(57)【要約】（ｉ）ＴＧＦベータ阻害剤と、（ｉｉ）ＣＳＦ１ＲまたはＣＣＲ２に結合する結合部分と、を含む多重特異性分子、及びその使用方法が開示される。本開示は、とりわけ、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分、または第１の骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）、及び（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分、または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）、を含む新規多重特異性分子に関し、第１と第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は異なる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された多重特異性分子、例えば、二重特異性または三重特異性の分子であって、
（ｉ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤と、
（ｉｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）または抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）と、
（ｉｉｉ）腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）とを含む、
前記多重特異性分子。
【請求項２】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦ−ベータ１、
（ｉｉ）ＴＧＦ−ベータ２、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ３、
のうちの１つ、２つ、または全ての活性を低減し、
任意で、前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ａ）ＴＧＦ−ベータ１及びＴＧＦ−ベータ３、または
（ｂ）ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、及びＴＧＦ−ベータ３（例えば、図７に関して実施例３に記載される方法を用いて測定されるとき）
の活性を低減する、請求項１に記載の多重特異性分子。
【請求項３】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ−ベータ受容体の細胞外ドメイン、または、その機能的バリアント）を含む、請求項１または２に記載の多重特異性分子。
【請求項４】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ１ポリペプチド）、
（ｉｉ）ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ２ポリペプチド）、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ３ポリペプチド）、
のうちの１つ、２つ、または全てを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤がＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、任意で前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
（ｉｉ）配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１、もしくは１２２の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤がＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、任意で前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
（ｉｉ）配列番号９８、９９、１２３、もしくは１２４の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、１０２、及び１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項７】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤がＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、任意で前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
（ｉｉ）配列番号１０６、１０７、１２５、もしくは１２６の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項８】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドを含み、任意で前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチド、
（ｉｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、または
（ｉｉｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチド、
を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項９】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ヘテロ二量体を形成する２つのＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドを含み、任意で前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ヘテロ二量体化を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドとＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、
（ｉｉ）ヘテロ二量体化を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドとＴＧＦＢＲ３ポリペプチド、または
（ｉｉｉ）ヘテロ二量体化を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチドとＴＧＦＢＲ３ポリペプチド、
を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１０】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１１】
前記多重特異性分子が、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１−Ｆｃ領域）及び第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１−Ｆｃ領域）を含み、任意で、
（ｉ）前記第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１−Ｆｃ領域）例えば、前記第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１−Ｆｃ領域）のＣ末端に連結され、
（ｉｉ）前記第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１−Ｆｃ領域）例えば、前記第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１−Ｆｃ領域）のＣ末端に連結され、
任意で、前記第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドと前記第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドがホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成し、任意で、前記第１または第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含み、
任意で、前記多重特異性分子が図６Ａまたは６Ｂの構成を有する、
請求項１０に記載の多重特異性分子。
【請求項１２】
前記多重特異性分子が、
（ｉ）配列番号１９２のアミノ酸配列及び配列番号１９３のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１９２のアミノ酸配列及び配列番号１９５のアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列及び配列番号１９３のアミノ酸配列、または
（ｉｖ）配列番号１９４のアミノ酸配列及び配列番号１９５のアミノ酸配列、
を含む、請求項１１に記載の多重特異性分子。
【請求項１３】
前記多重特異性分子が重鎖定常領域１（ＣＨ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、任意で、
（ｉ）前記第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記ＣＨ１、例えば、前記ＣＨ１のＮ末端に連結され、
（ｉｉ）前記第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記ＣＬ、例えば前記ＣＬのＮ末端に連結され、
任意で、前記第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドと前記第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドがホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成し、任意で、前記第１または第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含み、
任意で、前記多重特異性分子が図６Ｃまたは６Ｄの構成を有する、
請求項１０に記載の多重特異性分子。
【請求項１４】
前記多重特異性分子が、
（ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列及び配列番号１９８のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列及び配列番号１９９のアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列及び配列番号１９８のアミノ酸配列、または
（ｉｖ）配列番号１９７のアミノ酸配列及び配列番号１９９のアミノ酸配列、
を含む、請求項１３に記載の多重特異性分子。
【請求項１５】
抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１６】
抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１７】
前記腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）が、ＰＤ−Ｌ１、メソセリン、ＣＤ４７、ガングロシド２（ＧＤ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、Ｒｏｎキナーゼ、ｃ−Ｍｅｔ、未熟ラミニン受容体、ＴＡＧ−７２、ＢＩＮＧ−４、カルシウム依存性塩素チャネル２、サイクリン−Ｂ１、９Ｄ７、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ−１、サバイビン、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／−２、ＭＣ１Ｒ、β−カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ−Β受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ−１、ＣＡ−１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、β−カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン−４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８−１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（インテグリンアルファＶベータ３、インテグリンアルファ５ベータ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、またはＲＡＮＫＬに結合する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１８】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、または腫瘍標的化抗体分子が、独立して、完全抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖を含む抗体）、または抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、もしくはダイアボディ（ｄＡｂ））である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１９】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、または腫瘍標的化抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはそれらのフラグメントから選択される重鎖定常領域を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２０】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、または腫瘍標的化抗体分子が、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域、またはそれらのフラグメントから選択される軽鎖定常領域を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２１】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子が、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、前記腫瘍標的化抗体分子が、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２２】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子が、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、前記腫瘍標的化抗体分子が、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２３】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子と前記腫瘍標的化抗体分子が、共通の軽鎖可変領域を有する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２４】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４の重鎖定常領域、より具体的には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２５】
前記重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、腫瘍標的化抗体分子に結合、例えば共有結合している、請求項２４に記載の多重特異性分子。
【請求項２６】
前記重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させる１つ以上の変異を含む、請求項２４または２５に記載の多重特異性分子。
【請求項２７】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子が、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、前記腫瘍標的化抗体分子が第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、前記第１の重鎖定常領域が、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、前記第１の重鎖定常領域と前記第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含み、及び／または前記第２の重鎖定常領域が、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、前記第２の重鎖定常領域と前記第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２８】
前記第１及び前記第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）が、対形成した空洞−突起（「ノブインホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つ以上を含み、それにより、ヘテロ多量体：ホモ多量体を、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、より大きな比率で形成する、請求項２７に記載の多重特異性分子。
【請求項２９】
前記第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置でアミノ酸置換を含む、請求項２７または２８に記載の多重特異性分子。
【請求項３０】
前記第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、もしくはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞もしくはホールに対応する）、またはＴ３６６ＷもしくはＳ３５４Ｃ（例えば、突起もしくはノブに対応する）、あるいはそれらの組み合わせ（付番はＥｕ付番システムに基づく）から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３１】
リンカーをさらに含み、任意で、前記リンカーが、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、フレキシブルリンカー、リジッドリンカー、ヘリカルリンカー、または非ヘリカルリンカーから選択され、任意で、前記リンカーが、ペプチドリンカーであり、任意で、前記ペプチドリンカーが、Ｇｌｙ及びＳｅｒを含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３２】
単離された多重特異性分子であって、
（ｉ）ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）と、
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）と、
（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤と、
を含む、前記多重特異性分子。
【請求項３３】
前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、及び、前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が、独立して、完全抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖を含む抗体）、または抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、もしくはダイアボディ（ｄＡｂ））である、請求項３２に記載の多重特異性分子。
【請求項３４】
前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、及び／または、前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域、またはそれらのフラグメントから選択される軽鎖定常領域を含む、請求項３２または３３に記載の多重特異性分子。
【請求項３５】
（ｉ）前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）が、カッパ軽鎖定常領域もしくはそのフラグメントを含み、前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が、ラムダ軽鎖定常領域もしくはそのフラグメントを含むか、または
（ｉｉ）前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）が、ラムダ軽鎖定常領域もしくはそのフラグメントを含み、前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が、カッパ軽鎖定常領域もしくはそのフラグメントを含む、
請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３６】
前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）と前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が、共通の軽鎖可変領域を有する、請求項３２〜３５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３７】
前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、及び／または、前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１領域及びＦｃ領域）、またはそれらのフラグメントを含む、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３８】
前記重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させる１つ以上の変異を含む、請求項３７に記載の多重特異性分子。
【請求項３９】
前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）が第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、前記第１の重鎖定常領域が、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、前記第１の重鎖定常領域と前記第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含み、及び／または前記第２の重鎖定常領域が、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、前記第２の重鎖定常領域と前記第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含む、請求項３２〜３８のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４０】
前記第１及び前記第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）が、対形成した空洞−突起（「ノブインホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つ以上を含み、それにより、ヘテロ多量体：ホモ多量体を、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、より大きな比率で形成する、請求項３９に記載の多重特異性分子。
【請求項４１】
前記第１及び／または前記第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置でアミノ酸置換を含む、請求項３９または４０に記載の多重特異性分子。
【請求項４２】
前記第１及び／または前記第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、もしくはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞もしくはホールに対応する）、またはＴ３６６ＷもしくはＳ３５４Ｃ（例えば、突起もしくはノブに対応する）、あるいはそれらの組み合わせ（付番はＥｕ付番システムに基づく）から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４３】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦ−ベータ１、
（ｉｉ）ＴＧＦ−ベータ２、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ３、
のうちの１つ、２つ、または全ての活性を低減し、
任意で、前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ａ）ＴＧＦ−ベータ１及びＴＧＦ−ベータ３、または
（ｂ）ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、及びＴＧＦ−ベータ３
の活性を低減する、請求項３２〜４２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４４】
（ｉ）前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）または前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）に連結されているか、または
（ｉｉ）前記多重特異性分子が、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、前記第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結され、前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）に連結されている、
請求項３２〜４３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４５】
（ｉ）前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）が第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域及び第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含む第１の重鎖ポリペプチド）ならびに第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、第１の軽鎖可変領域及び第１の軽鎖定常領域を含む第１の軽鎖ポリペプチド）を含み、
（ｉｉ）前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）が第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域及び第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含む第２の重鎖ポリペプチド）ならびに第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖可変領域及び第２の軽鎖定常領域を含む第２の軽鎖ポリペプチド）を含み、
（ａ）前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記第１の重鎖ポリペプチド（例えば、前記第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、前記第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）、または前記第２の重鎖ポリペプチド（例えば、前記第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、前記第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結されるか、
（ｂ）前記多重特異性分子が、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、前記第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記第１の重鎖ポリペプチド（例えば、前記第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、前記第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結され、前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記第２の重鎖ポリペプチド（例えば、前記第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、前記第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結されるか、
（ｃ）前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、前記第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、前記第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）、または前記第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、前記第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、前記第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結されるか、または
（ｄ）前記多重特異性分子が、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、前記第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、前記第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、前記第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結され、前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して前記第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、前記第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、前記第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結されている、
請求項３２〜４４のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４６】
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含む前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含む前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分の第２の部分と、任意で（２）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）（１）第２のＶＨ、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む前記ＰＤ−Ｌ１結合部分の第１の部分と、任意で（２）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤とを含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第２のＶＬ及び第２のＣＬを含む前記ＰＤ−Ｌ１結合部分の第２の部分を含む第４のポリペプチド、
を含み、前記多重特異性分子が、前記第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤または前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤のうちの少なくとも１つを含み、任意で、前記第１及び前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する、
請求項３２〜４５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４７】
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含む前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含む前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分の第２の部分と、任意で（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含むＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、ｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド、
を含み、任意で、前記第１及び前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する、
請求項３２〜４５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４８】
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含む前記ＰＤ−Ｌ１結合部分の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含む前記ＰＤ−Ｌ１結合部分の第２の部分と、任意で（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含むＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、ｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド、
を含み、任意で、前記第１及び前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する、
請求項３２〜４５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４９】
（ｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第１のＣＬを含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３と、（２）第１のＶＨ及び第１のＶＬを含む前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、第１のｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）（１）第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含む前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、第２のｓｃＦｖ）とを含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド、
を含み、任意で、前記第１及び前記第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成し、及び／または前記第３及び前記第４の第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する、
請求項３２〜４５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５０】
（ｉ）（１）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３と、（２）第１のＶＨ及び第１のＶＬを含む前記ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、第１のｓｃＦｖ）とを含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含む前記ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、第２のｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
を含む、請求項３２〜４５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５１】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または前記第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ−ベータ受容体の細胞外ドメイン、もしくは、その機能的バリアント）を含む、請求項３２〜５０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５２】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または前記第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ１ポリペプチド）、
（ｉｉ）ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ２ポリペプチド）、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ３ポリペプチド）、
のうちの１つ、２つ、または全てを含む、請求項３２〜５１のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５３】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または前記第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
（ｉｉ）配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１、もしくは１２２の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
を含む、請求項３２〜５２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５４】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または前記第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
（ｉｉ）配列番号９８、９９、１２３、もしくは１２４の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、１０２、及び１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
を含む、請求項３２〜５３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５５】
前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または前記第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、前記ＴＧＦ−ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
（ｉｉ）配列番号１０６、１０７、１２５、もしくは１２６の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）、
を含む、請求項３２〜５４のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５６】
第１、第２、第３、及び第４の非隣接ポリペプチドを含み、前記第１、第２、第３、及び第４の非隣接ポリペプチドが、
それぞれ配列番号１７６、１３８、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７６、１３８、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７６、１３８、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７６、１３８、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７６、１３８、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７６、１３８、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７７、１５０、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７７、１５０、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７７、１５０、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７７、１５０、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７７、１５０、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７７、１５０、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７８、１５２、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７８、１５２、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７８、１５２、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７８、１５２、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７８、１５２、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７８、１５２、１９０、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７９、１３８、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７９、１３８、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７９、１３８、１８７、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７９、１３８、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７９、１３８、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７９、１３８、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８０、１５０、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８０、１５０、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８０、１５０、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８０、１５０、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８０、１５０、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８０、１５０、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８１、１５２、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８１、１５２、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８１、１５２、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８１、１５２、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８１、１５２、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１８１、１５２、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４５、１４７、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５３、１４７、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５４、１４７、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４６、１４８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５５、１４８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５６、１４８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４５、１４７、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５３、１４７、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５４、１４７、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４６、１４８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５５、１４８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５６、１４８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４５、１４７、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５３、１４７、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５４、１４７、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４６、１４８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５５、１４８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５６、１４８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４５、１４７、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５３、１４７、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５４、１４７、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４６、１４８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５５、１４８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５６、１４８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３７、１３８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３９、１３８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４９、１５０、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５１、１５２、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３７、１３８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３９、１３８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４９、１５０、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５１、１５２、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３７、１３８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３９、１３８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４９、１５０、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５１、１５２、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３７、１３８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１３９、１３８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４９、１５０、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５１、１５２、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６６、１６１、１７２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６７、１６１、１７２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６８、１６１、１７２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６６、１６１、１７３、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６７、１６１、１７３、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６８、１６１、１７３、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６９、１４１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７０、１４１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７１、１４１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６９、１４１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７０、１４１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１７１、１４１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６６、１６１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６７、１６１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６８、１６１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６６、１６１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６７、１６１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６８、１６１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６６、１４１、１７４、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６７、１４１、１７４、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６８、１４１、１７４、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６６、１４１、１７５、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６７、１４１、１７５、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
