(57)【要約】本出願は、がんなどのＡＸＬ／ＭＥＲ媒介性疾患の治療において有用である、ＡＸＬ／ＭＥＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物の医薬製剤及び剤形、ならびにそれらの調製方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）有機酸、及び
（ｃ）界面活性剤を含む、固体経口剤形の医薬製剤。
【請求項２】
前記有機酸が、クエン酸、アスコルビン酸、フマル酸、リンゴ酸、ソルビン酸、または酒石酸である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
前記有機酸が、クエン酸である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
約１重量％〜約５０重量％の有機酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５】
約５重量％〜約４０重量％の有機酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項６】
約５重量％〜約３０重量％の有機酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項７】
約１０重量％〜約２０重量％の有機酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項８】
約１０重量％または約２０重量％の有機酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項９】
約１重量％〜約２０重量％の化合物Ｉを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
約３重量％または約１２重量％の化合物Ｉを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
前記界面活性剤が、ポロキサマーである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
前記界面活性剤が、ポロキサマー４０７またはポロキサマー１８８である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
前記界面活性剤が、ポロキサマー４０７である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
約１重量％〜約２０重量％の界面活性剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
約５重量％〜約１５重量％の界面活性剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
約５重量％〜約１０重量％の界面活性剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
約１重量％〜約１０重量％の界面活性剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
希釈剤をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
前記希釈剤が、マンニトールである、請求項１９に記載の医薬製剤。
【請求項２１】
約４０重量％〜約９０重量％の希釈剤を含む、請求項１９または２０に記載の医薬製剤。
【請求項２２】
約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤を含む、請求項１９または２０に記載の医薬製剤。
【請求項２３】
約５０重量％〜約７５重量％の希釈剤を含む、請求項１９または２０に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
崩壊剤をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２５】
前記崩壊剤が、クロスポビドンである、請求項２４に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
約１重量％〜約１０重量％の崩壊剤を含む、請求項２４または２５に記載の医薬製剤。
【請求項２７】
約２重量％〜約５重量％の崩壊剤を含む、請求項２４または２５に記載の医薬製剤。
【請求項２８】
滑沢剤、流動促進剤、またはそれらの両方をさらに含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２９】
前記滑沢剤が、ステアリン酸である、請求項２８に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
約１重量％〜約５重量％の滑沢剤を含む、請求項２８または２９に記載の医薬製剤。
【請求項３１】
約２重量％の滑沢剤を含む、請求項２８または２９に記載の医薬製剤。
【請求項３２】
前記流動促進剤が、コロイド状シリカである、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
約０．１重量％〜約５重量％の流動促進剤を含む、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３４】
約０．５重量％または約１重量％の流動促進剤を含む、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
（ａ）Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、及び
（ｃ）ポロキサマーを含む、医薬製剤。
【請求項３６】
前記塩が、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエート（化合物Ｉマレエート）である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
約１重量％〜約２０重量％の化合物Ｉマレエートを含む、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエートを含む、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
約３重量％または約１２重量％の化合物Ｉマレエートを含む、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
（ａ）約２重量％〜約１５重量％のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマーを含む、医薬製剤。
【請求項４１】
（ａ）約２重量％〜約１５重量％のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％のマンニトール、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤。
【請求項４２】
（ａ）約２重量％〜約１５重量％のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約１重量％〜約１０重量％のポロキサマーを含む、医薬製剤。
【請求項４３】
（ａ）約２重量％〜約１５重量％のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１重量％〜約１０重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％のマンニトール、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤。
【請求項４４】
前記塩が、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエート（化合物Ｉマレエート）である、請求項４０〜４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４５】
化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物が、結晶形態である、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４６】
前記剤形が、錠剤またはカプセルである、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４７】
前記剤形が、カプセルである、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４８】
ＡＸＬ及びＭＥＲキナーゼを阻害するための方法であって、前記ＡＸＬ及びＭＥＲキナーゼを請求項１〜４７のいずれか一項に記載の医薬製剤と接触させることを含む、前記方法。
【請求項４９】
患者におけるがんを治療するための方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１〜４７のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項５０】
前記がんが、肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、膠芽腫、黒色腫、及び横紋肉腫から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記がんが、肺癌、前立腺癌、結腸癌、乳癌、黒色腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、胃癌、または横紋筋肉腫である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
経口投与に好適な医薬製剤を調製するための方法であって、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、水和物、もしくは溶媒和物と、有機酸と、界面活性剤とをブレンドして、経口投与に好適な前記医薬製剤を形成することを含む、前記方法。
【請求項５３】
前記医薬製剤を圧縮してカプセルを得ることをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
請求項５２に記載の方法によって調製される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、がんなどのＡＸＬ／ＭＥＲ媒介性疾患の治療において有用である、ＡＸＬ／ＭＥＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物の医薬製剤及び固体剤形、ならびにそれらの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、細胞外環境から細胞の細胞質及び核にシグナルを伝達して、生存、成長、増殖、分化、接着、及び遊走などの細胞事象を調節する、細胞表面タンパク質である。
【０００３】
ＴＡＭサブファミリーは、Ｔｙｒｏ３、ＡＸＬ、及びＭＥＲを含む、３つのＲＴＫからなる（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １４，７６９−７８５、Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。ＴＡＭキナーゼは、２つの免疫グロブリン様ドメイン及び２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインからなる細胞外リガンド結合ドメインを特徴とする。ＴＡＭキナーゼでは、成長停止特異的６（ＧＡＳ６）及びプロテインＳ（ＰＲＯＳ１）の２つのリガンドが特定されている。ＧＡＳ６は、３つ全てのＴＡＭのキナーゼに結合し、それらを活性化することができるが、ＰＲＯＳ１は、Ｍｅｒ及びＴｙｒｏ３のリガンドである（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １４，７６９−７８５）。
【０００４】
ＡＸＬ（ＵＦＯ、ＡＲＫ、ＪＴＫ１１、及びＴＹＲＯ７としても既知）は、もともと、慢性骨髄性白血病を有する患者のＤＮＡからの形質転換遺伝子として特定された（Ｏ’Ｂｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １１，５０１６−５０３１、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １４，７６９−７８５、Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。ＧＡＳ６は、ＡＸＬに結合し、その後のＡＸＬチロシンキナーゼの自己リン酸化及び活性化を誘導する。ＡＸＬは、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ、Ｒａｆ−ＭＡＰＫ、ＰＬＣ−ＰＫＣを含むいくつかの下流シグナル伝達経路を活性化する（Ｆｅｎｅｙｒｏｌｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １３，２１４１−２１４８、Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。
【０００５】
ＭＥＲ（ＭＥＲＴＫ、ＥＹＫ、ＲＹＫ、ＲＰ３８、ＮＹＫ、及びＴＹＲＯ１２としても既知）は、もともと、リンパ芽球発現ライブラリからのリン酸化タンパク質として特定された（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １０，２３４９−２３５９、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １４，７６９−７８５、Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。ＧＡＳ６及びＰＲＯＳ１の両方は、Ｍｅｒに結合し、Ｍｅｒキナーゼのリン酸化及び活性化を誘導することができる（Ｌｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＡＸＬのように、ＭＥＲ活性化もまた、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ及びＲａｆ−ＭＡＰＫを含む下流シグナル伝達経路を伝達する（Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。
【０００６】
ＴＹＲＯ３（ＤＴＫ、ＳＫＹ、ＲＳＥ、ＢＲＴ、ＴＩＦ、ＥＴＫ２としても既知）は、もともと、ＰＣＲに基づくクローニング研究により特定された（Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ６，６９１−７０，１９９１、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １４，７６９−７８５、Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。ＧＡＳ６及びＰＲＯＳ１の両方のリガンドは、ＴＹＲＯ３に結合し、それを活性化することができる。ＴＹＲＯ３活性化の下流シグナル伝達経路は、ＴＡＭ  ＲＴＫの間で最も研究されていないが、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ及びＲａｆ−ＭＡＰＫ経路の両方が関与していると思われる（Ｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １００，３５−８３）。ＡＸＬ、ＭＥＲ、及びＴＹＲＯ３は、がん細胞において過剰発現することがわかっている。
【０００７】
したがって、がんの治療におけるＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼの調節のための化合物及びその使用方法に対する必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、とりわけ、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、有機酸、及び界面活性剤を含む、医薬製剤を対象とする。
【０００９】
本発明は、本明細書に提供される医薬製剤を含む剤形をさらに対象とする。
【００１０】
本発明は、ＡＸＬ／ＭＥＲ活性に関連する疾患を治療する方法をさらに対象とし、この方法は、その治療を必要とする患者に、治療有効量の本明細書に提供される医薬製剤または剤形を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】化合物Ｉマレイン酸塩を表すＸＲＰＤパターンを示す。
【図２】化合物Ｉマレイン酸塩を表すＤＳＣサーモグラムを示す。
【図３】化合物Ｉマレイン酸塩を表すＴＧＡデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、改善された特性、例えば生物学的利用能を有する、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物１マレイン酸塩）、水和物、もしくは溶媒和物の医薬組成物（または製剤）及び剤形に関する。特に、本発明の製剤及び剤形は、化合物Ｉ（例えば、化合物Ｉマレエート）の生物学的利用能を高めるのを助ける。クエン酸などの有機酸、及びポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）などの界面活性剤を含めることにより、生物学的利用能を高めることができる。
【００１３】
製剤
本発明は、とりわけ、
（ａ）Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物１マレエート）、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）有機酸、及び
（ｃ）界面活性剤を含む、固体経口剤形の医薬製剤を提供する。
【００１４】
化合物Ｉは、ＡＸＬ／ＭＥＲ阻害剤であり、以下の式を有するＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドを指す。
【００１５】
【化１】
2021529765.tif 000002
化合物Ｉ
化合物Ｉマレイン酸塩は、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエートを指し、これは「化合物Ｉマレイン酸」または「化合物Ｉマレエート」とも称される。本開示はまた、化合物Ｉの他の塩も含む。そのような塩の例としては、例えば、硫酸塩（例えば、ヘミ硫酸塩）、リン酸塩、塩酸塩、サリチル酸塩、メタンスルホン酸塩（すなわち、メシル酸塩）、エタンスルホン酸塩（すなわち、エシル酸塩）、ベンゼンスルホン酸塩（すなわち、ベシル酸塩）、及びｐ−トルエンスルホン酸塩（例えば、トシル酸塩）が挙げられる。
【００１６】
化合物Ｉは、米国特許第９，９８１，９７５号の手順に従って調製することができる。例えば、例８３を参照されたい。化合物Ｉマレイン酸塩及び様々な結晶形態は、米国仮出願第６２／５６４，０７０号の手順に従って調製することができる。また、例えば、本明細書に提供される実施例も参照されたい。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物は、結晶形態である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物は、非結晶性である。他の実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物は、水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物は、溶媒和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物は、無水である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉマレエートは、結晶形態である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉマレエートは、非結晶性である。他の実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉマレエートは、水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉマレエートは、溶媒和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される化合物Ｉマレエートは、無水である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、
