(57)【要約】  本発明は、免疫エフェクター細胞の組成物およびこれらの免疫エフェクター細胞含有組成物を含む治療用キットを提供し、前記免疫エフェクター細胞の組成物は初回投与量の免疫エフェクター細胞および後続投与量の免疫エフェクター細胞を含む。
2021523090.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療する方法であって、
初回投与量の免疫エフェクター細胞をそれを必要とする被験者に投与するステップを含み、前記免疫エフェクター細胞はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、ＣＬＤ１８を特異的に識別し、前記初回投与量は約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１２細胞を超えず、
好ましくは、前記初回投与量は約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１１細胞を超えず、
好ましくは、前記初回投与量は約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えず、
好ましくは、前記初回投与量は約５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えず、
より好ましくは、前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えない、前記方法。
【請求項２】
前記ＣＬＤ１８はＣＬＤ１８Ａ２であることを特徴とする
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、ＣＬＤ１８を特異的に識別する免疫エフェクター細胞を少なくとも１回再投与することを特徴とする
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記初回投与量に投与された免疫エフェクター細胞がインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で検出できない後、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を再投与することを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与することを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記後続投与量は初回投与量より多く、好ましくは、前記後続投与量は前記初回投与量の２倍、５倍、７倍または１０倍であることを特徴とする
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記後続投与量は約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１２細胞を超えず、
好ましくは、前記後続投与量は約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１１細胞を超えず、
好ましくは、前記後続投与量は約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えず、
好ましくは、前記後続投与量は約５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えず、
より好ましくは、前記後続投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えないことを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記初回投与量または後続投与量は２０日以内に、Ｎ回に分けて投与され、Ｎは１より小さくない自然数であり、好ましくは、３日〜１５日以内に、Ｎ回に分けて投与されることを特徴とする
請求項１または３に記載の方法。
【請求項９】
後続投与量を投与する場合、前記被験者は、
（ｉ）被験者のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルの倍数が被験者の前記初回投与量を投与する直前のレベルよりも約１０倍、約２５倍、および／または約５０倍低い特徴と、
（ｉｉ）３級またはより高い神経毒性を示さない特徴と、
（ｉｉｉ）神経毒性またはＣＲＳレベルが初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後の神経毒性またはＣＲＳレベルのピークレベルと比較して、低下する特徴と、または
（ｉｖ）前記被験者が前記初回投与量の細胞によって発現されるＣＡＲの検出可能な体液または細胞媒介免疫反応を示さない特徴とのいずれか１つの特徴を有することを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記（ｉｉｉ）において、ＣＲＳレベルは、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後のＣＲＳのピークレベルと比較して、少なくとも５０％減少し、好ましくは、少なくとも２０％減少し、より好ましくは、少なくとも５％減少し、またはＣＲＳレベルは、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前のＣＲＳレベルに相当することを特徴とする
請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法は、前記免疫エフェクター細胞を投与する前に前処理するステップをさらに含み、前記前処理は、前記被験者に化学治療剤を投与すること、または前記被験者に全身放射線を行うこと、または前記被験者に局所放射線治療を行うこと、またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記前処理は、免疫エフェクター細胞を投与する４〜１２日前に実施されることを特徴とする
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学治療剤は、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、タキサン系化合物（ｔａｘａｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、ピリミジン系抗腫瘍薬物（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｄｒｕｇ）のいずれか１つまたはその組み合わせから選択されることを特徴とする
請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記化学治療剤は、シクロホスファミドおよびフルダラビン、またはシクロホスファミド、フルダラビンおよびアルブミン結合パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）であることを特徴とする
請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日、および／または
シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、および／または
アルブミン結合パクリタキセル投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約２００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約８０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約７０ｍｇ／ｍ２／日より多くないことを特徴とする
請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記化学治療剤の連続使用期間は、４日を超えないことを特徴とする
請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記シクロホスファミドおよび／または前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記アルブミン結合パクリタキセルは１回投与されることを特徴とする
請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍はＣＬＤ１８Ａ２陽性消化管腫瘍であり、好ましくは、前記消化管腫瘍は腺癌であり、より好ましくは、前記消化管腫瘍は膵臓癌、胃腺癌であることを特徴とする
請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記キメラ抗原受容体は、ＣＬＤ１８Ａ２に特異的に結合する抗体またはその断片、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、前記抗体は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９または６８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３に示されるＬＣＤＲ３を有することを特徴とする
請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体またはその断片は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２に示される軽鎖可変領域を有し、
好ましくは、前記抗体またはその断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５６、５７、または５８に示される配列を有することを特徴とする
請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５または２６に示される配列であることを特徴とする
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞またはＮＫＴリンパ球であり、好ましくはＴリンパ球であり、好ましくは、前記Ｔ細胞は前記被験者自体から由来することを特徴とする
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
後続投与量の免疫エフェクター細胞を２回以上投与するが、後続投与量の免疫エフェクター細胞の毎回の投与時間間隔は、約２１日ないし約８０日、または約２５日ないし約６０日、または約２５日ないし５０日であり、それぞれ端の値を含むことを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項２４】
毎回投与される後続投与量の免疫細胞の数は基本的に同じであるか、または後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞の数は先に投与される後続投与量の免疫細胞の数より多いことを特徴とする
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞の数は先に投与される後続投与量の免疫細胞の数より少ないことを特徴とする
請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記免疫エフェクター細胞を投与する前に、前記被験者は、ＣＬＤ１８を標的とする、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞で治療されていないことを特徴とする
請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記後続投与量は、前記被験者の腫瘍の負担を十分に安定化させたり、減少させる細胞数であることを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項２８】
前記初回投与量で投与される前に、前記被験者は、手術治療、化学治療または請求項１の方法とは異なる免疫治療を既に受けたことを特徴とする
請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
初回投与量で投与される前に、または初回投与量で投与された後かつ後続投与量で投与される前に、前記被験者のＣＲＳを指示する因子、神経毒性を指示する因子、腫瘍の負担を指示する因子、および／または宿主の抗−ＣＡＲ免疫応答を指示する因子の血清レベルを評価することを特徴とする
請求項１または３に記載の方法。
【請求項３０】
前記腫瘍の負担を指示する因子は、前記被験者の腫瘍細胞の総数、または前記被験者の器官における腫瘍細胞の総数、または前記被験者の組織における腫瘍細胞の総数、または腫瘍の質量または体積、または腫瘍転移の程度、または腫瘍の数であることを特徴とする
請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ｉ）後続投与量で投与する前に、腫瘍の負担を指示する因子を評価するステップと、
ｉｉ）前記評価の結果に基づいて、前記被験者に投与される細胞の後続投与量を決定するステップと、および
ｉｉｉ）評価を介して前記被験者の腫瘍質量または体積が安定したり、減少されたと決定されると、前記被験者に前記初回投与量でのＣＡＲ発現細胞の数よりも少ないか多いか、またはほぼ同じＣＡＲ発現細胞の数を含む後続投与量だけ投与するステップとを含むことを特徴とする
請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記初回投与量または前記後続投与量で投与される細胞の数は、約１.１×１０６細胞／ｋｇ被験者体重ないし２.８×１０７細胞／ｋｇ、約２.９×１０６細胞／ｋｇないし２.６×１０７細胞／ｋｇまたは約３.３×１０６細胞／ｋｇないし１.３×１０７細胞／ｋｇまたは約１.３×１０７細胞／ｋｇないし１.８×１０７細胞／ｋｇであり、それぞれ端の値を含むことを特徴とする
請求項１または３に記載の方法。
【請求項３３】
後続投与量のＣＡＲ発現細胞が投与される細胞の数は、約１.１×１０７細胞／ｋｇ（細胞／ｋｇ）体重ないし約５.１×１０７細胞／ｋｇ、約１.３×１０７細胞／ｋｇないし約３.７×１０７細胞／ｋｇ、約１.６×１０７細胞／ｋｇないし約２.２×１０７細胞／ｋｇ、約１.９×１０７細胞／ｋｇないし約２.２×１０７細胞／ｋｇ、約２.２×１０７細胞／ｋｇないし約２.７×１０７細胞／ｋｇを含み、それぞれ端の値を含むことを特徴とする
請求項３に記載の方法。
【請求項３４】
初回投与量または後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記被験者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を示さず、深刻なＣＲＳを示さず、神経毒性を示さず、深刻な神経毒性を示さず、または３級を超える神経毒性を示さなかったことを特徴とする
請求項１または３に記載の方法。
【請求項３５】
初回投与量または後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記免疫エフェクター細胞は前記被験者で増殖することを特徴とする
請求項１または３に記載の方法。
【請求項３６】
腫瘍の治療方法であって、
請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法で治療する前に、前記被験者が化学治療、放射線治療、または免疫治療を受けるステップを含む、前記腫瘍の治療方法。
【請求項３７】
組成物であって、
シクロホスファミドおよびフルダラビンまたはそれらとタキサン系化合物および／またはピリミジン系抗腫瘍薬物の組み合わせを含む、前記組成物。
【請求項３８】
前記組成物は、シクロホスファミド、フルダラビンおよびパクリタキセルを含むことを特徴とする
請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記組成物は、シクロホスファミド、フルダラビンおよびアルブミン結合パクリタキセルを含むことを特徴とする
請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
アルブミン結合パクリタキセル投与量は約３００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約２００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約８０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約７０ｍｇ／ｍ２／日を超えないことを特徴とする
請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
免疫エフェクター細胞治療を実行する約３０日前に、前記組成物を投与し、好ましくは、約２０日、より好ましくは、約１２日、最も好ましくは、約７日であることを特徴とする
請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記シクロホスファミド、フルダラビンおよび／またはアルブミン結合パクリタキセルの連続使用時間は４日を超えず、好ましくは、前記アルブミン結合パクリタキセルは１回投与されることを特徴とする
請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
抗腫瘍治療に使用され、好ましくは、抗腫瘍の標的治療に使用され、最も好ましくは、抗腫瘍のキメラ抗原受容体標的治療に使用されることを特徴とする
請求項３７〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞であることを特徴とする
請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４５】
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＬＤ１８Ａ２を特異的に識別することを特徴とする
請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記腫瘍は、ＣＬＤ１８Ａ２陽性消化管腫瘍であり、より好ましくは、前記消化管腫瘍は、腺癌であり、最も好ましくは、前記消化管腫瘍は、膵臓癌、胃腺癌であることを特徴とする
請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
薬物の調製におけるＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞の応用であって、
前記薬物は、ＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療するための前記細胞およびシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物（好ましくはパクリタキセル、より好ましくはアルブミン結合パクリタキセル）を含み、前記細胞およびシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物は、前記試薬それぞれの効果の合計より大きい治療効果を提供できるように調製される、前記応用。
【請求項４８】
初回投与量の前記免疫エフェクター細胞をそれを必要とする被験者に投与するステップを含み、前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えないことを特徴とする
請求項４７に記載の応用。
【請求項４９】
前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量前記免疫エフェクター細胞を少なくとも１回投与するが、前記後続投与量は、約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約５×１０９細胞を超えず、好ましくは、前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えないことを特徴とする
請求項４７または４８に記載の応用。
【請求項５０】
前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与することを特徴とする
請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の応用。
【請求項５１】
前記シクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物は、免疫エフェクター細胞を投与する４〜１２日前に投与されることを特徴とする
請求項４７〜５０のいずれか一項に記載の応用。
【請求項５２】
フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
タキサン系化合物投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約２００ｍｇ／ｍ２／日を超えないかまたは約１５０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約８０ｍｇ／ｍ２／日、または約７０ｍｇ／ｍ２／日を超えないことを特徴とする
請求項４７〜５１のいずれか一項に記載の応用。
【請求項５３】
前記シクロホスファミドおよび／または前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記タキサン系化合物は１回投与されることを特徴とする
請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の応用。
【請求項５４】
前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５または２６に示される配列であることを特徴とする
請求項４７〜５３のいずれか一項に記載の応用。
【請求項５５】
ＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療するためのキットであって、
前記キットは、
１）ＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞と、
２）シクロホスファミドと、
３）フルダラビンと、
４）タキサン系化合物、好ましくはパクリタキセル、より好ましくはアルブミン結合パクリタキセルと、
５）上記１）−４）に記載の物質を含むための容器と、および
６）前記キットを利用してＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療する投与説明書とを含み、
前記細胞とシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物は、前記試薬それぞれの効果の合計より大きい治療効果を提供できるように調製されることを特徴とする、前記キット。
【請求項５６】
前記投与説明書には、初回投与量の前記免疫エフェクター細胞をそれを必要とする被験者に投与する内容が記載され、
前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約５×１０９細胞を超えず、好ましくは、前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えないことを特徴とする
請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記投与説明書には、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量の前記免疫エフェクター細胞を少なくとも１回投与する内容が記載され、前記後続投与量は、約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約５×１０９細胞を超えないことを特徴とする
請求項５５または５６に記載のキット。
【請求項５８】
前記投与説明書には、前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する内容が記載されたことを特徴とする
請求項５５または５７に記載のキット。
【請求項５９】
前記投与説明書には、前記シクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物を投与する４〜１２日前に投与される内容が記載されたことを特徴とする
請求項５５または５７に記載のキット。
【請求項６０】
前記投与説明書には、
フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
タキサン系化合物投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約２００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約８０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約７０ｍｇ／ｍ２／日を超えない内容が記載されたことを特徴とする
請求項５５または５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記投与説明書には、
前記シクロホスファミドおよび／または前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記タキサン系化合物は１回投与される内容が記載されたことを特徴とする
請求項５５または６０に記載のキット。
【請求項６２】
前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５または２６に示される配列であることを特徴とする
請求項５５または６１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫治療の分野に属し、具体的に、腫瘍抗原を標的化して識別し、免疫エフェクター細胞の活性化を誘発し、抗腫瘍効果を発揮する免疫細胞治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、腫瘍免疫療法は、広範囲に注視と応用されているが、特にＣＡＲ−Ｔ技術は、人間が腫瘍の制御に歴史的発展を収めた。
【０００３】
固形腫瘍の癌細胞は、そのまわりで、腫瘍微小環境を形成して、癌細胞の成長と転移を支援した。腫瘍微小環境は、腫瘍が存在する細胞環境であり、周囲の血管、免疫細胞、繊維芽細胞、他の細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外基質、および腫瘍形質転換を促進し、腫瘍の成長、侵入をサポートし、宿主の免疫から腫瘍を保護し、治療に対する抵抗力を培養し、休眠変形および急速な成長のために微小環境を提供する機械的因子（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｃｕｅ）を含む。腫瘍は、その周囲の微小環境と密接に関連しており、絶えず交流するので、腫瘍は、細胞外シグナルを放出し、腫瘍血管新生を促進し、末梢性免疫耐性を誘導して、これらの微小環境に影響与えることができる。これは、Ｓｗａｒｔｓら、「Ｔｕｍｏｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ：  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ７２巻、第２４７３−２４８０ページ、２０１２を参照できる。したがって、ＣＡＲ−Ｔ技術は、固形腫瘍の治療に応用する際、一般的に効果を収めるのは難しい。例えば、現在のほとんどの文献では、血液腫瘍でＣＤ１９のＣＡＲ  Ｔ細胞の治療は、患者のための非常に良い臨床治療効果を引き起こす可能性があることが報じられた。しかし、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療は、固形腫瘍の治療ではまだ満足のいく治療効果をおさめることができなかった。
【０００４】
したがって、本技術分野で固形腫瘍の腫瘍微小環境で著しい抗腫瘍能力を持つことができる技術的な解決手段が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の目的は、ＣＬＤ１８陽性固形腫瘍に対して優れた殺傷効果を有することができる技術的手段を提供することである。
【０００６】
第１の態様では、本発明は、ＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療する方法であって、初回投与量の免疫エフェクター細胞をそれを必要とする被験者に投与するステップを含み、前記免疫エフェクター細胞はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、ＣＬＤ１８を特異的に識別し、前記初回投与量は約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１２細胞を超えない、前記方法を提供する。好ましくは、前記初回投与量は約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１１細胞を超えない。好ましくは、前記初回投与量は約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えない。好ましくは、前記初回投与量は約５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えない。より好ましくは、前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えない。
【０００７】
好ましい実施形態では、前記初回投与量は、１×１０５細胞／ｋｇ被験者体重より少なくない。
【０００８】
具体的な実施形態では、前記ＣＬＤ１８はＣＬＤ１８Ａ２である。
【０００９】
具体的な実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、ＣＬＤ１８を特異的に識別する免疫エフェクター細胞を少なくとも１回再投与する。
【００１０】
好ましい実施形態では、患者に安全な前提の下で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する。
【００１１】
好ましい実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞と前記後続投与量の免疫エフェクター細胞は同じである。
【００１２】
好ましい実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞と前記後続投与量の免疫エフェクター細胞はすべて、ＣＬＤ１８Ａ２を識別するが，異なるキメラ抗原受容体を含み、例えば、キメラ抗原受容体の細胞外セグメントは異なるが、すべてＣＬＤ１８Ａ２を識別すか、またはキメラ抗原受容体の細胞外セグメントは同じであるが、膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインは異なる。
【００１３】
具体的な実施形態では、前記初回投与量に投与された免疫エフェクター細胞がインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で検出できない後、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を再投与する。
【００１４】
好ましい実施形態では、例えば、ｑＰＣＲで測定する。
【００１５】
具体的な実施形態では、前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する。
【００１６】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、初回投与量より少ないか、同じか、多い。
【００１７】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、前記初回投与量に相当する。
【００１８】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、前記初回投与量より少ない。
【００１９】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、前記初回投与量より多い。
【００２０】
具体的な実施形態では、前記後続投与量は、初回投与量より多く、好ましくは、前記後続投与量は前記初回投与量の少なくとも２倍、５倍、７倍または１０倍である。
【００２１】
具体的な実施形態では、前記後続投与量は約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１２細胞を超えない。
【００２２】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または総数は約１×１０１１細胞を超えない。
【００２３】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えない。
【００２４】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または総数は約１×１０１０細胞を超えない。
【００２５】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または総数は５×１０９または約２×１０９細胞を超えない。
【００２６】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は１×１０５細胞／ｋｇ被験者体重より少なくない。
【００２７】
具体的な実施形態では、前記初回投与量または後続投与量は２０日以内に、Ｎ回に分けて投与され、Ｎは１より小さくない自然数である。
【００２８】
好ましい実施形態では、前記初回投与量または後続投与量は３日〜１５日以内に、Ｎ回に分けて投与され、Ｎは１より小さくない自然数である。
【００２９】
好ましい実施形態では、Ｎは１、２、３または４である。
【００３０】
好ましい実施形態では、Ｎは２または３である。
【００３１】
具体的な実施形態では、後続投与量を投与する場合、前記被験者は、
（ｉ）被験者のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルの倍数が被験者の前記初回投与量を投与する直前のレベルよりも約１０倍、約２５倍、および／または約５０倍低い特徴と、
（ｉｉ）３級またはより高い神経毒性を示さない特徴と、
（ｉｉｉ）神経毒性またはＣＲＳレベルが初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後の神経毒性またはＣＲＳレベルのピークレベルと比較して、低下する特徴と、または
（ｉｖ）前記被験者が前記初回投与量の細胞によって発現されるＣＡＲの検出可能な体液または細胞媒介免疫反応を示さない特徴とのいずれか１つの特徴を有する。
【００３２】
具体的な実施形態では、前記後続投与量を投与する場合、前記被験者が特徴（ｉｉｉ）を有する場合、ＣＲＳレベルは、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後のＣＲＳのピークレベルと比較して、少なくとも５０％減少し、好ましくは、少なくとも２０％減少し、より好ましくは、少なくとも５％減少し、またはＣＲＳレベルは、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前のＣＲＳレベルに相当する。
【００３３】
好ましい実施形態では、前記ＣＲＳレベルは、発熱、低血圧、低酸素症、神経障害、または炎症性サイトカインまたはＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）の血清レベルなどの情報に基づいて評価することができる。
【００３４】
好ましい実施形態では、神経毒性の臨床リスクおよび／または３級またはより高い神経毒性と関連する症状は、混乱、せん妄、表現失語症、無反応、ミオクローヌス、嗜眠、変更された精神状態、痙攣、てんかんに似た活動、てんかん（任意的に、脳波図ＥＥＧによって確定される）、アミロイドβ（Ａβ）レベルの上昇、グルタミン酸レベルの上昇、および酸素遊離基レベル上昇から選択される。
【００３５】
具体的な実施形態では、前記方法は、前記免疫エフェクター細胞を投与する前に前処理するステップをさらに含み、前記前処理は、前記被験者に化学治療剤を投与すること、または前記被験者に全身放射線を行うこと、または前記被験者に局所放射線治療を行うこと、またはそれらの組み合わせを含む。
【００３６】
好ましい実施形態では、前記前処理は、初回投与量で投与する前または初回投与量と後続投与量で投与する間に実行され、より好ましくは、前記前処理は、初回投与量と後続投与量で投与する間に実行される。
【００３７】
好ましい実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前に前記前処理を実行し、後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前に前記前処理を実行する必要がない。
【００３８】
好ましい実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前と後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前にすべて前記前処理を実行する必要がある。
【００３９】
好ましい実施形態では、前記前処理リンパ球を除去するために実行される。
【００４０】
好ましい実施形態では、前記前処理は、腫瘍の負担を安定化させたり、減少させるために実行されるが、特に免疫エフェクター細胞の治療を行う前に、腫瘍の負担の安定化または減少を維持するために実行される。
【００４１】
好ましい実施形態では、前記被験者にリンパ球の除去剤を投与してリンパ球を除去する。リンパ球除去剤は、例えばシクロホスファミド、フルダラビンなどである。
【００４２】
具体的な実施形態では、前記前処理は、免疫エフェクター細胞を投与する４〜１２日前に実施される。
【００４３】
具体的な実施形態では、前記化学治療剤は、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、タキサン系化合物（ｔａｘａｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、ピリミジン系抗腫瘍薬物（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｄｒｕｇ）のいずれか１つまたはその組み合わせから選択される。
【００４４】
好ましい実施形態では、前記タキサン系化合物は、包括但不限于パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、アルブミン結合パクリタキセルまたはドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）を含むがこれらに限定されず、好ましくは、アルブミン結合パクリタキセルであり、前記ピリミジン系抗腫瘍薬物は、５−フルオロウラシル（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、ギメラシル（ｇｉｍｅｒａｃｉｌ）、オテラシルカリウム（ｏｔｔｉｒａｃｉｌ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）、ジフルフロラシル（ｄｉｆｕｒｆｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、カルモフル（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、デオキシフルリジン（ｄｅｏｘｙｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）を含むがこれらに限定されない。
【００４５】
具体的な実施形態では、前記化学治療剤は、シクロホスファミドおよびフルダラビンの組み合わせ、またはシクロホスファミド、フルダラビンおよびアルブミン結合パクリタキセルの組み合わせである。
【００４６】
好ましい実施形態では、フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日である。
【００４７】
好ましい実施形態では、シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日である。
【００４８】
好ましい実施形態では、アルブミン結合パクリタキセル投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約２００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約８０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない。
【００４９】
具体的な実施形態では、前記化学治療剤の連続使用期間は、４日を超えない。
【００５０】
具体的な実施形態では、前記シクロホスファミドおよび／または前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記アルブミン結合パクリタキセルは１回投与される。
【００５１】
好ましい実施形態では、前処理を実行するが、特に初回投与量と後続投与量で投与する前に前処理を実行すると、その後投与される前記免疫エフェクター細胞の容量は対応的に減少することができる。
【００５２】
具体的な実施形態では、前記腫瘍はＣＬＤ１８Ａ２陽性消化管腫瘍であり、好ましくは、前記消化管腫瘍は腺癌であり、より好ましくは、前記消化管腫瘍は膵臓癌、胃腺癌である。
【００５３】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＣＬＤ１８Ａ２に特異的に結合する抗体またはその断片である。
【００５４】
好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通ドメインである。
【００５５】
好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζ融合ペプチド、またはＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζ融合ペプチド、またはＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζ融合ペプチドである。
【００５６】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＣＬＤ１８Ａ２に特異的に結合する抗体またはその断片、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、前記抗体は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９または６８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３に示されるＬＣＤＲ３を有する。
【００５７】
具体的な実施形態では、前記抗体またはその断片は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２に示される軽鎖可変領域を有する。好ましくは、前記抗体またはその断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５６、５７、または５８に示される配列を有する。
【００５８】
好ましい実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域を有する。
【００５９】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５または２６に示される配列である。
【００６０】
好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有する。
【００６１】
好ましい例では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４に示されるアミノ酸配列を有する。
【００６２】
具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞またはＮＫＴリンパ球である。
【００６３】
好ましい実施形態では、前記好ましい免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球である。
【００６４】
好ましい実施形態では、前記Ｔリンパ球は、前記被験者自体から由来する。
【００６５】
好ましい実施形態では、前記Ｔリンパ球は、同種異系から由来する。
【００６６】
具体的な実施形態では、後続投与量の免疫エフェクター細胞を２回以上投与するが、後続投与量の免疫エフェクター細胞の毎回の投与時間間隔は、約２１日ないし約８０日、または約２５日ないし約６０日、または約２５日ないし５０日であり、それぞれ端の値を含む。
【００６７】
好ましい解決手段では、後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞は、前に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞と比較して、前記被験者の腫瘍の負担を安定化させたり、減少させる。
【００６８】
具体的な実施形態では、毎回投与される後続投与量の免疫細胞の数は基本的に同じである。
【００６９】
具体的な実施形態では、後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞の数は先に投与される後続投与量の免疫細胞の数より多い。
【００７０】
具体的な実施形態では、後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞の数は先に投与される後続投与量の免疫細胞の数より少ない。
【００７１】
具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞を投与する前に、前記被験者は、ＣＬＤ１８を標的とする、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞で治療されていない。
【００７２】
具体的な実施形態では、前記後続投与量は、前記被験者の腫瘍の負担を十分に安定化させたり、減少させる細胞数である。
【００７３】
具体的な実施形態では、前記初回投与量で投与される前に、前記被験者は、手術治療、化学治療または第１の態様の方法とは異なる免疫治療を既に受けた。
【００７４】
具体的な実施形態では、初回投与量で投与される前に、または初回投与量で投与された後かつ後続投与量で投与される前に、前記被験者のＣＲＳを指示する因子、神経毒性を指示する因子、腫瘍の負担を指示する因子、および／または宿主の抗−ＣＡＲ免疫応答を指示する因子の血清レベルを評価する。
【００７５】
具体的な実施形態では、前記腫瘍の負担を指示する因子は、前記被験者の腫瘍細胞の総数、または前記被験者の器官における腫瘍細胞の総数、または前記被験者の組織における腫瘍細胞の総数、または腫瘍の質量または体積、または腫瘍転移の程度、または腫瘍の数である。
【００７６】
具体的な実施形態では、前記腫瘍を治療する方法は、
ｉ）後続投与量で投与する前に、腫瘍の負担を指示する因子を評価するステップと、
ｉｉ）前記評価の結果に基づいて、前記被験者に投与される細胞の後続投与量を決定するステップと、および
ｉｉｉ）評価を介して前記被験者の腫瘍質量または体積が安定したり、減少されたと決定されると、前記被験者に前記初回投与量でのＣＡＲ発現細胞の数よりも少ないか多いか、またはほぼ同じＣＡＲ発現細胞の数を含む後続投与量だけ投与するステップとを含む。
【００７７】
具体的な実施形態では、前記初回投与量または前記後続投与量で投与される細胞の数は、約１.１×１０６細胞／ｋｇ被験者体重ないし２.８×１０７細胞／ｋｇ、約２.９×１０６細胞／ｋｇないし２.６×１０７細胞／ｋｇまたは約３.３×１０６細胞／ｋｇないし１.３×１０７細胞／ｋｇまたは約１.３×１０７細胞／ｋｇないし１.８×１０７細胞／ｋｇであり、それぞれ端の値を含む。
【００７８】
具体的な実施形態では、後続投与量のＣＡＲ発現細胞が投与される細胞の数は、約１.１×１０７細胞／ｋｇ（細胞／ｋｇ）体重ないし約５.１×１０７細胞／ｋｇ、約１.３×１０７細胞／ｋｇないし約３.７×１０７細胞／ｋｇ、約１.６×１０７細胞／ｋｇないし約２.２×１０７細胞／ｋｇ、約１.９×１０７細胞／ｋｇないし約２.２×１０７細胞／ｋｇ、約２.２×１０７細胞／ｋｇないし約２.７×１０７細胞／ｋｇを含み、それぞれ端の値を含む。
【００７９】
具体的な実施形態では、初回投与量または後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記被験者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を示さず、深刻なＣＲＳを示さず、神経毒性を示さず、深刻な神経毒性を示さず、または３級を超える神経毒性を示さなかった。
【００８０】
具体的な実施形態では、初回投与量または後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記免疫エフェクター細胞は前記被験者で増殖する。
【００８１】
好ましい実施形態では、前記増殖は、（ｉ）前記投与する直前と比較して、前記初回投与量および／または後続投与量で投与した後、血清ＣＲＰレベルが増加されることにより表示され、および／または（ｉｉ）前記投与する直前と比較して、前記初回投与量および／または後続投与量で投与した後、血清中ＣＡＲエンコード核酸のレベルが増加されることにより表示され、例えば、ｑＰＣＲで測定する。
【００８２】
具体的な実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記被験者の腫瘍の負担を安定化させたり、減少させる。具体的な実施形態では、腫瘍の負担の安定化または減少は、腫瘍の負担を指示する１つまたは複数の因子による安定化または減少に表現される。
【００８３】
好ましい実施形態では、後続投与量の免疫エフェクター細胞で投与した後、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後の腫瘍の負担と比較して、腫瘍の負担はさらに安定化または減少された。
【００８４】
具体的な実施形態では、後続投与量で投与する場合、前記被験者はまだ再発していないか、および／または腫瘍の負担を指示する１つまたは複数の因子が減少した後、まだ増加しなかった。
【００８５】
具体的な実施形態では、前記負担の安定化または減少および／または負担のさらなる減少は、上記被験者において、前記被験者の器官で、前記被験者の組織で、または前記被験者の体液で病気の細胞総数の安定化または減少、および／または腫瘍の質量または体積の安定化または減少、および／または転移した数および／または程度の安定化または減少、および／または腫瘍マーカーの安定化または減少、および／または中末期がんでよく表示される合併症の消失または弱体化を含む。
【００８６】
具体的な実施形態では、前記腫瘍マーカーは、アルファ胎児タンパク（ＡＦＰ）、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、扁平上皮癌抗原（ＳＣＣ）、サイトケラチン１９の可溶性断片（ＣＹＦＲＡ２１−１）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９９、ＣＡ７２４などを含む。
【００８７】
具体的な実施形態では、中末期がんでよく表示される合併症は、癌性疼痛、感染症、癌性胸腹水ことを含んでいる。癌性胸膜および腹水を含む。
【００８８】
具体的な実施形態では、腫瘍の質量または体積はＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）とＣＴ（コンピュータ断層撮影）を介して測定する。
【００８９】
本発明の第２の態様では、腫瘍の治療方法であって、前記のいずれか一項に記載の方法で治療する前に、前記被験者が化学治療、放射線治療、免疫治療、またはその組み合わせを受けるステップを含む、前記腫瘍の治療方法をさらに提供する。
【００９０】
好ましい解決手段では、前記免疫治療は、チェックポイント阻害剤を投与またはＣＬＤ１８を標的としない免疫エフェクター細胞を投与して治療することを含む。
【００９１】
好ましい解決手段では、前記免疫治療は、ＣＬＤ１８を標的とする免疫エフェクター細胞治療を含まない。
【００９２】
好ましい解決手段では、前記被験者はＣＬＤ１８.２を標的としない免疫エフェクター細胞治療を受けた。
【００９３】
好ましい実施形態では、前記化学治療、放射線治療、他の免疫治療、またはその組み合わせを受けた後、腫瘍の負担は安定または減少を維持していなかった。
【００９４】
具体的な実施形態では、前記腫瘍は、再発性腫瘍、難治性腫瘍である。
【００９５】
本発明の第３の態様では、ＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲ  Ｔ細胞に先に治療した被験者でのＣＬＤ１８Ａ２陽性腫瘍を治療するための薬物の調製でＣＬＤ１８を特異的に識別するためのキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物の用途を提供し、ここで、使用時に、初回投与量の免疫エフェクター細胞を、それを必要とする被験者に投与するが、前記免疫エフェクター細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現してＣＬＤ１８を特異的に識別し、前記初回投与量は約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１２細胞を超えない。好ましくは、前記初回投与量は約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１１細胞を超えない。好ましくは、前記初回投与量は約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えない。好ましくは、前記初回投与量は約５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えない。より好ましくは、前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えない。
【００９６】
具体的な実施形態では、前記ＣＬＤ１８はＣＬＤ１８Ａ２である。
【００９７】
