(57)【要約】  本発明は慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の組成物に関し、その際、該組成物はＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイム、及び／又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含む。該組成物は該組成物におけるＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満であることを特徴とする。さらに本発明は、本発明による組成物の製造方法、並びに慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の薬剤としての該組成物の使用に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
呼吸器疾患患者治療用の組成物において、前記組成物がＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイム、及び／又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含むものであって、前記組成物における前記ＤＮＡザイムの濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満であることを特徴とする、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の組成物。
【請求項２】
前記組成物における前記ＤＮＡザイムの濃度が２０ｍｇ／ｍｌと５０ｍｇ／ｍｌの間であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が３．５ｍＰａ・ｓ未満の粘度を有することを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＤＮＡザイムがＤＮＡザイムｈｇｄ１からｈｇｄ７０まで（配列識別番号１から配列識別番号７０まで）を含むグループ及び／又はＤＮＡザイムｔｄ１からｔｄ７８まで（配列識別番号７１から配列識別番号１４８まで）を含むグループから選択されていることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＤＮＡザイムが配列ｈｇｄ４０、ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ（配列識別番号４０）を有することを特徴とする、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が少なくとも１つのヌクレアーゼ阻害剤を有することを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ヌクレアーゼ阻害剤がデゾキシリボヌクレアーゼを特異的に不活性化することを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が少なくとも１つの塩及び／又は少なくとも１つの陽イオンを含むことを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が少なくとも１つの無機及び／又は有機添加剤及び／又は１つの可溶化剤及び／又は１つの保存剤を含むことを特徴とする、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
少なくとも以下の段階、
ａ）ＤＮＡザイム含有溶液を、前記水溶液中の前記ＤＮＡザイムの濃度が８０ｍｇ／ｍｌを超えない状態で調製すること、
ｂ）前記段階ａ）の溶液のＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌを下回るまで、前記溶液を濾過すること
を含むことを特徴とする、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。
【請求項１１】
さらに以下の段階、
・前記少なくとも１つのヌクレアーゼ阻害剤を前記段階ｂ）の溶液に追加すること、
・前記少なくとも１つの塩及び／又は前記少なくとも１つの陽イオンを前記段階ｂ）の溶液に追加すること、
・前記少なくとも１つの無機及び／又は有機添加剤を前記段階ｂ）の溶液に追加すること、
・前記可溶化剤及び／又は前記保存剤を前記段階ｂ）の溶液に追加すること
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の薬剤としての、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１３】
前記組成物がエアゾール状で適用されることを特徴とする、請求項１２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、請求項１に記載の慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の組成物、請求項１０に記載の組成物の製造方法、及び請求項１２に記載のそうした組成物の使用に関する。
【０００２】
特に明記しない場合、「発現」と「遺伝子発現」という概念は以下同義的に使用される。
【背景技術】
【０００３】
慢性炎症は医学上重要性を増している。それに伴って重要であるのは、慢性炎症を伴う、例えば呼吸器疾患といった疾患の治療法を見つけることである。そうした呼吸器疾患は例えば即時型アレルギー反応、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【０００４】
慢性炎症反応及び（しばしば炎症依存性でもある）自己免疫疾患の発症には、とりわけ２つの転写因子、Ｔｈ１細胞特異的転写因子Ｔ‐ｂｅｔとＴｈ２細胞特異的転写因子ＧＡＴＡ‐３が関与している。その際、Ｔ‐ｂｅｔはＴｈ１細胞の特異的発達を誘導し、それに対してＧＡＴＡ‐３はＴｈ２細胞の特異的発達を誘導する。したがって、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞の間のバランスは、ＧＡＴＡ‐３の発現によって、又はＴｈ２細胞に有利となるＴ‐ｂｅｔの抑制によって変化する。同様に、ＧＡＴＡ‐３の抑制又はＴ‐ｂｅｔの発現はＴｈ１細胞のレベルを上昇させる。ＧＡＴＡ‐３とＴ‐ｂｅｔの間、又はＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の間の特定のバランスに関しては、学術出版物が多数出版されている。
【０００５】
その結果、近年転写因子ＧＡＴＡ‐３とＴ‐ｂｅｔを特異的に抑制又は「除外」する実験が行われた。これを達成する１つの可能性は上記両転写因子の遺伝子発現の抑制であり、この目的で最新の遺伝子工学によって様々な「手段」が提供される。該手段の１つがＤＮＡザイムである。
【０００６】
ＤＮＡザイムは比較的新しいクラスのアンチセンス分子である。アンチセンス分子と呼ばれるのは、一本鎖核酸（通例ｍＲＮＡ）を特異的に、かつ基本的に相補的に結合可能な分子である。その際、ＤＮＡザイムの特性の１つは上記の結合機能に加えて触媒機能も有することである。したがって、ＤＮＡザイムは一本鎖の標的ＤＮＡ又は標的ＲＮＡを特異的に切断し、それによって分解することができる（Ｓｅｌら、２００８）。この場合、転写後抑制についても言及されるが、それは、遺伝子発現の抑制がｍＲＮＡレベルで、したがって引き続きｍＲＮＡからタンパク質への翻訳が行われ得る前に行われるからである。
【０００７】
