(57)【要約】  本発明は、式Ｉで示す構造（ＲはＣ１-５アルキル）を有するエモジンスクシニルエステル系化合物およびその調製方法と用途を開示している。本発明に係る方法は簡単で、合成時間の節約とコストの低減に効果的で、操作は簡単で、実施が容易であり、工業生産に適している。実験により、本発明のエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンよりも糖尿病の創傷治癒を促進し、糖尿病の創傷治癒を促進する薬を調製できることが判明された。また、本発明は、実験混合型高脂血症ラットに薬理実験を行うことにより、本発明のエモジンスクシニルエステル系化合物が、エモジンより優れており、脂質低下作用が著しく、安全性が高く、薬の使用が簡単で、原料の価格が安く、入手が容易で、輸送と保存に便利である等の利点があることを確認した。【選択図】図１
2021505666.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2021505666.tif 000014
式Ｉで示す構造を有し、  
ただし、ＲはＣ１-５アルキルであることを特徴とする、エモジンスクシニルエステル系化合物。
【請求項２】
式Ｉでは、Ｒはエチル基であることを特徴とする、請求項１に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物。
【請求項３】
無水琥珀酸とＣ１−５のアルカノールとでコハク酸モノアルカノールを合成し、コハク酸モノアルカノールをまた塩化チオニルと反応させてコハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を得て、コハク酸モノアルカノールクロリド系化合物をまたエモジンと反応させて前記エモジンスクシニルエステル系化合物を得るステップを含むことを特徴とする、請求項１に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物の調製方法。
【請求項４】
Ｃ１−５のアルカノールを溶剤として無水琥珀酸を入れて加熱還流し、減圧蒸留して過剰なアルカノールを除去し、コハク酸モノアルカノールを得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノアルカノールを合成するステップ（１）と、
塩化チオニルを溶剤としてコハク酸モノアルカノールを入れて加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、コハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を合成するステップ（２）と、
エモジンとアルカリを円底フラスコに入れ、ジクロロメタンを溶剤としてコハク酸モノアルカノールクロリドをゆっくりと滴下し、室温で反応させる、エモジンスクシニルエステル系化合物を合成するステップ（３）と、
炭酸水素ナトリウムの水溶液で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、粗生成物を得るステップ（４）と、
粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール混合溶液で溶離し、エモジンスクシニルエステル化合物を得るステップ（５）と、を含むことを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒがエチル基である場合、
エタノールを溶剤として無水琥珀酸を入れて加熱還流し、減圧蒸留して過剰なエタノールを除去し、コハク酸モノアルカノールを得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノアルカノールを合成するステップ（１）と、
塩化チオニルを溶剤としてコハク酸モノアルカノールを加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、コハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノアルカノールクロリドを合成するステップ（２）と、
エモジンとアルカリを円底フラスコに入れ、ジクロロメタンを溶剤としてコハク酸モノアルカノールクロリドをゆっくりと滴下し、室温で反応させる、エモジンスクシニルエステルを合成するステップ（３）と、
炭酸水素ナトリウムの水溶液で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、粗生成物を得るステップ（４）と、
粗生成物シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール混合溶液で溶離し、エモジンスクシニルエチルを得るステップ（５）と、を含むことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ステップ（３）で、前記アルカリは弱アルカリから選択されることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（１）で、前記加熱還流の時間は３〜１０時間、好ましくは４時間であり、および、ｇ：ｍｌで計算すると、無水琥珀酸の質量とエタノールの体積比は１：１０、好ましくは１：４であり；ステップ（２）で、加熱還流の時間は１〜１０時間、好ましくは２時間であり、および、コハク酸モノエチルと塩化チオニルの質量比は１：１〜１：１０、好ましくは１：４であり；ステップ（３）で、前記アルカリは、ピリジン、トリエチルアミンまたはアンモニア水、好ましくはピリジンであり、および、エモジンとコハク酸モノエチルクロリドの質量比は１：０．５〜１、好ましくは１：０．７であり；ステップ（５）で、ジクロロメタン−メタノール混合溶液において、ジクロロメタンとメタノールの体積比は１００：１〜１００：４、好ましくは１００：１であることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【請求項８】
糖尿病の創傷治癒を促進する薬を調製するための、請求項１または２に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物の用途。
【請求項９】
請求項１または２に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物を含む薬物。
【請求項１０】
前記薬物は、製剤の成型に必要な補助材料を添加することにより調製される、乳膏剤、油剤、貼付剤、粉剤、噴霧剤、徐放性製剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、またはその他の製剤であることを特徴とする、請求項９に記載の薬物。
【請求項１１】
請求項１または２に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物および植物油を含む油剤。
【請求項１２】
植物油を焦黄状態になるまで加熱して滅菌し、室温で静置し、冷却して予備するステップ（１）と、
無菌条件下で、請求項１または２に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物を量り、ステップ（１）の滅菌後の植物油に溶解するステップであり、該ステップでは、好ましくは、ｍｇ：ｍｌで計算すると、エモジンスクシニルエステル系化合物の質量と植物油の体積との比は１〜５：１、より好ましくは４：１であるステップ（２）と、
超音波振動により、エモジンスクシニルエチルを生地の均一な油状製剤になるまで十分溶解させるステップ（３）と、
ステップ（３）で得られた油状製剤を無菌水で希釈し、無菌条件下で分包装、密封、室温で保存して予備する、好ましくは、無菌水で希釈した油状製剤において、エモジンスクシニルエステル系化合物の濃度は５０〜１５０μｇ／ｍｌ、より好ましくは１００μｇ／ｍｌであるステップ（４）と、を含むことを特徴とする、請求項１１に記載の油剤を調製する方法。
【請求項１３】
脂質降下薬および／または脂肪肝治療薬を調製するための、請求項１または２に記載のエモジンスクシニルエステル系化合物の用途。
【請求項１４】
前記脂質降下薬は、血清中の総コレステロール（ＴＣ）、低密度脂質タンパク質（ＬＤＬ−ｃ）、ならびに、肝臓の中の総コレステロール（ＴＣ）およびグリセリン三エステル（ＴＧ）を低減する役割を有することを特徴とする、請求項１３に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創薬合成および医薬衛生分野に属する。特に、エモジンスクシニルエステル系化合物（またはエモジースクシニルエステル系化合物）およびその調製方法に関し、この化合物の糖尿病の創傷治癒の促進や脂質の低下における用途にも関する。
【背景技術】
【０００２】
生活水準の向上に伴い、人々の飲食構造が変化し、コレステロールと飽和脂肪酸の摂取が明らかに増加したが、運動量が相対的に不足し、高脂血症の発症率は年々上昇している。高脂血症とは、例えば、血清中の総コレステロール（ｔｏｔａｌ  ｃｈｌｅｓｔｅｒｏｌｔｏｔａｌ、ＴＣ）、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、ＴＧ）や低密度リポタンパク質（ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｒｏｔｅｉｎ、ＬＤＬ−ｃ）の上昇および高密度リポタンパク質（ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｒｏｔｅｉｎ、ＨＤＬ−ｃ）の低下により、アテローム性動脈硬化、冠状動脈性硬化等のような人体に深刻な危害を及ぼす病気を直接引き起こす恐れがある。高脂血症は、また、脂肪肝、肝硬変、胆石症、膵炎、周辺血管疾患、高尿酸血症等の病気を引き起こす恐れもある。臨床研究によると、ほとんどの心臓急死者は冠動脈硬化性脂質異常があり、かつ冠動脈硬化性脂質異常が虚血性心脳血管疾患で重要な役割を果たす可能性がある。脂肪代謝の乱れは糖代謝の乱れを強める一方、糖尿病の大血管合併症の発生率と死亡率を著しく高める。