具体的な実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、ＣＬＤ１８を特異的に識別する免疫エフェクター細胞を少なくとも１回再投与する。
【００９８】
好ましい実施形態では、患者に安全な前提の下で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する。
【００９９】
好ましい実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞と前記後続投与量の免疫エフェクター細胞は、同じである。
【０１００】
好ましい実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞と前記後続投与量の免疫エフェクター細胞はすべて、ＣＬＤ１８Ａ２を識別するが、異なるキメラ抗原受容体を含み、例えば、キメラ抗原受容体の細胞外セグメントは異なるが、すべてＣＬＤ１８Ａ２を識別し、またはキメラ抗原受容体の細胞外セグメントは同じであるが、膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインは異なる。
【０１０１】
具体的な実施形態では、前記初回投与量に投与された免疫エフェクター細胞がインビボで検出できない後、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を再投与する。
【０１０２】
好ましい実施形態では、例えば、ｑＰＣＲで測定する。具体的な実施形態では、前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する。
【０１０３】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、前記初回投与量に相当する。
【０１０４】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、前記初回投与量より少ない。
【０１０５】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は、前記初回投与量より多い。
【０１０６】
具体的な実施形態では、前記後続投与量は、初回投与量より多く、好ましくは、前記後続投与量は前記初回投与量の少なくとも２倍、５倍、７倍または１０倍である。
【０１０７】
具体的な実施形態では、前記後続投与量は約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１２細胞を超えない。
【０１０８】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または総数は約１×１０１１細胞を超えない。
【０１０９】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約１×１０１０細胞を超えない。
【０１１０】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または総数は約１×１０１０細胞を超えない。
【０１１１】
好ましい実施形態では、前記後続投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または総数は５×１０９または約２×１０９細胞を超えない。
【０１１２】
具体的な実施形態では、前記初回投与量または後続投与量は２０日以内に、Ｎ回に分けて投与され、Ｎは１より小さくない自然数である。
【０１１３】
好ましい実施形態では、前記初回投与量または後続投与量は３日〜１５日以内に、Ｎ回に分けて投与され、Ｎは１より小さくない自然数である。
【０１１４】
好ましい実施形態では、Ｎは１、２、３または４である。
【０１１５】
好ましい実施形態では、Ｎは２または３である。
【０１１６】
具体的な実施形態では、後続投与量を投与する場合、前記被験者は、
（ｉ）被験者のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルの倍数が被験者の前記初回投与量を投与する直前のレベルよりも約１０倍、約２５倍、および／または約５０倍低い特徴と、
（ｉｉ）３級またはより高い神経毒性を示さない特徴と、
（ｉｉｉ）神経毒性またはＣＲＳレベルが初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後の神経毒性またはＣＲＳレベルのピークレベルと比較して、低下する特徴と、または
（ｉｖ）前記被験者が前記初回投与量の細胞によって発現されるＣＡＲの検出可能な体液または細胞媒介免疫反応を示さない特徴とのいずれか１つの特徴を有する。
【０１１７】
具体的な実施形態では、前記後続投与量を投与する場合、前記被験者が特徴（ｉｉｉ）を有する場合、ＣＲＳレベルは、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後のＣＲＳのピークレベルと比較して、少なくとも５０％減少し、好ましくは、少なくとも２０％減少し、より好ましくは、少なくとも５％減少し、またはＣＲＳレベルは、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前のＣＲＳレベルに相当する。
【０１１８】
好ましい実施形態では、前記ＣＲＳレベルは、発熱、低血圧、低酸素症、神経障害、または炎症性サイトカインまたはＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）の血清レベルなどの情報に基づいて評価することができる。
【０１１９】
好ましい実施形態では、神経毒性の臨床リスクおよび／または３級またはより高い神経毒性と関連する症状は、混乱、せん妄、表現失語症、無反応、ミオクローヌス、嗜眠、変更された精神状態、痙攣、てんかんに似た活動、てんかん（任意的に、脳波図ＥＥＧによって確定される）、アミロイドβ（Ａβ）レベルの上昇、グルタミン酸レベルの上昇、および酸素遊離基レベル上昇から選択される。
【０１２０】
具体的な実施形態では、前記方法は、前記免疫エフェクター細胞を投与する前に前処理するステップをさらに含み、前記前処理は、前記被験者に化学治療剤を投与すること、または前記被験者に全身放射線を行うこと、または前記被験者に局所放射線治療を行うこと、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１２１】
好ましい実施形態では、前記前処理は初回投与量の前にまたは初回投与量と後続投与量の間に実行し、より好ましくは、前記前処理は、初回投与量と後続投与量の投与の間に実行する。
【０１２２】
好ましい実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前に前記前処理を実行し、後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前に前記前処理を実行する必要がない。
【０１２３】
好ましい実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前と後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する前にすべて前記前処理を実行する必要がある。
【０１２４】
好ましい実施形態では、前記前処理リンパ球を除去するために実行される。
【０１２５】
好ましい実施形態では、前記前処理は、腫瘍の負担を安定化させたり、減少させるために実行されるが、特に免疫エフェクター細胞の治療を行う前に、腫瘍の負担の安定化または減少を維持するために実行される。
【０１２６】
好ましい実施形態では、前記被験者にリンパ球の除去剤を投与してリンパ球を除去する。リンパ球除去剤は、例えばシクロホスファミド、フルダラビンなどである。
【０１２７】
具体的な実施形態では、前記前処理は、免疫エフェクター細胞を投与する４〜１２日前に実施される。
【０１２８】
具体的な実施形態では、前記化学治療剤は、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、タキサン系化合物（ｔａｘａｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、ピリミジン系抗腫瘍薬物（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｄｒｕｇ）のいずれか１つまたはその組み合わせから選択される。具体的な実施形態では、前記化学治療剤は、シクロホスファミドおよびフルダラビンの組み合わせ、またはシクロホスファミド、フルダラビンおよびアルブミン結合パクリタキセルの組み合わせである。
【０１２９】
好ましい実施形態では、フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日である。
【０１３０】
好ましい実施形態では、シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日である。
【０１３１】
好ましい実施形態では、アルブミン結合パクリタキセル投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約２００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約８０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない。
【０１３２】
具体的な実施形態では、前記化学治療剤の連続使用期間は、４日を超えない。
【０１３３】
具体的な実施形態では、前記シクロホスファミドおよび前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記アルブミン結合パクリタキセルは１回投与される。
【０１３４】
具体的な実施形態では、前記腫瘍はＣＬＤ１８Ａ２陽性腫瘍であり、好ましくは、前記腫瘍はＣＬＤ１８Ａ２陽性消化管腫瘍であり、より好ましくは、前記消化管腫瘍は腺癌であり、最も好ましくは、前記消化管腫瘍は膵臓癌、胃腺癌である。
【０１３５】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＣＬＤ１８Ａ２に特異的に結合する抗体またはその断片である。
【０１３６】
好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体の膜貫通ドメインは、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通ドメインである。
【０１３７】
好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζ融合ペプチド、またはＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζ融合ペプチド、またはＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメインおよびＣＤ３ζ融合ペプチドである。
【０１３８】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＣＬＤ１８Ａ２に特異的に結合する抗体またはその断片、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、前記抗体は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９または６８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３に示されるＬＣＤＲ３を有する。
【０１３９】
具体的な実施形態では、前記抗体またはその断片は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に示される軽鎖可変領域を有する。
【０１４０】
好ましい実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域を有する。
【０１４１】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有する。
【０１４２】
好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有する。
【０１４３】
好ましい例では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４に示されるアミノ酸配列を有する。
【０１４４】
具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞またはＮＫＴリンパ球である。
【０１４５】
好ましい実施形態では、前記好ましい免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球である。
【０１４６】
好ましい実施形態では、前記Ｔリンパ球は、前記被験者自体から由来する。
【０１４７】
好ましい実施形態では、前記Ｔリンパ球は、同種異系から由来する。
【０１４８】
具体的な実施形態では、後続投与量の免疫エフェクター細胞を２回以上投与するが、後続投与量の免疫エフェクター細胞の毎回の投与時間間隔は、約２１日ないし約８０日、または約２５日ないし約６０日、または約２５日ないし５０日であり、それぞれ端の値を含む。
【０１４９】
好ましい解決手段では、後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞は、前に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞と比較して、前記被験者の腫瘍の負担を安定化させたり、減少させる。
【０１５０】
具体的な実施形態では、毎回投与される後続投与量の免疫細胞の数は基本的に同じである。
【０１５１】
具体的な実施形態では、後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞の数は先に投与される後続投与量の免疫細胞の数より多い。
【０１５２】
具体的な実施形態では、後に投与される後続投与量の免疫エフェクター細胞の数は先に投与される後続投与量の免疫細胞の数より少ない。
【０１５３】
具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞を投与する前に、前記被験者は、ＣＬＤ１８を標的とする、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞で治療されていない。
【０１５４】
具体的な実施形態では、前記後続投与量は、前記被験者の腫瘍の負担を十分に安定化させたり、減少させる細胞数である。
【０１５５】
具体的な実施形態では、前記初回投与量で投与される前に、前記被験者は、手術治療、化学治療または第１の態様の方法とは異なる免疫治療を既に受けた。
【０１５６】
具体的な実施形態では、初回投与量で投与される前に、または初回投与量で投与された後かつ後続投与量で投与される前に、前記被験者のＣＲＳを指示する因子、神経毒性を指示する因子、腫瘍の負担を指示する因子、および／または宿主の抗−ＣＡＲ免疫応答を指示する因子の血清レベルを評価する。
【０１５７】
具体的な実施形態では、前記腫瘍の負担を指示する因子は、前記被験者の腫瘍細胞の総数、または前記被験者の器官における腫瘍細胞の総数、または前記被験者の組織における腫瘍細胞の総数、または腫瘍の質量または体積、または腫瘍転移の程度、または腫瘍の数である。
【０１５８】
具体的な実施形態では、前記腫瘍を治療する方法は、
ｉ）後続投与量で投与する前に、腫瘍の負担を指示する因子を評価するステップと、
ｉｉ）前記評価の結果に基づいて、前記被験者に投与される細胞の後続投与量を決定するステップと、および
ｉｉｉ）評価を介して前記被験者の腫瘍質量または体積が安定したり、減少されたと決定されると、前記被験者に前記初回投与量でのＣＡＲ発現細胞の数よりも少ないか多いか、またはほぼ同じＣＡＲ発現細胞の数を含む後続投与量だけ投与するステップとを含む。
【０１５９】
具体的な実施形態では、前記初回投与量または前記後続投与量で投与される細胞の数は、約１.１×１０６細胞／ｋｇ被験者体重ないし２.８×１０７細胞／ｋｇ、約２.９×１０６細胞／ｋｇないし２.６×１０７細胞／ｋｇまたは約３.３×１０６細胞／ｋｇないし１.３×１０７細胞／ｋｇまたは約１.３×１０７細胞／ｋｇないし１.８×１０７細胞／ｋｇであり、それぞれ端の値を含む。
【０１６０】
具体的な実施形態では、後続投与量のＣＡＲ発現細胞が投与される細胞の数は、約１.１×１０７細胞／ｋｇ（細胞／ｋｇ）体重ないし約５.１×１０７細胞／ｋｇ、約１.３×１０７細胞／ｋｇないし約３.７×１０７細胞／ｋｇ、約１.６×１０７細胞／ｋｇないし約２.２×１０７細胞／ｋｇ、約１.９×１０７細胞／ｋｇないし約２.２×１０７細胞／ｋｇ、約２.２×１０７細胞／ｋｇないし約２.７×１０７細胞／ｋｇを含み、それぞれ端の値を含む。
【０１６１】
具体的な実施形態では、初回投与量または後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記被験者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を示さず、深刻なＣＲＳを示さず、神経毒性を示さず、深刻な神経毒性を示さず、または３級を超える神経毒性を示さなかった。
【０１６２】
具体的な実施形態では、初回投与量または後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記免疫エフェクター細胞は前記被験者で増殖する。
【０１６３】
好ましい実施形態では、前記増殖は、（ｉ）前記投与する直前と比較して、前記初回投与量および／または後続投与量で投与した後、血清ＣＲＰレベルが増加されることにより表示され、および／または（ｉｉ）前記投与する直前と比較して、前記初回投与量および／または後続投与量で投与した後、血清中ＣＡＲエンコード核酸のレベルが増加されることにより表示され、例えば、ｑＰＣＲで測定する。
【０１６４】
具体的な実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、前記被験者の腫瘍の負担を安定化させたり、減少させる。具体的な実施形態では、腫瘍の負担の安定化または減少は、腫瘍の負担を指示する１つまたは複数の因子による安定化または減少に表現される。
【０１６５】
好ましい実施形態では、後続投与量の免疫エフェクター細胞で投与した後、初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後の腫瘍の負担と比較して、腫瘍の負担はさらに安定化または減少された。
【０１６６】
具体的な実施形態では、後続投与量で投与する場合、前記被験者はまだ再発していないか、および／または腫瘍の負担を指示する１つまたは複数の因子が減少した後、まだ増加しなかった。
【０１６７】
具体的な実施形態では、前記負担の安定化または減少および／または負担のさらなる減少は、上記被験者において、前記被験者の器官で、前記被験者の組織で、または前記被験者の体液で病気の細胞総数の安定化または減少、および／または腫瘍の質量または体積の安定化または減少、および／または転移した数および／または程度の安定化または減少、および／または腫瘍マーカーの安定化または減少、および／または中末期がんでよく表示される合併症の消失または弱体化を含む。
【０１６８】
具体的な実施形態では、前記腫瘍マーカーは、アルファ胎児タンパク（ＡＦＰ）、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、扁平上皮癌抗原（ＳＣＣ）、サイトケラチン１９の可溶性断片（ＣＹＦＲＡ２１−１）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９９、ＣＡ７２４などを含む。
【０１６９】
具体的な実施形態では、中末期がんでよく表示される合併症は、癌性疼痛、感染症、癌性胸腹水ことを含んでいる。癌性胸膜および腹水を含む。
【０１７０】
具体的な実施形態では、腫瘍の質量または体積はＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）とＣＴ（コンピュータ断層撮影）を介して測定する。
【０１７１】
本発明の第４の態様では、組成物であって、シクロホスファミドおよびフルダラビンとタキサン系化合物および／またはピリミジン系抗腫瘍薬物を含む、前記組成物をさらに提供する。
【０１７２】
好ましい実施形態では、前記タキサン系化合物は、包括但不限于パクリタキセル、アルブミン結合パクリタキセルまたはドセタキセルを含むが、これらに限定されず、好ましくは、アルブミン結合パクリタキセルであり、前記ピリミジン系抗腫瘍薬物は、５−フルオロウラシル、ギメラシル、オテラシルカリウム、ジフルフロラシル、カルモフル、デオキシフルリジン、カペシタビンを含むがこれらに限定されない。
【０１７３】
具体的な実施形態では、前記組成物は、シクロホスファミド、フルダラビンおよびパクリタキセルを含む。
【０１７４】
具体的な実施形態では、前記組成物は、シクロホスファミド、フルダラビンおよびアルブミン結合パクリタキセルを含む。
【０１７５】
好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞治療を受ける被験者が免疫エフェクター細胞を投与される前に、好ましくは免疫エフェクター細胞治療を受ける被験者が毎回免疫エフェクター細胞を投与する前に、前記組成物を投与する。
【０１７６】
具体的な実施形態では、フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／またはシクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／またはアルブミン結合パクリタキセル投与量は約３００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約２００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約８０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約７０ｍｇ／ｍ２／日を超えない。
【０１７７】
具体的な実施形態では、免疫エフェクター細胞治療を実行する約３０日前に、前記組成物を投与し、好ましくは、約２０日、より好ましくは、約１２日、最も好ましくは、約７日である。
【０１７８】
具体的な実施形態では、前記シクロホスファミド、フルダラビンおよび／またはアルブミン結合パクリタキセルの連続使用時間は４日を超えず、好ましくは、前記アルブミン結合パクリタキセルは１回投与される。
【０１７９】
具体的な実施形態では、抗腫瘍治療に使用され、好ましくは、抗腫瘍の標的治療に使用され、最も好ましくは、抗腫瘍のキメラ抗原受容体標的治療に使用される。
【０１８０】
具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞である。
【０１８１】
具体的な実施形態では、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＬＤ１８Ａ２を特異的に識別する。
【０１８２】
具体的な実施形態では、前記腫瘍は、ＣＬＤ１８Ａ２陽性消化管腫瘍であり、より好ましくは、前記消化管腫瘍は、腺癌であり、最も好ましくは、前記消化管腫瘍は、膵臓癌、胃腺癌である。
【０１８３】
本発明の第５の態様では、免疫エフェクター細胞の併用で腫瘍を治療する方法であって、被験者に免疫エフェクター細胞治療を実行する前に、まずシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物を投与して前処理するステップを含む、前記免疫エフェクター細胞の併用で腫瘍を治療する方法をさらに提供する。
【０１８４】
好ましい実施形態では、前記腫瘍は、固形腫瘍である。
【０１８５】
好ましい実施形態では、前記固形腫瘍は、乳癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、胃癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巣癌、肛門癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、頸部癌、膣癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎腺癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎骨盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌である。
【０１８６】
好ましい実施形態では、前記タキサン系化合物は、パクリタキセル、アルブミン結合パクリタキセル、またはドセタキセルから選択される。
【０１８７】
好ましい実施形態では、前記タキサン系化合物は、アルブミン結合パクリタキセルから選択される。
【０１８８】
具体的な実施形態では、フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／またはシクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日でり、および／またはアルブミン結合パクリタキセル投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約２００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約１００ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約８０ｍｇ／ｍ２／日より多くない、または約７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない。
【０１８９】
具体的な実施形態では、免疫エフェクター細胞治療を実行する約３０日前に、前処理し、好ましくは、約２０日、より好ましくは、約１２日、最も好ましくは、約７日である。
【０１９０】
具体的な実施形態では、前記シクロホスファミド、フルダラビンおよび／またはアルブミン結合パクリタキセルの連続使用時間は４日を超えず、好ましくは、前記アルブミン結合パクリタキセルは１回投与される。
【０１９１】
具体的な実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＣＡＲ−ＮＫ細胞、ＣＡＲ−ＮＫＴ細胞などキメラ抗原受容体によって修飾された免疫エフェクター細胞である。
【０１９２】
本発明の第６の態様では、薬物の調製におけるＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞の応用であって、前記薬物は、ＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療するための前記細胞およびシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物（好ましくはパクリタキセル、より好ましくはアルブミン結合パクリタキセル）を含み、前記細胞およびシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物は、前記試薬それぞれの効果の合計より大きい治療効果を提供できるように調製される、前記応用をさらに提供する。
【０１９３】
具体的な実施形態では、初回投与量の前記免疫エフェクター細胞をそれを必要とする被験者に投与するステップを含み、前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えない。
【０１９４】
具体的な実施形態では、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量前記免疫エフェクター細胞を少なくとも１回投与するが、前記後続投与量は、約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約５×１０９細胞を超えない。
【０１９５】
具体的な実施形態では、前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する。
【０１９６】
具体的な実施形態では、前記シクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物は、免疫エフェクター細胞を投与する４〜１２日前に投与される。
【０１９７】
具体的な実施形態では、フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
タキサン系化合物投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約２００ｍｇ／ｍ２／日を超えないかまたは約１５０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約８０ｍｇ／ｍ２／日、または約７０ｍｇ／ｍ２／日を超えない。
【０１９８】
具体的な実施形態では、前記シクロホスファミドおよび／または前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記タキサン系化合物は１回投与される。
【０１９９】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５または２６に示される配列である。
【０２００】
第６の態様に対応的に、本発明は、ＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療するためのキットであって、前記キットは、
１）ＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞と、
２）シクロホスファミドと、
３）フルダラビンと、
４）タキサン系化合物、好ましくはパクリタキセル、より好ましくはアルブミン結合パクリタキセルと、
５）上記１）−４）前記物質を含むための容器と、および
６）前記キットを利用してＣＬＤ１８陽性腫瘍を治療する投与説明書とを含み、
ここで、前記細胞とシクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物は、前記試薬それぞれの効果の合計より大きい治療効果を提供できるように調製される。
【０２０１】
具体的な実施形態では、前記投与説明書には、初回投与量の前記免疫エフェクター細胞をそれを必要とする被験者に投与する内容が記載され、前記初回投与量は約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約２×１０９細胞を超えない。
【０２０２】
具体的な実施形態では、前記投与説明書には、前記初回投与量の免疫エフェクター細胞を投与した後、後続投与量前記免疫エフェクター細胞を少なくとも１回投与する内容が記載され、前記後続投与量は、約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えないか、または前記細胞の総数は約５×１０９細胞を超えない。
【０２０３】
具体的な実施形態では、前記投与説明書には、前記初回投与量が投与されてから約２１日から８０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から６０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与し、より好ましくは、前記初回投与量が投与されてから約２５日から５０日の時点で、前記後続投与量の免疫エフェクター細胞を投与する内容が記載された。
【０２０４】
具体的な実施形態では、前記投与説明書には、前記シクロホスファミド、フルダラビンおよびタキサン系化合物を投与する４〜１２日前に投与される内容が記載された。
【０２０５】
具体的な実施形態では、前記投与説明書には、
フルダラビンの投与量は、約１０〜５０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜４０ｍｇ／ｍ２／日、または約１５〜３０ｍｇ／ｍ２／日、または約２０〜３０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
シクロホスファミドの投与量は、約３００〜７００ｍｇ／ｍ２／日、または約４００〜６５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜６００ｍｇ／ｍ２／日、または約４５０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日、または約４９０〜５５０ｍｇ／ｍ２／日であり、および／または
タキサン系化合物投与量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約２００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１５０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約１００ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約８０ｍｇ／ｍ２／日を超えないか、または約７０ｍｇ／ｍ２／日を超えない内容が記載された。
【０２０６】
具体的な実施形態では、前記投与説明書には、
前記シクロホスファミドおよび／または前記フルダラビンの連続使用期間は、４日を超えず、前記タキサン系化合物は１回投与される内容が記載された。
【０２０７】
具体的な実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、２５または２６に示される配列である。
【０２０８】
当業者は、キットに投与説明書の記載に適応されている投与量の各組成成分が含まれることができることを知っている。
【０２０９】
本発明の一つの態様によると、腫瘍を患っている個体に免疫エフェクター細胞およびチューブリン阻害剤を使用するステップを含む、腫瘍を治療する方法を提供するが、前記免疫エフェクター細胞には、腫瘍抗原を識別するための受容体が発現される。いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍を患っている個体に免疫エフェクター細胞およびチューブリン阻害剤を使用するステップを含む、癌細胞の成長、生存または活性、またはこれら全部を減少させる方法を提供するが、前記免疫エフェクター細胞には、腫瘍抗原を識別するための受容体が発現される。いくつかの実施形態では、前記チューブリン阻害剤は、タキサン系化合物である。いくつかの実施形態では、前記タキサン系化合物は、パクリタキセル、アルブミン結合パクリタキセル（ｎａｂ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、アブラキサン）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）およびタクサン骨格構造（ｔａｘａｎｅ  ｓｋｅｌｅｔｏｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）を備える誘導体から選択される。
【０２１０】
別の実施形態では、前記腫瘍抗原を特異的に識別する抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９または６８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３に示されるＬＣＤＲ３を有する。
【０２１１】
別の実施形態では、前記腫瘍抗原を特異的に識別する抗体は、具有ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に示される軽鎖可変領域、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２に示される軽鎖可変領域を有する。
【０２１２】
別の実施形態では、前記腫瘍抗原を特異的に識別する抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５６、５７、または５８に示される配列に示されるアミノ酸配列を有し、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４に示される配列を有する。
【０２１３】
別の実施形態では、前記被験者に前処理またはリンパ球除去を実行しない。本発明は、薬物の調製における腫瘍抗原を識別する受容体が発現された免疫エフェクター細胞の応用をさらに提供し、前記薬物は、前記免疫エフェクター細胞およびタキサン系化合物を含み、前記薬物は腫瘍治療のために使用される。いくつかの実施形態では、前記薬物に含まれた前記免疫エフェクター細胞およびタキサン系化合物は、それぞれの効果の合計より大きい治療効果を提供する。本発明の一つの態様では、腫瘍を治療するためのキットであって、１）腫瘍抗原を識別する受容体が発現された免疫エフェクター細胞と、２）タキサン系化合物と、３）上記１）および２））に記載の物質を含むための容器と、および４）前記キットを利用して腫瘍を治療する投与説明書を含む、前記腫瘍を治療するためのキットを提供する。
【０２１４】
本発明の範囲内で、本発明の上記の技術的特徴及び以下に（例えば、実施例）具体的に説明する技術的特徴を互いに組み合わせて、新規または好ましい技術的解決策を形成できることを理解されたい。スペースの制限のため、ここでは繰り返さない。
【図面の簡単な説明】
【０２１５】
【図１】ＣＡＲ−Ｔのコピー数検出を示す。
【図２Ａ】初回投与量のＣＡＲ−Ｔを注射（第１の治療過程）した後、被験者体内のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）の変化を示す。
【図２Ｂ】後続投与量のＣＡＲ−Ｔを注射（第２の治療過程）した後、被験者体内のＣＲＰの変化を示す。
【図３Ａ】膵臓癌被験者のＣＡＲ−Ｔ治療過程での腫瘍病巣の変化を示す。
【図３Ｂ】膵臓癌被験者ＣＡＲ−Ｔ治療過程での腫瘍マーカーの変化を示す。
【図４Ａ】胃腺癌被験者ＣＡＲ−Ｔ治療過程での腫瘍病巣の変化を示す。
【図４Ｂ】胃腺癌被験者ＣＡＲ−Ｔ治療過程での新しい病巣の変化を示す。
【図４Ｃ】胃腺癌被験者ＣＡＲ−Ｔ治療過程での胸膜および腹水症の変化を示す。
【図４Ｄ】胃腺癌被験者ＣＡＲ−Ｔ治療過程でのＣＡ１２５レベルの変化を示す。
【図４Ｅ】胃腺癌被験者ＣＡＲ−Ｔ治療過程でのＣＡ１９９レベルの変化を示す。
【図５】組換え担体ＭＳＣＶ−８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺのプラスミドマップである。
【図６Ａ】それぞれ膵臓癌細胞およびＣＡＲ−Ｔ細胞のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）の毒性作用を検出するＣＣＫ８実験である。
【図６Ｂ】それぞれ膵臓癌細胞およびＣＡＲ−Ｔ細胞のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）の毒性作用を検出するＣＣＫ８実験である。
【図７Ａ】マウス膵臓癌のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）とＣＡＲ  Ｔ細胞の併用の抑制効果を観察した体内実験およびマウスの体重の変化図を示す。
【図７Ｂ】マウス膵臓癌のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）とＣＡＲ  Ｔ細胞の併用の抑制効果を観察した体内実験およびマウスの体重の変化図を示す。
【図８Ａ】本発明の方法で治療した後のマウスの生存期間を示す。
【図８Ｂ】本発明の方法で治療した後のマウスの生存期間を示す。
【図８Ｃ】本発明の方法で治療した後のマウスの生存期間を示す。
【図９】本発明の方法で治療した後のマウスモデルの体重変化グラフである。
【発明を実施するための形態】
【０２１６】
発明者は、広範かつ徹底的な研究を経て、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または例えばＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のような他の遺伝子組み換え受容体を発現する免疫エフェクター細胞を特定の量で特定の時間パラメータに基づいて投与して免疫エフェクター細胞を利用して腫瘍の治療を行う治療効果を大幅に向上させることにより、固形腫瘍での免疫エフェクター細胞の応用効果を向上させることを意外に発見した。本発明は、少なくとも部分的に上記の発見に基づいている。
【０２１７】
別に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての専門用語、符号および他の技術と科学用語や独自の語彙は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。場合によっては、本明細書は、説明および／または引用の目的で一般的に理解される意味を持つ用語をさらに限定するが、本明細書に含まれているこれらの追加限定は、当技術分野で一般的に理解される実質的な違いを示すものと理解してはならない。
【０２１８】
特許文書、学術論文、およびデータベースを含む、本発明で言及されるすべての出版物は、個々の出版物が参照により独立して組み込まれるように見えるのと同じ程度に、あらゆる目的のために引用によってその全体が組み込まれる。本明細書に示される定義が、参照により本明細書に組み込まれる特許、公開された出願、および他の刊行物に示される定義と異なる場合、または他の点で矛盾する場合、参照により本明細書に組み込まれる文書における定義は、本明細書に示される定義をメインとする。
【０２１９】
本明細書で使用される場合、単数形の「１つ」、「１種」および「前記」は、本文が明確に定義されない限り、複数の被験者を指すことを含む。例えば、「１種」または「１つ」は、「少なくとも１種または１つ」または「１種（１つ）または複数種（１つ以上）」を指す。
【０２２０】
この開示では、請求された主題のすべての側面が範囲形式で提示されている。範囲形式での説明は、単に便宜上および簡潔にするためのものであり、請求された主題の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、その範囲内のすべての可能なサブ範囲と範囲内の個々の値を具体的に開示していると見なす必要がある。例えば、値の範囲が提供されている場合、範囲の上限と下限の間の各中間値と、範囲内の任意の他に前記値または中間値は、請求された主題に含まれ、前記範囲の上限と下限も請求された主題に属することを理解されたい。前記より小さな範囲は、これらのより小さな範囲の上限および下限を独立して含むことができ、範囲の上限および下限が明示的に除外されない限り、それらはまた、請求された主題の範囲に属する。設定範囲に１つまたは２つの制限値が含まれる場合、請求された主題には１つまたは２つの制限値を除外する範囲も含まれるす。この原則は、範囲に関係なく適用される。
【０２２１】
本明細書で使用される用語「約」は、当技術分野で容易に知られている各値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における値またはパラメータの「約」への言及は、前記値または前記パラメータ自体を指す実施形態を含む（および説明）。例えば、「約Ｘ」の説明は、「Ｘ」の説明を含む。例えば、「約」は、当業界の実際の標準偏差に応じて、１以内または１を超えることを意味する場合がある。または、「約」は最大１０％（つまり、±１０％）の範囲を意味する。例えば、約５ｍｇは、４.５ｍｇから５.５ｍｇまでの任意の数を含むことができる。特定の値または組成が出願および特許出願の範囲で提供される場合、特に明記しない限り、「約」は、特定の値または組成の許容される誤差範囲内であると想定されるべきである。
【０２２２】
アミノ酸または核酸配列を説明する場合、特定の配列を「有す」ことは、特定の配列の変異体を包含すると理解されるべきである。いくつかの実施形態では、特定の配列を有するアミノ酸または核酸配列は、アミノ酸または核酸配列が特定の配列と８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％を超える配列同一性を有することを意味する。
【０２２３】
特に明記しない限り、本明細書に記載の任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、前記範囲内の任意の整数、および適切な場合にはその割合（例えば、整数の１０分の１および整数の１００分の１）を含むと理解されるべきである。
【０２２４】
本明細書で使用される「投与間隔」は、免疫エフェクター細胞療法の複数のコース（例えば、初回投与量の免疫エフェクター細胞の投与および後続投与量の免疫エフェクター細胞の投与を含む複数の治療コースを含む）の間、および前処理薬物の投与の間の経過時間を指す。したがって、投与間隔は範囲として示すことができる。本発明のいくつかの態様において、本発明は、免疫エフェクター細胞療法の複数のコースを個体に投与することを含み、それぞれのコースは、医師によって決定された投与量（例えば、初回投与量および後続投与量）で投与される。本発明のいくつかの態様において、本発明による免疫エフェクター細胞治療の特定の投与量は、２つまたは２つ以上の分割投与量で投与することができ、分割投与量で投与される総投与量は、医師によって決定される治療過程における総投与量に等しい。
【０２２５】
本明細書で言及される「投与量」は、重量に基づいて計算された投与量または体表面積（ＢＳＡ）に基づいて計算された投与量として表すことができる。重量に基づいて計算された投与量は、ｍｇ／ｋｇ、免疫エフェクター細胞の数／ｋｇなどの患者の体重に基づいて計算された患者に投与される投与量である。ＢＳＡに基づいて計算された投与量は、ｍｇ／ｍ２、免疫エフェクター細胞の数／ｍ２などの患者の表面積に基づいて計算された患者に投与される投与量である。
【０２２６】
本明細書で使用される「投与回数」は、所与の時間内の免疫エフェクター細胞または前処理薬物の投与量の投与の頻度を指す。投与回数は、所定の時間あたりの投与量数として示すことができる。例えば、１日１回連続４日間、１日１回連続３日間、１日１回連続２日間、または１日１回１日間フルダラビンを投与できる。１日１回連続４日間、１日１回連続３日間、１日１回連続２日間、または１日１回１日間シクロホスファミドを投与できる。１日１回連続４日間、１日１回連続３日間、１日１回連続２日間、または１日１回１日間アルブミン結合パクリタキセルを投与できる。
【０２２７】
本明細書で使用される組成物は、２つ以上の産物、物質または化合物（細胞を含む）の任意の混合物を指す。それは、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性、非水性、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
【０２２８】
本明細書で使用される場合、「細胞または細胞集団は、具体的なマーカーに対して「陽性」である」とは、細胞上または細胞内の具体的なマーカー（通常は表面マーカー）の検出可能な存在を指す。表面マーカーを指す場合、この用語は、表面発現の存在が、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体で染色し、抗体を検出することによって、フローサイトメトリーによって検出されることを意味する。ここで、染色は、アイソタイプが一致する対照を使用して同じ他の条件下で同じステップを実行するときに検出される染色レベルよりも有意に高い、および／または前記マーカーに対して陽性であることが知られている細胞のレベルと実質的に同様であり、および／または前記マーカーに対して陰性であることが知られている細胞のレベルより有意に高いことをフローサイトメトリーによって検出することができる。
【０２２９】
本明細書で使用される場合、「細胞または細胞集団は、具体的なマーカーに対して「陰性」である」とは、細胞上または細胞内の表面マーカーなどの具体的なマーカーを有さないか、またはそれを有するにもかかわらず実質的に検出できないことを意味する。表面マーカーを指す場合、この用語は、フローサイトメトリーによって、または表面発現の存在にもかかわらず、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体で染色された場合、表面発現が検出できないことを意味し、また、表面発現を検出するために抗体を検出すると、前記染色は、アイソタイプが一致する対照を使用して同じ他の条件下で同じステップを実行するときに検出される染色レベルよりも有意に低い、および／または前記マーカーに対して陽性であることが知られている細胞のレベルより有意に低い、および／または前記マーカーに対して陰性であることが知られている細胞のレベルと実質的に同様であることをフローサイトメトリーによって検出することができる。
【０２３０】
本明細書で使用される用語「担体」は、それが連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。前記用語は、自己複製核酸構造の形態の担体、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに導入されたベクターを含む。特定の担体は、それらに作動可能に連結された核酸の発現を誘導することができる。前記担体は、本明細書では「発現ベクター」とも呼ばれる。
【０２３１】
本出願は、固形腫瘍を治療するための養子細胞または免疫エフェクター細胞、および細胞の複数回投与または反復投与を含む使用方法、組成物、および製品に関する。細胞は一般に、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの他の遺伝子組み換え受容体を発現する。
【０２３２】
クローディン１８（Ｃｌａｕｄｉｎ  １８、ＣＬＤ１８）分子（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号：スプライス変異体１（ＣＬＤ１８Ａ１）：ＮＰ＿０５７４５３、ＮＭ０１６３６９、およびスプライス変異体２（ＣＬＤ１８Ａ２）：ＮＭ＿００１００２０２６、ＮＰ＿００１００２０２６）は、分子量が約２７.９／２７.７２ｋＤである内在的膜貫通蛋白質である。クローディンは、上皮と内皮の密着連接位置にある内在的膜タンパク質である。密着連接は、隣接する細胞間の組織膜内顆粒が互いに接続されたネットワークである。密着連接では、オクルディン（ｏｃｃｌｕｄｉｎ）とクローディンは最も重要な膜貫通タンパク質組成成分である。これらの強力な細胞間粘着特性のために、これらの溶質の部細胞的輸送（ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）を防止し、制御して、膜脂質とタンパク質の側方向への拡散を制限して、細胞極性を維持する１次障壁を生成する。密着連接を形成するタンパク質は、上皮組織の構造に決定的に関与する。
【０２３３】
ＣＬＤ１８Ａ１は正常な肺と胃の上皮で選択的に発現されるが、ＣＬＤ１８Ａ２は、胃細胞のみ発現される。また、ＣＬＤ１８Ａ２はすでに分化した上上皮短命細胞（ｓｈｏｒｔ−ｌｉｖｅｄ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ）に限定されるが、胃の幹細胞領域に存在していない。２つの変異体は、様々ながんの種類から強烈に発現されるが、胃、食道、膵臓および肺の腫瘍と人間癌細胞株を含む。発現は、主にこのような適応症の腺癌の亜型で行われる。
【０２３４】
本発明は、ＣＬＤ１８発現に関連する疾患（腫瘍など）を治療するための治療方法および組成物を提供する。
【０２３５】
本発明は、遺伝子工学操作（遺伝子組換え）されたキメラ受容体を発現する養子細胞または免疫エフェクター細胞を使用して被験者の腫瘍、特に固形腫瘍を治療する方法を提供する。前記方法は、養子細胞または免疫エフェクター細胞の単一の治療過程の再注入（ｒｅｉｎｆｕｓｉｏｎ）、または複数の治療過程の再注入を含む。本明細書において、「投与量」は、１つの治療過程で、養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与または再注入する総量を意味する。いくつかの実施形態では、本明細書による方法が複数の治療過程を含む場合は、各治療過程の投与量は同じである。いくつかの実施形態では、本明細書による方法が複数の治療過程を含む場合は、各治療過程の投与量は異なる。「分割投与量」は、１つの治療過程で、全体の治療過程の投与量を複数回に分けて被験者に投与する場合は、１回に投与される投与量を意味する。いくつかの実施形態では、１つの治療過程の投与量は、複数の回に分けて被験者に投与される場合は、毎回投与される分割投与量は同じである。いくつかの実施形態では、１つの治療過程の投与量は、複数の回に分けて被験者に投与される場合は、毎回投与される分割量は異なる。本明細書において、特に明示していない限り、投与量は、すべて１つの治療過程で投与または再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の総量を意味する。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、単一の治療過程で、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞を再注入するステップを含む。単一の治療過程は、一定の時点に一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を再注入することを意味する。いくつかの実施形態では、前記治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を１回再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を２回または２回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を３回または３回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を４回または４回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を５回または５回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を６回または６回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を７回または７回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を８回または８回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を９回または９回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を１０回または１０回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞は、再注入しようとする養子細胞または免疫エフェクター細胞の等分量である。いくつかの実施形態では、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞は、再注入しようとする養子細胞または免疫エフェクター細胞と不等分量である。いくつかの実施形態では、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量は、医師によって被験者の具体的な状況に応じて決定される。被験者の具体的な状況は、例えば被験者の全体的健康状況、疾患の重症度、同じ治療過程前回投与量に対する反応、以前の治療過程の反応、被験者の薬物併用状況、毒性反応程度または可能性、合併症、がん転移状況、および医師が被験者に再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量に影響与えることができると考えている任意の他の要素であることができる。いくつかの実施形態では、前記一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を複数回再注入する過程で、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量は徐々に増加する。いくつかの実施形態では、前記一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を複数回再注入する過程で、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量は徐々に減少する。いくつかの実施形態では、前記一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を複数回再注入する過程で、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量は、最初に徐々に増加した後、徐々に減少する。いくつかの実施形態では、前記一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を複数回再注入する過程で、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量は、最初に徐々に減少した後、徐々に増加する。
