(57)【要約】疾患または状態を有する個体における免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）の分布および発現レベルの決定のための方法、イメージング剤およびキットが提供される。抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤も提供される。本出願は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）を特異的に認識する標識された抗体部分を含むイメージング剤、そのイメージング剤を調製する方法、ならびにそのイメージング剤を使用するイメージングおよび診断方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法であって、
（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を、前記個体に投与するステップであって、前記抗体断片が前記免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、ステップ；および
（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて前記個体における前記イメージング剤をイメージングするステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記個体の目的の組織における前記免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、前記組織から前記イメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記イメージング剤が、約１０分〜約４８時間以内に前記個体からクリアランスされる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体部分の半減期が、血清中で約１０分〜約２４時間の間である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体部分の分子量が、約１２０ｋＤａ以下である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体部分が、前記免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍの間のＫＤを有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体部分が、非ヒト哺乳動物からの前記免疫チェックポイントリガンドと交差反応する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体部分がヒト化されている、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体部分が、酸性ｐＨで安定している、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体部分が、約５５〜７０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体部分が、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体部分が、ｓｃＦｖである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ｓｃＦｖが、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
目的の前記組織が、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに基づいて前記免疫チェックポイントリガンドに対して陰性である、請求項２から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
目的の前記組織が、前記免疫チェックポイントリガンドの低い発現レベルを有する、請求項２から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
目的の前記組織が、免疫細胞の浸潤の際にのみ前記免疫チェックポイントリガンドを発現する、請求項２から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ある期間にわたって前記個体をイメージングするステップを含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記放射性核種が、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記放射性核種が、６８Ｇａである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が、前記放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記キレート化合物が、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはその誘導体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体部分を前記放射性核種で標識することにより前記イメージング剤を調製するステップをさらに含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記非侵襲的イメージング技術が、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記非侵襲的イメージング技術が、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記イメージング剤が、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記イメージングが、前記イメージング剤の前記投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
放射性核種で標識されていない抗体部分を前記イメージング剤の前記投与の前に前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記個体が、固形腫瘍を有する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記個体が、血液悪性疾患を有する、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記個体が、感染性疾患、自己免疫疾患、または代謝疾患を有する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
疾患または状態を有する個体を診断する方法であって、
（ａ）請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法を使用して前記個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定するステップ、および
（ｂ）前記イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には前記個体を前記免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断し、または前記イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には前記個体を前記免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップ
を含む方法。
【請求項３４】
疾患または状態を有する個体を処置する方法であって、
（ａ）請求項３３に記載の方法を使用して前記個体を診断するステップ、および
（ｂ）前記個体が前記免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断された場合、前記免疫チェックポイントリガンドを標的とする治療剤の有効量を前記個体に投与するステップ
を含む方法。
【請求項３５】
前記治療剤が、前記免疫チェックポイントリガンドもしくはその受容体の阻害剤であるか、または前記免疫チェックポイントリガンドもしくはその受容体に特異的に結合する放射性標識分子である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体部分を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項３７】
前記抗体部分が、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、請求項３６に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項３８】
前記抗体部分が、ｓｃＦｖを含む、請求項３６または３７に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項３９】
前記ｓｃＦｖが、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、前記第１の操作されたシステイン残基および前記第２の操作されたシステイン残基が、ジスルフィド結合を形成し、前記アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく、請求項３８に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４０】
前記ｓｃＦｖが、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８または３９に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４１】
前記抗体部分が、ｓｃＦｖである、請求項３８から４０のいずれか一項に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４２】
前記抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、請求項３８から４０のいずれか一項に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４３】
前記Ｆｃ断片が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である、請求項４２に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４４】
前記Ｆｃ断片が、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、前記アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく、請求項４３に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４５】
請求項３６から４４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤中の前記抗体部分と競合的にＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【請求項４６】
放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、前記抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤。
【請求項４７】
前記抗体部分が、放射性核種で標識されている、請求項３６から４４のいずれか一項に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を含むイメージング剤。
【請求項４８】
ＰＤ−Ｌ１を標的とするイメージング剤を調製する方法であって、
（ａ）請求項３６から４４のいずれか一項に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤中の前記抗体部分にキレート化合物をコンジュゲートさせて抗ＰＤ−Ｌ１コンジュゲートを生じさせるステップ、
（ｂ）放射性核種を前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体コンジュゲートと接触させることによって前記イメージング剤を生じさせるステップ
を含む方法。
【請求項４９】
請求項３６から４４のいずれか一項に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤をコードする単離された核酸。
【請求項５０】
（ａ）免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分と、
（ｂ）キレート化合物と
を含むキット。
【請求項５１】
放射性核種をさらに含む、請求項５０に記載のキット。
【請求項５２】
（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、前記抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤と、
（ｂ）放射性核種で標識されていない抗体部分と
を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、これによりその全体があらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年６月１日に出願したＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０８９６７２の優先権の利益を主張するものである。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７９２５７２０００１４１ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年５月２８日、サイズ：６４ＫＢ）。
技術分野
【０００３】
本発明は、抗体、イメージング剤、および免疫チェックポイントリガンドをイメージングする方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
プログラム死（ＰＤ）ネットワークは、次の少なくとも５つの相互作用分子を含む：ＰＤ−１（プログラム細胞死１）、２つのＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２）、およびＰＤ−Ｌ１の２つの阻害性受容体（ＰＤ−１およびＣＤ８０）。感染に対して炎症反応を起こして末梢組織のＴ細胞の活性をモジュレートすることに関するおよび自己免疫を制限することに関するＰＤ経路の重要な機能は、腫瘍細胞によっておよび慢性ウイルス感染中のウイルスによって乗っ取られるように見える。ＰＤ−Ｌ１は、複数の組織に由来する多くの新しく単離したヒト腫瘍上に過剰発現される（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２；  ８：７９３−８００；  Ｒｏｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１５；  ３：１５；  Ｈｉｒａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００５；  ６５：１０８９−１０９６）。ＰＤ−Ｌ１の発現は、ある特定の種類のヒトがんの進行および予後不良と相関関係があることが示されている（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：  ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１５；  ４１：４５０−４５６；  Ｃｉｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ：  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ／  ＥＳＭＯ  ２０１６；  ２７：３００−３０５；  Ｇａｎｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２０１６；  １００：８８−９８；  Ｔｈｉｅｒａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５；  ２５：５０３−５０９；  Ｔａｕｂｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ：  ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１４；  ２０：５０６４−５０７４）。慢性ウイルス感染の間、ＰＤ−Ｌ１は、多くの組織上に持続的に発現され、その一方で、ＰＤ−１は、ウイルス特異的ＣＴＬ上で上方調節される（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６；  １２：２４４−２４６）。腫瘍誘導またはウイルス誘導ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞アネルギー、アポトーシス、消耗、ＩＬ−１０産生、ＤＣ抑制、ならびにＴｒｅｇ誘導および拡大増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を含む、複数の機序を利用して、宿主免疫監視の回避を促進し得る（Ｚｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００８；  ８：４６７−４７７）。
【０００５】
免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して決定されたＰＤ−Ｌ１発現レベルは、黒色腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）、および転移性去勢抵抗性前立腺がん（ｍＣＲＰＣ）を含む、複数のがん型に関するＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１指向療法の臨床試験において予測バイオマーカーとして評価されている。ＩＨＣによって決定されるＰＤ−Ｌ１レベルがより高い患者は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１指向療法による優れた奏効を示すように見えた。しかし、黒色腫を有するＰＤ−Ｌ１陰性患者は、それでも、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法への持続的奏効を得ることはできるものの、ＰＤ−Ｌ１陰性ＮＳＣＬＣ患者における奏効率は、かなり低い。
【０００６】
ヒト腫瘍検体におけるＩＨＣによるＰＤ−Ｌ１検出の精度は、複数の因子による交絡を受ける。２８−８、２２Ｃ３、５Ｈ１、ＭＩＨ１および４０５．９Ａ１１を含む、ＩＨＣ検出用の多数のＰＤ−Ｌ１抗体が利用されている。加えて、Ｖｅｎｔａｎａ  ＳＰ１４２およびＶｅｎｔａｎａ  ＳＰ２６３アッセイなどの、いくつかの独自のコンパニオン診断薬が、この分野で開発されている。これらのアッセイの相対的性能特性は、あまりよく分かっていない。腫瘍微小環境内での異種ＰＤ−Ｌ１発現の既存の問題に加えて、腫瘍試料におけるＩＨＣによる「陽性」ＰＤ−Ｌ１染色の明確な定義も欠けている。陽性結果のカットオフポイントは、染色された腫瘍細胞パーセントに基づいて、＞１％から＞５０％までの範囲であり得る。さらに、ＰＤ−Ｌ１は、２つの小さい親水性領域しか含有しないので、ＩＨＣ検出抗体の結合部位が限られており、このことが、ホルマリンで固定されパラフィンに包埋された（ＦＦＰＥ）検体で古典的に使用される免疫組織化学的手法の効果を下げる。ＰＤ−Ｌ１上の結合部位の不足に起因して、ＩＨＣ抗体は、治療用ＰＤ−Ｌ１抗体と比較してＰＤ−Ｌ１の構造的に特有の部位に概して結合する。
【０００７】
加えて、ＰＤ−Ｌ１は、細胞膜上に発現されたときにのみ、動的ＩＦＮγ発現または構成的癌遺伝子活性化のどちらかによって生物的に活性になる。癌遺伝子駆動ＰＤ−Ｌ１発現は、炎症駆動ＰＤ−Ｌ１発現と比較して、病理組織学的におよび生物学的に明確に異なる実体を示す。後者は、ＩＦＮγ媒介免疫学的攻撃部位で局所的に起こるが、癌遺伝子駆動ＰＤ−Ｌ１発現は、構成的であり、散在する。ＩＦＮγ誘導ＰＤ−Ｌ１発現は、動的バイオマーカーに相当し、活動性炎症の部位に存在し、生検試料は、空間および時間的に腫瘍免疫微小環境のスナップショットを表す。低酸素を含む腫瘍代謝微小環境における他の因子は、ＰＤ−Ｌ１上方調節をもたらすことができ、ＨＩＦ１ａによるシグナル伝達に依存する。より小さい腫瘍生検材料では、適切な腫瘍−免疫境界部（ｔｕｍｏｒ−ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ）が見逃がされることがあり、生体関連ＰＤ−Ｌ１過剰発現が既に起こった後に生検が行われることもある。ＰＤ−Ｌ１自体は、２つの潜在的に臨床的に関連性のある免疫学的シナプス、つまり腫瘍／Ｔ細胞境界部、およびＡＰＣ／Ｔ細胞境界部で発現される。腫瘍／Ｔ細胞境界部については、腫瘍／免疫境界部の生検材料獲得は、黒色腫におけるＩＨＣによるＰＤ−Ｌ１検出の肝要な決定因子である。転移性黒色腫を有する患者におけるＰＤ−Ｌ１発現を評価する研究では、ＰＤ−Ｌ１過剰発現黒色腫の９６％は、リンパ球浸潤（ＴＩＬ）を有したが、ＰＤ−Ｌ１過剰発現の残りの４％は、ＴＩＬを欠いており、これは恐らく癌遺伝子駆動ＰＤ−Ｌ１発現を表していた。加えて、ＰＤ−Ｌ１陰性試料の２２％はＴＩＬを伴い、これは腫瘍免疫干渉の代替機序を示していた。
【０００８】
ＰＤ−Ｌ１発現の大部分は、免疫細胞によるＩＦＮγの分泌に伴って腫瘍境界部で起こる。このことから、ＰＤ−Ｌ１過剰発現が、ＴＩＬによる成功裏の腫瘍殺滅に対する、初期においては防御的応答である可能性があり、これが、時を経るにつれて免疫抑制性腫瘍環境に吸収されてしまうという、反直感的な仮説が導かれる。加えて、ＰＤ−Ｌ１検出のための生検に適切な部位の選択をどのように行うかについては、依然として不明な部分が多い。前処理ＦＦＰＥ原発性腫瘍試料は、最も容易に入手可能であり得るが、これらの試料は、特に暫定の処置が施されていた場合、所与の患者にその時点で存在する全体的な免疫学的状態を反映しない場合がある。生検病変におけるＰＤ−Ｌ１発現の非存在は、全身の免疫学的景観を反映しない場合があり、ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達に依存する他の疾患部位での治療の有益な効果を捉えない場合がある。要するに、正確な代替のＰＤ−Ｌ１検出剤および方法に対する必要性は満たされていない。
本明細書で言及する全ての公表文献、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２；  ８：７９３−８００
【非特許文献２】Ｒｏｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１５；  ３：１５
【非特許文献３】Ｈｉｒａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００５；  ６５：１０８９−１０９６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本出願は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）を特異的に認識する標識された抗体部分を含むイメージング剤、そのイメージング剤を調製する方法、ならびにそのイメージング剤を使用するイメージングおよび診断方法を提供する。
【００１１】
本出願の一態様は、個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を、個体に投与するステップであって、抗体断片が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、ステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、個体における２つまたはそれより多くの免疫チェックポイントリガンドの分布を決定するステップを含む。
【００１２】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、イメージング剤は、血清中で約１０分〜約４８時間（例えば、約２時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、または約８時間〜約２４時間）以内に個体からクリアランスされる。一部の実施形態では、抗体部分の半減期は、約１０分〜約２４時間（例えば、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約１２時間、または約１２時間〜約２４時間）の間である。
【００１３】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分の分子量は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、または約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。
【００１４】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。
【００１５】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、カニクイザルからの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、マウスからの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。
【００１６】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒトのものである。一部の実施形態では、抗体部分は、キメラのものである。
【００１７】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、酸性または中性ｐＨで安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃）の融解温度を有する。
【００１８】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、重鎖可変領域（ＶＨ）、必要に応じたペプチドリンカー、および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。
【００１９】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む；または抗体部分は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と競合的に、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。
【００２０】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、目的の組織は、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイまたは他のアッセイに基づいて免疫チェックポイントリガンドに対して陰性である。一部の実施形態では、目的の組織は、免疫チェックポイントリガンドの低い発現レベルを有する。一部の実施形態では、目的の組織は、免疫細胞の浸潤の際にのみ免疫チェックポイントリガンドを発現する。
【００２１】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。
【００２２】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ｔｒｉｓａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはその誘導体である。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡである。
【００２３】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。
【００２４】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、非侵襲性イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングを含む。
【００２５】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。
【００２６】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後、約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分間〜１時間、約１時間〜２時間、約２時間〜４時間、約４時間〜８時間、または約８時間〜２４時間）の間に行われる。
【００２７】
上記の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、方法は、イメージング剤の投与の前に放射性核種で標識されていない抗体部分を個体に投与するステップをさらに含む。
【００２８】
本明細書に記載の方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、個体は、固形腫瘍を有する。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸腫瘍、黒色腫、腎臓腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、乳房腫瘍、および膵臓腫瘍からなる群から選択される。一部の実施形態では、個体は、血液悪性疾患を有する。一部の実施形態では、血液悪性疾患は、白血病、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、個体は、感染性疾患、自己免疫疾患、または代謝疾患を有する。
【００２９】
本出願の一態様は、疾患または状態を有する個体を診断する方法であって、（ａ）上記の方法のいずれか１つに従う方法を使用して個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定するステップ、および（ｂ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップを含む方法を提供する。
【００３０】
本出願の一態様は、疾患または状態を有する個体を処置する方法であって、（ａ）上記診断方法のいずれか１つに従う方法を使用して個体を診断するステップ、および（ｂ）個体が免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断された場合、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体を標的とする治療剤の有効量を個体に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体の阻害剤である。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体に特異的に結合する放射性標識分子である。免疫チェックポイントリガンドがＰＤ−Ｌ１である、一部の実施形態では、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体が個体に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。
【００３１】
本出願の別の態様は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体部分を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を提供する。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ；および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む。
【００３２】
一部の実施形態では、配列番号１のＨＣ−ＣＤＲ１とＨＣ−ＣＤＲ２とＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ；および配列番号３のＬＣ−ＣＤＲ１とＬＣ−ＣＤＲ２とＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む抗体部分を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が提供される。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％もしくはそれより高い％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％もしくはそれより高い％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｇ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｈ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；または（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００３３】
上記の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒトのものである。一部の実施形態では、抗体部分は、キメラのものである。
【００３４】
上記の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つに従う一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％もしくはそれより高い％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【００３５】
一部の実施形態では、上記の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つに従う抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤中の抗体部分と競合的にＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が提供される。
【００３６】
本出願の別の態様は、放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤を提供する。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、本明細書に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つに従う単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を含むイメージング剤であって、抗体部分が放射性核種で標識されているイメージング剤が、提供される。
【００３７】
本明細書に記載のイメージング剤のいずれか１つに従う一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡである。
【００３８】
本明細書に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つに従う単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤をコードする単離された核酸、単離された核酸を含むベクター、および単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤、単離された核酸またはベクターを含む単離された宿主細胞も、提供される。
【００３９】
本出願の別の態様は、免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分にキレート化合物をコンジュゲートさせて抗体部分コンジュゲートを生じさせるステップ、（ｂ）放射性核種を抗体部分コンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドである。
【００４０】
一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１を標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）上記の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つに従う単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤中の抗体部分にキレート化合物をコンジュゲートさせて抗ＰＤ−Ｌ１コンジュゲートを生じさせるステップ；および（ｂ）放射性核種を抗ＰＤ−Ｌ１抗体コンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法が提供される。
【００４１】
本明細書に記載の調製方法のいずれか１つに従う一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分のリシンにコンジュゲートされる。
【００４２】
（ａ）免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分と（ｂ）キレート化合物とを含むキットが、さらに提供される。一部の実施形態では、キットは、放射性核種をさらに含む。
【００４３】
一部の実施形態では、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤と、（ｂ）放射性核種で標識されていない抗体部分とを含むキットが、提供される。
【００４４】
本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤およびイメージング剤のいずれか１つを含む組成物、キットおよび製造物品も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１−１】図１Ａおよび１Ｂは、ｈＰＤ−Ｌ１タンパク質に対する抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体５Ｂ７の結合親和性を示す。図１Ａは、ｈＰＤ−Ｌ１タンパク質に対する異なる濃度での抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体５Ｂ７の結合親和性を実証するヒストグラムを示す。図１Ｂは、それぞれの濃度での平均蛍光強度を示す。
【図１−２】同上。
【００４６】
【図２−１】図２Ａおよび２Ｂは、ｈＰＤ−Ｌ１タンパク質またはｍＰＤ−Ｌ１タンパク質を発現するＣＨＯ細胞に対する抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の結合親和性を示す。
【図２−２】同上。
【００４７】
【図３】図３は、親マウス抗体と比較してＰＤ−Ｌ１に対するヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体の結合親和性を示す。
【００４８】
【図４】図４は、親マウス抗体と比較してヒト化抗体の結合親和性および動態プロファイルを示す。
【００４９】
【図５】図５は、ｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ（Ｗｔ）およびｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ（Ｍｔ）についての構築物設計の概略図を示す。
【００５０】
【図６】図６は、還元条件と非還元条件両方でのｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ（Ｗｔ）およびｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ（Ｍｔ）についてのＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果を示す。
【００５１】
【図７】図７は、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ（Ｗｔ）およびｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ（Ｍｔ）の結合親和性を親抗体のものと比較して実証するヒストグラムを示す。
【００５２】
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−ＨｕＦｃ融合タンパク質ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＷｔおよびｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｍｔの静脈内注射後の抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体およびｈＩｇＧの血清力価を示す。図８Ａは、抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体の血清力価を示す。図８Ｂは、ｈＩｇＧの血清力価を示す。
【００５３】
【図９】図９は、抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖについての構築物設計の概略図を示す。
【００５４】
【図１０】図１０は、還元条件下と非還元条件下の両方での、ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖについてのＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果を示す。
【００５５】
【図１１】図１１は、ＰＤ−Ｌ１に対する様々な濃度での親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体およびｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の結合親和性を示す。
【００５６】
【図１２】図１２は、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定した場合のｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖの疎水性露出の温度を示す。
【００５７】
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｄは、低温（４℃）および酸性ｐＨ（ｐＨ＝５．５）条件（図１３Ｃおよび１３Ｄ）と比較して高温（４０℃）および高ｐＨ（ｐＨ＝７．４）条件（図１３Ａおよび１３Ｂ）下でのＰＤ−Ｌ１に対する全長抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の結合親和性を示す。
【図１３−２】同上。
【図１３−３】同上。
【図１３−４】同上。
【００５８】
【図１４】図１４は、シリカゲルでのインスタント薄層クロマトグラフィーを使用して測定した６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−ｓｃＦｖの収率を示す。
【００５９】
【図１５】図１５は、シリカゲルでのインスタント薄層クロマトグラフィーを使用して測定した６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−ｓｃＦｖの純度を示す。
【００６０】
【図１６】図１６は、ＭＣ３８細胞と比較してＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞に対する６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−ｓｃＦｖの結合親和性を示す。
【００６１】
