(57)【要約】本発明は、ブロック・コポリマ（ＢＣＰ）に関し、特に、疎水性カーゴを送達するための、自己集合してナノ粒子になることができるブロック・コポリマを開示する。ＢＣＰは、チオエーテル官能基を含有する疎水性ブロックを含み、当該チオエーテル官能基は酸化されて、ブロックの溶解性を疎水性から親水性に変換し、それにより、ナノ粒子の疎水性カーゴが放出される。【選択図】図１
2021505755.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブロック・コポリマであって、
親水性ブロック、および
少なくとも１つのチオエーテル官能基を含有する疎水性ブロック
を含むブロック・コポリマ。
【請求項２】
前記疎水性ブロックが、カルボン酸官能基をさらに含有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項３】
前記親水性ブロックが、ポリ（エチレンオキシド）鎖を含む、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項４】
前記疎水性ブロックが、ポリカーボネート鎖を含む、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項５】
自己集合して、前記疎水性ブロックがナノ粒子のコアを形成し、かつ前記親水性ブロックが前記ナノ粒子のシェルを形成する、前記ナノ粒子になることができる、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項６】
式Ｉ：
【化１】
2021505755.tif 000018
（式中、ｍは１１４であり、ｘは５である）の構造を有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項７】
式Ｉ：
【化２】
2021505755.tif 000019
（式中、ｍは２２８であり、ｘは１０である）の構造を有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項８】
式ＩＩ：
【化３】
2021505755.tif 000020
（式中、ｎは１１４であり、ｙは１０である）の構造を有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項９】
式ＩＩ：
【化４】
2021505755.tif 000021
（式中、ｎは２２８であり、ｙは１０である）の構造を有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項１０】
式ＩＩＩ：
【化５】
2021505755.tif 000022
（式中、ｐは１１４であり、ｚは５である）の構造を有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項１１】
式ＩＩＩ：
【化６】
2021505755.tif 000023
（式中、ｐは２２８であり、ｚは５である）の構造を有する、請求項１に記載のブロック・コポリマ。
【請求項１２】
ブロック・コポリマを形成する方法であって、
ポリ（エチレンオキシド）親水性ブロック、および、少なくとも１つのアリル官能基またはプロパルギル官能基を含むポリカーボネート疎水性ブロックを含む両親媒性ジブロック・コポリマを、溶媒に溶解させることと；
前記ポリマ溶液を紫外線照射に曝露することと；
前記ポリマ溶液に、３−メルカプトプロピオン酸または１−（２−メルカプトエチル）−３−フェニル尿素のうち１つを添加することと；
前記ポリマ溶液から、酸官能化されたジブロック・ポリマを沈殿させることと
を含む、方法。
【請求項１３】
前記両親媒性ジブロック・コポリマがＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＡＣ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
３−メルカプトプロピオン酸が前記ポリマ溶液に添加される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
１−（２−メルカプトエチル）−３−フェニル尿素が前記ポリマ溶液に添加される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記両親媒性ジブロック・コポリマがＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＰＣ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
３−メルカプトプロピオン酸が前記ポリマ溶液に添加される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ミセル粒子を形成する方法であって、
治療剤を第１の溶媒に溶解させることと；
親水性ブロック、および、チオエーテル官能基からなる群から選択される少なくとも１つの官能基を含有する疎水性ブロックを含む少なくとも１つのブロック・コポリマを、第２の溶媒に溶解させることと；
前記治療剤の溶液と前記ブロック・コポリマの溶液とを混合することと；
前記混合溶液を水に添加することと
を含む、方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つのブロック・コポリマが、
式Ｉ：
【化７】
2021505755.tif 000024
（式中、ｍは１１４であり、ｘは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式Ｉ：
【化８】
2021505755.tif 000025
（式中、ｍは２２８であり、ｘは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化９】
2021505755.tif 000026
（式中、ｎは１１４であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化１０】
2021505755.tif 000027
（式中、ｎは２２８であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩＩ：
【化１１】
2021505755.tif 000028
（式中、ｐは１１４であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；および
式ＩＩＩ：
【化１２】
2021505755.tif 000029
（式中、ｐは２２８であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ
からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのブロック・コポリマが、
ｎ＝１１４およびｙ＝１０である式ＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝１１４およびｘ＝５である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物；
ｐ＝１１４およびｚ＝５である式ＩＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝１１４およびｘ＝５である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物；
ｎ＝２２８およびｙ＝１０である式ＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝２２８およびｘ＝１０である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物；および
ｐ＝２２８およびｚ＝５である式ＩＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝２２８およびｘ＝１０である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物
からなる群から選択されるブロック・コポリマの混合物を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
親水性シェル、および
前記親水性シェルの中に疎水性コア
を含むミセル粒子であって、
前記親水性シェルおよび前記疎水性コアが、
式Ｉ：
【化１３】
2021505755.tif 000030
（式中、ｍは１１４であり、ｘは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式Ｉ：
【化１４】
2021505755.tif 000031
（式中、ｍは２２８であり、ｘは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化１５】
2021505755.tif 000032
（式中、ｎは１１４であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化１６】
2021505755.tif 000033
（式中、ｎは２２８であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩＩ：
【化１７】
2021505755.tif 000034
（式中、ｐは１１４であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；および
式ＩＩＩ：
【化１８】
2021505755.tif 000035
（式中、ｐは２２８であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ
からなる群から選択される少なくとも１つのブロック・コポリマから形成される、
