(57)【要約】  一態様において、グラフィックユーザインターフェース（ＧＵＩ）を有するワークステーションを含むキャリア集合ステーションを含む、自動化された高速抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）のための改善されたシステム、方法及びインターフェースが開示される。ＧＵＩは、検査技師から、微生物含有試料に対して行われる試験の範囲に関する情報を含む、情報を受け取る。ＧＵＩは、類似の試験範囲の試料を一緒にグループ化し、１つの多重試験パネルを使用してそれらの試料を有利に試験することによって、試験キャリアの利用を最大限にする手法で、試験パネルへの微生物含有試料のインテリジェント割当てを制御する。多数の試料の並列処理を容易にするための試験範囲によるワークフローのカスタム化は、有利には、実験室の廃棄物を低減させ、試験の潜在性を低下させ、ＡＳＴシステムのスループット及び効率を増大させ、したがってＡＳＴ実験室に対するコストを低下させる。
2021519091.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムによって試験がなされる複数の抗菌薬試験パネル及び複数の試料を保持するキャリアを集合させるための方法であって、
試験範囲を受信するステップ、
前記試験範囲に応答して、前記ＡＳＴシステムを作動させるための複数の異なるワークフローの中から１つのワークフローを選択するステップであり、各ワークフローが、前記ワークフローに特有のキャリアマップ、及びプロンプトを含む、ステップ、並びに
前記ワークフローのキャリアマップをユーザに表示するステップ、
パネル及び試料を持つキャリアの集合を前記キャリアマップを使用して制御するように、前記ワークフローの１つ以上のプロンプトをユーザに表示するステップ、
１つ以上のパネルへの異なる試料の割当てに関する関連情報を収集するステップ、
前記キャリアのパネルごとに、前記表示するステップ及び前記収集するステップを繰り返すステップ、並びに
前記ＡＳＴシステムに関連情報を転送することを含め、前記ＡＳＴシステムに前記キャリアを転送するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記試験範囲が、試験パネルによって提供された異なる抗菌薬の数に関する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記試験範囲が、前記試験パネルのアーキテクチャに関する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
１つ以上のプロンプトを表示する前記ステップが、試料をパネルに割り当てるようユーザに促すステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
１つ以上のプロンプトを表示する前記ステップが、少なくとも２つの試料をパネルに割り当てるようユーザに促すステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
試験パネルが多重試験パネルである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）法をＡＳＴシステムで行うための方法であって、
試験範囲を受信するステップ、
前記試験範囲に応答して、試験キャリア及び１つ以上の抗菌薬試験パネルの選択を制御することを含む、前記試験範囲に関連付けられたワークフローを実行するステップ、
選択されたワークフローに関するワークフロー命令を表示して、試験パネルを持つ前記試験キャリアの集合及び前記試験パネルへの少なくとも２つの異なる試料の割当てを制御するステップ、並びに
少なくとも２つの異なる試料に並行してＡＳＴ法を行うステップ
を含む方法。
【請求項８】
前記試験範囲が、患者タイプ、療法タイプ、リクエスタタイプ、又は抗菌薬セットの１つに関する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記試験パネルが、抗菌薬の第１のセットが集合された第１のパネル及び抗菌薬の第２のセットが集合された第２のパネルを含む抗菌薬試験パネルのセットから選択され、前記抗菌薬の第２のセットが、抗菌薬の少なくとも２つの複製されたサブセットを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）処理のために複数の試験パネル及び複数の試験試料を持つキャリアの集合を制御するための、ＡＳＴシステムのキャリア集合ステーションであって、
プロセッサ、
前記ＡＳＴシステムを制御するためのユーザインターフェース命令を記憶する記憶デバイス、
前記プロセッサの動作中、前記ユーザインターフェース命令によって制御されたユーザインターフェースを表示するための、前記プロセッサ及び前記記憶デバイスに連結されたディスプレイであり、前記ユーザインターフェースが、試験範囲、試験キャリア、試験パネル、及び試験試料に関する情報を受信するための入力機構を含む、ディスプレイ、並びに
前記記憶デバイスに記憶された複数の異なるワークフローであり、各ワークフローが、試験範囲に関連付けられかつキャリアマップ及びプロンプトセットを含み、前記プロンプトセットが、キャリアの１つ以上の試験パネルへの試料の割当てを制御する、複数の異なるワークフロー
を含み、
前記ユーザインターフェースは、試験範囲に関するパネルを持つキャリアの集合及びＡＳＴ処理のための１つ以上の試験パネルへの１つ以上の試料の割当てを制御するように、キャリアマップ及びプロンプトセットを表示することを含めて、受信した試験範囲に関連付けられたワークフローをユーザに表示するように実行されたときに動作可能である、
キャリア集合ステーション。
【請求項１１】
前記試験範囲が、試験パネルによって提供されたいくつかの異なる抗菌薬に関する、請求項１０に記載のキャリア集合ステーション。
【請求項１２】
前記ワークフローの前記キャリアマップが、前記試験範囲に従って、前記ワークフローにより選択される試験パネルに関連付けられる、請求項１１に記載のキャリア集合ステーション。
【請求項１３】
前記試験パネルが、前記キャリアの利用を最適化するように選択される、請求項１２に記載のキャリア集合ステーション。
【請求項１４】
前記プロンプトセットが、前記１つ以上の試料を前記試験パネルに割り当てて、前記キャリアの利用を最適化する、請求項１３に記載のキャリア集合ステーション。
【請求項１５】
抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）処理のために複数の試験パネル及び複数の試験試料を持つキャリアの集合を制御するための、ＡＳＴシステムのキャリア集合ステーションであって、
プロセッサ、
前記ＡＳＴシステムを制御するためのユーザインターフェース命令を記憶する記憶デバイス、
前記キャリア集合ステーションの動作中、前記ユーザインターフェース命令によって制御されたユーザインターフェースを表示するための、前記プロセッサ及び前記記憶デバイスに連結されたディスプレイであり、前記ユーザインターフェースが、試験範囲、試験キャリア、試験パネル、及び試験試料に関する情報を受信するための入力機構を含む、ディスプレイ、並びに
前記記憶デバイスに記憶されかつ試験範囲に関連付けられたワークフローであり、前記ワークフローは、キャリアマップ及びプロンプトセットをユーザに表示するよう実行されたときに動作可能であり、前記プロンプトセットは、多重試験パネルの選択及び前記多重試験パネルへの少なくとも２つの試験試料の割当てを制御する、ワークフロー
を含む、キャリア集合ステーション。
【請求項１６】
前記試験範囲が、患者タイプ、療法タイプ、リクエスタタイプ、又は抗菌薬試験セットの１つに関する、請求項１５に記載のＡＳＴシステム。
【請求項１７】
Ｎ個の抗菌薬試験ウェルを有する試験パネルを使用する抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムのスループットを最適化するための方法であって、
試料に対して行われる試験を特定する試験範囲を受信するステップ、
受信された前記試験範囲が、Ｍ種の抗菌薬（Ｍ＜Ｎ）に関連付けられた試験であることに応答して、前記Ｍ種の抗菌薬のＮ／Ｍ個のコピーを含む多重試験パネルの選択を制御するステップ、
前記抗菌薬の各コピーと異なる試料との関連付けを制御するステップ、及び
前記多重試験パネルを処理して、異なる試料を並行して試験し、それによってＡＳＴシステムのスループットを最適化するステップ
を含む方法。
【請求項１８】
Ｎ個の抗菌薬試験ウェルを有する試験パネルを使用する抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムのスループットを最適化するための方法であって、
試料に対して行われる試験を特定する試験範囲を受信するステップ、
受信された前記試験範囲が、Ｍ種の抗菌薬（Ｍ＜Ｎ）に関連付けられた試験であることに応答して、前記Ｍ種の抗菌薬のＮ／Ｍ個のコピーを含む多重試験パネルの選択を制御するステップ、
前記Ｎ／Ｍ抗菌薬の１つのコピーと前記試料との関連付けを制御するステップ、
同じ試験範囲の第２の試料を検索し、前記第２の試料とＭ種の抗菌薬の前記Ｎ／Ｍ個のコピーの異なるコピーとの関連付けを制御するステップ、
試料を検索するステップ及び抗菌薬のコピーに試料を関連付けるステップを、各抗菌薬のコピーが試料に関連付けられるまで繰り返すステップ、並びに
前記多重試験パネルを処理して、異なる試料を並行して試験し、それによってＡＳＴシステムのスループットを最適化するステップ
を含む方法。
【請求項１９】
前記試験範囲が、患者タイプ、療法タイプ、リクエスタタイプ、又は抗菌薬試験セットの１つに関する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｎ個の抗菌薬ウェルを含む試験パネルを使用する、高スループット抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムであって、
プロセッサ、
前記プロセッサにより制御され、かつ試料に対して行われる試験を特定する試験範囲を受信するよう適合されるインターフェース、
受信された前記試験範囲が、Ｍ種の抗菌薬（Ｍ＜Ｎ）に関連付けられた試験であることに応答し、多重試験パネル上に提供された抗菌薬のＮ／Ｍ個のコピーの各コピーへの、複数の試料の異なる試料の割当てを制御するためのワークフロー制御器、及び
多重試験パネルに前記異なる試料を接種するための接種ユニット、及び
前記接種ユニットに連結されて、前記多重試験パネルを受けアッセイを行い、前記異なる試料を並行して試験してＡＳＴシステムのスループットを最適化する、アッセイ処理ユニット
を含むシステム。
【請求項２１】
少なくとも１５０個のリザーバ及び乾燥形態をとる８種以上の異なる抗菌薬を含み、それぞれが４つ以上の異なる濃度で存在する、自動化された抗菌薬感受性試験を行うためのＡＳＴカートリッジであって、複数の濃度にある複数の抗菌薬が、２個以上のリザーバで複製される、ＡＳＴカートリッジ。
【請求項２２】
３８４個又は１５３６個のリザーバを含む、請求項２１に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２３】
複数の濃度で複数の抗菌薬の２、３、４、５、６、７、８種の複製物を含む、請求項２１又は２２に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２４】
複数の抗菌薬濃度範囲が、希釈系列に存在する、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２５】
異なる抗菌薬の希釈系列が、前記カートリッジ上の幾何学的リザーバブロック内に存在する、請求項２４に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２６】
抗菌薬複製物が、前記ＡＳＴカートリッジが多数の抗菌薬ブロックを含むようなブロックレベルで存在する、請求項２５に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２７】
抗菌薬ブロック当たり少なくとも１つのリザーバが、抗菌剤を含まない、請求項２６に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２８】
抗菌薬ブロックが、空間ブロック内に空間的にグループ化される、請求項２６又は２７に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項２９】
各空間ブロック内で、同様の希釈系列が同様の位置にある、請求項２８に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３０】
各空間ブロック内で、抗菌薬を含まない同様のウェルが同様の位置にある、請求項２９に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３１】
前記抗菌薬が、グラム陰性微生物に対して活性を有することが知られている、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３２】
前記抗菌薬が、アムピシリン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、ニトロフラントイン、トリメトプリム、アミカシン、アモキシシリン−クラブラン酸、アムピシリン−スルバクタム、セフタジジム、セフタジジム−アビバクタム、セフトロザン−タゾバクタム、ピペラシリン−タゾバクタム、セフロキシム、セフェピム、セフォテタン、セフォキシチン、セフェピム、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、セフォタキシム、セフィデロコール、ドリペネム、エルタペネム、イミペネム、及びメロペネムから選択される、請求項３１に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３３】
前記抗菌薬が、アモキシリン；アモキシリン−クラブラン酸；アムピシリン；セフロキシム；シプロフロキサシン、レボフロキサシン、及びモキシフロキサシンの１種以上；ドキシサイクリン、ミノサイクリン、及びテトラサイクリンの１種以上；ニトロフラントイン；並びにトリメトプリム及びトリメトプリム−スルファメトキサゾールの１種以上から選択される、請求項３１に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３４】
前記抗菌薬が、グラム陽性微生物に対して活性を有することが知られている、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３５】
前記抗菌薬が、ニトロフラントイン、トリメトプリム、アジスロマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、オキサシリン、アムピシリン、ペニシリン、セフタロリン、ダプトマイシン、リネゾリド、テジゾリド、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン、バンコマイシン、シプロフロキサシン、及びレボフロキサシンから選択される、請求項３４に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３６】
前記抗菌薬が、アムピシリン及びペニシリンの１種以上；アジスロマイシン及びエリスロマイシンの１種以上；シプロフロキサシン及びレボフロキサシンの１種以上；クリンダマイシン；ドキシサイクリン、ミノサイクリン、及びテトラサイクリンの１種以上；リネゾリド；ニトロフラントイン；トリメトプリム及びトリメトプリム−スルファメトキサゾールの１種以上；並びにオキサシリンから選択される、請求項３４に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３７】
セフォキシチン耐性及び誘導性クリンダマイシン耐性の１種以上に関するスクリーンも含まれ、各スクリーンの各濃度は、各抗菌薬希釈が二重になされたのと同じ回数で二通りある、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３８】
前記抗菌薬が、複数のグラム陽性及びグラム陰性微生物に対して有効であることが知られている、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項３９】
前記抗菌薬が、アムピシリン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、ニトロフラントイン、トリメトプリム、アミカシン、アモキシシリン−クラブラン酸、アムピシリン−スルバクタム、セフタジジム、セフタジジム−アビバクタム、セフトロザン−タゾバクタム、ピペラシリン−タゾバクタム、セフロキシム、セフェピム、セフォテタン、セフォキシチン、セフェピム、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、セフォタキシム、ドリペネム、エルタペネム、イミペネム、メロペネム、アジスロマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、オキサシリン、アムピシリン、ペニシリン、セフタロリン、ダプトマイシン、リネゾリド、テジゾリド、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン、セフィデロコール、及びバンコマイシンから選択される、請求項３８に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４０】
各抗菌薬希釈系列の各複製物が、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を決定するのに適切な臨床範囲を含む、請求項２１〜３９のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４１】
各抗菌薬希釈系列の１種以上の複製物が、機器の品質管理（ＱＣ）を行うのに適切なＱＣ範囲を含む、請求項２１〜４０のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４２】
各抗菌薬希釈系列の各複製物が、機器のＱＣを行うのに適切なＱＣ範囲を含む、請求項４１に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４３】
少なくとも５種の抗菌薬の抗菌薬希釈範囲が、少なくとも１つの抗菌薬濃度によりＭＩＣを決定するのに必要な臨床範囲を超える、請求項２１〜４２のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４４】
各リザーバが、リザーバ壁及びリザーバ基部を含み、複数のリザーバに関する前記リザーバ壁が不透明である、請求項２１〜４３のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４５】
複数の前記リザーバが、リザーバ基部を通して、３５０ｎｍの光の＞８０％、＞８５％、＞９０％の通過を可能にする、請求項２１〜４４のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４６】
