(57)【要約】  本発明は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスに関する。本発明は、具体的に言うと、酸としてのイソニコチン酸、ガレートエピカテキン類を遊離させるための有機溶媒を使用する、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによる、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスに関する。本発明は、より具体的に言うと、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスに関し、ここで、プロセスは、溶解、遠心分離による濃縮、添加、沈殿、濾過、スラリー化、上清液の除去、洗浄、抽出、および凍結乾燥のステップを含む。本発明はまた、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体に関する。
2021505210.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセス。
【請求項２】
緑茶抽出物または緑茶粕を使用する、請求項１に記載のガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスであって、以下：
ａ）水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成すること、
ｂ）水混和性有機溶媒を使用してガレートエピカテキン類を遊離させること、および、
ｃ）水不混和性溶媒、これに続き、ブライン溶液を使用して、不溶性材料を除去すること、
を含む、前記プロセス。
【請求項３】
請求項１に記載の、緑茶抽出物からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスであって、プロセスは、以下：
ａ）水または有機溶媒またはそれらの混合物中の緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）の溶液を提供すること、
ｂ）ステップａ）で得られた濃縮溶液にイソニコチン酸を添加すること、
ｃ）溶液を撹拌し続け、沈殿および１２時間スラリー化させること、
ｄ）水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体をろ過すること、
ｅ）水混和性有機溶媒中で、ステップｄ）で得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−酸複合体をスラリー化して、ガレートエピカテキン類を遊離させること、
ｆ）ステップｅ）の上清水混和性有機溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、粗製の残渣を得ること、
ｇ）ステップｆ）の粗製の残渣を水不混和性溶媒中で溶解すること、
ｈ）ステップｇ）の水不混和性溶媒溶液をブライン溶液で３回処理すること、および、いずれかの微量レベルの不溶性材料をろ過すること、
ｉ）ステップｈ）の水不混和性溶媒溶液を濃縮させること、および、少量の水を添加すること、水不混和性溶媒を蒸留して、濃縮された水溶液を得ること、ならびに、
ｊ）ステップｉ）の濃縮された水溶液を凍結乾燥して、＞９７％ガレートエピカテキン類（＞７５％ＥＧＣＧおよび＞２０％ＥＣＧ）を得ること、
を含む、前記プロセス。
【請求項４】
請求項１に記載の、緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスであって、プロセスは、以下：
ａ）水または水性アセトンまたは水性アルコール溶液中のいずれかのグレードの緑茶粕を抽出すること、
ｂ）ステップａ）の緑茶粕を、その本来の容量の１／４まで、または好ましくは１／５まで濃縮すること、
ｃ）濃縮された水性緑茶抽出溶液を遠心分離して、いずれかの不溶性材料を除去すること、
ｄ）イソニコチン酸および水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体のシード材料を、ステップｃ）で得られた溶液に添加すること、
ｅ）溶液を撹拌し続け、さらに沈殿およびスラリー化させること、
ｆ）粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体をろ過すること、
ｇ）水不混和性溶媒中で、ステップｆ）で得られた粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）をスラリー化させること、および、ろ過すること、
ｈ）ステップｇ）で得られた部分的に精製された水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を、水混和性溶媒中でスラリー化させて、ガレートエピカテキン類を遊離させること、
ｉ）ステップｈ）の上清水混和性有機溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、粗製の残渣を得ること、
ｊ）ステップｉ）の粗製の残渣を水不混和性溶媒中で溶解すること、
ｋ）ステップｊ）の水不混和性溶媒溶液をブライン溶液で処理すること、および、いずれかの微量レベルの不溶性材料をろ過すること、
ｌ）ステップｋ）の水不混和性溶媒溶液を濃縮させること、および、少量の水を添加すること、水不混和性溶媒を蒸留して、濃縮された水溶液を得ること、ならびに、
ｍ）ステップｌ）の濃縮された水溶液を凍結乾燥して、＞９７％ガレートエピカテキン類（＞７５％ＥＧＣＧおよび＞２０％ＥＣＧ）を得ること、
を含む、前記プロセス。
【請求項５】
約６．０１０、６．６１２、７．２５８、１１．６４６、１２．２９４、１４．６１０、１４．９３９、１９．２２９、２２．０３２、２６．１８８、２６．９３４、２７．４３３、２９．５２２±０．２  °２θにおいて位置付けられるピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴付けられる、緑茶抽出物または緑茶粕からの、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体。
【請求項６】
好適な溶媒を使用してガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を分離するために使用される、請求項５に記載の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体。
【請求項７】
請求項２〜４において使用される水混和性有機溶媒が、これらに限定されないが、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のようなアルコール；アセトン、メチルブチルケトン等のようなケトン；テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等のようなエーテル；好ましくはエタノールまたはアセトンまたはそれらのいずれかの混合物を包含する。
