(57)【要約】本発明は、改良されたプロドラッグおよびその組成物に関する。特に、これは、液晶ナノ構造ナノ粒子を作製する能力を有する他の生物学的活性な分子の両親媒性ジェムシタビンプロドラッグまたは両親媒性プロドラッグ、およびヒトを含む動物を治療するためのその使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（ＩＩ）のプロドラッグ：
【化１】
2021522331.tif 000022
ここで
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、式（ｄ）による置換基、および式（ｅ）による置換基からなるグループから選択される：
【化２】
2021522331.tif 000023
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓはペグｎであり、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して、１つの付着部位でグループＳ−Ｒに共有結合し、２番目の付着部位でジェムシタビンに共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して３番目の結合部位でジェムシタビンに結合するリンカー基である；および
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合があ
る）に共有結合し、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して４番目の結合部位でジェムシタビンに結合するリンカーグループである。
【請求項２】
一般式Ｉのプロドラッグ：
【化３】
2021522331.tif 000024
ここで、Ａは生物学的活性エージェントである；
Ｙは生物学的活性エージェントとＸの間の切断可能な結合である；および
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、および式（ｄ）による置換基からなるグループから選択される：
【化４】
2021522331.tif 000025
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎであり、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、１つの結合部位で１つのＳ−Ｒグループに、２番目の付着部位でＡに、生体に不安定な結合ＹからＡを介して共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がる）および３番目の結合部位でＡに、生体に不安定な結合ＹからＡを介して共有結合しているリンカー基である；および
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体不安定性結合Ｙを介して４番目の結合部位でＡに共有結合するリンカーグループである。
【請求項３】
Ｙが、アミド、カルバメート、イミド、スルホンアミド、およびアミンからなるグループから選択される、請求項２に記載のプロドラッグ。
【請求項４】
Ｙがカルバメートである、請求項３に記載のプロドラッグ。
【請求項５】
Ｒが、ミリスチル、ミリストイル、ミリストイルアミド、パルミチル、パルミトイル、パルミトイルアミド、ステアリル、ステアロイル、ステアロイルアミド、オレイル、オレ
オイル、オレオイルアミド、リノレイル、リノレオイル、リノレオイルアミド、リノレニル、リノレノイル、リノレノイルアミド、アラキドニル、アラキドノイル、アラキドノイルアミド、フィタニル、フィタノイル、フィタノイルアミド、ヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネソイル、およびヘキサヒドロファルネソイルアミドからなるグループから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項６】
Ｒが、オレイル、リノレイル、リノレノイルおよびフィタニルからなるグループから選択される、請求項５に記載のプロドラッグ。
【請求項７】
Ｘが式（ａ）による置換基である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項８】
Ｓがペグ３−６である、請求項７に記載のプロドラッグ。
【請求項９】
Ｒが、オレオイル、オレオイルアミド、リノレオイル、リノレオイルアミド、リノレノイル、リノレノイルアミド、フィタノイル、およびフィタノイルアミドからなるグループから選択される、請求項７または８に記載のプロドラッグ。
【請求項１０】
Ｘが式（ｅ）による置換基である、請求項１、５または６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１１】
Ｒが、オレイル、リノレイル、リノレノイルおよびフィタニルからなるグループから選択される、請求項１０に記載のプロドラッグ。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のプロドラッグから形成される自己組織化構造であって、前記構造が、ラメラ相、双連続キュービック相、六角形およびスポンジ相からなるグループから選択される生理学的条件下で中間相を示す、自己組織化構造。
【請求項１３】
示される中間相がラメラ相および逆相である、請求項１２に記載の自己組織化構造。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のプロドラッグから形成される自己組織化構造であって、前記構造が固体脂質粒子である、自己組織化構造。
【請求項１５】
リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、プロドラッグ両親媒性物質およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される成分をさらに含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の自己組織化構造。
【請求項１６】
生物学的活性化合物または生物学的活性エージェントＡに代謝されることができる薬剤の放出を調節する方法であって、Ａを少なくとも１つのテール成分Ｘに共有結合させて、生理学的条件下で自己組織化構造に自己組織化できる両親媒性物質を形成することを含み、前記両親媒性物質が生物学的活性な形態でＡを放出するためにインビボで切断可能であり、ここで：
Ａは、ジェムシタビンである；
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、式（ｄ）による置換基、および式（ｅ）による置換基からなるグループから選択される：
【化５】
2021522331.tif 000026
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓはペグｎであり、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、１つの付着部位でグループＳ−Ｒに共有結合し、２番目の付着部位で治療的活性エージェントＡに共有結合し、Ａに生体に不安定な結合を示すリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した付着部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体に不安定な結合で３番目の付着部位で治療的活性エージェントＡに結合するリンカー基である；および
Ｌ３は、３つの独立した付着部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体に不安定な結合で４番目の付着部位で治療的活性エージェントＡに結合するリンカー基である、方法。
【請求項１７】
前記両親媒性物質が、化合物の生物学的活性な形態の形成を促進する酵素の酵素基質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
人の癌を治療または予防する方法であって、それを必要とする人に、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の自己組織化構造を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改善されたプロドラッグおよびその組成物に関する。特に、本発明は、両親媒性ジェムシタビンプロドラッグ、もしくは液晶ナノ構造ナノ粒子を作製する能力を有する他の生物的活性分子の両親媒性プロドラッグに関する、そしてヒトを含む動物を治療するために使用される。
【背景技術】
【０００２】
ジェムシタビン（２’、２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン）は、膵癌、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、卵巣癌および膀胱癌に対するヌクレオシドベースの化学療法剤である。当剤は、生体内でのバイオアベイラビリティが非常に制限され、薬物動態特性が不十分であり、体液および血流中の脱アミノ化および不活性化を受けやすい。
【０００３】
ジェムシタビンを含む現在の化学療法は一般に非選択的であり、高いクリアランス率、不十分な薬物動態プロファイル、生体循環中の失活、腫瘍選択性の欠如、および腫瘍による内因性または後天性の耐性により深刻な副作用を引き起こす。
【０００４】
化学療法剤の腫瘍部位への効率的なデリバリーには、部位特異的ターゲティングが必要である。ナノ粒子と高分子は、独特な血管障害と特性、ならびにリンパ系の回復システムの欠如による腫瘍および炎症組織に受動的に蓄積することがよく知られている。−いわゆる強化された浸透および保持効果（ＥＰＲ）（ＭａｔｓｕｍｕｒａＹ  ｅｔ  ａｌ、１９８６）ナノテクノロジーの医学（ナノメディシン）への応用には、抗がん剤のドラッグデリバリー担体としてのナノスケール粒子の使用が含まれるが、これに限定されない。ナノ医薬品は、薬物動態および薬力学を改善し、作用部位への活性薬剤の効率的なデリバリーを提供することにより、癌治療の治療指数、安全性および有効性を改善する。
【０００５】
抗がん剤のドラッグデリバリー担体としてナノ粒子を使用すると、癌の組織や細胞への薬剤のデリバリーを効果的にターゲティングできる。
【０００６】
ナノ粒子内の抗癌剤のカプセル化は、第２世代の化学療法として研究されている。リン脂質または高分子材料に基づくナノ粒子は、状況によっては、抗がん剤の高いペイロードを提供し、早期の不活性化から薬剤を保護することが実証されており、その結果、効力が増し、全身毒性が減少する。Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、最初のＦＤＡ承認ナノ薬剤（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  Ｙ）などのいくつかの製品が市場に出ている。
【０００７】
別のアプローチは、抗癌剤を化学的に修飾して、ナノスケールの粒子を形成することができるプロドラッグを形成すること（即ち、第３世代の化学療法剤）を含む。これは、疎水性分子に共有結合して、ナノスケールの粒子を形成できる５−ＦＵプロドラッグを提供する活性５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）で実証されている（ＵＳ８６０３９９９）。活性薬剤の化学修飾されたプロドラッグ誘導体は、全身毒性を低減し、薬物動態および薬力学を改善し、体液中での優れた安定性を備えている。インビボ（生体内）では、プロドラッグは、例えば、加水分解、酸化、還元または酵素による切断によって、好ましくは望ましい作用部位（腫瘍など）で生物変換反応を受ける。
【０００８】
ジェムシタビンは、活性薬剤をスクアレン（ＵＳ２００９０１３０２１４Ａ１）に結合させることによりナノ粒子に組み込まれている。ただし、このシステムでは、ナノ粒子を形成するために有機溶媒を使用する必要があり、水性の生体液での最終使用には望ましくない。
【０００９】
ドラッグデリバリーのより良い方法を生成する必要性が残っている。
【００１０】
本明細書における先行技術への言及は、この先行技術がオーストラリアまたは他の管轄区域における共通一般知識の一部を形成すること、またはこの先行技術が合理的に可能であるという承認または形式または提案ではなく、またそのように解釈されるべきではない。当業者によって確認され、理解され、関連があると見なされることが期待される。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、自己組織化構造を形成することができるプロドラッグを提供することを目指している。本発明はまた、その医薬組成物を提供する。これらの高次相は、薬物の放出プロファイルを変更する。
【００１２】
ある態様では、本発明は、一般式Ｉのプロドラッグを提供する：
【００１３】
【化１】
2021522331.tif 000002
【００１４】
ここで、Ａは生物学的活性エージェントである；
Ｙは、生物学的活性エージェントとＸの間の切断可能な結合である。そして
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、および式（ｄ）による置換基からなるグループから選択される：
【００１５】
【化２】
2021522331.tif 000003
【００１６】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基およびそれらの類似体からなる基から選択され、
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎで、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、１つの付着部位で１つのＳ−Ｒグループに、２番目の付着部位でＡに、生体不安定性結合Ｙを介して共有結合しているリンカー基で、
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）と３番目の結合部位のＡに、生体不安定性結合Ｙを介して共有結合しているリンカー基である。そして
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる可能性がある）と、４番目の結合部位でＡに、生体不安定性結合Ｙを介して共有結合しているリンカー基である。
【００１７】
本発明のこの態様の実施形態では、一般式（Ｉ）のプロドラッグが提供される：
【００１８】
【化３】
2021522331.tif 000004
【００１９】
ここで
Ａは治療的活性エージェントである；
Ｙは、治療的活性エージェントとＸの間の切断可能な結合である。そして
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、および式（ｄ）による置換基からなるグループから選択される：
【００２０】
【化４】
2021522331.tif 000005
【００２１】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基およびそれらの類似体からなる基から選択され、
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎで、ｎ＝１−１０である。
【００２２】
Ｌ１は、１つの結合部位でＳ−Ｒグループに、２番目の結合部位で治療的活性エージェントＡに、生体不安定性結合ＹからＡを介して共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、生体不安定性結合ＹからＡを介して３番目の結合部位で治療的活性エージェントＡに結合するリンカー基である。そして
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、生体不安定性結合ＹからＡを介して４番目の結合部位で治療的活性エージェントＡに結合するリンカー基である。
【００２３】
一実施形態では、Ａは、治療的活性なヌクレオシド剤、好ましくはシトシン塩基を含むヌクレオシド剤、より好ましくはジェムシタビンである。
【００２４】
一実施形態では、Ｙは、アミド、カルバメート、スルホンアミド、イミド、イミン、およびカーボネートからなるグループから独立して選択される選択的に切断可能な結合である。好ましくは、Ｙは、アミドおよびカルバメートからなるグループから独立して選択される。特に好ましい実施形態では、Ｙはカルバメート結合である。
【００２５】
好ましい実施形態では、Ｘは、一般式（Ｉ）のプロドラッグの式（ａ）による置換基である。
【００２６】
好ましい一実施形態では、一般式（Ｉ）は、式（ＩＩ）による化合物を表す。
【００２７】
【化５】
2021522331.tif 000006
【００２８】
ここで
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、式（ｄ）による置換基、および式（ｂ）による置換基からなるグループから選択される式（ｅ）：
【００２９】
【化６】
2021522331.tif 000007
【００３０】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基およびそれらの類似体からなるグループから選択され、
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎで、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、１つの結合部位でＳ−Ｒグループに、２番目の結合部位でジェムシタビンへのカルバメート結合を介してジェムシタビンに共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、３番目の結合部位でジェムシタビンへのカルバメート結合を介してジェムシタビンに結合するリンカー基。そして
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、４番目の結合部位でジェムシタビンへのカルバメート結合を介してジェムシタビンに結合するリンカー基である。
【００３１】
好ましい実施形態では、Ｘは、式（ＩＩ）のプロドラッグの式（ａ）または（ｅ）による置換基である。Ｒは一般に疎水性である。必要に応じて、Ｒは１０から３０個の炭素原子に相当する直鎖の長さを有する。一実施形態では、Ｒはアルファ−トコフェロールである。別の実施形態では、Ｒはイソプレノイド基である。他の実施形態では、Ｒは、ヒドロキシル化アルキルまたはヒドロキシル化アルケニル基である。Ｒの好ましい実施形態は、アルキル、アルケニル、アルキニル、分枝アルキル、分枝アルケニル（イソプレノイド）、分枝アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基およびそれらの類似体、例えばアルファ−トコフェロール、ヒドロキシル化アルキルまたはアルケニル基である。好ましい実施形態では、各Ｒは、１０から２４個の炭素原子に相当する、より好ましくは１２から２４個の炭素原子に相当する、より好ましくは１４から２０個の炭素原子に相当する鎖長を有する。Ｘが式（ｃ）または式（ｄ）による置換基である場合、各Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基およびそれらの類似体からなる基から独立して選択され得る。あるいは、Ｒ基は同一であってもよい。一般的に、Ｒは自己組織化特性をＡに与えることを目的としている。
【００３２】
好ましい実施形態において、Ｒは、ミリスチル、ミリストイル、ミリストイルアミド、パルミチル、パルミトイル、パルミトイルアミド、ステアリル、ステアロイル、ステアロイルアミド、オレイル、オレオイル、オレオイルアミド、リノレイル、リノレオイル、リノレオイルアミド、リノレニル、リノレノイル、リノレノイル、リノレノイルアラキドノイル、アラキドノイルアミド、フィタニル、フィタノイル、フィタノイルアミド、ヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネソイル、およびヘキサヒドロファルネソイルアミド鎖。最も好ましくは、Ｒは、オレイル、オレオイル、リノレイル、リノレオイル、フィタニル、およびフィタノイル鎖からなるグループから選択される。
【００３３】
一実施形態では、Ｓは、ポリエチレングリコール（ペグ）１−１０、α−カルボキシポリエチレングリコール（ＨＯＯＣ−ペグ）１−１０、およびα−アミノポリエチレングリコール（Ｈ２Ｎ−ペグ）１−１０からなる基（グループ）から選択される。好ましくは、Ｓは（ペグ）１−１０であり、より好ましくはＳは（ペグ）１−６である。特に好ましい実施形態では、Ｓは（ペグ）３−６である。
【００３４】
一実施形態では、Ｌ１は、無水コハク酸、無水マレイン酸、グリコール酸、クロロ酢酸、イソシアノ酢酸アリル、ヒドロキシプロパンスルホン酸、グリシンおよびアラニンからなるグループから選択される選択的に切断可能なリンカー基である。別の実施形態では、Ｌ２は、ジエタノールアミン、プロパン−１，２，３−トリカルボン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、セリン、チロシン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、およびスレオニンからなるグループから選択される選択的に切断可能なリンカー基である。別の実施形態では、Ｌ３は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノエタン（トリス）およびクエン酸からなるグループから選択される選択的に切断可能なリンカー基である。
【００３５】
式（ＩＩ）による化合物は、以下のスキーム１に記載されるように作製することができる。
【００３６】
特に好ましい実施形態では、一般式（ＩＩ）は、以下からなるグループから選択される化合物を表す：
【００３７】
【化７】
2021522331.tif 000008
【００３８】
ここで、ＺはＯまたはＮＨである。
【００３９】
より好ましくは、一般式（ＩＩ）は、以下からなるグループから選択される化合物を表す：
【００４０】
【化８】
2021522331.tif 000009
【００４１】
好ましくは、一般式（Ｉ）または（ＩＩ）のプロドラッグは、ラメラ相、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ、エマルジョン、または結晶ラメラ形態を示すリオトロピック相を有する自己組織化構造を形成することができる。より好ましくは、相は、ラメラ相、キュービック相、ヘキサゴナル相、またはスポンジ相である。さらにより好ましくは、相は逆相である。特に好ましい実施形態では、相はラメラ相と逆相である。
