６１７４号、国際公開第２０１５／１８５５６５号、国際公開第２０１６／１４５１０２号、国際公開第２０１８／００９４６６号、または国際公開第２０１６／１２０３０５号、および本明細書に引用されている参考文献に記載されている方法によって得ることができる。
本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物およびその塩を後に記載される方法によって調製することができる。
【００２２】
当業者は、式（Ｉ）の２つのホスホロチオエート部分はそれぞれ、Ｒ立体配置（ＲP）またはＳ立体配置（ＳP）で存在することができることを認識する。後に記載される方法は、合成の異なる段階で当業者に公知の方法、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別晶出、例えば好適な溶媒系およびカラムを用いるＨＰＬＣによって分離することができる、リン原子に関して最大で４つのジアステレオマーを生じることができる。場合によっては、例えば１つの硫化ステップがジアステレオ選択的に進行するとき、後に記載される方法は、合成の異なる段階で当業者に公知のクロマトグラフまたは結晶化方法によって分離することができる２つのジアステレオマーのみを優先的に生じることができる。
上述のように、式（Ｉ）の化合物を、当業者に公知の方法によって塩、特に医薬用途の場合には薬学的に許容される塩に変換することができる。
本発明による化合物は、以下の実施例に記載されている方法を使用して得られうることも有利であり、それらの方法をこのために文献から当業者に公知の方法と組み合わせることもできる。
以下の調製方法内で明瞭に指定されていない置換基は、「発明の概要」のもとで前に述べた定義を包含するように理解されている。
式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ−１）または（ＩＩ−２）の化合物の脱保護によって調製することができる
【００２３】
【化５】
2021519279.tif 000007
［式中、
Ｒ3は、ベンゾイルなどの好適な保護基を有するＮＨを表し、Ｒ4はＨを表し（「保護されたアデニン」）、または
Ｒ3はＯＨを表し、Ｒ4は、ｉｓｏ−ブチリルもしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミジニルなどの好適な保護基を有するＮＨを表し（「保護されたグアニン」）、または
Ｒ3はＯＨを表し、Ｒ4はＨを表し（「ヒポキサンチン」）、または
Ｒ3およびＲ4は両方とも、Ｈを表す（「プリン」）］。
例えば、式（ＩＩ−１）または（ＩＩ−２）の化合物を好適な混合物、例えばメタノールまたはエタノール中メチルアミンまたはアンモニア水に溶解し、好適な温度、例えば２０〜６０℃で好適な期間、例えば１〜２４時間撹拌する。
式（ＩＩ−１）の化合物は、式（ＩＩＩ−１）の化合物の環化、続いて硫化［式中、Ｒ3およびＲ4は、前述のように定義される］によって調製することができる。
【００２４】
【化６】
2021519279.tif 000008
【００２５】
例えば、式（ＩＩＩ−１）の化合物を好適な溶媒、例えばピリジンまたはピリジンとジクロロメタンの混合物に溶解し、好適なカップリング試薬、例えば２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）、ジフェニルクロロホスフェート、ピバロイルクロリドまたはアダマントイルクロリドで処理し、好適な温度、例えば−５０℃〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜２時間撹拌する。環化反応は、好適な硫化試薬、例えば３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オンまたは硫黄元素での処理によってクエンチされ、好適な温度、例えば−５０℃〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜２時間撹拌する。
類似した形で、式（ＩＩ−２）の化合物は、式（ＩＩＩ−２）の化合物の環化、続いて硫化によって調製することができる
【００２６】
【化７】
2021519279.tif 000009
［式中、Ｒ3およびＲ4は前述のように定義される］。
式（ＩＩＩ−１）の化合物は、式（ＩＶ−１）の化合物と式（Ｖ−１）の化合物のカップリング［式中、Ｒ3およびＲ4は、前述のように定義される］によって調製することができる。
【００２７】
【化８】
2021519279.tif 000010
【００２８】
例えば、式（Ｖ−１）の化合物を好適な溶媒、例えばアセトニトリルに溶解し、式（IＶ−１）の化合物を好適な溶媒、例えばアセトニトリルに溶解した溶液で、好適なカップリング試薬、例えばテトラゾール、Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ４２（登録商標）（アセトニトリル中５−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−テトラゾールを含む活性化因子溶液）、ピリジニウムジクロロアセテートまたはピリジニウムトリフルオロアセテート（または混合物カップリング試薬）が存在していてもよい条件下に処理し、好適な温度、例えば０〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜２時間撹拌する。カップリング反応は、好適な硫化試薬、例えば３−（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−３−チオン（ＤＤＴＴ）またはフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）または３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）での処理によってクエンチされ、好適な温度、例えば０〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜２時間撹拌する。溶媒の蒸発後、残渣を好適な溶媒、例えばジクロロメタンと水の混合物に溶解し、好適な試薬、例えばジクロロ酢酸で処理し、好適な温度、例えば０〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜１時間撹拌する。
式（ＩＩＩ−２）の化合物は、式（ＩＶ−２）の化合物と式（Ｖ−２）の化合物のカップリングによって類似した形で調製することができる
【００２９】
【化９】
2021519279.tif 000011
［式中、Ｒ3およびＲ4は前述のように定義される］。
【００３０】
式（ＩＶ−１）の化合物は、前に定義したように式（Ｖ−２）の化合物の反応によって調製することができる。
例えば、式（Ｖ−２）の市販化合物を、好適な混合物、例えば水を含むアセトニトリルに溶解し、ピリジニウムトリフルオロアセテートで処理し、好適な温度、例えば０〜２０℃で、好適な期間、例えば１〜３０分間撹拌する。次いで、ｔｅｒｔ−ブチルアミンを添加し、混合物を好適な温度、例えば０〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜１時間撹拌する。生成物を溶媒の蒸発により単離し、次いで好適な溶媒、例えば水を含むジクロロメタンに溶解し、ジクロロ酢酸で処理し、好適な温度、例えば０〜２０℃で好適な期間、例えば０．１〜１時間撹拌する。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ1はＨを表す］は、上記のように調製することができる。式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ1はＯＨを表す］は、酸素にｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルなどの好適な保護基を使用して上記のように調製することができる。保護基は、当業者に公知の方法を使用して除去することができる。例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルは、好適な溶媒、例えばピリジンまたはＴＨＦ中、それぞれトリエチルアミン三フッ化水素またはテトラブチルアンモニウムフルオリドで切断することができる。
一般式Ｉの化合物またはその合成中間体を、それ自体が公知の方法、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別晶出を使用して、それらの物理化学的特性が異なることを利用することによってそれらのジアステレオマーに分割することができる。
本発明による化合物は、以下の実施例に記載されている方法を使用して得られうることも有利であり、それらの方法をこのために文献から当業者に公知の方法と組み合わせることもできる。
本発明の薬学的に許容される塩は、酸性の部分を含む親化合物から通常の化学的方法で合成することができる。一般的に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸の形と十分量の適切な塩基を水またはエーテル、酢酸エチル、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトンまたはアセトニトリル、もしくはそれらの混合物のような有機希釈剤中で反応させることによって調製することができる。あるいは、本発明の化合物（遊離酸または塩の形）を、酢酸トリエチルアンモニウム、ギ酸トリエチルアンモニウム、酢酸アンモニウムまたは炭酸水素アンモニウムの水性溶液などの「揮発性緩衝液」を使用する逆相クロマトグラフィーにかけることにより、凍結乾燥／フリーズドライ後に本発明の化合物がそれぞれのトリエチルアンモニウムまたはアンモニウム塩として得られる。あるいは、塩は、イオン交換により、例えば本発明の化合物（遊離酸または塩の形）の水性溶液をカチオン交換体で処理することによって調製することができる。
【００３２】
薬理活性
本発明による化合物は、ヒトＳＴＩＮＧに対して良好な結合親和性を示す。結合親和性は、例えばNat. Chem. Biol. 10, 1043-1048 (2014)に記載されているシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ベースの競合結合試験によって決定することができる。あるいは、結合親和性は、例えばMolecular Cell 51, 226-235 (2013)に記載される等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）によって決定することができる。あるいは、結合親和性は、例えば国際公開第２０１６／１４５１０２号に記載される表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定することができる。あるいは、結合親和性は、例えば下記の示差走査蛍光定量（ＤＳＦ）によって決定することができる。
本発明による化合物は、良好な細胞活性を示す。インビトロサイトカイン誘導は、下記のようにレポーター細胞系、例えばＴＨＰ１細胞において測定することができる。ヒトＳＴＩＮＧは、少なくとも５種の公知変異型（ＷＴ、ＨＡＱ、ＲＥＦ／２３２Ｈ、ＡＱ、Ｑ／２９３Ｑ）で存在する。ヒトＳＴＩＮＧ変異型における異なるＣＤＮの活性を試験するために、ＴＨＰ１−ＳＴＩＮＧ  ＫＯ細胞に、異なるＳＴＩＮＧ変異型をコードするベクターを安定に導入することができる。さらに、インビトロサイトカイン誘導は、ヒト初代ＰＢＭＣまたはヒト樹状細胞において測定することができる。
【００３３】
ヒトＳＴＩＮＧに対して良好な結合親和性と良好な細胞活性および／または良好なＰＫ特性とがあいまって、より低用量で薬理的有効性が可能になりうる。より低用量には、副作用を潜在的に低減して、患者の「薬物負荷」または「薬物負担」（親薬物およびその代謝産物）を低減し、製剤の生産コストを下げるという利点がある。ヒトＳＴＩＮＧの変異体に対する同様に強力な活性は、一定用量が投与される場合、一塩基多型の患者において所望の薬理応答を誘導する機会を最大にするので有利である。
本発明の化合物とヒトＳＴＩＮＧとの結合は、以下のアッセイを使用して明らかにすることができる。
【００３４】
示差走査蛍光定量（ＤＳＦ）
材料：
Ｈａｒｄ−Ｓｈｅｌｌ（登録商標）ＰＣＲ  Ｐｌａｔｅｓ  ３８４−Ｗｅｌｌ  薄壁（カタログ番号  ＨＳＰ３８０５Ｒ、ＢＩＯ−ＲＡＤ）
Ｍｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）’Ｂ’  Ａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｓｅａｌｓ  ｆｏｒ  ＰＣＲ  Ｐｌａｔｅｓ（カタログ番号  ＭＳＢ−１００１、ＢＩＯ−ＲＡＤ）
ＳＹＰＲＯオレンジのＤＭＳＯ溶液（ＳＩＧＭＡカタログ番号  Ｓ５６９２−５００ＵＬ）、「５０００ｘ」濃縮
計測装置：読み取り装置：ＣＦＸ３８４  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）
ピペッティングロボット：ＨａｍｉｌｔｏｎＳｔａｒｌｅｔ
アッセイ緩衝液：２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５
標的タンパク質：ヒトＳＴＩＮＧ（ｈＳＴＩＮＧ、残基１５５−３４１、Ｎ末端Ｈｉｓ８タグおよびＴＥＶ切断部位を含む野生型配列、ＭＷ：２３６０１．５Ｄａ）
タンパク質保存液：ｃ＝アッセイ緩衝液中３０９μＭ保存液
試験化合物の最終アッセイ濃度：１００μＭ、３μＭ標的タンパク質、「５ｘ」ＳＹＰＲオレンジ
アッセイ手順：
１）  化合物保存液およびその希釈液をアッセイ緩衝液で調製した。
２）  ５μｌの蛍光色素保存液（５０００ｘ  ＳＹＰＲＯオレンジ）を５０μｌの標的タンパク質（３０９μＭ）および９４５μｌの緩衝液と混合した。