または、それぞれ配列番号１６８、１４１、１７５、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
のアミノ酸配列を含む、請求項３２〜５５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５７】
第１及び第２の非隣接ポリペプチドを含み、前記第１及び前記第２の非隣接ポリペプチドが、
それぞれ配列番号１４２及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１４２及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５７及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５７及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５８及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１５８及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６３及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６３及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６４及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６４及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
それぞれ配列番号１６５及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
またはそれぞれ配列番号１６５及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、
のアミノ酸配列を含む、請求項３２〜５５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５８】
請求項１〜５７のいずれか１項に記載の多重特異性分子をコードする単離された核酸分子。
【請求項５９】
請求項５８に記載の核酸分子を含むベクター、例えば発現ベクター。
【請求項６０】
請求項５８に記載の核酸分子、または請求項５９に記載のベクターを含む細胞、例えば宿主細胞。
【請求項６１】
請求項１〜５７のいずれか１項に記載の多重特異性分子を作製、例えば生成する方法であって、適切な条件下、例えば、遺伝子発現及び／またはヘテロ二量体化に適した条件下で、請求項６０に記載の細胞、例えば宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項６２】
請求項１〜５７のいずれか一項に記載の多重特異性分子と、医薬的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項６３】
対象においてがんを治療する方法であって、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の多重特異性分子を、それを必要とする前記対象に投与することを含み、前記多重特異性分子が、前記がんを治療するのに有効な量で投与される、前記方法。
【請求項６４】
前記がんが固形腫瘍がんまたは転移性病変であり、任意で前記固形腫瘍がんが、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌もしくは非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（例えば、神経膠腫）のうちの１つ以上である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記がんが血液癌または転移性病変であり、任意で前記血液癌が、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、多発性骨髄腫、または急性リンパ性白血病のうちの１つ以上である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
第２の治療的処置を投与することをさらに含む、請求項６３〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記第２の治療的処置が治療剤（例えが、化学療法剤、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または外科手術を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記治療剤がチェックポイント阻害剤である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、及び抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年１２月８日に出願された米国第６２／５９６，１７３号の優先権を主張し、その出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１８年１２月６日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｅ２０７０−７０２０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、６０３，５４１バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を標的とする多重特異性分子及びそれを使用する方法が開示される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本開示は、とりわけ、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分、または第１の骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）、及び（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分、または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）、を含む新規多重特異性分子に関し、第１と第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は異なる。理論に拘束されることなく、本明細書に開示される多重特異性分子は、ＴＡＭ及び／またはＭＤＳＣを枯渇させることが予期される。したがって、本明細書では、とりわけ、前述の部分を含む多重特異性分子（例えば、多重特異性抗体分子）、それをコードする核酸、前述の分子を生成する方法、及び前述の分子を使用してがんを治療する方法が提供される。
【０００５】
一態様では、本明細書で提供されるのは、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分、または第１の骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）、及び（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分、または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）を含む単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子であり、第１と第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は異なる。
【０００６】
いくつかの実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は第１のＭＤＳＣ結合部分であり、第２のＩＭＣ結合部分は第２のＭＤＳＣ結合部分である。いくつかの実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は第１のＴＡＭ結合部分であり、第２のＩＭＣ結合部分は第２のＴＡＭ結合部分である。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、または葉酸受容体ベータに結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、または葉酸受容体ベータに結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２（例えば、ヒトのＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２）に結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２（例えば、ヒトのＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２）に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＣＣＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、約１０ｎＭ未満、より典型的には、１０〜１００ｐＭの解離定数でＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、約１０ｎＭ未満、より典型的には、１０〜１００ｐＭの解離定数でＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２の立体配座の、または直鎖状のエピトープに結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２の立体配座の、または直鎖状のエピトープに結合する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は少なくとも２つの非隣接ポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は、第１の抗ＩＭＣ抗体分子を含み、及び／または第２のＩＭＣ結合部分は、第２の抗ＩＭＣ抗体分子を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子及び第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、独立して、完全抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖を含む抗体）、または抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、もしくはダイアボディ（ｄＡｂ））である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子及び／または第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはそれらのフラグメントから選択される重鎖定常領域を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子及び／または第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域、またはそれらのフラグメントから選択される軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子は、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子と第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、共通の軽鎖可変領域を有する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４の重鎖定常領域、より具体的には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、第１の抗ＩＭＣ抗体分子と第２の抗ＩＭＣ抗体分子の一方または両方に結合、例えば共有結合される。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能の１つ以上を増加または減少させるために改変、例えば変異導入される。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の界面が改変されて（例えば変異導入されて）、二量体化が、例えば、非操作の界面と比較して、増加または減少する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の二量体化は、第１と第２のＦｃ領域のＦｃ界面に、対形成した空洞−突起（「ノブインホール」、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つ以上を提供することにより増強され、これによって、例えば、非操作の界面と比較して、ヘテロ多量体：ホモ多量体を、より大きな比率で形成する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｅｕ付番システムに基づく付番で、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、もしくはＹ４０７Ｖ（例えば、空洞もしくはホールに対応する）、またはＴ３６６Ｗ（例えば、突起もしくはノブに対応する）、あるいはそれらの組み合わせから選択されるアミノ酸置換を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させる１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子は第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子は第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含み、及び／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）は、対形成した空洞−突起（「ノブインホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つ以上を含み、それにより、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、ヘテロ多量体：ホモ多量体をより大きな比率で形成する。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）は、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）は、Ｅｕ付番システムに基づく付番で、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、もしくはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞もしくはホールに対応する）、またはＴ３６６ＷもしくはＳ３５４Ｃ（例えば、突起もしくはノブに対応する）、あるいはそれらの組み合わせ以下から選択されるアミノ酸置換を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子はリンカー、例えば、第１の抗ＩＭＣ抗体分子と第２の抗ＩＭＣ抗体分子、第１の抗ＩＭＣ抗体分子と重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）、または第２の抗ＩＭＣ抗体分子と重鎖定常領域のうちの１つ以上の間にリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、フレキシブルリンカー、リジッドリンカー、ヘリカルリンカー、または非ヘリカルリンカーから選択される。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーはＧｌｙ及びＳｅｒを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態では、第１のまたは第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む、抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子は、配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９の重鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、第１のまたは第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む、抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２に結合する抗体分子は、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の重鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の軽鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００１７】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号４４の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号４４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号４５の軽鎖可変領域からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号４５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号４８の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号４８のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００１８】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５４の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００１９】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５４の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２０】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２１】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号５９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２２】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６２の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２３】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６２の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２４】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２５】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含むか、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または例えば配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む抗体分子である。
【００２６】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号４４の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号４４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号４５の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号４５のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号４８の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号４８のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００２７】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５４の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６６のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００２８】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５４の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００２９】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５９の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６６のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００３０】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号５９の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００３１】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６２の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６２のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６３のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６６のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００３２】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６２の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６２のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６３のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００３３】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６４の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６５のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６６の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６６のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００３４】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、配列番号６４の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６５のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子であり、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、配列番号６９の重鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列を含むか、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む、抗体分子である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子））をさらに含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子））をさらに含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第３のＴＡＭ結合部分（例えば、抗体分子）を含み、第３のＴＡＭ結合部分は第１及び第２のＴＡＭ結合分子とは異なる。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はヒトＣＣＲ２に結合し、第３のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、腫瘍標的化部分である第３の結合部分（例えば、抗体分子）を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的化部分は、ＰＤ−Ｌ１、メソセリン、ＣＤ４７、ガングロシド２（ＧＤ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、Ｒｏｎキナーゼ、ｃ−Ｍｅｔ、未熟ラミニン受容体、ＴＡＧ−７２、ＢＩＮＧ−４、カルシウム依存性塩素チャネル２、サイクリン−Ｂ１、９Ｄ７、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ−１、サバイビン、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／−２、ＭＣ１Ｒ、β−カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ−Β受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ−１、ＣＡ−１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、β−カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン−４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８−１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（インテグリンアルファＶベータ３、インテグリンアルファ５ベータ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、またはＲＡＮＫＬに結合する。
【００３７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は二重特異性分子であり、
（ｉ）第１のＴＡＭ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２に結合する結合部分）は、第１及び第２の非隣接ポリペプチドを含み、
（ｉｉ）第２のＴＡＭ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２に結合する結合部分）は、第３及び第４の非隣接ポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、任意でリンカーを介して、第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとの会合を促進する第１のドメイン（例えば、第１のＦｃ領域）に接続された、第１のＶＨ、第１のＣＨ１を含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、第１のＶＬ及び第１のＣＬを含み、
（ｃ）第３のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、任意でリンカーを介して、第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとの会合を促進する第２のドメイン（例えば、第２のＦｃ領域）に接続された、第２のＶＨ、第２のＣＨ１を含み、
（ｄ）第４のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、第２のＶＬ及び第２のＣＬを含む。いくつかの実施形態では、第１と第２のドメイン（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。
【００３８】
前述の態様のある特定の実施形態では、多重特異性分子は、ＴＧＦ−ベータ阻害剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータを隔離し、ＴＧＦ−ベータは内因性の膜結合型受容体を介して相互作用することもシグナル伝達することもできなくなる。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ｉ）ＴＧＦ−ベータ１、（ｉｉ）ＴＧＦ−ベータ２、または（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ３のうちの１つ、２つ、または全ての活性を低減する。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ１及びＴＧＦ−ベータ３以下の活性を低減する。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、及びＴＧＦ−ベータ３の活性を低減する。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分もしくは第１のＭＤＳＣ結合部分）、または第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分もしくは第２のＭＤＳＣ結合部分）に連結されている。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）に連結されている。
【００４０】
いくつかの実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）は、第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域及び第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含む第１の重鎖ポリペプチド）を含む第１の抗ＩＭＣ抗体分子（例えば、第１の抗ＴＡＭ抗体分子または第１の抗ＭＤＳＣ抗体分子）を含み、第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）は、第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域及び第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含む第２の重鎖ポリペプチド）ならびに第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖可変領域及び第２の軽鎖定常領域を含む第２の軽鎖ポリペプチド）を含む第２の抗ＩＭＣ抗体分子（例えば、第２の抗ＴＡＭ抗体分子または第２の抗ＭＤＳＣ抗体分子）を含み、
（ａ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の抗ＩＭＣ抗体分子（例えば、第１の抗ＴＡＭ抗体分子もしくは第１の抗ＭＤＳＣ抗体分子）、または第２の抗ＩＭＣ抗体分子（例えば、第２の抗ＴＡＭ抗体分子もしくは第２の抗ＭＤＳＣ抗体分子）に連結されているか、
（ｂ）多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の抗ＩＭＣ抗体分子（例えば、第１の抗ＴＡＭ抗体分子または第１の抗ＭＤＳＣ抗体分子）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第２の抗ＩＭＣ抗体分子（例えば、第２の抗ＴＡＭ抗体分子または第２の抗ＭＤＳＣ抗体分子）に連結されているか、
（ｃ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）、または第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結されているか、
（ｄ）多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結されているか、
（ｅ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）、または第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結されているか、または
（ｆ）多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結されている。
【００４１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含む、第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含む第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）と、任意で（２）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）（１）第２のＶＨ、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）と、任意で（２）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤とを含む第３のポリペプチド、及び
（ｉｖ）第２のＶＬ及び第２のＣＬを含む、第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）の第１の部分を含む第４のポリペプチド、
を含み、
多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤または第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤のうちの少なくとも１つを含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ａ〜１Ｊのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００４２】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含む、第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含む第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含む第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、ｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む第３のポリペプチド、及び
（ｉｖ）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド
を含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図２Ａ〜２Ｄ及び３Ａ〜３Ｄのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００４３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第１のＣＬを含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３と、（２）第１のＶＨ及び第１のＶＬを含む第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、第１のｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）（１）第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含む第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、第２のｓｃＦｖ）とを含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド、
を含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成し、及び／または第３及び第４の第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図４Ａ〜４Ｄのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００４４】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）（１）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３と、（２）第１のＶＨ及び第１のＶＬを含む第１のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分または第１のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、第１のｓｃＦｖ）とを含む第１のポリペプチド、及び
（ｉｉ）（１）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含む第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、第２のｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド
を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図５Ａ〜５Ｂのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００４５】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は二量体を形成する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ−ベータ受容体の細胞外ドメイン、もしくは、その機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ１ポリペプチド）、
（ｉｉ）ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ２ポリペプチド）、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ３ポリペプチド）
のうちの１つ、２つ、または全てを含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１、もしくは１２２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９８、９９、１２３、もしくは１２４の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１００、１０１、１０２、及び１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一である配列）を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０６、１０７、１２５、もしくは１２６の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【００５０】
一態様では、本明細書で開示されるのは、
（ｉ）ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）、及び
（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤
を含む単離された多重特異性分子である。
【００５１】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータを隔離し、ＴＧＦ−ベータは内因性の膜結合型受容体を介して相互作用することもシグナル伝達することもできなくなる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、完全抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖を含む抗体）、または抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、もしくはダイアボディ（ｄＡｂ））である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、完全抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖を含む抗体）、または抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、もしくはダイアボディ（ｄＡｂ））である。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）はカッパもしくはラムダの軽鎖定常領域、またはそれらのフラグメントから選択される軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域、またはそれらのフラグメントから選択される軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）とＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、共通の軽鎖可変領域を有する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１領域及びＦｃ領域）、またはそれらのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１領域及びＦｃ領域）、またはそれらのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させる１つ以上の変異を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、ＰＤ−Ｌ１結合部分（抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含み、及び／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）は、対形成した空洞−突起（「ノブインホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つ以上を含み、それにより、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、ヘテロ多量体：ホモ多量体を、より大きな比率で形成する。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）は、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置でアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、もしくはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞もしくはホールに対応する）、またはＴ３６６ＷもしくはＳ３５４Ｃ（例えば、突起もしくはノブに対応する）、あるいはそれらの組み合わせ（付番はＥｕ付番システムに基づく）から選択されるアミノ酸置換を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９の重鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号４８、配列番号６６、もしくは配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号５０、配列番号６７、もしくは配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号４８の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含むか、または、例えば配列番号４８のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含むか、または、例えば配列番号５０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号４８の重鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号４８のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号５０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含むか、または、例えば配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含むか、または、例えば配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号６６の重鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６６のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６７のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、配列番号６９の重鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号６９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号７０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１０９、配列番号１１１、もしくは配列番号１１３の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１０９、配列番号１１１、もしくは配列番号１１３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号１１０、配列番号１１２、もしくは配列番号１１４の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１１０、配列番号１１２、もしくは配列番号１１４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１０９、配列番号１１１、もしくは配列番号１１３の重鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号１０９、配列番号１１１、もしくは配列番号１１３のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号１１０、配列番号１１２、もしくは配列番号１１４の軽鎖可変領域配列、または、それらと実質的に同一である（例えば、配列番号１１０、配列番号１１２、もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００６０】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１０９の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１０９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号１１０の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１１０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１０９の重鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号１０９のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号１１０の軽鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号１１０のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１１１の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１１１のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号１１２の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１１２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１１１の重鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号１１１のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号１１２の軽鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号１１２のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１１３の重鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１１３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含み、及び／または配列番号１１４の軽鎖可変領域配列からの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、または、例えば配列番号１１４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、もしくは４つを超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲなどの密接に関連するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、配列番号１１３の重鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号１１３のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、または１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含み、及び／または配列番号１１４の軽鎖可変領域配列、または、それと実質的に同一である（例えば、配列番号１１４のアミノ酸配列と９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、