（ａ）化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）有機酸、及び
（ｃ）界面活性剤を含む、医薬製剤を提供する。
【００２０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される医薬製剤は、希釈剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される医薬製剤は、滑沢剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬製剤は、崩壊剤をさらに含むことができる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約１重量％〜約２０重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％〜約１２重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約５重量％〜約１０重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％〜約８重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約２重量％〜約６重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、または約１２重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約１２重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約１重量％〜約２０重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％〜約１２重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約５重量％〜約１０重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％〜約８重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約２重量％〜約６重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、または約１２重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約３重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約４重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約７重量％の化合物Ｉマレエートを含む。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、約１２重量％の化合物Ｉマレエートを含む。
【００２３】
本明細書に記載の化合物Ｉの重量パーセント及び量は、特に明記しない限り、化合物Ｉの遊離塩基に基づいて計算される。
【００２４】
本発明のある特定の製剤中に存在する界面活性剤は、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物の生物学的利用能を高めるのを助ける。「界面活性剤」という用語は、２種の液体間の界面張力、または液体と固体との間の界面張力を低下させる化合物を指す。いくつかの実施形態では、界面活性剤はまた、洗剤、湿潤剤、乳化剤、発泡剤、及び分散剤などの他の機能を有することができる。例示的な界面活性剤としては、ポロキサマーが挙げられるが、これに限定されない。ポロキサマーの例は、ポロキサマー４０７、ポロキサマー３３８、ポロキサマー２３７、及びポロキサマー１８８である。一実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１８８である。一実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー４０７である。ポロキサマーは、薬物放出を助けることができる熱可逆性特性及びゾル−ゲル転移特性を有する、ポリエチレン−プロピレングリコール共重合体（既知の商品名はＳｕｐｒｏｎｉｃ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、またはＴｅｔｒｏｎｉｃ）である。例えば、ポロキサマーは、室温未満でゾル状態を呈し、体温（３７．２℃）でゲル状態に変換し、これにより薬物放出特性を改変することができる（Ｄ．Ｒａｍｙａ  Ｄｅｖｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．＆Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．５（８），２０１３，１５９−１６５、Ｙ．Ｍａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ３５（２００４）１１２７−１１４２）。
【００２５】
いくつかの実施形態では、製剤に使用される界面活性剤は、ポロキサマー４０７である。とりわけ、溶解度研究により、界面活性剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）がポロキサマー４０７と比較して化合物Ｉマレエートの溶解度を増加させることが示されたため、ポロキサマー４０７が化合物Ｉマレエートの生物学的利用能を高めることは予想外であるが、ＳＬＳを含む製剤の生物学的利用能は、ポロキサマーを含む製剤の生物学的利用能よりも低い。本明細書に提供される実施例を参照されたい。
【００２６】
製剤中の界面活性剤は、約１重量％〜約２０重量％であり得る。製剤中の界面活性剤は、約５重量％〜約１５重量％であり得る。製剤中の界面活性剤は、約１重量％〜約１０重量％であり得る。製剤中の界面活性剤は、約５重量％〜約１０重量％であり得る。例えば、製剤中の界面活性剤は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、または約２０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、製剤中の界面活性剤は、約５重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中の界面活性剤は、約１０重量％である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマー４０７である。製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約１重量％〜約２０重量％であり得る。製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約１重量％〜約１０重量％であり得る。製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約５重量％〜約１５重量％であり得る。製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約５重量％〜約１０重量％であり得る。例えば、製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、または約２０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約５重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）は、約１０重量％である。
【００２８】
本発明の製剤は、化合物Ｉの生物学的利用能を高めることができる有機酸を含む。「有機酸」という用語は、酸性特性を有する有機化合物を指す。いくつかの実施形態では、有機酸は、各々が１つ以上の酸性基（例えば、１、２、もしくは３つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されたＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、または５〜６員のヘテロシクロアルキルであり、５〜６員のヘテロシクロアルキルは、任意に１つ以上の酸性基（例えば、１、２、３、もしくは４つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されたＣ１〜６アルキル基で任意に置換されている。有機酸は、１つ以上の酸性基（例えば、１、２、３、もしくは４つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されたＣ１〜６アルキルまたはＣ２〜６アルケニルであり得る。いくつかの実施形態では、有機酸は、１、２、もしくは３つのカルボン酸基で置換され、かつ０、１、もしくは２つのアルコール基で置換されたＣ１〜６アルキルまたはＣ２〜６アルケニルである。いくつかの実施形態では、有機酸は、１つ以上の酸性基（例えば、１、２、もしくは３つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換され、かつ任意にＣ１〜６アルキルで置換された５〜６員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃ１〜６アルキルは、任意に１つ以上の酸性基（例えば、１、２、もしくは３つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されている。例示的な有機酸としては、これらに限定されないが、クエン酸、アスコルビン酸、フマル酸、リンゴ酸、ソルビン酸、酒石酸、及びそれらの水和物または溶媒和物が挙げられる。製剤中の有機酸は、約１重量％〜約５０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約５重量％〜約４０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約５重量％〜約３０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約５重量％〜約２０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約１０重量％〜約２０重量％であり得る。例えば、製剤中の有機酸は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、形成物中の有機酸は、約１０重量％である。いくつかの実施形態では、形成物中の有機酸は、約２０重量％である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、有機酸は、クエン酸である。いくつかの実施形態では、クエン酸は、クエン酸一水和物である。製剤中のクエン酸は、約１重量％〜約５０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約５重量％〜約４０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約５重量％〜約３０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約５重量％〜約２０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約１０重量％〜約２０重量％であり得る。例えば、製剤中のクエン酸は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、形成物中のクエン酸は、約１０重量％である。いくつかの実施形態では、形成物中のクエン酸は、約２０重量％である。
【００３０】
本明細書に提供される医薬製剤は、希釈剤をさらに含むことができる。本明細書で使用される場合、「希釈剤」という用語は、組成物を希釈することができる化合物を指す。希釈剤はまた、充填剤、希釈剤、またはシンナーとも称され得る。例示的な希釈剤としては、これらに限定されないが、ラクトース、ラクトース一水和物、噴霧乾燥一水和物ラクトース、ラクトース−３１６  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏ（登録商標）、マンニトール、微結晶性セルロース、酸性化セルロース、デンプン１５００、プロソルブＭＣＣ、及びコロイド状シリカが挙げられる。ある特定の事例では、希釈剤は、マンニトールである。製剤中の希釈剤は、約４０重量％〜約９０重量％であり得る。製剤中の希釈剤は、約５０重量％〜約８０重量％であり得る。製剤中の希釈剤は、約５０重量％〜約７５重量％であり得る。製剤中の希釈剤は、約７０重量％〜約８０重量％であり得る。製剤中の希釈剤は、約７２重量％〜約７７重量％であり得る。例えば、製剤中の希釈剤は、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、または約９０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、製剤中の希釈剤は、約５０重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中の希釈剤は、約７５重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中の希釈剤は、約７３重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中の希釈剤は、約７６重量％である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、崩壊剤を含む。本明細書で使用される場合、「崩壊剤」という用語は、例えば、水分との接触時に、製剤（例えば、カプセルまたは錠剤）を崩壊させ、その原薬を放出させることができる化合物を指す。崩壊剤は、例えばカプセルが、経口投与後に崩壊するのを容易にすることができる。崩壊剤は、約１重量％〜約１０重量％の量で存在することができる。製剤中の崩壊剤は、約２重量％〜約５重量％であり得る。製剤中の崩壊剤は、約２重量％〜約３重量％であり得る。製剤中の崩壊剤は、約２．５重量％であり得る。崩壊剤の非限定的な例としては、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、デンプン、セルロース、及び低置換ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。いくつかの実施形態では、崩壊剤は、クロスポビドンである。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、滑沢剤を含む。本明細書で使用される場合、「滑沢剤」という用語は、化合物、例えば、製剤中の物質間の摩擦を低減することができる有機化合物を指す。滑沢剤は、約１重量％〜約５重量％の量で製剤中に存在することができる。いくつかの実施形態では、滑沢剤は、約２重量％の量で存在する。滑沢剤の非限定的な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸（ステアリン）、硬化油、ポリエチレングリコール、フマル酸ステアリルナトリウム、及びベヘン酸グリセリルが挙げられる。いくつかの実施形態では、滑沢剤は、フマル酸ステアリルナトリウムまたはステアリン酸である。いくつかの実施形態では、滑沢剤は、ステアリン酸である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される製剤は、流動促進剤を含む。本明細書で使用される場合、「流動促進剤」という用語は、混合物、例えば、カプセル内の粉末混合物の流動性を改善することができる化合物を指す。流動促進剤は、約０．１重量％〜約５重量％の量で製剤中に存在することができる。いくつかの実施形態では、製剤中の流動促進剤は、約０．５重量％〜約１重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中の流動促進剤は、約０．１重量％〜約１重量％である。いくつかの実施形態では、製剤中の流動促進剤は、約０．５重量％である。流動促進剤の非限定的な例としては、タルク、コロイド状シリカ（コロイド状二酸化ケイ素）、及びトウモロコシデンプンが挙げられる。いくつかの実施形態では、流動促進剤は、コロイド状シリカである。
【００３４】
いくつかの実施形態では、例えば、本発明の製剤及び剤形が持続放出剤形を意図する場合、持続放出マトリックス形成剤を含むことができる。持続放出マトリックス形成剤の例としては、高粘度ポリマーであるヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、ヒプロメロース）などのセルロース系エーテルが挙げられる。本発明の持続放出剤形は、例えば、約１０〜約３０重量％、約１５〜約２５重量％、または約１８〜約２４重量％の持続放出マトリックス形成剤を含むことができる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、及び
（ｃ）ポロキサマーを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマーを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）ポロキサマー約１重量％〜約１０重量％を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、及び
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、及び
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４０】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）、及び
（ｅ）滑沢剤（例えば、ステアリン酸）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４１】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）、及び
（ｅ）約１重量％〜約５重量％の滑沢剤（例えば、ステアリン酸）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４２】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）、
（ｅ）滑沢剤（例えば、ステアリン酸）、及び
（ｆ）崩壊剤（例えば、クロスポビドン）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％の滑沢剤（例えば、ステアリン酸）、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％の崩壊剤（例えば、クロスポビドン）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４４】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１重量％〜約１０重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％の滑沢剤（例えば、ステアリン酸）、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％の崩壊剤（例えば、クロスポビドン）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４５】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％のマンニトール、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４６】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１重量％〜約１０重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％のマンニトール、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約１２重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４８】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約１２重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％のマンニトール、
