(57)【要約】  本発明は、経口投与に適した製剤およびカプセルに関する。本発明はさらに、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病を治療するための製剤およびカプセルの使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、ならびに（ｉｉ）カプリル酸とプロピレングリコールとのモノエステルおよび／もしくはジエステル、またはカプリル酸とグリセロールとのモノエステルおよび／もしくはジエステルであるエステルを含む、経口投与に適した製剤。
【請求項２】
オリゴヌクレオチドが、配列５’−Ｘｍ−ＣＧ−Ｙｎ−３’を有するオリゴヌクレオチドでありオリゴヌクレオチドの全長が６〜４０ヌクレオチドである場合に、ＸがＡ、Ｔ、ＣまたはＧ、ＹがＡ、Ｔ、ＣまたはＧ、ｍが０〜３８、ｎが０〜３８である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドが、配列5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'（配列番号：２）を含む、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドが骨格修飾を有し、好ましくは、前記骨格修飾がホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート修飾に代表されるホスフェート骨格修飾であり、より好ましくは、前記骨格修飾が前記オリゴヌクレオチドの５’−および／または３’−末端に位置する、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドが、ＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない配列
5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'（配列番号：２）を有し；好ましくは、オリゴヌクレオチドが、ＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない、配列
5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'（配列番号：１）を有し；より好ましくは、前記オリゴヌクレオチドがコビトリモドである、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項７】
（ｉｉ）エステルが、カプリル酸とプロピレングリコールのモノエステルおよび／またはジエステルであり、好ましくは、（ｉｉ）エステルが、エステルの総重量に対して、５５重量％〜８０重量％のプロピレングリコールモノカプリレートおよび２０重量％〜４５重量％のプロピレングリコールジカプリレートを含む、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項８】
さらにゲル化剤を含み、好ましくは、ゲル化剤がヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項９】
さらに酸化防止剤を含み、好ましくは、酸化防止剤がブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）である、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項１０】
さらにｐＨ緩衝液を含み、好ましくは、ｐＨ緩衝液がトロメタミンである、先行する請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項１１】
以下を含む経口投与に適したカプセル：
ａ）ゼラチン容器、および容器内に
ｂ）請求項１〜１０のいずれか一項に定義された製剤。
【請求項１２】
さらに以下を含む、請求項１１に記載のカプセル：
ｃ）容器の外表面のコーティング。
【請求項１３】
コーティングが第１のポリマーと第２のポリマーを含む、請求項１２に記載のカプセル。
【請求項１４】
第１のポリマーがポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１であり、第２のポリマーがポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１である、請求項１３に記載のカプセル。
【請求項１５】
ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１およびポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１が、５：１〜１：５の重量比で、好ましくは２：１〜１：４の重量比で、より好ましくは１：１〜１：３の重量比で存在する、請求項１４に記載のカプセル。
【請求項１６】
第１のポリマーがｐＨ５．５を超えて溶解し、第２のポリマーがｐＨ７を超えて溶解する、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項１７】
コーティングがコーティング溶液中でカプセルをコーティングすることによって得られ、前記コーティング溶液は、請求項１４〜１６に定義される第１のポリマーおよび第２のポリマーを含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項１８】
前記カプセルが、請求項１〜６のいずれか一項で定義されるオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを、回盲部接合部で放出するように設計されている、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項１９】
前記カプセルが、請求項１〜６のいずれか１つに定義されるオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを、ｐＨ６．５から７．５、好ましくはｐＨ６．５から６．８、好ましくは少なくとも２時間にわたって、好ましくは３時間〜１８時間にわたって、さらに好ましくは５時間〜１２時間にわたって放出するように設計されている、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項２０】
前記カプセルが、請求項１〜６のいずれか一項に定義されるオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを回腸内に放出するように設計されている、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項２１】
前記カプセルが、ｐＨ５．５〜６で、請求項１〜６のいずれか一項に定義されるオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを、放出するように設計されている、請求項１１〜１７または２０のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項２２】
炎症性腸疾患の治療に使用するための、好ましくは、前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎またはクローン病である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤、または請求項１１〜２１のいずれか一項に記載のカプセル。
【請求項２３】
前記製剤またはカプセルが経口投与される、請求項２２に記載の使用のための製剤またはカプセル。
【請求項２４】
対象者の炎症性腸疾患を治療する方法であって、前記方法は、請求項１〜１０のいずれか一項に定義される製剤または請求項１１〜２１のいずれか一項に定義されるカプセルを前記対象者に経口投与すること含む、方法。
【請求項２５】
炎症性腸疾患治療用医薬の製造のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤または請求項１１〜２１のいずれか一項に記載のカプセルの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口投与に適した製剤およびカプセルに関する。本発明はさらに、炎症性腸疾患を治療するための製剤およびカプセルの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
多くの炎症状態は、腸（小腸、結腸および直腸）に影響を及ぼすことがある。炎症性腸疾患は、かかる状態の一例である。これらの状態は、オリゴヌクレオチド、特にＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドで治療され得る。これらのオリゴヌクレオチドは、免疫細胞および／または上皮細胞などの細胞上の受容体に結合し、それによって免疫応答を媒介し、炎症を緩和する。
【０００３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）とは、結腸や小腸の炎症性疾患群を指す。ＩＢＤの主な種類は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）とクローン病である。ＵＣとクローン病の主な違いは、炎症変化の場所と性質である。クローン病は口から肛門までの消化管のどの部分にも影響を与えるが、ＵＣはほとんどの場合結腸と直腸に限定される。
【０００４】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、直腸および結腸粘膜の慢性炎症によって特徴づけられる疾患で、最初の段階では最も内側の層に影響を与える。この疾患は再発性で、活動期と不活動期があり、病理学、症状および治療法が異なる。ＵＣの根本的な原因は明らかにされておらず、また、何がこの疾患の不活動と活動型を繰り返す引き金となるのかも不明である(Irvine, E. J. (2008) Inflamm Bowel Dis 14(4): 554-565)。活動性ＵＣの症状としては、血液を伴う進行性の軟便や排便回数の増加が挙げられる。活動性粘膜炎症は内視鏡検査で診断される。
【０００５】
便には、膿、粘液および血液が含まれ、しばしば緊急な排泄を伴う腹部の痙攣（しぶり腹（Ｔｅｎｅｓｍｉ））を伴う。下痢は、徐々に起こることもあれば、まれにほんとうに突然に始まることもある。重症の場合、症状としては発熱や全身倦怠感が挙げられる。重症期では、腹部圧痛、頻脈、発熱および腸穿孔の危険を伴う腸壁の深い炎症が発生しうる。さらに、ＵＣ患者は、関節痛や関節炎、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、眼の炎症などの腸外症状の発現に苦しむこともある。寛解している場合や不活動性のＵＣの場合は、患者には通常、腸の症状はない。
【０００６】
炎症や損傷を受けた粘膜の程度は、ＵＣの患者によって異なる。直腸のみを侵すＵＣは潰瘍性直腸炎と呼ばれる。炎症性変化が結腸の左側脾臓屈曲部まで存在する場合は、該状態は遠位大腸炎または左側大腸炎と呼ばれる。広汎性ＵＣでは横行結腸も侵され、全大腸炎は大腸全体が侵される疾患を示す。
【０００７】
活動性粘膜炎症は内視鏡検査で診断され、血管パターンの消失、浮腫、点状出血、自然出血および線維性滲出液などを特徴とする。内視鏡画像は、直腸から始まり、近位から結腸に不定の範囲で広がる連続的な炎症の画像である。内視鏡で得られ組織学的検査にかけられた生検は状態の診断に役立つ。クロストリジウム・ディフィシル（clostridium difficile）、カンピロバクター（camphylobacter）、サルモネラ（Salmonella）およびシゲラ（Shigella）などの感染原因はＵＣに類似している可能性があり、便培養によって除外することができる。
【０００８】
活動性ＵＣ患者の治療は、炎症を抑え、結腸の治癒と粘膜の回復を促進することを目的とする。軽度の場合は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）(Sutherland, L., F. Martin, S. Greer, M. Robinson, N. Greenberger, F. Saibil, T. Martin, J. Sparr, E. Prokipchuk and L. Borgn (1987) Gastroenterology 92: 1894-1898)およびグルココルチコステロイド（ＧＣＳ）(Domenech, E., M. Manosa and E. Cabre (2014). Dig Dis 32(4): 320-327)などの従来の薬で病気を制御しうる。
【０００９】
ＧＣＳは通常病気の再燃を治療するために使用されるが、長期的な使用では重大な副作用や、ステロイド依存性疾患が発生する可能性がある。グルココルチコイド薬は非選択的に作用するので、長期的には多くの健全な同化プロセスを損なう可能性がある(Prantera, C. and S. Marconi (2013) Therap Adv Gastroenterol 6(2): 137-156)。
【００１０】
ＧＣＳには無反応になり、重度または中等度のＵＣの発作に苦しむ患者には、シクロスポリン、６−メルカプトプリンおよびアザチオプリンなどの免疫調節薬を追加して使用することができる。しかし、免疫調節薬は作用が遅く、これらの患者での寛解導入はしばしば一時的である(Khan, K. J., M. C. Dubinsky, A. C. Ford, T. A. Ullman, N. J. Talley and P. Moayyedi (2011) Am J Gastroenterol 106(4): 630-642)。
【００１１】
ＵＣのさらなる治療選択肢としては、生物学的薬剤が挙げられる（Fausel, R. and A. Afzali (2015) Ther Clin Risk Manag 11: 63-73）。現在、中等度から重度のＵＣの治療に承認されている３つのＴＮＦ−α阻害剤は、インフリキシマブ、アダリムマブおよびゴリムマブである。これら３つの薬剤はいずれも使用に関連した潜在的なリスクを有し、制御不能な感染症、進行した心不全、神経疾患などの特定の患者、および腫瘍の増殖を促進する潜在的なリスクのため悪性腫瘍の既往歴のある患者では、避けるべきである。ＴＮＦ−α阻害剤治療の他の潜在的な副作用としては、好中球減少症、肝毒性、血清病、白血球破砕性血管炎、乾癬状発疹などの発疹、自己免疫の誘導、アナフィラキシー、痙攣および血圧低下などの注射または注入部位反応などが挙げられる。
【００１２】
３つのＴＮＦ−α阻害剤およびそれらに関連するバイオシミラー／誘導体に相当するものは、ＵＣ患者の臨床反応および寛解を導入し、維持するために使用することができる。アザチオプリンとの併用療法も寛解を導入するために用いられる。しかし、ＴＮＦ−α阻害剤を投与された５０％を超える患者は、導入用量に反応しないか、または時間の経過とともにＴＮＦ−α阻害剤の反応を失う(Fausel, R. and A. Afzali (2015) Ther Clin Risk Manag 11: 63-73)。 
【００１３】
α４β７インテグリン阻害薬であるベドリズマブは、最近ＵＣの治療に承認された。ＧＥＭＩＮＩ  １試験において、ベドリズマブは、臨床反応、臨床寛解および粘膜治癒の導入および維持に対してプラセボよりも有効であることが示された（Feagan,B. P. Rutgeerts、B. E. Sands、S. Hanauer、J. F. Colombel、W. J. Sandborn、G. Van Assche、J. Axler、H. J. Kim、S. Danese、I. Fox、C. Milch、S. Sankoh、T. Wyant、J. Xu、A. Parikh and G. S. Group (2013). "Vedolizumab as induction and maintenance therapy for ulcerative colitis." N Engl J Med 369(8): 699-710.)。潰瘍性大腸炎のさらなる治療選択肢としては、トファシチニブなどのＪＡＫ阻害剤が挙げられる。
【００１４】
慢性的に活動的であり、既知の治療に不応性である潰瘍性大腸炎患者は、深刻な医学的課題を抱えており、多くの場合、残された唯一の治療方針は結腸切除術である。全結腸切除術は重度のＵＣには治癒の可能性があるが、パウチ不全、パウチ炎、骨盤内敗血症、女性の不妊症、夜間の便汚れなどの合併症が後に続く可能性があるのでリスクを伴う人生が変わる手術である。そのため手術は通常、重度の難治性疾患、手術もしくはその他の緊急性のある患者、または結腸直腸異形成もしくは癌のある患者のために用意されている。
【００１５】
ＵＣの緊急の第三選択治療は、長さ１９塩基の修飾された一本鎖デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ベースの合成オリゴヌクレオチドであるコビトリモド（Ｋａｐｐａｐｒｏｃｔ／ＤＩＭＳ０１５０）である。コビトリモドは、配列5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'（配列番号：１）を有し、ＣＧジヌクレオチドはメチル化されていない。アスタリスク（＊）はホスホロチオエート修飾を表す。
【００１６】
コビトリモドは、免疫細胞もしくは腸管上皮細胞の表面に存在するＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）を標的とすることにより、免疫調節剤として機能する。これらの免疫細胞（すなわち、Ｂ細胞および形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ））は、結腸および鼻粘膜などの粘膜表面に豊富に存在する。免疫系はＵＣの変化の重要なメディエーターである。ＵＣ患者の結腸や直腸の粘膜は慢性的に炎症を起こしており、活動的な免疫細胞を含んでいる。
【００１７】
コビトリモドは、炎症部位に局所的に投与することができ、これにより、薬物を多数の標的細胞と密接に接触させ、薬物がＴＬＲ９を発現する細胞が豊富な部位に到達することを確実にする。コビトリモドによるこれらの細胞の活性化は、古典的な抗炎症性サイトカインであり、コビトリモドの臨床効果の重要な因子であると考えられているＩ型インターフェロンおよびインターロイキン１０（ＩＬ−１０）などの様々なサイトカインを誘導する。
【００１８】
コビトリモドを用いたさまざまな非臨床的安全性試験および４つの臨床試験が実施されている。ほとんどの試験では、比較的低用量（３０ｍｇ）のコビトリモドの投与が行われている。全体として、コビトリモドに関するデータは、慢性活動性ＵＣの患者に対するポジティブなベネフィット・リスク評価を裏付けている。コビトリモドは安全で忍容性が高く、慢性活動性ＵＣ患者の臨床反応と寛解、ならびに治療不応性の中等度から重度の慢性活動性ＵＣ患者の症候性および内視鏡的寛解の導入に有効であることが示されている。
【００１９】
コビトリモドを用いた現在の治療法としては、例えば直腸浣腸として結腸内に局所的に投与することが挙げられる。あるいは、コビトリモドは、結腸内視鏡検査中に、結腸内視鏡の生検チャンネルを通して挿入した噴霧カテーテルまたは他の適切な医療機器の助けを借りて投与することができる。コビトリモドを炎症部位に直接直腸投与するには、医療従事者を必要とすることがあり、したがって患者のコンプライアンスに問題が生じることがある。そのため、一般的に患者が自己投与しやすい経口投与に適したコビトリモドの製剤が必要とされている。
【００２０】