【図１７】図１７は、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞への６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの結合に対する様々な濃度での抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１の遮断効果を示す。
【００６２】
【図１８】図１８は、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを使用する、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１およびＭＣ３８細胞の注射により誘導した腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏイメージングを示す。
【００６３】
【図１９】図１９は、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを使用する、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１およびＭＣ３８細胞の注射により誘導した腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏイメージングを示す。
【００６４】
【図２０】図２０は、ＰＤ−Ｌ１への結合についての非標識ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１と６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ間の競合を実証するｉｎ  ｖｉｖｏイメージング結果を示す。
【００６５】
【図２１】図２１は、通常のカメラ感度設定での６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、非標識抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖおよび６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）、ならびに通常のカメラ感度の１／４の設定での６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）の注射の３０分後のマウスにおける腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏイメージングの結果を示す。
【００６６】
【図２２】図２２は、通常のカメラ感度設定での６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、非標識抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖおよび６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）、ならびに通常のカメラ感度の１／４の設定での６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）の注射の１時間後（上のパネル）または２時間後（下のパネル）のマウスにおける腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏイメージングの結果を示す。
【００６７】
【図２３】図２３は、放射性核種をキレート化するためにおよび抗体部分にコンジュゲートするために使用することができる例示的なＮＯＴＡ化合物を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
本出願は、個体における免疫チェックポイントリガンドの検出のためのイメージング剤および方法を提供する。本明細書に記載のイメージング剤は、放射性核種で標識された抗体部分であって、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドなどの免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分を含む。抗体部分（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦｃに融合したｓｃＦｖ）は、小さいサイズ、ならびに血液および正常な臓器からの迅速なクリアランスを特徴とする。一部の実施形態では、抗体部分は、増強された熱安定性を有するように操作される。寿命の短い放射性核種で標識されたそのような抗体部分を含むイメージング剤は、免疫チェックポイントリガンドを発現する罹病組織に対する有効な標的化および透過を可能にする。免疫チェックポイントリガンドの分布および発現レベルを、イメージング剤を投与した個体のｉｎ  ｖｉｖｏライブイメージングにより決定することができる。本発明より前は、バイオマーカーとしてのＰＤ−Ｌ１および他の免疫チェックポイントリガンドに基づく正確な診断は、依然としてがん免疫療法の分野での課題である。
【００６９】
したがって、本出願の一態様は、個体における免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）の分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含み、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤を個体に投与するステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法を提供する。
【００７０】
本出願の別の態様は、放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）に特異的に結合する、イメージング剤を提供する。
【００７１】
本提示の別の態様は、配列番号１のＨＣ−ＣＤＲ１とＨＣ−ＣＤＲ２とＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ；および配列番号３のＬＣ−ＣＤＲ１とＬＣ−ＣＤＲ２とＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を提供する。
【００７２】
本明細書に記載のイメージング剤および抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を含むキットおよび製造物品、それらの製造方法、および疾患または状態（例えば、がん、感染性疾患、自己免疫疾患または代謝疾患）を有する個体を診断または処置する方法も、提供される。
Ｉ．定義
【００７３】
本明細書で使用される場合、「免疫系チェックポイント」または「免疫チェックポイント」は、免疫系における阻害経路であって、一般に、自己寛容を維持するように作用する、または二次的組織損傷を最小にするように生理的免疫応答の期間および大きさをモジュレートする、経路を指す。刺激性チェックポイント分子は、免疫系を刺激するまたは正に調節する、タンパク質などの分子である。阻害性チェックポイント分子は、免疫系を阻害するまたは負に調節する、タンパク質などの分子である。免疫系チェックポイント分子としては、細胞障害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、プログラム細胞死１タンパク質（ＰＤ−１）、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｂ７−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有サプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ならびにＡ２Ａアデノシン受容体（Ａ２ａＲ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
「免疫チェックポイント受容体」は、Ｔ細胞などの免疫細胞上に発現される免疫チェックポイント分子である。
【００７５】
本明細書で使用される場合、用語「免疫チェックポイントリガンド」は、免疫チェックポイント受容体により特異的に認識される、天然に存在するまたは天然に存在しないリガンドを指す。天然に存在する免疫チェックポイントリガンドは、罹病組織、例えば、腫瘍細胞、感染細胞または炎症組織により発現され得る、免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントリガンドを特異的に認識する免疫チェックポイント受容体を発現する免疫細胞を調節することができる。天然に存在しない免疫チェックポイントリガンドは、免疫チェックポイント受容体の治療用阻害剤、リガンドおよび抗体などの、合成および組換え分子を含む。天然に存在しない免疫チェックポイントリガンドを、個体に、例えば個体への投与により、導入することができる。免疫チェックポイントリガンドは、経路内の刺激性チェックポイント受容体の活性を刺激することまたは阻害性チェックポイント受容体の活性を阻害することにより、免疫チェックポイントを阻害することができる。例示的な天然に存在する免疫チェックポイントリガンドとしては、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。「ＰＤ−Ｌ１様リガンド」は、ＰＤ−１の天然に存在するまたは天然に存在しないリガンドを指す。
【００７６】
用語「抗体」は、その最も広い意味で使用され、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、全長抗体および所望の抗原結合活性を示すことを条件にその抗原結合性断片を含む、様々な抗体構造を包含する。用語「抗体部分」は、全長抗体またはその抗原結合性断片を指す。
【００７７】
全長抗体は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」および「ＶＬ」と呼ばれることがある。両方の鎖内の可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ならびにＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高可変性ループを一般に含有する。本明細書で開示される抗体および抗原結合性断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉの規定（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  １９９７；  Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８５；  Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８７；  Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８９；  Ｋａｂａｔ  １９８７；  Ｋａｂａｔ  １９９１）により定義または特定され得る。重鎖または軽鎖の３つのＣＤＲは、これらのＣＤＲより高度に保存され、超可変ループを支持するための足場を形成する、フレームワーク領域（ＦＲ）として公知の隣接するストレッチの間に介在する。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与せず、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づくクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要クラスまたはアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭであり、これらは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμ重鎖の存在を特徴とする。主要抗体クラスのうちのいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などの、サブクラスに分けられる。
【００７８】
本明細書で使用される場合の用語「抗原結合性断片」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つもしくは複数のＣＤＲを含む抗体の部分から形成された多特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む、抗体断片を指す。抗原結合性断片は、親抗体または親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合するのと同じ抗原に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合性断片は、１つまたは複数の異なるヒト抗体からのフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体からの１つまたは複数のＣＤＲを含み得る。
【００７９】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および完全抗原結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが密接に非共有結合的に会合している二量体からなる。これら２つのドメインのフォールディングから、６つの超可変ループ（重鎖および軽鎖から各々３つのループ）が生じ、これらが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりは低い親和性でだが、抗原を認識するおよび抗原に結合する能力がある。
【００８０】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と略記されもする「一本鎖Ｆｖ」は、接続されて単一ポリペプチド鎖になっているＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ｖｏｌ．  １１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ２６９−３１５  （１９９４）を参照されたい。
【００８１】
用語「ダイアボディ」は、Ｖドメインの鎖内でなく鎖間対合が達成され、その結果、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片となるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（例えば、約５〜約１０残基）を通常は有するｓｃＦｖ断片（前の段落を参照されたい）を構築することにより調製される、小さい抗体断片を指す。二特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する、２つの「交差」ｓｃＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：６４４４−６４４８  （１９９３）に、より詳しく記載されている。
【００８２】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチド両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部位を意味するように意図される。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６  （１９７７）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”  （１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７  （１９８７）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２７３：  ９２７−９４８  （１９９７）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２：７３２−７４５  （１９９６）；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ４５：  ３８３２−３８３９  （２００８）；Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２７：  ５５−７７  （２００３）；およびＨｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ３０９：６５７−６７０  （２００１）により記載されており、これらにおける定義は、互いに比較したときのアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それでもやはり、抗体またはグラフト抗体またはそのバリアントのＣＤＲに言及するためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義され使用されるこの用語の範囲内であることが意図される。上に引用された参考文献の各々により定義されているようなＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、下の表１に比較として示されている。ＣＤＲ予測アルゴリズムおよびインターフェースは、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ４５：  ３８３２−３８３９  （２００８）；Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ３８：  Ｄ３０１−Ｄ３０７  （２０１０）；およびＡｄｏｌｆ−Ｂｒｙｆｏｇｌｅ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ４３：  Ｄ４３２−Ｄ４３８  （２０１５）を含めて、当技術分野において公知である。この段落に引用された参考文献の内容は、それら全体が、本発明での使用のために、および本願の１つまたは複数の請求項に含まれることが可能になるために、参照により本明細書に組み込まれる。
表１：  ＣＤＲ定義
【表１】
2021525805.tif 000002
１残基番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）の命名法に従う
２残基番号付けは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）の命名法に従う
３残基番号付けは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）の命名法に従う
４残基番号付けは、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）の命名法に従う
５残基番号付けは、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ（上掲）の命名法に従う
【００８３】
「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるようなアミノ酸位置番号付け」という表現、およびこれらの変形形態は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）における抗体の編成の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用された番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮または可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一アミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによれば残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とその抗体の配列の相同の領域でのアラインメントにより決定され得る。
【００８４】
本明細書で別段の指示がない限り、免疫グロブリン重鎖の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）におけるようなＥＵインデックスの番号付けである。「ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。
【００８５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義のＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００８６】
用語「キメラ抗体」は、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、鎖の残部が、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である抗体を指し、そのような抗体の断片が本発明の生物的活性を示すのであれば、それらも指す（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８１：６８５１−６８５５  （１９８４）を参照されたい）。
【００８７】
抗体または抗体部分に関して用語「半合成」は、抗体または抗体部分が、１つまたは複数の天然に存在する配列、および１つまたは複数の天然に存在しない（すなわち合成）配列を有することを意味する。
【００８８】
非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）からの残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基により置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基により置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことがある。これらの改変は、抗体の性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つの、通常は２つの、可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、通常はヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分も、含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５  （１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９  （１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２：５９３−５９６  （１９９２）を参照されたい。
【００８９】
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する、および／または本明細書で開示のヒト抗体を作製する技術のいずれかを使用して作製された、抗体である。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で公知の様々な技術を使用して、産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７：３８１  （１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１  （１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  ｐ．  ７７  （１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４７（１）：８６−９５  （１９９１）に記載されている方法も利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ５：  ３６８−７４  （２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、内在性遺伝子座が無能にされているが抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物、例えば、免疫ゼノマウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号を参照されたい）に抗原を投与することにより調製することができる。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体に関する、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １０３：３５５７−３５６２  （２００６）も参照されたい。
【００９０】
本明細書で同定されるポリペプチドおよび抗体配列に関して「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」または「相同性」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮して配列をアラインメントした後の、比較されるポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当技術分野における技能の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの、公開されているコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。しかし、本明細書では、アミノ酸同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥ（Ｅｄｇａｒ，  Ｒ．Ｃ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２（５）：１７９２−１７９７，  ２００４；  Ｅｄｇａｒ，  Ｒ．Ｃ．，  ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ５（１）：１１３，  ２００４）を使用して生成される。
【００９１】
「相同（の）」は、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較される配列の両方における位置が、同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットにより占有されているとき、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々における位置がアデニンにより占有されている場合には、それらの分子は、その位置で相同である。２配列間の相同性パーセントは、２つの配列により共有されるマッチするまたは相同な位置の数の関数であって、その数を比較される位置の数で除算し１００を掛けたものである。例えば、２つの配列中の位置の１０カ所のうちの６カ所がマッチしているまたは相同である場合には、２つの配列は６０％相同である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣおよびＴＡＴＧＧＣは、５０％相同性を共有する。一般に、比較は、最大の相同性が得られるように２つの配列がアラインメントされたときに行われる。
【００９２】
用語「定常ドメイン」は、抗原結合部位を含有する免疫グロブリンの他の部分、可変ドメイン、と比較してより多くの保存アミノ酸配列を有する、免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン（まとめて、ＣＨ）と、軽鎖のＣＨＬ（またはＣＬ）ドメインとを含有する。
【００９３】
任意の哺乳動物種から抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」を、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）およびラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプの一方に割り当てることができる。
【００９４】
ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、アミノ酸約１１８からアミノ酸約２１５（ＥＵ番号付けシステム）にわたる。
【００９５】
「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０までのストレッチ領域と定義される（Ｂｕｒｔｏｎ，  Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２：１６１−２０６  （１９８５））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、最初と最後のシステイン残基を配置して同位置に重鎖間Ｓ−Ｓ結合を形成することによりＩｇＧ１配列とアラインメントすることができる。
【００９６】
ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｈ２」ドメインの「Ｃ２」とも呼ばれる）は、通常、アミノ酸約２３１からアミノ酸約３４０にわたる。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合しない点で独特である。もっと正確に言えば、２つのＮ連結分岐炭水化物鎖が、無傷のネイティブＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に介在する。炭水化物がドメイン間対合の代替を提供してＣＨ２ドメインの安定化を支援することができると推測されている。Ｂｕｒｔｏｎ，  Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２：１６１−２０６  （１９８５）。
【００９７】
「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」または「Ｈ３」ドメインとも呼ばれる）は、Ｆｃ領域におけるＣＨ２ドメインのＣ末端側の（すなわち、アミノ酸残基約３４１から、抗体配列の、通常はＩｇＧのアミノ酸残基４４６または４４７にある、Ｃ末端までの）残基のストレッチを含む。
【００９８】
本明細書での用語「Ｆｃ領域」または「結晶性断片領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端に広がるように通常は定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵ番号付けシステムによれば残基４４７）を、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することにより、除去することができる。したがって、無傷抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基がある抗体とない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本明細書に記載の抗体での使用に好適なネイティブ配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。
【００９９】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体は、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシングを受けた形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、それらの細胞質側ドメインが主として異なる類似したアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質側ドメインに免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質側ドメインに免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｍ．  Ｄａｅｏｒｏｎ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５：２０３−２３４  （１９９７）を参照されたい。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：  ４５７−９２  （１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：  ２５−３４  （１９９４）；およびｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｌａｂ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．  １２６：  ３３０−４１  （１９９５）において概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書における用語「ＦｃＲ」に包含される。
【０１００】
本明細書で使用される場合の用語「エピトープ」は、抗体または抗体部分が結合する抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。２つの抗体または抗体部分は、それらが抗原に対する競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープに結合し得る。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、第１の抗体部分と第２の抗体部分は、第１の抗体部分が、等モル濃度の第１の抗体部分の存在下で第２の抗体部分の標的抗原結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）阻害する場合、または逆に、第２の抗体部分が、等モル濃度の第２の抗体部分の存在下で第１の抗体部分の標的抗原結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）阻害する場合、標的抗原への結合について「競合する」。抗体のそれらの交差競合に基づく「ビニング」のためのハイスループットプロセスは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／４８７３１に記載されている。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、および「に特異的である」は、生体分子をはじめとする分子の不均一集団の存在下で標的の存在の決定因となる、標的と抗体または抗体部分との間の結合などの、測定可能な再現性のある相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）を特異的に認識する抗体または抗体部分は、この標的に、他の標的へのその結合よりも大きい親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い期間、結合する、抗体または抗体部分である。一部の実施形態では、無関係の標的への抗体の結合度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により、測定して、標的への抗体の結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１０−５Ｍ、≦１０−６Ｍ、≦１０−７Ｍ、≦１０−８Ｍ、≦１０−９Ｍ、≦１０−１０Ｍ、≦１０−１１Ｍ、または≦１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）を有する。一部の実施形態では、抗体は、異なる種からのタンパク質間で保存されるタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、排他的結合を要求するわけではない。抗体または抗原結合ドメインの結合特異性を当技術分野において公知の方法によって実験により決定することができる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、ＥＩＡ試験、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）試験およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
【０１０３】
「単離された」抗体（または構築物）は、その産生環境（例えば、天然または組換え）の成分から同定、分離および／または回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドには、その産生環境からの他のあらゆる成分が付随していない。
【０１０４】
本明細書に記載の構築物、抗体またはその抗原結合性断片をコードする「単離された」核酸分子は、それが産生された環境に本来付随する少なくとも１つの夾雑核酸分子から同定および分離されている核酸分子である。好ましくは、単離された核酸には、産生環境に関連するあらゆる成分が付随していない。本明細書に記載のポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが自然界で見出される形態または設定のもの以外の形態のものである。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書に記載のポリペプチドおよび抗体をコードする核酸と区別される。単離された核酸は、細胞に含有されている核酸分子であって、その細胞に元々含有されている核酸分子を含むが、この核酸分子は、染色体外に存在するか、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【０１０５】
用語「制御配列」は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。例えば、原核生物に好適である制御配列は、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞がプロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することは公知である。
【０１０６】
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれているとき、「作動可能に連結されている」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質としてそれが発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されており、プロモーターもしくはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響を与える場合、コード配列に作動可能に連結されており、またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結された／されている（ｏｐｅｒａｂｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）」は、連結されているＤＮＡ配列が隣接していること、分泌リーダーの場合は、隣接しており、かつリーディングフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーが隣接している必要はない。連結は、都合のよい制限部位でのライゲーションにより果たされる。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。
【０１０７】
本明細書で使用される場合の用語「ベクター」は、核酸分子であって、その核酸分子が連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子である。この用語は、自己複製核酸構造物としてのベクター、および導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれるベクターを含む。ある特定のベクターは、それらのベクターが動作可能に連結されている核酸の発現を指令することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
【０１０８】
本明細書で使用される場合の用語「トランスフェクトされた／される（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ）」または「形質転換された／される（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）」または「形質導入された／される（ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ）」は、外来性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外来性核酸でトランスフェクトされた細胞、外来性核酸で形質転換された細胞、または外来性核酸で形質導入された細胞である。細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。
【０１０９】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞系」および「宿主細胞培養物」は、同義的に使用され、外来性核酸が導入された細胞を、そのような細胞の子孫を含めて、含む。宿主細胞は、「形質転換体」および「形質転換細胞」を含み、これらには、初代形質転換細胞、および継代数を問わずそれらに由来する子孫が含まれる。子孫は、核酸含有量の点で親細胞と完全に同一でないことがあり、変異を含有することもある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたのと同じ機能または生物的活性を有する変異体子孫が、本明細書に含まれる。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るための手法である。本発明の目的に関して、有益なまたは所望の臨床結果は、次のうちの１つまたは複数を含むが、これらに限定されない：疾患の結果として生じる１つもしくは複数の症状を緩和すること、疾患の程度を低下させること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を予防することもしくは遅延させること）、疾患の拡大（例えば、転移）を予防もしくは遅延させること、疾患の再発を予防することもしくは遅延させること、疾患の進行を遅延させることもしくは緩徐化すること、病状を改善すること、疾患の寛解（部分的もしくは完全）をもたらすこと、疾患を処置するために必要な１つもしくは複数の他の薬物の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を高めるもしくは向上させること、体重増加を増大させること、および／または生存期間を延長すること。がんの病理学的帰結（例えば、腫瘍体積など）の低減も、「処置」に包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のいずれか１つまたは複数を企図している。
【０１１１】
用語「有効量」は、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分である薬剤の量を指す。この用語は、本明細書に記載のイメージング方法のいずれか１つにより検出のための画像を生じさせる用量にも当てはまる。具体的な用量は、選択される特定の薬剤、従うべき投与レジメン、他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、イメージングされる組織、およびそれが運ばれる物理的送達系、のうちの１つまたは複数に依存して変わり得る。
【０１１２】
用語「対象」、「個体」および「患者」は、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、齧歯類または霊長類を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指すために本明細書では同義的に使用される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０１１３】
本明細書に記載の本発明の実施形態が、実施形態「からなること」および／または「から本質的になること」を含むことは理解される。
【０１１４】
