(57)【要約】【課題】がん治療のためのＣＣＬ２１およびチェックポイント阻害剤に関する。【解決手段】本開示は、一般に、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせてヒトＣＣＬ２１遺伝子を含む有効量の樹状細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを治療するための方法に関する。一態様では、治療は、高い変異量を有する腫瘍がある患者に適している。【選択図】図１Ａ
2021523237.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において、高い変異量を有するがんまたは充実性腫瘍を治療する方法であって、
ａ．前記対象に、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせを投与することと、
ｂ．前記対象に免疫チェックポイント阻害剤を投与することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＣＴＬＡ−４受容体阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ１−Ｌ２阻害剤、４−ｌＢＢ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＴＩＭ−３阻害剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗体、任意選択的にモノクローナル抗体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４阻害剤、任意選択的にイピリムマブまたはトレミリムマブである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ランブロリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、およびＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ２２４、ＡＵＮＰ１２、ＢＧＢ１０８、ＭＣＬＡ１３４、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲＯＯ１、ＲＥＧＮ２８１０、ＳＨＲ１２１０、ＳＴＩＡｌ  ｌＯＸ、ＳＴＩＡｌ  ｌ  ｌＯ、およびＴＳＲ０４２からなる群から選択されるＰＤ１阻害剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＡＬＮ−ＰＤＬ、ＢＧＢＡ３１７、ＫＤ０３３、ＫＹ１００３、ＳＴＩＡ１００Ｘ、ＳＴＩＡ１０１０、ＳＴＩＡ１０１１、ＳＴＩＡ１０１２およびＳＴＩＡ１０１４からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１阻害剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＳＬＣポリペプチドが、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ベクターに挿入され、前記ベクターが、前記対象に投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ベクターが、アデノウイルスベクターである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アデノウイルスベクターが、複製欠損アデノウイルスベクターである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含む細胞が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＡＰＣが、樹状細胞である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記樹状細胞が、前記対象に対し自己由来である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含む少なくともまたは約１ｘ１０６細胞が、前記対象に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞が、２４時間の期間で、ｌｘ１０６細胞あたり少なくともまたは約０．２５ｎｇのＣＣＬ２１を産生する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、充実性腫瘍を含み、前記細胞が前記対象に腫瘍内投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記充実性腫瘍が、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）充実性腫瘍である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、免疫チェックポイント阻害剤の前に前記対象に投与される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、前記免疫チェックポイント阻害剤の約２週間前に前記対象に投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、前記対象に複数回投与される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、１月に１回前記対象に投与される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記対象に複数回投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、２週間に１回前記対象に投与される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
対象において、がんまたは充実性腫瘍を治療する方法であって、
ａ．前記対象の前記腫瘍において高い変異量の存在を識別するステップと、
ｂ．高い変異量の腫瘍を有する前記対象に、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせを投与するステップと、
ｃ．前記対象に免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップと、を含む、方法。
【請求項２５】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＣＴＬＡ−４受容体阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ１−Ｌ２阻害剤、４−ｌＢＢ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＴＩＭ−３阻害剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗体、任意選択的にモノクローナル抗体である、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４阻害剤、任意選択的にイピリムマブまたはトレミリムマブである、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ランブロリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、およびＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ２２４、ＡＵＮＰ１２、ＢＧＢ１０８、ＭＣＬＡ１３４、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲＯＯ１、ＲＥＧＮ２８１０、ＳＨＲ１２１０、ＳＴＩＡｌ  １ＯＸ、ＳＴＩＡｌ  １Ｏ、およびＴＳＲ０４２からなる群から選択されるＰＤ１阻害剤である、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＡＬＮ−ＰＤＬ、ＢＧＢＡ３１７、ＫＤ０３３、ＫＹ１００３、ＳＴＩＡ１００Ｘ、ＳＴＩＡ１０１０、ＳＴＩＡ１０１１、ＳＴＩＡ１０１２およびＳＴＩＡ１０１４からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１阻害剤である、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＳＬＣポリペプチドが、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ベクターに挿入され、前記ベクターが前記対象に投与される、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ベクターが、アデノウイルスベクターである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記アデノウイルスベクターが、複製欠損アデノウイルスベクターである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含む細胞が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）である、請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＡＰＣが、樹状細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記樹状細胞が、対象に対し自己由来である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＳＬＣポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含む少なくともまたは約１×１０６細胞が、前記対象に投与される、請求項２４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞が、２４時間の期間で、１ｘ１０６細胞あたり少なくともまたは約０．２５ｎｇのＣＣＬ２１を産生する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象が充実性腫瘍を含み、前記細胞が前記対象に腫瘍内投与される、請求項２４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記充実性腫瘍が非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）充実性腫瘍である、請求項２４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、免疫チェックポイント阻害剤の前に前記対象に投与される、請求項２４〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、前記免疫チェックポイント阻害剤の約２週間前に前記対象に投与される、請求項２４〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、前記対象に複数回投与される、請求項２４〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、月１回前記対象に投与される、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
前記免疫チェックポイント阻害剤が前記対象に複数回投与される、請求項２４〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記免疫チェックポイント阻害剤が２週間に１回前記対象に投与される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記高い変異量が前記腫瘍の生検によって判定される、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項４８】
腫瘍関連新生抗原が判定される、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項４９】
併用治療の効果の後、前記腫瘍の新生抗原の状況を解明する、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項５０】
前記腫瘍が、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３（ＫＰ）またはＳＴＫ１１／ＬＫＢ１、またはこれらの任意の組み合わせから選択される変異を含む、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項５１】
前記腫瘍が、腫瘍内異種性を有する、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項５２】
前記腫瘍変異量が、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、およびＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）Ｈｅｍｅから選択される診断アッセイによって判定される、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項５３】
前記腫瘍が、上皮成長因子受容体または未分化リンパ腫キナーゼ遺伝子（ＡＬＫ）融合物において活性化変異を有しない、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項５４】
治療前、治療中、および治療後の体細胞変異量および腫瘍関連新生抗原を使用して、治療を開始、処方、および監視する、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項５５】
それを必要とする対象において、がんを治療するための方法、または高変異量がんの再発を低減するための方法であって、ａ）０、２１、および４２日目に、ベクター−ＣＣＬ２１（ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物を含む樹状細胞と、ｂ）０日目から開始して３週間ごとに有効量の抗ＰＤ−１抗体と、を含む有効量の併用治療を投与することを含み、任意選択的に、前記ベクターが、アデノウイルスベクター（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）である、方法。
【請求項５６】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、およびランブロリズマブからなる群から選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗ＰＤ−１抗体が、３週間ごとに２００ｍｇの用量で投与されるペンブロリズマブである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣが、５ｘ１０６細胞／注射〜３ｘ１０７細胞／注射の用量で投与される、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ用量が、５×１０６、１×１０７、または３×１０７細胞／注射である、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記肺がんが、細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現するステージＩＶ  ＮＳＣＬＣである、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記患者が、ＣＴ誘導介入または気管支鏡検査によってアクセス可能なＮＳＣＬＣ腫瘍を有し、前記患者が、ＮＳＣＬＣの全身治療を受けていない、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣが、ＣＴ誘導または気管支鏡によるＩＴ注射を介して投与される、請求項５５〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗ＰＤ−１抗体が、静脈内投与される、請求項５５〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣが、腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤を増加させる、請求項５５〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＣＤ８＋細胞が、併用治療を受けていない対象と比較して、前記治療対象では２倍以上増加する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣが、腫瘍のＰＤ−Ｌ１発現を増加させる、請求項５５〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記樹状細胞が、患者からの自己細胞である、請求項５５〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＣＣＬ２１が、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む、請求項５５〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記アデノウイルスが、複製欠損アデノウイルスベクターである、請求項５５〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記腫瘍体積が、２０％以上減少する、請求項５５〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記対象の腫瘍サイズが、約２５〜５０％、約４０〜７０％、または約５０〜９０％以上減少する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記治療が、転移率を低下させ、および／または前記患者の腫瘍の進行を遅らせる、請求項５５〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗ＰＤ−１抗体が、０、２１および４２日目に、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ治療後１時間以内に投与される、請求項５５〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記併用治療が、前記対象において、腫瘍抗原特異的なＣＤ８およびＣＤ４細胞の数を増加させる、請求項５５〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記がんの高い変異量が、腫瘍の生検によって判定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項７６】
腫瘍関連新生抗原が、判定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項７７】
前記併用治療の効果の後、がんの新生抗原の状況を解明する、請求項５５に記載の方法。
【請求項７８】
前記がんが、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３（ＫＰ）またはＳＴＫ１１／ＬＫＢ１、またはこれらの任意の組み合わせから選択される変異を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項７９】
前記がんが、腫瘍内異種性を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記がんの変異量が、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、およびＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）Ｈｅｍｅから選択される診断アッセイによって判定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項８１】
前記がんが、上皮成長因子受容体または未分化リンパ腫キナーゼ遺伝子（ＡＬＫ）融合物に活性化変異を有しない、請求項５５に記載の方法。
【請求項８２】
治療前、治療中、および治療後の前記体細胞変異量および腫瘍関連新生抗原を使用して、治療を判定、開始、処方、または監視する、請求項５５に記載の方法。
【請求項８３】
それを必要とする対象において、がんを治療するための方法、またはがんの再発を低減するための方法であって、ａ）０、２１、および４２日目に、ベクター−ＣＣＬ２１（ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物を含む樹状細胞と、ｂ）０日目から開始して３週間ごとに有効量の抗ＰＤ−１抗体と、を含む有効量の併用治療を投与することを含み、任意選択的に、前記ベクターが、アデノウイルスベクター（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）である、方法。
【請求項８４】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、およびランブロリズマブからなる群から選択される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記抗ＰＤ−１抗体が、３週間ごとに２００ｍｇの用量で投与されるペンブロリズマブである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣが、５×１０６細胞／注射〜３×１０７細胞／注射の用量で投与される、請求項８３〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８７】
前記Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの用量が、５ｘ１０６、１×１０７、または３×１０７細胞／注射である、請求項８３〜８６のいずれかに記載の方法。
【請求項８８】