【０２３７】
複数の治療過程の再注入は、多数の前記時点を備え、各時点内に一定量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を再注入することを意味する。いくつかの実施形態では、前記多数の時点の長さは一致している。いくつかの実施形態では、前記多数の時点の長さは不等である。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも２つの前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも３つの前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも４つの前記時点を備えることを意味するとを備えことを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも５つの前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも６つの前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも７つの前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも８つの前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態において、前記複数の治療過程は、少なくとも９つの上記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、少なくとも１０個の前記時点を備えることを意味する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程は、１０個以上の前記時点を備えることを意味する。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を１回再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を２回または２回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を３回または３回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を４回または４回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を５回または５回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を６回または６回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を７回または７回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を８回または８回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を９回または９回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を１０回または１０回以上に分けて再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程では、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞は、再注入しようとする養子細胞または免疫エフェクター細胞の等分量である。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程では、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞は、再注入しようとする養子細胞または免疫エフェクター細胞と不等分量である。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での１つの治療過程では、毎回再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量は、医師によって被験者の具体的な状況に応じて決定される。被験者の具体的な状況は、例えば被験者の全体的健康状況、疾患の重症度、同じ治療過程前回投与量に対する反応、以前の治療過程の反応、被験者の薬物併用状況、毒性反応程度または可能性、合併症、がん転移状況、および医師が被験者に再注入される養子細胞または免疫エフェクター細胞の量に影響与えることができると考えている任意の他の要素であることができる。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を同じ回数で再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を異なる回数で再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を同じ回数で再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で同じ一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を再注入する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で異なる一定の総量の養子細胞または免疫エフェクター細胞を再注入する。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の総量は徐々に増加する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の総量は徐々に減少する。いくつかの実施形態では、前記複数の治療過程での各治療過程で、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の総量は、まず徐々に増加した後、徐々に減少する。前記複数の治療過程での各治療過程で、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の総量は、まず徐々に減少した後、徐々に増加する。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、初回投与量は比較的低い投与量および／または調節または減少された投与量であるか、および／または後続投与量は、強化された投与量および／または調節または減少された投与量である。これらの方法に使用することができる細胞、組成物、および製品をさらに提供する。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、例えば、機能性非−ＴＣＲ抗原受容体のような遺伝子工学操作された抗原受容体であるが、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、遺伝子工学操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のような他の組換え抗原受容体である。受容体は、例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達の部分と同じリガンドまたは受容体または他の結合パートナーに特異的に結合されている細胞外部分と細胞内部分を含んでいる受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、投与量は比較的低い初回投与量を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、前記方法は、（ａ）腫瘍を患っている被験者に、単一の治療過程のキメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞を投与するステップと、および（ｂ）被験者に複数の治療過程のキメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞を投与するステップを含む。他の実施形態では、１つまたは複数の後続投与量で投与することができる。
【０２４２】
用語「ＣＬＤ１８」はクローディン−１８を指すが、細胞が自然に発現されるかＣＬＤ１８遺伝子が形質注入された細胞によって発現された任意のＣＬＤ１８の変異体（ＣＬＤ１８Ａ１とＣＬＤ１８Ａ２を含む）、コンフォメーション、イソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ）、種間ホモログ（ｓｐｅｃｉｅｓｈｏｍｏｌｏｇｓ）を含む。好ましくは、「ＣＬＤ１８」は、人ＣＬＤ１８を意味するが、特にＣＬＤ１８Ａ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）および／またはＣＬＤ１８Ａ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）を意味し、より好ましくＣＬＤ１８Ａ２を意味する。
【０２４３】
用語「ＣＬＤ１８Ａ１」は、細胞が自然に発現されるかＣＬＤ１８Ａ１遺伝子が形質注入された細胞によって発現された任意の人間ＣＬＤ１８Ａ１の翻訳後の変形された変異体、イソフォーム、および種ホモログを含む。
【０２４４】
用語「ＣＬＤ１８Ａ２」は、細胞が自然に発現されるかＣＬＤ１８Ａ２遺伝子が形質注入された細胞によって発現された任意の人間ＣＬＤ１８Ａ２の翻訳後の変形された変異体、イソフォーム、および種ホモログを含む。
【０２４５】
用語「ＣＬＤ１８変体」は、（ｉ）ＣＬＤ１８スプライス変異体、（ｉｉ）ＣＬＤ１８の翻訳後の変形された変異体は、特にＮグリコシル化状態が異なる変異体、（ｉｉｉ）ＣＬＤ１８配列変異体は、特にＣＬＤ１８−配列−１、ＣＬＤ１８−配列−２とＣＬＤ１８−配列−３、（ｉｖ）細胞間密着連接位置にある遊離ＣＬＤ１８とホモ／アロ関連変異体（ｈｏｍｏ／ａｌｌｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖａｒｉａｎｔｓ）、（ｖ）ＣＬＤ１８癌関連変異体とＣＬＤ１８非−癌関連変異体（ｎｏｎ−ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｖａｒｉａｎｔｓ）を含むべきである。
【０２４６】
キメラ抗原受容体を発現する細胞を使用して腫瘍を治療する方法
本発明は、細胞治療に使用され、各種の固形腫瘍を含む疾患または病症を治療する方法、組成物、および製品を提供する。前記方法は、キメラ受容体を発現する免疫エフェクター細胞の投与に関するもので、前記キメラ受容体は、腫瘍抗原を標的化して識別するか、および／または腫瘍抗原に特異的に結合され、免疫エフェクター細胞を活性化させる。前記受容体は、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）とＴ細胞抗原カプラ（Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）などのキメラ受容体を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、前記方法は、被験者に１つまたは複数の後続投与量の細胞を投与するステップを含む。投与量は、一般的に、特定の量で特定の時間パラメータに基づいて投与される。いくつかの実施形態では、前記方法は、一般的に、初回投与量の細胞を投与した後、初回投与量に対して、特定の時点に後続投与量の細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、投与される細胞数、および複数の回の投与量の時間は、設計を経て、１つまたは複数の結果を改善させ、例えば、被験者の毒性程度または可能性を減少させるか、および／または治療効果を改善させる。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、提供された方法は、本明細書で観察された投与された細胞の被験者の暴露の程度増加（例えば、時間に応じて増加した細胞数または時間）に基づいて、免疫エフェクター細胞の治療での効果と治療結果を改善させることができる。複数の臨床試験で、様々なＣＬＤ１８Ａ２陽性腫瘍を患っている被験者にＣＬＤ１８Ａ２を標的化する異なるＣＡＲ−Ｔ細胞を投与した後、初歩的な分析を行い、より高いか、および／またはより長いＣＡＲ−Ｔ細胞の暴露の程度と治療の結果の間に存在する関連性を示す。これらの結果は、患者の生存、緩和または病状の安定を含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の被験者の暴露の程度を監視し、前記露出の程度に応じて、後続的に回数を分けて投与するか、またはそれ以降の治療過程の投与量と時間間隔を決定するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の被験者の暴露の程度を監視し、前記露出度が一定程度に達するか、または超過することにより、後続的に回数を分けて投与または後続治療過程の投与量を維持または減少させるか、および／またはその後の的に回数を分けて投与するか、またはそれ以降の治療過程の間の時間間隔を維持または延長するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の被験者の暴露の程度を監視し、前記露出度が一定程度よりも低いことにより、後続的に回数を分けて投与するか、またはそれ以降の治療プロセスの投与量を維持または増加させたり、および／または後続的に回数を分けて投与するか、またはそれ以降の治療過程の間の時間間隔を維持または短縮させるステップを含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、前記養子細胞または免疫エフェクター細胞の被験者の毒性反応程度またはリスクを監視し、前記毒性程度または危険に応じて、後続的に回数を分けて投与するか、またはそれ以降の治療プロセスの投与量と時間間隔を決定するステップを含む。いくつかの実施形態では、前記毒性反応程度または危険は、例えば、ＣＲＳ、神経毒性、マクロファージ活性化症候群、腫瘍溶解症候群などを含むが、これらに限定されない。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、一般的に、初回投与量または以前の投与量で投与した後、毒性反応またはその症状や生化学指数（例えば、ＣＲＳまたは神経毒性、マクロファージ活性化症候群または腫瘍溶解症候群）の危険性が許容されるレベルより低いか同じ場合、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、前記毒性反応またはその症状または生化学指数は、発熱、低血圧、低酸素症、神経障害、炎症性サイトカイン、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）の血清レベルのいずれかまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、前記毒性反応またはその症状または生化学指数のリスクの許容されるレベルは、初回投与量または以前の投与量で投与した後のピークレベルの９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、または１０％であることを意味する。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、初回投与量または以前の投与量で投与した後、毒性反応がピークレベルに到達しても減少している場合、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、初回投与量または以前の投与量で投与した後、毒性反応が許容されるレベルよりも低いか、同じレベルにまで減少した後、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、初回投与量または以前の投与量で投与した後、毒性反応またはその症状または生化学指数の危険が初めて投与量または以前の投与量で投与した後、表示されるピークレベルの５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％よりも低いか同じ場合、後続投与量で投与する。したがって、いくつかの実施形態では、初回投与量または以前の投与量としては、少なくとも２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、５１日、５２日、５３日、５４日、５５日、５６日、５７日、５８日、５９日、６０日、６１日、６２日、６３日、６４日、６５日、６６日、６７日、６８日、６９日、７０日、７１日、７２日、７３日、７４日、７５日、７６日、７７日、７８日、８０日に投与した後、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、毒性作用と関連する１つまたは複数の症状またはリスクの存在を監視および／または評価して、症状またはリスクが許容されるレベルよりも低いかのようなことを決定した後、後続投与量で注入して、適切な時間を決定する。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、被験者からサイトカイン−放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルは、初回投与量で投与する前の前記被験者の血清レベルの５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、２５倍、２６倍、２７倍、２８倍、２９倍、３０倍を超えていない場合、後続投与量で投与する。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、既に投与された初回投与量または以前の投与量によって発生される宿主免疫反応が後続投与量の効果の低下を誘導することができないように防止するために、後続投与量で投与する時期を選択する。いくつかの態様では、宿主の免疫応答、例えば、投与される細胞および／またはこれにより発現されるキメラ抗原受容体の適応性や特異性は、例えば、体液または細胞媒介免疫反応が表示される前の後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、例えば、一つのまたは様々な専門的検出方法を使用して、これらの反応を検出する前に、後続投与量で投与することができる。一般的に、細胞の宿主適応免疫反応が検出されていないか、まだ構築されていないか、および／またはまだ一定のレベルまたは程度または段階に達していない場合、１つまたは複数の後続投与量で投与する。したがって、いくつかの実施形態では、初回投与量または以前の投与量で投与してから多くて３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、５１日、５２日、５３日、５４日、５５日、５６日、５７日、５８日、５９日、６０日、６１日、６２日、６３日、６４日、６５日、６６日、６７日、６８日、６９日、７０日、７１日、７２日、７３日、７４日、７５日、７６日、７７日、７８日、８０日、８１日、８２日、８３日、８４日、８５日、８６日、８７日、８８日、８９日、９０日、９１日、９２日、９３日、９４日、９５日、９６日、９７日、９８日、または９９日後、後続投与量で投与する。
【０２５４】
したがって、いくつかの実施形態で提供される方法は、毒性の危険性の時点の後の初回投与量に腫瘍の負担を安定化または減少させた後、適応性宿主免疫反応（つまり、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生物の免疫拒否反応）が発生する前に、１つまたは複数の後続投与量で投与する。このような条件では、後続投与量は、残存腫瘍細胞の増殖または転移に対する免疫監視、削除、または予防を安全かつ効果的提供することができる。したがって、いくつかの実施形態では、後続投与量は、疾患の強化された投与量である。
【０２５５】
腫瘍の負担とは、腫瘍体積の大きさや分化の程度、または転移のタイプ、段階、および／またはいずれかの末期がんでよく表示される癌性胸膜液などの合併症の発生と消失、および／または腫瘍マーカーの作成または発現レベルの変化、および／または被験者のＣＲＳ、マクロファージ活性化症候群、腫瘍溶解症候群、神経毒性などの毒性の結果が表示される可能性や発生率、および／または投与される細胞および／またはキメラ抗原受容体の宿主免疫反応を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍の大きさは、ＰＥＴ（陽電子放射断層撮影法）とＣＴ（コンピュータ断層撮影）のスケーラーで測定する。
【０２５６】
前記腫瘍マーカーはまた、腫瘍ラベルとも呼ばれ、特徴的に悪性腫瘍細胞に存在するか、悪性腫瘍細胞によって異常に生成された物質、または腫瘍の宿主の刺激反応により生成された物質、腫瘍発生、発展を反映しすることができ、治療反応の腫瘍を監視する物質を意味する。腫瘍マーカーは、腫瘍患者の組織、体液および排泄物に存在するが、免疫学、生物学的および化学的な方法で検出することができ、アルファ胎児タンパク（ＡＦＰ）、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、扁平上皮癌抗原（ＳＣＣ）、シートケラチン１９の可溶性断片（ＣＹＦＲＡ２１−１）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９９、ＣＡ７２４などを含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、初回投与量は、被験者の腫瘍の負担を十分に減少させる量の細胞を含み、被験者でサイトカイン−放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルが初回投与量で投与する前の前記被験者の血清レベルの１０倍または２５倍の場合は、および／または被験者のＣＲＳ関連の結果、ピークレベルが初回投与量で投与した後、減少し始め、また被験者で初回投与量の細胞によって発現されたキメラ受容体が特異的な検出可能な適応性宿主の免疫反応が発生していない場合は、後続投与量で投与する。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、初回投与量は約２.５×１０８個の細胞／ｋｇ被験者体重より少ないか、または約１×１０１２個の細胞よりも少ない量を含み、初回投与量で投与を開始した後、約２１日を超え、約８０日のない時間に後続投与量で投与される。
【０２５９】
免疫エフェクター細胞治療での細胞投与
本発明によって提供される方法は、腫瘍抗原を発現する固形腫瘍被験者に前記腫瘍抗原を識別する、例えばＣＡＲ、ＴＣＲ、ＴＦＰ、ＴＡＣキメラ抗原受容体などのキメラ抗原受容体を発現する複数の投与量の免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。
【０２６０】
本明細書に基づく「腫瘍抗原」は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ−１；Ｃ型レクチン様分子−１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ−１３Ｒα）；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ−１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胚抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＨＩＶ−１  Ｇａｇ；ＭＡＲＴ−１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソテリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；発生段階特異的胎児性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；上皮成長因子受容体ファミリー及びその突然変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸アンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ；ＴＧＳ５；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；Ｏ−アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（Ｃｌａｕｄｉｎ  ６）、クローディン１８.２（Ｃｌａｕｄｉｎ  １８.２）、クローディン１８.１（Ｃｌａｕｄｉｎ  １８.１）；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン；Ｂ細胞成熟化抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；κ軽鎖（ｋａｐｐａ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ）；ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚型ＡｃｈＲ；ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死部位のがん胚変異体；Ｇタンパク質共役型受容体のクラスＣのグループ５のメンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミド（ｇｌｙｃｏｃｅｒａｍｉｄｅ）のヘキソース部分（ｇｌｏｂｏＨ）；乳房分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ユーロプラキン２（ｕｒｏｐｌａｋｉｎ  ２、ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；パーネクシン３（ｐａｎｎｅｘｉｎ  ３、ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質結合受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ交互リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳトランスロケーションバリアント遺伝子６（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポイエチンは細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；メラノーマ癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；メラノーマ癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；ｐ５３突然変異体；人間テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；育肉腫転座ブレークポイント；細胞死滅の黒色腫阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスプロテインＰａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ−ｍｙｃ鳥骨髄症ウイルスの腫瘍遺伝子神経芽細胞腫由来同族体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ同族体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって識別される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン（ｐｒｏａｃｒｏｓｉｎ）結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼ固定タンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーのメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄基質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュールを含むムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；ホスファチジル筋肉グリカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ペプチド１（ＩＧＬＬ１）を含むが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、前記腫瘍抗原は、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、プロテオグリカン３、クローディン１８.２（Ｃｌａｕｄｉｎ  １８.２）またはＢＣＭＡである。
【０２６１】
本明細書で使用される「被験者」は、例えば、ヒトまたは他の動物のような哺乳動物であるが、一般的に人である。いくつかの実施形態では、初回投与量および／または後続投与量で投与する前に、被験者は、すでに腫瘍化学療法または放射線療法を受けた。いくつかの態様では、被験者は、他の治療剤について難治性または非−反応性を有する。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、腫瘍は、例えば、化学療法、放射線治療を含む他の治療に介入した後、持続性または再発性を有する。いくつかの実施形態では、上記のように投与することにより、被験者が他の治療法に耐性を持つかどうかに関係なく、前記被験者を効果的に治療する。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、被験者は、他の治療剤に対して反応性を持っている治療剤で治療して、腫瘍の負担を減少させる。いくつかの態様では、被験者は最初には治療剤に対して反応性を持つが、時間の経過に応じて、腫瘍が再発される。いくつかのこれらの実施形態では、前記被験者が再発リスクがあることが検出されると、例えば、再発リスクが高いことが検出されると、細胞を予防的に投与することにより、再発の可能性を減少するか、または再発を予防する。
【０２６４】
前記疾患は、腫瘍、または他の増殖性疾患または病症を含む。前記腫瘍は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、ファロピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎腺癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎骨盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌、前記癌の組み合わせと癌の転移病巣を含むが、これらに限定されない。。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、投与量の大きさと再注入時間は、被験者の初期の腫瘍負担によって決定される。例えば、いくつかの状況では、一般的に被験者に投与される初回投与量の細胞数は比較的少ない、腫瘍の負担が比較的低い場合には、例えば、固形腫瘍は、腫瘍マーカーを使用して検出し、腫瘍の負担の大きさおよび／または微細残存病巣を評価することができ、初期の投与量は比較的多いことができる。他の状況では、腫瘍の負担が比較的高い被験者では、初回投与量回数を分けて連続的に注入することができるが、前記初回投与量を１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回に分けて投与し、好ましくは、１〜５回に分けて投与し、より好ましくは、２〜３回に分けて投与する。毎回投与間隔は１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日または２０日、または間隔なしである。いくつかの状況では、後続投与量は、初回投与量と同じか、初回投与量よりも多かったり、初回投与量よりも少ないことができる。
【０２６６】
本明細書で使用される用語「治療」は、腫瘍または関連症状を完全にまたは部分的に軽減または減少させることを意味する。希望する治療効果は、腫瘍発生または再発の予防、症状の軽減、腫瘍の任意の直接的または間接的病理学の結果の減少、転移防止、腫瘍進行速度の低下、腫瘍状態の改善または軽減、および予後の軽減または改善を含むがこれらに限定されない。本明細書で使用される「腫瘍成長の遅延」は、前記腫瘍の成長を遅延、阻害、緩和、減速、安定化、抑制、および／または制限することを意味する。前記遅延は異なる時間の長さを持つことができるが、これは疾患の履歴および／または治療待機中の個体によって決定される。当業者は、遅延が（前記腫瘍に発展していない固体における）予防を含むことができることを理解する。例えば、転移の発展のような末期癌は遅延することができる。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、提供された細胞および組成物は、腫瘍発展を遅延させたり、腫瘍の進行を緩和させる。
【０２６８】
本明細書で使用される機能または活性の「阻害」は、他の場合と同じ病症に比べて、または別の症に比べて機能や活性が減少されることを意味する。
【０２６９】
薬物製剤、細胞または組成物のような試薬の投与からの「有効量」は、一定の投与量で必要な時間の長さで使用される場合には、例えば、治療または予防効果のような希望する結果を得る効果的な量を意味する。
【０２７０】
薬物製剤または細胞のような試薬の「治療有効量」は、投与量と必要な時間のコースで、例えば腫瘍の治療、および／または前記治療の薬動力学または薬物動態学効果のような希望する治療結果を得る効果的な量を意味する。治療有効量は、例えば疾患の状態、年齢、性別、および被験者の体重、および投与される細胞集団など、さまざまな要素の変化に従うことができる。いくつかの実施形態では、提供された方法は、有効量（例えば、治療有効量）の前記細胞および／または組成物の投与に関するものである。
【０２７１】
「予防有効量」は、一定の投与量と必要な時間のコースにおいて、希望する結果を得る有利な量を意味する。一般的に、予防投与量は、疾患の早期または以前に被験者に使用されるので、予防有効量は、治療有効量より少ない。腫瘍の負担が比較的低い場合には、いくつかの態様では、予防有効量は、治療有効量より高いことができる。
【０２７２】
免疫エフェクター細胞の治療に使用される細胞を投与する方法は、公知のものであり、本明細書で提供された方法および組成物と併用することができる。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、前記細胞治療は、例えば養子Ｔ細胞または免疫エフェクター細胞の治療は、それ自体の再注入方式を通じて進行される。したがって、いくつかの態様では、前記細胞は、治療及び前記細胞が必要な被験者に由来され、分離および処理された後、同じ被験者に投与される。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、前記細胞治療は、例えば、養子Ｔ細胞または免疫エフェクター細胞治療は、同種異系の再注入方式を介して進行されるが、ここで、前記細胞は、分離されたり、および／または他の状況で供与体から抽出し、調製されて、供与体と細胞を再注入する被験者が異なる。これらの実施形態において、前記細胞を遺伝学、組織適合性が高い被験者に投与する。いくつかの実施形態では、前記供与体と被験者は遺伝学的に同一である。いくつかの実施形態では、前記供与体と被験者は遺伝学的に類似している。いくつかの実施形態では、前記被験者と供与体は、同じＨＬＡ分類またはスーパータイプに属する。
【０２７５】
前記細胞は、任意の適切な方法で投与されることができるが、例えば、静脈内または皮下注射、眼内注射、眼底注射、網膜下注射、ガラス体内注射、カウンターインターバル注射（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｉｎｔｅｒｖａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、強膜下注射、脈絡膜内注射、前室注射（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｃｈａｍｂｅｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、）、結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｅｃｔｖａｌ）注射、結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｔｉｖａｌ）注射、超強膜腔注射、球後注射、眼周囲注射または球周囲送達などの注射によって投与することができる。いくつかの実施形態では、これらは、非経口的、肺内、および鼻腔内に投与され、局所治療が望まれる場合、病巣内投与を進行する。腹腔外注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。いくつかの実施形態では、１回の静脈内注射を介して指定された投与量だけの細胞を投与する。いくつかの実施形態では、複数回の静脈内注射を介して細胞を投与するが、例えば、２０日を超えない前提の下、複数回投与するか、または連続注入を介して細胞を投与する。
【０２７６】
疾患を予防または治療することにおける適切な投与量は、治療疾患のタイプ、キメラ抗原受容体または細胞のタイプ、疾患の重症度と疾患の経過、前記細胞が、予防または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療、被験者の臨床履歴及び前記細胞の応答、および主治医の医師の決定によって決定することができる。いくつかの実施形態では、前記組成物および細胞は、単一の時点または一連の治療で被験者に投与されることが好適である。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、併用治療の一部として、例えば、他の介入治療、例えば、抗体、操作された免疫エフェクター細胞、受容体または試薬、細胞毒性薬物などの他の治療剤または他の治療方法と併用されて同時に、または順次、任意の順序で投与される。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、１つ以上の他の治療法と併用されるか、または他の介入治療方法と併用されて、同時に、または順次、任意の順序で投与される。いくつかの状況では、前記免疫エフェクター細胞は、十分に近接した時間に他の治療と一緒に投与されることで、前記免疫エフェクター細胞集団または１つ以上の他の治療薬物または方法よりも大きな治療作用を起こし、逆にしても同様である。いくつかの実施形態では、１つ以上の他の治療剤を投与する前に、前記免疫エフェクター細胞を投与する。いくつかの実施形態では、１つ以上の他の治療剤を投与した後、前記免疫エフェクター細胞を投与する。いくつかの実施形態では、１つ以上の他の治療薬物は、持続性の増強させるためにＩＬ−２、ＩＬ−１２のようなサイトカインを含む。
【０２７８】
前記他の治療剤は、任意の適切な方法で投与されることができるが、例えば、静脈内または皮下注射、眼内注射、眼底注射、網膜下注射、ガラス体内注射、カウンターインターバル注射（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｉｎｔｅｒｖａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、強膜下注射、脈絡膜内注射、前室注射（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｃｈａｍｂｅｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、）、結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｅｃｔｖａｌ）注射、結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｔｉｖａｌ）注射、超強膜腔注射、球後注射、眼周囲注射または球周囲送達などの注射によって投与することができる。いくつかの実施形態では、これらは、非経口的、肺内、および鼻腔内に投与され、局所治療が望まれる場合、病巣内投与を進行することができる。腹腔外注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。いくつかの実施形態では、１回の静脈内注射を介して指定された投与量だけの前記治療剤を投与する。いくつかの実施形態では、複数回の静脈内注射を介して細胞を投与するが、例えば、２０日を超えない前提の下、複数回投与するか、または連続注入を介して投与する。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、被験者にチューブリン阻害剤及び前記養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つの治療過程で被験者にチューブリン阻害剤と免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、被験者にチューブリン阻害剤を投与して、免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、前記被験者に、まず免疫エフェクター細胞を投与して、チューブリン阻害剤を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、前記被験者にチューブリン阻害剤と免疫エフェクター細胞をほぼ同時に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、前記被験者にチューブリン阻害剤と免疫エフェクター細胞を交互に投与するステップを含む。複数の治療過程で、前記チューブリン阻害剤と免疫エフェクター細胞は、同じまたは異なることができる。
【０２８０】
本明細書によるチューブリン阻害剤は、チューブリン重合促進剤およびチューブリン重合阻害剤を含む。チューブリン重合促進剤は、例えば、タキサン系（ｔａｘａｎｅｓ）、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ）、スポンジラクトン（ｓｐｏｎｇｅ  ｌａｃｔｏｎｅｓ）、およびラウリマリド（Ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）などを含むが、これらに限定されない。チューブリン重合阻害剤は、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、コンブレタスタチンＡ−４（Ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ  Ａ−４）、ＢＰＲ０Ｌ０７５、プリナブリン（Ｐｌｉｎａｂｕｌｉｎ）（ＮＰＩ−２３５８）、ナキテルピオシン（Ｎａｋｉｔｅｒｐｉｏｓｉｎ）、ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ノコダゾール（Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）、ポドフィロトキシン（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、ドラスタチン１０（Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎｓ１０）、インジブリン（Ｉｎｄｉｂｕｌｉｎ）（Ｄ−２４８５１）およびエリブリン（Ｅｒｉｂｕｌｉｎ）などを含むが、これらに限定されない。
【０２８１】
タキサン（ｔａｘａｎｅｓ）系化合物は、パクリタキセル（（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、商品名：ｔａｘｏｌ）、アルブミン結合パクリタキセル（ｎａｂ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、アブラキサン）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）などおよびこれらの誘導体を含む。タキサン系チューブリン阻害剤は、微小管へのチューブリンの集合を促進し、微小管の解重合を阻害し、微小管の異常な配置と小惑星体の形成をもたらし、それによって紡錘体がその正常な機能を失い、最終的に細胞死につながる可能性がある。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つの治療過程で、被験者にタキサン系薬物および免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つの治療過程で、被験者にタキサン系薬物を投与して、免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つの治療過程で、前記被験者に、まず免疫エフェクター細胞を投与して、タキサン系薬物を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つの治療過程で、前記被験者にタキサン系薬物および免疫エフェクター細胞をほぼ同時に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つの治療過程で、前記被験者にタキサン系薬物および免疫エフェクター細胞を交互に投与するステップを含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、複数の治療過程で、被験者にタキサン系薬物および免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、複数の治療過程で、被験者にタキサン系薬物を投与してから、免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、複数の治療過程で、前記被験者に、まず免疫エフェクター細胞を投与して、タキサン系薬物を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、複数の治療の過程で、前記被験者にタキサン系薬物および免疫エフェクター細胞をほぼ同時に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、複数の治療過程で、前記被験者にタキサン系薬物および免疫エフェクター細胞を交互に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、異なる治療過程で、前記被験者に同じ量のタキサン系薬物および／または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、異なる治療過程で、前記被験者に異なる量のタキサン系薬物および／または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。用語「タキサン系（ｔａｘａｎｅｓ）薬物」は、タキサン系化合物を主成分として含まれている薬物を意味し、上前記タキサン系化合物は、タキサン系と同様のブリッジメチレンベンゾシクロデセンコア構造（ｂｒｉｄｇｅ  ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｅｎｚｏｃｙｃｌｏｄｅｃｅｎｅ  ｃｏｒｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）を有する。いくつかの実施形態では、前記タキサン系化合物の前記ブリッジメチレンベンゾシクロデセンコア構造は、不飽和結合を含む。いくつかの実施形態では、前記タキサン系化合物の前記ブリッジメチレンベンゾシクロデセンコア構造は、不飽和結合を含まない。いくつかの実施形態では、前記タキサン系の前記ブリッジメチレンベンゾシクロデセンコア構造の炭素原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｐから選択されるヘテロ原子によって置換される。いくつかの実施形態では、前記タキサン系化合物は、注射の方法で投与される。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、癌の治療過程では、免疫細胞の活性および／または数を増加、増強または延長することができたり、または医学的に効果的な反応を起こす。免疫細胞の活性を「増加」または「増強」させるという用語は、被験者または腫瘍細胞が本明細書で公開されたその治療への反応能力が改善されるように許可することを意味する。例えば、増強された反応は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、  ７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％またはこれ以上に増強された反応性を含むことができる。本明細書に使用される「増強」は、例えば、免疫エフェクター細胞の治療のような反応の治療の被験者数の増加を意味することもできる。例えば、増強された反応は、反応の治療の被験者の合計のパーセンテージを意味することができ、ここで、パーセンテージは５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％また��９８％以上である。いくつかの実施形態では、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）のようなタキサン系化合物の投与量は、３００ｍｇ／ｍ２／回より多くない、または約２００ｍｇ／ｍ２／回より多くなく、好ましくは、１００ｍｇ／ｍ２／回〜２００ｍｇ／ｍ２／回である。いくつかの実施形態では、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）のようなタキサン系化合物の投与量は、約２００ｍｇ／ｍ２／回、１９５ｍｇ／ｍ２／回、１９０ｍｇ／ｍ２／回、１８５ｍｇ／ｍ２／回、１８０ｍｇ／ｍ２／回、１７５ｍｇ／ｍ２／回、１７０ｍｇ／ｍ２／回、１６５ｍｇ／ｍ２／回、１６０ｍｇ／ｍ２／回、１５５ｍｇ／ｍ２／回、１５０ｍｇ／ｍ２／回、１４５ｍｇ／ｍ２／回、１４０ｍｇ／ｍ２／回、１３５ｍｇ／ｍ２／回、１３０ｍｇ／ｍ２／回、１２５ｍｇ／ｍ２／回、１２０ｍｇ／ｍ２／回、１１５ｍｇ／ｍ２／回、１１０ｍｇ／ｍ２／回、１０５ｍｇ／ｍ２／回、１００ｍｇ／ｍ２／回、９５ｍｇ／ｍ２／回、９０ｍｇ／ｍ２／回、８５ｍｇ／ｍ２／回、８０ｍｇ／ｍ２／回、７５ｍｇ／ｍ２／回、７０ｍｇ／ｍ２／回、６５ｍｇ／ｍ２／回、６０ｍｇ／ｍ２／回、５５ｍｇ／ｍ２／回、５０ｍｇ／ｍ２／回、４５ｍｇ／ｍ２／回、４０ｍｇ／ｍ２／回、３５ｍｇ／ｍ２／回、３０ｍｇ／ｍ２／回、２５ｍｇ／ｍ２／回、２０ｍｇ／ｍ２／回、１５ｍｇ／ｍ２／回、１０ｍｇ／ｍ２／回、８ｍｇ／ｍ２／回、６ｍｇ／ｍ２／回、４ｍｇ／ｍ２／回、３ｍｇ／ｍ２／回、２ｍｇ／ｍ２／回または１ｍｇ／ｍ２／回であり、好ましくは、１００ｍｇ／ｍ２／回〜２００ｍｇ／ｍ２／回である。いくつかの実施形態では、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）のようなタキサン系化合物は、約６週間、５週間、４週間、３週間、２週間、１週、６日、５日、４日、３日、２日、または１日ごとに１回静脈内注入される。いくつかの実施形態では、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）のようなタキサン系化合物の各治療過程で１回静脈内注入する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の治療は、タキサン系化合物を投与する１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、１ヶ月またはこれらの任意の組み合わせの前に実行される。