（ｅ）約２重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約３重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５０】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約３重量％の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約６０重量％のマンニトール、
（ｅ）約２重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、及び
（ｃ）ポロキサマーを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマーを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５３】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、及び
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５４】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、及び
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５５】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）、及び
（ｅ）滑沢剤（例えば、ステアリン酸）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５６】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）、及び
（ｅ）約１重量％〜約５重量％の滑沢剤（例えば、ステアリン酸）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５７】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）、
（ｅ）滑沢剤（例えば、ステアリン酸）、及び
（ｆ）崩壊剤（例えば、クロスポビドン）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５８】
いくつかの実施形態では、
（ａ）化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）クエン酸、
（ｃ）ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）希釈剤（例えば、マンニトール）、
（ｅ）滑沢剤（例えば、ステアリン酸）、
（ｆ）崩壊剤（例えば、クロスポビドン）、及び
（ｇ）流動促進剤（例えば、コロイド状シリカ）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００５９】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％の希釈剤（例えば、マンニトール）、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％の滑沢剤（例えば、ステアリン酸）、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％の崩壊剤（例えば、クロスポビドン）を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６０】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約２重量％〜約１５重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約５重量％〜約３０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％〜約１５重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％〜約８０重量％のマンニトール、
（ｅ）約１重量％〜約５重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約２重量％〜約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６１】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約１２重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６２】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約１２重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約５０重量％のマンニトール、
（ｅ）約２重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６３】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約３重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約４重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約１０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約５重量％のポロキサマー４０７を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６５】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約７重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約１０重量％のクエン酸、及び
（ｃ）約５重量％のポロキサマー４０７を含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６６】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約３重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約２０重量％のクエン酸、
（ｃ）約１０重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約６０重量％のマンニトール、
（ｅ）約２重量％のステアリン酸、及び
（ｆ）約５重量％のクロスポビドンを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６７】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約４重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約１０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約７６重量％のマンニトール、
（ｅ）約２重量％のステアリン酸、
（ｆ）約２．５重量％のクロスポビドン、及び
（ｇ）約０．５重量％のコロイド状シリカを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６８】
いくつかの実施形態では、
（ａ）約７重量％の化合物Ｉマレエート、またはその溶媒和物、もしくは水和物、
（ｂ）約１０重量％のクエン酸、
（ｃ）約５重量％のポロキサマー４０７、
（ｄ）約７３重量％のマンニトール、
（ｅ）約２重量％のステアリン酸、
（ｆ）約２．５重量％のクロスポビドン、及び
（ｇ）約０．５重量％のコロイド状シリカを含む、医薬製剤が、本明細書に提供される。
【００６９】
経口投与に好適である、本明細書に提供される固体剤形の医薬製剤は、化合物Ｉマレエートを有機酸及び界面活性剤とブレンドすることによって調製することができる。形成された医薬製剤は、カプセルを形成するためにさらに調製することができる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、結晶形態である。化合物Ｉマレエートの結晶形態は、米国仮出願第６２／５６４，０７０号に開示されており、その全体が参照により組み込まれる。また、例えば、本明細書に提供される実施例も参照されたい。
【００７１】
いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される、２シータに関する少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される、２シータに関する少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される、２シータに関する少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される、２シータに関する少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、２シータに関する以下のＸＲＰＤピーク：約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°を含む。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、２シータに関する以下のＸＲＰＤピーク：約４．３°、約８．４°、及び約１３．２°を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、図１に示されるようなＸＲＰＤプロファイルを実質的に有する。
【００７３】
同様に、ＤＳＣ、ＴＧＡ、または他の熱実験に関する温度読み取り値は、機器、特定の設定、試料調製などに応じて約±３℃変動し得る。したがって、図面のいずれかに示されるようなＤＳＣサーモグラムを「実質的に」有する本明細書に報告される結晶形態または「約」という用語は、そのような変動に対応すると理解される。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、約２１１℃に吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、図２に示されるようなＤＳＣサーモグラムを実質的に有する。いくつかの実施形態では、化合物Ｉのマレイン酸塩は、図３に示されるようなＴＧＡサーモグラムを実質的に有する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、実質的に単離される。「実質的に単離される」とは、塩または化合物が、それが形成または検出された環境から少なくとも部分的にまたは実質的に分離されることを意味する。部分的な分離は、例えば、本明細書に記載の塩が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離は、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７％重量、もしくは少なくとも約９９重量％の本明細書に記載の塩を含有する組成物、またはその塩を含むことができる。化合物及びそれらの塩を単離するための方法は、当該技術分野において慣例である。
【００７５】
本出願はまた、本明細書に提供される医薬製剤を含む固体剤形に関する。いくつかの実施形態では、固体剤形は、経口投与に好適な形態である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される剤形は、錠剤、カプセル、ピル、粉末、小袋、ならびにソフト及びハードゼラチンカプセルの形態である。他の実施形態では、本明細書に提供される剤形は、カプセルの形態である。
【００７６】
製剤を調製する際は、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくはその水和物を粉砕して、他の成分と組み合わせる前に適切な粒径を提供することができる。化合物Ｉマレエートは、２００メッシュ未満の粒径に粉砕することができる。粒径は、粉砕することによって、例えば、約４０メッシュに調整されて、製剤中に実質的に均一な分布をもたらすことができる。
【００７７】
化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくはその水和物は、既知の粉砕手順を使用して粉砕して、錠剤形成及び他の製剤タイプに適切な粒径を得ることができる。本発明の化合物の微細に分割された（ナノ粒子）調製物は、当該技術分野で既知のプロセスによって調製することができ、例えば、国際出願第ＷＯ２００２／０００１９６号を参照されたい。
【００７８】
本発明の製剤は、追加の賦形剤を含むことができる。好適な追加の賦形剤の例としては、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが挙げられる。他の賦形剤としては、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油などの滑沢剤；湿潤剤；乳化剤及び懸濁剤；メチル及びプロピルヒドロキシ安息香酸塩などの保存剤；甘味剤；及び香味剤が挙げられる。本発明の組成物は、当該技術分野において既知の手順を用いることによって患者に投与した後に、活性成分の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化することができる。
【００７９】
本発明は、本発明の上記の製剤のいずれかを含む剤形をさらに提供する。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、好適な薬学的賦形剤と関連して、所望の治療効果を生み出すように計算された、所定の量の活性材料を含有する。
【００８０】
カプセルなどの固体剤形を調製するために、化合物Ｉマレエートを賦形剤と混合して、本発明の化合物の均質な混合物を含有する固体予備製剤組成物を形成することができる。これらの予備製剤組成物が均質であると言及される場合、活性成分は、典型的には、組成物全体に均一に分散され、それにより組成物は、錠剤、ピル、及びカプセルなどの等しく有効な単位剤形に容易に細分化することができる。次いで、この固体予備製剤は、例えば、遊離塩基ベースで約０．１〜約１０００ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含有する、上記のタイプの単位剤形（例えば、カプセル）に細分化される。いくつかの実施形態では、単位剤形（例えば、カプセル）は、遊離塩基ベースで約１〜約５００ｍｇ、約１〜約２００、約１〜約１００、約１〜約５０、もしくは約１〜約３０ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形（例えば、カプセル）は、遊離塩基ベースで約５〜約５０ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含み、例えば、遊離塩基ベースで約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、もしくは約５０ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形（例えば、カプセル）は、遊離塩基ベースで約５ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形（例えば、カプセル）は、遊離塩基ベースで約１５ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形（例えば、カプセル）は、遊離塩基ベースで約２０ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形（例えば、カプセル）は、遊離塩基ベースで約２５ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む。
【００８１】
化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物、単位剤形（例えば、カプセル）は、対象に１日１回、１日２回、１日３回、１日４回などで投与することができる。当業者であれば、５ｍｇのカプセル２つを一緒に投与して、１０ｍｇの単位投与量を得ることができることを知っているであろう。化合物Ｉマレエートは、広範な投与量範囲にわたって有効であり得、一般に、薬学的有効量で投与される。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、通常、治療される状態、選択した投与経路、実際に投与される化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の症状の重症度などを含む関連状況に従って、医師によって決定されることが理解されよう。
【００８２】
いくつかの実施形態では、約５ｍｇ〜約２００ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物が、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇの化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物が、対象に１日１回投与される。
【００８３】
いくつかの実施形態では、約５ｍｇ〜約２００ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約１０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される（例えば、２４時間当たり、５ｍｇのカプセル２つ、または１０ｍｇのカプセル１つ）。いくつかの実施形態では、約１５ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約２０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約２５ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約４０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約５０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約７５ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約８０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約１００ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約１５０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約１６０ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。いくつかの実施形態では、約２００ｍｇの化合物Ｉマレエートが、対象に１日１回投与される。
【００８４】
定義
「置換された」という用語は、原子または原子群が、形式的には、別の基に結合した「置換基」として水素を置き換えることを意味する。「置換された」という用語は、特に明記しない限り、そのような置換が許可されている任意のレベルの置換、例えば、モノ、ジ、トリ、テトラ、またはペンタ置換を指す。置換基は独立して選択され、置換は化学的にアクセス可能な任意の位置にあり得る。所与の原子での置換は、原子価によって制限されることが理解されるべきである。所与の原子での置換は、化学的に安定な分子をもたらすことが理解されるべきである。「任意に置換された」という語句は、置換されていないかまたは置換されていることを意味する。「置換された」という用語は、水素原子が除去され、置換基によって置き換えられることを意味する。単一の二価の置換基、例えば、オキソは、２個の水素原子を置き換えることができる。
【００８５】
「Ｃｎ〜ｍ」という用語は、終点を含む範囲を示し、ｎ及びｍは整数であり、炭素の数を示す。例としては、Ｃ１〜４、Ｃ１〜６などが挙げられる。