【請求項８】
請求項２〜４において使用される水不混和性有機溶媒は、これらに限定されないが、酢酸エチル、プロピルアセタート、ブチルアセタート、ジエチルエーテル、ジクロロメタンおよびクロロホルム；好ましくは酢酸エチル、またはそれらのいずれかの混合物を包含する。
【請求項９】
請求項６において使用される溶媒は、これらに限定されないが、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のようなアルコール；アセトン、メチルブチルケトン等のようなケトン；テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等のようなエーテル；好ましくはエタノールまたはアセトン；酢酸エチル、プロピルアセタート、ブチルアセタートのようなエステル溶媒；ジエチルエーテル、ジクロロメタンおよびクロロホルム；好ましくは酢酸エチル、またはそれらのいずれかの混合物を包含する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスに関する。
本発明は、より具体的には、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスに関する。
【０００２】
本発明は、具体的に言うと、酸としてのイソニコチン酸、ガレートエピカテキン類を遊離させるための有機溶媒を使用して、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによる、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスに関する。
【０００３】
本発明は、より具体的に言うと、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスに関し、プロセスは、溶解、遠心分離による濃縮、添加、沈殿、濾過、スラリー化、上清液の除去、洗浄、抽出および凍結乾燥のステップを含む。
本発明はまた、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体に関する。
【背景技術】
【０００４】
本発明の背景
緑茶は、カテキン類の豊かな供給源であり、これは、その乾燥重量の約３０％を占める。緑茶カテキン類は、周知の抗酸化剤であり、および、それらの抗酸化特性は、ビタミンＣ、ビタミンＥ、およびβ−カロテンのものよりも強いことが見出された。緑茶カテキンは、心血管疾患（ＣＶＤ）、微生物疾患、糖尿病、および肥満を予防するために提案されている。しかしながら、研究により、健康上の利益は、緑茶が充分な量で消費されるときにのみ達成されることが明らかとなっている。
【０００５】
緑茶抽出物は、アジア起源の植物である茶の木(Camellia sinensis)から単離された、抗ウイルス活性および抗酸化活性および潜在的な化学予防活性を有する、緑茶ポリフェノール混合物として定義され、緑茶粕(green tee dust)は、細かい粗い粒子(fine grainy particle)から構成される。この産物は、植物の茶の木の葉からもっぱら作製され、および、加工の間に最小限の酸化を受ける。この産物は、灰緑色の粗い粉末様物質である。
【０００６】
カテキンは、数個のヒドロキシル基を有する２つのフェノール核（２つの芳香族環）に結合した中央の３炭素ユニットから構成される。茶カテキンは、エピ構造(epistrucutred)カテキンおよび非エピ構造(nonepistructured)カテキンの２つの群に分類される。エピカテキンは、茶における主要なカテキンであり、および、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）は、最も高い含量を占め、減少する順序で、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキンガレート（ＥＣＧ）、およびエピカテキン（ＥＣ）が続く。対照的に、ガロカテキンガレート（ＧＣＧ）、ガロカテキン（ＧＣ）、カテキンガレート（ＣＧ）およびカテキン（Ｃ）を含む、非エピ構造カテキンは、茶において少量でのみ存在する。緑茶の葉からの抽出物中の典型的なカテキンプロファイルは、１０〜１５％ＥＧＣＧ、６〜１０％ＥＧＣ、２〜３％ＥＣＧおよび２％ＥＣから構成される。
【０００７】
主要なエピカテキン類の中で、エピガロカテキン（ＥＧＣ）およびエピカテキン（ＥＣ）は、非ガレートエピカテキン類であり、および、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）およびエピカテキンガレート（ＥＣＧ）は、ガレートエピカテキン類である。ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）は、in vitroおよびin vivoの両方で、炎症、細菌感染、腫瘍成長、およびウイルス感染の抑制の際に最も有効である。これらは、抗酸化活性、抗発がん活性、抗糖尿病活性、抗肥満活性、抗アルツハイマー病活性、および抗ウイルス活性が可能であり、および、抗がん性化学予防剤としても機能し得る。加えて、これらは、心臓血管および代謝の健康上の明白な利益を提供することもできる。
【０００８】
エピガロカテキン−３−ガラートとしても知られているエピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）はまた、エピガロカテキンおよび没食子酸のエステルであり、および、茶の木または同種のものにおいて一般に存在する１つのタイプのカテキンである。エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）は、化学的には、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３，４，５−トリヒドロキシフェニル）−３，４−ジヒドロ−１（２Ｈ）−ベンゾピラン−３，５，７−トリオール−３−［３，４，５−トリヒドロキシベンゾネート(benzonate)］として表される。化学式は、Ｃ２２Ｈ１８Ｏ１１であり、分子量は、４５８．３７ｇ／ｍｏｌであり、および構造式は、
【化１】
2021505210.tif 000003
である。
【０００９】
エピカテキンガレート（ＥＣＧ）は、フラバン−３−オールであり、フラボノイドの１つのタイプであり、緑茶中に存在する。エピカテキンガレート（ＥＣＧ）は、化学的に（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３，４−ジヒドロ−１（２Ｈ）−ベンゾピラン−３，５，７−トリオール−３−（３，４，５−トリヒドロキシベンゾアート）として表される。化学式は、Ｃ２２Ｈ１８Ｏ１０であり、分子量は、４４２．３７ｇ／ｍｏｌであり、および構造式は、
【化２】
2021505210.tif 000004
