(57)【要約】  本開示は、シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）（「ＣＨＰ」）の新規の多形形態の合成および特性評価に関する。本開示は、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、固体核磁気共鳴（ＮＭＲ、または13Ｃ  ＳＳＮＭＲ）、ラマン分光法、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）、および熱重量分析（ＴＧＡ）を含むがこれらに限定されない種々の分析技術を使用して、特徴付けられ、ＣＨＰの他の固体形態と区別され得るシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物結晶形態（「ＣＨＰ水和物」または「パターン２」化合物）を提供する。
2021533182.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１３．７、１７、および２７．３度（２θで±０．２°）でのピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）ディフラクトグラムを特徴とする、シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物化合物。
【化１】
2021533182.tif 000054
【請求項２】
前記ＸＲＰＤディフラクトグラムが、約１０度（２θで±０．２°）でのピークをさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ＸＲＰＤが、図２（ｂ）に示されるものに実質的に類似している、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
約７５℃〜約１００℃で開始する示差走査熱量測定（ＤＳＣ）吸熱を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
約１１５℃〜約１２０℃で開始するＤＳＣ発熱を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
約１００℃および約１７０℃にピーク最大値がある２つの吸熱ピークを含むＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
以下：
（ａ）以下のリスト：１０、１３．７、１７、１８．１、２０．２、および２７．３度（２θで±０．２°）からの少なくとも２つのピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラム；
（ｃ）偏光顕微鏡法によって分析した場合、断片化された棒状の形態を有する複屈折性；
（ｄ）熱重量分析技術によって分析した場合、６．５％（０．９当量の水）の最初の質量喪失、その後の約２８０℃での試料分解；
（ｅ）ＤＳＣの最初の熱サイクルにおいて９９℃での開始および１０２℃でのピークを伴う吸熱；
（ｆ）４０℃での動的蒸気収着分析において、１０％未満の相対湿度（ＲＨ）での脱水の開始、１０〜０％ＲＨでの約６質量％（０．８当量の水）の損失、および０〜４０％ＲＨでの水和；および
（ｈ）６０℃での動的蒸気収着分析において、２０％未満のＲＨでの脱水の開始、２０〜０％ＲＨでの約７質量％（１．０当量の水）の損失、および０〜４０％ＲＨでの再水和
のうちの少なくとも２つを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
少なくとも９０％、少なくとも約９５％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、および約１００％からなる群から選択される純度を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
室温で約６カ月、約１２カ月、約１８カ月、約２４カ月、または約３６カ月間安定である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
溶媒を実質的に含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物を含む医薬組成物。
【請求項１２】
約１％〜約５０％、約５％〜約４５％、約１０％〜約４０％、約１５％〜約３５％、約２０％〜約３０％、約１％〜約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、約１％、約２％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％（質量／質量）のシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
約１〜約２０パーセント（質量％）のシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
追加の治療活性剤、薬学的に許容される担体、またはそれらの組合せをさらに含んでいてもよい、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
経口、局所、非経口、静脈内、皮内、結腸、直腸、筋肉内、または腹腔内投与をするのに好適な剤形である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
注射または連続注入による非経口投与用に製剤化される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物の濃度が約１ｍｇ／リットル〜約２００ｍｇ／ｍｌである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
経口単位剤形で製剤化される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
約１ｍｇ〜約１００ｍｇのシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物の投薬単位を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ａ．実質的に純粋なシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物；
ｂ．少なくとも１つの追加の治療活性剤；および
ｃ．少なくとも１つの薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
前記活性剤が、生体分子、生物活性剤、小分子、薬物、プロドラッグ、薬物誘導体、タンパク質、ペプチド、ワクチン、アジュバント、造影剤、ポリヌクレオチドまたは金属である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記活性剤が亜鉛である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物を合成するための方法であって、
ａ．ＥｔＯＨ／水中にシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）無水物を加えて混合物を形成するステップ；
ｂ．前記混合物を約５０℃に加熱して溶解し、溶液を形成するステップ；
ｃ．ステップ（ｂ）の溶液を約３５℃に冷却するステップ；
ｄ．種晶を加え、約２〜約３時間エージングさせるステップ；
ｅ．約５℃に冷却するステップ；
ｆ．ＭｔＢＥを約５℃で約８時間加えるステップ；
ｇ．約５℃で約８〜約１０時間撹拌するステップ；
ｈ．濾過して湿生成物を得るステップ；および
ｊ．湿生成物をＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥで洗浄し、減圧下で約３５℃で乾燥させて、シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物化合物を形成するステップ
を含む、方法。
【請求項２４】
前記化合物が、約１３．７、１７、および２７．３度（２θで±０．２°）でのピークを含むＸＲＰＤディフラクトグラムを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＸＲＰＤディフラクトグラムが、約１０度（２θで±０．２°）でのピークをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物が少なくとも２０時間安定である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物が、溶媒を使用する結晶化によって単離される、請求項２３に記載の方法
【請求項２８】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物のＤＳＣサーモグラムが、約１００℃および約１７０℃にピーク最大値がある２つの吸熱ピークを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物が、以下の、
（ａ）以下のリスト：１０、１３．７、１７、１８．１、２０．２、および２７．３度（２θで±０．２°）からの少なくとも２つのピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラム；
（ｃ）偏光顕微鏡法によって分析した場合、断片化された棒状の形態を有する複屈折性；
（ｄ）熱重量分析技術によって分析した場合、６．５％（０．９当量の水）の最初の質量喪失、その後の約２８０℃での試料分解；
（ｅ）ＤＳＣの最初の熱サイクルにおいて９９℃での開始および１０２℃でのピークを伴う吸熱；
（ｆ）４０℃での動的蒸気収着分析において、１０％未満のＲＨでの脱水の開始、１０〜０％ＲＨでの約６質量％（０．８当量の水）の損失、および０〜４０％ＲＨでの水和；および
（ｈ）６０℃での動的蒸気収着分析において、２０％未満のＲＨでの脱水の開始、２０〜０％ＲＨでの約７質量％（１．０当量の水）の損失、および０〜４０％ＲＨでの再水和；
うちの少なくとも２つを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物が、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の純度である、請求項２３に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年７月１０日出願の米国仮出願第６２／６９６，１９０号に対する優先権を主張し、当仮出願は法が認める最大限の範囲において参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示は、シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）（「ＣＨＰ」）の新規の多形形態に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）、Ｃ11Ｈ14Ｎ4Ｏ2は、ＣＡＳ登録番号５３１０９−３２−３を有する無水ジペプチドとして知られている。これは、視床下部甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンのアミノ末端ピログルタミン酸残基の加水分解による除去からインビボで誘導される内因性環状ジペプチドである。シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）はすべて、従来の化学的方法によってエクスビボで合成することができる。シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）は、グリア細胞の寄与の性質を制御する上で重要であり得る。Grotelli et al., The Role of Cyclo(His-Pro) in Neurodegeneration, Int J Mol Sci. 2016 Aug; 17(8): 1332。シクロ（Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）は中枢神経系に遍在しており、神経保護に強く関連している有機カチオントランスポーターの重要な基質である。環状ジペプチドはまた、脳血液関門を通過することができ、脳に入ると、Ｎｒｆ２−ＮＦ−κＢシグナル伝達軸を改変することにより、多様な炎症およびストレス応答に影響を与える可能性がある。
【０００３】
シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）の結晶性無水形態（「無水ＣＨＰ」または「パターン１」）は、これまで文献で報告されており、潜在的な治療用途を有する形態である。しかし、ある特定の無水形態は不安定な場合がある。パターン１を使用することで考えられる欠点は、（１）周囲湿度〜高湿度の条件での明らかな物理的不安定性；および（２）Ｄ，Ｌ−ＣＨＰ、Ｌ，Ｄ−ＣＨＰ、またはＤ，Ｄ−ＣＨＰなどの、所望のＬ，Ｌ−ジペプチドのジアステレオマーの形成をもたらす水分活性による潜在的な化学的不安定性を含む。したがって、当技術分野では、より安定な形態のＣＨＰが必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
本開示は、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、固体核磁気共鳴（ＮＭＲ、または13Ｃ  ＳＳＮＭＲ）、ラマン分光法、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）、および熱重量分析（ＴＧＡ）を含むがこれらに限定されない、種々の分析技術を使用して、特徴付けられ、ＣＨＰの他の固体形態と区別され得るシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物結晶形態（「ＣＨＰ水和物」または「パターン２」化合物）を提供する。
出願人は、ＣＨＰ水和物（ＣＡＳ  ＲＮ：２２５４８２６−９５−２（２０１９年１月））が、非晶質シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）またはパターン１よりも優れた安定性を有することを予期せず発見した。この驚くべき発見に基づいて、パターン１またはパターン１とパターン２との混合物を使用するのではなく、パターン２を単一成分の薬物として単独で使用することができる。
【０００５】
一実施形態では、本開示は、無水ＣＨＰを単離するために現在使用されているカラムクロマトグラフィーではなく、溶媒を使用する結晶化によってパターン２を単離するためのプロセスに関する。
別の実施形態では、パターン２は、典型的な室温保存条件で、約６カ月、または約１２カ月、または約１８カ月、または約２４カ月、または約３６カ月間安定である。
さらに別の実施形態では、本開示は、実質的に純粋なパターン２材料に関する。いくつかの実施形態では、パターン２材料は、少なくとも約９０％純粋、または少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋である。
【０００６】
一実施形態では、試料の純度を、任意の分析方法によって測定する。一実施形態では、純度を、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、ｐＫａ分析、偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）、熱重量分析／示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）、可変温度および可変湿度Ｘ線粉末回折法（ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ）、1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）、および／または異種核一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲによって測定する。別の実施形態では、試料の純度を、ＨＰＬＣによって測定する。
一実施形態では、パターン２材料は、ＨＰＬＣによって測定される場合、少なくとも約９０％純粋、または少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋である。
【０００７】
別の実施形態では、パターン２材料は、以下：
（ａ）以下のリスト：１０、１３．７、１７、１８．１、２０．２、および２７．３度（２θで±０．２°）から選択される少なくとも２つのピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラム；
（ｂ）約６．４のｐＫａ；
（ｃ）偏光顕微鏡法によって分析した場合、断片化された棒状の形態を有する複屈折；
（ｄ）熱重量分析技術によって分析した場合、約６．５％（０．９当量の水）の最初の質量損失、その後の約２８０℃での試料分解；
（ｅ）ＤＳＣの最初の熱サイクルにおいて約９９℃での開始および約１０２℃でのピークを伴う吸熱；
（ｆ）４０℃での動的蒸気収着分析において、約１０％未満の相対湿度（ＲＨ）での脱水の開始、１０〜０％ＲＨでの約５．８質量％（０．８当量の水）の損失、および０〜約４０％ＲＨでの水和；
（ｇ）５０℃での動的蒸気収着分析において、約２０％未満のＲＨでの脱水の開始、約２０〜０％ＲＨでの約６．１質量％（０．８当量の水）の損失、および０〜約４０％ＲＨでの再水和；
（ｈ）６０℃での動的蒸気収着分析において、約２０％未満のＲＨでの脱水の開始、約２０〜０％ＲＨでの約７質量％（１．０当量の水）の損失、および０〜約４０％ＲＨでの再水和
のうちの少なくとも２つを特徴とし得る。
【０００８】
本開示はまた、パターン２材料および賦形剤を含む医薬組成物を包含する。そのような組成物は、約１％〜約５０％、約５％〜約４５％、約１０％〜約４０％、約１５％〜約３５％、約２０％〜約３０％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、約１％、約２％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％（質量／質量）のＣＨＰ水和物を含み得る。一実施形態では、組成物は、約１％〜約１０％（質量／質量）のＣＨＰ水和物を含み得る。１つの特定の実施形態では、組成物は、約４％（質量／質量）のＣＨＰ水和物を含み得る。
【０００９】
別の実施形態では、組成物は、錠剤、カプセル、カプレット、リキゲル（ｌｉｑｕｉｇｅｌ）、トローチ（ｔｒｏｕｃｈｅ）、注射用減菌溶液などの形態であるように作製され得る。
あるいは、本明細書で教示される組成物は、使用前に、無菌パイロジェンフリー水などの好適なビヒクルで再構成するために粉末形態で製剤化されてもよい。例えば、非経口投与に好適な化合物は、０．１質量体積パーセント〜９０質量体積パーセントの間の化合物を含む減菌等張食塩水を含み得る。例として、溶液は、約５パーセント〜約２０パーセント、より好ましくは約５パーセント〜約１７パーセント、より好ましくは約８〜約１４パーセント、さらにより好ましくは約１０パーセントの化合物を含み得る。
【００１０】
本組成物、方法などの追加の実施形態は、以下の説明、図面、実施例、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。前述および以下の説明から理解できるように、本明細書に記載のすべての特徴、およびそのような特徴のうちの２つ以上のすべての組合せは、そのような組合せに含まれる特徴が相互に矛盾しないという条件で、本開示の範囲内に含まれる。加えて、任意の特徴または特徴の組合せを、任意の実施形態または態様から明確に除外してもよい。追加の態様および実施形態は、特に添付の実施例および図面と併せて検討される場合、以下の説明および特許請求の範囲に記載されている。
【００１１】
特許または出願のファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含んでいる。カラー図面による本特許または特許出願公開の写しは、請求に応じて、必要な手数料が支払われた場合に、米国特許商標庁により提供される。
実施形態の前述の特徴は、添付の図面と併せて以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解されるであろう、添付の図面において、
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】結晶パターン１のＸ線粉末ディフラクトグラムである。
【図２】（ａ）動的蒸気収着（ＤＶＳ）後のパターン１および（ｂ）ＣＨＰのパターン２のＸＲＰＤの比較である。これらの結果により、調製ＣＨＰ材料がパターン２（つまり、ＣＨＰ水和物）であり、ＤＶＳ後に、パターン１がパターン２に変化したことが確認される。
【図３】ＤＶＳ前およびＤＶＳ後の４０％ＲＨでのパターン２のＸ線粉末ディフラクトグラムの比較である。
【図４】ＶＴ−ＤＶＳ後のパターン２のＸ線粉末ディフラクトグラムの分析である。これは、材料がパターン１と２との混合物であったことを示す。
【図５】３つの条件下、すなわち、４０℃／７５％ＲＨ、８０℃、および周囲光、で７日間保存された約３０ｍｇのパターン２のＸ線粉末ディフラクトグラムの比較である。
【図６】ガラスバイアル内に量り取られ、５０℃に設定された真空オーブン内に１時間置かれた、約２．２ｇのＣＨＰ水和物（パターン２）のＸＲＰＤ分析である。
【図７】さらに３０分間真空オーブンに戻されたＣＨＰ水和物すなわちパターン２（青い線：図５からの試料）のＸＲＰＤ分析である。換言すれば、図７の紫色の線は、ＣＨＰ水和物（パターン２材料）を真空下５０℃で１．５時間保存した後の生成物のＸＲＰＤ分析であり、主としてパターン１を示し、一部でパターン２との混成である。
【図８】オーブンに戻され、温度を８０℃に上昇させたＣＨＰ水和物すなわちパターン２（青い線：図５からの試料）のＸＲＰＤ分析である。バイアルをオーブン内にさらに１８時間置いた。換言すれば、図８のピンク色の線は、ＣＨＰ水和物（パターン２材料）を８０℃で１８時間保存した後の生成物のＸＲＰＤ分析であり、主としてパターン１を示し、一部でパターン２との混成である。
【図９】異なる温度でのパターン２における変化の比較である。これは、３つの異なる期間で乾燥させた図５〜７からの試料の生成物ＸＲＰＤ分析の重ね合わせであり、結果を、ＸＲＰＤによって分析した。緑色の線は、５０℃で１時間保存されたパターン２試料を表し、紫色の線は、５０℃で９０分保存されたパターン２試料を表し、ピンク色の線は、８０℃で１８時間保存されたパターン２試料を表す（ピンク色の線）。
【図１０】受入れ材料（主としてパターン１）の最初の分析を示す。ｐＫａ値は６．４である。
【図１１】受入れＣＨＰ（主としてパターン１）の非偏光顕微鏡分析を示す。
【図１２】受入れＣＨＰ（主としてパターン１）の偏光顕微鏡分析を示す。
【図１３】パターン２の非偏光顕微鏡分析およびＰＬＭ分析を示す。
【図１４】受入れＣＨＰ（主としてパターン１）の熱重量分析を示す。
【図１５】パターン２の熱重量分析／示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）を示す。
【図１６】最初の熱サイクルにおける受入れＣＨＰ（主としてパターン１）のＤＳＣ分析を示す。
【図１７】冷却サイクルにおける受入れＣＨＰ（主としてパターン１）のＤＳＣ分析を示す。
【図１８】２回目の熱サイクルにおける受入れＣＨＰ（主としてパターン１）のＤＳＣ分析を示す。
【図１９】最初の熱サイクルにおけるパターン２のＤＳＣ分析を示す。
【図２０】冷却サイクルにおけるパターン２のＤＳＣ分析を示す。
【図２１】２回目の熱サイクルにおけるパターン２のＤＳＣ分析を示す。
【図２２】ＣＨＰ水和物のＦＲ−ＩＲ分光法の結果を示す。
【図２３】パターン１のＤＶＳ等温線プロットの結果を示し、６０％ＲＨと９０％ＲＨとの間で６．３％の質量増加を示している。
【図２４】最初の加熱サイクルにおける再結晶化後のパターン１のＤＶＳ等温線プロットの結果を示し、０〜９０％間のＲＨで０．８％の質量増加を伴い、わずかに吸湿性であることを示している。
【図２５】パターン１のＤＶＳの速度論的プロットの結果を示す。
【図２６】ＤＶＳの前後の材料のＸＲＰＤを示す。ＤＶＳ後のＸＲＰＤ分析は、パターン２として割り当てられた新しい形態を示している。
【図２７】ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２のＴＧ／ＤＴＡを示す。
【図２８】ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２材料が、４０〜９０％ＲＨおよび１０〜９０％ＲＨにおいて変化しなかったことを示すＤＶＳの等温線プロットである。
【図２９】ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２のＤＶＳの速度論的プロットを示す。
【図３０】ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２を４０℃で単一サイクルにかけた後のＶＴ−ＤＶＳ分析を示し、材料が１０％未満で脱水を開始し、５．８質量％（０．８モルの水に相当）を失ったことを示している。材料は０〜４０％ＲＨで再水和した。
【図３１】ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２を５０℃で単一サイクルにかけた後のＶＴ−ＤＶＳ分析を示し、材料が２０％未満で脱水を開始し、６．１質量％（０．８モルの水に相当）を失ったことを示している。材料は０〜４０％ＲＨで再水和した。
【図３２】ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２を６０℃で単一サイクルにかけた後のＶＴ−ＤＶＳ分析を示し、材料が２０％未満で脱水を開始し、７質量％（１．０モルの水に相当）を失ったことを示している。材料は０〜４０％ＲＨで再水和した。
【図３３】ＣＨＰ水和物すなわちパターン２およびパターン１のＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ分析の結果を示す。
【図３４】種々の条件のＶＴ／ＤＶＳ後のＣＨＰ水和物、すなわちパターン２材料のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。パターン１のＸＲＰＤディフラクトグラムを比較のために提供する。
【図３５】ＤＭＳＯ−ｄ6におけるパターン１の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３６】ＤＭＳＯ−ｄ6におけるパターン２の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３７】パターン１（青色の線）およびパターン２（赤色の線）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの比較を示す。
【図３８】パターン１のＨＳＱＣ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３９】パターン１と２との混合物のＨＳＱＣ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４０】パターン１の最初の凍結乾燥後のＸＲＰＤを示す。
【図４１】パターン１の長期凍結乾燥（７２時間）後のＸＲＰＤを示し、ＸＲＰＤによって、凍結乾燥から回収された材料が、ほとんど非晶質であったことが示される。
【図４２】パターン２の最初の凍結乾燥（７２時間の乾燥）後のＸＲＰＤを示し、凍結乾燥から回収された材料は、７２時間の乾燥後にパターン２であることが見出された。
【図４３】種々の溶媒中におけるパターン１のおよその溶解度を示す。
【図４４】加えられた溶媒の量に基づくパターン１の溶媒溶解度の結果を示す。
【図４５】パターン１を種々の溶媒で処理した場合の多形体（パターン１またはパターン２）を示す。
【図４６】一次多形スクリーニング溶媒を示す。
【図４７】種々の溶媒−パート１において形成された多形体のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。
【図４８】種々の溶媒−パート２において形成された多形体のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。
【図４９】種々の溶媒−パート３において形成された多形体のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。
【図５０】一次多形スクリーニング温度サイクリングを示す。
【図５１】パターン１（青色）およびパターン２（赤色）のＸＲＰＤディフラクトグラムの重畳画像である。
【図５２】代表的なブランククロマトグラムである。
【図５３】代表的な分離溶液クロマトグラムである。
【図５４】ＣＨＰ無水物（パターン１）とＣＨＰ水和物（パターン２）との間の総不純物の比較である。
【図５５】パターン１およびパターン２のＬＣ−ＭＳスペクトルであり、［Ｃ11Ｈ14Ｎ4Ｏ2］Ｈ+に対応する、予想された２３５．１のｍ／ｚが確認された。どちらのパターンも、溶媒（水）に溶解すると、溶媒中では「固体形態」も多形体も存在しないため、同じＬＣ−ＭＳが得られる。ＬＣ−ＭＳでは、固体形態ではなく、可溶化されたＣＨＰを測定する。
【図５６】受入れＣＨＰのＨＰＬＣ−ＵＶクロマトグラムである。これは、受入れＣＨＰが９９．５％純粋であったことを示している。
【図５７】溶媒溶解度スクリーニングから回収された固体の例示的なＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図５８−６０】温度サイクリングから回収された固体のＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図６１】パターン２のＸＲＰＤディフラクトグラムパターンである。
【図６２】水中におけるＣＨＰの繰り返し凍結乾燥から得られたＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図６３】水中におけるＣＨＰの３回目の凍結乾燥の試みから得られたＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図６４−６６】一次多形スクリーニングからの温度サイクリング実験に関連するディフラクトグラムである。
【図６７】一次多形スクリーニングからの蒸発実験に関連するディフラクトグラムである。
【図６８】一次多形スクリーニングからの貧溶媒添加に関連するディフラクトグラムである。
【図６９】パターン２スケールアップのＸＲＰＤ結果である。
【図７０】パターン２材料を８０℃に加熱したときに得られた材料のＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図７１】エタノール／ＤＣＭ実験における高速回転蒸発での回収された固体のＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図７２】パターン２の一次多形スクリーニングのＸＲＰＤディフラクトグラムである。