前記肺がんが、細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現するステージＩＶのＮＳＣＬＣである、請求項８３〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記患者が、ＣＴ誘導介入または気管支鏡検査によってアクセス可能なＮＳＣＬＣ腫瘍を有し、前記患者が、ＮＳＣＬＣの全身治療を受けていない、請求項８３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣが、ＣＴ誘導または気管支鏡によるＩＴ注射を介して投与される、請求項８３〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記抗ＰＤ−１抗体が、静脈内投与される、請求項８３〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣが、ＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍への浸潤を増加させる、請求項８３〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＣＤ８＋細胞が、併用治療を受けていない対象と比較して、前記治療対象では２倍以上増加する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣが、腫瘍のＰＤ−Ｌ１発現を増加させる、請求項８３〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記樹状細胞が、患者からの自己細胞である、請求項８３〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＣＣＬ２１が、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む、請求項８４〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記アデノウイルスが、複製欠損アデノウイルスベクターである、請求項８３〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記腫瘍体積が、２０％以上減少する、請求項８３〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記対象の腫瘍サイズが、約２５〜５０％、約４０〜７０％、または約５０〜９０％以上減少する、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記治療が、転移率を低下させ、および／または前記患者の腫瘍の進行を遅らせる、請求項８３〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗ＰＤ−１抗体が、０、２１および４２日目に、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ治療後１時間以内に投与される、請求項８３〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記併用治療が、前記対象において、腫瘍抗原特異的なＣＤ８およびＣＤ４細胞の数を増加させる、請求項８３〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府支援声明
本発明は、米国国立衛生研究所により付与された助成金番号ＣＡ１０５７０５の下で、政府の支援を受けた。政府は本発明に特定の権利を有する。
【０００２】
本開示は、一般に、対象において、がんの増殖および他の症状を低減するために、ＣＣＬ２１を発現する自己抗原提示細胞を、抗ＰＤ−１抗体などのチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することを含む、がんを治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
肺がんは、米国および世界の両方で、がんによる死亡の最も一般的な原因である（１、２）。米国単独でも、毎年約２００，０００人が肺がんと診断される。肺がん患者のほぼ８５％は、診断から５年以内にこの病気で死亡するであろう（３）。高い致死率は、２つの最重要課題に起因する。第一に、患者は進行期の疾患と診断されることが多い。第二に、初期の疾患と診断され治療された患者の間でさえ、再発は一般的である。その結果、肺がんと診断された患者の大多数は、経過のある時点で転移性疾患を患うことになる。
【０００４】
肺がん患者の８５％超が、肺がん組織（腺がん、扁平上皮がん、大細胞がん）のグループである非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を患っている（４）。転移性ＮＳＣＬＣは予後不良であり、大多数の患者は化学療法に対する客観的縮小効果を達成できていない（１３）。化学療法はまた、好ましくない副作用プロファイルを伴うことが多い。アメリカがん協会の統計によると、転移性ＮＳＣＬＣの５年生存率は約１％であることが示される。腫瘍がＥＧＦＲまたはＡＬＫ融合の活性化変異を抱える患者の場合、選択肢は過去１０年間で改善されたが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸の阻害剤が利用可能になる前は、これらの分子異常がない患者の８５％でほとんど改善が見られなかった。
【０００５】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸の阻害は、一部のＮＳＣＬＣ患者で非常に効果的なアプローチであることが証明されているが、大多数の患者は現在の免疫治療アプローチの利益を受けていない。ＰＤ−１阻害剤の初期評価には、標準的な白金ベースの化学療法を以前に受けた患者が含まれていた（１２、１４−１８）。ＰＤ−１阻害剤であるニボルマブおよびペンブロリズマブ、ならびにＰＤ−Ｌ１阻害剤であるアテゾリズマブを含むさまざまな薬剤の治験では、患者の約２０％で客観的縮小効果が示されている。持続的な反応がよく見られる。
【０００６】
ＫＥＹＮＯＴＥ−０２４試験では、以前に化学療法を受けておらず、腫瘍細胞の少なくとも半分にＰＤ−Ｌ１染色が見られた転移性ＮＳＣＬＣ患者は、ペンブロリズマブまたは白金ベースの化学療法に無作為に割り付けられた（５）。患者のほぼ半数は、ペンブロリズマブで客観的縮小効果を達成し、ペンブロリズマブは、化学療法よりも長い無増悪生存期間および全生存期間をもたらした。
【０００７】
細胞の少なくとも半分でＰＤ−Ｌ１発現のある患者に限定されたＫＥＹＮＯＴＥ−０２４試験とは対照的に、ＰＤ−１阻害剤であるニボルマブであるＣｈｅｃｋＭａｔｅ  ０２６を用いた同様のデザインの治験では、ＰＤ−Ｌ１の染色レベルが低い患者が含まれていた（一次分析は、腫瘍細胞の少なくとも５％で染色のある患者で行われた）（１９）。ＣｈｅｃｋＭａｔｅ  ０２６試験では、無増悪生存期間の主要評価項目に利点は示されず、中央値およびハザード比の両方とも化学療法に数値的に有利であった。したがって、腫瘍細胞の少なくとも半分でＰＤ−Ｌ１が発現していない患者では、転移性ＮＳＣＬＣの初期治療のため免疫治療アプローチの必要性が依然としてある。これには、転移性疾患患者の大多数が含まれる。
【０００８】
ＩＶ期のＮＳＣＬＣであり、ＰＤ−Ｌ１染色が５０％未満である患者は、現在白金ベースの化学療法を受けている。化学療法の欠点はよく知られている。白金ベースの化学療法単独は別として、承認された唯一の治療選択肢は、この化学療法、すなわちカルボプラチンおよびペメトレキセドとペンブロリズマブとの併用である。非扁平ＮＳＣＬＣ患者でのペメトレキセドの組織特異的承認に基づいて、この併用は非扁平疾患でのみ承認される。この迅速承認には、全面的承認のために大規模な無作為化試験を完了する必要がある。
【０００９】
以前は、多くのがん専門医がペンブロリズマブと化学療法の併用を受け入れていなかった。この併用は、いずれかの治療単独と比較して、患者が経験する毒性を増加させることが示されている。このアプローチの承認につながった治験には１２３人の患者しか含まれず、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤による化学療法を評価する他の治験と比較して良好な結果が得られた（２０）。さらに、この治験は生存率を確実に評価するようには設計されていなかったため、付随する毒性に照らして、この併用の価値に関して未解決の問題が依然としてある。最近、ヨーロッパでこの併用の承認申請が取り下げられた。しかし、最近の治験では、ＰＤ−Ｌ１の発現に関係なく、進行性または転移性のＮＳＣＬＣ患者において、第１選択のペンブロリズマブと化学療法（ペメトレキセドとシスプラチンまたはカルボプラチン）は、２剤併用化学療法を受ける患者と比較して、追跡期間中央値（１０．５月）で、死亡リスクが５１％低減したことを示す第ＩＩＩ相試験について報告された。（Ｇａｎｄｈｉ  ｅｔ  ａｌ：Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−ＣｅｌｌＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１８  Ｍａｙ  ３１；３７８（２２）：２０７８−２０９２）。
【００１０】
現在、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と、免疫応答を増大するように設計された第２選択薬剤とを組み合わせるなど、ＮＳＣＬＣ用に承認された免疫治療の併用はない。最も関心を集めた組み合わせは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤とＣＴＬＡ−４阻害剤との組み合わせである。ニボルマブ（抗ＰＤ−１）とイピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）は、各薬剤が個別に有効である疾患である黒色腫において、このタイプの承認された組み合わせである（２１）。ＣｈｅｃｋＭａｔｅ  ２２７第ＩＩＩ相臨床試験の結果は、進行性ＮＳＣＬＣ（扁平上皮および非扁平上皮）および腫瘍変異量が高い患者は、腫瘍のＰＤ−Ｌ１発現を問わず、化学療法と比較して、第一選択の併用（ニボルマブとイピリムマブ）で治療した場合に無増悪生存期間（ＰＦＳ）が増加したことを示している（Ｈｅｌｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ：Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｈｉｇｈ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｕｒｄｅｎ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１８  Ｍａｙ  ３１；３７８（２２）：２０９３−２１０４）。
【００１１】
別の無作為化試験であるＭＹＳＴＩＣ治験は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤のデュルバルマブおよびＣＴＬＡ−４阻害剤のトレメリムマブの治験であり、報道発表では、併用治療による無増悪生存期間は、細胞の少なくとも４分の１にＰＤ−Ｌ１染色がある患者において、白金ベースの化学療法と変わらないと述べている。
【００１２】
患者の観点から、現在の転移性ＮＳＣＬＣの治療は明らかに次善である（２３）。細胞毒性化学療法は、転移性ＮＳＣＬＣの患者を治療する能力がなく、有意な毒性を誘発する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸の阻害剤では、明らかに持続的な反応が見られた。しかし、この試験の一部として評価されている患者集団の中で、客観的縮小効果を達成すると予測される患者は１５％に過ぎず、持続的な反応はさらに少ないと予想される。特に、免疫治療アプローチの一般的に好ましい副作用プロファイルに照らして、そのような結果が現在ありそうもない状況での持続的な臨床的利点の可能性は、試験に適格である患者集団にとって、このアプローチを非常に魅力的なものにする。
【００１３】
ＷＯ２０１６／０７３７５９として公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５９２９７は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【００１４】
本開示は、対象において、がんを治療し腫瘍の進行を低減するための改善された方法であって、ＣＣＬ２１とも呼ばれる二次リンパ組織サイトカイン（ＳＬＣ）ポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤と組み合わせてヒトＣＣＬ２１遺伝子を発現する細胞を投与することを含む方法を提供する。投与の併用は、特に腫瘍細胞の５０％未満がＰＤ−Ｌ１タンパク質を発現する腫瘍集団において、チェックポイント阻害剤の単独投与の有効性を改善することを企図する。
【００１５】
様々な実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において、がんを治療するための方法、またはがんの再発を低減するための方法であって、ａ）０、２１、および４２日目に、ＳＬＣ（ＣＣＬ２１）ポリペプチド、またはベクター−ＣＣＬ２１（ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物を含む樹状細胞と、ｂ）０日目から開始して３週間ごとに有効量の抗ＰＤ−１抗体と、を含む有効量の併用治療を投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
様々な実施形態において、ベクターは、ウイルスベクター、リポソーム、または他の送達ベクターである。様々な実施形態において、ウイルスベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、改変アンカラウイルス、シンドビスウイルス、ヘルペスウイルス、ＣＭＶ、または小胞性口内炎ウイルスである。様々な実施形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１７】
様々な実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において、がんを治療するための方法、またはがんの再発を低減するための方法であって、ａ）０、２１、および４２日目に、アデノウイルス−ＣＣＬ２１（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物を含む樹状細胞と、ｂ）０日目から開始して３週間ごとに有効量の抗ＰＤ−１抗体と、を含む有効量の併用治療を投与することを含む方法を提供する。
【００１８】
様々な実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において、肺がんを治療するための方法、または肺がんの再発を低減するための方法であって、ａ）０、２１、および４２日目に、アデノウイルス−ＣＣＬ２１（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物を含む樹状細胞と、ｂ）０日目から開始して３週間ごとに有効量の抗ＰＤ−１抗体と、を含む有効量の併用治療を投与することを含む方法を提供する。様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、およびランブロリズマブからなる群から選択される。様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、３週間ごとに２００ｍｇの用量で投与されるペンブロリズマブである。
【００１９】
様々な実施形態において、５×１０６細胞／注射〜３×１０７細胞／注射の用量で投与されたＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ。いくつかの実施形態において、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ用量は、５×１０６、１×１０７、または３×１０７細胞／注射である。
【００２０】
様々な実施形態では、がんは、充実性腫瘍である。本方法で企図される例示的ながんは、発明を実施するための形態において、より詳しく記載されている。
【００２１】
様々な実施形態において、がんは、腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する。様々な実施形態において、がんは、腫瘍細胞の５０％以上でＰＤ−Ｌ１を発現する。一実施形態では、腫瘍細胞でのＰＤ−Ｌ１の発現は、細胞の免疫組織化学的染色によって評価される。様々な実施形態において、対象は、第１選択のペンブロリズマブと化学療法を受けているか、あるいは、対象は、この併用による初期治療に失敗している。
【００２２】
いくつかの実施形態では、がんは、肺がんである。様々な実施形態において、肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。様々な実施形態において、肺がんは、細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現するステージＩＶのＮＳＣＬＣである。
【００２３】
様々な実施形態において、ＮＳＣＬＣまたは他の充実性腫瘍は、扁平上皮細胞または非扁平上皮細胞の腫瘍である。様々な実施形態において、対象は、高い腫瘍変異量を有する。腫瘍の変異量は、例えば、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、またはＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）ＨｅｍｅなどのＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（マサチューセッツ州ケンブリッジ）の診断アッセイによって監視することができる。
【００２４】
様々な実施形態において、患者は、ＣＴ誘導介入または気管支鏡検査によってアクセス可能なＮＳＣＬＣ腫瘍を有し、患者は、ＮＳＣＬＣの全身治療を受けていない。様々な実施形態において、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣは、ＣＴ誘導または気管支鏡によるＩＴ注射を介して投与される。
【００２５】
様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は静脈内投与される。
【００２６】
様々な実施形態において、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣは、ＣＤ８  Ｔ細胞の腫瘍への浸潤を増加させる。様々な実施形態において、ＣＤ８細胞は、併用治療を受けていない対象と比較して、治療対象では２倍以上増加する。
【００２７】
様々な実施形態において、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣは、腫瘍のＰＤ−Ｌ１発現を増加させる。
【００２８】
様々な実施形態において、樹状細胞は、患者からの自己細胞である。
【００２９】
様々な実施形態において、ＣＣＬ２１は、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む。
【００３０】
様々な実施形態において、アデノウイルスは、複製欠損アデノウイルスベクターである。
【００３１】
様々な実施形態において、腫瘍体積は、２０％以上減少する。様々な実施形態において、対象の腫瘍サイズは、約２５〜５０％、約４０〜７０％、または約５０〜９０％以上減少する。様々な実施形態において、治療は、転移率を低下させ、および／または患者の腫瘍の進行を遅らせる。
【００３２】
様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、０、２１、および４２日目に、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ治療後１時間以内に投与される。
【００３３】
様々な実施形態において、併用治療は、対象において、腫瘍抗原特異的なＣＤ８およびＣＤ４細胞の数を増加させる。
【００３４】
様々な実施形態において、対象において、高い変異量を有するがんまたは充実性腫瘍を治療する方法であって、ａ．（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせを対象に投与すること、およびｂ．免疫チェックポイント阻害剤を対象に投与すること、を含む方法が提供される。
【００３５】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＣＴＬＡ−４受容体阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ１−Ｌ２阻害剤、４−ｌＢＢ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＴＩＭ−３阻害剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３６】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、任意選択的に、モノクローナル抗体である。
【００３７】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、任意選択的に、イピリムマブまたはトレミリムマブである。
【００３８】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ランブロリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、およびＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ２２４、ＡＵＮＰ１２、ＢＧＢ１０８、ＭＣＬＡ１３４、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲＯＯ１、ＲＥＧＮ２８１０、ＳＨＲ１２１０、ＳＴＩＡｌ  １ＯＸ、ＳＴＩＡｌ  １Ｏ、およびＴＳＲ０４２からなる群から選択されるＰＤ１阻害剤である。
【００３９】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＡＬＮ−ＰＤＬ、ＢＧＢＡ３１７、ＫＤ０３３、ＫＹ１００３、ＳＴＩＡ１００Ｘ、ＳＴＩＡ１０１０、ＳＴＩＡ１０１１、ＳＴＩＡ１０１２およびＳＴＩＡ１０１４からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１阻害剤である。
【００４０】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドは、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ベクターに挿入され、ベクターは、対象に投与される。その様々な実施形態において、ベクターは、アデノウイルスベクターである。その様々な実施形態において、アデノウイルスベクターは、複製欠損アデノウイルスベクターである。
【００４２】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。その様々な実施形態において、ＡＰＣは樹状細胞である。その様々な実施形態において、樹状細胞は、対象に対し自己由来である。
【００４３】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む少なくともまたは約１×１０６細胞が対象に投与される。その様々な実施形態において、細胞は、２４時間の期間において、１ｘ１０６細胞あたり少なくともまたは約０．２５ｎｇのＣＣＬ２１を産生する。
