(57)【要約】  Ｊに示される構造を有するフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖であって、コンドロイチン硫酸Ａ塩を原料として、酵素的分解、保護基操作、グリコシル化を順次行い、該オリゴ糖化合物を合成する該フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の製造方法をさらに開示し、該フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖は、明確な構造を有するため、医薬分野に適用できる。2021529877.tif 000050【選択図】なし
2021529877.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｊに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖。
【化１】
2021529877.tif 000034
（式Ｊ中、Ａｃはアセチル基であり、ｑは正の整数であり、且つｑ≦１０であり、Ｙは、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又はＮ（Ｒ６）４であり、ここで、Ｒ６はＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、Ｒはアジド基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である。）
【請求項２】
Ｒがアジド基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である場合、
【化２】
2021529877.tif 000035
はβ立体配置であり、ＲがＣ１〜Ｃ４アルコキシ基である場合、
【化３】
2021529877.tif 000036
はα立体配置である、請求項１に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖。
【請求項３】
式Ｊ中、ｑは１、２、３、又は４であり、ＹはＨ、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、又はマグネシウムであり、好ましくは、式Ｊ中、ｑは１、２、３、又は４であり、Ｙはナトリウムである、請求項１に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖。
【請求項４】
下記化合物から選ばれる１種である、請求項１に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖。
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩、
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十五ナトリウム塩、及び
メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩。
【請求項５】
無機酸のＣ１〜Ｃ４アルカノール溶液中に、式Ａ化合物からスルホン酸根を除去し、ＭＯＨ塩基で処理し、式Ｂ化合物を得て、ここで、式Ａ中のｍ及び式Ｂ中のｎは正の整数であり、且つ２０≦ｎ≦ｍであるステップ（１）と、
【化４】
2021529877.tif 000037
塩化ナトリウムを含有する弱酸性緩衝液中に、ヒアルロニダーゼの作用で式Ｂ化合物から式Ｃ化合物を得て、ここで、前記ヒアルロニダーゼは動物の精巣由来であり、活性が４００〜１０００ＩＵ／ｍｇであり、前記精巣はウシ精巣又はヒツジ精巣から選ばれ、好ましくはウシ精巣であり、ｑは１〜１０の正の整数であるステップ（２）と、
【化５】
2021529877.tif 000038
式Ｃ化合物を求核性試薬ＲＸと反応させ、式Ｄ化合物を得るステップ（３）と、
【化６】
2021529877.tif 000039
Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＲ１Ｃ（Ｏ）Ｈジ脂肪アルコールの存在下、酸で触媒し、式Ｄ化合物のアセチルガラクトサミン残基の４，６ジヒドロキシ基を選択的に保護し、式Ｅ化合物を得るステップ（４）と、
【化７】
2021529877.tif 000040
式Ｅ化合物を無水物Ｒ２−Ｏ−Ｒ２の作用で環化し、次に、アルカリで触媒し、Ｒ３ＯＨ溶液中にラクトン環を開環し、式Ｆ化合物を得るステップ（５）と、
【化８】
2021529877.tif 000041
式Ｆ化合物を酸触媒作用下、フコースドナーである式Ｇ化合物と反応させ、式Ｈ化合物を得るステップ（６）と、
【化９】
2021529877.tif 000042
酸作用で式Ｈ化合物からガラクトサミン４，６−ＯＨ保護を除去し、次に、フコース上の保護基Ｒ４を選択的に除去し、式Ｉ化合物を得るステップ（７）と、
【化１０】
2021529877.tif 000043
式Ｉ化合物に硫酸化及び脱保護操作を行い、式Ｊ′化合物を得るステップ（８）と、を含み、
【化１１】
2021529877.tif 000044
ここで、式Ｄ〜式Ｊ化合物、ＲＸにおいて、Ｒはアジド基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基であり、好ましくは、Ｒはアジド基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である場合、
【化１２】
2021529877.tif 000045
はβ立体配置であり、ＲがＣ１〜Ｃ４アルコキシ基である場合、
【化１３】
2021529877.tif 000046
はα立体配置であり、
ＲＸにおいて、Ｘは水素、又はアルカリ金属であり、
Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＲ１Ｃ（Ｏ）Ｈジ脂肪アルコール、式Ｅ〜式Ｈ化合物において、Ｒ１は非置換フェニル基又は置換フェニル基であり、ここで、前記置換フェニル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、フェニル基、４−メトキシフェニル基、４−クロロフェニル基、及び４−ブロモフェニル基から選ばれる１種であり、より好ましくは、フェニル基、及び４−メトキシフェニル基から選ばれる１種であり、ここで、前記Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＲ１Ｃ（Ｏ）Ｈジ脂肪アルコールにおいて、脂肪アルコールはＣ１〜Ｃ４アルカノールであり、好ましくはメタノールであり、
無水物Ｒ２−Ｏ−Ｒ２、又は式Ｆ〜式Ｉ化合物において、Ｒ２は、脂肪族アシル基、非置換ベンゾイル基又は置換ベンゾイル基、及びアセチルプロピオニル基から選ばれる１種であり、ここで、前記脂肪族アシル基とは、Ｃ２〜Ｃ６アルカノイル基であり、前記置換ベンゾイル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ２はアセチル基、ベンゾイル基、４−クロロベンゾイル基、及び４−ブロモベンゾイル基から選ばれる１種であり、より好ましくはアセチル基、及びベンゾイル基から選ばれる１種であり、
Ｒ３ＯＨ、又は式Ｆ〜式Ｉ化合物において、Ｒ３は、非置換ベンジル基又は置換ベンジル基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、及びアリル基から選ばれる１種であり、ここで、前記置換ベンジル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ３はメチル基、エチル基、アリル基、ベンジル基、及び４−メトキシベンジル基から選ばれる１種であり、より好ましくはメチル基、エチル基、及びベンジル基から選ばれる１種であり、
式Ｇ〜式Ｈ化合物において、Ｒ４は非置換ベンジル基又は置換ベンジル基から選ばれ、前記置換ベンジル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ４はベンジル基又はｐ−メトキシベンジル基であり、
式Ｇ〜式Ｉ化合物において、Ｒ５は脂肪族アシル基、非置換ベンゾイル基又は置換ベンゾイル基、及びアセチルプロピオニル基から選ばれる１種であり、ここで、前記脂肪族アシル基とは、Ｃ２〜Ｃ６アルカノイル基であり、前記置換ベンゾイル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ５はアセチル基、ベンゾイル基、アセチルプロピオニル基、４−クロロベンゾイル基、及び４−ブロモベンゾイル基から選ばれる１種であり、より好ましくはアセチル基、アセチルプロピオニル基又はベンゾイル基であり、
式Ｇ化合物において、Ｅｔはエチル基であり、
式Ａ〜式Ｄ及びＭＯＨ塩基において、Ｍはナトリウム、カリウム、リチウム又はカルシウムであり、好ましくはナトリウムである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法。
【請求項６】
前記ステップ（１）では、無機酸は塩化水素、硫酸、硝酸、及びリン酸から選ばれる１種又は複数種であり、好ましくは、塩化水素、又は硫酸であり、Ｃ１〜Ｃ４アルカノールはメタノール、又はエタノールであり、好ましくは、メタノールであり、前記ＭＯＨ塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、又はＬｉＯＨであり、好ましくは、ＮａＯＨである、請求項５に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法。
【請求項７】
前記ステップ（２）では、好ましくは、ヒアルロニダーゼは、活性が４００〜１０００ＩＵ／ｍｇであり、添加量がコンドロイチン即ち式Ｂ化合物の質量の２．０〜３．０％であり、反応温度が３７℃であり、前記弱酸性緩衝液のｐＨ値は３．０〜６．５であり、好ましくは５．０〜５．２であり、前記緩衝液は酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸−酢酸カリウム緩衝液、リン酸二水素ナトリウム−リン酸水素二ナトリウム緩衝液又はリン酸二水素カリウム−リン酸水素二カリウム緩衝液のうちの１種であり、好ましくは酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液であり、前記緩衝液の濃度が０．０１Ｍ〜１Ｍであり、好ましくは、０．１Ｍの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液であり、一定の濃度の塩化ナトリウムとは、塩化ナトリウムの濃度が０．０５Ｍ〜０．５Ｍであり、好ましくは、０．１５Ｍであることを意味し、前記ヒアルロニダーゼは、動物精巣由来のヒアルロニダーゼから選ばれ、
選択的に、前記ステップ（３）では、ＲＸがアジドナトリウム、ナトリウムフェノラート、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオナトリウム、安息香酸ナトリウム、又はベンゾイルチオナトリウムである場合、アルカリ性溶液において、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムクロリドの作用で、式Ｃ化合物をアジドナトリウム、ナトリウムフェノラート、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオナトリウム、安息香酸ナトリウム、又はベンゾイルチオナトリウムと反応させ、式Ｄ化合物を得て、且つ式Ｄ化合物において、
【化１４】
2021529877.tif 000047
はβ立体配置であり、ここで、前記アルカリ性溶液に使用される有機アルカリが、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ピリジン、２，６−ジメチルピリジン、及びジイソプロピルエチルアミンから選ばれる１種又は複数種であり、ＲＸがＣ１〜Ｃ４アルキルアルコールである場合、式Ｃ化合物をＨＣｌのアルキルアルコール溶液において一晩反応させ、次に、アルカリ性条件下、カルボキシ基を放出して式Ｄ化合物を得て、且つ式Ｄ化合物において
【化１５】
2021529877.tif 000048