【図７３】パターン２の偏光および非偏光における画像である。
【図７４】ＣＨＰパターン２のホットステージ顕微鏡法である。
【図７５】ホットステージ後の材料の偏光および非偏光画像である。
【図７６】パターン２のＴＧ／ＤＴＡ−ＴＧ分析である。
【図７７】９９℃の開始および１０２℃でのピークを伴う吸熱事象を特定したＤＳＣの最初の熱サイクルである。
【図７８】ＤＳＣの冷却サイクルである。
【図７９】ＤＳＣの２回目のか熱サイクルである。
【図８０】ＣＨＰパターン２のＦＴ−ＩＲスペクトルである。
【図８１】ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ分析に関連するディフラクトグラムである。
【図８２】ＣＨＰパターン２のＤＶＳ等温線プロットである。
【図８３】ＣＨＰパターン２のＤＶＳ速度論的プロットである。
【図８４】比較ＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。
【図８５】４０℃でのパターン２のＤＶＳ等温線プロットである。
【図８６】４０℃でのパターン２の速度論的プロットである。
【図８７】５０℃でのパターン２の等温線プロットである。
【図８８】４０℃でのパターン２の速度論的プロットである。
【図８９】６０℃でのパターン２の等温線プロットである。
【図９０】６０℃でのパターン２の速度論的プロットである。
【図９１】比較ＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。
【図９２】溶解後のパターン１試料の画像を示す。
【図９３】溶解後のパターン２試料の画像を示す。
【図９４】４０℃／７５％ＲＨ、８０℃および周囲光で試験された試料のＸＲＰＤ２Θディフラクトグラムである。
【図９５】安定性試料のＨＰＬＣクロマトグラムのうちの１つである。これは、４０℃／７５％ＲＨで１週目の安定性である。
【図９６】安定性試料のＨＰＬＣクロマトグラムのうちの１つである。これは、８０℃での１週間安定性である
【図９７】安定性試料のＨＰＬＣクロマトグラムのうち１つである。これは、周囲温度での１週間安定性である。
【図９８】純粋パターン１の２週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムである。
【図９９】パターン２の２週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムである。
【図１００】純粋パターン１の４週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムである。
【図１０１】パターン２の４週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムである。
【図１０２】純粋パターン１の８週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムである。
【図１０３】パターン２の８週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムである。
【図１０４】純粋パターン１−  初期時点のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１０５】純粋パターン１−  ２週目のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１０６】純粋パターン１−  ４週目のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１０７】純粋パターン１−  ８週目のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１０８】純粋パターン２−  初期時点のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１０９】純粋パターン２−  ２週目のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１１０】純粋パターン２−  ４週目のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１１１】４０℃／７５％ＲＨでの保存からのＸＲＰＤの結果である。
【図１１２】不純物試験のためのブランク、分離溶液、および試料溶液（６Ｍ）の代表的なクロマトグラムの重ね合わせである。
【図１１３】蒸発の一次多形スクリーニングである。
【図１１４】一次多形スクリーニングのまとめの表である。
【図１１５】８週間安定性外観結果のまとめである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
ここで、種々の態様および実施形態を本明細書で完全に説明する。しかし、これらの態様および実施形態は、多くの異なる形態で具体化することができ、限定的であると解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、開示が完璧かつ完全であり、本主題の範囲を当業者に完全に伝えるように提供される。本明細書で引用されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、上記または下記を問わず、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００１４】
Ａ．定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての用語および句は、その用語または句が使用される文脈からその反対が明確に示されない限りまたは明確に明らかでない限り、その用語および句が当技術分野において達成された意味を含む。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、特定の方法および材料をここで説明する。
【００１５】
他に記載がない限り、個々の数値の使用は、値の前に「約」または「およそ」という単語が付いているかのように、近似値として記載されている。同様に、本出願において明記された種々の範囲の数値は、特に明記しない限り、記載された範囲内の最小値および最大値の両方の前に「約」または「およそ」という単語が付いているかのように、近似値として記載されている。このようにして、記載された範囲の上および下の変動を使用して、範囲内の値と実質的に同じ結果を達成することができる。本明細書で使用する場合、数値を指す場合の「約」および「およそ」という用語は、開示された主題が最も密接に関係する当業者または問題の範囲または要素に関連する技術に対してそれらの明白かつ通常の意味を有するものとする。厳密な数値境界からの広がりの量は、多くの要因に依存する。例えば、考慮され得るいくつかの要因には、要素の重要性および／または所与の量の変動が特許請求の範囲に記載された主題の性能に及ぼす影響、ならびに当業者に知られている他の考慮事項が含まれる。本発明で使用する場合、異なる数値に対して異なる量の有効数字を使用することは、「約」または「およそ」という単語の使用が特定の数値または範囲を広げるために機能する方法を限定することを意味するものではない。したがって、一般的に、「約」または「およそ」は、数値を広げる。また、範囲の開示は、「約」または「およそ」という用語の使用によって提供される範囲の広がりに加えて、最小値と最大値の間のすべての値を含む範囲の連続として意図されている。したがって、本明細書における値の範囲の列挙は、単にその範囲内に含まれるそれぞれ別個の値を各々示すのを省略した方法として機能することを意図しているに過ぎず、それぞれ別個の値は、あたかも本明細書に各々記載されているかのように本明細書に組み込まれる。
【００１６】
「非経口投与」および「非経口的に投与された」という用語は、当技術分野で認識されており、通常は経腸および局所投与以外の注射による投与様式を指し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される「活性剤」または「薬物」という用語は、ヒトまたは動物に投与された場合に生化学的応答を誘発する任意の化学物質を指す。薬物は、生化学的応答の基質または生成物として作用し得るか、または薬物は、細胞受容体と相互作用して生理学的応答を誘発し得るか、または薬物は、受容体と結合して、受容体が生理学的応答を誘発することを阻止し得る。
本明細書で使用される「生物学的同等物」という用語は、ＡＵＣ、部分的ＡＵＣおよび／またはＣmaxの９０％信頼区間（ＣＩ）が０．８０〜１．２５の間である２つの組成物、製品または方法を指す。
「ＣＨＰ水和物」（ａ／ｋ／ａ「パターン２」）という用語は、２０１９年１月７日に発行されたＣＡＳ登録番号：２２５４８２６−９５−２によって識別される化合物を意味する。
「実質的に純粋な」という句は、９０％超の、または９５％超の、または９６％超の、または９７％超の、または９８％超の、または９９％超の、または９９．５％超の総純度を有する物質を指す。例えば、「実質的に純粋な物質Ａ」という句は、物質Ａがすべての不純物に対して少なくとも９０％純粋であるか、または物質Ａがすべての不純物に対して少なくとも９５％純粋であるか、または物質Ａがすべての不純物に対して少なくとも９８％純粋であるか、または物質Ａがすべての不純物に対して少なくとも９９％純粋であることを意味する。
【００１７】
一実施形態では、試料の純度を、任意の分析方法によって測定する。一実施形態では、純度を、ＨＰＬＣ、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、ｐＫａ分析、偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）、熱重量分析／示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）、可変温度および可変湿度Ｘ線粉末回折法（ＶＴ−ＸＲＰＤ／ＶＨ−ＸＲＰＤ）、1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）、および／または異種核一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲによって測定する。
いくつかの実施形態では、Ｘ線粉末回折パターンまたは示差走査熱量測定パターンに関する場合、「実質的に示されるように」という用語は、本明細書に示されるものと必ずしも同一ではないが、当業者によって考慮されるときの実験誤差または偏差の限界内にあるパターンを意味する。
「治療有効量」という用語は、そのような処置を必要とするヒトに投与した場合に、以下に定義されるような、処置を実施するのに十分な量を指す。治療有効量は、処置を受けるヒト対象、ヒト対象の体重および年齢、病状の重症度、投与方法などに応じて変化し、これらは当業者によって容易に決定され得る。
【００１８】
Ｂ．導入
本開示は、新規化合物ＣＨＰ水和物、その使用およびその製造に関する。新規化合物ＣＨＰ水和物を、以下に示す：
【００１９】
【化１】
2021533182.tif 000003
２０１９年１月７日に、ＣＨＰ水和物にＣＡＳ登録番号（ＣＡＳ  ＲＮ）：２２５４８２６−９５−２が割り当てられ、これはＣＡインデックス名：ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４−ジオン，ヘキサヒドロ−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル）−，水和物（１：１），（３Ｓ，８ａＳ）−を有する。ＣＨＰ水和物は、２５２．３ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【００２０】
当業者は、化合物構造が、他の一般的に認識されている命名体系および記号を使用して命名または同定され得ることを理解している。例として、化合物は、一般名、組織名または非組織名で命名または同定され得る。化学の分野において一般的に認識されている命名体系および記号は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  （ＣＡＳ）およびＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （ＩＵＰＡＣ）を含むがこれらに限定されない。したがって、ＣＡＳにおいてピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１，４−ジオン、ヘキサヒドロ−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル）−，水和物（１：１），（３Ｓ，８ａＳ）−、として同定され、上記で提供された化合物構造は、ＣＡＳ名と同等の他の名前で同定される場合がある。
【００２１】
Ｃ．ＣＨＰ水和物の一般的な特性評価
一実施形態では、ＣＨＰ水和物は、約１３．７度  ２θ、１７度  ２θ、および約２７．３度  ２θにおいて特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）を有する。いくつかの実施形態では、Ｘ線粉末回折パターンは、約１０度  ２θ、約１３．７度  ２θ、約１７度  ２θ、約１８．１度  ２θ、および２４．５度  ２θにおける特徴的なピークのうちの任意の１つまたは複数をさらに含む。
いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、約１７０℃〜約１７２℃の融解温度を有する。一変形形態では、ＣＨＰ水和物は、約１０度  ２θ、約１３．７度  ２θ、約１７度  ２θ、約１８．１度  ２θ、約２０．２度  ２θ、および約２７．３度  ２θにおいて任意の１つまたは複数の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを有する。
相対的ＸＲＰＤ強度は、試料の調製、マウント、ならびにスペクトルを得るために使用される機器および分析手順および設定を含む多くの要因に応じて変化し得ることを理解すべきである。したがって、本明細書に列挙されたピーク割り当ては、プラスマイナス０．２度  ２θの変動を包含することを意図している。
【００２２】
他の実施形態では、ＣＨＰ水和物は、約１７０℃での示差走査熱量測定によって決定される融解温度の開始を有することを特徴とする。さらに他の実施形態では、ＣＨＰ水和物は溶媒を実質的に含まない。
ＣＨＰ水和物のいくつかの実施形態では、以下の（ａ）〜（ｆ）、すなわち、
（ａ）ＣＨＰ水和物は、溶媒を実質的に含まない；
（ｂ）ＣＨＰ水和物は結晶性である；（ｃ）ＣＨＰ水和物は、実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する；（ｄ）ＣＨＰ水和物は、実質的に図１９〜２１に示されるような示差走査熱量測定サーモグラムを有する；（ｅ）ＣＨＰ水和物は、約１７０℃での示差走査熱量測定によって決定される融解温度の開始を有する；および（ｆ）ＣＨＰ水和物は、室温での保存条件において安定である、
のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、またはすべてを適用する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、以下の特性、すなわち、
（ａ）実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターン；
（ｂ）実質的に図１９〜２１に示されるような示差走査熱量測定サーモグラム；
および
（ｃ）約１７０℃での示差走査熱量測定によって決定される融解温度の開始、
の少なくとも１つ、少なくとも２つ、またはすべてを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターンとしての最大ピークのうちの少なくとも２つを表示するＸ線粉末回折パターンを有する。いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターンとしての最大ピークのうちの少なくとも３つを表示するＸ線粉末回折パターンを有する。いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターンとしての最大ピークのうちの少なくとも４つを表示するＸ線粉末回折パターンを有する。いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターンとしての最大ピークのうちの少なくとも５つを表示するＸ線粉末回折パターンを有する。いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、実質的に図２（ｂ）に示されるようなＸ線粉末回折パターンとしての最大ピークのうちの少なくとも６つを表示するＸ線粉末回折パターンを有する。
【００２５】
Ｄ．医薬組成物
一実施形態では、実質的に純粋なパターン２化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。例えば、医薬組成物は、医薬組成物の総量の約１〜約２０パーセント（質量％）（すなわち、約１パーセント、約２パーセント、約３パーセント、約４パーセント、約５パーセント、約６パーセント、約７パーセント、約８パーセント、約９パーセント、約１０パーセント、約１１パーセント、約１２パーセント、約１３パーセント、約１４パーセント、約１５パーセント、約１６パーセント、約１７パーセント、約１８パーセント、約１９パーセント、約２０パーセント）で実質的に純粋なパターン２化合物を含むことができる。さらなる例として、医薬組成物は、医薬組成物の総量の約１〜約１００パーセント、約１〜約１０パーセント、約１０〜約２０パーセント、約２０〜約３０パーセント、約３０〜約４０パーセント、約４０〜約５０パーセント、約５０〜約６０パーセント、約６０〜約７０パーセント、約７０〜約８０パーセント、約８０〜約９０パーセント、約９０〜約１００パーセント（質量％）でパターン２化合物を含むことができる。例えば、医薬組成物は、医薬組成物の総量の約１〜約４０パーセント（質量％）でパターン２化合物を含むことができる。特定の例では、医薬組成物は、医薬組成物の総量の約４パーセント（質量％）でパターン２化合物を含むことができる。
【００２６】
別の実施形態では、実質的に純粋なパターン２化合物、別の治療活性剤、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。一実施形態では、活性剤は、生体分子、生物活性剤、小分子、薬物、プロドラッグ、薬物誘導体、タンパク質、ペプチド、ワクチン、アジュバント、造影剤（例えば、蛍光部分）、ポリヌクレオチド、または金属から選択される。さらに別の実施形態では、活性剤は亜鉛である。
一実施形態では、パターン２原薬は、ＣＨＰ中の不純物レベルに関するＩＣＨ純度ガイドラインＱ．２Ａを満たしている。
別の実施形態では、本発明の組成物は、経口、局所、非経口、静脈内、皮内、結腸、直腸、筋肉内、または腹腔内を含む様々な方法で投与することができる。
【００２７】
組成物を、注射による、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与用に製剤化されてもよい。注射用製剤は、任意の防腐剤が添加されたアンプルまたは複数回投与容器の単位剤形で提示してもよい。非経口製剤は、ガラス、プラスチックなどで作製されたアンプル、使い捨て注射器、または複数回投与バイアル内に封入することができる。製剤は、油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤または乳剤などの形態をとることができ、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤などの薬剤を含み得る。
例えば、非経口製剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の減菌注射用溶液または懸濁液であり得る。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、０．９％食塩水、または他の好適な水性媒体がある。
【００２８】
一実施形態では、静脈内「溶液」製剤の濃度は、約１ｍｇ／リットル〜約２００ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、静脈内「溶液」製剤の濃度は、約１ｍｇ／リットル、約２ｍｇ／リットル、約３ｍｇ／リットル、約４ｍｇ／リットル、約５ｍｇ／リットル、約６ｍｇ／リットル、約７ｍｇ／リットル、約８ｍｇ／リットル、約９ｍｇ／リットル、約１０ｍｇ／リットル、約１１ｍｇ／リットル、約１２ｍｇ／リットル、約１３ｍｇ／リットル、約１４ｍｇ／リットル、約１５ｍｇ／リットル、約２０ｍｇ／リットル、約２５ｍｇ／リットル、約３０ｍｇ／リットル、約３５ｍｇ／リットル、約４０ｍｇ／リットル、約４５ｍｇ／リットル、約５０ｍｇ／リットル、約５５ｍｇ／リットル、約６０ｍｇ／リットル、約６５ｍｇ／リットル、約７０ｍｇ／リットル、約７５ｍｇ／リットル、約８０ｍｇ／リットル、約８５ｍｇ／リットル、約９０ｍｇ／リットル、約９５ｍｇ／リットル、約１００ｍｇ／リットル、約１１０ｍｇ／リットル、約１２０ｍｇ／リットル、約１３０ｍｇ／リットル、約１４０ｍｇ／リットル、約１５０ｍｇ／リットル、約１６０ｍｇ／リットル、約１７０ｍｇ／リットル、約１８０ｍｇ／リットル、約１９０ｍｇ／リットル、または約２００ｍｇ／リットルである。
【００２９】
別の実施形態では、組成物は、拡散（スロードリップ（ｓｌｏｗ  ｄｒｉｐ））製剤または静脈内ボーラス注射に製剤化することができる。
さらに別の実施形態では、パターン２化合物は、経口投与してもよく、または経口投与用に製剤化してもよい。投与は、即時放出錠剤およびカプセル、または腸溶性コーティング錠剤などを介して行うことができる。本明細書に記載の少なくとも１つの化合物を含む医薬組成物を製造する際、活性成分は、通常、賦形剤によって希釈され、および／またはカプセル、サシェ、紙または他の容器の形態であり得るそのような担体内に封入される。賦形剤が希釈剤として機能する場合、それは、活性成分のビヒクル、担体、または媒体として作用する、固体、半固体、または液体材料の形態であり得る。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてまたは液体媒体中）、軟膏剤、軟質および硬質ゼラチンカプセル、減菌注射液、ならびに減菌包装粉末の形態であり得る。
【００３０】
好適な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、ＵＳＰまたは滅菌水、シロップベースおよびメチルセルロース、が挙げられる。製剤としては、潤滑剤、例としてタルク、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸；湿潤剤；乳化剤および懸濁化剤；保存剤、例としてヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル；甘味剤；および香料添加剤、がさらに挙げられる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、組成物は、単位剤形で製剤化される。「単位剤形」という用語は、ヒト対象および他の哺乳動物用の単位投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、好適な医薬賦形剤（例えば、錠剤、カプセル、アンプル）と共同して、所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性材料（治療有効量）を含む。化合物は、一般に、薬学的に有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、各投薬単位は、約１ｍｇ〜約１００ｍｇのパターン２化合物を含む。いくつかの実施形態では、各投薬単位は、約２ｍｇ〜約６０ｍｇ、約３ｍｇ〜約５０ｍｇ、約４ｍｇ〜約４０ｍｇ、約５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約６ｍｇ〜約２０ｍｇ、約８ｍｇ〜約１５ｍｇ、または約８ｍｇ〜約１０ｍｇのパターン２化合物を含む。
他の実施形態では、各投薬単位は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、または約１００ｍｇのパターン２化合物を含む。
一実施形態では、対象は、１日あたり１または複数の投薬単位を受ける。さらに別の実施形態では、対象は、１日あたり１５ｍｇのパターン２化合物を受ける。
【００３２】
錠剤などの固体組成物を調製するために、有効成分を医薬賦形剤と混合して、本開示の化合物の均質な混合物を含む固体混合ブレンド組成物を形成する。これらの混合ブレンド組成物を均質であると呼ぶ場合、活性成分が組成物全体に均一に分散し、その結果、組成物が錠剤、丸剤およびカプセルなどの同等に有効な単位剤形に容易に細分され得ることを意味する。
【００３３】
本開示の錠剤または丸薬は、粉末コーティングされるか、そうでなければ配合されて、長期作用の利点を与えるか、または胃の酸性状態から保護する剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸薬は、内部投与成分および外部投与成分を含むことができ、外部投与成分は、内部投与成分を覆うエンベロープの形態である。２つの成分は、胃での崩壊に抵抗し、内部成分が無傷で十二指腸へ通過するか、放出を遅らせることができるように機能する腸溶層によって分離することができる。様々な材料をそのような腸溶層または腸溶コーティングに使用することができ、そのような材料としては、複数のポリマー酸およびポリマー酸とセラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料との混合物が挙げられる。一実施形態では、フィルムコーティングは、ポリビニルアルコール系コーティングである。
【００３４】
組成物および方法において有用な化合物には、該当する場合、ジアステレオマーおよびエナンチオマーなどの異性体、塩、溶媒和物、および多形体を含む、それらの薬学的に許容される形態のいずれかの本明細書に記載された化合物、ならびに本明細書に記載の化合物のラセミ混合物および純粋な異性体が含まれる。
好適な賦形剤としては、結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、抗酸化剤、キレート剤、および着色剤が挙げられる。
表１は、（記載された成分の質量％に基づいて）以下の成分を含む、経口剤形の例示的な製剤を提供する。
【００３５】
【表１】
2021533182.tif 000004
【００３６】
Ｅ．ＣＨＰ水和物の調製
いくつかの実施形態では、ＣＨＰ水和物は、結晶化によって得られる。ＣＨＰ無水物を、５０℃で２〜２．５体積のＥｔＯＨ／水またはアセトン／水中に溶解し、次に系を３５℃に冷却した。続いて、０．５体積のメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭｔＢＥ）を加え、次に０．５％種晶（ＣＨＰ水和物）を加えた。２時間撹拌した後、系を２時間で５℃に冷却した。最後に、７体積のＭｔＢＥを８時間で加え、次に８時間撹拌した。
ＣＨＰパターン１のバッチで実施された溶解度評価は、ＭｔＢＥの百分率が最も高いエタノール：水：ＭｔＢＥのブレンドを除いて、水を含むすべての溶媒混合物において高い溶解度を示した。水、および水：アセトンブレンド中で特に高い溶解度が観察された。この材料は、アセトン、アセトニトリル、およびＴＨＦ中では可溶性が低かった（≦１０ｍｇ／ｍＬ）。２点溶解度実験では、評価した２つの溶媒系（エタノール：水：ＭｔＢＥおよびアセトン：水）のうち、エタノール：水：ＭｔＢＥの方が、わずかに収率が高かったが、パターン１が形成されるリスクがあり；一方、アセトン：水ではパターン２のみであることが可能であったが、収率を減らすリスクがあった、ことが示された。
【００３７】
ＣＨＰパターン１を使用して、２セットの小スケールの結晶化試験（５００ｍｇスケール）を実施した。第１のセットではアセトン：水溶媒系を利用し、第２のセットではエタノール：水：ＭｔＢＥ溶媒系を利用した。貧溶媒の添加を、５℃または５０℃のいずれかで実施した。溶媒系にも貧溶媒添加温度にも関係なく、ＸＲＰＤによれば、パターン２が、専ら回収された。エタノール：水／ＭｔＢＥでは、特に固体がより高い温度（５０℃）で単離された場合に、より大きな粒子が生成された。蒸発による溶媒損失（特にエタノール：水：ＭｔＢＥ）によって、濾過後に回収された固体の質量と比較して、計算された収率がはるかに低くなった。
これらの結晶化進行研究では、良好な収率および粒子均一性を得ることを目的として、冷却プロトコルおよび貧溶媒添加プロトコルの組合せを調査した。これらの研究では、２０ｇスケールで、２％の粉砕種晶負荷、段階的な貧溶媒添加を使用し、２９℃で８時間の保持期間後、５℃への冷却を使用することが、粒子の均一性（光学顕微鏡およびＦＢＲＭで評価）および収率に関して最も有望なプロトコルであるとわかったことが示された。
【００３８】
Ｆ．Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
一実施形態では、本開示は、以下のような、
【化２】
2021533182.tif 000005
約１７度および約２７．３度（２θで±０．２°）でのピークを含むＸＲＰＤディフラクトグラムを特徴とする、実質的に純粋なシクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）水和物（パターン２）化合物に関する。
実質的に純粋なパターン２の一実施形態は、以下のリスト：１３．７、１７、１８．１、２０．２、および２７．３度（２θで±０．２°）から選択される少なくとも３つのピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを特徴とする。別の実施形態は、以下のリスト：１０、１３．７、１７、１８．１、２０．２、および２７．３度（２θで±０．２°）から選択される少なくとも２つのピークを含むＸＲＰＤディフラクトグラムを特徴とする。
【００３９】
Ｇ．核磁気共鳴（ＮＭＲ）または13Ｃ  ＳＳＮＭＲ
一実施形態では、パターン２の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、以下の化学シフトを示す：1H NMR (400MHz, D2O) δ 7.58 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 6.82 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 4.42 (m, 1H), 4.12 (m, 1H), 3.36-3.47(m, 2H), 3.05 - 3.09 (m, 2H), 2.12 (br, 1H), 1.80 - 1.84 (m, 2H), 1.37 - 1.40 (m, 1H).