（ｉ）ＴＧＦ−ベータ１、
（ｉｉ）ＴＧＦ−ベータ２、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ３、
のうちの１つ、２つ、または全ての活性を低減し、任意で、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、
（ａ）ＴＧＦ−ベータ１及びＴＧＦ−ベータ３、または
（ｂ）ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、及びＴＧＦ−ベータ３
の活性を低減する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介してＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）またはＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）に連結されている。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介してＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介してＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）に連結されている。
【００６５】
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域及び第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含む第１の重鎖ポリペプチド）と第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、第１の軽鎖可変領域及び第１の軽鎖定常領域を含む第１の軽鎖ポリペプチド）とを含み、ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域及び第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含む第２の重鎖ポリペプチド）と第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖可変領域及び第２の軽鎖定常領域を含む第２の軽鎖ポリペプチド）とを含み、
（ａ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）、または第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結されているか、
（ｂ）多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域、例えば、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域のＣ末端）に連結されているか、
（ｃ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）、または第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結されているか、または
（ｄ）多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第１の軽鎖ポリペプチド（例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第１の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結され、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して第２の軽鎖ポリペプチド（例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域、例えば、第２の軽鎖ポリペプチドの定常領域のＣ末端）に連結されている。
【００６６】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含むＣＳＦ１Ｒ結合部分の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含むＣＳＦ１Ｒ結合部分の第２の部分と、任意で（２）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤とを含む第２のポリペプチド、及び
（ｉｉｉ）（１）第２のＶＨ、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含むＰＤ−Ｌ１結合部分の第１の部分と、任意で（２）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤とを含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第２のＶＬ及び第２のＣＬを含むＰＤ−Ｌ１結合部分の第２の部分を含む第４のポリペプチド、
を含み、
多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤または第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤のうちの少なくとも１つを含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ａ〜１Ｊのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含むＣＳＦ１Ｒ結合部分の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含むＣＳＦ１Ｒ結合部分の第２の部分と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含むＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、ｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む第３のポリペプチド、及び
（ｉｖ）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド；
を含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図２Ａ〜２Ｄのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００６８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は：
（ｉ）第１のＶＬ及び第１のＣＬを含むＰＤ−Ｌ１結合部分の第１の部分を含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第１のＶＨ、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３を含むＰＤ−Ｌ１結合部分の第２の部分と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含むＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、ｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３を含む第３のポリペプチド、及び
（ｉｖ）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド
を含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図３Ａ〜３Ｄのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は：
（ｉ）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第１のＣＬを含む第１のポリペプチド、
（ｉｉ）（１）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第１のＣＨ１、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３と、（２）第１のＶＨ及び第１のＶＬを含むＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、第１のｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド、
（ｉｉｉ）（１）第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ１、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含むＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、第２のｓｃＦｖ）とを含む第３のポリペプチド、
（ｉｖ）第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＣＬを含む第４のポリペプチド
を含み、任意で、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成し、及び／または第３及び第４の第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図４Ａ〜４Ｄのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、
（ｉ）（１）第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第１のＣＨ２、及び第１のＣＨ３と、（２）第１のＶＨ及び第１のＶＬを含むＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、第１のｓｃＦｖ）とを含む第１のポリペプチド、及び
（ｉｉ）（１）第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＣＨ２、及び第２のＣＨ３と、（２）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含むＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、第２のｓｃＦｖ）とを含む第２のポリペプチド
を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図５Ａ〜５Ｂのうちのいずれか１つの構成を有する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は二量体を形成する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ−ベータ受容体の細胞外ドメイン、もしくは、その機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ１ポリペプチド）、
（ｉｉ）ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ２ポリペプチド）、または
（ｉｉｉ）ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＴＧＦＢＲ３ポリペプチド）
のうちの１つ、２つ、または全てを含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１、もしくは１２２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９８、９９、１２３、もしくは１２４の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１００、１０１、１０２、及び１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一である配列）を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０６、１０７、１２５、もしくは１２６の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、または第１、第２、第３、もしくは第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、例えば、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一な配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【００７６】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそのバリアント）及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそのバリアント）を含み、
（ｉ）ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）は、第１及び第２の非隣接ポリペプチドを含み、
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）は、第３及び第４の非隣接ポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、任意でリンカーを介して、第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとの会合を促進する第１のドメイン（例えば、第１のＦｃ領域）に接続された、第１のＶＨ、第１のＣＨ１を含み、第１のドメインのＣ末端（例えば、第１のＦｃ領域のＣ末端）は、任意でリンカーを介して、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそのバリアント）へと接続され、
（ｂ）第２のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−の方向で、第１のＶＬ及び第１のＣＬを含み、
（ｃ）第３のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、任意でリンカーを介して、第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとの会合を促進する第２のドメイン（例えば、第２のＦｃ領域）に接続された、第２のＶＨ、第２のＣＨ１を含み、第２のドメインのＣ末端（例えば、第２のＦｃ領域のＣ末端）は、任意でリンカーを介して、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそのバリアント）へと接続され、
（ｄ）第４のポリペプチドは、例えば、Ｎ−からＣ−の方向で、第２のＶＬ及び第２のＣＬを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のドメイン（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤（例えば、第１及び第２のＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそのバリアント）は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。
【００７７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１、第２、第３、及び第４の非隣接ポリペプチドを含み、第１、第２、第３、及び第４の非隣接ポリペプチドは、それぞれ配列番号１７６、１３８、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７６、１３８、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７６、１３８、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７６、１３８、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７６、１３８、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７６、１３８、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７７、１５０、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７７、１５０、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７７、１５０、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７７、１５０、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７７、１５０、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７７、１５０、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７８、１５２、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７８、１５２、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７８、１５２、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７８、１５２、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７８、１５２、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７８、１５２、１９０、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７９、１３８、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７９、１３８、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７９、１３８、１８７、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７９、１３８、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７９、１３８、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７９、１３８、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８０、１５０、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８０、１５０、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８０、１５０、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８０、１５０、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８０、１５０、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８０、１５０、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８１、１５２、１８５、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８１、１５２、１８６、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８１、１５２、１８７、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８１、１５２、１８８、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８１、１５２、１８９、及び１４７、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１８１、１５２、１９０、及び１４８、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４５、１４７、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５３、１４７、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５４、１４７、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４６、１４８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５５、１４８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５６、１４８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４５、１４７、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５３、１４７、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５４、１４７、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４６、１４８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５５、１４８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５６、１４８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４５、１４７、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５３、１４７、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５４、１４７、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４６、１４８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５５、１４８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５６、１４８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４５、１４７、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５３、１４７、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５４、１４７、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４６、１４８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５５、１４８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５６、１４８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３７、１３８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３９、１３８、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４９、１５０、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５１、１５２、１４０、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３７、１３８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３９、１３８、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４９、１５０、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５１、１５２、１４０、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３７、１３８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３９、１３８、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４９、１５０、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５１、１５２、１６２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３７、１３８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１３９、１３８、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４９、１５０、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５１、１５２、１６２、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６６、１６１、１７２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６７、１６１、１７２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６８、１６１、１７２、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６６、１６１、１７３、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６７、１６１、１７３、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６８、１６１、１７３、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６９、１４１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、そ
れと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７０、１４１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７１、１４１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６９、１４１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７０、１４１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１７１、１４１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６６、１６１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６７、１６１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６８、１６１、１７４、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６６、１６１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６７、１６１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６８、１６１、１７５、及び１４１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６６、１４１、１７４、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６７、１４１、１７４、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６８、１４１、１７４、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６６、１４１、１７５、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６７、１４１、１７５、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列；またはそれぞれ配列番号１６８、１４１、１７５、及び１６１、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、のアミノ酸配列を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１及び第２の非隣接ポリペプチドを含み、第１及び第２の非隣接ポリペプチドは、それぞれ配列番号１４２及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１４２及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５７及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５７及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５８及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１５８及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６３及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６３及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６４及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６４及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、それぞれ配列番号１６５及び１４３、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、またはそれぞれ配列番号１６５及び１４４、もしくはそれと実質的に同一（例えば、それと８５％〜９９％同一）な配列、のアミノ酸配列を含む。
【００７９】
（ｉ）ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）、及び（ｉｉｉ）１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子が、図１Ａ〜１Ｊ、２Ａ〜２Ｄ、３Ａ〜３Ｄ、４Ａ〜４Ｄ、及び５Ａ〜５Ｂに示されている。
【００８０】
図１Ａ〜１Ｊは、ＣＳＦ１Ｒに対するＦａｂ及びＰＤ−Ｌ１に対するＦａｂを含む多重特異性分子を示す略図である。抗ＣＳＦ１Ｒ  ＦａｂのＣＨ１ドメインは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域に連結され、これは任意で、リンカーを介して、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤にさらに連結されている。同様に、抗ＰＤ−Ｌ１  ＦａｂのＣＨ１ドメインは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域に連結され、これは任意で、リンカーを介して、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤にさらに連結されている。
【００８１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ａの構成を有する。図１Ａにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ）ａ、（ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ）ｂ、及び（ＴＧＦＢＲ３  ＥＣＤ）ｃまたはそれらのバリアントを含み、ここで、ａ≧０、ｂ≧０、及びｃ≧０である。様々な細胞外ドメインは、例えば、１つ以上のリンカーを介して、任意の順序で連結できる。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ）ｄ、（ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ）ｅ、及び（ＴＧＦＢＲ３  ＥＣＤ）ｆまたはそれらのバリアントを含み、ここで、ｄ≧０、ｅ≧０、及びｆ≧０である。様々な細胞外ドメインは、例えば、１つ以上のリンカーを介して、任意の順序で連結できる。ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、またはｆのうちの少なくとも１つはゼロではない。細胞外ドメインの例示的な配置には、Ｎ−からＣ−の方向で、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ；ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ；ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ；ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、及びＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ；ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ；ならびにＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、ＴＧＦＢＲ３  ＥＣＤが含まれるがこれらに限定されない：。
【００８２】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｂの構成を有する。図１Ｂにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｃの構成を有する。図１Ｃにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ヘテロ二量体）を形成する。
【００８４】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｄの構成を有する。図１Ｄにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体を形成する（例えば、ヘテロ二量体）。
【００８５】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｅの構成を有する。図１Ｅにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【００８６】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｆの構成を有する。図１Ｆにおいて、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【００８７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｇの構成を有する。図１Ｇにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ）２またはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、２つのＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤは、例えばリンカーを介して連結されている。２つのＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤは、同一であっても異なっていてもよい。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【００８８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｈの構成を有する。図１Ｈにおいて、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ）２またはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、２つのＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤは、例えばリンカーを介して連結されている。２つのＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤは、同一であっても異なっていてもよい。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【００８９】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｉの構成を有する。図１Ｉにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤは、例えばリンカーを介して、いずれかの順序で（例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤに続いてＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、またはＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤに続いてＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ）で、連結されている。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【００９０】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図１Ｊの構成を有する。図１Ｊにおいて、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤは、例えばリンカーを介して、いずれかの順序で（例えば、Ｎ−からＣ−への方向で、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤに続いてＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、またはＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤに続いてＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ）で、連結されている。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【００９１】
図２Ａ〜２Ｄは、ＣＳＦ１Ｒに対するＦａｂ、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖ、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む多重特異性分子を示す概略図である。抗ＣＳＦ１Ｒ  ＦａｂのＣＨ１ドメインは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域に連結され、これは任意で、リンカーを介して、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖにさらに連結されている。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、ＣＨ１ドメインに連結され、これは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域にさらに連結されている。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、ＣＬドメインに連結されている。
【００９２】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図２Ａの構成を有する。図２Ａにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図２Ｂの構成を有する。図２Ｂにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ヘテロ二量体）を形成する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図２Ｃの構成を有する。図２Ｃにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ヘテロ二量体）を形成する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図２Ｄの構成を有する。図２Ｄにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【００９６】
図３Ａ〜３Ｄは、ＰＤ−Ｌ１に対するＦａｂ、ＣＳＦ１Ｒに対するｓｃＦｖ、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む多重特異性分子を示す概略図である。抗ＰＤ−Ｌ１  ＦａｂのＣＨ１ドメインは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域に連結され、これは任意で、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ  ｓｃＦｖにさらに連結されている。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、ＣＨ１ドメインに連結され、これは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域にさらに連結されている。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、ＣＬドメインに連結されている。
【００９７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図３Ａの構成を有する。図３Ａにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【００９８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図３Ｂの構成を有する。図３Ｂにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ヘテロ二量体）を形成する。
【００９９】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図３Ｃの構成を有する。図３Ｃにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ヘテロ二量体）を形成する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図３Ｄの構成を有する。図３Ｄにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【０１０１】
