(57)【要約】  本開示は、緑内障、特に、Ｔｉｅ２ハプロ不全マウスと交配されたＶＥ−ＰＴＰｌａｃＺマウスのマウスモデル、並びに眼内圧上昇の緑内障症状からの神経保護のためのＶＥ−ＰＴＰ阻害の使用に関する。Ｔｅｋハプロ不全マウスにおける単一のＰＴＰＲＢ対立遺伝子の欠失によってマウスモデルを作製する方法が存在する。さらに、辺縁血管網におけるＶＥ−ＰＴＰ阻害の使用は、眼内圧上昇の緑内障症状からの神経保護をもたらす。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
高眼圧の低減を必要とする被験体において高眼圧を低減させる方法であって、前記被験体に治療的有効量のＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項２】
緑内障の治療を必要とする被験体において緑内障を治療する方法であって、前記被験体に、辺縁血管網、ＳＶＰ、及び／又は強膜上静脈における平滑筋細胞の血管弛緩を引き起こす化合物を投与することを含む、方法。
【請求項３】
前記化合物は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
視神経障害の治療又は眼内圧上昇による損傷からのＲＧＣを含む神経細胞の保護を必要とする被験体において視神経障害を治療する又は眼内圧上昇による損傷からＲＧＣを含む神経細胞を保護する方法であって、前記被験体にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項５】
ＳＶＰ／ＳＣＰにおけるＴｉｅ２シグナル伝達の活性化を必要とする被験体のＳＶＰ／ＳＣＰにおけるＴｉｅ２シグナル伝達を活性化する方法であって、前記患者にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項６】
辺縁血管網におけるＴｉｅ２シグナル伝達の活性化を必要とする被験体の辺縁血管網におけるＴｉｅ２シグナル伝達を活性化する方法であって、前記被験体にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項７】
前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、眼に投与される、上述の請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、全身に投与される、上述の請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、小分子又は生物製剤である、上述の請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
緑内障の治療を必要とする被験体において緑内障を治療する方法であって、前記被験体に治療的有効量のＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項１１】
高眼圧の低減を必要とする被験体において高眼圧を低減させる方法であって、前記被験体に、辺縁血管網、ＳＶＰ、及び／又は強膜上静脈における平滑筋細胞の血管弛緩を引き起こす化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
前記化合物は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤である、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、緑内障に関し、特に、Ｔｉｅ２ハプロ不全マウスと交配されたＶＥ−ＰＴＰｌａｃＺマウスのマウスモデル、並びに神経保護及び眼内圧上昇に起因する他の緑内障症状の軽減のためのＶＥ−ＰＴＰ阻害の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界的に不可逆的失明の２番目に多い原因である緑内障は治療法のない難病である。主に房水流出経路の欠陥によって引き起こされる眼内圧（ＩＯＰ）上昇は、疾患進行にとって重要な危険因子である。房水流出（ＡＨＯ）の減少は、前房における体液恒常性の変化につながり、高眼圧症、網膜神経節細胞死（ＲＧＣ）及び緑内障を引き起こす。
【０００３】
ＡＨＯの大部分は、線維柱帯網（ＴＭ）と、虹彩角膜角に位置する大きなリンパ管様のシュレム管（ＳＣ）とから構成される通常の経路を通過する。前房からの房水は、ＴＭを介してＳＣに入り、一連の集合管を経て強膜上静脈へと排出される。最近の研究では、ＳＣの発生及び維持におけるＡｎｇｐｔ−ＴＥＫシグナル伝達経路の重要性が確認され、Ａｎｇｐｔ受容体ＴＥＫ（内膜内皮細胞キナーゼ、Ｔｉｅ２としても知られる）及びその主要リガンドＡＮＧＰＴ１での機能喪失型突然変異が、早期／小児期発症を特徴とする重症型の緑内障である原発先天緑内障、牛眼症、及び視神経障害を伴う患者において確認された。ＴｅｋノックアウトマウスはＳＣを完全に欠損しており、急速進行性の緑内障様の表現型を示す。
【０００４】
米国特許第９，７１９，１３５号にはマウスモデルが記載されており、そこでは、アンジオポエチン１／アンジオポエチン２（「Ａｎｇｐｔ１／Ａｎｇｐｔ２」）ダブルノックアウトマウス及びＴｉｅ２ノックアウトマウスは、眼内圧上昇により牛眼症を発症する。Ａｎｇｐｔ１／Ａｎｇｐｔ２ダブルノックアウトマウス及びＴｉｅ２ノックアウトマウスは両者ともシュレム管を欠損している。アンジオポエチンシグナル伝達は、シュレム管形成に対して用量依存的な作用を有する。Ｔｉｅ２シグナル伝達（活性化）は、シュレム管形成に対して用量依存的な作用を有する。Ｔｉｅ２の活性化はシュレム管の管形成を促進し、Ｔｉｅ２を活性化する因子としては、血管内皮ホスホチロシンホスファターゼ（「ＶＥ−ＰＴＰ」）阻害剤が含まれる。
【０００５】
