(57)【要約】  本発明は、一部は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体およびそれらの治療薬としての使用に関する。本発明は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む医薬組成物および種々の疾患の治療でのそれらの使用にさらに関する。【選択図】図４９
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）標的を認識しおよび／またはそれに結合する認識ドメインを含むターゲティング部分、
（ｂ）シグナル伝達物質であって、
ｉ）野生型シグナル伝達物質、または
ｉｉ）前記野生型シグナル伝達物質に比べて改善された安全性を付与する１個または複数の変異を有する改変型シグナル伝達物質である、シグナル伝達物質、および
（ｃ）Ｆｃドメインであって、Ｆｃ鎖および任意選択で前記Ｆｃドメインの１種または複数のエフェクター機能を低減または除去する、前記ＦｃドメインのＦｃ鎖対形成を促進する、および／または前記Ｆｃドメイン中のヒンジ領域を安定化する１個または複数の変異を有するＦｃ鎖を含む、Ｆｃドメイン、
を含む、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２】
１個または複数のリンカーをさらに含む、請求項１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される、請求項１または２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される、請求項３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項６】
前記ヒトＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ野生型シグナル伝達物質に比べて前記シグナル伝達物質の受容体で低減された親和性または活性を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８】
前記シグナル伝達物質が、改変シグナル伝達物質でありかつ前記ターゲティング部分が前記シグナル伝達物質の受容体で前記改変型シグナル伝達物質の親和性または活性を回復する、請求項７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９】
前記Ｆｃ鎖対形成が、イオン対形成および／またはノブインホール対形成により促進される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、Ｆｃドメイン中のＦｃ鎖間のイオン対形成をもたらす、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメインのノブインホール対形成をもたらす、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１２】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメインのエフェクター機能の低減または除去をもたらす、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３】
前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞、および／または腫瘍間質、および／またはＥＣＭ、および／または免疫細胞上の抗原または受容体を認識しおよび／または結合する認識ドメインを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項１３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５】
前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６】
前記ターゲティング部分が、ＶＨＨを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７】
前記ターゲティング部分が、前記標的の活性を実質的に中和することなくその標的を認識するおよび／またはそれに結合するまたは前記ターゲティング部分が、その標的を認識するおよび／またはそれに結合しかつ前記標的の活性を実質的に中和する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１８】
前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に免疫細胞を直接的または間接的に動員する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９】
前記ターゲティング部分が、抗原提示を強化する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２０】
前記ターゲティング部分が、任意選択で樹状細胞により、腫瘍抗原提示を強化する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２１】
前記ターゲティング部分が、次の標的：ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ２０、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ４ｃ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、テネイシンＣＡ１、Ｆｌｔ３、またはＥＣＭタンパク質の１つに結合する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２２】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質中の前記変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２３】
アゴニストまたはアンタゴニスト活性が、減弱化される、請求項２２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２４】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子から選択される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２５】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質が、ヒト：ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦ、ＴＮＦＲ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＴＲＡＩＬ、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-3３、ＩＧＦ−１、またはＥＰＯから選択される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２６】
前記ヒトＩＦＮα２が、配列番号１または２のアミノ酸配列を基準にしてＲ３３Ａ、Ｔ１０６Ｘ３、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択され、かつＸ３が、ＡおよびＥから選択される、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２７】
前記ヒトＩＦＮβが、配列番号３のアミノ酸配列を基準にしてＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、およびＲ１５２Ｇから選択される１個または複数の変異を含む、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２８】
前記ヒトIL-1βが、配列番号１７のアミノ酸配列を基準にしてＡ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｇ、Ｒ１２０Ａ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１Ｓ、Ｅ２２１Ｋ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、およびＮ２４５Ｑから選択される１個または複数の変異を含む、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項２９】
前記ヒトIL-2が、配列番号１８のアミノ酸配列を基準にしてＲ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、Ｅ６２Ａ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、Ｄ１０９、およびＣ１２５から選択される１個または複数の変異を含む、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３０】
前記ヒトＴＮＦαが、配列番号１４のアミノ酸配列を基準にしてＲ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７０、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｔ、およびＹ８７Ｑ／Ｉ９７Ａから選択される１個または複数の変異を含む、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３１】
前記Ｆｃドメインが、ホモダイマーである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３２】
前記Ｆｃドメインが、ヘテロダイマーである、請求項１、２、および７〜３０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３３】
前記シグナル伝達物質が、配列番号１または２のアミノ酸配列を基準にして任意選択でＲ１４９Ａ変異を有する、改変型ＩＦＮα２である、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３４】
前記ターゲティング部分がＣｌｅｃ９Ａに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、任意選択で次の変異：Ｒ３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｉ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｙ、Ａ１４５Ｄ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｙ、Ｍ１４８Ａ、およびＬ１５３Ａの１個または複数を有する、改変型ＩＦＮα２である、請求項２６または３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３５】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３６】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３７】
（ｉ）前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ４Ｃに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、または
（ｉｉ）前記ターゲティング部分が、Ｘｃｒ１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３８】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ２０に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項３９】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ１３に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４０】
前記ターゲティング部分が、ＦＡＰに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４１】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ８に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４２】
前記ターゲティング部分が、Ｆｌｔ３に結合しかつ任意選択でＦｌｔ３Ｌの細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含みかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４３】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖでありかつ前記シグナル伝達物質が、野生型ＩＦＮα２である、請求項２１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４４】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１の細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４５】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−１の細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４６】
前記ターゲティング部分が、ＮＧＲペプチドを含みかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項３３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４７】
前記シグナル伝達物質が、野生型ＩＦＮβまたは改変型ＩＦＮβである、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４８】
前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ９Ａに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮβである、請求項４７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項４９】
前記シグナル伝達物質が、野生型IL-1βまたは改変型IL-1βである、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５０】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ８に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型IL-1βである、請求項４９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５１】
前記シグナル伝達物質が、野生型ＴＮＦまたは改変型ＴＮＦである、請求項２５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５２】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ２０に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＴＮＦである、請求項５１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５３】
前記キメラタンパク質複合体が、第２のターゲティング部分をさらに含む、請求項１〜５２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５４】
前記第２のターゲティング部分が、次の標的：ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ２０、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ４ｃ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、テネイシンＣＡ１、Ｆｌｔ３、またはＥＣＭタンパク質の１つに結合する、請求項５３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５５】
前記キメラタンパク質複合体が、第２のシグナル伝達物質をさらに含む、請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５６】
前記第２のシグナル伝達物質が、野生型または改変型シグナル伝達物質である、請求項５５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５７】
前記第２のシグナル伝達物質が、ヒト：ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦ、ＴＮＦＲ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＴＲＡＩＬ、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-3３、ＩＧＦ−１、またはＥＰＯから選択される、請求項５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項５８】
癌を治療するまたは予防するための方法であって、請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の有効量をそれを必要としている患者に投与することを含む、方法。
【請求項５９】
癌を治療するまたは予防するための、請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項６０】
癌の治療または予防のための薬物の作製のための請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項６１】
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群の１種または複数から選択される、請求項５８に記載の方法または請求項５９もしくは請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための方法であって、請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の有効量をそれを必要としている患者に投与することを含む、方法。
【請求項６３】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項６４】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための薬物の作製のための、請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項６５】
前記自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患が、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、およびグレーブス病から選択される、請求項６２に記載の方法または請求項６３もしくは請求項６４に記載の使用。
【請求項６６】
下記を含むホモダイマーである、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体：
（ａ）標的を認識しおよび／またはそれに結合する認識ドメインを含むターゲティング部分、
（ｂ）シグナル伝達物質であって、
ｉ）野生型シグナル伝達物質、または
ｉｉ）前記野生型シグナル伝達物質に比べて改善された安全性を付与する１個または複数の変異を有する改変型シグナル伝達物質
である、シグナル伝達物質、および
（ｃ）Ｆｃドメインであって、Ｆｃ鎖および任意選択で前記Ｆｃドメインの１種または複数のエフェクター機能を低減または除去するおよび／または前記Ｆｃドメイン中のヒンジ領域を安定化する１個または複数の変異を有するＦｃ鎖を含む、Ｆｃドメイン。
【請求項６７】
１個または複数のリンカーをさらに含む、請求項６６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項６８】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される、請求項６６または６７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項６９】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項６８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７０】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される、請求項６８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７１】
前記ヒトＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項７０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７２】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質が、野生型シグナル伝達物質に比べて前記シグナル伝達物質の受容体で低減された親和性または活性を有する、請求項６６〜７１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７３】
シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記ターゲティング部分が、前記シグナル伝達物質の受容体での前記改変型シグナル伝達物質の親和性または活性を回復する、請求項７２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７４】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメインのエフェクター機能の低減または除去をもたらす、請求項６６〜７３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７５】
前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞、および／または腫瘍間質、および／またはＥＣＭ、および／または免疫細胞上の抗原または受容体を認識しおよび／または結合する認識ドメインを含む、請求項６６〜７４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７６】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項７５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７７】
前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子を含む、請求項６６〜７６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７８】
前記ターゲティング部分が、ＶＨＨを含む、請求項６６〜７７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項７９】
前記ターゲティング部分が、前記標的の活性を実質的に中和することなくその標的を認識するおよび／またはそれに結合するまたは前記ターゲティング部分が、その標的を認識するおよび／またはそれに結合しかつ前記標的の活性を実質的に中和する、請求項６６〜７８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８０】
前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に免疫細胞を直接的または間接的に動員する、請求項６６〜７９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８１】
前記ターゲティング部分が、抗原提示を強化する、請求項６６〜８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８２】
前記ターゲティング部分が、任意選択で樹状細胞により、腫瘍抗原提示を強化する、請求項６６〜８１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８３】
前記ターゲティング部分が、次の標的：ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ２０、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ４ｃ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、テネイシンＣＡ１、Ｆｌｔ３、またはＥＣＭタンパク質の１つに結合する、請求項６６〜８２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８４】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質中の前記変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項６６〜８３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８５】
アゴニストまたはアンタゴニスト活性が、減弱化される、請求項８４に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８６】
前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子から選択される、請求項６６〜８５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８７】
前記改変型シグナル伝達物質が、ヒト：ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦ、ＴＮＦＲ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＴＲＡＩＬ、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-3３、ＩＧＦ−１、またはＥＰＯから選択される、請求項６６〜８６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８８】
前記ヒトＩＦＮα２が、配列番号１または２のアミノ酸配列を基準にしてＲ３３Ａ、Ｔ１０６Ｘ３、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択され、かつＸ３が、ＡおよびＥから選択される、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項８９】
前記ヒトＩＦＮβが、配列番号３のアミノ酸配列を基準にしてＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、およびＲ１５２Ｇから選択される１個または複数の変異を含む、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９０】
前記ヒトIL-1βが、配列番号１７のアミノ酸配列を基準にしてＡ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｇ、Ｒ１２０Ａ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１Ｓ、Ｅ２２１Ｋ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、およびＮ２４５Ｑから選択される１個または複数の変異を含む、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９１】
前記ヒトIL-2が、配列番号１８のアミノ酸配列を基準にしてＲ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、Ｅ６２Ａ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、Ｄ１０９、およびＣ１２５から選択される１個または複数の変異を含む、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９２】
前記ヒトＴＮＦαが、配列番号１４のアミノ酸配列を基準にしてＲ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７０、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｔ、およびＹ８７Ｑ／Ｉ９７Ａから選択される１個または複数の変異を含む、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９３】
前記シグナル伝達物質が、配列番号１または２のアミノ酸配列を基準にして任意選択でＲ１４９Ａ変異を有する、改変型ＩＦＮα２である、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９４】
前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ９Ａに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、任意選択で次の変異：Ｒ３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｉ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｙ、Ａ１４５Ｄ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｙ、Ｍ１４８Ａ、およびＬ１５３Ａの１個または複数を有する、改変型ＩＦＮα２である、請求項８８または９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９５】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９６】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９７】
（ｉ）前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ４Ｃに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、または
（ｉｉ）前記ターゲティング部分が、Ｘｃｒ１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９８】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ２０に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項９９】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ１３に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１００】
前記ターゲティング部分が、ＦＡＰに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０１】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ８に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０２】
前記ターゲティング部分が、Ｆｌｔ３に結合しかつ任意選択でＦｌｔ３Ｌの細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０３】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖであり前記シグナル伝達物質が、野生型ＩＦＮα２である、請求項８３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０４】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１の細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０５】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−１の細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０６】
前記ターゲティング部分が、ＮＧＲペプチドを含みかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項９３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０７】
前記シグナル伝達物質が、野生型ＩＦＮβまたは改変型ＩＦＮβである、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０８】
前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ９Ａに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮβである、請求項１０７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１０９】
前記シグナル伝達物質が、野生型IL-1βまたは改変型IL-1βである、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１０】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ８に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型IL-1βである、請求項１０９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１１】
前記シグナル伝達物質が、野生型ＴＮＦαまたは改変型ＴＮＦαである、請求項８７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１２】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ２０に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＴＮＦαである、請求項１１１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１３】
前記キメラタンパク質複合体が、第２のターゲティング部分をさらに含む、請求項６６〜１１２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１４】
前記第２のターゲティング部分が、次の標的：ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ２０、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ４ｃ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、テネイシンＣＡ１、Ｆｌｔ３、またはＥＣＭタンパク質の１つに結合する、請求項１１３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１５】
前記キメラタンパク質複合体が、第２のシグナル伝達物質をさらに含む、請求項６６〜１１４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１６】
前記第２のシグナル伝達物質が、野生型または改変型シグナル伝達物質である、請求項１１５に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１７】
前記第２のシグナル伝達物質が、ヒト：ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦα、ＴＮＦＲ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＴＲＡＩＬ、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-3３、ＩＧＦ−１、またはＥＰＯから選択される、請求項１１６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１１８】
癌を治療するまたは予防するための方法であって、請求項６６〜１１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の有効量をそれを必要としている患者に投与することを含む、方法。
【請求項１１９】
癌を治療するまたは予防するための請求項６６〜１１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１２０】
癌を治療するまたは予防するための薬物の作製のための請求項６６〜１１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１２１】
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群の１種または複数から選択される、請求項１１８に記載の方法または請求項１１９もしくは請求項１２０に記載の使用。
【請求項１２２】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための方法であって、請求項６６〜１１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の有効量をそれを必要としている患者に投与することを含む、方法。
【請求項１２３】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための請求項６６〜１１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１２４】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための薬物の作製のための請求項６６〜１１７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１２５】
前記自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患が、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、およびグレーブス病から選択される、請求項１２２に記載の方法または請求項１２３もしくは請求項１２４に記載の使用。
【請求項１２６】
下記を含むヘテロダイマーである、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体：
（ａ）標的を認識しおよび／またはそれに結合する認識ドメインを含むターゲティング部分、
（ｂ）シグナル伝達物質であって、
ｉ）野生型シグナル伝達物質、または
ｉｉ）前記野生型シグナル伝達物質に比べて改善された安全性を付与する１個または複数の変異を有する改変型シグナル伝達物質
である、シグナル伝達物質、および
（ｃ）Ｆｃドメインであって、Ｆｃ鎖を含みおよび任意選択で前記ＦｃドメインのＦｃ鎖対形成を促進する１個または複数の変異を有しおよび任意選択で前記Ｆｃドメインの１種または複数のエフェクター機能を低減するまたは除去する、および／または前記Ｆｃドメイン中のヒンジ領域を安定化する１個または複数の変異をさらに有する、Ｆｃドメイン。
【請求項１２７】
１個または複数のリンカーをさらに含む、請求項１２６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１２８】
前記ＦｃドメインのＦｃ鎖が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される、請求項１２６または１２７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１２９】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項１２８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３０】
前記ＦｃドメインのＦｃ鎖が、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される、請求項１２８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３１】
前記ヒトＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項１３０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３２】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質が、野生型シグナル伝達物質に比べて前記シグナル伝達物質の受容体での低減された親和性または活性を有する、請求項１２６〜１３１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３３】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記ターゲティング部分が、前記シグナル伝達物質の受容体での前記改変型シグナル伝達物質の親和性または活性を回復する、請求項１３２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３４】
前記Ｆｃ鎖対形成が、イオン対形成および／またはノブインホール対形成により促進される、請求項１２６〜１３３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３５】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、Ｆｃドメイン中のＦｃ鎖間のイオン対形成をもたらす、請求項１２６〜１３４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３６】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメインのノブインホール対形成をもたらす、請求項１２６〜１３５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３７】
前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメインのエフェクター機能の低減または除去をもたらす、請求項１２６〜１３６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３８】
前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞、および／または腫瘍間質、および／またはＥＣＭ、および／または免疫細胞上の抗原または受容体を認識しおよび／または結合する認識ドメインを含む、請求項１２６〜１３７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１３９】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項１３８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４０】
前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子を含む、請求項１２６〜１３９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４１】
前記ターゲティング部分が、ＶＨＨを含む、請求項１２６〜１４０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４２】
前記ターゲティング部分が、前記標的の活性を実質的に中和することなくその標的を認識するおよび／またはそれに結合するまたは前記ターゲティング部分が、その標的を認識するおよび／またはそれに結合しかつ前記標的の活性を実質的に中和する、請求項１２６〜１４１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４３】
前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に免疫細胞を直接的または間接的に動員する、請求項１２６〜１４２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４４】
前記ターゲティング部分が、抗原提示を強化する、請求項１２６〜１４３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４５】
前記ターゲティング部分が、任意選択で樹状細胞により、腫瘍抗原提示を強化する、請求項１２６〜１４４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４６】
前記ターゲティング部分が、次の標的：ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ２０、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ４ｃ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、テネイシンＣＡ１、Ｆｌｔ３、またはＥＣＭタンパク質の１つに結合する、請求項１２６〜１４５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４７】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質中の前記変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項１２６〜１４６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４８】
アゴニストまたはアンタゴニスト活性が、減弱化される、請求項１４７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１４９】
前記シグナル伝達物質が、改変型シグナル伝達物質でありかつ前記改変型シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子から選択される、請求項１２６〜１４８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５０】
前記改変型シグナル伝達物質が、ヒト：ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦα、ＴＮＦＲ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＴＲＡＩＬ、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-3３、ＩＧＦ−１、またはＥＰＯから選択される、請求項１２６〜１４９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５１】
前記ヒトＩＦＮα２が、配列番号１または２のアミノ酸配列を基準にしてＲ３３Ａ、Ｔ１０６Ｘ３、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択され、かつＸ３が、ＡおよびＥから選択される、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５２】
前記ヒトＩＦＮβが、配列番号３のアミノ酸配列を基準にしてＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、およびＲ１５２Ｇから選択される１個または複数の変異を含む、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５３】
前記ヒトIL-1βが、配列番号１７のアミノ酸配列を基準にしてＡ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｇ、Ｒ１２０Ａ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１Ｓ、Ｅ２２１Ｋ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、およびＮ２４５Ｑから選択される１個または複数の変異を含む、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５４】
前記ヒトIL-2が、配列番号１８のアミノ酸配列を基準にしてＲ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、Ｅ６２Ａ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、Ｄ１０９、およびＣ１２５から選択される１個または複数の変異を含む、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５５】
前記ヒトＴＮＦαが、配列番号１４のアミノ酸配列を基準にしてＲ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７０、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｔ、およびＹ８７Ｑ／Ｉ９７Ａから選択される１個または複数の変異を含む、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５６】
前記シグナル伝達物質が、配列番号１または２のアミノ酸配列を基準にして任意選択でＲ１４９Ａ変異を有する、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５７】
前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ９Ａに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、任意選択で次の変異：Ｒ３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｉ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｙ、Ａ１４５Ｄ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｙ、Ｍ１４８Ａ、およびＬ１５３Ａの１個または複数を有する、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５１または１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５８】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１５９】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６０】
（ｉ）前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ４Ｃに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、かつ改変型ＩＦＮα２である、または
（ｉｉ）前記ターゲティング部分が、Ｘｃｒ１に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、
請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６１】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ２０に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６２】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ１３に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６３】
前記ターゲティング部分が、ＦＡＰに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６４】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ８に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６５】
前記ターゲティング部分が、Ｆｌｔ３に結合しかつ任意選択でＦｌｔ３Ｌの細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６６】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１に対するｓｃＦｖでありかつ前記シグナル伝達物質が、野生型ＩＦＮα２である、請求項１４６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６７】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−Ｌ１の細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６８】
前記ターゲティング部分が、ＰＤ−１の細胞外ドメイン、またはその機能性部分を含み、かつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１６９】
前記ターゲティング部分が、ＮＧＲペプチドを含みかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮα２である、請求項１５６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７０】
前記シグナル伝達物質が、野生型ＩＦＮβまたは改変型ＩＦＮβである、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７１】
前記ターゲティング部分が、Ｃｌｅｃ９Ａに結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＩＦＮβである、請求項１７０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７２】
前記シグナル伝達物質が、野生型IL-1βまたは改変型IL-1βである、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７３】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ８に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型IL-1βである、請求項１７２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７４】
前記シグナル伝達物質が、野生型ＴＮＦαまたは改変型ＴＮＦαである、請求項１５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７５】
前記ターゲティング部分が、ＣＤ２０に結合しかつ前記シグナル伝達物質が、改変型ＴＮＦαである、請求項１７４に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７６】
前記キメラタンパク質複合体が、第２のターゲティング部分をさらに含む、請求項１２６〜１７５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７７】
前記第２のターゲティング部分が、次の標的：ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ２０、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ４ｃ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、テネイシンＣＡ１、Ｆｌｔ３、またはＥＣＭタンパク質の１つに結合する、請求項１７６に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７８】
前記キメラタンパク質複合体が、第２のシグナル伝達物質をさらに含む、請求項１２６〜１７７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１７９】
前記第２のシグナル伝達物質が、野生型または改変型シグナル伝達物質である、請求項１７８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１８０】
前記第２のシグナル伝達物質が、ヒト：ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦα、ＴＮＦＲ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＴＲＡＩＬ、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-3３、ＩＧＦ−１、またはＥＰＯから選択される、請求項１７９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１８１】
癌を治療するまたは予防するための方法であって、請求項１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の有効量をそれを必要としている患者に投与することを含む、方法。
【請求項１８２】
癌を治療するまたは予防するための請求項１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１８３】
癌を治療するまたは予防するための薬物の作製のための請求項１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１８４】
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群の１種または複数から選択される、請求項１８１に記載の方法または請求項１８２もしくは請求項１８３に記載の使用。
【請求項１８５】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための方法であって、請求項１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の有効量をそれを必要としている患者に投与することを含む、方法。
【請求項１８６】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための請求項１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１８７】
自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患を治療するまたは予防するための薬物の作製のための請求項１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
【請求項１８８】
前記自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および／または心臓血管疾患が、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、およびグレーブス病から選択される、請求項１８５に記載の方法または請求項１８６もしくは請求項１８７に記載の使用。
【請求項１８９】
請求項１〜５７、６６〜１１７、または１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体、またはその構成成分をコードする核酸。
【請求項１９０】
２つのタンパク質の複合体である、請求項１〜５７、６６〜１１７、または１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９１】
１個または複数の融合タンパク質を含む、請求項１９０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９２】
図１Ａ〜Ｆ、２Ａ〜Ｈ、３Ａ〜Ｈ、４Ａ〜Ｄ、５Ａ〜Ｆ、６Ａ〜Ｊ、７Ａ〜Ｄ、８Ａ〜Ｆ、９Ａ〜Ｊ、１０Ａ〜Ｆ、１１Ａ〜Ｌ、１２Ａ〜Ｌ、１３Ａ〜Ｆ、１４Ａ〜Ｌ、１５Ａ〜Ｌ、１６Ａ〜Ｊ、１７Ａ〜Ｊ、１８Ａ〜Ｆ、１９Ａ〜Ｆ、２０Ａ〜Ｅ、３８、４６Ａ〜Ｄ、４７、および４９のいずれか１つに示されるような構造および／または配向／構造を有する、請求項１〜５７、６６〜１１７、１２６〜１８０、または１９０〜１９１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９３】
図７Ｂに示されるような構造および／または配向／構造を有する、請求項１９２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９４】
互いに対し、任意のターゲティング部分およびシグナル伝達物質、および／または互いに対し任意のターゲティング部分、および／または互いに対し任意のシグナル伝達物質に関して、トランス配向／構造を有する、請求項１〜５７または１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９５】
互いに対し、任意のターゲティング部分およびシグナル伝達物質、および／または互いに対し任意のターゲティング部分相互、および／または互いに対し任意のシグナル伝達物質相互に関して、シス配向／構造を有する、請求項１〜５７または１２６〜１８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９６】
Ｆｃが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびヒトＩｇＧ１中のＫ３２２Ａ、Ｋ３２２Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２Ｇ、およびＰ３３１Ｓ置換から選択される１つの追加の変異を含み、ナンバリングが、ＥＵ規則に基づく、請求項１〜５７、６６〜１１７、１２６〜１８０、または１９０〜１９５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【請求項１９７】
Ｆｃが、ヒトＩｇＧ４中にＳ２２８Ｐ置換を含み、ナンバリングが、ＥＵ規則に基づく、請求項１〜５７、６６〜１１７、１２６〜１８０、または１９０〜１９５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は２０１８年３月２８日出願の米国特許仮出願第６２／６４９，２３８号、２０１８年３月２８日出願の同第６２／６４９，２４８号および２０１８年３月２８日出願の同第６２／６４９，２６４号の利益を主張する。これらの仮出願の全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、一部は、断片結晶化可能領域（Ｆｃ）ベースキメラタンパク質複合体およびそれらの治療薬としての使用に関する。
【０００３】
電子申請したテキストファイルの説明
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ−０４２ＰＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ、記録日付：２０１９年３月２７日、ファイルサイズ：１，５２１，０３０バイト）。
【背景技術】
【０００４】
エフェクター機能コード化生物製剤は、多くの潜在的治療用途を有する代表的生物製剤部類である。このような薬剤が疾患の治療に有用であるためには、効力の高いエフェクター機能をコードする場合には特に、それらの耐容性および治療指数を最大化することが極めて重要である（例えば、サイトカインは、ヒトにそのまま投与される場合にはその多くが全身毒性である）。従って、高い固有の安全性プロファイルを有するこのような薬剤を設計する必要性が存在し、それは、エフェクター機能の選択標的部位（例えば、目的の細胞型上の抗原）への高精度で制御された方式による標的化送達を必要とする。
【０００５】
このような薬剤の一例は、シグナル伝達物質（例えば、サイトカイン）を有し、ターゲティング要素に連結されたキメラタンパク質であり、この中のシグナル伝達物質は、野生型であるかまたは、その標的（例えば、標的細胞上の抗原）へのターゲティング要素の結合時にそのエフェクター機能が回復され得るような方式でシグナル伝達物質の活性を減弱化させる（例えば、その受容体と相互作用する／結合するその能力を実質的に低減させる）ように改変されている（例えば、変異により）。
【０００６】
しかし、このようなキメラタンパク質は、特定の条件、例えば、大規模生産される能力、治療上有益な効果を誘発するために薬物を暴露する十分な時間を確保するインビボ半減期、急速な排出または限定された組織浸透性および体内分布を回避するための適切なサイズ、ならびに機能の大きな低下のない適切な溶解度、安定性および貯蔵を保証する他の性質、が満たされる場合のみに、治療的使用に適用できる。重要なのは、全ての、または実質的にほとんどの上記性質が、エフェクター機能の条件付きターゲティングおよび改変シグナル伝達物質のその受容体との条件付き結合の維持の喪失なしに、達成されなくてはならないことである。多くの場合、単一の連続ポリペプチド鎖をコードするまたはそれにより表されるキメラタンパク質を用いて全てのこれらの目的を達成するのは困難である。その生物製剤の耐容性および治療指数を維持しながら、このような望ましい特性の生物製剤を達成できるということに対する必要性が当該技術分野で存在する。
【０００７】
その生物製剤の耐容性および治療指数を維持しながら、このような望ましい特性の生物製剤を達成できるということに対する必要性が当該技術分野で存在する。さらに、疾患の治療または予防に対する療法として、製造での使用に適用できる、エフェクター機能をコードする生物製剤の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００８】
本技術は、全てでないにしても、上記で概要を述べた要求がほとんど満たされる、結晶性断片領域（Ｆｃ）ベースキメラタンパク質複合体を提供する。これらの構築物は、そのエフェクター機能が高精度で、および全身性有害事象なしに、または軽減量の全身性有害事象で、最適標的に送達され得、それにより全身性交差反応性および関連する有害事象を制限し、また同時に、治療薬の製造を可能にする医薬品特性、例えば、所望のインビボ暴露時間（例えば、半減期）、サイズ（例えば、体内分布およびクリアランス特性のための）、ならびに商業生産のための大量生産および／または精製特性（例えば、適切な溶解度、純度、安定性および貯蔵特性を有する）を付与する特徴をもたらす、生物学的治療薬をコードする。
【０００９】
いくつかの態様では、本技術は、標的を認識しそれに結合する認識ドメインを含むターゲティング部分、野生型または改変型シグナル伝達物質であって、改変型シグナル伝達物質が野生型グナル伝達物質に比べ向上した安全性を付与する１個または複数の変異を有する、シグナル伝達物質、および１個または複数のＦｃ鎖を有するＦｃドメイン、を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体に関する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する、ＦｃドメインのＦｃ鎖対形成を促進する、および／またはＦｃドメインのヒンジ領域を安定化する、１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインの１個または複数のＦｃ鎖は、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する、ＦｃドメインのＦｃ鎖対形成を促進する、および／またはＦｃドメインのヒンジ領域を安定化する、１個または複数の変異を有する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、このようなＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーであり、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、トランス方向に配向される。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーであり、対形成は、Ｒｉｄｇｗａｙのノブインホール構造による（本明細書に記載のように）。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーであり、対形成は、Ｍｅｒｃｈａｎｔのノブインホール構造による（本明細書に記載のように）。
【００１１】
いくつかの実施形態では、このようなＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ホモダイマーである。
【００１２】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質中の１個または複数の変異は、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の受容体での親和性または活性を低減する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は改変シグナル伝達物質の親和性または活性を回復する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１個または複数の追加のターゲティング部分および／または野生型または改変型シグナル伝達物質を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、多重特異性である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）である。
【００１４】
別の態様では、本技術は、種々の疾患および障害を治療または予防するためのＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用に関する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、癌、感染症、代謝疾患、（神経）変性疾患、ならびに心臓血管疾患および免疫異常の治療に使用される。
【００１５】
図１Ａ〜Ｆ、２Ａ〜Ｈ、３Ａ〜Ｈ、４Ａ〜Ｄ、５Ａ〜Ｆ、６Ａ〜Ｊ、７Ａ〜Ｄ、８Ａ〜Ｆ、９Ａ〜Ｊ、１０Ａ〜Ｆ、１１Ａ〜Ｌ、１２Ａ〜Ｌ、１３Ａ〜Ｆ、１４Ａ〜Ｌ、１５Ａ〜Ｌ、１６Ａ〜Ｊ、１７Ａ〜Ｊ、１８Ａ〜Ｆ、１９Ａ〜Ｆ、２０Ａ〜Ｅ、３８、４６Ａ〜Ｄ、４７、および４９は、本発明の種々のＦｃベースキメラタンパク質複合体の非限定的概略図の例を示す。いくつかの実施形態では、それぞれの概略図は、本発明の組成物である。図中で該当する場合には、「ＴＭ」は、本明細書に記載の「ターゲティング部分」を指し、「ＳＡ」は、本明細書に記載の「シグナル伝達物質」を指し、
【化１】
2021519089.tif 000003
は、本明細書に記載の任意選択の「リンカー」であり、２つの長い平行長方形は、例えば、本明細書に記載のＩｇＧ１由来の、ＩｇＧ２由来の、またはＩｇＧ４由来の１個または複数のＦｃ鎖を有する、ヒトＦｃドメインであり、任意選択で、本明細書でまた記載されるエフェクターノックアウトおよび／または安定化変異を有し、および片方が突出部を有し他方が陥凹部を有する２つの長い平行長方形は、例えば、本明細書に記載のＩｇＧ１由来の、ＩｇＧ２由来の、またはＩｇＧ４由来の１個または複数のＦｃ鎖を有する、ヒトＦｃドメインであり、本明細書で記載のノブインホールおよび／またはイオン対（ａ／ｋ／ａ荷電対、イオン結合イオン結合、または荷電残基対）変異を有し、および任意選択で本明細書でまた記載されるエフェクターノックアウトおよび／または安定化変異を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ−１Ｆ】ホモダイマー２鎖複合体の例を示す。これらの図は、ホモダイマー２鎖複合体の構造例を示す。
【図２Ａ−２Ｈ】２個のターゲティング部分（ＴＭ）（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態ではより多くのターゲティング部分が存在する場合もある）を有するホモダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ボックスで示される構築物（すなわち、図２Ｂおよび２Ｃ）は、ＴＭ１とＴＭ２の間、またはＴＭ１とＦｃの間にシグナル伝達物質（ＳＡ）を有する。
【図３Ａ−３Ｈ】２種のシグナル伝達物質（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合もある）を有するホモダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ボックスで示される構築物（すなわち、図３Ｇおよび３Ｈ）は、ＳＡ１とＳＡ２の間にＴＭを、またはＮ末端またはＣ末端にＴＭを有する。
【図４Ａ−４Ｄ】分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＴＭおよびＦｃのホール鎖上にＳＡを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。
【図５Ａ−５Ｆ】分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上に両ＴＭおよびＦｃのホール鎖上にＳＡを有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。
【図６Ａ−６Ｊ】分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＴＭおよびＦｃのホール鎖上にＳＡを有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。これらの配向／構造では、１種のＳＡはノブ鎖上にあり、１種のＳＡはホール鎖上にある。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。
【図７Ａ−７Ｄ】分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＦｃのホール鎖上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。
【図８Ａ−８Ｆ】分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＦｃのホール鎖上に両ＴＭを有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。
【図９Ａ−９Ｊ】分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＦｃのホール鎖上にＴＭを有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。これらの配向／構造では、１種のＳＡはノブ鎖上にあり、１種のＳＡはホール鎖上にある。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。
【図１０Ａ−１０Ｆ】同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。
【図１１Ａ−１１Ｌ】同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。
【図１２Ａ−１２Ｌ】同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。
【図１３Ａ−１３Ｆ】同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ、すなわち、Ｆｃのホール鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。
【図１４Ａ−１４Ｌ】同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのホール鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。
【図１５Ａ−１５Ｌ】同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのホール鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。
【図１６Ａ−１６Ｊ】２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合もある）ならびにノブＦｃ上にＳＡおよび各鎖上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。
【図１７Ａ−１７Ｊ】２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合もある）ならびにホールＦｃ上にＳＡおよび各鎖上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。
【図１８Ａ−１８Ｆ】２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合もある）を有し、分離したＳＡおよびＴＭ鎖：ノブＦｃ上にＳＡおよびホールＦｃ上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。
【図１９Ａ−１９Ｆ】２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合もある）を有し、分離したＳＡおよびＴＭ鎖：ノブＦｃ上にＴＭおよびホールＦｃ上にＳＡを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。
【図２０Ａ−２０Ｅ】実施例１に記載のようにして構築されたホモダイマーまたはヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体の５つの変種を示す。これらの構築物の例では、抗ヒトＣ型レクチンドメイン含有９Ａ（Ｃｌｅｃ９Ａ）ＶＨＨはターゲティング部分であり、Ｒ１４９Ａ変異を有するヒトインターフェロンアルファ２はシグナル伝達物質であった。
【図２１】図２０Ａ〜図２０Ｅの精製タンパク質を分離するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図２２】凍結−解凍安定性実験を示す。
【図２３】ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体の生物活性を示す。
【図２４】マウスでの静脈内投与後のＦｃ−ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（Ｆｃ−ＡＦＮ）の血漿中濃度を示す。時点毎の３つの個別試料の平均値（＋ＳＥＭ）がプロットされている。
【図２５】緩衝液または２種の異なるＦｃ−ＡＦＮ構築物で治療後のヒト化マウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。時点毎の６匹の動物の平均値（＋ＳＥＭ）（ｍｍ３単位）がプロットされている。
【図２６】ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対するリンカー長バリアントの生物活性を示す。ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したリンカー長バリアントで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図２７】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対するエフェクターバリアントの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図２８】バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）での、（補体成分１ｑ）Ｃ１ｑの、ヒトＩｇＧ１重鎖およびヒンジ領域（ｈＩｇＧ１）のＦｃドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン）または異なるエフェクター変異を有するＦｃ  ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）への結合を示す。
【図２９】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞における生物活性に与えるインターフェロン（ＩＦＮ）変異の効果を示す。親ＨＬ１１６または由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図３０】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対する異なるＦｃフォーマットの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図３１】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対する異なるノブインホール（ＫｉＨ）を有するＦｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図３２】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対する一価および二価Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図３３】一価および二価標的化Ｆｃ  ＡＦＮのＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞への相対的結合を示す。
【図３４】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対するＦｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。２回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図３５】マウスでの静脈内投与後のＦｃ−ＡＦＮの血漿中濃度を示す。時点毎の３つの個別試料の平均値（＋ＳＥＭ）がプロットされている。
【図３６】緩衝液または４種の異なるＦｃ−ＡＦＮ構築物で治療後のヒト化マウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。時点毎の５匹の動物の平均値（＋ＳＥＭ）（ｍｍ３単位）がプロットされている。
【図３７】緩衝液または漸増用量の単一Ｆｃ−ＡＦＮ構築物で治療後のヒト化マウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。時点毎の５匹の動物の平均値（＋ＳＥＭ）（ｍｍ３単位）がプロットされている。
【図３８】ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ  ＡＦＮバリアントの略図および生物活性を示す。親ＨＬ１１６を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図３９】ＰＢＳ、ＰＤ−Ｌ１抑制剤（アテゾリズマブ）またはＰＤ−Ｌ１標的化Ｆｃ−ＡＦＮで治療後のヒト化マウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。時点毎の６匹の動物の平均値（＋ＳＥＭ）（ｍｍ３単位）がプロットされている。
【図４０】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４Ｃ細胞に対するＩＦＮａ２およびＣｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４Ｃ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図４１】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ２０細胞に対するＩＦＮａ２およびＣＤ２０  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣＤ２０細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図４２】ＨＬ１１６細胞に対するＣＤ１３  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６を、過剰ＣＤ１３  ＶＨＨの存在下または非存在下で段階希釈したＣＤ１３  Ｆｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図４３】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＦＡＰ細胞に対するＩＦＮａ２およびＦＡＰ  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＦＡＰ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図４４】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞に対するＩＦＮａ２およびＣＤ８  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図４５】二重特異性Ｃｌｅｃ９ＡおよびＦｃ  ＡＦＮを標的とするＰＤ−Ｌ１の、遊離ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ  ２ＬＩＧ９９との競合を含む、親ＰＤ−Ｌ１陽性ＨＬ１１６細胞（上段）およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ（両標的を発現している；下段）への相対的結合を示す。
【図４６Ａ−４６Ｄ】２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合もある）ならびにノブＦｃ上にＳＡおよび各鎖上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。各ターゲティング部分は、２コピーで存在し、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。
【図４７】二重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ−ＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ  ＡＦＮバリアントの略図および生物活性を示す。親ＨＬ１１６（左）およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ（右）を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図４８】ＰＢＳ、単一特異的または二重特異的Ｆｃ−ＡＦＮで治療後のヒト化マウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。時点毎の４〜５匹の動物の平均値（＋ＳＥＭ）（ｍｍ２単位）がプロットされている。
【図４９】二重特異的Ｃｌｅｃ４Ｃ−ＣＤ８  Ｆｃ  ＡＦＮバリアントの略図および生物活性を示す。親ＨＬ１１６、ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４ＣおよびＨＬ１１６−ｈＣＤ８を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５０】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＸｃｒ１細胞に対するＩＦＮａ２およびｓｃＦｖ  ＸＣＲ１  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＸｃｒ１細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５１】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ２０細胞に対するＩＦＮａ２およびｓｃＦｖ  ＣＤ２０  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣＤ２０細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５２】ＨＥＫ−ＤｕａｌおよびＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０細胞に対する腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）およびＣＤ２０  Ｆｃ  ＡｃＴａｆａｃｔｏｒ（ＡＦＲ）の生物活性を示す。親ＨＥＫ−Ｄｕａｌまたは派生ＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＲで一晩刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５３】一過性遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞中のＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）−Ｆｃ−ＡＦＮ上のｐＳＴＡＴ１を示す。ＦＬＴ３またはＭＯＣＫ（空のベクター）遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞を、示したように刺激し、ｐＳＴＡＴ１について染色した。２回の繰り返し測定のｐＳＴＡＴ１陽性細胞の平均％（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５４】ＨＬ１１６細胞に対するＩＦＮａ２およびプログラム細胞死タンパク質１の細胞外（ｅｃ）部分（ＰＤ−１）（ＰＤ−１ｅｃ）Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６を、過剰中和ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５５】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＰＤ−１細胞に対するＩＦＮａ２およびＰＤ−Ｌ１ｅｃ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＰＤ−１細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図５６】ＣＤ１３を標的とするＮＧＲペプチドベースＦｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。２回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。特異性は、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化Ｆｃ  ＡＦＮ（Ｒ１ＣＨＣＬ５０）との比較により示される。
【図５７】Ｃ型レクチンドメインファミリー４メンバーＣ（Ｃｌｅｃ４Ｃ）陽性および陰性細胞に対する標的化野生型および変異ＩＦＮａ２の生物活性を示す。健康なドナー由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＣｌｅｃ４Ｃ  Ａｂで染色し、Ｃｌｅｃ４Ｃ標的化野生型または変異型ＩＦＮａ２で１５分間刺激した。固定および透過処理後、細胞をｐＳＴＡＴ１  Ａｂで染色した。データは、ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージとしてプロットされる。
【図５８】ＣＤ８陽性および陰性細胞に対する標的化野生型および変異ＩＦＮａ２の生物活性を示す。健康なドナー由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＣＤ８  Ａｂで染色し、ＣＤ８標的化野生型または変異ＩＦＮａ２で１５分間刺激した。固定および透過処理後、細胞をｐＳＴＡＴ１  Ａｂで染色した。データは、ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージとしてプロットされる。
【図５９】ＣＤ１９陽性（すなわち、Ｂ細胞）および陰性細胞に対する標的化野生型および変異ＩＦＮａ２の生物活性を示す。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ１９  Ａｂで染色し、ＣＤ２０標的化野生型または変異ＩＦＮａ２で１５分間刺激した。固定および透過処理後、細胞をｐＳＴＡＴ１  Ａｂで染色した。データは、ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージとしてプロットされる。
【図６０】ＩＦＮａ２中の点変異の概要を示す。この図は、アミノ酸Ｎｏ．３０〜３９および１４２〜１６５由来の成熟ヒトＩＦＮａ２（配列番号２）の配列を示す。
【図６１】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対する種々のＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、示した濃度のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。各変異体に対し、バーは、左から右へ、１０００ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、０．１ｎｇ／ｍｌ、および刺激なし、である。
【図６２】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対するＩＦＮａ１およびＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６３】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対するＩＦＮｂおよびＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６４】一過性遺伝子導入ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  IL-1β細胞に対するＡｃＴａｌｅｕｋｉｎ（ＡＬＮ）の生物活性を示す。ＭＯＣＫ（空のベクター）またはヒトＣＤ８遺伝子導入細胞を、段階希釈野生型IL-1βまたはＡＬＮで一晩刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６５】ＨＥＫ−ＤｕａｌおよびＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０細胞に対するＴＮＦαおよびＣＤ２０  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＲの生物活性を示す。親ＨＥＫ−Ｄｕａｌまたは派生ＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０細胞を、段階希釈したＦｃ  ＡＦＲで一晩刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６６】ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞に対するＩＦＮａ２およびｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅの生物活性を示す。親ＨＬ１１６または由来ＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞を、段階希釈したｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６７】一過性遺伝子導入ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  IL-1β細胞に対するｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅの生物活性を示す。ＭＯＣＫまたはヒトＣＤ８遺伝子導入細胞を、段階希釈野生型IL-1βまたはｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅで一晩刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６８】ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ４をベースにしたＣｌｅｃ９Ａ  Ｆｃ  ＡＦＮバリアントの生物活性を示す。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）がプロットされている。
【図６９】マウスでの静脈内投与後のＣｌｅｃ９Ａ  ＡＦＮ（これは、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体である）の血漿中濃度を示す。時点毎の３つの個別試料の平均値（＋ＳＥＭ）がプロットされている。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本技術は、一部は、１個または複数のその受容体に対し低減された親和性または活性を有するように任意選択で改変されたシグナル伝達物質、および特異的標的を認識し結合するターゲティング部分の発見に基づいている。いくつかの実施形態では、１種または複数のシグナル伝達物質および１個または複数のターゲティング部分は、対を形成してＦｃベースキメラタンパク質複合体を形成できるＦｃベースキメラタンパク質に連結および／または結合および／または融合される。このようなＦｃベースキメラタンパク質複合体は、意外にも、特に本明細書に記載のヘテロダイマー構造で、Ｆｃを欠くキメラに比べて、劇的に改善されたインビボ半減期を有し、高められた溶解度、安定性およびその他の薬物様特性のため、製造、精製、および医薬製剤に特に適合する。従って、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体設計手法は、治療薬としての使用に特に好適な薬剤をもたらす。