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の治療は、タキサン系化合物を投与した１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、１ヶ月またはこれらの任意の組み合わせ後に実行される。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、初回投与量または後続投与量で投与する前に、例えば、化学療法薬物（化学治療剤）、全身放射線、局所放射線治療など、またはこれらの組み合わせのような前処理を実行するステップを含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、１つ以上の化学治療剤を使用して被験者に前処理を実行するステップを含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、チューブリン阻害剤と１つ以上の他の化学治療剤を使用して被験者に前処理を実行するステップを含む。理論的には制限されない場合には、前処理の作用は、リンパ球除去、腫瘍の負担の減少などを含むが、これらに限定されないものと理解される。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、初回投与量または後続投与量で投与する前に、前記前処理を実行していないステップを含む。いくつかの実施形態では、前記前処理を実行していないのは、リンパ球の除去剤の非投与、全身放射線治療またはこれらの組み合わせ、または他の手段で前処理を実行する場合、前記前処理を実行した被験者体内のリンパ球除去率はまだ５０％、５５％、６０％、６５％または７０％よりも低い場合を含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、本明細書による化学治療剤は、化学治療で使用される薬物を意味するもので、微生物感染症、寄生虫病や悪性腫瘍の予防、治療作用のある化学薬物を意味する。化学治療剤は、合成抗菌薬、抗生物質、抗寄生虫剤、抗真菌薬、抗ウイルス薬、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗結核薬、および抗腫瘍薬を含むが、これらに限定されない。例えば、ジテルペンアルカロイド化合物（ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ  ａｌｋａｌｏｉｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）（タキサンなど）、シクロホスファミド、フルダラビン、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ステロイド（ｓｔｅｒｏｉｄｓ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）、アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ），シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、ヒドロキシ尿素（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、および／またはビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）などである。いくつかの実施形態では、前記代謝拮抗薬は、カルモフル、テガフル（ｔｅｇａｆｕｒ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、デオキシフルリジン、トリメキサート（ｔｒｉｍｅｘａｔｅ）、フルダラビン、カペシタビン、ガロピタビン（ｇａｌｌｏｐｉｔａｂｉｎｅ）、シタラビンステアリルナトリウムホスフェート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ｓｔｅａｒｙｌ  ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、フォステアビンナトリウム水和物（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ  ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙｄｒａｔｅ）、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、パルチトレキセド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、ジピリテフル（ｄｉｐｙｒｉｔｅｆｌｕ）、チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）、ノルラトレキセド（ｎｏｒｌａｔｒｅｘｅｄ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ネルザラビン（ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ）、２’−デオキシ−２’−メチレンシチジン（２’−ｄｅｏｘｙ−２’−ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｙｔｉｄｉｎｅ）、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン（２’−ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ）、Ｎ−［５−（２，３−二水素−ベンゾフラン）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素（Ｎ−［５−（２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ−ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ］−Ｎ’−（３，４−ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｕｒｅａ）、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ）、４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロール−Ｂ−Ｌ−マンノース−ヘプタノシルピラノシル］アデニン（４（Ｅ）−ｔｅｔｒａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］ｇｌｙｃｙｌａｍｉｎｏ］−Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ−ＢＬ−ｍａｎｎｏｓ��−ｈｅｐｔａｎｏｓｙｌｐｙｒａｎｏｓｙｌ］ａｄｅｎｉｎｅ）、アプリジン（ａｐｌｉｄｉｎｅ）、アスシジン（ａｓｃｉｄｉｎ）、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸（４−［２−ａｍｉｎｏ−４−ｏｘｏ−４，６，７，８−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［５，４−ｂ］ｔｈｉａｚｉｎ−６−ｙｌ−（Ｓ）−ｅｔｈｙｌ］−２，５−ｔｈｉｅｎｏｙｌ−Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）、５−フルオロウラシル、アラノシン（ａｌａｎｏｓｉｎｅ）、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラサイクリン（７.４.１.０.０）−テトラデカノ−２，４，６−トリエン−９−イルアセテート（１１−ａｃｅｔｙｌ−８−（ｃａｒｂａｍｏｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）−４−ｆｏｒｍｙｌ−６−ｍｅｔｈｏｘｙ−１４−ｏｘａ−１，１１−ｄｉａｚａｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（７.４.１.０.０）−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏ−２，４，６−ｔｒｉｅｎｅ−９−ｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、スウェインソニン（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）、ロメトリソル（ｌｏｍｅｔｒｉｓｏｌ）、デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎａｓｅ）、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（２’−ｃｙａｎｏ−２’−ｄｅｏｘｙ−Ｎ４−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−１−Ｂ−Ｄ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ  ｃｙｔｏｓｉｎｅ  ）および３−アミノピリジン−２−アルデヒドチオセミカルバゾン（３−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ−２−ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｏｎｅ）などを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、前記アルキル化剤は、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、シクロホスファミド、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ブスルファン、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）およびニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）などを含むが、これらに限定されない。
【０２８６】
初回投与量または後続投与量で投与する前に、被験者を前処理して免疫エフェクター細胞の治療効果を向上させることができる。各治療過程で免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）を投与する最初の注入の日を第０日を指定する。免疫エフェクター細胞の注入を実行する前に、前処理する。いくつかの実施形態では、養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与する少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日前までに前処理する。いくつかの実施形態では、１つの化学治療剤を使用して前処理する。いくつかの実施形態では、２つまたは２つ以上の化学治療剤を使用して前処理する。いくつかの実施形態では、１つの微小管阻害剤と１つ以上の他の化学治療剤を使用して前処理する。いくつかの実施形態では、２つの微小管阻害剤と１つ以上の他の化学治療剤を使用して前処理する。いくつかの実施形態では、チューブリン重合促進剤などの１つの微小管阻害剤１つ以上のアルキル化剤、および１つまたは複数の代謝拮抗薬を使用して前処理する。いくつかの実施形態では、１つ以上のパクリタキセル系と１つ以上のアルキル化剤、および１つまたは複数の代謝拮抗薬を使用して前処理する。いくつかの実施形態では、一つの微小管阻害剤（例えば、パクリタキセルは、特にアルブミン結合パクリタキセル）と２つの他の化学治療剤（例えば、フルダラビンおよびシクロホスファミド）を使用して前処理する。説明の便宜の目的のために、フルダラビンおよびシクロホスファミドを、代表的な化学治療剤にして（アルブミン結合）パクリタキセルを、代表的な微小管阻害剤で、１つの微小管阻害剤および２つの他の化学治療剤を使用して前処理する場合の具体的な実施形態を説明する。例えば、いくつかの実施形態では、フルダラビン、またはシクロホスファミドおよびアルブミン結合パクリタキセルを単独で使用するか、２つずつの組み合わせ、または３つを併用して前処理としてＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日前までに、被験者に投与して、好ましくは、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日または２０日前までに、被験者に投与し、より好ましくは、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日または８日前までに、被験者に投与する。いくつかの実施形態では、前処理は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する６日前にフルダラビンおよびシクロホスファミドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、前処理は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する７日前にフルダラビンおよびシクロホスファミドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、前処理は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する５日前にフルダラビンおよびシクロホス���ァミドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、前処理は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する６日前にフルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。いくつかの実施形態では、前処理は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する４日前にアルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。
【０２８７】
上述したように、患者の各治療過程でＣＡＲ  Ｔ細胞治療を行った日を第０日を指定する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を実行する前に、いつでもフルダラビン、シクロホスファミドおよびアルブミン結合パクリタキセルを投与することができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する少なくとも７日、少なくとも６日、少なくとも５日、少なくとも４日、少なくとも３日、少なくとも２日、少なくとも１日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する少なくとも１２日、少なくとも１１日、少なくとも１０日、少なくとも９日、少なくとも８日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する７日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する６日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する１２日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する５日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する４日前にフルダラビン、シクロホスファミドまたはアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する７日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する７日前にシクロホスファミドを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する６日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する６日前にシクロホスファミドを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する５日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する５日前にシクロホスファミドを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する１２日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する１２日前にシクロホスファミドを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する５日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞砲を注入する５日前にシクロホスファミドを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する４日前にアルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する６日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する６日前にシクロホスファミドを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する５日前アルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する１２日前にフルダラビンを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する１２日前にシクロホスファミドを投与し始め、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する１１日前アルブミン結合パクリタキセルを投与し始める。
【０２８９】
前処理した成分を調整することができる時期は、ＣＡＲ  Ｔの治療効果が最も大きい時期である。一般的に、毎日フルダラビン、シクロホスファミド、および／またはアルブミン結合パクリタキセルを投与することができる。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビン、シクロホスファミドおよびアルブミン結合パクリタキセルを約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを４日間投与し、毎日シクロホスファミドを２日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを２日間投与し、毎日シクロホスファミドを３日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを２日間投与し、毎日シクロホスファミドを４日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを１日間投与し、毎日シクロホスファミドを３日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日のフルダラビンを１日間投与し、毎日シクロホスファミドを４日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを４日間投与し、毎日シクロホスファミドを２日間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを１日間投与し、毎日シクロホスファミドを３日間投与し、毎日アルブミン結合パクリタキセルを１日の間投与する。いくつかの実施形態では、毎日フルダラビンを１日間投与し、毎日シクロホスファミドを４日間投与し、毎日アルブミン結合パクリタキセルを１日の間投与する。
【０２９０】
上述したように、患者にＣＡＲ  Ｔ細胞治療を実行する日を第０日を指定する。いくつかの実施形態では、第０日に前の第４日（すなわち、第−４日）に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−１２日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日および第−５日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日および第−４日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−７日、第−６日、第−５日および第−４日に患者にフルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日、第−５日および第−４日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日、第−４日および第−２日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−１２日、第−１１日および第１０日に、患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−７日及び第−６日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日および第−５日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−４日に患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日に患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、第−１１日に患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日および第−４日に患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。
【０２９１】
同じ日または別の日にフルダラビン、シクロホスファミドとアルブミン結合パクリタキセルを投与することができる。同じ日にフルダラビン、シクロホスファミドとアルブミン結合パクリタキセルを投与すれば、フルダラビン前または後にシクロホスファミドおよび／またはアルブミン結合パクリタキセルを投与することができたり、またはシクロホスファミドの前または後にフルダラビンおよび／またはアルブミン結合パクリタキセルを投与することができたり、またはアルブミン結合パクリタキセルの前または後にシクロホスファミドおよび／またはフルダラビンを投与することができる。いくつかの実施形態では、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日に患者にフルダラビンを投与し、第−６日および第−５日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−７日、第−６日、第−５日および第−４日に患者にフルダラビンを投与し、第−７日及び第−６日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日および第−４日に患者にフルダラビンを投与し、第−５日、第−４日および第−２日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日および第−５日に患者にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日に患者にフルダラビンを投与し、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日に患者にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日および第−４日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日に患者にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、第−５日に患者にフルダラビンを投与し、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与し、第−４日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日に患者にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日および第−４日に患者にシクロホスファミドを投与し、第−５日アルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、第−１２日に患者にフルダラビンを投与し、第−１２日、第−１１日および第１０日に、患者にシクロホスファミドを投与し、第−１１日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、第−６日に患者にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日に患者にシクロホスファミドを投与し、第−５日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、フルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルを同時にまたは連続して投与することができる。いくつかの実施形態では、フルダラビンを投与する前に、患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、フルダラビンを投与した後、患者にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、フルダラビンを投与する前に、患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、フルダラビンを投与する前後に患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドを投与する前に、患者にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドを投与した後、アルブミン結合パクリタキセルを投与する。
【０２９３】
任意の経路（静脈注射（ＩＶ）を含む）を利用して、フルダラビン、シクロホスファミドとアルブミン結合パクリタキセルを投与することができる。いくつかの実施形態では、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約９０分、約１２０分でＩＶを利用して、フルダラビンを投与する。いくつかの実施形態では、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約９０分、約１２０分でＩＶを利用して、シクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約９０分、約１２０分でＩＶを利用して、アルブミン結合パクリタキセルを投与する。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、フルダラビンとシクロホスファミドの投与するか、フルダラビン、シクロホスファミドとアルブミン結合パクリタキセルを投与する際、患者にＴ細胞治療を行う。いくつかの実施形態では、前記Ｔ細胞治療は、養子細胞治療または免疫エフェクター細胞治療を含む。いくつかの実施形態では、養子細胞治療または免疫エフェクター細胞の治療は、腫瘍の浸潤リンパ球（ＴＩＬ）免疫治療、自己細胞治療、操作された自己細胞治療（ｅＡＣＴ）、および同種異系Ｔ細胞移植法から選択される。いくつかの実施形態では、ｅＡＣＴは操作された抗原特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ  Ｔ）陽性Ｔ細胞の投与を含む。いくつかの実施形態では、ｅＡＣＴは操作された抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）陽性Ｔ細胞の投与を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、患者の腫瘍を治療する。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、前処理は、約５００ｍｇ／ｍ２／日、４９０ｍｇ／ｍ２／日、４８０ｍｇ／ｍ２／日、４７０ｍｇ／ｍ２／日、４６０ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日、４４０ｍｇ／ｍ２／日、４３０ｍｇ／ｍ２／日、４２０ｍｇ／ｍ２／日、４１０ｍｇ／ｍ２／日、４００ｍｇ／ｍ２／日、３９０ｍｇ／ｍ２／日、３８０ｍｇ／ｍ２／日、３７０ｍｇ／ｍ２／日、３６０ｍｇ／ｍ２／日、３５０ｍｇ／ｍ２／日、３４０ｍｇ／ｍ２／日、３３０ｍｇ／ｍ２／日、３２０ｍｇ／ｍ２／日、３１０ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、２９０ｍｇ／ｍ２／日、２８０ｍｇ／ｍ２／日、２７０ｍｇ／ｍ２／日、２６０ｍｇ／ｍ２／日、２５０ｍｇ／ｍ２／日、２４０ｍｇ／ｍ２／日、２３０ｍｇ／ｍ２／日、２２０ｍｇ／ｍ２／日、２１０ｍｇ／ｍ２／日、２００ｍｇ／ｍ２／日、１９０ｍｇ／ｍ２／日、１８０ｍｇ／ｍ２／日、１７０ｍｇ／ｍ２／日、１６０ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、１４０ｍｇ／ｍ２／日、１３０ｍｇ／ｍ２／日、１２０ｍｇ／ｍ２／日、１１０ｍｇ／ｍ２／日、１００ｍｇ／ｍ２／日、９０ｍｇ／ｍ２／日、８５ｍｇ／ｍ２／日、７０ｍｇ／ｍ２／日、６５ｍｇ／ｍ２／日、６０ｍｇ／ｍ２／日、５５ｍｇ／ｍ２／日、５０ｍｇ／ｍ２／日、４９ｍｇ／ｍ２／日、４８ｍｇ／ｍ２／日、４７ｍｇ／ｍ２／日、４６ｍｇ／ｍ２／日、４５ｍｇ／ｍ２／日、４４ｍｇ／ｍ２／日、４３ｍｇ／ｍ２／日、４２ｍｇ／ｍ２／日、４１ｍｇ／ｍ２／日、４０ｍｇ／ｍ２／日、３９ｍｇ／ｍ２／日、３８ｍｇ／ｍ２／日、３７ｍｇ／ｍ２／日、３６ｍｇ／ｍ２／日、３５ｍｇ／ｍ２／日、３４ｍｇ／ｍ２／日、３３ｍｇ／ｍ２／日、３２ｍｇ／ｍ２／日、３１ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、２９ｍｇ／ｍ２／日、２８ｍｇ／ｍ２／日、２７ｍｇ／ｍ２／日、２６ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、２４ｍｇ／ｍ２／日、２３ｍｇ／ｍ２／日、２２ｍｇ／ｍ２／日、２１ｍｇ／ｍ２／日、２０ｍｇ／ｍ２／日、１９ｍｇ／ｍ２／日、１８ｍｇ／ｍ２／日、１７ｍｇ／ｍ２／日、１６ｍｇ／ｍ２／日、１５ｍｇ／ｍ２／日、１４ｍｇ／ｍ２／日、１３ｍｇ／ｍ２／日、１２ｍｇ／ｍ２／日、１１ｍｇ／ｍ２／日、１０ｍｇ／ｍ２／日、９ｍｇ／ｍ２／日、８ｍｇ／ｍ２／日、７ｍｇ／ｍ２／日、６ｍｇ／ｍ２／日、５ｍｇ／ｍ２／日、４ｍｇ／ｍ２／日、３ｍｇ／ｍ２／日、２ｍｇ／ｍ２／日、１ｍｇ／ｍ２／日より多くないフルダラビンの投与、および／または約１０００ｍｇ／ｍ２／日、９５０ｍｇ／ｍ２／日、９００ｍｇ／ｍ２／日、８５０ｍｇ／ｍ２／日、８００ｍｇ／ｍ２／日、７５０ｍｇ／ｍ２／日、７００ｍｇ／ｍ２／日、６９０ｍｇ／ｍ２／日、６８０ｍｇ／ｍ２／日、６７０ｍｇ／ｍ２／日、６６０ｍｇ／ｍ２／日、６５０ｍｇ／ｍ２／日、６４０ｍｇ／ｍ２／日、６３０ｍｇ／ｍ２／日、６２０ｍｇ／ｍ２／日、６１０ｍｇ／ｍ２／日、６００ｍｇ／ｍ２／日、５９５ｍｇ／ｍ２／日、５９０ｍｇ／ｍ２／日、５８５ｍｇ／ｍ２／日、５８０ｍｇ／ｍ２／日、５７９ｍｇ／ｍ２／日、５７８ｍｇ／ｍ２／日、５７６ｍｇ／ｍ２／日、５７５ｍｇ／ｍ２／日、５７４ｍｇ／ｍ２／日、５７３ｍｇ／ｍ２／日、５７２ｍｇ／ｍ２／日、５７１ｍｇ／ｍ２／日、５７０ｍｇ／ｍ２／日、５６９ｍｇ／ｍ２／日、５６８ｍｇ／ｍ２／日、５６７ｍｇ／ｍ２／日、５６６ｍｇ／ｍ２／日、５６５ｍｇ／ｍ２／日、５６４ｍｇ／ｍ２／日、５６３ｍｇ／ｍ２／日、５６２ｍｇ／ｍ２／日、５６１ｍｇ／ｍ２／日、５６０ｍｇ／ｍ２／日、５５９ｍｇ／ｍ２／日、５５８ｍｇ／ｍ２／日、５５７ｍｇ／ｍ２／日、５５６ｍｇ／ｍ２／日、５５５ｍｇ／ｍ２／日、５５４ｍｇ／ｍ２／日、５５３ｍｇ／ｍ２／日、５５２ｍｇ／ｍ２／日、５５１ｍｇ／ｍ２／日、５５０ｍｇ／ｍ２／日、５４９ｍｇ／ｍ２／日、５４８ｍｇ／ｍ２／日、５４７ｍｇ／ｍ２／日、５４６ｍｇ／ｍ２／日、５４５ｍｇ／ｍ２／日、５４４ｍｇ／ｍ２／日、５４３ｍｇ／ｍ２／日、５４２ｍｇ／ｍ２／日、５４１ｍｇ／ｍ２／日、５４０ｍｇ／ｍ２／日、５３９ｍｇ／ｍ２／日、５３８ｍｇ／ｍ２／日、５３７ｍｇ／ｍ２／日、５３６ｍｇ／ｍ２／日、５３５ｍｇ／ｍ２／日、５３４ｍｇ／ｍ２／日、５３３ｍｇ／ｍ２／日、５３２ｍｇ／ｍ２／日、５３１ｍｇ／ｍ２／日、５３０ｍｇ／ｍ２／日、５２９ｍｇ／ｍ２／日、５２８ｍｇ／ｍ２／日、５２７ｍｇ／ｍ２／日、５２６ｍｇ／ｍ２／日、５２５ｍｇ／ｍ２／日、５２４ｍｇ／ｍ２／日、５２３ｍｇ／ｍ２／日、５２２ｍｇ／ｍ２／日、５２１ｍｇ／ｍ２／日、５２０ｍｇ／ｍ２／日、５１９ｍｇ／ｍ２／日、５１８ｍｇ／ｍ２／日、５１７ｍｇ／ｍ２／日、５１６ｍｇ／ｍ２／日、５１５ｍｇ／ｍ２／日、５１４ｍｇ／ｍ２／日、５１３ｍｇ／ｍ２／日、５１２ｍｇ／ｍ２／日、５１１ｍｇ／ｍ２／日、５１０ｍｇ／ｍ２／日、５０９ｍｇ／ｍ２／日、５０８ｍｇ／ｍ２／日、５０７ｍｇ／ｍ２／日、５０６ｍｇ／ｍ２／日、５０５ｍｇ／ｍ２／日、５０４ｍｇ／ｍ２／日、５０３ｍｇ／ｍ２／日、５０２ｍｇ／ｍ２／日、５０１ｍｇ／ｍ２／日、５００ｍｇ／ｍ２／日、４９０ｍｇ／ｍ２／日、４８０ｍｇ／ｍ２／日、４７０ｍｇ／ｍ２／日、４６０ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日、４４０ｍｇ／ｍ２／日、４３０ｍｇ／ｍ２／日、４２０ｍｇ／ｍ２／日、４１０ｍｇ／ｍ２／日、４００ｍｇ／ｍ２／日、３９０ｍｇ／ｍ２／日、３８０ｍｇ／ｍ２／日、３７０ｍｇ／ｍ２／日、３６０ｍｇ／ｍ２／日、３５０ｍｇ／ｍ２／日、３４０ｍｇ／ｍ２／日、３３０ｍｇ／ｍ２／日、３２０ｍｇ／ｍ２／日、３１０ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、２９０ｍｇ／ｍ２／日、２８０ｍｇ／ｍ２／日、２７０ｍｇ／ｍ２／日、２６０ｍｇ／ｍ２／日、２５０ｍｇ／ｍ２／日、２４０ｍｇ／ｍ２／日、２３０ｍｇ／ｍ２／日、２２０ｍｇ／ｍ２／日、２１０ｍｇ／ｍ２／日、２００ｍｇ／ｍ２／日、１９０ｍｇ／ｍ２／日、１８０ｍｇ／ｍ２／日、１７０ｍｇ／ｍ２／日、１６０ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、１４０ｍｇ／ｍ２／日、１３０ｍｇ／ｍ２／日、１２０ｍｇ／ｍ２／日、１１０ｍｇ／ｍ２／日、１００ｍｇ／ｍ２／日、９０ｍｇ／ｍ２／日、８０ｍｇ／ｍ２／日、７０ｍｇ／ｍ２／日、６０ｍｇ／ｍ２／日、５０ｍｇ／ｍ２／日、４０ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、２０ｍｇ／ｍ２／日または１０ｍｇ／ｍ２／日より多くないシクロホスファミドの投与、および／または約５００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日、４００ｍｇ／ｍ２／日、３５０ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、２９０ｍｇ／ｍ２／日、２８０ｍｇ／ｍ２／日、２７０ｍｇ／ｍ２／日、２６５ｍｇ／ｍ２／日、２６０ｍｇ／ｍ２／日、２５５ｍｇ／ｍ２／日、２５０ｍｇ／ｍ２／日、２４５ｍｇ／ｍ２／日、２４０ｍｇ／ｍ２／日、２３５ｍｇ／ｍ２／日、２３０ｍｇ／ｍ２／日、２２５ｍｇ／ｍ２／日、２２０ｍｇ／ｍ２／日、２１５ｍｇ／ｍ２／日、２１０ｍｇ／ｍ２／日、２０５ｍｇ／ｍ２／日、２００ｍｇ／ｍ２／日、１９５ｍｇ／ｍ２／日、１９０ｍｇ／ｍ２／日、１８５ｍｇ／ｍ２／日、１８０ｍｇ／ｍ２／日、１７５ｍｇ／ｍ２／日、１７０ｍｇ／ｍ２／日、１６５ｍｇ／ｍ２／日、１６０ｍｇ／ｍ２／日、１５５ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、１４５ｍｇ／ｍ２／日、１４０ｍｇ／ｍ２／日、１３５ｍｇ／ｍ２／日、１３０ｍｇ／ｍ２／日、１２５ｍｇ／ｍ２／日、１２０ｍｇ／ｍ２／日、１１５ｍｇ／ｍ２／日、１１０ｍｇ／ｍ２／日、１０５ｍｇ／ｍ２／日、１００ｍｇ／ｍ２／日、９９ｍｇ／ｍ２／日、９８ｍｇ／ｍ２／日、９７ｍｇ／ｍ２／日、９６ｍｇ／ｍ２／日、９５ｍｇ／ｍ２／日、９４ｍｇ／ｍ２／日、９３ｍｇ／ｍ２／日、９２ｍｇ／ｍ２／日、９１ｍｇ／ｍ２／日、９０ｍｇ／ｍ２／日、８９ｍｇ／ｍ２／日、８８ｍｇ／ｍ２／日、８７ｍｇ／ｍ２／日、８６ｍｇ／ｍ２／日、８５ｍｇ／ｍ２／日、８４ｍｇ／ｍ２／日、８３ｍｇ／ｍ２／日、８２ｍｇ／ｍ２／日、８１ｍｇ／ｍ２／日、８０ｍｇ／ｍ２／日、７９ｍｇ／ｍ２／日、７８ｍｇ／ｍ２／日、７７ｍｇ／ｍ２／日、７６ｍｇ／ｍ２／日、
７５ｍｇ／ｍ２／日、７４ｍｇ／ｍ２／日、７３ｍｇ／ｍ２／日、７２ｍｇ／ｍ２／日、７１ｍｇ／ｍ２／日、７０ｍｇ／ｍ２／日、６９ｍｇ／ｍ２／日、６８ｍｇ／ｍ２／日、６７ｍｇ／ｍ２／日、６６ｍｇ／ｍ２／日、６５ｍｇ／ｍ２／日、６４ｍｇ／ｍ２／日、６３ｍｇ／ｍ２／日、６２ｍｇ／ｍ２／日、６１ｍｇ／ｍ２／日、６０ｍｇ／ｍ２／日、５９ｍｇ／ｍ２／日、５８ｍｇ／ｍ２／日、５７ｍｇ／ｍ２／日、５６ｍｇ／ｍ２／日、５５ｍｇ／ｍ２／日、５４ｍｇ／ｍ２／日、５３ｍｇ／ｍ２／日、５２ｍｇ／ｍ２／日、５１ｍｇ／ｍ２／日、４９ｍｇ／ｍ２／日、４８ｍｇ／ｍ２／日、４７ｍｇ／ｍ２／日、４６ｍｇ／ｍ２／日、４５ｍｇ／ｍ２／日、４４ｍｇ／ｍ２／日、４３ｍｇ／ｍ２／日、４２ｍｇ／ｍ２／日、４１ｍｇ／ｍ２／日、４０ｍｇ／ｍ２／日、３５ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、２０ｍｇ／ｍ２／日、１５ｍｇ／ｍ２／日、１０ｍｇ／ｍ２／日、５ｍｇ／ｍ２／日または１ｍｇ／ｍ２／日より多くないアルブミン結合パクリタキセルの投与を含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１０ｍｇ／ｍ２／日〜５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約３００ｍｇ／ｍ２／日〜７００ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミミッド投与することを含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１０ｍｇ／ｍ２／日〜５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与し、約３００ｍｇ／ｍ２／日〜７００ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与し、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約２００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、１００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、８０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、または７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない投与量でアルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１５ｍｇ／ｍ２／日〜４０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４００ｍｇ／ｍ２／日〜６５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミミッドを投与することを含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１５ｍｇ／ｍ２／日〜４０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４００ｍｇ／ｍ２／日〜６５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミミッドを投与し、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約２００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、１００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、８０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、または７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない量でアルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。
【０３００】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１５ｍｇ／ｍ２／日〜３０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４５０ｍｇ／ｍ２／日〜６００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日または４９０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与することを含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１５ｍｇ／ｍ２／日〜３０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４５０ｍｇ／ｍ２／日〜６００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日または４９０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与して、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約２００ｍｇ／ｍ２／日よりも多くなく、約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、１００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、８０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、または７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない量でアルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、前処理は、約２０ｍｇ／ｍ２／日〜３０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４５０ｍｇ／ｍ２／日〜６００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日または４９０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与することを含む。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、前処理は、約２０ｍｇ／ｍ２／日〜３０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４５０ｍｇ／ｍ２／日〜６００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日または４９０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与し、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約２００ｍｇ／ｍ２／日よりも多くなく、約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、１００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、８０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、または７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない量でアルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、前処理は、約２０ｍｇ／ｍ２／日〜２５ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４５０ｍｇ／ｍ２／日〜６００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日または４９０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与することを含む。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、前処理は、約１５ｍｇ／ｍ２／日〜２５ｍｇ／ｍ２／日の投与量でフルダラビンを投与して、約４５０ｍｇ／ｍ２／日〜６００ｍｇ／ｍ２／日、４５０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日または４９０ｍｇ／ｍ２／日〜５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量でシクロホスファミドを投与し、約３００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、約２００ｍｇ／ｍ２／日よりも多くなく、約１５０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、１００ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、８０ｍｇ／ｍ２／日より多くなく、または７０ｍｇ／ｍ２／日より多くない量でアルブミン結合パクリタキセルを投与することを含む。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日にフルダラビンを投与し、第−６日および第−５日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５１４ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−７日、第−６日、第−５日および第−４日にフルダラビンを投与し、第−７日及び第−６日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５１４ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−５日および第−４日にフルダラビンを投与し、第−５日、第−４日および第−２日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５１４ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−６日および第−５日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５１０ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−６日および第−５日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−５日にフルダラビンを投与し、第−５日、第−４日および第−３日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５４０ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−６日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日および第−４日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−６日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日および第−４日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−６日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビンと投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドを投与するステップを含み、ここで、第−１２日にフルダラビンを投与し、第−１２日、第−１１日および第１０日にシクロホスファミドを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビン、投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドと投与量が約１００ｍｇ／ｍ２／日であるアルブミン結合パクリタキセルを投与するステップを含み、ここで、第−５日にフルダラビンを投与し、第−５日、第−４日および第−３日にシクロホスファミドを投与し、第−４日にアルブミン結合パクリタキセル。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビン、投与量が約５４０ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドと投与量が約７１ｍｇ／ｍ２／日であるアルブミン結合パクリタキセルを投与するステップを含み、ここで、第−６日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日および第−４日にシクロホスファミドを投与し、第−５日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビン、投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドと投与量が約７１ｍｇ／ｍ２／日であるアルブミン結合パクリタキセルを投与するステップを含み、ここで、第−１２日にフルダラビンを投与し、第−１２日、第−１１日および第１０日にシクロホスファミドを投与し、第−１１日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビン、投与量が約５００ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドと投与量が約１００ｍｇ／ｍ２／日であるアルブミン結合パクリタキセルを投与するステップを含み、ここで、第−６日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日および第−４日にシクロホスファミドを投与し、第−５日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約２０ｍｇ／ｍ２／日であるフルダラビン、投与量が約５０７ｍｇ／ｍ２／日であるシクロホスファミドと投与量が約６８ｍｇ／ｍ２／日であるアルブミン結合パクリタキセルを投与するステップを含み、ここで、第−６日にフルダラビンを投与し、第−６日、第−５日、第−４日および第−３日にシクロホスファミドを投与し、第−５日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫エフェクター細胞を注入する前に、前処理する方法を含み、前記方法は、前記患者に投与量が約１３７ｍｇ／ｍ２／日であるアルブミン結合パクリタキセルを投与するステップを含み、ここで、第−４日にアルブミン結合パクリタキセルを投与する。
【０３０７】
ここで、前記方法は、他の様々な介入（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ）を含むことができる。例えば、シクロホスファミドとフルダラビンは投与された後、患者の有害効果を引き起こすことができる。本発明の範囲は、患者に組成物を投与して、これらの有害な効果の一部の効果を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、患者に生理食塩水を投与するステップを含む。シクロホスファミドおよび／またはフルダラビンを投与する前または後に、またはシクロホスファミドおよび／またはフルダラビンを投与する前と後の患者に生理食塩水を投与することができる。いくつかの実施形態では、注入日ごとにシクロホスファミドおよび／またはフルダラビンを投与する前に、およびシクロホスファミドおよび／またはフルダラビンを投与した後、患者に生理食塩水を投与する。なお、患者にアジュバントと賦形剤を投与することもできる。例えば、メスナ（Ｍｅｓｎａ）（（２−メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム）（ｓｏｄｉｕｍ  ２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ））を投与することもできる。なお、患者に外因性サイトカイン（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ）を投与することもできる。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、初回投与量または後続投与量で注入する前に、前処理することにより、治療の結果を改善させる。例えば、いくつかの態様では、前処理は、初回投与量または後続投与量で治療効果を向上させるか、または被験者のキメラ抗原受容体−発現免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−発現Ｔ細胞のようなＣＡＲ−発現免疫エフェクター細胞）の持続性を増加させる。いくつかの実施形態では、前処理の治療は疾患の安定期を増加させる。
【０３０９】