はα立体配置であり、ここで、前記アルカリ性条件下で使用される無機アルカリは水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、及び水酸化リチウムから選ばれる１種又は複数種であり、
選択的に、前記ステップ（４）では、酸で触媒するとは、下記プロトン酸又はルイス酸存在下、好ましくは、ｐ−トルエンスルホン酸、又はカンファースルホン酸存在下を意味し、
選択的に、前記ステップ（５）では、使用されるアルカリは、ナトリウムメトキシド、及び酢酸ナトリウムから選ばれる１種又は複数種であり、
選択的に、前記ステップ（６）では、酸で触媒するとは、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホネートアルキルシリケート、トリフルオロメタンスルホン酸金属塩、及び三フッ化ホウ素エーテルから選ばれる１種又は複数種、好ましくは、トリフルオロメタンスルホン酸金属塩から選ばれるプロトン酸又はルイス酸存在下を意味し、前記反応は有機溶媒にて行われ、前記有機溶媒はジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、トリクロロメタン、エチルエーテル、及びトルエンから選ばれる１種又は複数種であり、好ましくは、ジクロロメタンとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとの混合溶媒であり、ジクロロメタンとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとの体積比が３：１〜２：１であり、
選択的に、前記ステップ（７）では、使用される酸は、酢酸、カンファースルホン酸、及びｐ−トルエンスルホン酸から選ばれる１種又は複数種であり、前記「フコース上の保護基Ｒ４を選択的に除去する」ために使用される試薬は硝酸セリウムアンモニウム、ＤＤＱから選ばれる１種であり、
選択的に、前記ステップ（８）では、硫酸化に使用される試薬は、三酸化硫黄ピリジン複合体、三酸化硫黄トリメチルアミン複合体、及び三酸化硫黄トリエチルアミン複合体から選ばれる１種であり、前記硫酸化は、選択的に、無水ピリジン又は無水ＤＭＦにて行われ、保護基除去はテトラヒドロフランと水との混合溶媒にて行われ、テトラヒドロフランと水との体積比が３：１〜２：１であり、前記アルカリは、水酸化リチウム及び水酸化ナトリウムから選ばれる１種又は２種である、請求項５に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法。
【請求項８】
式Ｄ〜式Ｉ化合物から選ばれる１種である、フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を合成するための中間体化合物であって、
式Ｄ〜式Ｉ化合物において、各置換基は請求項５と同義である中間体化合物。
【化１６】
2021529877.tif 000049
【請求項９】
下記化合物から選ばれる１種である、請求項８に記載の中間体化合物。
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩、
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩、
アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］、
アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］、
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
メチル−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］、
メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、及び
メチル−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を含む医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖、又は請求項１０に記載の医薬組成物の、抗凝固薬の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、医薬化学の技術分野を含むが、それに制限されず、より具体的には、フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖、その製造方法、組成物、及び該化合物の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
フコシル化コンドロイチン硫酸は、ナマコから抽出されたグリコサミノグリカンであり、その構造では、コンドロイチン硫酸グリカンを骨格とし、またアルデヒド酸糖の３−位のヒドロキシ基にフコース側鎖が接続されており、異なる部位にスルホン酸基を有し、それにより三糖繰り返し単位が構成される（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８８，２６３，１８１７６）。
【化１】
2021529877.tif 000003
【０００３】
フコシル化コンドロイチン硫酸は抗凝固、抗ＨＩＶ、抗炎症、創傷修復などの生物学的機能を有する（Ｍａｒ．Ｄｒｕｇｓ  ２０１４，１２，２３２）。抗凝固活性に関しては、ヘパリン薬とは薬理学的メカニズムが異なるため、出血リスクを大幅に低減させ（Ｐ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，２０１５，１１２，８２８４）、且つ経口的投与の場合も、有効であり（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２００６，９６，８２２）、したがって、将来性及び研究価値が期待できる。
【０００４】
天然物から抽出されたフコシル化コンドロイチン硫酸グリカンは、活性化因子ＸＩＩと血小板が減少する副作用を有し、この問題を解決するために、ラジカル分解（Ｆｏｏｄ．Ｃｈｅｍ，２０１０，１２２，７１６）、光化学分解（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２０１４，２８９，２８２８４）、β−除去分解（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｐｏｌｙｍ，２０１５，１２７，４２７）など、複数種のグリカン分解方法が開発されており、その抗凝固活性を保持しながら、グリカンによる副作用を低減させる。しかし、抽出又は分解により得られるオリゴ糖は、微視的には不均一であり、且つ汚染のリスクが存在し、したがって、品質制御に関しては臨床薬の要件を満足できず、それにより、薬物への発展が深刻に制限されてしまう。したがって、明確な構造及び高純度を有するフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を合成方法によって取得することは、さらなる生物学的研究及び医薬品化学研究にとって唯一な有効方法である。
【０００５】
従来技術では、グルコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びフコースを原料とし、保護基操作及びグリコシル化によりオリゴ糖の集合を行い、フコシル化コンドロイチン硫酸三糖を合成し、糖ビルディングブロックから計１６個のステップの反応では、全収率が０．９５％（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．Ｌｅｔｔ，２０１３，５４，３９４０）であり、また改善する余裕があり、コンドロイチングリカンを原料とし、非選択的なフコシル化により類似した天然グリカンを得る場合は、その構造には不確定性が存在する（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃμｌｅｓ，２０１５，１６，２２３７、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ，２０１６，２２，１８２１５）。したがって、フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の新しい化学合成方法の開発は重要なことである。
【０００６】
さらに、研究から明らかなように、フコシル化コンドロイチン硫酸の抗凝固活性がその分子量に正相関を持ち（Ｊ．Ｂｉｏｌ，Ｃｈｅｍ，２０１４，２８９，２８２８４）、且つフコース側鎖の硫酸化モードがその活性に顕著な影響を与え、研究から明らかなように、フコース側鎖である２，４−Ｏ−硫酸化構造の場合の抗凝固活性が最も良好である（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｐｏｌｙｍ，２０１１，８３，６８８）。しかし、現在のすべての研究結果は、抽出又は分解方法によりオリゴ糖を得て、これらの構造は微視的には不均一であり、このため、明確な結論と明確な構造効果の関係は得られない。したがって、明確な構造及び高純度を有するフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を合成方法によって取得することは、フコシル化コンドロイチン硫酸の医薬品化学研究にとって重要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者は、低価なコンドロイチン硫酸グリカンを原料とし、酵素的分解、化学修飾及びフコシル化によりフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を得て、合成経路が簡単で効率的であり、化合物の構造が明確であり、従来技術に存在する欠陥を解決する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様によれば、本出願は、Ｊに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を提供する。
【化２】
2021529877.tif 000004
（式Ｊ中、Ａｃはアセチル基であり、ｑは正の整数であり、且つｑ≦１０であり、Ｙは、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又はＮ（Ｒ６）４であり、ここで、Ｒ６はＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、Ｒはアジド基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である。）
【０００９】
第２態様によれば、本出願は、コンドロイチン硫酸グリカンを原料とし、酵素的分解、化学修飾及びフコシル化によりフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を得る上記フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法を提供する。
【００１０】
第３態様によれば、本出願は、フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を合成するための中間体化合物を提供する。
【００１１】
第４態様によれば、本出願は、上記フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
第５態様によれば、本出願は、上記フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の用途を提供する。
詳細
【００１３】
本出願の実施形態では、本出願は、Ｊに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を提供する。
【化３】
2021529877.tif 000005
（式Ｊ中、Ａｃはアセチル基であり、ｑは正の整数であり、且つｑ≦１０であり、Ｙは、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又はＮ（Ｒ６）４であり、ここで、Ｒ６はＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、Ｒはアジド基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である。）
