(57)【要約】  本発明は、アセチルコリン活性の低下に関連する疾患または障害を治療するために、特定の脳領域における神経伝達物質アセチルコリンの活性を増加させる方法に関する。特に、これらの方法は、一方の鼻孔のみへのプレグネノロンの鼻腔内投与に関連し、この鼻孔に対応する扁桃体でのみアセチルコリン活性を増加させ、したがってアセチルコリン活性の同側の増加を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非げっ歯類対象にプレグネノロン製剤を鼻腔内投与することを含む、それを必要とする前記非げっ歯類対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させる方法であって、前記プレグネノロン製剤は、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含む経鼻内投与に適合した医薬組成物である、方法。
【請求項２】
前記プレグネノロン製剤は一方の鼻孔にのみ投与され、前記鼻孔の同側脳半球でアセチルコリン活性が増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アセチルコリン活性は、前記鼻孔の対側脳半球では実質的に増加しない、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象の扁桃体におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記対象の海馬におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記アセチルコリン活性は１０分以内に増加する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも６０分間持続する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１００分間持続する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
プレグネノロンの前記有効量は、前記対象の体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２．０ｍｇである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記医薬的に許容される担体は、（ａ）前記製剤の約６０質量％〜約９８質量％の量で存在する少なくとも１つの親油性または部分的に親油性の担体と、（ｂ）前記製剤の約１質量％〜約２０質量％の量で存在する表面張力低下活性を有する少なくとも１つの化合物と、（ｃ）前記製剤の約０．５質量％〜約１０質量％の量で存在する少なくとも１つの粘度調整剤と、を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記プレグネノロンは、多孔性賦形剤の細孔内に位置する前記多孔性賦形剤の表面に搭載される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはウサギである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象は、脳内のアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または状態に罹患している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患または状態は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記方法は、記憶および学習障害などの認知機能を改善するのに有効である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
必要とする非げっ歯類対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるのに使用される、または必要とする対象における統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される疾患もしくは状態を治療するために使用される、プレグネノロン製剤であって、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含む経鼻内投与に適合した医薬組成物である、プレグネノロン製剤。
【請求項１７】
前記プレグネノロン製剤は、前記対象の一方の鼻孔のみへの鼻腔内投与に適合している、請求項１６に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項１８】
前記プレグネノロン製剤は一方の鼻孔にのみ投与され、前記鼻孔の同側脳半球でアセチルコリン活性が増加する、請求項１６〜１７のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項１９】
アセチルコリン活性は、前記鼻孔の対側脳半球では実質的に増加しない、請求項１８のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２０】
前記使用は、前記対象の扁桃体におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２１】
前記使用は、前記対象の海馬におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２２】
前記アセチルコリン活性は１０分以内に増加する、請求項２１のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２３】
前記脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも６０分間持続する、請求項２１〜２２のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２４】
前記脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１００分間持続する、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２５】
プレグネノロンの前記有効量は、前記対象の体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２．０ｍｇである、請求項１６〜２４のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２６】
前記医薬的に許容される担体は、（ａ）前記製剤の約６０質量％〜約９８質量％の量で存在する少なくとも１つの親油性または部分的に親油性の担体と、（ｂ）前記製剤の約１質量％〜約２０質量％の量で存在する表面張力低下活性を有する少なくとも１つの化合物と、（ｃ）前記製剤の約０．５質量％〜約１０質量％の量で存在する少なくとも１つの粘度調整剤と、を含む、請求項１６〜２５のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２７】
前記プレグネノロンは、多孔性賦形剤の細孔内に位置する多孔性賦形剤の表面に搭載される、請求項１６〜２６のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２８】
前記対象は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはウサギである、請求項１６〜２７のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項２９】
前記対象は、前記脳内のアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または状態に罹患している、請求項１６〜２８のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項３０】
前記疾患または状態は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される、請求項２９に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項３１】
前記使用は、記憶および学習障害などの認知機能を改善するのに有効である、請求項１６〜３０のいずれか一項に記載の使用のためのプレグネノロン製剤。
【請求項３２】
必要とする非げっ歯類対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を増加させるための、または必要とする対象における統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される疾患もしくは状態を治療するための、薬物の調製におけるプレグネノロンの使用であって、前記薬物は、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含む経鼻内投与に適合した医薬組成物である、使用。
【請求項３３】
前記薬物は、前記対象の一方の鼻孔のみへの鼻腔内投与に適合している、請求項１８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０１８年４月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／６５８，９４６号に対する優先権を主張する。
【０００２】
本明細書に記載されるのは、例えば、特定の脳領域におけるアセチルコリン活性を増加させるために有用な、プレグネノロンの鼻腔内送達のための組成物および方法である。
【背景技術】
【０００３】
神経ステロイドおよび神経伝達物質は、認知、摂食、感情、動機付け、および運動能力の調節を含む、正常な脳機能の調節において特定の役割を果たす脳内で活性な化合物である。Ｚｈｅｎｇ，Ｐ．，“Ｎｅｕｒｏａｃｔｉｖｅ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＣＮＳ：  ａｃｔｉｏｎ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，”Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，８９，１３４−１５２（２００９）を参照されたい。神経ステロイドおよび神経伝達物質の異常な機能および／または濃度は、統合失調症、脳卒中、うつ病、パーキンソン病およびアルツハイマー病などの多数の中枢神経系（ＣＮＳ）障害に関連している。神経ステロイドであるプレグネノロンは、脳内におけるアセチルコリン（Ａｃｈ）の放出を増加させる。アセチルコリンは、コリン作動性伝達系の中心的な神経伝達物質であり、扁桃体におけるアセチルコリン放出の増加は、記憶の処理および学習に不可欠である。脳には多くのコリン作動性領域があり、それぞれが異なる機能を有する。それらは、覚醒、注意、記憶および動機付けにおいて重要な役割を果たす。Ｈａｓｓｅｌｍｏ，Ｍ．Ｅ．，  “Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，１６，７１０−７１５（２００６）を参照されたい。アセチルコリン活性は健康な認知機能に不可欠であり、アルツハイマー病患者ではアセチルコリンの濃度および機能の両方が損なわれていることを示唆する証拠があり、アセチルコリンはアルツハイマー病を治療する上で重要な標的となっている。Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｐ．Ｔ．，  “Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，”ＣＮＳ  Ｓｐｅｃｔｒ．，１０，６−９（２００５）を参照されたい。現在、アセチルコリン伝達の低下に罹患している患者の脳内でアセチルコリン活性を増加させるための主な戦略は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与することであるが、それらの毒性のためにその適用性は制限されている。Ｃｏｌｏｖｉｃ  Ｍ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，  “Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，”Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１，３１５−３３５（２０１３）を参照されたい。