【００１８】
いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、免疫細胞を結合しかつ直接的にまたは間接的に治療処置の必要な部位（例えば、腫瘍または腫瘍微小環境）に動員し得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、効果的な抗腫瘍免疫応答を誘発するための腫瘍抗原提示を強化する。いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍細胞、腫瘍微小環境関連細胞または間質標的を結合し得る。いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、罹患または疾患関連器官、組織および細胞に関連する組織特異的および／または細胞特異的マーカー（例えば、抗原、標的）に結合し得る。いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、同じまたは異なる細胞上に存在する２種以上の標的／タンパク質マーカー／抗原に結合し得る。いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２つ以上の細胞型に結合し得る。いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２つ以上の細胞型に結合し、細胞複合体（例えば、免疫細胞および腫瘍細胞）の形成を促進し得る。
【００１９】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、抗原提示を調節する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、免疫応答を調節して自己免疫を回避するか低減させる。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、患者のＴｒｅｇの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋  Ｔ細胞に対する比率を増大させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の自己反応性Ｔ細胞の低減に関する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、ジスルフィド結合および／またはイオン対形成により形成されるタンパク質の複合体である。いくつかの実施形態では、タンパク質の複合体は、１種または複数の融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１Ａ〜Ｆ、２Ａ〜Ｈ、３Ａ〜Ｈ、４Ａ〜Ｄ、５Ａ〜Ｆ、６Ａ〜Ｊ、７Ａ〜Ｄ、８Ａ〜Ｆ、９Ａ〜Ｊ、１０Ａ〜Ｆ、１１Ａ〜Ｌ、１２Ａ〜Ｌ、１３Ａ〜Ｆ、１４Ａ〜Ｌ、１５Ａ〜Ｌ、１６Ａ〜Ｊ、１７Ａ〜Ｊ、１８Ａ〜Ｆ、１９Ａ〜Ｆ、２０Ａ〜Ｅ、３８、４６Ａ〜Ｄ、４７、および４９のいずれか１つに示すような構造および／または配向／構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図７Ｂに示すような構造および／または配向／構造を有する。
【００２１】
本技術は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む医薬組成物ならびに、例えば、癌、自己免疫疾患、神経変性疾患、代謝疾患、心臓血管疾患および変性疾患を含む、種々の疾患の治療におけるそれらの使用を提供する。
【００２２】
Ｆｃドメイン
結晶性断片ドメイン（Ｆｃドメイン）は、免疫系、例えば、Ｂリンパ球、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞に関与する細胞の細胞表面上に位置するＦｃ受容体と相互作用する抗体のテール領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプでは、Ｆｃドメインは、抗体の２個の重鎖の第２および第３の定常ドメイン由来の、２個の同一のタンパク質鎖で構成される。ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体アイソタイプでは、Ｆｃドメインは、各ポリペプチド鎖中に３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２〜４）を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、このようなタンパク質複合体の形成を促進するＦｃドメインを有するキメラタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のＦｃドメインは、ＩｇＧのＣＨ２およびＣＨ３領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧはヒトＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。いくつかの実施形態では、変異Ｆｃドメインは、標的受容体に対する低減された親和性または結合を有する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、ＦｃγＲへのＦｃドメインの結合を低減または除去する。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ；ＦｃγＲＩＩａ、１３１Ｒ／Ｒ；ＦｃγＲＩＩａ，１３１Ｈ／Ｈ、ＦｃγＲＩＩｂ；およびＦｃγＲＩＩＩから選択される、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、例えば、Ｃ１ｑなどの相補体タンパク質への結合を低減または除去する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、ＦｃγＲおよび例えば、Ｃ１ｑなどの相補体タンパク質の両方への結合を低減または除去する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＬＡＬＡ変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＡＬＡ変異は、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）中にＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む（ナンバリングは、ＥＵ規則（ＰＮＡＳ，Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９；６３（１）７８−８５））に準拠して、ヒトＩｇＧ１に対しよく使われるＣＨ２残基のナンバリングを基準にする）。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｋ３２２、Ｄ２６５、Ｐ３２９、およびＰ３３１の１個または複数の位置で変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ｋ３２２Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３３１Ｇ、およびＰ３３１Ｓから選択される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＦＡＬＡ変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＡＬＡ変異は、ヒトＩｇＧ４中にＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインは、Ｆ２３４、Ｌ２３５、Ｋ３２２、Ｄ２６５、およびＰ３２９の１個または複数の位置で変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、変異は、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ｋ３２２Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＰ３２９Ａから選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、Ｆｃドメイン中のヒンジ領域を安定化する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧのＳ２２８の位置に変異を含み、ヒンジ領域を安定化する。いくつかの実施形態では、変異はＳ２２８Ｐである。
【００３２】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、Ｆｃドメイン中の鎖対形成を促進する。いくつかの実施形態では、鎖対形成は、イオン対形成（ａ／ｋ／ａ荷電対、イオン結合、または荷電残基対）により促進される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、イオン対形成を促進するために、次のもう１個のＩｇＧのアミノ酸残基の位置に変異を含む：Ｄ３５６、Ｅ３５７、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｋ３９２、Ｄ３９９、およびＫ４０９。
【００３４】
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、イオン対形成を促進するために、表１中の変異の組み合わせの１個を含む。
【表１】
2021519089.tif 000004
【００３５】
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質複合体中の個別のＦｃドメインの鎖対形成は、ノブインホール変異により促進される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、１個または複数の変異を含み、Ｆｃドメイン中のノブインホール相互作用を可能にする。いくつかの実施形態では、第１のＦｃ鎖は、「ノブ」を発現するように改変され、第２のＦｃ鎖は、相補的「ホール」を発現するように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、表２の変異を含み、ノブインホール相互作用を可能にする。
【表２】
2021519089.tif 000005
【００３６】
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、上記で開示の変異の任意の組み合わせを含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、イオン対形成および／またはノブインホール相互作用を促進する変異を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、次の特性の１つまたは複数を有する変異を含む：イオン対形成を促進する、ノブインホール相互作用を誘導する、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する、およびＦｃ安定化（例えば、ヒンジで）をもたらす。
【００３７】
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、表３に開示の変異を含み、それらはＦｃドメイン中のイオン対形成を促進し、および／またはノブインホール相互作用を促進する。
【表３】
2021519089.tif 000006
2021519089.tif 000007
【００３８】
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、表４に開示の変異を含み、それらはＦｃドメインのイオン対形成を促進し、および／またはノブインホール相互作用を促進し、またはこれらの組み合わせを促進する。いくつかの実施形態では、表４の「鎖１」および「鎖２」は、入れ替え可能である（例えば、鎖１はＹ４０７Ｔを有することができ、鎖２はＴ３６６Ｙを有することができる）。
【表４】
2021519089.tif 000008
2021519089.tif 000009
2021519089.tif 000010
2021519089.tif 000011
【００３９】
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、表５に開示の変異を含み、それらはＦｃドメイン中のＦｃγＲおよび／または補体結合を低減または除去する。いくつかの実施形態では、表５の変異は両鎖中に存在する。
【表５】
2021519089.tif 000012
2021519089.tif 000013
2021519089.tif 000014
【００４０】
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、ホモダイマーであり、すなわち、キメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、２個の同一のタンパク質鎖を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、ヘテロダイマーであり、すなわち、キメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、２個の同一でないタンパク質鎖を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃドメインは、本明細書で記載のイオン対形成および／またはノブインホール変異を用いて改変される。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、トランス配向／構造を有する。トランス配向／構造では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の同じポリペプチド鎖上には認められない。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインの同じ末端（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインの異なる末端（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃドメインは、本明細書で記載のイオン対形成および／またはノブインホール変異を用いて改変される。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、トランス配向を有する。
【００４４】
トランス配向では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の同じポリペプチド鎖上には認められない。トランス配向では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の別々のポリペプチド鎖上に認められる。シス配向では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の同じポリペプチド鎖上に認められる。
【００４５】
２個以上のターゲティング部分が本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に存在するいくつかの実施形態では、１つのターゲティング部分は、トランス配向（シグナル伝達物質に対し）で存在し、一方、別のターゲティング部分はシス配向（シグナル伝達物質に対し）で存在し得る。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインの同じ末端／側（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインの異なる側／末端（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。
【００４６】
本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に２個以上のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ヘテロダイマータンパク質複合体中の同じＦｃ鎖上または２個の異なるＦｃ鎖上に認められ得る（後者の場合には、ターゲティング部分は、それらが異なるＦｃ鎖上に存在するので、相互に対しトランスになるはずである）。２個以上のターゲティング部分が同じＦｃ鎖上に存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｆｃ鎖の同じまたは異なる側／末端上に存在し得る（Ｎ末端または／Ｃ末端）。
【００４７】
本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に２個以上のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ヘテロダイマータンパク質複合体中の同じＦｃ鎖上または２個の異なるＦｃ鎖上に認められ得る（後者の場合には、ターゲティング部分は、それらが異なるＦｃ鎖上に存在するので、相互に対しトランスになるはずである）。２種以上のシグナル伝達物質が同じＦｃ鎖上に存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、Ｆｃ鎖の同じまたは異なる側／末端上に存在し得る（Ｎ末端または／Ｃ末端）。
【００４８】
２種以上のシグナル伝達物質が本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に存在するいくつかの実施形態では、１種のシグナル伝達物質は、トランス配向（ターゲティング部分に対し）で存在し、一方、別のシグナル伝達物質はシス配向（ターゲティング部分に対し）で存在し得る。
【００４９】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域を含むかまたはその領域で始まり、この領域は、配列Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（配列番号１３４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはまた、上部ヒンジ、またはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（配列番号１３４２）；国際公開第２００９０５３３６８号参照）、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（配列番号１３４３）、またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（配列番号１３４４；Ｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｖｏｌ．１１  ｎｏ．６  ｐｐ．４９５−５００，１９９８）参照）を含む。
【００５０】
シグナル伝達物質（ＳＡ）
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、１種または複数のシグナル伝達物質（ＳＡ）を含む。本明細書で開示のシグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質または改変型シグナル伝達物質であり得る。
【００５１】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて改善された標的選択性および安全性を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて改善された標的選択活性を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、条件付き活性を可能にする。
【００５２】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特異的生物活性の１種または複数などの１種または複数の弱められた活性を有する野生型シグナル伝達物質を含む。
【００５３】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、向上した安全性、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、向上した安全性は、本Ｆｃベースキメラタンパク質が、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、野生型シグナル伝達物質のより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１個または複数のターゲティング部分を有する本発明の複合体中に包含することにより回復可能である。
【００５５】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１個または複数のその受容体に対し、低減された、実質的に低減または除去された親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能である）を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、シグナル伝達物質の受容体で低減された親和性は、活性の減弱化を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％〜２０％、約２０％〜４０％、約５０％、約４０％〜６０％、約６０％〜８０％、約８０％〜１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０〜５０倍低い、約５０〜１００倍低い、約１００〜１５０倍低い、約１５０〜２００倍低い、または２００倍超低い。
【００５６】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減されたシグナル伝達物質の内在性活性を有する野生型シグナル伝達物質を含む。
【００５７】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比べて、改善された標的選択性および安全性を付与する１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比べて、改善された標的選択性を付与する１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、条件付き活性を可能にする１個または複数の変異を有する。
【００５８】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、その１つまたは複数の受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、それはＦｃベースキメラタンパク質複合体の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能にし、および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体の非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。
【００５９】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は野生型の形態ではアゴニストであり、そのアゴニスト活性を弱める１個または複数の変異を有する。
【００６０】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は野生型の形態ではアンタゴニストであり、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因してアンタゴニストであり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異も有する（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【００６１】
したがって、種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質の改変（例えば、変異体）型である（例えば、１個または複数の変異を有する）。種々の実施形態では、改変（例えば、変異）は改変シグナル伝達物質が、非改変型または非変異型シグナル伝達物質、すなわち、野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変型または変異体形態の同じシグナル伝達物質を比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性の内の１種または複数などの１種または複数の弱められた活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異とは異なる。結果として、種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）型の同じシグナル伝達物質を比較して）、向上した安全性、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
【００６２】
本明細書に記載のように、シグナル伝達物質は、１個または複数の改変、例えば、変異により、向上した安全性を有し得る。種々の実施形態では、向上した安全性は、本Ｆｃベースキメラタンパク質がより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。
【００６３】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる活性は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する活性化作用を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された活性化シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズするまたは阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対するアンタゴナイズ活性を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された阻害シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または阻害シグナルが除去され得る。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因してアンタゴニストであり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１個または複数のその受容体に対し、その結合親和性または活性を低減する、またはその１個または複数の受容体に対し結合親和性または活性を低減または除去する１個または複数の変異も有する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１個または複数のターゲティング部分を有する本発明の複合体中に包含することにより回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１つまたは複数のターゲティング部分の活性により十分に回復可能ではない。
【００６５】
種々の実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、それらのシグナル伝達物質が受容体に対する結合親和性または活性を弱めるまたは除去する変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて、副作用におけるこの低減が観察される。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、標的細胞に対し活性である。理由は、ターゲティング部分（単一または複数）が、実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または結合力）を補償するためである。種々の実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質は、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより交差反応性および／または関連し得る副作用を大きく低減する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１個または複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単一または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単一または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単一または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単一または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、治療受容体に対し結合および／または活性を弱めしたがってより制御されたオンターゲット治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する改変シグナル伝達物質を有する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、本明細書で記載のターゲティング部分では十分に回復できない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分を用いて回復可能である。種々の実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、その他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を治療作用部位から離して隔離するのを低減するまたは無くするので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償するための高用量の本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体の必要性を無くする。このような投与量を低減する能力は、さらに副作用の可能性を低くする。
【００６８】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対し、シグナル伝達物質に、親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能である）を低減、実質的に低減、または除去する１個または複数の変異を含む。種々の実施形態では、シグナル伝達物質の受容体での低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％〜２０％、約２０％〜４０％、約５０％、約４０％〜６０％、約６０％〜８０％、約８０％〜１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０〜５０倍低い、約５０〜１００倍低い、約１００〜１５０倍低い、約１５０〜２００倍低い、または２００倍超低い。
【００６９】
Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、１つの受容体に対し結合を低減しかつ第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有する改変シグナル伝達物質を含むいくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的 低減または除去よりも、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。種々の実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。
【００７０】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の内在性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１個または複数の変異を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その受容体に対するターゲティング部分の結合親和性より低い、その受容体に対する低減された親和性を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上のシグナル伝達物質／受容体とターゲティング部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が、局在化されたオンターゲット効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。
【００７２】
受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，Ｔｈｅ  ａｔｔｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ａｎｄ  ｉｏｎｓ．Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ５１：６６０−６７２，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら、Ｂｉｏｓｅｎｓ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ  １９９３；８：３８７−３９２により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７３】
本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において、周知である。したがって、種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
【００７４】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質のいずれかのアミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
【００７５】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切断から独立に選択され得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、本明細書の他の場所で記載のように、保存的置換および／または非保存的置換を含み得る。
【００７６】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のアミノ酸の切断、例えば、Ｎ末端切断および／またはＣ末端切断を含む。
【００７７】
種々の実施形態では、本明細書の他の場所で記載のように、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。
【００７８】
本明細書に記載のように、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介される（例えば、アゴニズムまたはアンタゴニズム）受容体に対する低減された親和性および／または活性が存在する。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介されない（例えば、結合の混乱状態の結果として）受容体に対する親和性および／または活性が実質的に低減または除去される変異を有する。任意のシグナル伝達物質の受容体は、本明細書に記載のように当技術分野において既知である。
【００７９】
受容体に対し低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）をもたらす変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９１号および国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。治療受容体に対する親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８０】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子の１種または複数である。
【００８１】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型インターロイキンまたは改変インターロイキンであり、例えば、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-3１、IL-3２、IL-3３、IL-3５、IL-3６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１−２２５；ａｎｄ  Ｏｒｅｎｃｏｌｅ  ＆  Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １，１４−２０）。
【００８２】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型インターフェロンまたはインターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロンα−１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。
【００８３】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。
【００８４】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質のＩ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーの受容体、ＴＧＦベータ受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、および／またはチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体に対する親和性および／または活性を低減させる１個または複数の変異を含む。
【００８５】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野において既知であり、限定されないが、IL-2（ベータサブユニット）、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-11、IL-12、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦに対する受容体、およびトロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、および成長ホルモンに対する受容体も含む。例示Ｉ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＧＭ−ＣＳＦ受容体、Ｇ−ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、およびＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。
【００８６】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は、異種のサブユニットからなる多量体受容体であり、主にインターフェロンに対する受容体である。この受容体ファミリーには、限定されないが、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、IL-10、IL-22、および組織因子に対する受容体が含まれる。例示ＩＩ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＩＦＮα受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮβ受容体、ＩＦＮγ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２）、およびＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。
【００８７】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｇタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通型構造を有し、シグナル伝達のためにＧタンパク質に結合されるＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、およびＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられる。代表的ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、およびＣＸ３ＣＲ１が挙げられる。
【００８８】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーメンバーは、細長い分子を作成するＣＸＸＣＸＸＣのコアモチーフを取り囲む３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共有する。代表的腫瘍壊死因子受容体ファミリーには、下記が挙げられる：ＣＤＩ２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンホトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、破骨細胞分化抑制因子（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、およびＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）。ある実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）またはＴＮＦ−Ｒ１である。別の実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）またはＴＮＦ−Ｒ２である。
【００８９】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＧＦベータ受容体である。ＴＧＦベータ受容体は、１回膜貫通型セリン／トレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦベータ受容体には、限定されないが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３が挙げられる。
【００９０】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は、免疫グロブリンとの構造的相同性を共有する。Ｉｇスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、インターロイキン−１受容体、ＣＳＦ−１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢ）、およびＳＣＦＲが挙げられる。
【００９１】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は、当該技術分野において周知である。２０のサブファミリーに分類される約５８個の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在する。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、ＦＧＦ受容体およびそれらの種々のアイソフォーム、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、およびＦＧＦＲ５が挙げられる。
【００９２】
いくつかの実施形態では、インターフェロンはＩ型インターフェロンである。いくつかの実施形態では、Ｉ型インターフェロンは、ＩＦＮα２、ＩＦＮ−α１、ＩＦＮ−β、ＩＦＮγ、コンセンサスＩＦＮ、ＩＦＮ−ε、ＩＦＮ−κ、ＩＦＮ−τ、ＩＦＮ−δ、およぎＩＦＮ−νから選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型インターフェロンαまたは改変型インターフェロンαである。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【００９４】
変異型のインターフェロンα２は、当業者に既知である。ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、下記のアミノ酸配列を有するアレル型ＩＦＮα２ａである：
ＩＦＮα２ａ：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ（配列番号１）。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、下記のアミノ酸配列（これはアミノ酸位置２３でＩＦＮα２ａとは異なる）を有するＩＦＮα２ｂである：
ＩＦＮα２ｂ：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ（配列番号２）。
【００９５】
いくつかの実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体（ＩＦＮα２ａまたはＩＦＮα２ｂ）は、位置１４４〜１５４、例えば、アミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３で、１個または複数のアミノ酸の変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１個または複数の変異を含む。このような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号およびＰｉｅｈｌｅｒら、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７５：４０４２５−３３に記載されている。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９７】
いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異を含む。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、前記ＩＦＮα２変異体は、野生型ＩＦＮα活性２をアンタゴナイズする。このような実施形態では、上記変異体ＩＦＮα２は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、ＩＦＮＲ２に対する活性は保持される。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、ＩＦＮＡＲ２に対する減弱化効果を可能とする）を含む。ある実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号および同第２０１６／０６５４０９号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１２５Ａ、Ｒ１２５Ｅ、Ｋ１３１Ａ、Ｅ１３２Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１個または複数の変異を含み、これらの特許の開示の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａおよび／またはＤ１１４Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、Ｒ３３ＡおよびＴ１０６Ｘ３から選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ１は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ２は、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択され、Ｘ３は、ＡおよびＥから選択される。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、位置Ｒ３３、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ｍ１４８、およびＬ１５３の１つで１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｉ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｙ、Ａ１４５Ｄ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｙ、Ｍ１４８Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｌ１５Ａ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１３Ｒ、Ｌ１１６Ａ、Ｒ１１９Ａ、Ｒ１１９Ｅ、Ｒ１２４Ａ、Ｒ１２４Ｅ、Ｋ１３０Ａ、Ｅ１３１Ａ、Ｋ１３２Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｍ１４７Ａ、Ｒ１４８Ａ、Ｓ１４９Ａ、Ｌ１５２Ａ、Ｎ１５５Ａ、（Ｌ３０Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８ＮおよびＱ６１Ｓ）、（Ｍ１４７Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８ＮおよびＱ６１Ｓ）、（Ｌ１５２Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８ＮおよびＱ６１Ｓ）、（Ｒ１４３Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８ＮおよびＱ６１Ｓ）、（Ｎ６５Ｙ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５ＡおよびＹ８９Ａ，）（Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９ＡおよびＤ１１３Ａ）、（Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９ＡおよびＬ１１６Ａ）、（Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９ＡおよびＲＩ１９０Ａ）、（Ｙ８５Ａ、Ｙ８９ＡおよびＤ１１３Ａ）、（Ｄ１１３ＡおよびＲｌ１１９Ａ）、（Ｌ１１６ＡおよびＲ１１９Ａ）、（Ｌ１１６Ａ、Ｒ１１９ＡおよびＫ１２０Ａ）、（Ｒ１１９ＡおよびＫ１２０Ａ）、（Ｒ１１９ＥおよびＫ１２０Ｅ）、位置１４３でのＲのＡ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＹとの置換、位置１４４でのＡのＤ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＹとの置換、および残基Ｌ１６０〜Ｅ１６４の欠失から選択される１個または複数の変異を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、例えば、哺乳動物細胞培養で産生される場合、特定の位置でＯ結合型グリコシル化を許容しない変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｔ１０６で変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ１０６は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、またはＹで置換される。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、ＩＦＮα２−１ｂバリアントの変異体である。ＩＦＮα２−１ｂバリアントでの変異は、国際公開第２０１５／１６８４７４号に開示されている。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２−１ｂは、次の変異の１個または複数を含む：Ｈ５８Ａ、Ｅ５９Ａ、Ｒ１４５Ａ、Ｍ１４９Ａ、およびＲ１５０Ａ。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型インターフェロンα１または改変型インターフェロンα１である。いくつかの実施形態では、本発明は、野生型ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質を提供する。種々の実施形態では、野性型ＩＦＮα１は、次のアミノ酸配列を含む：
ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬ
ＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶ
ＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号１５６２）。
【０１０６】
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、改変型のＩＦＮα１、すなわち、ＩＦＮα１変異体を含むＩＦＮα１バリアントをシグナル伝達物質として含む。種々の実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、インターフェロンの変異体、機能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはフラグメントを包含する。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１インターフェロンは、配列番号１５６２を基準にして、位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２３、Ｓ２５、Ｌ３０、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｑ４０、Ｃ８６、Ｄ１１５、Ｌ１１８、Ｋ１２１、Ｒ１２６、Ｅ１３３、Ｋ１３４、Ｋ１３５、Ｒ１４５、Ａ１４６、Ｍ１４９、Ｒ１５０、Ｓ１５３、Ｌ１５４、およびＮ１５７で１個または複数のアミノ酸変異を有する。変異は、任意選択で、疎水性の変異であってよく、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンから選択され得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１インターフェロンは、配列番号１５６２を基準にして、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｃ８６Ｓ、Ｃ８６Ａ、Ｄ１１５Ｒ、Ｌ１１８Ａ、Ｋ１２１Ａ、Ｋ１２１Ｅ、Ｒ１２６Ａ、Ｒ１２６Ｅ、Ｅ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｋ１３５Ａ、Ｒ１４５Ａ、Ｒ１４５Ｄ、Ｒ１４５Ｅ、Ｒ１４５Ｇ、Ｒ１４５Ｈ、Ｒ１４５Ｉ、Ｒ１４５Ｋ、Ｒ１４５Ｌ、Ｒ１４５Ｎ、Ｒ１４５Ｑ、Ｒ１４５Ｓ、Ｒ１４５Ｔ、Ｒ１４５Ｖ、Ｒ１４５Ｙ、Ａ１４６Ｄ、Ａ１４６Ｅ、Ａ１４６Ｇ、Ａ１４６Ｈ、Ａ１４６Ｉ、Ａ１４６Ｋ、Ａ１４６Ｌ、Ａ１４６Ｍ、Ａ１４６Ｎ、Ａ１４６Ｑ、Ａ１４６Ｒ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ａ１４６Ｙ、Ｍ１４９Ａ、Ｒ１５０Ａ、Ｓ１５３Ａ、Ｌ１５４Ａ、およびＮ１５７Ａから選択される１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１変異体は、配列番号１５６２を基準にして、Ｌ３０Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ＿Ｑ６２Ｓ、Ｒ３３Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｍ１４９Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｌ１５４Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｒ１４５Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｄ１１５Ａ／Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ／Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ／Ｒ１２１Ａ／Ｋ１２２Ａ、Ｒ１２１Ａ／Ｋ１２２Ａ、およびＲ１２１Ｅ／Ｋ１２２Ｅから選択される１個または複数の変異を含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１インターフェロンは、配列番号１５６２を基準にして、アミノ酸位置Ｃ８６で変異を有するように改変される。位置Ｃ８６での変異は、例えば、Ｃ８６ＳまたはＣ８６Ａであり得る。これらのＩＦＮα１のＣ８６変異体は、還元システインによる凝集変異（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｂａｓｅｄ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｍｕｔａｎｔ）と呼ばれる。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型インターフェロンβまたは改変インターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１１０】
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＦＮβである。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、官能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはＩＦＮβのフラグメントを包含する。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、任意の種由来のＩＦＮβを包含する。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、改変型のマウスＩＦＮβを含む。別の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、改変型のヒトＩＦＮβを含む。ヒトＩＦＮβは、１６６個のアミノ酸残基を含む約２２ｋＤａの分子量を有するポリペプチドである。ヒトＩＦＮβのアミノ酸配列は次記である：
ＭＳＹＮＬＬＧＦＬＱＲＳＳＮＦＱＣＱＫＬＬＷＱＬＮＧＲＬＥＹＣＬＫＤＲＭＮＦＤＩＰＥＥＩＫＱＬＱＱＦＱＫＥＤＡＡＬＴＩＹＥＭＬＱＮＩＦＡＩＦＲＱＤＳＳＳＴＧＷＮＥＴＩＶＥＮＬＬＡＮＶＹＨＱＩＮＨＬＫＴＶＬＥＥＫＬＥＫＥＤＦＴＲＧＫＬＭＳＳＬＨＬＫＲＹＹＧＲＩＬＨＹＬＫＡＫＥＹＳＨＣＡＷＴＩＶＲＶＥＩＬＲＮＦＹＦＩＮＲＬＴＧＹＬＲＮ（配列番号３）。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβのグリコシル化型であるＩＦＮβ１ａである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮβは、Ｍｅｔ−１欠失およびＣｙｓ−１７のＳｅｒへの変異を有する非グリコシル化型のヒトＩＦＮβであるＩＦＮβ１ｂである。
【０１１２】
種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｆ６７、Ｒ７１、Ｌ８８、Ｙ９２、Ｉ９５、Ｎ９６、Ｋ１２３、およびＲ１２４に１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、Ｆ６７Ｇ、Ｆ６７Ｓ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８８Ｇ、Ｌ８８Ｓ、Ｙ９２Ｇ、Ｙ９２Ｓ、Ｉ９５Ａ、Ｎ９６Ｇ、Ｋ１２３Ｇ、およびＲ１２４Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７ＧおよびＲ７１Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ８８ＧおよびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ９２Ｇ、Ｉ９５Ａ、およびＮ９６Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３ＧおよびＲ１２４Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ、Ｌ８８Ｇ、およびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｓ、Ｌ８８Ｓ、およびＹ９２Ｓ変異を含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇ、およびＹ１５５Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ１５５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２ＧおよびＲ２７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２ＡおよびＲ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ１５１ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１個または複数の次の変異を有する：Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１個または複数の次の変異を有する：Ｃ１７ＳまたはＣ１７Ａと組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１個または複数の次の変異を有する：本明細書で記載の他のＩＦＮβ変異と組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。
【０１１６】
ヒトＩＦＮβの結晶構造は既知であり、Ｋａｒｐｕｓａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ，９４（２２）：１１８１３−１１８１８に記載されている。特に、ヒトＩＦＮβの構造は、５つのαヘリックス（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）およびこれらのヘリックスを連結する４つのループ領域（すなわち、ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ）を含むことが示された。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅヘリックスおよび／またはＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ中に、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減させる１個または複数の変異を有する。代表的変異は、国際公開第２０００／０２３１１４号および米国特許出願公開第２０１５００１１７３２号に記載されている。これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１５、１６、１８、１９、２２、および／または２３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置２８〜３０、３２、および３３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置３６、３７、３９、および４２にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置６４および６７にアラニン置換を含み、位置６８にセリン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置７１〜７３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置９２、９６、９９、および１００にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１２８、１３０、１３１、および１３４にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１４９、１５３、１５６、および１５９にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＷ２２で変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＦ６７に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＬ８８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＩ９５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＩ９５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＮ９６に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＶ１４８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびメチオニン（Ｍ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３およびＹ１５５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列および位置Ｗ２２での変異を有し、変異は脂肪族疎水性残基である改変ＩＦＮβ；および（ｂ）１つまたは複数のターゲティング部分を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体に関し、上前記ターゲティング部分は、目的の抗原または受容体に特異的に結合する認識ドメインを含み、改変ＩＦＮβおよびターゲティング部分は、１個または複数のリンカーと任意に結合されてもよい。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、およびＶから選択される脂肪族疎水性残基である。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異はＧである。
【０１４２】
追加の代表的ＩＦＮβ変異体は、国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号で提供される。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型または改変型インターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１４４】
例えば、変異体ＩＦＮγは、変異、非限定的例であるが、切り詰めを含んでよい。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、例えば、約５〜約２０個のアミノ酸残基、または約１６個のアミノ酸残基、または約１５個のアミノ酸残基、または約１４個のアミノ酸残基、または約７個のアミノ酸残基、または約５個のアミノ酸残基のＣ末端での切り詰めを有する。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、位置Ｑ１、Ｖ５、Ｅ９、Ｋ１２、Ｈ１９、Ｓ２０、Ｖ２２、Ａ２３、Ｄ２４、Ｎ２５、Ｇ２６、Ｔ２７、Ｌ３０、Ｋ１０８、Ｈ１１１、Ｅ１１２、Ｉ１１４、Ｑ１１５、Ａ１１８、Ｅ１１９、およびＫ１２５で１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ａ２３Ｆ、Ｄ２４Ｇ、Ｇ２６Ｑ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される置換である。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｖ２２Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ａ２３Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｄ２４Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｈ１１１Ａ変異またはＨ１１１Ｄ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｉ１１４Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｑ１１５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ａ１１８Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ａ２３Ｇ変異およびＤ２４Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮγは、Ｉ１１４Ａ変異およびＡ１１８Ｇ変異を含む。ＩＦＮγは、以下の配列番号１５６３で示され、全変異は、配列番号１５６３に対するものである。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はコンセンサスインターフェロンである。コンセンサスインターフェロンは、いくつかのヒト非アレルＩＦＮαサブタイプの配列を走査し、それぞれ対応する位置で最も高頻度に観察されるアミノ酸を割り当てることにより、生成される。コンセンサスインターフェロンは、１６６個のアミノ酸の内の２０個でＩＦＮα２ｂとは異なり（８８％相同性）、ＩＦＮβとの比較は、３０％を超えるアミノ酸位置で同一性を示す。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、次のアミノ酸配列を含む：
ＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡＶＫＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号４）。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５のアミノ酸配列を含み、これは、配列番号４のアミノ酸配列とは、１個のアミノ酸だけ異なり、すなわち、配列番号５は、配列番号４の最初のメチオニン残基を欠いている：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡＶＫＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号５）。
【０１４７】
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、野生型または改変型のコンセンサスインターフェロン、すなわち、コンセンサスインターフェロンバリアントをシグナル伝達物質として含む。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、機能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはコンセンサスインターフェロンのフラグメントを包含する。
【０１４８】
ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、同第５，５４１，２９３号、および同第８，４９６，９２１号で開示されているコンセンサスインターフェロンバリアントから選択される。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例えば、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、および同第５，５４１，２９３号で開示のような、ＩＦＮ−ＣＯＮ２またはＩＦＮ−ＣＯＮ３のアミノ酸配列を含み得る。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、次記のＩＦＮ−ＣＯＮ２のアミノ酸配列を含む：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡＶＫＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号６）。
【０１４９】
ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、次記のＩＦＮ−ＣＯＮ３のアミノ酸配列を含む：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号７）。
【０１５０】
ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第８，４９６，９２１号で開示のバリアントのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例えば、コンセンサスバリアントは、次のアミノ酸配列を含み得る：
ＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号８）。
【０１５１】
別の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、次記のアミノ酸配列を含み得る：
ＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＣＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号９）。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ペグ化され得、すなわち、ＰＥＧ部分を含む。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、配列番号９のＳ１５６Ｃの位置で結合されたＰＥＧ部分を含み得る。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、改変インターフェロンは、ヒトＩＦＮα２ａのバリアントであり、配列Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１０）中の位置４１の近傍へのＡｓｐの挿入によりＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１１）が得られ（これはＩＦＮα２ａ配列に対する配列の再番号割当をもたらす）、次の変異Ａｒｇ２３Ｌｙｓ、Ｌｅｕ２６Ｐｒｏ、Ｇｌｕ５３Ｇｌｎ、Ｔｈｒ５４Ａｌａ、Ｐｒｏ５６Ｓｅｒ、Ａｓｐ８６Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１０４Ｔｈｒ、Ｇｌｙ１０６Ｇｌｕ、Ｔｈｒ１１０Ｇｌｕ、Ｌｙｓ１１７Ａｓｎ、Ａｒｇ１２５Ｌｙｓ、およびＬｙｓ１３６Ｔｈｒを有する。コンセンサスインターフェロンについて記載する本明細書の全ての実施形態は、同様に、この遺伝子改変インターフェロンに該当する。
【０１５４】
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０１５６】
種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎ  α−メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。
【０１５７】
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、変異はコンセンサスインターフェロンバリアントが、非変異型、例えば、野生型のコンセンサスインターフェロン（例えば、配列番号４または５のアミノ酸配列を有するコンセンサスインターフェロン）に比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性の内の１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。例えば、非変異型、例えば、野生型のコンセンサスインターフェロンに比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減した特定の生物活性などの１つまたは複数の弱められた活性は、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するものであり得る。結果として、種々の実施形態では、変異は、コンセンサスインターフェロンバリアントが、非変異型、例えば、野生型のコンセンサスインターフェロンに比べて、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
【０１５８】
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減する変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンにより与えられる活性は、治療受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、コンセンサスインターフェロンは、治療受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、治療受容体に対し低減された活性化作用を有するコンセンサスインターフェロンバリアントをもたらす。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、治療受容体の低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１個または複数のターゲティング部分を有する本発明の複合体中に包含することにより回復可能である。他の実施形態では、治療受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１個または複数のターゲティング部分を有する本発明の複合体中に包含することでは十分に回復可能ではない。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、コンセンサスインターフェロンバリアントが、治療受容体に対する結合親和性または活性を弱める変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、これは、例えば、野生型コンセンサスインターフェロンで観察される副作用を低減する。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。
【０１６０】
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、コンセンサスインターフェロンバリアントが、１つまたは複数の治療受容体に対する弱められたまたは低減された親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能な）を有するようにさせる１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性は、治療受容体からの活性および／またはシグナル伝達の減弱化を可能にする。
【０１６１】
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。一実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットの両方に対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異、およびＩＦＮＡＲ２に対する結合またはその親和性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体は、標的選択的ＩＦＮＡＲ１活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ１活性は、ターゲティング部分、例えば、ＳＩＲＰαを介する標的化により回復可能である）。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ２に対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異、およびＩＦＮＡＲ１に対する結合またはその親和性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体は、標的選択的ＩＦＮＡＲ２活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ２活性は、ターゲティング部分、例えば、ＳＩＲＰαを介する標的化により回復可能である）。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異、およびＩＦＮＡＲ２に対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体は、標的選択的ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２活性は、ターゲティング部分、例えば、ＳＩＲＰαを介する標的化により回復可能である）。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５を基準にして、位置１４５〜１５５、例えば、アミノ酸位置１４９、１５０および／または１５４で、１個または複数のアミノ酸の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５を基準にして、位置１４５〜１５５、例えば、アミノ酸位置１４９、１５０および／または１５４で、１個または複数のアミノ酸の変異を有するように改変され、場合により、置換は疎水性であり、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンから選択される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロン変異体は、配列番号５を基準にして、Ｍ１４９Ａ、Ｒ１５０Ａ、およびＬ１５４Ａから選択される１個または複数の変異を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５を基準にして、アミノ酸位置１２１（すなわち、Ｋ１２１）で変異を有するように改変される。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５を基準にして、Ｋ１２１Ｅ変異を含む。
【０１６７】
種々の実施形態では、野生型または改変シグナル伝達物質は、サイトカイン、増殖因子、およびホルモンの野生型または改変型から選択される。このようなサイトカイン、増殖因子、およびホルモンの例としては、限定されないが、リンホカイン、モノカイン、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの従来のポリペプチドホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などのタンパク質ホルモン；肝臓増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦαなどの神経成長因子；血小板増殖因子；形質転換増殖因子（ＴＧＦ）例えば、ＴＧＦαおよびＴＧＦβ；インスリン様増殖因子−ＩおよびＩＩ；骨誘導因子；例えば、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ（およびインターフェロンＩ、ＩＩおよびＩＩＩ型）などのインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン(ＩＬs)例えば、IL-1β、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、およびIL-18などのインターロイキン；例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦβなどの腫瘍壊死因子；ならびにその他のポリペプチド因子、例えば、ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）が挙げられる。本明細書で使用される場合、サイトカイン、増殖因子、およびホルモンは、天然源から得た、または組換えの細菌、真核生物または哺乳動物の細胞培養システムから生成されたタンパク質および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、限定されないが、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦβ（ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３を含む種々のサブタイプのＴＧＦβを含むおよびそのサブタイプ）などの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様増殖因子−ＩおよびＩＩなどのインスリン様増殖因子、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ヘレグリン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）から選択される野生型または改変型増殖因子である。
【０１６９】
ある実施形態では、増殖因子質は、改変型の繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）である。ＦＧＦの例としては、限定されないが、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、マウスＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、およびＦＧＦ２３が挙げられる。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、野生型または改変シグナル伝達物質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理学的であるが病的でもある血管新生において重要な役割を果たし、血管透過性を調節し、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞に対して成長因子として作用できる、強力な成長因子である。さらなる機能には、特に、マクロファージ系統および内皮細胞の細胞遊走の刺激が含まれる。少なくとも３個の受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３）に加えて、ＶＥＧＦ成長因子ファミリーのいくつかのメンバーが存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは、２種以上のＶＥＧＦＲタイプを結合し活性化できる。例えば、ＶＥＧＦ−Ａは、ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２を結合し、一方、ＶＥＧＦ−Ｃは、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３を結合できる。ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２活性化は、血管新生を調節し、ＶＥＧＦＲ３活性化は、リンパ脈管新生に関与する。大部分の血管新生促進シグナルは、ＶＥＧＦＲ２の活性化から生成される。ＶＥＧＦＲ１活性化は、血管新生の負の役割と関連する可能性があることが報告された。ＶＥＧＦＲ１シグナル伝達は、腫瘍の骨髄由来ＶＥＧＦＲ１陽性細胞を介したインビボ進行にも重要である（骨中の転移前微小環境の形成の一因となる）ことも報告された。治療抗体に向けられた／治療抗体を中和するＶＥＧＦ−Ａをベースにしたいくつかの治療法が、主に、血管新生に依存する種々のヒト腫瘍の治療での使用のために開発されてきた。しかし、これらは、副作用がないわけではない。これは、これらが一般的な非細胞／組織特異的ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ相互作用阻害剤として作用することを考慮すると驚くべきことではない。従って、特定の標的細胞（例えば、腫瘍血管系内皮細胞）に対するＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）／ＶＥＧＦＲ２阻害を制限することが望ましいであろう。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、またはＶＥＧＦ−ＥおよびＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、およびＶＥＧＦ２０６などの種々のＶＥＧＦ−Ａのアイソフォームを含むこれらのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）および／またはＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）および／またはＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１）に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷治癒方法または虚血関連疾患の治療で使用される（理論に束縛されることを意図するものではないが、内皮細胞機能および血管新生に対するＶＥＧＦＲ２の効果により媒介されて）。種々の実施形態では、癌および炎症促進性活性と関連するＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）への結合が回避される。種々の実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）は、デコイ受容体として機能し、そのため、この受容体に対する親和性を実質的に低減または除去し、治療薬の隔離を回避する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ−ＣまたはＶＥＧＦ−Ｄである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する低減された親和性および／または活性を有する。あるいは、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１７２】
血管新生促進治療法はまた、種々の疾患（例えば、虚血性心疾患、出血など）において重要であり、ＶＥＧＦベース治療薬を含む。ＶＥＧＦＲ２の活性化は血管新生促進性である（内皮細胞上で作用する）。ＶＥＧＦＲ１は、炎症細胞（例えば、マクロファージを含む）の遊走の刺激を生じ、血管過多透過性に関連する炎症をもたらし得る。ＶＥＧＦＲ１の活性化はまた、腫瘍微小環境形成に関連する骨髄を活性化できる。従って、ＶＥＧＦＲ２活性化に対し選択性があるＶＥＧＦベース治療薬は、この場合には望ましいであろう。さらに、例えば、内皮細胞を特異的に標的とする細胞が望ましいであろう。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ−２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的な性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ−１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。腫瘍内皮細胞マーカー（例えば、ＰＳＭＡなど）に結合するターゲティング部分を介して腫瘍血管系内皮細胞を標的にする場合、このような構築物は、このようなマーカー陽性細胞上に対し特異的にＶＥＧＦＲ２活性化を阻害するが、標的細胞へ向かう途上および標的細胞上では（活性が除去された場合）ＶＥＧＦＲ１を活性化せず、従って、例えば、炎症反応の誘導を無くする。これは、ＶＥＧＦ−Ａ中和療法に比べて、多くの腫瘍型に対するより選択的で安全な抗血管新生薬療法を提供することになろう。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ−２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ−１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。血管内皮細胞への標的化により、いくつかの実施形態では、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ１が関連する炎症反応誘導を生じることなく、血管新生を促進する。従って、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ２ならびにＶＥＧＦＲ１の全身性活性化に起因する副作用の実質的に低減されたリスクを有する標的化血管新生促進効果を有するであろう。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は改変ＶＥＧＦ１６５であり、ＶＥＧＦ１６５の野生型アミノ酸配列は下記である：
ＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＮＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ（配列番号１２）。
【０１７５】
別の例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は改変ＶＥＧＦ１６５ｂであり、ＶＥＧＦ１６５ｂの野生型アミノ酸配列は下記である：
ＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＮＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＳＬＴＲＫＤ（配列番号１３）。
【０１７６】
これらの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸Ｉ８３での変異を有する（例えば、Ｉ８３での置換変異、例えば、Ｉ８３Ｋ、Ｉ８３Ｒ、またはＩ８３Ｈ）。理論に束縛されることを意図するものではないが、このような変異は、低減された受容体結合親和性を生じ得ると考えられている。例えば、米国特許第９，０７８，８６０号を参照されたい。この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、限定されないが、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、アンドロゲン、エストロゲン、甲状腺刺激ホルモン、濾胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、プロラクチン、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、抗利尿ホルモン、オキシトシン、チロトロピン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、ドーパミン、メラトニン、チロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイド、アドレナリン、ノルアドレナリン、プロゲステロン、インスリン、グルカゴン、アミリン、カルシトリオール、カルシフェロール、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、神経ペプチドＹ、グレリン、ＰＹＹ３−３６、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、レプチン、トロンボポエチン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、およびアンジオテンシノーゲンから選択される野生型または改変型のホルモンである。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、野生型または改変シグナル伝達物質はＴＮＦ−αである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）上の２つの別々の膜受容体に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で選択的に発現される。受容体活性化に応答して、全く別々の生物学的経路が活性化されるが、若干の重なり合いも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦκＢ経路の活性化）。ＴＮＦの投与は、全身的毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた、ＴＮＦＲ１と同様に、多様な作用に関連し、ＴＮＦ系治療薬の開発においては、ＴＮＦターゲティングおよび活性に対する制御が重要であることに留意されたい。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、かつ細胞死シグナル伝達に関与するが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与する。したがって、癌の治療法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば、腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞を標的にし得る。例えば、神経変性障害の治療のためのニューロン新生における、細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを優先できる改変ＴＮＦα物質を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなＦｃベースキメラタンパク質複合体は、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらす変異のみを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体に比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなＦｃベースキメラタンパク質複合体は、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の治療において）。また、いくつかの実施形態では、これらのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってインビボでのＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに裏付ける。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなＦｃベースキメラタンパク質複合体は、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型での細胞生存のより強力な活性化因子であり、これは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択Ｆｃベースキメラタンパク質複合体はまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の治療において有用である。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は自己反応性Ｔ細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔｒｅｇ細胞活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦにより）自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、例えば、ＮＦκＢ経路活性／シグナル伝達の変化により、変更されたアポトーシス／生存シグナルを有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、細胞死（アポトーシス）／生存シグナル特性の不均衡の根底にある、ＮＦκＢ経路での損傷または変更および、場合により特定の死誘導シグナルに対する変更された感受性（例えば、ＴＮＦＲ２活性化）を有する自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、特に、自己免疫疾患、種々の心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む疾患に対する追加の治療用途を有する。