図４Ａ〜４Ｄは、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖ、ＣＳＦ１Ｒに対するｓｃＦｖ、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤、第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤、及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む多重特異性分子を示す概略図である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第１のＣＬに連結されている。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第１のＣＨ１に連結され、これは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域にさらに連結され、これは、例えば、リンカーを介して、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖにさらに連結されている。第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第２のＣＨ１に連結され、これは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域にさらに連結され、これは、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ  ｓｃＦｖにさらに連結されている。第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第２のＣＬに連結されている。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図４Ａの構成を有する。図４Ａにおいて、第１、第２、第３、及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１、第２、第３、及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。いくつかの実施形態では、第３及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図４Ｂの構成を有する。図４Ｂにおいて、第１、第２、第３、及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１、第２、第３、及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。いくつかの実施形態では、第３及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図４Ｃの構成を有する。図４Ｃにおいて、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第３及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。第３と第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。いくつかの実施形態では、第３及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成する。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図４Ｄの構成を有する。図４Ｄにおいて、第２及び第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第１及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第２と第３のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。第１と第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体（例えば、ヘテロ二量体）を形成する。いくつかの実施形態では、第３及び第４のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、二量体を形成する（例えば、ヘテロ二量体）。
【０１０６】
図５Ａ〜５Ｂは、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖ、ＣＳＦ１Ｒに対するｓｃＦｖ、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤、及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む多重特異性分子を示す概略図である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域に連結され、これは、例えば、リンカーを介して、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖにさらに連結されている。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域に連結され、これは、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ  ｓｃＦｖにさらに連結されている。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図５Ａの構成を有する。図５Ａにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図５Ｂの構成を有する。図５Ｂにおいて、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。第１と第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、同一であっても異なっていてもよい。
【０１０９】
一態様では、本明細書で提供されるのは、（ｉ）ＴＧＦ−ベータ阻害剤、及び（ｉｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）または抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む単離された多重特異性、例えば、二重特異性または三重特異性の分子である。一実施形態では、多重特異性分子は、腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）をさらに含む。
【０１１０】
一実施形態では、例えば、図７に関して実施例３に記載される方法を用いて測定して、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は（ｉ）ＴＧＦ−ベータ１、（ｉｉ）ＴＧＦ−ベータ２、または（ｉｉｉ）ＴＧＦ−ベータ３のうちの１つ、２つ、または全ての活性を低減し、任意で、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ａ）ＴＧＦ−ベータ１及びＴＧＦ−ベータ３、または（ｂ）ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、及びＴＧＦ−ベータ３の活性を低減する。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ−ベータ受容体の細胞外ドメイン、または、その機能的バリアント）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、（ｉ）ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくはそれ以上のＴＧＦＢＲ１ポリペプチド）、（ｉｉ）ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくはそれ以上のＴＧＦＢＲ２ポリペプチド）、または（ｉｉｉ）ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくはそれ以上のＴＧＦＢＲ３ポリペプチド）のうちの１つ、２つ、または全てを含む。
【０１１１】
一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１、もしくは１２２の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０１１２】
一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９８、９９、１２３、もしくは１２４の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１００、１０１、１０２、及び１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０１１３】
一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０６、１０７、１２５、もしくは１２６の細胞外ドメイン、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列、または、それと実質的に同一である配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０１１４】
一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成する２つのＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチとＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチとＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチとＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。
【０１１５】
一実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、多重特異性分子は、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１−Ｆｃ領域）及び第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１−Ｆｃ領域）を含む。一実施形態では、第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１−Ｆｃ領域）例えば、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１−Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されている。一実施形態では、第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１−Ｆｃ領域）例えば、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１−Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されている。一実施形態では、第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一実施形態では、第１または第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図６Ａまたは６Ｂの構成を有する。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９３のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９５のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９３のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９５のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０１１６】
一実施形態では、多重特異性分子は、重鎖定常領域１（ＣＨ１）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。一実施形態では、（ｉ）第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＨ１、例えば、ＣＨ１のＮ末端に連結され、（ｉｉ）第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＬ、例えば、ＣＬのＮ末端に連結される。一実施形態では、第１のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一実施形態では、第１または第２のＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、図６Ｃまたは６Ｄの構成を有する。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９８のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９９のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９８のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）及び配列番号１９９のアミノ酸配列（または、それと実質的に同一である配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０１１７】
一実施形態では、多重特異性分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む。
【０１１８】
一実施形態では、腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）は、ＰＤ−Ｌ１、メソセリン、ＣＤ４７、ガングロシド２（ＧＤ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、Ｒｏｎキナーゼ、ｃ−Ｍｅｔ、未熟ラミニン受容体、ＴＡＧ−７２、ＢＩＮＧ−４、カルシウム依存性塩素チャネル２、サイクリン−Ｂ１、９Ｄ７、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ−１、サバイビン、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／−２、ＭＣ１Ｒ、β−カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ−Ｂ受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ−１、ＣＡ−１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、β−カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン−４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８−１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（インテグリンアルファＶベータ３、インテグリンアルファ５ベータ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、またはＲＡＮＫＬに結合する。
【０１１９】
一実施形態では、腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）は、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ９９、ＣＤ３０、ＢＣＭＡ、ＣＤ３８、ＣＤ２２、ＳＬＡＭＦ７、またはＮＹ−ＥＳＯ１に結合する。
【０１２０】
一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、または腫瘍標的化抗体分子は、独立して、完全抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖を含む抗体）、または抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、もしくはダイアボディ（ｄＡｂ））である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、または腫瘍標的化抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはそれらのフラグメントから選択される重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、または腫瘍標的化抗体分子は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域、またはそれらのフラグメントから選択される軽鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、腫瘍標的化抗体分子は、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子は、ラムダ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含み、腫瘍標的化抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域またはそのフラグメントを含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子と腫瘍標的化抗体分子は、共通の軽鎖可変領域を有する。
【０１２１】
一実施形態では、多重特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４の重鎖定常領域、より具体的には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。一実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、抗ＣＣＲ２抗体分子、腫瘍標的化抗体分子に共有結合している。一実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させる１つ以上の変異を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗ＣＣＲ２抗体分子は、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、腫瘍標的化抗体分子は第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含み、及び／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の変異を含む。一実施形態では、第１及び第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）は、対形成した空洞−突起（「ノブインホール」、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つ以上を含み、それにより、天然に存在する重鎖定常領域と比べて、ヘテロ多量体：ホモ多量体を、より大きな比率で形成する。一実施形態では、第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）は、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置でアミノ酸置換を含む。一実施形態では、第１及び／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１及び／または第２のＦｃ領域、例えば、第１及び／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、もしくはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞もしくはホールに対応する）、またはＴ３６６ＷもしくはＳ３５４Ｃ（例えば、突起もしくはノブに対応する）、あるいはそれらの組み合わせ（付番はＥｕ付番システムに基づく）から選択されるアミノ酸置換を含む。一実施形態では、多重特異性分子は、リンカーを含み、任意で、リンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、フレキシブルリンカー、リジッドリンカー、ヘリカルリンカー、または非ヘリカルリンカーから選択され、任意で、リンカーは、ペプチドリンカーであり、任意で、ペプチドリンカーは、Ｇｌｙ及びＳｅｒを含む。
【０１２２】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、先行請求項のいずれか１項に記載の多重特異性分子（例えば、抗体）をコードする単離された核酸である。
【０１２３】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離された核酸であり、これは、本明細書に記載の多重特異性分子のうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同（例えば、それと少なくとも９５％〜９９．９％同一）であるヌクレオチド配列を含む。
【０１２４】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の核酸分子のうちの１つ以上を含む、ベクター、例えば、発現ベクターである。
【０１２５】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の核酸分子または本明細書に記載のベクターを含む、宿主細胞である。
【０１２６】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の多重特異性分子を作製、例えば生成する方法であって、適切な条件下、例えば、遺伝子発現及び／またはヘテロ二量体化に適した条件下で本明細書に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法である。
【０１２７】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の多重特異性分子と、薬学体に許容される担体、賦形剤、または安定剤と、を含む医薬組成物である。
【０１２８】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、対象においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、がんを治療するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１２９】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、対象においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＴＡＭの数（例えば、対象の腫瘍内もしくは腫瘍近辺のＴＡＭの数）を低減する、ＴＡＭの増殖（例えば、対象の腫瘍内もしくは腫瘍近辺のＴＡＭの数）を阻害する、または対象の腫瘍へのマクロファージの浸潤を低減もしくは阻害するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３０】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＴＡＭの集団の一部を低減することによって対象においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させるのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３１】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、対象において（例えば、がん、例えば、固形腫瘍を有する対象において）ＴＡＭの集団の一部の増殖を低減する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＴＡＭの集団の一部の増殖を低減するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３２】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、がん（例えば、腫瘍）を有する対象においてＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させる方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、腫瘍浸潤マクロファージの数を低減する、腫瘍浸潤マクロファージの増殖を阻害する、または腫瘍へのマクロファージ浸潤を低減するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍がんまたは転移性病変である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍がんは、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌もしくは非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（例えば、神経膠腫）のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、がんは、ＴＡＭを含むものとして特徴づけらる、ＴＡＭの存在と関連し、ＴＡＭが、がん（例えば、腫瘍）中にある、及び／またはがんの一部を形成する、またはＴＡＭは固形腫瘍内または固形腫瘍近辺で検出されている。いくつかの実施形態では、がんは血液癌または転移性病変である。いくつかの実施形態では、血液癌は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、多発性骨髄腫、または急性リンパ性白血病のうちの１つ以上である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、方法は、対象におけるがん（例えば、腫瘍）内またはその近辺のＴＡＭの存在を識別することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＭは、ＣＸＣＲ２とＣＣＲ２、ＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ１ＲとＣＸＣＲ２、またはＣＣＲ２とＣＸＣＲ２とＣＳＦ１Ｒを発現する。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療的処置を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療的処置は、治療剤（例えば、化学療法剤、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または外科手術を含む。いくつかの実施形態では、治療薬は化学療法剤または生物学的製剤から選択される。いくつかの実施形態では、治療薬はチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、及び抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される。
【０１３６】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、対象においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＭＤＳＣの数（例えば、対象の腫瘍内もしくは腫瘍近辺のＭＤＳＣの数）を低減する、ＭＤＳＣの増殖（例えば、対象の腫瘍内もしくは腫瘍近辺のＭＤＳＣの数）を阻害する、または対象の腫瘍へのＭＤＳＣの浸潤を低減もしくは阻害するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３７】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＴＡＭの集団の一部を低減することによって対象においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させるのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３８】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、対象において（例えば、がん、例えば、固形腫瘍を有する対象において）ＭＤＳＣの集団の一部の増殖を低減する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＭＤＳＣの集団の一部の増殖を低減するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１３９】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、がん（例えば、腫瘍）を有する対象においてＭＤＳＣの集団の一部を阻害または枯渇させる方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を、それを必要とする対象に投与することを含み、多重特異性分子は、ＭＤＳＣの数を低減する、ＭＤＳＣの増殖を阻害する、または腫瘍へのＭＤＳＣ浸潤を低減するのに有効な量で投与される、方法である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍がんまたは転移性病変である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍がんは、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌もしくは非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（例えば、神経膠腫）のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、がんは、ＭＤＳＣを含むものとして特徴づけられる、ＭＤＳＣの存在と関連する、ＭＤＳＣががん（例えば、腫瘍）中にある、及び／またはがんの一部を形成する、またはＭＤＳＣは固形腫瘍内または固形腫瘍近辺で検出されている。いくつかの実施形態では、方法は、対象におけるがん（例えば、腫瘍）内またはその近辺のＭＤＳＣの存在を識別することをさらに含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療的処置を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療的処置は、治療剤（例えば、化学療法剤、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または外科手術を含む。いくつかの実施形態では、治療薬は化学療法剤または生物学的製剤から選択される。いくつかの実施形態では、治療薬はチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、及び抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される。
【０１４２】
別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明の所属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されているものと類似または同等の方法及び物質を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含め、本明細書が優先される。更に、材料、方法、及び例は、例示にすぎず、限定を意図しない。
【０１４３】
本発明の他の特長及び利点は、以下の発明を実施するための形態、図面、及び特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１４４】
【図１Ａ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、任意の順序で連結された、（ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ）ａ、（ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ）ｂ、及び（ＴＧＦＢＲ３  ＥＣＤ）ｃまたはそれらのバリアントを含み、ここで、ａ≧０、ｂ≧０、及びｃ≧０である。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、任意の順序で連結された、（ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ）ｄ、（ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ）ｅ、及び（ＴＧＦＢＲ３  ＥＣＤ）ｆまたはそれらのバリアントを含み、ここで、ｄ≧０、ｅ≧０、及びｆ≧０である。ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、またはｆのうちの少なくとも１つはゼロではない。
【図１Ｂ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図１Ｃ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図１Ｄ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図１Ｅ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【図１Ｆ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【図１Ｇ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は２つのＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【図１Ｈ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は２つのＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【図１Ｉ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【図１Ｊ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第２のポリペプチド、抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意で第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む第３のポリペプチド、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＬ及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第２のＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤ及びＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第１のＴＧＦ−ベータ阻害剤は存在していても不存在でもよい。
【図２Ａ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図２Ｂ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図２Ｃ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図２Ｄ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図３Ａ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＰＤＬ１  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図３Ｂ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＰＤＬ１  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図３Ｃ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＰＤＬ１  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図３Ｄ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、抗ＰＤＬ１  ＶＬ及びＣＬを含む第１のポリペプチド、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む第３のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図４Ａ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、第１のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第１のポリペプチド、第２のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第３のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第３のポリペプチド、ならびに第４のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１、第２、第３、及び第４のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図４Ｂ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、第１のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第１のポリペプチド、第２のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第３のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第３のポリペプチド、ならびに第４のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１、第２、第３、及び第４のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図４Ｃ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、第１のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第１のポリペプチド、第２のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第３のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第３のポリペプチド、ならびに第４のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第３及び第４のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図４Ｄ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、第１のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第１のポリペプチド、第２のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第２のポリペプチド、第３のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第３のポリペプチド、ならびに第４のＴＧＦ−ベータ受容体及びＣＬを含む第４のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第２及び第３のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第１及び第４のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図５Ａ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第１のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第２のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ１  ＥＣＤまたはそのバリアントを含み、第２のＴＧＦ−ベータ受容体はＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図５Ｂ】ＣＳＦ１Ｒ結合部分、ＰＤ−Ｌ１結合部分、及び１つ以上のＴＧＦ−ベータ受容体を含むさらなる例示的な多重特異性分子を示す概略図である。示されるのは、第１のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＰＤＬ１  ＶＨ、及び抗ＰＤＬ１  ＶＬを含む第１のポリペプチド、ならびに第２のＴＧＦ−ベータ受容体、ＣＨ２、ＣＨ３、抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＨ、及び抗ＣＳＦ１Ｒ  ＶＬを含む第２のポリペプチドを含む多重特異性抗体分子である。第１及び第２のＴＧＦ−ベータ受容体は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤまたはそのバリアントを含む。
【図６Ａ】ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体  ＥＣＤホモ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤヘテロ二量体を含む。２つのＴＧＦＢＲ  ＥＣＤドメインは、２つのＦｃ領域のＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、示されているＣＨ１−Ｆｃ−ＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ領域は、配列番号１９２または１９３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、示されているＦｃ−ＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ領域は、配列番号１９４または１９５のアミノ酸配列を含む。
【図６Ｂ】ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体  ＥＣＤホモ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤヘテロ二量体を含む。２つのＴＧＦＢＲ  ＥＣＤドメインは、２つのＦｃ領域のＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、示されているＣＨ１−Ｆｃ−ＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ領域は、配列番号１９２または１９３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、示されているＦｃ−ＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ領域は、配列番号１９４または１９５のアミノ酸配列を含む。
【図６Ｃ】ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体  ＥＣＤホモ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤヘテロ二量体を含む。２つのＴＧＦＢＲ  ＥＣＤドメインは、それぞれ、ＣＨ１及びＣＬに連結されている。いくつかの実施形態では、示されているＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ−ＣＨ１−Ｆｃ領域は、配列番号１９６または１９７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、示されているＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ−ＣＬ領域は、配列番号１９８または１９９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、結合部分Ａ及び結合部分Ｂを含む。いくつかの実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）を含む。いくつかの実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む。いくつかの実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）をさらに含む。
【図６Ｄ】ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多重特異性分子を示す概略図である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータ受容体  ＥＣＤホモ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤヘテロ二量体を含む。２つのＴＧＦＢＲ  ＥＣＤドメインは、それぞれ、ＣＨ１及びＣＬに連結されている。いくつかの実施形態では、示されているＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ−ＣＨ１−Ｆｃ領域は、配列番号１９６または１９７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、示されているＴＧＦＢＲ  ＥＣＤ−ＣＬ領域は、配列番号１９８または１９９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、結合部分Ａ及び結合部分Ｂを含む。いくつかの実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）を含む。いくつかの実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む。いくつかの実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、腫瘍標的化部分（例えば、腫瘍標的化抗体分子）をさらに含む。
【図７】ＴＧＦβ／Ｓｍａｄの活性化をＴＧＦβ−トラップ濃度に対してプロットしたグラフである。この研究で試験されたコンストラクトには以下が含まれる：単一のＴＧＦβ  Ｆａｂ−トラップ、抗ＰＤＬ１×ＴＧＦβ−トラップ、抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ、及び抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ×ＴＧＦβ−トラップ。
【発明を実施するための形態】
【０１４５】
ＴＡＭは循環する単球に由来し、腫瘍へのそれらの動員は腫瘍由来の走化性因子によって駆動される。ＴＡＭは、Ｂ細胞及びＴ細胞の活性化の阻害、腫瘍関連抗原提示の阻害、細胞毒性顆粒放出の阻害、血管新生の増加、及び様々な増殖因子及び血管新生促進因子の分泌などの応答を引き起こすことにより、腫瘍細胞の増殖と転移を促進できる（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ＆  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （２０１５）  １２，１−４、及びＮｏｙ，Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４１  ，Ｉｓｓｕｅ  １  ，４９−６１；及びＱｕａｔｒｏｍｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｒｅｓ．２０１２；４（４）：３７６−３８９を参照されたい）。その結果、多数のＴＡＭを有する多くの腫瘍では、腫瘍増殖速度、局所的な増殖、及び遠隔転移が増加している。したがって、ＴＡＭを枯渇させるか、またはそれらの活性を阻害する療法は有用であろう。
【０１４６】
定義
本明細書で使用されるとき、「形質転換増殖因子ベータ−１（ＴＧＦ−ベータ１）」という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＴＧＦＢ１またはそのオーソログによってコードされるタンパク質を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ０１１３７は、例示的なヒトＴＧＦ−ベータ１アミノ酸配列を提供する。例示的な未成熟ヒトＴＧＦ−ベータ１アミノ酸配列は、配列番号９２に提供されている。例示的な成熟ヒトＴＧＦ−ベータ１アミノ酸配列は、配列番号１１７に提供されている。
【０１４７】
本明細書で使用されるとき、「形質転換増殖因子ベータ−２（ＴＧＦ−ベータ２）」という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＴＧＦＢ２またはそのオーソログによってコードされるタンパク質を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ６１８１２は、例示的なヒトＴＧＦ−ベータ２アミノ酸配列を提供する。例示的な未成熟ヒトＴＧＦ−ベータ２アミノ酸配列は、配列番号９３に提供されている。例示的な成熟ヒトＴＧＦ−ベータ２アミノ酸配列は、配列番号１１８に提供されている。
【０１４８】
本明細書で使用されるとき、「形質転換増殖因子ベータ−３（ＴＧＦ−ベータ３）」という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＴＧＦＢ３またはそのオーソログによってコードされるタンパク質を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１０６００は、例示的なヒトＴＧＦ−ベータ３アミノ酸配列を提供する。例示的な未成熟ヒトＴＧＦ−ベータ３アミノ酸配列は、配列番号９４に提供されている。例示的な成熟ヒトＴＧＦ−ベータ３アミノ酸配列は、配列番号１１９に提供されている。
【０１４９】
本明細書で使用されるとき、“ＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチド”は、ＴＧＦ−ベータ受容体（例えば、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、もしくはＴＧＦＢＲ３）、またはそのフラグメント、またはそのバリアントを指す。
【０１５０】
本明細書で使用されるとき、「形質転換増殖因子ベータ受容体タイプ１（ＴＧＦＢＲ１）」（ＡＬＫ−５またはＳＫＲ４としても知られる）という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＴＧＦＢＲ１またはそのオーソログによってコードされるタンパク質を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ３６８９７は、例示的なヒトＴＧＦＢＲ１アミノ酸配列を提供する。例示的な未成熟ヒトＴＧＦＢＲ１アミノ酸配列は、配列番号９５、９６、及び９７に提供されている。例示的な成熟ヒトＴＧＦＢＲ１アミノ酸配列は、配列番号１２０、１２１、及び１２２に提供されている。本明細書で使用されるとき、「ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド」は、ＴＧＦＢＲ１、またはそのフラグメント、またはそのバリアントを指す。