【００８６】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アルキル」という用語は、直鎖または分岐であり得る飽和炭化水素基を指す。「Ｃｎ〜ｍアルキル」という用語は、ｎ〜ｍ個の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基は、形式的には、残りの化合物へのアルキル基の結合点によって置き換えられた１つのＣ−Ｈ結合を有するアルカンに対応する。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素原子、１〜４個の炭素原子、１〜３個の炭素原子、または１〜２個の炭素原子を含有する。アルキル部分の例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルなどの化学基；２−メチル−１−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、ｎ−ヘキシル、１，２，２−トリメチルプロピルなどの高級相同体が挙げられる。
【００８７】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重炭素−炭素結合を有するアルキル基に対応する直鎖または分岐炭化水素基を指す。アルケニル基は、形式的には、残りの化合物へのアルケニル基の結合点によって置き換えられた１つのＣ−Ｈ結合を有するアルケンに対応する。「Ｃｎ〜ｍアルケニル」という用語は、ｎ〜ｍ個の炭素を有するアルケニル基を指す。いくつかの実施形態では、アルケニル部分は、２〜６、２〜４、または２〜３個の炭素原子を含有する。アルケニル基の例としては、これらに限定されないが、エテニル、ｎ−プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、ｓｅｃ−ブテニルなどが挙げられる。
【００８８】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族環または環系を指し、これは環構造の一部として１つ以上のアルケニレン基を任意に含有し得、独立して窒素、硫黄、酸素、及びリンから選択される少なくとも１つのヘテロ原子環員を有し、４〜１０環員、４〜７環員、または４〜６環員を有する。「ヘテロシクロアルキル」という用語には、単環式４、５、６、及び７員ヘテロシクロアルキル基が含まれる。ヘテロシクロアルキル基は、単環式または二環式（例えば、２つの縮合環または架橋環を有する）またはスピロ環状環系を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、独立して窒素、硫黄、及び酸素から選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する、単環式基である。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子及びヘテロ原子は、任意に酸化されてオキソもしくはスルフィド基または他の酸化された連結（例えば、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）またはＳ（Ｏ）２、Ｎ−オキシドなど）を形成し得るか、あるいは窒素原子が四級化され得る。ヘテロシクロアルキル基は、環形成炭素原子または環形成ヘテロ原子を介して結合することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０〜３個の二重結合を含有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０〜２個の二重結合を含有する。また、ヘテロシクロアルキルの定義には、例えば、ピペリジン、モルホリン、アゼピンなどのベンゾまたはチエニル誘導体など、ヘテロシクロアルキル環に縮合した（すなわち、共通の結合を有する）１つ以上の芳香環を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含有するヘテロシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合することができる。ヘテロシクロアルキル基の例としては、ジヒドロキシフラノンが挙げられる。
【００８９】
本明細書で使用される場合、マレイン酸は、シス−ブテンジオン酸としても既知である。
【００９０】
本明細書で使用される場合、及び別途特定されない限り、「約」という用語は、特定の塩または固体形態を説明するために提供される数値または値の範囲、例えば、特定の温度もしくは温度範囲（例えば、溶融、脱水、もしくはガラス遷移を説明するものなど）、質量変化（例えば、温度もしくは湿度の関数としての質量変化など）、溶媒含有量もしくは水含有量（例えば、質量もしくはパーセンテージに関して）、またはピーク位置（例えば、１３Ｃ  ＮＭＲ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、及びＸＲＰＤなどによる分析において）などに関して使用される場合、その値または値の範囲が、当業者に相応であるとみなされる程度まで逸脱し得るが、依然として特定の固体形態を説明することを示す。具体的には、「約」という用語は、この文脈において使用される場合、数値または値の範囲が、列挙される値または値の範囲の５％、４％、３％、２％、または１％変動し得るが、依然として特定の固体形態を説明することを示す。いくつかの実施形態では、「約」という用語は、数値または値の範囲が５％変動し得ることを示す。「約」という用語は、度２シータ値に関して使用される場合、＋／−０．３度２シータまたは＋／−０．２度２シータを指す。本明細書で使用される場合、「ブレンド」、「ブレンドする」、及び「ブレンドされた」という用語は、異なる物質を組み合わせて、または混合して、混合物を得ることを指す。得られるブレンドされた混合物は、均質であり得る。
【００９１】
「水和物」という用語は、本明細書で使用される場合、水を含む化合物Ｉマレイン酸塩の固体形態を指すことを意味する。水和物中の水は、固体中の塩の量に関して化学量論的量で存在し得るか、またはチャネル水和物に関して見出され得るように可変量で存在し得る。いくつかの実施形態では、化合物Ｉマレイン酸塩は、一水和物である（例えば、塩対水のモル比は、約１：１である）。いくつかの実施形態では、化合物Ｉマレイン酸塩は、二水和物である（例えば、塩対水のモル比は、約１：２である）。いくつかの実施形態では、化合物Ｉマレイン酸塩は、半水和物である（例えば、塩対水のモル比は、約２：１である）。いくつかの実施形態では、化合物Ｉマレイン酸塩は、塩の分子１つ当たり、１つ以上の水の分子を有する。
【００９２】
化合物Ｉ、または薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）はまた、溶媒和形態であり得る。「溶媒和物」という用語は、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩（例えば、マレイン酸塩）を有する溶媒分子を含む固体形態を意味する。溶媒は、有機化合物、無機化合物、またはそれらの両方の混合物であり得る。溶媒が水である溶媒和物は、一般に、「水和物」または「水和形態」と称される。「水和物」という用語は、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩（例えば、マレイン酸塩）を有する水分子を含む固体形態を意味する。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「無水」という用語は、水または溶媒を含まない化合物（例えば、化合物Ｉ、化合物Ｉマレエート）を指す。例えば、化合物Ｉまたはそのマレイン酸塩は、水または溶媒を含まない固体形態であり得、例えば、１重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１重量％未満の水または溶媒が存在する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「ピーク」または「特徴的なピーク」という用語は、最大ピーク高さ／強度の少なくとも約３％の相対高さ／強度を有する反射を指す。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「結晶性」または「結晶形態」は、化学化合物の結晶性固体形態を指し、単一成分結晶形態、または、例えば、溶媒和物、水和物、包接体、及び共結晶を含む、多成分結晶形態が含まれるが、これらに限定されない。
【００９６】
「結晶形態」という用語は、結晶性物質のある特定の格子構成を指すことを意味する。同一物質の異なる結晶形態は、典型的には、異なる結晶格子（例えば、単位胞）を有し、典型的には、それらの異なる結晶格子に起因する異なる物理特性を有し、いくつかの事例では、異なる水含有量または溶媒含有量を有する。異なる結晶格子は、固体状態特性評価方法によって、例えば、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって特定することができる。他の特性評価方法、例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）などは、結晶形態の特定をさらに助け、同様に、安定性及び溶媒／水含有量の決定も助ける。
【００９７】
特定の物質、例えば、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物の異なる結晶形態は、その物質の無水形態及びその物質の溶媒和／水和形態の両方を含むことができ、無水形態及び溶媒和／水和形態の各々は、異なるＸＲＰＤパターンまたは他の固体状態特性評価方法によって互いに区別され、それにより異なる結晶格子を表す。いくつかの事例では、単結晶形態（例えば、固有のＸＲＰＤパターンによって特定される）は、可変的な水含有量または溶媒含有量を有することができ、格子は、水及び／または溶媒に関する組成変動にかかわらず、実質的に変化しないままである（ＸＲＰＤパターンも同様）。
【００９８】
反射（ピーク）のＸＲＰＤパターンは、典型的には、特定の結晶形態のフィンガープリントとみなされる。ＸＲＰＤピークの相対強度が、とりわけ、試料の調製技法、結晶サイズの分布、使用されるフィルタ、試料の取り付け手順、及び用いられる特定の機器に応じて広く変動し得ることは周知である。いくつかの事例では、機械の種類または設定（例えば、Ｎｉフィルタが使用されるか否か）に応じて、新たなピークが観測され得るか、または既存のピークが消失し得る。本明細書で使用される場合、「ピーク」という用語は、最大ピーク高さ／強度の少なくとも約３％または少なくとも約４％の相対高さ／強度を有する反射を指す。さらに、機器の変動及び他の要因は、２シータ値に影響を及ぼし得る。したがって、本明細書に報告されるものなどのピーク割り当ては、プラスもしくはマイナス約０．２°（２シータ）または約０．３°（２シータ）変動し得、「実質的に」という用語は、本明細書でＸＲＰＤの文脈において使用される場合、上述の変動を包含することを意味する。
【００９９】
同様に、ＤＳＣ、ＴＧＡ、または他の熱実験に関する温度読み取り値は、機器、特定の設定、試料調製などに応じて約±３℃変動し得る。
【０１００】
物質の結晶形態は、当該技術分野において既知の多くの方法によって得ることができる。そのような方法としては、これらに限定されないが、溶融再結晶化、溶融冷却、溶媒再結晶化、例えばナノポアまたは毛管内などの閉鎖空間内での再結晶化、例えばポリマー上などの表面またはテンプレート上での再結晶化、例えば共結晶カウンター分子などの添加剤の存在下での再結晶化、脱溶媒和、脱水、急速蒸発、急速冷却、徐冷、蒸気拡散、昇華、湿気曝露、研削、及び溶媒滴研削が挙げられる。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「非晶質」または「非晶質形態」という用語は、問題の物質、構成成分、もしくは生成物が、例えば、ＸＲＰＤによって決定される場合、実質的に結晶性でないこと、または例えば問題の物質、構成成分、もしくは生成物が、顕微鏡で見た場合に複屈折でないことを意味することが意図される。ある特定の実施形態では、物質の非晶質形態を含む試料は、他の非晶質形態及び／または結晶形態を実質的に含まない場合がある。例えば、非晶質物質は、反射が不在であるＸＲＰＤスペクトルによって特定することができる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、バッチ、試料、または調製物と称されるバッチ内で調製される。バッチ、試料、または調製物は、水和形態及び非水和形態、ならびにそれらの混合物を含めた、本明細書に記載の結晶形態または非結晶形態のいずれかである、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含むことができる。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「結晶純度」という用語は、同一化合物の非晶質形態などの他の形態、もしくはその化合物の少なくとも１つの他の結晶形態、またはそれらの混合物を含有し得る、調製物または試料中の結晶形態のパーセンテージを意味する。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「実質的に結晶性」という用語は、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物の試料または調製物の重量の大半が結晶性であり、試料の残りが、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物の非結晶形態（例えば、非晶質形態）であることを意味する。いくつかの実施形態では、実質的に結晶性の試料は、少なくとも約９５％の結晶化度（例えば、約５％の非結晶形態）、好ましくは少なくとも約９６％の結晶化度（例えば、約４％の非結晶形態）、より好ましくは少なくとも約９７％の結晶化度（例えば、約３％の非結晶形態）、さらにより好ましくは少なくとも約９８％の結晶化度（例えば、約２％の非結晶形態）、なおより好ましくは少なくとも約９９％の結晶化度（例えば、約１％の非結晶形態）、及び最も好ましくは約１００％の結晶化度（例えば、約０％非結晶形態）を有する。いくつかの実施形態では、「完全に結晶性」という用語は、少なくとも約９９％または約１００％の結晶化度を意味する。
【０１０５】
本明細書で用いられる「薬学的に許容される」という語句は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症のないヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適な、安全な医学的判断の範囲内にあり、妥当な受益度／危険度の比に見合う、それらの化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指す。
【０１０６】
様々な薬学的に許容される賦形剤を、本明細書に記載の製剤に使用することができる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」は、液体または固体の充填剤、希釈剤、溶媒、もしくはカプセル化材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを指す。賦形剤は、一般的に安全で無毒性であり、生物学的に望ましくないものでも他の点で望ましくないものでもなく、獣医学的用途ならびにヒトの医薬品用途に許容される賦形剤を含む。一実施形態では、各構成成分は、本明細書に定義されるように「薬学的に許容される」。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  ｅｄ．；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，２００５、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ  ｅｄ．；Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ  ｅｄ．；Ａｓｈ  ａｎｄ  Ａｓｈ  Ｅｄｓ．；Ｇｏｗｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｇｉｂｓｏｎ  Ｅｄ．；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，２００９を参照されたい。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「接触させる」という用語は、インビトロ系またはインビボ系において、示された部分を接合することを指す。例えば、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼを本発明の化合物と「接触させる」とは、本発明の化合物を、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼを有するヒトなどの個体または患者に投与することを含み、同様に、例えば、本発明の化合物を、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼを含有する細胞性調製物または精製調製物を含有する試料中に導入することも含む。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、互換的に使用される「個体」、「患者」、または「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくは、マウス、ラット、サル、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、及び最も好ましくはヒトを含む、任意の動物を指す。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という語句は、研究者、獣医師、医師、または他の臨床医によって組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて求められている生物学的または薬物的応答を引き出す、活性化合物または医薬品の量を指す。治療有効量は、化合物、疾患、障害、または状態、及びその重症度、ならびに治療される哺乳動物の年齢、体重などに応じて変動するであろう。一般に、対象における良好な結果は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．１〜約１０ｇの１日用量で得られることが示されている。いくつかの実施形態では、１日用量は、体重１ｋｇ当たり約０．１０〜１０．０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１．０〜３．０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約３〜１０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約３〜１５０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約３〜１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１０〜１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１０〜１５０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約１５０〜１０００ｍｇの範囲である。投与量は、例えば、１日４回までの分割用量で、または持続放出形態で、好都合に投与することができる。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」という用語は、疾患を阻害すること、例えば、疾患、状態、または障害の病理または総体症状を経験しているか、または呈している個体において、疾患、状態、または障害を阻害すること（すなわち、病理及び／または総体症状のさらなる発達を停止させること）、あるいは疾患を改善すること、例えば、疾患、状態、または障害の病理または総体症状を経験しているか、または呈している個体において、疾患、状態、または障害を改善すること（すなわち、病理及び／または総体症状を反転させること）、例えば、疾患の重症度を低減させることを指す。
【０１１１】
使用方法