複数のリザーバが、３５０ｎｍの光の≦８０％が通ることができるように不透明な基部を含む、請求項２１〜４５のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４７】
前記リザーバ壁及び／又は基部が、ポリスチレン又はポリプロピレンを含む、請求項４４〜４６のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４８】
前記リザーバ壁及び基部がポリスチレンを含む、請求項４７に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項４９】
前記ポリスチレンが未処理である、請求項４８に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項５０】
０℃〜３５℃の貯蔵に安定である、請求項２１〜４９のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項５１】
乾燥剤を含むパウチ内に封止された、請求項２１〜５０のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項５２】
接着剤カバーで封止することができる、請求項２１〜５１のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項５３】
取外し可能な蓋を備え付けることができる、請求項２１〜５２のいずれか一項に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項５４】
前記取外し可能な蓋がポリスチレンである、請求項５３に記載のＡＳＴカートリッジ。
【請求項５５】
各空間ブロックがＡＳＴパネルを含む複数の空間ブロックを含み、前記ＡＳＴパネルが８つ以上の抗菌薬希釈系列を含みかつ少なくとも１つのウェルが抗菌薬を含まない、ＡＳＴカートリッジであって、
ｉ．  各空間ブロック内で、同様の希釈系列が同様の位置にあり、
ｉｉ．  各空間ブロック内で、抗菌薬を含まない同様のウェルが同様の位置にある
ＡＳＴカートリッジ。
【請求項５６】
ａ．  ｉ．  約３８４又は約１５３６個のリザーバ、
ｉｉ．  乾燥形態をとる８種以上の異なる抗菌薬であり、それぞれが４つ以上の異なる濃度で存在し、複数の濃度にある複数の抗菌薬が、２個以上のリザーバで複製される、抗菌薬
を含み、
ｉｉｉ．  複数の抗菌薬濃度範囲が、希釈系列に存在し、
ｉｖ．  異なる抗菌薬の希釈系列が、カートリッジ上の幾何学的リザーバブロック内に存在し、
ｖ．  抗菌薬複製物が、ＡＳＴカートリッジが多数の抗菌薬ブロックを含むようなブロックレベルで存在し、
ｖｉ．  抗菌薬ブロック当たり少なくとも１つのリザーバが、抗菌剤を含まない
ＡＳＴカートリッジを選択すること、
ｂ．  前記ＡＳＴカートリッジに、２種以上の微生物を含む試料を接種し、各試料が別個の抗菌薬ブロック内に接種されるようにすること、
ｃ．  ２〜１２時間の期間、微生物成長を促進させる条件下で前記カートリッジをインキュベートすること、
ｄ．  １つ以上のＡＳＴアッセイを、複数のリザーバで行うこと、
ｅ．  複数のリザーバを光学的に調べること、及び
ｆ．  前記カートリッジ上の複数の抗菌薬に関し、微生物を含む試料ごとにＭＩＣを決定すること
を含む、自動化された抗菌薬感受性試験のための方法。
【請求項５７】
２、３、４、５、６、７、８種の異なる微生物を含む試料が、前記ＡＳＴカートリッジに接種される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
２種以上の微生物が、同じグラム型のものである、請求項５６又は５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記２種以上の微生物を含む試料が、ほぼ同じ濃度で、前記ＡＳＴカートリッジ内の複数のリザーバに接種される、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
１回以上の希釈が接種器によって行われる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
２回の希釈が前記接種器によって行われる、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
第１の希釈が、前記接種器によって、リザーバトラフ内で行われる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記第１の希釈が、栄養ブロス内で行われる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記栄養ブロスが、陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス又は鉄欠乏陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロスである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
第２の希釈が、前記接種器によって、複数のＡＳＴカートリッジリザーバ内で行われる、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第２の希釈が、栄養ブロス内で行われる、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記栄養ブロスが、陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス又は鉄欠乏陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロスである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
２種以上の異なる栄養ブロスが、異なるＡＳＴカートリッジリザーバに内に接種される、請求項５６〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
各微生物を含む試料が、２つ以上の異なる濃度で前記ＡＳＴカートリッジに接種される、請求項５６〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＡＳＴカートリッジ上の１種以上の抗菌薬希釈系列複製物が、試験下の全ての微生物を含む試料に関する抗菌薬ごとにＭＩＣを提供するよう十分に類似している、請求項５６〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記１種以上の抗菌薬希釈系列複製物が、同一である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗菌薬希釈系列複製物のサブセットのみが、品質管理ＡＳＴ情報を提供することが可能である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
微生物成長を促進させる前記条件が、３０〜３７℃、３３〜３５℃の複数の時間にわたるインキュベーションを含む、請求項５６〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
微生物成長を促進させる前記条件が、ＡＳＴカートリッジの撹拌を含む、請求項５６〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＡＳＴカートリッジの撹拌が、軌道振盪を含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記軌道振盪が、分当たり２５０、３００、４００回転よりも多い頻度で行われる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
軌道振盪半径が、２、５、１０、１５、２０、２５ｍｍよりも大きい、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
１つ以上の十分な成長アッセイが、カートリッジのインキュベーション中に行われる、請求項５６〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
１つ以上の十分な成長アッセイが、前記ＡＳＴカートリッジ上で微生物を含む試料ごとに行われる、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
接種された微生物を含む試料の数以上の数のリザーバが、前記十分な成長アッセイのために利用される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
事前に決定された十分な成長アッセイ閾値が、ＡＳＴアッセイが開始される前に実現されなければならない、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＡＳＴアッセイカートリッジ上での、各微生物を含む試料に関連付けられる１つ以上の十分な成長アッセイがそれぞれ、前記ＡＳＴカートリッジに関してＡＳＴアッセイが開始される前に、事前に決定された十分な成長アッセイ閾値を満たし又は超える、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記十分な成長アッセイが光学密度の読取りの１つ以上を含み、及び／又は代謝試薬製剤が、複数の細菌による低減を可能にする化学物質を含む、請求項５６〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記代謝試薬製剤が、レサズリン、メチレンブルー、及びフェリシアニド、及びフェロシアニド塩を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記リザーバの９０％、９５％、９８％以下が、ＭＩＣ結果を得るのに利用される、請求項５６〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
２つ以上のＡＳＴアッセイが、前記ＡＳＴカートリッジ上の複数のリザーバで行われる、請求項５６〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
２つのＡＳＴアッセイが、前記ＡＳＴカートリッジ上の複数のリザーバで行われる、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）、及び／又は定性的感受性結果（ＱＳＲ）を決定するのに使用されるＡＳＴアッセイ結果の数が、異なる抗菌薬に対して異なる、請求項５６〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
少なくとも１つのＡＳＴアッセイが、代謝プローブアッセイ、表面結合プローブアッセイ、化学プローブアッセイ、生化学プローブアッセイ、酵素生化学プローブアッセイ、ＡＴＰアッセイ、核酸プローブアッセイ、二本鎖核酸プローブアッセイ、光学密度アッセイ、視覚的アッセイ、及びｐＨ分子プローブアッセイからなる群から選択される、請求項５６〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記ＡＳＴアッセイのそれぞれが、代謝プローブアッセイ、表面結合プローブアッセイ、化学プローブアッセイ、生化学プローブアッセイ、酵素生化学プローブアッセイ、ＡＴＰアッセイ、核酸プローブアッセイ、二本鎖核酸プローブアッセイ、光学密度アッセイ、視覚的アッセイ、及びｐＨ分子プローブアッセイからなる群から選択される、請求項５６〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＡＳＴアッセイが、表面結合アッセイを含む、請求項５６〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記ＡＳＴアッセイが、代謝アッセイを含む、請求項５６〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＡＳＴアッセイが、代謝アッセイ及び表面結合アッセイを含む、請求項５６〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記代謝ＡＳＴアッセイが、
（ａ）  代謝プローブ製剤の、複数のチャンバへの添加、
（ｂ）  アッセイ成長インキュベーション期間、及び
（ｃ）  吸光度、蛍光、ルミネッセンス、電気化学的読取りの１つ以上
を含む、請求項１〜９、１７〜１９、５６〜９３のいずれかに記載の方法。
【請求項９５】
前記アッセイ成長インキュベーション期間が、約３０分〜２時間である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記アッセイ成長インキュベーション期間が、約１時間である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記代謝プローブ製剤が、７−ヒドロキシ−１０−オキシドフェノキサジン−１０−イウム−３−オン（レサズリン）を含む、請求項９４〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記代謝プローブ製剤が、レサズリン、メチレンブルー、及びフェリシアニド、及びフェロシアニドイオンを含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記代謝プローブが、式（Ｉ）
【化１】
2021519091.tif 000007
［式中、
Ｒ１は、独立して、ＣＮ、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ３は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリール、又は下位構造Ａであり、
下位構造Ａは、
【化２】
2021519091.tif 000008
（式中、
Ｌ１は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであり、
Ｌ２は、独立して、共有結合、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ４は、独立して、ＣＮ、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ５は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールである）であり、
各Ｘは独立して、存在しない又は１価の陰イオンである］
による構造を有する、請求項９４〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
Ｒ１が、独立して、ＣＮ又は任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールである、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
Ｒ２が、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールである、請求項９９又は１００に記載の方法。
【請求項１０２】
Ｒ３が、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールである、請求項９９〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
Ｘが、１価の陰イオンである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
Ｒ３が、下位構造Ａであり、化合物が、式（ＩＩ）
【化３】
2021519091.tif 000009
による構造を有する、請求項９９〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
Ｌ１及びＬ２のそれぞれが、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリーレンである、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
Ｒ４が、独立して、ＣＮ又は任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールである、請求項１０４又は１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
Ｒ５が、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールである、請求項１０４〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
各Ｘが、独立して、１価の陰イオンである、請求項１０４〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記代謝プローブが、
【化４】
2021519091.tif 000010
2021519091.tif 000011
からなる群から選択される構造を有する、請求項９４に記載の方法。
【請求項１１０】
前記代謝プローブが、２−（４−ロドフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロリド（ＩＮＴ）、（２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムナトリウム塩（ＷＳＴ−１）、４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（２，４−ジニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ］−１，３−ベンゼンジスルホネート（ＷＳＴ−３）、又は５−（２，４−ジスフォフェニル）−３−（２−メトキシ−４−ニトロフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム，分子内塩，一ナトリウム塩（ＷＳＴ−８）を含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記代謝プローブが、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）、２，３−ビス−（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム−５−カルボキスアニリド（ＸＴＴ）、２，３，５−トリフェニル−テトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）、５−シアノ−２，３−ジ（ｐ−トルイル）テトラゾリウムクロリド（ＣＴＣ）、３，３’（３，３’−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４，４’−ジイル）ビス（２−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾール−３−イウム）（ＤＢＮＰＴ）、３−（ナフタレン−１−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾール−３−イウム（ＮＤＴ）、チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド（ＴＢＴＢ）、フェナジンメチルスルフェート（ＰＭＳ）、フェナジンエチルスルフェート（ＰＥＳ）、グリシルフェニルアラニル−アミノフルオロクマリン（ＧＦ−ＡＦＣ）、ＲｅａｌＴｉｍｅ−Ｇｌｏ（商標）、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）、ＢＡＴＤＡのアセトキシメチルエステル、又はフェロセンを含む、請求項５６〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記表面結合プローブが、ランタニドとジエチレントリアミン四酢酸又はクリプテート配位子との配位錯体を含む、請求項５６〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記表面結合プローブが、