【０００４】
したがって、脳の特定の領域でアセチルコリン活性を増加させるための組成物および方法が必要である。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書に記載されるのは、対象にプレグネノロン製剤を鼻腔内投与することを含む、それを必要とする対象、特に非げっ歯類対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させる方法であり、プレグネノロン製剤は、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含む経鼻内投与に適合した医薬組成物である。対象は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはウサギであり得る。
【０００６】
いくつかの実施形態において、プレグネノロン製剤は一方の鼻孔にのみ投与され、前記鼻孔の同側脳半球でアセチルコリン活性が増加する：いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は、前記鼻孔の対側脳半球では実質的に増加しない。
【０００７】
いくつかの実施形態において、この方法は、対象の扁桃体におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、この方法は、対象の海馬におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。
【０００８】
いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は１０分以内に増加する。いくつかの実施形態において、脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも６０分間、または少なくとも１００分間持続する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、プレグネノロンの有効量は、対象の体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２．０ｍｇである。
【００１０】
いくつかの実施形態において、医薬的に許容される担体は、（ａ）製剤の約６０質量％〜約９８質量％の量で存在する少なくとも１つの親油性または部分的に親油性の担体と、（ｂ）製剤の約１質量％〜約２０質量％の量で存在する表面張力低下活性を有する少なくとも１つの化合物と、（ｃ）製剤の約０．５質量％〜約１０質量％の量で存在する少なくとも１つの粘度調整剤と、を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、プレグネノロンは、多孔性賦形剤の細孔内に位置する多孔性賦形剤の表面に搭載される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、対象は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害などの、脳内のアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または状態に罹患している。
【００１３】
いくつかの実施形態において、この方法は、記憶および学習障害などの認知機能を改善するのに有効である。
【００１４】
また、それを必要とする対象、特に非げっ歯類対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるのに使用される、またはそれを必要とする対象における統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される疾患もしくは状態を治療するのに使用される、プレグネノロン製剤であって、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含む経鼻内投与に適合した医薬組成物であるプレグネノロン製剤も提供される。いくつかの実施形態において、プレグネノロン製剤は、対象の一方の鼻孔のみへの鼻腔内投与に適合している。いくつかの実施形態において、プレグネノロン製剤は一方の鼻孔にのみ投与され、前記鼻孔の同側脳半球でアセチルコリン活性が増加する。いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は、前記鼻孔の対側脳半球では実質的に増加しない。いくつかの実施形態において、使用は、追加的または代替的に、対象の扁桃体におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、使用は、追加的または代替的に、対象の海馬におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は、１０分以内に増加する。いくつかの実施形態において、脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも６０分間持続する。いくつかの実施形態において、脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１００分間持続する。いくつかの実施形態において、プレグネノロンの有効量は、対象の体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２．０ｍｇである。いくつかの実施形態において、医薬的に許容される担体は、（ａ）製剤の約６０質量％〜約９８質量％の量で存在する少なくとも１つの親油性または部分的に親油性の担体と、（ｂ）製剤の約１質量％〜約２０質量％の量で存在する表面張力低下活性を有する少なくとも１つの化合物と、（ｃ）製剤の約０．５質量％〜約１０質量％の量で存在する少なくとも１つの粘度調整剤と、を含み得る。任意の実施形態において、プレグネノロンは、多孔性賦形剤の細孔の内側に位置する多孔性賦形剤の表面に搭載され得る。任意の実施形態において、対象は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはウサギであり得る。任意の実施形態において、対象は、脳内のアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または状態に罹患している可能性がある。任意の実施形態において、疾患または状態は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択され得る。任意の実施形態において、使用は、記憶および学習障害などの認知機能を改善するのに有効であり得る。
【００１５】
また、それを必要とする対象、特に非げっ歯類対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるための、またはそれを必要とする対象における統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される疾患もしくは状態を治療するための、薬物の調製におけるプレグネノロンの使用であって、薬物は、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含む経鼻内投与に適合した医薬組成物である使用も提供される。いくつかの実施形態において、薬剤は、対象の一方の鼻孔のみへの鼻腔内投与に適合している。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】プレグネノロンを一方の鼻孔に投与すると、この鼻孔と同側の扁桃体においてアセチルコリンが増加するが、対側の扁桃体では増加しないことを示している。扁桃体の細胞外アセチルコリンレベルに対するプレグネノロンの片側鼻腔内投与の効果を、麻酔下のラットにおけるインビボマイクロダイアリシスによって測定した。値はベースラインの％として表され、６つのベースラインサンプルが１００（平均＋ＳＥ）として取得される。プレグネノロンを、油性製剤（ビヒクル）中に１１．２ｍｇ／ｍＬの濃度で投与した。一方の鼻孔（同側半球）に５μｌの製剤を鼻腔内投与し、他方の鼻孔（対側半球）に５μｌのビヒクルを投与した。鼻腔内投与は０分の時点で行った。グラフは、投与前および投与後に２つの半球の扁桃体で放出されたアセチルコリンのレベルを示す。異なる時点（薬物治療後１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００分）で同側半球群と対側群との間に統計的有意差（ｐ＜０．００５）が認められる。
【図２】同側のアセチルコリン放出は、プレグネノロンを左鼻孔のみまたは右鼻孔のみに投与することにより達成できることを示している。同側扁桃体の細胞外アセチルコリンレベルに対するプレグネノロンの片側鼻腔内投与の効果を、麻酔下のラットにおけるインビボマイクロダイアリシスによって測定した。値はベースラインの％として表され、６つのベースラインサンプルが１００（平均＋ＳＥ）として取得される。プレグネノロンは、脂質ベースの製剤（ビヒクル）中に１１．２ｍｇ／ｍＬの濃度で投与した。一方の鼻孔（同側半球）に５μｌの製剤を鼻腔内投与し、他方の鼻孔（対側半球）に５μｌのビヒクルを投与した。鼻腔内投与は０分の時点で行った。グラフは、投与前および投与後に同側（右および左）半球の扁桃体で放出されたアセチルコリンのレベルを示す。薬物処理後の同側右半球群と同側左群との間に統計的有意性（ｐ＞０．０５）は認められない。同側右扁桃体はｎ＝７、同側左扁桃体はｎ＝３であった。
【図３】麻酔下の動物におけるインビボマイクロダイアリシスにより測定された、前頭葉（Ａ）、海馬（Ｂ）、および扁桃体（Ｃ）の細胞外アセチルコリンレベルに対するプレグネノロンの鼻腔内投与の効果を示している。アセチルコリン濃度値は、ベースラインの％として表され、６つのベースラインサンプルが１００（平均＋ＳＥ）として取得される。プレグネノロンは、０分の時点で両方の鼻孔にそれぞれ５μｌの量で鼻腔内投与した。時間はｘ軸に表示され、アセチルコリン濃度の平均および標準誤差（ベースラインの％として表される）はｙ軸に表示される。黒丸はビヒクルを表し、白丸は５．６ｍｇ／ｍＬのプレグネノロン用量を表し、三角形は１１．２ｍｇ／ｍＬのプレグネノロン用量を表す。
【図４】マイクロダイアリシスプローブの設計の概略図を示す。半透膜は、６ＫＤａ未満の分子を通過させる。活性膜の長さは、前頭皮質および扁桃体で２ｍｍ、海馬で４ｍｍである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書に記載されるのは、それを必要とする対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるための組成物および方法である。この方法は、プレグネノロンを鼻腔内に投与することを含む。いくつかの実施形態において、プレグネノロンは、一方の鼻孔にのみ投与され、前記鼻孔と同側の脳半球でアセチルコリン活性が増加する。いくつかの実施形態において、方法は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害などの、アセチルコリン欠乏に関連する疾患または障害を治療するためのものである。いくつかの実施形態において、方法は、記憶および学習障害などの認知機能を改善するためのものである。
【００１８】
Ｉ．定義
本明細書で使用される技術的および科学的用語は、別途定義されない限り、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。以下の説明および実施例において参照される材料、試薬などは、特記しない限り、商業的供給源から入手可能である。
【００１９】
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、単数形のみを示すように明示的に述べられていない限り、単数形および複数形の両方を示す。
【００２０】