アンジオポエチン−ＴＥＫシグナル伝達は、前眼房内の特有の脈管であるリンパ管様のシュレム管の発生に不可欠である。ＴＥＫ又はアンジオポエチンリガンドのＡＮＧＰＴ１及びＡＮＧＰＴ２を欠損しているノックアウトマウスは、高眼圧症、牛眼症、及び緑内障性神経障害を直ちに発症する。
【０００６】
アンジオポエチンリガンドのＡＮＧＰＴ１又はＡＮＧＰＴ２を欠損しているマウスでも同様の作用が観察されることから、アンジオポエチン−ＴＥＫシグナル伝達がＳＣの発生に必要とされることが確認される。
【０００７】
２０１７年５月４日に出願され、国際公開第２０１７／１９０２２２号として公開された「ＶＥ−ＰＴＰノックアウト（VE-PTP Knockout）」と題される国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１７／０００１２０号（引用することにより、その全体が本明細書の一部をなす）では、ＶＥ−ＰＴＰ発現及びＴｉｅ２発現を減少させたマウスを製造する方法であって、マウスのゲノムにおいて単一の野生型ＶＥ−ＰＴＰ対立遺伝子をＶＥ−ＰＴＰヌル対立遺伝子と置き換えることと、少なくとも１つの野生型Ｔｉｅ２対立遺伝子をＴｉｅ２ヌル対立遺伝子と置き換えることとを含む、方法が記載された。単一のＶＥ−ＰＴＰヌル対立遺伝子をＴｉｅ２ヘテロ接合ヌルマウスのゲノムへと導入すると、得られたマウスでの眼内圧がＴｉｅ２ヘテロ接合ヌルマウスの眼内圧と比較して高まる表現型発現が減少することが示された。また、国際公開第２０１７／１９０２２２号には、ゲノムがＶＥ−ＰＴＰヌル対立遺伝子、ＶＥ−ＰＴＰ野生型対立遺伝子、２つのアンジオポエチン１ヌル対立遺伝子、及び２つのアンジオポエチン２ヌル対立遺伝子を含み、アンジオポエチン１ヌル対立遺伝子及び／又はアンジオポエチン２ヌル対立遺伝子がＣｒｅレコンビナーゼの発現により誘導される条件付きヌル対立遺伝子であるマウスも記載されており、このマウスは正常な眼内圧を有する。
【０００８】
ヒト及びマウスにおけるアンジオポエチン−ＴＥＫ（Ｔｉｅ２としても知られる）シグナル伝達経路の破壊は、シュレム管の喪失、ＩＯＰ上昇、及び緑内障を引き起こす。ＴＥＫヘテロ接合マウスモデルにおける該経路の部分的な破壊により、ＳＣの発生における用量依存的な役割が明らかとなり、ヘテロ接合体の眼は、局所的な狭窄、裂け目、及び襞（convolutions）を伴う形成不全のＳＣを特徴とする。この奇形の管は通常の体液排出には不十分であり、ヘテロ接合マウスは、コントロール（１２．３０ｍｍＨｇ、ｐ＝０．００４６）と比較して高いＩＯＰ（１５．３９ｍｍＨｇ）を示す。
【０００９】
Ｔｅｋハプロ不全マウス（Ｔｅｋ＋／−マウス）は、確かにＳＣ及びＴＭの発生における欠陥とともにＩＯＰの中程度の上昇を示すことから、房水流出経路の発生及び機能におけるＴＥＫシグナル伝達の明らかな用量依存的な作用が指摘される。
【００１０】
ＴＥＫ受容体の異所性活性化は、ＡＮＧＰＴリガンドの利用可能性の向上又はＴＥＫを強力に脱リン酸化するホスファターゼＰＴＰＲＢ（血管内皮タンパク質チロシンホスファターゼ、ＶＥ−ＰＴＰとしても知られる）の抑制のいずれかによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで達成され得る。ＰＴＰＲＢ阻害により、全てのリン酸化チロシン残基でＴＥＫリン酸化の増加がもたらされ、下流のシグナル伝達の劇的な増加が引き起こされる。
【発明の概要】
【００１１】
本開示の様々な特徴の幾つかを以下で説明する。本発明は、その適用において、以下の実施の形態、特許請求の範囲、詳細な説明、及び図面に示された詳細に限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施の形態が可能であり、他の多くの様式で実行又は実施することが可能である。幾つかの実施の形態は以下の通りである：
１．高眼圧の低減を必要とする被験体において高眼圧を低減させる方法であって、前記被験体に治療的有効量のＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
２．緑内障の治療を必要とする被験体において緑内障を治療する方法であって、前記被験体に、辺縁血管網、ＳＶＰ、及び／又は強膜上静脈における平滑筋細胞の血管弛緩を引き起こす化合物を投与することを含む、方法。
３．前記化合物は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤である、実施の形態２の方法。
４．視神経障害の治療又は眼内圧上昇による損傷からのＲＧＣを含む神経細胞の保護を必要とする被験体において視神経障害を治療する又は眼内圧上昇による損傷からＲＧＣを含む神経細胞を保護する方法であって、前記被験体にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
５．ＳＶＰ／ＳＣＰにおけるＴｉｅ２シグナル伝達の活性化を必要とする被験体のＳＶＰ／ＳＣＰにおけるＴｉｅ２シグナル伝達を活性化する方法であって、前記患者にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
６．辺縁血管網におけるＴｉｅ２シグナル伝達の活性化を必要とする被験体の辺縁血管網におけるＴｉｅ２シグナル伝達を活性化する方法であって、前記被験体にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
７．前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、眼に投与される、上記の実施の形態のいずれか１つに記載の方法。
８．前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、全身に投与される、上記の実施の形態のいずれか１つに記載の方法。