【００４２】
本発明の第２の態様では、上記の態様の一般式（Ｉ）または（ＩＩ）のプロドラッグの自己組織化構造が提供される。一実施形態では、一般式（Ｉ）または（ＩＩ）のプロドラッグの自己組織化構造は、リン脂質、コレステロール脂質、グリセロール脂質、プロドラッグ両親媒性物質、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される成分をさらに含む。好ましくは、ｘが式（ｅ）による置換基である一般式（ＩＩ）のプロドラッグの自己組織化構造は、さらに、リン脂質、コレステロール脂質、グリセロール脂質、プロ
ドラッグ両親媒性、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される成分を含む。
【００４３】
好ましくは、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ、エマルジョン、または結晶ラメラ形態を示すリオトロピック相である。より好ましくは、相は、ラメラ相、キュービック相、ヘキサゴナル相、またはスポンジ（Ｌ３）相である。さらにより好ましくは、相は逆相である。一般に逆相は、過剰な水中での熱力学的安定性、より大きな表面積、および制御されたチャネル寸法のためにドラッグデリバリー担体として有利である。後者の特性は自己組織化マトリックス内に埋め込まれたアクティブの放出に特に重要である。したがって、ラメラ相、逆キュービック相、逆スポンジ相（Ｌ３）、逆ヘキサゴナル相または逆ミセル相（Ｌ２）、好ましくはラメラ相、逆キュービック相またはＬ３相に自己組織化することができるプロドラッグが提供される。別の実施形態では、自己組織化プロドラッグは結晶構造を有する。
【００４４】
本発明によるプロドラッグの自己組織化構造は、バルク相であってもよく、またはそれに由来するコロイド粒子であってもよい。特に好ましいコロイド粒子は、以下のグループから選択され得る：リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、「スポンジ状」粒子または逆ミセル。条件によっては、自己組織化構造に複数の相が存在する場合がある。
【００４５】
特に好ましい実施形態では、自己組織化構造は、式（ＩＩ）のジェムシタビン・プロドラッグのものである。好ましくは、自己組織化構造は、ラメラ相、キュービック相、Ｌ２またはＬ３相である。そのような粒子は、ポリエチレングリコール脂質、ポリソルベートまたはポロキサマーなどの界面活性剤安定剤によって、医薬用途のために適切に安定化され得る。
【００４６】
本発明の別の態様では、薬剤またはプロドラッグのような生物学的活性エージェントの放出を調節する方法が提供され、生物学的活性エージェントＡをスペーサーＳおよび開裂可能な共有結合Ｙを介して少なくとも一つの尾部成分Ｒに共有結合して、生理学的条件下で自己組織化することができる両親媒性物質を形成することを含み、かつ、両親媒性物質が生体内で開裂可能であって、生物学的活性エージェントを放出することを特徴とする。
【００４７】
この態様の一実施形態では、生物学的活性エージェントＡのバイオアベイラビリティを調節する方法が提供され、両親媒性を形成するために、開裂可能な共有結合Ｙを介して少なくとも一つの尾部成分Ｒに生物学的活性エージェントＡを共有結合で連結することを含む方法が提供され、ここで、共有結合は、生体内で開裂可能であって、生物学的活性エージェントを自己組織化構造から放出する；両親媒性物質が自己組織化構造に自己組織化するように患者に両親媒性物質を投与することが挙げられる。
【００４８】
本発明の別の態様では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の自己組織化構造を有効成分として含む病状の治療のための医薬組成物を提供される。いくつかの実施形態において、病状の治療のための医薬組成物は、本質的に、式（Ｉ）または（ＩＩ）の自己組織化構造である有効成分からなり、場合により、他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または自己組織化構造の他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせて構成される。いくつかの実施形態では、自己組織化構造はラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセルキュービック、ミセルまたはスポンジ相を示す。好ましくは、いくつかの実施形態において、有効成分は、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセルまたはより秩序のないスポンジ状ナノ粒子または固体脂質ナノ粒子またはそれらの組み合わせにおける式（ＩＩ）の自己組織化構造である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、疾患状態は、腫瘍がある状態であり、医薬組成物は、活性成
分として、固体脂質粒子または式（ＩＩ）の自己組織化構造を含む。
【００５０】
自己組織化構造／活性成分は、好ましくは、医薬組成物中に治療的活性な量で存在する。
【００５１】
本発明の別の態様においては、式（Ｉ）または（ＩＩ）の自己組織化構造を有効成分として含む疾患状態の治療のための医薬組成物の治療有効量を、任意選択的に、自己組織化コロイド粒子中の他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせて患者に投与することを含む疾患状態の治療のための方法が提供される。いくつかの実施形態では、自己組織化構造は、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、ミセルキュボソーム、ミセルまたはスポンジ状ナノ粒子を表示する。好ましくは、いくつかの実施形態では、活性成分は、式（ＩＩ）の自己組織化構造であり、任意に、他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、またはリポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセルまたはそれ以下の順序のスポンジ様ナノ粒子または固体脂質ナノ粒子またはそれらの組み合わせのような自己組織化構造における他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせてである。
【００５２】
いくつかの実施形態では、疾患状態は腫瘍の存在によるものであり、この場合、医薬組成物は、式（ＩＩ）の自己組織化構造の活性成分を含むことが好ましく、任意に他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせて、リポソーム、逆キュボソーム、ヘキソソーム、ミセル、秩序のないスポンジナノ粒子または固体脂質ナノ粒子またはそれらの組み合わせを含む。
【００５３】
本発明の別の態様における医薬は、式（ＩＩ）の本発明による自己組織化構造を提供し、必要に応じて、他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせて、疾患状態の治療用医薬を製造するための自己組織化構造を提供する。薬剤は、本発明以前の態様として、自己組織化されたバルクまたはコロイド粒子構造を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、疾患状態は、腫瘍の存在によるものであり、この場合、医薬組成物は、式（ＩＩ）の自己組織化構造を有効成分として含むことが好ましく、任意に他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせて、リポソーム、逆キュボソーム、ヘキソソーム、ミセル、スポンジ状ナノ粒子または固体脂質ナノ粒子またはそれらの組み合わせを含む。
【００５５】
本発明の別の態様では、活性剤を含む自己組織化構造を形成することによって増強された透過および保持効果を利用することによって生物学的活性エージェントをデリバリーする方法が提供され、この方法は、生物学的活性エージェントを少なくとも１つの疎水性尾部に共有結合させることを含む。成分Ｒは、スペーサーＳおよび切断可能な結合Ｙを介して、生理学的条件下で自己組織化構造に自己組織化することができる両親媒性物質を形成し、両親媒性物質は、生体内で切断可能であり、生物学的活性エージェントを放出する。好ましくは、生物学的活性エージェントはジェムシタビンである。
【００５６】
この態様の一実施形態は、生物学的活性エージェントをデリバリーする方法を提供するものであり、生物学的活性エージェントを少なくとも一つの尾部成分に共有結合して両親媒性を形成することを含む方法であり、ここで、リンクは、生体内で開裂可能であり、生物学的活性エージェントを自己組織化構造から放出する；両親媒性物質を患者に投与し、両親媒性物質が自己組織化構造に自己組織化するように、両親媒性物質を患者に投与する。
【００５７】
好ましくは、両親媒性は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジおよび／または乳化された形態およびそれらと類似のナノ粒子、固体脂質ナノ粒子またはそれらの組み合わせを表示するリオトロピック中間相の自己組織化構造を形成するために自己組織化する。
【００５８】
本発明のさらなる態様は、バルク相を調製するためのプロセスに関連するものであり、ラメラ相、キュービック相、ヘキサゴナル相、スポンジ相および結晶中間相は、この態様のプロセスによって調製される。
【００５９】
本発明のさらなる態様は、本発明によるバルク相からコロイド粒子を調製するための方法に関する。この態様の方法によって調製された本発明によるコロイド粒子がさらに提供される。
【００６０】
本明細書の任意の実施形態は、特に明記しない限り、必要な変更を加えて他の任意の実施形態に適用するものとする。
【００６１】
本開示は、例示のみを目的とする本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。機能的に同等の製品、組成物および方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本発明の範囲内にある。
【００６２】
本発明のさらなる態様および前の段落に記載された態様のさらなる実施形態は、例として、添付の図面を参照して与えられた以下の説明から明らかになるであろう。
【００６３】
本明細書で使用される「含む（原文ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」（またはその文法上の変形）という用語は、「含む（原文ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語と同等であり、他の要素または特徴の存在を除外するものと解釈されるべきではないことが理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】異なる両親媒性物質の水和時に起こり得る異なる相の概略図。異なる中間相の略語は、ミセル（Ｌ１）、ミセルキュービック（Ｉ１）、通常ヘキサゴナル（Ｈ１）、二連続キュービック相（Ｖ１）、ラメラ（Ｌａ）、逆二連続キュービック相（Ｖ２）、逆ヘキサゴナル（Ｈ２）、逆ミセルキュービック（Ｉ２）、および逆ミセル（Ｌ２）であり、添字１および２はそれぞれ「通常」および「逆」相を指す。
【図２】代表的なジェムシタビン両親媒性物質のＤＳＣ：（ａ）スペーサーなし、（ｂ）ペグスペーサー付き。
【図３】スペーサーを含まない代表的なジェムシタビン両親媒性物質のニートおよびリオトロピックメソ相挙動の１Ｄ  ＳＡＸＳ回折パターン：（ａ）ジェム−オレイル，（ｂ）ジェム−リノレイル，（ｃ）ジェム−フィタニル；−バルク＿２５°Ｃ，−−水和過剰水＿２５°Ｃ，・・・水和過剰水＿３７°Ｃ。
【図４−１】ペグスペーサーを用いた代表的なジェムシタビン両親媒性物質のニートおよびリオトロピックメソ相挙動の１Ｄ  ＳＡＸＳ回折パターン：（ａ）ジェム−ペグ６−オレオイル，（ｂ）ジェム−ペグ６−リノレノイル，（ｃ）ジェム−ペグ３−リノレオイルｌ，（ｄ）ジェム−ペグ６−リノレオイルｌ，（ｅ）ジェム−ペグ４−リノレオイルｌ，（ｆ）ジェム−ペグ２−リノレオイルｌ；−Ｂｕｌｋ＿２５°Ｃ，−−水和過剰水＿２５°Ｃ，・・・水和させた余分な水＿３７°Ｃ。
【図４−２】ペグスペーサーを用いた代表的なジェムシタビン両親媒性物質のニートおよびリオトロピックメソ相挙動の１Ｄ  ＳＡＸＳ回折パターン：（ａ）ジェム−ペグ６−オレオイル，（ｂ）ジェム−ペグ６−リノレノイル，（ｃ）ジェム−ペグ３−リノレオイルｌ，（ｄ）ジェム−ペグ６−リノレオイルｌ，（ｅ）ジェム−ペグ４−リノレオイルｌ，（ｆ）ジェム−ペグ２−リノレオイルｌ；−Ｂｕｌｋ＿２５°Ｃ，−−水和過剰水＿２５°Ｃ，・・・水和させた余分な水＿３７°Ｃ。
【図５】リン脂質／コレステロールの存在下または非存在下におけるジェムシタビン両親媒性ナノ粒子のＣｒｙｏ−ＴＥＭ画像：（ａ）ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール（１８．３８／７０．５２／８．１０ｗ％）、（ｂ）ジェム−ペグ３−オレオイル／ＤＭＰＣ／コレステロール（３１．０４／６２．０７／６．８９ｗ％）、（ｃ）ジェム−ペグ３−リノールオイルおよび（ｄ）ジェム−ペグ６−リノールオイル。
【図６−１】動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定されるリン脂質／コレステロールの存在下および非存在下でのジェムシタビン両親媒性ナノ粒子の粒度分布：（ａ）ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール（１８．３８／７０．５２／８．１０ｗ％）、（ｂ）ジェム−ペグ３−オレオイル／ＤＭＰＣ／コレステロール（３１．０４／６２．０７／６．８９ｗ％）、（ｃ）ジェム−ペグ３−リノールオイルおよび（ｄ）ジェム−ペグ６−リノールオイル。
【図６−２】動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定されるリン脂質／コレステロールの存在下および非存在下でのジェムシタビン両親媒性ナノ粒子の粒度分布：（ａ）ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール（１８．３８／７０．５２／８．１０ｗ％）、（ｂ）ジェム−ペグ３−オレオイル／ＤＭＰＣ／コレステロール（３１．０４／６２．０７／６．８９ｗ％）、（ｃ）ジェム−ペグ３−リノールオイルおよび（ｄ）ジェム−ペグ６−リノールオイル。
【図７】ＣＥＳ酵素（３３．７ユニット／ｍＬ）を３７°Ｃで使用した、リン脂質／コレステロールと５０ｕＭのジェム−フィタニル（■）、ジェム−ペグ３−オレオイル（ダイヤ）、またはジェム−ペグ３−オレオイルアミド（▲）を含むジェムシタビン両親媒性ナノ粒子の生物変換反応。
【図８】ジェムシタビン両親媒性ナノ粒子の腫瘍阻害（ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール：１８．３８／７０．５２／８．１０ｗ％）は、ジェムシタビン薬およびＰＢＳコントロールグループと比較した。
【図９】ジェムシタビン両親媒性ナノ粒子（ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール：１８．３８／７０．５２／８．１０ｗ％）、ジェムシタビン薬、およびＰＢＳコントロールで治療された腫瘍の平均生体外腫瘍重量。
【図１０】ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける蛍光ジェムシタビン両親媒性ナノ粒子（ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール／ＤｉＤ蛍光脂質：１８．３８／７０．５２／  ７．１０／１ｗ％）の生体内分布：（ａ）４、２４、４８、７２時間および９６時間の期間。（ｂ）マウスを淘汰した後に切除された様々な器官における分布。励起波長と発光波長は６５０ｎｍと７００ｎｍであった。
【図１１】ヌードマウス対アバスチンのＰＤＸＣＸＦ２６０異種移植モデルにおけるジェムシタビン−両親媒性ナノ粒子（ジェム−オレイル／ＤＯＰＣ／ペグ４０００−オレオイル２６／６０．８／１３．２ｗ％）の腫瘍阻害。
【図１２】ジェムシタビン両親媒性ナノ粒子の腫瘍阻害ジェム−ペグ３−オレオイル／リン脂質／コレステロール６／９／１ｗ％＋ペグ４Ｋ−オレオイル（総脂質重量の１５％）。ナノ粒子分散液には、１５ｍｇ／Ｋｇの活性ジェムシタビンが１５ｍｇ／Ｋｇのジェムシタビン薬，そしてＰＢＳと比較して含まれており、Ｍｉａ  ｐａｃａ２膵臓癌異種移植モデルで試験された。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
本明細書、実施例および特許請求の範囲において用いられる種々の用語は、当業者によって理解される意味を有することに留意されたい。しかし、この文書で意図される意味を明確にするために、特定の用語は以下に定義されている。
【００６６】
本明細書全体で使用される「プロドラッグ」という用語は、その構造修飾を含む生物学的活性な化合物を指し、その結果、インビボで、プロドラッグは、例えば、加水分解、酸化、還元または酵素による切断によって、生物学的活性な化合物に１つまたはより多くの
反応またはステップ。これには、活性な生体分子を生成するために代謝の一般的なステップを必要とする活性物質が含まれる。つまり、この用語は「プレプロドラッグ」も含むと理解されている。
【００６７】
本明細書全体を通して使用される用語、ジェムシタビン・プロドラッグは、例えば、酵素的および／または化学反応によって、インビボでジェムシタビンに変換されることができる一般式（ＩＩ）の化合物を指す。
【００６８】
【化９】
2021522331.tif 000010
【００６９】
ここで
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、式（ｄ）による置換基、および式（ｅ）による置換基からなるグループより選択される。
【００７０】
【化１０】
2021522331.tif 000011
【００７１】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎであり、ｎ＝１−１０；
Ｌ１は、ある接着部位でＳ−Ｒグループに共有結合し、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して第二の接着部位でジェムシタビンに結合するリンカー基であり；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して３番目の結合部位でジェムシタビンに結合するリンカー基である。そして
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、  ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して４番目の結合部位でジェムシタビンに結合するリンカー基である。
【００７２】
ここで、Ｘは化合物に自己組織化特性を与えることができる分子である。
【００７３】
本明細書を通して使用される「自己組織化構造」という用語は、ある程度の内部組織秩序を有する両親媒性物質の集合体を指すことを意味する。自己組織化された構造は、両親媒性物質を溶媒と接触させることによって形成することができる。自己組織化構造は、バルクリオトロピック相、それに由来するコロイド粒子（いわゆる「コロイドソーム」）、または固体脂質粒子のいずれかを指すことを意味する。
【００７４】
本明細書を通して使用される「バルク相」という用語は、ミセルキュービック（Ｉ１）；通常ヘキサゴナル（Ｈ１）；二連続キュービック（Ｖ１）；ラメラ（Ｌα）；逆二連続キュービック（Ｖ２）；逆ヘキサゴナル（Ｈ２）；逆ミセル（Ｌ２）およびスポンジ（Ｌ３）相を含むが、これらに限定されないリオトロピック相を意味すると理解される。
【００７５】
本明細書全体で使用される「コロイド粒子」という用語は、「コロイドソーム」および固体脂質粒子を指すと理解されるべきである。本明細書全体で使用される「コロイドソーム」という用語は、バルクリオトロピック相と同じ内部ナノ構造を有するコロイド粒子を指すと理解されるべきである。本明細書全体で使用される固体脂質粒子という用語は、本発明のプロドラッグのコロイド粒子を意味すると理解され、コロイド粒子は、ニートプロドラッグのコアを含み、通常、界面活性剤の表面層によって安定化される。ニートプロドラッグのコアは、結晶性、微結晶性、液晶性、または非結晶性の形態であり得る。  「粒子」という用語は、それらの平均サイズに基づいてナノ粒子またはマイクロ粒子であり得る粒子を指すことが理解されよう。多くの場合、そのような粒子は「固体脂質ナノ粒子」と呼ばれるが、実際には微粒子のサイズ範囲にある場合がある。この形態の自己組織化構造は、過剰な溶媒と接触しても膨潤しない。
【００７６】
本明細書全体で使用される「ラメラ相」という用語は、両親媒性分子の親水性部分の対向する単分子層が極性溶媒ドメインによって分離され、両親媒性分子の疎水性部分が背中合わせの層は、疎水性層を形成するために密接に接触している。平面ラメラ相は「Ｌα相」と呼ばれる。
【００７７】
本明細書全体で使用される「キュービック相」という用語は、ミセルキュービックおよび双連続キュービックの２つの主要なクラスの相を指す。「ミセルキュービック相」とは、キュービック配列に配置された球状ミセルからなる相を指す。「通常のミセルキュービック相」または「ＬＩ相」は、球状の通常のミセルで構成される。「逆ミセルキュービック相」という用語は、キュービック配列に配置された球状逆ミセルで構成されている。
【００７８】
「双連続キュービック相（バイコンティニュアスキュービックフェーズ相）」とは、極性溶媒空間を２つの連続しているが交差しないボリュームに分離する複雑なネットワークを形成する、単一の湾曲した脂質二重層からなる密接に関連するフェーズのファミリーを指す。双連続キュービック相は、キュービック単位セルに基づく長距離秩序を持っている
。双連続キュービック相の平均曲率はゼロである。つまり、両親媒性二重層の表面のすべての点で、表面は凹面であるのと同じくらい凸面である。双連続キュービック相は、通常（「ｖＩ相」）または逆（「ｖＩＩ相」）タイプであり得る。双連続キュービック相では、いくつかのタイプの長距離オリエンテーションオーダーが観察されている。これらのフェーズの方向の順序は、空間群Ｉａ３ｄ、Ｐｎ３ｍ、およびＩｍ３ｍに対応する。コロイドソームがバルクキュービック相の内部構造を有する場合、コロイドソームは「キュボソーム」と呼ばれることがある。