ミセル粒子。
【請求項２２】
前記疎水性コアの中に非共有結合した疎水性治療剤をさらに含む、請求項２１に記載のミセル粒子。
【請求項２３】
前記疎水性治療剤がドキソルビシンである、請求項２２に記載のミセル粒子。
【請求項２４】
前記親水性シェルおよび前記疎水性コアが、
ｎ＝１１４およびｙ＝１０である式ＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝１１４およびｘ＝５である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物；
ｐ＝１１４およびｚ＝５である式ＩＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝１１４およびｘ＝５である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物；
ｎ＝２２８およびｙ＝１０である式ＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝２２８およびｘ＝１０である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物；および
ｐ＝２２８およびｚ＝５である式ＩＩＩのブロック・コポリマと、ｍ＝２２８およびｘ＝１０である式Ｉのブロック・コポリマとの、それぞれ約１：０．５の比での混合物
からなる群から選択されるブロック・コポリマの混合物から形成される、請求項２１に記載のミセル粒子。
【請求項２５】
治療剤での処置に適している疾患または障害の処置を、そのような処置を必要とする個体において行う方法であって、
疎水性コア、
前記疎水性コアを包囲する親水性シェル、および
前記疎水性コア中に含有されるある量の治療剤
を含むミセル粒子を前記個体に体内投与することを含み、
前記親水性シェルおよび前記疎水性コアが、
式Ｉ：
【化１９】
2021505755.tif 000036
（式中、ｍは１１４であり、ｘは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式Ｉ：
【化２０】
2021505755.tif 000037
（式中、ｍは２２８であり、ｘは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化２１】
2021505755.tif 000038
（式中、ｎは１１４であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化２２】
2021505755.tif 000039
（式中、ｎは２２８であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩＩ：
【化２３】
2021505755.tif 000040
（式中、ｐは１１４であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；および
式ＩＩＩ：
【化２４】
2021505755.tif 000041
（式中、ｐは２２８であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ
からなる群から選択される少なくとも１つのブロック・コポリマから形成される、
方法。
【請求項２６】
医薬としての使用のための、請求項２２または２３に記載のミセル粒子。
【請求項２７】
がんの治療における使用のための、請求項２３に記載のミセル粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、ブロック・コポリマ（ＢＣＰ）に関し、特に、疎水性カーゴを送達するため、ならびに酸性の、ＲＯＳを豊富に含む環境（例えば、腫瘍およびがん細胞の酸性のエンドリソソーム・コンパートメント）において薬物放出を誘発するために、自己集合してナノ粒子になることができるブロック・コポリマ、ならびにそのようなブロック・コポリマおよびナノ粒子の製造および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ブロック・コポリマ（ＢＣＰ）は、共有結合している２種以上のホモポリマ・サブユニットを含み、各ホモポリマ・サブユニットは重合したモノマで構成される。２種のホモポリマ・サブユニットで構成されるブロック・コポリマはジブロック・コポリマと呼ばれ、３種のホモポリマ・サブユニットを有するブロック・コポリマはトリブロック・コポリマなどと呼ばれる。いずれのＢＣＰにおいても、ホモポリマ・ユニットの接合部は、場合により、接合ブロック、非反復サブユニットを含むことがある。
【０００３】
当業者には理解されるであろうが、ＢＣＰは、例えば、原子移動フリーラジカル重合（ＡＴＲＰ）、可逆的付加・開裂連鎖移動（ＲＡＦＴ）、および開環メタセシス重合（ＲＯＭＰ）を含む多くの技術を使用して形成することができる。
【０００４】
ＢＣＰは、多くの状況において使用されているが、最近着目されているのは、薬物を含む他の分子のカプセル化および送達におけるその使用である。そのような方法において使用されるとき、両親媒性のＢＣＰが作製されてミセルを形成し、送達される分子がミセルの中に含有される。
【０００５】
ポリマをベースとするミセルは、リポソームなどの他のナノ担体に勝るいくつかの利点を提供する。これらの利点の中には、そのサイズが小さいこと（１０〜１００ｎｍ）、多分散指数が適度に低いこと、および疎水性コアと親水性シェルを組み合わせることができることがある。疎水性コアは、疎水性薬物を含む疎水性カーゴを充填するのを容易する一方、親水性シェルは、水性環境中で安定性を向上させる。
【０００６】
体組織および細胞成分は、様々なｐＨ値を有する。例えば、血液および正常細胞外マトリックスはｐＨ約７．４を有するが、腫瘍の細胞外環境のｐＨは約６．５であり、これは細胞間環境におけるより低い酸素供給に起因し得る。エンドソームおよびリソソームの中のｐＨはさらに低い（５．０〜５．５）。
【０００７】
ポリマをベースとするいくつかのミセルは、このｐＨの違いに基づいて、腫瘍組織および腫瘍細胞を標的にするように構築されてきた。しかしながら、これらは、標的特異性が不十分であること、および標的部位での薬物放出が不活発であることを含めて、様々な欠陥に悩まされてきた。加えて、そのようなミセルは、ほとんどの用途において有効となるためには、相対的に狭いサイズ範囲内になければならないことが発見されている。例えば、約１００ｎｍよりも大きい粒子は、ほとんどの腫瘍の広範囲な脈管構造を効率的に透過しないことが分かっている。同時に、サイズが約１０ｎｍ未満のミセルは腎閾値の下であり、腫瘍部位から急速に流れ出て、排泄される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本開示の態様は、ＢＣＰならびにその製造および使用の方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第１の態様は、親水性ブロック、および、少なくとも１つのチオエーテル官能基を含有する疎水性ブロックを含むブロック・コポリマを提供する。
【００１０】
第２の態様は、ブロック・コポリマを形成する方法であって、ポリ（エチレンオキシド）親水性ブロック、および少なくとも１つのアリル官能基またはプロパルギル官能基を含むポリカーボネート疎水性ブロックを含む両親媒性ジブロック・コポリマを、溶媒に溶解させることと；ポリマ溶液を紫外線照射に曝露することと；ポリマ溶液に、ある量の３−メルカプトプロピオン酸またはある量の１−（２−メルカプトエチル）−３−フェニル尿素のうち１つを添加することと；ポリマ溶液から、酸官能化されたジブロック・ポリマを沈殿させることとを含む、方法を提供する。
【００１１】
第３の態様は、ミセル粒子を形成する方法であって、治療剤を第１の溶媒に溶解させることと；親水性ブロック、および、チオエーテル官能基からなる群から選択される少なくとも１つの官能基を含有する疎水性ブロックを含む少なくとも１つのブロック・コポリマを、第２の溶媒に溶解させることと；治療剤溶液とブロック・コポリマ溶液とを混合することと；混合溶液を水に添加することとを含む、方法を提供する。
【００１２】
第４の態様は、親水性シェル、および親水性シェルの中に疎水性コアを含むミセル粒子であって、親水性シェルおよび疎水性コアが：
式Ｉ：
【化１】
2021505755.tif 000003
（式中、ｍは１１４であり、ｘは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式Ｉ：
【化２】
2021505755.tif 000004
（式中、ｍは２２８であり、ｘは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化３】
2021505755.tif 000005
（式中、ｎは１１４であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化４】
2021505755.tif 000006
（式中、ｎは２２８であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩＩ：
【化５】
2021505755.tif 000007
（式中、ｐは１１４であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；および
式ＩＩＩ：
【化６】
2021505755.tif 000008
（式中、ｐは２２８であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ
からなる群から選択される少なくとも１つのブロック・コポリマから形成される、
ミセル粒子を提供する。
【００１３】