である。
【００１０】
CN1136024は、酢酸エチル−エタノール−水系を固定相として、およびｎ−ヘキサン−酢酸エチル−水系を移動相として使用する高速向流クロマトグラフィー方法による、お茶の粗製ポリフェノールからの、モノマーのカテキン類（ＥＧＣＧ、ＧＣＧおよびＥＣＧ）の９８％純度までの調製を開示する。
【００１１】
CN1683363は、７５％エタノールを使用する緑茶抽出物からのカテキン類の単離、これに続きクロロホルムを使用してカフェインを除去すること、および、カラムクロマトグラフィーにより分離して純粋なカテキンを得ることを開示する。
CN101381359は、熱水抽出、カフェインでの沈殿、クロロホルムおよび酢酸エチル抽出を使用してエピガロカテキンガレートを形成し、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥＣＧおよびＥＧＣＧモノマーを得る、緑茶抽出物からの純粋なＥＧＣＧおよびＥＣＧの分離を開示する。
【００１２】
CN102311419は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用する、高含量ＥＧＣＧおよび低含量のポリフェノール類原材料の精製を開示する。
CN104557839は、ＥＧＣＧおよびＺｎ塩を使用するＥＧＣＧ−Ｚｎ錯体の調製のためのプロセスを開示する。
CN105218503は、新鮮な茶葉からの茶カテキン類の調製技術を開示する。
【００１３】
US4,248,789は、カフェインの水溶液をタンニン物質の溶液に添加して遊離カテキン類の群およびエステルタイプのカテキン類の群に分離すること、カフェインを除去すること、および、次いで、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、およびエピガロカテキンガレートの各構成要素を、Sephadexのカラム上の溶媒分布を用いて分画することを特徴とする、カテキン類を産生するためのプロセスを開示する。
【００１４】
US4,613,672は、熱水またはメタノール、エタノールまたはアセトンの水溶液を用いて茶葉を抽出すること、クロロホルムを用いて抽出物含有溶液を洗浄すること、洗浄した溶液を有機溶媒に移すこと、溶液を除去すること、および、その結果得られる溶液を溶出溶液の存在下で逆相カラムを通過せることを含む、茶カテキン類を産生するためのプロセスを開示する。
【００１５】
US4,913,909は、主要な成分としての（−）−エピガロカテキンガレートを含有する茶葉抽出物および活性アルミニウム水酸化物の複合体を開示する。
US5,107,000は、水、精製された海の砂、ジクロロメタンおよびアセトンを使用する緑茶からカテキン複合体を得るためのプロセスを開示する。
US6,210,679は、高収率で無カフェインの高度に純粋なＥＧＣＧを単離するための、４ステッププロセスによる、緑茶の葉からの無カフェインのカテキン混合物の単離および精製を開示する。
【００１６】
US7,312,199は、緑茶抽出物をマクロ多孔性極性樹脂上のクロマトグラフィーに供すること、極性溶出を用いて樹脂からＥＧＣＧを溶離することによって、（−）−エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）を作製するためのプロセス、および特定の重量範囲の（−）−エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、カフェインおよびエピカテキンを開示する。
US9,018,248は、エピカテキン（ＥＣ）、エピカテキンガレート（ＥＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）を含む緑茶カテキン類の脂肪酸誘導体、およびそのプロセスを開示する。
【００１７】
WO2007/041891は、カテキン類をエステル形態に変換すること、およびカテキン類に再変換することによる、緑茶の葉からのカテキン類の分離を開示する。
US2010/0204204は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）およびイソニコチンアミドＫＡ１０１５３の共結晶の水和物、そのプロセス、ＤＳＣ、ＸＲＰＤおよび単結晶ｘ線回折データを開示する。それはまた、イソニコチンアミドおよびイソニコチン酸の共結晶形成剤としての使用を開示する。しかしながら、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）およびイソニコチン酸の共結晶についての具体的な調製の開示はない。
【００１８】
これまでに報告された先行技術文献は、高速向流クロマトグラフィー分離方法を使用する粗製の茶ポリフェノールからのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離、７５％エタノールを使用し、これに続き、クロロホルムを使用してカフェインを除去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して、純粋なカテキンを得る、緑茶抽出物からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離、ならびに、クロマトグラフィー技法、溶媒抽出、カフェイン沈殿等々を使用する緑茶からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離を開示する。先行技術文献のいずれも、緑茶抽出物または緑茶粕からガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を分離するための等張性酸の使用、および、緑茶抽出物または緑茶粕からの水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体の形成を開示していない。
【００１９】
したがって、本発明の目的は、イソニコチン酸を使用して、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによって、緑茶抽出物および緑茶粕から、ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供することであり、これは、高収率であり、ＥＧＣＧおよびＥＣＧを優れた純度で提供する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
発明の目的
本発明の主な目的は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供することである。
本発明の別の目的は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供することである。
【００２１】