【００１４】
本出願のいくつかの実施形態では、本出願に係るＪに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖において、Ｒがアジド基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である場合、
【化４】
2021529877.tif 000006
はβ立体配置であり、ＲがＣ１〜Ｃ４アルコキシ基である場合、
【化５】
2021529877.tif 000007
はα立体配置である。
【００１５】
本出願のいくつかの実施形態では、本出願に係るＪに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖において、Ｒはアジド基であり、
【化６】
2021529877.tif 000008
はβ立体配置である。
【００１６】
本出願のいくつかの実施形態では、本出願に係るＪに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖において、Ｒはメチル基であり、
【化７】
2021529877.tif 000009
はα立体配置である。
【００１７】
本出願のいくつかの実施形態では、本出願に係るＪに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖において、式Ｊ中、ｑは１、２、３、又は４であり、ＹはＨ、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、又はマグネシウムであり、Ｒはアジド基であり、
【化８】
2021529877.tif 000010
はβ立体配置であり、又は、Ｒはメチル基であり、
【化９】
2021529877.tif 000011
はα立体配置である。
【００１８】
本出願のいくつかの実施形態では、本出願に係るＪに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖において、式Ｊ中、ｑは１、２、３、又は４であり、Ｙはナトリウムであり、Ｒはアジド基であり、
【化１０】
2021529877.tif 000012
はβ立体配置であり、又は、Ｒはメチル基であり、
【化１１】
2021529877.tif 000013
はα立体配置である。
【００１９】
本出願の特に好ましい実施形態では、本出願に係るＪに示されるフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖は、下記化合物から選ばれる１種である。
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩、
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十五ナトリウム塩、及び
メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩。
【００２０】
第２態様によれば、本出願の実施形態において、本出願は、上記フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法を提供し、この合成方法は、
無機酸のＣ１〜Ｃ４アルカノール溶液中に、式Ａ化合物（即ち、コンドロイチン硫酸Ｍ塩、好ましくは、Ｍはナトリウムである）からスルホン酸根を除去し、ＭＯＨ塩基で処理し、式Ｂ化合物を得て、ここで、式Ａ中のｍ及び式Ｂ中のｎは正の整数であり、且つ２０≦ｎ≦ｍであるステップ（１）と、
【化１２】
2021529877.tif 000014
塩化ナトリウムを含有する弱酸性緩衝液中に、ヒアルロニダーゼの作用で式Ｂ化合物（即ちコンドロイチンＭ塩、好ましくは、Ｍはナトリウムである）から式Ｃ化合物を得て、ここで、前記ヒアルロニダーゼは動物の精巣由来であり、活性が４００〜１０００ＩＵ／ｍｇであり、前記精巣はウシ精巣又はヒツジ精巣から選ばれ、好ましくは、ウシ精巣であり、ｑは１〜１０の正の整数であるステップ（２）と、
【化１３】
2021529877.tif 000015
式Ｃ化合物を求核性試薬ＲＸ（たとえばアジドナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシナトリウム、フェノキシナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオナトリウム、安息香酸ナトリウム、又はベンゾイルチオナトリウム）と反応させ、式Ｄ化合物を得るステップ（３）と、
【化１４】
2021529877.tif 000016
Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＲ１Ｃ（Ｏ）Ｈジ脂肪アルコール（たとえばＲ１ＣＨ（ＯＣＨ３）２）の存在下、酸で触媒し、式Ｄ化合物のアセチルガラクトサミン残基の４，６ジヒドロキシ基を選択的に保護し、式Ｅ化合物を得るステップ（４）と、
【化１５】
2021529877.tif 000017
式Ｅ化合物を無水物Ｒ２−Ｏ−Ｒ２の作用で環化し、次に、アルカリで触媒し、Ｒ３ＯＨ溶液中にラクトン環を開環し、式Ｆ化合物を得るステップ（５）と、
【化１６】
2021529877.tif 000018
式Ｆ化合物を酸触媒作用下、フコースドナーである式Ｇ化合物と反応させ、式Ｈ化合物を得るステップ（６）と、
【化１７】
2021529877.tif 000019
酸作用で式Ｈ化合物からガラクトサミン４，６−ＯＨ保護を除去し、次に、フコース上の保護基Ｒ４を選択的に除去し、式Ｉ化合物を得るステップ（７）と、
【化１８】
2021529877.tif 000020
式Ｉ化合物に硫酸化及び脱保護操作を行い、式Ｊ′化合物を得るステップ（８）と、を含み、
【化１９】
2021529877.tif 000021
ここで、式Ｄ〜式Ｊ化合物、ＲＸにおいて、Ｒはアジド基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基であり、好ましくは、Ｒはアジド基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である場合、
【化２０】
2021529877.tif 000022
はβ立体配置であり、ＲがＣ１〜Ｃ４アルコキシ基である場合、
【化２１】
2021529877.tif 000023
はα立体配置であり、
ＲＸにおいて、Ｘは水素、又はアルカリ金属（ナトリウム、カリウム、又はリチウム）であり、
Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＲ１Ｃ（Ｏ）Ｈジ脂肪アルコール、式Ｅ〜式Ｈ化合物において、Ｒ１は非置換フェニル基又は置換フェニル基であり、ここで、前記置換フェニル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン（たとえばフッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基（たとえばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基又はｔ−ブチル基）、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基（たとえばトリフルオロメチル基）、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基（たとえばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基又はｔ−ブトキシ基）から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、フェニル基、４−メトキシフェニル基、４−クロロフェニル基、及び４−ブロモフェニル基から選ばれる１種であり、より好ましくは、フェニル基、及び４−メトキシフェニル基から選ばれる１種であり、ここで、前記Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＲ１Ｃ（Ｏ）Ｈジ脂肪アルコールにおいて、脂肪アルコールはＣ１〜Ｃ４アルカノール（たとえばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基又はｔ−ブチル基）であり、好ましくはメタノールであり、
無水物Ｒ２−Ｏ−Ｒ２、又は式Ｆ〜式Ｉ化合物において、Ｒ２は、脂肪族アシル基、非置換ベンゾイル基又は置換ベンゾイル基、及びアセチルプロピオニル基から選ばれる１種であり、ここで、前記脂肪族アシル基とは、Ｃ２〜Ｃ６アルカノイル基（たとえばアセチル基、プロピオニル基、ｎ−ブチリル基、イソブチリル基、ｎ−バレリル基、ピバロイル基又はｎ−ヘキサノイル基）であり、前記置換ベンゾイル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン（たとえばフッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基（たとえばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基又はｔ−ブチル基）、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基（たとえばトリフルオロメチル基）、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基（たとえばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基又はｔ−ブトキシ基）から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ２はアセチル基、ベンゾイル基、４−クロロベンゾイル基、及び４−ブロモベンゾイル基から選ばれる１種であり、より好ましくはアセチル基、及びベンゾイル基から選ばれる１種であり、
Ｒ３ＯＨ、又は式Ｆ〜式Ｉ化合物において、Ｒ３は、非置換ベンジル基又は置換ベンジル基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、及びアリル基から選ばれる１種であり、ここで、前記置換ベンジル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン（たとえばフッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基（たとえばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基又はｔ−ブチル基）、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基（たとえばトリフルオロメチル基）、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基（たとえばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基又はｔ−ブトキシ基）から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ３はメチル基、エチル基、アリル基、ベンジル基、及び４−メトキシベンジル基から選ばれる１種であり、より好ましくはメチル基、エチル基、及びベンジル基から選ばれる１種であり、
式Ｇ〜式Ｈ化合物において、Ｒ４は非置換ベンジル基又は置換ベンジル基から選ばれ、前記置換ベンジル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン（たとえばフッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基（たとえばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基又はｔ−ブチル基）、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基（たとえばトリフルオロメチル基）、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基（たとえばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基又はｔ−ブトキシ基）から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ４はベンジル基又はｐ−メトキシベンジル基であり、