通常この目的で１０‐２３型のＤＮＡザイムが用いられる（Ｓｏｎｔｏｒｏら、１９９７）。そうしたＤＮＡザイムは、２つの基質結合ドメインが隣接する１５ヌクレオチドの触媒ドメインを有する。その際、該触媒ドメインには特に保存配列ｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａが含まれ得る（配列識別番号１５４）。上述の配列ｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａは好ましい実施形態の１つにすぎない。専門家には、修飾された触媒ドメインを持つ１０‐２３型のＤＮＡザイムは同等の生物活性を有し得ることが周知である。それに対して基質結合ドメインの長さは可変であり、その際、２つの対応する基質結合ドメインも互いに異なり得る。好ましい実施形態の１つにおいて、基質結合ドメインの長さは６ヌクレオチドと１４ヌクレオチドの間であり、その際、特に好まれるのは９ヌクレオチドの長さである。そうしたＤＮＡザイムは例えばｎｎｎｎｎｎｎｎｎｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａｎｎｎｎｎｎｎｎｎといった特異的配列を有する。通例、該基質結合ドメインは標的ｍＲＮＡの予定切断部位に隣接する領域に対して完全に相補的である。しかし、標的ＲＮＡを結合し切断するために、ＤＮＡザイムは必ずしも完全に相補的である必要はない。１０‐２３型のＤＮＡザイムは標的ｍＲＮＡのプリン‐ピリミジン連続配列を切断する。
【０００８】
ＤＮＡザイムは、ＧＡＴＡ‐３又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に抑制するための使用でも知られている。したがって例えば特許文献１において、様々なＤＮＡザイムの作用機序が記載される。特許文献１の開示内容は本発明の技術的背景と考えられる。
【０００９】
ＤＮＡザイムを有効成分として使用する際に発生し得る問題は、しばしば核酸の不安定性が比較的高いこととその感受性に起因し得る。生理学的に好ましい溶液中に存在しなければ、核酸は例えば酵素的分解又は物理的ストレスによって急速に分解する傾向がある。これは特に一本鎖核酸に当てはまり、これにはＤＮＡザイムも含まれる。
【００１０】
さらに、有効成分を治療目的で使用する場合は、その都度その有効成分の適用可能性が問題となる。したがって、特に炎症を伴う呼吸器疾患の分野においては、局部に標的を定めた適用が必要であり、炎症病巣の効率的撲滅つまり標的細胞への的確な到達が望まれる。それにより、例えば即時型アレルギー反応、喘息又はＣＯＰＤの場合、有効成分が肺を通して摂取できれば最も有効である。
【００１１】
呼吸器疾患を的確に撲滅する可能性の１つは例えば吸入である。吸入によって患者は有効成分を肺に取り入れる、あるいは肺の中の標的細胞を通して取り入れることができ、それによって有効成分は部位特異的に作用し得るか、あるいは肺胞を通して迅速に血液循環に取り入れられ得る。該方法は生体の他の部位における副作用のリスクを減らすことができる。さらに、非特異的適用を行うより、服用量の内作用部位に達する割合がはるかに多いことから、必要な服用量がより僅かである。
【００１２】
実際に通常行われている炎症性疾患患者の治療方法は、特に、強力な免疫抑制作用を有する有効成分に限られる。そうした有効成分の例はコルチコステロイド、メサラジン（５‐アミノサリチル酸）、シクロスポリン、タクロリムス、又はＴＮＨα抗体である。その際、前述の治療法はいずれも標的を定めた使用には適さない。むしろ使用された物質はその強力な免疫抑制作用で知られている。さらに該物質は例えば免疫抑制、肝毒性、心筋肥大、胃腸障害、倦怠感及び目眩、下痢、嘔吐、腎毒性、神経毒性、震え、高血圧症、不眠症、抑鬱、痙攣、感染症の不顕性化、高カリウム血症、高血糖症、腫瘍リスクの上昇といった頻出する副作用と関連している（これらの例はごく一部にすぎない）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際公開第２００５／０３３３１４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって本発明の課題は、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の、標的を定めた適用に適するＤＮＡザイム含有組成物を提供することである。特に、該組成物は治療すべき患者の肺を通して摂取され得るものとし、そのため容易に噴霧可能でなければならない。さらに、該有効成分は副作用のリスクを低く抑えるものとする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
前記課題は発明により、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の組成物が、ＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイム、及び／又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含むことによって解決される。その際該組成物は、ＤＮＡザイムが７５ｍｇ／ｍｌ未満の濃度で該組成物中に存在することを特徴とする。特に、該組成物が肺を通して摂取されるエアゾールとして適用可能であることを考慮しておくことができる。主として該組成物は流体又は溶液、代替として粉末であり得る。
【００１６】
専門家には、発現の部分的な抑制も完全な抑制も発現の下方制御と解釈され得ることが周知である。いずれの場合も発現は自然発現レベルに比べて有意に減少する。この場合、特異的ＤＮＡザイムは、タンパク質がＴｈ１依存性又はＴｈ２依存性の慢性炎症性疾患の発症に対する中心的な鍵分子である転写因子ＧＡＴＡ‐３及び／又はＴ‐ｂｅｔのｍＲＮＡを、生体内で結合し切断する。上述のｍＲＮＡの切断によって、該ｍＲＮＡを機能性タンパク質に翻訳することはもはや不可能である。その結果、ＧＡＴＡ‐３タンパク質レベル又はＴ‐ｂｅｔタンパク質レベルが有意に最低限に抑えられる。
【００１７】
その際、本発明によるＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満の組成物が、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の治療に理想的に使用され得る。これは特に、ＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌを超える組成物が有効成分の損失と結びついていることによる。この原因は、そうした高濃度の組成物は粘度の増加によって、（例えば吸入装置を介した）噴霧がもはや問題なく行えないことである。医学上通例の手持ち式吸入器は通常４０ｂａｒから４５ｂａｒまでの噴霧圧力で作動する。そうした吸入装置に対しては、ＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌを超える溶液の表面張力は高すぎて、もはや噴霧可能ではない。結果として、吸入装置を用いて適用される場合、ＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌの組成物で、既に約６％の有効成分の損失が示される。それに対して、特にＤＮＡザイム濃度が２０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌまでの組成物は、そうした濃度の組成物が容易に噴霧され得ることから、吸入器を用いた治療の際に最高の作用効果を有する。よって、発明により好まれるのは２０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌまでのＤＮＡザイム濃度を有する組成物である。
【００１８】
その際、本発明による組成物は特にエアゾールとして患者の肺に適用され得る吸入液として存在可能であり、これは特にアレルギー性炎症反応によって引き起こされる呼吸器疾患の治療の際に有利である。そうした呼吸器疾患の場合、有効成分（ＤＮＡザイム）は発明による組成物によってエアゾール状で基本的に炎症部位に適用され得る。結果として当該患者の治療における効率が上昇することが明らかになる。この目的で、特に該組成物が流体又は溶液であることが考慮されている。代替として該組成物は粉末であり得る。
【００１９】
その際、ＤＮＡザイム濃度を７５ｍｇ／ｍｌ未満とする本発明による特徴は、特にＤＮＡザイム使用の際に大いに有利である。ＤＮＡ水溶液に関しては、通常、７５ｍｇ／ｍｌをはるかに超える濃度が、その際該溶液の粘度が有意に増加することなく可能である。したがって、まさに比較的小さい、ＤＮＡザイムもその一部であるＤＮＡ分子（＜１，０００ｂｐ）が、１００ｍｇ／ｍｌを超える濃度において、その際該溶液が特に粘性を帯びることなく存在し得る。