９．前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、小分子又は生物製剤である、上記の実施の形態のいずれか１つに記載の方法。
１０．緑内障の治療を必要とする被験体において緑内障を治療する方法であって、前記被験体に治療的有効量のＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
１１．高眼圧の低減を必要とする被験体において高眼圧を低減させる方法であって、前記被験体に、辺縁血管網、ＳＶＰ、及び／又は強膜上静脈における平滑筋細胞の血管弛緩を引き起こす化合物を投与することを含む、方法。
１２．前記化合物は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤である、実施の形態１１の方法。
【００１２】
図面は、本開示の例示的な実施の形態を表すものにすぎないため、その範囲を限定するものではない。図面は、特殊性及び詳細を付け加えるという役割を果たす。
【００１３】
特許ファイル又は出願ファイルには、カラーで仕上げられた少なくとも１つの図面が含まれている。カラー図面を含むこの特許又は特許出願の公開公報の複写は、請求及び必要な手数料の支払いにより特許庁によって提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】コントロールマウス及びＶＥ−ＰＴＰ／Ｐｔｐｒｂヘテロ接合マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでのＴＥＫ活性化の例示的なウェスタンブロット分析と、対応するグラフ表示とを示す図である。
【図２】コントロールの野生型マウス、ＴＥＫハプロ不全マウス、及びＴＥＫハプロ不全／ＶＥ−ＰＴＰヘテロ接合マウスにおける眼内圧のグラフを示す図である。
【図３】抗ＢＲＮ３Ｂ抗体（ＲＧＣを特定する）で染色された網膜ホールマウントと、ＴＥＫハプロ不全マウスにおける網膜神経節細胞の喪失及びＴＥＫ／ＶＥ−ＰＴＰダブルヘテロ接合マウスにおけるＲＧＣのレスキューを比較している対応するグラフとを示す図である。
【図４】シュレム管の形態の比較と、野生型コントロールマウス、ＴＥＫハプロ不全マウス及びＶＥ−ＰＴＰハプロ不全マウス、並びにＴＥＫ／ＶＥ−ＰＴＰダブルヘテロ接合マウスにおける面積及び襞の対応するグラフ表示とを示す図である。
【図５】ＴＥＫ／ＶＥ−ＰＴＰダブルヘテロ接合マウスにおける眼内圧とシュレム管の形態学的欠陥の量及びシュレム管の面積とを比較しているグラフを示す図である。
【図６】ＳＶＰと比較したシュレム管内皮の免疫蛍光染色を示す図である（ＦＳＰは、ＳＣ及び表層毛細血管網を含む全層画像に相当する）。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本開示の一実施形態では、Ｔｉｅ２ハプロ不全マウスと交配されたＶＥ−ＰＴＰｌａｃＺマウスのマウスモデルが存在する。
【００１６】
本開示の一実施形態では、Ｔｅｋハプロ不全マウスにおける単一のＰＴＰＲＢ対立遺伝子の欠失によってマウスモデルを作製する方法が存在する。
【００１７】
本開示の一実施形態では、辺縁血管網／表層毛細血管網におけるＶＥ−ＰＴＰ阻害の使用は、眼内圧上昇（の緑内障症状）からの神経保護をもたらす。
【００１８】
本開示の一実施形態では、ゲノムがＴｅｋハプロ不全マウスにおける単一のＰＴＰＲＢ対立遺伝子の欠失を含むマウスが存在する。
【００１９】
本開示の一実施形態では、眼内圧上昇（の緑内障症状）からの神経保護のための辺縁血管網におけるＶＥ−ＰＴＰ阻害により緑内障を治療する方法が存在する。
【００２０】
本開示の一実施形態では、ＴＥＫ活性化を高め、眼内圧（ＩＯＰ）を低下させ、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の圧力関連喪失を抑制するのに単一のＰＴＰＲＢ対立遺伝子を欠失させることで十分である、Ｔｅｋハプロ不全マウスモデルが存在する。その結果、シュレム管（ＳＣ）の管直径の変化なくＲＧＣが保護される。
【００２１】
本開示の一実施形態では、眼内圧上昇の緑内障症状の神経保護を評価するための、Ｔｉｅ２ハプロ不全マウスと交配されたＶＥ−ＰＴＰｌａｃＺマウスのマウスモデルが存在する。
【００２２】
本開示の更なる実施形態では、ＶＥ−ＰＴＰ／ＰＴＰＲＢ阻害の使用により、緑内障を伴う患者にＩＯＰ低下治療戦略が提供される。
【００２３】
本開示の更なる実施形態では、ＶＥ−ＰＴＰ／ＰＴＰＲＢ阻害の使用により、シュレム管の下流で房水流出の増加がもたらされる。
【００２４】
本開示の更なる実施形態では、眼の表層毛細血管網の周りの平滑筋の血管弛緩により、神経保護がもたらされ、高ＩＯＰにより引き起こされる網膜神経節細胞の喪失が回避される。
【００２５】
本開示の更なる実施形態では、高眼内圧及び緑内障の治療に薬理学的ＴＥＫ活性化が使用され得る。
【００２６】
本開示の一実施形態では、ＶＥ−ＰＴＰのハプロ不全を追加したＴｉｅ２／ＴＥＫハプロ不全マウスにおいて、緑内障においてＲＧＣ喪失に対して保護する方法、及びＩＯＰを低下させる方法が存在する。
【００２７】
房水流出は、流量及びＳＣ内壁の流動抵抗によって限定され、ＳＣ面積の減少は、流出量に直接作用すると想定される。しかしながら、ＳＣ内壁の流動抵抗は、房水流出に影響を与える唯一の要因ではなく、ゴールドマンの式（式１）によって説明されるように、流出及びＩＯＰの両方が強膜上静脈圧（ＥＶＰ）に直接関係している。本明細書で提示されたデータは、ｐｔｐｒｂ阻害がシュレム管の下流で流出を増加させ、より大きな脈管及びより多くの流出が可能となることを示唆している。これは更に神経保護的であり、ＲＧＣを保護する。
【００２８】
式１：
ＩＯＰ＝Ｆ／Ｃ＋ＥＶＰ
【００２９】