式Ｇ〜式Ｉ化合物において、Ｒ５は脂肪族アシル基、非置換ベンゾイル基又は置換ベンゾイル基、及びアセチルプロピオニル基から選ばれる１種であり、ここで、前記脂肪族アシル基とは、Ｃ２〜Ｃ６アルカノイル基（たとえばアセチル基、プロピオニル基、ｎ−ブチリル基、イソブチリル基、ｎ−バレリル基、ピバロイル基又はｎ−ヘキサノイル基）であり、前記置換ベンゾイル基とは、ベンゼン環が１つ又は２つ以上の置換基で置換されたことを意味し、前記置換基は、ハロゲン（たとえばフッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基（たとえばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基又はｔ−ブチル基）、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル基（たとえばトリフルオロメチル基）、及びＣ１〜Ｃ４アルコキシ基（たとえばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基又はｔ−ブトキシ基）から選ばれる１種又は複数種であり、且つ、選択的に、前記置換基はベンゼン環の任意の位置にあり、好ましくは、Ｒ５はアセチル基、ベンゾイル基、アセチルプロピオニル基、４−クロロベンゾイル基、及び４−ブロモベンゾイル基から選ばれる１種であり、より好ましくはアセチル基、アセチルプロピオニル基又はベンゾイル基であり、
式Ｇ化合物において、Ｅｔはエチル基であり、
式Ａ〜式Ｄ及びＭＯＨ塩基において、Ｍはナトリウム、カリウム、リチウム又はカルシウム（好ましくはナトリウム）である。
【００２１】
本出願に係る実施形態では、本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、Ｊ′化合物即ちＹがＮａのＪ化合物を得た後、本分野における一般的な技術により、ＹがＮａ以外のものであるＪ化合物が得られ得る。
【００２２】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（１）では、無機酸の由来は、塩化水素、硫酸、硝酸、及びリン酸から選ばれる１種又は複数種であり、好ましくは、塩化水素、又は硫酸であり、Ｃ１〜Ｃ４アルカノールはメタノール、又はエタノールであり、好ましくは、メタノールであり、前記ＭＯＨ塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、又はＬｉＯＨであり、好ましくは、ＮａＯＨである。
【００２３】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（２）では、好ましくは、ヒアルロニダーゼは、活性が４００〜１０００ＩＵ／ｍｇであり、添加量がコンドロイチンの質量の２．０〜３．０％であり、反応温度が３７℃であり、前記弱酸性緩衝液のｐＨ値は３．０〜６．５（好ましくは５．０〜５．２）であり、前記緩衝液は、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸−酢酸カリウム緩衝液、リン酸二水素ナトリウム−リン酸水素二ナトリウム緩衝液又はリン酸二水素カリウム−リン酸水素二カリウム緩衝液のうちの１種であり、好ましくは、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液であり、前記緩衝液の濃度が０．０１Ｍ〜１Ｍであり、好ましくは、０．１Ｍの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液であり、一定の濃度の塩化ナトリウムとは、塩化ナトリウムの濃度が０．０５Ｍ〜０．５Ｍであり、好ましくは、０．１５Ｍであることを意味し、前記ヒアルロニダーゼは、動物精巣由来のヒアルロニダーゼから選ばれ、たとえばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入したウシ精巣由来のヒアルロニダーゼである。
【００２４】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（３）では、ＲＸがアジドナトリウム、ナトリウムフェノラート、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオナトリウム、安息香酸ナトリウム、又はベンゾイルチオナトリウムである場合、アルカリ性溶液において、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムクロリドの作用で、式Ｃ化合物をアジドナトリウム、ナトリウムフェノラート、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオナトリウム、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオナトリウム、安息香酸ナトリウム、又はベンゾイルチオナトリウムと反応させ、式Ｄ化合物を得て、且つ式Ｄ化合物において、
【化２２】
2021529877.tif 000024
はβ立体配置であり、ここで、前記アルカリ性溶液に使用される有機アルカリが、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ピリジン、２，６−ジメチルピリジン、及びジイソプロピルエチルアミンから選ばれる１種又は複数種であり、ＲＸがＣ１〜Ｃ４アルキルアルコールである場合、式Ｃ化合物をＨＣｌのアルキルアルコール溶液において一晩反応させ、次に、アルカリ性条件下、カルボキシ基を放出して式Ｄ化合物を得て、且つ式Ｄ化合物において
【化２３】
2021529877.tif 000025
はα立体配置であり、ここで、前記アルカリ性条件下で使用される無機アルカリは水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、及び水酸化リチウムから選ばれる１種又は複数種であり、
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（４）では、酸で触媒するとは、下記プロトン酸又はルイス酸存在下、好ましくは、ｐ−トルエンスルホン酸、又はカンファースルホン酸存在下を意味する。
【００２５】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（５）では、使用されるアルカリは、ナトリウムメトキシド、及び酢酸ナトリウムから選ばれる１種又は複数種である。
【００２６】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（６）では、酸で触媒するとは、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホネートアルキルシリケート、トリフルオロメタンスルホン酸金属塩、及び三フッ化ホウ素エーテルから選ばれる１種又は複数種、好ましくは、トリフルオロメタンスルホン酸金属塩から選ばれるプロトン酸又はルイス酸存在下を意味し、前記ステップ（６）の反応は有機溶媒にて行われ、前記有機溶媒はジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、トリクロロメタン、エチルエーテル、及びトルエンから選ばれる１種又は複数種であり、好ましくは、ジクロロメタンとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとの混合溶媒であり、ジクロロメタンとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとの体積比が３：１〜２：１である。
【００２７】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（７）では、使用される酸は、酢酸、カンファースルホン酸、及びｐ−トルエンスルホン酸から選ばれる１種又は複数種である。前記「フコース上の保護基Ｒ４を選択的に除去する」ために使用される試薬は硝酸セリウムアンモニウム、ＤＤＱ（２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン）から選ばれる１種である。
【００２８】
本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の合成方法において、前記ステップ（８）では、硫酸化に使用される試薬は、三酸化硫黄ピリジン複合体、三酸化硫黄トリメチルアミン複合体、及び三酸化硫黄トリエチルアミン複合体から選ばれる１種であり、前記硫酸化は、選択的に、無水ピリジン又は無水ＤＭＦにて行われ、保護基除去はテトラヒドロフランと水との混合溶媒にて行われ、テトラヒドロフランと水との体積比が３：１〜２：１であり、前記アルカリは、水酸化リチウム及び水酸化ナトリウムから選ばれる１種又は２種である。
【００２９】
第３の態様によれば、本出願は、式Ｄ〜式Ｉ化合物から選ばれる１種である、フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を合成するための中間体化合物を提供する。
【化２４】
2021529877.tif 000026
ここで、各置換基の定義は上記合成方法の定義と同じであり、好ましくは、Ｒがアジド基、フェノキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルチオ基、ベンゾイルオキシ基、又はベンゾイルチオ基である場合、
【化２５】
2021529877.tif 000027
はβ立体配置であり、ＲがＣ１〜Ｃ４アルコキシ基である場合、
【化２６】
2021529877.tif 000028
はα立体配置である。
【００３０】
本出願の特に好ましい実施形態では、本出願は、以下から選ばれる、上記重要中間体を製造するための中間体化合物を提供する。
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩、
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩、
アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］、
アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］、
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、
メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩、
メチル−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］、
メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝、及び
メチル−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝。
【００３１】
第４の態様によれば、本出願は、上記フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を含む医薬組成物を提供する。本出願に係る上記医薬組成物は、経口又は非経口投与の製剤の形態であってもよく、用量が０．１〜１０００ｍｇ／回／日であってもよい。
【００３２】
第５の態様によれば、本出願は、上記フコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖の、抗凝固薬の製造における使用を提供する。本出願に係るフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖化合物は、優れた抗凝固活性を有し、ＡＰＴＴ（活性化部分トロンビン時間）を明らかに延ばし、且つＰＴ（プロトロンビン時間）やＴＴ（トロンビン時間）に対して顕著な影響がない。
【００３３】