「約」という用語は、理解される数が本明細書に記載される正確な数に限定されず、本発明の範囲から逸脱することなく、実質的におおよその列挙された数を指すことが意図されることを意味する。本明細書で使用される場合、「約」は、当業者によって理解され、使用される文脈に応じてある程度変動する。当業者に明確ではない用語が使用されている場合、使用される文脈を考慮して、「約」は、特定の用語のプラスまたはマイナス１０％までを意味する。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「対象」は、ヒトを含む任意の非げっ歯類哺乳動物を表す。対象は、脳の一方の半球のみでアセチルコリン活性を増加させる必要があることを含め、脳でアセチルコリン活性を増加させることを必要としている可能性がある。対象は、脳の一方の半球のみにおけるアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または障害を含む、脳内のアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または障害の治療を必要としている可能性がある。例えば、対象は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害に罹患している可能性がある。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「同側」または「同側で」は、対象の特定の鼻孔と同じ側に位置する脳の領域を指定するために使用される相対的な用語である。例えば、脳の右側は右鼻孔と同側である。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「対側」または「対側に」は、対象の一方の鼻孔の反対側に位置する脳の領域を指定するために使用される相対的な用語である。例えば、脳の右側は左鼻孔の対側である。
【００２４】
本明細書で使用される「投与する」という用語は、本明細書に開示される薬剤の別の直接投与、自己投与、および薬剤の投与の処方または指示を含む。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「有効量」および「治療有効量」という句は、それぞれ、活性薬剤がこのような治療を必要とする対象に投与される特定の薬理学的効果を提供する、対象におけるその活性薬剤の投薬量または血漿濃度を意味する。このような投薬量が当業者によって有効量であるとみなされるとしても、活性薬剤の有効量は、本明細書に記載される状態／疾患の治療において常に有効であるとは限らないことが強調される。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、医薬的に許容される担体、賦形剤または希釈剤と共に製剤化された１つ以上の活性薬剤を指す。
【００２７】
「医薬的に許容される」という句は、本明細書では、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症を伴わず、合理的な利益／リスク比に見合った、インビボでの使用に好適である、それらの化合物、材料、組成物、および／または投薬形を指すように使用される。
【００２８】
本明細書における任意の文書の引用または特定は、そのような文書が本発明の先行技術であることを認めるものではない。
【００２９】
ＩＩ．プレグネノロン
プレグネノロン（ＰＲＥＧ）は、内因性神経ステロイドの機能を模倣してアセチルコリン放出を誘発するために使用することができる。ＰＲＥＧは、中枢神経系と末梢神経系の両方で、アストロサイトおよびニューロンで発現するチトクロームＰ４５０コレステロール側鎖切断酵素（ＣＹＰ４５０ｓｃｃ）によってコレステロールから合成される。ＰＲＥＧは、ＤＨＥＡ、テストステロン、プロゲステロン、エストロゲン、およびコルチゾールなどのさまざまな神経活性ステロイドに変換することができる。Ｍｅｌｃａｎｇｉ，Ｒ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏａｃｔｉｖｅ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ，”Ｆｒｏｎｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，２，１０４（２０１１）を参照されたい。ＰＲＥＧは、スルホトランスフェラーゼによって自然に硫酸プレグネノロン（ＰＲＥＧ−Ｓ）に変換される場合もある。Ｒｏｂｅｌ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｓｓａｙ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ：  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ，”Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５３，３５５−３６０（１９９５）；Ｄｕｆｏｒｔ，Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ３ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｉｏｄ  ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）ｃＤＮＡ，”ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１５，４８１−４８７（１９９６）；Ｋｏｈｊｉｔａｎｉ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＵＬＴ２Ｂ１ａ（ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔ  Ｃ６  ｇｌｉｏｍａ  ｃｅｌｌｓ：ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｏｆ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ＮＯ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，”Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，４３０，７５−８０（２００８）を参照されたい。
【００３０】
ＰＲＥＧ−Ｓは、海馬に投射する内側中隔対角帯のコリン作動性ニューロンを阻害し（γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡA）受容体の負の調節による）、かつ活性化する（Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体の正の調節による）。Ｆｌｏｏｄ，Ｊ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｐｏｓｔ−ｔｒａｉｎｉｎｇ  ｍｅｍｏｒｙ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｗｈｅｎ  ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｉｎ  ｖｅｒｙ  ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｍｂｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ：ｔｈｅ  ａｍｙｇｄａｌａ  ｉｓ  ｂｙ  ｆａｒ  ｔｈｅ  ｍｏｓｔ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９２，１０８０６−１０８１０（１９９５）を参照されたい。ＰＲＥＧ−Ｓは、記憶過程に関与するコリン作動性伝達の中枢神経伝達物質であるアセチルコリンの活性を増加させることができると報告されており、また、ＰＲＥＧ−Ｓの投与が高齢ラットの記憶を増強することが報告されている。Ｖａｌｌｅｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，  “Ｓｔｅｒｏｉｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ａｍｎｅｓｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｓｓｉｖｅ  ａｖｏｉｄａｎｃｅ  ｔａｓｋ  ｉｎ  ｒａｔｓ，”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１４，２００３−２０１０（２００１）を参照されたい。
【００３１】
また、ＰＲＥＧ自体、またはＰＲＥＧ−Ｓへの自然な変換も、記憶を改善することができると報告されている。Ｌｉｙｏｕ，Ｎ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｂｒａｉｎ  ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＳＵＬＴ４Ａ１，ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ：ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ，”Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，５１，１６５５−１６６４（２００３）；Ｓａｌｍａｎ，Ｅ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＳＵＬＴ）１Ａ１  ａｎｄ  ＳＵＬＴ１Ａ３  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ，”Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．Ｂｉｏｌ．Ｆａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，３７，７０６−７０９（２００９）；Ｎｕｗａｙｈｉｄ  ａｎｄ  Ｗｅｒｌｉｎｇ，“Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ａｓｐａｒｔａｔｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ［３Ｈ］ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  ｒａｔ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ｖｉａ  ｓｉｇｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，３０６，９３４−９４０（２００３）を参照されたい。例えば、Ｎｕｗａｙｉｄ  ａｎｄ  Ｗｅｒｌｉｎｇ（２００３、上記）は、ＰＲＥＧがσ受容体による線条体でのＮＭＤＡ刺激［3Ｈ］ドーパミン放出を阻害したこと、および結合ＰＫＣβ経路も関与していることを報告した。
【００３２】