本明細書での「約」ある値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体に関する変形形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」についての記載を含む。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、ある値またはパラメーター「でない」への言及は、ある値またはパラメーター「以外」を一般に意味し、記載する。例えば、方法がＸ型のがんを処置するために使用されないことは、方法がＸ以外の型のがんを処置するために使用されることを意味する。
【０１１６】
本明細書で使用される用語「約Ｘ〜Ｙ」は、「約Ｘ〜約Ｙ」と同じ意味を有する。
【０１１７】
本明細書でおよび添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「または（ｏｒ）」および「前記（ｔｈｅ）」は、文脈による別段の明白な指図がない限り、複数の指示対象を含む。
ＩＩ．イメージング方法
【０１１８】
本出願の一態様は、放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を使用して個体における免疫チェックポイントリガンドの分布および／または発現レベルを決定する方法であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合するものである方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、個体における２つまたはそれより多くの免疫チェックポイントリガンドの分布および／または発現レベルの決定を含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を個体に投与するステップであって、抗体断片が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合するものであるステップ；および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。
【０１２０】
一部の実施形態では、個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識されたｓｃＦｖを含むイメージング剤を個体に投与するステップであって、ｓｃＦｖが免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合するものであるステップ；および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｓｃＦｖを放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていないｓｃＦｖをイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化されている。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、約５５〜７０℃（���えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０１２１】
一部の実施形態では、個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を個体に投与するステップであって、抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖであり、この抗体断片が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合するものであるステップ；および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している���一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０１２２】
一部の実施形態では、個体におけるＰＤ−Ｌ１の分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ）を含むイメージング剤を、個体に投与するステップであって、抗体断片がＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、ステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜約２時間、約１時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、または約１２時間〜約２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の���施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、Ｆｃに融合したｓｃＦｖである。
【０１２３】
一部の実施形態では、個体におけるＰＤ−Ｌ１様リガンドの分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ）を含むイメージング剤を、個体に投与するステップであって、抗体断片がＰＤ−Ｌ１様リガンドに特異的に結合する、ステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１様リガンドは、ＰＤ−１の天然に存在するリガンドである。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１様リガンドは、ＰＤ−１の天然に存在しないリガンドであり、ＰＤ−Ｌ１様リガンドが個体に投与された。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１様リガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａ、もしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分（ａｎｔｉ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｉｅｔｙ）は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、Ｆｃに融合したｓｃＦｖである。
【０１２４】
一部の実施形態では、個体におけるＰＤ−Ｌ１の分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤を個体に投与するステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含み、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０１２５】
一部の実施形態では、個体におけるＰＤ−Ｌ１の分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含むイメージング剤を個体に投与するステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含み、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖが、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、��１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０１２６】
一部の実施形態では、個体におけるＰＤ−Ｌ１の分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤を個体に投与するステップ、および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含み、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、Ｆｃ断片に融合した抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含み、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖが、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分��、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０１２７】
本明細書に記載の方法を使用して、個体におけるまたは個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）の分布を決定することができる。方法は、個体の１つまたは複数の組織または臓器における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルに関する質的または量的情報も提供することができる。加えて、本明細書に記載の方法は、ある期間にわたって個体のイメージングを、例えば、個体へのイメージング剤の投与後の異なる時点でのイメージング結果の複数のセットを提供することにより、可能にすることができる。一部の実施形態では、イメージングは、約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜１時間、約１時間〜２時間、約２時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、約１２時間〜２４時間、約１時間〜４時間、または約１時間〜８時間のいずれか１つ）の間の期間にわたって、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれより多くの回数が行われる。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に、例えば、約１０分〜１時間、約１時間〜２時間、約２時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、約１２時間〜２４時間、約１時間〜４時間、または約１時間〜８時間のいずれか１つの間に行われる。
【０１２８】
標識されたポリペプチドを使用してイメージングする方法は、当技術分野において周知であり、本明細書で開示されるイメージング剤を用いて任意のそのような公知の方法を使用することができる。例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  （ｅｄ．），  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９８８），  Ｃｈａｓｅ，  ”Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ，”  ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ６２４−６５２  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  １９９０）、およびＢｒｏｗｎ，  ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２７−４９，  Ｐｅｚｚｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａｌｌ  １９９３）を参照されたい。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、陽電子放出核種（ＰＥＴ同位体）、例えば約５１１ｋｅＶのエネルギーを有するもの、例えば、１８Ｆ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、および１２４Ｉを使用する。そのような放射性核種を周知のＰＥＴスキャン技術によりイメージングすることができる。参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，９５３，５６７号、同第９，８８４，１３１号、および国際特許出願番号ＷＯ２０１６１４９１８８Ａ１、ならびにＫｉｍ  ＨＹ．  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１８）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  １３（３）：  ｅ０１９２８２１も参照されたい。
【０１２９】
一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、ＳＰＥＣまたはＰＥＴイメージングは、イメージング剤からのシグナルに基づくこともありまたは基づかないこともある１つまたは複数の他の非侵襲的イメージング方法と組み合わせられる。例えば、ＰＥＴを、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）イメージング、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングと組み合わせることができる。
【０１３０】
本明細書に記載のイメージング方法は、低い、中等度のまたは高い発現レベルの免疫チェックポイントリガンドの検出に好適である。一部の実施形態では、イメージング方法は、免疫チェックポイントリガンドの発現レベルおよび分布に関する動的情報を提供する。一部の実施形態では、イメージング方法は、免疫組織化学（ＩＨＣ）などの他の検出方法には困難であり得る状況で免疫チェックポイントリガンドを検出することができる。例えば、一部の実施形態では、目的の組織は、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイまたは他のアッセイに基づいて免疫チェックポイントリガンドに対して陰性である。免疫チェックポイントリガンドの存在または非存在の検出に使用することができる分子アッセイとしては、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくアッセイ、次世代シークエンシング（ＮＧＳ）アッセイ、ハイブリダイゼーションアッセイ、およびＥＬＩＳＡが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、目的の組織は、免疫チェックポイントリガンドの低い発現レベルを有する。一部の実施形態では、目的の組織は、免疫細胞の浸潤の際にのみ免疫チェックポイントリガンドを発現する。
【０１３１】
イメージング剤は、任意の好適な投与量および投与経路を使用して個体に投与することができる。投与経路は、ある期間にわたっての好適な方式での単回または複数回の大量瞬時投与または注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、関節内、腫瘍内または経口経路による注射または注入による、公知の、受け入れられている方法に従うものである。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技能の範囲内である。動物実験は、ヒトへの診断的適用のための有効用量を決定するための信頼性のある指針を与える。有効用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，  Ｗ．  ”Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”  Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ，  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，  ｐｐ．  ４２−４６により定められた原則に従って行うことができる。
診断および処置
【０１３２】
本明細書に記載の方法は、異常免疫応答に関連する様々な疾患および状態の処置のための診断におよびコンパニオン診断方法として有用である。一部の実施形態では、疾患または状態は、免疫不全に関連する。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染性疾患、自己免疫疾患、または代謝疾患である。
【０１３３】
一部の実施形態では、疾患または状態を有する個体を診断する方法であって、（ａ）本明細書に記載の免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法のいずれか１つを使用して個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定するステップ、および（ｂ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染症、自己免疫疾患、または代謝疾患である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。
【０１３４】
一部の実施形態では、疾患または状態を有する個体を診断する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を、個体に投与するステップであって、抗体断片が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、ステップ、（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップ、および（ｃ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染症、自己免疫疾患、または代謝疾患である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片（例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に融合したｓｃＦｖである。
【０１３５】
一部の実施形態では、疾患または状態を有する個体を診断する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤を個体に投与するステップ、（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップ、および（ｃ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体をＰＤ−Ｌ１に対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップを含み、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染症、自己免疫疾患、または代謝疾患である。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片（例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に融合したｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
【０１３６】
一部の実施形態では、疾患または状態を有する個体を処置する方法であって、（ａ）本明細書に記載の任意の診断方法を使用して個体を診断するステップ、および（ｂ）個体が免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断された場合、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体を標的とする治療剤の有効量を個体に投与するステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体の阻害剤である。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体に特異的に結合する放射性標識分子である。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染症、自己免疫疾患、または代謝疾患である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。
【０１３７】
一部の実施形態では、疾患または状態を有する個体を処置する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を、個体に投与するステップであって、抗体断片が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、ステップ、（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップ、（ｃ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップ、および（ｄ）個体が免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断された場合、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体を標的とする治療剤（例えば、免疫チェックポイントリガンドもしくはその受容体の阻害剤、または免疫チェックポイントリガンドもしくはその受容体に特異的に結合する放射性標識分子）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染症、自己免疫疾患、または代謝疾患である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片（例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に融合したｓｃＦｖである。
【０１３８】
一部の実施形態では、疾患または状態を有する個体を処置する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤を個体に投与するステップ、（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップ、（ｃ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体をＰＤ−Ｌ１に対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップ、および（ｄ）個体がＰＤ−Ｌ１に対して陽性と診断された場合、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１を標的とする治療剤（例えば、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは抗ＰＤ−１抗体、またはＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−１に特異的に結合する放射性標識分子）の有効量を個体に投与するステップを含み、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の目的の組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む。一部の実施形態では、非侵襲的イメージング技術は、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングをさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される。一部の実施形態では、イメージングは、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる。一部の実施形態では、方法は、ラジオアイソトープで標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、疾患または状態は、がん、感染症、自己免疫疾患、または代謝疾患である。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片（例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に融合したｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
【０１３９】
一部の実施形態では、個体は、がんを有する。がんは、非固形腫瘍（例えば、血液腫瘍、例えば白血病およびリンパ腫）を含むこともあり、または固形腫瘍を含むこともある。本明細書に記載の方法を使用して診断することができる例示的ながんとしては、癌、芽腫および肉腫、ならびにある特定の白血病またはリンパ性悪性疾患、良性および悪性腫瘍、ならびに悪性病変、例えば肉腫、癌および黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。成人腫瘍／がんおよび小児腫瘍／がんも含まれる。本明細書で論じられる固形または血液がんとしては、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、肉腫および癌、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、子宮サクロノーマ滑膜腫（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｓａｃｒｏｎｏｍａｓｙｎｏｖｉｏｍａ）、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、および黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４０】
本明細書に記載の方法は、米国がん合同委員会（ＡＪＣＣ）ステージ分類群に従って、ステージ、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶを含む、全てのステージの固形または血液がんに適用可能である。一部の実施形態では、固形または血液がんは、早期がん、非転移性がん、原発性がん、進行がん、局所進行がん、転移性がん、または寛解期のがんである。
【０１４１】
一部の実施形態では、個体は、血液がんを有する。本明細書に記載の方法を使用して診断することができる例示的な血液がんとしては、白血病、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
一部の実施形態では、個体は、固形腫瘍を有する。本明細書に記載の方法を使用して診断することができる例示的な固形腫瘍としては、結腸腫瘍、黒色腫、腎臓腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、乳房腫瘍、および膵臓腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
がんの処置は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量または体積縮小、無増悪期間、生存期間、無増悪生存期間、全奏効率、奏効期間、生活の質、タンパク質発現および／または活性により、評価することができる。例えば、放射線イメージングによる応答の測定を含む、治療の有効性を決定する手法を、利用することができる。
【０１４４】
一部の実施形態では、個体は、感染性疾患を有する。感染症は、ウイルス、細菌、原生動物または寄生虫により引き起こされ得る。例示的な病原体としては、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｎａｐｌａｓｍａ属、Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂａｂｅｓｉａ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、ＢＫウイルス、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｐ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ科、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａおよび他のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ科、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、ＣＪＤプリオン、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ、コロナウイルス、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３およびＤＥＮ−４）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ属、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ属、エンテロウイルス、主としてコクサッキーＡウイルスおよびエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１およびＯ１０４：Ｈ４、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａおよびＦａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、ＦＦＩプリオン、Ｆｉｌａｒｉｏｉｄｅａスーパーファミリー、フラビウイルス、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌ���  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｓｐｐ、ＧＳＳプリオン、グアナリトウイルス、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルス、ニパウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ｈｏｒｔａｅａ  ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６型（ＨＨＶ−６）およびヒトヘルペスウイルス７型（ＨＨＶ−７）、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、クールー病プリオン、ラッサウイルス、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マチュポウイルス、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｐｐ、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ  ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ  ｐｈｙｌｕｍ、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、流行性耳下腺炎ウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅおよびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｐ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科（インフルエンザ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｓｐｐ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、パルボウイルスＢ１９、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ属、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ、ライノウイルス、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ａｋａｒｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、��疹ウイルス、サビアウイルス、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ、ＳＡＲＳコロナウイルス、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、シンノンブレウイルス、ハンタウイルス、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｔａｅｎｉａ属、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ  ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、Ｖａｒｉｏｌａ  ｍａｊｏｒまたはＶａｒｉｏｌａ  ｍｉｎｏｒ、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、黄熱病ウイルス、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、ならびにＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
一部の実施形態では、個体は、自己免疫疾患を有する。例示的な自己免疫疾患としては、ベーチェット病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症（全身性強皮症および進行性全身性強皮症）、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈周囲炎（結節性多発動脈炎および顕微鏡的多発血管炎）、大動脈炎症候群（高安動脈炎）、悪性関節リウマチ、関節リウマチ、ウェゲナー肉芽腫症（Ｗｅｇｎｅｒ’ｓ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、成人発症スチル病、アレルギー性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、側頭動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症症候群、抗リン脂質抗体症候群、好酸球性筋膜炎、ＩｇＧ４関連疾患（例えば、原発性硬化性胆管炎および自己免疫性膵炎）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、大動脈炎症候群、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、グレーブス病（甲状腺機能亢進症）、橋本甲状腺炎、自己免疫性副腎不全、原発性甲状腺機能低下症、特発性アジソン病（慢性副腎不全）、Ｉ型糖尿病、慢性円板状エリテマトーデス、限局性強皮症、乾癬、乾癬性関節炎、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、白斑、原田病、自己免疫性視神経症、特発性無精子症、習慣性胎児死亡、および炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４６】
一部の実施形態では、個体は、異常免疫応答に関連する代謝疾患を有する。例示的な代謝疾患としては、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、および全身性エリテマトーデスが挙げられるが、これらに限定されない。
ＩＩＩ．イメージング剤
【０１４７】
本出願の一態様は、放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤を提供する。このセクションで説明されるイメージング剤のいずれか１つを、本明細書に記載の、免疫チェックポイントリガンドの分布および／もしくは発現レベルを決定する方法、または診断もしくは処置方法において使用することができる。
【０１４８】
一部の実施形態では、放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。
【０１４９】
一部の実施形態では、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。
【０１５０】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体部分は、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングに適している、身体からの速いクリアランス速度に好適な血清中での半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約２４時間、約２０時間、約１６時間、１２時間、約８時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分以下またはそれ未満のいずれか１つの血清中での半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、例えば、約１０分〜約３０分、約３０分〜約１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、約１２時間〜約１６時間、約１６時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約１０分〜約２時間、約１時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、または約１２時間〜約２４時間のいずれか１つを含む、約１０分〜約２４時間の血清中での半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約４８時間、約３６時間、約３０時間、約２４時間、約２０時間、約１６時間、約１２時間、約８時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分以下またはそれ未満のいずれか１つで身体からクリアランスされる。一部の実施形態では、抗体部分は、例えば、約１０分〜約３０分、約３０分〜約１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、約１２時間〜約１６時間、約１６時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３６時間、約３６時間〜約４８時間、約１０分〜約２時間、約１時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、または約１２時間〜約４８時間のいずれか１つを含む、約１０分〜約４８時間の間に身体からクリアランスされる。
【０１５１】
一部の実施形態では、抗体部分は、身体からのその迅速なクリアランスを可能にする低い分子量を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約４０ｋＤａまたは約３０ｋＤａ以下のいずれか１つの分子量を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１５ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約８０ｋＤａ〜約１２０ｋＤａ、または約１５ｋＤａ〜約１２０ｋＤａの分子量を有する。例えば、ｓｃＦｖは、約２７ｋＤａの分子量を有し、Ｆｃは、約２６ｋＤａの分子量を有し、ｓｃＦｖ−Ｆｃは、約８０ｋＤａの分子量を有する。
【０１５２】
一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドに対する好適な親和性を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１０−８Ｍ、約９×１０−９Ｍ、約８×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ、約２×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ、または約９×１０−１０Ｍのいずれか１つより強い、免疫チェックポイントリガンドに対するＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約９×１０−１０Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約２×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ、約８×１０−９Ｍ、約９×１０−９Ｍ、または約１０−８Ｍのいずれか１つより弱い、免疫チェックポイントリガンドに対するＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約９×１０−１０Ｍ〜１×１０−８Ｍ、約９×１０−１０Ｍ〜１×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ〜２×１０−９Ｍ、約２×１０−９Ｍ〜３×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ〜４×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ〜５×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ〜６×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ〜７×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ〜８×１０−９Ｍ、約８×１０−９Ｍ〜９×１０−９Ｍ、約９×１０−９Ｍ〜１×１０−８Ｍ、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８のいずれか１つである、免疫チェックポイントリガンドに対するＫＤを有する。
【０１５３】
一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨまたは中性ｐＨで安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約７．０、６．９、６．８、６．７、６．６、６．５、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８、５．７、５．６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５．０または５．０未満よりも低いｐＨで安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、少なくとも約４時間、少なくとも約６時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、または約７日より長い日数のいずれか１つにわたって、酸性ｐＨまたは中性ｐＨで安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、塩基性ｐＨで、例えば、約７．０、７．５、８．０、８．５または８．５より高いｐＨよりも高いｐＨで、安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、塩基性ｐＨで、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約３日、少なくとも約５日、少なくとも約７日、または約７日より長い日数のいずれか１つにわたって、安定している。安定性は、対応するｐＨを有する緩衝液中である期間（例えば、１２時間、２４時間、またはそれより長い時間）にわたってイメージング剤または抗体部分をインキュベートすること、および、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、動的光散乱、クロマトグラフィー、ＮＭＲなどを含む当技術分野において公知の方法を使用してイメージング剤または抗体部分の完全性を評価することにより、測定することができる。
【０１５４】
一部の実施形態では、抗体部分は、高温で、例えば、室温または生理的温度で、安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、少なくとも約５０℃、少なくとも約５５℃、少なくとも約６０℃、少なくとも約６１℃、少なくとも約６２℃、少なくとも約６３℃、少なくとも約６４℃、少なくとも約６５℃、少なくとも約６６℃、少なくとも約６７℃、少なくとも約６８℃、少なくとも約６９℃、少なくとも約７０℃、または約７０℃より高い温度のいずれか１つの融解温度を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、例えば、約５５℃〜６０℃、約６０℃〜６５℃、約５０℃〜６５℃、約６４℃〜６８℃、または約６５℃〜７０℃のいずれか１つを含む、約５５℃〜７０℃の融解温度を有する。抗体部分の融解温度は、例えば示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）を含む、当技術分野において公知の方法を使用して測定することができる。