治療の間、経口投与では、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド、例えばコビトリモドが、炎症性腸疾患の影響を受ける部位にほとんど影響を及ぼさないような、例えば口の中や胃の中で、早期に放出されないことが重要である。言い換えれば、そのような製剤は、消化管内の関連するポイント、例えば回腸または結腸内でのＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドへの局所曝露を最大にしなければならない。したがって、適切な製剤は、消化器系内の所望のポイントまでＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの放出を防止すべきである。
【発明の概要】
【００２１】
現在驚くべきことに、経口投与に適した製剤が提供され得ることが判明しており、この製剤は、（ｉ）ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、および（ｉｉ）カプリル酸とプロピレングリコールとのモノエステルおよび／もしくはジエステル、またはカプリル酸とグリセロールとのモノエステルおよび／もしくはジエステルであるエステル、を含む。
【００２２】
好ましくは、オリゴヌクレオチドは、配列
5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'（配列番号：２）
を含む。
【００２３】
これは、カプリル酸とプロピレングリコールとのモノエステルおよび／もしくはジエステルであるエステル、またはカプリル酸とグリセロールとのモノエステルおよび／もしくはジエステルであるエステル、例えばプロピレングリコールカプリレートエステルが、上記のオリゴヌクレオチドとの高い化学的適合性を示すだけでなく、製剤に良好な分散性を与え、経時的な分解を最小限に抑えることができるという予想外の知見に基づくものである。多数の異なる担体を試験した結果、プロピレングリコールカプリレートエステルは、分散特性に変化を示さない一方で、経時的な分解が最も少ないことが判明した。さらに、この担体はまた、製剤が体内の所望の領域に存在すると、オリゴヌクレオチドを比較的迅速に放出することができる。
【００２４】
本発明はさらに、経口投与に適したカプセルを提供し、前記カプセルは以下を含む：
ａ）ゼラチン容器と、その容器内の
ｂ）上記で定義されているような製剤。
【００２５】
合わせてカプセルはさらに以下のものを含んでいてもよい：
ｃ）容器の外表面へのコーティング。
【００２６】
コーティングの存在は、オリゴヌクレオチドが体内で放出されるポイントを、例えば消化器系内の特定の環境におけるｐＨに基づいて決定することを可能にする。このようにして、カプセルは、炎症性腸疾患の治療に効果がないであろう時点でオリゴヌクレオチドを放出しない。オリゴヌクレオチドは、それにより、炎症の部位、通常は結腸を標的とし、最も効果的な治療を提供する。
【００２７】
本発明は、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎またはクローン病の治療における使用のための上記製剤またはカプセルを提供する。
【００２８】
本発明はまた、対象者における炎症性腸疾患を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書で定義される製剤またはカプセルを前記対象者に経口投与することを含む。
【００２９】
本発明はまた、炎症性腸疾患の治療用医薬の製造のための、本明細書で定義される製剤またはカプセルの使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、初期の時点で、異なる賦形剤（Ｃａｐｒｙｏｌ、Ｓｔｅｒｏｔｅｘ、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ、ＰＥＧ１５００およびＧｅｌｅｏｌ）を用いて調製した５つの２成分ミックスとコビトリモド標準を比較したクロマトグラムを示す。
【図２】図２は、４週間の時点での、異なる賦形剤（Ｃａｐｒｙｏｌ、Ｓｔｅｒｏｔｅｘ、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ、ＰＥＧ１５００およびＧｅｌｅｏｌ）を用いて調製した５つの２成分ミックスとコビトリモド標準を比較したクロマトグラムを示す。
【図３】図３は、コーティングされていないカプセルおよびコーティングされたカプセルの溶出試験を示す。
【図４】図４は、実施例５のカプセルの製造開始時、中間時および終了時の含有量均一性の結果を示す。
【図５】図５は、実施例５で調製したコーティングカプセルのコビトリモドの初期溶出試験結果を示す。
【図６】図６は、実施例５のカプセルについて、開始時（点線）、２５℃／相対湿度６０％で１ヶ月間保存した後（破線）、２５℃／相対湿度６０％で６ヶ月間保存した後（実線）の放出実験（溶出試験）の結果を示す。
【図７】図７は、実施例５のカプセルについて、開始時（点線）、４０℃／相対湿度７５％で１ヶ月間保存した後（破線）、４０℃／相対湿度７５％で６ヶ月間保存した後（実線）の放出実験（溶出試験）の結果を示す。
【００３１】
発明の詳細な説明
本明細書に引用されたすべての特許、特許出願、および刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００３２】
本発明は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し、６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'（配列番号：２）を有するオリゴヌクレオチドと、プロピレングリコールカプリレートエステルを含む経口投与に適した製剤を提供する。
【００３３】
本明細書で使用される用語「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結された個々のヌクレオシド単位から形成されるポリヌクレオシドを指す。このようなオリゴヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ、プラスミド、ベクター、または細菌ＤＮＡなどの既存の核酸源から得ることができるが、好ましくは合成法によって製造される。ヌクレオシド残基としては、多数の既知のヌクレオシド間結合のいずれかによって互いに結合することができる。そのようなヌクレオシド間結合としては、限定されないが、天然のヌクレオシド間ホスホジエステル結合、またはホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネート、アルキルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、シロキサン、カーボネート、カルボアルコキシ、アセトアミデート、カルバメート、モルホリノ、ボラノ、チオエーテル、架橋ホスホルアミデート、架橋メチレンホスホネート、架橋ホスホロチオエートおよびスルホンヌクレオシド間結合などの実際の修飾ヌクレオシド間結合が挙げられるが、これらに限定されない。また用語「オリゴヌクレオチド」は、１つ以上の立体特異的ヌクレオシド間結合（例えば、（Ｒｐ）−または（Ｓｐ）−ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、またはホスホトリエステル結合）を有するポリヌクレオシドを包含する。本明細書で使用する「オリゴヌクレオチド」および「ジヌクレオチド」という用語は、リン酸基を含む結合かどうかにかかわらず、そのようなヌクレオシド間結合を有するポリヌクレオシドおよびジヌクレオシドを含むことを明確に意図している。特定の好ましい実施形態では、これらのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合、またはそれらの組み合わせであってもよい。
【００３４】
また用語「オリゴヌクレオチド」は、限定されないが、プロテイン基、親油性基、挿入剤、ジアミン、葉酸、コレステロールおよびアダマンタンなどのさらなる置換基を有するポリヌクレオシドも包含する。また用語「オリゴヌクレオチド」は、限定されないが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、リン酸基を持つペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックされた核酸（ＬＮＡ）、モルホリノ骨格オリゴヌクレオチド、およびアルキルリンカーまたはアミノリンカーを含む骨格セクションを有するオリゴヌクレオチドなどのポリマーを含むいかなる他の核酸塩基も包含する。アルキルリンカーは、分岐または非分岐、置換または非置換、およびキラル的に純粋なまたはラセミ混合物であってもよい。
【００３５】
本発明のオリゴヌクレオチドとしては、天然に存在するヌクレオシド、修飾ヌクレオシド、またはそれらの混合物を挙げることができる。本明細書で使用される用語「修飾ヌクレオシド」は、修飾複素環式塩基、修飾糖部分、またはそれらの組み合わせを含むヌクレオシドである。修飾ヌクレオシドは、本明細書に記載されているように、非天然のピリミジンまたはプリンヌクレオシドであってもよい。修飾ヌクレオシドは、２’−置換リボヌクレオシド、アラビノヌクレオシド、または２’−デオキシ−２’−置換アラビノシドであってもよい。
【００３６】
本明細書で使用されるように、用語「ハイブリッドオリゴヌクレオチド」は、２種以上のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドである。
【００３７】
本明細書において、用語「オリゴヌクレオチド」には、ハイブリッドおよびキメラオリゴヌクレオチドが含まれる。「キメラオリゴヌクレオチド」は、その配列構造内に２種以上のタイプのヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドである。このようなキメラオリゴヌクレオチドの好ましい一例は、ホスホロチオエート、ホスホジエステルまたはホスホロジチオエート領域およびアルキルホスホネートなどの非イオン結合またはアルキルホスホノチオエート結合を含むキメラオリゴヌクレオチドである（ＵＳ５６３５３７７およびＵＳ５３６６８７８）。
【００３８】
本明細書において、用語「オリゴヌクレオチド」には、環状化変異体および環状オリゴヌクレオチドも含まれる。
【００３９】
好ましくは、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの天然ホスホジエステル、または１つの修飾ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートヌクレオシド間結合を含むが、好ましくは、限定されないが、メチルホスホネート、メチルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホチオトリエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、トリエステルプロドラッグ、スルホン、スルホンアミド、スルファメート、ホルマセタール、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、２’ＯＭｅ（２’位置のオキシメチル基）、カーボネート、カルバメート、モルホリノ、ボラノホスホネート、ホスホルアミデートなどの結合または実際の骨格修飾を含み、特に第一級アミノ−ホスホルアミデート、Ｎ３ホスホルアミデートおよびＮ５ホスホルアミデート、および立体特異的結合（例、（Ｒｐ）−または（Ｓｐ）−ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、またはホスホトリエステル結合）も想定される。
【００４０】
ヌクレオシドの糖部分は、天然に存在しない糖部分であり得る。本明細書において、「天然に存在する糖部分」は、例えば、リボースおよび２’−デオキシリボースなどの、核酸の一部として天然に存在する糖部分であり、「天然に存在しない糖部分」は、核酸の一部として天然には生じないが、オリゴヌクレオチドの骨格に使用できる任意の糖である。例えばヘキソースであるがこれに限定されない。アラビノースおよびアラビノース誘導体は、好ましい糖部分の例である。
【００４１】
修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば、細胞取り込みの強化、核酸標的に対する親和性の強化およびヌクレアーゼの存在下での安定性の向上などの望ましい特性のため、天然の形態よりもしばしば好まれる。オリゴヌクレオチドは通常、１０を超え１００までまたはそれ以上のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドで構成されるが、約６から約４０の間が好ましく、約８から約２０の間が最も好ましい。正確なサイズは多くの要因に依存し、次にその要因はオリゴヌクレオチドの最終的な機能または用途に依存する。オリゴヌクレオチドは、化学合成、ＤＮＡ複製、逆転写、またはそれらの組み合わせなどの任意の方法で生成してもよい。
【００４２】
ＣｐＧジヌクレオチドは、ホスホジエステル結合（すなわち「ｐ」）によってグアニン三リン酸デオキシヌクレオチド（すなわち「Ｇ」）に結合したシトシン三リン酸デオキシヌクレオチド（すなわち「Ｃ」）である。ＣｐＧジヌクレオチドを有するＣおよびＧ部位は、Ｃ部位がオリゴヌクレオチドの５’末端に近く、Ｇ部位がオリゴヌクレオチドの３’末端に近くなるように配向されている。ＣｐＧジヌクレオチドは、「ＣｐＧモチーフ」または「ＣＧジヌクレオチド」としても知られている。ＣｐＧジヌクレオチドは、メチル化されていても、メチル化されていなくてもよいが、好ましくはメチル化されていない。
【００４３】
本発明の一態様において、オリゴヌクレオチドは、配列５’−Ｘｍ−ＣＧ−Ｙｎ−３’を有するオリゴヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドの全長が６〜４０ヌクレオチドである時に、ＸはＡ、Ｔ、ＣまたはＧであり、ＹはＡ、Ｔ、ＣまたはＧであり、ｍは０〜３８であり、ｎは０〜３８である。
【００４４】
典型的には、上記配列（５’−Ｘｍ−ＣＧ−Ｙｎ−３’）を有するオリゴヌクレオチドにおいて、オリゴヌクレオチドの全長が６〜４０ヌクレオチドの時は、ｍは０〜３５かつｎは０〜３５であり、ｍは０〜３０かつｎは０〜３０であり、ｍは０〜２５かつｎは０〜２５であり、ｍは０〜２０かつｎは０〜２０であり、ｍは０〜１５かつｎは０〜１５であり、ｍは０〜１２かつｎは０〜１２であり、ｍは０〜１０かつｎは０〜１０であり、ｍは０〜８かつｎは０〜８であり、ｍは０〜６かつｎは０〜６であり、またはｍは０〜４かつｎは０〜４である。
【００４５】
好ましくは、上記配列（５’−Ｘｍ−ＣＧ−Ｙｎ−３’）を有するオリゴヌクレオチドにおいて、オリゴヌクレオチドの全長が６〜４０ヌクレオチドの時は、ｍは１〜３５かつｎは１〜３５であり、ｍは１〜３０かつｎは１〜３０であり、ｍは１〜２５かつｎは１〜２５であり、ｍは１〜２０かつｎは１〜２０であり、ｍは１〜１５かつｎは１〜１５、ｍは１〜１２かつｎは１〜１２であり、ｍは１〜１０かつｎは１〜１０であり、ｍは１〜８かつｎは１〜８であり、ｍは１〜６かつｎは１〜６であり、またはｍは１〜４かつｎは１〜４である。
【００４６】
より好ましくは、、上記配列（５’−Ｘｍ−ＣＧ−Ｙｎ−３’）を有するオリゴヌクレオチドにおいて、オリゴヌクレオチドの全長が６〜４０ヌクレオチドの時は、ｍが２〜３５かつｎが２〜３５であり、ｍが２〜３０かつｎが２〜３０であり、ｍが２〜２５かつｎが２〜２５であり、ｍが２〜２０かつｎが２〜２０であり、ｍが２〜１５かつｎが２〜１５であり、ｍは２〜１２かつｎは２〜１２であり、ｍは２〜１０かつｎは２〜１０であり、ｍは２〜８かつｎは２〜８であり、ｍは２〜６かつｎは２〜６であり、ｍは２〜４かつｎは２〜４であり、またはｍは２かつｎは２である。
【００４７】
典型的には、オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドは、メチル化されていない。
【００４８】
したがって、オリゴヌクレオチドは、ＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない配列5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'（配列番号:2）を有していてもよい。 あるいは、オリゴヌクレオチドは、配列5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'（配列番号：２）を有していてもよく、ここで、ＣＧジヌクレオチドはメチル化されており、好ましくは、ＣＧジヌクレオチドは、片方または両方のヌクレオチドのリボースユニット上でメチル化されている。
【００４９】
典型的には、前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、骨格修飾を有する。前記骨格修飾は、前記オリゴヌクレオチドの５’−および／または３’−末端に位置していてもよい。
【００５０】
典型的には、ホスフェート骨格修飾は、５’インターヌクレオチド結合上、または３’インターヌクレオチド結合上で生じてもよい。前記修飾は、前記オリゴヌクレオチドの全長に沿った任意の位置の１つ以上のヌクレオチドで生じてもよい。
【００５１】
典型的には、前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、ホスフェート骨格修飾を有する。骨格修飾は、典型的には、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート修飾である。
【００５２】
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾糖部位核酸塩基を含んでいてもよい。修飾糖部位は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖部位であってもよい。
【００５３】
ホスホロチオエート結合は、配列中、例えば、配列：ＣＧジヌクレオチドはメチル化されていない、5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'（配列番号：１）においてアスタリスク（＊）で図示することができる。
【００５４】
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、ＣＧジヌクレオチドはメチル化されていない、配列5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'（配列番号：1）を有する。したがって、好ましくは、前記オリゴヌクレオチドはコビトリモドである。
【００５５】
製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを含有するオリゴヌクレオチド、ならびに、カプリル酸とプロピレングリコールとのモノエステルおよび／もしくはジエステル、またはカプリル酸とグリセロールとのモノエステルおよび／もしくはジエステル、プロピレングリコールカプリレートエステル、であるエステル、を含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。
【００５６】
ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドは、製剤の１〜５０重量％、または２〜４０重量％、または３〜３０重量％、または４〜２５重量％、５〜２０重量％、１０〜１５重量％、または１１〜１４重量％の間の量のコビトリモドで存在してもよい。ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを有するオリゴヌクレオチドは、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１１．５重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％または約１５重量％の量で製剤中に存在していてもよい。
【００５７】
本発明の組成物に使用されるエステルは、カプリル酸とプロピレングリコール（プロパン−１，２−ジオールとしても知られる）とのモノエステルおよび／またはジエステル、またはカプリル酸とグリセロール（プロパン−１，２，３−トリオールとしても知られる）とのモノエステルおよび／またはジエステルである。カプリル酸は、オクタン酸としても知られている。したがって、そのエステルは、（ｉ）プロピレングリコールモノカプリレートおよび／もしくはプロピレングリコールジカプリレート、または（ｉｉ）グリセロールモノカプリレートおよび／もしくはグリセロールジカプリレートである。
【００５８】
カプリル酸とプロピレングリコールとのモノエステルでは、エステル結合は、プロピレングリコール（２−ヒドロキシプロピルオクタノエート）の１位にあってもよい。カプリル酸とプロピレングリコールのモノエステルでは、エステル結合はプロピレングリコール（１−ヒドロキシプロパン−２−イル  オクタノエート）の２位にあってもよい。
【００５９】
典型的には、本発明で使用されるエステルは、プロピレングリコールのモノエステルおよび／もしくはジエステル（すなわち、プロピレングリコールモノカプリレート［カプリル酸とプロピレングリコールとのモノエステル］および／またはプロピレングリコールジカプリレート［カプリル酸とプロピレングリコールとのジエステル］）である。このように、エステルはプロピレングリコールカプリレートエステルであることが好ましい。
【００６０】
エステルは、プロピレングリコールモノカプリレートを含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。あるいは、エステルは、プロピレングリコールジカプリレートを含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。
【００６１】
しかし、エステルは、プロピレングリコールモノカプリレートとプロピレングリコールジカプリレートの両方の組み合わせを含むことが特に好ましい。典型的には、エステルは、エステルの総重量に対して１０〜９０重量％のプロピレングリコールモノカプリレートと１０〜９０重量％のプロピレングリコールジカプリレートを含む。好ましくは、エステルは、エステルの総重量に対して、５５〜８０重量％の間のプロピレングリコールモノカプリレートと、２０〜４５重量％の間のプロピレングリコールジカプリレートを含む。より好ましくは、エステルは、エステルの総重量に対して、６０〜７０重量％の間のプロピレングリコールモノカプリレートと、３０〜４０重量％の間のプロピレングリコールジカプリレートを含む。
【００６２】
エステルは、製剤の５０から９９重量％、または６０から９８重量％、または７０から９７重量％、または７５から９６重量％、または８０から９５重量％、または８０から９０重量％、または８５から９０重量％の量で製剤中に存在してもよい。例えば、エステルは、製剤中、約９５％、約９４％、約９３％、約９２％、約９１％、約９０％、約８９％、約８８％、約８７％、約８６％、約８５％、約８４％、約８３％、または約８２重量％の量で存在してもよい。
【００６３】
製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１〜５０重量％、および本明細書で定義されるエステルを５０〜９９重量％を含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを２〜４０重量％、および本明細書で定義されるエステルを６０〜９８重量％を含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを３〜３０重量％、および本明細書で定義されるエステルを７０〜９７重量％を含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを４〜２５重量％、および本明細書で定義されるエステルを７５〜９６重量％含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを５〜２０重量％、および本明細書で定義されるエステルを８０〜９５重量％含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１０〜１５重量％、および本明細書で定義されるエステルを８５〜９０重量％含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１１〜１４重量％、および本明細書で定義されるエステルを８６〜８９重量％含んでいてもよい。
【００６４】
製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを約１３重量％、および本明細書で定義されるエステルを８７重量％含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを約１４重量％、および本明細書で定義されるエステルを８６重量％含んでいてもよい。
【００６５】
本発明の製剤は、好ましくは、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１１〜１４重量％、および本明細書で定義されるエステルを８６〜８９重量％を含む。
【００６６】
プロピレングリコールモノカプリレートおよびプロピレングリコールジカプリレートの両方の組み合わせを含む好適なエステルの市販例は、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓe社製のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣである。
【００６７】
製剤はさらにゲル化剤を含んでいてもよい。ゲル化剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）であってもよい。
【００６８】
製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモド、本明細書で定義されるエステル、およびゲル化剤を含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。
【００６９】
好適な高粘度ＨＰＭＣゲル化剤の市販例は、Ｄｏｗ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社製のＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍである。
【００７０】
ゲル化剤は、１から２０重量％、または２から１５重量％、３から１０重量％、または約４から８重量％の量で製剤中に存在してもよい。例えば、ゲル化剤は、約４から５重量％、例えば約５重量％の量で存在してもよい。ゲル化剤、例えばＨＰＭＣを添加することにより、作業性のある製品を提供する一方で、放出時間を増加させることができる。
【００７１】
例えば、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを５〜２０重量％、ＨＰＭＣ１〜１０重量％、および本明細書で定義されるエステル７０〜９４重量％を含んでいてもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１０〜１５重量％、ＨＰＭＣ３〜７重量％、および本明細書で定義されるエステル７８〜８７重量％を含んでもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを約１１．５重量％、ＨＰＭＣ約５重量％、およびプロピレングリコールカプリレートエステル約８３．５重量％を含んでいてもよい。
【００７２】
製剤はさらに酸化防止剤を含んでいてもよい。好適な酸化防止剤は、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）である。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモド、本明細書で定義されるエステル、ゲル化剤および酸化防止剤、を含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。ゲル化剤は、ＨＰＭＣであってもよい。したがって、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモド、本明細書で定義されるエステル、ＨＰＭＣおよびブチル化ヒドロキシトルネ（hydroxytolune）、を含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。酸化防止剤を含むことは、経時的にベース製剤の化学的安定性を向上させるのに役立つ。
【００７３】
酸化防止剤は、０．０１〜２重量％、０．０５〜１重量％、０．０７５〜０．５重量％、または約０．１重量％の量で製剤中に存在してもよい。
【００７４】
例えば、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを５から２０重量％、ＨＰＭＣを１から２０重量％、ブチル化ヒドロキシトルネ（hydroxytolune)を０．０１から２重量％、および本明細書で定義されるエステルを５８から９４重量％を含んでもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１０から１５重量％、ＨＰＭＣを３から１０重量％、ブチル化ヒドロキシトルネ（hydroxytolune)を０．０７５から０．５重量％、および本明細書で定義されるエステルを７５から８７重量％を含んでいてもよい。
【００７５】
製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを約１１．５重量％、ＨＰＭＣ約５重量％、プロピレングリコールカプリレートエステル約８３．５重量％、および約０．１重量％のブチル化ヒドロキシトルエンを含んでもよい。
【００７６】
製剤は、さらにｐＨ緩衝液を含んでいてもよい。したがって、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモド、本明細書で定義されるエステル、ゲル化剤、酸化防止剤、およびｐＨ緩衝液、を含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。ｐＨ緩衝液を含むことは、経時的にベース製剤の化学的安定性を向上させるのに役立つ。
【００７７】
ｐＨ緩衝液は、トロメタミンであってもよい。ゲル化剤は、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍのような高分子量ＨＰＭＣであってもよい。酸化防止剤は、ブチル化ヒドロキシトルエンであってもよい。したがって、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモド、本明細書で定義されるエステル、ＨＰＭＣ、ブチル化ヒドロキシトルネ（hydroxytolune)およびトロメタミン、を含む、から本質的になる、またはからなるものであってもよい。
【００７８】
ｐＨ緩衝液は、０．０５〜５重量％、０．１から４重量％、０．１から３重量％、０．１から２重量％、または０．１から１重量％の量で製剤中に存在してもよい。ｐＨ緩衝液は、０．１から０．５重量％の量で製剤中に存在してもよい。ｐＨ緩衝液は、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、または約０．４重量％の量で製剤中に存在してもよい。
【００７９】
例えば、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを５から２０重量％、ＨＰＭＣを１から２０重量％、ブチル化ヒドロキシトルエン０．０１から２重量％、トロメタミン０．０５から５重量％、および本明細書で定義されるエステル５３から９４重量％を含んでもよい。製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを１０から１５重量％、ＨＰＭＣを３から１０重量％、ブチル化ヒドロキシトルネ（hydroxytolune)０．０７５から０．５重量％、トロメタミン０．１から１重量％、および本明細書で定義されるエステル７５から８７重量％を含んでもよい。例えば、製剤は、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくは配列番号：２を含むオリゴヌクレオチド、より好ましくはコビトリモドを約１１．５重量％、ＨＰＭＣ約４．５重量％、プロピレングリコールカプリレートエステル約８３．７重量％、ブチル化ヒドロキシトルエン約０．１重量％、およびトロメタミン約０．２重量％を含んでもよい。
【００８０】
また本発明としては、経口投与に適したカプセルが挙げられ、前記カプセルは以下を含む：
ａ）ゼラチン容器、およびその容器内に
ｂ）上記で定義された製剤。
【００８１】
カプセルはさらに以下を含む：
ｃ）容器の外表面上のコーティング。
【００８２】
典型的には、コーティングは、第１のポリマーおよび／または第２のポリマーを含む。
【００８３】
第１のポリマーは、典型的には低ｐＨポリマーであり、第２のポリマーは、典型的には高ｐＨポリマーである。第１のポリマーは、典型的にはｐＨ４．５以上、ｐＨ７以下のリン酸緩衝液に溶解し、第２のポリマーは、典型的にはｐＨ６．８以上のリン酸緩衝液に溶解する。
【００８４】
第１のポリマーは、典型的には低ｐＨポリマー、すなわち４．５以上７以下のｐＨでリン酸緩衝液に溶解するポリマーである。第１のポリマーは、剤形が胃を出て小腸に入ったときにのみ溶解または崩壊を開始する。
【００８５】
より好ましくは、第１のポリマーは、５以上、さらに好ましくは５．５を超えるｐＨで溶解する。第１のポリマーは、ｐＨ７未満、より好ましくはｐＨ６．８未満で、リン酸緩衝液中で完全に溶解する。「ｐＨＸを超えると溶解する」ということは、ｐＨＸ以下ではポリマーが溶解せず固体であり、ｐＨＸを超えると溶解または崩壊することを意味し、「ｐＨＸを超えｐＨＹ以下で溶解する」ということは、ポリマーがｐＨＸ以下では溶解せず、固体であり、ｐＨＸを超えると溶解または崩壊し、ｐＨＹ以下では完全に溶解または崩壊することを意味する。
【００８６】
第二のポリマーは、典型的には高ｐＨポリマー、すなわちｐＨ６．８を超えるとリン酸緩衝液に溶解するポリマーである。したがって、第２のポリマーは、溶解するにしても、投与形態が遠位腸領域に到達したときにのみ、溶解を開始する。より好ましくは、第二のポリマーは、ｐＨ７．０以上で溶解するか、またはｐＨ７．２を超えた時点で溶解してもよい。
【００８７】
典型的には、コーティングは、乾燥コーティングベースでコーティングの１５重量％から５０重量％の量の第１のポリマーを含む。典型的には、コーティングは、乾燥コーティングベースでコーティングの１５重量％から５０重量％の量の第２のポリマーを含む。
【００８８】
第１のポリマーは、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１であってもよい。第１のポリマーは、ｐＨ５．５を超えて溶解してもよく、すなわち、第１のポリマーは、ｐＨ５．５を超えて溶解する。第１のポリマーは、９１〜１０１℃の間のガラス転移温度を有していてもよい。第１のポリマーは、２５０，０００〜５００，０００ｇ／ｍｏｌの間、または２７５，０００〜４００，０００ｇ／ｍｏｌの間、または３００，０００〜３５０，０００ｇ／ｍｏｌの間、好ましくは約３２０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有していてもよい。
【００８９】
例えば、第１のポリマーは、ｐＨ５．５を超えると溶解し、９１〜１０１℃の間のガラス転移温度を有し、約３２０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１であってもよい。
【００９０】
第１のポリマーとして好適なポリマーの市販例は、エボニック社製のＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０  Ｄ−５５コポリマーである。
【００９１】
第２のポリマーは、ポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１であってもよい。
【００９２】
第２のポリマーは、ｐＨ７を超えて溶解してもよく、すなわち、第１のポリマーはｐＨ７を超えて溶解し、第２のポリマーは、３８℃から４８℃の間のガラス転移温度を有してもよい。第２のポリマーは、１５０，０００〜４００，０００ｇ／ｍｏｌの間、または２００，０００〜３５０，０００ｇ／ｍｏｌの間、または２５０，０００〜３００，０００ｇ／ｍｏｌの間、好ましくは約２８０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有していてもよい。
【００９３】
例えば、第２のポリマーは、ｐＨ７を超えると溶解し、３８〜４８℃の間のガラス転移温度を有し、約２８０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１であってもよい。
【００９４】
第２のポリマーとして好適なポリマーの市販例は、Ｅｖｏｎｉｋ社製Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ  ３０Ｄコポリマーである。
【００９５】
したがって、典型的には、コーティングは、第１のポリマーとしてポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１と、第２のポリマーとしてポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１の両方を含んでもよい。
【００９６】
ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１とポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１は、５：１から１：５、または２：１から１：４、または１：１から１：３の重量比で存在してもよい。ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１とポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１の重量比は、約１：１、約１：２、または約１：３であってもよい。
【００９７】
典型的には、コーティングは、ｐＨ５．５を超えて溶解する第１のポリマーとｐＨ７を超えて溶解する第２のポリマーを含んでもよい。第１のポリマーは９１〜１０１℃の間のガラス転移温度を有してもよく、第２のポリマーは３８〜４８℃の間のガラス転移温度を有してもよい。
【００９８】
