(57)【要約】  サンプルから薄切片（７，１７）を作製するミクロトームであって、このミクロトームは、サンプルを受容するサンプルホルダーを含んでおり、サンプルを切り出す所定の切り出し方向を有する刃先（１）を含んでおり、ここで切り出し方向および刃先は切り出し平面にまたがり、切り出し方向において、サンプルホルダーと、サンプルを切り出す切り出しユニットと、の間の相対運動を生成する移動装置を含んでおり、送り方向において、切り出し平面に対して０°とは異なる角度で、サンプルホルダーと、サンプルを切り出す切り出しユニットと、の間の相対運動を生成する送り装置を含んでおり、サンプルホルダーとは反対側で、刃先と接する、液体を備える液体体積（３）を含んでおり、さらに、サンプルホルダーとは反対の、刃先の側で、横方向に配置され、刃先に向かって、かつ／または刃先から離れるように移動可能なチャネル（４）を含んでおり、ここでチャネルは、刃先に向かって開放されており、この液体および／または別の液体によって充填可能である。
2021505901.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプルから薄切片（７，１７）を作製するミクロトームであって、
ａ）前記ミクロトームは、前記サンプルを受容するサンプルホルダーを含んでおり、
ｂ）前記ミクロトームは、前記サンプルを切り出す所定の切り出し方向を有する刃先（１）を含んでおり、前記切り出し方向および前記刃先は、切り出し平面にまたがり、
ｃ）前記ミクロトームは、切り出し方向において、前記サンプルホルダーと、前記サンプルを切り出す切り出しユニットと、の間の相対運動を生成する移動装置を含んでおり、
ｄ）前記ミクロトームは、送り方向において、前記切り出し平面に対して０°とは異なる角度で、前記サンプルホルダーと、前記サンプルを切り出す前記切り出しユニットと、の間の相対運動を生成する送り装置を含んでおり、
ｅ）前記ミクロトームは、前記サンプルホルダーとは反対側で、前記刃先と接する、液体を備える液体体積（３）を含んでおり、
ｆ）前記ミクロトームは、前記サンプルホルダーとは反対の、前記刃先の側で、横方向に配置され、少なくとも往路運動および／または復路運動を介して、前記刃先に向かってかつ／または前記刃先から離れるように移動可能なチャネル（４）を含んでおり、前記チャネルは、開口チャネル端部として前記刃先に向かって開放されており、前記液体および／または別の液体によって充填可能である、
ミクロトーム。
【請求項２】
前記チャネルは、チャネル底部として基板（５）を有している、
請求項１記載のミクロトーム。
【請求項３】
前記開口チャネル端部は、前記基板の縁部の上に配置されている、
請求項２記載のミクロトーム。
【請求項４】
前記基板（５）は、光学顕微鏡法および／または電子顕微鏡法に適しており、スライド、有利には導電性材料または光および／または電子に対して透過性の材料から成るスライドまたは導電性材料でコーティングされたガラスまたはシリコンウェハまたはメッシュまたはグリッドによって形成されている、
請求項２または３記載のミクロトーム。
【請求項５】
複数のチャネルは、前記基板上に並んで配置されている、
請求項２から４までのいずれか１項記載のミクロトーム。
【請求項６】
前記チャネルは、前記基板（５）の上で、前記刃先を離れて、機械的な側壁（６）によって、または前記基板上の前記基板の構造化された表面の機能化（１８）によって制限されている、
請求項１から５までのいずれか１項記載のミクロトーム。
【請求項７】
前記液体のうちの少なくとも１つを前記チャネル（４）から吸い取る手段および／または前記チャネル（４）内に導入する手段が提供されている、
請求項１から６までのいずれか１項記載のミクロトーム。
【請求項８】
前記手段は、前記チャネル（４）において開孔領域を含んでいる、
請求項７記載のミクロトーム。
【請求項９】
個別化可能な液滴を上から、前記刃先（１）および／または前記チャネル（４）上で、前記液体または前記液体上の薄切片（７，１７）へ分離させる装置が提供されている、
請求項１から８までのいずれか１項記載のミクロトーム。
【請求項１０】
前記往路運動および／または復路運動は、チャネル開口部と刃先との間の横方向の剪断運動および／または直線状の剪断運動を含んでいる、
請求項１から９までのいずれか１項記載のミクロトーム。
【請求項１１】
請求項１から１０までのいずれか１項記載のミクロトームを使用してサンプルから薄切片を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）前記サンプル用のサンプルホルダーと、前記サンプルを切り出す刃先と、前記刃先に接する液体表面を伴う液体体積と、を備えるミクロトームを提供するステップと、