【００４４】
その様々な実施形態において、対象は充実性腫瘍を含み、細胞は対象に腫瘍内投与される。
【００４５】
その様々な実施形態において、充実性腫瘍は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）充実性腫瘍である。
【００４６】
その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、免疫チェックポイント阻害剤の前に対象に投与される。
【００４７】
その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、免疫チェックポイント阻害剤の約２週間前に対象に投与される。その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、対象に複数回投与される。
【００４８】
その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、月に１回対象に投与される。その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、対象に複数回投与される。その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、２週間に１回対象に投与される。
【００４９】
様々な実施形態において、対象において、がんまたは充実性腫瘍を治療する方法が提供され、該方法は、ａ。対象の腫瘍において高い変異量の存在を識別するステップ、ｂ．高い変異量の腫瘍を有する対象に、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせを投与するステップ、およびｃ．対象に免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップを含む。
【００５０】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＣＴＬＡ−４受容体阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＰＤ１−Ｌ２阻害剤、４−ｌＢＢ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＴＩＭ−３阻害剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００５１】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、任意選択的にモノクローナル抗体である。
【００５２】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、任意選択的にイピリムマブまたはトレミリムマブである。
【００５３】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ランブロリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、およびＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ２２４、ＡＵＮＰ１２、ＢＧＢ１０８、ＭＣＬＡ１３４、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲＯＯ１、ＲＥＧＮ２８１０、ＳＨＲ１２１０、ＳＴＩＡｌ  １ＯＸ、ＳＴＩＡｌ  １Ｏ、およびＴＳＲ０４２からなる群から選択されるＰＤ１阻害剤である。
【００５４】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＡＬＮ−ＰＤＬ、ＢＧＢＡ３１７、ＫＤ０３３、ＫＹ１００３、ＳＴＩＡ１００Ｘ、ＳＴＩＡ１０１０、ＳＴＩＡ１０１１、ＳＴＩＡ１０１２およびＳＴＩＡ１０１４からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１阻害剤である。
【００５５】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドは、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む。
【００５６】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ベクターに挿入され、ベクターは、対象に投与される。その様々な実施形態において、ベクターは、アデノウイルスベクターである。その様々な実施形態において、アデノウイルスベクターは、複製欠損アデノウイルスベクターである。
【００５７】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。その様々な実施形態において、ＡＰＣは樹状細胞である。その様々な実施形態において、樹状細胞は、対象に対し自己由来である。
【００５８】
その様々な実施形態において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む少なくともまたは約１×１０６細胞が対象に投与される。その様々な実施形態において、細胞は、２４時間の期間において、１ｘ１０６細胞あたり少なくともまたは約０．２５ｎｇのＣＣＬ２１を産生する。
【００５９】
その様々な実施形態において、対象は充実性腫瘍を含み、細胞は対象に腫瘍内投与される。
【００６０】
その様々な実施形態において、充実性腫瘍は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）充実性腫瘍である。
【００６１】
その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、免疫チェックポイント阻害剤の前に対象に投与される。その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、免疫チェックポイント阻害剤の約２週間前に対象に投与される。
【００６２】
その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、対象に複数回投与される。その様々な実施形態において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの任意の組み合わせが、月に１回対象に投与される。
【００６３】
その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、対象に複数回投与される。その様々な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、２週間に１回対象に投与される。
【００６４】
これらの前述の実施形態のいずれかにおいて、高い変異量が腫瘍の生検によって判定される。その様々な実施形態において、腫瘍関連新生抗原が判定される。その様々な実施形態において、併用治療の効果の後に、腫瘍の新生抗原の状況を解明する。
【００６５】
その様々な実施形態において、腫瘍は、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３（ＫＰ）またはＳＴＫ１１／ＬＫＢ１、またはこれらの任意の組み合わせから選択される変異を含む。その様々な実施形態において、腫瘍は腫瘍内異種性を有する。
【００６６】
その様々な実施形態において、腫瘍の変異量は、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、およびＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）Ｈｅｍｅから選択される診断アッセイによって判定される。
【００６７】
その様々な実施形態において、腫瘍は、上皮成長因子受容体または未分化リンパ腫キナーゼ遺伝子（ＡＬＫ）融合物に活性化変異を有しない。
【００６８】
その様々な実施形態において、治療前、治療中、および治療後の体細胞変異量および腫瘍関連新生抗原を使用して、治療を開始、処方、および監視する。
【００６９】
様々な実施形態において、それを必要とする対象において、高変異量がんを治療するための方法、または高変異量がんの再発を低減するための方法が提供され、該方法は、ａ）０、２１、および４２日目でベクター−ＣＣＬ２１（ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物を含む樹状細胞と、ｂ）０日目から開始して３週間ごとに有効量の抗ＰＤ−１抗体と、を含む有効量の併用治療を投与することを含み、任意選択的に、ベクターはアデノウイルスベクター（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）である。
【００７０】
その様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、およびランブロリズマブからなる群から選択される。
【００７１】
その様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、３週間ごとに２００ｍｇの用量で投与されるペンブロリズマブである。
【００７２】
その様々な実施形態において、５×１０６細胞／注射〜３×１０７細胞／注射の用量で投与されたＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ。
【００７３】
その様々な実施形態において、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ用量は、５×１０６、１×１０７、または３×１０７細胞／注射である。
【００７４】
その様々な実施形態において、肺がんは、細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現するステージＩＶのＮＳＣＬＣである。
【００７５】
その様々な実施形態において、患者は、ＣＴ誘導介入または気管支鏡検査によってアクセス可能なＮＳＣＬＣ腫瘍を有し、患者は、ＮＳＣＬＣの全身治療を受けていない。その様々な実施形態において、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣは、ＣＴ誘導または気管支鏡によるＩＴ注射を介して投与される。
【００７６】
その様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は静脈内投与される。
【００７７】
その様々な実施形態において、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍への浸潤を増加させる。
【００７８】
その様々な実施形態において、ＣＤ８＋細胞は、併用治療を受けていない対象と比較して、治療対象では２倍以上増加する。
【００７９】
その様々な実施形態において、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣは、腫瘍のＰＤ−Ｌ１発現を増加させる。
【００８０】
その様々な実施形態において、樹状細胞は、患者からの自己細胞である。
【００８１】
その様々な実施形態において、ＣＣＬ２１は、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含む。
【００８２】
その様々な実施形態において、アデノウイルスは、複製欠損アデノウイルスベクターである。
【００８３】
その様々な実施形態において、腫瘍体積は、２０％以上減少する。その様々な実施形態において、対象の腫瘍サイズは、約２５〜５０％、約４０〜７０％、または約５０〜９０％以上減少する。
【００８４】
その様々な実施形態において、治療は、転移率を低下させ、および／または患者の腫瘍の進行を遅らせる。
【００８５】
その様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、０、２１、および４２日目に、ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣ治療後１時間以内に投与される。
【００８６】
その様々な実施形態において、併用治療は、対象において、腫瘍抗原特異的なＣＤ８およびＣＤ４細胞の数を増加させる。
【００８７】
その様々な実施形態において、がんの高い変異量は、腫瘍の生検によって判定される。
【００８８】
その様々な実施形態において、腫瘍関連新生抗原が判定される。
【００８９】
その様々な実施形態において、併用治療の効果の後に、がんの新生抗原の状況を解明する。
【００９０】
その様々な実施形態において、がんは、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３（ＫＰ）またはＳＴＫ１１／ＬＫＢ１、またはこれらの任意の組み合わせから選択される変異を含む。
【００９１】
その様々な実施形態において、がんは腫瘍内異種性を有する。
【００９２】
その様々な実施形態において、がんの変異量は、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、およびＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）Ｈｅｍｅから選択される診断アッセイによって判定される。
【００９３】
その様々な実施形態において、がんは、上皮成長因子受容体または未分化リンパ腫キナーゼ遺伝子（ＡＬＫ）融合物に活性化変異を有しない。
【００９４】
その様々な実施形態において、治療前、治療中、および治療後の体細胞変異量および腫瘍関連新生抗原を使用して、治療を決定、開始、処方、または監視する。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】図１Ａ〜図１Ｄは、ＮＳＣＬＣのインビボモデルにおける併用治療の効果を示す。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、第Ｉ相試験における投薬および用量漸増を示す概略図である。
【図３】図３は、ペンブロリズマブ毒性の発生におけるプロトコルの概要を示すチャートである。
【図４】図４は、ヒトＣＣＬ２１（配列番号：１）およびマウスＣＣＬ２１（配列番号：２）のアミノ酸配列を示す。
【図５】図５Ａ〜図５Ｄは、低変異量（図５Ａ、図５Ｂ）および高変異量（図５Ｃ、図５Ｄ）の腫瘍における併用治療の有効性を示す。
【００９６】
定義
本明細書で使用される場合、「プログラム細胞死タンパク質１」、すなわち、「ＰＤ−１」は、２つのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２への結合によって媒介される免疫チェックポイント遮断に関与する細胞表面受容体を指す。ＰＤ−１のリガンドへの結合は、Ｔ細胞の増殖、サイトカイン産生、および細胞毒性の活性を低減させることが示されている。
【００９７】
本発明の方法で有用なポリペプチドは、天然に存在するタンパク質ならびにその変異体および改変された形態の両方を包含する。「ＳＬＣポリペプチドまたはタンパク質」とは、二次リンパ組織ケモカイン（ＳＬＣ）を意味する。二次リンパ組織サイトカイン（ＳＬＣ）ポリペプチドは、ＣＣＬ２１とも呼ばれる。ＳＬＣには、天然に存在する哺乳動物ＳＬＣ、ならびにその変異体および断片が含まれる。好ましくは、ＳＬＣは、ヒトまたはマウス起源のものである。最も好ましくは、ＳＬＣは、ヒトＳＬＣである。ヒトＳＬＣは、クローン化および配列決定されている（例えば、Ｎａｇｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：１９５１８を参照のこと。この内容は参照により組み込まれる）。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「ＣＣＬ２１」、「ＣＣＬ２１遺伝子」または「ＣＣＬ２１ポリペプチドまたはタンパク質」とは、天然に存在する哺乳動物ＣＣＬ２１、ならびにそれらの変異体および断片を指す。好ましくは、ＣＣＬ２１は、ヒトである。その結果、ヒトＣＣＬ２１のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列は、当技術分野で知られている（例えば、受託番号ＢＡＡ２１８１７およびＡＢ００２４０９を参照）。本発明のＣＣＬ２１剤は、天然のＣＣＬ２１ポリペプチド、天然のＣＣＬ２１核酸配列、ポリペプチドおよび核酸変異体、ならびにＣＣＬ２１の発現、活性および受容体結合の操作を通じて免疫応答を遮断することができる他の成分を含む。
【００９９】
マウスＳＬＣも、クローン化および配列決定されている（たとえば、受託番号ＮＰ＿０３５４６５およびＮＭ＿０１１３３５を参照）。Ｈｒｏｍａｓ  ｅｌ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １．５９：２５５４、Ｈｅｄｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５９：１５８９、およびａｎｄ  Ｔａｎａｂｅ  ｅｌ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １．５９：５６７１。これらの内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１００】
本明細書に開示される方法で使用するためのＳＬＣポリペプチドは、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、類似体、および誘導体であり得る。「変異体」という用語は、具体的に記載されたタンパク質の対応する位置に１つまたは複数の異なるアミノ酸残基を有するタンパク質など、記載されたタイプまたは標準からの変異を示す分子を指す。類似体は変異タンパク質の一例である。本明細書で使用される場合、ＳＬＣ関連遺伝子およびＳＬＣ関連タンパク質は、本明細書に具体的に記載されるＳＬＣ遺伝子およびタンパク質、ならびに前述の構造的および／または機能的に類似の変異体または類似体を含む。ＳＬＣペプチド類似体は、一般に、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のアミノ酸相同性を共有する（ＢＬＡＳＴ基準を使用する）。ＳＬＣヌクレオチド類似体は、好ましくは、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上の核酸相同性を共有する（ＢＬＡＳＴ基準を使用する）。しかし、いくつかの実施形態において、当業者によって理解されるように、種特異的コドン選好および／または特定の標的集団に合わせた最適なペプチドエピトープを考慮して好ましい残基を選択するためには、より低い相同性が好ましい。
【０１０１】
「類似体」とは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／０７３７５９に記載されているようないずれかの類似体を意図する。併用治療の調製、投与、および他の態様に関する指針は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／０７３７５９として公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５９２９７に見出すことができる。
【０１０２】
ヒトおよびマウスのＳＬＣポリペプチド配列を以下に示す。
ヒトＳＬＣ  ＭＡＱＳＬＡＬＳＬＬＩＬＶＬＡＦＧＩＰＲＴＱＧＳＤＧＧＡＱＤＣＣＬＫＹＳＱＲＫＩＰＡＫＶＶＲＳＹＲＫＱＥＰＳＬＧＣＳ  ＩＰＡＩＬＦＬＰＲＫＲＳＱＡＥＬＣＡＤＰＫＥＬＷＶＱＱＬＭＱＨＬＤＫＴＰＳＰＱＫＰＡＱＧＣＲＫＤＲＧＡＳＫＴＧＫ  ＫＧＫＧＳ  ＫＧＣＫＲＴＥＲＳ  ＱＴＰＫＧＰ（配列番号：１）
マウスＳＬＣ
ＭＡＱＭＭＴＬＳＬＬＳＬＤＬＡＬＣＩＰＷＴＱＧＳＤＧＧＧＱＤＣＣＬＫＹＳＱＫＫＩＰＹＳＩＶＲＧＹＲＫＱＥＰＳ  ＬＧＣＰＩＰＡＩＬＦＬＰＲＫＨＳＫＰＥＬＣＡＮＰＥＥＧＷＶＱＮＬＭＲＲＬＤＱＰＰＡＰＧＫＱＳＰＧＣＲＫＮＲＧＴＳＫ  ＳＧＫＫＧＫＧＳＫＧＣＫＲＴＥＱＴＱＰＳＲＧ（配列番号：２）
【０１０３】
「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）は、Ｔ細胞を活性化することができる細胞であり、単球／マクロファージ、Ｂ細胞、および樹状細胞（ＤＣ）を含むが、これらに限定されない。「樹状細胞」または「ＤＣ」という用語は、リンパ組織または非リンパ組織に見られる形態学的に類似した細胞型の多様な集団の任意のメンバーを指す。これらの細胞は、その独特の形態、高レベルの表面ＭＨＣクラスＩＩ発現を特徴とする。ＤＣは、多くの組織源から単離できる。ＤＣは、ＭＨＣ拘束性Ｔ細胞を感作する能力が高く、原位置でＴ細胞に抗原を提示するのに非常に効果的である。抗原は、Ｔ細胞の発達および寛容の間に発現する自己抗原、および通常の免疫過程の間に存在する外来抗原であり得る。
【０１０４】
「治療上有効な量」という用語は、本明細書では、治療される疾患の症状または徴候を改善または軽減するのに有効である、本開示の標的特異的組成物の量を示すために使用される。
【０１０５】
本明細書の方法に関して使用される「治療する」、「治療される」、「治療する」および「治療」という用語は、臨床症状、事象の発現もしくは進行、疾患または状態を、一時的または恒久的に、部分的または完全に、排除、低減、抑制または改善することを指す。このような治療は、有用であるために絶対的である必要はない。
【０１０６】
「がん」、「がん性」、または「悪性」という用語は、通常、無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を指す、または記載する。本明細書で企図される例示的ながんは、発明を実施するための形態において、より詳しく記載されている。治療または治療の目的での「哺乳動物」とは、ヒト、家畜および家畜、ならびに動物、変種、または犬、馬、猫、牛などのペット動物を含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０１０７】
「がんの治療」は、以下の効果のうちの１つまたは複数を指す。（１）（ｉ）減速、および（ｉｉ）完全な増殖停止を含む腫瘍増殖のある程度の阻害、（２）腫瘍細胞数の減少、（３）腫瘍サイズの維持、（４）腫瘍サイズの縮小、（５）末梢器官への腫瘍細胞浸潤の（ｉ）減少、（ｉｉ）減速、または（ｉｉｉ）完全阻止を含む阻害、（６）転移の（ｉ）減少、（ｉｉ）減速、または（ｉｉｉ）完全阻止を含む阻害、（７）抗腫瘍免疫反応の増強。これにより、（ｉ）腫瘍サイズの維持、（ｉｉ）腫瘍サイズの縮小、（ｉｉｉ）腫瘍増殖の遅延、（ｉｖ）浸潤の減少、遅延、または防止、および／または（８）障害に関連する１つまたは複数の症状の重症度または数のある程度の軽減、に至る場合がある。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、ヒトおよび哺乳動物を含む対象動物への投与に適した組成物を指す。医薬組成物は、薬理学的に有効な量の本発明のウイルス組成物または抗原組成物を含み、薬学的に許容される担体も含む。医薬組成物は、有効成分、および医薬的に許容される担体を構成する不活性成分、ならびに任意の２つ以上の成分の組み合わせ、複合体形成または凝集に直接的または間接的に由来する任意の生成物を含む組成物を包含する。したがって、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物または抱合体と薬学的に許容される担体とを混合することによって作製される任意の組成物を包含する。