一度被験者（例えば、ヒト）に免疫エフェクター細胞を投与すれば、いくつかの態様では、様々な公知の方法のいずれかの方法で操作された免疫エフェクター細胞集団の生物学的活性を測定する。評価に使用されるパラメータは、操作されたり、自然なＴ細胞または他の免疫細胞と抗原の特異的結合、体内方式（例えば、画像を通じた方式）または体外方式（例えば、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリー分析を通じた方法）を含む。いくつかの実施形態では、操作された免疫エフェクター細胞が標的細胞を破壊する能力は、本技術分野で公知された任意の適切な方法で検出することができる。例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｊ  ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，  ３２  （７）：  ６８９−７０２（２００９）及びＨｅｒｍａｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２８５  （１）：  ２５−４０  （２００４）である文献での細胞毒性実験を通して検出することができる。いくつかの実施形態では、例えばＣＤ１０７ａ、ＩＦＮγ、ＩＬ−２およびＴＮＦなど、いくつかのサイトカインの発現および／または分泌を測定して、免疫エフェクター細胞の生物学的活性を測定することもできる。いくつかの態様では、生物学的活性は、例えば、腫瘍の負担や負荷の減少のような臨床結果を評価して測定する。いくつかの態様では、腫瘍マーカーの減少を評価する。いくつかの態様では、細胞の毒性の結果、持続性および／または増殖、および／または宿主の免疫反応の存在または不在を評価する。
【０３１０】
投与
本発明では、多数の投与量の免疫エフェクター細胞の投与時間と大きさは、一般的に設計を使用してリスクを低減させたり、または毒性の結果を最小限にするか、および／または効果を向上させる、例えば、時間に応じて、免疫エフェクター細胞の被験者の露出増加を提供する。前記方法は、一般的に１つまたは複数の後続投与量の前に、異なる投与量の間の特定の時間範囲内で初回投与量で投与するステップを含む。
【０３１１】
免疫エフェクター細胞治療の場合には、指定された「投与量」で投与することは、単一の組成物および／または１回連続的に投与することを含むが、例えば、１回の注射または連続注入として指定量または数の免疫エフェクター細胞を投与することを含み、また、２０日、１９日、１８日、１７日、１６日、１５日、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日または２日を超えない特定の時点内に、分割量で、多数の単独組成物または注入物の提供で、指定量または数の免疫エフェクター細胞を投与することを含む。したがって、初回投与量または後続投与量は、単一の時点に投与されるか開始された指定された数の免疫エフェクター細胞の１回または連続投与量である。しかし、いくつかの状況では、初回投与量または後続投与量は、２０日、１９日、１８日、１７日、１６日、１５日、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日または２日を超えない時点内に複数の回の注射または注入されるが、例えば、毎日１回ずつ、３日または２日間持続するか、または１日複数回注入する。いくつかの態様では、初回投与量の免疫エフェクター細胞は、単一の薬物組成物で投与される。いくつかの実施形態では、後続投与量の免疫エフェクター細胞は、単一の薬物組成物で投与される。いくつかの実施形態では、初回投与量の免疫エフェクター細胞は、全体に初回投与量の免疫エフェクター細胞が含有された多数の組成物で投与される。いくつかの実施形態では、後続投与量の免疫エフェクター細胞は、全体の後続投与量の免疫エフェクター細胞が含有された多数の組成物で投与される。いくつかの態様では、２０日、１９日、１８日、１７日、１６日、１５日、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日または２日を超えない時間内に多数の組成物に追加の後続の使投与量で投与することができる。
【０３１２】
用語「分割量」は、単一の投与量で、前記単一の投与量を複数回に分けて投与される一部分を意味し、前記単一の投与量が一日を超えている時間内に被験者に投与する方法で投与されるようにする。いくつかの実施形態では、初回投与量および／または各後続投与量は、いずれも２回または２回以上の分割量として投与することができる。例えば、いくつかの実施形態では、３日、５日、１４日または１５日以内に、被験者に前記投与量（前記投与量は、初回投与量の総投与量または後続投与量の総投与量である）で投与することができる。分割投与する例示的な方法は、（患者に毎回ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を実行する日を第０日を指定する）第０日に総投与量の５０％の分割量で投与し、２日目に総投与量の５０％の分割量で投与するステップを含む。他の実施形態では、第０日に総投与量の１０％で投与することができ、第２日に総投与量の３０％で投与し、４日目に総投与量の６０％に投与する。いくつかの実施形態では、第０日に総投与量の１０％の分割量で投与し、第１日に総使投与量の３０％の分割量で投与し、２日目に総投与量の６０％の分割量で投与する。いくつかの実施形態では、第０日に総投与量の３分の１の分割量で投与し、第１１日に総投与量の３分の１の分割量で投与し、第１４日に総投与量の３分の１の分割量で投与する。いくつかの実施形態では、第０日に総投与量の４６％の分割量で投与し、第１日に総使投与量の１８％の分割量で投与し、２日目に総投与量の３６％の分割量で投与する。いくつかの実施形態では、第０日に総投与量の２５％の分割量で投与し、２日目に総投与量の２５％の分割量で投与し、第９日に総投与量の２５％の分割量で投与し、第１３日に総投与量の２５％の分割量で投与する。いくつかの実施形態では、単一の投与量を回数を分けて投与するフルタイムの拡散は１５日を超えない。
【０３１３】
本文に使用されたように、「初回投与量」は、本明細書による方法に基づいて治療する最初の治療過程で投与される総投与量を説明するためのものである。前記投与量は、単一の治療過程の実行において、前記治療過程で投与される総投与量、または複数の治療過程を実行する最初の治療過程で投与される総投与量と同じである。前記用語は、被験者が本明細書による方法で治療を受ける前に、免疫エフェクター細胞の治療を受けたことがないか、または被験者が以前に同じキメラ抗原受容体を発現するか、または同じ抗原を標的化するのと同じ免疫エフェクター細胞を投与したことのない投与量を意味しない。
【０３１４】
初回投与量に比べて、用語「後続投与量」は、複数の治療過程を実行する初回投与量で投与した後の各治療過程で投与される、単一の使投与量や、各治療過程での総投与量を意味する。いくつかの実施形態では、前記方法は、複数の治療過程の実行、すなわち１つ以上の後続投与量で投与するステップを含み、ここで、最初の後続投与量を第２の治療過程の投与量と呼ばれ、第二の後続投与量は第３の治療過程の投与量とも呼ばれ、このように類推する。また、一連の投与量では、以前の投与量は、その後に直接投与される後続投与量のすぐ前の投与量である。いくつかの実施形態では、初回投与量に類似した投与時間と方式を適用して、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、初回投与量との最初の後続投与量または第２の治療過程の投与量との間の間隔と多数の後続投与量との間の間隔は、同一または異なっていているが、上述した通りである。
【０３１５】
投与量の量または大きさ
一般的に、初回投与量および／または１つまたは複数の後続投与量の投与量大きさを設計して改善された効果および／または減少された毒性の危険性を提供する。いくつかの実施形態では、初回投与量、または単一の後続投与量での免疫エフェクター細胞の数は、約１×１０６細胞／ｋｇ被験者体重〜約３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重より多いか、少ないか、等しい、例えば、約１×１０５、１.５×１０５、２×１０５、２.５×１０５、３×１０５、３.５×１０５、４×１０５、４.５×１０５、５×１０５、５.５×１０５、６×１０５、６.５×１０５、７×１０５、７.５×１０５、８×１０５、８.５×１０５、９×１０５、９.５×１０５、１×１０６、１.５×１０６、２×１０６、２.５×１０６、３×１０６、３.５×１０６、４×１０６、４.５×１０６、５×１０６、５.５×１０６、６×１０６、６.５×１０６、７×１０６、７.５×１０６、８×１０６、８.５×１０６、９×１０６、９.５×１０６、１×１０７、１.５×１０７、２×１０７、２.５×１０７、３×１０７、３.５×１０７、４×１０７、４.５×１０７、５×１０７、６×１０７、６.５×１０７、７×１０７、７.５×１０７、８×１０７、８.５×１０７、９×１０７、９.５×１０７、１×１０８、１.５×１０８、２×１０８、２.５×１０８、３×１０８、３.５×１０８、４×１０８、４.５×１０８、５×１０８、５.５×１０８、６×１０８、６.５×１０８、７×１０８、７.５×１０８、８×１０８、８.５×１０８、９×１０８、９.５×１０８、１×１０９、１.５×１０９、２×１０９、２.５×１０９、３×１０９、３.５×１０９、４×１０９、４.５×１０９、５×１０９、５.５×１０９、６×１０９、６.５×１０９、７×１０９、７.５×１０９、８×１０９、８.５×１０９、９×１０９、９.５×１０９、１×１０１０、１.５×１０１０、２×１０１０、２.５×１０１０、３×１０１０、３.５×１０１０、４×１０１０、４.５×１０１０、５×１０１０、５.５×１０１０、６×１０１０、６.５×１０１０、７×１０１０、７.５×１０１０、８×１０１０、８.５×１０１０、９×１０１０、９.５×１０１０、１×１０１１細胞／ｋｇ被験者体重より多いか、少ないか、等しい。
【０３１６】
具体的な実施形態では、免疫エフェクター細胞の数および／または濃度は、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）−発現免疫エフェクター細胞の数を意味する。他の実施形態では、免疫エフェクター細胞の数および／または濃度は、投与されるすべての細胞、Ｔ細胞または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の数または濃度を意味する。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、初回投与量での免疫エフェクター細胞、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の数は、約１×１０６個のこれらの細胞／ｋｇ被験者体重より多いが、例えば、約または少なくとも約１×１０６、１.１×１０６、２×１０６、２.９×１０６、３×１０６、３.３×１０６、５×１０６、１×１０７、１.３×１０７、１.６×１０７、２.６×１０７、２.８×１０７、３×１０７、５×１０７、２.５×１０８、１×１０９、１×１０１０、５×１０１０個のこれらの細胞／ｋｇ体重、または任意の２つの前述した値との間の範囲である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、後続投与量で投与される免疫エフェクター細胞数は、本明細書の任意の実施形態に係る初回投与量で投与される免疫エフェクター細胞数と同じか類似または多いが、例えば、約１×１０６と同じか、約１×１０６、１×１０７と同じか、約１×１０７、１.３×１０７と同じか、約１.３×１０７、１.６×１０７と同じか、約１.６×１０７、１.９×１０７と同じか、約１.９×１０７、２×１０７と同じか、約２×１０７、２.２×１０７と同じか、約２.２×１０７、３.７×１０７と同じか、約３.７×１０７、５×１０７と同じか、約５×１０７、または５.１×１０７と同じか、約５.１×１０７、または１×１０８と同じか、約１×１０８、または２.５×１０８と同じか、約２.５×１０８、または１×１０９と同じか、約１×１０９、または１×１０１０と同じか、約１×１０１０、または５×１０１０と同じか、約５×１０１０個のこれらの細胞／ｋｇ被験者体重、または任意の２つの前述した値との間の範囲である。
【０３１９】
免疫エフェクター細胞数については、いくつかの実施形態では、これらの値は、キメラ抗原受容体−発現（例えば、ＣＡＲ−発現）細胞の数を意味し、他の実施形態では、これらの投与されるＴ細胞またはＰＢＭＣまたは全細胞の数を意味する。
【０３２０】
いくつかの態様では、後続投与量は、初回投与量よりも多いか、同じか、少ない。例えば、いくつかの実施形態では、後続投与量は、約１×１０６を超える細胞、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）−発現細胞、Ｔ細胞および／またはＰＢＭＣ／ｋｇ被験者体重を含み、例えば、約または少なくとも約１×１０６、１×１０７、１.３×１０７、１.６×１０７、１.９×１０７、２×１０７、２.２×１０７、３.７×１０７、５×１０７、５.１×１０７、１×１０８、２.５×１０８、１×１０９、１×１０１０、５×１０１０個のこれらの細胞／ｋｇ被験者体重、または任意の２つの前述した値との間の範囲内の値、それぞれ端の値を含む。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、後続投与量の量または大きさは、腫瘍の負担またはその指数、および／または疾患または病症の１つまたは複数の症状を十分に減少させる。いくつかの実施形態では、投与量は、被験者の生存を効果的に改善させる大きさを備えており、例えば、被験者の生存を誘導し、無再発生存または無事件の生存が少なくとも１ヶ月または少なくとも１年、２年、３年、４年または５年の間に持続させるなど、被験者の生存を改善させる大きさを備える。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、初回投与量または後続投与量で投与する前の時刻に比較して、後続投与量で投与した後、腫瘍大きさ、腫瘍体積および／または腫瘍質量を含む腫瘍の負担は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９０％以上と同じまたは約これだけに減少される。
【０３２３】
他の実施形態では、後続投与量で投与される免疫エフェクター細胞の数は、初回投与量で投与される免疫エフェクター細胞の数より少ない。
【０３２４】
いくつかの態様では、１つまたは複数の基準に基づいて、初回投与量または後続投与量の大きさを決定するために、例えば、化学療法のような以前の治療のために被験者の反応、腫瘍体積、大きさ、程度のような腫瘍の負担、または転移のタイプ、段階、および／またはいずれかの中末期がんでよく表示される癌性胸膜および腹水などの合併症は、および／または被験者のＣＲＳ、マクロファージ活性化症候群、腫瘍溶解症候群、神経毒性などの毒性の結果が表示される可能性や発生率、および／または投与される細胞および／またはキメラ抗原受容体の宿主免疫反応に基づいて決定する。
【０３２５】
本発明の示唆に基づいて、当業者は、本発明で具体的開示した投与量は、本発明者が研究を経て得られた、安全で効果的な使投与量であることを理解する必要がするが、当業者は、例えば、臨床医師が患者の腫瘍の負担、患者自身の身体状況などの要素など、さまざまな実際の状況に応じて具体的な初回投与量を決定することができていることを理解するべきで、さらに後続投与量で投与する必要がある場合には、当業者は、例えば、免疫エフェクター細胞を投与した後の腫瘍の負担の変化に応じて、後続投与量を決定することができる。
【０３２６】
当業者はまた、ＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞のような本発明の免疫エフェクター細胞は、他のＣＡＲ−Ｔと併用することができることを理解する。例えば、患者の腫瘍は、いくつかの腫瘍抗原を発現することができるので、前記患者は、前期に他の腫瘍抗原を標的化するＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けた後、本発明のＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けることができ、前記患者は、前期に本発明のＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞治療と異なる他の治療を受けた後、抗体の特異性が弱いか、抗体がマウス源性拒絶反応が表示される場合、本発明のＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞治療で変更することもできる。したがって、このような場合には、当業者は、例えば、臨床医師が以前の治療の状況に応じて、本発明のＣＬＤ１８Ａ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞の投与回数と投与量を決定することができていることを理解しなければならない。例えば、本明細書で公開された安全で効果的な使投与量と投与回数を参照することができ、すなわち、約２×１０１０細胞／ｋｇ被験者体重を超えていないか総量が約１×１０１２細胞；好ましくは、約２×１０９細胞／ｋｇ被験者体重を超えていないか総量が約２×１０１１細胞を超えていないか、より好ましくは、約２.５×１０８細胞／ｋｇ被験者体重、または５×１０７細胞／ｋｇ被験者体重、または３×１０７細胞／ｋｇ被験者体重を超えていないか、または総量が５×１０９または約１×１０１０細胞を超えていない。
【０３２７】
いくつかの態様では、初回投与量および／または後続投与量の大きさは、被験者の疾患または病症の負担によって決定される。例えば、いくつかの態様では、初回投与量で投与する前時刻に被験者に存在する腫瘍の負担に基づいて、初回投与量で投与される免疫エフェクター細胞の数を決定する。いくつかの実施形態では、初回投与量および／または後続投与量の大きさは、腫瘍の負担に反比例する。
【０３２８】
いくつかの態様では、初回投与量で投与する前に、被験者に存在する腫瘍の負担に基づいて、後続投与量で投与される免疫エフェクター細胞の数を決定する。いくつかの実施形態では、例えば、ここで、最初回投与量は、腫瘍の負担を減らすか、または低下させたり、または既に特定のしきい値またはレベルよりも低い場合には、例えば、その毒性の結果よりも高い毒性の結果が表示される危険性が増加する場合は、後続投与量は増加されるが、例えば、約１×１０７個の細胞（例えば、総細胞、受容体−発現細胞、Ｔ細胞またはＰＢＭＣ）／ｋｇ体重を超えて、例えば、約２.０×１０７、２.５×１０７、３.０×１０７、５.０×１０７、１.０×１０８、２.５×１０８個の細胞／ｋｇより多いか、および／または初回投与量より多い。
【０３２９】
いくつかの状況では、初回投与量で投与された被験者の腫瘍負担が減少しなくても、後続投与量を増加させることができ、例えば、約１×１０７個の細胞（例えば、総細胞、受容体−発現細胞、Ｔ細胞またはＰＢＭＣ）／ｋｇ体重を超えて、例えば、約２.０×１０７、２.５×１０７、３.０×１０７、５.０×１０７、１×１０８、２.５×１０８個の細胞／ｋｇを超えているか、および／または初回投与量より多い。
【０３３０】
任意の経路（静脈注射（ＩＶ）を含む）を利用して、Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）を投与することができる。いくつかの実施形態では、約３分、約４分、約５分、約６分、約７分、約８分、約０９分、約１０分、約１１分、約１２分、約１３分、約１４分、約１５分、約１６分、約１７分、約１８分、約１９分、約２０分、約２１分、約２２分、約２３分、約２４分、約２５分、約２６分、約２７分、約２８分、約２９分、約３０分、約４０分、約５０分、約６０分以内にＩＶを利用して、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与する。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、初回投与量は、例えば、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、深刻なＣＲＳ（ｓＣＲＳ）、マクロファージ活性化症候群、腫瘍溶解症候群、少なくとも３８℃、または約３８℃の発熱が３日または３日以上の持続、少なくとも約２０ｍｇ／ｄＬのＣＲＰ血漿レベル、および／または神経毒性などの毒性または有害な結果を引き起こす、または減少させることができる量の免疫エフェクター細胞を含む。いくつかの態様では、細胞を投与した後、被験者から毒性または毒性の結果（例えば、ＣＲＳ、ｓＣＲＳおよび／またはＣＲＳ関連の結果）が表示される可能性に基づいて、初回投与量で投与される細胞の数を決定する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍の負担に基づいて被験者の毒性の結果が進行されている可能性を予測する。いくつかの実施形態では、前記方法は、投与量に投与する前に、毒性の結果および／または腫瘍の負担を検出または評価するステップを含む。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、後続投与量で投与された後の毒性結果のＣＲＳ指標のような生化学的指標または他の指標を投与した時の血清レベルが許容されるレベルのような指定されたレベルよりも高いレベルまで増加されない場合には、例えば、約１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、５０倍、７５倍または１００倍の、初回投与量で投与する前に、時刻の指標の血清レベルよりも高いか同じか、または許容されるレベル以上に既に増加が、すでに許容されるレベルよりも低いか、同じレベルまで減少される場合には、後続投与量で被験者に投与する。いくつかの態様では、指標が初回投与量で投与された１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、または４０日以内に許容されるレベル以下にまで減少されると、後続投与量で投与が、指標のレベルが前記時間帯内で許容されるレベルまで減少されなければ、後続投与量で投与しない。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、マクロファージ活性化症候群または腫瘍溶解症候群または神経毒性が発生される臨床リスクが存在しないか、すでに過ぎたり、または初回投与量で投与した後、すでに消去された場合、後続投与量で投与し、例えば、このような状況は、一般的に、すでに消去されたか、および／または発生する可能性が低い決定的な時刻以降、例えば、約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の具体的な特定の疾患または病症の被験者で現われる。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、後続投与量で投与するかどうか、後続投与量で投与する時刻、および／または後続投与量で投与される細胞数は、被験者に初回投与量で投与される細胞またはこれにより発現されたキメラ抗原受容体の免疫反応または検出可能な免疫反応の存在、不在または程度によって決定される。いくつかの態様では、初回投与量の細胞の受容体を発現する細胞を含有する後続投与量は、検出可能な宿主適応免疫反応、または既に構築されたり、または、一定のレベル、段階または程度に達した免疫反応を有する被験者に投与されない。
【０３３５】
投与時間
いくつかの実施形態では、後続投与量で投与する時間は、初回投与量を完成した後（初回投与量の総容量の注入を完成した日を０日と定め）から計算し始める。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、被験者のＣＲＳを指示する因子の血清レベルが初回投与量で投与する前の時刻の被験者において、前記指標の血清レベルの約１０倍、２５倍、５０倍または１００を超える場合、後続投与量で投与する。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、被験者のＣＲＳと関連した結果（例えば、ＣＲＳと関連する、またはＣＲＳを指示する血清因子）またはそれらの臨床徴候または発熱、低酸素症、低血圧または神経障害のような症状がすでにピークレベルに到達してまた、初回投与量で投与した後、減少され始めた後、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、投与後に、これらの結果の最高レベルよりも減少されるか、または投与後に結果の最大値またはレベルに到達した後、レベルが減少を観察した時に、後続投与量で投与する。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、毒性の結果の指標（例えば、ＣＲＳの血清指標）のレベルが初回投与量前の時刻の指標レベルの約２５倍にまで減少される場合、後続投与量で投与する。いくつかの態様では、後続投与量は、被験者のＣＲＳが表示されないか、深刻なＣＲＳが表示されない場合には投与される。
【０３３９】
いくつかの態様では、後続投与量は、初回投与量で投与する前の腫瘍の負担が患者の腫瘍の負担に比べて減少している時点に投与される。いくつかの実施形態では、後続投与量は、初回投与量で投与された後、腫瘍の負担またはその指標、例えば被験者の血液、他の体液、組織または組織中の疾患（例えば、腫瘍）細胞の大きさまたは数またはパーセンテージ、または腫瘍大きさが既に約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９０％以上減少した場合には投与される。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、被験者の疾患または病症が初回投与量または以前の投与量に対する反応が減少した後の再発されない場合、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、腫瘍の負担の軽減は、１つまたは複数の因子の減少によって指示され、前記因子は、例えば、被験者またはその体液または組織または組織中の腫瘍マーカーの発現のレベル、腫瘍細胞の負担または数、腫瘍の質量または体積、転移される程度である。いくつかの実施形態では、再発は一般的であるか、または１つまたは複数の因子であるか、または腫瘍の負担である。被験者、疾患の負担またはその因子は、最初または以前に投与された後、測定したり、到達した最低点と比較して再発がまだ初回投与量で投与する前の開始に投与した量よりも少ない時、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、腫瘍の負担またはその指示因子が変わらない場合は、例えば、腫瘍の負担の増加が停止される場合には、被験者に後続投与量で投与する。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、宿主適応免疫反応が検出されていないか、構築されていないか、または一定のレベルでは、程度または段階に達していない場合、後続投与量で投与する。いくつかの態様では、被験者の記憶免疫反応が進行する前に、後続投与量で投与する。
【０３４２】
いくつかの態様では、初回投与量の投与と後続投与量の投与の間の時間は、約２１〜約８０日、約２５〜約６０日、または２５〜５５日である。いくつかの実施形態では、後続投与量の投与時間は、初回投与量で投与した後の約２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、５１日、５２日、５３日、５４日、５５日、５６日、５７日、５８日、５９日または６０日を超えない。いくつかの実施形態では、後続投与量の投与時間は、初回投与量で投与した後の約４４日、４５日、４６日、４７日、または４８日を超えない。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、後続投与量（すなわち、第１の後続投与量、または第２の治療過程の投与量と呼ばれる）で投与した後、追加またはより多くの後続投与量で投与するが、例えば、第２の後続投与量（第３の治療過程の投与量）、第３の後続投与量（第４の治療過程の投与量）で投与し、このように類推する。いくつかの態様では、前の後続投与量（例えば、第１の後続投与量）で投与した後、少なくとも約２１日〜約８０日以内に追加の後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、例示的な投与量案は、いつまたは約いつキメラ抗原受容体発現細胞（例えば、ＣＡＲ発現細胞、例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）を投与する時刻表を含む。いくつかの実施形態では、第１の後続投与量で投与した後、約４９日以内に追加の投与量（第２の後続投与量）で投与し、このように類推する。いくつかの実施形態では、後に投与される後続投与量の投与時間は、すぐ前の後続投与量で投与した後、約２１〜約８０日、約２５〜約６０日、または２５〜５５日を超えない。いくつかの実施形態では、後に投与される後続投与量の投与時間は、すぐ前の後続投与量で投与した後の約２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、５１日、５２日、５３日、５４日、５５日、５６日、５７日、５８日、５９日または６０日を超えない。
【０３４４】
任意の実施形態では、いくつかの状況では、前記方法は、初回投与量または以前の投与量と後続投与量で投与するステップを含み、他の状況では、以前に、初回投与量または以前の投与量として既に投与された被験者に、後続投与量で投与するステップを含み、前記被験者は、以前に、初回投与量または以前の投与量自体を含まない、初回投与量または以前の投与量で投与された。したがって、いくつかの場合では、前記方法は、例えば、以前に投与量（例えば、減少された使投与量）のキメラ抗原受容体−発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞が投与された被験者に強化性後後続投与量を投与する治療と同じ強化治療に関するものである。いくつかの態様では、ＣＡＲのような受容体を発現する細胞の前の投与量は、被験者の疾患または病症の負担を十分に減少させることで、後続投与量の細胞を投与する効果および／または安全性が初回投与量で投与されていない被験者の投与量に比べて改善されるようにする。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、初回投与量または後続投与量で投与する前時刻に比較して、後続投与量で投与した後、腫瘍マーカー、腫瘍大きさ、腫瘍体積および／または腫瘍質量を含む腫瘍の負担は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９０％以上に等しいか、または約これだけに減少される。
【０３４６】
再注入される細胞の宿主免疫反応
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の投与量は、例えば、後続投与量は、被験者の免疫反応（例えば、遺伝子組み換え受容体または細胞の適応性または特異性免疫反応）が存在しないか、検出されないか、または一定のレベル以上で検出されない場合には投与される。遺伝子組み換えの特異性免疫反応の存在または程度は、一般的に受容体の免疫原性（例えば、細胞によって発現されたＣＡＲまたは遺伝子組み換えＴＣＲ）および／または被験者が細胞に露出される時間と関連している。例えば、いくつかの実施形態では、被験者が初めて受容体を発現する細胞と接触した後、２８日、３５日または４２日前に、特異性体液および／または細胞媒介免疫反応ような受容体に対する免疫反応が検出されない。したがって、いくつかの実施形態では、被験者のキメラ抗原受容体または細胞に対する免疫応答、適応性または特異性免疫反応、検出可能な免疫反応および／または記憶の反応が進行する前に、後続投与量で投与する。この態様では、前の、または、初回投与量よりも比較的遅い時点に後続投与量で投与する他の方法に比べて、後続投与量の細胞増殖および／または被験者に継続的に存在している能力が改善される。前記方法は、例えば、初回または後続投与量で投与した後、および後続、または次の後続投与量で投与する前に、これらの免疫反応またはその指標の存在または不在、またはレベルを検出するステップを含む。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、いつ、および／または後続投与量で投与するかどうかは、被験者がこれらの免疫反応または検出可能なリーディング（ｒｅａｄｉｎｇ）が表示されるかどうか、例えば、細胞またはキメラ抗原受容体に対して特異的な検出可能な特異性または適応性宿主の免疫応答、例えば、初回投与量の細胞によって発現されるＣＡＲ、および／またはいずれかのレベルでこのような反応が検出されるかどうかによって決定される。いくつかの実施形態では、このような反応が検出される場合には、被験者に後続投与量で投与しない。被験者の受容体（例えば、初回投与量の細胞によって発現されたＣＡＲ）の特異性または適応性（例えば、体液または細胞によって媒介される）免疫反応が表示されない場合、または検出可能なレベルでは、または許容されるレベルよりも高いこれらの反応または指標が表示されない場合、後続投与量で投与する。いくつかの態様では、後続投与量で投与する場合には、初回投与量が比較的多いときに比べ、被験者は減少された、初回投与量の細胞によって発現されたＣＡＲの体液または細胞媒介免疫反応を表示させる。
【０３４８】
前記実施形態の任意の一つで、検出可能な免疫反応は、特定の抗原と細胞の特異性免疫反応を評価するための多数の公知された方法のいずれかの検出可能な量を意味する。例えば、いくつかの実施形態では、被験者の血清からＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡを行ったり、細胞の抗体検出方法（例えば、フローサイトメトリー分析を通じた方法）に基づいて、細胞に存在する抗原に特異的に結合および／または中和されている、例えばキメラ抗原受容体に結合されるエピトープ、例えば、ＣＡＲの抗原の存在を検出して、特定のタイプの免疫反応を検出する。いくつかのこのような測定では、検出された抗体のイソ型、および反応を指示するタイプおよび／または反応が記憶反応かどうかを決定する。
【０３４９】
いくつかの態様では、例えば、初回投与量または後続投与量で投与した後、これらの宿主免疫反応および／またはその数、程度の存在または不在を検出または測定する。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、代替的投与方法を使用した比較方法で減少したことを観察したところ、例えば、ここで、被験者は、単一の投与量（例えば、単一の大投与量の細胞）に投与されるが、例えば、提供された方法で統一的に、初回投与量と後続投与量で投与された細胞総数で、単一の投与量を置換するか、お互いに約２１日より少ないか、または約８０日を超える多数の大量または複数の量の投与に比較して、前記方法は、例えば、腫瘍細胞の数、腫瘍の大きさ、患者の生存の持続時間または無事件の生存時間、およびより長い時間帯のような疾患または病症の負担をより大きな程度に減少させる。いくつかの態様では、被験者の生存基、一定の時間帯での生存、生存範囲、無事件や無症状生存の存在または持続時間または無再発生存を評価する。
【０３５１】
いくつかの態様では、初回投与量で投与する前に、初回投与量で投与した後であるが後続投与量で投与する前に、および／または後続投与量で投与した後、疾患の負担を測定または検出する。多数の後続投与量の場合には、いくつかの実施形態での疾患の負担は、任意の後続投与量として投与する前または後、または後続投与量を投与する間に測定することができる。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、前記負担は少なくともまたは約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または１００％減少する。いくつかの態様では、後続投与量の投与は、疾患の負担、腫瘍の負担をより低減させることができるが、例えば、後続投与量で投与する前時刻に比べて、または初回投与量で投与する前時刻に比較して、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または１００％と同じか、約これだけで負担を軽減される。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、他の方法に比べて、前記方法で被験者の無事件生存率または全生存率を改善する。例えば、いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、１ヶ月以内に、前記方法で治療した被験者の無進行事件生存率または確率は約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％よりも高い。いくつかの態様では、総生存率は約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９５％よりも高い。いくつかの実施形態では、前記方法で治療した被験者で無信仰生存、無再発生存または少なくとも約１ヶ月の生存、または少なくとも約２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月の生存、または１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、または１０年の生存が示された。いくつかの実施形態では、例えば、約１ヶ月より長い同じか、または少なくとも約２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、または１０年の進行時間を改善する。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、前記方法で行われた治療は、他の方法に比べて、再発の確率が減少した。例えば、いくつかの実施形態では、初回投与量後、１ヶ月以内に再発または進行される確率は約８０％、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％よりも低い。
【０３５５】
細胞の露出と持続性
いくつかの実施形態では、その投与量および／またはその時間は、設計を経て、被験者が細胞に露出されるよう促進させ、例えば、時間の増加に応じて、その増殖および／または持続性を促進させる。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、提供される方法は、使用された細胞の被験者の露出（例えば、時間に応じて増加した細胞数または時間）および／または免疫細胞治療での効果と治療の結果を増加させる。いくつかの態様では、前記方法の利点は、ほかの方法に比べて、カメラの抗原受容体を発現する細胞（例えば、ＣＡＲ−発現細胞）の露出度がさらに大きいか、および／または治療の結果を、さらに大きな程度に改善させることである。これらの結果は、患者の生存と緩和を含むことができ、さらに深刻な腫瘍の負担を持つ固定でも現れる。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、初回投与量および／または後続投与量で投与した後、被験者でキメラ抗原受容体を発現する細胞（例えば、ＣＡＲ−発現細胞）の存在および／または量を検出する。いくつかの態様では、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用してか経験者の血液または血清または器官または組織（例えば、疾患部位）でのキメラ抗原受容体を発現する細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ）の量を評価する。いくつかの態様では、持続性はマイクログラムあたりＤＮＡからＣＡＲのような受容体をエンコードするＤＮＡまたはプラスミドの複製、またはマイクロリットルあたりの血液または血清のようなサンプルの受容体を発現する、例えばＣＡＲ発現細胞の数、またはマイクロリットルあたりのサンプルの末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）または白血球またはＴ細胞の総数で定量される。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、または少なくとも第１日、第２日、第３日、第４日、第５日、第６日、第７日、第８日、第９日、第１０日、第１１日、第１２日、第１３日、第１４日、第１５日、第１６日、第１７日、第１８日、第１９日、第２０日、第２１日、第２２日、第２３日、第２４日、第２５日、第２６日、第２７日、第２８日、第２９日または第３０日に、被験者からの細胞を検出する。いくつかの態様では、または少なくとも初回または後続投与量で投与した後、２週、４週、または６週間、または３ヶ月、６ヶ月または１２ヶ月、１８ヶ月または２４ヶ月または３０ヶ月または３６ヶ月、または１年、２年、３年、４年、５年または５年以上で細胞を検出する。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、単一の投与量で投与する方法など代替的方法は、例えば、初回投与量よりも多くの細胞を含む方法によって、総投与量の細胞を単一の投与量として使用して、初回投与量で投与されていない被験者に後続投与量の細胞を投与したり、および／または指定された時間以外の時間に後続投与量で投与するが、例えば、受容体（例えば、ＣＡＲ）の被験者の免疫反応が現れる時間より遅い規定された時間、または次に投与する。
【０３６０】
被験者に露出された細胞の最大数、特定の数またはパーセンテージよりも高い検出可能な細胞の持続時間、時間に応じた細胞数の曲線下面積および／またはこれらの組み合わせ及びその指数に基づいて、例えば、細胞数、増殖、および／または持続性を指示するの接触を表示することができる。血液または血清のような特定のサンプル中の核酸またはＤＮＡの総量に比較して、ｑＰＣＲなどの公知の方法を使用して、これらの結果を評価して、キメラ抗原受容体をエンコードする核酸の複製数を検出したり、および／または、一般的に受容体特異性の抗体で受容体を発現する細胞を検出するフローサイトメトリー分析測定を使用する。細胞の測定に基づいて、機能細胞の数またはパーセンテージを検出することもできるが、例えば、疾患または病症を誘導したり、または受容体によって識別される抗原を発現する細胞に結合および／または中和される反応（例えば、細胞毒性反応）を検出することができる。
【０３６１】
いくつかの態様では、被験者の細胞の露出の増加は、細胞増殖の増加を含む。いくつかの実施形態では、初回投与量および／または後続投与量で投与した後、受容体−（例えば、ＣＡＲ−）発現細胞は、被験者で増殖する。いくつかの態様では、他の方法に比べて、例えば、単一の投与量で細胞を投与し、比較的多くの初回投与量で投与し、後続投与量で投与するが初回投与量で投与していない、これらの方法を、および／または指定された時間帯または時点前または後に、後続投与量で投与して、例えば、後続投与量で投与する前に、免疫反応を発生させる方法に比べて、前記方法は、細胞の増殖をさらに増加させる。
【０３６２】
いくつかの態様では、前記方法は、投与される細胞の体内増殖を大幅に増加させることは、例えば、フローサイトメトリー分析を介して測定する。いくつかの態様では、より高いピーク比の細胞を検出する。例えば、いくつかの実施形態では、初回または後続投与量で投与した後、被験者の血液または疾患部位またはその白血球部分（例えば、ＰＢＭＣの部分またはＴ細胞の部分）がピークレベルまたは最大レベルに到達した場合は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％の細胞がＣＡＲのようなキメラ抗原受容体を発現する。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、前記方法は、被験者の血液または血清または他の体液または組織または組織の少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、５００個、１０００個、１５００個、２０００個、５０００個、１００００または１５０００個の複製された、または受容体をエンコードした核酸の最大濃度は、例えば、マイクログラム当たり、ＤＮＡのＣＡＲ、または少なくとも０.１、０.２、０.３、０.４、０.５、０.６、０.７、０.８、または０.９のＣＡＲのような受容体を発現する細胞／末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）総数、単核細胞総数、Ｔ細胞総数または総マイクロリットルことをもたらす。いくつかの実施形態では、受容体を発現する細胞は、被験者の血液から全ＰＢＭＣの少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％または６０％であるか、および／または前記レベルで初回、または後続投与量で投与した後、少なくとも１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、２４週間、３６週間、４８週間、または５２週間持続したり、またはこれらの方法で投与した後１年、２年、３年、４年または５年または５年以上持続されることを検出された。
【０３６４】
いくつかの態様では、前記方法で、例えばＣＡＲのようなキメラ抗原受容体をエンコードする核酸の複製は、マイクログラム当たりＤＮＡが少なくとも２倍、少なくとも４倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍増加するようにする。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、受容体を発現する細胞は、被験者の血液または血清から検出されるが、例えば、ｑＰＣＲ、またはフローサイトメトリー分析に基づく検出方法のような指定された方法を使用して、初回投与量で投与した後、または後続投与量で投与した後、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、５１日、５２日、５３日、５４日、５５日、５６日、５７日、５８日、５９日または６０日、または６０日以上、または、初回投与量または後続投与量で投与した後、少なくともまたは約２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２１週間、２２週間、２３週間または２４週間または２４週間以上持続する。
【０３６６】
いくつかの態様では、少なくとも約１×１０２、少なくとも約１×１０３、少なくとも約１×１０４、少なくとも約１×１０５、または少なくとも約１×１０６または少なくとも約５×１０６または少なくとも約１×１０７または少なくとも約５×１０７または少なくとも約１×１０８または少なくとも約２.５×１０８キメラ抗原受容体−発現は、例えば、ＣＡＲ−発現細胞、および／またはマイクロリットルあたり少なくとも１０個、２５個、５０個、１００個、２００個、３００個、４００個、または５００個、または１０００個の受容体発現−細胞、例えばマイクロリットルあたり少なくとも１０個は、被験者またはその流体、組織、またはそのコンパートメント（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）は、例えば、血液、例えば、末梢血またはその疾患部位で検出または存在することができる。いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、または後続投与量で投与した後、細胞数または濃度は、被験者から少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日は、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日は、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約４０日、または少なくとも約６０日、または少なくとも約３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月または１２ヶ月、または少なくとも２年または３年持続することを検出することができる。これらの細胞数は、フローサイトメトリー分析に基づいて、または定量ＰＣＲに基づいた方法を使用して検出することができ、公知の方法で総細胞数を推定することができる。
【０３６７】
いくつかの態様では、免疫組織化学、ＰＣＲおよび／またはフローサイトメトリー分析を通じ、１００個当たりの細胞からキメラ抗原受容体をエンコードする核酸の複製数、例えば、担体の複製数を測定するのに、例えば、末梢血または骨髄または他のコンパートメントでは、少なくとも０.０１、少なくとも０.１、少なくとも１、または少なくとも１０であり、例えば、初回投与量または後続投与量の細胞を投与した後、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、または少なくとも約６週間、または少なくとも約２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１または１２ヶ月、または少なくとも２または３年時に測定する。いくつかの実施形態では、マイクログラム当たりゲノムＤＮＡからＣＡＲのような受容体を発現する担体の複製数は、初回投与量または後続投与量のＣＡＲのような受容体を発現する細胞を投与した後、約１週間、約２週間、約３週間または少なくとも約４週間で、またはこれらの方法で投与した後、少なくとも２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または１２ヶ月、または少なくとも２年または３年時に測定した場合には、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、または少なくとも１００００、または少なくとも１５０００、または少なくとも２００００である。
【０３６８】
いくつかの態様では、細胞によって発現されたＣＡＲのような受容体は、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）またはフローサイトメトリー分析を介して被験者の血液および／またはその疾患部位で検出されるが、細胞を投与した後、例えば、初回投与量または後続投与量で投与を開始したり、またはそれ以降の後続投与量で投与した後、少なくとも約３日、少なくとも約６日、少なくとも約１０日、少なくとも約１５日、少なくとも約２０日、少なくとも約３０日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約８０日、３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約１２ヶ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年または３年を超えた場合に検出される。
【０３６９】
細胞によって発現されたキメラ抗原受容体
細胞は、一般的にキメラ抗原受容体を発現するが、キメラ抗原受容体は、遺伝子組み換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）とＴ細胞抗原カプラ（Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）などキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、他の抗原が結合された受容体のような機能性非−ＴＣＲ抗原受容体である抗原受容体を含む。
【０３７０】
例示的な抗原受容体は、ＣＡＲを含み、工学操作および受容体を細胞に導入するための方法は、例えば、公開番号がＣＮ１０７０５８３５４Ａ、ＣＮ１０７４６０２０１Ａ、ＣＮ１０５１９４６６１Ａ、ＣＮ１０５３１５３７５Ａ、ＣＮ１０５７１３８８１Ａ、ＣＮ１０６１４６６６６Ａ、ＣＮ１０６５１９０３７Ａ、ＣＮ１０６５５４４１４Ａ、ＣＮ１０５３３１５８５Ａ、ＣＮ１０６３９７５９３Ａ、ＣＮ１０６４６７５７３Ａの中国特許出願、公開番号がＷＯ２０１８００６８８２Ａ１、ＷＯ２０１５１７２３３９Ａ８の国際特許出願に記載された方法を含む。
【０３７１】