第５の態様は、そのような処置を必要とする個体において、治療剤での処置に適している疾患または障害を処置する方法であって、疎水性コア、疎水性コアを包囲する親水性シェル、および疎水性コアの中に含有されるある量の治療剤を含むミセル粒子を個体に体内投与することを含み、親水性シェルおよび疎水性コアが：
式Ｉ：
【化７】
2021505755.tif 000009
（式中、ｍは１１４であり、ｘは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式Ｉ：
【化８】
2021505755.tif 000010
（式中、ｍは２２８であり、ｘは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化９】
2021505755.tif 000011
（式中、ｎは１１４であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩ：
【化１０】
2021505755.tif 000012
（式中、ｎは２２８であり、ｙは１０である）の構造を有するブロック・コポリマ；
式ＩＩＩ：
【化１１】
2021505755.tif 000013
（式中、ｐは１１４であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ；および
式ＩＩＩ：
【化１２】
2021505755.tif 000014
（式中、ｐは２２８であり、ｚは５である）の構造を有するブロック・コポリマ
からなる群から選択される少なくとも１つのブロック・コポリマから形成される、
方法を提供する。
【００１４】
本発明のこれらの特徴および他の特徴は、添付の図面と併せて考慮されると、以下の本発明の様々な態様の詳細な説明から、より容易に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の様々な実施形態によるＢＣＰの製造のための化学反応スキームの概略図を示す図である。
【図２】Ｈ２Ｏ２またはＮａＯＣｌでの処理の前後の、本発明による２種のＢＣＰの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】本発明のＢＣＰの過酸化水素での処理に応答したミセルの安定性のプロットおよび流体力学的サイズ（挿入図）を示す図である。
【図４】本発明の別のＢＣＰの過酸化水素での処理に応答したミセルのサイズのプロットを示す図である。
【図５】５Ａ−Ｄは、本発明の２種のＢＣＰを使用して、ドキソルビシンを充填したミセルのサイズおよびサイズ分布に対する過酸化水素の効果のプロットを示す図である。
【図６】本発明の４種のＢＣＰを使用して形成したミセルからのドキソルビシンの放出に対するｐＨおよび過酸化水素の効果のプロットを示す図である。
【図７】本発明の様々な実施形態による混合ミセルによって送達されたドキソルビシンと比較した際の遊離ドキソルビシンのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性のプロットを示す図である。
【図８】本発明の様々な実施形態による非充填ミセルのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性効果のグラフを示す図である。
【図９】本発明の実施形態による、マウスにおけるドキソルビシンのｉｎ  ｖｉｖｏ送達のＸ線画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
図面は必ずしも縮尺通りではない。図面は単に概略図であり、本発明の特定のパラメータを描くものではない。図面は本発明の典型的な実施形態のみを示すものであり、したがって、本発明の範囲を限定するものと考えられるべきではない。図面において、同じ番号付けは同じ要素を表す。
【００１７】
出願人は、自己集合してナノ粒子になることができる新規なブロック・コポリマ（ＢＣＰ）を開発した。これらのナノ粒子は、疎水性カーゴをカプセル化し、輸送することができる疎水性コア、ならびにナノ粒子の投与後の循環の延長、ならびに疎水性カーゴの標的とする崩壊および放出を可能にする親水性のコロナまたはシェルとを有する。
【００１８】
より具体的には、出願人のＢＣＰは、酸化を受けやすいチオエーテル官能基を含有する疎水性ブロックを含む。いくつかの実施形態によれば、疎水性ブロックは、カルボン酸官能基をさらに含んでもよい。これらの官能基が酸化されると、ブロックの溶解性が疎水性から親水性に変換され、それにより、ナノ粒子の疎水性カーゴが放出される。
【００１９】
本発明のＢＣＰから形成されるナノ粒子は、薬物送達に適用するのに有用なナノサイズのミセル粒子である。治療剤（例えば、薬物化合物）の存在下でこれらのナノ粒子が自己集合すると、非共有結合相互作用（例えば、水素結合、疎水性相互作用）によって結合したＢＣＰおよび治療剤を含む「充填粒子」が形成される。
【００２０】
本明細書で使用する場合、自己集合したＢＣＰは、治療剤の「担体」と呼ぶことができ、一方、治療剤自体は「カーゴ」と呼ばれる。充填粒子は、カーゴを標的細胞に送達し、細胞膜を通過し、次いで、ｐＨの変化に応答して（例えば、より酸性度の高いエンドソーム環境またはより酸性度の高い腫瘍組織との遭遇に応答して）またはＢＣＰの疎水性ブロック中に含まれているチオエーテル官能基を酸化させることができる細胞内のもしくは細胞外の酸化剤と反応することによって、あるいはその両方によって、細胞の内部または腫瘍組織の中にカーゴを放出することができる。
【００２１】
例えば、出願人は、本発明のＢＣＰを使用して、腫瘍状組織の血管透過性・滞留性亢進効果（enhanced permeability and retention effect：ＥＰＲ）を利用し、細胞表面にリガンドの受容体を必要とせずに腫瘍部位に治療剤を送達することができることを立証した。ＥＰＲ効果は、腫瘍状組織の高い血管密度および広汎な血管外漏出に関連し、高分子（macromolecules）に対するがん性の血管の透過性が亢進され、一方では間質腔からの高分子の排出能も損なわれる。その結果、腫瘍組織中に高分子が滞留する。
【００２２】
しかしながら、ＥＰＲ効果の利用には、高分子が約１０ｎｍよりも大きいが、約１００ｎｍよりはあまり大きくないことが必要である。より小さい粒子は腫瘍部位から急速に流れ出て、排泄される。より大きい粒子は腫瘍の脈管構造を透過する際に非効率的である。
【００２３】
例えば、本明細書に記載のＢＣＰの使用によって、治療剤を腫瘍部位に直接送達できることは、いくつかの重要な利点を提供する。これらには、薬剤の生体内分布を制御できることが含まれ、それにより、有害効果を低減し、かつ標的細胞への薬剤の曝露を増加し、これにより、薬剤の半減期が相対的に短い場合があってもそれを補うことができる。
【００２４】
本発明のＢＣＰが、治療剤を含有するミセルを形成し、維持し、次いで標的とする位置でその薬剤を選択的に放出できることが、上記のような利点を提供する。
【００２５】
ブロック・コポリマの合成およびミセルの形成
この、治療剤の選択的放出を実現するために、本発明のＢＣＰは、疎水性ブロック中に易酸化性のスルフィド基、特にチオエーテル基を用いて設計される。一部の実施形態では、疎水性ブロックは、１つまたは複数のカルボン酸官能基をさらに含んでもよい。
【００２６】
本発明によるＢＣＰは、有機触媒による開環重合（ＯＲＯＰ）法を使用して調製することができ、この方法は、他の方法では一般的な毒性金属の使用をすることなく、重合度（ＤＰ）を高度に制御して官能性ポリカーボネートを合成することを可能にする。非共有結合相互作用（例えば、水素結合、イオン性相互作用およびπ−π相互作用）を形成する官能基を組み入れることで、腫瘍の脈管構造のＥＰＲ効果を利用するために十分小さく、十分安定したミセル担体を生成することが可能になる。
【００２７】
本明細書に記載のＢＣＰは、生分解性または生体適合性あるいはその両方とすることができる。「生分解性」という用語は、米国材料試験協会（American Society for Testing and Materials：ＡＳＴＭ）により、生物学的活性、特に酵素作用によって引き起こされる分解を受け、材料の化学構造に大きな変化が生じるものと定義されている。本明細書で使用する場合、ＡＳＴＭ  Ｄ６４００に従って、材料が１８０日以内に６０％生分解される場合、その材料は「生分解性」である。材料が、酵素により触媒される反応によって分解（例えば、解重合）できる場合、その材料は「酵素的に生分解性」である。
【００２８】
本明細書に記載の「生体適合性」材料は、特定の用途において、適切な宿主応答を伴って性能を発揮することができる。
【００２９】
図１は、本発明の実施形態によるＢＣＰの合成の一般的な化学反応スキームを示す。ここで、アリル官能基またはプロパルギル官能基、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を有するポリカーボネートブロックに、二価の連結基（−Ｏ−）によって連結されているポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＧ）ブロックを有する両親媒性ジブロック・コポリマを使用した。図１に示された反応の詳細を以下に提示する。
【００３０】
両親媒性ジブロック・コポリマをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、触媒量のラジカル開始剤２，２’−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン、および３〜５当量の３−メルカプトプロピオン酸または１−（２−メルカプトエチル）−３−フェニル尿素とともに、２５４ｎｍで２時間ＵＶ照射に供した。次いで、この溶液を冷エーテル中で再沈殿させて、酸官能化されたＢＣＰを生成した。
【実施例１】
【００３１】