本出願では、生産しやすく、容易に抽出できるコンドロイチン硫酸グリカンを原料とし、低価な動物精巣由来のヒアルロニダーゼを用いて原料を加水分解し、化学修飾を容易に実施できるオリゴ糖断片を得て、次に、この断片に対して一般的な保護基操作及びグリコシル化を行ってフコシル化コンドロイチン硫酸オリゴ糖を得る。経路が全体として簡単で効率的であり、且つ標識可能な基（たとえばアジド基は後でｃｌｉｃｋ反応により標識することに有利である）を有し、フコシル化コンドロイチン硫酸の生物学的機能の検討や医薬品化学研究に保証を提供する。
【００３４】
本出願の他の特徴及び利点は後述する明細書において説明され、且つ、この一部は明細書から明らかになるか、又は本出願を実施することにより把握できる。本出願の目的及び他の利点は明細書、特許請求の範囲に記載の手段により実現・取得することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本出願の目的、技術案及び利点をより明確にするために、以下、本出願の実施例を詳細に説明する。なお、矛盾がない限り、本出願の実施例及び実施例の特徴は互いに任意に組み合わせることができる。
【００３６】
以下、実施例にて本出願の実施可能性をさらに説明し、本出願の特許範囲を制限する。
検出器具：
核磁気：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ−４００型核磁気共鳴装置
質量分析：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸ  ＩＶ型質量分析装置
略語
ＣＤＣｌ３：重水素化クロロホルム
ＥｔＯＡｃ：酢酸メチル
ＭｅＯＨ：メタノール
ＨＲＭＳ：高解像度質量分析
ＥＳＩ：エレクトロスプレー質量分析
【００３７】
実施例１：コンドロイチングリカンの合成
市販のコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩２５ｇを塩酸−メタノール溶液（０．５％塩化アセチル、ｖ／ｖ）２．５Ｌに投入し、室温で２４時間撹拌し、吸引濾過して溶媒を除去し、得た固体を同じ濃度の塩酸−メタノール溶液２．５Ｌに再度投入した。このような操作に従って繰り返して液体を３回交換し、最終的に得た固体を濃度０．１Ｍの水酸化ナトリウム溶液７５０ｍＬに溶解し、室温で２４時間撹拌した。ＩＲ−１２０カチオン交換樹脂を加えて溶液をｐＨ＝３．５に中和し、ろ過して樹脂を除去し、適量の水酸化ナトリウム固体を加えてｐＨ＝８．０に調整し、乾固するまで濃縮させ、白色シロップを得た。その後、このシロップを少量の蒸留水で溶解して、激しく撹拌している絶対エタノール２０００ｍＬに緩やかに滴下して白色沈殿を析出させ、析出させた沈殿を減圧ろ過方法により収集し、少量の冷たい絶対エタノールでろ過ケーキを洗浄し、続いて、収集した固体を無水塩化カルシウムの入れた乾燥器に投入して所定の重量まで減圧乾燥させ、白色のアモルファス粉末状固体としてコンドロイチングリカン１５．０ｇを得た。該粗製品はさらに精製せずに、次のステップの合成にそのまま利用できる。
【００３８】
実施例２：（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース二ナトリウム塩、（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース三ナトリウム塩、及び（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース四ナトリウム塩の合成
実施例１で得たコンドロイチングリカン１５．０ｇをｐＨ＝５．００の０．１５Ｍ塩化ナトリウム含有の０．１０Ｍ酢酸ナトリウム−酢酸緩衝液７５０ｍＬに投入し、恒温水浴を用いて反応液を３７．０℃に昇温すると、ヒアルロニダーゼ乾燥粉末（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入、商品番号Ｈ−３５０６、Ｌｏｔ＃ＳＬＢＬ１９２２Ｖ）３７５ｍｇを加え、３７．０℃で７日間撹拌した。反応終了後、反応液を沸騰するまで昇温し、１０５℃で１５ｍｉｎ撹拌し、溶液が濁らなくなると室温まで高速で冷却し、１／２０体積の無水エタノールと混合した後減圧蒸留し、乾固するまで濃縮させ、白色シロップを得た。その後、このシロップを少量の蒸留水で溶解し、激しく撹拌している無水エタノール２０００ｍＬに緩やかに滴下して白色沈殿を析出させ、析出させた沈殿を減圧ろ過方法によって収集し、少量の冷たい絶対エタノールでろ過ケーキを洗浄し、続いて、収集した固体を無水塩化カルシウムの入れた乾燥器に投入して所定の重量まで減圧乾燥させ、白色のアモルファス粉末状固体２２ｇを得た。
【００３９】
粗製品５．０ｇを、まずＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で脱塩し、次に、強力な陰イオン交換樹脂で分離し、ＮａＣｌ溶液で溶出し（０．１５Ｍ〜０．２０Ｍ）、留分をＴＬＣにより検知し（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、次に、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で脱塩し、凍結乾燥させ、目標四糖として（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース二ナトリウム塩（１．２６ｇ、３８％）、六糖として（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース三ナトリウム塩（１．１５ｇ、３５％）、及び八糖として（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース四ナトリウム塩（４２７ｍｇ、１３％）をそれぞれ得た。
【００４０】
目標オリゴ糖のスペクトルデータは文献の報道と一致した。四糖：Ｒｆ＝０．３０（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値［Ｍ−２Ｎａ］２−ｍ／ｚ  ３８７．１０９５、実測値３８７．１０８２、六糖：Ｒｆ＝０．２４（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値［Ｍ−３Ｎａ＋Ｈ］２−ｍ／ｚ  ５７６．６６５２、実測値５７６．６６２２、八糖：Ｒｆ＝０．２０（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値［Ｍ−４Ｎａ＋２Ｈ］２−ｍ／ｚ  ７６６．２２０９、実測値７６６．２２２８．
【００４１】
実施例３：アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩の合成
（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース二ナトリウム塩（６６０ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２．４ｍＬ、２４．０ｍｍｏｌ）、及びアジドナトリウム（３．０ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）を水（１５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムクロリド（１．４ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を加えて、１５分間撹拌した後、氷浴を取り外し、室温に自然昇温して３６時間反応し続けた。反応終了後、濃縮させて溶媒を除去し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で脱塩し、凍結乾燥させて白色固体（５３１ｍｇ、７８％）を得た。Ｒｆ＝０．２４（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、1H NMR(600MHz,D2O)δ4.75(1H,d,J=9.4Hz),4.54-4.50(3H,m),4.19(2H,m),4.07-4.01(2H,m),3.89(1H,dd,J=3.1Hz,J=10.7Hz),3.84-3.76(7H,m),3.73-3.70(3H,m),3.62-3.59(1H,m),3.52-3.49(2H,m),3.42-3.37(1H,m),3.36-3.32(1H,m),2.06(3H,s),2.05(3H,s);13C NMR(150MHz,D2O)δ175.9,175.0,174.9,174.5,104.2,104.1,100.9,88.9,80.3,79.9,79.7,77.0,76.4,76.1,75.3,75.0,73.7,72.7,72.4,71.8,67.7,61.1,61.0,51.0,50.4,22.5,22.2、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値［Ｍ−２Ｎａ］２−ｍ／ｚ  ３９９．６１２７、実測値３９９．６１１９．
【００４２】
実施例４：アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩の合成
（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース三ナトリウム塩（５００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（１．２ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）、及びアジドナトリウム（１．５ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムクロリド（０．７ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加え、１５分間撹拌した後、氷浴を取り外し、室温に自然昇温して３６時間反応し続けた。反応終了後、濃縮させて溶媒を除去し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で脱塩し、凍結乾燥させて白色固体（３８３ｍｇ、７５％）を得た。Ｒｆ＝０．３０（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、1HNMR(600MHz,D2O)δ4.75(1H,d,J=9.5Hz),4.54-4.50(4H,m),4.19(1H,m),4.15-4.13(1H,m),4.07-4.00(3H,m),3.91-3.88(1H,dd,J=2.8Hz,J=10.7Hz),3.84-3.75(10H,m),3.72-3.70(5H,m),3.62-3.58(2H,m),3.54-3.49(3H,m),3.42-3.33(4H,m),2.06(3H,s),2.05(3H,s),2.04(3H,s);13C NMR(150MHz,D2O)δ175.9,175.0,174.6,174.5,104.3,104.2,104.1,100.8,88.9,80.3,79.9,79.7,77.0,76.4,76.1,75.3,75.0,73.7,72.7,72.5,72.4,71.8,67.7,61.1,61.0,51.0,50.9,50.4,22.5,22.2、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値［Ｍ−３Ｎａ＋Ｈ］２−ｍ／ｚ  ５８９．１６８４、実測値５８９．１６７６．
【００４３】
実施例５：アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩の合成