［０１００］
一部の実施形態では、抗体部分は、抗体部分の融解温度を上昇させるように、または抗体部分の安定性を増大させるように、１つまたは複数のジスルフィド結合で操作される。抗体部分がｓｃＦｖを含む一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。ｓｃＦｖの構造および配列に基づいて好適な位置にあるＶＨのシステインおよびＶＬのシステインを操作することにより、他の操作されたジスルフィド結合をｓｃＦｖに導入することができる。
【０１５５】
企図される抗体部分は、ヒト化抗体、部分的ヒト化抗体、完全ヒト化抗体、半合成抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ならびに本明細書で、例えば「抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤」セクションで、論じられる重鎖および／または軽鎖ＣＤＲを含む抗体を含むが、これらに限定されない。
【０１５６】
一部の実施形態では、抗体部分は、ヒトからの免疫チェックポイントリガンドを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗体部分は、２つまたはそれより多くの種からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。モデル動物およびヒトとの抗体部分の交差反応性は、イメージング剤の臨床研究を促進する。一部の実施形態では、抗体部分は、哺乳動物などの非ヒト動物からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、マウスまたはラットなどの齧歯類からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、カニクイザルなどの非ヒト霊長類からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。
【０１５７】
一部の実施形態では、抗体部分は、抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗体部分は、全長抗体である。好適な抗体部分としては、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、ＶＨＨ、およびこれらのＦｃ融合体が挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。本明細書に記載のイメージング剤に好適である抗体断片およびバリアントは、セクション「抗体部分」でさらに説明される。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである。
【０１５８】
したがって、一部の実施形態では、放射性核種で標識されたｓｃＦｖを含むイメージング剤であって、ｓｃＦｖが免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化されている。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０１５９】
一部の実施形態では、放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合し、抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位��は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０１６０】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するキレート化合物（例えば、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体）にコンジュゲートされている抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合し、抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するＮＯＴＡにコンジュゲートされている抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。
【０１６１】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するキレート化合物（例えば、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体）にコンジュゲートされているｓｃＦｖを含むイメージング剤であって、ｓｃＦｖが免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するＮＯＴＡにコンジュゲートされているｓｃＦｖを含むイメージング剤であって、ｓｃＦｖが免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化されている。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。
【０１６２】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するＮＯＴＡにコンジュゲートされている抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合し、抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、ガレクチン−９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。
【０１６３】
一部の実施形態では、放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分がＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、血清中で約１０分〜約２４時間（例えば、約１０分〜２時間、約１時間〜４時間、約４時間〜８時間、約８時間〜１２時間、または約１２時間〜２４時間のいずれか１つ）の半減期を有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、約１２０ｋＤａ以下（例えば、約３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、８０ｋＤａもしくは１００ｋＤａ以下、または約３０〜５０ｋＤａ、約５０〜１００ｋＤａ、もしくは約３０〜８０ｋＤａのいずれか１つ）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍ（例えば、約９×１０−１０〜１×１０−９、約１×１０−９〜２×１０−９、約２×１０−１０〜５×１０−９、または約５×１０−１０〜１×１０−８）の間のＫＤを有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラットまたはサル）からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、酸性ｐＨで（例えば、約６．５、６．０、５．５または５．０より低いｐＨで）安定している。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、約５５〜７０℃（例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つ）の融解温度（Ｔｍ）を有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、Ｆｃに融合したｓｃＦｖである。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、「抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤」セクションで詳細に論じられる。
放射性核種
【０１６４】
本明細書に記載のイメージング剤は、標識を含む。診断のために、標識は、放射性核種、放射線造影剤、常磁性イオン、金属、蛍光標識、化学発光標識、超音波造影剤および光活性剤であり得る。そのような診断用標識は、周知であり、任意のそのような公知の標識を使用することができる。
【０１６５】
一部の実施形態では、イメージング剤は、放射性核種を含む。「放射性核種」は、「放射性同位体」または「ラジオアイソトープ」と呼ばれることが多い。本明細書に記載の抗体部分に結合させることができる例示的な放射性核種または安定な同位体としては、１１０Ｉｎ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、９４ｍＴｃ、９４Ｔｃ、９９ｍＴｃ、１２０Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１５４〜１５８Ｇｄ、３２Ｐ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、５１Ｍｎ、５２ｍＭｎ、５５Ｃｏ、７２Ａｓ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、８２ｍＲｂ、８３Ｓｒ、または他のガンマ放射体、ベータ放射体もしくは陽電子放射体が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。
【０１６６】
有用な常磁性イオンとしては、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）またはエルビウム（ＩＩＩ）を挙げることができる。金属造影剤としては、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）またはビスマス（ＩＩＩ）を挙げることができる。放射線不透過性診断剤は、化合物、バリウム化合物、ガリウム化合物、およびタリウム化合物から選択することができる。多種多様な蛍光標識が、当技術分野において公知であり、それらは、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン（ｐｈｙｃｏｅ１ｙｔｈｅｒｉｎ）、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド（ｏｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）およびフルオレスカミンを、これらに限定されないが、含む。有用な化学発光標識としては、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩またはシュウ酸エステルを挙げることができる。
【０１６７】
放射免疫検出（ＲＡＩＤ）は、臨床的に有用な分野としてこの３５年の間に浮上してきた。ＲＡＩＤを使用するほぼ１０００件の臨床試験がこの期間に行われており、いくつかの明確かつ重要な発見があった。従来のイメージングにより「不顕性」と思われた病変を検出するこの技術のより大きな能力は、抗体、腫瘍または放射性核種の種類にかかわらず、初期研究においても認識され、研究により繰り返し確認されてきた。
【０１６８】
６８Ｇａ、９９Ｔｃ、６４Ｃｕおよび１８Ｆなどの多くの放射性核種は、一般に好まれる良好なイメージング剤である。それらは、安全なイメージングにとって理想的であるガンマまたはベータエネルギーを通常は有し、安価であり、容易に利用可能であり、発生装置により生成され、無担体である。それらの短い半減期（６時間未満）により、それらを初期イメージング研究のための抗体断片とのカップリングに役立てやすい。
【０１６９】
一部の実施形態では、イメージング剤は、放射性核種をキレート化するキレート化合物を含む。一部の実施形態では、キレート化合物は、放射性金属をキレート化する。一部の実施形態では、キレート化合物は、金属１８Ｆをキレート化する。一部の実施形態では、キレート化合物は、金属イオンに結合することおよび迅速なｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスを確実にするのに役立つことができる、親水性キレート化合物である。好適なキレート化合物をそれらの特定の金属結合特性について選択することができ、公知の化学的架橋技術による置換、または側鎖反応性基を有するキレート剤（例えば、二官能性キレート化合物）の使用による置換を、通例の実験のみで行うことができる。
【０１７０】
特に有用な金属−キレート化合物の組合せとしては、放射性イメージングのために、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、１８Ｆ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９Ｔｃ、９４Ｔｃ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７６Ｂｒなどの、６０〜４０００ｋｅＶの一般エネルギー範囲の診断用同位体とともに使用される、２−ベンジル−ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）ならびにそのモノメチルおよびシクロへキシル類似体が挙げられる。同じキレート化合物は、マンガン、鉄およびガドリニウムなどの非放射性金属と錯化した場合、ＭＲＩに有用である。ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸）、ＴＥＴＡ（ブロモアセトアミド−ベンジル−テトラエチルアミン四酢酸）およびＮＥＴＡ（｛４−［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−エチル］−７−カルボキシメチル−［１，４，７］トリアゾナン−１−イル｝−酢酸）などの、大環状キレート化合物は、ガリウム、イットリウムおよび銅などの様々な診断用放射性金属との使用に有用である。そのような金属キレート錯体を、目的の金属に環のサイズを合わせることによって非常に安定したものにすることができる。ＮＯＴＡなどの大環状の環構造に結合した基を変えることにより、種々の金属および／または放射性核種に対する結合特性および親和性を変化させることができること、したがって、例えばＮＯＴＡの、そのような誘導体または類似体を、本明細書で論じられる金属または放射性核種のいずれかに結合するように設計することができることは、当業者には理解される。
【０１７１】
リガンドが、カルボン酸基またはアミン基などの硬い塩基キレート官能基を含む場合、ＤＴＰＡおよびＤＯＴＡ型キレート剤は、硬い酸カチオン、特にＩＩａ族およびＩＩＩａ族金属カチオンをキレート化するのに最も有効である。そのような金属−キレート錯体を、目的の金属に環のサイズを合わせることによって、非常に安定したものにすることができる。大環状ポリエーテルなどの他の環型キレート剤は、核種に安定的に結合するため興味深い。ポルフィリンキレート剤は、非常に多くの金属錯体に関して使用することができる。１つより多くの種類のキレート剤をペプチドにコンジュゲートさせて複数の金属イオンに結合させることができる。米国特許第５，７５３，２０６号において開示されているものなどのキレート剤、特に、チオセミカルバゾニルグリオキシルシステイン（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ）およびチオセミカルバジニル−アセチルシステイン（Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ）キレート剤は、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉなどの軟らかい酸カチオンと、軟らかい塩基リガンドに堅く結合している他の遷移金属、ランタニドおよびアクチニドとを結合させるために有利に使用される。ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡなどのような他の硬い酸キレート剤でＤＴＰＡおよび／またはＴｓｃｇＣｙｓ基を置換することができる。
【０１７２】
一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分にコンジュゲートさせることができる官能基を含む。一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分の第一級アミン（−ＮＨ２）基と反応性である官能基を含む。第一級アミンは、各ポリペプチド鎖のＮ末端に、およびリシン（Ｌｙｓ）アミノ酸残基の側鎖内に存在する。抗体部分の第一級アミン、例えばリシン側鎖、にコンジュゲートさせることができる例示的な官能基としては、イソチオシアン酸、イソシアン酸、アシルアジド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、塩化スルホニル、アルデヒド、グリオキサール、エポキシド、オキシラン、炭酸、アリールハライド、イミドエステル、カルボジイミド、無水物、およびフルオロフェニルエステルが挙げられるが、これらに限定されない。これらの官能基のほとんどが、アシル化またはアルキル化のどちらかによりアミンにコンジュゲートする。
【０１７３】
一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分のシステイン側鎖（すなわち、スルフヒドリル基）と反応性である、官能基を含む。例示的なスルフヒドリル反応性基としては、ハロアセチル、マレイミド、アジリジン、アクリロイル、アリール化剤、ビニルスルホン、ピリジルジスルフィド、ＴＮＢ−チオールおよびジスルフィド還元剤が挙げられるが、これらに限定されない。これらの基のほとんどが、アルキル化（通常は、チオエーテル結合の形成）またはジスルフィド交換（ジスルフィド結合の形成）のどちらかによりスルフヒドリルにコンジュゲートする。
【０１７４】
一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ誘導体を含む、ＮＯＴＡである。抗体部分への、例えば、リシンおよびシステインなどのアミノ酸側鎖による、コンジュゲーションに好適な官能基を有する例示的なＮＯＴＡ化合物は、図２３に示されている。一部の実施形態では、イメージング剤は、抗体部分にコンジュゲートされているＮＯＴＡを含む。一部の実施形態では、ＮＯＴＡ化合物は、イソチオシアン酸（−ＳＣＮ）基を含む。一部の実施形態では、ＮＯＴＡ化合物は、ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＮＯＴＡである。一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分内のリシン残基にコンジュゲートされているＮＯＴＡを含み、ＮＯＴＡは、６８Ｇａをキレート化する。一部の実施形態では、ＮＯＴＡ化合物は、６８Ｇａ、または１８Ｆ−金属などの、放射性金属で先ず標識され、次いで抗体部分にコンジュゲートされる。
ＩＶ．抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤
【０１７５】
本出願の一態様は、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤および抗ＰＤ−Ｌ１イメージング剤を提供する。単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤は、非標識であることもあり、放射性核種で標識されていることもある。本明細書に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤は、抗ＰＤ−Ｌ１治療剤を包含しない。
【０１７６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分のいずれか１つを含む単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、Ｆｃ断片（例えば、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片）に融合したｓｃＦｖである。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０１７７】
一部の実施形態では、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。
【０１７８】
一部の実施形態では、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
【０１７９】
一部の実施形態では、Ｆｃ断片に融合した抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含む単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖが、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分
【０１８０】
本明細書に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体部分を含む。企図される抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、抗ＰＤ−Ｌ１  Ｆａｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃに融合した抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ）を含む。本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化抗体、部分的ヒト化抗体、完全ヒト化抗体、半合成抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ならびに本明細書で論じられる重鎖および／または軽鎖ＣＤＲを含む抗体を含むが、これらに限定されない。
【０１８１】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ＰＤ−Ｌ１を特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒトＰＤ−Ｌ１を特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ＰＤ−Ｌ１の細胞外ドメインを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号４９のアミノ酸１９〜２３８のアミノ酸配列内のエピトープを特異的に認識する。
配列番号４９ヒトＰＤ−Ｌ１配列
【化１】
2021525805.tif 000003
【０１８２】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；およびｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。
【０１８３】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨ；およびｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１８４】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントと、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントと、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントとを含むＶＨ；およびｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントと、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントと、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントとを含むＶＬを含む。
【０１８５】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、またはＨＣ−ＣＤＲ配列に最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、またはＬＣ−ＣＤＲ配列に最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ；およびｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む。
【０１８７】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｉ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨと、ｉｉ）配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【０１８８】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨの１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含むＶＨ、およびｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬの１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含むＶＬを含む。
【０１８９】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１に対して少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号２に対して少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ、およびｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９０】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、キメラ抗体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、マウスＣＤＲおよびヒトＦＲ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号５に対して少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７に対して少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９１】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号９、１１および１３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと、ｂ）配列番号１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５、１７および１９のいずれか１つに対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨと、ｂ）配列番号１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【０１９２】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９３】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９４】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１３に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９５】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１７に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９６】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１７に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９７】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１３に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１７に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９８】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１９に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１９９】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１９に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０２００】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１３に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨ；およびｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１９に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ；およびｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０２０１】
重鎖および軽鎖可変ドメインを様々な対での組み合わせで組み合わせて、いくつかの抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を生成することができる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例示的な配列は、表３および４で提供される。表３に示されるような例示的なＣＤＲ、ＶＨおよびＶＬ配列は、ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ  ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ  ＳＹＳＴＥＭ（登録商標）（ＩＭＧＴ）に従って範囲が定められている。例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ４３：Ｄ４１３−４２２  （２０１５）を参照されたく、この開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。抗体重鎖および軽鎖可変領域内のＣＤＲ位置の予測のための多くのアルゴリズムが公知であること、および本明細書に記載の抗体からのＣＤＲだがＩＭＧＴ以外の予測アルゴリズムに基づくＣＤＲを含む抗体剤が、本発明の範囲内であることは、当業者であれば認識する。表４は、様々な他の番号付けスキームおよび／または定義による例示的なＣＤＲ配列を収載する。
表３．例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体配列。
【表３】
2021525805.tif 000004
表４．様々なＣＤＲ定義による例示的な抗ＰＤ−Ｌ１  ＣＤＲ
【表４−１】
2021525805.tif 000005
【表４−２】
2021525805.tif 000006
【０２０２】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分のいずれか１つに従う第２の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分と、標的ＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、第２の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の場合と同じエピトープまたは実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的ＰＤ−Ｌ１への抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の結合は、ＰＤ−Ｌ１への第２の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の結合を少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）阻害し、または逆に、標的ＰＤ−Ｌ１への第２の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の結合は、ＰＤ−Ｌ１への抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の結合を少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）阻害する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分および第２の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、標的ＰＤ−Ｌ１への結合について交差競合する、すなわち、これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の各々が、標的ＰＤ−Ｌ１への結合について他方と競合する。
抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ
【０２０３】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、（Ｎ末端からＣ末端に向かって）：ＶＬ−Ｌ−ＶＨ、またはＶＨ−Ｌ−ＶＬ（ここで、Ｌはペプチドリンカーである）の配置を有する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、キメラ、ヒト、部分的にヒト化されている、完全にヒト化されている、または半合成のものである。
【０２０４】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、増強された熱安定性を有するように操作される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、約５５〜７０℃、例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つの融解温度を有するように操作される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。ｓｃＦｖの構造および配列に基づいて好適な位置にあるＶＨのシステインおよびＶＬのシステインを操作することにより、他の操作されたジスルフィド結合を抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖに導入することができる。
【０２０５】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、またはＨＣ−ＣＤＲ配列に最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、またはＬＣ−ＣＤＲ配列に最大約５つ（例えば、約１つ、約２つ、約３つ、約４つもしくは約５つのいずれか）のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０２０６】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０２０７】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、Ｈｉｓタグを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ部分のＣ末端に融合したＨｉｓタグを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、ＧＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号５１）を含む。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、図９で説明される。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ配列は、表５に示される。
表５．例示的な抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ配列。
【表５−１】
2021525805.tif 000007
【表５−２】
2021525805.tif 000008
抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ
【０２０８】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、Ｆｃ断片に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖのいずれか１つに従う抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、Ｆｃ断片にペプチドリンカーを介して融合している。抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、上記「抗体部分」セクションに記載のＦｃ断片のいずれかを含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、クリアランスを増加させるためのまたは半減期を短縮するための１つまたは複数の変異を含む。例えば、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０Ａおよび／またはＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０２０９】
一部の実施形態では、Ｆｃ断片の各鎖は、同じ実体に融合している。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃは、Ｆｃ断片の一方の鎖に各々が融合している、本明細書に記載の２つの同一の抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃは、ホモ二量体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃは、ヘテロ二量体である。
【０２１０】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃは、配列番号２１もしくは２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号２１もしくは２３のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ配列は、表６に示される。
表６．例示的な抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ配列。
【表６】
2021525805.tif 000009
抗ＰＤ−Ｌ１イメージング剤
【０２１１】
本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分のいずれか１つをＰＤ−Ｌ１の検出のためにイメージング剤に組み込むことができる。本明細書における抗ＰＤ−Ｌ１抗体に関するこのセクションに記載の特徴を、上記のセクション「イメージング剤」に記載の特徴と任意の好適な組合せで組み合わせることができる。
【０２１２】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分のいずれか１つを含むイメージング剤であって、抗体部分が放射性核種で標識されている、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、放射性核種は、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、８６Ｙ、９０Ｙおよび８９Ｚｒからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０２１３】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が放射性核種で標識されている、本明細書に記載の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤のいずれか１つを含むイメージング剤が、提供される。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０２１４】
一部の実施形態では、放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０２１５】
一部の実施形態では、放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖが、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７��ｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０２１６】
一部の実施形態では、放射性核種で標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、Ｆｃ断片に融合した抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖであり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ���１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。
【０２１７】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するＮＯＴＡにコンジュゲートされている抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。
【０２１８】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するＮＯＴＡにコンジュゲートされている抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖが、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉ��、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。
【０２１９】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をキレート化するＮＯＴＡにコンジュゲートされている抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分を含むイメージング剤であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、Ｆｃ断片に融合した抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖであり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＨと、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含むＶＬとを含む、イメージング剤が提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＨと；配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含むＶＬとを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、または配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形���では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。