【０００３】
臨床でよく使われる脂質調節薬の多くは化学合成製剤で、長期的に服用する必要がある。例えばシンバスタチンやロバスタチン等、各種のスタチン系薬は高脂血症を治療すると同時に心脳血管の意外な事件を予防することができる。しかし、長期または大量にスタチン系薬を使用すると、肝臓組織細胞の生物化学変化や心臓の横紋筋融解等に重大な不良反応を招く可能性があり、長期的な薬物使用を制限することがある。そのため、安全で効果的な新型の脂質調節薬を研究開発することは重要な意義を持っている。
【０００４】
現在、糖尿病は全世界で人類の健康を脅かす三大慢性非伝染病の一つになっている。中国は世界で糖尿病患者が一番多い国であり、２０１６年に、中国の１８歳以上の成人サンプルの中で、国際的に最新の臨床診断の基準に基づいて診断された糖尿病の推定有病率は１１．６％にも達した。糖尿病患者の中で、約３０％〜８０％が皮膚損害の合併症を持ち、足や下肢の組織が破壊され、潰瘍、感染、癒合しにくい傷口の症状が現れ、糖尿病足とも呼ばれる。糖尿病足は糖尿病の重要な合併症で、最悪の場合、足を切断せざるを得なくなることもある。疫学調査の結果、糖尿病患者の下肢切断の確率はこの病気がない人の２５倍を超え、ある国では糖尿病によって下肢切断される患者が３０秒ごとに一例ある。その他に、糖尿病足の治療費や看護のコストも非常に高く、データによると、一期における治癒のために、主な虚血症状のない糖尿病足の治療と看護費用は約１６０００ドルで、もし主な虚血症状を合併しているなら、費用は２６７００ドルまでに増える。稀な場合では切断後の治癒のための治療と看護費用は約４３０００ドルであり、主な場合では切断後の治癒のための治療と看護費用は６３１００ドルまでに増加し、途上国では、糖尿病およびその合併症の治療費は少なくとも４０％が糖尿病足の治療と看護に使われている。このように、糖尿病足は社会に大きな経済的負担と社会的負担をかけており、糖尿病の創傷治癒障害の問題は早急に解決しなければならない。
【０００５】
糖尿病患者の創傷治癒障害は日常生活に深刻な影響を与え、糖尿病の創傷治癒障害を有効的に予防および治療することは重要な臨床的意義を持っている。現在、臨床で採用されている治療法は、普遍サポート的なものである。例えば、血中脂質の乱れを是正し、貧血や低タンパク血症を是正し、栄養不良状態を改善する等の全身療法、抗感染療法、微循環の改善、神経機能の改善、高気圧酸素治療、手術治療および幹細胞移植等がある。これらは、多くの患者が耐えられないほど治療費が高いだけではなく、治療効果も思わしくない。そのため、糖尿病の創傷治癒を促進する効果的な薬を研究開発し、糖尿病の早期創傷治癒の進度を加速させ、糖尿病の創傷治癒過程を短縮させ、障害率を低減させることが医学分野の重大な課題である。
【０００６】
エモジン（１，３，８−トリヒドロキシ基−６−メチルアントラセンキノン）は、ダイオウ属、タデ属、クロウメモドキ属の根茎とセンナ葉の中に存在する主要な有効単量体で、植物型の薬である。近年、多くの学者がエモジンの薬理作用およびそのメカニズムについて深く研究することによって、エモジンは脂質の降下、抗菌と抗炎、抗腫瘍、細胞増殖の抑制、免疫力の向上、肝臓と腎臓の保護等幅広い薬理作用を持っていることを発見した。エモジンは脂質降下の作用が顕著で、毒性と副作用が小さい。しかし、エモジンの生物学的利用率が低いため、オスのＳＤラットにおける絶対生物学的利用率は７．５％で、メスの中では５％しかない。本発明に係るエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンに対して構造の改造を行い、エモジンスクシニルエチルの脂質降下の薬力学評価を行ったところ、エモジンスクシニルエチルは、高脂血症の治療に顕著な役割を有し、かつ脂質降下作用は同じ用量では明らかにエモジンより優れていることを発見した。本発明は、アトルバスタチンカルシウムを主な対照薬として、本発明のエモジンスクシニルエステル系化合物の実験混合高脂血症ラットの薬理作用を観察することを目的としている。また、化学的に修飾されたエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンよりも糖尿病の創傷治癒を促進する。従って、エモジンを修飾および改造する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従来技術の不足に対して、本発明は新たな脂質降下および糖尿病の創傷治癒を促進する化合物およびその用途を提供する。本発明に係る化合物は、脂質降下の作用が顕著で、安全性が良好で、薬の使用が簡単で、値段が安くて、輸送と保存に便利である等の利点がある。また、エモジンスクシニルエステル系化合物はエモジンよりも糖尿病の創傷治癒をより促進し、糖尿病の創傷治癒を促進する薬の調製に使うことができる。本発明の合成ルートは簡単であり、合成時間の節約およびコストの低減に効果的であり、操作は簡単で、実施し易いし、工業生産に適用する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下の技術方案により上記の目的を達成するものである。
【０００９】
エモジンスクシニルエステル系化合物であって、前記化合物は式Ｉで示す構造を有し、
【００１０】
【化１】
2021505666.tif 000003
【００１１】
ただし、ＲはＣ１-５アルキルであることを特徴とする。
【００１２】
また、好ましくは、式Ｉでは、Ｒはエチル基であり、即ち、エモジンスクシニルエステル系化合物はエモジンスクシニルエチル、化学命名：１，８−ジヒドロキシ基−３−コハク酸モノエチル基−６−メチルアントラセンキノン、分子式：Ｃ２１Ｈ１８Ｏ８、分子量：３９８、である。
【００１３】
さらに、本発明は、前記エモジンスクシニルエステル系化合物を調製する方法であって、無水琥珀酸とＣ１−５のアルカノールとでコハク酸モノアルカノールを合成し、コハク酸モノアルカノールをまた塩化チオニルと反応させてコハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を得て、コハク酸モノアルカノールクロリド系化合物をまたエモジンと反応させて前記エモジンスクシニルエステル系化合物を得るステップを含む。
【００１４】
具体的には、当該方法は以下のステップ：
【００１５】
無水琥珀酸を円底フラスコに入れ、Ｃ１−５のアルカノールを溶剤として加熱還流し、減圧蒸留して過剰なアルカノールを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノアルカノールを得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノアルカノールを合成するステップ（１）と、
【００１６】
コハク酸モノアルカノールを円底フラスコに入れ、塩化チオニルを溶剤として加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、淡黄色から黄色までの油状物であるコハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノアルカノールクロリド系化合物を合成するステップ（２）と、
【００１７】
エモジンとアルカリを円底フラスコに入れ、ジクロロメタンを溶剤として対応するコハク酸モノアルカノールクロリドをゆっくりと滴下し、室温で反応させる、エモジンスクシニルエステル系化合物を合成するステップ（３）と、
【００１８】
炭酸水素ナトリウムの水溶液で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、黄色から紫黄色までの固体である粗生成物を得るステップ（４）と、
【００１９】
粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール混合溶液で溶離し、淡黄色から黄色までの生成物の純品、即ち対応するエモジンスクシニルエステル化合物を得るステップ（５）とで行われる。
【００２０】
さらに、Ｒがエチル基である場合、即ちエモジンスクシニルエステル系化合物がエモジンスクシニルエチルである場合、前記方法は以下のステップ：
【００２１】
無水琥珀酸を円底フラスコに入れ、エタノールを溶剤として加熱還流し、減圧蒸留して過剰なエタノールを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノエチルを得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノエチルを合成するステップ（１）と、
【００２２】
コハク酸モノエチルを円底フラスコに入れ、塩化チオニルを溶剤として加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノエチルクロリドを得て、この生成物を分離せずに直接次の段階の反応を行う、コハク酸モノエチルクロリドを合成するステップ（２）と、
【００２３】
エモジンとアルカリを円底フラスコに入れ、ジクロロメタンを溶剤としてコハク酸モノエチルクロリドをゆっくりと滴下し、室温で反応させる、エモジンスクシニルエチルを合成するステップ（３）と、
【００２４】
炭酸水素ナトリウムの水溶液で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、紫黄色の固体である粗生成物を得るステップ（４）と、