ｂ）前記サンプルを前記サンプルホルダー内にはさむステップと、
ｃ）前記液体体積および前記刃先へ、前記チャネルを接近させるステップと、
ｄ）開始位置から開始して、切り出し方向における、前記サンプルホルダー内の前記サンプルと前記刃先との間の相対運動を開始するステップであって、前記サンプルは、前記刃先へ導かれるステップと、
ｅ）前記刃先によって前記サンプルに切り込みを入れるステップであって、切り出しによって、前記サンプルから薄切片が剥がされ、前記サンプルの残りの部分上に切り出し面が生ずるステップと、
ｆ）前記液体体積の前記液体表面上に前記薄切片を受容するステップと、
ｇ）前記液体表面上の前記薄切片を前記チャネルに搬送するステップと、
を含む方法。
【請求項１２】
前記方法は、
ｈ）前記サンプルを前記開始位置に戻すステップと、
ｉ）前記サンプルが入った前記サンプルホルダーを送り方向において、別の開始位置に搬送するステップと、
ｊ）ステップｄ）からｉ）を繰り返すステップと、
を含み、
ｋ）剥がされた前記薄切片は、前記液体体積上の前記液体表面上に連続して配置され、前記チャネルに搬送される、
請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
液体の少なくとも１つの個別化された滴を、前記液体体積上の表面上に連続して配置された２つの薄切片の間に加え、これによって前記２つの薄切片を相互に離す、
請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記方法は、ステップｉ）とｊ）との間にさらに、
ｌ）開始位置から開始して、切り出し方向における、前記サンプルホルダー内の前記サンプルと前記刃先との間の相対運動を開始するステップであって、前記サンプルは、前記刃先へ導かれるステップと、
ｍ）前記刃先によって前記サンプルに、２から１０００μｍ、有利には５から２０μｍの切り込みを入れるステップと、
ｎ）前記サンプルの運び上げによって前記相対運動を逆にするステップと、
ｏ）前記サンプルを前記刃先から前記開始位置へさらに運び上げるステップと、
を含む、
請求項１１から１３までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記方法は、引き続いて行われる、
ｐ）前記刃先から前記液体体積を吸い取る、導き出すまたは蒸発させるステップ、
ｑ）前記刃先から前記チャネルを離すステップおよび／または
ｒ）前記チャネルから前記液体を吸い取る、導き出すまたは蒸発させるステップ
のうちの少なくとも１つを含む、
請求項１１から１４までのいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、請求項１記載の、サンプルから薄切片を作製するミクロトームおよび請求項１１記載の、上述したミクロトームを使用してサンプルから薄切片を作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ミクロトームは、薄い切片標本（薄切片）を作製するための切削工具である。この際に、サンプル、有利には、生物学的組織および／または重合体を含んでいる材料科学サンプルがサンプルホルダー内に固定され、はさまれ、刃先にわたって導かれる。刃先ではサンプルが層状に薄切片として剥がされる。通常、個々に剥がされた薄切片は、刃先から離れて刃先から直接的に液体表面上に導かれ、刃先から例えば手動で、例えばまつげによって、または自動化可能に、例えばマイクロマニピュレーターによって、刃先から分離され、液体表面を介して、基板または基板帯上に導かれ、液体から取り出される。
【０００３】
通常、生物学的サンプルは、室温での各前処理を伴わない直接的な切り出しには適していない。それらの機械的な安定性はしばしば、それらを切り出すのに十分ではない。ここでは、例として組織サンプルまたは筋肉細胞を挙げる。さらに、生物学的サンプルは分解プロセスの影響を受け得る。したがって、一連の切片を生成する際の第１のステップは、サンプルを固定して、分解を停止させることであり、第２のステップは、サンプルを適切な媒体、有利には切り出し可能な重合体（例えばエポキシ樹脂、メタクリレート樹脂）を基礎にした埋め込み材料に埋め込むことである。これらは同時に、サンプルに対する保存作用を有している。
【０００４】
通常、サンプルで、上述した切り出しプロセスが繰り返され、これによって、同じサンプルから多数の、連続的に剥がされた薄切片、ひいてはこのようなサンプルの状態の三次元再構築に対する基礎が得られる。次に、薄切片はそれぞれ個々に分離され、基板または基板帯上に析出されなければならない。その上に、薄切片が連続的に配置されて、さらなる検査、例えば顕微鏡検査に供給される。
【０００５】