３）  ２μｌのこのタンパク質−色素−混合物（２５ｘ  ＳＹＰＲＯオレンジおよび１５μＭタンパク質）を８μｌの化合物溶液に添加した。最終体積は１０μｌであった。
４）  いくつかのウェル位置を陰性対照として使用した。
５）  プレートをデュプリケート測定用に調製し、１０００ｇで２分間遠心した。
６）  測定において、０．５℃の１６０サイクルを使用した（温度傾斜  １５秒／サイクル、１５℃から９５℃）。
データ解析：解離曲線をＢｉｏ−Ｒａｄ  ＣＦＸ  Ｍａｎａｇｅｒで処理した。ピーク型を「負」に設定した。少なくとも２回のＴｍ測定を平均した。Ｔｍの変化（「サーマルシフト」）を表１に示す。
【００３５】
【表１】
2021519279.tif 000012
本発明の化合物の細胞活性は、以下のインビトロＴＨＰ１アッセイを使用して明らかにすることができる。
【００３６】
インビトロサイトカイン誘導
本発明による化合物のサイトカイン誘導活性は、ＴＨＰ１レポーター細胞系を使用して明らかにされた。
ＴＨＰ１細胞において発現されるＳＴＩＮＧタンパク質の活性化によって、インターフェロン産生が増加する。インターフェロン制御因子（ＩＲＦ）誘導性ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーターコンストラクトの安定的な組込みによって、機能的インターフェロンシグナル伝達経路をモニターすることができる。ＩｎｖｉｖｏｇｅｎのＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）比色酵素アッセイおよび好適な光学濃度（ＯＤ）読み取り装置を使用して、ＳＥＡＰの活性を検出および定量化することができる。この技法を使用すれば、ＳＴＩＮＧタンパク質の薬理学的修飾を特徴付けることができる。
ヒトＳＴＩＮＧタンパク質およびＩＲＦ誘導性ＳＥＡＰレポーターコンストラクトを安定に発現するＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞において、ＳＥＡＰ活性の測定を行った。３７℃、湿度９５％および５％ＣＯ2インキュベーター内で、細胞を、１０％ウシ胎仔血清、５０μｇ／ｍｌペニシリン−ストレプトマイシン、１００μｇ／ｍｌ  Ｚｅｏｃｉｎ、および１００μｇ／ｍｌ  Ｎｏｒｍｏｃｉｎを含むＲＰＭＩ１６４０培地にて培養増殖した。アッセイレディ細胞を凍結ストックとして貯蔵した。
【００３７】
アッセイの準備において、細胞をＺｅｏｃｉｎ−／Ｎｏｒｍｏｃｉｎ−不含培地にて解凍し、アッセイプレートに１ウェル当たり１５０００細胞／１５μＬの密度で分布した。化合物を、５０％水性ＤＭＳＯにおける８点または１６点段階希釈およびアッセイにおいて最終ＤＭＳＯ濃度０．５％を確実にする培地への最終希釈段階によって調製した。５μｌの希釈化合物と５μＬの培地をプレートに添加し、続いて３７℃で２４時間インキュベートした。
アッセイの日に、１ウェル当たり７５μｌのＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ試薬をプレートのすべてのウェルに添加し、プレートを３７℃でもう３０分間インキュベートした。６２０ｎｍにおけるＯＤをＥｎＶｉｓｉｏｎ読み取り装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。
ＥＣ50値およびＨｉｌｌ勾配は、６２０ｎＭにおけるＯＤを使用してＭｅｇａｌａｂソフトウェア（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）で８点または１６点の４パラメトリック非線形曲線適合から導き出された。表２を参照のこと。
【００３８】
【表２】
2021519279.tif 000013
【００３９】
いくつかの一塩基多型が、環式ジヌクレオチドに対する応答に影響することができるヒトＳＴＩＮＧ遺伝子において同定された。本発明の化合物の活性を決定するために、異なるヒトＳＴＩＮＧ変異型を発現するＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧレポーター細胞系が生み出された。そうするために、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９系を使用して、内因性ヒトＳＴＩＮＧをまず欠失させた。ＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞を、ＳＴＩＮＧ遺伝子を標的にするＡＬＬ−ＩＮ−ＯＮＥ  ＣＲＩＳＰＲプラスミド（Ｓｉｇｍａから購入、導入成功のためのレポーター遺伝子としてのｇＲＮＡおよびＧＦＰをコードする）を用いて電気穿孔した。次いで、ＧＦＰ陽性細胞をトランスフェクション後２４時間で選別し、増殖させた。次いで、細胞を半固体のメトセル培地に分散して、単個細胞クローン単離を可能にした。次いで、Ｑｕａｎｔｉ−ブルーレポーターアッセイを使用して、クローンをｃＧＡＭＰ応答性についてスクリーニングした。続いて、非応答性クローンを、ウエスタンブロッティングおよびＳＴＩＮＧ座位のシーケンシングによってＳＴＩＮＧ損失について分析した。
ヒトＳＴＩＮＧ変異型の過剰発現については、確認されたＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ  ｈＳＴＩＮＧ  ＫＯクローンに、それぞれｈＳＴＩＮＧの変異対立遺伝子（ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ）をコードする個々のレトロウイルスプラスミド（ＭＳＣＶ−ｉｒｅｓ−ＧＦＰ−Ｂｌａｓｔｉ）を導入した。導入された細胞を異なるＧＦＰ蛍光レベルによって選別し、ＳＴＩＮＧ対立遺伝子発現をウェスタンブロットによって分析した。親の未修飾ＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞系から内因性ＳＴＩＮＧレベルに匹敵するレベルで異所性ＳＴＩＮＧタンパク質（ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ）を発現する集団を選択し、使用して、化合物を特徴付けた。驚くべきことに、本発明による化合物は、上記の変異型細胞系の５種すべてにおいて非常に強力な細胞活性を示し、例えば実施例１．１は、ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ変異型細胞系のそれぞれにおいて≦１μＭのＥＣ50値を示し、変異体の明白な差異／選択性が欠けていることが示唆されることが判明した。ヒトＳＴＩＮＧが欠失しているＴＨＰ１細胞系において活性が観察されなかったので、観察された細胞活性はＳＴＩＮＧ依存性である。
本発明の化合物の細胞安定性を以下の通り決定した。化合物を細胞培養用培地（１０％ＦＣＳ、１％非必須アミノ酸および１％ピルベートを補充したＭＥＭ）に溶解し、最終濃度を１０μＭとし、ヒト肺上皮細胞系Ｃａｌｕ−３（２４ウェルプレートに６００００細胞／ウェル）と共に最長で２４時間までインキュベートした。細胞培養上清の試料を１、６、２４時間に採取し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量化した。
【００４０】
処置方法
本発明の別の態様において、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが治療上の利益となる疾患または状態の処置にとって有用であり得ることが判明している。さらに、本発明の化合物は、それらの活性のためにワクチンアジュバントとして適している。
ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患および状態は、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、例えばアレルギー性鼻炎もしくは喘息、感染性疾患またはがんを包含するが、これらに限定されない。
自己免疫性疾患としては、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythmatosus）、乾癬、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、皮膚筋炎およびシェーグレン症候群（ＳＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
炎症は、外傷に対する血管、細胞および神経学的応答群を表す。炎症は、単球、好中球および顆粒球などの炎症細胞の組織への動きと特徴付けることができる。これは、通常、内皮バリアー機能の低減および組織への浮腫に関連している。炎症を急性または慢性に分類することができる。急性炎症は、身体の有害な刺激に対する初期応答であり、血漿および白血球の血液から傷害組織への動きの増大によって実現される。一連の生化学的事象が広がり、傷害組織内の局所血管系、免疫系、および様々な細胞に関係する炎症反応を成熟させる。慢性炎症として知られている遷延化した炎症は、炎症の部位に存在する細胞の種類の進行性の変化を招き、同時に起こる破壊と組織の炎症過程からの治癒とを特徴とする。
炎症は、感染に対する免疫応答の一部分または外傷に対する急性応答として起こるとき、有益であり得、通常は自己限定性である。しかし、炎症は、様々な条件下で有害であり得る。これには、著しい器官損傷および死亡（例えば、敗血症の状況において）に至る可能性がある、感染病原体に応答した過度の炎症の生成が含まれる。さらに、慢性炎症は、一般に有害であり、組織に重度で不可逆的な損傷を引き起こす多数の慢性疾患の根源にある。そのような状況において、免疫応答は、しばしば自己組織に対して生じる（自己免疫）が、異物に対する慢性応答も、自己組織に対するバイスタンダー損傷に至る可能性がある。したがって、抗炎症療法の目的は、この炎症を低減し、自己免疫が存在するときそれを阻害し、生理的過程または治癒および組織修復が進行することを可能にすることである。
【００４２】
本発明の化合物を使用して、以下に例示する筋骨格炎症、血管炎症、神経炎症、消化器系炎症、眼炎症、生殖系の炎症、および他の炎症を含めて、身体のいずれかの組織および器官の炎症を処置することができる。
筋骨格炎症は、筋骨格系のいずれかの炎症状態、特に手、手首、肘、肩、顎、脊椎、頸部、尻、膝、足首、および足の関節を含めて、骨格関節に影響する状態、ならびに腱など、筋肉を骨に接続する組織に影響する状態を指す。本発明の化合物で処置することができる筋骨格炎症の例としては、関節炎（例えば、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、急性および慢性の感染性関節炎、痛風および偽痛風に伴う関節炎、ならびに若年性特発性関節炎を含む）、腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑液包炎、結合織炎（線維筋痛）、上顆炎、筋炎、および骨炎（例えば、パジェット病、恥骨骨炎、および嚢胞性線維性骨炎を含む）が挙げられる。眼炎症は、眼瞼を含めて、眼のいずれかの構造の炎症を指す。本発明の化合物で処置することができる眼炎症の例としては、眼瞼炎、眼瞼皮膚弛緩症、結膜炎、涙腺炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ドライアイ）、強膜炎、睫毛乱生症、およびブドウ膜炎が挙げられる。本発明の化合物で処置することができる神経系の炎症の例としては、脳炎、ギランバレー症候群、髄膜炎、ニューロミオトニア、ナルコレプシー、多発性硬化症、脊髄炎および統合失調症が挙げられる。
本発明の化合物で処置することができる血管構造またはリンパ系の炎症の例としては、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎、およびリンパ管炎が挙げられる。
本発明の化合物で処置することができる消化器系の炎症状態の例としては、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病や潰瘍性大腸炎など）、回腸炎、および直腸炎が挙げられる。
【００４３】
本発明の化合物で処置することができる生殖系の炎症状態の例としては、子宮頚炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、精巣炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、膣炎、外陰炎、および外陰部痛が挙げられる。
作用剤を使用して、炎症性成分を有する自己免疫性状態を処置することができる。そのような状態としては、急性播種状汎発性脱毛症、ベーチェット病、シャガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、１型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、ヘノッホシェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発動脈炎、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌスミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、結節性多発動脈炎、多発性筋肉痛、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎、および白斑が挙げられる。
【００４４】
作用剤を使用して、炎症性成分を有するＴ細胞媒介性過敏性疾患を処置することができる。そのような状態としては、接触過敏症、接触性皮膚炎（ツタウルシが原因であるものを含む）、蕁麻疹、皮膚アレルギー、呼吸アレルギー（枯草熱、アレルギー性鼻炎）およびグルテン過敏性腸症（セリアック病（Celliac disease））が挙げられる。