【発明を実施するための形態】
【０１０９】
本開示は、ＣＣＬ２１遺伝子を含む自己細胞と、抗ＰＤ−１抗体などのチェックポイント阻害剤との組み合わせを使用して、がん、特に、転移性非小細胞肺がんを治療するための方法を提供する。一態様では、患者は、高い変異量の腫瘍を有する。このような腫瘍は、本明細書に記載の組み合わせによる治療に特に適している。本発明の組成物による治療の効果は、いくつかの方法で観察または監視することができ、例えば、効果は、サイトカインプロファイルの変化の評価、腫瘍増殖の阻害または腫瘍殺傷の評価によって観察することができ、例えば、いくつかの非限定的な例を挙げれば、腫瘍サイズの減少および／または腫瘍、および／または腫瘍増殖に関連する症状の重症度の減少、生存率の増加を観察することによる。
【０１１０】
一態様では、本明細書で説明する治験を実施する際の臨床的要因に関する組入れ基準および除外基準は、この集団の大部分を含むように設計されている。以下に説明するように、転移性ＮＳＣＬＣと診断された多くの患者は、患者の約７０％が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１染色を有するという点で、提案された試験の潜在的な候補である（５）。
【０１１１】
治験の理論的根拠。ＮＳＣＬＣ患者の大多数は、分子マーカーの観点から提案された治験にも適格である。腫瘍が上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）または未分化リンパ腫キナーゼ遺伝子（ＡＬＫ）融合物の活性化変異を示す患者は、分子標的の第１選択治療の選択肢があるため、除外される。欧米の集団では、患者の約１５％がこれら２つの遺伝子の１つにゲノム異常を抱えている（６−１１）。研究間でわずかな相違はあるが、２２Ｃ３アッセイを使用すると、ＮＳＣＬＣ患者の２３〜３０％が細胞の少なくとも半分でＰＤ−Ｌ１を発現する（５、１２）。残りの７０％、つまり細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１染色があるものは、提案された治験への登録を可能にするＰＤ−Ｌ１発現の適格基準を満たす。
【０１１２】
腫瘍細胞の半分未満でＰＤ−Ｌ１発現があるＮＳＣＬＣ患者の奏効率は、一般に１５％以下であった（１２）。したがって、この患者集団は、Ｔリンパ球の浸潤およびＰＤ−Ｌ１の上方制御を増加させるアプローチから実質的に利益を受ける可能性があり、どちらもＰＤ−１阻害剤に対する反応の可能性を高めるであろう。他の組み合わせは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤で評価中であるが、化学療法、放射線またはＣＴＬＡ−４阻害剤の追加など、これらの多くは、ＰＤ−１阻害剤単独で見られるものを超えて毒性を実質的に増加させる。
【０１１３】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤の有効性が欠如している最も一般的な提案理由は、腫瘍へのＴリンパ球の浸潤がないことである。これは、腫瘍の部位にＴ細胞を動員することができる治療を開発する理論的根拠につながる。腫瘍内Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの以前の臨床試験では、評価された患者の半数超でＴリンパ球が腫瘍部位に動員された（２２）。これらの発見と一致して、ＰＤ−Ｌ１の発現が腫瘍の部位で増加し、動員されたＴリンパ球が抗腫瘍反応を媒介するのを防ぐことによってＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの有効性を制限する可能性がある。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣとＰＤ−１との併用阻害は、両治療のこれらの実質的な制限要因に対処する可能性がある。
【０１１４】
Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの毒性プロファイルは、本発明者の以前の治験で非常に良好であった（２２）。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの局所注射は、腫瘍抗原に特異的なＴリンパ球集団を優先的に増殖させる全身性Ｔリンパ球応答をもたらし、ＣＴＬＡ−４阻害剤などのアプローチはより全体的なＴ細胞活性化を誘導すると仮定されている。したがって、本明細書では、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの添加が、有効性を高めながら、ペンブロリズマブにほとんど毒性を加えないであろうと予測することは合理的である。
【０１１５】
Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣは、ＮＳＣＬＣですでに承認されている治療とは大きく異なるように見えるが、この分野での進歩により、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣとペンブロリズマブの併用が有益である場合、採択の潜在的な障害は克服され得ることは明らかである。たとえば、細胞治療としてのＣＡＲ−Ｔ細胞は、現在、特定の血液悪性腫瘍の治療に承認されている。同様に、Ｔ−ＶＥＣは悪性黒色腫の治療用に承認された注射治療である。提案された治療は注射細胞治療であるが、そのような製品の構築および送達に必要なすべての必須基盤が利用可能であり、治療が承認される可能性がある時点でさらに一般的になる可能性がある。
【０１１６】
提案された治験は、第Ｉ相試験である。ペンブロリズマブは当初、第Ｉ相試験に基づいて承認されたが、その試験は特に大規模であった（１２）。提案された試験の結果は、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣをペンブロリズマブと組み合わせて投与することの実現可能性を示し、さらに大規模な治験を容易にする相関データを生成することが期待される。このアプローチが実行可能であり、潜在的に有効である場合、最も可能性の高い戦略は、がん細胞の半分未満でＰＤ−Ｌ１染色がある転移性ＮＳＣＬＣ患者の初期全身治療として、ペンブロリズマブとＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣを白金ベースの化学療法と比較する無作為化試験を実施することであろう。化学療法とＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤またはその他の組み合わせが、比較試験の時点でこれらの患者に承認された好ましい選択肢である場合、承認された好ましい組み合わせが対照群として機能する。
【０１１７】
提案された治験の実施中に、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣとペンブロリズマブの利益を受ける可能性が高いバイオマーカーに基づく患者集団が出現する可能性がある。それが事実であり、亜集団に関するデータが十分に強力である場合、確認研究は、この革新的なアプローチに反応する可能性が最も高いと考えられる患者に限定される可能性がある。
【０１１８】
ＰＤ−１。ＰＤ−１はＣＤ２８ファミリーの免疫グロブリンである。ＰＤ−１は、リガンド結合に関与する細胞外Ｉｇ可変型（Ｖ型）ドメインと細胞内シグナル伝達に関与する細胞質側末端を含むＩ型膜貫通糖タンパク質である（４８）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１（または他のリガンドＰＤ−Ｌ２）との結合は、ＳＨＰ−１およびＳＨＰ−２のＰＤ−１への動員を誘導し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達、およびＴリンパ球活性化の下方制御に不可欠なＣＤ３ζ、ＰＫＣθおよびＺＡＰ７０の脱リン酸化をもたらす（４９、５０）。健康な状態では、ＰＤ−Ｌ１は自己免疫などの望ましくない免疫反応を減弱する（５１）。
【０１１９】
ペンブロリズマブは、がん免疫治療で使用されるヒト化抗ＰＤ−１抗体である。ペンブロリズマブは、ＰＤ−１とそのリガンド、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）およびプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）の間の相互作用を遮断するように設計された、高度に選択的なヒト化ｍＡｂである。ペンブロリズマブは、ＩｇＧ４／カッパ・アイソタイプであり、Ｆｃ領域に安定化配列が変化している。グリコシル化を除く、アミノ酸配列に由来する重鎖および軽鎖の理論分子量は、それぞれ４９．４キロダルトン（ＫＤａ）および２３．７ＫＤａである。ペンブロリズマブの詳細な情報については、治験薬概要書および承認ラベルに記載されている。
【０１２０】
ＮＳＣＬＣ患者の治療におけるペンブロリズマブの安全性および有効性を試験する臨床試験により、この疾患の薬剤が承認された。ＫＥＹＮＯＴＥ−００１試験では、中程度の副作用プロファイルを持つ患者の約２０％で応答を示した（１２）。重要なことに、ＰＤ−Ｌ１ベースライン腫瘍染色が５０％を超える患者は、腫瘍ＰＤ−Ｌ１発現が５０％未満の患者よりも、抗ＰＤ−１治療の利益が大きく、固形がんの治療効果判定のためのガイドライン（ＲＥＣＩＳＴ）基準により定義されるＯＲＲは、ＰＤ−Ｌ１染色が５０％を超える患者では４５．２％であるのに対し、ＰＤ−Ｌ１染色が１−４９％の患者では１６．５％、ＰＤ−Ｌ１染色が１％未満の患者では１０．７％であった。ＫＥＹＮＯＴＥ−０１０第ＩＩ／ＩＩＩ相試験では、２ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｗのペンブロリズマブは、ＰＤ−Ｌ１染色が１％を超える無作為化のステージＩＶ前治療患者において、７５ｍｇ／ｍ２  ｑ３ｗドセタキセルを超える有意な利益を示した（１７）。ＫＥＹＮＯＴＥ−０２４試験では、２００ｍｇのペンブロリズマブは、ＰＤ−Ｌ１染色が５０％を超える治療歴のない患者において、医師が標準治療の化学療法を選択するよりも有意な利益を示した（５）。ＮＳＣＬＣ患者の部分群における抗ＰＤ−１治療に対する強く持続的な反応にもかかわらず、ほとんどの患者は単剤としてのＰＤ−１チェックポイント阻害剤に反応しない（１２）。したがって、進行したＮＳＣＬＣ患者における抗ＰＤ１治療の有効性を高めるには、ＰＤ−１阻害剤との合理的かつ効果的な併用戦略が必要である。
【０１２１】
ＰＤ−１に対する抗体は、米国特許第８，７３５，５５３号、第８，６１７，５４６号、第８，００８，４４９号、第８，７４１，２９５号、第８，５５２，１５４号、第８，３５４，５０９号、第８，７７９，１０５号、第７，５６３，８６９号、第８，２８７，８５６号、第８，９２７，６９７号、第８，０８８，９０５号、第７，５９５，０４８号、第８，１６８，１７９号、第６，８０８，７１０号、第７，９４３，７４３号、第８，２４６，９５５号および第８，２１７，１４９号に記載されている。
【０１２２】
本方法では、任意の既知の抗ＰＤ−１抗体を使用できることが企図されている。様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１受容体がそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方に結合することを阻害または遮断する。例示的な態様において、ＰＤ−１に特異的に結合するモノクローナル抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ９３６５５８、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ランブロリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、またはＡＭＰ−２２４（ＧＳＫ／Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、ＡＭＰ２２４（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＡＵＮＰ１２（Ｄｒ．Ｒｅｄｄｙ’ｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．）、ＢＧＢ１０８（ＢｅｉＧｅｎｅ）、ＭＣＬＡ１３４（Ｍｅｒｕｓ  ＢＶ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ｓａｎｏｆｉ）、ＳＨＲ１２１０（Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｈｅｎｇｒｕｉ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ／Ｉｎｃｙｔｅ）、ＳＴＩＡ１１０Ｘ（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、ＳＴＩＡ１１１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、ＴＳＲ０４２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ）である。例示的な態様において、ＰＤ１−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９（ＢＭＳ／Ｏｎｏ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、またはＭＥＤＩ−４７３６（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ／Ｓｅｒｏｎｏ）、ＡＬＮ−ＰＤＬ（Ａｌｎｙｌａｍ）、ＢＧＢＡ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ）、ＫＤ０３３（Ｋａｄｍｏｎ  Ｃｏｒｐ．）、ＫＹ１００３（Ｋｙｍａｂ  Ｌｔｄ．）、ＳＴＩＡ１００Ｘ（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、ＳＴＩＡ１０１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、ＳＴＩＡ１０１１（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、ＳＴＩＡ１０１２（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、およびＳＴＩＡ１０１４（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）である。
【０１２３】
ＰＤ−Ｌ１の阻害剤は、膀胱がん、頭頸部がん、および胃腸がんの充実性腫瘍の阻害にも有効であることが示されている（Ｈｅｒｂｓｔ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，３１：３０００（２０１３）、Ｈｅｅｒｙ  ＣＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，３２：５ｓ，３０６４（２０１４）、Ｐｏｗｌｅｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，３２：５ｓ，５０１１（２０１４）、Ｓｅｇａｌ  ＮＨ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，３２：５ｓ，３００２（２０１４））。
【０１２４】
ＣＣＬ２１改変樹状細胞。二次リンパ組織ケモカイン（ＳＬＣ）、Ｅｘｏｄｕｓ２または６Ｃｋｉｎｅとしても知られるＣＣＬ２１は、高内皮小静脈ならびに脾臓およびリンパ節のＴ細胞ゾーンで通常発現する高内皮由来ＣＣケモカインであり、ナイーブＴ細胞および樹状細胞（ＤＣ）を強く誘引する（Ｃｙｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９：４４７−４５０，１９９９．２４、Ｏｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９３：３２２５−３２３２，１９９９、Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９３：３６１０−３６１６，１９９９、Ｈｅｄｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５９：１５８９−１５９３，１９９７、Ｈｒｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５９：２５５４−２５５８，１９９７、Ｎａｇｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：１９５１８−１９５２４，１９９７、Ｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５９：５６７１−５６７９，１９９７、Ｗｉｌｌｉｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８：２０２５−２０３４，１９９８）。ＣＣＬ２１は、２つの特異的なＧタンパク質共役型７回膜貫通ドメインケモカイン受容体であるＣＣＲ７およびＣＸＣＲ３を介してその効果を仲介する（Ｙｏｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：７１１８、Ｊｅｎｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３７６５）。ＣＣＲ７はナイーブＴ細胞および成熟ＤＣで発現するが、ＣＸＣＲ３は記憶表現型を持つＴｈ１サイトカイン産生リンパ球で優先的に発現する（Ｙｏｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：７１１８、Ｊｅｎｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３７６５）。
【０１２５】
ＤＣを化学誘引するＣＣＬ２１の能力（Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２：３８５９−３８６４，１９９９）は、他のケモカインと共有される特性である（Ｓａｌｌｕｓｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８：２７６０−２７６９，１９９８、Ｓｏｚｚａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６１：１０８３−１０８６，１９９８、Ｄｉｅｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８８：３７３−３８６，１９９８）。しかし、ＳＬＣは、生体内で１型サイトカイン応答を誘発する能力があるため、明らかに有益であり得る（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：４５５８−４５６３，２０００）。ＣＣＬ２１は、ナイーブリンパ球と抗原刺激ＤＣの両方を二次リンパ器官のＴ細胞ゾーンに動員し、これらの初期免疫応答成分を共局在化し、同族のＴ細胞活性化に至る（Ｃｙｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９：４４７−４５０，１９９９．２４）。
【０１２６】
樹状細胞は、抗原を処理および提示して抗原特異的Ｔリンパ球の活性化および増殖を促進する骨髄由来の専門ＡＰＣである（５２、５３）。最近の研究では、腫瘍に存在するＢＡＴＦ３駆動のＣＤ１０３＋（マウス）／ＣＤ１４１＋（ヒト）ＤＣが、腫瘍抗原の輸送、エフェクターＴリンパ球浸潤、およびＴリンパ球抗腫瘍免疫に必要であることが証明されている（５４、５５）。さらに、ＣＤ１０３＋ＤＣによって産生されたＣＸＣＬ１０は、エフェクターＴリンパ球の遊走に必要である（５５）。がん免疫治療で活性化ＤＣを活用するために、さまざまな戦略が利用されてきた（５６−５９）。ケモカインは、白血球の遊走および活性化、ならびに血管新生を直接媒介する、相同であるが機能的に異なるタンパク質の一群である（６０）。ＣＣＬ２１は、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ３およびＣＣＲ７と相互作用することにより、Ｔリンパ球およびＤＣをＴリンパ球ゾーンに強く誘引し（４０、４１）、これらの初期免疫応答成分を共局在化させてＴリンパ球の活性化を促進する（４１）ケモカインである。さらに、ＣＣＬ２１は強力な血管新生抑制剤であり（６１）、したがって、がん治療におけるその使用へのさらなる支援を強化する。
【０１２７】
２つの独立した同系マウス肺がんモデルであるＬ１Ｃ２および３ＬＬｍにおいて、組換えＣＣＬ２１を介したＴリンパ球依存性抗腫瘍反応の腫瘍内（ＩＴ）投与が研究された（６２）。一貫して、ＣＣＬ２１のＩＴ注射は、腫瘍および流入領域リンパ節の両方へのＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔリンパ球ならびにＤＣの浸潤を有意に増加させた。これらの細胞浸潤に伴って、ＩＦＮγ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１２が増加し、同時に免疫抑制分子のＰＧＥ−２およびＴＧＦβが減少した。ＣＣＬ２１を介した抗腫瘍反応の有効性には、ＩＦＮγ、ＣＸＣＬ９、およびＣＸＣＬ１０の誘導を必要とした（６３）。さらに、全身性の抗腫瘍免疫反応が、ＣＣＬ２１で治療された担がんマウスで実証された（６２）。同様に、ＣＣＬ２１の抗腫瘍活性は、自然発生的なマウス気管支肺胞細胞がんのトランスジェニック・マウス・モデルで実証された（６４）。
【０１２８】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１チェックポイント遮断を使用するがん免疫治療は、黒色腫およびＮＳＣＬＣを含む転移性がん患者の部分群に、強力で持続的な応答を誘発する可能性があるが、患者の大多数は、がん免疫治療に対する一次的、適応的、または後天的な耐性のために、単剤としてのＰＤ−１阻害剤に応答しない（７９）。チェックポイント遮断の有効性を高めるための戦略は、進行したＮＳＣＬＣ患者を含む、より大規模ながん患者の集団に利益をもたらすであろう。
【０１２９】
ベクター。ＣＣＬ２１発現構築物の送達方法は、発現ベクターの使用を含む。例示的なベクターには、ウイルスベクター、リポソームまたはプラスミドベクター、ならびに他の遺伝子送達ベクターが含まれる。ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、改変アンカラウイルス、および小胞性口内炎ウイルスが含まれる。
【０１３０】