ＰＤ−１
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路および抗ＰＤ免疫療法
【０２２０】
プログラム細胞死１（ＰＤ−１）をコードする遺伝子は、１９９２年に古典的アポトーシスを受けるマウスＴ細胞ハイブリドーマおよび造血前駆細胞系から最初に単離された（Ｉｓｈｉｄａ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．    Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  ｊｏｕｒｎａｌ  １９９２；  １１：３８８７−３８９５）。構造的には、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ４ホモログと同様に、ＰＤ−１は、Ｉ型膜貫通タンパク質であり、Ｉｇスーパーファミリーに属する（Ｓｈａｒｐｅ  ＡＨ  ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ  ＧＪ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００２；  ２：１１６−１２６）。Ｔ細胞応答の負のモジュレーションおよび末梢寛容の維持におけるＰＤ−１の重要な役割が、種々のマウスモデルを使用するＰＤ−１遺伝子破壊研究により示された。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＰＤ−１欠損マウスは、同種抗原に対するＰＤ−１欠損Ｔ細胞の増殖の増強に起因してループス様自己免疫疾患を発症する（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９９；  １１：１４１−１５１）。ＢＡＬＢ／ｃの場合、ＰＤ−１ノックアウトマウスは、拡張型心筋症を発症し、うっ血性心不全から突然死を遂げたが、免疫不全ＢＡＬＢ／ｃ  ＲＡＧ２−／−バックグラウンドの場合はそうはならなかった（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００１；  ２９１：３１９−３２２）。主要誘因の１つは、心臓特異的タンパク質心筋トロポニンＩに対する高力価自己抗体の生成であると後に特定された（Ｏｋａｚａｋｉ  Ｔ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００３；  ９：１４７７−１４８３）。ＮＯＤ（非肥満糖尿病）バックグラウンドでのＰＤ−１欠損は、加速された膵島特異的Ｔ細胞拡大増殖および膵島への浸潤に起因してＩ型糖尿病の早期開始につながる（Ｙａｎｔｈａ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２０１０；  ５９：２５８８−２５９６）。全体的に見れば、ＰＤ−１分子は、末梢寛容に関与する阻害性受容体として作用する（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  Ｈ，  Ｈｏｎｊｏ  Ｔ．  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１；  ２２：２６５−２６８）。ＣＴＬＡ−４とは異なり、ＰＤ−１における免疫受容体チロシン依存性スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）は、ＴＣＲシグナル伝達後、ＳＨＰ−２ホスファターゼを動員し、活性化誘導リン酸化を逆転させるが、ＰＤ−１の細胞質側テールに位置する隣接ＩＴＩＭドメインはそうではなかった（Ｉｓｈｉｄａ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  ｊｏｕｒｎａｌ  １９９２；  １１：３８８７−３８９５）。
【０２２１】
いくつかの研究が、ＰＤ−１と相互作用する分子の発見に寄与した。１９９９年に、Ｂ７ホモログ１（Ｂ７Ｈ１、後の文献ではプログラム死リガンド−１［ＰＤ−Ｌ１］とも呼ばれた）が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトＴ細胞応答の負の調節因子として機能する免疫グロブリンスーパーファミリーのＢ７−ＣＤ２８ファミリーに属する２９０アミノ酸Ｉ型膜貫通糖タンパク質として同定された（Ｄｏｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９９；  ５：１３６５−１３６９）。１年後、ＰＤ−Ｌ１はＰＤ−１の結合性かつ機能的対応物であることが示された（Ｆｒｅｅｍａｎ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．    Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０００；  １９２：１０２７−１０３４）。ＰＤ−Ｌ１欠損マウスは自己免疫状態になりやすいことが、後に実証された（Ｄｏｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００４；  ２０：３２７−３３６）。注目すべきことに、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１のｍＲＮＡは、多くの細胞型に広範囲に発現されるが、それらの発現パターンは転写後調節によって厳密に制御されるので、両方が誘導性分子である。ＰＤ−１タンパク質は、休止Ｔ細胞上では検出できないが、Ｔ細胞活性化から２４時間以内に細胞表面に見られる（Ｋｅｉｒ  ＭＥ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００８；  ２６：６７７−７０４）。正常生理条件下では、ＰＤ−Ｌ１タンパク質は、扁桃、胎盤などの末梢組織と、肺および肝臓におけるほんの一部のマクロファージ様細胞とにしか発現されない（Ｄｏｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２；  ８：７９３−８００；  Ｐｅｔｒｏｆｆ  ＭＧ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｌａｃｅｎｔａ  ２００２；  ２３  Ｓｕｐｐｌ  Ａ：Ｓ９５−１０１）。ＰＤ−Ｌ１の外因性の誘導は、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）などの炎症性サイトカインにより主として媒介され、これは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用が、末梢組織における炎症反応の制御に重要な役割を果たすことを示す（Ｚｏｕ  Ｗ，  Ｃｈｅｎ  Ｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００８；  ８：４６７−４７７）。
【０２２２】
ＰＤ−Ｌ１に加えて、Ｂ７−ＤＣと呼ばれる別のＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ２としても公知）も２つの研究所により独立して同定された（Ｔｓｅｎｇ  ＳＹ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００１；  １９３：８３９−８４６；  Ｌａｔｃｈｍａｎ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１；  ２：２６１−２６８）。ＰＤ−Ｌ２は、樹状細胞（ＤＣ）上に選択的に発現されること、そしてまたＰＤ−１に結合することによりＴ細胞応答を負に調節することが判明した。最近、ＰＤ−Ｌ２は、肺マクロファージにおいて非常に豊富であり、呼吸耐性の誘導に必要とされ得る分子である、反発性ガイダンス分子ファミリーメンバーｂ（ＲＧＭｂ）と相互作用することも判明した（Ｘｉａｏ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１４；  ２１１：９４３−９５９）。興味深いことに、ＰＤ−Ｌ１は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴ細胞寛容の形成にも寄与し得る、阻害性シグナルを送るための別の受容体ＣＤ８０を活性化Ｔ細胞上に有することも判明した（Ｂｕｔｔｅ  ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．    Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００７；  ２７：１１１−１２２；  Ｐａｒｋ  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ  ２０１０；  １１６：１２９１−１２９８）。現在では、少なくとも５つの相互作用分子がＰＤネットワークに関与することが公知である。それ故、元々のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路は、より適切な「ＰＤ経路」に改名される。ＰＤ−１の２つのリガンド（ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２）、およびＰＤ−Ｌ１の２つの阻害性受容体（ＰＤ−１およびＣＤ８０）の存在は、ＰＤ−１遮断も、ＰＤ−Ｌ１遮断も、ＰＤ経路を完全に破壊することにならないことを示唆する。ＰＤ阻害経路を完全に消失させるには、両方の分子を標的とする組合せ戦略が必要である。
【０２２３】
感染に対して炎症反応を起こして末梢組織のＴ細胞の活性をモジュレートすることに関するおよび自己免疫を制限することに関するＰＤ経路の重要な機能は、腫瘍細胞によっておよび慢性ウイルス感染中のウイルスによって乗っ取られるように見える。ＰＤ−Ｌ１は、複数の組織に由来する多くの新しく単離したヒト腫瘍上に過剰発現される（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２；  ８：７９３−８００；  Ｒｏｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１５；  ３：１５；  Ｈｉｒａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００５；  ６５：１０８９−１０９６）。ＰＤ−Ｌ１の発現は、ある特定の種類のヒトがんの進行および予後不良と相関関係があることが示されている（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：  ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１５；  ４１：４５０−４５６；  Ｃｉｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ：  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ／  ＥＳＭＯ  ２０１６；  ２７：３００−３０５；  Ｇａｎｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２０１６；  １００：８８−９８；  Ｔｈｉｅｒａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５；  ２５：５０３−５０９；  Ｔａｕｂｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ：  ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１４；  ２０：５０６４−５０７４）。慢性ウイルス感染の間、ＰＤ−Ｌ１は、多くの組織上に持続的に発現され、その一方で、ＰＤ−１は、ウイルス特異的ＣＴＬ上で上方調節される（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６；  １２：２４４−２４６）。腫瘍誘導またはウイルス誘導ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞アネルギー、アポトーシス、消耗、ＩＬ−１０産生、ＤＣ抑制、ならびにＴｒｅｇ誘導および拡大増殖を含む、複数の機序を利用して、宿主免疫監視の回避を促進し得る（Ｚｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００８；  ８：４６７−４７７）。
【０２２４】
腫瘍免疫のＰＤ経路媒介逃避は、「適応的耐性」モデルとしてみなすことができる（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ２０１５；  １２５：３３８４−３３９１；  Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１３；  ４３：５７６−５７９）。具体的には、活性化腫瘍特異的Ｔ細胞は、腫瘍部位に到達し、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）になる。コグネイト抗原を認識すると、ＴＩＬは、ＩＦＮ−γを産生し、このＩＦＮ−γが、ＤＣ、マクロファージ、好中球およびＢリンパ球を含む、腫瘍微小環境の多くの細胞型において、ＰＤ−Ｌ１発現を誘導する。ＰＤ−１に結合すると、ＰＤ−Ｌ１は、抑制シグナルをＴ細胞に送り、抗アポトーシスシグナルを腫瘍細胞に送り、その結果、Ｔ細胞機能不全および腫瘍生存に至る（Ｔａｕｂｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１２；  ４：１２７ｒａ１３７；  Ｓｐｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１３；  ５：２００ｒａ１１６）。このモデルは、細胞表面ＰＤ−Ｌ１発現がＴ細胞に隣接する細胞でのみ検出される、ＩＨＣに基づく観察により支持されるばかりでなく、腫瘍部位におけるＰＤ−Ｌ１発現とＴＩＬの存在との強い相関関係を示す研究（Ｇａｎｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２０１６；  １００：８８−９８；  Ｔａｕｂｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１２；  ４：１２７ｒａ１３７）、およびマウス腫瘍モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの主要ＰＤ−Ｌ１誘導因子としてのＩＦＮ−γの実証（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２；  ８：７９３−８００）によっても支持される。このＰＤ経路媒介適応的耐性仮説は、ＰＤ−Ｌ１＋腫瘍の大多数が強い抗腫瘍免疫下でさえ免疫破壊を免れることができるという観察を支持する。
【０２２５】
「適応的耐性」モデルに基づいて、ＰＤ経路を標的とする免疫療法は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の相互作用を遮断し、ひいては抗腫瘍免疫に対する耐性を防止するように、設計される。ＰＤ−Ｌ１の豊富な発現が腫瘍において発見されて、ＰＤ経路ががんの処置と関連付けられる（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９９；  ５：１３６５−１３６９）までは、ＰＤ−１の発見は抗腫瘍療法におけるその応用につながらなかったが、今では、ヒトがんを処置するための２つのＰＤ−１モノクローナル抗体がＦＤＡにより既に認可されている。これらは、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発されたＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ、ＭＤＸ−１１０６、ＢＭＳ−９３６５５８およびＯＮＯ−４５３８としても公知）（６８）、およびＭｅｒｃｋにより開発されたＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ、ランブロリズマブおよびＭＫ−３４７５としても公知）（６９）である。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１のどちらかを標的とする複数のモノクローナル抗体が、何千名も患者を伴う何百もの臨床試験で集中的評価段階にある。抗ＰＤ療法は、腫瘍の著しい退縮および生存率の実質的な拡大を含む、有意な臨床的有益性を生じさせた。抗ＰＤ療法は、腫瘍部位における免疫モジュレーションによる腫瘍誘導免疫欠如を標的とするので、永続的有効性、許容可能な毒性、および広範囲のがん適応をもたらす５９。抗ＰＤ免疫療法の臨床的成功は、個別化療法または腫瘍型特異的療法とは明確に異なるがん療法の特有のカテゴリーとしてのＰＤ経路遮断の有効性をさらに検証する。規定された免疫チェックポイント経路を活用して免疫監視を免れる腫瘍を標的とすることにより、抗ＰＤ免疫療法は、ヒトがんおよび特に固形腫瘍に対する免疫療法において注目を集めている。
抗ＰＤ免疫療法の有効性を予測するためのバイオマーカーとしての腫瘍部位におけるＰＤ−Ｌ１発現
【０２２６】
古典的ホジキンリンパ腫などのいくつかの血液悪性疾患ばかりでなく、黒色腫、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がんを含む複数の固形腫瘍型も、抗ＰＤ免疫療法への奏効率と腫瘍内でのＰＤ−Ｌ１発現レベルとの正の相関を示す。黒色腫臨床試験では、試料のおおよそ４５％〜７５％においてＩＨＣによりＰＤ−Ｌ１過剰発現が検出された。ニボルマブ研究では、患者の４５％は、２８−８抗体を使用して５％カットオフに基づいてＰＤ−Ｌ１発現に対して陽性であった。ＰＤ−Ｌ１陽性患者の奏効率は、ＰＤ−Ｌ１陰性患者の１７％と比較して、４４％であった。ニボルマブで処置されたＰＤ−Ｌ１陽性黒色腫患者は、２１．１ヶ月のＯＳおよび９．１ヶ月のＰＦＳを有し、これに比べ、ＰＤ−Ｌ１陰性患者においてはそれぞれ１２．５ヶ月および２ヶ月であった。ペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１）も、進行黒色腫に関して、１％のＩＨＣカットオフを利用して研究された。ＰＤ−Ｌ１陽性患者（７７％）は、５１％のＯＲＲを有したが、ＰＤ−Ｌ１陰性患者は、６％のＯＲＲを有した。ペムブロリズマブで処置されたＰＤ−Ｌ１陽性患者は、１２ヶ月のＰＦＳおよび８４％の１年ＯＳ率を有したが、ＰＤ−Ｌ１陰性患者は、３ヶ月のＰＦＳおよび６９％の１年ＯＳを有した。
【０２２７】
同様の傾向がＮＳＣＬＣに見られ、ＰＤ−Ｌ１陽性患者は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１指向療法からの恩恵を優先的に受けるようであった。ニボルマブは、難治性ＮＳＣＬＣを有する患者において研究され、ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣは、ＤＡＫＯ  ＩＨＣアッセイを使用して５％カットオフで行われた。これらの基準に基づいて、患者の６０％は、ＰＤ−Ｌ１に対して陽性と分類され、ＰＤ−Ｌ１陽性患者の奏効率は、ＰＤ−Ｌ１陰性患者の０％と比較して６７％であった。ペムブロリズマブも、ＮＳＣＬＣに関して、未報告のアッセイを使用してＰＤ−Ｌ１発現について固有の５０％ＩＨＣカットオフを利用して調査された。このカットオフに基づいて、腫瘍の２５％がＰＤ−Ｌ１に対して陽性であり、６ヶ月の時点で、ＰＤ−Ｌ１陽性患者は、６７％免疫関連ＯＲＲ（ｉｒＯＲＲ）、６７％ＰＦＳ率、および８９％ＯＳ率を、０％  ｉｒＯＲＲ、１１％ＰＦＳ率および３３％ＯＳ率を有したＰＤ−Ｌ１陰性患者と比較して、有した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体であるＭＰＤＬ３２８０Ａも、ＮＳＣＬＣに関して、０〜３＋（＞１０％細胞が３＋、＞５％細胞が２＋、＜５％細胞が０〜１）のグレード分類により、独自開発ＩＨＣプラットフォームを利用して研究された。３＋のＰＤ−Ｌ１発現スコアを有したＮＳＣＬＣ患者は、２＋または３＋のどちらかのスコアを有した患者での４６％と比較して、８３％奏効率を有した。１＋／２＋／３＋  ＰＤ−Ｌ１発現を有した患者は、３１％ＯＲＲを有した。
【０２２８】
予測バイオマーカーとしてのＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣも、複数の組織学的検査を含む臨床試験で評価された。ニボルマブ第Ｉ相研究は、黒色腫、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）、および転移性去勢抵抗性前立腺がん（ｍＣＲＰＣ）を有する患者を含んだ。ＰＤ−Ｌ１は、５％閾値を利用して５Ｈ１抗体により検出され、腫瘍の６０％は、この基準により陽性であった。ＰＤ−Ｌ１陽性腫瘍を有する患者は、３６％奏効率を有したが、ＰＤ−Ｌ１陰性腫瘍を有する患者は、０％ＯＲＲを有した。ＭＰＤＬ３２８０Ａは、黒色腫、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、ｍＣＲＣおよび胃がんを有する患者において、独自開発ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣプラットフォームを利用して研究された。ＰＤ−Ｌ１陽性患者は、３９％奏効率を有したが、ＰＤ−Ｌ１陰性患者は、１３％奏効率を有した。
【０２２９】
これらの臨床試験からのデータは、ＩＨＣに従ってより高いＰＤ−Ｌ１レベルを有する患者がＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１指向療法による優れた奏効を示すことを示唆するように見える。しかし、抗ＰＤ免疫療法で処置されたＰＤＬ１陰性患者における奏効の性質または生存転帰について分かっていることは、比較的少ない。初期評価は、黒色腫を有する特定のＰＤ−Ｌ１陰性患者が抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法への持続的奏効をなお得ることができる一方で、ＰＤ−Ｌ１陰性ＮＳＣＬＣ患者における奏効が稀であることを示唆する。この傾向が、より大きい試験で再現される場合、それは、２つの異なる腫瘍型間の免疫生物学の根本的な相違を表し得、または異なる組織型におけるＩＨＣに関わる技術的問題を表し得る。転移性尿路上皮膀胱がんに関するＭＰＤＬ３２８０Ａの第Ｉ相臨床試験では、ＰＤ−Ｌ１陽性患者は、１２週間の時点で、ＰＤ−Ｌ１陰性患者での１１％と比較して５２％のＯＲＲを有した。したがって、ＰＤ−Ｌ１陰性患者における奏効の深さおよび奏効期間は、まだ分かっていない。
Ｖ．抗体
【０２３０】
ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ１様リガンドなどの、免疫チェックポイントリガンドを特異的に認識する抗体も、本明細書で提供される。そのような抗体、およびそれらに由来する抗体部分を、上記セクションに記載の方法およびイメージング剤に組み込むことができる。好適な抗体部分としては、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、およびＦｃ断片に融合したｓｃＦｖ（本明細書では「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」とも呼ばれる）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の抗体部分（抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を含む）は、下記のセクションａ）〜ｈ）に記載の特徴のいずれか１つまたは複数を有することができる。
【０２３１】
一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、（Ｎ末端からＣ末端に向かって）：ＶＬ−Ｌ−ＶＨ、またはＶＨ−Ｌ−ＶＬ（ここで、Ｌはペプチドリンカーである）の配置を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、キメラ、ヒト、部分的にヒト化されている、完全にヒト化されている、または半合成のものである。
【０２３２】
一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、増強された熱安定性を有するように操作される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、約５５〜７０℃、例えば、約５５〜６０℃、約６０〜６５℃、または約６５〜７０℃のいずれか１つの融解温度を有するように操作される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多くの）操作されたジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、および／または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。ｓｃＦｖの構造および配列に基づいて好適な位置にあるＶＨのシステインおよびＶＬのシステインを操作することにより、他の操作されたジスルフィド結合をｓｃＦｖに導入することができる。
【０２３３】
一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片を含む。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ断片にペプチドリンカーを介して融合したｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、クリアランスを増加させるためのまたは半減期を短縮するための１つまたは複数の変異を含む。例えば、Ｆｃ断片は、Ｈ３１０Ａおよび／またはＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【０２３４】
一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒンジ領域（Ｃｙｓ２２６で始まる）、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む、免疫グロブリンＩｇＧ重鎖定常領域を含む。本明細書で使用される場合の用語「ヒンジ領域」または「ヒンジ配列」は、リンカーとＣＨ２ドメインの間に位置するアミノ酸配列を指す。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ヒンジ領域を含むＦｃ断片を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質のＦｃ断片は、ヒンジ領域で始まり、ＩｇＧ重鎖のＣ末端にまで及ぶ。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ヒンジ領域を含まないＦｃ断片を含む。
【０２３５】
一部の実施形態では、抗体部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ならびにこれらの組合せおよびハイブリッドからのＦｃ断片からなる群から選択されるＦｃ断片を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧに由来する。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４または組合せもしくはハイブリッドＩｇＧのＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ４  Ｆｃ断片である。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ４のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。ＩｇＧ４  Ｆｃは、ＩｇＧ１  Ｆｃより低いエフェクター活性を示すことが公知であり、したがって、一部の用途に望ましいことがある。一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、マウス免疫グロブリンに由来する。
【０２３６】
一部の実施形態では、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインは、Ａｌａ２３１で始まる。一部の実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｇｌｙ３４１で始まる。ヒトＩｇＧのＣ末端Ｌｙｓ残基が必要に応じて非存在であり得ることは、理解される。Ｆｃの所望の構造および／または安定性に影響を与えないＦｃ領域の保存的アミノ酸置換が本発明の範囲内で企図されることも、理解される。
【０２３７】
一部の実施形態では、Ｆｃ断片の各鎖は、同じ抗体部分に融合している。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ−Ｆｃは、Ｆｃ断片の一方の鎖に各々が融合している、本明細書に記載の２つの同一のｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ−Ｆｃは、ホモ二量体である。
［０１０１］
一部の実施形態では、ｓｃＦｖ−Ｆｃは、Ｆｃ断片の一方の鎖に各々が融合している、２つの異なるｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ−Ｆｃは、ヘテロ二量体である。限定ではないが、ノブ−イントゥ−ホール技術によるヘテロ二量体化を含む、当技術分野において公知の方法により、ｓｃＦｖ−Ｆｃにおける非同一ポリペプチドのヘテロ二量体化を促進することができる。ノブ−イントゥ−ホール技術の構造および構築方法は、例えば、それら全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８２１，３３３号、米国特許第７，６４２，２２８号、米国特許出願公開第２０１１／０２８７００９号およびＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５９８１０において、見出すことができる。この技術は、小さいアミノ酸残基をより大きいもので置換することによって一方のＦｃのＣＨ３ドメインに「ノブ」（または突出部）を導入すること、および１つまたは複数の大きいアミノ酸残基をより小さいもので置換することによって他方のＦｃのＣＨ３ドメインに「ホール」（または空洞）を導入することにより、開発された。一部の実施形態では、融合タンパク質のＦｃ断片の一方の鎖がノブを含み、Ｆｃ断片のもう一方の鎖がホールを含む。
【０２３８】
ノブの形成に好ましい残基は、一般に、天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくは、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）から選択される。最も好ましいのは、トリプトファンおよびチロシンである。一実施形態では、ノブの形成のための元の残基、例えば、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニンまたはバリンは、小さい側鎖体積を有する。ノブを形成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸置換としては、限定ではないが、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６ＹまたはＦ４０５Ｗ置換が挙げられる。
【０２３９】
ホールの形成に好ましい残基は、一般に、天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくは、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）およびバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態では、ホールの形成のための元の残基、例えば、チロシン、アルギニン、フェニルアラニンまたはトリプトファンは、大きい側鎖体積を有する。ホールを生成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸置換としては、限定ではないが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７ＴおよびＹ４０７Ｖ置換が挙げられる。ある特定の実施形態では、ノブは、Ｔ３６６Ｗ置換を含み、ホールは、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換を含む。ヘテロ二量体化を促進する当技術分野において公知のＦｃ領域に対する他の改変も企図され、本出願により包含されることは、理解される。
【０２４０】
本明細書に記載のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント、エフェクター機能バリアント、グリコシル化バリアント、システイン操作バリアント）のいずれか、またはそれらの組合せを含む、他のｓｃＦｖ−Ｆｃバリアント（単離された抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃのバリアント、例えば、全長抗ＰＤ−Ｌ１抗体バリアントを含む）が、企図される。
ａ）抗体親和性
【０２４１】
抗体部分の結合特異性を、当技術分野において公知の方法によって実験により決定することができる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、ＥＩＡ試験、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）試験およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
【０２４２】
一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫＤは、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、または約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍである。一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫＤは、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、または約１０−１２Ｍのいずれか１つより強い。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ヒト免疫チェックポイントリガンド（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、カニクイザル免疫チェックポイントリガンド（例えば、カニクイザルＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）である。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号４のアミノ酸１９〜２３８などの、免疫チェックポイントリガンドの細胞外ドメイン内のエピトープを特異的に認識する。
【０２４３】
一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫｏｎは、約１０３Ｍ−１ｓ−１〜約１０８Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１〜約１０４Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１０５Ｍ−１ｓ−１、約１０５Ｍ−１ｓ−１〜約１０６Ｍ−１ｓ−１、約１０６Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、または約１０７Ｍ−１ｓ−１〜約１０８Ｍ−１ｓ−１である。一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫｏｎは、約１０３Ｍ−１ｓ−１〜約１０５Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１０６Ｍ−１ｓ−１、約１０５Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、約１０６Ｍ−１ｓ−１〜約１０８Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、または約１０５Ｍ−１ｓ−１〜約１０８Ｍ−１ｓ−１である。一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫｏｎは、約１０３Ｍ−１ｓ−１以下、約１０４Ｍ−１ｓ−１以下、約１０５Ｍ−１ｓ−１以下、約１０６Ｍ−１ｓ−１以下、約１０７Ｍ−１ｓ−１以下、または約１０８Ｍ−１ｓ−１以下のいずれか１つである。
【０２４４】
一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫｏｆｆは、約１ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１ｓ−１〜約１０−２ｓ−１、約１０−２ｓ−１〜約１０−３ｓ−１、約１０−３ｓ−１〜約１０−４ｓ−１、約１０−４ｓ−１〜約１０−５ｓ−１、約１０−５ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１ｓ−１〜約１０−５ｓ−１、約１０−２ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−３ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−４ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−２ｓ−１〜約１０−５ｓ−１、または約１０−３ｓ−１〜約１０−５ｓ−１である。一部の実施形態では、抗体部分と免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）間の結合のＫｏｆｆは、少なくとも約１ｓ−１、少なくとも約１０−２ｓ−１、少なくとも約１０−３ｓ−１、少なくとも約１０−４ｓ−１、少なくとも約１０−５ｓ−１または少なくとも約１０−６ｓ−１のいずれか１つである。
ｂ）キメラまたはヒト化抗体
【０２４５】
一部の実施形態では、抗体部分は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８１：６８５１−６８５５  （１９８４）に記載されている。一部の実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウスに由来する可変領域）およびヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、それらの抗原結合性断片を含む。
【０２４６】
一部の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。概して、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながらヒトに対する免疫原性が低下されるようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つまたは複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、ヒト定常領域の少なくとも一部分も必要に応じて含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復するまたは向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換されている。
【０２４７】
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，  Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １３：１６１９−１６３３  （２００８）において概説されており、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９  （１９８８）；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３  （１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４  （２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフト化を記載している）；Ｐａｄｌａｎ，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２８：４８９−４９８  （１９９１）（「リサーフェーシング」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０  （２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載している）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８  （２００５）およびＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ８３：２５２−２６０  （２０００）（ＦＲシャフリングのための「誘導選択」手法を記載している）に記載されている。
【０２４８】
ヒト化に使用することができるヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：２２９６  （１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８９：４２８５  （１９９２）；およびＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．    Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５１：２６２３  （１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，  Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １３：１６１９−１６３３  （２００８）を参照されたい）；およびＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：１０６７８−１０６８４  （１９９７）およびＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１：２２６１１−２２６１８  （１９９６）を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。
ｃ）ヒト抗体
【０２４９】
一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト抗体（ヒトドメイン抗体、またはヒトＤＡｂとしても公知）である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ５：  ３６８−７４  （２００１），  Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９  （２００８）、およびＣｈｅｎ，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７（４）：９１２−２１  （２０１０）に記載されている。完全ヒト単一ドメイン抗体（またはＤＡｂ）を産生することができるトランスジェニックマウスまたはラットは、当技術分野において公知である。例えば、米国特許出願公開第２００９０３０７７８７Ａ１号、米国特許第８，７５４，２８７号、米国特許出願公開第２０１５０２８９４８９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１００１２２３５８Ａ１号、およびＷＯ２００４０４９７９４を参照されたい。
