(57)【要約】  本発明は、以下の式Ｉ：    【化１】 2021505640.tif 000067（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｍは、本明細書に記載される通りである）の化合物、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩、ならびに癌の患者を治療するためにこれらの化合物および塩を使用する方法、を提供する。
2021505640.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2021505640.tif 000063
（式中、
ｍが、０〜２であり、
各Ｒ１が、Ｆであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｆ、およびＣｌから選択される）
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
以下：
【化２】
2021505640.tif 000064
から選択される請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
以下：
【化３】
2021505640.tif 000065
から選択される請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
以下：
【化４】
2021505640.tif 000066
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、請求項４または５に記載の化合物。
【請求項８】
１３．５°、７．１°、および２３．０°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて５．４°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、請求項４または６に記載の化合物。
【請求項１０】
２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤、を含む薬学的組成物。
【請求項１２】
治療において使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
癌の治療において使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
前記癌が、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌である、請求項１３に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
前記癌が、非小細胞肺癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、請求項１４に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
前記癌が、大腸癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、請求項１４に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
前記癌が、脾臓癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、請求項１４に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
患者が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の投与前に、前記ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有すると判定された癌を有する、請求項１４に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
有効量のアベマシクリブまたはその薬学的に許容される塩の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
有効量のＥＧＦＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、エルロチニブまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２０に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、アファチニブまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２０に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、セツキシマブである、請求項２０に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
有効量の抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規２−アミノベンゾチアゾール化合物およびその薬学的に許容される塩、２−アミノベンゾチアゾール化合物および塩を含む薬学的組成物、ならびに肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌などの癌を治療するための化合物および塩の使用方法に関する。本発明はまた、新規２−アミノベンゾチアゾール化合物とＣＤＫ４およびＣＤＫ６阻害剤アベマシクリブ、ＥＧＦＲ小分子阻害剤、ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブ、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体との組み合わせを含む。
【背景技術】
【０００２】
ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路は、細胞外刺激を核に中継し、それにより細胞増殖、分化、およびアポトーシスを含む多様な細胞応答を調節する。ＫＲａｓタンパク質は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路のイニシエーターであり、細胞分裂の誘発に関与するスイッチとして機能する。その非活性状態では、ＫＲａｓは、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）と結合し、効果的に負のシグナルを送信して細胞分裂を抑制する。細胞外シグナルに応答して、ＫＲａｓは、アロステリックに活性化され、ＧＤＰのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）へのヌクレオチド交換を可能にする。そのＧＴＰに結合した活性状態では、ＫＲａｓは、成長因子によって誘発されたシグナル伝達、ならびに他の細胞シグナル伝達受容体の伝播に必要なタンパク質を動員および活性化する。ＫＲａｓ−ＧＴＰによって動員されるタンパク質の例は、ｃ−ＲａｆおよびＰＩ３キナーゼである。ＧＴＰ−ａｓｅとしてのＫＲａｓは、結合したＧＴＰをＧＤＰに変換して戻し、それによってそれ自身を非活性状態に戻し、再びシグナルを伝播して細胞分裂を抑制する。ＫＲａｓ機能獲得変異は、ＧＴＰ結合の程度の増加およびＧＴＰをＧＤＰに変換する能力の減少を示す。その結果、癌性細胞の増殖を促進するＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナルが増加する。コドン１２のＫＲａｓのミスセンス変異は、最も一般的な変異であり、ＧＴＰａｓｅ活性を著しく低下させる。
【０００３】
発癌性ＫＲａｓ変異は、ヒトの癌の約３０％で確認されており、複数の下流シグナル伝達経路を活性化することが示されている。ＫＲａｓ変異の有病率にもかかわらず、それは困難な治療標的となっている。（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．Ｄｒｕｇｇｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｕｎｄｒｕｇｇａｂｌｅ  ＲＡＳ：Ｍｉｓｓｉｏｎ  Ｐｏｓｓｉｂｌｅ？Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．２０１４，１３，８２８−８５１；Ｐｙｌａｙｅｖａ−Ｇｕｐｔａ，ｙ  ｅｔ  ａｌ．ＲＡＳ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ：Ｗｅａｖｉｎｇ  ａ  Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ  Ｗｅｂ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２０１１，１１，７６１−７７４）。
【０００４】
ＷＯ２０１５／０５４５７２およびＷＯ２０１６／１６４６７５は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃと結合することができるある特定のキナゾリン誘導体を開示している。ＷＯ２０１６／０４４７７２はまた、そのようなクアンゾリン誘導体を使用する方法を開示している。
【発明の概要】
【０００５】
代替の小分子ＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性が残っている。特に、癌を治療するのに有用な、より強力で経口送達可能なＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性がある。より具体的には、ＫＲａｓ  ＧＴＰ活性を特異的に阻害する小分子阻害剤を提供する必要性がある。また、同じまたは低減されたＫＲａｓ阻害活性でより大きな有効性を示す小分子ＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性もある。さらに、より良好な薬物動態／薬力学的特性を示すＫＲａｓ阻害剤を提供することが望ましい。また、不都合な効果が低減または最小化された、増加された有効性を示すより強力なＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性がある。本発明は、新規のＫＲａｓ阻害剤を提供することにより、これらの必要性のうちの１つ以上に対処する。
【０００６】
本発明は、以下の式Ｉ：
【化１】
2021505640.tif 000003
（式Ｉ中、ｍが、０〜２であり、各Ｒ１が、Ｆであり、Ｒ２が、Ｈ、Ｆ、およびＣｌから選択される）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、Ｒ２はＦである。別の実施形態では、Ｒ２はＣｌである。別の実施形態では、ｍは０である。別の実施形態では、ｍは１である。別の実施形態では、式Ｉの化合物は、遊離塩基として提供される。さらに別の実施形態では、式Ｉの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【０００７】
本発明はまた、以下の式ＩＩ〜ＶＩＩ：
【化２】
2021505640.tif 000004
のいずれか１つから選択される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＩＩ〜ＶＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【０００８】
本発明はまた、式ＩＩ、Ｖ、およびＶＩ：
【化３】
2021505640.tif 000005
のいずれか１つから選択される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００９】
本発明はまた、以下の式ＩＩ：
【化４】
2021505640.tif 000006
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。別の実施形態では、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。別の実施形態では、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。
【００１０】
本発明はまた、以下の式ＩＩＩ：
【化５】
2021505640.tif 000007
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＩＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１１】
本発明はまた、以下の式ＩＶ：
【化６】
2021505640.tif 000008
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＩＶの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１２】
本発明はまた、以下の式Ｖ：
【化７】
2021505640.tif 000009
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式Ｖの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１３】
本発明はまた、以下の式ＶＩ：
【化８】
2021505640.tif 000010
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＶＩの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１４】
本発明はまた、以下の式ＶＩＩ：
【化９】
2021505640.tif 000011
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＶＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１５】
本発明はまた、以下の式ＶＩＩＩ：
【化１０】
2021505640.tif 000012
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＶＩＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１６】
本発明はまた、以下の式ＩＸ：
【化１１】
2021505640.tif 000013
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、式ＩＸの化合物は、薬学的に許容される塩として提供される。
【００１７】
本発明はまた、結晶塩形態の１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンである式ＩＩの化合物を提供する。本発明はまた、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートを提供する。本発明はまた、１３．５°、７．１°、および２３．０°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて５．４°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶形態の１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートを提供する。本発明はまた、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートを提供する。本発明はまた、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶形態の１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートを提供する。
【００１８】
本発明はまた、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。
【００１９】
本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法、を提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。一実施形態では、癌は、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌である。好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、膵臓癌、または大腸癌である。さらにより好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、脾臓癌である。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、大腸癌である。
【００２０】
本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法、を含み、当該癌は、変異ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。さらに別の実施形態では、癌は、脾臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、非小細胞肺癌であり、より好ましくは、非小細胞癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、脾臓癌であり、より好ましくは、脾臓癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して、特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、大腸癌であり、より好ましくは、大腸癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。
【００２１】