【０１８４】
ある実施形態では、野生型ＴＮＦαは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＲＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＲＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ（配列番号１４）。
【０１８５】
このような実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これが、低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦαをもたらす。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変ヒトＴＮＦα部分は、アミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、Ａ１４５、およびＥ１４６の内の１つまたは複数に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１  ＧＩ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従ってナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９Ｓ、Ｒ３２Ｇ、Ｒ３２Ｗ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｓ８６Ｔ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｙ８７Ｈ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、Ｅ１４６Ｋ、およびＳ１４７Ｄから選択される置換変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆ、およびＹ８７Ｈから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｅ１４６Ｋ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＳ８６Ｔ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９ＳおよびＲ３２Ｗ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５ＴおよびＳ１４７Ｄ変異を有する。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、改変ＴＮＦα物質は、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載のような受容体選択性をもたらす変異を有する。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ｒ３２、Ｓ８６、およびＥ１４６の内の１つまたは複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、およびＥ１４６Ｋの内の１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｒ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｋの内の１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ａ１４５、Ｅ１４６、およびＳ１４７の内の１個または複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄの内の１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、およびＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄの内の１個または複数である。
【０１８９】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はＴＮＦβである。ＴＮＦβは、ＬＴβ（ＬＴα１β２）と、ホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１９０】
ある実施形態では、野生型ＴＮＦβは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＬＰＧＶＧＬＴＰＳＡＡＱＴＡＲＱＨＰＫＭＨＬＡＨＳＮＬＫＰＡＡＨＬＩＧＤＰＳＫＱＮＳＬＬＷＲＡＮＴＤＲＡＦＬＱＤＧＦＳＬＳＮＮＳＬＬＶＰＴＳＧＩＹＦＶＹＳＱＶＶＦＳＧＫＡＹＳＰＫＡＴＳＳＰＬＹＬＡＨＥＶＱＬＦＳＳＱＹＰＦＨＶＰＬＬＳＳＱＫＭＶＹＰＧＬＱＥＰＷＬＨＳＭＹＨＧＡＡＦＱＬＴＱＧＤＱＬＳＴＨＴＤＧＩＰＨＬＶＬＳＰＳＴＶＦＦＧＡＦＡＬ（配列番号１５）。
【０１９１】
このような実施形態では、改変ＴＮＦβ物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６〜１１３に変異を含み得、これが、ＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦβをもたらす。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸位置１０６〜１１３に１個または複数の置換変異を有する。例示的実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、位置１０６〜１１３に、約１〜約３個のアミノ酸の挿入を有する。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７９０３号および国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載のように、野生型または改変型物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、単鎖トリマー型であり得る。これら特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、改変型物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変型物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変型物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的な様式でＴＮＦ応答を抑制する方法において使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型である。
【０１９４】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ−ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ−ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ−ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ−ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。
【０１９５】
ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＭＡＭＭＥＶＱＧＧＰＳＬＧＱＴＣＶＬＩＶＩＦＴＶＬＬＱＳＬＣＶＡＶＴＹＶＹＦＴＮＥＬＫＱＭＱＤＫＹＳＫＳＧＩＡＣＦＬＫＥＤＤＳＹＷＤＰＮＤＥＥＳＭＮＳＰＣＷＱＶＫＷＱＬＲＱＬＶＲＫＭＩＬＲＴＳＥＥＴＩＳＴＶＱＥＫＱＱＮＩＳＰＬＶＲＥＲＧＰＱＲＶＡＡＨＩＴＧＴＲＧＲＳＮＴＬＳＳＰＮＳＫＮＥＫＡＬＧＲＫＩＮＳＷＥＳＳＲＳＧＨＳＦＬＳＮＬＨＬＲＮＧＥＬＶＩＨＥＫＧＦＹＹＩＹＳＱＴＹＦＲＦＱＥＥＩＫＥＮＴＫＮＤＫＱＭＶＱＹＩＹＫＹＴＳＹＰＤＰＩＬＬＭＫＳＡＲＮＳＣＷＳＫＤＡＥＹＧＬＹＳＩＹＱＧＧＩＦＥＬＫＥＮＤＲＩＦＶＳＶＴＮＥＨＬＩＤＭＤＨＥＡＳＦＦＧＡＦＬＶＧ（配列番号１６）。
【０１９６】
このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７〜Ｒ１３２、Ｅ１４４〜Ｒ１４９、Ｅ１５５〜Ｈ１６１、Ｙ１８９〜Ｙ２０９、Ｔ２１４〜１２２０、Ｋ２２４〜Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６〜Ｌ２３９、Ｅ２４９〜Ｋ２５１、Ｔ２６１〜Ｈ２６４およびＨ２７０〜Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３、ヒト配列に基づいてナンバリング；上記参照）。
【０１９７】
このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、切断、例えば、限定されないが、例えば、Ｔｒｅｂｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，５：ｅ１０３５に記載されているような切断を含む。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ−Ｒ２に特異的に結合し得る。代表的変異は、アミノ酸位置Ｙ１８９、Ｒ１９１、Ｑ１９３、Ｈ２６４、Ｉ２６６、およびＤ２６７の内の１つまたは複数で変異を含む。例えば、変異は、Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６ＬおよびＤ２６７Ｑの内の１個または複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６Ｌ  およびＤ２６７Ｑを含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１に特異的に結合し得る。代表的変異には、アミノ酸位置Ｇ１３１、Ｒ１４９、Ｓ１５９、Ｎ１９９、Ｋ２０１、およびＳ２１５の内の１つまたは複数での変異が挙げられる。例えば、変異は、Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄの内の１個または複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄを含む。さらなるＴＲＡＩＬ変異は、例えば、Ｔｒｅｂｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，５：ｅ１０３５に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２００】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はＴＧＦαである。このような実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２０１】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はＴＧＦβである。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、これは、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、ＴＧＦＢＲ２よりもＴＧＦＢＲ１またはＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を選択する。同様に、理論に束縛されることを望むものではないが、ＬＡＰは、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、このようＦｃベースキメラタンパク質複合体は、カムラチ・エンゲルマン病、または不適切なＴＧＦβシグナル伝達に関連する他の疾患において使用される。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、野生型または改変型物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の内の１種または複数に対し、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変型物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３の内の１種または複数に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、改変型物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変型物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２０４】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はIL-1である。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はIL-1αまたはIL-1βである。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-1Ｒ１および／またはIL-1ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-1Ｒ１および／またはIL-1ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-1Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-1Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変型IL-1物質は、IL-1Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって、治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。
【０２０５】
ある実施形態では、野生型IL-1βは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＡＰＶＲＳＬＮＣＴＬＲＤＳＱＱＫＳＬＶＭＳＧＰＹＥＬＫＡＬＨＬＱＧＱＤＭＥＱＱＶＶＦＳＭＳＦＶＱＧＥＥＳＮＤＫＩＰＶＡＬＧＬＫＥＫＮＬＹＬＳＣＶＬＫＤＤＫＰＴＬＱＬＥＳＶＤＰＫＮＹＰＫＫＫＭＥＫＲＦＶＦＮＫＩＥＩＮＮＫＬＥＦＥＳＡＱＦＰＮＷＹＩＳＴＳＱＡＥＮＭＰＶＦＬＧＧＴＫＧＧＱＤＩＴＤＦＴＭＱＦＶＳＳ（配列番号１７）。
【０２０６】
IL-1βは、炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それは、ＣＤ４  Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率を高め、ＩＦＮγおよびIL-4産生細胞の増殖を増大させる。IL-1βはまた、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。IL-1β受容体には、IL-1Ｒ１およびIL-1Ｒ２が含まれる。IL-1Ｒ１への結合およびIL-1Ｒ１を介したシグナル伝達は、IL-1βが多くのその生物学的（および病理学的）作用を媒介する機序を構成する。IL-1Ｒ２は、デコイ受容体として機能できることにより、IL-1Ｒ１を介した相互作用およびシグナル伝達を行うためのIL-1βの利用可能性を減らす。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、改変IL-1βは、IL-1Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変IL-1βは、IL-1Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能なIL-1β／IL-1Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の損失の防止およびその結果としての必要なIL-1β投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体に比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を治療する方法で使用される。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、改変IL-1βは、IL-1Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。いくつかの実施形態では、改変IL-1βは、IL-1Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、IL-1β／IL-1Ｒ１シグナル伝達は回復可能ではなく、ＩＬＲ２に対する治療用Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の損失の防止およびその結果としての必要なIL-1β投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体に比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を治療する方法で使用される。
【０２０９】
このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、アミノ酸５２〜５４の欠失を有し、これは、Ｉ型IL-1Ｒに対して、低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトIL-1βが産生する。例えば、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、改変ヒトIL-1βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１個または複数の置換変異（Ｘはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、IL-1Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ−０００５６７．１、Ｇｌ：１０８３５１４５、ヒトIL-1β配列に基づいてナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトIL-1βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１個または複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ａを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｎを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｒを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトIL-1βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。
【０２１０】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-2である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-2Ｒαおよび／またはIL-2Ｒβおよび／またはIL-2Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-2Ｒβおよび／またはIL-2Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-2Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、改変IL-2がIL-2Ｒβおよび／またはIL-2Ｒγに対するアゴニストである場合、癌の治療に適切であり得る。例えば、本発明の構築物は、IL-2受容体βおよびγを有するＣＤ８＋  Ｔ細胞（抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化を優先し、IL-2受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇ（免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）を優先しない。さらに、いくつかの実施形態では、IL-2ＲαよりもIL-2Ｒβおよび／またはIL-2Ｒγに対する選択性は、肺水腫などのIL-2副作用を回避させる。また、IL-2ベースのＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、改変IL-2が、IL-2Ｒβおよび／またはIL-2Ｒγに対してアンタゴニスト（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）である場合、疾患（例えば、自己免疫疾患）の治療に有用である。例えば、本発明の構築物は、IL-2受容体βおよびγを有するＣＤ８＋  Ｔ細胞の抑制の減弱化（したがって、免疫応答を抑制する）を優先し、IL-2受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇを優先しない。あるいは、いくつかの実施形態では、IL-2を有するＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制を優先し、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を優先しない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制により恩恵を受けると思われる疾患、例えば、自己免疫障害の治療に使用される。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞に向けられた本明細書に記載のターゲティング部分を有し、改変IL-2物質は、IL-2Ｒβおよび／またはIL-2Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはIL-2Ｒαに対し実質的に低減されたまたは除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞活性を標的とし、通常、Ｔｒｅｇ細胞に対して不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型IL-2に比べて、高められた免疫刺激効果を有し（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）、一方で、IL-2に関連する全身毒性を除去または低減する。
【０２１２】
ある実施形態では、野生型IL-2は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８）。
【０２１３】
このような実施形態では、改変IL-2物質は１個または複数の変異を、アミノ酸Ｌ７２の位置（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２の位置（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５の位置（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）で有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変IL-2物質は、野性型IL-2と比べて、高親和性IL-2受容体に対して低減された親和性を有し、中間的親和性IL-2受容体に対しては親和性をそのまま維持すると考えられる。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、改変IL-2物質は、アミノ酸位置Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、およびＥ６２に１個または複数の変異を有する。例えば、改変IL-2物質は、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａの内の１個または複数を含み得る。いくつかの実施形態では、改変IL-2物質は、Ｃ１２５で変異を含み得る。例えば、Ｃ１２５Ｓであってよい。このような実施形態では、改変IL-2物質は、例えば、Ｃａｒｍｅｎａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９０：６２３０−６２３８に記載されているように、IL-2Ｒαに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変IL-2物質は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＮＫ細胞を含むが、Ｔｒｅｇ細胞を含まない、エフェクター細胞の増殖を誘導できる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変IL-2物質は、野生型IL-2物質よりも少ない毒性である。IL-2Ｒαに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変IL-2物質を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、腫瘍学において用途が見出され得る。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、改変IL-2シグナル伝達物質は、配列番号１８のＮ末端でＡｌａの欠失を含む。いくつかの実施形態では、改変IL-2シグナル伝達物質は、配列番号１８の位置１２５でＣｙｓのＳｅｒによる置換を含む。いくつかの実施形態では、改変IL-2シグナル伝達物質は、配列番号１８のＮ末端でＡｌａの欠失および位置１２５でＣｙｓのＳｅｒによる置換を含む。
【０２１６】
他の実施形態では、改変IL-2物質は、例えば、国際公開第２０１６／０２５３８５号に記載されているように、IL-2Ｒβに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、改変IL-2物質は、Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導し得るが、ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＮＫ細胞などのエフェクター細胞の増殖を誘導し得ない。IL-2Ｒβに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変IL-2物質を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、自己免疫疾患の治療で用途が見出され得る。いくつかの実施形態では、改変IL-2物質は、アミノ酸位置Ｎ８８、Ｄ２０、および／またはＡ１２６に１個または複数の変異を有し得る。例えば、改変IL-2物質は、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆの内の１個または複数を含み得る。
【０２１７】
種々の実施形態では、改変IL-2物質は、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を含み得る。例えば、変異は、Ｄ１０９ＣまたはＣ１２５Ｓであってよい。いくつかの実施形態では、Ｄ１０９またはＣ１２５での変異を有する改変IL-2は、ＰＥＧ部分への結合のために利用され得る。
【０２１８】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-3である。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-3受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、IL-3受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-3受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、IL-3受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。
【０２１９】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-4である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、１型および／または２型IL-4受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、１型および／または２型IL-4受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型IL-4受容体は、共通のγ鎖を有するIL-4Ｒαサブユニットから構成され、IL-4を特異的に結合する。２型IL-4受容体は、IL-13Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したIL-4Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、２型IL-4受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２２０】
ある実施形態では、野生型IL-4は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＨＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＶＴＤＩＦＡＡＳＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ（配列番号１９）。
【０２２１】
このような実施形態では、改変IL-4物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変IL-4物質は、Ｉ型受容体により媒介される活性を維持するが、その他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられる。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２２】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-6である。IL-6は、リガンド結合IL-6Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。IL-6はまた、可溶性型のIL-6Ｒ（ｓIL-6Ｒ）にも結合し得、これは、IL-6Ｒの細胞外の部分である。ｓIL-6Ｒ／IL-6複合体は、神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し、したがって、再ミエリン化による神経再生に重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-6Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓIL-6Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-6Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓIL-6Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２２３】
ある実施形態では、野生型IL-6は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＡＰＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＴＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号２０）。
【０２２４】
このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変IL-6物質は、IL-6Ｒαに対し低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２５】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-10である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-10受容体１およびIL-10受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-10受容体１およびIL-10受容体２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２２６】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-11である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-11Ｒαおよび／またはIL-11Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル型伝達物質は、IL-11Ｒαおよび／またはIL-11Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２２７】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-12である。このような実施形態では、改変シグナル型伝達物質は、IL-12Ｒβ１および／またはIL-12Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-12Ｒβ１および／またはIL-12Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２２８】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-13である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-4受容体（IL-4Ｒα）およびIL-13Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-4受容体（IL-4Ｒα）またはIL-13Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２２９】
ある実施形態では、野生型IL-13は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＳＰＧＰＶＰＰＳＴＡＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫＴＱＲＭＬＳＧＦＣＰＨＫＶＳＡＧＱＦＳＳＬＨＶＲＤＴＫＩＥＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮ（配列番号２１）。
【０２３０】
このような実施形態では、改変IL-13物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変IL-13物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３１】
ある実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型または改変型IL-15である。いくつかの実施形態では、改変IL-15は、インターロイキン１５受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。
【０２３２】
ある実施形態では、野生型IL-15は、配列番号１５６４のアミノ酸配列を有する。
【０２３３】
このような実施形態では、改変IL-15物質は、アミノ酸Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ４６、Ｌ４７、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｄ６１、Ｎ６５、Ｌ６６、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７２、Ｑ１０８で１個または複数の変異を有する。
【０２３４】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-18である。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-18Ｒαおよび／またはIL-18Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、IL-18Ｒαおよび／またはIL-18Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くIL-18ＲαのアイソフォームであるIL-18Ｒα  ＩＩ型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２３５】
ある実施形態では、野生型IL-18は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＭＡＡＥＰＶＥＤＮＣＩＮＦＶＡＭＫＦＩＤＮＴＬＹＦＩＡＥＤＤＥＮＬＥＳＤＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤＬ（配列番号２２）。
【０２３６】
このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変IL-18物質は、Ｙ３７〜Ｋ４４、Ｒ４９〜Ｑ５４、Ｄ５９〜Ｒ６３、Ｅ６７〜Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７〜Ａ９７、Ｎ１２７〜Ｋ１２９、Ｑ１３９〜Ｍ１４９、Ｋ１６５〜Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０〜Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、Ｇｌ：５４６９６６５０、ヒトIL-18配列に基づいてナンバリング）。
【０２３７】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はIL-3３である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体１およびIL-1ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体およびIL-1ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０２３８】
ある実施形態では、野生型IL-3３は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＭＫＰＫＭＫＹＳＴＮＫＩＳＴＡＫＷＫＮＴＡＳＫＡＬＣＦＫＬＧＫＳＱＱＫＡＫＥＶＣＰＭＹＦＭＫＬＲＳＧＬＭＩＫＫＥＡＣＹＦＲＲＥＴＴＫＲＰＳＬＫＴＧＲＫＨＫＲＨＬＶＬＡＡＣＱＱＱＳＴＶＥＣＦＡＦＧＩＳＧＶＱＫＹＴＲＡＬＨＤＳＳＩＴＧＩＳＰＩＴＥＹＬＡＳＬＳＴＹＮＤＱＳＩＴＦＡＬＥＤＥＳＹＥＩＹＶＥＤＬＫＫＤＥＫＫＤＫＶＬＬＳＹＹＥＳＱＨＰＳＮＥＳＧＤＧＶＤＧＫＭＬＭＶＴＬＳＰＴＫＤＦＷＬＨＡＮＮＫＥＨＳＶＥＬＨＫＣＥＫＰＬＰＤＱＡＦＦＶＬＨＮＭＨＳＮＣＶＳＦＥＣＫＴＤＰＧＶＦＩＧＶＫＤＮＨＬＡＬＩＫＶＤＳＳＥＮＬＣＴＥＮＩＬＦＫＬＳＥＴ（配列番号２３）。
【０２３９】
このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変IL-3３物質は、Ｉ１１３〜Ｙ１２２、Ｓ１２７〜Ｅ１３９、Ｅ１４４〜Ｄ１５７、Ｙ１６３〜Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０〜Ｃ２２７およびＴ２６０〜Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョン２５４２７４．１、Ｇｌ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づいてナンバリング）。
【０２４０】
ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は上皮増殖因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは、強力な成長因子のファミリーである。メンバーは、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、およびＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレグリン、エピレギュリン、ベータセルリンなどの他のものを含む。ＥＧＦファミリー受容体は、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を含む。これらは、ホモダイマーおよび／またはヘテロダイマー受容体サブタイプとして機能し得る。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、種々の受容体サブタイプに対して、他と異なる選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２およびいくつかの他のヘテロダイマーサブタイプと結合する。ＨＢ−ＥＧＦは、類似のパターンを有するが、ＥｒｂＢ４／４と結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の正または負方向への調節は、大きな治療上の観点から関心がもたれている。例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、ＥＧＦＲシグナル伝達が主要な成長促進シグナルを構成する種々の癌の治療で関心がもたれている。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激は、例えば、創傷治癒（急性および慢性）、口腔粘膜炎（限定されないが、放射線療法を含む種々の癌療法の主要な副作用）における治療上の観点から関心が持たれている。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４の内の１種または複数に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、その受容体の活性が弱められる様式でアンタゴナイズされる。このような実施形態は、例えば、癌の治療で使用される。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。ＥｒｂＢ１は、キナーゼ阻害剤の治療標的であるが−大抵の場合、副作用があり、その理由は、それらがあまり選択的でないためである（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブおよびイコチニブ）。いくつかの実施形態では、弱められた拮抗的ＥｒｂＢ１シグナル伝達は、ＥＧＦの受容体を標的とする他の物質より、オンターゲットであり、少ない副作用を有する。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）および／またはＥｒｂＢ４またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対し実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ターゲティング部分を介した特異的標的化により、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（アンタゴニズム、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）が達成されるであろう−阻害関連副作用に関連する可能性のある他の受容体サブタイプを関与させずに。従って、身体中の全ての細胞型のＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤と対照的に、このような構築物は、副作用の低減された細胞選択的（例えば、受容体の増幅、過剰発現などよる活性化ＥＧＦＲシグナル伝達を有する腫瘍細胞）抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬物作用を提供するであろう。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４および／またはそれが相互作用する他のサブタイプに対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。ターゲティング部分を介した特定の標的細胞に対する標的化により、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の選択的活性化が達成される（例えば、上皮細胞）。このような構築物は、いくつかの実施形態では、副作用が低減された創傷の治療（創傷治癒の促進）、特に慢性状態の治療および治療薬局所投与以外の適用（例えば、全身性創傷治癒）のために使用される。
【０２４４】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はインスリンまたはインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。インスリン受容体に対する弱められた応答は、糖尿病、肥満症、代謝障害などの制御を可能とし、同時に、ＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体から離れた方向に向けることにより、癌促進性作用を回避する。
【０２４５】
ある実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質は、インスリン様増殖因子−Ｉまたはインスリン様増殖因子−ＩＩ（ＩＧＦ１またはＩＧＦ２）である。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＧＦ１である。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、したがって、インスリンシグナル伝達を妨げない。種々の実施形態では、これは、癌治療に適用される。種々の実施形態では、本物質は、ＩＲアイソフォームＡが癌治療に対し耐性を生じるのを防止し得る。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、野生型または改変型シグナル伝達物質はＥＰＯである。種々の実施形態では、改変ＥＰＯ物質は、野生型ＥＰＯまたは本明細書で記載の他のＥＰＯベース物質に比べて、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）および／またはエフリン受容体（ＥｐｈＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯ物質は、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）および／またはＥｐｈ受容体（ＥｐｈＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＥＰＯ受容体の例としては、限定されないが、ＥＰＯＲホモダイマーまたはＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロダイマーが挙げられる。また、ベータ共通受容体（βｃＲ）もＥＰＯ受容体に含まれる。Ｅｐｈ受容体の例としては、限定されないが、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、およびＥＰＨＢ６が挙げられる。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯタンパク質に、１個または複数の異なるＥＰＯ受容体またはＥｐｈ受容体（例えば、限定されないが、ＥＰＯＲ−ＥＰＨＢ４、ＥＰＯＲ−βｃＲ−ＥＰＯＲを含むヘテロダイマー、ヘテロトリマーなど）を含む受容体に対する低減された親和性を持たせる１個または複数の変異を含む。また、限定されないが、ＮＥＰＯＲを含む、ＥＰ特許公報第２４９２３５５号の受容体も提供される（この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、ヒトＥＰＯは、次のアミノ酸配列を有する（最初の２７個のアミノ酸はシグナルペプチドである）：
ＭＧＶＨＥＣＰＡＷＬＷＬＬＬＳＬＬＳＬＰＬＧＬＰＶＬＧＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣＡＥＨＣＳＬＮＥＮＩＴＶＰＤＴＫＶＮＦＹＡＷＫＲＭＥＶＧＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶＮＳＳＱＰＷＥＰＬＱＬＨＶＤＫＡＶＳＧＬＲＳＬＴＴＬＬＲＡＬＧＡＱＫＥＡＩＳＰＰＤＡＡＳＡＡＰＬＲＴＩＴＡＤＴＦＲＫＬＦＲＶＹＳＮＦＬＲＧＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ（配列番号２４）。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯの成熟型であり（シグナルペプチドは切断されている）、これは、次の配列を有する１６６個のアミノ酸残基の糖タンパク質である：
ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣＡＥＨＣＳＬＮＥＮＩＴＶＰＤＴＫＶＮＦＹＡＷＫＲＭＥＶＧＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶＮＳＳＱＰＷＥＰＬＱＬＨＶＤＫＡＶＳＧＬＲＳＬＴＴＬＬＲＡＬＧＡＱＫＥＡＩＳＰＰＤＡＡＳＡＡＰＬＲＴＩＴＡＤＴＦＲＫＬＦＲＶＹＳＮＦＬＲＧＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ（配列番号２５）。
【０２４８】
ヒトＥＰＯタンパク質の構造は、ヘリックスＡ、Ｂ、ＣおよびＤを含む４ヘリックス束を含むと予測される。種々の実施形態では、改変ＥＰＯは、生物活性のために重要なＥＰＯタンパク質の４つの領域、すなわち、アミノ酸残基１０〜２０，４４〜５１、９６〜１０８、および１４２〜１５６に位置する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、残基１１〜１５、４４〜５１、１００〜１０８、および１４７〜１５１に位置する。これらの残基は、ヘリックスＡ（Ｖａｌ１１、Ａｒｇ１４、およびＴｙｒ１５）、ヘリックスＣ（Ｓｅｒ１００、Ａｒｇ１０３、Ｓｅｒ１０４、およびＬｅｕ１０８）、ヘリックスＤ（Ａｓｎ１４７、Ａｒｇ１５０、Ｇｌｙ１５１、およびＬｅｕ１５５）、およびＡ／Ｂ接続ループ（残基４２〜５１）に局在化される。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、アミノ酸４１〜５２の残基ならびにアミノ酸１４７、１５０、１５１、および１５５の残基中に変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合およびインビトロ生物活性の両方に実質的な影響を有すると考えられている。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基１１、１４、１５、１００、１０３、１０４、および１０８に変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合活性に対し中程度の影響を有し、インビトロ生物活性に対し遙かに大きい影響を有すると考えられている。置換の例としては、限定されないが、Ｖａｌ１１Ｓｅｒ、Ａｒｇ１４Ａｌａ、Ａｒｇ１４Ｇｌｎ、Ｔｙｒ１５ｌｌｅ、Ｐｒｏ４２Ａｓｎ、Ｔｈｒ４４ｌｌｅ、Ｌｙｓ４５Ａｓｐ、Ｖａｌ４６Ａｌａ、Ｔｙｒ５１Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１００Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１００Ｔｈｒ、Ａｒｇ１０３Ａｌａ、Ｓｅｒ１０４ｌｌｅ、Ｓｅｒ１０４Ａｌａ、Ｌｅｕ１０８Ｌｙｓ、Ａｓｎ１４７Ｌｙｓ、Ａｒｇ１５０Ａｌａ、Ｇｌｙ１５１Ａｌａ、およびＬｅｕ１５５Ａｌａの１つまたは複数が挙げられる。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、生物活性に影響を与え、結合には影響を与えない変異、例えば、Ｅｌｉｏｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｓｉｔｅ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  Ｊａｎｕａｒｙ  １５，１９９７；Ｂｌｏｏｄ：８９（２）に記載のものを含む。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体接触に関与するＥＰＯタンパク質の表面残基を含む１個または複数の変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの表面残基の変異は、タンパク質フォールディングの影響が少ない可能性があり、そのため、いくらかの生物活性を保持すると考えられている。変異導入され得る表面残基の例としては、限定されないが、残基１４７および１５０が挙げられる。例示的実施形態では、変異は、Ｎ１４７Ａ、Ｎ１４７Ｋ、Ｒ１５０ＡおよびＲ１５０Ｅの１つまたは複数を含む置換である。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基Ｎ５９、Ｅ６２、Ｌ６７およびＬ７０での１個または複数の変異、およびジスルフィド結合形成に影響を与える１個または複数の変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変は、フォールディングに影響を与える、および／または埋没した位置にあることが予測され、従って、生物活性に間接的に影響を与えると考えられている。
【０２５２】
ある実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体結合を大きく低減するＫ２０Ｅ置換を含む。例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｂｌｏｏｄ，８９：４９３−５０２を参照されたい。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５３】
本発明のキメラＥＰＯタンパク質に組み込み得る追加のＥＰＯ変異は、例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｂｌｏｏｄ，８９：４９３−５０２およびＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）ＰＥＤＳ，２３（４）：２５１−２６０に開示されている。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、Ｍａｔｈｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  １００（８）：１３５９−６５、に開示のものを含む。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、細胞型特異的に細胞死を誘導するのに利用し得る。このような実施形態では、毒素は改変されて、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載のように、効果を弱めるために、毒素の親和性および／または活性を低減させ得る。
【０２５５】
ターゲティング部分（ＴＭ）
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの、特異的結合の可能なタンパク質ベース物質である。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗体の誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；アフィマー、デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成のまたは天然の）分子である。これらは、例えば、限定されないが、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０２５７】
一実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物由来のＶＨＨ、または設計されたＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０２５８】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２６０】
種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、１個または複数の免疫細胞上に見つけることができ、免疫細胞は、限定されないが、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得る。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合し、直接または間接的に１個または複数の免疫細胞を効果的に動員する。いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、１個または複数の腫瘍細胞上に見つけられ得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に免疫細胞を動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、免疫細胞、例えば、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制できる免疫細胞を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。
【０２６１】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、疾患細胞および／またはエフェクター細胞などの細胞を直接にまたは間接的に動員できる。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように免疫細胞を関与させ、免疫細胞のバランスを変化させることができ、またはその方法での用途が見つかる。例えば、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、臨床的に重要な部位の免疫細胞の比率を腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞またはこれらのサブセット）に有利なように、および腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変化させることができる。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、エフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率を高めることができる。
【０２６２】
例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｔ細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、直接または間接的にＴ細胞を動員する。ある実施形態では、認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、エフェクターＴ細胞 を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋）；ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、IL-7Ｒ／ＣＤ１２７＋）；ＣＤ８＋  エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、IL-7Ｒ／ＣＤ１２７＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４＋、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、IL-7Ｒ／ＣＤ１２７＋、IL-15Ｒ＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、IL-7Ｒ／ＣＤ１２７＋、IL-15Ｒ＋）；ＣＤ６２Ｌ＋  エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７＋  ＣＤ６２Ｌ−）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７−  ＣＤ６２Ｌ−）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８＋  エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／−）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（−）ＣＤ２５（−）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８＋  幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋、ＣＸＣＲ６＋およびＣＣＲ５＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、IL-12Ｒ＋、ＩＦＮγＲ＋、ＣＸＣＲ３＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３＋、ＣＣＲ４＋およびＣＣＲ８＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、IL-4Ｒ＋、IL-3３Ｒ＋、ＣＣＲ４＋、IL-17ＲＢ＋、ＣＲＴＨ２＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、IL-23Ｒ＋、ＣＣＲ６＋、IL-1Ｒ＋）；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋  エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ＋  エフェクターＴ細胞；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７（−）エフェクターＴ細胞；およびIL-2、IL-4および／またはＩＦＮ−γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。
【０２６３】
目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメインも含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、IL-2Ｒα、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、IL-2Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１、IL-4Ｒ、Ｂ７−Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、IL-6Ｒ、ＣＣＲ３、IL-7Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、IL-10Ｒα、ＣＣＲ７、IL-10Ｒβ、ＣＣＲＳ、IL-12Ｒβ１、ＣＣＲ９、IL-12Ｒβ２、ＣＤ２、IL-13Ｒα１、IL-13、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ  α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ−３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ−４、ＣＤ６９、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／IL-2Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ−１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ−セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＤＮＡＭ−１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ−１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ−３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ−４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ−６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ−γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＳＬＰ、IL-1Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示Ｔ細胞抗原を結合する。
【０２６４】
種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、細胞受容体のための天然リガンドなどの細胞受容体に特異的に結合できるタンパク質ベース物質である。種々の実施形態では、細胞受容体は、１個または複数の免疫細胞上に見つけることができ、免疫細胞は、限定されないが、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得る。いくつかの実施形態では、細胞受容体は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはこれらのサブセット上に見つけられる。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はケモカインなどの天然リガンドである。本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中に含め得る代表的ケモカインとしては、限定されないが、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＬＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１、ＨＣＣ−４、およびＬＤＧＦ−ＰＢＰが挙げられる。例示的実施形態では、ターゲティング部分は、樹状細胞受容体ＸＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＸＣＬ１であり得る。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ８を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ９を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ３またはＣＣＲ４またはＣＣＲ５を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ７である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ２またはＣＣＲ２ＢまたはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ８である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ９である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ１０である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ３またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ１１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ３またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ１３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ９を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ１４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ３を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ１５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、またはＣＣＲ５、またはＣＣＲ８を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ１６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ４を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１７である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ７を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ１９である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ６を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２０である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ７を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ４を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ３を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ９を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ３を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１０を認識し、それに結合するケモカインであるＣＣＬ２７である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ３またはＣＣＲ１０を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＣＬ２８である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＸＣＬ１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３Ｂを認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＸＣＬ６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＸＣＬ８である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ９である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ１０である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３またはＣＸＣＲ７を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＸＣＬ１１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ７を認識し、それらに結合するケモカインであるＣＸＣＬ１２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ５を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ１３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ６を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸＣＬ１６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、それに結合するケモカインであるＬＤＧＦ−ＰＢＰである。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＸＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＸＣＬ２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸ３ＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸ３ＣＬ１である。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＦｌｔ３またはその切り詰められた領域などの天然リガンドである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｆｌｔ３の細胞外ドメイン、またはその機能性部分（例えば、同族リガンドまたは受容体にまだ結合できる部分）である。
【０２６７】
天然リガンドの細胞外ドメインの機能的等価物は、完全長細胞外ドメインの結合能力を保持するＮ末端および／またはＣ末端短縮型を包含する。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＮＧＲペプチドまたはその切り詰められた領域である。
【０２６９】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上で発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１個または複数に対するターゲティング部分を有する。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２の細胞外ドメイン、またはその機能性部分（例えば、同族リガンドまたは受容体にまだ結合できる部分）である。
【０２７１】
例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｂ細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｂ細胞 を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示Ｂ細胞抗原に結合する。
【０２７２】
さらに、例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、ナチュラルキラー細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、ナチュラルキラー細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＤＮＡＭ−１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ−イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ−γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ−２／ＣＤ１１２、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ−受容体様３／ＣＤ１６−２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ−１、Ｒａｅ−１α、Ｒａｅ−１β、Ｒａｅ−１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ−１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ−１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ−１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ−３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ−１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ−２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ−３が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示ＮＫ細胞抗原を結合する。
【０２７３】
また、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マクロファージ／単球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マクロファージ／単球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７−Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ−Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ−１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ−１、ＥＣＦ−Ｌ、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ−γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ−Ｌ２、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ−ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ−γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＲＥＭ−ｌ、ＩＬ−ｌ  ＲＩＩ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ−３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、IL-10Ｒα、ＡＬＣＡＭ、IL-10Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ−Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ−１、ＣＸＣＲ６、Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＭＤ−１、ＤＮＡＭ−１、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、Ｆｃ−γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ−ＣＳＦＲ、Ｌ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦＲα、シグレック−３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ−ｌ、IL-6Ｒ、ＴＲＥＭ−２、ＣＸＣＲｌ／IL-8ＲＡ、ＴＲＥＭ−３およびＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示マクロファージ／単球抗原を結合する。
【０２７４】
また、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、樹状細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、樹状細胞 を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ−１／ＳＲ−Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ−Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ−１、ＣＬ−Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ−ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４−ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、IL-12／IL-23ｐ４０、４−Ａｍｉｎｏ−１、８−ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８−ｏｘｏ−ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎα４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７−２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４Ｒｌ、Ｂ７−Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ−４−ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ−１、ＣＤ６８、ＭＤ−２、ＣＤ８３、ＭＤＬ−１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ  ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ−Ｌ２、ＣＬＥＣ−１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ−２、ＣＬＥＣ−８、シグレック−２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック−３／ＣＤ３３、ＤＣ−ＳＩＧＮ、シグレック−５、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック−６、ＤＣＡＲ、シグレック−７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック−９、ＤＥＣ−２０５、シグレック−１０、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック−Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ−２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、Ｆｃ−γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ−２、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ−３、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、およびバニロイドＲ１が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示ＤＣ抗原を結合する。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはこれらのサブセットを、例えば、いくつかの実施形態では、直接または間接的に、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に局在化させる。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、巨核球および／または血小板に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の巨核球および／または血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示巨核球および／または血小板抗原を結合する。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、赤血球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ−ｋｉｔ、ＨＬＡ−ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ−ＩＩ）、およびＲｈ抗原が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示赤血球抗原を結合する。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マスト細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的のマスト細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡｌ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢｌが挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示マスト細胞抗原を結合する。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好塩基球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示好塩基球抗原を結合する。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好中球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ−１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示好中球抗原を結合する。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好酸球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示好酸球抗原を結合する。
【０２８２】
種々の実施形態では、認識ドメインは、当業者に既知の任意の適切な標的、抗原、受容体または細胞表面マーカーに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭｌ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭｌ、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨｌＯ、ＭＹＨｌ  １、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ−４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤｌＤ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴｌＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣｌ、ＴＡＣＳＴＤｌなどの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ−ｖ  ベータ−３（αＶβ３）、Ｅ−セレクチンなどの新生血管マーカー；およびＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの抗原を結合する。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、腫瘍細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、直接または間接的に腫瘍細胞を動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の直接または間接的動員は、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１個または複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対するものである。
【０２８４】
腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御な増殖および／または細胞生存の異常な増大および／またはアポトーシスの抑制の異常な増大を指す。例えば、腫瘍細胞は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８５】
腫瘍細胞または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））も挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８６】
腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）−００１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、およびＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００  Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ−１、ＮＡ、ＥＢＶ−コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１  ＣＴ−７、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの腫瘍抗原を結合する。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＨＥＲ２に結合する。別の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する。
【０２８７】
種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）を結合するが、機能的に調節せず、例えば、認識ドメインは、結合抗体であるか、または結合抗体に類似である。例えば、種々の実施形態では、認識ドメインは、抗原または受容体を単に標的とし、抗原または受容体が有する生物学的作用を実質的に阻害、低減または機能的に調節しない。例えば、いくつかの上記の抗体フォーマット（例えば、完全抗体に比較して）は、アクセスが困難なエピトープを標的とする能力を有し、より広範囲の特異的結合場面を提供する。種々の実施形態では、認識ドメインは、その生物活性にとって重要な抗原または受容体部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
【０２８８】
このような非中和結合は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体が直接的にまたは間接的に活性免疫細胞をエフェクター抗原を介して必要な部位に動員するために用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、腫瘍を縮小させるまたは除去する方法において、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体を使って、細胞傷害性Ｔ細胞をＣＤ８を介して腫瘍細胞に直接的または間接的に動員し得る（例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、抗ＣＤ８認識ドメインおよび腫瘍抗原に対する認識ドメインを含み得る）。このような実施形態では、直接的または間接的にＣＤ８発現細胞傷害性Ｔ細胞を動員するがＣＤ８活性を機能的に調節しないのが望ましい。これに対して、これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍を低減させるまたは除去する作用の重要な部分である。さらなる例として、種々の実施形態では、腫瘍を縮小させるまたは除去する方法において、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体を使って、Ｃｌｅｃ９Ａを介して、直接的または間接的に樹状細胞（ＤＣ）を動員する（例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、抗Ｃｌｅｃ９Ａ認識ドメインおよび腫瘍抗原に対する認識ドメインを含み得る）。このような実施形態では、直接的または間接的にＣｌｅｃ９Ａ発現細胞ＤＣを動員するがＣｌｅｃ９Ａ活性を機能的に調節しないのが望ましい。これに対して、これらの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａシグナル伝達は、腫瘍を低減させるまたは除去する作用の重要な部分である。
【０２８９】
種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、免疫調節抗原に結合する（例えば、免疫刺激的または免疫抑制的）。種々の実施形態では、免疫調節抗原は、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド；ＯＸ−４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンドおよびＴＬ１Ａの１種または複数である。種々の実施形態では、免疫刺激抗原は、腫瘍細胞上で発現される。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、そのような免疫刺激抗原を結合するが、機能的に調節せず、従って、これらの抗原を発現している細胞の動員を、潜在的な腫瘍低減または除去能力の低減または損失なしに可能にする。
【０２９０】
種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、中和活性を有する２個の認識ドメインを含む、または中和活性を有する１個の認識ドメインおよび非中和（例えば、結合）活性を有する２個の認識ドメインを含む、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体に関連する。
【０２９１】
Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合できるタンパク質ベース物質であるＣｌｅｃ９Ａターゲティング部分である。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、Ｃｌｅｃ９Ａの機能的調節（例えば、部分的または完全な中和）を行わずにＣｌｅｃ９Ａに特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。Ｃｌｅｃ９Ａは、死細胞由来の物質の取込とプロセッシングに特化された樹状細胞のサブセット（すなわち、ＢＤＣＡ３＋樹状細胞）の表面上で発現される５群Ｃ型レクチン様受容体（ＣＴＬＲ）である。Ｃｌｅｃ９Ａは、細胞膜が損傷を受けた場合に露出される、有核細胞および無核細胞内の保存された成分を認識する。Ｃｌｅｃ９Ａは、グリコシル化されたダイマーとして細胞表面で発現され、エンドサイトーシスを媒介できるが、食作用は媒介できない。Ｃｌｅｃ９Ａは、Ｓｙｋキナーゼを動員し炎症促進性サイトカイン産生を誘導できる細胞質免疫受容体チロシンベース活性化モチーフを有する（Ｈｕｙｓａｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８），ＪＢＣ，２８３：１６６９３−７０１を参照）。
【０２９２】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０２９３】
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ヒトＣｌｅｃ９Ａの完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＣｌｅｃ９Ａに結合し得る。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、モノマー型のＣｌｅｃ９Ａに結合する。別の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ダイマー型のＣｌｅｃ９Ａに結合する。さらなる実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、グリコシル化型のＣｌｅｃ９Ａに結合し、これはモノマーであってもダイマーであってもよい。