【００２５】
粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール混合溶液で溶離し、淡黄色の生成物の純品、即ちエモジンスクシニルエチルを得るステップ（５）とで行われる。
【００２６】
好ましくは、上記方法の中で、前記ステップ（３）に記載のアルカリは弱アルカリから選択されるものである。
【００２７】
さらに、ステップ（１）で、前記加熱還流の時間は３〜１０時間、好ましくは４時間であり、および、ｇ：ｍｌで計算すると、無水琥珀酸の質量とエタノールの体積比は１：１０、好ましくは１：４であり；ステップ（２）で、加熱還流の時間は１〜１０時間、好ましくは２時間であり、および、コハク酸モノエチルと塩化チオニルの質量比は１：１〜１：１０、好ましくは１：４であり；ステップ（３）で、前記アルカリはピリジン、トリエチルアミンまたはアンモニア水で、好ましくはピリジンであり、および、エモジンとコハク酸モノエチルクロリドの質量比は１：０．５〜１、好ましくは１：０．７であり；ステップ（５）で、ジクロロメタン−メタノール混合溶液において、ジクロロメタンとメタノールの体積比は１００：１〜１００：４、好ましくは１００：１である。
【００２８】
本発明は、さらに、糖尿病の創傷治癒を促進する薬の調製における前記エモジンスクシニルエステル系化合物の用途を提示している。このエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンスクシニルエチルであることが好ましい。
【００２９】
また、本発明は、前記エモジンスクシニルエステル系化合物を含む薬物を提示している。このエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンスクシニルエチルであることが好ましい。
【００３０】
具体的には、この薬物は、脂質降下薬または糖尿病の創傷治癒を促進する薬になることができる。
【００３１】
さらに、この薬物は、製剤の成型に必要な補助材料を添加することにより調製される、乳膏剤、油剤、貼付剤、粉剤、噴霧剤、徐放性製剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、またはその他の製剤にすることができる。
【００３２】
また、本発明は前記エモジンスクシニルエステル系化合物および植物油を含む油剤を提示している。このエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンスクシニルエチルであることが好ましい。
【００３３】
また、本発明は、前記油剤を調製するために下記ステップ：
【００３４】
植物油を焦黄状態になるまで加熱滅菌し、室温で静置し、冷却して予備するステップ（１）と、
【００３５】
無菌条件下で、上記のエモジンスクシニルエステル系化合物を量り、ステップ（１）の滅菌後の植物油に溶解するステップであり、該ステップでは、好ましくは、ｍｇ：ｍｌで計算すると、エモジンスクシニルエステル系化合物の質量と植物油の体積との比は１〜５：１であり、より好ましくは４：１であるステップ（２）と、
【００３６】
超音波振動により、エモジンスクシニルエチルを生地の均一な油状製剤になるまで十分に溶解させるステップ（３）と、
【００３７】
ステップ（３）で得た油状製剤を無菌水で希釈し、無菌条件下で分包装、密封、室温で保存して予備し、好ましくは、無菌水で希釈した後の油状製剤において、エモジンスクシニルエステル系化合物の濃度は５０〜１５０μｇ／ｍｌであり、より好ましくは１００μｇ／ｍｌであるステップ（４）と、を含むことを特徴とする方法を提示している。
【００３８】
また、本発明は、脂質降下薬および／または脂肪肝治療薬の調製における、前記エモジンスクシニルエステル系化合物の用途を提示している。このエモジンスクシニルエステル系化合物は、エモジンスクシニルエチルであることが好ましい。
【００３９】
具体的には、前記脂質降下薬は、血清中の総コレステロール（ＴＣ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ−ｃ）、ならびに、肝臓中の総コレステロール（ＴＣ）およびトリグリセリド（ＴＧ）を低減する役割を有する。
【００４０】
前記新たな脂質降下化合物であるエモジンスクシニルエステル系化合物は、生体に吸収されやすく、経口服用の生物学的利用率の向上に役立つ。実験混合型高脂血症ラットに対して薬理実験を行うことにより、本発明の脂質降下化合物であるエモジンスクシニルエチルは、著しい脂質降下作用を有し、かつ脂質降下作用は明らかにエモジンより優れていることが確認された。
【発明の効果】
【００４１】
従来技術に対して、本発明の有益な技術的効果は、以下の通りである。
【００４２】
１、本発明の研究成果は、新たな糖尿病の創傷治癒促進と脂質降下薬の開発に効果的な根拠を提供し、しかも将来の経済効果が巨大で、広範な社会効果を生み出すことができ、応用される見通しが広い。
【００４３】
２、本発明の調製ルートは実行可能かつ合理的で、コストが低く、有毒有害の試薬の使用はより少なく、環境に汚染をもたらさない。エモジンスクシニルエチルの総収率は最高で９０％に達し、純度は最高で９８％以上に達し、大量の工業生産に適している。
【００４４】
３、本発明に係るエモジンスクシニルエステル系化合物は、１型糖尿病マウスの皮膚の創傷治癒速度を著しく加速することが実験で証明された。
【００４５】
４、また、本発明は糖尿病の創傷治癒を効果的に促進する油剤およびその調製方法を提供しており、この油剤は、エモジンスクシニルエステル系化合物を唯一の有効成分として、糖尿病患者の皮膚組織の修復と創傷治癒を効果的に促進することができ、かつ、この油剤は、大規模な生産によって薬物の調製、および糖尿病患者の創傷治癒遅延等の治療に用いられる。
【００４６】
５、本発明に係る糖尿病の創傷治癒を効果的に促進する油剤は量産することができ、糖尿病患者の創傷治癒障害等の病気を治療するために使用され、皮膚組織の創傷修復等の効果を発揮することができる。
【００４７】
６、エモジンスクシニルエステル系化合物は、血液中の脂質を著しく調節することができ、臨床で最も一般的なアトルバスタチンとの最大臨床用量に比べて、血清ＴＣやＬＤＬおよび肝臓のＴＣやＴＧを著しく低下させることができ、高脂血症の予防や治療に効果的な薬物として作用する。エモジンスクシニルエステル系化合物は、血液中の脂質を著しく調節することができ、その血清ＴＣとＬＤＬ−ｃを低下させる効果は、同じ用量のエモジンより著しく優れている。
【００４８】
７、安全性が良好：本発明に係る新たな脂質降下化合物であるエモジンスクシニルエステル系化合物は、投与可能量が多く、明らかな毒または副作用がない。
【００４９】
８、薬物の使用は簡単かつ便利で、人や動物の経口投与で吸収しやすい。輸送と保存に便利であり、密封して、日陰で乾燥した所に保管すればよい。
【００５０】
９、本発明の薬物の原料はエモジンで、完成品のドラッガビリティー（ｄｒｕｇｇａｂｉｌｉｔｙ）が強いので、他の輸入された脂質降下薬と比べて、価格が安く、コストパフォーマンスが高く、患者に受け入れられやすい。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】エモジンスクシニルエステル系化合物の合成ロードマップである。
【図２】エモジンスクシニルエチルの二次元核磁気の相関信号の概略図である。
【図３】各群のマウスの血糖値を示す図である。  ここで、Ａ：糖尿病モデル構築後の各群のマウスの血糖値；Ｂ：薬物投与終了前の各群のマウスの血糖値；であり、  データは平均値±標準誤差で表され、ＳＴＺを与えた後、血糖値に応じて、モデル構築に成功した動物をランダムにモデル対照群、溶剤対照群、陽性薬（組換えヒト上皮細胞成長因子）対照群、エモジン群、エモジンスクシニルエチル群に分け、各群当たり６匹のマウス（＊＊＊：ブランク対照群と比べて、Ｐ＜０．００１、ｎ＝６）。
【図４】マウスの創傷治癒に対するエモジンスクシニルエチルの影響の実例を示す図である。
【図５】マウスの創傷治癒に対するエモジンスクシニルエチルの影響の当て嵌め曲線図である。  データは平均値±標準誤差で表され、＊：モデル群と比べて、Ｐ＜０．０５；＃＃＃：エモジンスクシニルエチル群と比べて、Ｐ＜０．００１、ｎ＝４−６）。
【図６】高脂血モデルを構築した後、動物の血清の中のＴＣ、ＴＧおよびＬＤＬ−Ｃの値である。  データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬低用量群、ｎ＝１０；被験薬中用量群、ｎ＝１０；被験薬高用量群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝１１。
【図７】混合高脂血症ラットの脂質レベルに対するエモジンスクシニルエチルの影響を示す図である。  データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．高脂血症モデル群；ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬低用量群、ｎ＝１０；被験薬中用量群、ｎ＝１０；被験薬高用量群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝１１。
【図８】混合高脂血症ラット肝臓の中のＴＣおよびＴＧの値に対するエモジンスクシニルエチルの影響を示す図である。  データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．高脂血症モデル群；ブランク対照群、高脂血症モデル群、被験薬低用量群、被験薬中用量群、被験薬高用量群およびアトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、各群ｎ＝５。