米国特許出願公開第２０１４／００２６６８３号明細書は、例えば、冒頭に挙げたタイプのミクロトームを備えた装置を開示している。この装置では、サンプルは上述のように多数の薄切片にされ、ここでこれらの薄切片は基板帯によって液体から連続的に取り上げられ、基板帯を用いて広げられる。特に、基板帯上に薄切片を置くのにはかなりの設備的なコストがかかる。さらに、標本基板に基づいて、このような方法は、光学顕微鏡法と電子顕微鏡法の両方で、ひいては相関アレイトモグラフィーで使用される、例えばインジウムスズ被覆ガラス基板に対する標準基板の使用には適していない。
【０００６】
一般的に、サンプルから薄切片を作製するミクロトームの上述した動作は、通常、手動で行われるか、または基板帯を使用する場合には部分的に自動化され、これによって多数の薄切片の作製および分離はすぐにその限界に達してしまう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
これに基づいて、本発明の課題は、上述した制限および欠点のない薄切片の大量生産に適しているだけでなく、特に一定の品質の薄切片の自動化可能な大量生産に対する基礎も提供するミクロトームをさらに開発および提案することである。
【０００８】
別の課題は、好適には剛性の基板（ＩＴＯコーティングされたガラスまたはシリコンウェハの部分）上に、より多数を配列して析出することも可能にすることである。これらは例えば光学顕微鏡フォローアップ検査および／または電子顕微鏡フォローアップ検査（ＬＩＭ、ＲＥＭ等）に対するスライドとして使用可能である。
【０００９】
別の課題は、好適に構造化されたまたは合成された剛性の基板上に、より多数を配列して析出することも可能にすることである。これらは例えば透過型電子顕微鏡検査（ＴＥＭ）のスライドとして使用可能である。
【００１０】
別の課題は、薄切片を作製する、相応の方法を提案することである。これは特に、より良い自動化可能性に特に適している。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上述の課題は、請求項１記載の特徴を備えるミクロトームおよび請求項１１記載の特徴を備えるミクロトームを使用した方法によって解決される。これらの請求項を引用する従属請求項には、有利な構成が記載されている。
【００１２】
上述の問題の解決策は、サンプル、有利には冒頭に記載した生物学的サンプルおよび／または重合体サンプルから薄切片を作製するミクロトームに基づいている。
【００１３】
ミクロトームは、サンプルを受容するサンプルホルダーを有している。サンプルホルダー内にサンプルが固定して統合されている。すなわち、有利には、転倒および／またはねじれのないように防護される。自由選択的な構成では、サンプルは、切り出し可能な材料、例えばエポキシ樹脂マトリクスから成るマトリクス内に統合され、サンプルホルダー内にクランプによって固定される。
【００１４】
さらに、ミクロトームはサンプルを切り出す刃先を有している。刃先は、有利には直線状であり、所定の切り出し方向を指す。切り出し方向および刃先は切り出し平面にまたがる。さらに好適には、刃先は水平に配置されており、上向きになっている。これは、特に、液体表面による基板への薄切片の移行のその後の構成に有利である。
【００１５】
基板は、有利には剛性の基板である。自由選択的な構成では、このような基板は、その上に幾つかが配列されるように好適に構造化または合成された剛性の基板としても構成される。これらは、例えば透過型電子顕微鏡検査（ＴＥＭ）のスライドとして使用可能である。これには、例えば以下のものが含まれる。
・異なる寸法および幾何学的形状を備えるメッシュ／グリッドおよび／または超薄型切り出しパッド（セクションサポート）、
・基板上に直接的に載置されたＴＥＭグリッド（その上にチャネルが構造化される）、
・それ自体が硬く、面全体にわたってチャネルを形成する、大きくて細長い自己支持型のストリップ状グリッド（グレーチング、このようなストリップ状グリッドのうちの複数が並んで配置されてもよい）、
・ＴＥＭグリッド（丸型ＴＥＭグリッド、スロットグリッド、例えばメンブレンコーティング（例えばフォルムバールフィルムおよび／またはカーボンフィルム、ストリップ状グリッド）を備えるスロットグリッド）用の空白部分を備える基板、
・基板上での直接的なグリッドの生成／構造化（例えばプリント技術またはＣ−ＭＥＭＳプロセス）、ＴＥＭサンプルホルダー。
【００１６】
サンプルホルダー内のサンプルを刃先へ導き、これによって、薄切片を切り出しプロセスによって剥がすために、サンプルホルダーと刃先との間の相対運動用の移動装置が必要である。ここでは、切り出し方向における運動または切り出し方向に沿った運動、すなわち元来の切り出しプロセスのための運動と、サンプルホルダーの送り方向における運動またはサンプルホルダーの送り方向に沿った運動、すなわち各薄切片の厚さの調節のため、またはサンプルを刃先から、切り出し方向とは異なる配向に戻すための、２つの切り出しの間の搬送の実現ための運動と、が区別される。