本発明はまた、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することにより、それを必要とする患者において変異体ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ酵素を調節する方法を提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。好ましくは、本方法は、ヒトＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ酵素を阻害することを含む。
【００２２】
本発明はまた、治療を必要とする患者において癌を治療する方法を提供し、患者は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現すると判定された癌を有する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。本方法は、有効量の、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。１つ以上の癌細胞のＧ１２Ｃ変異状態は、当該技術分野でのいくつかアッセイにより決定され得る。典型的には、１つ以上の癌細胞を含む１つ以上の生検が得られ、シークエンシングおよび／またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供される。循環細胞遊離ＤＮＡはまた、例えば、進行性癌において使用され得る。変異状態（例えば、１つ以上の癌細胞または循環細胞遊離ＤＮＡにおける、Ｇ１２Ｃ変異状態）の決定に使用される配列決定およびＰＣＲ技術の非限定的な例には、直接シークエンシング、次世代シークエンシング、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、マルチプレックスＰＣＲ、ならびにパイロシークエンシングおよびマルチアナライトプロファイリングが挙げられる。
【００２３】
本発明はまた、治療において使用するための式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物を提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。化合物またはその薬学的に許容される塩は、癌の治療における使用のためのものであり得る。好ましくは、癌は、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌である。好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、膵臓癌、または大腸癌である。さらにより好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌である。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、非小細胞肺癌であり、より好ましくは、非小細胞癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、脾臓癌であり、より好ましくは、脾臓癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、大腸癌であり、より好ましくは、大腸癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。
【００２４】
本発明はまた、癌を治療するための医薬品の製造において、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。好ましくは、癌は、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌である。好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、膵臓癌、または大腸癌である。さらにより好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌である。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、非小細胞肺癌であり、より好ましくは、非小細胞癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、脾臓癌であり、より好ましくは、脾臓癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の好ましい実施形態では、化合物は、式ＩＩの化合物、より好ましくは、式ＩＩの化合物のメシレート塩、さらにより好ましくは、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる式ＩＩの化合物の結晶メシレート塩であり、癌は、大腸癌であり、より好ましくは、大腸癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。
【００２５】
本発明はまた、癌の治療における同時、個別、または逐次使用のための、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびアベマシクリブ、またはその薬学的に許容される塩を含む組み合わせを提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。
【００２６】
本発明はまた、癌の治療における同時、個別、または逐次使用のための、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびＥＧＦＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を含む組み合わせを提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。好ましくは、ＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブである。好ましくは、ＥＧＦＲ阻害剤は、アファチニブである。好ましくは、ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブである。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。
【００２７】
本発明はまた、癌の治療における同時、個別、または逐次使用のための、式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、および抗プログラム細胞死抗体を含む組み合わせを提供する。好ましくは、化合物は、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、メシレート塩である。好ましくは、式ＩＩの化合物の塩は、ヘミマロネート塩である。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、臨床的および／または獣医学的使用に許容されると考えられる化合物の塩を指す。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な方法論の例は、“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ”Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．，２ｎｄ  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２０１１およびＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６（１），１−１９に見出され得る。
【００２９】
本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される添加剤を使用して調製され得る。薬学的組成物について本明細書で使用される「薬学的に許容される添加剤（複数可）」という用語は、組成物または製剤の他の添加剤と適合性であり、かつ患者に有害ではない１つ以上の担体、希釈剤、および賦形剤を指す。薬学的組成物およびそれらの調製のためのプロセスの例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，Ｌｏｙｄ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｄｓ．，２２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０１２に見出され得る。薬学的に許容される担体、希釈剤、および賦形剤の非限定的な例には、以下が含まれる：生理食塩水、水、デンプン、糖、マンニトール、およびシリカ誘導体；カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、およびポリビニルピロリドンなどの結合剤；カオリンおよびベントナイト；ならびにポリエチルグリコール。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、癌性病変または異常な細胞増殖および／もしくは細胞分裂の進行などの障害または疾患の治療において有効な用量である量を指す。主治医は、当業者として、従来技術の使用によって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、有効量を容易に決定することができる。治療の１日あたりの投与量は、通常、１日あたりまたは１日２回約１ｍｇ〜１日あたりまたは１日２回１０００ｍｇ、より好ましくは１日あたりまたは１日２回１００ｍｇ〜１日あたりまたは１日２回９００ｍｇの範囲内である。化合物の有効量または用量を決定する際に考慮される要因には、化合物またはその塩を投与するかどうか；使用される場合、他の薬剤の同時投与、治療される患者の種類；患者の大きさ、年齢、および一般的な健康；障害の関与の程度または病期および／もしくは重症度；個々の患者の応答；投与の様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択される投与計画；ならびに他の併用薬剤の使用が挙げられる。
【００３１】
治療担当医、獣医師、または医療従事者は、治療を必要とする患者に対して化合物の有効量を決定することができるであろう。好ましい薬学的組成物は、経口投与のための錠剤もしくはカプセル剤、経口投与のための溶液、または注射可能な溶液として製剤化され得る。錠剤、カプセル剤、または溶液は、癌の治療を必要とする患者を治療するのに有効な量で本発明の化合物を含み得る。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」、または「治療」という用語は、既存の症状、障害、状態の進行または重症度を遅らせるか、低減するか、または逆転させることを含み、これは癌性病変の成長または異常な細胞増殖および／もしくは細胞分裂を特に遅らせることを含み得る。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、治療を必要とする哺乳動物を指す。好ましくは、患者は、癌、例えば、癌を有するＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異体の治療を必要とするヒトである。
【００３４】
ある特定の略語は、次のように定義される：「ＡｃＯＨ」は、酢酸を指し、「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを指し、「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを指し、「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＡＰ」は、４−ジメチルアミノピリジンを指し、「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを指し、「ＤＴＴ」は、ジチオトレイトールを指し、「ＥＤＴＡ」は、エチレンジアミン四酢酸を指し、「ＥＧＴＡ」は、エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸を指し、「ＥＬＩＳＡ」は、酵素結合免疫吸着測定法を指し、「Ｅｔ２Ｏ」は、ジエチルエーテルを指し、「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを指し、「ＦＢＳ」は、ウシ胎児血清を指し、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーを指し、「ｈ」、「ｈｒ」、または「ｈｒｓ」は、時間（複数可）を指し、「ＨＲＰ」は、西洋ワサビペルオキシダーゼを指し、「ＩＰＡ」は、イソプロピルアルコールを指し、「ＬＣ−ＥＳ／ＭＳ」は、液体クロマトグラフ−エレクトロスプレー質量分析法を指し、「ＬＣ−ＭＳ」は、液体クロマトグラフィー質量分析法を指し、「ＭｅＯＨ」は、メタノールを指し、「ｍｉｎ」または「ｍｉｎｓ」は、「分（複数可）」を指し、「ＭＴＢＥ」は、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し、「ＮａＯＡｃ」は、酢酸ナトリウムを指し、「ＮａＯＭｅ」は、ナトリウムメトキシドを指し、「ＮＭＰ」は、１−メチルピロリジン−２−オンを指し、「ＰＣＲ」は、ポリメラーゼ連鎖反応を指し、「ＲＴ」または「ｒｔ」は、室温を指し、「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを指し、「ＴＥＡ」は、トリメチルアミンを指し、「ＴＦ２Ｏ」は、トリフルオロメタンスルホン酸無水物を指し、「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を指す。
【００３５】
個々の異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、およびアトロプ異性体は、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法により、以下に列挙される化合物の合成の任意の好都合な点で分離または分解され得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，”Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）。本発明は、アトロプ異性体であり、異なる立体配座で、または異なる回転異性体として存在し得るある特定の化合物を含む。アトロプ異性体は、単結合の周りの制限された回転から生じる異なる立体配座で存在する化合物である。アトロプ異性体は、単一の周りの回転に対するエネルギー障壁が十分に高く、相互変換の速度が、個々の回転異性体を互いに分離するのに十分に遅い場合、別個の化学種として分離され得る。
【００３６】
式Ｉ〜ＩＸのいずれか１つの化合物は、容易に変換され、薬学的に許容される塩として単離され得る。塩形成は、酸付加塩を形成するための薬学的に許容される酸の添加時に起こり得る。塩はまた、窒素または酸素の脱保護、すなわち、保護基の除去時に同時に形成することができる。塩形成の例、反応、および条件は、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｓａｌｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，（１９７７）に見出され得る。好ましくは、塩は、メシレート塩である。好ましくは、塩は、ヘミマロネート塩である。
【００３７】
本発明の化合物またはその塩は、様々な手順によって調製され得、それらのいくつかを以下の調製および実施例に例示する。本発明の化合物または塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを、異なる様式で組み合わせるか、または異なる経路のステップと併せてもよい。以下の調製における各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収することできる。
【００３８】
【化１２】
2021505640.tif 000014
【００３９】
スキーム１は、ジフルオロ化合物５の調製を示す。市販のトリフルオロフェニルチオ尿素１は、アミノベンゾチアゾール２を得るために適切な強塩基で処理することにより環化され得る。その後の臭素化は、臭素および好適な強い酸を用いて成し遂げられ、化合物３を得ることができる。化合物３の一級アミンは、好適な無水物またはアルキルクロロホルメートを使用して保護され、ブロモベンゾチゾール化合物４を得ることができる。ブロモベンゾチアゾール４は、適切なホウ酸塩およびリチオ化試薬を用いてボロン酸５に官能化され得る。
【００４０】
【化１３】
2021505640.tif 000015
【００４１】
スキーム２は、ｍ＝０〜２であり、Ｒ１が、Ｆである、ボロン酸１２の調製を示す。市販のベンゾイルイソチオシアン酸塩６からのチオ尿素形成は、冷反応温度を維持しながら、許容可能に置換されたおよび市販のメトキシ−アニリンによる処理によって達成され、チオ尿素７を得ることができる。環化は、臭素の添加後、クロロホルム中でチオ尿素７を還流させることによって達成され、メトキシアミノベンゾチアゾール８を提供することができる。８の脱メチル化およびＮ保護は、不活性雰囲気下で冷反応混合物を維持しながら、ＢＢｒ３の添加、続いて一級アミンの保護によって達成され、Ｎ保護アミノベンゾチアゾール１０を提供することができる。Ｎ保護アミノベンゾチアゾール１０は、塩基および適切な無水スルホン酸または塩化スルホニルで処理され、トリフルオロメタンスルホネート１１を得ることができる。トリフルオロメタンスルホネートのボロン酸への転換は、様々な金属触媒、塩基、およびボロン酸エステルまたは酸源を利用して実施され、アミノベンゾチアゾールボロン酸１２を提供することができる。
【００４２】
【化１４】
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【００４３】
スキーム３は、ｍが０〜２であり、Ｒ１がＦであり、Ｒ２がＨ、Ｆ、またはＣｌである、化合物式Ｉの調製を示す。出発ピペラジンキナゾリン、１３は、ＵＳ９，８４０，５１６に記載されているように調製することができる。化合物１３およびスキーム１の化合物５またはスキーム２の化合物１２のいずれかを使用して鈴木カップリングを使用し、置換キナゾリン１４を提供することができる。化合物１４上の両方のアミンの脱保護は、中間体１５を提供する。最後に、式Ｉによる化合物は、極性非プロトン性またはプロトン性溶媒および適切な酸塩化物中の塩基を用いたジアミン１５の処理により形成され得る。