アデノウイルスベクターはゲノムＤＮＡに組み込む能力が低いことが知られているが、この特性は、これらのベクターによってもたらされる遺伝子導入の高効率によって相殺される。「アデノウイルス発現ベクター」とは、（ａ）相補的パッケージング機能を有する宿主細胞における構築物のパッケージングをサポートし、（ｂ）その中にクローン化された目的の異種遺伝子を最終的に発現するのに十分なアデノウイルス配列を含むこれらの構築物を含むことを意味する。例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／５９２９７を参照されたい。
【０１３１】
発現ベクターは、遺伝子操作された形態のアデノウイルスを含む。３６ｋｂの直鎖二本鎖ＤＮＡウイルスであるアデノウイルスの遺伝的構成に関する知見により、アデノウイルスＤＮＡの大きな断片を外来配列で置き換えることができる（Ｇｒｕｎｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｗｉｔｚ、１９９２）。レトロウイルスとは対照的に、野生型アデノウイルスＤＮＡは潜在的な遺伝毒性なしにエピソーム様式で複製できるため、宿主細胞のアデノウイルス感染は染色体組込みを引き起こさない。また、アデノウイルスは構造的に安定しており、大規模な増幅後のゲノム再配列は検出されていない。
【０１３２】
アデノウイルスは、中型のゲノム、操作の容易さ、高力価、広い標的細胞範囲、および高い感染力のために、遺伝子導入ベクターとしての使用に特に適している。ウイルスゲノムの両端には、ウイルスＤＮＡの複製およびパッケージングに必要なシスエレメントである１００〜２００塩基対の逆方向反復（ＩＴＲ）が含まれている。ゲノムの初期（Ｅ）領域と後期（Ｌ）領域には、ウイルスＤＮＡ複製の開始によって分割される異なる転写ユニットが含まれている。Ｅｌ領域（Ｅ１ＡおよびＥ１Ｂ）は、ウイルスゲノムおよびいくつかの細胞遺伝子の転写調節に関与するタンパク質をコードする。Ｅ２領域（Ｅ２ＡおよびＥ２Ｂ）の発現により、ウイルスＤＮＡ複製用のタンパク質が合成される。これらのタンパク質は、ＤＮＡ複製、後期遺伝子発現、および宿主細胞の遮断に関与している（Ｒｅｎａｎ、１９９０）。ウイルスキャプシドタンパク質の大部分を含む後期遺伝子の産物は、主要後期プロモーター（ＭＬＰ）によって生じる単一の一次転写産物の有意なプロセシング後にのみ発現される。ＭＬＰ（１６．８ｍ．ｕ．に位置）は、感染後期に特に効率的であり、このプロモーターから生じるすべてのｍＲＮＡは、翻訳に好ましいｍＲＮＡにさせる５’−３部リーダー（ＴＰＬ）配列を有する。
【０１３３】
様々な実施形態において、ベクターは、複製欠損アデノウイルスベクターである。
【０１３４】
様々な実施形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３５】
使用方法。提案された併用治療で治療できる例示的な状態または障害には、食道がん、膵臓がん、転移性膵臓がん、膵臓の転移性腺がん、膀胱がん、胃がん、線維性がん、神経膠腫、悪性神経膠腫、びまん性内因性橋膠腫、再発性小児脳新生物腎細胞がん、明細胞転移性腎細胞がん、腎臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺がん、ステージＩＶ前立腺がん、転移性黒色腫、黒色腫、悪性黒色腫、皮膚の再発性黒色腫、黒色腫脳転移、ステージＩＩＩＡ皮膚黒色腫、ステージＩＩＩＢ皮膚黒色腫、ステージＩＩＩＣ皮膚黒色腫、ステージＩＶ皮膚黒色腫、頭頸部の悪性黒色腫、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮細胞非小細胞肺がん、乳がん、再発性転移性乳がん、肝細胞がん、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、進行性Ｂ細胞ＮＨＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含むＨＬ、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、寛解期の成人急性骨髄性白血病、Ｉｎｖ（１６）（ｐ１３．１ｑ２２）を伴う成人急性骨髄性白血病、ＣＢＦＢ−ＭＹＨ１１、ｔ（１６、１６）（ｐ１３．１、ｑ２２）を伴う成人急性骨髄性白血病、ＣＢＦＢ−ＭＹＨ１１、ｔ（８、２１）（ｑ２２、ｑ２２）を伴う成人急性骨髄性白血病、ＲＵＮＸ１−ＲＵＮＸ１Ｔ１、ｔ（９、１１）（ｐ２２、ｑ２３）を伴う成人急性骨髄性白血病、ＭＬＬＴ３−ＭＬＬ、ｔ（１５、１７）（ｑ２２、ｑ１２）を伴う成人急性前骨髄球性白血病、ＰＭＬ−ＲＡＲＡ、アルキル化剤関連の急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、リヒター症候群、ワルデンストレーム・マクログロブリン血症、成人神経膠芽腫、成人神経膠肉腫、再発性神経膠芽腫、再発性小児横紋筋肉腫、再発性ユーイング肉腫／末梢原始神経外胚葉性腫瘍、再発性神経芽細胞腫、再発性骨肉腫、結腸直腸がん、ＭＳＩ陽性結腸直腸がん、ＭＳＩ陰性結腸直腸がん、鼻咽頭非角質化がん、再発性鼻咽頭未分化がん、子宮頸部腺がん、子宮頸部腺扁平上皮がん、子宮頸部扁平上皮がん、再発子宮頸がん、ステージＩＶＡ子宮頸がん、ステージＩＶＢ子宮頸がん、肛門管扁平上皮がん、転移性肛門管がん、再発性肛門管がん、再発性頭頸部がん、がん腫、頭頸部扁平上皮細胞、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、卵巣がん、結腸がん、胃がん、進行性ＧＩがん、胃腺がん、胃食道接合部腺がん、骨新生物、軟部肉腫、骨肉腫、胸腺がん、尿路上皮がん、再発性メルケル細胞がん、ステージＩＩＩメルケル細胞がん、ステージＩＶメルケル細胞がん、骨髄異形成症候群、および再発性菌状息肉腫およびセザリー症候群などのがんが含まれる。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本方法で治療されたがんにおいて、腫瘍細胞の５０％未満が、それらの表面にＰＤ−Ｌ１タンパク質を発現する。様々な実施形態において、がんは、それらの細胞表面に５０％超のＰＤ−Ｌ１染色を有し、したがって、腫瘍細胞の５０％超が、それらの表面にＰＤ−Ｌ１タンパク質を発現する。
【０１３７】
本方法は、第１選択ペンブロリズマブと化学療法で治療された対象、あるいは、この組み合わせによる初期治療に失敗した対象において有用であることがさらに企図される。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本方法で治療することができるがんには、本明細書に記載の転移性ＮＳＣＬＣおよび他の充実性腫瘍が含まれる。
【０１３９】
本明細書の方法は、対象の腫瘍サイズもしくは腫瘍量を低減し、および／または対象の転移を低減することが企図される。様々な実施形態において、対象の腫瘍サイズまたは腫瘍体積は、約２５〜５０％、約４０〜７０％、または約５０〜９０％またはそれ以上減少する。様々な実施形態において、本方法は、腫瘍サイズまたは腫瘍体積を１０％、２０％、３０％、またはそれ以上減少させる。様々な実施形態において、本方法は、腫瘍サイズまたは腫瘍体積を１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％減少させる。
【０１４０】
本明細書の方法は、腫瘍量を減少させ、また、がんが一旦寛解した腫瘍の再発を低減または予防することも企図される。
【０１４１】
ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣの投与がＣＤ８Ｔ細胞の腫瘍への浸潤を増加させることも考えられる。様々な実施形態において、ＣＤ８細胞は、併用治療を受けていない対象と比較して、治療対象では２倍以上増加する。ベクター−ＣＣＬ２１−ＤＣが腫瘍のＰＤ−Ｌ１発現を増加させることが提供される。
【０１４２】
様々な実施形態において、樹状細胞は、腫瘍内、静脈内、動脈内、腹腔内、鼻腔内、筋内、皮内または皮下に、またはＣＴ誘導または気管支鏡によるＩＴ注射を介して投与される。様々な実施形態において、チェックポイント阻害剤は静脈内投与される。
【０１４３】
ＳＬＣ、樹状細胞、またはチェックポイント阻害剤の投与経路は、所望する結果に応じて異なる。一般に、免疫応答の開始のために、炎症または応答の所望部位またはその近くでの薬剤の注射が利用される。あるいは、病状に応じて他の投与経路が正当な場合がある。すなわち、新生物または腫瘍の増殖を抑制するために、腫瘍部位またはその近くに医薬組成物を注射することが好ましい。あるいは、移植片拒絶の予防のために、全身投与を使用することができる。同様に、自己免疫疾患の治療または予防のために、全身投与が好ましい場合がある。全身投与の経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸の投与が含まれる。非経口、皮内、または皮下の適用に使用される溶液または懸濁液には、以下の成分が含まれ得る。注射用水、生理食塩水などの無菌希釈剤、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性調整剤。
【０１４４】
一実施形態では、医薬組成物は、ＳＬＣタンパク質、または体内の部位内またはその周辺でのＳＬＣタンパク質の発現に適したＤＮＡ構築物を含む徐放性製剤またはマトリックスを介して送達することができる。このようにして、一過性のリンパ節を所望の移植位置で作成し、樹状細胞および免疫応答を開始するＴ細胞を誘引することができる。
【０１４５】
抗ＰＤ−１抗体は、０日目に開始して３週間ごとに投与されることが企図される。様々な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、３週間ごとに２００ｍｇの用量で投与されるペンブロリズマブである。
【０１４６】
様々な実施形態において、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣは、５×１０６細胞／注射〜３×１０７細胞／注射、例えば、５×１０６、１×１０７、または３×１０７細胞／注射の用量で投与される。アデノウイルス−ＣＣＬ２１（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）構築物などのベクター−ＣＣＬ２１を含む樹状細胞は、３週間間隔で、例えば、０、２１、および４２日目に投与されることが企図される。
【０１４７】
必要に応じて、他の補助治療を投与され得ることがさらに企図される。例えば、患者はまた、必要に応じて、外科的治療、化学療法、細胞毒性剤、光線力学治療または放射線治療も投与され得る。
【０１４８】
多種多様な化学療法剤を、本発明の併用治療と組み合わせて使用することができる。これらは、例えば、ＤＮＡを直接架橋する薬剤、ＤＮＡに挿入する薬剤、および核酸合成に影響を及ぼすことによって染色体および有糸分裂の異常を引き起こす薬剤であり得る。様々な化学療法剤が、本明細書に開示される併用治療法において使用されることが意図される。例示として企図される化学療法剤には、例えば、エトポシド（ＶＰ−１６）、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カンプトテシン、アクチノマイシン−Ｄ、マイトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、さらには過酸化水素が含まれる。他の実施形態では、任意の外科的介入を本発明と組み合わせて実施することができる。放射線治療に関連して、γ照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、さらには電子放出など、腫瘍細胞内で局所的にＤＮＡ損傷を誘発するための任意のメカニズムが企図される。腫瘍細胞への放射性同位元素の直接送達も企図されており、これは、標的化抗体または他の標的化手段と関連して使用され得る。サイトカイン治療はまた、併用治療レジメンの効果的なパートナーであることが証明されている。このような併用アプローチでは、様々なサイトカインを使用することができる。サイトカインの例には、ＩＬ−１、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＴＮＦａ、ΤΝΡβ、ＬＡＦ、ＴＣＧＦ、ＢＣＧＦ、ＴＲＦ、ＢＡＦ、ＢＤＧ、ＭＰ、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＴＭＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γが含まれる。サイトカインは、患者の状態およびサイトカインの相対毒性などの臨床的適応症と一致する標準的なレジメンに従って投与される。以下は、本発明の特定の実施形態での使用が企図されるサイトカイン遺伝子の例示的な表であるが、決して限定するものではない。
【０１４９】
当業者に理解されるように、化学療法剤の適切な用量は、一般に、化学療法剤が単独でまたは他の化学療法剤と組み合わせて投与される臨床治療ですでに使用されているようなものである。ほんの一例として、シスプラチンなどの薬剤、および他のＤＮＡアルキル化を使用することができる。シスプラチンは、がんの治療に広く使用されており、臨床適用で使用される有効な用量は、２０  ｍｇ／ｉｎ２で３週間ごとに５日間、合計３コースである。シスプラチンは経口吸収されないため、静脈内、皮下、腫瘍内、または腹腔内の注射を介して送達する必要がある。
【０１５０】
ＤＮＡ損傷に帰着するために、核酸、特にＤＮＡを直接架橋する薬剤が構想され、本明細書に示され、相乗的な抗腫瘍性の組み合わせをもたらす。シスプラチンなどの薬剤、および他のＤＮＡアルキル化剤を使用することができる。
【０１５１】
さらに有用な薬剤には、ＤＮＡ複製、有糸分裂、および染色体分離に干渉する化合物が含まれる。このような化学療法化合物には、ドキソルビシンとしても知られるアドリアマイシン、エトポシド、ベラパミル、ポドフィロトキシンなどが含まれる。新生物の治療のために臨床現場で広く使用されているこれらの化合物は、アドリアマイシンの場合、ボーラス注射により静脈内に２１日間隔で２５〜７５  ｍｇ／ｉｎ２から、エトポシドの場合、静脈内に３５〜５０  ｍｇ／ｉｎ２までの範囲の用量で、または静注用量の２倍を経口で投与される。
【０１５２】
ポリヌクレオチド前駆体の合成および忠実度を破壊する薬剤も使用することができる。特に有用なのは、広範な試験を受け容易に利用できる薬剤である。このように、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの薬剤は、腫瘍性組織によって優先的に使用され、この薬剤を腫瘍性細胞への標的化に特に有用にする。非常に毒性があるとはいえ、５−ＦＵは局所を含む幅広い担体に適用できるが、３〜１５  ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量での静脈内投与が一般的に使用される。
【０１５３】
タキソールなどの植物アルカロイドもまた、本発明の特定の態様での使用が企図されている。タキソールは、トネリコ、Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａの樹皮から単離された実験的な有糸分裂阻害剤である。チューブリン（ビンカアルカロイドが使用する部位とは異なる部位）に結合し、微小管の集合を促進する。タキソールは現在、臨床評価されており、悪性黒色腫および卵巣がんに対して活性を有する。最大用量は、５日間１日あたり３０  ｍｇ／ｍ２、または３週間に１回２１０〜２５０  ｍｇ／ｍ２である。無論、これらの投与量のすべては例示的なものであり、これらの点の間の任意の投与量もまた、本発明において有用であると予測される。
【０１５４】
併用治療に関連して有用である他の例示的な化学療法剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／０７３７５９の表Ｂに列挙されている。そこに列挙されている薬剤のそれぞれは例示的なものであり、決して限定するものではない。当業者は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」第１５版、第３３章、特に６２４〜６５２ページを対象にする。治療される対象の状態に応じて、投与量にいくらかの変動が必然的に生じる。いずれにせよ、投与の責任者は、個々の対象に適切な用量を決定する。さらに、ヒト投与の場合、調製物は、ＦＤＡ局生物製剤基準で要求するように、無菌性、発熱性、一般的安全性、および純度の基準を満たす必要がある。
【０１５５】
本明細書に記載されるように、一実施形態では、本明細書に記載される方法のいずれも、高い変異量を伴う腫瘍を有する患者の治療に適している。一実施形態では、腫瘍は、ＮＳＣＬＣ、または扁平上皮細胞または非扁平上皮細胞の腫瘍などであるがこれらに限定されない別の充実性腫瘍である。腫瘍における高い腫瘍変異量の存在は、多数の診断アッセイのうちのいずれかを用いて生検から、例えば、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、またはＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）ＨｅｍｅなどのＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（マサチューセッツ州ケンブリッジ）から決定できる。
【０１５６】
非限定的な実施形態では、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３（ＫＰ）およびＳＴＫ１１／ＬＫＢ１などの変異が腫瘍に存在し得る。他の実施形態では、高い非同義の変異量が存在する。一実施形態では、発がん物質への曝露による高い変異量は、腫瘍および本明細書に記載の併用治療に対するその感受性の根底にある。本明細書に記載されるように、一実施形態では、腫瘍の変異量が最初に評価され、本明細書に記載の治療は、高い変異量の腫瘍に対して開始される。
【０１５７】
以下の実施例に記載されているように、変異量の高い腫瘍に対する併用治療の有効性は、変異量の高いヒト腫瘍のモデルで実証されている。最近の研究は、ヒトＮＳＣＬＣ（肺がんの８５％超）が、ＰＤ−１遮断の臨床的利点に関連するバイオマーカーである高い非同義の変異量を有することを証明している。ＫＲＡＳ変異はＮＳＣＬＣで最も一般的な発がんドライバーであり（ＬＵＡＣでは約２５％）、最近の研究では、ＳＴＫ１１／ＬＫＢ１（ＫＬ）およびＴＰ５３（ＫＰ）腫瘍抑制遺伝子の同時発生変異が、独自のＴＭＥ免疫プロファイルをもつＮＳＣＬＣの異なる部分群を規定することが明らかになっている。ＬＫＢ１変異は、最近、ＫＲＡＳ変異肺腺がん（ＬＵＡＣ）におけるＰＤ−１遮断に対する一次耐性の主要なドライバーとして識別された。上記は、本明細書に記載の方法による治療に適した腫瘍の変異の単なる非限定的な例である。
【０１５８】
本明細書の例では、ＫｒａｓＧ１２Ｄ（ＬＫＲ１３）、ＫｒａｓＧ１２Ｄ、Ｐ５３−／−（ＫＰ）およびＫｒａｓＧ１２Ｄ、Ｐ５３−／−、Ｌｋｂ１−／−（ＫＰＬ）などの遺伝子操作された肺がんのマウスモデルは、ヒトＮＳＣＬＣの共通のドライバー変異を有する。高い腫瘍変異量（ＴＭＢ）を有することが多いモデルヒトＮＳＣＬＣの変異量を増やすために、ＬＫＲ１３、ＫＰ、およびＫＰＬ細胞をタバコ発がん物質のメチルニトロソ尿素（ＭＮＵ）に曝露すると、ヒトＮＳＣＬＣの変異の状況が再現される。実施例で記載するように、これらの変異細胞株の全エクソーム配列決定（ＷＥＳ）は、変異量および腫瘍内異種性の有意な増加を示した。図５Ｃおよび５Ｄは、本明細書に記載する併用治療が効果的な腫瘍根絶をもたらしたことを示し（＊、Ｐ  ＜０．０５；＊＊、Ｐ  ＜０．００５；＊＊＊＊、Ｐ  ＜０．００００５）、従って、ＣＣＬ２１−ＤＣが肺がん治療のための抗ＰＤ−１の有効性、特に高腫瘍量モデルでの有効性を改善することを示す。
【０１５９】
一実施形態では、臨床試験の設計、投薬設計およびレジメン、ならびにがん治療の他の態様に関するこの前述の説明のすべてが、高い変異量の腫瘍を有する患者に適用可能である。さらに、ＰＣＴ／ＵＳ１５／５９２９７に記載されている研究設計および治療の態様は、変異量の高い腫瘍の患者に適用可能である。ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、発現する少なくとももしくは約１ｘｌ０５個または少なくとももしくは約１×１０６個の細胞の非限定的な態様が対象に投与される。例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、発現する少なくとももしくは約２ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約３ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約４ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約５ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約６ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約７ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約８ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約９ｘｌ０６個の細胞、少なくとももしくは約１ｘｌ０７個の細胞、少なくとももしくは約２ｘｌ０７個の細胞、または少なくとももしくは約３ｘｌ０７個の細胞が対象に投与される。例示的な態様では、細胞は、所与の期間に十分な量のＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．１０ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．１５ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．２０ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．２５ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．３０ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．３５ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．４０ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．４５ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、細胞は、２４時間の期間で、ｌｘ１０６個の細胞あたり少なくともまたは約０．５０ｎｇのＳＬＣを産生する。例示的な態様では、１００万から３０００万個の細胞が、２４時間の期間で、１×１０６個の細胞あたり約０．２〜０．４５ｎｇ（例えば、０．２９２ｎｇ〜約０．４１３ｎｇ）のＳＬＣを産生する。
【０１６０】