本発明のもう１つの目的は、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによる、緑茶抽出物および緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセス、ガレートエピカテキン類を遊離させるための水混和性有機溶媒、不溶性材料を除去するために水不混和性溶媒に続いてブライン溶液で処理することを提供することである。
【００２２】
本発明のさらにもう１つの目的は、酸としてイソニコチン酸、ガレートエピカテキン類を遊離させるための有機溶媒としてのエタノールまたはアセトンを使用し、不溶性材料を除去するための水不混和性溶媒としてのブライン溶液を用いて、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによる、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供することである。
【００２３】
本発明のもう１つの目的は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供することであり、ここで、プロセスは、溶解、遠心分離による濃縮、添加、沈殿、濾過、スラリー化、上清液の除去、洗浄、抽出および凍結乾燥のステップを含む。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
発明の概要
結果的に、本発明は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類の分離のための改善されたプロセスを提供する。
本発明の別の態様は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供する。
【００２５】
本発明のもう１つの態様は、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによる、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセス、ガレートエピカテキン類を遊離させるための水混和性有機溶媒、不溶性材料を除去するための、水不混和性溶媒に続いてブライン溶液で処理することを提供する。
【００２６】
本発明のもう１つの態様は、酸としてのイソニコチン酸、ガレートエピカテキン類を遊離させるための有機溶媒としてのエタノールまたはアセトンまたはアルコール溶媒、および不溶性材料を除去するための酢酸エチル  水不混和性溶媒、これに続く、ブライン溶液での処置を使用する、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することによる、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供する。
【００２７】
本発明のさらにもう１つの態様は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供し、ここで、プロセスは、溶解、遠心分離による濃縮、添加、沈殿、濾過、スラリー化、上清液の除去、洗浄、抽出、および凍結乾燥のステップを含む。
【００２８】
本発明のさらにもう１つの態様は、以下を含む、緑茶抽出物からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスを提供する：
ａ）水または有機溶媒またはそれらの混合物中の緑茶抽出物の溶液（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）を提供すること、
ｂ）ステップａ）で得られた溶液にイソニコチン酸を添加すること、
ｃ）溶液を撹拌し続け、沈殿およびスラリー化させること、
ｄ）水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体をろ過すること、
ｅ）水混和性有機溶媒中で、ステップｄ）で得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）をスラリー化して、ガレートエピカテキン類を遊離させること、
ｆ）ステップｅ）の上清水混和性有機溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、粗製の残渣を得ること、
ｇ）ステップｆ）の粗製の残渣を水不混和性溶媒中で溶解すること、
ｈ）ステップｇ）の水混和性溶媒溶液をブライン溶液で処理すること、および、いずれかの微量レベルの不溶性材料をろ過すること、
ｉ）ステップｈ）の水不混和性溶媒溶液を濃縮させること、および、少量の水を添加すること、水不混和性溶媒をろ過して、濃縮された水溶液を得ること、ならびに、
ｊ）ステップｉ）の濃縮された水溶液を凍結乾燥して、＞９７％ガレートエピカテキン類（＞７５％ＥＧＣＧおよび＞２０％ＥＣＧ）を得ること。
【００２９】
本発明のさらにもう１つの態様は、以下を含む、緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスを提供する：
ａ）水または水性アセトンまたは水性アルコール溶液中のいずれかのグレードの緑茶粕を抽出すること、
ｂ）ステップａ）の緑茶粕を、その本来の容量の１／４まで、または好ましくは１／５まで濃縮すること、
ｃ）濃縮された水性緑茶抽出溶液を遠心分離して、いずれかの不溶性材料を除去すること、
ｄ）イソニコチン酸および水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体のシード材料を、ステップｃ）で得られた溶液に添加すること、
ｅ）溶液を撹拌し続け、さらなる沈殿およびスラリー化させること、
ｆ）粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体をろ過すること、
ｇ）水不混和性有機溶媒中で、ステップｆ）で得られた粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）をスラリー化させること、および、ろ過すること、
ｈ）ステップｇ）で得られた部分的に精製された水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を、水混和性溶媒中でスラリー化させて、ガレートエピカテキン類を遊離させること、
ｉ）ステップｈ）の上清水混和性有機溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、粗製の残渣を得ること、
ｊ）ステップｉ）の粗製の残渣を水不混和性溶媒中で溶解すること、
ｋ）ステップｊ）の水不混和性溶媒溶液をブライン溶液で処理すること、および、いずれかの微量レベルの不溶性材料をろ過すること、
ｌ）ステップｋ）の水不混和性溶媒溶液を濃縮させること、および、少量の水を添加すること、水不混和性溶媒を蒸留して、濃縮された水溶液を得ること、ならびに、
ｍ）ステップｌ）の濃縮された水溶液を凍結乾燥して、＞９７％ガレートエピカテキン類（＞７５％ＥＧＣＧおよび＞２０％ＥＣＧ）を得ること。
【００３０】