【００４５】
作用剤で処置することができる他の炎症状態としては、例えば、虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合織炎、歯肉炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎（percarditis）、腹膜炎（peritonoitis）、咽頭炎、胸膜炎、肺臓炎、前立腺炎（prostatistis）、腎盂腎炎、および口内炎（stomatisi）、移植片拒絶（腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓(例えば、膵島細胞)、骨髄、角膜、小腸、皮膚アログラフト、皮膚ホモグラフト、および心臓弁ゼノグラフト（xengraft）などの器官、血清病（sewrum sickness）、ならびに移植片対宿主病に関係する）、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸窮迫症候群、セザリー症候群（Sexary's syndrome）、先天性副腎皮質過形成症、非化濃性甲状腺炎、がんに伴う高カルシウム血症、天疱瘡、水疱性疱疹状皮膚炎、重度多形性紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性または通年性アレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎（astopic dermatitis）、薬剤過敏性反応（drug hypersensistivity reaction）、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎および虹彩毛様体炎（oiridocyclitis）、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、電撃性または播種性肺結核化学療法、成人における特発性血小板減少性紫斑病、成人における続発性血小板減少症、後天性（自己免疫性（autroimmine））溶血性貧血、成人における白血病およびリンパ腫、小児期の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫性血管炎、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、実質器官移植拒絶反応、敗血症が挙げられる。好ましい処置としては、移植片拒絶、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多発性硬化症、１型糖尿病、喘息、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性肺疾患、および感染状態に伴う炎症（例えば、敗血症）の処置が挙げられる。
【００４６】
一態様において、本発明の化合物を使用して処置する疾患または状態はがんである。式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が潜在的に有益な抗腫瘍効果を及ぼすことができるがん疾患および状態の例としては、肺、骨、膵臓、皮膚、頭部、頸部、子宮、卵巣、胃、結腸、乳房、卵巣、食道、小腸、腸、内分泌系、甲状腺、副甲状腺、副腎、尿道、前立腺、陰茎、精巣、尿管、膀胱、腎臓または肝臓のがん；尿路上皮がん；直腸がん；肛門部のがん；ファロピウス管、子宮内膜、頸部、腟、陰門、腎盂、腎細胞の癌；軟部組織の肉腫；粘液腫；横紋筋腫；線維腫；脂肪腫；奇形腫；胆管癌；肝芽腫；血管肉腫；血管腫（hemagioma）；肝癌；線維肉腫；軟骨肉腫；骨髄腫；慢性または急性白血病；リンパ球性リンパ腫；原発性ＣＮＳリンパ腫；ＣＮＳの新生物；脊髄軸腫瘍；扁平上皮癌；滑膜肉腫；悪性胸膜中皮腫；脳幹グリオーマ；下垂体腺腫；気管支腺腫;軟骨性過誤腫（chondromatous hanlartoma）；中皮腫(inesothelioma)；ホジキン病、あるいは上述のがんの１種もしくは複数の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
本発明による化合物で処置することができる好ましいがんは、皮膚がん、肺がん、肝がん、結腸がん、脳がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、膵がん、腎がん、胃がん、頭部がん、頸部がん、皮膚がんおよび尿路上皮がん、ならびにリンパ腫および白血病である。
新規化合物は、上記の疾患の予防、短期または長期の処置のために使用することができ、手術、放射線治療、あるいは例えば細胞分裂抑制もしくは細胞毒性物質、細胞増殖阻害剤、抗血管新生物質、ステロイドまたは抗体など他の「最新の」化合物とも組み合わせて使用してもよい。
いくつかの実施形態において、アジュバントとしての役割で、本化合物および組成物は、ワクチンを使用する治療的または予防的（prophylactic）戦略でアジュバントとして使用することができる。したがって、本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容される塩を、１種または複数の所定の抗原に対する免疫応答を刺激するために選択される１種または複数のワクチンと一緒に使用することができる。本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容される塩を、そのようなワクチンと一緒にまたはそれらに加えて提供することができる。
そのようなワクチンは、対象となる抗原、精製された抗原、抗原を発現および／もしくは分泌するように組換え改変された生ウイルスもしくは細菌送達ベクター、抗原を負荷されたもしくは抗原をコードする核酸を含む組成物をトランスフェクトされた細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）ベクター、リポソーム抗原送達担体、または抗原をコードするネイキッド核酸ベクターを含む、不活性化または減弱された細菌またはウイルスを含むことができる。この一覧は、限定するものではない。例として、そのようなワクチンは、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ３、ＩＬ−１２ｐ７０、ＦＬＴ−３リガンドのサイトカインの１種または複数を発現および分泌する不活性化された腫瘍細胞も含むことができる。
【００４８】
一般式（Ｉ）の化合物の１日当たりの適用可能な用量範囲は、患者の体重１ｋｇ当たり通常０．００００１〜１０ｍｇ、例えば０．００００１〜１ｍｇである。各投与量単位は、好都合には０．００１〜１０００ｍｇ、例えば０．００１〜１００ｍｇを含むことができる。
実際の治療有効量または治療投与量は、当然、患者の年齢および体重、投与経路ならびに疾患の重症度など当業者によって公知の因子によって決まる。いずれの場合も、化合物または組成物は、様々な投与量で、患者の独自の状態に基づいて治療有効量を送達することが可能になる形で投与される。
【００４９】
本発明による化合物、組成物は、１種または複数の追加の治療剤とのいずれの組合せをも含めて、粘膜（例えば、経口、舌下、腟内、経鼻、頸部など）、腫瘍内、腫瘍周囲、経皮、吸入、または非経口（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、髄腔内および硬膜外投与）経路によって投与することができる。可能な投与方法のうち、腫瘍内、腫瘍周囲、皮下または静脈内投与が好ましい。
【００５０】
本発明の化合物は、ヒトＳＴＩＮＧへの良好な結合親和性、良好な細胞活性などのいくつかの利点を示し、すなわち、異なるヒトＳＴＩＮＧ対立遺伝子を有する細胞で、細胞アッセイにおいて良好な安定性を示す。
したがって、別の態様において、本発明は、サイトカイン産生をＳＴＩＮＧに依存した形でインビトロおよび／またはインビボで誘導し、治療で使用する、すなわち医薬として使用するのに適した薬理および薬物動態特性を有する、新規式（Ｉ）の化合物をその薬学的に許容される塩を含めて提供する。
別の態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置方法において使用するための新規式（Ｉ）の化合物をその薬学的に許容される塩を含めて提供する。
別の態様において、本発明は、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置のため、感染性疾患またはがんの処置のため、あるいはワクチンアジュバントとしての使用のための新規式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
別の態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置において使用するための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置、あるいは感染性疾患またはがんの処置において使用するための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
したがって、本発明は、医薬としての式（Ｉ）の化合物に関する。
さらに、本発明は、患者、好ましくはヒトにおいてＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置方法における式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
さらに、本発明は、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置、あるいは感染性疾患またはがんの処置の方法における式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
さらに別の態様において、本発明は、哺乳動物においてＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置方法であって、そのような処置を必要とする患者、好ましくはヒトに本発明の化合物または医薬組成物の治療有効量を投与するステップを含む方法に関する。
【００５１】
別の態様において、本発明は、対象においてＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
別の態様において、本発明は、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置、あるいは感染性疾患またはがんの処置を必要とする患者におけるそれらの処置方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を患者に投与するステップを含む方法を提供する。
関連した態様において、本発明は、個体において免疫応答を誘導、刺激、または補助する方法に関する。これらの方法は、本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容される塩を個体に投与するステップを含む。
別の態様において、本発明は、疾患の処置または予防のための抗原または抗原組成物を含む免疫原性組成物を製造するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、疾患を処置または予防する方法であって、疾患に苦しむまたは感染しやすいヒト対象に、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む免疫原性組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
別の態様において、本発明は、疾患の処置または予防において使用するための抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含むワクチン組成物を提供する。
別の態様において、本発明は、疾患の処置または予防のための抗原または抗原組成物を含むワクチン組成物を製造するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、疾患を処置または予防する方法であって、疾患に苦しむまたは感染しやすいヒト対象に、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含むワクチン組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【００５２】
医薬組成物
本発明の別の態様において、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置のために前記阻害剤の治療有効量を投与するのに適している上記の化合物の医薬組成物を製剤化することができることが判明している。
【００５３】
本開示では、医薬組成物を薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含む製剤として、経口、非経口、吸入噴霧、局所、または直腸投与を含めて様々な手段によって投与することができる。本発明の化合物の腫瘍内（腫瘍塊に直接に）または腫瘍周囲（腫瘍塊の周り）投与により、局所浸潤ＤＣを直接に活性化し、腫瘍細胞のアポトーシスを直接に促進し、または腫瘍細胞を細胞傷害性剤に対して感作させる。
【００５４】