一実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、ＤＭＳＯ−ｄ6溶媒中の無水ＣＨＰと本質的に同じ1Ｈ−ＮＭＲを呈する。これには、以下の値が含まれる：１．７ｐｐｍ（ｍ，３Ｈ）、２．１ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）、２．５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）、３．２ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）、３．５ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）、４．２ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），７．０ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）、７．６ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）、８．１ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）。
Ｈ．固体赤外分光法
一実施形態では、パターン２の固体赤外スペクトルは、３４５７、３４１１（ｍ）；３２９２、３２１１（ｍ）；２９７６；１６５８；１６３３（ｍ）；および１４４５〜１４２４（ｍ）ｃｍ-1、でシグナルを表示する。
Ｉ．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
別の実施形態では、パターン２の吸熱開始は、約１００±２℃および１７１±２℃であることが見出された。他の実施形態では、本開示のパターン２（ＣＨＰ水和物）は、約７５℃〜約１００℃で吸熱開始を呈する。
【００４０】
Ｊ．動的蒸気収着（ＤＶＳ）
さらに別の実施形態では、パターン２の動的蒸気収着は、
−  ４０℃にて１０％ＲＨ未満で脱水すると、６±０．２質量％の損失が生じ、０％ＲＨ〜４０％ＲＨで再水和すること；
−  ５０℃にて２０％ＲＨ未満で脱水すると、６±０．２質量％の損失が生じ、０％ＲＨ〜４０％ＲＨで再水和すること；
−  ６０℃にて２０％ＲＨ未満で脱水すると、７±０．２質量％の損失が生じ、０％ＲＨ〜４０％ＲＨで再水和すること
のうちの１つまたは複数を示す。
他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約３％〜約９％、または約４％〜約８．５％、または約５％〜約８％の質量損失を呈する。別の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約５．５％〜約７．３％の質量損失を呈する。
さらに別の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約５．８％〜約７．０％の質量損失を呈する。
【００４１】
Ｋ．熱重量分析（ＴＧＡ）
別の実施形態では、パターン２のＴＧＡは、分解前に６±０．５％の質量損失を示す。
他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約７５〜８５℃で、少なくとも１つの吸熱事象を呈し、これは水の損失である。別の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約１１５〜約１２０℃で少なくとも１つの発熱事象を呈し、これはパターン１への再結晶事象である。
Ｌ．融解温度
別の実施形態では、パターン２の融解温度は、１７０±２℃である。
【００４２】
Ｍ．準安定領域（ＭＳＺＷ）の測定
さらに別の実施形態では、０％ＭｔＢＥでの沈殿の欠如は、結晶化が起こるために貧溶媒の添加が必要であることを示した。１０％ＭｔＢＥでは、約４３．２℃の準安定領域が観察された。２０％ＭｔＢＥでは、ＣＨＰは開始濃度が＞１００ｍｇ／ｍＬになるまで溶液のままであった。３２５および４２５ｍｇ／ｍＬ実験での準安定領域を測定し、それぞれ約３５．２℃および約３０．７℃であった。ＭｔＢＥ含有量を３０％体積／体積に増やすと、ＭＳＺＷは約３０±０．５℃（３２５ｍｇ／ｍＬにおいて）になった。さらに、６０％ＭｔＢＥでは、ＭＳＺＷは５１．４℃（１００ｍｇ／ｍＬにおいて）であった。８０％ＭｔＢＥでは、１００ｍｇ／ｍＬおよび４２５ｍｇ／ｍＬの濃度で調製された試料は、より高い温度でも、実験期間を通じて、スラリーとして残った。準安定領域の分析を通じて、そこでは透明点を得るためにおよそ５６〜６１℃の温度が必要になる傾向が見られた。
【００４３】
Ｐ．処置方法
本開示のパターン２化合物は、酸化的損傷に対する細胞保護作用を提供し、ＰＣ１２細胞株の炎症反応を抑制し、食欲抑制剤として、様々な疾患および障害、例として、糖尿病およびその他の代謝性疾患、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、急性腎障害（ＡＫＩ）、慢性腎臓病（ＣＫＤ）、腎臓線維症を処置するために治療有効量で使用され得る。
【実施例】
【００４４】
以下の実施例は、本開示のある特定の実施形態を実証することが含まれる。しかしながら、当業者であれば、本開示の見地から、本発明（ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ）の精神および範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態において改変がなされ、依然として同様のまたは類似の結果が得られることを認識すべきである。したがって、記載されているすべての事項は、限定的な意味ではなく、例示として解釈されるべきである。
【００４５】
（実施例１）
パターン１（無水ＣＨＰ）からパターン２（ＣＨＰ水和物）への変換
２ｇの量のパターン１材料（ロット番号ＰＳ００７２６−５５−Ｄ）を、８０℃で１ｍＬの水中に溶解した。かなりの量の蒸発に対処するために、さらに１ｍＬの水を加えた。８０℃で、これにより透明な暗褐色の溶液が得られた。続いて、溶液を５０℃に急冷し、９．５体積（１９ｍＬ）のアセトンを溶液に加えて、淡黄色の溶液を得た。油化も沈殿も検出されなかった。溶液を室温まで冷却すると、顕著な量の固体沈殿が生じた。溶液を６℃に冷却し（収率を上げるため）、スラリーを濾過した。脱水を防ぐために、固体をフィルター上で乾燥させた。パターン１への脱水は減圧下にて８０℃以上で起こるため、減圧下で５０℃での乾燥は、パターン２を維持するのに安全であると考えられた。ＸＲＰＤにより、生成物がパターン２であり、収率がおよそ７２％であることを確認した。
ＣＨＰ水和物のバッチを、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、ｐＫａ分析、偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）、熱重量分析／示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）、可変温度および可変湿度Ｘ線粉末回折法（ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ）、1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）、および異種核一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲを含む種々の技術によって分析した。
【００４６】
Ａ．Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
ＸＲＰＤ分析を、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’ｐｅｒｔ  ｐｒｏで、３〜３５°２θの試料を走査して実施した。材料を穏やかに粉砕して、粒塊を放出し、試料を支持するために、カプトンまたはマイラーポリマーフィルムを使用してマルチウェルプレートに装填した。次に、マルチウェルプレートを回折計に配置し、４０ｋＶ／４０ｍＡの発電機設定を使用して、透過モード（ステップサイズ０．０１３０°  ２θ）で操作し、Ｃｕ  Ｋ放射線（α１λ＝１．５４０６０Å；α２＝１．５４４４３Å；β＝１．３９２２５Å；α１：α２比＝０．５）を使用して分析した。
【００４７】
図１に示すように、バッチは、ＸＲＰＤによれば結晶性であり、パターン１として割り当てた。ＸＲＰＤ分析を、５ｇのＣＨＰ水和物の試料において実施した。試料をガラスバイアルに量り取り、６ｍＬの９０：１０エタノール／水混合物を加えてスラリーを作製した。次に、混合物を周囲温度でおよそ２４時間撹拌し、次にＸＲＰＤによって分析した。図２に示すように、この材料を、パターン２として確認した（図２（ｂ））。図３に示すように、ＤＶＳ後のパターン２の分析では、ＤＶＳ後の４０％ＲＨで形状に変化は示されなかった。図４に示すように、パターン２の分析では、種々の温度のＤＶＳ（ＶＴ−ＤＶＳ）後、材料はパターン１と２の混合物であることが示された。図５に示すように、およそ３０ｍｇのパターン２（黒色の線、図５）を、３つの条件下、すなわち、４０℃／７５％ＲＨ、８０℃、および周囲光、で７日間保存した。ＸＰＲＤ分析を実施して、材料の形態の変化を評価した。７日後、４０℃／７５％ＲＨで保存された試料（青色の線、図５）および周囲光で保存された試料（緑色の線、図５）に、変化は観察されなかった。８０℃で保存された試料はパターン１に変換された（赤色の線、図５）。図７に示すように、パターン２の試料（図７の青色の線）をさらに３０分間真空オーブンに戻した。ＸＲＰＤ分析（図７の紫色の線）は、材料が依然としてほとんどパターン２であり、いくつかのパターン１ピークを有することを示した。
【００４８】
図６に示すように、ＣＨＰ水和物（パターン２）を、ガラスバイアルに量り取り、５０℃に設定された真空オーブン内に１時間置いた。ＸＲＰＤ分析（緑色の線）は、材料が依然としてほとんどパターン２であり、いくつかのパターン１ピークを有することを示した。
図８に示すように、図５（黒色の線）からの投入材料をオーブンに戻し、温度を８０℃に上昇させた。バイアルをオーブン内にさらに１８時間置いた。ＸＲＰＤ分析（ピンク色の線）は、材料がパターン１と２の混合物であることを示した。これまでどのパターンにも見られなかった８°  ２θの追加のピークがあった。図９に示すように、図５のパターン２を３つの異なる時間で乾燥させ、結果を、ＸＲＰＤによって分析した。試料を５０℃で１時間乾燥させると、パターン１のピークを有するパターン２（緑色の線）が生成され、試料を５０℃で９０分間乾燥させると、またパターン１のピークを有するパターン２（紫色の線）が生成され、試料を８０℃で１８時間乾燥させると、パターン１とパターン２との混成（ピンク色の線）が示された。
図３４では、パターン２がパターン１に変化する異なる条件をまとめた。パターン２（黒色の線、図３４）の試料を（実行２、赤色の線）８０℃にて０％ＲＨで処理すると、２０分以内にパターン２がパターン１に変換され（実行３、青色の線）、一方、周囲温度にて０％ＲＨでは１時間後でもパターン２を維持した（赤色の線）。パターン２は、４０％ＲＨで周囲温度にて安定である（実行１、茶色の線）。
【００４９】
Ｂ．ｐＫａ分析
ｐＫａ分析は、ｐＫａ点を決定するための酸／塩基滴定である電位差測定技術を介してパターン１において実施した。
図１０に示すように、無水ＣＨＰ（パターン１）の分析によって、６．４のｐＫａ値が得られた。
Ｃ．光学顕微鏡法（非偏光）および偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）
【００５０】
光学顕微鏡法では、Ｍｏｔｉｃカメラおよび画像キャプチャソフトウェア（Ｍｏｔｉｃ  Ｉｍａｇｅｓ  Ｐｌｕｓ  ２．０）を装備したＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０偏光顕微鏡に結合した、接続コントローラーユニットを備えた較正Ｌｉｎｋａｍ  ＴＨＭ６００ホットステージを使用して目視で測定した。およそ０．５ｍｇの材料を顕微鏡のカバーガラス上に置き、１０℃／分の速度で加熱し、決まった間隔で画像を撮影して熱転移を記録した。特に明記されていない限り、すべての画像を、１０倍の対物レンズを使用して記録した。
（ＰＬＭ）分析は、Ｍｏｔｉｃカメラおよび画像キャプチャソフトウェア（Ｍｏｔｉｃ  Ｉｍａｇｅｓ  Ｐｌｕｓ  ２．０）を装備したＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０偏光顕微鏡を使用して実施した。特に明記されていない限り、すべての画像を、２０倍の対物レンズを使用して記録した。結晶化度（複屈折）の存在を、ＰＬＭによって決定した。偏光顕微鏡は、主にその光学的に異方性である性質によって目に見える標本を観察および写真撮影するように設計されている。
【００５１】
図１１（非偏光顕微鏡）および１２（偏光顕微鏡）では、供給されたＣＨＰ（主としてパターン１）が複屈折性であり、明確な形態がないことが実証された。図１３に示すように、パターン２は、断片化された棒状の形態を有する複屈折性であることがわかった。他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物（パターン２）は、ＰＬＭ下で断片化された棒状の形態を示す。
【００５２】
Ｄ．熱重量分析／示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）
およそ５ｍｇの材料を、アルミニウム製オープンパン内に量り取り、Ｓｅｉｋｏ  ６２００／７２００同時熱重量分析／示差熱分析装置（ＴＧ／ＤＴＡ）に装填し、室温で保持した。次に、試料を１０℃／分の速度で２０℃から３００℃に加熱し、その間に試料質量の変化を示差熱事象（ＤＴＡ）とともに記録した。パージガスとして、窒素を３００ｃｍ3／分の流量で使用した。
図１４に示すように、パターン１のＴＧＡ分析によって、約７５〜８５℃で０．６％（０．０８当量の水）の最初の質量損失が明らかになった。この０．６％の水は、表面水−非結合水に起因していた。試料が約２６０℃で分解する前に、０．２％および０．３％（それぞれ０．０３および０．０４当量の水）の２つのさらなる質量損失が観察された。最初の質量損失は、少量のパターン２材料が水を失った材料に混合してパターン１になったことによる場合がある。質量損失に基づいて、この量は８％であると推定される。およそ１００℃での２番目の水分損失は、非結合表面水の蒸発による場合がある。ＤＴ分析により、１７０℃での開始および１７２℃でのピークを伴う１つの鋭い吸熱事象が特定された。
【００５３】
図１５に示すように、パターン２のＴＧＡ分析によって、６．５％（０．９当量の水）の最初の質量損失、その後の約２８０℃での試料分解が示された。ＤＴトレースによって、最初の質量損失に関連する吸熱事象が特定された。これに続いて、１１８℃で発熱事象（パターン１への再結晶）が発生した。試料融解と考えられる２番目の吸熱が１７０℃で観察され、１７２℃でピークが観察された。他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約７５〜８５℃で、少なくとも１つの吸熱事象を呈し、これは水の損失である。別の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約１１５〜約１２０℃で少なくとも１つの発熱事象を呈し、これはパターン１への再結晶事象である。
【００５４】
Ｅ．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣを、アルミニウムＤＳＣパンに量り取った約５ｍｇの材料を加え、穴開きアルミニウム蓋で非気密的に密封することによって実施した。次に、試料パンを、Ｓｅｉｋｏ  ＤＳＣ６２００（クーラーを装備）に装填し、冷却して２０℃に保持した。安定な熱流応答が得られたら、試料および基準物質を１０℃／分の走査速度で２５０℃に加熱し、得られた熱流応答を監視した。パージガスとして、窒素を５０ｃｍ3／分の流量で使用した。
【００５５】
図１６に示すように、パターン１の第１の熱サイクルでは、小さく、７５℃で開始し、ピークが８５℃である、幅広い吸熱を示した。これは、図１４に見られるＴＧ／ＤＴＡにおいて観察された０．６％の質量損失と一致している。２番目の大きな吸熱事象は、１６９℃で観察され、ピークは１７１℃であった。これは、ＴＧ／ＤＴＡにおいて見られる融解と一致している。図１６の最初のブロードピークは、パターン２からパターン１への脱水によるものであり得る。図１６の２番目のピークは、パターン１の融解であり得る。
図１７に示すように、冷却サイクルにおいて熱事象は観察されなかった。図１８に示すように、非常に小さなブロードピークである潜在的ガラス転移点が、２回目の熱サイクルにおいておよそ８０℃で観察された。
図１９に示すように、パターン２の最初の熱サイクルでは、９９℃の開始および１０２℃でのピークを伴う吸熱が特定された。試料融解が１７０℃で開始し、１７３℃でピークを伴うことが観察された。これは、ＴＧ／ＤＴＡにおいて見られるデータと一致している。図２０に示すように、パターン２の冷却サイクルにおいて熱事象は観察されなかった。
図２１に示すように、考えられるガラス転移点が、ＣＨＰ水和物の２回目の熱サイクルにおいて７７℃で観察された。
一実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約７５℃〜約１００℃で吸熱開始を呈する。
【００５６】
Ｆ．フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）
ＦＲ−ＩＲを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＬＰＨＡ  Ｐ分光計で実施した。十分な材料を分光計のプレートの中央に配置し、以下のパラメータを使用してスペクトルを取得した：解像度：４ｃｍ-1、バックグラウンド走査時間：１６スキャン、試料走査時間：１６スキャン、データ収集：４０００〜４００ｃｍ-1、結果スペクトル：透過およびソフトウェア：ＯＰＵＳバージョン６。
図２２に示すように、パターン２のＦＴ−ＩＲは、構造と一致している。パターン２の固体赤外スペクトルは、３４５７、３４１１（ｍ）；３２９２、３２１１（ｍ）；２９７６；１６５８；１６３３（ｍ）；および１４４５〜１４２４（ｍ）ｃｍ-1、でシグナルを表示する。他の実施形態では、本開示のＣＨＰおよびＣＨＰ水和物は、約５００ｃｍ-1〜約１６６０ｃｍ-1の少なくとも９つのバンドを呈する本質的に同じＩＲスペクトルを示す。パターン２は、結晶格子内の水（水和物）により、３４５７および３４１１ｃｍ-1で伸びているが、パターン１は伸びていない。
【００５７】
Ｇ．動的蒸気収着（ＤＶＳ）
ＤＶＳは、約１０〜２０ｍｇの試料を金網式蒸気収着バランスパンに入れ、Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ＳｙｓｔｅｍｓによるＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ動的蒸気収着バランスに装填することによって実施した。試料を、安定な質量が達成されるまで、２５℃にて各ステップで（ｄｍ／ｄｔ  ０．００４％、最小ステップ長３０分、最大ステップ長５００分）試料を維持しながら、１０％刻みで４０〜９０％の相対湿度（ＲＨ）の傾斜プロファイルにかけた。収着サイクルの完了後、同じ手順を使用して試料を０％ＲＨまで乾燥させ、次に２番目の収着サイクルで４０％ＲＨまで戻した。２サイクルを行った。収着／脱着サイクル中の質量変化をプロットし、試料の吸湿性を決定できるようにした。次に、保持された固体に対してＸＲＰＤ分析を実施した。
図２３に示すように、パターン１のＤＶＳ等温線プロットは、６０％ＲＨから９０％ＲＨまでで６．３％の質量増加を示し、これは、ＣＨＰ水和物、すなわちパターン２への変換を示している。図２４に示すように、パターン２に変換した後、０〜９０％の間のＲＨで最大０．８質量％の取り込みがあり、材料はほんのわずかに吸湿性であると見られ、この取り込みは結晶構造の一部ではなく、表面水であると想定された。この現象を図２５に示し、パターン１のＤＶＳの速度論的プロットは、パターン１が最初に水和してパターン２を形成するが、脱着段階の間、水を放出しないことを示しており、これは、０．８％のわずかな質量増加が固体構造の一部ではないことを示している。
図２６に示すように、パターン１のＤＶＳ後のＸＲＰＤ分析は、パターン２として割り当てられた新しい形態を示している。図２７に示すように、パターン２のＤＶＳ後ＴＧ／ＤＴＡ分析によって、６．８％（０．９５当量の水）の最初の質量損失、その後のおよそ２８０℃での試料分解が示された。ＤＴトレースによって、質量損失に関連する吸熱事象、その後の再結晶化（パターン１への）、約１２０℃での発熱事象、次に１６８℃での開始および１７２℃でのピークを伴う融解が、特定された。
【００５８】
ＣＨＰパターン２を、いくつかのより高い温度条件、すなわち、２５℃（図２８）；４０℃（図３０）；５０℃（図３１）；および６０℃（図３２）に置いて、湿度０％〜９０％の下での脱水／再水和を確認した。
【００５９】
図２８に示すように、ＤＶＳの等温線プロットは、パターン２材料が、４０〜９０％ＲＨおよび１０〜９０％ＲＨにおいて変化しなかったことを示した。次に、材料は、１０％ＲＨ未満で３．５質量％を失い、０〜９０％ＲＨで再水和した。図２９に示すように、ＤＶＳの速度論的プロットは、ＣＨＰ水和物が５００分で８０％〜０％ＲＨの脱着段階の間に、３．５％の水を失うことを示している（赤色の線）。図３０、３１、および３２に示すように、パターン２を、４０℃、５０℃、および６０℃で単一サイクルにかけた。４０℃では、材料が１０％ＲＨ未満で脱水を開始し、１０〜０％ＲＨでおよそ５．８質量％（０．８当量の水）を失ったことが示された。材料は、０〜４０％ＲＨで水和する（図３０）。５０℃では、材料が２０％ＲＨ未満で脱水を開始し、２０〜０％ＲＨでおよそ６．１質量％（０．８当量の水）を失ったことが示された。材料は、０〜４０％ＲＨで再水和する（図３１）。６０℃の分析では、材料が２０％ＲＨ未満で脱水を開始し、２０〜０％ＲＨでおよそ７質量％（１．０当量の水）を失ったことが示された。材料は、０〜４０％ＲＨで再水和する（図３２）。
他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約３％〜約９％、または約４％〜約８．５％、または約５％〜約８％の質量損失を呈する。別の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約５．５％〜約７．３％の質量損失を呈する。
さらに別の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、約５．８％〜約７．０％の質量損失を呈する。
【００６０】
Ｈ．可変温度および可変湿度Ｘ線粉末回折法（ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ）
ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ分析を、パターン２材料で実施した。パターン２は、４０％ＲＨおよび周囲温度での初回走査において存在していた。パターン２は、実行２においてＲＨが周囲温度で０％に低下した場合に残存していた。温度を８０℃に上昇させ、試料を２０分間放置した後、走査を行った。得られたディフラクトグラムは、生成された材料が純粋パターン１であることを示唆している。純粋パターン１は、８０℃および０％ＲＨで８０分後に残存していた。図３３にこれらの結果を示す。