本発明のもう１つの態様は、約６．０１０、６．６１２、７．２５８、１１．６４６、１２．２９４、１４．６１０、１４．９３９、１９．２２９、２２．０３２、２６．１８８、２６．９３４、２７．４３３、２９．５２２±０．２°２θに位置付けられるピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴付られる、緑茶抽出物からの、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を提供する。
【００３１】
本発明のもう１つの態様は、約５．９９５、６．６２０、７．２２７、１１．６５６、１２．２６８、１４．６３７、１４．８２４、１６．５６９＊、１９．３８３、２２．００７、２６．１４、２６．９１４、２７．４８１、２７．８２１＊、２９．４８９±０．２°２θ（＊イソニコチン酸相混入ピーク）に位置付けられるピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴付られる、緑茶粕からの、粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
図の簡単な記載
【図１】図１は、緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体のＸＰＲＤパターンを示す。
【図２】図２は、緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた、（ａ）ＥＧＣＧ水和物  （ｂ）ＥＣＧ  （ｃ）イソニコチン酸  （ｄ）水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体のＸＰＲＤパターンのオーバーレイを示す（下から上）。
【図３】図３は、緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体の１Ｈ  ＮＭＲを示す。
【００３３】
【図４】図４は、入力緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）のＨＰＬＣを示す。
【図５】図５は、緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られたガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）のＨＰＬＣを示す。
【図６】図６は、緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られたガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の１Ｈ  ＮＭＲを示す。
【図７】図７は、緑茶粕から得られた粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体のＸＰＲＤパターンを示す。
【００３４】
【図８】図８は、（ａ）ＥＧＣＧ水和物  （ｂ）ＥＣＧ  （ｃ）イソニコチン酸  （ｄ）緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体  （ｅ）緑茶粕から得られた粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体のＸＰＲＤオーバーレイを示す（下から上）。
【図９】図９は、緑茶粕から得られた粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体の１Ｈ  ＮＭＲを示す。
【図１０】図１０は、緑茶粕から得られたガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）のＨＰＬＣを示す。
【図１１】図１１は、緑茶粕から得られたガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の１Ｈ  ＮＭＲを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明の詳細な記載
結果的に、本発明は、緑茶抽出物および緑茶粕からのガレートエピカテキン類の分離のための改善されたプロセスを提供する。
本発明は、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供する。
【００３６】
本発明はまた、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成すること、ガレートエピカテキン類を遊離するための水混和性有機溶媒、不溶性材料を除去するための、水不混和性溶媒に続く、ブライン溶液での処理による、緑茶抽出物または緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のための改善されたプロセスを提供する。
【００３７】
本発明において使用され得る水混和性有機溶媒は、これらに限定されないが、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のようなアルコール；アセトン、メチルブチルケトン等のようなケトン；テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等のようなエーテル；およびそれらのいずれかの混合物を包含する。好ましく使用される有機溶媒は、エタノールまたはアセトンである。
【００３８】
本発明の水不混和性溶媒は、これらに限定されないが、酢酸エチル、プロピルアセタート、ブチルアセタート、ジエチルエーテル、ジクロロメタンおよびクロロホルムを包含する。好ましく使用される水不混和性溶媒は、酢酸エチルである。
【００３９】
ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）は、酸としてのイソニコチン酸、ガレートエピカテキン類を遊離させるための有機溶媒としてのエタノールまたはアセトンまたはアルコール性溶媒、不溶性材料を除去するための水不混和性溶媒としての酢酸エチル、これに続く、ブライン溶液での処理を使用して、水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を形成することにより、緑茶抽出物または緑茶粕から分離される。
【００４０】
緑茶抽出物および緑茶粕からのガレートエピカテキン類の分離プロセスは、溶解、遠心分離による濃縮、添加、沈殿、濾過、スラリー化、上清液の除去、洗浄、抽出、および凍結乾燥のステップを包含する。
【００４１】
本発明は、以下を含む、緑茶抽出物からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスを提供する：
ａ）水または有機溶媒またはそれらの混合物中の緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）の溶液を提供すること、
ｂ）ステップａ）で得られた濃縮溶液にイソニコチン酸を添加すること、