【００７９】
本明細書全体で使用される「ヘキサゴナル相」という用語は、六角形の配列に詰められた長い棒状のミセルからなる両親媒性相を意味すると理解されるべきである。「通常のヘキサゴナル相」は、長い棒状の通常のミセルからなるヘキサゴナル相であり、「逆ヘキサゴナル相」は、長い棒状の逆ミセルからなるヘキサゴナル相である。通常のヘキサゴナル相は「ＨＩ相」と呼ばれ得、逆ヘキサゴナル相は「ＨＩＩ相」と呼ばれ得る。コロイドソームがバルクヘキサゴナル相の内部構造を有する場合、コロイドソームは「ヘキソソーム」と呼ばれることがある。
【００８０】
本明細書全体で使用される「スポンジ相」または「Ｌ３相」という用語は、極性溶媒空間を２つの接続されていないボリュームに分離する両親媒性二重層を有するという点で、双連続キュービック相に似た相を指すが、長距離オーダーを持っていない。したがって、これらの相は「溶融キュービック相」に類似している。
【００８１】
本明細書全体で使用される「格子定数」という用語は、結晶性固体または液晶のユニットセルを定義する格子定数のセットを意味し、ユニットセルの長さなどの値を含み得る。
【００８２】
本明細書全体で使用される「イソプレノイド」という用語は、イソプレン（２−メチル−１，３−ブタジエン）モノマーまたはサブユニットからなるアルキル鎖を意味する。本明細書で使用される「イソプレノイド」という用語の使用は、不飽和、部分的に飽和または完全に飽和したイソプレン類似体および誘導体を包含することを意図している。
【００８３】
本明細書全体で使用されるという「医薬組成物」用語は、本発明による少なくとも一つのプロドラッグと、意図される投与形態に基づいて選択される少なくとも一つの薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、添加剤または担体の治療的有効量を含み、従来の医薬的慣行と一致する組成物を意味する。
【００８４】
本明細書全体を通して使用される「生物学的活性エージェント」、「治療的活性エージェント」、「薬学的活性エージェント」、「活性エージェント」および「活性成分」という用語は、生物学的系における状態の診断、治癒、緩和、治療、予防および／または修飾を意図するが、これらに限定されない物質を指す。「生物学的活性エージェント」への言及は、「治療的活性エージェント」への言及よりも広い。  用語「薬物」および治療剤は、本明細書全体を通じて互換的に使用される。
【００８５】
生物学的活性エージェントは薬剤であり得る。その場合、Ａ−Ｙ−Ｘはプロドラッグを表す。別の実施形態において、生物学的活性エージェントは、プロドラッグであり得る。したがって、生物学的活性エージェントは、生物学的活性エージェントに代謝されることができる薬剤であり得る。その場合、Ａ−Ｙ−Ｘは、プレプロドラッグを表す。生物学的活性エージェントは、好ましくは治療的活性エージェントである。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、１つまたは複数の望ましい効果、特に腫瘍増殖の阻害または停止をもたらす、ジェムシタビン・プロドラッグまたはその組成物などの薬剤の量または用量に関する。物質の治療有効量は、対象の病状、年齢、性別、お
よび体重、ならびに対象において所望の応答を誘発する物質の能力などの要因によって変化するであろう。
【００８７】
一態様では、本発明は、一般式Ｉのプロドラッグを提供する：
【００８８】
【化１１】
2021522331.tif 000012
【００８９】
ここで、Ａは生物学的活性エージェントである；
Ｙは、治療的活性エージェントとＸの間の切断可能な結合である。そして
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、および式（ｄ）による置換基からなるグループから選択される。
【００９０】
【化１２】
2021522331.tif 000013
【００９１】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎであり、ｎ＝１−１０；
Ｌ１は、１つの結合部位で１つのＳ−Ｒグループに、２番目の結合部位でＡに、生体に不安定な結合ＹからＡを介して共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、３番目の結合部位でＡに生体不安定結合ＹからＡを介して共有結合するリンカー基である。そして
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体不安定性結合Ｙを介して４番目の結合部位でＡに共有結合するリンカーグループである。
【００９２】
好ましい実施形態では、Ｘは、一般式（Ｉ）のプロドラッグの式（ａ）による置換基である。
【００９３】
Ｒは一般的に疎水性である。任意選択で、Ｒは、１０から３０個の炭素原子に相当する線形鎖長を有する。一実施形態では、Ｒはα−トコフェロールである。別の実施形態では、Ｒはイソプレノイド基である。他の実施形態では、Ｒは、ヒドロキシル化アルキルまたはヒドロキシル化アルケニル基である。Ｒの好ましい実施形態は、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、アルキニル（イソプレノイド）、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基、ならびにそれらの類似体、例えばアルファ−トコフェロール、ヒドロキシル化アルキルまたはアルケニル基である。好ましい実施形態では、Ｒは、１０から２４個の炭素原子に相当する鎖長、より好ましくは１４から２０個の炭素原子に相当する鎖長を有する。Ｘが式（ｃ）または式（ｄ），による置換基である場合、各Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換からなるグループから独立して選択され得る。アルキニル基とその類似体。あるいは、両方のＲ基が同一であり得る。一般に、ＲはＡに自己組織化特性を与えることを目的としている。
【００９４】
好ましい実施形態において、Ｒは、ミリスチル、ミリストイル、ミリストイルアミド、パルミチル、パルミトイル、パルミトイルアミド、ステアリル、ステアロイル、ステアロイルアミド、オレイル、オレオイル、オレオイルアミド、リノレイル、リノレオイル、リノレオイルアミド、リノレニル、リノレノイル、リノイルからなるグループから選択される。アラキドノイル、アラキドノイルアミド、フィタニル、フィタノイル、フィタノイルアミド、ヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネソイル、およびヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネソイル、およびヘキサヒドロファルネソイルアミド鎖。最も好ましくは、Ｒは、オレイル、オレオイル、リノレイル、リノレオイル、フィタニル、フタノイル、ヘキサヒドロファルネシルおよびヘキサヒドロファルネソイル鎖からなる基から選択される。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、１０から３０個の炭素原子、またはその間の任意の範囲を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを指す。アルキル基は、場合により置換基で置換されており、複数置換度が可能である。本明細書で使用される「アルキル」の例には、デカン、ウンデカン、ドデカン、トリデカン、テトラデカン、ペンタデカン、ヘキサデカン、ヘプタデカン、オクタデカン、ノナデカン、イコサン、ヘニコサン、ドコサン、トリコサン、テトラコサン、ペンタコサン、ヘキサコサンが含まれるが、これらに限定されない。ヘプタコサン、オクタコサン、ノナコサン、トリアコンタンなど。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１０−Ｃ３０アルキル」という用語は、それぞれ少なくとも１０個および最大で３０個の炭素原子、または１２−２４の間の任意の範囲を含む、上で定義されたアルキル基を指す。（例えば、１２−２４個の炭素原子を含むアルキル基もＣ１０−Ｃ３０の範囲内にある）。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、二重結合を含むアルキル基を指す。必要に応じて置換基で置換することもでき、複数の程度の置換が可能である。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、三重結合を含むアルキル基を指す。必要に応じて置換基で置換することもでき、複数の程度の置換が可能である。
【００９９】
本明細書全体で使用される「任意選択で置換される」または「置換され得る」などの用語は、基が（多環式系を形成するために）１つまたは複数の非−水素置換基で置換または融合されてもされなくてもよいことを示している。特定の官能基に適した化学的に実行可能な置換基は、当業者には明らかであろう。適切な置換基の例には、酸素または硫黄で置換された類似体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
本発明によるいくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３はリンカー基である。「リンカー」は、生物学的活性エージェントＡとグループＳ−Ｒとの間の多機能ドメインとして作用するグループを指す。リンカーは、Ｌ１の場合は少なくとも二官能性であり、Ｌ２の場合は少なくとも三官能性であり、Ｌ３の場合は少なくとも四官能性であり、分子内の一つの部位にグループＳ−Ｒをアンカーするための少なくとも一つの官能基（「付着部位」）を含み、Ｙ結合を介して薬剤Ａをアンカーするための別の付着部位に選択的に開裂可能な官能基を含む。好ましくは、リンカー基は共有結合である。
【０１０１】
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、少なくとも１つの選択的に切断可能な官能基に結合した少なくとも１つの官能基であり得る。好ましくは、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、少なくとも１つの官能基および少なくとも１つの選択的に切断可能な官能基を連結する部分を含む。部分は、例えば、ヘテロ原子、アルキル、アルケニル、アルキンからなるグループから選択され得、これらは環状であり得る、および／または、さらなるヘテロ原子および官能的置換基（例えば、カルボニル、カルボン酸、アミド、ヒドロキシル、エーテル、アミンなど）、またはこれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０１０２】
Ｌ１は、無水コハク酸、無水マレイン酸、グリコール酸、アリルスルホンアミド、イソシアノ酸アリル、ヒドロキシプロパンスルホン酸、クロロ酢酸、グリシンおよびアラニンからなるグループから選択される選択的に切断可能な官能基を含む。Ｌ２  は、ジエタノールアミン、プロパン−１，２，３−トリカルボン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、セリン、チロシン、アルギニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、およびスレオニンからなるグループから選択される選択的に切断可能なリンカーグループである。  Ｌ３は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノエタン（トリス）およびクエン酸からなるグループから選択される選択的に切断可能なリンカー基である。Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３について提供される例は、全てを網羅したリストであることを意図するものではなく、本発明は、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３の他の実施形態を企図している。
【０１０３】
ＡとＬの間の結合Ｙは、プロドラッグＡ−Ｙ−Ｌ−Ｓ−Ｒの代謝時にインビボで切断される可能性がある。結合Ｙの例には、アミド、カルバメート、エステル、イミド、スルホンアミド、およびイミンを含むがこれらに限定されない、選択的に切断可能な結合が含まれる。好ましい実施形態では、共有結合は不安定であるため、活性薬剤を放出するために必要なときに切断され得るが、時期尚早の活性化に抵抗するのに十分安定している。好ましくは、Ｙはカルバメートまたはアミド結合である。特に好ましい実施形態では、Ｙはカルバメート結合である。
【０１０４】
薬剤（Ａ）リンカー（Ｌ）またはスペーサー（Ｓ）と疎水性テール基（Ｒ）との間の結合（Ｙ）は、薬剤とスペーサーとの間のカルバメートまたはアミド結合を含み得る。好ましくは、スペーサーと疎水性テールとの間にカルバメート、アミド、エステルまたはチオエステル結合が存在する。クロロ酢酸、ヒドロキシルまたはチオール基、およびそれらの組み合わせなど、他の二官能性基も必要に応じて加えることができ、当技術分野で知られている。
【０１０５】
本発明によるいくつかの実施形態では、Ｓはスペーサーである。「スペーサー」は、治療的活性なドメインＡに直接、または一端のリンカーＬおよび他端の疎水性基Ｒを介して連結する二官能性基を指す。スペーサーは、極性溶媒へのヘッドグループの溶媒和の改善をサポートし、より優れた自己組織化特性を提供する。スペーサーは通常二官能性であり、分子の一端のＲ基に固定する１つの官能基と、選択的で切断可能なＹ結合を使用して薬剤Ａまたはリンカー（Ｌ）を介して結合する１つの官能基を含む。一実施形態では、Ｓは、ポリエチレングリコール（ペグ）１−１０、α−カルボキシポリエチレングリコール（
ＨＯＯＣ−ペグ）１−１０、またはα−アミノポリエチレングリコール（Ｈ２Ｎ−ペグ）１−１０からなるグループから選択される。好ましくは、Ｓは（ペグ）１−１０であり、より好ましくは、Ｓは（ペグ）１−６である。特に好ましい実施形態では、Ｓは（ペグ）３−６である。当業者は、どの化合物および方法がＡをＸに結合するのに適しているかを理解するであろう。
【０１０６】
好ましくは、Ａは親水性の生物学的活性エージェントである。例えば、Ａは、ｌｏｇＰ値が０未満の生物学的活性エージェントである。別の実施形態では、Ａは、生物学的活性エージェントに代謝され得る薬剤であり、生物学的活性エージェントは、ｌｏｇＰ値が０未満の親水性である。一実施形態では、Ａはそれ自体、例えば、親水性、酸化的、還元的、または酵素的切断によって、１つまたは複数の反応ステップによって生物学的活性エージェントに変換されるプロドラッグである。Ａ自体がプロドラッグである場合、一般式（Ｉ）は、プレプロドラッグと呼ばれる化合物を説明すると見なすことができる。
【０１０７】
本発明は、治療的活性エージェントＡ自体が、薬剤または活性物質ではなくプロドラッグであり得ることを想定している。上記の式（ＩＩ）による化合物において、Ａは、治療的活性エージェントであるジェムシタビン三リン酸を放出するためにインビボで修飾を受けるプロドラッグであることが当業者によって認識されるであろう。即ち、Ａは、例えば酵素によるプロドラッグの切断後にインビボで形成される生物学的活性エージェントの前駆体である。
【０１０８】
化合物Ａは、治療的活性な形態をもたらす前に、さらなる化学修飾ステップを必要とする場合もあれば、必要としない場合もある。すなわち、化合物Ａはそれ自体がプロドラッグである可能性があり、その場合、Ａ−Ｙ−Ｌ−Ｓ−Ｒはプレプロドラッグとして説明することができる。生物学的活性エージェント自体がプロドラッグである実施形態では、両親媒性プロドラッグが生物学的活性な形態に変換される前に、少なくともさらなる化学修飾ステップが必要となる場合がある。
【０１０９】
一実施形態では、Ａは、治療的活性なヌクレオシド剤、好ましくはシトシン塩基、より好ましくはジェムシタビンを含むヌクレオシド剤である。
【０１１０】
好ましくは、両親媒性物質は、両親媒性物質に存在する生物学的活性エージェントの生物学的活性な形態の形成を促進する酵素の酵素基質である。両親媒性物質は、患者に存在する酵素によって作用され得るものであることが事前に決定されていることが好ましい。より好ましくは、酵素は切断可能なリンカーに作用する。
【０１１１】
１つの好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）は、式（ＩＩ）による化合物を表す：
【０１１２】
【化１３】
2021522331.tif 000014
【０１１３】
ここで、Ｘは上記の式（ＩＩ）のように定義されており、化合物に自己組織化特性を与えることができる分子である。好ましい実施形態では、Ｘは、式（ＩＩ）のプロドラッグの式（ａ）または（ｅ）による置換基である。好ましくは、Ｒは、１２−２４個の炭素原子の間の鎖長のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはイソプレノイドである。好ましくは、Ｙは、アミドまたはカルバメート、より好ましくはカルバメートである。好ましくは、Ｓは、ｎ＝１−１０、より好ましくはｎ＝１−６、より好ましくはｎ＝３−６であるペグｎである。
【０１１４】
特に好ましい実施形態では、一般式（ＩＩ）は、以下からなるグループから選択される化合物を表す。
【０１１５】
【化１４】
2021522331.tif 000015
【０１１６】
ここで、ＺはＯまたはＮＨである。
【０１１７】
より好ましくは、一般式（ＩＩ）は、以下からなるグループから選択される化合物を表す：
【０１１８】
【化１５】
2021522331.tif 000016
【０１１９】
本発明の化合物の特に好ましい実施形態は２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（３，７，１１，１５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｈｅｘｄｅｃａｎｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−フィタニル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｃｉｓ−９−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−オレイル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−リノレイル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｃｉｓ−６，ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−ｏｃｔａｄｅｃａｔｒｉｅｎ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−リノレノイル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｘｙｌ−ｃｉｓ−９−ｏｃｔａｄｅｃｅｎ
ｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−ペグ３−オレオイル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｘｙｌ−ｃｉｓ−９−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−ペグ６−オレオイル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｘｙｌ−ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−ペグ６−リノレオイル），２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｘｙｌ−ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−ペグ４−リノレオイル）ｏｒ２’−ｄｅｏｘｙ−２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−Ｎ４−（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｘｙｌ−ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ−１−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（ジェム−ペグ２−リノレオイル）、または、溶媒和物、水和物、および塩を含むそれらの薬学的に許容される形態である。
【０１２０】
好ましくは、一般式（Ｉ）または（ＩＩ）のプロドラッグは、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ、エマルジョン、または結晶性ラメラ状形態を示すリオトロピック相を有する自己組織化構造を形成することができる。より好ましくは、相は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、またはスポンジ相である。さらに好ましくは、相は逆相である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）のプロドラッグを、他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質または自己組織化構造の疎水性薬物と組み合わせて使用して、化学療法剤の組み合わせ、または化学療法剤と診断薬の組み合わせをデリバリーできるナノ粒子を形成することができる。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）または（ＩＩ）のプロドラッグは、標的活性物質をより効率的にデリバリーするために、標的分子、ペプチド、抗体、タンパク質またはアプタマーを含む標的リガンドと組み合わせて使用され得る。
【０１２３】
特に好ましい実施形態では、自己組織化構造は、式（ＩＩ）の化合物ジェムシタビンと、任意選択で、自己組織化構造における他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質との組み合わせである。そのような構造は、ポロキサマー、ペグ化脂質およびポリソルベートなどの界面活性剤安定剤の恩恵を受けて、製薬用途のために適切に安定化され得る。
【０１２４】