ＣＮＳ障害を治療するためのＰＲＥＧおよびＰＲＥＧ−Ｓの医学的使用には、特定の脳組織へのこれらの薬物の制御および標的化された送達システムの開発が必要である。脳組織にＰＲＥＧまたはＰＲＥＧ−Ｓを送達する以前の試みには、脳室内注射による薬物の全身送達が含まれていた。例えば、Ｆｌｏｏｄ，Ｊ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｅｍｏｒｙ−ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ  ｏｆ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃａｌｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｉｔ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８９，１５６７−１５７１（１９９２）は、ＰＲＥＧ−Ｓのトレーニング直後の脳室内投与によるマウスの記憶増強効果を報告した。Ｍｅｚｉａｎｅ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ  ａｎｄ  ｈａｓ  ｐｒｏｍｎｅｓｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ，”Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｂｅｒｌ．），１２６，３２３−３３０（１９９６）において、げっ歯類におけるＰＲＥＧ−Ｓの脳室内注射は、視覚弁別におけるスコポラミン誘発学習障害を補うことが報告された。さらに、Ｖａｌｌｅｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｓ：ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ｒａｔｓ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｌｏｗ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９４，１４８６５−１４８７０（１９９７）では、ＰＲＥＧ−Ｓの腹腔内または両側海馬内注射は、ラットの記憶障害を一時的に修正することが報告された。Ｓ．  Ａ．，  ９４，  １４８６５−１４８７０  （１９９７）．Ｄａｒｎａｕｄｅｒｙ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｓｐａｔｉａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，”Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．，８５２，１７３−１７９（２０００）では、ＰＲＥＧ−Ｓの脳室内注射が海馬におけるアセチルコリン放出の増加と同時に空間記憶を改善することが報告された。
【００３３】
また、統合失調症を患っているヒト患者へのプレグネノロンの経口投与が認知機能を改善したことも報告されている。Ｍａｒｘ  Ｃ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｃｏｎｃｅｐｔ  ｔｒｉａｌ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｉｎ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ，”Ｎｅｕｒｏｐｈｓｙｃｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３４：１８８５−９０３（２００９）を参照されたい。
【００３４】
プレグネノロンの鼻腔内送達は、Ｄｕｃｈａｒｍｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｂｒａｉｎ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｔｒａｎａｓａｌ  ｏｒ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，６４１，１２８−１３４（２０１０）において報告された。Ｄｕｃｈａｒｍｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）では、放射性標識プレグネノロンをマウスの両方の鼻孔に鼻腔内投与し、放射性標識プレグネノロンを測定することにより、血液および脳へのプレグネノロンの送達を調べた。この研究は、マウスの両方の鼻孔へのプレグネノロンの鼻腔内投与が、血中へのプレグネノロンの取り込みをもたらし、脳の全ての検査領域で様々なレベルのプレグネノロンが観察されたことを示した。したがって、Ｄｕｃｈａｒｍｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）によれば、両方の鼻孔へのプレグネノロンの投与により、血液および脳の両半球にプレグネノロンが全身送達される結果となった。
【００３５】
ＩＩＩ．アセチルコリン活性を同側で増加させるためのプレグネノロンの鼻腔内投与
Ｉｐｓｉｌａｔｅｒａｌｌｙ  Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ
上記のように、本明細書に記載されるのは、それを必要とする対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるための組成物および方法である。脳の一方の半球でアセチルコリン活性を選択的に増加させる能力はこれまで記載されておらず、脳卒中、統合失調症、鬱病、パーキンソン病、およびアルツハイマー病の状況で起こり得るように、脳の特定の領域、例えば脳の特定の半球などでアセチルコリン活性の増加が所望される場合に、明白な利点を提供する。
【００３６】
本明細書に記載の方法は、対象の一方の鼻孔のみへのプレグネノロンの鼻腔内送達が、その鼻孔と同側の脳半球でのみアセチルコリン活性を増加させるという驚くべき発見に基づいている。プレグネノロンは、げっ歯類の動物モデルにおいて認知機能を改善するために鼻腔内で脳に送達できることが以前に報告されているが、これらの研究は、プレグネノロンが血液脳関門を介して全身に送達されることを示唆していた。Ｄｕｃｈａｒｍｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，  “Ｂｒａｉｎ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｔｒａｎａｓａｌ  ｏｒ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，６４１，１２８−１３４（２０１０）；Ａｂｄｅｌ−Ｈａｆｉｚ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｍｎｅｓｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｎａｓａｌｌｙ  ａｐｐｌｉｅｄ  ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  ｉｎ  ｒａｔｓ，”Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅａｒｎ．Ｍｅｍ．，１３３，１８５−１９５（２０１６）を参照されたい。実際、Ｄｕｃｈａｒｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０、上記）で観察されたプレグネノロンの分布は、プレグネノロンが血液脳関門を容易に通過する小さな親油性薬物であることと一致している。したがって、血液脳関門を通過する薬物が一方の半球を他方よりも選択的に標的とするとは考えられないため、一方の鼻孔にのみプレグネノロンを投与して同側半球のみでアセチルコリン活性を増加させ得ることは非常に予想外であった。
【００３７】
したがって、本発明のいくつかの態様は、プレグネノロンを一方の鼻孔にのみ投与して、前記鼻孔の同側脳半球でアセチルコリン活性の増加を達成することを含む方法に関する。いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は、前記鼻孔の対側脳半球では実質的に増加しない。本明細書で使用される場合、「実質的に増加しない」とは、プレグネノロンの投与前と比較して、測定されたパラメータが、プレグネノロンの投与後に統計的に有意に増加しないことを意味する。したがって、投与前と比較して、アセチルコリン活性がプレグネノロンの投与後に統計的に有意に増加しない場合、アセチルコリン活性の実質的な増加は認められない。
【００３８】
これらの方法は、いずれかの半球でアセチルコリン活性を増加させるのに効果的である。すなわち、左鼻孔にプレグネノロンを投与することによって、左半球でアセチルコリン活性を増加させることができ、右鼻孔にプレグネノロンを投与することによって右半球でアセチルコリン活性を増加させることができる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、この方法は、海馬におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。
【００４０】
いくつかの実施形態において、この方法は、同側扁桃体におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、鼻孔にプレグネノロンを投与することは、投与の１分、５分、１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、または６０分以内に同側扁桃体におけるアセチルコリン活性を増加させる。いくつかの実施形態において、鼻孔にプレグネノロンを投与することは、投与の１０分以内に同側扁桃体におけるアセチルコリン活性を増加させる。いくつかの実施形態において、同側扁桃体におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、７０分、８０分、９０分、１００分、１１０分、１２０分、１３０分、１４０分、１５０分、１６０分、１７０分、１８０分、１９０分、２００分、または２１０分間、初期レベルと比較して増加したままである。いくつかの実施形態において、同側扁桃体におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１００分間、初期レベルと比較して増加したままである。
【００４１】
理論に拘束されるものではないが、血液脳関門の通過にはより時間がかかることが予想されるため、鼻腔内プレグネノロン投与の迅速な効果は、プレグネノロンが血液脳関門を通過するのではなく（またはそれに加えて）、直接的な嗅覚経路／三叉神経経路を介して輸送されることを示唆している。例えば、Ｗａｎｇ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｂｒａｉｎ  ｕｐｔａｋｅ  ｏｆ  ｄｉｈｙｄｒｏｅｒｇｏｔａｍｉｎｅ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｎａｓａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ，”Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｐｏｓ．，１９，５７１−５７５（１９９８）；Ｃｈｏｕ，Ｋ．−Ｊ．ａｎｄ  Ｄｏｎｏｖａｎ，Ｍ．Ｄ．，  “Ｌｉｄｏｃａｉｎｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ＣＮＳ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｎａｓａｌ  ａｎｄ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｌｏｃａｌ  ｓａｍｐｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１７１，５３−６１（１９９８）；Ｓａｋａｎｅ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，  “Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｎａｓａｌ  ｃａｖｉｔｙ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４３，４４９−４５１（１９９１）を参照されたい。理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載の方法の同側特異性は、嗅覚経路または三叉神経経路を介した輸送とも一致している。
【００４２】
ＩＶ．プレグネノロンの鼻腔内投与のための組成物
本明細書に記載の方法によれば、プレグネノロンは、プレグネノロンと、鼻腔内投与のための医薬的に許容される担体とを含む組成物など、鼻腔内投与に適した任意の組成物中で鼻腔内投与することができる。
【００４３】