【０２９４】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ヒトＣｌｅｃ９Ａ上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する。ある実施形態では、ヒトＣｌｅｃ９Ａは、下記のアミノ酸配列を含む：
ＭＨＥＥＥＩＹＴＳＬＱＷＤＳＰＡＰＤＴＹＱＫＣＬＳＳＮＫＣＳＧＡＣＣＬＶＭＶＩＳＣＶＦＣＭＧＬＬＴＡＳＩＦＬＧＶＫＬＬＱＶＳＴＩＡＭＱＱＱＥＫＬＩＱＱＥＲＡＬＬＮＦＴＥＷＫＲＳＣＡＬＱＭＫＹＣＱＡＦＭＱＮＳＬＳＳＡＨＮＳＳＰＣＰＮＮＷＩＱＮＲＥＳＣＹＹＶＳＥＩＷＳＩＷＨＴＳＱＥＮＣＬＫＥＧＳＴＬＬＱＩＥＳＫＥＥＭＤＦＩＴＧＳＬＲＫＩＫＧＳＹＤＹＷＶＧＬＳＱＤＧＨＳＧＲＷＬＷＱＤＧＳＳＰＳＰＧＬＬＰＡＥＲＳＱＳＡＮＱＶＣＧＹＶＫＳＮＳＬＬＳＳＮＣＳＴＷＫＹＦＩＣＥＫＹＡＬＲＳＳＶ（配列番号２６）。
【０２９５】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、特異的結合ができる。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アルファボディ；二環式ペプチド；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成または天然）分子であるターゲティング部分を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ＶＨＨなどの、単一ドメイン抗体である。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０２９８】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３００】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０３０１】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列の少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号２７〜１１２から選択される。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号１１３〜２００から選択される。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号２０１〜２８７、ＬＧＲ、およびＶＩＫから選択される。
【０３０５】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号２７、配列番号１１３、および配列番号２０１を含む。
【０３０６】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号２８、配列番号１１４、および配列番号２０２を含む。
【０３０７】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号２９、配列番号１１５、および配列番号２０２を含む。
【０３０８】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号２７、配列番号１１６、および配列番号２０３を含む。
【０３０９】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３０、配列番号１１７、および配列番号２０５を含む。
【０３１０】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３１、配列番号１１８、および配列番号２０５を含む。
【０３１１】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３２、配列番号１１９、および配列番号２０６を含む。
【０３１２】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３３、配列番号１２０、および配列番号２０７を含む。
【０３１３】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３３、配列番号１２０、および配列番号２０８を含む。
【０３１４】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３３、配列番号１２０、および配列番号２０９を含む。
【０３１５】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３４、配列番号１２１、および配列番号２１０を含む。
【０３１６】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３５、配列番号１２２、および配列番号２１１を含む。
【０３１７】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３５、配列番号１２２、および配列番号２１２を含む。
【０３１８】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３６、配列番号１２３、および配列番号２１３を含む。
【０３１９】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３７、配列番号１２４、および配列番号２１４を含む。
【０３２０】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３８、配列番号１２５、および配列番号２１４を含む。
【０３２１】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号３９、配列番号１２６、および配列番号２１４を含む。
【０３２２】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４０、配列番号１２７、および配列番号２１４を含む。
【０３２３】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４１、配列番号１２８、および配列番号２１４を含む。
【０３２４】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４２、配列番号１２８、および配列番号２１４を含む。
【０３２５】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４３、配列番号１２９、および配列番号２１５を含む。
【０３２６】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４４、配列番号１３０、およびＬＧＲを含む。
【０３２７】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４４、配列番号１３１、およびＬＧＲを含む。
【０３２８】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４４、配列番号１３２、およびＬＧＲを含む。
【０３２９】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４５、配列番号１３３、およびＬＧＲを含む。
【０３３０】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、配列番号４６、配列番号１３４、およびＶＩＫを含む。
【０３３１】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
Ｒ２ＣＨＣＬ８（配列番号２８８）；Ｒ１ＣＨＣＬ５０（配列番号２８９）；Ｒ１ＣＨＣＬ２１（配列番号２９０）；Ｒ２ＣＨＣＬ８７（配列番号２９１）；Ｒ２ＣＨＣＬ２４（配列番号２９２）；Ｒ２ＣＨＣＬ３８（配列番号２９３）；Ｒ１ＣＨＣＬ１６（配列番号２９４）；Ｒ２ＣＨＣＬ１０（配列番号２９５）；Ｒ１ＣＨＣＬ３４（配列番号２９６）；Ｒ１ＣＨＣＬ８２（配列番号２９７）；Ｒ２ＣＨＣＬ３（配列番号２９８）；Ｒ２ＣＨＣＬ６９（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９９）；Ｒ１ＣＨＣＬ５６（配列番号３００）；Ｒ２ＣＨＣＬ３２（配列番号３０１）；Ｒ２ＣＨＣＬ４９（配列番号３０２）；Ｒ２ＣＨＣＬ５３（配列番号３０３）；Ｒ２ＣＨＣＬ２２（配列番号３０４）；Ｒ２ＣＨＣＬ２５（配列番号３０５）；Ｒ２ＣＨＣＬ１８（配列番号３０６）；Ｒ１ＣＨＣＬ２３（配列番号３０７）；Ｒ１ＣＨＣＬ２７（配列番号３０８）；Ｒ２ＣＨＣＬ１３（配列番号３０９）；Ｒ２ＣＨＣＬ１４（配列番号３１０）；Ｒ２ＣＨＣＬ４２（配列番号３１１）；Ｒ２ＣＨＣＬ４１（配列番号３１２）；Ｒ２ＣＨＣＬ９４（配列番号３１３）；またはＲ２ＣＨＣＬ２７（配列番号３１４）。
【０３３２】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
１ＬＥＣ７（配列番号３１５）；１ＬＥＣ９（配列番号３１６）；１ＬＥＣ２６（配列番号３１７）；１ＬＥＣ２７（配列番号３１８）；１ＬＥＣ２８（配列番号３１９）；１ＬＥＣ３０（配列番号３２０）；１ＬＥＣ３８（配列番号３３３）；１ＬＥＣ４２（配列番号３３４）；１ＬＥＣ５１（配列番号３３５）；１ＬＥＣ６１（配列番号３３６）；１ＬＥＣ６２（配列番号３３７）；１ＬＥＣ６３（配列番号３３８）；１ＬＥＣ６４（配列番号３３９）；１ＬＥＣ７０（配列番号３４０）；１ＬＥＣ８４（配列番号３４１）；１ＬＥＣ８８（配列番号３４２）；１ＬＥＣ９１（配列番号３４３）；１ＬＥＣ９２（配列番号３４４）；１ＬＥＣ９４（配列番号３４５）；２ＬＥＣ６（配列番号３４６）；２ＬＥＣ１３（配列番号３４７）；２ＬＥＣ１６（配列番号３４８）；２ＬＥＣ２０（配列番号３４９）；２ＬＥＣ２３（配列番号３５０）；２ＬＥＣ２４（配列番号３５１）；２ＬＥＣ２６（配列番号３５２）；２ＬＥＣ３８（配列番号３５３）；２ＬＥＣ４８（配列番号３５４）；２ＬＥＣ５３（配列番号３５５）；２ＬＥＣ５４（配列番号３５６）；２ＬＥＣ５５（配列番号３５７）；２ＬＥＣ５９（配列番号３５８）；２ＬＥＣ６０（配列番号３５９）；２ＬＥＣ６１（配列番号３６０）；２ＬＥＣ６２（配列番号３６１）；２ＬＥＣ６３（配列番号３６２）；２ＬＥＣ６７（配列番号３６３）；２ＬＥＣ６８（配列番号３６４）；２ＬＥＣ７６（配列番号３６５）；２ＬＥＣ８３（配列番号３６６）；２ＬＥＣ８８（配列番号３６７）；２ＬＥＣ８９（配列番号３６８）；２ＬＥＣ９０（配列番号３６９）；２ＬＥＣ９３（配列番号３７０）；２ＬＥＣ９５（配列番号３７１）；３ＬＥＣ４（配列番号３７２）；３ＬＥＣ６（配列番号３７３）；３ＬＥＣ９（配列番号３７４）；３ＬＥＣ１１（配列番号３７５）；３ＬＥＣ１３（配列番号３７６）；３ＬＥＣ１５（配列番号３７７）；３ＬＥＣ２２（配列番号３７８）；３ＬＥＣ２３（配列番号３７９）；３ＬＥＣ２７（配列番号３８０）；３ＬＥＣ３０（配列番号３８１）；３ＬＥＣ３６（配列番号３８２）；３ＬＥＣ５５（配列番号３８３）；３ＬＥＣ５７（配列番号３８４）；３ＬＥＣ６１（配列番号３８５）；３ＬＥＣ６２（配列番号３８６）；３ＬＥＣ６６（配列番号３８７）；３ＬＥＣ６９（配列番号３８８）；３ＬＥＣ７６（配列番号３８９）；３ＬＥＣ８２（配列番号３９０）；３ＬＥＣ８９（配列番号３９１）；または３ＬＥＣ９４（配列番号３９２）。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９３）のない、配列番号３１５〜３２０および３３３〜３９２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号３９４）のない配列番号３１５〜３２０および３３３〜３９２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）のない配列番号３１５〜３２０および３３３〜３９２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９５）のない配列番号３１５〜３２０および３３３〜３９２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３３７】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、Ｔｕｌｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１６；１（７）：ｅ８７１０２で開示の抗Ｃｌｅｃ９Ａ抗体を含む。この文献の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＣｌｅｃ９Ａターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０３３９】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含む。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、本明細書で開示のＣｌｅｃ９Ａ配列のいずれかに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＣｌｅｃ９Ａ配列のいずれか１つに、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含むターゲティング部分を含み得る。
【０３４０】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０３４２】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性の：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０３４３】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０３４４】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０３４５】
種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。
【０３４６】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってよい。
【０３４７】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０３４８】
種々の実施形態では、変異は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合する本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合する本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の能力を実質的に低下させず、かつＣｌｅｃ９Ａを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。
【０３４９】
種々の実施形態では、ヒトＣｌｅｃ９Ａの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に対するＣｌｅｃ９Ａターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、ヒトＣｌｅｃ９Ａの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【０３５０】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａを結合するが、機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和する）しない。例えば、種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害、低減または中和する）しない。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープに結合する。
【０３５１】
顕著な機能調節のないこのような結合は、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するために用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、腫瘍細胞にＣｌｅｃ９Ａを介して直接的または間接的に樹状細胞を動員するために使用され得る（例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、抗Ｃｌｅｃ９Ａ抗原認識ドメインを有するターゲティング部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、 抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、樹状細胞を直接的または間接的に動員するがＣｌｅｃ９Ａ活性を機能的に調節または中和しないことが望ましい。これらの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａシグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、樹状細胞による抗原提示を強化する。例えば、種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、Ｃｌｅｃ９Ａを介して樹状細胞を直接または間接的に腫瘍細胞へ動員でき、そこでその後、腫瘍抗原が取り込まれ、強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために樹状細胞上に提示される。
【０３５３】
他の実施形態では（例えば、自己免疫または神経変性疾患の治療に関連して）、Ｃｌｅｃ９Ａターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａを結合し、中和する。例えば、種々の実施形態では、本発明の方法は、例えば、免疫応答を低減させるために、Ｃｌｅｃ９Ａシグナル伝達または発現を阻害または低減し得る。
【０３５４】
ＣＤ８ターゲティング部分
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＤ８に特異的に結合できるタンパク質ベース物質であるＣＤ８ターゲティング部分である。種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＣＤ８を機能的に調節する（例えば、部分的なまたは完全な中和を行う）ことなく、ＣＤ８に特異的に結合できるタンパク質ベース物質である。
【０３５５】
ＣＤ８は、ヘテロダイマーＩ型膜貫通型糖タンパク質であり、そのαおよびβ鎖は両方が、伸長Ｏ−グリコシル化ストークにより単回通過膜貫通ドメインに連結された免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメインおよび短い細胞質側末端から構成される。ＣＤ８α鎖の細胞質領域は、ｓｒｃチロシンキナーゼｐ５６ｌｃｋ（Ｌｃｋ）のためのドッキング部位として機能する２つのシステインモチーフを含む。対照的に、このＬｃｋ結合ドメインは、ＣＤ８β鎖には存在しないように見え、ＣＤ８β鎖が下流シグナル伝達に関与しないことを示唆している。ＣＤ８は、Ｔ細胞受容体に対する共受容体として機能し、その基本的な役割は、ＭＨＣへの共受容体結合の後、ＬｃｋをＴＣＲ−ｐＭＨＣ複合体に動員することである。このキナーゼの局所濃度の増加は、ζ鎖結合プロテインキナーゼ７０（ＺＡＰ−７０）を動員および活性化するシグナル伝達カスケードを活性化し、その後、Ｔ細胞活性化信号の増幅をもたらす。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上の１個または複数の線形エピトープ（ｌｉｎｅａｒ  ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を意味する。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上に存在する１個または複数の立体構造エピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０３５７】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然または合成類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖に結合し得る。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、モノマー型のＣＤ８α鎖またはＣＤ８β鎖に結合する。別の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、２つのＣＤ８α鎖または２つのＣＤ８β鎖からなるホモダイマー型に結合する。さらなる実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つのＣＤ８α鎖または１つのＣＤ８β鎖からなるヘテロダイマー型に結合する。
【０３５８】
ある実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ヒトＣＤ８α鎖上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、アイソフォーム１のアミノ酸配列（配列番号３９６）を含む。
【０３５９】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、アイソフォーム２のアミノ酸配列（配列番号３９７）を含む。
【０３６０】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、アイソフォーム３のアミノ酸配列（配列番号３９８）を含む。
【０３６１】
ある実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ヒトＣＤ８β鎖上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム１のアミノ酸配列（配列番号３９９）を含む。
【０３６２】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム２のアミノ酸配列（配列番号４００）を含む。
【０３６３】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム３のアミノ酸配列（配列番号４０１）を含む。
【０３６４】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム４のアミノ酸配列（配列番号４０２）を含む。
【０３６５】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム５のアミノ酸配列（配列番号４０３）を含む。
【０３６６】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム６のアミノ酸配列（配列番号４０４）を含む。
【０３６７】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム７のアミノ酸配列（配列番号４０５）を含む。
【０３６８】
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム８のアミノ酸配列（配列番号４０６）を含む。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、特異的に結合できる。種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを含む。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アルファボディ；二環式ペプチド；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成のまたは天然の）分子を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０３７２】
ある実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨを含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０３７５】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列の少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号４０７〜４７７から選択される。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号４７８〜５４８から選択される。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号５４９〜６２０から選択される。 
【０３７９】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０７、配列番号４７８、および配列番号５４９を含む。
【０３８０】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０７、配列番号４７８、および配列番号５５０を含む。
【０３８１】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０７、配列番号４７８、および配列番号５５１を含む。
【０３８２】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０７、配列番号４７９、および配列番号５４９を含む。
【０３８３】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０７、配列番号４７９、および配列番号５５０を含む。
【０３８４】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０７、配列番号４７９、および配列番号５５１を含む。
【０３８５】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０８、配列番号４７８、および配列番号５４９を含む。
【０３８６】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０８、配列番号４７８、および配列番号５５０を含む。
【０３８７】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０８、配列番号４７８、および配列番号５５１を含む。
【０３８８】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０８、配列番号４７９、および配列番号５４９を含む。
【０３８９】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０８、配列番号４７９、および配列番号５５０を含む。
【０３９０】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号４０８、配列番号４７９、および配列番号５５１を含む。
【０３９１】
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：Ｒ３ＨＣＤ２７（配列番号６２１）；Ｒ３ＨＣＤ１２９（配列番号６２２）；またはＲ２ＨＣＤ２６（配列番号６２３）。
【０３９２】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：１ＣＤＡ７（配列番号６２４）；１ＣＤＡ１２（配列番号６２５）；１ＣＤＡ１４（配列番号６２６）；１ＣＤＡ１５（配列番号６２７）；１ＣＤＡ１７（配列番号６２８）；１ＣＤＡ１８（配列番号６２９）；１ＣＤＡ１９（配列番号６３０）；１ＣＤＡ２４（配列番号６３１）；１ＣＤＡ２６（配列番号６３２）；１ＣＤＡ２８（配列番号６３３）；１ＣＤＡ３７（配列番号６３４）；１ＣＤＡ４３（配列番号６３５）；１ＣＤＡ４５（配列番号６３６）；１ＣＤＡ４７（配列番号６３７）；１ＣＤＡ４８（配列番号６３８）；１ＣＤＡ５８（配列番号６３９）；１ＣＤＡ６５（配列番号６４０）；１ＣＤＡ６８（配列番号６４１）；１ＣＤＡ７３（配列番号６４２）；１ＣＤＡ７５（配列番号６４３）；１ＣＤＡ８６（配列番号６４４）；１ＣＤＡ８７（配列番号６４５）；１ＣＤＡ８８（配列番号６４６）；１ＣＤＡ８９（配列番号６４７）；１ＣＤＡ９２（配列番号６４８）；１ＣＤＡ９３（配列番号６４９）；２ＣＤＡ１（配列番号６５０）；２ＣＤＡ５（配列番号６５１）；２ＣＤＡ２２（配列番号６５２）；２ＣＤＡ２８（配列番号６５３）；２ＣＤＡ６２（配列番号６５４）；２ＣＤＡ６８（配列番号６５５）；２ＣＤＡ７３（配列番号６５６）；２ＣＤＡ７４（配列番号６５７）；２ＣＤＡ７５（配列番号６５８）；２ＣＤＡ７７（配列番号６５９）；２ＣＤＡ８１（配列番号６６０）；２ＣＤＡ８７（配列番号６６１）；２ＣＤＡ８８（配列番号６６２）；２ＣＤＡ８９（配列番号６６３）；２ＣＤＡ９１（配列番号６６４）；２ＣＤＡ９２（配列番号６６５）；２ＣＤＡ９３（配列番号６６６）；２ＣＤＡ９４（配列番号６６７）；２ＣＤＡ９５（配列番号６６８）；３ＣＤＡ３（配列番号６６９）；３ＣＤＡ８（配列番号６７０）；３ＣＤＡ１１（配列番号６７１）；３ＣＤＡ１８（配列番号６７２）；３ＣＤＡ１９（配列番号６７３）；３ＣＤＡ２１（配列番号６７４）；３ＣＤＡ２４（配列番号６７５）；３ＣＤＡ２８（配列番号６７６）；３ＣＤＡ２９（配列番号６７７）；３ＣＤＡ３１（配列番号６７８）；３ＣＤＡ３２（配列番号６７９）；３ＣＤＡ３３（配列番号６８０）；３ＣＤＡ３７（配列番号６８１）；３ＣＤＡ４０（配列番号６８２）；３ＣＤＡ４１（ＳＥＱＩＤＮＯ：６８３）；３ＣＤＡ４８（配列番号６８４）；３ＣＤＡ５７（配列番号６８５）；３ＣＤＡ６５（配列番号６８６）；３ＣＤＡ７０（配列番号６８７）；３ＣＤＡ７３（配列番号６８８）；３ＣＤＡ８３（配列番号６８９）；３ＣＤＡ８６（配列番号６９０）；３ＣＤＡ８８（配列番号６９１）；または３ＣＤＡ９０（配列番号６９２）。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９３）のない配列番号６２４〜６９２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号３９４）のない配列番号６２１〜６９２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）のない配列番号６２１〜６９２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカーおよびＨＡタグのない配列番号６２１〜６２３（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９５）を含まない配列番号６２４〜６９２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号に記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号の表０．１、表０．２、表０．３、および／または図１Ａ〜１２Ｉに記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、配列番号６９３または６９４のＨＣＤＲ１および／または配列番号６９３または６９４のＨＣＤＲ２および／または配列番号６９３または６９４のＨＣＤＲ３および／または配列番号６９５のＬＣＤＲ１および／または配列番号６９５のＬＣＤＲ２および／または配列番号６９５のＬＣＤＲ３を含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＣＤ８ターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０４００】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、本明細書で開示のＣＤ８配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含むターゲティング部分を含む。例えば、ＣＤ８ターゲティング部分は、本明細書で開示のＣＤ８配列のいずれか１つに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＣＤ８配列のいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含むターゲティング部分を含み得る。
【０４０１】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、本明細書で開示のＣＤ８配列のいずれか１つに対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、本明細書で開示のＣＤ８配列のいずれか１つに対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０４０３】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０４０４】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０４０５】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０４０６】
種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎ  α−メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。
【０４０７】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってよい。
【０４０８】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において、周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０４０９】
種々の実施形態では、変異は、ＣＤ８に特異的に結合するＣＤ８ターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＣＤ８を機能的に調節することなくＣＤ８に特異的に結合するＣＤ８ターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。
【０４１０】
種々の実施形態では、ヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび／または会合型を含む）に対するＣＤ８ターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付け得る。種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、ヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび／または会合型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【０４１１】
種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＣＤ８を結合するが、これを機能的に調節しない。例えば、種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、単に抗原を標的とするのみであり、抗原を機能的に調節することは実質的に行わず、例えば、抗原が有する生物学的作用を阻害する、低下させる、または中和することは実質的に行わない。種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
【０４１２】
このような非機能調節（例えば、非中和）結合は、ＣＤ８ターゲティング部分が直接的にまたは間接的に活性免疫細胞をエフェクター抗原を介して必要な部位に動員するのに用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、ＣＤ８ターゲティング部分を使って、直接的または間接的にＣＤ８を介して細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞に動員し得る（例えば、ＣＤ８結合物質は、抗ＣＤ８抗原認識ドメインを有するターゲティング部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、ＣＤ８発現細胞傷害性Ｔ細胞を直接的または間接的に動員するが、ＣＤ８活性を中和しないのが望ましい。これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
【０４１３】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２に特異的に結合できるタンパク質ベース物質であるＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２を結合するが、機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和する）しない。例えば、種々の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害、低減または中和する）しない。種々の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
【０４１４】
ＰＤ−１ターゲティング部分
プログラム細胞死タンパク質１はＰＤ−１および表面抗原分類２７９（ＣＤ２７９）としても知られる、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージ上で主に発現される細胞表面受容体である。ＰＤ−１は、そのリガンド（ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２）の結合時に、抗原受容体シグナル伝達を負に制御することが示されている。ＰＤ−１は、免疫系の下方制御およびＴ細胞炎症活性の抑制による自己寛容の促進において重要な役割を果たす。ＰＤ−１は、リガンド結合に関与するＩｇ可変型（Ｖ型）ドメインおよびシグナル伝達分子の結合に関与する細胞質側末端を含むＩ型膜貫通型糖タンパク質である。ＰＤ−１の細胞質側末端は、２つのチロシンベースシグナル伝達モチーフ、ＩＴＩＭ（免疫受容抑制性チロシンモチーフ）およびＩＴＳＭ（免疫受容体チロシン依存性スイッチモチーフ）を含む。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＰＤ−１上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ−１上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＰＤ−１上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ−１上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＰＤ−１の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、任意の形態のヒトＰＤ−１に結合し得る。ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、リン酸化型のＰＤ−１に結合する。
【０４１７】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ヒトＰＤ−１上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ヒトＰＤ−１は、下記のアミノ酸配列（下線はシグナルペプチド）を含む：
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号６９６）。
【０４１８】
別の実施形態では、ヒトＰＤ−１は、アミノ端末シグナルペプチドのない配列番号６９６のアミノ酸配列を含む。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、特異的結合ができる。種々の実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを含む。
【０４２０】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗体の誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アルファボディ；二環式ペプチド；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成のまたは天然の）分子を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０４２２】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０４２３】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４２４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨを含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０４２５】
種々の実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、ＰＤ−１結合物質は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。
【０４２６】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号６９７〜７１０から選択される。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号７１１〜７２４から選択される。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号７２５〜７３８から選択される。
種々の例示的実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
２ＰＤ２３（配列番号７３９）；２ＰＤ２６（配列番号７４０）；２ＰＤ９０（配列番号７４１）；２ＰＤ−１０６（配列番号７４２）；２ＰＤ−１６（配列番号７４３）；２ＰＤ７１（配列番号７４４）；２ＰＤ−１５２（配列番号７４５）；２ＰＤ−１２（配列番号７４６）；３ＰＤ５５（配列番号７４７）；３ＰＤ８２（配列番号７４８）；２ＰＤ８（配列番号７４９）；２ＰＤ２７（配列番号７５０）；２ＰＤ８２（配列番号７５１）；または３ＰＤ３６（配列番号７５２）。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９３）のない配列番号７３９〜７５２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号３９４）のない配列番号７３９〜７５２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４３１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）のない配列番号７３９〜７５２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９５）を含まない配列番号７３９〜７５２（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４３３】
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＰＤ−１ターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。いくつかの実施形態では、ＰＤ１ターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ−３４７５、キイトルーダ）、またはそのフラグメントを含む。ペムブロリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９（２）：１３４−４４，ＵＳ  ８，３５４，５０９、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号７５３のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号７５４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３５】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体、ニボルバム（別名ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８、オプジーボ）、またはそのフラグメントを含む。ＰＤ−１に特異的に結合するニボルバム（クローン５Ｃ４）およびその他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ニボルバムまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号７５５のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号７５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３６】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ−０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ−１）、またはそのフラグメントを含む。ピディリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ−Ｉモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５〜１８（本出願の配列番号７５７〜７６０）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；および／または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０〜２４（本出願の配列番号７６１〜７６５）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０４３７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号７６０）を含む軽鎖および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２（配列番号７６３）を含む重鎖を含む。
【０４３８】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＡＭＰ−５１４（別名ＭＥＤＩ−０６８０）を含む。
【０４３９】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ｐｄ−ｌ２−Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ−２２４を含み、これは、国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４（本出願の配列番号７６６）を含むターゲティングドメインおよび／または国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３（本出願の配列番号７６７）を含むＢ７−ＤＣ融合タンパク質を含み得る。
【０４４０】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号または米国特許第８，９０７，０５３号に開示のいずれかの他のペプチドを含む。例えば、ターゲティング部分は、ＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８または配列番号４９）を含み得、これは、下記配列を有する：
【化２】
2021519089.tif 000015
【０４４１】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号７６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４４２】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号７７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４４３】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ＰＤ−１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号７７３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４４４】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ−１に対するＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ−１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７〜３５１（配列番号７７４〜７７８）を含む。
【０４４５】
ある実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のように、抗ＰＤ−１抗体またはそのフラグメントのいずれか１種を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５〜２９（本出願の配列番号７７９〜７８３）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０〜３３（本出願の配列番号７８４〜７８７）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４４６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ターゲティング部分は、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ  Ｌｔｄ．）から選択されるＰＤ−１に対する抗体、またはその抗体フラグメントである。
【０４４７】
一実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ−１に結合し、シグナル伝達部分は、野生型ＩＦＮαまたは改変型ＩＦＮαである。いくつかの実施形態では、Ｆｃキメラタンパク質は、図４Ａ〜４Ｄに示す構造の１つであり、ターゲティング部分はＰＤ−１に結合し、シグナル伝達部分は野生型ＩＦＮαである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ−１に結合し（例えば、ｓｃＦｖ）、シグナル伝達部分は、野生型ＩＦＮα２である。
【０４４８】
ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分である。プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、表面抗原分類２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７−Ｈ１）としても知られ、免疫系の抑制に大きな役割を果たすと推測されている１型膜貫通タンパク質である。ＰＤ−Ｌ１は、ＬＰＳおよびＧＭ−ＣＳＦ処理に応答してマクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）上で、ならびにＴＣＲおよびＢ細胞受容体シグナル伝達時にＴ細胞およびＢ細胞上で発現上昇される。
【０４４９】
種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ＰＤ−Ｌ１上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ−Ｌ１上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＰＤ−Ｌ１上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ−Ｌ１上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０４５０】
種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ヒトＰＤ−Ｌ１の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、任意の形態のヒトＰＤ−Ｌ１に結合し得る。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、リン酸化型のＰＤ−Ｌ１に結合する。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、アセチル化型のＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０４５１】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ヒトＰＤ−Ｌ１上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ヒトＰＤ−Ｌ１は、下記のアミノ酸配列（下線はシグナルペプチド）を含む：
アイソフォーム１：
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号７８８）；
アイソフォーム２：
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号７８９）；または
アイソフォーム３：
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＤ（配列番号７９０）。
【０４５２】
種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、特異的結合ができる。種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗体を含む。
【０４５３】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アルファボディ；二環式ペプチド；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成または天然）分子を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０４５５】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０４５６】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨを含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０４５８】
種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。
【０４５９】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号７９１〜８２１から選択される。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号８２２〜８５２から選択される。
【０４６１】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号８５３〜８８３から選択される。
【０４６２】
種々の例示的実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＬＩＧ２（配列番号８８４）；２ＬＩＧ３（配列番号８８５）；２ＬＩＧ１６（配列番号８８６）；２ＬＩＧ２２（配列番号８８７）；２ＬＩＧ２７（配列番号８８８）；２ＬＩＧ２９（配列番号８８９）；２ＬＩＧ３０（配列番号８９０）；２ＬＩＧ３４（配列番号８９１）；２ＬＩＧ３５（配列番号８９２）；２ＬＩＧ４８（配列番号８９３）；２ＬＩＧ６５（配列番号８９４）；２ＬＩＧ８５（配列番号８９５）；２ＬＩＧ８６（配列番号８９６）；２ＬＩＧ８９（配列番号８９７）；２ＬＩＧ９７（配列番号８９８）；２ＬＩＧ９９（配列番号８９９）；２ＬＩＧ１０９（配列番号９００）；２ＬＩＧ１２７（配列番号９０１）；２ＬＩＧ１３９（配列番号９０２）；２ＬＩＧ１７６（配列番号９０３）；２ＬＩＧ１８９（配列番号９０４）；３ＬＩＧ３（配列番号９０５）；３ＬＩＧ７（配列番号９０６）；３ＬＩＧ８（配列番号９０７）；３ＬＩＧ９（配列番号９０８）；３ＬＩＧ１８（配列番号９０９）；３ＬＩＧ２０（配列番号９１０）；３ＬＩＧ２８（配列番号９１１）；３ＬＩＧ２９（配列番号９１２）；３ＬＩＧ３０（配列番号９１３）；または３ＬＩＧ３３（配列番号９１４）。
【０４６３】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９３）のない配列番号８８４〜９１４（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号３９４）を含まない配列番号８８４〜９１４（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）を含まない配列番号８８４〜９１４（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９５）を含まない配列番号８８４〜９１４（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４６７】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ−Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０受容体に対する結合を阻止する。本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は、国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９１５のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号９１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４６８】
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４（配列番号９１７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３（配列番号９１８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 
【０４６９】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号９１９のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号９２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４７０】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２１のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号９２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４７１】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＢＭＳ−９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ−１１０５）、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＢＭＳ−９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７２】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。  
【０４７３】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７４】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７５】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７６】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７７】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７８】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４７９】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８０】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８１】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｅ１２またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８２】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｆ４またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８３】
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２Ｇ１１またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８４】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｂ６、またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８５】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８６】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４〜３８（配列番号９５３〜９５７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９〜４２（配列番号９５８〜９６１）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４８７】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．７Ａ４またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２（配列番号９６２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７（配列番号９６３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８８】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．９Ｄ１０またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２（配列番号９６４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１７（配列番号９６５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４８９】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．１４Ｈ９またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２（配列番号９６６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７（配列番号９６７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４９０】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．２０Ａ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２（配列番号９６８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７（配列番号９６９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４９１】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３．１５Ｇ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２（配列番号９７０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４７（配列番号９７１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４９２】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３．１８Ｇ１またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２（配列番号９７２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７（配列番号９７３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４９３】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２（配列番号９７４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７（配列番号９７５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０４９４】
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２（配列番号９７６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７（配列番号９７７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。  
【０４９５】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８（それぞれ、配列番号９７８、９７９、９８０、９８１、９８２、９８３、９８４、９８５、および９８６）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６（それぞれ、配列番号９８７、９８８、９８９、９９０、９９１、９９２、９９３、９９４、および９９５）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４９６】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６（それぞれ、配列番号９９６、９９７、９９８、９９９、１０００、１００１、１００２、１００３、１００４、１００５、１００６、および１００７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８（それぞれ、配列番号１００８、１００９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、１０１５、１０１６、１０１７、１０１８、および１０１９）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４９７】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８、５０、８２、および８６（それぞれ、配列番号１０２０、１０２１、１０２２、および１０２３）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８（それぞれ、配列番号１０２４、１０２５、１０２６、１０２７、１０２８、１０２９、１０３０、１０３１、および１０３２）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４９８】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ−Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０（配列番号１０３３）のアミノ酸配列を含む重鎖領域；および／または国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１（配列番号１０３４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されているように、ＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−４１２２、ＣＮＣＭ  Ｉ−４０８０およびＣＮＣＭ  Ｉ−４０８１により入手可能なハイブリドーマから得ることができるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４９９】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１抗体に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４〜３９９（それぞれ、配列番号１０３５〜１０４０）を含む。
【０５００】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ−Ｌ１に結合し、シグナル伝達部分は、野生型ＩＦＮαまたは改変型ＩＦＮαである。いくつかの実施形態では、Ｆｃキメラタンパク質は、図４Ａ〜４Ｄに示す形式の１つであり、ターゲティング部分はＰＤ−Ｌ１に結合し、シグナル伝達部分は野生型ＩＦＮαである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ−Ｌ１に結合し（例えば、ｓｃＦｖ）、シグナル伝達部分は、野生型ＩＦＮα２である。
【０５０１】
ＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＰＤ−Ｌ２に対する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＰＤ−Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、ＰＤ−Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質を含む。
【０５０２】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ−Ｌ２に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ−Ｌ２に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９〜４５５（それぞれ、配列番号１０４１〜１０４７）を含む。
【０５０３】
ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３〜４７（それぞれ、配列番号１０４８〜１０５２）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８〜５１（それぞれ、配列番号１０５３〜１０５６）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０５０４】
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０５０５】
種々の実施形態では、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２を標的とする配列を含む。
【０５０６】
種々の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２配列のいずれか１つに対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む結合物質を含む。種々の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む結合物質を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０５０７】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０５０８】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０５０９】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０５１０】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０５１１】
種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。
【０５１２】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってよい。
【０５１３】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０５１４】
種々の実施形態では、変異は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２に特異的に結合するＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２に特異的に結合するＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分の能力を実質的に低下させず、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２を機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和する）しない。
【０５１５】
種々の実施形態では、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に対するＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【０５１６】
種々の実施形態では、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２ターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれかの組み合わせを含み得る。
【０５１７】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２を選択的に結合するまたは標的にする追加の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチドまたは融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００号で開示されている。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
ＳＩＲＰ１αターゲティング部分
【０５１８】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、シグナル調節タンパク質α１（ＳＩＲＰ１α）を選択的に結合する。ＳＩＲＰ１α（ＳＩＲＰαとしても知られる）は、阻害性（ＳＩＲＰα）、活性化（ＳＩＲＰβ）、非シグナル伝達（ＳＩＲＰγ）および可溶性（ＳＩＲＰδ）メンバーを包含する細胞免疫受容体ファミリーに属する。ＳＩＲＰ１αは、主に、マクロファージ、顆粒球、骨髄細胞（ＤＣ）、マスト細胞、および造血幹細胞を含むそれらの前駆物質で発現される。ＳＩＲＰ１αは、広範に発現した膜貫通型糖タンパク質ＣＤ４７と相互作用して食作用を調節する抑制性受容体として作用する。特に、標的細胞上に発現されるＣＤ４７によるマクロファージ上のＳＩＲＰ１αの結合は、標的細胞の食作用を負に調節する抑制シグナルを生成する。
【０５１９】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、マクロファージ上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識し、結合する。
【０５２０】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、単球上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識し、結合する。
【０５２１】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＴＡＭ（腫瘍関連マクロファージ）上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識し、結合する。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、限定されないが、ｃＤＣ２およびｐＤＣを含む樹状細胞上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識し、結合する。
【０５２２】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１α上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＳＩＲＰ１α上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＳＩＲＰ１α上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０５２３】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αの完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合する。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１αはヒトＳＩＲＰ１αである。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、任意の形態のヒトＳＩＲＰ１αに結合し得る。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、モノマー型のＳＩＲＰ１αに結合する。別の実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ダイマー型のＳＩＲＰ１αに結合する。
【０５２４】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ヒトＳＩＲＰ１α上に存在する１個または複数のエピトープを認識する認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、シグナルペプチド配列を有するヒトＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを含む。シグナルペプチド配列を有する代表的ヒトＳＩＲＰ１αポリペプチドは、配列番号１０５７である。
【０５２５】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、シグナルペプチド配列のないヒトＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを含む。シグナルペプチド配列のない代表的ヒトＳＩＲＰ１αポリペプチドは、配列番号１０５８である。
【０５２６】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ヒトＳＩＲＰ１αアイソフォーム２（配列番号１０５９）をコードするポリペプチドを認識する認識ドメインを含む。
【０５２７】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ヒトＳＩＲＰ１αアイソフォーム４（配列番号１０６０）をコードするポリペプチドを認識する認識ドメインを含む。
【０５２８】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの、特異的結合の可能な任意のタンパク質ベース物質であり得る。
【０５２９】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、例えば、限定なしに、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アルファボディ；二環式ペプチド；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；アフィマー；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成のまたは天然の）分子を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０５３０】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物由来のＶＨＨ、または設計されたＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０５３１】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０５３２】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０５３３】
例えば、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、ＶＨＨ、または融合タンパク質の内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合する抗体またはこれらの誘導体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合するラクダ類重鎖抗体（ＶＨＨ）を含む。
【０５３４】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。
【０５３５】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αを認識およびそれに結合することが既知である、重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれかの組み合わせを含み得る。
【０５３６】
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＳＩＲＰ１αターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０５３７】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、本明細書で開示のＳＩＲＰ１α配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、本明細書で開示のＳＩＲＰ１α配列のいずれかに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＳＩＲＰ１α配列のいずれか１つに、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含む。
【０５３８】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αを認識し、結合することが既知のいずれかのターゲティング部分配列に対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αを認識し、結合することが既知のいずれかのターゲティング部分配列に対して、１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、２０個、３０個、４０個、または５０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０５３９】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０５４０】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０５４１】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０５４２】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０５４３】
種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。
【０５４４】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってよい。
【０５４５】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０５４６】
種々の実施形態では、変異は、ＳＩＲＰ１αを特異的に認識し、それに結合するＳＩＲＰ１αターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合するＳＩＲＰ１αターゲティング部分の能力を実質的に低下させず、また、ＳＩＲＰ１αを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。
【０５４７】
種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１αの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体に対するＳＩＲＰ１αターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、ＳＩＲＰ１αの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【０５４８】
種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＳＩＲＰ１αに結合するが、これを機能的に調節しない。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、抗原を単に標的とし、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、実質的に阻害、低減または中和する）しない。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
【０５４９】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＳＩＲＰ１αを結合するが、しかし、機能的に調節する。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、抗原、すなわち、ＳＩＲＰ１αを標的とし、かつ抗原が有する生物学的作用を機能的に調節する（例えば、阻害、低減または中和する）。このような結合は、機能的調節と共に、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するのに用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。
【０５５０】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αターゲティング部分は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、腫瘍細胞へＳＩＲＰ１αを介して直接的または間接的にマクロファージを動員するために使用され得る（例えば、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、抗ＳＩＲＰ１α抗原認識ドメインを有するターゲティング部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。証拠は、腫瘍細胞がＣＤ４７を頻繁に上方制御し、それは食作用を回避するようにＳＩＲＰ１αを関与させることを示す。従って、種々の実施形態では、直接または間接的にマクロファージを腫瘍細胞に動員し、ＳＩＲＰ１αの阻害活性を阻害、低減、または中和し、それによりマクロファージによる腫瘍細胞の食作用を生じさせることが望ましいであろう。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージによる腫瘍細胞または任意の他の望ましくない細胞の食作用を強化する。
【０５５１】
ＳＩＲＰアルファターゲティング部分は、国際公開第２００１４０３０７Ａ１号、国際公開第２０１３０５６３５２Ａ１号、国際公開第２０１５１３８６００Ａ２号、国際公開第２０１７１７８６５３Ａ２号、国際公開第２０１８０５７６６９Ａ１号、国際公開第２０１８１０７０５８Ａ１号、国際公開第２０１８１９０７１９Ａ２号、国際公開第２０１９０２３３４７Ａ１号に記載の抗体のＣＤＲを含み得る。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５５２】
ＦＡＰターゲティング部分
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、セリンプロテアーゼファミリーに属する１７０ｋＤａの黒色腫膜結合型ゼラチナーゼである。ＦＡＰは、上皮癌の反応性間質線維芽細胞、回復期創傷の肉芽組織、および骨および軟組織肉腫の悪性細胞で選択的に発現される。ＦＡＰは、発達、組織修復、および上皮発癌の間の線維芽細胞成長または上皮−間葉系相互作用の制御に関与すると考えられている。
【０５５３】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＦＡＰに特異的に結合できるタンパク質ベース物質であるＦＡＰターゲティング部分である。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＦＡＰの機能的調節（例えば、部分的または完全な中和）を行わずにＦＡＰに特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。
【０５５４】
いくつかの実施形態では、線維芽細胞ターゲティング部分は、Ｆ２線維芽細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、線維芽細胞ターゲティング部分は、Ｆ２線維芽細胞の微小環境を直接または間接的に変える。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞をＦ１線維芽細胞に直接または間接的に分極させる。
【０５５５】
Ｆ２線維芽細胞は、腫瘍形成促進（または腫瘍促進）癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）（ａ／ｋ／ａ  ＩＩ型−ＣＡＦ）を指す。Ｆ１線維芽細胞は、腫瘍抑制性ＣＡＦ（ａ／ｋ／ａ  Ｉ型−ＣＡＦ）を指す。分極は、細胞の表現型を変更すること、例えば、腫瘍原性Ｆ２線維芽細胞を腫瘍抑制性Ｆ１線維芽細胞に変更することを指す。
【０５５６】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＦＡＰマーカーを標的にする。
【０５５７】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＦＡＰ上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する結合物質を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、ＦＡＰ上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＦＡＰ上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＦＡＰ上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０５５８】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＦＡＰの完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合できる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＦＡＰに結合できる。ある実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、モノマー型のＦＡＰに結合する。別の実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ダイマー型のＦＡＰに結合する。さらなる実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、グリコシル化型のＦＡＰに結合し、これはモノマーであってもダイマーであってもよい。
【０５５９】
ある実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ヒトＦＡＰ上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰは、配列番号１０６１のアミノ酸配列を含む。
【０５６０】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、特異的結合ができる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを含む。
【０５６１】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、抗体の誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アルファボディ；二環式ペプチド；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成のまたは天然の）分子を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０５６２】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物から誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【０５６３】
ある実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
【０５６４】
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示の完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０５６５】
例えば、限定されないが、いくつかの実施形態では、ヒトＶＨＨ  ＦＡＰターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＨＦＡ４４（配列番号１０６２）；２ＨＦＡ５２（配列番号１０６３）；２ＨＦＡ１１（配列番号１０６４）；２ＨＦＡ４（配列番号１０６５）；２ＨＦＡ４６（配列番号１０６６）；２ＨＦＡ１０（配列番号１０６７）；２ＨＦＡ３８（配列番号１０６８）；２ＨＦＡ２０（配列番号１０６９）；２ＨＦＡ５（配列番号１０７０）；２ＨＦＡ１９（配列番号１０７１）；２ＨＦＡ２（配列番号１０７２）；２ＨＦＡ４１（配列番号１０７３）；２ＨＦＡ４２（配列番号１０７４）；２ＨＦＡ１２（配列番号１０７５）；２ＨＦＡ２４（配列番号１０７６）；２ＨＦＡ６７（配列番号１０７７）；２ＨＦＡ２９（配列番号１０７８）；２ＨＦＡ５１（配列番号１０７９）；２ＨＦＡ６３（配列番号１０８０）；２ＨＦＡ６２（配列番号１０８１）；２ＨＦＡ２６（配列番号１０８２）；２ＨＦＡ２５（配列番号１０８３）；２ＨＦＡ１（配列番号１０８４）；２ＨＦＡ３（配列番号１０８５）；２ＨＦＡ７（配列番号１０８６）；２ＨＦＡ３１（配列番号１０８７）；２ＨＦＡ６（配列番号１０８８）；２ＨＦＡ５３（配列番号１０８９）；２ＨＦＡ９（配列番号１０９０）；２ＨＦＡ７３（配列番号１０９１）；２ＨＦＡ５５（配列番号１０９２）；２ＨＦＡ７１（配列番号１０９３）；２ＨＦＡ６０（配列番号１０９４）；２ＨＦＡ６５（配列番号１０９５）；２ＨＦＡ４９（配列番号１０９６）；２ＨＦＡ５７（配列番号１０９７）；２ＨＦＡ２３（配列番号１０９８）；２ＨＦＡ３６（配列番号１０９９）；２ＨＦＡ１４（配列番号１１００）；２ＨＦＡ４３（配列番号１１０１）；および２ＨＦＡ５０（配列番号１１０２）。
【０５６６】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９３）のない配列番号１０６２〜１１０２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５６７】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号３９４）を含まない配列番号１０６２〜１１０２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５６８】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）を含まない配列番号１０６２〜１１０２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５６９】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９５）を含まない配列番号１０６２〜１１０２（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５７０】