酸官能化および尿素官能化されたＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＡＣ）
１００ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）の５−メチル−５−アリルオキシカルボニル−１，３−ジオキサン−２−オン（ＭＴＣ−ＭＡＣ）を、乾燥ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解した１−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）−フェニル）−３−シクロヘキシル−２−チオ尿素（ＴＵ）触媒（９．２５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を含有する反応バイアルに添加した。混合物に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（２５０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、Ｍｎ  １０，０００ｇ／ｍｏｌ、ＰＤＩ  １．０４）を入れ、その後、１，８−ジアザビシクロ−［５，４，０］−ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）（３．８μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）を添加し、室温でおよそ４５分間撹拌した。
【００３２】
反応の最後に、過剰の安息香酸（５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加して、触媒をクエンチした。次いで、粗製ポリマを冷エーテル中に２回沈殿させ、上清をデカントして、緩い白色粉末状固体を収率８９％で得た。
【００３３】
酸官能化
２００ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌアルケン）のＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＡＣ）ポリマを乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１ｍＬ）に溶解し、その後、３−メルカプトプロピオン酸（５７μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）および２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（２．８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を添加し、混合した。
【００３４】
混合物を２５４ｎｍで２時間照射し、次いで、冷エーテル中で２回沈殿させ、上清をデカントして、粘着性の白色粉末状固体を収率９３％で得た。
【００３５】
尿素官能化
１−（２−メルカプトエチル）−３−フェニル尿素（２１６ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦに溶解し、その後、ＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＡＣ）（２００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌアルケン）および２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（２．８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を添加し、混合した。
【００３６】
混合物を２５４ｎｍで２時間照射し、次いで、カラムクロマトグラフィにより、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（Ｒ）ＬＨ−２０カラムで、メタノールを溶離液として用いて精製し、純粋な白色結晶性固体を収率８２％で得た。
【実施例２】
【００３７】
酸官能化されたＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＰＣ）
９９ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）の５−メチル−５−プロパルギルオキシカルボニル−１，３−ジオキサン−２−オン（ＭＴＣ−ＭＰＣ）を、乾燥ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解したＴＵ触媒（９．２５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を含有する反応バイアルに添加した。混合物にＰＥＧ（５００ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、Ｍｎ  １０，０００ｇ／ｍｏｌ、ＰＤＩ  １．０４）を入れ、その後、ＤＢＵ（３．８μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）を添加し、室温でおよそ４５分間撹拌した。
【００３８】
反応の最後に、過剰の安息香酸（５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加して、触媒をクエンチした。次いで、粗製ポリマを冷エーテル中に２回沈殿させ、上清をデカントして、白色粉末状固体を収率８９％で得た。
【００３９】
酸官能化
１９８ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌアルキン）のＰＥＧ−Ｐ（ＭＴＣ−ＭＰＣ）を無水ＤＭＦに溶解し、その後、３−メルカプトプロピオン酸（１１４μＬ、１．３ｍｍｏｌ）および２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（１．７ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を添加し、混合した。
【００４０】
混合物を２５４ｎｍで２時間照射し、冷エーテル中で２回沈殿させ、上清をデカントして、粘着性の白色粉末状固体を収率９３％で得た。
【００４１】
これらのＢＣＰは、本明細書および図１において、ＰＥＧブロックおよびポリカーボネートブロックの長さに応じて、５Ｕ５、１０Ｕ１０、５Ｓ１０、１０Ｓ１０、５Ｄ５および１０Ｄ５と命名されているが、これらはそれぞれ、酸性環境または高度な酸化雰囲気において酸化に供されるスルフィド基（図１において円で囲まれている）を含む。これらの基が酸化されると、ポリカーボネートブロックが疎水性から親水性に変わり、それにより、疎水性カーゴがミセルコアから放出される。
【００４２】
いくつかの、ＰＥＧ／酸官能化および尿素官能化されたチオエーテルを含有するポリカーボネートのジブロック・コポリマを図１の合成スキームおよび上記の実施例に従って合成した。これらのポリマを使用して、疎水性コアおよび親水性シェルを有する混合ミセルを形成した。疎水性治療剤の存在下で自己集合してそのようなミセルになると、結果として薬剤がコアの中に充填され、標的部位まで薬剤を保護しながら輸送することが可能になる。
【００４３】
疎水性ブロックの長さは、５カーボネートモノマから１５カーボネートモノマまで、様々とした。これにより、自己集合を促進するのには十分に長いが、水中で沈殿を起こさない疎水性ブロックがもたらされる。当業者には理解されるように、用いられる重合度（ＤＰ）は、例えば、送達される治療剤のサイズおよび種類に依存する。
【００４４】
本明細書に記載の実施例において、用いられる治療剤はドキソルビシン（ＤＯＸ）である。しかしながら、当業者には理解されるように、他の薬剤を用いてもよい。ＤＯＸの使用は単に例示のためであり、本発明の範囲を限定するものと考えられるべきではない。
【００４５】
本明細書に記載の実施例において、ＤＯＸを充填したミセルの調製は、概して、下記の手順に従った。
【００４６】
ＤＯＸを充填したミセルの調製
ＤＯＸ（５ｍｇ）を３モル過剰のトリエチルアミンで中和し、１．５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に溶解した。１０ｍｇのポリマを０．５ｍＬのＤＭＡｃに溶解し、ＤＯＸ溶液と、ボルテックスすることにより混合し、その後、ＤＯＸとポリマとの溶液を１０ｍＬの脱イオン水に滴下添加しながら、プローブベースの超音波処理器を使用して１３０Ｗで２分間超音波処理した。
【００４７】
次いで、溶液を、分画分子量（ＭＷＣＯ）が１０００Ｄａの透析袋を使用して、１Ｌの脱イオン水に対して透析し、３時間時点、６時間時点、および翌日にもう１度水を交換した。透析袋の中の溶液を４８時間時点で回収し、２日間凍結乾燥した。すべての実験を３連で実施した。
【００４８】
ＤＯＸを充填した既知量のミセルを１ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。ＵＶ−Ｖｉｓ分光計を４８０ｎｍで使用して溶液の吸光度を測定して、ＤＯＸ含有量を決定した。標準線を１〜１００ｍｇ／Ｌの範囲で構築し、ＤＭＳＯ中のＤＯＸ濃度に対して直線的にプロットした４８０ｎｍでの吸光度のｒ２値は、少なくとも０．９９であった。ＤＯＸの充填レベルを下の式１に従って決定した。
【００４９】
【数１】
2021505755.tif 000015
【００５０】
下の表１および２は、本発明の実施形態に従って調製した種々のＢＣＰ（表１）の性質を示し、次いでこれらを使用してＤＯＸを充填したミセル（表１）またはＤＯＸを充填した混合ミセル（表２）を形成した。酸官能化されたＢＣＰ中の酸基は、ＤＯＸの充填を容易にするために導入した。尿素官能化されたＢＣＰ中のベンジル環は、π−πスタッキングによってＤＯＸの安定な充填に役立ち、より堅い疎水性ミセルコアをもたらす。尿素基は、カルボン酸基との、または他の尿素基との水素結合により、ミセルを安定化させる。