提案されたメカニズムに縛られることを望むものではないが、ＶＥ−ＰＴＰ欠失によるＴＥＫハプロ不全マウスのレスキューによって得られるＩＯＰの減少は、欠失前に高レベルのＰＴＰＲＢが発現されるため、表層血管網を含む排出血管の血管拡張に起因する可能性が高い。単一のＶＥ−ＰＴＰ対立遺伝子の欠失により、（全身）ＴＥＫ活性化が増加し、Ｔｅｋヘテロ接合ヌルマウスで観察される高眼圧症及びＲＧＣ喪失がレスキューされた。
【００３０】
ＶＥＰＴＰ阻害による眼保護のメカニズムは、通常ＶＥ−ＰＴＰを発現する表層毛細血管網に対するＶＥ−ＰＴＰ阻害の効果によるものと思われる。
【００３１】
これらの結果は、シュレム管自体がβ−ｇａｌ  ＶＥ−ＰＴＰレポーターを発現しないことを示唆しており、ＳＣ自体にはＶＥ−ＰＴＰが存在しない、又は存在するにしても、周囲の血管系よりも低いレベルで存在することを示唆している。ＶＥ−ＰＴＰは、シュレム管を生ずる早期の毛細血管網での発生の間に発現するようには見えず、始原細胞がＶＥ−ＰＴＰを発現するように見える。
【００３２】
ＩＯＰ低下及び神経保護は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害によって、おそらく、排出血管（必ずしもシュレム管自体におけるものではない）に対するＶＥ−ＰＴＰ阻害の直接的な作用による流出の増強によって達成され得る。
【００３３】
ＶＥ−ＰＴＰ−ＬａｃＺレポーターマウス系統を使用することで、ＳＣから房水を排出し、発生の間に成長して管を形成する辺縁血管網においてＶＥ−ＰＴＰが発現されることが確認された。しかしながら、ＶＥ−ＰＴＰの発現は、成熟したＳＣ内皮自体では特定されなかった。ＴＥＫ；ＶＥ−ＰＴＰダブルヘテロ接合マウスを作製したところ、ＴＥＫヘテロ接合同腹仔とは異なり、ＴＥＫ；ＶＥ−ＰＴＰダブルヘテロ接合マウスは正常なＩＯＰを有し、ＴＥＫ欠損マウスの眼疾患表現型を発症しなかった。この負の調節因子（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害によるＴＥＫの活性化は、先天緑内障を伴う患者に治療戦略を提供することが確認された。
【００３４】
以下は、本発明の追加の実施形態である：
１．高眼圧の低減を必要とする被験体において高眼圧を低減させる方法であって、前記被験体に治療的有効量のＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
２．緑内障の治療を必要とする被験体において緑内障を治療する方法であって、前記被験体に、辺縁血管網、ＳＶＰ、及び／又は強膜上静脈における平滑筋細胞の血管弛緩を引き起こす化合物を投与することを含む、方法。
３．前記化合物は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤である、実施形態２の方法。
４．視神経障害の治療又は眼内圧上昇による損傷からのＲＧＣを含む神経細胞の保護を必要とする被験体において視神経障害を治療する又は眼内圧上昇による損傷からＲＧＣを含む神経細胞を保護する方法であって、前記被験体にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
５．ＳＶＰ／ＳＣＰにおけるＴｉｅ２シグナル伝達の活性化を必要とする被験体のＳＶＰ／ＳＣＰにおけるＴｉｅ２シグナル伝達を活性化する方法であって、前記患者にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
６．辺縁血管網におけるＴｉｅ２シグナル伝達の活性化を必要とする被験体の辺縁血管網におけるＴｉｅ２シグナル伝達を活性化する方法であって、前記被験体にＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
７．前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、眼に投与される、上記の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
８．前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、全身に投与される、上記の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
９．前記ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は、小分子又は生物製剤である、上記の実施形態のいずれか１つに記載の方法。
１０．緑内障の治療を必要とする被験体において緑内障を治療する方法であって、前記被験体に治療的有効量のＶＥ−ＰＴＰ阻害剤を投与することを含む、方法。
１１．高眼圧の低減を必要とする被験体において高眼圧を低減させる方法であって、前記被験体に、辺縁血管網、ＳＶＰ、及び／又は強膜上静脈における平滑筋細胞の血管弛緩を引き起こす化合物を投与することを含む、方法。
１２．前記化合物は、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤である、実施形態１１の方法。
【００３５】
一実施形態では、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は小分子である。別の実施形態では、ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤は生物製剤である。ＶＥ−ＰＴＰ阻害剤の例は、以下の論文に記載されているものを含めて、当該技術分野でよく知られている。
【００３６】
Antioxid Redox Signal. 2014 May 10;20(14):2130-40. doi: 10.1089/ars.2013.5463. Epub 2014 Feb 4.