本開示の医薬組成物は、無菌の注射可能な水性または油性懸濁液などの無菌注射製剤の形をとることができる。この懸濁液は、以上または以下に述べる好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知技術に従って製剤化することができる。無菌注射製剤は、１，３−ブタン−ジオール溶液など無毒性の非経口投与に許容される希釈剤もしくは溶媒中の無菌の注射溶液もしくは懸濁液とすることもでき、または凍結乾燥粉末として調製することもできる。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中に、水、リンゲル液および等張食塩水がある。さらに、無菌の不揮発油を溶媒または懸濁化媒体として慣例的に使用することができる。このために、合成モノ−またはジグリセリドを含めて、いずれの無刺激性不揮発油でも使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、同様に注射剤の調製において使用することができる。
口腔における局所投与に適した製剤としては、活性成分をフレーバー付き基剤、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に含むロゼンジ；活性成分をゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中に含む香錠；ならびに活性成分を好適な液体担体中に含む洗口剤が挙げられる。
腟内投与に適している製剤は、活性成分に加えて、当技術分野において適切であることが公知であるような担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたは噴霧製剤として提示することができる。
非経口投与に適している製剤としては、製剤を所期のレシピエントの血液と等張にする抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および溶質を含むことができる水性および非水性無菌等張注射液；ならびに懸濁化剤および粘稠化剤を含むことができる水性および非水性の無菌の懸濁液が挙げられる。製剤は、ユニット用量またはマルチ用量シール容器、例えばアンプルおよびバイアルで提示することができ、使用直前に無菌液体担体、例えば注射用水を添加するだけですむフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。注射溶液および懸濁液は、前に記載された種類の無菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
したがって、本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の１つもしくは複数の化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物を提供する。
さらに、本発明は、患者、好ましくはヒトにおいてＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置のための本発明による医薬組成物の使用に関する。
【００５５】
本発明の第２の態様の一実施形態によれば、ＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態の処置方法において使用するための、上記の化合物の１つもしくは複数、またはその薬学的に許容される塩を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物が提供される。
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の１つもしくは複数の化合物またはその薬学的に許容される塩を含むワクチンが提供される。
別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含むワクチンアジュバントを提供する。
別の態様において、本発明は、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む免疫原性組成物を提供する。
別の態様において、本発明は、疾患の処置または予防において使用するための、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む免疫原性組成物を提供する。
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の１つもしくは複数の化合物またはその薬学的に許容される塩、および１種または複数の追加の治療剤を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物が提供される。好ましくは、この組成物は、式（Ｉ）の１つの化合物またはその薬学的に許容される塩、および１種または複数の追加の治療剤を含む。
【００５６】
組合せ治療
本発明の化合物は、それら自体で使用することができ、または適切な免疫応答を誘導し、修飾し、もしくは刺激するのに十分な量の薬学的に許容される添加物と組み合わせることができる。免疫応答は、限定されるものではないが、特異的免疫応答、非特異的免疫応答、特異的応答と非特異的応答の両方、自然応答、一次免疫応答、適応免疫、二次免疫応答、記憶免疫応答、免疫細胞活性化、免疫細胞増殖、免疫細胞分化、およびサイトカイン発現を含むことができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている化合物およびその組成物は、１種または複数の所定の抗原に対する免疫応答を刺激するためのものであるワクチン；アジュバント；ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１経路アンタゴニスト、脂質、リポソーム、化学療法剤、免疫調節性細胞系などを含む１種または複数の追加の組成物と一緒に投与される。
【００５７】
本明細書に記載されている化合物およびその組成物は、追加の治療もしくは予防組成物またはモダリティの前、後、および／またはそれと同時に投与することができる。これらとしては、限定されるものではないが、Ｂ７共刺激分子、インターロイキン−２、インターフェロン−ｇ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＯＸ−４０／ＯＸ−４０リガンド、ＣＤ４０／ＣＤ４０リガンド、サルグラモスチム、レバミゾール、ワクシニアウイルス、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、リポソーム、ミョウバン、フロインド完全または不完全アジュバント、無毒化エンドトキシン、鉱油、表面活性物質、例えばリポレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、および油または炭化水素乳濁液などが挙げられる。細胞溶解性Ｔ細胞応答対抗体応答を優先的に刺激するＴ細胞免疫応答を誘導するための担体が好ましいが、両タイプの応答を刺激するものを同様に使用することができる。作用剤がポリペプチドである場合、ポリペプチド自体またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを投与することができる。担体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または樹状細胞などの細胞とすることができる。抗原提示細胞としては、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞のような細胞型が挙げられる。他のプロフェッショナル抗原提示細胞としては、単球、辺縁帯クッパー細胞、ミクログリア、ランゲルハンス細胞、指状嵌入樹状細胞、濾胞樹状細胞、およびＴ細胞が挙げられる。通性抗原提示細胞も使用することができる。通性抗原提示細胞の例としては、星細胞、濾胞細胞、内皮および線維芽細胞が挙げられる。担体は、ポリペプチドを発現し、またはポリヌクレオチド（polynucleoteide）を送達し、続いてワクチン接種された個体の細胞において発現されるように形質変換される細菌細胞とすることができる。水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムなどのアジュバントを添加して、ワクチンが免疫応答を引き起こし、増強し、または延長する能力を増加させることができる。リポタンパク質、ＬＰＳ、モノホスホリル脂質Ａ、リポタイコ酸、イミキモド、レシキモド、およびさらにポリＩ：Ｃなどのレチノイン酸誘導型遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）アゴニストを含めて、ＣｐＧ、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）９アゴニストおよび追加のＴＬＲ  ２、ＴＬＲ  ４、ＴＬＲ  ５、ＴＬＲ  ７、ＴＬＲ  ８、ＴＬＲ９に対するアゴニストのような、サイトカイン、ケモカイン、および細菌の核酸配列などの追加の材料は、別々にまたは記載される組成物と組み合わせて使用され、潜在的なアジュバントでもある。アジュバントの他の代表例としては、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａの樹皮およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍから精製される均質サポニンを含む合成アジュバントＱＳ−２１が挙げられる（McCune et al., Cancer, 1979; 43:1619）。
【００５８】
追加の治療剤との共投与方法は、当技術分野において周知である（Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA）。一般に、共投与または投与は一緒に、対象を２種以上の作用剤で処置することを示し、作用剤を同時にまたは異なる時間に投与することができる。例えば、そのような作用剤を単一の対象に、本質的に同じ時間でも、異なる時間でもよく、同じ投与経路でも、異なる投与経路でもよい別々の投与として送達することができる。そのような作用剤は、同時に同じ投与経路で投与されるように、単一の対象に同じ投与（例えば、同じ製剤）として送達することができる。
【００５９】
本発明の化合物のアジュバント特性のため、それらの使用は、他のワクチン、アジュバント、抗原、抗体、および免疫モジュレーターを含めて、他の治療モダリティと組み合わせることもできる。下にその例を示す。
【００６０】
アジュバント
本明細書に記載されている本発明の化合物およびその組成物に加えて、本発明の組成物または方法は、１種または複数の追加の物質をさらに含んでもよく、その追加の物質は、その性質のため、免疫系を刺激またはその他の方法で利用して、標的とされる腫瘍細胞に存在するがん抗原に応答するように働くことができる。そのようなアジュバントとしては、脂質、リポソーム、先天免疫を誘導する不活性化された細菌（例えば、不活性化または減弱されたListeria monocytogenes）、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、（ＮＯＤ）−様受容体（ＮＬＲ）、レチノイン酸誘導遺伝子ベース（ＲＩＧ）−Ｉ−様受容体（ＲＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）および／または病原体関連分子パターン（「ＰＡＭＰＳ」）を介して先天性免疫活性化を媒介する組成物が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＡＭＰの例としては、リポタンパク質、リポポリペプチド、ペプチドグリカン、ザイモサン、リポ多糖、ナイセリアポリン、フラジェリン、プロフィリン（profillin）、ガラクトセラミド、ムラミルジペプチドが挙げられる。ペプチドグリカン、リポタンパク質、およびリポタイコ酸は、グラム陽性の細胞壁成分である。リポ多糖は、大半の細菌によって発現され、ＭＰＬは一例である。フラジェリンは、病原性および共生細菌によって分泌される、細菌鞭毛の構造部品を指す。ガラクトシルセラミドは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性化因子である。ムラミルジペプチドは、すべての細菌に共通の生物活性ペプチドグリカンモチーフである。
【００６１】
免疫チェックポイント阻害剤
本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニスト、ＰＤ−１経路アンタゴニスト、Ｔｉｍ−３経路アンタゴニスト、Ｖｉｓｔａ経路アンタゴニスト、ＢＴＬＡ経路アンタゴニスト、ＬＡＧ−３経路アンタゴニスト、またはＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストからなる群から選択される免疫チェックポイント阻害剤などの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｔｉｍ−３抗体、抗Ｖｉｓｔａ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、または抗ＴＩＧＩＴ抗体からなる群から選択される。
【００６２】
本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せを使用して、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する。ＣＴＬＡ−４は、適応免疫応答の重要な負の制御因子と考えられている。活性化Ｔ細胞は、ＣＴＬＡ−４を上方制御し、抗原提示細胞のＣＤ８０およびＣＤ８６をＣＤ２８より高い親和性で結合させ、したがってＴ細胞刺激、ＩＬ−２遺伝子発現およびＴ−細胞増殖を阻害する。ＣＴＬＡ４遮断の抗腫瘍効果が、結腸癌、転移性前立腺がん、および転移性悪性黒色腫のマウスモデルにおいて観察された。一部の実施形態において、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニスト（antogonist）は、トレメリムマブおよびイピリムマブからなる群から選択される抗ＣＴＬＡ−４抗体分子である。
イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０としても知られているＣＴＬＡ−４抗体、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）およびトレメリムマブ（以前にチシリムマブとして知られているＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５，２０６）は、ヒトＣＴＬＡ４に結合し、ＣＤ８０およびＣＤ８６とのその相互作用を防止するヒト化モノクローナル抗体である。同様の戦略によって標的とすることができる他の負の免疫制御因子としては、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター、トランスフォーミング増殖因子β＾、インターロイキン−１０、および血管内皮増殖因子が挙げられる。
一部の実施形態において、本発明の化合物は、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて使用することができる。一実施形態において、組合せは、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書に記載されている抗ＰＤ−１抗体分子、および抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブを含む。使用することができる例示的な用量としては、抗ＰＤ−１抗体分子の約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば３ｍｇ／ｋｇの用量、および抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブの約３ｍｇ／ｋｇの用量が挙げられる。
【００６３】
本発明の化合物は、ＰＤ−１経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せを使用して、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する。ＰＤ−１は、活性化されたＴ細胞で発現される適応免疫応答の別の負の制御因子である。ＰＤ−１は、Ｂ７−Ｈ１およびＢ７−ＤＣに結合し、ＰＤ−１の関与によりＴ−細胞活性化を抑制する。抗腫瘍効果は、ＰＤ−１経路遮断で明らかにされた。抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（商標））、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標））、およびピディリズマブ）、およびＡＭＰ−２２４が、本発明において使用することができるＰＤ−１経路ブロッカーの例であると文献で報告されている。一部の実施形態において、ＰＤ−１経路アンタゴニスト（antogonist）は、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体分子である。
一部の実施形態において、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合しているＰＤ−ＬｌまたはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号および国際公開第２０１１／０６６３４２号で開示されている）であり、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１の間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ溶融可溶性受容体である。
一部の実施形態において、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤である。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌｌ阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、またはＭＤＸ−１１０５から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＳＢ００１０７１８Ｃである。ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２と呼ぶこともある；Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。
【００６４】
本発明の化合物は、ＴＩＭ−３経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せを使用して、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する。一部の実施形態において、ＴＩＭ−３経路アンタゴニストは抗ＴＩＭ−３抗体である。一部の実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子が、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＴＩＭ−３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称で２０１５年８月６日公開の米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号に開示されている。
【００６５】
本発明の化合物は、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せを使用して、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する。一部の実施形態において、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストは抗ＬＡＧ−３抗体である。一部の実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子が、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＬＡＧ−３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称で２０１５年３月１３日出願の米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号に開示されている。
【００６６】
Ｔ細胞  受容体アゴニスト
本発明の化合物は、ＣＤ２８アゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、ＣＤ１３７アゴニスト、ＣＤ２７アゴニストまたはＨＶＥＭアゴニストなどのＴ細胞受容体アゴニストと組み合わせて使用することができる。
本発明の化合物は、ＣＤ２７アゴニストと組み合わせて使用することができる。例示的なＣＤ２７アゴニストとしては、抗ＣＤ２７アゴニスト抗体、例えば国際公開第２０１２／００４３６７号に記載されている抗ＣＤ２７アゴニスト抗体が挙げられる。
本発明の化合物は、ＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せを使用して、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する。例示的なＧＩＴＲアゴニストとしては、例えばＧＩＴＲ融合タンパク質および抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価の抗ＧＩＴＲ抗体）が挙げられる。
【００６７】
ＴＬＲアゴニスト
本発明の化合物は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと組み合わせて使用することができる。本明細書において用いられる「Ｔｏｌｌ様受容体」（または「ＴＬＲ」）という用語は、微生物産物を感知し、かつ／または適応免疫応答を開始させるタンパク質またはその断片のＴｏｌｌ様受容体ファミリーのメンバーを指す。一実施形態において、ＴＬＲは、樹状細胞（ＤＣ）を活性化する。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、微生物病原体を認識する自然免疫系のセンサーであると最初に同定されたパターン認識受容体のファミリーである。ＴＬＲは、ロイシンリッチリピートの外部ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ＴＩＲ  （Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ）ドメインを含む保存膜貫通分子のファミリーを含む。ＴＬＲは、「ＰＡＭＰ」（病原体関連分子パターン）と呼ばれることが多い、微生物における異なる構造を認識する。ＴＬＲへのリガンド結合は、炎症および免疫に関与する因子の生成を誘導する一連の細胞内シグナル伝達経路を呼び出す。
【００６８】
当技術分野において公知であり、本発明において使用されるＴＬＲアゴニストとしては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＴＬＲ−１／２アゴニスト；
ＣＦＡ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＭＡＬＰ２、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＦＳＬ−１、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ポリリボシン酸：ポリリボシチジン酸（ポリＩ：Ｃ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリアデノシン−ポリウリジル酸（ポリＡＵ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリ−Ｌ−リシンおよびカルボキシメチルセルロースで安定化されたポリイノシン酸−ポリシチジル酸（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、ＴＬＲ−３アゴニスト；
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、ＴＬＲ−４アゴニスト；
ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニスト；
細菌フラジェリン、ＴＬＲ−５アゴニスト；
シアリル−Ｔｎ（ＳＴｎ）、いくつかのヒトがん細胞におけるＭＵＣ１ムチンと結合している炭水化物およびＴＬＲ−４アゴニスト；
イミキモド、ＴＬＲ−７アゴニスト；
レシキモド、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；
ロキソリビン、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；および
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）、ＴＬＲ−９アゴニスト。
ＴＬＲアゴニストは、そのアジュバントの性質のため、好ましくは他のワクチン、アジュバントおよび／または免疫モジュレーターとの組合せで使用され、様々な組合せで組み合わせることができる。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されているように、ＳＴＩＮＧに結合し、ＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化、ならびに樹状細胞誘導、動員および／または成熟を刺激する１種または複数のサイトカインを発現および分泌する不活性化された腫瘍細胞を誘導するモノ−またはジ−ＦＣＤＮ化合物を、治療目的の１種または複数のＴＬＲアゴニストと一緒に投与することができる。
【００６９】
抗体治療薬
本発明の化合物は、治療抗体と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、治療抗体の作用機序は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。ＡＤＣＣは、膜表面抗原に特異的抗体が結合している標的細胞を免疫系のエフェクター細胞が活発に溶解する細胞性免疫防御の機序である。それは、抗体が体液性免疫応答の一部分として、感染を限定および抑制するように働くことができる機序の１つである。古典的ＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって媒介される。マクロファージ、好中球および好酸球もＡＤＣＣを媒介することができる。ＡＤＣＣは、トラスツズマブおよびリツキシマブを含めて治療モノクローナル抗体の腫瘍に対する重要な作用機序である。本発明の化合物は、ＡＤＣＣを増強するように働くことができる。
下記は、本発明の化合物と一緒に使用することができる抗体の例示的な一覧である。
ムロモナブ−ＣＤ３、インフリキシマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、Ｌｙｍ−１  イピリムマブ、ビタキシン、ベバシズマブおよびアブシキシマブ。
本発明の化合物と組み合わせて使用することができる追加の治療抗体としては、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＥＧＦＲ２および／またはＥＧＦＲ４阻害剤、Ｍ−ＣＳＦ阻害剤、抗ＡＰＲＩＬ抗体、または抗ＳＩＲＰ＾または抗ＣＤ４７抗体が挙げられる。
【００７０】
化学療法剤