例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリヌクレオチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前に投与される。例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリペプチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間前に投与される。
【０１６１】
例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリヌクレオチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリペプチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間後に投与される。
【０１６２】
例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリヌクレオチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤と同時に投与される。様々な実施形態において、薬剤は、別個の製剤で投与され、同時に投与され、同時にとは、薬剤が互いに３０分以内に与えられることを指す。本方法はまた、ＳＬＣ組成物およびチェックポイント阻害剤が、第２薬剤、例えば化学療法剤とともに投与されることを提供し、化学療法剤は、ＳＬＣ組成物および／またはチェックポイント阻害剤のいずれかを投与する前に、ＳＬＣ組成物および／またはチェックポイント阻害剤のいずれかを投与した後に投与でき、またはＳＬＣ組成物および／またはチェックポイント阻害剤のいずれかと同時に投与できる。
【０１６３】
様々な実施形態において、ＳＬＣ剤およびチェックポイント阻害剤は、同じ製剤で同時に与えられ得ることが企図される。
【０１６４】
例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリヌクレオチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の投与の前後に投与される。例示的な態様において、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ変異体、ＳＬＣ断片、ＳＬＣ類似体、ＳＬＣ誘導体、前記ポリペプチド、変異体、または断片をコードするＳＬＣポリヌクレオチド、および／または本明細書に記載のＳＬＣ剤は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前、免疫チェックポイント阻害剤の投与後、および免疫チェックポイント阻害剤と同時に投与される。
【０１６５】
例示的な態様において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）該ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）該ポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの組み合わせは、対象に２回以上投与される。例示的な態様において、（ｉ）ＳＬＣポリペプチド、（ｉｉ）該ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）該ポリヌクレオチドを含む細胞、または（ｉｖ）これらの組み合わせは、週２回、週１回、２週間に１回、３週間に１回、または月に１回、対象に投与される。例示的な態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、対象に複数回投与される。例示的な態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、週に２回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、または月に１回、対象に投与される。
【０１６６】
例示的な態様では、対象は充実性腫瘍を含み、細胞は対象に腫瘍内投与される。代替の態様では、細胞は、非経口的に、例えば、静脈内または皮下に対象に投与される。
【０１６７】
例示的な態様では、本方法は、免疫チェックポイント阻害剤を、約２週間に１回、約１〜約２０ｍｇ／ｋｇの用量で対象に静脈内投与することと、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含むＳＬＣポリペプチドをコードするＳＬＣポリヌクレオチドを含み発現する約１００万〜約３０００万個の細胞を対象に腫瘍内投与することとを含む。例示的な態様では、本方法は、免疫チェックポイント阻害剤を、約２週間に１回、約１〜約２０ｍｇ／ｋｇの用量で対象に静脈内投与することと、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸配列を含むＳＬＣポリペプチドをコードするＳＬＣポリヌクレオチドを対象に腫瘍内投与することとを含む。
【０１６８】
例示的な態様では、細胞またはＳＬＣポリペプチドは、免疫チェックポイント阻害剤の初回投与の約２週間前に対象に投与される。例示的な態様では、細胞またはＳＬＣポリペプチドは、細胞またはＳＬＣポリペプチドの初回投与後に毎月対象に投与される。例示的な態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント阻害剤の初回投与の２週間後から開始して２週間ごとに対象に投与される。
【実施例】
【０１６９】
実施例１．ＣＣＬ２１およびＰＤ−１の併用治療はＮＳＣＬＣのモデルで効果的である
ＮＳＣＬＣの生体内モデル（３ＬＬモデルおよびＫＲＡＳ変異ＬＫＲ１３モデル）を使用して、腫瘍増殖および免疫刺激についてのＣＣＬ２１および抗ＰＤ−１抗体の組み合わせの有効性を測定した。初期結果は、共同所有の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／５９２９７で報告された。
【０１７０】
結果は、ＮＳＣＬＣのマウスモデルにおいて、併用治療が両方の単剤治療よりも優れていることを示す。図１Ａは、３ＬＬ腫瘍を有するＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ処理マウスのＴＩＬの生体外活性がＰＤ−１遮断によって増強されたことを示す。自己腫瘍に対する生体外Ｔ細胞溶解活性は、抗ＰＤ−１（１μｇ／ｍｌ）または対照抗体（１μｇ／ｍｌ）の存在下で評価された。値は、平均±ＳＥＭ、ｎ＝８マウス／群、ビヒクルに対して＊Ｐ＜０．０５、対照抗体に対して＊＊Ｐ＜０．０５を反映している。
【０１７１】
図１Ｂは、生体内３ＬＬマウス肺がんモデルにおける治療の効果を示す。５０ｍｍ３  ＳＣ  ３ＬＬ腫瘍を有するマウスは、ｉ）ビヒクル対照、ｉｉ）ＣＣＬ２１（１．５μｇ／用量  ＩＴ）、ｉｉｉ）抗ＰＤ−１（２００μｇ／用量  ＩＰ）、またはｉｖ）５日ごとに３回の併用治療で治療された。結果は、併用治療が単剤またはビヒクル治療と比較して腫瘍体積が小さかったことを示す。ＫＲＡＳ変異ＬＫＲ１３モデルも使用された。腫瘍接種（１．５ｘ１０６  ＬＫＲ１３送達ＳＣ）後５日目に、２５ｍｍ３未満の腫瘍を有する１２９／Ｅマウスを、治験期間中１日おきに図１Ｂのように治療した。ＬＫＲ１３腫瘍は単剤治療に耐性があったが、併用治療は誘導後２０日まで腫瘍増殖を低減した（図１Ｃ）。
【０１７２】
図１Ｃの腫瘍の多重免疫蛍光（ＭＩＦ）分析では、対照と比較して、ＣＣＬ２１治療群および併用群の腫瘍境界および腫瘍内で腫瘍ＰＤ−Ｌ１発現の増加およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の流入が示された（図１Ｄ）。
【０１７３】
一貫して、ＩＴ  ＣＣＬ２１とＩＰ抗ＰＤ−１との組み合わせは、２つの独立した同系マウス肺がんモデルで、両方の単剤治療を上回り、抗腫瘍免疫を誘発した（図１Ｂおよび１Ｃ）。以前のデータと一致して、ＫＬＲ１３腫瘍モデル（図１Ｄ）でのＣＣＬ２１治療に応答して、腫瘍ＣＤ８＋  Ｔ細胞浸潤およびＰＤ−Ｌ１発現の増加も観察された。
【０１７４】
実施例２．非小細胞肺がんを治療するためのＣＣＬ２１および抗ＰＤ−１抗体の第Ｉ相試験
Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣのＩＴ投与は、進行したＮＳＣＬＣ患者のサブセットでＣＤ８＋  Ｔリンパ球腫瘍浸潤および全身性抗腫瘍反応を誘発したが、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ治療患者のＴＭＥでＰＤ−Ｌ１発現の増加が観察され、Ｔリンパ球機能の腫瘍媒介性障害は、より強力なＣＣＬ２１媒介性抗腫瘍反応を未然に防ぐ可能性があることを示唆している。同様に、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤の有効性の欠如は、Ｔリンパ球浸潤の増強および抗原提示細胞機能の増強によって対抗できる可能性がある。したがって、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ治療とＰＤ−１阻害とを組み合わせて、ＮＳＣＬＣ患者の宿主抗腫瘍免疫を増幅することを提案する。これは、ベースラインの腫瘍ＰＤ−Ｌ１発現が低いまたは無い患者で特に重要であり、該患者はまた、最小限の腫瘍Ｔリンパ球の浸潤を示す場合があり、ＰＤ−１阻害のみに反応しないことがほとんどである。現在の目標は、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣがＮＳＣＬＣ患者の抗ＰＤ−１効果を高める特定の抗腫瘍免疫反応を刺激する可能性を判断することである。
【０１７５】
以下の実施例は、腫瘍が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する未治療の進行ＮＳＣＬＣ患者にペンブロリズマブ静脈内投与と併用される場合、ＣＣＬ２１遺伝子で改変されたＤＣ（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）の腫瘍内（ＩＴ）注射の安全性および最大耐量（ＭＴＤ）を決定する第Ｉ相試験について説明する。
【０１７６】
治験の別の態様では、腫瘍が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する未治療の進行ＮＳＣＬＣ患者にペンブロリズマブを静脈内投与した場合に、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣのＩＴ注射の用量漸増（ＥｘＤ）中に確立された用量で治療された対象の客観的奏効率（ＯＲＲ）を評価する。現在、ＰＤ−Ｌ１免疫染色は、疾患の診断時に日常的に行われている標準的な手順（２２Ｃ３アッセイ）である。２２Ｃ３アッセイを使用すると、ＮＳＣＬＣ患者の約７０％が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する（５、１２）。
【０１７７】
第Ｉ相試験の副次的目的には、腫瘍が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する未治療の進行ＮＳＣＬＣ患者にペンブロリズマブを静脈内投与した場合の、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ（用量漸増中に決定）のＩＴ注射の有害事象（ＡＥ）プロファイルを定義すること、および治療を研究するためにＡＥの関係を決定することが含まれる。また、腫瘍が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する未治療の進行ＮＳＣＬＣ患者にペンブロリズマブを静脈内投与した場合の、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣのＩＴ注射の治療前および治療後の連続生検および血液検体を分析することによって薬物標的活性を決定することも意図される。
組入れ基準
【０１７８】
以下の対象を治験に含めることができる。
１．インフォームドコンセントが可能な１８歳超の成人。
２．ステージＩＶの病理学的に証明されたＮＳＣＬＣ。
３．ＣＣ２３抗体を使用した腫瘍細胞の半分未満でのＰＤ−Ｌ１の染色（０％の染色は許容される）。
４．ＲＥＣＩＳＴｖ１．１ガイドラインによる測定可能な疾患。
５．０、１のＥＣＯＧパフォーマンスステータス。
６．ＮＳＣＬＣの全身治療は受けていないこと。アジュバント化学療法またはネオアジュバント化学療法を受けた患者は、最後の治療から少なくとも６か月が経過していれば適格である。
７．適切な腎機能（ＢＵＮ≦４０ｍｇ／ｄＬまたは血清クレアチニン≦２ｍｇ／ｄＬとして定義）。
８．適切な肝機能（血清総ビリルビン≦正常の上限（ＵＬＮ）の２倍または血清トランスアミナーゼ≦３ＸＵＬＮとして定義）。注：肝転移の状況では、トランスアミナーゼは最大５倍のＵＬＮである可能性がある。
９．適切な凝固パラメーター（ＰＴおよび／またはＰＴＴ≦１．５ＸＵＬＮまたは血小板≧１００，０００として定義）。
１０．適切な好中球（絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ３として定義）。
１１．次のいずれかの病変：ｉ．気管支鏡でアクセスすることを意図する、またはｉｉ．ＣＴガイド下経胸壁注射でアクセスすることを意図し、手順を実行する放射線科医の推定では、気胸のリスクを有意に高める水疱を横断する必要はない。
１２．閉経を経験していない女性では、治療開始前の妊娠検査が陰性であり、治療中は適切な避妊が行われる。避妊の適切な形態は、ｉ．２つの適切なバリア法、ｉｉ．バリア法とホルモン避妊法、ｉｉｉ．スクリーニング訪問から始まり、ペンブロリズマブの最終投与の１２０日後まで、試験全体を通して性的活動を控えること。
【０１７９】
除外対象は、化学療法、放射線治療または非細胞毒性の治験薬を含む、過去に全身治療を受けたステージＩＶ  ＮＳＣＬＣの患者、およびＥＧＦＲ変異および／またはＡＬＫ遺伝子再構成で感作された患者である。
材料および方法
【０１８０】
ペンブロリズマブ：抗ＰＤ−１免疫治療ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）は、  Ｍｅｒｃｋから提供され、試験開始時に利用可能である。
【０１８１】
組換えヒトＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４：組換えヒトＧＭ−ＣＳＦおよびヒトＩＬ−４は、医薬品適正製造基準（ｃＧＭＰ）ガイドラインに従って、Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ、Ｉｎｃ．（ミネソタ州ミネアポリス）により製造され、臨床使用のために試験される。
【０１８２】
ｃＧＭＰ−Ａｄ−ＣＣＬ２１ウイルス誘導体：ヒトＣＣＬ２１（ｃＧＭＰ−Ａｄ−ＣＣＬ２１）を発現する完全に試験され定量化されたＧＭＰグレードの複製欠損アデノウイルスが使用される。また、ＢＤＰ／ＳＡＩＣ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、Ｉｎｃ．によって製造されたｃＧＭＰ−Ａｄ−ＣＣＬ２１（ロットＬ０６０４００６）も利用できる。ＳＡＩＣ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、Ｉｎｃ．は、政府所有・契約運営研究機関である米国国立がん研究所（ＮＣＩ−フレデリック）（メリーランド州フレデリック）の契約運営者である。
【０１８３】
Ａｄ−ＣＣＬ２１で形質導入されたＤＣ：Ａｄ−ＣＣＬ２１で形質導入されたＤＣ（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）は、記載されているように（４５）、ＵＣＬＡ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ（ＨＧＣＴＦ）で調製される。簡単に説明すると、自己ヒト単球由来ＤＣは、ＧＭＰ条件下で患者の末梢血から調製され、８００  Ｕ／ｍｌの臨床グレードの組換えヒトＧＭ−ＣＳＦおよび４００Ｕ／ｍｌの臨床グレードの組換えヒトＩＬ−４とともに生体外培養される。６〜７日間の培養後、ＤＣは、３７℃で２時間２０００ｘｇ超遠心分離によりｃＧＭＰグレードのＡｄ−ＣＣＬ２１で形質導入される。さまざまなバイオセーフティ試験の後、Ａｄ−ＣＣＬ２１で改変されたＤＣ（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）は、ＣＴガイドまたは気管支鏡による送達によって患者の肺がんに注射するために調製される。
【０１８４】
ＰＢＭＣの収集：患者の自家白血球除去生成物は、最初に予定されているＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ投与の１４日前に収集される。白血球除去手順は、Ｈｅｍａｐｈｅｒｅｓｉｓ  Ｕｎｉｔで実行される。白血球除去生成物の試料は、無菌試験に送られる。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＭＰグレード、ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）での密度勾配遠心分離によって白血球除去生成物から単離される。ＰＢＭＣは、制御された速度で凍結する冷凍容器で、１ｘ１０８個の細胞／１ｍｌの凍結培地を含むＤＭＳＯの濃度で凍結保存される（７０％ＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）＋２０％自己血清＋１０％ＤＭＳＯ。ＰＢＭＣは−８０℃で保存される。凍結培地を含むＤＭＳＯ中のＰＢＭＣの試料は、無菌試験のために送られる。
【０１８５】
患者へのＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ計画投与の６日前（プロトコル日−６、＋  １５、および＋３６）、凍結保存ＰＢＭＣを３７℃の水浴で急速に解凍する。細胞を無血清ＲＰＭＩ−１６４０培地で洗浄し、５％培地（ＲＰＭＩ−１６４０＋５％自己血清）に５−１０ｘ１０６細胞／ｍｌ（Ｔ１７５フラスコあたり１５ｍｌあたり７５−１５０ｘ１０６細胞）で播種する。３７℃で２時間付着させた後、無血清ＲＰＭＩ−１６４０培地で洗浄することにより非付着細胞を穏やかに除去する。付着細胞は、ｒｈＧＭ−ＣＳＦ（８００Ｕ／ｍｌ）およびｒｈＩＬ−４（４００Ｕ／ｍｌ）の存在下、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで５％培地で６日間培養される。すべての培地は、使用前に０．２２μｍフィルターでろ過される。ＤＣ培養の４日後、各フラスコからの上清のアリコートを無菌用に収集する。ＤＣ培養の５日後、各フラスコの上清のアリコートをプールし、マイコプラズマＰＣＲ試験に送る。
【０１８６】
培養６日後、培養液から穏やかにピペッティングすることによりＴ１７５フラスコからＤＣを回収し、無血清ＲＰＭＩ−１６４０で洗浄し、１ｍｌの無血清ＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁する。Ａｄ−ＣＣＬ２１形質導入の前に、ＤＣ細胞懸濁液の試料（〜１％）がＤＣ表現型決定のために送られる。Ａｄ−ＣＣＬ２１は１１６７ＶＰ／細胞でＤＣに添加される（１００：１のウイルス：ＤＣ  ＭＯＩ）。Ａｄ−ＣＣＬ２１の前臨床特性評価は、ＭＯＩ  １００：１でのアデノウイルス形質導入が細胞生存率を損なうことなく最高レベルのＣＣＬ２１産生をもたらしたことを示した（８３）。細胞懸濁液を２０００ｘｇ、２５℃で２時間遠心分離する（８４）。
【０１８７】
ＤＣの気管支鏡検査および腫瘍内注射：気管支鏡検査は外来処置として実施される。患者は、適切な腎機能、肝機能、白血球数、血小板数、ＰＴ／ＰＴＴ、および肺機能を有することを確認する完全なスクリーニング実験作業を行う。患者は、治験の前に少なくとも６時間絶食しているであろう。患者は継続的なモニタリング（ＥＣＧ、非侵襲的血圧モニタリング、およびパルスオキシメトリ）に接続され、鼻カニューレを介して２〜６リットル／分の酸素が供給される。咽頭反射を除去するために、患者は３ｍｌの２または４％リドカインを含む携帯型ネブライザーで治療され、その後、必要に応じて２０％ベンゾカインまたは４％リドカインで局所噴霧される。喫煙歴があるため、一部の患者は、手順時の臨床状況によって示されるように、携帯型ネブライザーによってアルブテロール２．５ｍｇおよびアトロベント１．０ｍｇで治療される場合がある。意識下鎮静は、施設内の意識下鎮静ガイドラインに従って、静脈内抗不安薬（例えば、０．５〜１ｍｇのアリコートのミダゾラム）および鎮痛薬（例えば、フェンタニル２５ｍｇのアリコート）を使用して投与される。
【０１８８】
光ファイバービデオ気管支鏡は、手順の訓練を受け認定された医師によって経口または経鼻的に導入される。喉頭、気管、および両側気道（主気管支、葉気管支、および区域気管支）が体系的に視覚化される。追加の局所麻酔が必要な場合は、２％リドカインの２ｍｌアリコートを選択部位の気管支粘膜に塗布する。この方法で投与されたリドカインの量は、記録され、リドカイン毒性を防ぐために、４ｍｇ／ｋｇまたは総投与量２８０ｍｇを超えない。
【０１８９】
Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣを注入する前に、１９ゲージのＷａｎｇ経気管支針（Ｍｉｌｌ−Ｒｏｓｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、針の長さ１５ｍｍ、作業長１４０ｃｍ、直径２ｍｍ）を使用して４本の針生検を行い、生体外モニタリング研究のための腫瘍のコア生検を得る。質量は視覚的に４つの４分区に分割され、針生検はこれらの各４分区から得られる。患者は、２２ゲージの経気管支細胞診針（針長１３ｍｍ、作業長１４４ｃｍ、直径１．８ｍｍ）を使用して、各４分区に１つずつＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣを４回注射される。細胞診針アセンブリのデッドスペースは、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ懸濁液で注意深く満たされ、０．２５ｍｌの細胞懸濁液が各部位に注入される。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣを注入する前に、穏やかな吸引を適用し、針先が血管構造に配置されていないことを確認する。あるいは、Ｗａｎｇ経気管支針を使用する代わりに、気管支鏡生検鉗子を使用して、または気管支内超音波ガイド針によって生検を得る。治療前の生検後に気胸または出血などの合併症が患者に発生した場合でも、治験責任医師および／または処置医がリスクを不適切と見なさない限り、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣを注射する。リスクが高すぎて患者がＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの注射を受けることができないと判断された場合、患者はペンブロリズマブのみを服用し続ける。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの投与スケジュール全体を完了できない患者は、ＭＴＤ／ＭＡＤの決定から除外され、別の参加者と交代する。ワクチンは、直接気管支鏡検査または気管支内超音波ガイダンスによって送達することができる。