【化５】
2021519091.tif 000012
を含む、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記表面結合プローブが、テルビウムの配位錯体である、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記表面結合プローブが、細菌表面に関連付けられる、請求項５６〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記表面結合プローブが、細菌表面に、非共有結合的に結合する、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記表面結合プローブが、細菌表面に、静電的に結合することができる、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記表面結合プローブを：細胞壁、細胞外皮、原形質膜、若しくは細胞被膜の外側表面；細胞壁、細胞外皮、原形質膜、若しくは細胞被膜の内側表面；又は細胞壁、細胞外皮、原形質膜、若しくは細胞被膜の内部；繊毛、線毛、若しくは鞭毛を含むがこれらに限定することのない、細胞外に突出する細胞の任意の構造；任意の膜貫通タンパク質、細胞壁タンパク質、細胞外タンパク質、細胞内タンパク質、細胞外関連多糖、細胞内関連多糖、細胞外脂質、細胞内脂質、膜脂質、細胞壁脂質、タンパク質、多糖、及び／又は細胞外皮に一体化した若しくは関連付けられた脂質であり、限定するものではないがペプチドグリカン、ムレイン、マンノプロテイン、ポリン、ベータ−グルカン、キチン、糖タンパク質、多糖、リポ多糖、リポオリゴ糖、リポタンパク質、エンドトキシン、リポタイコ酸、タイコ酸、脂質Ａ、炭水化物結合ドメイン、排出ポンプ、その他の細胞壁及び／又は細胞膜関連タンパク質、その他の陰イオン性リン脂質、及びこれらの組合せの、１種以上に関連付けることができる、請求項５６〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
１種以上の界面活性剤が、表面結合プローブの添加前にリザーバに添加される、請求項５６〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記界面活性剤が、ポリソルベート、脂肪アルコールエトキシレート、ノノキシノール、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンｘ−１００）、エトキシル化アミン、ポロキサマー、モノステアリン酸グリセロール、モノラウリン酸グリセロール、スパン（ｓｐａｎ）、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）、アルキルポリグリコシド、アミンオキシド、スルホキシド、及びホスフィンオキシド、Ｉｇｅｐａｌ、セチル−トリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、オクテニジンジヒドロクロリド、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、メチルトリアルキル（Ｃ８〜Ｃ１０）アンモニウムクロリド（アドゲン（ａｄｏｇｅｎ）４６４）、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム、及びジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミドを含むがこれらに限定されないリストから選択され得る、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
異なる界面活性剤が、同じＡＳＴカートリッジ上の異なる抗菌薬ブロックに添加され得る、請求項１１９又は１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
複数の界面活性剤が、表面結合プローブの添加前に除去される、請求項１１９〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
関連付けられていない表面結合プローブが、１つ以上の洗浄ステップにより除去される、請求項５６〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
表面積アッセイが、１つ以上の時間分解蛍光測定によって調べられる、請求項５６〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
２種以上の独立した微生物を含有する試料に関して、独立したＡＳＴ評価を支援することが可能な、ＡＳＴカートリッジに接種するためのシステムであって、
ａ．  ８又は１６チャネルバルク溶液ディスペンサ、
ｂ．  使い捨て可能なピペットチップを利用する、８又は１６ヘッドマルチチャネル液体ハンドラ、並びに
ｃ．  接種手順の開始前に、接種されるＡＳＴカートリッジの数及びＡＳＴカートリッジ当たり接種される微生物を含む試料の数の入力を可能にする、インターフェース
を含むシステム。
【請求項１２６】
ユーザが、キャリア集合ステーションで、接種されるＡＳＴカートリッジの数及びＡＳＴカートリッジ当たり接種される微生物を含む試料の数を入力する、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１２７】
前記バルク溶液ディスペンサが、圧力駆動型である、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１２８】
前記バルク溶液ディスペンサが、排出駆動型である、請求項１２８に記載のシステム。
【請求項１２９】
前記液体ハンドラが、液体を吸引し吐出するのに空気排出を利用する、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１３０】
前記液体ハンドラが、吸引され又は吐出された液体の量を決定するのに質量流量センサを利用する、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１３１】
前記液体ハンドラが、個々に対処可能なピペット分取チャネルからなる、請求項１３０〜１３１に記載のシステム。
【請求項１３２】
前記液体ハンドラが少なくとも１つのプランジャからなり、前記プランジャがアクチュエータによって駆動される、請求項１３０に記載のシステム。
【請求項１３３】
前記液体ハンドラに取着された可動ヘッドが、前記ピペットチップを駆出するのに使用される、請求項１３０〜１３２に記載のシステム。
【請求項１３４】
前記可動ヘッドが、空気圧式アクチュエータによって駆動される、請求項１３３に記載のシステム。
【請求項１３５】
前記マルチチャネル液体ハンドラが、２つ以上の異なる濃度の微生物を含む試料を、同じＡＳＴカートリッジ上の異なるリザーバにピペット分取することができる、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１３６】
１つ以上の追加の単一チャネルピペッタを含む、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１３７】
前記液体ハンドラ及び前記ディスペンサが、ＸＹＺガントリーシステム上に載置される、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１３８】
前記液体ハンドラが、１５μＬを超える送出体積に関して、５％、４％、３％、２％以下の精度を有する、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１３９】
前記バルク溶液ディスペンサが、２０μＬを超える送出体積に関して、８％、７％、６％、５％、４％、３％以下の精度を有する、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１４０】
前記バルク溶液ディスペンサで吐出された１種以上の試薬が、前記システム内に貯蔵される、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１４１】
使用前の試薬が、２種以上の異なる栄養ブロスを含む、請求項１４０に記載のシステム。
【請求項１４２】
前記試薬が、４０、５０、６０、８０、１００個のＡＳＴカートリッジの接種を支援するのに十分な体積で貯蔵される、請求項１４１に記載のシステム。
【請求項１４３】
前記バルク溶液ディスペンサ及び／又はマルチチャネル液体ハンドラが、前記ＡＳＴカートリッジとは独立に、１つ以上のリザーバトラフに液体を吐出すること及び前記リザーバトラフから液体を回収することの１つ以上が可能である、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１４４】
１つ以上のＡＳＴカートリッジ、及び１種以上の対応する独立した微生物を含む試料が、再使用可能なキャリア上に配置されかつ前記システム内に投入される、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１４５】
１つ以上の使い捨て可能な容器が、前記１つ以上のＡＳＴカートリッジ及び前記微生物を含む試料と併せて配置され、前記使い捨て可能な容器により、前記ＡＳＴカートリッジに移送する前に追加の試料処理ステップ（例えば、希釈、混合）が可能になる、請求項１４４に記載のシステム。
【請求項１４６】
前記試料の処理が、前記キャリアの投入後に自動的に開始される、請求項１４４〜１４５に記載のシステム。
【請求項１４７】
単一の微生物を含む試料を含む、ＡＳＴパネルの接種が、約５、４、３、２分以下を必要とする、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１４８】
４種の独立した微生物を含む試料を含む、ＡＳＴパネルの接種が、約１５、１２、１０、８、６、５、４分以下を必要とする、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１４９】
前記システム内に、１つ以上の視覚システム及び／又はバーコードリーダが存在し、前記視覚システム及び／又はバーコードリーダが、前記ＡＳＴパネル及び前記キャリア上の１つ以上のバーコードを読むことが可能である、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１５０】
前記システムのソフトウェアが、入力された微生物を含む試料（複数可）に関して適切なＡＳＴパネルが選択されていることを検証する、請求項１４９に記載のシステム。
【請求項１５１】
前記検証が、グラム型判定及びＡＳＴカートリッジ当たりの試料の数を含む、請求項１５０に記載のシステム。
【請求項１５２】
前記システム内に、１つ以上の視覚システムが存在し、前記視覚システムが、機器に入力された前記ＡＳＴパネルが蓋を含まないことを検証することが可能である、請求項１２５に記載のシステム。
【請求項１５３】
前記システム内に、１つ以上の視覚システムが存在し、前記視覚システムが、微生物を含む接種物のチューブが蓋を含まないことを検証することが可能である、請求項１２５に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年３月２７日に出願された米国仮出願第６２／６４８，８１９号の優先権を主張するものである。前述の出願は、その全体が全ての目的で、本明細書に参照により組み込まれる。
【０００２】
本開示は、インビトロ診断デバイス、システム及び方法に関し、詳細には、微生物学的診断デバイスに関する。本開示は、より詳細には、試験キャリアの利用を最大限にすることによって試験コストを削減しつつシステムのスループット及び効率を高めるＡＳＴ試験方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムは、患者をどのように最良に治療するかを決定するために、患者から回収された試料の微生物に対する、抗菌薬の薬物の有効性を評価する。ＡＳＴシステムは、細菌が成長を止める濃度、即ち「最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）」を決定する。これは微生物に対する抗菌薬の作用などの定性的感受性結果（ＱＳＲ）情報に変換され得る。次いでＭＩＣ又はＱＳＲ情報は、患者の治療のために医師又は薬剤師に転送されてもよい。
【０００４】
ＡＳＴ法は、異なるタイプ及び／又は濃度の抗菌薬を事前に集合させたウェル又は「反応槽」を有する試験パネルを受容する試験システムを使用して、中央実験室で頻繁に行われる。例えば、患者検体に対するアムピシリンなどの抗生剤の作用を試験するとき、パネルの複数の異なるウェルのそれぞれに、６〜８つの間の濃度のアムピシリンを集合させてもよい。患者検体も各ウェルに堆積させ、患者検体に対するそれぞれの抗生剤濃度の作用をモニタする。
【０００５】
現行の自動化されたブロス希釈ＡＳＴ法は、所望の試験濃度で供給された抗菌薬化合物が事前に充填されている、１４０個よりも少ないリザーバを備えた個々のパネルを使用する。例えば、抗菌薬は、ブロス微量希釈技法と共に使用されるアメリカ微生物学会の「Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ」（登録商標）２００５年に従い選択されてもよい。さらに、利用可能なシステムは一般に、試料当たり類似の数の抗菌薬を、即ち１０〜１５種の抗菌薬を試験するので、「ＡＳＴ」試験の指示は、この数の抗菌薬に関する情報を受け取ることを意味する。
【０００６】
ＡＳＴパネルのアーキテクチャは、それが使用されるＡＳＴシステムのアーキテクチャに相関し、リザーバは、ＡＳＴ接種／アッセイ処理システムに応じた数及び幾何形状で配置構成される。今日、ＦＤＡの認可を受けた自動化されたＡＳＴプラットフォームの３つ全て、Ｖｉｔｅｋ２（登録商標）（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）、ＭｉｃｒｏＳｃａｎ（商標）（Ｄａｎａｈｅｒ）及びＰｈｏｅｎｉｘ（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に関し、システム設計は、消費可能なカートリッジごとに処理される単一の微生物を含む試料を中心にしている。これまで、Ｖｉｔｅｋ２及びＰｈｏｅｎｉｘは、特別に設計されたカートリッジを有し、単一の微生物を含む試料を等しく全てのカートリッジリザーバに接種できるよう、全てのリザーバが流体により接続されている。ＭｉｃｒｏＳｃａｎは、接種器の９６チップ全てが同じ試料に同時にアクセスできるように、微生物を含む試料が投入される単一トレイを含む、非標準ＭｉｃｒｏＳｃａｎ９６ウェルプレートに適合するよう独自に設計された専用のＲｅｎｏｋマニュアル９６チャネル接種器を有する。
【０００７】
１４０個よりも少ないリザーバを有するパネルは、それほど複雑ではないＡＳＴシステムによって処理できるが、しばしば、１０〜１５種よりも多くの異なる微生物を試験して、ハイリスク患者の標的治療を特定するための広域スペクトル分析を行うことが望ましい。広域スペクトル分析を行うとき、多数の＜１４０個のリザーバパネルをＡＳＴシステムによって逐次処理してもよく、その結果は収集され分析される。代替として、初期自動化されたパネルの後、ブロス微量希釈又はＫｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒディスク拡散などの手動による方法を使用してもよい。そのような逐次処理は、ハイリスク状況における治療を遅延させる。
【０００８】
連続処理の必要性を低減させるために試験パネルのリザーバの数を増加させることが望ましいように考えられるが、試験パネルのサイズを単に増大することで、新たな難題が持ち込まれる。より大きい試験パネルはパネル製造コスト及びＡＳＴの複雑さを増大させるだけでなく、検査室での試験当たりのコストも増大させる。さらに、現行のプラットフォームの技術に対する基本的な制約は、スループット又は感受性に対する並列減少のないリザーバの数の増加を妨げる。
【０００９】
現況技術のプラットフォームは、典型的には試験当たり１０〜１５種の抗菌薬しか流すことができないので、この数の結果を「ＡＳＴ試験指示」から得ることが臨床上の標準である。この制約は、実際に試験結果が異なる患者に関して非常に異なる示唆を有することができるとき、全てのＡＳＴを効果的に一緒にまとめる。ＡＳＴ結果は、効果のない実験的抗菌薬からより強力な抗菌薬へと敗血症患者を段階的に進めて患者の生命を救うのに、極めて重要になり得る。それらは、静脈内から送達される過度に広範な実験療法薬からより標的を狙う経口的に利用可能な抗菌薬へと段階的に縮小するのにも使用することができ、副作用を制限することにより患者に利益を与えることができかつ広域スペクトル薬の使用を減少させることによって社会にも利益を与えることができる。その一方で、尿路感染症の懸念から外来診療所に行く、その他の点では健康な若い成人患者の場合、ＡＳＴ結果は、適切な経口的に利用可能な療法薬を決定するのに極めて有用と考えられる。
【００１０】
これらの患者タイプは現在同じＡＳＴ処理を受け、病院の統合は検査室の統合に繋がっているので、統合された臨床微生物学検査室は、一般には外来患者の試料が主なものである両方の試料タイプを実験にかけなければならない。この設計は資源を無駄にし、敗血症患者の場合にはしばしば、試験ごとに不完全な情報を提供する。広域スペクトル分析が外来患者の検体に対して行われるとき、ＡＳＴパネルの大部分は使用されず又はその結果が無視される。パネルの未活用は、少なくとも、抗菌薬化合物を無駄にしかつより少ない結果を得るのに同じ処理費用を使用し、各試験のコストを検査室まで不必要に増大させるという理由で、望ましくない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】アメリカ微生物学会、「Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ」（登録商標）２００５年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