本発明による好ましい実施形態は、上記の式（ＩＩ）による化合物を含む自己組織化構造である。好ましくは、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、およびスポンジ相の形態である。自己組織化構造がナノ粒子の形態である場合、平均粒子サイズは、好ましくは１０−５００ｎｍの間であり、より好ましくは１０−２００ｎｍである。
【０１２５】
本発明による化合物の合成のための反応条件は、最小限の実験量で当業者によって容易に決定され、添付の実施例にも例示されている。特に好ましい実施形態において、化合物は、スキーム１に従って調製される。
【０１２６】
【化１６】
2021522331.tif 000017
【０１２７】
スキーム１
Ｘが本明細書に記載されるように定義される場合、Ｌｇは、好ましくはハロゲン化物または疑似ハロゲン化物であり、最も好ましくは塩化物である脱離基であり、Ｐｇは、好ましくはトリメチルシリル基である保護基である。保護基の選択は、最小限の実験で当業者によって容易に決定され、添付の実施例にも例示されている。
【０１２８】
本発明による化合物の合成のための反応条件は、最小限の実験量で当業者によって容易に決定され、添付の実施例にも例示されている。
【０１２９】
本発明に従って化合物を合成するために使用される出発原料および試薬は、特に明記しない限り、または当業者に知られている方法によって調製されない限り、例えば、ケミカルカンパニーシグマアルドリッチケミカルカンパニー（ミズーリ州セントルイス）およびメルク（オーストラリア）などの商業的供給業者から入手可能である。
【０１３０】
本発明による別の好ましい実施形態は、式（Ｉ）によるものを含む自己組織化構造であり、Ａは、シタラビンおよび５−フルオロシトシンなどの異なる形態のジェムシタビンなどの別の治療用ヌクレオシドである。
【０１３１】
【化１７】
2021522331.tif 000018
【０１３２】
ここで、Ｘは式ＩＩのように定義され、Ｘは化合物に自己組織化特性を与えることができる分子である。
【０１３３】
本発明の自己組織化構造は、ラメラ、逆キュービック、逆ヘキサゴナルおよび逆スポンジおよびミセル相への自己組織化を受けないプロドラッグと比較して、それらの改変された放出特性のために、望ましいプロドラッグデリバリーシステムを表す。理論または作用様式に拘束されることを望まないが、本発明の自己組織化構造は、第一に、自己組織化両親媒性分子に対する加水分解効果の違い、および非組織化系における単離された単一分子のそれと比較した自己組織化系における単一分子へのアクセスの複雑さのために，修飾された放出特性を有すると考えられる。第二に、好ましい化合物の場合、好ましいプロドラッグの疎水性テールＲおよびスペーサーＳは、プロドラッグを変換するために必要とされる最初の酵素、およびその類似体をジェムシタビンまたはシアトラビンまたは５−フルロ
シチジンに変換するのに少ない基質活性を有する化合物をもたらすと考えられる。したがって、本発明による化合物の改善されたリリースプロファイルをもたらす。最後に、本発明の化合物の加水分解は、それ自体が自己組織化構造を形成し得、次に酵素反応の局所環境を変化させ、結果として酵素挙動に影響を及ぼし得る脂肪鎖部分を放出すると考えられる。
【０１３４】
さらに同様に、本発明による自己組織化構造は、ミセル形態を示すプロドラッグ自己組織化構造よりも望ましいと考えられる。本発明によるプロドラッグラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ相または逆ミセルナノ粒子は、以前に開示されたプロドラッグ自己組織化構造のいずれよりもはるかに大きな両親媒性物質と溶媒インターフェース区域を有する。さらに、通常のミセルとは異なり、本発明による逆相は、過剰の水性溶媒中で安定である。
【０１３５】
一実施形態では、本発明の自己組織化構造は、少なくとも１つの溶媒ドメインおよび少なくとも１つの両親媒性ドメインを含み、両親媒性ドメインは、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）による化合物の少なくとも１つを含み、ここで、Ｘは、プロドラッグに自己組織化特性を与えることができる任意のグループとして定義される。
【０１３６】
本発明の溶媒ドメインは、少なくとも一つの極性溶媒を含む。  極性溶媒としては、両親媒性自己集合体に通常用いられる溶媒、例えば、水、グリセロール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、Ｎ−メチルホルムアミド、ヒドラジン、プロピレンカーボネート、メタノール、エタノール、硝酸アンモニウムなどの選択されたイオン性液体、およびこれらの混合物などが挙げられる。
【０１３７】
溶媒はまた、例えば、溶媒を含む他の成分を含み得る。塩、ｐＨ緩衝剤、ブドウ糖やショ糖などの糖、ならびにポリソルベート８０およびペグ−ＰＰＯ−ペグ共重合体などの安定化試薬、より具体的にはポロキサマー１２７、ポロキサマー１０８、様々なペグ長または脂質鎖のペグ脂質鎖、例えばペグ４０００−オレオイル、ペグ４０００−リノレオイル、ペグ２０００−オレオイル、ペグ２０００−リノレオイル、ペグ１００００−オレオイルまたはペグ１００００−リノレオイルなどを含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、式（（Ｉ）または（ＩＩ）または（ＩＩＩ））のプロドラッグは、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセルおよびスポンジ状ナノ粒子から選ばれる自己組織化構造において、他のリン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、または他のプロドラッグ両親媒性物質と組み合わせて使用されるであろう。
【０１３９】
両親媒性ドラッグデリバリー担体に組み込まれることができる薬学的活性エージェントは、当業者に公知である。例えば、ＷＯ２００５／０２１００４６（ＤＢＬ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）およびＷＯ９８３０２０６を参照のこと。担体に組み込まれ得る薬学的または生物学的活性エージェントの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：グローバルタンパク質および糖タンパク質、プロスタグランジンのような高反応性の脂質、タンパク質のような生物活性の大きい薬剤分子、多糖類、ＤＮＡおよびＲＮＡ、ならびにシクロスポリン、パクリタキセル、インドメタシン、フェノフィブラート、プロゲステロン、アンホテリシンＢ（ＡＭＢ）およびイリノテカンのようなより小さい薬剤分子が挙げられる。
【０１４０】
本発明の自己組織化構造はまた、自己組織化構造を安定化させることを意図する少なくとも一つの他の構成要素を含み得る。安定化試薬の例は、異なるビルディングブロックのペグ−ＰＰＯ−ペグのトリブロック共重合体であり、より具体的には、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１２７、ポロキサマー１０８、ならびにポリソルベート８０、様々なペ
グ長のペグ−脂質鎖、例えばペグ４０００−オレオイル、ペグ４０００−リノレオイル、ペグ２０００−オレオイル、ペグ２０００−リノレオイル、ペグ２０００−リノレオイル、ペグ２０００−リノレオイルなどである
本発明の望ましいリオトロピック液晶相の形成には、特定の親水性ドメインと疎水性ドメインとの間の厳重なバランスが必要であることが当業者によって認識されるであろう。従って、当業者は、Ａに関するＸの選択が、本発明のプロドラッグが本発明に従ってリオトロピック相および／または固体脂質粒子のいずれかを形成するかどうかを決定することを認識するであろう。
【０１４１】
一般に、界面活性剤頭部基、尾部および体積の相互作用は、リオトロピック相挙動を決定する上で非常に重要である。分子形状と相挙動との関係は臨界充填パラメータ（ＣＰＰ）によって記述できる。ＣＰＰは、ＣＰＰ＝ｖ／ａ０ｌｃとして定義され、ここで、ｖは分子体積、ａ０は界面活性剤頭部基の断面積、およびｌｃは疎水性尾部の長さに対応する。この式の開発以来、ＣＰＰは分子の曲率に基づいて中間相挙動を予測するのに広く使用されてきた。小さなヘッドグループとバルキーな疎水性を持つ分子のために、ＣＰＰ値は１より大きくなり、それによって平均負の界面曲率と逆メソ相の潜在的に形成を誘導する。
【０１４２】
本発明による開裂可能な尾部は、本発明による頭部基の文脈において考慮されるときに、一つよりも大きいＣＰＰの形成に基づいて選択される。図１は、頭部グループと尾部グループ間のこの相互作用を示している。ラメラ相の左側の相は１未満の臨界充填密度を有し、しばしば両親媒性物質の低濃度で起こる。ラメラ相の右側にある相はＣＰＰが１以上あり、通常は両親媒性物質の濃度が高いときに起こる。ＣＰＰは両親媒性分子に対して一定ではなく、両親媒性分子の温度、圧力、濃度およびｐＨ、ならびにいくつかの追加の溶媒および添加剤などの外的要因による。しかしながら、このパラメータは、室温または生理学的温度および生理学的ｐＨおよび圧力で両親媒性物質の水和時に起こり得る相の単純な推測として使用することができる。
【０１４３】
溶媒中の両親媒性物質の自己組織化挙動は，溶媒と両親媒性分子の親水性または疎水性部分のいずれかとの間の優先的相互作用のために生じる。両親媒性物質が極性溶媒にさらされると、両親媒性物質の親水性部分は、極性溶媒と優先的に相互作用する傾向があり、その結果、親水性ドメイン（「溶媒ドメイン」）の形成をもたらす。両親媒性分子の疎水性部分は、このドメインから除外される傾向があり、その結果、疎水性ドメイン（「疎水性ドメイン」）が形成される。
【０１４４】
リオトロピック液晶は、適切な固体または液体両親媒性物質に溶媒を添加することによって形成される。それらは、親水性ドメインと疎水性ドメインとの間の界面の曲率によって分類され得る。これらのドメイン間の曲率は、両親媒性物質の濃度および分子構造を含むいくつかの要因に依存する。界面が疎水性ドメインに向かってネット曲率を表示するとき、相は「通常」と呼ばれる。界面が親水性ドメインに向かってネット曲率を表示するとき、相は「逆」と呼ばれる。系のネット曲率がゼロに近づくと，得られる相は溶媒ドメインによって分離された平面両親媒性二重層からなるラメラ型構造を有することができる。あるいは、表面上の各点がある次元で凸であり、別の次元で凹である場合、ネット曲率はゼロに近づくことがあり、そのような相は「二連続キュービック相」と呼ばれる。自己組織化構造によって形成することができる特定の相の例としては、ミセル（通常および逆）、ヘキサゴナル（通常および逆）、ラメラ、キュービック相（通常、逆および両連続相）、および逆ミセルキュービック相、リボン、メッシュ、または非キュービック「スポンジ」両連続相などの他の中間相が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
上記のバルク相は、分散されて、非分散バルク相の内部構造を保持するコロイド粒子を
形成することができる。これらのコロイド粒子は、ドラッグデリバリー担体としての応用についても研究されている。米国特許５，５３１，９２５は、内部相の二層または単層層に固定された表面相によって囲まれた両親媒性相の内部を含むコロイド粒子を開示している。粒子の内部相は、層状相、逆キュービック相、ヘキサゴナル相またはＬ３（「スポンジ」）相、またはそれらの混合物から選択され得る。
【０１４６】
これらの粒子が逆二連続キュービック相の内部構造を有する場合、粒子は口語的にキュボソームと呼ばれる。同様に、粒子が逆ヘキサゴナル相の内部構造を有する場合、それらはヘキソソームと呼ばれる。粒子がラメラ相の内部構造を有する場合、それらはリポソームと呼ばれる。コロイド粒子はまた「スポンジ」相から形作られるかもしれない。
【０１４７】
代替ドラッグデリバリー担体は、固体脂質粒子である。固体脂質粒子は、ポリソルベート８０、ポロキサマーおよびペグ化脂質などの界面活性剤表層によって安定化された結晶性両親媒性コアから構成される。固体脂質粒子は、疎水性薬剤の担体として使用されてきた。例えば、固体脂質に吸着され、ＳＬＮｓとして分散された抗癌剤であるカンプトテシンは、脳組織における薬剤レベルの増加を示した（Ｙａｎｇ１９９９，Ｊ．ｃｏｎｔｒｏｌ  ｒｅｌｅａｓｅ，５９（３）：２９９−３０７）。しかしながら、従来のＳＬＮの薬剤負荷は、脂質溶融物中の薬剤の溶解度および脂質マトリックスの構造によって制限される。
【０１４８】
薬剤負荷を増加させるために、「ファーマコソーム」アプローチが採用されている。この方法は、ミセルまたはリポソームに組み立てることができるプロドラッグを生成することを含む。ジン−エトワール通常なラメラ小胞（２００５、２００６）またはより高次のナノ構造を形成することができるいくつかの脂質−ヌクレオシド類似体を同定する（ＷＯ２０１００６３０８０Ａ１、ＵＳ８６０３９９９Ｂ２）。しかしながら、ミセルは、ドラッグデリバリーに適した相として実質的な欠点を有する。ミセル系は希釈下および臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）以下で崩壊する可能性がある。
【０１４９】
バルク相
一態様では、本発明の自己組織化構造は、少なくとも一つのバルク相を含む。
【０１５０】
本発明のバルク相は、次のグループから選択される少なくとも一つの相を含む：通常ヘキサゴナル、通常ミセルキュービック、通常二連続キュービック相、ラメラ、逆二連続キュービック相、Ｌ２「逆ミセル」、Ｌ３「スポンジ」、および逆ヘキサゴナル。好ましくは、バルク相は、逆ヘキサゴナル相、逆キュービック相、Ｌ２「逆ミセル」、Ｌ３「スポンジ」相およびラメラ相からなるグループから選択される少なくとも一つの相を含む。最も好ましくは、バルク相は、層状相、逆ヘキサゴナル相および逆キュービック相を含む。
【０１５１】
好ましい実施形態では、本発明によるバルク相は、約室温から約５０℃の温度範囲で容易に生成され得、この温度範囲内で少なくとも数ヶ月間安定であり得る。
【０１５２】
本発明による好ましい実施形態は、バルクリオトロピック逆相である。過剰な水性溶媒中で希釈することに対する本発明によるリオトロピック相の熱力学的安定性は，バルク相がその一次高次構造を維持することを意味するが，格子パラメータは水中の両親媒性物質の膨潤により変化する可能性がある。最も好ましくは、本発明によるリオトロピック相は、ラメラ相、逆二連続キュービック相、またはスポンジ中間相である。
【０１５３】
観察されたリオトロピック相は温度に依存することは当業者によって認識されるであろう。本発明によるバルク相は、室温と生理学的温度との間で安定であり、好ましくは約３５℃から約４０℃の温度で安定であり、最も好ましくは約３５℃から約３７℃の温度で安
定である。
【０１５４】
本発明によるバルク相を調製するためのプロセスは、当業者に知られている。一実施形態では、本発明によるバルク相は、各両親媒性物質を適切な緩衝液に適切な濃度に溶解することによって調製することができる。適切な緩衝剤の例としては、生理学的に許容される緩衝剤、例えば、リン酸、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、トリス−スクロース、トリス−グリシン、およびグリシン緩衝剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１５５】
別の実施形態では、本発明による好ましい相は、視覚的に均質なサンプルが得られるまで、溶融脂質を室温−５０℃の間で機械的に混合することによって調製される。場合により、例えば、１０−２０重量％の範囲のエタノールなどの共溶媒の添加は、均質化プロセスを支援し得る。
【０１５６】
コロイド粒子：コロイドソームまたはナノ粒子
本発明のさらなる態様は、バルク相の内部構造を保持する一つまたは複数の粒子を含む本発明の自己組織化構造に関する。このような粒子は、「コロイドソーム」または「ナノ粒子」と呼ばれる。
【０１５７】
一実施形態では、本発明の自己組織化構造は、コロイドソームを含むか、または以下のグループから選択される：リポソーム、キュボソーム、ヘキソソームおよび「スポンジ状」  好ましい実施形態において、コロイド粒子は、以下のグループから選択される：リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、およびスポンジ状粒子最も好ましくは、コロイド粒子は、リポソームおよびキュボソーム、およびスポンジ状粒子である。
【０１５８】
本発明による特に好ましい実施形態では、コロイドソームは、ラメラ相および逆相に由来する。本発明によるリオトロピック相の熱力学的安定性は、バルク相を過剰の水性溶媒中で徐々に希釈し、バルク相と同じ液晶構造を維持しながらコロイドソーム中に分散させることができることを意味する。
【０１５９】
本発明によるコロイドソームは、当業者に知られているプロセスに従って調製することができる。例えば、コロイドソーム／ナノ粒子は、水または生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）中で脂質薄膜を水和することによって調製することができる。さらに、グルコース、デキストロースなどの糖が培地に添加される場合がある。逆キュボソームやヘキソソームなどの逆相コロイドソームは、水中で水和してバルク相のようなゲルを形成し、安定剤の存在下で超音波処理や高圧均質化などのせん断力を使用して粒子に分散させることができる。
【０１６０】
安定なコロイドソームを調製するためには、安定化剤または断片化剤を添加することが必要であることは、当業者によって認識されるであろう。適切な断片化剤は、当業者に公知であり、例えば、ポロキサマーまたはポリソルベートまたはペグ化脂質を含む。ポロキサマーは、逆相コロイドソームのための最も広く使用されている安定剤であり、ポリエチレングリコール（ペグ）と酸化ポリプロピレン（ＰＰＯ）のブロック共重合体である。本発明による好ましい実施形態では、安定化剤は、異なるビルディングブロックのペグ−ＰＰＯ−ペグのトリブロック共重合体である。本発明による特に好ましい態様において、安定化剤は、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１０８、およびペグ化脂質（ペグ２ｋ−１０Ｋ−オレオイル）である。
【０１６１】
一実施形態では、コロイド粒子は、バルク相を分散させることによって調製される。本
発明のバルク相は、安定化試薬を含む水にバルク相のエタノール溶液を滴下することによって分散させることができる。あるいは、バルク相は、少なくとも１つの安定化試薬を含む水をバルク相に加えることによって分散させることができる。これらの粒子のサイズは、当業者に周知の技術である、ボルテックス、超音波処理、濾過、押し出しおよび均質化によって制御することができる。
【０１６２】
好ましい実施形態において、本発明によるコロイドソームまたはナノ粒子分散体は、プロドラッグ−両親媒性混合のバルク相を、ボルテキシングを用いた安定化試薬を含む水、およびプローブ型超音波ホモジナイザーまたは超音波浴のようなせん断力で好ましく分散させることによって調製される。この実施形態に従って調製されたコロイドソームは、任意選択で一つまたは複数の追加の処理工程を受けてもよい。このような処理方法は、当業者に公知であり、高圧均質化、および膜を通る段階的押出を含む。段階的押出のために用いられる膜は、例えば、０．８、０．４、０．２、０．１および０．０５μｍを含む細孔サイズを有し得る。一実施形態では、処理ステップは、サイズ選択処理である。
【０１６３】
好ましい実施形態では、コースコロイドソームまたはナノ粒子調製物は、一連のポリカーボネート（ＰＣ）膜を通過することによってさらに処理される。膜のサイズ範囲は、最終製品の望ましい粒子サイズに従って当業者によって選択されるであろう。この処理工程に用いることができる装置は、当業者に公知であるが、例えば押出機を含んでもよい。
【０１６４】
本発明のナノ粒子のサイズが意図される用途に依存することは、当業者によって認識されるであろう。例えば、静脈内投与のために、好ましいコロイドソームサイズ範囲は、一般に約３０ｎｍ−約４００ｎｍの間である。より好ましくは、サイズ範囲は、静脈内適用のために約３０ｎｍ−約２００ｎｍの間である。
【０１６５】
肝臓などの特定の臓器へのナノ粒子のデリバリーおよび腫瘍への受動的標的化のために、約３０ｎｍから約４００ｎｍの間の粒子サイズが企図される。より好ましくは、粒子サイズは、約３０ｎｍから約２００ｎｍ未満である。理論に拘束されることを望まないが、３０−２００ｎｍのサイズの粒子は、固形腫瘍の漏出性と混沌とした新生血管系での浸透および保持時間が強化されているため、癌細胞を受動的に標的としていると考えられている。たとえば、Ｂｒａｎｎｏｎ−Ｐｅｐｐａｓ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ（Ｂｒａｎｎｏｎ−Ｐｅｐｐａｓ２０１２およびＭａｔｓｕｍｕｒａｅｔａｌ）７，１を参照。
【０１６６】
コロイド粒子：固体脂質粒子
本発明の好ましい態様は、少なくとも一つの  ジェムシタビン・プロドラッグからなる固体−脂質粒子を提供することを目的とする。
本発明による固体脂質粒子は、当業者に公知の方法によって製造することができる。  例えば、ＭｅｈｎｅｒｔおよびＭaｄｅｒを参照のこと。（Ｍｅｈｎｅｒｔ  ２００１）８。
【０１６７】
本発明に従って固体脂質粒子を製造するために使用される適切な方法は、本発明のプロドラッグの物理化学的性質に従って選択され得る。固体脂質粒子を製造するための典型的な方法のいくつか、例えば、ｌｉｐｉｄ液中で脂質を溶融させることを必要とする方法は、１００℃より高い融点を有する
一実施形態において、本発明の固体脂質粒子は、機械的方法に従って調製される。  この実施形態によれば、一つまたは複数の安定剤がニート両親媒性物質に添加される。  安定剤の例としては、トリブロックポリマー（例えば、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１０８、およびペグ化脂質）が挙げられるが、これらに限定されない。ニート両親媒性物質に添加される安定剤の量は、約５−３０％（ｗ／ｗ）の間であり得、好ましくは約１０−３０％（ｗ／ｗ）の間であり、最も好ましくは約１５−３０％（ｗ／ｗ）の間である。
初期バルク相を調製するために、通常２０−３０重量％の水を両親媒性物質に、通常は室温（約２２−約２５℃）で添加する。次いで、両親媒性物質−水混合物を当業者に公知の方法を用いて剪断する。次に、混合物をさらに処理して、望ましいサイズおよび多分散性の粒子を生成することができる。さらなる処理の方法は当業者に知られており、例えば、高圧均質化、超音波処理、および既知の孔径を有する異なる膜を介した押し出しを含み得る。