【００１７】
切り出し方向における運動のために、ミクロトームは、移動装置を有している。これは、サンプルホルダーとサンプルを切り出す刃先との間の相対運動を生成する。切り出し方向における運動は、切り出し平面上で有利には平らに経過し、さらに好適には直線状に経過する。別の好適な構成では、有利には円形または楕円形の運動として、切り出し平面上の運動の二次元の経過が提供される。
【００１８】
ある構成では、移動装置および／または刃先に、付加的に振動発生器、有利には音源または超音波源が装備され、これは、サンプルから薄切片を剥がす際に切り出しプロセスをサポートする。
【００１９】
切り出し方向における運動は、有利には、戻り運動も含んでいる。すなわち、これは、切り出し運動を伴う開始位置から始まり、サンプルを刃先へ接近させることおよび切り出しプロセス中にサンプルから薄切片を完全に剥がすことを含んでおり、ここで刃先はサンプルを完全に通って押し動かされ、この際にサンプルを貫通する。目標位置に達した後、戻り運動が行われ、ここではサンプルが上述した開始位置へ戻される。戻り運動時に、薄切片の剥離によってサンプル上に生じた切り出し面と刃先との接触が回避されるべき場合、切り出し面は自由選択的に、戻り運動の開始前に、送り運動によって切り出し平面から離される。
【００２０】
薄切片の層厚は、送り方向における送り運動によって調節される。送り方向における運動のために、ミクロトームは、送り方向において、切り出し平面に対して０°とは異なる角度で、有利には６０から９０°で、サンプルホルダーと、サンプルを切り出す切り出しユニットと、の間の相対運動を生成する送り装置を有している。このような運動によって、先行する切り出しからのサンプルの切り出し面と切り出し平面との距離が調節される。
【００２１】
サンプルホルダーと切り出しユニットとの間の上述した相対運動は、有利には、刃先が固定されている場合には、サンプルホルダーのモーター駆動部によって行われる。移動装置と送り装置とを、微調整可能な可変変速比を伴うクランク機構内にまとめ、汚れに対して有利な方法で、共同で防護することは、特に小さいサンプルまたは軽量なサンプルの場合には有用である。この際に運動質量には、サンプルホルダーおよびサンプルが含まれる。
【００２２】
装置の択一的な構成は、移動装置および送り装置のために別個の装置を有している。ここで目的は、特に自動化において運動質量を小さく保つことであり、これによって再び、切り出し精度が向上する。
【００２３】
特に、大きなサンプルから薄切片を作製する場合（特に、層厚と横方向の薄切片の拡がりとの比が小さい）、一定の層厚を確保するために、送り装置と移動装置とを機械的に分離することも有利である。
【００２４】
ミクロトームはさらに、サンプルホルダーとは反対側で刃先と接する液体体積を有している。液体体積は、液体、有利には水または水溶液、択一的にアルコール（例えばエタノール、グリコール等）から成る。液体は、これが薄切片を溶解したり、薄切片と反応したりしないように選択されるべきである。液体体積はさらに、有利には刃先の全長にわたって、有利には刃先から一定の距離にある、またはより好適には刃先まで達する液体表面を有している。
【００２５】
課題を解決するための特徴は、サンプルホルダーとは反対の、刃先の側で、横方向に配置され、刃先に向かって、かつ／または刃先から離れるように移動可能なチャネルを含んでいる。したがって、チャネルと上述した液体体積とは刃先の同じ側にあり、サンプルを備えたサンプルホルダーは別の側に配置されている。チャネルは刃先に向かって開放されている。チャネルを液体で充填することができ、ここで液体は、液体体積の上述した液体、別の液体、またはこれら２つの液体の混合物のいずれかである。
【００２６】
チャネルは、有利には、基板によって形成されるチャネル底部を有している。基板は、有利には、後続の光学顕微鏡法および／または電子顕微鏡法（例えば、走査型電子顕微鏡法）のための少なくとも１つの薄切片のためのスライド（より好適には剛性のスライド）を形成し、この目的に適していなければならない。有利にはスライドは、透過性の材料もしくは導電性材料（特に、インジウムスズ酸化物、ＣＮＴ、炭素、ＷＳ２、ＭｏＳ２、ヘテロ構造、導電性重合体等）、コーティングされたガラスまたはシリコンウェハの部分（コーティングされている、またはコーティングされていない）から成る。
【００２７】