【実施例】
【００４４】
調製物および実施例
次の調製および実施例は、本発明をさらに示し、本発明の化合物の典型的な合成を表すが、いかなる方法においても本発明の範囲を制限すると解釈されるべきではない。試薬および出発物質は、容易に入手可能であるか、または既知の手順によって、もしくは当業者によって行われ得る様々な改変を用いることによってのいずれかで容易に合成され得る。
【００４５】
化合物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ１１００液体クロマトグラフィーシステムで実行される液体クロマトグラフ−エレクトロスプレー質量分析（ＬＣ−ＥＳ／ＭＳ）によって特徴付けられ得る。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブおよび／またはネガティブモードで取得される）は、ＨＰ１１００  ＨＰＬＣと連動するＭａｓｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ四重極質量分析計で行われる。ＬＣ−ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ  Ｃ−１８  ２．１×５０ｍｍ  ３．０μｍ、勾配：５〜１００％Ｂで３分間、次に１００％Ｂで０．７５分間カラム温度：５０℃±１０℃、流量：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨ含有脱イオン水、溶媒Ｂ：０．１％ギ酸含有ＡＣＮ、波長２１４ｎｍ。代替ＬＣ−ＭＳ条件（高ｐＨ）：カラム：ＷＡＴＥＲＳ（商標）ＸＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳ  Ｃ−１８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５ｍ、勾配：５％の溶媒Ａで０．２５分、５％〜１００％の勾配の溶媒Ｂで３分、および１００％の溶媒Ｂで０．５分、または１０％〜１００％の溶媒Ｂで３分、および１００％の溶媒Ｂで０．７５分、カラム温度：５０℃＋／−１０℃、流量：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３  ｐＨ９、溶媒Ｂ：ＡＣＮ、波長：２１４ｎｍ。
【００４６】
分取逆相クロマトグラフィーは、Ｍａｓｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ質量分析計およびＬｅａｐ自動試料採取装置／分画収集装置を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００ＬＣ−ＥＳ／ＭＳで実施される。高ｐＨ方法は、７５×３０ｍｍのＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）−ＮＸ、１０×２０ｍｍのガードを備えた５μｍ粒径カラムで実行される。８５ｍＬ／分の流量。溶離液は、ＡＣＮ中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ１０）である。
【００４７】
調製物１
６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン
【００４８】
【化１５】
2021505640.tif 000017
【００４９】
Ｎ２下でＮａＨ（１４．６ｇ、１．５ｅｑ）およびＮＭＰ（４００ｍＬ）を組み合わせる。（２，３，４−トリフルオロフェニル）チオ尿素（５０．０ｇ、２４３ｍｍｏｌ）を、３〜４分毎に約５ｇずつ添加する。室温で２時間、次いで、１００℃で９０分間撹拌する。室温に冷却し、反応混合物を氷／水（２．５Ｌ）に注ぐ。ＭＴＢＥを追加し、層を分離する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。ＤＣＭ（７５ｍＬ）、次にヘキサン（４２５ｍＬ）で希釈する。超音波処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物を灰色がかった白色の固体（３３．５ｇ、７４％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１８７（Ｍ＋Ｈ）。
【００５０】
調製物２
４−ブロモ−６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン
【００５１】
【化１６】
2021505640.tif 000018
【００５２】
ＮａＯＡｃ（３１．０ｇ、２．０当量）を、ＡｃＯＨ（６２５ｍＬ）中６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン（３５．０ｇ、１８８ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。臭素（ＡｃＯＨ中１．０Ｍ、２３０ｍＬ、１．２当量）を７５分にわたって滴下で添加する。室温で３時間撹拌する。反応混合物を真空中でほぼ乾燥するまで濃縮する。水（１．４Ｌ）、ＭＴＢＥ（１Ｌ）、およびＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）で希釈する。層を分離する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。水層をＥｔＯＡｃと組み合わせる。層を分離する。水層をＭＴＢＥと組み合わせる。層を分離する。組み合わせた有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。ＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、超音波処理する。混合物を真空中で約１００ｍＬに濃縮し、室温に冷却する。濾過し、ヘキサンで洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物を灰色がかった白色の固体（４４．４ｇ、８９％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２６５／２６７（Ｍ＋Ｈ）。
【００５３】
調製物３
ｔｅｒｔ−ブチル（４−ブロモ−６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）カルバメート
【００５４】
【化１７】
2021505640.tif 000019
【００５５】
ＤＭＡＰ（０．４ｇ、０．０２当量）およびＤＩＰＥＡ（３５ｍＬ、１．２当量）を、ＴＨＦ（１Ｌ）中４−ブロモ−６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン（４４．４ｇ、１６８ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。Ｎ２下に置く。二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４２．５ｇ、１．２当量）を添加する。室温で２．５時間撹拌する。ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）を添加する。反応混合物を真空中でほぼ乾燥するまで濃縮する。水（７００ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５０ｍＬ）で希釈する。ＭＴＢＥ（７５０ｍＬ）を添加し、層を分離する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、表題化合物を黄色の固体（６０．６ｇ、９９％）として得た。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３６３／３６５（Ｍ−Ｈ）。
【００５６】
調製物４
｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝ボロン酸
【００５７】
【化１８】
2021505640.tif 000020
【００５８】
ｔｅｒｔ−ブチル（４−ブロモ−６，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）カルバメート（２．０ｇ、５．５ｍｍｏｌ）をフラスコに添加する。Ｎ２でパージし、ＴＨＦ（２７ｍＬ）を添加する。ホウ酸トリイソプロピル（３．８ｍＬ、３．０当量）を添加する。Ｎ２下で−７８℃に冷却する。内部反応温度を−６０℃未満に維持しながら、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、６．６ｍＬ、３．０当量）を滴下で添加する。３０分にわたって−３０℃〜−３５℃に温める。−３０℃で３０分間撹拌する。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。ＤＣＭおよび水で希釈する。層を分離する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空濃縮する。ヘキサンで希釈し、超音波処理する。５０℃に加熱し、室温に冷却する。濾過して、表題化合物を白色の固体（１．２ｇ、６５％）として収集する。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）。
【００５９】
調製物５
Ｎ−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）チオ尿素
【００６０】
【化１９】
2021505640.tif 000021
【００６１】
イソチオシアン酸ベンゾイル（１１０ｇ、６７１ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（８７５ｍＬ）を組み合わせる。Ｎ２下で５℃に冷却する。内部反応温度を１０℃未満に維持しながら、５−フルオロ−２−メトキシアニリン（８３．２ｍＬ、１．０５当量）を滴下で添加する。室温に温め、３０分間撹拌する。５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（１６１ｍＬ、１．２０当量）および水（２００ｍＬ）を添加する。３．５時間還流で加熱する。水（５００ｍＬ）および酢酸イソプロピル（８００ｍＬ）を添加する。室温に冷却する。濃縮ＨＣｌ水溶液を添加して、ｐＨを約９〜１０に調整する。層を分離する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。ＥｔＯＡｃ（３６０ｍＬ）およびヘキサン（８４０ｍＬ）を添加する。５分間還流で加熱する。−２０℃に冷却し、一晩放置する。濾過し、収集した固体を冷ヘキサンで洗浄して、表題化合物を無色の固体（１１８ｇ、８８％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝２０１（Ｍ＋Ｈ）。
【００６２】
調製物６
Ｎ−（３，５−ジフルオロ−２−メトキシフェニル）チオ尿素
【００６３】
【化２０】
2021505640.tif 000022
【００６４】
イソチオシアン酸ベンゾイル（３．２ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１００ｍＬ）を組み合わせる。３，５−ジフルオロ−２−メトキシアニリン（４．０ｇ、１．０当量）を滴下で添加する。室温で３時間撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮する。ＴＨＦ（１００ｍＬ）および１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（１４ｍＬ、１．２当量）を添加する。８０℃で一晩加熱する。反応混合物を真空中で濃縮する。１：１のＥｔＯＡｃ：ＤＣＭで希釈し、超音波処理し、濾過する。濾液を真空中で濃縮する。順相クロマトグラフィーにより精製し、ＤＣＭ中０〜５０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出し、表題化合物（３．５ｇ、６７％）を得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝２１９（Ｍ＋Ｈ）。
【００６５】
調製物７
７−フルオロ−４−メトキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン臭化水素
【００６６】
【化２１】
2021505640.tif 000023
【００６７】
Ｎ−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）チオ尿素（１１８ｇ、５７１ｍｍｏｌ）およびＣＨＣｌ３  （２Ｌ）を組み合わせる。Ｎ２下で５℃に冷却する。内部反応温度を７℃未満に維持しながら、Ｂｒ２（３０．１ｍＬ、１．０２当量）を滴下で添加する。０℃で３０分間撹拌する。２．２５時間還流で加熱する。−２０℃に冷却し、一晩放置する。濾過し、冷ヘキサンで洗浄して、表題化合物を黄色の固体（１４１ｇ、８９％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１９９（Ｍ＋Ｈ）。
【００６８】
調製物８
５，７−ジフルオロ−４−メトキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン臭化水素
【００６９】
【化２２】
2021505640.tif 000024
【００７０】
調製物７で説明される方法と同様の方法で、表題化合物を調製する。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ２１７（Ｍ＋Ｈ）。
【００７１】
調製物９
２−アミノ−５，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−オール
【００７２】
【化２３】
2021505640.tif 000025
【００７３】
５，７−ジフルオロ−４−メトキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン臭化水素（４．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（７０ｍＬ）を組み合わせる。０℃に冷却する。ＢＢｒ３（ＤＣＭ中１．０Ｍ、３４ｍＬ、２．５当量）を添加する。ゆっくりと室温に温め、一晩撹拌する。ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で注意深くクエンチする。室温で３０分間撹拌する。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で希釈する。室温で３０分間撹拌する。濾過して、表題化合物を白色の固体（２．７ｇ、９２％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝２０３（Ｍ＋Ｈ）。
【００７４】
調製物１０
ｔｅｒｔ−ブチル（５，７−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）カルバメート
【００７５】
【化２４】
2021505640.tif 000026
【００７６】
２−アミノ−５，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−オール（２．５ｇ、１２ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（６０ｍＬ）を組み合わせる。ＴＥＡ（３．４ｍＬ、２．０当量）、ＤＭＡＰ（０．３ｇ、０．２当量）、および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４．２ｇ、１．５当量）を添加する。室温で一晩撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮する。ＭｅＯＨ（６０ｍＬ）およびＮａＯＭｅ（３．４ｇ、５．０当量）を添加する。室温で一晩撹拌する。氷／水の混合物に注ぐ。濾過して、固形分を除去する。濃縮ＨＣｌ水溶液を濾液に添加して、ｐＨを約５に調整する。ＤＣＭで希釈する。層を分離する。有機物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を薄茶色の固体（１．４ｇ、３１％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝３０１（ＭＨ）。
【００７７】
調製物１１
２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−オール臭化水素
【００７８】
【化２５】
2021505640.tif 000027
【００７９】
Ｎ２下でＤＣＭ（１．５Ｌ）を０℃に冷却する。カニューレを介してＢＢｒ３（１５０ｍＬ、３．１当量）を添加する。７−フルオロ−４−メトキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン臭化水素（１４１ｇ、５０６ｍｍｏｌ）を、１５分にわたって少しずつ添加する。反応混合物を室温にゆっくりと温め、一晩撹拌する。内部温度を１０℃未満に維持しながら、０℃に冷却し、ＭｅＯＨで注意深くクエンチする。ガスを出力し、冷却された５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液中に泡立たせる。濾過し、収集した固体を冷ＤＣＭで洗浄して、表題化合物を無色の固体（１１７ｇ、８７％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１８５（Ｍ＋Ｈ）。
【００８０】
調製物１２
ｔｅｒｔ−ブチル（７−フルオロ−４−ヒドロキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）カルバメート
【００８１】
【化２６】
2021505640.tif 000028
【００８２】