本明細書に記載されている方法の追加の実施形態において、本発明の化合物は、化学療法剤（例えば、低分子医薬化合物）と組み合わせて使用される。したがって、方法は、さらに１種または複数の化学療法剤の有効量を追加の処置または組合せ処置として対象に投与するステップを含むものである。いくつかの実施形態において、１種または複数の化学療法剤は、酢酸アビラテロン、アルトレタミン、アンヒドロビンブラスチン、アウリスタチン、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢＭＳ  １８４４７６、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、ブレオマイシン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド（N,N-dimethyl-L-valyl-L-valyl-N-methyl-L-valyl-L-proly-1-Lproline-tbutylamide）、カケクチン、セマドチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビン−カロイコブラスチン、ドセタキソール、ドセタキセル（doxetaxel）、シクロホスファミド、カルボプラチン、カルムスチン、シスプラチン、クリプトフィシン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、ドラスタチン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エトポシド、５−フルオロウラシル、フィナステリド、フルタミド、ヒドロキシ尿素およびヒドロキシ尿素タキサン、イホスファミド、リアロゾール、ロニダミン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、エンザルタミド、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルファラン、イセチオン酸ミボブリン、リゾキシン、セルテネフ（sertenef）、ストレプトゾシン、マイトマイシン、メトトレキセート、タキサン、ニルタミド、オナプリストン、パクリタキセル、プレドニムスチン、プロカルバジン、ＲＰＲ１０９８８１、リン酸エストラムスチン（stramustine phosphate）、タモキシフェン、タソネルミン、タキソール、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、およびビンフルニンからなる群から選択される。
【００７１】
本明細書に記載されている方法の追加の実施形態において、本発明の化合物は、本明細書の方法に記載されている徴候を処置するための化学療法剤および／または追加の作用剤と組み合わせて使用される。一部の実施形態において、本発明の化合物は、ソトラスタウリン、ニロチニブ、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルフェニル）−Ｎ−エチル−４−（４−（モルホリノメチル）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド、ダクトリシブ、８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチル尿素、ブパルリシブ、８−（２，６−ジフルオロ−３，５−ジメトキシフェニル）−Ｎ−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）キノキサリン−５−カルボキサミド、（Ｓ）−Ｎ１−（４−メチル−５−（２−（１，１，１−トリフルオロ−２−メチルプロパン−２−イル）ピリジン−４−イル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１，２−ジカルボキサミド、（Ｓ）−１−（４−クロロフェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−（メチル−（（（１ｒ，４Ｓ）−４−（４−メチル−３−オキソピペラジン−１−イル）シクロヘキシル）メチル）アミノ）フェニル）−１，２−ジヒドロイソキノリン−３（４Ｈ）−オン、デフェラシロクス、レトロゾール、（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−５−メチルオキサゾリジン−２−オン、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン、４−（（２−（（（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド、メシル酸イマチニブ、２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド、ルキソリチニブ、パノビノスタット、オシロドロスタット、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−フルオロベンゾイル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−フルオロベンゾイル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド、リン酸ソニデギブ、セリチニブ、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、Ｎ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド、２−（２’，３−ジメチル−［２，４’−ビピリジン］−５−イル）−Ｎ−（５−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２−イル）アセトアミド、エンコラフェニブ、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（（１Ｒ，６Ｓ）−９−メチル−４−オキソ−３，９−ジアザビシクロ［４．２．１］−ノナン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、ビニメチニブ、ミドスタウリン、エベロリムス、１−メチル−５−（（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イル）オキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール２−アミン、二アスパラギン酸パシレオチド、ドビチニブ、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド、Ｎ６−（２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（１−メチルピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ４−（２−（イソプロピルスルホニル）−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン、３−（４−（４−（（５−クロロ−４−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）アミノ）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル）チエタン１，１−ジオキシド、５−クロロ−Ｎ２−（２−フルオロ−５−メチル−４−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン、５−クロロ−Ｎ２−（４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−フルオロ−５−メチルフェニル）−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン、バルスポダル、およびコハク酸バタラニブからなる群から選択される１種または複数の作用剤と組み合わせて使用される。
【００７２】
他の実施形態において、本発明の化合物は、ＰＫＣ阻害剤、ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋおよび／もしくはｍＴＯＲの阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、シトクロムＰ４５０の阻害剤（例えば、ＣＹＰ１７阻害剤）、ＨＤＭ２阻害剤、アロマターゼ阻害剤、ｐ５３および／もしくはｐ５３／Ｍｄｍ２相互作用の阻害剤、またはＣＳＦ−１Ｒチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用することができる。
好適な製剤としては、例えば錠剤、カプセル剤、坐剤、溶液、特に（皮下、静脈内、筋肉内）注射および点滴用溶液−エリキシル剤、乳剤または分散性散剤が挙げられる。薬学的に活性な化合物の含有量は、組成物全体の０．１〜９０質量％、好ましくは０．５〜５０質量％の範囲、すなわち以下に指定する投与量範囲を達成するのに十分な量とすべきである。指定された用量は、必要なら１日数回与えることができる。
上述した組合せのパートナーの投与量は普通、通常推奨される最低用量の１／５から通常推奨される用量の１／１までである。
さらに別の態様において、本発明は、患者においてＳＴＩＮＧに関連しているまたはＳＴＩＮＧによってモジュレートされる疾患または状態を処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者、好ましくはヒトに、本発明の化合物の治療有効量を以上に記載した１種または複数の追加の治療剤の治療有効量と組み合わせて投与するステップを含む方法に関する。
【００７３】
本発明による化合物と追加の治療剤を組み合わせた使用を、同時にまたは時間をずらして行うことができる。
本発明による化合物および１種または複数の追加の治療剤は、両方が一緒に１種の製剤の中に存在してもよく、または別々に２種の同一または異なる製剤中に、例えばいわゆるキットオブパーツとして存在してもよい。
したがって、別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種の別の治療剤を含む組合せを提供する。
【００７４】
本発明の別の目的は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、ならびに少なくとも１種の別の治療剤および薬学的に許容される添加物の１種または複数を含む医薬組成物を提供することである。
別の態様において、本発明は、治療において使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種の別の治療剤を含む組合せを提供する。
別の態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置において使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種の別の治療剤を含む組合せを提供する。
別の態様において、本発明は、炎症、アレルギー性および自己免疫性疾患、感染性疾患ならびにがんの処置において使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種の別の治療剤を含む組合せを提供する。
別の態様において、本発明は、患者におけるＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種の別の治療剤を含む組合せの治療有効量を投与するステップを含む方法を提供する。
別の態様において、本発明は、患者における炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種の別の治療剤を含む組合せの治療有効量を投与するステップを含む方法を提供する。
【００７５】
実際の薬学的に有効な量または治療用量は、当然、患者の年齢および体重、投与経路ならびに疾患の重症度など当業者によって公知の因子によって決まる。いずれの場合も、組成物は、様々な投与量で、患者の独自の状態に基づいて薬学的に有効な量を送達することが可能になる形で投与される。
別の態様において、本発明は、本発明による化合物ならびに以上および以下に記載する１種または複数の追加の治療剤を含み、１種または複数の不活性な担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい医薬組成物に関する。
本発明の他の特徴および利点は、例として本発明の原理を説明する以下のさらに詳細な実施例から明らかになる。
【００７６】
実施例および実験データ
以下の実施例は、本発明を例示するためのものにすぎず、決して本発明の範囲を限定するものではない。
下記の略語は、以上および以下で使用される。
【００７７】
【表３】
2021519279.tif 000014
【００７８】
一般的な技術的所見
「周囲温度」および「室温」という用語は同義に使用され、約２０℃、例えば１５〜２５℃の温度を意味する。
一般に、本発明による化合物の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよび／または質量スペクトルが得られた。別段の記載がない限り、すべてのクロマトグラフ操作は室温で行われた。環式ジヌクレオチド合成時に、溶媒の蒸発は、典型的には、水浴が３５℃を超えない温度で減圧下に回転蒸発により行われた。さらに、環式ジヌクレオチドの合成時に、反応は、典型的には窒素またはアルゴン下で行われた。
【００７９】
Ａ）分析方法
ＬＣ−ＭＳ分析：
方法名：システムＡ