【０１６８】
医薬組成物
本発明のさらなる態様は、本発明の医薬組成物に関する。一実施形態において、本発明による医薬組成物は、式（Ｉ）による化合物の少なくとも一つを含む。別の実施形態において、医薬組成物は、本発明による少なくとも一つの自己組織化構造を含む。さらなる実施形態において、組成物は、本発明の固体−脂質粒子の少なくとも一つを含む。
【０１６９】
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、凍結乾燥、噴霧凍結乾燥、リオフィライズ、または噴霧乾燥粉末であり得る。
【０１７０】
本発明による医薬組成物は、意図された投与形態に基づいて選択され、従来の医薬慣行と一致する、薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、添加剤およびビヒクルを含み得る。適切な医薬担体、賦形剤、希釈剤、添加剤およびビヒクルは、当業者に知られており、例えば、レミントン：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙなどの刊行物に記載されている。
【０１７１】
本発明による医薬組成物は、防腐剤、湿潤剤または抗菌剤を含むがこれらに限定されないアジュバントをさらに含み得る。他の補助剤には、凍結防止剤、噴霧乾燥補助剤、緩衝液、等張性調整剤、およびｐＨ調整材料が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７２】
単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療されるホストおよび特定の投与様式に応じて変化するであろう。投薬単位形態は、一般に、約１ｍｇから約５，０００ｍｇの有効成分を含み、好ましくは２０から１０００ｍｇの有効成分を含み、最も好ましくは１０から７５０ｍｇの有効成分を含む。
【０１７３】
有効成分の質量への言及は、自己組織化構造またはその固体脂質粒子の質量ではなく、
ジェムシタビン・プロドラッグの質量を指すことが理解されよう。
【０１７４】
治療法
本発明の別の態様は、腫瘍増殖阻害のための、本発明による自己組織化構造、固体脂質粒子またはそれらの医薬組成物の使用に関する。好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物を使用して、固形腫瘍および転移性腫瘍の増殖を阻害する。特に好ましい実施形態では、本発明による医薬組成物を使用して、膵臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、または乳癌に関連する固形腫瘍または転移性腫瘍の増殖を阻害する。
【０１７５】
一実施形態では、それを必要とする人に本発明による自己組織化構造を投与することを含む、個体の癌を治療または予防する方法が提供される。
【０１７６】
「治療」は、一般に、治療的処置および予防的または予防的措置の両方を指す。
【０１７７】
治療の目的または結果は、癌細胞の数を減少させること；原発腫瘍のサイズを減少させること；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害すること（即ち、ある程度遅くし、好ましくは停止する）、腫瘍転移を阻害する（即ち、ある程度遅くし、好ましくは停止する）、腫瘍の成長をある程度阻害する、および／または障害に関連する症状の１つまたは複数をある
程度緩和する。
【０１７８】
治療の有効性は、生存期間、疾患の進行までの時間、リスポンスレート（ＲＲ）、レスポンス期間、および／または生活の質を評価することによって測定できる。
【０１７９】
一実施形態では、この方法は、疾患の進行を遅らせるのに特に有用である。
【０１８０】
一実施形態では、この方法は、全生存期間ならびに無増悪生存期間を含む、ヒトの生存期間を延長するために特に有用である。
【０１８１】
一実施形態では、この方法は、治療に対する完全な応答を提供するために特に有用であり、それにより、治療に応答した癌のすべての兆候が消失した。これは必ずしも癌が治癒したことを意味するわけではありません。
【０１８２】
一実施形態では、この方法は、治療に応答して、１つまたは複数の腫瘍または病変のサイズ、または体内の癌の程度が減少した治療に対する部分的応答を提供するために特に有用である。
【０１８３】
別の実施形態では、活性薬剤のプロドラッグを、それを必要とする個体にインビボで提供する方法が提供され、好ましくは、活性薬剤はジェムシタビンであり、プロドラッグは、例えば、加水分解、酸化、還元または酵素によって生物変換反応を受ける。活性薬剤への切断、好ましくは望ましい作用部位（腫瘍など）での切断。プロドラッグは、活性薬剤と比較した場合、全身毒性の低下、薬物動態および／または薬力学の改善、および体液中での安定性の改善という、より多くの特徴の１つを示す可能性がある。プロドラッグは、活性薬剤のより高いペイロードのデリバリーを可能にし、活性薬剤を早期の不活性化から保護し、その結果、効力が増加し、全身毒性が減少する可能性がある。好ましくは、プロドラッグは、自己組織化構造の形態で提供される。より好ましくは、自己組織化構造は、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、プロドラッグ両親媒性物質、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分を含む。最も好ましくは、自己組織化構造は、リン脂質、コレステロール、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分を含む。
【０１８４】
自己組織化構造の意図された投与形態は、そのバルク相として、そこから誘導されたコロイド粒子として、または固脂質粒子としてのいずれかであることが認識されるであろう。
【０１８５】
本発明による自己組織化構造、固体脂質粒子またはそれらの医薬組成物の投与計画は、化合物の薬力学的特性、自己組織化構造、コロイド粒子および現在のそれらの組成物などの既知の要因に応じて変化し、それらの投与方法および投与経路；患者の年齢、性別、健康状態、病状、体重、症状の性質と程度、同時治療の種類、治療の頻度、腎臓、肝臓、心臓血管に応じても変化し、そうでなければ、そのような治療を必要としている患者の一般的な健康状態であり、標準的な臨床技術によって容易に決定することができる。
【０１８６】
本明細書において開示および定義される本発明は、テキストまたは図面から言及されるか、または明らかな二つ以上の個々の特徴のすべての代替的な組み合わせに及ぶことが理解されよう。これらの異なる組み合わせの全ては、本発明の様々な代替態様を構成する。
【実施例】
【０１８７】
以下の実施例は、本発明を説明することを意図しているが、決して限定するものではない。
【０１８８】
材料：
すべての溶媒は分析グレードであり、Ｍｅｒｃｋ  Ａｕｓｔｒａｌｉａから購入した。すべての試薬はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。ジェムシタビンは、中国のＸｉｎｇｃｈｅｎｇ  Ｃｈｅｍｐｈａｒｍ  Ｃｏ．、ＬＴＤから購入した。脂肪酸とアルコールはＮｕｃｈｅｃｋＰｒｅｐ  ＩＮＣ。（ＭＮ、ＵＳＡ）から購入した。Ｎ−ＢＯＣ−アミノ（ペグ）３＿アルコールリンカーはＬｅｏ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（中国）から購入した。ＤｉＤ’（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’、３’−テトラメチルインドジカルボシアニン、４−クロロベンゼンスルホン酸塩）は分子プローブ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から購入した。
【０１８９】
計装：
核磁気共鳴（ＮＭＲ）：１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（２００ＭＨｚ）は、特に明記しない限り、内部標準としてテトラメチルシラン（（ＣＨ３）４Ｓｉ、ＴＭＳ）を使用して重水素化溶媒中でＢｒｕｋｅｒＡＣ４００分光計に記録された。溶質濃度は、標準の５ｍｍＮＭＲチューブで約１５ｍｇ／ｍｌでした。スペクトルは、ｍＮｏｖａソフトウェアを使用して分析された。化学シフト値（δ）はｐｐｍで表され、結合定数はヘルツ単位のＪ値で表された。
【０１９０】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：分析用ＨＰＬＣは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ
Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラム（５μＭ、４．６Ｘ１５０ｍｍ）およびＡｌｔｅｃｈ  ３３００蒸発光散乱（ＥＬＳ）およびＳｈｉｍａｄｚｕ  ＵＶ−Ｖｉｓ（λ＝２６０ｎｍ）検出器。プロドラッグ両親媒性物質の分析用の移動相は、（Ａ）５０：５０  水／アセトニトリルおよび（Ｂ）６０：４０  テトラヒドロフラン／アセトニトリルで構成されていた。
【０１９１】
フラッシュカラムクロマトグラフィー：プロドラッグ両親媒性物質の精製は、Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  ｉＥＳフラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｇｒａｃｅ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）で、Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８１２または４０ｇ、および８０ｇカラムを使用して行った。プロドラッグ両親媒性物質の分析用の移動相は、（バッファーＡ）水／エタノール（９０／１０）、（バッファーＢ）エタノールで構成された。
【０１９２】
エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）：エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）は、ＥＳＩとＡＰＣＩインターフェース。シリンジポンプを使用してサンプルを注入した。特に明記しない限り、移動相としてメタノールを使用した。
【０１９３】
サンプルは通常、ＤＣＭに溶解して導入した。溶媒は、水浴温度が５０℃以下の減圧下でロータリーエバポレーターを用いて除去した。
【０１９４】
物理化学的特性
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：示差走査熱量測定（ＤＳＣ）測定は、メトラーＴＳＯ  ８０１ＲＯサンプルロボット（メトラートレド、スイス）を備えたメトラートレドＤＳＣ８２２システムで実行された。サンプルは、４〜８ｍｇのサンプルを４０μＬのアルミニウムるつぼに量り入れて密封することにより調製した。サンプルを−１３０°Ｃに冷却した後、２．５°Ｃ／分の速度で３００°Ｃまで加熱した。ＤＳＣサーモグラムは、ＳＴＡＲｅソフトウェアパッケージ（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ、スイス）を使用して記録された。機器の校正にはインジウムを使用した。
【０１９５】
偏光光学顕微鏡法（ＰＯＭ）：偏光光学顕微鏡法（ＰＯＭ）に使用されるサンプルは、
顕微鏡スライド上に少量のプロドラッグ両親媒性物質を置き、カバーガラスで覆うことによって調製された。水をカバースリップの端に置き、水と５０℃の相互作用、および室温と５０℃の間で３℃／分で加熱した。両親媒性物質は交差偏光レンズの存在下および非存在下で、ＯｌｙｍｐｕｓＧＸ５１倒立光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ
Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）、メルボルン、オーストラリア）で観察した。画像はＮｉｋｏｎＤＳ−Ｒｉ−１カメラで撮影された。すべての画像は１００倍の顕微鏡で撮影された。
【０１９６】
動的光散乱（ＤＬＳ）：分散液の粒子サイズ分布は、Ｈｅ−Ｎｅレーザー（４ｍＷ、６３３ｎｍ）を備えたＭａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｎａｎｏ  ＺＳ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を使用して分析した。すべての測定には、散乱角９０°の使い捨て４０μＬキュベットを使用した。サンプルを２５°Ｃで１分間平衡化した。粘度と屈折率の値は、すべての分散液でそれぞれ０．８８７２ｃＰと１．３３０に設定された。サイズ分布は、強度と数で記録された。
【０１９７】
小角Ｘ線散乱（ＳＡＸＳ）：
両親媒性物質のバルク相およびリオトロピック相のＳＡＸＳ分析は、Ｂｒｕｋｅｒ  ＮａｎｏＳＴＡＲ実験室ＳＡＸＳ装置（Ｂｒｕｃｋｅｒ  ＡＸＳ、カールスルーエ、ドイツ）で実行された。
【０１９８】
平衡化されたリオトロピック相は、取り外し可能なボタンサンプルセルに配置された。分散液の分析には、マルチキャピラリーホルダーを使用した。ボタン電池とキャピラリーホルダーは、ペルチェヒーター−クーラーシステムで温度制御されたブロックセットアップに交換可能に適合する。  ２Ｄ散乱画像は、従来の１Ｄ散乱プロットに対して放射状に平均化され、ｑ値（Å−１）の関数として計算された。ここで、ｑは、式ｑ＝（４π／λ）ｓｉｎ（θ／２）を使用して計算された散乱ベクトルの長さである。ここで、λは波長、θは散乱角である。
【０１９９】
形成された中間相は、Ｄｅ  Ｃａｍｐｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｌａｎｇｍｕｉｒ、２００４。２０（１３）、５２５４−５２６１によって説明されているように、反射則を使用してピークにインデックスを付けることによって決定された。エマルジョンやリポソームの小角Ｘ線散乱パターンは大きく広いピークを示すが、キュボソームやヘキソソームなどの高度に秩序化されたナノ構造粒子の液晶相は明確な鋭いピークを示す。ピークの相対位置（「間隔」）により、構造の対称性を解明できる。  ２つの反射面間の面間距離（ｄ）は、式ｄ＝（２π）／ｑを使用して計算できる。ここで、ｑはピークの絶対位置である。これにより、単位格子のサイズである格子定数（ａ）の計算が可能になる。
【０２００】
実施例１：２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（シス−９，オクタデセニル）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−オレイル）の合成
ジェムシタビン塩基（２．００ｇ、７．６０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解、丸底フラスコに入れた。無水ピリジン（３．０６ｍＬ、３８ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（４．８２ｍＬ、３８ｍｍｏｌ）を溶液に滴下し、反応物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。クロロギ酸オレイル（２．５６ｇ、７．６ミリモル、ジェムシタビン１：１とのモル比）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、溶液に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応をクエンチし、反応の終わりに脱イオン水（３ｍＬ）を加え、続いて３時間撹拌することにより保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにおいてＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇを使用して精製した。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、２．
３０ｇの白色ワックス（収率：５４．３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，
ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８３  （ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ６−ＣＨ）；  ７．０９  （ｄ，  １Ｈ  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｂ，  １Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；  ５．３５  −  ５．２８  （ｍ，  ３Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ  ａｎｄ    ３’−ＯＨ）；  ４．１８  （ｄｔ，  １Ｈ．  ４’−ＣＨ）；  ４．０９  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６５  Ｈｚ，  ＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．８  −
３．６７  （ｄｄ，  ２Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  １．９７  （ｑ，  ４Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．５８  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＯＨ）；  １．３６  −  １．１５  （ｍ，  ２２Ｈ  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，  −ＣＨ３）．  ＥＳＩ  −  ＭＳ
（ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ５５８．１０  ［Ｍ  ＋  Ｈ］＋，  １１１５．１３  ［２Ｍ  ＋Ｈ］＋。
【０２０１】
中間化合物の合成
実施例１．１クロロギ酸オレイル
クロロギ酸オレイルの合成に使用された方法は、ＤｉｎｇとＦｒｉｔｚによって報告された方法の修正版に基づいていた。オレイルアルコール（５ｇ、１８．６２ミリモル）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、１／３モル比のトリホスゲン（１．８４ｇ、６．０２ミリモル）と合わせ、氷浴上で撹拌した。ピリジン（１．５ｍＬ、１８．６２ミリモル）を溶液に滴下し、予冷した溶液中で１時間、さらに室温で２時間撹拌した。次に、反応混合物を氷冷水で素早く抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶液が蒸発して油になり、さらに精製することなくさらなる反応に使用した（４．８１ｇ、７８％収率）。
【０２０２】
実施例２：２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（シス−９，１２，オクタデカジエネニル）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−リノレイル）の合成
ジェムシタビン塩基（２．００ｇ、７．６０ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解、丸底フラスコに入れた。無水ピリジン（３．０６ｍＬ、３８ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（４．８２ｍＬ、３８ミリモル）を溶液に滴下し、反応物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。クロロギ酸リノレイル（２．５ｇ、７．６０ミリモル、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、溶液に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応をクエンチし、反応の終わりに脱イオン水（６ｍＬ）を加えて３時間撹拌することにより保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。。粗生成物をＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、２．６ｇの淡黄色ワックス（収率：６３．５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８２  （ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ，  ６−ＣＨ）；  ７．１０  （ｄ，  １Ｈ，  ５−ＣＨ）；  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；  ５．３７  −  ５．２６  （ｍ，  ５Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ，  ３’ＯＨ）；  ４．１８  （ｑ，  １Ｈ，  ４’−ＣＨ）；  ４．１０  （ｔ，  ２Ｈ，  ＮＨＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．８９  −３．７８  （ｄｄ，  ２Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  ２．７３  （ｔ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２−）  ２．００  （ｑ，  ４Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．５９  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．３６  −  １．２０  （ｍ，  １６Ｈ，  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，  −ＣＨ３）．  ＥＳＩ  −  ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  −ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ５５４．２７