２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−オール臭化水素（１１７ｇ、４４１ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（１．５Ｌ）を組み合わせる。１０℃に冷却する。ＴＥＡ（１２９ｍＬ、２．１当量）を添加し、内部反応温度を１５℃未満に維持する。ＤＭＡＰ（２．７ｇ、０．０５当量）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２２８ｇ、２．３当量）を添加する。反応混合物を室温にゆっくりと温め、２日間撹拌する。水、ＥｔＯＡｃ、および飽和ＮａＣｌ水溶液で希釈する。層を分離する。真空中で有機層を収集して濃縮する。ＭｅＯＨ（９００ｍＬ）およびＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中５Ｍ、１３２ｍＬ、１．５当量）を添加する。室温で一晩撹拌する。追加のＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中５Ｍ、１０ｍＬ、０．１１当量）を添加する。室温で３時間撹拌する。真空中で濃縮する。水およびＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を固形分が形成されるまで真空中で濃縮する。ヘキサンで希釈する。濾過し、収集した固体をヘキサンで洗浄して、表題化合物を淡黄褐色の固体（９７．２ｇ、７８％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝２８３（ＭＨ）。
【００８３】
調製物１３
２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イルトリフルオロメタンスルホネート
【００８４】
【化２７】
2021505640.tif 000029
【００８５】
ｔｅｒｔ−ブチル（７−フルオロ−４−ヒドロキシ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）カルバメート（１１６ｇ、４０７ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（１．４Ｌ）、およびピリジン（６６ｍＬ、２．０当量）を組み合わせる。Ｎ２下で５℃に冷却する。内部反応温度を１０℃未満に維持しながら、ＴＦ２Ｏ（８３ｍＬ、１．２当量）を滴下で添加する。水で希釈する。層を分離する。有機層を１０％クエン酸水溶液で洗浄する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。順相クロマトグラフィーで精製し、Ａ中２５〜２８％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＥｔＯＡｃ中２５％ＤＣＭ）で溶出し、表題化合物を黄色の固体（１２３ｇ、７３％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝４１５（ＭＨ）。
【００８６】
調製物１４
２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イルトリフルオロメタンスルホネート
【００８７】
【化２８】
2021505640.tif 000030
【００８８】
調製物１３で説明される方法と同様の方法で、表題化合物を調製する。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ４３３（Ｍ＋Ｈ）。
【００８９】
調製物１５
｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝ボロン酸
【００９０】
【化２９】
2021505640.tif 000031
【００９１】
１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中で、２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５，７−ジフルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イルトリフルオロメタンスルホネート（１．７ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１．１ｇ、２．９当量）、およびビス（ピナコラート）ジボロン（８．０ｇ、８．１当量）を組み合わせる。Ｎ２で１０分間スパージする。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ｉｉ）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．４８ｇ、０．１５当量）を添加する。１００℃で一晩加熱する。ビス（ピナコラート）ジボロン（２．５ｇ、２．５当量）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ｉｉ）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．４８ｇ、０．１５当量）を添加する。１００℃で８時間加熱する。室温に冷却する。反応混合物を真空中で濃縮する。ＥｔＯＡｃで希釈する。珪藻土およびシリカゲルの小さなパッドを通して濾過する。濾液を真空中で濃縮する。順相クロマトグラフィーで精製し、Ａ中０〜１００％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＥｔＯＡｃ中１０％ＭｅＯＨ）で溶出し、表題化合物を茶色の固体（０．４１ｇ、３２％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）。
【００９２】
調製物１６
｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝ボロン酸
【００９３】
【化３０】
2021505640.tif 000032
【００９４】
１，４−ジオキサン（２４０ｍＬ）中で、２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イルトリフルオロメタンスルホネート（２０．０ｇ、４８．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１４．２ｇ、３．０当量）、ビス（ピナコラート）ジボロン（９７．７ｇ、８．０当量）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５．５５ｇ、０．１０当量）を組み合わせる。Ｎ２で１０分間スパージする。８０℃で一晩加熱する。室温に冷却し、水およびＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。アセトン（５００ｍＬ）、水（５００ｍＬ）、およびＮＨ４ＯＡｃ（１１２ｇ、３０当量）を添加する。内部反応温度を１８〜２３℃に維持しながら、ＮａＩＯ４（３０９ｇ、３０当量）を添加する。室温で一晩激しく撹拌する。ＥｔＯＡｃで希釈する。３０分間撹拌し、珪藻土を通して濾過し、層を分離する。有機層を真空中で濃縮する。水層を飽和ＮａＣｌ水溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機抽出物を以前に濃縮した有機層と組み合わせる。最初に水で、次に飽和ＮａＣｌ水溶液で、次に水および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（ｐＨ約７）で何度も洗浄する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。少量のＤＣＭを含むヘキサン中のスラリー。濾過し、収集した固体をヘキサンで洗浄して、表題化合物を黄褐色の固体（１３．４ｇ、８９％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝３１３（Ｍ＋Ｈ）。
【００９５】
調製物１７
｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝ボロン酸
【００９６】
【化３１】
2021505640.tif 000033
【００９７】
ｔｅｒｔ−ブチル（４−ブロモ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）カルバメート（８．０ｇ、２４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１１５ｍＬ）を組み合わせる。Ｎ２下に置く。ＮａＨ（パラフィンオイル中６０質量％、１．５ｇ、１．５当量）を少しずつ添加する。室温で１０分間撹拌し、次いで−７８℃に冷却する。ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、１５ｍＬ、１．５当量）を滴下で添加する。２５分間撹拌する。ホウ酸トリイソプロピル（１７ｍＬ、３．０当量）を滴下で添加する。２５分間撹拌し、次いで反応混合物を室温に温める。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。ＥｔＯＡｃ、水、および飽和ＮａＣｌ水溶液で希釈する。層を分離する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。ヘキサン中のスラリー。濾過し、収集した固体をヘキサンで洗浄する。濾液を部分的に濃縮し、最小限のＥｔＯＡｃに溶解し、ヘキサンを添加し、濾過し、ヘキサンで洗浄してより多くの固体を得る。固形分が形成されなくなるまで繰り返す。固形分を組み合わせて、表題化合物（６．２ｇ、８７％）を得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝２９５（Ｍ＋Ｈ）。
【００９８】
調製物１８
ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ブロモ−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート
【００９９】
【化３２】
2021505640.tif 000034
【０１００】
ＤＣＭ（６８ｍＬ）中で、７−ブロモ−４，６−ジクロロ−８−フルオロキナゾリン（２．０ｇ、６．９ｍｍｏｌ；ＵＳ９，８４０，５１６を参照されたい）およびｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（３．８ｇ、３．０当量）を組み合わせる。ＴＥＡ（９．６ｍＬ、１０当量）を添加する。Ｎ２下で、３５℃で一晩撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮する。ＥｔＯＡｃおよび水で希釈する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。ＤＣＭおよびヘキサンで希釈し、次いで濾過する。濾液を真空中で濃縮する。順相クロマトグラフィーにより精製し、ＥｔＯＡｃ中０〜５％ＭｅＯＨの勾配で溶出し、表題化合物（２．５ｇ、８０％）を得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４４５／４４７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０１】
調製物１９
ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ブロモ−６−クロロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキサレート
【０１０２】
【化３３】
2021505640.tif 000035
【０１０３】
ＡＣＮ（７０ｍＬ）中で、７−ブロモ−４，６−ジクロロキナゾリン（５．４ｇ、１６ｍｍｏｌ；ＵＳ９，８４０，５１６を参照されたい）およびｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（３．３ｇ、１．１当量）を組み合わせる。Ｋ２ＣＯ３（４．５ｇ、２．０当量）を添加する。６０℃で４．５時間撹拌する。室温に冷却する。１５分にわたって水（２００ｍＬ）を添加する。濾過し、真空下で乾燥させて、表題化合物を白色の固体（６．８ｇ、９８％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４２７／４２９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０４】
調製物２０
ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ブロモ−６，８−ジクロロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート
【０１０５】
【化３４】
2021505640.tif 000036
【０１０６】
調製物１９で説明される方法と同様の方法で、表題化合物を調製する。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ４６３（Ｍ＋Ｈ）
【０１０７】
調製物２１
ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート
【０１０８】
【化３５】
2021505640.tif 000037
【０１０９】
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）および水（３ｍＬ）中で、ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ブロモ−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．６０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝ボロン酸（０．４７ｇ、１．１当量）、およびリン酸カリウム（０．４３ｇ、１．５当量）を組み合わせる。Ｎ２で１０分間スパージする。１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン二塩化パラジウム（０．０８５ｇ、０．１０当量）を添加する。９０℃で１０５分間撹拌する。室温に冷却する。水（１ｍＬ）で希釈し、珪藻土を通して濾過する。ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を真空中で濃縮し、順相クロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン中の２０％アセトンで溶出して、表題化合物を白色の固体（０．８５ｇ、８９％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝６３３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１０】
調製物２１で説明される方法と同様の表１の以下の化合物を調製する。
【０１１１】
【表１−１】
2021505640.tif 000038
【０１１２】
【表１−２】
2021505640.tif 000039
【０１１３】
調製物２７
ＫＲａｓプローブ
Ｎ−（２−｛２−［２−（｛６−クロロ−８−フルオロ−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−４−［４−（プロプ−２−エノイル）ピペラジン−１−イル］キナゾリン−２−イル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）−５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタンアミド
【０１１４】
【化３６】
2021505640.tif 000040
【０１１５】
ステップＡ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ブロモ−２，６−ジクロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．５１ｇ、１．１ｍｍｏｌ）およびＩＰＡ（５ｍＬ）を組み合わせる。ＤＩＰＥＡ（０．５５ｍＬ、３．０当量）および５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］−Ｎ−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル］ペンタンアミド（０．４８ｇ、１．２当量）を添加する。マイクロ波反応器で６時間、１２０℃に加熱する。室温に冷却する。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液およびＣＨＣｌ３中２５％ＩＰＡで希釈する。層を分離する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。順相クロマトグラフィーで精製し、Ａ中５０〜１００％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）で溶出し、ｔｅｒｔ−ブチル４−｛７−ブロモ−６−クロロ−８−フルオロ−２−［（２−｛２−［２−（｛５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレートを黄色の固体（０．６８ｇ、７８％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝８１９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１６】
ステップＢ：ｔｅｒｔ−ブチル４−｛７−ブロモ−６−クロロ−８−フルオロ−２−［（２−｛２−［２−（｛５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート（０．３０ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（４ｍＬ）、および水（０．７５ｍＬ）を組み合わせる。Ｋ２ＣＯ３（０．２４ｇ、３．０当量）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ナフタレン−２−オール（０．２０ｇ、２．０当量）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０８５ｇ、０．２０当量）を添加する。Ｎ２下で、８５℃で１２時間撹拌する。室温に冷却する。濾過して、固形分を除去する。濾液を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液およびＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。順相クロマトグラフィーで精製し、Ａ中９０〜１００％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）で溶出し、ｔｅｒｔ−ブチル４−｛６−クロロ−８−フルオロ−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−２−［（２−｛２−［２−（｛５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレートを黄色の固体（０．３１ｇ、９６％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１７】