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩（５４０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、及びカンファースルホン酸（３００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）を、アルゴンガス保護下、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１．５ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）を加えて４５℃に加熱し、５時間減圧反応させた。ＴＬＣで反応終了を検知した場合、飽和重炭酸ナトリウム溶液を滴下してクエンチングし、反応液をそのままＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し（純水溶出）、凍結乾燥させて白色固体（５５６ｍｇ、８５％）を得た。Ｒｆ＝０．５０（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／＝１／１／０．３）、１H NMR(600MHz,D2O)δ7.61-7.57,7.50-7.48(10H,m),5.80(1H,s,PhCH),5.76(1H,s,PhCH),4.89(1H,d,J=9.3Hz),4.66(1H,d,J=8.5Hz),4.62(1H,m),4.61(1H,m),4.55(1H,d,J=7.9Hz),4.52(1H,d,J=7.9Hz),4.29-4.23(4H,m),4.21-4.17(2H,m),4.09(1H,dd,J=3.2Hz,J=10.9Hz),4.02(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.0Hz),3.88(1H,m),3.79(1H,m),3.77-3.72(2H,m),3.71-3.69(1H,m),3.62(1H,dd,J=J=9.2Hz),3.51-3.46(2H,m),3.35-3.25(2H,m),2.06(3H,s,CH3CO),2.04(3H,s,CH3CO);13C NMR(150MHz,D2O)δ175.8,175.1,175.0,174.2,173.3,167.6,136.6,136.5,129.9,129.8,128.6,126.5,126.4,104.4,104.3,101.3,101.1,88.7,80.4,77.6,76.6,76.2,75.3,75.2,74.9,73.5,72.5,72.1,71.7,68.9,68.6,68.1,66.4,50.8,50.1,45.4,38.8,34.2,22.6,22.2、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値Ｃ４２Ｈ４９Ｎ５Ｏ２２２−ｍ／ｚ  ４８７．６４４０、実測値４８７．６４３８．
【００４４】
実施例６：アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩の合成
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩（４５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、及びカンファースルホン酸（３４５ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を、アルゴンガス保護下、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７．５ｍＬ）に溶解し、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１．３５ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃に加熱し、５時間減圧反応させた。ＴＬＣで反応終了を検知した場合、飽和重炭酸ナトリウム溶液を滴下してクエンチングし、反応液をそのままＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し（純水溶出）、凍結乾燥させて白色固体（４４５ｍｇ、８１％）を得た。Ｒｆ＝０．４５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／＝１／１／０．３）、1H NMR(600MHz,D2O)δ7.61-7.57,7.50-7.48(15H,m),5.79(1H,s,PhCH),5.75(2H,s,PhCH),4.88(1H,d,J=9.3Hz),4.67-4.64(2H,m),4.62(1H,m),4.59(1H,m),4.57-4.51(4H,m),4.27-4.22(6H,m),4.22-4.15(3H,m),4.08(1H,dd,J=3.2Hz,J=11.0Hz),4.03-4.00(2H,m),3.86(1H,m),3.78-3.69(7H,m),3.64-3.60(2H,m),3.51-3.48(2H,m),3.35-3.28(3H,m),2.06(3H,s,CH3CO),2.05(3H,s,CH3CO),2.04(3H,s,CH3CO);13C NMR(150MHz,D2O)δ175.7,175.1,175.0,174.2,167.7,136.7,136.6,129.9,129.8,128.7,128.6,126.6,126.5,104.5,104.4,101.3,101.1,88.7,80.5,78.0,77.6,76.7,76.2,75.3,75.2,75.0,73.6,72.5,72.1,71.7,69.0,68.6,68.2,66.4,65.6,57.0,50.8,50.1,22.6,22.2;ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値Ｃ６３Ｈ７３Ｎ６Ｏ３３３−ｍ／ｚ  ４８０．４７４５、実測値４８０．４７４１．
【００４５】
実施例７：アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］の合成
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩（１７０ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）、安息香酸無水物（１．１７ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７．５ｍＬ）に溶解し、８５℃で加熱して７時間反応させ、室温に冷却し、無水ピリジン（４ｍＬ）及び４−ジメチルアミノピリジン（４１ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を加えて、常温で３６時間反応させた。ＴＬＣで反応終了を検知した場合、メタノール（４ｍＬ）及び無水酢酸ナトリウム（２０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で一晩反応させた。反応液を濃縮させてメタノールを除去し、大量の無水エチルエーテルを加えて、微黄白色固体を析出させ、ろ過してろ液を除去し、カラムクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ３０：１）、白色固体（１４４ｍｇ、２段収率６６％）を得た。Ｒｆ＝０．３５（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝２０：１）、1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ7.99-7.93,7.69-7.60,7.56-7.48,7.44-7.43,7.38-7.36,7.31-7.29(27H,m),5.82(1H,d,J=6.4Hz),5.43(1H,s,PhCH),5.37(1H,s,PhCH),5.09(1H,m),5.04(1H,dd,J=J=9.6Hz),4.99(1H,dd,J=J=8.0Hz),4.97-4.95(2H,m),4.84(1H,dd,J=J=8.5Hz),4.56(1H,d,J=7.4Hz),4.44(1H,d,J=8.0Hz),4.41(1H,d,J=9.9Hz),4.35(1H,m),4.27(1H,m),4.10-3.97(6H,m),3.93(1H,m),3.85(2H,m),3.80-3.76(2H,m),3.72(1H,m),3.68(1H,m),3.63(3H,s,COOCH3),3.57(1H,m),3.48(3H,s,COOCH3),1.17(3H,s,CH3CO),1.15(3H,s,CH3CO);13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.0,168.7,167.8,167.3,165.1,164.3,138.3,138.2,133.6,133.2,132.8,130.7,129.7,129.6,129.5,129.4,129.2,128.8,128.7,128.6,128.5,128.4,128.0,127.9,126.1,126.0,101.0,100.6,100.0,99.8,88.2,79.5,77.9,74.3,73.6,73.2,72.3,72.0,71.4,71.3,68.3,67.5,65.9,52.3,52.2,49.9,48.9,22.1,21.9;ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ６５Ｈ７１Ｎ６Ｏ２５＋ｍ／ｚ１３３５．４４６３、実測値１３３５．８８１８．
【００４６】
実施例８：アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］の合成
アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］三ナトリウム塩（３５０ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）、安息香酸無水物（１．６２ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解し、８５℃で加熱して１２時間反応させ、室温に冷却し、無水ピリジン（４ｍＬ）及び４−ジメチルアミノピリジン（５６ｍｇ、０．４６２ｍｍｏｌ）を加え、常温で３６時間反応させた。ＴＬＣで反応終了を検知した場合、メタノール（４ｍＬ）及び無水酢酸ナトリウム（２８ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で一晩反応させた。反応液を濃縮させてメタノールを除去し、大量の無水エチルエーテルを加えて、微黄白色固体を析出させ、ろ過してろ液を除去し、カラムクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ２０：１）、白色固体（２６２ｍｇ、２段収率６０％）を得た。Ｒｆ＝０．２８（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝２０：１）、1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.01-7.95,7.71-7.62,7.58-7.50,7.46-7.45,7.41-7.36,7.33-7.27(38H,m),5.84(1H,d,J=6.6Hz),5.45(1H,s,PhCH),5.38(1H,s,PhCH),5.34(1H,s,PhCH),5.08-5.03(3H,m),5.02-4.95(4H,m),4.87-4.83(2H,m),4.57(1H,d,J=6.8Hz),4.52(1H,d,J=6.6Hz),4.46(1H,d,J=7.8Hz),4.43(1H,d,J=10.0Hz),4.38(1H,m),4.28(1H,m),4.25(1H,m),4.12-3.98(10H,m),3.86(3H,m),3.80-3.78(4H,m),3.76-3.69(3H,m),3.63(3H,s,COOCH3),3.61(3H,s,COOCH3),3.59(1H,m),3.57(1H,m),3.51(3H,s,COOCH3),1.19(3H,s,CH3CO),1.16(6H,s,CH3CO);13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.9,168.7,168.6,167.8,167.3,165.1,164.4,164.3,138.3,138.2,133.6,133.2,132.8,130.7,129.7,129.6,129.5,129.4,129.2,128.8,128.7,128.6,128.5,128.4,128.0,127.9,126.1,126.0,101.0,100.8,100.7,100.0,99.8,99.7,88.2,79.5,79.4,77.8,74.3,74.0,73.6,73.2,72.3,72.1,72.0,71.4,71.3,68.3,67.5,65.9,52.3,52.2,34.7,22.1,21.9、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ９４Ｈ１０６Ｎ８Ｏ３７２＋ｍ／ｚ  ９６９．８３４１、実測値９６９．８０７８．