【０１５１】
本明細書で使用されるとき、「形質転換増殖因子ベータ受容体タイプ２（ＴＧＦＢＲ２）」という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＴＧＦＢＲ２またはそのオーソログによってコードされるタンパク質を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ３７１７３は、例示的なヒトＴＧＦＢＲ２アミノ酸配列を提供する。例示的な未成熟ヒトＴＧＦＢＲ２アミノ酸配列は、配列番号９８及び９９に提供されている。例示的な成熟ヒトＴＧＦＢＲ２アミノ酸配列は、配列番号１２３及び１２４に提供されている。本明細書で使用されるとき、「ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド」は、ＴＧＦＢＲ２、またはそのフラグメント、またはそのバリアントを指す。
【０１５２】
本明細書で使用されるとき、「形質転換増殖因子ベータ受容体タイプ３（ＴＧＦＢＲ３）」という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＴＧＦＢＲ３またはそのオーソログによってコードされるタンパク質を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ０３１６７は、例示的なヒトＴＧＦＢＲ３アミノ酸配列を提供する。例示的な未成熟ヒトＴＧＦＢＲ３アミノ酸配列は、配列番号１０６及び１０７に提供されている。例示的な成熟ヒトＴＧＦＢＲ３アミノ酸配列は、配列番号１２５及び１２６に提供されている。本明細書で使用されるとき、「ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド」は、ＴＧＦＢＲ３、またはそのフラグメント、またはそのバリアントを指す。
【０１５３】
本明細書で使用されるとき、親配列の「バリアント」という用語は、親配列、またはそのフラグメントと実質的に同一のアミノ酸配列を有する配列を指す。いくつかの実施形態では、バリアントは機能的バリアントである。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、ポリペプチドの「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを欠くポリペプチドの一部を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、ポリペプチドが細胞表面上にある場合、細胞外空間にあるポリペプチドの全ての部分、そのフラグメント、そのバリアントを含む。
【０１５５】
本明細書で使用されるとき、冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法的な対象の、１または１を超えるもの、例えば少なくとも１を指す。本明細書において用語「含む」と合わせて使用される場合の「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という用語の使用は、「１つ」を意味する場合もあるが、それはまた「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つまたは１つ以上」の意味とも一致する。
【０１５６】
本明細書で使用されるとき、「約」及び「およそ」は、一般に、測定の性質または精度を考慮して、測定された量の許容可能な誤差の程度を意味する。誤差の例示的な程度は、所与の範囲の値の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、そしてより典型的には５％以内である。
【０１５７】
本明細書で使用されるとき、「抗体分子」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメントを指す。抗体分子は、抗体（例えば、全長抗体）及び抗体フラグメントを包含する。一実施形態では、抗体分子は、全長抗体または全長免疫グロブリン鎖の抗原結合フラグメントまたは機能的フラグメントを含む。例えば、全長抗体は、天然に存在するか、または通常の免疫グロブリン遺伝子フラグメントの組換えプロセスによって形成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（例えば、ＩｇＧ抗体）である。実施形態では、抗体分子は、免疫学的に活性な、免疫グロブリン分子の抗原結合部分、例えば抗体フラグメントを指す。抗体フラグメント、例えば、機能性フラグメントは、抗体の一部、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、可変フラグメント（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。機能性抗体フラグメントは、無傷（例えば、全長）抗体によって認識されるものと同一の抗原に結合する。「抗体フラグメント」または「機能性フラグメント」には、可変領域からなる単離されたフラグメント、例えば、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメント、または軽鎖可変領域と重鎖可変領域がペプチドリンカーによって連結されている組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）もまた含まれる。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントは、抗原結合活性を有さない抗体の部分、例えば、Ｆｃフラグメントまたは単一アミノ酸残基を含まない。例示的な抗体分子には、全長抗体及び抗体フラグメント、例えば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２フラグメント、ならびに単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）が含まれる。
【０１５８】
本明細書で使用されるとき、「免疫グロブリン可変領域配列」は、免疫グロブリン可変領域の構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、この配列は、天然に存在する可変領域のアミノ酸配列の全てまたは部分を含んでもよい。例えば、配列は、１つ、２つ、またはそれ以上のＮまたはＣ末端アミノ酸を含んでも含まなくてもよく、またはタンパク質構造の形成に適合する他の変更を含んでもよい。
【０１５９】
実施形態では、抗体分子は、単一特異性であり、例えば、それは、単一のエピトープに対する結合特異性を含む。いくつかの実施形態では、抗体分子は多重特異性であり、例えば、それは複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、第１の免疫グロブリン可変領域配列は第１のエピトープに対する結合特異性を有し、第２の免疫グロブリン可変領域配列は第２のエピトープに対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、抗体分子は、二重特異性抗体分子である。本明細書で使用されるとき、「二重特異性抗体分子」は、１つを超える（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の）エピトープ及び／または抗原に対する特異性を有する抗体分子を指す。
【０１６０】
本明細書で使用されるとき、「抗原」（Ａｇ）は、例えば、特定の免疫細胞の活性化及び／または抗体生成を含む、免疫応答を誘発し得る分子を指す。ほぼ全てのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原になる可能性がある。抗原はまた、ゲノム組換え体またはＤＮＡに由来し得る。例えば、免疫応答を誘発することができるタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡは、「抗原」をコードする。実施形態では、抗原は遺伝子の全長ヌクレオチド配列のみによってコード化される必要はなく、抗原は遺伝子によってコードされる必要もまったくない。実施形態では、抗原は合成すること、または生体試料、例えば、組織試料、腫瘍試料、細胞、もしくは他の生体成分を含む液体に由来することができる。本明細書で使用されるとき、「腫瘍抗原」または互換可能に、「がん抗原」には、免疫応答を誘発し得る、がん、例えば、がん細胞または腫瘍微小環境上に存在するか、またはそれらに関連する任意の分子が含まれる。本明細書で使用されるとき、「免疫細胞抗原」には、免疫応答を引き起こすことができる免疫細胞上に存在するか、またはそれらに関連する任意の分子が含まれる。
【０１６１】
抗体分子の「抗原結合部位」または「結合部分」は、抗原結合に関与する抗体分子、例えば免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の部分を指す。実施形態では、抗原結合部位は重（Ｈ）鎖と軽（Ｌ）鎖の可変（Ｖ）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖と軽鎖の可変領域内の、超可変領域と呼ばれる３つの高度に多様なストレッチは、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された隣接ストレッチの間に配置される。ＦＲは、免疫グロブリンの超可変領域間及びそれに隣接して天然に見出されるアミノ酸配列である。実施形態では、抗体分子では、軽鎖の３つの超可変領域と重鎖の３つの超可変領域が三次元空間で互いに相対的に配置され、結合した抗原の三次元表面と相補的な抗原結合表面を形成する。重鎖と軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。フレームワーク領域及びＣＤＲは、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、及びＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７において、定義され、説明されている。各可変鎖（例えば、可変重鎖及び可変軽鎖）は典型的には、３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成され、アミノ酸の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に向けて以下のように配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。
【０１６２】
本明細書で使用されるとき、「がん」は、あらゆる種類の発がん過程及び／またはがん性増殖を包含することができる。実施形態では、がんには、原発腫瘍、ならびに、転移組織または悪性転した換細胞、組織、もしくは臓器が含まれる。実施形態では、がんは、がんの全ての組織病理学及び病期、例えば、侵襲性／重症度の病期を含む。実施形態では、がんには再発がん及び／または耐性がんが含まれる。「がん」と「腫瘍」という用語は、互換可能に使用できる。例えば、両方の用語は固形腫瘍と液体腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、「がん」または「腫瘍」という用語には、前がん、ならびに悪性のがん及び腫瘍が含まれる。
【０１６３】
本発明の組成物及び方法は、特定された配列、またはそれらと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、特定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を有するポリペプチド及び核酸を包含する。アミノ酸配列との関連で、本明細書で使用されるとき、「実質的に同一」という用語は、第１及び第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメイン及び／または共通の機能的活性を有することができるように、ｉ）第２のアミノ酸配列中のアライメントしたアミノ酸残基に同一である、またはｉｉ）その保存的置換のいずれかである十分または最小数のアミノ酸残基を含む第１のアミノ酸を指す。例えば、共通の構造ドメインを含むアミノ酸配列は、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対して、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。
【０１６４】
ヌクレオチド配列の文脈において、本明細書で使用されるとき、「実質的に同一」という用語は、第１及び第２の核酸配列が、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造的ポリペプチドドメインまたは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように第２の核酸配列中のアライメントされたヌクレオチドに同一である、十分または最小数のヌクレオチドを含む第１の核酸配列を指す。例えば、ヌクレオチド配列は、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対して、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。
【０１６５】
配列間の相同性または配列同一性（用語は本明細書では互換可能に使用される）の計算は、以下のように行われる。
【０１６６】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するためには、最適な比較の目的で配列をアライメントする（例えば、最適のアライメントのために第１及び第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップを導入でき、非相同配列は、比較の目的で無視できる）。好ましい実施形態では、比較の目的でアライメントされた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、分子はその位置で同一である（本明細書で使用されるとき、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と同等である）。
【０１６７】
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要のあるギャップの数と各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。
【０１６８】
配列の比較と２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して実行できる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかで、１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、及び１、２、３、４、５、または６の長さの重みを使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ６２マトリックスで、４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重み、及び１、２、３、４、５、または６の長さの重みを使用して決定される。特に好ましいパラメーターのセット（及び別段の定めがない限り使用するべきパラメーター）は、１２のギャップペナルティ、４のギャップ拡張ペナルティ、５のフレームシフトギャップペナルティを有するＢｌｏｓｓｕｍ  ６２スコアリングマトリックスである。
【０１６９】
２つのアミノ酸またはヌクレオチドの配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残基テーブル、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定できる。
【０１７０】
本明細書に記載の核酸及びタンパク質配列は、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連する配列を特定するために公共データベースに対して検索を行うための「クエリ配列」として使用され得る。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行できる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸（例えば、配列番号１）分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行することができる。比較の目的でギャップ付きのアライメントを得るには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されているように、ギャップ付きＢＬＡＳＴを利用できる。ＢＬＡＳＴ及びギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメーターを使用できる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【０１７１】
本発明の分子は、その機能に実質的な影響を及ぼさない、さらなる保存的置換または非必須アミノ酸置換を有し得る。
【０１７２】
「アミノ酸」という用語は、アミノ官能性と酸官能性の両方を含み、天然に存在するアミノ酸のポリマーに含まれることができる全ての分子を、天然であろうと合成であろうと包含することを意図している。例示的なアミノ酸には、天然に存在するアミノ酸、それらの類似体、誘導体及び同族体、バリアント側鎖を有するアミノ酸類似体、及び前述のいずれかのいずれかの全ての立体異性体が含まれる。本明細書で使用されるとき、「アミノ酸」という用語は、Ｄ−またはＬ−光学異性体とペプチド模倣体の両方を含む。
【０１７３】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【０１７４】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、または「タンパク質」（単一鎖である場合）という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書で互換可能に使用される。ポリマーは、直鎖状または分枝状であってよく、修飾アミノ酸を含み得、そして非アミノ酸により中断されていてもよい。この用語は、改変されたアミノ酸ポリマーも包含し、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作を包含する。ポリペプチドは、天然源から単離することができ、真核生物または原核生物の宿主から組換え技術によって生成することができ、または合成手順の産物とすることができる。
【０１７５】
「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」及び「ポリヌクレオチド」という用語は互換可能に使用される。これらは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはそれらの類似体のいずれかである、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得、一本鎖はコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体のような、修飾されたヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識構成要素とのコンジュゲーションなどによって、重合後にさらに修飾することができる。核酸は、組換えポリヌクレオチド、または天然には存在しないか、または非天然の配置で別のポリヌクレオチドに連結されている、ゲノム、ｃＤＮＡ、半合成、または合成起源のポリヌクレオチドであり得る。
【０１７６】
「単離された」という用語は、本明細書で使用されるとき、元の環境または天然の環境（例えば、天然に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質を指す。例えば、生きている動物に存在する天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されてないが、ヒトの介入により、自然系で共存する物質の一部または全てから分離された同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベクターの一部であり得、及び／またはそのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の一部であり得、そのようなベクターまたは組成物が、それが天然に見出される環境の一部ではないという点でなお単離されている。
【０１７７】
本明細書で使用されるとき、「免疫抑制性骨髄細胞」または「ＩＭＣ」という用語は一般に、免疫抑制（例えば、腫瘍微小環境において）（例えば、細胞の活性化を阻害すること、Ｔ細胞生存を阻害すること、制御性Ｔ細胞の誘導と動員を促進することによって）を促進する骨髄系の細胞を指す。免疫抑制性骨髄細胞には、例えば、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が含まれる。
【０１７８】
本明細書で使用されるとき、「腫瘍関連マクロファージ」または「ＴＡＭ」という用語は、一般に、例えば腫瘍などのがんの微小環境に存在するマクロファージを指す。
【０１７９】
本明細書で使用されるとき、「ＴＡＭを低減すること」という用語は、一般にＴＡＭの数を減らすことを指す。低減することは、腫瘍内または腫瘍近辺のＴＡＭの数を、（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の投与前（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の投与前）のＴＡＭの数と比較して）減らすことを含む。低減することは、腫瘍内または腫瘍近辺のＴＡＭの任意の数を、（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の投与前（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の投与前）のＴＡＭの数と比較して）、（例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、全て、または実質的に）減らすことを含む。
【０１８０】
本明細書で使用されるとき、「骨髄由来サプレッサー細胞」または「ＭＤＳＣ」という用語は一般に、免疫抑制を促進することができ、ＣＤ３３、ＣＤ１１ｂ、及びＣＤ４５を共通に発現する骨髄由来の細胞を指す。ＭＤＳＣの様々な分集団が定義されており、例えば、単球性ＭＤＳＣ（Ｍ−ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１４及びＣＤ１２４の発現とＨＬＡ−ＤＲの低発現に一般的に関連している。いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣ集団はＭＯ−ＭＤＳＣ集団である。多形核ＭＤＳＣ（ＰＭＮ−ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１５、ＣＤ６６ｂ、及びＣＤ１２４の発現、ならびにＨＬＡ−ＤＲの非発現に関連している。未成熟ＭＤＳＣ（Ｉ−ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１１７及びＣＤ３４の発現、ならびにＬＩＮ及びＨＬＡ−ＤＲの非発現に関連している。例えば、Ｕｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＪＣＩ  Ｖｏｌ  １２５（９），ｐａｇｅ  ３３６５を参照されたい。
【０１８１】
本発明の様々な態様が、以下にさらに詳述される。さらなる定義は、本明細書全体に示される。
【０１８２】
抗原
本開示のＴＡＭ標的化抗原は、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、及び受容体ベータを含む。本明細書では、ＴＡＭ標的化抗原の例示的なアミノ酸配列が提供される。
【０１８３】
ＣＳＦ１Ｒ
ＣＳＦ１Ｒ（マクロファージコロニー刺激因子１受容体としても知られる）は、ＣＳＦ１及びＩＬ３４の細胞表面受容体として機能し、造血前駆細胞、特にマクロファージ及び単球などの単核食細胞の生存、増殖、及び分化の調節に重要な役割を果たすチロシンタンパク質キナーゼである。ＣＳＦ１Ｒは、ＩＬ３４及びＣＳＦ１に応答して炎症誘発性ケモカインの放出を促進し、それにより自然免疫及び炎症過程において重要な役割を果たす。例示的なＣＳＦ１Ｒ未成熟アミノ酸配列が、配列番号８７及び８８に提供される。
【０１８４】
ＣＳＦ１Ｒ未成熟アミノ酸配列アイソフォーム１（識別子：Ｐ０７３３３−１）：
ＭＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧＩＰＶＩＥＰＳＶＰＥＬＶＶＫＰＧＡＴＶＴＬＲＣＶＧＮＧＳＶＥＷＤＧＰＰＳＰＨＷＴＬＹＳＤＧＳＳＳＩＬＳＴＮＮＡＴＦＱＮＴＧＴＹＲＣＴＥＰＧＤＰＬＧＧＳＡＡＩＨＬＹＶＫＤＰＡＲＰＷＮＶＬＡＱＥＶＶＶＦＥＤＱＤＡＬＬＰＣＬＬＴＤＰＶＬＥＡＧＶＳＬＶＲＶＲＧＲＰＬＭＲＨＴＮＹＳＦＳＰＷＨＧＦＴＩＨＲＡＫＦＩＱＳＱＤＹＱＣＳＡＬＭＧＧＲＫＶＭＳＩＳＩＲＬＫＶＱＫＶＩＰＧＰＰＡＬＴＬＶＰＡＥＬＶＲＩＲＧＥＡＡＱＩＶＣＳＡＳＳＶＤＶＮＦＤＶＦＬＱＨＮＮＴＫＬＡＩＰＱＱＳＤＦＨＮＮＲＹＱＫＶＬＴＬＮＬＤＱＶＤＦＱＨＡＧＮＹＳＣＶＡＳＮＶＱＧＫＨＳＴＳＭＦＦＲＶＶＥＳＡＹＬＮＬＳＳＥＱＮＬＩＱＥＶＴＶＧＥＧＬＮＬＫＶＭＶＥＡＹＰＧＬＱＧＦＮＷＴＹＬＧＰＦＳＤＨＱＰＥＰＫＬＡＮＡＴＴＫＤＴＹＲＨＴＦＴＬＳＬＰＲＬＫＰＳＥＡＧＲＹＳＦＬＡＲＮＰＧＧＷＲＡＬＴＦＥＬＴＬＲＹＰＰＥＶＳＶＩＷＴＦＩＮＧＳＧＴＬＬＣＡＡＳＧＹＰＱＰＮＶＴＷＬＱＣＳＧＨＴＤＲＣＤＥＡＱＶＬＱＶＷＤＤＰＹＰＥＶＬＳＱＥＰＦＨＫＶＴＶＱＳＬＬＴＶＥＴＬＥＨＮＱＴＹＥＣＲＡＨＮＳＶＧＳＧＳＷＡＦＩＰＩＳＡＧＡＨＴＨＰＰＤＥＦＬＦＴＰＶＶＶＡＣＭＳＩＭＡＬＬＬＬＬＬＬＬＬＬＹＫＹＫＱＫＰＫＹＱＶＲＷＫＩＩＥＳＹＥＧＮＳＹＴＦＩＤＰＴＱＬＰＹＮＥＫＷＥＦＰＲＮＮＬＱＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＦＧＬＧＫＥＤＡＶＬＫＶＡＶＫＭＬＫＳＴＡＨＡＤＥＫＥＡＬＭＳＥＬＫＩＭＳＨＬＧＱＨＥＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＨＧＧＰＶＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＡＥＡＭＬＧＰＳＬＳＰＧＱＤＰＥＧＧＶＤＹＫＮＩＨＬＥＫＫＹＶＲＲＤＳＧＦＳＳＱＧＶＤＴＹＶＥＭＲＰＶＳＴＳＳＮＤＳＦＳＥＱＤＬＤＫＥＤＧＲＰＬＥＬＲＤＬＬＨＦＳＳＱＶＡＱＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＶＡＡＲＮＶＬＬＴＮＧＨＶＡＫＩＧＤＦＧＬＡＲＤＩＭＮＤＳＮＹＩＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＣＶＹＴＶＱＳＤＶＷＳＹＧＩＬＬＷＥＩＦＳＬＧＬＮＰＹＰＧＩＬＶＮＳＫＦＹＫＬＶＫＤＧＹＱＭＡＱＰＡＦＡＰＫＮＩＹＳＩＭＱＡＣＷＡＬＥＰＴＨＲＰＴＦＱＱＩＣＳＦＬＱＥＱＡＱＥＤＲＲＥＲＤＹＴＮＬＰＳＳＳＲＳＧＧＳＧＳＳＳＳＥＬＥＥＥＳＳＳＥＨＬＴＣＣＥＱＧＤＩＡＱＰＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ
配列番号８７
ＣＳＦ１Ｒ未成熟アミノ酸配列アイソフォーム２（識別子：Ｐ０７３３３−２）：
ＭＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧＩＰＶＩＥＰＳＶＰＥＬＶＶＫＰＧＡＴＶＴＬＲＣＶＧＮＧＳＶＥＷＤＧＰＰＳＰＨＷＴＬＹＳＤＧＳＳＳＩＬＳＴＮＮＡＴＦＱＮＴＧＴＹＲＣＴＥＰＧＤＰＬＧＧＳＡＡＩＨＬＹＶＫＤＰＡＲＰＷＮＶＬＡＱＥＶＶＶＦＥＤＱＤＡＬＬＰＣＬＬＴＤＰＶＬＥＡＧＶＳＬＶＲＶＲＧＲＰＬＭＲＨＴＮＹＳＦＳＰＷＨＧＦＴＩＨＲＡＫＦＩＱＳＱＤＹＱＣＳＡＬＭＧＧＲＫＶＭＳＩＳＩＲＬＫＶＱＫＶＩＰＧＰＰＡＬＴＬＶＰＡＥＬＶＲＩＲＧＥＡＡＱＩＶＣＳＡＳＳＶＤＶＮＦＤＶＦＬＱＨＮＮＴＫＬＡＩＰＱＱＳＤＦＨＮＮＲＹＱＫＶＬＴＬＮＬＤＱＶＤＦＱＨＡＧＮＹＳＣＶＡＳＮＶＱＧＫＨＳＴＳＭＦＦＲＶＶＧＴＰＳＰＳＬＣＰＡ
配列番号８８
【０１８５】
ＣＣＲ２
ＣＣＲ２（Ｃ−Ｃケモカイン受容体タイプ２としても知られる）は、ＣＣＬ２、ＣＣＬ７、及びＣＣＬ１３ケモカインのＧタンパク質共役型受容体である。ＣＣＲ２は単球／マクロファージ及びＴ細胞の動員において機能することが知られている。ＣＣＲ２は単球とＴ細胞の小さな分集団で発現し、マウスとヒトでほぼ同一の発現パターンを示す（Ｍａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１；１６６：４６９７−４７０４）。
例示的なＣＣＲ２アミノ酸配列は、配列番号８９及び９０に提供されている。
【０１８６】
ＣＣＲ２アミノ酸配列アイソフォームＡ（識別子：Ｐ４１５９７−１）：
ＭＬＳＴＳＲＳＲＦＩＲＮＴＮＥＳＧＥＥＶＴＴＦＦＤＹＤＹＧＡＰＣＨＫＦＤＶＫＱＩＧＡＱＬＬＰＰＬＹＳＬＶＦＩＦＧＦＶＧＮＭＬＶＶＬＩＬＩＮＣＫＫＬＫＣＬＴＤＩＹＬＬＮＬＡＩＳＤＬＬＦＬＩＴＬＰＬＷＡＨＳＡＡＮＥＷＶＦＧＮＡＭＣＫＬＦＴＧＬＹＨＩＧＹＦＧＧＩＦＦＩＩＬＬＴＩＤＲＹＬＡＩＶＨＡＶＦＡＬＫＡＲＴＶＴＦＧＶＶＴＳＶＩＴＷＬＶＡＶＦＡＳＶＰＧＩＩＦＴＫＣＱＫＥＤＳＶＹＶＣＧＰＹＦＰＲＧＷＮＮＦＨＴＩＭＲＮＩＬＧＬＶＬＰＬＬＩＭＶＩＣＹＳＧＩＬＫＴＬＬＲＣＲＮＥＫＫＲＨＲＡＶＲＶＩＦＴＩＭＩＶＹＦＬＦＷＴＰＹＮＩＶＩＬＬＮＴＦＱＥＦＦＧＬＳＮＣＥＳＴＳＱＬＤＱＡＴＱＶＴＥＴＬＧＭＴＨＣＣＩＮＰＩＩＹＡＦＶＧＥＫＦＲＳＬＦＨＩＡＬＧＣＲＩＡＰＬＱＫＰＶＣＧＧＰＧＶＲＰＧＫＮＶＫＶＴＴＱＧＬＬＤＧＲＧＫＧＫＳＩＧＲＡＰＥＡＳＬＱＤＫＥＧＡ
配列番号８９
ＣＣＲ２アミノ酸配列アイソフォームＢ（識別子：Ｐ４１５９７−２）：
ＭＬＳＴＳＲＳＲＦＩＲＮＴＮＥＳＧＥＥＶＴＴＦＦＤＹＤＹＧＡＰＣＨＫＦＤＶＫＱＩＧＡＱＬＬＰＰＬＹＳＬＶＦＩＦＧＦＶＧＮＭＬＶＶＬＩＬＩＮＣＫＫＬＫＣＬＴＤＩＹＬＬＮＬＡＩＳＤＬＬＦＬＩＴＬＰＬＷＡＨＳＡＡＮＥＷＶＦＧＮＡＭＣＫＬＦＴＧＬＹＨＩＧＹＦＧＧＩＦＦＩＩＬＬＴＩＤＲＹＬＡＩＶＨＡＶＦＡＬＫＡＲＴＶＴＦＧＶＶＴＳＶＩＴＷＬＶＡＶＦＡＳＶＰＧＩＩＦＴＫＣＱＫＥＤＳＶＹＶＣＧＰＹＦＰＲＧＷＮＮＦＨＴＩＭＲＮＩＬＧＬＶＬＰＬＬＩＭＶＩＣＹＳＧＩＬＫＴＬＬＲＣＲＮＥＫＫＲＨＲＡＶＲＶＩＦＴＩＭＩＶＹＦＬＦＷＴＰＹＮＩＶＩＬＬＮＴＦＱＥＦＦＧＬＳＮＣＥＳＴＳＱＬＤＱＡＴＱＶＴＥＴＬＧＭＴＨＣＣＩＮＰＩＩＹＡＦＶＧＥＫＦＲＲＹＬＳＶＦＦＲＫＨＩＴＫＲＦＣＫＱＣＰＶＦＹＲＥＴＶＤＧＶＴＳＴＮＴＰＳＴＧＥＱＥＶＳＡＧＬ
配列番号９０
【０１８７】
ＣＸＣＲ２
ＣＸＣＲ２（インターロイキン−８受容体としても知られる）は、好中球走化性因子であるＩＬ８のＧタンパク質共役型受容体である。ＩＬ８の受容体への結合は、好中球の活性化を引き起こす。この応答は、ホスファチジルイノシトールカルシウムセカンドメッセンジャー系を活性化するＧタンパク質を介して仲介される。ＣＸＣＲ２はＩＬ−８に高い親和性で結合し、ＣＸＣＬ３、ＧＲＯ／ＭＧＳＡ、及びＮＡＰ−２にも高い親和性で結合する。ＣＸＣＲ２は循環する好中球に高レベルで発現し、炎症部位へのそれらの遊走を誘導するために重要である（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２０１２；１２２（９）：３１２７−３１４４）。例示的なＣＸＣＲ２アミノ酸配列が、配列番号９１に提供される。
【０１８８】
ＣＸＣＲ２アミノ酸配列（識別子：Ｐ２５０２５−１）：
ＭＥＤＦＮＭＥＳＤＳＦＥＤＦＷＫＧＥＤＬＳＮＹＳＹＳＳＴＬＰＰＦＬＬＤＡＡＰＣＥＰＥＳＬＥＩＮＫＹＦＶＶＩＩＹＡＬＶＦＬＬＳＬＬＧＮＳＬＶＭＬＶＩＬＹＳＲＶＧＲＳＶＴＤＶＹＬＬＮＬＡＬＡＤＬＬＦＡＬＴＬＰＩＷＡＡＳＫＶＮＧＷＩＦＧＴＦＬＣＫＶＶＳＬＬＫＥＶＮＦＹＳＧＩＬＬＬＡＣＩＳＶＤＲＹＬＡＩＶＨＡＴＲＴＬＴＱＫＲＹＬＶＫＦＩＣＬＳＩＷＧＬＳＬＬＬＡＬＰＶＬＬＦＲＲＴＶＹＳＳＮＶＳＰＡＣＹＥＤＭＧＮＮＴＡＮＷＲＭＬＬＲＩＬＰＱＳＦＧＦＩＶＰＬＬＩＭＬＦＣＹＧＦＴＬＲＴＬＦＫＡＨＭＧＱＫＨＲＡＭＲＶＩＦＡＶＶＬＩＦＬＬＣＷＬＰＹＮＬＶＬＬＡＤＴＬＭＲＴＱＶＩＱＥＴＣＥＲＲＮＨＩＤＲＡＬＤＡＴＥＩＬＧＩＬＨＳＣＬＮＰＬＩＹＡＦＩＧＱＫＦＲＨＧＬＬＫＩＬＡＩＨＧＬＩＳＫＤＳＬＰＫＤＳＲＰＳＦＶＧＳＳＳＧＨＴＳＴＴＬ
配列番号９１
【０１８９】
例示的な抗体
ＴＡＭ抗原と結合する例示的な抗体は、本明細書全体及び以下に提供される。例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書ならびにＷＯ２００９０２６３０３Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１６２０７３１２Ａ１、ＷＯ２０１６１０６１８０Ａ１、ＵＳ２０１６０２２０６６９Ａ１、ＵＳ２０１６０３２６２５４Ａ１、ＷＯ２０１３１６９２６４Ａ１、ＷＯ２０１３０８７６９９Ａ１、ＷＯ２０１１１４０２４９Ａ２、ＷＯ２０１１１３１４０７Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１１１０７５５３Ａ１、及びＷＯ２０１１０７００２４Ａ１に記載され、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的な抗ＣＣＲ２抗体は、本明細書ならびにＷＯ２０１３１９２５９６Ａ２、ＷＯ２０１００２１６９７Ａ２、ＷＯ２００１０５７２２６Ａ１、及びＷＯ１９９７０３１９４９Ａ１に記載され、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的なＣＸＣＲ２抗体は、ＷＯ２０１４１７０３１７Ａ１及びＵＳ２０１６００６０３４７に記載され（例えば、ａ）配列番号１４（軽鎖）及び配列番号１５（重鎖）、ｂ）配列番号２４（軽鎖）及び配列番号２５（重鎖）、ｃ）配列番号３４（軽鎖）及び配列番号３５（重鎖）、ｄ）配列番号４４（軽鎖）及び配列番号４５（重鎖）、ｅ）配列番号５４（軽鎖）及び配列番号５５（重鎖）、ｆ）配列番号６４（軽鎖）及び配列番号６５（重鎖）、ｇ）配列番号７４（軽鎖）及び配列番号７５（重鎖）、ｈ）配列番号８４（軽鎖）及び配列番号８５（重鎖）を参照されたい）、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的な抗ＣＤ１６３抗体は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１２０２５７８１０７（例えば、ＭＡＣ２１５８、ＭＡＣ２−４８を参照されたい）に提供されている。例示的な抗ＣＤ５２抗体は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２００５０１５２８９８に記載されている。例示的な抗葉酸抗体は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ９５２２１９６に記載されている。例示的な抗ＣＤ５２抗体は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２００５０１５２８９８に記載されている。例示的な抗ＭＡＲＣＯ抗体は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６１９６６１２に記載されている。
【０１９０】
抗体分子
一実施形態では、多重特異性分子は、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）抗原に結合する抗体分子、及び第２のＴＡＭ抗原に結合する抗体分子を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２のＴＡＭ抗原は、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトである。例えば、抗体分子は、ＴＡＭ抗原上のエピトープ、例えば、直線状、または立体配座エピトープに特異的に結合する。
【０１９１】
一実施形態では、多重特異性分子は、第１の骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）抗原に結合する抗体分子、及び第２のＭＤＳＣ抗原に結合する抗体分子を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２のＭＤＳＣ抗原は、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトである。例えば、抗体分子は、ＭＤＳＣ抗原上のエピトープ、例えば、直線状、または立体配座エピトープに特異的に結合する。
【０１９２】
一実施形態では、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープと結合する。例えば、それぞれが同一のエピトープと結合する複数の免疫グロブリン可変領域配列を有する単一特異性抗体分子である。
【０１９３】
一実施形態では、抗体分子は多重特異性抗体分子であり、例えば、それは複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変領域配列は第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変領域配列は第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、同一の抗原上、例えば同一のタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープが重複する。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープは重複しない。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、別個の抗原上、例えば別個のタンパク質（または多量体タンパク質の別個のサブユニット）上にある。一実施形態では、多重特異性抗体分子は、第３、第４、または第５の免疫グロブリン可変領域を含む。一実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、または四重特異性抗体分子である。
【０１９４】
一実施形態では、多重特異性抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対する特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変領域配列及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変領域配列によって特徴付けられる。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、同一の抗原上、例えば同一のタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープが重複する。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープは重複しない。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、別個の抗原上、例えば別個のタンパク質（または多量体タンパク質の別個のサブユニット）上にある。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列、ならびに第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体またはそのフラグメント及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体またはそのフラグメントを含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖまたはＦａｂまたはそのフラグメント、及び第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖまたはＦａｂまたはそのフラグメントを含む。
【０１９５】
一実施形態では、抗体分子は、ダイアボディ、及び単鎖分子、ならびに抗体の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ）を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域配列（本明細書ではＶＨと略される）及び軽（Ｌ）鎖可変領域配列（本明細書ではＶＬと略される）を含み得る。一実施形態では、抗体分子は、重鎖及び軽鎖を含むか、またはそれらからなる（本明細書では半抗体と呼ばれる）。別の例において、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域配列及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域配列を含み、それにより、抗体全体の改変により産生され得、または組換えＤＮＡ技術を使用してｄｅ  ｎｏｖｏで合成されたものである得る、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、単鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、単一の可変領域抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価及び二重特異性）、及びキメラ（例えば、ヒト化）抗体などの２つの抗原結合部位を形成する。これらの機能的抗体フラグメントは、それぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体及び抗体フラグメントは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを含むがこれらに限定されない抗体の任意のクラス、ならびに抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に由来し得る。抗体分子の調製は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体分子はまた、ヒト、ヒト化、ＣＤＲ移植、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成された抗体であり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択された重鎖定常領域を有し得る。抗体は、例えば、カッパまたはラムダから選択される軽鎖を有することもできる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」という用語と互換可能に使用される。
【０１９６】
抗体分子の抗原結合フラグメントの例には、以下が含まれる：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂフラグメントを含二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）フラグメント、（ｖｉ）ラクダ科またはラクダ化可変領域、（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３）を参照されたい、（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、フラグメントは、無傷の抗体と同一の方法で有用性についてスクリーニングされる。
【０１９７】
抗体分子には、無傷の分子及びその機能的フラグメントが含まれる。抗体分子の定常領域は、抗体の特性を改変するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させるために）、改変することができ、例えば、変異導入することができる。
【０１９８】
抗体分子は単一ドメイン抗体であってもよい。単一ドメイン抗体は、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含み得る。例には、重鎖抗体、軽鎖を天然に欠く抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、改変抗体、及び抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場が含まれるが、これらに限定されない。単一ドメイン抗体は、当該技術分野のいずれか、または将来の任意の単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含むがこれらに限定されない任意の種に由来し得る。本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる天然に存在する単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は、例えば、ＷＯ９４０４６７８に開示されている。明確にするために、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体に由来するこの可変領域は、４鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するために、ＶＨＨまたはナノボディとして本明細書で知られている。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、グアナコなどのラクダ科の種で産生された抗体に由来し得る。ラクダ科以外の他の種が、天然に軽鎖を欠く重鎖抗体を産生する可能性があり、このようなＶＨＨは本発明の範囲内である。
【０１９９】
ＶＨ及びＶＬ領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に細分でき、それは「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と呼ばれる、より保存された領域と散在する。
【０２００】
フレームワーク領域とＣＤＲの範囲は、いくつかの方法で正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、及びＯｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されるＡｂＭ定義を参照されたい）。一般的に、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇを参照されたい。
【０２０１】
本明細書で使用されるとき、「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性及び結合親和性を与える、抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。
【０２０２】
特定のＣＤＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”  ５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）を含む、いくつかの既知のスキームのいずれかを使用して決定できる。本明細書で使用されるとき、「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキームに従って定義されたＣＤＲは、「超可変ループ」とも呼ばれる。
【０２０３】
例えば、Ｋａｂａｔでは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は、３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａでは、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、ＶＬのアミノ酸残基は、２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。
【０２０４】
各々のＶＨ及びＶＬには通常、３つのＣＤＲと４つのＦＲが含まれ、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【０２０５】
抗体分子は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。
【０２０６】
本明細書で使用されるとき、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術により、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え法）により作製することができる。
【０２０７】
抗体は、組換えにより作製することができ、例えば、ファージディスプレイにより、またはコンビナトリアル法により作製することができる。
【０２０８】
抗体を産生するためのファージディスプレイ及びコンビナトリアル法は、（例えば、参照により、本明細書にその全ての内容が組み込まれる、Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，２２３，４０９号、Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９２／１８６１９、Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９２／２０７９１、Ｍａｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９２／１５６７９、Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９３／０１２８８、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９２／０９６９０、Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開ＷＯ９０／０２８０９、Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１、Ｇｒｉｆｆｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８、Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０、Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７、及びＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２に記載されるように）当該技術分野において公知である。