ｃ）溶液を撹拌し続け、沈殿および１２時間スラリー化させること、
ｄ）水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体をろ過すること、
ｅ）水混和性有機溶媒中で、ステップｄ）で得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）をスラリー化して、ガレートエピカテキン類を遊離させること、
ｆ）ステップｅ）の上清水混和性有機溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、粗製の残渣を得ること、
ｇ）ステップｆ）の粗製の残渣を水不混和性溶媒中で溶解すること、
ｈ）ステップｇ）の水不混和性溶媒溶液をブライン溶液で処理すること、および、いずれかの微量レベルの不溶性材料をろ過する(filtering off)こと、
ｉ）ステップｈ）の水不混和性溶媒溶液を濃縮させること、および、少量の水を添加すること、水不混和性溶媒を蒸留して(distilling away)、濃縮された水溶液を得ること、ならびに、
ｊ）ステップｉ）の濃縮された水溶液を凍結乾燥して、＞９７％ガレートエピカテキン類（＞７５％ＥＧＣＧおよび＞２０％ＥＣＧ）を得ること。
【００４２】
本発明は、以下を含む、緑茶粕からのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の分離のためのプロセスを提供する：
ａ）水または水性アセトンまたは水性アルコール溶液中のいずれかのグレードの緑茶粕を抽出すること、
ｂ）ステップａ）の緑茶粕を、その本来の容量の１／４まで、または好ましくは１／５まで濃縮すること、
ｃ）濃縮された水性緑茶抽出液を遠心分離して、いずれかの不溶性材料を除去すること、
ｄ）イソニコチン酸および水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体のシード材料(seed material)を、ステップｃ）で得られた溶液に添加すること、
ｅ）溶液を撹拌し続け、さらに沈殿およびスラリー化させること、
ｆ）粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体をろ過すること、
ｇ）水不混和性溶媒中で、ステップｆ）で得られた粗製水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）をスラリー化させること、および、ろ過すること、
ｈ）ステップｇ）で得られた部分的に精製された水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を、水混和性溶媒中でスラリー化させて、ガレートエピカテキン類を遊離させること、
ｉ）ステップｈ）の上清水混和性有機溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、粗製の残渣を得ること、
ｊ）ステップｉ）の粗製の残渣を水不混和性溶媒中で溶解すること、
ｋ）ステップｊ）の水不混和性溶媒溶液をブライン溶液で処理すること、および、いずれかの微量レベルの不溶性材料をろ過すること、
ｌ）ステップｋ）の水不混和性溶媒溶液を濃縮させること、および、少量の水を添加すること、水不混和性溶媒を蒸留して、濃縮された水溶液を得ること、ならびに、
ｍ）ステップｌ）の濃縮された水溶液を凍結乾燥して、＞９７％ガレートエピカテキン類（＞７５％ＥＧＣＧおよび＞２０％ＥＣＧ）を得ること。
【００４３】
本発明の緑茶抽出物は、水中に緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）を、または、水または水性アルコール溶液中に緑茶粕を溶解すること、水溶性抽出物を、その本来の容量の１／４まで、または好ましくは１／５まで濃縮すること、および、いずれかの不溶性材料を除去するために遠心分離することによって、得ることができる。
【００４４】
本発明の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体は、必要な場合、好ましくは５０℃で酢酸エチル中でスラリー化されて、ＥＧＣ、ＥＣおよびカフェインなどの不純物を除去することができる。
【００４５】
緑茶抽出物から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体は、約６．０１０、６．６１２、７．２５８、１１．６４６、１２．２９４、１４．６１０、１４．９３９、１９．２２９、２２．０３２、２６．１８８、２６．９３４、２７．４３３、２９．５２２±０．２°２θに位置づけられるピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴付けられる（図１）。
【００４６】
本発明のプロセスによって得られたガレートエピカテキン類は、エタノールを使用して、（ａ）ＥＧＣＧ水和物  （ｂ）ＥＣＧ  （ｃ）イソニコチン酸  （ｄ）緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体のＸＲＰＤオーバーレイによって確認される（下から上）（図２）。
【００４７】
緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体は、プロトンＮＭＲによって確認される（図３）。
【００４８】
ＥＧＣＧ、カフェイン＋カテキン、ＥＧＣＧ、ＥＣ、ＥＣＧを含有する緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）は、ＨＰＬＣクロマトグラムによって確認される（図４）。
【００４９】
緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られたガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の存在を示すＨＰＬＣは、ＥＧＣＧ（７５．７４４％）、ＥＣＧ（２１．３１０％）（＞９７％ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ））の純度を指し示す（図５）。
【００５０】
エタノールを使用して、緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られたガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）は、プロトンＮＭＲによって確認される（図６）。
【００５１】
緑茶粕から得られた粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体は、約５．９９５、６．６２０、７．２２７、１１．６５６、１２．２６８、１４．６３７、１４．８２４、１６．５６９＊、１９．３８３、２２．００７、２６．１４、２６．９１４、２７．４８１、２７．８２１＊、２９．４８９±０．２°２θ（＊イソニコチン酸相混入ピーク）において位置付けられるピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴付けられる（図７）。