【００２０】
しかしＤＮＡザイムの場合は、ＤＮＡザイム含有溶液が既に少なくとも７５ｍｇ／ｍｌの濃度において粘度が不均衡に大幅に増加するという驚くべき作用が現れる。それどころか濃度が７５ｍｇ／ｍｌを超えれば該溶液は沈殿する。この原因は、特に「ループ」形状すなわち「環」形状を特徴とするＤＮＡザイムの三次元構造である。この特殊な構造に基づき、ＤＮＡザイムは、これが一本鎖であることによって促進されて、一種のポリマー構造を形成し、互いに容易に凝集可能であり、これはまた全体的に大量のＤＮＡザイムの溶解が困難になるという結果をもたらす。したがって本発明による組成物は、ＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満であることにより粘度が高すぎず、それによりエアゾールとして容易に投与され得ることから、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の部位特異的治療に対して大いに有利である。
【００２１】
特に、該組成物が２０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌまでのＤＮＡザイム濃度を有することが考慮されている。そうした組成物を用いて、手持ち式吸入器又は同等の吸入装置の使用時にも十分な量の有効成分を患者が摂取し得ることが保証される。つまり、２０ｍｇ／ｍｌ未満のＤＮＡザイム濃度を有する組成物の場合は、吸入器の１回の作動又は操作によって放出される有効成分の量が不十分で、所望の治療成果が得られないというリスクがある。吸入器の作動毎に放出される有効成分が全く少なすぎるということだ。その結果、患者は吸入装置を何度も操作する必要があり、これは治療されるべき患者の負担になり得る一方で、他方では吸入器の損耗をより大きくする。有効成分の濃度が高いことによって、さらに、１つの吸入器で多数回の適用が可能である。
【００２２】
したがって、本発明による組成物によって、特に上述の好ましい実施形態において理想的な折衷点が確保される。つまり、ＤＮＡザイム濃度は５０ｍｇ／ｍｌ未満であれば尚十分低くて、吸入装置によって未だ噴霧可能である一方で、ＤＮＡザイム濃度は２０ｍｇ／ｍｌを超えれば十分高くて、例えば手持ち式吸入器を使用する場合に、既に少数回の操作で十分な量の有効成分を放出できる。
【００２３】
それに加えて、有利な発展形態の１つにより、上記組成物が３．５ｍＰａ・ｓ未満の粘度を有することを考慮しておくことができる。そうした粘度により結果として、該組成物が問題なく、かつ有意な有効成分の損失なくエアゾールとして、例えば吸入器の吸入液として適用され得ることになる。粘度がより高くなると、組成物を噴霧するために加えるべき圧力が高すぎて、もはや通常の吸入装置によって加圧することができないという結果になる。それにより、粘度が３．５ｍＰａ・ｓを超える組成物は、通常当該患者の治療に用いられる吸入器の噴霧器が既に短期間で詰まったり、塞がったりするという結果をもたらし得る。したがって該組成物の粘度が、比較的僅かな粘度で可能な限り高い有効成分濃度（ＤＮＡザイム）を保証する範囲内にあることが有利である。
【００２４】
ＤＮＡザイムとしては、限定列挙ではなく例示として、先の出願、独国特許出願公開第１０３４６４８７号明細書のＤＮＡザイムが引用され、本出願に記載される。該ＤＮＡザイムはＧＡＴＡ‐３及びＴ‐ｂｅｔタンパク質のｍＲＮＡを対象としており、炎症性疾患に対する薬剤の製造を目的として開示されている。
【００２５】
例えば、以下のＤＮＡザイムが（それぞれ個別に、又は他のＤＮＡザイムとの組合せにおいて）用いられる。
【００２６】
ＧＡＴＡ‐３ｍＲＮＡに対するＤＮＡザイム配列の名称
配列識別番号１  ｈｇｄ１  ５’‐ＴＣＧＧＴＣＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＧＴＴＧＣＴ‐３’
配列識別番号２  ｈｇｄ２  ５’‐ＧＧＣＧＴＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＣＴＣＧＧＴ‐３’
配列識別番号３  ｈｇｄ３  ５’‐ＧＧＣＧＧＣＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＣＴＧＣＴＣ‐３’
配列識別番号４  ｈｇｄ４  ５’‐ＣＴＣＧＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＧＴＡＧＣ‐３’
配列識別番号５  ｈｇｄ５  ５’‐ＴＣＣＴＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＧＧＴＣＣＴ‐３’
配列識別番号６  ｈｇｄ６  ５’‐ＡＣＴＣＴＧＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＣＧＡＧＣ‐３’
配列識別番号７  ｈｇｄ７  ５’‐ＧＧＧＣＧＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＣＡＡＴＴ‐３’
配列識別番号８  ｈｇｄ８  ５’‐ＡＡＧＧＧＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＴＣＴＧＣＡ‐３’
配列識別番号９  ｈｇｄ９  ５’‐ＡＡＡＡＣＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＧＧＴＴＧＴＡ‐３’
配列識別番号１０  ｈｇｄ１０  ５’‐ＡＧＡＡＴＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＣＣＡＧＧ‐３’
配列識別番号１１  ｈｇｄ１１  ５’‐ＡＴＧＧＣＡＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＡＣＧＧＧＡ‐３’
配列識別番号１２  ｈｇｄ１２  ５’‐ＡＡＣＴＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＡＧＡＡＴＡ‐３’
配列識別番号１３  ｈｇｄ１３  ５’‐ＡＴＣＣＡＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＧＧＴＡＴＧＧ‐３’
配列識別番号１４  ｈｇｄ１４  ５’‐ＡＧＧＧＧＡＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＡＡＴＣＣＡ‐３’
配列識別番号１５  ｈｇｄ１５  ５’‐ＴＴＴＴＡＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＡＴＣＴＴＧＧＡ‐３’
配列識別番号１６  ｈｇｄ１６  ５’‐ＧＴＧＧＧＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＡＧＧＣＴ‐３’
配列識別番号１７  ｈｇｄ１７  ５’‐ＧＴＴＧＡＡＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＴＴＴＣＧ‐３’
配列識別番号１８  ｈｇｄ１８  ５’‐ＧＴＣＧＴＴＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＴＴＴＧＣＴＴ‐３’
配列識別番号１９  ｈｇｄ１９  ５’‐ＧＧＣＣＣＧＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＣＧＣＧＣＧ‐３’
配列識別番号２０  ｈｇｄ２０  ５’‐ＴＣＡＣＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＣＴＣＧＧＣ‐３’
配列識別番号２１  ｈｇｄ２１  ５’‐ＣＣＧＣＣＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＡＴＧＧＣ‐３’
配列識別番号２２  ｈｇｄ２２  ５’‐ＧＧＴＧＧＣＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＣＧＣＧＧ‐３’
配列識別番号２３  ｈｇｄ２３  ５’‐ＣＧＴＴＧＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＧＧＧＧＴＧ‐３’
配列識別番号２４  ｈｇｄ２４  ５’‐ＣＣＧＣＧＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＧＧＡＧＴＧ‐３’
配列識別番号２５  ｈｇｄ２５  ５’‐ＣＡＧＣＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＧＣＣＧＣＧ‐３’
配列識別番号２６  ｈｇｄ２６  ５’‐ＧＣＡＣＡＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＴＣＣＧＧ‐３’
配列識別番号２７  ｈｇｄ２７  ５’‐ＡＡＡＡＧＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＣＣＴＣＣＴ‐３’
配列識別番号２８  ｈｇｄ２８  ５’‐ＴＡＡＡＡＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＣＣＡＣＣＴＣ‐３’
配列識別番号２９  ｈｇｄ２９  ５’‐ＧＡＣＣＧＴＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＴＡＡＡＡＡＧ‐３’
配列識別番号３０  ｈｇｄ３０  ５’‐ＴＴＧＣＣＴＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＴＣＧＡＴＧＴ‐３’
配列識別番号３１  ｈｇｄ３１  ５’‐ＡＧＧＧＣＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＧＧＴＴＧＣＣ‐３’
配列識別番号３２  ｈｇｄ３２  ５’‐ＴＧＧＣＣＣＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＡＧＴＴＴＣＣ‐３’
配列識別番号３３  ｈｇｄ３３  ５’‐ＡＣＣＴＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＴＧＧＣＣＣＴ‐３’
配列識別番号３４  ｈｇｄ３４  ５’‐ＣＧＧＡＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＴＧＣＡＣＣ‐３’
配列識別番号３５  ｈｇｄ３５  ５’‐ＧＧＣＧＧＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＣＴＣＣＣ‐３’
配列識別番号３６  ｈｇｄ３６  ５’‐ＣＧＧＧＣＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＣＴＧＧＣＴＣ‐３’
配列識別番号３７  ｈｇｄ３７  ５’‐ＡＧＧＧＡＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＡＧＣＡＧＡＧ‐３’
配列識別番号３８  ｈｇｄ３８  ５’‐ＧＧＧＴＡＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＴＧＡＡＧＣ‐３’
配列識別番号３９  ｈｇｄ３９  ５’‐ＧＧＧＣＴＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＡＧＧＧＧＧ‐３’
配列識別番号４０  ｈｇｄ４０  ５’‐ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ‐３’
配列識別番号４１  ｈｇｄ４１  ５’‐ＣＧＴＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＣＧＴＣＴＴ‐３’
配列識別番号４２  ｈｇｄ４２  ５’‐ＧＧＧＧＧＴＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＧＡＧＧＧＧ‐３’
配列識別番号４３  ｈｇｄ４３  ５’‐ＧＧＡＧＧＡＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＧＧＣＣＧＧＧ‐３’
配列識別番号４４  ｈｇｄ４４  ５’‐ＧＣＣＣＣＣＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＧＧＡＧＧＡＧ‐３’
配列識別番号４５  ｈｇｄ４５  ５’‐ＣＣＧＧＧＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＣＴＴＣＧＧ‐３’
配列識別番号４６  ｈｇｄ４６  ５’‐ＧＧＡＣＡＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＴＣＣＧＧＧ‐３’
配列識別番号４７  ｈｇｄ４７  ５’‐ＴＧＧＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＣＧＡＴＧＧＧ‐３’
配列識別番号４８  ｈｇｄ４８  ５’‐ＣＴＴＧＡＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＴＴＣＴＣＧ‐３’
配列識別番号４９  ｈｇｄ４９  ５’‐ＣＡＣＣＴＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＡＧＧＣＡＣ‐３’
配列識別番号５０  ｈｇｄ５０  ５’‐ＧＣＡＧＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＴＡＣＴＴ‐３’
配列識別番号５１  ｈｇｄ５１  ５’‐ＣＣＡＧＣＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＴＣＧＧＧ‐３’
配列識別番号５２  ｈｇｄ５２  ５’‐ＧＴＧＧＧＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＡＧＣＴＴＣ‐３’
配列識別番号５３  ｈｇｄ５３  ５’‐ＧＧＡＧＴＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＴＣＣＡＧＣ‐３’
配列識別番号５４  ｈｇｄ５４  ５’‐ＡＴＧＣＴＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＧＴＧＧＧ‐３’
配列識別番号５５  ｈｇｄ５５  ５’‐ＧＧＧＣＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＣＣＡＣＧ‐３’
配列識別番号５６  ｈｇｄ５６  ５’‐ＧＡＧＧＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＧＧＣＧＧ‐３’
配列識別番号５７  ｈｇｄ５７  ５’‐ＧＴＧＧＧＴＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＧＧＡＧＧＣＴ‐３’
配列識別番号５８  ｈｇｄ５８  ５’‐ＡＧＧＴＧＧＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＧＴＧＧＴＧ‐３’
配列識別番号５９  ｈｇｄ５９  ５’‐ＡＣＴＣＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＧＧＧＣＧＧ‐３’
配列識別番号６０  ｈｇｄ６０  ５’‐ＧＧＡＧＣＴＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＧＧＧＣＡＣＧ‐３’
配列識別番号６１  ｈｇｄ６１  ５’‐ＧＧＡＣＴＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＡＡＧＣＣＧ‐３’
配列識別番号６２  ｈｇｄ６２  ５’‐ＧＧＧＣＣＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＡＴＣＣＧ‐３’
配列識別番号６３  ｈｇｄ６３  ５’‐ＴＧＴＧＣＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＧＣＣＴＴＧ‐３’
配列識別番号６４  ｈｇｄ６４  ５’‐ＧＴＴＣＡＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＣＴＧＣＣＴ‐３’
配列識別番号６５  ｈｇｄ６５  ５’‐ＣＡＧＴＴＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＴＣＣＣＴＧＣ‐３’
配列識別番号６６  ｈｇｄ６６  ５’‐ＣＡＣＡＧＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＡＣＴＣＣＣＴ‐３’
配列識別番号６７  ｈｇｄ６７  ５’‐ＧＴＴＧＣＣＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＴＣＡＣＡＣ‐３’
配列識別番号６８  ｈｇｄ６８  ５’‐ＴＣＧＣＣＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＧＧＧＧＴＣ‐３’
配列識別番号６９  ｈｇｄ６９  ５’‐ＣＣＣＧＴＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＧＣＣＧＣＣ‐３’
配列識別番号７０  ｈｇｄ７０  ５’‐ＧＧＣＧＴＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＧＴＡＧＴＧＴ‐３’
【００２７】
Ｔ‐ｂｅｔｍＲＮＡに対するＤＮＡザイム配列の名称
配列識別番号７１  ｔｄ１  ５’‐ＴＧＧＣＴＴＣＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＣＣＴＣＧＴＣ‐３’
配列識別番号７２  ｔｄ２  ５’‐ＧＧＧＣＴＣＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＣＴＧＧＣＴＴ‐３’
配列識別番号７３  ｔｄ３  ５’‐ＧＧＧＡＣＣＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＡＧＣＣＣＧ‐３’
配列識別番号７４  ｔｄ４  ５’‐ＧＧＴＧＧＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＣＡＣＣＧＧＡ‐３’
配列識別番号７５  ｔｄ５  ５’‐ＧＧＣＧＧＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＡＧＧＧＣＣ‐３’
配列識別番号７６  ｔｄ６  ５’‐ＧＧＧＣＴＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＣＡＧＧＧＡ‐３’
配列識別番号７７  ｔｄ７  ５’‐ＣＧＴＣＧＡＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＣＣＣＣＴＣ‐３’
配列識別番号７８  ｔｄ８  ５’‐ＧＧＧＣＴＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＴＣＣＣＧＴＡ‐３’
配列識別番号７９  ｔｄ９  ５’‐ＣＧＡＴＧＣＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＧＧＧＣＧＧ‐３’
配列識別番号８０  ｔｄ１０  ５’‐ＧＣＴＣＣＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＣＣＡＴＣＣＧ‐３’
配列識別番号８１  ｔｄ１１  ５’‐ＣＣＧＧＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＴＧＣＣＣＡＴ‐３’
配列識別番号８２  ｔｄ１２  ５’‐ＴＣＴＣＣＧＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＧＣＴＣＣＡ‐３’
配列識別番号８３  ｔｄ１３  ５’‐ＣＣＧＴＣＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＣＣＧＣＡ‐３’
配列識別番号８４  ｔｄ１４  ５’‐ＴＣＣＣＣＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＣＴＣＧＧＴ‐３’
配列識別番号８５  ｔｄ１５  ５’‐ＣＣＣＣＣＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＣＧＴＣＣＧ‐３’
配列識別番号８６  ｔｄ１６  ５’‐ＧＴＡＧＧＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＣＡＧＧＣＴＧ‐３’
配列識別番号８７  ｔｄ１７  ５’‐ＧＧＧＣＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＡＧＧＣＧＣＣ‐３’
配列識別番号８８  ｔｄ１８  ５’‐ＣＧＧＧＡＡＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＧＣＣＣＧＣＧ‐３’
配列識別番号８９  ｔｄ１９  ５’‐ＴＡＧＴＣＣＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＧＧＣＣＣＣＧ‐３’
配列識別番号９０  ｔｄ２０  ５’‐ＴＣＣＣＣＧＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＡＧＴＣＣ‐３’
配列識別番号９１  ｔｄ２１  ５’‐ＴＴＴＣＣＣＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＣＴＣＣＡＧＴ‐３’
配列識別番号９２  ｔｄ２２  ５’‐ＴＧＡＧＣＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＴＣＡＧＴＴＴ‐３’
配列識別番号９３  ｔｄ２３  ５’‐ＧＧＡＣＣＡＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＧＴＧＧＴＴＧ‐３’
配列識別番号９４  ｔｄ２４  ５’‐ＣＴＴＧＧＡＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＣＡＧＧＴＧＧ‐３’
配列識別番号９５  ｔｄ２５  ５’‐ＡＡＡＣＴＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＣＡＡＣＡＧＧ‐３’
配列識別番号９６  ｔｄ２６  ５’‐ＣＴＧＡＴＴＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＧＡＣＣＡＣ‐３’
配列識別番号９７  ｔｄ２７  ５’‐ＴＧＧＴＧＣＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＡＡＡＣＴＴＧＧ‐３’
配列識別番号９８  ｔｄ２８  ５’‐ＴＧＡＴＧＡＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＴＧＴＣＴＧ‐３’
配列識別番号９９  ｔｄ２９  ５’‐ＴＧＧＴＧＡＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＴＣＴＣＴＧＴ‐３’
配列識別番号１００  ｔｄ３０  ５’‐ＧＣＴＴＧＧＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＴＣＡＴＣＴＣ‐３’
配列識別番号１０１  ｔｄ３１  ５’‐ＡＴＧＧＧＡＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＣＣＧＴＣＣ‐３’
配列識別番号１０２  ｔｄ３２  ５’‐ＧＡＡＴＧＧＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＣＣＧＣＣＧＴ‐３’
配列識別番号１０３  ｔｄ３３  ５’‐ＴＧＡＣＡＧＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＡＣＡＴＣ‐３’
配列識別番号１０４  ｔｄ３４  ５’‐ＡＧＴＡＡＡＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＧＡＡＴＧＧＧ‐３’
配列識別番号１０５  ｔｄ３５  ５’‐ＣＡＣＡＧＴＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＡＧＧＡＡＴ‐３’
配列識別番号１０６  ｔｄ３６  ５’‐ＧＣＣＣＧＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＡＡＡＴＧＡ‐３’
配列識別番号１０７  ｔｄ３７  ５’‐ＣＣＡＣＡＡＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＴＧＴＡＧＴＧ‐３’
配列識別番号１０８  ｔｄ３８  ５’‐ＧＴＣＣＡＣＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＣＣＴＧＴＡＧ‐３’
配列識別番号１０９  ｔｄ３９  ５’‐ＣＣＡＣＧＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＣＡＴＣＣＴ‐３’
配列識別番号１１０  ｔｄ４０  ５’‐ＣＣＡＡＧＡＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＣＡＣＡＡＡ‐３’
配列識別番号１１１  ｔｄ４１  ５’‐ＣＣＡＣＣＡＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＣＧＴＣＣＡＣ‐３’
配列識別番号１１２  ｔｄ４２  ５’‐ＧＣＴＧＧＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＡＧＡＣＣＡＣ‐３’
配列識別番号１１３  ｔｄ４３  ５’‐ＧＣＴＣＴＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＣＣＡＧＴＧＧ‐３’
配列識別番号１１４  ｔｄ４４  ５’‐ＣＴＧＣＡＣＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＣＧＣＴＣ‐３’
配列識別番号１１５  ｔｄ４５  ５’‐ＣＡＣＡＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＣＴＴＧＣＣ‐３’
配列識別番号１１６  ｔｄ４６  ５’‐ＣＴＴＴＣＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＡＣＣＣＡＣ‐３’
配列識別番号１１７  ｔｄ４７  ５’‐ＧＣＣＴＴＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＴＧＣＡＣＣＣ‐３’
配列識別番号１１８  ｔｄ４８  ５’‐ＴＴＣＣＴＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＣＣＣＴＣ‐３’
配列識別番号１１９  ｔｄ４９  ５’‐ＧＴＧＧＡＣＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＧＣＧＧＴＴＴ‐３’
配列識別番号１２０  ｔｄ５０  ５’‐ＣＣＧＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＣＡＧＧＣＧ‐３’
配列識別番号１２１  ｔｄ５１  ５’‐ＣＣＴＧＧＣＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＴＧＣＧＣ‐３’
配列識別番号１２２  ｔｄ５２  ５’‐ＣＡＡＡＴＧＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＣＣＴＧＧＣＧ‐３’
配列識別番号１２３  ｔｄ５３  ５’‐ＴＴＴＣＣＣＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＡＡＣＴＴＣＣ‐３’
配列識別番号１２４  ｔｄ５４  ５’‐ＡＴＴＧＴＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＣＣＣＣＴＴＧ‐３’
配列識別番号１２５  ｔｄ５５  ５’‐ＴＧＧＧＴＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＴＴＧＧＡＣＧ‐３’
配列識別番号１２６  ｔｄ５６  ５’‐ＴＣＴＧＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＴＧＴＴＧＧＡ‐３
配列識別番号１２７  ｔｄ５７  ５’‐ＧＣＡＣＡＡＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＧＴＣＡＣ‐３’
配列識別番号１２８  ｔｄ５８  ５’‐ＧＧＡＧＣＡＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＴＣＴＧＧＧＴ‐３’
配列識別番号１２９  ｔｄ５９  ５’‐ＡＣＴＧＧＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＴＣＡＴＣＴＧ‐３’
配列識別番号１３０  ｔｄ６０  ５’‐ＡＴＧＧＡＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＧＡＧＣＡＣＡ‐３’
配列識別番号１３１  ｔｄ６１  ５’‐ＴＧＧＴＡＣＴＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＧＧＧＡＣＴ‐３’
配列識別番号１３２  ｔｄ６２  ５’‐ＧＧＧＣＴＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＡＴＧＧＡＧＧ‐３’
配列識別番号１３３  ｔｄ６３  ５’‐ＴＣＡＡＣＧＡＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＡＧＣＣＧＧＧ‐３’
配列識別番号１３４  ｔｄ６４  ５’‐ＣＣＴＣＡＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＧＣＡＧＣＣＧ‐３’
配列識別番号１３５  ｔｄ６５  ５’‐ＴＣＡＣＣＴＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＴＡＴＧＣＡＧ‐３’
配列識別番号１３６  ｔｄ６６  ５’‐ＣＧＴＣＧＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＡＡＣＧＡＴ‐３’
配列識別番号１３７  ｔｄ６７  ５’‐ＧＴＡＡＡＧＡＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＧＴＧＴＴＧＧ‐３’
配列識別番号１３８  ｔｄ６８  ５’‐ＡＡＧＴＡＡＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＧＣＧＴＧＴＴ‐３’
配列識別番号１３９  ｔｄ６９  ５’‐ＧＧＣＡＡＴＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＧＧＴＴＴＣＴ‐３’
配列識別番号１４０  ｔｄ７０  ５’‐ＴＣＡＣＧＧＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＡＣＴＧＧＧＴ‐３’
配列識別番号１４１  ｔｄ７１  ５’‐ＡＧＧＣＡＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＡＡＴＧＡＡ‐３’
配列識別番号１４２  ｔｄ７２  ５’‐ＡＴＣＴＣＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＧＴＡＧＧ‐３’
配列識別番号１４３  ｔｄ７３  ５’‐ＧＣＴＧＡＧＴＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＧＧＣＡＴＴ‐３’
配列識別番号１４４  ｔｄ７４  ５’‐ＴＡＴＴＡＴＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＴＣＡＧＣＴＧ‐３’
配列識別番号１４５  ｔｄ７５  ５’‐ＧＧＧＴＴＡＴＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＡＴＴＴＴＣＡ‐３’
配列識別番号１４６  ｔｄ７６  ５’‐ＡＡＧＧＧＧＴＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＡＴＣＡＡＴＴＴ‐３’
配列識別番号１４７  ｔｄ７７  ５’‐ＣＴＣＣＣＧＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＴＴＴＧＧＣＡ‐３’
配列識別番号１４８  ｔｄ７８  ５’‐ＧＴＡＣＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＡＡＡＧＴＴＣ‐３’
【００２８】
これに応じて、有利な実施形態の１つでは、ＤＮＡザイムをＤＮＡザイムｈｇｄ１からｈｇｄ７０までを含むグループ（表２も参照）及び／又はＤＮＡザイムｔｄ１からｔｄ７８までを含むグループ（表２を参照）から選択しておくことが考慮される。
【００２９】
上述の配列を有するＤＮＡザイムは、炎症誘発性転写因子ＧＡＴＡ‐３又はＴ‐ｂｅｔの発現の生体内での特異的抑制を特に効率良く行うことが明らかになる。その際、一般的に好まれるのは、その基質結合ドメインが特定の標的ｍＲＮＡの切断部位の隣接領域に対して完全に相補的である配列である。当然ＤＮＡザイムは、標的ｍＲＮＡを結合し切断するために、完全に相補的である必要はない。場合によっては全体的相同性のある基質結合ドメイン内の僅かな相補的配列セグメントで十分である。
【００３０】
特に好ましい変形形態として、該転写因子ＧＡＴＡ‐３の発現を下方制御するためにＤＮＡザイムｈｇｄ４０、ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ（配列識別番号４０）を有する組成物が考慮されている。
【００３１】
上記の配列は特に高い酵素活性を示し、ＧＡＴＡ‐３ｍＲＮＡを非常に特異的にかつ高効率で切断する。その結果、該配列ｈｇｄ４０（配列識別番号４０）を有するＤＮＡザイムは、Ｔｈ２依存性の、つまりＧＡＴＡ‐３レベルの上昇に伴う呼吸器疾患の標的を定めた有効な治療に並外れて適している。
【００３２】
有利な発展形態の１つにより、該組成物は少なくとも１つのヌクレアーゼ阻害剤を有し、その際、該少なくとも１つのヌクレアーゼ阻害剤は特にデゾキシリボヌクレアーゼを特異的に不活性化する、つまりＤＮアーゼ阻害剤である。そうしたヌクレアーゼ阻害剤によって、該少なくとも１つのＤＮＡザイムは、ＤＮアーゼによって引き起こされ得る酵素的分解から保護される。
【００３３】
さらに、該組成物が少なくとも１つの塩及び／又は少なくとも１つの陽イオンを含むと有利である。
【００３４】
そうした組成物は、それによって生理的に好ましい環境を有し、したがって、患者における忍容性が良好であることから、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の治療における使用に有利に適している。その際、特にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が考慮されている。しかし、例えばトリス・ＥＤＴＡ（ＴＥ）バッファといった、核酸が生理的に好ましい環境で中に溶解して存在し得る他の緩衝液も考慮しておくことができる。それに応じて、無機及び／又は有機添加剤が、好ましくは物質、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、リン酸水素二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素カルシウム（ＫＨ２ＰＯ４）、トリス（ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ：ＴＲＩＳ）及びエチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ：ＥＤＴＡ）を含むグループから選択されている。その際、陽イオンはＮａ、Ｍｇ、Ｋ、Ｌｉ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｃｕ及びＡｇを含むグループから選択しておくことができる。さらに、例えばＭｇ（Ｎ（ＳＯ２ＣＦ３）２）２又はＭｇ（ＯＳＯ２ＣＦ３）２といった有機陽イオンを考慮しておくこともできる。さらに、二価陽イオンを考慮しておくことができる。
【００３５】
そうした緩衝化組成物は、ＤＮＡザイムが無機及び／又は有機添加剤によって安定化され、酵素的分解から保護されることから、特にＤＮＡザイムの保護に適している。さらに、塩によって標的細胞内への十分な取込みが可能になる。ＤＮＡザイムが二価陽イオン（主としてＭｇ２＋）依存性の触媒ドメインを有することから、二価陽イオンはＤＮＡザイムの補因子としてＤＮＡザイムの活性を上昇させ得る。したがって、二価陽イオンはエンハンサすなわち補強剤として作用する。
【００３６】
有利な発展形態の１つに従って、該組成物は少なくとも１つの無機及び／又は有機添加剤及び／又は１つの可溶化剤及び／又は１つの保存剤を含み得る。その際、可溶化剤は特に錯体生成に役立つ。さらに、可溶化剤は該組成物の溶解性を改善する。好ましくは可溶化剤として、グリセロール誘導体及び／又はポリエチレングリコールかレシチンを考慮しておくことができる。保存剤は例えばパラベンであり得る。さらに、例えば該組成物の表面張力の変化又は該組成物の粘度の低下をもたらす添加剤を考慮しておくことができる。
【００３７】
本発明の付加的な態様の１つは本発明による組成物の製造方法であり、その際、該方法が少なくとも以下の段階を含むことが考慮されている。
ａ）ＤＮＡザイム含有溶液を、水溶液中のＤＮＡザイム濃度が８０ｍｇ／ｍｌを超えない状態で調製すること、
ｂ）段階ａ）の溶液のＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌを下回るまで、該溶液を濾過すること。
【００３８】
上記の濾過段階は、それによって不要な（非無菌）物質並びに未溶解の有効成分の分子（つまり未溶解のＤＮＡザイム）が取り除かれることから有利である。該組成物は慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者を治療するために無菌である必要がある。他の滅菌方法（放射線、加熱、オートクレーブ等）は、それによってＤＮＡザイムも破壊されることから、ここでは利用不能である。この理由により、溶液を濾過によって滅菌することが考慮されている。その際、好ましくは細孔径が０．２０から０．２５μｍまでのポリエーテルスルホン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｓｕｌｆｏｎｅ：ＰＥＳ）膜を有するフィルタが用いられる。特に好ましくは細孔径が０．２２μｍのＰＥＳ膜である。
【００３９】
さらなる実施形態の１つに従って、上記方法が少なくとも１つのさらなる手順の段階を、特に以下の段階の１つから選択して、有することが考慮されている。
‐ヌクレアーゼ阻害剤を段階ｂ）の溶液に追加すること、
‐少なくとも１つの塩及び／又は少なくとも１つの陽イオンを段階ｂ）の溶液に追加すること、
‐無機及び／又は有機添加剤を段階ｂ）の溶液に追加すること、
‐可溶化剤及び／又は保存剤を段階ｂ）の溶液に追加すること。
【００４０】
そうした方法によって、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の治療に使用され得る組成物の製造が簡単な方法で保証される。上記段階の選択によって、該方法は特異的な要求に個々に適応し得る。
【００４１】
本発明のさらなる態様としては、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の薬剤としての上述の組成物の使用がある。この目的で、該組成物は特に吸入液として存在し得る。しかし、例えば粉体吸入器で使用するための粉末といった他の形状も考えられ得る。
【００４２】
好ましい実施形態の１つにおいて、該組成物をエアゾール状で適用し得ることが考慮されている。そのように適用された組成物は慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の肺において部位特異的に作用し得る。それによって、薬剤の効力を向上させることができる。同時に副作用のリスクが最低限に抑えられる。