本開示の化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼの活性を調節または阻害することができる。例えば、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、阻害量の化合物Ｉマレエートを細胞、個体、または患者に投与することによって、キナーゼの阻害を必要とする細胞、または個体もしくは患者においてＡＸＬ／ＭＥＲ酵素の活性を阻害するために使用することができる。したがって、化合物Ｉマレエートを含む医薬製剤を使用して、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼの活性を阻害することができる。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、１つ以上の他のキナーゼよりもＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼに対して選択的である。いくつかの実施形態では、選択性は、２倍以上、３倍以上、５倍以上、１０倍以上、２５倍以上、５０倍以上、または１００倍以上である。
【０１１３】
化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、１つ以上のＡＸＬ及びＭＥＲを阻害することができる。いくつかの実施形態では、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、１つのＴＡＭキナーゼに対して別のものよりも選択的である。「選択的」とは、化合物が、参照酵素、例えば別のＴＡＭキナーゼと比較して、それぞれ、より大きい親和性または効力でＴＡＭキナーゼに結合するか、またはそれを阻害することを意味する。例えば、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、ＭＥＲ及びＴＹＲＯ３よりもＡＸＬに対して選択的であり得るか、ＡＸＬ及びＴＹＲＯ３よりもＭＥＲに対して選択的であり得るか、またはＴＹＲＯ３よりもＡＸＬ及びＭＥＲに対して選択的である。いくつかの実施形態では、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、ＴＹＲＯ３及び他のキナーゼよりもＡＸＬ及びＭＥＲに対して選択的である。いくつかの実施形態では、ＡＸＬ及びＭＥＲキナーゼを阻害するための方法が本明細書に提供され、この方法は、ＡＸＬ及びＭＥＲキナーゼを、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物と接触させることを含む。
【０１１４】
ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼ阻害剤として、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼの異常な発現または活性に関連する様々な疾患の治療において有用である。化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、特に、血管新生を阻害することによって、腫瘍の成長を防止するか、またはアポトーシスを誘導する手段を提供するのに有用であろう。したがって、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物は、がんなどの増殖性障害の治療または予防に有用であると証明することが期待される。特に、受容体チロシンキナーゼの活性化変異体または受容体チロシンキナーゼのアップレギュレーションを伴う腫瘍は、阻害剤に対して特に感受性であり得る。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼによって媒介される疾患または障害の治療を必要とする患者においてそれを治療するための方法を提供し、この方法は、該患者に、化合物Ｉ、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物Ｉマレエート）、溶媒和物、もしくは水和物を含む医薬製剤を投与するステップを含む。
【０１１６】
例えば、本開示の医薬製剤は、がんの治療に有用である。がんの例としては、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、小腸の癌、結腸癌、直腸癌、肛門の癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌（例えば、喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭、唇、及び口の癌）、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌、胆管細胞癌）、肺癌（例えば、腺癌、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌、小細胞性及び非小細胞性癌、気管支癌、気管支腺腫、胸膜肺芽細胞腫）、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌（例えば、外分泌性膵臓癌）、胃癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌、カポジ肉腫、メルケル細胞皮膚癌）、ならびに脳腫瘍（例えば、星状細胞腫、髄芽細胞腫、上衣腫、神経外分泌腫瘍、松果体腫瘍）が挙げられる。
【０１１７】
本開示の化合物で治療可能な他のがんとしては、骨癌、眼内癌、婦人科系癌、内分泌系の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、下垂体癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、及びアスベストによって誘発されるものを含む環境誘発癌が挙げられる。
【０１１８】
さらなるがんの例としては、造血器悪性腫瘍、例えば、白血病またはリンパ腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、骨髄増殖性腫瘍（例えば、真性多血症、本態性血小板血症、及び原発性骨髄線維症）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、慢性骨髄性リンパ腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びバーキットリンパ腫が挙げられる。
【０１１９】
本開示の医薬製剤で治療可能な他のがんとしては、眼の腫瘍、膠芽腫、黒色腫、横紋肉腫、リンパ肉腫、及び骨肉腫が挙げられる。
【０１２０】
本開示の医薬製剤はまた、腫瘍転移の阻害においても有用であり得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本開示の医薬製剤を使用して治療可能である疾患及び適応症としては、これらに限定されないが、血液癌、肉腫、肺癌、胃腸癌、泌尿生殖路癌、肝臓癌、骨癌、神経系癌、婦人科系癌、及び皮膚癌が挙げられる。
【０１２２】
例示的な血液癌としては、リンパ腫及び白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、非ホジキンリンパ腫（再発性または難治性ＮＨＬを含む）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性疾患（例えば、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板増加症（ＥＴ））、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、多発性骨髄腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、慢性骨髄性リンパ腫、及びバーキットリンパ腫が挙げられる。
【０１２３】
例示的な肉腫としては、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、血管肉腫、線維肉腫、脂肪肉腫、粘液腫、横紋筋腫、横紋肉腫、線維腫、脂肪腫、過誤腫、及び奇形腫が挙げられる。
【０１２４】
例示的な肺癌としては、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（気管支）癌、気管支腺腫、軟骨性過誤腫、及び中皮腫が挙げられる。
【０１２５】
例示的な胃腸癌としては、食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管腺癌、膵島細胞腫、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）の癌、及び直腸結腸癌が挙げられる。
【０１２６】
例示的な泌尿生殖路癌としては、腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、腎細胞癌）、膀胱癌及び尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌、尿路上皮癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、ならびに精巣（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）の癌が挙げられる。
【０１２７】
例示的な肝臓癌としては、肝細胞腫（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、及び血管腫が挙げられる。
【０１２８】
例示的な骨癌としては、例えば、骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫瘍、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、及び巨細胞腫瘍が挙げられる。
【０１２９】
例示的な神経系癌としては、頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫（松果体腫）、膠芽腫、多形性膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、及び脊髄（神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）の癌、ならびに神経芽細胞腫、レルミット・デュクロ病、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、ＣＮＳ原発リンパ腫、及び脊椎軸腫瘍が挙げられる。
【０１３０】
例示的な婦人科系癌としては、子宮（子宮内膜癌）、頸部（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌（漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、分類不能癌）、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫））、及び卵管（癌腫）の癌が挙げられる。
【０１３１】
例示的な皮膚癌としては、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、メルケル細胞皮膚癌、ほくろ異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、及びケロイドが挙げられる。
【０１３２】
例示的な頭頸部癌としては、膠芽腫、黒色腫、横紋肉腫、リンパ肉腫、骨肉腫、扁平上皮癌、腺癌、口腔癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、鼻及び副鼻腔癌、甲状腺及び副甲状腺癌が挙げられる。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本開示は、肝細胞癌の治療を必要とする患者においてそれを治療するための方法を提供し、この方法は、該患者に、本明細書に記載の医薬製剤を投与するステップを含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本開示は、横紋筋肉腫、食道癌、乳癌、または頭頸部癌の治療を必要とする患者においてそれを治療するための方法を提供し、この方法は、該患者に、本明細書に記載の医薬製剤を投与するステップを含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞癌、乳癌、膀胱癌、結腸直腸癌、黒色腫、中皮腫、肺癌、前立腺癌、膵臓癌、精巣癌、甲状腺癌、扁平上皮癌、膠芽腫、神経芽細胞腫、子宮癌、及び横紋肉腫から選択される。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、膠芽腫、黒色腫、及び横紋肉腫から選択される。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、がんは、肺癌、前立腺癌、結腸癌、乳癌、黒色腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、胃癌、及び横紋筋肉腫から選択される。
【０１３８】
ＴＡＭ受容体チロシンキナーゼの標的化は、ウイルス性疾患を治療するための治療的アプローチを提供することができる（Ｔ  Ｓｈｉｂａｔａ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１４，１９２，３５６９−３５８１）。本開示は、ウイルス感染症などの感染症を治療するための方法を提供する。この方法は、感染症の治療を必要とする患者に、治療有効量の本明細書に記載の医薬製剤を投与することを含む。
【０１３９】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こすウイルスの例としては、これらに限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、またはＤ型肝炎ウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、及び麻疹ウイルスが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の方法によって治療可能な感染症を引き起こすウイルスとしては、これらに限定されないが、肝炎（Ａ型、Ｂ型、またはＣ型）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、及びＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス（例えば、西ナイル、デング、ダニ媒介脳炎、黄熱病、ジカ）、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、及びアルボウイルス性脳炎ウイルスが挙げられる。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本開示は、血栓形成を治療するための方法を提供する（Ｊ．Ｍ．Ｅ．Ｍ．Ｃｏｓｅｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ２０１０，８，１７９７−１８０８、及びＡ．Ａｎｇｅｌｉｌｌｏ−Ｓｃｈｅｒｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００８，１１８，５８３−５９６）。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本開示の塩は、疾患を発症する危険性を予防または低減すること、例えば、疾患、状態、または障害の素因があり得るが、その疾患の病理または総体症状をまだ経験していないか、または呈していない個体において、疾患、状態、または障害を発症する危険性を予防または低減するのに有用であり得る。
【０１４２】
明確にするために、別個の実施形態の文脈において説明される本発明のある特定の特徴を、単一の実施形態に組み合わせて提供することもできることが理解される（一方でこれらの実施形態は、多重従属形態で記述されるかのように組み合わされることが意図される）。逆に、簡潔性のために、単一の実施形態の文脈において説明される本発明の様々な特徴を、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供することもできる。
【実施例】
【０１４３】
本発明を、具体的な実施例によってより詳細に記載する。以下の実施例は例示の目的のために提供され、いかなる様式でも本発明を限定することは意図されていない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または改変することができる、様々な重要でないパラメータを容易に認識するであろう。
【０１４４】
一般的な方法
調製された化合物の一部の分取ＬＣ−ＭＳ精製を、Ｗａｔｅｒｓの質量分別システムで実施した。これらのシステムの操作のための基本的な機器のセットアップ、プロトコル、及び制御ソフトウェアは、文献に詳細に記載されている。例えば、「Ｔｗｏ−Ｐｕｍｐ  Ａｔ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ」Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，４，２９５（２００２）、「Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ  Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ｊ．Ｄｏｕｇｈｔｙ，Ｇ．Ｅｖｅｒｌｏｆ，Ｔ．Ｈａｑｕｅ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，５，６７０（２００３）、及び「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４−８８３（２００４）を参照されたい。分離された化合物は、典型的には、以下の条件下で純度チェックのために分析液体クロマトグラフィ質量分析法（ＬＣＭＳ）にかけられた：機器：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ、ＬＣ／ＭＳＤ、カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ１８  ５μｍ粒径、２．１×５．０ｍｍ、緩衝液：移動相Ａ：０．０２５％ＴＦＡ水溶液及び移動相Ｂ：アセトニトリル；流量２．０ｍＬ／分で３分間に勾配２％〜８０％のＢ。
【０１４５】
調製された化合物の一部はまた、実施例に示されるように、ＭＳ検出器を有する逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）またはフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル）により、分取規模で分離した。典型的な分取逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）のカラム条件は以下のとおりである：
ｐＨ＝２での精製：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ１８  ５μｍ粒径、１９×１００ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）水溶液及び移動相Ｂ：アセトニトリルで溶出；流量は３０ｍＬ／分であり、分離勾配は、文献に記載されるようなＣｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎプロトコルを使用して各化合物に対して最適化した（「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４−８８３（２００４）を参照されたい）。典型的には、３０×１００ｍｍカラムで使用される流量は６０ｍＬ／分であった。
【０１４６】
ｐＨ＝１０での精製：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ５μｍ粒径、１９×１００ｍｍカラム、移動相Ａ：０．１５％ＮＨ４ＯＨ水溶液及び移動相Ｂ：アセトニトリルで溶出；流量は３０ｍＬ／分であり、分離勾配は、文献に記載されるようなＣｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎプロトコルを使用して各化合物に対して最適化した（「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４−８８３（２００４）を参照されたい）。典型的には、３０×１００ｍｍカラムで使用される流量は６０ｍＬ／分であった。
【０１４７】
実施例１．カプセルの調製
化合物Ｉマレエートのカプセルを、以下のとおり調製する。以下に記載の製剤に使用される化合物Ｉマレエートは結晶性であり、実施例４〜６に従って調製する。
【０１４８】