［Ｍ  −  Ｈ］−，  ５９０．０７［Ｍ  −  Ｈ  ＋  Ｃｌ］−，  １１０９．１３  ［２Ｍ  −  ２Ｈ］−。
【０２０３】
中間化合物の合成
例２．１：クロロギ酸リノレイル
クロロギ酸リノレオイルの合成に使用された方法は、ＤｉｎｇとＦｒｉｔｚによって報告された方法の修正版に基づいていた。リノレイルアルコール（３．５ｇ，１３．１４ミリモル）を、氷浴上でＤＣＭ（３５ｍＬ）中の１／３モル比のトリホスゲン（１．２９ｇ、４．３５ミリモル）と組み合わせた。ピリジン（１．０６ｍＬ，１３．１４ミリモル）を溶液に滴下して加え、反応混合物を氷上で１時間、次に室温でさらに２時間撹拌した。反応の終わりに、氷冷水を使用して混合物を迅速に抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次に、混合物を減圧下で蒸発させて黄色の油を生じ、それ以上精製することなくさらなる反応に使用した（３．５０ｇ，８１％収率）。
【０２０４】
実施例３：２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（３，７，１１，１５−テトラメチル−ヘキサデシル）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−フィタニル）の合成
ジェムシタビン塩基（２．００ｇ、７．６ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解、丸底フラスコに入れた。無水ピリジン（３．０６ｍＬ、３８ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（４．８２ｍＬ、３８ミリモル）を溶液に滴下し、反応物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。クロロギ酸フィタニル（２．７４ｇ，７．６ミリモル）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、そして溶液に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応をクエンチし、反応の終わりに脱イオン水（６ｍＬ）を加え、続いて３時間撹拌することにより保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにおいてＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  １２ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、３．２２ｇの白色結晶性ワックス（収率：７２．１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：
δ  １０．８３  （ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ  Ｊ  ＝
７．６  Ｈｚ，  ６−ＣＨ）；  ７．１０  （ｄ，  １Ｈ  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｂ，  １Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１５  （ｔ，  １Ｈ  Ｊ
＝  ７．５  Ｈｚ，  ５’−ＯＨ）；  ５．２５  （ｄｄ，１Ｈ，  ３’−ＯＨ），  ４．２５  −  ４．０７  （ｍ，  ３Ｈ，  ４’−ＣＨ，  ＮＨＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．８９−  ３．６６  （ｄｄ，  １Ｈ  ５’−ＣＨ２）；  １．６９  −  ０．９５  （ｍ，  ２４Ｈ  −ＣＨ，  ＣＨ２）；  ０．９０  −  ０．７７  （ｍ，  １５Ｈ，  −ＣＨ３）．  ＥＳＩ  −  ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  −ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ５８６．１０  ［Ｍ  −  Ｈ］−，  ６２１．９５  ［Ｍ  −  Ｈ  ＋  Ｃｌ］−，  １１７２．９９  ［２Ｍ  −  ２Ｈ］−。
【０２０５】
中間化合物の合成
例３．１：クロロギ酸３，７，１１，１５−テトラメチル−ヘキサデシル
フィタノイル（４．８ｇ、１６．３５ミリモル）およびトリホスゲン（１．６２ｇ、５．４６ミリモル）を３０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、撹拌し、氷浴上で冷却した。無水ピリジン（１．３ｇ、１６．３５ミリモル）を１時間かけて滴下した。反応混合物を室温でさらに１時間撹拌し、次に追加の塩化メチレンおよび氷水で迅速に抽出した。有機層を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させて、５．２２ｇ（収率：８８．７％）のクロロギ酸フィタニルを黄色の液体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ｉｎ  ＣＤＣｌ３：  δ０．８３，  ０．８５，  ０．８６，  ０．８８，  （４ｓ，  ｅａｃｈ  ３Ｈ，  ＣＨ３），  ０．９１  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ＝６．０Ｈｚ，  ＣＨ３），  ０．９５−１．４０  （ｍ，  ２０Ｈ，  ＣＨ２），  １．３９−１．６８  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ），
１．６８−１．８８  （ｍ，  １Ｈ，  ＯＨ），  ４．２７−４．４７  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ）。
【０２０６】
実施例４：２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（（シス−９，オクタデセノイル）オキシ−トリエチレングリコール）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−ペグ３−オレオイル）の合成
ジェムシタビン塩基（１．２６ｇ、４．８ミリモル）を１０ｍＬＤＭＦに溶解した。無水ピリジン（２．０ｍＬ、２４ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（２．６１ｍＬ、２４ミリモル）を溶液に滴下し、反応混合物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。ペグ３−オレエート（４．７４ミリモル）のクロロギ酸溶液をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、反応混合物に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応の終わりに、脱イオン水（６ｍＬ）を加え、続いて１時間撹拌した、保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにおいてＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、２．４２ｇの白色結晶性ワックス（収率：７２．１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８３  （ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ，  ６−ＣＨ）；  ７．０９  （ｄ，  １Ｈ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｂ，  １Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；  ５．３５  −  ５．２８  （ｍ，  ３Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ  ａｎｄ    ３’−ＯＨ）；    ４．２５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２−ＯＣＯ），  ４．１８  （ｄｔ，  １Ｈ．  ４’−ＣＨ）；  ４．０９  （ｔ，  ２Ｈ，−ＣＨ２−ＯＣＯ）；  ３．８９  −  ３．６７  （ｄｄ，  １Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  ３．６７−３．４５  （ｍ，  ８Ｈ，  ＣＨ２−Ｏ，），  ２．３３  （ｔ，  ２Ｈ，ＣＨ２），  １．９７  （ｄｔ，  ４Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．４８  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２）；  １．３６  −  １．１５  （ｍ，  ２２Ｈ  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，  −ＣＨ３）．
ＥＳＩ  −ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ７０４［Ｍ  ＋  Ｈ］。
【０２０７】
中間化合物の合成
例４．１：ペグ３−オレオイル
オレイン酸（５ｇ、１７．７ミリモル）を５０ｍＬのＤＣＭに溶解し、氷浴で冷却した。塩化オキサリル（５ｇ、３９．３９ミリモル）を反応混合物に滴下して加えた。反応混合物を氷浴中でさらに１０分間撹拌し、そして室温に戻し、さらに２時間撹拌した。過剰の塩化オキサリルを除去し、残留物をＤＣＭに再溶解し、蒸発乾固させて、塩化オキサリルを除去し、オレオイルクロリドの油性残留物を得た。
塩化オレオイル（２．８ｇ、８．８９ミリモル）を２０ｍＬのＤＣＭに溶解し、氷上で予冷した。トリエチレングリコール（４．８４ｍＬ、３５．５６ミリモル）およびＴＥＡ（１．２８ｍＬ、８．８９ミリモル）を反応混合物に加えた。必要に応じてＴＥＡを添加してｐＨを９に調整した。反応混合物を一晩撹拌した。ＥＳＩ／ＭＳによってテストされた製品は、追加のビスペグオレイン酸でペグ３−オレイン酸が優勢であることを示している。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をＤＣＭに再溶解し、水で抽出した。ＤＣＭ相を蒸発乾固し、エタノールに再溶解し、分取ＨＰＬＣでＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）Ｃ１８、４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固して、３．０ｇの油を得た（収率：８１．５％）。ＥＳＩ  −  ＭＳ（ＭｅＯＨ）＋  ｖｅモードｍ
／  ｚ：４１５  ［Ｍ  ＋  Ｈ］。
【０２０８】
例４．２：ペグ３−クロロギ酸オレオイル
ペグ３−オレオイル（２ｇ，４．７６ミリモル）およびトリホスゲン（０．４７０ｇ，１．５８ミリモル）を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、攪拌し、氷浴上で冷却した。無水ピリジン（０．３ｍＬ、７．２４ミリモル）を反応混合物に滴下し、反応混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、続いて室温で２時間撹拌した。反応混合物を追加の塩化メチレンおよび氷水で迅速に抽出した。有機層をプールし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、保護されたジェムシタビンとの次の段階の反応に使用した。
【０２０９】
実施例５：２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（（シス−９，シス−１２−オクタデカジエノイル）−オキシ−トリエチレングリコール）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−ペグ３−リノレオイル）の合成）
ジェムシタビン塩基（３．４８ｇ、１３．２ミリモル）を３０ｍＬのＤＭＦに溶解した。無水ピリジン（５．４ｍＬ、６６ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（８．３２ｍＬ、６６ミリモル）を溶液に滴下し、反応混合物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。ペグ３−リノール酸のクロロギ酸溶液（６．２７ｇ，１３．２ミリモル）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、反応混合物に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応の終わりに、脱イオン水（１２ｍＬ）を加え、続いて１時間撹拌することにより、保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにおいてＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、６．２７ｇの白色結晶性ワックス（収率：７６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８３
（ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ，  ６−ＣＨ）；  ７．０９  （ｄ，  １Ｈ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｄ，  １Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；  ５．５５  （ｂ，  ３’ＯＨ）  ５．３５  −  ５．２８  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ）；    ４．２５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２−ＯＣＯ），  ４．１８  （ｍ，  ４’−ＣＨ）；  ４．０９  （ｔ，  ２Ｈ，  ＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．８９  （ｄｔ，  １Ｈ．  ４’−ＣＨ）；  ３．７９  −３．６７  （ｄｄ，  １Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  ３．６７−３．４５  （ｍ，  ８Ｈ，  ＣＨ２−Ｏ），    ２．７  （ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ），    ２．３３  （ｔ，  ４Ｈ，ＣＨ２），  １．９７  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．４８  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２）；  １．３６  −  １．１５  （ｍ，  １８Ｈ  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，
−ＣＨ３）．ＥＳＩ  −  ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ［Ｍ  ＋  Ｈ］：  ７０２．２０，  ［Ｍ  ＋  Ｎａ］：  ７２４．３３。
【０２１０】
中間化合物の合成
例５．１：ペグ３−リノレオイル
リノール酸（５．６１ｇ、２０ミリモル）を５０ｍＬのＤＣＭに溶解し、氷浴で冷却した。塩化オキサリル（５ｇ、４０ミリモル）を反応混合物に滴下して加えた。反応混合物を氷浴中でさらに１０分間撹拌し、そして室温に戻し、さらに２時間撹拌した。過剰の塩化オキサリルを除去し、残留物をＤＣＭに再溶解し、蒸発乾固させて塩化オキサリルを除去し、塩化リノレオイルの油性残留物を得た。
【０２１１】
上で得られた塩化リノレオイルを５０ｍＬのＤＣＭに再溶解し、氷浴で予冷した。トリエチレングリコール（１２ｇ、８０ミリモル）およびＴＥＡを反応混合物に加え、ｐＨを９に調整した。反応混合物を一晩撹拌した。ＥＳＩ／ＭＳによってテストされた製品は、追加のビスペグ３−リノレオイルとともにペグ３−リロレオイルが優勢であることを示し
た。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をＤＣＭに再溶解し、水で抽出した。ＤＣＭ相を蒸発乾固し、エタノールに再溶解し、分取ＨＰＬＣでＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）Ｃ１８、４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固して、６．１８ｇの油を得た（収率：８１．５％）。
【０２１２】
ＥＳＩ  −  ＭＳ（ＭｅＯＨ）＋  ｖｅモードｍ  ／  ｚ：４１３  ［Ｍ  ＋  Ｈ］。
【０２１３】
例５．２：ペグ３−クロロギ酸リノレオイル
ペグ３−リノレオイル（６．１８ｇ，１５ミリモル）およびトリホスゲン（１．４８ｇ，５ミリモル）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、撹拌し、氷浴上で冷却した。無水ピリジン（１．２０９ｍＬ、１５ミリモル）を反応混合物に滴下し、反応混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、続いて室温で２時間撹拌した。反応混合物を追加の塩化メチレンおよび氷水で迅速に抽出した。有機層をプールし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、保護されたジェムシタビンとの次の段階の反応に使用した。
【０２１４】
実施例６：２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（（シス−９，オクタデセノイル）−オキシ−ヘキサエチレングリコール）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−ペグ６−オレオイル）の合成
ジェムシタビン塩基（１ｇ、３．８０ミリモル）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解した。無水ピリジン（１．５２ｍＬ、１９ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（２．１５ｍＬ、１９．０ミリモル）を溶液に滴下し、反応混合物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。ペグ６−オレエートのクロロギ酸溶液（２．１ｇ，３．８ミリモル）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、反応混合物に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応の終わりに、脱イオン水（１２ｍＬ）を加え、続いて１時間撹拌することにより、保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにおいてＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、０．７３ｇの黄色のワックス（収率：２３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８３  （ｓ，
１Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ，  ６−ＣＨ）；  ７．０９  （ｄ，  １Ｈ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｄ，  １Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；  ５．３５  −  ５．２８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ，
３’−ＯＨ）；    ４．２５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２−ＯＣＯ），  ４．１８  （ｍ，  ４’−ＣＨ）；  ４．０９  （ｔ，  ２Ｈ，  ＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．７９  −３．６７  （ｄｄ，  １Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  ３．６７−３．４５  （ｍ，  ２０Ｈ，
ＣＨ２−Ｏ），    ２．３３  （ｔ，  ２Ｈ，ＣＨ２），  １．９７  （ｍ，  ４Ｈ，
−ＣＨ２−）；  １．４８  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２）；  １．３６  −  １．１５
（ｍ，  ２２Ｈ  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，  −ＣＨ３）．  ＥＳＩ
−  ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ［Ｍ  ＋  Ｈ］：  ８３６．２０，  ［Ｍ  ＋  Ｎａ］：  ８５８．３３。
【０２１５】
中間化合物の合成
例６．１：ペグ６−オレオイル
オレイン酸（２．５ｇ、８．８５ミリモル）を２５ｍＬのＤＣＭに溶解し、氷浴で冷却した。塩化オキサリル（２．５ｇ、１７．７ミリモル）を反応混合物に滴下した。反応混合物を氷浴中でさらに１０分間撹拌し、そして室温に戻し、さらに２時間撹拌した。過剰
の塩化オキサリルを除去し、残留物をＤＣＭに再溶解し、蒸発乾固させて塩化オキサリルを除去し、塩化オレオイルの油性残留物を得た。
【０２１６】
上で得られた塩化オレオイルを５０ｍＬのＤＣＭに再溶解し、氷浴で予冷した。ヘキサエチレングリコール（４．９９ｇ，１７．７ミリモル）およびＴＥＡを反応混合物に加え、ｐＨを９に調整した。反応混合物を一晩撹拌した。ＥＳＩ／ＭＳによってテストされた製品は、追加のビスペグ６−オレオイルとともにペグ６−オレオイルが優勢であることを示している。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をＤＣＭに再溶解し、水で抽出した。ＤＣＭ相を蒸発乾固し、エタノールに再溶解し、分取ＨＰＬＣでＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固して、２．９ｇの油を得た（収率：６０％）。  ＥＳＩ  −  ＭＳ（ＭｅＯＨ）＋  ｖｅモードｍ  ／  ｚ：５４７  ［Ｍ  ＋  Ｈ］。