プレグネノロンは、疎水性のプレグネノロン自体であり得るか、または水溶性の硫酸化誘導体である硫酸プレグネノロンを使用することができる。
【００４４】
鼻腔内投与に適した組成物には、鼻腔内投与に適した医薬的に許容される担体中のプレグネノロンの溶液、懸濁液、または粉末製剤が含まれる。鼻腔内投与用の組成物は、水溶液、水性ゲル、水性懸濁液、水性リポソーム分散液、水性エマルジョン、水性マイクロエマルジョン、およびそれらの組み合わせを含む水性製剤であり得る。代替的に、鼻腔内組成物は、非水溶液、非水性ゲル、非水性懸濁液、非水性リポソーム分散液、非水性エマルジョン、非水性マイクロエマルジョン、およびそれらの組み合わせなどの非水性製剤であり得る。鼻腔内組成物は、水性成分および非水性成分を含み得る。代替的に、鼻腔内投与に適した組成物は、粉末製剤であり得る。粉末製剤は、単純な粉末混合物、粉末ミクロスフェア、コーティングされた粉末ミクロスフェア、リポソーム分散液、およびそれらの組み合わせであり得る。
【００４５】
任意の実施形態によれば、鼻腔内組成物は、生体接着性を有する賦形剤も含み得る。
【００４６】
製剤は、１つ以上の有機溶媒、懸濁剤、等張性剤、緩衝液、乳化剤、安定剤、および防腐剤を含み得る。
【００４７】
いくつかの実施形態において、プレグネノロンは、テストステロンに関する米国特許第８，５７４，６２２号に記載されるようなオレオゲル鼻腔内医薬組成物、例えば、活性薬剤（複数可）を含み、（ａ）製剤の約６０質量％〜約９８質量％の量で存在する少なくとも１つの親油性または部分的に親油性の担体と、（ｂ）製剤の約１質量％〜約２０質量％の量で存在する表面張力低下活性を有する少なくとも１つの化合物と、（ｃ）製剤の約０．５質量％〜約１０質量％の量で存在する少なくとも１つの粘度調整剤と、をさらに含む組成物に製剤化される。
【００４８】
このようなオレオゲルの実施形態において、親油性または部分的に親油性の担体は、油、例えば、ヒマシ油、硬化ヒマシ油、大豆油、ごま油、もしくはピーナッツ油などの植物油などの経鼻用医薬組成物の担体もしくはビヒクルとして好適な任意のこのような担体、または親油性もしくは部分的に親油性である以下で考察される任意のビヒクル、または任意の他の好適な親油性もしくは部分的に親油性の担体であり得る。
【００４９】
このようなオレオゲルの実施形態において、表面張力低下活性を有する化合物（複数可）は、レシチン、多価アルコールの脂肪酸エステル、ソルビタンの脂肪酸エステル、ポリオキシエチルソルビタンの脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンの脂肪酸エステル、スクロースの脂肪酸エステル、ポリグリセロールの脂肪酸エステルなどの１つ以上の界面活性剤、および／またはソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびマクロゴールグリセロール脂肪酸エステルなどの１つ以上の保湿剤、または１つ以上のオレオイルマクロゴールグリセリド（ＬＡＢＲＡＦＩＬ（登録商標）Ｍ  １９４４  ＣＳなど、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ（Ｆｒａｎｃｅ）から入手可能）、または以下で考察される任意の界面活性剤、または任意の他の好適な界面活性剤であり得る。
【００５０】
このようなオレオゲルの実施形態において、粘度調整剤（複数可）は、セルロースおよびセルロース誘導体、多糖類、カルボマー、ポリビニルアルコール、ポビドン、コロイド状二酸化ケイ素、セチルアルコール、ステアリン酸、蜜蝋、ワセリン、トリグリセリド、およびラノリンなどの増粘剤およびゲル化剤、または以下で考察される任意の粘度調整剤、または任意の他の好適な界面活性剤から選択される１つ以上であり得る。
【００５１】
追加的または代替的に、プレグネノロンは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１８／０００８６１５号に記載されるような鼻腔内医薬組成物、例えば、プレグネノロンが多孔性剤に搭載される鼻腔内医薬組成物に製剤化され得る。そのような実施形態において、プレグネノロンは、多孔性剤の細孔の内側に位置する多孔性剤の表面に搭載され得る。ＵＳ２０１８／０００８６１５に記載されるように、活性薬剤を搭載した多孔性剤は、それ自体、米国特許第８，５７４，６２２号に記載されるようなオレオゲル組成物に製剤化され得る。
【００５２】
このような多孔性剤の実施形態において、多孔性剤は、コロイド状二酸化ケイ素、マイクロ多孔性二酸化ケイ素、メソ多孔性二酸化ケイ素、マクロ多孔性二酸化ケイ素、ポリオルガノシロキサン、医薬用粘土、二酸化ケイ素ナノチューブ、二酸化ケイ素ゲル、マグネシウムアルモシリケート（限定されないが、Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  Ｍｉｎｅｒａｌｓ，ＬＬＣのＶＥＥＧＵＭ（登録商標）など）、活性炭、無水リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、アルミナ、およびそれらの任意の２つ以上の組み合わせなどの無機多孔性材料を含む。例示的な無機多孔性材料には、Ｗ．Ｒ．Ｇｒａｃｅ  ＆  Ｃｏ．のＳＹＬＯＩＤ（登録商標）商標で市販されている多孔性二酸化ケイ素（限定されないが、ＳＹＬＯＩＤ（登録商標）２４４ＦＰ、７２ＦＰ、ＸＤＰ６０３５（ＳＩＬＳＯＬ（商標）６０３５としても知られる）、ＸＤＰ３０５０、ＸＤＰ３１５０、ＡＬ−１ＦＰ、およびそれらの任意の２つ以上の組み合わせ）、Ｅｖｏｎｉｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｃｏｒｐ．のＡＥＲＯＰＥＲＬ（登録商標）  商標で入手可能な多孔性二酸化ケイ素（限定されないが、ＡＥＲＯＰＥＲＬ（登録商標）３００（表面積約２６０〜３２０ｍ2／ｇ（約３００ｍ2／ｇなど）、細孔容積約１．５〜１．９ｍｌ／ｇ、および平均粒径約２０〜約６０μｍを有する）など）、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅの二酸化ケイ素ＰＡＲＴＥＣＫ（登録商標）ＳＬＣ、Ｆｕｊｉ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＩｎｄｕｓｔｒｙのＮＥＵＳＩＬＩＮ（登録商標）（合成の非晶形のメタケイ酸アルミン酸マグネシウム）、Ｚｅｏｌｉｔｅ  Ｓｏｃｏｎｙ  Ｍｏｂｉｌ−５、Ｍｏｂｉｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｔｔｅｒ  Ｎｏ．４１、ＳＢＡ−１５、ＦＤＵ−１１、ＯＭＳ−７、ＯＭＳ−Ｌｅｍｏｎ−７、およびＩＩＴＭ−５６が含まれる。いくつかの実施形態において、多孔性剤は、例えば、表面に化学的に結合される基に応じて、疎水性または親水性であり得るシリコン系粉末を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、多孔性剤は、金属有機構造体（ＭＯＦ）など有機−無機ハイブリッドを含む。例示的なハイブリッド材料は、多座性架橋配位子および金属連結点の自己組織化によって形成することができる。
【００５４】
いくつかの実施形態において、多孔性剤は、マイクロ多孔性有機ポリマー、ポリスチレン、セルロース、および／またはポリ（メタクリル酸メチル）などの有機ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、マイクロ多孔性有機ポリマーは、炭素−炭素結合反応により形成され、炭素、水素、酸素、窒素、および／またはホウ素などの非金属元素で構成される。いくつかの実施形態において、有機ポリマーは、犠牲ＳｉＯ2コアのエマルジョン重合および超架橋、続いて化学エッチングによって生成される。いくつかの実施形態において、有機ポリマーのネットワークは、小有機ビルディングブロックから構築される。
【００５５】
いくつかの実施形態において、多孔性剤は、イオン交換樹脂（限定されないが、架橋ポリスチレンなど）または吸着体（限定されないが、β−シクロデキストリン系多孔性シリカ、α−シクロデキストリン系多孔性シリカ、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン系多孔性シリカ、および他の吸着体樹脂をベースとする多孔性材料）などの錯化剤をベースとする多孔性材料を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態において、多孔性剤の表面（内部細孔表面を含む）を官能化して、活性薬剤（複数可）に結合させ、かつ／またはある特定の時間量の後または刺激に応答して活性薬剤（複数可）の放出を制御する。
【００５７】
活性薬剤を搭載した多孔性剤は、経鼻用医薬組成物のビヒクルとして好適な任意のビヒクルに製剤化され得る。いくつかの実施形態において、多孔性剤のビヒクルは、親水性ビヒクルである。いくつかの実施形態において、ビヒクルは、１つ以上の脂肪、油、ワックス、リン脂質、ステロイド（例えば、コレステロール）、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴシン、プロスタグランジン、および／または脂肪−油ビタミンを含むビヒクルなどの親油性または部分親油性ビヒクルである。いくつかの実施形態において、ビヒクルは、植物油、ヒマシ油、硬化ヒマシ油、大豆油、ごま油、またはピーナッツ油などの油または油の混合物；オレイン酸エチルおよびオレイン酸オレイル、ミリスチン酸イソプロピルなどの脂肪酸エステル；中鎖トリグリセリド；脂肪酸のグリセロールエステル；ポリエチレングリコール；リン脂質；白色軟パラフィン；またはそれらの任意の２つ以上の組み合わせを含む。
【００５８】
ビヒクルは、経鼻投与のための所望の特性、所望の物理的特性、所望の放出特性、所望の薬物動態などを提供するのに有効な量などの任意の好適な量で存在し得る。いくつかの実施形態において、本組成物は、組成物の総質量に基づいて、約１５質量％〜約９８質量％、約３０質量％〜約９８質量％、約５０質量％〜約９５質量％、約７５質量％〜約９５質量％、約８０質量％、または約９０質量％の量でビヒクルを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、組成物の総質量に基づいて、１５質量％〜９８質量％、３０質量％〜９８質量％、５０質量％〜９５質量％、７５質量％〜９５質量％、８０質量％、または９０質量％の量でビヒクルを含む。
【００５９】
活性薬剤を搭載した多孔性剤は、表面低下活性を有する１つ以上の化合物、例えば界面活性剤と共に製剤化されてもよい。界面活性剤は、存在する場合、経鼻用医薬組成物において界面活性剤としての使用に好適な任意の界面活性剤であり得る。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、限定されないが、レシチン、多価アルコールの脂肪酸エステル、ソルビタンの脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンの脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンの脂肪酸エステル、スクロースの脂肪酸エステル、ポリグリセロールの脂肪酸エステル、オレオイルポリオキシルグリセリド（限定されないが、杏仁油ＰＥＧ−６−エステルなど）、オレオイルマクロゴールグリセリド、および／またはソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、マクロゴールグリセロール脂肪酸エステルなどの保湿剤、およびそれらの任意の２つ以上の組み合わせを含む、アニオン性、カチオン性、両性、および非イオン性界面活性剤から選択される。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、オレオイルマクロゴールグリセリド（ＬＡＢＲＡＦＩＬ（登録商標）Ｍ  １９４４  ＣＳ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ，Ｓａｉｎｔ−Ｐｒｉｅｓｔ，Ｆｒａｎｃｅ））またはオレオイルマクロゴールグリセリドの混合物を含む。
【００６０】