２０ｍｇ（遊離塩基として）の手順
【表１Ａ】
2021529765.tif 000003
【０１４９】
マンニトール（希釈剤）、クエン酸（ｐＨ調整剤）、クロスポビドン（崩壊剤）、ポロキサマー４０７（界面活性剤）、及びステアリン酸（滑沢剤）を、４０メッシュのふるいに通して、秤量した。賦形剤を２０ｃｃのガラスバイアルに添加した。粉砕された原薬を秤量し、バイアルに添加した。構成成分を、バイアル内でスパチュラを用いて手作業で混合した。次いで、内容物全体を３０メッシュのスクリーンに通して（３回）、ブレンドを均質化した。最終ブレンドを、サイズ２のカプセル（Ｃａｐｓｕｇｅｌ製のＶｃａｐｓ（登録商標）Ｐｌｕｓ（ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）カプセル））に充填した。塩基としての化合物Ｉ対クエン酸対ポロキサマー４０７の比率：１対２対１。
【０１５０】
他の２０ｍｇカプセル（製剤Ａ、Ｃ、Ｄ、及びＥ）を同様の様式で調製した。
【表１Ｂ】
2021529765.tif 000004
【表１Ｃ】
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【表１Ｄ】
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【表１Ｅ】
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２５ｍｇ（遊離塩基として）の手順
【表１Ｆ】
2021529765.tif 000008
【０１５１】
マンニトール、クエン酸一水和物、ポロキサマー４０７、クロスポビドン、及びステアリン酸を、４０メッシュのふるいでふるい分け、秤量した。マンニトール、クエン酸、及びポロキサマー４０７を、５００ｍｌのガラス瓶に添加し、タービュラミキサで速度３２で５分間混合した。粉砕された原薬を添加し、次いで５分間混合した。ブレンド全体を、４０メッシュのふるいで２回ふるい分け、次いで瓶に戻した。クロスポビドンを添加し、２分間混合した。コロイド状シリカを５ｇのブレンドに添加し、手作業で混合し、４０メッシュのふるいでふるい分け、ステアリン酸と一緒に瓶に戻した。ブレンドを、タービュラミキサでさらに３分間混合した。最終ブレンドを、サイズ０のカプセル（Ｖｃａｐｓ  Ｐｌｕｓ−Ｃａｐｓｕｇｅｌ）に充填した。塩基としての化合物Ｉ対クエン酸対ポロキサマー４０７の比率：１対１．６対０．８。
【０１５２】
２５ｍｇ（遊離塩基として）の代替手順
【表１Ｇ】
2021529765.tif 000009
【０１５３】
構成成分を秤量した。以下の材料：必要量の半分のマンニトール、ポロキサマー４０７、粉砕された化合物Ｉマレエート、及びクロスポビドンを、Ｑｕａｄｒｏ  Ｃｏｍｉｌ（０３９スクリーン）を用いて１５００±１００  ＲＰＭの速度で粉砕した。粉砕されたブレンドを収集した。クエン酸とコロイド状シリカを袋の中で混合し、次いでＣｏｍｉｌに通し、続いて残りのマンニトールを通した。両方のブレンドを１６Ｑブレンダに添加し、２１ＲＰＭで１８分間混合した。得られたブレンドをＣｏｍｉｌに通し、さらに１８分間ブレンドした。次いで、ブレンドをＣｏｍｉｌに通した。ふるい分けられた（３０メッシュ）ステアリン酸を添加し、さらに３．５分間ブレンドした。最終ブレンドを排出し、Ｂｏｓｃｈ  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｏｒを用いて、目標充填重量４００ｍｇで、サイズ０のカプセル（Ｖｃａｐｓ  Ｐｌｕｓ）にカプセル化した。塩基としての化合物Ｉ対クエン酸対ポロキサマー４０７の比率：１対１．６対０．８。
【０１５４】
５ｍｇ（遊離塩基として）の手順
【表１Ｈ】
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【０１５５】
構成成分を秤量した。以下の材料：必要量の１／２のマンニトール、ポロキサマー４０７、粉砕された化合物Ｉマレエート、及びクロスポビドンを、Ｑｕａｄｒｏ  Ｃｏｍｉｌ（０３９スクリーン）を用いて１５００±１００  ＲＰＭの速度で粉砕した。粉砕されたブレンドを収集した。クエン酸とコロイド状シリカを袋の中で混合し、次いでＣｏｍｉｌに通し、続いて残りのマンニトールを通した。両方のブレンドを１６Ｑブレンダに添加し、２１ＲＰＭで１８分間混合した。得られたブレンドをＣｏｍｉｌに通し、さらに１８分間ブレンドした。次いで、ブレンドをＣｏｍｉｌに通した。ふるい分けられた（３０メッシュ）ステアリン酸を添加し、さらに３．５分間ブレンドした。最終ブレンドを排出し、Ｂｏｓｃｈ  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｏｒを用いて、目標充填重量２００ｍｇで、サイズ２のカプセル（Ｖｃａｐｓ  Ｐｌｕｓ）にカプセル化した。塩基としての化合物Ｉ対クエン酸対ポロキサマー４０７の比率：１対８対４。
【０１５６】
１５ｍｇ（遊離塩基として）の手順
【表１Ｉ】
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【０１５７】
構成成分を秤量した。以下の材料：必要量の１／２のマンニトール、ポロキサマー４０７、粉砕された化合物Ｉマレエート、及びクロスポビドンを、Ｑｕａｄｒｏ  Ｃｏｍｉｌ（０３９スクリーン）を用いて１５００±１００  ＲＰＭの速度で粉砕した。粉砕されたブレンドを収集した。クエン酸とコロイド状シリカを袋の中で混合し、次いでＣｏｍｉｌに通し、続いて残りのマンニトールを通した。両方のブレンドを１６Ｑブレンダに添加し、２１ＲＰＭで１８分間混合した。得られたブレンドをＣｏｍｉｌに通し、さらに１８分間ブレンドした。次いで、ブレンドをＣｏｍｉｌに通した。ふるい分けられた（３０メッシュ）ステアリン酸を添加し、さらに３．５分間ブレンドした。最終ブレンドを排出し、Ｂｏｓｃｈ  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｏｒを用いて、目標充填重量４００ｍｇで、サイズ０のカプセル（Ｖｃａｐｓ  Ｐｌｕｓ）にカプセル化した。塩基としての化合物Ｉ対クエン酸対ポロキサマー４０７の比率：１対２．６７対１．３３。
【０１５８】
実施例２．生物学的利用能研究
実施例１からの化合物Ｉマレエートのカプセル（遊離塩基として２０ｍｇ）を、以下の生物学的利用能研究に使用した。具体的には、表２Ａの製剤Ｂを調製するための手順を実施例１に詳述する。表２Ａの他の製剤もまた、実施例１の２０ｍｇカプセルと同様の様式で調製した。
【０１５９】
この研究の目的は、化合物マレエートのカプセルの投与後の化合物Ｉマレエートの薬物動態学的特性に対する製剤構成成分の影響を決定することであった。この研究の生体実験の部分は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｏｕｉｓｉａｎａ  ａｔ  ＬａｆａｙｅｔｔｅのＮｅｗ  Ｉｂｅｒｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＩＲＣ）で実施し、研究プロトコル及びＮＩＲＣ標準操作手順を遵守した。
【０１６０】
４匹のオスのカニクイザル対象は少なくとも１２時間絶食させ、ピルガンにより投与される化合物Ｉマレエートを含有する経口投与を受けた。連続血液試料を、投与の１５、３０分前、ならびに投与の１、２、３、４、６、８、１２、１６、及び２４時間後に収集した。血液を湿った氷の上に置き、冷蔵下で遠心分離して血漿を得、約−２０℃で冷凍保存した。血漿試料を、分析のためにドライアイス上でＩｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）に出荷した。
【０１６１】
化合物Ｉの血漿及び尿中濃度を、Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎで非ＧＬＰ条件下で測定した。この方法は、タンパク質沈殿抽出とＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を組み合わせたものである。血漿中濃度−時間データを使用して、ＩＤＢＳ  Ｅ−Ｗｏｒｋｂｏｏｋ  Ｓｕｉｔｅ  ＰＫテンプレート（Ｅ−Ｗｏｒｋｂｏｏｋバージョン９．４．０  Ｂｕｉｌｄ  １８，ＩＤＢＳ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を使用した標準的な非コンパートメント法により、各動物の薬物動態パラメータを決定した。
【表２Ａ】
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【０１６２】
同様の研究を、実施例１からの化合物Ｉマレエート（遊離塩基として５ｍｇ）のカプセルを使用して実施した。５ｍｇ製剤は、Ｃａｐｓｕｇｅｌ製のＶｃａｐｓ（登録商標）Ｐｌｕｓカプセル（ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）カプセル）を使用して調製する。
【表２Ｂ】
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【０１６３】
実施例３．溶解度研究
化合物Ｉマレエートの溶解度を、いくつかの界面活性剤の存在下で、水溶液中で３７℃で測定した。界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ポロキサマー１８８、及びポロキサマー４０７を水中０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で含み、界面活性剤を含まない容器を対照として含めた。実験は、１００ＲＰＭで攪拌された５００ｍｌの培地を使用したＤｉｓｔｅｋ  ２１００溶解浴（ＵＳＰ  ＩＩ型溶解装置）で実施した。１００ｍｇの原薬（遊離塩基当量）を培地に添加して、理論上の最大濃度０．２０ｍｇ／ｍｌを得た。５ｍｌの試料を採取し、０．４５ミクロンのＧＨＰフィルタで濾過した後、ＨＰＬＣで分析した。６０分の攪拌時間後の試料について観察された濃度を以下に列挙する。
【表３】
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【０１６４】
データは、ラウリル硫酸ナトリウム溶液における溶解度が、水またはポロキサマーの溶液よりも有意に高いことを示した。原薬は０．２％ＳＬＳの存在下で完全に溶解し、透明な溶液を形成した。
【０１６５】
実施例４．Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエート（化合物Ｉマレエート）の合成
スキーム１．
【化２】
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【０１６６】
ステップ１．５−ブロモ−７−（ピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン二塩酸塩（化合物２）
メカニカルスターラー、加熱マントル、熱電対、還流冷却器、窒素入口、及び窒素出口を備えた五つ口の２２Ｌ丸底フラスコに、ジクロロメタン（ＤＣＭ、８．０Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１、８８０ｇ、２．２２１ｍｏｌ）を室温で入れた。懸濁液に、２−プロパノール中の塩酸（５．８Ｎ、２．７Ｌ、１５．６６ｍｏｌ、７．０５当量）を添加した。この混合物を３５℃に加熱した。４時間後、反応混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、４．５Ｌ）で希釈した。混合物を室温に冷却し、濾過し、ＴＢＭＥ（２．０Ｌ）で洗浄した。濾塊を、フィルタ上でハウス真空下で２４時間乾燥させて、５−ブロモ−７−（ピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン二塩酸塩（化合物２、８４８ｇ、１０３％）を淡褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．５３〜９．２９（ｍ、３Ｈ）、８．２３（ｓ、１Ｈ）、６．９１（ｓ、１Ｈ）、３．３８（ｔｔ、Ｊ＝１１．８、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３０（ｄ、Ｊ＝１２．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．００（ｄｔｄ、Ｊ＝１２．８、１０．１、２．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．０７（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、３．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９７〜１．８７（ｍ、２Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５０．３４、１３９．３２、１３８．９２、１１３．２４、１０９．６７、９５．７０、４３．０６、３０．５７、２６．８９ｐｐｍ；Ｃ１１Ｈ１４ＢｒＮ５（ＭＷ２９５．０）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ２９６．０（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１６７】
ステップ２．１−（４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（化合物３）。
【０１６８】
メカニカルスターラー、熱電対、還流冷却器、窒素入口、及び窒素出口を備えた五つ口の２２Ｌ丸底フラスコに、Ｎ−メチルピペリジノン（ＮＭＰ、１０Ｌ）中の５−ブロモ−７−（ピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン二塩酸塩（化合物２、１３００ｇ、３．５２２ｍｏｌ）を室温で入れた。懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５９３ｇ、１２．３ｍｏｌ）を添加した。混合物を１０℃に冷却した後、塩化イソブチリル（３８８ｇ、３．６４５ｍｏｌ）を充填した。反応物を室温で攪拌し、ＨＰＬＣによりモニタリングした。余分な塩化イソブチリル（２２．５ｇ、０．２１１ｍｏｌ）を添加して、全ての出発材料を消費した。反応が完了すると、反応混合物をセライトパッドを通して濾過した。得られた濾液を１０℃に冷却し、水（２６Ｌ）を徐々に添加して、生成物を沈殿させた。固体を濾過により収集し、水（１２Ｌ）で洗浄した。濾塊を、フィルタ上でハウス真空下で４８時間乾燥させて、１−（４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（化合物３、１０９５ｇ、８５％）を淡褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８６（ｓ、１Ｈ）、６．６４（ｓ、１Ｈ）、４．５１（ｄ、Ｊ＝１２．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｄ、Ｊ＝１３．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．３５〜３．３０（ｍ、１Ｈ）、３．１２（ｔ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１〜２．８４（ｍ、１Ｈ）、２．６４（ｔ、Ｊ＝１２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．０２〜１．９３（ｍ、２Ｈ）、１．５５〜１．４２（ｍ、２Ｈ）、１．０２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．００（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７４．５０、１５５．６８、１４８．３７、１３５．２２、１１１．３６、１１０．６５、８７．２７、４５．３４、４１．６７、３２．９１、３１．３０、３０．３３、２９．４９、２０．０３、１９．８７ｐｐｍ；Ｃ１５Ｈ２０ＢｒＮ５Ｏ（ＭＷ３６５．０９）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ３６６．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１６９】
ステップ３．１−（４−（４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（化合物５）。
【０１７０】
メカニカルスターラー、加熱マントル、熱電対、還流冷却器、窒素入口、及び窒素出口を備えた五つ口の２２Ｌ丸底フラスコに、１−ブタノール（７．７Ｌ）及び水（１．４Ｌ）中の１−（４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（化合物３、７００ｇ、１．９１１ｍｏｌ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（化合物４、５０２ｇ、２．２９３ｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（５２８ｇ、３．８２２ｍｏｌ）を室温で充填した。混合物に、クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（ＸＰｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ２、９０ｇ、１１５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を脱気し、窒素を再充填した後、８０℃に加熱した。８０℃で２時間後、ｎ−ヘプタン（８Ｌ）を反応混合物に添加した。得られたスラリーを、室温に冷却した。固体を濾過により収集し、水（６Ｌ）で洗浄した。濾塊を、フィルタ上でハウス真空下で７２時間乾燥させて、１−（４−（４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（化合物５、６４８ｇ、９０％）を褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８５（ｓ、１Ｈ）、７．０９（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．６５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．４３（ｓ、１Ｈ）、５．２４（ｓ、２Ｈ）、４．５３（ｄ、Ｊ＝１２．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４（ｄ、Ｊ＝１３．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．３８（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．８。８．２、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．１６（ｔ、Ｊ＝１２．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８７（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．７１〜２．６６（ｍ、１Ｈ）、２．０８〜２．００（ｍ、２Ｈ）、１．６１〜１．５８（ｍ、２Ｈ）、１．０２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．００（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７４．５１、１５６．３１、１４８．５１、１４７．６５、１３３．９８、１３０．３５、１２２．５７、１１９．３７、１１４．５７、１０９．６７、１０８．８５、４５．４８、４１．８１、３２．９７、３１．５０、３０．５６、２９．５０、２０．０６、１９．８９ｐｐｍ；Ｃ２１Ｈ２６Ｎ６Ｏ（ＭＷ３７８．４８）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ３７９．２（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１７１】
ステップ４．Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ）。
【０１７２】