【０２０９】
一実施形態では、抗体は完全ヒト抗体（例えば、ヒトの免疫グロブリン配列からの抗体を生成するように遺伝子操作されたマウスで作られた抗体）、または非ヒトの抗体、例えば、げっ歯類（マウスもしくはラット）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体である。好ましくは、非ヒト抗体はげっ歯類（マウスまたはラット抗体）である。げっ歯類抗体を作製する方法は、当該技術分野で公知である。
【０２１０】
ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなく、ヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを使用して生成できる。目的の抗原で免疫されたこれらのトランスジェニックマウスの脾細胞を使用して、ヒトタンパク質のエピトープに対する特異的な親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを作製する（例えば、Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．、国際出願ＷＯ９１／００９０６、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９１／１０７４１、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．、国際出願ＷＯ９２／０３９１８、Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．、国際出願９２／０３９１７、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９、Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：３３−４０、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  ＰＮＡＳ  ９０：３７２０−３７２４、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：１３２３−１３２６を参照されたい）。
【０２１１】
抗体分子は、可変領域またはその一部、例えば、ＣＤＲが非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成されるものであり得る。キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、及びヒト化抗体は本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスで生成され、次いで可変フレームワークまたは定常領域において改変されて、ヒトでの抗原性を低下させる抗体分子は、本発明の範囲内である。
【０２１２】
「実質上ヒト」タンパク質は、中和抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を実質的に誘発しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、例えば、慢性または再発性の疾患状態の治療において、抗体分子が繰り返し投与される場合など、多くの状況で問題になる可能性がある。ＨＡＭＡ応答は、血清からの抗体クリアランスが増加するため（例えば、Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３２：１８０−１９０（１９９０）を参照されたい）、及び潜在的なアレルギー反応のため（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，５：５１１７−５１２３（１９８６）を参照されたい）、抗体の反復投与を潜在的に無効にする可能性がある。
【０２１３】
キメラ抗体は、当該技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって産生することができる（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、国際特許出願公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願第１８４，１８７号、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．欧州特許出願第１７１，４９６号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願第１７３，４９４号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．国際出願ＷＯ８６／０１５３３、Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願第１２５，０２３号、Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３）、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：３４３９−３４４３、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：２１４−２１８、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５、Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９、及びＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照されたい）。
【０２１４】
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体は、少なくとも１つまたは２つであるが、一般的には３つ全ての（免疫グロブリン重鎖及び／または軽鎖の）レシピエントＣＤＲがドナーＣＤＲで置きかえられている。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部と置き換えることができ、またはＣＤＲの一部のみを非ヒトＣＤＲと置き換えることができる。抗原への結合に必要とされる数のＣＤＲを置き換えるのみでよい。好ましくは、ドナーはげっ歯類の抗体、例えば、ラットまたはマウスの抗体であり、レシピエントはヒトのフレームワークまたはヒトのコンセンサスフレームワークである。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態では、ドナー免疫グロブリンは非ヒト（例えば、げっ歯類）である。アクセプターフレームワークは、天然に存在する（例えば、ヒト）フレームワークまたはコンセンサスフレームワーク、またはそれと約８５％以上、好ましくは９０％、９５％、９９％またはそれ以上同一の配列である。
【０２１５】
本明細書で使用されるとき、「コンセンサス配列」という用語は、関連配列のファミリーで最も頻繁に発生するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成された配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ  １９８７を参照されたい）。タンパク質のファミリーでは、コンセンサス配列の各位置は、ファミリーのその位置で最も頻繁に発生するアミノ酸によって占められている。２つのアミノ酸が同等に頻繁に発生する場合は、どちらもコンセンサス配列に含めることができる。「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列のフレームワーク領域を指す。
【０２１６】
抗体分子は、当該技術分野で公知の方法によってヒト化することができる（例えば、参照によりその全ての内容が本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７、Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４によるもの、ならびにＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１、及びＵＳ５，６９３，７６２によるものを参照されたい）。
【０２１７】
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体分子は、免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、または全てのＣＤＲを置き換えることができるＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって作製することができる。例えば、参照により全ての内容が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０、Ｗｉｎｔｅｒ  ＵＳを参照されたい）。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用され得るＣＤＲ移植方法（１９８７年３月２６日に出願された英国特許出願ＧＢ２１８８６３８Ａ、Ｗｉｎｔｅｒ  ＵＳ５，２２５，５３９）を記載し、その内容は参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【０２１８】
同様に、特定のアミノ酸が置換、欠失、または付加されているヒト化抗体分子も本発明の範囲内である。ドナーからアミノ酸を選択するための基準が、参照によりその全ての内容が本明細書に組み込まれる、ＵＳ５，５８５，０８９、例えば、ＵＳ５，５８５，０８９の１２〜１６列、例えば、ＵＳ５，５８５，０８９の１２〜１６列に記載されている。抗体をヒト化するための他の技術は、１９９２年１２月２３日に公開されたＰａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．ＥＰ  ５１９５９６  Ａ１に記載されている。
【０２１９】
抗体分子は単鎖抗体であってよい。単鎖抗体（ｓｃＦＶ）は、改変されていてもよい（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８８０：２６３−８０、及びＲｅｉｔｅｒ，Ｙ．（１９９６）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２：２４５−５２を参照されたい）。単鎖抗体を二量体化または多量体化して、同一の標的タンパク質の異なるエピトープに対する特異性を有する多価抗体を生成することができる。
【０２２０】
さらに他の実施形態では、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥの重鎖定常領域から選択され、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗体分子は、カッパまたはラムダの、例えば、（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定数領域は、抗体の特性を改変するため（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、及び／または補体機能の１つ以上を増加または減少させるため）に改変、例えば変異させることができる。一実施形態では、抗体はエフェクター機能を有し、補体を結合できる。他の実施形態では、抗体はエフェクター細胞を動員せず、または補体を結合しない。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低下しているか、または全くない。例えば、Ｆｃ受容体への結合をサポートしないアイソタイプまたはサブタイプ、フラグメントまたはその他の変異体であり、例えば、Ｆｃ受容体結合領域が変異または削除されている。
【０２２１】
抗体定常領域を改変する方法は、当該技術分野で公知である。例えば、細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１成分などのエフェクターリガンドに対する改変された親和性などの改変された機能を有する抗体は、抗体の定常部分の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基に置き換えることによって生成できる（例えば、参照により全ての内容が本明細書に組み込まれる、ＥＰ３８８１５１  Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号、及び米国特許第５６４８２６０号を参照されたい）。改変の同様のタイプは、マウスに適用した場合について説明することができ、または他の種の免疫グロブリンは、これらの機能を低減または排除する。
【０２２２】
抗体分子は、誘導体化するか、別の機能性分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結することができる。本明細書で使用されるとき、「誘導体化」抗体分子は改変されたものである。誘導体化の方法には、蛍光部分、放射性ヌクレオチド、毒素、酵素、またはビオチンなどの親和性リガンドの付加が含まれるが、これらに限定されない。したがって、本発明の抗体分子は、免疫接着分子を含む、本明細書に記載の抗体の誘導体化及び他の改変された形態を含むことが意図されている。例えば、抗体分子は、別の抗体（例えば、二重特異性抗体またはダイアボディ）、検出可能な薬剤、細胞傷害剤、医薬品、及び／または抗体もしくは抗体部分と別の分子（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなど）との会合を媒介することができるタンパク質もしくはペプチドなどの１つ以上の他の分子実体に（化学結合、遺伝子融合、非共有会合、その他などによって）機能的に連結することができる。
【０２２３】
１つのタイプの誘導体化抗体分子は、（同一のタイプまたは異なるタイプの、例えば二重特異性抗体を作成するために）２つ以上の抗体を架橋することによって生成される。適切な架橋剤は、適切なスペーサー（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）で区切られた２つの明確に異なる反応性基を含むヘテロ二官能性、またはホモ二官能性（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）を含む。このようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌから入手可能である。
【０２２４】
多重特異性抗体分子
実施形態では、多重特異性抗体分子は、１つを超える抗原結合部位を含むことができ、異なる部位が異なる抗原に特異的である。実施形態では、多重特異性抗体分子は、同一の抗原上の１つを超える（例えば、２つ以上）のエピトープと結合できる。実施形態では、多重特異性抗体分子は、標的細胞（例えば、がん細胞）に特異的な抗原結合部位及び免疫エフェクター細胞に特異的な異なる抗原結合部位を含む。一実施形態では、多重特異性抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体分子は、５つの異なる構造の群、すなわち（ｉ）二重特異性免疫グロブリンＧ（ＢｓＩｇＧ）、（ｉｉ）追加の抗原結合部分が付加されたＩｇＧ、（ｉｉｉ）二重特異性抗体フラグメント、（ｉｖ）二重特異性融合タンパク質、及び（ｖ）二重特異性抗体コンジュゲートに分類することができる。
【０２２５】
ＢｓＩｇＧは、各抗原に対して一価であるフォーマットである。典型的なＢｓＩｇＧフォーマットには、ｃｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ツーインワン）、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ−ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブインホールアセンブリ、電荷ペア、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂが含まれるがこれらに限定されない。Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５−１０６を参照されたい。例示的なＢｓＩｇＧには、抗ＣＤ３アーム及び抗ＥｐＣＡＭアームを含むカツマキソマブ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｔｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ，Ｎｅｏｐｈａｒｍ）、ならびに、ＣＤ３及びＨＥＲ２を標的とするエルツマキソマブ（Ｎｅｏｖｉｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）が含まれる。いくつかの実施形態では、ＢｓＩｇＧはヘテロ二量体化のために操作された重鎖を含む。例えば、重鎖は「ノブイントゥホール」戦略、ＳＥＥＤプラットフォーム、共通重鎖（例えば、κλ−ボディ）、及びヘテロ二量体Ｆｃ領域の使用を使用して、ヘテロ二量体化のために操作できる。Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５−１０６を参照されたい。ＢｓＩｇＧにおけるホモ二量体の重鎖対形成を回避するために使用されてきた戦略には、ノブインホール、デュオボディ、アズィメトリック、電荷ペア、ＨＡ−ＴＦ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、及び差動プロテインＡアフィニティが含まれる。同文献を参照されたい。ＢｓＩｇＧは、異なる宿主細胞での成分抗体の個別の発現と、それに続くＢｓＩｇＧへの精製／アセンブリによって生成できる。ＢｓＩｇＧはまた、単一の宿主細胞における成分抗体の発現により産生され得る。ＢｓＩｇＧは、アフィニティークロマトグラフィーなどを使用して、例えば、プロテインＡ及び連続的ｐＨ溶出を使用して精製できる。
【０２２６】
追加の抗原結合部分が付加されたＩｇＧは、二重特異性抗体分子の別のフォーマットである。例えば、単一特異性ＩｇＧは、例えば重鎖または軽鎖のいずれかのＮ末端またはＣ末端において、単一特異性ＩｇＧなどに追加の抗原結合ユニットを付加することにより、二重特異性を有するように操作できる。例示的な追加の抗原結合ユニットには、単一ドメイン抗体（例えば、可変重鎖または可変軽鎖）、操作されたタンパク質足場、及び対形成抗体可変領域（例えば、単鎖可変フラグメントまたは可変フラグメント）が含まれる。同文献を参照されたい。付加されたＩｇＧフォーマットの例には、二重可変ドメインＩｇＧ（ＤＶＤ−Ｉｇ）、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ、Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ザイボディ、及びＤＶＩ−ＩｇＧ（フォーインワン）が含まれる。Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５−１０６を参照されたい。ＩｇＧ−ｓｃＦｖの例は、ＩＧＦ−１Ｒ及びＨＥＲ３と結合するＭＭ−１４１（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）である。ＤＶＤ−Ｉｇの例には、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βと結合するＡＢＴ−９８１（ＡｂｂＶｉｅ）、ならびにＴＮＦ及びＩＬ−１７Ａと結合するＡＢＴ−１２２（ＡｂｂＶｉｅ）が含まれる。
【０２２７】
二重特異性抗体フラグメント（ＢｓＡｂ）は、抗体定常領域の一部または全てを欠く二重特異性抗体分子のフォーマットである。例えば、一部のＢｓＡｂはＦｃ領域を欠く。実施形態では、二重特異性抗体フラグメントには、単一の宿主細胞でのＢｓＡｂの効率的な発現を可能にするペプチドリンカーによって接続された重鎖及び軽鎖領域が含まれる。例示的な二重特異性抗体フラグメントには、ナノボディ、ナノボディ−ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ−ＣＨ３、ダイアボディ−ＣＨ３、三重ボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、及び細胞内抗体が含まれるがこれらに限定されない。同文献を参照されたい。例えば、ＢｉＴＥフォーマットはタンデムｓｃＦｖを含み、成分ｓｃＦｖはＴ細胞上のＣＤ３及びがん細胞上の表面抗原に結合する。
【０２２８】
二重特異性融合タンパク質は、例えば、追加の特異性及び／または機能性を付加するために他のタンパク質に連結された抗体フラグメントを含む。二重特異性融合タンパク質の例は、ＨＬＡ提示ペプチドを認識する親和性成熟Ｔ細胞受容体に連結された抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含むｉｍｍＴＡＣである。実施形態では、ドックアンドロック（ＤＮＬ）法を使用して、より高い価数の二重特異性抗体分子を生成できる。同様に、アルブミン結合タンパク質またはヒト血清アルブミンへの融合は、抗体フラグメントの血清半減期を延長することができる。同文献を参照されたい。
【０２２９】
実施形態では、化学的コンジュゲーション、例えば、抗体及び／または抗体フラグメントの化学的コンジュゲーションを使用して、ＢｓＡｂ分子を作成することができる。同文献を参照されたい。例示的な二重特異性抗体コンジュゲートには、低分子量薬物が各Ｆａｂアームまたは抗体もしくはそのフラグメントの単一の反応性リジンに部位特異的にコンジュゲートされるＣｏｖＸ−ボディフォーマットが含まれる。実施形態では、コンジュゲーションは低分子量薬物の血清半減期を改善する。例示的なＣｏｖＸ−ボディはＣＶＸ−２４１（ＮＣＴ０１００４８２２）であり、これはＶＥＧＦまたはＡｎｇ２のいずれかを阻害する２つの短いペプチドにコンジュゲートした抗体を含む。同文献を参照されたい。
【０２３０】
抗体分子は、宿主系において、少なくとも１つ以上の成分の組換え発現などによって産生することができる。例示的な宿主系には、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞、または昆虫細胞、例えば、ＳＦ９もしくはＳ２細胞）及び原核細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）が含まれる。二重特異性抗体分子は、異なる宿主細胞での成分の個別の発現と、それに続く精製／構築によって生成できる。代替的に、抗体分子は、単一の宿主細胞における成分の発現により産生され得る。二重特異性抗体分子の精製は、例えばプロテインＡ及び連続的なｐＨ溶出を使用するアフィニティークロマトグラフィーなどの様々な方法により行うことができる。他の実施形態では、親和性タグ、例えば、ヒスチジン含有タグ、ｍｙｃタグ、またはストレプトアビジンタグを精製に使用することができる。
【０２３１】
ＣＳＦ１Ｒを標的化する多重特異性抗体分子
一態様では、本明細書で開示されるのは、ＣＳＦ１Ｒ結合部分を含む多重特異性抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含む。例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子配列は、ＷＯ２００９０２６３０３Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１６２０７３１２Ａ１、ＷＯ２０１６１０６１８０Ａ１、ＵＳ２０１６０２２０６６９Ａ１、ＵＳ２０１６０３２６２５４Ａ１、ＷＯ２０１３１６９２６４Ａ１、ＷＯ２０１３０８７６９９Ａ１、ＷＯ２０１１１４０２４９Ａ２、ＷＯ２０１１１３１４０７Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１１１０７５５３Ａ１、及びＷＯ２０１１０７００２４Ａ１に記載され、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、エマクツズマブのＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一である（例えば、それと９５％〜９９．９％同一であるか、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、カビラリズマブのＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＡＭＧ８２０のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＩＭＣ−ＣＳ４のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、表１に開示されるＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列、表１に開示されるＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列のＣＤＲ、またはそれらと実質的に同一の配列を含む。
【０２３２】
【表１−１】
2021505155.tif 000002
【表１−２】
2021505155.tif 000003
【０２３３】
ＣＣＲ２を標的とする多重特異性抗体分子
一態様では、本明細書で開示されるのは、ＣＣＲ２結合部分を含む多重特異性抗体分子である。例示的な抗ＣＣＲ２抗体は、本明細書ならびにＷＯ２０１３１９２５９６Ａ２、ＷＯ２０１００２１６９７Ａ２、ＷＯ２００１０５７２２６Ａ１、及びＷＯ１９９７０３１９４９Ａ１に記載され、これらは全て、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２結合部分は、プロザリズマブのＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２結合部分は、表２に開示されるＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列、表２に開示されるＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列のＣＤＲ、またはそれらと実質的に同一の配列を含む。
【０２３４】
【表２−１】
2021505155.tif 000004
【表２−２】
2021505155.tif 000005
【０２３５】
ＰＤ−Ｌ１を標的とする多重特異性抗体分子
一態様では、本明細書で開示されるのは、ＰＤ−Ｌ１結合部分を含む多重特異性抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子を含む。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子配列は、ＷＯ２０１３０７９１７４、ＷＯ２０１００７７６３４、ＷＯ２００７／００５８７４、及びＵＳ２０１２００３９９０６に記載され、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、デュルバルマブのＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、アテゾリズマブのＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、アベルマブのＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つ全てのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列、またはそれと実質的に同一な（例えば、それと９５％〜９９．９％同一、もしくは、少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、５つ、１０個、もしくは１５個を超えない改変（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、表３に開示されるＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列、表３に開示されるＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列のＣＤＲ、またはそれらと実質的に同一の配列を含む。
【０２３６】
【表３−１】
2021505155.tif 000006
【表３−２】
2021505155.tif 000007
【０２３７】
ＣＤＲ−移植足場
実施形態では、抗体分子は、ＣＤＲ−移植足場ドメインである。実施形態では、足場ドメインは、フィブロネクチンドメイン、例えば、フィブロネクチンタイプＩＩＩドメインに基づく。フィブロネクチンタイプＩＩＩ（Ｆｎ３）ドメインの全体的な折り畳みは、最小の機能的抗体フラグメントである、抗体の重鎖の可変領域の折り畳みと密接に関連する。Ｆｎ３の末端には３つのループがあり、ＢＣ、ＤＥ、及びＦＧループの位置は、抗体のＶＨドメインのＣＤＲ１、２、及び３の位置にほぼ対応している。Ｆｎ３はジスルフィド結合を有さず、したがって、Ｆｎ３は、抗体及びそのフラグメントとは異なり、還元条件下で安定している（例えば、ＷＯ９８／５６９１５、ＷＯ０１／６４９４２、ＷＯ００／３４７８４を参照されたい）。Ｆｎ３ドメインは、本明細書に記載の抗原／マーカー／細胞に結合するドメインを選択するために、（例えば、本明細書に記載のＣＤＲまたは超可変ループを使用して）改変され得るか、または変更され得る。
【０２３８】
実施形態では足場ドメイン、例えば、折り畳まれたドメインは、抗体、例えば、モノクローナル抗体の重鎖可変領域から３つのベータ鎖を除去することによって作製された「ミニボディ」足場に基づく（例えば、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．７：９；及びＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：５３０３−５３０９を参照されたい）。「ミニボディ」を使用して、２つの超可変ループを提示することができる。実施形態では、足場ドメインはＶ様ドメイン（例えば、Ｃｏｉａ  ｅｔ  ａｌ．ＷＯ９９／４５１１０を参照されたい）、または７４残基の、２つのジスルフィド結合によって結合された６つの鎖のベータシートサンドイッチである、テンダミスタチンに由来するドメイン（例えば、ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｏｅｓｓ，１９９５，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５０：４６０を参照されたい）である。例えば、テンダミスタチンのループは、本明細書に記載のマーカー／抗原／細胞に結合するドメインを選択するために、（例えば、ＣＤＲまたは超可変ループを使用して）改変され得るか、または変更され得る。別の例示的な足場ドメインは、ＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインに由来するベータサンドイッチ構造である（例えば、ＷＯ００／６００７０を参照されたい）。
【０２３９】
他の例示的な足場ドメインには、Ｔ細胞受容体、ＭＨＣタンパク質、細胞外ドメイン（例えば、フィブロネクチンタイプＩＩＩリピート、ＥＧＦリピート）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、エコチン、ＢＰＴＩなど）、ＴＰＲリピート、トリフォイル構造、ジンクフィンガードメイン、ＤＮＡ結合タンパク質、特に単量体ＤＮＡ結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、酵素、例えば、プロテアーゼ（特に不活性化されたプロテアーゼ）、ＲＮａｓｅ、シャペロン、例えば、チオレドキシン、熱ショックタンパク質、細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＨ２及びＳＨ３ドメインなど）が含まれるがこれらに限定されない。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００４０００９５３０及びＵＳ７，５０１，１２１を参照されたい。
【０２４０】
実施形態では、足場ドメインは、例えば次の基準の１つ以上によって評価され、選択される：（１）アミノ酸配列、（２）複数の相同ドメインの配列、（３）三次元構造、及び／または（４）一定範囲のｐＨ、温度、塩分濃度、有機溶媒、酸化剤濃度にわたる安定性データ。実施形態では、足場ドメインは小さく、安定したタンパク質ドメイン、例えば、１００、７０、５０、４０、または３０アミノ酸未満のタンパク質である。ドメインは、１つ以上のジスルフィド結合を含み得るか、金属、例えば、亜鉛をキレート化し得る。
【０２４１】
本明細書で定義される多機能性分子の例示的な構造を以下に記載する。例示的な構造は、以下にさらに記載される：Ｗｅｉｄｌｅ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｔｈｅ  Ｉｎｔｒｉｇｕｉｎｇ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒｍａｔｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ＆  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １０：  １−１８（２０１３）、及びＳｐｉｅｓｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｍａｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６７：９５−１０６）。これらそれぞれの全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４２】
ヘテロ二量体化抗体分子
ヘテロ二量体化二重特異性抗体は、２つの結合アームが異なる抗原を認識する天然のＩｇＧ構造に基づく。定義された一価（及び同時）の抗原結合を可能にするＩｇＧ由来のフォーマットは、重鎖のヘテロ二量化を強制的に行い、軽鎖のミスペアリングを最小限に抑える技術（例えば、共通の軽鎖）と組み合わせて生成される。強制重鎖ヘテロ二量化は、例えば、ノブインホールまたは鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）を使用して取得できる。
【０２４３】
ノブインホール
ＵＳ５，７３１，１１６、ＵＳ７，４７６，７２４、及びＲｉｄｇｗａｙ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９（７）：６１７−６２１に記載されるようなノブインホールは、広く以下を含む：（１）一方または両方の抗体のＣＨ３ドメインを変異させてヘテロ二量体化を促進する、（２）ヘテロ二量体化を促進する条件下で変異抗体を組み合わせる。「ノブ」または「突起」は、典型的には、親抗体の小さなアミノ酸を大きなアミノ酸で置き換える（例えば、Ｔ３６６ＹまたはＴ３６６Ｗ）ことによって作製され、「ホール」または「空洞」は、親抗体の大きな残基を小さなアミノ酸で置き換える（例えば、Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）ことによって作製され、これらは、Ｅｕ付番システムに基づいて付番されている。
【０２４４】
鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）
ＳＥＥＤは、ＩｇＧ１とＩｇＡ間の配列交換に基づいて、優先的にヘテロ二量体化する非同一の鎖を作製する。ＳＥＥＤ  ＣＨ３ドメイン内のヒトＩｇＡ及びＩｇＧからの代替配列は、ＡＧ及びＧＡと呼ばれる２つの非対称だが相補的なドメインを生成する。ＳＥＥＤ設計は、ＡＧ及びＧＡ  ＳＥＥＤ  ＣＨ３ドメインのホモ二量体化を嫌う一方で、ＡＧ／ＧＡヘテロ二量体の効率的な生成を可能にする。
【０２４５】
共通軽鎖及びＣｒｏｓｓＭａｂ
二重特異性ＩｇＧの均質な調製物を生成するために、軽鎖のミスペアリングを回避する必要がある。これを達成する１つの方法は、共通軽鎖原理を使用すること、すなわち、１つの軽鎖を共有しているが、個別の特異性を有する２つの結合因子を組み合わせることである。別の選択肢は、二重特異性抗体の半分のＦａｂのＣＨ１ドメインとＣＬドメインを交換することにより、非特異的なＬ鎖のミスペアリングを回避するＣｒｏｓｓＭａｂ技術である。このようなクロスオーバーバリアントは、結合の特異性と親和性を保持するが、２つのアームが非常に異なるため、Ｌ鎖のミスペアリングが防止される。
【０２４６】
抗体ベースの融合体
抗体のＮ末端またはＣ末端に付加された追加の結合実体を含む様々なフォーマットを生成できる。一本鎖またはジスルフィドで安定化されたＦｖまたはＦａｂとのこれらの融合により、各抗原に対して二価の結合特異性を有する四価分子が生成される。ｓｃＦｖ及びｓｃＦａｂとＩｇＧの組み合わせにより、３つ以上の異なる抗原を認識できる分子の生成が可能になる。
【０２４７】
抗体−Ｆａｂ融合体
抗体−Ｆａｂ融合体は、第１の標的に対する従来の抗体と、抗体重鎖のＣ末端に融合した第２の標的に対するＦａｂとを含む二重特異性抗体である。通常、抗体とＦａｂは共通の軽鎖を有する。抗体融合体は、（１）標的融合のＤＮＡ配列を操作すること、（２）標的ＤＮＡを適切な宿主細胞にトランスフェクトして融合タンパク質を発現させることによって生成できる。Ｃｏｌｏｍａ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １５：１５９に記載されるように、抗体−ｓｃＦｖ融合体は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端の間の（Ｇｌｙ）−Ｓｅｒリンカーによって連結できるようである。
【０２４８】
抗体−ｓｃＦｖ融合体
抗体−ｓｃＦｖ融合体は、従来の抗体と、抗体重鎖のＣ末端に融合した固有の特異性のｓｃＦｖとを含む二重特異性抗体である。ｓｃＦｖは、直接またはリンカーペプチドを介して、ｓｃＦｖの重鎖を介してＣ末端に融合できる。抗体融合体は、（１）標的融合のＤＮＡ配列を操作すること、（２）標的ＤＮＡを適切な宿主細胞にトランスフェクトして融合タンパク質を発現させることによって生成できる。Ｃｏｌｏｍａ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １５：１５９に記載されるように、抗体−ｓｃＦｖ融合体は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端の間の（Ｇｌｙ）−Ｓｅｒリンカーによって連結できるようである。
【０２４９】
可変ドメイン免疫グロブリンＤＶＤ
関連するフォーマットは、デュアル可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）であり、これは、短いリンカー配列によってＶドメインのＮ末端にある第２の特異性の場所のＶＨドメイン及びＶＬドメインからなる。
【０２５０】
Ｆｃ含有実体（ミニ抗体）
Ｆｃ含有実体（ミニ抗体とも呼ばれる）は、ｓｃＦｖを、特異性の異なる抗体の定常重領域ドメイン３のＣ末端（ＣＨ３−ｓｃＦｖ）及び／またはヒンジ領域（ｓｃＦｖ−ｈｉｎｇｅ−Ｆｃ）に融合することで生成できる。ＩｇＧのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合したジスルフィド安定化可変領域（ペプチドリンカーを有さない）を有する３価実体も作製できる。
【０２５１】
Ｆｃ非含有二重特異性体
Ｆｃ非含有二重特異性体は、一般にＦｃ含有実体よりもサイズが小さいことを特徴とする。このクラスの一般的な二重特異性体には、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ２及びＦａｂ−ｓｃＦｖ分子が含まれる。このクラスには、例えば、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）、ダイアボディ、ＴａｎｄＡｂ（四価タンデム抗体）、及びＤＡＲＴ（二重親和性リターゲティング分子）も含まれる。ＢｉＴＥは、柔軟なリンカーペプチドを介して２つのｓｃＦｖを融合することによって作製される。ダイアボディは、２つの異なる抗体からの２つのＶＨドメインと２つのＶＬドメインからなる。ＶＨ及びＶＬドメインのみとの対形成を可能にする短いリンカーペプチドでドメインを接続することにより、別の鎖の相補ドメインとのみ相互作用させることができる。第２の結合因子のＶＬに連結された第１の結合因子のＶＨは、第１の抗体のＶＬに連結された第２の抗体のＶＨと共発現する。ＴａｎｄＡｂ分子は、分子内対形成を防止する方向に４つの抗体可変Ｈ鎖とＬ鎖からなるタンパク質の機能的二量体化によって生成される。ＤＡＲＴは、ダイアボディと同様の設計概念を適用するジスルフィド結合によって安定化された実体である。
【０２５２】
カッパ／ラムダフォーマット
ラムダ軽鎖ポリペプチド及びカッパ軽鎖ポリペプチドを含む多重特異性分子（例えば、多重特異性抗体分子）は、ヘテロ二量体化を可能にするために使用できる。ラムダ軽鎖ポリペプチド及びカッパ軽鎖ポリペプチドを含む二重特異性抗体分子を生成する方法は、２０１７年９月２２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１７／５３０５３に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５３】
実施形態では、多重特異性分子には、多重特異性抗体分子、例えば、２つの結合特異性を含む抗体分子、例えば、二重特異性抗体分子が含まれる。多重特異性抗体分子には以下が含まれる：
第１のエピトープに特異的なラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）、
第１のエピトープに特異的な重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）、
第２のエピトープに特異的なカッパ軽鎖ポリペプチド１（ＫＬＣＰ２）、
第２のエピトープに特異的な重鎖リペプチド１（ＨＣＰ２）。
【０２５４】
「ラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）」は、その用語が本明細書で使用されるとき、同族の重鎖可変領域と組み合わせると、そのエピトープ及びＨＣＰ１との複合体に対する特異的な結合を媒介できるようになるのに十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域の全てまたはフラグメントを含む。一実施形態では、ＬＬＣＰ１は、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、及びＣＨ１、またはそれらのエピトープ及びＨＣＰ１との複合体に対する特異的な結合を媒介するのに十分なそれらからの配列を含む。ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１とともに、第１のエピトープに対する特異性を提供する（ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２とともに、第２のエピトープに対する特異性を提供する）。本明細書の他の箇所に記載されているように、ＬＬＣＰ１はＨＣＰ２よりもＨＣＰ１に対して高い親和性を有する。
【０２５５】
「カッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）」は、その用語が本明細書で使用されるとき、同族の重鎖可変領域と組み合わせると、そのエピトープ及びＨＣＰ２との複合体に対する特異的な結合を媒介できるようになるのに十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域の全てまたはフラグメントを含む。一実施形態では、ＫＬＣＰ２は、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、及びＣＨ１、またはそれらのエピトープ及びＨＣＰ２との複合体に対する特異的な結合を媒介するのに十分なそれらからの配列を含む。ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２とともに、第２のエピトープに対する特異性を提供する（ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１とともに、第１のエピトープに対する特異性を提供する）。
【０２５６】
「重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）」は、その用語が本明細書で使用されるとき、同族のＬＬＣＰ１と組み合わせると、そのエピトープ及びＨＣＰ１との複合体に対する特異的な結合を媒介できるようになるのに十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えばＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域の全てまたはフラグメントを含む。一実施形態では、それは、ＣＨ２及び／またはＣＨ３領域の全てまたはフラグメントを含む。一実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３、またはそれらからの以下をするのに十分な配列を含む：（ｉ）そのエピトープ及びＬＬＣＰ１との複合体の特異的結合を仲介する、（ｉｉ）本明細書で記載されるように、ＫＬＣＰ２ではなく、ＬＬＣＰ１と優先的に複合体化する、（ｉｉｉ）本明細書に記載されるように、ＨＣＰ１の別の分子ではなく、ＨＣＰ２と優先的に複合体化する。ＨＣＰ１は、そのＬＬＣＰ１とともに、第１のエピトープに対する特異性を提供する（ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２とともに、第２のエピトープに対する特異性を提供する）。
【０２５７】
「重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）」は、その用語が本明細書で使用されるとき、同族のＬＬＣＰ１と組み合わせると、そのエピトープ及びＨＣＰ１との複合体に対する特異的な結合を媒介できるようになるのに十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えばＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域の全てまたはフラグメントを含む。一実施形態では、それは、ＣＨ２及び／またはＣＨ３領域の全てまたはフラグメントを含む。一実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３、またはそれらからの以下をするのに十分な配列を含む：（ｉ）そのエピトープ及びＫＬＣＰ２との複合体の特異的結合を仲介する、（ｉｉ）本明細書で記載されるように、ＬＬＣＰ１ではなく、ＫＬＣＰ２と優先的に複合体化する、（ｉｉｉ）本明細書に記載されるように、ＨＣＰ２の別の分子ではなく、ＨＣＰ１と優先的に複合体化する。ＨＣＰ２は、そのＫＬＣＰ２とともに、第２のエピトープに対する特異性を提供する（ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１とともに、第１のエピトープに対する特異性を提供する）。
【０２５８】
本明細書に開示される多重特異性抗体分子のいくつかの実施形態では、
ＬＬＣＰ１はＨＣＰ２よりもＨＣＰ１に対して高い親和性を有する、及び／または
ＫＬＣＰ２はＨＣＰ１よりもＨＣＰ２に対して高い親和性を有する。
【０２５９】
実施形態では、ＬＬＣＰ１のＨＣＰ１に対する親和性は、そのＨＣＰ２に対する親和性よりも十分に大きいため、事前に選択した条件下で、例えば、水性緩衝液中、例えば、ｐＨ７、生理食塩水中、例えば、ｐＨ７、または生理学的条件下で、多重特異性抗体分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％は、ＨＣＰ１と複合化または相互作用したＬＬＣＰ１を有する。
【０２６０】
本明細書に開示される多重特異性抗体分子のいくつかの実施形態では、
ＨＣＰ１はＨＣＰ１の第２の分子よりもＨＣＰ２に対して大きい親和性を有する、及び／または
ＨＣＰ２はＨＣＰ２の第２の分子よりもＨＣＰ１に対して大きい親和性を有する。
【０２６１】
実施形態では、ＨＣＰ１のＨＣＰ２に対する親和性は、そのＨＣＰ１の第２の分子に対する親和性よりも十分に大きいため、事前に選択した条件下で、例えば、水性緩衝液中、例えば、ｐＨ７、生理食塩水中、例えば、ｐＨ７、または生理学的条件下で、多重特異性抗体分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％は、ＨＣＰ２と複合化または相互作用したＨＣＰ１を有する。
【０２６２】
別の態様では、本明細書に開示されるのは、多重特異性抗体分子を作製または生成するための方法である。方法は、（ｉ）〜（ｉｖ）が会合する条件下で、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３、またはその両方）のうちの１つ、２つ、３つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド）を提供することと、
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３、またはその両方）のうちの１つ、２つ、３つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド）を提供することと、
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に会合するラムダ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ鎖可変領域（ＶＬλ）、ラムダ鎖定常領域（ＶＬλ）、またはその両方）を提供すること、及び
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に会合するカッパ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ鎖可変領域（ＶＬκ）、ラムダ鎖定常領域（ＶＬκ）、またはその両方）を提供すること
を、含む。
【０２６３】
実施形態では第１及び第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量化を促進するＦｃ界面を形成する。
【０２６４】
実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）（例えば、（ｉ）〜（ｉｖ）をコードする核酸）は、単一の細胞、例えば、単一の哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞に導入される。実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）は細胞で発現する。
【０２６５】