さらに有利には、チャネルには、電子ビームに対して透過性であり、したがって、例えば透過型電子ビーム顕微鏡法に適した基板によって形成されるチャネル底部が備えられている。上述したＴＥＭ基板（グリッドおよびコーティングされたグリッド等）がこれに適している。
【００２８】
ウェハは、ここでは基板として理解されるべきである。そのような基板は次のように構成されている。すなわち、例えば、少なくとも１つの電子チップおよび／または少なくとも１つの集積回路および／または少なくとも１つの接続要素がその上に形成され得るように構成されている。ここでこの接続要素は、そのようなチップおよび／または集積回路間に少なくとも１つの導電性または電気光学的な接続を提供する。そのような基板は、少なくとも半導体材料のグループからの半導体材料から形成されており、ここでこのようなグループは、特にシリコンを含むが、ゲルマニウム、炭素または他の元素半導体、または化合物半導体、例えばＳｉＣ、ＡｌＮ等または有機半導体も含んでいる。基板は、例えば、円形の板、多面体、長方形または任意のあらゆる幾何学的自由形状として形成されていてよい。
【００２９】
有利には、チャネルは、特に刃先に面していない側に、チャネルとチャネル内に流入する液体とを制限する機械的な側壁を有している。
【００３０】
チャネル制限の択一的な設計は、基板またはチャネル底部の有利に構造化された表面の機能化を提供する。これは有利には、液体を退けるまたは撥液性（疎水性）の領域と、液体を引き付けるもしくは水を引き付ける（親水性）の領域と、に基板を細分することによって行われる。表面の機能化、ひいては液体の拘束性は、有利には、表面の構造化によって、基板領域のコーティングまたは防水加工を用いて、または化学的な活性化によって行われる。したがって、液体、ひいては薄切片に対するアクセス性は、液体を引き付けるもしくは親水性の基板領域またはチャネル底部領域にのみ広がり、これは、特にチャネルの寸法が小さくなるにつれて、薄切片の正確な配置性を有利に一層促進する（毛管作用）。
【００３１】
チャネルが刃先に向かって押し動かされる場合、チャネルの開口端部もまた、有利には液体体積内に入り込む。あらかじめチャネル内に液体が含まれていない場合には、これに液体体積の液体が入れられる。あらかじめチャネル内に液体が含まれている場合には、チャネル内の液体と液体体積内の液体との間に接触が生じ、ここで接触する２つの液体は、有利には同一または混和性である。どちらの場合でも、共通の液体表面が刃先から液体体積を介してチャネルに達する。これによって、薄切片を刃先からチャネルに移すことができる。
【００３２】
有利には少なくとも１つの薄切片を伴うチャネルが刃先から再び離れるように押し動かされる（離される）場合、チャネル内の液体および表面と液体体積とが分離される。液体体積は有利には、刃先において変化しないままであるが、チャネル内の液体は、チャネルから別個に排出可能または除去可能な別個の液体量を形成する。
【００３３】
チャネルは、有利には、液体のうちの少なくとも１つをチャネルから導き出す（例えば、除去する、吸い取る）手段および／またはチャネル内に導入する（例えば、追加する、引き込む、供給する）手段を有している。有利にはチャネル領域における吸い取りおよび／または導入は、チャネルに注ぐ多数の開口部を介して、有利にはチャネル、例えばチャネル制限、より好適にはチャネル底部または側壁における開孔領域を介して行われる。吸い取りおよび／または導入を複数の開口部に分散させることによって、チャネル内の流れの形成が最小限に抑えられ、これによって例えば基板上での薄切片の不所望な変位のリスクが最小限に抑えられる。
【００３４】
自由選択的に、開口部の配置を次のようにし、これらの開口部を介した液体の吸い取りまたは供給を次のようにすることが提案される。すなわち、それらがチャネル内の薄切片の所定の操作および搬送を可能にするように、チャネル内の流れが形成され、制御および／または調整されるようにすることが提案される。
【００３５】
さらに、自由選択的に、有利には、空気流を生成する少なくとも１つのノズル出口開口部を備える手段をチャネル上に設けることが提案される。ここで、少なくとも１つのノズル出口開口部、ひいては空気流をチャネルへ配向することができる。これらの手段は、上からの空気流、表面波ならびに横方向に挿入される基板（例えばフィルム）によって液体表面上の切り出しを操作することを可能にする。この基板には、切片が、メニスカスの形成によって当たり、その変位によって操作可能である。
【００３６】