図３４は、種々のＶＴ／ＤＶＳ後のパターン２材料のＸＲＰＤを示す。他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、室温にて少なくとも約０％〜約９０％ＲＨで存在する。さらに別の実施形態では、パターン２の１００％が、８０℃にて０％ＲＨでパターン１に変換される。
【００６１】
Ｉ．1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）
ＮＭＲは、プロトンに対して５００．１２ＭＨｚで作動するＤＣＨクライオプローブを装備したＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＩＩＩＨＤ分光計を使用することによって実施した。実験は重水素化ＤＭＳＯ中で行い、各試料を約１０ｍＭの濃度に調製した。パターン１  ＣＨＰ（ＤＭＳＯ−ｄ６）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、結果が化合物の構造と一致していることを示す（図３５）。パターン２（ＤＭＳＯ−ｄ６）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、図３６に示す。パターン２およびパターン１  ＣＨＰは、どちらも溶媒中に完全に溶解しているため、同じＮＭＲスペクトルを示した。図３７に示すように、ＮＭＲを、乾燥材料、すなわちパターン２（図９のピンク色の線）で実施した。パターン２投入材料からの乾燥材料に、変化は観察されなかった。
一実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、ＤＭＳＯ−ｄ6溶媒中の無水ＣＨＰと本質的に同じ1Ｈ−ＮＭＲを呈する。
【００６２】
Ｊ．異種核一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲ
ＨＳＱＣ−ＮＭＲを、Ｂｒｕｋｅｒ  ５００  ＭＨｚ  ＮＭＲ装置を使用してパターン２において実施した。ＤＭＳＯ−ｄ6を、ＮＭＲ試料溶媒として使用した。図３８に示すように、パターン１の結果は、２つのイミダゾールＣ−Ｈの化学シフトが４．２ｐｐｍであることを示していた。
ＨＳＱＣ−ＮＭＲ実験を、乾燥材料、すなわちパターン２（図９のピンク色の線）で実施した。図３９に示すように、結果は、乾燥材料（パターン１とパターン２との混合物）およびパターン２材料のＮＭＲが同一であることを示した。
【００６３】
Ｋ．凍結乾燥
溶解度スクリーニングの場合：３３０ｍｇのＣＨＰパターン１を水（３．３ｍＬ）中に（穏やかに加熱して）溶解し、３３個のバイアルに均等に分割した。次に、これらのバイアルを−５０℃で凍結させた後、一晩凍結乾燥させた。結晶性化合物の凍結乾燥では、通常、所与の化合物の結晶形態よりも溶解性が高い非晶質材料が生成されることが広く知られている。
図４０に示すように、パターン１の凍結乾燥から回収された材料は、ＸＲＰＤによって分析した場合に、いくつかの結晶性ピークを示した。出願人は、最初のピークは、非晶質形態で混合した水和物と無水形態との混合物を示していると考えている。
凍結乾燥の再実施のために、図４０の各１０ｍｇの試料を２００μＬの水中に再溶解させた。バイアルを再び−５０℃で凍結した後、７２時間凍結乾燥させた。図４１に示すように、凍結乾燥から回収された材料は、ＸＲＰＤによれば、ほとんど非晶質であった。
【００６４】
非晶質化試験のために：ＣＨＰ水和物（パターン２）を蒸留水中に溶解した。この溶液を２６個のガラスバイアルに均等に分割し、凍結乾燥の調製においてバイアルを−５０℃で凍結した。凍結したら、試料を凍結乾燥機に取り付けられたデシケーターに入れ、およそ４８時間乾燥させた。図４２に示すように、パターン２の凍結乾燥から回収された材料は、ＸＲＰＤによって分析すると、パターン２であることがわかった。
非晶質化の再実施のために、各バイアルに１ｍＬの蒸留水を加えることによって試料を再溶解した。次に、溶液をピペットで２６、２０ｍＬのガラスバイアルに入れ、追加の１５ｍＬの蒸留水をかけた。バイアルを−５０℃で凍結させた後、およそ４８時間凍結乾燥させた。４８時間後、試料は完全には凍結乾燥しておらず、バイアルをデシケーターに戻し、さらなる７２時間凍結乾燥させた。ＸＲＰＤによって分析された材料には、パターン２のピークがまだ含まれていることがわかった。
他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物の凍結乾燥では、パターン２がパターン１よりも安定であり、非晶質化後、少なくとも約１０％〜約４０％純粋のままであることを示す。
【００６５】
Ｌ．溶解度スクリーニング
ＣＨＰパターン１（無水形態）の３３×１０ｍｇの試料を、２ｍＬのバイアル中で凍結乾燥させ、１００μＬの異なる溶媒系を各バイアルに加えた。それぞれを加えている間に、混合物が溶解したことを確認し、溶解が観察されなかった場合、混合物を約４０℃に加熱して再度確認した。３００μＬの溶媒を加えた後、１００μＬのアリコートを加えた。この手順を、溶解が観察されるまで、または１ｍＬの溶媒が加えられるまで続けた。溶解が起こらなかった場合、固体を濾過により単離し、ＸＲＰＤを収集した。
溶解が起こった場合、溶媒を蒸発させ、残存する固体についてＸＲＰＤを収集した。
図４３は、種々の溶媒中におけるパターン１のおよその溶解度を提供し、図４４は、加えられた溶媒の量に基づくパターン１の溶媒溶解度の結果を提供する。図４３および４４に示すように、エタノール、メタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、水、ＤＭＳＯ、トリフルオロエタノール、１−プロパノール、およびメタノール／水混合物において高い溶解度が観察された。試料は、蒸発できるように蓋をしないままにして、観察された固体をＸＲＰＤによって分析した。
【００６６】
図４５に示すように、ＸＲＰＤ分析によっては、速度論的溶解度スクリーニングからパターン１（結晶形態）に加えて２つの独自のパターンが特定されたが、パターン３はパターン２との混合物としてのみ現れた。アセトン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ギ酸エチル、およびＭｔＢＥでは、パターン２（水和物形態）が生成された。エタノール中では、結晶形態と水和物形態との混合物が観察された。クロロベンゼンではパターン２と３との混合物が生成され、ＴＨＦではいくつかのパターン２のピークを有する主に非晶質である材料が回収された。無色のゲルがメタノール中に見られ、ＸＲＰＤでは分析されなかった。この溶媒系では蒸発中に結晶が生成され、潜在的なＴＨＦ溶媒和物として特定された。
図４５に示すように、列挙された３０種類の溶媒系のうちの９つでは、ＸＲＰＤ分析用に不完全な固体が生成された。溶媒のうち１６種類ではパターン２が回収され、パターン１は１−プロパノール中で観察され、パターン１と２との混合物はエタノール中で見られ、パターン２と３との混合物はクロロベンゼン中で生成され、いくつかのパターン２のピークを有する主に非晶質の材料は、ＴＨＦ中で生成された。
図４６は、一次多形スクリーニング溶媒を示す。
【００６７】
他の実施形態では、本開示のＣＨＰ水和物は、１−プロパノール、２−プロパノール、メタノール／水混合物、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ギ酸エチル、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルイソブチルケトン、ニトロメタン（ｉｔｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、トルエン、およびトリフルオロエタノールからの結晶化速度（２〜６時間）により生成することができる。
【００６８】
Ｍ．一次多形スクリーニング
４０ｍｇの無水ＣＨＰを含む２４個のバイアルに、薄いスラリーが観察されるまで、１００μＬのアリコートで異なる溶媒を加えた。次に、バイアルを、７２時間にわたって４時間サイクルで周囲温度と４０℃との間で温度サイクリングさせた。残存するすべての固体を遠心分離によって単離し、ＸＲＰＤによって分析した。
図４６は、速度論的（２〜６時間）多形スクリーニングに使用される溶媒を示し、図５０は、パターン１の一次多形スクリーニング温度サイクリングを示す。
結果は、水が試料中に存在する場合、パターン２が優勢であることを示している。パターン１は、試料自体、溶媒系から、または大気からの吸着のいずれかから、試料に十分な水が存在しない場合にのみ形成される。これらの結果は、表２４および２５にまとめられている。
【００６９】
（実施例２）
ＣＨＰ水和物の製造プロセス
この研究は、（１）パターン１（無水物、Ｃ１６０８１７３５−Ｄ）をパターン２（水和物、パターン２）に変換するための転換プロセスを評価するために；（２）指定された製造業者にて保存されている非ＧＭＰ  ＣＨＰパターン１（無水物）を使用して、約１００グラムスケールでのデモ実行を評価するために；（３）現行適正製造基準（ｃＧＭＰ）規制の条件下で、約４００ｇのパターン２を製造するために；（４）乾燥条件を評価して、所望のパターン２（水和物、パターン２）が得られることを確認するために、行った。
仕様を、以下のように設定した：ＨＰＬＣ純度：≧９８．０％；不純物プロファイル：Ｈ−Ｈｉｓ−ＯＨ≦１．０％、他の各々≦１．０％；キラル純度：≧９８．０％；キラル不純物：各々≧０．１％不純物を報告する；ＤＬ、ＬＤ、ＬＬ光学異性体≦１．０％、など。
パターン１（無水物）をＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ＝９／１（体積／体積）に溶解し、ＭｔＢＥを加えてパターン２（水和物）を沈殿させることによる、パターン２（シクロ（Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｒｏ）ジペプチド水和物）の製造のための再現可能なプロセスを開発した。このプロセスは、３７０ｇスケールのｃＧＭＰバッチで実装することに成功した。最終的に、９９．９％のＨＰＬＣ純度および１００．０％のキラル純度を有する合計２８８ｇのパターン２（ＣＨＰ水和物）が、ｃＧＭＰ条件下で生成された。
【００７０】
Ａ．導入および合成スキーム
パターン１（無水物）をパターン２（水和物、パターン２）に変換するためのプロセスを評価した。２つの結晶化手順を提供した、すなわち、１つは無水固体を水に溶解し、アセトンを加えて沈殿させること（合成スキーム１を参照）；もう１つは、無水固体をＥｔＯＨ／水＝９／１に溶解し、ＭｔＢＥを加えて沈殿させること（合成スキーム２を参照）である。２つの手順ならびに最適化作業のためにスキーム２に関し修正された手順による品質および収率を評価した。
最終的に、最適化プロセス（スキーム３を参照）の実行が成功し、２８８ｇのパターン２（ＣＨＰ水和物）が生成された。キャンペーン製造は、スキーム３に従った。
【００７１】
【化３】
2021533182.tif 000006
スキーム１：パターン２（ＣＨＰ水和物）への第１の合成経路
【００７２】
【化４】
2021533182.tif 000007
スキーム２：パターン２（ＣＨＰ水和物）への第２の合成経路
【００７３】
【化５】
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スキーム３：ｃＧＭＰ製造用のパターン２（ＣＨＰ水和物）への最適化合成経路
両方の手順（スキーム１および２）を評価し、標的パターン２を有する水和物として生成物が得られた。両方の条件下での化学的安定性を研究し、パターン２は５０℃で２０時間安定であった。しかし、水／アセトン手順では、良溶媒として非常に少量の水（１倍量）を利用し、最小撹拌量が非常に少ない好適な反応器を選択するのは困難であった。さらに、水／アセトン手順では、約７０％の単離収率しか得られなかった。最適化作業のためにＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＭｔＢＥ手順を選択し、これにより、およそ９０％の単離収率を得た。最適化結晶化手順に従って、３７０ｇスケールのｃＧＭＰバッチを、キロラボにおいて実行することに成功した。
【００７４】
Ｂ．まとめ
パターン２の調製のために、水／アセトンおよびＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＭｔＢＥを用いた２つの結晶化手順を評価し、両方において、標的パターン２を有する水和物として生成物が得られた。両方の条件下での化学的安定性を研究し、生成物は、５０℃で２０時間安定であった。水／アセトン手順では約７０％の単離収率しか得られなかったことを考慮して、最適化作業のためにＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＭｔＢＥ手順を選択した。ＭｔＢＥ添加の温度および速度を研究し、容器の壁に大量の固体が付着するのを避けるために、比較的遅い速度で５℃にてＭｔＢＥを加える手順を完了した。最適化結晶化手順に続いて、１００ｇスケールで１回のデモを実行し、結晶化により、パターン２としておよそ９０％の単離収率で９６．４４ｇの生成物を得ることに成功した。乾燥安定性の研究に基づくと、水和物生成物は、−０．０９ＭＰａ未満ラボ用オーブン内で、４０℃未満にて安定であった。
【００７５】
Ｃ．水／アセトン条件による結晶化手順の評価。
【化６】
2021533182.tif 000009
【００７６】
水／アセトン条件によるＲＦＰ結晶化手順を評価するために、２つの試験を実施した（表２）。実験ＰＳ０３０２７−２では種晶を加えず結晶化は観察されず、種晶添加後、固体が沈殿した。実験ＰＳ０３０２７−４では種晶を加えて、結晶化はスムーズに進んだ。ＸＲＰＤは、標的パターン２が得られたことを示していた。水／アセトン系における損失生成物は比較的高く（約２０％）、ＲＦＰにおける収率（７２％）と一致していた。
【００７７】
【表２】
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【００７８】
Ｄ．ＥｔＯＨ／水／ＭＴＢＥを使用した代替結晶化手順の評価
【化７】
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代替ＥｔＯＨ／水／ＭＴＢＥ結晶化条件を評価するために５ｇスケールで１ロットを実行し、ＭｔＢＥ添加中に結晶が核形成され、ＸＲＰＤでは標的パターン２が得られたことが示された。母液の損失は、水／アセトン条件よりも比較的低かった（８％）（表３）。
【００７９】
【表３】
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【００８０】
Ｅ．水／アセトンおよびＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥ中の化学的安定性の研究
化合物の溶液状態の化学的安定性を、異なる溶媒系で異なる温度にて研究した（表４）。溶液を５０℃および８０℃に保持し、溶液の純度をトラッキングした。化合物は一般に少なくとも２０時間安定であった。
【００８１】
【表４】
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【００８２】
Ｆ．ＣＨＰ水和物（パターン２）の溶解度の研究
水／アセトンおよびＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥ中のＣＨＰ水和物の溶解度を研究し、溶解度は、両方の条件下で溶媒比および温度に敏感であることが見出された（表５および６）。ＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥ結晶化の収率は９０％以上であった。
【００８３】
【表５】
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【００８４】
【表６】
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【００８５】
Ｇ．ＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥ条件のプロセス最適化
ＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥにおける結晶化をさらに理解するために、３つの実験を実施し、そこでは、ＭｔＢＥをそれぞれ５０℃、３５℃、および５℃で加えた。表７に示すように、３つの実験により所望の結晶形態が得られ、残留溶媒は少なかった。
【００８６】
【表７】
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【００８７】
より大きなスケールで手順を検証するために、表８に示すように、３つの１５ｇスケールの実験を実施した。ＰＳ０３０２７−１３およびＰＳ０３０２７−１４（ＭｔＢＥを５０℃および３５℃で加えた）の実験中に、エンクラステーション（ｅｎｃｒｕｓｔａｔｉｏｎ）の問題が観察された。特にＭｔＢＥの添加中に、容器の壁に大量の固体が付着した。この問題を回避するために、実験ＰＳ００２７−１５では、ＭｔＢＥを５℃で加え、添加を８時間まで延長した（以前の実験では４時間）。壁のクラストは、はるかに少ないことがわかった。したがって、ＭｔＢＥは５℃にて比較的遅い速度で加える必要があると結論付けられた。
【００８８】
【表８】
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Ｈ．ＭｔＢＥの高速添加におけるストレステスト
表９に示すように、ＭｔＢＥの添加を比較的速い速度で実施した手順のために、ストレステストを実施した。実験中の固体のＸＲＰＤをトラッキングし、データは、パターン２が結晶化全体にわたって観察されたことを示した。
【００８９】
【表９】
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【００９０】
Ｉ．ＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥ中での形態安定性の研究
ＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥにおける形態安定性を研究するために、１００ｍｇの無水パターン１固体および１００ｍｇのパターン２固体を加えることにより、それぞれ５０℃、３５℃、および５℃で競合的リピニング（ｒｅｐｉｎｉｎｇ）実験を実施した。表１０に示すように、パターン１とパターン２との混合形態は、様々な条件下でパターン２にすばやく変換される。
【００９１】
【表１０】
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【００９２】
Ｊ．３５℃、４０℃、５０℃、および６５℃での乾燥安定性の研究
乾燥安定性を、それぞれ３５℃、４０℃、５０℃、および６５℃で実施した。表１１に示すように、パターン２は最高４０℃まで少なくとも４日間安定である。
【００９３】
【表１１】
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【００９４】
Ｋ．より粗悪な結晶性を変換してパターン２に戻すためのスラリー手順の研究
パターン２のｃＧＭＰバッチ（パターン２１８００１）において、３５〜４０℃で１０時間乾燥させた場合でも、過度の乾燥（ＫＦ＝５．４％、理論上７．４％）により、結晶化度が低下したためである。低結晶性パターン２固体を、所望のパターン２に変換するために、２回の再スラリー実験を実施した。２ｇのパターン２１８００１−ＳＴＥＰ５．７を、８体積のＥｔＯＨ／水／ＭｔＢＥ＝９体積／１体積／３０体積中でＲＴおよび５℃にて再スラリー化し、わずか３０分でパターン２に変換されることがわかった。固体を単離し、１４時間乾燥させ、この期間中、形態は変化しなかった。母液濃度に基づく損失は約５％であった（フラスコ壁における損失および操作における損失を含めて合計損失は１０％と予想されていた）。１つの利点は、この手順により、すべての固体がパターン２に変換されることであるが、生成物のうちの約１０％が失われる場合がある。
【００９５】
Ｌ．パターン１からパターン２への一般的経路
１．ＥｔＯＨ（１．７５〜１．７９Ｘ；２．２５体積）を、Ｎ2下でＲ１に仕込む
２．精製水（０．２４５〜０．２５５Ｘ；０．２５体積）を、Ｎ2下でＲ１に仕込む
３．Ｒ１を５〜１０分間撹拌して、混合溶液ＥｔＯＨ／水＝９：１（体積／体積）を与える。
４．溶液を、Ｒ１からドラムに移す。
５．パターン１（１．０当量、１．０Ｘ）をＲ１に仕込む。
６．ステップ４からのＥｔＯＨ／水混合物（１．６１〜１．６３Ｘ、２．０体積）を、Ｎ2下でＲ１に仕込む。
７．Ｎ2下でＲ１を４７〜５３℃に調整する。
８．Ｎ2下でＲ１を４７〜５３℃にて１０〜６０分間撹拌する。
９．溶液をＲ１からＲ２へポリッシング濾過（Ｐｏｌｉｓｈ  ｆｉｌｔｅｒ）する。Ｒ２のジャケットを、５０〜５５℃に予熱した。
１０．ステップ４からのＥｔＯＨ／水混合物（０．３９〜０．４１Ｘ；０．５体積）を、Ｎ2下でＲ１に仕込む。
１１．Ｎ2下でＲ１を５〜３０分間撹拌する。
１２．溶液をＲ１からＲ２へポリッシング濾過する。
１３．Ｎ2下でＲ２を４７〜５３℃に調整し、１０〜６０分間撹拌する。プロジェクトリーダーが完全な溶解を確認する。
１４．Ｎ2下でＲ２を３２〜３７℃に調整する。
１５．ＭｔＢＥ（０．３６〜０．３８Ｘ；０．５体積）を、Ｎ2下で３２〜３７℃にてゆっくりとＲ２に加える。
１６．パターン２の種晶（０．０１５〜０．０２５Ｘ）を、３２〜３７℃でＲ２に仕込む。
１７．Ｎ2下でＲ２を３２〜３７℃で２〜３時間撹拌する。
１８．Ｎ2下でＲ２を２〜３時間で３〜８℃に調整する。
１９．試料およびフィルターを採取し、ＸＲＰＤのために分析にケーキを送る：ＸＲＰＤ（ＰＳ０３０２７−１５−Ｈと一致）。基準：結果が仕様を満たしている場合は、ステップ２０を実行する；それ以外の場合は、プロジェクトリーダーに相談する。
２０．ＭｔＢＥ（５．１〜５．３Ｘ；７体積）を、Ｎ2下で３〜８℃で８時間かけてＲ２に仕込む。
２１．Ｎ2下でＲ２を３〜８℃で８〜１０時間撹拌する。
２２．試料およびフィルターを採取し、ＸＲＰＤ分析のためにケーキを送る：ＸＲＰＤ（ＰＳ０３０２７−１５−Ｈと一致）；パターン２残留物の分析のために濾液を送る：上清液中の残留物Ｈ（≦１．５％  質量／質量）。
基準：結果が仕様を満たしている場合は、ステップ２５を実行する；それ以外の場合はステップ２３を実行する。
２３．Ｎ2下でＲ２を３〜８℃で４〜１０時間撹拌する。
２４．試料およびフィルターを採取し、ＸＲＰＤ分析のためにケーキを送る：ＸＲＰＤ（ＰＳ０３０２７−１５−Ｈと一致）；残留物Ｈの分析のために濾液を送る：上清液中の残留物Ｈ（≦１．５％  質量／質量）。基準：結果が仕様を満たしている場合は、ステップ２５を実行する。
２５．Ｎ2下で３〜８℃にて懸濁液を濾過する。
２６．ＥｔＯＨ（０．３５５Ｘ）、精製水（０．０５Ｘ）、およびＭｔＢＥ（１．１１Ｘ）を清浄なドラムに仕込む。
２７．ステップ２６の材料を撹拌して、透明な混合溶液を得る。
２８．ＳＴＥＰ２７の溶液（１．５−１．６Ｘ）をＲ２に移して、Ｒ２をすすぐ。
２９．Ｒ２を３〜８℃に冷却する。
３０．湿ケーキを３〜８℃のＲ２すすぎ液で洗浄する。
３１．湿生成物の品質を確認する：