【０１９０】
Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣのＣＴガイド下腫瘍内注射：ＣＴガイド下手順は外来手順として実行される。患者は、適切な腎機能、肝機能、白血球数、血小板数、ＰＴ／ＰＴＴ、および肺機能を有することを確認する完全なスクリーニング実験作業を行う。すべてのＣＴスキャンは、ＧＥ  Ｈｉｇｈ  Ｓｐｅｅｄ  Ａｄｖａｎｔａｇｅスキャナー（ＧＥ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ウィスコンシン州ミルウォーキー）で実施される。限定的な軸方向スキャンは、病変のサイズに応じて、３ｍｍ、５ｍｍ、または１０ｍｍの視準で、標的病変を介して実施される。スキャンは、針の配置前、配置中、配置後に行われ、針の配置アプローチを計画し、注射の成功および無併発を確認する。すべての患者は、通常の無菌的な方法で準備され、ドレープをかけられる。１％リドカインは局所麻酔を達成するために使用される。鎮静は計画されていない。患者は、処置前後の気温、脈拍、および血圧に関して監視される。酸素飽和度および血圧は、手順全体を通して監視される。
【０１９１】
サイズが３ｃｍを超える肺腫瘍の場合、腫瘤は４つの等４分区に分割され、各４分区は生検およびＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ注射を受ける。サイズが３ｃｍ未満の腫瘍の場合、腫瘤は単一部位でのみ生検および注射を受ける。コア生検標本を取得するために、２０ゲージの生検内針を備えた１９ゲージの外針が使用される。選択した標的病変に針先を挿入した後、注射器に吸引を適用し、血管構造に侵入していないことを確認する。肺腫瘍のコア生検が得られる。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの送達には、１９ゲージの外針に挿入された２２ゲージのチバ脊髄針が使用される。総量１．２ｍｌのＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣを、腫瘍のサイズに応じて４つの別々の４分区に均等に注射するか、または単一の部位に注射し、その後１ｍｌの生理食塩水フラッシュを投与する。すべての経胸膜肺内注射では、２〜５  ｍｌの自己血が、針を抜いた血液パッチとして実質針路に沿って投与される。経胸腔注射により気胸が生じた場合、可能であれば、注射針を抜くと気胸が排出される。気胸または生検後の出血の場合、リスクが治験責任医師および／または処置医によって不適切であると見なされない限り、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣは依然として注射される。リスクが高すぎる場合、患者はペンブロリズマブのみを服用し続ける。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの投与スケジュール全体を完了できない患者は、ＭＴＤ／ＭＡＤの決定から除外され、別の参加者と交代する。
【０１９２】
治験
フェーズＩ、非無作為化、用量漸増、マルチコホート試験、続いてＥｘＤ中に確立された用量での用量拡大部が実施される。細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現する、病理学的に確認されＸ線撮影で測定可能なステージＩＶ  ＮＳＣＬＣ患者であって、ＣＴガイド下介入または気管支鏡検査によって腫瘍にアクセス可能であり、ＮＳＣＬＣの全身治療を受けていない患者が、本治験のために選択される。
【０１９３】
最大２４人の患者が登録される。用量漸増中、最大１２人の患者が評価され、用量制限毒性（ＤＬＴ）の有無に応じて、各用量レベルで３人または６人の患者が評価される。用量拡大中、１２人の患者が用量漸増（ＥｘＤ）中に確立された用量で評価される。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣは、気管支鏡またはＣＴガイド下のＩＴ注射によって送達される。ペンブロリズマブは静脈内投与される。
【０１９４】
用量漸増中、修正された３＋３設計が使用される。３人の患者が各コホートに割り当てられる。特定のコホートに登録された患者は、ＣＴガイドまたは気管支鏡のＩＴ注射によって同じＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ用量を投与され、その後、０、２１、４２日目にＤＣ注射の１時間後にＩＶペンブロリズマブ２００ｍｇ、その後３週間ごとにＩＶペンブロリズマブ２００ｍｇを最大１年間投与される。Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣの用量は、最初のコホートでは１ｘ１０７個の細胞／注射であり（１）、前のコホートでの忍容性が出るまで３ｘ１０７個の細胞／注射（２）に増加する。低用量コホートに登録された３人の患者すべてがＤＬＴを経験していないか、コホートの６人の患者のうち１人がＤＬＴである場合にのみ、用量漸増を進めることができる。患者が治験治療を受けてから３０日以内に死亡した場合、さらなる評価まで治験が保留され、治験を継続することの潜在的なリスクと利益がＵＣＬＡ  ＪＣＣＣ  ＤＳＭＢと論議される。コホート１の投与計画（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ  １ｘ１０７個の細胞／注射）が十分に耐容性を示さない場合、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣから５ｘ１０６個の細胞／注射への漸減が許可される（−１）。コホート（２）（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ  ３  ｘ  １０７細胞／注射）に指定された用量レジメンが最大耐量（ＭＴＤ）でない場合、さらなる用量漸増は行われず、この用量レベルは最大投与量（ＭＡＤ）として定義される。患者は外来患者としてＵＣＬＡメディカルセンターに登録される。
【０１９５】
図２は、提案されたレジメンおよび用量拡大を示す。用量漸増中、試験では、コホートに０または１／６ＤＬＴがある場合、最大耐量（ＭＴＤ）／最大投与量（ＭＡＤ）を、１／６超の患者が用量制限毒性（ＤＬＴ）または用量コホートを経験する用量レベルよりも低い用量レベルとして確立する必要がある（２）。用量拡大は、ＲＥＣＩＳＴｖ１．１基準によって定義されたＯＲＲによって特徴付けられる。
【０１９６】
用量制限毒性（ＤＬＴ）は、ＮＣＩ共通毒性基準４．０版で定義されているグレード３以上の毒性として定義されている。特定のコホートで、３人の患者のうち０人にＤＬＴがある場合、患者を次のコホートに登録することにより、次の用量に漸増する。３人の患者全員が低用量コホートに登録されており、２８日間にわたってＤＬＴが見られない場合にのみ、用量漸増に進み得る。３人のうち２人または３人にＤＬＴがある場合、用量は前の用量に減量される。３人のうち１人にＤＬＴがある場合、さらに３人の患者が同じコホートに登録され、同じＡｄＡｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ用量を投与される。６人のうち合計１人にＤＬＴがある場合、用量は漸増され、患者は次のコホートに登録される。６人のうち２人以上にＤＬＴがある場合、用量は前の用量に減量される。３人の患者がすでに治療されている用量に減量することが決定された場合、さらに３人の患者が同じ用量で治療される。追加の患者の２人以上にＤＬＴがある場合、以前の用量に減量する。いずれの場合でも、患者が治験治療を受けてから３０日以内に死亡した場合、さらなる評価まで治験が保留され、治験を継続することの潜在的なリスクと利益がＵＣＬＡ  ＪＣＣＣ  ＤＳＭＢと論議される。ＭＴＤ／ＭＡＤを決定する際に、６人以下の患者が特定の用量で治療される。ＭＴＤ／ＭＡＤは、６人の患者のうち２人未満にＤＬＴがある用量レベルとして定義される。３人のうち２人または３人が最初のコホート（Ａ）でＤＬＴがある場合、治験が生じる。治験薬に関連しない重篤な有害事象（ＳＡＥ）（例えば、生検または注射による気胸、または処置関連合併症の他の形態）は、ＤＬＴとしてカウントされない。ＤＬＴ以外の理由で治療を中止した患者は、少なくとも３人の評価可能な患者が特定のコホートで治療を完了するまで、他の対象と交換される。
【０１９７】
治療の変更および毒性の一般的管理：グレード１の毒性については、用量の変更はない。グレード２の毒性が発生した場合、治験責任医師は注意深く監視しながら腫瘍内治療を継続するか、または値がグレード１以下に戻るまで治療を保留してから治療を再開するかを選択できる。肺腫瘍注射に関連して予想されるグレード２の毒性の１つは、気胸の医原性導入である。気胸が発生した場合は、患者を監視するか、または針胸郭切開術によって気胸を排出することができる。扱いにくいまたは拡大する気胸は、胸腔チューブの配置を必要とする場合がある。これは予想される合併症であり、それ以上の注射を中止する必要があるとは予想されていない。したがって、気胸が注射から７２時間以内に胸郭切開の排出で解消し、次の注射時にＸ線写真で明らかでない場合、プロトコルは所定どおりに進行する。
【０１９８】
ＤＣの生物学的影響に起因すると思われるグレード３の毒性が観察された場合、毒性がグレード２未満に低下するまでそれ以上の投与は差し控えられ、治験責任医師は対象を評価してプロトコルを継続するための臨床的受容性を判断する。治療は治験責任医師の裁量で再開することができるが、腫瘍内ＤＣの用量を５０％減量する。観察されたグレード３の毒性が予想される処置合併症である場合（例えば、７日で胸郭切開ドレナージに反応しなかった持続的な空気漏れ）、腫瘍内治療は合併症が解消するまで保留される。最初のワクチン投与後７〜１４日で合併症が解消し、治験責任医師が対象がプロトコルを継続するのに臨床的に許容できると評価した場合、ワクチン投与は全用量で再開される。
【０１９９】
毒性による２週間を超える投与の遅延、または用量を減らしてもグレード３の毒性を繰り返すと、対象はプロトコルを中止する。投与の遅れにより中止された対象は、評価に必要な患者数が満たされるまで交換される。
【０２００】
グレード４の毒性があると、プロトコルから対象が除外され、臨床状況が示すとおり、対象の観察および治療が継続される。プロトコル治療に関連すると考えられる、コホートのいずれか１人の対象におけるグレード４の毒性の発現は、その投与レベルでの治療の終了、および前のコホートで投与された用量でのＭＴＤ／ＭＡＤの定義にいたる。
【０２０１】
治験薬の投与から３０日以内に対象が死亡した場合、原因の評価が決定されるまで治験が保留される。死亡がプロトコル治療に起因する場合、すべての対象でさらなる治療が中止され、治験は中止される。
【０２０２】
ペンブロリズマブ曝露に関連する有害事象（非重篤および重篤の両方）は、免疫学的病因を表す可能性がある。これらの有害事象は、初回投与の直後または治療の最終投与の数ヶ月後に発生する可能性がある。図３に示すように、ペンブロリズマブは、薬物関連の毒性および重度または生命を脅かすＡＥのために差し控える必要がある。
【０２０３】
生物学的反応および臨床的反応：すべての患者を監視し、治療の臨床的有効性を評価し、反応の潜在的な決定要因を規定する。臨床反応は、スクリーニング時、６３日目、およびその後３か月ごとに、疾患の進行または患者の治験中止までＣＴスキャンによって評価される。免疫モニタリングは、以下に詳述するように腫瘍生検および末梢血試料を使用して実施される。腫瘍生検はまた、変異量および腫瘍関連新生抗原を決定するために利用される。
【０２０４】
マルチプレックス免疫蛍光法（ＭＩＦ）は、ＴＭＥの免疫表現型を特徴づけるために利用される。以下の表１は、ＣＤ８およびＰＤ−Ｌ１染色に特に重点を置いて、免疫表現型の代替マーカーを列挙している（８１）。これらのアッセイは、０、２１、および４２日目に採取された生検試料を用いて実施される。
【表１】
2021523237.tif 000003
【０２０５】
全エクソーム配列決定（ＷＥＳ）は、治療前および治療後の腫瘍試料からのゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を使用して実施され、体細胞変異量および腫瘍関連新生抗原を識別する。患者の診断組織遮断（または、そのような遮断が利用できない場合はパラフィン包埋０日生検）およびパラフィン包埋４２日生検は、それぞれ治療前および治療後の試料として利用される。腫瘍細胞は、レーザー・キャプチャー・マイクロダイセクションとそれに続くｇＤＮＡ単離によって濃縮される。ＰＢＭＣからの患者のｇＤＮＡは、変異分析における生殖細胞系列の参照として役立つ。これらの治験は、併用治療後の新生抗原の状況の展開を解明する。
【０２０６】
末梢血試：スクリーニング、０、１１、２１、４２、６３、１２６、１８９、２５２、３１５日目。
【０２０７】
ＣＤ８＋  ＰＤ−１＋  Ｔリンパ球は、フローサイトメトリーによってＰＭＢＣ（０、２１、６３、１２６、２５２日目）から選別され、ＤＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してそれらのｇＤＮＡが単離される。ＴＣＲ−β鎖ＣＤＲ３領域が増幅され、ｓｕｒｖｅｙ  ＩｍｍｕｎｏＳｅｑ  ａｓｓａｙ（Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してディープシーケンシングが実施され、クローン性が決定される。
【０２０８】
マスサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）は、ＰＢＭＣからの免疫細胞サブセットの包括的な免疫表現型決定を実行し（０、１１、４２、１８９、３１５日目）、治療過程における免疫応答の展開を解明するために使用される。
【０２０９】
ＭＩＦおよびＣｙＴＯＦへの補完的なアプローチとして、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ  ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｎｅｌを使用して、治験患者の抗腫瘍免疫反応を監視する。このパネルは７７０の遺伝子で構成され、２４の異なる免疫細胞タイプの細胞表面マーカーに関連する１０９の遺伝子と、主要なチェックポイント遮断遺伝子を含む免疫応答のすべてのカテゴリーを表す５００超の遺伝子とが含まれている。発現解析におけるデータ正規化のための４０の参照遺伝子も含まれる。遺伝子発現に基づいて白血球亜集団を識別するために、ＣＹＢＥＲＳＯＲＴ法が利用される（８２）。簡単に説明すると、ｍｉＲＮｅａｓｙ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＰＢＭＣからＲＮＡを単離する（０、１１、４２、１８９、３１５日目）。ＲＮＡの品質および完全性は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒで実行することによって評価される。２００ナノグラムのＲＮＡは、ＵＣＬＡ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＢｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅでＮａｎｏｓｔｒｉｎｇ分析に使用される。
【０２１０】
抗Ａｄ  ＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の定量化は、０日目の６３の血液試料からの血漿を使用してＥＬＩＳＡによって実施される。ＮＳＣＬＣ患者に一般的に見られるＨＬＡ適合ＴＡＡに対する免疫応答を監視するための抗原特異的ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、０、２１、６３、１２６、２５２日目からＰＢＭＣを使用して実施される。
【０２１１】
臨床反応：スクリーニング、６３日目、疾患の進行または治験中止まで３か月に１回：腫瘍量の評価のためにＣＴスキャンが実施される（患者管理のためのｉｒＲＥＣＩＳＴ基準、最終分析のためのＲＥＣＩＳＴ１．１）。ＮＣＩ共通毒性基準４．０版による毒性は、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣとペンブロリズマブの併用治療に関連する有害事象（ＡＥ）を定義するために使用される。
【０２１２】
有害事象は、２つの相で治験全体を通して監視される。第１相は、治療中の安全性モニタリングを構成し、アデノウイルス特異的ＩｇＭおよびＩｇＧ抗体のＥＬＩＳＡは、０日目と６３日目の血液試料を用いて患者の血漿で実施される。第２相は、臨床反応評価中に生じ、これは、スクリーニング日、６３日目、およびその後３か月に１回、疾患の進行または患者の治験中止まで実施される。ＮＣＩ共通毒性基準による毒性は、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣとペンブロリズマブの併用治療に関連するＡＥを定義するために適用される。すべてのＡＥは監視され、適用されるすべての国際法および規制に従って規制当局およびＩＲＢ／ＩＥＣに報告される。
【０２１３】
対象は、評価可能な標的病変および非標的病変の連続測定を行い、０日目より前、６３日目、およびその後３か月ごとに、免疫関連および標準のＲＥＣＩＳＴｖ１．１両ガイドラインに従って、疾患進行またはプロトコル中止まで等級付けされる。
標的病変
完全奏効（ＣＲ）：すべての標的病変の消失
部分奏効（ＰＲ）：ベースラインの最長径（ＬＤ）の合計を対照として、標的病変のＬＤの合計が少なくとも３０％減少する
進行（ＰＤ）：治療開始以降に記録された最小の合計ＬＤ、または１つ以上の新しい病変の出現を対照として、標的病変のＬＤの合計が少なくとも２０％増加する。
安定（ＳＤ）：治療開始以来の最小合計ＬＤを対照として、ＰＲの適格となるのに十分な収縮もＰＤの適格となるのに十分な増加もない。
非標的病変
完全奏効（ＣＲ）：すべての非標的病変の消失および腫瘍マーカーレベルの正常化。
不完全奏効／安定（ＳＤ）：１つまたは複数の非標的病変の持続または／および正常範囲を超える腫瘍マーカーレベルの維持。
進行（ＰＤ）：１つまたは複数の新しい病変の出現および／または既存の非標的病変の明白な進行。「非標的」病変のみの明らかな進行は例外的であるが、そのような状況では、治療を行う医師の意見が優先され、進行状況は後でレビューパネル（または治験責任医師）によって確認されるべきである。
【０２１４】
用量漸増中の主要評価項目は、最大耐量（ＭＴＤ）／最大投与量（ＭＡＤ）を確立することである。本明細書で提案される併用治療は以前の臨床試験で試験されていないため、この評価項目は安全に投与できる最も強力な用量を決定するのに適切である。用量拡大中の主要評価項目は、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ／ペンブロリズマブ併用治療の客観的奏効率を定義することである。特に、本治験は、Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ投与ががんの進行制御においてＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害を増強するか否かを決定することに関心がある。治験全体を通して、副次的評価項目には、ＣＴＣＡＥ４．０版を使用して有害事象（ＡＥ）を評価する毒性の定義、および包括的な免疫モニタリング研究による薬物標的活性に対する治療効果の決定が含まれる。
【０２１５】
実施例３高変異量モデルにおける併用治療の有効性
本明細書に記載する治験は、変異量の高い腫瘍に対する併用治療の有効性を証明している。
【０２１６】
最近の研究は、ヒトＮＳＣＬＣ（肺がんの８５％超）が、ＰＤ−１遮断の臨床的利点に関連するバイオマーカーである高い非同義の変異量を有することを証明している。ＫＲＡＳ変異はＮＳＣＬＣで最も一般的な発がんドライバーであり（ＬＵＡＣでは約２５％）、最近の研究では、ＳＴＫ１１／ＬＫＢ１（ＫＬ）およびＴＰ５３（ＫＰ）腫瘍抑制遺伝子の同時発生変異が、独自のＴＭＥ免疫プロファイルをもつＮＳＣＬＣの異なる部分群を規定することが明らかになっている。ＬＫＢ１変異は、最近、ＫＲＡＳ変異肺腺がん（ＬＵＡＣ）におけるＰＤ−１遮断に対する一次耐性の主要なドライバーとして識別された。
【０２１７】
ＫｒａｓＧ１２Ｄ（ＬＫＲ１３）、ＫｒａｓＧ１２Ｄ、Ｐ５３−／−（ＫＰ）およびＫｒａｓＧ１２Ｄ、Ｐ５３−／−、Ｌｋｂ１−／−（ＫＰＬ）などの遺伝子操作された肺がんのマウスモデル（ＧＥＭＭ）は、ヒトＮＳＣＬＣの共通のドライバー変異を有する。しかし、最近の研究および本発明者らのデータにより、頻繁に高い腫瘍変異量（ＴＭＢ）を有するヒトＮＳＣＬＣを模倣しないこれらのモデルにおいて、低い一塩基変異（ＳＮＶ）が示される。したがって、ＬＫＲ１３、ＫＰ、およびＫＰＬ細胞をタバコ発がん物質のメチルニトロソ尿素（ＭＮＵ）に生体外曝露し、ヒトＮＳＣＬＣの変異の状況を再現することにより、さまざまな変異量を有するＧＥＭＭを開発した。これらの変異細胞株の全エクソーム配列決定（ＷＥＳ）により、変異量および腫瘍内異種性の有意な増加が明らかになった。
【０２１８】
低（ＫＰＬ）および高（ＫＰＬ−３Ｍ；３つの生体外ＭＮＵ曝露を伴うＫＰＬ）変異量を有する肺がんの新たに確立されたＧＥＭＭの２つで、ＩＴＣＣＬ２１−ＤＣおよびＩＰ抗ＰＤ−１併用治療の有効性を評価するための治験が実施された。ＣＣＬ２１−ＤＣのＩＴ投与は、ＫＰＬモデルで抗ＰＤ−１の有効性を有意に増強したが、ＣＣＬ２１−ＤＣまたは抗ＰＤ−１単独では有意な効果は示されなかった（図５Ａおよび５Ｂ）。ＫＰＬ−３Ｍモデルでは、ＣＣＬ２１−ＤＣおよび抗ＰＤ−１の単剤治療は中程度の有効性を誘発するが、併用治療は効果的な腫瘍根絶をもたらした（図５Ｃおよび５Ｄ）。これらのデータは、ＩＴ  ＣＣＬ２１−ＤＣの送達により、肺がん治療に対する抗ＰＤ−１の有効性、特に高腫瘍量モデルにおける有効性が向上することを示している。
【０２１９】
図５Ａ〜Ｄは、ＣＣＬ２１−ＤＣの腫瘍内（ＩＴ）投与が、肺がんの遺伝子操作マウスモデル（ＧＥＭＭ）における抗ＰＤ−１効果を増強することを示している。Ａ）マウスＫｒａｓＧ１２Ｄ；Ｐ５３−／−；Ｌｋｂ−／−（ＫＰＬ）モデルにおけるＩＴＣＣＬ２１−ＤＣと抗ＰＤ−１との併用。ＦＶＢマウスに７．５ｘ１０４個のＫＰＬ細胞を皮下接種した。７日目に、２５ｍｍ３未満の腫瘍を有するマウスを、ａ）ビヒクル対照、ｂ）ＩＴ  ＣＣＬ２１−ＤＣ（１０６ＣＣＬ２１−ＤＣ／７、１１、１５日目の用量）、ｃ）ＩＰ抗ＰＤ−１（７、９、１１、１３、１５日目に２００μｇ／用量）、ｄ）上記と同じ時点でのＩＴ  ＣＣＬ２１−ＤＣとＩＰ抗ＰＤ−１との併用、を用いて治療した。腫瘍体積を記録した。Ｂ）治験終了時の腫瘍重量が提示されたことを除いてＡと同じ。Ｃ）高い変異量を有するＫＰＬ−３Ｍ細胞（１．０ｘ１０５細胞）を利用したことを除いてＡと同じ。Ｄ）ＫＰＬ−３Ｍ細胞を使用したことを除いてＢと同じ。Ｐ値は、対応のないｔ検定によって決定された。ｎ．ｓ．有意ではない、＊  Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．００５、＊＊＊＊  Ｐ＜０．００００５