活性薬剤を搭載した多孔性剤は、経鼻用医薬組成物における粘度調整剤としての使用に好適な任意の粘度調整剤であり得る１つ以上の粘度調整剤と共に製剤化され得る。いくつかの実施形態において、粘度調整剤は、メソ多孔性シリカ（活性薬剤が搭載されているか、または搭載されていない場合がある）を含む。いくつかの実施形態において、粘度調整剤は、セルロース、セルロース含有物質、多糖、カルボマー、ポリビニルアルコール、ポビドン、コロイド状二酸化ケイ素、セチルアルコール、ステアリン酸、蜜ロウ、ペトロラタム、トリグリセリド、ラノリン、またはそれらの任意の２つ以上の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、粘度調整剤は、コロイド状二酸化ケイ素（限定されないが、ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００（Ｅｖｏｎｉｋ）および／またはＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ（登録商標）Ｍ５（Ｃａｂｏｔ）など）を含む。いくつかの実施形態において、粘度調整剤は、Ｗ．Ｒ．Ｇｒａｃｅ＆Ｃｏ．のＳＹＬＯＤＥＮＴ（登録商標）（圧縮かさ密度約１１０ｋｇ／ｍ3、比表面積約１９０ｍ2／ｇ、および平均粒径約１８μｍを有する沈降シリカ）またはＳＹＬＯＢＬＡＮＣ（登録商標）シリカ（細孔容積約１．６ｍｌ／ｇおよび平均粒径約３μｍを有する多孔性シリカゲル）などの合成シリカを含む。いくつかの実施形態において、粘度調整剤は、ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００などの親水性ヒュームドシリカ、および／またはＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）Ｒ９７２（ジメチルジクロロシランで処理された後のヒュームドシリカであり、表面積約９０〜約１３０ｍ2／ｇを有する）などの親油性二酸化ケイ素を含む。理論に拘束されるものではないが、親水性ヒュームドシリカを使用して、他の粘度調整剤で生成された同等のゲルと比較して高温安定性を有するチキソトロピーゲル組成物を調製することができると考えられる。
【００６１】
粘度調整剤は、存在する場合、組成物の粘度を所望のレベルに調整するのに有効な量で存在し得る。いくつかの実施形態において、本組成物は、組成物の総質量に基づいて、約０．５〜約２０質量％、約０．５〜約１０質量％、約０．５〜約７質量％、約１〜約４質量％、約４質量％、または約２質量％の粘度調整剤を含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、組成物の総質量に基づいて、０．５〜２０質量％、０．５〜１０質量％、０．５〜７質量％、１〜４質量％、４質量％、または２質量％の粘度調整剤を含む。
【００６２】
使用される特定の製剤に関係なく、プレグネノロンは、例えば、一方または両方の鼻孔への投与に適した組成物の体積などの、投与経路に適した用量で治療有効量の活性製剤を提供するように製剤化される。
【００６３】
Ｖ．治療方法および使用
本明細書に記載されるのは、例えば、脳内の一方の半球でのみアセチルコリン活性を増加させるために、それを必要とする対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるための治療方法、およびそのような方法で使用するためのプレグネノロン製剤である。
【００６４】
いくつかの実施形態において、方法は、プレグネノロンを必要とする対象にそれを鼻腔内投与することを含む。いくつかの実施形態において、プレグネノロンは、対象の一方の鼻孔にのみ投与される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、対象は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害などのアセチルコリン欠乏に関連する疾患または障害に罹患している。いくつかの実施形態において、対象は、記憶および／または学習障害の治療を必要とするなど、認知機能の改善を必要としている。
【００６６】
上記のように、対象は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはウサギなどの任意の非げっ歯類哺乳動物であり得る。
【００６７】
また、上記のように、プレグネノロンは、鼻腔内投与に適した、または適合した任意の医薬組成物で投与することができる。
【００６８】
また、上記のように、プレグネノロンは、上で論じたように、アセチルコリン活性を増加させるのに有効な量で投与することができる。本明細書で使用される場合、「アセチルコリン活性」という用語は、脳組織におけるアセチルコリンの放出を指す。脳組織におけるアセチルコリンの放出は、後述の実施例に記載されるようなマイクロダイアリシスおよびアセチルコリンアッセイなどの方法によって評価することができるが、本明細書に記載される方法は、アセチルコリン活性を評価するためのこれらまたは他の特定の方法論によって制限されない。
【００６９】
いくつかの実施形態において、プレグネノロンは、対象の体重１キログラム当たり約０．０１〜約２．０ｍｇの用量で投与される。すなわち、いくつかの実施形態において、対象の体重１キログラム当たり約０．０１〜約２．０ｍｇの用量が、アセチルコリン活性を増加させるのに効果的である。
【００７０】
上記のように、いくつかの実施形態において、この方法は、投与の１分、５分、１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、または６０分以内にアセチルコリン活性を増加させるのに効果的である。いくつかの実施形態において、鼻孔にプレグネノロンを投与することは、投与の１０分以内に同側扁桃体におけるアセチルコリン活性を増加させる。いくつかの実施形態において、同側扁桃体におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、７０分、８０分、９０分、１００分、１１０分、１２０分、１３０分、１４０分、１５０分、１６０分、１７０分、１８０分、少なくとも１９０分、２００分、または２１０分間、初期レベルと比較して増加したままである。いくつかの実施形態において、プレグネノロンの量は、脳組織におけるアセチルコリン活性の増加を少なくとも１００分間維持するのに効果的である。
【００７１】
以下の実施例は本発明を図示するために提供されるが、本発明はこれらの実施例の特定の条件または詳細に限定されないことが理解されるべきである。
【００７２】
ＶＩ．使用
また、それを必要とする対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるのに使用される、またはそれを必要とする対象における統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される疾患もしくは状態を治療するのに使用されるプレグネノロン製剤も提供される。いくつかの実施形態において、対象は、非げっ歯類対象である。プレグネノロン製剤は、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含み、医薬組成物としての使用に適し、かつ鼻腔内投与に適合した、本明細書に記載の任意のプレグネノロン製剤を含む任意のプレグネノロン製剤であり得る。いくつかの実施形態において、プレグネノロン製剤は、対象の一方の鼻孔のみへの鼻腔内投与に適合している。
【００７３】
いくつかの実施形態において、プレグネノロン製剤は一方の鼻孔にのみ投与され、前記鼻孔の同側脳半球でアセチルコリン活性が増加する。いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は、前記鼻孔の対側脳半球では実質的に増加しない。いくつかの実施形態において、使用は、追加的または代替的に、対象の扁桃体におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、使用は、追加的または代替的に、対象の海馬におけるアセチルコリン活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、アセチルコリン活性は、１０分以内に増加する。いくつかの実施形態において、脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも６０分間持続する。いくつかの実施形態において、脳組織におけるアセチルコリン活性は、少なくとも１００分間持続する。
【００７４】
いくつかの実施形態において、プレグネノロンの有効量は、対象の体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２．０ｍｇである。いくつかの実施形態において、医薬的に許容される担体は、（ａ）製剤の約６０質量％〜約９８質量％の量で存在する少なくとも１つの親油性または部分的に親油性の担体と、（ｂ）製剤の約１質量％〜約２０質量％の量で存在する表面張力低下活性を有する少なくとも１つの化合物と、（ｃ）製剤の約０．５質量％〜約１０質量％の量で存在する少なくとも１つの粘度調整剤と、を含み得る。任意の実施形態において、プレグネノロンは、多孔性賦形剤の細孔の内側に位置する多孔性賦形剤の表面に搭載され得る。
【００７５】
任意の実施形態によれば、対象は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ウサギ、マウス、またはラットであり得る。任意の実施形態において、対象は、脳内のアセチルコリン活性の低下に関連する疾患または状態に罹患している可能性がある。任意の実施形態において、疾患または状態は、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択され得る。任意の実施形態において、使用は、記憶および学習障害などの認知機能を改善するために効果的であり得る。
【００７６】
また、それを必要とする対象の脳組織におけるアセチルコリン活性を同側で増加させるための、またはそれを必要とする対象における統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、無関心、自閉症、不安、ストレス、関節リウマチ、外傷性脳損傷、脳卒中、脳卒中後神経保護、双極性障害、鬱病、注意欠陥多動障害、および睡眠障害から選択される疾患もしくは状態を治療するための、薬物の調製におけるプレグネノロンの使用も提供される。いくつかの実施形態において、対象は、非げっ歯類対象である。薬物は、医薬的に許容される担体中に有効量のプレグネノロンを含み、医薬組成物としての使用に適し、かつ鼻腔内投与に適合した、本明細書に記載の任意のプレグネノロン製剤を含む任意のプレグネノロン製剤であり得る。いくつかの実施形態において、薬物は、対象の一方の鼻孔のみへの鼻腔内投与に適合している。
【実施例】
【００７７】
材料および方法
対象。手術時に生後３〜４ヶ月で、体重が４００〜５００グラムの成体雄ウィスターラット合計１０匹を、地元の動物施設（Ｔｉｅｒｖｅｒｓｕｃｈｓａｎｌａｇｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。それらをケージ（マクロロンケージ、ＩＶ型、６０．０×２０．０×３８．０センチメートル）当たり４匹に群分けし、手術後に個別のケースに分けた。逆明暗サイクル（午前７時（ＡＭ）から午後７時（ＰＭ）まで消灯）下で収容し、餌と水は自由摂取させた。室温は摂氏２０±２度であり、環境の湿度を制御した。２週間の順応後、以下に記載するように動物にマイクロダイアリシスを行った。全ての実験は、動物福祉に関する欧州共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って行われ、ドイツの動物保護法当局であるＬＡＮＵＶＮｏｒｄｒｈｅｉｎ−Ｗｅｓｔｆａｌｅｎによって承認された。
【００７８】