ＸＲＰＤ（ＰＳ０３０２７−１５−Ｈと一致）；ＨＰＬＣ≧９８．０％領域；Ｈ−Ｈｉｓ−ＯＨ≦１．０％領域
他の各々≦１．０％領域；ＲＲＴを使用して各不純物≧０．０５％領域を報告する
注：ステップ３２を並行して実行する。
基準：結果が仕様を満たしている場合は、ステップ３３を実行する。
３２．母液中の残留パターン２を確認する。パターン２の残留量を報告する（％、報告）。
３３．３５〜４０℃にて減圧下で１０〜１２時間乾燥させる。過度の乾燥を避けるためにオーブン内に水浴を置くことを推奨する。
３４．残留溶媒を確認する：
ＥｔＯＨ（≦５０００ｐｐｍ）；ＭｔＢＥ（≦５０００ｐｐｍ）；含水量（報告）
乾燥生成物の多形を確認する：ＸＲＰＤ（ＰＳ０３０２７−１５−Ｈと一致）；
基準：結果が仕様を満たしている場合は、ステップ３７を実行する；それ以外の場合はステップ３５を実行する。
３５．３５〜４０℃にて減圧下で５〜８時間乾燥させる。過度の乾燥を避けるためにオーブン内に水浴を置くことを推奨する。
３６．残留溶媒を確認する：
ＥｔＯＨ（≦５０００ｐｐｍ）；ＭｔＢＥ（≦５０００ｐｐｍ）；含水量（報告）
乾燥生成物の多形を確認する：ＸＲＰＤ（ＰＳ０３０２７−１５−Ｈと一致）；
基準：結果が仕様を満たしている場合は、ステップ３７を実行する。
３７．乾燥生成物をドラムおよび篩に充填する。
３８．放出分析のために試料を採取する。
【００９６】
Ｍ．完全な特性評価
ＨＰＬＣ純度、1ＨＮＭＲ、ＴＧＡ、ＤＳＣおよびＸＲＰＤスペクトルを表１２に示す。
【００９７】
【表１２】
2021533182.tif 000021
【００９８】
（実施例３）
ＣＨＰ水和物の結晶化プロセス進行
この研究は、ＣＨＰ水和物（パターン２）の結晶化進行に焦点を合わせた。ＣＨＰ水和物のバッチの最初の特性評価の後、溶解度の研究、小スケール結晶化評価、準安定領域の測定、およびスケールアップ結晶化を実施した。ワークプログラムの目的は、製造用に効果的にスケールアップすることができるＣＨＰ水和物パターン２の生成を成功させる結晶化条件を確立することであった。
【００９９】
ＣＨＰパターン１で実施された溶解度評価では、ＭｔＢＥの百分率が最も高いエタノール：水：ＭｔＢＥのブレンドを除いて、水を含むすべての溶媒混合物において高い溶解度が示された。水（≧２００ｍｇ／ｍＬ）およびアセトン：水ブレンド（≧２００、水：アセトン［９０：１０］で）から特に高い溶解度が観察された。この材料では、アセトン、アセトニトリル、ＴＨＦ中では低い可溶性（≦１０ｍｇ／ｍＬ）が観察された。
２点溶解度では、評価した２つの溶媒系のうち、エタノール：水：ＭｔＢＥの方が、わずかに収率が高かったが、パターン１が形成されるリスクがあったことを示した。アセトン：水ではパターン２のみが可能であったが、収率が犠牲になった。
【０１００】
一実施形態では、ＣＨＰ水和物を製造するために以下のプロセスが提供される：
・５０℃に予熱したジャケット付反応容器に、約２０ｇのＣＨＰパターン１を加える。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成する。
・オーバーヘッド撹拌機を使用して３００ｒｐｍで撹拌する。
・完全に溶解したら、２５ｍＬのＭｔＢＥ（滴下）を容器に加える。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、２質量％（４００ｍｇ）の粉砕結晶性パターン２ＣＨＰを実験に種晶添加する。
・５０℃で２０分間撹拌を続ける。
・さらなる５ｍＬのＭｔＢＥ（滴下）を容器に加える。
・２０ｍＬ／時間の速度で、７０ｍＬのＭｔＢＥを加える。
・添加が完了したら、０．１℃／分で３０℃から２９℃に冷却する。
・２９℃で８時間撹拌を続ける。
・０．２５℃／分の速度で、２９℃から５℃に冷却する。
・２０ｍＬ／時間の速度で、１９０ｍＬのＭｔＢＥを加える。
・５℃で１２時間撹拌を続ける。
・濾過により固体を単離し、濾過ケーキを４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄する。
・４０℃で１時間減圧下にて固体を乾燥させる。
【０１０１】
実験室スケールでの混合性能の推定を実施し、次にプラントスケールでの形状寸法をモデル化して、プロセスの移行を成功させる混合パラメータを推定した。この手順を１０ｋｇスケールへの移行では、以下の手順を実施してもよい：
・５０℃に予熱したジャケット付反応容器に、およそ１０ｋｇのＣＨＰパターン１を加える。
・２５Ｌのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成する。
・４８ｒｐｍで撹拌する。
・完全に溶解したら、１２．５ＬのＭｔＢＥを容器に加える。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、２質量％（２００ｇ）の粉砕結晶パターン２ＣＨＰを実験に種晶添加する。
・５０℃で２０分間撹拌を続ける。
・さらなる２．５ＬのＭｔＢＥ（滴下）を容器に加える。
・１０Ｌ／時間の速度で、３５ＬのＭｔＢＥを加える。
・添加が完了したら、０．１℃／分で３０℃から２９℃に冷却する。
・２９℃で８時間撹拌を続ける。
・０．２５℃／分の速度で、２９℃から５℃に冷却する。
・１０Ｌ／時間の速度で、９５ＬのＭｔＢＥを加える。
・５℃で１２時間撹拌を続ける。
・濾過により固体を単離し、濾過ケーキを２０Ｌのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄する。
・４０℃で減圧下にて固体を乾燥させる。
【０１０２】
４８ＲＰＭの使用は、これにより、プラントスケールの容器の許容損失は、実験室スケールの容器の許容損失により類似することが可能になるので、推奨される。プラントでの許容損失は０．０６７Ｗ／ｋｇと推定されるが、実験室スケールでは０．０６４Ｗ／ｋｇと推定される。これらのパラメータを推定するために使用されるモデルでは、粒子がおそらく懸濁しているということも推定される。
あるいは、プラントの撹拌機は、５５ＲＰＭで作動させることができる。これは、この混合モデルによって、粒子が容器内に懸濁される最小懸濁混合速度、すなわちＮＪＳであると推定される。これにより、混合が効果的であるという確信が高まるが、粒子が０．１０１Ｗ／ｋｇというはるかに高い許容損失を経験するリスクがある。
しかし、ＣＨＰ水和物を得るための上記のステップのうちの１つまたは複数を省略してもよく、またはステップの順序を変えることができることを理解すべきである。
【０１０３】
Ｂ．分析方法
１．Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
ＸＲＰＤ分析を、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’ｐｅｒｔ  ｐｒｏで、３〜３５°  ２θ間で試料を走査して実施した。材料を穏やかに粉砕して、粒塊を放出し、試料を支持するために、マイラーポリマーフィルムを使用してマルチウェルプレートに装填した。次に、マルチウェルプレートを回折計に配置し、４０ｋＶ／４０ｍＡの発電機設定を使用して、透過モード（ステップサイズ０．０１３０°  ２θ）で操作し、Ｃｕ  Ｋ放射線（α１λ＝１．５４０６０Å；α２＝１．５４４４３Å；β＝１．３９２２５Å；α１：α２比＝０．５）を使用して分析した。
２．偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）
複屈折の存在、ならびに粒子サイズおよび粒子形態を、Ｍｏｔｉｃカメラおよび画像キャプチャソフトウェア（Ｍｏｔｉｃ  Ｉｍａｇｅｓ  Ｐｌｕｓ  ２．０）を装備したＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０偏光顕微鏡を使用して評価した。
特に明記されていない限り、すべての画像を、２０倍の対物レンズを使用して記録した。
【０１０４】
３．熱重量分析（ＴＧＡ）
およそ５ｍｇの材料を、アルミニウム製オープンパン内に量り取り、同時熱重量分析／示差熱分析装置（ＴＧ／ＤＴＡ）に装填し、室温で保持した。次に、試料を１０℃／分の速度で２０℃から３５０℃まで加熱し、その間に試料質量の変化を示差熱事象（ＤＴＡ）とともに記録した。パージガスとして、窒素を３００ｃｍ3／分の流量で使用した。
４．核磁気共鳴（ＮＭＲ）
ＮＭＲ実験は、プロトンに対して５００．１２ＭＨｚで作動するＤＣＨクライオプローブを装備したＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＩＩＩＨＤ分光計で行った。実験は重水素化ジメチルスルホキシド中で行い、各試料を約１０ｍＭの濃度に調整した。
【０１０５】
５．集束ビーム反射率測定（ＦＢＲＭ）
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  Ｄ６００プローブを使用して、集束ビーム反射率測定を実施した。各結晶化について、結晶化の開始時にプローブを反応容器に入れ、核形成および結晶成長を監視した。コード長分布および種々の計数統計を、以下の設定を使用して全体にわたって監視した：電子識別範囲  微細
走査速度  ２ｍｓ-1
試料時間  １０秒
６．Ｃｒｙｓｔａｌ１６
Ｃｒｙｓｔａｌ１６機器により、透明バイアル内の溶液（またはスラリー）を通る光の透過性百分率を使用して、時間および温度の関数として、溶液（またはスラリー）の濁度プロファイルを作成する。得られたプロファイルを使用して、曇り点（核形成温度）および透明点（溶解温度）を決定した。
【０１０６】
７．高速液体クロマトグラフィー−紫外線検出（ＨＰＬＣ−ＵＶ）
ＨＰＬＣ分析を、以下の装置パラメータを用いて実施した：
機器：Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００
カラム：ＬＣ／１６８  Ｘ―Ｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ×３．５μｍ）
カラム温度：３０℃
オートサンプラー温度：５℃
ＵＶ波長：２２０ｎｍ
注入量：５μＬ
流量：１ｍｌ／分
移動相Ａ：１０ｍＭ  酢酸アンモニウム
移動相Ｂ：アセトニトリル
希釈剤：水中の０．１％ＴＦＡ
勾配プログラム：
【０１０７】
【表１３】
2021533182.tif 000022
【０１０８】
Ｃ．実験
１．ＣＨＰパターン１の最初の特性評価
ＣＨＰパターン１は、セクションＢに詳述された手順に従って、ＸＲＰＤ、1Ｈ−ＮＭＲ、ＨＳＣＱ−ＮＭＲ、および13Ｃ−ＮＭＲならびにＨＰＬＣによって特徴付けられた。
【０１０９】
２．ＣＨＰパターン１（無水）のおよその溶解度
３７種類の選択された溶媒系（表１３）におけるＣＨＰのおよその溶解度を、溶媒添加技術によって推定した。以下の手順を使用した：
・約２０ｍｇのＣＨＰパターン１を、３７個のバイアルのそれぞれに量り取った。
・各溶媒／溶媒混合物は、溶解が観察されるか、または最大２ｍＬの溶媒が加えられるまで、５体積（１００μＬ）のアリコートで適切なバイアルに加えた。
・添加の間に、試料を４０℃に加熱して、高温での溶解を確認した。
・材料を溶解せずに２ｍＬの溶媒を加えた場合、溶解度は１０ｍｇ／ｍＬ未満と計算された。
・溶媒を加えた後、３７個のバイアルすべてを冷蔵庫に入れて２〜８℃の間で約１８時間クラッシュ冷却した。
・存在する任意の固体を遠心濾過によって単離し、ＸＲＰＤによって分析した（材料量が許容される場合）。
・固体が生成されなかった場合、バイアルに蓋をせず、放置して周囲温度で蒸発させた。
・存在する任意の固体を、ＸＲＰＤによって分析した（材料量が許容される場合）。
【０１１０】
【表１４】
2021533182.tif 000023
【０１１１】
３．２点溶解度
以下の手順を使用して、１１種類の溶媒混合物中で、５℃および５０℃にて２点溶解度研究を実施した：
・選択した溶媒混合物１ｍＬを、事前に秤量したＣＨＰパターン１の塊を入れた１．５ｍＬスクリュートップガラスバイアルに加えて、スラリーを生成した。各溶媒系に対して選択された最初の質量は、セクション２で詳述されているおよその溶解度の知見に基づいていた。
溶媒ブレンドを表１４に示す。
・バイアルを、５℃または５０℃どちらかに設定されたサーモスタット制御の反応ブロックに保持し、電磁撹拌機プレートを介して撹拌した。
・１時間後に完全な溶解が観察された場合、さらにＣＨＰパターン１の固体を実験に加えて、スラリーを形成させた。
・すべてのバイアル内に可動性スラリーが形成されたら、実験を必要な温度で約１８時間撹拌した。必要なＣＨＰパターン２の最終質量を表１４に示す。
・約１８時間後、撹拌を停止し、０．４５μｍのＰＶＤＦニードルフィルターおよびシリンジを使用して上清を濾過した。
・上清の濃度を、ＨＰＬＣで分析した。
・バイアル内の残存するスラリーをそれぞれ０．２２μｍのナイロンフィルター遠心分離管に移し、遠心分離によって固体を単離した。
・回収された固体（許容量の場合）について、ＸＲＰＤおよびＨＰＬＣによって純度を分析した。
【０１１２】
【表１５】
2021533182.tif 000024
【０１１３】
４．小スケール結晶化
受入れＣＨＰ（パターン１）について小スケール結晶化試験を実施した。これらの試験の目的は、さらなる結晶化研究に最適な溶媒系、温度、および濃度を調査することであった。これを、アセトン：水およびエタノール：水：ＭｔＢＥの２つの異なる溶媒系を使用して実施した。
【０１１４】
結晶化セットＡ：  アセトン：水
・約５００ｍｇの受入れＣＨＰ（パターン１）を、４×２０ｍＬのシンチレーションバイアルに量り取った。
・各バイアルに、適切な量のアセトン：水（８０：２０体積／体積％）を加えて試料を溶解させた。使用した溶媒量については、表１５を参照のこと。
・撹拌棒を各バイアルに加え、実験を５０℃で撹拌した。
・５０℃で１時間後、４つのバイアルのうち２つ（バイアル１および３）にアセトンを滴加した。
・実験を、約１時間５０℃で撹拌したままにした。
・１時間後、バイアルを、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。
・５℃になったら、残存する２つのバイアル（バイアル２および４）にアセトンを滴加した。
・実験を、およそ１８時間５℃で撹拌したままにした。
・５℃で１８時間後、得られたスラリーを４７ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝４２．５ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して濾過した。
・固体を、予め秤量したバイアルに移し、ＸＲＰＤ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより化学純度を分析した。
・濾過した母液を、ＨＰＬＣ濃度分析のために提出した。
・実験を、表１５にまとめる。
【０１１５】
結晶化セットＢ：  エタノール：水：ＭｔＢＥ
・およそ５００ｍｇの受入れＣＨＰ（パターン１）を、５×２０ｍＬのシンチレーションバイアルに量り取った。
・各バイアルに、２ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）を加えて試料を溶解させた。
・撹拌棒を各バイアルに加え、実験を５０℃で撹拌した。
・５０℃で１時間後、５つのバイアルのうち３つ（バイアル１、３、および５）にＭｔＢＥを滴加した。
・実験を、約１時間５０℃で撹拌したままにした。
・５０℃で１時間後、バイアル１内に存在するスラリーを、４７ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝４２．５ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して濾過した。
・以前の結果では、この百分率（８０％）のＭｔＢＥで、冷却後にパターン１が形成される潜在的なリスクが示されたため、実験を５０℃で濾過した。
・残存するバイアルを、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。
・５℃になったら、残りの２つのバイアル（バイアル２および４）にＭｔＢＥを滴加した。
・実験を、およそ１８時間５℃で撹拌したままにした。
・５℃で１８時間後、得られたスラリーを４７ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝４２．５ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して濾過した。
・すべての固体を、予め秤量したバイアルに移し、ＸＲＰＤ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより化学純度を分析した。
・濾過した母液を、ＨＰＬＣ濃度分析のために提出した。
・実験を、表１５にまとめる。
【０１１６】
【表１６】
2021533182.tif 000025
【０１１７】
５．準安定領域（ＭＳＺＷ）の測定
受入れＣＨＰ（パターン１）について、２つのパラメータ−冷却および貧溶媒添加を調査することにより、ＭＳＺＷ測定を実施した。
【０１１８】
冷却方法
冷却によるＭＳＺＷの決定は、Ｃｒｙｓｔａｌ１６を使用して完了した。使用した手順は以下の概要である：
・既知量のＣＨＰ（パターン１）を、スクリューキャップバイアルに量り取った。
・各バイアルに、１ｍＬの適切な溶媒系を加えてスラリーを形成した。撹拌棒を、各バイアル内に置いた。
・各実験で使用した溶媒系およびＣＨＰの質量を表１６にまとめる。バイアルを、Ｃｒｙｓｔａｌ１６機器の試料ホルダーに入れ、必要な温度プログラムを開始した。温度プロファイルを、表１７Ａに見ることができる。
・系の濁度を全体にわたって監視し、透明点および曇り点を決定することができた。
【０１１９】
【表１７】
2021533182.tif 000026
【０１２０】
【表１８】
2021533182.tif 000027
【０１２１】
ａ．貧溶媒添加法
貧溶媒添加に対するＭＳＺＷの決定は、エタノール：水：ＭｔＢＥを使用して完了した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇの受入れＣＨＰパターン１を、５０℃に予熱した２５０ｍＬのジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ４０分）、蠕動ポンプを介して、７５ｍＬのＭｔＢＥを１０ｍＬ／時間の速度で加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、実験を０．２５℃／分で５℃に冷却し、５℃で一晩保持した。
・５℃で９時間後、８３ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキの試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析した。
・残存するケーキを、３５℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって決定した。
【０１２２】
６．結晶化進行
結晶化スケールアップ実験を、エタノール：水：ＭｔＢＥ中で実施した。種々の実験条件、例として冷却速度、貧溶媒添加速度および温度、種晶負荷および温度、ならびに貧溶媒比を評価した。以下のプロトコルを検討した：
【０１２３】
ａ．結晶化１
結晶化１のために、溶液に２質量％の種結晶を種晶添加した。種晶添加およびＭｔＢＥの添加を、３５℃で実施した。スラリーを、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇの受入れＣＨＰパターン１を、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ３０分）、実験を０．２５℃／分の速度で３５℃に冷却し、蠕動ポンプを介して、１０ｍＬのＭｔＢＥを１０ｍＬ／時間の速度で加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した。・系を３５℃で約２時間監視した。
・次に、実験を０．２５℃／分で５℃に冷却し、蠕動ポンプを介して、１４０ｍＬのＭｔＢＥを１０ｍＬ／時間の速度で加え（１４時間）、最終溶媒比２５：７５体積／体積％を与えた。
・８３ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体を、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１２４】
ｂ．結晶化２
結晶化２のために、溶液に２質量％の種結晶を種晶添加した。種晶添加およびＭｔＢＥの添加を、５０℃で実施した。スラリーを、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇの受入れＣＨＰパターン１を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０°に保持し、シリンジポンプを介して、１０ｍＬのＭｔＢＥを１０ｍＬ／時間の速度で加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した。・系を５０℃で約２時間監視した。
・蠕動ポンプを介して、１４０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加え、最終溶媒比２５：７５体積／体積％を与えた。
・次に、実験を０．２５℃／分で５℃に冷却し、５℃で約９時間保持した。
・５℃で９時間後、８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１２５】
ｃ．結晶化３
結晶化３のために、溶液に２質量％の種結晶を種晶添加した。種晶添加およびＭｔＢＥの添加を、３５℃で実施した。スラリーを、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇの受入れＣＨＰパターン１を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した；
・系が２３℃に達すると、核形成が観察された；
・系を５０℃に加熱して、材料を再溶解した。溶解が観察されたら、系を、０．２５℃／分の速度で２５℃に冷却した。
・系が２５℃に達すると、核形成が観察された；
・系を５０℃に加熱して、材料を再溶解した。溶解が観察されたら、系を、３５℃に冷却し、４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した。
・蠕動ポンプを介して、１４０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加え、最終溶媒比２６：７４体積／体積％を与えた。
・次に、実験を０．２５℃／分で５℃に冷却し、５℃で約９時間保持した。
・８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した。
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１２６】
ｄ．結晶化４
結晶化４のために、溶液に２質量％の種結晶を種晶添加した。種晶添加およびＭｔＢＥの添加を、５０℃で実施した。スラリーを、０．１℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇのＣＨＰパターン２（結晶化１および３から回収された材料）を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０°に保持し、シリンジポンプを介して、２０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した。・系を５０℃で約２時間監視した。