ステップＣ：ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−｛６−クロロ−８−フルオロ−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−２−［（２−｛２−［２−（｛５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン−４−イル｝ピペラジン−１−カルボキシレート（０．３１ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却する。ＨＣｌ（ＭｅＯＨ中３Ｍ、６ｍＬ、５０当量）を添加し、０℃で３０分間撹拌する。室温に温め、一晩撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮する。ＤＣＭで希釈し、真空中で濃縮する。ヘキサンで希釈し、室温で２時間撹拌する。濾過し、得られた固体を真空下で乾燥させて、Ｎ−｛２−［２−（２−｛［６−クロロ−８−フルオロ−７−（３−ヒドロキシナフタレン−１−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）キナゾリン−２−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝−５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタンアミド塩化水素を得る。ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中のＤＩＰＥＡ（０．１６ｍＬ、４．０当量）と組み合わせることによって、この塩酸塩（０．１９ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を中和する。−７８℃に冷却する。塩化アクリロイル（ＤＣＭ中０．５Ｍ、０．４ｍＬ、０．９当量）を添加する。３０分後、室温に温める。１時間後、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）で希釈し、反応混合物を真空中で濃縮する。逆相クロマトグラフィーで精製し、Ａ中の３５〜６０％Ｂの勾配（Ａ：５％ＭｅＯＨを含む１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液；Ｂ：ＡＣＮ）で溶出し、表題化合物を白色の固体（０．０２７ｇ、１４％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝８３５（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１８】
実施例１
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン
【０１１９】
【化３７】
2021505640.tif 000041
【０１２０】
ＴＦＡ（２ｍＬ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル｝−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．７６ｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で３日間撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮する。ＤＣＭで希釈し、真空中で濃縮し、３回繰り返す。Ｅｔ２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、室温で３時間すばやく撹拌する。濾過し、真空下で乾燥させて、４−［６−クロロ−８−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）キナゾリン−７−イル］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミンジトリフルオロ酢酸を得る。
【０１２１】
２−メチルテトラヒドロフラン（５ｍＬ）および水（５ｍＬ）中で、４−［６−クロロ−８−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）キナゾリン−７−イル］−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミンジトリフルオロ酢酸（０．５０ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．５６ｇ、４．４当量）を組み合わせる。０℃に冷却する。塩化アクリロイル（２−メチルテトラヒドロフラン中０．５Ｍ、２．０ｍＬ、１．１当量）を添加する。５分後、ＥｔＯＡｃおよび水で希釈する。層を分離する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮する。残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解する。すばやく撹拌し、ヘキサン（１５ｍＬ）をゆっくりと添加する。室温で１５分間撹拌し、濾過し、収集した固体を真空下で乾燥させて、表題化合物を白色の固体（０．３２ｇ、７２％）として得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝４８７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２２】
上記の適切な調製物２２〜２６を使用して、実施例１で説明される方法と同様の表２の以下の実施例を調製する。
【０１２３】
【表２−１】
2021505640.tif 000042
【０１２４】
【表２−２】
2021505640.tif 000043
【０１２５】
【化３８】
2021505640.tif 000044
【０１２６】
実施例７
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン；ヘミマロネート塩
【０１２７】
【化３９】
2021505640.tif 000045
【０１２８】
９：１のＴＨＦ：水（２．２ｍＬ）を、１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン（１９９ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）を含むバイアルに添加し、黄色の溶液を得る。別個のバイアルで、ＴＨＦ（０．１ｍＬ）をマロン酸（４８ｍｇ、１．１当量）に添加し、無色の溶液を得る。マロン酸溶液を実施例１の溶液に添加し、０．１ｍＬのＴＨＦですすぐ。定期的に播種しながら、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を少しずつ添加し、濁った混合物を得る。混合物を真空中で部分的に濃縮して、溶媒を除去する。濃縮を介して約５．４ｇの総質量を除去し、懸濁液を形成する。混合物を室温で撹拌して、濃厚な懸濁液を得る。ＥｔＯＡｃ（１．５ｍＬ）を添加して懸濁液を薄くし、次いで、濾過し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）ですすぎ、バイアルからすべての固形分をすすぐ。固形分を５０℃の真空オーブンで乾燥させて、表題化合物を淡黄色の固体（１７７ｍｇ、７９％）として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．６８（ｓ、１Ｈ）、８．００（ｄ、Ｊ＝１．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．９２（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、７．２５（ｄｄ、Ｊ＝８．４、５．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｄ、Ｊ＝１６．８、１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．１６（ｄｄ、Ｊ＝１６．８、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．７３（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．８６〜３．９６（ｍ、４Ｈ）、３．８２（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、３．７５（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、３．２２（ｓ、１Ｈ）。シード結晶の調製：９：１のＴＨＦ：水（５ｍＬ）を、１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン（１４９ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）、続いてマロン酸（５０ｍｇ、１．５５当量）に添加した。溶液をＮ２下で４８時間乾燥させた。ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を得られた油に添加し、５０℃で２時間撹拌して、白色の固体のスラリーを形成する。濾過して、１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンを得る；播種用のヘミマロネート結晶。
【０１２９】
実施例８
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン；メシレート塩
【０１３０】
【化４０】
2021505640.tif 000046
【０１３１】
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン（６．５６ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）をフラスコに添加する。９：１のＴＨＦ：水（５５ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃に加熱する。得られた溶液を濾過し、９：１のＴＨＦ：水（３．３ｍＬ）ですすぐ。濾過した溶液をシリンジに充填し、シリンジポンプに入れる。別々に、メタンスルホン酸（０．８３ｍＬ、０．９５当量）をＴＨＦ（１３ｍＬ）に添加する。この溶液をシリンジに充填、２つ目のシリンジポンプに入れる。１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートシード（６５ｍｇ）を、ＴＨＦ（１３ｍＬ）とともにフラスコに添加する。シードスラリーを室温で撹拌する。１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン溶液およびメタンスルホン酸溶液を、シードスラリーに添加し、０．２２５ｍｌ／分の１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン溶液および０．０５７５ｍＬ／分のメタンスルホン酸溶液で出発する。１時間後、添加速度をそれぞれ０．３ｍＬ／分および０．０７７ｍＬ／分に増加させる。さらに１時間後、添加速度をそれぞれ０．４５ｍＬ／分と０．１１５ｍＬ／分に増加させる。同時添加が完了した後、スラリーを約４５分間撹拌する。スラリーを濾過し、９５：５のＴＨＦ：水（２ｘ１３  ｍＬ）ですすぐ。ウエットケーキを、５０℃で、真空下で恒量になるまで乾燥させる。白色の固体としての表題化合物（６．２２ｇ、７９％）を単離する。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、２５℃）：δ＝８．８２（ｓ、１Ｈ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．９８（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、７．２９（ｄｄ、Ｊ＝８．５、５．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８２（ｄｄ、Ｊ＝１６．７、１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．１９（ｄｄ、Ｊ＝１６．７、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．７６（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１２〜４．２５（ｍ、４Ｈ）、３．９０（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、３．８１（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、２．３５ｐｐｍ（ｓ、３Ｈ）。シード結晶の調製：ＴＨＦ（３ｍＬ）中の１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オン（２１８ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で加熱する。ＴＨＦ（２ｍＬ）中に希釈したメタンスルホン酸（４０ｍＬ）を混合物に添加する。得られたスラリーにＴＨＦ（１０ｍＬ）を添加し、室温で撹拌する。濾過し、収集した固形分を窒素下で１５分間乾燥させて、１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンを得る；播種用のメシレート結晶。
【０１３２】
実施例９
結晶形態のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
３５ｋＶおよび５０ｍＡで動作するＣｕＫα源およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計で、結晶固形分のＸＲＰＤパターンを得る。ステップサイズ０．００８２θ°、０．５秒／ステップの走査速度で、１．０ｍｍの発散スリット、６．６ｍｍの固定散乱防止スリット、および１１．３ｍｍの検出器スリットを使用して、４〜４０  ２θ°で試料を走査する。石英粉末ホルダーに乾燥粉末を充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。室温および相対湿度で結晶形態回折パターンを収集する。８．８５３および２６．７７４  ２θ°でピークを有する内部ＮＩＳＴ  ６７５標準に基づいて、パターン全体をシフトした後、ＭＤＩ−Ｊａｄｅの結晶ピーク位置を決定する。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ＃２３，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ＃１８，ｐａｇｅｓ  １８４３−１８４４，１９９５を参照されたい。さらに、所与の任意の結晶形態について、角ピーク位置がわずかに変化し得ることも、結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、サンプルが分析される温度の変動、サンプルの変位、または内部標準の有無に起因して変動し得る。本発明の場合、０．２  ２θ°のピーク位置の変動は、示された結晶形態の明確な同定を妨げることなくこれらの潜在的な変動を考慮すると推定される。結晶形態の確認は、顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行うことができる。
【０１３３】
実施例９ａ
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンのＸＲＰＤ；ヘミマロネート塩
結晶ヘミマロネート形態の調製された試料を、ＣｕＫα照射を使用して、ＸＲＰＤパターンにより、以下の表３に記載されるような回折ピーク（２θ値）を有するものとして、特に、１３．５°、７．１°、および２３．０°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わせて５．４°のピークを有するものとして特徴付け、回析角の許容誤差は０．２度である。
【０１３４】
【表３】
2021505640.tif 000047
【０１３５】
実施例９ｂ
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンのＸＲＰＤ；メシレート塩
結晶メシレート塩形態の調製された試料を、ＣｕＫα照射を使用して、ＸＲＰＤパターンにより、以下の表４に記載されるような回折ピーク（２θ値）を有するものとして、特に、２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わせて６．１°のピークを有するものとして特徴付け、回析角の許容誤差は０．２度である。
【０１３６】
【表４】
2021505640.tif 000048
【０１３７】
生物学的アッセイ
ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃプローブ占有率ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ
このアッセイは、コドン１２でＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃに結合し、共有結合的に修飾することについてプローブと競合する阻害剤の能力を測定する。シグナルを、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃユーロピウム標識抗ヒスチジンタグ抗体ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（Ｅｕ  Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ抗体）と結合した抗体上のユーロピウムと、ストレプトアビジンおよびビオチン化阻害剤を介したＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ（「ＫＲａｓプローブ」、調製物２７を参照されたい）と結合した蛍光トレーサー６４７（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標））との間の蛍光の時間分解移送によって生成する。
【０１３８】
阻害剤を、１００％ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックから用量応答形式で試験する。Ｌａｂｙｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ（登録商標）５５５を使用して、希釈し、１０ポイント、２．８倍連続希釈液を含む１ウェルあたり１００ｎＬをアッセイプレートに移す。ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃとともに阻害剤を５分間および６０分間インキュベートした後、アッセイプレートの２つのコピーを調製して効力を測定する。Ｈｉｓタグ付きＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ（２０ｎＭ）を、アッセイ緩衝液（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．０１％ＴＸ−１００、１ｍＭ  ＤＴＴ）中のプレートに添加する。５分間または６０分間のインキュベーション後、１μＭ  ＫＲａｓプローブを添加し、遊離ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃを１時間共有結合的に修飾させる。これを、Ｅｕ  Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ抗体およびストレプトアビジンコーティングトレーサー６４７（両方ともＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから）を含む緩衝液中で４倍に希釈し、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ（５ｎＭ）、Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ抗体（２ｎＭ）、ＫＲａｓプローブ（３００ｎＭ）、およびストレプトアビジンコーティングトレーサー６４７（５００ｎＭ）を達成する。３０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダーで蛍光シグナルを読み取る（３４０ｎＭでの励起、６６５ｎＭでのトレーサー放出、および６１５ｎＭでの抗体放出）。最大対照ウェルは、阻害剤を欠乏し、最小対照ウェルは、阻害剤およびＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃの両方を欠乏する。シグナル比（６６５でのｅｍ／６１５でのｅｍ）を、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：阻害％＝１００−［（試験化合物シグナル−中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル−中央値最小シグナル）ｘ１００］。ＩＣ５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。
【０１３９】
本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。このアッセイで評価される本発明の例示的な化合物は、６０分間のインキュベーションで５００ｎＭ未満および５分間のインキュベーションで１２００ｎＭ未満のＩＣ５０を示す。このアッセイで評価される実施例１の化合物は、５分および６０分、ｎ＝５で、それぞれ０．０２５および０．０２４μＭのＩＣ５０を示す。このデータは、実施例の化合物が、表５に記載されるこの結合アッセイにおいてＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ阻害活性を示すことを示す。
【０１４０】
【表５−１】
2021505640.tif 000049
【０１４１】
【表５−２】
2021505640.tif 000050
【０１４２】
上記のデータは、実施例１が、当該技術分野におけるある特定のＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ阻害剤と比較して、効力において予想外の改善を有することを示す。
【０１４３】
Ｈ３５８細胞ホスホ−ＥＲＫ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）
このアッセイを使用して、ヒト肺癌細胞Ｈ３５８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８０７）のＫＲａｓの下流エフェクターであるｐ−ＥＲＫ１／２のリン酸化を阻害する試験化合物の能力を測定する。簡潔には、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（商標）ｐ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイは、Ａｌｐｈａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒカタログ番号ＡＬＳＵ−ＰＥＲＫ−Ａ５０Ｋ）を使用した細胞溶解物におけるホスホ−ＥＲＫ１／２（ＥＲＫ１のＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４またはＥＲＫ２のＴｈｒ１８５／Ｔｙｒ１８７でリン酸化される）の定量的検出のためのサンドイッチイムノアッセイである。
【０１４４】
Ｈ３５８細胞を、９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３５９６）に、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯカタログ番号：１００８２−１４７）を含む１００μＬ培地（ＲＰＭＩ１６４０、ＧＩＢＣＯカタログ＃２２４００−０７１）に１ウェルあたり４０Ｋ細胞で播種し、３７℃、５％ＣＯ２で、湿ったトレイで一晩インキュベートする。翌朝、１０μＬの連続希釈（３倍）試験化合物（５０μＭの最高濃度）および１０ｕＬの対照（最大シグナルウェル：５％ＤＭＳＯおよび最小シグナルウェル：２μＭのＮ−（３−｛３−シクロプロピル−５−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−Ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル｝フェニル）アセトアミド（陽性対照としてのトラメチニブ）を、細胞プレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２で、湿ったトレイで２時間インキュベートする。プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含む溶解緩衝液を、室温で調製する。シンク内のセルプレートを逆さにし、振盪して、次いでペーパータオルで吸い取ることによって、培養培地を除去する。溶解緩衝液を、細胞プレートに添加し（１ウェルあたり５０μＬ）、プレートを、シェーカーで１０分間、室温でインキュベートする。ｐ−ＥＲＫ検出では、アクセプタービーズを、緩衝液との懸濁液混合物に希釈する。Ｓｔａｒｌｅｔｔ液体ハンドラーを使用して、５μＬのアクセプタービーズおよび２μＬの細胞溶解物を、単一ステップのチップ内希釈液として３８４ウェルアッセイプレートに移す。アッセイプレートをホイルで密封し、室温で２時間インキュベートする。ドナービーズを、緩衝液との懸濁液混合物に希釈する。Ｓｔａｒｌｅｔを使用して、５μＬのドナービーズをアッセイプレートに添加し、次いでアッセイプレートを密封して、ホイルで包む。プレートを暗所で２時間、室温でインキュベートする。次いで、アッセイプレートを、発光プログラムを使用してＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。
【０１４５】
シグナルを、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：
阻害パーセントに変換する：阻害％＝１００−［（試験化合物シグナル−中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル−中央値最小シグナル）ｘ１００］。最大シグナルは、阻害剤を含まない対照ウェルである。最小シグナルは、活性を完全に阻害するのに十分な参照阻害剤を含む対照ウェルである。ＩＣ５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。
【０１４６】
本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。実施例の化合物は、０．３００μＭ未満の相対ＩＣ５０を示した。実施例１の化合物は、このアッセイにおいて０．００５７μＭ  ｎ＝１３の相対ＩＣ５０を示した。このデータは、実施例の化合物が、この細胞アッセイにおいてＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ阻害活性を示すことを示す。
【０１４７】
Ｈ３５８細胞活性ＲＡＳ  ＧＴＰａｓｅ  ＥＬＩＳＡ
このアッセイを使用して、ヒト肺癌細胞Ｈ３５８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８０７）の構成的ＲＡＳ  ＧＴＰＡｓｅ活性を阻害する試験化合物の能力を測定する。ＲＡＳ  ＧＴＰａｓｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆカタログ番号５２０９７）は、キットに供給されるＧＳＴ−Ｒａｆ−ＲＢＤタンパク質を捕捉するために、グルタチオンで事前にコーティングされた９６ウェルプレートを含む。細胞抽出物中の活性化ＲＡＳ（ＧＴＰ結合）は、Ｒａｆ−ＲＢＤと特異的に結合する。結合したＲＡＳを、ヒトＫＲａｓを認識する一次抗体で検出する。ＨＲＰと複合体化した二次抗体は、一次抗体を認識し、現像溶液は、化学発光の読み取りを提供する。
【０１４８】
Ｈ３５８細胞を、９０μＬ無血清培地（ＲＰＭＩ１６４０、ＧＩＢＣＯ）に８０，０００個の細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートする。翌朝、１０μＬの連続希釈（３倍）試験化合物（５００μＭの最高濃度）および１０μＬの対照（最大シグナルウェル：５％ＤＭＳＯおよび最小シグナルウェル：阻害剤として５００μＭ  ＬＳＮ３４２９４１０）を、細胞プレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。プロテアーゼ阻害剤カクテルおよびＧＳＴ−Ｒａｆ−ＲＢＤを含む完全溶解／結合緩衝液を調製し、氷上で保存する。細胞プレートのインキュベーションが完了する１時間前に、５０μＬのＧＳＴ−Ｒａｆ−ＲＢＤを、溶解／結合緩衝液に希釈し、緩衝液を、ＥＬＩＳＡアッセイプレートに添加し、それを穏やかに揺動させながら４℃で１時間インキュベートする。２時間後、細胞を１００μＬの氷冷ＰＢＳで洗浄し、１００μＬの溶解／結合緩衝液で溶解する。細胞プレートを、室温で１０分間振盪する。次いで、細胞プレートを、室温で、１０分間１５００ｒｐｍで遠心分離する。この時間の間に、１倍の洗浄緩衝液を室温で調製し、次いで、ＧＳＴ−Ｒａｆ−ＲＢＤコーティングアッセイプレートを洗浄（３ｘ１００μＬ）するために使用する。洗浄後、５０μＬの細胞溶解液をＧＳＴ−Ｒａｆ−ＲＢＤコーティングアッセイプレートに添加し、穏やかに振盪しながら室温で１時間インキュベートする。このインキュベーション期間中に、１倍の抗体結合緩衝液を調製し、室温にする。アッセイプレートを、１倍の洗浄バッファーで３ｘ１００μＬ洗浄し、次いで、５０μＬの一次抗体（１倍の抗体結合緩衝液中１：５００に希釈）を添加する。プレートを室温で１時間インキュベートする。アッセイプレートを、１倍の洗浄バッファーで３ｘ１００μＬ洗浄し、次いで、５０μＬの二次抗体（１倍の抗体結合緩衝液中１：５０００に希釈）を添加し、室温で１時間インキュベートする。アッセイプレートを、１倍の洗浄緩衝液で４×１００μＬ洗浄し、次いで、５０μＬの化学発光標準溶液を、室温で添加する。次いで、アッセイプレートを、発光プログラムを使用してＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。
【０１４９】
シグナルを、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：
阻害パーセントに変換する：阻害％＝１００−［（試験化合物シグナル−中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル−中央値最小シグナル）ｘ１００］。最大シグナルは、阻害剤を含まない対照ウェルである。最小シグナルは、活性を完全に阻害するのに十分な参照阻害剤を含む対照ウェルである。ＩＣ５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。
【０１５０】
本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。実施例の化合物は、０．７５０μＭ未満の相対ＩＣ５０を示した。実施例１の化合物は、このアッセイにおいて０．０３７μＭ、ｎ＝１０の相対ＩＣ５０を示した。このデータは、実施例の化合物が、このヒト肺癌細胞培養においてＫＲａｓ−ＧＴＰ阻害活性を示すことを示す。
【０１５１】
３Ｄ  Ｈ３５８細胞増殖アッセイ
ヒト肺癌細胞Ｈ３５８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８０７）を使用して、３Ｄ増殖アッセイで化合物の阻害を評価する。細胞増殖を反映するシグナルを、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）３Ｄ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ９６８３）で検出する。細胞を、１０％熱不活性化ＦＢＳおよび０．１ｍｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ（登録商標）で増殖させる。Ｈ３５８細胞を、増殖相で培養し、１ウェルあたり５０００個の細胞を、８０μｌ／ウェルの培養培地を含む黒色ウェルの透明な丸底９６ウェル超低付着表面プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）カタログ４５２０）に播種する。細胞を、湿度チャンバー内で、３７℃で一晩インキュベートする。２０μｌ／ウェルの連続希釈した試験化合物を、プレートに添加し、次いで、それを９６時間インキュベートする。プレートを室温にし、等量の室温ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）３Ｄ試薬を添加する。プレートを、室温で１０分間、７５０ＲＰＭで振盪する。室温で１時間インキュベートして、シグナルを安定させた後、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダーで発光シグナルを測定する。シグナルを、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：阻害％＝１００−［（試験化合物シグナル−中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル−中央値最小シグナル）ｘ１００］。最大シグナルは、阻害剤を含まない対照ウェルである。最小シグナルは、細胞増殖を完全に阻害するのに十分な参照阻害剤を含む対照ウェルである。ＩＣ５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。
【０１５２】
本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。実施例１の化合物は、このアッセイにおいて０．０１１６μＭ未満の相対ＩＣ５０を示した。このデータは、実施例１の化合物が、Ｈ３５８ヒト肺癌細胞の増殖を阻害することを示す。
【０１５３】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ細胞増殖アッセイ
ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃまたは他のＫＲａｓ変異を含む腫瘍細胞株のパネルを収集する（表６）。全ての細胞株は、ＡＴＣＣまたは示される他のソースからのものである。
【０１５４】
典型的には、細胞を、ＲＰＭＩ１６４０または１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ）で培養する。上に記載される増殖培地で維持した２Ｄ培養細胞（４ｘ１０３／ウェル）については、処理の前日に、９６ウェル組織培養プレートＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）カタログ３６０３）に播種する。３Ｄ培養の場合、８０００個の細胞／ウェルを、９６ウェルの超低付着組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３４７４）に播種する。細胞を、化合物で９６時間処理し、製造者の指示およびＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダーに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（登録商標）（２Ｄの場合はＰｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７２、および３Ｄ培養の場合はＰｒｏｍｅｇａ＃Ｇ９６８３）を使用して生存率を分析する。非線形回帰およびＳ字型の用量応答曲線を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４（登録商標）ソフトウェアを用いて半分の最大阻害濃度（ＩＣ５０）を計算する。