【図９】高脂血モデルを構築した後の、動物血清中のＴＣおよびＬＤＬ−ｃのレベルである。  データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬（エモジンスクシニルエチル）群、ｎ＝１０；エモジン群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝１１。
【図１０】混合高脂血症ラットの脂質レベルの低下作用について、エモジンスクシニルエチルとエモジンとの比較を示す図である。  データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．高脂血症モデル群、＆Ｐ＜０．０５ＶＳ．エモジン群；ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬（エモジンスクシニルエチル）群、ｎ＝１０；エモジン群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝１１。
【図１１】オレイン酸から誘導された高脂細胞におけるＴＣおよびＴＧのレベルに対するエモジンスクシニルエチルの影響を示す図である。  データは平均値±標準偏差で表され、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．オレイン酸群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．オレイン酸群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．オレイン酸群、ブランク対照群、ｎ＝６；オレイン酸群、ｎ＝６；被験薬低用量（エモジンスクシニルエチル５μｍｏｌ／Ｌ）群、ｎ＝６；被験薬中用量（エモジンスクシニルエチル１０μｍｏｌ／Ｌ）群、ｎ＝６；被験薬高用量（エモジンスクシニルエチル２０μｍｏｌ／Ｌ）群、ｎ＝６。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
以下では、具体的な実施形態を参照しながら本発明をさらに詳しく説明するが、本発明の利点と特徴は、説明に従ってより明確になる。しかし、これらの実施形態は単なる例示的なものであり、本発明の範囲に限定されない。当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の詳細および形態を修正または置換することができるが、これらの修正および置換は本発明の保護範囲内に含まれていることを理解すべきである。
【００５３】
実施例１  エモジンスクシニルエチルの調製
【００５４】
無水琥珀酸（１．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの円底フラスコに入れ、エタノール（３．５ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）を溶剤として４時間加熱還流し、減圧蒸留して過剰なエタノールを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノエチル（１．４ｇ、９６％）を得て、この生成物を分離せずに直接次のステップの反応を行う。
【００５５】
コハク酸モノエチル（１．０ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの円底フラスコに入れ、塩化チオニル（４．０ｇ、３４．０ｍｍｏｌ）を溶剤として２時間加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノエチルクロリド（１．１ｇ、９８％）を得て、この生成物を分離せずに直接次のステップの反応を行う。
【００５６】
エモジン（１．０ｇ、３．７ｍｍｏｌ）とピリジン（０．４５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの円底フラスコに入れ、ジクロロメタン（３ｍＬ）を溶剤として０℃でコハク酸モノエチルクロリド（０．７ｇ、４．０ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、室温で３時間反応させる。
【００５７】
炭酸水素ナトリウム水溶液（２ｍＬ×３）で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相（３ｍＬ×３）を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、得た粗生成物は紫黄色の固体である。
【００５８】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール（ｖ／ｖ  １００：１）で溶離し、淡黄色の生成物である純品１．４ｇを得る。収率は９４．７％で、純度は９７％である。
【００５９】
エモジンスクシニルエステル系化合物の合成ロードマップは、図１に示し、Ｒはエチル基である。
【００６０】
実施例２  エモジンスクシニルエチルの調製
【００６１】
無水琥珀酸（１０ｇ、１００ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬの円底フラスコに入れ、エタノール（４０ｍＬ、６００ｍｍｏｌ）を溶剤として６時間加熱還流し、減圧蒸留して過剰なエタノールを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノエチル（１４ｇ、９６％）を得て、この生成物を分離せずに直接次のステップの反応を行う。
【００６２】
コハク酸モノエチル（１０ｇ、６８ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬの円底フラスコに入れ、塩化チオニル（４０ｇ、３４０ｍｍｏｌ）を溶剤として２時間加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、淡黄色油状物であるコハク酸モノエチルクロリド（１１ｇ、９８％）を得て、この生成物を分離せずに直接次のステップの反応を行う。
【００６３】
エモジン（１０ｇ、３７ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（２．３ｇ、２２ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬの円底フラスコに入れ、ジクロロメタン（３ｍＬ）を溶剤として０℃でコハク酸モノエチルクロリド（７ｇ、４０ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、室温で３時間反応させる。炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相（３０ｍＬ×３）を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、得た粗生成物は紫黄色の固体である。
【００６４】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール（ｖ／ｖ  １００：１）で溶離し、淡黄色の生成物である純品１２．７ｇを得る。収率は９２．３％で、純度は９８％以上である。
【００６５】
エモジンスクシニルエステル系化合物の合成ロードマップは、図１に示し、Ｒはエチル基である。
【００６６】
実施例３  エモジンスクシニルエチルの調製
【００６７】
無水琥珀酸（１０ｇ、１００ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬの円底フラスコに入れ、エタノール（２０ｍＬ、４３４ｍｍｏｌ）を溶剤として２時間加熱還流し、減圧蒸留して過剰なエタノールを除去し、淡黄色の油状物であるコハク酸モノエチル（１４ｇ、９６％）を得て、この生成物を分離せずに直接次のステップの反応を行う。
【００６８】
コハク酸モノエチル（１０ｇ、６８ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬの円底フラスコに入れ、塩化チオニル（２０ｇ、１７０ｍｍｏｌ）を溶剤として１時間加熱還流し、減圧蒸留して過剰な塩化チオニルを除去し、淡黄色の油状物であるコハク酸モノエチルクロリド（８ｇ、９８％）を得て、この生成物を分離せずに直接次のステップの反応を行う。
【００６９】
エモジン（１０ｇ、３７ｍｍｏｌ）とアンモニア水（１．５ｇ、４４ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬの円底フラスコに入れ、ジクロロメタン（３ｍＬ）を溶剤として室温でコハク酸モノエチルクロリド（８ｇ、４５ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、室温で引き続き１時間反応させる。炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を混ぜ合わせて、飽和食塩水で有機相（３０ｍＬ×３）を抽出し、有機相を混ぜ合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過、減圧濃縮し、得た粗生成物は紫黄色の固体である。
【００７０】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール（ｖ／ｖ１００：１）で溶離し、淡黄色の生成物である純品８Ｇを得る。総収率は５４．１％で、純度は９８％以上である。
【００７１】
エモジンスクシニルエステル化合物の合成ロードマップは、図１に示し、Ｒはエチル基である。
【００７２】
実施例４  ターゲット化合物構造同定
【００７３】