【００４３】
本発明のさらなる特徴、詳細及び利点は請求項の文面並びに以下の実施例の説明より明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】ＤＮＡザイム含有組成物の濃度に応じた粘度を示すグラフである。
【図２】ＤＮＡザイム含有組成物の濃度に応じた粘度の測定結果である。
【図３】ＤＮＡザイム濃度の異なる組成物の工場受入試験（Ｆａｃｔｏｒｙ  Ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ  Ｔｅｓｔ：ＦＡＴ）の測定結果である。
【図４】本発明によるＤＮＡザイム濃度が２０ｍｇ／ｍｌ又は５０ｍｇ／ｍｌの組成物のＦＡＴの測定結果である。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００４５】
表１はＧＡＴＡ‐３特異的ＤＮＡザイムの一覧である。
表２はＴ‐ｂｅｔ特異的ＤＮＡザイムの一覧である。
表３は発明による組成物の例である。
表４は表３の組成物への可能な追加成分である。
2021507942.tif 000003
2021507942.tif 000004
2021507942.tif 000005
【００４６】
2021507942.tif 000006
2021507942.tif 000007
2021507942.tif 000008
2021507942.tif 000009
【００４７】
2021507942.tif 000010
【００４８】
2021507942.tif 000011
【００４９】
図１には、ＤＮＡザイム含有組成物の濃度に応じた粘度を示すグラフが示されている。その際、該ＤＮＡザイムはＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に下方制御及び／又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に下方制御することができる。
【００５０】
好ましい実施形態に従って、特に、ＤＮＡザイムｈｇｄ１からｈｇｄ７０までを含むグループ、又はＤＮＡザイムｔｄ１からｔｄ７８までを含むグループのＤＮＡザイムが考慮されている。特に、配列ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧを有し、ＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に抑制する、ＤＮＡザイムｈｇｄ４０（配列識別番号４０）を使用するものとする。
【００５１】
図１のグラフはｈｇｄ４０含有組成物の粘度を示す。図１のグラフのＹ軸に沿って、組成物の粘度がｍＰａ・ｓで描かれ、Ｘ軸は該組成物のＤＮＡザイム濃度を示す。このグラフから、該組成物の粘度が基本的に指数関数的に増加することが明らかになる。その際、特に濃度が５０ｍｇ／ｍｌ以上で粘度の大幅な増加が認められ得る。既に約７５ｍｇ／ｍｌの濃度において３．５ｍＰａ・ｓの粘度が記録され得る。
【００５２】
図２には、ＤＮＡザイム含有組成物の濃度に応じた粘度の測定結果が示されている。この結果が明確にする濃度と粘度の関係は図２のグラフと同じである。したがって、粘度はＤＮＡザイム濃度が５０ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間で指数関数的に増加する。この相関関数は他のＤＮＡ分子に関しては通常このようにはっきりと認めることはできず、通常、ＤＮＡ含有溶液の粘度はＤＮＡ濃度の増加に伴って基本的に直線的に増加する。
【００５３】
粘度が３．５ｍＰａ・ｓを超える場合は、組成物を噴霧するために従来の吸入装置によって加えられるべき圧力が高くなりすぎる。これによって通常当該患者の治療に用いられる吸入器が既に短期間で詰まったり、塞がったりすることになり得る。このリスクはＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満の組成物によって有意に最低限に抑えられる。
【００５４】
図３には、ＤＮＡザイム濃度の異なる組成物のＦＡＴの測定結果が表形式で示されている。工場受入試験（「Ｆａｃｔｏｒｙ  Ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ  Ｔｅｓｔ」：ＦＡＴ）は製品の適合性が試験されるべき工場検査に匹敵する。該表によって、本発明による組成物において７５ｍｇ／ｍｌを超えるＤＮＡザイム濃度はもはや試験用吸入装置によって噴霧不能であることが証明される（図３の表の結果の２行目）。ＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌの組成物が実験の前段階で滅菌濾過される場合、その濃度は７５ｍｇ／ｍｌ未満に減少する。そうしたＤＮＡザイム濃度の組成物は、図３の表の結果の４行目と５行目から読み取れるように、試験で使用した噴霧器で噴霧され得る。ＦＡＴは粘度をｄＰ／ｍｌで表示する。この単位における粘度は、ここで実施したＦＡＴに合格するには５％未満でなければならない。１行目と３行目にある略語「ＷＦＩ」は「注射用水（Ｗａｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）」を表しており、これはコントロールとして理解されるべきものである。したがって「ＷＦＩ」‐コントロールは粘度１ｄＰ／ｍｌに当たる。
【００５５】
図４には、本発明によるＤＮＡザイム濃度が２０ｍｇ／ｍｌ又は５０ｍｇ／ｍｌの組成物のＦＡＴの測定結果が示されている。この結果により、そうした組成物がＦＡＴに合格し（ＦＡＴ試験状態）、従来の吸入装置を用いて噴霧され得ること（結果の行の「合格」）が証明される。
【００５６】
したがって図３と図４の測定結果により、本発明によるＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満の組成物は、そうした組成物が噴霧され、それによりエアゾールとして用いられ得ることから、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の治療に理想的に適していることが証明される。その際、好ましくは２０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌまでのＤＮＡザイム濃度が使用される。
【００５７】
したがって、本発明は慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者治療用の組成物に関し、その際、該組成物がＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイム、及び／又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含むことが認識される。該組成物は該組成物におけるＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満であり、その際、該組成物におけるＤＮＡザイム濃度が主として２０ｍｇ／ｍｌと５０ｍｇ／ｍｌの間であることを特徴とする。
【００５８】
さらに本発明は、本発明による、ＧＡＴＡ‐３の発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイム、及び／又はＴ‐ｂｅｔの発現を特異的に下方制御する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含む組成物の製造方法に関する。この場合も、該組成物におけるＤＮＡザイム濃度が７５ｍｇ／ｍｌ未満であり、主として３．５ｍＰａ・ｓ未満であることが考慮されている。
【００５９】
該組成物の使用は、慢性炎症を伴う呼吸器疾患患者の治療に使用される薬剤を対象としている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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