【０２５０】
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、抗原チャレンジに応答して無傷のヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷の抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製することができる。そのような動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座が、内在性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、またはその動物の染色体にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を概して含有する。そのようなトランスジェニックマウスにおける内在性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．    ２３：１１１７−１１２５  （２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術が記載されている米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術が記載されている米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術が記載されている米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術が記載されている米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。そのような動物により生成される無傷の抗体からのヒト可変領域を、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、さらに改変することができる。
【０２５１】
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）を、ハイブリドーマに基づく方法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １３３：  ３００１  （１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐｐ．  ５１−６３  （Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４７：  ８６  （１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されたヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １０３：３５５７−３５６２  （２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞系からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）およびＮｉ，  Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，  ２６（４）：２６５−２６８  （２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されているものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  ２０（３）：９２７−９３７  （２００５）、およびＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ２７（３）：１８５−９１  （２００５）にも記載されている。
【０２５２】
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することにより生成することもできる。次いで、そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術は、下記で説明される。
ｄ）ライブラリー由来の抗体
【０２５３】
所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより、抗体部分を単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成するための、および所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための、様々な方法が、当技術分野において公知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７  （Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  ２００１）において概説されており、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：  ６２４−６２８  （１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：  ５８１−５９７  （１９９２）；Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５  （Ｌｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  ２００３）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ３３８（２）：  ２９９−３１０  （２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３４０（５）：  １０７３−１０９３  （２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０１（３４）：  １２４６７−１２４７２  （２００４）；およびＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：  １１９−１３２（２００４）に記載されている。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築する方法は、例えば、米国特許第７３７１８４９号に記載されている。
【０２５４】
ある特定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １２：  ４３３−４５５  （１９９４）に記載されているように、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーの中でランダムに組み換えられ、その後、それらを抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、概して、抗体断片をｓｃＦｖ断片またはＦａｂ断片のどちらかとして提示する。免疫された供給源に由来するライブラリーにより、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体が得られる。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ，  １２：  ７２５−７３４  （１９９３）により記載されているように、一切の免疫なしにナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローニングして広範な非自己およびまた自己抗原に対する抗体の単一供給源を得ることができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７：  ３８１−３８８  （１９９２）に記載されているように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高可変性ＣＤＲ３領域をコードすることおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏで再配列を果たすことにより、ナイーブライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０２５５】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
ｅ）置換、挿入、欠失およびバリアント
【０２５６】
一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発のための目的の部位は、ＨＶＲ（またはＣＤＲ）およびＦＲを含む。保存的置換は、表２に「好ましい置換」という見出しで示される。より大きな変化は、表２に「例示的置換」という見出しで提供され、アミノ酸側鎖クラスに関して下記でさらに説明される。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、産物を所望の活性、例えば、抗原結合の保持／向上、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの向上についてスクリーニングすることができる。
表２．アミノ酸置換
【表２−１】
2021525805.tif 000010
【表２−２】
2021525805.tif 000011
【０２５７】
アミノ酸を共通の側鎖特性に従って分類することができる：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２５８】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのクラスのメンバーを別のクラスと交換することを必然的に伴う。
【０２５９】
１つのタイプの置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基の置換を含む。一般に、さらなる研究に選択される、結果として得られるバリアントは、親抗体と比較してある特定の生物学的特性の改変（例えば、向上）（例えば、親和性増大、免疫原性低下）を有し、および／または親抗体のある特定の生物学的特性を実質的に有する。例示的な置換バリアントは、親和性成熟した抗体であり、この抗体は、例えば、本明細書に記載のものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して、都合よく生成することができる。手短に述べると、１つまたは複数のＨＶＲ残基を変異させ、バリアント抗体をファージ上に提示させ、特定の生物的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
【０２６０】
例えば抗体親和性を向上させるために、ＨＶＲに変更（例えば、置換）を加えることができる。ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞変異プロセス中に高頻度で変異を起こすコドンによりコードされている残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２０７：１７９−１９６  （２００８）を参照されたい）、および／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）に、そのような変更を加えて、結果として得られるバリアントＶＨまたはＶＬを結合親和性について試験することができる。二次ライブラリーからの構築および再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７  （Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  （２００１））に記載されている。親和性成熟の一部の実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指定変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択されたバリアブル遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定するためにライブラリーがスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、１度に４〜６残基）が無作為に割り当てられるＨＶＲ特異的手法を含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基を、例えばアラニンスキャニング変異誘発またはモデル化を使用して、特異的に同定することができる。特に、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３は、標的とされることが多い。
【０２６１】
一部の実施形態では、置換、挿入または欠失を、そのような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させないことを条件に、１つまたは複数のＨＶＲ内で行うことができる。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。そのような変更がＨＶＲ「ホットスポット」またはＣＤＲの外部に存在することもある。上で提供されたバリアントＶＨＨ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲは、変更されないか、または１つ、２つもしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【０２６２】
変異誘発の標的となり得る抗体の残基または領域の同定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  （１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４４：１０８１−１０８５により記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕなどの荷電残基）のうちの１つの残基または標的残基の群を同定し、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）により置換して、抗体と抗原の相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。最初の置換に対して機能感受性を示すアミノ酸位置にさらなる置換を導入することができる。あるいは、または加えて、抗体と抗原間の接触点を同定するために抗原−抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基および隣接残基を置換の候補として標的化または除去することができる。バリアントを、それらが所望の特性を有するかどうかを決定するためにスクリーニングすることができる。
【０２６３】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００またはそれより多くの残基を含有するポリペプチドまで長さに幅があるアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体のＮまたはＣ末端側への抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）またはポリペプチドとの融合を含む。
ｆ）グリコシル化バリアント
【０２６４】
一部の実施形態では、抗体部分は、構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。グリコシル化部位の抗体への付加またはグリコシル化部位の欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより、都合よく果たすことができる。
【０２６５】
抗体部分がＦｃ領域（例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ）を含む場合、それに結合している炭水化物を変更することができる。哺乳動物細胞により産生されるネイティブ抗体は、Ｎ連結によりＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合されている分岐した、二分岐オリゴ糖を概して含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２  （１９９７）を参照されたい。このオリゴ糖は、様々な糖、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」の中のＧｌｃＮＡｃに結合しているフコースを含み得る。一部の実施形態では、抗体部分におけるオリゴ糖の改変を行って、ある特定の向上した特性を有する抗体バリアントを作製することができる。
【０２６６】
一部の実施形態では、抗体部分は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合しているフコースを欠いている糖鎖構造を有する。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により測定してＡｓｎ２９７に結合している全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）の合計に対する糖鎖内のＡｓｎ２９７におけるフコースの平均量を算出することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体内の小さい配列変異に起因して２９７位の約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもある。そのようなフコシル化バリアントは、ＡＤＣＣ機能の向上を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する公表文献の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３３６：１２３９−１２４９  （２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ８７：  ６１４  （２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞系の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２４９：５３３−５４５  （１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞系、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ８７：  ６１４  （２００４）；Ｋａｎｄａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｅｎｇ．，  ９４（４）：６８０−６８８  （２００６）；およびＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０２６７】
一部の実施形態では、抗体部分は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合している二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている、バイセクト型オリゴ糖を有する。そのような抗体バリアントは、フコシル化の低減および／またはＡＤＣＣ機能の向上を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、および米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合しているオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、ＣＤＣ機能の向上を有し得る。そのような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｇ）Ｆｃ領域バリアント
【０２６８】
一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変を抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ）のＦｃ領域に導入することによってＦｃ領域バリアントを生成することができる。Ｆｃ領域バリアントは、１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０２６９】
一部の実施形態では、Ｆｃ断片は、全てではなく一部のエフェクター機能を有し、このことにより、Ｆｃ断片は、抗体部分のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体およびＡＤＣＣ）が不必要または有害である用途の望ましい候補となる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低下／喪失を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体が、ＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性がある）がＦｃＲｎ結合能力を保持することを保証することができる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩしか発現しないが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９：４５７−４９２  （１９９１）の４６４頁の表２にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３  （１９８６）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２  （１９８５）を参照されたい）；同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １６６：１３５１−１３６１  （１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を利用することができる（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）；およびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性をｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６  （１９９８）において開示されているものなどの動物モデルにおいて、評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを行って、抗体が、Ｃ１ｑに結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３  （１９９６）；Ｃｒａｇｇ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２  （２００３）；およびＣｒａｇｇ，  Ｍ．Ｓ．  ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．  Ｇｌｅｎｎｉｅ，  Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３  （２００４）を参照されたい）。当技術分野において公知の方法（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，  Ｓ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８（１２）：１７５９−１７６９  （２００６）を参照されたい）を使用して、ＦｃＲｎ結合およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期決定を行うこともできる。
【０２７０】
エフェクター機能の低下を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうちの１つまたは複数の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５および２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７および３２７位のうちの２つまたはそれより多くの位置に置換を有するＦｃ変異体を含む。
【０２７１】
ＦｃＲへの結合の向上または低下を有する、ある特定の抗体バリアントが、記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、およびＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ９（２）：  ６５９１−６６０４  （２００１）を参照されたい）。
【０２７２】
一部の実施形態では、抗体部分は、ＡＤＣＣを向上させる１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３および／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２７３】
一部の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４：  ４１７８−４１８４  （２０００）に記載されているような、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変更（すなわち、向上または低下のどちらか）をもたらす変更がＦｃ領域に加えられる。
【０２７４】
一部の実施形態では、半減期を変更するおよび／または新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を変化させる１つまたは複数のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ）バリアント。半減期の増加、および胎児への母性ＩｇＧの移入に関与する新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の向上（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１７：５８７  （１９７６）、およびＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４：２４９  （１９９４））を有する抗体が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を変更する１つまたは複数の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃバリアントは、Ｆｃ領域残基の１つまたは複数に対する置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものを含む。
【０２７５】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０  （１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
ｈ）システイン操作抗体バリアント
【０２７６】
一部の実施形態では、システイン操作抗体部分、例えば、抗体の１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されている「チオＭＡｂ」を作製することが望ましいことがある。特定の実施形態では、置換される残基は、抗体の利用しやすい部位に存在する。それらの残基をシステインで置換することにより、その結果として反応性チオール基が抗体の利用しやすい部位に位置し、それを使用して抗体を他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分にコンジュゲートさせて、本明細書でさらに説明されるようなイムノコンジュゲートを作製することができる。一部の実施形態では、次の残基のいずれか１つまたは複数をシステインで置換することができる：重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体分子は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成することができる。
ｉ）抗体誘導体
【０２７７】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体部分を、当技術分野において公知であり、容易に入手可能である、さらなる非タンパク質性部分を含むように、さらに改変することができる。抗体の誘導体化に好適な部分は、水溶性ポリマーが含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのどちらか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、それらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定のため、製造の際に有利であり得る。ポリマーは、いずれの分子量のものであってもよく、分岐していてもまたは分岐していなくてもよい。抗体に結合しているポリマーの数は、様々であり得、１つより多くのポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子であってもまたは異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、抗体の向上させるべき特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で診断に使用されることになるかどうかなどを含むがこれらに限定されない、考慮事項に基づいて、決定することができる。
【０２７８】
一部の実施形態では、抗体部分を、１つまたは複数の生物的活性タンパク質、ポリペプチドまたはそれらの断片を含むように、さらに改変することができる。本明細書で同義的に使用される場合の「生体活性」または「生物的に活性な」は、特定の機能を行うための生物的活性を体内で示すことを意味する。例えば、それは、タンパク質、ＤＮＡなどのような特定の生体分子との化合、およびひいてはそのような生体分子の活性の促進または阻害を意味することもある。一部の実施形態では、生体活性タンパク質またはその断片は、疾患または状態の予防または処置のために活性原薬として患者に投与されるタンパク質およびポリペプチド、ならびに診断試験またはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで使用される酵素などの、診断目的で使用されるタンパク質およびポリペプチド、ならびにワクチンなどの、疾患を予防するために患者に投与されるタンパク質およびポリペプチドを含む。
ＶＩ．調製方法
【０２７９】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法が、提供される。本明細書に記載のイメージング剤は、下記で一般的におよび実施例でより具体的に説明されるようないくつかのプロセスによって調製することができる。
【０２８０】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ）にキレート化合物をコンジュゲートさせて抗体部分コンジュゲートを生じさせるステップ、および（ｂ）放射性核種を抗体部分コンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分のリシンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、方法は、キレート化合物および／または放射性核種からイメージング剤を単離するステップをさらに含む。
【０２８１】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）本明細書に記載の抗体部分のいずれか１つにキレート化合物をコンジュゲートさせて抗体部分コンジュゲートを生じさせるステップであって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合するものであるステップ、および（ｂ）放射性核種を抗体部分コンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分のリシンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、方法は、キレート化合物および／または放射性核種からイメージング剤を単離するステップをさらに含む。
【０２８２】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）キレート化合物を放射性核種と接触させるステップ、（ｂ）放射性核種をキレート化するキレート化合物を本明細書に記載の抗体部分のいずれか１つにコンジュゲートさせるステップを含み、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合することによってイメージング剤を生じさせる、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドは、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである。一部の実施形態では、キレート化合物は、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である。一部の実施形態では、放射性核種は、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される。一部の実施形態では、放射性核種は、６８Ｇａである。一部の実施形態では、キレート化合物は、抗体部分のリシンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、方法は、キレート化合物および／または放射性核種からイメージング剤を単離するステップをさらに含む。
【０２８３】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）に特異的に結合するｓｃＦｖをｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＮＯＴＡにコンジュゲートさせてｓｃＦｖコンジュゲートを生じさせるステップ、および（ｂ）６８ＧａをｓｃＦｖコンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法が、提供される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖコンジュゲートは、ｓｃＦｖとｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＮＯＴＡの混合物をカラム（例えば、ＮＡＰ−５カラム）に通すことにより単離される。一部の実施形態では、イメージング剤は、ｓｃＦｖコンジュゲートを伴う６８Ｇａの混合物をカラム（例えば、ＮＡＰ−５カラム）に通すことにより単離される。
抗体発現および産生
【０２８４】
本明細書に記載の抗体部分は、下記でおよび実施例で説明されるものを含む、当技術分野における任意の公知の方法を使用して調製することができる。
モノクローナル抗体
【０２８５】
モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち、この集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、自然に起こる可能性のある変異および／または翻訳後改変（例えば、異性化、アミド化）を除いて、同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個別の抗体の混合物でないような抗体の性質を示す。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５  （１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製することができ、または組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）により作製することができる。ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターもしくはラマを上文に記載の通りに免疫して、免疫に使用したタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生できるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫することができる。その場合、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用してリンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  ｐｐ．  ５９−１０３  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８６））。ラクダにおける免疫については実施例１も参照されたい。
【０２８６】
免疫剤は、概して、抗原タンパク質またはその融合バリアントを含む。一般に、ヒト由来の細胞が所望される場合には末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、または非ヒト哺乳動物源が所望される場合には脾細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。その場合、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用してリンパ球を不死化細胞系と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８６），  ｐｐ．  ５９−１０３。
【０２８７】
不死化細胞系は、通常は、形質転換された哺乳動物細胞、特に、齧歯類、ウシおよびヒト由来の骨髄腫細胞である。通常は、ラットまたはマウス骨髄腫細胞系が利用される。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つまたは複数の物質を好ましくは含有する好適な培養培地に播種し、成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる物質である、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを、通常は含む（ＨＡＴ培地）。
【０２８８】
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性であるものである。これらのうち、好ましいのは、マウス骨髄腫系、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２細胞（およびその誘導体、例えば、Ｘ６３−Ａｇ８−６５３）である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系も、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １３３：３００１  （１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐｐ．  ５１−６３  （Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８７））。
【０２８９】
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法により、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）により決定される。
【０２９０】
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を所望の抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性および特異性を、免疫沈降法により、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）により決定することができる。そのような技術およびアッセイは、当技術分野において公知である。例えば、結合親和性を、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １０７：２２０  （１９８０）のスキャッチャード解析により決定することができる。
【０２９１】
所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈手順によりサブクローニングし、標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ、上掲）により成長させることができる。このために好適な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞を哺乳動物においてｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍として成長させることができる。
【０２９２】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡセファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの、従来の免疫グロブリン精製手順により、培養培地、腹水液または血清から適切に分離される。
【０２９３】
モノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているものおよび上述のものなどの、組換えＤＮＡ法により作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離およびシークエンシングされる。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離したら、ＤＮＡを発現ベクター内に配置することができ、次いでこれらを、そうしなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞にトランスフェクトして、そのような組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ５：２５６−２６２  （１９９３）およびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖｓ．  １３０：１５１−１８８  （１９９２）が挙げられる。
【０２９４】
さらなる実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４８：５５２−５５４  （１９９０）に記載されている技術を使用して生成された抗体ファージライブラリーから抗体を単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１−５９７  （１９９１）には、ファージライブラリーを使用する、マウスおよびヒト抗体の単離が、それぞれ記載されている。その後の公表文献には、鎖シャフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １０：７７９−７８３  （１９９２））、ならびに非常に大きいファージライブラリーを構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染およびｉｎ  ｖｉｖｏ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２１：２２６５−２２６６  （１９９３））が記載されている。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための旧来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替法である。
【０２９５】