実施例１〜３で調製した化合物の構造に対して同定を行い、同定は下記の結果を表明した：この化合物はエモジンスクシニルエチルであり、黄色の粉末で、メタノールに溶解し、
2021505666.tif 000004
（ｃ０．５，ＣＨＣｌ３）。ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）３５００（−ＯＨ）、３０８８（Ａｒ−Ｈ）、２９８１（Ｒ−Ｈ）、１７６３（Ｃ＝０）、１７３０（Ｃ＝０）、１６２４（ベンゼン環）、１４８１（ベンゼン環）。ＵＶ［ｎｍ（ｌｏｇｅ），ＭｅＯＨ］：２７８（３．３７），２６８（３．４０）。ＣＤ（ｎｍ，Δε，ＭｅＯＨ）：２１２（−０．５６）。１Ｈ−ＮＭＲ中δ７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）はベンゼン環上でメタカップリングにあるプロトンシグナルであり、δ７．３９（１Ｈ，ｂｒｓ）、７．０７（１Ｈ，ｂｒｓ）は芳香族プロトンシグナルであり、δ２．９１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２）、２．７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ）、４．１３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）は３つのメチレンプロトンシグナルであり、δ２．３６（３Ｈ，ｓ）、１．２２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）はメチルプロトンシグナルである。炭素スペクトルには２１個の炭素シグナルがあり、その中で、δ１９０．８、１８１．０がケトンカルボニル炭素シグナルであり、δ１７２．０、１７０．６がエステルカルボニル炭素シグナルであり、１６３．２、１６２．０、１５７．０がベンゼン環上の酸素炭素シグナルである。１Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトルでは、δ２．９１、２．７１に相関シグナルがあり、δ４．１３、１．２２に相関シグナルがある。この化合物のＤＥＰＴスペクトルから、構造には４個のｓｐ２混成のメチレン基炭素シグナル、１２個のｓｐ２混成の第四炭素シグナル、３個のｓｐ３混成のメチレン基炭素シグナル、２個のメチル炭素シグナルが含まれていることが分かった。その炭化水素シグナルはＨＭＱＣスペクトルによって帰属される。ＨＭＢＣスペクトルでは、δ７．０８プロトンは化学シフトの１６３．２、１１４．３と遠隔相関があり、δ７．３３プロトンは１５７．０、１８１．０、１１４．３の炭素シグナルと遠隔相関があり、δ７．３９のプロトンはδ１４９．５、１８１．０、１１３．８の炭素シグナルと遠隔相関があり、δ７．０７のプロトンはδ１６２．２、１１３．８の炭素シグナルと遠隔相関がある。δ２．９１のプロトンはδ１７０．６の炭素シグナルと遠隔相関があり、δ２．７１のプロトンはδ１７２．２の炭素シグナルと遠隔相関があり、δ４．１３のプロトンはδ１７２．２の炭素シグナルと遠隔相関があり、δ１．２２のプロトンはδ６０．７の炭素シグナルと遠隔相関があり、２．３６のメチルプロトンは１２１．１、１４９．５、１１６．７の炭素と遠隔相関がある。上記の情報を総合してこの化合物の構造を式Ｉに示し、シグナルの帰属を表１に示しているように確定する。エモジンスクシニルエチルの二次元核磁気の相関信号の模式は図２に示す。
【００７４】
【化２】
2021505666.tif 000005
【００７５】
表１．エモジンスクシニルエチルＮＭＲデータ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）
【００７６】
【表１】
2021505666.tif 000006
【００７７】
実施例５  本発明製品の効能評価試験１
【００７８】
１．薬品の調製
【００７９】
（１）エモジンスクシニルエチル油剤の調製
【００８０】
１）１０ｍｇのエモジンスクシニルエチル（実施例１〜３で調製）を量り、２．５ｍＬの煮沸した後に冷却した植物油に溶解させ；
【００８１】
２）１０分間超音波振動でエモジンスクシニルエチルを十分に溶解させ；
【００８２】
３）無菌で冷却した植物油でそれを１００μｇ／ｍＬに希釈し、無菌分装、密封、室温保存、予備。
【００８３】
（２）エモジン油剤の調製
【００８４】
１）１０ｍｇのエモジンを量り、２．５ｍＬの煮沸した後に冷却した植物油に溶解させ；
【００８５】
２）１０分間超音波振動でエモジンを十分に溶解させ；
【００８６】
３）無菌で冷却した植物油でそれを２００μｇ／ｍＬに希釈し、無菌分包装、密封、予備。
【００８７】
２．実験方法
【００８８】
２．１  マウス糖尿病モデルの構築
【００８９】
ＳＰＦ級別のオスの昆明マウス（１８−２０ｇ）を、普通維持飼料で３〜５日間飼養し、体重を量ってからランダムにグループ（群）分けをし、ブランク対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と糖尿病モデル群に分けて、糖尿病モデル群に対して腹腔注射により大用量ＳＴＺ（ストレプトゾトシン、１８０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、一週間後に空腹血糖を測定する。モデル構築に成功したマウスをランダムに糖尿病モデル群（Ｍｏｄｅｌ）、溶剤対照群（Ｓｏｌｖｅｎｔ）、陽性薬（組換えヒト上皮細胞成長因子）対照群（ＥＧＦ）、エモジン群（ＤＨＳ）、エモジンスクシニルエチル群（ＤＨＳ−ＹＳＷ）の５つの群に分ける。
【００９０】
２．２  マウス創傷モデルの構築
【００９１】
各群の動物はペントバルビタールナトリウム（１％）で麻酔を行い、背中の毛を剃り、背中の一番高いところに５ｍｍの皮膚生検パンチを使って、直径５ｍｍの創傷モデルを作る。Ｃｏｎｔｒｏｌ群とＭｏｄｅｌ群はいかなる薬物処理も行わず、溶剤対照群に無菌植物油１０μｌを滴下して塗布し、陽性薬群は毎日１０μｌ（２０００ＩＵ／ｍＬ）組換えヒト上皮細胞成長因子を滴下して塗布し、残りの各群は創傷のところに毎日１０μＬの対応する薬物を滴下して塗布し、毎日１回、１４日間続ける。
【００９２】
２．３  マウス創傷面積の検測
【００９３】
実験の過程で、毎日固定高度、固定焦点距離で各群のマウスの創傷治癒状況を撮影して記録し、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ−Ｐｌｕｓソフトウェアを使って傷口の面積を測定して、各群のマウスの創傷治癒状況を統計的に分析し、糖尿病マウスの創傷治癒過程に対するエモジンスクシニルエチルの影響を評価する。
【００９４】
創傷治癒率＝（０日目の創傷面積−Ｎ日目の創傷面積）／０日目の創傷面積＊１００％
【００９５】
２．４  統計学の方法
【００９６】
実験データは平均値±標準誤差で表され、Ｏｎｅ−ｗａｙＡＮＯＶＡおよびＴ検定を用いて各群のマウスの血糖値を統計的に分析し、Ｏｎｅ−ｗａｙＡＮＯＶＡおよびペアＴ検定を用いて各群のマウスの創傷治癒率の差異変化を統計的に分析し、Ｐ＜０．０５の場合に有意差があることを示している。実験結果はＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ６．０を用いて統計および作図を行った。
【００９７】
３．実験の結果
【００９８】
３．１  各群の動物の血糖
【００９９】
結果は図３に示し、図３からわかるように、大用量ＳＴＺを投与した後、糖尿病モデル群、溶剤対照群、陽性薬対照群（組換えヒト上皮細胞成長因子、ＥＧＦ）、エモジン群、エモジンスクシニルエチル群のマウス血糖値は、ブランク対照群に比べて著しく高くなった（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群の比較）。その結果から、マウスの創傷治癒実験を行っている過程において、ブランク対照群を除いて、他の各群のマウスは高血糖状態にあることがわかった。
【０１００】
３．２  糖尿病マウスの創傷治癒に対するエモジンスクシニルエチルの影響
【０１０１】
その結果は図４、５から分かるように、ブランク対照群に比べて、糖尿病モデル群のマウスの創傷治癒速度は遅いが、エモジンスクシニルエチル群は、糖尿病モデル群、溶剤対照群およびエモジン群のマウスに比べて、創傷治癒速度が著しく速くなり、かつ統計学的に有意差がある（＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．モデル群との比較；＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．エモジン群；＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．溶剤対照群）。この結果は、エモジンスクシニルエチルが糖尿病マウスの創傷治癒速度を効果的に加速させることができ、溶剤やエモジンより効果がよく、薬の効果は安定で顕著であることを説明している。
【０１０２】
実施例６  本発明製品の効能評価試験２
【０１０３】
１、実験の材料
【０１０４】
実験動物：６１匹の体重が均一なラット
【０１０５】
被験薬：エモジンスクシニルエチル（実施例１〜３で調製）
【０１０６】
高脂飼料：維持飼料に２０．０％の蔗糖、１５．０％のラード、１．２％のコレステロール、０．２％のコール酸ナトリウム、適量のカゼイン、リン酸水素カルシウム、石粉等を添加する。粗脂肪以外に、モデル飼料の水分、粗タンパク、粗脂肪、粗繊維、粗灰分、カルシウム、リンは維持飼料の国家基準を満たすべきである。飼料は清潔で、真空包装で、常温保存のものである。
【０１０７】
２、実験の原理
【０１０８】