ＨＰＬＣ−システム：ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２１３０ポンプ；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２２００オートサンプラー；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２３００カラムオーブン；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２４５０ダイオードアレイ検出器；Ａｇｉｌｅｎｔ：ＯｐｅｎＬａｂ
ＭＳ−システム：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ  ＬＣ  ６０００分光計
カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００−５  Ｃ8、５μｍ、５０ｍｍ×３ｍｍ。
流量：０．４ｍＬ／分、３５℃、ＵＶ−検出範囲：２２０〜３００ｎｍ
質量スペクトル：ネガティブおよびポジティブＥＳＩを使用して質量分析計で記録
溶媒:Ａ:アセトニトリル
Ｂ:水
Ｃ:水中20mM NH4HCO3(pH 5.5)
グラジエント:時間     A%      B%      C%
0        2      93       5
20       60      35       5
23       95       0       5
24        2      93       5
30        2      93       5
試料調製：試料（２μＬ〜２０μＬ）を８７．５μＬのアセトニトリルおよび２６２．５μＬの水に溶解した。注入量２μＬ〜５μＬ。
方法名：Ｚ０１１＿Ｓ０３
装置摘要：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８＿３．０×３０ｍｍ、２．５μｍ
カラム製造業者：Ｗａｔｅｒｓ
摘要：
グラジエント/溶媒   溶媒%[H2O     溶媒%[アセトニトリル]  流量[mL/分]    T[℃]
時間[分]            0.1%NH4OH]
0.0                 97.0             3.0                   2.2           60.0
0.2                 97.0             3.0                   2.2           60.0
1.2                 0.0              100.0                 2.2           60.0
1.25                0.0              100.0                 3.0           60.0
1.4                 0.0              100.0                 3.0           60.0
方法名：Ｚ０１７＿Ｓ０４
装置摘要：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００
カラム：ＳｔａｂｌｅＢｏｎｄ  Ｃ１８＿３．０×３０ｍｍ、１．８μｍ
カラム製造業者：Ａｇｉｌｅｎｔ
摘要：
グラジエント/溶媒   溶媒%[H2O     溶媒%[アセトニトリル]  流量[mL/分]    T[℃]
時間［分］          0.1%TFA]
0.0                 97.0             3.0                   2.2           60.0
0.2                 97.0             3.0                   2.2           60.0
1.2                 0.0              100.0                 2.2           60.0
1.25                0.0              100.0                 3.0           60.0
1.4                 0.0              100.0                 3.0           60.0
方法名：Ｚ０１８＿Ｓ０４
装置摘要：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００
カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８＿３．０×３０ｍｍ、２．５μｍ
カラム製造業者：Ｗａｔｅｒｓ
摘要：
グラジエント/溶媒   溶媒%[H2O     溶媒%[アセトニトリル]  流量[mL/分]    T[℃]
時間[分]             0.1% TFA]
0.0                  97.0            3.0                   2.2           60.0
0.2                  97.0            3.0                   2.2           60.0
1.2                  0.0             100.0                 2.2           60.0
1.25                 0.0             100.0                 3.0           60.0
1.4                  0.0             100.0                 3.0           60.0
【００８０】
分析用ＨＰＬＣ構成：
方法名：構成Ａ（グラジエントＨＰＬＣ）
ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２１３０ポンプ；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２２００オートサンプラー；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２３５０カラムオーブン（３０℃に設定）；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２４００可変波長ＵＶ／Ｖｉｓ検出器；ＥＺＣｈｒｏｍソフトウェア、バージョン３．３．１  ＳＰ１．
ＹＭＣ*ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ  １２ｎｍ（１０μｍ；２５０×４ｍｍ）チャンネルＡ＝水中２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ  ６．８）；チャンネルＢ＝１００％アセトニトリル、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ  ６．８）。グラジエント：０分  １００％Ａ；３０分  １００％Ｂ；４０分  １００％Ｂ、３０℃；流量：１．０ｍＬ／分；ＵＶ  ２６２ｎｍ；
【００８１】
ＮＭＲ分光法：
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：31Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、1Ｈ／31Ｐの絶対周波数の比較により間接的に参照した（Ｂｒｕｋｅｒ  ＢｉｏＳｐｉｎ  ＧｍｂＨ、Ｓｏｆｔｗａｒｅ：ＴｏｐＳｐｉｎ、ａｕプログラム：ｘｓｉ）。すべての31Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、プロトンデカップリングを用いて記録した。
【００８２】
Ｂ）中間体の合成
中間体１
３’，５’−ジ−Ｏ−Ａｃ−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン
【化１０】
2021519279.tif 000015
市販の２‘−Ｆ−２‘−デオキシアデノシン（３．０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）懸濁液を０℃に冷却し、無水酢酸（３．１６ｍＬ、３３．４ｍｍｏｌ、３．０当量）を滴下して加えた。対応する混合物を０℃で３０分間撹拌した後、室温まで温め、もう３時間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（７５ｍＬ）に溶解した。有機層をＮａＨＣＯ3水溶液で（２回）洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．６５分；ＥＳＩ−ＭＳ：３５４［Ｍ＋Ｈ］+
【００８３】
中間体２
３’，５’−ジ−Ｏ−Ａｃ−２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン
【化１１】
2021519279.tif 000016
中間体１（３．２９ｇ、９．３１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）溶液に、亜硝酸ｎ−アミル（９．１７ｍＬ、６８．９ｍｍｏｌ、７．４当量）を添加し、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次いで、温度を上げ、混合物を６０℃でもう４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を水で（２回）洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎ、カラム：ＳｕｎＦｉｒｅ  ５０×５００ｍｍ、７μｍの水＋０．３％ＨＣＯＯＨ／アセトニトリル１０％→９０％、１４分間）で精製した。精製生成物を含む画分を合わせ、真空中で濃縮した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．７４分；ＥＳＩ−ＭＳ：３３９［Ｍ＋Ｈ］+
【００８４】
中間体３
２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン
【化１２】
2021519279.tif 000017
中間体２（１．４７ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）に、アンモニアのメタノール溶液（７Ｍ、１２ｍＬ、８４ｍｍｏｌ、１９．３当量）を添加し、混合物を室温で５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣をエタノールで粉末にした。形成された固体を濾別し、少量のエタノールおよびジイソプロピルエーテルで洗浄し、５０℃で乾燥すると、所望の生成物が得られた。それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．２２分；ＥＳＩ−ＭＳ：２５５［Ｍ＋Ｈ］+
【００８５】
中間体４
５’−Ｏ−ＤＭＴｒ−２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン
【化１３】
2021519279.tif 000018
中間体３（０．８２ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）に、無水ピリジン（４ｍＬ）を添加し、混合物を真空中３５℃で濃縮した。この手順を２回繰り返した。次いで、中間体３を乾燥ピリジン（４０ｍＬ）に溶解し、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．２０ｇ、３．５５ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、得られた反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣に酢酸エチルを添加した。有機層を半飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で（３回）洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、真空中で濃縮すると、所望の生成物が得られた。それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１１＿Ｓ０３）：ｔRet＝１．０４分；ＥＳＩ−ＭＳ：５５７［Ｍ＋Ｈ］+
【００８６】
中間体５
３’−ＣＥＰ−５’−Ｏ−ＤＭＴｒ−２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン
【化１４】
2021519279.tif 000019
【００８７】
中間体４（２．２９ｇ、４．１１ｍｍｏｌ）をアセトニトリルに溶解し、真空中３５℃で濃縮した。このプロセスをもう１回繰り返した。中間体４の無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液に、アルゴン雰囲気下で、１Ｈ−テトラゾール（ＭｅＣＮ中０．５ｍｏｌ／Ｌ、１４．６ｍＬ、６．５８ｍｍｏｌ、１．６当量）および２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（１．９６ｍＬ、６．１７ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、得られた混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄し、分離した有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ−１８  ５μＭ、５０×１５０ｍｍ；流量：室温で１５０ｍＬ／分；グラジエント：ＭｅＣＮ／水／改質剤なし；１２分で３５％ＭｅＣＮ→９８％ＭｅＣＮ）で精製した。精製生成物を含む画分を合わせ、真空中で濃縮した。残渣をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、高真空下で１時間濃縮すると、所望の生成物が得られた。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１１＿Ｓ０３）：ｔRet＝１．２０９／１．２２９分；ＥＳＩ−ＭＳ：７５７［Ｍ＋Ｈ］+