手術。ラットの特定の脳領域にマイクロダイアリシスプローブを移植した。ラットを塩酸ケタミン（９０．０ミリグラム／キログラム（ｍｇ／ｋｇ）：Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ）と塩酸キシラジン（８．０ｍｇ／ｋｇ：Ｂａｙｅｒ）の混合物で麻酔し、定位固定フレーム（Ｄａｖｉｄ  Ｋｏｐｆ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）に配置した。さらに、ブピバカイン（２．５ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ／ｍＬ）、頭蓋骨の上０．１ミリリットル（ｍＬ）の注射量；ブカイン、Ｄｅｌｔａｓｅｌｅｃｔ  ＨｍｂＨ）を局所麻酔薬として投与した。マイクロダイアリシスプローブ用の２本のガイドカニューレ（長さ１４ミリメートル（ｍｍ）、２６ゲージ）を左右両方の扁桃体に移植した（前後方向（ＡＰ）：−２．５ｍｍ、内外方向（ＭＬ）：±４．６ｍｍ、背腹方向（ＤＶ）：−７．２ｍｍ）。全ての座標は、ラットの脳地図に従ってブレグマに対するものであった（Ｐａｘｉｎｏｓ  Ｇ，Ｗａｔｓｏｎ  Ｃ（１９８６）Ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）。インプラントをさらに固定するために、２．６ｍｍの２本のステンレス鋼ネジを頭蓋骨に取り付けた。術後の疼痛を軽減するために、リン酸緩衝生理食塩水（ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ）によって運ばれるカルプロフェン（５ｍｇ／ｋｇ  Ｒｉｍａｄｙｌ、Ｐｆｉｚｅｒ）を１ｍｇ／ｋｇ（０．１ミリリットル／キログラムのカルプロフェンおよび０．９ミリリットル／キログラムのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））の注射量で頭頸部に注射した。マイクロダイアリシスを行う前に、３〜６日間、動物を手術から回復させた。
【００７９】
マイクロダイアリシス。マイクロダイアリシスプロセスの前に、動物をウレタンの腹腔内注射で麻酔した。（１．２５グラム／キログラム、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）。動物との物理的接触なしに流体供給（灌流液）（リンゲル液０．２ミリリットル２０分ごと）を可能にするために、カテーテルを腹腔内に配置した。動物をアクリルボックス（４５×２５×２２センチメートル）に入れ、体温をモニターし、温度調節器（ＣＭＡ／１５０）および加熱パッドにより３６．５±０．５℃で安定に保持した。インレットチューブをマイクロインフュージョンポンプ（ＣＭＡ／１００）に接続し、ネオスチグミン（１０マイクロモル）を含むリンゲル液を２マイクロリットル／分の流量（灌流液）で灌流させた。したがって、プローブを流れる流体の流体速度は、シリンジポンプにより制御された。ネオスチグミンは、現在利用可能なＨＰＬＣ法を用いて容易に検出可能なアセチルコリンのレベルを得るために灌流させたコリンエステラーゼ阻害剤である（感度限界５０〜１００フェムトモル／注射）。コリンエステラーゼの阻害は、ムスカリン性シナプス前抑制受容体の持続的な占有を引き起こし、それによってコリン作動性末端からのアセチルコリン放出を制御する抑制性緊張を維持した。Ｂｏｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ｉｎ  ｖｉｖｏ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，１１６，３５７−３６０（１９９０）。灌流液は、プローブの周囲の領域と比較して低濃度になるように設計し、そうすることで流束の流れがプローブに流れ込むのであって、その逆ではないこと確実にした。流体が膜を通って流れると、灌流流体（現在は透析液）は、Ｋｈｏ，Ｃ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  Ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ  Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ：ｔｈｅ  Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｅｆｆｏｒｔｓ，”Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，５４，３５０６−３５２７（２０１７）に記載されるように、その領域の細胞外流体における目的の神経伝達物質の濃度を反映するはずである。２時間の安定化期間の後、それぞれ１０分の時間枠に対応するベースラインサンプルを収集した。６番目のベースラインサンプルの後、一方の鼻孔（同側）に５マイクロリットル（μＬ）の１１．２ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ／ｍＬ）のプレグネノロン（ＰＲＥＧ）を、反対の鼻孔（対側）に５μＬのビヒクル脂質ゲルを鼻腔内投与した。処理後、それぞれが同じく１０分の時間枠に対応する別の１０個のサンプルを収集した。各サンプルの収集量は２０μＬであった。プローブの効率を低下させ得る外部要因によって引き起こされる回収率の変化（プローブ周辺領域のアセチルコリン濃度と収集された透析液の濃度の関係）を判定するために、１０μＬの内部標準が各バイアルに存在した（１００ｍＬのＮａＯＨ希釈液中の２５μＬのエチルホモコリン原液）。
【００８０】
マイクロダイアリシスプローブ。Ｂｏｉｘ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，  “Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｎｅｏｓｔｒｉａｔｕｍ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ａｃｃｕｍｂｅｎｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ：  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｒｅｗａｒｄ  ａｎｄ  ａｖｅｒｓｉｏｎ，”Ｂｅｈａｖ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．，６３，２１３−２１９（１９９４），ａｎｄ  Ｂｏｉｘ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，  “Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ａｃｃｕｍｂｅｎｓ  ａｎｄ  ｐｌａｃｅ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｂａｓａｌｉｓ  ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ  ｒｅｇｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，”６４，１０４５−１０５５（１９９５）に記載されるように、マイクロダイアリシスプローブは、半透膜に取り付けたフューズドシリカ開口チューブから作製した。Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，”  ６４，  １０４５−１０５５  （１９９５）．この膜により、拡散によって分子がその細孔を通過することを可能にした。膜の細孔のサイズは６キロダルトン（ｋＤａ）であった。膜の小さなセグメントを金属チューブの内側１／３に配置し、接着剤２  ＴｏｒＥｐｏｘｙで接着した。シリカの外側の膜（活性膜）の長さは２．４ｍｍであった。次に、膜の先端を接着剤２  Ｔｏｒ  Ｅｐｏｘｙで接着した（０．４ｍｍ）。プローブを作製してから、それをシリカチューブに接着した。プローブの内部では、フューズドシリカキャピラリーチューブが出口として機能した。カニューレの長さに応じて適切なプローブの長さを定義するために、金属製ソケットを特定の距離で接着した。
【００８１】
薬物。脂質ベースのゲル製剤に混合されたプレグネノロン（ＰＲＥＧ）（Ｂａｙｅｒ  ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を使用した。１１．２ｍｇ／ｍＬプレグネノロンを含むゲル製剤の組成は、１．１２％の微粉化プレグネノロン、９０．８８％のヒマシ油、４．０％のオレオイルポリオキシグリセリド、および４．０％のコロイド状二酸化ケイ素であった。５．６ｍｇ／ｍＬプレグネノロンゲル製剤の組成は、０．５６％の微粉化プレグネノロン、９１．４４％のヒマシ油、４．０％のオレオイルポリオキシグリセリド、および４．０％のコロイド状二酸化ケイ素であった。微粉化プレグネノロンをヒマシ油に加え、１３０００回転／分（ｒｐｍ）で１０分間混合することによりゲル製剤を作成した。次に、オレオイルポリオキシグリセリドを加え、１３０００ｒｐｍで２分間混合した。最後に、コロイド状二酸化ケイ素を加え、１３０００ｒｐｍで２分間混合した。プレグネノロンを含まない同じゲル製剤（ゲルビヒクル）を対照として使用した。全ての投与について、各動物の一方の鼻孔に５μＬのゲルビヒクル製剤を、他方の鼻孔にそれぞれ５μＬの１１．２ｍｇ／ｍＬまたは５．６ｍｇ／ｍＬのプレグネノロン（ＰＲＥＧ）を投与した。投与は、Ｔｒａｎｓｆｅｒｐｅｔｔｏｒピペット（ＧＭＢＨ＋ＣＯ  ＫＧ、Ｗｅｒｔｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して行った。手術時の動物の平均体重は４５０グラムであったため、使用した用量は０．３７３ミリグラム／キログラム（ｍｇ／ｋｇ）であり、ラット１匹当たり合計０．１１２ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ／ｍＬ）を意味する。
【００８２】
アセチルコリンアッセイ。マイクロダイアリシスサンプル中のアセチルコリンの量を定量化する目的で、電気化学検出（ＥＣ）を備えた高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）技術を、Ｓｏｕｚａ  Ｓｉｌｖａ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｂｙ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｂａｓａｌｉｓ  ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ  ｒｅｇｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｒｅｅｌｙ−ｍｏｖｉｎｇ  ｖｓ．ｔｈｅ  ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，”Ｓｙｎａｐ．Ｎ．Ｙ．Ｎ，３８，２４３−２５３（２０００）に記載されるように使用した。Ｎ．  Ｙ．  Ｎ，  ３８，  ２４３−２５３  （２０００）．ＣｈｒｏｍＳｐｈｅｒ  ５Ｃ１８（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を充填し、ドデシル硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳ）をロードした長さ７５ｍｍの逆相カラムでアセチルコリンを分離した。カラムに連結した酵素反応器を使用することにより検出を行った。酵素反応器にＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ−ＮＨ２（Ｍｅｒｃｋ）を充填し、グルタルアルデヒド（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で活性化した後、アセチルコリンエステラーゼ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳ）をロードした。酵素は固定相に共有結合させた。酵素反応器がアセチルコリンを過酸化水素に変換したことが、０．３５０ミリボルト（ｍＶ）の電位に設定した白金電極で電気化学的に検出された。参照電極は、インサイチュのＡｇ／ＡｇＣｌ（ＩＳＡＡＣ）電極（Ａｎｔｅｃ、Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳ）であった。移動相は、１ミリモル（ｍＭ）の塩化テトラメチルアンモニウムと０．１８モル（Ｍ）のＫ２ＨＰＯ４で構成され、Ｓｏｕｚａ  Ｓｉｌｖａ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ３  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｔｏ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｇｅｄ  ｏｒｇａｎｉｓｍ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１１０，１５０９７−１５１０２（２０１３）に記載されるように、ＫＨ２ＰＯ４（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でｐＨ８．０に調整した。Ｓ．  Ａ．，  １１０，  １５０９７−１５１０２  （２０１３）．