【００５２】
本発明のプロセスによって得られるガレートエピカテキン類は、（ａ）ＥＧＣＧ水和物  （ｂ）ＥＣＧ  （ｃ）イソニコチン酸  （ｄ）緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）から得られた水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体  （ｅ）緑茶粕から得られた粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体のＸＲＰＤオーバーレイ（下から上）によって確認される（図８）。
【００５３】
緑茶粕から得られた粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体は、プロトンＮＭＲによって確認される（図９）。
緑茶粕から得られた純粋なガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の存在を示すＨＰＬＣは、ＥＧＣＧ（７６．８０１％）、ＥＣＧ（２０．７８８％）（＞９７％ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ））の純度を指し示す（図１０）。
緑茶粕から得られたガレートカテキン（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）は、プロトンＮＭＲによって確認される（図１１）。
【００５４】
本発明は、以下の例によってさらに説明され、これらの例は、ただ単に本発明の例示のために提供され、および、本発明の範囲を限定することを意図されない。ある改変および均等物は、当業者に明らかであり、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【実施例】
【００５５】
例
緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）からのガロイルまたはガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の産生のためのプロセス：
【００５６】
例１：
ステップ１：水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体の調製：
１０グラムの緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）を、室温にて、８０ｍｌの水中に溶解した。この透明な溶液に、３．０２グラムのイソニコチン酸を添加し、および、１時間後に沈殿を観察し、スラリーが１２時間続いた。水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を濾過し、および、８０ｍｌの水で湿潤ケーキを洗浄し、および吸引乾燥した。水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を、すり鉢およびすりこぎを使用して粉砕し、８．７グラムの微粉末を得た。
【００５７】
ステップ２：水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を破壊して、ガレートエピカテキン類を遊離させる
４２．５ｍｌのエタノールを、８．５グラムの水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体に添加し、および懸濁液は、４５℃で１時間スラリー化した。沈殿を０．４５ミクロンフィルターを使用して濾過し、および、３ｍｌのエタノールで洗浄した。沈殿は、イソニコチン酸として特徴付けられた。エタノール溶液を含有するガレートカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を、減圧下４５℃で蒸発させて、粗製の残渣を得た。次いで、粗製の残渣を、４２．５ｍｌの酢酸エチル中に溶解した。酢酸エチル溶液を、各２８．３ｍｌのブライン溶液で３回処理し、水含量を除去した。不溶性粒子を、接合部(junction)で観察した。酢酸エチル溶液を０．４５μｍフィルターを使用して濾過し、および溶液を減圧下で濃縮した。少量の水を添加後、酢酸エチルを蒸留し、濃縮した水溶液を得た。この濃縮した水溶液を、次いで、凍結乾燥し、≧９７％の純度の、５．３グラムのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を得、それは、≧７５％のＥＧＣＧを含む。
【００５８】
例２：
ステップ−１：水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体の調製：
１０グラムの緑茶抽出物（＞５０％ＥＧＣＧおよび＞９０％のポリフェノール類）を、室温にて８０ｍｌの水中に溶解した。この透明な溶液に、３．０２グラムのイソニコチン酸を添加し、および沈殿を１時間後に観察し、およびスラリーが１２時間続いた。水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を濾過し、および湿潤ケーキを８０  ｍｌの水で洗浄し、および吸引乾燥した。水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を、すり鉢およびすりこぎを使用して粉砕し、８．７グラムの微粉末を得た。
【００５９】
ステップ２：水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を破壊してガレートエピカテキン類を遊離させる
４２．５ｍｌのアセトンを、８．５グラムの水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体に添加し、および、懸濁液は、４５℃で１時間スラリー化した。沈殿を０．４５ミクロンフィルターを使用して濾過し、および３ｍｌのアセトンで洗浄した。沈殿は、イソニコチン酸として特徴付けられた。アセトン溶液を含有するガレートカテキン（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を、減圧下４５℃で蒸発させて、粗製の残渣を得た。次いで、粗製の残渣を、４２．５ｍｌの酢酸エチル中に溶解した。酢酸エチル溶液を、各２８．３ｍｌのブライン溶液で３回処理し、水含量を除去した。不溶性粒子を、接合部で観察した。酢酸エチル溶液を０．４５μｍフィルターを使用して濾過し、および溶液を減圧下で濃縮した。少量の水の添加後、酢酸エチルを蒸留して、濃縮した水溶液を得た。この濃縮水溶液を、次いで、凍結乾燥し、≧９７％の純度の、５．５グラムのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を得、これは、≧７５％のＥＧＣＧを含む。
【００６０】