・蠕動ポンプを介して、１４０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加え、最終溶媒比２４：７６体積／体積％を与えた。
・次に、実験を０．１℃／分で５℃に冷却した。
・系を５℃で一晩保持した。
・５℃で８時間後、８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１２７】
ｅ．結晶化５
結晶化５のために、溶液に２質量％の粉砕した種結晶を種晶添加した。種晶添加およびＭｔＢＥの添加を、５０℃で実施した。スラリーを、０．１℃／分の速度で５℃に冷却した。
以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇのＣＨＰパターン１と２のブレンド（受入れＣＳ／３５２／１８からのパターン１と結晶化４からのパターン２）を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０°に保持し、２５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して滴加した。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、乳棒および乳鉢を使用して粉砕した４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した。
・系を５０℃で約７５分間監視した。
・蠕動ポンプを介して、１４０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加え、最終溶媒比２３：７７体積／体積％を与えた。
・次に、実験を０．１℃／分で５℃に冷却した。
・系を５℃で一晩保持した。
・５℃で９時間後、８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１２８】
ｆ．結晶化６
結晶化６のために、溶液に２質量％の粉砕した種結晶を種晶添加した。種晶添加を５０℃で実施し、段階的なＭｔＢＥの添加を使用した。スラリーを、０．１℃／分の速度で２９℃に冷却し、この温度で８時間保持した。スラリーを、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇのＣＨＰパターン１と２のブレンド（受入れＣＳ／３５２／１８からのパターン１と結晶化５からのパターン２）を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０℃に保持し、２５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して滴加した。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、乳棒および乳鉢を使用して粉砕した４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した；
・系を５０℃で約１０分間監視した。
・種晶は持続しなかった。さらに５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して容器に滴加した。
・蠕動ポンプを介して、７０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加えた：
・次に、実験を０．１℃／分で２９℃に冷却した。
・系を２９℃で８時間保持した。
・２９℃で８時間後、系を、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。
・系が５℃に達すると、第２のステップのＭｔＢＥの添加を開始した。１９０ｍＬを２０ｍＬ／時間の速度で加えた。１５：８５体積／体積％の最終溶媒比。
・系を５℃でおよそ１２時間保持した。
・次に、８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体を、純度についてＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより分析し、さらにキラルＨＰＬＣにより分析した。
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１２９】
ｇ．結晶化７
結晶化７のために、溶液に２質量％の粉砕した種結晶を種晶添加した。種晶添加を５０℃で実施し、段階的なＭｔＢＥの添加を使用した。スラリーを、０．１℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇのＣＨＰパターン１と２のブレンド（受入れＣＳ／３５２／１８からのパターン１と結晶化６からのパターン２）を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０℃に保持し、２７．５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して手動で（滴下）加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、乳棒および乳鉢を使用して粉砕した４００ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した；
・系を５０℃で約１０分間監視した。
・蠕動ポンプを介して、７０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加えた：
・次に、実験を０．１℃／分で５℃に冷却した。
・系を５℃で一晩保持した。
・５℃で約９時間後、第２のステップのＭｔＢＥの添加を開始した。１９０ｍＬを２０ｍＬ／時間の速度で加えた。１５：８５体積／体積％の最終溶媒比。
・８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１３０】
ｈ．結晶化８
結晶化８のために、溶液に５質量％の粉砕した種結晶を種晶添加した。種晶添加を５０℃で実施し、段階的なＭｔＢＥの添加を使用した。スラリーを、０．１℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇのＣＨＰパターン１と２のブレンド（受入れＣＳ／３５２／１８からのパターン１と結晶化７からのパターン２）を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０℃に保持し、２７．５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して手動で（滴下）加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、乳棒および乳鉢を使用して粉砕した１ｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した；
・系を５０℃で約１０分間監視した。
・蠕動ポンプを介して、７０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加えた；
・次に、実験を０．１℃／分で５℃に冷却した。
・系を５℃で一晩保持した。
・５℃で約９時間後、第２のステップのＭｔＢＥの添加を開始した。１９０ｍＬを２０ｍＬ／時間の速度で加えた。１５：８５体積／体積％の最終溶媒比。
・８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１３１】
ｉ．結晶化９
結晶化９のために、溶液に５質量％の粉砕した種結晶を種晶添加した。種晶添加を５０℃で実施し、段階的なＭｔＢＥの添加を使用した。スラリーを、０．１℃／分の速度で３０℃に冷却し、この温度で８時間保持した。次に、スラリーを、０．１℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ２０ｇのＣＨＰパターン１と２のブレンド（受入れＣＳ／３５２／１８からのパターン１と結晶化８からのパターン２）を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・５０ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０℃に保持し、２７．５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して手動で（滴下）加えた。
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、乳棒および乳鉢を使用して粉砕した１ｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した；
・系を５０℃で約１０分間監視した。
・蠕動ポンプを介して、７０ｍＬのＭｔＢＥを１５ｍＬ／時間の速度で加えた；
・次に、実験を０．１℃／分で３０℃に冷却した；
・系を３０℃で８時間保持した。
・３０℃で８時間後、系の冷却を再開し、０．１℃／分の速度で５℃にした。
・第２のステップのＭｔＢＥの添加を開始した。１９０ｍＬを２０ｍＬ／時間の速度で加えた。１５：８５体積／体積％の最終溶媒比。
・系を５℃で一晩保持した。
・５℃で約１０時間後、ブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、４０ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、およびＨＰＬＣにより純度を分析した；
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１３２】
Ｊ．結晶化１０
結晶化１０では、結晶化６と同じ手順を利用した。容器サイズのため、パラメータを元の実験の７０％にスケールダウンした。受入れＣＨＰ（パターン１）の新しいバッチもまた、この実験で使用した（ＣＳ／８０２／１８）。溶液に２質量％の粉砕した種結晶を種晶添加した。種晶添加を５０℃で実施し、段階的なＭｔＢＥの添加を使用した。スラリーを、０．１℃／分の速度で２９℃に冷却し、この温度で８時間保持した。スラリーを、次に、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。以下の手順を使用した：
・およそ１４ｇの受入れＣＨＰパターン１を秤量して、５０℃に予熱したジャケット付容器に移した。
・３５ｍＬのエタノール：水（９０：１０体積／体積％）溶媒混合物を容器に加え、４００ｍｇ／ｍＬの開始濃度を達成した。
・実験は、５０℃にて、オーバーヘッド撹拌機を使用して約３００ｒｐｍで撹拌した。
・ＦＢＲＭプローブを容器に挿入して、核形成および粒子計数を監視および記録した。
・完全に溶解したら（およそ２０分）、実験を５０℃に保持し、１７．５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して滴加した；
・ＭｔＢＥの添加が完了したら、乳棒および乳鉢を使用して粉砕した２８０ｍｇのＣＨＰパターン２を実験に種晶添加した；
・系を５０℃で約１０分間監視した；
・種晶は持続しなかった。さらに３．５ｍＬのＭｔＢＥを、シリンジを使用して容器に滴加した。
・蠕動ポンプを介して、５０ｍＬのＭｔＢＥを２０ｍＬ／時間の速度で加えた；
・次に、実験を０．１℃／分で２９℃に冷却した；
・系を２９℃で８時間保持した。
・２９℃で８時間後、系を、０．２５℃／分の速度で５℃に冷却した。
・系が５℃に達すると、第２のステップのＭｔＢＥの添加を開始した。１３４ｍＬを２０ｍＬ／時間の速度で加えた。１５：８５体積／体積％の最終溶媒比。
・系を５℃でおよそ１２時間保持した。
・次に、８８ｍｍブフナー漏斗およびＷｈａｔｍａｎグレード１濾紙（直径＝７０ｍｍ、孔径＝１１μｍ）を使用して減圧濾過によって固体を単離した。
・濾過ケーキを、２８ｍＬのエタノール：水：ＭｔＢＥ（９体積：１体積：３０体積）で洗浄した後、４０℃で１時間減圧下にて乾燥させた。
・乾燥固体について、ＸＲＰＤ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＰＬＭ、キラルＨＰＬＣおよびＨＰＬＣにより純度を分析した。
・濾過した母液の濃度を、ＨＰＬＣによって定量した。
【０１３３】
（実施例４）
純度決定
ＣＨＰおよびＣＨＰ水和物の純度を、ＨＰＬＣを使用して測定した。ＣＨＰおよびＣＨＰ−水和物の純度測定のためのＨＰＬＣ法のクロマトグラフィーパラメータを、表１７Ｂにまとめる。
【０１３４】
【表１９】
2021533182.tif 000028
【０１３５】
アッセイ決定のための標準溶液の調製（０．８ｍｇ／ｍＬ  ＣＨＰ無水物または０．８５ｍｇ／ｍＬ  ＣＨＰ水和物）：およそ４０ｍｇのＣ１６０８１７３５−Ｄ参照標準を秤量し、５０ｍＬのメスフラスコに移す。希釈液で体積希釈し（Ｄｉｌｕｔｅ  ｔｏ  ｖｏｌｕｍｅ）、よく混合する（必要に応じて超音波処理して溶解させる）。これをＳＴＤ−１とラベル付けする。標準確認として使用するための第２の標準溶液を調製する。これをＳＴＤ−２とラベル付けする。
アッセイ決定のための試料溶液の調製（０．８５ｍｇ／ｍＬ  ＣＨＰ水和物）：およそ４２．５ｍｇのＣＨＰ水和物試料を、５０ｍＬメスフラスコに量り入れる。希釈液で体積希釈し、よく混合する。
代表的なブランククロマトグラムおよび代表的な分離溶液クロマトグラムを、それぞれ図５２および５３に示す。
【０１３６】
（実施例５）
ＣＨＰ水和物の安定性の比較
Ａ．ＣＨＰ無水物とＣＨＰ水和物パターン２との間の化学的安定性の比較
ＣＨＰ無水物（パターン１）および水和物（パターン２）化合物を、ＧＭＰ条件下で製造した。ＣＨＰ無水物化合物の安定性試験を、加速条件（４０±５℃／７５±５％ＲＨ）下で６カ月間、室温条件（２５±５℃／６０±５％ＲＨ）下で１２カ月間実施した。ＣＨＰ水和物化合物のさらなる安定性試験を、加速条件（４０±５℃／７５±５％ＲＨ）下で６カ月間実施した（表１８）。
【０１３７】
【表２０】
2021533182.tif 000029
【０１３８】
ＣＨＰ無水物化合物の長期保存条件は、ＣＨＰが吸湿性であるため、注意深い取り扱いを必要とする。安定性試験中にＣＨＰ無水物は水分を吸収し、ＣＨＰの分解による新しい不純物の成長およびＣＨＰ無水物の減少が観察された（表１９）。ＣＨＰ水和物パターン２の安定性データを表２０に示す。
【表２１】
2021533182.tif 000030
【０１３９】
【表２２】
2021533182.tif 000031
ＣＨＰ無水物は、ＣＨＰ中の水分含有量が７％に達するまで水分を吸収した。したがって、ＣＨＰ無水物は水分を吸収する傾向がある。ＣＨＰ無水物の分解も観察された。対照的に、６カ月間の加速条件下での安定性試験中、安定なパターン２水和物の形態に有意な品質変化はなかった。
ＣＨＰ無水物とＣＨＰ水和物（パターン２）との間の総不純物の比較を図５４に示す。
【０１４０】
（実施例６）
ＣＨＰ水和物における多形スクリーニング
改善された固体状態特性を有する任意の新規の多形を特定することを目的として、ＣＨＰについて多形研究を行った。この研究では、化学量論的一水和物であるＣＨＰパターン２を、進行の安定な形態として特定した。この研究は、受入れＣＨＰ無水物（パターン１、バッチ：１０５８７０７）の最初の分析、３０種類の溶媒系における溶媒溶解度スクリーニング、ならびに２４種類の溶媒系および４つのプロセス関連条件（サイクリング、冷却、貧溶媒の添加、および蒸発）を使用した一次多形スクリーニングを伴う。これに続いて、１週間の安定性評価およびｐＨ溶解度評価を含むＣＨＰパターン２の二次スクリーニングスケールアップを行った。
【０１４１】
受入れ時の材料は、ＸＲＰＤによって結晶性であることが見出され、定義された形態を有していない複屈折粒子から構成されていた。熱的に、パターン１は、１７０℃で試料の融解が認められる前に、加熱の開始時に３つの小さな質量損失を呈することがわかった。ＤＶＳ分析は、形状変化が発生したことを示し、ＤＶＳ後に生成された材料が投入材料の水和形態であることを示唆した。ＤＶＳ後の固体のＴＧ／ＤＴＡはこのことを裏付け、ＴＧ／ＤＴＡサーモグラムは、二次多形スクリーニング中に分析されたパターン２材料の熱的データに適合した。
【０１４２】
エタノールおよびメタノール中で高い溶解度が観察され、およその溶解度は１００≧ｘ≧５０ｍｇ／ｍＬと推定された。溶解度スクリーニングから収集した情報を使用して、受入れＣＨＰ（パターン１）から調製したほとんど非晶質の投入材料を使用して一次多形スクリーニングを行った。パターン１および２に加えて、１つの新しい多形体、すなわち純粋パターン１が一次スクリーニングで観察された。
【０１４３】
一次多形スクリーニングからの結果に基づいて、パターン２を、さらなる分析のためにスケールアップした。熱的に、パターン２材料は、ＴＧ／ＤＴＡ実験の開始から、およそ１２０℃で再結晶化が起こる前に、０．９当量の水を失うことがわかった。これに続いて１７０℃で融解した。融解の温度はパターン１の融解温度と同じであることがわかり、このことは、加熱して試料が脱水されると、再結晶化してパターン１になったことを示唆していた。再結晶化事象はＤＳＣトレースでは目に見えなかったが、パターン２からパターン１への再結晶化の証拠はホットステージＰＬＭ顕微鏡法により明らかになった。パターン２ＣＨＰの短期１週間安定性研究では、評価した条件下で良好な化学的安定性が示されたが、ＸＲＰＤ分析では、密閉バイアル内に８０℃で７日間保存した後、パターン２の投入材料がパターン１に変換されることが示された。周囲温度および４０℃／７５％ＲＨで保存された試料はパターン２のままであった。
パターン２  ＣＨＰについてのより長期の８週間安定性研究では、４０℃／７５％ＲＨでの良好な物理的安定性が示された。ＸＲＰＤ分析により、８週間評価期間にわたってパターン２が優勢であったことが確認された。
【０１４４】
純粋パターン１は、パターン２のＶＴ／ＶＨ−ＸＲＰＤ特性評価の間、最初に観察された。８０℃／０％ＲＨで作成されたディフラクトグラムは、いくつかのピークが欠落していたが、最も顕著には１７°  ２θで、パターン１材料と類似のピークプロファイルを示した。最初のパターン２ディフラクトグラムとさらに比較すると、欠落したピークはパターン２ディフラクトグラムには存在することが明らかになった。このことは、受入れ材料（パターン１として割り当てられた）が、純粋パターン１とパターン２との混合物であることを示唆していた。純粋パターン１のスケールアップは、５０℃に加熱しても８０℃に加熱しても成功しなかったが、エタノール／ジクロロメタン中での高速蒸発によって達成され、これは、エタノール／ＤＣＭ混合物が水を共沸することに加えて材料を溶解し、無水パターン１の形成を促進するためであった。
純粋パターン１  ＣＨＰについての８週間の安定性研究では、４０℃／７５％ＲＨでの低い物理的安定性が示された。ＸＲＰＤ分析により、純粋パターン１が１４日後にパターン２に変換されたことが確認された。
【０１４５】
パターン１およびパターン２の両方の材料は、安定性評価の期間にわたってキラル的に純粋なままであった。元の試料で研究を継続したが、この温度および湿度では純粋パターン１の安定性が低いため、２週目の時点から安定性試験を行った材料は、パターン１ではなくパターン２であった。
純粋パターン１  ＣＨＰの短期１日安定性試験では、４０℃／７５％ＲＨで２時間後に、材料がパターン２に変換されることが示された。
最も安定な形態としてパターン２を強調する本文書内に記載された観察に基づいて、パターン２材料を調製するための信頼できるスケーラブルな手順を提供する目的で、結晶化進行ワークプログラムが推奨される。
【０１４６】
Ａ．材料
以下の材料を分析した。バッチ／ロット／試料ＩＤ：シクロ（−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）バッチ：１０５８７０７  ＳＦＳ  ＩＤ  ：ＣＳ／２９８／１８／１およびＣＳ／２９８／１８／２
受入れ量：１０ｇ
外観：オフホワイト固体
Ｂ．分析方法
１．Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
ＸＲＰＤ分析を、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’ｐｅｒｔ  ｐｒｏで、３〜３５°２θの試料を走査して実施した。材料を穏やかに粉砕して、粒塊を放出し、試料を支持するために、カプトンまたはマイラーポリマーフィルムを使用してマルチウェルプレートに装填した。次に、マルチウェルプレートを回折計に配置し、４０ｋＶ／４０ｍＡの発電機設定を使用して、透過モード（ステップサイズ０．０１３０°２θ）で操作し、Ｃｕ  Ｋ放射線（α１λ＝１．５４０６０Å；α２＝１．５４４４３Å；β＝１．３９２２５Å；α１：α２比＝０．５）を使用して分析した。
【０１４７】
２．偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）
結晶化度（複屈折）の存在を、Ｍｏｔｉｃカメラおよび画像キャプチャソフトウェア（Ｍｏｔｉｃ  Ｉｍａｇｅｓ  Ｐｌｕｓ  ２．０）を装備したＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０偏光顕微鏡を使用して決定した。特に明記されていない限り、すべての画像を、２０倍の対物レンズを使用して記録した。
３．ホットステージ光学顕微鏡
熱事象を、Ｍｏｔｉｃカメラおよび画像キャプチャソフトウェア（Ｍｏｔｉｃ  Ｉｍａｇｅｓ  Ｐｌｕｓ  ２．０）を装備したＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０偏光顕微鏡に結合した、接続コントローラーユニットを備えた較正Ｌｉｎｋａｍ  ＴＨＭ６００ホットステージを使用して目視で監視した。およそ０．５ｍｇの材料を顕微鏡のカバーガラス上に置き、１０℃／分の速度で加熱し、決まった間隔で画像を撮影して熱転移を記録した。特に明記されていない限り、すべての画像を、１０倍の対物レンズを使用して記録した。
【０１４８】
４．熱重量分析（ＴＧＡ）
およそ５ｍｇの材料を、アルミニウム製オープンパン内に量り取り、同時熱重量分析／示差熱分析装置（ＴＧ／ＤＴＡ）に装填し、室温で保持した。次に、試料を１０℃／分の速度で２０℃から３００℃まで加熱し、その間に試料質量の変化を示差熱事象（ＤＴＡ）とともに記録した。パージガスとして、窒素を３００ｃｍ3／分の流量で使用した。
５．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
およそ５ｍｇの材料を、アルミニウムＤＳＣパン内に量り取り、穴開きアルミニウム蓋で非気密的に密封した。次に、試料パンを、セイコーＤＳＣ６２００（クーラーを装備）に装填し、冷却して２０℃に保持した。安定な熱流応答が得られたら、試料および基準物質を１０℃／分の走査速度で２５０℃に加熱し、得られた熱流応答を監視した。パージガスとして、窒素を５０ｃｍ3／分の流量で使用した。
【０１４９】
６．赤外分光法（ＩＲ）
赤外分光法を、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＬＰＨＡ  Ｐ分光計で実施した。十分な材料を分光計のプレートの中央に配置し、以下のパラメータを使用してスペクトルを取得した：
解像度：４ｃｍ-1
バックグラウンド走査時間：１６スキャン
試料走査時間：１６スキャン
データ収集：４０００〜４００ｃｍ-1
結果スペクトル：透過
ソフトウェア：ＯＰＵＳバージョン６
【０１５０】