【０２２０】
実施例４．変異量の高い非小細胞肺がんを治療するためのＣＣＬ２１および抗ＰＤ−１抗体の第Ｉ相試験
試験は、上記の実施例２に詳細に記載されているように実施され、試験に参加した患者は、腫瘍が高い変異量を有する場合、事前にスクリーニングおよび登録され、例えば、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  ＣＤｘ（商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＡｃｔ（登録商標）、またはＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）ＨｅｍｅなどのＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（マサチューセッツ州ケンブリッジ）の診断アッセイなどであるがこれに限定されない、本明細書に記載の方法によって決定される。他の方法を使用して、腫瘍が高い変異量を有することを確認できる。この試験では、腫瘍が腫瘍細胞の５０％未満でＰＤ−Ｌ１を発現し、かつ変異量の高い腫瘍がある、未治療の進行ＮＳＣＬＣ患者において、ペンブロリズマブの静脈内投与と組み合わせた場合、ＣＣＬ２１遺伝子改変ＤＣ（Ａｄ−ＣＣＬ２１−ＤＣ）の腫瘍内（ＩＴ）注射の安全性および有効性を決定する。
【０２２１】
参照文献
１．Ｌ．Ａ．Ｔｏｒｒｅ，Ｒ．Ｌ．Ｓｉｅｇｅｌ，Ａ．Ｊｅｍａｌ，Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ  ８９３，１−１９（２０１６）．
２．Ｙ．Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｔｈｅｒ  １０，４５２７−４５３４（２０１７）．
３．Ｎ．Ａ．Ｍ．Ｈｏｗｌａｄｅｒ  Ｎ．，Ｋｒａｐｃｈｏ  Ｍ．，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｄ．，Ｂｉｓｈｏｐ  Ｋ．，Ａｌｔｅｋｒｕｓｅ  Ｓ．Ｆ．，Ｋｏｓａｒｙ  Ｃ．Ｌ．，Ｙｕ  Ｍ．，Ｒｕｈｌ  Ｊ．，Ｔａｔａｌｏｖｉｃｈ  Ｚ．，Ｍａｒｉｏｔｔｏ  Ａ．，Ｌｅｗｉｓ  Ｄ．Ｒ．，Ｃｈｅｎ  Ｈ．Ｓ．，Ｆｅｕｅｒ  Ｅ．Ｊ．，Ｃｒｏｎｉｎ  Ｋ．Ａ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（２０１６）．
４．Ｒ．Ｌ．Ｓｉｅｇｅｌ，Ｋ．Ｄ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ．Ｊｅｍａｌ，ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  ６５，５−２９（Ｊａｎ−Ｆｅｂ，２０１５）．
５．Ｍ．Ｒｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７５，１８２３−１８３３（Ｎｏｖ  １０，２０１６）．
６．Ａ．Ｔ．Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２７，４２４７−５３（Ｓｅｐ  １０，２００９）．
７．Ｔ．Ｊ．Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０，２１２９−３９（Ｍａｙ  ２０，２００４）．
８Ｊ．Ｇ．Ｐａｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０４，１４９７−５００（Ｊｕｎ  ４，２００４）．
９．Ｗ．Ｐａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０１，１３３０６−１１（Ｓｅｐ  ７，２００４）．
１０．Ｊ．Ｐ．Ｋｏｉｖｕｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １４，４２７５−８３（Ｊｕｌ  １，２００８）．
１１．Ｒ．Ｃｈｉａｒｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ８，１１−２３（Ｊａｎ，２００８）．
１２．Ｅ．Ｂ．Ｇａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７２，２０１８−２８（Ｍａｙ  ２１，２０１５）．
１３．Ｇ．Ｖ．Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２６，３５４３−５１（Ｊｕｌ  ２０，２００８）．
１４．Ｊ．Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７３，１２３−３５（Ｊｕｌ  ９，２０１５）．
１５．Ｈ．Ｂｏｒｇｈａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７３，１６２７−３９（Ｏｃｔ  ２２，２０１５）．
１６．Ｌ．Ｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，ＪＣＯ２０１７７４３０６２（Ｏｃｔ  １２，２０１７）．
１７．Ｒ．Ｓ．Ｈｅｒｂｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３８７，１５４０−５０（Ａｐｒ  ０９，２０１６）．
１８．Ａ．Ｒｉｔｔｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３８９，２５５−２６５（Ｊａｎ  ２１，２０１７）．
１９．Ｄ．Ｐ．Ｃａｒｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７６，２４１５−２４２６（Ｊｕｎ  ２２，２０１７）．
２０．Ｃ．Ｊ．Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  １７，１４９７−１５０８（Ｎｏｖ，２０１６）．
２１．Ｍ．Ｄ．Ｈｅｌｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  １８，３１−４１（Ｊａｎ，２０１７）．
２２．Ｊ．Ｍ．Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２３，４５５６−６８（Ｍａｙ  ０３，２０１７）．
２３．Ｓ．Ｎｏｖｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２７，ｖ１−ｖ２７（Ｓｅｐ，２０１６）．
２４．Ｍ．Ｌ．Ｓｐｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ（Ｎｏｖ  １０，２０１７）．
２５．Ｓ．Ｎ．Ｇｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３３，２００４−１２（Ａｐｒ  ２０，２０１５）．
２６．Ｊ．Ｒ．Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３２：５ｓ，２０１４（ｓｕｐｐｌ：ａｂｓｔｒ  ８０２１）．
２７．Ｖ．Ｋ．Ａｎａｇｎｏｓｔｏｕ，Ｊ．Ｒ．Ｂｒａｈｍｅｒ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２１，９７６−８４（Ｍａｒ  １，２０１５）．
２８．Ｒ．Ｓ．Ｈｅｒｂｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ５１５，５６３−７（Ｎｏｖ  ２７，２０１４）．
２９．Ｐ．Ｃ．Ｔｕｍｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ５１５，５６８−７１（Ｎｏｖ  ２７，２０１４）．
３０．Ｌ．Ｒｏｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３，ｅ２９２４４（２０１４）．
３１．Ｉ．Ｙｏｓｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４，３３８７−９０（Ｊｕｌ  １，１９９４）．
３２．Ｓ．Ｍ．Ｄｕｂｉｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２，５２４−７（Ｍａｙ，２０００）．
３３．Ｎ．Ｐ．Ｒｅｓｔｉｆｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７７，２６５−７２（Ｆｅｂ  １，１９９３）．
３４．Ｓ．Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６３，５０２０−８（Ｎｏｖ  １，１９９９）．
３５．Ｍ．Ｋ．Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４，２９１−３０４（Ｍａｒ，２０１２）．
３６．Ｌ．Ｘ．Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０，３５８５−９１（Ａｐｒ  １，２００３）．
３７．Ｓ．Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６５，５２１１−２０（Ｊｕｎ  １５，２００５）．
３８．Ｆ．Ｂａｒａｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｒｅｓ  ２，３５６−６７（２０１０）．
３９．Ｓ．Ｍ．Ｄｕｂｉｎｅｔｔ，Ｊ．Ｍ．Ｌｅｅ，Ｓ．Ｓｈａｒｍａ，Ｊ．Ｊ．Ｍｕｌｅ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  １６，３２５−３５（Ｊｕｌ−Ａｕｇ，２０１０）．
４０．Ｖ．Ｗ．Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９３，３６１０−６（Ｊｕｎ  １，１９９９）．
４１．Ｊ．Ｇ．Ｃｙｓｔｅｒ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８９，４４７−５０（Ｆｅｂ  １，１９９９）．
４２．Ｊ．Ｆ．Ａｒｔｈｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４，１７−２５（Ｊａｎ−Ｆｅｂ，１９９７）．
４３．Ｐ．Ｇａｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １２  Ｓｕｐｐｌ  １，Ｓ８４−９１（Ｏｃｔ，２００５）．
４４．Ｌ．Ｈ．Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ，Ｌ．Ｖｕｊａｎｏｖｉｃ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  １１，１３９９−４０８（Ｄｅｃ，２０１０）．
４５．Ｆ．Ｂａｒａｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ６，３８（Ｊｕｌ  ２２，２００８）．＿
ＣＬＩＮ２−１０７８４  ＣＬＩＮ  ２：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｓｔａｇｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ  ６５
４６．Ｓ．Ｃ．Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６６，３２０５−１３（Ｍａｒ  １５，２００６）．
４７．Ｓ．Ｃ．Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０，２８９１−９０１（Ａｐｒ  １５，２００４）．
４８．Ｔ．Ｏｋａｚａｋｉ，Ａ．Ｍａｅｄａ，Ｈ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｔ．Ｋｕｒｏｓａｋｉ，Ｔ．Ｈｏｎｊｏ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９８，１３８６６−７１（Ｎｏｖ  ２０，２００１）．
４９．Ｊ．Ｌ．Ｒｉｌｅｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２２９，１１４−２５（Ｍａｙ，２００９）．
５０．Ｋ．Ａ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５７４，３７−４１（Ｓｅｐ  １０，２００４）．
５１．Ｍ．Ｅ．Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｊ．Ｂｕｔｔｅ，Ｇ．Ｊ．Ｆｒｅｅｍａｎ，Ａ．Ｈ．Ｓｈａｒｐｅ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２６，６７７−７０４（２００８）．
５２．Ｊ．Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，Ｒ．Ｍ．Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９２，２４５−５２（Ｍａｒ  １９，１９９８）．
５３．Ｒ．Ｍ．Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０，１−２２（２０１２）．
５４．Ｅ．Ｗ．Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３０，３２４−３３６（Ａｕｇ  ０８，２０１６）．
５５．Ｓ．Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｄ．Ｄａｉ，Ｂ．Ｈｏｒｔｏｎ，Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３１，７１１−７２３  ｅ４（Ｍａｙ  ０８，２０１７）．
５６．Ｊ．Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ６５，７９８−８１０（Ａｕｇ，２０１７）．
５７．Ａ．Ｄ．Ｇａｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６，ｅ１３２８３４１（２０１７）．
５８．Ｖ．Ｃｅｒｕｎｄｏｌｏ，Ｉ．Ｆ．Ｈｅｒｍａｎｓ，Ｍ．Ｓａｌｉｏ，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５，７−１０（Ｊａｎ，２００４）．
５９．Ｒ．Ｌ．Ｓａｂａｄｏ，Ｓ．Ｂａｌａｎ，Ｎ．Ｂｈａｒｄｗａｊ，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ  ２７，７４−９５（Ｊａｎ，２０１６）．
６０．Ｎ．Ｎａｇａｒｓｈｅｔｈ，Ｍ．Ｓ．Ｗｉｃｈａ，Ｗ．Ｚｏｕ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７，５５９−５７２（Ｓｅｐ，２０１７）．
６１．Ａ．Ｐ．Ｖｉｃａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６５，１９９２−２０００（Ａｕｇ  １５，２０００）．
６２．Ｓ．Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４，４５５８−６３（Ｍａｙ  ０１，２０００）．
６３．Ｓ．Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ２，２２（Ａｐｒ  １５，２００３）．
６４．Ｓ．Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６１，６４０６−１２（Ｓｅｐ  ０１，２００１）．
６５．Ａ．Ｒｉｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６０，２２１８−２４（Ａｐｒ  １５，２０００）．
６６．Ｓ．Ｈｉｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７１，６４５７−６５．（２００３）．
６７．Ｓ．Ｍ．Ｄｕｂｉｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ８７，５９３−７（Ａｐｒ  １９，１９９５）．
６８．Ａ．Ｈａｇｅｎｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８５，２１０１−１０（Ｊｕｎ  １６，１９９７）．
６９．Ｍ．Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８，１２０８−１６（Ｍａｒ  １５，１９９８）．
７０．Ｓ．Ｍ．Ｄｕｂｉｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５９，３７２−７（１９９１）．
７１．Ｓ．Ｍ．Ｄｕｂｉｎｅｔｔ，Ｊ．Ｔ．Ｋｕｒｎｉｃｋ，Ｒ．Ｌ．Ｋｒａｄｉｎ，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １，３６１−９（Ｎｏｖ，１９８９）．
７２．Ｊ．Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５，２２４０−７（Ａｕｇ  １５，１９９５）．
７３．Ｗ．Ｈ．ＭｃＢｒｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２，３９３１−７（Ｊｕｌ  １５，１９９２）．
７４．Ｓ．Ｍ．Ｄｕｂｉｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３６，１５６−６２（１９９３）．
７５．Ｊ．Ｍ．Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．（２０１４），ｖｏｌ．２，ｐｐ．Ｏ２０．
７６．Ｙ．Ｃａｒｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ５２１，９９−１０４（Ｍａｙ  ０７，２０１５）．
７７．Ｎ．Ａ．Ｒｉｚｖｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４８，１２４−８（Ａｐｒ  ０３，２０１５）．
７８．Ｋ．Ｐｏｌｉｔｉ，Ｒ．Ｓ．Ｈｅｒｂｓｔ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２１，２２１３−２０（Ｍａｙ  １５，２０１５）．
７９．Ｐ．Ｓｈａｒｍａ，Ｓ．Ｈｕ−Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ，Ｊ．Ａ．Ｗａｒｇｏ，Ａ．Ｒｉｂａｓ，Ｃｅｌｌ  １６８，７０７−７２３（Ｆｅｂ  ０９，２０１７）．
８０．Ｗ．Ｚｏｕ，Ｊ．Ｄ．Ｗｏｌｃｈｏｋ，Ｌ．Ｃｈｅｎ，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ８，３２８ｒｖ４（Ｍａｒ  ０２，２０１６）．
８１．Ｅ．Ｒ．Ｐａｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ７，１３３８０（Ｏｃｔ  １７，２０１７）．
８２．Ａ．Ｍ．Ｎｅｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２，４５３−７（Ｍａｙ，２０１５）．
８３．Ｋ．Ｒｉｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ２，３５（Ｎｏｖ  ０２，２００３）．
８４．Ｎ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｙ．Ｎｉｓｈｉｏｋａ，Ｔ．Ｓｈｉｎｏｈａｒａ，Ｓ．Ｓｏｎｅ，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １２，３３３−４６（Ｍａｒ  １，２００１）．
８５．Ｅ．Ｇｕｅｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３８，３１３８−４９（Ｎｏｖ，２００８）．
８６．Ｇ．Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｂｌｏｏｄ  ８４，４００８−２７（Ｄｅｃ  １５，１９９４）．
８７．Ｓ．Ｅ．Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５４，５０７１−９（Ｍａｙ  １５，１９９５）．
８８．Ｇ．Ｂｒｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２１３，２８６１−２８７０（Ｄｅｃ  １２，２０１６）．
８９．Ｍ．Ｇｕｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４５，６６９−６８４（Ｓｅｐ  ２０，２０１６）．
９０．Ｍ．Ａｌｃａｎｔａｒａ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４７，１０３７−１０５０  ｅ６（Ｄｅｃ  １９，２０１７）．
９１．Ｍ．Ｄａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０，４０６９−７６（Ａｐｒ  １５，２００３）．
９２．Ｗ．Ｚｏｕ，Ｌ．Ｃｈｅｎ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８，４６７−７７（Ｊｕｎ，２００８）．
９３．Ｊ．Ｇａｌｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｉｄｍａｎ，Ｆ．Ｐａｇｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７，１８８３−６（Ｍａｒ  １，２００７）．
【図１Ａ】
2021523237.tif 000004
【図１Ｂ】
2021523237.tif 000005
【図１Ｃ】
2021523237.tif 000006
【図１Ｄ】
2021523237.tif 000007
【図２Ａ】
2021523237.tif 000008
【図２Ｂ】
2021523237.tif 000009
【図３−１】
2021523237.tif 000010
【図３−２】
2021523237.tif 000011
【図４】
2021523237.tif 000012
【図５Ａ】
2021523237.tif 000013
【図５Ｂ】
2021523237.tif 000014
【図５Ｃ】
2021523237.tif 000015
【図５Ｄ】
2021523237.tif 000016
【配列表】
2021523237000001.app
【国際調査報告】
2021523237.tif 000017
2021523237.tif 000018
2021523237.tif 000019