【００８８】
中間体６
５’−ＯＨ−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化１５】
2021519279.tif 000020
５’−ＤＭＴｒ−３’−ＣＥＰ−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（Ｅｘｉｑｏｎから入手、１．０ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）および水（０．０４６ｍＬ、２．５５ｍｍｏｌ、２当量）に室温で溶解した。ピリジニウムトリフルオロアセテート（０．２９４ｇ、１．５２ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。その後、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１０ｍＬ、９５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、無水アセトニトリル（３０ｍＬ）に再溶解し、減圧下で蒸発させると、フォームが得られた。残渣をジクロロメタン（２５ｍＬ）および水（０．２２９ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ、１０当量）に溶解した。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中ジクロロ酢酸（０．９４４ｍＬ、１１．４ｍｍｏｌ、９当量）を添加し、得られた橙色溶液を室温で１０分間撹拌した。ピリジン（１．８５ｍＬ、２３ｍｍｏｌ、１８当量）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。
【００８９】
粗製材料のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体６の存在が確認された。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：ｔRet＝４．３９分；ＥＳＩ−ＭＳ：４４８［Ｍ＋Ｈ］+
溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を無水アセトニトリル（４回×１５ｍＬ）で共沸した。最後の蒸発手順の間に、溶液を約５ｍＬの最終共沸混合物まで濃縮した。得られた中間体６の無水溶液を直接次の反応順序で使用した。
【００９０】
中間体７
線状二量体５’−ＯＨ−２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化１６】
2021519279.tif 000021
３’−ＣＥＰ−５’−ＤＭＴｒ−２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン（中間体５、１．６３ｇ、２．１６ｍｍｏｌ、１．７当量）を無水アセトニトリル（４回×１５ｍＬ）で共沸した。最後の蒸発手順の間に、溶液を約５ｍＬの最終共沸混合物まで濃縮した。得られた溶液を、約５ｍＬの無水アセトニトリルに溶解した５’−ＯＨ−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（中間体６、最大理論量：１．２７ｍｍｏｌ）に室温で添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−メチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾリン−３−チオン（ＤＤＴＴ）（０．２８７ｇ、１．４０ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。揮発性物質を減圧下で蒸発させ、残渣をジクロロメタン（２５ｍＬ）および水（０．２２９ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ、１０当量）に溶解した。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中ジクロロ酢酸（１．８９ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ、１８当量）を添加し、橙色溶液を室温で２０分間撹拌した。ピリジン（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。粗製材料のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体７の存在が確認された。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：ｔRet＝８．２４分；ＥＳＩ−ＭＳ：８３３［Ｍ＋Ｈ］+。
【００９１】
フラスコに栓をし、慎重に封止し、−７０℃で１６時間貯蔵した。混合物を減圧下で蒸発させ、残渣を無水ピリジン（２回×２０ｍＬ）と減圧下で共蒸発させた。６８ｍＬの無水ピリジンの別の一部分を添加し、残渣を全体積が約２０ｍＬになるまで減圧下で濃縮した。得られた中間体７の無水溶液を直接次の反応順序で使用した。
【００９２】
中間体８
環式二量体２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化１７】
2021519279.tif 000022
２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）（０．８２１ｇ、４．４５ｍｍｏｌ、３．５当量）を、粗製線状二量体５’−ＯＨ−２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（中間体７、最大理論量：１．２７ｍｍｏｌ）の無水ピリジン溶液（全体積約２０ｍＬ）に添加した。得られた混合物を室温で２０分間撹拌した。水（０．８０ｍＬ、４４ｍｍｏｌ、３５当量）および３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（０．３２１ｇ、１．９１ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、室温で撹拌を続けた。３０分後、反応混合物を、炭酸水素ナトリウム（５．７ｇ、６７．９ｍｍｏｌ）を水（２００ｍＬ）にとかした溶液に注ぎ込み、次に２００ｍＬの酢酸エチルを添加した。得られた混合物を室温で５分間振盪した。さらに、水相を酢酸エチル（２回×１５０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次に溶媒を減圧下で蒸発させた。粗製材料をさらに真空中で乾燥し、分取フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１６０ｇ、０→１２．５％ＭｅＯＨ／ジクロロメタンのグラジエント）で精製すると、粗製中間体８がジアステレオマーの混合物として得られた。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：各ジアステレオマーのｔRet＝９．８７分；１０．０５分；ＥＳＩ−ＭＳ：８４７［Ｍ＋Ｈ］+
【００９３】
Ｃ）本発明による化合物の合成
（実施例１．１および実施例１．２）
環式（２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン−（３’→５’）−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）
【００９４】
【化１８】
2021519279.tif 000023
無水エタノール中３３％メチルアミン２５０ｍＬを、粗製環式二量体２’−Ｆ−２’−デオキシネブラリン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート（中間体８；０．３５ｇ）に添加し、得られた溶液を室温で６時間撹拌した。すべての揮発性物質を減圧下で蒸発させ、残渣をさらに真空中で乾燥すると、実施例１．１および実施例１．２を含む粗製混合物が得られた。
【００９５】
５０ｍＬの水を添加し、得られた懸濁液を室温で超音波浴に入れた。１５分後、この懸濁液を５０ｍＬのクロロホルムに注ぎ込み、振盪し、有機相を分離した。この抽出をクロロホルム（２回×５０ｍＬ）でもう２回繰り返した。有機相を合わせ、５０ｍＬの水で抽出し、生成物を含む水性相を合わせ、０．４５μｍの再生セルロース（ＲＣ）フィルター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、外径：５０ｍｍ）を用いて濾過して、粒状成分を除去した。生成物溶液を水で２５０ｍＬに希釈し、２Ｍ塩化ナトリウムで事前に再生し、水で洗浄したＱ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗアニオン交換カラム（４０−１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｃｌ-形にかけた。カラムを水（２カラム体積）で洗浄し、次に１６．７カラム体積にわたって０→１Ｍ炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＢ、ｐＨ  ７）／水のグラジエントで洗浄した（検出波長２５４ｎｍ）。実施例１．１および実施例１．２を約０．４Ｍ  ＴＥＡＢ〜約０．６Ｍ  ＴＥＡＢで溶離した。生成物を含む画分を減圧下で慎重に濃縮した。
実施例１．１（第２の溶離）および実施例１．２（第１の溶離）の最初の分離を半分取逆相ＨＰＬＣ精製により行った。生成物溶液を、７％アセトニトリル、水中２０ｍＭトリエチルアンモニウムホルメート（triethyammonium formate）（ＴＥＡＦ、ｐＨ  ６．８）で事前に平衡化したＹＭＣ*ゲルＯＤＳ−Ａ  １２ｎｍカラム（１０μｍ；２５０×１６ｍｍ；約５０ｍＬ）にかけた。溶離は７％、８％、１０％および１２％アセトニトリル、水中２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ  ６．８）のステップ−グラジエントで行った。生成物を含む画分を減圧下で慎重に濃縮した。
９〜１０％アセトニトリル、水中２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ  ６．８）で事前に平衡化した同じカラムを用いた半分取逆相ＨＰＬＣ精製を繰り返すことにより、実施例１．１および実施例１．２をさらに精製した。溶離は、９％および１０％アセトニトリル、水中２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ  ６．８）のステップ−グラジエント（実施例１．２）または１０％および１２％アセトニトリル、水中２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ  ６．８）のステップ−グラジエント（実施例１．１）で行った。生成物を含む画分を減圧下で慎重に濃縮した。
【００９６】
実施例１．１、ナトリウム塩（「第２の溶離ジアステレオマー」）の調製
実施例１．１、ＴＥＡ塩の脱塩を分取逆相中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）で行った。生成物溶液（約２５ｍＬ）を、水で事前に平衡化したＭｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ−１８カラム（１５〜２５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）にかけた。カラムを水で洗浄して、過剰のＴＥＡＦ緩衝液を除去した。その後、水中２％２−プロパノールを使用して、脱塩した実施例１．１を溶離した。生成物を含む画分を減圧下で部分濃縮し、続いて２Ｍ塩化ナトリウムで事前に再生し、水で洗浄したＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗカチオン交換カラム（４５〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｎａ+形にかけた。ＵＶ−吸光度が検出可能（検出波長２５４ｎｍ）でなくなるまで、カラムを水で洗浄した。生成物を含む画分を減圧下で慎重に蒸発させ、さらに真空中で乾燥すると、実施例１．１が二ナトリウム塩として得られた。
ＨＰＬＣ（構成Ａ、ＵＶ  ２６０ｎｍ）：ｔRet＝１１．０６分；ＥＳＩ−ＭＳ：６９０［Ｍ＋Ｈ］+
31P NMR (162 MHz, D2O, 303 K): δ 54.2 (s, 1P), 54.9 (s, 1P) ppm.
【００９７】
実施例１．２、ナトリウム塩（「第１の溶離ジアステレオマー」）の調製
実施例１．２、ＴＥＡ塩の脱塩およびＴＥＡからナトリウムへの塩変更を、実施例１．１、ＴＥＡ塩について記載したのと同様の形で行った。
ＨＰＬＣ（構成Ａ、ＵＶ  ２６０ｎｍ）：ｔRet＝１０．２１分；ＥＳＩ−ＭＳ：６９０［Ｍ＋Ｈ］+
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 54.3 (s, 1P), 54.9 (s, 1P) ppm.
【国際調査報告】
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