受容体型タンパク質チロシンタンパク質ホスファターゼβに対するヒドロキシインドールカルボン酸ベースの阻害剤（Hydroxyindole carboxylic acid-based inhibitors for receptor-type protein tyrosine protein phosphatase beta.）
Zeng LF, Zhang RY, Bai Y, Wu L, Gunawan AM, Zhang ZY.
PMID: 24180557 PMCID: PMC3995206 DOI: 10.1089/ars.2013.5463
【００３７】
J Biol Chem. 2004 Jun 4;279(23):24226-35. Epub 2004 Mar 15.
タンパク質チロシンホスファターゼβの選択的で強力な阻害剤の構造に基づく設計（Structure-based design of selective and potent inhibitors of protein-tyrosine phosphatase beta.）
Lund IK, Andersen HS, Iversen LF, Olsen OH, Moller KB, Pedersen AK, Ge Y, Holsworth DD, Newman MJ, Axe FU, Moller NP.
PMID: 15024017 DOI: 10.1074/jbc.M313027200
【００３８】
Proc Natl Acad Sci U S A. 2006 Jul 11;103(28):10606-11. Epub 2006 Jun 29.
生物指向型合成によるタンパク質ホスファターゼ阻害剤クラスの発見（Discovery of protein phosphatase inhibitor classes by biology-oriented synthesis.）
Noeren-Mueller A, Reis-Correa I Jr, Prinz H, Rosenbaum C, Saxena K, Schwalbe HJ, Vestweber D, Cagna G, Schunk S, Schwarz O, Schiewe H, Waldmann H.
PMID: 16809424 PMCID: PMC1502279 DOI: 10.1073/pnas.0601490103
【００３９】
J Inorg Biochem. 2003 Aug 1;96(2-3):321-30.
ＢＭＯＶ（ビスマルトラトオキソバナジウム）によるインスリン感作のメカニズム；活性成分としての配位子非結合バナジウム（ＶＯ４）（Mechanism of insulin sensitization by BMOV (bis maltolato oxo vanadium); unliganded vanadium (VO4) as the active component.）
Peters KG, Davis MG, Howard BW, Pokross M, Rastogi V, Diven C, Greis KD, Eby-Wilkens E, Maier M, Evdokimov A, Soper S, Genbauffe F.
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【００４０】
Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2004 Jul;287(1):H268-76. Epub 2004 Feb 26.
チロシンホスファターゼ阻害は、末梢血管疾患のラットモデルにおける側副血行を増強する（Tyrosine phosphatase inhibition augments collateral blood flow in a rat model of peripheral vascular disease.）
Carr AN, Davis MG, Eby-Wilkens E, Howard BW, Towne BA, Dufresne TE, Peters KG.
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【００４１】
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チロシンホスファターゼβは、ヒト内皮細胞におけるアンジオポエチン−Ｔｉｅ２シグナル伝達を調節する（Tyrosine phosphatase beta regulates angiopoietin-Tie2 signaling in human endothelial cells.）
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アリールスチボン酸は、Ｃｄｃ２５ａホスファターゼ及びＣｄｃ２５ｂホスファターゼの強力でアイソフォーム選択的な阻害剤である（Arylstibonic acids are potent and isoform-selective inhibitors of Cdc25a and Cdc25b phosphatases.）
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ACS Chem Biol. 2006 Dec 15;1(12):780-90.
１０番染色体で欠失されたホスファターゼ・テンシン・ホモログ（ＰＴＥＮ）の小分子阻害剤（A small molecule inhibitor for phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10 (PTEN).）
Rosivatz E, Matthews JG, McDonald NQ, Mulet X, Ho KK, Lossi N, Schmid AC, Mirabelli M, Pomeranz KM, Erneux C, Lam EW, Vilar R, Woscholski R.
PMID: 17240976 DOI: 10.1021/cb600352f
【００４７】
J Med Chem. 2013 Jun 27;56(12):4990-5008. doi: 10.1021/jm400248c. Epub 2013 Jun 6.
自己免疫疾患に関連する標的であるリンパ系特異的チロシンホスファターゼ（ＬＹＰ）の強力で選択的な小分子阻害剤（A potent and selective small-molecule inhibitor for the lymphoid-specific tyrosine phosphatase (LYP), a target associated with autoimmune diseases.）
He Y, Liu S, Menon A, Stanford S, Oppong E, Gunawan AM, Wu L, Wu DJ, Barrios AM, Bottini N, Cato AC, Zhang ZY.