刃先における上述した液体体積は、有利には、液体のうちの少なくとも１つを吸い取るおよび／または導入する別個の手段を有していない。この体積は、有利には、液体の表面張力によって、またはより大きい体積の場合には、相応する内壁または刃先の隣接領域の表面の機能化によって安定化される。１つの液体だけが使用される場合、液体の量は、チャネルが液体体積へ押し入れられるときに有利にはチャネルを介して調整される。これに対して、異なる液体が液体体積内およびチャネル内に設けられる場合、液体体積を供給するために、液体のうちの少なくとも１つを吸い取る別個の手段および／または液体体積内に導入する別個の手段が提供されるべきである。
【００３７】
別の好適な構成は、複数のチャネルを並んで配置すること、有利には互いに平行に、共通の基板上に配置することである。次に、基板のチャネルは、好適には連続的に、刃先に導かれ、液体体積内へ導かれ、薄切片または薄切片列によって満たされる。基本的に、チャネルはここで、上述したように、開口チャネル端部を刃先に対して往復運動させることによって導かれる。これは、有利には行って、戻ってくる移動によって、すなわち、方向転換を伴って同じ配向で、刃先から離すことによって行われる。ここで、次のチャネルへの変更は、チャネル開口部を伴って、基板を付加的に、横方向にさらに押し動かすことによって行われる。択一的な構成では、往復運動が、方向転換を伴わずに設計される。これは例えば、チャネル開口部を伴って、基板を、刃先に対して平行に引っ張ることによって、すなわち、有利には横方向の、かつ／または直線状の剪断運動による往復運動をチャネル開口部と刃先との間で行うことによって行われる。
【００３８】
ミクロトームの好適な構成は、刃先および／またはチャネル上で、個別化可能な液滴を上から、液体または液体上の薄切片へ分離させる装置を含んでいる。これは特に、液体表面上に浮上し、互いに接着された２つの薄切片の個別化または分離に使用される。これはこれらの薄切片が刃先で、サンプルから連続的に剥がされて、液体表面によって受容され、そこで連続して、直列配置された後に行われる。特に、液体体積上の表面上に連続して配置された２つの薄切片の間の液体に加えられる、個別化された滴によって、２つの薄切片は互いに離れる。
【００３９】
上述の課題を解決するために、さらに、上述したミクロトームを使用してサンプルから薄切片を作製する方法が提案される。この方法はさらに、以降のステップを、有利には挙げられた順番で含んでいる。
１．サンプル用のサンプルホルダーと、サンプルを切り出す刃先と、この刃先に接する液体表面を伴う液体体積と、を備える、上述した様式のミクロトームを提供する。
２．上述したように、サンプルをサンプルホルダー内にはさむ。
３．液体体積および刃先へ、チャネルとともに基板を接近させる。ここでチャネルは、上述したように、液体体積の液体によって、または導入のための手段によって液体によって満たされる、または既に液体を含んでいる。この接近によって、剥がされた薄切片の搬送手段であるチャネル内に、液体体積と液体との共通の液体表面が生じる。
４．上述した開始位置から開始して、切り出し方向における、サンプルホルダー内のサンプルと刃先との間の相対運動を開始する。ここでサンプルは刃先へ導かれる。
５．刃先によってサンプルに切り込みを入れる。ここで有利には上述した切り出し平面における切り出しによって、サンプルから薄切片が剥がされる。ここでサンプルの残りの部分上に切り出し面が生じる。切り出し面と切り出し平面とは、有利には共通の平面を形成する。刃先は切り出し平面においてサンプルを完全に貫通する。
６．液体体積の液体表面上に薄切片を受容する。一方の端部では、薄切片は有利には、刃先に付着したままである。このような場合には、刃先から薄切片が剥がれ、薄切片が液体表面上に完全に移る。
７．液体表面上の薄切片をチャネルに搬送する。
【００４０】
これに続いて、有利には、刃先の液体体積から、薄切片を備えたチャネルが離される。これに続く、上述した吸い取り手段による、チャネル内の液体の除去によって、液体表面上にある薄切片が乾かされ、チャネル底部、有利には基板またはスライドの上に配置される。
【００４１】
剥がされた薄切片を刃先からより良好に引き離すために、自由選択的に、以降の後続のステップが提案される。
８．サンプルを開始位置に戻す。
９．上述した開始位置から、切り出し方向における、サンプルホルダー内のサンプルと刃先との間の相対運動を開始する。ここでサンプルは刃先へ導かれる。
１０．サンプル端部を通じて刃先を渡す。ここで切り出し面が刃先上でスライドする。この際に、サンプルが搬送されていないために再度の切り出しが生じることはない。ここで、場合によってまだ刃先に付着している薄切片が剥がれる。
【００４２】
ステップ８から１０に対して択一的に、以降の自由選択的なステップを介して、剥がされた薄切片が刃先からより良好に引き離される。
１１．サンプルを開始位置に戻す。
１２．サンプルが入ったサンプルホルダーを送り方向において、別の開始位置に搬送する。