【００５１】
【表１】
2021505755.tif 000016
【００５２】
表１に示されるように、酸官能化されたミセルは、ＤＯＸ充填の容量が大きかった。水中で小さいミセルを形成するにもかかわらず、酸官能化されたポリマは、ＤＯＸ充填後に凝集体を形成するため、２００ｎｍに近いかまたはそれよりも大きいナノ粒子になった。これは、ＥＰＲ効果を利用してｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍を標的とするのに望ましいサイズよりも大きく、このことは、長い疎水性アルキル鎖は自己集合することができるが、ＤＯＸのカプセル化はあまり整然としていなかったことを示唆している。
【００５３】
【表２】
2021505755.tif 000017
【００５４】
表２に記載している混合ミセルは、サイズが１００ｎｍ未満で、単峰形サイズ分布を有し、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用するのにより望ましいものになった。ＤＯＸを充填する容量が２０〜２７ｗｔ％であることは、かなり良好であり、５ＫＰＥＧ混合ミセルの方が１０ＫＰＥＧ混合ミセルよりも（すなわち、ＭＭ５Ｓ対ＭＭ１０Ｓ、ＭＭ５Ｄ対ＭＭ１０Ｄ）多かった。後者の所見については、５ＫＰＥＧのＢＣＰは疎水性ブロックが相対的により多いことに起因し得る。
【００５５】
ＢＣＰのカルボン酸基がＤＯＸの第一級アミン基と静電相互作用を形成したという事実も注目に値する。酸基の数を固定すると、類似の薬物充填レベルが得られた（すなわち、ＭＭ５Ｓ対ＭＭ５Ｄ、ＭＭ１０Ｓ対ＭＭ１０Ｄ）。
【００５６】
表２の、ＤＯＸを充填して凍結乾燥した混合ミセルは、抗凍結剤を使用しなくても水中に容易に分散した。ミセルの粒径は、凍結乾燥前のサイズに近似していた。
【００５７】
ミセルは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切となるために、血清の存在下で安定していなければならない。血清タンパク質結合により、免疫系による認識、オプソニン化、および細網内皮系による除去が起こり得る。表２のＤＯＸを充填したミセルのサイズは１０％血清とともに４８時間インキュベートした後でも大きく変化はしなかった。
【００５８】
加えて、沈殿も凝集も観測されなかった。これは、ミセルのＰＥＧコロナに起因し得、１０００コイルの分子量を超えるＰＥＧは、ランダムにかつ一時的に水分子を捕捉する。この捕捉により、血清タンパク質が接近するのを防ぐ、排除用体積が作り出される。
【００５９】
活性酸素種（ＲＯＳ）による酸化
スルフィドは、強酸化剤の存在下で、スルホキシドおよびスルホンに酸化される。図２は、１０Ｓ５ポリマ（上のパネル）および１０Ｕ１０ポリマ（下のパネル）（１５ｍｇを水に溶解）の、Ｈ２Ｏ２またはＮａＯＣｌでの処理（３７℃で４時間）の前後の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。シグナル中に観測された低磁場シフトは、オリジナルのスルフィド基に隣接したプロトンを表す。図２は、濃度依存的な酸化およびモル当量を示す。
【００６０】
図２の上のパネルに示されるように、１０Ｓ５ポリマにおいて、１０当量の１０ｍＭ  Ｈ２Ｏ２で処理すると、硫黄に隣接したプロトンの一部のみが低磁場シフトし、これは、スルフィド基が部分的にしか酸化されなかったことを示唆している。過酸化水素濃度を１００ｍＭとした場合、スルフィド基は十分に酸化された。
【００６１】
それと比較して、図２の下のパネルに示されるように、１０Ｕ１０ポリマを１当量の１３．３ｍＭ（１０００ｐｐｍ）ＮａＯＣｌでインキュベートした場合、硫黄に隣接したプロトンが低磁場シフトした程度はずっと大きかった。これは、過酸化水素がより高い活性化エネルギを必要とし、その結果、酸化速度が遅くなることが原因であり得る。
【００６２】
ナノ粒子の酸化効果を試験するために、本発明によるポリマを水に溶解して空のミセルを形成した。次いで、ポリマ溶液に過酸化水素を添加した。図３は、１０Ｓ１０ポリマについての結果を示す。示されるように、１０Ｓ１０ミセルは、過酸化水素を添加すると、平均散乱光強度の着実な減少を示した。これは、ミセルの安定性が撹乱されてことを示唆している。同時に、流体力学的サイズ（図３の挿入図を参照）および対応する多分散指数が増加し、これは、ポリマの親水性の増加がミセルの自己集合に必要な親水性／疎水性を崩壊させたことを示唆している。
【００６３】
図４に示すように、平均散乱光強度における同様の減少が、尿素官能化された１０Ｕ１０ポリマで形成されたミセルについて観測されたが、その速度は大幅に緩やかであった。１０Ｓ１０ミセルと比較して、酸化後に、流体力学的サイズにわずかな変化しか観測されなかった。これは、尿素基が、ミセルコア内で尿素基同士の間に強力な水素結合を形成することができ、酸化プロセスを遅らせるという事実に起因し得る。加えて、スルホキシド結合から親水性が増加すると、尿素／尿素水素結合相互作用を崩壊することができないことがある。
【００６４】
表２の、ＤＯＸを充填したＭＭ１０Ｓ混合ミセルおよびＭＭ５Ｄ混合ミセルを同様の処理に供し、その結果を図５に示す。示されるように、両方のミセルについて、過酸化水素の負荷後に流体力学的サイズの変化が観測された。過酸化水素濃度が高くなると、粒径およびサイズ分布の変化が大きくなった。
【００６５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出
ＤＯＸを充填して凍結乾燥したミセルを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）に１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、１０００ＤａのＭＷＣＯを有する透析袋に入れた。次いで袋を、３７℃の水浴中で、１００回転／分で振盪させながら３０ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）を含有するビンの中に沈めた。
【００６６】
透析袋の外側のバルク溶液から、選択した時点で試料（１ｍＬ）を採取し、１ｍＬの新たなＰＢＳで置き換えた。溶液中のＤＯＸの吸光度は、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計を４８０ｎｍで使用して決定し、ＤＯＸ含有量は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中ＤＯＸの較正線を使用して計算した。溶液中のＤＯＸのモル減衰係数が経時で減少することを説明するために、種々の時点での較正曲線を構築した。
【００６７】
同様の試験を、ｐＨ５．０および過酸化水素の存在下で行った。これらの試験の結果のまとめが、図６の４つのパネルに示されている。示されるように、混合ミセルのいずれを使用しても、ＤＯＸ放出の顕著な初期バーストはなかった。カプセル化されたＤＯＸは、徐放で８時間かけて放出された。８時間後には、濃度勾配が低くなったため、放出速度は速くはなかった。
【００６８】
５Ｋ  ＰＥＧを使用したミセルと１０Ｋ  ＰＥＧを使用したミセルとの間でも、放出速度の大きな違いはなかった。ナノ粒子が小さいほど、その表面積の体積との比が大きいため、より速い放出速度が示されると予想され得るが、ここでの流体力学的サイズにおける１０〜２０ｎｍの差は、拡散速度の差をもたらすのに十分なほど重要ではない場合がある。
【００６９】
ＭＭ５ＳミセルおよびＭＭ５Ｄミセルの両者について、ＤＯＸ放出は、ｐＨ５．０の方がｐＨ７．４よりも速く、過酸化水素の存在下のｐＨ５．０ではさらに速かった。図６に示されるように、ＭＭ５ＤからのＤＯＸの最終累積放出は、ｐＨ７．４、ｐＨ５．０、および１００ｍｍの過酸化水素の存在下のｐＨ５．０で、それぞれ、４２％、５５％、および７２％であった。
【００７０】
ｐＨが低いほどＤＯＸ放出が速いのは、ＤＯＸ中のプロトン化基の数の変化およびポリカーボネートに導入したカルボン酸に起因する。ｐＨ５．０では、酸基とアミノ基の両方が、プロトン化することが多い。結果として、ＤＯＸをポリマに保持する初期の静電相互作用は弱くなる。加えて、プロトン化したＤＯＸは、水に対する可溶性が高く、濃度勾配の存在下で、ミセルコアからより迅速に拡散することができる。
【００７１】
ＭＭ１０ＳミセルおよびＭＭ１０ＤミセルからのＤＯＸ放出は、同様に、ｐＨ５．０の方がｐＨ７．４よりも速かった。しかしながら、図６に示してはいないが、出願人は、過酸化水素がＤＯＸ放出の速度に対して効果を有さないことを発見した。これは、尿素官能化された、より長鎖のポリカーボネートがミセルを安定化させ、ミセルが解離するのを防ぐことに起因し得る場合がある。
【００７２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性
遊離ＤＯＸ、空のミセル、およびＤＯＸを充填したミセルの細胞毒性を試験するために、ＰＣ−３細胞（アンドロゲン非依存性ヒト前立腺がん細胞株）を、９６ウェルＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅアッセイプレートに、１ウェル当たり２５００細胞の密度で播種し、インキュベータ中に、５％ＣＯ２中３７℃で終夜放置した。
【００７３】
遊離ＤＯＸ、ポリマ、およびＤＯＸを充填して凍結乾燥したミセルを、細胞培養培地に種々の濃度で溶解した。１００μＬの調製溶液を使用して、各ウェル中の培地を置換した。各試料の１つの濃度に対して、６レプリケートを試験した。プレートを７２時間インキュベートした。
【００７４】