PMID: 23713581 PMCID: PMC3711248 DOI: 10.1021/jm400248c
【００４８】
J Biol Chem. 2009 Apr 24;284(17):11385-95. doi: 10.1074/jbc.M807241200. Epub 2009 Feb 20.
ＧＬＥＰＰ１／タンパク質チロシンホスファターゼｐｈｉ阻害剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで走化性を阻止し、マウス潰瘍性大腸炎を改善する（GLEPP1/protein-tyrosine phosphatase phi inhibitors block chemotaxis in vitro and in vivo and improve murine ulcerative colitis.）
Gobert RP, van den Eijnden M, Szyndralewiez C, Jorand-Lebrun C, Swinnen D, Chen L, Gillieron C, Pixley F, Juillard P, Gerber P, Johnson-Leger C, Halazy S, Camps M, Bombrun A, Shipp M, Vitte PA, Ardissone V, Ferrandi C, Perrin D, Rommel C, Hooft van Huijsduijnen R.
PMID: 19233845 PMCID: PMC2670144 DOI: 10.1074/jbc.M807241200
【００４９】
Bioorg Med Chem. 2007 Aug 1;15(15):5137-49. Epub 2007 May 17.
タンパク質チロシンホスファターゼの阻害剤としての５−アリーリデン−２，４−チアゾリジンジオン（5-Arylidene-2,4-thiazolidinediones as inhibitors of protein tyrosine phosphatases.）
Maccari R, Paoli P, Ottana R, Jacomelli M, Ciurleo R, Manao G, Steindl T, Langer T, Vigorita MG, Camici G.
PMID: 17543532 DOI: 10.1016/j.bmc.2007.05.027
【００５０】
Molecules. 2018 Mar 2;23(3). pii: E569. doi: 10.3390/molecules23030569.
生物療法薬による受容体型タンパク質チロシンホスファターゼの標的化：内側から外側よりも外側から内側が優れているか？（Targeting Receptor-Type Protein Tyrosine Phosphatases with Biotherapeutics: Is Outside-in Better than Inside-Out?）
Seis YA, Barr AJ.
PMID: 29498714 DOI: 10.3390/molecules23030569
【００５１】
これは、チロシンホスファターゼを標的とする阻害剤の包括的なレビューである。
【００５２】
Trends Pharmacol Sci. 2017 Jun;38(6):524-540. doi: 10.1016/j.tips.2017.03.004. Epub 2017 Apr 12.
チロシンホスファターゼの標的化：スティグマを終わらせる時（Targeting Tyrosine Phosphatases: Time to End the Stigma.）
Stanford SM, Bottini N.
PMID: 28412041 PMCID: PMC5494996 DOI: 10.1016/j.tips.2017.03.004
【００５３】
Curr Diab Rep. 2016 Dec;16(12):126.
糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫の治療のためのＴｉｅ２の標的化（Targeting Tie2 for Treatment of Diabetic Retinopathy and Diabetic Macular Edema.）
Campochiaro PA, Peters KG.
PMID: 27778249 DOI: 10.1007/s11892-016-0816-5
【００５４】
Prog Retin Eye Res. 2015 Nov;49:67-81. doi: 10.1016/j.preteyeres.2015.06.002. Epub 2015 Jun 23.
網膜疾患及び脈絡膜血管疾患の分子病態（Molecular pathogenesis of retinal and choroidal vascular diseases.）
Campochiaro PA.
PMID: 26113211 PMCID: PMC4651818 DOI: 10.1016/j.preteyeres.2015.06.002
【００５５】
生物製剤であるＶＥ−ＰＴＰ阻害剤の例としては、抗体及び以下の薬物が含まれる。
【００５６】
J Exp Med. 2015 Dec 14;212(13):2267-87. doi: 10.1084/jem.20150718. Epub 2015 Dec 7.
ＶＥ−ＰＴＰと干渉することで、ＶＥ−カドヘリンの不存在下でＴｉｅ−２を介してｉｎ  ｖｉｖｏで内皮接合部が安定する（Interfering with VE-PTP stabilizes endothelial junctions in vivo via Tie-2 in the absence of VE-cadherin.）
Frye M, Dierkes M, Kueppers V, Vockel M, Tomm J, Zeuschner D, Rossaint J, Zarbock A, Koh GY, Peters K, Nottebaum AF, Vestweber D.
PMID: 26642851 PMCID: PMC4689167 DOI: 10.1084/jem.20150718
【００５７】
J Clin Invest. 2014 Oct;124(10):4564-76. doi: 10.1172/JCI74527. Epub 2014 Sep 2.
ＶＥ−ＰＴＰを標的化すると、ＴＩＥ２が活性化し、眼の血管系が安定する（Targeting VE-PTP activates TIE2 and stabilizes the ocular vasculature.）
Shen J, Frye M, Lee BL, Reinardy JL, McClung JM, Ding K, Kojima M, Xia H, Seidel C, Lima e Silva R, Dong A, Hackett SF, Wang J, Howard BW, Vestweber D, Kontos CD, Peters KG, Campochiaro PA.