コレステロール、蔗糖、ラード、コール酸ナトリウムを含む高脂飼料でラットを飼育し、脂肪代謝が乱れたラットのモデルを形成することができる。それからラットに薬を投与すると、高脂血症に対する被験薬の影響を測定することができるし、ラットの脂質吸収、リポタンパク質の形成、脂質の分解や排泄に対する被験薬の影響を判定することもできる。
【０１０９】
混合型高脂血症ラットモデルの判定：モデル構築期が終了した後、高脂血症モデル群はブランク対照群に比べて、血清トリグリセリド、総コレステロールまたは低密度リポタンパク質コレステロールが上昇し、顕著な有意差があり、モデルが成立したと判定する。
【０１１０】
３、実験の方法
【０１１１】
３．１  動物のグループ分け
【０１１２】
第１回目のランダムグループ分け：動物を受け入れた後、適応的に５〜７日間飼育し、飼育期間中にラットの外観、一般状態を観察し、検査に合格したラットだけは本実験に入る。適応期間が終了した後、ラットの体重を量って、ラットをランダムにブランク対照群（１０匹）と高脂モデル群（５１匹）に分ける。
【０１１３】
第２回目のランダムグループ分け：ラット高脂血症モデルの構築が終了した後、ラットの脂質を測定し、高脂モデル群をランダムに５つの群に分け、陽性薬群は１１匹、その他の各群は１０匹で、それぞれ高脂血症モデル群、被験薬低用量群（エモジンスクシニルエチル１０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）、被験薬中用量群（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）、被験薬高用量群（エモジンスクシニルエチル４０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）、陽性薬対象群（アトルバスタチンカルシウム群１０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）である。
【０１１４】
３．２  混合高脂血症モデルの構築期間
【０１１５】
各群の動物の薬物投与と飲食の状況は表２に示すように、実験の各群に、ブランク対照群のラットに維持飼料を与え、ほかの５群のラットに高脂飼料を与え、２週間後にラットの血清中のトリグリセリド、総コレステロール、低密度リポタンパク質および高密度リポタンパク質のレベルを測定する。週に１回体重を量る。
【０１１６】
高脂血症モデル群は高脂飼料を与えてから２週間後に、ブランク対照群と高脂モデル群のラットは禁食せずに尾先採血をし、採血後に血清を分離し、血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃのレベルを測定する。ＴＣ、ＴＧおよびＬＤＬ−ｃのレベルに基づいて高脂モデル群をランダムに５つのグループに分け、グループ化した後の高脂血症モデル群、被験薬低用量群、被験薬中用量群、被験薬高用量群、陽性薬対象群（アトルバスタチンカルシウム群）を、ブランク対照群と、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃについて比較する。
【０１１７】
高脂血症モデル群および各投薬群を観察して、ブランク対照群と比較した結果、ラットの血中脂質の変化状況は表３と図６に示すように、混合高脂血症モデルの構築が終了した後、高脂血症モデル群および各投薬群のラットはブランク組のラットに比べると、ラットの血清中の総コレステロール（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）、トリグリセリド（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群）および低密度リポタンパク質（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群）はいずれも顕著に高くなり、統計学的に有意差があり、かつ各投薬群の間には、総コレステロール、トリグリセリドおよび低密度リポタンパク質の有意差がなく、高脂血症モデルの構築に成功したと判定できる。
【０１１８】
表２．各群の動物の薬物投与および飲食状況
【０１１９】
【表２】
2021505666.tif 000007
【０１２０】
表３．高脂血モデルが構築された後、動物の血清中のＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃのレベル
【０１２１】
【表３】
2021505666.tif 000008
【０１２２】
注：データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬低用量群、ｎ＝１０；被験薬中用量群、ｎ＝１０；被験薬高用量群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝１１。
【０１２３】
３．３  投薬期間
【０１２４】
グループ化に成功した被験薬高、中、低用量群および陽性薬対象群（アトルバスタチンカルシウム群）のラットに対して毎日胃内投薬し、ブランク対照群および高脂血症モデル群に対して対応する用量のリゾチームを投与する。各群の投与量は表２に示すとおりである。
【０１２５】
飼料の給与状況は変わらず、週に一回体重を量って、投与２週間後に、尾先採血をし、肝臓を取って、ラット血清中のＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃのレベルと肝臓中のＴＣおよびＴＧのレベルを測定し、ラット血清中のＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃと肝臓中のＴＣおよびＴＧに対する被験薬の影響を観察する。
【０１２６】
３．４  観察期間
【０１２７】
実験中に一般的なバイタルサイン観察を行う。
【０１２８】
３．５  主な測定指標
【０１２９】
（１）体重は週に一回測定する。
【０１３０】
（２）血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃのレベルは、高脂モデルを構築した後、および薬を投与した後２週間に１回ずつ測定する。
【０１３１】
（３）サンプリングした後、肝臓ＴＣおよびＴＧのレベルを測定する
【０１３２】
４．実験データと結果
【０１３３】
４．１  データ処理
【０１３４】
分散分析を採用したが、まず分散分析の手順により等分散性の検定を行い、分散が等しいと、Ｆ値を計算し、３６Ｆ値＜０．０５、結論：各群の平均数間に有意差がない。Ｆ値≧０．０５、Ｐ≦０．０５、複数の実験群と１つの対照群間の平均数をペアワイズ比較方法で統計する。非正規または分散が等しくないデータに対して適切な変数変換を行い、正規または分散が等しい要求を満たしたら、変換されたデータで統計する。変数が変換されても正規または分散が等しい目的に達していない場合、順位和検定に変えて統計する。
【０１３５】
４．２  動物実験結果の判定
【０１３６】
脂質低下機能の結果の判定：高脂血症モデル対照群は、ブランク対照群と比較して、血清トリグリセリドが上昇し、血清総コレステロールが上昇したり、低密度リポタンパク質コレステロールが上昇したりして、顕著な有意差があり、モデルが成立したと判定する。
【０１３７】
（１）各用量群はモデル対照群と比較して、いずれの用量群の血清総コレステロールまたは低密度リポタンパク質コレステロールが低下し、いずれの用量群の血清トリグリセリドが低下し、有意差があると同時に、各用量群の血清高密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく低くなく、この被験サンプルは脂質低下機能の動物実験の結果が陽性であると判定できる。
【０１３８】
（２）各用量群はモデル対照群と比較して、いずれの用量群の血清総コレステロールまたは低密度リポタンパク質コレステロールが低下し、有意差があると同時に、各用量群の血清トリグリセリドはモデル対照群より著しく高くなく、各用量群の血清高密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく低くなく、この被験サンプルはコレステロール低下機能の動物実験の結果が陽性であると判定できる。
【０１３９】
（３）各用量群はモデル対照群と比較して、いずれの用量群の血清トリグリセリドが低下し、有意差があると同時に、各用量群の血清総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく高くなく、血清高密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく低くなく、この被験サンプルはトリグリセリド低下機能の動物実験の結果が陽性であると判定できる。
【０１４０】
４．３  実験結果
【０１４１】
結果は表４と図７に示すように、投薬２週間後に混合高脂血症モデル群のラットはブランク対照群のラットに比べて、血清中総コレステロール（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）、トリグリセリド（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）、低密度リポタンパク質（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）のレベルが著しく高くなり、モデルの構築に成功したと判定する。エモジンスクシニルエチル低、中、高用量およびアトルバスタチンカルシウムは高脂血症ラットの血清中のＴＣ（＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症群）およびＬＤＬ−ｃ（＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症群）を著しく低下させることができ、エモジンスクシニルエチル高用量およびアトルバスタチンカルシウムは高脂血症ラットの血清中のＴＧ（＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．高脂血症群）を著しく低下させることができる。