メカニカルスターラー、熱電対、窒素入口、及び窒素出口を備えた五つ口の２２Ｌ丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１０Ｌ）中の１−（４−（４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（化合物５、９４４ｇ、２．４９４ｍｏｌ）及び１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボン酸塩酸塩（化合物６、８０１ｇ、２．５６９ｍｏｌ）を室温で入れた。反応混合物にトリエチルアミン（ＮＥｔ３、０．６９５Ｌ、４．９８８ｍｏｌ）を添加した。反応完了時に、反応混合物を２つの２２Ｌ丸底フラスコに均等に分けた。各フラスコに、水（８Ｌ）を室温で充填した。固体を濾過により収集した。得られた湿った濾塊を、２２Ｌ丸底フラスコに戻した。フラスコに、ＴＨＦ（３．２Ｌ）及び水（１０．５Ｌ）を充填した。スラリーを５５℃に加熱し、５５℃で２時間攪拌した。固体を濾過により３０℃で収集し、水（８Ｌ）で洗浄した。濾塊を、フィルタ上でハウス真空下で７２時間乾燥させて、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（１４２５ｇ、９０％）を淡褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８２（ｓ、１Ｈ）、８．７１（ｓ、１Ｈ）、８．６４（ｄｄｄ、Ｊ＝４．８、１．８、０．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．０６（ｔｄ、Ｊ＝７．７、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．９１（ｓ、１Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．６０〜７．５３（ｍ、２Ｈ）、７．４３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．５８（ｓ、１Ｈ）、４．７８（ヘプト、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５４（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６（ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｔｔ、Ｊ＝１１．７、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２０（ｔ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ヘプト、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９（ｔ、Ｊ＝１２．３  Ｈｚ、１Ｈ）、２．０６（ｄｄ、Ｊ＝２７．７、１２．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．６１（ｑ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．５５〜１．４７（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）、１．０２（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．００（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７４．５１、１６３．０２、１６０．３１、１５６．２０、１５０．１８、１４９．９８、１４９．１８、１４８．０８、１４７．７９、１３９．５５、１３７．５１、１３４．４５、１３１．２４、１３０．２３、１２５．０９、１２４．５７、１２０．４６、１１７．９８、１０９．９０、１０９．３５、１０５．２７、５１．１７、４５．４６、４１．７９、３２．９７、３１．４８、３０．５４、２９．４９、２１．０９（２−ＣＨ３）、２０．０７、１９．８９ｐｐｍ；Ｃ３４Ｈ３７Ｎ９Ｏ４（ＭＷ６３５．７３）、ＬＣＭＳ（Ｅ��）ｍ／ｅ６３６．３（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１７３】
ステップ５．Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエート（化合物Ｉマレエート）。
【０１７４】
メカニカルスターラー、加熱ジャケット、熱電対、還流冷却器、窒素入口、及び窒素出口を備えた５０Ｌ反応器に、メタノール（ＭｅＯＨ、１０Ｌ）及びジクロロメタン（ＤＣＭ、２０Ｌ）中のＮ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｉ、１４０１ｇ、２．２０４ｍｏｌ）を室温で入れた。スラリーを５０℃に加熱して、溶液を得た。溶液に活性炭（７０ｇ）及びシリカゲル（７０ｇ）を添加した。５０℃で２時間攪拌した後、混合物をセライトパッドを通して濾過した。濾液にマレイン酸（２６９ｇ、２．３１４ｍｏｌ）を添加した。ほとんどのＤＣＭは大気圧下で蒸留した。固体が徐々に沈殿した。固体を濾過により１８℃で収集し、ＭｅＯＨ（３Ｌ）で洗浄した。濾塊を、フィルタ上でハウス真空下で７２時間乾燥させて、Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエート（化合物Ｉマレエート、１４２５ｇ、８６％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８３（ｓ、１Ｈ）、８．７１（ｓ、１Ｈ）、８．６５〜８．６３（ｍ、１Ｈ）、８．０６（ｔｄ、Ｊ＝７．８、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．９５（ｓ、１Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．５８〜７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．４４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６２（ｓ、１Ｈ）、６．２５（ｓ、２Ｈ）、４．７８（ヘプト、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．５４（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６（ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｔｔ、Ｊ＝１１．６、３．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．２０（ｔ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ヘプト、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９（ｔ、Ｊ＝１２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．０９〜２．０１（ｍ、２Ｈ）、１．６５〜１．５７（ｍ、１Ｈ）、１．５６〜１．４９（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）、１．０２（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．００（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ１７４．５２、１６７．２１、１６３．０３、１６０．３３、１５５．２０、１５０．１８、１４９．９９、１４９．１８、１４８．０７、１４６．２６、１３９．５５、１３７．６７、１３５．３２、１３１．３４、１３０．８７、１３０．２２、１２５．０９、１２４．５７、１２０．４９、１１９．３０、１０９．８０、１０９．４７、１０５．２６、５１．１７、４５．４３、４１．７６、３２．９７、３１．４５、３０．５３、２９．５０、２１．０９（２−ＣＨ３）、２０．０６、１９．８９ｐｐｍ；Ｃ３４Ｈ３７Ｎ９Ｏ４（遊離塩基ＭＷ６３５．７３）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ６３６．３（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１７５】
実施例５．ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（スキーム１の化合物１）の合成
スキーム２
【化３】
2021529765.tif 000016
【０１７６】
ステップ１．ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（化合物１３）
メカニカルスターラー、加熱マントル、熱電対、還流冷却器、窒素入口、及び窒素出口を備えた３Ｌ丸底フラスコに、１，４−ジオキサン（８７６ｍＬ）中の７−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン（化合物１１、１００ｇ、４６９ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（化合物１２、１７４ｇ、５６３ｍｍｏｌ）を室温で充填した。反応フラスコに、炭酸カリウム（１３０ｇ、９３９ｍｍｏｌ）及び水（２１８ｇ）を順に添加した。混合物を真空に曝露することにより脱気し、窒素雰囲気を３回再充填した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、１３．５６ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を脱気し、窒素を室温で３回再充填した。次いで、反応混合物を８５〜９０℃に加熱し、その温度で１６時間攪拌した。反応完了時に、水（９００ｍＬ）を３０分間添加したが、内部温度は５０℃超であった。混合物を室温に冷却した。固体が徐々に沈殿した。固体を濾過により１８℃で収集し、水（２×２５０ｍＬ）及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、３×２００ｍＬ）で洗浄した。湿った濾塊を反応フラスコに戻し、ＭＴＢＥ（７５０ｍＬ）中で５０℃で１時間攪拌した。固体を濾過により室温で収集した。濾塊を、真空オーブン中５０℃で真空下、窒素掃引しながら７２時間乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（化合物１３、１２３．７ｇ、８４％）を褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８９（ｓ、１Ｈ）、７．６９（ｓ、２Ｈ）、７．００（ｓ、１Ｈ）、６．９１（ｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．６９（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６（ｓ、２Ｈ）、３．５５（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５９〜２．５２（ｍ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；Ｃ１６Ｈ２１Ｎ５Ｏ２（ＭＷ３１５．３７）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ３１６．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１７７】
ステップ２．ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１４）
２Ｌフラスコに、酢酸（１０００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（化合物１３、５０．０ｇ、１５９ｍｍｏｌ）及び酸化白金（ＩＶ）（１０．０ｇ、４４ｍｍｏｌ）を室温で充填した。フラスコを、５０ｐｓｉの水素ガスを入れたＰａｒｒ  Ｓｈａｋｅｒ上に置いた。１６時間後、反応混合物を、セライトパッド（５０ｇ）を通して濾過し、メタノール（５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物にメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、６００ｍＬ）を室温で添加した。水（１２００ｍＬ）中の炭酸カリウム（約５０ｇ）の溶液を、ＭＴＢＥ溶液に添加して、ｐＨ値を６〜７に調整した。固体を濾過により収集し、水（２×３００ｍＬ）及びｎ−ヘプタン（２×３００ｍＬ）で洗浄した。濾塊を、真空オーブン中５０℃で真空下、窒素掃引下しながら１６時間乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１４、４９．３ｇ、９８％）を淡褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８２（ｓ、１Ｈ）、７．５９（ｓ、２Ｈ）、６．８１（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．４４（ｄ、Ｊ＝４．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｄ、Ｊ＝１１．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．２５（ｔｔ、Ｊ＝１１．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．８８（ｓ、２Ｈ）、１．９５（ｄ、Ｊ＝１１．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．５１（ｑｄ、Ｊ＝１２．６、４．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．４２（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；Ｃ１６Ｈ２３Ｎ５Ｏ２（ＭＷ３１７．３９）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ３１８．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１７８】
ステップ３．ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１）
メカニカルスターラー、熱電対、還流冷却器、窒素入口、及び窒素出口を備えた五つ口の２２Ｌ丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１４．０Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１４、７３０ｇ、２．３０ｍｏｌ）を室温で充填した。混合物を０〜５℃に冷却した。反応混合物に、内部温度を１５℃未満に維持しながら、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、４０９ｇ、２．３０ｍｏｌ）を５分間添加した。１０℃未満で１時間攪拌した後、一部の溶媒（９．０Ｌ）を減圧下で除去した。残留溶液に、水（１４．０Ｌ）中の重炭酸ナトリウム（１４０ｇ、１．６７ｍｏｌ）の溶液を５分間かけて添加した。固体が沈殿した。固体を濾過により収集し、水（７．０Ｌ）及びｎ−ヘプタン（４Ｌ）で洗浄した。湿った濾塊を、フィルタ上でハウス真空下で４８時間乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−５−ブロモピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物１、８８６ｇ、９７％）を褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８６（ｓ、１Ｈ）、６．６６（ｓ、１Ｈ）、４．０４（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．３０〜３．２３（ｍ、１Ｈ）、２．８６（ｂｒ．ｓ、２Ｈ）、１．９２（ｄ、Ｊ＝１２．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．５０（ｑｄ、Ｊ＝１２．８、４．１Ｈｚ、２Ｈ）、１．４１（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５５．６８、１５４．２９、１４８．３５、１３５．３７、１１１．３１、１１０．６８、８７．２９、７９．１０、４３．９７、３２．６３、３０．３７、２８．５８ｐｐｍ；Ｃ１６Ｈ２２ＢｒＮ５Ｏ２（ＭＷ３９５．１０）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ３９６．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１７９】
実施例６．１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボン酸（スキーム１の化合物６）の合成
ステップ３：ジエチル２−（（３−ピリジン−２−イルレイド）メチレン）マロネート
【化４】
2021529765.tif 000017
１，２−ジクロロエタン（９．０ｍＬ）中のジエチル２−（アミノメチレン）マロネート（３．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）と２−イソシアナトピリジン（２．０２ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．６ｍＬ、２０．８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、反応混合物を７０℃で一晩攪拌し、室温に冷却し、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２中の０％〜１５％ＭｅＯＨ）を介して直接精製して、生成物（３．１８ｇ、６５％）を得た。Ｃ１４Ｈ１８Ｎ３Ｏ５（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３０８．１。実測値：３０８．１。
【０１８０】
ステップ４：１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボン酸
【化５】
2021529765.tif 000018
ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）中のジエチル２−（（３−（ピリジン−２−イル）ウレイド）メチレン）マロネート（３．１８ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）とＥｔＯＨ中２．５ＭのＮａＯＥｔ（６．２ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で３時間攪拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎクエン酸溶液（３０ｍＬ）で洗浄／酸性化した。有機層を分離し、水層を３：１のＣＨＣｌ３／イソプロピルアルコール（３０ｍＬ×３）でさらに抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物エチル２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキシレートを得、これを次のステップで直接使用した。Ｃ１２Ｈ１２Ｎ３Ｏ４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝２６２．１。実測値：２６２．２。
【０１８１】
前のステップからの粗エチル２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキシレート、２−ヨードプロパン（２．０６ｍＬ、２０．７ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（３５ｍＬ）中のＣｓ２ＣＯ３（１０．１ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）の混合物を、７０℃で３時間攪拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、３：１のＣＨＣｌ３／イソプロピルアルコール（７５ｍＬ）で希釈し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物エチル１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキシレートを得、これを次のステップで直接使用した。Ｃ１５Ｈ１８Ｎ３Ｏ４（Ｍ＋Ｈ）＋ＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３０４．１。実測値：３０４．１。