１３．好適には数マイクロメートル、有利には５から２０μｍ、サンプルに、次の切り出しの切れ目をつける。
１４．切り出し装置の運動方向を逆にして、切片から出す（サンプルを運び上げる）。この際に、刃先に付着している薄切片がサンプルと接着性に結び付いており、サンプルが戻る際にともに引っ張られて、この際に刃先から剥がれる。
１５．刃先からサンプルをさらに戻す。この際に薄切片もサンプルから剥がれ、液体表面上で刃先から離れる。
【００４３】
複数の薄切片がサンプルから連続的に剥がされ、液体表面上で並べられて、チャネル内へ押し動かされる場合、この方法は以降のさらなるステップを含む。
１６．サンプルを開始位置に戻す。
１７．サンプルが入ったサンプルホルダーを送り方向において、別の開始位置に搬送する。
１８．ステップ４から７ならびに１６および１７を繰り返す。ここで剥がされた薄切片は、液体体積上の液体表面上に連続して配置され、チャネル内へ、すなわち有利には基板上に搬送される。
１９．場合によっては、基板の横方向の供給によって、切片を操作する。これによって、切片が、切片と基板との間のメニスカスの形成によって、基板に当たり、これによって、その移動によって、ともに動かされ得る。
【００４４】
薄切片を基板上に移すために、以降の自由選択的なステップの少なくとも１つを含んでいる方法が提案される。
２０．刃先から液体体積を吸い取る、導き出すまたは蒸発させる。
２１．刃先からチャネルを離すおよび／または
２２．チャネルから液体を吸い取る、導き出すまたは蒸発させる。
【００４５】
この方法の特別な利点は、剥がされた薄切片を備えたチャネルをミクロトームから離すことができ、さらなる処理に供給することができ、他方で、後続の薄切片を刃先に押し動かされた別のチャネルによって受容することができることである。
【００４６】
基板上で並んで位置する複数のチャネルの有利な配置では、基板は横方向に次のチャネルへ移動させられ、基板上のすべてのチャネルが占有されるまで、ステップ１から７が再度実行される。したがって別の利点は、基板上の複数のチャネル内に多数の薄切片を並んで置くことができることである。
【００４７】
本発明を、実施例、以降の図および説明に基づいてより詳細に説明する。図示される特徴およびそれらの組み合わせは、これらの実施例およびそれらの構成だけに限定されない。むしろ、それらは、他の可能な、しかし明示的には実施例として示されていない、さらなる構成を表すために組み合わせることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】剥がされた薄切片は示されているが、サンプルおよびサンプルホルダーが示されていない、ミクロトームの有利な実施形態の概略図（左側は図、右側は平面図）である。
【図２】ミクロトームを使用して、サンプルから薄切片を作製する有利な方法のフローチャートである。
【図３】図３ａから図３ｈは、図２に示されたステップに対応する有利な実施形態の概略図である（図１に相応して、それぞれ左側は図、それぞれ右側は平面図）。
【図４】チャネルが、液体を引き付ける領域または親水性の領域によって、側壁を伴わずに形成されている、例示的な基板の概略的な平面図である。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
図１に示されているミクロトームは、有利にはダイヤモンドウェッジ２から成る刃先１と、刃先と接する液体体積３と、を含んでいる。さらに、ミクロトームは、図示のように液体体積３内に押し動かされる、基板５および側壁６を備えたチャネル４を含んでいる。液体体積内の液体はチャネル４内にも延在する。サンプル（詳細には図示せず）の４つの連続的に剥がされた薄切片７は、サンプルホルダー（同様に図示せず）において、液体表面上に列になって位置している。
【００５０】
図２に示されたフローチャートでは、ミクロトームを使用してサンプルから薄切片を作製する有利な方法の個々のステップが示されている。個々のステップは、概略図によって、図３ａから図３ｈを用いてより詳細に説明される。図および平面図ならびに図３ａから図３ｈに示された構成要素は、図１に示されたそれに相応し、そのため、図１を参照し、参照符号は省略されている。
【００５１】