（発明の要旨）
ＵＳ  １０，１６１，１９４及びＵＳ  ９，８３４，８０８において、本発明者らは、＞１５０個の独立したリザーバを含むカートリッジを備えた、自動化されたＡＳＴを行うための方法及び機器を紹介し、０３３ＰＲにおいて、本発明者らは、３８４リザーバＡＳＴカートリッジ消耗品を開示した。ここで本発明者らは、＞１５０個のリザーバを備えた単一ＡＳＴカートリッジ消耗品を使用して、２種以上の微生物を含む試料を、カートリッジ上に配置され個別のＡＳＴパネル上で同時に処理することができ、各試料が抗菌薬のメニュー及び濃度に関して類似の試験を受けるという概念を紹介する。本発明者らはさらに、試料間で汚染がないように、そのような消耗品を２つ以上の試料に接種するための方法を紹介する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一態様によれば、抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムによって試験がなされる複数の抗菌薬試験パネル及び複数の試料を保持するキャリアを集合させるための方法は、試験範囲を受信するステップ、並びに、試験範囲に応答して、ＡＳＴシステムを作動させるための複数の異なるワークフローの中から１つのワークフローを選択するステップであり、各ワークフローが、ワークフローに特有のキャリアマップ、及びプロンプトを含む、ステップを含む。方法は、ワークフローのキャリアマップをユーザに表示すること、並びにパネル及び試料を持つキャリアの集合を、キャリアマップを使用して制御するように、ワークフローの１つ以上のプロンプトをユーザに表示することを含む。方法は、１つ以上のパネルへの異なる試料の割当てに関する関連情報を収集することを含む。方法は、キャリアのパネルごとに、表示するステップ及び収集するステップを繰り返すステップ、及びＡＳＴシステムに関連情報を転送することを含め、ＡＳＴシステムにキャリアを転送するステップを含む。
【００１４】
別の態様によれば、抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）法をＡＳＴシステムで行うための方法は、試験範囲を受信するステップ、試験範囲に応答して、試験キャリア及び１つ以上の抗菌薬試験パネルの選択を制御することを含む、試験範囲に関連付けられたワークフローを実行するステップ、選択されたワークフローに関するワークフロー命令を表示して、試験パネルを持つ試験キャリアの集合及び試験パネルへの少なくとも２つの異なる試料の割当てを制御するステップ、並びに少なくとも２つの異なる試料に並行してＡＳＴ法を行うステップを含む。
【００１５】
さらなる態様によれば、抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）処理のために複数の試験パネル及び複数の試験試料を持つキャリアの集合を制御するための、ＡＳＴシステムのキャリア集合ステーションが提供される。キャリア集合ステーションは、プロセッサ、ＡＳＴシステムを制御するためのユーザインターフェース命令を記憶する記憶デバイス、プロセッサの動作中、ユーザインターフェース命令によって制御されたユーザインターフェースを表示するための、プロセッサ及び記憶デバイスに連結されたディスプレイであり、ユーザインターフェースが、試験範囲、試験キャリア、試験パネル、及び試験試料に関する情報を受信するための入力機構を含む、ディスプレイを含む。キャリア集合ステーションはさらに、記憶デバイスに記憶された複数の異なるワークフローであり、各ワークフローが、試験範囲に関連付けられかつキャリアマップ及びプロンプトセットを含み、プロンプトセットが、キャリアの１つ以上の試験パネルへの試料の割当てを制御する、複数の異なるワークフローを含む。ユーザインターフェースは、試験範囲に関するパネルを持つキャリアの集合及びＡＳＴ処理のための１つ以上の試験パネルへの１つ以上の試料の割当てを制御するように、キャリアマップ及びプロンプトセットを表示することを含めて、受信した試験範囲に関連付けられたワークフローをユーザに表示するよう実行されたときに動作可能である。
【００１６】
別の態様によれば、抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）処理のために複数の試験パネル及び複数の試験試料を持つキャリアの集合を制御するための、ＡＳＴシステムのキャリア集合ステーションが提供される。キャリア集合ステーションは、プロセッサ、ＡＳＴシステムを制御するためにユーザインターフェース命令を記憶する記憶デバイス、キャリア集合ステーションの動作中、ユーザインターフェース命令によって制御されたユーザインターフェースを表示するための、プロセッサ及び記憶デバイスに連結されたディスプレイを含み、ユーザインターフェースは、試験範囲、試験キャリア、試験パネル、及び試験試料に関する情報を受信するための入力機構を含む。キャリア集合ステーションはさらに、記憶デバイスに記憶されかつ試験範囲に関連付けられたワークフローを含み、ワークフローは、キャリアマップ及びプロンプトセットをユーザに表示するよう実行されたときに動作可能であり、プロンプトセットは、多重試験パネルの選択及び多重試験パネルへの少なくとも２つの試験試料の割当てを制御する。
【００１７】
他の態様によれば、Ｎ個の抗菌薬試験ウェルを有する試験パネルを使用する抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムのスループットを最適化するための方法は、試料に対して行われる試験を特定する試験範囲を受信するステップ、受信された試験範囲が、Ｍ種の抗菌薬、（Ｍ＜Ｎ）に関連付けられた試験であることに応答して、Ｍ種の抗菌薬試験のＮ／Ｍ個のコピーを含む多重試験パネルの選択を制御するステップ、抗菌薬の各コピーと異なる試料との関連付けを制御するステップ、並びに多重試験パネルを処理して、異なる試料を並行して試験し、それによってＡＳＴシステムのスループットを最適化するステップを含む。
【００１８】
一態様によれば、Ｎ個の抗菌薬試験ウェルを有する試験パネルを使用する抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムのスループットを最適化するための方法は、試料に対して行われる試験を特定する試験範囲を受信するステップ、受信された試験範囲が、Ｍ種の抗菌薬（Ｍ＜Ｎ）に関連付けられた試験であることに応答して、Ｍ種の抗菌薬のＮ／Ｍ個のコピーを含む多重試験パネルの選択を制御するステップ、Ｎ／Ｍ個のコピーの１つのコピーと試料との関連付けを制御するステップ、同じ試験範囲の第２の試料を検索し、第２の試料とＭ種の抗菌薬のＮ／Ｍ個のコピーの異なるコピーとの関連付けを制御するステップ、試料を検索するステップ及びＭ種の抗菌薬のコピーに試料を関連付けるステップを、各コピーが試料に関連付けられるまで繰り返すステップ、並びに多重試験パネルを処理して、異なる試料を並行して試験し、それによってＡＳＴシステムのスループットを最適化するステップを含む。
【００１９】
他の態様によれば、Ｎ個の抗菌薬ウェルを含む試験パネルを使用する、高スループット抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムは、プロセッサ、プロセッサにより制御されかつ試料に対して行われる試験を特定する試験範囲を受信するよう適合されるインターフェース、受信された試験範囲が、Ｍ種の抗菌薬試験ウェル（Ｍ＜Ｎ）に関連付けられた試験であることに応答して、多重試験パネル上に提供された抗菌薬のＮ／Ｍ個のコピーの各コピーへの、複数の試料の異なる１つの試料の割当てを制御するためのワークフロー制御器、及び多重試験パネルに異なる試料を接種して、改善されたＡＳＴシステムのスループットのために複数の試料の並列処理を可能にする接種ユニットを含む。
【００２０】
さらに本発明は、少なくとも１５０個のリザーバ、及び乾燥形態をとる８種以上の異なる抗菌薬であり、それぞれが４つ以上の異なる濃度で存在する抗菌薬を含み得る、ＡＳＴカートリッジであって、複数の濃度にある複数の抗菌薬が、２個以上のリザーバで複製される、ＡＳＴカートリッジを含む。カートリッジは、３８４又は１５３６個のリザーバを含み得る。複数の濃度にある２、３、４、５、６、７、８種の抗菌薬の複製物があってもよい。カートリッジは、複数の抗菌薬濃度範囲を希釈系列で含有していてもよい。希釈系列は、カートリッジ上の幾何学的リザーバブロック（例えば、空間ブロック）内に存在し得る。抗菌薬ブロック当たり少なくとも１個のリザーバは、抗菌剤を含まなくてもよい。特に、抗菌薬希釈系列はＡＳＴパネル内で組織され、それらのパネルは隣接する空間ブロックに実装されて、異なる微生物を含む試料間の潜在的な汚染を最小限に抑える。「空間ブロック」という用語は、カセット消耗品の空間組織の単位を指す。各空間ブロックは、ＡＳＴパネルレイアウトを含み、カセット消耗品における各空間ブロックの組織は一貫しており、即ち同様の希釈系列及び対照ウェルは、各空間ブロック内で同様の位置にある。本開示の一部の実施形態では、個別の空間ブロックのＡＳＴパネルが実質的に同一であり、したがって流体の取扱い及びその他の処理ステップは、空間ブロックの全体にわたって一定のままになり、均等なＭＩＣ及び／又はＱＳＲ情報が、空間ブロック上に接種された各試料に関して得られるようになる。しかし他の実施形態では、異なる空間ブロックは、ブロックが非同一となり得る場合であっても、同様の希釈系列及び対照ウェルが各空間ブロック内で同様の位置にあるように配置された異なるＡＳＴパネルを含む。
【００２１】
本発明はさらに、多重化パネル（ＡＳＴカートリッジ）に接種するための方法及び接種を行うための接種器システムを含む。接種器は、ユーザにより入力され得る情報である、ＡＳＴカートリッジ内で接種されることになる微生物を含む試料の数を、入力できるように設計される。接種器は、さらに、＜５分でＡＳＴカートリッジの接種を行うことが可能になるように設計される。接種器は、微生物を含む試料を２つ以上の異なる濃度で、単一のＡＳＴカートリッジにさらに接種してもよい。
【００２２】
抗菌薬は、複数のグラム陰性微生物に対して有効であることが知られている可能性がある。抗菌薬は、アムピシリン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、ニトロフラントイン、トリメトプリム、アミカシン、アモキシシリン−クラブラン酸、アムピシリン−スルバクタム、セフタジジム、セフタジジム−アビバクタム、セフトロザン−タゾバクタム、ピペラシリン−タゾバクタム、セフロキシム、セフェピム、セフォテタン、セフォキシチン、セフェピム、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、セフォタキシム、ドリペネム、エルタペネム、イミペネム、メロペネム及びメロペネム−バボルバクタムから選択されてもよい。抗菌薬は、アモキシリン；アモキシリン−クラブラン酸；アムピシリン；セフロキシム；シプロフロキサシン、レボフロキサシン及びモキシフロキサシンの１種以上；ドキシサイクリン、ミノサイクリン及びテトラサイクリンの１種以上；ニトロフラントイン；並びにトリメトプリム及びトリメトプリム−スルファメトキサゾールの１種以上から選択されてもよい。抗菌薬は、グラム陽性微生物に対して有効であることが知られている可能性がある。抗菌薬は、ニトロフラントイン、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、アジスロマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、オキサシリン、アムピシリン、ペニシリン、セフタロリン、ダプトマイシン、リネゾリド、テジゾリド、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン、バンコマイシン、シプロフロキサシン及びレボフロキサシンから選択されてもよい。抗菌薬は、アムピシリン及びペニシリンの１種以上、アジスロマイシン及びエリスロマイシンの１種以上、シプロフロキサシン及びレボフロキサシンの１種以上、クリンダマイシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン及びテトラサイクリンの１種以上、リネゾリド、ニトロフラントイン、トリメトプリム及びトリメトプリム−スルファメトキサゾールの１種以上、並びにオキサシリンから選択されてもよい。セフォキシチン耐性及び誘導性クリンダマイシン耐性の１種以上に関するスクリーンも含まれ、各スクリーンの各濃度は、各抗菌薬希釈が二重になされたのと同じ回数で二通りある。抗菌薬は、複数のグラム陽性及びグラム陰性微生物に対して有効であることが知られている可能性がある。抗菌薬は、アムピシリン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、ニトロフラントイン、トリメトプリム、アミカシン、アモキシシリン−クラブラン酸、アムピシリン−スルバクタム、セフタジジム、セフタジジム−アビバクタム、セフトロザン−タゾバクタム、ピペラシリン−タゾバクタム、セフロキシム、セフェピム、セフォテタン、セフォキシチン、セフェピム、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、セフォタキシム、ドリペネム、エルタペネム、イミペネム、メロペネム、アジスロマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、オキサシリン、アムピシリン、ペニシリン、セフタロリン、ダプトマイシン、リネゾリド、テジゾリド、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン及びバンコマイシンから選択されてもよい。各抗菌薬希釈系列の各複製物は、ＭＩＣを決定するのに適切な臨床範囲を含んでいてもよい。各抗菌薬希釈系列の１種以上の複製物は、機器の品質管理（ＱＣ）を行うのに適切なＱＣ範囲を含んでいてもよい。各抗菌薬希釈系列の各複製物は、機器のＱＣを行うのに適切なＱＣ範囲を含んでいてもよい。少なくとも５種の抗菌薬の抗菌薬希釈範囲は、少なくとも１つの抗菌薬濃度によりＭＩＣを決定するのに必要な臨床範囲を超えてもよい。
【００２３】
カートリッジは、抗菌薬を含有しない３個以上のリザーバを含んでいてもよい。少なくとも５種の抗菌薬の希釈範囲は、少なくとも１つの抗菌薬濃度により、細菌種に関する臨床的に関連する希釈範囲を超えてもよい。カートリッジは、リザーバ壁及びリザーバ基部を含むリザーバを含んでいてもよく、複数のリザーバに関するリザーバ壁は不透明であってもよい。リザーバは、リザーバ基部を通して、３５０ｎｍの光の＞８０％、＞８５％、＞９０％の通過を可能にしてもよい。リザーバ基部は、３５０ｎｍの光の≦８０％が通ることができるように不透明であってもよい。リザーバ壁及び／又は基部は、ポリスチレン又はポリプロピレンを含んでいてもよい。ポリスチレンは、未処理であってもよい。カートリッジは、０〜３５℃の間で貯蔵するのに安定であってもよい。カートリッジは、乾燥剤を含むパウチ内に封止されてもよい。カートリッジは、接着カバーで封止されてもよい。カートリッジは、取外し可能な蓋を含んでいてもよい。取外し可能な蓋は、ポリスチレンであってもよい。
【００２４】
本開示は、複数の空間ブロックを含み、各空間ブロックが、８つ以上の抗菌薬希釈系列、及び抗菌薬を含まない少なくとも１つのウェルを含むＡＳＴパネルを含む、ＡＳＴカートリッジであって、各空間ブロック内で、同様の希釈系列が同様の位置にあり、各空間ブロック内で、抗菌薬を含まない同様のウェルが同様の位置にある、ＡＳＴカートリッジを含んでいてもよい。
【００２５】
本開示は、自動化された抗菌薬感受性試験のための方法も含む。この方法は：約３８４又は約１５３６個のリザーバ、乾燥形態をとる８種以上の異なる抗菌薬であり、それぞれが４つ以上の異なる濃度で存在し、複数の濃度にある複数の抗菌薬が、２個以上のリザーバで複製される抗菌薬を含み、複数の抗菌薬濃度範囲が、希釈系列に存在し、異なる抗菌薬の希釈系列が、カートリッジ上の幾何学的リザーバブロック（例えば、空間ブロック）内に存在し、抗菌薬複製物（例えば、ＡＳＴパネル）は、ＡＳＴカートリッジが多数の抗菌薬ブロックを含むようなブロックレベルで存在し、抗菌薬ブロック当たり少なくとも１つのリザーバが抗菌薬を含まない、ＡＳＴカートリッジを選択すること；ＡＳＴカートリッジに２種以上の別個の微生物を含む試料を接種し、各試料が別個の抗菌薬ブロック内に接種されるようにすること；２〜１２時間間のの期間、微生物成長を促進させる条件下でカートリッジをインキュベートすること；１つ以上のＡＳＴアッセイを複数のリザーバで行うこと；複数のリザーバを光学的に調べること；及びカートリッジ上の複数の抗菌薬に関し、微生物を含む試料ごとにＭＩＣを決定することを含む。この方法において、２、３、４、５、６、７、８種の異なる微生物を含む試料は、カートリッジに接種されてもよい。２種以上の微生物は、同じグラム型のものであってもよい。２種以上の微生物を含む試料は、ほぼ同じ濃度で、ＡＳＴカートリッジ内の複数のリザーバに接種されてもよい。１回以上の希釈が、接種器によって行われてもよい。２回の希釈が、接種器によって行われてもよい。第１の希釈は、リザーバトラフ内で接種器によって行われてもよい。第１の希釈は、栄養ブロス内で行われてもよい。栄養ブロスは、陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス又は鉄欠乏陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロスであってもよい。第２の希釈は、接種器によって、ＡＳＴカートリッジリザーバ内で行われてもよい。栄養ブロスは陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス又は鉄欠乏陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロスであってもよい。２種以上の異なる栄養ブロスは、異なるＡＳＴカートリッジリザーバに接種されてもよい。各微生物を含む試料は、２つ以上の異なる濃度でＡＳＴカートリッジ内に接種されてもよい。ＡＳＴカートリッジ上の１種以上の抗菌薬希釈系列複製物は、試験下の全ての微生物を含む試料に関する抗菌薬ごとにＭＩＣを提供するよう十分に類似していてもよい。１種以上の抗菌薬希釈系列複製物は、同一であってもよい。抗菌薬希釈系列複製物のサブセットのみが、品質管理ＡＳＴ情報を提供することが可能であってもよい。微生物成長を促進させる条件は、３０〜３７℃の間、３３〜３５℃の間の温度での複数の時間にわたるインキュベーションを含んでいてもよい。微生物成長を促進させる条件は、ＡＳＴカートリッジの撹拌を含んでいてもよい。ＡＳＴカートリッジの撹拌は、軌道振盪を含んでいてもよい。軌道振盪は、分当たり２５０、３００、４００回転よりも多い頻度で行われてもよい。軌道振盪半径は、２、５、１０、１５、２０、２５ｍｍより大きくてもよい。１つ以上の十分な成長アッセイは、カートリッジのインキュベーション中に行われてもよい。１つ以上の十分な成長アッセイは、ＡＳＴカートリッジ上で微生物を含む試料ごとに行われてもよい。接種された微生物を含む試料の数以上の数のリザーバは、十分な成長アッセイのために利用されてもよい。一部の実施形態では、事前に決定された十分な成長アッセイ閾値は、ＡＳＴアッセイが開始される前に実現されなければならない。この実施形態では、ＡＳＴカートリッジ上の各微生物を含む試料に関連付けられた１つ以上の十分な成長アッセイは、それぞれ、ＡＳＴカートリッジに関してＡＳＴアッセイが開始される前に、事前に決定された十分な成長アッセイ閾値を満たし又は超える。十分な成長アッセイは光学密度の読取りの１つ以上を含んでいてもよく、及び／又は代謝試薬製剤は、複数の細菌による低減を可能にする化学物質を含んでいてもよい。代謝試薬製剤は、レサズリン、メチレンブルー及びフェリシアニド及びフェロシアニド塩を含んでいてもよい。一実施形態では、リザーバの９０％、９５％、９８％以下が、ＭＩＣ結果を提供するのに利用される。２つ以上のＡＳＴアッセイは、ＡＳＴカートリッジ上の複数のリザーバで行われてもよい。２つのＡＳＴアッセイは、ＡＳＴカートリッジ上の複数のリザーバで行われてもよい。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）及び／又は定性的感受性結果（ＱＳＲ）を決定するのに使用されるＡＳＴアッセイ結果の数は、異なる抗菌薬に対して異なってもよい。少なくとも１つのＡＳＴアッセイは：代謝プローブアッセイ、表面結合プローブアッセイ、化学プローブアッセイ、生化学プローブアッセイ、酵素生化学プローブアッセイ、ＡＴＰアッセイ、核酸プローブアッセイ、二本鎖核酸プローブアッセイ、光学密度アッセイ、視覚的アッセイ及びｐＨ分子プローブアッセイからなる群から選択されてもよい。ＡＳＴアッセイのそれぞれは：代謝プローブアッセイ、表面結合プローブアッセイ、化学プローブアッセイ、生化学プローブアッセイ、酵素生化学プローブアッセイ、ＡＴＰアッセイ、核酸プローブアッセイ、二本鎖核酸プローブアッセイ、光学密度アッセイ、視覚的アッセイ及びｐＨ分子プローブアッセイからなる群から選択されてもよい。ＡＳＴアッセイは、表面結合アッセイを含んでいてもよい。ＡＳＴアッセイは、代謝アッセイを含んでいてもよい。ＡＳＴアッセイは、代謝アッセイ及び表面結合アッセイを含んでいてもよい。代謝ＡＳＴアッセイは：代謝プローブ製剤の、複数のチャンバへの添加；アッセイ成長インキュベーション期間；及び吸光度、蛍光、ルミネッセンス、電気化学的読取りの１つ以上を含んでいてもよい。アッセイ成長インキュベーション期間は、約３０分〜２時間であってもよい。アッセイ成長インキュベーション期間は、約１時間であってもよい。代謝プローブ製剤は、７−ヒドロキシ−１０−オキシドフェノキサジン−１０−イウム−３−オン（レサズリン）を含んでいてもよい。代謝プローブ製剤は、レサズリン、メチレンブルー及びフェリシアニド及びフェロシアニドイオンを含んでいてもよい。代謝プローブは、式（Ｉ）による構造を有し、