緑茶粕からのガロイルまたはガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）の産生のためのプロセス：
例３：
ステップ１：粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を得るためのプロセス
６０グラムの緑茶粕を、４５０ｍｌの水性アセトン（アセトン：水比率２：１）（茶：溶媒比率１：７．５）を用いて、５０℃で３時間抽出した。不溶性材料を濾過した。上清の緑茶抽出溶液を、減圧下４０℃で９０ｍｌまで濃縮し、次いで濃縮された水溶液を、２５℃で１０分間遠心分離し（７０００ｒｐｍ）、いずれかの不溶性材料を除去した。３．９９９グラムのイソニコチン酸および０．５４０グラムの水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体シード材料を、上記の透明な溶液に添加し、沈殿を１時間後に観察し、およびスラリーが１２時間続いた。粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を濾過し、および湿潤ケーキを９０ｍｌの水で洗浄し、および吸引乾燥した。粗製の複合体を、すり鉢およびすりこぎを使用して粉砕し、９．２４グラムの微粉末を得た。材料は、粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体（水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体およびイソニコチン酸の混合物）として特徴付けられた。
【００６１】
ステップ２：粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を破壊してガレートエピカテキン類を得る
８．７グラムの粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を、１７４ｍｌの酢酸エチル中に懸濁し、および５０℃で２時間スラリー化した。部分的に精製された複合体を濾過し、３５ｍｌのアセトンを、７グラムの部分的に精製された水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体に添加し、懸濁液を、４５℃で１時間スラリー化した。沈殿を０．４５ミクロンフィルターを使用して濾過し、および３ｍｌのアセトンで洗浄した。沈殿を、イソニコチン酸として特徴付けた。アセトン溶液を含有するガレートカテキン（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を、減圧下４５℃で蒸発させ、粗製の残渣を得た。次いで、粗製の残渣を、３５ｍｌの酢酸エチル中に溶解した。酢酸エチル溶液を、各２３．３ｍｌのブライン溶液を用いて３回処理し、水含量を除去した。不溶性粒子を接合部で観察した。酢酸エチル溶液を、０．４５μｍフィルターを使用して濾過し、および溶液を減圧下で濃縮した。少量の水を添加した後、酢酸エチルを蒸留し、濃縮した水溶液を得た。この濃縮した水溶液を、次いで、凍結乾燥し、≧９７％の純度の、３．４グラムのガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を得、これは、≧７５％のＥＧＣＧを含む。
【００６２】
例４：
ステップ１：粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を得るためのプロセス
６０グラムの緑茶粕を、６００ｍｌの水性エタノール（エタノール：水比率１：１）（茶：溶媒比率１：１０）で、５０℃で３時間抽出した。不溶性材料を濾過した。上清の緑茶抽出溶液を、減圧下４０℃で、９０ｍｌまで濃縮し、次いで濃縮した水溶液を、２５℃で１０ｍｉｎ遠心分離し（７０００ｒｐｍ）、いずれかの不溶性材料を除去した。４グラムのイソニコチン酸および０．５４０グラムの水和型ガロイルカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体シード材料を、上記の透明な溶液に添加し、および沈殿を１時間後に観察し、およびスラリーが１２時間続いた。粗製の水和型ガロイルカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体を濾過し、および湿潤ケーキを９０ｍｌの水で洗浄し、および吸引乾燥した。粗製の複合体を、すり鉢およびすりこぎを使用して粉砕し、７．６ｇｍｓの微粉末を得た。材料は、粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体（水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体およびイソニコチン酸の混合物）として特徴付けられた。
【００６３】
ステップ２：粗製の水和型ガレートエピカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体を破壊してガレートエピカテキン類を得る
７グラムの粗製の水和型ガロイルカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）−イソニコチン酸複合体−１を、１４０ｍｌの酢酸エチル中に懸濁し、および５０℃で２時間スラリー化した。部分的に精製された複合体を濾過し、２５ｍｌのエタノールを、５グラムの部分的に精製された水和型ガロイルカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）イソニコチン酸複合体に添加し、および懸濁液を、４５℃で１時間スラリー化した。沈殿を、０．４５ミクロンフィルターを使用して濾過し、および３ｍｌのエタノールで洗浄した。沈殿を、イソニコチン酸として特徴付けた。エタノール溶液を含有するガロイルカテキン（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を、減圧下４５℃で蒸発させて、粗製の残渣を得た。次いで、粗製の残渣を、２５ｍｌの酢酸エチル中で溶解した。酢酸エチル溶液を、各１６．６ｍｌのブライン溶液で３回処理し、水含量を除去した。不溶性粒子を接合部で観察した。酢酸エチル溶液を、０．４５μｍフィルターを使用して濾過し、および溶液を減圧下で濃縮した。少量の水の添加後、酢酸エチルを蒸留し、濃縮された水溶液を得た。この濃縮した水溶液を、次いで、凍結乾燥して、≧９７％の純度で、２．３グラムのガロイルカテキン類（ＥＧＣＧおよびＥＣＧ）を得、それは、≧７５％のＥＧＣＧを含む。
【図１】
2021505210.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2021505210.tif 000013
【図１０】
2021505210.tif 000014
【図１１】
2021505210.tif 000015
【国際調査報告】
2021505210.tif 000016
2021505210.tif 000017