第１のポリマーは、２５０，０００から５００，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有してもよく、第２のポリマーは、１５０，０００から４００，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有してもよい。第１のポリマーは、２７５，０００から４００，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有してもよく、第２のポリマーは、２００，０００から３５０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有してもよい。第１のポリマーは、３００，０００から３５０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有してもよく、第２のポリマーは、２５０，０００から３００，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有してもよい。好ましくは、第１のポリマーは約３２０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有し、第２のポリマーは約２８０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【００９９】
例えば、コーティングは、第１ポリマーであるｐＨ５．５を超えて溶解し、９１から１０１℃の間のガラス転移温度を有し、約３２０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１と、第２のポリマーであるｐＨ７を超えて溶解し、３８〜４８℃の間のガラス転移温度を有し、約２８０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を約１：１の重量比で含んでもよい。
【０１００】
例えば、コーティングは、第１ポリマーであるｐＨ５．５を超えて溶解し、９１から１０１℃の間のガラス転移温度を有し、約３２０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１と、第２のポリマーであるｐＨ７を超えて溶解し、３８〜４８℃の間のガラス転移温度を有し、約２８０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を約１：３の重量比で含んでもよい。
【０１０１】
ゼラチン容器の外表面へのコーティングは、カプセルをコーティング溶液中でコーティングすることによって得ることができ、前記コーティング溶液は、上記で定義された第１のポリマーおよび第２のポリマーを含んでいる。
【０１０２】
カプセルは、コーティング後に硬化させてもよい。カプセルは、流動層コーティング機を用いてコーティングしてもよい。カプセルは、１〜２４時間、３から１８時間、６から１２時間、または約８時間、室温で放置して硬化させてもよい。
【０１０３】
コーティング溶液は、さらに、タルク、トリエチルシトレートおよび水を含んでもよい。この場合、コーティング溶液は、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１を５から４０重量％、ポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を５から４０重量％、タルク１から１０重量％、トリエチルシトレート０．５から５重量％、および水８．５から８８．５重量％を含んでもよい。コーティング溶液は、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１を１５重量％から２０重量％、ポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を１５重量％から２０重量％、タルク１重量％から１０重量％、トリエチルシトレート０．５重量％から５重量％、および水４５重量％から６８．５重量％を含んでもよい。例えば、コーティング溶液は、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１を約２１重量％、ポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を約２１重量％、タルク約５．５重量％、トリエチルシトレート約２重量％、および水約５１重量％を含んでもよい。
【０１０４】
コーティング溶液は、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１を５から１５重量％、ポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を２０から４０重量％、タルクを１から１０重量％、トリエチルシトレートを０．５から５重量％、および水を３０から７３．５重量％を含んでもよい。例えば、コーティング溶液は、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１を約１０重量％、ポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を約３０重量％、タルク約５．５重量％、トリエチルシトレート約２重量％、および水約５１重量％を含んでもよい。
【０１０５】
好ましい態様において、本発明はまた、経口投与に適したカプセルを提供し、前記カプセルは、以下を含む：
ａ）ゼラチン容器、および容器内に
ｂ）製剤、および
ｃ）容器の外表面上のコーティング、
ここで、製剤は、約１１．５重量％のコビトリモド、約４．５重量％の高分子量ヒドロキシプロピルメチルセルロース、約８３．７重量％のプロピレングリコールカプリレートエステル、約０．１重量％のブチルヒドロキシトルエン、および約０．２重量％のトロメタミンを含み；またコーティングは、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１とポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を約１：１の割合で含む。
【０１０６】
好ましい態様において、本発明はまた、経口投与に適したカプセルを提供し、前記カプセルは、以下を含む：
ａ）ゼラチン容器、および容器内に
ｂ）製剤、および
ｃ）容器の外表面上のコーティング、
ここで、製剤は、約１１．５重量％のコビトリモド、約４．５重量％の高分子量ヒドロキシプロピルメチルセルロース、約８３．７重量％のプロピレングリコールカプリレートエステル、約０．１重量％のブチルヒドロキシトルエン、および約０．２重量％のトロメタミンを含み；またコーティングは、ポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１とポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１を約１：３の割合で含む。
【０１０７】
好ましい態様において、本発明はまた、経口投与に適したカプセルを提供し、前記カプセルは、以下を含む：
ａ）ゼラチン容器、および容器内に
ｂ）製剤、および
ｃ）容器の外表面上のコーティング、
ここで、製剤は、約１１．５重量％のコビトリモド、約４．５重量％の高分子量ヒドロキシプロピルメチルセルロース、約８３．７重量％のプロピレングリコールカプリレートエステル、約０．１重量％のブチルヒドロキシトルエン、および約０．２重量％のトロメタミンを含み；またコーティングが、コーティング溶液中でカプセルをコーティングすることによって得られ、前記コーティング溶液は、約２１重量％のポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１、約２１重量％のポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１、約５．５重量％のタルク、約２重量％のトリエチルシトレートおよび約５１重量％の水を含む。
【０１０８】
好ましい態様において、本発明はまた、経口投与に適したカプセルを提供し、前記カプセルは、以下を含む：
ａ）ゼラチン容器、および容器内に
ｂ）製剤、および
ｃ）容器の外表面上のコーティング、
ここで、製剤は、約１１．５重量％のコビトリモド、約４．５重量％の高分子量ヒドロキシプロピルメチルセルロース、約８３．７重量％のプロピレングリコールカプリレートエステル、約０．１重量％のブチルヒドロキシトルエン、および約０．２重量％のトロメタミンを含み；またコーティングが、コーティング溶液中でカプセルをコーティングすることによって得られ、前記コーティング溶液は、約１０重量％のポリ（メタクリル酸−コ−エチルアクリレート）１：１、約３０重量％のポリ（メチルアクリレート−コ−メチルメタクリレート−コ−メタクリル酸）７：３：１、約５．５重量％のタルク、約２重量％のトリエチルシトレートおよび約５１重量％の水を含む。
【０１０９】
本発明のカプセルは、コーティング中の第２のポリマーに対する第１のポリマーの比率を変化させることにより、消化管内の特定の領域のｐＨに対応する特定のｐＨまたは範囲のｐＨの条件に曝されたときに、ＣｐＧジヌクレオチドを含有し６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドを放出するように設計されていてもよい。
【０１１０】
例えば、回盲部接合部のｐＨは、ｐＨ６．５〜７．５程度である。ＧＩ管に沿ったｐＨの変動性を認識することが重要であり、特に罹患状態でのｐＨの変動性を認識することが重要である。例えば、ｐＨ＞７．０で溶解するコーティングが適用された場合、ＧＩ管のｐＨが最小値に達することがなく、それによって活性物質の不放出をもたらす危険性がある。この問題は、結腸を標的とした薬物送達システムのいくつかでしばしば報告されている。この問題を克服するために、本発明のコーティング組成物は、標的より低いｐＨで溶解する量の腸管ポリマーを含むようにデザインされている。コア製剤中に制御放出機構を含むことと共に、「ラグ」タイムを作成して、薬物放出の発現を遅延させて、無放出だけでなく、任意の早期放出を最小化する。典型的には、本発明のカプセルは、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを、ｐＨ６．５〜７．５の条件に曝露したとき、すなわち、オリゴヌクレオチド放出の開始がｐＨ６．５〜７．５の間であるときに放出するように設計されている。これは、回盲部接合部のｐＨに対応し、オリゴヌクレオチドを結腸に標的化することを可能にする。したがって、本発明のカプセルは、対象者に経口投与されたときに、オリゴヌクレオチドの放出を回盲部接合部で開始するように設計されていてもよい。これにより、オリゴヌクレオチドを結腸に標的化することができ、それにより、結腸に影響を与える炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎またはクローン病の標的化された治療を可能にする。典型的には、カプセルは、ｐＨ６．５〜７．５の条件に２時間以上、好ましくは３〜１８時間、より好ましくは５〜１２時間の期間にわたって曝露したときに、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを放出するように設計されている。
【０１１１】
回腸（小腸）のｐＨは約５．５である。あるいは、本発明のカプセルは、ＣｐＧジヌクレオチドを含み６〜４０個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドを、ｐＨ５．５〜６の条件に曝露したとき、すなわちオリゴヌクレオチド放出の開始がｐＨ５．５〜６の間であるときに放出するように設計されている。これは、回腸のｐＨに対応し、オリゴヌクレオチドを回腸に標的化することを可能にする。したがって、本発明のカプセルは、対象者に経口投与された場合、オリゴヌクレオチドを回腸で放出するように設計されていてもよい。これにより、オリゴヌクレオチドを回腸に標的化することができ、それにより、回腸に影響を及ぼす炎症性腸疾患、特にクローン病の標的化された治療を可能にする。
【０１１２】
本発明はまた、対象者の炎症性腸疾患、好ましくは潰瘍性大腸炎またはクローン病の治療に使用するための上記のような製剤またはカプセルに関する。
【０１１３】
上記のような使用のための製剤またはカプセルは、上記で定義されたオリゴヌクレオチドを、回盲部接合部で放出してもよい。上記のように使用するための製剤またはカプセルは、ｐＨ６．５〜７．５、好ましくはｐＨ６．５〜６．８で上記定義されたオリゴヌクレオチドを放出してもよい。
【０１１４】
上記のように使用するための製剤またはカプセルは、上記で定義されたオリゴヌクレオチドを回腸で放出してもよい。上記のように使用するための製剤またはカプセルは、ｐＨ５．５〜６で上記定義されたオリゴヌクレオチドを放出してもよい。
【０１１５】
本明細書で使用される用語「対象者」は、ヒトの対象者／患者を指す。「対象者」および「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【０１１６】
本明細書で使用される、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）という用語は、結腸および胃腸管の炎症状態の一群を指す。ＩＢＤの主なタイプは、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）およびクローン病である。ＵＣとクローン病の主な違いは、炎症性変化の場所と性質である。クローン病は、口から肛門まで、消化管のあらゆる部分に影響を及ぼすが、ＵＣは結腸と直腸に限定される。場合によっては、症状の特異性のために、クローン病またはＵＣのいずれかの確定診断を下すことができない。これらの場合、不確定な大腸炎の診断が行われる場合がある。ＩＢＤの他の形態には、コラーゲン性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、転用性大腸炎、ベーチェット病および不確定性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１７】
典型的には、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病である。
【０１１８】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）という疾患は、当業者にはよく知られている。本発明に従って治療される潰瘍性大腸炎は、潰瘍性直腸炎、遠位または左側大腸炎、広汎性大腸炎、膵炎およびパウチ炎の治療を含み得る。
【０１１９】
ＵＣの患者は典型的には、寛解から重度の活動性に至るまで、疾患重症度のスペクトルを示す。臨床評価を使用して、ＵＣ患者をD’Haens, Gastroenterology 2007; 132: 763-786で定義されている４つの疾患活動性サブグループに分類でき、その全体は参照により本明細書に組み込まれる：（１）寛解（２または３回以下の便／日、便中に血液および／または膿が存在せず、全身症状なし）；（２）軽度の活動性疾患（３または４回の便／日および／または便中に血液および／または膿の存在が毎日ではない、発熱または体重減少の全身症状なし）；（３）中等度の活動性疾患（４回を超える便／日、および／または血液および／または膿が毎日存在）、全身症状が最小限；および（４）重度の活動性疾患（６回を超える血便／日、および発熱、頻脈、貧血、または赤血球沈降速度ＥＳＲによって示される毒性の証拠）。
【０１２０】
典型的には、患者は中等度から重度のＵＣに苦しんでいる。好ましくは、患者は上記で定義された中等度から重度のＵＣに苦しんでいる。
【０１２１】
本明細書で使用する場合、「治療」および「治療する」という用語は、疾患もしくは状態の治療および/もしくは回復および/もしくは予防または徴候の重篤化／悪化の軽減、ならびに疾患もしくは状態の原因の治療を包含すると理解されるべきであり、対象者の状態を改善または安定させる方法で、症状、臨床徴候および状態の根底にある病状を逆転、軽減または阻止することを含んでもよい。
【０１２２】
特に潰瘍性大腸炎の文脈において、「治療する」とは、典型的には、活動性の潰瘍性大腸炎を有する患者に反応または寛解を導入することを指す。したがって、典型的には、オリゴヌクレオチドは、患者の活動性潰瘍性大腸炎の反応または寛解を導入するためのものである。反応を導入するとは、例えば、活動性疾患の症状および臨床徴候の軽減および/または阻止によって、患者の状態を改善することを意味する。寛解の導入とは、患者が疾患の活動段階にあると考えられている状態から、寛解していると考えられる状態に移行することを意味する。
【０１２３】
ＵＣ患者の反応または寛解の導入は、典型的には、内視鏡検査、組織学、患者記録のアウトカムおよび生活の質のアウトカムの１つ以上によって評価される。したがって、反応または寛解の導入への言及には、内視鏡的寛解、内視鏡的反応、組織学的寛解、組織学的反応、医師または患者が記録したアウトカムにより決定された反応または寛解、および生活の質によって決定された反応もしくは寛解の１つ以上の導入が挙げられる。これは、典型的には、１つ以上の標準指標を参照して評価できる。
【０１２４】
典型的には、潰瘍性大腸炎は、慢性活動性潰瘍性大腸炎である。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、用語「慢性活動性潰瘍性大腸炎」は、活動性および慢性の両方である潰瘍性大腸炎の患者を指す。活動性潰瘍性大腸炎は、典型的には本明細書で定義されるとおりであり、すなわち、患者は寛解状態ではない。慢性潰瘍性大腸炎とは、直腸および結腸粘膜の慢性炎症を特徴とする疾患を指す。
【０１２６】
好ましくは、本明細書で「治療する」とは、慢性の活動性潰瘍性大腸炎を有する患者に反応または寛解を導入することを指す。したがって、典型的に、オリゴヌクレオチドは、患者の慢性活動性潰瘍性大腸炎の反応または寛解を導入するためのものである。
【０１２７】
ＵＣ患者における反応または寛解の導入は、１つ以上の標準的な疾患指標に従って決定されてもよい。典型的な疾患指標には、以下；（ｉ）臨床的および生化学的疾患活動性により決定される疾患活動性、（ｉｉ）内視鏡的疾患活動性により決定される疾患活動性、（ｉｉｉ）複合臨床および内視鏡的疾患活動性指標により決定される疾患活動性、（ｉｖ）生活の質、（ｖ）組織学的疾患の活動性が挙げられるが、これらに限定されない。これらの指標については、D'Haens（同上）で説明されている。
【０１２８】
臨床的および生化学的疾患活動性により決定される疾患活動性に基づく指標としては、トゥルーラブアンドウィッツ重症度指標（Truelove and Witts Severity Index; パウエル−トゥック（セントマルク）指標（Powell-Tuck（St. Mark’s） Index）;臨床活動（ラハメルヴィッチ）指標（Clinical Activity (Rachmilewitz) Index）;活動性（セオ）指標（Activity (Seo) Index）;医師の総合評価（Physician Global Assessment）;リチタイガー（修正トゥルーラブアンドウィッツ重症度）指標（Lichtiger (Modified Truelove and Witts Severity) Index）;研究者の総合評価（Investigators Global Evaluation）;シンプル臨床大腸炎活動性指標（Simple Clinical Colitis Activity Index）;個々の症状スコアによる改善（Improvement Based on Individual Symptom Scores）;潰瘍性大腸炎の臨床スコア（Ulcerative Colitis Clinical Score）;および患者定義の寛解（Patient-defined remission）が挙げられる。これらの指標については、D'Haens（同上）で説明されている。
【０１２９】