【００２６】
【化１】
2021519091.tif 000003
式中、Ｒ１は、独立して、ＣＮ、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであってもよく；Ｒ２は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであってもよく；Ｒ３は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリール、又は下位構造Ａであってもよく；式中、Ｌ１は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであってもよく；Ｌ２は、独立して、共有結合、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであってもよく；Ｒ４は、独立して、ＣＮ、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであってもよく；Ｒ５は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は任意選択的に置換された５〜１０員のヘテロアリールであってもよく；各Ｘは独立して、存在しない又は１価の陰イオンであってもよい。Ｒ１は、独立して、ＣＮ又は任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。Ｒ２は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。Ｒ３は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。Ｘは、１価の陰イオンであってもよい。Ｒ３は、下位構造Ａであってもよく、化合物は、式（ＩＩ）：
【００２７】
【化２】
2021519091.tif 000004
による構造を有する。Ｌ１及びＬ２のそれぞれは、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリーレンであってもよい。Ｒ４は、独立して、ＣＮ又は任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。Ｒ５は、独立して、任意選択的に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。各Ｘは、独立して、１価の陰イオンであってもよい。代謝プローブは：
【００２８】
【化３】
2021519091.tif 000005
からなる群から選択される構造を有していてもよい。代謝プローブは、２−（４−ロドフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロリド（ＩＮＴ）、（２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムナトリウム塩（ＷＳＴ−１）、４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（２，４−ジニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ］−１，３−ベンゼンジスルホネート（ＷＳＴ−３）又は５−（２，４−ジスフォフェニル）−３−（２−メトキシ−４−ニトロフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム，分子内塩，一ナトリウム塩（ＷＳＴ−８）を含んでいてもよい。代謝プローブは、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）、２，３−ビス−（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム−５−カルボキスアニリド（ＸＴＴ）、２，３，５−トリフェニル−テトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）、５−シアノ−２，３−ジ（ｐ−トルイル）テトラゾリウムクロリド（ＣＴＣ）、３，３’（３，３’−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４，４’−ジイル）ビス（２−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾール−３−イウム）（ＤＢＮＰＴ）、３−（ナフタレン−１−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾール−３−イウム（ＮＤＴ）、チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド（ＴＢＴＢ）、フェナジンメチルスルフェート（ＰＭＳ）、フェナジンエチルスルフェート（ＰＥＳ）、グリシルフェニルアラニル−アミノフルオロクマリン（ＧＦ−ＡＦＣ）、ＲｅａｌＴｉｍｅ−Ｇｌｏ（商標）、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）、ＢＡＴＤＡのアセトキシメチルエステル又はフェロセンを含んでいてもよい。表面結合プローブは、ランタニドとジエチレントリアミン四酢酸又はクリプテート配位子との配位錯体を含んでいてもよい。表面結合プローブは、
【００２９】
【化４】
2021519091.tif 000006
を含んでいてもよい。表面結合プローブは、テルビウムの配位錯体であってもよい。表面結合プローブは、細菌表面に関連付けられてもよい。表面結合プローブは、非共有結合的に細菌表面に結合してもよい。表面結合プローブは、静電的に細菌表面に結合することができる。表面結合プローブは：細胞壁、細胞外皮、原形質膜若しくは細胞被膜の外側表面；細胞壁、細胞外皮、原形質膜若しくは細胞被膜の内側表面；又は細胞壁、細胞外皮、原形質膜若しくは細胞被膜の内部；繊毛、線毛若しくは鞭毛を含むがこれらに限定することのない、細胞外に突出する細胞の任意の構造；任意の膜貫通タンパク質、細胞壁タンパク質、細胞外タンパク質、細胞内タンパク質、細胞外関連多糖、細胞内関連多糖、細胞外脂質、細胞内脂質、膜脂質、細胞壁脂質、タンパク質、多糖及び／又は細胞外皮に一体化した若しくは関連付けられた脂質であり、限定するものではないがペプチドグリカン、ムレイン、マンノプロテイン、ポリン、ベータ−グルカン、キチン、糖タンパク質、多糖、リポ多糖、リポオリゴ糖、リポタンパク質、エンドトキシン、リポタイコ酸、タイコ酸、脂質Ａ、炭水化物結合ドメイン、排出ポンプ、その他の細胞壁及び／又は細胞膜関連タンパク質、その他の陰イオン性リン脂質及びこれらの組合せの、１種以上に関連付けることができる。１種以上の界面活性剤は、表面結合プローブの添加前に、リザーバに添加されてもよい。界面活性剤は、ポリソルベート、脂肪アルコールエトキシレート、ノノキシノール、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンｘ−１００）、エトキシル化アミン、ポロキサマー、モノステアリン酸グリセロール、モノラウリン酸グリセロール、スパン（ｓｐａｎ）、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）、アルキルポリグリコシド、アミンオキシド、スルホキシド及びホスフィンオキシド、Ｉｇｅｐａｌ、セチル−トリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、オクテニジンジヒドロクロリド、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、メチルトリアルキル（Ｃ８〜Ｃ１０）アンモニウムクロリド（アドゲン（ａｄｏｇｅｎ）４６４）、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム及びジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミドを含むがこれらに限定されないリストから選択されてもよい。異なる界面活性剤は、同じＡＳＴカートリッジ上の異なる抗菌薬ブロックに添加されてもよい。複数の界面活性剤は、表面結合プローブの添加前に除去されてもよい。関連付けられていない表面結合プローブは、１つ以上の洗浄ステップによって除去される。表面積アッセイは、１つ以上の時間分解蛍光測定によって調べられてもよい。
【００３０】
本開示は、２種以上の独立した微生物含有試料に関して、独立したＡＳＴ評価を支援することが可能な、ＡＳＴカートリッジに接種するためのシステムについても記述し、このシステムは、８又は１６チャネルバルク溶液ディスペンサ、使い捨て可能なピペットチップを利用する８又は１６ヘッドマルチチャネル液体ハンドラ、及び接種手順の開始前に、接種されるＡＳＴカートリッジの数及びＡＳＴカートリッジ当たり接種される微生物を含む試料の数の入力を可能にする、インターフェースを含む。ユーザは、キャリア集合ステーションにおける、接種されるＡＳＴカートリッジの数及びＡＳＴカートリッジ当たり接種される微生物を含む試料の数を、入力してもよい。バルク溶液ディスペンサは、圧力駆動型であってもよい。バルク溶液ディスペンサは、排出駆動型であってもよい。液体ハンドラは、液体を吸引し吐出するのに空気排出を利用してもよい。液体ハンドラは、吸引され又は吐出された液体の量を決定するのに、質量流量センサを利用してもよい。液体ハンドラは、個々に対処可能なピペット分取チャネルからなってもよい。液体ハンドラは少なくとも１つのプランジャからなってもよく、前記プランジャはアクチュエータによって駆動されてもよい。可動ヘッドは、液体ハンドラに取着されてもよく、ピペットチップを駆出するのに使用されてもよい。可動ヘッドは、空気圧式アクチュエータによって駆動されてもよい。マルチチャネル液体ハンドラは、２つ以上の異なる濃度の微生物を含む試料を、同じＡＳＴカートリッジ上の異なるリザーバにピペット分取することができる。システムは、１つ以上の追加の単一チャネルピペッタを含んでいてもよい。液体ハンドラ及びディスペンサは、ＸＹＺガントリーシステム上に載置されてもよい。液体ハンドラは、１５μＬを超える送出体積に関して、５％、４％、３％、２％以下の精度を有していてもよい。バルク溶液ディスペンサは、２０μＬを超える送出体積に関して、８％、７％、６％、５％、４％、３％以下の精度を有していてもよい。バルク溶液ディスペンサで吐出された１種以上の試薬は、システム内に貯蔵されてもよい。使用前の試薬が、２種以上の異なる栄養ブロスを含んでいてもよい。試薬は、４０、５０、６０、８０、１００個のＡＳＴカートリッジの接種を支援するのに十分な体積で貯蔵されてもよい。バルク溶液ディスペンサ及び／又はマルチチャネル液体ハンドラは、ＡＳＴカートリッジとは独立に、１つ以上のリザーバトラフに液体を吐出すること及びこれらリザーバトラフから液体を回収することの１つ以上が可能であってもよい。１つ以上のＡＳＴカートリッジ及び１種以上の対応する独立した微生物を含む試料は、再使用可能なキャリア上に配置されてもよくかつシステム内に投入されてもよい。１つ以上の使い捨て可能な容器は、１つ以上のＡＳＴカートリッジ及び微生物を含む試料と併せて配置されてもよく、前記使い捨て可能な容器により、ＡＳＴカートリッジに移送する前に追加の試料処理ステップ（例えば、希釈、混合）が可能になる。試料処理は、キャリアの投入後に自動的に開始されてもよい。単一の微生物を含む試料を含む、ＡＳＴパネルの接種は、約５、４、３、２分以下を必要としてもよい。４種の独立��た微生物を含む試料を含む、ＡＳＴパネルの接種は、約１５、１２、１０、８、６、５、４分以下を必要としてもよい。システム内に、１つ以上の視覚システム及び／又はバーコードリーダが存在してもよく、前記視覚システム及び／又はバーコードリーダは、ＡＳＴパネル及びキャリア上の１つ以上のバーコードを読むことが可能である。システムのソフトウェアは、入力された微生物を含む試料（複数可）に関して適切なＡＳＴパネルが選択されていることを検証する。検証は、グラム型判定及びＡＳＴカートリッジ当たりの試料の数を含んでいてもよい。１つ以上の視覚システムがシステム内に存在するとき、前記視覚システムは、機器に入力されたＡＳＴパネルが蓋を含まないことを検証することが可能であってもよい。１つ以上の視覚システムがシステム内に存在するとき、前記視覚システムは、微生物を含む接種物のチューブが蓋を含まないことを検証することが可能であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の態様を取り入れた抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）システムの例示的な構成要素を示すブロック図である。
【図２】本発明の態様によるキャリア集合のための、図１のシステムで実現され得る様々なワークフローの流れ図である。
【図３Ａ】図１のＡＳＴシステムで使用される、グラフィックユーザインターフェース（ＧＵＩ）のインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図３Ｂ】図１のＡＳＴシステムで使用される、グラフィックユーザインターフェース（ＧＵＩ）のインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図４Ａ】多数の抗菌薬パネルを持つＡＳＴキャリアの集合を制御するのに使用され得る、ＧＵＩのインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図４Ｂ】多数の抗菌薬パネルを持つＡＳＴキャリアの集合を制御するのに使用され得る、ＧＵＩのインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図４Ｃ】多数の抗菌薬パネルを持つＡＳＴキャリアの集合を制御するのに使用され得る、ＧＵＩのインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図５Ａ】多数の微生物を含む試料に関する多数の抗菌薬パネルを持つＡＳＴキャリアの集合を制御するのに使用され得る、ＧＵＩのインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図５Ｂ】多数の微生物を含む試料に関する多数の抗菌薬パネルを持つＡＳＴキャリアの集合を制御するのに使用され得る、ＧＵＩのインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図５Ｃ】多数の微生物を含む試料に関する多数の抗菌薬パネルを持つＡＳＴキャリアの集合を制御するのに使用され得る、ＧＵＩのインターフェースウィンドウの例示的な実施形態を示す図である。
【図６】全域抗菌薬試験を支援するように配置構成されたキャリア及びパネルの写真である。
【図７】全域抗菌薬パネルに関する例示的な抗菌薬／リザーバマッピングを示す図である。
【図８】多重抗菌薬パネルに関する例示的な抗菌薬／リザーバマッピングを示す図である。
【図９】単一ＡＳＴ試験サイクルにおける多数の試料の並列処理のための、多重化パネルを支援するキャリアの画像である。
【図１０】ＡＳＴカートリッジの接種のためのワークフローである。
【図１１】接種器に関する高レベルシステムブロック図である。
【図１２】単一チップが搭載されたマルチチャネルピペット及びバルク溶液ディスペンサ（マルチチャネルピペットヘッドの後ろ）を含む、ｚ軸を備えた接種器ガントリーの、高レベルＣＡＤである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
（定義）
本明細書で使用される「又は」という単語は、他に特に指示されない限り、「及び／又は」の包括的な意味で使用され、「いずれか／又は」の排他的な意味ではない。
【００３３】
任意の発行された米国特許、許可された出願、公開された外国出願及び本明細書に引用される参考文献は、それぞれが参照により組み込まれるように特にかつ個々に示されたかのごとく同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
【００３４】
本発明を、より容易に理解するために、ある特定の用語について、最初に以下に定義する。下記の用語及びその他の用語に関する追加の定義については、本明細書の全体を通して述べる。
【００３５】