例として示されている方法は、（まだ行われていない場合には）刃先において、液体体積を充填すること８、ならびにチャネルを液体（例えば水）で充填すること９から始まる。チャネルはまだ、生じている液体体積の外側にある（図３ａおよび図３ｂ）。次に、チャネルが刃先に向かって押し動かされ、これによって、チャネル内の液体と液体体積とが統合され、共通の液体表面が形成される１０（図３ｃ、特に右側の平面図）。上述した液体の上部の吸い取りを開始することによる液体表面のレベル補正が続く１１。これによってミクロトームは薄切片を作製する準備を終えた。これに続いて、刃先で複数の薄切片が連続的に剥がされる１２。これらは、上述した液体表面上で連続して相互に列にされた一連の薄切片としてチャネルへ押し動かされる（図３ｄ）。一連の薄切片がその全体または一部の長さでチャネルを満たすと、個別化可能な液滴を上から、液体上の薄切片へ分離させる、上述した、詳細に図示されていない装置によって、チャネルの開口端部の領域において２つの薄切片の間で一連の薄切片が分離される１３。液体体積上の液体表面上に連続して配置された２つの薄切片の間に加えられる滴によって、２つの薄切片が互いに離れる（図３ｅ、特に右側の平面図）。チャネルは、液体体積および刃先から離れるように移動される１４。この例では、薄切片は刃先の液体体積上に残っている（図３ｆ、特に右側の平面図）。次に、液体体積から分離されたチャネルが空にされ、ここでチャネル内にあるに薄切片が基板上に載置され、接着で固定される（図３ｇ、特に右側の平面図）。同じ基板上での、刃先の前の、別のチャネルの提供が続く１６（図３ｈ、特に右側の平面図）。
【００５２】
自由選択的な設計は、共通の基板５上に複数のチャネル４を提供し、これらは、連続した薄切片列１７によって連続的に充填され得る(図４)。さらに好適には、特に有利に省スペースの方法で、これらのチャネル４は、チャネルの周りの側方の機械的な側壁を伴わずに、そうでない場合には撥液性もしくは疎水性のスライドの上の、上述したタイプの機能化された、液体を引き付ける領域構造化もしくは親水性の領域構造化１８によって形成される。ここで開口チャネル端部は、図示されたように、基板縁部まで、液体を引き付けるもしくは親水性の領域構造化が達することによって実現され、さらに好適には、基板の端面上への、その周囲の液体体積へのより良好な流体拘束のために実現される。このような構成では、チャネルは、有利には液体体積を介して、択一的に、個別化可能な液滴を上から、液体上の薄切片へ分離させる上述した装置によって、液体で満たされる（本来の目的を離れて、例えばピペット装置によって）。
【００５３】
図４に示された基板の特に有利な構成は、液体を引き付ける領域構造化もしくは親水性の領域構造化が、そうでない場合には撥液性のスライドもしくは疎水性のスライド上に、開孔基板構造によって形成されることによって実現される。したがってチャネル内の水は、流体体積から分離した直後に液体を吸い取るおよび／または導入する、上述した手段によって、面状に、下から、薄切片列の下方の基板構造を通じて吸い取り可能である。
【符号の説明】
【００５４】
１  刃先
２  ダイヤモンドウェッジ
３  液体体積
４  チャネル
５  基板
６  側壁
７  薄切片
８  刃先における液体体積の充填
９  水によるチャネルの充填
１０  チャネル内の液体と液体体積との統合
１１  液体表面のレベル補正
１２  複数の薄切片の剥離
１３  ２つの薄切片間での薄切片列の分離
１４  液体体積および刃先からチャネルを離す移動
１５  チャネルの排水／乾燥
１６  刃先前の別のチャネルの提供
１７  薄切片列
１８  液体を引き付ける領域構造化もしくは親水性の領域構造化
【図１】
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【図２】
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【図３ａ）】
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【図３ｂ）】
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【図３ｃ）】
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【図３ｄ）】
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【図３ｅ）】
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【図３ｆ）】
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【図３ｇ）】
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【図３ｈ）】
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【図４】
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【国際調査報告】
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