内視鏡的疾患活動性により決定される疾患活動性に基づく指標としては、トゥルーラブアンドウィッツＳ状結腸鏡評価（Truelove and Witts Sigmoidoscopic Assessment）;バロンスコア（Baron score）;パウエル−トゥックＳ状結腸鏡評価（Powell-Tuck Sigmoidoscopic Assessment）; 内視鏡的（ラハメルヴィッチ内視鏡的）指標（Endoscopic (Rachmilewitz Endoscopic) Index）;Ｓ状結腸鏡指標（Sigmoidoscopic Index）; Ｓ状結腸鏡炎症グレードスコア（Sigmoidoscopic Inflammation Grade Score）;メイヨースコアフレキシブル直腸Ｓ状結腸鏡評価（Mayo Score Flexible Proctosigmoidoscopy Assessment）;サザーランド粘膜状態評価（Sutherland Mucosal Appearance Assessment）;および修正バロンスコア（Modified Baron Score）が挙げられる。これらの指標については、D'Haens（同上）で説明されている。
【０１３０】
複合臨床および内視鏡的疾患活動性指標により決定される疾患活動性としては、メイヨースコア（メイヨ−クリニックスコア／疾患活動性指標）（Mayo Score (Mayo Clinic Score/Disease Activity Index)）;修正メイヨースコア（Modified Mayo Score）およびサザーランド指標（疾患活動性指標／UC疾患活動性指標）（Sutherland Index (Disease Activity Index/UC Disease Activity Index)）が挙げられる。メイヨースコアとサザーランド指標については、D'Haens（同上）で説明されている。
【０１３１】
生活の質に基づく指標には、ＩＢＤ患者の懸念の評価フォーム（Rating Form of IBD Patient Concerns）および炎症性腸疾患アンケート（Inflammatory Bowel Disease Questionnaire (IBDQ)）が挙げられる。これらの指標については、D'Haens（同上）で説明されている。
【０１３２】
組織学的疾患の活動性に基づく指標には、ゲボーズ指標（Geboes Index）やリレイ指標（Riley Index）などのD'Haens（同上）で説明されている指標や、ナンシー指標（Nancy Index）やロバート指標（Robarts Index）などのその他の指標が挙げられる。
【０１３３】
ＵＣ患者を評価するための好ましい指標には、臨床活動性（ラハメルヴィッチ）指標（Clinical Activity (Rachmilewitz) Index）、メイヨースコア（Mayo Score）および修正メイヨースコア（Modified Mayo Score）が挙げられる。
【０１３４】
臨床活動性（ラハメルヴィッチ）指標は、７つの変数：便の数、便中の血液、症状状態の調査者の総合評価、腹痛またはけいれん、大腸炎による体温、腸管外症状、および検査所見を考慮した指標である。これについては、D'Haens（同上）およびRachmilewitz D., BMJ 1989; 298: 82-86でさらに説明されている。その全体は参照により本明細書に組み込まれる。臨床活動性（ラハメルヴィッチ）指標の決定は、０〜２９ポイントの範囲の患者のスコアを生成する（スコアが高いほど、より重症の疾患を意味する）。
【０１３５】
臨床的寛解は、臨床活動性（ラハメルヴィッチ）指標のスコアが４ポイント以下と見なされる。臨床活動性（ラハメルヴィッチ）指標によって決定される反応は、治療前よりも治療後の患者のスコアが低いことを意味する。
【０１３６】
メイヨースコアは、４つの項目：排便回数、直腸出血、下部ＧＩ内視鏡検査の結果、および医師の総合評価（ＰＧＡ）を考慮した指標である。これについては、D’Haens（同上）およびSchroeder KW et al、N Engl J Med 1987; 317：1625-1629でさらに説明され、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。メイヨースコアの決定により、０〜１２ポイントの範囲のスコアが得られる（スコアが高いほど、より重症の疾患を意味する）。４つの特定の項目に加えて、患者の機能的評価も測定される。これは、１２ポイント指標計算に含めることを意図したものではなく、ＰＧＡスコアを決定する際の一般的なウェルビーイング（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）の尺度として使用する必要がある。
【０１３７】
４つの各項目のメイヨースコアリングは、以下の表に示すように決定される。
【０１３８】
【表１−１】
2021522350.tif 000002
【０１３９】
ｂ各患者は、排便回数の異常の程度を確立するため自身をコントロールとして扱う。
ｃ毎日の出血スコアは、最も重症の出血日を表す。
ｄ医師の総合評価は、３つの他の判断基準、腹部不快感および一般的なウェルビーイングの感覚の患者の毎日の記録、身体所見および患者のパフォーマンスステータスなどのその他の観察を認定する。
【０１４０】
メイヨースコアによる寛解は、（１）排便回数（正常な排便回数）、（２）直腸出血（直腸出血なし）、（３）患者の機能的評価スコア（一般的に良好）、（４）内視鏡検査所見（正常）の完全な解決、およびＰＧＡスコア０として定義される。メイヨースコアによって決定される反応は、典型的には、ＰＧＡスコアの改善（ベースラインから最小１ポイントの減少）および少なくとも１つの他の臨床評価（排便回数、直腸出血、患者の機能的評価、内視鏡検査所見）の改善およびその他の臨床評価で悪化がないことが要求される。
【０１４１】
あるいは、臨床的寛解は、メイヨースコアが０、そして臨床的改善（反応）は、メイヨースコアが３ポイント以上のベースラインからの低下として定義される。
【０１４２】
あるいは、臨床的寛解は、メイヨースコアが０、そして臨床的改善（反応）は、メイヨースコアのベースラインからの３ポイント以上の減少（またはメイヨースコアベースラインが３ポイント以下の場合、２ポイント以上の減少）として定義される。
【０１４３】
あるいは、メイヨースコアによって決定される寛解は、要求されるスコアとして、Ｓ状結腸鏡検査と直腸出血の両方のサブスコアが０、排便回数とＰＧＡのサブスコアが０または１と定義できる。反応は、メイヨースコアがベースラインからの３ポイント以上の減少として定義できる；臨床反応は、メイヨースコアがベースラインから２ポイント以上の減少として定義でき（内視鏡サブスコアなし、部分的メイヨースコアとしても知られている）、内視鏡反応は、内視鏡サブスコアがベースラインから１ポイント以上の減少として定義できる。
【０１４４】
あるいは、臨床的寛解は、メイヨースコアの合計が２ポイント以下、かつ１ポイントを超える個々のサブスコアを伴わないと定義され、臨床反応は、ベースラインからのメイヨースコアの合計が３ポイント以上かつ３０％以上の減少、さらに直腸出血サブスコア１ポイント以上の減少または直腸出血サブスコアの絶対値が０または１と定義され、また粘膜治癒は内視鏡サブスコア絶対値が０または１として定義される場合がある。
【０１４５】
典型的には、活動性潰瘍性大腸炎の患者は、メイヨースコアは２を超える。潰瘍性大腸炎の寛解期にある患者は、典型的に、メイヨースコアは２以下である。
【０１４６】
修正メイヨースコアは、上記で定義されたメイヨースコアに関連している。修正メイヨースコアは、大腸内視鏡検査/Ｓ状結腸鏡検査スコアリングでは脆弱性をあまり考慮しないという点で、メイヨースコアとは異なる。したがって、修正メイヨースコアのスコア表は以下のとおりである。
【０１４７】
【表１−２】
2021522350.tif 000003
【０１４８】
ｂ各患者は、排便回数の異常の程度を確立するため自身をコントロールとして扱う。
ｃ毎日の出血スコアは、最も重症の出血日を表す。
ｄ医師の総合評価は、３つの他の判断基準、腹部不快感および一般的なウェルビーイングの感覚の患者の毎日の記録、身体所見および患者のパフォーマンスステータスなどのその他の観察を認定する。
【０１４９】
修正メイヨースコアの寛解と反応の値は、メイヨースコアについて上記で説明したとおりである。修正されたメイヨースコアは、典型的には、http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM515143.pdfで示される、ＦＤＡのドラフトガイダンス文書「潰瘍性大腸炎：業界向け臨床試験エンドポイントガイダンス（Ulcerative Colitis: Clinical Trial Endpoints Guidance for Industry）」に従って評価される。
【０１５０】
または、修正メイヨースコアは、大腸内視鏡検査/Ｓ状結腸鏡検査スコアリングが脆弱性をあまり考慮しないという点、また医師の総合評価が決定的ではないという点で、メイヨースコアと異なる場合がある。したがって、修正メイヨースコアのスコアリングの表も次のようになる。
【０１５１】
【表１−３】
2021522350.tif 000004
【０１５２】
ｂ各患者は、排便回数の異常の程度を確立するため自身をコントロールとして扱う。
ｃ毎日の出血スコアは、最も重症の出血日を表す。
【０１５３】
この代わりの修正メイヨースコアの寛解と反応の値は、典型的には、メイヨースコアについて上記で説明したとおりである。あるいは、寛解は、ｉ）直腸出血０、ｉｉ）排便回数０または１（０週目であるベースラインから、少なくとも１ポイント減少）、およびｉｉｉ）内視鏡検査スコア０または１（脆弱性を除く）のサブスコアによって、この代わりの修正メイヨースコアに従って定義してもよい。
【０１５４】
ＵＣの寛解の導入は、S. P. L. Travis, Aliment Pharmacol Ther 2011; 34: 113-124; に定められた基準に従ってもよく、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、すなわち、好ましくは内視鏡的粘膜治癒により確認される、直腸出血、排便回数の切迫かつ増加の完全な停止であってもよい。
【０１５５】
あるいは、反応または寛解の導入は、E.F. Stanger, Journal of Crohn's and Colitis (2008) 2, 1-23; S.P.L. Travis, Journal of Crohn's and Colitis (2008) 2, 24-62; Kebo’s, Gut 2000; 47: 404-409に定められた基準に従ってもよく、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
クローン病患者の反応または寛解の導入は、１つ以上の標準的な疾患指標に従って決定してもよい。典型的な指標には、クローン病活動指数（ＣＤＡＩ）が挙げられる。ＣＤＡＩは、Love, “Pharmacotherapy for Moderate to Severe Inflammatory Bowel Disease: Evolving Strategies”、Am J Manga Care. 2016;22:S39-S50; Manga et al “Defining disease severity in inflammatory bowel diseases: current and future directions” Clin Gastroenterol Hepatol. 2015; pie: S1542-3565(15)00787-00789. doe: 10.1016/j.cgh.2015.06.001;doeUngar et al “Advances in the development of new biologics in inflammatory bowel disease”、Annals of Gastroenterology (2016) 29, 243-248、において議論されている。クローン病患者を評価するための代替指標としては、ハーベイ−ブラッドシャウ指標（Harvey-Bradshaw index）および炎症性腸疾患アンケート（Inflammatory Bowel Disease Questionnaire）が挙げられる。
【０１５７】
ＣＤＡＩは、液体便または軟便の回数；腹痛；一般的なウェルビーイング；合併症の存在（関節の痛み（関節痛）または明白な関節炎の存在；虹彩またはブドウ膜炎の炎症；結節性紅斑、壊疽性膿皮症、またはアフタ性潰瘍の存在；肛門裂傷、瘻孔または膿瘍；その他の瘻孔；前週の発熱）；下痢に対するロモチルまたはアヘン剤の使用；腹部腫瘤の存在；ヘマトクリット値；および標準重量からのパーセント偏差などの、クローン病に関連する多数の症状を考慮した複合スコアである。ＣＤＡＩによる臨床的寛解は、典型的には、１５０未満のスコアで示される。
【０１５８】
本発明に従って治療される対象者は、典型的には、抗炎症療法に対して不応性、反応が不十分もしくは不耐性であり、および／または少なくとも１つの免疫調節剤、ＴＮＦ−α阻害剤または抗インテグリンに対して、不十分な反応、反応の喪失、または不耐性を示すまたは以前に示した。したがって、対象者は、典型的には、抗炎症療法、好ましくはＵＣのための抗炎症療法、および／または免疫調節剤、ＴＮＦ−α阻害剤または抗インテグリン療法、好ましくはＵＣのためにかかる療法を以前に受けたか、または現在受けている。ＵＣの抗炎症療法については本明細書で説明するが、典型的には、ＧＣＳ、スルファサラジンおよび５−ＡＳＡが挙げられる。
【０１５９】
免疫調節剤、ＴＮＦ−α阻害剤および抗インテグリンは本明細書で議論され、典型的には、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、ならびにＴＮＦ−α阻害剤であるインフリキシマブとそのバイオシミラーと誘導体、ゴリムマブとそのバイオシミラーと誘導体、アダリムマブとそのバイオシミラーと誘導体、および抗インテグリンであるベドリズマブとそのバイオシミラーと誘導体などの生物学的製剤が挙げられる。
【０１６０】
治療に対して不応性疾患または十分に反応しない疾患は、典型的には、少なくとも１コースの治療、本発明の文脈における抗炎症治療の履歴にもかかわらず活動性疾患の徴候および症状が持続する疾患である。典型的には、ＵＣの治療の文脈では、以前のコースの抗炎症療法の履歴にもかかわらず、活動性疾患の徴候と症状が持続する。ＵＣの抗炎症療法による典型的な治療コースは、当業者によく理解されており、典型的には、典型的な患者に寛解を導入するのに十分な用量で十分な回数の投与を伴う。
【０１６１】
療法、本発明の文脈においては抗炎症療法に対する不耐性とは、療法が、許容されない対象者の副作用、例えば、典型的には、治療の中止につながる副作用、を引き起こすことを意味する。
【０１６２】
典型的には、対象者は、アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）、好ましくはＵＣのための５−ＡＳＡ療法を以前に受けたことがあるか、現在受けている。
【０１６３】
典型的には、対象者は経口グルココルチコステロイド（ＧＣＳ）、好ましくはＵＣのための経口ＧＣＳ療法を以前に受けたことがあるか、現在受けている。
【０１６４】
典型的には、抗炎症療法に対して不応性もしくは反応が不十分、または不耐性である対象者は、直腸、経口、および／または非経口のＧＣＳ治療（以前の副作用によるＧＣＳ治療なしを含む）に対して、不十分な反応、または反応の喪失（すなわち不応性）または不耐性を示しているか、以前に示している。
【０１６５】
典型的には、抗炎症療法に対して不応性もしくは反応が不十分、または不耐性である対象者は、ＧＣＳ治療に対して、不十分な反応（すなわちステロイド不応性）、ステロイド依存、反応の喪失、または不耐性の履歴または現在の状態を有する。ステロイド／ＧＣＳは、典型的に、潰瘍性大腸炎の治療中に対象者に投与される。
【０１６６】
ステロイド不応性とは、典型的に、意味のある臨床反応を欠く、すなわち、例えば、３０日間にわたる経口投与、または７〜１０日間にわたる静脈内（ＩＶ）投与で、毎日４０−６０ｍｇのプレドニゾンに相当する用量を含む導入計画などの少なくとも１コースのステロイド治療歴があるにもかかわらず、持続的に活動性潰瘍性大腸炎の徴候と症状を示す対象者を指す。
【０１６７】
ステロイド依存とは、典型的には、再発性の活動性潰瘍性大腸炎を伴わずに、ステロイドを開始してから３か月以内にプレドニゾロン１０ｍｇ／ｄに相当するステロイド量以下に減らすことができない患者か、ステロイドを止めてから３か月以内に再発する患者を指す。
【０１６８】
ＧＣＳ治療の不耐性とは、典型的には、対象者が、限定されないが、クッシング症候群、骨減少症／骨粗鬆症、高血糖、不眠症、または感染症など、ＧＣＳ治療後に対象者が許容できない副作用を経験したことを意味する。
【０１６９】
免疫調節薬に対する不十分な反応または反応の喪失は、典型的には、アザチオプリン（１．５ｍｇ／ｋｇ以上）もしくは６−メルカプトプリン（０．７５ｍｇ／ｋｇ以上）の経口投与での８週間の投与計画などの少なくとも１つの免疫調節薬での以前の治療にもかかわらず、活動性潰瘍性大腸炎の徴候および症状が持続することを意味する。
【０１７０】
免疫調節薬に対する不耐性とは、典型的には、対象者が吐き気／嘔吐、腹痛、膵炎、肝機能検査（ＬＦＴ）異常、リンパ球減少症、チオプリンメチルトランスフェラーゼ（ＴＰＭＴ）遺伝子突然変異、または免疫調節薬を投与した後の感染またはその他の副作用を経験したことを意味する。
【０１７１】
ＴＮＦ−α阻害剤に対する不十分な反応、または反応の喪失とは、インフリキシマブ（５ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）、少なくとも２週間間隔で２回投与）またはそのバイオシミラーもしくは誘導体；ゴリムマブ（２００／１００ｍｇ（ＳＣ）、少なくとも２週間間隔で２回投与）またはそのバイオシミラーもしくは誘導体；あるいはアダリムマブ（１６０／８０ｍｇ（ＳＣ）、少なくとも２週間間隔で２回投与）またはそのバイオシミラーもしくは誘導体、の４週間の導入計画（または現在のラベルに従った推奨量）などの少なくとも１つのＴＮＦ−α阻害剤での以前の治療にもかかわらず、活動性潰瘍性大腸炎の徴候および症状が持続する、または以前の臨床的利益に続く維持投与中の症状の再発を意味する。
【０１７２】
ＴＮＦ−α阻害剤に対する不耐性とは、注入に関連する反応、脱髄、うっ血性心不全、感染症またはＴＮＦ−α阻害剤を受けた後のその他の副作用を意味する。
【０１７３】
抗インテグリンに対する不十分な反応または反応の喪失とは、例えば、ベドリズマブ３００ｍｇ（ＩＶ）またはそのバイオシミラーもしくは誘導体の少なくとも１０週間の投与計画または、現在のラベルで推奨されているような抗インテグリンによる以前の治療にもかかわらず、活動性潰瘍性大腸炎の徴候および症状が持続することまたは以前の臨床的利益に続く維持投与中の症状の再発を意味する。
【０１７４】
典型的には、対象者は左側潰瘍性大腸炎、すなわち直腸Ｓ状結腸炎を含む遠位大腸炎と診断されている。
【０１７５】
典型的には、前記対象者は膵炎と診断されている。
【０１７６】
典型的には、前記対象者は結腸切除術については随意である。
【０１７７】