実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）（例えば、（ｉ）〜（ｉｖ）をコードする核酸）は、異なる細胞、例えば、異なる哺乳動物細胞、例えば、２つ以上のＣＨＯ細胞に導入される。実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）は細胞で発現する。
【０２６６】
一実施形態では、方法は、ラムダ及び／またはカッパ特異的精製、例えば、アフィニティークロマトグラフィーを使用して、細胞発現抗体分子を精製することをさらに含む。
【０２６７】
実施形態では、方法は、細胞発現した多重特異性抗体分子を評価することをさらに含む。例えば、精製された細胞発現多重特異性抗体分子は、質量分析を含む、当該技術分野で公知の技術によって分析することができる。一実施形態では、精製された細胞発現抗体分子は切断され、例えば、パパインで消化されてＦａｂ部分を生成し、質量分析を使用して評価される。
【０２６８】
実施形態では、方法は、正しく対形成されたカッパ／ラムダ多重特異性、例えば、二重特異性の抗体分子を、例えば、少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％の高収率で生成する。
【０２６９】
他の実施形態では、多重特異性、例えば、二重特異性の抗体分子は、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ１）（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３、またはその両方）のうちの１つ、２つ、３つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド）（例えばＨＣＰ１は第１のエピトープに結合する）、
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ２）（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３、またはその両方）のうちの１つ、２つ、３つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド）（例えばＨＣＰ２は第２のエピトープに結合する）、
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に会合するラムダ軽鎖ポリペプチド（ＬＬＣＰ１）（例えば、ラムダ鎖可変領域（ＶＬｌ）、ラムダ鎖定常領域（ＶＬｌ）、またはその両方）（例えばＬＬＣＰ１は第１のエピトープに結合する）、及び
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に会合するカッパ軽鎖ポリペプチド（ＫＬＣＰ２）（例えば、ラムダ鎖可変領域（ＶＬκ）、ラムダ鎖定常領域（ＶＬκ）、またはその両方）（例えばＫＬＣＰ２は第２のエピトープに結合する）
を含む。
【０２７０】
実施形態では第１及び第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量化を促進するＦｃ界面を形成する。実施形態では、多重特異性抗体分子は、Ｆｃ定常、ＣＨ２〜ＣＨ３ドメインに接続された第１の重鎖可変領域にヘテロ二量体化されたハイブリッドＶＬ１−ＣＬ１（ノブ改変を有する）を含む第１の結合特異性、及びＦｃ定常、ＣＨ２〜ＣＨ３ドメインに接続された第２の重鎖可変領域にヘテロ二量体化されたハイブリッドＶＬκ−ＣＬκ（ホール改変を有する）を含む第２の結合特異性を有する。
【０２７１】
非隣接ポリペプチドを含む多重特異性分子
一実施形態では、多重特異性分子は単一のポリペプチド鎖ではない。
【０２７２】
一実施形態では、抗体分子には２つの完全な重鎖と２つの完全な軽鎖が含まれる。一実施形態では、少なくとも２つまたは少なくとも３つの非隣接ポリペプチド鎖を有する多重特異性分子は、例えば、本明細書に記載の、少なくとも２つの非隣接ポリペプチド鎖中の第１及び第２重鎖定常領域（例えば、第１及び第２のＦｃ領域）を含む。
【０２７３】
実施形態では、多重特異性分子は二重特異性または二機能性分子であり、第１及び第２のポリペプチド（ｉ）及び（ｉｉ）は非隣接であり、例えば、２つの別個のポリペプチド鎖である。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド（ｉ）及び（ｉｉ）は、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の、Ｅｕ付番システムに基づいて付番される、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つ以上から選択される位置で対になったアミノ酸置換を含む。例えば、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、またはＹ４０７Ｖ（例えば、空洞またはホールに対応）から選択されるアミノ酸置換を含み得、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）は、Ｔ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応）を含み、ここで付番はＥｕ付番システムに基づく。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチドは、ヘテロ二量体の第１及び第２のＦｃ領域の第１及び第２のメンバーである。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＮからＣに向けて以下の構成を有する：（ａ）任意でリンカーを介して第１の重鎖定常領域（例えば、ＣＨ３領域に接続されたＣＨ２）（例えば、第１のＦｃ領域）に接続された、第１の抗原ドメインの第１の部分、例えば、第１の抗原、例えばＣＳＦ１Ｒに結合するＦａｂ分子の第１のＶＨ−ＣＨ１、（ｂ）任意でリンカーを介して第２の重鎖定常領域（例えば、ＣＨ３領域に接続されたＣＨ２）（例えば、第１のＦｃ領域）に接続された、第２の抗原ドメインの第１の部分、例えば、第２の抗原、例えばＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２に結合するＦａｂ分子の第２のＶＨ−ＣＨ１、（ｃ）第３のポリペプチドは、ＮからＣに向けて以下の構成を有する：第１の抗原ドメインの第２の部分、例えばＦａｂの第１のＶＬ−ＣＬ、ここでＶＬは、第１の抗原、例えばＣＳＦ１Ｒ（例えば、第１のＶＨ−ＣＨ１が結合する同一の抗原）に結合するカッパサブタイプである、（ｄ）第４のポリペプチドは、ＮからＣに向けて以下の構成を有する：第２の抗原ドメインの第２の部分、例えばＦａｂの第２のＶＬ−ＣＬ、ここでＶＬはラムダサブタイプのものであり、第２の抗原、例えばがん抗原、例えばＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２（例えば、第２のＶＨ−ＣＨ１が結合する同一の抗原）に結合する。
【０２７５】
実施形態では第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２−ＣＨ３領域）は、例えば本明細書に記載されるような、突起またはノブを含む。実施形態では第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２−ＣＨ３領域）は、空洞またはホールを含む。実施形態では第１及び第２の重鎖定常領域は、二重特異性分子のヘテロ二量体化を促進する。
【０２７６】
ＴＧＦ−ベータ阻害剤
一態様では、本明細書で提供されるのは、ＴＧＦ−ベータ阻害剤を含む多重特異性抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータに結合して阻害、例えば、ＴＧＦ−ベータの活性を低減する。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータ１を阻害する（例えば、その活性を低減する）。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータ２を阻害する（例えば、その活性を低減する）。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータ３を阻害する（例えば、その活性を低減する）。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータ１及びＴＧＦ−ベータ３を阻害する（例えば、その活性を低減する）。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤はＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、及びＴＧＦ−ベータ３を阻害する（例えば、その活性を低減する）。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦ−ベータを阻害する（例えば、その活性を低減する）ことができるＴＧＦ−ベータ受容体の部分（例えば、ＴＧＦ−ベータ受容体の細胞外ドメイン）、またはその機能性フラグメントもしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）及びＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）及びＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）及びＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。
【０２７８】
ＴＧＦ−ベータ阻害剤として使用できる例示的なＴＧＦ−ベータ受容体ポリペプチドは、ＵＳ８９９３５２４、ＵＳ９６７６８６３、ＵＳ８６５８１３５、ＵＳ２０１５００５６１９９、ＵＳ２００７０１８４０５２、及びＷＯ２０１７０３７６３４に記載されており、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９５の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９６の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９７の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０４のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０５のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９８の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号９９の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１００のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０１のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０２のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０３のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０６の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０７の細胞外ドメイン、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。いくつか実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列、または、それに実質的に同一である配列（例えば、それに少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列）を含む。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は１つを超えないＴＧＦ−ベータ受容体細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ−ベータ阻害剤は、例えばリンカーなどを介して一緒に連結された、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上）のＴＧＦ−ベータ受容体細胞外ドメインを含む。
【０２８３】
【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
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【表４−６】
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【表４−７】
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【表４−８】
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【表４−９】
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【表４−１０】
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【表４−１１】
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【表４−１２】
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【表４−１３】
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【表４−１４】
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【表４−１５】
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【０２８４】
核酸
本発明はまた、本明細書に記載されるように、抗体分子の重鎖及び軽鎖可変領域及びＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を特徴とする。例えば、本発明は、本明細書に開示される抗体分子の１つ以上から選択される抗体分子の重鎖及び軽鎖可変領域をそれぞれコードする第１及び第２の核酸を特徴とする。核酸は、本明細書の表に記載されているヌクレオチド配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれ以上同一の配列、または本明細書の表に示されている配列から３、６、１５、３０、または４５以下のヌクレオチドの違いがある配列）を含み得る。
【０２８５】
ある特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されているアミノ酸配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である、及び／または１つ以上の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。他の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されているアミノ酸配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である、及び／または１つ以上の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。さらに別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されているアミノ酸配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である、及び／または１つ以上の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
【０２８６】
特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されているヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である、及び／または本明細書に記載のストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる配列）を有する重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されているヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である、及び／または本明細書に記載のストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる配列）を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。さらに別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されているヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である、及び／または本明細書に記載のストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる配列）を有する重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
【０２８７】
別の態様では、本出願は、本明細書に記載の核酸を含む宿主細胞及びベクターを特徴とする。本明細書で以下により詳述されるように、核酸は、同一の宿主細胞または別個の宿主細胞に存在する単一のベクターまたは別個のベクターに存在し得る。
【０２８８】
ベクター
本明細書でさらに提供されるのは、本明細書に記載の抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターである。一実施形態では、ベクターは、本明細書に記載の抗体分子をコードするヌクレオチドを含む。一実施形態では、ベクターは本明細書に記載のヌクレオチド配列を含む。ベクターには、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージ、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２８９】
多数のベクター系を使用することができる。例えば、１つのクラスのベクターは、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶ、もしくはＭＯＭＬＶ）、またはＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素を利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、及びフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡ要素を利用する。
【０２９０】
さらに、ＤＮＡを染色体に安定に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって選択され得る。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主への原栄養性、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅などの重金属への耐性などを提供することができる。選択可能なマーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接連結するか、または共形質転換により同一の細胞に導入することができる。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加の要素も必要になる場合がある。これらの要素には、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサー、及び終結シグナルが含まれ得る。
【０２９１】
コンストラクトを含む発現ベクターまたはＤＮＡ配列が発現のために調製されると、発現ベクターは、適切な宿主細胞にトランスフェクトまたは導入され得る。これを達成するために、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクション、または他の従来の技術などの様々な技術を使用することができる。プロトプラスト融合の場合、細胞は培地で増殖され、適切な活性についてスクリーニングされる。
【０２９２】
得られたトランスフェクト細胞を培養し、産生された抗体分子を回収する方法及び条件は当業者に公知であり、本記載に基づいて、使用される特定の発現ベクター及び哺乳動物宿主細胞に応じて変更または最適化することができる。
【０２９３】
細胞
別の態様では、本出願は、本明細書に記載の核酸を含む宿主細胞及びベクターを特徴とする。核酸は、単一のベクター、または同一の宿主細胞もしくは別個の宿主細胞に存在する別個のベクターに存在し得る。宿主細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉであり得る。例えば、哺乳動物細胞は、培養細胞または細胞株であり得る。例示的な哺乳動物細胞には、リンパ球細胞株（例えば、ＮＳＯ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞、及びトランスジェニック動物からの細胞、例えば、乳腺上皮細胞が含まれる。
【０２９４】
本発明はまた、本明細書に記載の抗体分子をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
【０２９５】
一実施形態では、宿主細胞は、抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作されている。
【０２９６】
一実施形態では、宿主細胞は発現カセットを用いて遺伝子操作される。「発現カセット」という表現は、そのような配列と適合する宿主における遺伝子の発現に影響を与えることができるヌクレオチド配列を指す。そのようなカセットは、プロモーター、イントロンを伴うまたは伴わないオープンリーディングフレーム、及び終結シグナルを含み得る。発現をもたらすのに必要または有用な追加の因子、例えば、誘導性プロモーターなどもまた使用され得る。
【０２９７】
本発明はまた、本明細書に記載のベクターを含む宿主細胞を提供する。
【０２９８】
細胞は、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞、またはヒト細胞であり得るが、これらに限定されない。適切な真核細胞には、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、及びＭＤＣＫＩＩ細胞が含まれるが、これらに限定されない。適切な昆虫細胞には、Ｓｆ９細胞が含まれるが、これに限定されない。
【０２９９】
用途と組み合わせ療法
本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の多重特異性分子を使用すること、例えば、本明細書に記載の医薬組成物を使用することにより、対象におけるがんを治療することを含む。同様に提供されるのは、対象におけるがんの症状を軽減または改善するための方法、ならびにがんの増殖を阻害する及び／または１つ以上のがん細胞を死滅させるための方法である。実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のまたは本明細書に記載の医薬組成物を投与された対象における腫瘍のサイズを減少させ、及び／またはがん細胞の数を減少させる。
【０３００】
実施形態では、がんは血液癌である。実施形態では、血液癌は白血病またはリンパ腫である。本明細書で使用されるとき、「血液癌」は、造血組織またはリンパ組織の腫瘍、例えば、血液、骨髄、またはリンパ節に影響を与える腫瘍を指す。例示的な血液悪性腫瘍には、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、もしくは大顆粒リンパ球性白血病）、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（例えば、古典的ホジキンリンパ腫または結節リンパ球優位型ホジキンリンパ腫）、菌状息肉腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ））、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、もしくはマントル細胞リンパ腫）、もしくはＴ細胞非ホジキンリンパ腫（菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、もしくは前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫））、一次中枢神経系リンパ腫、セザリー症候群、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、慢性骨髄増殖性腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、多発性骨髄腫／プラズマ細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、または骨髄異形成性／骨髄増殖性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０１】
実施形態では、がんは固形がんである。例示的な固形がんには、卵巣癌、直腸癌、胃癌、精巣癌、肛門領域の癌、子宮癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、カポジ肉腫、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、類表皮癌、子宮頸部扁平上皮癌、卵管癌、子宮内膜癌、膣癌、軟部組織肉腫、尿道癌、外陰部癌、陰茎癌、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、脊髄腫瘍、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、前記癌の転移性病変、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、がんは血液癌または転移性病変である。いくつかの実施形態では、血液癌は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、多発性骨髄腫、または急性リンパ性白血病のうちの１つ以上である。
【０３０３】
実施形態では多重特異性分子（または医薬組成物）は、治療または予防される疾患に適切な方法で投与される。投与の量と頻度は、患者の状態、患者の疾患の種類と重症度などの要因によって決定される。適切な投与量は、臨床試験によって決定され得る。例えば、「有効量」または「治療量」が示される場合、投与される医薬組成物（または多重特異性分子）の正確な量は、対象の腫瘍サイズ、感染または転移の程度、年齢、体重、及び状態の個人差を考慮して医師によって決定され得る。実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、例えば、１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の投与量で投与でき、これらの範囲内の全ての整数値を含む。実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、これらの投与量で複数回投与することができる。実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、免疫療法に記載の注入技術を使用して投与することができる  （例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０３０４】
実施形態では、多重特異性分子または医薬組成物が非経口的に対象に投与される。実施形態では、細胞は、静脈内、皮下、腫瘍内、結節内、筋肉内、皮内、または腹腔内で対象に投与される。実施形態では、細胞は腫瘍またはリンパ節に直接投与、例えば、注射される。実施形態では、細胞は注入（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８に記載されるように）または静脈内プッシュとして投与される。実施形態では細胞は注射可能なデポ製剤として投与される。
【０３０５】
実施形態では、対象は哺乳動物である。実施形態では、対象は、ヒト、サル、ブタ、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、またはマウスである。実施形態では、対象はヒトである。実施形態では、対象は小児科の対象、例えば、１８歳未満、例えば、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１歳、またはそれ未満である。実施形態では、対象は成人、例えば、１８歳以上、例えば、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、または８０〜９０歳である。
【０３０６】
組み合わせ療法
本明細書に開示される多重特異性分子は、第２の治療剤または処置と組み合わせて使用され得る。
【０３０７】
実施形態では、多重特異性分子及び第２の治療薬または処置は、対象ががんと診断された後、例えば、がんが対象から取り除かれる前に投与／実行される。実施形態では、多重特異性分子及び第２の治療薬または処置は、同時にまたは並行して投与／実行される。例えば、第２の送達の開始時に、１つの治療の送達がまだ行われており、例えば治療の投与に重複がある。他の実施形態では、多重特異性分子及び第２の治療薬または処置は、逐次的に投与／実行される。例えば、一方の治療の送達は、他方の治療の送達が始まる前に中止される。
【０３０８】
実施形態では、組み合わせ療法は、いずれかの薬剤単独の単独療法よりも効果的な治療をもたらし得る。実施形態では、第１及び第２の治療の組み合わせは、第１または第２の治療単独よりも効果的である（例えば、症状及び／またはがん細胞の大幅な減少をもたらす）。実施形態では、組み合わせ療法は、単独療法として投与した場合に同様の効果を達成するために通常必要な第１または第２の治療の用量と比較して、第１または第２の治療の低用量の使用を可能にする。実施形態では、組み合わせ療法は、部分的に相加的な効果、完全に相加的な効果を有するか、または相加的な効果より大きい。
【０３０９】
一実施形態では、多重特異性分子は、療法、例えば、がん療法（例えば、抗がん剤、免疫療法、光線力学療法（ＰＤＴ）、手術、及び／または放射線のうちの１つ以上）と組み合わせて投与される。「化学療法」、「化学療法剤」、及び「抗がん剤」という用語は、本明細書では互換可能に使用される。多重特異性分子の投与及び治療、例えば、がん治療は、逐次的（重複を有するかまたは有さない）または同時であり得る。多重特異性分子の投与は、治療（例えば、がん治療）過程の間、継続的または断続的であり得る。本明細書に記載の特定の療法は、がん及び非がん性疾患を治療するために使用することができる。例えば、ＰＤＴの有効性は、本明細書に記載の方法及び組成物を使用して、がん性及び非がん性の状態（例えば、結核）で強化することができる（例えば、Ａｇｏｓｔｉｎｉｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．６１：２５０−２８１で総説される）。
【０３１０】
抗がん療法
他の実施形態では、多重特異性分子は、低分子量または小分子量の化学療法剤と組み合わせて投与される。例示的な低分子量または低分子量の化学療法剤には、１３−シス−レチノイン酸（イソトレチノイン、ＡＣＣＵＴＡＮＥ（登録商標））、２−ＣｄＡ（２−クロロデオキシアデノシン、クラドリビン、ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（商標））、５−アザシチジン（アザシチジン、ＶＩＤＡＺＡ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ、フルオロウラシル、ＡＤＲＵＣＩＬ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ、メルカプトプリン、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（登録商標））、６−ＴＧ（６−チオグアニン、チオグアニン、ＴＨＩＯＧＵＡＮＩＮＥ  ＴＡＢＬＯＩＤ（登録商標））、アブラキサン（パクリタキセルタンパク質結合）、アクチノマイシン−Ｄ（ダクチノマイシン、ＣＯＳＭＥＧＥＮ（登録商標））、アリトレチノイン（ＰＡＮＲＥＴＩＮ（登録商標））、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ、トレチノイン、ＶＥＳＡＮＯＩＤ（登録商標））、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ＨＥＸＡＬＥＮ（登録商標））、アメトプテリン（メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、ＭＴＸ、ＴＲＥＸＡＬＬ（商標）、ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標））、アミフォスチン（ＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、アラビノシルシトシン（Ａｒａ−Ｃ、シタラビン、ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ（登録商標））、三酸化ヒ素（ＴＲＩＳＥＮＯＸ（登録商標））、アスパラギナーゼ（エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＥＬＳＰＡＲ（登録商標）、ＫＩＤＲＯＬＡＳＥ（登録商標））、ＢＣＮＵ（カルムスチン、ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ベンダムスチン（ＴＲＥＡＮＤＡ（登録商標））、ベクサーオテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））、ブレオマイシン（ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（登録商標））、ブスルファン（ＢＵＳＵＬＦＥＸ（登録商標）、ＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標））、カルシウムロイコボリン（シトロボラム因子、ホリニン酸、ロイコボリン）、カンプトテシン−１１（ＣＰＴ−１１、イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、カルボプラチン（ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標））、カルムスチンウェーハ（カルムスチンインプラントプロライフプロスパン２０、ＧＬＩＡＤＥＬ（登録商標）ウェーハ）、ＣＣＩ−７７９（テムシロリムス、ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＣＣＮＵ（ロムスチン、ＣｅｅＮＵ）、ＣＤＤＰ（シスプラチン、ＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標）、ＰＬＡＴＩＮＯＬ−ＡＱ（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン）、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＩＣ、ＤＴＩＣ、イミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ−ＤＯＭＥ（登録商標））、ダウノマイシン（ダウノルビシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ルビドマイシン（セルビジン（登録商標））、デシタビン（ＤＡＣＯＧＥＮ（登録商標））、デクスラゾキサン（ＺＩＮＥＣＡＲＤ（登録商標））、ＤＨＡＤ（ミトキサントロン、ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、ドキソルビシン（ＡＤＲＩ���ＭＹＣＩＮ（登録商標）、ＲＵＢＥＸ（登録商標））、エピルビシン（ＥＬＬＥＮＣＥ（商標））、エストラムスチン（ＥＭＣＹＴ（登録商標））、エトポシド（ＶＰ−１６、リン酸エトポシド、ＴＯＰＯＳＡＲ（登録商標）、ＶＥＰＥＳＩＤ（登録録商標）、ＥＴＯＰＯＰＨＯＳ（登録商標））、フロクスウリジン（ＦＵＤＲ（登録商標））、フルダラビン（ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標））、フルオロウラシル（クリーム）（ＣＡＲＡＣ（商標）、ＥＦＵＤＥＸ（登録商標）、ＦＬＵＯＲＯＰＬＥＸ（登録商標））、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ヒドロキシ尿素（ＨＹＤＲＥＡ（登録商標）、ＤＲＯＸＩＡ（商標）、ＭＹＬＯＣＥＬ（商標））、イダルビシン（ＩＤＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イクサベピロン（ＩＸＥＭＰＲＡ（商標））、ＬＣＲ（ロイロクリスチン、ビンクリスチン、ＶＣＲ、ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標）、ＶＩＮＣＡＳＡＲ  ＰＦＳ（登録商標））、Ｌ−ＰＡＭ（Ｌ−サルコリシン、メルファラン、フェニルアラニンマスタード、ＡＬＫＥＲＡＮ（登録商標））、メクロレタミン（塩酸メクロレタミン、ムスチン、窒素マスタード、ＭＵＳＴＡＲＧＥＮ（登録商標））、メスナ（ＭＥＳＮＥＸ（商標））、マイトマイシン（マイトマイシン−Ｃ、ＭＴＣ、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ネララビン（ＡＲＲＡＮＯＮ（登録商標））、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ＯＮＸＡＬ（商標））、ペガスパルガーゼ（ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＯＮＣＯＳＰＡＲ（登録商標））、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ（ＡＬＩＭＴＡ（登録商標））、ペントスタチン（ＮＩＰＥＮＴ（登録商標））、プロカルバジン（ＭＡＴＵＬＡＮＥ（登録商標））、ストレプトゾシン（ＺＡＮＯＳＡＲ（登録商標））、テモゾロミド（ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標））、テニポシド（ＶＭ−２６、ＶＵＭＯＮ（登録商標））、ＴＥＳＰＡ（チオホスホアミド、チオテパ、ＴＳＰＡ、ＴＨＩＯＰＬＥＸ（登録商標））、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン、ＶＬＢ、ＡＬＫＡＢＡＮ−ＡＱ（登録商標）、ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビノレルビン（酒石酸ビノレルビン、ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））、及びボリノスタット（ＺＯＬＩＮＺＡ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１１】
別の実施形態では、多重特異性分子は、生物学的製剤と組み合わせて投与される。がんの治療に有用な生物製剤は当該技術分野で公知であり、本発明の結合分子は、例えば、そのような公知の生物製剤と組み合わせて投与することができる。例えば、ＦＤＡは乳癌の治療のために次の生物製剤を承認している：ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．、ＨＥＲ２陽性乳癌で抗腫瘍活性を有するヒト化モノクローナル抗体）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）（フルベストラント、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＰ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ．、乳癌の治療に使用されるエストロゲン受容体拮抗薬）、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＰ、エストロゲンの生成に必要な酵素であるアロマターゼをブロックする非ステロイド性アロマターゼ阻害剤）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）（エキセメスタン、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、乳癌の治療に使用される不可逆的なステロイド性アロマターゼ不活性化剤）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ，Ｎ．Ｊ．、乳癌の治療のためにＦＤＡにより承認された非ステロイド性アロマターゼ阻害剤）、及びＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）（タモキシフェン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＰ、乳癌の治療のためにＦＤＡによって承認された非ステロイド性抗エストロゲン）。本発明の結合分子と組み合わせることができる他の生物製剤には、以下が含まれる：ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．、血管新生を阻害するように設計された第１のＦＤＡ承認治療）、及びＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．、Ｂ細胞リンパ腫の治療に現在承認されている放射性標識モノクローナル抗体）。
【０３１２】
さらに、ＦＤＡは結腸直腸癌の治療のために次の生物製剤を承認している：ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セツキシマブ、ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．及びＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）に対するモノクローナル抗体である）、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ、プロテインキナーゼ阻害剤）、ならびにＥＲＧＡＭＩＳＯＬ（登録商標）（塩酸レバミゾール、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＬＰ，Ｔｉｔｕｓｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｊ．、デュークスステージＣの結腸癌患者の外科的切除後の５−フルオロウラシルと組み合わせたアジュバント治療としてＦＤＡにより１９９０年に承認された免疫調節剤）。
【０３１３】
肺癌の治療のための例示的な生物製剤には、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブＨＣＬ、ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｙ．、ヒト上皮増殖因子受容体１（ＨＥＲ１）経路を標的とするように設計された小分子）が含まれる。
【０３１４】
多発性骨髄腫の治療のための例示的な生物製剤には、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）Ｖｅｌｃａｄｅ（ボルテゾミブ、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｍａｓｓ．、プロテアソーム阻害剤）が含まれる。さらなる生物製剤には、ＴＨＡＬＩＤＯＭＩＤ（登録商標）（サリドマイド、Ｃｌｅｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｒｒｅｎ，Ｎ．Ｊ．、免疫調節剤、骨髄腫細胞の増殖と生存を阻害する能力、抗血管新生を含む複数の作用があるようである）が含まれる。
【０３１５】
さらなる例示的ながん治療用抗体には、３Ｆ８、アバゴボマブ、アデカツママブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）、ＭＡＢＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、アルツモマブペンテテート（ＨＹＢＲＩ−ＣＥＡＫＥＲ（登録商標））、アナツモマブマフェナトックス、アンルキンズマブ（ＩＭＡ−６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ（ＣＥＡ−ＳＣＡＮ（登録商標））、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（登録商標））、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標）、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（登録商標））、ベシレソマブ（ＳＣＩＮＴＩＭＵＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、カンツズマブメルタンシン、カプロマブペンデチド（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（登録商標））、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標））、ＣＣ４９、セツキシマブ（Ｃ２２５、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、シタツズマブボガトックス、シクツムマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、ダセツズマブ、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標））、デツモマブ、エクロメキシマブ、エドレコロマブ（ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標））、エロツズマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標））、エタラシズマブ、ファレツズマブ、フィギツムマブ、フレゾリムマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ジレンツキシマブ、グレンバツムマブベドチン、イブリツモマブ（イブリツモマブチウキセタン、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））、イゴボマブ（ＩＮＤＩＭＡＣＩＳ−１２５（登録商標））、インテツムマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、ラベツズマブ（ＣＥＡ−ＣＩＤＥ（登録商標））、レクサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、ナコロマブタフェナトックス、ナプツモマブエスタフェナトックス、ネシツムマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標））、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、オララツマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標））、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標））、ピンツモマブ、プリツムマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、リロツムマブ、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標）、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、ロバツムマブ、サツモマブペンデチド、シブロツズマブ、シルツキシマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン（ＡＦＰ−ＣＩＤＥ（登録商標））、タプリツモマブパプトックス、テナツモマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標））、ザルツムマブ（ＨＵＭＡＸ−ＥＧＦＲ（登録商標））、及びザノリムマブ（ＨＵＭＡＸ−ＣＤ４（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１６】