７．核磁気共鳴（ＮＭＲ）
ＮＭＲ実験は、プロトンに対して５００．１２ＭＨｚで作動するＤＣＨクライオプローブを装備したＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＩＩＩＨＤ分光計で行った。実験は重水素化ＤＭＳＯ中で行い、各試料を約１０ｍＭの濃度に調整した。
８．動的蒸気収着（ＤＶＳ）
およそ１０〜２０ｍｇの試料を金網式蒸気収着バランスパンに入れ、これをＳｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ＳｙｓｔｅｍｓによるＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ動的蒸気収着バランスに装填した。試料を、安定な質量が達成されるまで、２５℃にて各ステップで（ｄｍ／ｄｔ  ０．００４％、最小ステップ長３０分、最大ステップ長５００分）試料を維持しながら、１０％刻みで４０〜９０％の相対湿度（ＲＨ）の傾斜プロファイルにかけた。収着サイクルの完了後、同じ手順を使用して試料を０％ＲＨまで乾燥させ、次に２番目の収着サイクルで４０％ＲＨまで戻した。２サイクルを行った。収着／脱着サイクル中の質量変化をプロットし、試料の吸湿性を決定できるようにした。次に、保持された固体に対してＸＲＰＤ分析を実施した。
【０１５１】
９．可変温度動的蒸気収着（ＶＴ−ＤＶＳ）
およそ１０〜２０ｍｇの試料を金網式蒸気収着バランスパンに入れ、これをＳｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ＳｙｓｔｅｍｓによるＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気収着バランスに装填した。試料を、安定な質量が達成されるまで、４０℃にて各ステップで（ｄｍ／ｄｔ  ０．００４％、最小ステップ長３０分、最大ステップ長５００分）試料を維持しながら、１０％刻みで４０〜９０％の相対湿度（ＲＨ）の傾斜プロファイルにかけた。収着サイクルの完了後、同じ手順を使用して試料を０％ＲＨまで乾燥させ、次に２番目の収着サイクルで４０％ＲＨまで戻した。収着／脱着サイクル中の質量変化をプロットし、試料の吸湿性を決定できるようにした。実験を５０℃で繰り返し、最後に６０℃で行った。次に、保持された固体に対してＸＲＰＤ分析を実施した。
【０１５２】
１０．可変温度および可変湿度Ｘ線粉末回折（ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ）
ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ分析を、温度および湿度チャンバーを装備したＰｈｉｌｉｐｓ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｐｒｏ多目的回折計で実施した。試料を、４０ｋＶ／４０ｍＡの発電機設定を使用して、Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏジオメトリ（ステップサイズ０．００８  °２θ）で操作し、Ｃｕ  Ｋ放射線（α１λ＝１．５４０６０Å；α２＝１．５４４４３Å；β＝１．３９２２５Å；α１：α２比＝０．５）を使用して、４〜３５．９９°  ２θの間で走査した。以下の湿度プロファイルの各ステップで、測定を行った：
プログラム：
４０％ＲＨ／周囲温度−初回走査
０％ＲＨ／周囲温度−初回走査、１時間保持、走査
０％ＲＨ／８０℃−初回走査、２０分保持、走査
０％ＲＨ／８０℃−初回走査、８０分保持、走査
【０１５３】
１１．高速液体クロマトグラフィー−紫外線検出（ＨＰＬＣ−ＵＶ）
機器：Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００
カラム：ＬＣ／１６８  Ｘ―Ｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ×３．５μｍ）
カラム温度：３０℃
オートサンプラー温度：５℃
ＵＶ波長：２２０ｎｍ
注入量：５μＬ
流量：１ｍｌ／分
移動相Ａ：１０ｍＭ  酢酸アンモニウム
移動相Ｂ：アセトニトリル
希釈剤：水中０．１％ＴＦＡ
勾配プログラム：
【０１５４】
【表２３】
2021533182.tif 000032
【０１５５】
１２．液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）
機器：Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００
カラム：ＡＣＥ  Ｅｘｃｅｌ  ３  Ｓｕｐｅｒ  Ｃ１８、７５×４．６ｍｍ
カラム温度：３０℃
注入量：１０μＬ
流量：１．０ｍＬ／分
移動相Ａ：脱イオン水中０．１％ギ酸
移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸
希釈剤：アセトニトリル
ニードル洗浄：アセトニトリル、バイアル位置＃１００
ＰＤＡ範囲：１９０〜４００ｎｍ
勾配プログラム：
【０１５６】
【表２４】
2021533182.tif 000033
【０１５７】
１３．キラルＨＰＬＣ
カラム：Ｄａｉｃｅｌ  ＩＣ（５．０ｕｍ、２５０＊４．６ｍｍ）
カラム温度：３０℃
注入量：５μＬ
流量：１．０ｍＬ／分
移動相Ａ：ｎ−ヘキサン中０．０１％ＤＥＡ
移動相Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ＝２：８（体積／体積）
希釈剤：アセトニトリル
ＰＤＡ範囲：２２０ｎｍ
勾配プログラム：
【０１５８】
【表２５】
2021533182.tif 000034
【０１５９】
Ｃ．実験
１．最初の特性評価
本明細書においてＣＨＰと呼ばれる、供給されたシクロ（Ｈｉｓ−Ｐｒｏ）を受入れると、最初の特性評価を、ＸＲＰＤ、ＰＬＭ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＤＳＣ、ＤＶＳ（ＸＲＰＤ後分析を伴う）、1ＨおよびＨＳＱＣ  ＮＭＲ、ＨＰＬＣ（純度およびＵＶスペクトル用）、ｐＫａ、ならびにＬＣ−ＭＳを使用し、セクションＢで概説した技術および方法を利用して、行った。
【０１６０】
２．溶媒溶解度スクリーニングのための試料調製
水中での凍結乾燥
材料を、以下のように溶媒溶解度スクリーニングのために凍結乾燥によって調製した：
・受入れＣＨＰ（パターン１）（３３０ｍｇ）に３．３ｍＬの蒸留水を加え、無色透明の溶液を得た。
・この溶液を、３３．２ｍＬのガラスバイアル（各バイアル内におよそ１００μＬ、および１０ｍｇの固体を含む）間で均等に分けた；
・凍結乾燥の調製において、バイアルを−５０℃で凍結した；
・凍結したら、試料を凍結乾燥機に取り付けられたデシケーターに入れ、およそ１８時間乾燥させた。この後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析して、バッチの非晶質性を確認した。
水中での凍結乾燥を繰り返す。
凍結乾燥の繰り返しは、以下のように実施した：
・各１０ｍｇの試料（セクション５．２．１に従って調製）を、２００μＬの蒸留水中に再溶解した。
・凍結乾燥の調製において、バイアルを−５０℃で凍結した；
・凍結したら、試料を凍結乾燥機に取り付けられたデシケーターに入れ、およそ７２時間乾燥させた。この後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析して、バッチの非晶質性を確認した。
【０１６１】
３．溶媒溶解度スクリーニング
既知の質量のＣＨＰ凍結乾燥品（１０ｍｇ、セクション５．２．２から）に、１００μＬの適切な溶媒を加え、固体が残存している場合、バイアルを穏やかに約４０℃に加熱して溶解を助けた。溶媒の添加を、材料が完全に溶解するか、または２ｍＬが加えられるまで続けた（＜５ｍｇ／ｍＬ）。
試料に蓋をせず、周囲で蒸発させた。溶解度スクリーニングで使用される溶媒は、表２１に見出すことができる。
【０１６２】
４．一次多形スクリーニングのための試料調製
ａ．水中での凍結乾燥
材料を、以下のように一次多形スクリーニングのために凍結乾燥によって調製した：
・受入れＣＨＰ（１．０４）に、１３ｍＬの蒸留水を加え、無色透明の溶液を得た；
・この溶液を、２６．２ｍＬのガラスバイアル（各バイアル内におよそ５００μＬ、および４０ｍｇの固体を含む）間で均等に分けた；
・凍結乾燥の調製において、バイアルを−５０℃で凍結した；
・凍結したら、試料を凍結乾燥機に取り付けられたデシケーターに入れ、およそ４８時間乾燥させた。この後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析して、バッチの非晶質性を確認した。
【０１６３】
ｂ．水中での凍結乾燥の繰り返し
２番目の凍結乾燥の試みを、以下のように実施した：
・各４０ｍｇの試料（セクションａに従って調製）に、１．５ｍＬの蒸留水を加えて材料を再溶解した；
・凍結乾燥の調製において、バイアルを−５０℃で凍結した；
・凍結したら、試料を凍結乾燥機に取り付けられたデシケーターに入れ、およそ７２時間乾燥させた。この後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析して、バッチの非晶質性を確認した。
【０１６４】
【表２６】
2021533182.tif 000035
【０１６５】
Ｃ．水中での凍結乾燥の繰り返し（２）
３番目の凍結乾燥の試みを、以下のように実施した：
・各４０ｍｇの試料（セクションｂに従って調製）に、１ｍＬの蒸留水を加えて材料を再溶解した；
・次に、溶液をピペットで２６．２０ｍＬのガラスバイアルに入れて、追加の１５ｍＬの蒸留水をかけた；
・凍結乾燥の調製において、バイアルを−５０℃で凍結した；
・凍結したら、試料を凍結乾燥機に取り付けられたデシケーターに入れ、およそ１２０時間乾燥させた。この後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析して、バッチの非晶質性を確認した。
【０１６６】
５．一次多形スクリーニング
ＣＨＰの一次多形スクリーニングを、以下のように実施した：
・この実験では、セクションｂからの約４０ｍｇのＣＨＰを含む２４個のバイアルを使用した；
・材料を、適切な溶媒／溶媒混合物中に懸濁させて、７２時間にわたって４時間サイクルで周囲温度と４０℃との間で温度サイクリングさせた。使用される溶媒は、表２２に見出すことができる；
・得られた固体を遠心分離による濾過によって単離し、ＸＲＰＤによって分析した。新しい形態を、ＴＧ／ＤＴＡによって分析した；
・次に、濾過した飽和溶液を３つのバイアルに分割し、下記の後続の多形スクリーニング実験に使用した：
【０１６７】
ａ．蒸発
ＣＨＰの飽和溶液を２ｍＬバイアルに移し；次に、これらのバイアルに蓋をせず、周囲温度で蒸発させて材料を回収した。回収したすべての材料を、ＸＲＰＤによって特徴付けた。
【０１６８】
ｂ．クラッシュ冷却
ＣＨＰの飽和溶液を、２〜８℃で９６時間保存した。この時点で、回収された任意の材料をＸＲＰＤによって分析し、バイアルを移動させて、−２０℃で７２時間保存した。この時間経過後、回収された任意の材料をＸＲＰＤによって分析した。
【０１６９】
ｃ．周囲での貧溶媒添加
最大２ｍＬの貧溶媒（ヘプタンまたはＭｔＢＥ）を、ＣＨＰの飽和溶液に滴加した。試料を、周囲温度で７２時間蓋をしたままにした。得られた固体をＸＲＰＤにより分析した。
【０１７０】
【表２７】
2021533182.tif 000036
【０１７１】
６．二次多形スクリーニング
ａ．パターン２のスケールアップ
ＣＨＰパターン２を、以下に概説される手順によりスケールアップさせた：
・受入れＣＨＰ（パターン１）５ｇを、６ｍＬの９０：１０エタノール／水混合液でスラリー化した；
・得られたスラリーを撹拌機上に置き、約２４時間撹拌した；
・２４時間後、試料をシェーカーから取り外し、固体をＸＲＰＤにより分析した；
・固体を、Ｐ−ＳＦＳ１４８２−００セクション２．４に従って特徴付けた。
ａ．純粋パターン１のスケールアップ
ｉ．パターン２を８０℃で加熱する
・約２．２ｇのパターン２材料（セクション５．６．１に従って調製）を、５０℃に設定した真空オーブン内に入れた；
・１時間後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析した；
・バイアルを真空オーブンに戻し、温度を６０℃に上昇させた；
・３０分後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析した；
・バイアルを真空オーブンに戻し、温度を８０℃に上昇させた；
・８０℃で１８時間後、試料を採取し、ＸＲＰＤにより分析した；
ｉｉ．エタノール／ＤＣＭにおける高速回転蒸発
・１ｇの受入れＣＨＰパターン１を、丸底フラスコ内に量り入れ、４０ｍＬのエタノール中に溶解させた；
・固体が溶解したら、２ｍＬのジクロロメタンをピペットでフラスコに入れた；
・次に、フラスコをロータリーエバポレーターに取り付け、減圧下で周囲温度にて急速に蒸発させた；
・淡いベージュ色の固体を回収し、ＸＲＰＤで分析した。
【０１７２】
７．ｐＨ溶解度評価
ＣＨＰパターン１および２を、ｐＨ溶解度評価のために以下のように調製した：
・１００ｍｇのＣＨＰパターン１およびパターン２を、それぞれ４、５ｍＬのスクリュートップガラスバイアルに量り取った；
・３７℃に予熱した、１００μＬの選択された緩衝液を、各バイアルに加えた；
・各体積の緩衝液を（加えた）後、試料を、インキュベーターシェーカーで約１０分間、３７℃に加熱し、試料の溶解を確認した。
【０１７３】
Ｃ．結果
１．最初の特性評価
ＣＨＰ（ＣＳ／２９８／１８）の最初の特性評価は、以下を示した：
・材料はＸＲＰＤにより結晶性であった（図１）。供給されたＣＨＰのＸＲＰＤパターンを、パターン１と表記した。
・ＰＬＭ分析により、材料は複屈折性であり、明確な形態がないことがわかった。偏光画像および非偏光画像を、それぞれ図１２および図１１に見ることができる。
・ＴＧ分析では、加熱の開始から試料の劣化が観察されたおよそ２８０℃まで、一連の小さな質量損失（０．６％、０．２％、および０．３％）があったことが示された。ＤＴＡにより、１７０℃での開始および１７２℃でのピークを伴う１つの鋭い吸熱事象が特定された。これはおそらく試料融解である。ＴＧ／ＤＴＡサーモグラムを、図１４において見ることができる。
・図１６は、ＤＳＣ分析の最初の熱サイクルを示す。７５℃で小さな幅広い吸熱事象が認められ、ピークは８５℃であった。２番目の吸熱事象は、１６９℃で観察され、ピークは１７１℃であった。これは、ＴＧ／ＤＴにおいて見られる融解と一致していた。冷却サイクルでは、有意な熱事象は観察されなかった（図１７）。２回目の熱サイクル中の７５℃〜８０℃で、非常に小さな吸熱事象、すなわちおそらく弱いガラス転移が観察された（図１８）。
・図２３のＤＶＳ等温線プロットは、６０％ＲＨ〜９０％ＲＨでの質量の＋６．３％の変化を示し、明確な形態変化を示している。形態が変化した後、最大取り込み量は、０〜９０％ＲＨ間で０．８質量％であり、材料はわずかに吸湿性に見えた（図２４）。ＤＶＳ速度論的プロットを、図２５において見ることができる。ＸＲＰＤ分析により、ＤＶＳ湿度条件にさらされた後、パターン１投入材料は、再結晶化してパターン２になったことが確認された（セクション３で詳述したが、最初に溶媒溶解度スクリーニングにおいて見られた）。ＸＲＰＤディフラクトグラムを、図２６において見ることができる。パターン１とパターン２のディフラクトグラムを比較すると、受入れパターン１にはまたいくつかのパターン２のピークが存在したことが示されている。このことは、受入れパターン１が潜在的な混合物であることを示唆していた。このことを、パターン２材料に対してＶＴ／ＶＨ−ＸＲＰＤを実施することによって、（セクションＢ．１に従って）さらに調査した。
・ＴＧ／ＤＴＡ分析を、パターン２のＤＶＳ後に回収された固体で実施した。サーモグラムを、図２７において見ることができる。ＴＧ分析によって、６．８％（０．９５当量の水）の最初の質量損失、その後の２８０℃での試料分解が示された。ＤＴトレースによって、最初の質量損失に関連する吸熱事象が特定された。これに続いて、発熱事象、おそらく材料の再結晶化が起こり、その後、１６８℃で２番目の吸熱（試料融解）が観察された。
・受入れＣＨＰの1Ｈ−ＮＭＲ（図３５）およびＨＳＱＣ−ＮＭＲ（図３８）は、提供された構造と一致していた。おそらく緩慢な緩和のために、イミダゾールＣＨシグナルは観察されなかった。
・受入れ材料の分析では、６．３８のｐＫａ値が得られた（図１０）。
・ＣＨＰパターン１のＬＣ−ＭＳスペクトルにより、［Ｃ11Ｈ14Ｎ4Ｏ2］Ｈ+に対応する予想された２３５．１のｍ／ｚが確認された（図５５）。
・受入れＣＨＰは、ＨＰＬＣ−ＵＶで分析すると９９．５％純粋であった。関連するクロマトグラムを図５６に示す。
【０１７４】
２．溶媒溶解度スクリーニングのための試料調製
ａ．水中での凍結乾燥
水中での凍結乾燥からの固体の分析により、材料がまだ結晶性であることが示された。非晶質材料の２θディフラクトグラムを図４０に提示する。
【０１７５】
ｂ．水中での凍結乾燥の繰り返し
水中での繰り返し凍結乾燥固体の分析では、ほとんどがこの材料であることが示された。
【０１７６】
３．溶媒溶解度スクリーニング
上で概説したように、ＣＨＰ凍結乾燥物の溶解度を、３０種類の選択された溶媒／溶媒混合物中で評価した。表２３の結果から、この材料は、この研究で使用されたほとんどの溶媒／溶媒混合物中で低い溶解度を示した。エタノールおよびメタノール中で高い溶解度が観察され、およその溶解度は１００≧ｘ≧５０ｍｇ／ｍＬと推定された。この材料は、水、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、トリフルオロエタノール、およびメタノール／水両方の混合物に可溶であることが観察された。
溶媒溶解度からの回収された固体のＸＲＰＤ分析の結果を、表２４に示す。生成された各パターンのＸＲＰＤディフラクトグラムの例を、図５７において見ることができる。残りのディフラクトグラムは、図５８〜図６０に含まれている。
【０１７７】
【表２８】
2021533182.tif 000037
【０１７８】
【表２９】
2021533182.tif 000038
【０１７９】
４．一次多形スクリーニングのための試料調製
ａ．水中での凍結乾燥
水中での凍結乾燥からの固体の分析により、試料がまだ結晶性であることが示された。ディフラクトグラムパターンはパターン２として特定された（図６１）。
ｂ．水中での凍結乾燥の繰り返し
図６２は、水中でのＣＨＰの繰り返し凍結乾燥から得られたディフラクトグラムを示している。ＸＲＰＤ分析により、材料は図６１に示された以前の試料よりも結晶性が低いが、パターン２のピークが依然として含まれていたことが確認された。
ｃ．水中での凍結乾燥の繰り返し（２）
図６３は、水中でのＣＨＰの３回目の凍結乾燥の試みから得られたディフラクトグラムを示す。ＸＲＰＤ分析により、材料は図６１に示された試料よりも結晶性が低いが、図６２からのパターン２のピークが残存していたことが確認された。
【０１８０】
５．一次多形スクリーニング
上で概説したように、多形を呈するＣＨＰの性質を、２４種類の選択された溶媒／溶媒混合物中で評価した。
【０１８１】
ａ．温度サイクリング
一次多形スクリーニングからの温度サイクリング実験の結果を表２５に示す。関連するディフラクトグラムを図６４〜６６に示す。
・ＣＨＰの純粋パターン１を、５０：５０メタノール／ＭｔＢＥ、１０：９０メタノール／ＭｔＢＥ、両方のエタノール／ＭｔＢＥ混合物、および酢酸エチルから回収したが、この試料ではいくつかの好ましい配向が明らかであった。
・パターン１を、ギ酸エチル、アセトニトリル、ＭＥＫ、およびＴＨＦから回収した。
・５つの溶媒系、すなわち、ヘプタン、酢酸イソプロピル、ＭＩＢＫ、ＭｔＢＥ、およびトルエンによりパターン２を生成した。
・ＤＣＭから生成された固体の好ましい配向は、パターンを割り当てることができなかったことを意味した。
・クロロベンゼンから固体が認められたが、生成量が不十分であったため、ＸＲＰＤ分析を実施することができなかった。
・油はメタノール中で生成された。
・残りの溶媒系では、溶液が生成されたため、ＸＲＰＤ分析を実行することができなかった。
【０１８２】
【表３０】
2021533182.tif 000039
【０１８３】
ｂ．蒸発
一次多形スクリーニングからの蒸発実験の結果を、表２６および図１１３に提示する。関連するディフラクトグラムを図６７に示す。
・低結晶性のパターン１がアセトニトリルから回収された。
・パターン２は２回、すなわちトリフルオロエタノールから１回、またニトロメタンから１回生成された。
・ＤＣＭおよびＴＨＦから非晶質材料が特定された。
・１０：９０エタノール／ＭｔＢＥ、５０：５０エタノール／ＭｔＢＥ、ＭＩＢＫ、およびエタノールから固体が認められたが、生成量が不十分であったため、ＸＲＰＤ分析を実施することができなかった。
・溶媒系の大部分では、バイアル壁に無色の膜が生成されたが、ＸＲＰＤではこれを分析することができなかった。
【０１８４】
【表３１】
2021533182.tif 000040
ｃ．クラッシュ冷却
表２７では、一次多形スクリーニングからの２〜８℃および−２０℃の両方でのクラッシュ冷却から得られた結果を示す。
・温度サイクリングによる母液の生成が不十分なため、５０：５０メタノール／ＭｔＢＥおよびメタノール中ではクラッシュ冷却実験を行わなかった。
・残りの実験では溶液のみが生成されたため、ＸＲＰＤ分析を行うことができなかった。
【０１８５】
【表３２】
2021533182.tif 000041
【０１８６】
ｄ．貧溶媒添加
表２８では、一次多形スクリーニングからの貧溶媒添加から得られた結果を示す。関連するディフラクトグラムを図６８に提示する。
・不完全な固体が、アセトン、ＤＣＭ、および５０：５０エタノール／ＭｔＢＥ中で生成された。
・パターン１（エタノールによる）は、貧溶媒添加実験において観察された唯一のパターンであった。
・温度サイクリングによる母液の生成が不十分なため、５０：５０メタノール／ＭｔＢＥおよびメタノール中では貧溶媒実験を行わなかった。
【０１８７】
【表３３】
2021533182.tif 000042
【０１８８】
６．一次多形スクリーニング  まとめ
表２９および図１１４では、一次多形スクリーニングからの結果のまとめを提示する。
【０１８９】
【表３４】
2021533182.tif 000043
【０１９０】
一次多形スクリーニングでは、純粋パターン１として割り当てられ、温度サイクリング後に生成された１つの新しい形態のＣＨＰが特定された。パターン１および２はまた、温度サイクリングからの複数の溶媒系において再生成された。２〜８℃および−２０℃の両方でのクラッシュ冷却実験では、透明溶液のみが回収された。溶媒系の大部分では、貧溶媒添加実験において透明溶液が回収されたが、パターン１は、ＭｔＢＥの添加後にエタノールから見られた。
【０１９１】
７．二次多形スクリーニング
ａ．パターン２のスケールアップ
図６９は、パターン２スケールアップのＸＲＰＤ結果を示す。ＸＲＰＤディフラクトグラムにより、パターン２の形成を確認した。
【０１９２】
ｂ．純粋パターン１のスケールアップ
ｉ．パターン２を８０℃で加熱する
この実験では、純粋パターン１を生成することに成功しなかった。パターン１とパターン２との混合物は、５０℃と８０℃の両方で回収された。試料を５０℃で９０分間保持した後、８°  ２Θで、これまでに見られなかったピークが現れた。このピークは、８０℃で１８時間後に強度が増加した。関連するディフラクトグラムを、図７０において見ることができる。