本明細書で使用される用語「結腸切除術」は、大腸（結腸）のあらゆる範囲の外科的切除を指す。本明細書において、結腸切除術には、右半結腸切除術、左半結腸切除術、拡張型半結腸切除術、横断結腸切除術、Ｓ状結腸切除術、直腸Ｓ状結腸切除術、ハルトマン手術、「ダブルバレル」またはミクリッツ人工肛門、総結腸切除術（レーン手術とも呼ばれる）、直腸結腸全切除術および結腸亜全摘術などが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「結腸切除術については随意」というフレーズは、医師および外科医の評価に基づいて非緊急結腸切除の処置を受けることを選択できる対象者を指す。結腸切除術を選択する対象は、利用可能な治療に不応性の患者（潰瘍性大腸炎の場合）または利用可能な治療に不耐性（潰瘍性大腸炎の場合）であり得るが、これらに限定されない。これは、急性の病気や怪我を抱え、すぐに医師の診察を必要とする対象者に対する急性介入である緊急の結腸切除術とは異なる。このフレーズには、結腸切除術に選出された対象者も含まれる。
【０１７８】
以下でより詳細に説明するように、本発明の製剤およびカプセルを、適応症のための単独療法治療として、または適応症のための補助療法として他の薬剤（単数または複数）と一緒に投与してもよい。例えば、対象者は、炎症性腸疾患、典型的には潰瘍性大腸炎またはクローン病の治療のために、１種またはそれ以上の追加治療剤を投与されてもよい。
【０１７９】
補助（または「アドオン」）療法の場合、本発明で使用する薬剤を、他の薬剤（単数または複数）と一緒に、例えば固定用量の組み合わせまたは別々の用量で、同時に、別々に、または連続して投与してもよい。
【０１８０】
本明細書で使用される用語「アドオン」は、現在の療法または薬物投与計画を中断することなく、現在の療法または薬物投与計画に加えて前記オリゴヌクレオチドを投与することを指す。
【０１８１】
したがって、オリゴヌクレオチドは、単独療法として、または炎症性腸疾患、好ましくは潰瘍性大腸炎またはクローン病の治療のための１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与してもよい。典型的には、オリゴヌクレオチドは、単剤療法として、または免疫調節薬、抗ＴＮＦ療法薬、または潰瘍性大腸炎を治療するための他の適切な薬剤から選択される１つ以上の潰瘍性大腸炎の治療のための追加の治療薬と組み合わせて投与してもよい。
【０１８２】
前記オリゴヌクレオチドと組み合わせて使用するのに適した薬物の例としては、ＧＣＳまたは誘導体；プレドニゾロン、デコルチン、抗ＴＮＦまたは誘導体；インフリキシマブとそのバイオシミラーと誘導体、アダリムマブとそのバイオシミラーと誘導体、ゴリムマブとそのバイオシミラーと誘導体、抗インテグリンまたは誘導体；ベドリズマブとそのバイオシミラーと誘導体、天然ＩＦＮ−β、チオプリンまたは誘導体；アザチオプリン、６−メルカプトプリン、５−ＡＳＡ、スルファサラジン、メトトレキサート、シクロスポリン、トファシチニブおよびそれらの同等物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８３】
典型的には、前記オリゴヌクレオチドを受ける対象者は、ＧＣＳ、デコルチン、５−ＡＳＡ、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、スルファサラジン、メトトレキサート、プレドニゾロンおよびそれらの同等物または誘導体から選択される１つ以上の他の薬剤も受ける。
【０１８４】
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドを受ける対象者は、ＧＣＳ、５−ＡＳＡ、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、スルファサラジンおよびメトトレキサートから選択される１つ以上の他の薬物も受ける。
【０１８５】
より好ましくは、前記オリゴヌクレオチドを受ける対象者は、経口ＧＣＳ、経口５−ＡＳＡ、アザチオプリン、６−メルカプトプリンおよび経口メトトレキサートから選択される１つ以上の他の薬物も受ける。
【０１８６】
また典型的には、前記オリゴヌクレオチドを受ける対象者は、例えばコルチコステロイドおよびグルココルチコステロイドなどの１つ以上のステロイド薬を受ける。
【０１８７】
本発明の目的のために、「と組み合わせて（in combination with）」および「アドオン（add-on）」という用語は、同じ患者の同じ疾患を治療する過程において、オリゴヌクレオチドおよび１つ以上の追加の治療薬を同時投与、および数ヶ月までの時間的に間隔をあけるなど任意の順序で投与することを包含及び意味する。
【０１８８】
典型的には、製剤またはカプセルは経口投与される。
【０１８９】
本発明はまた、対象者の炎症性腸疾患、好ましくは潰瘍性大腸炎またはクローン病を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書で定義されるような製剤またはカプセルを前記対象者に経口投与することを含む。
【０１９０】
本発明はまた、炎症性腸疾患、好ましくは潰瘍性大腸炎またはクローン病を治療するための医薬の製造のための、本明細書で定義されるような製剤またはカプセルの使用を提供する。
【０１９１】
以下の非限定的な実施例は本発明を説明するものである。実施例を通して、医薬品有効成分（ＡＰＩ）およびコビトリモドという用語は、交換可能に使用されている。
【０１９２】
実施例１−コビトリモド／賦形剤適合性研究
１．１  材料
本研究で使用した賦形剤その他の材料を表１および表２に詳述する。
【０１９３】
【表１−４】
2021522350.tif 000005
【０１９４】
【表２】
2021522350.tif 000006
【０１９５】
１．２  コビトリモド溶解度評価法
溶解度は、最大溶解度に達するまでＡＰＩを賦形剤に段階的に添加することにより、動力学的溶解度法により評価した。
【０１９６】
１．３  コビトリモド／賦形剤適合性試験法
コビトリモド含有ミックスとそれに対応するプラセボについて、調製後４週間以内に２〜８℃で保存した場合（Ｔ＝０）と、４０℃／７５％相対湿度で４週間静置した場合（Ｔ＝４）の２つの時点で、ＵＶ検出機能を備えたＨＰＬＣを用いて分析した。
【０１９７】
１．４  カプセルシェル適合性試験法
コビトリモド含有ミックスおよび対応するプラセボミックスを、各タイプのカプセル（ゼラチンおよびＨＰＭＣ）に充填し、１カプセルあたり３０ｍｇの目標濃度とした。次に、カプセルを適切なバンディング溶液を用いてバンディングし、一晩乾燥させた。その後、カプセルを真空チャンバー内で２０分間リークテストを行い、その後漏れや割れを目視で評価した。検査後、カプセルを４０℃／相対湿度７５％で２週間静置し、カプセルシェルの漏れ、割れおよび変形を再度目視で確認した。
【０１９８】
１．５  コビトリモド溶解度評価結果
溶解度評価の結果は、すべてのミックスは、８ｇ賦形剤中４０ｍｇコビトリモドの初期濃度では懸濁液であったことを示した。
【０１９９】
表３は、８ｇの賦形剤中６００ｍｇコビトリモド濃度で作業可能な2成分ミックスと作業不可能なミックスを示している。
【０２００】
【表３】
2021522350.tif 000007
【０２０１】
１．６  カプセルシェル適合性検討結果
表４と表５は、カプセルシェル適合性検討で採用された５種類のミックスを詳述する。
【０２０２】
【表４】
2021522350.tif 000008
【０２０３】
【表５】
2021522350.tif 000009
【０２０４】
表６は、静置直前と２週間静置後の時点での検討結果を詳述する。ＨＰＭＣカプセル中のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣプラセボは、対応するＨＰＭＣカプセル中のＣａｐｒｙｏｌとコビトリモドがバンディングプロセス中にすべて割れが発生したため、実行しなかった。表７は、賦形剤＋コビトリモドカプセルの静置直前と２週間の静置時点後の検討結果を詳述する。Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４３／０１＋コビトリモドカプセルは、カプセルに同様の変形の兆候を示したが、これは、４０℃での保存中にバンドが軟化し、琥珀瓶の底に対して平らになったことに起因する可能性がある。対応する賦形剤のみのカプセルは、カプセルの変形の兆候を示さなかった。Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ  ＋コビトリモド含有ミックスは、すべてのカプセルがバンディング後に割れたため、ＨＰＭＣカプセル中では静置されなかった。
【０２０５】
【表６】
2021522350.tif 000010
【０２０６】
【表７】
2021522350.tif 000011
【０２０７】
１．７  コビトリモド／賦形剤適合性検討結果
表８に詳述する以下のミックスはコビトリモド／賦形剤適合性検討のために実施した。
【０２０８】
【表８】
2021522350.tif 000012
【０２０９】
サンプルは、関連物質およびアッセイ値について、初期および４週間の時点で分析され、結果は面積％に基づいて報告される。
【０２１０】
下の図１は、初期時点で調製した５つの２成分ミックスと比較したコビトリモド標準の比較を示す。クロマトグラムは、ＧｅｌｅｏｌおよびＰＥＧ  １５００ミックスにおいて同じ分解を示すが、残りのＣａｐｒｙｏｌ、ＧｅｌｕｃｉｒｅおよびＳｔｅｒｏｔｅｘミックスについては、ＡＰＩ標準と初期時点のサンプルとの間に目立った変化はない。
【０２１１】
下の図２は、４週間の時点での５つの２成分ミックスと比較したコビトリモド標準の比較を示す。クロマトグラフィーは、Ｓｔｅｒｏｔｅｘ、ＰＥＧ  １５００およびＧｅｌｅｏｌミックスに顕著な分解があり、４週間後にＧｅｌｕｃｉｒｅミックスにわずかな分解があることを示している。Ｃａｐｒｙｏｌミックスは、４週間後でも分解はあったとしてもほんのわずかしか示さないようである。
【０２１２】
１．８  Ｓｔｅｒｏｔｅｘとコビトリモド
Ｓｔｅｒｏｔｅｘ＋コビトリモドサンプルは、初期と４週間時点の間に５．５％の関連物質（ＲＳ）の中程度の増加を示し、２８％のアッセイの増加を示した（表９）。このサンプルもまた、４週間後には異なる挙動を示し、バイアルの底に固体ペレットが形成され、撹拌、加熱、超音波処理によって均質化することができなかった。アッセイ値の増加は、サンプリング中のミックスが不均一であったことによる可能性が高い。
【０２１３】
【表９】
2021522350.tif 000013
【０２１４】
１．９  Ｇｅｌｅｏｌとコビトリモド
Ｇｅｌｅｏｌ＋コビトリモドサンプルは、初期と４週間時点の間に１３．６％の関連物質（ＲＳ）の有意な増加を示し、２８％のアッセイの有意な減少を示した（表１０）。このサンプルもまた、４週間後には異なる挙動を示し、バイアルの底に固体ペレットが形成され、撹拌、加熱、超音波処理によって均質化することができなかった。アッセイ値の減少は、コビトリモドの分解によるものである可能性が高く、また、サンプルが４週間の時点で均質ではなかったことによる可能性が高い。
【０２１５】
【表１０】
2021522350.tif 000014
【０２１６】
１．１０  Ｇｅｌｕｃｉｒｅ４３／０１とコビトリモド
Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４３／０１＋コチボリモド（ｃｏｔｉｂｏｌｉｍｏｄ）サンプルは、初期と４週間時点の間に８．３％の関連物質の増加を示し、１１％のアッセイの有意な減少を示した（表１１）。このサンプルもまた、４週間後には異なる挙動を示し、バイアルの底に固体ペレットが形成され、撹拌、加熱、超音波処理では均質化できなかった。アッセイ値の減少は、コチボリモド（ｃｏｔｉｂｏｌｉｍｏｄ）の分解によるものである可能性が高く、また、サンプルが４週間の時点で均質ではなかったことによる可能性が高く、これは初期のアッセイ結果も低いことからも分かる。
【０２１７】
【表１１】
2021522350.tif 000015
【０２１８】
１．１１  ＰＥＧｌ５００とコビトリモド
ＰＥＧ１５００＋コビトリモドサンプルでは、初期と４週間時点の間に６．６％の関連物質の増加を示し、１１％のアッセイの有意な減少を示した（表１２を参照）。しかし、分散特性の変化は観察されない。
【０２１９】
【表１２】
2021522350.tif 000016
【０２２０】
１．１２  Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣとコビトリモド
Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ＋コビトリモドサンプルは、初期と４週間時点の間に１．８％の関連物質のわずかな増加を示し、４％のアッセイ値のわずかな増加を示した（表１３）。分散特性の変化は観察されない。
【０２２１】
【表１３】
2021522350.tif 000017
【０２２２】
Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣベース系は、分解の量が最も少なかった。さらに、再分散性の問題は疎水性の高融点ワックス系で観察されたが、ＣａｐｒｙｏｌとＰＥＧ系では観察されなかったことは、これが疎水性環境でのコビトリモッドの凝集に関連している可能性を示唆していることは注目に値する。分解を最小限に抑えるために、これらの賦形剤に少量の酸化防止剤とｐＨ緩衝材料を含めることに関する更なる研究は、実施例３に記載されている。
【０２２３】
１．１３  結論
検討したすべてのミックスは、どんな溶解度も示さない懸濁液を提供したので、コビトリモドは、さらなる開発のために懸濁液として調製される。
【０２２４】
分解は、すべての懸濁液の調製中に異なる程度に検出された。Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣベースの系は、最小量の分解を有していた。コビトリモド／賦形剤適合性試験でコビトリモドが明らかに分解した理由は、コビトリモドが酸分解だけでなく酸化にも敏感であること、およびサンプルの調製に使用された温度に起因している可能性がある。再分散性の問題は疎水性の高融点ワックス系で観察されたが、ＣａｐｒｙｏｌとＰＥＧの系では観察されなかったことから、分散性は疎水性環境でのコビトリモドの凝集に関係している可能性が示唆された。
【０２２５】
実施例２−基本的なコア製剤
実施例１は、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣが、コビトリモドとの化学的適合性の点で最も適切な担体材料であることを実証した。この担体は、コビトリモドを比較的速く放出することが予想され、したがって、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）の添加が示唆される。この研究の目的は、まず第一に、十分なコビトリモドを懸濁してコビトリモドの合理的／適切な濃度に達することができるかどうかを判断するために、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ賦形剤で達成可能なコビトリモド懸濁液の限界を調査し、懸濁液がコビトリモドの負荷が増加しても作業可能なままであるかどうかを調査すること；第二に、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のＭｅｔｈｏｃｅｌ／ＨＰＭＣの懸濁限界を調査し、さらなる研究のための最適な組成物および濃度を決定するために、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のＨＰＭＣの様々な濃度および組成物のゲル形成特性を目視で評価すること；および第三に、作業性および目視でのゲル形成プロファイルについて、様々な異なるコビトリモド／Ｃａｐｒｙｏｌ／ＨＰＭＣ組成および濃度を調査することである。
【０２２６】
２．１  材料
【０２２７】
【表１４】
2021522350.tif 000018
【０２２８】
２．２  Ｃａｐｒｙｏｌ単独でのコビトリモド懸濁限界方法
Ｃａｐｒｙｏｌ単独のコビトリモドの懸濁限界は、（ｉ）ＣａｐｒｙｏｌへのＡＰＩの添加、（ｉｉ）スパチュラ撹拌および（ｉｉｉ）超音波処理のステップを、懸濁液の粘度が高すぎる、凝集体が形成されて分解しないなどの理由で懸濁液が作業不可能になるまで繰り返すことで評価した。
【０２２９】
２．３  ＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌ混合法の予備的分散試験
５つの異なる比率のＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌミックスの予備的な分散試験は、以下の方法を用いて実施した。５００ｍｌのビーカーに２５０ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水を入れ、３７℃のウォーターバスに入れ、温度を平衡化した。下記表１５および１６において調製された５つのミックス各１ｇをビーカーに添加しマグネットスターラーで優しく撹拌した。この研究では２つのグレードのＨＰＭＣを使用し、ＨＰＭＣ−１はＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍ高分子量ＨＰＭＣであり、ＨＰＭＣ２はＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｅ３低分子量ＨＰＭＣであった。
【０２３０】
溶液の色、粒子、沈降、凝集などの分散試験結果の目視観察は、サンプルの最初の添加時、５分、３０分、１時間、２時間、４時間、５時間、２４時間の時点で行った。５時間の時点の後に撹拌を停止し、溶液を２４時間放置した。
【０２３１】
【表１５】
2021522350.tif 000019
【０２３２】
【表１６】
2021522350.tif 000020
【０２３３】
２．４  コビトリモドＣａｐｒｙｏｌＨＰＭＣ製剤試験
ＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌ／コビトリモドの予備的分散試験のために以下のサンプルを調製し、作業性を評価した。２つのグレードのＨＰＭＣを使用し、３つのミックスは高分子量ＨＰＭＣ  １（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍ）をベースとし、残りの２つのミックスは高分子量ＨＰＭＣ  １（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍ）と低分子量ＨＰＭＣ  ２（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｅ３）のミックスである。これは、低分子量ＨＰＭＣと高分子量ＨＰＭＣを組み合わせたミックスが、高分子量ＨＰＭＣ  １のみのミックスよりも迅速にゲルを形成するかどうか、ならびに製剤の作業性への影響を検討することを調べるためである。
【０２３４】
サンプルは、ＡＰＩとＨＰＭＣをＣａｐｒｙｏｌに段階的に添加し、添加の間に２５℃で１５分間超音波処理を行い、微細な均一懸濁液を生成することによって調製した。調製した５つのサンプルを表１７および１８において以下詳述する。
【０２３５】
【表１７】
2021522350.tif 000021
【０２３６】
【表１８】
2021522350.tif 000022
【０２３７】
２．５  コビトリモド／Ｃａｐｒｙｏｌ／ＨＰＭＣ分散試験法
上記表１７および１８に示すＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌ／ＡＰＩ混合物の予備的分散試験は、混合物を３７℃の蒸留水に、穏やかな撹拌下で添加し、添加後の様々な時間間隔での観察を記録することによって行われた。添加５時間後に撹拌を停止した。
【０２３８】
２．６  Ｃａｐｒｙｏｌのみでのコビトリモド懸濁限界検討の結果
コビトリモドとＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣを用いた２５℃でのコビトリモド懸濁限界試験の結果を表１９に詳述する。このデータは、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のコビトリモッドの最大１３〜１４％（約５３ｍｇのコビトリモド／カプセルに相当）が、２成分系におけるコビトリモドの懸濁限界である可能性が高いことを示唆している。
【０２３９】
【表１９】
2021522350.tif 000023
【０２４０】
２．７  ＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌミックスの予備的分散試験結果
懸濁限界検討に基づいて、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のＨＰＭＣ（５％から１５％のＨＰＭＣ１（高分子量ＨＰＭＣ）（表１５）およびＨＰＭＣ１（高分子量ＨＰＭＣ）およびＨＰＭＣ２（低分子量ＨＰＭＣ；表１６）のブレンド）の５つのミックスを分散検討のために調製した。ＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌのみの分散の検討結果は、以下の表２０に詳述する。データは、高分子量ＨＰＭＣ１のミックスすべてが効果的なゲル化マトリックスを形成することを確認している。ＨＰＭＣｌの濃度が高いほど、分散時間が長くなる。
【０２４１】
【表２０−１】
2021522350.tif 000024
【０２４２】
【表２０−２】
2021522350.tif 000025
【０２４３】
２．８  コビトリモド／Ｃａｐｒｙｏｌ／ＨＰＭＣ製剤の検討結果
Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のコビトリモドおよびＨＰＭＣの懸濁液負荷（loading）検討、およびＨＰＭＣ／Ｃａｐｒｙｏｌ混合物の水中での分散特性の評価に基づいて、表１７および１８でセクション２．４に記載されているように、いくつかの試作製剤を調製した。
【０２４４】
コビトリモドを最終添加した後にこれらのサンプルを調製している間に、ミックスは濃厚な作業不可能なペーストになったが、これは各ステップで添加する際にコビトリモドの量が多すぎて、懸濁液を形成する系の能力に過大な負荷を与えたためであろう。これは、全製剤中のコビトリモドの全体的な濃度が１１．５％であることによって説明されるが、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ賦形剤に関するコビトリモドの実際の濃度は１２．１％から１３．５％の間であり、これは懸濁液の限界に近いものであった。余分なＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣを添加し、均一な懸濁液が達成されるまで２５℃でミックスを超音波処理した。余分な量のＨＰＭＣとコビトリモドは、製剤を正しい組成にするために小さなステップで追加されたが、ＡＰＩの最終的な添加後、５つのミックスはすべて再び濃厚なペーストになった。その後、ミックスを温度が３０℃以下にしながら１分間高剪断混合を行い、最終的な高剪断混合の後、すべての製剤を２５℃で１５分間超音波処理した。下記表２１において結果を詳述する。
これらの結果は、コビトリモドを１１．５％負荷した場合の３成分のミックスに充填できるＨＰＭＣの最大レベルは約１０％であることを示す。
【０２４５】
【表２１】
2021522350.tif 000026
【０２４６】
２．９  コビトリモド／賦形剤／ＨＰＭＣ分散試験結果
分散研究は、ミックス１活性（５％ＨＰＭＣ１、ＨＭＷ）、ミックス２活性（１０％ＨＰＭＣｌ、ＨＭＷ）およびミックス４活性（５％ＨＰＭＣｌおよび５％ＨＰＭＣ２）のみが作業可能なミックスであったので、これらを使用して実施された。ＡＰＩ／Ｃａｐｒｙｏｌ／ＨＰＭＣの分散評価の結果を表２２に詳述する。
【０２４７】
活性剤とＣａｐｒｙｏｌの２成分混合物の分散評価も実施した。分散は、製剤を水に加えるとすぐに完全に分散しているように見えた。
【０２４８】
【表２２】
2021522350.tif 000027
【０２４９】
すべての製剤は、水と接触するとゲル化マトリックスを形成するようである。これらのマトリックスは時間の経過とともに侵食される。３時間後の評価データ（表２２）は、低分子量ＨＰＭＣの存在が浸食プロセスを加速させることを示唆している。またこのデータは、コビトリモドを含む剤形の分散がＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のＨＰＭＣの２成分ミックスよりも速いように見え、これはコビトリモドの親水性の性質が剤形の分散を促進した可能性を示唆している。
【０２５０】
２．１０  結論
この検討は、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ２成分系では約１３％というコビトリモドの取り込みに限界があることを示している。潜在的に薬物放出を調節することができるＨＰＭＣに基づくゲル系は、５〜１５％のＨＰＭＣを用いて調製することができる。この理解に基づいて、１１．５％のコビトリモド、５〜１５％のＨＰＭＣを組み込んだ５つの試作製剤を評価した。完全な製剤に関して１１．５％ｗ／ｗのコビトリモド負荷が選択されたのは、これがＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣに関してはコビトリモド負荷が１３．７％から１５．６％の間であるからである（ＨＰＭＣはコビトリモド負荷の改善に寄与しないと仮定されているが、放出調節剤として組み込まれている）。これらの製剤の分散特性の評価に基づいて、５％〜１０％の高分子量ＨＰＭＣ１を、結腸放出を標的とするコーティングを評価する検討のベース製剤として使用しうることが推奨される。
【０２５１】
実施例３−酸化防止剤および緩衝剤を含むコア製剤の調製
本実施例で使用した賦形剤および他の材料を以下の表２３に詳述する。
【０２５２】
【表２３】
2021522350.tif 000028
【０２５３】
３．１  Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣとコビトリモドベース製剤の調製
Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣおよびコビトリモドベース製剤の組成を表２４に詳述する。Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣおよびコビトリモドベース製剤は以下のように調製し、１３．３７ｇのＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣを容器に秤量した。これに、１．８４ｇのコビトリモドＡＰＩを０．４ｇから０．５ｇの間の複数のステップで添加した。ＡＰＩの各添加の間に、製剤をスパチュラで混合し、１分を超えない期間で３０℃の高剪断混合の前に、流動性のあり見かけ上均一な懸濁液に達するまで混合した。この懸濁液に、０．８ｇのＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍ  ＨＰＭＣを添加し、スパチュラで混合し、１分を超えない期間で３０℃の再高剪断混合の前に、流動性があり見かけ上均一な懸濁液に達するまで混合した。約２ｇの懸濁液の２つのサンプルを取った。１つのサンプルは、分析の前に、２〜８℃で保存し、２番目のサンプルは、４０℃／７５％ＲＨで安定的に静置した。
【０２５４】
【表２４】
2021522350.tif 000029
【０２５５】
３．２  Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモドおよび酸化防止剤製剤の調製
Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモドおよび酸化防止剤製剤の組成を表２５に詳述する。セクション３．１で調製した製剤、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣおよびコビトリモドベースの製剤から、サンプルの１２ｇを容器に秤量し、これに０．０１２ｇのＢＨＴを加えた。次いで、製剤を、流動性があり見かけ上均一な懸濁液に達するまで、１分を超えない期間または３０℃で高剪断混合した。約２ｇの懸濁液の２つのサンプルを取った。１つのサンプルは、分析の前に、２〜８℃で保存し、２番目のサンプルは、４０℃／７５％ＲＨで安定的に静置した。
【０２５６】
【表２５】
2021522350.tif 000030
【０２５７】
３．３  Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモド、酸化防止剤及びｐＨ緩衝液製剤の調製
Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモド、酸化防止剤及びｐＨ緩衝液製剤の組成を表２６に詳述する。セクション３．２で調製したサンプル、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモドおよび酸化防止剤製剤から、６ｇのサンプルを容器に秤量し、これに０．０３ｇのトロメタミンを添加した。次に、製剤を、流動性があり見かけ上均一な懸濁液に達するまで、１分を超えない期間または３０℃で高剪断混合した。約２ｇの懸濁液の２つのサンプルを取った。１つのサンプルは、分析の前に、２〜８℃で保存し、２番目のサンプルは、４０℃／７５％ＲＨで安定的に静置した。
【０２５８】
【表２６】
2021522350.tif 000031
【０２５９】
３．４  物理的及び化学的安定性評価
バルクミックスを初期および４０℃／７５％ＲＨで４週間保存した後に物理的および化学的に評価した。物理的評価では、サンプルの色と物理的挙動に焦点を当て、外観の変化を目視で評価した。
【０２６０】
化学分析には以下の方法を用いた。
【０２６１】
サンプルは、Ｘ  Ｂｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８、２．５μｍ、４．６ｍｍｘ５０ｍｍカラム上で、流量０．４ｍｌ／ｍｉｎ、６０℃、ランタイム６０分、検出波長２６０ｎｍで行った。サンプル注入量は４０μｌ、サンプラー温度は５℃とした。移動相組成は以下の通りであった。
・移動相Ａ  ０．２％ＴＥＡ中の３％アセトニトリル、１％ＨＦＩＰ。
・移動相Ｂ  ０．２％ＴＥＡ中の１２％アセトニトリル、１％ＨＦＩＰ。
・移動相Ｃ  アセトニトリル。
・移動相Ｄ  水。
【０２６２】
安定性設定のためのサンプル識別子は以下の通りであった。
・１２３３／０７１／０１  Ｔ＝０週目の時点  セクション３．１のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣおよびコビトリモドベース製剤
・１２３３／０７１／０２  Ｔ＝４週目の時点  セクション３．１のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣおよびコビトリモドベース製剤
・１２３３／０７２／０１  Ｔ＝０週目時点  セクション３．２の  Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモドおよび酸化防止剤製剤
・１２３３／０７２／０２  Ｔ＝４週目時点  セクション３．２のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモドおよび酸化防止剤製剤
・１２３３／０７２／０３  Ｔ＝０週目時点  セクション３．３のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモド、酸化防止剤およびｐＨ緩衝液製剤
・１２３３／０７２／０４  Ｔ＝４週目時点  セクション３．３のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ、コビトリモド、酸化防止剤およびｐＨ緩衝液製剤
【０２６３】
３．５  物理的評価
４０℃／７５％ＲＨでの４週間の安定保存の前後で、製剤の物理的評価を行った。３つの製剤はすべて白色の懸濁液を形成し、安定保存後の物理的変化は明らかではなかった。
【０２６４】
３．６  化学的評価
製剤は、４０℃／７５％ＲＨでの４週間の安定保存の前後で、アッセイおよび関連物質について化学的に評価した。平均的な結果を表２７に、個別の結果を表２８にまとめた。アッセイの結果は、初期と４週間時点の間で若干の変動を示す（ベースでは１３．８％の増加、酸化防止剤を含むベースでは９．１％の減少、酸化防止剤とｐＨ緩衝液を含むベースでは８．９％増加）が、これは少量のサンプルのホモジナイズのため、この段階では一般的であり、方法は製剤特異的ではない。この理由から、安定性の指標として関連物質レベルが使用されている。結果は、３つの製剤すべてにおいて、４週間にわたり関連物質の変化が非常に少ないことを示している。ベース製剤では、関連物質は０．６７％増加し、酸化防止剤を添加したベース製剤では、関連物質は０．６７％減少し、酸化防止剤およびｐＨ緩衝液を添加したベース製剤では、関連物質は０．０７％減少した。賦形剤を添加した両製剤は、４０℃／７５％ＲＨで４週間保存した後、ベース製剤よりも化学的安定性が向上することを示した。
【０２６５】
ベース製剤の結果は、実施例１の前回の結果と良好に比較した。先行研究の関連物質が５．２４％（Ｔ＝０）および７．０５％（Ｔ＝４）であったのに対し、本研究では５．３１％（Ｔ＝０）および６．０７％（Ｔ＝４）であったことは、ベース製剤がわずかな分解を受けることを示している。観察された結果に基づいて、酸化防止剤を製剤中に含有させることが示唆される。さらに、製造時の取り扱い性の向上をサポートするために、トロメタミンｐＨ緩衝液も含有させることが示唆される。
【０２６６】
さらに、参照コビトリモド原料の不純物レベル（５．３面積％）は、製剤化プロセス中に該材料が安定であったことを示すＴ＝０の結果と類似している。
【０２６７】
また、製造中に、トロメタミンｐＨ緩衝液がＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中でいくつかの不溶性を示し、残りの不溶性トロメタミンが非常に微細な懸濁液を形成していることにも注目される。したがって、トロメタミンは、今後、試作製剤中に懸濁される可能性がある。
【０２６８】
【表２７】
2021522350.tif 000032
【０２６９】
【表２８】
2021522350.tif 000033
【０２７０】
３．７  結論
結果は、３つの製剤すべてにおいて、高温下での４週間にわたり関連物質の変化は非常に小さいことを示す。ベースとなる製剤では、最も高い不純物の増加が報告されている。賦形剤を添加した製剤はいずれも、４０℃／７５％ＲＨで４週間保存した後、不純物のレベルに変化はないか、または減少が見られた。観察された結果に基づいて、ｐＨ緩衝液の有無にかかわらず酸化防止剤を組み込むことは、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ／コビトリモドとの相性が良く、化学的分解に対してポジティブな安定化効果を有する。さらに、製剤化プロセスは、混合物の化学的分解を引き起こさなかった。
【０２７１】
実施例４−コーティング
本検討で使用した賦形剤、ＡＰＩ、その他の材料を以下の表２９に詳述し、前の実施例の通りとする。
【０２７２】
【表２９】
2021522350.tif 000034
【０２７３】
４．１  非被覆カプセル用バルクミックスとカプセル製剤の調製
バルクミックスは、最初にステンレス製容器で調製した。１４０カプセルのための製剤組成物および必要な重量は、表３０に詳細に記載されている。必要量のＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ（４１．６０４ｇ）を適当な容器に分注し、これに０．０５０ｇのＢＨＴと０．２００ｇのトロメタミンを加えた。次いで、製剤を、すべての固形物が完全に溶解するまで、５分を超えない期間、３０℃で高剪断混合した。次に、必要量のコビトリモド（６．６６３ｇ）をアリコートでミックスに分注し、スパチュラで混合して粉末を湿らせた。次いで、製剤を、均質な懸濁液に達成するまで、５分を超えない期間、３０℃で高剪断混合した。この混合に続いて、この均質な懸濁液に、必要量のＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍ（２．２８１ｇ）を添加し、スパチュラで混合して粉末を湿らせた。均質な懸濁液に達成するまで、５分を超えない期間、３０℃で再び製剤を高剪断混合した。
【０２７４】
調製に続いて、ミックスを、サイズ１の白色ゼラチンＣｏｎｉ−Ｓｎａｐカプセルに、目標充填重量３６２．６ｍｇ、上限３８９．８ｍｇ、下限３３５．４ｍｇに手で充填した。充填されたカプセルは、標準的な２５％ゼラチンバンディング溶液を用いて、Ｑｕａｌｉ−Ｓｅａｌのベンチスケールバンディングマシンでバンディングされた。バンディングされたカプセルは、室温で少なくとも６時間風乾させた。その後、カプセルは真空試験（＜−２０ｍｍＨｇ）を行い、カプセルが漏れていないかどうかを目視で確認した。最後に、カプセルは二重のポリテン袋に入れ、コーティングに必要とされるまで２〜８℃の冷蔵庫に保管した。
【０２７５】
【表３０】
2021522350.tif 000035
【０２７６】
コビトリモドのアッセイの補正係数は１．１４である。Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣの補正量は次のように計算される：総バッチ量−［（補正されたコビトリモドのバッチ量）＋（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍのバッチ量）＋（ＢＨＴのバッチ量）＋（トロメタミンのバッチ量）］。
【０２７７】
４．２  コーティング液１およびコーティング液２の調製
次に両コーティング液の調製方法について詳述する。表３１はコーティング液１に必要な組成および重量を詳述し、表３２はコーティング液２に必要な組成および重量を詳述する。必要量のＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０およびＥｕｄｒａｇｉｔ  ＦＳ３０を適当な容器に分注し、磁気撹拌プレートを用いて最低１０分間撹拌した。混合後、必要量の滅菌水（２５４．１５ｇ）を別の容器に分注した。これに必要量のタルクを分注し、スパチュラで混合してタルク（２７．５０  ｇ）を湿らせた。次いで、必要量のトリエチルシトレートを水およびタルクをいれた容器に分注し、均質な懸濁液が形成されるまで、ミックスを少なくとも１０分間高剪断混合した。水／タルク／トリエチルシトレートミックスをＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０およびＦＳ３０ミックスにゆっくりと添加し、懸濁液を最低１０分間撹拌した後、５００μｍ以下のステンレス製のふるいを通して濾過した。濾過されたミックスは、コーティングに必要とされるまで撹拌し続けた。
【０２７８】
【表３１】
2021522350.tif 000036
【０２７９】
【表３２】
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【０２８０】
４．３  カプセルコーティング