他の実施形態では、多重特異性分子は、ウイルス性がん治療薬と組み合わせて投与される。例示的なウイルス性がん治療薬には、ワクシニアウイルス（ｖｖＤＤ−ＣＤＳＲ）、がん胎児性抗原発現麻疹ウイルス、組換えワクシニアウイルス（ＴＫ欠失プラスＧＭ−ＣＳＦ）、セネカバレーウイルス−００１、ニューカッスルウイルス、コクサッキーウイルスＡ２１、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＥＢＮＡ１  Ｃ末端／ＬＭＰ２キメラタンパク質発現組換え改変ワクシニアアンカラワクチン、がん胎児性抗原発現麻疹ウイルス、Ｇ２０７腫瘍溶解性ウイルス、ｐ５３発現改変ワクシニアウイルスアンカラワクチン、ＯｎｃｏＶＥＸ  ＧＭ−ＣＳＦ改変単純ヘルペス１ウイルス、鶏痘ウイルスワクチンベクター、組換えワクシニア前立腺特異的抗原ワクチン、ヒトパピローマウイルス１６／１８  Ｌ１ウイルス様粒子／ＡＳ０４ワクチン、ＭＶＡ−ＥＢＮＡ１／ＬＭＰ２注射ワクチン、４価ＨＰＶワクチン、４価ヒトパピローマウイルス（タイプ６、１１、１６、１８）組換えワクチン（ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標））、組換え鶏痘−ＣＥＡ（６Ｄ）／ＴＲＩＣＯＭワクチン、組換えワクシニア−ＣＥＡ（６Ｄ）−ＴＲＩＣＯＭワクチン、組換え改変ワクシニアアンカラ−５Ｔ４ワクチン、組換え鶏痘−ＴＲＩＣＯＭワクチン、腫瘍溶解性ヘルペスウイルスＮＶ１０２０、ＨＰＶ  Ｌ１  ＶＬＰワクチンＶ５０４、ヒトパピローマウイルス２価（タイプ１６及び１８）ワクチン（ＣＥＲＶＡＲＩＸ（登録商標））、単純ヘルペスウイルスＨＦ１０、Ａｄ５ＣＭＶ−ｐ５３遺伝子、組換えワクシニアＤＦ３／ＭＵＣ１ワクチン、組換えワクシニア−ＭＵＣ−１ワクチン、組換えワクシニア−ＴＲＩＣＯＭワクチン、ＡＬＶＡＣ  ＭＡＲＴ−１ワクチン、複製欠損単純ヘルペスウイルスタイプＩ（ＨＳＶ−１）ヒトプレプロエンケファリン（ＮＰ２）発現ベクター、野生型レオウイルス、レオウイルスタイプ３ディアリング（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、腫瘍溶解性ウイルスＨＳＶ１７１６、エプスタイン−バーウイルスの標的抗原をコードする組換え型改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ベースのワクチン、組換え鶏痘前立腺特異的抗原ワクチン、組換えワクシニア前立腺特異的抗原ワクチン、組換えワクシニアＢ７．１ワクチン、ｒＡｄ−ｐ５３遺伝子、Ａｄ５−ｄｅｌｔａ２４ＲＧＤ、ＨＰＶワクチン５８０２９９、ＪＸ−５９４（チミジンキナーゼ欠失ワクシニアウイルスプラスＧＭ−ＣＳＦ）、ＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＡＳ０４、鶏痘ウイルスワクチンベクター、ワクシニアチロシナーゼワクチン、ＭＥＤＩ−５１７  ＨＰＶ−１６／１８  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン、単純ヘルペスウイルスＴＫ９９ＵＮのチミジンキナーゼを含むアデノウイルスベクター、ＨｓｐＥ７、ＦＰ２５３／フルダラビン、ＡＬＶＡＣ（２）黒色腫マルチ抗原治療ワクチン、ＡＬＶＡＣ−ｈＢ７．１、ｃａｎａｒｙｐｏｘ−ｈＩＬ−１２黒色腫ワクチン、Ａｄ−ＲＥＩＣ／Ｄｋｋ−３、ｒＡｄ−ＩＦＮ  ＳＣＨ  ７２１０１５、ＴＩＬ−Ａｄ−ＩＮＦｇ、Ａｄ−ＩＳＦ３５、及びコクサッキーウイルスＡ２１（ＣＶＡ２１、ＣＡＶＡＴＡＫ（登録商標））が含まれるが、これらには限定されない。
【０３１７】
他の実施形態では、多重特異性分子は、ナノ医薬品と組み合わせて投与される。例示的ながんナノ医薬品には、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（パクリタキセル結合アルブミンナノ粒子）、ＣＲＬＸ１０１（直線状シクロデキストリンベースのポリマーに結合したＣＰＴ）、ＣＲＬＸ２８８（ドセタキセルを生分解性ポリマーポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）にコンジュゲートする）、シタラビンリポソーム（リポソームＡｒａ−Ｃ、ＤＥＰＯＣＹＴ（商標））、ダウノルビシンリポソーム（ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、ドキソルビシンリポソーム（ＤＯＸＩＬ（登録商標）、ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、カプセル化ダウノルビシンクエン酸リポソーム（ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、及びＰＥＧ抗ＶＥＧＦアプタマー（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、パクリタキセルまたはパクリタキセル製剤、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）、タンパク質結合パクリタキセル（例えば、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））と組み合わせて投与される。例示的なパクリタキセル製剤には、ナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、Ａｂｒａｘｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって販売）、ドコサヘキサエン酸結合パクリタキセル（ＤＨＡ−パクリタキセル、タキソプレキシン、Ｐｒｏｔａｒｇａによって販売）、ポリグルタミン酸結合パクリタキセル（ＰＧ−パクリタキセル、パクリタキセルポリグリメックス、ＣＴ−２１０３、ＸＹＯＴＡＸ、Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃによって販売）、腫瘍活性化プロドラッグ（ＴＡＰ）、ＡＮＧ１０５（Ａｎｇｉｏｐｅｐ−２がパクリタキセルの３つの分子に結合、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎによって販売）、パクリタキセル−ＥＣ−１（ｅｒｂＢ２認識ペプチドＥＣ−１に結合したパクリタキセル、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（２００７）８７：２２５−２３０を参照されたい）、及びグルコースコンジュゲートパクリタキセル（例えば、２’−パクリタキセルメチル２−グルコピラノシルコハク酸、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００７）１７：６１７−６２０を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１９】
がんを治療するための例示的なＲＮＡｉ及びアンチセンスＲＮＡ剤には、ＣＡＬＡＡ−０１、ｓｉＧ１２Ｄ  ＬＯＤＥＲ（Ｌｏｃａｌ  Ｄｒｕｇ  ＥｌｕｔｅＲ）、及びＡＬＮ−ＶＳＰ０２が含まれるが、これらに限定されない。
【０３２０】
他のがん治療薬には、サイトカイン（例えば、アルデスロイキン（ＩＬ−２、インターロイキン−２、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標））、アルファインターフェロン（ＩＦＮ−アルファ、インターフェロンアルファ、ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａ（インターフェロンアルファ−２ｂ）、ＲＯＦＥＲＯＮ−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ））、エポエチンアルファ（ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標））、フィルグラスチム（Ｇ−ＣＳＦ、顆粒球−コロニー刺激因子、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標））、ＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、サルグラモスチム、ＬＥＵＫＩＮＥ（商標））、ＩＬ−１１（インターロイキン−１１、オプレルベキン、ＮＥＵＭＥＧＡ（登録商標））、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）（ＰＥＧインターフェロン、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標））、及びペグフィルグラスチム（ＮＥＵＬＡＳＴＡ（商標）））、ホルモン療法剤（例えば、アミノグルテチミド（ＣＹＴＡＤＲＥＮ（登録商標））、アナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、ビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ（登録商標））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））、フルオキシメステロン（ＨＡＬＯＴＥＳＴＩＮ（登録商標））、フルタミド（ＥＵＬＥＸＩＮ（登録商標））、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、ゴセレリン（ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、ロイプロリド（ＥＬＩＧＡＲＤ（商標）、ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（登録商標）、ＶＩＡＤＵＲ（商標））、メゲストロール（酢酸メゲストロール、ＭＥＧＡＣＥ（登録商標））、ニルタミド（ＡＮＡＮＤＲＯＮ（登録商標）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮ（登録商標））、オクトレオチド（酢酸オクトレオチド、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ（登録商標）、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ  ＬＡＲ（登録商標））、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、ロミプロスチム（ＮＰＬＡＴＥ（登録商標））、タモキシフェン（ＮＯＶＡＬＤＥＸ（登録商標））、及びトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）））、ホスホリパーゼＡ２阻害剤（例えば、アナグレリド（ＡＧＲＹＬＩＮ（登録商標）））、生物学的応答修飾因子（例えば、ＢＣＧ（ＴＨＥＲＡＣＹＳ（登録商標）、ＴＩＣＥ（登録商標））、ダルベポエチンアルファ（ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標）））、標的治療薬（例えば、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（商標））、デニロイキンジフチトックス（ＯＮＴＡＫ（登録商標））、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、エベロリムス（ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（ＳＴＩ−５７１、ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、及びＳＵ１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）））、免疫調節剤及び抗血管新生剤（例えば、ＣＣ−５０１３（レナリドマイド、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））、及びサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）））、グルココルチコステロ��ド（例えば、コルチゾン（ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、ＡＬＡ−ＣＯＲＴ（登録商標）、ＨＹＤＲＯＣＯＲＴ  ＡＣＥＴＡＴＥ（登録商標）、リン酸ヒドロコルトンＬＡＮＡＣＯＲＴ（登録商標）、ＳＯＬＵ−ＣＯＲＴＥＦ（登録商標））、デカドロン（デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、ＤＥＸＡＳＯＮＥ（登録商標）、ＤＩＯＤＥＸ（登録済み）商標）、ＨＥＸＡＤＲＯＬ（登録商標）、ＭＡＸＩＤＥＸ（登録商標））、メチルプレドニゾロン（６−メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロンナトリウム、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ＤＵＲＡＬＯＮＥ（登録商標）、ＭＥＤＲＡＬＯＮＥ（登録商標）、ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）、Ｍ−ＰＲＥＤＮＩＳＯＬ（登録商標）、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標））、プレドニゾロン（ＤＥＬＴＡ−ＣＯＲＴＥＦ（登録商標）、ＯＲＡＰＲＥＤ（登録商標）、ＰＥＤＩＡＰＲＥＤ（登録商標）、ＰＲＥＬＯＮＥ（登録商標））、及びプレドニゾン（ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＩＤ  ＰＲＥＤ（登録商標）、ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＮ（登録商標）、ＯＲＡＳＯＮＥ（登録商標）））、ならびにビスフォスフォネート（例えば、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、及びゾレドロン酸（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）））が含まれるが、これらに限定されない。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤）と組み合わせて使用される。例示的なチロシンキナーゼ阻害剤には、上皮増殖因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、ＶＥＧＦに対する抗体、ＶＥＧＦトラップ、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ−１阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２阻害剤、ＶＥＧＦＲ−３阻害剤）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ−β阻害剤））、ＲＡＦ−１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤、及びＲＥＴ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＡＨＣＭ剤と組み合わせて使用される抗がん剤は、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ−３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ−５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ  （登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマクサニブ（セマキシニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リタキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ−２０７６、ＰＣＩ−３２７６５、ＡＣ２２０、乳酸ドビチニブ（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ−２５８）、ＢＩＢＷ  ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ−０４２１７９０３、ＰＦ−０２３４１０６６、ＰＦ−２９９８０４、ＢＭＳ−７７７６０７、ＡＢＴ−８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ  １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ−２０３６、ＢＭＳ−６９０１５４、ＣＥＰ−１１９８１、チボザニブ（ＡＶ−９５１）、ＯＳＩ−９３０、ＭＭ−１２１、ＸＬ−１８４、ＸＬ−６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、ＡＧ−４９０、ＡＳＴ−６、ＢＭＳ−５９９６２６、ＣＵＤＣ−１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、バンデタニブ（ザクチマ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ−���６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ−９５１（チボザニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ  ７３−４５０６（レゴラフェニブ）、ブリバニブアラニン酸塩（ＢＭＳ−５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ−５４０２１５）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＨＩＲ−２５８（ドビチニブ）、ＣＰ  ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、Ｋｉ８７５１、マシチニブ（ＡＢ１０１０）、ＭＧＣＤ−２６５、モテサニブ二リン酸（ＡＭＧ−７０６）、ＭＰ−４７０、ＯＳＩ−９３０、塩酸パゾパニブ、ＰＤ１７３０７４、ｎソラフェニブトシラート（Ｂａｙ  ４３−９００６）、ＳＵ５４０２、ＴＳＵ−６８（ＳＵ６６６８）、バタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ−２８８０）からなる群から選択される。選択されたチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはソラフェニブから選択される。一実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤はスニチニブである。
【０３２２】
一実施形態では、多重特異性分子は、抗血管新生剤、または血管標的化剤または血管破壊剤のうちの１つ以上と組み合わせて投与される。例示的な抗血管新生剤には、とりわけ、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）、ＶＥＧＦ受容体阻害剤（例えば、イトラコナゾール）、細胞増殖阻害剤及び／または内皮細胞の遊走の阻害剤（例えば、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０）、血管新生刺激因子の阻害剤（例えば、スラミン）が含まれるが、これらに限定されない。血管標的化剤（ＶＴＡ）または血管破壊剤（ＶＤＡ）は、がん腫瘍の血管（血管）を損傷して中心性壊死を引き起こすように設計されている（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ，Ｐ．Ｅ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．１０：４１５−４２７に総説される）。ＶＴＡは低分子であってよい。例示的な小分子ＶＴＡには、微小管不安定化剤（例えば、コンブレタスタチンＡ−４リン酸二ナトリウム（ＣＡ４Ｐ）、ＺＤ６１２６、ＡＶＥ８０６２、Ｏｘｉ  ４５０３）、及びバジメザン（ＡＳＡ４０４）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３２３】
免疫チェックポイント阻害剤
他の実施形態では、本明細書に記載の方法は、多重特異性分子と組み合わせた免疫チェックポイント阻害剤の使用を含む。この方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏの治療プロトコールで使用することができる。
【０３２４】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はチェックポイント分子を阻害する。例示的なチェックポイント分子には、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、及びＡ２ａＲが含まれるが、これらに限定されない。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰａｒｄｏｌｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １２．４（２０１２）：２５２−６４を参照されたい。
【０３２５】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−１阻害剤、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブなどの抗ＰＤ−１抗体である。ニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、またはＢＭＳ−９３６５５８とも呼ばれる）は、ＰＤ１を特異的に阻害する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。例えば、ＵＳ８，００８，４４９及びＷＯ２００６／１２１１６８を参照されたい。ペンブロリズマブ（ラムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５またはＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）とも呼ばれる、Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。例えば、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９（２）：１３４−４４、ＵＳ８，３５４，５０９、及びＷＯ２００９／１１４３３５を参照されたい。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１またはＣｕｒｅ  Ｔｅｃｈとも呼ばれる）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。例えば、ＷＯ２００９／１０１６１１を参照されたい。一実施形態では、ＰＤ−１の阻害剤は、実質的に同一または類似の配列、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブの配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列を有する抗体分子である。さらなる抗ＰＤ１抗体、例えば、ＡＭＰ  ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）は、例えば、ＵＳ８，６０９，０８９、ＵＳ２０１００２８３３０、及び／またはＵＳ２０１２０１１４６４９に記載されている。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、イムノアドヘシン、例えば、定常領域（例えば、重鎖のＦｃ領域）に融合したＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）の細胞外／ＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシンである。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、Ｂ７−Ｈ１とＰＤ−１の間の相互作用をブロックするＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体であるＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ、例えば、ＷＯ２０１１／０６６３４２及びＷＯ２０１０／０２７８２７に記載）である。
【０３２７】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤はＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、またはＭＤＸ−１１０５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体であるＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２とも呼ばれる、Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）である。例示的なヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、ＷＯ２０１３／０７９１７４に記載されている。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０抗体は、例えば、ＷＯ２０１０／０７７６３４に記載されている。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９とも呼ばれる）であり、例えば、ＷＯ２００７／００５８７４に記載されている。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であるＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）である。例えば、米国特許第７，９４３，７４３号、及び米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号を参照されたい。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤は、実質的に同一または類似の配列、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、またはＭＤＸ−１１０５の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列を有する抗体分子である。
【０３２８】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ２阻害剤、例えば、ＡＭＰ−２２４（ＰＤ１とＢ７−Ｈ１の間の相互作用をブロックするＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である）である。例えば、ＷＯ２０１０／０２７８２７及びＷＯ２０１１／０６６３４２を参照されたい。
【０３２９】
一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ−３阻害剤、例えば、抗ＬＡＧ−３抗体分子である。実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体はＢＭＳ−９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６とも呼ばれる、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ−９８６０１６及び他のヒト化抗ＬＡＧ−３抗体は、例えば、ＵＳ２０１１／０１５０８９２、ＷＯ２０１０／０１９５７０、及びＷＯ２０１４／００８２１８に記載されている。
【０３３０】
実施形態では免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３阻害剤、例えば、抗ＴＩＭ３抗体分子であり、例えば、米国特許第８，５５２，１５６号、ＷＯ２０１１／１５５６０７、ＥＰ２５８１１１３、及び米国特許公開第２０１４／０４４７２８号に記載されている。
【０３３１】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体分子である。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体には、トレメリムマブ（以前はチシリムマブとして知られていたＰｆｉｚｅｒからのＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５，２０６）、及びイピリムマブ（ＭＤＸ−０１０とも呼ばれる、ＣＡＳ  Ｎｏ．４７７２０２−００−９）が含まれる。他の例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、米国特許第５，８１１，０９７号に記載されている。
【実施例】
【０３３２】
以下の実施例は、例示を意図したものであり、決して限定を意味するものではない。
【０３３３】
実施例１．複数のαＣＣＲ２／αＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体分子の生成
１．プラスミドの構築
タンパク質配列をコードするＤＮＡは、Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ  ｇｒｉｓｅｕｓでの発現用に最適化され、合成され、ゲートウェイクローニングを使用してｐｃＤＮＡ３．４−ＴＯＰＯ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４６９７）にクローニングされた。全てのコンストラクトはＩｇカッパリーダー配列を含んだ。（ＡＴＧＧＡＡＡＣＣＧＡＣＡＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＴＧＣＴＣＴＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＧＧＡＴＣＴＡＣＡＧＧＡ（配列番号１１５）、配列番号ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１１６））。使用した核酸配列を表５に示す。
【０３３４】
【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【表５−７】
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【表５−８】
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【表５−９】
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【表５−１０】
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【表５−１１】
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【０３３５】
【表６】
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【０３３６】
【表７−１】
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【表７−２】
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【表７−３】
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【表７−４】
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【表７−５】
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【表７−６】
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【表７−７】
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【表７−８】
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【表７−９】
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【表７−１０】
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【表７−１１】
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【表７−１２】
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【表７−１３】
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【表７−１４】
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【０３３７】
２．発現及び精製
プラスミドは、Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４５２７）またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ２９１２７）に共トランスフェクションされた。トランスフェクションは、１：１のノブとホールの重鎖の比率、及び３：２の軽鎖と重鎖の比率の多重特異性コンストラクトに対して、１ｍｇの総ＤＮＡを使用して実行された。ビオチン化が必要な場合は、多重特異性コンストラクトＤＮＡに加えて、１リットルあたり２５０μｇのＢｉｒＡを添加した。Ｅｘｐｉ２９３細胞へのトランスフェクションは、２５，０００Ｄａの直鎖状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ  ２３９６６）を、総ＤＮＡと３：１の比率で使用して実行した。ＤＮＡとＰＥＩをそれぞれ５０ｍＬのＯｐｔｉＭｅｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ３１９８５０８８）培地に加え、滅菌ろ過した。ＤＮＡとＰＥＩを１０分間混合し、１．８〜２．８×１０６細胞／ｍＬ細胞密度、少なくとも９５％の生存率のＥｘｐｉ２９３細胞に添加した。ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクションは、製造者の取扱説明書に従って実施した。Ｅｘｐｉ２９３細胞は加湿インキュベーター内で、トランスフェクション後５〜７日間、３７℃、８％ＣＯ２で増殖し、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞は、１４日間、３２℃、５％ＣＯ２で増殖した。細胞を４５００×ｇでの遠心分離によりペレット化し、上清を０．２μｍメンブレンで濾過した。プロテインＡ樹脂（ＧＥ  １７−１２７９−０３）を濾過した上清に加え、室温で１〜３時間インキュベートした。樹脂をカラムに充填し、３×１０カラム容量のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １４１９０−１４４）で洗浄した。結合したタンパク質は、２０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．９でカラムから溶出した。必要な場合、タンパク質は、リガンド親和性及び／またはサイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＤＰＢＳの泳動用緩衝液を含むＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラムでさらに精製した。
【０３３８】
【表８−１】
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【表８−２】
2021505155.tif 000050
【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【０３３９】
【表９】
2021505155.tif 000054
【０３４０】
【表１０−１】
2021505155.tif 000055
【表１０−２】
2021505155.tif 000056
【表１０−３】
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【表１０−４】
2021505155.tif 000058
【表１０−５】
2021505155.tif 000059
【表１０−６】
2021505155.tif 000060
【０３４１】
【表１１】
2021505155.tif 000061
【０３４２】
実施例２．複数のαＣＣＲ２／αＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体分子の生成
１．プラスミドの構築
タンパク質配列をコードするＤＮＡは、Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ  ｇｒｉｓｅｕｓでの発現用に最適化され、合成され、ゲートウェイクローニングを使用してｐｃＤＮＡ３．４−ＴＯＰＯ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４６９７）にクローニングされた。全てのコンストラクトはＩｇカッパリーダー配列ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１１６）を含んだ。
【０３４３】
２．発現及び精製
プラスミドは、Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４５２７）またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ２９１２７）に共トランスフェクションされた。トランスフェクションは、１：１のノブとホールの重鎖の比率、及び３：２の軽鎖と重鎖の比率の多重特異性コンストラクトに対して、１ｍｇの総ＤＮＡを使用して実行された。ビオチン化が必要な場合は、多重特異性コンストラクトＤＮＡに加えて、１リットルあたり２５０μｇのＢｉｒＡを添加した。Ｅｘｐｉ２９３細胞へのトランスフェクションは、２５，０００Ｄａの直鎖状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ  ２３９６６）を、総ＤＮＡと３：１の比率で使用して実行した。ＤＮＡとＰＥＩをそれぞれ５０ｍＬのＯｐｔｉＭｅｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ３１９８５０８８）培地に加え、滅菌ろ過した。ＤＮＡとＰＥＩを１０分間混合し、１．８〜２．８×１０６細胞／ｍＬ細胞密度、少なくとも９５％の生存率のＥｘｐｉ２９３細胞に添加した。ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクションは、製造者の取扱説明書に従って実施した。Ｅｘｐｉ２９３細胞は加湿インキュベーター内で、トランスフェクション後５〜７日間、３７℃、８％ＣＯ２で増殖し、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞は、１４日間、３２℃、５％ＣＯ２で増殖した。細胞を４５００×ｇでの遠心分離によりペレット化し、上清を０．２μｍメンブレンで濾過した。プロテインＡ樹脂（ＧＥ  １７−１２７９−０３）を濾過した上清に加え、室温で１〜３時間インキュベートした。樹脂をカラムに充填し、３×１０カラム容量のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １４１９０−１４４）で洗浄した。結合したタンパク質は、２０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．９でカラムから溶出した。必要な場合、タンパク質は、リガンド親和性及び／またはサイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＤＰＢＳの泳動用緩衝液を含むＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラムでさらに精製した。
【０３４４】
【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１２−３】
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【表１２−４】
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【０３４５】
【表１３−１】
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【表１３−２】
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【表１３−３】
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【表１３−４】
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【表１３−５】
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【表１３−６】
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【表１３−７】
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【表１３−８】
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【表１３−９】
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【表１３−１０】
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【表１３−１１】
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【表１３−１２】
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【表１３−１３】
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【表１３−１４】
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【表１３−１５】
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【表１３−１６】
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【表１３−１７】
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【表１３−１８】
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【表１３−１９】
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【表１３−２０】
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【表１３−２１】
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【表１３−２２】
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【表１３−２３】
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【表１３−２４】
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【表１３−２５】
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【表１３−２６】
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【表１３−２７】
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【表１３−２８】
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【表１３−２９】
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【表１３−３０】
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【表１３−３１】
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【表１３−３２】
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【表１３−３３】
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【表１３−３４】
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【０３４６】
【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１４−３】
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【表１４−４】
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【表１４−５】
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【表１４−６】
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【０３４７】
実施例３  ＴＧＦβトラップを使用したＴＧＦβシグナル伝達の阻害
この試験では、ＴＧＦβシグナル伝達を阻害する能力について、３つのＴＧＦβトラップコンストラクトを調べる。第１のコンストラクトである、図７に示す「単一ＴＧＦβ  Ｆａｂ−トラップ」は、２つの鎖を含み、第１の鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、第１のＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、第１のリンカー、及び重鎖定常領域１（ＣＨ１）を含み、第２の鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、第２のＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤ、第２のリンカー、及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。このコンストラクトは標的化ドメインを含まない。第２のコンストラクトである、図７に示される「抗ＰＤＬ１×ＴＧＦβトラップ」は、その２つのＦｃ領域のＣ末端で、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤホモ二量体に融合された抗ＰＤＬ１抗体を含む。第３のコンストラクトである、図７に示される「抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ×ＴＧＦβトラップ」は、その２つのＦｃ領域のＣ末端で、ＴＧＦＢＲ２  ＥＣＤホモ二量体に融合された抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体を含む。さらに、第４の構築物である図７に示される「抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ」は、ＴＧＦβトラップのない抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体であり、陰性対照として使用した。
【０３４８】
簡潔に述べると、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＧＦ−ｂ細胞を０．５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−β１の存在下で２０〜２２時間、用量依存的に上述の４つのコンストラクトで処理した。ＴＧＦ−β１はＨＥＫ−Ｂｌｕｅ細胞上の受容体に結合し、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ経路の活性化を誘導して、Ｓｍａｄ３／Ｓｍａｄ４複合体の形成をもたらす。このヘテロ複合体は核に入り、ＳＢＥ（Ｓｍａｄ３／４結合要素）部位と結合し、ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）の産生を誘導する。上清に分泌されたＳＥＡＰを、比色酵素アッセイ（ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ）で定量した。図７に示すように、ＴＧＦ−β１を介したＳＥＡＰの産生は、ここで試験された３つ全てのＴＧＦβトラップコンストラクトによって減少した。ＴＧＦβトラップなしの抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体は、ＴＧＦ−β１シグナル伝達を減少させなかった（図７）。
【０３４９】
参照による組み込み
本明細書で言及される全ての刊行物及び特許は、あたかも各個々の刊行物または特許が特定的かつ個別に参照により組み込まれることが示されているかのように、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０３５０】
均等物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識し、または日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2021505155.tif 000107
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
2021505155.tif 000112
【図１Ｈ】
2021505155.tif 000113
【図１Ｉ】
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【図１Ｊ】
2021505155.tif 000115
【図２Ａ】
2021505155.tif 000116
【図２Ｂ】
2021505155.tif 000117
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2021505155.tif 000119
【図３Ａ】
2021505155.tif 000120
【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
2021505155.tif 000122
【図３Ｄ】
2021505155.tif 000123
【図４Ａ】
2021505155.tif 000124
【図４Ｂ】
2021505155.tif 000125
【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
2021505155.tif 000127
【図５Ａ】
2021505155.tif 000128
【図５Ｂ】
2021505155.tif 000129
【図６Ａ】
2021505155.tif 000130
【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2021505155.tif 000133
【図７】
2021505155.tif 000134
【配列表】
2021505155000001.app
【国際調査報告】
2021505155.tif 000135
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2021505155.tif 000137
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