抗菌薬：  本明細書で使用される抗菌薬は、微生物を死滅させ（殺菌性）、減衰させ（静菌性）又は微生物の機能を阻害する薬剤を指す。抗菌薬は、化学的化合物、生物学的生成物、例えばペプチド、タンパク質、抗体若しくは核酸又は小分子とすることができる。天然に生ずる生成物であっても合成生成物であってもよい。
【００３６】
およそ又は約：  本明細書で使用される「およそ」又は「約」という用語は、問題となっている１つ以上の値に適用されるとき、言及される基準値に類似の値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」又は「約」という用語は、他に記述されない限り又は他に文脈から明らかにされない限り（そのような値が、可能な値の１００％を超える可能性がある場合を除く）、記述される基準値のいずれかの方向（基準値よりも大きい又は小さい）で、２５％〜１％以下の範囲に包含される値の範囲を指す。
【００３７】
キャリア：  本明細書で使用される「キャリア」は、１つ以上のパネルを支援するデバイスである。
【００３８】
改善する、増大する又は低減する：  本明細書で使用される「改善する」、「増大する」若しくは「低減する」という用語又は文法上の均等物は、機器のスループット、性能又は効率に関する測定値など、ベースラインの測定値に対する値を示す。
【００３９】
微生物：  本明細書で使用される微生物は、ヒト又は動物対象において疾患を引き起こす可能性のある細菌、ウイルス、原生動物、藻類、真菌又は任意の微生物剤などの生物である。微生物は、対象において不定の期間にわたり潜在的でもあり続ける可能性があり、疾患を決して引き起こさない可能性がある。
【００４０】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）：  本明細書で使用される抗菌薬のＭＩＣは、その濃度でその抗菌薬活性が検出可能である、抗菌薬の最低濃度を指す。
【００４１】
ＡＳＴパネル：  本明細書で使用される「ＡＳＴパネル」又は「パネル」は、多数の抗菌剤が多数の濃度で存在し、それらの濃度が任意選択的に２、３、４、倍などにより関連付けられる（例えば、２倍抗菌剤希釈系列）、複数の抗菌薬希釈系列を一緒に定めるＡＳＴカートリッジ上の複数のリザーバである。
【００４２】
包括的パネル：  本明細書で使用される「包括的パネル」は、ＡＳＴカートリッジの多数のウェルを利用するＡＳＴパネルであり、一般に、必ずしも必要ではないが、多重化に不適合である。包括的パネルは、限定するものではないが１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０以上の抗菌薬希釈系列を含んでいてもよい。
【００４３】
多重化パネル：  本明細書で使用される多重化パネルは、包括的パネルよりもより少ない抗菌薬希釈系列を含むＡＳＴパネルである。典型的には、必ずしも必要ではないが、多重ＡＳＴカートリッジは複数の多重化パネルを含むことになる。
【００４４】
ＡＳＴカートリッジ：  本明細書で使用される「ＡＳＴカートリッジ」という用語は、ＡＳＴシステムで使用されるマルチウェル消耗品カートリッジを意味する。
【００４５】
希釈系列：  本明細書で使用される抗菌薬の希釈系列は、４種以上の異なる量のその抗菌薬を別個のリザーバに含み、その結果、溶媒和したときに、抗菌薬濃度は、（１）ＣＬＳＩ、ＦＤＡ、ＥＵＣＡＳＴ又はその他の管理団体の１つ以上のブレークポイントに基づいて、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）情報を提供することが可能な２種以上の抗菌薬濃度のセットとして定義された臨床範囲；及び（２）ＣＬＳＩ、ＥＵＣＡＳＴ又はその他の管理団体によって定義されたＱＣ微生物を持つ抗菌薬に関する陽性ＱＣ結果が、抗菌薬を含む少なくとも１つのリザーバで陽性ＱＣ微生物成長を登録すること、及び抗菌薬を含むより高い濃度の少なくとも１つのリザーバで陰性ＱＣ微生物成長を登録することを確実にするのに十分な、２種以上の抗菌薬濃度のセットとして定義された品質管理（ＱＣ）範囲を含むようになされている。
【００４６】
幾何学的／空間ブロック：  「空間ブロック」又は「幾何学的ブロック」という用語は、ＡＳＴカセットの空間組織の単位を指す。各空間ブロックは、ＡＳＴカセットのウェル上にマップされたＡＳＴパネルを含み、ＡＳＴカセットにおける各空間ブロックの組織は一貫しており、即ち同様の希釈系列及び対照ウェルは、各空間ブロック内の同様の位置にある。本開示のある特定の実施形態では、各ブロックは、例えば異なる微生物含有試料が接種されたウェルの交差汚染の防止を助けるために、ＡＳＴカートリッジ上にリザーバの最外行又は列を含む少なくとも１つの縁部を有する。
【００４７】
患者：  本明細書で使用される「患者」又は「対象」という用語は、提供された組成物が、例えば実験、診断、予防、化粧及び／又は治療目的で投与され得る任意の生物を指す。典型的な患者には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類及び／又はヒトなどの哺乳動物）が含まれる。一部の実施形態では、患者はヒトである。ヒトは、出生前及び出生後の形態を含む。
【００４８】
定性的感受性結果（ＱＳＲ）：  本明細書で使用されるＱＳＲは、抗菌薬が微生物に対して影響を及ぼすか否か及び微生物が抗菌薬の影響を受けるか否か及びその逆の、決定を指す。例えば微生物は、抗菌薬の存在下で成長を停止させ、これは抗菌薬が微生物に対して影響を及ぼすことを示している。
【００４９】
リザーバ：  本明細書で使用されるリザーバという用語は、試薬又は試料などの組成物を保持するための、貯蔵するための、又は調製するための、又はアッセイを行うための収容空間を表すのに使用される。この用語は、例えばカートリッジ又はマルチウェルマイクロタイターパネルにおける「ウェル」と同義で使用されてもよい。リザーバは、単一ウェル構造であってもよい。リザーバは、丸みの付いたウェル又は任意の形状若しくはサイズのウェル又は細長いチャネルを含むがこれらに限定されない任意の形態又は形状であってもよい。リザーバは、流体又は乾燥／凍結乾燥した粉末物質を保持することを意味する。
【００５０】
試料：  本明細書で使用される「試料」という用語は、生物学的試料、患者試料又は微生物を含む試料を指す。
【００５１】
実質的に：  本明細書で使用される「実質的に」という用語は、問題となっている特性又は性質の全体的又はほぼ全体的な範囲又は程度を示す、定性的状態を指す。生物学の分野の当業者なら、生物学的及び化学的現象は、例えそうであったとしてもごくまれに、完全に至りかつ／又は完全へと進行し、又は絶対的な結果を実現し若しくは回避することが理解されよう。したがって「実質的に」という用語は、本明細書では、多くの生物学的及び化学的現象における完全性の潜在的な欠如を捕えるのに使用される。
【００５２】
システム／構成要素／アセンブリ：  本出願で使用される「システム」、「構成要素」又は「アセンブリ」という用語は、コンピュータ関連の実体、ハードウェア、ハードウェア及びソフトウェアの組合せ、ソフトウェア又は実行中のソフトウェアのいずれかを指すものとし、その例は本明細書に記述される。例えば、構成要素は、プロセッサで実行されるプロセス、プロセッサ、ハードディスクドライブ、多数のストレージドライブ（光学及び／又は磁気記憶媒体）、オブジェクト、実行可能ファイル、実行スレッド、プログラム及び／又はコンピュータとすることができるが、これらに限定されない。システム及びアセンブリは、複数の連結された構成要素から構成される。例として、サーバ上で実行されるアプリケーション及びサーバは共に、構成要素とすることができる。１つ以上の構成要素は、プロセス及び／又は実行スレッド内に存在することができ、構成要素は、１つのコンピュータに局在化させかつ／又は２つ以上のコンピュータの間に分散させることができる。さらに、構成要素は、作動を協働させるために様々なタイプの通信媒体によって、互いに通信により連結されてもよい。協働では、一方向又は二方向での情報交換が行われてもよい。例えば、構成要素は、通信媒体上で通信される信号の形で情報を通信してもよい。情報は、様々な信号線に割り当てられた信号として実装することができる。そのような割当てにおいて、各メッセージは信号である。しかし他の実施形態は、代替としてデータメッセージを用いてもよい。そのようなデータメッセージは、様々な接続を横断して送信されてもよい。例示的な接続には、並列インターフェース、直列インターフェース及びバスインターフェースが含まれる。
【００５３】
標的微生物：  本明細書で使用される標的微生物は、問題となっている抗菌薬が、その感染性に関する微生物のある特定の機能を破壊するための殺菌剤、静菌剤又は阻害剤として有効となる微生物である。
【００５４】
治療有効量：  本明細書で使用される、療法剤の「治療有効量」という用語は、疾患、障害及び／又は状態に罹患した又は罹患し易い対象に投与したときに、それらの疾患、障害及び／又は状態の症状（複数可）を治療し、診断し、予防しかつ／又はその発症を遅延させるのに十分な量を意味する。
【００５５】
治療：  本明細書で使用される「治療する」、「治療」又は「治療している」という用語は、特定の疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を、部分的に又は完全に軽減し、改善し、緩和し、阻害し、予防し、発症を遅延させ、重症度を低減させ、かつ／又は発生率を低減させるのに使用される任意の方法を指す。治療は、疾患に関連付けられた病態の発症のリスクを低下させるため、疾患の徴候を示さないかつ／又は疾患の初期の徴候しか示さない対象に施されてもよい。
【００５６】
（概説）
表現型ＡＳＴは、細菌成長を阻害する抗生剤のパネルのそれぞれの能力を決定することにより、適正な抗生剤療法を決定するために、重要な実用的情報を医師に提供する。これはブロス微量希釈（ＢＭＤ）、微生物を含む試料に関する抗生剤のパネルのそれぞれに関する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を決定する方法によって、最も一般的に決定される。所与の抗生剤に関する正確なＭＩＣを決定するために、ある範囲の濃度を試験しなければならない。このようにＡＳＴ「パネル」は、それぞれがある範囲の濃度で試験がなされる多数の抗生剤を含み、各「ウェル」は、所与の濃度の抗生剤を有する。既存のＡＳＴプラットフォームは正確な結果を提供できるが、それらが反復測定に依拠することは、並列して試験することができる抗生剤の数に対して著しい工学上の制約を課す。本発明者らは、その全てが本明細書に参照により完全に組み込まれる９，８３４，８０８、Ｕ．Ｓ．２０１８／０１７９５７２、ＰＣＴ／ＵＳ１７／６８３０６及びＰＣＴ／ＵＳ１８／１６７０８に記載されたＡＳＴ法を開発しており、パネル当たりのウェルの数を低減させるという工学上の圧力を取り除くことによって、２００個よりも多くのウェルを多重化することが可能である。アッセイは、僅か３．５時間のインキュベーション後に正確なＡＳＴデータを提供する。バンコマイシン中間耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）などの低速成長株を順応させるために、方法は、アッセイ処理を開始するため「十分な成長」閾値に達したことを確実にするのに、パネル当たり＜５個のウェルを測定するが、これは参照により本明細書に十分に組み込まれる、２０１６年１１月７日に出願されたＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６２／４１８，５２１に詳述されている。詳細には、３８４又は１５３６ウェルの標準のマイクロプレートフォーマットを使用することが可能になり、２００個よりも多い任意の数のウェルを備えたパネルの並列処理がさらに可能になる。本発明は、多数の患者由来の試料を単一カートリッジ上で実験にかけることにより、ＡＳＴ分析器スループットを改善することができ、コストが低下するという意外な発見を開示する。このことは、外来患者の尿試料など、多数の抗生剤による試験を必要としない高体積試料に、特に有利と考えられる。
【００５７】
上記にて論じたように、ＡＳＴパネルの設計は、一般に、それらが一緒に使用されるＡＳＴシステムのアーキテクチャに相関し、現在認可されているＡＳＴシステムは、単一の微生物を含む試料のみが接種されるように設計されたＡＳＴパネルを利用する。その結果、現在認可されているＡＳＴシステム構成要素は、「１つの試料、１つのカートリッジ」のワークフローに順応するように設計される。対照的に、本開示の実施形態は、単一カートリッジ上の多数の微生物を含む試料に順応するように設計される。多数の微生物を含む試料の接種に関連付けられたいくつかの技術的な難題は、下記の開示によって対処される。
【００５８】
同じＡＳＴカートリッジ上で２種以上の微生物を含む試料（ＭＳＣ）の接種を行うために、試料間の交差汚染を最小限に抑えるようシステムを設計することが重要である。これは、微生物を含む液体がピペット内にあるときに物理的にのみ移動され、システムのデッキ上で微生物を含む液体を保持する全てのチューブ、トラフ、リザーバ及びその他の槽が接種手順中に静止したままになるように、ガントリーシステムに取着された液体取扱いモジュールを利用するシステムの設計を通して実現されてもよい。システム設計はさらに、ＭＳＣ流体移送中にピペットチップが、他のＭＣＳを含有するチューブ上に移動しないことを、確実にすることにまで拡がってもよい。
【００５９】
自動化された高速抗菌薬感受性試験（ＡＳＴ）のための改善されたシステム、方法及びインターフェースは、一態様において、グラフィックユーザインターフェース（ＧＵＩ）を有するワークステーションを含むキャリア集合ステーションを含む。ＧＵＩは、検査技師から、微生物を含む試料に対して行われる試験の範囲に関する情報を含む、情報を受け取る。ＧＵＩは、類似の試験範囲の試料を一緒にグループ化し、１つの多重試験パネルを使用してそれらの試料を有利に試験することによって、試験キャリアの利用を最大限にする手法で、試験パネルへの、微生物を含む試料のインテリジェントな割当てを制御する。多数の試料の並列処理を容易にする試験範囲による、ワークフローのカスタム化は、有利には検査室の廃棄物を低減させ、試験の潜在性を低下させ、ＡＳＴシステムのスループット及び効率を増大させ、したがってＡＳＴ検査室に対するコストを低下させる。
【００６０】
次に本発明のこれら及びその他の特徴について、同様の参照符号が全体を通して同様の要素を指すのに使用される図を参照しながら記述する。
【００６１】
図１は、臨床試験検査室などで使用するために提供され得る、本発明のＡＳＴシステム１００の一実施形態の例示的な構成要素を示す。ＡＳＴシステム１００は、キャリア集合ステーション１２０及びＡＳＴ処理ユニット１５０に連結された検査室ワークステーション１１０を含むことが示される。一態様では、以下により詳細に記述されるように、作動中、ワークステーション１１０での検査技師（「ラボテック」）は、ワークフローに従い作動して、試験キャリア１１８にパネルＡ１１０及びパネルＢ１１５などの抗菌薬パネル並びに微生物を含む試料１２５ａ〜１２５ｄを集合させる。本発明の一態様によれば、著しいコスト利益は、並列処理の性能及びコスト利益を活用するために、多重化パネルに複数の試料を集合させるワークフローを利用する検査室によって実現され得ることが、理解される。
【００６２】
集合試験キャリア１１８は、接種ユニット１２２、インキュベーションアセンブリ１２５、アッセイプロセッサ１３０及び光分析器１３５を含む、ＡＳＴ処理ユニット１５０に転送される。一実施形態において、接種、インキュベーション及びアッセイ処理は、Ｓｔｅｒｎらに２０１７年１２月５日に発行された「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｒａｐｉｄ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ」という名称の米国特許第９，８３４，８０８号（’８０８号特許）に記載される技法を使用して行われる。しかし、ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ  Ｖｉｔｅｋ２（登録商標）、Ｄａｎａｈｅｒ  ＭｉｃｒｏＳｃａｎ（登録商標）、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＳｅｎｓｉＴｉｔｒｅ（登録商標）及びＡｃｃｅｌｅｒａｔｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｐｈｅｎｏ（登録商標）を含むがこれらに限定することのない、本明細書に開示される方法から同様に利益が得られるその他のＡＳＴプラットフォームが存在し、それらのいずれもが、本発明の利用及びスループット効率を実現するために当業者によって、本明細書に提示されるそれらの特定のシステムアーキテクチャ及び概念に従いそのいずれかを変化させることができることが理解される。
【００６３】
本明細書の「試験サイクル」は、異なる抗菌薬の存在下で、試料を集合させ、接種し、インキュベートし、アッセイ処理し及び試料の挙動を分析するために、試料に対して逐次行われるステップの集合体を意味するものとする。
【００６４】
一実施形態では、ワークステーション１１０は、ディスプレイ１０２、機器可読性記憶デバイス１０４（例えば、読出し専用メモリ（ＲＯＭ）、フラッシュメモリ、動的ランダムアクセスメモリ（ＤＲＡＭ）、例えばシンクロナスＤＲＡＭ（ＳＤＲＡＭ）又はＲａｍｂｕｓ  ＤＲＡＭ（ＲＤＲＡＭ）など）に通信可能に連結されたプロセッサ１０５（例えば、中央処理ユニット（ＣＰＵ）、グラフィック処理ユニット（ＧＰＵ）又は両方）を含むコンピュータデバイスである。一態様では、記憶デバイス１０４は、本明細書に記述される方法を使用してＡＳＴワークフローを制御するのに検査技師（「ラボテック」）にグラフィックユーザインターフェース（ＧＵＩ）１０１を表示するように、プロセッサ１０５によって実行するときに動作可能な、そこに記憶された命令を含む。
【００６５】
ＧＵＩ  １０１は、試験キャリアの集合を制御するようにワークフロー命令をラボテックに表示し、集合パネル及び微生物を含む試料に関する情報をラボテックにより提供可能にする入力機構を含む。ＧＵＩは、ラボテックによりＡＳＴ試験を開始することを許可する制御器を含んでいてもよい。一態様では、ＧＵＩは、キャリアマップ、及びＡＳＴシステムのスループットを最適化する手法で試験キャリア集合プロセスを通してラボテックを案内する１つ以上のプロンプトを表示する。ＧＵＩは、試験パネル又は試験パネルの部分に試料を関連付ける機構も含んでいてもよい。
【００６６】
ＧＵＩ  １０１はワークステーションのディスプレイとして記述されるが、本発明は、ディスプレイ及び／又は制御入力を提供する任意の物理的媒体の使用に限定されないことに留意されるべきである。代替の実施形態では、ワークステーション１１０は、パーソナルコンピュータ（ＰＣ）、タブレットＰＣ、パーソナルデジタルアシスタント（ＰＤＡ）、携帯電話、又はＡＳＴシステム１００がとるべき動作を特定するひと組の命令を応答可能に実行する（逐次又はその他の手法で）よう検査技師に制御を表示すること及び技師から制御を受けることが可能な任意の機器であってもよい。さらに、ただ１つのワークステーション１０１が図示されるが、「ワークステーション」という用語は、本明細書で論じられる方法のいずれか１つ以上を行うのに、ひと組（又は多数の組の）命令を個々に又は併せて実行するデバイスの任意の集合体を含むようにも解釈されるべきである。