例えば、限定されないが、いくつかの実施形態では、ヒトＶＨＨ  ＦＡＰターゲティング部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＨＦＡ４４（配列番号１１０３）；２ＨＦＡ５２（配列番号１１０４）；２ＨＦＡ１１（配列番号１１０５）；２ＨＦＡ４（配列番号１１０６）；２ＨＦＡ４６（配列番号１１０７）；２ＨＦＡ１０（配列番号１１０８）；２ＨＦＡ３８（配列番号１１０９）；２ＨＦＡ２０（配列番号１１１０）；２ＨＦＡ５（配列番号１１１１）；２ＨＦＡ１９（配列番号１１１２）；２ＨＦＡ２（配列番号１１１３）；２ＨＦＡ４１（配列番号１１１４）；２ＨＦＡ４２（配列番号１１１５）；２ＨＦＡ１２（配列番号１１１６）；２ＨＦＡ２４（配列番号１１１７）；２ＨＦＡ６７（配列番号１１１８）；２ＨＦＡ２９（配列番号１１１９）；２ＨＦＡ５１（配列番号１１２０）；２ＨＦＡ６３（配列番号１１２１）；２ＨＦＡ６２（配列番号１１２２）；２ＨＦＡ２６（配列番号１１２３）；２ＨＦＡ２５（配列番号１１２４）；２ＨＦＡ１（配列番号１１２５）；２ＨＦＡ３（配列番号１１２６）；２ＨＦＡ７（配列番号１１２７）；２ＨＦＡ３１（配列番号１１２８）；２ＨＦＡ６（配列番号１１２９）；２ＨＦＡ５３（配列番号１１３０）；２ＨＦＡ９（配列番号１１３１）；２ＨＦＡ７３（配列番号１１３２）；２ＨＦＡ５５（配列番号１１３３）；２ＨＦＡ７１（配列番号１１３４）；２ＨＦＡ６０（配列番号１１３５）；２ＨＦＡ６５（配列番号１１３６）；２ＨＦＡ４９（配列番号１１３７）；２ＨＦＡ５７（配列番号１１３８）；２ＨＦＡ２３（配列番号１１３９）；２ＨＦＡ３６（配列番号１１４０）；２ＨＦＡ１４（配列番号１１４１）；２ＨＦＡ４３（配列番号１１４２）；および２ＨＦＡ５０（配列番号１１４３）。
【０５７１】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨである結合物質を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０５７２】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。
【０５７３】
いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰターゲティング部分は、配列番号１１４４〜１１７２から選択されるＣＤＲ１配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰターゲティング部分は、配列番号１１７３〜１２０１から選択されるＣＤＲ２配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰターゲティング部分は、配列番号１２０２〜１２３２から選択されるＣＤＲ３配列を含む。
【０５７４】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、本明細書で開示の選択された任意のＦＡＰアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、本明細書で開示の選択された任意のＦＡＰアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％の同一性を有する。
【０５７５】
種々の例示的実施形態では、マウスＦＡＰターゲティング部分は、シブロツズマブのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０５７６】
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＦＡＰターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、または他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０５７７】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、本明細書で開示のＦＡＰ配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含む。例えば、ＦＡＰターゲティング部分は、本明細書で開示のＦＡＰ配列のいずれかに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＦＡＰ配列のいずれか１つに、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含み得る。
【０５７８】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０５７９】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０５８０】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０５８１】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０５８２】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０５８３】
いくつかの実施形態では、置換は非古典的アミノ酸を含む。例示非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。
【０５８４】
いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、ＦＡＰターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中に存在する。別の実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中に存在する。
【０５８５】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０５８６】
いくつかの実施形態では、変異は、ＦＡＰに特異的に結合するＦＡＰターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。いくつかの実施形態では、変異は、ＦＡＰに特異的に結合する本発明のＦＡＰターゲティング部分の能力を実質的に低下させず、ＦＡＰを機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和する）しない。
【０５８７】
いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に対するＦＡＰターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ヒトＦＡＰの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に、約１μＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【０５８８】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＦＡＰを結合するが、機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和する）しない。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害、低減または中和する）しない。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
【０５８９】
顕著な機能調節のないこのような結合は、ＦＡＰターゲティング部分がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するために用いられる方法を含む、本技術のいくつかの実施形態で使用される。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、ＦＡＰを介して直接的または間接的に樹状細胞を腫瘍細胞に動員するために使用され得る（例えば、ＦＡＰターゲティング部分は、抗ＦＡＰ抗原認識ドメインを有する結合物質および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、樹状細胞を直接的または間接的に動員するがＦＡＰ活性を機能的に調節または中和しないことが望ましい。これらの実施形態では、ＦＡＰシグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
【０５９０】
いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、樹状細胞による抗原提示を強化する。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、ＦＡＰを介して樹状細胞を腫瘍細胞に直接または間接的に動員でき、その後、腫瘍抗原が取り込まれ、強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために、樹状細胞上に提示される。
【０５９１】
他の実施形態では（例えば、癌、自己免疫または神経変性疾患の治療に関連して）、ＦＡＰターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＦＡＰを結合し中和する結合物質を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、例えば、免疫応答を低減させるために、ＦＡＰシグナル伝達または発現を阻害または低減し得る。
【０５９２】
ＸＣＲ１ターゲティング部分
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＸＣＲ１に特異的に結合できるＸＣＲ１ターゲティング部分である。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、ＸＣＲ１を機能的に調節する（例えば、部分的なまたは完全な中和を行う）ことなく、ＸＣＲ１に特異的に結合できるタンパク質ベース物質である。ＸＣＲ１は、Ｇタンパク質共役受容体スーパーファミリーに属するケモカイン受容体である。ファミリーメンバーは、７回膜貫通ドメインおよび多数の保存アミノ酸の存在を特徴とする。ＸＣＲ１は、ＲＢＳ１１およびＭＩＰ１−アルファ／ＲＡＮＴＥＳ受容体に最も密接に関係している。ＸＣＲ１は、細胞内カルシウムイオンレベルを高めることによりシグナルを伝達する。ＸＣＲ１は、ＸＣＬ１およびＸＣＬ２（またはリンホタクチン−１および−２）に対する受容体である。
【０５９３】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、ＸＣＲ１上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、ＸＣＲ１上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＸＣＲ１上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＸＣＲ１上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０５９４】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、ＸＣＲ１の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合できる。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＸＣＲ１に結合し得る。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、モノマー型のＸＣＲ１に結合する。別の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、ダイマー型のＸＣＲ１に結合する。さらなる実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、グリコシル化型のＸＣＲ１に結合し、これはモノマーであってもダイマーであってもよい。
【０５９５】
ある実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、ヒトＸＣＲ１上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ヒトＸＣＲ１は、配列番号１２３３のアミノ酸配列を含む。
【０５９６】
種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、特異的結合ができる。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを含む。
【０５９７】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；アフィマー；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アルファボディ；二環式ペプチド；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（合成のまたは天然の）分子を含む。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０５９８】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物から誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＶＨＨを含む。
【０５９９】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨを含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０６００】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。
【０６０１】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書で記載のＸＣＲ１ターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、または他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０６０２】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、本明細書で開示のＸＣＲ１配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含む。例えば、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、本明細書で開示のＸＣＲ１配列のいずれかに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＸＣＲ１配列のいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含み得る。
【０６０３】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０６０４】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０６０５】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０６０６】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０６０７】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０６０８】
種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。
【０６０９】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってよい。
【０６１０】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０６１１】
種々の実施形態では、変異は、ＸＣＲ１に特異的に結合するＸＣＲ１ターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＸＣＲ１に特異的に結合するＸＣＲ１ターゲティング部分の能力を実質的に低下させず、また、ＸＣＲ１を機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。
【０６１２】
種々の実施形態では、ヒトＸＣＲ１の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に対するＸＣＲ１ターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヒトＸＣＲ１の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合するターゲティング部分を含む。
【０６１３】
種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＸＣＲ１に結合するが、機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和する）しない。例えば、種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害、低減または中和する）しない。種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープに結合する。
【０６１４】
顕著な機能調節のないこのような結合は、ＸＣＲ１ターゲティング部分がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するために用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、腫瘍細胞にＸＣＲ１を介して直接的または間接的に樹状細胞を動員するために使用され得る（例えば、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、抗ＸＣＲ１抗原認識ドメインを有する結合物質および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、樹状細胞を直接的または間接的に動員するがＸＣＲ１活性を機能的に調節または中和しないことが望ましい。これらの実施形態では、ＸＣＲ１シグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
【０６１５】
いくつかの実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、樹状細胞による抗原提示を強化する。例えば、種々の実施形態では、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、腫瘍細胞にＸＣＲ１を介して直接または間接的に樹状細胞を動員でき、その後、腫瘍抗原が取り込まれ、強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために、樹状細胞上に提示される。
【０６１６】
他の実施形態では（例えば、癌、自己免疫または神経変性疾患の治療に関連して）、ＸＣＲ１ターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＸＣＲ１を結合し、中和する結合物質を含む。例えば、種々の実施形態では、本発明の方法は、例えば、免疫応答を低減させるために、ＸＣＲ１シグナル伝達または発現を阻害または低減し得る。
【０６１７】
非細胞構造ターゲティング部分
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分の標的（例えば、抗原または受容体）は、非細胞構造の一部である。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞マーカーであり、これらは、限定されないが、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、などのＤＮＡまたはＲＮＡを含む、核酸またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含む。
【０６１８】
いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれと関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結および支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に別々の成分の多数の集まりからなる。これらのＥＣＭ成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識するターゲティング部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。
【０６１９】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性プロテオグリカン単位は、１つまたは複数の共有結合グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは、浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和した状態に保持する。プロテオグリカンはまた、成長因子を捕捉し、ＥＣＭ内に貯蔵し得る。本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、ターゲティング部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。
【０６２０】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭ繊維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維は、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在性細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は、組織に弾性を与え、組織が必要に応じ伸縮し、その後、元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。
【０６２１】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１種または複数のＥＣＭタンパク質を認識する。
【０６２２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種のメンバー：テネイシン−Ｃ、テネイシン−Ｒ、テネイシン−Ｘ、およびテネイシン−Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列中に順序づけられたいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変動に関連付けられる。アイソフォームバリアントはまた、特にテネイシン−Ｃに対して存在する。２７種を超えるテネイシン−Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシン−ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン−Ｒはまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン−Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン−Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン−Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンタンパク質上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。
【０６２３】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はテネイシン−ＣＡ１を認識する。
【０６２４】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンを認識し、結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結し、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能とする糖タンパク質である。インテグリンに結合時には、フィブロネクチンは折り畳みをほどいて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン上の１個または複数のエピトープを認識する。例示的実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害に関連する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を癌細胞を含む疾患細胞に向けるのに使用し得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。種々の実施形態では、このようなターゲティング部分は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞に向けるのに使用し得る。
【０６２５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中に見つかることが多い、もう１つのタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成され、これにより、フィブリンを重合させる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。
【０６２６】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは、基底膜の主要成分であり、細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、β鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。
【０６２７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、ラミニンと、基底膜中のコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン−１およびナイドジェン−２を含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェン−１および／またはナイドジェン−２上のエピトープを認識する。
【０６２８】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０６２９】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。
【０６３０】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙中に脱落する。
【０６３１】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アテローム斑と関連する１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維−脂質（線維−脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ−ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ−ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を取り込んだ（ｌｉｐｉｄ−ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、増大した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量を有する脂質を取り込んだ細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに壊死細胞片を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出）を含み、これは、空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の内膜下にも局在し、壁の肥厚化および増殖、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化した狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を取り込んだ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種または複数の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、壊死細胞片は、核酸、例えば、死細胞から放出される ＤＮＡまたはＲＮＡである。
【０６３２】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中に局在する１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、ターゲティング部分は、ペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。ペプチドアミロイドベータは、アミロイド斑の主要な成分である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。
【０６３３】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの、特異的結合ができるタンパク質ベース物質である。
【０６３４】
ＣＤ３ターゲティング部分
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ３に対する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ３ポリペプチドを選択的に結合する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ３ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体の誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
【０６３５】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体ムロモナブ−ＣＤ３（別名Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３）、またはそのフラグメントを含む。ムロモナブ−ＣＤ３は、米国特許第４，３６１，５４９号およびＷｉｌｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）５１：８６５−８９４で開示されている。これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのムロモナブ−ＣＤ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２３４のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１２３５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６３６】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体オテリキシズマブ、またはそのフラグメントを含む。オテリキシズマブは、米国特許出願公開第２０１６００００９１６号およびＣｈａｔｅｎｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）９：３７２−３８１で開示されている。これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのオテリキシズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２３６のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１２３７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６３７】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体テプリズマブ（別名ＭＧＡ０３１およびｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ−Ａｌａ））、またはそのフラグメントを含む。テプリズマブは、Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）９：３７２−３８１で開示されている。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのテプリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２３８のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１２３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６３８】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体ビジリズマブ（別名Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）；ＨｕＭ２９１）、またはそのフラグメントを含む。ビジリズマブは、米国特許第５，８３４，５９７号および国際公開第２００４０５２３９７号およびＣｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９９９）６８：５６３−５７１で開示されている。これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのビジリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１２４１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０６３９】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体フォラルマブ（別名ＮＩ−０４０１）、またはそのフラグメントを含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４０１９３３９９号、米国特許第７，７２８，１１４号、米国特許出願公開第２０１００１８３５５４号および米国特許第８，５５１，４７８号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４０】
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号２および６（それぞれ、配列番号１２４２および１２４３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号４および８（配列番号１２４４および１２４５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０６４１】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号６〜９（それぞれ、配列番号１２４６〜１２４９）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号１０〜１２（それぞれ、配列番号１２５０〜１２５２）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６４２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号の配列番号９（配列番号１２５３）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号の配列番号１０（配列番号１２５４）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６４３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第８，７８４，８２１号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、および１１４（それぞれ、配列番号１２５５、１２５６、１２５７、１２５８、１２５９、１２６０、１２６１、および１２６２）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、および１２２（それぞれ、配列番号１２６３、１２６４、１２６５、１２６６、１２６７、１２６８、１２６９、および１２７０）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６４４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１５０１１８２５２号で開示される抗ＣＤ３結合構築物のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１５０１１８２５２号の配列番号６および８６（それぞれ、配列番号１２７１および１２７２）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号の配列番号３（配列番号１２７３）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６４５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号で開示される抗ＣＤ３結合タンパク質のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号６〜９（配列番号１２７４〜１２７７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号１〜４（配列番号１２７８〜１２８１）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０６４６】
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＣＤ３を標的とする配列を含み得る。
【０６４７】
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示のＣＤ３を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれかの組み合わせを含み得る。種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、限定されないが、Ｘ３５−３、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ−Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆｌ  １１−４０９、ＣＬＢ−Ｔ３．４．２、ＴＲ−６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ−Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ−１４１、ＸＩＩＩ−４６、ＸＩＩＩ−８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２−８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２−４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ−Ｔ３０１、ＳＭＣ２、ＷＴ３１およびＦ１０１．０１を含むＣＤ３特異的抗体の、重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれかを含み得る。これらのＣＤ３特異的抗体は、当該技術分野において周知であり、特に、Ｔｕｎｎａｃｌｉｆｆｅ（１９８９），Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１，５４６−５５０で記載されている。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４８】
選択的にＣＤ３を結合または標的とする追加の抗体、抗体誘導体またはフォーマット、ペプチドまたはポリペプチド、または融合タンパク質は、米国特許出願公開第２０１６／００００９１６号、米国特許第４，３６１，５４９号、同第５，８３４，５９７号、同第６，４９１，９１６号、同第６，４０６，６９６号、同第６，１４３，２９７号、同第６，７５０，３２５号および国際公開第２００４／０５２３９７号で開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４９】
ＣＤ２０ターゲティング部分
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＣＤ２０に特異的に結合できるタンパク質ベース物質である。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＣＤ２０を中和することなく、ＣＤ２０に特異的に結合できるタンパク質ベース物質である。ＣＤ２０は、膜貫通４−Ａ（ＭＳ４Ａ）ファミリーの非グリコシル化メンバーである。これは、マウスおよびヒトの両方におけるＢ細胞特異的分化抗原として機能する。特に、ヒトＣＤ２０  ｃＤＮＡは、４つの疎水性膜貫通ドメイン、２つの細胞外ループおよび細胞内Ｎ末端およびＣ末端領域からなる膜貫通タンパク質をコードする。
【０６５０】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＣＤ２０上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ２０上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。いくつかの実施形態では、線形エピトープは、ＣＤ２０上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ２０上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０６５１】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＣＤ２０（例えば、ヒトＣＤ２０）の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、任意の型のＣＤ２０（例えば、ヒトＣＤ２０）に結合し得る。ある実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、モノマー型のＣＤ２０に結合する。別の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ダイマー型のＣＤ２０に結合する。別の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、テトラマー型のＣＤ２０に結合する。さらなる実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、リン酸化型のＣＤ２０に結合し、これはモノマー、ダイマー、またはテトラマーであってよい。
【０６５２】
ある実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ヒトＣＤ２０上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ２０は、配列番号１３４６のアミノ酸配列を含む。
【０６５３】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、特異的結合ができるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。
【０６５４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットであるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；アフィマー；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または小（例えば、合成のまたは天然の）分子であるターゲッティング部分を含む。これらは、例えば、限定されないが、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【０６５５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体であるターゲティング部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物から誘導されるか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ＶＨＨは、ＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの登録商標で市販されている。ある実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ナノボディを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、免疫グロブリン単一可変ドメインまたはＩＳＶＤである。
【０６５６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【０６５７】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。
【０６５８】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号１３４７〜１３６６から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号１３６７〜１３８３から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号１３８４〜１３９６から選択される。
【０６５９】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６０】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６１】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６２】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６３】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６４】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６５】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６６】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６７】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６８】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６６９】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７０】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７１】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７２】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７３】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７４】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７５】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７６】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７７】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７８】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６７９】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６８０】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６８１】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０６８２】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、配列番号１３６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番１３９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＨＣＤ１６（配列番号１３９７）；２ＨＣＤ２２（配列番号１３９８）；２ＨＣＤ３５（配列番号１３９９）；２ＨＣＤ４２（配列番号１４００）；２ＨＣＤ７３（配列番号１４０１）；２ＨＣＤ８１（配列番号１４０２）；Ｒ３ＣＤ１０５（配列番号１４０３）；Ｒ３ＣＤ１８（配列番号１４０４）；Ｒ３ＣＤ７（配列番号１４０５）；２ＨＣＤ２５（配列番号１４０６）；２ＨＣＤ７８（配列番号１４０７）；２ＨＣＤ１７（配列番号１４０８）；２ＨＣＤ４０（配列番号１４０９）；２ＨＣＤ８８（配列番号１４１０）；２ＨＣＤ５９（配列番号１４１１）；２ＨＣＤ６８（配列番号１４１２）；２ＨＣＤ４３（配列番号１４１３）；２ＭＣ５７（配列番号１４１４）；Ｒ２ＭＵＣ７０（配列番号１４１５）；Ｒ３ＭＵＣ１７（配列番号１４１６）；Ｒ３ＭＵＣ５６（配列番号１４１７）；Ｒ３ＭＵＣ５７（配列番号１４１８）；Ｒ３ＭＵＣ５８（配列番号１４１９）；Ｒ２ＭＵＣ８５（配列番号１４２０）；Ｒ３ＭＵＣ６６（配列番号１４２１）；Ｒ２ＭＵＣ２１（配列番号１４２２）；２ＭＣ５２（配列番号１４２３）；Ｒ３ＭＵＣ２２（配列番号１４２４）；Ｒ３ＭＵＣ７５（配列番号１４２５）；２ＭＣ３９（配列番号１４２６）；２ＭＣ５１（配列番号１４２７）；２ＭＣ３８（配列番号１４２８）；２ＭＣ８２（配列番号１４２９）；２ＭＣ２０（配列番号１４３０）；２ＭＣ４２（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４３１）；Ｒ２ＭＵＣ３６（配列番号１４３２）；Ｒ３ＭＣＤ１３７（配列番号１４３３）；またはＲ３ＭＣＤ２２（配列番号１４３４）。
【０６８３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９３）のない配列番号１３９７〜１４３４（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０６８４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号３９４）のない配列番号１３９７〜１４３４（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０６８５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）のない配列番号１３９７〜１４３４（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０６８６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカーおよびＨＡタグのない配列番号１３９７〜１４３４（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０６８７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号３９５）を含まない配列番号１３９７〜１４３４（上記で提供される）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０６８８】
種々の実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＣＤ２０ターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、または他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【０６８９】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、本明細書で開示のＣＤ２０配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含むターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、上記で開示のＣＤ２０配列のいずれか１つから、リンカー配列、ＨＡタグおよび／またはＨＩＳ６タグを除いた配列に少なくとも６０％同一である配列を含む。例えば、ＣＤ２０ターゲティング部分は、本明細書で開示のＣＤ２０配列のいずれか１つに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示のＣＤ２０配列のいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含み得る。
【０６９０】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、上記で開示のＣＤ２０配列のいずれか１つに対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【０６９１】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【０６９２】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０６９３】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【０６９４】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）〜（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【０６９５】
種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎ  α−メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。
【０６９６】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってよい。
【０６９７】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【０６９８】
種々の実施形態では、変異は、ＣＤ２０に特異的に結合するＣＤ２０ターゲティング部分の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＣＤ２０に特異的に結合するＣＤ２０ターゲティング部分の能力を実質的に低下させることなく、ＣＤ２０を中和しない。
【０６９９】
種々の実施形態では、ヒトＣＤ２０の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／またはテトラマー型および／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型および／またはテトラマー型を含む）に対するＣＤ２０ターゲティング部分の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、ヒトＣＤ２０の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型および／またはテトラマー型を含む）に、約１μＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約４．５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合するターゲティング部分を含む。
【０７００】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、目的の抗原、すなわち、ＣＤ２０に結合するが、機能的に調節しないターゲティング部分を含む。例えば、種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、抗原を標的とするのみであり、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、実質的に阻害、低減または中和することを）しない。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープに結合する。
【０７０１】
顕著な機能調節のないこのような結合は、本出願の種々の実施形態で使用される。種々の実施形態では、変異は、ＣＤ２０ターゲティング部分はＣＤ２０陽性細胞に結合し、このような細胞の死亡を誘導する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、１つまたは複数のアポトーシスまたは直接細胞死、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）により媒介されて、細胞死を誘導する。いくつかの実施形態では、本発明のＣＤ２０ターゲティング部分は、結合時に、細胞膜内の大きな脂質マイクロドメインまたは「脂質ラフト」中へのＣＤ２０の移動を誘導する。このクラスタリングプロセスは、補体の活性化を高め、強力な補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を発揮する。別の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、直接細胞死を誘導する。代替実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分の治療効力は、Ｂ細胞枯渇に依存しない。
【０７０２】
種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、エフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するために用いられ得る。例えば、種々の実施形態では、癌または腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、ＣＤ２０ターゲティング部分を使って、直接的または間接的に免疫細胞を癌または腫瘍細胞に動員し得る（例えば、ＣＤ２０ターゲティング部分は、抗ＣＤ２０抗原認識ドメインおよび樹状細胞上に発現する抗原であるＣｌｅｃ９Ａに対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。これらの実施形態では、ＣＤ２０シグナル伝達は、癌を減らすまたは取り除く作用の重要な部分である。種々の実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を動員し得る。
【０７０３】
二重特異的および多重特異的ターゲティング部分フォーマット
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、本明細書で開示の１個または複数のターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的とするターゲティング部分を有する。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、標的結合の親和性を高めるために、同じターゲティング部分の２個以上のコピー（多価）を有する。
【０７０４】
種々の実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、多重特異的であり、すなわち、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２つ以上の標的（例えば、抗原、または受容体、またはエピトープ）を認識し、結合する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有する２個以上のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、同じ抗原上または異なる抗原上または異なる受容体上の２個以上のエピトープを認識して結合する認識ドメインを有するさらに２個のターゲティング部分を含み得る。種々の実施形態では、このような多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、増大した結合力および／または改善された選択性などの有利な特性を示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２つのターゲティング部分を含み、二重特異性であり、すなわち、同じ抗原上または異なる抗原上または異なる受容体上の２個のエピトープを結合し、認識する。したがって、種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、このような２個以上のターゲティング部分を含む多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を包含する。
【０７０５】
種々の実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、それぞれのターゲティング部分が本明細書に記載の抗体または抗体誘導体である２個以上のターゲティング部分を含む。ある実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１つの標的に対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種のＶＨＨおよび腫瘍抗原および／または免疫細胞マーカーに対する認識ドメインを含む１種の抗体または抗体誘導体を含む。
【０７０６】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、異なる抗原または受容体を標的とする２個以上のターゲティング部分を有し、１つのターゲティング部分は、その抗原または受容体に対し減弱化され得、例えば、ターゲティング部分はその抗原または受容体を低親和性または低結合力で結合する（例えば、その他のターゲティング部分がその抗原または受容体に対して有する親和性または結合力より低い親和性または結合力で結合することを含み、例えば、結合親和性の間の差異は、約１０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または３００倍、または５００倍、または１０００倍、または５０００倍であってよく；例えば、より低い親和性または結合力のターゲティング部分はその抗原または受容体に中〜高ｎＭまたは低〜中μＭの範囲のＫＤで結合し得るが、より高い親和性または結合力のターゲティング部分は、中〜高ｐＭまたは低〜中ｎＭの範囲のＫＤで結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、無差別の抗原または受容体に向けられた減弱化ターゲティング部分を含み、これは目的の細胞への標的化を改善し（例えば、他のターゲティング部分を介して）かつ治療用の標的にされないものを含む、複数細胞型間にまたがる効果を防止し得る（例えば、これらの実施形態で与えられるものより高い親和性で無差別に抗原または受容体に結合することによる）。
【０７０７】
多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、当該技術分野において既知の方法を使用して構築され得る。例えば、米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１０２６２３４８号および国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、２個以上のターゲティング部分を含む多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、化学架橋により、例えば、アミノ酸残基を、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌａｔｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４，１５１７−１５２４および欧州特許第２９４７０３号に記載のような有機誘導体化試薬を反応させることにより構築され得る。別の例示的実施形態では、２個以上のターゲティング部分を含む多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、遺伝子融合、すなわち、個別のターゲティング部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより、構築される。例えば、第１の標的に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨおよび、例えば、腫瘍抗原またはチェックポイント阻害剤に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体をコードする単一ポリペプチド構築物を形成し得る。二価または多価性のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、国際公開第９６／３４１０３号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。さらなる例示的実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、リンカーを用いることにより構築され得る。例えば、第１の標的に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨのカルボキシ末端を、例えば、腫瘍抗原またはチェックポイント阻害剤に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体のアミノ末端に連結し得る（または逆もまた同じ）。使用し得るリンカーの例は、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の成分は、リンカーを使用せずに、相互に直接連結される。
【０７０８】
種々の実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、標的（例えば、ＸＣＲ１、Ｃｌｅｃ９Ａ、ＦＡＰ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、またはＣＤ８）および１個または複数の免疫細胞上に見出される１種または複数の抗原を認識し、それらに結合する。免疫細胞は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、目的の抗原に特異的に結合し、直接または間接的に１個または複数の免疫細胞を効果的に動員する。
【０７０９】
種々の実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、標的（例えば、ＸＣＲ１、Ｃｌｅｃ９Ａ、ＦＡＰ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＳＩＲＰ１α、またはＣＤ８）および腫瘍細胞上に見出される１種または複数の抗原を認識し、それらに結合する。これらの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、免疫細胞を直接的にまたは間接的に腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、免疫細胞、例えば、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制できる免疫細胞（例えば、ＣＴＬ）を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために、樹状細胞による抗原の提示（例えば、腫瘍抗原の提示）を強化する。
【０７１０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、非細胞構造に結合する２個以上のターゲティング部分を有し得る。いくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分が存在し、１個は細胞を標的にし、一方、もう１個は非細胞構造を標的にする。
【０７１１】
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、および（ｉｉ）本明細書で記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、を有する。一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞（限定されないが、エフェクターＴ細胞を含む）に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｂ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）ＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７１２】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ８、ＳＬＡＭＦ４、IL-2Ｒα、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、IL-2Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１、IL-4Ｒ、Ｂ７−Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、IL-6Ｒ、ＣＣＲ３、IL-7Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、IL-10Ｒα、ＣＣＲ７、IL-10Ｒβ、ＣＣＲＳ、IL-12Ｒβ１、ＣＣＲ９、IL-12Ｒβ２、ＣＤ２、IL-13Ｒα１、IL-13、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ  α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ−３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ−４、ＣＤ６９、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／IL-2Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ−１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ−セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＤＮＡＭ−１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ−１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ−３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ−４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ−６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ−γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＳＬＰ、IL-1Ｒ１、またはＴＳＬＰＲへの標的化により媒介される、Ｔ細胞に対するターゲティング部分を有し；および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７１３】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞上に発現したチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの内の１個または複数に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７１４】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ８への標的化により媒介されるＴ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＣＤ８に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７１５】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ４への標的化により媒介されるＴ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＣＤ４に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７１６】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ３、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ９、ＣＤ７０、ＣＤ１０３、または１個または複数の免疫チェックポイントマーカーへの標的化により媒介されるＴ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＣＤ３に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７１７】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＰＤ−１への標的化により媒介されるＴ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７１８】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、またはＣＤｗ１５０への標的化により媒介されるＢ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ２０に対するターゲティング部分を有する。
【０７１９】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ７０への標的化により媒介されるＢ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７２０】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ２０への標的化により媒介されるＢ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞上のＣＤ２０に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７２１】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＤＮＡＭ−１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ−イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ−γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ−２／ＣＤ１１２、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ−受容体様３／ＣＤ１６−２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ−１、Ｒａｅ−１α、Ｒａｅ−１β、Ｒａｅ−１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ−１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ−１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ−１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ−３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ−１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ−２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄまたはＵＬＢＰ−３への標的化により媒介されるＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７２２】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、Ｋｉｒ１アルファ、ＤＮＡＭ−１またはＣＤ６４への標的化により媒介されるＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７２３】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＫＩＲ１への標的化により媒介されるＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞上のＫＩＲ１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７２４】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＴＩＧＩＴまたはＫＩＲ１への標的化により媒介されるＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞上のＴＩＧＩＴに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７２５】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ−１／ＳＲ−Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ−Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ−１、ＣＬ−Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ−ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４−ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、IL-12／IL-23ｐ４０、４−Ａｍｉｎｏ−１、８−ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８−ｏｘｏ−ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ  α４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７−２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４  Ｒｌ、Ｂ７−Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ−４−ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ−１、ＣＤ６８、ＭＤ−２、ＣＤ８３、ＭＤＬ−１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ  ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ−Ｌ２、ＣＬＥＣ−１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ−２、シグレック−２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック−３／ＣＤ３３、ＤＣ−ＳＩＧＮ、シグレック−５、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック−６、ＤＣＡＲ、シグレック−７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック−９、ＤＥＣ−２０５、シグレック−１０、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック−Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ−２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、Ｆｃ−γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ−２、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ−３、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、またはバニロイドＲ１への標的化により媒介される樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７２６】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＬＥＣ−９Ａ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＣＤ６４、ＣＬＥＣ４Ａ、またはＤＥＣ２０５への標的化により媒介される樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７２７】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、Ｃｌｅｃ９Ａへの標的化により媒介される樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７２８】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＸＣＲ１への標的化により媒介される樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＸＣＲ１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７２９】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＲＡＮＫへの標的化により媒介される樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＲＡＮＫに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７３０】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７−Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ−Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ−１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ−１、ＥＣＦ−Ｌ、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ−γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ−Ｌ２、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ−ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ−γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＲＥＭ−ｌ、ＩＬ−ｌＲＩＩ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ−３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、IL-10Ｒα、ＡＬＣＡＭ、IL-10Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ−Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ−１、ＣＸＣＲ６、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＭＤ−１、ＤＮＡＭ−１、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、Ｆｃ−γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ−ＣＳＦＲ、Ｌ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦＲα、シグレック−３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ−１、IL-6Ｒ、ＴＲＥＭ−２、ＣＸＣＲｌ／IL-8ＲＡ、ＴＲＥＭ−３、またはＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１への標的化により媒介される単球／マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７３１】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、またはマクロファージマンノース受容体ＣＤ２０６への標的化により媒介される単球／マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。
【０７３２】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＳＩＲＰ１ａへの標的化により媒介される単球／マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージ上のＳＩＲＰ１ａに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７３３】
種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、およびＡ２ａＲの内の１個または複数に対する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞、例えば、ＰＤ−１上のチェックポイントマーカーに対するターゲティング部分、および（ｉｉ）本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞、例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に向けられるターゲティング部分を有する。ある実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＰＤ−１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１に対する第２のターゲティング部分を有する。別の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＰＤ−１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
【０７３４】
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、同じまたは異なる免疫細胞に向けられた２個以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、および（ｉｉ）本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質に加えて、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはこれらのサブセットから選択される同じまたは別の免疫細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、を有する。
【０７３５】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。例えば、例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分を含み得る。別の例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＣＤ３に対するターゲティング部分を含み得る。別の例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＰＤ−１に対するターゲティング部分を含み得る。
【０７３６】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
【０７３７】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別の樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
【０７３８】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
【０７３９】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
【０７４０】
一実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍細胞に対するターゲティング部分および同じまたは異なる腫瘍細胞に対する第２のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書で記載のいずれかの腫瘍抗原に結合し得る。
【０７４１】
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞、褐色脂肪細胞）、肝臓脂質細胞、肝臓細胞、腎臓細胞（例えば、腎臓壁細胞、腎臓唾液腺、乳腺など）、導管細胞（精嚢、前立腺などの）、腸管刷子縁細胞（微絨毛を有する）、外分泌腺線条導管細胞、胆嚢上皮細胞、小遠心路非線毛細胞、精巣上体主部細胞、精巣上体基底細胞、内皮細胞、エナメル芽上皮細胞（歯のエナメル質分泌）、耳の前庭系の半月面上皮細胞（プロテオグリカン分泌）、コルチ器官歯間上皮細胞（有毛細胞を覆う蓋膜分泌）、疎性結合組織線維芽細胞、角膜線維芽細胞（角膜実質細胞）、腱線維芽細胞、骨髄網状組織線維芽細胞、非上皮性線維芽細胞、周皮細胞、椎間板の髄核細胞、セメント芽細胞（ｃｅｍｅｎｔｏｂｌａｓｔ）／セメント芽細胞（ｃｅｍｅｎｔｏｃｙｔｅ）（歯根骨様イワン細胞分泌）、象牙芽細胞／オドントサイト（ｏｄｏｎｔｏｃｙｔｅ）（歯象牙質分泌）、ガラス軟骨軟骨細胞、繊維軟骨軟骨細胞、弾性軟骨軟骨細胞、骨芽細胞／骨細胞、骨前駆体細胞（骨芽細胞の幹細胞）、眼の硝子体の硝子体細胞、耳の外リンパ腔の星状細胞、肝臓星状細胞（Ｉｔｏ細胞）、膵臓星状細胞、骨格筋細胞、衛星細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、虹彩の筋上皮細胞、外分泌腺の筋上皮細胞、外分泌物分泌性上皮細胞（例えば、唾液腺細胞、乳腺細胞、涙腺細胞、汗腺細胞、皮脂腺細胞、前立腺細胞、胃腺細胞、膵腺房細胞、肺細胞）、ホルモン分泌細胞（例えば、下垂体細胞、神経分泌細胞、腸管および気道細胞、甲状腺細胞、副甲状腺細胞、副腎細胞、精巣のライディッヒ細胞、膵島細胞）、角質化上皮細胞、湿性層化バリア上皮細胞、神経細胞（例えば、感覚変換器細胞、自律神経ニューロン細胞、感覚器官および周辺神経支持細胞、および中枢神経系ニューロン、ならびに介在ニューロン、主細胞、星状膠細胞、乏突起膠細胞、および上衣細胞などのグリア細胞）から選択される１個または複数の細胞上に見出されるものを含む目的の標的（例えば、抗原、受容体）に結合する認識ドメインを有する１個または複数のターゲティング部分を含む。
【０７４２】
Ｆｃベースキメラタンパク質複合体
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、少なくとも１個の本明細書で開示のＦｃドメイン、少なくとも１種の本明細書で開示のシグナル伝達物質（ＳＡ）、および少なくとも１個の本明細書で開示のターゲティング部分（ＴＭ）を含む。
【０７４３】
本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体が２つの融合タンパク質を包含し得ることは理解されている。
【０７４４】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、トランス配向／構造を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、シス配向／構造を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、単一ポリペプチド上にシグナル伝達物質およびターゲティング部分を含まない。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、ＦｃドメインまたはそのＦｃ鎖の同じ末端（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、ＦｃドメインまたはそのＦｃ鎖の異なる末端（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。
【０７４５】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質は、Ｆｃを欠くキメラタンパク質またはヘテロダイマー複合体ではないキメラタンパク質に比べて改善されたインビボ半減期を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質は、Ｆｃを欠くキメラタンパク質またはヘテロダイマー複合体ではないキメラタンパク質に比べて改善された溶解度、安定性およびその他の薬理学的特性を有する。
【０７４６】
ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個の異なるポリペプチドから構成される。本明細書で記載のいくつかの実施形態では、ターゲティングドメインは、シグナル伝達物質とは異なるポリペプチド上に存在し、従って、１個のみのターゲティングドメインコピー、および同様に１種のみのシグナル伝達物質を含むタンパク質を作製できる（これは、望ましい特性との起こり得る干渉を制御できる）。さらに、いくつかの実施形態では、１個のターゲティングドメイン（例えば、ＶＨＨ）のみにより、細胞表面上の抗原の架橋（これは、望ましくない効果を誘発する場合があり得る）を回避できる。さらに、いくつかの実施形態では、１個のシグナル伝達物質は、分子の「密集」、およびターゲティングドメインに依存して、エフェクター機能の回復により媒介される結合力との起こり得る干渉を緩和し得る。さらに、いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個のターゲティング部分を有することができ、これらは、２個の異なるポリペプチド上に配置できる。例えば、いくつかの実施形態では、両方のターゲティング部分（例えば、ＶＨＨ）のＣ末端をマスクして、潜在的自己抗体または既存の抗体（例えば、ＶＨＨ自己抗体または既存の抗体）を回避できる。さらに、いくつかの実施形態では、例えば、シグナル伝達物質（例えば、野生型シグナル伝達物質）とは異なるポリペプチド上にターゲティングドメインを有するヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２つの細胞型（例えば、腫瘍細胞および免疫細胞）の「架橋」を優先し得る。さらに、いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、それぞれ、異なるポリペプチド上に２つのシグナル伝達物質を有し、より複雑な反応を可能にする（例えば、本明細書で記載の任意の２種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮアルファ２およびＴＮＦ）。
【０７４７】
さらに、いくつかの実施形態では、例えば、シグナル伝達物とは異なるポリペプチド上にターゲティングドメインを有し、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質の組み合わせの多様性を有するヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体が、実用的な方法で提供される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で記載のいずれかのターゲティング部分を有するポリペプチドは、「既製品として」本明細書で記載のいずれかのシグナル伝達物質を有するポリペプチドと組み合わせて、単一Ｆｃベースキメラタンパク質複合体中のターゲティング部分およびシグナル伝達物質の種々の組み合わせの迅速な生成を可能にする。
【０７４８】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１個または複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメイン、シグナル伝達物質およびターゲティング部分を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、シグナル伝達物質およびターゲティング部分をそれぞれ連結する（または２つ以上のターゲティング部分の場合、シグナル伝達物質をターゲティング部分の１つに連結する）リンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、各シグナル伝達物質をＦｃドメインに連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、各ターゲティング部分をＦｃドメインに連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ターゲティング部分を別のターゲティング部分に連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体はシグナル伝達物質を別のシグナル伝達物質に連結するリンカーを含む。