前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。ＣＡＲのようなキメラ受容体は、一般的に、細胞外抗原結合ドメインを含むが、例えば、抗体分子の一部は、一般的にｓｃＦｖ抗体断片のような抗体の重鎖可変（ＶＨ）領域および／または軽鎖可変（ＶＬ）領域である。いくつかの実施形態において、前記キメラ受容体は、クローディン１８（Ｃｌａｕｄｉｎ  １８、ＣＬＤ１８）のスプライス変異体１（ＣＬＤ１８Ａ１、ＣＬＤ１８．１）（登録番号ＮＰ＿０５７４５３、ＮＭ０１６３６９）またはその変異体、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４に表示されているアミノ酸配列を含むか、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６  ％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を識別することができ、およびスプライス変異体２（ＣＬＤ１８Ａ２、ＣＬＤ１８.２）（登録番号ＮＭ＿００１００２０２６、ＮＰ＿００１００２０２６）またはその変異体は、例えばたとえば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３に表示されるアミノ酸配列を含むか、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を識別することができる。いくつかの実施形態において、前記キメラ受容体は、ＣＬＤ１８Ａ２を特異的に識別するが、ＣＬＤ１８Ａ１を識別していない。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に示されるＨＣＤＲまたはＬＣＤＲを含むアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列などｓｃＦｖ抗体断片を含む。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲまたはＬＣＤＲを含むアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列などｓｃＦｖ抗体断片を含む。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲまたはＬＣＤＲを含むアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列などｓｃＦｖ抗体断片を含む。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９に示される重鎖または軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％  、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列などｓｃＦｖ抗体断片を含む。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示される重鎖または軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、  ８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列などｓｃＦｖ抗体断片を含む。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示される重鎖または軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）は、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８またはＳＥＱＩＤ  ＮＯ：２９またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２に示されるアミノ酸配列またはその変異体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ領域および／またはＣＨ１／ＣＬおよび／またはＦｃ領域などのヒンジ領域のような免疫グロブリン不変領域またはその変異体またはその変形形態である少なくとも一部分であることがあるかこれらを含む接続配列をさらに含んでいる。いくつかの実施形態では、前記不変領域または部分は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１のようなヒトＩｇＧのものである。いくつかの態様では、不変領域の部分は、ｓｃＦｖ、および膜貫通ドメインの間の接続配列と同じ抗原−識別部分である。前記接続配列は、これらの長さを備えることができ、前記接続序列が存在しない場合に比べて、前記長さは、抗原に結合された後の細胞の反応性を増加させる。いくつかの実装例では、接続序列の長さは、約１２個のアミノ酸の長さであるか、または長さが１２個のアミノ酸を超えない長さである。例示的な接続配列は、少なくとも約１０〜２２９個のアミノ酸、約１０〜２００個のアミノ酸、約１０〜１７５個のアミノ酸、約１０〜１５０個のアミノ酸、約１０〜１２５個のアミノ酸、約１０〜１００個のアミノ酸、約１０〜７５個のアミノ酸、約１０〜５０個のアミノ酸、約１０〜４０個のアミノ酸、約１０〜３０個のアミノ酸、約１０〜２０個のアミノ酸、または約１０〜１５個のアミノ酸の長さを含み、前記範囲の任意の欠点（ｅｎｄｐｏｉｎｔ）との間の整数を含む。いくつかの実施形態では、接続序列領域は約１２個のアミノ酸、またはより短い長さ、約１１９個のアミノ酸またはより短い長さまたは約２２９個のアミノ酸またはより短い長さを備える。例示的な接続配列は単独ＩｇＧ４ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに接続されたＩｇＧ４ヒンジ、またはＣＨ３ドメインに接続されたＩｇＧ４ヒンジを含む。
【０３８０】
前記抗原は、一般的に１つまたは複数の細胞内シグナル伝達の部分に接続されているドメインを識別し、例えば、ＣＡＲの場合には、抗原受容体複合体（例えば、ＴＣＲ複合体）を介して模擬有効信号の部分、および／または他の細胞表面受容体を介した信号を識別する。したがって、いくつかの実施形態では、抗原結合成分（例えば、抗体）は、１つまたは複数の膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインに接続される。いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは、上記の細胞外ドメインに融合される。一つの実施形態では、自然関連受容体（例えば、ＣＡＲ）でのドメインのいずれかである膜貫通ドメインを使用する。いくつかの状況では、前記膜貫通ドメインは、アミノ酸置換を使用して選択または変形して、前記ドメインが、同一または異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合されないように防止することにより、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑える。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは、天然的または合成されたものである。天然的では、いくつかの態様では、前記ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通ドメインは、Ｔ−細胞受容体から由来するα鎖、β鎖、またはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４を含むか、および／または膜貫通ドメインは、その機能変異体（例えば、その構造部分（例えば、膜貫通構造部分）、性質を基本的に保留したもの）など（すなわちは、少なくともこれらを含む膜貫通ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ２８またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８αまたはその機能変異体に由来する膜貫通ドメインである。または、いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは合成である。いくつかの態様では、前記合成膜貫通ドメインは、主にロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ）およびバリン（ｖａｌｉｎｅ）のような疎水性残基を含む。いくつかの態様では、フェニルアラニン（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）およびバリンの三量体は、合成された膜貫通ドメインの各末端に現れる。いくつかの実施形態では、前記接続は、リンカー、スペーサー（ｓｐａｃｅｒ）および／または膜貫通ドメインを介して実装される。
【０３８２】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、天然抗原受容体を介して模擬または近似する信号、これらの受容体を介して共同刺激受容体と結合されている信号、および／または単独の共同刺激受容体を介したシグナルなどを含む。いくつかの実施形態では、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドコネクタは、例えば、グリシンおよびセリンを含む長さが２〜１０個のアミノ酸であるリンカー、例えば、グリシン−セリンダブレットのリンカーが存在し、ＣＡＲの細胞シグナル伝達ドメインと膜貫通ドメインの間で接続を形成する。
【０３８３】
ＣＡＲのような前記受容体は、一般的に、少なくとも１種の１つまたは複数の細胞内シグナル伝達部分を含む。いくつかの実施形態では、前記受容体は、ＴＣＲ複合体の細胞内成分を含み、例えば、Ｔ−細胞活性化および細胞毒性を媒介するＣＤ３ζ鎖のようなＴＣＲＣＤ３＋鎖を含む。したがって、いくつかの態様では、抗原結合部分は、１つまたは複数の細胞のシグナル伝達モジュールに接続される。いくつかの実施形態では、細胞シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ３細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または他のＣＤ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのような上記の受容体は、Ｆｃ受容体γ、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５またはＣＤ１６のような１つまたは複数の他の分子の部分をさらに含む。例えば、いくつかの態様では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体は、ＣＤ３ζ（ＣＤ３−ζ）またはＦｃ受容体γとＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５またはＣＤ１６との間のキメラ分子を含む。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体と結合時、受容体の細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞の正常な作動体機能または反応の少なくとも一つ、例えば、ＣＡＲを発現するためのＴ細胞の操作を有効にする。例えば、いくつかの状況では、ＣＡＲは、Ｔ細胞の機能、例えば、細胞溶解活性または補助Ｔ細胞活性、例えば、サイトカインまたは他の因子の分泌を誘導する。いくつかの実施形態では、例えば、エフェクター機能の信号を形質導入する場合、抗原受容体の部分または共同刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分に完全免疫刺激鎖を置換する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列を含み、いくつかの態様では、抗原受容体に結合された後、信号伝達を開始するために、天然的に存在する共同受容体と一致するように作用する受容体をさらに含む。
【０３８５】
天然ＴＣＲの場合、完全な活性化は、一般的にＴＣＲを介して信号を伝達するだけでなく、共同刺激シグナルも必要である。したがって、いくつかの実施形態では、完全な活性化を促進させるため、第２または共同刺激信号を生成するための成分も、前記ＣＡＲに含まれる。他の実施形態では、ＣＡＲは、共同刺激信号を生成するための成分を含まない。いくつかの態様では、他のＣＡＲは、同じ細胞で発現され、第２または共同刺激信号を生成するための原料を提供する。
【０３８６】
いくつかの態様では、Ｔ細胞活性化は、２つの細胞シグナル伝達配列を介して媒介されるものとして説明され、すなわちＴＣＲ開始抗原が依存的に、最初に活性化したもの（最初の細胞シグナル伝達配列）、および抗原が非−依存的な方法として作用することを介して、第２または共同刺激シグナルを提供するもの（第２の細胞シグナル伝達配列）である。いくつかの態様では、前記ＣＡＲは、これらのシグナル伝達成分のいずれかまたは両方を含む。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗体部分は、ＣＤ８またはその変異体を含む信号ペプチドのような信号ペプチドをさらに含み、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５として表示されるアミノ酸序列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む信号ペプチドをさらに含む。
【０３８８】
いくつかの態様では、前記ＣＡＲはＴＣＲ複合体の初期活性化を調節する主要な細胞シグナル伝達配列を含む。刺激方法で作用する初めて細胞シグナル伝達配列は、免疫受容体がチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ）に基づいて有効化されモチーフまたはＩＴＡＭに公知された信号伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭの実装例は、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤＳ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものを含む、最初の細胞シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの中の細胞のシグナル伝達分子は、細胞シグナル伝達ドメイン、その部分、またはＣＤ３ζに由来する配列を含む。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、前記ＣＡＲはＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、およびＩＣＯＳなどの共同刺激受容体の膜貫通部分および／またはシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、同じＣＡＲは有効と共同刺激部分を同時に含む。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、活性化ドメインは、単一のＣＡＲの中に含まれるが、共同刺激成分は、他の抗原を識別するために、他のＣＡＲによって提供される。いくつかの実施形態では、前記ＣＡＲはすべて同じ細胞で発現される活性化または刺激ＣＡＲ、共同刺激ＣＡＲを含む（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照）。いくつかの態様では、細胞は、１つまたは複数の刺激または活性化ＣＡＲおよび／または共同刺激ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、細胞は抑制性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖなど、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５（２１５）（２０１３年１２月）を参照）をさらに含み、例えば、疾患または病症関連および／または特異的ＣＡＲを除いたものを識別することにより、前記疾患標的化ＣＡＲを介して配信された刺激信号は、抑制性ＣＡＲとそのリガンドの結合を介して減少または抑制され、例えば、オフ−ターゲット（ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ）効果を減少させる。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのような、前記キメラ抗原受容体の細胞内シグナル伝達部分はＣＤ３ζ細胞内ドメインとの共同刺激シグナル伝達領域を含む。いくつかの実施形態では、前記細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３（例えば、ＣＤ３−ζ）細胞内ドメインに接続されているＣＤ２８膜貫通及びシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、前記細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζ細胞内ドメインに接続されているキメラＣＤ２８および／またはＣＤ１３７（４−１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）共同刺激ドメインを含む。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、前記ＣＡＲは１つまたは複数、例えば２つまたは２つ以上の共同刺激ドメインおよび細胞の部分での初期活性化ドメインのような活性化ドメインを含む。例示的なＣＡＲはＣＤ３−ζ、ＣＤ２８、およびＣＤ１３７の細胞内部分を含む。
【０３９３】
いくつかの状況では、ＣＡＲは、第１世代は、第２世代および／または第３世代ＣＡＲに呼ばれる。いくつかの態様では、第１世代のＣＡＲは、抗原結合の際ＣＤ３鎖誘導信号のＣＡＲのみ提供し、いくつかの態様では、第２世代のＣＡＲは、これらの信号との共同刺激信号の、共同刺激受容体（例えば、ＣＤ２８またはＣＤ１３７）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲのようなＣＡＲを提供し、いくつかの態様では、第３世代のＣＡＲは異なる共同刺激受容体の複数の共同刺激ドメインを含むＣＡＲである。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含有する細胞外部分を含む。いくつかの態様では、キメラ抗原受容体は、抗体または断片を含有する細胞外部分と細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、前記抗体または断片は、ｓｃＦｖを含み、前記細胞内ドメインは、ＩＴＡＭを含む。いくつかの態様では、前記細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３−ζ鎖のζ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、前記キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインに接続されている膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通部分を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞の共同刺激分子の細胞内ドメインを含む。細胞外ドメインと膜貫通ドメインは、直接または間接的に接続することができる。いくつかの実施形態において、前記細胞外ドメインと膜貫通ドメインは、接続配列を介して接続される。いくつかの実施形態では、前記受容体は、膜貫通ドメインから由来した分子であるＣＤ２８の細胞外の部分と同じ細胞外部分を含む。いくつかの実施形態において、前記キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞の共同刺激分子またはその機能変異体由来の、例えば膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインの間の細胞内ドメインを含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞の共同刺激分子は、ＣＤ２８または４１ＢＢある。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体断片のような抗体を含むか、ＣＤ２８の膜貫通部分またはその機能変異体の膜貫通ドメインを含み、ＣＤ２８のシグナル伝達部分または機能性変異体の細胞内シグナル伝達ドメインと、およびＣＤ３ζの信号伝達部分またはその機能変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体断片のような抗体を含み、ＣＤ２８の膜貫通部分またはその機能変異体の膜貫通ドメインを含み、ＣＤ１３７のシグナル伝達部分または機能変異体の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ３ζの信号伝達部分またはその機能変異体を含む。いくつかの実施形態において、前記受容体は、Ｉｇ分子（例えば、ヒトＩｇ分子）の部分を含む接続配列をさらに含み、例えば、Ｉｇヒンジ、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、例えば、ただヒンジ接続配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、（ｉ）腫瘍抗原を特異的に識別する抗体、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の共同刺激信号のドメインとＣＤ３ζ、または（ｉｉ）腫瘍抗原を特異的に識別する抗体、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７の共同刺激信号のドメインとＣＤ３ζ、または（ｉｉｉ）腫瘍抗原を特異的に識別する抗体、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の共同刺激信号ドメイン、ＣＤ１３７の共同刺激信号のドメインとＣＤ３ζを備える。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、前記キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ２８（例えば、登録番号：Ｐ０１７４７１）またはその変異体の膜貫通ドメイン、またはこれらを含み、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９に示されるアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列、またはこれらを含む。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、前記キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８またはその変異体の膜貫通ドメイン、またはこれらを含み、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５に示されるアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、  ９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列、またはこれらを含む。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、前記キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞内シグナル伝達の部分は、ヒトＣＤ２８またはその機能変異体または部分の細胞内共同刺激シグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内シグナル伝達ドメインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含むことができる。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、前記細胞内ドメインは、ＣＤ１３７（例えば、登録番号：Ｑ０７０１１．１）または機能変異体またはその部分の細胞内共同刺激シグナル伝達ドメインを含み、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、前記キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ζ刺激シグナル伝達ドメインまたはその機能変異体を含む。例えば、いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む。
【０４００】
いくつかの態様では、前記キメラ抗原受容体は、ＣＤ８ヒンジのようなヒンジを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む。
【０４０１】
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体断片のような抗体を含み、ｓｃＦｖ、接続序列は、例えば、免疫グロブリン分子の一部を含む接続序列、例えば、ヒンジ領域、および／または１つまたは複数の重鎖分子の不変領域、例えば、Ｉｇ−ヒンジを含む接続序列、全部または一部ＣＤ２８によって誘導された膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＣＤ２８によって誘導される細胞内シグナルドメインとＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体または断片は、例えば、ｓｃＦｖ、接続序列、例えば、Ｉｇ−ヒンジを含む任意の接続序列、ＣＤ２８によって誘導された膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７によって誘導された細胞内シグナル伝達ドメインとＣＤ３ζによって誘導されるシグナル伝達ドメインを含む。
【０４０２】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを表示し、最小の長さに制限されない。指定された受容体および他のポリペプチド（例えば、リンカー、またはペプチド）を含むポリペプチドは、天然および／または非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸残基を含むことができる。前記用語は、例えばグリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、シアル化（ｓｉａｌｙｌａｔｉｏｎ）、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）とリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）などポリペプチドの発現後の変形をさらに含む。いくつかの態様では、前記ポリペプチドは、前記タンパク質が必要な活性を保持するだけで、元のまたは天然の配列の変形をさらに含むことができる。このような変形は、部位指定突然変異誘発を介して有意なものか、またはタンパク質の宿主突然変異の発生またはＰＣＲ増幅に起因する誤差を通じた意外な可能性がある。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、前記被験者に１種の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、異なる治療過程で、前記被験者に同じ腫瘍抗原に対する２つのまたは２種類以上の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、異なる治療過程で、前記被験者に異なる腫瘍抗原に対する２つのまたは２種類以上の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、異なる治療過程で、前記被験者に同じ腫瘍抗原の同じエピトープに対する２つのまたは２種類以上の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、異なる治療過程で、前記被験者に同じ腫瘍抗原の異なるエピトープに対する２つのまたは２種類以上の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、異なる治療過程で、前記被験者に２つのまたは２種類以上の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与して、同じ部位の腫瘍を治療するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法は、異なる治療過程で、前記被験者に２つのまたは２種類以上の養子細胞または免疫エフェクター細胞を投与して、異なる部位の腫瘍を治療するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書による方法で使用した養子細胞または免疫エフェクター細胞のうちの少なくとも一つＣＬＤ１８Ａ２を標的化するＣＡＲ−Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本明細書による方法で使用した養子細胞または免疫エフェクター細胞のうちの少なくとも一つの本明細書によるＣＬＤ１８Ａ２を標的化するＣＡＲ−Ｔ細胞である。
【０４０４】
様々な使投与量で被験者に投与された細胞によって発現されたキメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）は、一般的は、治療される疾患または病症または細胞によって発現される、それに関連する、および／または特異的な分子を特定したり、またはこれに特異的に結合される。抗原のような分子に特異的に結合する場合には、受容体は、一般的に、免疫刺激信号（例えば、ＩＴＡＭで伝達された信号）を細胞に伝達することにより、疾患または病症を標的化する免疫反応を促進させる。例えば、いくつかの実施形態では、初回投与量での細胞は、疾患または病症の細胞または組織によって発現された抗原または疾患または病症関連抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。
【０４０５】
後続投与量の細胞によって発現される受容体（例えば、ＣＡＲ）は、一般的に、初回投与量のＣＡＲと同じ抗原に特異的に結合され、一般的に、初回投与量の細胞の受容体と同じ受容体または非常に類似した受容体である。いくつかの実施形態では、後続投与量の細胞での受容体は、初回投与量の細胞での受容体と同じか、または前記受容体と非常に類似している。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、後続投与量の細胞によって発現されるＣＡＲは、初回投与量の細胞によって発現されるＣＡＲと同じｓｃＦｖ、同じ信号伝達ドメインおよび／または同じ接続を含む。いくつかの実施形態では、これは初回投与量と同じ共同刺激、刺激、膜貫通および／または他のドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、後続投与量のＣＡＲの１つまたは複数の成分は、初回投与量のＣＡＲと異なる。
【０４０７】
免疫エフェクター細胞
本発明では、キメラ受容体を発現して本明細書による方法を使用して提供された細胞は、免疫エフェクター細胞である。前記細胞は、一般的に、ヒト細胞である哺乳動物細胞のような真核生物の細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ組織から誘導された、リンパ球を含む、一般的にＴ細胞および／またはＮＫ細胞である骨髄またはリンパ形細胞のような先天性または適応免疫の細胞などの免疫系の細胞である。他の例示的な細胞は、多分化能（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）と多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞のような幹細胞を含み、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む。細胞は、一般的に、被験者から直接分離するか、および／または被験者から分離して冷凍した細胞のような１次細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞または他の細胞型の１つまたは複数のサブグループを含み、例えば、前Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞およびそのサブグループ、例えば、機能、有効状態、成熟、分化の可能性、増幅、再循環、位置決め、および／または持続能力、抗原特異性、抗原受容体タイプ、特定の器官またはコンパートメントでの存在は、マーカーまたはサイトカインの分泌状況、および／または分化の程度によって限定されたものを含む。治療待機中の被験者について、細胞は、同種異系および／または自体であることができる。方法は、既存の方法を含む。いくつかの態様では、先行技術において、細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）のような多能性および／または多分化能幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記方法は、被験者から分離された細胞を製造、処理、培養および／または操作して、冷凍保存の前または後、これを同じ患者に導入するステップを含む。
【０４０８】
Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプおよびサブグループは、元のＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、記憶Ｔ細胞およびそのサブタイプを含み、例えば、幹細胞記憶Ｔ（ＴＳＣＭ）、中心記憶Ｔ（ＴＣＭ）、エフェクター記憶Ｔ（ＴＥＭ）、または最終的に分化したエフェクター記憶Ｔ細胞、腫瘍−浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連非変異体Ｔ（ＭＡＩＴ）細胞、天然的に生成されたと養子調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞は、例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、小胞ヘルパーＴ細胞、α／βＴ細胞、およびδ／γＴ細胞を含む。
【０４０９】
いくつかの実施形態では、前記細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は、単核細胞または顆粒性白血球であり、例えば、骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、および／または好塩基球である。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、前記細胞は、遺伝子工学操作されて導入された１つまたは複数の核酸を含み、これにより前記核酸の組換えまたは遺伝子工学操作された産物を発現する。いくつかの実施形態では、核酸は、異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）であり、すなわち、一般的に、細胞または前記細胞から得られたサンプルを、例えば、他の生物体または細胞から得られたサンプルに存在せず、例えば、一般的に操作された細胞および／またはこれらの細胞に由来する生物体で発見されない。いくつかの実施形態では、核酸は、天然に存在することなく、例えば、核酸は、自然の中で発見されたものであり、様々な異なる細胞タイプから由来されたドメインをエンコードする核酸を含むキメラの組み合わせを含む。
【０４１１】
遺伝子工学操作のための方法および担体
本発明は、キメラ抗原受容体を発現する遺伝子工学操作された細胞を生成するための方法、組成物、およびキットをさらに提供する。遺伝子工学操作は、一般的に、前記組換えまたは操作された部分をエンコードする核酸を細胞に導入する操作、例えば、レトロウイルス形質導入し、形質注入、形質転換を介して行われる操作に関するものである。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、まず、細胞を刺激し、例えば、これを刺激物と組み合わせ、前記刺激物で増殖、生存および／または活性化のような反応を誘導し、例えば、サイトカインまたは活性化マーカーの発現により検出した後、前記活性化された細胞を形質導入し、培養物から臨床応用に十分に提供することができる数まで増幅させることで、遺伝子転移を進行する。
【０４１３】
いくつかの状況では、刺激因子（例えば、リムポーカーまたはサイトカイン）の過発現は、被験者に対して毒性を持つことができる。したがって、いくつかの状況では、操作された細胞は、例えば、免疫効果の治療で投与された後、細胞が体内に敏感な遺伝子セグメントを、陰性選択するようにする。例えば、いくつかの態様では、前記細胞は、操作されることにより、これらはこれらが投与された被験者の体内の状況の変化により除去することができる。陰性選択できる表現型は、投与された試薬（例えば、化合物）の感度を提供する遺伝子を使用して作成することができる。陰性選択できる遺伝子はガンシクローバー（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）に対して敏感を提供する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ、ＨＳＶ−Ｉ  ＴＫ）遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒなど、Ｃｅｌｌ  ＩＩ：２２３、Ｉ９７７  ）、細胞性ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞性アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｅｎｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＡＰＲＴ）遺伝子、細菌シトシンデアミナーゼ（ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｃｙｔｏｓｉｎｅ  ｄｅａｍｉｎａｓｅ）（Ｍｕｌｌｅｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．  ８９：  ３３  （１９９２））を含む。
【０４１４】
いくつかの態様では、細胞はまた、操作されてサイトカインまたは他の因子の発現を促進させる。抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）のような遺伝子工学操作された成分を導入するための様々な方法は、公知のものであり、本明細書で提供された方法と、組成物を使用することができる。例示的な方法は、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）またはレンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）のようなウイルス、形質導入し、転移因子、および電気穿孔を通じた方法を含む受容体をエンコードする核酸を転移させるための方法を含む。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、組換え感染性ウイルス顆粒を使用して、組換え核酸を細胞に転移させる、例えば、類人猿ウイルス４０（ｓｉｍｉａｎ  ｖｉｒｕｓ４０、ＳＶ４０）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、アデノ関連ウイルス（ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓ、ＡＡＶ）に由来する担体を使用する。いくつかの実施形態では、組換えレンチウイルス担体、またはγ−レトロウイルス担体のようなレトロウイルス担体を使用して、組換え核酸をＴ細胞転移させる（例えば、Ｋｏｓｔｅら、（２０１４）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ２０１４年４月３日．  ｄｏｉ：１０．１０３８／  ｇｔ．２０１４．２５；Ｃａｒｌｅｎｓら、（２０００）Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ２８（１０）：１１３７−４６；Ａｌｏｎｓｏ−Ｃａｍｉｎｏら、（２０１３）Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ２、ｅ９３；Ｐａｒｋら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１年１１月に、２９（１１）：５５０−５５７を参照）。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、前記レトロウイルス担体は、長い末端重複配列（ＬＴＲ）を備えており、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏｌｏｎｅｙ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ、ＭｏＭＬＶ）、骨髄増殖性肉腫ウイルス（ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｓａｒｃｏｍａ  ｖｉｒｕｓ、ＭＰＳＶ）  、マウス胚性幹細胞ウイルス（ｍｕｒｉｎｅ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｖｉｒｕｓ、ＭＥＳＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ｍｕｒｉｎｅ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｖｉｒｕｓ、ＭＳＣＶ）、脾臓病巣形成ウイルス（ｓｐｌｅｅｎ  ｆｏｃｉ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｖｉｒｕｓ、ＳＦＦＶ）またはアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）に由来するレトロウイルス担体である。ほとんどのレトロウイルスベクターは、マウスレトロウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、前記レトロウイルスは、任意の鳥類または哺乳動物の細胞源に由来するものを含む。レトロウイルスは通常両親媒性であり、これは、多くの種類（人間を含む）の宿主細胞に感染させることができることを意味する。レンチウイルス形質導入方法は、公知されたものである。例示的な方法は、例えばＷａｎｇら、（２０１２）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：６８９−７０１；Ｃｏｏｐｅｒなど、（２００３）Ｂｌｏｏｄ．  １０１：１６３７−１６４４；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、（２００９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ５０６：９７−１１４；とＣａｖａｌｉｅｒｉなど、（２００３）Ｂｌｏｏｄ．  １０２（２）：４９７−５０５に記載されている。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、電気穿孔を介して組換え核酸をＴ細胞に転移させる（例えば、Ｃｈｉｃａｙｂａｍら、（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（３）：ｅ６０２９８とＶａｎ  Ｔｅｄｅｌｏｏら、（２０００）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７（１６）：１４３１−１４３７を参照）。いくつかの実施形態では、転座（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）を介して組換え核酸をＴ細胞に転移させる（例えば、Ｍａｎｕｒｉら、（２０１０）Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２１（４）：４２７−４３７；Ｓｈａｒｍａら、（２０１３）Ｍｏｌｅｃ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  ２、ｅ７４；およびＨｕａｎｇら、（２００９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ５０６：１１５−１２６を参照）。免疫細胞に遺伝物質を導入し、発現する他の方法は、リン酸カルシウム形質注入（例えば、「分子生物学の現在のプロトコル」（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）に記載されており、ジョン・ワイリー＆サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク州ニューヨーク）、プロトプラスト融合、カチオン性リポソーム媒介形質注入が含まれ、タングステン粒子によって促進される粒子の衝撃（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３４６：７７６−７７７（１９９０）、およびリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈（Ｂｒａｓｈら、Ｍｏｌ  ｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、７：２０３１−２０３４（１９８７））を含む。
【０４１８】
組換え産物をエンコードする核酸を転移させるための他の方法と担体は、例えば、公開番号がＷＯ２０１４０５５６６８である国際特許出願、および番号が７，４４６，１９０である米国特許に記載されている。
【０４１９】
導入のための他の核酸（例えば、遺伝子）は、例えば転移される細胞の活性および／または機能を促進させ、治療効果を改善させるためのもの；遺伝マーカーを提供して細胞を選択し、および／または評価する遺伝子、例えば、体内の生存や位置決めを評価する遺伝子；安全性の遺伝子、例えば、細胞が体内に敏感な遺伝子セグメントを、陰性選択できるようにする遺伝子を含むが、例えば、Ｌｕｐｔｏｎ  Ｓ  ．Ｄ．ら、Ｍｏｌ．  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１１：６（１９９１）；とＲｉｄｄｅｌｌら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ３：３１９−３３８（１９９２）に記載された通りであり；また、Ｌｕｐｔｏｎの公開番号ＰＣＴ／ＵＳ９１／０８４４２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１などを参照することができるが、これに陽性選択可能なマーカーと陰性可能なマーカーの融合誘導による二重の機能は、選択可能な融合遺伝子の応用が説明されている。例えば、Ｒｉｄｄｅｌｌら、番号が６，０４０，１７７である米国特許第１４〜１７のコラムを参照することができる。
【０４２０】
免疫エフェクター細胞の調製
いくつかの実施形態では、操作された細胞の製造は、１つまたは複数の培養および／または１つまたは複数の調製ステップを含む。遺伝子組み換え受容体（例えば、ＣＡＲ）をエンコードする核酸を導入するための細胞は、サンプル（例えば、生物学的サンプルは、例えば、被験者から得るか、または被験者に由来するサンプル）から分離することができる。いくつかの実施形態では、細胞が分離されている被験者は、一定の疾患または病症を患っているか、または細胞治療を必要とするか、または細胞治療を行う被験者である。いくつかの実施形態では、被験者は、特定の治療的に媒介されたヒトであり、例えば、養子細胞治療またはエフェクター細胞治療法を必要とするヒトであり、前記治療に使用される細胞は、分離、加工および／または操作を経たものである。いくつかの実施形態では、前記細胞は、１次ヒト細胞のような１次細胞である。前記サンプルは、被験者の組織、体液および他のサンプルから直接得られたサンプル、および例えば分離、遠心分離、遺伝子工学による操作（例えば、ウイルス担体を用いた形質導入）、洗浄および／またはインキュベートなどの１つまたは複数の処理ステップから得られたサンプルを含む。前記生物学的サンプルは、生物由来のサンプルまたは処理されたサンプルから直接得ることができる。生物学的サンプルは、例えば血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑膜液、尿や汗などの体液、組織、器官のサンプルを含むが、これに限定されず、これらから由来された処理されたサンプルを含む。
【０４２１】
いくつかの態様では、細胞が誘導または分離されたサンプルは、血液または血液由来のサンプルであるか、または成分採集や白血球除去術による産物である。例示的なサンプルは、全血、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検水、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸関連リンパ形の組織、粘膜関連リンパ形の組織、脾臓、他のリンパ形の組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃または他の器官、および／またはこれら由来の細胞を含む。細胞治療（例えば、養子細胞治療または免疫エフェクター細胞治療）の場合には、サンプルは、独自のと同種異系由来のサンプルを含む。
【０４２２】
いくつかの実施形態では、前記細胞は、Ｔ細胞株のような細胞株に由来する。いくつかの実施形態では、細胞は、マウス、ラット、非ヒト霊長類、およびブタのような異種（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）に由来する。
【０４２３】
いくつかの実施形態では、細胞の分離は、１つまたは複数の調製および／または進化性基づいていない細胞分離ステップを含む。いくつかの実装例では、細胞は、１つまたは複数の物質の存在下で洗浄、遠心分離、および／またはインキュベートを経たが、例えば、不必要な成分を除去し、必要な成分を豊富にし、具体的な物質について敏感細胞を分解または除去するために、これらの手順を経る。いくつかの実装例では、細胞は、例えば密度、付着性質、大きさ、具体的成分の感度および／または抵抗性などの１つまたは複数の性質に基づいて分離される。いくつかの実装例では、例えば、成分採集や白血球除去術を介して被験者の循環血液から由来された細胞を得る。いくつかの態様では、前記サンプルは、リンパ球を含み、Ｔ細胞、単核細胞、顆粒性白血球、Ｂ細胞、他のユヘク血液白血球、赤血球、および／または血小板を含み、いくつかの態様では、赤血球と血小板と異なる細胞を含む。
【０４２４】
いくつかの実施形態において、前記被験者から収集した血液細胞を洗浄するために、例えば、血漿部分を除去し、前記細胞を、適切な緩衝液または培地に置いて、後続の処理ステップで使用するために洗浄する。いくつかの実施形態では、前記細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。いくつかの実施形態では、洗浄溶液中のカルシウムおよび／またはマグネシウムおよび／または多数のまたはすべての２価陽イオンが不足している。いくつかの態様では、洗浄ステップは、メーカーの説明にしたがって、半自動化「フロースルー」遠心分離法（例えば、ＣＯＢＥ  ２９９１セルプロセッサー、ＢａＸｔｅｒ）を介して完成される。いくつかの態様では、洗浄ステップは、メーカーの説明にしたがって、接線流動濾過（ＴＦＦ）を介して完成される。いくつかの実施形態では、洗浄後、前記細胞は、例えばＣａ＋＋／Ｍｇ＋＋ＰＢＳフリーＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋ＰＢＳ  −  ｆｒｅｅ  ＰＢＳ）のような様々な生体適合緩衝液で再懸濁される。いくつかの実施形態では、血液細胞のサンプル成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁させる。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、前記方法は、密度ベースの細胞分離方法を含むが、例えば、赤血球を分解したり、赤血球を分解せずにＰｅｒｃｏｌｌまたはＦｉｃｏｌｌ勾配を介して末梢血を遠心分離するか、またはサンプルについて成分採集または白血球除去術を実行して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得る。
【０４２６】
いくつかの実施形態では、前記分離方法は、細胞の１つまたは複数の特定の分子、例えば、表面マーカー、例えば、表面タンパク質、細胞内マーカーまたは核酸の発現または存在に基づいて、異なる種類の細胞を分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、これらのマーカーに基づいて分離する任意の公知の方法を使用することができる。いくつかの実施形態では、前記分離は親和性ベースの、または免疫親和性ベースの分離である。例えば、いくつかの態様では、前記分離は、細胞の１つまたは複数のマーカー（一般的には、細胞表面マーカー）の発現または発現レベルに基づいて、細胞と細胞群を分離することを含み、例えば、このようなマーカーに特異的に結合されている抗体または結合パートナーを介してインキュベートし、その後、一般的に洗浄ステップを実行し、前記抗体または結合パートナーにまだ結合していない細胞から前記抗体または結合パートナーに既に結合された細胞を分離することを含む。
【０４２７】
これらの分離ステップは、陽性選択および／または陰性選択に基づいて行うことができ、陽性選択では、前記試薬に既に結合された細胞を保留してさらに応用され、陰性選択では、前記抗体または結合パートナーにまだ結合していない細胞を保留する。いくつかの実装例では、２つの部分はすべて保留して追加的に応用される。いくつかの態様では、異種（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）群で細胞の種類を特異的に検証することができる抗体が存在しない場合には、陰性選択が非常に役に立つことができることで、必要な群と異なる細胞を介して発現されたマーカーに基づいて進行して分離することが望ましい。
【０４２８】
前記分離は、具体的な細胞集団、または具体的なマーカーを発現する細胞の１００％を豊かにしたり、削除する必要がない。例えば、具体的なタイプの細胞を陽性選択するか、豊富にするのは、例えば、マーカーを発現するのは、前記細胞の数またはパーセンテージを増加させるが、前記マーカーを発現していない細胞を完全に存在しないようにする必要がありがないことを意味する。同様に、具体的なタイプの細胞を陰性選択、削除または消費するするのは、例えば、マーカーを発現するのは、前記細胞の数またはパーセンテージを減少させるが、すべてのこれらの細胞を完全に除去する必要がないことを意味する。
【０４２９】
いくつかの実装例では、複数回の分離のステップを実行するが、ここでは、１つのステップからの陽性選択または陰性選択の部分は、他の分離ステップを実行するために、例えば、後続の陽性選択または陰性選択を行う。いくつかの実装例では、単一の分離ステップは、複数のマーカーを発現する細胞を同時に消費し、例えば、インキュベートを介して細胞を自己の陰性選択の標的化するマーカーと特異的多様抗体または結合パートナーと一緒にインキュベートする。同様に、細胞を、様々な細胞タイプで発現される様々な抗体または結合パートナーと一緒にインキュベートして、複数の細胞タイプに対して同時に陽性選択を行うようすることができる。
【０４３０】
例えば、いくつかの態様では、Ｔ細胞の特定のサブグループ、例えば、１つまたは複数の表面マーカー陽性細胞、または高レベルの１つまたは複数の表面マーカーを発現する細胞、例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋および／またはＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性選択または陰性選択技術によって分離される。
【０４３１】