【０１４２】
表４．混合高脂血症ラットの脂質レベルに対するエモジンスクシニルエチルの影響
【０１４３】
【表４】
2021505666.tif 000009
【０１４４】
注：データは平均値±標準偏差で表され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．高脂血症モデル群、ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬低用量群、ｎ＝１０；被験薬中用量群、ｎ＝１０；被験薬高用量群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝１１。
【０１４５】
結果は表５と図８に示すように、投薬２週間後に混合高脂血症モデル群のラットはブランク対照群のラットに比べて、肝臓中の総コレステロール（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）およびトリグリセリド（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）のレベルが著しく高くなり、モデルの構築に成功したと判定する。エモジンスクシニルエチル低、中、高用量およびアトルバスタチンカルシウムは高脂血症ラットの血清中のＴＣ（＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症モデル群）およびＴＧ（＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．高脂血症モデル群）を低下させることができ、エモジンスクシニルエチルは良好な脂質低下および肝臓保護の効果を示しているので、脂肪肝の予防や治療にも使える。
【０１４６】
表５．混合高脂血症ラットの肝臓中のＴＣおよびＴＧのレベルに対するエモジンスクシニルエチルの影響
【０１４７】
【表５】
2021505666.tif 000010
【０１４８】
注：データは平均値±標準偏差で表示され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．高脂血症モデル群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．高脂血症モデル群、ブランク対照群；高脂血症モデル群；被験薬低用量群；被験薬中用量群；被験薬高用量群；アトルバスタチンカルシウム群：陽性薬対象群、ｎ＝５。
【０１４９】
実施例７  本発明製品の効能評価試験３
【０１５０】
１、実験材料
【０１５１】
実験動物：５１匹の体重が均一なラット
【０１５２】
被験薬：エモジンスクシニルエチル（実施例１〜３で調製）
【０１５３】
高脂飼料：維持飼料に２０．０％の蔗糖、１５％のラード、１．２％のコレステロール、０．２％のコール酸ナトリウム、適量のカゼイン、リン酸水素カルシウム、石粉等を添加する。粗脂肪の外に、モデル飼料の水分、粗タンパク、粗脂肪、粗繊維、粗灰分、カルシウム、リンは全て維持飼料の国家基準を満たすべきである。飼料は清潔、真空包装、常温保存するものである。
【０１５４】
２、実験の原理
【０１５５】
コレステロール、蔗糖、ラード、コール酸ナトリウムを含んだ高脂飼料でラットを育てると脂肪代謝が乱れたラットモデルを形成することができる、それからラットに薬を投与すると、高脂血症に対する被験薬の影響を測定することができるし、ラットの脂質吸収、リポタンパク質の形成、脂質の分解や排泄に対する被験薬の影響を判定することもできる。
【０１５６】
混合型高脂血症ラットモデルの判定：モデル構築期間が終了した後、高脂血症モデル群はブランク対照群に比べると、血清トリグリセリド、総コレステロールまたは低密度リポタンパク質コレステロールが上昇し、顕著な有意差があり、モデルが成立したと判定する。
【０１５７】
３、実験の方法
【０１５８】
３．１  動物のグループ分け
【０１５９】
１回目のランダムグループ分け：動物を受け入れた後、適応的に５〜７日間飼育し、飼育期間中にラットの外観、一般状態を観察し、検査に合格したラットは本実験に入る。適応期間が終わったら、ラットの体重を量って、ラットをランダムにブランク対照群（１０匹）と高脂モデル群（４１匹）に分ける。
【０１６０】
２回目のランダムグループ分け：ラット高脂血症モデルの構築が完了した後、ラットの脂質を測定し、高脂モデル群をランダムに４つの群に分け、陽性薬群は１１匹、その他の各群は１０匹で、それぞれ高脂血症モデル群、被験薬（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）群、エモジン（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）群と陽性薬対象群（アトルバスタチンカルシウム群１０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）である。
【０１６１】
３．２  混合高脂血症モデルの構築期間
【０１６２】
各群の動物の薬物投与と飲食状況は表６に示すように、実験の各群に、ブランク対照群のラットに維持飼料を与え、ほかの５群のラットに高脂飼料を与え、２週間後にラットの血清中のトリグリセリド、総コレステロール、低密度リポタンパク質と高密度リポタンパク質のレベルを測定する。週に１回体重を量る。
【０１６３】
高脂血症モデル群は高脂飼料を与え、２週間後に、ブランク対照群と高脂モデル群のラットは禁食せずに尾先採血をし、採血後に血清を分離し、血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃのレベルを測定する。ＴＣ、ＴＧおよびＬＤＬ−ｃのレベルに基づいて高脂モデル群をランダムに４つのグループに分け、グループ化した後の高脂血症モデル群、被験薬（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）群、被験薬（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）群、エモジン（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）群および陽性薬対象群（アトルバスタチンカルシウム群１０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）は、ブランク対照群と、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃについて比較する。
【０１６４】
高脂血症モデル群および各投薬群を観察して、ブランク対照群と比較した結果、ラットの血中脂質の変化状況は図９と表７に示すように、混合高脂血症モデルを構築した後、高脂血症モデル群および各投薬群のラットはブランク組のラットに比べると、ラットの血清中の総コレステロール（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）および低密度リポタンパク質（＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群）はいずれも顕著に高くなり、統計学的に有意差があり、かつ各投薬群の間に総コレステロールおよび低密度リポタンパク質の有意差がなく、混合高脂血症モデルの構築に成功したと判定できる。
【０１６５】
表６．各群の動物の投薬および飲食状況
【０１６６】
【表６】
2021505666.tif 000011
【０１６７】
表７．モデルを構築した後のラットの血中脂質状況
【０１６８】
【表７】
2021505666.tif 000012
【０１６９】
注：データは平均値±標準偏差で表示され、＊Ｐ＜０．０５ＶＳ．ブランク対照群、＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ．ブランク対照群、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、ブランク対照群、ｎ＝１０；高脂血症モデル群、ｎ＝１０；被験薬（エモジンスクシニルエチル）群、ｎ＝１０；エモジン群、ｎ＝１０；アトルバスタチンカルシウム群、ｎ＝１１。
【０１７０】
３．３  投薬期間
【０１７１】
グループ化に成功した被験薬（エモジンスクシニルエチル）群、エモジン群および陽性薬対象群（アトルバスタチンカルシウム群）のラットに対して毎日胃内投薬し、ブランク対照群および高脂血症モデル群に対して対応する用量のリゾチームを投与する。各群の投与量は表６に示すとおりである。
【０１７２】
飼料の給与状況は変わらず、週に一回体重を量って、投薬してから２週間後に、尾先採血をし、ラットの血清中のＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃに対する被験薬の影響を観察する。
【０１７３】
３．４  観察期間
【０１７４】
実験中に一般的なバイタルサイン観察を行う。
【０１７５】
３．５  主な測定指標
【０１７６】
（１）体重は週に一回測定する。
【０１７７】
（２）血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−ｃおよびＨＤＬ−ｃのレベル、高脂モデルが構築された後および薬を投与してから２週間に１回ずつ測定する。
【０１７８】
４．実験データと結果
【０１７９】
４．１  データ処理
【０１８０】