【０１５５】
【表６】
2021505640.tif 000051
【０１５６】
データは、実施例１の化合物が、表６に列挙されるＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異腫瘍細胞株の増殖を阻害することを示す。
【０１５７】
表６に要約されるように、実施例１の化合物は、２Ｄおよび３Ｄ培養条件でＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有するほとんどの腫瘍細胞で抗増殖活性を示した。ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｓ変異を有するＡ５４９細胞では、実施例１の化合物は、２Ｄまたは３Ｄアッセイのいずれかでほとんど活性を示さず、実施例１が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞を選択的に阻害することを提案する。
【０１５８】
Ｈ３５８およびＨ２１２２異種移植モデルを使用したＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ薬力学（ＰＤ）マーカーおよび腫瘍成長の阻害
化合物のインビボ標的阻害および抗腫瘍有効性を評価するために、ヒト肺癌細胞、Ｈ３５８またはＨ２１２２を、ヌードマウス異種移植腫瘍モデルに移植する。Ｈ３５８またはＨ２１２２細胞（１：１のＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）混合液中１０ｘ１０６、総量０．２ｍＬ）のいずれかを、雌のヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の後肢に皮下注射によって移植する。各郡合計５匹のマウスを、有効性研究に使用し、各郡合計３〜４匹のマウスを、標的結合およびＰＤ研究に使用する。腫瘍サイズが約３００ｍｇに達したときに、試験化合物またはビヒクル（０．２ｍＬ体積中２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭホスフェート、ｐＨ２．０）の経口投与（強制飼養）により処置を開始する。腫瘍成長および体重を経時的に監視し、有効性および毒性の兆候を評価する。腫瘍の二次元測定を、週に２回行い、腫瘍体積を、中心軸の長さおよび中心軸の幅に基づいて計算する。腫瘍体積データを対数スケールに変換して、時間および処置群の分散を均等にする。ＳＡＳソフトウェア（バージョン８．２）の混合手順を使用して、時間および処置による反復のある二元配置分散分析を用いて、対数体積データを分析する。繰り返しのある測定の相関モデルはＳｐａｔｉａｌ  Ｐｏｗｅｒである。各時点で処置群を対照群と比較する。また、各処置群について別々に混合手順を使用して、各時点での調整された平均および標準誤差を計算する。両方の分析は、各動物内の自己相関を説明する。時間に対する各治療群の調整された平均および標準誤差をプロットする。
【０１５９】
インビボ標的阻害およびＰＤ分析のために、腫瘍を、ドライアイス上で乳鉢および乳棒によって粉砕し、腫瘍断片を、１％トリトンＸ１００、２５ｍＭトリスｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１ｍＭ  ＥＧＴＡを含む８００μＬの溶解緩衝液に、チューブあたり１つの追加の大きなビーズ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（登録商標）１／４”セラミック球ビーズ、カタログ番号６５４０−４１２）を有する溶解マトリックスＤチューブ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（登録商標）、カタログ番号６９１３−５００）内のＨａｌｔプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１８６１２８１）とともに添加する。腫瘍断片を、合計２回冷却しながら、１５分間設定４で、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｂｉｏ１０１（登録商標）ｆａｓｔ  ｐｒｅｐ（ＦＰ１２０）で均質化する。溶解物を、４℃で１０分間１４，０００ｒｐｍで回転させて、透明にする。ＢｉｏＲａｄ  Ｄｃ（登録商標）タンパク質アッセイを使用して、溶解物上清でタンパク質の推定を行い、溶解物を、Ｒａｓ  ＧＴＰａｓｅ  Ｃｈｅｍｉ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（登録商標）（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ、カタログ番号５２０９７）からの完全な溶解／結合緩衝液で希釈する。活性ＫＲａｓ  ＥＬＩＳＡを、次のように行った：グルタチオンでコーティングされたＥＬＩＳＡウェルを、完全な溶解／結合緩衝液で希釈したＲＡＦ１−ＧＳＴとともに、穏やかに撹拌しながら４℃で１時間インキュベートした。ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μｇの溶解物を各ウェルに添加し、穏やかに撹拌しながら室温で１時間インキュベートする。ウェルをさらに３回洗浄し、次いで、抗体結合緩衝液で希釈した一次抗体を、各ウェルに添加する。プレートを１時間インキュベートする。ウェルをさらに３回洗浄した後、抗体結合緩衝液で希釈したＨＲＰ複合体化二次抗体を各ウェルに添加する。プレートを室温で１時間インキュベートする。ＥＬＩＳＡウェルを４回洗浄し、化学発光試薬を添加し、次いで、発光を読み取る。ｐＥＲＫ  Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＥＬＩＳＡでは、０．１％ＳＤＳを含む２５μｇのタンパク質を使用し、ｐＭＥＫ  Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＥＬＩＳＡでは、ＳＤＳを含まない５０μｇのタンパク質を使用する。ｐＥＲＫおよびｐＭＥＫのＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ全細胞溶解物キットは、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙにより提供される。
【０１６０】
肺癌Ｈ３８８異種移植モデルにおける用量および濃度依存性インビボ標的阻害ならびに薬力学的効果：
実施例１の化合物を、肺癌Ｈ３５８マウス異種移植モデルに１〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与する。腫瘍試料を、単回用量の４時間後に収集する。腫瘍溶解物を調製し、ｐＥＲＫ、ｐＭＥＫ、および活性ＫＲａｓの阻害を、上に記載されるように測定する。結果を表７に提供する；実施例１の化合物は、４時間で１〜１００ｍｇ／ｋｇの単回用量処置後、ｐＥＲＫ、ｐＭＥＫ、および活性ＫＲａｓの用量依存性阻害を示した。この用量依存性標的阻害に基づいて、５０％標的阻害（ＴＥＤ５０）を達成するための用量は、活性ＫＲａｓ、ｐＥＲＫ、およびｐＭＥＫについて、それぞれ１１．２、９，７８、および１１．１９ｍｇ／ｋｇである。さらに、質量スペクトルを使用して、異なる用量での実施例１の化合物の血漿曝露を測定した。５０％標的阻害（ＴＥＣ５０）を達成するための血漿濃度は、活性ＫＲａｓ、ｐＥＲＫ、およびｐＭＥＫについて、それぞれ５７４．４、４７４．４、および５１５．３ｎＭであった。
【０１６１】
【表７】
2021505640.tif 000052
【０１６２】
肺癌Ｈ３８８異種移植マウスモデルにおける時間依存性インビボ標的阻害および薬力学的効果
実施例１の化合物もまた、１０および３０ｍｇ／ｋｇで投与する。単回用量後、腫瘍試料を、投与後２、４、８、１２、および２４時間で採取する。腫瘍溶解物を調製し、ｐＥＲＫ、ｐＭＥＫ、および活性ＫＲａｓの阻害を、上に記載されるように測定する。結果を表８に提供する。実施例１の化合物は、１０または３０ｍｇ／ｋｇの単回用量処置後、ｐＥＲＫ、ｐＭＥＫ、および活性ＫＲａｓの時間依存性阻害を示した。１０ｍｇ／ｋｇでは、２〜１２時間で６１〜８３％のｐＥＲＫ阻害を観察し、２４時間でｐＥＲＫ阻害は４５％に減少した。ｐＭＥＫ阻害の場合、２〜１２時間で４９〜７８％の阻害を観察し、それは２４時間で３０％に減少した。活性Ｋｒａｓの場合、２〜２４時間で２１〜６１％の阻害を達成した。３０ｍｇ／ｋｇでは、単回用量の２〜２４時間後に、６３〜８７％のｐＥＲＫ阻害、３５〜８９％のｐＭＥＫ阻害、および２９〜７０％の活性ＫＲａｓ阻害を達成した。
【０１６３】
【表８】
2021505640.tif 000053
【０１６４】
肺癌Ｈ２１２２異種移植マウスモデルにおける用量および時間依存性インビボ標的阻害ならびに薬力学的効果
実施例１の化合物を、１０、３０、および１００ｍｇ／ｋｇで投与する。単回用量後、腫瘍試料を、異なる時点で採取する。腫瘍溶解物を、上に記載されるように調製する。ｐＥＲＫ、ｐＭＥＫ、および活性ＫＲａｓの阻害を、上に記載されるように測定する。表９に示されるように、実施例１の化合物は、４時間で１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇの単回用量治療後にｐＥＲＫ、ｐＭＥＫ、および活性ＫＲａｓの用量依存的阻害を示した。これらのＰＤマーカーの阻害は、用量を１０〜１００ｍｇ／ｋｇ増加させることにより増加した。さらに、実施例１の化合物は、このモデルにおいて時間依存性標的阻害およびＰＤ効果を示した。１０ｍｇ／ｋｇでは、２〜１２時間で７〜４７％のｐＥＲＫ阻害、０〜６０％のｐＭＥＫ阻害、および２６〜３７％の活性ＫＲａｓ阻害を観察した。このＰＤマーカーの阻害は、２４時間で減少した。３０ｍｇ／ｋｇでは、単回用量の２〜１２４時間後に、４９〜７６％のｐＥＲＫ阻害、４５〜７８％のｐＭＥＫ阻害、および２６〜７９％の活性ＫＲａｓ阻害を達成した。これらのＰＤマーカーの阻害は、２４時間で減少した（表６）。
【０１６５】
【表９】
2021505640.tif 000054
【０１６６】
肺癌Ｈ３５８異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍成長活性：
実施例１の化合物の抗腫瘍活性を、肺癌Ｈ３５８マウス異種移植モデルで判定する。Ｈ３５８肺腫瘍細胞（１０ｘ１０６）を、雌のヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の後肢に皮下注射によって移植する。各群合計５匹のマウスを、有効性試験に使用する。腫瘍サイズが約３００ｍｇに達したときに、２８日間１日１回または２回、試験化合物またはビヒクル（０．２ｍＬ体積中２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭホスフェート、ｐＨ２．０）の経口投与（強制飼養）により処置を開始する。上のＨ３５８およびＨ２１２２異種移植モデルを使用したＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ薬力学（ＰＤ）マーカーおよび腫瘍成長の阻害の説明に記載されるように、腫瘍成長および体重を経時的に監視し、有効性および毒性の兆候を評価する。１０ｍｇ／ｋｇで毎日の投与スケジュールで、４２．７％の腫瘍成長阻害を観察した。１０ｍｇ／ｋｇで１日２回の投与スケジュールで、−１．９８％の腫瘍退縮を観察した。３０ｍｇ／ｋｇで１日１回または１日２回の投与スケジュールで、それぞれ−３３．９８％および−７４．３５％の腫瘍進行を達成した。研究全体を通して、有意な動物の体重減少は観察されなかった。
【０１６７】
肺癌Ｈ２１２２異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍成長活性：
実施例１の化合物の抗腫瘍活性はまた、肺癌Ｈ２１２２異種移植モデルで判定する。Ｈ２１２２肺腫瘍細胞（１０ｘ１０６）を、雌のヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の後肢に皮下注射によって移植する。各群合計５匹のマウスを、有効性試験に使用する。腫瘍サイズが約３００ｍｇに達したときに、２８日間１日１回または２回、試験化合物またはビヒクル（０．２ｍＬ体積中２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭホスフェート、ｐＨ２．０）の経口投与（強制飼養）により処置を開始する。上のＨ３５８およびＨ２１２２異種移植モデルを使用したＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ薬力学（ＰＤ）マーカーおよび腫瘍成長の阻害の説明に記載されるように、腫瘍成長および体重を経時的に監視し、有効性および毒性の兆候を評価する。実施例１の化合物を、３０ｍｇ／ｋｇで１日１回または１日２回投与した場合、それぞれ７７．１７％および７２．９７％の腫瘍成長阻害を観察した。１００ｍｇ／ｋｇで１日１回の投与スケジュールで、９１．０６％の腫瘍阻害を観察した。研究全体を通して、有意な動物の体重減少は観察されなかった。
【０１６８】
他の肺癌モデルならびに大腸癌、膵臓癌、および食道癌の異種移植モデルにおける抗腫瘍成長活性
Ｈ３５８およびＨ２１２２異種移植モデルに加えて、化合物実施例１を、異なる用量で、肺癌、大腸癌、膵臓癌、および食道癌の多くの他の異種移植または患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルで試験する。単剤療法の抗腫瘍成長または退縮活性を表１０に要約した。表１０に示されるように、化合物実施例１は、これら全てのモデルにおいて５〜１００ｍｇ／ｋｇの抗腫瘍活性を示し、実施例１が、肺癌、大腸癌、膵臓癌、および食道癌を含むＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する癌に対して活性であることを提案する。
【０１６９】
【表１０】
2021505640.tif 000055
【０１７０】
ＣＤＫ４およびＣＤＫ６阻害剤アベマシクリブ、ＥＧＦＲ小分子阻害剤、またはＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブとの組み合わせ有効性
単剤療法に加えて、化合物実施例１を、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６阻害剤アベマシクリブ、ＥＧＦＲ小分子阻害剤エルロチニブ、およびＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブなどの他の標的療法とのその組み合わせ有効性のために利用する。この研究のための細胞株を、ＡＴＣＣから得て、両方とも推奨条件下で成長させる、Ｏｎｃｏｔｅｓｔ／Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得られるＬＸＦＡ−９８３ＬおよびＬ．Ｅｉｓｅｎｂａｃｈ（Ｗｅｉｚｍａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｒｅｈｏｖｏｔ，Ｉｓｒａｅｌ）から得られるＤ１２２−９６を除いて、ＡＴＣＣ推奨条件下で成長させる。全ての細胞株は、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ変異を有する。増殖アッセイを、Ｃｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）を読み取りとして使用する４日間の成長アッセイとして行う。簡潔には、細胞を、９６ウェル細胞培養プレートに播種し、３７℃で一晩接着させる。翌日、細胞を、化合物で、単一処理または組み合わせ処理のいずれかで処理する。最初に、試験化合物をＤＭＳＯ中に連続希釈し、続いて、１％ＤＭＳＯで５倍濃度として培地に希釈し、最後に、培地で細胞に添加し、１倍に希釈する。細胞を、３７℃でさらに４日間インキュベートする。インキュベーション期間の終了時に、Ｃｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）試薬を混合し、ウェルに添加する。１０分後、発光を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器によって読み取る。単一および組み合わせ処理用の４パラメータロジスティックスモデルによって生成された絶対ＩＣ５０値、その後、各組み合わせ処理および細胞株の組み合わせインデックスを生成する。組み合わせＩＣ５０値を、一緒に添加した場合の各化合物の合計濃度に基づいて調整する。（例：化合物１および化合物２の１：１の濃度比の場合、組み合わせＩＣ５０は２倍増加する）。組み合わせインデックス（ＣＩ）を、組み合わせ療法の効力が予想される場合の相加的効力と異なる程度を測定し、Ｌｏｅｗｅ定義の相加性に基づく。
【０１７１】
【数１】
2021505640.tif 000056
【０１７２】
式中、
●ＣＡ，ｙおよびＣＢ，ｙは、組み合わせて与えられた場合に効果ｙを生み出す治療ＡおよびＢの濃度である。
●ＩＣＡ，ｙおよびＩＣＢ，ｙは、個別に与えられた場合に効果ｙを生み出すＡおよびＢの濃度である。
【０１７３】
組み合わせインデックスの生物学的解釈は、以下の通りである：組み合わせインデックスが０．５未満の場合は相乗的、組み合わせインデックスが０．５〜２の場合は相加的、組み合わせインデックスが２より大きい場合はアンタゴニスティックである。
【０１７４】
表１１に示されるように、実施例１およびアベマシクリブの組み合わせは、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞の阻害において相加的または相乗的有効性を有する。組み合わせインデックスに基づいて、試験した１６個の細胞株のうち、１１個の細胞株は、相加的効果を有し、５個の細胞株は、相乗的効果を有し、実施例１およびアベマシクリブの組み合わせは、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者に利益を提供し得ることを提案する。