【０７４９】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、ターゲティング部分は、同じターゲティング部分であっても、異なるターゲティング部分であってもよい。
【０７５０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のシグナル伝達物質を含む。このような実施形態では、シグナル伝達物質は、同じターゲティング部分であっても、異なるターゲティング部分であってもよい。
【０７５１】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメイン、少なくとも２種のシグナル伝達物質（ＳＡ）、および少なくとも２個のターゲティング部分（ＴＭ）を含み、Ｆｃドメイン、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分は、本明細書で開示のＦｃドメイン、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分のいずれかから選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
【０７５２】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５３】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図２Ａ〜Ｈのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５４】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図３Ａ〜Ｈのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５５】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図４Ａ〜Ｄのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５６】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図５Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５７】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図６Ａ〜Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５８】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図７Ａ〜Ｄのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７５９】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図７Ｂのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６０】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図８Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６１】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図９Ａ〜Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６２】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１０Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６３】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１１Ａ〜Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６４】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１２Ａ〜Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６５】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１３Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６６】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１４Ａ〜Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６７】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１５Ａ〜Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６８】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１６Ａ〜Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７６９】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１７Ａ〜Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７７０】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１８Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７７１】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１９Ａ〜Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７７２】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図２０Ａ〜Ｅのいずれかの概略図の形式を取る。
【０７７３】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質はターゲティング部分に連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図１Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
【０７７４】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は同じ末端上で連結される（図１Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
【０７７５】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、シグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図１Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
【０７７６】
いくつかの実施形態では、ホモダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在し、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、シグナル伝達物質は同じ末端上でターゲティング部分に連結される（図２Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、２個のターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、これらは、同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図２Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分は相互に連結され、各対からの１個のターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、シグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図２Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分は相互に連結され、各対からの１個のターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、この対の他のターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、Ｆｃドメインに連結されるターゲティング部分は同じ末端上で連結される（図２Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
【０７７７】
いくつかの実施形態では、ホモダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のシグナル伝達物質を含む。４種のシグナル伝達物質および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２種のシグナル伝達物質は相互に連結され、対からの１種のシグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図３Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４種のシグナル伝達物質および２個のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２種のシグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、２種のシグナル伝達物質はそれぞれターゲティング部分に連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図３Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４種のシグナル伝達物質および２個のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２種のシグナル伝達物質は相互に連結され、対の１種のシグナル伝達物質はターゲティング部分に連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図３Ａ〜Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
【０７７８】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメインを含み、Ｆｃドメインはイオン対形成変異および／またはノブインホール変異、少なくとも１種のシグナル伝達物質、および少なくとも１個のターゲティング部分を含み、イオン対形成モチーフおよび／またはノブインホールモチーフ、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分は、本明細書で開示のいずれかのイオン対形成モチーフおよび／またはノブインホールモチーフ、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７７９】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質はターゲティング部分に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結される（図１０Ａ〜Ｆおよび１３Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結される（図１０Ａ〜Ｆおよび１３Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８０】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインに連結される（図４Ａ〜Ｄ、７Ａ〜Ｄ、１０Ａ〜Ｆ、および１３Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図４Ａ〜Ｄおよび７Ａ〜Ｄ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、異なる末端上の異なるＦｃ鎖に連結される（図４Ａ〜Ｄおよび７Ａ〜Ｄ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖に連結される（図１０Ａ〜Ｆおよび１３Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８１】
１種のシグナル伝達物質および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質はＦｃドメインに連結され、２個のターゲティング部分は、１）Ｆｃドメインに連結された１個のターゲティング部分を用いて相互に連結され得るか、または２）それぞれＦｃドメインに連結され得る（図５Ａ〜Ｆ、８Ａ〜Ｆ、１１Ａ〜Ｌ、１４Ａ〜Ｌ、１６Ａ〜Ｊ、および１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は１つのＦｃ鎖に連結され、シグナル伝達物質はもう一方のＦｃ鎖に連結される（図５Ａ〜Ｆおよび８Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、対を形成したターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖に連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、もう一方のターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、対を形成したターゲティング部分は、Ｆｃドメインに連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ、１６Ａ〜Ｊ、および１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成しないターゲティング部分および対形成したターゲティング部分は、同じＦｃ鎖に連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、対形成しないターゲティング部分および対形成したターゲティング部分は、異なるＦｃ鎖に連結される（図１６Ａ〜Ｊおよび１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成しないターゲティング部分および対形成したターゲティング部分は、同じ末端上で連結される（図１６Ａ〜Ｊおよび１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８２】
１種のシグナル伝達物質および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、これは、Ｆｃドメイン連結され、対形成しないターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ、１６Ａ〜Ｊ、および１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質および対形成しないターゲティング部分は、同じＦｃ鎖に連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質および対形成したターゲティング部分は、異なるＦｃ鎖に連結される（図１６Ａ〜Ｊおよび１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質および対形成しないターゲティング部分は、同じ末端上で連結される（図１６Ａ〜Ｊおよび１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８３】
１種のシグナル伝達物質および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は一緒に連結され、シグナル伝達物質は対形成したターゲティング部分の１個に連結され、シグナル伝達物質に連結されないターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８４】
１種のシグナル伝達物質および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は一緒に連結され、シグナル伝達物質は対形成したターゲティング部分の１個に連結され、シグナル伝達物質はＦｃドメインに連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８５】
１種のシグナル伝達物質および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は両方ともシグナル伝達物質に連結され、ターゲティング部分の１個は、Ｆｃドメインに連結される（図１１Ａ〜Ｌおよび１４Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８６】
１種のシグナル伝達物質および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質はＦｃドメインに連結される（図１６Ａ〜Ｊおよび１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、末端上で連結される（図１６Ａ〜Ｊおよび１７Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８７】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖上でＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分は、もう一方のＦｃ鎖上で連結される（図１８Ａ〜Ｆおよび１９Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８８】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質はターゲティング部分に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結され、もう一方のシグナル伝達物質はＦｃドメインに連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ、１２Ａ〜Ｌ、および１５Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質は、異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質は、異なる末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。 いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖に連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７８９】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結され、もう一方のシグナル伝達物質はＦｃドメインに連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質および対形成しないシグナル伝達物質は、異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質および対形成しないシグナル伝達物質は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質および対形成しないシグナル伝達物質は、異なる末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ〜Ｊおよび９Ａ〜Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７９０】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は一緒に連結され、ターゲティング部分は対形成したシグナル伝達物質の１種に連結され、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７９１】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は一緒に連結され、シグナル伝達物質の１種はＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ、１８Ａ〜Ｆ、および１９Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質およびターゲティング部分は、同じＦｃ鎖に連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質およびターゲティング部分は、異なるＦｃ鎖に連結される（図１８Ａ〜Ｆおよび１９Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質およびシグナル伝達物質は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図１８Ａ〜Ｆおよび１９Ａ〜Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７９２】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は両方ともターゲティング部分に連結され、シグナル伝達物質の１種はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
【０７９３】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は一緒に連結され、シグナル伝達物質の１種はターゲティング部分に連結され、もう一方のシグナル伝達物質はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。
【０７９４】
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、各シグナル伝達物質はＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分はシグナル伝達物質の１種に連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖に連結される（図１２Ａ〜Ｌおよび１５Ａ〜Ｌ参照）。
【０７９５】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分またはシグナル伝達物質は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの片方または両方、および任意選択でヒンジ領域を含む、Ｆｃドメインに連結される。例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃドメインに連結されたターゲティング部分、シグナル伝達物質、またはこれらの組み合わせをコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを作製できる。
【０７９６】
いくつかの実施形態では、リンカーを、本明細書に記載の種々の官能基、残基、または部分をＦｃベースキメラタンパク質複合体に連結するのに利用し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一アミノ酸または複数のアミノ酸である。種々の実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。
【０７９７】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、シグナル伝達物質内にリンカーを含む（例えば、単鎖ＴＮＦの場合には、トリマーを得るために２つのリンカーを含み、またはＩＦＮガンマの場合には、ダイマーを得るために１つのリンカーを含み得る）。
【０７９８】
本技術は、種々のリンカー配列の使用を意図している。種々の実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２２（２）：１５３−１６７；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９に記載されている経験的リンカーである。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９  および  Ｃｒａｓｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３０９−３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計し得る。種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、フォールディングおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体の生物活性を改善するように機能し得る。
【０７９９】
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長超である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長さ超であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。
【０８００】
いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、ターゲティング部分とシグナル伝達物質、および／またはＦｃドメインのそれらの標的（例えば、受容体）への効率的結合を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、リンカー長さは、１つのターゲティング部分とシグナル伝達物質の同じ細胞上の受容体への効果的結合、ならびにその他のターゲティング部分の別の細胞への効果的結合を可能とする。細胞対の例は、本明細書の他の場所で提供される。
【０８０１】
いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、少なくとも、同じ細胞上のターゲティング部分、シグナル伝達物質、および／またはＦｃドメイン標的（例えば、受容体）の結合部位間の最短距離に等しい。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上のターゲティング部分、シグナル伝達物質、および／またはＦｃドメイン標的の結合部位間の最短距離の、少なくとも２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または、それを超える。
【０８０２】
いくつかの実施形態では、あるリンカーは２個のターゲティング部分を相互に連結し、このリンカーは短い長さを有し、また、あるリンカーはターゲティング部分とシグナル伝達物質を連結し、このリンカーは２個のターゲティング部分を連結するリンカーより長い。例えば、２個のターゲティング部分を連結するリンカーと、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーとの間のアミノ酸長さの差異は、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。
【０８０３】
種々の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンとセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、式中、ｎは、約１〜約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８（それぞれ、配列番号１２８３〜配列番号１２９０）である。ある実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２９１）である。追加のリンカーの例としては、限定されないが、次記配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号１２８３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜７）（配列番号１２８３〜配列番号１２８９）、（Ｇｌｙ）８（配列番号１２９２）、（Ｇｌｙ）６（配列番号１２９３）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１〜３）（配列番号１２９４〜配列番号１２９６）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２〜５）（配列番号１２９７〜配列番号１３００）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１２９７）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号１３０１）、ＰＡＰＡＰ（配列番号１３０２）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１３０３）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１３０４）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１３０５）、および（ＸＰ）ｎ、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。種々の実施形態では、リンカーはＧＧＳまたは（ＧＧＳ）ｎ（ｎ＝２〜２０）（配列番号１３０６〜配列番号１３２４）である。いくつかの実施形態では、リンカーはＧである。いくつかの実施形態では、リンカーはＡＡＡである。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝９〜２０）（配列番号１３２５〜配列番号１３３６）である。
【０８０４】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号１３３７）、ＧＳＥＳＧ（配列番号１３３８）、ＧＳＥＧＳ（配列番号１３３９）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号１３４０）、および４アミノ酸間隔毎にランダムに配置されたＧ、Ｓ、およびＥのリンカー、の１種または複数である。
【０８０５】
いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。種々の実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中の配列および長さの両方で変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス内で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６〜２３１を包含し、それが自由にフレキシブルであるために、Ｆａｂフラグメントは、それらの対称軸の周りで回転でき、最初の２つの重鎖間ジスルフィド架橋を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、また、追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性ポリプロリン二重らせん体を含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸を含む（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）その特有の延長されたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により、他のサブクラスとは異なり、柔軟性を欠くポリプロリン二重らせん体を形成する。ＩｇＧ３では、Ｆａｂフラグメントは、Ｆｃフラグメントから比較的遠くに離れており、より大きな可撓性を分子に与える。ＩｇＧ３の伸びたヒンジは、他のサブクラスに比べて、そのより高分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ部は、ＩｇＧ１より短く、その可撓性は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、次の順に低下すると報告されている：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。
【０８０６】
結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コア部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、ＣＨ１のカルボキシル末端から運動を制限するヒンジ中の最初の残基、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部はＣＨ２ドメインのアミノ末端に繋がり、ＣＨ２中の残基を含む。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は、配列Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（配列番号１３４１）を含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能することにより、可撓性を付与すると考えられている。種々の実施形態では、リンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１、または２、または３個の上部ヒンジ部、コア部および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは、多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは、分泌性免疫グロブリンにとって、有利な性質であると考えられる。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。種々の実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインである。
【０８０７】
いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。
【０８０８】
種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、フォールディングおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を特定の細胞型または部位に向けるように機能し得る。
【０８０９】
官能基
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、１個または複数の官能基、残基、または部分を含む。種々の実施形態では、１つまたは複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のＦｃタンパク質、シグナル伝達物質およびターゲティング部分のいずれかに結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、１つまたは複数の望ましい特性または官能基を本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体に付与する。このような官能基およびそれらをＦｃベースキメラタンパク質複合体に導入する技術の例は、当技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。
【０８１０】
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、別の物質と複合化および／または融合して、半減期を延長するか、または別の方法で薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＳＡ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどの１種または複数と融合または複合化され得る。
【０８１１】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を伸ばし、および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体の免疫原性を低減する。通常、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの、任意の好適な形態のペグ化が用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１−５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３−４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第０４／０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介する部位特異的なペグ化が使用される（例えば、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１−７７０（２００３）を参照されたい。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、この目的のために、ＰＥＧは、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中で自然発生するシステイン残基に結合され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を適切に導入するように改変されるか、またはＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、当該技術分野において既知の技術を使用してＦｃベースキメラタンパク質複合体のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。
【０８１２】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。
【０８１３】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１つまたは複数の検出可能なラベルまたは他のシグナル生成基または部分を含む。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはインビボ、インビトロまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適している他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−ＶＩ−リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識された本発明のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、インビトロ、インビボまたはインサイツアッセイ（これ自体ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよびその他の「サンドイッチ法」などとして知られるイムノアッセイ）ならびにインビボ診断および画像処理の目的に使用し得る。
【０８１４】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体に結合または遺伝的に融合されたタグを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、単一タグまたは複数タグを含み得る。例えば、タグは、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の目的の、標的または、例えば、腫瘍抗原などのいずれか他の目的抗原に対する結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。種々の実施形態では、タグは、少なくとも約：３〜５アミノ酸長、５〜８アミノ酸長、８〜１２アミノ酸長、１２〜１５アミノ酸長、または１５〜２０アミノ酸長である。タグの例は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヒスチジンタグを含む。
【０８１５】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、１種の金属または金属カチオンをキレートするためのキレート化基を含む。好適なキレート化基は、例えば、限定されないが、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む。
【０８１６】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン−（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の部分である官能基を含む。このような官能基を使って、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体を、結合対のもう一方の半分に結合された別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の形成を介して、連結し得る。例えば、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体をビオチンに複合化させ、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化させた別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結し得る。例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化されている診断システムにおいて、このような結合Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を、例えば、レポーターとして用い得る。例えば、このような結合対を使用して、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を、医薬品目的に好適な担体を含む、担体に結合し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ  ａｎｄ  Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。また、このような結合対を使用して、治療活性薬剤を、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体に連結し得る。
【０８１７】
Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の改変および産生
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＶＨＨであるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の産生法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、次記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶＨＨドメインの「ヒト化」により、またはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載の「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたはその他のアミノ酸配列のための合成または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製し、続けて、こうして得られた拡散を発現させることにより；および／または（８）前述の１つまたは複数の任意の組み合わせにより。
【０８１８】
ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、目的の標的に対する天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種を目的の標的（例えば、ＸＣＲ１、Ｃｌｅｃ９Ａ、ＣＤ８、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰなど）に基づく分子で適切に免疫化する（すなわち、目的の標的に対する免疫応答を生じさせる、および／または目的の標的に対する重鎖抗体を産生させるように）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、目的の標的に対するＶＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、目的の標的に対する天然のＶＨＨドメインは、ラクダ科の動物ＶＨＨ配列の未処理ライブラリーから、例えば、当技術分野で既知の１種または複数のスクリーニング技術を使って、目的の標的、またはその少なくとも１つの部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、および国際公開第０３／０３５６９４号に記載されている。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、国際公開第００／４３５０７号に記載のランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理ＶＨＨライブラリーから得られたＶＨＨライブラリーなどの未処理ＶＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーを使用し得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、目的の標的に対するＶＨＨ配列を得る別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫化し（すなわち、目的の標的に対する免疫応答を生じさせる、および／または目的の標的に対する重鎖抗体を産生させるように免疫化し）、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得て、その後、任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＸＣＲ１に対するＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、このために、国際公開第０２／０８５９４５号および国際公開第０４／０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。
【０８１９】
ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、「ヒト化」、すなわち、天然のＶＨＨ配列（および特に、フレームワーク配列中の）のアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ヒトの従来の４鎖抗体由来のＶＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知のヒト化技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られたヒト化ＶＨＨが置換後の時点でも有利な機能特性を保持しているように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明のＶＨＨは、より「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。種々の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって、出発材料として天然のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
【０８２０】
ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、「ラクダ化」、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ−ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置に、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴残基（例えば、国際公開第９４／０４６７８号を参照されたい。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）の位置に挿入されるいくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するまたは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。種々の実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）〜（８）で示したような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
【０８２１】
種々の実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意し、次に、当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１個または複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするような方法で変更することにより実施することができる。この核酸は、その後、本発明の目的のＶＨＨを得るように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。あるいは、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、目的の本発明のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれのアミノ酸配列を設計し、その後、当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて、新規に合成できる。また、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後、こうして得られた核酸を、本発明の目的のＶＨＨが得られるように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から出発して、本発明のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るその他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１つまたは複数の天然のＶＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、１つまたは複数の天然のＶＨＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、および／または１つまたは複数の合成または半合成配列を、本発明のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸を得るように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。
【０８２２】
本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体を産生する方法は、本明細書で記載されている。例えば、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野において既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列は、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結し、目的の本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。
【０８２３】
本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（連結され）てよく、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入できる。例えば、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする核酸を、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入できる。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞に、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする遺伝子を発現させるのを可能にする条件下で増殖させることができる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。種々の実施形態では、本発明は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
【０８２４】
特定の発現および精製条件は、用いた発現系に応じて変化する。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中に挿入される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。
【０８２５】
本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、タンパク質の発現を許容する条件下で、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体をコードする発現ベクターを形質導入した宿主細胞を増殖させることにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）などの親和性タグまたはクロマトグラフィーにより、当該技術分野において、周知の技術を用いて精製できる。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヒスチジンタグを含む。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体結合物質はＨｉｓタグおよびＨｉｓタグの切断を可能にするタンパク分解部位を含む。
【０８２６】
したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする核酸を提供する。種々の実施形態では、本発明は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
【０８２７】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体を改変および産生する方法は、２つ以上のターゲティング部分および／またはシグナル伝達物質を含む任意の多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の改変と産生に容易に適応させることができる。
【０８２８】
種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例えば、患者中でインビボ発現され得る。例えば、種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする核酸の形態で投与され得る。種々の実施形態では、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、修飾ｍＲＮＡ、すなわち、１種または複数の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによりコードされる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、米国特許第８，２７８，０３６号で見出される１つまたは複数の修飾を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、および２’−Ｏ−メチル−Ｕの内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の１個または複数のＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする修飾ｍＲＮＡの投与に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。種々の実施形態では、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、アデノウイルス、レオウイルス、はしか、単純ヘルペス、ニューカッスル病ウイルスまたはワクシニアの形態である。
【０８２９】
薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、充分に塩基性の官能基を有することができ、これは無機もしくは有機酸またはカルボキシル基と反応することができ、またこれは、無機または有機塩基と反応することができ、薬学的に許容可能な塩を形成することができる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩には、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）およびＴｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含む。これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０８３０】
薬学的に許容可能な塩としては、非限定的例であるが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１，４−ジカルボキシレート、ヘキシン−１，４−ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。
【０８３１】
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基としては、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ−、ジ−、またはトリ−アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ＯＨ−低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシル−低級アルキル）−アミン；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などが挙げられる。
【０８３２】
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。
【０８３３】
医薬組成物および製剤
種々の実施形態では、本発明は、本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態では、本発明は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体と本明細書に記載のいずれか他の治療薬との組み合わせを含む医薬組成物に関する。本明細書で記載のいずれの医薬組成物も、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与することができる。このような組成物は、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を任意に含み得る。
【０８３４】
種々の実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの液体であり得る。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素なであってよい。さらに、助剤、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用することができる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液はまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤のそのほかの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １４４７−１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｓ．，１９ｔｈ  ｅｄ．１９９５）に記載されている。この文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【０８３５】
本発明は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も、液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適する他の任意の形態をとってよい。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態に処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態に処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。
【０８３６】
必要に応じて、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含み得る。また、薬剤は当技術分野において既知の適切なビークルまたは送達装置を使って送達することができる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたは送達担体で同時送達できる。
【０８３７】
本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製され得る。このような方法は通常、治療薬を担体と混合するステップを含み、担体は１種または複数の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬と、液体担体、微粉化固相担体、または両方とを均一に、完全に混合すること、その後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンド、など、それに続く、当該技術分野で既知の従来の方法を使って錠剤化すること）により調製される。
【０８３８】
種々の実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。
【０８３９】
投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的または全身性であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任すことができ、一部には、病状の部位に依存する。大抵の場合、投与は本明細書で記載のいずれかの薬剤の血流中への放出をもたらす。
【０８４０】
一実施形態では、本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。経口送達用の組成物は、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に口当たりの良い製剤を提供するために、１種または複数の薬剤、例えば、ラクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料、ペパーミント、冬緑油またはチェリー油などの調味料、着色料および保存剤を含み得る。さらに、タブレットまたは丸薬形態では、組成物をコートして、消化管での崩壊および吸収を遅らせることにより長期間にわたり持続作用を可能とすることができる。本明細書に記載のいずれかの浸透活性駆動性Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が運搬化合物により吸収され、この化合物は膨潤し、開口部を介して薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、基本的に０次の送達プロファイルを提供することができる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質も使用することができる。経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。一実施形態は、賦形剤は医薬品グレードである。活性化合物に加えて、懸濁剤は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガント、など、およびこれらの混合物などの沈殿防止剤を含んでよい。
【０８４１】
非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてよく、これは、使用直前に、無菌の注入可能媒体中に溶解または懸濁され得る。それらは、例えば、当該技術分野において、既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適な製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。
【０８４２】
静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。
【０８４３】
本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）を作製することができる。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容され得る加圧化噴射剤中に入れることができる。
【０８４４】
本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出によりまたは徐放手段または送達装置により投与可能である。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、その他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて、１つまたは複数の有効成分の制御放出または徐放を可能にするために有用であり、様々な割合での所望の放出プロファイルを提供することができる。本明細書に記載されたものを含む当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分と共に使用する上で容易に選択することができる。本発明はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。
【０８４５】
有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激できる。
【０８４６】
別の実施形態では、徐放系を、治療される標的領域の近傍に配置でき、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３、中の概説で考察されている他の放出制御系を使用し得る。
【０８４７】
医薬製剤は好ましくは無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜で濾過することにより達成される。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥および再構成の前またはその後でフィルター滅菌を行うことができる。
【０８４８】
投与および投与量
本発明により投与される本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わるであろうということは理解されよう。当業者なら、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の作用を変える多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮に入れることができる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１種または複数の別々の投与量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。
【０８４９】
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の好適な投与量は、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）〜約１０ｇ／（対象のｋｇ体重）、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）〜約１ｇ／（対象のｋｇ体重）、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）〜約１００ｍｇ／（対象のｋｇ体重）、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）〜約１０ｍｇ／（対象のｋｇ体重）の範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。
【０８５０】
本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の個々の用量は、例えば、単位剤形当たり、約０．０１ｍｇ〜約１００ｇ、約０．０１ｍｇ〜約７５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約５０ｇ、約０．０１ｍｇ〜約２５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約１０ｇ、約０．０１ｍｇ〜約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約１ｇ、約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約４０ｍｇの有効成分、約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約３ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、または単位剤形当たり約５ｍｇ〜約８０ｍｇを含む単位剤形として投与できる。例えば、単位剤形は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であってよい。
【０８５１】
一実施形態では、本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、毎日約０．０１ｍｇ〜約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ〜約８０ｍｇの量で投与される。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。
【０８５２】
本発明の特定の実施形態では、本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、６ヶ月毎に約１回、または毎年約１回投与してよい。
【０８５３】
併用療法および追加の治療薬
種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬と共に同時投与される。同時投与は、同時または順次であってよい。
【０８５４】
一実施形態では、追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語の「同時に」は、追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体が約６０分以下、例えば、約３０分以下、約２０分以下、約１０分以下、約５分以下、または約１分以下の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む製剤）または別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む第２の製剤）の同時投与により行うことが可能である。
【０８５５】
同時投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体の薬理学的活性が時間経過と共に重なりあい、それにより組み合わされた治療効果が発揮されるような場合には、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体は、順次に投与できる。本明細書で使用される場合、用語の「順次に」は、追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体が約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とＦｃベースキメラタンパク質複合体との逐次投与の間の時間間隔を、約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて間隔を開ける、約２週間を超えて間隔を開ける、または約１ヶ月を越えて間隔を開けることができる。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびＦｃベースキメラタンパク質複合体の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはＦｃベースキメラタンパク質複合体のいずれかを、最初に投与してよい。
【０８５６】
同時投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ−ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与できる。
【０８５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、別の治療薬と同時投与されると、相乗的に作用する。このような実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体および追加の治療薬は、その治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。
【０８５８】
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体と化学療法剤とのこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の治療に使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）、スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドーパ，カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ、エチレンイミン、メチラメラミン例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよび、トリメチロールメラミン、アセトゲニン（例えば、ブラタシン、ブラタチノン）、カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙ  ｓｔａｔｉｎ）、ＣＣ−１０６５（アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８など）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコディクチン、スポンギスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照）、ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む、ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート、エスペラマイシン、ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾル���シン、代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン、葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デメコルチン、ジアジクオン、エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）、エリプチニウムアセテート、エポチロン、エトグルシド、ガリウムニトレート、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（例えば、Ｔ２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイディン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（アラ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサンクレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、タキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロランブシル、ジェムザール（ゲムシタビン）、６−チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ−１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ナベルビン（ビノレルビン）、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（キャンプトサー，ＣＰＴ−１１）（イリノテカンと５−ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド、例えば、レチノイン酸、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ−Ａならびに上述のいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、治療の方法は、放射線の使用をさらに含み得る。さらに、治療の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含み得る。
【０８５９】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体および化学療法剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、化学療法剤を用いた治療を受けている患者に対するＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与に関する。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＤＮＡ挿入剤、例えば、限定されないが、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、およびエピルビシンである。ある実施形態では、ＤＮＡ挿入剤は、ドキソルビシンである。
【０８６０】
例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ドキソルビシンと同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍または癌の治療での使用において、ドキソルビシンと同時投与されると相乗的に作用する。例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体とドキソルビシンとの同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体とドキソルビシンの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される薬剤に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体およびドキソルビシンは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、変異ＩＦＮα２などの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮα２は、配列番号１または配列番号２を基準にして、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置で１個または複数の変異を含む。
【０８６１】
いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質を用いる併用療法に関する。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２の内の１種または複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ−１阻害剤である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２の内の１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ニボルバム（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１，ＣＵＲＥ  ＴＥＣＨ）、ＭＫ−３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの内の１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの内の１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３および抗４−１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の治療のために、ウレルマブと組み合わされる（任意選択で、ニボルバム、リリルマブ、およびウレルマブの内の１種または複数と組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ−４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ−２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの内の１種または複数を標的とする物質である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ−４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ−２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの内の１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌の内の１種または複数の治療のために、イピリムマブと組み合わされる（必要に応じ、バビツキシマブと組み合わされる）。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、ＡＭＥ−１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ−０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ−１０６）などの抗体である。
【０８６２】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体およびチェックポイント阻害剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、チェックポイント阻害剤で治療を受けている患者に対するＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与に関する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、およびＣＴＬＡ−４（本明細書に記載の抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、および抗ＣＴＬＡ−４物質のいずれかを含む）の内の１種または複数を標的とする物質である。いくつかの実施形態ではチェックポイント阻害剤は、ニボルバム（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１，ＣＵＲＥ  ＴＥＣＨ）、ＭＫ−３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）内の１種または複数である。ある実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ１に対する抗体である。
【０８６３】
例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍または癌の治療での使用において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と同時投与されると相乗的に作用する。例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される薬剤に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その薬剤が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、変異ＩＦＮα２などの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮα２は、配列番号１または配列番号２を基準にして、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置で１個または複数の変異を含む。
【０８６４】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体および免疫抑制剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫抑制剤で治療を受けている患者に対するＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与に関する。ある実施形態では、免疫抑制剤は、ＴＮＦである。
【０８６５】
例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＴＮＦと同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍または癌の治療での使用において、ＴＮＦと同時投与されると相乗的に作用する。例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体とＴＮＦとの同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体とＴＮＦの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される薬剤に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体およびＴＮＦは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、変異ＩＦＮα２などの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮα２は、配列番号１または配列番号２を基準にして、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置で１個または複数の変異を含む。
【０８６６】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍または癌の治療において、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、血液系腫瘍の治療において、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、固形腫瘍の治療において、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体およびＣＡＲ  Ｔ細胞の使用は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＡＲ  Ｔ細胞分裂を誘導する。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖を誘導する。種々の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＡＲ  Ｔ細胞増のアナジーを防止する。
【０８６７】
種々の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法は、抗原（例えば、腫瘍抗原）、例えば、限定されないが、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ−１、IL-13Ｒα２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマタイプ１６  Ｅ６（ＨＰＶ−１６  Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、および血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびに当該技術分野において周知のその他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。追加の腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）−００１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、およびＰＳＡ−３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００  Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ−１、ＮＡ、ＥＢＶ−コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１  ＣＴ−７、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２が挙げられるが、これらに限定���れない。
【０８６８】
代表的ＣＡＲ  Ｔ細胞療法としては、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＫＴＥ−Ｃ１９（Ｋｉｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＢＰＸ−４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ−５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ−６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ  Ｂｉｏ）、ＣＤ−１９  Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  ｃｅｌｌｓ（眠れる森の美女細胞）（Ｚｉｏｐｈａｒｍ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＯＸＢ−３０２（Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＭＢ−１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｂｉｏ）およびＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＡＲ  Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０８６９】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、限定されないが、３−インターフェロン、酢酸グラチラマー、Ｔ−インターフェロン、ＩＦＮβ２（米国特許出願公開第２００２／００２５３０４号）、スピロゲルマニウム（例えば、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジメチル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジエチル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジプロピル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン、およびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジブチル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン）、ビタミンＤ類似体（例えば、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、（例えば、米国特許第５，７１６，９４６号を参照））、プロスタグランジン（例えば、ラタノプロスト、ブリモニジン、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３、例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５２５号を参照）、テトラサイクリンと誘導体（例えば、ミノサイクリンおよびドキシサイクリン、例えば、米国特許出願公開第２００２／００２２６０８号を参照）、ＶＬＡ−４結合抗体（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２０２５２７号を参照）、副腎皮質刺激ホルモン、副腎皮質ステロイド、プレドニゾン、メチルプレドニソン、２−クロロデオキシアデノシン、ミトキサントロン、スルファサラジン、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、フマレート、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、およびチザニジン塩酸塩を含む多発性硬化症（ＭＳ）治療薬の内の１種または複数と組み合わせてＭＳの治療方法で使用される。
【０８７０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＭＳの１つまたは複数の症状または副作用を治療する１種または複数の治療薬と組み合わせて使用される。このような薬剤としては、アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドクセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン（ｐｈｅｎｙｌｏｉｎ）、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファキシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、プロパンテリンブロミド、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０８７１】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１種または複数の本明細書に記載の疾患修飾治療薬（ＤＭＴ）（例えば、表Ａの物質）と組み合わせて多発性硬化症の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の開示結合物質を含まない場合の、１個または複数の本明細書に記載のＤＭＴ（例えば、下表に挙げた物質）と比べて、改善された治療効果を提供する。ある実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体と１種または複数のＤＭＴの組み合わせは、相乗的治療効果をもたらす。
【表６】
2021519089.tif 000016
2021519089.tif 000017
2021519089.tif 000018
2021519089.tif 000019
2021519089.tif 000020
【０８７２】
ＭＳ疾患進行は、疾患進行の最初期段階で、最も激しく、最も多くの損害を与え得る。したがって、例えば、コストと副作用緩和を考慮した多くの償還方針および医療業務とは逆に、例えば、いわゆる二次治療として、最も強力なＤＭＴを用いて治療を開始することが患者の長期疾患状態にとって最も有益である可能性がある。いくつかの実施形態では、患者は二次治療と組み合わせたＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与計画により治療される。このような組み合わせを用いて、１種または複数の二次治療の副作用プロファイルが低減される。いくつかの実施形態では、この組み合わせを用いて、１種または複数の二次治療の投与頻度用量が低減される。例えば、組み合わせた場合、上記表に列挙された物質の用量を、約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％低減し得、および／または投与頻度を通常の半分、または通常の１／３に、または例えば、毎日から隔日もしくは毎週に、隔日から毎週もしくは２週毎に、毎週から２週毎もしくは毎月に、などに減らせ得る。したがって、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、より都合のよい治療計画を可能にすることにより、患者のアドヒアランスを高める。さらに、いくつかのＤＭＴは、例えば、ミトキサントロンに対する生涯の投与量限度として、１４０ｍｇ／ｍ２の生涯累積投与量、または２、３年の治療に厳密に制限されるべきことが示唆されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を補充し、このＤＭＴのより低い用量またはより少ない頻度の投与を可能にすることにより、患者のミトキサントロンへの接触が維持される。
【０８７３】