例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８に接続された磁性ビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＭ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ細胞増幅器）を使用して陽性選択を行うことができる。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、分離は陽性選択を介して、具体的な細胞群を豊富にしたり、または陰性選択を介して、具体的な細胞群を消費することによって行われる。いくつかの実施形態では、陽性選択または陰性選択は、細胞を１つまたは複数の表面マーカーに特異的に結合される１つまたは複数の抗体または他の結合試薬と一緒にインキュベートして完成し、前記１つまたは複数の表面マーカーは、それぞれ陽性選択または陰性選択された細胞で発現されるか（マーカー＋）または比較的高いレベルで発現される（マーカーハイ（ｍａｒｋｅｒ  ｈｉｇｈ））。
【０４３３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、非−Ｔ細胞（例えば、Ｂ細胞、単核細胞または他の血液の白血球）で発現されるマーカー（例えば、ＣＤ１４）に対して、音声選択を行い、ＰＢＭＣサンプルから分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択ステップを使用してヘルパーＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離する。１つまたは複数の１次、記憶および／またはエフェクターＴ細胞のサブグループで発現されるか、または比較的高い程度で発現されるマーカーについて陽性選択または陰性選択を行い、これらのＣＤ４＋およびＣＤ８＋群をサブグループにさらに分離することができる。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、１次、中心記憶、エフェクター記憶および／または中心記憶幹細胞をさらに豊かにしたり消費し、例えば、対応するサブグループに関連付けられて表面抗原に基づいて陽性選択または陰性選択を進行する。いくつかの実施形態では、効果を増加させるためには、例えば、長期生存、増幅および／または投与後の移植を改善させるために中心記憶Ｔ（ＴＣＭ）細胞を豊富にして、いくつかの態様では、これは、これらのサブグループで特に強い。Ｔｅｒａｋｕｒａら、（２０１２）  Ｂｌｏｏｄ．  １：  ７２-８２；Ｗａｎｇら、（２０１２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：  ６８９−７０１を参照することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＭを豊かにしたＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞を組み合わせて効果をより増強させる。
【０４３５】
実施形態では、記憶Ｔ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ６２Ｌ−サブグループに存在する。ＰＢＭＣは、ＣＤ６２Ｌ−ＣＤ８＋および／またはＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋部分を豊かたり消費し、例えば、抗ＣＤ８抗体および抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用する。
【０４３６】
いくつかの実施形態では、中心記憶Ｔ（ＴＣＭ）細胞を豊富にすることはＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、および／またはＣＤ１２７陽性または表面過発現によって行われ、いくつかの態様では、これはＣＤ４５ＲＡおよび／またはグランザイム（ｇｒａｎｚｙｍｅ）Ｂ発現または過発現された細胞に基づいて、陰性選択される。いくつかの態様では、ＴＣＭ細胞を豊富にするＣＤ８＋群の分離はＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の消耗、および陽性選択またはＣＤ６２Ｌを発現する細胞を豊富にする方法を使用して実行される。一方、中心記憶Ｔ（ＴＣＭ）細胞を豊富にすることはＣＤ４発現に基づいて選択された細胞の陰性部分をはじめとして、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡの発現に基づいて、陰性選択をし、ＣＤ６２Ｌに基づいて陽性選択を行う方式を使用して実行される。いくつかの態様では、このような選択は、同時に進行され、別の態様では、このような選択は、特定の順序で順次行われる。いくつかの態様では、ＣＤ４発現ベースの同じ選択ステップは、ＣＤ８＋細胞群またはサブグループを調製するためのものであり、また、ＣＤ４＋細胞群またはサブグループを作成するためのものなので、ＣＤ４ベースの分離からの陽性および陰性の部分を保留して、１つまたは複数の追加の陽性選択または陰性選択ステップを選択的に実行した後、前記方法の後続のステップに使用される。
【０４３７】
具体的な実装例では、ＰＢＭＣサンプルまたは他の血液の白血球サンプルについてＣＤ４＋細胞の選択を進行するが、ここで、陰性と陽性部分を保留する。その後、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡまたはＣＤ１９の発現に基づいて、陰性部分について陰性選択を行い、ＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７などの中心記憶Ｔ細胞特徴マーカーに基づいて陽性選択を進行するが、ここで、前記陽性選択および陰性選択は特定の順序で行われる。
【０４３８】
細胞表面抗原を備える細胞集団を検証してヘルパーＣＤ４＋Ｔ細胞を、１次、中心記憶とエフェクター細胞に分離する。ＣＤ４＋リンパ球は、標準的な方法を介して取得することができる。いくつかの実施形態では、１次ＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、中心記憶ＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋である。いくつかの実施形態では、エフェクターＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ−とＣＤ４５ＲＯ−ある。
【０４３９】
１つの実装例では、陰性選択を介してＣＤ４＋細胞を豊富にするために、単一のクローン抗体の混合物は、一般的にＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体または結合パートナーは、例えば磁気ビーズまたは常磁性ビーズ（ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ  ｂｅａｄ）のような固体支持物または基質に結合させて陽性選択および／または陰性選択のための細胞を分離することを許可する。
【０４４０】
いくつかの実施形態では、調製方法は、分離、インキュベートおよび／または操作の前または後に前記細胞を凍結保存するステップのようなステップを含む。いくつかの実施形態において、前記凍結し、その後の溶解ステップで顆粒性白血球を除去し、さらに、ある程度では、細胞集団中の単核細胞を除去する。いくつかの実施形態では、例えば、洗浄ステップは、血漿と血小板を除去した後、前記細胞を凍結溶液に懸濁させるために行われる。いくつかの態様では、任意の様々な公知の冷凍液とパラメータを使用することができる。一つの実装例では、２０％のＤＭＳＯおよび８％のヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）を含むＰＢＳまたは他の適切な細胞凍結培地を使用する。その後、ＤＭＳＯとＨＡＳの最終濃度がそれぞれ１０％および４％になるように培地を１：１に希釈する。その後、一般的にプログラム可能な冷却装置として、既に定められたプログラムまたは１°／分の速度と同じ原理に基づいて、細胞を−８０℃または−９０℃まで凍結し、液体窒素貯蔵タンクの気相に格納する。
【０４４１】
いくつかの実施形態では、提供された方法は、培養、インキュベート、および／または遺伝子工学操作のステップを含む。例えば、いくつかの実施形態では、消費された細胞集団と培養開始組成物をインキュベートおよび／または操作する方法を提供する。
【０４４２】
いくつかの実施形態では、前記細胞群は培養開始組成物でインキュベートされる。例えば、細胞、チャンバー、ウェル、カラム、チューブ、チューブセット、バルブ、バイアル、ペトリ皿、バック（ｂａｇ）、または細胞を培養するための他の容器のような容器でインキュベートおよび／または操作する。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学操作の前に、または遺伝子工学操作と一緒に細胞をインキュベートおよび／または培養する。インキュベートステップは、培養、刺激、活性化、および／または増殖を含むことができる。いくつかの実施形態では、刺激条件または刺激性試薬の存在下で細胞または組成物をインキュベートする。これらの条件は、群で細胞増殖、繁殖、活性化、および／または生存を誘導するように設計して、抗原との接触を模擬したり、および／または細胞を組換え抗原受容体への導入のような遺伝子工学操作に使用するように誘導する条件を含む。
【０４４４】
前記条件は、具体的な培地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含有量、時間、例えば栄養物質、アミノ酸、抗生物質、イオンのような試薬、および／または、例えばサイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え供給受容体のような刺激因子、および設計を経て細胞の状態の活性化を維持することができる任意の他の物質を含むことができる。
【０４４５】
いくつかの実施形態では、刺激条件または試薬は、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化させることができるリガンドなどの１つまたは複数の物質を含む。いくつかの態様では、前記物質は、Ｔ細胞中のＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル伝達カスケード反応を開始するか、起こす。これらの物質は、例えば、ＴＣＲの成分および／または共同刺激受容体に対して特異的な抗体を含むことができるが、例えば、ビーズのような固体支持物に結合される、例えば抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、および／または一つまたは複数のサイトカインを含むことができる。選択的に、増幅方法は、培地（例えば、少なくとも約０.５ｎｇ／ｍｌの濃度）に抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体を添加するステップをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、刺激剤は、少なくとも約１０単位／ｍＬの濃度のＩＬ−２のような１Ｌ−２および／またはＩＬ−１５および／またはＩＬ−７および／またはＩＬ−２１を含む。
【０４４６】
いくつかの態様では、インキュベートは、例えば、Ｒｉｄｄｅｌｌらに授与した番号が６，０４０，１７７である米国特許、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら、（２０１２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：６５１−６６０、Ｔｅｒａｋｕｒａら、（２０１２）Ｂｌｏｏｄ．  １：７２−８２、および／またはＷａｎｇら、（２０１２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：６８９−７０１に記載されたいくつかの技術に基づいて進行する。
【０４４７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、非−分裂型末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のような培養開始組成物フィーダー細胞まで増加させて（例えば、増幅する初期群中の各Ｔリンパについて得られた細胞群は、少なくとも約５、１０、２０または４０または４０以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含む）、前記培養物をインキュベートする（例えば、前記数のＴ細胞を増幅するのに十分な時間）方式で増幅する。いくつかの態様では、前記非−分裂型フィーダー細胞はγ線照射されたＰＢＭＣフィーダー細胞を含むことができる。いくつかの実施形態では、前記ＰＢＭＣは、約３０００〜３６００ラドの範囲内γ線照射を介して細胞分裂を防止する。いくつかの態様では、前記フィーダー細胞は、Ｔ細胞を加える前に、培地に添加する。
【０４４８】
いくつかの実施形態では、前記刺激条件は、ヒトＴリンパ球の成長に適した温度、例えば、約２５℃、一般的に、少なくとも約３０℃、また、一般的に、または約３７℃である温度を含む。選択的に、インキュベートは、非−分裂型ＥＢＶ−転換されたリンパ芽球細胞（ＬＣＬ）をフィーダー細胞として添加するステップをさらに含むことができる。ＬＣＬは約６０００〜１００００ラドの範囲内γ線で照射することができる。いくつかの態様では、ＬＣＬフィーダー細胞は、任意の適切な量で提供されるが、例えば、ＬＣＬフィーダー細胞と初期Ｔリンパ球の割合は、少なくとも約１０：１である。
【０４４９】
いくつかの実施形態では、抗原に天然または抗原特異的Ｔリンパ球を刺激して、抗原特異的ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のような抗原特異的Ｔ細胞を得る。例えば、抗原特異的Ｔ細胞株またはクローンは、サイトメガロウイルス抗原に対して発生し、感染した被験者からのＴ細胞を分離して、同じ抗原を使用して、細胞を体外で刺激することによって行われる。
【０４５０】
組成物および製剤
本発明は、本発明の方法のための薬物組成物および製剤を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の薬物組成物および製剤は、投与のための細胞の組成物を含み、例えば、指定された投与量またはその一部を含む投与のための細胞数からの単位剤形組成物を含む薬剤組成物及び製剤を含む。前記薬物組成物および製剤は、一般的に１つまたは複数の選択的な薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも一つの他の治療剤を含む。
【０４５１】
用語「薬物製剤」は、このような形の製剤を意味するが、前記製剤は、その中に活性成分を含有する生物学的活性が効果的であるよう可能にし、また、前記製剤を投与しようとする被験者が許容されていない毒性を備える追加の成分を含有しない。
【０４５２】
「薬学的に許容される担体」は、活性成分ではなく、被験者について毒性がない薬物製剤のいずれかの成分を意味する。薬学的に許容される担体は、緩衝剤、賦形剤、安定剤または防腐剤を含むが、これらに限定されない。
【０４５３】
いくつかの態様では、担体の選択部分は、特定の細胞および／または投与方法によって決定される。したがって、様々な適切な調製方法が存在する。例えば、前記薬物組成物は、防腐剤を含むことができる。適切な防腐剤には、例えば、メチルパラベン（ｍｅｔｈｙｌ  ｐａｒａｂｅｎ）、プロピルパラベン（ｐｒｏｐｙｌ  ｐａｒａｂｅｎ）、安息香酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｅｎｚｏａｔｅ）、および塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を含み得る。いくつかの態様では、２つまたは２つ以上の防腐剤の混合物を使用する。適切な防腐剤は、例えば、メチルパラベン（ｍｅｔｈｙｌ  ｐａｒａｂｅｎ）、プロピルパラベン（ｐｒｏｐｙｌ  ｐａｒａｂｅｎ）、安息香酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｅｎｚｏａｔｅ）、および塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を含むことができる。いくつかの態様では、２つのまたは２種類以上の防腐剤の混合物を使用する。防腐剤またはそれらの混合物の存在量は、一般的に約０.０００１％〜約２％（組成物の総重量で計算）である。担体は、例えば、「レミントンの製薬科学」（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．  編集（１９８０）に記載されている。使用される投与量および濃度において、薬学的に許容される担体は、一般的に被験者に対して毒性がなく、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸緩衝剤のような緩衝剤；アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）とメチオニン（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）を含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド（ｏｃｔａｄｅｃｙｌ  ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｙｌ  ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ヘキサアルキル第四級アンモニウムクロリド（ｈｅｘａａｌｋｙｌ  ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ  ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）；塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化ベンゼトニウム（ｂｅｎｚｅｔｈｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）；フェノール（ｐｈｅｎｏｌ）、ブチル（ｂｕｔｙｌ）またはベンジルアルコール（ｂｅｎｚｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）；メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸（ｍｅｔｈｙｌ  ｏｒ  ｐｒｏｐｙｌ  ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅ）などのｐ−ヒドロキシ安息香酸アルキル（ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙ  ａｌｋｙｌ  ｂｅｎｚｏａｔｅ）；カテコール（ｃａｔｅｃｈｏｌ）；レゾルシノール（ｒｅｓｏｒｃｉｎｏｌ）；シクロヘキサノール（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｏｌ）；３−ペンタノール（３−ｐｅｎｔａｎｏｌ）；およびｍ−クレゾール（ｍ−ｃｒｅｓｏｌ））；低分子量（約１０個の残基より少ない）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）または免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）のような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）、アスパラギン（ａｓｐａｒａｇｉｎｅ）、ヒスチジン（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ）またはリジン（ｌｙｓｉｎｅ）のようなアミノ酸；グルコース（ｇｌｕｃｏｓ��）、マンノース（ｍａｎｎｏｓｅ）またはデキストリン（ｄｅｘｔｒｉｎ）を含む単糖類、二糖類、および他の糖類；ＥＤＴＡのようなキレート剤；ショ糖（ｓｕｃｒｏｓｅ）、マンニトール（ｍａｎｎｉｔｏｌ）、トレハロース（ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）またはソルビトール（ｓｏｒｂｉｔｏｌ）のような糖類；ナトリウムのような塩を形成する対イオン（ｓａｌｔ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｃｏｕｎｔｅｒｉｏｎｓ）；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／またはポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
【０４５４】
いくつかの態様では、前記組成物は、緩衝剤を含む。適切な緩衝剤は、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、および様々な他の酸および塩を含む。いくつかの態様では、２つまたは２つ以上の緩衝剤の混合物を使用する。緩衝剤またはそれらの混合物の存在量は、一般的に約０.００１％〜約４％（組成物の総重量で計算）である。投与可能な薬物組成物を製造するための方法は、公知されたものである。例示的な方法は、具体的には、例えば、「レミントン：薬学の科学実践」（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、ＬＷＷ社（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ）；第２１版（２００５年５月１日）に記載されている。
【０４５５】
前記製剤は、水溶液を含むことができる。前記製剤または組成物は、一つ以上の活性成分をさらに含むことができ、前記活性成分は、前記細胞治療が適用される特定の適応症、疾患または病症に使用することができ、好ましくは、前記細胞の補充活性を備えるものに使用することができ、ここで、対応する活性剤は、互いに悪影響を発生しない。これらの活性成分は、必要な目的のために効果的な投与量に組み合わされて、適切に存在する。したがって、いくつかの実施形態では、前記薬物組成物は、他の薬学活性物質または薬物をさらに含み、例えば、化学治療剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、および／またはビンクリスチンをさらに含む。
【０４５６】
いくつかの実施形態では、薬物組成物は、例えば、治療有効量または予防有効量のような疾患または病症を効果的に治療または予防する量の細胞を含む。いくつかの実施形態では、治療される被験者を定期的に評価して、治療または予防効果を監視する。必要な投与量は、単一のボールルース（ｓｉｎｇｌｅ  ｂｏｌｕｓ）を介して前記細胞を投与したり、複数のボールルース（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｂｏｌｕｓｅｓ）を介して前記細胞を投与したり、あるいは細胞を連続的に注入して転送することができる。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、前記組成物は、疾患または病症の負担を効果的に低減させる量、および／または被験者のＣＲＳまたは重大なＣＲＳを起こさない量、および／または本明細書に基づく方法の任意の他の結果を実装する量の細胞を含む。
【０４５８】
前記細胞と組成物は、標準的な投与技術、製剤および／または装置を使用して投与することができる。前記細胞の投与は、自己（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）または異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）であることができる。例えば、免疫抑制細胞または前駆細胞は、同じ被験者から得られ、同じ被験者または異なる相溶性被験者に投与することができる。末梢血から誘導された免疫抑制細胞またはその後代（例えば、体内、生体外または体外から誘導される）は、カテーテル投与（ｃａｔｈｅｔｅｒ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、全身注射、局所注射、静脈注射、または非経口投与を含む局所注射を介して投与することができる。治療性組成物（例えば、遺伝変形された免疫抑制細胞を含有する薬物組成物）を投与する場合には、これは一般的に単位剤形の注射可能な形態（溶液、懸濁液、乳液）に調製される。
【０４５９】
製剤は、経口投与、静脈内、腹膜内、皮下、肺、経皮、筋肉内、鼻腔内、粘膜、舌下、または坐剤投与に使用される製剤を含む。いくつかの実施形態では、前記細胞集団は、非経口投与される。。本明細書に使用された用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣および腹腔内投与を含む。いくつかの実施形態では、前記細胞は、静脈内、腹膜内または皮下注射を介して末梢全身配信を利用して、被験者に投与される。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、組成物は、無菌の液体製剤の形態で提供されるが、例えば、等張性水溶液、懸濁液、乳液、分散体または粘性組成物として提供され、その一部の態様では、選択されたｐＨまで緩衝することができる。液体製剤は、一般的にゲル、他の粘性組成物と固体組成物よりも容易に製造される。なお、液体組成物は、特に注射を介して投与することがよりやすい。別の態様では、粘性組成物は、適切な粘度範囲内で調製され、特定の組織よりも長い接触時間を提供することができる。液体または粘性組成物は、例えば、水、塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリヒドロキシ化合物（例えば、グリセリン（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、液体ポリエチレングリコール）、およびその適した混合物を含有溶媒または分散媒体であることができる担体を含むことができる。例えば、適切な担体、希釈剤、または滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースのような賦形剤などの溶媒に前記細胞を入れて無菌注射可能溶液を調製することができる。組成物は、湿潤、分散、または乳化剤（例えば、メチルセルロース（ｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ））、ｐＨ緩衝剤、ゲル化剤または増粘添加剤、防腐剤、風味剤、および／または色素などの補助物質を含むことができるが、必要な投与および調製経路によって決定される。いくつかの態様では、標準的な教科書を参照して、適切な製造物を製造することができる。
【０４６１】
組成物の安定性と無菌性を増強させる抗微生物防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤を含む、様々な添加剤を添加することができる。また、様々なパラベン系（ｐａｒａｂｅｎｓ）、クロロブタノール（ｃｈｌｏｒｏｂｕｔａｎｏｌ）、フェノール、およびソルビン酸（ｓｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）のような抗細菌剤及び抗真菌剤を使用して、微生物の作用を防止するように確保することができる。アルミモノステアレート（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｍｏｎｏｓｔｅａｒａｔｅ）やゼラチンなどの吸収を遅延させる物質を使用して注射可能な薬物形態の吸収を延長させることができる。
【０４６２】
体内投与のための製剤は、一般的に無菌である。無菌は、例えば無菌ろ過膜でろ過して容易に実装することができる。
【０４６３】
製品
本発明は、提供された養子細胞治療または免疫エフェクター細胞の治療方法に応じて、被験者に、細胞を投与して、前記細胞および組成物を保存するための、例えばキットおよび装置などの製品を提供する。
【０４６４】
製品は、１つまたは複数の容器を含み、一般的に多数の容器、包装材料、および１つまたは複数の容器および／または包装組み合わせ、またはそれに付着されたラベル、または被験者に細胞を投与する説明を含むパッケージ挿入ページである。
【０４６５】
容器は、一般的に、例えば１つまたは複数の単位投与量の投与される細胞を含む。製品は、一般的に、単一の単位投与量の細胞を含有する多数の容器を含む。単位投与量は、被験者に初回投与量で投与される細胞の量または数あるいは、初回または後続投与量で投与される細胞の数の２倍（または２倍以上）であることができる。これは投与方法に関する被験者に投与される細胞の最も少ない投与量または一番少ない可能量であることができる。いくつかの実施形態では、単位投与量は、本発明の方法に基づいて単位投与量で、特定の疾患また病症を患っている任意の被験者に投与されるか、または任意の被験者の細胞数または細胞最低数である。例えば、いくつかの態様では、単位投与量は、比較的少ない体重および／または比較的低い疾患の負担を持つ被験者に投与される細胞の最少量を含むことができ、例えば、初回投与量に指定された被験者に一つまたはいくつかの状況から１つを超える単位量で投与しても１つまたは複数の後続投与量で指定された被験者に１つまたは１つを超える単位投与量を投与するが、例えば、提供された方法に基づいて投与する。いくつかの実施形態では、例えば、細胞から誘導された被験者のキメラ抗原受容体−発現またはＣＡＲ−発現の数や細胞数などの単位投与量での細胞数は、初回投与量で、特定の被験者に投与されるべきである。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書によって提供され方法で治療しようとしたり、あるいは、これを必要とする被験者から誘導される。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、各容器は、独立して単位投与量の細胞を含み、例えば、同一または基本的に同じ数の細胞を含む。したがって、いくつかの実施形態では、各容器は同じか、ほぼまたは基本的に同じ数の細胞またはキメラ抗原受容体−発現細胞を含む。いくつかの実施形態では、単位投与量は約１×１０１０、約１×１０９、約１×１０８または約１×１０７個よりも少ない操作された細胞、全細胞、Ｔ細胞またはＰＢＭＣ／ｋｇ治療される、および／または細胞から誘導された被験者を含む。
【０４６７】
適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、注射器、および冷凍バッグのような柔軟性バッグを含む。特定の実施形態では、容器は、バックであるが、例えば、被験者に細胞を注入するのに適したバッグのような柔軟性バッグ、例えば、柔軟性プラスチックまたはＰＶＣバックまたはＥＶＡまたはＵＬＰＤＥ、および／またはＩＶ溶液バッグである。いくつかの実施形態では、バックは、無菌溶液と細胞と組成物を提供するための密封可能またはおよび／または滅菌可能なバックである。いくつかの実施形態では、容器、例えば、バッグの容積は約１０ｍｌ、２０ｍｌ、３０ｍｌ、４０ｍｌ、５０ｍｌ、６０ｍｌ、７０ｍｌ、８０ｍｌ、９０ｍｌ、１００ｍｌ、２００ｍｌ、３００ｍｌ、４００ｍｌ、５００ｍｌ、または１０００ｍｌの容積と等しいか、または約これだけであるか、または少なくともこれだけであり、例えば、約１０ｍＬ〜１００ｍＬまたは約１００ｍＬ、または約１０ｍＬ〜５００ｍＬまたは約５００ｍＬの容積と同じである。いくつかの実施形態では、バッグのような容器は１つまたは複数の異なる温度で安定するか、および／または細胞の安定保存を提供および／または維持する材料で製造されるが、例えば、治療の前にすぐに凍結融解されるように、低温、例えば、約−２０℃、−８０℃、−１２０℃、１３５℃、−１９６℃より低いか、同じ温度および／または冷凍保管に適した温度、および／または他の温度、例えば、細胞を凍結解凍するのに適した温度と体温、例えば、約３７℃または−３８℃、または−３９℃、または−４０℃のような温度で行わされるが、例えば、被験者の地点または治療地点、例えば、ベッドで行われる。
【０４６８】
前記容器は、例えば、ガラスやプラスチックのような様々な材料で製造することができる。いくつかの実施形態では、容器は無菌侵入ポートなどの１つまたは複数のポートを含み、これは、例えば、チューブまたはカーケトを通じて１つまたは複数のチューブに接続され、例えば、静脈内トルンの他の注入用および／または、例えば、細胞培養および／または保存バッグまたは他の容器などの他の容器から出て、別の容器に転移される目的のために接続される。例示的な容器は、冷凍バッグ、静脈内溶液バッグ、バイアルを含み、注射針を介して膜を貫通することができるものを備える。
【０４６９】
製品は、一つまたは複数の使用情報および／または説明が表示され包装挿入ページまたはラベルをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、情報または説明は、特定の疾患または病症を治療することができるか、治療しなければなら内容を表示したり、および／またはその説明を提供する。ラベルまたは包装挿入ページは疾患または病症を治療する製品の内容を表示することができる。いくつかの実施形態では、ラベルまたは包装挿入ページは被験者を治療する説明は、例えば、細胞から誘導された被験者に、初回と１つまたは複数の後続投与量で細胞を投与するが、例えば、提供された方法の実施の形態中のいずれかの方法で投与する説明を提供する。いくつかの実施形態では、説明は、初回投与量の１つの単位投与量、例えば製品の単一単独容器の内容物を投与した後、指定された時点または指定された時間帯内および／または被験者から１つまたは複数の因子または結果の存在または欠失または量または程度を検出した後、１つまたは複数の後続投与量で投与することを指定した。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、説明は被験者に多数の単位投与量で初回投与と連続投与することを指定した。いくつかの実施形態では、初回投与は被験者に、前記単位投与量のいずれかを提供することを含み、その後続投与は、被験者に、前記単位投与量の一つまたは複数を投与することを含む。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、説明は、初回投与後、例えば、初回投与または前投与を開始した後、約２１日〜約８０日、または約２５日〜約６０日、例えば、５０日と同じか、約５０日である時間に進行される後続投与を指定した。いくつかの実施形態では、説明は、被験者からサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルが、前記初回投与すぐ前の前記被験者の指標の血清レベルよりも約１０倍、約２５倍、および／または約５０倍低いか、および／またはＣＲＳの指数がすでにピークレベルに到達して減少しているか、および／または、前記被験者の細胞によって発現された受容体（例えば、ＣＡＲ）に特異的な検出可能な適応性宿主免疫反応が表示されないことを決定した後、後続投与量で投与することを指定した。
【０４７２】
いくつかの実施形態では、ラベルまたは包装挿入ページまたはパッケージは、誘導された細胞の被験者および／または投与する被験者の身分を指示するための標識を含む。自己移植の場合には、細胞から誘導された被験者の身分は、細胞が投与される被験者の身分と同一である。したがって、識別情報は、細胞の元の由来の細胞のような細胞を、特定の患者に投与することを指定することができる。これらの情報は、バーコードまたは他の符号化標識の形で包装材料および／またはラベルに存在することができたり、または被験者の氏名および／または他の識別特徴を指示することができる。
【０４７３】
いくつかの実施形態では、製品は、１つまたは複数の一般的に細胞を含む組成物を含有した多数の容器を含むが、例えば、その単独の単位投与量形態を含み、その中に組成物を含む１つまたは複数の他の容器をさらに含み、その前記組成物は、他の試薬、例えば、細胞との組み合わせになり、同時に投与したり、任意の順序で１回投与される細胞毒性または他の治療薬を含む。またはこのほかに、前記製品は、薬学的に許容される緩衝剤を含む他のまたは同じ容器をさらに含むことができる。これは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、チューブ、針、および／または注射器のような他の成分をさらに含むことができる。
【０４７４】
用語「包装挿入ページ」は、治療性製品の商品パッケージによく含まれる説明書を意味し、前記説明書は、これらの治療性の製品を使用するの説明、使用方法、投与量、投与、併用療法、禁忌症および／または警告などの情報を含む。
【０４７５】
初回投与量と後続投与量のＣＡＲを発現する自己Ｔ細胞を用いた癌患者の治療
本発明の方法は、下記のように総合することができる。
【０４７６】
「単核細胞分離技術」に基づいて、がんを患っている人間被験者から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）またはＴ細胞を分離し、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をエンコードするウイルス担体で細胞を培養および形質導入し、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、被験者の癌により発現された腫瘍関連または腫瘍特異的抗原である抗原に特異的に結合される。細胞は、単独の柔軟性冷凍バッグの注入媒体に冷凍保管され、それぞれは約１×１０６個の細胞〜５×１０７個の細胞である単一ユニットの投与量の細胞を含む。各被験者に注入された初回投与量は、約１×１０１２個の細胞よりも多くなく、好ましくは、約１×１０１１個の細胞よりも多くなく、より好ましくは、約１×１０１０個の細胞または約５×１０９または約２×１０９個の細胞よりも多くない。注入前に、細胞を約−１３０℃または約−１７５℃より低い温度に維持する。
【０４７７】
細胞治療を開始する前に、被験から血液を得て、必要に応じてＥＬＩＳＡおよび／またはＭＳＤおよび／またはＣＢＡの方法を使用して、血清中サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を指示する１つ以上の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−１０およびＩＬ−６のような血清因子を評価する。治療を開始する前に、例えば、ＰＥＴまたはＣＴスキャンにより固形腫瘍の大きさや質量を測定し、必要に応じて、腫瘍の負担を評価することができる。
【０４７８】
約３８℃まで昇温させて蘇生させ、被験者に複数回の注入を介して、初回投与量の細胞を投与する。毎回の注入は、約３〜３０分の時間内に連続注入して静脈内（ＩＶ）投与を行う。
【０４７９】
初回投与量で投与した後、被験者は身体検査を受けて、任意の毒性または毒性の結果の症状、例えば、発熱、低血圧、低酸素症、神経障害または炎症性サイトカインまたはＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）の血清レベルの上昇を監視する。選択的に、初回投与量で投与した後、１回または複数回投与する場合には、患者から血液を得て、ＥＬＩＳＡおよび／またはＭＳＤおよび／またはＣＢＡの方法を使用してＣＲＳを指示する血清因子のレベルを評価する。血清因子のレベルとちょうど初回投与量で投与する前に、得られた血清因子のレベルを比較する。必要に応じて、抗ＩＬ６または他のＣＲＳの治療を実行して、ＣＲＳの症状を減少させる。
【０４８０】
初回投与量で投与した後、例えば、投与を開始した後、１週、２週、３週、および／または４週間に被験者からの抗ＣＡＲ免疫反応の存在または不在を選択的に検出するために、例えば、ｑＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞ベースの抗体測定および／または混合リンパ球反応を介して検出する。
【０４８１】
初回投与量を使用して実装された腫瘍の負担の減少パーセンテージは、必要に応じてスキャン（例えば、ＰＥＴとＣＴスキャン）を介して固形腫瘍患者に初回投与量で投与した後、１回または複数回の測定されることができるか、および／または定量化を介して血液または腫瘍部位の疾患陽性細胞で測定することができる。
【０４８２】
後続投与量で投与する。一部の被験者では、初回投与量で投与を開始した後、約８０日以内に、後続投与量で投与し、好ましくは、約６０日、より好ましくは、約５０日以内に投与する。いくつかの状況では、試験を経たＣＲＳ関連の結果または血清因子レベルが許容されるレベルよりも低く、また、初回投与量で投与した後、約６０日に被験者の抗ＣＡＲ免疫反応が検出されていない場合にのみ、後続投与量で投与する。他の被験者では、初回投与量で投与した後、３０日を超えている時間も被験者がＣＲＳまたは重大なＣＲＳを持たないと考えか、またはすべての試験されたＣＲＳを指示する血清因子のレベルが初回投与量で投与した後のピークレベルよりも低い場合にＣＲＳの２０％が観察され、また、被験者の抗−ＣＡＲ免疫反応が検出されていない場合に、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の後続投与量の細胞を投与する。毎回の投与量の投与間隔は２１〜８０日にあり、好ましくは、２５〜６０日であり、より好ましくは、２５〜５５日である。
【０４８３】
後続投与量の大きさは、患者に特異的であり、腫瘍の負担に基づいたものであり、抗ＣＡＲ免疫反応の存在およびＣＲＳ関連の結論のレベルである。一部の被験者に１、２、３、またはさらに多くの単位投与量の細胞の後続投与量で投与される。各被験者に注入される後続投与量は、約１×１０１２個の細胞よりも多くない、または約１×１０１１個の細胞よりも多くない、または約１×１０１０個の細胞よりも多くない、または約５×１０９個の細胞よりも多くないか、または約２×１０９個の細胞よりも多くない。連続静脈内注射を介して、約３〜３０分以内に、後続投与量で投与する。
【０４８４】
初回投与量から開始して数年間継続的に経被験者を定期的に監視する。患者訪問期間に、腫瘍の負担を測定したり、および／またはフローサイトメトリー分析と定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）を使用してＣＡＲ−発現細胞を検出して投与される細胞の体内増殖と持続性を測定したり、および／または抗−ＣＡＲ免疫反応の進行を評価する。
【０４８５】
本発明の利点は、下記の通りである。
【０４８６】
１．本発明は、キメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を用いて腫瘍の治療を進行する治療効果を大幅に向上させる、すなわち、腫瘍の数を減らすか、または体積を縮小させるか、および／または転移される数および／または程度を減少させるか、および／または腫瘍マーカーを減少させるか、および／またはいずれかの末期がんでよく表示される合併症を消失させたり悪化させる。
【０４８７】
２．固形腫瘍に対する抗腫瘍効果は顕著で、安全で効果的であり、ＣＬＡ１８Ａ２陽性の中末期消化管の腺癌を安定させたり、さらには完治することができる治療手段を提供する。
【０４８８】
３．免疫エフェクター細胞抗腫瘍治療を向上させる前処理組成物を提供し、免疫エフェクター細胞を投与する前に、フルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセル組成物を投与することにより、免疫エフェクター細胞の抗腫瘍治療効果を著しく促進させ、患者の腫瘍の負担を大幅に減少させ、患者の生活の質を向上させ、生存期を延長させることができる。
【実施例】
【０４８９】
以下、具体的な実施例と併せて本発明をさらに説明する。これらの実施例は、本発明を説明するためのもので、本発明の範囲を限定しないことを理解しなければならない。以下の実施例では、具体的な条件を明示していない実験方法は、一般的に、例えばＪ．  Ｓａｍｂｒｏｏｋ等の編集、分子クローニング実験ガイド、第３版、科学出版社、２００２年による条件、またはメーカーから提案された条件に基づいて進行される。
【０４９０】
材料および方法：
材料：
本発明で使用される試薬を含む様々な材料はすべて商業的に購入できる。
【０４９１】
本発明の例示的な抗原受容体は、ＣＡＲを含み、工学操作および受容体を細胞に導入するための方法は、例えば、公開番号がＣＮ１０７０５８３５４Ａ、ＣＮ１０７４６０２０１Ａ、ＣＮ１０５１９４６６１Ａ、ＣＮ１０５３１５３７５Ａ、ＣＮ１０５７１３８８１Ａ、ＣＮ１０６１４６６６６Ａ、ＣＮ１０６５１９０３７Ａ、ＣＮ１０６５５４４１４Ａ、ＣＮ１０５３３１５８５Ａ、ＣＮ１０６３９７５９３Ａ、ＣＮ１０６４６７５７３Ａの中国特許出願、公開番号がＷＯ２０１８００６８８２Ａ１、ＷＯ２０１５１７２３３９Ａ８の国際特許出願で公開したすべての内容を参照する。
【０４９２】
本発明の実施例では、キメラ抗原受容体のｓｃＦｖ部分はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される重鎖可変領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８に示される軽鎖可変領域を備え、キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４に示される配列、ｓｃＦｖのＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４に示されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５に示される核酸配列を備え、利用されたＣＤＲ領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３ある。
【０４９３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の構築方法は、下記の通りである。まず、ＣＡＲ遺伝子を構築するが、例えば、ｈｕ８Ｅ５−２Ｉ−ＢＢＺの構築は、５’端から３’端まで順次にＣＤ８α信号ペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６に示されるヌクレオチド配列）、ｈｕ８Ｅ５−２Ｉ  ｓｃＦＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５に示されるヌクレオチド配列）、ＣＤ８  ｈｉｎｇｅ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８に示されるヌクレオチド配列）、ＣＤ８膜貫通ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６に示されるヌクレオチド配列）とＣＤ１３７の細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８に示されるヌクレオチド配列）とＣＤ３ξの細胞内シグナル伝達ドメインＣＤ３ξ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４として表示されるヌクレオチド配列）を含む。その後、ＣＡＲ遺伝子をシャトルプラスミド（ｓｈｕｔｔｌｅ  ｐｌａｓｍｉｄ）にクローンさせＣＡＲ遺伝子を含有したターゲットプラスミドを得る。構築されたターゲットプラスミドとパッケージングプラスミドを２９３Ｔ細胞に共同形質注入して、レンチウイルス担体を製造し、レンチウイルス担体を患者の末梢血から得られたＴ細胞に形質導入し、ＣＡＲ−Ｔ細胞を得る。例示的に、下記の実施例ではｈｕ８Ｅ５−２Ｉ−ＢＢＺを使用する。
【実施例１】
【０４９４】
実施例１：用初回投与量と後続投与量のＣＡＲ−発現自己Ｔ細胞を用いた癌患者の治療
ＣＬＤ１８Ａ２陽性の消化管腫瘍（例えば、胃腺癌、膵臓癌）患者に抗−ＣＬＤ１８Ａ２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する自己Ｔ細胞を投与する。細胞を投与する前に、患者は「単核細胞分離技術」の成分採集分離技術による前処理の治療を受ける。自己ＣＡＲ−発現Ｔ細胞を得るために、固体被験者からの成分採集サンプルに基づいて分離してＰＢＭＣを得、抗ＣＬＤ１８Ａ２ＣＡＲをエンコードするウイルス担体を介して形質導入し、その後大量に増幅した後、製剤の自己ＣＡＲ−発現Ｔ細胞を単独の柔軟性冷凍バック注入媒体に冷凍保管する。各被験者に注入される、初回投与量は、約１×１０１２個の細胞よりも多くなく、好ましくは、約１×１０１１個の細胞よりも多くなく、好ましくは、約１×１０１０個の細胞よりも多くない、または約５×１０９個の細胞よりも多くない、または２×１０９個の細胞よりも多くない。注入前に、細胞を−１７５℃より低い温度に維持する。
【０４９５】
細胞治療を開始する前に、被験者から血液を得て、必要に応じてＥＬＩＳＡおよび／またはＭＳＤおよび／またはＣＢＡの方法を使用して、血清中サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を指示する１つ以上の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−１０およびＩＬ−６のような因子のレベルを評価する。治療を開始する前に、例えば、ＰＥＴまたはＣＴスキャンにより固形腫瘍の大きさまたは性状を測定し、必要に応じて、腫瘍の負担を評価することができ、また、腫瘍マーカーを検出するか、および／または腫瘍の合併症発生と深刻さを観察して、腫瘍の負担を評価することができる。
【０４９６】
約３８℃まで昇温させて蘇生させ、被験者に複数回の注入を介して、初回投与量の細胞を投与する。２０日を超えない時間内に複数の回に分けて投入するが、例えば、１〜６回、好ましくは、１〜５回、好ましくは、１〜４回、好ましくは、１〜３回、より好ましく、２〜３回に分けて、初回投与量で投与する。毎回の注入は、約３〜３０分、好ましくは、５〜２５分の時間内に連続静脈（ＩＶ）注入を介して投与する。
【０４９７】
初回投与量で投与した後、被験者は身体検査を受けて、任意の毒性または毒性の結果の症状、例えば、発熱、低血圧、低酸素症、神経障害または炎症性サイトカインまたはＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）の血清レベルの上昇を監視する。選択的に、初回投与量で投与した後、１回または複数回投与する場合には、患者から血液を得て、ＥＬＩＳＡおよび／またはＭＳＤおよび／またはＣＢＡの方法を使用してＣＲＳを指示する血清因子のレベルを評価する。血清因子のレベルとちょうど初回投与量で投与する前に、得られた血清因子のレベルを比較する。必要に応じて、抗ＩＬ６または他のＣＲＳの治療を実行して、ＣＲＳの症状を減少させる。
【０４９８】
初回投与量で投与した後、例えば、投与を開始した後、１週、２週、３週、および／または４週間に被験者からの抗ＣＡＲ免疫反応の存在または不在を選択的に検出するために、例えば、ｑＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞ベースの抗体測定および／または混合リンパ球反応を介して検出する。
【０４９９】
初回投与量を使用して実装された腫瘍の負担の減少パーセンテージは、必要に応じてスキャン（例えば、ＰＥＴとＣＴスキャン）を介して固形腫瘍患者に初回投与量で投与した後、１回または複数回の測定されることができるか、および／または定量化を介して血液または腫瘍部位の疾患陽性細胞で測定することができる。
【０５００】
後続投与量で投与する。一部の被験者では、初回投与量で投与を開始した後、約８０日以内に、初回投与量で投与し、好ましくは、約６０日、より好ましくは、約５０日以内に投与する。いくつかの状況では、試験を経たＣＲＳ関連の結果または血清因子レベルが許容されるレベルよりも低く、また、初回投与量で投与した後、約６０日に被験者の抗ＣＡＲ免疫反応が検出されていない場合にのみ、後続投与量で投与する。他の被験者では、初回投与量で投与した後、３０日を超えている時間も被験者がＣＲＳまたは深刻なＣＲＳを持たないと見なされるか、またはすべての試験されたＣＲＳを指示する血清因子のレベルが初回投与量で投与した後のピークレベルよりも低い場合にＣＲＳの２０％が観察され、また、被験者の抗−ＣＡＲ免疫反応が検出されていない場合に、後続投与量で投与する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の後続投与量の細胞を投与する。毎回の投与量の投与間隔は２１〜８０日にあり、好ましくは、２５〜６０日であり、より好ましくは、２５〜５５日である。
【０５０１】
後続投与量の大きさは、患者に特異的であり、腫瘍の負担に基づいたものであり、抗ＣＡＲ免疫反応の存在およびＣＲＳ関連の結果のレベルである。一部の被験者に１、２、３、４またはさらに多くの回数の後続投与量で投与される。各被験者に注入される後続投与量は、約１×１０１２個の細胞よりも多くなく、好ましくは、約１×１０１１個の細胞よりも多くなく、より好ましくは、約１×１０１０個の細胞よりも多くなく、より好ましくは、約５×１０９個の細胞よりも多くないか、または約２×１０９個の細胞よりも多くない。後続投与量は、約２０日を超えない時間内に複数の回に分けて投入されるが、例えば、１〜５回、好ましくは、１〜４回、好ましくは、１〜３回、より好ましくは、２〜３回に分けて投与される。毎回の注入は、約３〜３０分、好ましくは、５〜２５分の時間内に連続静脈内（ＩＶ）注入を介して投与する。
【０５０２】
初回投与量から開始して数年間継続的に被験者を定期的に監視する。患者訪問期間に、腫瘍の負担を測定したり、および／またはフローサイトメトリー分析と定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）を使用してＣＡＲ−発現細胞を検出して投与される細胞の体内増殖と持続性を測定したり、および／または抗−ＣＡＲ免疫反応の進行を評価する。
【実施例２】
【０５０３】
実施例２：治療前の形態学的疾患を有する被験者でのＣＡＲ−Ｔ細胞治療の神経毒性の評価
映像学を使用して、ターゲット病巣を検出し、治療前の腫瘍の負担を評価し、ターゲット病巣の数とサイズを決定し、治療効果の評価基準は、表１の通りである。
【０５０４】
【表１】
2021523090.tif 000003
【０５０５】