１００μＬの新たな増殖培地および２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ試薬を添加して、各ウェル中の試料溶液を置き換え、プレートをインキュベータ中で４時間維持した。プレートを手短に振盪し、各ウェルの吸光度の読み取り値をマイクロプレート・リーダで記録した。各ウェル中のレゾルフィンの吸光度は、５７０ｎｍでの吸光度から６００ｎｍでのレサズリンの吸光度を差し引いたものとして計算した。細胞生存率を、未処置の対照細胞の吸光度の百分率として公式化した。
【００７５】
これらの試験の結果は、図７および８に示されている。ＰＣ−３細胞株は、ＤＯＸに対するある程度の薬物耐性を示すことが知られているが、混合ミセルによって送達されると、ＩＣ５０は低くなった。尿素官能化された、より長鎖のポリカーボネートから作製されたＭＭ１０ＳミセルおよびＭＭ１０Ｄミセルは、ＭＭ５ＳミセルおよびＭＭ５Ｄミセルと比較して、より低い細胞毒性を示した。これは、ＭＭ５ＳおよびＭＭ５Ｄは酸化によってより効率的に解離し、ＤＯＸ放出を増強し、このため、細胞毒性がより大きくなることに起因し得る場合がある。空のミセルは顕著な細胞毒性を示さず（図８）、これにより、ＤＯＸを充填したミセルに観測された細胞毒性は、カプセル化されたＤＯＸに起因し得ることが示された。
【００７６】
担腫瘍マウスにおける混合ミセルの生体内分布
本発明のミセルの生体内分布を試験するために、近赤外蛍光色素であるＤｉＲを、ＭＭ５Ｄミセルの中にカプセル化し、皮下ＰＣ−３腫瘍を担持するヌードＢＡＬＢ／ｃマウスに、尾静脈内注射によって投与した。ｉｎ  ｖｉｖｏでの蛍光色素のリアルタイム生体内分布を、全身ライブイメージングにより、７日間にわたって種々の時点で試験した。同量の遊離ＤｉＲを、マウスの対照群に同様に投与した。
【００７７】
ＤｉＲを充填したミセルの調製
ＤｉＲのＭＭ５Ｄミセルの中への充填は、上記のＤＯＸを充填するプロトコールに従って行った。手短に言うと、ポリマ（１０ｍｇ）およびＤｉＲ（０．３ｍｇ）をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、混合物を、１０ｍＬの脱イオン水の中に一滴ずつピペットで移し、１０分間音波処理した。溶液を、脱イオン水に対して４８時間透析し、３時間時点、６時間時点、および２４時間時点で水を交換した。ＤｉＲの充填レベルは、ＤｉＲを充填して凍結乾燥した既知量のミセルをＤＭＳＯに溶解し、その吸光度を７５９ｎｍで測定することによって実証した。
【００７８】
動物モデルの調製およびＤｉＲ投与
Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁させたＰＣ−３細胞（５×１０６）（１：１比）を、雄ＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部に皮下注射した（２００μＬ）。注射から５週間後に腫瘍が直径５〜７ｍｍに達したとき、マウスを、尾静脈注射による８ｍｇ／ｋｇのＤｉＲを充填した混合ミセル、または同量の遊離ＤｉＲで処置した。
【００７９】
全身蛍光画像は、ＩＣＧフィルタを付けたＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  １００（励起光７１０〜７６０ｎｍ、蛍光８１０〜８７５ｎｍ）を使用して、投与後３０分から７日の範囲の時点で撮影した。画像の取得のために、曝露時間を２秒にセットして、麻酔下の動物（ミセル製剤についてｎ＝３、および遊離ＤｉＲについてｎ＝２）を、加熱したプレート（３７℃）に一方の側臥位で置いた。投与から７日後に処分したマウスから、腫瘍および器官を取り出し、次いで画像化した。
【００８０】
図９に示されるように、投与から３０分以内に、血流中にミセルが広範に循環した結果、ＤｉＲ蛍光シグナルが全身に検出された。２４時間後までに、遊離ＤｉＲと、ミセルカプセル化ＤｉＲとのコントラストが明白になり、ミセルカプセル化ＤｉＲは全身により広範に分布し、遊離ＤｉＲは肝臓に強く集中した。これは、遊離ＤｉＲが注射後に血液から急速に排出されたこと、および本発明のミセルはカプセル化された治療剤の循環時間を長くすることによって腫瘍の処置を改善することができることを示唆している。
【００８１】
注射から４８時間後まで、ＤｉＲシグナルの強度は、ミセルカプセル化ＤｉＲの方が、遊離ＤｉＲよりも大幅に強かった。さらに、ミセルカプセル化ＤｉＲからのシグナルは、皮下腫瘍の領域に集中していた。遊離ＤｉＲを投与したマウスの腫瘍には、シグナルは、ほとんどまたは全く観測されなかった。
【００８２】
図９に示されるように、ＤｉＲカプセル化ＭＭ５Ｄミセルを投与したマウスは、腫瘍において最も強いシグナルを、肝臓、脾臓および腎臓においてより弱いシグナルを示す。これらの動物の心臓および肺において、シグナルは、ほとんどまたは全く検出されなかった。一方、遊離ＤｉＲを投与したマウスは、肺、肝臓および脾臓において最も強いシグナルを示し、腫瘍において、シグナルは、ほとんどまたは全くなかった。
【００８３】
上記の本発明の実施形態において、様々な構成要素が記載されており、当業者はこれらを、本発明を実施する際に用いることができるより広範な群を例示し、または説明するものと認識するであろう。したがって、上記の実施形態は、単に本発明を実施することができる多くの方法の一部を説明するものであり、決して本発明の範囲を限定するものではない。
【００８４】
例えば、本発明の一部の態様または実施形態に従って用いられる溶媒としてジクロロメタンが記述されているが、当業者は、他の溶媒、例えば、クロロホルム、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン、ベンゾトリフルオリド、石油エーテル、アセトニトリル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、２，２，４−トリメチルペンタン、シクロヘキサン、ジエチル・エーテル、ｔ−ブチル・メチル・エーテル、ジイソプロピル・エーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、またはこれらの組合せもしくは混合物を、同様に使用してもよいことを認識するであろう。
【００８５】
同様に、上記の本発明の一部の態様または実施形態に従って用いられる有機溶媒としてＤＭＦが記述されているが、好適な代替の溶媒には、限定せずに、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔ−ブタノール、ｔ−ブチル・アルコール、アセトン、２−ブタノン、ジメトキシエタン、ジグリム、ジエチル・エーテル、メチル・ｔ−ブチル・エーテル、塩化メチレン、酢酸エチル、エチレン・グリコール、グリセリン、ジメチルスルホキシド、酢酸、テトラヒドロフラン、およびジオキサンが含まれる。
【００８６】
例えば、本発明を実施する際に用いられる治療剤は、ＢＣＰと可逆的な複合体を形成し、望ましい医学的応答を誘導することができる任意の薬剤であり得る。これらには、限定せずに、ＤＮＡ、ヌクレオチド、遺伝子、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、リン脂質、天然または合成の有機化合物（例えば、薬物、染料、合成ポリマ、オリゴマ、アミノ酸）、無機材料（例えば、金属および金属酸化物）、これらの放射性変異体、およびこれらの組合せが含まれる。
【００８７】
本発明を実施際に、治療剤として用いることができる薬物としては：１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、２−ＣｄＡ（クラドリビン）、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、５−アザシチジン、５−フルオロウラシル（フルオロウラシル）、５−ＦＵ（フルオロウラシル）、６−メルカプトプリン、６−ＭＰ（６−メルカプトプリン）、６−ＴＧ（チオグアニン）、６−チオグアニン（チオグアニン）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（Ｒ）（タンパク質結合型パクリタキセル）、ＡＣＣＵＴＡＮＥ（Ｒ）（イソトレチノイン）、アクチノマイシン−Ｄ（ダクチノマイシン）、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（Ｒ）（ドキソルビシン）、ＡＤＲＵＣＩＬ（Ｒ）（フルオロウラシル）、ＡＦＩＮＩＴＯＲ（Ｒ）（エベロリムス）、ＡＧＲＹＬＩＮ（Ｒ）（アナグレリド）、ＡＬＡ−ＣＯＲＴ（Ｒ）（ヒドロコルチゾン）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ（Ｒ）（ペメトレキセド）、アリトレチノイン（９−ｃｉｓ−レチノイン酸）、アルカバン−ＡＱ（ビンブラスチン）、ＡＬＫＥＲＡＮ（Ｒ）（メルファラン）、全トランス型レチノイン酸（トレチノイン）、アルファ・インターフェロン（インターフェロン・アルファ）、アルトレタミン、アメトプテリン（メトトレキセート）、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、ＡＮＡＮＤＲＯＮ（Ｒ）（ニルタミド）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン（シタラビン）、Ａｒａ−Ｃ（シタラビン）、ＡＲＡＮＥＳＰ（Ｒ）（ダルベポエチン・アルファ）、ＡＲＥＤＩＡ（Ｒ）（パミドロネート）、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（Ｒ）（アナストロゾール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（Ｒ）（エキセメスタン）、ＡＲＲＡＮＯＮ（Ｒ）（ネララビン）、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ（全トランス型レチノイン酸）、ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）（ベバシズマブ）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ（カルムスチン）、ベンダムスチン（ベンダムスチン塩酸塩）、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（Ｒ）（トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢＩＣＮＵ（Ｒ）（カルムスチン）、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（Ｒ）（ブレオマイシン）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ＢＵＳＵＬＦＥＸ（Ｒ）（ブスルファン）、Ｃ２２５（セツキシマブ）、カルシウム・ロイコボリン（ロイコボリン）、ＣＡＭＰＡＴＨ（Ｒ）（アレムツズマブ）、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（Ｒ）（イリノテカン）、カンプトテシン−１１（イリノテカン）、カペシタビン、ＣＡＲＡＣ（Ｒ）（フルオロウラシル）、カルボプラチン、カルムスチン、カルムスチン・ウエハ、ＣＡＳＯＤＥＸ（Ｒ）（ビカルタミド）、ＣＣ−５０１３（レナリドミド）、ＣＣＩ−７７９（テムシロリムス）、ＣＣＮＵ（ロムスチン）、ＣＤＤＰ（シスプラチン）、ＣＥＥＮＵ（Ｒ）（ロムスチン）、ＣＥＲＵＢＩＤＩＮＥ（Ｒ）（ダウノマイシン）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボラム因子（ロイコボリン）、クラドリビン、コルチゾン（ヒドロコルチゾン）、ＣＯＳＭＯＧＥＮ（Ｒ）（ダクチノマイシン）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン）、シクロホスファミド、ＣＹＴＡＤＲＥＮ（Ｒ）（アミノグルテチミド）、シタラビン、リポソーム化シタラビン、ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ（Ｒ）（シタラビン）、ＣＹＴＯＸＡＮ（Ｒ）（シクロホスファミド）、ダカルバジン、ＤＡＣＯＧＥＮ（Ｒ）（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダルベポエチン・アルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、リポソーム化ダウノルビシン、ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（Ｒ）（リポソーム化ダウノルビシン）、ＤＥＣＡＤＲＯＮ（商標）（デキサメタゾン）、デシタビン、ＤＥＬＴＡ−ＣＯＲＴＥＦ（Ｒ）（プレドニゾロン）、ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（Ｒ）（プレドニゾン）、デニロイキン・ディフチトクス、ＤＥＰＯＣＹＴ（Ｒ）（リポソーム化シタラビン）、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン・ナトリウム、ＤＥＸＡＳＯＮＥ（Ｒ）（デキサメタゾン）、デキスラゾキサン、ＤＨＡＤ（ミトキサントロン）、ＤＩＣ（ダカルバジン）、ＤＩＯＤＥＸ（Ｒ）（デキサメタゾン）、ドセタキセル、ＤＯＸＩＬ（Ｒ）（リポソーム化ドキソルビシン）、ドキソルビシン、リポソーム化ドキソルビシン、ＤＲＯＸＩＡ（Ｒ）（ヒドロキシ尿素）、ＤＴＩＣ（ダカルバジン）、ＤＴＩＣ−ＤＯＭＥ（Ｒ）（デカルバジン）、デュラロン（メチルプレドニゾロン）、ＥＦＵＤＥＸ（Ｒ）（フルオロウラシル）、ＥＬＩＧＡＲＤ（Ｒ）（ロイプロリド）、ＥＬＬＥＮＣＥ（Ｒ）（エピルビシン）、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（Ｒ）（オキサリプラチン）、ＥＬＳＰＡＲ（Ｒ）（アスパラギナーゼ）、ＥＭＣＹＴ（Ｒ）（エストラムスチン）、エピルビシン、エポエチン・アルファ、ＥＲＢＩＴＵＸ（Ｒ）（セツキシマブ）、エルロチニブ、エルウィニア・Ｌ−アスパラギナーゼ（アスパラギナーゼ）、エストラムスチン、ＥＴＨＹＯＬ（Ｒ）（アミホスチン）、ＥＴＯＰＯＰＨＯＳ（Ｒ）（エトポシド）、エトポシド、リン酸エトポシド、ＥＵＬＥＸＩＮ（Ｒ）（フルタミド）、エベロリムス、ＥＶＩＳＴＡ（Ｒ）（ラロキシフェン）、エキセメスタン、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（Ｒ）（トレミフェン）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（Ｒ）（フルベストラント）、ＦＥＭＡＲＡ（Ｒ）（レトロゾール）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、ＦＬＵＤＡＲＡ（Ｒ）（フルダラビン）、フルダラビン、ＦＬＵＯＲＯＰＬＥ（Ｒ）（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、フルオロウラシル（クリーム）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸（ロイコボリン）、ＦＵＤＲ（Ｒ）（フロクスウリジン）、フルベストラント、Ｇ−ＣＳＦ（ペグフィルグラスチム）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、ＧＥＭＺＡＲ（Ｒ）（ゲムシタビン）、ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｒ）（メシル酸イマチニブ）、ＧＬＩＡＤＥＬ（Ｒ）ウエハ（カルムスチン・ウエハ）、ＧＭ−ＣＳＦ（サルグラモスチム）、ゴセレリン、顆粒球コロニ刺激因子（ペグフィルグラスチム）、顆粒球マクロファージコロニ刺激因子（サルグラモスチム）、ＨＡＬＯＴＥＳＴＩＮ（Ｒ）（フルオキシメステロン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｒ）（トラスツズマブ）、ＨＥＸＡＤＲＯＬ（Ｒ）（デキサメタゾン）、ＨＥＸＡＬＥＮ（Ｒ）（アルトレタミン）、ヘキサメチルメラミン（アルトレタミン）、ＨＭＭ（アルトレタミン）、ＨＹＣＡＭＴＩＮ（Ｒ）（トポテカン）、ＨＹＤＲＥＡ（Ｒ）（ヒドロキシ尿素）、酢酸ヒドロコルト（ヒドロコルチゾン）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾン・ナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾン・ナトリウム、ＨＹＤＲＯＣＯＲＴＯＮＥ（Ｒ）ホスフェート（ヒドロコルチゾン）、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン（イブリツモマブ）、ＩＤＡＭＹＣＩＮ（Ｒ）（イダルビシン）、イダルビシン、ＩＦＥＸ（Ｒ）（イホスファミド）、ＩＦＮ−アルファ（インターフェロン・アルファ）、イホスファミド、ＩＬ−１１（オプレルベキン）、ＩＬ−２（アルデスロイキン）、メシル酸イマチニブ、イミダゾール・カルボキサミド（デカルバジン）、インターフェロン・アルファ、インターフェロン・アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２（アルデスロイキン）、インターロイキン−１１（オプレルベキン）、ＩＮＴＲＯＮ（Ｒ）Ａ（インターフェロン・アルファ−２ｂ）、ＩＲＥＳＳＡ（Ｒ）（ゲフィチニブ）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、ＩＸＥＭＰＲＡ（Ｒ）（イキサベピロン）、キドロラーゼ（アスパラギナーゼ）、ＬＡＮＡＣＯＲＴ（Ｒ）（ヒドロコルチゾン）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ（ビンクリスチン）、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ＬＥＵＫＥＲＡＮ（Ｒ）（クロラムブシル）、ＬＥＵＫＩＮＥ（Ｒ）（サルグラモスチム）、ロイプロリド、ロイロクリスチン（ビンクリスチン）、ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（Ｒ）（クラドリビン）、リポソーム化Ａｒａ−Ｃ、ＬＩＱＵＩＤ  