【０２１７】
例６．２：ペグ６−クロロギ酸オレオイル
ペグ６−オレオイル（２．９ｇ，５．３２ミリモル）およびトリホスゲン（０．５３ｇ，１．７７ミリモル）を３０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、撹拌し、氷浴上で冷却した。無水ピリジン（０．４３ｍＬ，５．３２ミリモル）を反応混合物に滴下して加え、反応混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、続いて室温で２時間撹拌した。反応混合物を追加の塩化メチレンおよび氷水で迅速に抽出した。有機層をプールし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、保護されたジェムシタビンとの次の段階の反応に使用した。
【０２１８】
実施例７：２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（（シス−９，１２、１５オクタデカトリエノイル）−オキシ−ヘキサエチレングリコール）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−ペグ６−リノレノイル）の合成
ジェムシタビン塩基（０．４２ｇ，１．６ミリモル）を５ｍＬＤＭＦに溶解した。無水ピリジン（０．６４ｍＬ，８ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（０．９１ｍＬ、８ミリモル）を溶液に滴下し、反応混合物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。ペグ６−オレイン酸のクロロギ酸溶液（０．９７ｇ，１．６ミリモル）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、反応混合物に滴下して加えた。反応物を室温で２時間撹拌したままにした。反応の終わりに、脱イオン水（１２ｍＬ）を加え、続いて１時間撹拌することにより、保護シリルエーテルを除去した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をジエチルエーテルおよび少量の水に取り込んだ後、抽出漏斗で分離した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにおいてＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０  Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を集め、蒸発乾固させて、０．５８ｇの黄色のワックス（収率：５０％）を得た。ＥＩ
−  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８３  （ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ，  ６−ＣＨ）；  ７．０９  （ｄ，  １Ｈ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｄ，  １Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；  ５．３５  −  ５．２８  （ｍ，  ７Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ，  ３’−ＯＨ）；    ４．２５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２−ＯＣＯ），  ４．１８  （ｍ，  ４’−ＣＨ）；  ４．０９  （ｔ，  ２Ｈ，  ＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．７９  −３．６７  （ｄｄ，  １Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  ３．６７−３．４５  （ｍ，  ２０Ｈ，  ＣＨ２−Ｏ），    ２．７  （ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ２．３３  （ｔ，  ２Ｈ，ＣＨ２），  １．９７  （ｍ，  ４Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．４８  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２）；  １．３６  −  １．１５  （ｍ，  ２２Ｈ  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，  −ＣＨ３），  ＥＳＩ−ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ［Ｍ  ＋  Ｈ］：  ８３２．２０，  ［Ｍ  ＋  Ｎａ］：  ８５４．３３。
【０２１９】
中間化合物の合成
例７．１：ペグ６−リノレノイル
リノレン酸（１ｇ、３．５ミリモル）を１０ｍＬのＤＣＭに溶解し、氷浴で冷却した。塩化オキサリル（０．９ｇ、７ミリモル）を反応混合物に滴下した。反応混合物を氷浴中でさらに１０分間撹拌し、そして室温に戻し、さらに２時間撹拌した。過剰の塩化オキサリルを除去し、残留物をＤＣＭに再溶解し、蒸発乾固させて塩化オキサリルを除去し、塩化リノレノイルの油性残留物を得た。
【０２２０】
上で得られた塩化リノレノイルを２０ｍＬのＤＣＭに再溶解し、氷浴で予冷した。ヘキサエチレングリコール（０．５６ｇ，７ミリモル）およびＴＥＡを反応混合物に加え、ｐＨを９に調整した。反応混合物を一晩撹拌した。ＥＳＩ／ＭＳによってテストされた製品は、追加のビスペグ６−オレオイルとともにペグ６−リノレノイルが優勢であることを示している。反応混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残留物をＤＣＭに再溶解し、水で抽出した。ＤＣＭ相を蒸発乾固し、エタノールに再溶解し、分取ＨＰＬＣでＲｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）  Ｃ１８  ４０ｇカラムを使用して精製した。移動相（Ａ）９０：１０
Ｈ２Ｏ／エタノールおよび（Ｂ）１００％エタノール。純粋な画分を収集し、蒸発乾固して、０．９５ｇの油を得た（収率：５０％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．８３  （ｓ，  １Ｈ，  −ＮＨＣＯ）；  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ，  ６−ＣＨ）；  ７．０９  （ｄ，  １Ｈ，  ５−ＣＨ）；  ６．３  （ｄ，
１Ｈ，  １’−ＣＨ），  ６．１６  （ｔ，  １Ｈ，  ５’−ＯＨ）；    ５．５  （ｂ，  ３’−ＯＨ），  ５．３５  −  ５．２８  （ｍ，  ６Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ）；    ４．２５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２−ＯＣＯ），  ４．１８  （ｍ，  ４’−ＣＨ）；  ４．０９  （ｔ，  ２Ｈ，  ＣＯ２−ＣＨ２）；  ３．７９  −３．６７  （ｄｄ，  １Ｈ，  ５’−ＣＨ２）；  ３．６７−３．４５  （ｍ，  ２０Ｈ，  ＣＨ２−Ｏ），    ２．３３  （ｔ，  ２Ｈ，ＣＨ２），  １．９７  （ｍ，  ４Ｈ，  −ＣＨ２−）；  １．４８  （ｍ，  ２Ｈ，  −ＣＨ２）；  １．３６  −  １．１５  （ｍ，  ８Ｈ  −ＣＨ２−）；  ０．８４  （ｔ，  ３Ｈ，  −ＣＨ３）．  ＥＳＩ  −  ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ  ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ５４５．１３  ［Ｍ  ＋  Ｈ］。
【０２２１】
例７．２：ペグ６−クロロギ酸リノレノイル−
ペグ６−リノレノイル（０．５９ｇ，１．７５ミリモル）およびトリホスゲン（０．１６６ｇ，０．５８ミリモル）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、撹拌し、氷浴上で冷却した。無水ピリジン（０．１５ｍＬ、１．７５ミリモル）を反応混合物に滴下し、反応混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、続いて室温で２時間撹拌した。反応混合物を追加の塩化メチレンおよび氷水で迅速に抽出した。有機層をプールし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、保護されたジェムシタビンとの次の段階の反応に使用した。
【０２２２】
実施例８：２’−デオキシ−２  ’、２’−ジフルオロ−Ｎ４−（（（（シス−９，オクタデセノイル）アミノ−トリエチレングリコール）オキシ）カルボニル）シチジン（ジェム−ペグ３−オレオイルアミド）の合成
ジェムシタビン塩基（１．０５２ｇ、４ミリモル）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、丸底フラスコに加え、窒素下で密封した。無水ピリジン（１．６２ｍＬ、２０ミリモル）を溶液に加え、マグネチックスターラーを使用して氷浴上で撹拌した。クロロトリメチルシラン（２．１７２ｍＬ、２０ミリモル）を溶液に滴下し、反応物を１時間撹拌した。生成物は４０８の陽イオンｍ／Ｚを示した。８．１に記載された反応から得られた生成物であるＮ−Ｂｏｃ（ペグ３）−クロロホルメート（４ミリモル）をジェムシタビン溶液に加えた。無水ピリジン（１．６２ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。生成物は６８２．７の陽イオンｍ／Ｚを示した。ピリジン塩を濾過により除去し、濾液を蒸発乾固させた。残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に再溶解し、４℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡ、５ｍＬ）をＤＣＭ溶液に加え、４℃で３０分間、室温で１時間撹拌した。生成物は陽イオンを示した（ｍ／Ｚは４３８．９３）。次に、ＴＦＡとＤＣＭを減圧下で蒸発させた。残留物を水に再溶解し、Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）Ｃ１８  ４０ｇを使用する分取ＨＰＬＣで精製した。水および水／エタノール（５０／５０）を溶媒ＡおよびＢとして使用し、１００％溶媒Ａから１００％溶媒Ｂへの線形勾配プログラムを使用した。適切な画分をプールし、蒸発乾固させた。この生成物（０．８７６ｇ、２ミリモル）に、実施例８．２から得られたオレオイルスクシンイミドを加えた。トリエチルアミン（０．７ｍＬ）を加えることにより、反応のｐＨを７．５〜８に調整した。ＭＳによって確認されたように、３０分の反応後に表題化合物が形成され、正しいＭＳ＋ｖｅモードｍ／Ｚ：７０３．１４を示した。溶媒を蒸発乾固し、残留物をエタノール／水に再溶解し、Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）Ｃ１８  ４０ｇを使用する分取ＨＰＬＣで精製した。水／エタノール（９０／１０）とエタノールを溶媒ＡとＢとして使用し、１００％溶媒Ａから１００％溶媒Ｂへの線形勾配プログラムを使用した。適切なフラクションをプールして、４５０ｍｇの純粋な化合物を取得した。総収率３６％。ＥＳＩ  −  ＭＳ  （ＭｅＯＨ）  ＋ｖｅ
ｍｏｄｅ  ｍ／ｚ：  ７０３．１４，  ７２５．２７，  １４２７．１０。
【０２２３】
中間化合物の合成
例８．１  Ｎ−Ｂｏｃ−ペグ３−クロロギ酸
Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ（ペグ）３−ＯＨ（０．９９７ｇ、４ミリモル）を４ｍＬのＤＣＭに溶解し、丸底フラスコに加え、窒素下で密封した。３ｍＬのＤＣＭに溶解したトリホスゲン（０．３９５ｇ，１．３３ミリモル）を４℃で反応混合物に加え、続いてピリジン（０．３３ｍＬ）を滴下して加えた。混合物を４℃で３０分間および室温で２時間撹拌した。生成物溶液を、さらに精製することなく、保護されたジェムシタビン溶液（実施例８）にさらに加えた。
【０２２４】
実施例８．２オレオイルスクシンイミド
オレイン酸（０．５６４ｇ、２ミリモル）を２ｍＬのＤＣＭに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳＵ、０．２７６ｇ、２．４ミリモル）と混合した。混合物を窒素下で密封し、４℃で撹拌した。４ｍＬのＤＣＭに溶解したＮ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、０．４５３ｇ、２．２ミリモル）を反応混合物に滴下し、４℃で３０分間、室温で３時間撹拌した。白色のＤＣＵ沈殿物を濾過し、濾液を、実施例８に記載されているように、精製せずに次のステップの反応に使用した。
【０２２５】
例９：ジェムシタビン−両親媒性物質のＤＳＣ
ＤＳＣを使用して、さまざまなジェムシタビン・プロドラッグ両親媒性物質の相転移に関連する温度を測定した（図２Ａ）。ジェム−ＯｌｅのＤＳＣサーモグラムは、５９．９７°Ｃと７６．３１°Ｃで吸熱転移を示す。これは、結晶構造の変化に起因する可能性がある。９８℃での吸熱ピークはプロドラッグの融点に対応し、これは光学顕微鏡下での目視観察で確認された。１６７．７２℃での大きな吸熱ピークは、このピークが後続の加熱および冷却サンプルでは観察されなかったため、サンプルの劣化に起因する可能性がある（データは示していない）。ジェム−リノレイルのＤＳＣでは４．８１℃でガラス転移が観察された。発熱ピークは、約７４℃で始まる高温で発生した。これは、不飽和リノレオイル鎖の酸化の原因である可能性がある。〜１３７．８２℃での２番目の吸熱ピークは、その後の加熱および冷却サイクルでは観察されず、サンプルの劣化に起因する可能性がある。ジェム−フィタニルのＤＳＣでは、２．９２℃と７９．３１℃で２つのガラス転移が観察された。大きな吸熱ピークが１５２．６４℃で観察された。これはサンプルの劣化を示している。
【０２２６】
ペグスペーサーを使用したジェム両親媒性物質のＤＳＣを図２Ｂに示す。オレオイル鎖またはリノレオイル鎖のいずれかを持つペグ３スペーサーを持つジェム両親媒性物質は、
８５．６および７９．１℃で大きな吸熱ピークを示した。ペグの長さを６に追加すると、サンプルの融点が５９．７に低下したが、リノレオイルの対応する融点は３４．２６に低下し、融解エンタルピーははるかに小さくなった。リノレノイルの対応物は油サンプルであり、融点を示さなかった。
【０２２７】
自己組織化挙動のデモンストレーション
例１０：偏光光学顕微鏡（ＰＯＭ）と小角Ｘ線散乱（ＳＡＸＳ）を使用したジェム両親媒性物質の中間相挙動の分析
水浸透スキャンおよびＳＡＸＳの結果は、表１および２に要約され、様々な自己組織化リオトロピック液晶相が、ラメラ結晶構造からラメラ液晶、キュービック相メソ相およびスポンジメソ相に広い範囲で、異なる  ジェム−両親媒性物質に対して形成されたことを示している。
【０２２８】
純粋な両親媒性物質から純水への確立された濃度勾配に沿った水浸透スキャンから得られたテクスチャは、界面活性剤／水システムのリオトロピック相の挙動への迅速な洞察を提供する。溶けたニート両親媒性物質を顕微鏡のスライド上に置き、次に水を縁の周りに導入した。ジェム−フィタニルには、最初に３Ｄ逆双連続キュービック相（Ｐｎ３ｍ空間群）を形成し、次に高温または長時間の平衡化で２Ｄヘキサゴナル相に変換する機能がある。同様に、プロドラッグ  ジェム−Ｏｌｅは、室温で従来のラメラ（Ｌα）相を形成し、３３°Ｃを超える高温で３Ｄキュービック（Ｐｎ３ｍ）相を形成することができた。
【０２２９】
【表１】
2021522331.tif 000019
【０２３０】
【表２】
2021522331.tif 000020
【０２３１】
例１１：コロイド粒子または分散液の調製
本発明による好ましいプロドラッグは、以下の手順を使用することにより、水溶液に分散され、１００−１０００ｎｍのサイズ範囲の非常に微細な内部ナノ構造を有するコロイド粒子を形成することができる。
【０２３２】
典型的なナノ粒子分散液は、リン脂質（必要に応じてコレステロールを含む）の存在下または非存在下でジェム両親媒性物質から調製し、ここでリン脂質は、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、およびそれらの組み合わせから選択される。代表的な方法は以下のとおりである：
ジェム両親媒性物質は、１５−３０％ペグ４Ｋ−オレオイルを含む暖かいＰＢＳで水和し、ソニケータ浴で超音波処理し、脂質エマルジョンをもたらすプローブソニケータを使用した。ジェム両親媒性ナノ粒子は、均質なサイジングを確実にするために、押出機（Ａｖｅｓｔｉｎ、ＬｉｐｏＦａｓｔ  ＬＦ−５０）を用いてポリカーボネート膜（３ｘ２００ｎｍ、３ｘ１００ｎｍ）を介して処理された。リン脂質を含むジェムシタビン両親媒性ナノ粒子は、（ｉ）ＤＯＰＣとジェム−オレイル、（ｉｉ）ＤＭＰＣ／コレステロールとジェム−フィタニル、または（ｉｉｉ）ＤＭＰＣ／コレステロールとジェム−ペグ３−オレオイルをエタノール中で混合した後、激しく混合することによって調製した。減圧下で穏やかに蒸発させると、薄膜が生成される。次に、薄膜を１０−１５％のペグ４Ｋ−オレオイル溶液を含む温かいＰＢＳで水和し、ソニケーター浴で超音波処理し、プローブソニケーターを使用して脂質エマルジョンを得た。次に、ナノ粒子を、均一なサイジングを確保するために、押出機（Ａｖｅｓｔｉｎ、ＬｉｐｏＦａｓｔ  ＬＦ−５０）を使用してポリカーボネート膜（３ｘ２００ｎｍ、３ｘ１００ｎｍ）を介して処理された。
【０２３３】
インビトロまたはインビボ研究に使用される分散液は、２２０μＭフィルターを用いて滅菌濾過された。ナノ粒子溶液の最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。上記の懸濁液の粒子サイズ分布および形態は、ゼータサイザーおよびクライオＴＥＭ特性評価法を用いて上記の方法を使用して決定された。
【０２３４】
固体脂質粒子：ジェム両親媒性物質の固体脂質粒子を、上記の方法に従った機械的方法を用いて調製（製造）した。
【０２３５】
例１２：形態およびサイズ分布
１２．１  Ｃｒｙｏ−ＴＥＭ：オプションでリン脂質およびコレステロールを含むジェム−両親媒性ナノ粒子のＣｒｙｏ−ＴＥＭ画像は、サンプルプランジングおよびガラス化中に湿度が９０％近く保たれることを可能にする実験室で構築されたガラス化システムを用いて得られた。４−５μｌの試料溶液をレイシーカーボンフィルム（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ、Ｔｈｕｒｉｎｇｏｗａ  Ｑｌｄ４８１７Ａｕｓｔｒａｌｉａ）でコーティングされた３００メッシュの銅ＴＥＭグリッドに塗布し、３０秒間沈降させ、グリッドを１０−１５ｓ秒間手動でブロットし、得られた薄膜を液体エタンに突入することによってガラス化した。格子はＧａｔａｎ６２６−ＤＨのＣｒｙｏホールダーに移る前に液体窒素で貯えられた。イメージングは、ＭｅｇａＶｉｅｗ  ＩＩＩ  ＣＣＤカメラとＡｎａｌｙｓｉｓイメージングソフトウェア（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｓｏｆｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を備えた１２０ｋＶで動作するＦＥＩＴｅｃｎａｉ  １２ＴＥＭを使用して実行された。サンプルは−１８０°Ｃの温度に保たれ、放射線による損傷を最小限に抑えるために標準的な低線量手順が使用された。ペグ４Ｋ−オレオイルで安定化されたＤＭＰＣ／ジェム−フィタニル／コレステロール、およびペグ４Ｋ−オレオイルで安定化されたＤＭＰＣ／ジェム−ペグ３−オレオイル／コレステロールのナノ粒子の代表的なクライオＴＥＭを図５（ａ）および５（ｂ）に示する。それぞれ。ジェム−ペグ３−リノレオイルとジェム−ペグ６−リノレオイルから作られたナノ粒子をそれぞれ図５（ｃ）と５（ｄ）に示す。
【０２３６】
１２．２分散液の特性評価：粒子サイズ分布：ナノ粒子分散液（コロイドドーム）の粒子サイズ分布の決定は、Ｈｅ−Ｎｅレーザー（４ｍｗ、６３３ｎｍ）を備えたゼータサイザー（ｎａｎｏ  ｚｓ、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｅｎｇｌａｎｄ）とアバランシェフォトダイオード検出器。動的光散乱（ＤＬＳ）分析は、２５°Ｃで散乱角θ＝９０°の使い捨てサイジングキュベット内の分散に対して実行された。各測定は少なくとも３回繰り返された。データ計算では、それぞれ０．８８７２ｃｐと１．３３０の粘度とＲＩ値を使用した。サイズ分布は強度によって記録された。
【０２３７】
さまざまなジェム両親媒性物質から製造された代表的なナノ粒子分散液を図６に示す。
【０２３８】
例１３：インビボの結果
ＤＭＰＣ−コレステロールの存在または非存在下でジェムシタビン両親媒性物質から作られたジェムシタビンナノ粒子分散液の細胞毒性は、ＣＦ  Ｐａｃ−１、ＢｘＰＣ３、Ｐａｎｃ−１およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２、Ｍｃｆ７およびＣＡＣＯ２細胞株を含むいくつかの膵臓細胞株におけるジェムシタビン単独と比較して評価された。細胞株は、処理（１００−０．００１μＭ）の様々な濃度でメディアにさらされ、７２時間インキュベートされた。細胞生存率をＭＴＳアッセイを用いて決定し、ＩＣ５０値を導出するために三重に行った。
【０２３９】