分散分析を採用するが、まず分散分析の手順により等分散性の検定を行い、分散が等しいと、Ｆ値を計算し、３６Ｆ値＜０．０５、結論：各群の平均数間に有意差がない。Ｆ値≧０．０５、Ｐ≦０．０５、複数の実験群と１つの対照群間の平均数をペアワイズ比較方法で統計する。非正規または分散が等しくないデータに対して適切な変数変換を行い、正規または分散が等しい要求を満たしたら、変換されたデータで統計する。変数が変換されても正規または分散が等しい目的に達していない場合、順位和検定に変えて統計する。
【０１８１】
４．２  動物実験結果の判定
【０１８２】
脂質低下機能の結果の判定：高脂血症モデル対照群はブランク対照群と比較すると、血清トリグリセリドが上昇し、血清総コレステロールが上昇したり、低密度リポタンパク質コレステロールが上昇したりして、顕著な有意差があり、モデルが成立したと判定する。
【０１８３】
（１）被験薬群はモデル対照群と比較して、被験薬群の血清総コレステロールまたは低密度脂質コレステロールが低下し、かつ被験者群の血清グリセリン三エステルが低下し、顕著な有意差があると同時に、被験者群の血清高密度脂質コレステロールはモデル対照群より著しく低くなく、この試験サンプルは脂質低下機能の動物実験の結果が陽性であると判定できる。
【０１８４】
（２）被験者群はモデル対照群と比較して、被験者群血清総コレステロールまたは低密度リポタンパク質コレステロールが低下し、有意差があると同時に、被験薬群の血清トリグリセリドはモデル対照群より著しく高くなく、被験薬群の血清高密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく低くなく、この試験サンプルは脂質低下機能の動物実験の結果が陽性であると判定できる。
【０１８５】
（３）被験薬群はモデル対照群と比較して、被験薬群の血清トリグリセリドが低下し、有意差があると同時に、被験薬群の血清総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく高くなく、血清高密度リポタンパク質コレステロールはモデル対照群より著しく低くなく、この試験サンプルはトリグリセリド低下機能の動物実験の結果が陽性であると判定できる。
【０１８６】
４．３  実験結果
【０１８７】
結果は図１０に示すように、投薬してから２週間後に、混合高脂血症モデル群のラットはブランク対照群のラットに比べて、血清中総コレステロール（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）および低密度リポタンパク質（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）のレベルが著しく高くなり、モデルの構築に成功したと判定する。被験薬（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）は、高脂血症ラット血清中のＴＣ（＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症群）およびＬＤＬ−ｃ（＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．高脂血症群）を著しく低下させることができ、これと同等用量のエモジン（２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）に比べて、被験薬（エモジンスクシニルエチル２０ｍｇ／ｋｇ・ｄ−１）は、ラットの血清中の総コレステロール（＆Ｐ＜０．０５ＶＳ．エモジン群）および低密度リポタンパク質（＆Ｐ＜０．０５ＶＳ．エモジン群）を低下させる作用がエモジンより著しく優れている。
【０１８８】
実施例８  本発明製品の効能評価試験４
【０１８９】
１、実験材料
【０１９０】
実験細胞：ＨｅｐＧ２細胞系
【０１９１】
被験薬：エモジンスクシニルエチル（実施例１〜３で調製）
【０１９２】
２、実験の原理
【０１９３】
培養されたＨｅｐＧ２の細胞にオレイン酸誘導を加えて細胞高脂モデルを作製し、細胞に試薬を与え、細胞脂質のレベルに対する被験薬の影響を検測することができる。
【０１９４】
３、実験方法
【０１９５】
３．１  細胞のグループ分け
【０１９６】
細胞の融合度は８０％前後まで達すると、正常群を除いて、他の群には２００μｍｏｌ／Ｌのオレイン酸を加えてから、正常群、オレイン酸誘導高脂群、エモジンスクシニルエチル低用量群（５μｍｏｌ／Ｌ）、エモジンスクシニルエチル中用量群（１０μｍｏｌ／Ｌ）およびエモジンスクシニルエチル高用量群（２０μｍｏｌ／Ｌ）の５つの群に分ける。２４時間後、細胞のＴＣおよびＴＧのレベルを検測する。
【０１９７】
３．２  検測方法
【０１９８】
３．２．１  細胞の収集：
【０１９９】
０．２５％のトリプシンを利用して細胞を消化し、細胞懸濁液を調製し、１０００回転／分、遠心１０分間で、上清液を捨てて、細胞沈殿を残して、ＰＢＳで１〜２回洗浄し、同様に１０００回転／分、遠心１０ｍｉｎで、上清液を捨てて、細胞沈殿を残す。
【０２００】
３．２．２  細胞の破砕：
【０２０１】
２００μｌの２％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００を加えて、３０分間分解する。
【０２０２】
３．２．３  測定方法：
【０２０３】
まず、Ｂｉｙｕｎｔｉａｎキットを利用してサンプルのタンパク濃度を測定する。９６ウェルプレートに２５０μｌの作動液を添加し、ブランクホールに２．５μｌの蒸留水を添加し、較正ホールに２．５μｌの較正液を添加し、サンプル孔に２．５μｌのサンプルを添加し、３７℃で１０分間孵化し、酵素標識５１０ｎｍでＯＤ値を測定する。
【０２０４】
３．２．４  計算式：
【０２０５】
コレステロール含有量＝（サンプルＯＤ値−ブランクＯＤ値）／（較正ＯＤ値−ブランクＯＤ値）＊５．１７／測定対象のサンプルタンパク質濃度
【０２０６】
トリグリセリド含有量＝（サンプルＯＤ値−ブランクＯＤ値）／（較正ＯＤ値−ブランクＯＤ値）＊２．２６／測定対象のサンプルタンパク質濃度
【０２０７】
４．実験データと結果
【０２０８】
４．１  データ処理
【０２０９】
分散分析を採用するが、まず分散分析の手順により等分散性の検定を行い、分散が等しいと、Ｆ値を計算し、３６Ｆ値＜０．０５、結論：各群の平均数間に有意差がない。Ｆ値≧０．０５、Ｐ≦０．０５、複数の実験群と１つの対照群間の平均数をペアワイズ比較方法で統計する。非正規または分散が等しくないデータに対して適切な変数変換を行い、正規または分散が等しい要求を満たしたら、変換されたデータで統計する。変数が変換されても正規または分散が等しい目的に達していない場合、順位和検定に変えて統計する。
【０２１０】
４．２  実験結果
【０２１１】
オレイン酸誘導高脂細胞中のＴＣとＴＧのレベルに対するエモジンスクシニルエチルの影響は、表８と図１１に示すように、この結果からわかるように、オレイン酸誘導の高脂質細胞はブランク対照群細胞に比べて、総コレステロール（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）およびトリグリセリド（＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群）のレベルが著しく高くなり、モデルの構築に成功したと判定する。エモジンスクシニルエチル低、中、高用量は、オレイン酸誘導の高脂細胞のＴＣ（＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．オレイン酸群）およびＴＧ（＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．オレイン酸群）を著しく低下させることができる。
【０２１２】
表８．オレイン酸誘導の高脂細胞中のＴＣおよびＴＧのレベルに対するエモジンスクシニルエチルの影響
【０２１３】
【表８】
2021505666.tif 000013
【０２１４】
注：データは平均値±標準偏差で表され、＊＊＊Ｐ＜０．００１ＶＳ．ブランク対照群、＃Ｐ＜０．０５ＶＳ．オレイン酸群、＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ．オレイン酸群、＃＃＃Ｐ＜０．００１ＶＳ．オレイン酸群、ブランク対照群、ｎ＝６；オレイン酸群、ｎ＝６；被験薬低用量（エモジンスクシニルエチル５μｍｏｌ／Ｌ）群、ｎ＝６；被験薬中用量（エモジンスクシニルエチル１０μｍｏｌ／Ｌ）群、ｎ＝６；被験薬高用量（エモジンスクシニルエチル２０μｍｏｌ／Ｌ）群、ｎ＝６。
【０２１５】
以上は本発明の好ましい実施形態のみであり、当業者にとっては、本発明の原理を逸脱しない前提で、いくつかの改良および潤飾を行うことができ、これらの改良および潤飾も本発明の保護範囲と見なすべきである。
【図１】
2021505666.tif 000015
【図２】
2021505666.tif 000016
【図３】
2021505666.tif 000017
【図４】
2021505666.tif 000018
【図５】
2021505666.tif 000019
【図６】
2021505666.tif 000020
【図７】
2021505666.tif 000021
【図８】
2021505666.tif 000022
【図９】
2021505666.tif 000023
【図１０】
2021505666.tif 000024
【図１１】
2021505666.tif 000025
【国際調査報告】
2021505666.tif 000026
2021505666.tif 000027
2021505666.tif 000028
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