ＤＮＡを、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を代用することにより改変することもでき（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８１：６８５１  （１９８４））、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を共有結合で結合させることにより改変することもできる。概して、そのような非免疫グロブリンポリペプチドで抗体の定常ドメインを置換し、またはそれらで抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインを置換して、ある抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位と、異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作製する。
【０２９６】
本明細書に記載のモノクローナル抗体は一価であり得、その調製は、当技術分野において周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖と改変された重鎖との組換え発現を含む。重鎖は、一般に、重鎖架橋を防止するためにＦｃ領域内の任意の地点で切断される。あるいは、適切なシステイン残基は、架橋を防止するために、別のアミノ酸残基で置換されることもありまたは欠失される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法は、一価抗体の調製にも好適である。抗体のその断片、特にＦａｂ断片を生じさせるための消化は、当技術分野において公知の通例の技術を使用して果たすことができる。
【０２９７】
架橋剤を伴うものを含む、合成タンパク質化学における公知の方法を使用して、キメラまたはハイブリッド抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することもできる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を構築することができる。この目的のための好適な試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデートが挙げられる。
【０２９８】
モノクローナル抗体産生については実施例１も参照されたい。
抗体部分をコードする核酸分子
【０２９９】
本出願は、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）の１つまたは複数の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子をさらに提供する。一部の実施形態では、核酸分子は、抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、核酸分子は、抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）の、重鎖をコードするポリヌクレオチドと軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。一部の実施形態では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ）をコードする核酸分子が提供される。
【０３００】
一部のそのような実施形態では、重鎖および軽鎖は、２つの別々のポリペプチドとして、１つの核酸分子からまたは２つの別々の核酸分子から発現される。抗体がｓｃＦｖである場合などの一部の実施形態では、単一のポリヌクレオチドが、互いに連結されている重鎖と軽鎖両方を含む単一のポリペプチドをコードする。
【０３０１】
一部の実施形態では、抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されたときに重鎖または軽鎖のＮ末端に位置する、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上述の通り、リーダー配列は、ネイティブ重鎖もしくは軽鎖リーダー配列であってもよく、または別の異種リーダー配列であってもよい。
【０３０２】
核酸分子は、当技術分野における従来の組換えＤＮＡ技術を使用して構築することができる。一部の実施形態では、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に好適である発現ベクターである。
ベクター
【０３０３】
本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）のいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。本明細書に記載のｓｃＦｖ（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ）のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。そのようなベクターとしては、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、重鎖および軽鎖は、２つの別々のポリペプチドとしてベクターから発現される。例えば、抗体がｓｃＦｖである場合などの、一部の実施形態では、重鎖および軽鎖は、単一ポリペプチドの部分として発現される。
【０３０４】
一部の実施形態では、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、第１のベクターおよび第２のベクターは、同様の量（例えば、同様のモル量または同様の質量の量）で宿主細胞にトランスフェクトされる。一部の実施形態では、５：１〜１：５の間のモル比または質量比の第１のベクターと第２のベクターが、宿主細胞にトランスフェクトされる。一部の実施形態では、重鎖をコードするベクターおよび軽鎖をコードするベクターについて１：１〜１：５の間の質量比が使用される。一部の実施形態では、重鎖をコードするベクターおよび軽鎖をコードするベクターについて１：２の質量比が使用される。
【０３０５】
一部の実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞におけるまたはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されているベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０−８８９  （２００４）に記載されている。
宿主細胞
【０３０６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）を、細菌細胞などの原核細胞に、または真菌細胞（例えば、酵母）、植物細胞、昆虫細胞および哺乳動物細胞などの、真核細胞に、発現させることができる。そのような発現を、例えば、当技術分野において公知の手順に従って、行うことができる。ポリペプチドを発現させるために使用することができる例示的な真核細胞としては、ＣＯＳ細胞、例えばＣＯＳ７細胞など；２９３細胞、例えば２９３−６Ｅ細胞など；ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ−Ｓ、ＤＧ４４．Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、およびＦＵＴ８  ＣＨＯ細胞など；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；ならびにＮＳＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）を酵母に発現させることができる。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５Ａ１号を参照されたい。一部の実施形態では、特定の真核生物宿主細胞は、抗体部分の重鎖および／または軽鎖に所望の翻訳後改変を加えるその能力に基づいて選択される。例えば、一部の実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞において産生される同じポリペプチドより高いシアリル化レベルを有するポリペプチドを産生する。
【０３０７】
所望の宿主細胞への１つまたは複数の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されない、任意の方法により果たすことができる。非限定的な例示的な方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ３ｒｄ  ｅｄ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （２００１）に記載されている。核酸を任意の好適な方法に従って所望の宿主細胞に一過性にまたは安定的にトランスフェクトすることができる。
【０３０８】
本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターのいずれかを含む宿主細胞も提供する。一部の実施形態では、本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む宿主細胞を提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離するために使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例としては、ＣＯＳ、ＨｅＬａおよびＣＨＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０４４６２を参照されたい。好適な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）および酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、またはＫ．ｌａｃｔｉｓ）が挙げられる。
【０３０９】
一部の実施形態では、抗体部分は、無細胞系において産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ４９８：  ２２９−４４  （２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２２：  ５３８−４５  （２００４）；Ｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｄｖ．  ２１：  ６９５−７１３  （２００３）に記載されている。
抗体部分の精製
【０３１０】
抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）を任意の好適な方法により精製することができる。そのような方法としては、親和性マトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられるが、これらに限定されない。好適な親和性リガンドとしては、ＲＯＲ１  ＥＣＤ、および抗体定常領域に結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体親和性カラムを使用して、定常領域に結合することおよびＦｃ断片を含有する抗体部分を精製することができる。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルまたはフェニルカラムも、抗体などの一部のポリペプチドの精製に好適であり得る。イオン交換クロマトグラフィー（例えば、アニオン交換クロマトグラフィーおよび／またはカチオン交換クロマトグラフィー）も、抗体などの一部のポリペプチドの精製に好適である。ミックスモードクロマトグラフィー（例えば、逆相／アニオン交換、逆相／カチオン交換、疎水性相互作用／アニオン交換、親水性相互作用／カチオン交換など）も、抗体などの一部のポリペプチドの精製に好適である。多くのポリペプチド精製方法が、当技術分野において公知である。
ＶＩＩ．組成物、キットおよび製造物品
【０３１１】
本明細書に記載のイメージング剤もしくは単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤、抗体部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分）をコードする核酸、抗体部分をコードする核酸を含むベクター、または核酸もしくはベクターを含む宿主細胞のうちのいずれか１つを含む組成物（例えば、製剤）も、本明細書で提供される。
【０３１２】
本明細書に記載のイメージング剤または単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤の好適な製剤は、所望の純度を有するイメージング剤または単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤と必要に応じた薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｓｏｌ，  Ａ．  Ｅｄ．  （１９８０））とを混合することにより、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で得ることができる。許容される担体、賦形剤または安定剤は、利用される投与量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸；抗酸化剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えばメチルもしくはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシン；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む）；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。皮下投与に適応する凍結乾燥製剤は、ＷＯ９７／０４８０１に記載されている。そのような凍結乾燥製剤を、好適な希釈剤で高タンパク質濃度に復元し、復元された製剤を、本明細書におけるイメージング、診断または処置を受ける個体に皮下投与することができる。
【０３１３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば滅菌濾過膜による濾過により、容易に果たされる。
【０３１４】
本明細書に記載の、イメージング剤、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤、のいずれか１つ、ならびに／または必要に応じてキレート化合物および／もしくは放射性核種を含むキットも提供される。このキットは、本明細書に記載のイメージング、診断および処置の方法のいずれかに有用であり得る。
【０３１５】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）に特異的に結合する抗体部分とキレート化合物（例えば、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体）とを含むキットが、提供される。一部の実施形態では、キットは、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）をさらに含む。一部の実施形態では、キレート化合物は、放射性核種をキレート化する。
【０３１６】
一部の実施形態では、放射性核種（例えば、６８Ｇａ）で標識された抗体部分を含むイメージング剤を含むキットであって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンド）に特異的に結合する、キットが提供される。一部の実施形態では、抗体部分は、放射性核種をキレート化するキレート部分（例えば、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡまたはその誘導体）にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キットは、放射性核種で標識されていない抗体部分をさらに含む。
【０３１７】
一部の実施形態では、キットは、イメージング剤または単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を送達することができるデバイスをさらに含む。非経口送達などの用途のための１つのタイプのデバイスは、対象の身体に組成物を注射するために使用されるシリンジである。吸入デバイスも、ある特定の用途に使用され得る。
【０３１８】
一部の実施形態では、キットは、疾患または状態、例えば、がん、感染性疾患、自己免疫疾患、または代謝疾患を処置するための治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体の阻害剤である。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体に特異的に結合する放射性標識分子である。
【０３１９】
本出願のキットは、好適な包装材の中に存在する。好適な包装材としては、バイアル、ビン、ジャー、軟包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチックバッグ）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、緩衝剤および解釈情報などの追加の構成要素を必要に応じて提供することができる。
【０３２０】
したがって、本出願は、製造物品も提供する。製造物品は、容器と、その容器上のまたはその容器に付随するラベルまたは添付文書とを含むことができる。好適な容器としては、バイアル（例えば、密封バイアル）、ビン、ジャー、軟包装などが挙げられる。一般に、容器は、組成物を保持し、無菌取出口を有し得る（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能なストッパーを有する静脈内輸液バッグ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｂａｇ）またはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体の特定の状態のイメージング、診断または処置に使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、個体に組成物を投与するためのおよび個体をイメージングするための指示（ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）をさらに含む。ラベルは、復元および／または使用についての指示（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ）を示し得る。組成物を保持する容器は、復元製剤の反復投与（２〜６回の投与）を可能にする、複数回使用用バイアルであることもある。添付文書は、診断製品の市販のパッケージ内に慣習的に含まれている指示であって、そのような診断製品の使用に関する適応症、使用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含む指示を指す。加えて、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などの、薬学的に許容される緩衝液を含む、第２の容器をさらに含むことができる。製造物品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含むことができる。
【０３２１】
キットまたは製造物品は、薬局、例えば、病院の薬局および調剤薬局における保管および使用に十分な量で包装された、組成物の複数の単位用量および使用のための指示を含むことができる。
【０３２２】
いくつかの実施形態が本発明の範囲および趣旨の中で可能であることは、当業者であれば認識する。以下の非限定的実施例への言及によってこれからさらに詳細に本発明を説明する。以下の実施例は、本発明をさらに例証するものであるが、言うまでもなく、以下の実施例を、いかなる点でも本発明の範囲を制限すると解釈すべきでない。
例示的実施形態
【０３２３】
実施形態１．個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定する方法であって、（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤を、個体に投与するステップであって、抗体断片が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、ステップ；および（ｂ）非侵襲的イメージング技術を用いて個体においてイメージング剤をイメージングするステップを含む方法。
【０３２４】
実施形態２．個体の目的の組織における免疫チェックポイントリガンドの発現レベルを、組織からイメージング剤により放出されるシグナルに基づいて決定するステップをさらに含む、実施形態１の方法。
【０３２５】
実施形態３．個体における２つまたはそれより多くの免疫チェックポイントリガンドの分布を決定するステップを含む、実施形態１または２の方法。
【０３２６】
実施形態４．イメージング剤が、血清中で約１０分〜約４８時間以内に個体からクリアランスされる、実施形態１〜３のいずれか１つの方法。
【０３２７】
実施形態５．抗体部分の半減期が、約１０分〜約２４時間の間である、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０３２８】
実施形態６．抗体部分の分子量が、約１２０ｋＤａ以下である、実施形態１〜５のいずれか１つの方法。
【０３２９】
実施形態７．抗体部分が、免疫チェックポイントリガンドとの約９×１０−１０Ｍ〜約１×１０−８Ｍの間のＫＤを有する、実施形態１〜６のいずれか１つの方法。
【０３３０】
実施形態８．抗体部分が、非ヒト哺乳動物からの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する、実施形態１〜７のいずれか１つの方法。
【０３３１】
実施形態９．抗体部分が、カニクイザルからの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する、実施形態８の方法。
【０３３２】
実施形態１０．抗体部分が、マウスからの免疫チェックポイントリガンドと交差反応する、実施形態８または９の方法。
【０３３３】
実施形態１１．抗体部分がヒト化されている、実施形態１〜１０のいずれか１つの方法。
【０３３４】
実施形態１２．抗体部分が、酸性または中性ｐＨで安定している、実施形態１〜１１のいずれか１つの方法。
【０３３５】
実施形態１３．抗体部分が、約５５〜７０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する、実施形態１〜１２のいずれか１つの方法。
【０３３６】
実施形態１４．抗体部分が、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、およびＶＨＨからなる群から選択される、実施形態１〜１３のいずれか１つの方法。
【０３３７】
実施形態１５．抗体部分が、ｓｃＦｖである、実施形態１〜１４のいずれか１つの方法。
【０３３８】
実施形態１６．ｓｃＦｖが、１つまたは複数の操作されたジスルフィド結合を含む、実施形態１５の方法。
【０３３９】
実施形態１７．ｓｃＦｖが、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基が、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく、実施形態１６の方法。
【０３４０】
実施形態１８．抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、実施形態１〜１３のいずれか１つの方法。
【０３４１】
実施形態１９．Ｆｃ断片が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である、実施形態１８の方法。
【０３４２】
実施形態２０．Ｆｃ断片が、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく、実施形態１８または１９の方法。
【０３４３】
実施形態２１．ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、重鎖可変領域（ＶＨ）、必要に応じたペプチドリンカー、および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態１５〜２０のいずれか１つの方法。
【０３４４】
実施形態２２．ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、必要に応じたペプチドリンカー、およびＶＨを含む、実施形態１５〜２０のいずれか１つの方法。
【０３４５】
実施形態２３．ｓｃＦｖが、配列番号４７または４８のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含む、実施形態２１または２２の方法。
【０３４６】
実施形態２４．免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドである、実施形態１〜２３のいずれか１つの方法。
【０３４７】
実施形態２５．免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１である、実施形態２４の方法。
【０３４８】
実施形態２６．抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含むか；または抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体と競合的に、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、実施形態２５の方法。
【０３４９】
実施形態２７．目的の組織が、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイまたは他のアッセイに基づいて免疫チェックポイントリガンドに対して陰性である、実施形態２〜２６のいずれか１つの方法。
【０３５０】
実施形態２８．目的の組織が、免疫チェックポイントリガンドの低い発現レベルを有する、実施形態２〜２７のいずれか１つの方法。
【０３５１】
実施形態２９．目的の組織が、免疫細胞の浸潤の際にのみ免疫チェックポイントリガンドを発現する、実施形態２〜２８のいずれか１つの方法。
【０３５２】
実施形態３０．ある期間にわたって個体をイメージングするステップを含む、実施形態１〜２９のいずれか１つの方法。
【０３５３】
実施形態３１．放射性核種が、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される、実施形態１〜３０のいずれか１つの方法。
【０３５４】
実施形態３２．放射性核種が、６８Ｇａである、実施形態３１の方法。
【０３５５】
実施形態３３．抗体部分が、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている、実施形態３１または３２の方法。
【０３５６】
実施形態３４．キレート化合物が、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはその誘導体である、実施形態３３の方法。
【０３５７】
実施形態３５．キレート化合物が、ＮＯＴＡである、実施形態３４の方法。
【０３５８】
実施形態３６．抗体部分を放射性核種で標識することによりイメージング剤を調製するステップをさらに含む、実施形態１〜３５のいずれか１つの方法。
【０３５９】
実施形態３７．非侵襲的イメージング技術が、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングまたは陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを含む、実施形態１〜３６のいずれか１つの方法。
【０３６０】
実施形態３８．非侵襲的イメージング技術が、コンピュータ断層撮影イメージング、磁気共鳴イメージング、化学発光イメージング、または電気化学発光イメージングを含む、実施形態３７の方法。
【０３６１】
実施形態３９．イメージング剤が、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または経口投与される、実施形態１〜３８のいずれか１つの方法。
【０３６２】
実施形態４０．イメージングが、イメージング剤の投与後約１０分〜約２４時間の間に行われる、実施形態１〜３９のいずれか１つの方法。
【０３６３】
実施形態４１．放射性核種で標識されていない抗体部分をイメージング剤の投与の前に個体に投与するステップをさらに含む、実施形態１〜４０のいずれか１つの方法。
【０３６４】
実施形態４２．個体が、固形腫瘍を有する、実施形態１〜４１のいずれか１つの方法。
【０３６５】
実施形態４３．固形腫瘍が、結腸腫瘍、黒色腫、腎臓腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、乳房腫瘍、および膵臓腫瘍からなる群から選択される、実施形態４２の方法。
【０３６６】
実施形態４４．個体が、血液悪性疾患を有する、実施形態１〜４３のいずれか１つの方法。
【０３６７】
実施形態４５．血液悪性疾患が、白血病、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される、実施形態４４の方法。
【０３６８】
実施形態４６．個体が、感染性疾患、自己免疫疾患、または代謝疾患を有する、実施形態１〜４１のいずれか１つの方法。
【０３６９】
実施形態４７．疾患または状態を有する個体を診断する方法であって、（ａ）実施形態１〜４６のいずれか１つの方法を使用して個体における免疫チェックポイントリガンドの分布を決定するステップ、および（ｂ）イメージング剤のシグナルが目的の組織で検出された場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断し、またはイメージング剤のシグナルが目的の組織で検出されなかった場合には個体を免疫チェックポイントリガンドに対して陰性と診断するステップを含む方法。
【０３７０】
実施形態４８．疾患または状態を有する個体を処置する方法であって、（ａ）実施形態４７の方法を使用して個体を診断するステップ、および（ｂ）個体が免疫チェックポイントリガンドに対して陽性と診断された場合、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体を標的とする治療剤の有効量を個体に投与するステップを含む方法。
【０３７１】
実施形態４９．治療剤が、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体の阻害剤である、実施形態４８の方法。
【０３７２】
実施形態５０．治療剤が、免疫チェックポイントリガンドまたはその受容体に特異的に結合する放射性標識分子である、実施形態４８の方法。
【０３７３】
実施形態５１．免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１であり、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体が個体に投与される、実施形態４８〜５０のいずれか１つの方法。
【０３７４】
実施形態５２．免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１様リガンドである、実施形態４８〜５０のいずれか１つの方法。
【０３７５】
実施形態５３．配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大約５つのアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体部分を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３７６】
実施形態５４．抗体部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む、実施形態５３の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３７７】
実施形態５５．配列番号１のＨＣ−ＣＤＲ１とＨＣ−ＣＤＲ２とＨＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＨ；および配列番号３のＬＣ−ＣＤＲ１とＬＣ−ＣＤＲ２とＬＣ−ＣＤＲ３とを含むＶＬを含む抗体部分を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３７８】
実施形態５６．抗体部分が、配列番号１、５、９、１１および１３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３、７、１５、１７および１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態５３〜５５のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３７９】
実施形態５７．抗体部分が、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｇ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｈ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；または（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態５６の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８０】
実施形態５８．抗体部分がヒト化されている、実施形態５３〜５７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８１】
実施形態５９．抗体部分が、ｓｃＦｖを含む、実施形態５３〜５８のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８２】
実施形態６０．ｓｃＦｖが、第１の操作されたシステイン残基をＶＨの４４位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの１００位に含み、または第１の操作されたシステイン残基をＶＨの１０５位に、および第２の操作されたシステイン残基をＶＬの４３位に含み、第１の操作されたシステイン残基および第２の操作されたシステイン残基が、ジスルフィド結合を形成し、アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく、実施形態５９の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８３】
実施形態６１．ｓｃＦｖが、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態５９または６０の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８４】
実施形態６２．ｓｃＦｖが、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７および３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態６１の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８５】
実施形態６３．抗体部分が、ｓｃＦｖである、実施形態５９〜６２のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８６】
実施形態６４．抗体部分が、Ｆｃ断片に融合したｓｃＦｖである、実施形態５９〜６２のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８７】
実施形態６５．Ｆｃ断片が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片である、実施形態６４の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８８】
実施形態６６．Ｆｃ断片が、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ変異を有し、アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく、実施形態６４または６５の単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３８９】
実施形態６７．実施形態５３〜６６のいずれか１つの抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤中の抗体部分と競合的にＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤。
【０３９０】
実施形態６８．放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤。
【０３９１】
実施形態６９．免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドである、実施形態６８のイメージング剤。
【０３９２】
実施形態７０．抗体部分が、放射性核種で標識されている、実施形態５３〜６７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を含むイメージング剤。
【０３９３】
実施形態７１．放射性核種が、６４Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９Ｆ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、８６Ｙ、８８Ｙおよび４５Ｔｉからなる群から選択される、実施形態６８〜７０のいずれか１つのイメージング剤。
【０３９４】
実施形態７２．放射性核種が、６８Ｇａである、実施形態７１のイメージング剤。
【０３９５】
実施形態７３．抗体部分が、放射性核種をキレート化するキレート化合物にコンジュゲートされている、実施形態７１または７２のイメージング剤。
【０３９６】
実施形態７４．キレート化合物が、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはその誘導体である、実施形態７３のイメージング剤。
【０３９７】
実施形態７５．キレート化合物が、ＮＯＴＡである、実施形態７４のイメージング剤。
【０３９８】
実施形態７６．免疫チェックポイントリガンドを標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分にキレート化合物をコンジュゲートさせて抗体部分コンジュゲートを生じさせるステップ、（ｂ）放射性核種を抗体部分コンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法。
【０３９９】
実施形態７７．免疫チェックポイントリガンドが、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ１様リガンドである、実施形態７６の方法。
【０４００】
実施形態７８．ＰＤ−Ｌ１を標的とするイメージング剤を調製する方法であって、（ａ）実施形態５３〜６７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤中の抗体部分にキレート化合物をコンジュゲートさせて抗ＰＤ−Ｌ１コンジュゲートを生じさせるステップ；および（ｂ）放射性核種を抗ＰＤ−Ｌ１抗体コンジュゲートと接触させることによってイメージング剤を生じさせるステップを含む方法。
【０４０１】
実施形態７９．キレート化合物が、抗体部分のリシンにコンジュゲートされる、実施形態７６〜７８のいずれか１つの方法。
【０４０２】
実施形態８０．実施形態５３〜６７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤をコードする単離された核酸。
【０４０３】
実施形態８１．実施形態８０の単離された核酸を含むベクター。
【０４０４】
実施形態８２．実施形態５３〜６７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤、実施形態８０の単離された核酸、または実施形態８１のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【０４０５】
実施形態８３．実施形態５３〜６７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤を含む医薬組成物。
【０４０６】
実施形態８４．実施形態５３〜６７のいずれか１つの単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体剤または実施形態６８〜７５のいずれか１つのイメージング剤を含むキット。
【０４０７】
実施形態８５．（ａ）免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する抗体部分と、（ｂ）キレート化合物とを含むキット。
【０４０８】
実施形態８６．放射性核種をさらに含む、実施形態８５のキット。
【０４０９】
実施形態８７．（ａ）放射性核種で標識された抗体部分を含むイメージング剤であって、抗体部分が免疫チェックポイントリガンドに特異的に結合する、イメージング剤と、（ｂ）放射性核種で標識されていない抗体部分とを含むキット。
【実施例】
【０４１０】
下記の実施例は、本発明の単なる典型例であることを意図したものであり、したがって、いかなる点においても本発明を限定するものと見なすべきではない。以下の実施例および詳細な説明は、実例として提供するものであり、限定として提供するものではない。
（実施例１）
ヒトＰＤ−Ｌ１に対するモノクローナル抗体の調製および特徴付け
免疫
【０４１１】
８〜１０週齢メスＰＤ−Ｌ１欠損マウス（Ｈ  Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  ２００４  Ｍａｒ；２０（３）：３２７−３６）の複数の部位に、１００μｇのｈＰＤ−Ｌ１ｍＩｇ融合タンパク質とフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とを含む２００μｌのエマルジョンで皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。各動物に、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中で処方した同じ濃度のｈＰＤ−Ｌ１ｍＩｇ融合タンパク質を含むエマルジョンで、２または３回の追加免疫を施した。血清力価試験のために各免疫の２週間後に動物から血液試料を採取した。十分な力価に到達し次第、動物に、ＰＢＳ中のＰＤ−Ｌ１ｍＩｇ融合タンパク質６０μｇの追加免疫注射を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって施した。追加免疫注射の５日後に、動物を屠殺し、それらの脾臓を無菌採取した。
【０４１２】
全脾臓を解離させて単個細胞浮遊液にした。ＡＣＫ緩衝液を使用して、赤血球を溶解した。次いで、５０ｍｌ円錐遠心分離管の中で脾細胞をＳＰ２／０−Ａｇ１４骨髄腫細胞（ＡＴＣＣから）と１：１比で混合した。遠心分離後、上清を廃棄し、５０％ポリエチレングリコール（Ｒｏｃｈｅ）で細胞融合を誘導した。融合細胞をＨＡＴ選択培地で８〜１０日間培養した。ＥＬＩＳＡを使用して、上清の内容物をｈＰＤ−１発現細胞に結合するそれらの能力について分析し、フローサイトメトリー分析を使用して陽性クローンをさらに確認した。５回、限界希釈法を使用して陽性ハイブリドーマのサブクローニングを行って、純粋なモノクローナル培養物を獲得した。
抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の特徴付け
抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の結合特異性
【０４１３】