いくつかの実施形態では、患者は、１種または複数のＤＭＴでの治療を受けていない未処置患者であり、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が二次治療の副作用を和らげるために使用される。したがって、未処置患者は、疾患の最初に、二次治療の長期間の効果から利益を得ることができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、二次治療の使用の前のエントリー治療として使用される。例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、第一の約３ヶ月の治療期間投与されて疾患を安定化させ、その後患者は二次薬剤の維持療法に移行され得る。
【０８７４】
未処置患者は、１種または複数のＤＭＴを受けたことがありかつおそらく失敗した患者に比べて、治療に応答する可能性が大きいと一般に考えられる。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１種または複数のＤＭＴを受けたことがありかつおそらく失敗した患者に使用される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１種または複数のＤＭＴを受けたことがありかつおそらく失敗した患者の治療効果を高め、これらの患者が未処置患者のように応答することを可能にし得る。
【０８７５】
いくつかの実施形態では、患者は１種または複数のＤＭＴを受けたことがあるか受けているが、十分に応答していない。例えば、患者は１種または複数のＤＭＴに対し、不応性であるか、または応答が不十分であり得る。いくつかの実施形態では、患者は、テリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（ＧＥＮＺＹＭＥ））；インターフェロンβ１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）；インターフェロンβ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（ＢＡＹＥＲ  ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．）；酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（ＴＥＶＡ  ＮＥＵＲＯＳＣＩＥＮＣＥ）；インターフェロンβ１ｂ（ＥＸＴＡＶＩＡ（ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ  ＣＯＲＰ．）；フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ  ＣＯＲＰ．）；アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（ＧＥＮＺＹＭＥ）；ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（ＥＭＤ  ＳＥＲＯＮＯ）；ペグ化インターフェロンβ１ａ（ＰＬＥＧＲＩＤＹ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）；インターフェロンβ１ａ（ＲＥＢＩＦ（ＥＭＤ  ＳＥＲＯＮＯ，ＩＮＣ．）；フマル酸ジメチル（ＢＧ−１２）（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）；およびナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）の内の１種または複数に対し、不応性であるか、または不十分な応答である。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、患者における１種または複数のＤＭＴの治療効果をもたらし、したがって、ＤＭＴに対する非応答性を低減または除去する。例えば、これは、より高い用量または頻度での１種または複数のＤＭＴを用いる治療から患者を免れさせ得る。
【０８７６】
より侵攻性の疾患の患者では、１つの手法は、誘導治療モデルであり、この場合、強力な効力があるが安全性の懸念の強い治療を最初に投与し、続いて、維持療法を行う。このようなモデルの例には、アレムツズマブによる最初の治療に続けて、ＩＦＮβ、ＧＡ、またはＢＧ−１２による治療を含み得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質を用いて、療法を維持療法に切り替える必要性をなくする。いくつかの実施形態では、二次治療を含み、１種または複数の開示結合物質を、１種または複数のＤＭＴに対する維持療法として用いられる。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質を、例えば、一次治療などの、誘導療法での第一の治療として用い、続けて維持療法として別のＤＭＴを用いる。
【０８７７】
いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質を、約３ヶ月の初期治療期間の間投与して疾患を安定させ、その後患者を一次治療薬による維持療法に移行し得る。
【０８７８】
種々の実施形態では、１種または複数の開示結合物質を用いて、限定されないが、本明細書で開示のいずれかの物質を含む、ＤＭＴの１種または複数の副作用を低減する。例えば、１種または複数の開示結合物質は、１種または複数のＤＭＴの用量を節約可能とし、したがって、より少ない副作用とする投与計画で使用し得る。例えば、いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＡＵＢＡＧＩＯまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減させ得る。この副作用には、毛髪菲薄化、下痢、インフルエンザ、悪心、異常な肝臓検査および手または足の異常な痺れまたは刺痛（知覚異常）、白血球のレベル（感染症のリスクの増大の可能性）；血圧の増大；および重篤な肝障害を含み得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＡＶＯＮＥＸまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、うつ、軽度の貧血、肝障害、アレルギー反応および心臓障害を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＢＥＴＡＳＥＲＯＮまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー反応、うつ、肝障害、および低白血球数を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＣＯＰＡＸＯＮＥまたは関連物質の、注射部位反応、血管拡張（血管の拡張）；胸部痛；不安症、胸部痛、動悸、息切れおよび顔面紅潮を含む注射直後の反応を含む、１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＥＸＴＡＶＩＡまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー反応、うつ、肝障害、および低白血球数を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＧＩＬＥＮＹＡまたは関連物質の、頭痛、インフルエンザ、下痢、背部痛、肝臓酵素上昇、咳、最初の投与後の遅い心拍数、感染症、および眼の膨潤を含む１つまたは複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、発疹、頭痛、発熱、鼻詰まり、悪心、尿路感染症、疲労、不眠、上気道感染症、じん麻疹、そう痒、甲状腺障害、真菌感染、関節、四肢および背中の痛み、下痢、嘔吐、顔面紅潮、および輸注反応（悪心、じん麻疹、そう痒、不眠、悪寒、顔面紅潮、疲労、息切れ、味覚の変化、消化障害、眩暈、疼痛を含む）を含むＬＥＭＴＲＡＤＡまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ノバントロンまたは関連物質の、投与の２４時間後の緑色尿；感染症、骨髄抑制（疲労、紫斑、低血液細胞数）、悪心、毛髪菲薄化、膀胱感染症、口のびらん、および深刻な肝障害および心臓障害を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＰＬＥＧＲＩＤＹまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、うつ、軽度の貧血、肝障害、アレルギー反応および心臓障害を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＲＥＢＩＦまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、肝障害、うつ、アレルギー反応、および低赤血球数または白血球数を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＴＥＣＦＩＤＥＲＡまたは関連物質の、顔面紅潮（熱またはそう痒の感覚、皮膚の紅潮）、消化管障害（悪心、下痢、腹痛）、発疹、尿中タンパク、肝酵素の上昇；および血中のリンパ球（白血球）数の減少を含む１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、頭痛、疲労、尿路感染症、うつ、気道感染症、関節痛、胃もたれ、腹部不快感、下痢、腟炎、腕または脚部痛、発疹、輸注の２時間以内のアレルギー性反応または過敏症反応（眩暈、発熱、発疹、そう痒、悪心、顔面紅潮、低血圧、呼吸困難、胸部痛）を含むＴＹＳＡＢＲＩまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。
【０８７９】
いくつかの実施形態では、本発明は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種または複数のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０８８０】
限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、これは、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗菌剤であり、これは、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。
【０８８１】
限定されないが、自己免疫疾患適用を含むいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は当該技術分野においてよく知られている。本発明で有用な副腎皮質ステロイドの例には、ヒドロキシルトリアムシノロン、α−メチルデキサメタゾン、β−メチルβ−メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β−メタゾンベンゾエート、β−メタゾンジプロピオネート、β−メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびその残りのエステル、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）としては、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル−２，５−ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０８８２】
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないような任意のタイプの分子の組成物への共有結合により修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合、などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のいずれかを既知の技術、例えば、限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、などを使って行うことができる。
【０８８３】
さらにその他の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、例示的実施形態では、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシス、壊死または任意のその他の形の細胞死を引き起こす物質を含む細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。
【０８８４】
本明細書で記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体をこのように翻訳後修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば、蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または、例えば、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。
【０８８５】
細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１−メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。その他の細胞傷害薬には、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン，１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’−（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。
【０８８６】
さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、IL-1βアンタゴニスト、インターロイキン（例えば、IL-12またはIL-2）、IL-12Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合体形成して、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：５４１９（１９８０））。
【０８８７】
他の細胞傷害薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がＦｃベースキメラタンパク質複合体に安定に結合される。このような放射性核種としては、例えば、リン−３２、スカンジウム−４７、銅−６７、ガリウム−６７、イットリウム−８８、イットリウム−９０、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、レニウム−１８６またはレニウム−１８８などのβ放射体、およびアスタチン−２１１、鉛−２１２、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３またはアクチニウム−２２５などのα放射体が挙げられる。
【０８８８】
検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素−１２５、炭素−１４、硫黄−３５、トリチウムおよびリン−３２が挙げられるが、これらに限定されない。
【０８８９】
治療方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、および炎症性疾患または状態を含む、種々の疾患および障害を治療する用途がある。
【０８９０】
さらに、本発明の物質は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の治療、または治療用の薬物の製造に使用し得る。
【０８９１】
いくつかの実施形態では、本発明は、癌の治療、または癌の患者に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る任意の制御されない細胞増殖に関し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。元の位置から移動し、重要な器官に播種される原発性腫瘍または癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす場合がある。転移は、原発腫瘍部位のものとは異なる癌細胞または一群の癌細胞であり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の播種から生ずる。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。
【０８９２】
治療され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖が挙げられるが、これらに限定されない。
【０８９３】
種々の実施形態では、本発明は、癌の治療のための野生型または改変シグナル伝達物質を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体を提供する。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、腫瘍を大幅に低減および／または除去する。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、その他の抗癌剤、例えば、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、および免疫抑制剤と併せて対象に投与されると、腫瘍を大幅に低減および／または除去する。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体と他の抗癌剤の組み合わせは、相乗的に腫瘍サイズを低減するおよび／または腫瘍細胞を除去する。
【０８９４】
種々の実施形態では、本発明は、１つまたは複数のターゲティング部分および１種または複数の野生型または改変型シグナル伝達物質を含むキメラの一部であるＦｃベースキメラタンパク質複合体を用いる癌併用療法に関する。したがって、本発明は、例えば、ターゲティング部分および１種または複数のシグナル伝達物質を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体および抗癌剤と組み合わせたその使用提供する。
【０８９５】
例えば、種々の実施形態では、本発明は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体、および限定されないが、ヒトインターフェロンアルファ２を含むＩＦＮアルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む野生型または改変型シグナル伝達物質を含む癌のための併用療法に関する。
【０８９６】
他の実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、複数のターゲティング部分を含み、従って二重特異性または三重特異性フォーマットで存在する。例えば、種々の実施形態では、本発明は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体と、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤結合物質（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ２、または抗ＣＴＬＡ）、および限定されないが、ヒトインターフェロンアルファ2を含むＩＦＮアルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む改変シグナル伝達物質と、を含む癌のための併用療法剤に関する。
【０８９７】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、その１つまたは複数の受容体に対する低減された親和性または活性を有し、それにより、キメラタンパク質の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止するように野生型であるか、または改変される。いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１個または複数のターゲティング部分を有する本発明の複合体中に包含することにより回復可能である。
【０８９８】
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症および／または慢性感染症の治療、またはそれらの感染症を罹患している患者に関する。感染症の例としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０８９９】
いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、癌、心不全、自己免疫疾患、鎌状赤血球症、地中海貧血症、失血、輸血反応、糖尿病、ビタミンＢ１２欠乏症、膠原病性脈管疾患、シュワックマン症候群、血小板減少性紫斑病、セリアック病、甲状腺機能低下症またはアジソン病などの内分泌欠損状態、クローン病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチまたは若年性関節リウマチなどの自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、好酸球性筋膜炎、低免疫グロブリン血症、または胸腺腫／胸腺癌などの免疫異常、移植片対宿主病、前白血病状態、非血液学的症候群（例えば、ダウン、デュボヴィッツ、ゼッケル症候群）、フェルティ症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、夜間発作性血色素尿症、骨髄線維症、汎血球減少症、赤芽球ろう、シェーンライン−ヘノッホ紫斑病、マラリア、タンパク質欠乏、月経過多、全身性硬化症、肝硬変、代謝低下状態、およびうっ血性心不全の１つまたは複数の治療、またはこれらの１つまたは複数を有する患者の治療に関する。
【０９００】
いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、マイコバクテリア感染症、癌、強皮症、肝炎、Ｃ型肝炎、敗血性ショック、および関節リウマチの１つまたは複数の治療、またはこれらの１つまたは複数を有する患者の治療に関する。
【０９０１】
種々の実施形態では、本発明の組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患、結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの１種または複数の炎症性疾患または状態を治療するまたは予防するために使用される。
【０９０２】
種々の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を治療する用途を有する。
【０９０３】
種々の実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の望ましくないＣＴＬ活性を特徴とする状態、および／または高レベルの細胞死を特徴とする状態を治療するまたは予防するために使用される。例えば、種々の実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の無制御または過敏性の免疫応答に関連する状態を治療するまたは予防するために使用される。
【０９０４】
種々の実施形態では、本発明の組成物は、ＭＳ、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、およびその他の自己免疫疾患などの１種または複数の自己免疫疾患および／または神経変性疾患または状態の治療または予防に使用される。
【０９０５】
種々の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を治療するまたは予防するために用いられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患および／または神経変性疾患は、ＭＳ（限定されないが、本明細書に記載のサブタイプを含む）、アルツハイマー病（限定されないが、早期発症型アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、および家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病およびパーキンソニズム（限定されないが、特発性パーキンソン病、脳血管性パーキンソニズム、薬剤誘発性パーキンソニズム、レヴィー小体型痴呆、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、限定されないが、突発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、平山病（Ｈｉｒａｍａｙａ  ｄｉｓｅａｓｅ））から選択される。
【０９０６】
ある実施形態では、本発明は、ウイルス性肝炎、アルコール肝炎、自己免疫性肝炎、アルコール性肝障害、脂肪性肝疾患、脂肪症、脂肪性肝炎、非アルコール脂肪性肝疾患、薬剤誘発性肝疾患、肝硬変、線維症、肝不全、薬剤誘導肝不全、代謝症候群、肝細胞癌、胆管癌、原発性胆汁性肝硬変（原発性胆汁性胆管炎）、毛細胆管、ジルベール症候群、黄疸、およびいずれか他の肝毒性関連兆候から選択される肝障害の１つまたは複数の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、肝線維症の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、慢性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎感染症、アルコール性肝疾患、肝損傷（場合により、進行性線維症および肝線維症に起因する）の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、線維症の軽減または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、肝硬変の軽減または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、肝細胞癌の軽減または予防のための方法を提供する。
【０９０７】
種々の実施形態では、本発明は、限定されないが、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、脳血管疾患（ＣＶＤ）、大動脈弁狭窄症、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、心筋梗塞（心臓発作）、脳血管疾患（脳卒中）、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、狭心症（安定および不安定）、心房細動、不整脈、弁膜症、および／またはうっ血性心不全を含む心臓および脈管構造に影響を与える疾患または状態などの心臓血管疾患の治療または予防のための方法を提供する。種々の実施形態では、本発明は、炎症を伴う心臓血管疾患の治療または予防のための方法を提供する。
【０９０８】
種々の実施形態では、本発明は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、肺血管収縮、炎症、アレルギー、呼吸障害、呼吸促迫症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧症、肺血管収縮、肺気腫、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、レフレル症候群、グッドパスチャー症候群、胸膜炎、間質性肺炎、肺水腫、肺線維症、サルコイドーシス、呼吸器多核体ウイルス感染症に関連する合併症、および他の呼吸器疾患などの１種または複数の呼吸器疾患の治療または予防のための方法を提供する。
【０９０９】
種々の実施形態では、本発明は、ＭＳを治療または予防するために用いられる。種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、複数のＭＳ症状を除去または低減するために用いられる。本明細書に記載の組成物および方法で予防または治療できる多発性硬化症に関連する症状の例には、視神経炎、複視、眼振、眼球運動測定異常、核間性眼筋麻痺、運動眼閃および音眼閃、求心性瞳孔障害、不全麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、不全片麻痺、四肢不全麻痺、麻痺、対麻痺、半身麻痺、四肢麻痺、四肢不全麻痺（ｑｕａｄｒａｐｌｅｇｉａ）、痙縮、構音障害、筋萎縮症、痙攣、筋痙攣、筋緊張低下、クローヌス、間代性筋痙攣、ミオキミア、不隠脚症候群、下垂足、反射機能不全、錯感覚、麻酔、神経痛、神経障害性および神経性疼痛、レルミット徴候、固有受容機能不全、三叉神経痛、運動失調、企図振戦、測定異常、前庭性運動失調、めまい、発語運動失調、ジストニア、拮抗運動反復障害、頻尿、膀胱痙性、弛緩性膀胱、排尿筋・括約筋筋失症、勃起不全、無オルガスム症、不感症、便秘、便意切迫、便失禁、うつ、認知障害、認知症、気分変動、情緒不安定、多幸感、双極症候群、不安症、失語症、言語障害、疲労、ウートホフ徴候、胃食道逆流症および就眠障害が挙げられる。本明細書に記載の１種または複数の物質により、対象におけるこれらの症状の１種または複数の緩和または改善を実現できる。
【０９１０】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、単一の臨床症状（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＩＳ）を治療または予防するために用いられる。単一の臨床症状（ＣＩＳ）は、視神経炎、脳幹症状、および部分的な脊髄炎などのＭＳと合致する単一症状の発作である。第２の臨床的発作を経験するＣＩＳの患者は通常、臨床的に確実な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）であると見なされる。ＣＩＳおよびＭＲＩ病変の患者の８０％超がＭＳを発病し、約２０％は自己限定プロセスを有する。ＭＳに適合する単一の臨床的発作を経験する患者は、臨床的に確実な多発性硬化症の発作の前に、多発性硬化症に合致する少なくとも１つの病変を有し得る。種々の実施形態では、本明細書中に記載されるＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＣＩＳが、例えばＲＲＭＳを含むＭＳに進行しないように、ＣＩＳを治療するために使用される。
【０９１１】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、単一の臨床症状（ＲＩＳ）を治療または予防するために用いられる。ＲＩＳでは、偶発画像所見が、臨床的徴候または症状の非存在下で炎症性脱髄を示唆する。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＲＩＳが、例えば、ＲＲＭＳを含むＭＳに進行しないように、ＲＩＳを治療するために使用される。
【０９１２】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、良性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次性進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）、進行性再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）、および一次性進行型多発性硬化症（ＰＰＭＳ）の１種または複数を治療するために用いられる。
【０９１３】
良性多発性硬化症は、レトロスペクティブな診断であり、１〜２回の増悪と完全な回復、継続しない能力障害および初期の発症後１０〜１５年の間の無疾患進行を特徴とする。しかし、良性多発性硬化症は他の型の多発性硬化症に進行する可能性がある。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、良性多発性硬化症がＭＳに進行しないように良性多発性硬化症の治療に使用される。
【０９１４】
ＲＲＭＳに罹患している患者は、散発性増悪または再発、ならびに寛解期間を経験する。病変および軸索喪失の証拠は、ＲＲＭＳの患者のＭＲＩ上で見える場合も見えない場合もある。種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＲＲＭＳを治療するために用いられる。いくつかの実施形態では、ＲＲＭＳは、ＲＲＭＳの患者；ＳＰＭＳの患者で再発が重畳している患者；およびＣＩＳの患者で、その後のＭＲＩスキャンでマクドナルド基準に従って病変の多発を示す患者を含む。本明細書で「再発」、「画定再発」、または「臨床的画定再発（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｒｅｌａｐｓｅ）」としても使用され得る臨床的再発は、１種または複数の新しい神経学的異常の出現または１種または複数の以前に観察された神経学的異常の再出現である。この臨床状態の変化は、４８時間持続しなければならず、直前に少なくとも３０日間の比較的安定なまたは改善されている神経学的状態がなければならない。いくつかの実施形態では、対象の症状に、以前の評価に比べて総合障害度評価尺度（ＥＤＳＳ）スコアでの少なくとも１．００または７つのＦＳの２以上のスコアでの１グレードまたはＦＳの１つのスコアの２グレードの増加に一致する、観察される客観的な神経学的変化が付随する場合、イベントは再発としてカウントされる。
【０９１５】
ＳＰＭＳは、ＲＲＭＳから進化し得る。ＳＰＭＳに罹患している患者は、再発し、寛解中の回復の程度の漸減、ＲＲＭＳ患者より頻度の少ない寛解および顕著な神経障害を有する。脳梁、正中中枢および脊髄の萎縮のマーカーである脳室拡大がＳＰＭＳの患者のＭＲＩで認められる。種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＲＲＭＳがＳＰＭＳに進行しないようＲＲＭＳを治療するために使用される。
【０９１６】
ＰＰＭＳは、明確な発作または寛解なしに増大する神経障害の着実な進行を特徴とする。ＰＰＭＳの患者のＭＲＩでは、脳病変、びまん性脊髄損傷および軸索喪失の証拠が明白である。ＰＰＭＳは急性増悪の期間があり、一方で、増大する神経障害の過程に沿って寛解することなく進行が続く。ＰＲＭＳを罹患している患者のＭＲＩでは、病変が明らかである。種々の実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ＲＲＭＳおよび／またはＳＰＭＳがＰＰＭＳに進行しないように、ＲＲＭＳおよび／またはＳＰＭＳを治療するために使用される。
【０９１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、再発型のＭＳの治療の方法に使用される。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、再発型のＭＳの治療方法おいて使用され、身体障害の蓄積を遅らせ、および／または臨床的増悪の頻度を低減させ、かつ任意で、最初の臨床的発症を経験しＭＳに合致するＭＲＩの特徴を有する患者に対して使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、悪化する再発寛解型ＭＳ、進行再発型ＭＳまたは二次性進行型ＭＳの治療方法において使用され、神経障害および／または臨床的増悪の頻度を低減する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、再発の頻度および／または重症度を低減する。
【０９１８】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１回、または２回、または３回、または４回、または５回、または６回、または７回、または８回、または９回、または１０回以上の疾患修飾治療（ＤＭＴ）に対し不適切な応答のあった（または不応性である）患者における再発型のＭＳの治療方法で使用される。
【０９１９】
種々の実施形態では、対象の症状は、ＥＤＳＳ、または再発の頻度の減少、または持続性進行までの時間の増加、または高頻度の連続的ＭＲＩ調査における磁気共鳴画像（ＭＲＩ）挙動の改善によりなど、定量的に評価され、患者の治療前後の状態測定値を比較し得る。良好な治療において、が成功すると、患者の状態は改善されるであろう（例えば、ＥＤＳＳ測定スコアまたは再発の頻度が減少する、または持続性進行までの時間が増加する、またはＭＲＩスキャンが病状の低下を示す）。
【０９２０】
いくつかの実施形態では、患者を、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を受ける前、その間またはその後で応答性の指標を評価できる。種々の臨床的またはその他の治療の有効性の指標、例えば、ＥＤＳＳスコア；ＭＲＩスキャン；再発数、比率、または重症度；多発性硬化症機能評価（ＭＳＦＣ）；多発性硬化症の生活の質質問票（ＭＳＱＬＩ）；連続聞き取り加算検査（ＰＡＳＡＴ）；符号数字モダリティー検査（ＳＤＭＴ）；２５フィートの歩行試験；９ホールペグ試験；低コントラスト視力；修正疲労重症度スケール；総合障害度評価スコア（ＥＤＳＳ）；多発性硬化症機能評価（ＭＳＦＣ）；ベックうつ病質問票；および７／２４空間認知検査を使用できる。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、これらの尺度の内の１つまたは複数で改善をもたらす。さらに、患者を投与計画中の様々な時間でモニターできる。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、空間的、時間的マクドナルド多発性により評価して、疾患の改善をもたらす。例えば、空間的多発性に関しては、病変イメージング、例えば、実例として、Ｂａｒｋｈｏｆ−ＴｉｎｔｏｒｅのＭＲＩ基準、を使用し得る。病変イメージングには、ガドリニウム強調病変または９  Ｔ２高信号病変；少なくとも１つのテント下病変；少なくとも１つの傍骨性病変；少なくとも約３個の脳室周囲病変；脊髄病変を含む。時間的多発性に関してもまた、ＭＲＩを使用できる；例えば、最初の臨床的イベント後、３ヶ月以上実施された脳のＭＲＩスキャンにより、新しいガドリニウム強調病変が示される場合、これは、新規ＣＮＳ炎症性のイベントを示す可能性がある。理由は、ＭＳのガドリニウム強調期間は通常、６週間未満であるためである。ガドリニウム強調病変はないが新しいＴ２病変が存在する場合（初期イベントの時のＭＲＩを仮定して）、新しいＴ２病変またはガドリニウム強調病変を実証する３ヶ月後の反復ＭＲイメージングが必要となり得る。
【０９２１】
いくつかの実施形態では、疾患効果は、Ｌａｖｅｒｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｖｏｌ  ２０１４（２０１４），Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ ２６２３５０に記載されているいずれかの尺度を用いて評価される。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０９２２】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、（ａ）ＥＤＳＳの１．０ポイントの低下として定義される身体障害の悪化の防止、（ｂ）再発までの時間の増加、（ｃ）ガドリニウム強調病変の数および／または体積の低減または安定化、（ｄ）年間再発率の低下、（ｅ）再発持続時間およびＮＲＳスコアによる重症度の低減、（ｆ）ＭＲＩで測定して、疾患活動性（新規または拡大病変の年率）の低下、（ｇ）１年間、または２年間でのより低い再発平均数、（ｈ）３ヶ月のＥＤＳＳで測定した持続性疾患進行、（ｉ）ＣＤＭＳへの移行の防止、（ｊ）新規または強調Ｔ２病変がない、またはわずか、（ｋ）高信号Ｔ２病変体積の最小限の変化、（ｌ）マクドナルド定義のＭＳまでの時間の延長、（ｍ）１２週でのＥＤＳＳの持続性悪化により測定して身体障害の進行の防止、（ｎ）９６週での再発までの時間の短縮、および（ｏ）脳萎縮（例えば、ベースラインからの％変化）の低減化または安定化の内の１つまたは複数をもたらす。
【０９２３】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、治療の投与前の再発率に比べて（例えば、投与後１２ヶ月、または１２ヶ月未満、例えば、約１０ヶ月、または約８ヶ月、または約４ヶ月、または約２ヶ月、またはそれ未満の月数の後の発生率と比較して）、または以前の再発後の３〜２４ヶ月（例えば、６〜１８ヶ月、例えば、１２ヶ月）に測定した場合、治療の開始前と比べて、再発率の低下（例えば、少なくとも、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはそれを超える再発率の低下）を効果的に生ずる。
【０９２４】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、前処理状態からのＥＤＳＳスコアの増加の防止を効果的にもたらす。Ｋｕｒｔｚｋｅ総合障害度評価尺度（ＥＤＳＳ）は、多発性硬化症での身体障害を定量化する方法である。ＥＤＳＳは、ＭＳの一群の人に対し、下括弧に入れて使用された、以前の障害度評価尺度を置き換えた。ＥＤＳＳは、身体障害を８つの機能別障害度（ＦＳ）に定量化し、神経学者がこれらのそれぞれの機能別障害度スコア（ＦＳＳ）に割り付けるのを可能にする。機能系は：錐体路機能、小脳機能、脳幹機能、感覚機能、膀胱直腸機能、視覚機能および脳機能である。
【０９２５】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の投与後のＥＤＳＳスコアに比較して（例えば、１２ヶ月間または１２ヶ月未満の期間、例えば、１０、８、４またはそれ未満の期間にわたる投与後、または治療開始以前に比較して）ＥＤＳＳスコアの低減（例えば、少なくとも３ヶ月、６ヶ月、１年、またはそれより長期にわたり、例えば、１、１．５、２、２．５、３ポイント以上の低減）を効果的にもたらす。
【０９２６】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、１２ヶ月間、または１２ヶ月未満の期間、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の期間にわたるＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与後、または治療開始以前の新しい病変の数に比べて、新しい病変全体の数またはいずれか１つの型の新しい病変の数の低減（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の低減）を効果的にもたらす。
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、１２ヶ月間または１２ヶ月未満の期間、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の期間にわたるＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与後、または治療開始以前の病変の数に比べて、病変全体の数またはいずれか１つの型の病変の数の減少（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の減少）を効果的にもたらす。
【０９２７】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、１２ヶ月間または１２ヶ月未満の期間、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の期間の投与後、または治療開始以前での新しい病変の数の出現比率に比べて、新しい病変全体の数またはいずれか１つの型の新しい病変の数の出現比率の低下（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の比率の低下）を効果的にもたらす。
【０９２８】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、１２ヶ月間または１２ヶ月未満の期間、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の期間の投与後、または治療開始以前の病変面積の増加に比べて、病変面積全体またはいずれか１つの型の病変面積の低減（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の低減）を効果的にもたらす。
【０９２９】
一実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が投与され、１２ヶ月間または１２ヶ月未満の期間、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の期間の投与後、または治療開始以前の視神経炎の発生率または症状に比べて、視神経炎の発生率または症状の低減（例えば、視力の改善）を効果的にもたらす。
【０９３０】
種々の実施形態では、本発明の方法は、ヒト対象の処置に有用である。いくつかの実施形態では、ヒトは小児科のヒトである。他の実施形態では、ヒトは成人のヒトである。他の実施形態では、ヒトは老人のヒトである。他の実施形態では、ヒトは患者と呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、ヒトは女性である。いくつかの実施形態では、ヒトは男性である。
【０９３１】
特定の実施形態では、ヒトは、約１〜約１８ヶ月、約１８〜約３６ヶ月、約１〜約５才、約５〜約１０才、約１０〜約１５才、約１５〜約２０才、約２０〜約２５才、約２５〜約３０才、約３０〜約３５才、約３５〜約４０才、約４０〜約４５才、約４５〜約５０才、約５０〜約５５才、約５５〜約６０才、約６０〜約６５才、約６５〜約７０才、約７０〜約７５才、約７５〜約８０才、約８０〜約８５才、約８５〜約９０才、約９０〜約９５才または約９５〜約１００才の範囲の年齢である。種々の実施形態では、ヒトは３０才より大きい年齢である。
【０９３２】
免疫調節
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、免疫調節ができ、または免疫調節の方法において使用される。例えば、種々の実施形態では、本発明の治療方法は、本明細書に記載の免疫調節を含み得る。いくつかの実施形態では、免疫調節は、樹状細胞（ＤＣ）の場合、改変ＩＦＮシグナル伝達を含むＩＦＮシグナル伝達を含む。
【０９３３】
種々の実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が提供される。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、第１の標的および１個または複数の免疫細胞上に見出される１種または複数の抗原を認識し、それらに結合する。免疫細胞は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、目的の抗原に特異的に結合し、直接または間接的に１個または複数の免疫細胞を効果的に動員する。
【０９３４】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、目的の抗原に特異的に結合し、効果的に、直接または間接的に１個または複数の免疫細胞を動員し、免疫抑制効果を生じさせる。例えば、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は直接的または間接的に免疫抑制性免疫細胞を動員する。いくつかの実施形態では、免疫抑制性免疫細胞は、制御性Ｔ細胞（または、本明細書で使用される場合、免疫系を調節し、自己免疫疾患を抑制し、自己抗原に対する寛容を維持し、抗腫瘍免疫応答を妨害するＴ細胞の亜集団を指す、「Ｔｒｅｇ」）である。）。その他の免疫抑制性免疫細胞には、骨髄系サプレッサー細胞（または「ＭＳＣ」で、本明細書で使用される場合、それらの骨髄起源、未成熟状態、およびＴ細胞応答を強力に抑制する能力により規定される不均一細胞集団を意味する）；腫瘍関連好中球（または「ＴＡＮ」で、本明細書で使用される場合、免疫応答を抑制することができる好中球サブセットを意味する）；腫瘍関連マクロファージ（または「ＴＡＭ」で、本明細書で使用される場合、免疫応答を低減させ得るマクロファージのサブセットを意味する）、Ｍ２マクロファージ、および／または腫瘍誘導マスト細胞（本明細書で使用される場合、骨髄由来の長寿命不均一細胞集団のサブセットを意味する）が挙げられる。また、免疫抑制性免疫細胞は、Ｔｈ２細胞およびＴｈ１７細胞を含む。さらに、免疫抑制性免疫細胞には、免疫細胞、例えば、１種または複数のチェックポイント阻害剤受容体を発現しているＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞（例えば、例えば、無制御免疫応答を防止または抑制する免疫細胞上に発現したＣＴＬＡ−４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＴＩＭ−３を含む受容体）が挙げられる。Ｓｔａｇｇ，Ｊ．ｅｔ．ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｉｎ  ｔｒｉｐｌｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ．（２０１３）５（３）：１６９−１８１）を参照されたい。
【０９３５】
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）増殖を刺激する。Ｔｒｅｇ細胞は、Ｆｏｘｐ３（Ｆｏｒｋｈｅａｄ  ｂｏｘ  ｐ３）転写因子の発現を特徴とする。大部分のＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ２５＋であり、ヘルパーＴ細胞のサブセットと見なすことができるが、小さい集団はＣＤ８＋である場合もある。したがって、本発明の方法により調節されるべき免疫応答は、Ｔｒｅｇ細胞の、場合により抗原に応答した、増殖誘導を含み得る。したがって、方法は、対象に抗原を含むＦｃベースキメラタンパク質複合体を投与することを含み得る。抗原はＴｒｅｇ細胞の増殖を促進するアジュバントと共に投与されてよい。
【０９３６】
この方法が特異的抗原に応答してＴｒｅｇの増殖と分化を伴う限り、それは免疫応答を刺激する方法であると見なすことができる。しかし、Ｔｒｅｇは抗原に対し免疫系の他の細胞の応答を他の方法、例えば、それらの活性を阻害または抑制することで調節することができることを考慮すれば、全体としての免疫系に対する効果は、その抗原に対する応答を調節（例えば、抑制または阻害）することであり得る。したがって、本発明のこの態様の方法は、同様に、抗原に対する免疫応答を調節（例えば、阻害または抑制）する方法と呼ぶことができる。
【０９３７】
いくつかの実施形態では、方法は、その抗原に対する既存の免疫または進行中の免疫応答を有する対象の場合でも、特定の抗原に対する望ましくない免疫応答を治療的にまたは予防的に阻害または抑制する。これは、例えば、自己免疫疾患の処置に特に有用であり得る。
【０９３８】
特定の条件下では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分の標的を発現している抗原提示細胞を抗原の標的にすることにより、特定の抗原に対して対象を寛容化することも可能である。したがって、本発明は、対象の抗原に対する寛容を誘導する方法を提供し、この方法は、対象に抗原を含む組成物を投与することを含み、この場合、抗原はＦｃベースキメラタンパク質複合体のターゲティング部分に対する親和性を有する結合物質に結合され、その抗原はアジュバントの非存在下で投与される。この状況において、寛容は通常、その抗原に応答できるはずの免疫細胞の枯渇を伴うか、またはこのような免疫細胞の抗原に対する応答性の持続的低減の誘導を伴う。
【０９３９】
それに対し対象が望ましくない免疫応答を示す、または生じる危険性のある抗原に対して、Ｔｒｅｇ応答を高めることは特に望ましいであろう。例えば、それは、それに対し自己免疫疾患で免疫応答が起こる自己抗原であり得る。特定の抗原が病因になり得る可能性のある重要なものとして特定されている自己免疫疾患の例には、多発性硬化症（ミエリン塩基性タンパク質）、インスリン依存性糖尿病（グルタミン酸デカルボキシラーゼ）、インスリン耐性糖尿病（インスリン受容体）、セリアック病（グリアジン）、水疱性類天疱瘡（コラーゲンＸＶＩＩ型）、自己免疫性貧血（Ｒｈタンパク質）、自己免疫性血小板減少症（ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ）、重症筋無力症（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ  ｇｒａｖｉｓ）（アセチルコリン受容体）、グレーブス病（甲状腺刺激ホルモン受容体）、グッドパスチャー病などの糸球体腎炎（アルファ３（ＩＶ）ＮＣ１コラーゲン）、および悪性貧血（内因子）が挙げられる。あるいは、標的抗原は、同様に宿主組織に損害をもたらす応答を刺激する外来性抗原であってもよい。例えば、急性リウマチ熱は、心筋細胞抗原と交差反応する連鎖球菌抗原に対する抗体応答により引き起こされる。したがって、これらの抗原、またはその特定のフラグメントまたはエピトープは、本発明での使用のために好適な抗原であり得る。
【０９４０】
種々の実施形態では、本発明の物質、またはこれらの物質を用いる方法は、自己反応性Ｔ細胞を低減または抑制する。いくつかの実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の存在下で、任意選択でインターフェロンシグナル伝達を介して、この免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、多重特異的Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２シグナル伝達および／または発現を刺激し、これは自己反応性Ｔ細胞を抑制し得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の存在下で、任意選択でインターフェロンシグナル伝達を介して、この免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２シグナル伝達および／または発現を刺激し、これは自己反応性Ｔ細胞を抑制し得る。
【０９４１】
種々の実施形態では、本発明の方法は、制御性Ｔ細胞対エフェクターＴ細胞の比率を、例えば、自己免疫疾患を治療するために、免疫抑制に有利なように調整することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１種または複数の細胞傷害性Ｔ細胞；エフェクターメモリーＴ細胞；セントラルメモリーＴ細胞；ＣＤ８＋  幹細胞メモリーエフェクター細胞；ＴＨ１エフェクターＴ細胞；ＴＨ２エフェクターＴ細胞；ＴＨ９エフェクターＴ細胞；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞を低減および／または抑制する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５−制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ制御性Ｔ細胞、ＴＩＭ−３＋ＰＤ−１＋制御性Ｔ細胞、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）＋制御性Ｔ細胞、ＣＴＬＡ−４／ＣＤ１５２＋制御性Ｔ細胞、ニューロピリン−１（Ｎｒｐ−１）＋制御性Ｔ細胞、ＣＣＲ４＋ＣＣＲ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン）＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＢｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＬＲＲＣ３２／ＧＡＲＰ＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ３９＋制御性Ｔ細胞、ＧＩＴＲ＋制御性Ｔ細胞、ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞、１Ｂ１１＋制御性Ｔ細胞、ＢＴＬＡ＋制御性Ｔ細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、Ｔヘルパー３型（Ｔｈ３）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞表現型の制御性細胞（ＮＫＴｒｅｇ）、ＣＤ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２８−制御性Ｔ細胞および／またはIL-10、IL-3５、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ガレクチン−１、ＩＦＮ−γおよび／またはＭＣＰ１分泌制御性Ｔ細胞の内の１種または複数を増加させる、および／または刺激する。
【０９４２】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫刺激シグナルより免疫抑制シグナルを優先する。本発明の方法は、免疫活性化シグナルまたは共刺激シグナルの逆転または抑制を可能とする。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫抑制シグナルの提供を可能とする。例えば、いくつかの実施形態では、本物質および方法は、免疫刺激シグナルの効果を低減する。免疫刺激シグナルは、限定されないが、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド；ＯＸ−４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンドおよびＴＬ１Ａの内の１種または複数である。さらにいくつかの実施形態では、本物質および方法は、免疫抑制シグナルの効果を高める。これらのシグナルは、限定されないが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、および種々のＢ−７ファミリーリガンド（限定されないが、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈ６およびＢ７−Ｈ７を含む）の内の１種または複数である。
【０９４３】
キット
本発明はまた、本明細書に記載のいずれかのＦｃベースキメラタンパク質複合体の投与（追加の治療薬を含み、または含まずに）のためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の本発明の医薬組成物を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の医薬組成物を含む。
【０９４４】
キットを構成する成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象用を治療する目的のために構成される。
【０９４５】
使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は、通常、癌の治療などの望まれる治療結果を達成するために、キットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。
【０９４６】
キットに組込まれる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管され開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料に収容される。種々の実施形態では、梱包材料は、よく知られた方法、好ましくは、無菌の、混入物のない環境を与える方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。
【０９４７】
定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種）または１つ（１種）を超えるを意味し得る。
さらに、参照数値表示に関連して使われる用語の「約」は、参照数値表示±参照数値表示の最大で１０％を意味する。例えば、用語の「約５０」は、４５〜５５の範囲を含む。
【０９４８】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、望ましい治療的および／または予防的効果を達成するのに十分な量、例えば、疾患もしくは障害または疾患または障害と関連する１つまたは複数の兆候または症状の予防または軽減をもたらす量を指す。治療的または予防的適用の場合、対象に投与される組成物の量は、疾患の程度、タイプ、および重症度、ならびに総体的な健康、年齢、性別、体重および薬物耐性などの個体の特性に依存するであろう。当業者なら、これらおよび他の因子に基づいて適切な投与量を決定できるであろう。上記組成物はまた１種または複数の追加の治療化合物と組み合わせて投与できる。本明細書に記載される方法において、治療化合物は、疾患または障害の１種または複数の兆候または症状を有する対象に投与され得る。本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「減少されている」。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は低下し、かついくつかの下流の出力値は低下するが、他のものは増加し得る。
【０９４９】
逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「高く」なる。
【０９５０】
本明細書において、参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まない本発明の技術のその他の実施形態を排除するものではない。
【０９５１】
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としてのオープンエンド用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明を記載および請求するが、本発明、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などの代替用語を使って、代わりに記載することができる。
【０９５２】
本明細書で使用される場合、用語の「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、また、本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【０９５３】
治療効果の達成に必要な本明細書で記載の組成物の量は、特定目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてよい。一般に、治療目的のために治療薬を投与する場合、治療薬は薬理学的有効量で投与される。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、特に障害または疾患を治療するために、目的の生理的な効果を生み出すのに十分な量または目的の結果を達成することができる量を意味する。本明細書で使用される場合、有効量は、例えば、障害または疾患の症状の進展を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変える（例えば、疾患の症状の進展を遅らせる）、障害または疾患の１つまたは複数の症状または発症を減らすまたはなくする、および障害または疾患の症状を回復させるのに十分な量を含んでよい。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
【０９５４】
有効量、毒性、および治療効果は、例えば、細胞培養または実験動物によりＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％での治療的有効量）を測定するための標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果との間の用量比率は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は、最初は、例えば、細胞培養アッセイを含むインビトロアッセイから推測することができる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定したＩＣ５０などの循環血漿中濃度範囲を達成するように動物モデルで処方することができる。記載の組成物の血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。いずれかの特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニターすることができる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察された治療の効果に適合するように調節できる。
【０９５５】
特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量化可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
【０９５６】
本明細書で使用される場合、「治療方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の治療のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の治療のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。
【０９５７】
実施例
いくつかの実施例では、ノブインホール技術の次の２つのバリアントが使用される：Ｒｉｄｇｗａｙ（Ｒｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １９９６；９：６１７−６２１に由来し、例えば、実施例１〜６で使用される）およびＭｅｒｃｈａｎｔ（Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９８；１６：６７７−６８１に由来し、実施例７以降のほとんどの実施例で使用される）。配列は、Ｆｃ１およびＦｃ２（それぞれ、Ｒｉｄｇｗａｙのホールおよびノブ）およびＦｃ３およびＦｃ４（それぞれ、Ｍｅｒｃｈａｎｔのホールおよびノブ）と呼ばれる。特に断りのない限り、Ｒｉｄｇｗａｙ構築物中の「標準的」エフェクター変異は、ＬＡＬＡ−ＰＧ（Ｐ３２９Ｇ）である（実施例４参照）。Ｍｅｒｃｈａｎｔ構築物については、この目的を達成するために、ＬＡＬＡ−ＫＱ（Ｋ３２２Ｑ）変異が使用される（実施例４のデータに基づいて）。
Ｆｃ１：Ｒｉｄｇｗａｙホール：次記アミノ酸配列を有するｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ＿Ｙ４０７Ｔ：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＴＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５６５）
Ｆｃ２：Ｒｉｄｇｗａｙノブ：次記アミノ酸配列を有するｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ＿Ｔ３６６Ｙ：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＹＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５６６）
Ｆｃ３：Ｍｅｒｃｈａｎｔホール：次のアミノ酸配列を有するｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｋ３２２Ｑ＿Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖ：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５６７）
Ｆｃ４：Ｍｅｒｃｈａｎｔノブ：次のアミノ酸配列を有するｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｋ３２２Ｑ＿Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６Ｗ：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５６８）
【０９５８】
実施例全体を通して次の２つのＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨが使用される：Ｒ１ＣＨＣＬ５０（配列番号２８９）および３ＬＥＣ８９（配列番号３９１）。両者は、元の配列で、または次の変異型で使用される：
○Ｒ１ＣＨＣＬ５０＿ｏｐｔ４：Ｒ１ＣＨＣＬ５０＿Ｅ１Ｄ−Ａ７４Ｓ−Ｋ８３Ｒ−Ｑ１０８Ｌ−Ｈ１３Ｑ−Ｔ６４Ｋ（Ｅ１Ｄ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｑ１０８Ｌ、Ｈ１３Ｑ、およびＴ６４Ｋは配列番号２８９のアミノ酸配列を有するＲ１ＣＨＣＬ５０  ＶＨＨ中の変異を指す）。Ｒ１ＣＨＣＬ５０＿ｏｐｔ４は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＦＳＳＩＮＶＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＹＬＶＡＬＫＡＥＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５６９）；
○３ＬＥＣ８９＿ｏｐｔ４：３ＬＥＣ８９＿Ｅ１Ｄ−Ｑ５Ｖ−Ａ７４Ｓ−Ｑ１０８Ｌ−Ｇ７５Ｋ（Ｅ１Ｄ、Ｑ５Ｖ、Ａ７４Ｓ、Ｑ１０８Ｌ、およびＧ７５Ｋは配列番号３９１のアミノ酸配列を有する３ＬＥＣ８９  ＶＨＨ中の変異を指す）。
○３ＬＥＣ８９＿ｏｐｔ４は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＩＦＳＶＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＮＱＧＡＰＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＫＡＦＴＲＧＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５７０）。
【０９５９】
実施例１：Ｆｃベースキメラタンパク質複合体構築
ターゲティング部分およびシグナル伝達物質を有するキメラタンパク質を、低減されたＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合のために変異導入したヒトＩｇＧ１  Ｆｃ−融合フォーマット（ＬＡＬＡ−ＰＧ変異）にクローン化した。合計５種の組み合わせ（図２０Ａ〜Ｅ参照）：２種のホモダイマーおよび３種のヘテロダイマー（ノブインホール変異を基準にした；Ｒｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ  ９，Ｉｓｓｕｅ  ７，１  Ｊｕｌｙ  １９９６，Ｐａｇｅｓ  ６１７−６２１を参照）を構築した。これらの融合タンパク質では、抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ  ３ＬＥＣ８９がターゲティング部分であり、Ｒ１４９Ａ変異を有するヒトＩＦＮａ２がシグナル伝達物質であった；これらの試薬を一般概念の説明に使用した。
【０９６０】
関連配列（識別子については、図２０Ａ〜Ｅを参照）は以下の通り：
【化３】
2021519089.tif 000021
2021519089.tif 000022
【０９６１】
種々の構築物を、製造業者の説明書に従って、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）により作製し、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１０日後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。製造業者の説明書に従いｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ  ｒｅｓｉｎ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使って、培地から組換えタンパク質を精製した。平均収率は、７０〜２００ｍｇ／リットルの範囲であった（下表を参照）。還元（添加されたβ−メルカプトエタノール（β−ｍＥｔＯＨ）による）および非還元条件（β−ｍＥｔＯＨなし）下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図２１参照、ゲルのレーンＡ〜Ｅにロードされたタンパク質は、下表に記載される）は、タンパク質がジスルフィド結合複合体として発現されたことを明確に示した。異常なクラスタリング（２つのノブまたは２つのホール鎖の組み合わせ；β−ｍＥｔＯＨなしのレーンＤおよびＥの＊、＊＊、または＊＊＊で示されるゲル上の余分のバンド）がヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体ＤおよびＥで観察される。還元条件下では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体の２つの部分は、うまく分離されている。
【０９６２】
ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ホモダイマータンパク質より可溶性であるように見えた。後者のケースでは、１ｍｇ／ｍｌ未満の濃度でも、タンパク質は凝集し沈殿する傾向があった。ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ）でＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いるタンパク質融解分析は、種々のタンパク質の融解温度は、ほぼ同等であり、６６〜７０℃の範囲であったことを示した。
【表７】
2021519089.tif 000023
【０９６３】
タンパク質の安定性をさらに推定するために、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体「Ｃ」、「Ｄ」、および「Ｅ」（図２０Ａ〜Ｅ参照）を５サイクルの凍結および解凍に供した。解凍直後にタンパク質凝集体を遠心分離により取り出し、タンパク質濃度を測定し、プロットした（図２２参照）。タンパク質ＣおよびＤは、タンパク質Ｅより凍結−解凍サイクルに対しより耐性のように思われた。
【０９６４】
実施例２：Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の特性評価
ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体のヒトＣｌｅｃ９Ａに対する親和性を、Ｏｃｔｅｔ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）でバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）技術を用いて測定した。組換えＣｌｅｃ９Ａをビオチン化し、ストレプトアビジンセンサーで捕捉した。担持チップを段階希釈Ｆｃ融合体と共にインキュベートした。干渉縞でのシフトを結合および解離速度、およびそれによる親和性の定量化に使用した。下表のデータは、親和性はタンパク質ＣおよびＥで同等であるが、一方、タンパク質Ｄでは、１０倍低いことを示す。
【表８】
2021519089.tif 000024
【０９６５】
ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体の生物活性を試験するために、親およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞株で６−１６レポーター活性を測定した。ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞を、ヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターで遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種した後、ポジティブコントロールとしての段階希釈ＩＦＮａ２およびＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図２３のデータは、ホモダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体よりもわずかにより活性であることを示す。いずれの場合も、標的細胞に対する活性は、親細胞に対する活性と比べて、１０，０００倍を超える差異で観察された。
【０９６６】
実施例３：マウスでの薬物動態学的調査
ＦｃベースＡｃＴａｆｅｒｏｎ（Ｆｃ−ＡＦＮ）の薬物動態学的挙動を評価するために、分子Ｐ９５７およびＰ９５８／Ｐ９５９（実施例１）の各構築物を１２匹のマウスに対し１．５ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与した。Ｋ−ＥＤＴＡ血液を、３匹のマウスの第１群から５分、８時間および２日目に採取し、３匹のマウスの第２群から１５分、１日および４日目に採取し、３匹のマウスの第３群から１、７および１４日目に採取し、３匹のマウスの第４群から３時間、２１日および２８日目に採取した。未処理のＦｃ−ＡＦＮの濃度をＥＬＩＳＡで測定した。簡単に説明すると、ＭＡＸＩＳＯＲＰ  Ｎｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｅプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌの濃度の抗ヒトインターフェロンアルファｍＡｂ（クローンＭＭＨＡ−１３；ＰＢＬ  Ａｓｓａｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）で一晩コートした。プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン−２０で４回洗浄後、ＰＢＳ中の０．１％カゼインを用いて室温で少なくとも１時間ブロッキングした。その後、希釈試料および標準物質をＰＢＳ中の０．１％カゼイン中、室温下で２時間インキュベートした。別の洗浄サイクル後、注文製作のウサギ抗ＶＨＨ（ＰＢＳ中０．１％中で１／２００００に希釈）を室温で２時間インキュベートし、続け、追加の洗浄サイクルおよびＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギ（Ｊａｃｋｓｏｎ−１１１−０３５−１４４；０．１％カゼイン中１：５０００に希釈）と共に室温で１時間のインキュベーションを行った。最後の洗浄サイクル後、製造業者の説明書に従いＫＰＬ基質（５１２０−００４７；ＳｅｒａＣａｒｅ）を用いてペルオキシダーゼ活性を測定した。試料からの濃度を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使い計算した。測定した濃度を図２４にプロットした。終末相半減期は、Ｐ９５８／Ｐ９５９が平均で約４．５日およびＰ９５７が３．２５日と推定された。
【０９６７】
実施例４：ヒト化マウスでの有効性研究
ＦｃベースＡＦＮのインビボ有効性を評価するために、分子Ｐ９５７およびＰ９５８／Ｐ９５９（実施例１；ヒトＣｌｅｃ９Ａ、高度に特異的な従来の樹状細胞１（ｃＤＣ１）マーカーを標的とする）をヒト化マウスの腫瘍モデルで試験した。簡単に説明すると、新生児ＮＳＧマウス（１〜２日齢）に、１００ｃＧｙで亜致死量照射し、その後、１ｘ１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＨＬＡ−Ａ２陽性臍帯血由来）を肝内に送達した。１３週後、幹細胞移入マウスに２５ｘ１０５個のヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６１；インターフェロン（ＩＦＮ）の直接抗増殖作用に感受性がない）を皮下に接種した。マウスを、３０μｇのヒトＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）タンパク質で、腫瘍接種後６日目〜１７日目に毎日腹腔内治療した。触知できる腫瘍が認められたら、緩衝液またはＦｃ−ＡＦＮ（２５μｇ）での毎週の静脈内注射を、腫瘍接種後の１０日目に開始した（群当たりｎ＝６匹のマウス）。腫瘍サイズ（ノギス測定値）、体重および体温を、毎日評価した。図２５は、第２の治療（マウスは、毎週、ＰＢＳまたはＡＦＮの注射を受け、データは、第２の毎週治療後７日までの腫瘍増殖を示す）後７日までの腫瘍増殖を示し、全ての構築物が類似のレベルの腫瘍増殖抑制を誘導したことを示す。体重および体温のデータは、緩衝液治療およびＡＦＮ治療間で何ら大きな差異を示さず、ＡＦＮ治療が耐容性良好であったことを裏付けた。
【０９６８】
実施例５：種々リンカー長さのヘテロダイマー構築物
実施例１および２のヘテロダイマーＦｃ  ＡＦＮ構造では、ＶＨＨとＦｃならびにＦｃとＩＦＮの間で２０＊ＧＧＳリンカーを使用した。バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）で生物活性（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａレポーター）またはＣｌｅｃ９Ａに対する親和性に与えるこれらのリンカーの種々の長さの影響を評価した。
この実施例および次の実施例では、種々のＦｃバリアントは以下の通りである（アミノ酸番号はＥＵ規則（ＰＮＡＳ、Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９；６３（１）７８−８５）に準ずる）：
・Ｆｃ：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇは、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ配列中の変異である）
・Ｆｃ１：Ｒｉｄｇｗａｙホール：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ＿Ｙ４０７Ｔ（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＹ４０７Ｔは、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ１配列中の変異である）
・Ｆｃ２：Ｒｉｄｇｗａｙノブ：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ＿Ｔ３６６Ｙ（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＴ３６６Ｙは、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ配列中の変異である）
【０９６９】
発現に使用したリーダー配列は、実施例１のものと同じであり、この実施例では、いずれの構築物もさらに詳細に記載しない。
【０９７０】
使用したリンカーは、多数のＧＧＳ反復と、それに続く任意選択の追加の単一グリシン残基からなる。これらは、ｎＧＧＳと呼ばれ、ｎはＧＧＳ反復の数を表し、任意の追加のＧは構築物名中では別々に示されていない。
【０９７１】
構築物：
【化４】
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2021519089.tif 000026
【０９７２】
リンカー長さバリアントの産生と精製
ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）により種々の構築物を作製し、ホール（Ｆｃ１ベース）およびノブ（Ｆｃ２ベース）の組み合わせを、図７Ｂで概要を示したような実施例１の構築物Ｐ９５８／９５９に類似のヘテロダイマー構造に結合し、製造業者の説明書に従いＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。リンカー長さの変化は、産生（１００〜３００ｍｇ／リットルの収率）および得られたタンパク質の安定性に影響を与えないように思われた。
【０９７３】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞を、ヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターで遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図２６および表６のデータは、リンカー長さの変化が、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞）の生物活性に対し大きな影響を与えなかったことを示す。留意すべきは、３ＬＥＣ８９−５＊ＧＧＳ−Ｆｃ１ベース構築物のいずれかについて測定された生物活性も、実施例２で測定したように、３ＬＥＣ８９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ１／Ｆｃ２−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａに対する測定生物活性と同等であることである。
【表９】
2021519089.tif 000027
【０９７４】
ｈＣｌｅｃ９Ａに対する親和性
リンカー長バリアントのヒトＣｌｅｃ９Ａに対する親和性を、Ｏｃｔｅｔ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）でバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）技術を用いて測定した。従って、組換えＣｌｅｃ９Ａをビオチン化し、ストレプトアビジンセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で捕捉した。担持チップを段階希釈Ｆｃ融合体と共にインキュベートした。この実験では、３ＬＥＣ８９およびＲ１ＣＨＣＬ５０ホール構築物を１０＊ＧＧＳノブ構築物を有する５＊ＧＧＳまたは３＊ＧＧＳリンカーと組み合わせ、２つの２０＊ＧＧＳリンカーを有する元の３ＬＥＣ８９構造物と比較した。干渉縞でのシフトを結合および解離速度（およびそれによる親和性）の定量化に使用した。表７にまとめたデータは、リンカーの短縮化がｈＣｌｅｃ９Ａに対する親和性に悪い影響を与えないことを示す。
【表１０】
2021519089.tif 000028
【０９７５】
実施例６：種々リンカー長さのホモダイマー構築物
実施例１および２のホモダイマーＦｃ  ＡＦＮ構造で、ＶＨＨとＦｃならびにＦｃとＩＦＮの間に２０＊ＧＧＳリンカーを使用した。これらの種々のリンカー長の生物活性（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａレポーター）に与える影響を評価した。
【０９７６】
構築物：
【化５】
2021519089.tif 000029
【０９７７】
リンカー長さバリアントの産生と精製
ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）により図１Ａで概要を示したような実施例１の構築物Ｐ９５７に類似の種々の構築物を作製し、製造業者の説明書に従ってＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。 遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【０９７８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞を、ヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターで遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。表８のデータは、リンカー長の変化が、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞）の生物活性に対し大きな影響を与えなかったことを示す。
【表１１】
2021519089.tif 000030
【０９７９】
実施例７：別のエフェクター変異
Ｆｃドメインのエフェクター機能、すなわち、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を漸減させるために、主としてＦｃガンマ受容体結合に影響を及ぼすＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ変異を、４つの余分のＦｃエフェクター変異（Ｐ３２９Ｇ、Ｋ３２２Ｑ、Ｋ３２２ＡまたはＰ３３１Ｓ）と組み合わせて、補体結合をさらに低減させた。これらの変異を、２０＊ＧＧＳリンカーを有する３ＬＥＣ８９ベースヘテロダイマーＦｃフォーマットに適用した。得られたタンパク質を生物活性（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａレポーター）および補体結合（ＢＬＩ；Ｏｃｔｅｔ）について試験した。
【０９８０】
構築物：
【化６】
2021519089.tif 000031
2021519089.tif 000032
【０９８１】
エフェクター変異バリアントの産生と精製
種々のエフェクター変異を有する３ＬＥＣ８９ベースＦｃ  ＡＦＮを、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で、図７Ｂ中で概要を示し、前の実施例で記載のように、ヘテロダイマーＡＦＮとして産生した。製造業者の説明書に従いＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。産生収率（５０〜１５０μｇ／ｍｌ）および安定性に大きな差異は観察されなかった。
【０９８２】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように、代わりのエフェクター変異体の生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を測定し、図２７にプロットした。データは、得られた変異体が、標的化（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ）および非標的化（親ＨＬ１１６）細胞に対し、ＥＣ５０値が０．３〜０．６５ｎｇ／ｍｌで変化する、ほぼ同等の生物学的活性化プロファイルを示すことを明確に示す。
【０９８３】
補体（Ｃ１ｑ）に対する親和性
種々のエフェクター変異の補体成分Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑ）に対する親和性に与える影響を、Ｏｃｔｅｔ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）でバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）技術を用いて測定した。種々の変異またはポジティブコントロールとしてのｈＩｇＧ１を有するＦｃ  ＡＦＮを、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）にロードし、その後、組換えＣ１ｑ（１００ｎＭ；ＰｒｏＳｐｅｃ）と共にインキュベートした。図２８のデータは、全てのエフェクターバリアントがＣ１ｑに結合するそれらの能力を大きく失ったこと、および変異体間で大きな差異が認められなかったことを明確に示す。
【０９８４】
実施例８：ＩＦＮａ２バリアント
ここで、我々は、位置１０６（Ｔ１０６）上のｈＩＦＮａ２  Ｏ−グリコシル化部位の変異の影響を評価し、２種の天然ＩＦＮａ２バリアント：ＩＦＮａ２ＡおよびＩＦＮａ２Ｂの生物活性を比較する。
【０９８５】
構築物：
【化７】
2021519089.tif 000033
2021519089.tif 000034
【０９８６】
ＩＦＮα２バリアントの産生と精製
Ｒ１ＣＨＣＬ５０−５＊ＧＧＳ−Ｆｃ１または３ＬＥＣ８９−５＊ＧＧＳ−Ｆｃ１を、１０＊ＧＧＳリンカーを介してＦｃ２に融合した変異導入Ｏ−グリコシル化部位（Ｔ１０６、Ｔ１０６ＡまたはＴ１０６Ｅ）を有するまたは有しないＩＦＮａ２ＡまたはＩＦＮａ２ＢのＲ１４９Ａ変異体と組み合わせて、図７Ｂに概要を示した構造を有するヘテロダイマーＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）を得た。組み合わせ物を、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。製造業者の説明書に従いＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。種々の組み合わせ物の産生量は同等であり、１７０〜４２０μｇ／ｍｌで変動した。Ｏ−グリコシル化の減少をＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて確認した。
【０９８７】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように、代わりのＩＦＮａ２変異体の生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を測定し、図２９にプロットし、表９にまとめた。データは、ＩＦＮａ２ＢベースＡＦＮが、ＩＦＮａ２Ａを有するものよりほんのわずかに強力であり、一方ＩＦＮａ２  Ｏ−グリコシル化部位Ｔ１０６の変異（ＡまたはＥへの）は、シグナル伝達に影響を与えないことを示唆する。
【表１２】
2021519089.tif 000035
【０９８８】
ＩＦＮＡＲ２に対する親和性
ここで、ＩＦＮａ２変異の、ＢＬＩでのその受容体ＩＦＮＡＲ２に対する親和性に与える影響をＯｃｔｅｔ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで評価した。ＩＦＮａ２中に配列変化を有するＲ１ＣＨＣＬ５０ベースＦｃバリアントを、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａバイオセンサー（Ｐａｌｌ）にロードし、その後、段階希釈組換えＩＦＮＡＲ２（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）と共にインキュベートした。干渉縞でのシフトを、結合および解離速度、およびそれによる親和性の定量化に使用した。これらの実験は、変異がＩＦＮＡＲ２に対する親和性に大きな影響を与えないことを示した。
【０９８９】
実施例９：追加のＦｃフォーマット
前の実施例では、ＶＨＨ（Ｒ１ＣＨＣＬ５０または３ＬＥＣ８９）がＦｃ部分のＮ末端でクローン化されＩＦＮａ２変異体がＣ末端でクローン化されたヘテロマーＦｃフォーマットを用いた。この実施例では、分子の同じ側（ＮまたはＣ末端）にＶＨＨおよびＩＦＮａ２変異体を有するフォーマットを生成した。得られたＡＦＮを生物活性（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａレポーター）およびｈＣｌｅｃ９Ａ親和性（Ｏｃｔｅｔ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔでのバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）技術）について試験した。
【０９９０】
構築物:
【化８】
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【０９９１】
種々のＦｃフォーマットの産生と精製
ホール（ＶＨＨ  ＣまたはＮ末端を有する）およびノブ（変異体ＩＦＮａ２  ＣまたはＮ末端を有する）配列を以下のように組み合わせた：
・３ＬＥＣ８９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ１  ＋  Ｆｃ２−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（構造：図７Ｂ）；
・Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ１  ＋  Ｆｃ２−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（構造：図７Ｂ）；
・３ＬＥＣ８９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ１  ＋  ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ２（構造：図７Ｃ）；
・Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ１  ＋  ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ２（構造：図７Ｃ）；
・Ｆｃ１−２０＊ＧＧＳ  −３ＬＥＣ８９  ＋  Ｆｃ２−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（構造：図７Ｄ）；
・Ｆｃ１−２０＊ＧＧＳ  −Ｒ１ＣＨＣＬ５０  ＋  Ｆｃ２−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（構造：図７Ｄ）；
【０９９２】
これらの配列をＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で産生した。製造業者の説明書に従いＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。種々のＦｃの収率は同等であり、１００〜２５０μｇ／ｍｌの範囲であった。
【０９９３】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように種々のＦｃフォーマットの生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を測定し、図３０にプロットし、表１０にまとめた。データは、Ｃ末端にクローン化されたＶＨＨおよびＩＦＮＡ２＿Ｒ１４９Ａの両方を有するＦｃフォーマットが、他の２つのフォーマットに比べて、標的細胞に対し幾分低い活性であることを示唆する。留意すべきは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）では、いずれの構築物に対してもシグナル伝達が観察されず、従って、全ての構築物は極めて高いターゲティング指数を保持している。
【表１３】
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【０９９４】
ｈＣｌｅｃ９Ａに対する親和性
異なるＦｃフォーマットのヒトＣｌｅｃ９Ａに対する親和性を実施例１に記載のようにして測定した。表１１にまとめたデータは、種々のフォーマット間の結合および解離（および従ってＫＤ）の差異はごくわずかなにすぎないことを示す。
【表１４】
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【０９９５】
実施例１０：２つの異なるノブインホール（ＫｉＨ）変異の比較
ここで、２つのノブインホール技術のバリアント：Ｒｉｄｇｗａｙ（前の実施例で使用されたような）およびＭｅｒｃｈａｎｔを比較した。配列は、Ｆｃ１およびＦｃ２（それぞれ、Ｒｉｄｇｗａｙのホールおよびノブ）およびＦｃ３およびＦｃ４（それぞれ、Ｍｅｒｃｈａｎｔのホールおよびノブ）と呼ばれる。図７Ｂに概要を示す構造を有する両方のＫｉＨを有するＦｃ構築物を、ＶＨＨ  Ｒ１ＣＨＣＬ５０および３ＬＥＣ８９をベースにして作製した。