約３〜３０分以内に、静脈内（ＩＶ）の連続注入を１回、２回、３回行い、約１.１×１０６個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ＫＧ〜約２.８×１０７個ＣＡＲ−Ｔ／ＫＧの総量に被験者にＣＡＲ−発現Ｔ細胞を投与する。フルダラビン、またはシクロホスファミド、またはアルブミン結合パクリタキセル、またはフルダラビンとアルブミン結合パクリタキセル、またはシクロホスファミドとアルブミン結合パクリタキセル、またはフルダラビンとシクロホスファミド、またはフルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルの併用の化学治療を前処理化学治療にしてＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する１〜３０日前に、好ましくは、１〜２０日前に、より好ましくは、４〜１２日前に被験者に行う。
【０５０６】
ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与した後、被験者の疾患状態を評価し、治療に対する反応を評価する。治療後、被験者の評価を行い、神経毒性（混乱の症状は、失語症、てんかん発作、痙攣、眠気、および／または変更された精神状態を含む神経系の合併症）を監視し、重症度に応じて評価を交わし（１〜５評価表を使用するが、例えば、Ｇｕｉｄｏ  ＣａｖａｌｅｔｔｉとＰａｏｌａ  Ｍａｒｍｉｒｏｌｉ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ６、６５７−６６６（２０１０年１２月）である）、ここで、３級（深刻な症状）、４級（生命を脅かす症状）または５級（死亡）は、深刻な神経毒性に認められる。
【０５０７】
（一）サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の決定および監視：
１級（軽症）−生命を脅かすがなく、解熱剤や制吐剤投与のような全身治療のみが必要（例えば、発熱、エリア、疲労、頭痛、筋肉痛、不快感）；
２級（中級）−中等干渉及びこれに対する反応が必要である：
酸素ガスの要求＜４０％、または
体液または低投与量の単一血管収縮剤に対応する低血圧、または
２級器官毒性（ＣＴＣＡＥ  ｖ４.０を通じる）；
３級（深刻）−積極的な干渉及びこれに対する反応が必要である：
酸素ガスの要求≧４０％、または
試験容量の単一血管収縮剤（例えば、ノルエピネフリン（ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）≧２０ｕｇ／ｋｇ／分、ドーパミン（ｄｏｐａｍｉｎｅ）≧１０ｇ／ｋｇ／分、フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ）≧２００ｕｇ／ｋｇ／分、またはエピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）≧１０ｕｇ／ｋｇ／分）が必要な低血圧、または
様々な血管収縮剤（例えば、抗利尿＋前記試薬のいずれか、または≧２０ｕｇ／ｋｇ／分のノルエピネフリンの血管収縮剤の組み合わせ）が必要な低血圧、または
３級器官の毒性または４級トランスアミナーゼ炎症（ＣＴＣＡＥ  ｖ４.０をトンハム）；
４級（生命を脅かす）−人工呼吸器によって支持されるか、または
４級器官の毒性（トランスアミナーゼ炎症を排除）；
５級（致命的）−死亡。
【０５０８】
（２）神経毒性の例示的分類標準：
１級（臨床症状がないか、または軽症である）−軽症、または臨床症状がない；
２級（中級）−例えば料理、買い物や洗濯、電話の使用、お金の管理など、積極的な日常の活動を制限（ＡＤＬ）する症状が存在する；
３級（深刻）−例えば風呂、着衣や脱衣、食事、トイレの使用、薬を服用するなど自我管理ＡＤＬを制限する症状が存在する；
４級（生命を脅かす）−生命を脅かし、緊急干渉が必要な症状が存在する；
５級（致命的）−死亡。
【０５０９】
治療前に疾患の負担に基づいて分離した被験者群では投与量と比較して、異なる量のＣＡＲ−Ｔ細胞を１回注入して治療した後の反応、深刻なＣＲＳの存在、および深刻な神経毒性の存在を評価した。結果は表２の通りである。表２は、さまざまなマルチ量で投与される細胞の特定の使用状況、初回投与量と後続投与量、隣接する前の後続投与量と隣接する後の後続投与量との間の時間間隔を列挙した。表２はまた、実施例２による基準に基づいて、初回投与量で投与する前に時刻を腫瘍負担基底線にして評価した毎回ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療後の反応を列挙した。表２はまた、６例の患者が毎回投与に対する反応の結果（「反応」に対応する欄に投与後の腫瘍の負担、この腫瘍の負担基底線を比較して、治療に対する反応を示すことを列挙したこと）、深刻なＣＲＳと深刻な神経毒性の存在または不在（Ｙ／Ｎ）を列挙した。表２に示したように、治療前の疾患の負担がどうとか、テストされるすべての投与量では、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療した被験者からＳＤが観察された。様々な投与量レベルのＣＡＲ−Ｔ細胞が投与された被験者は、すべての深刻なＣＲＳ、深刻な神経毒性が発生していなかった。
【０５１０】
これらの結果は、毒性を最小限に抑え、効果を最大化するために使用方法を使用することを提示し、これは形態学的疾患を有する被験者に初めて低投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を投与して疾患の負担を軽減させ、その後の腫瘍の負担この安定化されたり、既に減少しているか行われた後、後続の細胞投与量に投与し、より多くの投与量の後続の投与量で投与することもでき、深刻なＣＲＳがないか、または重大な神経毒性のリスクがある。初回投与量は、より多くの量のＣＡＲ−Ｔ細胞を投与して疾患の負担を軽減させることができ、その後の腫瘍の負担が安定したり、既に減少しているか行われた後、後続細胞投与量を投与し、比較的少ない投与量の後続投与量で投与することがことがあり、深刻なＣＲＳがないか、または重大な神経毒性のリスクがある。
【０５１１】
【表２】
2021523090.tif 000004
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【０５１２】
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ＩＤ：被験者番号
ＳＤ：疾患の安定
ＰＤ：疾患の進行
Ｎ／Ａ：取得できない
Ｎ：なし
表２の結果は、初回投与量の治療で深刻なＣＲＳ、深刻な神経毒性が発生していないので、初回投与量の細胞は、すべての被験者について安全であることを示す。
【０５１３】
いくつかの被験者が疾患の安定（ＳＤ）であることを観察した。初回投与量または後続投与量の細胞を投与した後、映像学の手段を介して腫瘍が変わらないか、わずかに減少することを観察した（患者番号：１号、２号、３号、５号、６号被験者の初回投与量の治療過程、４号、５号、６号被験者の後続投与量（第２）の治療過程、４号被験者の後続投与量（第３、第４）治療過程を参照）。すべての被験者は、任意の投与量の両方で深刻なＣＲＳ、深刻な神経毒性を示さなかった。
【０５１４】
いくつかの場合では、表２は、いくつかの被験者は、初回投与量で反応性（ＮＲ）がないので（患者番号：２号、４号被験者の初回投与量の治療過程を参照）、疾患または腫瘍負担水準の安定化または減少を実装するできないことを説明する。なお、結果は、初回投与量を注入した後、臨床緩和を実装することができず、被験者の深刻なＣＲＳ、神経毒性の危険度は頻度を増加させていない場合は、後続の比較的多い投与量で投与した後、これらの被験者でも深刻なＣＲＳ、深刻な神経毒性が検出されなかったことを示す。
【０５１５】
いくつかの実施形態では、被験者からの反応性や毒性の程度が不足（または比較的低い）は被験者がＣＡＲ−Ｔ細胞治療について優れた反応を示さないことを説明するが、他の回に注入時にも何らかの毒性有害効果の危険がないが、それ以外の場合、後続の投与が、より多い投与量を避ける必要があることを説明する。したがって、初回投与量に比較して、これらの結果は、投与量方法（例えば、必要とするかの効果を最大化または改善するために）、すなわち、初回低投与量で投与した後、後続投与では比較的多い投与量を使用する。一部の被験者で初回投与に対する反応が表示されなかったが、後続投与量で投与した後、深刻な神格毒性のリスクは比較的低い。
【０５１６】
初回投与量と後続投与量で投与される細胞の効果をより評価するために、体内でのＣＡＲ−Ｔ細胞の継続的な生存期、すなわち、ＣＡＲ−Ｔ細胞が体内に「移植」された後、継続的な生存期検出する。初回注入（第０日）が終わってから各訪問の時点でＱ−ＰＣＲ方法（使用されたプローブは、ＦＡＭ−５’−ＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣ−３’ＴＡＭＲＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）であり；上流プライマー配列は５’−  ＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣ−３  ’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）であり、ダウンストリームプライマー配列は、５’−ＡＧＴＡＧＴＡＧＡＴＧＧＣＧＧＴＧＴＣＧ−３’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１）である）を使用して、任意の２回の連続した検出が音声が表示されるまで末梢血にＣＡＲ−ＣＬＤ１８  ＤＮＡを含有する複製数を検出して、ＣＡＲ−ＣＬＤ１８  Ｔ細胞持続生存期記録する。結果は、図１に示したように、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、すべての被験者で増殖される。Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）の血清レベルで測定されたピークレベルに基づいて、投与されたＣＡＲ−Ｔ細胞の生物学的活性を比較する。血清中ＣＲＰの上昇ピークレベルも注入後、Ｔ細胞増殖の証拠として使用される。結果は、図２Ａ、図２Ｂに示したように、初回投与量と後続投与量のＴ細胞を注入した後、細胞は、すべての被験者で増殖される。
【実施例３】
【０５１７】
実施例３．膵臓癌の治療のためのＣＡＲ−Ｔ細胞のマルチ投与量方法
前述した材料および方法での説明を参照して、ＣＡＲ−Ｔ細胞を調製する。
【０５１８】
例示的な投与量方法では、重複投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞療法のために再発性または難治性の膵臓癌を持つ被験者にとって、毎回の投与量の投与間隔は、約２１〜８０日にあり、好ましくは、約２５〜６０日であり、より好ましくは、約２５〜５５日である。選択的に、被験者がフルダラビンとシクロホスファミドの併用またはフルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルの併用の化学治療またはアルブミン結合パクリタキセル単独の化学治療を受けた後、これは初回投与量と後続投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を投与する少なくとも２日前に投与されて、一般的に、細胞を投与する前に約１５日を超えない場合、または約１２日を超えない。
【０５１９】
被験者は、約２.５×１０８個の細胞／ｋｇ患者体重より少ないか、同じＣＡＲ−Ｔ細胞、例えば、約１.１×１０６個の細胞／ｋｇ〜約２.８３×１０７個の細胞／ｋｇのＣＡＲ−Ｔ細胞の、端の値を含む初回投与量で投与される。初回投与量で投与された後、８０日以内に、および／または被験者のＣＡＲに対する免疫反応が進む前に、被験者に比較的少ないか等しいか、より多い投与量の細胞を投与する。いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、約４４日に初回投与量よりも、多いか少ない投与量の後続投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を投与し、例えば、約１.１×１０７個の細胞／ｋｇ（総投与量が約５×１０８）〜約１.９×１０７個の細胞／ｋｇ（総投与量が約１×１０９）は、１つまたは複数の後続投与量の細胞を投与する。毎回の投与量の投与間隔は、約２１〜８０日にあり、好ましくは、約２５〜６０日であり、より好ましくは、約２５〜５５日である。選択的に、被験者がフルダラビンとシクロホスファミドの併用またはフルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルの併用の化学治療またはアルブミン結合パクリタキセル単独の化学治療を受けた後、これは毎回の投与量のＣＡＲ  −Ｔ細胞を投与する少なくとも２日前に投与されて、一般的に、細胞を投与する前に約１５日を超えない場合、または約２０日を超えない。
【０５２０】
例示的な投与量方法の中で、２つの投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞治療のためにＣＬＤ１８Ａ２陽性の再発性または難治性の膵臓癌の１号被験者は、初回に低投与量で投与される細胞および後続で比較的多い投与量で投与される細胞を含む。治療の前に、基本的に実施例２のように自己ＣＡＲ−Ｔ細胞を生成する。被験者は、初回にＣＡＲ−Ｔ細胞が投与される前にフルダラビン約２０ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×２日（−６日、−５日）を含む化学治療の前処理（患者に毎回ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療を行った日を第０日を指定する）を受ける。初回投与量は、約１.１×１０６個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が５×１０７）を含み、一日おきに１回注射し、１０％：３０％：６０％の治療過程の総投与量に応じて３回に分けて注入する。初回投与量で投与した後、被験者からサイトカイン−放出症候群（ＣＲＳ）を指示する因子の血清レベルがピークレベルに到達しても、約初回投与量で注入する前に、視覚のレベルに減少し始めると、後続投与量（第２の治療過程）に投与する。第２の治療の過程で、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×２日（−６日、−５日）を投与し、約１.１１×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約５×１０８）を注入し、１０％：３０％：６０％の治療過程の総投与量に応じて、３回に分けて連続注入する。
【０５２１】
腹部または他の部位（例えば、転移）の映像学（ＭＲＩ、ＣＴなどを含む）と腫瘍マーカーを通じた検出を含む、被験者の治療効果を監視して、化学治療前処理した後、基底線期間の検出である、初回投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する前の腹部または他の部位（例えば、転移）の映像学（ＭＲＩ、ＣＴなどを含む）と腫瘍マーカーの検出結果を疾患の負担を評価および監視し、有害効果の証拠は、ＣＲＳおよび神経毒性、および生存を含む。
【０５２２】
図３Ａに示したように、１号被験者は総投与量が約５×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞である第１の治療過程の最後の回に注入された後、２週：左腹部脾臓領域病巣は安定であり、短径が若干縮小され、第１の治療過程の最後の回に注入された後、６週：左腹部脾臓領域病巣は安定であり、総投与量が約５×１０８個ＣＡＲ  Ｔ細胞の第２の治療過程で注入された後、２週：左腹部脾臓領域病巣は安定であり、第２の治療過程で注入された後、５週：左腹部脾臓領域病巣は安定であり、肝臓で新しい病巣疾患が進行された。図３Ｂに示したように、１号被験者で腫瘍マーカーＣＡ１２５を検出し、初回投与量で初めて注入した日を第０日を指定する。第１の治療過程で注入された後から第２の治療過程を開始するまで、被験者の左腹部脾臓領域病巣は安定した状態であり、体内のＣＡ１２５発現も若干減少したので、前記被験者は疾患安定期（ＳＤ）にある。第２の治療過程で注入された後、被験者の左腹部脾臓領域病巣は安定した状態であるが、肝臓に新しい病巣が現れたので、治療から退出される。この２つの治療過程で、すべての深刻なＣＲＰと深刻な神経毒性が現れなかった。患者は引き続き鎮痛剤を使用し、鎮痛剤を使用していない３〜４分前に痛みを感じ、鎮痛剤を使用した後、１分間鎮痛を感じ、連続投与量の第１回注入した後、もはや鎮痛剤を使用しておらず、陣痛も感じない。
【実施例４】
【０５２３】
実施例４．胃腺癌治療のためのＣＡＲ−Ｔ細胞の重複投与方法、多重投与量方法
例示的な投与量方法では、重複投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞治療のために再発性または難治性胃腺癌の被験者にとって、毎回投与量の投与間隔は、約２１〜８０日にあり、好ましくは、約２５〜６０日であり、より好ましくは、約２５〜５５日である。治療の前に、基本的に実施例２のように自己ＣＡＲ−Ｔ細胞を生成する。選択的に、被験者がフルダラビンとシクロホスファミドの併用またはフルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルの併用の化学療法またはアルブミン結合パクリタキセル単独の化学療法を受けた後、初回投与量と後続投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を投与する少なくとも２日前に投与されて、一般的に、細胞を投与する前に約１５日を超えない場合、または約１２日を超えない。
【０５２４】
再発性または難治性胃腺癌被験者は約２.５×１０８細胞／ｋｇ患者体重より少ないか、同じＣＡＲ−Ｔ細胞、例えば、約２.９×１０６細胞／ｋｇ〜約２.６×１０７細胞／ｋｇのＣＡＲ−Ｔ細胞の、端の値を含む、初回投与量で投与される。初回投与量で投与された後、８０日以内に、および／または被験者のＣＡＲに対する免疫反応が進む前に、被験者に比較的少ないか、等しいか、より多くの量の細胞を投与する。いくつかの実施形態では、初回投与量で投与した後、約５０日に初回投与量よりも、多いか、少ない投与量の後続投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を投与し、例えば、１.３×１０７細胞／ｋｇ〜約５.１×１０７細胞／ｋｇ（総投与量が約２×１０９）、例えば、約２.２×１０７細胞／ｋｇ患者体重の投与量で投与する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の後続投与量の細胞を投与する。毎回投与量の投与間隔は、約２１〜８０日にあり、好ましくは、約２５〜６０日であり、より好ましくは、約２５〜５５日である。選択的に、被験者がフルダラビンとシクロホスファミドの併用またはフルダラビン、シクロホスファミド、アルブミン結合パクリタキセルの併用の化学療法またはアルブミン結合パクリタキセル単独の化学療法を受けた後、毎回投与量のＣＡＲ  −Ｔ細胞を投与する少なくとも２日前に投与されて、一般的に、細胞を投与する前に約１５日を超えない場合、または約１２日を超えない。
【０５２５】
再発性、難治性４号胃腺癌被験者は悪悪性胸膜および腹水を伴う胃癌卵巣転移の患者であるが、フルダラビン、約３０ｍｇ／日×４日（すなわち、約２０ｍｇ／ｍ２／日×４日（−７日、−６日、−５日、−４日））、シクロホスファミド、０.７５ｇ／日×２日（すなわち、約５１４ｍｇ／ｍ２／日×２日（−７日、−６日））を含む前処理を受けた後、約３.３×１０６個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ（総投与量は約１.５×１０８個ＣＡＲ−Ｔ細胞）の初回投与量で注入される第１の治療過程の治療を受ける。初回投与量の１０％：３０％：６０％の治療過程の総投与量に応じて３日に分けて連続注射し、毎日１回注射する。初回投与量で投与した後、被験者からＣＲＳを指示する因子の血清レベルが、前記被験者に初回投与量で投与する前の血清レベルの２０倍（許容されるレベル）である場合には、ここで、ＩＬ−１０、ＴＮＦαがすでに減少始めて、ＩＬ−６がすでに初回投与量で注入する前の時刻のレベルよりも低いレベルまで減少される場合には、後続投与量（第２の治療過程）で投与する。第２の治療過程で、前処理は、フルダラビン、約３７ｍｇ／日×２日（すなわち、約２５ｍｇ／ｍ２／日×２日（−５日、−４日））、シクロホスファミド、約０.７５ｇ／日×３日（すなわち、約５１４ｍｇ／ｍ２／日×３日（−５日、−４日、−２日））化学療法を含み、次に約２.２×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ（総投与量が約１.０×１０９個ＣＡＲ−Ｔ細胞）を投与し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分けて注入し、一日おきにに１回注射する。第２の治療過程で投与した後、被験者からＣＲＳを指示する因子の血清レベルがピークレベルに到達し、約２治療過程の投与量に注入する前時刻のレベルより低いレベルまで減少し始めると、後続投与量（第３の治療過程）で投与する。第３の治療過程の前処理は、アルブミン結合パクリタキセル、約１３７ｍｇ／ｍ２／日×１日（−４）を投与する化学療法を含み、次に約２.２×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ（総投与量が約１.０×１０９個ＣＡＲ−Ｔ細胞）を注入し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分けて注入し、一日おきにに１回注射する。第３の治療過程で投与した後、６週間では、骨盤ターゲット病巣最大径合計は第二の注射後６週間に比べて顕著な変化がなく、骨盤の新しい病巣は前に比べて増大され、少量の腹水と少量の骨盤液が生成され、ＣＡ１２５は１１.３Ｕ／ｍｌである。第３の治療過程で投与された後、被験者からＣＲＳを指示する因子の血清レベルが、前記被験者に第３の治療過程の投与量で投与する前の血清レベルの１０倍（許容されるレベル）である場合には、また、ＣＲＳを指示する因子がピークレベルにも約３治療過程の投与量に注入する前時刻のレベルより低いレベルまで減少し始めると、後続投与量（第４の治療過程）で投与する。第４の治療過程の前処理は、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×２日（−６日、−５日）、シクロホスファミド、約５１４ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）化学療法を含み、次に、約３.７×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ（総投与量が約１.６５×１０９個ＣＡＲ−Ｔ細胞）を注入し、約４６％：１８％：３６％の治療過程の総投与量に応じて３回に分けて注射した（０日、１日、１３日）。第４の治療過程で投与した後、６週間では、骨盤ターゲット病巣最大径合計は前に比べて顕著な変化がなく、骨盤の新しい病巣は前に比べて顕著な変化はなかった。胸膜および腹水は継続して減少し、これはＣＡＲ−ＣＬＤ１８  Ｔ細胞治療が悪性胸膜および腹水の制御にもまともな効果を有するを説明する。
【０５２６】
図４Ａに示したように、４号被験者は、初回投与量の第１の治療過程の最後の回に注入された後、２週間に右骨盤最大病巣最大径は６.５ｃｍであり、左骨盤最大病巣最大径は５.２ｃｍであり、第１の治療過程の最後の回に注入された後、６週間に右最大骨盤病巣最大径は６.８ｃｍであり、左最大骨盤病巣最大径は５.３ｃｍであり、骨盤新しい病巣は１.９ｃｍであり（図４Ｂ）、今回の結果も第２の治療過程基底線として使用され、後続投与量の第２の治療過程で注入された後、２週間に右骨盤最大病巣最大径は６.８ｃｍであり、左骨盤最大病巣最大径は５.２ｃｍであり、骨盤新しい病巣は１.９ｃｍであり、第２の治療過程の最終回に注入された後、６週間に右骨盤最大病巣最大径は６.５ｃｍであり、左骨盤最大病巣最大径は５.１ｃｍであり、骨盤新しい病巣は１.３ｃｍである。
【０５２７】
図４Ｃに示したように、ＣＡＲ−Ｔ治療過程で、被験者の癌性胸膜および腹水は大幅に減少した。図４Ｄ、図４Ｅは、それぞれ腫瘍マーカーＣＡ１２５とＣＡ１９９を検出したものであり、初回投与量で初めて注入した日を第０日を指定する。腫瘍マーカーＣＡ１２５、ＣＡ１９９は著しく減少された、ここで、第１の治療過程でＣＡ１２５はＣＡＲ−Ｔを注入する前の１０６.７Ｕ／ｍｌのから第２の治療過程で注入する前の３２.１Ｕ／ｍｌ（正常範囲＜３５Ｕ／ｍｌ）まで減少され、第２の治療過程でＣＡ１２５はずっと比較的低いレベルを維持した。第１の治療過程でＣＡ１９９はＣＡＲ−Ｔを注入する前の９９.４１Ｕ／ｍｌのから第２の治療過程で注入する前の５２.９８Ｕ／ｍｌ（正常範囲＜３７Ｕ／ｍｌ）まで減少され、第２の治療過程でＣＡ１９９はずっと正常範囲を維持した。
【０５２８】
上記の結果は、第１の治療過程で４号被験者の元の病巣は安定した状態であるが、新しい病巣が表示され、第２の治療過程で、元の病巣は安定した状態で、新たな病巣が著しく縮小され、縮小率が３１.６％に達したするとともに、被験者体内の腫瘍マーカーＣＡ１２５は、比較的低いレベルを維持し、ＣＡ１９９は、通常のレベルを保持することを説明する。この２つの治療過程で、すべての深刻なＣＲＳと深刻な神経毒性が現れなかった。
【０５２９】
再発性、難治性５号胃腺癌被験者は最初のＣＡＲ−Ｔ細胞が投与される前に、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×２日（−６日、−５日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）を含む化学療法の前処理を受ける。初回投与量は、約１.６×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９）を含み、一日おきに１回注射し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分けて注入される。初回投与量で投与した後、被験者からＣＲＳを指示する因子の血清レベルがピークレベルに到達し、減少し始めたり、または約初回投与量で注入する前の時刻のレベルよりも低いレベルまで減少されると、後続投与量（第２の治療過程）で投与する。第２の治療過程で前処理は、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×１日（−５日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×３日（−５日、−４日、−３日）、アルブミン結合パクリタキセル約１００ｍｇ／ｍ２／日×１日（−４日）を投与する化学療法を含み、次に約１.６×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９）を注入し、一日おきに１回注射して、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分けて注入される。
【０５３０】
再発性、難治性の６号胃腺癌被験者は最初のＣＡＲ−Ｔ細胞が投与される前に、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×２日（−６日、−５日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）を含む化学療法の前処理を受ける。初回投与量は、約１.２５×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９）を含み、一日おきに１回注射し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分けて注入される。初回投与量で投与した後、被験者からＣＲＳを指示する因子の血清レベルがピークレベルに到達し、約初回投与量で注入する前の時刻のレベルよりも低いレベルまで減少されると、後続投与量（第２の治療過程）で投与する。第２の治療過程で前処理は、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×１日（−５日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×３日（−５日、−４日、−３日）、アルブミン結合パクリタキセル、約１００ｍｇ／ｍ２／日×１日（−４日）を投与することを含み、次に約１.２５×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９）を注入し、一日おきに１回注射して、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分けて注入される。
【実施例５】
【０５３１】
実施例５．再発性、難治性胃腺癌被験者の治療
再発性、難治性胃腺癌７号被験者は噴門腺癌を１.３年間患って、胃切除術を受けた後、多発性肝転移疾患が進行され、ｔｉｇｅｏ、ドセタキセル、オキサリプラチン、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）などの治療を受けたが、まだ疾患の進行状況である。このような状況では、患者は、本発明に係るＣＡＲ−Ｔ細胞の治療を受けた。
【０５３２】
初めてＣＡＲ−Ｔ細胞を投与する前に、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×１日（−１２日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×３日（−１２日、−１１日、１０日）を含む化学療法の前処理を受ける。初回投与量は、約２.６×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９）を含み、一日おきに１回注射し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回分割注入される。注入後、患者は３９.３の熱が出たが、物理的に体温を下げる方法でのみ制御することができた。初回投与量で２週間投与した後、がん胚抗原は１２.４９Ｕ／ｍｌから５Ｕ／ｍｌ以下にまで減少され、糖類抗原ＣＡ１９９は１２.１７Ｕ／ｍｌから４Ｕ／ｍｌ以下にまで減少され、初回投与量で投与した６週間後、ＭＲスキャンを経て右側後葉上部の腫瘍が４１％縮小されたことが観察された。
【０５３３】
初回投与量で投与した後、被験者からＣＲＳを指示する因子の血清レベルがピークレベルに到達し、約初回投与量で注入する前の時刻のレベルよりも低いレベルまで減少されると、後続投与量（第２の治療過程は、初回投与量で投与した後、第４７日）に投与する。第２の治療過程で前処理は、フルダラビン、約２１ｍｇ／ｍ２／日×１日（−６日）、シクロホスファミド、約５４０ｍｇ／ｍ２／日×３日（−６日、−５日、−４日）、アルブミン結合パクリタキセル、約７１ｍｇ／ｍ２／日×１日（−５日）を投与することを含み、次に約５.１×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約２×１０９）を注入し、２５％：２５％：２５％：２５％の治療過程の総投与量に応じて、４回に分けて注入される（０日、２日、９日、１３日）。第２の治療過程の後続投与量として投与した２週間後の間の右後葉上部の腫瘍が６３％縮小した。
【０５３４】
再発性、難治性胃腺癌９号被験者は胃癌両側の卵巣転移術を受けた後、８サイクルのＳＯＸ案化学療法、２サイクル経口投与ＴＳ案化学療法５周期（ドセタキセル、ｔｉｇｅｏ）などの治療を受けたが、まだ疾患の進行状況である。このような状況では、患者は、本発明に係るＣＡＲ−Ｔ細胞の治療を受けた。
【０５３５】
初めてＣＡＲ−Ｔ細胞を投与する前に、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×１日（−６日）、シクロホスファミド、約５００ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）、アルブミン結合パクリタキセル、約６４ｍｇ／ｍ２／日×１日（−５日）を含む化学療法の前処理を受ける。初回投与量は、約１.８２×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９個ＣＡＲ−Ｔ細胞）を含み、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて回数を分けて注入し、また二日連続注射し、毎日１回注射する。初めて注入した後、患者から２級発熱現象が現れ、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）座薬で解熱した。
【０５３６】
初回投与量で投与した後、ＩＬ−２は、注入後３日目から顕著に上昇するが、約１０日でピークレベルに到達し、約初回投与量で注入する前の時刻のレベルよりも低いレベルまで減少され、残りのサイトカインは顕著な変化はない。後続投与量（第２の治療過程は、初回投与量で投与した後、第４０日）に投与する。第２の治療過程で前処理（第１の治療過程のような前処理）を実行した後、約２.７３×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１.５×１０９個ＣＡＲ−Ｔ細胞）を注入し、１／３：１／３：１／３の治療過程の総投与量に応じて、３回に分けて連続注入し、毎回１回注射する。その間、研究治療に関連するＩＩＩリンパ球の減少と白血球の減少、ＩＩ低カルシウム血症、低カリウム血症、悪心現象が現れたが、いずれも症状に対する支持的治療を経て回復した。ＳＡＥが発生していなかった。
【０５３７】
後続投与量（第３の治療過程は、第２の治療過程の投与量で投与した後、第２５日）に投与する。第３の治療過程の前処理（第１の治療過程のような前処理）を実行した後、約１.８２×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ（総投与量が約１.０×１０９個ＣＡＲ−Ｔ細胞）を注入し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて回数を分けて注入し、二日連続注射し、毎日１回注射する。映像学的に検査した結果、患者病巣は消失され、映像専門医によって完全緩和（ＣＲ）と評価された。
【実施例６】
【０５３８】
実施例６  再発性、難治性膵臓癌被験者の治療
再発性、難治性膵臓癌８号被験者はＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受ける前に膵体および尾膵臓切除を受けた後、ＰＤが現れ、腸間膜リンパ節、および肝臓の両方に転移され、局所放射線治療で処理した後、まだ疾患の進行状況であり、このような状況では、肝臓で４つの新しい病巣が現れた。
【０５３９】
初めてＣＡＲ−Ｔ細胞を投与する前に、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×１日（−６日）、シクロホスファミド、約５０７ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）、アルブミン結合パクリタキセル、約６８ｍｇ／ｍ２／日×１日（−５日）を含む化学療法の前処理を受ける。初回投与量は、約２.８３×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１.５×１０９）を含み、３分の１：１／３：１／３の治療過程の総投与量に応じて３回に分けて注入する（０日、１１日、１４日）。初回投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞を注射した後、６週間では、基底線で肝臓内２つのターゲット病巣と骨盤１つのターゲット病巣最大径が９０％縮小され、ＣＡ１９９は８９９.６Ｕ／ｍｌのから５６.７９Ｕ／ｍｌのまで減少され、評価を経て、ＰＲ（部分緩和）に達した。
【０５４０】
初回投与量で投与した後、４４日の目に後続投与量（第２の治療過程）に投与し、フルダラビン、約２０ｍｇ／ｍ２／日×１日（−６日）、シクロホスファミド、約５０７ｍｇ／ｍ２／日×４日（−６日、−５日、−４日、−３日）、アルブミン結合パクリタキセル、約６８ｍｇ／ｍ２／日×１日（−５日）化学療法を行い、ＣＡＲ−Ｔ細胞、約１.８８７×１０７個ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇ患者体重（総投与量が約１×１０９）を注入し、一日おきに１回注射し、５０％：５０％の治療過程の総投与量に応じて２回に分け注入される。第２の治療過程を進行した連続投与量に投与した後、９日に、肝臓ＭＲスキャンの結果の間に明確な活性病巣が発見されておらず、骨盤ＣＴスキョン結果、第１の治療過程６週の結果に比較して、骨盤の軟組織結節が著しく縮小されたことが発見された。
【実施例７】
【０５４１】
実施例７  患者の副作用の統計
前述した実施例では９例の患者について身体検査を行い、表３に列挙された症状を含む有害効果（ＡＥ）の症状を検出した。初回投与量で注入した後の急性治療ＡＥ（ＴＥＡＥ）は、初回投与量で投与された後に表示される任意のＡＥとして定義される。結果は表３の通りである。
【０５４２】
【表３】
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【実施例８】
【０５４３】
実施例８  Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ  １８.２、８Ｅ５−２Ｉ−  ｍＢＢＺ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の構築
１．Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２細胞の構築
分子生物学通常の手段を用いて、マウスＣｌａｕｄｉｎ１８.２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）を過発現するＰａｎｃ０２膵臓癌細胞モデルを構築した。ｐＷＰＴを担体として使用し、マウスＣｌａｕｄｉｎ１８.２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）を挿入してプラスミドｐＷＰＴ−ｍＣｌａｕｄｉｎ１８.２を構築した。その後、レンチウイルスパッケージング感染方法でマウスＣｌａｕｄｉｎ１８.２を過発現する膵臓癌細胞Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２を構築した。
【０５４４】
２．キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞の構築
（１）プラスミドの構築
本技術分野の通常の分子生物学的方法で、本実施例ではｓｃＦｖのＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４に示されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５に示される核酸配列を使用し、備えられたＣＤＲ領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ３である。
【０５４５】
使用されたキメラ抗原受容体は、ＣＤ８の膜貫通ドメイン、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、およびＣＤ３ζを含む第２世代キメラ抗原受容体である。図５に示されたプラスミド図を参照してプラスミドＭＳＣＶ−８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺを構築した。
【０５４６】
ＭＳＣＶ．ｐＢＡＢＥ５を担体として使用して、第２世代キメラ抗原受容体を発現するレトロウイルスプラスミドＭＳＣＶ−８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺを構築した。８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ配列はマウスＣＤ８α信号ペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９に示されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０に示されるヌクレオチド配列）、ｃｌａｕｄｉｎ１８.２を標的化するｓｃＦｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５）、マウスＣＤ８  ｈｉｎｇｅと膜貫通ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１に示されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２に示されるヌクレオチド配列）、およびマウス４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３に示されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４に示されるヌクレオチド配列）、およびマウスＣＤ３の細胞内セグメントＣＤ３ζ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５に示されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６に示されるヌクレオチド配列）で構成されている。
【０５４７】
ＭＳＣＶ−８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺを２９３Ｔパッケージングレトロウイルスを形質注入してレトロウイルスを得る。感染方法は、本技術分野でキメラ抗原受容体を発現するＴ細胞の製造過程で通常の感染方法である。
【０５４８】
（２）ＣＡＲ  Ｔ細胞の構築：Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓Ｔリンパ球をとり、精製されたマウスＣＤ３＋  Ｔリンパ球を１：１の体積比でＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍｏｕｓｅ  Ｔ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８に入れて、ＰＢＳで一回洗浄し、活性化し、培養器で培養するが、培地は、ＲＰＭＩ１６４０完全培地であり、１０％のＦＢＳ血清を添加する。
【０５４９】
２４時間活性化させたマウスの脾臓Ｔリンパ球を、組換えヒトフィブリン断片でコーティングされた１２ウェルプレートに接種させ、レトロウイルスを入れて１２時間感染させ、その後、必要な数だけ増幅されるように培養して、マウスの８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺＣＡＲ  Ｔ細胞を得る。
【実施例９】
【０５５０】
実施例９  ＣＣＫ８実験を用いた膵臓癌細胞およびＣＡＲ−Ｔ細胞のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）の毒性作用の検出
Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２細胞および実施例８で調製した８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を、それぞれ９６ウェルプレートでウェル当たり１００００個の細胞（Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２）またはウェル当たり１０００００個の細胞（ｈｕ８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ  Ｔ）を１００ｕｌの培地にプレート（ｐｌａｔｅｄ  ｉｎ）する。それぞれ異なる溶解度のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）をとり、それぞれの細胞に入れて、１０個の勾配（最大濃度は５００μｇ／ｍｌであり、２倍勾配で希釈する）で調製し、なお、１グループの培地のみを有するウェルをブランク群に設定する。２４時間後、各ウェルに１０ｕｌのＣＣＫ８試薬（Ｄｏｊｉｎｄｏ社）を入れ、３７℃で２時間培養した後、マイクロプレートリーダー（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ）で４５０ｎｍでの吸光度を測定した余り、それぞれの細胞活性を計算した。
【０５５１】
計算公式：細胞活性（％）＝［Ａ（薬物投与）−Ａ（ブランク）］／［Ａ（０薬物投与）−Ａ（ブランク）］
結果は、図６Ａ及び図６Ｂに示されたように、Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２細胞のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）のＩＣ５０値は１７４.４５±２０.９８μｇ／ｍｌである。８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ細胞のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）の殺傷結果は、５００μｇ／ｍｌの濃度のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）で処理しても８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の生存率は依然として５０％より高いことを示している。これにより、８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ細胞のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）の毒性が比較的低いことを説明する。
【実施例１０】
【０５５２】
実施例10  マウス膵臓癌のアブラキサン（Abraxane）とCAR T細胞の同時投与の抑制効果
６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの膵臓ウォンの位置に２×１０５  Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２細胞を接種し、腫瘍細胞接種日、第０日（つまり、Ｄａｙ０）に記録する。
【０５５３】
腫瘍を接種した後、２日目（つまり、Ｄａｙ２）に、マウスＴ細胞をとり、８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を構築する。
【０５５４】
腫瘍を接種した後、７日目（つまり、Ｄａｙ７）にマウスに１×１０６８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を尾静脈注射したり、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）（６０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔注射したり、両者を併用で、１４日目に同じ量のＣＡＲＴとアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）を重複して１回の注射で、毎週、生体内映像で治療効果を観察する。
【０５５５】
結果は、図７Ａに示したように、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注射した後、１９日（つまり、Ｄｄｙ２６日）に、併用群のルシポラゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）活性が単一のＣＡＲ−Ｔ群または単一のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）群より著しく低いことを観察した（Ｐ＜０.０５、Ｔｗｏ  ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）。これは、８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ群、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）治療群に比べて、８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔとアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）併用群の腫瘍の成長速度が最も遅く、膵臓源の位置の腫瘍に対して優れた成長抑制効果を有することを説明する。上記の結果は、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）併用は、腫瘍細胞の成長のためにＣＡＲ−Ｔ細胞の抑制作用を向上させることができることを説明する。
【０５５６】
毎週マウスの体重を１〜２回モニタリングし、結果は、図７Ｂに示されたように、ＵＴ対照群に比較して、マウスがＣＡＲ−Ｔ細胞とアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）併用治療を受ける間、および受信した後、２週間では、体重が軽減されなかった。マウスにも、他の異常現象が表示されなかったが、これはＣＡＲ−Ｔ細胞とアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）併用治療がマウスの深刻な毒性副作用がないことを説明する。
【実施例１１】
【０５５７】
実施例１１  マウス膵臓癌のアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）とＣＡＲ  Ｔ細胞の前後投与の抑制効果
６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの膵臓ウォンの位置に２×１０５  Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ−ＧＦＰ−Ｃｌａｕｄｉｎ１８.２細胞を接種し、腫瘍細胞接種日、第０日（つまり、Ｄａｙ０）に記録する。
【０５５８】
腫瘍を接種した後、７日目（つまり、Ｄａｙ７）に、マウス脾臓Ｔ細胞をとり、ｈｕ８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を構築する。
【０５５９】
腫瘍を接種した後、７日目（つまり、Ｄａｙ７）にマウスに６０ｍｇ／ｋｇのアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）を腹腔注射（アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）群）で、腫瘍を接種した後、１０日目（つまり、Ｄａｙ１０）マウス３×１０６  ８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を尾静脈注射（８Ｅ５−２Ｉ−ＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ群）、または３×１０６対照ＵＴ細胞を尾静脈注射（ＵＴ群）し、または両者を併用して（腫瘍を接種した後、７日目に６０ｍｇ／ｋｇのマウスアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）を腹腔注射し、腫瘍を接種した後、１０日目にマウス３×１０６  ８Ｅ５−２Ｉ−ｍＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を尾静脈注射して、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）＋８Ｅ５−２Ｉ−ＢＢＺ  ＣＡＲ−Ｔ群に設定する）、マウスの生存期を記録しが、結果は図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃに示したように、併用群（アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）＋８Ｅ５−２Ｉ−ＢＢＺ）は、対照ＵＴ群に比べて、マウスの生存期を著しく延長させた（Ｐ＜０.０５）、併用群はアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）、単一の投与群に比べて、マウスの生存期を著しく延長させた（Ｐ＜０.０５）。
【０５６０】
毎週マウスの体重を１〜２回モニタリングし、結果は図９に示したように、ＵＴ対照群に比較して、マウスがＣＡＲ−Ｔ細胞とアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）併用治療を受ける間、および受信した後、２週間では、体重が軽減されなかった。マウスにも、他の異常現象が表示されなかったが、これはＣＡＲ−Ｔ細胞とアブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）併用治療がマウスの深刻な毒性副作用がないことを説明する。
【０５６１】
本発明で言及されるすべての文書は、あたかも各文書が個々に参照により組み込まれたかのように、本出願に参照により組み込まれている。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も本願に添付された特許請求の範囲によって定義される範囲内にあることを理解されたい。
【図１】
2021523090.tif 000023
【図２Ａ】
2021523090.tif 000024
【図２Ｂ】
2021523090.tif 000025
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
2021523090.tif 000030
【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
2021523090.tif 000032
【図５】
2021523090.tif 000033
【図６Ａ】
2021523090.tif 000034
【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
2021523090.tif 000039
【図８Ｃ】
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【図９】
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【配列表】
2021523090000001.app
【国際調査報告】
2021523090.tif 000042
2021523090.tif 000043
2021523090.tif 000044
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