【０１７５】
【表１１】
2021505640.tif 000057
【０１７６】
表１２に示されるように、実施例１およびＥＧＦＲ小分子阻害剤エルロチニブの組み合わせは、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞の阻害において相加的または相乗的有効性を有する。組み合わせインデックスに基づいて、試験した１６個の細胞株のうち、１１個の細胞株は、相加的効果を有し、５個の細胞株は、相乗的効果を有し、１個の細胞株は、効果を有さず、実施例１およびエルロチニブの組み合わせは、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者に利益を提供し得ることを提案する。
【０１７７】
【表１２】
2021505640.tif 000058
【０１７８】
表１３に示されるように、実施例１およびＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブの組み合わせは、一般に、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞の阻害において相加的または相乗的有効性を有する。組み合わせインデックスに基づいて、試験した１６個の細胞株のうち、６個の細胞株は、相加的効果を有し、７個の細胞株は、相乗的効果を有し、２個の細胞株は、アンタゴニスティック効果を有し、１個の細胞株は、効果を有さず、実施例１およびセツキシマブの組み合わせは、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有するほとんどの癌患者に利益を提供し得ることを提案する。
【０１７９】
【表１３】
2021505640.tif 000059
【０１８０】
アベマシクリブ、ＥＧＦＲ小分子阻害剤、またはＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブと組み合わせた実施例１の相加的効果または相乗的効果をさらに確認するために、６つの異種移植またはＰＤＸモデル（肺３、大腸２、膵臓１）においてインビボ組み合わせ研究を実施する。表１４に示されるように、実施例１およびアベマシクリブの組み合わせは、試験した６つのモデル全てにおいて、単剤療法よりも優れた抗腫瘍活性を有する。多くの場合、この組み合わせにより有意な腫瘍退縮を達成し、実施例１およびアベマシクリブの組み合わせが、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者のための潜在的な利益を有することを提案する。
【０１８１】
さらに、実施例１およびＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブの組み合わせもまた、４つの異種移植片またはＰＤＸモデルで評価した。表１４に要約されるように、セツキシマブとの実施例１の組み合わせは、２つの大腸異種移植モデル（ＳＷ８３７、ＳＷ１４６３）における単剤療法よりも優れた腫瘍成長退縮を示し、実施例１のＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブとの組み合わせが、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する大腸癌患者のための利益を有し得ることを提案する。
【０１８２】
【表１４】
2021505640.tif 000060
【０１８３】
ＥＧＦＲの小分子阻害剤、エルロチニブ、またはアファチニブとの実施例１の組み合わせをまた、ＥＬ３１８７肺癌ＰＤＸモデルで評価した。表１５に要約されるように、エルロチニブまたはアファチニブとの実施例１の組み合わせは、単剤療法よりも有意な腫瘍成長退縮およびはるかに優れた抗腫瘍活性を示し、ＥＧＦＲ小分子阻害剤との実施例１の組み合わせが、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する肺癌患者のための有意な利益を有し得ることを提案する。
【０１８４】
【表１５】
2021505640.tif 000061
【０１８５】
免疫療法、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせの有効性
マウス同系モデルを使用して、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ阻害および免疫療法の組み合わせの効果を評価する。このモデルでは、マウスの大腸腫瘍細胞株であるＣＴ−２６細胞株でのＣＲＩＳＰＲノックインにより、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｄ変異がＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異に変換する。ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃノックインは、遺伝的および機能的特性によって確認される。操作された細胞株は、ＣＴ−２６−Ｈ４／ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃと名付けられる。これらの細胞を、Ｂａｌｂ／ｃマウスに移植し、腫瘍細胞移植の６日後に化合物処理を開始する。この研究では、実施例１を、表１８に列挙される投与スケジュールで抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＰＤ−１抗体のいずれかと組み合わせる。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１阻害剤は、当技術分野で既知であり、デュルバルマブ、ペンブロリズマブ、およびニボルマブを含む。表１６に示されるように、実施例１は、３週間の投与終了時に、平均９６％の腫瘍成長阻害および１０％（１０匹中１匹）の完全奏効（ＣＲ）を有する有意な単剤活性を示す。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は３８％の腫瘍成長阻害を示し、完全な応答はなく、抗ＰＤ−１抗体は８２％の腫瘍成長阻害および１０％の完全な応答を示す。しかしながら、実施例１の、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＰＤ−１抗体のいずれかとの組み合わせは、有意により優れた抗腫瘍活性を達成する。３週間の投与終了時に、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１との組み合わせは、それぞれ−５６％および−５１％の腫瘍退縮、ならびに８０％および８９％の完全奏効を示す。３週間後、化合物処置を中止すると、抗ＰＤ−１群の１匹の動物を除く単剤療法群の全ての腫瘍が再成長し始めた。しかしながら、２つの組み合わせ群の腫瘍は、再成長の兆候を有さない。最終投与の４０日後、組み合わせ群は、８０および８９％の完全な応答を維持し、組み合わせ群の腫瘍が除去されることを示す。これらの結果は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または抗ＰＤ−１抗体のいずれかとの実施例１の組み合わせが、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者への重大な利益を有し得ることを提案する。
【０１８６】
【表１６】
2021505640.tif 000062
【手続補正書】
【提出日】令和2年6月11日(2020.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2021505640.tif 000068
（式中、
ｍが、０〜２であり、
各Ｒ１が、Ｆであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｆ、およびＣｌから選択される）
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
以下：
【化２】
2021505640.tif 000069
から選択される請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
以下：
【化３】
2021505640.tif 000070
から選択される請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
以下：
【化４】
2021505640.tif 000071
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、請求項４または５に記載の化合物。
【請求項８】
１３．５°、７．１°、および２３．０°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて５．４°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、請求項４または６に記載の化合物。
【請求項１０】
２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤、を含む薬学的組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、癌の治療に使用される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記癌が、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記癌が、非小細胞肺癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記癌が、大腸癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記癌が、脾臓癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
患者が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の投与前に、前記ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有すると判定された癌を有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
有効量のアベマシクリブまたはその薬学的に許容される塩の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
有効量のＥＧＦＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、エルロチニブまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、アファチニブまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、セツキシマブである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
有効量の抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８６】
【表１６】
2021505640.tif 000072
本発明は以下の態様を含みうる。
［１］式：
【化４１−１】
2021505640.tif 000073
（式中、
ｍが、０〜２であり、
各Ｒ１が、Ｆであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｆ、およびＣｌから選択される）
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［２］以下：
【化４１−２】
2021505640.tif 000074
から選択される上記［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［３］以下：
【化４１−３】
2021505640.tif 000075
から選択される上記［１］または［２］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［４］以下：
【化４１−４】
2021505640.tif 000076
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［５］１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、上記［４］に記載の化合物。
［６］１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、上記［４］に記載の化合物。
［７］結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、上記［４］または［５］に記載の化合物。
［８］１３．５°、７．１°、および２３．０°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて５．４°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンヘミマロネートである、上記［７］に記載の化合物。
［９］結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、上記［４］または［６］に記載の化合物。
［１０］２１．３°、１８．６°、および１９．８°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上との組み合わせにおいて６．１°で発生する、２θ±０．２°で、ＣｕＫα照射を使用して特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる、結晶性１−｛４−［７−（２−アミノ−７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−イル）−６−クロロ−８−フルオロキナゾリン−４−イル］ピペラジン−１−イル｝プロプ−２−エン−１−オンメシレートである、上記［９］に記載の化合物。
［１１］上記［１〜１０のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤、を含む薬学的組成物。
［１２］治療において使用するための、上記［１］〜［１０］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１３］癌の治療において使用するための、上記［１］〜［１０］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１４］前記癌が、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、または食道癌である、上記［１３］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１５］前記癌が、非小細胞肺癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、上記［１４］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１６］前記癌が、大腸癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、上記［１４］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１７］前記癌が、脾臓癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する、上記［１４］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１８］患者が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の投与前に、前記ＫＲａｓ  Ｇ１２Ｃ変異タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有すると判定された癌を有する、上記［１４］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１９］有効量のアベマシクリブまたはその薬学的に許容される塩の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、上記［１４］〜［１８］のいずれかに記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２０］有効量のＥＧＦＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、上記［１４］〜［１８］のいずれかに記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２１］前記ＥＧＦＲ阻害剤が、エルロチニブまたはその薬学的に許容される塩である、上記［２０］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２２］前記ＥＧＦＲ阻害剤が、アファチニブまたはその薬学的に許容される塩である、上記［２０］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２３］前記ＥＧＦＲ阻害剤が、セツキシマブである、上記［２０］に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２４］有効量の抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体の同時、個別、または逐次投与をさらに含む、上記［１４］〜［１８］のいずれかに記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【国際調査報告】
2021505640.tif 000077
2021505640.tif 000078