・Ｆｃ１：Ｒｉｄｇｗａｙホール：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ＿Ｙ４０７Ｔ
・Ｆｃ２：Ｒｉｄｇｗａｙノブ：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｐ３２９Ｇ＿Ｔ３６６Ｙ
・Ｆｃ３：Ｍｅｒｃｈａｎｔホール：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｋ３２２Ｑ＿Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖ
・ＦＣ４：Ｍｅｒｃｈａｎｔノブ：ｈＩｇＧ１  Ｆｃ＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｋ３２２Ｑ＿Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６Ｗ
【０９９６】
構築物：
【化９】
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【０９９７】
種々のＦｃフォーマットの産生と精製
ノブおよびホール構築物の組み合わせを、上述のようにＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で産生した。製造業者の説明書に従いＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。種々のノブインホール（ＫｉＨ）の使用は、産生量に大きな影響を与えず、２５０〜４００μｇ／ｍｌ変動した。
【０９９８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように種々のＫｉＨ  Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を測定し、図３１にプロットした。データは、種々のＫｉＨ変化が標的細胞の生物活性（すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａ発現）に有意な影響を与えないことを示唆する。
【０９９９】
実施例１１：一価対二価標的化Ｆｃフォーマット
この実施例では、Ｒ１ＣＨＣＬ５０  Ｆｃ  ＡＦＮの一価および二価標的化（すなわち、それぞれ１つまたは２つのＶＨＨを有する分子）フォーマットの生物活性および相対的結合を比較した。
【１０００】
構築物：
【化１０】
2021519089.tif 000042
【１００１】
種々のＦｃフォーマットの産生と精製
Ｒ１ＣＨＣＬ５０  Ｆｃ  ＡＦＮの一価（概略図：図７Ｂ）または二価（概略図：図１６Ａ）標的化バリアントを、対応するノブおよびホール構築物を組み合わせることにより作製し、上述のように、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中でそれらを発現させた。製造業者の説明書に従いＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１００２】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように、一価および二価標的化Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を測定し、図３２にプロットした。データは、二価標的化ＡＦＮが、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ）に対し約５倍高い活性であることを示す。非標的細胞（親ＨＬ１１６細胞）中でのシグナル伝達は、両バリアントで同等であった。
【１００３】
ＦＡＣＳでの相対的親和性
一価および二価標的化Ｆｃ  ＡＦＮのＣｌｅｃ９Ａに対する相対的親和性を測定するために、ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を段階希釈のＡＦＮと共にインキュベートした。結合を、その後のＦＩＴＣ標識抗ヒト二次Ａｂと共にインキュベーションすることにより検出し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ｘ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で測定し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて分析した。図３３のデータは、二価の標的化ＡＦＮが、一価バリアントと比較すると、約１５倍低い結合ＥＣ５０を有することを示す。 
【１００４】
実施例１２：バリアント二価標的化Ｆｃフォーマット
この実施例では、追加の二価でヘテロダイマーのバリアントＦｃフォーマットを生成し、生物活性を試験した。
【１００５】
構築物：
【化１１】
2021519089.tif 000043
【１００６】
種々のＦｃフォーマットの産生と精製
我々のＲ１ＣＨＣＬ５０  Ｆｃ  ＡＦＮの二価（概略図：図８Ｂ）標的化バリアントを、対応するノブおよびホール構築物を組み合わせることにより作製し、上述のように、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中でそれらを発現させた。製造業者の説明書に従いＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１００７】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように、二価標的化Ｆｃ  ＡＦＮの生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。
【１００８】
実施例１３：マウスでの薬物動態学的調査
ＦｃベースＡＦＮの薬物動態学的挙動を評価するために、全てがＫ３２２Ｑ変異を有する４種の異なる分子を選択した：
・ＬＡＬＡ−Ｋ３２２Ｑ変異を有するＲｉｄｇｗａｙ  ＫｉＨ  Ｆｃを用いて、ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａと組み合わせたＲ１ＣＨＣＬ５０（ｏｐｔ）４（構築物１と２を組み合わせる）
・ＬＡＬＡ−Ｋ３２２Ｑ変異を有するＲｉｄｇｗａｙ  ＫｉＨ  Ｆｃを用いて、ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−Ｔ１０６Ｅと組み合わせたＲ１ＣＨＣＬ５０（ｏｐｔ）４（構築物１と３を組み合わせる）
・ＬＡＬＡ−Ｋ３２２Ｑ変異を有するＭｅｒｃｈａｎｔ  ＫｉＨ  Ｆｃを用いて、ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａと組み合わせたＲ１ＣＨＣＬ５０（ｏｐｔ）４（構築物４と５を組み合わせる）
・ＬＡＬＡ−Ｋ３２２Ｑ変異を有するＭｅｒｃｈａｎｔ  ＫｉＨ  Ｆｃを用いて、ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−Ｔ１０６Ｅと組み合わせたＲ１ＣＨＣＬ５０（ｏｐｔ）４（構築物５と６を組み合わせる）
【１００９】
構築物：
【化１２】
2021519089.tif 000044
2021519089.tif 000045
【１０１０】
種々のＦｃフォーマットの産生と精製
上述のようにＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で産生を行った。Ｈｉｔｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＨＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製し、溶出タンパク質を、中和後、Ｇ２５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で脱塩し、続けて、最後の０．２２μｍの濾過を行った。
【１０１１】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
前に行った実施例に記載のように、精製されたＦｃ−ＡＦＮの生物活性を測定した。簡単に説明すると、親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａを、段階希釈したＦｃ−ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を測定し、図３４にプロットした。データは、４種の構築物が、標的細胞のみに対し、類似の効力および特異性を有することを示す。
【１０１２】
マウスでのＰＫ試験
合計９匹のマウスに、各構築物の１ｍｇ／ｋｇを静脈内に投与した。Ｋ−ＥＤＴＡ血液を、３匹のマウスの第１群から５分、８時間および６日目に採取し、３匹のマウスの第２群から１５分、１日および１０日目に採取し、３匹のマウスの第３群から２時間、３日および１４日目に採取した。未処理のＦｃ−ＡＦＮの濃度をＥＬＩＳＡで測定した。簡単に説明すると、ＭＡＸＩＳＯＲＰ  Ｎｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｅプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌの濃度の抗ヒトインターフェロンアルファｍＡｂ（クローンＭＭＨＡ−１３；ＰＢＬ  Ａｓｓａｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）で一晩コートした。プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン−２０で４回洗浄後、ＰＢＳ中の０．１％カゼインを用いて室温で少なくとも１時間ブロッキングした。その後、希釈試料および標準物質をＰＢＳ中の０．１％カゼイン中、室温下で２時間インキュベートした。別の洗浄サイクル後、注文製作のウサギ抗ＶＨＨ（ＰＢＳ中０．１％中で１／２００００に希釈）を室温で２時間インキュベートし、続けて、追加の洗浄サイクルおよびＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギ（Ｊａｃｋｓｏｎ−１１１−０３５−１４４；０．１％カゼイン中１：５０００に希釈）と共に室温で１時間のインキュベーションを行った。最後の洗浄サイクル後、製造業者の説明書に従いＫＰＬ基質（５１２０−００４７；ＳｅｒａＣａｒｅ）を用いてペルオキシダーゼ活性を測定した。試料からの濃度を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使い計算した。  測定した濃度を図３５にプロットし、４種全ての構築物が、最後のサンプリング時点でＲｉｄｇｗａｙベースＦｃ構築物の排出が幾分速いことを除いて、類似のＰＫプロファイルを有することを示す。 終末相半減期は、Ｒｉｄｇｗａｙ構築物について平均で約３日およびＭｅｒｃｈａｎｔ構築物について４．５日と推定された。
【１０１３】
実施例１４：ヒト化マウスでの有効性研究
ＦｃベースＡＦＮのインビボ有効性を評価するために、実施例１２で選択されたものと同じ４種の分子（ヒトＣｌｅｃ９Ａ、高度に特異的なｃＤＣ１マーカーを標的とする）をヒト化マウスの腫瘍モデルで試験した。簡単に説明すると、新生児ＮＳＧマウス（１〜２日齢）を、１００ｃＧｙで亜致死量照射し、その後、１ｘ１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＨＬＡ−Ａ２陽性臍帯血由来）を肝内に送達した。１３週後、幹細胞移入マウスに２５ｘ１０５個のヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６１；ＩＦＮの直接抗増殖作用に感受性がない）を皮下接種した。マウスを３０μｇのヒトＦｌｔ３Ｌタンパク質で、腫瘍接種後１０日目〜１９日目に毎日腹腔内治療した。触知できる腫瘍が認められると、緩衝液またはＦｃ−ＡＦＮ（８または７５μｇ）での毎週の静脈内注射を、腫瘍接種後の１１日目に開始した（群当たりｎ＝５匹のマウス）。腫瘍サイズ（ノギス測定値）、体重および体温を毎日評価した。図３６および３７でのデータは、第２の治療（マウスは、毎週、ＰＢＳまたはＡＦＮの注射を受け、データは、第２の毎週治療後７日までの腫瘍増殖を示す）後６日までの腫瘍増殖を示す。図３６は、全ての構築物が、８μｇの低い投与量で、類似のレベルの腫瘍増殖抑制を誘導したことを示す。図３７は、増大する腫瘍増殖抑制をもたらすＭｅｒｃｈａｎｔ構築物についてのより高い投与量の結果を示す。体重および体温のデータは、緩衝液治療およびＡＦＮ治療間で何ら大きな差異を示さず、全てのＡＦＮ治療が耐容性良好であったことを裏付けた。
【１０１４】
実施例１５：ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、腫瘍細胞または活性化免疫細胞を標的にするために、ヒトＰＤ−Ｌ１特異的ＶＨＨ（クローン２ＬＩＧ９９；ＰＤ−１との相互作用を遮断する）をベースにしたＰＤ−Ｌ１（プログラム死リガンド１）標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１０１５】
構築物：
【化１３】
2021519089.tif 000046
2021519089.tif 000047
【１０１６】
ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
ホモダイマー（２ＬＩＧ９９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ；スキーム：図１Ａ）、一価ヘテロダイマー（２ＬＩＧ９９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ１＋Ｆｃ２−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ；スキーム：図７Ｂ）、または２ＬＩＧ９９  Ｆｃ  ＡＦＮの二価標的化ヘテロダイマー（２ＬＩＧ９９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋２ＬＩＧ９９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ；図１６Ａ）バリアント（図式表現は、図３８参照）を、製造業者の説明書に従い、対応する構築物の一過的遺伝子導入により、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で産生した。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。ホモダイマー２ＬＩＧ９９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａは、精製後、かなり安定性が低く、凝集する高い傾向があったが、一方、他の２種の構築物は良好な溶解性を示した。
【１０１７】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞は、ＰＤ−Ｌ１を内在性に発現し、そのため、標的化を過剰の対応する遊離ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ（２ＬＩＧ９９）の存在下または非存在下で評価した。親ＨＬ１１６を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、２ＬＩＧ９９（２０μｇ／ｍｌ）と共にプレインキュベートし、その後、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図３８のデータは、ホモダイマーおよび一価ヘテロダイマーバリアントが同等に活性であり（それぞれ、ＥＣ５０値：２．９８および２．１４ｎｇ／ｍｌ）、一方、二価標的化ヘテロダイマーバリアントは、４０〜５０倍高い活性であることを示す。全ての３つのケースで、過剰な遊離ＶＨＨは、シグナル伝達を遮断するために十分であり、それにより、シグナル伝達のＰＤ−Ｌ１依存性を示す。
【１０１８】
実施例１６：ヒト化マウスでの有効性研究
ＦｃベースＰＤ−Ｌ１標的化ＡＦＮのインビボ有効性を評価するために、実施例１５記載のようなホモダイマーバリアント（２ＬＩＧ９９−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ）をヒト化マウスの腫瘍モデルで試験した。上述のようにＥｘｐｉＣＨＯ細胞中でタンパク質産生を行った。Ｈｉｔｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＨＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。低ｐＨ溶出タンパク質を、中和後、Ｇ２５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で脱塩し、０．２２μｍの濾過を行った。新生児ＮＳＧマウス（１〜２日齢）を、１００ｃＧｙで亜致死量照射し、その後、１ｘ１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＨＬＡ−Ａ２陽性臍帯血由来）を肝内に送達した。１３週後、幹細胞移入マウスに２５ｘ１０５個のヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６１；ＩＦＮの直接抗増殖作用に感受性がない）を皮下に接種した。マウスを３０μｇのヒトＦｌｔ３Ｌタンパク質で、腫瘍接種後５日目〜１８日目に毎日腹腔内治療した。触知できる腫瘍が存在すると、ＰＢＳまたはＦｃ−ＡＦＮ（２７μｇ）またはＰＤ−Ｌ１遮断モノクローナル抗体アテゾリズマブ（３０μｇ；ＩｎＶｉｖｏＧｅｎカタログ番号：ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１２）での毎週の病変周囲注射を、腫瘍接種後の９日目に開始した（群当たりｎ＝６匹のマウス）。腫瘍サイズ（ノギス測定値）、体重および体温を毎日評価した。図３９のデータは、第２の治療（マウスは、毎週、ＰＢＳまたはＡＦＮの注射を受け、データは、第２の毎週治療後７日までの腫瘍増殖を示す）後７日までの腫瘍増殖を示し、ＰＢＳに対するＰＤ−Ｌ１標的化Ｆｃ−ＡＦＮあるいはアテゾリズマブ治療の優位性を実証している。体重および体温のデータは、緩衝液治療およびＡＦＮ治療間で何ら大きな差異を示さず、全てのＡＦＮ治療が耐容性良好であったことを裏付けた。
【１０１９】
実施例１７：Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、形質細胞様樹状細胞を標的にするために、ヒトＣｌｅｃ４Ｃ特異的ＶＨＨ（クローン２ＣＬ９２）をベースにしたＣｌｅｃ４Ｃ標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１０２０】
構築物：
【化１４】
2021519089.tif 000048
【１０２１】
Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
構築物Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、ヘテロダイマーＡＦＮに結合し（図式表現は、図７Ｂを参照）、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０２２】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣｌｅｃ４Ｃ配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４Ｃ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４０のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、Ｃｌｅｃ４Ｃ  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４Ｃ）に対し遙かに活性であることを示す。
【１０２３】
実施例１８：ＣＤ２０  ＶＨＨベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、Ｂ細胞および／またはＢ細胞由来腫瘍細胞を標的にするために、ヒトＣＤ２０特異的ＶＨＨ（クローン２ＨＣＤ２５）をベースにしたＣＤ２０標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１０２４】
構築物：
【化１５】
2021519089.tif 000049
【１０２５】
ＣＤ２０  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
構築物ＣＤ２０  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、ヘテロダイマーＡＦＮに結合し（図式表現は、図７Ｂを参照）、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０２６】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣＤ２０配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ２０細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４１のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ＣＤ２０  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣＤ２０）に対し遙かに活性であることを示す。
【１０２７】
実施例１９：ＣＤ１３  ＶＨＨベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、腫瘍間質細胞を標的にするために、ヒトＣＤ１３特異的ＶＨＨをベースにしたＣＤ１３標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１０２８】
構築物
【化１６】
2021519089.tif 000050
【１０２９】
ＣＤ１３  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
構築物ＣＤ１３  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、ヘテロダイマーＡＦＮに結合し（図式表現は、図７Ｂを参照）、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０３０】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞は、ＣＤ１３を内在性に発現し、そのため、標的化を過剰の対応する遊離ＣＤ１３  ＶＨＨの存在下または非存在下で評価する。親ＨＬ１１６を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、ＣＤ１３  ＶＨＨと共にプレインキュベートし、その後、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４２のデータは、過剰ＣＤ１３  ＶＨＨの存在下での刺激が、生物活性を６０倍低下させることを示し、それにより、ＩＦＮシグナル伝達の再構成は、ＣＤ１３標的化に実際に依存することを示す。
【１０３１】
実施例２０：ＦＡＰ  ＶＨＨベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、腫瘍間質細胞を標的にするために、３つのヒトＦＡＰ特異的ＶＨＨ（クローン２ＰＥ１４、３ＰＥ１２および３ＰＥ４２）をベースにしたＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１０３２】
構築物：
【化１７】
2021519089.tif 000051
【１０３３】
ＦＡＰ  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
構築物２ＰＥ１４−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３、３ＰＥ１２−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３、または３ＰＥ４２−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３および、構築物Ｆｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、ヘテロダイマーＡＦＮに結合し（図式表現は、図７Ｂを参照）、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０３４】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒＦＡＰ配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＦＡＰ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４３のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ＦＡＰ  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＦＡＰ）に対し遙かに活性であることを示す。
【１０３５】
実施例２１：ＣＤ８  ＶＨＨベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、細胞傷害性Ｔ細胞を標的にするために、ヒトＣＤ８特異的ＶＨＨ（クローン１ＣＤＡ６５）をベースにしたＣＤ８標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１０３６】
構築物：
【化１８】
2021519089.tif 000052
【１０３７】
ＣＤ８  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
構築物ＣＤ８  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、ヘテロダイマーＡＦＮに結合し（図式表現は、図７Ｂを参照）、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０３８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣＤ８配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４４のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ＣＤ８  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣＤ８）に対し遙かに活性であることを示す。
【１０３９】
実施例２２：一価Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１標的化Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、Ｃｌｅｃ９Ａ（ｃＤＣ１樹状細胞のマーカー）およびＰＤ−Ｌ１（腫瘍細胞および活性化免疫細胞上に発現）の両方を標的化するＦｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。標的化のために、我々は、２つのＶＨＨ：Ｒ１ＣＨＣＬ５０（ヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的）および２ＬＩＧ９９（ヒトＰＤ−Ｌ１特異的）を使用した。
【１０４０】
構築物：
【化１９】
2021519089.tif 000053
【１０４１】
Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
次の組み合わせをＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で一過的に遺伝子導入した：
ｉ．Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２ＬＩＧ９９−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的；一価標的化；スキーム：図８Ｂ）；
ｉｉ．２ＬＩＧ９９−Ｒ１ＣＨＣＬ５０−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的；一価標的化；スキーム：図８Ｂ）；
【１０４２】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０４３】
ＦＡＣＳによる相対的親和性
Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１に対する相対的親和性を測定するために、二重特異的標的化Ｆｃ  ＡＦＮ、およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、過剰の競合遊離ＶＨＨ  ２ＬＩＧ９９の存在下または非存在下で段階希釈のＡＦＮと共にインキュベートした。その後、ＦＩＴＣ標識抗ヒト二次Ａｂと共にインキュベーションすることにより結合を検出し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ｘ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で測定し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて分析した。図４５のデータは、両方の二重特異的標的化ＡＦＮが、両標的に同時に結合でき、両標的を発現している細胞に対する増大した親和性を生ずることを示す。
【１０４４】
実施例２３：一価および二価Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１標的化Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、Ｃｌｅｃ９Ａ（ｃＤＣ１樹状細胞のマーカー）およびＰＤ−Ｌ１（腫瘍細胞および活性化免疫細胞上に発現）の両方を標的化するＦｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。標的化のために、我々は、２つのＶＨＨ：Ｒ１ＣＨＣＬ５０（ヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的）および２ＬＩＧ９９（ヒトＰＤ−Ｌ１特異的）を使用した。２種の二重特異的フォーマット（１つは一価標的化を生じ、もう１つは、二価標的化を生ずる）の生物活性を単一特異性Ｆｃ  ＡＦＮと比較した。二価二重特異的標的化は、図４６Ａ〜Ｄに概略的に示されている。
【１０４５】
構築物：
【化２０】
2021519089.tif 000054
2021519089.tif 000055
【１０４６】
Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
次の組み合わせをＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で一過的に遺伝子導入した：
ｉ．Ｒ１ＣＨＣＬ５０−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（単一特異性Ｃｌｅｃ９Ａ；スキーム：図７Ｂ）；
ｉｉ．２ＬＩＧ９９−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（単一特異性ＰＤ−Ｌ１；スキーム：図７Ｂ）；
ｉｉｉ．Ｒ１ＣＨＣＬ５０−Ｆｃ３＋２ＬＩＧ９９−Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的；一価標的化；スキーム：図１６Ａ）；
ｉｖ．３ＬＥＣ８９−Ｆｃ３−２ＬＩＧ９９＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的；一価標的化；スキーム：図８Ａ）；
ｖ．Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２ＬＩＧ９９−Ｆｃ３＋Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２ＬＩＧ９９−Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的および二価標的化；図４６Ｃ）。
【１０４７】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０４８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞は、ＰＤ−Ｌ１を内在性に発現し、従って、ＰＤ−Ｌ１標的化をベースにしたシグナル伝達の評価に使用された。「非標的化」状況は、過剰の遊離ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ  ２ＬＩＧ９９の存在下での細胞の刺激により模倣した。Ｃｌｅｃ９Ａ標的化は、親ＨＬ１１６対ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞のシグナル伝達を比較することにより評価した。親および由来細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、２ＬＩＧ９９（２０μｇ／ｍｌ）と共にプレインキュベートし（該当する場合には）、その後、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４７および表１２のデータは、特に、下記を示す：
・Ｆｃ  ＡＦＮ含有２ＬＩＧ９９は、予測通り両細胞株に対し活性であり、標的化の特異性は、遊離ＶＨＨ  ２ＬＩＧ９９との競合により実証される；
・Ｒ１ＣＨＣＬ５０のみをベースにしたＡＦＮは、ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対してのみ活性である；
・二重特異的ＡＦＮは、単一特異性バリアントに比較して、またはＰＤ−Ｌ１のみを発現している親ＨＬ１１６に比較して、ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞（両標的を発現している）に対して顕著により活性である；および
・二重特異的および二価標的化分子は、ＰＤ−Ｌ１のみを発現している細胞株に対して最も低いＥＣ５０を有し、二価の標的化により効力が増大するという以前の知見（実施例１５）を確証する。
【表１５】
2021519089.tif 000056
【１０４９】
実施例２４：ヒト化マウスでの有効性研究
ＦｃベースＰＤ−Ｌ１および／またはＣｌｅｃ９Ａ標的化ＡＦＮのインビボ有効性を評価するために、実施例２３、表１２に記載の分子（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）ならびに、分子（ｉ）および（ｉｉ）の混合物をヒト化マウスの腫瘍モデルで試験した。上述のようにＥｘｐｉＣＨＯ細胞中でタンパク質産生を行った。Ｈｉｔｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＨＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。結合タンパク質をｐＨ３．５（２５ｍＭのクエン酸ナトリウム）でカラムから溶出し、１ＭトリスｐＨ８．８で中和した。最終的に、タンパク質を１０ｍＭ  NH4-酢酸アンモニウムｐＨ５−１２３．５ｍＭ  ＮａＣｌ−０．０２％ツイーン２０に対しＧ２５カラムで脱塩またはＧ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で脱塩および最終精製し、および０．２２μｍ濾過に供した。新生児ＮＳＧマウス（１〜２日齢）を、１００ｃＧｙで亜致死量照射し、その後、１ｘ１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＨＬＡ−Ａ２陽性臍帯血由来）を肝内に送達した。１３週後、幹細胞移入マウスに２５ｘ１０５個のヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６１）を皮下接種した。マウスを３０μｇのヒトＦｌｔ３Ｌタンパク質で、腫瘍接種後８日目〜１５日目に毎日腹腔内治療した。触知できる腫瘍が認められると、緩衝液またはＦｃ−ＡＦＮを用いた静脈内注射を、腫瘍接種後の９および１５日目に実施した（群当たりｎ＝４〜５匹のマウス）。２回目の免疫の４日後まで、動物を追跡調査した。腫瘍サイズ（ノギス測定値）を定期的間隔で評価した。図４８は、緩衝液治療のみに比較して、Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１の両方を標的化したＡＦＮが腫瘍増殖を低減したという優位性を示す。ＰＤ−Ｌ１およびＣｌｅｃ９Ａの両方を標的とする二重特異的ＡＦＮは、単一標的化ＡＦＮまたは単一標的化ＡＦＮの組み合わせに比べて優れていると思われる。
【１０５０】
実施例２５：ＣＤ８およびＣｌｅｃ４Ｃ標的化Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、Ｃｌｅｃ４Ｃ（形質細胞様樹状細胞のマーカー）およびＣＤ８（Ｔ細胞サブセット）の両方を標的化するＦｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。標的化のために、我々は、２つのＶＨＨ：２ＣＬ９２（ヒトＣｌｅｃ４Ｃ特異的）および１ＣＤＡ６５（ヒトＣＤ８特異的）を使用した。二重特異的フォーマットが、標的発現ＨＬ１１６細胞に対する生物活性を単一特異性Ｆｃ  ＡＦＮと比較される。
【１０５１】
構築物：
【化２１】
2021519089.tif 000057
【１０５２】
Ｃｌｅｃ４ＣおよびＣＤ８  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
次の組み合わせをＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で一過的に遺伝子導入した：
（ｉ）Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（Ｃｌｅｃ４Ｃ特異的ＡＦＮ；スキーム：図７Ｂ）；
（ｉｉ）ＣＤ８  ＶＨＨ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（Ｃｌｅｃ４Ｃ特異的ＡＦＮ；スキーム：図７Ｂ）；
（ｉｉｉ）Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ−Ｆｃ３＋ＣＤ８  ＶＨＨ−Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的ＡＦＮ；スキーム：図１６Ａ）。
【１０５３】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０５４】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。ヒトＣｌｅｃ４ＣまたはヒトＣＤ８をコードするベクターをこれらのＨＬ１１６細胞に安定に遺伝子導入し、ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４ＣおよびＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞株を得た。生物活性を測定するために、親および由来細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図４９のデータは、単一特異性Ｆｃ  ＡＦＮは、それぞれのＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ４ＣおよびＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞株に対してのみ活性であり、一方、二重特異的Ｆｃ  ＡＦＮは、両細胞株でシグナル伝達を誘導するが、親細胞では誘導しないことを示す。
【１０５５】
実施例２６：ｓｃＦｖ  Ｘｃｒ１  Ａｂ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、従来の樹状細胞１型（ｃＤＣ１）の標的化のために、ヒトＸｃｒ１  Ａｂ  ５Ｇ７のｓｃＦｖバリアントをベースにしたＡＦＮを設計し、評価した。
【１０５６】
構築物：
【化２２】
2021519089.tif 000058
【１０５７】
ｓｃＦｖ  Ｘｃｒ１  ＡｂベースＡＦＮの産生と精製
構築物ｓｃＦｖ  Ｘｃｒ１  Ａｂ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、図７Ｂで概要を示した構造を有するヘテロダイマーＡＦＮに結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０５８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＸｃｒ１配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＸｃｒ１細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図５０のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ｈＸｃｒ１  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＸｃｒ１）に対し、より活性であることを示す。
【１０５９】
実施例２８：ｓｃＦｖ  ＣＤ２０  Ａｂ  ＡＦＮの構築
この実施例では、我々は、Ｂ細胞および腫瘍細胞を標的化するために、ヒトＣＤ２０  Ａｂ  リツキシマブのｓｃＦｖバリアントをベースにしたＡＦＮを設計し、評価した。
【１０６０】
構築物：
【化２３】
2021519089.tif 000059
【１０６１】
ｓｃＦｖ  ＣＤ２０  ＡｂベースＡＦＮの産生と精製
構築物ｓｃＦｖ  ＣＤ２０  Ａｂ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、図７Ｂで概要を示した構造を有するヘテロダイマーＡＦＮに結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０６２】
実施例２８：ｓｃＦｖ  ＣＤ２０  Ａｂ  ＡＦＮの特性評価
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣＤ２０配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ２０細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図５１のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ｈＣＤ２０  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣＤ２０）に対しより活性であることを示す。
【１０６３】
実施例２９：ｓｃＦｖ  ＣＤ２０  Ａｂ  ＡＦＲ
この実施例では、我々は、ヒトＣＤ２０  Ａｂ  リツキシマブのｓｃＦｖバリアントを用いてＢ細胞または腫瘍細胞をＡｃＴａｆａｃｔｏｒ（ＡＦＲ）の標的にする。Ｙ８７Ｆ変異を有するＴＮＦが、単鎖トリマー（ＧＧＧＧＳリンカーを用いて）としてＡＦＲの１つのＦｃアーム上にクローン化される。
【１０６４】
構築物：
【化２４】
2021519089.tif 000060
【１０６５】
ＡＦＲの産生および精製
構築物ｓｃＦｖ  ＣＤ２０  Ａｂ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−３＊ＴＮＦ＿Ｙ８７Ｆを、図７Ｂで概要を示した構造を有するヘテロダイマーＡＦＲに結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０６６】
ＨＥＫ−Ｄｕａｌレポーター細胞株に対する生物活性
分泌アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）または分泌ルシフェラーゼ（Ｌｕｃｉａ）をベースにした２つのＮＦ−κＢ誘導性レポーター構築物の安定な同時遺伝子導入により、ＨＥＫ−Ｄｕａｌ  ＴＮＦ−α細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）をヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞株から誘導した。親細胞にヒトＣＤ２０配列をコードする発現ベクターを安定に遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをピューロマイシン含有培地中で選択した。親ＨＥＫ−ＤｕａｌおよびＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＲで一晩刺激した。分泌Ｌｕｃｉａルシフェラーゼ活性を、ＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いて測定した。図５２のデータは、両細胞株は、野生型ＴＮＦに対し同程度に感受性であり、一方、ＣＤ２０  Ｆｃ  ＡＦＲは、非標的化細胞（ＨＥＫ−Ｄｕａｌ）に比較して、標的細胞（ＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０）に対し、より活性であることを示す。
【１０６７】
実施例３０：ＦＬＴ３Ｌ  Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、造血（血液）前駆細胞の標的化のために、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（Ｆｌｔ３Ｌ）をベースにしたＡＦＮを設計し、評価した。
【１０６８】
構築物
【化２５】
2021519089.tif 000061
【１０６９】
Ｆｌｔ３ＬベースＡＦＮの産生および精製
構築物Ｆｌｔ３Ｌ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、図７Ｂで概要を示した構造を有するＡＦＮバリアントに結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０７０】
生物活性：一過的遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞でのＳＴＡＴ１リン酸化
Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞にＦＬＴ３発現プラスミドまたは空のベクター（ＭＯＣＫ）を一過的に遺伝子導入した。遺伝子導入の２日後、細胞を、段階希釈（示したように）野生型ＩＦＮａ２またはＦＬＴ３Ｌ−Ｆｃ−ＡＦＮを用いて３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ  ＩＩＩ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後、細胞を抗ＳＴＡＴ１  ｐＹ７０１  Ａｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料をＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ｘ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で取得し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて分析した。図５３のデータは、ＦＬＴ３Ｌ  Ｆｃ  ＡＦＮは、ＦＬＴ３中でのみＳＴＡＴ１リン酸化を誘導でき、ＭＯＣＫ遺伝子導入細胞では誘導できないことを明確に示し、それにより、このリガンドを用いる標的化が可能であることを示す。留意すべきは、ＦＬＴ３またはＭＯＣＫ遺伝子導入細胞は、野生型ＩＦＮａ２に対し同等に感受性であることである。
【１０７１】
実施例３１：ＰＤ−１ｅｃ  Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、ＰＤ−Ｌ１発現Ｔ細胞およびプロＢ細胞に対し標的化するために、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）の細胞外（ｅｃ）部分をベースにしたＡＦＮを設計し、評価した。
【１０７２】
構築物：
【化２６】
2021519089.tif 000062
【１０７３】
ＰＤ−１ｅｃ  ＡＦＮの産生および精製
構築物ＰＤ−１ｅｃ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、図７Ｂで概要を示した構造を有するヘテロダイマーＡＦＮに結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０７４】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞は、ＰＤ−Ｌ１（ＰＤ−１のリガンド）を内在性に発現し、そのため、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を妨害する過剰のＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ（２ＬＩＧ９９）の存在下または非存在下で標的化を評価した。細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、２ＬＩＧ９９  ＶＨＨ（５０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ−１  Ｆｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図５４のデータは、ＶＨＨは、ＰＤ−１ｅｃ  Ｆｃ  ＡＦＮにより、少なくとも部分的にシグナル伝達を中和できることを示し、それにより、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用に基づき変異サイトカインを標的にできることを示す。
【１０７５】
実施例３２：ＰＤ−Ｌ１ｅｃ  Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、腫瘍細胞または活性化免疫細胞の標的化のために、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）の細胞外（ｅｃ）部分をベースにしたＡＦＮを設計し、評価した。
【１０７６】
構築物：
【化２７】
2021519089.tif 000063
【１０７７】
ＰＤ−Ｌ１ｅｃベースＡＦＮの産生および精製
構築物ＰＤ−Ｌ１ｅｃ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを、図７Ｂで概要を示した構造を有するヘテロダイマーＡＦＮに結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０７８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞に細胞質側末端を欠くヒトＰＤ−１配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＰＤ−１細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図５５のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ＰＤ−Ｌ１ｅｃ  Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ＰＤ−１）に対しより活性であることを示す。
【１０７９】
実施例３３：二価リガンド標的化ＡＦＮ
この実施例では、我々は、ＰＤ−Ｌ１を発現するＴ細胞およびプロＢ細胞への標的化のためにプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）の二価細胞外（ｅｃ）部分の使用に基づいて、または腫瘍細胞または活性化免疫細胞の標的化のためにプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）の二価細胞外（ｅｃ）部分の使用に基づいて、ＡＦＮを設計し、評価した。
【１０８０】
構築物：
【化２８】
2021519089.tif 000064
2021519089.tif 000065
【１０８１】
二価ｅｃ−ＡＦＮの産生および精製
次の組み合わせをＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で一過的に遺伝子導入した：
ｉ．ＰＤ−１ｅｃ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＰＤ−１ｅｃ−２０＊ＧＧＳ−ＦＣ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的；一価標的化；スキーム：図１６Ａ）；
ｉｉ．ＰＤ−Ｌ１ｅｃ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＰＤ−Ｌ１ｅｃ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（二重特異的；一価標的化；スキーム：図１６Ａ）。
【１０８２】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０８３】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞は、ＰＤ−Ｌ１（ＰＤ−１のリガンド）を内在性に発現し、そのため、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を妨害する過剰の遊離ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ（２ＬＩＧ９９）の存在下または非存在下で標的化を評価した。加えて、細胞質側末端を欠くヒトＰＤ−１配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入したＨＬ１１６細胞（実施例３２）を用いて、ＰＤ−Ｌ１ベース構築物を試験した。細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、２ＬＩＧ９９  ＶＨＨ（５０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ−１  Ｆｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。
【１０８４】
実施例３４：ＮＧＲペプチドベースＦｃ−ＡＦＮ
この実施例では、我々は、標的化薬剤としてＮＧＲ−ペプチド−モチーフを用いて、腫瘍新生血管中のＣＤ１３を標的とするＡＦＮを設計し、評価した。配列を、得られるＮＧＲ  Ｆｃ  ＡＦＮ中の両Ｆｃアームの環状ｓｇｃＮＧＲｃペプチドＣ末端としてクローン化した。親ＨＬ１１６細胞に対する生物活性を、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化Ｆｃ  ＡＦＮと比較した。
【１０８５】
構築物：
【化２９】
2021519089.tif 000066
【１０８６】
ＡＦＮの産生および精製
構築物を以下のように結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。
（ｉ）Ｃｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ  Ｆｃ  ＡＦＮ：Ｆｃ３−２０＊ＧＧＳ−Ｒ１ＣＨＣＬ５０＋ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ４（図７Ａに概要を示した構造）；
（ｉｉ）ＮＧＲ  Ｆｃ  ＡＦＮ：Ｆｃ３−ｓｇＮＧＲｃ＋ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ４−ｓｇｃＮＧＲｃ（図１６Ｂに概要を示した構造）；
【１０８７】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０８８】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞はＮＧＲ標的ＣＤ１３を内在性に発現する。細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図５６のデータは、ＮＧＲ  Ｆｃ  ＡＦＮは、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化Ｆｃ  ＡＦＮに比べてＩＦＮ様シグナル伝達の誘導の点で明らかにより強力であることを示し、ＮＧＲ標的化の特異性を示す。
【１０８９】
実施例３５：野生型ＩＦＮａ２の標的化
この実施例では、我々は、野生型ＩＦＮａ２またはＡＦＮ変異体ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａの標的化時の、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）内の特定の集団に対するシグナル伝達を比較した。サイトカイン、またはその変異体は、Ｆｃ中のＣＤ２０  ＶＨＨ（クローン２ＨＣＤ２５）、ＣＤ８  ＶＨＨ（クローン１ＣＤＡ６５）、またはＣｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ（クローン２ＣＬ９２）を用いて標的化される。
【１０９０】
構築物：
【化３０】
2021519089.tif 000067
2021519089.tif 000068
【１０９１】
ＣＤ２０およびＣｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
これらの構築物の組み合わせをＥｘｐｉＣＨＯで一過的に遺伝子導入し、次のＡＦＮ（概略図は図７Ｂを参照）を得た：
（ｉ）ＣＤ２０  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ
（ｉｉ）ＣＤ２０  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２
（ｉｉｉ）ＣＤ８  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ
（ｉｖ）ＣＤ８  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２
（ｖ）Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ
（ｖｉ）Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２
【１０９２】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０９３】
Ｃｌｅｃ４Ｃ標的化時の生物活性：ＰＢＭＣのＳＴＡＴ１リン酸化
Ｃｌｅｃ４Ｃ標的化分子の生物活性を以下のように試験した：健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による密度勾配遠心分離を用いて単離した。樹状細胞を、ｐａｎ−ＤＣ濃縮キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて最初に濃縮した。濃縮細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、ＦＩＴＣ標識抗ｈＣｌｅｃ４Ｃ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４℃で２０分間染色した。２回の洗浄後、細胞を、段階希釈の野生型または変異体Ｆｃ  ＡＦＮを用いて、３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ  ＩＩＩ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後、細胞を抗ＳＴＡＴ１  ｐＹ７０１  Ａｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料をＷａｃｑｕａｎｔ  Ｘ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で取得し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて分析した。データを図５７にまとめている。 Ｃｌｅｃ４Ｃ陽性および陰性細胞は、類似の効力（ＥＣ５０の比率：約１）で野生型ＩＦＮａ２に応答する。他方、野生型または変異体ＩＦＮａ２は、Ｃｌｅｃ４Ｃ  ＶＨＨでＣＬＥＣ４Ｃ陽性細胞を標的にした場合、遙かに活性である。それぞれのＥＣ５０比率は、約４０および＞４０である。
【１０９４】
ＣＤ８標的化時の生物活性：ＰＢＭＣのＳＴＡＴ１リン酸化
ＣＤ８標的化分子の生物活性を以下のように試験した：健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による密度勾配遠心分離を用いて単離した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、ＦＩＴＣ標識抗ｈＣＤ８（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４℃で２０分間染色した。２回の洗浄後、細胞を段階希釈の野生型または変異体Ｆｃ  ＡＦＮを用いて、３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ  ＩＩＩ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後、細胞を抗ＳＴＡＴ１  ｐＹ７０１  Ａｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料をＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ｘ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で取得し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて分析した。データを図５８にまとめている。ＣＤ８陽性および陰性細胞は、類似の効力（ＥＣ５０の比率：約１）で野生型ＩＦＮａ２に応答する。他方、野生型または変異体ＩＦＮａ２は、ＣＤ８  ＶＨＨでＣＤ８陽性細胞を標的にした場合、遙かに活性である。それぞれのＥＣ５０比率は、約１２５および＞１２５である。
【１０９５】
ＣＤ２０標的化時の生物活性：ＰＢＭＣのＳＴＡＴ１リン酸化
ＣＤ２０標的化分子の生物活性を以下のように試験した：健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による密度勾配遠心分離を用いて単離した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、ＦＩＴＣ標識抗ｈＣＤ１９（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃｓ）を用いて４℃で２０分間、Ｂ細胞染色した。２回の洗浄後、細胞を段階希釈の野生型または変異体Ｆｃ  ＡＦＮを用いて、３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ  ＩＩＩ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｉ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後、細胞を抗ＳＴＡＴ１  ｐＹ７０１  Ａｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料をＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ｘ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で取得し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて分析した。データを図５９にまとめている。ＣＤ１９陽性（すなわち、Ｂ細胞）および陰性細胞は、類似の効力（ＥＣ５０の比率：約１）で野生型ＩＦＮａ２に応答する。他方、野生型または変異体ＩＦＮａ２は、ＣＤ２０  ＶＨＨでＣＤ１９陽性細胞を標的にした場合、遙かに活性である。それぞれのＥＣ５０比率は、約２５および＞５００である。
【１０９６】
実施例３６：別のＩＦＮａ２  ＡＦＮ変異
この実施例では、標的化および非標的化細胞中のシグナル伝達に対する影響を評価するために、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化Ｆｃ  ＡＦＮにおいてＩＦＮａ２中のいくつかの異なる残基に変異導入した。種々の変異の位置を図６０に示す（ここで、野生型は配列番号２である）。
【１０９７】
構築物（図６０）
【化３１】
2021519089.tif 000069
【１０９８】
ＡＦＮの産生および精製
Ｆｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２の種々の変異バリアントを、構築物Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３と結合し、図７Ｂに概要を示した構造を有するＡＦＮを生じた。タンパク質を、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１０９９】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、異なる濃度のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図６１のデータは、全ての変異は、標的細胞（ここでは、ＨＬ１１６を発現するｈＣｌｅｃ９Ａ）中で選択的にシグナル伝達をするＦｃ  ＡＦＮをもたらすことを示す。
【１１００】
実施例３７：インターフェロンアルファ１をベースにしたＡｃＴａｋｉｎｅ
本実施例は、野生型インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）をベースにし、ヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨ（クローンＲ１ＣＨＣＬ５０）を介して標的化されるＡｃＴａｋｉｎｅを評価し、生成する。
【１１０１】
構築物：
【化３２】
2021519089.tif 000070
【１１０２】
ＩＦＮα１  ＡＦＮの産生および精製
構築物Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ１を結合し、図７Ｂに概要を示した構造を有するＡＦＮを得て、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１１０３】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図６２のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ１に対し同程度に感受性であることを示す。標的細胞中のＩＦＮａ１ベースＦｃ  ＡＦＮシグナル伝達のＥＣ５０は、０．３ｎｇ／ｍｌであり、一方、親ＨＬ１１６細胞中では、ルシフェラーゼ誘導は測定できなかった。
【１１０４】
実施例３８：インターフェロンβをベースにしたＡｃＴａｋｉｎｅ
この実施例では、我々は、Ｗ２２Ｇ変異を有するインターフェロンβ（ＩＦＮｂ＿Ｗ２２Ｇ）をベースにし、ヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨ（クローンＲ１ＣＨＣＬ５０）を介して標的化されるＡｃＴａｋｉｎｅを生成し、評価した。
【１１０５】
構築物：
【化３３】
2021519089.tif 000071
【１１０６】
ＩＦＮｂ  ＡＦＮの産生および精製
構築物Ｒ１ＣＨＣＬ５０−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮｂ＿Ｗ２２Ｇを結合し、図７Ｂに概要を示した構造を有するＡＦＮを得て、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１１０７】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図６３のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮｂに対し同程度に感受性であり、一方、Ｃｌｅｃ９Ａ−標的化Ｆｃ  ＡＦＮは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ）に対し遙かに活性であることを示す。
【１１０８】
実施例３９：インターロイキン−１をベースにしたＡｃＴａｋｉｎｅ
この実施例では、我々は、Ｑ１４８Ｇ（ｈIL-1ｂ＿Ｑ１４８Ｇ）変異を有するヒトインターロイキン−１をベースにし、ヒトＣＤ８特異的ＶＨＨ（クローン１ＣＤＡ６５）を介して標的化されるＡｃＴａｋｉｎｅを生成し、評価した。得られたＡｃＴａｋｉｎｅは、以降では、ＡｃＴａｌｅｕｋｉｎ（ＡＬＮ）と呼ばれる。
【１１０９】
構築物：
【化３４】
2021519089.tif 000072
【１１１０】
ＡＬＮの産生および精製
構築物ＣＤ８  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３およびＦｃ４−２０＊ＧＧＳ−IL-1ｂ＿Ｑ１４８Ｇを結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過性に発現させた。得られたＡＬＮは、図７Ｂで概要を説明した構造を有する。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１１１１】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  IL-1β細胞に対する生物活性
得られたＡＬＮの生物活性を、ＮＦ−κＢ／ＡＰ１誘導性ＳＥＡＰ（分泌アルカリフォスファターゼ）レポーターを用いて、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（登録商標）IL-1β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）で測定した。従って、細胞に、空のベクターまたはヒトＣＤ８コード発現プラスミドを一過的に遺伝子導入した。遺伝子導入の３６時間後、細胞を再懸濁し、段階希釈野生型IL-1βまたはＡＬＮで一晩刺激した。Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ  ＳＥＡＰ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用い、製造業者の説明書に従ってＳＥＡＰを測定した。図６４のデータは、ＭＯＣＫまたはｈＣＤ８遺伝子導入細胞は、野生型IL-1βに対し同等の感受性を示し、一方、ＡＬＮは、標的（ここでは、ｈＣＤ８）を発現する細胞中では、特異的にシグナル伝達することを示す。
【１１１２】
実施例４０：腫瘍壊死因子をベースにしたＡｃＴａｋｉｎｅ
この実施例では、我々は、Ｙ８７Ｆ変異を有する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ＿Ｙ８７Ｆ）をベースにし、ヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨ（クローンＲ１ＣＨＣＬ５０）を介して標的化されるＡｃＴａｋｉｎｅを生成し、評価した。ＴＮＦ＿Ｙ８７Ｆは、単鎖トリマー（ＧＧＧＧＳリンカーを用いて）として１つのＦｃアーム上にクローン化され、得られたＡｃＴａｋｉｎｅは、以後、ＡｃＴａｆａｃｔｏｒ（ＡＦＲ）と呼ばれる。
【１１１３】
構築物：
【化３５】
2021519089.tif 000073
【１１１４】
ＣＤ２０  ＶＨＨベースＡＦＲの産生と精製
以下のように構築物を結合し、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系で一過的に発現させた：
（ｉ）ＣＤ２０  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−２０＊ＧＧＳ−３＊ＴＮＦ＿Ｙ８７Ｆ（ＡＦＲ；スキームは図７Ｂ参照）。
【１１１５】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１１１６】
ＨＥＫ−Ｄｕａｌレポーター細胞株に対する生物活性
２つのＮＦ−κＢ誘導性レポーター構築物の安定な同時遺伝子導入により、ＨＥＫ−Ｄｕａｌ  ＴＮＦ−α細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）をヒト胎児腎臓２９３細胞株から誘導した。これは、分泌アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）または分泌ルシフェラーゼ（Ｌｕｃｉａ）の活性を監視することにより、ＴＮＦ−α誘導ＮＦ−κＢ活性化を可能にする。親細胞にヒトＣＤ２０配列をコードする発現ベクターを安定に遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをピューロマイシン含有培地中で選択した。親ＨＥＫ−ＤｕａｌおよびＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＲで一晩刺激した。分泌Ｌｕｃｉａルシフェラーゼ活性をＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いて測定した。図６５のデータは、両細胞株は、野生型ＴＮＦに対し同程度に感受性でり、一方、ＣＤ２０  Ｆｃ  ＡＦＲは、非標的化細胞（ＨＥＫ−Ｄｕａｌ）に比較して、標的細胞（ＨＥＫ−Ｄｕａｌ−ｈＣＤ２０）に対し、より活性であることを示す。
【１１１７】
実施例４１：Ｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅ
この実施例では、我々は、ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９ＡおよびｈIL-1ｂ＿Ｑ１４８Ｑの両方の変異を含みヒトＣＤ８特異的ＶＨＨ（クローン１ＣＤＡ６５）を介して標的化されるｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅを生成および評価した。
【１１１８】
構築物：
【化３６】
2021519089.tif 000074
【１１１９】
ｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅの産生および精製
構築物Ｆｃ３−２０＊ＧＧＳ−IL-1ｂ＿Ｑ１４８ＧおよびＣＤ８  ＶＨＨ−２０＊ＧＧＳ−Ｆｃ４−２０＊ＧＧＳ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａを結合し、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。得られたｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅは、図６Ａで概要を説明した構造を有する。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１１２０】
生物活性
ＨＬ１１６レポーター細胞株を用いて、ｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅのＩＦＮ様シグナル伝達を試験した。親ＨＬ１１６細胞にヒトＣＤ８配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンをＧ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣＤ８細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図６６のデータは、両細胞株は、野生型ＩＦＮａ２に対し同程度に感受性であり、一方、ｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅは、非標的化細胞（親ＨＬ１１６）に比較して、標的細胞（ＨＬ１１６−ｈＣＤ８）に対し遙かに活性であることを示す。
【１１２１】
ｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅのIL-1β様シグナル伝達を、ＮＦ−κＢ／ＡＰ１誘導性ＳＥＡＰ（分泌アルカリフォスファターゼ）レポーターを用いて、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（登録商標）IL-1β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）で測定した。従って、細胞に、空のベクターまたはヒトＣＤ８コード発現プラスミドを一過的に遺伝子導入した。遺伝子導入の３６時間後、細胞を再懸濁し、段階希釈野生型IL-1βまたはｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅで一晩刺激した。Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ  ＳＥＡＰ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用い、製造業者の説明書に従ってＳＥＡＰを測定した。図６７のデータは、ＭＯＣＫまたはＣＤ８遺伝子導入ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ細胞は、野生型IL-1βに対し同等の感受性を示し、一方、ｂｉ−ＡｃＴａｋｉｎｅは、標的（ここでは、ＣＤ８）を発現する細胞中では特異的にシグナル伝達を誘導できるがＭＯＣＫ遺伝子導入細胞では誘導できないことを示す。
【１１２２】
実施例４２：ヒトＩｇＧ４をベースにしたＣｌｅｃ９Ａ  Ｆｃ  ＡＦＮ
この実施例では、我々は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４をベースにしたＣｌｅｃ９Ａ標的化（ＶＨＨ  Ｒ１ＣＨＣＬ５０経由）ＡＦＮを設計し、評価した。使用したヒトＩｇＧ４は、Ｓ２２８Ｐ変異を有し、半分子のインビボ交換を回避する。加えて、ノブまたはホールがそれぞれのＦｃ鎖中で改変された。
【１１２３】
構築物：
【化３７】
2021519089.tif 000075
【１１２４】
Ｃｌｅｃ９ＡおよびＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨベースＡＦＮの産生と精製
次の組み合わせをＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で一過的に遺伝子導入した：
（ｉ）Ｒ１ＣＨＣＬ５０−Ｆｃ３＋Ｆｃ４−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（ＩｇＧ１ベースＡＦＮ）
（ｉｉ）Ｒ１ＣＨＣＬ５０−ｈＩｇＧ４  Ｆｃ＋ｈＩｇＧ４  Ｆｃ−ＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ（ＩｇＧ４ベースＡＦＮ）
【１１２５】
遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出した。得られたＡｃＴａｋｉｎｅは、図７Ｂで概要を説明した構造を有する。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製した。
【１１２６】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。安定なＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞株を用いて、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化を試験した。親および由来細胞を２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続けて、段階希釈のＦｃ  ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を細胞ライセート中で測定した。図６８のデータは、ＨＬ１１６およびＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａの両方は野生型ＩＦＮａ２に対し同様に応答することを示す。さらに、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４をベースにしたＣｌｅｃ９Ａ標的化Ｆｃ  ＡＦＮは、標的化ＨＬ１１６−ｈＣｌｅｃ９Ａに対し同等のＥＣ５０値を有し、一方、親細胞に対するシグナル伝達は、極めて高い濃度でのみ観察可能であった。
【１１２７】
実施例４３：Ｆｃを欠くキメラと本発明のＰＣベースキメラタンパク質複合体の間の比較に基づくＰＫ
本実施例は、マウスにおけるＦｃ（３ＬＥＣ８９−２０＊ＧＧＳ−ｈｕＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ−ｈｉｓ６）のないＡＦＮのＰＫ（薬物動態学）に関する。このキメラは次記の配列を有する：
Ｐ−６０２配列
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＩＦＳＶＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＮＱＧＡＰＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＧＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＫＡＦＴＲＧＤＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＶＤＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＲＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＡＡＡＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＡＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥＬＥＨＨＨＨＨＨ（配列番号１５６１）
【１１２８】
９匹のマウスに、３ｍｇ／ｋｇの静脈内投与を実施した。Ｋ−ＥＤＴＡ血液を、３匹のマウスの第１群から５分、および１時間目に採取し、３匹のマウスの第２群から１５分および３時間目に採取し、最後に、最後の群から８時間目に採取した。血漿試料中の濃度をＦｃ融合タンパク質について記載のものと同じＥＬＩＳＡを用いて測定した。測定した濃度（図６９）は、このタイプの分子の急速排出を示し、８時間の時点で、検出限界（０．１２μｇ／ｍｌ）未満の濃度をもたらした。推定終末相半減期は２時間の範囲である。
【１１２９】
同じＩＦＮおよび抗Ｃｌｅｃ９Ａ成分による、同等での試験であるが、この場合はＦｃフォーマットでの試験（すなわち、ＧＧＳリンカーを記載のＦｃで置き換えて）を、実施例３で記載した（図２４参照）。半減期は、複数日へと劇的に増大した（図２４）。
【１１３０】
実施例４４：ｓｃＦｖ  ＰＤ−Ｌ１ベースＦｃ  ＡＦＮ
この実施例では、腫瘍細胞または活性化免疫細胞を標的にするために、ヒトＰＤ−Ｌ１特異的ｓｃＦｖをベースにしたＰＤ−Ｌ１（プログラム死リガンド１）標的化Ｆｃ  ＡＦＮを生成し、評価した。
【１１３１】
ＰＤ−Ｌ１に向けられたｓｃＦｖを標的化薬剤として、および野生型ＩＦＮα２をシグナル伝達物質として含むいくつかの構築物を構築する。これらのＰＤ−Ｌ１標的化構築物のいくつかの構造の例は、例えば、図４Ａ〜Ｄに示され、標的化薬剤は、ＰＤ−Ｌ１に向けられたｓｃＦｖであり、シグナル伝達物質は野生型ＩＦＮα２である。
【１１３２】
ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖベースＡＦＮの産生と精製
構築物を、製造業者の説明書に従い、対応する構築物の一過性遺伝子導入により、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で産生する。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、遠心分離により細胞を取り出す。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、組換えタンパク質を上清から精製する。
【１１３３】
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
これらの構築物の生物活性を、ＨＬ１１６レポーター細胞株で調査する。ＨＬ１１６クローンをヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６−１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞は、ＰＤ−Ｌ１を内在性に発現し、そのため、過剰の対応する遊離ＰＤ−Ｌ１  ｓｃＦｖの存在下または非存在下で標的化を評価する。
【１１３４】
ＩＦＮαで武装した抗ＰＤ−Ｌ１の構造および特性評価を行う。８０ｎＭの濃度でのＩＦＮＡＲ１−／−Ａ２０細胞およびＰＤ−Ｌ１−／−Ａ２０細胞中の示されたタンパク質の結合を示すために、フローサイトメトリーを使用する。
【１１３５】
数字は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。ｓｃＦｖ  ＰＤ−Ｌ１ベースＦｃ  ＡＦＮの生物活性を、抗ウイルス感染生物学的アッセイにより測定した。Ｌ９２９細胞を各タンパク質と共に一晩培養した後、ＶＳＶ−ＧＦＰウイルスに感染させた。さらに３０時間の培養後、ウイルス感染細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーにより測定した。
【１１３６】
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝５）に３ｘ１０６個のＡ２０細胞を接種する。腫瘍が確立された後で、マウスを、２０μｇの対照、抗ＰＤ−Ｌ１、ＩＦＮα−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ  ＰＤ−Ｌ１ベースＦｃ  ＡＦＮによる腫瘍内または静脈内注射（１１日目および１５日目）で治療する。
【１１３７】
腫瘍サイズを週２回測定する。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝４〜８）に５ｘ１０５個のＭＣ３８細胞を接種する。マウスを、１４日目および１８日目に、２５μｇの対照またはｓｃＦｖ  ＰＤ−Ｌ１ベースＦｃ  ＡＦＮの静脈内注射で治療する。マウスに、２５μｇの示したタンパク質の静脈内注射を行う。異なる時点での腫瘍組織または血清中のタンパク質濃度を、ＥＬＩＳＡで測定する。
【１１３８】
等価物
本発明をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。
【１１３９】
当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。
【１１４０】
参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で考察された出版物は、単に本出願の出願日に先行してそれらが開示されているという理由で提供されている。本明細書のいずれも、本発明が、先行発明の理由でこのような出版物に先行する権利がないことを容認すると解釈されるべきではない。
本明細書で使用されている全ての見出しは、単に構成上の理由によるものであり、どんな形にせよ、本開示を限定することを意図するものではない。任意の個別のセクションの内容は、等しく全てのセクションに適用できる。
【図１Ａ】
2021519089.tif 000076
【図１Ｂ】
2021519089.tif 000077
【図１Ｃ】
2021519089.tif 000078
【図１Ｄ】
2021519089.tif 000079
【図１Ｅ】
2021519089.tif 000080
【図１Ｆ】
2021519089.tif 000081
【図２Ａ】
2021519089.tif 000082
【図２Ｂ】
2021519089.tif 000083
【図２Ｃ】
2021519089.tif 000084
【図２Ｄ】
2021519089.tif 000085
【図２Ｅ】
2021519089.tif 000086
【図２Ｆ】
2021519089.tif 000087
【図２Ｇ−２Ｈ】
2021519089.tif 000088
【図３Ａ】
2021519089.tif 000089
【図３Ｂ】
2021519089.tif 000090
【図３Ｃ】
2021519089.tif 000091
【図３Ｄ】
2021519089.tif 000092
【図３Ｅ】
2021519089.tif 000093
【図３Ｆ】
2021519089.tif 000094
【図３Ｇ−３Ｈ】
2021519089.tif 000095
【図４Ａ】
2021519089.tif 000096
【図４Ｂ】
2021519089.tif 000097
【図４Ｃ】
2021519089.tif 000098
【図４Ｄ】
2021519089.tif 000099
【図５Ａ】
2021519089.tif 000100
【図５Ｂ】
2021519089.tif 000101
【図５Ｃ】
2021519089.tif 000102
【図５Ｄ】
2021519089.tif 000103
【図５Ｅ】
2021519089.tif 000104
【図５Ｆ】
2021519089.tif 000105
【図６Ａ】
2021519089.tif 000106
【図６Ｂ】
2021519089.tif 000107
【図６Ｃ】
2021519089.tif 000108
【図６Ｄ】
2021519089.tif 000109
【図６Ｅ】
2021519089.tif 000110
【図６Ｆ】
2021519089.tif 000111
【図６Ｇ】
2021519089.tif 000112
【図６Ｈ】
2021519089.tif 000113
【図６Ｉ】
2021519089.tif 000114
【図６Ｊ】
2021519089.tif 000115
【図７Ａ】
2021519089.tif 000116
【図７Ｂ】
2021519089.tif 000117
【図７Ｃ】
2021519089.tif 000118
【図７Ｄ】
2021519089.tif 000119
【図８Ａ】
2021519089.tif 000120
【図８Ｂ】
2021519089.tif 000121
【図８Ｃ】
2021519089.tif 000122
【図８Ｄ】
2021519089.tif 000123
【図８Ｅ】
2021519089.tif 000124
【図８Ｆ】
2021519089.tif 000125
【図９Ａ】
2021519089.tif 000126
【図９Ｂ】
2021519089.tif 000127
【図９Ｃ】
2021519089.tif 000128
【図９Ｄ】
2021519089.tif 000129
【図９Ｅ】
2021519089.tif 000130
【図９Ｆ】
2021519089.tif 000131
【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
2021519089.tif 000133
【図９Ｉ】
2021519089.tif 000134
【図９Ｊ】
2021519089.tif 000135
【図１０Ａ】
2021519089.tif 000136
【図１０Ｂ】
2021519089.tif 000137
【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
2021519089.tif 000140
【図１０Ｆ】
2021519089.tif 000141
【図１１Ａ】
2021519089.tif 000142
【図１１Ｂ】
2021519089.tif 000143
【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
2021519089.tif 000145
【図１１Ｅ】
2021519089.tif 000146
【図１１Ｆ】
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【図１１Ｇ】
2021519089.tif 000148
【図１１Ｈ】
2021519089.tif 000149
【図１１Ｉ】
2021519089.tif 000150
【図１１Ｊ】
2021519089.tif 000151
【図１１Ｋ】
2021519089.tif 000152
【図１１Ｌ】
2021519089.tif 000153
【図１２Ａ】
2021519089.tif 000154
【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１２Ｇ】
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【図１２Ｈ】
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【図１２Ｉ】
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【図１２Ｊ】
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【図１２Ｋ】
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【図１２Ｌ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１４Ｇ】
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【図１４Ｈ】
2021519089.tif 000179
【図１４Ｉ】
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【図１４Ｊ】
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【図１４Ｋ】
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【図１４Ｌ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
2021519089.tif 000185
【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１５Ｇ】
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【図１５Ｈ】
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【図１５Ｉ】
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【図１５Ｊ】
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【図１５Ｋ】
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【図１５Ｌ】
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【図１６Ａ】
2021519089.tif 000196
【図１６Ｂ】
2021519089.tif 000197
【図１６Ｃ】
2021519089.tif 000198
【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
2021519089.tif 000200
【図１６Ｆ】
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【図１６Ｇ】
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【図１６Ｈ】
2021519089.tif 000203
【図１６Ｉ】
2021519089.tif 000204
【図１６Ｊ】
2021519089.tif 000205
【図１７Ａ】
2021519089.tif 000206
【図１７Ｂ】
2021519089.tif 000207
【図１７Ｃ】
2021519089.tif 000208
【図１７Ｄ】
2021519089.tif 000209
【図１７Ｅ】
2021519089.tif 000210
【図１７Ｆ】
2021519089.tif 000211
【図１７Ｇ】
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【図１７Ｈ】
2021519089.tif 000213
【図１７Ｉ】
2021519089.tif 000214
【図１７Ｊ】
2021519089.tif 000215
【図１８Ａ】
2021519089.tif 000216
【図１８Ｂ】
2021519089.tif 000217
【図１８Ｃ】
2021519089.tif 000218
【図１８Ｄ】
2021519089.tif 000219
【図１８Ｅ】
2021519089.tif 000220
【図１８Ｆ】
2021519089.tif 000221
【図１９Ａ】
2021519089.tif 000222
【図１９Ｂ】
2021519089.tif 000223
【図１９Ｃ】
2021519089.tif 000224
【図１９Ｄ】
2021519089.tif 000225
【図１９Ｅ】
2021519089.tif 000226
【図１９Ｆ】
2021519089.tif 000227
【図２０】
2021519089.tif 000228
【図２１】
2021519089.tif 000229
【図２２】
2021519089.tif 000230
【図２３】
2021519089.tif 000231
【図２４】
2021519089.tif 000232
【図２５】
2021519089.tif 000233
【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９−１】
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【図２９−２】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
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【図４６Ｃ】
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【図４６Ｄ】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年12月1日(2020.12.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021519089000001.app
【国際調査報告】
2021519089.tif 000282
2021519089.tif 000283
2021519089.tif 000284