【００６７】
通信ネットワークは、ワークステーション１０１を、キャリア集合ステーション１２０及び／又はＡＳＴ処理ユニット１５０に接続し得る。ネットワークは、直接相互接続、セキュリティカスタム接続、プライベートネットワーク（例えば、エンタープライズイントラネット）、パブリックネットワーク（例えば、インターネット）、パーソナルエリアネットワーク（ＰＡＮ）、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）、メトロポリタンエリアネットワーク（ＭＡＮ）、インターネット上のノードとしてのオペレーティングミッション（ＯＭＮＩ）、ワイドエリアネットワーク（ＷＡＮ）、無線ネットワーク、セルラネットワーク及びその他の通信ネットワークを含むがこれらに限定することのない、有線及び／又は無線ネットワークのいずれか１つ及び組合せであってもよい。
【００６８】
キャリア集合ステーション１２０で、ＧＵＩ  １０１上に表示されたワークフロープロンプトに応答してかつ協働して作動するラボテックは、試験キャリア１１８に、パネルＡ  １１０又はパネルＢ  １１５などの１つ以上の試験パネルを選択的に集合させる。１つ以上の試料１２５ａ、１２５ｂ、１２５ｃ及び１２５ｄは、試験キャリアの各パネルに関連付けられる。例えば、図６を簡単に参照すると、試験キャリア６００の例は、パネルレセプタ６１０などの４つのパネルレセプタであって、そのそれぞれが、試験キャリア６００上に試験パネル６０２、６０４及び６０６などの１つ以上の試験パネルを確実に位置決めするために１つ以上の突起又はその他の連結要素を含むパネルレセプタを、含むことが示される。試験キャリア６００は、それぞれが、パネルを使用して試験がなされる試料を貯蔵する試験管を受容するためのものである、４つの管穴６１５ａ、６１５ｂ、６１５ｃ及び６１５ｄを含むことが示される。
【００６９】
図６の試験キャリアでは、各試験パネルは１つの試料を試験するのに使用され、例えば管穴６１５ａに提供された試料は、パネル６０２によって提供された抗菌薬を使用して試験される。この実施例では、パネル６０２は、タイプ又は濃度の少なくとも１つが異なる様々な抗菌薬を含む包括的パネルである。タイプ又は濃度が異なる抗菌薬を有する例示的な包括的試験パネルのマップが、図７に示される。図７において、各行及び列の交点は、リザーバ７０２などの試験プレートのリザーバにマップされる。抗菌薬のタイプ及び濃度が示されるが、本発明は、任意の特定のタイプ又は濃度を持つ試験パネルに限定されない。
【００７０】
一実施形態において、パネルＡ  １１０及びパネルＢ  １１５はそれぞれ、類似のリザーバアーキテクチャを含むが、リザーバ内の抗菌薬の集合が異なる。例示的なパネルＡ  １１０は、内部に配置された抗菌薬の単一セットを有する包括的試験パネルであってもよく、パネルＢ  １１５は、内部に配置された抗菌薬の複製サブセットを有する多重試験パネルであってもよい。本発明で使用され得る多重試験パネルの例については、本出願の他の箇所でさらに詳細に記述する。本出願は、２、３、４、５、６、７又は８種の微生物試料の並列試験を支援する、抗菌薬の薬物及び濃度の十分な複製物を有する試験パネルについて記述する。
【００７１】
一態様によれば、ワークフローは、試験範囲情報に応答して作動し、包括的試験パネル及び多重試験パネルを含む、試験パネルを持つキャリアの集合を選択的に制御する。上述のように、多重試験パネルは、微生物の少なくともサブセットがＭ回複製されてきた試験パネルであり、ただ１つのパネルを使用して、少なくともＭ個の異なる試料の並列試験が可能になる。一実施形態では、ワークフローは、ユーザに、単一の多重化パネルでの同時集合のために同じ試験範囲の試料を選択させるよう促し、それによって、全体的な試験の潜在性を減少させ、廃棄物を著しく削減し、その結果、ＡＳＴ試験を行うコスト、特にＡＳＴワークロードの少なくとも６０％を含み得る外来患者タイプの試験のコストが削減される。
【００７２】
図８は、例示的な多重試験パネル８００を示し、微生物８０２のサブセットがパネル８００上で４回複製されており、その結果、抗菌薬コピー８０２、８０４、８０６及び８０８が得られる。パネル８００は、例えば、４種の異なる微生物を含む試料を同時にスクリーニングする、標準の経口抗生剤療法を行うのに使用されてもよい。
【００７３】
図９は、例えば図８に示される抗菌薬のセットの多数のコピーを集合させた多重化パネル９４５、９５５を支援するように構成されたキャリア９００の一実施形態を示す。キャリアは、パネル９４５、９５５をそれぞれ係合させるための２つのパネルレセプタ９４６、９４７を含む。キャリア９００はさらに、各パネルに近接して、複数の試験管穴９１５ａ〜９１５ｄ及び９２５ａ〜９２５ｄを含み、管９３５などの試験管を受容するための各穴は、試験がなされる異なる試料を貯蔵する。各試験管９３５とパネル９４５との間には、トラフ９６５などのトラフがある。一実施形態では、接種中に、試験管からの試料が隣接するトラフに移送され、非選択的培地、例えばＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス、トリプシン性ソイ寒天であって溶解ウマ全血を含むものと、例えば成長制御ウェルとして合わせられる。図１に戻って参照すると、一実施形態で既に述べたように、ラボテックは、ＧＵＩ  １０１で提供されたワークフロープロンプトによって方向が定められたように試験キャリア１１８を集合させる。このように、キャリア集合ステーションは、キャリア又は試料試験管バーコードをスキャンするのに使用されるバーコードリーダなど、キャリア／試料を追跡するための機能を含んでいてもよい。手動によるキャリア集合の、案内されたプロセスについて記述してきたが、例えば、類似の機能を発揮することが可能なキャリアローディングハードウェア及びソフトウェアを使用して、キャリア集合ワークフローの部分が自動化されてもよいことが、当業者により理解されることに留意されるべきである。したがって本発明は、キャリア集合ワークフローを実現する手法よって限定されない。
【００７４】
試験キャリア１１８が集合すると、ＡＳＴ処理ユニット１５０に転送されてもよい。上述のように、微生物を含む試料１２５ａは一般に、バーコードで標識された試験管に受容される。ブロス微量希釈と呼ばれるプロセスを使用して、評価がなされる微生物を含む試料をブロスで希釈し、接種デバイス１２２によって、異なる抗菌薬を異なる濃度で含有するリザーバに導入して、抗菌薬の適切なパネルに関してＭＩＣを決定することができるようにする。ブロスは、陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎブロス（ＭＨＢ）であってもよく、溶解ウマ血液などの微生物成長に及び／又は高塩化ナトリウム濃度などの抗菌効力の決定に有利であることが当業者に公知の追加の栄養補助剤を含有していてもよい。ＭＨＢは、接種ユニット１２２によって提供されてもよく、又は抗菌薬パネル１１０及び１１５上に乾燥形態で存在していてもよい。
【００７５】
リザーバのそれぞれが適切に接種されると、試験キャリア１１８はインキュベータ１２５に転送される。インキュベータ１２５は、細菌を成長させるのに適切な条件下、最も好ましくは好気性の条件下で、キャリアを適切な温度に加熱する。この時間中及び細菌に関連した抗菌薬の効力に依存して、細菌は多重化されてもよい。一部の実施形態では、２０１８年１０月５日に出願されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／２０１８／５４５６０に記載されるように、キャリアはこの成長期間中に撹拌されてもよく、そのようにすることで、栄養素の分散及び／又は気体の交換及び／又は各ウェルの抗菌薬及び／又はバイオフィルム形成の低下をなすのに有利となり得る。
【００７６】
ＡＳＴ開始から０〜８時間以内に（最も好ましくは、０〜４時間に）、アッセイ試験は、信号伝達剤の公知の量が各ウェルに添加されたとき、ＡＳＴ処理ユニット１３０によって開始される。試薬（信号発生剤を含む）の添加は、自動化された機器若しくは半自動化された機器によって行われてもよく、又は手動で行われてもよい。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｔｅｒｎらによる国際特許公開Ｎｏ．ＷＯ２０１８／１１９４３９（「Ｓｔｅｒｎ  ２０１８」）に記載されるように、ＡＳＴアッセイの開始は、事前に決定された成長閾値に到達する細菌によって誘発され得る。
【００７７】
信号伝達剤（「スティッキー・アンプ（ｓｔｉｃｋｙ−ａｍｐｓ）」と呼んでもよい）は、微生物に結合することが可能な部分（例えば、抗体及び／又はレクチンであって、微生物表面、荷電部分及び／又は微生物表面に非特異的に結合する機能的部分に結合するもの）及び信号を提供すること又は信号の生成に寄与することが可能な化学的部分（例えば、酵素化学発光団及びランタニドキレート）を含む。例示的なランタニドは、ユーロピウム及びテルビウムを含む。例示的な酵素には、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アセチルコリンエステラーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ベータ−ラクタマーゼ及びこれらの組合せが含まれる。化学的部分は、信号伝達剤と微生物とを接触させる前に、信号伝達剤が最初に微生物に接触する間、又は信号伝達剤が微生物と接触した後に、信号伝達剤と共役してもよい。Ｓｔｅｒｎ  ２０１８  ２３８〜２４６は、使用され得る代替の信号伝達剤の化学について記述する。
【００７８】
信号伝達剤がＡＳＴ処理ユニット１３０によって、微生物を含有するＡＳＴ希釈物に添加されたとき、信号伝達剤レセプタ（例えば、微生物に特異的に又は非特異的に結合できる部分）は、微生物表面に関連付けられる。このように、より無傷な微生物は、例えば溶液中にある場合、これらの細菌に関連付けられることになる信号伝達剤の数がより大きくなる。その結果、無傷の細菌に結合されていないものにより定義されるように、無傷の細菌の数と、無傷の溶液中で「遊離」している信号伝達剤の数との間には逆相関がある。遊離信号伝達剤は、例えば微生物が抗菌薬治療に応答して溶解した場合、可溶性微生物成分に結合され得ることに留意されたい。
【００７９】
‘８０８号特許に開示されるように、微生物表面に関連付けられ及び／又はインターカレートされる信号伝達剤の数は、微生物表面積に比例し、これは真に耐性のある微生物に強力に関連付けられるものである。ＡＳＴ処理ユニット１３０は、微生物表面積（体積ではなく）を測定可能な信号に、最も好ましくは光信号に変換する。次いで各キャリアリザーバからの光信号は、試験リザーバに残された細菌の濃度（存在する場合）決定するために、光分析ユニット１３５によって光学的に分析されてもよい。光分析ユニット１３５は、結果に従いＭＩＣを計算し、治療医又は薬局に報告するためにその情報をラボテックに転送する。
【００８０】
Ｓｔｅｒｎ  ２０１８の１９７〜２４６に開示されるように、複数のアッセイを、表面結合アッセイの前、後又は並列に行ってもよい。そのようなアッセイには、限定するものではないが代謝アッセイ、核酸アッセイ、酵素アッセイなどを含めることができる。
【００８１】
図２は、キャリア集合ステーション１２０で試験キャリアの集合を制御するのに使用され得るワークフローの例示的なステップを示す。ステップ２０２で、ラボテックはシステムで認証されてもよいが、一部の実施形態ではワークフローを合理化するのに、このステップを周期的にのみ行ってもよい。ステップ２０６で、キャリア集合ステーション１２０は、ＧＵＩ  １０１を使用してラボテックに試験範囲の選択肢を表示する。
【００８２】
ステップ２０６で、ＧＵＩ  １０１によって表示され得る１つのワークフローウィンドウ３００の例を、図３Ａに示す。一実施形態では、ワークフローウィンドウ３００は、ワークステーション１１０上で作動し、かつキャリア集合ステーション１２０及びインキュベーション／アッセイ処理ユニット１５０と通信するソフトウェアによって制御される、モニタのディスプレイスクリーンの一部を含む。ウィンドウは、各試験サイクルに関する入力データを収集するための、及びキャリアの利用を最適化する手法でキャリアの集合を知的に方向付けるようにワークフロープロンプトを表示するための機構を含む。
【００８３】
ディスプレイウィンドウ３００は、一般に、３つの領域；キャリアマップ３０２領域、ワークフロープロンプト領域３０５及び試料情報領域３１０に分割して示される。一態様によれば、より詳細に以下に記述されるように、ワークフロープロンプト領域３０５は、ラボテックから制御情報を受け取るための入力機構及びキャリア集合中にラボテックに指示を与えるテキストの両方を含んでいてもよい。ワークフロープロンプト領域３０５は、試験サイクルに関するワークフロータイプを定めるために、ワークフロー選択肢入力機構３０４を含むことが示される。図３Ａの例は、ＡＳＴ及び品質管理（ＱＣ）試験サイクルを含む、２つの試験サイクル選択肢を示す。
【００８４】
より詳細に以下に記述されるように、ラボテックにより選択された特定のワークフロー及び試験範囲に依存して、キャリアマップ領域３０２は、試験キャリア及びその集合の進行の視覚表示を提供する。
【００８５】
試料情報領域３１０は、試料を独自に特定するための（受入れＩＤ  ３１２及び単離物＃３１４など）及び試料に関する属性情報を受け取るための（ＧＰ  ３１６、ＧＮ  ３１８又はシュードモナス３１９など）、フィールド及び／又はその他の入力機構を含む。
【００８６】
図３Ｂは、ＡＳＴワークフロー選択肢３０６の選択に応じて、ステップ２０６でＧＵＩ  １０１によって表示され得る第２のウィンドウ３２０を示す。ＡＳＴワークフロー選択肢３０６の選択は、ＧＵＩ  １０１に対し試験範囲３２２をユーザに表示させ、この試験範囲は、包括的試験３２４型及び経口試験３２６を含むことが示される。包括的試験３２４は、各試験の利用可能な微生物によって、経口試験３２６とは差別化されてもよく、この経口試験３２６は、包括的試験よりも小さい様々な抗菌薬を評価する。
【００８７】
試験範囲３２２として利用可能にされた選択肢は「包括的」及び「経口」を含むが、試験範囲を差別化するのに任意の標識が使用され得ることを理解することができる。一般に、一態様によれば、試験範囲は、試験パネルによって提供される抗菌薬の数及び／又はタイプと、それに付随して治療に利用可能な療法剤の数によって差別化される。このように、試験範囲は、患者タイプ（入院患者対外来患者）、要求側のタイプ（病院対クリニック又は薬局）又は療法タイプ（経口又は静脈内）などに基づいて異なってもよい。比較的限定された範囲の試験は、多数の試料の並列処理を可能にする、多重化パネルアーキテクチャの使用から利益が得られる。一態様によれば、ワークフローは、多重化パネルアーキテクチャの利益が実現されるよう、類似の範囲の試験を必要とする試料を一緒にグループ化することによって、キャリアの利用を最適化するように設計される。このように、２つの試験範囲の選択肢が図３Ｂに示されるが、そのそれぞれは２つの異なるパネルアーキテクチャに本質的に関係するものであり（包括的及び多重化）、一部のシステムは様々な異なるパネルアーキテクチャを含み得ることが理解され（例えば、異なる多重化度を有する）、そのようなシステムにおいては、同様の様々な試験範囲及びワークフローがあってもよく、そのそれぞれはＡＳＴスループットが最大限になるようにキャリアの集合を推進させるものである。
【００８８】
図２に戻って参照すると、ステップ２０６でラボテックが包括的パネルワークフローを選択する場合、ステップ２０７では空のキャリアがシステムに導入され、識別バーコードが有利にスキャンされ、ラボテックはシステムを通してキャリアを追跡できるようになる。ステップ２０８では包括的パネルがキャリアに投入される。ステップ２１０で、試料が調製され、試験管をスキャンしてそれを包括的パネルに関連付け、それをキャリアに投入する。ステップ２１２では、キャリアが満杯であるか否かが決定され、そうでない場合には、プロセスをステップ２０８に戻して、キャリアがステップ２１２で満杯であると決定されるまで、ラボテックが別の包括的パネル及び関連付けられた試料を投入するように促す。その時点で、キャリアはステップ２１６でアッセイ処理ユニットに移送される。
【００８９】
図４Ａ〜４Ｃは、図２のステップ２０８〜２１６のプロセスを使用してキャリアの集合を制御するための、ＧＵＩで表示され得る例示的なウィンドウを示す。図４Ａのウィンドウ４２０では、ＡＳＴ  ４２２／包括的４２４試験範囲が選択されて示される。一実施形態では、包括的ワークフローの選択は、ウィンドウ４２０のキャリアマップ領域内にキャリアマップ４３０の表示をもたらす。キャリアマップ４３０は、４つの包括的パネル４３２、４３４、４３６及び４３８の視覚表示を含む。一実施形態では、各包括的試験パネルが３８４個のリザーバを含み、キャリアは、４つの包括的パネルを支援することが可能である。
【００９０】
ＧＵＩは、例えばワークフロープロンプト４２６（「キャリアバーコードをスキャンして下さい」）を提供することによって、ラボテックに指示を出す。ラボテックに指示を出すその他の方法は、例えば、ワークフローに関する次の入力フィールドを強調し又はその他の手法で視覚的に差別化することを含む（ここでは、キャリアバーコードフィールド４２８）。視覚的プロンプトが示されるが、聴覚的プロンプトを組み込んでもよく又は置換してもよいことが理解される。
【００９１】
図４Ｂでは、キャリアバーコードを受信した後（ステップ２０７、図２）、４４０などのＧＵＩウィンドウをラボテックに対し表示してもよい。ＧＵＩウィンドウ４４０では、パネル４３２が、強調されたワーキングパネルとして示され、ウィンドウ４４０の試料入力部分４１０も、試料情報の適切な入力を促すようにフィーチャされる。命令プロンプト４４２も、ワークフローを通してラボテックを導くよう提供される。図４Ｂの実施形態では、キャリア集合ステーション１２０は、受入れ番号を含む、パネル４３２と共に使用される試料に関する情報の入力を促す。受入れ番号（臨床研究室で使用される。）は、試験のために提出されたとき、微生物を含む試料に与えられた固有の識別子である。ラボテックは、グラム陰性（ＧＮ）若しくはグラム陽性（ＧＰ）生物又はシュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）など、試料がある特定のタイプの細菌であることが判っているか否かなどの試料の属性を含む、その他の試料情報を入力するように促してもよい。
【００９２】
図４Ｃは、試料情報の受信後に表示され得る（図２、ステップ２１０）例示的なウィンドウを示す。試料アイコン４６４は、試料情報の受信を視覚的に示すために集合して示される。次いでラボテックには、キャリアが満杯であるか否かが指示されることになる（図２、ステップ２１１）。満杯ではない場合、ラボテックには、別のパネル及び試料を投入するという選択肢が与えられ、ステップ２０８及び２１０が繰り返される。キャリアにパネルを投入するプロセスは、キャリアが完成したと決定されるまで（図２、ステップ２１２）又はユーザがより多くのパネルを投入することを望まなくなるまで、継続される。この時点で、ラボテックは起動ボタン（「実行（Ｄｏｎｅ）」４６５）を選択してもよく、次いでキャリアをＡＳＴ処理ユニット１５０に移送してもよい。ラボテックが、パネル接種前に試料又はキャリア情報を修正する必要があるなら、ラボテックは、ナビゲーションボタン４６７を使用して任意のその他のウィンドウに戻るようナビゲートしてもよい。