ＰＲＥＤ（Ｒ）（プレドニゾン）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ（メルファラン）、Ｌ−サルコリシン（メルファラン）、ＬＵＰＲＯＮ（Ｒ）（ロイプロリド）、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（Ｒ）（ロイプロリド）、ＭＡＴＵＬＡＮＥ（Ｒ）（プロカルバジン）、ＭＡＸＩＤＥＸ（Ｒ）（デキサメタゾン）、メクロレタミン、塩酸メクロレタミン、メドラロン（メチルプレドニゾロン）、ＭＥＤＲＯＬ（Ｒ）（メチルプレドニゾロン）、ＭＥＧＡＣＥ（Ｒ）（メゲストロール）、メゲストロール、酢酸メゲストロール（メガストロール（Ｍｅｇａｓｔｒｏｌ））、メルファラン、メルカプトプリン（６−メルカプトプリン）、メスナ、ＭＥＳＮＥＸ（Ｒ）（メスナ）、メトトレキセート、メトトレキセート・ナトリウム（メトトレキセート）、メチルプレドニゾロン、ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＮ（Ｒ）（プレドニゾン）、マイトマイシン（マイトマイシンＣ）、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（メチルプレドニゾロン）、ＭＴＣ（マイトマイシン−Ｃ）、ＭＴＸ（メトトレキセート）、ＭＵＳＴＡＲＧＥＮ（Ｒ）（メクロレタミン）、ムスチン（メクロレタミン）、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（Ｒ）（マイトマイシン−Ｃ）、ＭＹＬＥＲＡＮ（Ｒ）（ブスルファン）、ＭＹＬＯＣＥＬ（Ｒ）（ヒドロキシ尿素）、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（Ｒ）（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）、ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（Ｒ）（ビノレルビン）、ネララビン、ＮＥＯＳＡＲ（Ｒ）（シクロホスファミド）、ＮＥＵＬＡＳＴＡ（Ｒ）（ペグフィルグラスチム）、ＮＥＵＭＥＧＡ（Ｒ）（オプレルベキン）、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（Ｒ）（フィルグラスチム）、ＮＥＸＡＶＡＲ（Ｒ）（ソラフェニブ）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮ��Ｒ）（ニルタミド）、ニルタミド、ＮＩＰＥＮＴ（Ｒ）（ペントスタチン）、ナイトロジェン・マスタード（メクロレタミン）、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（Ｒ）（タモキシフェン）、ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（Ｒ）（ミトキサントロン）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド（オクトレオチド）、ＯＮＣＡＳＰＡＲ（Ｒ）（ペガスパルガーゼ）、ＯＮＣＯＶＩＮ（Ｒ）（ビンクリスチン）、ＯＮＴＡＫ（Ｒ）（デニロイキン・ディフチトクス）、ＯＮＸＯＬ（Ｒ）（パクリタキセル）、オプレルベキン（インターロイキン−１１）、ＯＲＡＰＲＥＤ（Ｒ）（プレドニゾロン）、ＯＲＡＳＯＮＥ（Ｒ）（プレドニゾン）、オキサリプラチン、パクリタキセル、タンパク質結合型パクリタキセル、パミドロネート、パニツムマブ、ＰＡＮＲＥＴＩＮ（Ｒ）（アリトレチノイン）、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（Ｒ）（カルボプラチン）、ＰＥＤＩＡＰＲＥＤ（Ｒ）（プレドニゾロン）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（Ｒ）（インターフェロン・アルファ−２ｂ）、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ペメトレキセド、ペントスタチン、フェニルアラニン・マスタード（メルファラン）、ＰＬＡＴＩＮＯＬ（Ｒ）（シスプラチン）、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（Ｒ）−ＡＱ（シスプラチン）、プレドニゾロン、プレドニゾン、ＰＲＥＬＯＮＥ（Ｒ）（プレドニゾロン）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（Ｒ）（エポエチン・アルファ）、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（Ｒ）（アルデスロイキン）、カルムスチン埋め込みを伴うプロリフェプロスパン２０（カルムスチン・ウエハ）、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（Ｒ）（６−メルカプトプリン）、ラロキシフェン、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（Ｒ）（レナリドミド）、ＲＨＥＵＭＡ  ＴＲＥＸ（Ｒ）（メトトレキセート）、ＲＩＴＵＸＡＮ（Ｒ）（リツキシマブ）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（インターフェロン・アルファ−２ａ）、ＲＵＢＥＸ（Ｒ）（ドキソルビシン）、塩酸ルビドマイシン（ダウノマイシン）、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ（Ｒ）（オクトレオチド）、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ  ＬＡＲ（Ｒ）（オクトレオチド）、サルグラモスチム、ＳＯＬＵ−ＣＯＲＴＥＦ（Ｒ）（ヒドロコルチゾン）、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（Ｒ）（メチルプレドニゾロン）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ（Ｒ）（ダサチニブ）、ＳＴＩ−５７１（メシル酸イマチニブ）、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８（スニチニ
ブ）、スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（Ｒ）（スニチニブ）、タモキシフェン、ＴＡＲＣＥＶＡ（Ｒ）（エルロチニブ）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（Ｒ）（ベキサロテン）、ＴＡＸＯＬ（Ｒ）（パクリタキセル）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（Ｒ）（ドセタキセル）、ＴＥＭＯＤＡＲ（Ｒ）（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ（チオテパ）、サリドマイド、ＴＨＡＬＯＭＩＤ（Ｒ）（サリドマイド）、ＴＨＥＲＡＣＹＳ（Ｒ）（ＢＣＧ）、チオグアニン、チオグアニン・タブロイド（チオグアニン）、チオホスホアミド（チオテパ）、ＴＨＩＯＰＬＥＸ（Ｒ）（チオテパ）、チオテパ、ＴＩＣＥ（Ｒ）（ＢＣＧ）、ＴＯＰＯＳＡＲ（Ｒ）（エトポシド）、トポテカン、トレミフェン、ＴＯＲＩＳＥＬ（Ｒ）（テムシロリムス）、トシツモマブ、トラスツズマブ、ＴＲＥＡＮＤＡ（Ｒ）（ベンダムスチン塩酸塩）、トレチノイン、ＴＲＥＸＡＬＬ（Ｒ）（メトトレキセート）、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（Ｒ）（三酸化ヒ素）、ＴＳＰＡ（チオテパ）、ＴＹＫＥＲＢ（Ｒ）（ラパチニブ）、ＶＣＲ（ビンクリスチン）、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（Ｒ）（パニツムマブ）、ＶＥＬＢＡＮ（Ｒ）（ビンブラスチン）、ＶＥＬＣＡＤＥ（Ｒ）（ボルテゾミブ）、ＶＥＰＥＳＩＤ（Ｒ）（エトポシド）、ＶＥＳＡＮＯＩＤ（Ｒ）（トレチノイン）、ＶＩＡＤＵＲ（Ｒ）（ロイプロリド）、ＶＩＤＡＺＡ（Ｒ）（アザシチジン）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ＶＩＮＣＡＳＡＲ  ＰＦＳ（Ｒ）（ビンクリスチン）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン（ビノレルビン）、ＶＬＢ（ビンブラスチン）、ＶＭ−２６（テニポシド）、ボリノスタット、ＶＰ−１６（エトポシド）、ＶＵＭＯＮ（Ｒ）（テニポシド）、ＸＥＬＯＤＡ（Ｒ）（カペシタビン）、ＺＡＮＯＳＡＲ（Ｒ）（ストレプトゾシン）、ＺＥＶＡＬＩＮ（Ｒ）（イブリツモマブ）、ＺＩＮＥＣＡＲＤ（Ｒ）（デキスラゾキサン）、ＺＯＬＡＤＥＸ（Ｒ）（ゴセレリン）、ゾレドロン酸、ＺＯＬＩＮＺＡ（Ｒ）（ボリノスタット）、およびＺＯＭＥＴＡ（Ｒ）（ゾレドロン酸）などがある。
【００８８】
本発明による充填ミセルの投与は、典型的には静脈内注射によることになるが、非経口または筋肉内もしくは皮下の投与によることもできる。当業者には理解されるように、投与の特定の経路および方法は、ある程度、投与される治療剤および処置される疾患または状態に依存することになる。
【００８９】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のためだけのものであり、本発明の限定を意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「ある（a）」「ある（an）」および「その（the）」は、文脈上、明らかに他の意味が示されていない限り、複数形も含むものとする。「含む（comprises）」または「含むこと（comprising）」あるいはその両方の用語は、本明細書で使用される場合、記載された特徴、整数、ステップ、操作、要素、または構成成分あるいはその組合せの存在を明示するが、１つまたは複数の他の特徴、整数、ステップ、操作、要素、構成成分、またはそれらの群あるいはその組合せの存在または追加を排除しないことがさらに理解される。２つの数字による限界値ＸおよびＹを使用して、あり得る値を表すために範囲が使用されるとき（例えば、Ｘｐｐｍ〜Ｙｐｐｍの濃度）、他の意味が記載されていない限り、値は、Ｘ、Ｙ、またはＸ〜Ｙの間の任意の数字であり得る。
【００９０】
本発明の記載は、例示および説明のために提示してきたが、網羅する意図も、開示された形態での本発明に限定する意図もない。本発明の範囲および思想から逸脱することなく、多くの変更形態および変形形態が、当業者には明らかである。実施形態は、本発明の原理およびその実用的な応用例を最適に説明するために、かつ当業者が本発明を理解することができるように、選択し、記載した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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