【０１９３】
ｉｉ．エタノール／ＤＣＭにおける高速回転蒸発
エタノール／ＤＣＭの高速蒸発から回収された固体の分析では、ＸＲＰＤにより材料が純粋パターン１であることが示された。ディフラクトグラムを図７１に示す。
【０１９４】
ｃ．パターン２の特性評価
９０：１０エタノール／水からのＣＨＰパターン２の分析により、以下の結果を得た：
・材料は、ＸＲＰＤによれば結晶性であり、一次多形スクリーニングで得られたパターン２のディフラクトグラムのものと一致していた（図７２）。
・ＣＨＰパターン２のＰＬＭ画像も撮影され、材料は、断片化された棒状の形態を有する複屈折性であることがわかった。偏光および非偏光の画像を、図７３において見ることができる。
・ホットステージ顕微鏡法もＣＨＰパターン２において実施した。最初の画像では棒状の形態が特定された（図７４）。これは、図６９におけるＰＬＭ分析の画像と一致していた。材料は９５℃で融解を開始し、１０１℃で完全に融解したことが観察された。１１５℃で再結晶化が起こったことが観察された。ホットステージ後に撮影されたＰＬＭ画像では、材料の形態はもはや明確に定義されていないが、試料は依然として複屈折性であったことが示されている。ホットステージ後の材料の偏光および非偏光画像を、図７５において見ることができる。
・ＴＧ／ＤＴＡ−ＴＧ分析によって、６．５％の最初の質量損失（０．９当量の水）、その後の２８０℃での試料分解が示された。ＤＴトレースによって、最初の質量損失に関連する吸熱事象が特定された。これに続いて、発熱事象、おそらく材料の再結晶化が起こり、その後、１７０℃で２番目の吸熱（試料融解）が観察された（図７６）。
ＤＳＣの最初の熱サイクルでは、９９℃の開始および１０２℃でのピークを伴う吸熱事象が特定された（図７７）。これは、ＴＧＡでは見られた再結晶化事象がＤＳＣでは存在しなかったが、ＴＧＡで観察された吸熱データと一致していた。冷却サイクルでは、熱事象は観察されなかった（図７８）。２回目の熱サイクルでは、７５℃でガラス転移の可能性が特定された（図７９）。
・図８０は、ＣＨＰパターン２のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。ピーク表は、表３０に見出すことができる。
・ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ分析：湿度が周囲温度で０％に低下した場合に、パターン２投入材料は残存していた。温度が８０℃に上昇すると、材料は純粋パターン１として割り当てられた形態に変化した。８０℃で８０分間保持した場合、純粋パターン１が残存した。表３１は、各ステップでの湿度、温度、およびパターン識別を示している。関連するディフラクトグラムを、図８１において見ることができる。
・ＣＨＰパターン２のＤＶＳ分析では、材料は、４０％ＲＨ〜９０％ＲＨ、または９０％ＲＨ〜１０％ＲＨでは形態が変化しなかったが、１０％ＲＨ未満では３．５質量％（０．５当量の水）が失われることが示された。再水和は０〜９０％ＲＨで起こることが認められた。このことは、図８２のＤＶＳ等温線プロットにおいて見ることができる。図８３は、ＤＶＳ速度論プロットを示す。ＤＶＳ後のＸＲＰＤ分析では、４０％ＲＨで形態に変化は示されなかった。ＸＲＰＤディフラクトグラムの比較を、図８４において見ることができる。この実験で観察された非化学量論的水分損失は、周囲温度（約２５℃）に起因すると考えられ、脱水の反応速度が遅すぎたため、機器は、完了の前に次の段階に移行した。これをさらに調査するために、以下に詳述する可変温度ＤＶＳ実験を実施した。
・４０℃でのＶＴ−ＤＶＳ分析では、材料は１０％ＲＨ未満で脱水を開始し、１０〜０％ＲＨでおよそ５．８質量％（０．８当量の水）を失うことが示された。材料は、その後０〜４０％ＲＨで再水和する。ＤＶＳ等温線プロットを図８５において、速度論的プロットを図８６において見ることができる。５０℃でのＤＶＳ分析では、材料が２０％ＲＨ未満で脱水を開始し、およそ６．１質量％（０．８当量の水）を失うことが示された。材料は、その後０〜４０％ＲＨで再水和する。図８７は５０℃での等温線プロットを示し、図８８は速度論的プロットを示す。６０℃でのＶＴ−ＤＶＳでは、材料が２０％ＲＨ未満で脱水を開始し、およそ７質量％すなわち１．０当量の水を失うことが示された。材料は、０〜４０％の間のＲＨで再水和することが認められた。６０℃の等温線プロットを、図８９において見ることができる。速度論的プロットを、図９０において見ることができる。回収された固体のＸＲＰＤ分析により、ＤＶＳ後、材料はパターン１とパターン２の混合物であることが示された。ＸＲＰＤディフラクトグラムの比較を、図９１において見ることができる。
・ＣＨＰパターン２のＨＰＬＣ純度は９９．５％であることがわった。
【０１９５】
【表３５】
2021533182.tif 000044
【０１９６】
【表３６】
2021533182.tif 000045
【０１９７】
８．ｐＨ溶解度評価
ＣＨＰパターン１およびパターン２の両方のｐＨ溶解度評価では、試験されたすべてのｐＨ値（ｐＨ１、４、６．８および７．２）で３体積の緩衝液を加えた後に溶解が起こったことが見出された。パターン１およびパターン２の溶解度は、５００≧ｘ≧３３３．３ｍｇ／ｍＬと推定された。結果のまとめを、表３２に示す。
溶解後の試料の画像は、パターン１材料については図９２に、パターン２については図９３に見ることができる。
【０１９８】
【表３７】
2021533182.tif 000046
【０１９９】
９．安定性研究
ａ．１週間安定性評価
４０℃／７５％ＲＨ、８０℃および周囲光で試験された試料のＸＲＰＤ２Θディフラクトグラムを図９４に示す。４０℃／７５％ＲＨまたは周囲光で保存された試料では、形態の変化は観察されなかった。パターン２材料は、以前の熱的、ＤＶＳ、およびＶＴ／ＶＨ  ＸＲＰＤ実験に基づいて予想されたように、８０℃で７日後にパターン１に変換されることがわかった。
ＣＨＰパターン２のＨＰＬＣ純度の結果を、表３３に提示する。すべての条件において、７日間保存した後、純度の低下はなかった。安定性試料のＨＰＬＣクロマトグラムを図９５〜９７に示す。
【０２００】
【表３８】
2021533182.tif 000047
【０２０１】
ｂ．８週間安定性評価
ｉ．２週目時点
２週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムを、純粋パターン１については図９８に、パターン２については図９９に示す。結果は、純粋パターン１が４０℃／７５％ＲＨで１４日後にパターン２に変換されたことを示している。１４日後、ＣＨＰパターン２で観察された形態の変化はなかった。
ｉｉ．４週目時点
４週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムを、純粋パターン１については図１００に、パターン２については図１０１に示す。結果は、以前に２週間後にパターン２に変換された純粋パターン１の材料が、４０℃／７５％ＲＨで４週間後にパターン２のままであることを示している。４週間後、ＣＨＰパターン２で観察された形態の変化はなかった。
ｉｉｉ．８週目時点
８週目時点のＸＲＰＤ  ２Θディフラクトグラムを、純粋パターン１については図１０２に、パターン２については図１０３に示す。結果は、以前に２週間後にパターン２に変換された純粋パターン１の材料が、４０℃／７５％ＲＨで８週間後にパターン２のままであることを示している。８週間後、ＣＨＰパターン２で観察された形態の変化はなかった。
ｉｖ．外観試験
表３４および図１１５は、８週間安定性研究の外観試験結果を示す。純粋パターン１およびパターン２の外観は、実験期間にわたって一貫していた。
【０２０２】
【表３９】
2021533182.tif 000048
【０２０３】
ｖ．キラルＨＰＬＣ
ＨＰＬＣ分析によって、純粋パターン１およびパターン２投入試料の両方が高いキラル純度のものであることを確認した。安定性評価の期間にわたって、キラル純度に変化はなかった。結果のまとめを、表３５に見ることができる。ＨＰＬＣクロマトグラムは、図１０４〜図１１０において利用可能である。
【０２０４】
【表４０】
2021533182.tif 000049
ｃ．１日安定性評価
４０℃／７５％ＲＨで保存したものからのＸＲＰＤの結果を、図１１１に示す。純粋パターン１は、４０℃／７５％ＲＨで２時間後にパターン２に変換されることがわかった。元の実験には、４、６、および８時間目のさらなる時点が含まれていたが、最初の時点の後に材料がパターン２に変換されたため、実験を２時間後に停止した。
【０２０５】
ｄ．結果のまとめ
１．最初の特性評価
供給された材料、すなわちＣＨＰは、ＸＲＰＤによって結晶性であり、ＰＬＭによって明確に定義された形態を有していない複屈折性であることが見出された。この材料は、ＴＧ／ＤＴＡによって０．６、０．２、および０．３％のいくつかの質量損失があり、２８０℃に加熱すると分解することがわかった。融解はまた、１７０℃で観察された。ＤＳＣによって、溶媒（水）損失による７５℃での小さな吸熱事象が得られた。２番目の吸熱事象は、１６９℃で観察され、ピークは１７１℃であった。これは、ＴＧ／ＤＴにおいて見られる融解と一致していた。冷却サイクルでは、有意な熱事象は観察されなかったが、２回目の熱サイクル中の７５℃で、弱いガラス転移が認められた。
【０２０６】
ＤＶＳデータは、６０％ＲＨ〜９０％ＲＨでの質量の＋６．３％の変化を示し、これは明確な再結晶化事象を示している。再結晶後、０〜９０％の間のＲＨで最大０．８質量％の取り込みがあり、材料はわずかに吸湿性であると見られた。ＤＶＳ後のＸＲＰＤ分析により、形態の変化が確認された。ＤＶＳ後に作成されたディフラクトグラムパターンはパターン２として割り当てられ、パターン１の水和形態として特定された。ＤＶＳ後のＴＧ／ＤＴＡによって、パターン２投入材料は加熱すると脱水し、６．８質量％（０．９５当量の水）を失うことが示された。これに続いて再結晶が起こり、その後試料は１６８℃で融解した。この融解の温度は、パターン１の融解と一致していた。２つの試料間の融点の一致は、パターン２が一水和物であり、加熱時にパターン１に再結晶する前に約１当量の水を失うことを意味する。
ＮＭＲデータは、供給された構造と一致し、溶媒含有量を示さなかった。
【０２０７】
２．溶媒溶解度
受入れＣＨＰ（パターン１）は、この研究で使用されたほとんどの溶媒／溶媒混合物中で低い溶解度を示した。メタノールおよびエタノール中で高い溶解度が観察され、およその溶解度は１００≧ｘ≧５０ｍｇ／ｍＬと推定された。この材料は、水、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、トリフルオロエタノール、およびメタノール／水両方の混合物に可溶であることが観察された。パターン２は、（受入れパターン１に加えて）この実験中に特定された唯一の新しい結晶形態であった。パターン２は１７種類の溶媒系から回収され、パターン１は１−プロパノールから１度だけ見られた。パターン１とパターン２との混合物が、エタノールから認められた。ＴＨＦではいくつかのパターン２のピークを有する非晶質材料が回収された。
【０２０８】
３．一次多形スクリーニング
一次多形スクリーニングでは、純粋パターン１として割り当てられ、温度サイクリング後に生成された１つの新しい形態のＣＨＰが特定された。パターン１および２はまた、温度サイクリングからの複数の溶媒系において再生成された。２〜８℃および−２０℃の両方でのクラッシュ冷却実験では、透明溶液のみが回収された。溶媒系の大部分では、貧溶媒添加実験において透明溶液が回収されたが、パターン１は、ＭｔＢＥの添加後にエタノールから見られた。
【０２０９】
４．二次多形スクリーニング
二次多形スクリーニングでは、エタノール／水からのＣＨＰパターン２のスケールアップの成功が見られた。材料の分析により、以下の結果が得られた：
・材料は、ＸＲＰＤによれば結晶性であり、一次多形スクリーニングで得られたパターン２のディフラクトグラムのものと一致していた。
・ＣＨＰパターン２のＰＬＭ画像も撮影され、材料は、断片化された棒状の形態を有する複屈折性であることがわかった。
・ホットステージ顕微鏡法実験の開始時に撮影された最初の画像では、パターン２のＰＬＭ画像と一致する棒状の形態が特定された。材料は９５℃で融解を開始し、１０１℃で完全に融解したことが観察された。１１５℃で再結晶化が起こったことが観察された。ホットステージ後に撮影されたＰＬＭ画像では、材料の形態はもはや明確に定義されていないが、試料は依然として複屈折性であったことが示されている。
・ＴＧ／ＤＴＡ−ＴＧ分析によって、６．５％の最初の質量損失、その後の２８０℃での試料分解が示された。ＤＴトレースによって、最初の質量損失に関連する吸熱事象が特定された。これに続いて、発熱事象、おそらく材料の再結晶化が起こり、その後、１７０℃で２番目の吸熱（試料融解）が観察された。
・ＤＳＣの最初の熱サイクルでは、９９℃の開始および１０２℃でのピークを伴う吸熱事象が特定された。これは、ＴＧＡでは見られた再結晶化事象がＤＳＣでは存在しなかったが、ＴＧＡで観察された吸熱データと一致していた。冷却サイクルでは、熱事象は観察されなかったが、２回目の熱サイクル中の７５℃で、弱いガラス転移が観察された。
・ＶＴ−／ＶＨ−ＸＲＰＤ分析：湿度が周囲温度で０％に低下した場合に、パターン２投入材料は残存していた。温度が８０℃に上昇すると、材料は純粋パターン１として割り当てられた形態に変化した。８０℃で８０分間保持した場合、純粋パターン１が残存した。
・ＣＨＰパターン２のＤＶＳ分析では、材料は、４０％ＲＨ〜９０％ＲＨ、または９０％ＲＨ〜１０％ＲＨでは形態が変化しなかったが、１０％ＲＨ未満では３．５質量％（０．５当量の水）が失われたことが示された。再水和は０〜９０％ＲＨで起こることが認められた。ＤＶＳ後のＸＲＰＤ分析では、４０％ＲＨで形態に変化は示されなかった。
・ＶＴ−ＤＶＳ−試料は、４０℃にて１０％ＲＨ未満で脱水され、ならびに５０および６０℃にて２０％ＲＨ未満で脱水された。材料は、各温度上昇においてより高い百分率の水を失ったが、各実験において０〜４０％ＲＨで再水和した。パターン１と２との混合物が、ＶＴ−ＤＶＳ後のＸＲＰＤで見られた。
・ＣＨＰパターン２のＨＰＬＣ純度は９９．５％であることがわかった。
【０２１０】
純粋パターン１は、８０℃に加熱した場合、再生成に成功せず、パターン１と２との混合物がＸＲＰＤによって確認された。ＸＲＰＤではまた、試料を５０℃で９０分間保持すると、８°  ２Θで、これまでに見られなかったピークが特定された。このピークは、８０℃で１８時間後に強度が増加した。このピークは、この研究で作成された他のディフラクトグラムでは見られなかった。
純粋パターン１の再調製の成功は、エタノール／ＤＣＭ中での高速蒸発によって達成された。
【０２１１】
５．１週間安定性研究
１週間安定性研究では、パターン２が、評価された条件下（４０℃／７５％ＲＨ、８０℃および周囲光）で、良好な化学的安定性を示したことが示された。７日後、どの試料でも純度の変化は観察されなかった。
８０℃の高温では、１週間後にパターン２からパターン１への脱水が生じたが、４０℃／７５％ＲＨで周囲光下にて保存された場合、材料はパターン２のままであった。
６．８週間安定性研究
８週間安定性研究では、純粋パターン１の材料は４０℃／７５％ＲＨで低い物理的安定性を示し、最初の（２週目）時点後に材料が水和パターン２に変換することが示された。元の試料で研究を継続したが、この温度および湿度では純粋パターン１の安定性が低いため、２週目の時点から安定性試験を行った材料は、パターン１ではなくパターン２であった。ＸＲＰＤによって特定された形態の変化にもかかわらず、試験されたどの時点でも外観の変化は見られなかった。
逆に、パターン２は、８週間安定性評価の期間中形態の変化が観察されず、良好な物理的安定性を示した。パターン２材料の外観は、実験にわたってどの時点でも変化しなかった。純粋パターン１とパターン２との両方で、８週間評価の開始時にキラル純度が高いことがわかり、このキラル純度は実験期間にわたってすべての試料で高いままであった。
７．１日安定性研究
１日安定性評価により、純粋パターン１材料は、高湿度条件下でパターン２に容易に変換されることが確認された。ＸＲＰＤ分析により、４０℃／７５％ＲＨでわずか２時間後に形態変化が起こったことが確認された。
８．ｐＨ溶解度評価
ＣＨＰパターン１およびパターン２の両方のｐＨ溶解度評価では、試験されたすべてのｐＨ値（ｐＨ１、４、６．８および７．２）で３体積の緩衝液を加えた後に溶解が起こったことが見出された。パターン１およびパターン２の溶解度は、５００≧ｘ≧３３３．３ｍｇ／ｍＬと推定された。
【０２１２】
ｅ．結果
パターン２  ＣＨＰについてのより長期の８週間安定性研究では、４０℃／７５％ＲＨでの良好な物理的安定性が示された。ＸＲＰＤ分析により、８週間評価期間にわたってパターン２が優勢であったことが確認された。純粋パターン１  ＣＨＰについての８週間安定性研究では、４０℃／７５％ＲＨでの低い物理的安定性が示された。パターン２は、さらなる進行に最も好適なＣＨＰの形態である。
【０２１３】
（実施例７）
安定性研究
目的：原薬、ＧＭＰ様式の安定性データを保存および作成すること。
パッケージング：各々の時点での試料を、両方ともケーブルタイで固定された二重帯電防止ＬＤＰＥバッグにパッケージ化した。同じ保存条件でパッケージ化された試料を、ファイバードラム内に一緒に保存し、金属製の蓋で密閉した。すべてのパッケージを同じ方法で準備し、ラベルを付けた。パッケージ材料の説明の詳細を表３６に提供する。
【０２１４】
【表４１】
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タイムゼロは、試料がステーションに配置される日である。初期試験結果は、試料がリリース試験日からステーションに配置されて３０日以内である場合に限り、リリース試験からのものであり、それ以外の場合は、初期試験を繰り返した。表３７に安定性プロトコルを示す。
【０２１５】
【表４２】
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研究要件：合計２２．５ｇの試料（初期試験が必要でない場合は合計２１ｇの試料）：
・必要であれば、初期試験用に１．５ｇ；
・２１ｇの試料を１４パーツに分割し、各パーツは１．５ｇになり、各パーツの試料は、両方ともケーブルタイで固定された二重帯電防止ＬＤＰＥバッグに量り取る必要がある。各保存条件の安定性試料を、ファイバードラム内に一緒に保存し、金属製の蓋で密閉してから、２５±２℃／６０＋５％ＲＨ（９個のバッグ）および４０±２℃／７５±５％ＲＨ（５個のバッグ）でそれぞれ保存する。
【０２１６】
サンプリング時間：
保存して６カ月以内の試料を、スケジュール日に、またはスケジュール日から２営業日以内に取り出した。６カ月を超えて保存された試料を、スケジュール日から２営業日以内に取り出した。
【０２１７】
試料の保存およびテスト期間の制限：
１カ月〜１年間、および１年より長く保存された安定性試料を、試料を安定性チャンバーから取り出してからそれぞれ１０営業日および２０営業日以内に分析し、完了した。タイムゼロ試験を行った場合、研究開始後１０営業日以内に試料を分析した。
パターン２の安定性に関する詳細情報を、表３８および表３９に提供する。
【０２１８】
【表４３】
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【０２１９】
【表４４】
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【０２２０】
安定性試料の結果は、仕様の許容基準を満たしていた。不純物試験のためのブランク、分離溶液、および試料溶液（６Ｍ）の代表的な重ね合わせクロマトグラムを図１１２に示す。
【０２２１】
本明細書に記載の実施形態は、例示的であることを意図している。当業者は、以下の特許請求の範囲に含まれる本発明の範囲から逸脱することなく、変形および修正を行うことができることを理解するであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９】
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【図９０】
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【図９１】
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【図９２】
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【図９３】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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【図９８】
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【図９９】
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【図１００】
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【図１０１】
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【図１０２】
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【図１０３】
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【図１０４】
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【図１０５】
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【図１０６】
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【図１０７】
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【図１０８】
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【図１０９】
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【図１１０】
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【図１１１】
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【図１１２】
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【図１１３】
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【図１１４】
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【図１１５】
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【国際調査報告】
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