【０１８２】
１，４−ジオキサン（２０ｍＬ、８２ｍｍｏｌ）中の４Ｍ  ＨＣｌ中の前のステップからの粗エチル１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキシレート及び水（５．０ｍＬ）の混合物を、８０℃で５時間攪拌し、室温に冷却し、濃縮した。次いで、得られた材料をカラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２中の０％〜１５％ＭｅＯＨ）を介して精製して、生成物をわずかに黄色の固体（１．５０ｇ、４７％  ３つのステップ）として得た。Ｃ１３Ｈ１４Ｎ３Ｏ４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝２７６．１。実測値：２７６．１。
【０１８３】
実施例７．Ｎ−（４−（４−アミノ−７−（１−イソブチリルピペリジン−４−イル）ピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）フェニル）−１−イソプロピル−２，４−ジオキソ−３−（ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボキサミドマレエート（化合物Ｉマレエート）の固体状態特性評価
化合物ＩマレエートのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を、Ｒｉｇａｋｕ  ＭｉｎｉＦｌｅｘ  Ｘ線粉末回折計（ＸＲＰＤ）から得た。ＸＲＰＤの一般的な実験手順は、以下のとおりであった：（１）Ｋβフィルタを用いた１．０５４０５６Åでの銅からのＸ線放射、（２）３０ＫＶ、１５ｍＡでのＸ線パワー、及び（３）試料粉末をゼロバックグラウンド試料ホルダ上に分散させた。βＸＲＰＤの一般的な測定条件は、開始角度３度；停止角度４５度；サンプリング０．０２度；及び走査速度２度／分であった。ＸＲＰＤパターンを図１に示し、ＸＲＰＤデータを表６Ａに提供する。
【表４】
2021529765.tif 000019
【０１８４】
化合物Ｉマレエートの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣは、オートサンプラを有するＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ視差走査熱量測定、モデルＱ２００から得た。ＤＳＣ機器条件は、以下のとおりであった：１０℃／分で３０〜３００℃；Ｔｚｅｒｏアルミニウム試料皿及び蓋；ならびに５０ｍＬ／分の窒素ガス流。ＤＳＣサーモグラムを図２に示す。ＤＳＣサーモグラムは、開始温度２０２．９℃で主要な吸熱事象を示し、ピーク温度は２１１．０℃であった。これは、化合物の溶融及び分解温度であると考えられる。
【０１８５】
化合物Ｉマレエートの熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡは、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ熱重量分析器、モデルＱ５００から得た。ＴＧＡの一般的な実験条件は、以下のとおりであった：２０℃／分で２０℃〜６００℃の傾斜；窒素パージ、４０ｍＬ／分のガス流、続いてパージ流の均衡；６０ｍＬ／分の試料パージ流；白金試料皿。ＴＧＡサーモグラムを図３に示す。１５０℃までに約０．７％の重量減少が観測され、水分及び残留溶媒の喪失に関連していると考えられた。化合物は、２００℃超で有意に分解し始める。
【０１８６】
他の結晶性塩
ＨＣｌ塩、一硫酸塩、半硫酸塩、メシル酸塩、及びベシル酸塩など、化合物Ｉの他の結晶性塩が発見され、調製されている。
【０１８７】
実施例Ａ．
Ａｘｌ自己リン酸化アッセイ
Ａｘｌの自己リン酸化を、５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、０．２ｍｇ／ｍｌのＡｘｌ、５ｍＭのＡＴＰ、２０ｍＭのＭｇＣｌ２、及び２ｍＭのＤＴＴを含有する緩衝液中の組み換えＡｘｌタンパク質（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＰＶ４２７５）を室温で１時間インキュベートすることにより実施した。
【０１８８】
ＴＡＭ酵素アッセイ
キナーゼアッセイ緩衝液には、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０１％ＮＰ−４０、及び２ｍＭのＤＴＴが含まれていた。ＤＭＳＯ中に溶解した０．１ｕｌの試験化合物を、化合物プレートから白色の３８４ウェルアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＬＵＭＩＴＲＡＣプレート）に移した。ＤＭＳＯの最終濃度は１．２５％であった。５．１ｎＭのリン酸化Ａｘｌ、または０．０６２５ｎＭのｃ−Ｍｅｒ（Ｃａｒｎａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、０８−１０８）、または０．３６６ｎＭのＴｙｒｏ３（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＰＲ７４８０Ａ）の酵素溶液を、アッセイ緩衝液で調製した。ＤＭＳＯ中に溶解したペプチド基質ビオチン−ＥＱＥＤＥＰＥＧＤＹＦＥＷＬＥ−アミド配列番号１（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ＭＡ）の１ｍＭのストック溶液を、２０００ｕＭのＡＴＰを含有するアッセイ緩衝液中で１ｕＭに希釈した。４ｕｌの酵素溶液（または酵素ブランクのアッセイ緩衝液）を各プレートの適切なウェルに添加し、次いで４ｕｌ／ウェルの基質溶液を添加して、反応を開始した。プレートを光から保護し、室温で６０分間インキュベートした。５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％ＢＳＡ、４５ｍＭのＥＤＴＡ、１８０ｎＭのＳＡ−ＡＰＣ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ＣＲ１３０−１００）、及び３ｎＭのＥｕ−Ｗ１０２４抗ホスホチロシンＰＹ２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ＡＤ００６７）を含有する４ｕｌの検出溶液を添加することにより、反応を停止した。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）シグナルをＰＨＥＲＡｓｔａｒ  ＦＳプレート読み取り機（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）上で測定した。阻害のパーセンテージを各濃度について計算し、ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた曲線適合から生成した。
【０１８９】
化合物Ｉは、ＡＸＬ、ＭＥＲ、及びＴＹＲＯ３のうちの１つ以上の阻害剤であることがわかった。化合物Ｉのトリフルオロ酢酸塩のＩＣ５０データは、米国特許第９，９８１，９７５号に開示されており、以下の表７Ａに提供する。記号「†」は、５ｎＭ以下のＩＣ５０を示し、「††」は、５ｎＭ超だが１０ｎＭ以下のＩＣ５０を示し、「†††」は、１０ｎＭ超だが１００ｎＭ以下のＩＣ５０を示す。
【表５】
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【０１９０】
実施例Ｂ．ＢＡＦ３−ＡＸＬ、ＢＡＦ３−ＭＥＲ、及びＢＡＦ３−ＴＹＲＯ３細胞の生成ならびに細胞増殖アッセイ
二量体化配列及びＨＡタグと融合したＡＸＬ、ＭＥＲ、またはＴＹＲＯ３の細胞質ドメインを、ピューロマイシン耐性マーカーを含むｐＭＳＣＶベクターにクローニングして、３つの構築物（ｐＭＳＣＶ−ＡＸＬ、ｐＭＳＣＶ−ＭＥＲ、及びｐＭＳＣＶ−ＴＹＲＯ３）を生成する。ＢＡＦ３細胞を、電気穿孔法により３つの構築物で個々にトランスフェクトする。ＩＬ３に依存せず、ピューロマイシン耐性のある単一クローンを選択し、特性評価する。ＡＸＬ、ＭＥＲ、またはＴＹＲＯ３の発現が安定している細胞を選択し、ＢＡＦ３−ＡＸＬ、ＢＡＦ３−ＭＥＲ、及びＢＡＦ３−ＴＹＲＯ３細胞と呼称する。
【０１９１】
ＢＡＦ３、ＢＡＦ３−ＡＸＬ、ＢＡＦ３−ＭＥＲ、またはＢＡＦ３−ＴＹＲＯ３細胞株を、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に維持する。細胞生存率に対する試験化合物の効果を測定するために、１０００細胞／ウェルを、化合物またはＤＭＳＯ単独の段階希釈を含む増殖培地中の３８４ウェル組織培養プレート中に５％ＣＯ２とともに３７℃で４８時間播種し、細胞生存率を、ＡＴＰアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ）により、製造元の手順に従って測定する。データをＤＭＳＯ対照と比較した阻害パーセントに変換し、ＩＣ５０曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して適合する。
【０１９２】
実施例Ｃ．ＢａＦ３−ＡＸＬ  ＥＬＩＳＡ及びＢａＦ３−ＭＥＲ  ＥＬＩＳＡ
ＢａＦ３−ＡＸＬまたはＢａＦ３−ＭＥＲ細胞を、１０％ＦＢＳ及びピューロマイシン（１μｇ／ｍｌ、Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む培地ＲＰＭＩ中に維持する。リン酸化ＡＸＬまたはリン酸化ＭＥＲに対する試験化合物の効果を測定するために、細胞を、Ｖ底ポリプロピレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂｉｏ−ｏｎｅ）中に、培地中の希釈した試験化合物の存在下または非存在下で播種（５×１０４細胞／ウェル）し、５％ＣＯ２とともに３７℃で１時間インキュベートする。細胞を遠心分離により採取し、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｈａｌｔｓ  ＰＩ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を含む１１０μＬの氷冷溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）中に氷上で３０分間溶解する。細胞溶解物を、ＥＬＩＳＡのために−８０℃で保存する。ＥＬＩＳＡプレートを、Ｃｏｓｔａｒプレートを抗ＨＡ抗体（１μｇ／ｍｌ）とともに室温で１時間インキュベートすることにより調製する。プレートを洗浄し、３％ＢＳＡを含むＰＢＳでブロックする。細胞溶解物をＥＬＩＳＡプレートに装填し、４℃で一晩インキュベートする。プレートを洗浄し、ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中のＬＡＮＣＥ  Ｅｕ−Ｗ１０２４抗ホスホチロシン抗体（ＰＹ−２０）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）とともに１時間インキュベートし、Ｐｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）上で読み取る。データをＤＭＳＯ対照と比較した阻害パーセントに変換し、ＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して、阻害剤濃度の対数に対して阻害パーセントの曲線を適合することにより実施する。
【０１９３】
実施例Ｄ．Ｈ１２９９リン酸化ＡＸＬ  ＥＬＩＳＡ
Ａｘｌ発現を伴うヒト非小細胞肺癌細胞株であるＨ１２９９細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含む培地ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に維持する。リン酸化ＡＸＬに対する試験化合物の効果を測定するために、細胞を９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ）中に播種（３００００個の細胞／ウェル）し、５％ＣＯ２とともに３７℃で一晩インキュベートする。適切な濃度の化合物を添加し、５％ＣＯ２とともに３７℃で１時間インキュベートする。ｒｈＧａｓ６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、６μｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加する。プレートを、５％ＣＯ２とともに３７℃で１５分間インキュベートする。細胞を採取し、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｈａｌｔｓ  ＰＩ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を含む１１０μＬの氷冷溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）中に溶解する。溶解物を氷上で１時間インキュベートし、ＥＬＩＳＡのために−８０℃で保存する。ＥＬＩＳＡプレートを、Ｃｏｓｔａｒプレートを抗ＨＡ抗体（１μｇ／ｍｌ）とともに室温で１時間インキュベートすることにより調製する。プレートを洗浄し、３％ＢＳＡを含むＰＢＳでブロックする。細胞溶解物をＥＬＩＳＡプレートに装填し、４℃で一晩インキュベートする。プレートを洗浄し、ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中のＬＡＮＣＥ  Ｅｕ−Ｗ１０２４抗ホスホチロシン抗体（ＰＹ−２０）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）とともに１時間インキュベートし、Ｐｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）上で読み取る。データをＤＭＳＯ対照と比較した阻害パーセントに変換し、ＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して、阻害剤濃度の対数に対して阻害パーセントの曲線を適合することにより実施する。
【０１９４】
実施例Ｅ．全血Ｈ１２９９リン酸化ＡＸＬ  ＥＬＩＳＡ
Ｈ１２９９細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含む培地ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に維持する。全血におけるリン酸化ＡＸＬに対する試験化合物の効果を測定するために、細胞を９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ）中に播種（３００００個の細胞／ウェル）し、５％ＣＯ２とともに３７℃で一晩インキュベートする。正常なドナーから得た血液を、試験化合物と１時間混合する。培地をＨ１２９９細胞から除去し、化合物を含む血液を各ウェルに添加する。５％ＣＯ２とともに３７℃で１時間インキュベートした後、ｒｈ−Ｇａｓ６（４μｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を各ウェルに添加する。プレートを、５％ＣＯ２とともに３７℃で１５分間インキュベートする。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｈａｌｔｓ  ＰＩ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を含む１１０ｕＬの氷冷溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）中に氷上で１時間溶解する。プレートをＥＬＩＳＡのために−８０℃で保存する。ＥＬＩＳＡプレートを、Ｃｏｓｔａｒプレートを抗ＨＡ抗体（１ｕｇ／ｍｌ）とともに室温で１時間インキュベートすることにより調製する。プレートを洗浄し、３％ＢＳＡを含むＰＢＳでブロックする。細胞溶解物をＥＬＩＳＡプレートに装填し、４℃で一晩インキュベートする。プレートを洗浄し、ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中のＬＡＮＣＥ  Ｅｕ−Ｗ１０２４抗ホスホチロシン抗体（ＰＹ−２０）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）とともに１時間インキュベートし、Ｐｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）上で読み取る。データをＤＭＳＯ対照と比較した阻害パーセントに変換し、ＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して、阻害剤濃度の対数に対して阻害パーセントの曲線を適合することにより実施する。
【０１９５】
実施例Ｆ．Ｇ３６１リン酸化Ａｋｔ細胞インサイトＥＬＩＳＡ
Ｍｅｒを発現するヒト悪性黒色腫細胞株であるＧ３６１細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含む培地ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に維持する。ＭＥＲシグナル伝達経路に対する試験化合物の効果を測定するために、細胞を９６ウェルＣｅｌｌＢｉｎｄ表面プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に１００μＬの体積で２×１０４細胞／ウェルで播種し、５％ＣＯ２とともに３７℃で一晩インキュベートする。２０μＬの適切な濃度の試験化合物を細胞に添加し、１時間インキュベートする。ｒｈＧａｓ６（４μｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を各ウェルに添加し、２０分間インキュベートする。５０ｕＬのＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中の４％パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を室温で３０分間添加することにより、細胞を固定する。プレートを洗浄し、５０μＬのＰＢＳ中の０．２％トリトンＸ−１００（Ｓｉｇｍａ）とともに室温で１０分間インキュベートする。プレートを洗浄し、１００ｕＬのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡ）とともに３０分間インキュベートする。プレートを洗浄し、０．１％ＢＳＡ（１：３００希釈）中に希釈したリン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）（Ｄ９Ｅ）ウサギｍＡｂ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）とともに４℃で一晩インキュベートする。プレートを洗浄し、５０ｕＬのＰＢＳ中のヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）のＡｌｅｘａｆｌｏｕｒ  ４８８  Ｆ（ａｂ’）２断片（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、１：１０００希釈）とＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、１：２０００希釈）とともに室温で２時間インキュベートする。プレートをＰＢＳで洗浄し、Ｃｅｌｌ  Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＣＸ５（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）上で読み取る。
【０１９６】
本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。そのような改変はまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図されている。本出願で引用された全ての特許、特許出願、及び刊行物を含む各参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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