処理により、すべての細胞株で細胞生存率が用量依存的に低下した。実験結果は、ジェムシタビン単独がＰＡＮＣ１細胞株において６ｎＭから＞１００のＩＣ５０値を有することを示した。ＣＦＰＡＣ−１細胞株に対するジェムシタビンの７２時間でのＩＣ５０は、６．１−３３ｎＭの範囲である。すべてのジェムシタビン両親媒性ナノ粒子は、細胞に対する毒性が少なかった。理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、この現象の理由は、ジェムシタビンナノ粒子が活性で細胞毒性のある遊離ジェムシタビンに変換するのに必要な時間枠が長く、モノ、ジおよびトリホスフェートへのさらなるリン酸化反応に起因する可能性があると仮定する。一方、遊離ジェムシタビンは輸送タンパク質を介して侵入し、エンドサイトーシスによるナノ粒子の取り込みのメカニズムとは異なる。ジェムシタビンプロドラッグはまた、すでに活性状態にあるジェムシタビンとは対照的に、その細胞毒性効果を発揮するためにジェムシタビンに生物変換する必要がある。
【０２４０】
【表３】
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【０２４１】
実施例１４：ｉｎ−ｓｉｔｕ酵素反応
４．１：反応速度論研究のためのナノ粒子の調製
ジミリストイルホスファチジルコリンとコレステロールの混合物のナノ粒子分散液（ｉ）ジェムシタビン−フィタニル、（ｉｉ）ジェムシタビン−ペグ３−オレオイルまたは（ｉｉｉ）ジェムシタビン−ペグ３−オレオイルアミドジェム  シタビンプロドラッグの５
０μｍ濃度で行われた。Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得られたブタ肝臓からのカルボキシルエステラーゼ溶液をナノ粒子分散液に添加し、各ナノ粒子分散液中の酵素濃度を３３．７単位／ｍＬに設定した。
【０２４２】
１４．２：酵素による生物変換反応
酵素溶液を添加した時間を加水分解反応の時間ゼロとした。この混合物を実験を通して３７℃に維持した。加水分解生成物の濃度は、活性ジェムシタビンに変換されたプロドラッグの検出のためにＬＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＭＳ２を用いて様々な時間間隔で測定した。試料がＬＣカラムに注入された時間を、そのような試料の反応時間とした。ジェムシタビンへの生物変換反応はＭＳ２法によって決定されたのに対し、元の基質の濃度の減少を示す加水分解進行曲線は、時間に対してプロットされた。プロドラッグと活性生物変換ジェムシタビンの両方の標準曲線を標準試料を用いて評価した。
【０２４３】
電子噴霧イオン化（ＥＳＩ）を備えたＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ（Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱシリーズ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）ＬＣ／ＭＳを使用して、ＭＳおよびＭＳ２モードの両方を使用して酵素反応を評価した。プロドラッグの枯渇は負イオン形態によって検出された。プロドラッグのジェムシタビンへの変換は、ＭＳ２によって１１２．１で検出された。反応溶液から取り出した１０μｌの試料を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ８  １５０ｍｍＸ２ｍｍ５ｕＬｕｎａカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に直接注入した。１００％メタノール溶液を０．５ｍｌ／分の流量で移動相として使用した。カラム分離後の試料はＥＳＩ源に関連していた。キャピラリー温度およびイオンスプレー電圧は、それぞれ３５０℃および４．６０に設定した。サンプル温度は、温度制御されたオートサンプラーでサンプルをインキュベートすることによって、全体の測定中に３７℃でよく維持された。データを取得し、Ｘｃａｌｉｂｕｒ  Ｑｕａｎクロマトグラフィーソフトウェアで処理した。
【０２４４】
合成されたプロドラッグの保持時間は５．２６、４．８０、および４．７５分であり、ｍ／ｚはそれぞれジェム−フィタニル、ジェム−ペグ３−オレオイル、およびジェム−ペグ３−オレオイルアミドに対応する５８５．９７、７０２．０７、および７０１．０５であった。
【０２４５】
減少したプロドラッグは、酵素の添加前の面積と比較した、ジェムシタビン−プロドラッグのピーク下の面積のパーセンテージとして計算された。生成されたジェムシタビンの量は、２６３のジェムシタビンと１１２．１のそのＭＳ２に関連する３．４分のピークの下の面積から計算された。
【０２４６】
同等の酵素濃度（３３．７ユニット／ｍＬ）での酵素加水分解反応を、特定のインキュベーション時間でのプロドラッグと元のプロドラッグ濃度の比率としてプロットした（図７ａ）。図７ｂは、比較した時間間隔で生成されたジェムシタビンの量を示している。
【０２４７】
疎水性鎖とペグ３の間にエステル結合を持つジェム−ペグ３−オレオイルは、ジェム−ペグ３とオレイン酸に急速に還元されたが、ジェムシタビンは非常にゆっくりと生物変換された。ジェム−ペグ３−オレオイルアミドは約６時間の低速度で減少したが（図７ａ）、ジェムシタビンを持続的に生成した。ジェム−フィタニルは完全に還元するのに最も遅いプロドラッグであったが、ジェム−ペグ３−オレオイルアミドと同様のレベルでジェムシタビンを生成した。
【０２４８】
実施例１５：インビボ腫瘍阻害
ジェム−フィタニル−ＤＭＰＣ−コレステロールナノ粒子の抗腫瘍効果は、ＣＦＰＡＣ−１細胞株由来異種移植動物モデルで無料ジェムシタビンと比較して３４日にわたって評
価した。すべての治療は、週に２回、４週間ＩＶ注射で投与された。ジェムナノ粒子中に投与されたジェムシタビンの量は４．４５ｍｇ／ｋｇであり、これは診療所で使用される通常の用量よりも一桁小さい。用量はジェムシタビン対照グループと等モルであり，グループ間の抗腫瘍有効性の直接比較を可能にした。注入された総脂質の量は１ｍｇ／用量であった。ジェムシタビンは、ヒトの膵臓癌を治療するために１０００ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内投与される。ここで投与される用量は、ヒトに注入されるジェムシタビンの１３．３５ｍｇ／ｍ２と同等であり、ヒトにおけるジェムシタビンの臨床用量の１．３３％である。他の研究では、インビボ試験でマウスに注入されたジェムシタビンの量は７−１００ｍｇ／ｋｇの範囲であった。
【０２４９】
この実験では３０匹のマウスを使用した。しかしながら、生理食塩水対照グループの１匹のマウスが腫瘍を成長させることができなかったので、データ分析は２９匹のマウスで行われた。したがって、対照グループには９匹のマウス、ジェムシタビングループには１０匹のマウス、ジェム両親媒性リン脂質／コレステロールナノ粒子グループには１０匹のマウスがあった。生の腫瘍体積を経時的にグラフ化し、図８に表示した。ネイティブのジェムシタビンおよびジェム両親媒性リン脂質／コレステロールナノ粒子で治療されたマウスが経時的に腫瘍サイズの減少を示した一方で、経時的な腫瘍サイズの成長。ネイティブのジェムシタビンで治療されたマウスの腫瘍体積は対照腫瘍サイズの５４％であったが、ジェム両親媒性リン脂質／コレステロールナノ粒子で治療されたマウスの腫瘍体積はそれぞれ対照腫瘍サイズの１１％であった。したがって、一般的な傾向は、対照グループの腫瘍のサイズが増加したことを示している。ジェムシタビンで治療された腫瘍はサイズが大きくなったが、対照のＰＢＳグループと比較して遅い速度であり、ジェム両親媒性リン脂質／コレステロールナノ粒子で治療された腫瘍は実質的にサイズが大きくならなかった。
【０２５０】
現在の実験で使用されている比較的低用量を考慮すると、より高用量のジェムシタビンが理想的であるが、制限要因は、マウスに注射された量、ジェムナノ粒子濃度の組み合わせであった。ジェムナノ粒子のストック溶液は５ｍｇ／ｍＬにした。注入量の制限により、３０ｍｇ／ｍＬ以上のストック溶液が必要であるが、１０ｍｇ／ｍＬを超える分散液は安定せず、ジェムナノ粒子が溶液から沈殿した。
【０２５１】
研究の終わりに、腫瘍が採取された。目視検査による一般的な傾向は、平均腫瘍サイズに基づいて、対照グループ＞ジェムシタビン＞ジェムナノ粒子を示唆した。腫瘍の重さを量り、対照マウスの平均体重が最も大きく、次にジェムシタビンで治療したマウス、最後にジェムナノ粒子で治療した腫瘍であると判断した（図９）。従って、一般的な傾向は、対照グループ＞ジェムシタビングループ＞ジェムシタビンナノ粒子（ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール：１８．３８／７０．５２／８．１０ｗ％）の順序で腫瘍重量の増加を示している。対照グループの腫瘍とジェムシタビンナノ粒子の間で統計的有意性が観察された。ペアリングは統計的有意性を示す（ｐ＜０．０５）。
【０２５２】
例１６：ジェムナノ粒子の生体内分布
インビボでの生体内分布を解明するために、マウスに蛍光標識されたジェム−両親媒性リン脂質／コレステロールナノ粒子（ジェム−フィタニル／ＤＭＰＣ／コレステロール／ＤｉＤの蛍光脂質：１８．３８／７０．５２／７．１０／１ｗ％）を注射した。Ｃａｒｅｓｔｒｅａｍ蛍光イメージャーを使用して、４、２４、４８、７２、および９６時間の時間でマウスの画像を作成した（図１０）。結果は、腫瘍内の蛍光ジェムナノ粒子の蓄積を示している。耳と脚に少量の自家蛍光が観察された。ＩｍａｇｅＪを使用して蛍光の強度／面積を定量化し、これらの値をグラフ化した（最大強度は７２時間後に達成され、循環が７２時間継続した後、最終的に腫瘍に蓄積したことを示唆している。この期間の後、蛍光の量は次第に減少した。エクスビボ分布は、ジェムナノ粒子の生物学的運命が主に腫瘍および肝臓にあり、ジェムナノ粒子が効率的に腫瘍に入ることができたことを示した（受
動的標的化）。
【０２５３】
実施例１７：結腸直腸癌異種移植モデルにおけるインビボ腫瘍阻害
別の独立したテストでは、図１１に示すように、ジェム−オレイル−ＤＯＰＣナノ粒子を結腸直腸癌異種移植モデルでテストした。この一連の実験の４つのグループは、５ｍｇ／Ｋｇ／用量の活性薬剤であるプロドラッグナノ粒子であった。プロドラッグとベバシズマブ（アバスチン）なしでナノ粒子を制御する。ＮＰは、マウス腫瘍モデルで通常使用されるジェムシタビンの用量の約１／１０の低用量で使用された。アバスチンは２５ｍｇ／Ｋｇ／用量の高用量で使用された。これは、マウス実験の通常の用量のほぼ１０倍である。結果は、臨床用量の１０分の１の非常に低いレベルのジェムナノ粒子が、２５ｍｇ／Ｋｇアバスチンの高用量の場合よりも有意に低くないレベルまで腫瘍増殖を効率的に阻害したことを示している。一般的な傾向は、対照グループの腫瘍のサイズが増加したのに対し、ジェムシタビンナノ粒子グループは、ジェムシタビンの臨床用量（４ｍｇ／Ｋｇ）の何分の１かで腫瘍の成長を阻害したことを示している。
【０２５４】
実施例１８：Ｍｉａｐａｃａ２膵臓癌異種移植モデルにおけるインビボ腫瘍阻害
別のテストでは、ジェム−ペグ３−オレオイル／ＤＭＰＣ／コレステロールナノ粒子を、図１２に示す高耐性Ｍｉａ  ｐａｃａ２膵臓癌異種移植モデルでテストした。この一連の実験の３つのグループは、次のとおりである。１５ｍｇ／のジェムナノ粒子Ｋｇ／用量の活性ジェムシタビン、１５ｍｇ／Ｋｇ／用量のジェムシタビン薬液および対照ＰＢＳグループ（コントロールＰＢＳグループ）。
【０２５５】
結果は、プロドラッグナノ粒子グループがジェムシタビンよりも効率的に腫瘍増殖を阻害し、ＰＢＳよりも有意に優れていることを示している。この非常に耐性のある膵臓癌異種移植片における腫瘍増殖は完全には阻害されなかったが、増殖速度は、同様の用量の  ジェムシタビンと比較して、プロドラッグナノ粒子で遅くなった。
【０２５６】
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ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｂｒａｉｎ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃ
ｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ，  １９９９，  ３，  ２９９−３０７．
６）  Ｊｉｎ  Ｙ．，  Ｔｏｎｇ  Ｌ，  Ａｉ  Ｐ．，  Ｌｉ  Ｍ．  ａｎｄ  Ｈｏｕ  Ｘ．    Ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ
１．  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｅｈａｖｉｏｕｒ  ｏｆ  ａｃｙｃｌｏｖｉｒ  ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  （ＳＡＮ），  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，  ２００６，  ３０９：  １９９−２０７
７）  Ｂｒａｎｎｏｎ−Ｐｅｐｐａｓ  Ｌ．  Ｂｌａｎｃｈｔｔｅ  Ｊ．Ｏ．，  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｌｅｓ  ａｎｄ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅａｐｙ，  Ａｄｖ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｒｅｖｉｅｗｓ，  ２０１２，  ６４，  ２０６−２１２
８）  Ｍｅｈｎｅｒｔ  Ｗ．，  Ｍａｅｄｅｒ  Ｋ．，  Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ａｄｖ  ｄｒｕｇ  ｓｅｌｉｖｅｒｙ  ｒｅｖ．  ２００１，  ４７２−３）：１６５−９６
９）  Ｊｉｎ，  ｅｔ  ａｌ．  ２００５．  Ｃｏｌｌｏｉｄ．  Ｓｕｒｆ．  Ｂ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ  ４２，  ４５−５１。
【図１】
2021522331.tif 000027
【図２】
2021522331.tif 000028
【図３】
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【図４−１】
2021522331.tif 000030
【図４−２】
2021522331.tif 000031
【図５】
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【図６−１】
2021522331.tif 000033
【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年12月24日(2020.12.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（ＩＩ）のプロドラッグ：
【化１】
2021522331.tif 000041
ここで
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、式（ｄ）による置換基、および式（ｅ）による置換基からなるグループから選択される：
【化２】
2021522331.tif 000042
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓはペグｎであり、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して、１つの付着部位でグループＳ−Ｒに共有結合し、２番目の付着部位でジェムシタビンに共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して３番目の結合部位でジェムシタビンに結合するリンカー基である；および
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、ジェムシタビンへのカルバメート結合を介して４番目の結合部位でジェムシタビンに結合するリンカーグループである。
【請求項２】
一般式Ｉのプロドラッグ：
【化３】
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ここで、Ａは生物学的活性エージェントである；
Ｙは生物学的活性エージェントとＸの間の切断可能な結合である；および
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、および式（ｄ）による置換基からなるグループから選択される：
【化４】
2021522331.tif 000044
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓは（ポリエチレングリコール）ｎであり、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、１つの結合部位で１つのＳ−Ｒグループに、２番目の付着部位でＡに、生体に不安定な結合ＹからＡを介して共有結合しているリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した結合部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がる）および３番目の結合部位でＡに、生体に不安定な結合ＹからＡを介して共有結合しているリンカー基である；および
Ｌ３は、３つの独立した結合部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体不安定性結合Ｙを介して４番目の結合部位でＡに共有結合するリンカーグループである。
【請求項３】
Ｙが、アミド、カルバメート、イミド、スルホンアミド、およびアミンからなるグループから選択される、請求項２に記載のプロドラッグ。
【請求項４】
Ｙがカルバメートである、請求項３に記載のプロドラッグ。
【請求項５】
Ｒが、ミリスチル、ミリストイル、ミリストイルアミド、パルミチル、パルミトイル、パルミトイルアミド、ステアリル、ステアロイル、ステアロイルアミド、オレイル、オレオイル、オレオイルアミド、リノレイル、リノレオイル、リノレオイルアミド、リノレニル、リノレノイル、リノレノイルアミド、アラキドニル、アラキドノイル、アラキドノイルアミド、フィタニル、フィタノイル、フィタノイルアミド、ヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネソイル、およびヘキサヒドロファルネソイルアミドからなるグループから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項６】
Ｒが、オレイル、リノレイル、リノレノイルおよびフィタニルからなるグループから選択される、請求項５に記載のプロドラッグ。
【請求項７】
Ｘが式（ａ）による置換基である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項８】
Ｓがペグ３−６である、請求項７に記載のプロドラッグ。
【請求項９】
Ｒが、オレオイル、オレオイルアミド、リノレオイル、リノレオイルアミド、リノレノイル、リノレノイルアミド、フィタノイル、およびフィタノイルアミドからなるグループから選択される、請求項７または８に記載のプロドラッグ。
【請求項１０】
Ｘが式（ｅ）による置換基である、請求項１、５または６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１１】
Ｒが、オレイル、リノレイル、リノレノイルおよびフィタニルからなるグループから選択される、請求項１０に記載のプロドラッグ。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のプロドラッグから形成される自己組織化構造であって、前記構造が、ラメラ相、双連続キュービック相、六角形およびスポンジ相からなるグループから選択される生理学的条件下で中間相を示す、自己組織化構造。
【請求項１３】
示される中間相がラメラ相および逆相である、請求項１２に記載の自己組織化構造。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のプロドラッグから形成される自己組織化構造であって、前記構造が固体脂質粒子である、自己組織化構造。
【請求項１５】
リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、プロドラッグ両親媒性物質およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される成分をさらに含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の自己組織化構造。
【請求項１６】
生物学的活性化合物または生物学的活性エージェントＡに代謝されることができる薬剤の放出を調節する方法であって、Ａを少なくとも１つのテール成分Ｘに共有結合させて、生理学的条件下で自己組織化構造に自己組織化できる両親媒性物質を形成することを含み、前記両親媒性物質が生物学的活性な形態でＡを放出するためにインビボで切断可能であり、ここで：
Ａは、ジェムシタビンである；
Ｘは、式（ａ）による置換基、式（ｂ）による置換基、式（ｃ）による置換基、式（ｄ）による置換基、および式（ｅ）による置換基からなるグループから選択される：
【化５】
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ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される；
Ｓはペグｎであり、ｎ＝１−１０である；
Ｌ１は、１つの付着部位でグループＳ−Ｒに共有結合し、２番目の付着部位で治療的活性エージェントＡに共有結合し、Ａに生体に不安定な結合を示すリンカー基である；
Ｌ２は、２つの独立した付着部位で２つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体に不安定な結合で３番目の付着部位で治療的活性エージェントＡに結合するリンカー基である；および
Ｌ３は、３つの独立した付着部位で３つのＳ−Ｒグループ（同一または異なる場合がある）に共有結合し、Ａへの生体に不安定な結合で４番目の付着部位で治療的活性エージェントＡに結合するリンカー基である、方法。
【請求項１７】
前記両親媒性物質が、化合物の生物学的活性な形態の形成を促進する酵素の酵素基質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の自己組織化構造を含む、人の癌の治療または予防に使用される薬剤。
【国際調査報告】
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