PMID: 25180601 PMCID: PMC4191011 DOI: 10.1172/JCI74527
【００５８】
J Cell Biol. 2009 May 18;185(4):657-71. doi: 10.1083/jcb.200811159.
ＶＥ−ＰＴＰは、Ｔｉｅ−２活性の平衡化により血管の発生を制御する（VE-PTP controls blood vessel development by balancing Tie-2 activity.）
Winderlich M, Keller L, Cagna G, Broermann A, Kamenyeva O, Kiefer F, Deutsch U, Nottebaum AF, Vestweber D.
PMID: 19451274 PMCID: PMC2711575 DOI: 10.1083/jcb.200811159
【００５９】
平滑筋細胞の弛緩を促進する薬物の例としては、
α−アドレナリン受容体拮抗薬（α遮断薬）
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤
アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）
β２−アドレナリン受容体作動薬（β２作動薬）
カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）
中枢作用性交感神経遮断薬
直接作用する血管拡張薬
エンドセリン受容体拮抗薬
神経節遮断薬
ニトロ拡張薬（Nitrodilators）
ホスホジエステラーゼ阻害剤
カリウムチャネル開口薬
レニン阻害剤
等の血管弛緩薬／血管拡張薬が含まれる。
【実施例】
【００６０】
Ｐｔｐｒｂハプロ不全マウスはＴｅｋリン酸化の上昇を伴う。本明細書に記載されるｐｔｐｒｂハプロ不全マウス系統は、ＶＥ−ＰＴＰ−ＬａｃＺレポーターマウス系統である。ＴＥＫリン酸化のレベルをｉｎ  ｖｉｖｏで上昇させるために、以前に記載されたＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺレポーター対立遺伝子を使用して、Ｐｔｐｒｂ遺伝子の単一の対立遺伝子を欠失させた。このコンストラクトは、Ｐｔｐｒｂの最初のエキソンの代わりに核局在化シグナルがタグ付けされたＬａｃＺ  ｃＤＮＡを含み、ＰＴＰＲＢタンパク質の産生が妨げられる。ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスは正常に生まれるが、ＰＴＰＲＢの発現はおよそ５０％減少することが知られている（図１）。総ＴＥＫ発現には影響はなかった。予想通り、ホスファターゼの存在量の減少がＴＥＫの活性化に直接的な作用を有し、免疫沈降アッセイを使用して測定した場合に、ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスは、リン酸化ＴＥＫの有意な増加を示した（図１）。
【００６１】
本開示では、高眼圧症のＴｅｋハプロ不全モデルにおける単一のＰｔｐｒｂ対立遺伝子の欠失はＩＯＰを低下させ、関連するＲＧＣ喪失を防ぐ。３０週齢で測定されたＴｅｋヘテロ接合マウスは、ＩＯＰ上昇を伴うことが判明した（図２、コントロール：１３．７±０．２３、Ｔｅｋ＋／−１８．１５±０．３３ｍｍＨｇ）。ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスは正常なＩＯＰ（１３．８１±０．８２ｍｍＨｇ）を有したが、この対立遺伝子をＴｅｋ＋／−モデルに組み込むことは有益であり、Ｔｅｋハプロ不全に関連する高眼圧症を部分的にレスキューした（Ｔｅｋ＋／−；ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴのＩＯＰ：１４．９２±０．３１ｍｍＨｇ）。ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺに誘導されたＩＯＰの減少が網膜に対して及ぼす影響を確かめるために、１９週齢のＢＲＮ３Ｂ陽性神経節細胞を計数した（図３）。Ｔｅｋヘテロ接合マウスはＲＧＣの著しい減少を示したが、この喪失はＴｅｋ＋／−；ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスでは鈍くなった。
【００６２】
Ｐｔｐｒｂヘテロ接合性はＳＣの形態を変えない。Ｐｔｐｒｂヘテロ接合性がＴｅｋ＋／−マウス緑内障モデルにおいて保護的であることが判明したので、シュレム管の形態を調べて、この保護のメカニズムを確かめた。ＣＤ３１染色に続いての共焦点顕微鏡法により、Ｔｅｋ＋／−マウスにおける局所的な狭窄及び襞を特徴とする低形質のＳＣが明らかとなる（図４）。
【００６３】
Ｔｅｋ＋／−；ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスはＴｅｋ＋／−同腹仔より低いＩＯＰを伴うが、ＳＣ面積の有意な増加又は局所的な襞の減少はないことが確かめられた。ＳＣ面積における全体的な変化は動物間変動性のため有意ではなかったが、眼当たりのＳＣ面積又はＳＣの襞の数は各実験群内でＩＯＰと相関する可能性があった。しかしながら、回帰分析（図５）により、Ｔｅｋ＋／−；ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスにおいてＩＯＰと、眼当たりのＳＣ面積又は襞のいずれかとの間に相関関係がないことが明らかになったことから、このメカニズムは他にあることが示唆される。