【００８３】
システムを流れる移動相（溶離液）のｐＨを、酵素変換を促進し、より良好な検出感度を得るためにｐＨ＝８に制御した。移動相または溶離液は、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ポンプ（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）を使用して、０．３マイクロリットル／分（μｌ／分）の速度で流した。クロマトグラムを完了するのに要した時間は８〜９分であった。神経伝達物質の内容を、Ｃｈｒｏｍ  Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｊｕｓｔｉｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｄｅｎｖｉｌｌｅ，ＮＪ，ＵＳＡ）の助けを借りて分析した。
【００８４】
組織学分析。マイクロダイアリシスプロセスが終了した後、ラットにペントバルビタールの過剰用量（０．５〜１ミリリットル（ｍＬ））を注射し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）および体の１０％のホルマリンを灌流させた。脳を注意深く取り出し、１０％ホルマリン＋３０％スクロース（固定液）の入ったバイアルに入れ、さらなる組織学的分析のために４°Ｃで保存した。死後組織学を用いて、正確なマイクロダイアリシスの移植位置を確認した。クリオスタット（Ｌｅｉｃａ  ＣＭ１９００）で脳の切片を作製し、ゼラチンで被覆した顕微鏡ガラス上に配置した。Ｇｅｌａｔｉｎｅ（Ａｍｒｅｓｃｏ）を用いてゼラチンで被覆した顕微鏡ガラスは事前に調製した。クリオスタットの試料台に脳を固定するために組織凍結培地を使用した。小脳領域を除いて、全ての脳を切片化した。１日後、クレシルバイオレット（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて染色を行うことができた。染色手順では、異なる希釈率のエタノール（１００％、９５％、８０％、または７０％）、クレシルバイオレット染料溶液、および最後のステップとしてキシロールが必要であった。脳地図（“Ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ−６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，”２０１７）を使用してプローブ配置の精度を判定した。カニューレ移植に成功した脳のみが統計分析で考慮された。
【００８５】
統計分析。高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析のデータを、ＩＢＭ  ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ２４．０ソフトウェアを用いてさらに処理した。各脳領域からのデータを分析した。次に、「時間」因子内の「側」について双方向ＡＮＯＶＡを実行した。さらに、扁桃体半球のアセチルコリン濃度（１１．２ｍｇ／ｍＬの薬物処理と同側および対側）と、鼻腔内投与後のマイクロダイアリシスプロセス中の経時変化を示すグラフを、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ１２．０を使用して作成した。
【００８６】
実施例１：プレグネノロンを一方の鼻孔に鼻腔内投与すると、アセチルコリン活性が同側で増加する
図１に示すように、対象内の反復測定分散分析について双方向ＡＮＯＶＡのペアワイズ比較を実施して、同側半球へのプレグネノロン（１１．２ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ／ｍＬ））および対側半球へのビヒクルの片側鼻腔内投与が各動物の扁桃体における細胞外アセチルコリン（Ａｃｈ）の放出に与える影響を評価した。扁桃体の分析のために調査した動物の数は次の通りである：ｎ＝１０。
【００８７】
各動物内で、２つの扁桃体半球（同側および対側）におけるアセチルコリンの細胞外放出の間に統計的有意差が認められた：Ｆ（１／９）＝４０．１９５；ウィルクスのラムダ＝．１８３、ｐ＜０．００５、偏イータ二乗＝．８１７。同側扁桃体にアセチルコリンの細胞外レベルのより高い増加が見られた。
【００８８】
独立ｔ検定（両側）を行って、一方の鼻孔（同側下位群）における５マイクロリットル（μｌ）の１１．２ｍｇ／ｍＬプレグネノロン（ＰＲＥＧ）、および反対の鼻孔（対側群）における５μｌのビヒクルの鼻腔内投与前と鼻腔内投与後の時点で、２つの扁桃体半球における細胞外アセチルコリン（ＡＣｈ）放出の差を評価した。
【００８９】
対側扁桃体の場合と比較して、１１．２ｍｇ／ｍＬ投与後の同側扁桃体と反対の鼻孔におけるビヒクル投与との間に有意差が認められた。これらの統計的有意差は、下の表１に示すように、処理後１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、および１００分に見られた。
【表１】
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【００９０】
さらに、右嗅覚系および左嗅覚系への鼻腔内送達に関連する差があるかどうかを調査した。図２に示すように、右鼻孔にプレグネノロン（ＰＲＥＧ）を投与すると、右扁桃体でアセチルコリン（ＡＣｈ）が放出され、左鼻孔にプレグネノロンを投与すると、左扁桃体でＡＣｈが放出された。図２に示すように、左嗅覚系または右嗅覚系へのプレグネノロン投与時のＡＣｈ放出間に統計的有意差は見られなかった。したがって、一方の鼻孔にのみプレグネノロンを投与した場合のアセチルコリンの同側での増加は、右鼻孔または左鼻孔に限定されず、むしろ、いずれの鼻孔にプレグネノロンを投与しても、扁桃体のアセチルコリンの同側での増加を達成することができる。
【００９１】
実施例２：両方の鼻孔にプレグネノロンを投与すると、扁桃体と海馬の両方でアセチルコリン活性が増加する
対象間および対象内の両方の分散分析を実施して、前頭皮質、海馬、および扁桃体におけるプレグネノロン（ＰＲＥＧ）（５．６ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ／ｍＬ）、１１．２ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ／ｍＬ））またはビヒクルの鼻腔内投与の影響を評価した。前頭皮質の分析のために調査した動物の数は、ビヒクル群でｎ＝７、ＰＲＥＧ  ５．６ｍｇ／ｍＬ用量群でｎ＝５、ＰＲＥＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬ用量群でｎ＝６であった。海馬の分析のために調査した動物の数は、ビヒクル群でｎ＝６、ＰＲＥＧ  ５．６ｍｇ／ｍＬ用量群でｎ＝７、ＰＲＥＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬ用量群でｎ＝５であった。扁桃体の分析のために調査した動物の数（動物３８および３９を除く）は、ビヒクル群でｎ＝７、ＰＲＥＧ  ５．６ｍｇ／ｍＬ用量群でｎ＝５、ＰＲＥＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬ用量群でｎ＝４であった。
【００９２】
図３Ａに示すように、投与量５．６ｍｇ／ｍＬまたは１１．２ｍｇ／ｍＬのプレグネノロン（ＰＲＥＧ）のどちらも、前頭皮質でのアセチルコリン放出に影響を与えなかった。時間について有意な主効果は認められず（ウィルクスのラムダ＝０．０７６、Ｆ（１５，１）＝０．８１０、ｐ＞０．０５、偏イータ二乗＝０．９２４）、時間と薬物効果との間に相互作用は見られなかった（ウィルクスのラムダ＝０．０２１、Ｆ（３０，２）＝０．３９３、ｐ＞０．０５、偏イータ二乗＝０．９２４）。さらに、図３Ａに示すように、薬物について有意な主効果は認められなかった。Ｆ（２，１５）＝０．００２、ｐ＞０．０５、偏イータ二乗＜０．００１。
【００９３】
１１．２ｍｇ／ｍＬ用量のＰＲＥＧは、海馬でのアセチルコリン放出に影響を及ぼしたが、この影響は有意ではなかった。扁桃体の場合と同様に、体循環／ＢＢＢの通過によるさらなる移動が原因であり得る第２のピークがある。図３Ｂを参照されたい。５．６ｍｇ／ｍＬ用量のＰＲＥＧは影響を及ぼさなかった。時間について有意な主効果は認められず、ウィルクスのラムダ＝０．００３、Ｆ（１５，１）＝１９．４１５、ｐ＞０．０５、偏イータ二乗＝０．９９７であった。しかしながら、時間と薬物効果との間には相互作用が見られ、ウィルクスのラムダ＜０．００１、Ｆ（３０，２）＝８４．２０９、ｐ＜０．０５、偏イータ二乗＝０．９９９であった。また、海馬におけるアセチルコリン放出に対する高用量と低用量との差は有意ではなかった。Ｆ（１５，２）＝１．５０１、ｐ＞０．０５、偏イータ二乗＝０．１６７。
【００９４】
時間と薬物との間に相互作用効果が見られ、一元配置ＡＮＯＶＡを実施して、１１．２ｍｇ／ｍＬのプレグネノロン用量を投与した後の異なる時点でアセチルコリンレベルを比較した：ウィルクスのラムダ＝０．０１、Ｆ（４，１）＝２３２．９８４、ｐ＜０．０５。図３Ｂに示すように、５．６ｍｇ／ｍＬ用量およびビヒクル薬物の一元配置ＡＮＯＶＡは、有意な結果を示さなかった：５．６ｍｇ／ｍＬおよびビヒクルでそれぞれ、ウィルクスのラムダ＝０．０８６、Ｆ（４，１）＝１．７６２、ｐ＞０．０５およびウィルクスのラムダ＝０．１０４、Ｆ（４，１）＝１．７２０、ｐ＞０．０５。
【００９５】
１１．２ｍｇ／ｍＬ用量のＰＲＥＧは、扁桃体におけるアセチルコリン（ＡＣｈ）放出に対する鼻腔内プレグネノロン投与の有意な効果を示した。薬物について対象間に有意な影響が認められた：Ｆ（１４，２）＝４．２８１、ｐ＝０．０３５、偏イータ二乗＝．３７９。プレグネノロン（ＰＲＥＧ）１１．２ｍｇ／ｍＬ薬物用量とビヒクルとの間の多重比較による事後検定であるダネット両側検定は、Ｍ＝１０１．５１およびＳＥ＝３７．４２、ｐ＝０．０３１を示した。ＰＲＥＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬとビヒクルとの差をさらに分析するために、異なる時点で一元配置ＡＮＯＶＡを実行した。下の表２に示すように、処理後４０、５０、６０、７０、８０、９０分でＰＲＥＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬとビヒクルとの間に有意差が認められた。
【表２】
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【００９６】
さらなる事後ダネット両側検定は、下の表３に示すように、処理後４０、５０、６０、７０、８０、９０分でＰＲＥＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬとビヒクルとの間に有意差を示した。
【表３】
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【００９７】
したがって、図３Ｃに示すように、ＰＥＲＧ  １１．２ｍｇ／ｍＬは、扁桃体におけるアセチルコリン放出の増加を誘発した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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