【００４７】
実施例９：アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成
アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］（５５．０ｍｇ、４１．８μｍｏｌ）、及びエチル−２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−１−チオ−β−Ｌ−フコース（１３７ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）を、アルゴンガス保護下、無水ジクロロメタン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．８ｍＬ／０．６ｍＬ）に溶解し、４Å分子篩（２００ｍｇ）を加えて、室温で２時間撹拌し、０℃に冷却し、Ｎ−ヨードスクシンイミド（７５．２ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ）及びトリフルオロメタンスルホン酸銀（１０．７ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を順次加え、この温度を維持しながら２．５時間反応させ、室温に緩やかに昇温し、一晩反応させた。トリエチルアミンを加えて反応をクエンチングし、珪藻土で分子篩をろ過除去し、ろ液を乾固するまで蒸発させ、得た固体を酢酸／無水酢酸（０．８ｍＬ／２．４ｍＬ）混合溶媒に加えて、７０℃で３時間反応させ、溶媒をトルエンで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより分離し（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３５：１）、減圧濃縮させて白色固体（６７．２ｍｇ、７０％）を得た。Ｒｆ＝０．３０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２５：１）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ１１９Ｈ１３９Ｎ７Ｏ４１２＋ｍ／ｚ  １１６１．４５１５、実測値１１６１．４２９３。
【００４８】
実施例１０：アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成
アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］（７１．４ｍｇ、３７．５μｍｏｌ）、及びエチル−２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−１−チオ−β−Ｌ−フコース（２１７ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）を、アルゴンガス保護下、無水ジクロロメタン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．２ｍＬ／１．１ｍＬ）に溶解し、４Å分子篩（３００ｍｇ）を加えて、室温で２時間撹拌し、０℃に冷却し、Ｎ−ヨードスクシンイミド（１１０ｍｇ、０．４８８ｍｍｏｌ）及びトリフルオロメタンスルホン酸銀（１４．５ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を順次加え、この温度を維持しながら２．５時間反応させ、室温に緩やかに昇温し、一晩反応させた。トリエチルアミンを加えて反応をクエンチングし、珪藻土で分子篩をろ過除去し、ろ液を乾固するまで蒸発させ、得た固体を酢酸／無水酢酸（０．８ｍＬ／２．４ｍＬ）混合溶媒に加え、７０℃で３時間反応させ、溶媒をトルエンで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより分離し（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３５：１）、減圧濃縮させて白色固体（７８．１ｍｇ、６２％）を得た。Ｒｆ＝０．３０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０：１）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ１７５Ｈ２０２Ｎ８Ｏ６１２＋ｍ／ｚ１６９６．６５０３、実測値１６９６．６０８６。
【００４９】
実施例１１：アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝（４６．０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）と水（２００μＬ）の混合溶媒に溶解し、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン（４６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間反応させた。ＴＬＣで反応終了を検知した場合、反応液をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム／チオ硫酸ナトリウム溶液（１：１）及び飽和食塩水で順次洗浄し、ジクロロメタンを用いて３回逆抽出し、有機相を併せて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させて得た粗製品を８０％酢酸水溶液（２．０ｍＬ）に溶解し、６０℃で３時間反応させ、次に、無水トルエンで溶媒を乾燥させ、ジクロロメタン／メタノール（１：１）を直接溶出剤として、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し、減圧濃縮させて白色固体（２４．０ｍｇ、２段収率７３％）を得た。Ｒｆ＝０．２０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ８：１）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ７３Ｈ９５Ｎ６ＮａＯ３７２＋ｍ／ｚ  ８３５．２８１２、実測値８３５．２９６６。
【００５０】
実施例１２：アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成
アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝（３５．７ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１．５ｍＬ）と水（１５０μＬ）の混合溶媒に溶解し、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン（３７ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４時間反応させた。ＴＬＣで反応終了を検知した場合、反応液をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム／チオ硫酸ナトリウム溶液（１：１）及び飽和食塩水で順次洗浄し、ジクロロメタンを用いて３回逆抽出し、有機相を併せて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させて得た粗製品を８０％酢酸水溶液（２．０ｍＬ）に溶解し、６０℃で３時間反応させ、次に、無水トルエンで溶媒を乾燥させ、ジクロロメタン／メタノール（１：１）を直接溶出剤として、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し、減圧濃縮させて白色固体（１７．８ｍｇ、２段収率７１％）を得た。Ｒｆ＝０．３０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ６：１）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ１０６Ｈ１３４Ｎ６Ｎａ２Ｏ５５２＋ｍ／ｚ  １２０８．３８２９、実測値１２０８．４８４７。
【００５１】
実施例１３：アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩の合成
アルゴンガス保護下、アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝（２４ｍｇ、１４．７μｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）に溶解し、三酸化硫黄トリメチルアミン複合体（２４６ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で９０時間反応させ、室温に冷却し、トリエチルアミン（１００μＬ）及びメタノール（１５０μＬ）を加えて反応をクエンチングし、ジクロロメタン／メタノール１：１を直接溶出剤として、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し、減圧濃縮させて、得た白色固体をテトラヒドロフラン−水（３：１、２ｍＬ）混合溶媒に溶解し、−５℃に冷却し、新しい１Ｍ水酸化リチウム−３５％過酸化水素（２：１、０．７５ｍＬ）の混合溶液を滴下し、−５℃で１時間反応させ、室温移し一晩反応させた。氷浴条件下、メタノール（０．５ｍＬ）を加えて、４Ｍ水酸化ナトリウム溶液（１．３ｍＬ）を緩やかに滴下し、室温に自然昇温して１０時間反応させた。ＩＲ−１２０カチオン交換樹脂で反応液をｐＨ＝７に中和し、ろ過して、蒸留水を用いて樹脂を洗浄し、ろ液を濃縮させ、水を溶出剤として、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し、凍結乾燥させて、白色固体（２２．０ｍｇ、２段収率７７％）を得た。ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値Ｃ４０Ｈ６７Ｎ７Ｏ５４Ｓ８２−ｍ／ｚ  ８８２．５２４４、実測値８８２．５２５０。
【００５２】
実施例１４：アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十五ナトリウム塩の合成
アルゴンガス保護下、アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝（１９．５ｍｇ、８．２μｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．８ｍＬ）に溶解し、三酸化硫黄トリメチルアミン複合体（２０６ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で９０時間反応させ、室温に冷却し、トリエチルアミン（１００μＬ）及びメタノール（１５０μＬ）を順次加えて反応をクエンチングし、ジクロロメタン／メタノール１：１を直接溶出剤として、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し、減圧濃縮させて、得た白色固体をテトラヒドロフラン−水（３：１、２ｍＬ）混合溶媒に溶解し、−５℃に冷却し、新しい１Ｍ水酸化リチウム−３５％過酸化水素（２：１、０．７５ｍＬ）混合溶液に滴下し、−５℃で１時間反応させ、室温に移し一晩反応させた。氷浴条件下、メタノール（０．５ｍＬ）を加えて、４Ｍ水酸化ナトリウム溶液（１．３ｍＬ）を緩やかに滴下し、室温に自然昇温して１０時間反応させた。ＩＲ−１２０カチオン交換樹脂で反応液をｐＨ＝７に中和し、ろ過して、蒸留水を用いて樹脂を洗浄し、ろ液を濃縮させ、水を溶出剤として、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で精製し、凍結乾燥させて、白色固体（１６．２ｍｇ、２段収率６８％）を得た。ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値Ｃ６０Ｈ１００Ｎ９Ｏ８１Ｓ１２３−ｍ／ｚ  ８７５．３５４９、実測値８７５．３５６４。
【００５３】
実施例１５：メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩の合成