ｈＰＤ−Ｌ１をトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／ｈＰＤ−Ｌ１細胞）を使用して、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳＶｅｒｓｅ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの結合特異性を決定した。具体的には、ＣＨＯ／ｈＰＤ−Ｌ１細胞を氷上で３０分間、漸増量（０．０６ｎｇ、０．１２５ｎｇ、０．２５ｎｇ、０．５ｎｇ、１ｎｇ、２ｎｇ、４ｎｇ、および１００ｎｇ）の抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｂ７とともにインキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析の前に抗ｍＩｇＧ−ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とともにさらにインキュベートした。図１Ａおよび１Ｂに示されているように、抗ｈｐＤ−Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｂ７は、用量依存的に高い特異性でｈＰＤ−Ｌ１に結合した。
【０４１４】
Ｍｏｕｓｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｉｓｏｔｙｐｉｎｇ  Ｋｉｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、モノクローナル抗体のアイソタイプはＩｇＧ１κであることが決定された。
種間交差反応性
【０４１５】
マウスＰＤ−Ｌ１をトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／ｍＰＤ−Ｌ１）を使用して、抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂとマウスＰＤ−Ｌ１の種間交差反応性を評価した。フローサイトメトリー分析の前に細胞を抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂとともにインキュベートした。図２Ａは、ヒトＰＤ−Ｌ１に対する抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの結合特異性を示す。図２Ｂに示されているように、抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂは、マウスＰＤ−Ｌ１にも結合する。
抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体産生ハイブリドーマ細胞のシークエンシング
【０４１６】
抗体産生ハイブリドーマ細胞をシークエンシングするために、１×１０７個のハイブリドーマ細胞を採取し、ＰＢＳで洗浄した。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、メッセンジャーＲＮＡをハイブリドーマから抽出した。ＳＭＡＲＴｅｒ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して、ＲＡＣＥ−Ｒｅａｄｙ  ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡを合成した。逆転写後、ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡを鋳型として用い、キットにより提供された５’ユニバーサルプライマー（ＵＰＭ）と、マウスＩｇＧ１重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列を使用して設計した３’遺伝子特異的プライマー（ＧＳＰ１）とを用いて、５’ＲＡＣＥ  ＰＣＲ反応を行った。ＲＡＣＥ産物をゲル電気泳動分析により特定した。次いで、Ｚｅｒｏ  Ｂｌｕｎｔ  ＴＯＰＯ  ＰＣＲ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してＰＣＲ産物をＴベクターにクローニングした。形質転換後、プラスミドをシークエンシング解析により検証した。ＶＢＡＳＥ２（ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  ｗｗｅｂ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ）を使用して重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列を解析し、表３に収載した。
（実施例２）
抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体のヒト化および特徴付け
抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体のヒト化
【０４１７】
ヒト化は、抗ｈＰＤ−Ｌ１ハイブリドーマ細胞からの重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）配列に基づいて行った。最初のステップとして、親マウスＶＨおよびＶＬ配列と、ヒトＩｇＧ定常領域と、ヒトκ鎖とを含むマウス−ヒトキメラｍＡｂを生成した。キメラ抗体の特徴付けに基づいて、３つのＶＨおよび３つのＶＬヒト化配列を設計し、９つのヒト化抗体を生成するために使用した。キメラおよびヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体のＶＨおよびＶＬ配列を表２に収載する。
ヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体の特徴付け
ヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体の結合活性
【０４１８】
親キメラ抗体と比較してヒト化抗体の結合活性を調査するために、ＣＨＯ／ｈＰＤ−Ｌ１細胞を、段階希釈した親キメラ抗体またはヒト化抗体とともにインキュベートした。フローサイトメトリーを使用して結合親和性を分析し、結果は、ｈＰＤ−Ｌ１に対して親キメラ抗体と比較して高い結合親和性を実証するヒト化抗体もあり、その一方で、親キメラ抗体と比較して同様のまたは若干低い結合親和性を実証するヒト化抗体もあることを示した（図３）。
ヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体の結合親和性および動態
【０４１９】
ヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂとｈＰＤ−Ｌ１タンパク質との結合親和性および動態（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）をＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で評価した。ｈＰＤ−Ｌ１ｍＩｇタンパク質をセンサーチップＣＭ５上にアミンカップリングにより固定した。親およびヒト化抗体を１、２、４、８、１６および３２ｎＭの濃度勾配で注入した。結合速度（Ｋｏｎ）、解離速度（Ｋｏｆｆ）、および親和定数（ＫＤ）を含む、結合動態パラメーターを、完全動態解析（ｆｕｌｌ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ）により決定した。表７に示されているように、親抗体とヒト化抗体の間に結合速度（Ｋｏｎ）の有意な差はなかった。表７および図４に示されているように、抗体は、解離速度（Ｋｏｆｆ）が最低のものから最高のもの順に、親（ＰＡ２００）、Ｈ１＋Ｌ２（Ｈ１２）、Ｈ３＋Ｌ２（Ｈ３２）、Ｈ１＋Ｌ１（Ｈ１１）、Ｈ１＋Ｌ３（Ｈ１３）、Ｈ３＋Ｌ１（Ｈ３１）、Ｈ３＋Ｌ３（Ｈ３３）、Ｈ２＋Ｌ２（Ｈ２２）、Ｈ２＋Ｌ１（Ｈ２１）、およびＨ２＋Ｌ３（Ｈ２３）であった。表７に示されているように、抗体は、親和定数（ＫＤ）が最高のものから最低のもの順に、親、Ｈ１＋Ｌ２、Ｈ３＋Ｌ２、Ｈ３＋Ｌ３、Ｈ３＋Ｌ１、Ｈ２＋Ｌ２、Ｈ１＋Ｌ３、Ｈ１＋Ｌ１、Ｈ２＋Ｌ３、およびＨ２＋Ｌ１であった。
表７：親およびヒト化抗体のＫｏｎ、ＫｏｆｆおよびＫＤ値
【表７】
2021525805.tif 000012
（実施例３）
抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体の調製および特徴付け
ｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体の配列設計および合成
【０４２０】
ヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体バリアント２の重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を使用してｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体を生成した。具体的には、重鎖および軽鎖をリンカーにより接続し、その後、ヒンジ配列（ＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣ、配列番号５０）およびヒト免疫グロブリンＩｇＧ１  Ｆｃ部分（ＣＨ２−ＣＨ３領域）を接続した。加えて、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体の迅速なクリアランスのために、Ｈ３１０Ａ（すなわち、ＣＡＣからＧＣＣへの）およびＨ４３５Ｑ（すなわちＣＡＣからＣＡＧへの）変異をＣＨ２およびＣＨ３領域に導入した（図５）。野生型ＣＨ２−ＣＨ３領域を有するｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体（ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｗｔ）の配列、および変異体ＣＨ２−ＣＨ３領域を有するｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体（ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｍｔ）の配列を、表６に示す。
【０４２１】
ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＷｔおよびｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＭｔのＤＮＡ配列をそれぞれｐｃＤＮＡ３．３ベクターにクローニングし、ＥｘＰｉ  ２９３細胞への一過性トランスフェクションに使用した。細胞培養上清からのタンパク質を、機能分析のためにプロテインＧセファロースカラム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。
ｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体の特徴付け
【０４２２】
抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＷｔおよびｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｍｔ抗体を、ＳＤＳ  Ｐａｇｅ  Ｇｅｌ電気泳動（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）により同定した。図６に示されているように、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを用いて還元条件と非還元条件の両方でｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体を同定した。ｈＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体の結合親和性を、親抗体のものと比較してＦＡＣＳにより調査した。結果を図７に示す。ヒストグラムに示されているように、ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＷｔとｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｍｔの両方が、親抗体と同様の結合親和性を実証した。Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔシステムを使用して、ｈＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体（ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＷＴおよびｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＭＴ）の結合親和性および動態を親抗体（抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１）のものと比較してさらに分析した。表８は、抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１、抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１−Ｃ５２Ｗ（すなわち、Ｃ５２Ｗ変異を有するＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＭｔおよびｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｗｔの結合親和性および動態パラメーターを示す。
表８：抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−ｈＦｃおよび親対照抗体の結合動態パラメーター
【表８】
2021525805.tif 000013
【０４２３】
薬物動態研究は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＷｔおよびｓｃＦｖ−ｈＦｃ  ＭＴ抗体の注射、続いて、注射後１、２、３、４および６日目のｓｃＦｖ−ｈＦｃ抗体およびｈＩｇＧの血清力価の測定により行った。図８Ａおよび８Ｂに示されているように、ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｗｔは、ｓｃＦｖ−ｈＦｃ  Ｍｔと比較して抗体およびｈＩｇＧの高い血清力価を示した。
（実施例４）
抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの生成および特徴付け
ヒト化抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの生成および小規模発現
【０４２４】
抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖについての構築物設計の概略図を図９に示す。具体的には、ヒト化抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体からのＶＨおよびＶＬ抗原結合ドメインを含有し、かつ間にペプチドリンカーを含有する断片を人工的に合成し、これらの断片は、両方の配向（すなわち、ＶＨ−リンカー−ＶＬ、およびＶＬ−リンカー−ＶＨ）を含んだ。（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）４（配列番号４７）ペプチドおよびＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号４８）ペプチドリンカーを、全てのｓｃＦｖの構築に使用した。加えて、ＶＨ４４／ＶＬ１００またはＶＨ１０５／ＶＬ４３（Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う）に単一変異を導入することにより、ｓｃ−ｄｓＦｖも構築した。ＶＨおよびＶＬを含有する断片はまた、制限エンドヌクレアーゼＨｉｎｄＩＩＩおよびＥｃｏＲＩ認識部位をそれぞれ５’および３’末端に、ならびにＨｉｓタグ配列をＣ末端に含んだ。ＶＨおよびＶＬを含有する断片を５’末端でオーバーラッピングＰＣＲによりヒトＩｇＧ１重鎖ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３またはＩｇＧ１軽鎖ＣＬのどちらかと融合させた。次いで、融合した重鎖および軽鎖をｐＣＤＮＡ３．１（＋）発現ベクターの対応するＨｉｎｄＩＩＩおよびＥｃｏＲＩ認識部位にクローニングした。合計８個のｓｃＦｖを設計し、合成した。ｓｃＦｖは、表５に示す配列を含む。加えて、各ｓｃＦｖは、短いペプチドリンカー（すなわち、配列番号５１）を介してＣ末端に融合したＨｉｓタグを含む。親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖ（ｉｒｒ−対照ｓｃＦｖ）の構築物も合成した。
【０４２５】
構築物をｅｘｐｉＣＨＯ細胞に一過性にトランスフェクトした。１回だけの給餌を１８時間後に行い、連続５日間の培養後に上清を回収した。上清からのタンパク質を、機能分析のためにプロテインＬセファロースカラム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびｓｕｐｅｒｄｅｘ−７５  ｉｎｃｒｅａｓｅカラム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により精製した。親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖに同様にトランスフェクトし、それらを同様に精製した。ｓｃＦｖの力価をＦｏｒｔｅｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔにより測定した。最終精製ｓｃＦｖの濃度をＮａｎｏｄｒｏｐにより決定した。５０ｍｇ／Ｌの高い収量を有したｓｃ−ｄｓＦｖを同位体標識に選択した。このｓｃ−ｄｓＦｖをｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）と呼ぶ。図１０は、還元条件下と非還元条件下の両方での、ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖのＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果を示す。
ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の特徴付け
ＦＡＣＳにより測定した場合のｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）のＰＤ−Ｌ１結合活性
【０４２６】
ＣＨＯ／ＰＤ−Ｌ１安定性細胞を回収し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＦＢＳを含有する１×ＰＢＳ）で２回洗浄した。次いで、細胞を、様々な希釈度の親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体（抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１）またはｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）で３０分間、氷上で染色した。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、６０ｎｇのＰＥコンジュゲート抗ヒトＦｃ抗体（抗ＨｕＦｃ−ＰＥ、ＢＤ）でまたは６０ｎｇのＰＥコンジュゲート抗Ｈｉｓタグ抗体（抗Ｈｉｓタグ−ＰＥ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で３０分間さらに染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、３００ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液に浮遊させた。図１１のヒストグラムにより示されているように、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体（抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１）とｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の両方の結合活性が濃度依存性パターンを明示した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６により測定した場合のｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）のＰＤ−Ｌ１結合親和性
【０４２７】
全ての試料をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中で調製した。ビオチン標識ｈＰＤ−Ｌ１−マウスＦｃ融合タンパク質を所定の負荷しきい値でＳＡセンサーにロードした。ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）を３．１２５ｎＭ〜５０ｎＭの濃度勾配でセンサーに適用した。バックグラウンド減算を使用して、センサーのドリフトを補正した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェアを使用してデータを１：１結合モデルにフィッティングして、結合（Ｋｏｎ）および解離（Ｋｏｆｆ）速度を得た。ＫＤ値は、Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎに基づいて算出した。表９に示されているように、ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の結合親和性は、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体のものと同様であった。
表９．  ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）および親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体の結合親和性分析
【表９】
2021525805.tif 000014
示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定した場合のｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の疎水性露出の温度
【０４２８】
ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体および陰性対照ｓｃＦｖ（ｉｒｒ−対照ｓｃＦｖ）を上記の通り発現させ、精製した。２つの緩衝液条件（ｐＨ７．４での１×ＰＢＳおよびｐＨ５．５でのクエン酸Ｎａ緩衝液）を使用し、Ｈｉｔｒａｐ  Ｇ２５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して濃縮タンパク質ストックの緩衝液交換によってこれらの条件を達成した。緩衝液を変えた後、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を用いて溶質のタンパク質濃度を決定した。ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）およびｉｒｒ−対照ｓｃＦｖの最終濃度は１ｍｇ／ｍｌであり、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体の濃度は、０．５ｍｇ／ｍｌであった。使用直前に、ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ原液（５０００倍）を対応する緩衝液で２５倍の濃度に希釈した。次いで、希釈した染料をタンパク質試料に添加して、５倍ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ最終作業濃度を得た。ＣＦＸ９６リアルタイムＰＣＲシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用してＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅシグナルを測定した。励起／発光フィルター設定は、ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ蛍光シグナルと適合する「ＦＲＥＴ」チャネルに従って決定した。１℃／分の加熱速度で０．５℃刻みの２５℃〜９５℃の温度勾配に試料を曝露した。温度勾配に対するＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅシグナルの変化を表す−ｄ（ＲＦＵ）／ｄＴ曲線を図１２に示す。−ｄ（ＲＦＵ）／ｄＴ曲線の第１のトラフを疎水性露出の温度（Ｔｍ１またはＴｈ）と定義し、ＣＦＸ  ＭＡＮＡＧＥＲ（商標）ソフトウェアにより数学的二次導関数法を使用して算出した。図１２に示されているように、ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）は、６１℃のＴｍ１を示し、親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体は、６２℃のＴｍ１を示したが、陰性対照ｓｃＦｖは、５４℃のＴｍ１を示した。ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）は、ＰＢＳ緩衝液中でもクエン酸Ｎａ緩衝液中でも親抗体と同様の熱安定性を示した。
低温および酸性ｐＨ条件でのｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の安定性
【０４２９】
４０℃加速安定性試験をｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）および親ヒト化ＩｇＧ１陽性対照抗体に対して行った。手短に述べると、ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）および対照抗体を１ｍｇ／ｍＬの濃度で４℃または４０℃安定性試験チャンバー（Ｍｅｍｍｅｒｔ  ＩＣＨ１１０Ｌ）のどちらかに入れた。２週間ごとに、試料をチャンバーから取り出し、ＦＡＣＳを使用してＰＤ−Ｌ１に対するそれらの結合親和性を測定した。図１３Ａ〜１３Ｄに示されているように、ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）の結合親和性は、高温（４０℃）および高ｐＨ（ｐＨ７．４）条件下では経時的に劇的に低下した。ｓｃＦｖ（ＰＤ−Ｌ１）は、低温（４℃）および酸性ｐＨ（ｐＨ５．５）条件では比較的安定した特性を示した。
（実施例５）
抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの放射性標識および放射性標識された抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの特徴付け
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１抗体部分の調製
【０４３０】
下記の実験は、ヒトＰＤ−Ｌ１の検出用のイメージング剤を調製するために一例として抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを使用した。他の抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体部分を有するイメージング剤は、同様の実験手順を使用して、下記の抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの代わりに別の抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、または全長抗体）を用いることにより調製した。
抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖとＮＯＴＡのカップリング
【０４３１】
ｓｃＦｖ抗体を（２０ｍＭクエン酸／クエン酸ナトリウム／塩化ナトリウム、＋０．８％（ｍ／ｖ）、ｐＨ５．５で緩衝化）２．３１８ｍｇ／ｍＬの濃度で調合した。４００μＬの０．０５Ｍ  ＮａＨＣＯ３−Ｎａ２ＣＯ３（ｐＨ８．７）をｓｃＦｖ抗体溶液に添加し、その後、１６０００ｒｐｍで２０分間、遠心分離した。上清を取り出して１００μＬの最終体積を得た。上記ステップをもう１度繰り返し、最終１００μＬ溶液を１．５ｍＬ遠心分離管に移した。２．６４μＬのｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＮＯＴＡを９２７μＭの最終濃度で遠心分離管に添加し、その後、１時間、３７℃でインキュベートした。
【０４３２】
ＮＡＰ−５カラムをＰＢＳで予備平衡させた後、ｓｃＦｖ／ＮＯＴＡ溶液をカラムに添加した。次いで、カラムを０．４ｍＬのＰＢＳで洗浄し、０．５ｍＬのＰＢＳで溶出した。溶出物を０．０５ｍＬ分に小分けし、−２０℃で保管した。
６８ＧａでのＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの標識
【０４３３】
６８Ｇａを０．０５Ｎ  ＨＣｌで洗浄して２１ｍＣｉ／ｍＬの最終濃度にした。次いで、４６．５μＬの１．２５Ｍ酢酸ナトリウムを最終ｐＨ４に達するように添加した。５０μＬのＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ（０．０５ｍｇ／ｍｌ）を３５０ｕＬの６８Ｇａに添加し、その後、１０分間、２５℃でインキュベートした。薄層クロマトグラフィーペーパーを使用して、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの標識率を決定した。０．１Ｍシトレートを展開剤（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）として使用した場合、標識率は１７％であると決定された。ＰＢＳを展開剤として使用した場合、標識率は１００％であると決定された。
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの精製
【０４３４】
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの精製は、先ず、ＮＡＰ−５カラムをＰＢＳで平衡させ、その後、４００μＬの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを添加することにより行った。次いで、カラムを４００μＬのＰＢＳで洗浄し、その後、別の４００μＬのＰＢＳで溶出した。
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの品質管理
【０４３５】
０．１Ｍクエン酸ナトリウムを現像剤として用い、原点が標識生成物であり、現像剤の先端が解離６８Ｇａである、インスタント薄層クロマトグラフィー−シリカゲル（ＩＴＬＣ−ＳＧ）を使用して、精製６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの放射化学的純度を測定した。図１４および１５に示されているように、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの収率は１７％であり、純度は９３．５％であった。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのヒトＰＤ−Ｌ１への６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ特異的結合
【０４３６】
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ細胞結合アッセイ。ＭＣ３８およびＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を、各々、２４ウェルプレートの１２個のウェルに、２．５×１０５細胞／ウェルの密度で播種した。細胞を終夜３７℃で培養した。翌日に、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを０．２０、０．４０、０．８０、１．６０、３．２０および６．４０ｎＭの最終濃度でウェルに添加し（各濃度は二つ組を２つ有した）、細胞を３７℃で１時間インキュベートした。氷冷ＰＢＳでの３回の洗浄後、細胞を０．１Ｍ  ＮａＯＨで溶解し、ガンマ線計数装置を使用して放射活性を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖのＫＤ値を算出した。図１６に示されているように、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖは、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１（「ＭＣ３８−Ｂ７Ｈ１」とも呼ばれる）細胞に対してＭＣ３８細胞と比較してはるかに高い結合親和性を示し、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１結合についてのＫＤ値が１．５３±０．４４ｎＭであった。
【０４３７】
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ競合結合アッセイ。ＭＣ３８細胞を８個のウェルに蒔き、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を２４ウェルプレートの１６個のウェルに、２．５×１０５細胞／ウェルの密度で蒔いた。翌日、抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１を２０、４０、８０および１６０ｎＭの最終濃度で添加した。抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１および６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを、０．２０、０．４０、０．８０、１．６０、３．２０および６．４０ｎＭの最終濃度で、二連で添加した。細胞を３７℃で１時間インキュベートした。氷冷ＰＢＳでの３回の洗浄後、細胞を０．１Ｍ  ＮａＯＨで溶解し、ガンマ線計数装置を使用して放射活性を測定した。
【０４３８】
図１７に示されているように、抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１は、ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞への６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの結合を遮断した。この結果は、ヒトＰＤ−Ｌ１への６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの結合が特異的であることを実証した。
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖのｉｎ  ｖｉｖｏライブイメージング
ｉｎ  ｖｉｖｏライブイメージングアッセイ
【０４３９】
ＭＣ３８細胞およびＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を培養し、トリプシン消化後にカウントした。１×１０６個のＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を５匹の６〜８週齢メスマウスの右腋窩に注射し、１×１０６個のＭＣ３８細胞を同じマウスの左腋窩に注射した。別の５匹の６〜８週齢メスマウスには１×１０６個のＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を右腋窩のみに注射した。腫瘍は、６日後に直径約０．５ｃｍに達し、この時点で動物に尾静脈注射によって２００ｕＣｉの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを施した。注射の０．５時間、１時間および２時間後に５分の曝露時間でライブイメージングを行った。
【０４４０】
注射後１時間および２時間の時点で撮影した最大曝露画像を図１８に示す。右腋窩（ＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を注射した）の腫瘍は、左腋窩（ＭＣ３８細胞を注射した）の腫瘍と比較して強い発現を示した。左腋窩の腫瘍は、注射後１時間と比較して注射後２時間の時点でのほうが明らかであった。肝臓および心臓組織で低い取込み量および曝露量が観察されたが、腎臓では高い取込み量が観察された。
【０４４１】
図１９は、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの注射後０．５時間、１時間および２時間の時点での動物＃１〜＃６のｉｎ  ｖｉｖｏイメージング結果を示す。動物＃１〜＃４には、右腋窩へのＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞のみを施したが、動物＃５および＃６には、右腋窩へのＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞に加えて左腋窩へのＭＣ３８細胞も施した。結果は、放射活性シグナルが０．５時間まで検出可能であること、および腎臓による取込み量が経時的に有意に減少しないことを示した。動物＃１は、明瞭なイメージングを示したため腫瘍の特定の成長状態に関係づけることができる。
結合競合ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングアッセイ
【０４４２】
ＭＣ３８細胞およびＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を培養し、トリプシン消化後にカウントした。１×１０６個のＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を５匹の６〜８週齢メスマウス（＃２、＃３、＃４、＃７および＃８）の右腋窩に注射した。マウス＃７および＃８には左腋窩に１×１０６個のＭＣ３８細胞も注射した。腫瘍は６日後に直径約０．５ｃｍに達した。動物＃３、＃４、＃７および＃８には、尾静脈注射によって非標識抗体抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１と１４０ｕＣｉの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの両方を施した。非標識抗体抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１は、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの濃度の５０倍である濃度で注射した。動物＃２には、対照として１４０ｕＣｉの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖのみを施した。注射の０．５時間、１時間および２時間後に５分の曝露時間でライブイメージングを行った。図２０に示されているように、動物＃２は、Ｂ７Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）への６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの結合を示したが、非標識ａｂ−２２０抗体は、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの濃度の５０倍の濃度で注射したとき、Ｂ７Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）への６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの結合を遮断した。
６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖと６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ間の比較
【０４４３】
ＭＣ３８細胞およびＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を培養し、トリプシン消化後にカウントした。１×１０６個のＭＣ３８−ＰＤ−Ｌ１細胞を５匹の６〜８週齢メスマウスの右腋窩に注射し、１×１０６個のＭＣ３８細胞を同じマウスの左腋窩に注射した。腫瘍は、６日後に直径約０．５ｃｍに達し、この時点で動物に尾静脈注射によって２００μＣｉの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、非標識抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖと２００μＣｉの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ、または２００μＣｉの６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃを施した。注射の０．５時間、１時間および２時間後に５分の曝露時間でライブイメージングを行った。６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃを注射したマウスについて、通常のカメラ感度設定およびカメラ感度低下設定（通常条件の１／４）で画像を撮影した。
【０４４４】
図２１は、イメージング剤の注射後３０分の時点でのイメージング結果の並列比較を示す。図の左から右に向かって、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを注射したマウス、非標識ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖと６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを注射したマウス、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）を注射したマウスの通常のカメラ感度設定でのイメージング結果、および６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）を注射した同じマウスのカメラ感度低下設定でのイメージング結果を示す。
【０４４５】
図２２は、イメージング剤の注射後６０分の時点（上のパネル）および１２０分の時点（下のパネル）でのイメージング結果の並列比較を示す。図の左から右に向かって、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを注射したマウス、非標識抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖと６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖを注射したマウス、６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）を注射したマウスの通常のカメラ感度設定でのイメージング結果、および６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｗｔ）を注射した同じマウスのカメラ感度低下設定でのイメージング結果を示す。
【図１−１】
2021525805.tif 000015
【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2021525805.tif 000026
【図１１】
2021525805.tif 000027
【図１２】
2021525805.tif 000028
【図１３−１】
2021525805.tif 000029
【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１３−４】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2021525805.tif 000039
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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