【００６４】
Ｔｅｋ＋／−；ＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴマウスにおいてＳＣ面積又は形態のレスキューは見られなかったため、前房におけるＰｔｐｒｂ発現を調べて、ＩＯＰ及びＲＧＣ生存に対して観察された効果について潜在的なメカニズムを探した。抗ＣＤ３１抗体及び抗βｇａｌ抗体を用いたＰｔｐｒｂＮＬＳ−ＬａｃＺ／ＷＴの眼のホールマウント染色（図６）によって、辺縁領域では、Ｐｔｐｒｂ発現が表層毛細血管網（ＳＶＰ）においてＰ０．５からＰ５の間で活性化され、ＳＶＰ発現は一生を通じて高いままであることが確認された。しかしながら、ＳＣの形態又は面積に対する明らかな作用がないことと一致して、Ｐｔｐｒｂは、発生の間又は成体期のどの時点でもＳＣ内皮細胞自体によって発現されなかった。
【００６５】
房水流出は、流量及びＳＣ内壁の流動抵抗によって限定されることが知られており、ＳＣ面積の減少は、流出量に直接作用すると想定される。しかしながら、ＳＣ内壁の流動抵抗は、房水流出に影響を与える唯一の要因ではなく、ゴールドマンの式（式１）によって説明されるように、流出及びＩＯＰの両方が強膜上静脈圧（ＥＶＰ）に直接関係していることが確認された。
【００６６】
式１：
ＩＯＰ＝Ｆ／Ｃ＋ＥＶＰ
【００６７】
ｐｔｐｒｂ阻害（遺伝子欠失）がシュレム管の下流で流出を増加させることが確認された。ＳＶＰの周りの平滑筋の血管弛緩はより大きな血管及びより多くの流出を可能にし、これは更に神経保護的であることから、ＲＧＣは温存され得る。
【００６８】
Ａｎｇｐｔ−ＴＥＫシグナル伝達は、シュレム管の発生及び維持に不可欠であり、このシグナル伝達経路の調節不全は、マウス及びヒトにおいて緑内障を引き起こす。アンジオポエチンリガンドに加えて、ＴＥＫ受容体の活性化は、内皮特異的受容体型ホスファターゼＰＴＰＲＢ（ＶＥ−ＰＴＰ）によって調節される。Ｐｔｐｒｂヘテロ接合性は、（全身の）ＴＥＫの過剰活性化をもたらし、虹彩角膜角における不十分なＴＥＫシグナル伝達から生じる発生表現型の部分的な補償を提供することが確認された。
【００６９】
図１は、コントロールマウス及びＶＥ−ＰＴＰヘテロ接合マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでのＴＥＫ活性化のゲル及び対応するグラフである。
【００７０】
Ｐｔｐｒｂヘテロ接合性は、全身のＴＥＫの過剰活性化をもたらし、虹彩角膜角における不十分なＴＥＫシグナル伝達から生じる発生表現型の部分的な補償を提供することが確認された。図２は、ＶＥ−ＰＴＰヘテロ接合性がＴＥＫハプロ不全マウスモデルにおいて観察される高眼圧症をレスキューすることを示している。マウスにおける単一のＶｅ−ｐｔｐ対立遺伝子の欠失は、緑内障のＴｅｋハプロ不全モデルにおいて観察される高眼圧症を防ぐ。
【００７１】
図３は、ＶＥ−ＰＴＰ／ＴＥＫダブルヘテロ接合マウスがＴＥＫハプロ不全動物において観察されるＲＧＣ喪失を示さないことを示している。Ｔｉｅ２＋／−コントロールと比較して、ＶＥ−ＰＴＰ；Ｔｉｅ２ダブルヘテロ接合マウスは、高眼圧症から保護され、１２週間でＢＲＮ３Ｂ陽性神経節細胞の喪失の減少を示した。抗ＢＲＮ３Ｂ抗体で染色された網膜ホールマウントからの代表的な画像を図３に示す。
【００７２】
図４は、ＶＥ−ＰＴＰハプロ不全がＳＣの生理学的機能を改善するが、ＳＣ面積又は形態に対して作用を有しないことを示している。ＶＥ−ＰＴＰハプロ不全は、ＴＥＫリン酸化を増加させ、眼内圧を低下させ、そして網膜神経節細胞の喪失を防ぐが、シュレム管の面積又は形態に対する作用は、共焦点顕微鏡法によっては観察されなかった。
【００７３】
図５は、ＳＣの形態学的欠陥の量又はＳＣ面積が、ＶＥＰＴＰ−ＴＥＫダブルヘテロ接合マウスにおいてＩＯＰと相関しているように見えないことを示している。
【００７４】
図６は、ＶＥ−ＰＴＰがＳＣ内皮で発現されていないことを示しており、シュレム管を通る排出の改善に対するＶＥＰＴＰ欠失の効果は、ＳＣ自体の下流で表層毛細血管網及び／又は強膜上静脈に対して作用していることが確認された。ＦＳＰは、ＳＣ及び表層毛細血管網を含む全層画像に相当する。
【００７５】
本開示の実施形態を詳細な説明に記載したが、特許請求の範囲は、実施例に示される好ましい実施形態によって限定されるべきではなく、詳細な説明全体と一致する最も広い解釈が与えられるべきである。
【００７６】
本出願において引用される全ての出版物、特許、特許出願及び他の文書は、各個別の出版物、特許、特許出願又は他の文書が全ての目的のため引用されることにより本明細書の一部をなすように個別に示されるのと同じ程度に全ての目的のためその全体が引用されることにより本明細書の一部をなす。
【図１】
2021530530.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2021530530.tif 000010
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