【００９３】
次に図２に戻って参照して、多重化パネルを使用してキャリアを集合させたときに行われるプロセスについて、図５Ａ〜５Ｃに関して記述する。ステップ２２０で、空のキャリアをシステムに導入し、識別バーコードを有利にスキャンし、システムを通してラボテックがキャリアを追跡できるようになる。ステップ２２２で、第１の試料を調製し、パネルに割り当てる。一実施形態では、試料を、バーコード識別試験バイアルに含めてもよく、試料を調製するステップは、それぞれのパネルにバイアルのバーコードを割り当てることを含んでいてもよい。ステップ２２３では、空間が別の試料に関してパネル内にあり続けるか否かが決定される。空間が１つ以上の追加の試料に関してパネル上にあり続ける場合、ラボテックには、別の試料を投入し及び／又はそのバーコードを有利にスキャンし及び／又は試料情報を入力するように指示がなされる。パネルが満杯である場合又はラボテックが追加の試料の投入を望まない場合、ラボテックはステップ２２４に進んでもよい。ステップ２２４では、空間が、別のパネルを受容するためのキャリア内にあり続けるか否かが決定される。空間が残される場合、キャリアの集合は完了していないことがステップ２２４で決定され、プロセスはステップ２２０に戻り、そこで別の多重化パネルがキャリアに投入され、試料がパネルに接種される。ステップ２２０で多重化パネルをキャリアに投入し、ステップ２２３、２２４で多重化キャリアに試料を割り当てるプロセスを、キャリアが満杯であることをステップ２２４で決定されるまで又はユーザがより多くのパネルを投入するのを望まなくなるまで繰り返し、その時点で、集合したキャリアがＡＳＴ処理ユニット１５０に転送されてもよい。
【００９４】
図５Ａ〜５Ｃは、低減されたサイズのパネルに関して上述のワークフローを容易にするのに提供され得る、例示的なＧＵＩウィンドウを示す。図５Ａに示されるように、多重化パネルの使用から利益が得られるものである試験範囲に応答して、多重化パネルキャリアマップ５６５及び関連付けられたワークフロー命令／プロンプト５６６、５６７がラボテックに対して表示される。一態様では、キャリアマップ５６５は、異なるパネルと単一キャリア上での異なる試料との双方向の関連付けを可能にする。パネル５６８は、好ましくは、‘８１９号特許出願に記載された多重化パネルであり；即ち、包括的パネルからの抗菌薬のサブセットの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、３２又は４８個の間のコピーを含む単一パネルであるが、微生物を含む試料の並列処理に適合した任意のパネルが本明細書では置換されてもよい。図５Ａの例では、パネルは、２つの多重抗菌薬パネル５６８及び５６９を含み、そのそれぞれは、最大４種の独立した試料５６１〜５６４及び５６１ａ〜５６４ａの並列試験を支援してもよい。
【００９５】
包括的ワークフロープロセスの場合のように、多重パネルワークフロープロセスは、キャリアのバーコードのキャプチャにより開始される。したがって、プロンプト５６６はラボテックに表示され、キャリアバーコード入力フィールド５６７は、有利に強調される。キャリアバーコードのキャプチャ後、パネル５６８は、ワーキングパネルであることをラボテックに対して表すために図５Ｂにおけるように強調して示されてもよく、ラボテックは、試料入力数５６１を選択してもよい。選択されると、ラボテックは、図４Ｂで記述されるように試料情報データを入力するように促されてもよい。試料に関する試料情報の入力５６１が完了したら、ラボテックは、パネル５６２に関する次の試料の作製を進めてもよく、これはナビゲーションボタン５７５を使用することによって開始される。これはパネルが試料で完全に占有されるまで又はラボテックがそれ以上試料を持たなくなるまで繰り返されてもよい。ラボテックがパネル５６８上での作業を完了した後、パネル５６９には同様に、試料を任意選択的に投入してもよい。パネル及び試料が完全に投入されると、ＧＵＩは、図５Ｃに示されるように、投入される試料の数に関してどれを加える必要があるか、５９１及び５９３、を強調することによって、キャリアに希釈トラフ５９１〜５９４を配置するという警告をユーザに発してもよい。
【００９６】
ラボテックは、キャリアが最大限利用されるまで、試料を備えるパネルを選択的に集合させるのに、ＧＵＩ  １０１の異なる特徴を使用してもよい。次いでラボテックは、ナビゲーションボタン５７６及び５８６を使用して、パネル／試料のマッピングを修正してもよく、又は代替として集合したキャリアをＡＳＴ処理ユニットに転送してももよい。
【００９７】
図２のプロセスは、１つのタイプのパネルを使用してキャリアをそれぞれ集合させる２つのワークフローについて記述するが、各キャリアが試験パネルの１つのタイプしか含まないことは要件ではない。事実、試験パネルの各タイプのリザーバの数は同じであるので、パネルタイプとは無関係に、ワークフローは、単一試験サイクル内で同じキャリア上に異なる範囲の様々な異なる試験を提供するため、様々な異なるタイプの試験パネルを備えたキャリアを集合させるように当業者によって適合され得ると考えられる。したがって本発明は、試験当たり１つの試験パネルタイプを支援するキャリアに限定されない。
【００９８】
したがって、廃棄物及び間接費コストを削減しながら、システムの利用、スループット及び効率を増大させる手法でＡＳＴ法を行うための、システム、方法及びインターフェースが、図示され記述されてきた。方法は、多重試験パネルによって可能になった並列処理の利益を活かすように類似の範囲の試験をグループ化する手法で、試験試料上で行われることになる試験の範囲によりキャリアの集合を調整する、インターフェース及びワークフローを提供する。
【００９９】
一部の実施形態は、「一実施形態」又は「実施形態」という表現を、それらの派生語と一緒に使用して記述されてもよい。これらの用語は、実施形態に関連して記述される特定の特徴、構造又は特性が、少なくとも一実施形態に含まれることを意味する。本明細書の様々な箇所での「一実施形態では」という文言の出現は、必ずしも全てが同じ実施形態に言及するわけではない。さらに、他に指示しない限り、上述の特徴は任意の組合せで一緒に使用可能であることが理解される。したがって、別々に論じられる任意の特徴は、特徴が互いに矛盾していることが記述されない限り、互いに組み合わせて用いられてもよい。
【０１００】
本明細書で使用される表記及び命名法を一般に参照すると、本明細書の詳細な記述は、構成要素のコンピュータ又はネットワーク上で実行されるプログラム手順として実現され得る機能性ブロック又はユニットに関して提示されてもよい。これらの手順上の記述及び表現は、それらの作業の実体を当業者に最も効果的に伝えるために、当業者により使用される。
【０１０１】
手順はここで、一般には、所望の結果に繋がる操作の自己矛盾のない順序であると考えられる。これらの操作は、物理量の物理的操作を必要とするものである。通常、必ずしも必要ではないが、これらの量は、記憶し、転送し、組み合わせ、比較し及びその他の手法で操作される電気、磁気又は光信号の形態をとる。主として一般的な用法上の理由で、これらの信号がビット、値、要素、記号、文字、用語、数又は同様のものを指すことが、時には好都合であることが証明される。しかし、これら及び類似の用語の全ては、適切な物理量に関連付けられ、それらの量に適用される単なる都合の良い標識であることに留意されるべきである。
【０１０２】
さらに、行われる操作はしばしば、人間オペレータによって行われる知的操作に一般に関連付けられる、添加する又は比較するなどの用語で言及される。そのような人間オペレータの能力は、１つ以上の実施形態の部分を形成する、本明細書に記述される操作のいずれかにおいて、必ずしも必要ではなく、又はほとんどの場合に望ましくない。むしろ操作は、機器操作である。様々な実施形態の操作を行うのに有用な機器は、汎用デジタルコンピュータ又は類似のデバイスを含む。
【０１０３】
図１１は、以後、「接種器」と呼ばれる１種以上の微生物を含む試料をＡＳＴカートリッジに接種するシステム内の、ワークフローを示す。図４に示されるインターフェースを使用して、ユーザは、ＡＳＴカートリッジに接種される試料の数をシステムに入力する。システムは、プレートタイプ（例えば、適切な数の抗菌薬複製物を持つグラム陰性）が配置されており、トラフが挿入され、ＡＳＴカートリッジの蓋（複数可）が除去され、及び微生物接種キャップが除去されることを確実にする。次いでシステムは、生理食塩液を個々のウェルに光学的にピペット分取し、その後、陽イオン調節型Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス（ＭＨＢ）などの微生物成長を支援するブロスを大量吐出する。次いでシステムは、濃縮された微生物を含む試料を、ピペットで希釈トラフに添加し、その後、ＭＨＢをトラフに添加して、適切な希釈を実現する。ある場合には、システムはさらに、濃縮された微生物を含む試料を、ＡＳＴカートリッジ上の１個以上のリザーバに添加してもよく、それによって、ＡＳＴカートリッジ上の異なるリザーバに、少なくとも２つの異なる微生物濃度で接種する。このことは、ＡＳＴに典型的に使用される、より高い濃度の微生物がカルバペネマーゼ媒介型耐性メカニズムを決定するのに有用となり得る適用例に、有利となり得る。次いでマルチチャネルピペットを使用して、希釈された微生物を含む試料を適切なウェルに接種する。最後の２つのステップは、追加の微生物を含む試料がＡＳＴカートリッジへの組込みのためにユーザによって選択された場合、繰り返されてもよい。接種プロセスが完了すると、機器は、キャリアが除去され得るという警告をユーザに発する。次いでユーザは、ＡＳＴカートリッジに蓋をし、トラフ及び残りの試料を廃棄し、キャリアを、自動化されたＡＳＴ用のＡＳＴ分析器に移送してもよい（共同所有のＵＳ  １０，１６１，９４８で論じられるように）。
【０１０４】
図１２は、１種又は２種以上の微生物を含む試料のいずれかを含んでいてもよいＡＳＴカートリッジの高速処理を可能にする、接種器内の必須構成要素を示す。バルク流体ハンドラは、Ｆｅｓｔｏ  ＶＴＯＩ−１〜８チャネル流体ヘッドなど、単一の供給源からほぼ等しい体積を吐出することができる、８又は１６チャネルのマニホールドである。複数のリザーバに存在する、ＭＨＢなどの複数の総合栄養ブロスのバルク流体の添加は、高速接種に有利となり得る。汚染を最小限に抑えるために、バルク流体添加システムは微生物に接触しなくなることが、有利となり得る。バルク流体添加システムは、適切な希釈が実現されるよう、栄養ブロスを希釈ウェルに添加してもよい。次いでＳｅｙｏｎｉｃ空気排出ピペットなどのマルチチャネル液体ハンドラピペットは、ピペット消耗品であるので微生物に特に接触してもよい。ピペットは、濃縮された微生物を含む試料を、ユーザによって投入された接種物管から得るのに使用されてもよく、次いで栄養ブロスで、希釈トラフ内に希釈されてもよい。共同所有の米国出願第１６／２４５，０９２号の場合などの一部の実施形態では、ピペットは、濃縮された微生物を含む試料を、ＡＳＴカートリッジ上の１つ以上のリザーバに移送するのに使用されてもよい。図１２は、バルク流体ハンドラ、及びガントリーに３自由度で外付けされたピペット、例えばｘ及びｙ移動に関してはＦｅｓｔｏ  ＥＸＣＭ−３０モデルＨ−ガントリー、及びｚ軸移動に関してはＦｅｓｔｏ  ＥＧＳＫ−２０−１２５−６Ｐ−Ｐ−Ｚであるものを示す。ガントリーは、Ｃｏｐｌｅｙ単軸モータ制御器により駆動される、ＮＥＭＡ  １７ステッピングモータによって駆動されてもよい。ピペットの運動は、生理食塩液又はその他の栄養ブロスなど、接種器デッキ上に貯蔵された追加の試薬、並びに廃棄物レセプタクルに達するのに十分となり得る。さらに、洗浄ステーションが、汚染を最小限に抑えるのに利用されてもよい。
【０１０５】
一部の実施形態は、「連結された」及び「接続された」という表現を、それらの派生語と一緒に使用して記述されてもよい。これらの用語は、互いに同義であることを必ずしも意図するものではない。例えば一部の実施形態は、２つ以上の要素が互いに直接物理的に又は電気的に接触することを示すのに、「接続された」及び／又は「連結された」という用語を使用して記述されてもよい。しかし「連結された」という用語は、２つ以上の要素が互いに直接接触しておらず、それでも互いに協働し又は相互作用することを意味してもよい。
【０１０６】
様々な実施形態は、これらの操作を行うための装置又はシステムにも関する。この装置は、必要とされる目的のために特に構成されてもよく、又はコンピュータに記憶されたコンピュータプログラムによって選択的に能動化され若しくは再構成される汎用コンピュータを含んでいてもよい。本明細書に提示された手順は、特定のコンピュータ又はその他の装置に本質的に関係するものではない。様々な汎用機器が、本明細書の教示に従い書かれたプログラムと共に使用されてもよく、又は必要な方法ステップを行うためにより特殊化した装置を構成することが都合良いことが証明されてもよい。様々なこれらの機器に必要とされる構造は、与えられた記述から明らかにされよう。
【０１０７】
本開示の要約書は、技術的開示の性質を読者に素早く確認させるために提供されることが、強調される。請求項の範囲又は意味を解釈し又は限定するのに使用されることがないという理解と共に提出される。さらに、前述の詳細な説明において、様々な特徴は、本開示を合理化するのに単一の実施形態で一緒にグループ化される。本開示の方法は、請求項に記載の実施形態が、各請求項で明らかに列挙されるよりも多くの特徴を必要とするという意図を反映するとして解釈されるものではない。むしろ、下記の請求項が反映するように、本発明の対象は、単一の開示される実施形態の全ての特徴よりも少ない範囲内にある。したがって下記の請求項は、本明細書では詳細な説明に組み込まれ、各請求項は、個別の実施形態として独自に成り立つ。添付される請求項において、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「その中で（ｉｎ  ｗｈｉｃｈ）」という用語は、それぞれ、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「そこで（ｗｈｅｒｅｉｎ）」というそれぞれの用語の平易な英語の均等物として使用される。さらに、「第１」、「第２」、「第３」及び以下同様の用語は、単に標識として使用され、それらの目的語に数値要件を課すものではない。
【０１０８】
これまで記述してきた内容は、開示されたアーキテクチャの例を含む。当然ながら、構成要素及び／又は方法の全ての考えられる組合せを記述することは可能ではないが、当業者なら、多くの他の組合せ及び順列が可能であることが理解されよう。したがって、新規なアーキテクチャは、添付される請求項の本旨及び範囲内に包含されるそのような変形例、修正例及び変更例の全てを包含するものとする。
【実施例】
【０１０９】
１種よりも多くの細菌単離物を、個々のカートリッジ上で並列に処理することができる。３８４−ウェル抗生剤パネルを、米国特許第４，９３５，３４７号の手順に従って調製した。簡単に言うと、Ｔｙｐｅ  Ｂ、２２５ｇブルームゼラチンであってウシの皮膚からのもの（Ｓｉｇｍａ）を脱イオン水に溶解し、その溶液を０．２μｍフィルタに通すことによって、滅菌ゼラチン溶液（０．０２５％ｗ／ｖ）を作製した。３２０μｇ／ｍＬのアムピシリン（Ｓｉｇｍａ）及び８０μｇ／ｍＬのシプロフロキサシンの２次医薬品標準のストック溶液を、滅菌ゼラチン溶液中で作製した。抗生剤ごとの最高濃度ウェルに、ストック溶液１０μＬを満たした。１０μＬの最終体積の、９種の連続希釈物を、滅菌ゼラチン溶液を使用して調製した。ゼラチンの陰性滅菌対照も含めた。次いでプレートを真空乾燥器に投入し、２５Ｔｏｒｒまで排気し、適切な乾燥状態が実現された後に取り出した。
【０１１０】
パネルに、品質管理Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）株（２５９２２）又はＫ．ニューモニエ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（ＢＡＡ−１７０５）を、０．５ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準から得た１：２００希釈のＭＨＢに加えたものを接種した。５０ｕｌの接種されたＭＨＢを、各抗生剤含有ウェルに添加した。接種されていないＭＨＢウェルは、陰性対照として含めた。細菌を３５℃で３時間、振盪条件下でインキュベートした。インキュベーション後、レサズリン試薬を１：５のウェル体積で添加し、さらに１時間インキュベートした。０．０６％のセチルトリメチルアンモニウムブロミドを含有する洗浄剤溶液５０マイクロリットルを各ウェルに添加し、振盪状態で１０分間保持した。培養物を、２，５００×ｇで２．５分間遠心分離して、細菌ペレットを得た。上澄みを吸引し、ペレットを、ウェル当たり０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳ中に５０マイクロリットル再懸濁した。２０ｎｇ／ウェルの濃度にあるＥｕ−クリプテートの１０マイクロリットルを添加し、プレートを１０分間振盪させた。プレートを、２，５００×ｇで２．５分間遠心分離した。上澄みを吸引し、ペレットを、０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳ（１００μｌ／ウェル）で１回洗浄した。ペレットを、０．０５％Ｔｗｅｅｍを含有するＰＢＳ（１００μｌ／ウェル）に再懸濁し、蛍光測定値を、結合アッセイ結果を得るための時間分解蛍光法によって得た。
【図１】
2021519091.tif 000013
【図２】
2021519091.tif 000014
【図３Ａ】
2021519091.tif 000015
【図３Ｂ】
2021519091.tif 000016
【図４Ａ】
2021519091.tif 000017
【図４Ｂ】
2021519091.tif 000018
【図４Ｃ】
2021519091.tif 000019
【図５Ａ】
2021519091.tif 000020
【図５Ｂ】
2021519091.tif 000021
【図５Ｃ】
2021519091.tif 000022
【図６】
2021519091.tif 000023
【図７】
2021519091.tif 000024
【図８】
2021519091.tif 000025
【図９】
2021519091.tif 000026
【図１０】
2021519091.tif 000027
【図１１】
2021519091.tif 000028
【図１２】
2021519091.tif 000029
【国際調査報告】
2021519091.tif 000030
2021519091.tif 000031
2021519091.tif 000032
2021519091.tif 000033