カプセルは、コーティング液１またはコーティング液２のいずれかでコーティングされた。１つのコーティング液につき合計４３個のカプセルがコーティングされた。必要な数のコーティングされるカプセルをコーティング装置のボウルに加えた。カプセルは流動層コーティング装置（Ｓｔｒｅａ−１）を用いてコーティングした。カプセルの重量はコーティングプロセスを通して定期的にチェックされ、必要に応じてコーティング散布量の調整が行われた。コーティングは、カプセルが１カプセルあたり５０ｍｇの目標量までコーティングを継続した。その後、室温で硬化させた後、目視で選別し、不良品を除去した。最後に、カプセルを溶出試験まで２〜８℃の冷蔵庫で保存した。
【０２８１】
４．４  溶出試験
溶出試験は、２つの緩衝液ステージプロセス（最初は０．１Ｍ  ＨＣｌで２時間、カプセルの破裂を目視で確認した後、完了するまでｐＨ６．８リン酸緩衝液ステージに移す）にて３７℃で実施した。ＵＳＰ装置２をパドル速度５０ｒｐｍ、培地容量９００ｍｌ、サンプル容量１ｍｌで使用した。サンプルは、ｐＨ６．８緩衝液フェーズの間、５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０、１２０分、その後３、４、５、６、７、８、１２、１８、２４時間の時点で採取した。各カプセルバッチおよび各時点について、２つのカプセルを試験した（ｎ＝２）。次いで、サンプルは、時点ごとに１カプセルにつき１回のインジェクションで分析した。
【０２８２】
化学分析には以下の方法を用いた。
Ｘ  Ｂｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８、２．５μｍカラム上で、流量０．４ｍｌ／ｍｉｎ、６０℃、ランタイム１６分、検出波長２６０ｎｍ、サンプラー温度５℃で行った。移動相組成は以下の通りであった。
移動相Ａ  ０．２％  ＴＥＡ中の３％アセトニトリル、１％ＨＦＩＰ。
移動相Ｂ  ０．２％  ＴＥＡ中の１２％アセトニトリル、１％ＨＦＩＰ。
【０２８３】
４．５  製剤のｐＨ緩衝液レベルの評価
トロメタミンの溶解度とｐＨに対するこの緩衝液の影響を評価するために、シンチレーションバイアル内にＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中にトロメタミンを０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、および０．５％負荷して１０ｇのミックスを調製した。バイアルは、その後、最低２×２分間高剪断混合し、その後静置した。すべてのバイアルは、目に見える不溶性物質を有していたため、サンプルは、その後、さらに２分間高剪断混合し、ｐＨ分析のためにサンプルを採取する前に目視で評価した。ｐＨ分析は、サンプルを１４０００ＲＰＭで１０分間遠心分離して不溶性物質を分離し、透明な上清の１ｇを３ｇの脱イオン水で希釈し、完全に混合し、ｐＨを測定することを含む。
【０２８４】
結果およびディスカッション
４．６  カプセルの製造
製剤は問題なく調製され、均質性の目視評価は許容できるものであった。製剤は、手で充填し、Ｑｕａｌｉｓｅａｌのベンチスケールバンダー（ｂｅｎｃｈ  ｓｃａｌｅ  ｂａｎｄｅｒ）を使用してバンディングすることによりカプセル化したが目立った観察や問題はなかった。すべてのカプセルは許容できる重量範囲内に充填されており、最小充填重量は３５５．３ｍｇ、最大充填重量は３８３．０ｍｇであった。真空選別の結果、カプセルに漏れは見られず、すべてのカプセルは許容範囲内であると判断された。バルキングカプセルとアクティブカプセルを流動化させるために、ファンの回転数を４．７５〜７．２５の範囲で使用した。カプセルは均一にコーティングされ、コーティングの表面は滑らかであった。
【０２８５】
４．７  コーティングされていないカプセルとコーティングされているカプセルの溶出試験結果
表３３および図３に、非コーティングカプセルおよびコーティングカプセルの溶出試験結果を詳述する。非コーティングカプセルは２段階の緩衝液溶出評価にさらされておらず、ｐＨ６．８の緩衝液のみで試験された。その結果は、非コーティングカプセルはｐＨ６．８緩衝液に曝露してから５〜１０分以内にコビトリモドの放出を開始し，約１時間半以内にコビトリモドの８０％が放出されたことを示した。その後、カプセルは約３時間以内に完全放出を達成した。この結果から、ＨＰＭＣゲル化マトリックスは、物理的なバリアを形成しうることにより、カプセルからのコビトリモドの放出速度を遅らせる効果があることが示唆された。製剤によって形成されたバリアは、製剤マトリックスから溶出媒体へのコビトリモドの移行を遅延させた。
【０２８６】
コーティング溶液１（５０：５０  Ｌ：Ｓポリマー比）でコーティングされたカプセルは、０．１Ｍ  ＨＣｌに２時間曝露してもカプセルの破裂の視覚的徴候を示さなかった。ｐＨ６．８の緩衝液に移した後、カプセルはコビトリモドの放出開始に遅延が見られ、約１時間後に放出が開始されたことを示した。放出の遅延は、使用されたＥｕｄｒａｇｉｔポリマーの組み合わせによるものであり、Ｌ３０ポリマーの溶出はｐＨ６．８の媒体に曝露した際に発生した。Ｓポリマーは、Ｌ３０ポリマーよりも媒体に対する抵抗力が大きく、Ｌ３０ポリマーが溶出すると、カプセルシェルが部分的に露出し、コビトリモドが溶出媒体中に移動することを可能にする。コビトリモドは、その後、Ｌ３０ポリマーによって生成された細孔サイズが溶出媒体の流入および流出を減少させ、ＨＰＭＣゲルマトリックスがカプセルコアから放出される製剤の量を制限するという複合的な効果のために、約１０時間にわたって着実に放出される。コビトリモドの約８０％は６時間後に放出され、その後、放出率は約１２時間後に完全放出が達成されるまで遅くなる。
【０２８７】
コーティング溶液２（２５：７５  Ｌ：Ｓポリマー比）でコーティングされたカプセルは、０．１Ｍ  ＨＣｌに２時間曝露してもカプセルの破裂の視覚的徴候を示さなかった。ｐＨ６．８の緩衝液に移した後、カプセルはコビトリモドの放出開始に遅延が見られ、約２時間後に放出が開始された。放出の遅延は、使用されたＥｕｄｒａｇｉｔポリマーの組み合わせによるものであり、Ｌ３０ポリマーの溶出はｐＨ６．８の媒体に曝露した際に発生した。５０：５０コーティングポリマー調製物と比較して、より高いＳポリマー含有量は、媒体に対してさらに大きな抵抗を提供し、したがって、放出のより大きな遅延をもたらす。コビトリモドは、その後、Ｌ３０ポリマーによって生成された細孔サイズが溶出媒体の流入および流出を減少させ、ＨＰＭＣゲルマトリックスがカプセルコアから放出される製剤の量を制限するという複合的な効果のために、約１６時間にわたって着実に放出される。
【０２８８】
【表３３】
2021522350.tif 000038
【０２８９】
４．８  製剤のｐＨ緩衝液レベルの評価
検討結果は表３４に詳述する。全てのサンプルでトロメタミンの多少の不溶性を示したが、低負荷の０．０５％と０．０１％のサンプルでは不溶性が最も低く、わずかに微細な不溶性物質が残っていた。全てのサンプルのｐＨは終始安定していたが、０．０１％の負荷レベルではｐＨが低下し始めた可能性があった。
【０２９０】
【表３４】
2021522350.tif 000039
【０２９１】
４．９  結論
コビトリモドおよび賦形剤を含むカプセルの製造に成功した。次いで、カプセルを、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０  Ｄ−５５とＦＳ  ３０Ｄの組み合わせで、５０：５０または２５：７５の比率でコーティングした。コーティングカプセルおよび非コーティングカプセルの両方を溶出試験に付した。非コーティングカプセルはｐＨ６．８の緩衝液にのみ付し３時間にわたり徐放性を示した。コーティングカプセルは０．１Ｍ  ＨＣｌ中で２時間、その後ｐＨ６．８リン酸緩衝液中で２４時間放置した。どちらのコーティングも酸性媒体中でのカプセルの破裂を防ぎ、ｐＨ６．８リン酸緩衝液中ではコーティングポリマーとＨＰＭＣゲル化マトリックスの組み合わせにより徐放性を可能にした。得られた結果に基づいて、カプセル充填剤の処方を維持しながら、ＬとＳのコーティングポリマーの比率を変えることで、放出プロファイルを変化させることができる。
【０２９２】
実施例５−バルクテストデータ
技術的なバッチ製造の一環として、充填期間中のバルクミックスの均一性とカプセル含有量の均一性を評価した。
【０２９３】
５．１  材料
この研究で使用されたすべての材料の詳細を表３５に示す。
【０２９４】
【表３５】
2021522350.tif 000040
【０２９５】
５．２  バルクミックスの調製
製剤組成物の詳細を表３６に示す。製剤を、蓋付きのラベル付きステンレススチール製容器に調製し、１１４．０ｇのＣａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣを添加した。Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣに０．１３９ｇのＢＨＴを加え、ＢＨＴが完全に溶解するまで、窒素下で２分間、フルスピードで混合物を高剪断混合した。これに続いて、０．２７８ｇのトロメタミンをミックスに加え、窒素下で、トロメタミンが目視で完全に均質化されるまで、ハイシアミキサーを使用して、フルスピードで５分間２ピリオド均質化した。合計１８．２６ｇのコビトリモドをアリコートでバルクミックスに添加し、目に見えるほど均質な懸濁液に達するまで、窒素下で４×５分間および１×２分間、フルスピードで高剪断混合した。最後に、６．２４ｇのＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ１００Ｍをアリコートで添加し、目に見えるほど均一な懸濁液に達するまで、窒素下で１×５分と１×４分の期間、フルスピードで高剪断混合した。次いで、ミックスを-21 in Hg（インチ．水銀）の真空下で８分間脱気し、バルクミックス中に存在する空気を除去し、ハイバー充填機での効果的な充填を確実にした。
【０２９６】
【表３６】
2021522350.tif 000041
【０２９７】
５．３  カプセル充填とバンディング、バルクミックスサンプリングとｐＨ評価方法
ＨｉＢａｒ充填機に、サイズ１の金型をセットアップした。１２カプセルの空重量を計算し、充填重量コントロールチャートの限界値を計算するために使用した。次に、バルクミックスをＨｉＢａｒホッパーに移し、窒素下で維持し、１１２ｒｐｍに設定されたオーバーヘッドスターラーを使用して撹拌した。次に、ＨｉＢａｒを目標重量３６２．６ｍｇで充填するように設定し、上限値３８９．８ｍｇ（上）と下限値３３５．４ｍｇ（下）を設定した。充填を開始し、カプセル重量を１５分間隔で運転中ずっとモニターした。
【０２９８】
製剤のｐＨは、製造開始時、中間時、および製造終了時に０．５ｇのバルクミックスをサンプリングし、サンプルを５ｇの脱イオン水で希釈することで評価した（当初は４ｇの脱イオン水を使用していたが、処理のしやすさを考慮してさらに１ｇの脱イオン水を追加した）。その後、手持ちｐＨプローブを用いてｐＨを測定した。
【０２９９】
次に、サイズ１の金型を使用して、Ｑｕａｉｌｓｅａｌのベンチスケールバンダー上で２５％ゼラチンバンディング溶液を用いてカプセルをバンディングした。充填とバンディングの段階が完了した後、カプセルは周囲温度で乾燥させた。カプセルのバンディング中に、各時点で１０個のカプセルを分離し、製造開始時、中間時、終了時の含有量の均一性を評価した。
【０３００】
５．４  コーティング懸濁液の調製
コーティング懸濁液は以下の方法を用いて調製した。Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０  Ｄ−５５  １５６．２８ｇとＥｕｄｒａｇｉｔ  ＦＳ  ３０Ｄ  １５６．３０ｇを容器に秤量し、マグネチックスターラーを用いて少なくとも１０分間撹拌した（表３７）。第二の容器に滅菌水３８１．２７ｇを秤量し、これにタルク４１．２６ｇを加え、スパチュラで混合してタルクを湿らせた。タルクが十分に湿ったところで、トリエチルシトレート１５．０１ｇを加え、ミックスをスパチュラで撹拌した。このミックスを、目視で均質な懸濁液を作成するために、少なくとも１０分間、フルスピードで高剪断混合した。得られた懸濁液をＥｕｄｒａｇｉｔ混合物に加え、マグネチックスターラーを用いて少なくとも１０分間撹拌した後、５００μｍのステンレススチール製のふるいを通して濾過した。濾過された懸濁液は、一定の撹拌下に維持された。
【０３０１】
【表３７】
2021522350.tif 000042
【０３０２】
５．５  カプセルコーティング方法
充填されバンディングされたカプセルを数えて、コーティングされるカプセルの正確な数を得て、充填されバンディングされたカプセルの平均重量を用いて目標コーティングカプセル重量を算出した。コーティングマシンをセットアップし、ペリスタルティックポンプの設定を調整しコーティング懸濁液の必要な流量を得た。その後、カプセルをコーティング機に移し、流動化し、コーティングを開始した。コーティングは、カプセル上で均一で滑らかであることが確認された。その後、カプセルを周囲温度で硬化させた。その後、カプセルを目視で検査し、欠陥のあるカプセルを取り除いた。残りのコーティングされたカプセルの平均重量を測定し、二重ポリテン袋に入れて２〜８℃で保存した。
【０３０３】
５．６  ブリスター包装法
ベンチブリスター包装機をセットアップし、機械の性能を確認するために、リークテスト用に空のブリスターストリップ１０本を準備した。次に、１０本の空のブリスターストリップを水に浸し、０．５ｂａｒの絶対真空下で３０秒間放置した後、失敗したポケットがないかどうかを目視で評価した。その後、カプセルは完成するまでブリスター包装され、その後、さらに１０個の空のブリスターが準備され、リークテストが繰り返された。その後、完全なブリスターにラベルを貼り、安定的放置の前に２〜８℃で保存した。
【０３０４】
結果と議論
５．７  技術的なバッチ製造
充填とバンディング後、合計３０６カプセルが入手でき、これらのカプセルから３０カプセルを含有量の均一性試験のためのサンプルとした。目視選別では、バンドに気泡が入っていたり、バンドが不完全だったりしたため、９つのカプセルが取り除かれた。カプセルのコーティングは、コーティング中に問題が発生することなく実施された。合計２６７個のカプセルがコーティングされた。最後に、１０個のカプセルを含むブリスターにカプセルをブリスター包装したので、２６０個のカプセルをブリスター包装し、残りの７個のカプセルをブリスター包装し、空のブリスターポケットを切断した。初期溶出試験の結果を図５に示す。
【０３０５】
５．８  バルクミックスと含有量均一性評価
ホッパーから採取したバルクミックスサンプル（上述のように）は、個々のカプセルの含有量均一性の結果が９０％〜１００％の範囲内であったため、試験しなかった。含有量均一性の結果は、製造行程の開始、中間および終了について、表３８、表３９および図４に詳述されている。含有量均一性の結果は、１５未満の平均変動（ＡＶ）を有するという受け入れ基準を満たしていた。すべての個々の結果は、９０％〜１１０％の範囲内である。製造行程の中間で製造されたカプセルは、ＡＶ値が２．４と非常に良好な一貫性を示した。また行程の終了時に製造されたカプセルは、ＡＶ値が５．５と良好な一貫性を示した。すべての結果は許容範囲のばらつきを示し、すべての結果はＡＶ値の限界内であった（１５未満）。カプセル充填重量とコビトリモド濃度との間には、すべてのサンプルにおいて顕著な関係は示されなかった（表３９）。
【０３０６】
【表３８】
2021522350.tif 000043
【０３０７】
【表３９】
2021522350.tif 000044
【０３０８】
５．９  ｐＨ評価結果
バルクミックスは、セクション５．２と同様にサンプリングし、行程の開始、中間および終了時のバルクミックスのｐＨ評価の結果を以下の表４０に詳述する。ｐＨは、トロメタミン緩衝液封入物とのｐＨの整合性を示す、行程中ずっと７．６２から７．８８の間で維持された。バルクミックスのｐＨは、脱イオン水に溶解したコーティングされていない全カプセルと同様に、Ｃａｐｒｙｏｌ  ＰＧＭＣ中のトロメタミンの以前の評価と一致しており、ｐＨは７．６から７．８の間の結果を示した。
【０３０９】
【表４０】
2021522350.tif 000045
【０３１０】
５．１０  結論
カプセルの充填、バンド化、コーティングは、重大な問題なく正常に行われた。ＡＰＩの低密度で物理的な性質のため、ＡＰＩは容器に部分的に添加された。含有量均一性の結果は、１５未満のＡＶの受け入れ基準を満たした。個々の結果はすべて９０％から１１０％以内である。
【０３１１】
生成されたアッセイおよび関連物質データは、最終製品中の関連物質の含有量が出発原料で報告された関連物質と同等であったため、ＡＰＩが製造プロセス中に安定していることを実証した。さらに、アップスケール製造から得られたカプセルの結果としての溶出プロファイルは、図５を参照して、以前の実施例で得られた結果と一致していた。
【０３１２】
実施例６−安定性試験
上記実施例５に記載のブリスター包装で包装されたカプセルを、長期保存中のＡＰＩの安定性を評価するための試験に供した。カプセルは、２５℃６０％相対湿度（ＲＨ）で保存するか、または４０℃７５％相対湿度で保存した。
【０３１３】
ＡＰＩの全不純物および放出プロファイルは、初期、１ヶ月後、および６ヶ月後に記録された。全不純物は、実施例３、上記のセクション３．４で議論したようにＨＰＬＣを使用して確立した。放出プロファイルは、上記の実施例４、セクション４．７および実施例５の溶出試験の場合と同様に記録した。
【０３１４】
【表４１】
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【０３１５】
表４１に、調査した時期の全不純物の結果を示す。６ヶ月後の分解量が少ないことから、カプセルが長期保存に適していることがわかる。
【０３１６】
図６に試験開始時（点線）、２５℃／６０％ＲＨで１ヶ月保存後（破線）、２５℃／６０％ＲＨで６ヶ月保存後（実線）のカプセルからのＡＰＩの放出プロファイルを示す。
【０３１７】
図７は、試験開始時（点線）、４０℃／７５％ＲＨで１ヶ月間保存した後（破線）、４０℃／７５％ＲＨで６ヶ月間保存した後（実線）のカプセルからのＡＰＩの放出プロファイルを示す。
【０３１８】
図６及び図７の両方とも、調査した保存期間において、ＡＰＩの放出プロファイルは経時的に変化しないことが示されている。これは、カプセルの内容物が経時的に安定しており、その放出特性を保持していることを示している。さらに、これは、高温（４０℃）および相対湿度（７５％）で保存されたカプセルの場合のように、保存条件が非理想的な場合でも同様である。結論として、実施例６の結果は、カプセルが長期にわたって良好な安定性を有し、その放出特性を保持していることを示している。
【０３１９】
配列表
配列番号:1
5’-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'、ここでアスタリスク（＊）はホスホロチオエート修飾を表す。
配列番号:2
5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'
【図１】
2021522350.tif 000047
【図２】
2021522350.tif 000048
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
2021522350000001.app
【国際調査報告】
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2021522350.tif 000055
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