（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−２−デオキシ−Ｎ−アセチルアミノ−Ｄ−ガラクトピラノース二ナトリウム塩（４９０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を、塩酸−メタノール溶液（３．５％体積の塩化アセチルに無水メタノールを加えて製造したもの）５０ｍＬに溶解し、室温で１６時間反応させ、氷浴下、０．１Ｍ水酸化ナトリウム溶液を滴下して溶液をｐＨ＝１２に調整し、２時間撹拌して、濃縮させて溶媒を除去し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０で脱塩し、凍結乾燥させて白色固体（３４５ｍｇ、７０％）を得た。Ｒｆ＝０．２４（ｎ−ブタノール／水／エタノール／酢酸＝１／１／１／０．０５）、１H NMR(400MHz,D2O)δ4.41-4.38(3H,m),4.32(1H,d,J=8.5Hz),4.06(1H,m),4.01(1H,m),3.92-3.87(2H,m),3.72-3.62(7H,m),3.59-3.57(4H,m),3.49-3.45(1H,m),3.40~3.36(5H,m),3.28-3.19(2H,m),1.92(3H,s),1.90(3H,s);13C NMR(100MHz,D2O)δ175.9,175.0,174.9,174.5,104.2,104.1,102.2,100.9,80.4,80.2,79.7,76.1,75.3,75.0,74.9,73.7,72.7,72.5,71.8,67.8,67.7,61.1,61.0,57.1,51.0,22.6,22.3、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値［Ｍ−２Ｎａ］２−ｍ／ｚ  ３９４．１１７３、実測値３９４．１１８０．
【００５４】
実施例１６：メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩の合成
メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩（１９５ｍｇ）を原料として、アジド−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩の合成方法によって、白色固体（２００ｍｇ、８４％）を製造し、Ｒｆ＝０．５０（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／＝１／１／０．３）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値Ｃ４３Ｈ５２Ｎ５Ｏ２３２−ｍ／ｚ  ４８２．１４８６、実測値４８２．１４７３．
【００５５】
実施例１７：メチル−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］の合成
メチル−［（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］二ナトリウム塩（２００ｍｇ）を原料として、アジド−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］の合成方法によって、白色固体（１８０ｍｇ、２段収率７０％）を製造した。Ｒｆ＝０．３５（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝２０：１）、1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24-8.01,7.62-7.38,7.34-7.32,7.14(25H,m),6.21(1H,m),5.58-5.51(2H,m),5.47-5.46(2H,m),5.31(1H,dd,J=J=9.6Hz),5.23(1H,m),5.08(1H,m),5.06(1H,m),4.96(1H,d,J=8.6Hz),4.91(1H,d,J=7.1Hz),4.77(1H,m),4.52(1H,m),4.47(1H,m),4.27-4.20(3H,m),4.13(1H,m),4.04-3.96(3H,m),3.90~3.86(2H,m),3.69(3H,s,COOCH3),3.65(3H,s,COOCH3),3.52(1H,m),3.40(4H,m),1.54(3H,s,CH3CO),1.41(3H,s,CH3CO)、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ６６Ｈ７４Ｎ３Ｏ２６＋［Ｍ＋ＮＨ４＋］ｍ／ｚ  １３２４．４５５５、実測値１３２４．４９６０．
【００５６】
実施例１８：メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成
メチル−［（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］を原料（１３０ｍｇ）として、アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成方法によって、白色固体（１６４．７ｍｇ、７３％）を製造した。Ｒｆ＝０．３０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２５：１）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ１２０Ｈ１４２Ｎ４Ｏ４２２＋［Ｍ＋２ＮＨ４］２＋ｍ／ｚ  １１５５．９５６１、実測値１１５５．５２１０。
【００５７】
実施例１９：メチル−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成
メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝を原料（１４０ｍｇ）として、アジド−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝の合成方法によって、白色固体（６８．６ｍｇ、２段収率７０％）を製造した。Ｒｆ＝０．２０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ８：１）、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（正イオンモード）計算値Ｃ７４Ｈ１０２Ｎ４Ｏ３８２＋ｍ／ｚ  ８２７．３０８１、実測値８２７．１３２４。
【００５８】
実施例２０：メチル−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩の合成
メチル−｛（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（３−Ｏ−アセチルプロピオニル−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（２−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチル）−（１→３）−（２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝を原料（６８．６ｍｇ）として、アジド−｛（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−［（２，４−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−フコシル）−（１→３）−（β−Ｄ−グルコピラヌロン酸）−（１→３）−（４，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−デオキシ−２−Ｎ−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）］｝十ナトリウム塩の合成方法によって、白色固体（６４．０ｍｇ、２段収率７８％）を製造した。1H NMR(400MHz,D2O)δ5.62(1H,d,J=3.8Hz),5.52(1H,d,J=3.7Hz),4.84(1H,m),4.80(1H,m),4.75(2H,m),4.62(1H,m),4.50-4.36(7H,m),4.25-4.06(7H,m),4.02-3.88(7H,m),3.70-3.52(8H,m),3.46(3H,s,OCH3),1.99(3H,s,COOCH3),1.95(3H,s,COOCH3),1.29(3H,d,J=6.4Hz),1.18(3H,d,J=6.5Hz);13C NMR(100MHz,D2O)δ175.0,174.9,103.7,101.9,99.9,96.6,81.5,81.1,80.9,77.2,76.5,76.3,76.1,75.9,75.4,75.2,75.1,73.6,72.9,72.3,71.8,69.9,68.0,67.2,66.5,66.3,66.2,57.3,51.4,22.6,22.3,15.8,15.7、ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ（負イオンモード）計算値Ｃ４１Ｈ６７Ｎ３Ｏ５５Ｓ８２−ｍ／ｚ  ８６８．５１５７、実測値８６８．５１８２。
【００５９】
抗凝固活性のテスト
本出願のオリゴ糖化合物Ｊ１（式Ｊ化合物、ここで、Ｙ＝Ｎａ、ｑ＝１、Ｒはアジド基であり、
【化２７】
2021529877.tif 000029
はβ立体配置である）、Ｊ２（式Ｊ化合物、ここで、Ｙ＝Ｎａ、ｑ＝２、Ｒはアジド基であり、
【化２８】
2021529877.tif 000030
はβ立体配置である）、Ｊ３（式Ｊ化合物、ここで、Ｙ＝Ｎａ、ｑ＝３、Ｒはアジド基であり、
【化２９】
2021529877.tif 000031
はβ立体配置である）、Ｊ４（式Ｊ化合物、ここで、Ｙ＝Ｎａ、ｑ＝４、Ｒはアジド基であり、
【化３０】
2021529877.tif 000032
はβ立体配置である）に対して、活性化部分トロンビン時間（ＡＰＴＴ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、トロンビン時間（ＴＴ）を含む抗凝固活性をテストした。
【００６０】
ＡＰＴＴ測定
実験にわたって、ＡＰＴＴキットの取扱書に従って操作し、まず、貧血小板血漿２０μｌと被測定溶液（対照群又はサンプル溶液）５μｌをテストカップに混合して、３７℃の予熱領域で３ｍｉｎインキュベートし、次に、該混合系へＡＰＴＴ試薬２５μｌを加え、さらに３７℃で３ｍｉｎインキュベートし続け、次に、テストカップをテスト領域に移し、５ｍｉｎ予熱した塩化カルシウム溶液２５μｌを加えた直後、フィブリンが形成された時間を記録し、実験終了後、凝固計からフィブリンが形成された時間を読み取った。
【００６１】
ＰＴ測定
実験にわたって、ＰＴキットの取扱書に従って操作し、まず、貧血小板血漿２０μｌと被測定溶液（対照群又はサンプル溶液）５μｌをテストカップに混合して、３７℃の予熱領域で３ｍｉｎインキュベートし、次に、テストカップをテスト領域に移した後、予熱されたＰＴ試薬（予熱時間は１０ｍｉｎよりも長く、３０ｍｉｎ未満）５０μｌを加えた直後、フィブリンが形成された時間を記録し、実験終了後、凝固計からフィブリンが形成された時間を読み取った。
【００６２】
ＴＴ測定
実験にわたって、ＴＴキットの取扱書に従って操作し、まず、貧血小板血漿２０μｌと被測定溶液（対照群又はサンプル溶液）５μｌをテストカップに混合して、３７℃の予熱領域で３ｍｉｎインキュベートし、次に、テストカップをテスト領域に移した後、予熱されたＴＴ試薬（予熱時間は１０ｍｉｎよりも長く、３０ｍｉｎ未満）５０μｌを加えた直後、フィブリンが形成された時間を記録し、実験終了後、凝固計からフィブリンが形成された時間を読み取った。
【００６３】
テスト結果を以下に示す（表中のデータは、ＡＰＴＴ／ＰＴ／ＴＴを１倍延ばすのに必要な濃度を表す）。
【表１】
2021529877.tif 000033
【００６４】
以上、本出願の実施形態を開示したが、前記内容は本出願を容易に理解するためにする実施形態に過ぎず、本出願を限定するものではない。当業者であれば、本出願で開示された趣旨及び範囲を逸脱することなく、実施の形態及び詳細について任意の修正や変化を加えることができるが、本出願特許の保護範囲は、添付の特許請求の範囲により定められる範囲に準じる。
【国際調査報告】
2021529877.tif 000051
2021529877.tif 000052
2021529877.tif 000053
2021529877.tif 000054